JP2023545585A - 新規の生体活性ペプチドの組み合わせ及びその使用 - Google Patents

新規の生体活性ペプチドの組み合わせ及びその使用 Download PDF

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Abstract

本発明は、コラーゲンＶＩ型に由来するポリペプチドの組み合わせを含む組成物を提供する。また、本発明の組成物を含む薬学的組成物及びキットも提供される。関連する態様は、本発明の組成物と会合される医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品及びそれらに使用するための材料、並びにそれらの調製方法を提供する。また、微生物感染症の治療及び／又は予防並びに創傷ケアにおける方法及び組成物の使用、並びにインビトロで微生物を殺傷する方法も提供される。【選択図】なし

Description

本発明は、コラーゲンＶＩポリペプチド及びその誘導体を含む生体活性ペプチドの組み合わせと、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、及びそれらを含むキットとの組み合わせ、並びにそれらの使用及び医学的使用に関する。
皮膚は私たちの主要な外部防御システムであり、侵入する微生物、及び外部環境の悪影響から私たちの内臓構造を保護することを担当している。成人の皮膚は、主に角質細胞からなる表皮又は角質層、コラーゲン及びエラスチンが豊富な結合組織である真皮、並びに脂肪組織で構成される下皮又は皮下層の３つの層で構成され、身体に熱的分離及び機械的保護を提供する［１］。創傷は皮膚内の表面的又は深部の傷害であり、物理化学的又は熱的損傷のために形成される可能性がある。急性創傷は、８～１２週間にわたる治癒期間を必要とする傷害組織（例えば、火傷、化学的傷害、切断）によって定義される。対照的に、慢性創傷は、静脈又は動脈管不全、圧力壊死、がん、及び糖尿病などの疾患の副産物である［２、３］。それらはより長い治癒時間（数週間～数ヶ月から数年）を必要とし、しばしば正常な健康状態に達することができず、炎症の病理学的状態が持続する［４］。したがって、創傷治癒の遅延又は障害は、治療費及び廃棄物生成の観点から、世界中の患者及び医療システムに重大な社会経済的負担を課す［５］。
傷害後の組織再生は、失活した細胞及び組織構造が置き換えられる複雑なプロセスである［６］。皮膚修復中に活性化される慎重に調整された生化学的及び細胞的事象への洞察は、適切な創傷包帯を設計するために重要である［１、７、８］。それは、細胞応答及び細胞外マトリックス（ＥＣＭ）組成の広範な変化を含む。一般に、創傷修復は、異なる予測可能な相及び重複する相に分けられる：止血、炎症、増殖、続いて瘢痕組織の成熟及び再調節［９～１１］。止血は、一時的な障壁としてのフィブリン布によって、創傷部位での失血を止めるために、傷害に対する身体の即時反応である［１２］。炎症（２４時間から４～６日）は、創傷床から異質粒子及び組織破片を一掃する、好中球及びマクロファージによって媒介される［１３］。サイトカイン及び酵素は、線維芽細胞及び筋線維芽細胞のマクロファージを刺激するために放出され［１４］、一方、創傷滲出液は、回復に不可欠な水分を提供する。増殖相に上皮化が起こり、新しく形成された造粒組織が創傷領域を満たし始め、新しいＥＣＭを生成する。最後に、リモデリング相では、コラーゲンベースの架橋が緊密な３Ｄネットワーク形成の原因となり、新しい組織の引張強度が増加する［１２］。重要なことに、細胞とそれらの周囲のフレームワークとの間の親密な関係は、一般的に再生プロセスを調節する上で重要な役割を果たすと考えられている。したがって、優れた創傷治癒特性を確保するために、生体分子を広範囲に充填した適切な生体材料を作成することが重要である。
創傷治癒の最初の２つの相に続いて、増殖相と呼ばれる修復相がある。傷害の３日後に始まり、２週間続く。傷害後、線維芽細胞及び筋線維芽細胞は、局所創傷環境で増殖し、ＴＧＦβ及びＰＤＧＦによって刺激され、３日目に傷害部位に移動し、そこで大量に増殖する。線維芽細胞は、マトリックスタンパク質：ヒアルロナン、フィブロネクチン、プロテオグリカン、及びＩ／ＩＩＩ／Ｖ型コラーゲンからなる拡張原線維ネットワークの細胞外マトリックスを生じる。このマトリックスは、細胞の移動及び修復プロセスをサポートするのに役立つ。創傷縁に接近するための重要な修復プロセスである創傷収縮は、線維芽細胞が排除された後に行われる［１５］。
コラーゲンは、最も豊富な哺乳類タンパク質であり、組織に機械的強度を提供し、細胞接着及び増殖を刺激する［１６、１７］。約３０の異なる型のコラーゲンが同定されており、ポリペプチド配列の三重らせん状三次構造を示すが、コラーゲンベースの生体材料の生成に使用されるのはごくわずかである。
コラーゲンＶＩ型は、ほとんどの結合組織において複雑で広範なビーズ状微小原線維ネットワークを形成する。コラーゲンＶＩ型の主な形態は、３つの異なるポリペプチド鎖、α１（ＶＩ）、α２（ＶＩ）及びα３（ＶＩ）で構成され、これらは三重らせん状単量体を形成する（すなわち、単量体は別個の生成物として存在せず、天然産物は、代わりにこれらの三重らせん状単量体から形成される）。細胞内では、単量体が集合して二量体及び四量体になり、細胞外空間に分泌される。そこで、四量体は、端と端とを合わせて凝集して微小原線維を形成し、それが拡張超分子マトリックスアセンブリの一部となる。より最近では、３つの追加の鎖（α４、α５及びα６）が発見され、いくつかの組織でα３鎖の代わりになる可能性がある［３０、３１］。構造の観点から、各α鎖は、２つの大きなＮ末端及びＣ末端球状領域に隣接する短い拡張三重らせん領域を特徴とし、これはフォン・ヴィレブランド因子Ａ型ドメイン（ＶＷＡ）と相同性を共有する［３２～３４］。ＶＷＡはまた、ＥＣＭにおけるタンパク質間相互作用にも関与している［３２～３５］。コラーゲンＶＩ型のα１（ＶＩ）及びα２（ＶＩ）鎖は、１つのＮ末端（Ｎ１）及び２つのＣ末端（Ｃ１及びＣ２）ＶＷＡドメインを含み、一方、α３（ＶＩ）は、はるかに大きく、約１０のＮ末端（Ｎ１０－Ｎ１）ＶＷＡドメイン及び２つのＣ末端ＶＷＡドメインを含む。追加的に、α３（ＶＩ）鎖は、唾液腺タンパク質、フィブロネクチンＩＩＩ型反復、及びセリンプロテアーゼ阻害剤のＫｕｎｉｔｚファミリーと相同性を共有する、３つのＣ末端ドメイン（Ｃ３～Ｃ５）を有する［３６］。その独自の設定により、コラーゲンＶＩ型は、幅広い組織に強度、完全性及び構造を提供する。また、アポトーシス、オートファジー、血管新生、線維症及び組織修復などの他の重要な生物学的プロセスにも関与している［３７］。
本発明者らは、コラーゲンＶＩペプチド及びそれらの誘導体が、創傷治癒を能動的に促進し、抗菌特性を有し（その内容が参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１７／１２５５８５を参照）、治癒しにくい創傷の治療に関連する用途、また同時に、ＭＲＳＡなどの従来の抗生物質に対する耐性を発現した細菌の殺傷又は成長阻害に有用であることを以前に示している。それらはまた、例えば、医療デバイスの表面にコーティングされたとき、又は医療デバイス、若しくは他のそのような材料に組み込まれたときに、急速な創傷閉鎖の刺激及び汚染された創傷における微生物感染症の治療に有用である。
内因性コラーゲナーゼによる高い生体適合性及び生分解性により、コラーゲンは生物医学的用途に理想的である［１８、１９］。創傷治癒の間、線維芽細胞は、凝集して直径が１０～５００ｎｍの範囲内の原線維を形成するコラーゲン分子を産生する。この線維ネットワークは、創傷部位への細胞移動を促進し、組織修復を積極的にサポートする［２０］。タンパク質構造の容易な化学的機能化のおかげで、様々な包帯アーキテクチャが利用されてきた。ハイドロゲル、エレクトロスパンファイバー、又はナノ結晶含有足場のいずれかの形態のコラーゲンベースの創傷包帯が、火傷創を覆い、潰瘍を治療し［２１～２４］、組織の収縮及び瘢痕を低減し、上皮化率を増加させる［２５］ために適用されている。軟部組織への縫合を可能にし、新しい組織成長のためのテンプレートを提供する湿潤強度のために、コラーゲンスポンジ及び線維膜が特に有望であることが見出された。多機能プラットフォームは、細胞増殖のための良好なトポグラフィーを保持しながら、抗菌及び抗炎症特性を示し、したがって治癒及び創傷閉鎖を加速させた。足場設計のための生体材料としてかなり広範囲に使用されているにもかかわらず、コラーゲン足場は、依然として未知の高い工学的可能性を持つ持続可能な材料のままである［２６、２７］。
皮膚創傷治癒プロセスに関与する複数の細胞機序及びいくつかの外部要因の相互作用を考えると、好適な包帯材料の選択は魅力的である。具体的には、生分解性天然材料の場合、それらの分解は、創傷修復のダイナミクスに従う必要があり、生理学的治癒の進化を保証し、必要に応じて活性原理を解放する必要がある［６］。この問題に対処するために、いくつかの創傷包帯は、天然の細胞外マトリックスの生物学的及び物理化学的特徴を再現することによって、最高レベルの生体模倣を達成するように設計されている。特に、天然コラーゲンネットワークに基づく生物学的包帯は、創傷微小環境を改善し、したがって、新しい組織の再生を促進するために使用される。これらの材料の使用の背後にある理論的根拠は、それらが固有の天然細胞認識ドメインを提示し、したがって創傷床における線維芽細胞及び角質細胞の接着及び増殖を刺激するというアプローチである［２８］。加えて、そのような天然原線維コラーゲン足場は、細胞に侵入するための誘導リッジを提供すると考えられ、したがって構造化された皮膚創傷治癒を促進し得る。
生物医学的用途のためのウシコラーゲンは、典型的には、ウシの皮膚及び腱を処理及び精製することに由来する。天然のコラーゲン原線維からなる得られたコラーゲン分散体は、構造化された創傷治癒を促進する真皮に構造的かつ機能的に高度に類似している［４３、４４］。これらのコラーゲンはまた、異なる種間で高度に保存されており［４５、４６］、例えば、ヒトとウシコラーゲンＩとの間の配列相関は、８８％である。これは、安定したコラーゲン三重らせん構造が、構造及び機能の重要な喪失なしに、一次アミノ酸配列に非常にわずかなばらつきしか許容しないという事実と一致している［４７］。したがって、種間の分子配列変動は、非常に保存されており、ウシコラーゲンはヒトでの使用に好適である。
コラーゲン含有創傷包帯は、固体コラーゲンゲルとして創傷床に統合され得る。このゲルは、創傷治癒中に分泌される流体中に存在するタンパク質分解酵素によって部分的に消費され得る。したがって、創傷のケアをするときに、新しいコラーゲン包帯を残っているコラーゲン包帯の上に配置することができる。それ故に、コラーゲンは創傷に「供給」され、徐々に入れ替わり、ヒト真皮に置き換えられる。
医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、及びそれらに使用するための材料などの生体材料中の生体活性コラーゲンＶＩペプチドなどの、改善された創傷治癒及び抗菌活性を達成することができる改善された生体活性ペプチドの開発が依然として必要である。
ここで、本発明者らは、コラーゲンＶＩのアルファ－３鎖由来の２つの生体活性ペプチドの組み合わせが、個々のペプチド単独と比較して、たとえ同等の用量であっても、創傷治癒及び抗菌活性を大幅に向上させることを初めて示した。「同等の用量」とは、個々に試験したペプチドが、２つの合わせたペプチドと同じ用量であったことを意味し、例えば、ペプチドを３μＭの濃度で単独で試験したが、各々１．５μＭの濃度で２つのペプチドとして合わせ、合計３μＭのペプチドを投与した。この効果は、汎用性、多機能性、かつ適切な細胞外環境を提供する顕著な可能性をもたらし、組織の再生及び瘢痕のリモデリングを促進しながら、感染及び炎症の発症を積極的に対比させ、したがって、生体適合性の所望の向上をもたらすことができる。
更に、Ｐｕｎｊａｔａｅｗａｋｕｐｔ ｅｔ ａｌ．，２０１９に記載されているように、多くの既知の消毒剤は、細胞毒性効果及びそれらに発展する細菌耐性に苦しんでいる。対照的に、本発明のペプチドは、限られた／低減した細胞毒性を示し、合成抗生剤よりも多剤耐性の発達の低度が固有に低い。一実施形態において、本明細書に記載のペプチドは、細胞毒性を示さない。興味深いことに、２つの生体活性ペプチドの組み合わせは、非感染及び感染創傷治癒のシナリオにおいて著しく改善される。これは、ペプチドの組み合わせの改善された創傷治癒及び抗菌活性が、基礎となる感染症の低減又は予防に依存しないことを示す。
本発明の第１の態様は、コラーゲンＶＩ型に由来するポリペプチドの組み合わせを含む組成物を提供する。例えば、組成物は、コラーゲンＶＩ型に由来する少なくとも２つのポリペプチドを含み得る。
一実施形態において、組成物は、
（ａ）創傷治癒を促進することができる一次活性を有する、コラーゲンＶＩ型に由来するアミノ酸配列、又はその断片、バリアント、融合体若しくは誘導体、又は該その断片、誘導体のバリアントの融合体を含むか、若しくはそれからなる、コラーゲンＶＩ型ポリペプチド（すなわち、第１のポリペプチド）と、
（ｂ）抗菌効果を発揮することができる一次活性を有する、コラーゲンＶＩ型に由来するアミノ酸配列、又はその断片、バリアント、融合体若しくは誘導体、又は該その断片、誘導体のバリアントの融合体を含むか、若しくはそれからなる、コラーゲンＶＩ型ポリペプチド（すなわち、第２のポリペプチド）と、を含む。
したがって、一実施形態において、組成物は、
（ａ）コラーゲンＶＩ型に由来するアミノ酸配列、又はその断片、バリアント、融合体若しくは誘導体、又は該その断片、誘導体のバリアントの融合体を含むか、若しくはそれからなる、コラーゲンＶＩ型ポリペプチド（すなわち、第１のポリペプチド）（第１のポリペプチドは、創傷治癒を促進することができる）と、
（ｂ）コラーゲンＶＩ型に由来するアミノ酸配列、又はその断片、バリアント、融合体若しくは誘導体、又は該その断片、誘導体のバリアントの融合体を含むか、若しくはそれからなる、コラーゲンＶＩ型ポリペプチド（すなわち、第２のポリペプチド）（第２のポリペプチドは、抗菌効果を発揮することができる）と、を含む。
したがって、一実施形態において、組成物は、創傷治癒を促進することができ、また抗菌効果を発揮することができるという二重の効果を有する。
当業者は、そのような効果が相乗的であり得ること、すなわち、ポリペプチドの組み合わせの効果が、２つのポリペプチドを組み合わせることの付加的効果よりも大きい場合があることを理解するであろう。
当業者は、コラーゲンＶＩ型が、ヒト又は非ヒト供給源由来のものであり得ることを理解するであろう。例えば、コラーゲンＶＩ型は、類人猿（例えば、チンパンジー、ボノボ、ゴリラ、テナガザル及びオランウータン）、サル（例えば、マカク、ヒヒ及びコロブス）、げっ歯類（例えば、マウス、ラット）又は有蹄類（例えば、ブタ、ウマ及びウシ）などの非ヒト哺乳動物に（直接的又は間接的に）由来し得る。コラーゲンＶＩはまた、鳥類、例えば、ニワトリ（Ｇａｌｌｕｓ ｇａｌｌｕｓ）に由来し得る。
したがって、「コラーゲンＶＩ型」（また「コラーゲンＶＩ」）としては、天然に存在するヒトコラーゲンＶＩ型、コラーゲンＶＩ型単量体、二量体及び四量体、コラーゲンＶＩ型微小原線維、並びにウシコラーゲンＶＩ型などのそれらの相同体が挙げられる。また、ヒトコラーゲンＶＩ及び／又はその一部の組換え発現を含み、発現された分子は、ヒト及び／又は非ヒト遺伝子配列から生成され得る。そのような発現は、細菌及び／又はヒト及び／又は非ヒト細胞発現系（例えば、酵母発現系）を利用することができる。また、合成細胞発現系も含まれる。また、コラーゲンＶＩ及び／又はその一部からのタンパク質配列の合成化学合成も含まれる。
コラーゲンＶＩ型は、典型的には、３つのコラーゲンＶＩペプチド鎖（α１（ＶＩ）、α２（ＶＩ）及びα３（ＶＩ））の各々で構成される。場合によっては、α３（ＶＩ）鎖は、α４（ＶＩ）、α５（ＶＩ）又はα６（ＶＩ）鎖に置換されてもよい。
異なるコラーゲンＶＩアルファ鎖の配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／）などで公的に入手可能である。各α鎖のＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ及びＵｎｉＰｒｏｔの個々のページの詳細は、次のとおりである。
アルファ－１：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｐ１２１０９
アルファ－２：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｐ１２１１０
アルファ－３：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｐ１２１１１
アルファ－４：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ａ２ＡＸ５２
アルファ－５：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ａ８ＴＸ７０
アルファ－６：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ａ６ＮＭＺ７
したがって、ある特定の実施形態において、本発明の組成物のコラーゲンＶＩは、α１（ＶＩ）、α２（ＶＩ）、α３（ＶＩ）、α４（ＶＩ）、α５（ＶＩ）及びα６（ＶＩ）からなる群から選択される任意の３つのアミノ酸鎖を含むか、又はそれらからなる。一実施形態において、コラーゲンＶＩは、α１（ＶＩ）鎖、α２（ＶＩ）鎖及び／又はα３（ＶＩ）鎖を含むか、又はそれらからなる。
一実施形態において、第１の態様の組成物のポリペプチドは、コラーゲンＶＩ型のα１、α２及び／若しくはα３鎖であるか、又はそれらに由来する。
一実施形態において、第１の態様の組成物のポリペプチドは、コラーゲンＶＩ α３（ＶＩ）鎖であるか、又はそれに由来する。
別の実施形態において、コラーゲンＶＩは、１つのα１（ＶＩ）鎖、１つのα２（ＶＩ）鎖を含んでもよく、α３、α４、α５又はα６鎖のいずれかである第３の鎖を更に含む。
ある特定の実施形態において、コラーゲンＶＩは、ヒトコラーゲンＶＩであるか、又はそれに由来するペプチドである。代替実施形態において、コラーゲンＶＩは、ウシコラーゲンＶＩであるか、又はそれに由来するペプチドである。
一実施形態において、ポリペプチドのうちの少なくとも１つは、コラーゲンＶＩ型に由来するアミノ酸配列、又はその断片、バリアント、融合体若しくは誘導体、又は該その断片、誘導体のバリアントの融合体を含むか、若しくはそれらからなり、かつコラーゲンＶＩ α３鎖に由来し、任意選択で、ポリペプチドは、異なるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。ポリペプチドのアミノ酸配列は、重複又は非重複であり得る。
「ポリペプチドのうちの少なくとも１つ」とは、第１のポリペプチド、又は第２のポリペプチド、又は第１及び第２のポリペプチドの両方を意味する。
一実施形態において、コラーゲンＶＩ型に由来するアミノ酸配列、又はその断片、バリアント、融合体若しくは誘導体、又は該その断片、バリアント若しくは誘導体の融合体を含むか、若しくはそれらからなる、ポリペプチドは、α１（ＶＩ）、α２（ＶＩ）及びα３（ＶＩ）からなる群から選択される１つ以上のポリペプチドを含むか、又はそれらからなる。
一実施形態において、組成物は、コラーゲンＶＩ、コラーゲンＶＩ α１鎖、コラーゲンＶＩ α２鎖、コラーゲンＶＩ α３鎖、ＧＶＲ２８、ＦＹＬ２５、ＦＦＬ２５、ＶＴＴ３０、及びＳＦＶ３３からなる群から選択される１つ以上のポリペプチドを含む。
「ポリペプチド」は、２つ以上のサブユニットアミノ酸、アミノ酸類似体、又は他のペプチド模倣体の化合物を指すために、その最も広い意味で本明細書で使用される。したがって、「ポリペプチド」という用語は、短いペプチド配列、並びにより長いポリペプチド及びタンパク質を含む。本明細書で使用する場合、「アミノ酸」という用語は、Ｄ又はＬ光学異性体、並びにアミノ酸類似体及びペプチド模倣体の両方を含む、天然及び／又は非天然若しくは合成アミノ酸のいずれかを指す。
コラーゲンＶＩ型及び／又はコラーゲンＶＩ型のα１、α２及び／又はα３鎖に「由来する」アミノ酸配列とは、天然に存在するコラーゲンＶＩ型タンパク質及び／又はコラーゲンＶＩ型のα１、α２及び／又はα３鎖のアミノ酸配列内に見出されるアミノ酸配列を含む。特に、天然に存在するコラーゲンＶＩ型及び／又はコラーゲンＶＩ型のα１、α２及び／又はα３鎖の配列から少なくとも５つの連続したアミノ酸を含むアミノ酸配列を含む。例えば、一実施形態において、アミノ酸配列は、コラーゲンＶＩ型及び／又はコラーゲンＶＩ型のα１、α２及び／又はα３鎖からの少なくとも５つの連続したアミノ酸、例えば、コラーゲンＶＩ型及び／又はコラーゲンＶＩ型のα１、α２及び／又はα３鎖からの少なくとも６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、４０、５０又はそれ以上の連続したアミノ酸を含有し得る。したがって、コラーゲンＶＩ型及び／又はコラーゲンＶＩ型のα１、α２及び／又はα３鎖に由来するアミノ酸配列は、コラーゲンＶＩ型及び／又はコラーゲンＶＩ型のα１、α２及び／又はα３鎖の断片に対応する。したがって、一実施形態において、コラーゲンＶＩ型及び／又はコラーゲンＶＩ型のα１、α２及び／又はα３鎖に由来するアミノ酸配列は、コラーゲンＶＩ型の全長配列及び／又はコラーゲンＶＩ型のα１、α２及び／又はα３鎖の全長配列ではない。代替的に、又は追加的に、アミノ酸配列は、コラーゲンＶＩ型及び／又はコラーゲンＶＩ型のα１、α２及び／又はα３鎖の全長からの連続したアミノ酸の配列を含有しない場合がある。例えば、アミノ酸配列は、コラーゲンＶＩ型並びに／又はコラーゲンＶＩ型のα１、α２及び／若しくはα３鎖からの少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、４０、５０又はそれ以上の連続したアミノ酸を含有しない場合がある。
当業者には、第１のコラーゲンＶＩ型ポリペプチド及び第２のコラーゲンＶＩ型ポリペプチドが、異なるポリペプチドであること、すなわち、創傷治癒を促進する第１のコラーゲンＶＩ型ポリペプチドは、抗菌効果を発揮する第２のＶＩ型ポリペプチドとは異なるポリペプチドであることは明らかであろう。「異なるポリペプチド」とは、異なるアミノ酸配列及び／又は異なる長さの配列を有する、すなわち、ペプチドが同一の配列を有しないという意味を含む。
一実施形態において、組成物のコラーゲンＶＩ型ポリペプチド（又はコラーゲンＶＩのその断片、バリアント、融合体若しくは誘導体）のうちの少なくとも１つは、抗菌効果を発揮することができる。したがって、一実施形態において、組成物のポリペプチドのうちの少なくとも１つは、微生物を殺傷するか、又はその成長を減衰させることができる。
コラーゲンＶＩ、並びにＧＶＲ２８、ＦＹＬ２５、ＦＦＬ２５、ＶＴＴ３０、及びＳＦＶ３３などのコラーゲンＶＩに由来するアミノ酸配列を含むポリペプチドの抗菌特性は、ＷＯ２０１７／１２５５８５に記載されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
「微生物を殺傷するか、又はその成長を減衰させることができる」とは、抗菌活性を有するコラーゲンＶＩ及びポリペプチドを含む。抗菌活性は、全体又は部分的であってもよく、用量依存的であってもよい。これは、例えば、放射状拡散アッセイによって実証され得る。
本発明のポリペプチドが有効である微生物は、細菌、マイコプラズマ、酵母、真菌及びウイルスからなる群から選択され得る。したがって、一実施形態において、組成物のポリペプチドのうちの少なくとも１つは、抗菌効果を発揮することができる。
一実施形態において、第１の態様の組成物のポリペプチドのうちの少なくとも１つは、微生物の膜に結合することができる。別の実施形態において、ポリペプチドのうちの少なくとも１つは、負に荷電した表面、例えば細菌膜に対して親和性を有し得る。この親和性は、例えば、ヘパリンに対する親和性によって試験することができ、ヘパリンに対するより高い親和性は、負に荷電した表面に対するより高い親和性を示す。
有利には、ポリペプチドのうちの少なくとも１つの親和性又は結合能力は、ＬＬ－３７のそれに匹敵するか、又はそれを超える。したがって、一実施形態において、ポリペプチドのうちの少なくとも１つは、ＬＬ－３７（すなわち、ＬＬＧＤＦＦＲＫＳＫＥＫＩＧＫＥＦＫＲＩＶＱＲＩＫＤＦＬＲＮＬＶＰＲＴＥＳ、配列番号２４）以上の抗菌効果を示すことができる。いくつかの実施形態において、ポリペプチドのうちの少なくとも１つは、ＬＬ－３７よりも少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％。３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％若しくは１００％、又はこれらの特定のパーセンテージの間（例えば、５～１００％、１０～２０％、２０～６０％など）で選択された範囲の優れた抗菌効果を示すことができる。好ましい実施形態において、ポリペプチドのうちの少なくとも１つは、ＬＬ－３７よりも少なくとも１０％優れた抗菌効果を示すことができる。一実施形態において、ポリペプチドのうちの少なくとも１つは、ＬＬ－３７の抗菌効果よりも１０～２０％優れた範囲内の抗菌効果を示すことができる。
したがって、一実施形態において、ポリペプチドのうちの少なくとも１つは、ＬＬ－３７（すなわち、ＬＬＧＤＦＦＲＫＳＫＥＫＩＧＫＥＦＫＲＩＶＱＲＩＫＤＦＬＲＮＬＶＰＲＴＥＳ、配列番号２４）以上の創傷治癒効果を示すことができる。いくつかの実施形態において、ポリペプチドのうちの少なくとも１つは、ＬＬ－３７よりも少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％。３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％若しくは１００％、又はこれらの特定のパーセンテージの間（例えば、５～１００％、１０～２０％、２０～６０％など）で選択された範囲の優れた創傷治癒効果を示すことができる。好ましい実施形態において、ポリペプチドのうちの少なくとも１つは、ＬＬ－３７よりも少なくとも１５％優れた創傷治癒効果を示すことができる。一実施形態において、ポリペプチドのうちの少なくとも１つは、ＬＬ－３７の創傷治癒効果よりも１５～２５％の範囲の優れた抗菌効果を示すことができる。
一実施形態において、ポリペプチドのうちの少なくとも１つは、微生物に対して構造変化を引き起こすことができ、例えば、細胞質成分の膜摂動、小疱形成又は滲出を含む。
したがって、組成物のポリペプチドのうちの少なくとも１つは、微生物の膜の破壊を引き起こすことが可能であり得る。これは、例えば、電子顕微鏡法又は蛍光顕微鏡法などの顕微鏡研究によって定量化され、微生物による蛍光分子の取り込みを研究することができる。
更なる実施形態において、組成物のポリペプチドのうちの少なくとも１つは、創傷閉鎖及び／又は創傷治癒を促進することが可能であり得る。
「創傷閉鎖を促進する」及び／又は「創傷治癒」とは、例えば治癒を加速させることによって、創傷の治癒プロセスを支援することを含む。例えば、創傷ケア製品は、創傷上皮及び／又は創傷間質の上皮再生及び／又は治癒を増強することができる場合がある。一実施形態において、創傷ケア製品は、非溶解機序を介して上皮及び／又は間質細胞の増殖を増強することができる場合がある。創傷閉鎖能力は、例えば、マウス又はブタモデルにおける細胞スクラッチ実験及びインビボ実験によって定量化され得る。「上皮再生を増強する」とは、表皮再生の増強、又は言い換えれば、表皮の再生の増強を含む。「創傷上皮の治癒を増強する」とは、表皮治癒の増強、又は言い換えれば、表皮（例えば、創傷した表皮）の治癒の増強を含む。「創傷間質の治癒を増強する」とは、皮膚治癒の増強、又は言い換えれば、真皮（例えば、創傷した真皮）の治癒の増強を含む。
したがって、組成物のポリペプチドのうちの少なくとも１つは、創傷閉鎖／治癒を促進することによって、及び／又は創傷の感染症を予防することによって、創傷ケアにおける役割を有し得る。
更なる実施形態において、ポリペプチドのうちの少なくとも１つは、抗菌活性を有し得、ポリペプチドのうちの少なくとも１つ（同じ又は異なるポリペプチドのいずれか）は、創傷治癒を促進し得る。例えば、ポリペプチドのうちの少なくとも１つは、抗菌活性を有し得るが、単独で創傷治癒を促進するものではない。代替的に、又は追加的に、ポリペプチドのうちの少なくとも１つは、創傷治癒を促進し得るが、単独では抗菌活性を有しない。したがって、ポリペプチドの特性は、組成物中のポリペプチドに対して相互に排他的であり得る。ポリペプチドが両方の活性を有することができる場合、該ポリペプチドの活性のうちの１つは、その一次活性とみなされてもよく、他の特性は、その二次活性とみなされてもよい。例えば、ポリペプチドのうちの少なくとも１つの一次活性は、抗菌活性であり得、第２の活性は、創傷治癒の促進であり得る。代替的に、ポリペプチドは、一次活性のみを有するとみなされ得る。いくつかの実施形態において、第１のポリペプチドは、創傷治癒及び抗菌特性（例えば、ＧＶＲ２８）を有し、第２のポリペプチドは、創傷治癒特性を有さず、抗菌特性（例えば、ＳＦＶ３３）を有し、任意選択で、第２のポリペプチドは、第１のポリペプチドよりも優れた抗菌特性を有する。
第１の態様の組成物によって治療される創傷は、体外（すなわち、皮膚及び下層組織の表面創傷）及び／又は体内（例えば、臓器移植又は組織／臓器の一部の除去、例えば、以下の結腸手術による内傷など）であり得る。
当業者は、第１の態様の組成物が、グラム陽性及び／又はグラム陰性細菌に対して抗菌効果を発揮し得ることを理解するであろう。例えば、微生物は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ａ群連鎖球菌（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、Ｂ群連鎖球菌、例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ）、Ｃ群連鎖球菌（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）、Ｄ群連鎖球菌（例えば、Ｅｎｔｅｒｏ－ｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、Ｆ群連鎖球菌（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｎｇｉｎｏｓｕｓ）、Ｇ群連鎖球菌（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）、アルファ－溶血性連鎖球菌（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｒｉｄａｎｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｂｏｖｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｉｔｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｎｇｉｎｏｓｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｎｇｕｉｎｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｕｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、無莢膜型Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ（ＮＴＨｉ）、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ ｂ（Ｈｉｂ）、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｎａｅｓｌｕｎｄｉｉ、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔｕｍ、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｃｌｏａｃａｅ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、多剤耐性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（ＭＲＰＡ）、多剤耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）、多剤耐性Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（ＭＲＥＣ）、多剤耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ（ＭＲＳＥ）、多剤耐性Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（ＭＲＫＰ）、多剤耐性Ｅｎｔｅｒｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ（ＭＲＥＦ）、多剤耐性Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ（ＭＲＡＢ）及び多剤耐性Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐｐ．（ＭＲＥ）からなる群から選択される細菌であり得る。
一実施形態において、微生物は、１つ以上の従来の抗生剤に耐性のある細菌である。
「従来の抗生剤」とは、微生物を殺傷する、及び／又はその成長を減衰させることができる既知の薬剤、例えば、天然及び合成ペニシリン及びセファロスポリン、スルホンアミド、エリスロマイシン、カノマイシン、テトラサイクリン、クロラムフェニコール、リファンピシン、及びゲンタマイシン、アンピシリン、ベンジペニシリン、ベネタミンペニシリン、ベンザチンペニシリン、フェネチシリン、フェノキシ－メチルペニシリン、プロカインペニシリン、クロキサシリン、フルクロキサシリン、メチシリンナトリウム、アモキシシリン、塩酸バカンピシリン、シクラシリン、メズロシリン、ピバンピシリン、塩酸タランピシリン、カルフェシリンナトリウム、ピペラシリン、チカルシリン、メシリナム、ピルメシリナン、セファクロル、セファドロキシル、セフォタキシム、セフォキシチン、セフスロジンナトリウム、セフタジジム、セフチゾキシム、セフロキシム、セファレキシン、セファロチン、セファマンドール、セファゾリン、セフラジン、ラタモキセフ二ナトリウム、アズトレオナム、塩酸クロルテトラサイクリン、クロモサイクリンナトリウム、塩酸デメクロシジン、ドキシサイクリン、リメサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、アミカシン、硫酸フラミセチン、硫酸ネオマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシン、コリスチン、フシジン酸ナトリウム、ポリミキシンＢ硫酸塩、スペクチノマイシン、バンコマイシン、硫酸カルシウム、スルファメトピラジン、スルファジアジン、スルファジミジン、スルファグアニジン、硫黄尿素、カプレオマイシン、メトロニダゾール、チニダゾール、シノキサシン、シプロフロキサシン、ニトロフラントイン、ヘキサミン、ストレプトマイシン、カルベニシリン、コリスチメタート、ポリミキシンＢ、フラゾリドン、ナリジキシン酸、トリメトプリム－スルファメトキサゾール、クリンダマイシン、リンコマイシン、シクロセリン、イソニアジド、エタンブトール、エチオナミド、ピラジンアミド等を含む；抗真菌剤、例えばミコナゾール、ケトコナゾール、イトラコナゾール、フルコナゾール、アムホテリシン、フルシトシン、グリセオフルビン、ナタマイシン、ナイスタチン等；並びに抗ウイルス剤、例えばアシクロビル、ＡＺＴ、ｄｄＩ、塩酸アマンタジン、イノシンプラノベックス、ビダラビン等を含む。
したがって、一実施形態において、微生物は、多剤耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）（メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、多剤耐性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（ＭＲＰＡ）、多剤耐性Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（ＭＲＥＣ）、多剤耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ（ＭＲＳＥ）及び多剤耐性Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（ＭＲＫＰ）からなる群から選択される。
有利には、本発明の第１の態様による組成物は、微生物剤に対して選択的毒性を示す。「選択的」とは、組成物のポリペプチドが、哺乳類（例えばヒト）宿主細胞と比較して、１つ以上の微生物（細菌、マイコプラズマ、酵母、真菌及び／又はウイルスなど）に対して優先的に毒性であることを意味する。例えば、組成物のポリペプチドの標的微生物に対する毒性は、その組成物の哺乳類細胞に対する毒性の少なくとも２倍、より好ましくは少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも８倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍又は少なくとも２０倍である。
好都合には、第１の態様の組成物のポリペプチドのうちの少なくとも１つは、哺乳類、例えばヒトの細胞に対して実質的に無毒性である。いくつかの実施形態において、抗菌効果は、グラム陽性及び／又はグラム陰性細菌に特異的であり、他の生物（例えば、マイコプラズマ、酵母、真菌及び／又はウイルス）に対して非活性である。
例えば、第１の態様の組成物のポリペプチドのうちの少なくとも１つは、細菌などの微生物を殺傷するために使用され得る濃度で赤血球又は単球に対して細胞毒性を示さない場合がある。一実施形態において、組成物のポリペプチドのうちの少なくとも１つは、最大３０μＭの濃度で、又は代替的に、最大５０μＭの濃度で細胞毒性を示さない。
このようにして、化合物を微生物感染症を治療するために使用する場合、例えば、微生物細胞が健康な宿主組織への損傷を最小限に抑えて破壊されるように、投与レジメンを選択することができる。したがって、組成物のポリペプチドのうちの少なくとも１つは、「治療濃度域」を示し得る。
一実施形態において、組成物のポリペプチドのうちの少なくとも１つは、抗内毒性効果を発揮することができる。
「抗内毒性効果」とは、内毒素によって誘導される効果に対抗するポリペプチドを含む。例えば、一実施形態において、組成物のポリペプチドのうちの少なくとも１つは、少なくとも一部、亜硝酸塩のＬＰＳ誘導を抑制することができる。
一実施形態において、組成物のポリペプチドのうちの少なくとも１つは、ＶＷＡドメイン、例えば球状ＶＷＡドメインに由来するか、又はそれに対するアミノ酸配列相同性を示す。したがって、組成物のポリペプチドは、ＶＷＡドメインの少なくとも５つ（例えば、少なくとも１０、１５、２０若しくはそれ以上）の連続したアミノ酸に対応するアミノ酸配列、又は配列などと少なくとも７０％（例えば、少なくとも８０％、９０％若しくは９５％）の同一性を有するアミノ酸配列を含み得るか、又はそれからなり得る。
更なる実施形態において、組成物のポリペプチドは、無傷のＶＷＡドメインを含み得るか、又はそれからなり得る。
「ＶＷＡドメイン」とは、フォン・ヴィレブランド因子のＡ型ドメイン、及びフォン・ヴィレブランド因子のＡ型ドメインに対する相同性を示すドメイン、並びにＶＷＡドメイン含有領域を含む。
一実施形態において、組成物のポリペプチドは、コラーゲンＶＩ型のα３鎖に由来する。したがって、組成物のポリペプチドは、α３Ｎ又はα３Ｃ領域に由来することができる。例えば、組成物のポリペプチドは、コラーゲンＶＩ型のα３鎖のＮ２、Ｎ３若しくはＣ１ドメインであり得るか、又はそれに由来し得る。
代替実施形態において、組成物のポリペプチドは、コラーゲンＶＩ型のα４鎖に由来する。
別の代替実施形態において、組成物のポリペプチドは、コラーゲンＶＩ型のα５鎖に由来する。
更なる代替実施形態において、組成物のポリペプチドは、コラーゲンＶＩ型のα６鎖に由来する。
なお更なる代替実施形態において、組成物のポリペプチドは、コラーゲンＶＩ型のα２鎖、例えば、α２Ｎ領域に由来する。
当業者は、第１の態様の組成物のポリペプチドのうちの少なくとも１つが、その表面にカチオン性残基、又はその中にカチオン性配列モチーフを有し得ることを理解するであろう。
したがって、一実施形態において、組成物のポリペプチドのうちの少なくとも１つは、正味正電荷を有する。例えば、ポリペプチドは、＋２～＋９の範囲の電荷を有し得る。
更なる実施形態において、組成物のポリペプチドのうちの少なくとも１つは、少なくとも３０％の疎水性残基を有する。
なお更なる実施形態において、組成物のポリペプチドのうちの少なくとも１つは、両親媒性構造を有してもよい。
本発明の第１の態様の組成物の例示的なコラーゲンＶＩポリペプチドは、配列番号１～２３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列（以下の表１に示される）、又はその断片、バリアント、融合体若しくは誘導体、又は該その断片、バリアント若しくは誘導体の融合体を含むか、又はそれからなり、これは、配列番号１～２３のうちのいずれか１つの抗菌活性を保持する。配列番号１～２３の各々は、組成物中で、配列番号１～２３のうちのいずれか１つ以上と組み合わされてもよい。例えば、組成物は、配列番号１のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるポリペプチドと、配列番号２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２及び／若しくは２３のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるポリペプチドから形成され得る。あるいは、組成物は、配列番号５のアミノ酸を含むか、又はそれからなるポリペプチドと、配列番号１、２、３、４、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２及び／若しくは２３のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるポリペプチドから形成され得る。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号６ではない。
以下の表１は、本発明の組成物の様々なポリペプチドを示す。これらの創傷治癒データは、配列番号１～６について入手可能であり、ＧＶＲ２８、ＦＹＬ２５、ＦＦＬ２５及びＶＴＴ３０（配列番号１～４）は、創傷治癒特性を有する。創傷治癒データは、配列番号７～２３については入手可能でない。配列番号１～５及び７～２３は、全て抗菌活性を有する。したがって、配列番号１～４（ＧＶＲ２８、ＦＹＬ２５、ＦＦＬ２５及びＶＴＴ３０）は、二重の活性を有し、すなわち、それらは、創傷治癒効果を発揮し、かつ抗菌効果を発揮することの両方が可能である。
Figure 2023545585000001
いくつかの実施形態において、抗菌特性を有するポリペプチドは、ＧＶＲ２８、ＳＦＶ３３、ＦＹＬ２５、ＦＦＬ２５、ＶＴＴ３０、ＫＰＥ２０、ＧＦＡ２０、ＡＡＡ７６、ＹＤＲ２０、ＥＱＮ２０、ＶＶＨ２０、ＬＲＬ２０、ＦＴＫ２０、ＲＤＡ２０及びＴＫＲ２０からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、抗菌特性を有するポリペプチドは、ＡＡＫ２０、ＫＧＦ２０、ＱＡＰ２０、ＲＫＶ２０、ＴＳＳ３６、ＴＴＫ２０、ＶＡＡ２０又はＤＶＮ３２ではない。
いくつかの実施形態において、創傷治癒特性を有するポリペプチドは、ＧＶＲ２８、ＳＦＶ３３、ＦＹＬ２５及びＦＦＬ２５からなる群から選択される。
例えば、本発明の組成物のポリペプチドは、配列番号１～５からなる群から選択されるアミノ酸配列、
Figure 2023545585000002
又はその断片、バリアント、融合体若しくは誘導体、又は該その断片、バリアント若しくは誘導体の融合体を含み得るか、又はそれからなり得、これは、配列番号１～５のうちのいずれか１つの抗菌活性を保持するか、又は配列番号１～４のうちのいずれか１つの創傷治癒促進活性を保持する。
したがって、一実施形態において、本発明の組成物は、ポリペプチドであって、配列番号１ によるアミノ酸配列（すなわち、ＧＶＲ２８）、又はその断片、バリアント、融合体若しくは誘導体、並びに該その断片、バリアント及び誘導体の融合体を含むか、又はそれからなる、ポリペプチドを含み、これは、配列番号１の創傷治癒活性を保持する。
一実施形態において、本発明の組成物は、ポリペプチドであって、配列番号５によるアミノ酸配列（すなわち、ＳＦＶ３３）、又はその断片、バリアント、融合体若しくは誘導体、並びに該その断片、バリアント及び誘導体の融合体を含むか、又はそれらからなる、ポリペプチドを含み、これは、配列番号５の抗菌活性を保持する。
特に好ましい実施形態において、本発明の組成物は、配列番号１のアミノ酸配列（ＧＶＲ２８）を含むか、若しくはそれからなるポリペプチド（すなわち、第１のポリペプチド）、及び配列番号５のアミノ酸配列（ＳＦＶ３３）を含むか、若しくはそれからなるポリペプチド（すなわち、第２のポリペプチド）、又はそれらの断片、バリアント、融合体若しくは誘導体、又は該それらの断片、バリアント若しくは誘導体の融合体を含み、これらはそれぞれ、配列番号１又は５のうちのいずれか１つの抗菌活性を保持する。
そのような組成物において、ＧＶＲ２８（配列番号１）の主な作用は、創傷治癒を促進することであり、ＳＦＶ３３（配列番号５）の主な作用は、抗菌効果を提供／発揮することである。
したがって、一実施形態において、本発明の組成物は、
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる第１のポリペプチド、及び
（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、又はそれらからなる。
そのようなペプチドはまた、二次効果を有し得る。例えば、ＧＶＲ２８は、創傷治癒を促進する一次作用を有するが、ＧＶＲ２８はまた、ペプチドが抗菌効果を発揮することも可能である二次活性を有し得る。
本発明の組成物は、配列番号１～２３による２つ以上のポリペプチドを、等用量で、例えば１：１の比で含み得るか、又はそれらからなり得る。あるいは、組成物中の各ポリペプチドは、異なる用量、例えば、０．５：１、０．６：１、０．７：１、０．８：１、０．９：１であり得る。いくつかの実施形態において、組成物は、２つのポリペプチドを含み、第１のポリペプチドは、ＧＶＲ２８（配列番号１）であり、第２のポリペプチドは、ＳＦＶ３３（配列番号５）であり、０．５：１、０．６：１、０．７：１、０．８：１、０．９：１又は１：１の比（ＧＶＲ２８：ＳＦＶ３３又はＳＦＶ３３：ＧＶＲ２８のいずれか）である。いくつかの実施形態において、組成物は、２つのポリペプチドを含み、第１のポリペプチドは、ＧＶＲ２８であり、第２のポリペプチドは、ＳＦＶ２８であり、それぞれ１：０．９の比である。いくつかの実施形態において、組成物は、２つのポリペプチドを含み、第１のポリペプチドは、ＧＶＲ２８であり、第２のポリペプチドは、ＳＦＶ２８であり、１：１の比である。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、配列番号６ではない。
本発明の例示的な組成物は、対照治療と比較して、例えば、本発明のポリペプチドが存在しない担体のみの対照と比較して、改善された創傷治癒を有する。例えば、組成物のポリペプチドの創傷治癒は、担体のみの対照の創傷治癒よりも少なくとも２倍優れていることがあり、より好ましくは少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも８倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍又は少なくとも２０倍改善され得る。
当業者は、「アミノ酸」という用語が、本明細書で使用する場合、（天然の「Ｌ」形態と比較して）「Ｄ」形態の標準的な２０個の遺伝子コードされたアミノ酸及びそれらの対応する立体異性体、オメガ－アミノ酸他の天然に存在するアミノ酸、非従来型アミノ酸（例えば、α，α－二置換アミノ酸、Ｎ－アルキルアミノ酸等）、及び化学的に誘導体化されたアミノ酸（以下を参照）を含むことを理解するであろう。
「アラニン」又は「Ａｌａ」又は「Ａ」などのアミノ酸が具体的に列挙されている場合、別段明記されていない限り、この用語は、Ｌ－アラニン及びＤ－アラニンの両方を指す。所望の機能的特性がポリペプチドによって保持される限り、他の非従来型アミノ酸もまた、本発明のポリペプチドに好適な成分であり得る。示されるペプチドについて、適切な場合、各コードされたアミノ酸残基は、従来型アミノ酸の慣用名に対応する単一の文字指定によって表される。
一実施形態において、第１の態様の組成物のコラーゲンＶＩ型に由来するポリペプチドのうちの少なくとも１つは、Ｌ－アミノ酸を含むか、又はそれからなる。
ポリペプチドのうちの少なくとも１つが参照配列（例えば、配列番号１～２３）によるアミノ酸配列を含む場合、ポリペプチドは、参照配列のアミノ酸を超えて、そのＮ末端及び／又はＣ末端に追加のアミノ酸を含んでもよく、例えば、ポリペプチドのうちの少なくとも１つは、そのＮ末端に追加のアミノ酸を含んでもよい。同様に、ポリペプチドのうちの少なくとも１つが、参照配列によるアミノ酸配列の断片、バリアント又は誘導体を含む場合、ポリペプチドは、そのＮ末端及び／又はＣ末端に追加のアミノ酸を含んでもよい。
加えて、組成物がコラーゲンＶＩ型を含む場合、コラーゲンＶＩ型α鎖のうちの１つ以上は、そのＮ末端及び／又はＣ末端に追加のアミノ酸を含み得、例えば、ポリペプチドは、そのＮ末端に追加のアミノ酸を含み得る。
一実施形態において、組成物のポリペプチドのうちの少なくとも１つは、参照配列によるアミノ酸配列の断片（例えば、配列番号１～２３のうちのいずれか１つの断片）を含むか、又はそれからなる。したがって、ポリペプチドのうちの少なくとも１つは、参照配列の少なくとも５個の連続したアミノ酸、例えば、配列番号１～２３のうちのいずれか１つの少なくとも６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４又は７５個の連続したアミノ酸を含み得るか、又はそれらからなり得る。いくつかの実施形態において、ポリペプチドの断片は、配列番号６の断片ではない。
当業者は、第１の態様の組成物のポリペプチドのうちの少なくとも１つが、参照配列（例えば、配列番号１～２３のいずれか１つのバリアント）によるアミノ酸配列のバリアント、又は該バリアントの断片を含み得るか、又はそれからなり得ることを更に理解するであろう。そのようなバリアントは、天然に存在しない場合がある。いくつかの実施形態において、バリアントは、配列番号６のバリアントではない。
ポリペプチドの「バリアント」とは、保存的又は非保存的のいずれかの挿入、欠失及び置換を含む。例えば、保存的置換は、同じ一般クラス内のアミノ酸（例えば、酸性アミノ酸、塩基性アミノ酸、非極性アミノ酸、極性アミノ酸又は芳香族アミノ酸）を、同じクラス内の別のアミノ酸によって置換することを指す。したがって、保存的アミノ酸置換及び非保存的アミノ酸置換の意味は、当該技術分野において周知である。特に、抗菌活性を示す、及び／又は創傷治癒を促進するポリペプチドのバリアントを含む。例えば、創傷治癒（及び／又は抗菌活性）を促進する主要な機能を有するポリペプチドのバリアントは、創傷治癒（及び／又は抗菌活性）を促進する主要な機能を保持するバリアントであり得る。ポリペプチドのバリアントは、そのバリアントが由来するポリペプチドと比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の活性を含み得る。あるいは、バリアントは、そのバリアントが由来するポリペプチドと比較して増加した活性を有し得る。
一実施形態において、バリアントは、参照配列（例えば、配列番号１～２３）又はその断片によるアミノ酸配列と少なくとも５０％の同一性、例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
組成物中のポリペプチドのうちのいずれか１つ以上は、バリアントであり得る。例えば、第１のポリペプチドは、配列番号１～２３による配列に対応してもよく、第２又はそれ以降のポリペプチドは、配列番号１～２３による配列のバリアントに対応してもよい。いくつかの実施形態において、第１及び／又は第２のポリペプチドは、配列番号６又はそのバリアントではない。
２つのポリペプチド間のパーセント配列同一性は、好適なコンピュータープログラム、例えば、ウィスコンシン大学Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ ＧｒｏｕｐのＧＡＰプログラムを使用して決定することができ、パーセント同一性は、配列が最適に整列されているポリペプチドに関連して計算されることが理解されるであろう。
あるいは、アラインメントは、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗプログラムを使用して実行され得る（参照により本明細書に組み込まれる、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．２２：４６７３－４６８０に記載のとおり）。
使用されるパラメータは、次のとおりであってもよい。
高速ペアライズアラインメントパラメータ：Ｋ－ｔｕｐｌｅ（単語）サイズ；１、ウィンドウサイズ；５、ギャップペナルティ；３、上の対角線の数；５。スコアリング方法：ｘパーセント。
複数のアラインメントパラメータ：ギャップオープンペナルティ；１０、ギャップエクステンションペナルティ；０．０５。
スコアリングマトリックス：ＢＬＯＳＵＭ。
あるいは、ＢＥＳＴＦＩＴプログラムを使用して、局所配列アラインメントを決定することができる。
例えば、一実施形態において、上記参照配列からのアミノ酸は、例えば、Ｉ、Ｆ～Ｗ修飾によって、ポリペプチドのタンパク質分解を低減するために変異され得る（参照により本明細書に組み込まれる、Ｓｔｒｏｍｓｔｅｄｔ ｅｔ ａｌ，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ ２００９，５３，５９３を参照）。
バリアントは、組換えポリヌクレオチドを使用して、当該技術分野において周知のタンパク質工学及び部位特異的変異誘発の方法を使用して作製され得る（実施例を参照、参照により本明細書に組み込まれる、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｓａｍｂｒｏｏｋ＆Ｒｕｓｓｅｌｌ，２０００，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓを参照）。
更なる実施形態において、組成物のポリペプチドのうちの少なくとも１つは、上記のアミノ酸配列（例えば、配列番号１～２３）のうちのいずれか１つの種相同体であるアミノ酸を含むか、又はそれからなる。「種相同体」とは、ポリペプチドが、非ヒト種由来の等価タンパク質内の同じアミノ酸配列に対応することを含み、すなわち、このポリペプチドは、配列番号１～２３のうちのいずれか１つとの最大配列同一性を示すポリペプチドを含む（例えば、ＧＡＰ又はＢＬＡＳＴ配列比較によって測定される）。典型的には、種相同体ポリペプチドは、ヒト参照配列（すなわち、配列番号１～２３）と同じ長さである。
なお更なる実施形態において、組成物のポリペプチドのうちの少なくとも１つは、融合タンパク質を含むか、又はそれからなる。
ポリペプチドの「融合体」とは、任意の他のポリペプチドに融合された参照配列（例えば、配列番号１～２３のうちのいずれか１つ、又はその断片若しくはバリアント）に対応するアミノ酸配列を含む。例えば、該コラーゲンＶＩ又はポリペプチドは、該ポリペプチドの精製を容易にするために、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）又はタンパク質Ａなどのポリペプチドに融合されてもよい。そのような融合体の例は、当業者に周知である。同様に、該コラーゲンＶＩ又はポリペプチドは、Ｈｉｓ６などのオリゴヒスチジンタグ、又は周知のＭｙｃタグエピトープなどの抗体によって認識されるエピトープに融合され得る。加えて、疎水性オリゴペプチドエンドタグを含む融合体が使用され得る。該コラーゲンＶＩ又はポリペプチドの任意のバリアント又は誘導体への融合体もまた、本発明の範囲に含まれる。追加的に、本発明の第１のポリペプチドは、本発明の第２のポリペプチドに融合されてもよく、任意選択で、リンカーは、各ポリペプチド間で融合される。したがって、例えば、配列番号１を含むか、又はそれからなるポリペプチド（又はそのバリアント、断片若しくは誘導体）は、配列番号５を含むか、又はそれからなるポリペプチド（又はそのバリアント、断片若しくは誘導体）に融合されてもよく、あるいはその逆であってもよく、任意選択で、リンカーは、２つのポリペプチドの間に存在する。抗菌活性及び／又は創傷治癒の促進などの所望の特性を保持する融合体（又はそのバリアント若しくは誘導体）が好ましいことが理解されるであろう。
融合体はまた、配列番号１～２３のうちのいずれか１つ以上による任意の他の１つ以上のポリペプチドに融合された、配列番号１～２３のうちのいずれか１つによるポリペプチドを含んでもよく、任意選択で、ポリペプチドは、リンカーを介して融合される。いくつかの実施形態において、融合体は、複数のポリペプチドであってもよいが、コラーゲンＶＩの完全なα３鎖をもたらさない。例えば、配列番号１～２３のうちのいずれか１つ以上の融合ポリペプチドは、コラーゲンＶＩの完全α３鎖のアミノ酸長よりも短いアミノ酸長であり得る。例えば、融合ポリペプチドのアミノ酸配列は、コラーゲンＶＩ型のα３鎖からの少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、４０、５０又はそれ以上の連続したアミノ酸を含有しなくてもよい。
融合体は、本発明の組成物の該ポリペプチドのうちの少なくとも１つに望ましい特徴を付与する更なる部分を含み得、例えば、この部分は、ポリペプチドのうちの少なくとも１つの検出若しくは単離、又はポリペプチドのうちの少なくとも１つの細胞取り込みを促進するのに有用であり得る。この部分は、当業者に周知のように、例えば、ビオチン部分、ストレプトアビジン部分、放射性部分、蛍光部分、例えば、小蛍光団又は緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）蛍光団であり得る。この部分は、当業者に既知のように、免疫原性タグ、例えば、Ｍｙｃタグであり得るか、又は当業者に既知のように、ポリペプチドの細胞取り込みを促進することができる親油性分子又はポリペプチドドメインであり得る。
当業者は、組成物のポリペプチドのうちの少なくとも１つが、例えば、ＰＥＧ化、アミド化、エステル化、アシル化、アセチル化及び／又はアルキル化によって修飾又は誘導体化される１つ以上のアミノ酸を含み得ることを理解するであろう。この部分は、以下からなる群から選択されるタグであってもよい：ＦＬＡＧタグ、Ｈｉｓタグ、ＧＳＴタグ、ＭＢＰタグ、Ｔｒｘタグ、ＮｕｓＡタグ、ＳＵＭＯタグ、ＳＥＴタグ、ＤｓｂＣタグ、Ｓｋｐタグ、Ｔ７ＰＫタグ、ＧＢ１タグ、ＺＺタグ、Ｓｔｒｅｐｔａｇ ＩＩ、ＨＡタグ、Ｓｏｆｔａｇ １、Ｓｏｆｔａｇ ３、Ｔ７タグ、Ｓタグ、及びｍＣｈｅｒｒｙタグ。
当該技術分野で理解されるように、ＰＥＧ化タンパク質は、腎クリアランス及びタンパク質分解の低下、毒性の低減、免疫原性の低減及び溶解性の増加を示し得る［Ｖｅｒｏｎｅｓｅ，Ｆ．Ｍ．ａｎｄ Ｊ．Ｍ．Ｈａｒｒｉｓ，Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ，２００２．５４（４）：ｐ．４５３－６．，Ｃｈａｐｍａｎ，Ａ．Ｐ．，Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ，２００２．５４（４）：ｐ．５３１－４５］（参照により本明細書に組み込まれる）。ＰＥＧ化は、第１のＰＥＧ化分子アスパラギナーゼ及びアデノシンデアミナーゼを含むいくつかのタンパク質ベースの薬物に用いられている［Ｖｅｒｏｎｅｓｅ，Ｆ．Ｍ．ａｎｄ Ｊ．Ｍ．Ｈａｒｒｉｓ，Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ，２００２．５４（４）：ｐ．４５３－６．，Ｖｅｒｏｎｅｓｅ，Ｆ．Ｍ．ａｎｄ Ｇ．Ｐａｓｕｔ，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ，２００５．１０（２１）：ｐ．１４５１－８］（参照により本明細書に組み込まれる）。
最大限に増加した半減期及び保持された生物学的活性を有する成功したＰＥＧ化タンパク質を得るためには、結果に影響を与える可能性のあるいくつかのパラメータが重要であり、考慮されるべきである。ＰＥＧ分子は異なる場合があり、タンパク質のＰＥＧ化に使用されてきたＰＥＧバリアントには、ＰＥＧ及びモノメトキシ－ＰＥＧが含まれる。加えて、それらは、直鎖状又は分枝状のいずれかであり得る［Ｗａｎｇ，Ｙ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ，２００２．５４（４）：ｐ．５４７－７０］（参照により本明細書に組み込まれる）。使用されるＰＥＧ分子のサイズは変化し得、１～４０ｋＤａのサイズ範囲のＰＥＧ部分は、タンパク質に連結されている［Ｗａｎｇ，Ｙ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ，２００２．５４（４）：ｐ．５４７－７０．，Ｓａｔｏ，Ｈ．，Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ，２００２．５４（４）：ｐ．４８７－５０４、Ｂｏｗｅｎ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐ Ｈｅｍａｔｏｌ，１９９９．２７（３）：ｐ．４２５－３２、Ｃｈａｐｍａｎ，Ａ．Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，１９９９．１７（８）：ｐ．７８０－３］（参照により本明細書に組み込まれる）。加えて、タンパク質に付着したＰＥＧ部分の数は変化し得、タンパク質に付着している１～６個のＰＥＧ単位の例が報告されている［Ｗａｎｇ，Ｙ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ，２００２．５４（４）：ｐ．５４７－７０．、Ｂｏｗｅｎ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐ Ｈｅｍａｔｏｌ，１９９９．２７（３）：ｐ．４２５－３２］（参照により本明細書に組み込まれる）。更に、コンジュゲーションのためのＰＥＧと様々な反応性基との間のリンカーの存在又は非存在が利用されてきた。したがって、ＰＥＧは、Ｎ末端アミノ基、又は反応性アミノ若しくはヒドロキシル基（Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ及びＴｙｒ）を有するアミノ酸残基に直接、又はγアミノ酪酸をリンカーとして使用することによって連結され得る。加えて、ＰＥＧは、カルボキシル（Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｃ末端）又はスルフヒドリル（Ｃｙｓ）基にカップリングされ得る。最後に、Ｇｌｎ残基は、酵素トランスグルタミナーゼを使用して特異的にＰＥＧ化されてもよく、ＰＥＧのアルキルアミン誘導体が記載されている［Ｓａｔｏ，Ｈ．，Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ，２００２．５４（４）：ｐ．４８７－５０４］（参照により本明細書に組み込まれる）。
ＰＥＧ化の程度を増加させると、インビボ半減期が増加することが示されている。しかしながら、当業者は、ＰＥＧ化プロセスが個々の基準で特定のタンパク質に対して最適化される必要があることを理解するであろう。
ＰＥＧは、参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２００５／００７１９７に記載されているように、天然に存在するジスルフィド結合でカップリングされ得る。ジスルフィド結合は、タンパク質の三次構造を損なわない化学架橋を付加することによって安定化することができる。これにより、ジスルフィド結合を含む２つの硫黄のコンジュゲーティングチオール選択性を利用して、ＰＥＧの部位特異的付着のための架橋を作成することができる。それによって、標的分子への付着のために残基をペプチドに操作する必要性は回避される。
様々な代替ブロックコポリマーはまた、参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２００３／０５９９７３に記載されるように共有結合されてもよい。治療用ポリマーコンジュゲートは、改善された熱特性、結晶化、接着、膨潤、コーティング、ｐＨ依存性コンフォメーション及び生体内分布を示すことができる。更に、それらは、飲作用によるコンジュゲートの細胞取り込み後の二次リソソームのタンパク質分解性及び酸性環境における生体活性の長期循環、放出、並びに大分子の特徴（例えば、生体液中の薬物溶解性の増加）によるより好ましい物理化学的特性を達成することができる。親水性及び疎水性ブロックを含むブロックコポリマーは、溶液中でポリマーミセルを形成する。ミセルが解離すると、個々のブロックコポリマー分子が安全に排泄される。
１つ以上のアミノ酸の化学誘導体は、官能性側基との反応によっても達成され得る。そのような誘導体化分子としては、例えば、遊離アミノ基が誘導体化されて、塩酸アミン、ｐ－トルエンスルホニル基、カルボキシベンゾキシ基、ｔ－ブチルオキシカルボニル基、クロロアセチル基又はホルミル基を形成している分子が挙げられる。遊離カルボキシル基は、塩、メチルエステル及びエチルエステル、又は他のタイプのエステル及びヒドラジドを形成するように誘導体化され得る。遊離ヒドロキシル基は、Ｏ－アシル又はＯ－アルキル誘導体を形成するために誘導体化され得る。また化学誘導体として、２０個の標準アミノ酸の天然に存在するアミノ酸誘導体を含有するペプチドも含まれる。例えば、４－ヒドロキシプロリンは、プロリンに置き換えられてもよく、５－ヒドロキシリジンは、リジンに置き換えられてもよく、３－メチルヒスチジンは、ヒスチジンに置き換えられてもよく、ホモセリンは、セリンに置き換えられてもよく、オルニチンは、リジンに置き換えられてもよい。誘導体はまた、必要な活性が維持される限り、１つ以上の付加又は欠失を含有するペプチドを含む。他の含まれる修飾は、アミド化、アミノ末端アシル化（例えば、アセチル化又はチオグリコール酸アミド化）、末端カルボキシルアミド化（例えば、アンモニア又はメチルアミンによる）などの末端修飾である。
ペプチド模倣化合物も有用であり得ることは、当業者によって更に理解されるであろう。したがって、「コラーゲンＶＩ型ポリペプチド」とは、抗菌活性を有する、及び／又は創傷治癒を促進することができるペプチド模倣化合物を含む。用語「ペプチド模倣体」は、治療薬としての特定のペプチドのコンフォメーション及び望ましい特徴を模倣する化合物を指す。
例えば、本発明のポリペプチドは、アミノ酸残基がペプチド（－ＣＯ－ＮＨ－）連結によって接合している分子だけでなく、ペプチド結合が逆転している分子も含む。そのようなｒｅｔｒｏ－ｉｎｖｅｒｓｏペプチド模倣体は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｍｅｚｉｅｒｅ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５９，３２３０－３２３７に記載されるものなどの、当該技術分野で既知の方法を使用して作製され得る。このアプローチは、側鎖の配向ではなく、骨格を含む変化を含む擬似ペプチドを作製することを伴う。ＣＯ－ＮＨペプチド結合の代わりにＮＨ－ＣＯ結合を含む、ｒｅｔｒｏ－ｉｎｖｅｒｓｅペプチドは、タンパク質分解に対してはるかに耐性がある。あるいは、本発明のコラーゲンＶＩ又はポリペプチドは、アミノ酸残基のうちの１つ以上が、従来のアミド連結の代わりに－ｙ（ＣＨ２ＮＨ）－結合によって連結されているペプチド模倣化合物であってもよい。
更なる代替において、ペプチド結合は、アミノ酸残基の炭素原子間の間隔を保持する適切なリンカー部分が使用されることを条件として、完全に分配されてもよく、リンカー部分が、ペプチド結合と実質的に同じ電荷分布及び実質的に同じ平坦性を有することが有利であり得る。
ポリペプチドのうちの少なくとも１つは、外タンパク質分解消化に対する感受性を低減するのを助けるために、そのＮ末端領域又はＣ末端領域で好都合にブロックされ得ることが理解されるであろう。
Ｄ－アミノ酸及びＮ－メチルアミノ酸などの種々の非コード又は修飾アミノ酸もまた、哺乳動物ペプチドを修飾するために使用されてきた。加えて、推定される生体活性コンフォメーションは、環化などの共有結合的修飾によって、又はラクタム若しくは他のタイプの架橋の組み込みによって安定化されてもよく、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｖｅｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９７８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７５：２６３６及びＴｈｕｒｓｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１１１：１６６を参照されたい。
多くの合成戦略の共通のテーマは、ペプチドベースのフレームワークへのいくつかの環状部分の導入である。環状部分は、ペプチド構造の立体配座空間を制限し、これはしばしば、特定の生物学的受容体に対するペプチドの特異性の増加をもたらす。この戦略の追加の利点は、ペプチドへの環状部分の導入がまた、細胞ペプチダーゼに対する感受性が低下したペプチドをもたらし得ることである。
したがって、第１の態様の組成物の例示的なポリペプチドは、末端システインアミノ酸を含む。そのようなポリペプチドは、末端システインアミノ酸中のメルカプチド基のジスルフィド結合形成によるヘテロデティック環状形態で、又は末端アミノ酸間のアミドペプチド結合形成によるホモデティック形態で存在し得る。上述のように、Ｎ末端領域システインとＣ末端領域システインとの間のジスルフィド又はアミド結合を介して小ペプチドを環化することは、タンパク質分解を減少させ、また構造の剛性を増加させることによって、直鎖ペプチドで時折観察される特異性及び半減期の問題を回避することができ、これにより、より高い特異性化合物が得られ得る。ジスルフィド結合によって環化されたポリペプチドは、依然としてタンパク質分解を受けやすい場合がある遊離アミノ及びカルボキシ末端を有し、一方、ペプチドは、Ｎ末端アミンとＣ末端カルボキシルとの間のアミド結合の形成によって環化され、したがって、遊離アミノ又はカルボキシ末端をもはや含有しない。したがって、本発明の組成物のペプチドは、Ｃ－Ｎ結合又はジスルフィド結合のいずれかによって連結され得る。
本発明は、ペプチドの環化方法によっていかなる方法でも限定されないが、その環状構造が任意の好適な合成方法によって達成され得るペプチドを包含する。したがって、ヘテロデティック連結は、ジスルフィド、アルキレン又はスルフィド架橋を介した形成を含み得るが、これらに限定されない。ジスルフィド、硫化物及びアルキレン架橋を含む環状ホモデティックペプチド及び環状ヘテロデティックペプチドの合成方法は、参照により本明細書に組み込まれる、ＵＳ５，６４３，８７２に開示されている。環化方法の他の例としては、クリック化学、エポキシド、アルデヒド－アミン反応による環化、並びに参照により本明細書に組み込まれる、ＵＳ６，００８，０５８に開示される方法が挙げられる。
環状安定化ペプチド模倣化合物の合成への更なるアプローチは、環閉鎖メタセシス（ＲＣＭ）である。この方法は、ペプチド前駆体を合成し、それをＲＣＭ触媒と接触させて、立体構造的に制限されたペプチドを得るステップを伴う。好適なペプチド前駆体は、２つ以上の不飽和Ｃ－Ｃ結合を含有してもよい。この方法は、固相ペプチド合成技法を使用して実行され得る。この実施形態において、固体支持体に係留された前駆体をＲＣＭ触媒と接触させ、次いで、生成物を固体支持体から切断して、立体構造的に制限されたペプチドを得る。
参照により本明細書に組み込まれる、Ｐｒｏｔｅａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，Ｂａｒｒｅｔｔ ａｎｄ Ｓｅｌｖｅｓｏｎ，ｅｄｓ．，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ（１９８６）においてＤ．Ｈ．Ｒｉｃｈにより開示された別のアプローチは、酵素阻害剤設計における遷移状態類似体概念の適用を通じてペプチド模倣体を設計することであった。例えば、スタリン（ｓｔａｌｉｎｅ）の二級アルコールは、ペプシン基質の解離しやすいアミド結合の四面体遷移状態を模倣することが知られている。
要約すると、末端修飾は、周知のように、プロテイナーゼ消化によって感受性を低減し、したがって、溶液中、特にプロテアーゼが存在し得る生物流体中のペプチドの半減期を延長するのに有用である。ポリペプチドの環化はまた、環化によって形成される安定な構造のために、及び環状ペプチドについて観察される生物学的活性を鑑みて、有用な修飾である。
したがって、一実施形態において、本発明の第１の態様の組成物のポリペプチドのうちの少なくとも１つは、直鎖状である。しかしながら、代替実施形態において、ポリペプチドは環状である。
当業者は、本発明の組成物のポリペプチドが、様々な長さであり得ることを理解するであろう。しかしながら、典型的には、ポリペプチドは、１０～２００アミノ酸長、例えば、１０～１５０、１５～１００、１５～５０、２０～４０、２５～３５、又は２８～３３アミノ酸長である。例えば、ポリペプチドは、少なくとも２０アミノ酸長であってもよい。ポリペプチドのうちの少なくとも１つは、少なくとも２８アミノ酸長であってもよい。ポリペプチドのうちの少なくとも１つは、最大で７６アミノ酸長、例えば最大で３６又は３３アミノ酸長であってもよい。
したがって、本発明の一実施形態において、本発明の組成物のポリペプチドは、より長いアミノ酸配列の一部として配列番号１～２３のうちのいずれか１つの特定の配列を含み得る。例えば、ポリペプチドのうちの少なくとも１つは、最大で２５、２８、３０、３３、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５又は１００アミノ酸長であるアミノ酸配列の一部として、配列番号１～２３（又はそのバリアント若しくは断片）のうちのいずれか１つを含んでもよい。更なる実施例において、ポリペプチドのうちの少なくとも１つは、配列番号１～２３（又はそのバリアント若しくは断片）のうちのいずれか１つを含んでもよく、ポリペプチドは、１０～２００アミノ酸長、例えば、２０～２００、２８～２００、３３～２００、２８～１５０、３３～１５０、２８～１００、３３～１００、２８～５０、３３～５０、２８～４０、３３～４０、又は２８～３３アミノ酸長である。
一実施形態において、コラーゲンＶＩ又は組成物のポリペプチドのうちの少なくとも１つは、組換えポリペプチドであるか、又はそれを含む。そのような組換えポリペプチドの生成のための好適な方法は、原核又は真核宿主細胞における発現など、当該技術分野において周知である（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ＆Ｒｕｓｓｅｌｌ，２０００，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、文献が参照により本明細書に組み込まれる関連開示を参照）。
本発明の組成物のコラーゲンＶＩ又はポリペプチドはまた、ウサギ網状赤血球溶解物又は小麦胚芽溶解物（Ｐｒｏｍｅｇａから入手可能）などの市販のインビトロ翻訳系を使用して生成することもできる。好ましくは、翻訳系は、ウサギ網状赤血球溶解物である。好都合には、翻訳系は、ＴＮＴ転写翻訳系（Ｐｒｏｍｅｇａ）などの転写系にカップリングされ得る。この系は、翻訳と同じ反応でコードＤＮＡポリヌクレオチドから好適なｍＲＮＡ転写物を生成する利点を有する。
当業者は、本発明の組成物のコラーゲンＶＩ又はポリペプチドが、代替的に、例えば、周知の液相又は固相合成技法（ｔ－Ｂｏｃ又はＦｍｏｃ固相ペプチド合成など）を使用して、人工的に合成され得ることを理解するであろう。例えば、ポリペプチドは、参照により本明細書に組み込まれる、Ｓｏｌｉｄ－Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（１９９７）Ｆｉｅｌｄｓ，Ａｂｅｌｓｏｎ＆Ｓｉｍｏｎ（Ｅｄｓ），Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（ＩＳＢＮ：０－１２－１８２１９０－０）に記載のように合成され得る。
一実施形態において、組成物は、ポリリジンを更に含む。いくつかの実施形態において、組成物は、ポリリジンを含まない。好適なポリリジン成分は、ＰＣＴ／ＥＰ２０２０／０６８０４７において更に定義されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書で使用する場合、「ポリリジン」は、好ましくはペプチド結合によって接合された、リジン単量体単位のポリマーである任意の化合物を含む。例えば、ポリリジンは、ε又はα炭素位置のいずれかで重合によって一緒に接合された３つ以上のリジン残基を含むか、又はそれらからなる任意の化合物を含んでもよい。
「ポリマー」とは、化学結合によって一緒に接合した複数の単量体単位からなる物質を意味する。ポリマーは、重合される分子の種類及び重合の位置に応じて、分子の直鎖又は三次元ネットワークのいずれかを形成することができる。
「重合」とは、複数の単量体単位が化学結合を形成し、直鎖状ポリマー鎖又は三次元分子ネットワークの形成をもたらす、ポリマーを形成するために使用されるプロセスを指す。本明細書に記載のリジンなどのアミノ酸の重合の場合、重合は、アミノ基とカルボン酸基との反応によるアミノ酸単量体間のペプチド結合の形成を伴う。ペプチド結合の形成は、当該技術分野において周知のプロセスである。
ポリリジンは、使用されるリジンのエナンチオマー（すなわち、Ｌ又はＤリジン）及び重合の炭素位置（すなわち、α又はε）の両方において異なる場合がある。
リジンは、Ｌ形態及びＤ形態と呼ばれるキラル中心の周りのＲ基の配置が異なる、２つの異なるエナンチオマーとして見出される。他の形態の命名エナンチオマーが、当該技術分野で使用されるが（例えば、Ｓ－リジンがＬ－リジンに対応し、Ｒ－リジンがＤ－リジンに対応するＲ及びＳ表記法）、Ｌ／Ｄ表記法は、依然としてアミノ酸に関して最も一般的に使用されている。Ｌ－アミノ酸とＤ－アミノ酸との違いは、当該技術分野において周知である。
本発明のポリリジンは、Ｌ－リジン及びＤ－リジン単量体単位の両方を含むか、若しくはそれからなるポリマーを含み得るか、又はＬ－リジン若しくはＤ－リジン単量体単位のみを含み得るか、若しくはそれからなり得、この場合、ポリマーは、それぞれ、ポリ－Ｌ－リジン（ＰＬＬ）及びポリ－Ｄ－リジン（ＰＤＬ）と称される。
一実施形態において、ポリリジンは、ポリ－Ｌ－リジン（ＰＤＬ）及び／又はポリ－Ｄ－リジン（ＰＬＬ）を含むか、又はそれらからなる。
ＰＬＬ／ＰＤＬなどの光学異性体は、平面偏光（単一平面内を移動する光）に対して異なる効果を有する。一方の異性体は、この平面偏光の平面を時計回りに回転させ、他方は、反時計回りに回転させる。このようにして異性体を互いに区別することができる。
更なる実施形態において、ポリリジンは、ポリ－Ｌ－リジンを含むか、又はそれからなり、任意選択で、ポリリジンを構成する単量体単位の１００％は、Ｌ－リジンである。
別の実施形態において、ポリリジンは、ポリ－Ｄ－リジンを含むか、又はそれからなり、任意選択で、ポリリジンを構成する単量体単位の１００％は、Ｄ－リジンである。
ＰＬＬ及びＰＤＬの互換性は、両方とも同じ電荷関連特性を有するため、当該技術分野において周知である。例えば、Ｂａｎｋｅｒ，Ｇ．ａｎｄ Ｇｏｓｌｉｎ，Ｋ．，Ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ Ｎｅｒｖｅ Ｃｅｌｌｓ，ＭＩＴ Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ｐ．６５（１９９１）を参照されたい。
一実施形態において、ポリリジンは、Ｌ－リジン及びＤ－リジン単量体単位の混合物を含んでもよい。例えば、リジン単量体の５０％がＬ－リジンであり得、５０％がＤ－リジンであり得るか、又はＤ－リジン：Ｌ－リジンの代替比、例えば、９０：１０、８０：２０、７０：３０、６０：４０、５０：５０、４０：６０、３０：７０、２０：８０、１０：９０が使用され得る。
リジンのＲ基もアミノ基（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）を含有するため、α炭素又はε炭素のいずれかを伴う、２つの可能な重合位置が存在する。「α炭素」とは、アミン及びカルボン酸基の両方が付着するアミノ酸の骨格内の炭素原子を意味する。次いで、リジンＲ基中の炭素原子を順次標識する（すなわち、α炭素に付着したＲ基の第１の炭素は、β炭素と呼ばれ、それぞれ、炭素鎖中のγ炭素、δ炭素及びε炭素原子が続く）。したがって、「ε炭素」とは、アミン基が付着しているリジンＲ基の末端炭素を意味する。
一実施形態において、本発明の組成物のポリリジンは、ε炭素位置で重合される。代替実施形態において、ポリリジンは、α炭素位置で重合される。
一実施形態において、重合の１００％は、ε炭素位置で発生する。代替実施形態において、ポリリジンは、同じ分子内のα位置及びε位置の両方で重合されたリジン単量体単位を含み、例えば、重合の５０％は、リジン単量体単位のα位置で発生し得、重合の５０％は、ε位置で発生し得る。α又はε位置での重合はまた、異なる比で、例えば、以下のα：ε重合位置の比、１００：０、９０：１０、８０：２０、７０：３０、６０：４０、５０：５０、４０：６０、３０：７０、２０：８０、１０：９０、０：１００で発生し得る。
組成物のポリリジンは、異なるタイプのポリリジンの混合物であり得る。ある特定の実施形態において、組成物は、以下のεポリ－Ｌ－リジン、αポリ－Ｌ－リジン、εポリ－Ｄ－リジン、αポリ－Ｄ－リジンのうちのいずれか１つの組み合わせを含み得る。異なる形態のポリリジンは、組成物中に異なる割合で見出され得、これは、問題の表面へのポリペプチドの最適な結合を達成するために調整され得る。例えば、ある特定の実施形態において、組成物は、５０％のεポリＬ－リジン及び５０％のεポリＤ－リジンを含み得る。組成物は、等量又は不等量のポリリジンの４つ全てのバリアントを含み得る。
一実施形態において、ポリリジンは、ポリ－Ｌ－リジン（ＰＬＬ）であり、リジン単量体のε位で重合される。
ある特定の実施形態において、ポリリジンは修飾されてもよい。例えば、ポリリジンを構成するリジン単量体は、重合前に修飾されてもよく、又はポリリジン自体は、重合後に修飾されてもよい。
ポリリジン分子は、それらの分子量が異なり得るポリマーである。市販の形態のポリリジンは、しばしば、単一の分子量としてではなく、一連の分子量のポリマーを含む組成物として見出される。典型的には、ポリマーの分子量のこの範囲は、３０，０００Ｄａ～３００，０００Ｄａである。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物のポリリジンは、３０，０００Ｄａ～３００，０００Ｄａの範囲の分子量を有する。他の実施形態において、ポリリジンは、５０，０００～２５０，０００Ｄａ、７０，０００～２００，０００Ｄａ、又は１００，０００～１５０，０００Ｄａの範囲の分子量を有する。一実施形態において、ポリリジン分子は、３０，０００～７０，０００Ｄａの範囲の分子量を有する。一実施形態において、ポリリジンは、ポリ－Ｌ－リジンであり、ポリ－Ｌ－リジン分子は、３０，０００～７０，０００Ｄａの範囲の分子量を有する。
ポリリジンはまた、一緒に重合されるリジン単量体単位の数に関して分類され得る。リジンの分子量はおよそ１４６Ｄａであるため、分子量範囲３０，０００Ｄａ～３００，０００Ｄａのポリリジンのポリマーは、およそ２００～２０５４個のリジン単量体単位で構成される。したがって、いくつかの実施形態において、本明細書に記載の組成物のポリリジンは、２００～２０５４個のリジン単量体単位で構成される。他の実施形態において、ポリリジンは、ポリ－Ｌ－リジンであり、分子は、２００～２０５４個のＬ－リジン単量体単位で構成される。
組成物中のポリリジン分子の分子量の範囲を変化させると、各ポリマー分子を構成するリジン残基の数が変化することが、当業者には明らかであろう。したがって、他の実施形態において、本明細書に記載の組成物のポリリジン分子は、３４２～１７１２個のリジン単量体、４７９～１３６９個のリジン単量体単位、６８４～１０２７個のリジン単量体単位で構成される。一実施形態において、本明細書に記載の組成物のポリリジン分子は、３０，０００～７０，０００Ｄａの分子量範囲に対応する２００～４８０個のリジン単量体単位で構成される。他の実施形態において、ポリリジンは、ポリ－Ｌ－リジンであり、分子は、２００～４８０個のリジン単量体単位で構成される。
更なる実施形態において、組成物は、生物学的及び／又は生分解性材料などの足場材料を追加として含み得る。足場材料は、コラーゲン、例えば、コラーゲンＩを含み得るか、又はそれからなり得る。いくつかの実施形態において、コラーゲンは、他のタンパク質、多糖類及び／又はペプチドを更に含む。いくつかの実施形態において、足場は、ウシコラーゲンＩから調製される。いくつかの実施形態において、足場は、ポリリジンを含まない。いくつかの実施形態において、足場材料は、ウシ天然コラーゲンＩ原線維を含む。
足場を含む組成物は、それ自体が足場として解釈され得る。したがって、更なる実施形態において、組成物を含む足場は、本明細書に記載のような使用のためのものであり得る。そのような足場は、医療デバイスであり得る。足場は、本発明のエフェクター分子（すなわち、ペプチド）の担体であり得る。
本明細書に記載される組成物は、臨床医学及び／又は獣医学での使用のために製剤化され得ることが理解されるであろう。
したがって、本発明の第２の態様は、薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、担体、緩衝液又はアジュバントとともに、本発明の第１の態様による組成物を含む薬学的組成物を提供する。更なる実施形態において、本明細書に記載の個々のペプチドは、互いに連続して、その後に、及び／又は同時に、共投与するための別個の薬学的組成物として製剤化され得る。
本明細書で使用する場合、「薬学的組成物」は、微生物及び微生物感染症に関連する障害及び状態の治療又は予防に使用するための治療上有効な製剤を意味する。
他のペプチド、低分子量免疫調節剤、受容体アゴニスト及びアンタゴニスト、並びに抗菌剤などの追加の化合物もまた、薬学的組成物中に含まれ得る。他の例としては、ＥＤＴＡ、クエン酸塩、ＥＧＴＡ又はグルタチオンなどのキレート剤が挙げられる。
薬学的組成物は、十分に貯蔵安定であり、ヒト及び動物への投与に好適である、当該技術分野において既知の方法で調製され得る。薬学的組成物は、例えば、凍結乾燥、スプレー乾燥、スプレー冷却を介して、又は超臨界粒子形成からの粒子形成の使用によって、凍結乾燥されてもよい。
「薬学的に許容される」とは、有効成分、すなわち、組成物の抗菌ポリペプチドの生物学的活性の有効性を低下させない無毒性材料を意味する。そのような薬学的に許容される緩衝液、担体又は賦形剤は、当該技術分野において周知である（参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ（１９９０）及びｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，３ｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｋｉｂｂｅ，Ｅｄ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ（２０００）を参照）。
「緩衝液」という用語は、ｐＨを安定化することを目的とした酸塩基混合物を含有する水溶液を意味することを意図する。緩衝液の例は、Ｔｒｉｚｍａ、Ｂｉｃｉｎｅ、Ｔｒｉｃｉｎｅ、ＭＯＰＳ、ＭＯＰＳＯ、ＭＯＢＳ、Ｔｒｉｓ、Ｈｅｐｅｓ、ＨＥＰＢＳ、ＭＥＳ、リン酸塩、炭酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、グリコール酸塩、乳酸塩、ホウ酸塩、ＡＣＥＳ、ＡＤＡ、酒石酸塩、ＡＭＰ、ＡＭＰＤ、ＡＭＰＳＯ、ＢＥＳ、ＣＡＢＳ、カコジル酸塩、ＣＨＥＳ、ＤＩＰＳＯ、ＥＰＰＳ、エタノールアミン、グリシン、ＨＥＰＰＳＯ、イミダゾール、イミダゾール乳酸、ＰＩＰＥＳ、ＳＳＣ、ＳＳＰＥ、ＰＯＰＳＯ、ＴＡＰＳ、ＴＡＢＳ、ＴＡＰＳＯ及びＴＥＳである。
「希釈剤」という用語は、薬学的調製物中のペプチドを希釈する目的で、水性又は非水性溶液を意味することが意図される。希釈剤は、生理食塩水、水、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、エタノール又は油（サフラワー油、トウモロコシ油、ピーナッツ油、綿実油若しくはゴマ油など）のうちの１つ以上であってもよい。
「アジュバント」という用語は、組成物のペプチドの生物学的効果を増加させるために製剤に添加される任意の化合物を意味することを意図している。アジュバントは、異なるアニオン、例えば、限定されないが、異なるアシル組成物のフッ化物、塩化物、臭化物、ヨウ化物、チオシアネート、亜硫酸塩、水酸化物、リン酸塩、炭酸塩、乳酸塩、グリコール酸塩、クエン酸塩、ホウ酸塩、酒石酸塩、及び酢酸塩を有するコロイド銀、又は亜鉛、銅、若しくは銀塩のうちの１つ以上であってもよい。アジュバントはまた、ＰＨＭＢなどのカチオン性ポリマー、カチオン性セルロースエーテル、カチオン性セルロースエステル、脱アセチル化ヒアルロン酸、キトサン、カチオン性デンドリマー、ポリ（ビニルイミダゾール）などのカチオン性合成ポリマー、並びにポリヒスチジン、ポリリジン、ポリアルギニン、及びこれらのアミノ酸を含有するペプチドなどのカチオン性ポリペプチドであってもよい。
賦形剤は、炭水化物、ポリマー、脂質及びミネラルのうちの１つ以上であってもよい。炭水化物の例としては、例えば、凍結乾燥を容易にするために、組成物に添加される、ラクトース、スクロース、マンニトール、及びシクロデキストリンが挙げられる。ポリマーの例は、デンプン、セルロースエーテル、セルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、エチルヒドロキシエチルセルロース、エチルセルロース、メチルセルロース、プロピルセルロース、アルギン酸塩、カラギーナン、ヒアルロン酸及びその誘導体、ポリアクリル酸、ポリスルホネート、ポリエチレングリコール／ポリエチレンオキシド、ポリエチレンオキシド／ポリプロピレンオキシドコポリマー、異なる程度の加水分解のポリビニルアルコール／ポリビニルアセテート、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）又は様々な組成物を有するそのコポリマー、並びにポリビニルピロリドン（全てが異なる分子量）であり、これらは、例えば、粘度制御のため、生体接着を達成するため、又は有効成分（Ａ～Ｃに同様に適用する）を化学分解及びタンパク質分解から保護するために組成物に添加される。脂質の例は、脂肪酸、リン脂質、モノ－、ジ－、及びトリグリセリド、セラミド、スフィンゴ脂質及び糖脂質（全てが異なるアシル鎖長及び飽和度）、卵レシチン、大豆レシチン、水素化卵及び大豆レシチンであり、これらは、ポリマーに対するものと同様の理由で組成物に添加される。ミネラルの例は、タルク、酸化マグネシウム、酸化亜鉛及び酸化チタンであり、これらを組成物に添加して、液体蓄積の低減又は有利な顔料特性などの利点を得る。
薬学的組成物はまた、キシリトール、ソルビトール、マンニトール、ラクチチオール、イソモルト、マルチトール若しくはキシロシドなどの１つ以上の単糖類若しくは二糖類、及び／又はモノラウリンなどのモノアシルグリセロールを含有し得る。担体の特徴は、投与経路に依存する。１つの投与方法は、局所投与である。例えば、局所投与の場合、好ましい担体は、活性ペプチドを含む乳化クリームであるが、ある特定の石油／ミネラルベース及び植物ベースの軟膏、並びにポリマーゲル、液晶相及びマイクロエマルジョンなどの他の一般的な担体を使用することができる。
薬学的組成物は、第１の態様の組成物のポリペプチドのうちの１つ以上、例えば、該ペプチドの１つ、２つ、３つ、４つ以上の異なるペプチド及び／又は異なる断片、バリアント若しくは誘導体を含み得ることが理解されるであろう。例えば、第１の態様の組成物は、配列番号１～２３のうちのいずれか１つに記載のポリペプチド、及び該配列番号１～２３のポリペプチド断片、バリアント及び／又は誘導体を含んでもよい。異なるペプチドの組み合わせを使用することによって、創傷治癒及び／又は抗菌効果の促進を増加させることができる。いくつかの実施形態において、組成物は、配列番号６に対応するポリペプチドを含まない。
上記のように、ポリペプチドのうちの少なくとも１つは、塩、例えば、塩酸、硫酸、硝酸、臭化水素酸、リン酸、過塩素酸、チオシアン酸、ホウ酸などの無機酸、又はギ酸、酢酸、ハロ酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、クエン酸、酒石酸、コハク酸、グルコン酸、乳酸、マロン酸、フマル酸、アントラニル酸、安息香酸、シンナミン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、スルファン酸などの有機酸を有する酸付加物として提供され得る。一価のナトリウム、カリウム、又は二価の亜鉛、マグネシウム、銅カルシウムなどの無機塩（全てが対応するアニオンを有する）を添加して、抗菌組成物の生物学的活性を改善することができる。
本発明の薬学的組成物はまた、ポリペプチドが、他の薬学的に許容される担体に加えて、ミセル、不溶性単層及び液晶として凝集形態で存在する脂質などの両親媒性剤と組み合わされるリポソームの形態であってもよい。リポソーム製剤に好適な脂質としては、限定されないが、モノグリセリド、ジグリセリド、スルファチド、リゾレシチン、リン脂質、サポニン、胆汁酸等が挙げられる。好適な脂質はまた、血流循環時間を延長するために、極性ヘッド基中のポリ（エチレングリコール）によって修飾された上記脂質を含む。そのようなリポソーム製剤の調製は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、ＵＳ４，２３５，８７１に見出すことができる。
本発明の薬学的組成物はまた、生分解性マイクロスフェアの形態であってもよい。ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ＰＬＡ及びＰＧＡのコポリマー（ＰＬＧＡ）又はポリ（カプロラクトン）（ＰＣＬ）、並びにポリ無水物などの脂肪族ポリエステルは、マイクロスフェアの生成において生分解性ポリマーとして広く使用されている。そのようなマイクロスフェアの調製は、参照により本明細書に組み込まれる、ＵＳ５，８５１，４５１及びＥＰ２１３，３０３に見出すことができる。
本発明の薬学的組成物はまた、界面活性剤及びブロックコポリマー、好ましくは、血流循環時間を延長するためのポリ（エチレンオキシド）部分を含有するものによって形成されるミセル系で製剤化され得る。
本発明の薬学的組成物はまた、デンプン、セルロースエーテル、セルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、エチルヒドロキシエチルセルロース、エチルセルロース、メチルセルロース、プロピルセルロース、アルギン酸塩、キトサン、カラギーナン、ヒアルロン酸及びその誘導体、ポリアクリル酸、ポリビニルイミダゾール、ポリスルホネート、ポリエチレングリコール／ポリエチレンオキシド、ポリエチレンオキシド／ポリプロピレンオキシドコポリマー、異なる程度の加水分解のポリビニルアルコール／ポリビニルアセテート、並びにポリビニルピロリドンなどのポリマーが、ペプチドを含有する溶液の増粘に使用される、ポリマーゲルの形態であってもよい。ポリマーはまた、ゼラチン又はコラーゲンも含み得る。
あるいは、組成物のコラーゲンＶＩ又はポリペプチドは、生理食塩水、水、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、エタノール若しくは油（サフラワー油、トウモロコシ油、ピーナッツ油、綿実油若しくはゴマ油など）、トラガントガム、及び／又は様々な緩衝液中に溶解され得る。
薬学的組成物はまた、抗菌ポリペプチドの作用の増強のため、及び／又は創傷治癒ポリペプチドの作用の増強のためのイオン及び定義されたｐＨを含み得る。
本発明の上記組成物は、例えば、本明細書の他の箇所に開示されるように、滅菌などの従来の薬学的操作に供されてもよく、及び／又は防腐剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、緩衝液、充填剤等の従来のアジュバントを含有してもよい。
当業者は、本発明の薬学的組成物が、局所的又は全身的に投与され得ることを理解するであろう。投与経路には、局所（例えば、眼）、眼、鼻、肺、口腔、非経口（静脈内、皮下、及び筋肉内）、経口、膣並びに直腸が含まれる。また、インプラントからの投与も可能である。好適な調製形態は、例えば、顆粒、粉末、錠剤、コーティング錠剤、（マイクロ）カプセル、坐剤、シロップ、エマルジョン、マイクロエマルジョン（水、油及び界面活性剤からなる光学的等方性熱力学的安定系として定義される）、液晶相（長距離秩序であるが短距離無秩序（例としては、水又は油の連続のいずれかのラメラ相、六角相及び立方相が挙げられる）を特徴とする系として定義される）、又はそれらの分散した対応物、ゲル、軟膏、分散液、懸濁液、クリーム、エアロゾル、液滴若しくは又はアンプル形態の注射可能な溶液、並びに活性化合物の長期放出を伴う調製物であり、その調製賦形剤、希釈剤、アジュバント又は担体は、上記のように習慣的に使用される。薬学的組成物はまた、包帯、絆創膏又は縫合糸などで提供され得る。
特定の実施形態において、薬学的組成物は、経口投与、非経口投与又は局所投与に好適である。例えば、薬学的組成物は、局所投与（例えば、スプレー、ローション、ペースト又はドロップ等の形態の眼科投与）に好適であり得る。
薬学的組成物は、薬学的に有効な用量で患者に投与される。「薬学的に有効な用量」とは、それが投与される状態に関連して所望の効果をもたらすのに十分な用量を意味する。正確な用量は、化合物の活性、投与方法、障害の性質及び重症度、患者の年齢及び体重に依存し、異なる用量が必要とされ得る。用量の投与は、個々の用量単位の形態での単回投与、又は他のいくつかのより小さい用量単位の両方によって、また、特定の間隔での細分化された用量の複数回投与によって実行され得る。
本発明の薬学的組成物は、単独で、又は他の治療剤、例えば、追加の抗生物質、抗炎症剤、免疫抑制剤、血管活性剤及び／又は消毒剤（例えば、抗菌剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、及び抗寄生虫剤）と組み合わせて投与されてもよい。好適な追加の抗生剤の例としては、ペニシリン、セファロスポリン、カルバセフェム、セファマイシン、カルバペネム、モノバクタム、アミノグリコシド、グリコペプチド、キノロン、テトラサイクリン、マクロライド、及びフルオロキノロンが挙げられる。消毒剤としては、ヨウ素、銀、銅、クロルヘキシジン、ポリヘキサニド及び他のビグアニド、キトサン、酢酸、及び過酸化水素が挙げられる。同様に、薬学的組成物はまた、ステロイド及びマクロラクタム誘導体などの抗炎症薬を含有し得る。
そのような追加の治療剤は、同じ薬学的組成物の一部として組み込まれ得るか、又は別々に投与され得る。追加の治療剤は、第２の態様の薬学的組成物の投与前、投与後又は投与中のいずれかに、同時に、連続して及び／又は別々に投与することができる。
当業者は、本発明の組成物、若しくはその薬学的組成物が、ヒト若しくは動物の体内への移植若しくは適用が微生物剤による感染症のリスクに関連している医療デバイス及び他の製品に適用され得ること、並びに／又は本発明の組成物、若しくはその薬学的組成物が、ヒト若しくは動物の体内への移植又は適用が創傷治癒を促進する必要性に関連している医療デバイス及び他の製品に適用され得ることを理解するであろう。
したがって、本発明の第３の態様は、本発明の第１の態様による組成物又は本発明の第２の態様による薬学的組成物でコーティング、含浸、混和されるか、又は他の方法で会合される、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、又はそれらに使用するための材料を提供する。
そのような医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、又はそれらに使用するための材料は、人体又はその構成要素（例えば、血液）と接触し得る。
一実施形態において、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、又はそれらに使用するための材料は、バイパス手術、体外循環、創傷ケア及び／又は透析に使用するためのものである。
組成物は、縫合糸、プロテーゼ、インプラント、創傷包帯、カテーテル、レンズ、皮膚移植片、皮膚代替物、フィブリン糊又は包帯等でコーティング、塗装、スプレーされ得るか、又は他の方法で適用若しくは混和されてもよい。そうすることで、組成物は、改善された抗菌性及び／又は創傷治癒特性をデバイス又は材料に付与することができる。
「インプラント」とは、以下を含む：
（ａ）カテーテル（例えば、血管内若しくは尿路使用のための）、
（ｂ）ステント（例えば、冠状動脈ステント）、
（ｃ）シャント（例えば、脳脊髄シャント）、
（ｄ）挿管又は気管切開チューブ、
（ｅ）眼科用デバイス（例えば、コンタクトレンズ、強膜バックル及び眼内レンズ）、
（ｆ）関節プロテーゼ（すなわち、関節形成術及び他の整形外科用デバイスのインプランテーション）、
（ｇ）人工心臓弁、
（ｈ）乳房インプラント、
（ｉ）インプラント可能な薬物送達デバイス（例えば、能動ポンプ及び受動固体インプラント）。
いくつかの好ましい実施形態において、インプラントは、プロテーゼ又は他の整形外科用デバイスである。いくつかの好ましい実施形態において、プロテーゼは、膝関節プロテーゼである。他の好ましい実施形態において、プロテーゼは、股関節プロテーゼである。そのようなインプラントの更なる例は、当該技術分野において周知である。更なる好ましい実施形態において、インプラントは、チタン若しくはチタン合金、及び／又は１つ以上のセラミック複合体を含むか、又はそれらからなるプロテーゼ若しくは他の整形外科用デバイスである。一実施形態において、プロテーゼ又は他の整形外科用デバイスは、チタン若しくはチタン合金、及び／又は１つ以上のセラミック複合体を含むか、又はそれらからなり、本明細書に定義される組成物又は薬学的組成物でコーティングされる。
他の実施形態において、インプラントは、骨置換デバイス、骨固定デバイス、骨プレート、人工股関節の茎、人工臓器、人工椎間板、脊髄棒、顎顔面プレート、ステントグラフト、経皮デバイス及びペースメーカーから選択される。一実施形態において、これらのインプラントは、チタン若しくはチタン合金、及び／又は１つ以上のセラミック複合体を含むか、又はそれらからなる。更なる実施形態において、インプラントは、チタン若しくはチタン合金、及び／又は１つ以上のセラミック複合体を含むか、又はそれらからなり、本明細書に定義される組成物又は薬学的組成物でコーティングされる。
一実施形態において、デバイス又は材料は、本発明の組成物又は薬学的組成物（又はそのポリペプチド成分のうちの少なくとも１つ）でコーティングされる。「コーティングされた」とは、組成物又は薬学的組成物を、デバイス又は材料の表面に適用することを意味する。したがって、デバイス又は材料は、本発明の組成物又は薬学的組成物（又はそのポリペプチドのうちの少なくとも１つ）を含む溶液で塗装又はスプレーされ得る。あるいは、デバイス又は材料は、本発明の組成物又は薬学的組成物を含む溶液のリザーバに浸漬され得る。
一実施形態において、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、又はそれらに使用するための材料は、本明細書に定義される組成物又は薬学的組成物でコーティングされる。
代替の実施形態において、デバイス又は材料は、本発明の薬学的組成物（又はコラーゲンＶＩ若しくはそのポリペプチドのうちの少なくとも１つ）で含浸される。「含浸される」とは、薬学的組成物が、それが全体にわたって分布するように、デバイス又は材料と組み込まれるか、又は他の方法で混合されることを意味する。
例えば、デバイス又は材料を、本発明の組成物又は薬学的組成物を含む溶液中で４℃で一晩インキュベートすることができる。あるいは、本発明の組成物又は薬学的組成物は、蒸発によって、又は室温でのインキュベーションによって、デバイス又は材料表面に固定化され得る。更なる代替として、本発明の組成物又は薬学的組成物（又は実際にはポリペプチド）は、デバイス又は材料表面上に固定化されてもよく、更なる組成物又は薬学的組成物は固定化されない。組成物、薬学的組成物及び／又はポリペプチドが別々に投与される場合（例えば、１つが固定化され、他方が固定化されない）、それらの投与は、各々（又は２つより多い場合、全て）を宿主生体材料界面に共同で曝露するような方法であってもよい。
更なる代替の実施形態において、本発明の組成物のポリペプチドは、例えば、デバイス又は材料の外面において、デバイス又は材料に共有結合される。したがって、ポリペプチド上の適切な官能基と、デバイス又は材料上の官能基との間に共有結合が形成される。例えば、ポリペプチドのポリマー支持体への共有結合のための方法としては、ジアゾニウム中間体を介した、ペプチド結合の形成による、結合タンパク質上のフェノール、アミン及びスルフィドリル基のアルキル化による、ポリ官能性中間体（例えば、グルタルジアルデヒド）を使用することによる、並びに例えば、ジアルコキシシランとトリアルコキシシランとの反応が多くの異なる官能基とのガラス表面の誘導体化を可能にする、シリル化ガラス又は石英を使用する他の雑多な方法による共有結合が挙げられる。詳細については、参照により本明細書に組み込まれる、Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｍ．，Ｈａｍｍｏｎｄｓ，Ｅ．Ｊ．ａｎｄ Ｌｅａｃｈ，Ｃ．Ｋ．（１９９３）Ｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｂｉｏｃａｔａｌｙｓｔｓ（ＢＩＯＴＯＬ ＳＥＲＩＥＳ），ｐｐ．７５－１１８，Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ－Ｈｅｉｎｅｍａｎｎによる酵素固定化を参照されたい。また、参照により本明細書に組み込まれる、‘Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ｉｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ’と題されたＨｕｂｂｅｌｌ，Ｊ．Ａ．（１９９５）Ｓｃｉｅｎｃｅ １３：５６５－５７６によるレビュー記事も参照されたい。
一実施形態において、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、又は材料は、ポリマーを含むか、又はそれからなる。好適なポリマーは、ポリエステル（例えば、様々な組成物のポリ乳酸、ポリグリコール酸又はポリ乳酸－グリコール酸コポリマー）、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリ尿素、ポリカーボネート、ポリウレタン、ポリアミド）及び多糖類材料（例えば、架橋アルギン酸塩、ヒアルロン酸、カラギーナン、ゼラチン、デンプン、セルロース誘導体）からなる群から選択され得る。
代替的に、又は加えて、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、又は材料は、金属（例えば、チタン、ステンレス鋼、金、チタン）、金属酸化物（酸化ケイ素、酸化チタン）及び／又はセラミック（アパタイト、ヒドロキシアパタイト）若しくはセラミック複合体を含み得るか、又はそれらからなる。
一実施形態において、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料は、チタンを含むか、又はそれからなる。一実施形態において、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料は、１つ以上のセラミック複合体を含むか、又はそれからなる。
「チタンを含むか、又はそれからなる」とは、純粋なチタンのみで作製された材料、及び他の元素と組み合わせてチタンを含む材料を含む。例えば、「チタンを含むか、又はそれからなる」とは、チタン合金（例えば、ニッケル、バナジウム及び／又はアルミニウムを有するチタンの合金）であるか、又はそれを含む材料も含む。また、チタン及び／若しくは１つ以上のチタン合金を含むか、又はそれらからなる少なくとも１つの構成要素を有する、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品及びそれらに使用するための材料も含む。また、チタンを含むか、又はそれからなるコーティング、例えば、チタン又は窒化チタンを含むか、又はそれからなるコーティングを有する、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品及びそれらに使用するための材料も含む。したがって、本明細書におけるチタンについての言及はまた、チタン合金についての言及を含むことも意味することは、当業者には明らかであろう。
したがって、一実施形態において、チタンは、商業的に純粋なチタン（ＣＰ Ｔｉ）である。あるいは、特定の実施形態において、チタンは、合金、例えば、Ｔｉ６Ａｌ４Ｖ合金又はニッケル－チタン合金（ニチノール）である。
「１つ以上のセラミック複合体を含むか、又はそれらからなる」とは、セラミック複合体のみで作製された材料、及び他の要素と組み合わせたセラミック複合体を含む材料を含む。また、１つ以上のセラミック複合体を含むか、又はそれらからなる少なくとも１つの構成要素を有する、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品及びそれらに使用するための材料も含む。また、１つ以上のセラミック複合体を含むか、又はそれらからなるコーティングを有する、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品及びそれらに使用するための材料も含む。
一実施形態において、セラミック複合体は、リン酸カルシウム、ヒドロキシアパタイト、硫酸カルシウム二水和物、ジルコニア、酸化アルミニウム、コーディエライト、フォルステライト、窒化ケイ素、パイロスタット、ステアタイト及びスーパーパイロスタットからなる群から選択され得る。
そのような材料は、巨視的固体／モノリスの形態であってもよく、化学的又は物理化学的架橋ゲルとして、多孔質材料として、又は粒子としてであってもよい。
本発明の医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、及び材料は、当該技術分野で周知の方法を使用して作製され得る。
ある特定の実施形態において、本発明の第１の態様の組成物は、生物学的足場、例えば、コラーゲン足場、例えば、コラーゲンＩ足場上にコーティングされる。一実施形態において、コラーゲン足場は、医療デバイス、インプラント若しくは創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料として直接使用することができる。他の実施形態において、コラーゲン足場は、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料の構成要素である。例えば、コラーゲン足場は、そのような医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料の表面上にコーティングされ得る。
ある特定の実施形態において、足場は、コラーゲンＩ足場などのコラーゲン足場である。組成物がポリリジンを更に含むある特定の実施形態において、ポリリジンは、足場とコラーゲンＶＩポリペプチドとの間に中間層を形成する。
ある特定の実施形態において、コラーゲン足場は、コラーゲンＩ及び／又はＩＩＩ及び／又はＶ及び／又はＶＩを主成分として含むウシ原線維コラーゲン足場であり得る。例えば、足場の８０～８５％は、Ｉ型コラーゲン線維であり得、及び／又は８～１１％は、ＩＩＩ型コラーゲン線維であり得、残りは、コラーゲンＶ及び／又はＶＩであり得る。好ましくは、足場は、凍結乾燥ウシコラーゲンＩ／ＩＩＩ／Ｖ足場である。
本発明の第１の態様の組成物のコラーゲンＶＩペプチドと混合されたコラーゲンＩ／ＩＩＩ／Ｖ足場（実施例ではＷＯＵＮＤＣＯＭと称される製品など）は、創傷に暫定的なバリア機能を提供し、封じ込められた湿った創傷微小環境を確立する。この微小環境は、再上皮化及び再血管構築を促進し、したがって創傷治癒を促進する［４８］。
「足場」という用語及び「担体」又は「ＷＯＵＮＤＣＯＭ担体」という用語は、本明細書において互換的に使用される。したがって、足場の全ての定義は、担体又はＷＯＵＮＤＣＯＭ担体にも適用される。したがって、一実施形態において、担体又はＷＯＵＮＤＣＯＭ担体は、コラーゲンＩタンパク質などのコラーゲンタンパク質である。ある特定の実施形態において、担体は、コラーゲンＩ及び／又はＩＩＩ及び／又はＶ及び／又はＶＩを主成分として含む、ウシ原線維コラーゲン担体などの原線維コラーゲン担体であり得る。例えば、足場の８０～８５％は、Ｉ型コラーゲン線維であり得、及び／又は８～１１％は、ＩＩＩ型コラーゲン線維であり得、残りは、コラーゲンＶ及び／又はＶＩであり得る。好ましくは、担体は、凍結乾燥ウシコラーゲンＩ／ＩＩＩ／Ｖ担体である。
ＷＯＵＮＤＣＯＭ製品は、ＷＯＵＮＤＣＯＭ担体及びＷＯＵＮＤＣＯＭエフェクターの組み合わせ、例えば、生体活性ペプチド（ＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３など）を含浸させたコラーゲンＩ足場である。したがって、一実施形態において、ＷＯＵＮＤＣＯＭは、ＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３ペプチドの組み合わせを含浸させたコラーゲンＩ創傷マトリックスである。
追加的に、コラーゲン足場が存在するコラーゲンベースの創傷ケアデバイス（ＷＯＵＮＤＣＯＭなど）における高度に整列したコラーゲン線維は、天然真皮の自然構造を模倣する平行なコラーゲン線維束を有する適切な多孔質構造を示す。したがって、創傷床におけるコラーゲン足場ベースの創傷ケアデバイスの中心的な役割は、天然コラーゲン原線維によって三次元分子誘導リッジを提供することによって、創傷への細胞流入及び移動を指向及び誘導することである。したがって、コラーゲン足場ベースの創傷ケアデバイス（ＷＯＵＮＤＣＯＭなど）は、構造化された創傷治癒を促進し、創傷床における新たに形成されたコラーゲン線維及び他の組織成分の堆積を整理及び整列させることによって、新しい組織成長をもたらす［４３］。
更に、本発明の第１の態様の組成物に適用されるコラーゲンＶＩペプチドは、身体自身の創傷治癒効果を増強する。これは、物理的な膜不安定化によって病原体に作用し、細胞質滲出、細胞溶解を引き起こし、それによって病原体の成長及びバイオフィルム形成の阻害を引き起こす、それらの天然の抗菌特性によって達成される［４９］。ペプチドはまた、創傷治癒プロセスに有益な皮膚細胞及び免疫細胞の効率的な動員、生存及び増殖のための追加の構造的及び機能的要素を提供することによって、創傷治癒プロセスを更に加速させる。
他の実施形態において、本発明の第１の態様の組成物は、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料の表面上に直接コーティングされ、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料は、チタン若しくはチタン合金を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態において、コーティングされたチタン表面は、医療デバイス、インプラント若しくは創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料として直接使用され得る。他の実施形態において、コーティングされたチタン表面は、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料の構成要素である。
組成物がポリリジンを更に含むある特定の実施形態において、ポリリジンは、チタン表面とコラーゲンＶＩポリペプチドとの間に中間層を形成する。
いくつかの実施形態において、コーティングされたチタン表面は、チタン又はチタン合金を含むか、又はそれからなるインプラントとして、例えば、関節プロテーゼ又は他の整形外科用デバイスとして、例えば、膝関節プロテーゼ又は股関節プロテーゼとして直接使用され得る。更なる実施形態において、コーティングされたチタン表面は、チタン若しくはチタン合金を含むか、又はそれからなるインプラントとして、例えば、骨置換デバイス、骨固定デバイス、骨プレート、人工股関節の茎、人工臓器、人工椎間板、脊髄ロッド、顎顔面プレート、ステントグラフト、経皮デバイス及びペースメーカーとして直接使用され得る。
「チタン表面」とは、チタン若しくはチタン合金を含むか、又はそれからなる表面を有する全ての医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料を含む。
他の実施形態において、本発明の第１の態様の組成物は、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料の表面上に直接コーティングされ、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料は、１つ以上のセラミック複合体を含むか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態において、コーティングされたセラミック複合体表面は、医療デバイス、インプラント若しくは創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料として直接使用され得る。他の実施形態において、コーティングされたセラミック複合体表面は、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料の構成要素である。
組成物がポリリジンを更に含むある特定の実施形態において、ポリリジンは、セラミック複合体表面とコラーゲンＶＩポリペプチドとの間に中間層を形成する。
いくつかの実施形態において、コーティングされたセラミック複合体表面は、セラミック複合体を含むか、又はそれからなるインプラントとして、例えば、関節プロテーゼ又は他の整形外科用デバイスとして、例えば、膝関節プロテーゼ又は股関節プロテーゼとして直接使用され得る。更なる実施形態において、コーティングされたセラミック複合体表面は、セラミック複合体を含むか、又はそれからなるインプラントとして、例えば、骨置換デバイス、骨固定デバイス、骨プレート、人工股関節の茎、人工臓器、人工椎間板、脊髄ロッド、顎顔面プレート、ステントグラフト、経皮デバイス及びペースメーカーとして直接使用され得る。
「セラミック複合体表面」とは、１つ以上のセラミック複合体を含むか、又はそれらからなる表面を有する全ての医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料を含む。
本発明の医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、及び材料のいずれも、本明細書に開示される医療用途のうちのいずれかに使用され得ることが理解されるであろう。
一実施形態において、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料は、組成物又は薬学的組成物が該材料の表面に適用され、その結果、組成物のポリペプチドが材料の表面に結合するように、第１の態様で定義される組成物でコーティングされる。
当業者は、ペプチドの放射性標識など、組成物のポリペプチド成分の材料表面への結合レベルを決定するための、当該技術分野で利用可能な技法を認識するであろう。この一例は、リジン又はチロシン残基を標識することによってヨウ素（例えば、ヨウ素１３１）の放射性同位体で標識すること、及び達成される結合レベルに比例するコーティングされた材料によって生成される放射能レベルを測定することである。異なる生体分子のコーティング効率は、γカウンター内のｃｐｍ値として放射能を決定することによって、材料に関連付けられた結合したヨウ素１３１放射能と遊離ヨウ素１３１放射能との間の比を決定することによって評価することができ、すなわち、１００％結合の測定では、検出できない量の放射性ヨウ素１３１が材料の表面に結合していない。
表面へのペプチド又はタンパク質のパーセンテージ結合を測定するための他の技法としては、限定されないが、分光アッセイ、放射能ベースの結合アッセイ、エリプソメトリー、単一振動水晶薄膜厚モニタリング、蛍光ベースの結合アッセイ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）及び原子力顕微鏡（ＡＦＭ）が挙げられる。
一実施形態において、医療デバイス、創傷ケア製品、又はそれらに使用するための材料は、湿ったときに柔らかくなってもよく、又は成形可能になってもよい。水分は、創傷自体に由来してもよく、及び／又は水分は、外部源に由来してもよい（例えば、医療デバイス、創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料に適用された生理食塩水など）。一実施形態において、医療デバイス、創傷ケア製品、又はそれらに使用するための材料は、二次包帯及び／又は圧縮衣服を使用して所定の位置に固定され得る。
本発明の第４の態様は、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料を、第１又は第２の態様に記載の組成物又は薬学的組成物でコーティング、含浸、混和するか、又は他の方法で会合させるステップを含む、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料を調製する方法を提供する。
当業者は、上記のコーティング、含浸、及び混和の一般的な方法が、本発明のこの態様による医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料を調製する方法にも適用され得ることを理解するであろう。
本発明の第５の態様は、以下：
（ｉ）第１の態様で定義される、２種以上のコラーゲンＶＩ型ポリペプチドを含む組成物を調製するステップと、
（ｉｉ）医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、又はそれらに使用するための材料を、ステップ（ｉ）において調製した組成物でコーティング、含浸、混和するか、又は他の方法で会合させるステップと、を含む、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料を調製する方法を提供する。
したがって、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品及びそれらに使用するための材料は、第１の態様の組成物の両方のポリペプチドを含む単一の組成物を利用することによって、本発明の第１の態様の組成物でコーティング、含浸、混和され得るか、又は他の方法で会合され得る。医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料は、好ましくは、そのような組成物でコーティングされ得る。
一実施形態において、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料は、チタン表面を含むか、又はそれからなる。
一実施形態において、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料は、セラミック複合体表面を含むか、又はそれからなる。
本発明の第６の態様は、以下：
（ｉ）医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、又はそれらに使用するための材料を、第１のコラーゲンＶＩ型ポリペプチドでコーティング、含浸、混和するか、又は他の方法で会合させるステップと、
（ｉｉ）ステップ（ｉ）において生成された医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、又はそれらに使用するための材料を、第２のコラーゲンＶＩ型ポリペプチドでコーティング、含浸、混和するか、又は他の方法で会合させるステップと、
任意選択で、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、又はそれらに使用するための材料を、本明細書に定義されるポリリジンでコーティング、含浸、混和するか、又は他の方法で会合させるステップと、を含む、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料を調製する方法を提供する。
一実施形態において、第１及び第２のポリペプチドは、同時に（例えば、融合体として又は混合物として）コーティングされる。あるいは、ポリペプチドは、任意の順序で連続してコーティングされてもよい。
本発明の第６の態様に対する変化は、以下：
（ｉ）医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、又はそれらに使用するための材料を、本明細書に定義されるポリリジンでコーティング、含浸、混和するか、又は他の方法で会合させるステップと、
（ｉｉ）医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、又はそれらに使用するための材料を、第１のコラーゲンＶＩ型ポリペプチドでコーティング、含浸、混和するか、又は他の方法で会合させるステップと、
（ｉｉｉ）医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、又はそれらに使用するための材料を、第２のコラーゲンＶＩ型ポリペプチドでコーティング、含浸、混和するか、又は他の方法で会合させるステップと、を含み、
任意選択で、第１及び第２のポリペプチドが、同時に（例えば、融合体として）又は連続してコーティングされる、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料を調製する方法を提供する。
したがって、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品及びそれらに使用するための材料は、最初に第１の態様で定義される第１のコラーゲンＶＩ型ポリペプチドでコーティング、含浸、混和するか、又は他の方法で会合させることによって、続いて第１の態様で定義される第２のコラーゲンＶＩ型ポリペプチドがその後に適用される追加のステップによって調製され得る。あるいは、ポリペプチドを、コーティングの単一ステップにおいて同時に適用することができる。
ある特定の実施形態において、本明細書で使用するための医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品及び材料は、コラーゲンＶＩ型ポリペプチドをその後に適用する前に、最初に材料をポリリジンでコーティング、含浸、混和するか、又は他の方法で会合させることによって調製されてもよい。
ある特定の実施形態において、ポリリジンは、材料を第１の態様で定義されるポリペプチドのうちの少なくとも１つでコーティング、含浸、混和するか、若しくは他の方法で会合させる前に、生物学的足場（例えば、コラーゲンＩなどのコラーゲン）などの足場上にコーティングされるか、又はその逆である。足場は、チタン表面又はセラミック複合体表面上に存在し得る。
他の実施形態において、ポリリジンは、材料を第１の態様で定義されるコラーゲンＶＩ又はポリペプチドでコーティング、含浸、混和するか、又は他の方法で会合させる前に、足場上にコーティングされない。例えば、いくつかの実施形態において、ポリリジンは、材料を第１の態様で定義されるコラーゲンＶＩ又はポリペプチドでコーティング、含浸、混和するか、又は他の方法で会合させる前に、表面、例えば、チタン又はチタン合金を含むか、又はそれからなる表面、又は１つ以上のセラミック複合体を含むか、又はそれからなる表面上に直接コーティングされる。
他の実施形態において、ポリリジンは、第１の態様で定義されるコラーゲンＶＩ又はポリペプチドと混合されてもよく、その混合物を、コラーゲン足場又は他の表面、例えば、チタン若しくはチタン合金を含むか、若しくはそれからなる表面、又は１つ以上のセラミック複合体を含むか、若しくはそれらからなる表面でコーティング、含浸、混和するか、又は他の方法で会合させる前に、混合されてもよい。
いくつかの実施形態において、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、又はそれらに使用するための材料は、チタン表面を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態において、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、又はそれらに使用するための材料は、１つ以上のセラミック複合体表面を含むか、又はそれからなる。
ある特定の実施形態において、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料を調製する方法は、以下：
（ｉ）足場、例えば、コラーゲン足場を、ポリリジンの溶液でインキュベートするステップ、
（ｉｉ）足場を（例えば、蒸留水中で）洗浄するステップ、
（ｉｉｉ）足場を（例えば、空気乾燥によって）乾燥させるステップ、
（ｉｖ）足場を、本発明の第１の態様で定義される少なくとも１つのコラーゲンＶＩポリペプチドでコーティングするステップ（例えば、足場を、コラーゲンＶＩポリペプチドを含有する溶液中に投入することによって）、
（ｖ）足場を、コラーゲンＶＩ溶液中で（例えば、一晩）インキュベートするステップ、
（ｖｉ）足場を（例えば、空気乾燥によって）乾燥させるステップのうちの１つ以上を含む。
上記方法のある特定の実施形態において、コラーゲン足場は、コラーゲンＩ足場である。一実施形態において、コラーゲン足場は、例えば、凍結乾燥コラーゲンＩからなるディスク形状又は膜である。
上記方法のある特定の実施形態において、ステップ（ｉ）のポリリジンは、ポリ－Ｌ－リジンである。いくつかの実施形態において、ポリリジン溶液の濃度は、およそ０．２ｍｇ／ｍｌである。一実施形態において、ステップ（ｉ）のポリリジン溶液は、およそ０．２ｍｇ／ｍｌのポリ－Ｌ－リジン溶液である。いくつかの実施形態において、コラーゲン足場は、およそ６０℃でポリリジンの溶液中でインキュベートされる。いくつかの実施形態において、コラーゲン足場は、ポリリジンの溶液中でおよそ２時間インキュベートされる。
上記方法のある特定の実施形態において、ステップ（ｉｖ）のコラーゲンＶＩペプチド溶液中のコラーゲンＶＩペプチドの濃度は、およそ１５０ｍＭである。いくつかの実施形態において、ステップ（ｉｖ）のコラーゲンＶＩ溶液中のコラーゲンＶＩペプチドの濃度は、およそ２～３ｍＭである。いくつかの好ましい実施形態において、ステップ（ｉｖ）のコラーゲンＶＩ溶液中のコラーゲンＶＩペプチドの濃度は、およそ２～３μＭである。いくつかの実施形態において、ステップ（ｉｖ）のコラーゲンＶＩ溶液中のコラーゲンＶＩペプチドの濃度は、３μＭであり、任意選択で、１．５μＭのＧＶＲ２８（配列番号１）及び１．５μＭのＳＦＶ３３（配列番号５）からなる。
ある特定の実施形態において、コラーゲン足場は、コラーゲンＶＩ溶液中で一晩、すなわち、およそ１６時間インキュベートされる。いくつかの実施形態において、コラーゲン足場は、コラーゲンＶＩ溶液とともにおよそ４℃でインキュベートされる。
上記ステップ（ｉ）の他の実施形態において、ステップ（ｉ）のポリリジンは、材料を第１の態様で定義されるコラーゲンＶＩ若しくはポリペプチドでコーティング、含浸、混和するか、又は他の方法で会合させる前に、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、又はそれらに使用するための材料の表面上にコーティングされる。いくつかの実施形態において、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、又はそれらに使用するための材料は、チタン表面を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態において、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、又はそれらに使用するための材料は、セラミック複合体表面を含むか、又はそれからなる。
ある特定の実施形態において、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料を調製する方法は、以下のステップ：
（ｉ）医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料、例えば、チタン表面、又は代替的にセラミック複合体表面を、ポリリジンの溶液でインキュベートすること、
（ｉｉ）表面を（例えば、蒸留水中で）洗浄すること、
（ｉｉｉ）表面を（例えば、空気乾燥によって）乾燥させること、
（ｉｖ）表面を、本発明の第１の態様で定義されるコラーゲンＶＩ又はコラーゲンＶＩポリペプチドでコーティングすること（例えば、表面をコラーゲンＶＩ又はコラーゲンＶＩポリペプチドを含有する溶液に投入することによって）、
（ｖ）表面を、コラーゲンＶＩ溶液中で（例えば、一晩）インキュベートすること、
（ｖｉ）表面を（例えば、空気乾燥によって）乾燥させることのうちの１つ以上を含む。
上記方法のある特定の実施形態において、ステップ（ｉ）のポリリジンは、ポリ－Ｌ－リジンである。いくつかの実施形態において、ポリリジン溶液の濃度は、およそ０．２ｍｇ／ｍｌである。一実施形態において、ステップ（ｉ）のポリリジン溶液は、およそ０．２ｍｇ／ｍｌのポリ－Ｌ－リジン溶液である。いくつかの実施形態において、表面（例えば、セラミック複合体表面及び／又はチタン表面）は、およそ６０℃でポリリジンの溶液中でインキュベートされる。いくつかの実施形態において、表面（例えば、セラミック複合体表面及び／又はチタン表面）は、ポリリジンの溶液中でおよそ２時間インキュベートされる。
上記方法のある特定の実施形態において、ステップ（ｉｖ）のコラーゲンＶＩ溶液中のコラーゲンＶＩの濃度は、およそ１５０ｍＭである。いくつかの実施形態において、ステップ（ｉｖ）のコラーゲンＶＩ溶液中のコラーゲンＶＩペプチドの濃度は、およそ２～３ｍＭである。いくつかの好ましい実施形態において、ステップ（ｉｖ）のコラーゲンＶＩ溶液中のコラーゲンＶＩペプチドの濃度は、およそ２～３μＭである。
ある特定の実施形態において、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料を調製する方法は、以下：
（ｉ）足場溶液（例えば、コラーゲン足場）を、本発明の第１の態様で定義される少なくとも１つのコラーゲンＶＩポリペプチドと混合する（例えば、コラーゲンＶＩポリペプチドを含有する溶液を足場の溶液に添加する）ステップ、及び
（ｉｉ）足場／ポリペプチド混合物を（例えば、空気乾燥又は凍結乾燥によって）乾燥するステップのうちの１つ以上を含む。
本発明の第７の態様は、
（ｉ）本発明の第１の態様による組成物、及び／又は本発明の第２の態様による薬学的組成物、又は本発明の第３の態様による医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、又はそれらに使用するための材料と、
（ｉｉ）使用説明書と、を含むキットを提供する。
キットは、任意選択で、本発明の第１の態様に記載される２つ以上のポリペプチドを、混和物中に、又は使用前若しくは使用時に混合物を必要とする別個の構成要素として含む。例えば、各構成要素は、別々に、又は任意の１つ以上の更なるポリペプチドと組み合わせて凍結乾燥することができ、任意選択で、使用前にポリペプチドを再構成及び／又は混合するための１つ若しくは複数の好適な緩衝液をキットに含み得る。
本発明の第８の態様は、
（ｉ）本発明の第１の態様による創傷治癒を促進することができるという主な機能を有するコラーゲンＶＩ型ポリペプチドと、
（ｉｉ）本発明の第１の態様による抗菌効果を発揮することができるという主な機能を有するコラーゲンＶＩ型ポリペプチドと、
（ｉｉｉ）使用説明書と、を含むキットを提供し、
任意選択で、このキットは、本明細書に記載されるポリリジンを更に含む。
第７及び第８の態様のキットのある特定の実施形態において、キットは、追加として、生物学的及び／又は生分解性足場などの足場材料を含む。足場は、コラーゲン、例えば、コラーゲンＩを含み得るか、又はそれからなり得る。
第７及び第８の態様のキットの他の実施形態において、キットは、追加的に、チタン若しくはチタン合金を含むか、又はそれからなる材料、例えば、チタンを含むか、又はそれからなる医療デバイス、インプラント、製造された創傷ケア、又はそれらに使用するための材料を含む。
第７及び第８の態様のキットの他の実施形態において、キットは、追加的に、１つ以上のセラミック複合体を含むか、又はそれからなる材料、例えば、セラミック複合体を含むか、又はそれからなる医療デバイス、インプラント、製造された創傷ケア、又はそれらに使用するための材料を含む。
本発明の第９の態様は、本発明の第１の態様による組成物、又は医学において使用するための本発明の第２の態様による薬学的組成物を提供する。
本発明の第１０の態様は、本発明の第１の態様による組成物、又は微生物感染症染の治癒的及び／又は予防的治療に使用するための本発明の第２の態様による薬学的組成物を提供する。
「予防的」という用語は、患者又は対象における状態又は疾患状態の可能性を予防又は低減する、本明細書に記載の組成物又は製剤の使用を包含するために使用される。
「微生物感染症」とは、上記のように微生物によって引き起こされる感染症を含む。例えば、一実施形態において、治療される微生物感染症は、細菌感染症である。治療される微生物感染症は、急性又は全身感染症であり得る。一実施形態において、微生物感染症は、（上述のように）１つ以上の従来の抗生剤に耐性である。
一実施形態において、治療される微生物感染症は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ及びＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓからなる群から選択される微生物によって引き起こされる。
更なる実施形態において、微生物感染症は、多剤耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）（メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）及び多剤耐性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（ＭＲＰＡ）からなる群から選択される微生物によって引き起こされる。
当業者は、本発明の組成物は、特定の疾患又は状態の治療のために、１つ以上の既知の又は従来の薬剤と組み合わせて共投与され得ることを理解するであろう。「共投与する」とは、本組成物が、化合物が実際に投与される時期（同時に、連続して、及び／又はその後を含む）にかかわらず、組成物の成分並びに共投与される化合物が患者の体内（例えば、血流中）で同時に見出され得るように、患者に投与されることを意味する。
したがって、一実施形態において、組成物又は薬学的組成物は、上記の従来の抗生物質などの１つ以上の追加の抗菌剤と組み合わせて使用するためのものである。代替的に、又は加えて、追加の抗菌剤は、ＬＬ－３７及びコラーゲンＶＩ型タンパク質などの抗菌ポリペプチド若しくはタンパク質、又は例えば、親タンパク質の抗菌活性を少なくとも一部保持する、ディフェンシン、グラミシジンＳ、マガイニン、セクロピン、ヒスタチン、ヒファンシン、シンナマイシン、ブルフォリン１、パラシン１及びプロタミン、並びにそれらの断片、バリアント及び融合体からなる群から選択され得る。
本発明の第１１の態様は、創傷ケアに使用するための（すなわち、創傷治癒の促進に使用するための）本発明の第１の態様による組成物又は本発明の第２の態様による薬学的組成物を提供する。
「創傷ケア」とは、創傷の治療、創傷閉鎖（すなわち、治癒）の促進、創傷感染症及び／又は潰瘍の予防及び／又は治療を含み、創傷は、体外又は体内であり得る。したがって、創傷ケアでの使用は、創傷治癒プロセスを補助する（例えば、加速させるか、若しくはその効率を改善する）ことができ、異常な瘢痕形成を低減し、かつ／又は創傷の感染症を防止することができるポリペプチドを含む組成物を含む。例えば、組成物のコラーゲンＶＩ又はポリペプチドは、上皮再生並びに／又は創傷上皮及び／若しくは創傷間質の治癒を増強することができる、クリーム、ゲル、軟膏、包帯又は絆創膏などの創傷ケア製品で使用され得る。一実施形態において、ポリペプチドのうちの少なくとも１つは、非溶解機序を介して上皮及び／又は間質細胞の増殖を増強することができる。
創傷治癒特性を有するコラーゲンＶＩ及びポリペプチドは、本発明の創傷ケア製品の機能において主要又は補助的な役割を有し得ることが理解されるであろう。
一実施形態において、コラーゲンＶＩ又はポリペプチド若しくは薬学的組成物のうちの少なくとも１つは、上記のように、追加の抗菌剤と組み合わせて投与される。
本発明の第１２の態様は、上記のように、微生物感染症の治療のための医薬品の製造における、本発明の第１の態様による組成物、又は本発明の第２の態様による薬学的組成物の使用を提供する。
本発明の第１３の態様は、上記のように、創傷の治療のための医薬品の製造における、本発明の第１の態様による組成物、又は本発明の第２の態様による薬学的組成物の使用を提供する。
本発明の第１４の態様は、微生物感染症を有する個体を治療する方法を提供し、この方法は、その治療を必要とする個体に、有効量の本発明の第１の態様による組成物、又は本発明の第２の態様による薬学的組成物を投与するステップを含む。
本発明の第１５の態様は、個体における創傷を治療する方法を提供し、この方法は、その治療を必要とする個体に、有効量の本発明の第１の態様による組成物、又は本発明の第２の態様による薬学的組成物を投与するステップを含む。
「有効量」という用語は、本明細書では、治療される疾患又は状態の好ましい変化を生じさせるために使用され得る本発明による組成物又は薬学的組成物の濃度又は量を説明するために使用され、その変化は、治療される疾患又は状態に応じて、寛解、好ましい生理学的結果、治療される疾患状態又は状態の逆転又は減衰、状態又は疾患状態の予防又はそれが生じる可能性の低減であるかどうかにかかわらない。本発明の組成物又は薬学的組成物が組み合わせて使用される場合、組成物又は薬学的組成物の各々を有効量で使用することができ、有効量は相乗的な量を含み得る。
当業者は、本発明の組成物及び薬学的製剤が、医療及び獣医学の両方の分野において有用であることを理解するであろう。したがって、本発明の方法は、ヒト及び非ヒト動物（ウマ、イヌ及びネコなど）の両方の治療に使用することができる。しかしながら、好ましくは、患者はヒトである。
獣医学的使用のために、本発明の組成物は、通常の獣医学的慣行に従って好適に許容される製剤として投与され、獣医は、特定の動物に最も適切であろう投与レジメン及び投与経路を決定する。
本発明の第１６の態様は、微生物を、本発明の第１の態様による組成物又は本発明の第２の態様による薬学的組成物と接触させることを含む、インビトロで微生物を殺傷するための方法を提供する。例えば、組成物又は薬学的組成物はまた、臨床環境（例えば、外科手術室）又は家庭環境（例えば、台所作業面、ベッドリネンなどの衣類の洗浄）などの表面又は基板上の微生物の増殖を防止するために、滅菌溶液又は洗浄液の形態で使用され得る。
一実施形態において、抗菌化合物は、１～１００μｇ／ｍｌの濃度で溶液中にあってもよい。
一実施形態において、溶液は、表面活性剤又は界面活性剤を更に含む。好適な界面活性剤としては、アニオン性界面活性剤（例えば、脂肪族スルホネート）、両性及び／又は双性イオン性界面活性剤（例えば、脂肪族四級アンモニウム、ホスホニウム及びスルホニウム化合物の誘導体）、並びに非イオン性界面活性剤（例えば、脂肪族アルコール、酸、アミド又はアルキレンオキシドを有するアルキルフェノール）が挙げられる。
好都合には、表面活性剤は、０．５～５重量％の濃度で存在する。
滅菌溶液は、病院環境での使用に特に適している。例えば、滅菌溶液を使用して、外科用器具及び外科手術室表面、並びに手術室職員の手及び手袋を滅菌することができる。加えて、滅菌溶液は、例えば、露出した骨を滅菌するために、手術中に使用され得る。全ての場合に、溶液を滅菌される表面に適用する。
組成物又は薬学的組成物はまた、血液及び血液製剤を消毒するために、及び細菌汚染又は感染症の診断に使用され得る。
インビトロ使用及びインビボ使用の両方において、薬学的組成物又はポリペプチドのうちの少なくとも１つは、好ましくは、標的微生物（又は治療される表面／領域）に少なくとも５分間曝露される。例えば、曝露時間は、少なくとも１０分、２０分、３０分、４０分、５０分、１時間、２時間、３時間、５時間、１２時間及び２４時間であり得る。
本発明の第９、第１０若しくは第１１の態様による使用のための組成物若しくは薬学的組成物、本発明の第１２若しくは第１３の態様による使用、又は本発明の第１４、第１５若しくは第１６の態様による方法の一実施形態において、組成物又は薬学的組成物は、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、若しくはそれらに使用するための材料上にコーティング若しくは含浸されるか、又は混和されるか、又は他の方法で会合される。
本明細書における明らかに以前に公開された文書のリスト又は議論は、文書が最新技術の一部であるか、又は共通の一般知識であるという認識として必ずしも理解されるべきではない。
本発明の特定の態様を具体化する好ましい非限定的な実施例を、以下の図面を参照して説明する。
非感染創傷におけるＷＯＵＮＤＣＯＭ中のコラーゲンＶＩ由来ペプチドのインビボ創傷治癒効率の定量的評価。マウス動物モデルの皮膚において、外科的に創傷を負わせた。その後、それらを、異なるコラーゲンＶＩペプチドを含浸させたコラーゲンＩ担体で覆った。１０日間の創傷治癒を評価し、自然創傷治癒、Ｐｕｒａｃｏｌ（コラーゲンＶＩペプチドを含まない担体）及びＰｕｒａｃｏｌ Ａｇ（銀イオンを含浸させた担体）とそれぞれ比較した。Ｐｕｒａｃｏｌ（Ｍｅｄｓｋｉｎ製）は、臨床性能のために最適化された濃度で使用した。創傷低減速度は、ＷＯＵＮＤＣＯＭでかなり加速され、担体は、それぞれ、３μＭのＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３の１：１混合物（すなわち、合計３μＭの各ポリペプチド１．５μＭ）（図１Ａ）、又は１．５μＭのＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３の１：１混合物（合計１．５μＭの各ポリペプチド０．７５μＭ）（図１Ｂ）で含浸される。 非感染創傷におけるＷＯＵＮＤＣＯＭ中のコラーゲンＶＩ由来ペプチドのインビボ創傷治癒効率の定量的評価。マウス動物モデルの皮膚において、外科的に創傷を負わせた。その後、それらを、異なるコラーゲンＶＩペプチドを含浸させたコラーゲンＩ担体で覆った。１０日間の創傷治癒を評価し、自然創傷治癒、Ｐｕｒａｃｏｌ（コラーゲンＶＩペプチドを含まない担体）及びＰｕｒａｃｏｌ Ａｇ（銀イオンを含浸させた担体）とそれぞれ比較した。Ｐｕｒａｃｏｌ（Ｍｅｄｓｋｉｎ製）は、臨床性能のために最適化された濃度で使用した。創傷低減速度は、ＷＯＵＮＤＣＯＭでかなり加速され、担体は、それぞれ、３μＭのＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３の１：１混合物（すなわち、合計３μＭの各ポリペプチド１．５μＭ）（図１Ａ）、又は１．５μＭのＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３の１：１混合物（合計１．５μＭの各ポリペプチド０．７５μＭ）（図１Ｂ）で含浸される。 感染した創傷におけるＷＯＵＮＤＣＯＭにおけるコラーゲンＶＩ由来ペプチドのインビボ創傷治癒効率の定量的評価。マウス動物モデルの皮膚において、外科的に皮膚創傷を負わせ、１×１０６ｃｆｕのＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａに感染させた。その後、それらを、異なるコラーゲンＶＩペプチドを含浸させたコラーゲンＩ担体で覆った。１０日間の創傷治癒を評価し、自然創傷治癒、Ｐｕｒａｃｏｌ（コラーゲンＶＩペプチドを含まない担体）及びＰｕｒａｃｏｌ Ａｇ（銀イオンを含浸させた担体）とそれぞれ比較した。創傷低減速度は、ＷＯＵＮＤＣＯＭでかなり加速され、担体は、それぞれ、３μＭのＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３の１：１混合物（すなわち、合計３μＭの各ポリペプチド１．５μＭ）（図２Ａ）、又は１．５μＭのＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３の１：１混合物（すなわち、合計１．５μＭの各ポリペプチド０．７５μＭ）（図２Ｂ）で含浸される。 感染した創傷におけるＷＯＵＮＤＣＯＭにおけるコラーゲンＶＩ由来ペプチドのインビボ創傷治癒効率の定量的評価。マウス動物モデルの皮膚において、外科的に皮膚創傷を負わせ、１×１０６ｃｆｕのＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａに感染させた。その後、それらを、異なるコラーゲンＶＩペプチドを含浸させたコラーゲンＩ担体で覆った。１０日間の創傷治癒を評価し、自然創傷治癒、Ｐｕｒａｃｏｌ（コラーゲンＶＩペプチドを含まない担体）及びＰｕｒａｃｏｌ Ａｇ（銀イオンを含浸させた担体）とそれぞれ比較した。創傷低減速度は、ＷＯＵＮＤＣＯＭでかなり加速され、担体は、それぞれ、３μＭのＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３の１：１混合物（すなわち、合計３μＭの各ポリペプチド１．５μＭ）（図２Ａ）、又は１．５μＭのＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３の１：１混合物（すなわち、合計１．５μＭの各ポリペプチド０．７５μＭ）（図２Ｂ）で含浸される。 創傷閉鎖の尺度としての創傷滲出の分析。創傷液滲出の量は、ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｗｏｕｎｄｓｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ．ｃｏｍ／ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ／ｄｅｔａｉｌｓ／ｗｕｗｈｓ－ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ－ｄｏｃｕｍｅｎｔ－ｗｏｕｎｄ－ｅｘｕｄａｔｅ－ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ－ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ－ａｎｄ－ｍａｎａｇｅｍｅｎｔに記載されているスコアリングシステムに準拠して経時的に測定した。創傷スコアリングシステムはまた、以下の表に概説されている。
Figure 2023545585000003
要約すると、創傷床滲出は、上記のスコアリングシステムによりスコアリングされ、更に分割され、結果として、１．１滲出なし、１．２最小限の滲出、２．１中程度の滲出、２．２中程度～滲出性、３．１滲出性～非常に滲出性、３．２非常に滲出性が得られた。図に示すように、創傷を異なる物品で治療した。結果を、４匹の動物における６つの異なる創傷の平均±ＳＥＭとして表す。「自然創傷治癒」の状態を除いて、他の全ての状態は、感染した創傷にあった。
創傷治癒の尺度としての創傷床深さの分析。創傷床の深さを経時的に測定した。各創傷において、最も深い位置を測定した。結果を、４匹の動物における６つの異なる創傷の平均±ＳＥＭとして表す。「自然創傷治癒」の状態を除いて、他の全ての状態は、感染した創傷にあった。 創傷治癒の尺度としての創傷床組織型の分析。創傷床組織型を、ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｃｏｌｏｐｌａｓｔ．ｓｇ／Ｄｏｃｕｍｅｎｔｓ／Ｗｏｕｎｄ／ＷＵＷＨＳ＿ＰＯＳＩＴＩＯＮ％２０ＤＯＣＵＭＥＮＴ．ｐｄｆに記載されているスコアリングシステムに従って経時的に測定した。要するに、組織型は、以下のようにスコアリングした：１．１非常に柔らかく水っぽい、１．２非常に柔らかく水っぽい～中程度に柔らかく水っぽい、２．１中程度に柔らかく水っぽい～粒状、２．２粒状、３．１粒状～上皮化、３．２上皮化。図に示すように、創傷を異なる物品で治療した。結果を、４匹の動物における６つの異なる創傷の平均±ＳＥＭとして表す。「自然創傷治癒」の状態を除いて、他の全ての状態は、感染した創傷にあった。 創傷における細菌負荷の評価。全厚の創傷を、５×１０５ｃｆｕのＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａに感染させた。ＣＦＵを、生存カウントアッセイによって定量的に分析した。図に示すように、創傷を異なる物品で治療した。特に、感染していない対照創傷（黒線）では、４日目と７日目との間に二次感染が観察された。結果を、４匹の動物における６つの異なる創傷の平均±ＳＥＭとして表す。 製造業者Ａによって製造されたＷＯＵＮＤＣＯＭの内部コラーゲン原線維構造に対する影響。密集したコラーゲン原線維は、横紋パターン（矢印）で見える。ＷＯＵＮＤＣＯＭパッチを、貯蔵寿命の０ヶ月（ａ）、２ヶ月（ｂ）、６ヶ月（ｃ）及び１２ヶ月（ｄ）後に評価した。構造的な差異は、経時的に観察されない。 製造業者Ｂによって製造されたＷＯＵＮＤＣＯＭの内部コラーゲン原線維構造に対する貯蔵寿命の影響。密集したコラーゲン原線維は、横紋パターン（矢印）で見える。ＷＯＵＮＤＣＯＭパッチを、貯蔵寿命の０ヶ月（ａ）及び２ヶ月（ｂ）後に評価した。構造的な差異は、経時的に観察されない。 製造業者Ａによって製造されたＷＯＵＮＤＣＯＭのコラーゲンスポンジ構造に対する貯蔵寿命の影響。ＷＯＵＮＤＣＯＭパッチを、貯蔵寿命の０ヶ月（ａ）、２ヶ月（ｂ）、６ヶ月（ｃ）及び１２ヶ月（ｄ）後に評価した。構造的な差異は、経時的に観察されない。 製造業者Ｂによって製造されたＷＯＵＮＤＣＯＭのコラーゲンスポンジ構造に対する貯蔵寿命の影響。ＷＯＵＮＤＣＯＭパッチを、貯蔵寿命の０ヶ月（ａ）、２ヶ月（ｂ）後に評価した。構造的な差異は、経時的に観察されない。 製造業者Ｂによって製造されたＷＯＵＮＤＣＯＭのコラーゲンスポンジ構造に対する貯蔵寿命の影響。ＷＯＵＮＤＣＯＭパッチを、貯蔵寿命の０ヶ月（ａ）、２ヶ月（ｂ）後に評価した。構造的な差異は、経時的に観察されない。 製造業者Ａによって製造されたＷＯＵＮＤＣＯＭにおけるコラーゲンＶＩペプチドＧＶＲ２８分布に対する貯蔵寿命の影響。ＷＯＵＮＤＣＯＭパッチを、薄切片上のＧＶＲ２８に対する金標識抗体によって評価した。採取された時点は、貯蔵寿命の０ヶ月（ａ）、２ヶ月（ｂ）、６ヶ月（ｃ）及び１２ヶ月（ｄ）後であった。構造的な差異は、経時的に観察されなかった。 製造業者Ｂによって製造されたＷＯＵＮＤＣＯＭにおけるコラーゲンＶＩペプチドＧＶＲ２８分布に対する貯蔵寿命の影響。ＷＯＵＮＤＣＯＭパッチを、薄切片上のＧＶＲ２８に対する金標識抗体によって評価した。採取された時点は、貯蔵寿命の０ヶ月（ａ）及び２ヶ月（ｂ）後であった。構造的な差異は、経時的に観察されなかった。 製造業者Ａ（ａ～ｄ）又は製造業者Ｂ（ｅ及びｆ）によって製造されたＷＯＵＮＤＣＯＭ中のコラーゲンＶＩペプチドＳＦＶ３３分布に対する貯蔵寿命の影響。ＷＯＵＮＤＣＯＭパッチを、薄切片上のＳＦＶ３３に対する金標識抗体によって評価した。製造業者Ａによって製造されたＷＯＵＮＤＣＯＭの場合、採取された時点は、貯蔵寿命の０ヶ月（ａ）、２ヶ月（ｂ）、６ヶ月（ｃ）及び１２ヶ月（ｄ）後であった。製造業者Ｂによって製造されたＷＯＵＮＤＣＯＭの場合、採取された時点は、貯蔵寿命の０ヶ月（ｅ）及び２ヶ月（ｆ）後であった。構造的な差異は、経時的に観察されなかった。 インビトロでの創傷治癒に対する異なる膜のインビトロ効果。創傷治癒に対する３つの異なる膜（ＷＯＵＮＤＣＯＭ、ＰｒｏＨｅａｌ及びＷｈａｔｍａｎセルロース濾紙）の効果を、９６時間にわたる線維芽細胞密度を測定することによって評価した。細胞密度（％）を、０時間、２４時間、４８時間及び９６時間で測定した。ＷＯＵＮＤＣＯＭ（コラーゲン足場及び生体活性コラーゲンＶＩペプチドＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３を含む）は、全ての時点で優れた創傷治癒効果を示した。 細菌の生存に対する異なる膜のインビトロ効果。異なる細菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ又はＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）の生存に対する３つの異なる膜（ＷＯＵＮＤＣＯＭ、ＰｒｏＨｅａｌ及びＷｈａｔｍａｎセルロース濾紙）の効果を経時的に評価した。生存期間は、０分、３０分、６０分及び１２０分で測定した。ＷＯＵＮＤＣＯＭ（コラーゲン足場及び生体活性コラーゲンＶＩペプチドＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３を含む）は、３０分、６０分及び１２０分で抗菌活性を示した。
実施例１－生体活性コラーゲンＶＩペプチドの組み合わせの改善された創傷治癒特性。
導入
生体材料は、人体の機能を維持するか、又は置き換えるために内部に配置される。これらは、優れた機械的特性、耐食性、及び生体適合性のために、金属合金、セラミック、ポリマー、又はバイオポリマーの様々な組み合わせで構成されている。創傷マトリックスは、発泡体、フィルム、ハイドロコロイド、ハイドロゲル、スポンジ、膜、皮膚代替物、電気紡績マイクロ線維、及びナノ線維などの様々な形態に製造された天然ポリマー及び合成ポリマーを含む、種々の材料で提供される。生体活性創傷マトリックスは、生体活性化合物の送達によって、又は内因性活性を有する材料から構築されることによって、創傷治癒において活性な物質を送達する。治癒成功率は、創傷治癒中に宿主－生体材料界面で起こる細胞及び生理学的プロセスによって高度に決定される。具体的には、有害な宿主応答プロセスは、しばしば、生体材料の性能を妨げる慢性炎症及びカプセル化をもたらす。したがって、組織及び細胞などの創傷特性を積極的に使用して治癒を増強する能力を備えた適切な創傷治療戦略を設計することが重要である。また患者は、しばしば、インプラント部位で重度の感染症に苦しみ、通常の創傷治癒プロセスを妨げる。通常、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、又はＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉのような無害な細菌は、新鮮な創傷の損傷した組織に浸潤する可能性がある。ここでは、それらは高い病原性の可能性を発達させ、持続的な感染を確立し、生体材料機能を著しく損なう可能性がある。したがって、抗菌効果を有する生体活性創傷治癒促進生体材料表面を含む新しい戦略は、患者にとって有益であり得る。特に、一連の相乗効果を有する所与の生体材料表面の充填を可能にする、異なる生体活性生体分子の組み合わせは、高質な生体材料の機能及び生体適合性にとって重要である。
この目標を達成するために、コラーゲンＩマトリックスを修飾する効果を、コラーゲンＶＩ配列に由来する生体活性ペプチドＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３の組み合わせ（ＷＯＵＮＤＣＯＭエフェクター）を用いて調査した（ＷＯＵＮＤＣＯＭ担体、すなわち、Ｐｕｒａｃｏｌ）。それらを、それぞれ、ＷＯＵＮＤＣＯＭ担体単独（Ｐｕｒａｃｏｌ）、又はＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３単独、又は銀イオン（Ｐｕｒａｃｏｌ Ａｇ）で修飾されたＷＯＵＮＤＣＯＭ担体と比較した。異なるＷＯＵＮＤＣＯＭバリアントを、マウスモデルにおける異なる皮膚創傷にインビボで適用した。ＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３の組み合わせは、予期せぬ、特に高い創傷治癒及び炎症調節効率を示し、その結果、創傷閉鎖を著しく加速させた。ＷＯＵＮＤＣＯＭ担体とＷＯＵＮＤＣＯＭエフェクターとを一緒に組み合わせて、ＷＯＵＮＤＣＯＭ製品を製造する。
要約すると、これらのデータは、ＷＯＵＮＤＣＯＭ修飾のための生体活性コラーゲンＶＩペプチドの試験された組み合わせが、特に高い創傷治癒効率を示すことを示す。したがって、これらは、他の生体分子と比較して特定の高い速度で、宿主－生体材料界面上の初期及び中間細胞事象を促進し得る。したがって、所与のコラーゲンＩ創傷マトリックスに結合したコラーゲンＶＩ由来ペプチドの組み合わせは、生体活性宿主－生体材料界面の高質な生体適合性及び組織統合に生物学的に適切であると考えられ得る。特に、それらは、生体材料の挿入／適用後、及び創傷閉鎖及び創傷治癒の最初のステップ中に、創傷床を局所感染から、及び患者を全身感染から保護することができる。この治療戦略は創傷環境に有益であり、改善された創傷修復を促進し、異常な瘢痕形成を低減する可能性がある。
したがって、本研究において、異なる市販のコラーゲン足場の表面上の優れた創傷治癒特性を促進するために、天然コラーゲンＶＩ由来生体分子の組み合わせの使用を検討した。ここでは、天然コラーゲンＶＩ由来生体分子の組み合わせの使用が、インビボでの生物学的コラーゲン足場の創傷治癒特性を大幅に向上させることが初めて実証されている。この効果は、汎用性、多機能性、及び適切な細胞外環境を提供する顕著な可能性をもたらし、組織の再生及び瘢痕のリモデリングを促進しながら、感染及び炎症の発症を積極的に対比させ、したがって、生体適合性の所望の向上をもたらすことができる。
材料及び方法
材料－ＭＤＳコラーゲン及びＭＤＳコラーゲンＡｇ（すなわち、それぞれＰｕｒａｃｏｌ及びＰｕｒａｃｏｌ Ａｇ）は、ＭｅｄＳｋｉｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ Ｄｒ．Ｓｕｗｅｌａｃｋ ＡＧ（ＭＤＳ）から入手した。ε－ポリ－Ｌ－リジン臭化水素酸塩（ＰＬＬ、３０ ０００～１５０ ０００ｇ／ｍｏｌ）は、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＵＳＡ）から購入した。コラーゲンＶＩ及びその由来ペプチドを、［２９］に記載されるように調製した。
直径及び厚さがそれぞれ５ｍｍ（厚い足場）及び１～２ｍｍ（薄い足場）のＰＬＬ－コラーゲン足場ディスクを用いた生体材料表面コーティングは、より大きなシート（およそ１０ｃｍ×１０ｃｍ）からパンチアウトした。コラーゲンコーティングの前に、６０℃で２時間インキュベーションすることにより、１５０μＬのポリ－Ｌ－リジン臭化水素酸塩溶液（０．２ｍｇ／ｍｌ）をコラーゲン足場ディスク上に適用した。その後、ディスクを蒸留水中で２回洗浄して、未結合のＰＬＬを除去し、空気乾燥させ、室温で貯蔵した。
生体活性コラーゲンＶＩ分子－コラーゲン足場ディスクを用いた生体材料表面コーティングは、ＰＬＬで事前処理した後、２４ウェル細胞培養プレート（ＴＰＰ、Ｔｒａｓａｄｉｎｇｅｎ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）に入れた。それらを、１５０μＬのコラーゲンＶＩ型ペプチドＧＶＲ２８、又はＳＦＶ３３、又は両方のペプチドの混合物（それぞれ、濃度３μＭ又は１．５μＭ）で４℃で２時間インキュベートすることによってコーティングし、続いて蒸留水ですすぎ、空気乾燥した。
動物及び飼育－Ｂａｌｂ／ｃマウス（雌、８～１０週）を、Ｊａｎｖｉｅｒ Ｅｕｒｏｐｅから取得した。マウスを、Ｍｅｄｉｃｏｎ Ｖｉｌｌａｇｅ（Ｌｕｎｄ，Ｓｗｅｄｅｎ）の動物施設に収容し、木材削りくずを含むポリスチレンケージ（ＩＩＩ型ケージ、ケージ当たり１０匹のマウス）中で１２時間の明暗サイクルで維持し、標準的なげっ歯類の食餌及び水を自由に与えた。個々のマウスを、１日目に実施した耳マーキングによって識別した。
倫理的許可－地元の動物倫理委員会（Ｍａｌｍｏ／Ｌｕｎｄ，Ｓｗｅｄｅｎ）は、５４９０－２０１７のライセンス下での実験を承認した。
生体材料ディスクインプランテーション－マウスをイソフルランで麻酔し、カミソリを使用して背中を剃った。必要に応じて、毛髪除去溶液を、残っている毛髪の除去のために適用した。インプランテーションの領域をヨウ素又は７０％エタノールで洗浄し、切開を行う前にＭａｒｃａｉｎｅを局所投与した。コーティングされた生体材料ディスクを皮下に挿入し、創傷を縫合糸及び／又は外科用糊で閉じた。
絶命及び組織収集－動物は、移植後の異なる時点、すなわち、１時間（表２及び５、それぞれ非感染及び感染）、３日（表３及び６、それぞれ非感染及び感染）並びに１０日（表４及び７、それぞれ非感染及び感染）で絶命させた。絶命時に、動物を生理食塩水中の氷冷ホルマリンで灌流固定した。インプラントを周囲の組織とともに収集し、固定剤に移し、４℃で貯蔵した。次いで、それらを標準的な埋め込み及び免疫組織化学的処置に供した［３８～４１］。
結果
生体活性ペプチドＧＶＲ２８とＳＦＶ３３との組み合わせは、非感染及び感染皮膚創傷におけるコラーゲンＩ足場の優れた創傷治癒効率を媒介する。
マウスモデルにおける創傷治癒に対する生体活性コラーゲンＶＩペプチドの可能な影響を評価するために、コラーゲンＩ足場に、生体活性ペプチドＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３の異なる組み合わせを含浸させた。ＧＶＲ２８若しくはＳＦＶ３３単独、又は銀イオン、若しくは事前にコーティングされていないコラーゲン足場でコーティングすることが、対照として機能した。異なるコラーゲン足場で治療したマウスの皮膚創傷の組織学的評価の結果は、それらの異なる創傷治癒加速特性を示す（図１及び２）。ＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３の組み合わせによるコラーゲンＩ足場の前処理は、非感染創傷及び感染創傷の両方において、対照と比較してインビボでの創傷治癒特性を著しく増強した（それぞれ、図１及び２）。加えて、創傷床における炎症反応は、ＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３の組み合わせを有するコラーゲンＩ足場によって最も有益な方法で調節した（表２～７）。特に、これらのコラーゲンＩ足場の創傷治癒効率は、銀イオンを用いる広く市販されているゴールドスタンダードと比較して大幅に向上した。
まとめると、図１及び２並びに表２～７に提示されるデータは、コラーゲンＶＩアルファ－３鎖に由来する生体活性ペプチドの適切な組み合わせが、インビボでの皮膚創傷治癒を強く刺激することを示す。ＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３の組み合わせを含浸させたコラーゲンＩ創傷マトリックスのこの優れた創傷治癒効果は、他の試験された創傷マトリックスではかなり顕著ではなかった。これらの効果は、コラーゲンＶＩ由来のペプチドの組み合わせでコーティングされた生体材料の優れた創傷治癒特性をもたらすことが期待される。
表２、３及び４：ＷＯＵＮＤＣＯＭで治療された非感染創傷の細胞及び組織学的パラメータの定量的評価。マウス動物モデルの皮膚において、外科的に創傷を負わせた。その後、それらを、異なるコラーゲンＶＩペプチドを含浸させたコラーゲンＩ担体で覆った。１０日間の創傷治癒を評価し、自然創傷治癒、Ｐｕｒａｃｏｌ（コラーゲンＶＩペプチドを含まない担体）及びＰｕｒａｃｏｌ Ａｇ（銀イオンを含浸させた担体）とそれぞれ比較した。表２：１時間の治療、表３：３日間の治療、表４：１０日間の治療。治癒中の創傷における異なる細胞の出現の時間経過、及び他の創傷パラメータを、組織学的評価によって定量的に評価した。マクロファージ、好中球及び白血球の数として表される炎症反応のレベルは、ＷＯＵＮＤＣＯＭで治療された創傷において著しく低減し、担体は、３μＭのＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３の１：１混合物（すなわち、合計３μＭの各ポリペプチド１．５μＭ）で含浸される。並行して、組織壊死及びフィブリン滲出のレベルもまた、ＷＯＵＮＤＣＯＭで治療された創傷において著しく低減し、担体は、３μＭのＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３の１：１混合物（すなわち、合計３μＭの各ポリペプチド１．５μＭ）で含浸される。
表５、６及び７：ＷＯＵＮＤＣＯＭで治療された感染創傷の細胞及び組織学的パラメータの定量的評価。マウス動物モデルの皮膚において、外科的に皮膚創傷を負わせ、１×１０６ｃｆｕのＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａに感染させた。その後、それらを、異なるコラーゲンＶＩペプチドを含浸させたコラーゲンＩ担体で覆った。１０日間の創傷治癒を評価し、自然創傷治癒、Ｐｕｒａｃｏｌ（コラーゲンＶＩペプチドを含まない担体）及びＰｕｒａｃｏｌ Ａｇ（銀イオンを含浸させた担体）とそれぞれ比較した。表５：１時間の治療、表６：３日間の治療、表７：１０日間の治療。治癒中の創傷における異なる細胞の出現の時間経過、及び他の創傷パラメータを、組織学的評価によって定量的に評価した。マクロファージ、好中球及び白血球の数として表される炎症反応のレベルは、ＷＯＵＮＤＣＯＭで治療された創傷において著しく低減し、担体は、３μＭのＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３の１：１混合物（すなわち、合計３μＭの各ポリペプチド１．５μＭ）で含浸される。並行して、組織壊死及びフィブリン滲出のレベルもまた、ＷＯＵＮＤＣＯＭで治療された創傷において著しく低下し、担体は、３μＭのＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３の１：１混合物（すなわち、合計３μＭの各ポリペプチド１．５μＭ）を含浸される。
Figure 2023545585000004
Figure 2023545585000005
Figure 2023545585000006
Figure 2023545585000007
Figure 2023545585000008
Figure 2023545585000009
実施例２－インビボブタ研究における生体活性コラーゲンＶＩペプチドの組み合わせの改善された創傷治癒特性。
マウスモデルにおける創傷治癒に関する生体活性コラーゲンＶＩペプチドの陽性所見に続いて、ヒトにおける創傷治癒とより密接に相関するブタモデルにおける創傷治癒について、生体活性コラーゲンＶＩペプチドを評価した。
評価は、以下のＷＯＵＮＤＣＯＭ組成物を使用して実施した。
●ＷＯＵＮＤＣＯＭ１：３μＭのエフェクター（１．５μＭ ＧＶＲ２８＋１．５μＭ ＳＦＶ３３）、ＰＬＬなし
●ＷＯＵＮＤＣＯＭ２：３０μＭのエフェクター（１５μＭ ＧＶＲ２８＋１５μＭ ＳＦＶ３３）、ＰＬＬなし
●ＷＯＵＮＤＣＯＭ３：３μＭのエフェクター（１．５μＭ ＧＶＲ２８＋１．５μＭ ＳＦＶ３３）、ＰＬＬ含有
●ＷＯＵＮＤＣＯＭ４：３０μＭのエフェクター（１５μＭ ＧＶＲ２８＋１５μＭ ＳＦＶ３３）、ＰＬＬ含有
創傷滲出の評価によって測定される創傷閉鎖
創傷滲出液（創傷液又は創傷排液とも称される）は、（Ｍｅｒｒｉａｍ－Ｗｅｂｓｔｅｒ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ，２０１８で定義されるように）表面的な病変又は炎症領域に逃げ込み、創傷治癒において重要な役割を果たすが、誤った量、場所又は組成で治癒を遅らせる可能性がある血清、フィブリン及び白血球で構成される材料を指す。創傷滲出液は、湿潤な創傷環境を提供し、免疫メディエーター及び成長因子が創傷床全体に拡散することを可能にし、組織修復細胞の移動のための媒体として作用し、細胞代謝のための必須栄養素を供給し、及び自己分解を促進することによって、治癒プロセスをサポートする。
創傷滲出を評価するためのスコアリングシステムは、Ｗｏｒｌｄ Ｕｎｉｏｎ ｏｆ Ｗｏｕｎｄ Ｈｅａｌｉｎｇ Ｓｏｃｉｅｔｉｅｓ（ＷＵＷＨＳ）Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ Ｄｏｃｕｍｅｎｔ，Ｗｏｕｎｄ ｅｘｕｄａｔｅ：ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ａｎｄ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ，Ｗｏｕｎｄｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，２０１９に記載されている。
したがって、創傷治癒は、図３に示されるように、世界創傷治癒学会連合によって合意文書で確立された基準を使用して、創傷滲出液に関して評価することができる。
創傷スコアリングシステムはまた、以下の表に概説されている。
Figure 2023545585000010
図３は、ポリリジンを含まないＷＯＵＮＤＣＯＭ（これは、実施例１に記載されるように、ＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３の組み合わせで含浸されたコラーゲンＩ創傷マトリックスである）（ＷＯＵＮＤＣＯＭ１＋２）が、創傷滲出液についての改善された不応期を有し、試験された他の全ての状態と比較して、スコアをより速い速度でより健康なレベルに低減し、かつより改善された速度に低減することを示す。ポリリジンを含むＷＯＵＮＤＣＯＭ（ＷＯＵＮＤＣＯＭ３＋４）も大幅に改善されたが、ＷＯＵＮＤＣＯＭ１＋２と同じレベルではなかった。
創傷深さの評価によって測定される創傷閉鎖
創傷閉鎖の別の評価には、創傷深さの測定が含まれる。ブタに創傷を負わせ、次いで、その深さを測定する（例えば、ミリメートル）。深さの更なる測定は、創傷がどれくらい速く治癒するかを評価するために、一定の時間間隔で行われ、深さの低減は、改善された治癒と相関する。
図４は、ＷＯＵＮＤＣＯＭ１＋２及び３＋４が創傷深さの最速の低減（すなわち、最速の創傷治癒）を提供し、ＷＯＵＮＤＣＯＭ１＋２では７日までに完全な創傷治癒に到達することを示す。実験は２１日目に終了したが、その時点までに自然創傷治癒、感染した創傷治癒及びコラーゲン包帯ＳｏＣは、ＷＯＵＮＤＣＯＭ１＋２及び３＋４と比較して、創傷深さによって評価されるのと同じレベルの創傷治癒に達していなかった。
創傷床組織型の評価によって測定される創傷閉鎖
創傷閉鎖の更なる評価には、創傷床組織型の測定、特に、以前に利用可能な多くの創傷評価ツールを改善するために開発された創傷評価のトライアングル（Ｔｒｉａｎｇｌｅ ｏｆ Ｗｏｕｎｄ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ）アプローチが含まれる。１４の創傷評価ツールの研究に続いて、各々が創傷状態のある特定のパラメータを記録するための枠組みを提供していたが、最適な創傷評価のための全ての基準を満たしておらず、多くが治癒の目標設定、ケアの計画、及び重要な介入の決定の観点から実践を導くことができなかったことが判明した（Ａｎｄｅｒｓｏｎ Ｋ，Ｈａｍｍ ＲＬ．Ｆａｃｔｏｒｓ ｔｈａｔ ｉｍｐａｉｒ ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ．Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃｌｉｎ Ｗｏｕｎｄ Ｓｐｅｃｉａｌｉｓｔｓ ２０１２；４（４）：８４－９１．１１）。トライアングルアプローチは、そのような以前の創傷評価基準と比較して改善された評価である。
創傷床組織型の評価のためのスコアリングシステムは、Ｗｏｒｌｄ Ｕｎｉｏｎ ｏｆ Ｗｏｕｎｄ Ｈｅａｌｉｎｇ Ｓｏｃｉｅｔｉｅｓ（ＷＵＷＨＳ），Ｆｌｏｒｅｎｃｅ Ｃｏｎｇｒｅｓｓ，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｗｏｕｎｄ ｃａｒｅ：ｔｈｅ Ｔｒｉａｎｇｌｅ ｏｆ Ｗｏｕｎｄ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ，Ｗｏｕｎｄｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，２０１６に記載されており、上記の表に概説されている。
図５は、創傷床スコアをより急速に改善し、実験終了までに全体的に高いスコアに到達するために、ＷＯＵＮＤＣＯＭ１＋２及び３＋４が他の全ての他の条件を上回ることを再び示している。
創傷床における細菌負荷の評価
抗菌特性はまた、診療所における日和見感染症に関連するグラム陰性好気性桿菌であるＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａで完全な厚さの創傷に感染させることによって、様々なＷＯＵＮＤＣＯＭ条件について試験された。抗菌活性は、創傷当たりの対数コロニー形成単位（ｌｏｇ ＣＦＵ／創傷）によって測定されるように、細菌数の低減によって実証される。
図６は、ＷＯＵＮＤＣＯＭ（１、２、３及び４）の全ての変形例が、対照条件と比較して改善された抗菌活性を示し、ＷＯＵＮＤＣＯＭ１が最高のパフォーマンスを示し、ＷＯＵＮＤＣＯＭ２、３及び４も高い抗菌特性を示すことを実証する。
結論
要約すると、図３～６のデータから、ＷＯＵＮＤＣＯＭは感染した創傷を治療するための安全かつ効果的な手段を提供し、ＷＯＵＮＤＣＯＭは、エフェクター分子を含まない他のコラーゲン膜と比較して、急速な創傷閉鎖及び創傷治癒を促進することが明らかである。
ＷＯＵＮＤＣＯＭ１＋２（ＰＬＬなし）は、ＷＯＵＮＤＣＯＭ３＋４（ＰＬＬ含有）よりも創傷サイズの低減をより効率的に加速させ、３μＭのエフェクター含有量（ＷＯＵＮＤＣＯＭ１及び３）と３０μＭのエフェクター含有量（ＷＯＵＮＤＣＯＭ２及び４）との間で創傷サイズの低減に差異は観察されなかった。ＷＯＵＮＤＣＯＭ１は、創傷床における最も高い細菌負荷低減速度を示した。
まとめると、図３～６に提示されるデータは、コラーゲンＶＩ アルファ－３鎖に由来する生体活性ペプチドの適切な組み合わせが、ヒトの創傷治癒に密接に類似するブタモデルにおけるインビボでの皮膚創傷治癒を強く刺激することを示す。マウス研究と同様に、ＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３の組み合わせ（ＷＯＵＮＤＣＯＭ）を含浸させたコラーゲンＩ創傷マトリックスのこの優れた創傷治癒効果は、他の試験された創傷マトリックスではかなり顕著ではなかった。これらの効果は、コラーゲンＶＩ由来のペプチドの組み合わせでコーティングされた生体材料の優れた創傷治癒特性をもたらすことが期待される。このコーティング戦略は創傷環境に有益であり、改善された創傷修復を促進し、異常な瘢痕形成を低減する可能性がある。
実施例３－コラーゲンＶＩペプチドの安定性（単独）
コラーゲンＶＩペプチドＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３の安定性を評価した。安定性とは、ペプチドの純度及び／又は特定の温度、特に－２０℃又は２５℃でのペプチドの長期安定性を含む。
ｉ．初期安定性試験
コラーゲンＶＩ由来ペプチドＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３を、非ｃＧＭＰ下でペプチド合成プロバイダーによって合成した。
コラーゲンＶＩ由来ペプチドＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３を、－２０℃、又はベンチトップ条件で２５℃のいずれかで３年間貯蔵した。ペプチドを、それらの創傷治癒（インビトロ引っかき試験を介して）及び抗菌特性（生存カウントアッセイを介して）について定期的に試験した。
結果
インビトロ引っかき試験では、ＨａＣａＴ細胞に対するペプチドの細胞毒性効果はなく、試験期間中にペプチドの創傷治癒活性が低下しなかったことが示されている。生存カウントアッセイは、ペプチドの連続的な広域スペクトル抗菌活性を示し、これは、試験期間を通して低下しなかった。
いずれの貯蔵温度でも、これらのパラメータにおける有意な変化は３年間観察されなかった。
ｉｉ．更なる安定性及び純度試験
ＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３の両方を、非ｃＧＭＰ条件下で合成した。ペプチドを調査の対象として、純度（クロマトグラフィー、ＬＣ－ＭＳ）を評価し、ペプチド合成中に生成された不純物／関連物質を評価するための試験及び分析方法を評価し、検証した。この評価は、リスク管理の一環として材料特性評価に使用される。背景として、ペプチドＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３の合成中に、関連物質としても言及される少量の不純物が、プロセスの通常の部分として生成される。関連物質は、例えば、切断ペプチド又は修飾アミノ酸を含むペプチドである。この分数は、できる限り最小限に抑えられる。材料仕様によると、最大５％の不純物が許容される。プロセス開発中に、関連物質を分析し、濃度≧０．５０％の全ての物質の上限を定義した。全ての不純物≧０．１０％は、分析証明書に報告された。
分析中、コラーゲンＶＩ由来ペプチドＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３を定量クロマトグラフィーによって分析し、不純物を、それらの相対保持時間（ＲＴＴ）、ピーク面積、及び計算された分子量によって特徴付けた。推奨される分子構造を有する不純物／関連物質は、それらの計算された分子量に基づいて、潜在的な生体適合性／毒性の問題の評価と同様に評価した。
ＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３ペプチド調製物は、どちらも非常に純粋であり、Ｔｅｃｈバッチの純度は、９６％である。
各ペプチド調製物にはいくつかの不純物／関連物質が含まれており、これらは２つの群に分けることができる。
（１）欠損アミノ酸を有する切断ペプチド
切断ペプチドは、一般に不活性であると考えられる。これは、宿主防御ペプチドの活性が、ペプチド鎖に沿った荷電アミノ酸及び疎水性アミノ酸の正しい配置を含む、それらの二次構造に大きく依存するという事実に起因する［５０、５１］。興味深いことに、長さが増加するＡＭＰは、膜に対してより破壊的であり（細胞毒性）、切断ペプチドは元の全長ペプチドよりも更に細胞毒性が低いことも記載されている（［５０］）。
（２）アミノ酸修飾を有するペプチド
全てのペプチド修飾は、無毒性として分類され、したがって、最終生成物にいかなる害も及ぼさない。これらの所見は、データベース検索（ＥＣＨＡ、ＰｕｂＣｈｅｍ）に基づいている。しかしながら、１つの例外は、有毒な仮想ペプチド修飾、１，１，３，３－テトラメチルグアニジンである。重要なことに、この物質は、アミノ酸修飾としてのポリペプチド鎖の不可欠な部分であり、したがって、遊離化学形態での最終生成物中に存在しない。更に、それは非常に低い濃度で存在し、毒性濃度レベルをはるかに下回り、したがって、最終生成物にいかなる害も及ぼさない。
したがって、チェックしたペプチド及び不純物は、毒性又は生体適合性の問題を示さなかった。
ｉｉ．更なる安定性試験
ＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３の両方を、ｃＧＭＰ条件下で、ＡｍｂｉｏＰｈａｒｍ Ｉｎｃ．によって合成した。個々のペプチドＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３（すなわち、ＷＯＵＮＤＣＯＭフォーマットではない）は、－２０℃及び＋２５℃の両方で進行中の安定性試験の対象となる。これらは最大２４ヶ月間実施される。
安定性研究は、ＡｍｂｉｏＰｈａｒｍの内部標準操作手順（ＳＯＰ）、Ｓｌａｂ １１．１２－００５「安定性試験管理手順」及び個々の安定性プロトコル、ＧＶＲ２８の場合はＡＰｉ３０９１（ＦＰ．２３１－３）－００１、ＳＦＶ３３の場合はＡＰｉ３０９２（ＦＰ．２３２－３）－００１に従って行われる。
ＳＯＰは、ＡＰＩの安定性研究の計画及び実施のために、次の該当する文書を参照する。
●Ｇｕｉｄａｎｃｅ ｆｏｒ ｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｑ１Ａ（Ｒ２）Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ Ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ Ｎｅｗ Ｄｒｕｇ Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ
●Ｇｕｉｄａｎｃｅ ｆｏｒ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｑ１Ｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ Ｄａｔａ
●ＩＣＨ Ｑ７－Ｇｏｏｄ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ Ｐｒａｃｔｉｃｅ Ｇｕｉｄａｎｃｅ ｆｏｒ Ａｃｔｉｖｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ，Ｓｕｂｐａｒｔ １１．５“Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｏｆ ＡＰＩｓ”
●Ｅｕｄｒａｌｅｘ Ｖｏｌｕｍｅ ４，Ｐａｒｔ ＩＩ：Ｓｅｃｔｉｏｎ １１．５“Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｏｆ ＡＰＩｓ”
●Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ（２０２０ Ｅｄｉｔｉｏｎ）Ｖｏｌｕｍｅ ＩＶ，９００１－Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ ａｃｔｉｖｅ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ ａｎｄ ｆｉｎｉｓｈｅｄ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｓ
結果
以下は、０日目（０Ｄ）及び３ヶ月での安定性試験の実験結果である。表８及び９は、それぞれ、ＧＶＲ２８を－２０℃及び２５℃で貯蔵した場合の安定性結果を示す。表１０及び１１は、それぞれ、ＳＦＶ３３を－２０℃及び２５℃で貯蔵した場合の安定性結果を示す。加速条件を表すために２５℃を選択した。
この研究は、長期的なペプチドの安定性と潜在的な危険性についての有用な情報及び指示を提供すると考えられている。
Figure 2023545585000011
Figure 2023545585000012
Figure 2023545585000013
Figure 2023545585000014
ＧＶＲ２８又はＳＦＶ３３が－２０℃で貯蔵された場合、０日目と３ヶ月時点との間に分解は観察されなかった。ＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３については、最初の３ヶ月間に２５℃で貯蔵した場合、純度のわずかな低下が観察された。しかしながら、３ヶ月時点で、純度レベルは許容基準内であった。
２５℃で貯蔵したＳＦＶ３３では、３ヶ月でいくらかの新しい不純物が検出されたが、純度が低下した場合にはこれが予想される。水分含有量は３ヶ月間で増加したが、依然として許容基準の範囲内であった。
３ヶ月後に室温で見られるＳＦＶ３３不純物は評価されるが、懸念は生じず、無害な切断及び不活性配列であることが予想される。
進行中の長期ペプチド安定性試験では、外観、同一性、純度／関連不純物、及び含水量に関して、コラーゲンＶＩペプチド（ＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３）の安定性に著しい変化は示されていない。安定性研究は、コラーゲンＶＩペプチドが、商業的及び臨床的に関連する持続時間の間、それらの凍結乾燥状態で安定であることを示す。
実施例４－コラーゲンＶＩペプチドを含む構築されたＷＯＵＮＤＣＯＭの安定性
ＷＯＵＮＤＣＯＭは、２つの独立した会社によって製造され、異なる重要な製品安定性パラメータを、以下を含む電子顕微鏡法によって評価した。
（ｉ）長期コラーゲンＩ原線維及びコラーゲンＩスポンジの安定性及び完全性（特に、肉眼的外観及びコラーゲンスポンジ孔径）、並びに
（ｉｉ）金標識ポリクローナル抗体を用いた定量的電子顕微鏡法による、ＷＯＵＮＤＣＯＭマトリックスにおける長期的なペプチド安定性及び濃度。
ＷＯＵＮＤＣＯＭ製造プロセス
安定性を評価するために、ＷＯＵＮＤＣＯＭユニットを以下のように製造した。
ウシコラーゲンＩ
ウシコラーゲンＩは、機械的手段によって採取した。真皮を、下層組織（脂肪、筋肉、骨）及び表皮（剥離皮膚生成）からナイフで分離した。腱を筋肉及び骨から機械的に分離した。
ＴＳＥ／ＢＳＥのリスクを低減するとともに、原材料に存在する可能性のある他の微生物の移行を低減するために、ＩＳＯ２２４４２シリーズの規格に規定されている手順を遵守し、適切な調達、トレーサビリティ、取り扱い及び管理を保証した。例えば、群れはＢＳＥフリーであり、一定の制御下にあり、組織採取方法は、中枢神経系組織などの潜在的にＴＳＥ汚染され得る身体部分との接触を慎重に回避した。
コラーゲン懸濁液への処理は、微生物のために生き残ることが困難であり、結果として生じるコラーゲン懸濁液は、デフォルトで微生物の負荷を十分に低減した。ＩＳＯ２２４４２－３に従ったウイルス不活性化研究は、処理ステップがウイルス負荷を十分に低減することを検証した。また、処理されたコラーゲンは、細胞、細胞破片、脂質、ＲＮＡ及びＤＮＡを欠いていた。
このワークフローは、ヒトコラーゲンＶＩのアルファ３鎖の配列の正確なレプリカであったウシコラーゲンＩヒトコラーゲンＶＩペプチドＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３の安定した再現性のある生成を確実にした。ペプチドは、各々約３μＭの濃度で生成物中に存在した。このペプチド量は、所望の効果を提供することが示されている。ペプチドは、標準的な化学ペプチド合成によって合成的に製造された。最終的な凍結乾燥させた材料のペプチド含有量は、≧７０％である。残りの含有量は、水及び酢酸塩である。ペプチド含有量のうち、ＧＶＲ２８又はＳＦＶ３３の純度は、それぞれ、＞９５％の範囲内であった。０．５０％を超える任意の単一の不純物は、製造業者によってデフォルトで特徴付けられた。ＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３については、主要な不純物が分析及び評価されている。それらは、機能障害を有するか、又は無傷の機能を有しない切断又は修飾されたペプチドからなる。
このワークフローは、合成された生体活性ヒトコラーゲンＶＩペプチドの安定した再現性のある生成を保証する。
ＷＯＵＮＤＣＯＭは、次のとおり製造された。
１．コラーゲンＶＩペプチドを化学合成し、次いで凍結乾燥させ、ガラスバイアルに詰め、冷凍庫で保管した。
２．ウシ組織を、純粋な天然コラーゲンＩ懸濁液が導出されるまで処理した。
３．ペプチドを、コラーゲンスラリーに機械的に混合した。
４．得られた懸濁液を容器に注ぎ込み、凍結させ、次いで凍結乾燥させた（フリーズドライ）。
５．凍結乾燥に関連して脱水熱架橋（ＤＨＴ）が行われた（化学架橋なし）
６．シートの切断／スライス及び滅菌バッグへの包装
７．滅菌
最終製品は、一緒にＷＯＵＮＤＣＯＭ生成物を形成する担体（コラーゲンＩ）及びエフェクター分子（例えば、ＧＲＶ２８及びＳＦＶ３３）で構成される。
ＷＯＵＮＤＣＯＭ安定性実験
ＷＯＵＮＤＣＯＭプロトタイプは、製造業者Ａ及び製造業者Ｂによって製造された。それらは室温及び乾燥条件下で貯蔵された。試料を、送達時に電子顕微鏡によって検査し、次いで異なる時点で、生成物の構造安定性の側面を評価した。
この目的のために、異なるＷＯＵＮＤＣＯＭ標本におけるコラーゲン原線維構造、天然性（ｎａｔｉｖｉｔｙ）、及びアーキテクチャなどのパラメータを、走査及び透過電子顕微鏡法による試料の評価によって調査した。５つの異なるＷＯＵＮＤＣＯＭパッチを、５つの異なる領域に分けた。各領域から、５つの異なる試料（直径２ｍｍ）をパンチアウトし、合計１２５個の試料を得た。試料を、確立されたルーチン電子顕微鏡法試料調製に供した。
したがって、生成安定性研究は、ＷＯＵＮＤＣＯＭ上の走査電子顕微鏡及び透過電子顕微鏡の確立されたルーチン方法論を適用するように設計された。この技法は、ＷＯＵＮＤＣＯＭ足場の構造的詳細を直接評価するための貴重なツールであることが証明された。したがって、天然コラーゲン線維／μｍ２の密度を、製造業者Ａ及び製造業者ＢからのＷＯＵＮＤＣＯＭ物品において、製造直後及び貯蔵寿命の経過中の材料品質の尺度として定量的に評価した（図７～１０）。
別のアプローチにおいて、生成安定性研究は、ＷＯＵＮＤＣＯＭ足場内の局所ＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３濃度及び分布の直接評価を可能にする、ＷＯＵＮＤＣＯＭ上の定量的免疫電子顕微鏡法の確立されたルーチン方法論を適用するように設計された。異なるＷＯＵＮＤＣＯＭ足場全体にわたるＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３濃度変動を、製造後及び貯蔵寿命経過中に評価した（図１１～１３）。結果は、研究されたプロトタイプの品質の指標として役立ち、したがって、製造プロセスパラメータに関するフィードバックとして役立ち得る。免疫金粒子（黒い点）／μｍ２の数は、ＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３ペプチドの濃度に直接変換される。
結果は、研究されたプロトタイプの品質の指標として役立ち、したがって、製造プロセスパラメータに関するフィードバックとして役立ち得る。研究は、標準手順及び公表された研究プロトコルに従って実施した。
結果
製造業者Ａ（図７）及び製造業者Ｂ（図８）の２つの異なる製造業者によって製造されたＷＯＵＮＤＣＯＭの内部コラーゲン原線維構造に対する効果を、透過型電子顕微鏡を使用して経時的に評価した。全ての検査されたＷＯＵＮＤＣＯＭ標本は、約１０～１２コラーゲン原線維／μｍ２のコラーゲン原線維密度を有する均質な超構造を示す。コラーゲン原線維は、６３～６７ｎｍの横紋周期性で天然に現れる。全てのＷＯＵＮＤＣＯＭ試料は、天然コラーゲンＩ原線維の高密度を有する均質な超構造を示す。コラーゲンＩテンプレートの超構造特性は、製造業者とは独立しており、試験された貯蔵寿命中に変化しなかった。
２つの異なる製造業者、製造業者Ａ（図９）及び製造業者Ｂ（図１０）によって製造されたＷＯＵＮＤＣＯＭのコラーゲンスポンジ構造に対する効果を、走査電子顕微鏡を使用して経時的に評価した。全ての検査されたＷＯＵＮＤＣＯＭ標本は、開いた多孔質の超構造を示し、８０％の孔は、２０～６０μｍの直径を有する。製造業者Ｂのコラーゲンテンプレートは、孔径分布に関する超構造外観においてより均質に見える。評価された全てのＷＯＵＮＤＣＯＭパッチは、試験された貯蔵寿命中にアーキテクチャの変化はなかった。
コラーゲンの２つの異なる製造業者、製造業者Ａ及び製造業者Ｂによって製造されたＷＯＵＮＤＣＯＭにおけるＳＦＶ３３及びＧＶＲ２８分布に対する効果を、経時的に評価した（図１１～１３）。５つの異なるＷＯＵＮＤＣＯＭパッチからの異なるＷＯＵＮＤＣＯＭ試料中のＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３の濃度を、定量的免疫電子顕微鏡法によって経時的に評価した（図１１～１３）。免疫金粒子の数／μｍ２を、ランダムに選択された領域でカウントした。選択された実験条件は、免疫金粒子の数／μｍ２を、標的構造の実際の濃度（すなわち、局所ＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３濃度）に直接変換することを可能にした。
ＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３の両方が、全ての検査されたＷＯＵＮＤＣＯＭパッチのコラーゲン足場内に均等に分布した。両方のペプチドについての局所濃度の計算された変動は、約＋／－１０％の範囲内であった。製造業者Ａによって製造されたＷＯＵＮＤＣＯＭと製造業者Ｂによって製造されたＷＯＵＮＤＣＯＭとの間に差異は見出されなかった。
ＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３は、検査した全てのＷＯＵＮＤＣＯＭパッチにおいて、均一かつ再現性のある分布及び濃度を明らかに示す。したがって、ＷＯＵＮＤＣＯＭは、安定した再現性のある製造プロセスによって製造される。
製造業者Ｂ及び製造業者ＡによるＷＯＵＮＤＣＯＭの生産技術は本質的に同一であるため、製造業者ＢからのＷＯＵＮＤＣＯＭユニットの長期安定性は、製造業者Ａによって製造されたＷＯＵＮＤＣＯＭユニットと同じ安定性を１２ヶ月後に実証すると仮定することができる。
結論
評価された異なる時点で、走査電子顕微鏡的外観でも透過電子顕微鏡レベルでも、ＷＯＵＮＤＣＯＭの微細構造又はペプチド濃度に変化は観察されなかった。
まとめると、これらの結果は、ＷＯＵＮＤＣＯＭ創傷包帯が堅牢で再現性のある生産プロファイルを有し、したがって慢性感染創傷の管理のための信頼できる利益を有することを示している。更に、この評価はまた、製造業者Ａ及び製造業者Ｂの両方からのＷＯＵＮＤＣＯＭの同等の製造を示す。
データは、ＷＯＵＮＤＣＯＭの貯蔵寿命が少なくとも１年であることを示しており、これは関連する設定で製品を効果的に利用するのに十分である（例えば、診療所又は病院での製造、流通及び使用に十分な時間を提供する）。
実施例５－生体活性コラーゲンＶＩペプチドを含むＷＯＵＮＤＣＯＭの創傷治癒及び抗菌効果を他の膜と比較する
ＷＯＵＮＤＣＯＭの創傷治癒効果及び抗菌活性を、ＰｒｏＨｅａｌのそれと比較した。ＰｒｏＨｅａｌは１００％コラーゲン製品であり、ＷＯＵＮＤＣＯＭと同じ基材を有しているため、生体活性コラーゲンＶＩペプチドの効果を評価するための比較器として機能する。Ｗｈａｔｍａｎセルロースを更なる対照として使用して、増加した線維芽細胞増殖におけるコラーゲン基材の寄与に関する洞察を提供した。
ＷＯＵＮＤＣＯＭは、生体活性コラーゲンＶＩポリペプチドＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３を組み合わせたコラーゲンベースの担体を含む。
ｉ．膜の創傷治癒効果を評価するインビトロ試験
材料及び方法
ＷＯＵＮＤＣＯＭの滅菌されていない試料は、製造業者Ｂによって製造された。滅菌されたＰｒｏＨｅａｌ試料（ＲＥＦ８３０３０－００１、バッチ番号２００１０９９）は、ＭｅｄＳｋｉｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓによって製造された。Ｗｈａｔｍａｎセルロース濾紙（ＲＥＦ１０ ３１１ ６１１、バッチ番号Ｇ１５０４０１７）を使用した。
皮膚線維芽細胞（Ｌｏｎｚａ ＃ＣＣ２５１１）、ＦＢＭ培地（Ｌｏｎｚａ ＃ＣＣ３１３１）、試薬、器具等は、以下のように説明された。
Figure 2023545585000015
プロトコル
パンチの調製
●６．２で定義された６つの異なる創傷パッドからの円形パンチは、滅菌条件下で組織８ｍｍ生検パンチャーによって調製される。
皮膚線維芽細胞の事前培養及び播種
●真皮線維芽細胞に特有のＬｏｎｚａの推奨に従って細胞を解凍する（回転なし）
●サプリメントを含むＦＢＭ培地中で細胞を増殖させる。細胞がより集密的になるにつれて漸増量の培地を使用する（２５％集密下で１ｍｌ／５ｃｍ２、２５～４５％ １．５ｍｌ／５ｃｍ２、＞４５％ ２ｍｌ／５ｃｍ２）
●細胞は、播種日に約６０～８０％集密である必要がある
●培地を取り除き、細胞をＰＢＳで洗浄する
●Ｌｏｎｚａトリプシンを添加する
●細胞を放出した後、２倍量の培地をＦＢＳとともに添加する
●３００×ｇで５分間回転させる
●上清を吸引し、培地中の細胞を再懸濁する
●細胞濃度を決定し、細胞を希釈する。
●パンチは、所定の位置に保持するために、底部に５０ｕｌの培地を有する１２ウェルプレートに配置される。
●細胞をパンチ上に播種する
ａ．１０，０００細胞／５０ｕｌ培地（ＥＭ）を２回又は
ｂ．２０，０００細胞／５０ｕｌ培地（増殖）を３回
●細胞を１時間パンチに付着させる
●１４００ｕｌ培地をウェルにそっと添加する
●細胞を０、２４、４８及び９６時間インキュベートする
●９６時間試料の場合、培地を４８時間後に交換する。
電子顕微鏡法のための細胞の調製
●パッドパンチ上で０、２４、４８及び９６時間インキュベートした細胞を、ＰＢＳ中で１回洗浄する
●次いで、試料をＥＭ ｆｉｘ（スポンサーにより提供）に固定し、スポンサーに送達する
同じ量の細胞（１０，０００）を、３つの試料型（ＷＯＵＮＤＣＯＭ、ＰｒｏＨｅａｌ及びＷｈａｔｍａｎセルロース濾紙）に適用した。３つの異なる試料の創傷治癒効果を、所与の試料上の細胞付着及び増殖を評価することによってインビトロで試験した。これを、上記の方法を使用して評価した）。
結果
インビトロ研究の結果を図１４に提示する。カウントされた細胞の最大数（ＷＯＵＮＤＣＯＭ ９６時間で１１９細胞）を、ｙ軸上で１００％に設定した。
同じ量の細胞を、３つの試料型に適用した。異なる開始数は、既にｔ＝０から、コラーゲンＶＩペプチド（ＧＶＲ２８及びＳＦＶ３３）が存在する材料に細胞が付着しやすくなり得ることを示す。その後、ＷＯＵＮＤＣＯＭは、線維芽細胞の増殖を加速させる。ＷＯＵＮＤＣＯＭで観察された線維芽細胞密度の増加は、ＰｒｏＨｅａｌで観察されたものの少なくとも２倍、Ｗｈａｔｍａｎセルロース濾紙で観察されたものの少なくとも４倍であった。
要約すると、ＷＯＵＮＤＣＯＭは、他の膜と比較して優れた創傷治癒効果を示す。
ｉｉ．膜の抗菌活性を評価するインビトロ試験
材料及び方法
本研究で使用したＷＯＵＮＤＯＭ、ＰｒｏＨｅａｌ及びＷｈａｔｍａｎセルロース線維の試料は、上記の創傷治癒実験で概説したものと同じである。
異なる試料の抗菌活性を、以下の方法によって所与の膜表面上の細菌殺傷を決定することによってインビトロで評価した。
細菌株
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ
Figure 2023545585000016
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ
Figure 2023545585000017
材料及び試薬リスト
Figure 2023545585000018
器具
Figure 2023545585000019
細菌培養の増殖
以下の手順は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ及びＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａについて同一である。
実験前の１週間以内に、小白金耳量の細菌ストックを非選択的寒天プレート（ＴＳＡ）上で縞模様にし、３７℃±１℃で一晩インキュベートした。培養物を使用前に、純度について目視で検査した。全ての細菌コロニーを調べて、それらが同じコロニー形態及び色を示すことを確認した。
実験の前日（－１日目）、ＴＳＡプレートからの小白金耳量を使用して、２０ｍＬのＴＳＢ培地を含有する２つの滅菌５０ｍＬのエルレンマイヤーフラスコに植菌した。フラスコを、振盪（３００ｒｐｍ）で３７℃±１℃でインキュベートした。
実験日（０日目）に、一晩培養物からのアリコートをＴＳＢ培地中で１０倍希釈し、ＯＤ６００を測定した。以前の測定から、一晩培養物は、およそ１０９ＣＦＵ／ｍＬの密度まで増殖する。
電子顕微鏡分析用の試料を調製する
試験品試料を、滅菌した２４ウェルプレートに配置した。一晩培養物からのアリコートを段階的に希釈し、ＴＳＡプレート上にプレートして、細胞密度を決定した。一晩培養物からの５０μＬのアリコートを試験品試料上にピペットし、湿潤チャンバ内で３７±１℃で０時間（１０秒）、０．５時間、１時間及び２時間インキュベートした。各インキュベーション時間の終了時に、試験品試料を滅菌した２４ウェルプレートの１ｍＬ ＥＭ ｆｉｘに入れ、ＥＭ分析のためにスポンサーに渡して、活性／生存を決定する。
結果
インビトロ抗菌活性実験の結果を図１５に提示する。３０分間の曝露後、ＷＯＵＮＤＣＯＭ上の細菌生存率の低減が観察された。具体的には、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓの生存率の１８％低減が観察され、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの生存率の２５％低減が観察された。６０分後、ＷＯＵＮＤＣＯＭ試料の表面上の細菌生存率は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓで３０％、Ｐ．ａｕｒｕｇｉｎｏｓａで２０％であり、細菌生存率は、それぞれ７０％及び８０％低減した。研究の終了時（１２０分）、ＷＯＵＮＤＣＯＭ試料の表面上のＳ．ａｕｒｅｕｓ及びＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの生存率は１０％未満であった。研究全体（０～１２０分）にわたって、比較器膜は、限られた（ＰｒｏＨｅａｌ）抗菌効果のみを示すか、又は検出可能な（セルロース濾紙）抗菌効果を示さなかった。
この研究から得られた結果は、ＷＯＵＮＤＣＯＭが、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ及びＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａなどの細菌に対する抗菌効果を有し、抗菌効果が試験された他の膜（ＰｒｏＨｅａｌ及び濾紙）よりも優れていることを実証している。
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２９．Ａｂｄｉｌｌａｈｉ ＳＭ，Ｍａａβ Ｔ，Ｋａｓｅｔｔｙ Ｇ，Ｓｔｒｏｍｓｔｅｄｔ ＡＡ，Ｂａｕｍｇａｒｔｅｎ Ｍ，Ｔａｔｉ Ｒ，Ｎｏｒｄｉｎ ＳＬ，Ｗａｌｓｅ Ｂ，Ｗａｇｅｎｅｒ Ｒ，Ｓｃｈｍｉｄｔｃｈｅｎ Ａ，Ｍｏｒｇｅｌｉｎ Ｍ．Ｃｏｌｌａｇｅｎ ＶＩ Ｃｏｎｔａｉｎｓ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｈｏｓｔ Ｄｅｆｅｎｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｗｉｔｈ Ｐｏｔｅｎｔ Ｉｎ Ｖｉｖｏ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１８；２０１：１００７－１０２０．
３０．Ｙｏｕｎｔ，Ｎ．Ｙ．，Ｂａｙｅｒ，Ａ．Ｓ．，Ｘｉｏｎｇ，Ｙ．Ｑ．，ａｎｄ Ｙｅａｍａｎ，Ｍ．Ｒ．（２００６）Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ．Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ８４，４３５－４５８
３１．Ｔｅｉｘｅｉｒａ，Ｖ．，Ｆｅｉｏ，Ｍ．Ｊ．，ａｎｄ Ｂａｓｔｏｓ，Ｍ．（２０１２）Ｒｏｌｅ ｏｆ ｌｉｐｉｄｓ ｉｎ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｗｉｔｈ ｍｅｍｂｒａｎｅｓ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ ｌｉｐｉｄ ｒｅｓｅａｒｃｈ ５１，１４９－１７７
３２．Ｓｐｅｃｋｓ，Ｕ．，Ｍａｙｅｒ，Ｕ．，Ｎｉｓｃｈｔ，Ｒ．，Ｓｐｉｓｓｉｎｇｅｒ，Ｔ．，Ｍａｎｎ，Ｋ．，Ｔｉｍｐｌ，Ｒ．，Ｅｎｇｅｌ，Ｊ．，ａｎｄ Ｃｈｕ，Ｍ．Ｌ．（１９９２）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｎ－ｔｅｒｍｉｎａｌ ｇｌｏｂｕｌｅ ｏｆ ｔｙｐｅ ＶＩ ｃｏｌｌａｇｅｎ ａｌｐｈａ ３ ｃｈａｉｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｏ ｈｅｐａｒｉｎ ａｎｄ ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ．Ｔｈｅ ＥＭＢＯ ｊｏｕｒｎａｌ １１，４２８１－４２９０
３３．Ｃｈｕ，Ｍ．Ｌ．，Ｐａｎ，Ｔ．Ｃ．，Ｃｏｎｗａｙ，Ｄ．，Ｋｕｏ，Ｈ．Ｊ．，Ｇｌａｎｖｉｌｌｅ，Ｒ．Ｗ．，Ｔｉｍｐｌ，Ｒ．，Ｍａｎｎ，Ｋ．，ａｎｄ Ｄｅｕｔｚｍａｎｎ，Ｒ．（１９８９）Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａｌｐｈａ １（ＶＩ）ａｎｄ ａｌｐｈａ ２（ＶＩ）ｃｈａｉｎｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｔｙｐｅ ＶＩ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｒｅｖｅａｌｓ ｉｎｔｅｒｎａｌ ｔｒｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｌｏｂｕｌａｒ ｄｏｍａｉｎｓ ｓｉｍｉｌａｒ ｔｏ ｔｈｅ Ａ ｄｏｍａｉｎｓ ｏｆ ｖｏｎ Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ ｔｗｏ ａｌｐｈａ ２（ＶＩ）ｃｈａｉｎ ｖａｒｉａｎｔｓ ｔｈａｔ ｄｉｆｆｅｒ ｉｎ ｔｈｅ ｃａｒｂｏｘｙ ｔｅｒｍｉｎｕｓ．Ｔｈｅ ＥＭＢＯ ｊｏｕｒｎａｌ ８，１９３９－１９４６
３４．Ｃｈｕ，Ｍ．Ｌ．，Ｚｈａｎｇ，Ｒ．Ｚ．，Ｐａｎ，Ｔ．Ｃ．，Ｓｔｏｋｅｓ，Ｄ．，Ｃｏｎｗａｙ，Ｄ．，Ｋｕｏ，Ｈ．Ｊ．，Ｇｌａｎｖｉｌｌｅ，Ｒ．，Ｍａｙｅｒ，Ｕ．，Ｍａｎｎ，Ｋ．，Ｄｅｕｔｚｍａｎｎ，Ｒ．，ａｎｄ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｍｏｓａｉｃ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｇｌｏｂｕｌａｒ ｄｏｍａｉｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｔｙｐｅ ＶＩ ｃｏｌｌａｇｅｎ ａｌｐｈａ ３ ｃｈａｉｎ：ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｔｏ ｖｏｎ Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ ｆａｃｔｏｒ，ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ，ａｃｔｉｎ，ｓａｌｉｖａｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ ａｐｒｏｔｉｎｉｎ ｔｙｐｅ ｐｒｏｔｅａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．Ｔｈｅ ＥＭＢＯ ｊｏｕｒｎａｌ ９，３８５－３９３
３５．Ｃｈｕ，Ｍ．Ｌ．，Ｐａｎ，Ｔ．Ｃ．，Ｃｏｎｗａｙ，Ｄ．，Ｓａｉｔｔａ，Ｂ．，Ｓｔｏｋｅｓ，Ｄ．，Ｋｕｏ，Ｈ．Ｊ．，Ｇｌａｎｖｉｌｌｅ，Ｒ．Ｗ．，Ｔｉｍｐｌ，Ｒ．，Ｍａｎｎ，Ｋ．，ａｎｄ Ｄｅｕｔｚｍａｎｎ，Ｒ．（１９９０）Ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｙｐｅ ＶＩ ｃｏｌｌａｇｅｎ．Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ５８０，５５－６３
３６．Ｌａｍａｎｄｅ，Ｓ．Ｒ．，Ｍｏｒｇｅｌｉｎ，Ｍ．，Ａｄａｍｓ，Ｎ．Ｅ．，Ｓｅｌａｎ，Ｃ．，ａｎｄ Ａｌｌｅｎ，Ｊ．Ｍ．（２００６）Ｔｈｅ Ｃ５ ｄｏｍａｉｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｔｙｐｅ ＶＩ ａｌｐｈａ３（ＶＩ）ｃｈａｉｎ ｉｓ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｆｏｒ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍｉｃｒｏｆｉｂｒｉｌ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｓ ｐｒｅｓｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ ｏｆ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２８１，１６６０７－１６６１４
３７．Ｃｅｓｃｏｎ，Ｍ．，Ｇａｔｔａｚｚｏ，Ｆ．，Ｃｈｅｎ，Ｐ．，ａｎｄ Ｂｏｎａｌｄｏ，Ｐ．（２０１５）Ｃｏｌｌａｇｅｎ ＶＩ ａｔ ａ ｇｌａｎｃｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃｅｌｌ ｓｃｉｅｎｃｅ １２８，３５２５－３５３１
３８．Ｉｓｅｎｈａｔｈ，Ｓ．Ｎ．，Ｆｕｋａｎｏ，Ｙ．，Ｕｓｕｉ，Ｍ．Ｌ．，Ｕｎｄｅｒｗｏｏｄ，Ｒ．Ａ．，Ｉｒｖｉｎ，Ｃ．Ａ．，Ｍａｒｓｈａｌｌ，Ａ．Ｊ．，Ｈａｕｃｈ，Ｋ．Ｄ．，Ｒａｔｎｅｒ，Ｂ．Ｄ．，Ｆｌｅｃｋｍａｎ，Ｐ．，ａｎｄ Ｏｌｅｒｕｄ，Ｊ．Ｅ．（２００７）Ａ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｆａｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｓｋｉｎ ａｎｄ ａ ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｄｅｖｉｃｅ．Ｊ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ ａｎｄ Ｍａｔｅｒｉａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ８３Ａ，９１５－９２２
３９．Ｌｉｎ Ｑ．，Ｆａｎｇ，Ｄ．，Ｆａｎｇ，Ｊ．，Ｒｅｎ，Ｘ．，Ｙａｎｇ，Ｘ．，Ｗｅｎ，Ｆ．，ａｎｄ Ｓｕ，Ｓ．Ｂ．（２０１１）Ｉｍｐａｉｒｅｄ ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ ｗｉｔｈ ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ ｏｆ ｍｙｅｌｏｉｄ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ＴＬＰ３－ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｍｉｃｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １８６，３７１０－３７１７
４０．Ｃａｎｅｓｓｏ，Ｍ．Ｃ．Ｃ．，Ｖｉｅｉｒａ，Ａ．Ｔ．，Ｃａｓｔｒｏ，Ｔ．Ｂ．Ｒ．，Ｓｃｈｉｒｍｅｒ，Ｂ．Ｇ．Ａ．，Ｃｉｓａｌｐｉｎｏ，Ｄ．，Ｍａｒｔｉｎｓ，Ｆ．Ｓ．，Ｒａｃｈｉｄ，Ｍ．Ａ．，Ｎｉｃｏｌｉ，Ｊ．Ｒ．，Ｔｅｉｘｅｉｒａ，Ｍ．Ｍ．，ａｎｄ Ｂａｒｃｅｌｏｓ，Ｌ．Ｓ．（２０１４）Ｓｋｉｎ Ｗｏｕｎｄ Ｈｅａｌｉｎｇ Ｉｓ Ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ ａｎｄ Ｓｃａｒｌｅｓｓ ｉｎ ｔｈｅ Ａｂｓｅｎｃｅ ｏｆ Ｃｏｍｍｅｎｓａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １９３，５１７１－５１８０
４１．Ｔｅｒｈｏｒｓｔ，Ｄ．，Ｃｈｅｌｂｉ，Ｒ．，Ｗｏｈｎ，Ｃ．，Ｍａｌｏｓｓｅ，Ｃ．，Ｔａｍｏｕｔｏｕｎｏｕｒ，Ｓ．，Ｊｏｒｑｕｅｒａ，Ａ．，Ｂａｊｅｎｏｆｆ，Ｍ．，Ｄａｌｏｄ，Ｍ．，Ｍａｌｉｓｓｅｎ，Ｂ．，ａｎｄ Ｈｅｎｒｉ，Ｓ．（２０１５）Ｄｙｎａｍｉｃｓ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｉｃｓ ｏｆ Ｓｋｉｎ Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ｉｎ ａｎ Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ－Ｉｎｄｕｃｅｄ，Ｂｉｐｈａｓｉｃ Ｍｏｕｓｅ Ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ｐｓｏｒｉａｓｉｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １９５，４９５３－４９６１
４２．Ｐｕｎｊａｔａｅｗａｋｕｐｔ，Ａ．，Ｎａｐａｖｉｃｈａｙａｎｕｎ，Ｓ．，Ａｒａｍｗｉｔ，Ｐ．（２０１９）Ｔｈｅ ｄｏｗｎｓｉｄｅ ｏｆ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ．Ｅｕｒ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．，３８（１）：３９－５４
４３．Ｄｉｌｌ Ｖ，Ｍｏｒｇｅｌｉｎ Ｍ（２０２０）Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄｅｒｍａｌ Ｔｅｍｐｌａｔｅｓ ｗｉｔｈ Ｎａｔｉｖｅ Ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｓｃａｆｆｏｌｄｓ Ｐｒｏｖｉｄｅ Ｇｕｉｄｉｎｇ Ｒｉｄｇｅｓ ｆｏｒ Ｉｎｖａｄｉｎｇ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｍａｙ Ｐｒｏｍｏｔｅ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｄ Ｄｅｒｍａｌ Ｗｏｕｎｄ Ｈｅａｌｉｎｇ．Ｉｎｔ Ｗｏｕｎｄ Ｊ １７：６１８－３０．
４４．Ｔａｔｉ Ｒ，Ｎｏｒｄｉｎ Ｓ，Ａｂｄｉｌｌａｈｉ ＳＭ，Ｍｏｒｇｅｌｉｎ Ｍ．（２０１８）Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｗｏｕｎｄ Ｍａｔｒｉｃｅｓ ｗｉｔｈ Ｎａｔｉｖｅ Ｄｅｒｍｉｓ－ｌｉｋｅ Ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ Ｍｏｄｕｌａｔｅ Ｐｒｏｔｅａｓｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｊ Ｗｏｕｎｄ Ｃａｒｅ ２７：１９９－２０９．
４５．Ｔａｊｉｍａ Ｓ，Ｔｉｎｇ ＪＰＹ，Ｐｉｎｎｅｌｌ ＳＲ，Ｋａｕｆｍａｎ ＲＥ．（１９８４）Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｈｕｍａｎ Ｐｒｏ ａｌｐｈａ ２（Ｉ）Ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｇｅｎｅ Ｓｅｇｍｅｎｔ．Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍ ８２：２６５－６９．
４６．Ｒｉｃａｒｄ－Ｂｌｕｍ Ｓ．（２０１１）Ｔｈｅ Ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｆａｍｉｌｙ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ Ｐｅｒｓｐｅｃｔ Ｂｉｏｌ ３：ａ００４９７８．
４７．Ｂｕｃｋｌｅｙ Ｍ（２０１６）Ｓｐｅｃｉｅｓ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｏｖｉｎｅ，Ｏｖｉｎｅ ａｎｄ Ｐｏｒｃｉｎｅ Ｔｙｐｅ １ Ｃｏｌｌａｇｅｎ；Ｃｏｍｐａｒｉｎｇ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｍａｓｓ Ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ ａｎｄ ＬＣ－ｂａｓｅｄ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ Ｓｃｉ １７：４４５．
４８．Ｊｕｎｋｅｒ ＪＰＥ，Ｋａｍｅｌ ＲＡ，Ｃａｔｅｒｓｏｎ ＥＪ，Ｅｒｉｋｓｓｏｎ Ｏ．（２０１３）Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｐａｃｔ ｕｐｏｎ Ｗｏｕｎｄ Ｈｅａｌｉｎｇ ａｎｄ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｉｎ Ｍｏｉｓｔ，Ｗｅｔ ａｎｄ Ｄｒｙ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓ．Ａｄｖ Ｗｏｕｎｄ Ｃａｒｅ（Ｎｅｗ Ｒｏｃｈｅｌｌｅ）２：３４８－５６．
４９．Ａｂｄｉｌｌａｈｉ ＳＭ，Ｍａａβ Ｔ，Ｋａｓｅｔｔｙ Ｇ，Ｓｔｒｏｍｓｔｅｄｔ ＡＡ，Ｂａｕｍｇａｒｔｅｎ Ｍ，Ｔａｔｉ Ｒ，Ｎｏｒｄｉｎ ＳＬ，Ｗａｌｓｅ Ｂ，Ｗａｇｅｎｅｒ Ｒ，Ｓｃｈｍｉｄｔｃｈｅｎ Ａ，Ｍｏｒｇｅｌｉｎ Ｍ．（２０１８）Ｃｏｌｌａｇｅｎ ＶＩ Ｃｏｎｔａｉｎｓ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｈｏｓｔ Ｄｅｆｅｎｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｗｉｔｈ Ｐｏｔｅｎｔ Ｉｎ Ｖｉｖｏ Ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１：１００７－１０２０．
５０．Ｊｉａｎｂｏ Ｓｕｎ，Ｙｕｑｉｏｎｇ Ｘｉａ，Ｄｏｎｇ Ｌｉ，Ｑｕａｎ Ｄｕ，Ｄｅｈａｉ Ｌｉａｎｇ．Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ ｂｙ ｄｅ ｎｏｖｏ ｄｅｓｉｇｎｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅｓ．Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ（ＢＢＡ）－Ｂｉｏｍｅｍｂｒａｎｅｓ Ｖｏｌｕｍｅ １８３８，Ｉｓｓｕｅ １２，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２０１４，Ｐａｇｅｓ ２９８５－２９９３．Ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｂａｍｅｍ．２０１４．０８．０１８
５１．Ｈａｏ－Ｔｉｎｇ Ｌｅｅ，Ｃｈｅｎ－Ｃｈｅ Ｌｅｅ，Ｊｅ－Ｒｕｅｉ Ｙａｎｇ，Ｊｉｍ Ｚ．Ｃ．Ｌａｉ，Ｋｕａｎ Ｙ．Ｃｈａｎｇ．Ａ Ｌａｒｇｅ－Ｓｃａｌｅ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ．ＢｉｏＭｅｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ２０１５：１－６．Ｄｏｉ：１０．１１５５／２０１５／４７５０６２

Claims (68)

  1. 組成物であって、
    （ａ）コラーゲンＶＩ型に由来するアミノ酸配列、又はその断片、バリアント、融合体若しくは誘導体、又は前記その断片、誘導体のバリアントの融合体を含むか、又はそれからなる、第１のコラーゲンＶＩ型ポリペプチドであって、前記第１のポリペプチドが、創傷治癒を促進することができる一次活性を有する、第１のコラーゲンＶＩ型ポリペプチドと、
    （ｂ）コラーゲンＶＩ型に由来するアミノ酸配列、又はその断片、バリアント、融合体若しくは誘導体、又は前記その断片、誘導体のバリアントの融合体を含むか、又はそれからなる、第２のコラーゲンＶＩ型ポリペプチドであって、前記第２のポリペプチドが、抗菌効果を発揮することができる一次活性を有する、第２のコラーゲンＶＩ型ポリペプチドと、を含む、組成物。
  2. 前記第１及び／又は第２のポリペプチド、断片、バリアント、融合体又は誘導体が、微生物を殺傷するか、又はその成長を減衰させることができる、請求項１に記載の組成物。
  3. 前記微生物が、細菌、マイコプラズマ、酵母、真菌及びウイルスからなる群から選択される、請求項２に記載の組成物。
  4. 前記第１及び／又は第２のポリペプチドが、前記微生物の膜に結合することができる、請求項１～３のいずれか一項に記載の組成物。
  5. 前記第１及び／又は第２のポリペプチドが、前記微生物の膜破壊を引き起こすことができる、請求項１～４のいずれか一項に記載の組成物。
  6. 前記第１及び／又は第２のポリペプチド、断片、バリアント、融合体又は誘導体が、創傷閉鎖を促進することができる、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
  7. 前記第１及び／又は第２のポリペプチドが、
    （ａ）上皮（表皮を含む）再生を増強すること、及び／又は
    （ｂ）創傷上皮（表皮を含む）の治癒を増強すること、及び／又は
    （ｃ）創傷間質（真皮を含む）の治癒を増強することができる、請求項１～６のいずれか一項に記載の組成物。
  8. 前記第１及び／又は第２のポリペプチドが、ＬＬ－３７以上の抗菌効果を示すことができる、請求項１～７のいずれか一項に記載の組成物。
  9. 前記抗菌効果が、グラム陽性又はグラム陰性細菌である微生物に対するものである、請求項１～８のいずれか一項に記載の組成物。
  10. 前記微生物が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ａ群連鎖球菌（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、Ｂ群連鎖球菌（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ）、Ｃ群連鎖球菌（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）、Ｄ群連鎖球菌（例えば、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、Ｆ群連鎖球菌（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｎｇｉｎｏｓｕｓ）、Ｇ群連鎖球菌（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）、アルファ－溶血性連鎖球菌（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｒｉｄａｎｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｂｏｖｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｉｔｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｎｇｉｎｏｓｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｎｇｕｉｎｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｕｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、無莢膜型Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ（ＮＴＨｉ）、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ ｂ（Ｈｉｂ）、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｎａｅｓｌｕｎｄｉｉ、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔｕｍ、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｃｌｏａｃａｅ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、多剤耐性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（ＭＲＰＡ）、多剤耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）、多剤耐性Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（ＭＲＥＣ）、多剤耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ（ＭＲＳＥ）、多剤耐性Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（ＭＲＫＰ）、多剤耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ（ＭＲＥＦ）、多剤耐性Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ（ＭＲＡＢ）及び多剤耐性Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐｐ．（ＭＲＥ）からなる群から選択される、請求項９に記載の組成物。
  11. 前記微生物が、１つ以上の従来の抗生剤に耐性である細菌である、請求項１～１０のいずれか一項に記載の組成物。
  12. 前記微生物が、多剤耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）、多剤耐性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（ＭＲＰＡ）、多剤耐性Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（ＭＲＥＣ）、多剤耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ（ＭＲＳＥ）及び多剤耐性Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（ＭＲＫＰ）からなる群から選択される、請求項１１に記載の組成物。
  13. 前記第１及び／又は第２のポリペプチドが、哺乳類細胞に対して実質的に無毒性である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の組成物。
  14. 前記第１及び／又は第２のポリペプチドが、抗内毒性効果を発揮することができる、請求項１～１３のいずれか一項に記載の組成物。
  15. 前記第１及び／又は第２のポリペプチドが、フォン・ヴィレブランド因子Ａ型ドメインに由来する、請求項１～１４のいずれか一項に記載の組成物。
  16. 前記第１及び／又は第２のポリペプチドが、コラーゲンＶＩ型のα１、α２及び／若しくはα３鎖であるか、又はそれらに由来する、請求項１～１５のいずれか一項に記載の組成物。
  17. 前記第１及び／又は第２のポリペプチドが、コラーゲンＶＩ型のα３鎖であるか、又はそれに由来する、請求項１６に記載の組成物。
  18. 前記第１及び／又は第２のポリペプチドが、コラーゲンＶＩ型のα３鎖のＮ２、Ｎ３若しくはＣ１ドメインであるか、又はそれらに由来する、請求項１～１７のいずれか一項に記載の組成物。
  19. 前記第１及び／又は第２のポリペプチドが、正味正電荷を有する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の組成物。
  20. 前記第１及び／又は第２のポリペプチド上の前記電荷が、＋２～＋９の範囲であり、任意選択で、前記電荷が異なるか、又は同じである、請求項１９に記載の組成物。
  21. 前記第１及び／又は第２のポリペプチドが、少なくとも３０％の疎水性残基を有する、請求項１～２０のいずれか一項に記載の組成物。
  22. 前記ポリペプチドのうちの少なくとも１つが、配列番号１～２３からなる群から選択されるアミノ酸配列、及びその断片、バリアント、融合体又は誘導体、並びに前記その断片、バリアント及び誘導体の融合体を含むか、又はそれらからなり、配列番号１～２３のうちのいずれか１つの抗菌活性を保持する、請求項１～２１のいずれか一項に記載の組成物。
  23. 前記ポリペプチドのうちの少なくとも１つが、配列番号１～５からなる群から選択されるアミノ酸配列：
    Figure 2023545585000020
    及びその断片、バリアント、融合体又は誘導体、並びに前記その断片、バリアント及び誘導体の融合体を含むか、又はそれらからなり、配列番号１～５のうちのいずれか１つの抗菌活性を保持する、請求項２２に記載の組成物。
  24. 前記ポリペプチドのうちの少なくとも１つが、配列番号１～５からなる群から選択される前記アミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、請求項２３に記載の組成物。
  25. 前記第１及び／又は第２のポリペプチドが、配列番号１～２３からなる群から選択される前記アミノ酸配列のバリアントを含むか、又はそれからなる、請求項１～２４のいずれか一項に記載の組成物。
  26. 前記バリアントが、配列番号１～２３のうちのいずれか１つの前記アミノ酸配列アミノ酸配列と少なくとも５０％の同一性、例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有する、請求項２５に記載の組成物。
  27. 前記第１及び／又は第２のポリペプチドが、
    （ａ）１０～２００アミノ酸長、例えば、１０～１５０、１５～１００、１５～５０、２０～４０、２５～３５、若しくは２８～３３アミノ酸長；
    （ｂ）前記第１及び／若しくは第２のポリペプチドが、最大２５、２８、３０、３３、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５若しくは１００アミノ酸長であるアミノ酸配列の一部である、より長いアミノ酸配列の一部、並びに／又は
    （ｃ）前記第１及び／若しくは第２のポリペプチドが、２０～２００、２８～２００、３３～２００、２８～１５０、３３～１５０、２８～１００、３３～１００、２８～５０、３３～５０、２８～４０、３３～４０、又は２８～３３アミノ酸長であるアミノ酸配列の一部である、より長いアミノ酸配列の一部である、請求項１～２６のいずれか一項に記載の組成物。
  28. 前記ポリペプチドが、少なくとも２０アミノ酸長、好ましくは少なくとも２８アミノ酸長である、請求項２７に記載の組成物。
  29. 前記第１及び／若しくは第２のポリペプチド、又はその断片、バリアント、融合体若しくは誘導体が、修飾又は誘導体化された１つ以上のアミノ酸を含む、請求項１～２８のいずれか一項に記載の組成物。
  30. 前記１つ以上のアミノ酸が、ＰＥＧ化、アミド化、エステル化、アシル化、アセチル化及び／又はアルキル化によって修飾又は誘導体化される、請求項２９に記載の組成物。
  31. 前記第１及び／又は第２のポリペプチドが、組換えポリペプチドである、請求項１～３０のいずれか一項に記載の組成物。
  32. 前記組成物が、少なくとも２つのポリペプチドを含み、各ポリペプチドが、配列番号１～２３のアミノ酸配列、及びその断片、バリアント、融合体又は誘導体、並びに前記その断片、バリアント及び誘導体の融合体を含むか、又はそれらからなり、配列番号１～２３のいずれか１つの抗菌活性を保持し、前記少なくとも２つのポリペプチドが、異なる配列である、請求項１～３１のいずれか一項に記載の組成物。
  33. （ａ）前記第１のポリペプチドが、配列番号１によるアミノ酸配列（すなわち、ＧＶＲ２８）、又はその断片、バリアント、融合体若しくは誘導体、並びに前記その断片、バリアント及び誘導体の融合体を含むか、又はそれらからなり、配列番号１の創傷治癒活性を保持する、かつ／あるいは
    （ｂ）前記第２のポリペプチドが、配列番号５によるアミノ酸配列（すなわち、ＳＦＶ３３）、又はその断片、バリアント、融合体若しくは誘導体、並びに前記その断片、バリアント及び誘導体の融合体を含むか、又はそれらからなり、配列番号５の抗菌活性を保持する、請求項１～３２のいずれか一項に記載の組成物。
  34. 第１及び第２のポリペプチドが、少なくとも０．５：１、例えば、０．６：１、０．７：１、０．８：１、０．９：１若しくは１：１の比で前記組成物中に存在するか、又は
    前記第２及び第１のポリペプチドが、少なくとも０．５：１、例えば、０．６：１、０．７：１、０．８：１、０．９：１若しくは１：１の比で前記組成物中に存在する、請求項１～３３のいずれか一項に記載の組成物。
  35. 前記組成物が、足場材料を更に含む、請求項１～３４のいずれか一項に記載の組成物。
  36. 前記足場材料が、コラーゲンタンパク質であり、任意選択で、前記足場が、コラーゲンＩである、請求項３５に記載の組成物。
  37. 請求項１～３６のいずれか一項に記載の組成物を、薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、担体、緩衝液又はアジュバントとともに含む、薬学的組成物。
  38. 請求項１～３７のいずれか一項に記載の組成物若しくは薬学的組成物でコーティング、含浸、混和されるか、又は他の方法で会合される、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、又はそれらに使用するための材料。
  39. 請求項１～３６のいずれか一項に記載の組成物又は請求項３７に記載の薬学的組成物でコーティングされる、請求項３８に記載の医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、又はそれらに使用するための材料。
  40. 前記デバイス、インプラント、創傷ケア製品、又は材料が、バイパス手術、体外循環、創傷ケア及び／又は透析で使用するためのものである、請求項３８又は３９に記載の医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、又はそれらに使用するための材料。
  41. 前記組成物が、縫合糸、プロテーゼ、インプラント、創傷包帯、カテーテル、レンズ、皮膚移植片、皮膚代替物、フィブリン糊若しくは包帯でコーティング、塗装、スプレーされるか、又は他の方法で適用される、請求項３８～４０のいずれか一項に記載の医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、又はそれらに使用するための材料。
  42. ポリマー、金属、金属酸化物及び／若しくはセラミックを含むか、又はそれらからなる、請求項３８～４１のいずれか一項に記載の、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、又はそれらに使用するための材料。
  43. 医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、又はそれらに使用するための材料を、請求項１～３７のいずれか一項に記載の組成物若しくは薬学的組成物でコーティング、含浸、混和するか、又は他の方法で会合させるステップを含む、前記医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料を調製する方法。
  44. 医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料を調製する方法であって、以下：
    （ｉ）請求項１～３６のいずれか一項によって定義される第１及び／又は第２のポリペプチドを含む組成物を調製するステップと、
    （ｉｉ）前記医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、又はそれらに使用するための材料を、ステップ（ｉ）で調製した前記組成物でコーティング、含浸、混和するか、又は他の方法で会合させるステップと、
    任意選択で、前記医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、又はそれらに使用するための材料を、ポリリジンでコーティング、含浸、混和するか、又は他の方法で会合させるステップと、を含む、方法。
  45. 医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料を調製する方法であって、以下：
    （ｉ）前記医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、又はそれらに使用するための材料を、請求項１～３６のいずれか一項によって定義される第１のコラーゲンＶＩ型ポリペプチドでコーティング、含浸、混和するか、又は他の方法で会合させるステップと、
    （ｉｉ）前記医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、又はそれらに使用するための材料を、請求項１～３６のいずれか一項によって定義される第２のコラーゲンＶＩ型ポリペプチドでコーティング、含浸、混和するか、又は他の方法で会合させるステップと、
    任意選択で、前記医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、又はそれらに使用するための材料を、ポリリジンでコーティング、含浸、混和するか、又は他の方法で会合させるステップと、を含む、方法。
  46. 医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品又はそれらに使用するための材料を調製する方法であって、以下：
    （ｉ）足場溶液を、請求項１～３６のいずれか一項によって定義される少なくとも１つのコラーゲンＶＩポリペプチドと混合するステップと、
    （ｉｉ）足場と、請求項１～３６のいずれか一項によって定義される少なくとも１つのコラーゲンＶＩポリペプチドとの混合物を乾燥させるステップと、を含み、任意選択で、前記乾燥が、空気乾燥又は凍結乾燥によるものである、方法。
  47. キットであって、
    （ｉ）請求項１～３６のいずれか一項に記載の組成物、又は請求項３７に記載の薬学的組成物、又は請求項３８～４２のいずれか一項に記載の医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、若しくはそれらに使用するための材料と、
    （ｉｉ）使用説明書と、を含み、
    任意選択で、ポリリジンを更に含む、キット。
  48. 医学における使用のための、請求項１～３６のいずれか一項に記載の組成物又は請求項３７に定義される薬学的組成物。
  49. 微生物感染症の治癒的及び／又は予防的治療に使用するための、請求項１～３６のいずれか一項に記載の組成物又は請求項３７に定義される薬学的組成物。
  50. 前記微生物感染症が、全身感染症である、請求項４９に記載の使用のための組成物又は薬学的組成物。
  51. 前記微生物感染症が、１つ以上の従来の抗生剤に耐性である、請求項４９又は５０に記載の使用のための組成物又は薬学的組成物。
  52. 前記微生物感染症が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ａ群連鎖球菌（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、Ｂ群連鎖球菌（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ）、Ｃ群連鎖球菌（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）、Ｄ群連鎖球菌（例えば、Ｅｎｔｅｒｏ－ｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、Ｆ群連鎖球菌（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｎｇｉｎｏｓｕｓ）、Ｇ群連鎖球菌（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）、アルファ－溶血性連鎖球菌（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｒｉｄａｎｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｂｏｖｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｉｔｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｎｇｉｎｏｓｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｎｇｕｉｎｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｕｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、無莢膜型Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ（ＮＴＨｉ）、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ ｂ（Ｈｉｂ）、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｎａｅｓｌｕｎｄｉｉ、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔｕｍ、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｃｌｏａｃａｅ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、多剤耐性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（ＭＲＰＡ）、及び多剤耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）、多剤耐性Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（ＭＲＥＣ）、多剤耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ（ＭＲＳＥ）、多剤耐性Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（ＭＲＫＰ）、多剤耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ（ＭＲＥＦ）、多剤耐性Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ（ＭＲＡＢ）及び多剤耐性Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐｐ．（ＭＲＥ）．多剤耐性からなる群から選択される微生物によって引き起こされる、請求項４９～５１のいずれか一項に記載の使用のための組成物又は薬学的組成物。
  53. 前記微生物感染症が、多剤耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）及び多剤耐性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（ＭＲＰＡ）からなる群から選択される微生物によって引き起こされる、請求項４９～５２のいずれか一項に記載の使用のための組成物又は薬学的組成物。
  54. １つ以上の追加の抗菌剤と組み合わせた、請求項４８～５３のいずれか一項に記載の使用のための組成物又は薬学的組成物。
  55. 前記１つ以上の追加の抗菌剤が、抗菌ポリペプチド及び抗生物質からなる群から選択される、請求項５４に記載の使用のための組成物又は薬学的組成物。
  56. 創傷ケアにおける使用のための、請求項１～３６のいずれか一項に記載の組成物又は請求項３７に記載の薬学的組成物。
  57. 微生物感染症の治療のための医薬品の製造における、請求項１～３６のいずれか一項に定義される組成物又は請求項３７に定義される薬学的組成物の使用。
  58. 創傷の治療のための医薬品の製造における、請求項１～３６のいずれか一項に定義される組成物又は請求項３７に定義される薬学的組成物の使用。
  59. 微生物感染症を有する個体を治療する方法であって、その治療を必要とする個体に、有効量の請求項１～３６のいずれか一項に定義される組成物又は請求項３７に定義される薬学的組成物を投与するステップを含む、方法。
  60. 個体における創傷を治療する方法であって、その治療を必要とする個体に、有効量の請求項１～３６のいずれか一項に定義される組成物又は請求項３７に定義される薬学的組成物を投与するステップを含む、方法。
  61. インビトロで微生物を殺傷するための方法であって、前記微生物を請求項１～３６のいずれか一項に記載の組成物又は請求項３７に定義される薬学的組成物と接触させることを含む、方法。
  62. 前記組成物又は薬学的組成物が、医療デバイス、インプラント、創傷ケア製品、若しくはそれらに使用するための材料でコーティング若しくは含浸されるか、又は混和されるか、若しくは他の方法で会合される、請求項４８～５６に記載の使用のための組成物若しくは薬学的組成物、請求項５７若しくは５８に記載の使用、又は請求項５９～６１に記載の方法。
  63. 創傷ケア製品であって、
    （ａ）足場材料（前記足場が、コラーゲンＩである）、
    （ｂ）ＧＶＲ２８の配列を含むか、又はそれからなる第１のポリペプチド、
    「ＧＶＲ２８」：ＧＶＲＰＤＧＦＡＨＩＲＤＦＶＳＲＩＶＲＲＬＮＩＧＰＳＫＶ［配列番号１］、
    及び
    （ｃ）ＳＦＶ３３の配列を含むか、又はそれからなる第２のポリペプチド、
    「ＳＦＶ３３」：ＳＦＶＡＲＮＴＦＫＲＶＲＮＧＦＬＭＲＫＶＡＶＦＦＳＮＴＰＴＲＡＳＰ［配列番号５］を含む、創傷ケア製品。
  64. 説明及び図面を参照して本明細書に実質的に記載される、組成物。
  65. 説明及び図面を参照して本明細書に実質的に記載される、医療インプラント若しくはデバイス、又はそれらに使用するための生体材料。
  66. 説明及び図面を参照して本明細書に実質的に記載される、組成物の使用。
  67. 説明及び図面を参照して本明細書に実質的に記載される、感染症を治療又は予防するための方法。
  68. 説明及び図面を参照して本明細書に実質的に記載される、創傷を治療するための方法。
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