JP2023545009A - ポリヌクレオチドワクチンおよびその使用方法 - Google Patents

ポリヌクレオチドワクチンおよびその使用方法 Download PDF

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Abstract

第１の病原体抗原をコードする第１の核酸、および任意で第２の病原体抗原をコードする第２の核酸、および任意で免疫修飾因子をコードする核酸を含むポリヌクレオチドが本明細書に開示される。いくつかの態様では、第１の病原体抗原は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質またはその抗原性断片である。いくつかの態様では、第２の病原体抗原は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質またはその抗原性断片である。いくつかの態様では、ポリヌクレチドは、２つ以上の異なる免疫修飾因子を含む。ベクター、組成物、医薬組成物、ワクチン、凍結乾燥組成物、およびそのようなポリヌクレオチドを含む細胞も本明細書に開示される。製造方法および治療的使用方法も本明細書に開示される。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年１０月２日に出願され、その全体が参照により組み込まれる米国仮出願第６３／０８７，１１８号の利益を主張する。
電子的に提出された配列表の参照
本開示と共に提出されたＡＳＣＩＩテキストファイル（名称：２４３７＿０４９ＰＣ０１＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ；サイズ：９８，６０６バイト；および作成日：２０２１年１０月１日は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本開示は、一般に、免疫学、ワクチン、および遺伝子療法に関する。特定の態様では、本開示は、哺乳動物における感染および疾患を治療、その可能性を低減、または予防するために、１つ以上のウイルス抗原（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原）、細菌抗原、または寄生虫抗原に対する免疫応答を生成する組成物および方法に関する。
重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）は、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）と呼ばれるコロナウイルスによって引き起こされる伝染性ウイルス呼吸器疾患である。重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）は、コロナウイルス疾患２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）を引き起こし、ＣＯＶＩＤ－１９の世界的流行の原因であるコロナウイルスの株である。ＣＯＶＩＤ－１９を患っている患者については、軽度の症状から死に至る可能性がある重度の疾患まで、広範囲の症状が報告されている。一般的な症状には、発熱、呼吸器症状、疲労、痛み、味覚および／または嗅覚の喪失、ならびに腸苦痛（例えば、悪心、嘔吐および／または下痢）が含まれる。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２用の安全で効果的なワクチンの開発が緊急に必要とされている。不活化ウイルス、抗原サブユニット、および核酸（ＤＮＡおよびＲＮＡ）ワクチンを含むいくつかの潜在的なワクチンアプローチが、世界中の診療所で研究されている。最近、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２「Ｓ」タンパク質をコードするプラスミドベクターを電気パルスの援助でげっ歯類に、または送達システムもしくはアジュバントなしでアカゲザルに筋肉内投与したところ、これらのＤＮＡワクチンは中和抗体の産生および抗原特異的Ｔ細胞応答をもたらした。Ｓｍｉｔｈ，Ｔ．Ｒ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．、Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，１１（２６０１）：１－１３（２０２０）（以後「Ｓｍｉｔｈ ２０２０」）およびＨｉｒａｏ，Ｌ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３６９（６５０５）：８０６－１１（２０２０）（以後「Ｈｉｒａｏ ２０２０」）を参照されたい。
ＤＮＡワクチンは、体液性免疫および細胞性免疫を生成するそれらの潜在能力、および不活性化ウイルスおよびサブユニットワクチンにそれぞれ関連する病原性およびフォールディング問題の低いリスクのため、従来の不活性化ウイルスまたはタンパク質サブユニットワクチンを上回る一定の利点を有することができる。さらに、ＲＮＡワクチンと比較して、ＤＮＡワクチンは、より良好な安定性、耐久性、低コスト、および長い開発歴の可能性を有することができる。それらの魅力にもかかわらず、最適以下の免疫原性および効果的な送達などの問題は、ＤＮＡワクチンに関する懸念であり、ＤＮＡワクチンが実行可能な選択肢になるために克服されなければならない。
したがって、予防的および治療的状況において有効な、改良されたＤＮＡワクチン組成物が依然として必要とされている。
本開示の特定の態様は、（ｉ）１つ以上のウイルス抗原（例えば、ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２抗原）をコードする核酸配列を含むベクター（例えば、マルチシストロン性ＤＮＡプラスミドベクターまたはマルチシストロン性メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）ベクター）および（ｉｉ）送達成分（例えば、カチオン性ポリマー、ポリイノシン－ポリシチジル酸、またはポロキサマー）を含む組成物に関する。いくつかの態様では、ベクターは、１つ以上の免疫修飾因子をコードする核酸配列をさらに含む。いくつかの態様では、ベクターは、ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２抗原、および場合により第２のウイルス抗原をコードする核酸配列を含む。いくつかの態様は、本開示のベクターまたは組成物のインビボ投与後に、病原体（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）チャレンジまたは感染に対する体液性および／または細胞性免疫応答を誘発する方法に関する。
本開示の特定の態様は、（ｉ）１つ以上の抗原をコードする核酸配列、および１つ以上の免疫修飾因子をコードする核酸配列を含むマルチシストロン性ベクター（例えば、マルチシストロン性ＤＮＡプラスミドベクターまたはマルチシストロン性メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）ベクター）、ならびに（ｉｉ）送達成分、例えば、合成非ウイルス担体／アジュバントを含む組成物に関する。いくつかの態様は、本開示のマルチシストロン性ＤＮＡプラスミド、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクター、またはそれを含む組成物のインビボ投与後に、病原体（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）チャレンジまたは感染に対する体液性および／または細胞性免疫応答を誘発する方法に関する。
本開示の特定の態様は、（ｉ）１つ以上の抗原のＤＮＡ配列、および１つ以上の免疫修飾因子のＤＮＡ配列を含むマルチシストロン性ＤＮＡプラスミドベクターならびに（ｉｉ）送達成分、例えば、合成非ウイルスＤＮＡ担体／アジュバントを含む組成物に関する。本開示の特定の態様は、（ｉ）１つ以上の抗原のＲＮＡ配列、および１つ以上の免疫修飾因子のＲＮＡ配列を含むマルチシストロン性ｍＲＮＡベクター、ならびに（ｉｉ）送達成分、例えば、合成非ウイルスＲＮＡ担体／アジュバントを含む組成物に関する。いくつかの態様は、本開示のマルチシストロン性ＤＮＡプラスミドベクター、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクター、またはそれを含む組成物のインビボ投与後に、病原体（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）チャレンジまたは感染に対する体液性および／または細胞性免疫応答を誘発する方法に関する。
本開示の特定の態様は、（ｉ）１つ以上の抗原をコードする核酸配列を含むベクター（例えば、ＤＮＡプラスミドベクターまたはメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）ベクター）および（ｉｉ）送達成分、例えば、合成非ウイルス担体／アジュバント（例えば、カチオン性ポリマー、ポリイノシン－ポリシチジル酸、またはポロキサマー）を含む組成物に関する。いくつかの態様は、本開示のＤＮＡプラスミドベクター、ｍＲＮＡベクター、またはそれを含む組成物のインビボ投与後に、病原体（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）チャレンジまたは感染に対する体液性および／または細胞性免疫応答を誘発する方法に関する。
本開示の特定の態様は、（ｉ）１つ以上の抗原のＤＮＡ配列を含むＤＮＡプラスミドベクターおよび（ｉｉ）送達成分、例えば、合成非ウイルスＤＮＡ担体／アジュバント（例えば、カチオン性ポリマー、ポリイノシン－ポリシチジル酸、またはポロキサマー）を含む組成物に関する。本開示の特定の態様は、（ｉ）１つ以上の抗原のＲＮＡ配列を含むｍＲＮＡベクターおよび（ｉｉ）送達成分、例えば、合成非ウイルスＲＮＡ担体／アジュバント（例えば、カチオン性ポリマー、ポリイノシン－ポリシチジル酸、またはポロキサマー）を含む組成物に関する。いくつかの態様は、本開示のＤＮＡプラスミドベクター、ｍＲＮＡベクター、またはそれを含む組成物のインビボ投与後に、病原体（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）チャレンジまたは感染に対する体液性および／または細胞性免疫応答を誘発する方法に関する。いくつかの態様では、送達成分は塩化ベンザルコニウムをさらに含む。
本明細書に開示される組成物の送達成分は、本明細書に開示される送達成分の任意の組み合わせを含み得る。
いくつかの態様では、病原体は、ウイルス、細菌または寄生虫である。いくつかの態様では、１つ以上の抗原は、１つ以上のウイルス抗原、１つ以上の細菌抗原、または１つ以上の寄生虫抗原を含む。いくつかの態様では、１つ以上のウイルス抗原、１つ以上の細菌抗原、または１つ以上の寄生虫抗原は、同じ抗原の２つ以上のバリアント（例えば、ウイルス、細菌または寄生虫の異なる株由来の抗原の２つ以上のバリアント）を含む。
いくつかの態様では、細菌抗原は、ペスト菌抗原、結核菌抗原、それらの任意の抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、ペスト菌抗原は、ペスト菌莢膜抗原である。いくつかの態様では、ペスト菌莢膜抗原は、Ｆ１－Ａｇまたは病原性抗原（Ｖ－Ａｇ）である。いくつかの態様では、結核菌抗原は、Ａｐａ抗原、ＨＰ６５抗原、ｒＡｇ８５Ａ抗原、それらの任意の抗原性断片、およびそれらの任意の組み合わせである。
いくつかの態様では、ウイルス抗原は、エンテロウイルス抗原、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）抗原、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）抗原、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）抗原、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）抗原、デングウイルス抗原、エボラウイルス抗原、ジカウイルス、チクングニアウイルス抗原、麻疹ウイルス抗原、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ抗原、それらの任意の抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、エンテロウイルス抗原は、エンテロウイルス７１（Ｅ７１）抗原、コクサッキーウイルス（Ｃｏｘ）タンパク質抗原、それらの任意の抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、Ｅ７１抗原は、Ｅ７１－ＶＰ１抗原、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）タグ付きＥ７１－ＶＰ１抗原、それらの任意の抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、Ｃｏｘタンパク質抗原は、ＧＳＴタグ付きＣｏｘタンパク質抗原である。いくつかの態様では、ＨＳＶ抗原は、ＨＳＶ－１エンベロープ抗原、ＨＳＶ－２エンベロープ抗原、ＨＳＶ－２表面糖タンパク質抗原、それらの任意の抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ＨＳＶ－２表面糖タンパク質抗原は、ｇＢ２抗原、ｇＣ２抗原、ｇＤ２抗原、ｇＥ２抗原、それらの任意の抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ＨＩＶ抗原は、Ｅｎｖ抗原、Ｇａｇ抗原、Ｎｅｆ抗原、Ｐｏｌ抗原、それらの任意の抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ＨＰＶ抗原は、マイナーカプシドタンパク質Ｌ２抗原である。いくつかの態様では、マイナーカプシドタンパク質Ｌ２抗原は、マイナーカプシドタンパク質Ｌ２の１つ以上のエピトープドメイン（アミノ酸１０～３６および／またはアミノ酸６５～８９）を含む。いくつかの態様では、ＨＣＶ抗原は、非構造３（ＮＳ３）抗原である。いくつかの態様では、ＲＳＶ抗原は、Ｆ抗原、Ｇ抗原、それらの任意の抗原性断片、またはそれらの組み合わせである。いくつかの態様では、デングウイルス抗原は、Ｅタンパク質抗原、Ｅタンパク質ドメインＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ）抗原、非構造タンパク質１（ＮＳ１）抗原、ＤＥＮ－８０Ｅ抗原、それらの任意の抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、エボラウイルス抗原は、スパイク糖タンパク質（ＧＢ）抗原、ＶＰ２４抗原、ＶＰ４０抗原、核タンパク質（ＮＰ）抗原、ＶＰ３０抗原、ＶＰ３５抗原、それらの任意の抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ジカウイルス抗原は、エンベロープドメインＩＩＩ抗原、ＣＫＤ抗原、それらの任意の抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、チクングニアウイルス抗原は、Ｅ１糖タンパク質サブユニット抗原、ＭＨＣクラスＩエピトープＰＰＦＧＡＧＲＰＧＱＦＧＤＩ（配列番号３４）、ＭＨＣクラスＩエピトープＴＡＥＣＫＤＫＮＬ（配列番号３５）、ＭＨＣクラスＩＩエピトープＶＲＹＫＣＮＣＧＧ（配列番号３６）、それらの任意の抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、麻疹ウイルス抗原は、赤血球凝集素タンパク質ＭＶ－Ｈ抗原、融合タンパク質ＭＶ－Ｆ抗原、それらの任意の抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ抗原は、スパイク（Ｓ）タンパク質抗原、Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン由来の抗原、Ｓタンパク質の膜融合ドメイン由来の抗原、それらの任意の抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ抗原は、スパイク（Ｓ）タンパク質抗原、Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン由来の抗原、Ｓタンパク質の膜融合ドメイン由来の抗原、エンベロープ（Ｅ）タンパク質抗原、Ｍタンパク質抗原、それらの任意の抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。
いくつかの態様では、１つ以上のウイルス抗原は、任意のインフルエンザウイルス型またはサブタイプに由来する１つ以上のインフルエンザウイルス抗原を含む。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルス赤血球凝集素（ＨＡ）抗原、インフルエンザウイルスノイラミニダーゼ（ＮＡ）抗原、インフルエンザウイルスマトリックス－２（Ｍ２）タンパク質抗原、それらの抗原性断片、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＡ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、またはそれらの任意の組み合わせに由来する。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＡ型に由来する。いくつかの態様では、インフルエンザウイルスＡ型に由来する１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、（ａ）Ｈ１～Ｈ１８またはそれらの任意の組み合わせから選択されるＨＡサブタイプ、および（ｂ）Ｎ１～Ｎ１１またはそれらの任意の組み合わせから選択されるＮＡサブタイプを有する。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ１Ｎ１；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ２Ｎ２；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ３Ｎ２；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ５Ｎ１；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ７Ｎ７；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ７Ｎ９；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ９Ｎ２；またはそれらの任意の組み合わせに由来する。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ１Ｎ１；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ３Ｎ２；またはそれらの組み合わせに由来する。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＢ型に由来する。いくつかの態様では、１つ以上のウイルス抗原は、本明細書に開示される１つ以上のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原またはその抗原性断片、および本明細書に開示される１つ以上のインフルエンザウイルス抗原またはその抗原性断片を含む。いくつかの態様では、寄生虫抗原は原虫抗原である。いくつかの態様では、寄生虫抗原は、トキソプラズマ抗原、熱帯熱マラリア原虫抗原、それらの任意の抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、トキソプラズマ抗原は、抗原ＭＩＣ８である。いくつかの態様では、熱帯熱マラリア原虫抗原は、ＳＥＲＡ５ポリペプチド抗原、サーカムスポロゾイト（ｃｉｒｃｕｍｓｐｏｒｏｚｉｔｅ）タンパク質抗原、それらの任意の抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、寄生虫抗原は、寄生虫または病原性真菌抗原である。いくつかの態様では、寄生虫または病原性真菌抗原は、カンジダ種抗原（例えば、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）抗原、カンジダ・グラブラタ（Ｃａｎｄｉｄａ ｇｌａｂｒａｔａ）抗原、カンジダ・パラプシロシス（Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）抗原、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）抗原、カンジダ・ルシタニア（Ｃａｎｄｉｄａ ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ）抗原、カンジダ・クルセイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｅｉ）抗原）、ニューモシスチス種抗原、マラセジア種抗原（例えば、マラセジア・ファーファー抗原）、アスペルギルス・フミガーツス抗原、クリプトコッカス種抗原（例えば、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）抗原、クリプトコッカス・ガティイ（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇａｔｔｉｉ）抗原）、ヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）抗原、ブラストマイセス・デルマチティディシス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）抗原、パラコクシジオイデス種抗原（例えば、パラコクシディオイデス・ブラシリエンシス（Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）抗原、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｌｕｔｚｉｉ抗原）、コクシジオイデス種抗原（例えば、コクシジオイデス・イミティス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）抗原、コクシジオイデス・ポサダシイ（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｐｏｓａｄａｓｉｉ）抗原）、ペニシリウム・マルネフェイ抗原、スポロトリクス・シェンキイ抗原、トリコスポロン・アサヒ抗原、フザリウム種抗原（例えば、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｕｍ抗原、フザリウム・オキシスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）抗原）、アカツブタケ属抗原、シュードアレシェリア・ボイジイ（Ｐｓｅｕｄｏａｌｌｅｓｃｈｅｒｉａ ｂｏｙｄｉｉ）抗原、クラドフィアロフォラ・バンチアナム（Ｃｌａｄｏｐｈｉａｌｐｈｏｒａ ｂａｎｔｉａｎｕｍ）抗原、Ｒａｍｉｃｈｌｏｒｉｄｉｕｍ ｓｐｐ抗原、ダクチィラリア・ガルロパバ（Ｄａｃｔｙｌａｒｉａ ｇａｌｌｏｐａｖａ）抗原、エクソフィアラ属抗原（例えば、エクソフィアラ ジャンセルメイ（Ｅｘｏｐｈｉａｌａ ｊｅａｎｓｅｌｍｅｉ）抗原、エクソフィアラ・デルマチチディス（Ｅｘｏｐｈｉａｌａ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）抗原）、カーブラリア属抗原、ビポラリス属抗原、アルタナリア属抗原、Ｌａｃａｚｉａ ｌｏｂｏｉ抗原、Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ ｓｐｐ．抗原（例えば、Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ ｃｏｒｏｎａｔｕｓ抗原、Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ ｉｎｃｏｎｇｒｕｕｓ抗原）、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
いくつかの態様では、１つ以上の抗原はウイルス抗原である。いくつかの態様では、１つ以上のウイルス抗原は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原またはその抗原性断片を含む。いくつかの態様では、１つ以上のウイルス抗原は、アルファＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．１．７およびＱ．１～Ｑ．８）；ベータＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．３５１、Ｂ．１．３５１．２およびＢ．１．３５１．３）；デルタＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．６１７．２株およびＡＹ．１株の亜系統）；ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株ガンマ株（例えば、株Ｐ．１、Ｐ．１．１およびＰ．１．２）；エプシロンＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．４２７およびＢ．１．４２９）；エータＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．５２５株）；イオタＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．５２６株）；カッパＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．６１７．１株）；ラムダＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株；Ｂ．１．６１７．３ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株；ミューＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．６２１およびＢ．１．６２１．１）；ゼータ株（例えば、株Ｐ．２）；およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来の、１つ以上のウイルス抗原（例えば、Ｓタンパク質、Ｓタンパク質のＳ１サブユニット、Ｓタンパク質のＲＢＤ、Ｓタンパク質の膜融合ドメイン、Ｍタンパク質、Ｅタンパク質、またはその抗原性断片）を含む。いくつかの態様では、１つ以上のウイルス抗原は、アルファＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．１．７およびＱ．１～Ｑ．８）；ベータＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．３５１、Ｂ．１．３５１．２およびＢ．１．３５１．３）；デルタＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．６１７．２株およびＡＹ．１株の亜系統）；ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株ガンマ株（例えば、株Ｐ．１、Ｐ．１．１およびＰ．１．２）；エプシロンＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．４２７およびＢ．１．４２９）；エータＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．５２５株）；イオタＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．５２６株）；カッパＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．６１７．１株）；ラムダＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株；Ｂ．１．６１７．３ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株；ミューＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．６２１およびＢ．１．６２１．１）；ゼータ株（例えば、株Ｐ．２）；およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来の、１つ以上のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片である。いくつかの態様では、１つ以上のウイルス抗原は、Ｂ．１．１．７、Ｑ．１、Ｑ．２、Ｑ．３、Ｑ．４、Ｑ．５、Ｑ．６、Ｑ．７、Ｑ．８、Ｂ．１．３５１、Ｂ．１．３５１．２、Ｂ．１．３５１．３、Ｂ．１．６１７．２、ＡＹ．１亜系統、Ｐ．１、Ｐ．１．１、Ｐ．１．２、Ｂ．１．４２７、Ｂ．１．４２９、Ｂ．１．５２５、Ｂ．１．５２６、Ｂ．１．６１７．１、Ｂ．１．６１７．３、Ｂ．１．６２１、Ｂ．１．６２１．１、Ｐ．２、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来の１つ以上のウイルス抗原（例えば、Ｓタンパク質、Ｓタンパク質のＳ１サブユニット、Ｓタンパク質のＲＢＤ、Ｍタンパク質、またはそれらの抗原性断片）を含む。いくつかの態様では、１つ以上のウイルス抗原は、Ｂ．１．１．７、Ｑ．１、Ｑ．２、Ｑ．３、Ｑ．４、Ｑ．５、Ｑ．６、Ｑ．７、Ｑ．８、Ｂ．１．３５１、Ｂ．１．３５１．２、Ｂ．１．３５１．３、Ｂ．１．６１７．２、ＡＹ．１亜系統、Ｐ．１、Ｐ．１．１、Ｐ．１．２、Ｂ．１．４２７、Ｂ．１．４２９、Ｂ．１．５２５、Ｂ．１．５２６、Ｂ．１．６１７．１、Ｂ．１．６１７．３、Ｂ．１．６２１、Ｂ．１．６２１．１、Ｐ．２、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来の、１つ以上のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはそれらの抗原性断片である。
いくつかの態様では、１つ以上のウイルス抗原は、アルファＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片を含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、ΔＨ６９－Ｖ７０、Δ１４４、Ｅ４８４Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、Ａ５７０Ｄ、Ｄ６１４Ｇ、Ｐ６８１Ｈ、Ｔ７１６Ｉ、Ｓ９８２Ａ、およびＤ１１１８Ｈから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上のウイルス抗原は、ベータＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片を含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｌ１８Ｆ、Ｄ８０Ａ、Ｄ２１５Ｇ、ΔＬ２４１－Ｓ２４３、Ｋ４１７Ｎ、Ｅ４８４Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、Ｄ６１４ＧおよびＡ７０１Ｖから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上のウイルス抗原は、ガンマＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片を含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｌ１８Ｆ、Ｔ２０Ｎ、Ｐ２６Ｓ、Ｄ１３８Ｙ、Ｒ１９０Ｓ、Ｋ４１７Ｔ、Ｅ４８４Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、Ｄ６１４Ｇ、Ｈ６５５Ｙ、Ｔ１０２７ＩおよびＶ１１７６Ｆから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上のウイルス抗原は、デルタＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片を含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｔ１９Ｒ、ΔＤ１１９－Ｆ１２０、ΔＥ１５６－Ｆ１５７、Ｒ１５８Ｇ、Ｌ４５２Ｒ、Ｔ４７８Ｋ、Ｄ６１４Ｇ、Ｐ６８１ＲおよびＤ９５０Ｎから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上のウイルス抗原は、カッパＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片を含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｅ１５４Ｋ、Ｌ４５２Ｒ、Ｅ４８４Ｑ、Ｄ６１４Ｇ、Ｐ６８１ＲおよびＱ１０７１Ｈから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上のウイルス抗原は、エータＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片を含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｑ５２Ｒ、Ａ６７Ｖ、ΔＨ６９－Ｖ７０、ΔＹ１４４、Ｅ４８４Ｋ、Ｄ６１４Ｇ、Ｑ６７７ＨおよびＦ８８８Ｌから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上のウイルス抗原は、イオタＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片を含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｌ５Ｆ、Ｔ９５Ｉ、Ｄ２５３Ｇ、Ｅ４８４Ｋ、Ｄ６１４ＧおよびＡ７０１Ｖから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上のウイルス抗原は、ラムダＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片を含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｇ７５Ｖ、Ｔ７６Ｉ、ΔＲ２４６－Ｇ２５２、Ｄ２５３Ｎ、Ｌ４５２Ｑ、Ｆ４９０Ｓ、Ｄ６１４ＧおよびＴ８５９Ｎから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上のウイルス抗原は、ミューＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片を含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｔ９５Ｉ、Ｙ１４４Ｓ、Ｙ１４５Ｎ、Ｒ３４６Ｋ、Ｅ４８４Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、Ｄ６１４Ｇ、Ｐ６８１ＨおよびＤ９５０Ｎから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上のウイルス抗原は、エプシロンＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片を含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｓ１３Ｉ、Ｗ１５２Ｃ、Ｌ４５２ＲおよびＤ６１４Ｇから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。
いくつかの態様では、１つ以上のウイルス抗原は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の２つ以上の異なる株に由来する少なくとも２つのウイルス抗原（例えば、Ｓタンパク質、Ｓタンパク質のＳ１サブユニット、Ｓタンパク質のＲＢＤ、Ｓタンパク質の膜融合ドメイン、Ｍタンパク質、Ｅタンパク質、またはそれらの任意の組み合わせからの２つ以上の抗原または抗原性断片）を含む。いくつかの態様では、１つ以上のウイルス抗原は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の２つ以上の異なる株に由来する少なくとも２つのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片を含む。いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の２つ以上の異なる株は、アルファＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．１．７およびＱ．１～Ｑ．８）；ベータＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．３５１、Ｂ．１．３５１．２およびＢ．１．３５１．３）；デルタＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．６１７．２株およびＡＹ．１株の亜系統）；ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株ガンマ株（例えば、株Ｐ．１、Ｐ．１．１およびＰ．１．２）；エプシロンＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．４２７およびＢ．１．４２９）；エータＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．５２５株）；イオタＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．５２６株）；カッパＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．６１７．１株）；ラムダＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株；Ｂ．１．６１７．３ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株；ミューＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．６２１およびＢ．１．６２１．１）；ゼータ株（例えば、株Ｐ．２）；およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の２つ以上の異なる株は、Ｂ．１．１．７、Ｑ．１、Ｑ．２、Ｑ．３、Ｑ．４、Ｑ．５、Ｑ．６、Ｑ．７、Ｑ．８、Ｂ．１．３５１、Ｂ．１．３５１．２、Ｂ．１．３５１．３、Ｂ．１．６１７．２、ＡＹ．１亜系統、Ｐ．１、Ｐ．１．１、Ｐ．１．２、Ｂ．１．４２７、Ｂ．１．４２９、Ｂ．１．５２５、Ｂ．１．５２６、Ｂ．１．６１７．１、Ｂ．１．６１７．３、Ｂ．１．６２１、Ｂ．１．６２１．１、Ｐ．２、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の２つ以上の異なる株由来の少なくとも２つのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、各々、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｌｉ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｍｅｒｇ Ｍｉｃｒｏｂｅｓ Ｉｎｆｅｃｔ．９（１）：２０７６－９０（２０２０）；Ｌｅｅ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｅ Ｎｅｔｗ．２１（１）：ｅ４（２０２１）；Ｙｕ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６９（６５０５）：８０６－１１（２０２０）；Ｃａｔｔｉｎ－Ｏｒｔｏｌａ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ．１２（１）：５３３３（２０２１）；Ｃｏｒｂｅｔｔ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ５８６（７８３０）：５６７－７１（２０２０）；Ｈｓｉｅｈ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６９（６５１０）：１５０１－５（２０２０）；およびＨａｒｖｅｙ，Ｗ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９（７）：４０９－２４（２０２１）において以前に報告された１つ以上の変異を含む。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントの変異およびウイルス配列データは、ＣｏＶａｒｉａｎｔｓウェブサイト（ｈｔｔｐｓ：／／ｃｏｖａｒｉａｎｔｓ．ｏｒｇ／）およびアメリカ国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）のウェブサイト（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｌａｂｓ／ｖｉｒｕｓ／ｖｓｓｉ／＃／ｓａｒｓ－ｃｏｖ－２）で公的に入手可能であり、それぞれ参照によりその全体が組み込まれる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、アルファＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片を含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、ΔＨ６９－Ｖ７０、Δ１４４、Ｅ４８４Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、Ａ５７０Ｄ、Ｄ６１４Ｇ、Ｐ６８１Ｈ、Ｔ７１６Ｉ、Ｓ９８２Ａ、およびＤ１１１８Ｈから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、本明細書に開示されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、ベータＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片を含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｌ１８Ｆ、Ｄ８０Ａ、Ｄ２１５Ｇ、ΔＬ２４１－Ｓ２４３、Ｋ４１７Ｎ、Ｅ４８４Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、Ｄ６１４ＧおよびＡ７０１Ｖから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、本明細書に開示されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、ガンマＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片を含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｌ１８Ｆ、Ｔ２０Ｎ、Ｐ２６Ｓ、Ｄ１３８Ｙ、Ｒ１９０Ｓ、Ｋ４１７Ｔ、Ｅ４８４Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、Ｄ６１４Ｇ、Ｈ６５５Ｙ、Ｔ１０２７ＩおよびＶ１１７６Ｆから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、本明細書に開示されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、デルタＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片を含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｔ１９Ｒ、ΔＤ１１９－Ｆ１２０、ΔＥ１５６－Ｆ１５７、Ｒ１５８Ｇ、Ｌ４５２Ｒ、Ｔ４７８Ｋ、Ｄ６１４Ｇ、Ｐ６８１ＲおよびＤ９５０Ｎから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、本明細書に開示されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、カッパＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片を含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｅ１５４Ｋ、Ｌ４５２Ｒ、Ｅ４８４Ｑ、Ｄ６１４Ｇ、Ｐ６８１ＲおよびＱ１０７１Ｈから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、本明細書に開示されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、エータＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片を含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｑ５２Ｒ、Ａ６７Ｖ、ΔＨ６９－Ｖ７０、ΔＹ１４４、Ｅ４８４Ｋ、Ｄ６１４Ｇ、Ｑ６７７ＨおよびＦ８８８Ｌから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、本明細書に開示されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、イオタＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片を含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｌ５Ｆ、Ｔ９５Ｉ、Ｄ２５３Ｇ、Ｅ４８４Ｋ、Ｄ６１４ＧおよびＡ７０１Ｖから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、本明細書に開示されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、ラムダＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片を含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｇ７５Ｖ、Ｔ７６Ｉ、ΔＲ２４６－Ｇ２５２、Ｄ２５３Ｎ、Ｌ４５２Ｑ、Ｆ４９０Ｓ、Ｄ６１４ＧおよびＴ８５９Ｎから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、本明細書に開示されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、ミューＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片を含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｔ９５Ｉ、Ｙ１４４Ｓ、Ｙ１４５Ｎ、Ｒ３４６Ｋ、Ｅ４８４Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、Ｄ６１４Ｇ、Ｐ６８１ＨおよびＤ９５０Ｎから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、本明細書に開示されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、エプシロンＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片を含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｓ１３Ｉ、Ｗ１５２Ｃ、Ｌ４５２ＲおよびＤ６１４Ｇから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。
本開示の特定の態様は、（ｉ）１つ以上のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス抗原のＤＮＡ配列および１つ以上の免疫修飾因子のＤＮＡ配列を含むマルチシストロン性ＤＮＡプラスミドベクター、ならびに（ｉｉ）送達成分、例えば、合成非ウイルスＤＮＡ担体／アジュバント（例えば、カチオン性ポリマー、ポリイノシン－ポリシチジル酸、またはポロキサマー）を含む組成物に関する。いくつかの態様では、組成物は、自然免疫系を活性化することができる１つ以上の免疫賦活剤をさらに含む。いくつかの態様では、免疫賦活剤は、非コードＤＮＡ（例えば、非コード５’－Ｃ－ホスファート－Ｇ－３’（ＣｐＧ）ジヌクレオチドのコンカテマー）、非コードＲＮＡ、小分子、またはそれらの任意の組み合わせから選択される。本開示の特定の態様は、（ｉ）１つ以上のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス抗原のＲＮＡ配列および１つ以上の免疫修飾因子のＲＮＡ配列を含むマルチシストロン性ＲＮＡベクター、ならびに（ｉｉ）送達成分、例えば、合成非ウイルスＲＮＡ担体／アジュバント（例えば、カチオン性ポリマー、ポリイノシン－ポリシチジル酸、またはポロキサマー）を含む組成物に関する。いくつかの態様は、本開示のマルチシストロン性ＤＮＡプラスミドベクター、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクター、またはそれを含む組成物のインビボ投与後に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２チャレンジまたは感染に対する体液性および／または細胞性免疫応答を誘発する方法に関する。
本開示の特定の態様は、（ｉ）１つ以上のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス抗原のＤＮＡ配列を含むＤＮＡプラスミドベクター、および（ｉｉ）送達成分、例えば、合成非ウイルスＤＮＡ担体／アジュバント（例えば、カチオン性ポリマー、ポリイノシン－ポリシチジル酸、またはポロキサマー）を含む組成物に関する。本開示の特定の態様は、（ｉ）１つ以上のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス抗原のＲＮＡ配列を含むＲＮＡベクター、および（ｉｉ）送達成分、例えば、合成非ウイルスＲＮＡ担体／アジュバント（例えば、カチオン性ポリマー、ポリイノシン－ポリシチジル酸、またはポロキサマー）を含む組成物に関する。いくつかの態様は、本開示のＤＮＡプラスミドベクター、ｍＲＮＡベクター、またはそれを含む組成物のインビボ投与後に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２チャレンジまたは感染に対する体液性および／または細胞性免疫応答を誘発する方法に関する。
本開示の特定の態様は、（ａ）第１の病原体タンパク質またはその抗原性断片をコードする第１抗原核酸；および（ｂ）免疫修飾因子をコードする核酸を含むポリヌクレオチドに関する。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドはマルチシストロン性（例えば、マルチシストロン性ＤＮＡプラスミドまたはマルチシストロン性メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ））である。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、合成非ウイルス担体／アジュバントなどの送達成分と組み合わされる。
本明細書に開示されるポリヌクレオチドと組み合わされる送達成分は、本明細書に開示される送達成分の任意の組み合わせを含み得る。
本開示の特定の態様は、（ａ）第１の病原体タンパク質またはその抗原性断片をコードする第１抗原核酸であって、第１のプロモーターに作動可能に連結されている第１抗原核酸；および（ｂ）免疫修飾因子をコードする核酸を含む、ポリヌクレオチドに関する。いくつかの態様では、第１の病原体タンパク質は、ウイルス抗原、細菌抗原、または寄生虫抗原である。いくつかの態様では、病原体タンパク質は、ウイルス抗原、例えばＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質またはその抗原性断片である。いくつかの態様では、病原体はウイルス抗原、例えば、アルファＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．１．７およびＱ．１～Ｑ．８）；ベータＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．３５１、Ｂ．１．３５１．２およびＢ．１．３５１．３）；デルタＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．６１７．２株およびＡＹ．１株の亜系統）；ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株ガンマ株（例えば、株Ｐ．１、Ｐ．１．１およびＰ．１．２）；エプシロンＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．４２７およびＢ．１．４２９）；エータＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．５２５株）；イオタＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．５２６株）；カッパＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．６１７．１株）；ラムダＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株；Ｂ．１．６１７．３ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株；ミューＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．６２１およびＢ．１．６２１．１）；およびゼータ株（例えば、株Ｐ．２）；からなる群から選択されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来の、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質またはその抗原性断片である。いくつかの態様では、病原体タンパク質は細菌抗原である。いくつかの態様では、病原体タンパク質は寄生虫抗原である。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、マルチシストロン性ＤＮＡベクターである。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターである。
いくつかの態様では、（ａ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質またはその抗原性断片をコードする第１抗原核酸であって、第１のプロモーターに作動可能に連結されている第１抗原核酸；および（ｂ）免疫修飾因子をコードする核酸を含む、ポリヌクレオチドが本明細書に提供される。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、マルチシストロン性ＤＮＡベクターである。いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、アルファＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．１．７およびＱ．１～Ｑ．８）；ベータＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．３５１、Ｂ．１．３５１．２およびＢ．１．３５１．３）；デルタＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．６１７．２株およびＡＹ．１株の亜系統）；ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株ガンマ株（例えば、株Ｐ．１、Ｐ．１．１およびＰ．１．２）；エプシロンＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．４２７およびＢ．１．４２９）；エータＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．５２５株）；イオタＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．５２６株）；カッパＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．６１７．１株）；ラムダＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株；Ｂ．１．６１７．３ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株；ミューＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．６２１およびＢ．１．６２１．１）；およびゼータ株（例えば、株Ｐ．２）；からなる群から選択されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片である。
いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、アルファＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来であり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、ΔＨ６９－Ｖ７０、Δ１４４、Ｅ４８４Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、Ａ５７０Ｄ、Ｄ６１４Ｇ、Ｐ６８１Ｈ、Ｔ７１６Ｉ、Ｓ９８２Ａ、およびＤ１１１８Ｈから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、ベータＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来であり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｌ１８Ｆ、Ｄ８０Ａ、Ｄ２１５Ｇ、ΔＬ２４１－Ｓ２４３、Ｋ４１７Ｎ、Ｅ４８４Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、Ｄ６１４ＧおよびＡ７０１Ｖから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、ガンマＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来であり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｌ１８Ｆ、Ｔ２０Ｎ、Ｐ２６Ｓ、Ｄ１３８Ｙ、Ｒ１９０Ｓ、Ｋ４１７Ｔ、Ｅ４８４Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、Ｄ６１４Ｇ、Ｈ６５５Ｙ、Ｔ１０２７ＩおよびＶ１１７６Ｆから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、デルタＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来であり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｔ１９Ｒ、ΔＤ１１９－Ｆ１２０、ΔＥ１５６－Ｆ１５７、Ｒ１５８Ｇ、Ｌ４５２Ｒ、Ｔ４７８Ｋ、Ｄ６１４Ｇ、Ｐ６８１ＲおよびＤ９５０Ｎから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、カッパＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来であり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｅ１５４Ｋ、Ｌ４５２Ｒ、Ｅ４８４Ｑ、Ｄ６１４Ｇ、Ｐ６８１ＲおよびＱ１０７１Ｈから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、エータＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来であり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｑ５２Ｒ、Ａ６７Ｖ、ΔＨ６９－Ｖ７０、ΔＹ１４４、Ｅ４８４Ｋ、Ｄ６１４Ｇ、Ｑ６７７ＨおよびＦ８８８Ｌから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、イオタＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来であり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｌ５Ｆ、Ｔ９５Ｉ、Ｄ２５３Ｇ、Ｅ４８４Ｋ、Ｄ６１４ＧおよびＡ７０１Ｖから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、ラムダＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来であり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｇ７５Ｖ、Ｔ７６Ｉ、ΔＲ２４６－Ｇ２５２、Ｄ２５３Ｎ、Ｌ４５２Ｑ、Ｆ４９０Ｓ、Ｄ６１４ＧおよびＴ８５９Ｎから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、ミューＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来であり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｔ９５Ｉ、Ｙ１４４Ｓ、Ｙ１４５Ｎ、Ｒ３４６Ｋ、Ｅ４８４Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、Ｄ６１４Ｇ、Ｐ６８１ＨおよびＤ９５０Ｎから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、エプシロンＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来であり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｓ１３Ｉ、Ｗ１５２Ｃ、Ｌ４５２ＲおよびＤ６１４Ｇから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。
いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、免疫修飾因子をコードする２つ以上の核酸を含む。いくつかの態様では、免疫修飾因子をコードする核酸の各々は、異なる免疫修飾因子をコードする。いくつかの態様では、免疫修飾因子をコードする核酸の２つ以上は、ＩＬ－１２ ｐ３５およびＩＬ－１２ ｐ４０をコードする。
いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、（ｃ）第２の病原体タンパク質またはその抗原性断片をコードする第２抗原核酸をさらに含む。いくつかの態様では、第２の病原体タンパク質またはその抗原性断片は、第２のウイルス抗原タンパク質、第２の細菌抗原タンパク質または第２の寄生虫抗原タンパク質からなる群から選択される。
いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、（ｃ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質またはその抗原性断片をコードする第２抗原核酸をさらに含む。いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質またはその抗原性断片は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２膜（Ｍ）タンパク質またはその抗原性断片、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２エンベロープ（Ｅ）タンパク質またはその抗原性断片、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質またはその抗原性断片、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、第１抗原核酸および第２抗原核酸は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の異なる株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質またはその抗原性断片をコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸および第２抗原核酸は、同じＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質またはその抗原性断片の異なるバリアントをコードし、同じＳＡＲＳ－ＣｏＶ２タンパク質またはその抗原性断片の異なるバリアントは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の異なる株に由来する。いくつかの態様では、第１抗原核酸および第２抗原核酸は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の異なる株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片をコードする。いくつかの態様では、異なるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、各々、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＬｉ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｍｅｒｇ Ｍｉｃｒｏｂｅｓ Ｉｎｆｅｃｔ．９（１）：２０７６－９０（２０２０）；Ｌｅｅ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｅ Ｎｅｔｗ．２１（１）：ｅ４（２０２１）；Ｙｕ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６９（６５０５）：８０６－１１（２０２０）；Ｃａｔｔｉｎ－Ｏｒｔｏｌａ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ．１２（１）：５３３３（２０２１）；Ｃｏｒｂｅｔｔ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ５８６（７８３０）：５６７－７１（２０２０）；Ｈｓｉｅｈ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６９（６５１０）：１５０１－５（２０２０）；およびＨａｒｖｅｙ，Ｗ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９（７）：４０９－２４（２０２１）において以前に報告された１つ以上の変異を含む。いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の異なる株は、アルファＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．１．７およびＱ．１～Ｑ．８）；ベータＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．３５１、Ｂ．１．３５１．２およびＢ．１．３５１．３）；デルタＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．６１７．２株およびＡＹ．１株の亜系統）；ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株ガンマ株（例えば、株Ｐ．１、Ｐ．１．１およびＰ．１．２）；エプシロンＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．４２７およびＢ．１．４２９）；エータＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．５２５株）；イオタＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．５２６株）；カッパＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．６１７．１株）；ラムダＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株；Ｂ．１．６１７．３ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株；ミューＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．６２１およびＢ．１．６２１．１）；ゼータ株（例えば、株Ｐ．２）；およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の異なる株は、Ｂ．１．１．７、Ｑ．１、Ｑ．２、Ｑ．３、Ｑ．４、Ｑ．５、Ｑ．６、Ｑ．７、Ｑ．８、Ｂ．１．３５１、Ｂ．１．３５１．２、Ｂ．１．３５１．３、Ｂ．１．６１７．２、ＡＹ．１亜系統、Ｐ．１、Ｐ．１．１、Ｐ．１．２、Ｂ．１．４２７、Ｂ．１．４２９、Ｂ．１．５２５、Ｂ．１．５２６、Ｂ．１．６１７．１、Ｂ．１．６１７．３、Ｂ．１．６２１、Ｂ．１．６２１．１、Ｐ．２、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
いくつかの態様では、第２抗原核酸は、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列を介して第１のプロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号４１と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは、１つ以上の第２のプロモーターを含む。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、１つ以上の第２のプロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、免疫修飾因子をコードする１つ以上の核酸は、１つ以上の第２のプロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、免疫修飾因子をコードする核酸の１つ以上は、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列を介して第１のプロモーターまたは１つ以上の第２のプロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号４１と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの態様では、第１のプロモーターまたは１つ以上の第２のプロモーターは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター（配列番号３１）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、モロニーマウス白血病ウイルス（Ｍｏ－ＭｕＬＶ）長末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーター、哺乳動物伸長因子１（ＥＦ１）プロモーター、サイトケラチン１８（ＣＫ１８）プロモーター、サイトケラチン１９（ＣＫ１９）プロモーター、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）プロモーター（配列番号３２）、マウスＵ６プロモーター、骨格α－アクチンプロモーター、β－アクチンプロモーター、マウスホスホグリセリン酸キナーゼ１（ＰＧＫ１）プロモーター、ヒトＰＧＫ１プロモーター、ＣＢＡプロモーター、ＣＡＧプロモーター（配列番号３３）、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、哺乳動物ＥＦ１プロモーターはｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーター（配列番号３８）である。いくつかの態様では、１つ以上の第２のプロモーターはＣＭＶプロモーターである。
いくつかの態様では、免疫修飾因子をコードする核酸の各々は、ＣＭＶプロモーター、ＲＳＶプロモーター、Ｍｏ－ＭｕＬＶ ＬＴＲプロモーター、哺乳動物ＥＦ１プロモーター、ＣＫ１８プロモーター、ＣＫ１９プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、マウスＵ６プロモーター、骨格α－アクチンプロモーター、β－アクチンプロモーター、マウスＰＧＫ１プロモーター、ヒトＰＧＫ１プロモーター、ＣＢＡプロモーター、ＣＡＧプロモーター、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるプロモーターの制御下にある。いくつかの態様では、哺乳動物ＥＦ１プロモーターはｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである。
いくつかの態様では、第２抗原核酸の各々は、ＣＭＶプロモーター、ＲＳＶプロモーター、Ｍｏ－ＭｕＬＶ ＬＴＲプロモーター、哺乳動物ＥＦ１プロモーター、ＣＫ１８プロモーター、ＣＫ１９プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、マウスＵ６プロモーター、骨格α－アクチンプロモーター、β－アクチンプロモーター、マウスＰＧＫ１プロモーター、ヒトＰＧＫ１プロモーター、ＣＢＡプロモーター、ＣＡＧプロモーター、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるプロモーターの制御下にある。いくつかの態様では、哺乳動物ＥＦ１プロモーターはｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである。
いくつかの態様では、免疫修飾因子は、インターロイキン（ＩＬ）２（ＩＬ－２）、ＩＬ－１２ ｐ３５、ＩＬ－１２ ｐ４０、ＩＬ－１２ ｐ７０、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、インターフェロン（ＩＦＮ）α（ＩＦＮ－α）、ＩＦＮ－β、ケモカイン、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ（ＭＨＣ Ｉ）、ＭＨＣクラスＩＩ（ＭＨＣ ＩＩ）、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）－ＤＲアイソタイプ（ＨＬＡ－ＤＲ）、ＣＤ８０、ＣＤ８６、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様において、ケモカインは、Ｃ－Ｃモチーフケモカインリガンド（ＣＣＬ）３（ＣＣＬ３）、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２８、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド（ＣＸＣＬ）１０（ＣＸＣＬ１０）、およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。
いくつかの態様では、ＩＬ－１２ ｐ３５免疫修飾因子は、配列番号４３（マウスＩＬ－１２ ｐ３５）または配列番号４７（ヒトＩＬ－１２ ｐ３５）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２ ｐ４０免疫修飾因子は、配列番号４５（マウスＩＬ－１２ ｐ４０）または配列番号４９（ヒトＩＬ－１２ ｐ４０）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸は、配列番号４２（マウスＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸配列）または配列番号４６（ヒトＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸配列）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する。いくつかの態様において、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸は、配列番号４４（マウスＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸配列）または配列番号４８（ヒトＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸配列）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する。
いくつかの態様では、免疫修飾因子は、局所炎症応答および／またはインターフェロン応答を減衰させるウイルスタンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２非構造タンパク質１（Ｎｓｐ１）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１３、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ３ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ｂ）を含む。いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、抗原核酸によってコードされるウイルス抗原と同じウイルスに由来する。いくつかの態様では、いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、抗原核酸によってコードされるウイルス抗原と異なるウイルスに由来する。いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、本明細書に開示される病原体抗原によって誘発される局所炎症応答および／またはインターフェロン応答を減衰させる。いくつかの態様では、免疫修飾因子は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１３、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ３ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ｂ、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
いくつかの態様では、免疫修飾因子は、非コード５’－Ｃ－ホスファート－Ｇ－３’（ＣｐＧ）ジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーを含む。いくつかの態様では、非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーは、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）シグナル伝達経路を活性化する。いくつかの態様では、非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーは、Ｂａｕｅｒ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３８（１２）：３８９１－９０８（２０１０）；Ｃｏｒｎｅｌｉｅ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７９（１５）：１５１２４－９（２００４）；Ｋｌｉｎｍａｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８（８）：３６３５－９（１９９７）；Ｋｌｉｎｍａｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ １９９（１）：２０１－１６（２００４）；Ｌｕｏ，Ｚ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｍｅｄ Ｒｅｐ．６（６）：１３０９－１４（２０１２）；Ｂｏｄｅ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｖａｃｃｉｎｅｓ １０（４）：４９９－５１１（２０１１）；およびＫｕｏ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ １０：２００８５（２０２０）において以前に報告された非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーを含み、その各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの態様では、免疫修飾因子をコードする核酸は、（ｉ）インターロイキンをコードする核酸、ならびに（ｉｉ）主要組織適合遺伝子複合体および／またはケモカインをコードする核酸の組み合わせを含む。
いくつかの態様では、免疫修飾因子をコードする核酸は、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの態様において、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸は、配列番号４２（マウスＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸配列）または配列番号４６（ヒトＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸配列）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する。いくつかの態様において、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸は、配列番号４４（マウスＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸配列）または配列番号４８（ヒトＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸配列）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、免疫修飾因子をコードする核酸は、ＭＨＣ Ｉをコードする核酸、ＭＨＣ ＩＩをコードする核酸、またはそれらの組み合わせをさらに含む。
いくつかの態様では、免疫修飾因子をコードする核酸は、ＩＬ－１２をコードする核酸、ＩＬ－１５をコードする核酸、またはそれらの組み合わせを含む。
いくつかの態様では、免疫修飾因子をコードする核酸は、ＩＬ－１２をコードする核酸と、ＩＬ－１５をコードする核酸との組み合わせを含む。
いくつかの態様では、免疫修飾因子をコードする核酸は、ＩＬ－２をコードする核酸、ＩＬ－１５をコードする核酸、ＭＨＣ Ｉをコードする核酸、ＭＨＣ ＩＩをコードする核酸、ＣＣＬ３をコードする核酸、ＣＣＬ４をコードする核酸、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
いくつかの態様では、免疫修飾因子をコードする核酸は、ＭＨＣ Ｉをコードする核酸、ＭＨＣ ＩＩをコードする核酸、ＣＣＬ３をコードする核酸、ＣＣＬ４をコードする核酸、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
いくつかの態様では、免疫修飾因子をコードする核酸は、ＣＣＬ３をコードする核酸、ＣＣＬ４をコードする核酸、またはそれらの組み合わせを含む。
いくつかの態様では、ポリヌクレオチドまたは核酸は、ＤＮＡまたはｍＲＮＡ配列を含むことができる。
いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓタンパク質についてのアミノ酸配列）または配列番号４（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓタンパク質＋Ｄ６１４Ｇについてのアミノ酸配列）の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号１（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓタンパク質をコードする核酸配列）または配列番号３（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓタンパク質＋Ｄ６１４Ｇをコードする核酸配列）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓタンパク質についてのアミノ酸配列）または配列番号４（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓタンパク質＋Ｄ６１４Ｇについてのアミノ酸配列）の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号１（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓタンパク質をコードする核酸配列）または配列番号３（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓタンパク質＋Ｄ６１４Ｇをコードする核酸配列）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号２または配列番号４の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸をコードし、配列番号２または配列番号４の連続アミノ酸は、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ポリペプチドは、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。
いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２または配列番号４の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸をコードし、配列番号２または配列番号４の連続アミノ酸は、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ここでポリペプチドは１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。
いくつかの態様では、第１抗原核酸は、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）またはその抗原性断片をコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号６（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＲＢＤについてのアミノ酸配列）の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号６のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号５（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＲＢＤをコードする核酸配列）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの態様では、第２抗原核酸は、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）またはその抗原性断片をコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号６（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＲＢＤについてのアミノ酸配列）の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号６のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号５（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＲＢＤをコードする核酸配列）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸をコードし、配列番号６の連続アミノ酸は、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号６のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ポリペプチドは、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。
いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸をコードし、配列番号６の連続アミノ酸は、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号６のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ここでポリペプチドは１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。
いくつかの態様では、第１抗原核酸は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片のＳ１サブユニットをコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号４０（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｄ６１４Ｇ Ｓタンパク質のＳ１サブユニットについてのアミノ酸配列）の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも５５０、少なくとも６００、少なくとも６５０、または少なくとも６６０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号４０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号３９（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｄ６１４Ｇ Ｓタンパク質のＳ１サブユニットをコードする核酸配列）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの態様では、第２抗原核酸は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片のＳ１サブユニットをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号４０（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｄ６１４Ｇ Ｓタンパク質のＳ１サブユニットについてのアミノ酸配列）の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも５５０、少なくとも６００、少なくとも６５０、または少なくとも６６０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号４０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号３９（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｄ６１４Ｇ Ｓタンパク質のＳ１サブユニットをコードする核酸配列）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号４０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも５５０、少なくとも６００、少なくとも６５０、または少なくとも６６０個の連続アミノ酸をコードし、配列番号４０の連続アミノ酸は、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ポリペプチドは、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。
いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号４０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも５５０、少なくとも６００、少なくとも６５０、または少なくとも６６０個の連続アミノ酸をコードし、配列番号４０の連続アミノ酸は、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ここでポリペプチドは１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。
いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓタンパク質、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質のＲＢＤ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＳ１サブユニット、またはそれらの抗原性断片中の１つ以上の変異は、各々、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｌｉ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｍｅｒｇ Ｍｉｃｒｏｂｅｓ Ｉｎｆｅｃｔ．９（１）：２０７６－９０（２０２０）；Ｌｅｅ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｅ Ｎｅｔｗ．２１（１）：ｅ４（２０２１）；Ｙｕ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６９（６５０５）：８０６－１１（２０２０）；Ｃａｔｔｉｎ－Ｏｒｔｏｌａ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ．１２（１）：５３３３（２０２１）；Ｃｏｒｂｅｔｔ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ５８６（７８３０）：５６７－７１（２０２０）；Ｈｓｉｅｈ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６９（６５１０）：１５０１－５（２０２０）；およびＨａｒｖｅｙ，Ｗ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９（７）：４０９－２４（２０２１）において以前に報告された１つ以上の変異を含む。
いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓタンパク質、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質のＲＢＤ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＳ１サブユニット、またはそれらの抗原性断片中の１つ以上の変異は、ΔＭ１－Ｓ１３、Ｓ１２Ｐ、Ｓ１３Ｉ、Ｌ５Ｆ、Ｌ１８Ｆ、Ｔ１９Ｒ、Ｔ２０Ｎ、Ｐ２６Ｓ、Ｑ５２Ｒ、Ａ６７Ｖ、ΔＨ６９－Ｖ７０、Ｇ７５Ｖ、Ｔ７６Ｉ、Ｄ８０Ａ、Ｔ９５Ｉ、Ｒ１０２Ｉ、ΔＤ１１９－Ｆ１２０、Ｃ１３６Ｙ、Ｄ１３８Ｙ、ΔＦ１４０、ΔＬ１４１－Ｙ１４４、ΔＹ１４４、Ｙ１４４Ｓ、Ｙ１４５Ｎ、ΔＨ１４６、Ｎ１４８Ｓ、Ｋ１５０Ｒ、Ｋ１５０Ｅ、Ｋ１５０Ｔ、Ｋ１５０Ｑ、Ｓ１５１Ｐ、Ｗ１５２Ｃ、Ｅ１５４Ｋ、ΔＥ１５６－Ｆ１５７、Ｆ１５７Ｌ、Ｆ１５７Ａ、Ｒ１５８Ｇ、Ｒ１９０Ｓ、ΔＩ２１０、Ｄ２１５Ｇ、Ａ２２２Ｖ、ΔＬ２４１－Ｓ２４３、ΔＬ２４２－Ｌ２４４、ΔＡ２４３－Ｌ２４４、ΔＲ２４６－Ｇ２５２、Ｒ２４６Ｉ、Ｙ２４８およびＬ２４９間の１１－アミノ酸残基挿入、Ｄ２５３Ｇ、Ｄ２５３Ｎ、Ｒ３４６Ｋ、Ｖ３６７Ｆ、Ｅ４０６Ｗ、Ｋ４１７Ｅ、Ｋ４１７Ｖ、Ｋ４１７Ｎ、Ｋ４１７Ｔ、Ｎ４３９Ｋ、Ｋ４４４Ａ、Ｋ４４４Ｒ、Ｋ４４４Ｎ、Ｋ４４４Ｑ、Ｖ４４５Ａ、Ｖ４４５Ｅ、Ｇ４４７Ａ、Ｎ４５０Ｄ、Ｌ４５２Ｒ、Ｌ４５２Ｑ、Ｙ４５３Ｆ、Ｌ４５５Ｆ、Ｎ４６０Ｉ、Ｓ４７７Ｇ、Ｓ４７７Ｎ、Ｓ４７７Ｒ、Ｔ４７８Ｉ、Ｔ４７８Ｋ、Ｖ４８３Ｉ、Ｅ４８４Ｋ、Ｅ４８４Ｑ、Ｇ４８５Ｒ、Ｆ４８６Ａ、Ｆ４８６Ｖ、Ｆ４８６Ｌ、Ｎ４８７Ａ、Ｆ４９０Ｓ、Ｑ４９３Ｅ、Ｑ４９３Ｋ、Ｓ４９４Ｐ、Ｎ５０１Ｙ、Ａ５７０Ｄ、Ｑ６１３Ｈ、Ｄ６１４Ｇ、Ｈ６５５Ｙ、Ｑ６７７Ｈ、Δ６７８－６７９、Δ６８１－６８２、Δ６８１－６８４、Δ６８２－６８５、Ｐ６８１Ｈ、Ｐ６８１Ｒ、Ｒ６８２Ｓ、Ｒ６８２Ａ、Ｒ６８２Ｑ、Ｒ６８３Ｓ、Ｒ６８３Ｇ、Ｒ６８３Ｑ、Ｒ６８５Ｇ、Ｒ６８５Ｑ、Ｉ６９２Ｖ、Ａ７０１Ｖ、Ｔ７１６Ｉ、Ｆ８１７Ｐ、Ｔ８５９Ｎ、Ｆ８８８Ｌ、Ａ８９２Ｐ、Ａ８９９Ｐ、Ａ９４２Ｐ、Ｄ９５０Ｎ、Ｓ９８２Ａ、Ｋ９８６Ｐ、Ｖ９８７Ｐ、Ｔ１０２７Ｉ、Ｑ１０７１Ｈ、Ｄ１１１８Ｈ、Ｖ１１７６Ｆ、Ｍ１２２９Ｉ、ΔＣ１２５３－Ｔ１２７３、ΔＣ１２５４－Ｔ１２７３、ΔＫ１２５５－Ｔ１２７３、Ｄ１２５７Ａ、Ｅ１２５８Ａ、Ｄ１２５９Ａ、Ｄ１２６０Ａ、Ｅ１２６２Ａ、Ｋ１２６９Ａ、Ｈ１２７１Ｋ、Ｔ１２７３Ａ、またはそれらの任意の組み合わせから選択され、アミノ酸位置は、配列番号２または配列番号４に対応する。
いくつかの態様では、１つ以上の変異は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸１～１３に対応するＮ末端シグナルペプチドにおける１つ以上の変異を含む。いくつかの態様では、Ｎ末端シグナルペプチドにおける１つ以上の突然変異はΔＭ１～Ｓ１３であり、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。
いくつかの態様では、１つ以上の変異は、全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＣ末端に１つ以上の変異を含む。いくつかの態様では、全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＣ末端における１つ以上の変異は、Ｃ末端小胞体（ＥＲ）保持ペプチドにおける１つ以上の変異を含み、それは配列番号２または配列番号４のアミノ酸１２５４～１２７３に対応する。いくつかの態様では、Ｃ末端ＥＲ保持ペプチドにおける１つ以上の変異は、Ｄ１２５７Ａ、Ｅ１２５８Ａ、Ｄ１２５９Ａ、Ｄ１２６０Ａ、Ｅ１２６２Ａ、Ｋ１２６９Ａ、Ｈ１２７１Ｋ、Ｔ１２７３Ａ、またはそれらの任意の組み合わせから選択され、アミノ酸位置は、配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、Ｃ末端ＥＲ保持ペプチドにおける１つ以上の変異は、Ｄ１２５７Ａ＋Ｅ１２５８Ａ＋Ｄ１２５９Ａ＋Ｄ１２６０Ａ＋Ｅ１２６２Ａ（すなわち、Ｄ／ＥからＡの変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、Ｃ末端ＥＲ保持ペプチドにおける１つ以上の変異は、ΔＣ１２５３－Ｔ１２７３、ΔＣ１２５４－Ｔ１２７３またはΔＫ１２５５－Ｔ１２７３である。
いくつかの態様では、１つ以上の変異はＫ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、ヘキサ－プロリンＳ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、６８１－ＰＲＲＡＲ／ＳＶＡ－６８８ Ｓ１／Ｓ２フーリン切断部位における１つ以上の変異を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、６８１－ＰＲＲＡＲ／ＳＶＡ－６８８ Ｓ１／Ｓ２フーリン切断部位における１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｓ＋Ｒ６８３Ｓ（すなわち、ＳＳＡＲ変異）、（ｂ）Δ６８１－６８４（すなわち、ΔＰＲＲＡ変異）、（ｃ）Δ６７８－６７９＋Δ６８１－６８２、（ｄ）Ｒ６８２Ａ＋Ｒ６８３Ｇ＋Ｒ６８５Ｇ（すなわち、６８２－ＡＧＡＧ－６８５変異）、（ｅ）Ｒ６８２Ｑ＋Ｒ６８３Ｑ＋Ｒ６８５Ｑ、（ｆ）Ｒ６８２Ｓ＋Ｒ６８５Ｇ、または（ｇ）Δ６８２－６８５（すなわち、ΔＲＲＡＲ変異）であり、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。
いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、ヘキサ－プロリンＳ変異）および（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ａ＋Ｒ６８３Ｇ＋Ｒ６８５Ｇ（すなわち、６８２－ＡＧＡＧ－６８５変異）および（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ａ＋Ｒ６８３Ｇ＋Ｒ６８５Ｇ（すなわち、６８２－ＡＧＡＧ－６８５変異）、（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）、および（ｃ）Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、ヘキサ－プロリンＳ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｑ＋Ｒ６８３Ｑ＋Ｒ６８５Ｑおよび（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含む。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｑ＋Ｒ６８３Ｑ＋Ｒ６８５Ｑ、（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）、および（ｃ）Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、ヘキサ－プロリンＳ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｓ＋Ｒ６８５Ｇおよび（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｓ＋Ｒ６８５Ｇ、（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）、および（ｃ）Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、ヘキサ－プロリンＳ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。
いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号８（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｍタンパク質についてのアミノ酸配列）、配列番号１０（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＷＡ９－ＵＷ６バリアントＭタンパク質についてのアミノ酸配列）、配列番号１２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＮＩＨＥバリアントＭタンパク質についてのアミノ酸配列）、配列番号１４（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｗｕｈａｎ＿ＩＭＥ＿ＢＪＯ７バリアントＭタンパク質についてのアミノ酸配列）、配列番号１６（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＷＡ－ＵＷ－１７５３バリアントＭタンパク質についてのアミノ酸配列）、配列番号１８（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＷＡ ＵＷ－１７５５バリアントＭタンパク質についてのアミノ酸配列）、または配列番号２０（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＵＳＡ＿ＳＣ＿３５７２バリアントＭタンパク質についてのアミノ酸配列）の、少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１２０、少なくとも１４０、少なくとも１６０、少なくとも１８０、少なくとも２００、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８または配列番号２０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。
いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０の、少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１２０、少なくとも１４０、少なくとも１６０、少なくとも１８０、少なくとも２００、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸をコードし、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０の連続アミノ酸は、Ａ２Ｓ、Ｆ２８Ｌ、Ｉ４８Ｖ、Ｖ７０Ｌ、Ｉ８２Ｔ、Ｍ８４Ｔ、またはそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の変異を含み、アミノ酸位置は配列番号８に対応する。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ここでポリペプチドは、Ａ２Ｓ、Ｆ２８Ｌ、Ｉ４８Ｖ、Ｖ７０Ｌ、Ｉ８２Ｔ、Ｍ８４Ｔ、またはそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の変異を含み、アミノ酸位置は配列番号８に対応する。
いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号７（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｍタンパク質をコードする核酸配列）、配列番号９（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＷＡ９－ＵＷ６バリアントＭタンパク質をコードする核酸配列）、配列番号１１（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＮＩＨＥバリアントＭタンパク質をコードする核酸配列）、配列番号１３（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｗｕｈａｎ＿ＩＭＥ＿ＢＪＯ７バリアントＭタンパク質をコードする核酸配列）、配列番号１５（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＷＡ－ＵＷ－１７５３バリアントＭタンパク質をコードする核酸配列）、配列番号１７（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＷＡ ＵＷ－１７５５バリアントＭタンパク質をコードする核酸配列）、または配列番号１９（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＵＳＡ＿ＳＣ＿３５７２バリアントＭタンパク質をコードする核酸配列）と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２２、配列番号２４または配列番号２６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、または少なくとも７５個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２１、配列番号２３または配列番号２５のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２２、配列番号２４または配列番号２６のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２１、配列番号２３または配列番号２５と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２８の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、または少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、または少なくとも４００個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２７と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、（ａ）ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質のＳ１サブユニットまたはその抗原性断片をコードする第１抗原核酸、および（ｂ）免疫修飾因子をコードする２つ以上の核酸を含み、免疫修飾因子をコードする２つ以上の核酸は、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸およびＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸を含み、第１抗原核酸は哺乳動物伸長因子１（ＥＦ１）プロモーターに作動可能に連結されており、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸は第１のＣＭＶプロモーターに作動可能に連結されており、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸は第２のＣＭＶプロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号４０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも５５０、少なくとも６００、少なくとも６５０、または少なくとも６６０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号４０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号３９と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸は、配列番号４６と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２ ｐ３５は、配列番号４７のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸は、配列番号４８と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２ ｐ４０は、配列番号４９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、（ａ）ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片のＳ１サブユニットをコードする第１抗原核酸、（ｂ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２膜（Ｍ）タンパク質またはその抗原性断片をコードする第２抗原核酸、および（ｃ）免疫修飾因子をコードする２つ以上の核酸を含み、免疫修飾因子をコードする２つ以上の核酸は、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸およびＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸を含み、第１抗原核酸は、哺乳動物伸長因子１（ＥＦ１）プロモーターに作動可能に連結されており、第２抗原核酸は、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列を介してＥＦ１プロモーターに作動可能に連結されており、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸は、第１のＣＭＶプロモーターに作動可能に連結されており、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸は、第２のＣＭＶプロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号４０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも５５０、少なくとも６００、少なくとも６５０、または少なくとも６６０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号４０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号３９と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１２０、少なくとも１４０、少なくとも１６０、少なくとも１８０、少なくとも２００、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８または配列番号２０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、または配列番号１９と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸は、配列番号４６と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２ ｐ３５は、配列番号４７のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸は、配列番号４８と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２ ｐ４０は、配列番号４９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、（ａ）全長ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片をコードする第１抗原核酸、および（ｂ）免疫修飾因子をコードする２つ以上の核酸を含み、免疫修飾因子をコードする２つ以上の核酸は、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸およびＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸を含み、第１抗原核酸は哺乳動物伸長因子１（ＥＦ１）プロモーターに作動可能に連結されており、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸は第１のＣＭＶプロモーターに作動可能に連結されており、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸は第２のＣＭＶプロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号２または配列番号４の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号１または配列番号３と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸は、配列番号４６と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２ ｐ３５は、配列番号４７のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸は、配列番号４８と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２ ｐ４０は、配列番号４９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、（ａ）全長ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片をコードする第１抗原核酸、（ｂ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２膜（Ｍ）タンパク質またはその抗原性断片をコードする第２抗原核酸、および（ｃ）免疫修飾因子をコードする２つ以上の核酸を含み、第１抗原核酸は、哺乳動物伸長因子１（ＥＦ１）プロモーターに作動可能に連結されており、第２抗原核酸は、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列を介してＥＦ１プロモーターに作動可能に連結されており、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸は、第１のＣＭＶプロモーターに作動可能に連結されており、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸は、第２のＣＭＶプロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号２または配列番号４の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号１または配列番号３と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１２０、少なくとも１４０、少なくとも１６０、少なくとも１８０、少なくとも２００、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８または配列番号２０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、または配列番号１９と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸は、配列番号４６と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２ ｐ３５は、配列番号４７のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸は、配列番号４８と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２ ｐ４０は、配列番号４９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、１つ以上の転写後調節エレメントをさらに含む。いくつかの態様では、転写後調節エレメントは、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）である。
いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、第１抗原核酸、第２抗原核酸、免疫修飾因子をコードする核酸、またはそれらの任意の組み合わせに作動可能に連結された少なくとも１つの３’ＵＴＲポリ（ａ）テール配列をさらに含む。いくつかの態様では、３’ＵＴＲポリ（ａ）テール配列は、３’ＵＴＲ ＳＶ４０ポリ（ａ）テール配列（配列番号２９）、３’ＵＴＲウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）ポリ（Ａ）配列（配列番号３０）、３’ＵＴＲアクチンポリ（Ａ）テール配列、３’ＵＴＲヘモグロビンポリ（Ａ）配列、またはそれらの任意の組み合わせである。
いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは、少なくとも１つのエンハンサー配列をさらに含む。いくつかの態様では、エンハンサー配列は、ヒトアクチンエンハンサー配列、ヒトミオシンエンハンサー配列、ヒトヘモグロビンエンハンサー配列、ヒト筋クレアチンエンハンサー配列、ウイルスエンハンサー配列、またはポリヌクレオチド機能エンハンサー配列である。いくつかの態様では、エンハンサー配列は、ＣＭＶイントロン配列またはβ－アクチンイントロン配列である。態様では、エンハンサー配列は、ＳＶ４０エンハンサー配列（配列番号３７）である。
いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは、逆方向末端反復配列（ＩＴＲ）をさらに含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは第１のＩＴＲおよび第２のＩＴＲを含む。いくつかの態様において、第１のＩＴＲおよび第２のＩＴＲは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）に由来する。
いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは、５’キャップおよび３’ＵＴＲポリ（Ａ）テール配列を含むマルチシストロン性ｍＲＮＡである。いくつかの態様では、３’ＵＴＲポリ（ａ）テール配列は、３’ＵＴＲ ＳＶ４０ポリ（ａ）テール配列（配列番号２９）、３’ＵＴＲウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）ポリ（Ａ）配列（配列番号３０）、３’ＵＴＲアクチンポリ（Ａ）テール配列、３’ＵＴＲヘモグロビンポリ（Ａ）配列、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、マルチシストロン性ｍＲＮＡは、５’ＵＴＲおよび／または３’ＵＴＲを含む。
本明細書に記載または例示される任意のポリヌクレオチドを含むベクターであって、ＤＮＡプラスミド、マルチシストロン性ｍＲＮＡ、ウイルスベクター、細菌ベクター、コスミドまたは人工染色体であるベクターも本明細書で提供される。いくつかの態様では、ベクターは、ＡＡＶベクター、アデノウイルスベクター、レトロウイルスベクター、ポックスウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、またはそれらの組み合わせから選択される。
本明細書に記載または例示される任意のポリヌクレオチドまたはベクターを含む組成物、医薬組成物またはワクチンも本明細書で提供される。いくつかの態様では、組成物、医薬組成物、またはワクチンは、薬学的に許容される担体をさらに含む。いくつかの態様では、組成物、医薬組成物またはワクチンは、ＩＬ－２、ＩＬ－１２ ｐ３５、ＩＬ－１２ ｐ４０、ＩＬ－１２ ｐ７０、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＴＮＦα、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ケモカイン、ＭＨＣ Ｉ、ＭＨＣ ＩＩ、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ８０およびＣＤ８６からなる群から選択される少なくとも１つの免疫修飾因子をコードする第２のポリヌクレオチドをさらに含み、少なくとも１つの免疫修飾因子をコードするポリヌクレオチドは、プロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、組成物、医薬組成物、またはワクチンは、送達成分をさらに含む。
組成物、医薬組成物またはワクチンの送達成分は、本明細書に開示される送達成分の任意の組み合わせを含み得る。
いくつかの態様では、ＩＬ－１２ ｐ３５免疫修飾因子は、配列番号４３（マウスＩＬ－１２ ｐ３５）または配列番号４７（ヒトＩＬ－１２ ｐ３５）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２ ｐ４０免疫修飾因子は、配列番号４５（マウスＩＬ－１２ ｐ４０）または配列番号４９（ヒトＩＬ－１２ ｐ４０）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、第２のポリヌクレオチドは、ＩＬ－１２ ｐ３５、ＩＬ－１２ ｐ４０、またはそれらの組み合わせをコードする。いくつかの態様において、ＩＬ－１２ ｐ３５免疫修飾因子は、配列番号４２（マウスＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸配列）または配列番号４６（ヒトＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸配列）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、ＩＬ－１２ ｐ４０免疫修飾因子は、配列番号４４（マウスＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸配列）または配列番号４８（ヒトＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸配列）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様では、第２のポリヌクレオチドによってコードされる少なくとも１つの免疫修飾因子は、局所炎症応答および／またはインターフェロン応答を減衰させるウイルスタンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２非構造タンパク質１（Ｎｓｐ１）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１３、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ３ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ｂ）を含む。いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、抗原核酸によってコードされるウイルス抗原と同じウイルスに由来する。いくつかの態様では、いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、抗原核酸によってコードされるウイルス抗原と異なるウイルスに由来する。いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、本明細書に開示される病原体抗原によって誘発される局所炎症応答および／またはインターフェロン応答を減衰させる。いくつかの態様では、第２のポリヌクレオチドによってコードされる少なくとも１つの免疫修飾因子は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１３、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ３ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ｂ、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、少なくとも１つの免疫修飾因子は、非コード５’－Ｃ－ホスファート－Ｇ－３’（ＣｐＧ）ジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーを含む。いくつかの態様では、非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーは、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）シグナル伝達経路を活性化する。いくつかの態様では、非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーは、Ｂａｕｅｒ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３８（１２）：３８９１－９０８（２０１０）；Ｃｏｒｎｅｌｉｅ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７９（１５）：１５１２４－９（２００４）；Ｋｌｉｎｍａｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８（８）：３６３５－９（１９９７）；Ｋｌｉｎｍａｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ １９９（１）：２０１－１６（２００４）；Ｌｕｏ，Ｚ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｍｅｄ Ｒｅｐ．６（６）：１３０９－１４（２０１２）；Ｂｏｄｅ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｖａｃｃｉｎｅｓ １０（４）：４９９－５１１（２０１１）；およびＫｕｏ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ １０：２００８５（２０２０）において以前に報告された非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーを含み、その各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの態様では、組成物、医薬組成物またはワクチンは、ＩＬ－２、ＩＬ－１２ ｐ３５、ＩＬ－１２ ｐ４０、ＩＬ－１２ ｐ７０、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＴＮＦα、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ケモカイン、ＭＨＣ Ｉ、ＭＨＣ ＩＩ、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ８０およびＣＤ８６からなる群から選択される少なくとも１つの免疫修飾因子をコードする第３のポリヌクレオチドをさらに含み、少なくとも１つの免疫修飾因子をコードするポリヌクレオチドは、プロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、少なくとも１つの免疫修飾因子をコードする第２のポリヌクレオチドは、ＩＬ－１２ ｐ３５免疫修飾因子をコードし、少なくとも１つの免疫修飾因子をコードする第３のポリヌクレオチドは、ＩＬ－１２ ｐ４０免疫修飾因子をコードする。いくつかの態様において、ＩＬ－１２ ｐ３５修飾因子をコードする第２のポリヌクレオチドは、配列番号４２（マウスＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸配列）または配列番号４６（ヒトＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸配列）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの態様において、ＩＬ－１２ ｐ４０免疫修飾因子をコードする第３のポリヌクレオチドは、配列番号４４（マウスＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸配列）または配列番号４８（ヒトＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸配列）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの態様では、第３のポリヌクレオチドによってコードされる少なくとも１つの免疫修飾因子は、局所炎症応答および／またはインターフェロン応答を減衰させるウイルスタンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２非構造タンパク質１（Ｎｓｐ１）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１３、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ３ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ｂ）を含む。いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、抗原核酸によってコードされるウイルス抗原と同じウイルスに由来する。いくつかの態様では、いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、抗原核酸によってコードされるウイルス抗原と異なるウイルスに由来する。いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、本明細書に開示される病原体抗原によって誘発される局所炎症応答および／またはインターフェロン応答を減衰させる。いくつかの態様では、第３のポリヌクレオチドによってコードされる少なくとも１つの免疫修飾因子は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１３、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ３ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ｂ、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、少なくとも１つの免疫修飾因子は、非コード５’－Ｃ－ホスファート－Ｇ－３’（ＣｐＧ）ジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーを含む。いくつかの態様では、非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーは、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）シグナル伝達経路を活性化する。いくつかの態様では、非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーは、Ｂａｕｅｒ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３８（１２）：３８９１－９０８（２０１０）；Ｃｏｒｎｅｌｉｅ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７９（１５）：１５１２４－９（２００４）；Ｋｌｉｎｍａｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８（８）：３６３５－９（１９９７）；Ｋｌｉｎｍａｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ １９９（１）：２０１－１６（２００４）；Ｌｕｏ，Ｚ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｍｅｄ Ｒｅｐ．６（６）：１３０９－１４（２０１２）；Ｂｏｄｅ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｖａｃｃｉｎｅｓ １０（４）：４９９－５１１（２０１１）；およびＫｕｏ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ １０：２００８５（２０２０）において以前に報告された非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーを含み、その各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの態様では、組成物、医薬組成物、またはワクチンは、アジュバントをさらに含む。いくつかの態様では、アジュバントは、非コード５’－Ｃ－ホスファート－Ｇ－３’（ＣｐＧ）ジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーを含む。いくつかの態様では、非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーは、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）シグナル伝達経路を活性化する。いくつかの態様では、非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーは、Ｂａｕｅｒ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３８（１２）：３８９１－９０８（２０１０）；Ｃｏｒｎｅｌｉｅ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７９（１５）：１５１２４－９（２００４）；Ｋｌｉｎｍａｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８（８）：３６３５－９（１９９７）；Ｋｌｉｎｍａｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ １９９（１）：２０１－１６（２００４）；Ｌｕｏ，Ｚ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｍｅｄ Ｒｅｐ．６（６）：１３０９－１４（２０１２）；Ｂｏｄｅ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｖａｃｃｉｎｅｓ １０（４）：４９９－５１１（２０１１）；およびＫｕｏ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ １０：２００８５（２０２０）において以前に報告された非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーを含み、その各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本明細書に記載または例示される任意のポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡまたはｍＲＮＡ）を含むベクター（例えば、プラスミドベクター）も本明細書で提供される。いくつかの態様では、プラスミドベクターはＤＮＡプラスミドベクターである。
本明細書に記載または例示される任意のポリヌクレオチド、ベクター、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクターを含む組成物、医薬組成物またはワクチンも本明細書で提供される。いくつかの態様では、組成物、医薬組成物またはワクチンは、ＩＬ－２、ＩＬ－１２ ｐ３５、ＩＬ－１２ ｐ４０、ＩＬ－１２ ｐ７０、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＴＮＦα、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ケモカイン、ＭＨＣ Ｉ、ＭＨＣ ＩＩ、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ８０およびＣＤ８６からなる群から選択される少なくとも１つの免疫修飾因子をコードする第２のポリヌクレオチドを含み、少なくとも１つの免疫修飾因子をコードする第２のポリヌクレオチドは、プロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、組成物、医薬組成物またはワクチンは、ＩＬ－２、ＩＬ－１２ ｐ３５、ＩＬ－１２ ｐ４０、ＩＬ－１２ ｐ７０、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＴＮＦα、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ケモカイン、ＭＨＣ Ｉ、ＭＨＣ ＩＩ、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ８０およびＣＤ８６からなる群から選択される少なくとも１つの免疫修飾因子をコードする第３のポリヌクレオチドをさらに含み、少なくとも１つの免疫修飾因子をコードする第３のポリヌクレオチドは、プロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、少なくとも１つの免疫修飾因子をコードする第２のポリヌクレオチドはＩＬ－１２ ｐ３５コードし、少なくとも１つの免疫修飾因子をコードする第３のポリヌクレオチドはＩＬ－１２ ｐ４０をコードする。
いくつかの態様では、第２のポリヌクレオチドによってコードされる少なくとも１つの免疫修飾因子は、局所炎症応答および／またはインターフェロン応答を減衰させるウイルスタンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２非構造タンパク質１（Ｎｓｐ１）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１３、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ３ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ｂ）を含む。いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、抗原核酸によってコードされるウイルス抗原と同じウイルスに由来する。いくつかの態様では、いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、抗原核酸によってコードされるウイルス抗原と異なるウイルスに由来する。いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、本明細書に開示される病原体抗原によって誘発される局所炎症応答および／またはインターフェロン応答を減衰させる。いくつかの態様では、第２のポリヌクレオチドによってコードされる少なくとも１つの免疫修飾因子は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１３、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ３ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ｂ、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、少なくとも１つの免疫修飾因子は、非コード５’－Ｃ－ホスファート－Ｇ－３’（ＣｐＧ）ジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーを含む。いくつかの態様では、非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーは、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）シグナル伝達経路を活性化する。いくつかの態様では、非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーは、Ｂａｕｅｒ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３８（１２）：３８９１－９０８（２０１０）；Ｃｏｒｎｅｌｉｅ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７９（１５）：１５１２４－９（２００４）；Ｋｌｉｎｍａｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８（８）：３６３５－９（１９９７）；Ｋｌｉｎｍａｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ １９９（１）：２０１－１６（２００４）；Ｌｕｏ，Ｚ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｍｅｄ Ｒｅｐ．６（６）：１３０９－１４（２０１２）；Ｂｏｄｅ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｖａｃｃｉｎｅｓ １０（４）：４９９－５１１（２０１１）；およびＫｕｏ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ １０：２００８５（２０２０）において以前に報告された非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーを含み、その各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの態様では、第３のポリヌクレオチドによってコードされる少なくとも１つの免疫修飾因子は、局所炎症応答および／またはインターフェロン応答を減衰させるウイルスタンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２非構造タンパク質１（Ｎｓｐ１）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１３、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ３ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ｂ）を含む。いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、抗原核酸によってコードされるウイルス抗原と同じウイルスに由来する。いくつかの態様では、いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、抗原核酸によってコードされるウイルス抗原と異なるウイルスに由来する。いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、本明細書に開示される病原体抗原によって誘発される局所炎症応答および／またはインターフェロン応答を減衰させる。いくつかの態様では、第３のポリヌクレオチドによってコードされる少なくとも１つの免疫修飾因子は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１３、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ３ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ｂ、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、少なくとも１つの免疫修飾因子は、非コード５’－Ｃ－ホスファート－Ｇ－３’（ＣｐＧ）ジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーを含む。いくつかの態様では、非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーは、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）シグナル伝達経路を活性化する。いくつかの態様では、非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーは、Ｂａｕｅｒ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３８（１２）：３８９１－９０８（２０１０）；Ｃｏｒｎｅｌｉｅ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７９（１５）：１５１２４－９（２００４）；Ｋｌｉｎｍａｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８（８）：３６３５－９（１９９７）；Ｋｌｉｎｍａｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ １９９（１）：２０１－１６（２００４）；Ｌｕｏ，Ｚ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｍｅｄ Ｒｅｐ．６（６）：１３０９－１４（２０１２）；Ｂｏｄｅ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｖａｃｃｉｎｅｓ １０（４）：４９９－５１１（２０１１）；およびＫｕｏ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ １０：２００８５（２０２０）において以前に報告された非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーを含み、その各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
（ａ）ポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドを含むベクター、および（ｂ）送達成分を含む組成物、医薬組成物またはワクチンも本明細書で提供され、ここで、ポリヌクレオチドは、第１の病原体タンパク質またはその抗原性断片をコードする第１抗原核酸を含み、第１抗原核酸は、第１のプロモーターに作動可能に連結されており、場合により送達成分は、カチオン性ポリマー、ポリイノシン－ポリシチジル酸、またはポロキサマーもしくはその誘導体である。いくつかの態様では、送達成分は、カチオン性ポリマー、ポリイノシン－ポリシチジル酸、またはポロキサマーもしくはその誘導体である。いくつかの態様では、第１の病原体タンパク質をコードする第１抗原核酸は、ウイルスタンパク質、細菌タンパク質、寄生虫タンパク質、およびそれらの任意の抗原性断片からなる群から選択される。いくつかの態様では、送達成分は塩化ベンザルコニウムをさらに含む。
組成物、医薬組成物またはワクチンの送達成分は、本明細書に開示される送達成分の任意の組み合わせを含み得る。
いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、第２の病原体タンパク質またはその抗原性断片をコードする第２抗原核酸をさらに含む。いくつかの態様では、第２の病原体タンパク質をコードする第２抗原核酸は、ウイルスタンパク質、細菌タンパク質、寄生虫タンパク質、およびそれらの任意の抗原性断片からなる群から選択される。
いくつかの態様では、第１の病原体タンパク質および／または前記第２の病原体タンパク質は、ペスト菌抗原、結核菌抗原、エンテロウイルス抗原、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）抗原、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）抗原、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）抗原、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）抗原、デングウイルス抗原、エボラウイルス抗原、ジカウイルス、チクングニアウイルス抗原、麻疹ウイルス抗原、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ抗原、トキソプラズマ抗原、熱帯熱マラリア原虫抗原、インフルエンザウイルス抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
いくつかの態様では、第１の病原体タンパク質および／または第２の病原体タンパク質は、ペスト菌Ｆ１－Ａｇ、ペスト菌Ｖ－Ａｇ、結核菌Ａｐａ抗原、結核菌ＨＰ６５抗原、結核菌ｒＡｇ８５Ａ抗原、Ｅ７１ ＶＰ１抗原、ＧＳＴタグ付きＥ７１－ＶＰ１抗原、Ｃｏｘタンパク質抗原、ＧＳＴタグ付きＣｏｘタンパク質抗原、ＨＳＶ－１エンベロープ抗原、ＨＳＶ－２エンベロープ抗原、ＨＳＶ－２ ｇＢ２抗原、ＨＳＶ－２ ｇＣ２抗原、ＨＳＶ－２ ｇＤ２抗原、ＨＳＶ－２ ｇＥ２抗原、ＨＩＶ Ｅｎｖ抗原、ＨＩＶ Ｇａｇ抗原、ＨＩＶ Ｎｅｆ抗原、ＨＩＶ Ｐｏｌ抗原、ＨＰＶマイナーカプシドタンパク質Ｌ２抗原、ＨＣＶ ＮＳ３抗原、ＲＳＶ Ｆ抗原、ＲＳＶ Ｇ抗原、デングウイルスＥタンパク質抗原、デングウイルスＥＤＩＩＩ抗原、デングウイルスＮＳ１抗原、デングウイルスＤＥＮ－８０Ｅ抗原、エボラウイルスＧＢ抗原、エボラウイルスＶＰ２４抗原、エボラウイルスＶＰ４０抗原、エボラウイルスＮＰ抗原、エボラウイルスＶＰ３０抗原、エボラウイルスＶＰ３５抗原、ジカウイルスエンベロープドメインＩＩＩ抗原、ジカウイルスＣＫＤ抗原、チクングニアウイルスＥ１糖タンパク質サブユニット抗原、ＭＨＣクラスＩエピトープＰＰＦＧＡＧＲＰＧＱＦＧＤＩ（配列番号：３４）、ＭＨＣクラスＩエピトープＴＡＥＣＫＤＫＮＬ（配列番号：３５）、ＭＨＣクラスＩＩエピトープＶＲＹＫＣＮＣＧＧ（配列番号：３６）、麻疹ウイルス赤血球凝集素タンパク質ＭＶ－Ｈ抗原、麻疹ウイルス融合タンパク質ＭＶ－Ｆ抗原、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質抗原、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン由来の抗原、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質の膜融合ドメイン由来の抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン由来の抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質の膜融合ドメイン由来の抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｅタンパク質抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｍタンパク質抗原、トキソプラズマＭＩＣ８抗原、熱帯熱マラリア原虫ＳＥＲＡ５ポリペプチド抗原、熱帯熱マラリア原虫サーカムスポロゾイト（ｃｉｒｃｕｍｓｐｏｒｏｚｉｔｅ）タンパク質抗原、インフルエンザウイルス赤血球凝集素（ＨＡ）抗原、インフルエンザウイルスノイラミニダーゼ（ＮＡ）抗原、インフルエンザウイルスマトリックス－２（Ｍ２）タンパク質抗原、それらの抗原性断片、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
いくつかの態様では、第１抗原核酸は、ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質またはその抗原性断片をコードする。いくつかの態様では、第２の病原体タンパク質またはその抗原性断片は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２膜（Ｍ）タンパク質またはその抗原性断片、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２エンベロープ（Ｅ）タンパク質またはその抗原性断片、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質またはその抗原性断片、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、第１抗原核酸および第２抗原核酸は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の異なる株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質またはその抗原性断片をコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸および第２抗原核酸は、同じＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質またはその抗原性断片の異なるバリアントをコードし、同じＳＡＲＳ－ＣｏＶ２タンパク質またはその抗原性断片の異なるバリアントは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の異なる株に由来する。いくつかの態様では、第１抗原核酸および第２抗原核酸は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の異なる株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片をコードする。いくつかの態様では、異なるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、各々、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＬｉ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｍｅｒｇ Ｍｉｃｒｏｂｅｓ Ｉｎｆｅｃｔ．９（１）：２０７６－９０（２０２０）；Ｌｅｅ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｅ Ｎｅｔｗ．２１（１）：ｅ４（２０２１）；Ｙｕ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６９（６５０５）：８０６－１１（２０２０）；Ｃａｔｔｉｎ－Ｏｒｔｏｌａ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ．１２（１）：５３３３（２０２１）；Ｃｏｒｂｅｔｔ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ５８６（７８３０）：５６７－７１（２０２０）；Ｈｓｉｅｈ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６９（６５１０）：１５０１－５（２０２０）；およびＨａｒｖｅｙ，Ｗ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９（７）：４０９－２４（２０２１）において以前に報告された１つ以上の変異を含む。いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の異なる株は、アルファＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．１．７およびＱ．１～Ｑ．８）；ベータＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．３５１、Ｂ．１．３５１．２およびＢ．１．３５１．３）；デルタＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．６１７．２株およびＡＹ．１株の亜系統）；ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株ガンマ株（例えば、株Ｐ．１、Ｐ．１．１およびＰ．１．２）；エプシロンＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．４２７およびＢ．１．４２９）；エータＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．５２５株）；イオタＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．５２６株）；カッパＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．６１７．１株）；ラムダＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株；Ｂ．１．６１７．３ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株；ミューＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．６２１およびＢ．１．６２１．１）；ゼータ株（例えば、株Ｐ．２）；およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の異なる株は、Ｂ．１．１．７、Ｑ．１、Ｑ．２、Ｑ．３、Ｑ．４、Ｑ．５、Ｑ．６、Ｑ．７、Ｑ．８、Ｂ．１．３５１、Ｂ．１．３５１．２、Ｂ．１．３５１．３、Ｂ．１．６１７．２、ＡＹ．１亜系統、Ｐ．１、Ｐ．１．１、Ｐ．１．２、Ｂ．１．４２７、Ｂ．１．４２９、Ｂ．１．５２５、Ｂ．１．５２６、Ｂ．１．６１７．１、Ｂ．１．６１７．３、Ｂ．１．６２１、Ｂ．１．６２１．１、Ｐ．２、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸は、アルファＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片をコードし、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、ΔＨ６９－Ｖ７０、Δ１４４、Ｅ４８４Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、Ａ５７０Ｄ、Ｄ６１４Ｇ、Ｐ６８１Ｈ、Ｔ７１６Ｉ、Ｓ９８２Ａ、およびＤ１１１８Ｈから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸は、ベータＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片をコードし、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｌ１８Ｆ、Ｄ８０Ａ、Ｄ２１５Ｇ、ΔＬ２４１－Ｓ２４３、Ｋ４１７Ｎ、Ｅ４８４Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、Ｄ６１４ＧおよびＡ７０１Ｖから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸は、ガンマＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片をコードし、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｌ１８Ｆ、Ｔ２０Ｎ、Ｐ２６Ｓ、Ｄ１３８Ｙ、Ｒ１９０Ｓ、Ｋ４１７Ｔ、Ｅ４８４Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、Ｄ６１４Ｇ、Ｈ６５５Ｙ、Ｔ１０２７ＩおよびＶ１１７６Ｆから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸は、デルタＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片をコードし、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｔ１９Ｒ、ΔＤ１１９－Ｆ１２０、ΔＥ１５６－Ｆ１５７、Ｒ１５８Ｇ、Ｌ４５２Ｒ、Ｔ４７８Ｋ、Ｄ６１４Ｇ、Ｐ６８１ＲおよびＤ９５０Ｎから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸は、カッパＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片をコードし、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｅ１５４Ｋ、Ｌ４５２Ｒ、Ｅ４８４Ｑ、Ｄ６１４Ｇ、Ｐ６８１ＲおよびＱ１０７１Ｈから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸は、エータＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片をコードし、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｑ５２Ｒ、Ａ６７Ｖ、ΔＨ６９－Ｖ７０、ΔＹ１４４、Ｅ４８４Ｋ、Ｄ６１４Ｇ、Ｑ６７７ＨおよびＦ８８８Ｌから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸は、イオタＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片をコードし、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｌ５Ｆ、Ｔ９５Ｉ、Ｄ２５３Ｇ、Ｅ４８４Ｋ、Ｄ６１４ＧおよびＡ７０１Ｖから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸は、ラムダＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片をコードし、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｇ７５Ｖ、Ｔ７６Ｉ、ΔＲ２４６－Ｇ２５２、Ｄ２５３Ｎ、Ｌ４５２Ｑ、Ｆ４９０Ｓ、Ｄ６１４ＧおよびＴ８５９Ｎから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸は、ミューＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片をコードし、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｔ９５Ｉ、Ｙ１４４Ｓ、Ｙ１４５Ｎ、Ｒ３４６Ｋ、Ｅ４８４Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、Ｄ６１４Ｇ、Ｐ６８１Ｈ、およびＤ９５０Ｎから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸は、イプシロンＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片をコードし、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｓ１３Ｉ、Ｗ１５２Ｃ、Ｌ４５２ＲおよびＤ６１４Ｇから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。
いくつかの態様では、第２抗原核酸は、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列を介して第１のプロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号４１と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは、１つ以上の第２のプロモーターを含む。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、１つ以上の第２のプロモーターに作動可能に連結されている。
いくつかの態様では、第１のプロモーターまたは１つ以上の第２のプロモーターは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、モロニーマウス白血病ウイルス（Ｍｏ－ＭｕＬＶ）長末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーター、哺乳動物伸長因子１（ＥＦ１）プロモーター、サイトケラチン１８（ＣＫ１８）プロモーター、サイトケラチン１９（ＣＫ１９）プロモーター、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）プロモーター、マウスＵ６プロモーター、骨格α－アクチンプロモーター、β－アクチンプロモーター、マウスホスホグリセリン酸キナーゼ１（ＰＧＫ１）プロモーター、ヒトＰＧＫ１プロモーター、ＣＢＡプロモーター、ＣＡＧプロモーター、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、哺乳動物ＥＦ１プロモーターはｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである。いくつかの態様では、１つ以上の第２のプロモーターはＣＭＶプロモーターである。
いくつかの態様では、第２抗原核酸は、ＣＭＶプロモーター、ＲＳＶプロモーター、Ｍｏ－ＭｕＬＶ ＬＴＲプロモーター、哺乳動物ＥＦ１プロモーター、ＣＫ１８プロモーター、ＣＫ１９プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、マウスＵ６プロモーター、骨格α－アクチンプロモーター、β－アクチンプロモーター、マウスＰＧＫ１プロモーター、ヒトＰＧＫ１プロモーター、ＣＢＡプロモーター、ＣＡＧプロモーター、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるプロモーターの制御下にある。いくつかの態様では、哺乳動物ＥＦ１プロモーターはｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである。
いくつかの態様では、第１抗原核酸は、全長ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片をコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号２または配列番号４の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号１または配列番号３と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、哺乳動物ＥＦ１プロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、哺乳動物ＥＦ１プロモーターはｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである。
いくつかの態様では、第２抗原核酸は、全長ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片をコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２または配列番号４の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号１または配列番号３と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、ＩＲＥＳ配列を介して哺乳動物ＥＦ１プロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、哺乳動物ＥＦ１プロモーターはｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである。
いくつかの態様では、第１抗原核酸は全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片をコードし、第２抗原核酸はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２膜（Ｍ）タンパク質またはその抗原性断片をコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号２または配列番号４の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸をコードし、第２抗原核酸は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１２０、少なくとも１４０、少なくとも１６０、少なくとも１８０、少なくとも２００、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードし、第２抗原核酸は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、第２抗原核酸は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８または配列番号２０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号１または配列番号３と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含み、第２抗原核酸は、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、または配列番号１９と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの態様では、第１抗原核酸は哺乳動物ＥＦ１プロモーターに作動可能に連結されており、第２抗原核酸はＣＭＶプロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、哺乳動物ＥＦ１プロモーターはｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである。
いくつかの態様では、第１抗原核酸は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）またはその抗原性断片をコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号６のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号５と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの態様では、第２抗原核酸は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）またはその抗原性断片をコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号６のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号５と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの態様では、第１抗原核酸は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片のＳ１サブユニットをコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号４０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも５５０、少なくとも６００、少なくとも６５０、または少なくとも６６０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号４０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号３９と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、哺乳動物ＥＦ１プロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、哺乳動物ＥＦ１プロモーターはｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである。
いくつかの態様では、第２抗原核酸は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片のＳ１サブユニットをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号４０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも５５０、少なくとも６００、少なくとも６５０、または少なくとも６６０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号４０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号３９と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、ＩＲＥＳ配列を介して哺乳動物ＥＦ１プロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、哺乳動物ＥＦ１プロモーターはｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである。
いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１２０、少なくとも１４０、少なくとも１６０、少なくとも１８０、少なくとも２００、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８または配列番号２０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、または配列番号１９と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２２、配列番号２４または配列番号２６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、または少なくとも７５個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２２、配列番号２４または配列番号２６のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２２、配列番号２４または配列番号２６のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２１、配列番号２３または配列番号２５と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２８の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、または少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、または少なくとも４００個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２７と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの態様では、第１抗原核酸（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓタンパク質、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質のＲＢＤ、またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＳ１サブユニットをコードする第１抗原核酸）および／または第２抗原核酸（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓタンパク質、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質のＲＢＤ、またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＳ１サブユニットをコードする第２抗原核酸）によってコードされるポリペプチドは、１つ以上の変異を含む。いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸によってコードされるポリペプチドの１つ以上の変異は、各々、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＬｉ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｍｅｒｇ Ｍｉｃｒｏｂｅｓ Ｉｎｆｅｃｔ．９（１）：２０７６－９０（２０２０）；Ｌｅｅ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｅ Ｎｅｔｗ．２１（１）：ｅ４（２０２１）；Ｙｕ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６９（６５０５）：８０６－１１（２０２０）；Ｃａｔｔｉｎ－Ｏｒｔｏｌａ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ．１２（１）：５３３３（２０２１）；Ｃｏｒｂｅｔｔ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ５８６（７８３０）：５６７－７１（２０２０）；Ｈｓｉｅｈ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６９（６５１０）：１５０１－５（２０２０）；およびＨａｒｖｅｙ，Ｗ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９（７）：４０９－２４（２０２１）において以前に報告された１つ以上の変異を含む。
いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸によってコードされるポリペプチドの１つ以上の変異は、ΔＭ１－Ｓ１３、Ｓ１２Ｐ、Ｓ１３Ｉ、Ｌ５Ｆ、Ｌ１８Ｆ、Ｔ１９Ｒ、Ｔ２０Ｎ、Ｐ２６Ｓ、Ｑ５２Ｒ、Ａ６７Ｖ、ΔＨ６９－Ｖ７０、Ｇ７５Ｖ、Ｔ７６Ｉ、Ｄ８０Ａ、Ｔ９５Ｉ、Ｒ１０２Ｉ、ΔＤ１１９－Ｆ１２０、Ｃ１３６Ｙ、Ｄ１３８Ｙ、ΔＦ１４０、ΔＬ１４１－Ｙ１４４、ΔＹ１４４、Ｙ１４４Ｓ、Ｙ１４５Ｎ、ΔＨ１４６、Ｎ１４８Ｓ、Ｋ１５０Ｒ、Ｋ１５０Ｅ、Ｋ１５０Ｔ、Ｋ１５０Ｑ、Ｓ１５１Ｐ、Ｗ１５２Ｃ、Ｅ１５４Ｋ、ΔＥ１５６－Ｆ１５７、Ｆ１５７Ｌ、Ｆ１５７Ａ、Ｒ１５８Ｇ、Ｒ１９０Ｓ、ΔＩ２１０、Ｄ２１５Ｇ、Ａ２２２Ｖ、ΔＬ２４１－Ｓ２４３、ΔＬ２４２－Ｌ２４４、ΔＡ２４３－Ｌ２４４、ΔＲ２４６－Ｇ２５２、Ｒ２４６Ｉ、Ｙ２４８およびＬ２４９間の１１－アミノ酸残基挿入、Ｄ２５３Ｇ、Ｄ２５３Ｎ、Ｒ３４６Ｋ、Ｖ３６７Ｆ、Ｅ４０６Ｗ、Ｋ４１７Ｅ、Ｋ４１７Ｖ、Ｋ４１７Ｎ、Ｋ４１７Ｔ、Ｎ４３９Ｋ、Ｋ４４４Ａ、Ｋ４４４Ｒ、Ｋ４４４Ｎ、Ｋ４４４Ｑ、Ｖ４４５Ａ、Ｖ４４５Ｅ、Ｇ４４７Ａ、Ｎ４５０Ｄ、Ｌ４５２Ｒ、Ｌ４５２Ｑ、Ｙ４５３Ｆ、Ｌ４５５Ｆ、Ｎ４６０Ｉ、Ｓ４７７Ｇ、Ｓ４７７Ｎ、Ｓ４７７Ｒ、Ｔ４７８Ｉ、Ｔ４７８Ｋ、Ｖ４８３Ｉ、Ｅ４８４Ｋ、Ｅ４８４Ｑ、Ｇ４８５Ｒ、Ｆ４８６Ａ、Ｆ４８６Ｖ、Ｆ４８６Ｌ、Ｎ４８７Ａ、Ｆ４９０Ｓ、Ｑ４９３Ｅ、Ｑ４９３Ｋ、Ｓ４９４Ｐ、Ｎ５０１Ｙ、Ａ５７０Ｄ、Ｑ６１３Ｈ、Ｄ６１４Ｇ、Ｈ６５５Ｙ、Ｑ６７７Ｈ、Δ６７８－６７９、Δ６８１－６８２、Δ６８１－６８４、Δ６８２－６８５、Ｐ６８１Ｈ、Ｐ６８１Ｒ、Ｒ６８２Ｓ、Ｒ６８２Ａ、Ｒ６８２Ｑ、Ｒ６８３Ｓ、Ｒ６８３Ｇ、Ｒ６８３Ｑ、Ｒ６８５Ｇ、Ｒ６８５Ｑ、Ｉ６９２Ｖ、Ａ７０１Ｖ、Ｔ７１６Ｉ、Ｆ８１７Ｐ、Ｔ８５９Ｎ、Ｆ８８８Ｌ、Ａ８９２Ｐ、Ａ８９９Ｐ、Ａ９４２Ｐ、Ｄ９５０Ｎ、Ｓ９８２Ａ、Ｋ９８６Ｐ、Ｖ９８７Ｐ、Ｔ１０２７Ｉ、Ｑ１０７１Ｈ、Ｄ１１１８Ｈ、Ｖ１１７６Ｆ、Ｍ１２２９Ｉ、ΔＣ１２５３－Ｔ１２７３、ΔＣ１２５４－Ｔ１２７３、ΔＫ１２５５－Ｔ１２７３、Ｄ１２５７Ａ、Ｅ１２５８Ａ、Ｄ１２５９Ａ、Ｄ１２６０Ａ、Ｅ１２６２Ａ、Ｋ１２６９Ａ、Ｈ１２７１Ｋ、Ｔ１２７３Ａ、またはそれらの任意の組み合わせから選択され、アミノ酸位置は、配列番号２または配列番号４に対応する。
いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸によってコードされるポリペプチド中の１つ以上の変異は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸１～１３に対応する、全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＮ末端シグナルペプチド中の１つ以上の変異を含む。いくつかの態様では、Ｎ末端シグナルペプチドにおける１つ以上の突然変異はΔＭ１～Ｓ１３であり、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。
いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸によってコードされるポリペプチド中の１つ以上の変異は、全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＣ末端の１つ以上の変異を含む。いくつかの態様では、全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＣ末端における１つ以上の変異は、Ｃ末端小胞体（ＥＲ）保持ペプチドにおける１つ以上の変異を含み、それは配列番号２または配列番号４のアミノ酸１２５４～１２７３に対応する。いくつかの態様では、Ｃ末端ＥＲ保持ペプチドにおける１つ以上の変異は、Ｄ１２５７Ａ、Ｅ１２５８Ａ、Ｄ１２５９Ａ、Ｄ１２６０Ａ、Ｅ１２６２Ａ、Ｋ１２６９Ａ、Ｈ１２７１Ｋ、Ｔ１２７３Ａ、またはそれらの任意の組み合わせから選択され、アミノ酸位置は、配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、Ｃ末端ＥＲ保持ペプチドにおける１つ以上の変異は、Ｄ１２５７Ａ＋Ｅ１２５８Ａ＋Ｄ１２５９Ａ＋Ｄ１２６０Ａ＋Ｅ１２６２Ａ（すなわち、Ｄ／ＥからＡの変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、Ｃ末端ＥＲ保持ペプチドにおける１つ以上の変異は、ΔＣ１２５３－Ｔ１２７３、ΔＣ１２５４－Ｔ１２７３またはΔＫ１２５５－Ｔ１２７３である。
いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸によってコードされるポリペプチド中の１つ以上の変異は、Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸によってコードされるポリペプチド中の１つ以上の変異は、Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、ヘキサ－プロリン Ｓ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸によってコードされるポリペプチド中の１つ以上の変異は、６８１－ＰＲＲＡＲ／ＳＶＡ－６８８ Ｓ１／Ｓ２フーリン切断部位における１つ以上の変異を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、６８１－ＰＲＲＡＲ／ＳＶＡ－６８８ Ｓ１／Ｓ２フーリン切断部位における１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｓ＋Ｒ６８３Ｓ（すなわち、ＳＳＡＲ変異）、（ｂ）Δ６８１－６８４（すなわち、ΔＰＲＲＡ変異）、（ｃ）Δ６７８－６７９＋Δ６８１－６８２、（ｄ）Ｒ６８２Ａ＋Ｒ６８３Ｇ＋Ｒ６８５Ｇ（すなわち、６８２－ＡＧＡＧ－６８５変異）、（ｅ）Ｒ６８２Ｑ＋Ｒ６８３Ｑ＋Ｒ６８５Ｑ、（ｆ）Ｒ６８２Ｓ＋Ｒ６８５Ｇ、または（ｇ）Δ６８２－６８５（すなわち、ΔＲＲＡＲ変異）であり、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。
いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸によってコードされるポリペプチド中の１つ以上の変異は、（ａ）Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、ヘキサ－プロリン Ｓ変異）および（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸によってコードされるポリペプチド中の１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ａ＋Ｒ６８３Ｇ＋Ｒ６８５Ｇ（すなわち、６８２－ＡＧＡＧ－６８５変異）および（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸によってコードされるポリペプチド中の１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ａ＋Ｒ６８３Ｇ＋Ｒ６８５Ｇ（すなわち、６８２－ＡＧＡＧ－６８５変異）、（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）、および（ｃ）Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、すなわち、ヘキサ－プロリン Ｓ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸によってコードされるポリペプチド中の１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｑ＋Ｒ６８３Ｑ＋Ｒ６８５Ｑおよび（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含む。いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸によってコードされるポリペプチド中の１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｑ＋Ｒ６８３Ｑ＋Ｒ６８５Ｑ、（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）、および（ｃ）Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、すなわち、ヘキサ－プロリン Ｓ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸によってコードされるポリペプチド中の１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｓ＋Ｒ６８５Ｇおよび（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸によってコードされるポリペプチド中の１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｓ＋Ｒ６８５Ｇ、（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）、および（ｃ）Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、すなわち、ヘキサ－プロリン Ｓ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。
いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、１つ以上の転写後調節エレメントをさらに含む。いくつかの態様では、転写後調節エレメントは、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）である。
いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、第１抗原核酸、第２抗原核酸、免疫修飾因子をコードする核酸、またはそれらの任意の組み合わせに作動可能に連結された少なくとも１つの３’ＵＴＲポリ（ａ）テール配列をさらに含む。いくつかの態様では、３’ＵＴＲポリ（ａ）テール配列は、３’ＵＴＲ ＳＶ４０ポリ（ａ）テール配列、３’ＵＴＲウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）ポリ（Ａ）配列、３’ＵＴＲアクチンポリ（Ａ）テール配列、３’ＵＴＲヘモグロビンポリ（Ａ）配列、またはそれらの組み合わせである。
いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは、少なくとも１つのエンハンサー配列をさらに含む。いくつかの態様では、エンハンサー配列は、ヒトアクチンエンハンサー配列、ヒトミオシンエンハンサー配列、ヒトヘモグロビンエンハンサー配列、ヒト筋クレアチンエンハンサー配列、ウイルスエンハンサー配列、ポリヌクレオチド機能エンハンサー配列、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、エンハンサー配列は、ＣＭＶイントロン配列、β－アクチンイントロン配列、またはそれらの組み合わせである。
いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは、逆方向末端反復配列（ＩＴＲ）をさらに含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは第１のＩＴＲおよび第２のＩＴＲを含む。いくつかの態様において、第１のＩＴＲおよび第２のＩＴＲは、両方ともアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）に由来する。
いくつかの態様では、ベクターはＤＮＡプラスミドベクターである。いくつかの態様では、ＤＮＡプラスミドベクターは、ｐＶａｃ １、ｐＶａｃ ４、およびｐＶａｃ ７からなる群から選択される。いくつかの態様では、ベクターは、ウイルスベクター、細菌ベクター、コスミド、または人工染色体である。いくつかの態様では、ウイルスベクターは、ＡＡＶベクター、アデノウイルスベクター、レトロウイルスベクター、ポックスウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、またはそれらの組み合わせから選択される。
いくつかの態様では、組成物、医薬組成物、またはワクチンは、アジュバントをさらに含む。いくつかの態様では、アジュバントは、非コード５’－Ｃ－ホスファート－Ｇ－３’（ＣｐＧ）ジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーを含む。いくつかの態様では、非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーは、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）シグナル伝達経路を活性化する。いくつかの態様では、非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーは、Ｂａｕｅｒ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３８（１２）：３８９１－９０８（２０１０）；Ｃｏｒｎｅｌｉｅ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７９（１５）：１５１２４－９（２００４）；Ｋｌｉｎｍａｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８（８）：３６３５－９（１９９７）；Ｋｌｉｎｍａｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ １９９（１）：２０１－１６（２００４）；Ｌｕｏ，Ｚ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｍｅｄ Ｒｅｐ．６（６）：１３０９－１４（２０１２）；Ｂｏｄｅ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｖａｃｃｉｎｅｓ １０（４）：４９９－５１１（２０１１）；およびＫｕｏ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ １０：２００８５（２０２０）において以前に報告された非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーを含み、その各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの態様では、組成物、医薬組成物、またはワクチンは、薬学的に許容される担体をさらに含む。いくつかの態様では、組成物、医薬組成物またはワクチンは凍結乾燥される。
いくつかの態様では、組成物、医薬組成物、またはワクチンの送達成分はカチオン性ポリマーである。いくつかの態様では、カチオン性ポリマーは、合成官能化ポリマー、脂質、リポポリマー、またはそれらの化学誘導体である。いくつかの態様では、合成官能化ポリマーは生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーである。
いくつかの態様では、生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーは、式：（ＣＰ）ｘＬｙＹｚによって表され、式中：（ａ）ＣＰは、少なくとも１つの第二級アミン基を含有する、１，０００～２５，０００ダルトンの範囲内の数平均分子量を有するカチオン性ポリマーを表し；（ｂ）Ｙは、エステル、アミド、ジスルフィドまたはホスファート架橋を含有する二官能性生分解性リンカーを表し；（ｃ）Ｌは、リガンドを表し；（ｄ）ｘは、１から２０の範囲の整数であり；（ｅ）ｙは、０から１００の範囲の整数であり；（ｆ）ｚは、０から４０の範囲の整数である。いくつかの態様では、カチオン性ポリマーは、直鎖ポリエチレンイミン（ＬＰＥＩ）を含む。いくつかの態様では、直鎖ポリエチレンイミン（ＬＰＥＩ）を含むカチオン性ポリマーは、以下の式：
，
を有するＢＤ１５Ｋ－１２であり、ここでＰＥＩは約１５，０００Ｄａであり、ＰＥＩあたり平均１２個の架橋剤が存在する。いくつかの態様では、二官能性生分解性リンカーは親水性であり、ジスルフィド結合を含む生分解性結合を含む。いくつかの態様では、二官能性生分解性リンカーは、ジチオジプロピオニルリンカーである。
いくつかの態様では、生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーは、ＬＰＥＩと、マルチブロックコポリマーを架橋するためのジチオジプロピオニルリンカーとを含み、ＬＰＥＩは１，０００～２５，０００ダルトンの平均分子量を有する。いくつかの態様では、生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーは、少なくとも１つのリガンドに共有結合している。
いくつかの態様では、リガンドは、糖部分、ポリペプチド、葉酸および抗原からなる群から選択される標的化リガンドである。いくつかの態様では、糖部分は単糖である。いくつかの態様では、単糖はガラクトースである。いくつかの態様では、糖部分はオリゴ糖である。いくつかの態様では、ポリペプチドは、糖タンパク質、抗体、抗体断片、細胞受容体、サイトカイン受容体、または成長因子受容体である。いくつかの態様では、成長因子受容体は上皮成長因子受容体である。いくつかの態様では、糖タンパク質は、トランスフェリンまたはアシアロオロソムコイド（ＡＳＯＲ）である。いくつかの態様では、抗原は、ウイルス抗原、細菌抗原、または寄生虫抗原である。
いくつかの態様では、生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーは、５００～２０，０００ダルトンの範囲の分子量のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）に共有結合している。いくつかの態様では、生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーは、オレイン酸、パルミチン酸およびステアリン酸からなる群から選択される脂肪アシル鎖に共有結合している。いくつかの態様では、生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーは、ポリアニオン性化合物に静電的に誘引される少なくとも１つのアミン基を含む。いくつかの態様では、ポリアニオン性化合物は核酸であり、生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーは、核酸を凝縮してコンパクトな構造を形成する。
いくつかの態様では、組成物、医薬組成物またはワクチンの送達成分は、脂質またはＰＥＧに共有結合したＰＥＩ骨格を含むカチオン性リポポリマーである。いくつかの態様では、ＰＥＩ骨格は、脂質およびＰＥＧに共有結合している。いくつかの態様では、脂質およびＰＥＧは、共有結合によってＰＥＩ骨格に直接結合している。いくつかの態様では、脂質は、ＰＥＧスペーサーを介してＰＥＩ骨格に結合している。いくつかの態様では、ＰＥＧは５０～２０，０００ダルトンの分子量を有する。いくつかの態様では、ＰＥＧ対ＰＥＩのモル比は、０．１：１～５００：１の範囲内である。いくつかの態様では、脂質対ＰＥＩのモル比は、０．１：１～５００：１の範囲内である。いくつかの態様では、脂質は、コレステロール、コレステロール誘導体、Ｃ１２～Ｃ１８脂肪酸、または脂肪酸誘導体である。いくつかの態様では、ＰＥＩは、コレステロールおよびＰＥＧに共有結合しており、カチオン性リポポリマー中の平均ＰＥＧ：ＰＥＩ：コレステロールモル比は、ＰＥＧ １～５：ＰＥＩ １：コレステロール０．４～１．５の範囲内である。いくつかの態様では、ＰＥＩは、１００～５００，０００ダルトンの分子量を含む、直鎖または分岐構成を有する。
いくつかの態様では、カチオン性リポポリマーは、受容体リガンド、膜透過剤、エンドソーム分解剤、核局在化配列およびｐＨ感受性エンドソーム分解性ペプチドからなる群から選択されるペンダント官能性部分をさらに含む。
いくつかの態様では、カチオン性リポポリマーは、標的化リガンドをさらに含み、標的化リガンドは、ＰＥＩ骨格に直接結合しているか、またはＰＥＧリンカーを介して結合している。いくつかの態様では、標的化リガンドは、糖部分、ポリペプチド、葉酸および抗原からなる群から選択される。いくつかの態様では、糖部分は単糖である。いくつかの態様では、単糖はガラクトースである。いくつかの態様では、糖部分はオリゴ糖である。いくつかの態様では、ポリペプチドは、糖タンパク質、抗体、抗体断片、細胞受容体、サイトカイン受容体、または成長因子受容体である。いくつかの態様では、成長因子受容体は上皮成長因子受容体である。いくつかの態様では、糖タンパク質は、トランスフェリンまたはアシアロオロソムコイド（ＡＳＯＲ）である。いくつかの態様では、抗原は、ウイルス抗原、細菌抗原、または寄生虫抗原である。
いくつかの態様では、組成物、医薬組成物またはワクチンのカチオン性ポリマーは、カチオン性ポリマー中のアミン窒素の、ポリヌクレオチド、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクター中のホスファートに対する比を約０．０１：１～約５０：１（例えば、約０．０１：１～約４０：１；約０．０１：１～約３０：１；約０．０１：１～約２０：１；約０．０１：１～約１０：１、または約０．０１：１～約５：１）にするのに十分な量で存在する。いくつかの態様では、カチオン性ポリマー中のアミン窒素の、ポリヌクレオチド、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクター中のホスファートに対する比は、約０．１：１～約５０：１（例えば、約０．１：１～約４０：１；約０．１：１～約３０：１；約０．１：１～約２０：１；約０．１：１～約１０：１、または約０．１：１～約５：１）である。いくつかの態様では、ポリヌクレオチド、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクター中のホスファートに対するカチオン性ポリマー中のアミン窒素の比は、約１：１０～約１０：１である。
いくつかの態様では、組成物、医薬組成物またはワクチンは、カチオン性ポリマーと複合体化した核酸（例えば、ＤＮＡプラスミドベクターまたはマルチシストロン性ｍＲＮＡベクター）を約０．１ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌ（例えば、約０．１ｍｇ／ｍｌ～約５ｍｇ／ｍｌ；約０．５ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌ；または約０．５ｍｇ／ｍｌ～約５ｍｇ／ｍｌ）含む。いくつかの態様では、組成物、医薬組成物またはワクチンは、カチオン性ポリマーと複合体化した核酸（例えば、ＤＮＡプラスミドベクターまたはマルチシストロン性ｍＲＮＡベクター）を約１ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌ（例えば、約１ｍｇ／ｍｌ～約６ｍｇ／ｍｌ；約２ｍｇ／ｍｌ～約６ｍｇ／ｍｌ；約５ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌ；または約６ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌ）含む。
いくつかの態様では、組成物、医薬組成物またはワクチンの送達成分は、以下の式を有するリポポリアミンを含む：

（Ｓｔａｒａｍｉｎｅ）
いくつかの態様では、送達成分は、リポポリアミンと、リポポリアミンのアルキル化誘導体との混合物を含む。いくつかの態様では、リポポリアミンのアルキル化誘導体は、ポリオキシアルキレン、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミド、ポリビニルアルコール、デキストラン、ポリ（Ｌ－グルタミン酸）、スチレン無水マレイン酸、ポリ－Ｎ－（２－ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、またはポリジビニルエーテル無水マレイン酸である。いくつかの態様では、リポポリアミンのアルキル化誘導体は、以下の式を有し：

（メトキシポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）修飾Ｓｔａｒａｍｉｎｅ）、
式中、ｎは、それぞれ２～５個の炭素原子を含む１０～１００個の整数の繰り返し単位を表す。いくつかの態様では、リポポリアミンのアルキル化誘導体は、以下の式を有し：
，
式中、ｎ＝１１である（Ｓｔａｒａｍｉｎｅ－ｍＰＥＧ５１５）。いくつかの態様では、リポポリアミンのアルキル化誘導体は、以下の式を有する：

（Ｓｔａｒａｍｉｎｅ－ｍＰＥＧ１１）。
いくつかの態様では、混合物中のリポポリアミンとリポポリアミンのアルキル化誘導体との比は、１：１～１０：１である。いくつかの態様では、リポポリアミンは、リポポリアミン中のアミン窒素の、ポリヌクレオチド、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクター中のホスファートに対する比を約０．０１：１～約５０：１（例えば、約０．０１：１～約４０：１；約０．０１：１～約３０：１；約０．０１：１～約２０：１；約０．０１：１～約１０：１、または約０．０１：１～約５：１）にするのに十分な量で存在する。いくつかの態様では、リポポリアミン中のアミン窒素の、ポリヌクレオチド、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクター中のホスファートに対する比は、約０．１：１～約５０：１（例えば、約０．１：１～約４０：１；約０．１：１～約３０：１；約０．１：１～約２０：１；約０．１：１～約１０：１、または約０．１：１～約５：１）である。いくつかの態様では、ポリヌクレオチド、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクター中のホスファートに対するリポポリアミン中のアミン窒素の比は、約１：１０～約１０：１である。
いくつかの態様では、組成物、医薬組成物またはワクチンの送達成分は、以下の式を有するリポポリアミンを含む：

（クロスアミン）。
いくつかの態様では、送達成分は、リポポリアミンと、リポポリアミンのアルキル化誘導体との混合物を含む。いくつかの態様では、リポポリアミンのアルキル化誘導体は、ポリオキシアルキレン、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミド、ポリビニルアルコール、デキストラン、ポリ（Ｌ－グルタミン酸）、スチレン無水マレイン酸、ポリ－Ｎ－（２－ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、またはポリジビニルエーテル無水マレイン酸である。いくつかの態様では、混合物中のリポポリアミンとリポポリアミンのアルキル化誘導体との比は、１：１～１０：１である。いくつかの態様では、リポポリアミンは、リポポリアミン中のアミン窒素の、ポリヌクレオチド、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクター中のホスファートに対する比を約０．０１：１～約５０：１（例えば、約０．０１：１～約４０：１；約０．０１：１～約３０：１；約０．０１：１～約２０：１；約０．０１：１～約１０：１、または約０．０１：１～約５：１）にするのに十分な量で存在する。いくつかの態様では、リポポリアミン中のアミン窒素の、ポリヌクレオチド、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクター中のホスファートに対する比は、約０．１：１～約５０：１（例えば、約０．１：１～約４０：１；約０．１：１～約３０：１；約０．１：１～約２０：１；約０．１：１～約１０：１、または約０．１：１～約５：１）である。いくつかの態様では、ポリヌクレオチド、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクター中のホスファートに対するリポポリアミン中のアミン窒素の比は、約１：１０～約１０：１である。
いくつかの態様では、組成物、医薬組成物またはワクチンの送達成分は、ポロキサマー骨格の少なくとも１つの末端に共有結合した金属キレーターを有するポロキサマー骨格を含む。いくつかの態様では、金属キレーターは、ポロキサマー骨格の少なくとも２つの末端に結合している。いくつかの態様では、ポロキサマー骨格は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１０／０００４３１３号に開示されているポロキサマーである。いくつかの態様では、金属キレーターは、米国特許出願公開第２０１０／０００４３１３号に開示される金属キレーターである。いくつかの態様では、組成物、医薬組成物またはワクチンの送達成分は、以下の式：

を有するポリマー
およびその薬学的に許容される塩を含み、式中、
Ａは、２から１４１の整数を表し、
Ｂは、１６から６７の整数を表し、
Ｃは、２から１４１の整数を表し、
ＲＡおよびＲＣは、同一であるかまたは異なり、Ｒ’－Ｌ－またはＨであり、ＲＡおよびＲＣの少なくとも一方は、Ｒ’－Ｌ－であり、
Ｌは、結合、－ＣＯ－、－ＣＨ２－Ｏ－、または－Ｏ－ＣＯ－であり、
Ｒ’は、金属キレーターである。
いくつかの態様では、金属キレーターは、ＲＮＮＨ－、ＲＮ２Ｎ－、または（Ｒ”－（Ｎ（Ｒ”）－ＣＨ２ＣＨ２）ｘ）２－Ｎ－ＣＨ２ＣＯ－であり、各ｘは独立して０～２であり、Ｒ”はＨＯ２Ｃ－ＣＨ２－である。いくつかの態様では、金属キレーターは、１２－クラウン－４、１５－クラウン－５、１８－クラウン－６、２０－クラウン－６、２１－クラウン－７および２４－クラウン－８からなる群から選択されるクラウンエーテルである。いくつかの態様では、クラウンエーテルは置換クラウンエーテルであり、置換クラウンエーテルは、以下を有する：
（１）独立してＮＨまたはＳで置換されたクラウンエーテル酸素の１つ以上、
（２）－Ｃ６Ｈ４－、－Ｃ１０Ｈ６－、または－Ｃ６Ｈ１０－で置換されたクラウンエーテル－ＣＨ２－ＣＨ２－部分の１つ以上、
（３）－Ｃ４Ｈ２Ｏ－または－Ｃ５Ｈ３Ｎ－で置換されたクラウンエーテル－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－部分の１つ以上、または
（４）それらの任意の組み合わせ。
いくつかの態様では、金属キレーターはクリプタンドであり、クリプタンドは、（１，２，２）クリプタンド、（２，２，２）クリプタンド、（２，２，３）クリプタンド、および（２，３，３）クリプタンドからなる群から選択される。いくつかの態様では、クリプタンドは置換クリプタンドであり、置換クリプタンドは、以下を有する：
（１）独立してＮＨまたはＳで置換されたクリプタンドエーテル酸素の１つ以上、
（２）－Ｃ６Ｈ４－、－Ｃ１０Ｈ６－、または－Ｃ６Ｈ１０－で置換されたクラウンエーテル－ＣＨ２－ＣＨ２－部分の１つ以上、
（３）－Ｃ４Ｈ２Ｏ－または－Ｃ５Ｈ３Ｎ－で置換されたクラウンエーテル－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－部分の１つ以上、または
（４）それらの任意の組み合わせ。
いくつかの態様では、送達成分はクラウンポロキサマー（アザ－クラウン結合ポロキサマー）であり、クラウンポロキサマーは、以下の式：

を有するポリマー
またはその薬学的に許容される塩を含み、式中、
ａは、約１０単位の整数を表し、
ｂは、約２１単位の整数を表し、
ポリマーの総分子量は、約２，０００Ｄａ～約２，２００Ｄａである。
いくつかの態様では、ポリマーは、ポリヌクレオチド、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクターを含む溶液中、約０．１％～約５％または約０．５％～約５％で存在する。
いくつかの態様では、組成物、医薬組成物、またはワクチンの送達成分はβ－アミノエステルである。いくつかの態様では、ポリマーは、ポリヌクレオチド、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクターを含む溶液中、約０．１％～約５％または約０．５％～約５％で存在する。
いくつかの態様では、組成物、医薬組成物、またはワクチンの送達成分は、ポリイノシン－ポリシチジル酸である。いくつかの態様では、ポリイノシン－ポリシチジル酸は、ポリヌクレオチド、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクターを含む溶液中、約０．１％～約５％または約０．５％～約５％で存在する。
いくつかの態様では、送達成分は塩化ベンザルコニウムをさらに含む。
いくつかの態様では、送達成分はＢＤ１５－１２を含む。いくつかの態様では、ヌクレオチド対ＢＤ１５－１２ポリマー（Ｎ：Ｐ）の比は５：１である。
いくつかの態様では、送達成分はＯｍｎｉｆｅｃｔを含む。いくつかの態様では、ヌクレオチド対Ｏｍｎｉｆｅｃｔポリマー（Ｎ：Ｐ）の比は１０：１である。
いくつかの態様では、送達成分は、クラウンポロキサマー（アザ－クラウン結合ポロキサマー）を含む。いくつかの態様では、ヌクレオチド対クラウンポロキサマーの比（Ｎ：Ｐ）は５：１である。いくつかの態様では、送達成分は、クラウンポロキサマーおよびＰＥＧ－ＰＥＩ－コレステロール（ＰＰＣ）リポポリマーを含む。いくつかの態様では、送達成分は、クラウンポロキサマーおよび塩化ベンザルコニウムを含む。いくつかの態様では、送達成分は、クラウンポロキサマーおよびＯｍｎｉｆｅｃｔを含む。いくつかの態様では、送達成分は、クラウンポロキサマーおよび直鎖ポリエチレンイミン（ＬＰＥＩ）を含む。いくつかの態様では、送達成分は、クラウンポロキサマーおよびＢＤ１５－１２を含む。
いくつかの態様では、送達成分は、ＳｔａｒａｍｉｎｅおよびｍＰＥＧ修飾Ｓｔａｒａｍｉｎｅを含む。いくつかの態様では、ｍＰＥＧ修飾Ｓｔａｒａｍｉｎｅは、Ｓｔａｒａｍｉｎｅ－ｍＰＥＧ５１５である。いくつかの態様では、ｍＰＥＧ修飾Ｓｔａｒａｍｉｎｅは、Ｓｔａｒａｍｉｎｅ－ｍＰＥＧ１１である。いくつかの態様では、Ｓｔａｒａｍｉｎｅ対ｍＰＥＧ修飾Ｓｔａｒａｍｉｎｅの比は１０：１である。いくつかの態様では、ヌクレオチド対ポリマー比（Ｎ：Ｐ）は５：１である。いくつかの態様では、送達成分は、Ｓｔａｒａｍｉｎｅ、ｍＰＥＧ修飾Ｓｔａｒａｍｉｎｅおよびクラウンポロキサマーを含む。いくつかの態様では、送達成分は、Ｓｔａｒａｍｉｎｅ、Ｓｔａｒａｍｉｎｅ－ｍＰＥＧ５１５およびクラウンポロキサマーを含む。いくつかの態様では、送達成分は、Ｓｔａｒａｍｉｎｅ、Ｓｔａｒａｍｉｎｅ－ｍＰＥＧ１１およびクラウンポロキサマーを含む。
いくつかの態様では、組成物、医薬組成物またはワクチンは凍結乾燥される。
本明細書に記載または例示される任意のポリヌクレオチド、ベクター、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクター、組成物、医薬組成物またはワクチンを含む宿主細胞も本明細書で提供される。いくつかの態様では、宿主細胞は真核生物宿主細胞である。いくつかの態様では、宿主細胞はヒト宿主細胞である。
本明細書に記載または例示される任意のポリヌクレオチド、ベクター、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクター、ＤＮＡプラスミドベクター、組成物、医薬組成物、ワクチンまたは凍結乾燥組成物を含むキットも本明細書で提供される。いくつかの態様では、キットは、ガラスバイアルをさらに含む。いくつかの態様では、キットは、対象において免疫応答を誘導するための方法においてポリヌクレオチド、ベクター、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクター、ＤＮＡプラスミドベクター、組成物または医薬組成物を使用するための説明書をさらに含む。いくつかの態様では、キットは、組成物、医薬組成物、ワクチンまたは凍結乾燥ワクチンを再構成するための説明書をさらに含む。いくつかの態様では、キットは、対象におけるウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）、細菌または寄生虫感染症を予防、発生の低減、軽減または治療する方法において、ポリヌクレオチド、ベクター、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクター、ＤＮＡプラスミドベクター、組成物、医薬組成物、ワクチンまたは凍結乾燥組成物を使用するための説明書をさらに含む。
対象において免疫応答を誘導する方法も本明細書に提供され、方法は、有効量の本明細書に記載または例示される任意のポリヌクレオチド、ベクター、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクター、ＤＮＡプラスミドベクター、組成物、医薬組成物またはワクチンを対象に投与することを含む。いくつかの態様では、免疫応答は、本明細書に開示される１つ以上の抗原に対するものである。いくつかの態様では、免疫応答は防御免疫応答である。いくつかの態様では、ポリヌクレオチド、ベクター、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクター、ＤＮＡプラスミドベクター、組成物、医薬組成物またはワクチンは、筋肉内、皮下、リンパ内、鼻腔内または腹腔内投与経路によって対象に投与される。
いくつかの態様では、免疫応答は、１つ以上のウイルス抗原、１つ以上の細菌抗原、または１つ以上の寄生虫抗原を含む１つ以上の抗原に対する。
いくつかの態様では、免疫応答は、ペスト菌抗原または結核菌抗原からなる群から選択される細菌抗原に対する。いくつかの態様では、ペスト菌抗原は、ペスト菌莢膜抗原である。いくつかの態様では、ペスト菌莢膜抗原は、Ｆ１－Ａｇまたは病原性抗原（Ｖ－Ａｇ）である。いくつかの態様では、結核菌抗原は、Ａｐａ抗原、ＨＰ６５抗原またはｒＡｇ８５Ａ抗原である。
いくつかの態様では、免疫応答は、エンテロウイルス抗原、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）抗原、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）抗原、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）抗原、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）抗原、デングウイルス抗原、エボラウイルス抗原、ジカウイルス、チクングニアウイルス抗原、麻疹ウイルス抗原、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）抗原、またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ抗原からなる群から選択されるウイルス抗原に対する。いくつかの態様では、エンテロウイルス抗原は、エンテロウイルス７１（Ｅ７１）抗原またはコクサッキーウイルス（Ｃｏｘ）タンパク質抗原である。いくつかの態様では、Ｅ７１抗原は、Ｅ７１－ＶＰ１抗原またはグルタチオンＳ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）タグ付きＥ７１－ＶＰ１抗原である。いくつかの態様では、Ｃｏｘタンパク質抗原は、ＧＳＴタグ付きＣｏｘタンパク質抗原である。いくつかの態様では、ＨＳＶ抗原は、ＨＳＶ－１エンベロープ抗原、ＨＳＶ－２エンベロープ抗原、またはＨＳＶ－２表面糖タンパク質抗原である。いくつかの態様では、ＨＳＶ－２表面糖タンパク質抗原は、ｇＢ２抗原、ｇＣ２抗原、ｇＤ２抗原、またはｇＥ２抗原ある。いくつかの態様では、ＨＩＶ抗原は、Ｅｎｖ抗原、Ｇａｇ抗原、Ｎｅｆ抗原、またはＰｏｌ抗原である。いくつかの態様では、ＨＰＶ抗原は、マイナーカプシドタンパク質Ｌ２抗原である。いくつかの態様では、マイナーカプシドタンパク質Ｌ２抗原は、マイナーカプシドタンパク質Ｌ２の１つ以上のエピトープドメイン（アミノ酸１０～３６および／またはアミノ酸６５～８９）を含む。いくつかの態様では、ＨＣＶ抗原は、非構造３（ＮＳ３）抗原である。いくつかの態様では、ＲＳＶ抗原は、Ｆ抗原またはＧ抗原である。いくつかの態様では、デングウイルス抗原は、Ｅタンパク質抗原、Ｅタンパク質ドメインＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ）抗原、非構造タンパク質１（ＮＳ１）抗原、またはＤＥＮ－８０Ｅ抗原である。いくつかの態様では、エボラウイルス抗原は、スパイク糖タンパク質（ＧＢ）抗原、ＶＰ２４抗原、ＶＰ４０抗原、核タンパク質（ＮＰ）抗原、ＶＰ３０抗原、またはＶＰ３５抗原である。いくつかの態様では、ジカウイルス抗原は、エンベロープドメインＩＩＩ抗原またはＣＫＤ抗原である。いくつかの態様では、チクングニアウイルス抗原は、Ｅ１糖タンパク質サブユニット抗原、ＭＨＣクラスＩエピトープＰＰＦＧＡＧＲＰＧＱＦＧＤＩ（配列番号３４）、ＭＨＣクラスＩエピトープＴＡＥＣＫＤＫＮＬ（配列番号３５）、またはＭＨＣクラスＩＩエピトープＶＲＹＫＣＮＣＧＧ（配列番号３６）である。いくつかの態様では、麻疹ウイルス抗原は、赤血球凝集素タンパク質ＭＶ－Ｈ抗原、または融合タンパク質ＭＶ－Ｆ抗原である。いくつかの態様では、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ抗原は、スパイク（Ｓ）タンパク質抗原、Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン由来の抗原、またはＳタンパク質の膜融合ドメイン由来の抗原である。いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ抗原は、スパイク（Ｓ）タンパク質抗原、Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン由来の抗原、Ｓタンパク質の膜融合ドメイン由来の抗原、エンベロープ（Ｅ）タンパク質抗原、またはＭタンパク質抗原である。
いくつかの態様では、免疫応答は、任意のインフルエンザウイルス型またはサブタイプに由来する１つ以上のインフルエンザウイルス抗原に対する。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルス赤血球凝集素（ＨＡ）抗原、インフルエンザウイルスノイラミニダーゼ（ＮＡ）抗原、インフルエンザウイルスマトリックス－２（Ｍ２）タンパク質抗原、それらの抗原性断片、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＡ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、またはそれらの任意の組み合わせに由来する。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＡ型に由来する。いくつかの態様では、インフルエンザウイルスＡ型に由来する１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、（ａ）Ｈ１～Ｈ１８またはそれらの任意の組み合わせから選択されるＨＡサブタイプ、および（ｂ）Ｎ１～Ｎ１１またはそれらの任意の組み合わせから選択されるＮＡサブタイプを有する。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ１Ｎ１；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ２Ｎ２；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ３Ｎ２；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ５Ｎ１；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ７Ｎ７；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ７Ｎ９；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ９Ｎ２；またはそれらの任意の組み合わせに由来する。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ１Ｎ１；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ３Ｎ２；またはそれらの組み合わせに由来する。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＢ型に由来する。いくつかの態様では、免疫応答は、本明細書に開示される１つ以上のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原またはその抗原性断片、および本明細書に開示される１つ以上のインフルエンザウイルス抗原またはその抗原性断片に対する。いくつかの態様では、免疫応答は、本明細書に開示される２つ以上のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原またはその抗原性断片に対するものである。いくつかの態様では、免疫応答は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の異なる株に由来する、本明細書に開示される２つ以上のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原またはその抗原性断片に対するものである。いくつかの態様では、免疫応答は、同じＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質またはその抗原性断片の２つ以上の異なるバリアントに対するものであり、同じＳＡＲＳ－ＣｏＶ２タンパク質またはその抗原性断片の異なるバリアントは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の異なる株に由来する。いくつかの態様では、免疫応答は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の異なる株に由来する２つ以上のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片に対するものである。いくつかの態様では、異なるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、各々、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＬｉ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｍｅｒｇ Ｍｉｃｒｏｂｅｓ Ｉｎｆｅｃｔ．９（１）：２０７６－９０（２０２０）；Ｌｅｅ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｅ Ｎｅｔｗ．２１（１）：ｅ４（２０２１）；Ｙｕ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６９（６５０５）：８０６－１１（２０２０）；Ｃａｔｔｉｎ－Ｏｒｔｏｌａ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ．１２（１）：５３３３（２０２１）；Ｃｏｒｂｅｔｔ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ５８６（７８３０）：５６７－７１（２０２０）；Ｈｓｉｅｈ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６９（６５１０）：１５０１－５（２０２０）；およびＨａｒｖｅｙ，Ｗ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９（７）：４０９－２４（２０２１）において以前に報告された１つ以上の変異を含む。いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の異なる株は、アルファＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．１．７およびＱ．１～Ｑ．８）；ベータＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．３５１、Ｂ．１．３５１．２およびＢ．１．３５１．３）；デルタＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．６１７．２株およびＡＹ．１株の亜系統）；ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株ガンマ株（例えば、株Ｐ．１、Ｐ．１．１およびＰ．１．２）；エプシロンＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．４２７およびＢ．１．４２９）；エータＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．５２５株）；イオタＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．５２６株）；カッパＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．６１７．１株）；ラムダＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株；Ｂ．１．６１７．３ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株；ミューＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．６２１およびＢ．１．６２１．１）；ゼータ株（例えば、株Ｐ．２）；およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の異なる株は、Ｂ．１．１．７、Ｑ．１、Ｑ．２、Ｑ．３、Ｑ．４、Ｑ．５、Ｑ．６、Ｑ．７、Ｑ．８、Ｂ．１．３５１、Ｂ．１．３５１．２、Ｂ．１．３５１．３、Ｂ．１．６１７．２、ＡＹ．１亜系統、Ｐ．１、Ｐ．１．１、Ｐ．１．２、Ｂ．１．４２７、Ｂ．１．４２９、Ｂ．１．５２５、Ｂ．１．５２６、Ｂ．１．６１７．１、Ｂ．１．６１７．３、Ｂ．１．６２１、Ｂ．１．６２１．１、Ｐ．２、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
いくつかの態様では、免疫応答は、寄生虫抗原に対するものであり、寄生虫抗原は原虫抗原である。いくつかの態様では、免疫応答は、トキソプラズマ抗原または熱帯熱マラリア原虫抗原からなる群から選択される寄生虫抗原に対するものである。いくつかの態様では、トキソプラズマ抗原は、抗原ＭＩＣ８である。いくつかの態様では、熱帯熱マラリア原虫抗原は、ＳＥＲＡ５ポリペプチド抗原、またはサーカムスポロゾイト（ｃｉｒｃｕｍｓｐｏｒｏｚｉｔｅ）タンパク質抗原である。いくつかの態様では、免疫応答は、寄生虫抗原に対するものであり、寄生虫抗原は、寄生虫または病原性真菌抗原である。いくつかの態様では、免疫応答は、カンジダ種抗原（例えば、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）抗原、カンジダ・グラブラタ（Ｃａｎｄｉｄａ ｇｌａｂｒａｔａ）抗原、カンジダ・パラプシロシス（Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）抗原、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）抗原、カンジダ・ルシタニア（Ｃａｎｄｉｄａ ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ）抗原、カンジダ・クルセイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｅｉ）抗原）、ニューモシスチス種抗原、マラセジア種抗原（例えば、マラセジア・ファーファー抗原）、アスペルギルス・フミガーツス抗原、クリプトコッカス種抗原（例えば、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）抗原、クリプトコッカス・ガティイ（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇａｔｔｉｉ）抗原）、ヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）抗原、ブラストマイセス・デルマチティディシス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）抗原、パラコクシジオイデス種抗原（例えば、パラコクシディオイデス・ブラシリエンシス（Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）抗原、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｌｕｔｚｉｉ抗原）、コクシジオイデス種抗原（例えば、コクシジオイデス・イミティス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）抗原、コクシジオイデス・ポサダシイ（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｐｏｓａｄａｓｉｉ）抗原）、ペニシリウム・マルネフェイ抗原、スポロトリクス・シェンキイ抗原、トリコスポロン・アサヒ抗原、フザリウム種抗原（例えば、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｕｍ抗原、フザリウム・オキシスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）抗原）、アカツブタケ属抗原、シュードアレシェリア・ボイジイ（Ｐｓｅｕｄｏａｌｌｅｓｃｈｅｒｉａ ｂｏｙｄｉｉ）抗原、クラドフィアロフォラ・バンチアナム（Ｃｌａｄｏｐｈｉａｌｐｈｏｒａ ｂａｎｔｉａｎｕｍ）抗原、Ｒａｍｉｃｈｌｏｒｉｄｉｕｍ ｓｐｐ抗原、ダクチィラリア・ガルロパバ（Ｄａｃｔｙｌａｒｉａ ｇａｌｌｏｐａｖａ）抗原、エクソフィアラ属抗原（例えば、エクソフィアラ ジャンセルメイ（Ｅｘｏｐｈｉａｌａ ｊｅａｎｓｅｌｍｅｉ）抗原、エクソフィアラ・デルマチチディス（Ｅｘｏｐｈｉａｌａ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）抗原）、カーブラリア属抗原、ビポラリス属抗原、アルタナリア属抗原、Ｌａｃａｚｉａ ｌｏｂｏｉ抗原、Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ ｓｐｐ．抗原（例えば、Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ ｃｏｒｏｎａｔｕｓ抗原、Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ ｉｎｃｏｎｇｒｕｕｓ抗原）、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される寄生虫に対するものである。
対象におけるウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）、細菌または寄生虫感染を予防、発生の低減、軽減または治療する方法も本明細書に提供され、方法は、有効量の本明細書に記載または例示される任意のポリヌクレオチド、ベクター、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクター、ＤＮＡプラスミドベクター、組成物、医薬組成物またはワクチンを対象に投与することを含む。いくつかの態様では、ポリヌクレオチド、ベクター、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクター、ＤＮＡプラスミドベクター、組成物、医薬組成物、またはワクチンは、筋肉内、皮下、リンパ内、または腹腔内投与経路によって対象に投与される。
本明細書に記載または例示される任意の組成物、医薬組成物またはワクチンを製造する方法も本明細書で提供され、方法は、（ａ）本明細書に開示される送達成分を本明細書に開示されるポリヌクレオチドと組み合わせる工程、（ｂ）組み合わせた送達成分およびポリヌクレオチドを粉末に凍結乾燥する工程、および（ｃ）粉末を希釈剤で再構成して、送達成分と複合体を形成した核酸の溶液を形成する工程を含む。
本明細書に開示される任意の方法に従って使用するための組成物、医薬組成物、またはワクチンも本明細書で提供される。
（図１）プラスミド骨格における、プロモーター１（Ｐｒｏｍ－１）の制御下でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質をコードする遺伝子、プロモーター２（Ｐｒｏｍ－２）の制御下で第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードする遺伝子、ならびに２つのサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターの制御下でインターロイキン１２（ＩＬ－１２）ｐ３５およびＩＬ－１２ ｐ４０をコードする遺伝子のポリヌクレオチド配列を含むベクター構築物の概略図を提供する。
（図２）プラスミド骨格における、プロモーター１（Ｐｒｏｍ－１）の制御下でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質をコードする遺伝子、プロモーター２（Ｐｒｏｍ－２）の制御下で第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードする遺伝子、２つのＣＭＶプロモーターの制御下でＩＬ－１２ ｐ３５およびＩＬ－１２ ｐ４０をコードする遺伝子、ならびにプロモーターＺ（Ｐｒｏｍ－Ｚ）の制御下で主要組織適合遺伝子複合体クラスＩ（ＭＨＣ Ｉ）をコードする遺伝子のポリヌクレオチド配列を含むベクター構築物の概略図を提供する。
（図３）プラスミド骨格における、プロモーター１（Ｐｒｏｍ－１）の制御下でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質をコードする遺伝子、プロモーター２（Ｐｒｏｍ－２）の制御下で第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードする遺伝子、２つのＣＭＶプロモーターの制御下でＩＬ－１２ ｐ３５およびＩＬ－１２ ｐ４０をコードする遺伝子、ならびにプロモーターＺ（Ｐｒｏｍ－Ｚ）の制御下で主要組織適合遺伝子複合体クラスＩＩ（ＭＨＣ ＩＩ）をコードする遺伝子のポリヌクレオチド配列を含むベクター構築物の概略図を提供する。
（図４）プラスミド骨格中における、プロモーター１（Ｐｒｏｍ－１）の制御下でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質をコードする遺伝子、プロモーター２（Ｐｒｏｍ－２）の制御下で第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードする遺伝子、およびＣＭＶプロモーターの制御下でインターロイキン２（ＩＬ－２）をコードする遺伝子のポリヌクレオチド配列を含むベクター構築物の概略図を提供する。
（図５）プラスミド骨格における、プロモーター１（Ｐｒｏｍ－１）の制御下でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質をコードする遺伝子、プロモーター２（Ｐｒｏｍ－２）の制御下で第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードする遺伝子、ＣＭＶプロモーターの制御下でＩＬ－２をコードする遺伝子、およびプロモーターＺ（Ｐｒｏｍ－Ｚ）の制御下でＭＨＣ Ｉをコードする遺伝子のポリヌクレオチド配列を含むベクター構築物の概略図を提供する。
（図６）プラスミド骨格における、プロモーター１（Ｐｒｏｍ－１）の制御下でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質をコードする遺伝子、プロモーター２（Ｐｒｏｍ－２）の制御下で第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードする遺伝子、ＣＭＶプロモーターの制御下でＩＬ－２をコードする遺伝子、およびプロモーターＺ（Ｐｒｏｍ－Ｚ）の制御下でＭＨＣ ＩＩをコードする遺伝子のポリヌクレオチド配列を含むベクター構築物の概略図を提供する。
（図７）プラスミド骨格における、プロモーター１（Ｐｒｏｍ－１）の制御下でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質をコードする遺伝子、プロモーター２（Ｐｒｏｍ－２）の制御下で第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードする遺伝子、ＣＭＶプロモーターの制御下でＩＬ－２をコードする遺伝子、プロモーターＸ（Ｐｒｏｍ－Ｘ）の制御下でＣ－Ｃモチーフケモカインリガンド（ＣＣＬ）３（ＣＣＬ３）をコードする遺伝子、およびプロモーターＹ（Ｐｒｏｍ－Ｙ）の制御下でＣＣＬ４をコードする遺伝子のポリヌクレオチド配列を含むベクター構築物の概略図を提供する。
（図８）プラスミド骨格中における、プロモーター１（Ｐｒｏｍ－１）の制御下でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質をコードする遺伝子、プロモーター２（Ｐｒｏｍ－２）の制御下で第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードする遺伝子、およびＣＭＶプロモーターの制御下でインターロイキン１５（ＩＬ－１５）をコードする遺伝子のポリヌクレオチド配列を含むベクター構築物の概略図を提供する。
（図９）プラスミド骨格における、プロモーター１（Ｐｒｏｍ－１）の制御下でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質をコードする遺伝子、プロモーター２（Ｐｒｏｍ－２）の制御下で第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードする遺伝子、ＣＭＶプロモーターの制御下でＩＬ－１５をコードする遺伝子、およびプロモーターＺ（Ｐｒｏｍ－Ｚ）の制御下でＭＨＣ Ｉをコードする遺伝子のポリヌクレオチド配列を含むベクター構築物の概略図を提供する。
（図１０）プラスミド骨格における、プロモーター１（Ｐｒｏｍ－１）の制御下でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質をコードする遺伝子、プロモーター２（Ｐｒｏｍ－２）の制御下で第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードする遺伝子、ＣＭＶプロモーターの制御下でＩＬ－１５をコードする遺伝子、およびプロモーターＺ（Ｐｒｏｍ－Ｚ）の制御下でＭＨＣ ＩＩをコードする遺伝子のポリヌクレオチド配列を含むベクター構築物の概略図を提供する。
（図１１）プラスミド骨格における、プロモーター１（Ｐｒｏｍ－１）の制御下でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質をコードする遺伝子、プロモーター２（Ｐｒｏｍ－２）の制御下で第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードする遺伝子、ＣＭＶプロモーターの制御下でＩＬ－１５をコードする遺伝子、プロモーターＸ（Ｐｒｏｍ－Ｘ）の制御下でＣＣＬ３をコードする遺伝子、およびプロモーターＹ（Ｐｒｏｍ－Ｙ）の制御下でＣＣＬ４をコードする遺伝子のポリヌクレオチド配列を含むベクター構築物の概略図を提供する。
（図１２）プラスミド骨格における、プロモーター１（Ｐｒｏｍ－１）の制御下でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質をコードする遺伝子、プロモーター２（Ｐｒｏｍ－２）の制御下で第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードする遺伝子、プロモーターＸ（Ｐｒｏｍ－Ｘ）の制御下でＣＣＬ３をコードする遺伝子、およびプロモーターＹ（Ｐｒｏｍ－Ｙ）の制御下でＣＣＬ４をコードする遺伝子のポリヌクレオチド配列を含むベクター構築物の概略図を提供する。
（図１３Ａ－１３Ｂ）境界が画定されたＳ１およびＳ２サブユニットを有する全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質の概略図（図１３Ａ）および構築物ｐＶａｃ１～ｐＶａｃ ５の概要（図１３Ｂ）を提供する。 （図１３Ａ－１３Ｂ）境界が画定されたＳ１およびＳ２サブユニットを有する全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質の概略図（図１３Ａ）および構築物ｐＶａｃ１～ｐＶａｃ ５の概要（図１３Ｂ）を提供する。
（図１４Ａ－１４Ｉ）ｐＶａｃベクターを含むベクターの概略図を提供する。すべての構築物は、Ｄ６１４Ｇアミノ酸置換を含む、部分的（Ｓ１、アミノ酸１５～６９５）または完全（Ｓ、アミノ酸１～１２７３）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を発現する。Ｓタンパク質は、哺乳動物ＥＦ－１αプロモーターの制御下にある。全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を発現する遺伝子を含むｐＵＮＯベクターが提供される（図１４Ａ）。 図１４Ｂは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質Ｓ１サブユニットを発現するｐＶａｃ１を提供する。 図１４Ｃは、２つの別々のＣＭＶプロモーターの制御下でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質Ｓ１サブユニットおよびＩＬ－１２；単一遺伝子（ｐ３５およびｐ４０）を発現するｐＶａｃ２を提供する。 図１４Ｄは、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列の制御下でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質Ｓ１サブユニット、ＣｏＶ－２Ｍ抗原を、および２つの別々のＣＭＶプロモーターの制御下でヒトヘテロ二量体サイトカインＩＬ１２；単一遺伝子（ｐ３５およびｐ４０）を発現するｐＶａｃ３提供する。 図１４Ｅ（図１４Ｅ）は、Ｄ６１４Ｇ変異を有する全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を発現するｐＶａｃ４を提供する。 図１４Ｆ（図１４Ｆ）は、Ｄ６１４Ｇ変異を有する全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を発現し、ヒトヘテロ二量体サイトカインＩＬ１２（単一遺伝子ｐ３５およびｐ４０、２つの別々のＣＭＶプロモーターの制御下）を共発現するｐＶａｃ５を提供する。（ｐＶａｃ５；図１４Ｆ）、図１４Ｇ（ＦＩＧ．１４Ｇ）は、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列の制御下で、Ｄ６１４Ｇ変異を有する全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質をＭ抗原と共に発現し、２つの別々のＣＭＶプロモーターの制御下でヒトヘテロ二量体サイトカインＩＬ１２；単一遺伝子（ｐ３５およびｐ４０）を共発現するｐＶａｃ６を提供する。 （ｐＶａｃ５；図１４Ｆ）、図１４Ｇ（ＦＩＧ．１４Ｇ）は、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列の制御下で、Ｄ６１４Ｇ変異を有する全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質をＭ抗原と共に発現し、２つの別々のＣＭＶプロモーターの制御下でヒトヘテロ二量体サイトカインＩＬ１２；単一遺伝子（ｐ３５およびｐ４０）を共発現するｐＶａｃ６を提供する。 図１４Ｈ（図１４Ｈ）は、ＣＭＶプロモーターの制御下で、Ｄ６１４Ｇ変異を有する全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質をＭ抗原と共に発現するｐＶａｃ７を提供する。 図１４Ｉ（図１４Ｉ）は、ｐＶａｃ １ベクターを構築するために使用されるｐ２ＣＭＶ－Ｖ４骨格ベクターを提供する。
（図１５Ａ－１５Ｆ）ｐＶａｃ１トランスフェクション後の２９３Ｔ細胞溶解物におけるスパイクＳ１タンパク質発現（図１５Ａ）を提供する。 ｐＶａｃ１、ｐＶａｃ２、またはｐＶａｃ３のいずれかのトランスフェクション後の２９３Ｔ細胞溶解物におけるスパイクＳ１タンパク質発現（図１５Ｂ）を提供する。 ｐＶａｃ１、ｐＶａｃ２、またはｐＶａｃ３のいずれかのトランスフェクション後の２９３Ｔ細胞溶解物におけるスパイクＳ１タンパク質発現（図１５Ｂ）、細胞溶解物（図１５Ｃ）および細胞培地（図１５Ｄ）におけるスパイクタンパク質発現を提供する。 ｐＶａｃ１、ｐＶａｃ２、またはｐＶａｃ３のいずれかのトランスフェクション後の２９３Ｔ細胞溶解物におけるスパイクＳ１タンパク質発現（図１５Ｂ）、細胞溶解物（図１５Ｃ）および細胞培地（図１５Ｄ）におけるスパイクタンパク質発現を提供する。 ｐＶａｃ２およびｐＶａｃ３の両方のトランスフェクション後のインビトロでのｍＩＬ１２発現（図１５Ｅ）を提供する。 スパイクタンパク質プラスミドおよびＯｍｎｉｆｅｃｔのトランスフェクション後の２９３Ｔ細胞溶解物および上清中のスパイクタンパク質発現レベル（図１５Ｆ）を提供する。
（図１６）プラスミドＤＮＡのＣＰ送達がインビボで抗原の発現をもたらすことを示す。ＣＰを用いたＩＭ送達によって、レポーター遺伝子分泌型アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）を発現するプラスミドを注射したマウスからの血液を、接種後１、３および７日目に採取し、ＳＥＡＰ酵素活性について試験した。ＳＥＡＰ酵素活性は、相対光単位（ＲＬＵ）によって表される。データは、群あたり５匹のマウスの算術平均力価として表される。
（図１７Ａ）エレクトロポレーション（ＥＰ）によって送達されたｐＶａｃ１で免疫化されたマウスからの血清が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｄ６１４Ｇ Ｓ ｅＧＦＰレポーターシュードタイプレンチウイルスを部分的に中和することができることを示す。 （図１７Ｂ）クラウンポロキサマー（ＣＰ；アザ－クラウン結合ポロキサマー）と共に筋肉内（ＩＭ）経路によって送達された、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｄ６１４Ｇ Ｓタンパク質を発現するプラスミドＤＮＡ（ｐＶａｃ１またはｐＵＮＯ）で免疫化されたマウスからの血清が、ＩｇＧ抗原特異的抗体を産生することを示す。 （図１７Ｃ）ＣＰと共にＩＭ送達された、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｄ６１４Ｇ Ｓタンパク質を発現するプラスミドＤＮＡ（ｐＶａｃ１またはｐＵＮＯ）で免疫化されたマウスからの脾臓が、１５ｍｅｒのＳ重複ペプチドライブラリーの存在下でインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）を産生することを示す。図１７Ｃの各柱は、４つの脾臓のプールの複製の平均を表す。エラーバーは標準偏差を表す。
（図１８）ＣＰで送達されたｐＵＮＯで免疫化されたマウスからの血清が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｄ６１４Ｇ Ｓ ｅＧＦＰレポーターシュードタイプレンチウイルスを効果的に中和することができることを提示する。
（図１９）ＣＰと共にＩＭ送達された、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｄ６１４Ｇ Ｓタンパク質を発現するプラスミドＤＮＡ（ｐＵＮＯ、ｐＶａｃ２またはｐＶａｃ３）で免疫化されたマウスからの脾臓が、１５ｍｅｒのＳ重複ペプチドライブラリーの存在下でインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）を産生することを提示する。各柱は、４つの脾臓のプールの複製の平均を表す。エラーバーは標準偏差を表す。
（図２０Ａ）２回または３回の免疫化後にＣＰ ＤＮＡワクチン製剤（ｐＶａｃ１およびｐＵＮＯ ２５０ｕｇ、ＩＭ）に対してＴ細胞が応答することを示す（図１９Ａ）。各柱は、４つの脾臓のプールの複製の平均を表す。エラーバーは標準偏差を表す。 （図２０Ｂ）２回または３回の免疫化後にＣＰ ＤＮＡワクチン製剤（ｐＶａｃ１およびｐＵＮＯ ２５０ｕｇ、ＩＭ）に対してＢ細胞が応答することを示す。抗体力価は、２回免疫化した群と比較して、３回免疫化した群のほうが高い。
５．１ 概要
本開示のポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡまたはｍＲＮＡ）、ベクター、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクター、ＤＮＡプラスミドベクター、組成物、医薬組成物、およびワクチンは、例えば、ＤＮＡベースのワクチンアプローチにしばしば伴う、最適以下の免疫原性の問題に１つ以上のレベルで対処する。第１に、いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、強力な免疫修飾因子、例えばウイルス抗原に対する免疫応答を増強するサイトカインおよびケモカインを共発現することができる。第２に、いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、単一のウイルス抗原の代わりに、複数のウイルス抗原および／またはウイルス抗原の複数の典型を含み得、それは、本明細書に開示されるベクターから共発現され、免疫原性のスペクトルを拡大することができる。第３に、いくつかの態様では、ワクチン効率をさらに改善するために、本明細書に開示されるベクターは、ベクターまたはポリヌクレオチドをヌクレアーゼ分解から保護し、細胞区画を通したその移行を促進する送達システム（例えば、本明細書に開示される送達成分）と共に製剤化することができる。いくつかの態様では、本明細書に開示される送達システムはまた、ワクチン送達および抗原発現の部位への抗原提示細胞の動員を促進し、それによりプロフェッショナル抗原提示細胞へのワクチンベクターおよび発現ウイルス抗原の取り込みを増強して、ＭＨＣクラスＩおよびＭＨＣクラスＩＩ提示を誘発するアジュバント特性を示すように製剤化することができる。Ｇｒｅｅｎｌａｎｄ，Ｊ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，１２（１）：１６４－７０（２００５）（以後、「Ｇｒｅｅｎｌａｎｄ ２００５」）およびＳｕｓｃｈａｋ，Ｊ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ＆Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１３（１２）：２８３７－４８（２０１７）（以後、「Ｓｕｓｃｈａｋ ２０１７」）を参照されたい。
いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、１つ以上のウイルス抗原（例えば、ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２抗原）をコードする核酸配列を含むことができる。いくつかの態様では、１つ以上のウイルス抗原は、２つ以上のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株に由来するウイルス抗原（例えば、Ｓタンパク質、Ｓタンパク質のＳ１サブユニット、Ｓタンパク質のＲＢＤ、Ｓタンパク質の膜融合ドメイン、Ｍタンパク質、Ｅタンパク質、またはそれらの抗原性断片）を含む。いくつかの態様では、ベクターは、１つ以上の免疫修飾因子をコードする核酸配列をさらに含む。いくつかの態様では、ベクターは、ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２抗原、および場合により第２のウイルス抗原をコードする核酸配列を含む。いくつかの態様では、ベクターは、異なるＳＡＲＳ ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ ＣｏＶ－２抗原および第２のＳＡＲＳ ＣｏＶ－２抗原をコードする核酸配列を含む。いくつかの態様では、ベクターは、異なるＳＡＲＳ ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質抗原および第２のＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質抗原をコードする核酸配列を含む。
いくつかの態様では、本開示は、（ａ）第１の病原体抗原（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片）をコードする第１抗原核酸、および（ｂ）免疫修飾因子をコードする核酸を含むポリヌクレオチド（例えば、マルチシストロン性ＤＮＡプラスミドまたはマルチシストロン性ｍＲＮＡ）に関する。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、第１のプロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、免疫修飾因子をコードする２つ以上の核酸を含む。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、（ｃ）第２の病原体抗原（例えば、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質抗原またはその抗原性断片）をコードする第２抗原核酸をさらに含む。本明細書に記載されるように、本開示の核酸分子は、本核酸分子を天然に存在するものと区別する１つ以上の特徴（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質をコードする少なくとも１つの遺伝子および免疫修飾因子をコードする遺伝子を含む）を含む。いかなる理論にも拘束されるものではないが、いくつかの態様では、複数の病原体抗原（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原）の発現が免疫原性のスペクトルを拡大する一方で、少なくとも１つの免疫修飾因子の発現が複数の病原体抗原に対する免疫応答を増強する。いくつかの態様では、病原体抗原は、ウイルス病原体抗原、細菌病原体抗原、または寄生虫病原体抗原である。
いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、（ａ）第１の病原体抗原（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質またはその抗原性断片）をコードする第１の核酸であって、第１のプロモーターに作動可能に連結されている第１の核酸；（ｂ）第２の病原体抗原（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質またはその抗原性断片）をコードする第２の核酸であって、第２のプロモーターに作動可能に連結されている第２の核酸；および（ｃ）免疫修飾因子をコードする第３の核酸であって、第３のプロモーターに作動可能に連結されている第３の核酸を含み得る。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは、図１～図１２のいずれかに開示されるような要素を含むことができる。いくつかの態様において、図１～図１２のいずれかに例示されるベクター構築物は、「Ｃｏｖｉｄ－１９スパイク遺伝子」（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードする第１のヌクレオチド配列）および「Ｃｏｖｉｄ－１９遺伝子－２」（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードする第２のヌクレオチド配列）を、本明細書中に開示される病原体抗原またはその抗原性断片の任意の組み合わせをコードするヌクレオチド配列で置き換えるように修飾され得る。
いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、（ａ）第１の病原体抗原（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質またはその抗原性断片）をコードする第１の核酸であって、第１のプロモーターに作動可能に連結されている第１の核酸；（ｂ）第２の病原体抗原（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２膜（Ｍ）タンパク質またはその抗原性断片）をコードする第２の核酸であって、ＩＲＥＳ配列を介して第１のプロモーターに作動可能に連結されている第２の核酸；および（ｃ）第１の免疫修飾因子をコードする第３の核酸であって、第３のプロモーターに作動可能に連結されている第３の核酸を含み得る。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、第２の免疫修飾因子をコードする第４の核酸をさらに含み、第４の核酸は第４のプロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは、図１４Ｃ（ｐＶａｃ ２）、図１４Ｄ（ｐＶａｃ ３）、図１４Ｆ（ｐＶａｃ ５）または図１４Ｇ（ｐＶａｃ ６）のいずれかに開示されるような要素を含むことができる。いくつかの態様では、１４Ｃ（ｐＶａｃ ２）、１４Ｄ（ｐＶａｃ ３）、１４Ｆ（ｐＶａｃ ５）、または１４Ｇ（ｐＶａｃ ６）のいずれかに示されるベクター構築物を修飾して、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長表面（Ｓ）タンパク質、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｄ６１４Ｇ Ｓタンパク質、またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＳ１サブユニット（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードする第１のヌクレオチド配列）および／またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２膜（Ｍ）タンパク質（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードする第２の核酸）を、本明細書に開示される病原体抗原またはその抗原性断片の任意の組み合わせをコードするヌクレオチド配列で置き換えることができる。
いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、第１の病原体抗原（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質またはその抗原性断片）をコードする第１の核酸を含み得、第１の核酸は、第１のプロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、第２の病原体抗原（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２膜（Ｍ）タンパク質またはその抗原性断片）をコードする第２の核酸をさらに含む。いくつかの態様では、第２の核酸は、ＩＲＥＳ配列を介して第１のプロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、第１の病原体抗原および第２の病原体抗原は、異なるＳＡＲＳ ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原である。いくつかの態様では、第１の病原体抗原および第２の病原体抗原は、同じＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原の異なるバリアントであり、同じＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原の異なるバリアントは、異なるＳＡＲＳ ＣｏＶ－２株に由来する。いくつかの態様では、第１の病原体抗原および第２の病原体抗原は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質抗原の異なるバリアントであり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質抗原の異なるバリアントは、異なるＳＡＲＳ ＣｏＶ－２株に由来する。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは第２のプロモーターをさらに含み、第２の核酸は第２のプロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは、図１４Ｂ（ｐＶａｃ １）、図１４Ｅ（ｐＶａｃ ４）、または図１４Ｈ（ｐＶａｃ ７）のいずれかに開示されるような要素を含むことができる。いくつかの態様では、１４Ｂ（ｐＶａｃ １）、１４Ｅ（ｐＶａｃ ４）、または１４Ｈ（ｐＶａｃ ７）のいずれかに示されるベクター構築物を修飾して、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長表面（Ｓ）タンパク質、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｄ６１４Ｇ Ｓタンパク質、またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＳ１サブユニット（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードする第１のヌクレオチド配列）および／またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２膜（Ｍ）タンパク質（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードする第２の核酸）を、本明細書に開示される病原体抗原またはその抗原性断片の任意の組み合わせをコードするヌクレオチド配列で置き換えることができる。
いくつかの態様では、第１の病原体抗原および／または第２の病原体抗原は、アルファＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片を含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、ΔＨ６９－Ｖ７０、Δ１４４、Ｅ４８４Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、Ａ５７０Ｄ、Ｄ６１４Ｇ、Ｐ６８１Ｈ、Ｔ７１６Ｉ、Ｓ９８２Ａ、およびＤ１１１８Ｈから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、第１の病原体抗原および／または第２の病原体抗原は、ベータＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片を含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｌ１８Ｆ、Ｄ８０Ａ、Ｄ２１５Ｇ、ΔＬ２４１－Ｓ２４３、Ｋ４１７Ｎ、Ｅ４８４Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、Ｄ６１４ＧおよびＡ７０１Ｖから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、第１の病原体抗原および／または第２の病原体抗原は、ガンマＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片を含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｌ１８Ｆ、Ｔ２０Ｎ、Ｐ２６Ｓ、Ｄ１３８Ｙ、Ｒ１９０Ｓ、Ｋ４１７Ｔ、Ｅ４８４Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、Ｄ６１４Ｇ、Ｈ６５５Ｙ、Ｔ１０２７ＩおよびＶ１１７６Ｆから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、第１の病原体抗原および／または第２の病原体抗原は、デルタＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片を含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｔ１９Ｒ、ΔＤ１１９－Ｆ１２０、ΔＥ１５６－Ｆ１５７、Ｒ１５８Ｇ、Ｌ４５２Ｒ、Ｔ４７８Ｋ、Ｄ６１４Ｇ、Ｐ６８１ＲおよびＤ９５０Ｎから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、第１の病原体抗原および／または第２の病原体抗原は、カッパＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片を含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｅ１５４Ｋ、Ｌ４５２Ｒ、Ｅ４８４Ｑ、Ｄ６１４Ｇ、Ｐ６８１ＲおよびＱ１０７１Ｈから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、第１の病原体抗原および／または第２の病原体抗原は、エータＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片を含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｑ５２Ｒ、Ａ６７Ｖ、ΔＨ６９－Ｖ７０、ΔＹ１４４、Ｅ４８４Ｋ、Ｄ６１４Ｇ、Ｑ６７７ＨおよびＦ８８８Ｌから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、第１の病原体抗原および／または第２の病原体抗原は、イオタＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片を含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｌ５Ｆ、Ｔ９５Ｉ、Ｄ２５３Ｇ、Ｅ４８４Ｋ、Ｄ６１４ＧおよびＡ７０１Ｖから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、第１の病原体抗原および／または第２の病原体抗原は、ラムダＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片を含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｇ７５Ｖ、Ｔ７６Ｉ、ΔＲ２４６－Ｇ２５２、Ｄ２５３Ｎ、Ｌ４５２Ｑ、Ｆ４９０Ｓ、Ｄ６１４ＧおよびＴ８５９Ｎから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、第１の病原体抗原および／または第２の病原体抗原は、ミューＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片を含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｔ９５Ｉ、Ｙ１４４Ｓ、Ｙ１４５Ｎ、Ｒ３４６Ｋ、Ｅ４８４Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、Ｄ６１４Ｇ、Ｐ６８１ＨおよびＤ９５０Ｎから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、第１の病原体抗原および／または第２の病原体抗原は、エプシロンＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片を含み、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片は、Ｓ１３Ｉ、Ｗ１５２Ｃ、Ｌ４５２ＲおよびＤ６１４Ｇから選択される１つ以上の変異を有する配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。
いくつかの態様では、本開示はまた、本明細書に開示されるポリヌクレオチドを含むベクター、ワクチン、組成物または医薬組成物に関する。いくつかの態様では、ベクター、ワクチン、組成物または医薬組成物は、送達成分（例えば、カチオン性ポリマー、例えば生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマー、ＰＥＧ－ＰＥＩ－コレステロール（ＰＰＣ）リポポリマー、リポポリアミン、またはリポポリアミン誘導体）をさらに含む。いくつかの態様では、ＰＥＧ－ＰＥＩ－コレステロール（ＰＰＣ）リポポリマーは、２．５：１：０．６の平均ＰＥＧ：ＰＥＩ：コレステロール比を有する。
いくつかの態様では、送達成分はアジュバント特性を示す。いかなる理論にも拘束されるものではないが、いくつかの態様では、送達成分のアジュバント特性は、ワクチン送達および抗原発現の部位への抗原提示細胞の動員を促進し、それにより、プロフェッショナル抗原提示細胞へのポリヌクレオチドおよび発現された抗原の取り込みを増強して、ＭＨＣクラスＩおよびＭＨＣクラスＩＩ提示を誘発する。いくつかの態様では、本開示は、（ｉ）１つ以上のウイルス抗原（例えば、ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２抗原）をコードする核酸配列を含むベクター（例えば、マルチシストロン性ＤＮＡプラスミドベクターまたはマルチシストロン性メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）ベクター）および（ｉｉ）送達成分（例えば、カチオン性ポリマー、ポリイノシン－ポリシチジル酸、またはポロキサマー）を含むワクチンまたは組成物に関する。いくつかの態様では、ベクターは、１つ以上の免疫修飾因子をコードする核酸配列をさらに含む。いくつかの態様では、ベクターは、ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２抗原、および場合により第２のウイルス抗原をコードする核酸配列を含む。いくつかの態様では、ベクターは、異なるＳＡＲＳ ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ ＣｏＶ－２抗原および第２のＳＡＲＳ ＣｏＶ－２抗原をコードする核酸配列を含む。いくつかの態様では、ベクターは、異なるＳＡＲＳ ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質抗原および第２のＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質抗原をコードする核酸配列を含む。
いくつかの態様は、本開示のベクターまたは組成物のインビボ投与後に、病原体（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）チャレンジまたは感染に対する体液性および／または細胞性免疫応答を誘発する方法に関する。
本開示はまた、有効量の本明細書に開示される任意のポリヌクレオチド、ベクター、組成物、医薬組成物またはワクチンを対象に投与することを含む、対象において免疫応答を誘導する方法に関する。本開示はまた、有効量の本明細書に開示される任意のポリヌクレオチド、ベクター、組成物、医薬組成物またはワクチンを対象に投与することを含む、対象におけるウイルス、細菌または寄生虫感染を予防、その発生を低減、軽減または治療する方法に関する。いくつかの態様では、感染はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス感染である。本開示はまた、本明細書に開示される任意の組成物、医薬組成物、またはワクチンを製造する方法に関する。
５．２ 定義
本開示がより容易に理解され得るように、特定の用語が最初に定義される。本出願で使用される場合、本明細書で他に明示的に提供される場合を除き、以下の用語の各々は、以下に記載される意味を有するものとする。さらなる定義は、本出願中に記載される。
本明細書で使用される「および／または」という用語は、他のものの有無にかかわらず、２つの指定された特徴または構成要素のそれぞれの具体的な開示として解釈されるべきである。したがって、本明細書において「Ａおよび／またはＢ」などの語句で使用される「および／または」という用語は、「ＡおよびＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、および「Ｂ」（単独）を含むことが意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、および／またはＣ」などの語句で使用される「および／または」という用語は、以下の態様：Ａ、Ｂ、およびＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡおよびＣ；ＡおよびＢ；ＢおよびＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；およびＣ（単独）、のそれぞれを包含することが意図されている。
本明細書において「～を含む」という文言で態様が説明される場合は常に、「～からなる」および／または「本質的に～からなる」という用語で説明される他の類似の態様も提供されることが理解される。
本明細書で使用される場合、１つ以上の目的の値に適用される「およそ」または「約」という用語は、特に明記しない限り、または文脈から明らかでない限り、記載された基準値と同程度であり、記載された基準値のいずれかの方向（より大きいまたはより小さい）の２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ未満以内に入る値の範囲の値を指す（そのような数が可能な値の１００％を超える場合を除く）。「およそ」または「約」という用語が本明細書で特定の値に適用される場合、「およそ」または「約」という用語のない値も本明細書に開示される。
本明細書に記載されるように、任意の濃度範囲、パーセンテージ範囲、比率範囲、または整数範囲は、特に明記しない限り、列挙された範囲内の任意の整数の値、および適切な場合はその分数（整数の１／１０および１００分の１など）を含むと理解されるべきである。
本明細書で使用される場合、「ｕｇ」および「ｕＭ」という用語は、それぞれ「μｇ」および「μＭ」と互換的に使用される。
単位、接頭辞、および記号は、国際単位系（ＳＩ）が認めた形式で示されている。数値範囲は、範囲を定義する数を含む。本明細書で提供される見出しは、本開示の様々な態様の限定ではなく、全体として本明細書を参照することによって与えられ得る。したがって、すぐ下に定義される用語は、その全体が本明細書を参照することによってより完全に定義される。
本明細書で使用される場合、「コロナウイルス」または「ＣｏＶ」という用語は、コロナウイルス科の一般名を指す。ヒトでは、ＣｏＶは呼吸器感染症を引き起こし、これは典型的には軽度であるが、ＳＡＲＳ（重症急性呼吸器症候群）－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ（中東呼吸器症候群）－ＣｏＶ、およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２などのまれな形態では致死的であり得る。ＣｏＶは、螺旋対称のヌクレオカプシドを有し、ゲノムサイズは約２６～約３２キロベースの範囲である。他の例示的なヒトＣｏＶとしては、ＣｏＶ ２２９Ｅ、ＣｏＶ ＮＬ６３、ＣｏＶ ＯＣ４３、ＣｏＶ ＨＫＵ１およびＣｏＶ ＨＫＵ２０が挙げられる。ＣｏＶのエンベロープは、３つの糖タンパク質：スパイク（Ｓ）タンパク質（受容体結合、細胞融合、主要抗原）；エンベロープ（Ｅ）タンパク質（小さなエンベロープ関連タンパク質）；および膜（Ｍ）タンパク質（出芽およびエンベロープ形成）を有する。ＣｏＶのいくつかのタイプでは、第４の糖タンパク質：赤血球凝集素－エステラーゼ（ＨＥ）タンパク質が存在する。ゲノムは、５’メチル化キャップおよび３’ポリＡを有し、ｍＲＮＡとして直接機能する。ヒト細胞へのＣｏＶの侵入は、エンドサイトーシスおよび膜融合を介して起こり、複製は細胞の細胞質で起こる。ＣｏＶは、呼吸分泌物のエアロゾルによって、糞口経路によって、および機械的伝染によって伝染される。ほとんどのウイルス増殖は上皮細胞で起こる。時折、マクロファージなどの他の細胞型と同様に、肝臓、腎臓、心臓または眼が感染し得る。
本明細書で使用される場合、用語「ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２」は、ＣＯＶＩＤ－１９の世界的流行の原因である呼吸器疾患である、コロナウイルス疾患２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）を引き起こすコロナウイルスの株を指す。分類学的に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、サルベコウイルス亜属（ベータ－ＣｏＶ系統Ｂ）のメンバーであり、ＳＡＲ－ＣｏＶの株である。これは、人畜共通起源を有すると考えられており、コウモリコロナウイルスに近い遺伝的類似性を有しており、コウモリ由来のウイルスから出現したことを示唆している。そのＲＮＡ配列は、約３０，０００塩基長である。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、他のウイルスにおいて病原性および透過性を増加させることが知られている特徴である多塩基性切断部位の組み込みにおいて、既知のベータコロナウイルスの中で独特である。他のコロナウイルスと同様に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、Ｓ（スパイク）、Ｅ（エンベロープ）、Ｍ（膜）、およびＮ（ヌクレオカプシド）タンパク質の４つの構造タンパク質を有する。Ｎタンパク質はＲＮＡゲノムを保持し、Ｓ、ＥおよびＭタンパク質は一緒にウイルスエンベロープを形成する。スパイクタンパク質は、ウイルを宿主細胞の膜に付着させて融合させる役割を有するタンパク質であり、具体的には、そのＳ１サブユニットが付着、Ｓ２サブユニット融合を触媒する。ウイルスのスパイクタンパク質でのタンパク質モデリング実験は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２がヒト細胞上の受容体アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）に対して、それらを細胞侵入の機構として使用するのに十分な親和性を有することを示唆した。Ｘｕ，Ｘ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｃｈｉｎａ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，６３（３）：４５７－６０（２０２０）を参照されたい。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２はまた、細胞進入を支援するためにベイシジンを使用することができる。Ｗａｎｇ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，ｂｉｏＲｘｉｖ，ｄｏｉ：１０．１１０１／２０２０．０３．１４．９８８３４５（２０２０）を参照されたい。
用語「核酸」、「核酸分子」、「ヌクレオチド」、「ヌクレオチド配列」および「ポリヌクレオチド」は、互換的に使用され、リボヌクレオシドのリン酸エステルポリマー形態（アデノシン、グアノシン、ウリジンまたはシチジン；ｍＲＮＡを含む「ＲＮＡ分子」）、またはデオキシリボヌクレオシド（デオキシアデノシン、デオキシグアノシン、デオキシチミジン、またはデオキシシチジン；「ＤＮＡ分子」）、またはホスホロチオエートおよびチオエステルなど、一本鎖形態または二本鎖ヘリックスのいずれかのそれらの任意のホスホエステル類似体を指すことができる。一本鎖核酸配列は、一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）または一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）を指す。二本鎖ＤＮＡ－ＤＮＡ、ＤＮＡ－ＲＮＡおよびＲＮＡ－ＲＮＡヘリックスが可能である。核酸分子、特にＤＮＡまたはＲＮＡ分子という用語は、分子の一次および二次構造のみを指し、それを特定の三次形態に限定するものではない。したがって、この用語は、とりわけ、線状または環状ＤＮＡ分子（例えば、制限断片）、プラスミド、スーパーコイル状ＤＮＡおよび染色体に見られる二本鎖ＤＮＡを含む。特定の二本鎖ＤＮＡ分子の構造を議論する際に、配列は、ＤＮＡの非転写鎖に沿って５’から３’方向の配列（すなわち、ｍＲＮＡに相同な配列を有する鎖）のみを提供する通常の慣例に従って本明細書に記載することができる。「組換えＤＮＡ分子」は、分子生物学的操作を受けたＤＮＡ分子である。ＤＮＡには、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ＤＮＡプラスミド、合成ＤＮＡおよび半合成ＤＮＡが含まれるが、これらに限定されない。本開示の「核酸組成物」は、本明細書に記載の１つ以上の核酸を含む。
ＲＮＡは、例えば細胞内でのＤＮＡ配列の転写によって得ることができる。真核細胞では、典型的には核内またはミトコンドリア内で転写が行われる。インビボでは、ＤＮＡの転写は通常、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）にプロセシングされなければならない未熟ＲＮＡをもたらす。例えば真核生物における未熟ＲＮＡのプロセシングは、多様な転写後修飾、例えばスプライシング、５’キャッピング、ポリアデニル化、核またはミトコンドリアからのエクスポートなどを含む。これらのプロセシングの合計は、ＲＮＡの成熟とも呼ばれる。成熟ｍＲＮＡは、通常、特定のペプチド、タンパク質、またはタンパク質抗原のアミノ酸配列に翻訳され得るヌクレオチド配列を提供する。典型的には、成熟ｍＲＮＡは、５’キャップ、場合により５’－ＵＴＲ、オープンリーディングフレーム、場合により３’－ＵＴＲおよびポリ（Ａ）配列を含む。
本明細書で使用される「マルチシストロン性ｍＲＮＡ」または「マルチシストロン性ｍＲＮＡベクター」という用語は、２つ以上のオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡを指す。この文脈におけるオープンリーディングフレームは、ポリペプチドまたはタンパク質に翻訳可能なコドンの配列である。
本明細書で使用される「５’キャップ」という用語は、成熟ｍＲＮＡの５’末端を一般に「キャップ」する実体、典型的には修飾ヌクレオチド実体を指す。５’キャップは、典型的には、修飾ヌクレオチド、特にグアニンヌクレオチドの誘導体によって形成され得る。いくつかの態様において、５’－キャップは、５’－５’－三リン酸架橋を介して５’末端に連結されている。５’キャップは、メチル化された、例えば、ｍ７ＧｐｐｐＮであり得、ここでＮは、５’キャップを有する核酸の末端５’ヌクレオチド、典型的にはＲＮＡの５’末端である。天然に存在する５’キャップは、ｍ７ＧｐｐｐＮである。
本明細書で使用される場合、「ポリ（Ａ）テール」または「３’－ポリ（Ａ）テール」とも呼ばれる「ポリ（Ａ）配列」は、典型的には、アデニンヌクレオチド、例えば最大約４００個のアデニンヌクレオチドの配列であると理解される。ポリ（Ａ）配列は、ｍＲＮＡの３’末端に位置し得る。いくつかの態様では、ポリ（Ａ）配列は、ｍＲＮＡまたは任意の他の核酸分子内、例えばベクター内、例えばＲＮＡ、好ましくはｍＲＮＡの生成のための鋳型として機能するベクター内にベクターの転写によって配置することもできる。いくつかの態様では、ポリ（Ａ）配列は、本明細書中で定義されるようなｍＲＮＡの３’－ＵＴＲに存在する。
いくつかの態様において、３’－ＵＴＲ配列は、タンパク質コード領域（すなわち、オープンリーディングフレーム）とｍＲＮＡ分子の３’末端との間に位置するｍＲＮＡの一部である。３’末端ポリ（Ａ）配列（「ポリ（Ａ）テール」）をＲＮＡに付加した場合（例えば、ポリアデニル化によって）、３’－ＵＴＲという用語は、タンパク質コード領域と３’末端ポリ（Ａ）配列との間に位置する分子の部分を指すことができる。いくつかの態様において、３’－ＵＴＲはまた、ポリ（Ａ）配列（例えば、ＲＮＡ分子のまさに３’末端に位置しないポリ（Ａ）配列）を含むことができる。ｍＲＮＡの３’－ＵＴＲはアミノ酸配列に翻訳されない。３’－ＵＴＲ配列は、一般に、遺伝子発現プロセス中にそれぞれのｍＲＮＡに転写される遺伝子によってコードされる。ゲノム配列は、最初に、任意選択のイントロンを含む未熟ｍＲＮＡに転写される。次いで、未熟ｍＲＮＡは、成熟プロセスにおいて成熟ｍＲＮＡへとさらにプロセシングされる。この成熟プロセスは、５’キャッピングする工程、未熟ｍＲＮＡをスプライシングして任意選択のイントロンを切除する工程、および３’末端の修飾、例えば未熟ｍＲＮＡの３’末端のポリアデニル化および任意選択のエンドヌクレアーゼまたはエキソヌクレアーゼ切断などを含む。いくつかの態様では、３’－ＵＴＲは成熟ｍＲＮＡの配列に対応し、それは、タンパク質コード領域の終止コドンの３’側（例えば、タンパク質コード領域の終止コドンの３’側に接近して）位置し、ＲＮＡ分子の３’末端または３’末端ポリ（Ａ）配列の５’側まで（例えば、３’末端の５’側に接近した、または３’末端のポリ（Ａ）配列の５’側に接近したヌクレオチドまで）延びる。「対応する」という用語は、３’－ＵＴＲ配列が、３’－ＵＴＲ配列を定義するために使用されるｍＲＮＡ配列などのＲＮＡ配列、またはそのようなＲＮＡ配列に対応するＤＮＡ配列であり得ることを意味する。いくつかの態様では、用語「遺伝子の３’－ＵＴＲ」例えば「アルファまたはベータグロビンの３’－ＵＴＲ」は、この遺伝子に由来する成熟ｍＲＮＡ、すなわち遺伝子の転写および未熟ｍＲＮＡの成熟によって得られるｍＲＮＡの３’－ＵＴＲに対応する配列である。「遺伝子の３’－ＵＴＲ」という用語は、３’－ＵＴＲのＤＮＡ配列およびＲＮＡ配列を包含する。いくつかの態様において、３’－ＵＴＲは、増強されたハーフ・ライク（ｈａｌｆ－ｌｉｋｅ）を含むｍＲＮＡに関連する遺伝子、例えば、アルブミン遺伝子（すなわち、安定なｍＲＮＡを提供する）、α－グロビン遺伝子、β－グロビン遺伝子、チロシンヒドロキシラーゼ遺伝子、リポキシゲナーゼ遺伝子およびコラーゲンアルファ遺伝子、例えば、コラーゲンアルファ１（Ｉ）遺伝子からなる群より選択される遺伝子の３’－ＵＴＲに由来する。
５’－ＵＴＲは、典型的には、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の特定の部分であると理解される。これは、ｍＲＮＡのオープンリーディングフレームの５’側に位置する。いくつかの態様において、５’－ＵＴＲは、転写開始部位から始まり、オープンリーディングフレームの開始コドンの１つ前のヌクレオチドで終わる。５’－ＵＴＲは、調節エレメントとも呼ばれる、遺伝子発現を制御するためのエレメントを含み得る。そのような調節エレメントは、例えば、リボソーム結合部位または５’末端オリゴピリミジントラクトであり得る。５’－ＵＴＲは、例えば、５’キャップの付加によって転写後に修飾され得る。いくつかの態様において、５’－ＵＴＲは、５’キャップと開始コドンとの間に位置する成熟ｍＲＮＡの配列に対応する。いくつかの態様において、５’－ＵＴＲは、５’キャップの３’側に位置するヌクレオチドから（例えば、５’キャップの３’側に接近して位置するヌクレオチドから）、タンパク質コード領域の開始コドンの５’側に位置するヌクレオチドまで（例えば、タンパク質コード領域の開始コドンの５’側に接近して位置するヌクレオチドまで）延びる配列に対応する。成熟ｍＲＮＡの５’キャップの３’側に接近して位置するヌクレオチドは、典型的には転写開始部位に対応する。「対応する」という用語は、５’－ＵＴＲ配列が、５’－ＵＴＲ配列を定義するために使用されるｍＲＮＡ配列などのＲＮＡ配列、またはそのようなＲＮＡ配列に対応するＤＮＡ配列であり得ることを意味する。いくつかの態様において、用語「遺伝子の５’－ＵＴＲ」は、この遺伝子に由来する成熟ｍＲＮＡの５’－ＵＴＲに対応する配列である。
本明細書で使用される場合、「トランスフェクトする」または「トランスフェクション」という用語は、特定の細胞質および／または細胞核に関して、細胞の外部の環境から細胞内環境への核酸の輸送を指す。いかなる特定の理論にも拘束されるものではないが、核酸は、１つ以上のカチオン性ポリマー／核酸複合体内に封入されるか、またはそれらに付着するか、またはそれらに取り込まれた後に細胞に送達され得ることが理解されるべきである。特定のトランスフェクション例は、核酸を細胞核に送達する。核酸には、ＤＮＡおよびＲＮＡならびにそれらの合成同族体が含まれる。そのような核酸には、ミスセンス、アンチセンス、ナンセンス、ならびにタンパク質産生ヌクレオチド、タンパク質、ペプチド、および核酸の産生を制御するオン／オフの速度調節ヌクレオチドが含まれる。特に、限定されないが、それらは、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ハイブリッド配列または合成もしくは半合成配列であり得、天然または人工起源のものであり得る。さらに、核酸は、オリゴヌクレオチドから染色体の範囲で、サイズが可変的であり得る。これらの核酸は、ヒト、動物、植物、細菌、ウイルス、または合成起源のものであり得る。それらは、当業者に公知の任意の技術によって得ることができる。
本明細書で使用される場合、「生分解性」または「生分解」という用語は、可溶化加水分解によって、または酵素および生物の他の産物であり得る、生物学的に形成された実体の作用によって、材料をより単純な中間体または最終産物へと変換することとして定義される。
本明細書で使用される場合、「ペプチド」は、任意の長さのペプチドを意味し、タンパク質を含む。「ポリペプチド」および「オリゴペプチド」という用語は、本明細書では、特定のサイズが特に明記されていない限り、いかなる特定の意図されたサイズ制限もなく使用される。
本明細書で使用される場合、炭水化物の「誘導体」は、例えば、糖の酸形態、例えばグルクロン酸；糖のアミン、例えばガラクトサミン；糖のホスファート、例えばマンノース－６－リン酸；その他である。
本明細書で使用される場合、「逆方向末端反復配列」（または「ＩＴＲ」）という用語は、下流にその逆相補体が続くヌクレオチドの一本鎖配列を指す。最初の配列と逆相補体との間に介在するヌクレオチドの配列は、０を含む任意の長さであり得る。
「投与」および類似の用語は、当業者に公知の様々な方法および送達システムのいずれかを使用した、対象への治療薬（例えば、本明細書中に記載される核酸分子、ベクター、組成物および医薬組成物）の物理的導入を指す。例示的な投与経路としては、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、リンパ内、病巣内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、胸骨内、経口、直腸、局所、表皮、粘膜、鼻腔内、膣、直腸、舌下投与、およびそれらの組み合わせが挙げられる。投与は、例えば、１回、複数回、および／または１回以上の長期間にわたって行うこともできる。
対象の「治療」または「療法」は、疾患に関連する症状、合併症、状態または生化学的徴候の発症、進行、発達、重症度または再発を逆転、緩和、改善、阻害、減速または予防することを目的として、対象に対して行われるあらゆるタイプの介入もしくはプロセス、または対象への活性薬剤の投与を指す。
本明細書で使用される「治療有効量」、「有効量」、「治療用量」、「有効用量」または「有効投与量」は、本明細書に記載される治療目標を達成する量または用量を意味する。当業者は、治療有効量などが単回用量で投与され得るか、または複数回用量（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０回以上の投与）の投与によって達成され得ることをさらに理解するであろう。疾患の退行を促進するか、または疾患の発症もしくは再発を阻害する治療剤の能力は、当業者に公知の様々な方法を使用して、例えば臨床試験中のヒト対象において、ヒトにおける有効性を予測する動物モデルシステムにおいて、またはインビトロアッセイにおいて薬剤の活性をアッセイすることによって評価することができる。
本明細書で使用される場合、「予防する」、「予防すること」、「予防」、「予防的治療」などの用語は、疾患または状態を有しないが、発症するリスクがあるか、または発症しやすい対象において疾患または状態を発症する確率を低下させることを指す。
本明細書で使用される場合、「アジュバント」という用語は、ワクチンに対する身体の応答を改善する任意の成分を指す。
本明細書で使用される場合、「ワクチン」または「ワクチン組成物」という用語は、疾患を予防および／または治療するための免疫原性的に活性な組成物を指す。したがって、いくつかの態様では、ワクチンは、抗原を含むかまたは送達し、ワクチン接種によって特定の防御および保護物質を生成するためにヒトまたは動物に使用されることを意図した医薬品である。
本明細書で使用される場合、「免疫を誘導する」または「免疫原性的に活性な」という用語は、免疫応答を刺激する能力、すなわち抗体、特に体液性抗体の産生を刺激する能力、または細胞媒介性応答を刺激する能力を指す。例えば、局所粘膜領域、末梢血、脳脊髄液などにおける循環抗体もしくは分泌抗体の産生、または細胞媒介性応答の産生を刺激する能力である。いくつかの態様では、本開示の免疫原性的に活性な成分の有効免疫量は変動し得、免疫応答を誘発し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス感染に対する防御免疫応答を提供するのに十分な任意の量であり得る。本開示のポリヌクレオチド（例えば、プラスミドＤＮＡ）を含む投与単位が企図される。患者あたり少なくとも１つの投与単位は、本明細書ではワクチン接種レジメンとして企図される。いくつかの実施形態では、２つ以上の投与単位が有用であり得る。当業者は、ウイルスまたはその成分の有効な免疫化量が最終的に対象に送達される限り、投与単位当たりのワクチン組成物の特定の量、ならびにワクチン接種レジメン当たりの投与単位の総数が最適化され得ることをすぐに認識するであろう。
組成物またはワクチンなどの物質に対する「免疫学的応答」は、対象における、目的の組成物またはワクチンに対する細胞性および／または抗体媒介性の免疫応答の発生である。通常、「免疫学的応答」には、限定されないが、以下の効果：目的の組成物またはワクチンに含まれる１つ以上の抗原に特異的に向けられる抗体、Ｂ細胞、ヘルパーＴ細胞、および／または細胞傷害性Ｔ細胞の産生、の１つ以上が含まれる。いくつかの態様では、対象は、治療的または防御的な免疫学的応答のいずれかを示すことができるので、新たな感染に対する耐性が増強され、かつ／または疾患の臨床的重症度が低下する。いくつかの態様では、そのような防御は、感染した対象によって通常示される症状の減少もしくは欠如、より速い回復時間および／または感染した対象におけるウイルス力価の低下のいずれかによって実証することができる。
本開示の抗原性ポリペプチドは、完全長ポリペプチドまたはその活性断片もしくはバリアントであり得ることが認識されている。いくつかの態様では、「活性断片」または「活性バリアント」または「抗原性断片」という用語は、ポリペプチドの抗原性の全部または一部を保持する断片またはバリアントを指す。したがって、いくつかの態様では、本開示は、対象において免疫原性応答を誘発する任意のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ポリペプチド、抗原、エピトープまたは免疫原を包含する。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ポリペプチド、抗原、エピトープまたは免疫原は、対象において応答を誘発、誘導または刺激する任意のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ポリペプチド、抗原、エピトープまたは免疫原、例えば限定されないが、タンパク質、ペプチドまたはその断片もしくはバリアントであり得る。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ポリペプチド、抗原、エピトープまたは免疫原は、限定されないが、アルファＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．１．７およびＱ．１～Ｑ．８）；ベータＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．３５１、Ｂ．１．３５１．２およびＢ．１．３５１．３）；デルタＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．６１７．２株およびＡＹ．１株の亜系統）；ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株ガンマ株（例えば、株Ｐ．１、Ｐ．１．１およびＰ．１．２）；エプシロンＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．４２７およびＢ．１．４２９）；エータＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．５２５株）；イオタＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．５２６株）；カッパＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、Ｂ．１．６１７．１株）；ラムダＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株；Ｂ．１．６１７．３ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株；ミューＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株（例えば、株Ｂ．１．６２１およびＢ．１．６２１．１）；またはゼータ株（例えば、株Ｐ．２）を含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の任意の株に由来し得る。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントの変異およびウイルス配列データは、ＣｏＶａｒｉａｎｔｓウェブサイト（ｈｔｔｐｓ：／／ｃｏｖａｒｉａｎｔｓ．ｏｒｇ／）およびアメリカ国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）のウェブサイト（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｌａｂｓ／ｖｉｒｕｓ／ｖｓｓｉ／＃／ｓａｒｓ－ｃｏｖ－２）で公的に入手可能であり、それぞれ参照によりその全体が組み込まれる。
「エピトープ」という用語は、特定のＢ細胞および／またはＴ細胞が応答する抗原またはハプテン上の部位を指す。この用語はまた、「抗原決定因子」または「抗原決定因子部位」と互換的に使用される。同じエピトープを認識する抗体は、１つの抗体の、別の抗体の標的抗原への結合を遮断する能力を示す単純なイムノアッセイで同定することができる。
本明細書で使用される場合、用語「医薬剤」、「医薬組成物」もしくは「薬剤」または任意の他の類似の用語は、当技術分野で以前に知られている方法および／または本開示で教示される方法による投与に適した任意の化学的または生物学的材料または化合物を意味し、それらは、限定されないが、（１）生物に対する予防的効果を有し、望ましくない生物学的効果を予防、例えば感染を予防すること、（２）疾患によって引き起こされる状態を緩和すること、例えば、疾患の結果として引き起こされる疼痛または炎症を緩和すること、および／または（３）生物から疾患を緩和、軽減、または完全に排除することを含む、所望の生物学的または薬理学的効果を誘導する。効果は局所的であってもよく、または全身的であってもよい。
「薬学的に許容される担体」は、薬剤と一緒に対象に投与することができ、その薬理活性を破壊せず、治療量の薬剤を送達するのに十分な用量で投与した場合に非毒性である担体を指す。特定の態様では、薬学的に許容される担体は、水性溶媒、すなわち、水を、場合により追加の共溶媒と共に含む溶媒である。例示的な薬学的に許容される担体としては、水、水中緩衝液（例えばリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、および水中５％デキストロース（Ｄ５Ｗ）が挙げられる。ある特定の実施形態において、水性溶媒は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を、例えば、約１～４％または１～３％の量でさらに含む。特定の態様では、薬学的に許容される担体は等張性（すなわち、血漿などの体液と実質的に同じ浸透圧を有する）である。
「対象」は、任意のヒトまたは非ヒト動物を含む。「非ヒト動物」という用語は、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌなどの脊椎動物、ならびにマウス、ラット、およびモルモットなどのげっ歯類を含むが、これらに限定されない。いくつかの態様では、対象はヒトである。「対象」および「患者」という用語は、本明細書では交換可能に使用される。
本明細書で使用される「発現」という用語は、ポリヌクレオチドが遺伝子産物、例えばＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片を産生するプロセスを指す。いくつかの態様では、それは、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）へのポリヌクレオチドの転写およびｍＲＮＡのポリペプチドへの翻訳を含むが、限定されない。発現は「遺伝子産物」をもたらす。本明細書で使用される場合、遺伝子産物は、核酸、例えば遺伝子の転写によって産生されるメッセンジャーＲＮＡ、または転写産物から翻訳されるポリペプチドのいずれかであり得る。本明細書に記載の遺伝子産物は、転写後修飾、例えばポリアデニル化もしくはスプライシングを有する核酸、または翻訳後修飾、例えばメチル化、グリコシル化、脂質の付加、他のタンパク質サブユニットとの会合、もしくはタンパク質分解的切断を有するポリペプチドをさらに含み得る。
本明細書で使用される場合、「５’」または「５プライム」という用語は、核酸または核酸配列の５’末端を指し、「３’」または「３プライム」という用語は、核酸または核酸配列の３’末端を指す。
２つ以上の核酸の文脈における「同一」または「同一性」パーセントという用語は、配列同一性の一部としていかなる保存的アミノ酸置換も考慮せずに、最大の一致について比較およびアラインメント（必要に応じてギャップを導入）した場合に、同じであるか、または同じであるヌクレオチドもしくはアミノ酸残基の指定されたパーセンテージを有する２つ以上の配列を指す。同一性パーセントは、配列比較ソフトウェアもしくはアルゴリズムを使用して、または目視検査によって測定することができる。当技術分野で公知である様々なアルゴリズムおよびソフトウェアを使用して、アミノ酸またはヌクレオチド配列のアラインメントを得ることができる。
本明細書で使用される場合、「プロモーター」という用語は、コード配列または機能性ＲＮＡの発現を制御することができるＤＮＡ配列を指す。いくつかの態様では、コード配列は、プロモーター配列の３’側に位置する。プロモーターは、その全体が天然の遺伝子に由来し得るか、または天然に見出される種々のプロモーターに由来する種々の要素から構成され得るか、または合成ＤＮＡセグメントを含み得る。種々のプロモーターが、種々の組織もしくは細胞型において、または種々の発生段階において、または種々の環境条件もしくは生理学的条件に応答して、遺伝子の発現を指示することができることが当業者によって理解される。多くの場合においてほとんどの細胞型で遺伝子を発現させるプロモーターは、一般に「構成的プロモーター」と呼ばれる。特定の細胞型において遺伝子を発現させるプロモーターは、一般に「細胞特異的プロモーター」または「組織特異的プロモーター」と呼ばれる。発生または細胞分化の特定の段階で遺伝子を発現させるプロモーターは、一般に「発生特異的プロモーター」または「細胞分化特異的プロモーター」と呼ばれる。プロモーターを誘導する薬剤、生物学的分子、化学物質、リガンド、光などによる細胞の曝露または処理後に誘導され、遺伝子を発現させるプロモーターは、一般に「誘導性プロモーター」または「調節可能なプロモーター」と呼ばれる。ほとんどの場合、調節配列の正確な境界は完全には定義されていないので、異なる長さのＤＮＡ断片が同一のプロモーター活性を有し得ることがさらに認識されている。
「作動可能に連結された」という用語は、それらがそれらの通常の機能を実行することを可能にするように互いに連結された遺伝要素を指す。例えば、遺伝子は、その転写がプロモーターの制御下にあり、この転写が遺伝子によってコードされる産物の産生をもたらす場合、プロモーターに作動可能に連結されている。
本明細書で使用される場合、「免疫修飾因子」という用語は、１つ以上の抗原に対する免疫応答を増強するタンパク質を指す。いくつかの態様では、免疫修飾因子としては、サイトカイン、ケモカイン、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ（ＭＨＣ Ｉ）、ＭＨＣクラスＩＩ（ＭＨＣ ＩＩ）、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）－ＤＲアイソタイプ（ＨＬＡ－ＤＲ）、ＣＤ８０、ＣＤ８６、およびそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。サイトカイン免疫修飾因子には、インターロイキン（ＩＬ）２（ＩＬ－２）、ＩＬ－１２ ｐ３５、ＩＬ－１２ ｐ４０、ＩＬ－１２ ｐ７０、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、インターフェロン（ＩＦＮ）α（ＩＦＮ－α）およびＩＦＮ－βが含まれるが、これらに限定されない。ケモカイン免疫修飾因子には、Ｃ－Ｃモチーフケモカインリガンド（ＣＣＬ）３（ＣＣＬ３）、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２８、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド（ＣＸＣＬ）１０（ＣＸＣＬ１０）、およびそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの態様では、免疫修飾因子には、局所炎症応答および／またはインターフェロン応答を減衰させるウイルスタンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２非構造タンパク質１（Ｎｓｐ１）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１３、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ３ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ｂ）が含まれる。いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、抗原核酸によってコードされるウイルス抗原と同じウイルスに由来する。いくつかの態様では、いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、抗原核酸によってコードされるウイルス抗原と異なるウイルスに由来する。いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、本明細書に開示される病原体抗原によって誘発される局所炎症応答および／またはインターフェロン応答を減衰させる。いくつかの態様では、免疫修飾因子は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１３、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ３ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ｂ、およびそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、免疫修飾因子は、非コード５’－Ｃ－ホスファート－Ｇ－３’（ＣｐＧ）ジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーを含む。いくつかの態様では、非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーは、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）シグナル伝達経路を活性化する。いくつかの態様では、非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーは、Ｂａｕｅｒ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３８（１２）：３８９１－９０８（２０１０）；Ｃｏｒｎｅｌｉｅ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７９（１５）：１５１２４－９（２００４）；Ｋｌｉｎｍａｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８（８）：３６３５－９（１９９７）；Ｋｌｉｎｍａｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ １９９（１）：２０１－１６（２００４）；Ｌｕｏ，Ｚ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｍｅｄ Ｒｅｐ．６（６）：１３０９－１４（２０１２）；Ｂｏｄｅ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｖａｃｃｉｎｅｓ １０（４）：４９９－５１１（２０１１）；およびＫｕｏ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ １０：２００８５（２０２０）において以前に報告された非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーを含み、その各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの態様では、本明細書に開示される免疫修飾因子は、免疫修飾因子の組み合わせ、例えば、抗原と同じプラスミドまたは異なるプラスミドから共発現されるサイトカインもしくはケモカインタンパク質またはそれらのコード配列を含み得る。例えば、Ｈｉｒａｏ，Ｌ．Ａ．，ｅｔ ａｌ，Ｖａｃｃｉｎｅ，２６：３１１２－２０（２００８）；Ｋａｎａｇａｖｅｌｕ，Ｓ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ，３０：６９１－７０２（２０１２）；Ａｈｌｅｒｓ，Ｄ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．，３：２８５－３０１（２００３）；Ｊａｆａｒｆｚａｄｅ，Ｂ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｒａｔｉｓｌ Ｌｅｋ Ｌｉｓｔｙ，１１８：５６４－９（２０１７）；Ａｈｌｅｒ，Ｊ．Ｄ．ａｎｄ Ｂｅｌｙａｋｏｖ，Ｉ．Ｍ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，３９：２６５７－６９（２００９）；Ｍｏｏｒｅ，Ａ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｖｉｒｏｌ．７６：２４３－５０（２００２）；Ｂａｒｏｕｃｈ，Ｄ．Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ，９７：４１９２－７（２０００）；Ｋａｌａｍｓ，Ｓ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ，２０８：８１８－２９（２０１３）；Ｂｕｃｈｂｉｎｄｅｒ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，ＰＬＯＳ Ｏｎｅ，１２（７）：ｅ０１７９５９７（２０１７）；Ｈｅｎｋｅ，Ａ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏｇｙ，４９：２４９－５２（２００６）；およびＹａｎｇ，Ｓ．Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎ Ｔｈｅｒ．，１３：１１１０－７（２００６）を参照されたい。
本明細書で使用される「標的化リガンド」という用語は、直接または１つ以上のスペーサー分子を介してポリマーにコンジュゲートされたリガンドを指すことを意図している。いくつかの態様では、ポリマーの利用可能なアミノ基のごく一部のみが、リガンドに結合される。いくつかの態様では、ポリマーにコンジュゲートされた標的化リガンドは、ポリマー－核酸複合体が特定の標的細胞に結合し、そのような細胞（例えば、上皮細胞、内皮細胞、造血細胞など）に浸透するように導く。いくつかの態様では、標的リガンドは、核酸／薬物の移動を特定の好ましい細胞区画（ミトコンドリア、核等）に導くことを可能にする、細胞内標的化要素でもあり得る。いくつかの態様では、リガンドは、ポリペプチド、葉酸および抗原である。いくつかの態様では、ポリペプチドリガンドは、糖タンパク質（例えば、トランスフェリンまたはアシアロオロソムコイド（ＡＳＯＲ））、抗体、抗体断片、細胞受容体、サイトカイン受容体、または成長因子受容体（例えば、上皮成長因子受容体）である。いくつかの態様では、抗原リガンドは、ウイルス抗原、細菌抗原、または寄生虫抗原である。いくつかの態様では、リガンドは、融合原性物質（ｆｕｓｏｇｅｎｉｃ ａｇｅｎｔ）（例えば、ポリミキシンＢおよびヘマグルチニンＨＡ２）、リソソモトロピック剤または核局在化シグナル（ＮＬＳ）（例えば、Ｔ抗原など）である。いくつかの態様では、リガンドは、アミノ基に結合した糖部分である。いくつかの態様では、糖部分は単糖類またはオリゴ糖類、例えば、ガラクトース、グルコース、フコース、フルクトース、ラクトース、スクロース、マンノース、セロビオース、ニトロース、トリオース、デキストロース、トレハロース、マルトース、ガラクトサミン、グルコサミン、ガラクツロン酸、グルクロン酸、およびグルコン酸である。
「抗体」という用語は、抗原に結合する分子または分子の活性断片（すなわち、抗原結合断片）を含む。これらの活性断片は、いくつかの技術によって本開示の抗体から誘導することができる。抗体の活性断片を単離するための一般的な技術のさらなる説明については、例えば、Ｋｈａｗ，Ｂ．Ａ．ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２３：１０１１－１０１９（１９８２）を参照されたい。「抗体」という用語はまた、二重特異性抗体およびキメラ抗体、および非哺乳動物種における抗体を含む。
本明細書で使用される「生分解性リンカー」または「生体機能性生分解性リンカー」という用語は、カチオン性マルチブロックコポリマーを架橋するために使用されるエステル、アミド、ジスルフィド、および／またはホスファート架橋を含む生分解性リンカーを指す。いくつかの態様では、生分解性リンカーは親水性であり、ジスルフィド結合を含む生分解性結合を含む。いくつかの態様では、生分解性リンカーは、ジチオジプロピオニルリンカーである。
本明細書で使用される「ベクター」という用語は、それが連結されている別の核酸を輸送することができる核酸分子；または別の核酸を輸送することができるそのような核酸分子を含む実体を指すことを意図している。いくつかの態様では、ベクターは「プラスミド」であり、それは、追加のＤＮＡセグメントをライゲーションすることができる環状二本鎖ＤＮＡループを指す。いくつかの態様では、ベクターは、追加のＤＮＡセグメントをウイルスゲノムにライゲーションすることができるウイルスベクターである。いくつかの態様では、そのようなベクターには、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、ポックスウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）、およびモロニーマウス白血病ウイルスが含まれるが、これらに限定されない。特定のベクター、またはベクターの一部であるポリヌクレオチドは、それらが導入される宿主細胞において自律複製することができる（例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクター、およびエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノムに組み込むことができ、それによって宿主ゲノムと共に複製される。さらに、特定のベクターは、それらが作動可能に連結されている遺伝子の発現を指示することができる。そのようなベクターは、本明細書では「組換え発現ベクター」（または単純に、「発現ベクター」）と呼ばれる。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、プラスミドの形態であることが多い。本明細書では、プラスミドがベクターの最も一般的に使用される形態であるので、「プラスミド」および「ベクター」は、文脈に応じて交換可能に使用されることがある。しかしながら、他の形態の発現ベクター、例えばウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、ポックスウイルス、ヘルペスウイルス、バキュロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）も本明細書に開示され、これらは同等の機能を果たすことができる。
本明細書で使用される場合、「ポロキサマー」または「ポロキサマー骨格」という用語は、ａとｃがほぼ等しい一般式ＨＯ－（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ａ（Ｃ３Ｈ６Ｏ）ｂ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｃ－Ｈを有する分子を指す。Ｌｏｒｒａｉｎｅ Ｅ．Ｒｅｅｖｅ著のＨａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，Ｃｈａｐｔｅｒ １２’「Ｔｈｅ Ｐｏｌｏｘａｍｅｒｓ：Ｔｈｅｉｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄＭｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」を参照されたい。全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許公開第２０１０／０００４３１３号も参照されたい。ポロキサマーは一連の反応の生成物であるため、個々のポロキサマーブロックの鎖長は、平均鎖長に関する統計的分布である。したがって、エチレンオキシ基の数（ａおよびｃ）およびプロピレンオキシ基の数（ｂ）は、平均値であることを意味する。ポロキサマーは、一般にエチレンオキシドとプロピレンオキシドの両親媒性トリブロックコポリマーに基づいており、ポリエチレンオキシドの２つの親水性鎖が隣接するポリプロピレンオキシドの中心疎水性鎖を有する。ポロキサマー骨格のポリマーブロックの長さは様々なポリマー構築物間で異なり得るので、多くの異なるポロキサマーが本開示の範囲内であると考えられる。一態様では、例えば、ポロキサマー骨格の平均分子量は、約１００～約１００，０００ダルトンの範囲であり得る。別の態様では、ポロキサマー骨格の平均分子量は、約５００～約５０，０００ダルトンの範囲であり得る。さらに別の態様では、ポロキサマー骨格の平均分子量は、約１０００～約２０，０００ダルトンの範囲であり得る。ポロキサマー骨格はまた、エチレンオキシド対プロピレンオキシドの比に関して記載することができる。別の態様では、エチレンオキシド対プロピレンオキシドの比は、約２０：１～約１：２０である。例えば、一態様では、エチレンオキシド対プロピレンオキシドの比は、約５：１～約１：５である。
本開示の様々な追加の態様は、以下のサブセクションでさらに詳細に説明、開示、または例示される。
５．３ ポリヌクレオチド
いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチドは、本明細書に開示される組成物（例えば、医薬組成物およびワクチン）に使用するためのＤＮＡまたはｍＲＮＡ配列（例えば、マルチシストロン性ＤＮＡまたはマルチシストロン性ｍＲＮＡ）を含むことができる。いくつかの態様では、本開示は、１つ以上のウイルス抗原（例えば、ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２抗原）をコードする核酸配列を含むことができるポリヌクレオチドに関する。いくつかの態様では、ベクターは、１つ以上の免疫修飾因子をコードする核酸配列をさらに含む。いくつかの態様では、ベクターは、ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２抗原、および場合により第２のウイルス抗原をコードする核酸配列を含む。いくつかの態様では、ベクターは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原および第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原をコードする核酸配列を含む。いくつかの態様では、核酸配列は、異なるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原および第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原をコードする。いくつかの態様では、核酸配列は、同じＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原の異なるバリアントをコードし、同じＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原の異なるバリアントは、異なるＳＡＲＳ ＣｏＶ－２株に由来する。いくつかの態様では、核酸配列は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質抗原の異なるバリアントをコードし、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質抗原の異なるバリアントは、異なるＳＡＲＳ ＣｏＶ－２株に由来する。
いくつかの態様では、本開示は、（ａ）病原体タンパク質抗原（例えば、ウイルス抗原、細菌抗原、または寄生虫抗原）またはその抗原性断片をコードする第１抗原核酸；および（ｂ）免疫修飾因子をコードする核酸を含むポリヌクレオチドに関する。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、第１のプロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、免疫修飾因子をコードする２つ以上の核酸を含む。いくつかの態様では、免疫修飾因子をコードする核酸の各々は、異なる免疫修飾因子をコードする。
本明細書に開示されるポリヌクレオチドは、（ｃ）第２の病原体タンパク質抗原（例えば、ウイルス抗原、細菌抗原、または寄生虫抗原）またはその抗原性断片をコードする第２抗原核酸をさらに含むことができる。いくつかの態様では、第２の病原体タンパク質またはその抗原性断片は、１つ以上のウイルス抗原、１つ以上の細菌抗原、または１つ以上の寄生虫抗原を含む。いくつかの態様では、第１の病原体抗原および第２の病原体抗原は、ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２の異なる株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原である。いくつかの態様では、第１の病原体抗原および第２の病原体抗原は、同じＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原の異なるバリアントであり、同じＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原の異なるバリアントは、異なるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株に由来する。いくつかの態様では、第１の病原体抗原および第２の病原体抗原は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質抗原の異なるバリアントであり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質抗原の異なるバリアントは、異なるＳＡＲＳ ＣｏＶ－２株に由来する。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列を介して第１のプロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号４１と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの態様では、第１および／または第２の病原体タンパク質は、ペスト菌抗原、結核菌抗原、それらの抗原性断片、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される細菌抗原である。いくつかの態様では、ペスト菌抗原は、ペスト菌莢膜抗原である。いくつかの態様では、ペスト菌莢膜抗原は、Ｆ１－Ａｇまたは病原性抗原（Ｖ－Ａｇ）である。いくつかの態様では、結核菌抗原は、Ａｐａ抗原、ＨＰ６５抗原、ｒＡｇ８５Ａ抗原、それらの任意の抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。
いくつかの態様では、第１および／または第２の病原体タンパク質は、エンテロウイルス抗原、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）抗原、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）抗原、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）抗原、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）抗原、デングウイルス抗原、エボラウイルス抗原、ジカウイルス、チクングニアウイルス抗原、麻疹ウイルス抗原、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるウイルス抗原である。いくつかの態様では、エンテロウイルス抗原は、エンテロウイルス７１（Ｅ７１）抗原、コクサッキーウイルス（Ｃｏｘ）タンパク質抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、Ｅ７１抗原は、Ｅ７１－ＶＰ１抗原、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）タグ付きＥ７１－ＶＰ１抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、Ｃｏｘタンパク質抗原は、ＧＳＴタグ付きＣｏｘタンパク質抗原である。いくつかの態様では、ＨＳＶ抗原は、ＨＳＶ－１エンベロープ抗原、ＨＳＶ－２エンベロープ抗原、ＨＳＶ－２表面糖タンパク質抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ＨＳＶ－２表面糖タンパク質抗原は、ｇＢ２抗原、ｇＣ２抗原、ｇＤ２抗原、ｇＥ２抗原、またはそれらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ＨＩＶ抗原は、Ｅｎｖ抗原、Ｇａｇ抗原、Ｎｅｆ抗原、Ｐｏｌ抗原、それらの抗原性断片、および、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ＨＰＶ抗原は、マイナーカプシドタンパク質Ｌ２抗原である。いくつかの態様では、マイナーカプシドタンパク質Ｌ２抗原は、マイナーカプシドタンパク質Ｌ２の１つ以上のエピトープドメイン（アミノ酸１０～３６および／またはアミノ酸６５～８９）を含む。いくつかの態様では、ＨＣＶ抗原は、非構造３（ＮＳ３）抗原である。いくつかの態様では、ＲＳＶ抗原は、Ｆ抗原、Ｇ抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、デングウイルス抗原は、Ｅタンパク質抗原、Ｅタンパク質ドメインＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ）抗原、非構造タンパク質１（ＮＳ１）抗原、ＤＥＮ－８０Ｅ抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、エボラウイルス抗原は、スパイク糖タンパク質（ＧＢ）抗原、ＶＰ２４抗原、ＶＰ４０抗原、核タンパク質（ＮＰ）抗原、ＶＰ３０抗原、ＶＰ３５抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ジカウイルス抗原は、エンベロープドメインＩＩＩ抗原、ＣＫＤ抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、チクングニアウイルス抗原は、Ｅ１糖タンパク質サブユニット抗原、ＭＨＣクラスＩエピトープＰＰＦＧＡＧＲＰＧＱＦＧＤＩ（配列番号３４）、ＭＨＣクラスＩエピトープＴＡＥＣＫＤＫＮＬ（配列番号３５）、ＭＨＣクラスＩＩエピトープＶＲＹＫＣＮＣＧＧ（配列番号３６）、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、麻疹ウイルス抗原は、赤血球凝集素タンパク質ＭＶ－Ｈ抗原、融合タンパク質ＭＶ－Ｆ抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ抗原は、スパイク（Ｓ）タンパク質抗原、Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン由来の抗原、Ｓタンパク質の膜融合ドメイン由来の抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ抗原は、スパイク（Ｓ）タンパク質抗原、Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン由来の抗原、Ｓタンパク質の膜融合ドメイン由来の抗原、エンベロープ（Ｅ）タンパク質抗原、Ｍタンパク質抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。
いくつかの態様では、第１および／または第２の病原体タンパク質は、任意のインフルエンザウイルス型またはサブタイプに由来する１つ以上のインフルエンザウイルス抗原を含む。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルス赤血球凝集素（ＨＡ）抗原、インフルエンザウイルスノイラミニダーゼ（ＮＡ）抗原、インフルエンザウイルスマトリックス－２（Ｍ２）タンパク質抗原、それらの抗原性断片、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＡ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、またはそれらの任意の組み合わせに由来する。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＡ型に由来する。いくつかの態様では、インフルエンザウイルスＡ型に由来する１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、（ａ）Ｈ１～Ｈ１８またはそれらの任意の組み合わせから選択されるＨＡサブタイプ、および（ｂ）Ｎ１～Ｎ１１またはそれらの任意の組み合わせから選択されるＮＡサブタイプを有する。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ１Ｎ１；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ２Ｎ２；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ３Ｎ２；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ５Ｎ１；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ７Ｎ７；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ７Ｎ９；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ９Ｎ２；またはそれらの任意の組み合わせに由来する。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ１Ｎ１；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ３Ｎ２；またはそれらの組み合わせに由来する。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＢ型に由来する。いくつかの態様では、第１の病原体タンパク質は、本明細書に開示される１つ以上のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原またはその抗原性断片を含み、第２の病原体タンパク質は、本明細書に開示される１つ以上のインフルエンザウイルス抗原またはその抗原性断片を含む。いくつかの態様では、病原体タンパク質は寄生虫抗原であり、寄生虫抗原は原虫抗原である。いくつかの態様では、病原体タンパク質は、トキソプラズマ抗原、熱帯熱マラリア原虫抗原、それらの抗原性断片、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される寄生虫抗原である。いくつかの態様では、トキソプラズマ抗原は、抗原ＭＩＣ８である。いくつかの態様では、熱帯熱マラリア原虫抗原は、ＳＥＲＡ５ポリペプチド抗原、サーカムスポロゾイト（ｃｉｒｃｕｍｓｐｏｒｏｚｉｔｅ）タンパク質抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、病原体タンパク質は、寄生虫抗原であり、寄生虫抗原は、寄生虫または病原性真菌抗原である。いくつかの態様では、寄生虫または病原性真菌抗原は、カンジダ種抗原（例えば、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）抗原、カンジダ・グラブラタ（Ｃａｎｄｉｄａ ｇｌａｂｒａｔａ）抗原、カンジダ・パラプシロシス（Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）抗原、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）抗原、カンジダ・ルシタニア（Ｃａｎｄｉｄａ ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ）抗原、カンジダ・クルセイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｅｉ）抗原）、ニューモシスチス種抗原、マラセジア種抗原（例えば、マラセジア・ファーファー抗原）、アスペルギルス・フミガーツス抗原、クリプトコッカス種抗原（例えば、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）抗原、クリプトコッカス・ガティイ（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇａｔｔｉｉ）抗原）、ヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）抗原、ブラストマイセス・デルマチティディシス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）抗原、パラコクシジオイデス種抗原（例えば、パラコクシディオイデス・ブラシリエンシス（Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）抗原、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｌｕｔｚｉｉ抗原）、コクシジオイデス種抗原（例えば、コクシジオイデス・イミティス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）抗原、コクシジオイデス・ポサダシイ（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｐｏｓａｄａｓｉｉ）抗原）、ペニシリウム・マルネフェイ抗原、スポロトリクス・シェンキイ抗原、トリコスポロン・アサヒ抗原、フザリウム種抗原（例えば、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｕｍ抗原、フザリウム・オキシスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）抗原）、アカツブタケ属抗原、シュードアレシェリア・ボイジイ（Ｐｓｅｕｄｏａｌｌｅｓｃｈｅｒｉａ ｂｏｙｄｉｉ）抗原、クラドフィアロフォラ・バンチアナム（Ｃｌａｄｏｐｈｉａｌｐｈｏｒａ ｂａｎｔｉａｎｕｍ）抗原、Ｒａｍｉｃｈｌｏｒｉｄｉｕｍ ｓｐｐ抗原、ダクチィラリア・ガルロパバ（Ｄａｃｔｙｌａｒｉａ ｇａｌｌｏｐａｖａ）抗原、エクソフィアラ属抗原（例えば、エクソフィアラ ジャンセルメイ（Ｅｘｏｐｈｉａｌａ ｊｅａｎｓｅｌｍｅｉ）抗原、エクソフィアラ・デルマチチディス（Ｅｘｏｐｈｉａｌａ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）抗原）、カーブラリア属抗原、ビポラリス属抗原、アルタナリア属抗原、Ｌａｃａｚｉａ ｌｏｂｏｉ抗原、Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ ｓｐｐ．抗原（例えば、Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ ｃｏｒｏｎａｔｕｓ抗原、Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ ｉｎｃｏｎｇｒｕｕｓ抗原）、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
いくつかの態様では、本開示は、（ａ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質またはその抗原性断片をコードする第１抗原核酸；および（ｂ）免疫修飾因子をコードする核酸を含むポリヌクレオチド（例えば、マルチシストロン性ＤＮＡまたはマルチシストロン性ｍＲＮＡ）に関する。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、第１のプロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、免疫修飾因子をコードする２つ以上の核酸を含む。いくつかの態様では、免疫修飾因子をコードする核酸の各々は、異なる免疫修飾因子をコードする。
本明細書に開示されるポリヌクレオチドは、（ｃ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質またはその抗原性断片をコードする第２抗原核酸をさらに含むことができる。いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質またはその抗原性断片は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２膜（Ｍ）タンパク質またはその抗原性断片、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２エンベロープ（Ｅ）タンパク質またはその抗原性断片、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質またはその抗原性断片、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、第１抗原核酸はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質またはその抗原性断片をコードし、第２抗原核酸は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の異なる株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質またはその抗原性断片をコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片をコードし、第２抗原核酸は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の異なる株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片をコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列を介して第１のプロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号４１と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
本明細書中に開示されるポリヌクレオチドは、１つ以上の第２のプロモーターをさらに含むことができる。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、１つ以上の第２のプロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、免疫修飾因子をコードする１つ以上の核酸は、１つ以上の第２のプロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、免疫修飾因子をコードする核酸の１つ以上は、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列を介して第１のプロモーターまたは１つ以上の第２のプロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号４１と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの態様では、第１のプロモーターまたは１つ以上の第２のプロモーターは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター（配列番号３１）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、モロニーマウス白血病ウイルス（Ｍｏ－ＭｕＬＶ）長末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーター、哺乳動物伸長因子１（ＥＦ１）プロモーター、サイトケラチン１８（ＣＫ１８）プロモーター、サイトケラチン１９（ＣＫ１９）プロモーター、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）プロモーター（配列番号３２）、マウスＵ６プロモーター、骨格α－アクチンプロモーター、β－アクチンプロモーター、マウスホスホグリセリン酸キナーゼ１（ＰＧＫ１）プロモーター、ヒトＰＧＫ１プロモーター、ＣＭＶエンハンサー／ニワトリβ－アクチン（ＣＡＧ）プロモーター（配列番号３３）、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、１つ以上の第２のプロモーターはＣＭＶプロモーターである。いくつかの態様では、１つ以上の第２のプロモーターは哺乳動物ＥＦ１プロモーターである。いくつかの態様では、哺乳動物ＥＦ１プロモーターはｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーター（配列番号３８）である。
いくつかの態様では、免疫修飾因子をコードする核酸の各々は、ＣＭＶプロモーター、ＲＳＶプロモーター、Ｍｏ－ＭｕＬＶ ＬＴＲプロモーター、哺乳動物ＥＦ１プロモーター、ＣＫ１８プロモーター、ＣＫ１９プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、マウスＵ６プロモーター、骨格α－アクチンプロモーター、β－アクチンプロモーター、マウスＰＧＫ１プロモーター、ヒトＰＧＫ１プロモーター、ＣＡＧプロモーター、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるプロモーターの制御下にある。いくつかの態様では、哺乳動物ＥＦ１プロモーターはｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである。
いくつかの態様では、第２抗原核酸の各々は、ＣＭＶプロモーター、ＲＳＶプロモーター、Ｍｏ－ＭｕＬＶ ＬＴＲプロモーター、哺乳動物ＥＦ１プロモーター、ＣＫ１８プロモーター、ＣＫ１９プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、マウスＵ６プロモーター、骨格α－アクチンプロモーター、β－アクチンプロモーター、マウスＰＧＫ１プロモーター、ヒトＰＧＫ１プロモーター、ＣＡＧプロモーター、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるプロモーターの制御下にある。いくつかの態様では、哺乳動物ＥＦ１プロモーターはｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである。
いくつかの態様では、免疫修飾因子は、インターロイキン（ＩＬ）２（ＩＬ－２）、ＩＬ－１２ ｐ３５、ＩＬ－１２ ｐ４０、ＩＬ－１２ ｐ７０、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、インターフェロン（ＩＦＮ）α（ＩＦＮ－α）、ＩＦＮ－β、ケモカイン、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ（ＭＨＣ Ｉ）、ＭＨＣクラスＩＩ（ＭＨＣ ＩＩ）、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）－ＤＲアイソタイプ（ＨＬＡ－ＤＲ）、ＣＤ８０、ＣＤ８６、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様において、ケモカインは、Ｃ－Ｃモチーフケモカインリガンド（ＣＣＬ）３（ＣＣＬ３）、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２８、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド（ＣＸＣＬ）１０（ＣＸＣＬ１０）、およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。
いくつかの態様では、免疫修飾因子はインターロイキン、例えばＩＬ－１２である。ＩＬ－１２は、４つのアルファヘリックスから構成される。これは、２つの別個の遺伝子、ＩＬ－１２Ａ（ｐ３５）およびＩＬ－１２Ｂ（ｐ４０）によってコードされるヘテロ二量体サイトカインである。活性ヘテロ二量体（ｐ７０と呼ばれる）およびｐ４０のホモ二量体は、タンパク質合成後に形成される。いくつかの態様では、免疫修飾因子は、ＩＬ－１２ヘテロ二量体（ＩＬ－１２ ｐ７０）またはＩＬ－１２ホモ二量体（例えば、ＩＬ－１２ ｐ３５またはＩＬ－１２ ｐ４０）である。
いくつかの態様では、ＩＬ－１２ ｐ３５免疫修飾因子は、配列番号４３（マウスＩＬ－１２ ｐ３５）または配列番号４７（ヒトＩＬ－１２ ｐ３５）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２ ｐ４０免疫修飾因子は、配列番号４５（マウスＩＬ－１２ ｐ４０）または配列番号４９（ヒトＩＬ－１２ ｐ４０）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸は、配列番号４２（マウスＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸配列）または配列番号４６（ヒトＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸配列）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する。いくつかの態様において、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸は、配列番号４４（マウスＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸配列）または配列番号４８（ヒトＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸配列）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する。
いくつかの態様では、免疫修飾因子は、局所炎症応答および／またはインターフェロン応答を減衰させるウイルスタンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２非構造タンパク質１（Ｎｓｐ１）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１３、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ３ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ｂ）である。いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、抗原核酸によってコードされるウイルス抗原と同じウイルスに由来する。いくつかの態様では、いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、抗原核酸によってコードされるウイルス抗原と異なるウイルスに由来する。いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、本明細書に開示される病原体抗原によって誘発される局所炎症応答および／またはインターフェロン応答を減衰させる。いくつかの態様では、免疫修飾因子は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１３、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ３ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ｂ、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
いくつかの態様では、免疫修飾因子は、非コード５’－Ｃ－ホスファート－Ｇ－３’（ＣｐＧ）ジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーを含む。いくつかの態様では、非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーは、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）シグナル伝達経路を活性化する。いくつかの態様では、非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーは、Ｂａｕｅｒ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３８（１２）：３８９１－９０８（２０１０）；Ｃｏｒｎｅｌｉｅ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７９（１５）：１５１２４－９（２００４）；Ｋｌｉｎｍａｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８（８）：３６３５－９（１９９７）；Ｋｌｉｎｍａｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ １９９（１）：２０１－１６（２００４）；Ｌｕｏ，Ｚ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｍｅｄ Ｒｅｐ．６（６）：１３０９－１４（２０１２）；Ｂｏｄｅ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｖａｃｃｉｎｅｓ １０（４）：４９９－５１１（２０１１）；およびＫｕｏ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ １０：２００８５（２０２０）において以前に報告された非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーを含み、その各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの態様では、免疫修飾因子をコードする核酸は、（ｉ）インターロイキンをコードする核酸、ならびに（ｉｉ）主要組織適合遺伝子複合体および／またはケモカインをコードする核酸の組み合わせを含む。
いくつかの態様では、免疫修飾因子をコードする核酸は、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの態様において、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸は、配列番号４２（マウスＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸配列）または配列番号４６（ヒトＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸配列）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する。いくつかの態様において、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸は、配列番号４４（マウスＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸配列）または配列番号４８（ヒトＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸配列）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、免疫修飾因子をコードする核酸は、ＭＨＣ Ｉをコードする核酸、ＭＨＣ ＩＩをコードする核酸、またはそれらの組み合わせをさらに含む。
いくつかの態様では、免疫修飾因子をコードする核酸は、ＩＬ－１２をコードする核酸、ＩＬ－１５をコードする核酸、またはそれらの組み合わせを含む。
いくつかの態様では、免疫修飾因子をコードする核酸は、ＩＬ－１２をコードする核酸と、ＩＬ－１５をコードする核酸との組み合わせを含む。
いくつかの態様では、免疫修飾因子をコードする核酸は、ＩＬ－２をコードする核酸、ＩＬ－１５をコードする核酸、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの態様では、免疫修飾因子をコードする核酸は、ＭＨＣ Ｉをコードする核酸、ＭＨＣ ＩＩをコードする核酸、ＣＣＬ３をコードする核酸、ＣＣＬ４をコードする核酸、それらの任意の組み合わせをさらに含む。
いくつかの態様では、免疫修飾因子をコードする核酸は、ＣＣＬ３をコードする核酸、ＣＣＬ４をコードする核酸、またはそれらの組み合わせを含む。
本明細書に開示されるポリヌクレオチドの第１抗原核酸は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長ポリペプチドまたはその抗原性断片をコードすることができる。例えば、いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第１抗原核酸は、配列番号２または配列番号４の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第１抗原核酸は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第１抗原核酸は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第１抗原核酸は、配列番号１または配列番号３と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長ポリペプチドまたはその抗原性断片をコードすることができる。例えば、いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、配列番号２または配列番号４の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、配列番号１または配列番号３と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第１抗原核酸は、配列番号２または配列番号４の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸をコードし、配列番号２または配列番号４の連続アミノ酸は、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第１抗原核酸は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ポリペプチドは、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。
いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、配列番号２または配列番号４の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸をコードし、配列番号２または配列番号４の連続アミノ酸は、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ここでポリペプチドは１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドの第１抗原核酸は、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）またはその抗原性断片をコードすることができる。例えば、いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第１抗原核酸は、配列番号６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第１抗原核酸は、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第１抗原核酸は、配列番号６のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第１抗原核酸は、配列番号５と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）またはその抗原性断片をコードする。例えば、いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、配列番号６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、配列番号６のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、配列番号５と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドの第１抗原核酸は、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片のＲＢＤをコードすることができる。例えば、いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第１抗原核酸は、配列番号６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸をコードし、配列番号６の連続アミノ酸は、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第１抗原核酸は、配列番号６のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ポリペプチドは、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片のＲＢＤをコードすることができる。例えば、いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、配列番号６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸をコードし、配列番号６の連続アミノ酸は、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、配列番号６のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ポリペプチドは、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドの第１抗原核酸は、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片のＳ１サブユニットをコードすることができる。例えば、いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第１抗原核酸は、配列番号４０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも５５０、少なくとも６００、少なくとも６５０、または少なくとも６６０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号４０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第１抗原核酸は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第１抗原核酸は、配列番号３９と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片のＳ１サブユニットをコードすることができる。例えば、いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、配列番号４０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも５５０、少なくとも６００、少なくとも６５０、または少なくとも６６０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号４０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、配列番号３９と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドの第１抗原核酸は、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片のＳ１サブユニットをコードすることができる。例えば、いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第１抗原核酸は、配列番号４０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも５５０、少なくとも６００、少なくとも６５０、または少なくとも６６０個の連続アミノ酸をコードし、配列番号４０の連続アミノ酸は、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第１抗原核酸は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ポリペプチドは、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片のＳ１サブユニットをコードすることができる。例えば、いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、配列番号４０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも５５０、少なくとも６００、少なくとも６５０、または少なくとも６６０個の連続アミノ酸をコードし、配列番号４０の連続アミノ酸は、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ポリペプチドは、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。
いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓタンパク質、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質のＲＢＤ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＳ１サブユニット、またはそれらの抗原性断片中の１つ以上の変異は、各々、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｌｉ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｍｅｒｇ Ｍｉｃｒｏｂｅｓ Ｉｎｆｅｃｔ．９（１）：２０７６－９０（２０２０）；Ｌｅｅ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｅ Ｎｅｔｗ．２１（１）：ｅ４（２０２１）；Ｙｕ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６９（６５０５）：８０６－１１（２０２０）；Ｃａｔｔｉｎ－Ｏｒｔｏｌａ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ．１２（１）：５３３３（２０２１）；Ｃｏｒｂｅｔｔ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ５８６（７８３０）：５６７－７１（２０２０）；Ｈｓｉｅｈ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６９（６５１０）：１５０１－５（２０２０）；およびＨａｒｖｅｙ，Ｗ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９（７）：４０９－２４（２０２１）において以前に報告された１つ以上の変異を含む。
いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓタンパク質、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質のＲＢＤ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＳ１サブユニット、またはそれらの抗原性断片中の１つ以上の変異は、ΔＭ１－Ｓ１３、Ｓ１２Ｐ、Ｓ１３Ｉ、Ｌ５Ｆ、Ｌ１８Ｆ、Ｔ１９Ｒ、Ｔ２０Ｎ、Ｐ２６Ｓ、Ｑ５２Ｒ、Ａ６７Ｖ、ΔＨ６９－Ｖ７０、Ｇ７５Ｖ、Ｔ７６Ｉ、Ｄ８０Ａ、Ｔ９５Ｉ、Ｒ１０２Ｉ、ΔＤ１１９－Ｆ１２０、Ｃ１３６Ｙ、Ｄ１３８Ｙ、ΔＦ１４０、ΔＬ１４１－Ｙ１４４、ΔＹ１４４、Ｙ１４４Ｓ、Ｙ１４５Ｎ、ΔＨ１４６、Ｎ１４８Ｓ、Ｋ１５０Ｒ、Ｋ１５０Ｅ、Ｋ１５０Ｔ、Ｋ１５０Ｑ、Ｓ１５１Ｐ、Ｗ１５２Ｃ、Ｅ１５４Ｋ、ΔＥ１５６－Ｆ１５７、Ｆ１５７Ｌ、Ｆ１５７Ａ、Ｒ１５８Ｇ、Ｒ１９０Ｓ、ΔＩ２１０、Ｄ２１５Ｇ、Ａ２２２Ｖ、ΔＬ２４１－Ｓ２４３、ΔＬ２４２－Ｌ２４４、ΔＡ２４３－Ｌ２４４、ΔＲ２４６－Ｇ２５２、Ｒ２４６Ｉ、Ｙ２４８およびＬ２４９間の１１－アミノ酸残基挿入、Ｄ２５３Ｇ、Ｄ２５３Ｎ、Ｒ３４６Ｋ、Ｖ３６７Ｆ、Ｅ４０６Ｗ、Ｋ４１７Ｅ、Ｋ４１７Ｖ、Ｋ４１７Ｎ、Ｋ４１７Ｔ、Ｎ４３９Ｋ、Ｋ４４４Ａ、Ｋ４４４Ｒ、Ｋ４４４Ｎ、Ｋ４４４Ｑ、Ｖ４４５Ａ、Ｖ４４５Ｅ、Ｇ４４７Ａ、Ｎ４５０Ｄ、Ｌ４５２Ｒ、Ｌ４５２Ｑ、Ｙ４５３Ｆ、Ｌ４５５Ｆ、Ｎ４６０Ｉ、Ｓ４７７Ｇ、Ｓ４７７Ｎ、Ｓ４７７Ｒ、Ｔ４７８Ｉ、Ｔ４７８Ｋ、Ｖ４８３Ｉ、Ｅ４８４Ｋ、Ｅ４８４Ｑ、Ｇ４８５Ｒ、Ｆ４８６Ａ、Ｆ４８６Ｖ、Ｆ４８６Ｌ、Ｎ４８７Ａ、Ｆ４９０Ｓ、Ｑ４９３Ｅ、Ｑ４９３Ｋ、Ｓ４９４Ｐ、Ｎ５０１Ｙ、Ａ５７０Ｄ、Ｑ６１３Ｈ、Ｄ６１４Ｇ、Ｈ６５５Ｙ、Ｑ６７７Ｈ、Δ６７８－６７９、Δ６８１－６８２、Δ６８１－６８４、Δ６８２－６８５、Ｐ６８１Ｈ、Ｐ６８１Ｒ、Ｒ６８２Ｓ、Ｒ６８２Ａ、Ｒ６８２Ｑ、Ｒ６８３Ｓ、Ｒ６８３Ｇ、Ｒ６８３Ｑ、Ｒ６８５Ｇ、Ｒ６８５Ｑ、Ｉ６９２Ｖ、Ａ７０１Ｖ、Ｔ７１６Ｉ、Ｆ８１７Ｐ、Ｔ８５９Ｎ、Ｆ８８８Ｌ、Ａ８９２Ｐ、Ａ８９９Ｐ、Ａ９４２Ｐ、Ｄ９５０Ｎ、Ｓ９８２Ａ、Ｋ９８６Ｐ、Ｖ９８７Ｐ、Ｔ１０２７Ｉ、Ｑ１０７１Ｈ、Ｄ１１１８Ｈ、Ｖ１１７６Ｆ、Ｍ１２２９Ｉ、ΔＣ１２５３－Ｔ１２７３、ΔＣ１２５４－Ｔ１２７３、ΔＫ１２５５－Ｔ１２７３、Ｄ１２５７Ａ、Ｅ１２５８Ａ、Ｄ１２５９Ａ、Ｄ１２６０Ａ、Ｅ１２６２Ａ、Ｋ１２６９Ａ、Ｈ１２７１Ｋ、Ｔ１２７３Ａ、またはそれらの任意の組み合わせから選択され、アミノ酸位置は、配列番号２または配列番号４に対応する。
いくつかの態様では、１つ以上の変異は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸１～１３に対応するＮ末端シグナルペプチドにおける１つ以上の変異を含む。いくつかの態様では、Ｎ末端シグナルペプチドにおける１つ以上の突然変異はΔＭ１～Ｓ１３であり、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。
いくつかの態様では、１つ以上の変異は、全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＣ末端に１つ以上の変異を含む。いくつかの態様では、全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＣ末端における１つ以上の変異は、Ｃ末端小胞体（ＥＲ）保持ペプチドにおける１つ以上の変異を含み、それは配列番号２または配列番号４のアミノ酸１２５４～１２７３に対応する。いくつかの態様では、Ｃ末端ＥＲ保持ペプチドにおける１つ以上の変異は、Ｄ１２５７Ａ、Ｅ１２５８Ａ、Ｄ１２５９Ａ、Ｄ１２６０Ａ、Ｅ１２６２Ａ、Ｋ１２６９Ａ、Ｈ１２７１Ｋ、Ｔ１２７３Ａ、またはそれらの任意の組み合わせから選択され、アミノ酸位置は、配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、Ｃ末端ＥＲ保持ペプチドにおける１つ以上の変異は、Ｄ１２５７Ａ＋Ｅ１２５８Ａ＋Ｄ１２５９Ａ＋Ｄ１２６０Ａ＋Ｅ１２６２Ａ（すなわち、Ｄ／ＥからＡの変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、Ｃ末端ＥＲ保持ペプチドにおける１つ以上の変異は、ΔＣ１２５３－Ｔ１２７３、ΔＣ１２５４－Ｔ１２７３またはΔＫ１２５５－Ｔ１２７３である。
いくつかの態様では、１つ以上の変異はＫ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、ヘキサ－プロリンＳ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、６８１－ＰＲＲＡＲ／ＳＶＡ－６８８ Ｓ１／Ｓ２フーリン切断部位における１つ以上の変異を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、６８１－ＰＲＲＡＲ／ＳＶＡ－６８８ Ｓ１／Ｓ２フーリン切断部位における１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｓ＋Ｒ６８３Ｓ（すなわち、ＳＳＡＲ変異）、（ｂ）Δ６８１－６８４（すなわち、ΔＰＲＲＡ変異）、（ｃ）Δ６７８－６７９＋Δ６８１－６８２、（ｄ）Ｒ６８２Ａ＋Ｒ６８３Ｇ＋Ｒ６８５Ｇ（すなわち、６８２－ＡＧＡＧ－６８５変異）、（ｅ）Ｒ６８２Ｑ＋Ｒ６８３Ｑ＋Ｒ６８５Ｑ、（ｆ）Ｒ６８２Ｓ＋Ｒ６８５Ｇ、または（ｇ）Δ６８２－６８５（すなわち、ΔＲＲＡＲ変異）であり、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。
いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、ヘキサ－プロリンＳ変異）および（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ａ＋Ｒ６８３Ｇ＋Ｒ６８５Ｇ（すなわち、６８２－ＡＧＡＧ－６８５変異）および（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ａ＋Ｒ６８３Ｇ＋Ｒ６８５Ｇ（すなわち、６８２－ＡＧＡＧ－６８５変異）、（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）、および（ｃ）Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、ヘキサ－プロリンＳ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｑ＋Ｒ６８３Ｑ＋Ｒ６８５Ｑおよび（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含む。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｑ＋Ｒ６８３Ｑ＋Ｒ６８５Ｑ、（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）、および（ｃ）Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、ヘキサ－プロリンＳ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｓ＋Ｒ６８５Ｇおよび（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｓ＋Ｒ６８５Ｇ、（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）、および（ｃ）Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、ヘキサ－プロリンＳ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。
本明細書に開示されるポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｍタンパク質もしくはその抗原性断片、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｅタンパク質もしくはその抗原性断片、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎタンパク質もしくはその抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせをコードすることができる。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第１抗原核酸および第２抗原核酸は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の異なる株由来のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質またはその抗原性断片をコードする。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第１抗原核酸および第２抗原核酸は、同じＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質またはその抗原性断片のバリアントをコードし、同じＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質またはその抗原性断片のバリアントは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の異なる株に由来する。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第１抗原核酸および第２抗原核酸は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片のバリアントをコードし、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片のバリアントは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の異なる株に由来する。
例えば、いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１２０、少なくとも１４０、少なくとも１６０、少なくとも１８０、少なくとも２００、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８または配列番号２０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、または配列番号１９と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０の、少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１２０、少なくとも１４０、少なくとも１６０、少なくとも１８０、少なくとも２００、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸をコードし、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０の連続アミノ酸は、Ａ２Ｓ、Ｆ２８Ｌ、Ｉ４８Ｖ、Ｖ７０Ｌ、Ｉ８２Ｔ、Ｍ８４Ｔ、またはそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の変異を含み、アミノ酸位置は配列番号８に対応する。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、ここでポリペプチドは、Ａ２Ｓ、Ｆ２８Ｌ、Ｉ４８Ｖ、Ｖ７０Ｌ、Ｉ８２Ｔ、Ｍ８４Ｔ、またはそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の変異を含み、アミノ酸位置は配列番号８に対応する。
いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、配列番号２２、配列番号２４または配列番号２６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、または少なくとも７５個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２２、配列番号２４または配列番号２６のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、配列番号２２、配列番号２４または配列番号２６のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、配列番号２１、配列番号２３または配列番号２５と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、配列番号２８の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、または少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、または少なくとも４００個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドの第２抗原核酸は、配列番号２７と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの態様では、本開示は、第１の病原体タンパク質またはその抗原性断片をコードする第１抗原核酸含むポリヌクレオチド（例えば、マルチシストロン性ＤＮＡまたはマルチシストロン性ｍＲＮＡ）に関し、第１抗原核酸は、第１のプロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、第１の病原体タンパク質をコードする第１抗原核酸は、ウイルスタンパク質、細菌タンパク質、寄生虫タンパク質、およびそれらの任意の抗原性断片からなる群から選択される。
いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、第２の病原体タンパク質またはその抗原性断片をコードする第２抗原核酸をさらに含む。いくつかの態様では、第２の病原体タンパク質をコードする第２抗原核酸は、ウイルスタンパク質、細菌タンパク質、寄生虫タンパク質、およびそれらの任意の抗原性断片からなる群から選択される。
いくつかの態様では、第１の病原体タンパク質および／または前記第２の病原体タンパク質は、ペスト菌抗原、結核菌抗原、エンテロウイルス抗原、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）抗原、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）抗原、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）抗原、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）抗原、デングウイルス抗原、エボラウイルス抗原、ジカウイルス、チクングニアウイルス抗原、麻疹ウイルス抗原、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ抗原、トキソプラズマ抗原、熱帯熱マラリア原虫抗原、インフルエンザウイルス抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
いくつかの態様では、第１の病原体タンパク質および／または第２の病原体タンパク質は、ペスト菌Ｆ１－Ａｇ、ペスト菌Ｖ－Ａｇ、結核菌Ａｐａ抗原、結核菌ＨＰ６５抗原、結核菌ｒＡｇ８５Ａ抗原、Ｅ７１ ＶＰ１抗原、ＧＳＴタグ付きＥ７１－ＶＰ１抗原、Ｃｏｘタンパク質抗原、ＧＳＴタグ付きＣｏｘタンパク質抗原、ＨＳＶ－１エンベロープ抗原、ＨＳＶ－２エンベロープ抗原、ＨＳＶ－２ ｇＢ２抗原、ＨＳＶ－２ ｇＣ２抗原、ＨＳＶ－２ ｇＤ２抗原、ＨＳＶ－２ ｇＥ２抗原、ＨＩＶ Ｅｎｖ抗原、ＨＩＶ Ｇａｇ抗原、ＨＩＶ Ｎｅｆ抗原、ＨＩＶ Ｐｏｌ抗原、ＨＰＶマイナーカプシドタンパク質Ｌ２抗原、ＨＣＶ ＮＳ３抗原、ＲＳＶ Ｆ抗原、ＲＳＶ Ｇ抗原、デングウイルスＥタンパク質抗原、デングウイルスＥＤＩＩＩ抗原、デングウイルスＮＳ１抗原、デングウイルスＤＥＮ－８０Ｅ抗原、エボラウイルスＧＢ抗原、エボラウイルスＶＰ２４抗原、エボラウイルスＶＰ４０抗原、エボラウイルスＮＰ抗原、エボラウイルスＶＰ３０抗原、エボラウイルスＶＰ３５抗原、ジカウイルスエンベロープドメインＩＩＩ抗原、ジカウイルスＣＫＤ抗原、チクングニアウイルスＥ１糖タンパク質サブユニット抗原、ＭＨＣクラスＩエピトープＰＰＦＧＡＧＲＰＧＱＦＧＤＩ（配列番号：３４）、ＭＨＣクラスＩエピトープＴＡＥＣＫＤＫＮＬ（配列番号：３５）、ＭＨＣクラスＩＩエピトープＶＲＹＫＣＮＣＧＧ（配列番号：３６）、麻疹ウイルス赤血球凝集素タンパク質ＭＶ－Ｈ抗原、麻疹ウイルス融合タンパク質ＭＶ－Ｆ抗原、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質抗原、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン由来の抗原、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質の膜融合ドメイン由来の抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン由来の抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質の膜融合ドメイン由来の抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｅタンパク質抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｍタンパク質抗原、トキソプラズマＭＩＣ８抗原、熱帯熱マラリア原虫ＳＥＲＡ５ポリペプチド抗原、熱帯熱マラリア原虫サーカムスポロゾイト（ｃｉｒｃｕｍｓｐｏｒｏｚｉｔｅ）タンパク質抗原、インフルエンザウイルス赤血球凝集素（ＨＡ）抗原、インフルエンザウイルスノイラミニダーゼ（ＮＡ）抗原、インフルエンザウイルスマトリックス－２（Ｍ２）タンパク質抗原、それらの抗原性断片、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
いくつかの態様では、第１抗原核酸は、ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質またはその抗原性断片をコードする。いくつかの態様では、第２の病原体タンパク質またはその抗原性断片は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２膜（Ｍ）タンパク質またはその抗原性断片、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２エンベロープ（Ｅ）タンパク質またはその抗原性断片、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質またはその抗原性断片、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片および第２の病原体タンパク質またはその抗原性断片は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の異なる株に由来する。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２の異なる株由来のＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片、および第２のＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片をコードする。
いくつかの態様では、第２抗原核酸は、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列を介して第１のプロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号４１と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは、１つ以上の第２のプロモーターを含む。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、１つ以上の第２のプロモーターに作動可能に連結されている。
いくつかの態様では、第１のプロモーターまたは１つ以上の第２のプロモーターは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、モロニーマウス白血病ウイルス（Ｍｏ－ＭｕＬＶ）長末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーター、哺乳動物伸長因子１（ＥＦ１）プロモーター、サイトケラチン１８（ＣＫ１８）プロモーター、サイトケラチン１９（ＣＫ１９）プロモーター、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）プロモーター、マウスＵ６プロモーター、骨格α－アクチンプロモーター、β－アクチンプロモーター、マウスホスホグリセリン酸キナーゼ１（ＰＧＫ１）プロモーター、ヒトＰＧＫ１プロモーター、ＣＢＡプロモーター、ＣＡＧプロモーター、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、哺乳動物ＥＦ１プロモーターはｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである。いくつかの態様では、１つ以上の第２のプロモーターはＣＭＶプロモーターである。
いくつかの態様では、第２抗原核酸は、ＣＭＶプロモーター、ＲＳＶプロモーター、Ｍｏ－ＭｕＬＶ ＬＴＲプロモーター、哺乳動物ＥＦ１プロモーター、ＣＫ１８プロモーター、ＣＫ１９プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、マウスＵ６プロモーター、骨格α－アクチンプロモーター、β－アクチンプロモーター、マウスＰＧＫ１プロモーター、ヒトＰＧＫ１プロモーター、ＣＢＡプロモーター、ＣＡＧプロモーター、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるプロモーターの制御下にある。いくつかの態様では、哺乳動物ＥＦ１プロモーターはｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである。
いくつかの態様では、第１抗原核酸は、全長ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片をコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号２または配列番号４の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号１または配列番号３と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、哺乳動物ＥＦ１プロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、哺乳動物ＥＦ１プロモーターはｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである。
いくつかの態様では、第２抗原核酸は、全長ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片をコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２または配列番号４の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号１または配列番号３と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、ＩＲＥＳ配列を介して哺乳動物ＥＦ１プロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、哺乳動物ＥＦ１プロモーターはｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである。
いくつかの態様では、第１抗原核酸は全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片をコードし、第２抗原核酸はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２膜（Ｍ）タンパク質またはその抗原性断片をコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号２または配列番号４の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸をコードし、第２抗原核酸は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１２０、少なくとも１４０、少なくとも１６０、少なくとも１８０、少なくとも２００、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、第２抗原核酸は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８または配列番号２０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号１または配列番号３と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含み、第２抗原核酸は、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、または配列番号１９と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの態様では、第１抗原核酸は哺乳動物ＥＦ１プロモーターに作動可能に連結されており、第２抗原核酸はＣＭＶプロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、哺乳動物ＥＦ１プロモーターはｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである。
いくつかの態様では、第１抗原核酸は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）またはその抗原性断片をコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号６のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号５と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの態様では、第２抗原核酸は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）またはその抗原性断片をコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号６のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号５と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの態様では、第１抗原核酸は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片のＳ１サブユニットをコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号４０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも５５０、少なくとも６００、少なくとも６５０、または少なくとも６６０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、配列番号３９と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの態様では、第１抗原核酸は、哺乳動物ＥＦ１プロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、哺乳動物ＥＦ１プロモーターはｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである。
いくつかの態様では、第２抗原核酸は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片のＳ１サブユニットをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号４０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも５５０、少なくとも６００、少なくとも６５０、または少なくとも６６０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号３９と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、ＩＲＥＳ配列を介して哺乳動物ＥＦ１プロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、哺乳動物ＥＦ１プロモーターはｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである。
いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１２０、少なくとも１４０、少なくとも１６０、少なくとも１８０、少なくとも２００、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８または配列番号２０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、または配列番号１９と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２２、配列番号２４または配列番号２６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、または少なくとも７５個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２２、配列番号２４または配列番号２６のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２１、配列番号２３または配列番号２５と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２８の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、または少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、または少なくとも４００個の連続アミノ酸をコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、第２抗原核酸は、配列番号２７と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの態様では、第１抗原核酸（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓタンパク質、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質のＲＢＤ、またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＳ１サブユニットをコードする第１抗原核酸）および／または第２抗原核酸（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓタンパク質、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質のＲＢＤ、またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＳ１サブユニットをコードする第１抗原核酸）によってコードされるポリペプチドは、１つ以上の変異を含む。いくつかの態様では、第１抗原核酸または第２抗原核酸によってコードされるポリペプチドの１つ以上の変異は、各々、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＬｉ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｍｅｒｇ Ｍｉｃｒｏｂｅｓ Ｉｎｆｅｃｔ．９（１）：２０７６－９０（２０２０）；Ｌｅｅ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｅ Ｎｅｔｗ．２１（１）：ｅ４（２０２１）；Ｙｕ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６９（６５０５）：８０６－１１（２０２０）；Ｃａｔｔｉｎ－Ｏｒｔｏｌａ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ．１２（１）：５３３３（２０２１）；Ｃｏｒｂｅｔｔ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ５８６（７８３０）：５６７－７１（２０２０）；Ｈｓｉｅｈ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６９（６５１０）：１５０１－５（２０２０）；およびＨａｒｖｅｙ，Ｗ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９（７）：４０９－２４（２０２１）において以前に報告された１つ以上の変異を含む。
いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸によってコードされるポリペプチドの１つ以上の変異は、ΔＭ１－Ｓ１３、Ｓ１２Ｐ、Ｓ１３Ｉ、Ｌ５Ｆ、Ｌ１８Ｆ、Ｔ１９Ｒ、Ｔ２０Ｎ、Ｐ２６Ｓ、Ｑ５２Ｒ、Ａ６７Ｖ、ΔＨ６９－Ｖ７０、Ｇ７５Ｖ、Ｔ７６Ｉ、Ｄ８０Ａ、Ｔ９５Ｉ、Ｒ１０２Ｉ、ΔＤ１１９－Ｆ１２０、Ｃ１３６Ｙ、Ｄ１３８Ｙ、ΔＦ１４０、ΔＬ１４１－Ｙ１４４、ΔＹ１４４、Ｙ１４４Ｓ、Ｙ１４５Ｎ、ΔＨ１４６、Ｎ１４８Ｓ、Ｋ１５０Ｒ、Ｋ１５０Ｅ、Ｋ１５０Ｔ、Ｋ１５０Ｑ、Ｓ１５１Ｐ、Ｗ１５２Ｃ、Ｅ１５４Ｋ、ΔＥ１５６－Ｆ１５７、Ｆ１５７Ｌ、Ｆ１５７Ａ、Ｒ１５８Ｇ、Ｒ１９０Ｓ、ΔＩ２１０、Ｄ２１５Ｇ、Ａ２２２Ｖ、ΔＬ２４１－Ｓ２４３、ΔＬ２４２－Ｌ２４４、ΔＡ２４３－Ｌ２４４、ΔＲ２４６－Ｇ２５２、Ｒ２４６Ｉ、Ｙ２４８およびＬ２４９間の１１－アミノ酸残基挿入、Ｄ２５３Ｇ、Ｄ２５３Ｎ、Ｒ３４６Ｋ、Ｖ３６７Ｆ、Ｅ４０６Ｗ、Ｋ４１７Ｅ、Ｋ４１７Ｖ、Ｋ４１７Ｎ、Ｋ４１７Ｔ、Ｎ４３９Ｋ、Ｋ４４４Ａ、Ｋ４４４Ｒ、Ｋ４４４Ｎ、Ｋ４４４Ｑ、Ｖ４４５Ａ、Ｖ４４５Ｅ、Ｇ４４７Ａ、Ｎ４５０Ｄ、Ｌ４５２Ｒ、Ｌ４５２Ｑ、Ｙ４５３Ｆ、Ｌ４５５Ｆ、Ｎ４６０Ｉ、Ｓ４７７Ｇ、Ｓ４７７Ｎ、Ｓ４７７Ｒ、Ｔ４７８Ｉ、Ｔ４７８Ｋ、Ｖ４８３Ｉ、Ｅ４８４Ｋ、Ｅ４８４Ｑ、Ｇ４８５Ｒ、Ｆ４８６Ａ、Ｆ４８６Ｖ、Ｆ４８６Ｌ、Ｎ４８７Ａ、Ｆ４９０Ｓ、Ｑ４９３Ｅ、Ｑ４９３Ｋ、Ｓ４９４Ｐ、Ｎ５０１Ｙ、Ａ５７０Ｄ、Ｑ６１３Ｈ、Ｄ６１４Ｇ、Ｈ６５５Ｙ、Ｑ６７７Ｈ、Δ６７８－６７９、Δ６８１－６８２、Δ６８１－６８４、Δ６８２－６８５、Ｐ６８１Ｈ、Ｐ６８１Ｒ、Ｒ６８２Ｓ、Ｒ６８２Ａ、Ｒ６８２Ｑ、Ｒ６８３Ｓ、Ｒ６８３Ｇ、Ｒ６８３Ｑ、Ｒ６８５Ｇ、Ｒ６８５Ｑ、Ｉ６９２Ｖ、Ａ７０１Ｖ、Ｔ７１６Ｉ、Ｆ８１７Ｐ、Ｔ８５９Ｎ、Ｆ８８８Ｌ、Ａ８９２Ｐ、Ａ８９９Ｐ、Ａ９４２Ｐ、Ｄ９５０Ｎ、Ｓ９８２Ａ、Ｋ９８６Ｐ、Ｖ９８７Ｐ、Ｔ１０２７Ｉ、Ｑ１０７１Ｈ、Ｄ１１１８Ｈ、Ｖ１１７６Ｆ、Ｍ１２２９Ｉ、ΔＣ１２５３－Ｔ１２７３、ΔＣ１２５４－Ｔ１２７３、ΔＫ１２５５－Ｔ１２７３、Ｄ１２５７Ａ、Ｅ１２５８Ａ、Ｄ１２５９Ａ、Ｄ１２６０Ａ、Ｅ１２６２Ａ、Ｋ１２６９Ａ、Ｈ１２７１Ｋ、Ｔ１２７３Ａ、またはそれらの任意の組み合わせから選択され、アミノ酸位置は、配列番号２または配列番号４に対応する。
いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸によってコードされるポリペプチド中の１つ以上の変異は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸１～１３に対応する、全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＮ末端シグナルペプチド中の１つ以上の変異を含む。いくつかの態様では、Ｎ末端シグナルペプチドにおける１つ以上の突然変異はΔＭ１～Ｓ１３であり、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。
いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸によってコードされるポリペプチド中の１つ以上の変異は、全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＣ末端の１つ以上の変異を含む。いくつかの態様では、全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＣ末端における１つ以上の変異は、Ｃ末端小胞体（ＥＲ）保持ペプチドにおける１つ以上の変異を含み、それは配列番号２または配列番号４のアミノ酸１２５４～１２７３に対応する。いくつかの態様では、Ｃ末端ＥＲ保持ペプチドにおける１つ以上の変異は、Ｄ１２５７Ａ、Ｅ１２５８Ａ、Ｄ１２５９Ａ、Ｄ１２６０Ａ、Ｅ１２６２Ａ、Ｋ１２６９Ａ、Ｈ１２７１Ｋ、Ｔ１２７３Ａ、またはそれらの任意の組み合わせから選択され、アミノ酸位置は、配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、Ｃ末端ＥＲ保持ペプチドにおける１つ以上の変異は、Ｄ１２５７Ａ＋Ｅ１２５８Ａ＋Ｄ１２５９Ａ＋Ｄ１２６０Ａ＋Ｅ１２６２Ａ（すなわち、Ｄ／ＥからＡの変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、Ｃ末端ＥＲ保持ペプチドにおける１つ以上の変異は、ΔＣ１２５３－Ｔ１２７３、ΔＣ１２５４－Ｔ１２７３またはΔＫ１２５５－Ｔ１２７３である。
いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸によってコードされるポリペプチド中の１つ以上の変異は、Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸によってコードされるポリペプチド中の１つ以上の変異は、Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、ヘキサ－プロリン Ｓ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸によってコードされるポリペプチド中の１つ以上の変異は、６８１－ＰＲＲＡＲ／ＳＶＡ－６８８ Ｓ１／Ｓ２フーリン切断部位における１つ以上の変異を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、６８１－ＰＲＲＡＲ／ＳＶＡ－６８８ Ｓ１／Ｓ２フーリン切断部位における１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｓ＋Ｒ６８３Ｓ（すなわち、ＳＳＡＲ変異）、（ｂ）Δ６８１－６８４（すなわち、ΔＰＲＲＡ変異）、（ｃ）Δ６７８－６７９＋Δ６８１－６８２、（ｄ）Ｒ６８２Ａ＋Ｒ６８３Ｇ＋Ｒ６８５Ｇ（すなわち、６８２－ＡＧＡＧ－６８５変異）、（ｅ）Ｒ６８２Ｑ＋Ｒ６８３Ｑ＋Ｒ６８５Ｑ、（ｆ）Ｒ６８２Ｓ＋Ｒ６８５Ｇ、または（ｇ）Δ６８２－６８５（すなわち、ΔＲＲＡＲ変異）であり、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。
いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸によってコードされるポリペプチド中の１つ以上の変異は、（ａ）Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、ヘキサ－プロリン Ｓ変異）および（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸によってコードされるポリペプチド中の１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ａ＋Ｒ６８３Ｇ＋Ｒ６８５Ｇ（すなわち、６８２－ＡＧＡＧ－６８５変異）および（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸によってコードされるポリペプチド中の１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ａ＋Ｒ６８３Ｇ＋Ｒ６８５Ｇ（すなわち、６８２－ＡＧＡＧ－６８５変異）、（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）、および（ｃ）Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、すなわち、ヘキサ－プロリン Ｓ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸によってコードされるポリペプチド中の１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｑ＋Ｒ６８３Ｑ＋Ｒ６８５Ｑおよび（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含む。いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸によってコードされるポリペプチド中の１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｑ＋Ｒ６８３Ｑ＋Ｒ６８５Ｑ、（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）、および（ｃ）Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、すなわち、ヘキサ－プロリン Ｓ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸によってコードされるポリペプチド中の１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｓ＋Ｒ６８５Ｇおよび（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、第１抗原核酸および／または第２抗原核酸によってコードされるポリペプチド中の１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｓ＋Ｒ６８５Ｇ、（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）、および（ｃ）Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、すなわち、ヘキサ－プロリン Ｓ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドは、１つ以上の転写後調節エレメントをさらに含み得る。いくつかの態様において、翻訳後調節エレメントは、ポリヌクレオチドのコード領域の３’側に位置する。本開示に有用な転写後調節エレメントの非限定的な例としては、変異型ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）、マイクロＲＮＡ結合部位、ＤＮＡ核標的化配列、またはそれらの組み合わせが挙げられる。いくつかの態様では、転写後調節エレメントはＷＰＲＥである。
ポリヌクレオチドはまた、任意のタンパク質コード配列の下流にあり得る、１つ以上のポリアデニル化（ポリ（ａ））シグナルを含み得る。ポリアデニル化シグナルの例としては、ＳＶ４０ポリ（ａ）テール（配列番号２９）、ＬＴＲポリ（ａ）テール、ウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）ポリ（ａ）テール（配列番号３０）、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）ポリ（ａ）テールまたはヒトβ－グロビンポリ（ａ）テールが挙げられるが、これらに限定されない。ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルは、ｐＣＥＰ４ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）からのポリアデニル化シグナルであり得る。いくつかの態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドは、第１抗原核酸、第２抗原核酸、免疫修飾因子をコードする核酸、またはそれらの任意の組み合わせに作動可能に連結された少なくとも１つの３’ＵＴＲポリ（ａ）テール配列をさらに含む。いくつかの態様では、３’ＵＴＲポリ（ａ）テール配列は、３’ＵＴＲ ＳＶ４０ポリ（ａ）テール配列、３’ＵＴＲウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）ポリ（Ａ）配列、３’ＵＴＲアクチンポリ（Ａ）テール配列、３’ＵＴＲヘモグロビンポリ（Ａ）配列、またはそれらの組み合わせである。
本明細書に開示されるポリヌクレオチドは、任意のタンパク質コード配列の上流に少なくとも１つのエンハンサー配列をさらに含むことができる。エンハンサーは、ＤＮＡ発現に必要である可能性がある。いくつかの態様では、エンハンサーは、ヒトアクチンエンハンサー、ヒトミオシンエンハンサー、ヒトヘモグロビンエンハンサー、ヒト筋クレアチンエンハンサー、またはＣＭＶ、ＨＡ、ＲＳＶもしくはＥＢＶ由来のものなどのウイルスエンハンサーである。いくつかの態様では、エンハンサーは、米国特許第５，５９３，９７２号、第５，９６２，４２８号および国際公開第９４／０１６７３７号に記載されているようなポリヌクレオチド機能エンハンサーである。いくつかの態様では、エンハンサー配列は、ＣＭＶイントロン配列またはβ－アクチンイントロン配列である。態様では、エンハンサー配列は、ＳＶ４０エンハンサー配列（配列番号３７）である。
本明細書中に開示されるポリヌクレオチドは、１つ以上の逆方向末端反復配列（ＩＴＲ）をさらに含むことができる。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは第１のＩＴＲおよび第２のＩＴＲを含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは第１のＩＴＲ、例えば５’ＩＴＲ、および第２のＩＴＲ、例えば３’ＩＴＲを含む。典型的には、ＩＴＲは、パルボウイルス（例えば、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ））ＤＮＡ複製および原核生物プラスミドからのレスキューまたは切除に関与する（Ｓａｍｕｌｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，１９８３，１９８７；Ｓｅｎａｐａｔｈｙ ｅｔ ａｌ．，１９８４；Ｇｏｔｔｌｉｅｂ ａｎｄ Ｍｕｚｙｃｚｋａ，１９８８）。さらに、ＩＴＲは、ＡＡＶプロウイルスの組込み、およびＡＡＶ ＤＮＡのウイルス粒子へのパッケージングに必要な最小配列であるようである（ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８；Ｓａｍｕｌｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，１９８９）。これらの要素は、パルボウイルスゲノムの効率的な増殖に不可欠である。いくつかの態様では、ＩＴＲはヘアピンＴ型構造に折り畳まれる。いくつかの態様では、ＩＴＲは、非Ｔ型ヘアピン構造、例えばＵ型ヘアピン構造に折り畳まれる。
いくつかの態様では、本開示に有用なＩＴＲは、ＡＡＶゲノム由来のＩＴＲを含む。特定の態様では、ＩＴＲは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、およびそれらの任意の組み合わせから選択されるＡＡＶゲノムのＩＴＲである。いくつかの態様では、ＩＴＲはＡＡＶ２ゲノムのＩＴＲである。いくつかの態様では、ＩＴＲは、ＡＡＶゲノムの１つ以上に由来するＩＴＲをその５’および３’末端に含むように遺伝子操作された合成配列である。
いくつかの態様では、ＩＴＲはＡＡＶゲノムに由来しない。いくつかの態様では、ＩＴＲは非ＡＡＶのＩＴＲである。いくつかの態様では、ＩＴＲは、これらに限定されないが、ボカウイルス、ディペンドウイルス、エリスロウイルス、アムドウイルス、パルボウイルス、デンソウイルス、イターウイルス、コントラウイルス、アベパルボウイルス、コピパルボウイルス、プロトパルボウイルス、テトラパルボウイルス、アンビデンソウイルス、ブレビデンソウイルス、ヘパンデンソウイルス、ペンスチルデンソウイルスおよびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるウイルス科パルボウイルス科由来の非ＡＡＶゲノムのＩＴＲである。特定の態様では、ＩＴＲは、エリスロウイルスパルボウイルスＢ１９（ヒトウイルス）に由来する。いくつかの態様では、ＩＴＲは、ノバリケンパルボウイルス（ＭＤＰＶ）株に由来する。特定の態様では、ＭＤＰＶ株、例えばＭＤＰＶ株ＦＺ９１－３０が減弱される。いくつかの態様では、ＭＤＰＶ株、例えばＭＤＰＶ株ＹＹは病原性である。いくつかの態様では、ＩＴＲは、ブタパルボウイルス、例えばブタパルボウイルスＵ４４９７８に由来する。いくつかの態様では、ＩＴＲは、マウス微小ウイルス、例えばマウス微小ウイルスＵ３４２５６に由来する。いくつかの態様では、ＩＴＲは、イヌパルボウイルス、例えばイヌパルボウイルスＭ１９２９６に由来する。いくつかの態様では、ＩＴＲは、ミンク腸炎ウイルス、例えばミンク腸炎ウイルスＤ００７６５に由来する。いくつかの態様では、ＩＴＲは、ディペンドパルボウイルスに由来する。特定の態様では、ディペンドパルボウイルスは、ディペンドウイルスガチョウパルボウイルス（ＧＰＶ）株である。いくつかの態様では、ＧＰＶ株、例えばＧＰＶ株８２－０３２１Ｖは減弱される。いくつかの態様では、ＧＰＶ株、例えばＧＰＶ株は病原性である。
本明細書に開示されるポリヌクレオチドはまた、ベクターを染色体外に維持し、細胞内でベクターの複数のコピーを作製するために、哺乳動物の複製起点（例えば、エプスタイン・バーウイルス複製起点）を含むことができる。
いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、マルチシストロン性ｍＲＮＡである。いくつかの態様において、マルチシストロン性ｍＲＮＡは、５’キャップおよび３’ＵＴＲポリ（Ａ）テール配列を含む。いくつかの態様では、３’ＵＴＲポリ（ａ）テール配列は、３’ＵＴＲ ＳＶ４０ポリ（ａ）テール配列（配列番号２９）、３’ＵＴＲウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）ポリ（Ａ）配列（配列番号３０）、３’ＵＴＲアクチンポリ（Ａ）テール配列、３’ＵＴＲヘモグロビンポリ（Ａ）配列、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、マルチシストロン性ｍＲＮＡは、５’ＵＴＲおよび／または３’ＵＴＲを含む。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドは、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第４のヌクレオチド配列であって、第２の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含むことができる。例えば、いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第３のヌクレオチド配列の３’側に位置する第４のヌクレオチド配列であって、第２の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３および第４のヌクレオチド配列は、図１に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドは、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ Ｉをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；第４のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列；および第５のヌクレオチド配列であって、第２の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第５のヌクレオチド配列を含むことができる。例えば、いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ Ｉをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列の３’側に位置する第４のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列、および第４のヌクレオチド配列の３’側に位置する第５のヌクレオチド配列であって、第２の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第５のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３、第４および第５のヌクレオチド配列は、図２に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドは、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ ＩＩをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；第４のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列；および第５のヌクレオチド配列であって、第２の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第５のヌクレオチド配列を含むことができる。例えば、いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ ＩＩをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列の３’側に位置する第４のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列、および第４のヌクレオチド配列の３’側に位置する第５のヌクレオチド配列であって、第２の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第５のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３、第４および第５のヌクレオチド配列は、図３に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドは、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－２をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；および第３のヌクレオチド配列であって、第２の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列を含むことができる。例えば、いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－２をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；および第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、第２の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２および第３のヌクレオチド配列は、図４に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドは、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－２をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ Ｉをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第４のヌクレオチド配列であって、第２の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含むことができる。例えば、いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－２をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ Ｉをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第３のヌクレオチド配列の３’側に位置する第４のヌクレオチド配列であって、第２の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３および第４のヌクレオチド配列は、図５に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドは、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－２をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ ＩＩをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第４のヌクレオチド配列であって、第２の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含むことができる。例えば、いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－２をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ ＩＩをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第３のヌクレオチド配列の３’側に位置する第４のヌクレオチド配列であって、第２の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３および第４のヌクレオチド配列は、図６に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドは、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－２をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ３をコードし、プロモーターＸに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ４をコードし、プロモーターＹに作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；第４のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列；および第５のヌクレオチド配列であって、第２の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第５のヌクレオチド配列を含むことができる。例えば、いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－２をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ３をコードし、プロモーターＸに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ４をコードし、プロモーターＹに作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列の３’側に位置する第４のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列、および第４のヌクレオチド配列の３’側に位置する第５のヌクレオチド配列であって、第２の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第５のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３、第４および第５のヌクレオチド配列は、図７に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドは、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；および第３のヌクレオチド配列であって、第２の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列を含むことができる。例えば、いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；および第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、第２の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２および第３のヌクレオチド配列は、図８に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドは、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ Ｉをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第４のヌクレオチド配列であって、第２の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含むことができる。例えば、いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ Ｉをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第３のヌクレオチド配列の３’側に位置する第４のヌクレオチド配列であって、第２の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３および第４のヌクレオチド配列は、図９に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドは、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ ＩＩをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第４のヌクレオチド配列であって、第２の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含むことができる。例えば、いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ ＩＩをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第３のヌクレオチド配列の３’側に位置する第４のヌクレオチド配列であって、第２の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３および第４のヌクレオチド配列は、図１０に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドは、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ３をコードし、プロモーターＸに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ４をコードし、プロモーターＹに作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；第４のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列；および第５のヌクレオチド配列であって、第２の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第５のヌクレオチド配列を含むことができる。例えば、いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ３をコードし、プロモーターＸに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ４をコードし、プロモーターＹに作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列の３’側に位置する第４のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列、および第４のヌクレオチド配列の３’側に位置する第５のヌクレオチド配列であって、第２の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第５のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３、第４および第５のヌクレオチド配列は、図１１に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドは、第１のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ３をコードし、プロモーターＸに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ４をコードし、プロモーターＹに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第４のヌクレオチド配列であって、第２の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含むことができる。例えば、いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ３をコードし、プロモーターＸに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ４をコードし、プロモーターＹに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第３のヌクレオチド配列の３’側に位置する第４のヌクレオチド配列であって、第２の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質）をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３および第４のヌクレオチド配列は、図１２に示されるように構成される。
いくつかの態様において、図１～図１２のいずれかに例示されるベクター構築物は、「Ｃｏｖｉｄ－１９スパイク遺伝子」（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードする第１のヌクレオチド配列）および「Ｃｏｖｉｄ－１９遺伝子－２」（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードする第２のヌクレオチド配列）を、本明細書中に開示される病原体抗原またはその抗原性断片の任意の組み合わせをコードするヌクレオチド配列で置き換えるように修飾され得る。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、ウイルス、細菌または寄生虫に対する抗原をコードする。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、１つ以上のウイルス抗原、１つ以上の細菌抗原、または１つ以上の寄生虫抗原を含む１つ以上の抗原をコードする。いくつかの態様では、本明細書に開示されるベクター構築物を使用して、ＤＮＡまたはｍＲＮＡを発現させることができる。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドは、病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原）をコードし、プロモーターに作動可能に連結されているヌクレオチド配列を含むことができる。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、１つ以上の免疫修飾因子をコードする核酸配列をさらに含む。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２抗原、および場合により第２のウイルス抗原（例えば、第２のＳＡＲＳ ＣｏＶ－２抗原および／またはインフルエンザウイルス抗原）をコードする核酸配列を含む。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドは、第１のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＳ１サブユニット）をコードし、第１のプロモーター（例えば、ｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーター）に作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードし、第２のプロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター）に作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；および第３のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードし、第２のプロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター）に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列を含むことができる。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２および第３のヌクレオチド配列は、図１４Ｃ（ｐＶａｃ ２）に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドは、第１のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＳ１サブユニット）をコードし、第１のプロモーター（例えば、ｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーター）に作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、第２の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｍタンパク質）をコードし、ＩＲＥＳ配列を介して第１のプロモーターに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であってＩＬ－１２ ｐ３５をコードし、第２のプロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター）に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第４のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ３４０をコードし、第２のプロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター）に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含むことができる。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３および第４のヌクレオチド配列は、図１４Ｄ（ｐＶａｃ ３）に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドは、第１のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｄ６１４Ｇ Ｓタンパク質）をコードし、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ－１αプロモーター）に作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードし、第２のプロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター）に作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；および第３のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードし、第２のプロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター）に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列を含むことができる。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２および第３のヌクレオチド配列は、図１４Ｆ（ｐＶａｃ ５）に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドは、第１のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｄ６１４Ｇ Ｓタンパク質）をコードし、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ－１αプロモーター）に作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、第２の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｍタンパク質）をコードし、ＩＲＥＳ配列を介して第１のプロモーターに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であってＩＬ－１２ ｐ３５をコードし、第２のプロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター）に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第４のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ３４０をコードし、第２のプロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター）に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含むことができる。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３および第４のヌクレオチド配列は、図１４Ｇ（ｐＶａｃ ６）に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドは、第１のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＳ１サブユニットまたはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｄ６１４Ｇ Ｓタンパク質）をコードし、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ－１αプロモーター）に作動可能に連結されている第１のヌクレオチド配列を含むことができる。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１のヌクレオチド配列は、図１４Ｂ（ｐＶａｃ １）または図１４Ｅ（ｐＶａｃ ４）に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチドは、第１のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｄ６１４Ｇ Ｓタンパク質）をコードし、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ－１αプロモーター）に作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；および第２のヌクレオチド配列であって、第２の病原体（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｍタンパク質）をコードし、第２のプロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター）に作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列を含むことができる。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１のヌクレオチド配列は、図１４Ｈ（ｐＶａｃ ７）に示されるように構成される。
いくつかの態様では、図１４Ａ～図１４Ｈのいずれかに例示されるベクター構築物は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＳ１サブユニットまたはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｄ６１４Ｇ Ｓタンパク質（第１の病原体タンパク質をコードする第１のヌクレオチド配列）および／またはＳＡＳＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｍタンパク質（第２の病原体タンパク質をコードする第２のヌクレオチド配列）を、本明細書に開示される病原体抗原またはその抗原性断片の任意の組み合わせをコードするヌクレオチド配列で置き換えるように修飾することができる。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、ウイルス、細菌または寄生虫に対する抗原をコードする。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、１つ以上のウイルス抗原、１つ以上の細菌抗原、または１つ以上の寄生虫抗原を含む１つ以上の抗原をコードする。いくつかの態様では、本明細書に開示されるベクター構築物を使用して、ＤＮＡまたはｍＲＮＡを発現させることができる。
いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、ペスト菌抗原、結核菌抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上の細菌抗原をコードする。いくつかの態様では、ペスト菌抗原は、ペスト菌莢膜抗原である。いくつかの態様では、ペスト菌莢膜抗原は、Ｆ１－Ａｇまたは病原性抗原（Ｖ－Ａｇ）である。いくつかの態様では、結核菌抗原は、Ａｐａ抗原、ＨＰ６５抗原、ｒＡｇ８５Ａ抗原、それらの任意の抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。
いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、エンテロウイルス抗原、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）抗原、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）抗原、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）抗原、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）抗原、デングウイルス抗原、エボラウイルス抗原、ジカウイルス、チクングニアウイルス抗原、麻疹ウイルス抗原、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上のウイルス抗原をコードする。いくつかの態様では、エンテロウイルス抗原は、エンテロウイルス７１（Ｅ７１）抗原、コクサッキーウイルス（Ｃｏｘ）タンパク質抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、Ｅ７１抗原は、Ｅ７１－ＶＰ１抗原、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）タグ付きＥ７１－ＶＰ１抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、Ｃｏｘタンパク質抗原は、ＧＳＴタグ付きＣｏｘタンパク質抗原である。いくつかの態様では、ＨＳＶ抗原は、ＨＳＶ－１エンベロープ抗原、ＨＳＶ－２エンベロープ抗原、ＨＳＶ－２表面糖タンパク質抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ＨＳＶ－２表面糖タンパク質抗原は、ｇＢ２抗原、ｇＣ２抗原、ｇＤ２抗原、ｇＥ２抗原、またはそれらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ＨＩＶ抗原は、Ｅｎｖ抗原、Ｇａｇ抗原、Ｎｅｆ抗原、Ｐｏｌ抗原、それらの抗原性断片、および、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ＨＰＶ抗原は、マイナーカプシドタンパク質Ｌ２抗原である。いくつかの態様では、マイナーカプシドタンパク質Ｌ２抗原は、マイナーカプシドタンパク質Ｌ２の１つ以上のエピトープドメイン（アミノ酸１０～３６および／またはアミノ酸６５～８９）を含む。いくつかの態様では、ＨＣＶ抗原は、非構造３（ＮＳ３）抗原である。いくつかの態様では、ＲＳＶ抗原は、Ｆ抗原、Ｇ抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、デングウイルス抗原は、Ｅタンパク質抗原、Ｅタンパク質ドメインＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ）抗原、非構造タンパク質１（ＮＳ１）抗原、ＤＥＮ－８０Ｅ抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、エボラウイルス抗原は、スパイク糖タンパク質（ＧＢ）抗原、ＶＰ２４抗原、ＶＰ４０抗原、核タンパク質（ＮＰ）抗原、ＶＰ３０抗原、ＶＰ３５抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ジカウイルス抗原は、エンベロープドメインＩＩＩ抗原、ＣＫＤ抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、チクングニアウイルス抗原は、Ｅ１糖タンパク質サブユニット抗原、ＭＨＣクラスＩエピトープＰＰＦＧＡＧＲＰＧＱＦＧＤＩ（配列番号３４）、ＭＨＣクラスＩエピトープＴＡＥＣＫＤＫＮＬ（配列番号３５）、ＭＨＣクラスＩＩエピトープＶＲＹＫＣＮＣＧＧ（配列番号３６）、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、麻疹ウイルス抗原は、赤血球凝集素タンパク質ＭＶ－Ｈ抗原、融合タンパク質ＭＶ－Ｆ抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ抗原は、スパイク（Ｓ）タンパク質抗原、Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン由来の抗原、Ｓタンパク質の膜融合ドメイン由来の抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ抗原は、スパイク（Ｓ）タンパク質抗原、Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン由来の抗原、Ｓタンパク質の膜融合ドメイン由来の抗原、エンベロープ（Ｅ）タンパク質抗原、Ｍタンパク質抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。
いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、任意のインフルエンザウイルス型またはサブタイプに由来する１つ以上のインフルエンザウイルス抗原をコードする。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルス赤血球凝集素（ＨＡ）抗原、インフルエンザウイルスノイラミニダーゼ（ＮＡ）抗原、インフルエンザウイルスマトリックス－２（Ｍ２）タンパク質抗原、それらの抗原性断片、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＡ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、またはそれらの任意の組み合わせに由来する。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＡ型に由来する。いくつかの態様では、インフルエンザウイルスＡ型に由来する１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、（ａ）Ｈ１～Ｈ１８またはそれらの任意の組み合わせから選択されるＨＡサブタイプ、および（ｂ）Ｎ１～Ｎ１１またはそれらの任意の組み合わせから選択されるＮＡサブタイプを有する。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ１Ｎ１；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ２Ｎ２；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ３Ｎ２；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ５Ｎ１；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ７Ｎ７；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ７Ｎ９；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ９Ｎ２；またはそれらの任意の組み合わせに由来する。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ１Ｎ１；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ３Ｎ２；またはそれらの組み合わせに由来する。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＢ型に由来する。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、本明細書に開示される１つ以上のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原またはその抗原性断片、および本明細書に開示される１つ以上のインフルエンザウイルス抗原またはその抗原性断片をコードする。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、本明細書に開示される少なくとも２つのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原またはその抗原性断片をコードする。いくつかの態様では、少なくとも２つのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原またはその抗原性断片は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の異なる株に由来する。いくつかの態様では、少なくとも２つのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原またはその抗原性断片は、同じＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原またはその抗原性断片の異なるバリアントであり、同じＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原またはその抗原性断片の異なるバリアントは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の異なる株に由来する。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、１つ以上の寄生虫抗原をコードし、１つ以上の寄生虫抗原は、１つ以上の原虫抗原を含む。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、トキソプラズマ抗原、熱帯熱マラリア原虫抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の寄生虫抗原をコードする。いくつかの態様では、トキソプラズマ抗原は、抗原ＭＩＣ８である。いくつかの態様では、熱帯熱マラリア原虫抗原は、ＳＥＲＡ５ポリペプチド抗原、サーカムスポロゾイト（ｃｉｒｃｕｍｓｐｏｒｏｚｉｔｅ）タンパク質抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、１つ以上の寄生虫抗原をコードし、１つ以上の寄生虫抗原は、１つ以上の寄生虫または病原性真菌抗原を含む。いくつかの態様では、１つ以上の寄生虫または病原性真菌抗原は、カンジダ種抗原（例えば、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）抗原、カンジダ・グラブラタ（Ｃａｎｄｉｄａ ｇｌａｂｒａｔａ）抗原、カンジダ・パラプシロシス（Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）抗原、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）抗原、カンジダ・ルシタニア（Ｃａｎｄｉｄａ ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ）抗原、カンジダ・クルセイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｅｉ）抗原）、ニューモシスチス種抗原、マラセジア種抗原（例えば、マラセジア・ファーファー抗原）、アスペルギルス・フミガーツス抗原、クリプトコッカス種抗原（例えば、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）抗原、クリプトコッカス・ガティイ（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇａｔｔｉｉ）抗原）、ヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）抗原、ブラストマイセス・デルマチティディシス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）抗原、パラコクシジオイデス種抗原（例えば、パラコクシディオイデス・ブラシリエンシス（Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）抗原、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｌｕｔｚｉｉ抗原）、コクシジオイデス種抗原（例えば、コクシジオイデス・イミティス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）抗原、コクシジオイデス・ポサダシイ（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｐｏｓａｄａｓｉｉ）抗原）、ペニシリウム・マルネフェイ抗原、スポロトリクス・シェンキイ抗原、トリコスポロン・アサヒ抗原、フザリウム種抗原（例えば、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｕｍ抗原、フザリウム・オキシスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）抗原）、アカツブタケ属抗原、シュードアレシェリア・ボイジイ（Ｐｓｅｕｄｏａｌｌｅｓｃｈｅｒｉａ ｂｏｙｄｉｉ）抗原、クラドフィアロフォラ・バンチアナム（Ｃｌａｄｏｐｈｉａｌｐｈｏｒａ ｂａｎｔｉａｎｕｍ）抗原、Ｒａｍｉｃｈｌｏｒｉｄｉｕｍ ｓｐｐ抗原、ダクチィラリア・ガルロパバ（Ｄａｃｔｙｌａｒｉａ ｇａｌｌｏｐａｖａ）抗原、エクソフィアラ属抗原（例えば、エクソフィアラ ジャンセルメイ（Ｅｘｏｐｈｉａｌａ ｊｅａｎｓｅｌｍｅｉ）抗原、エクソフィアラ・デルマチチディス（Ｅｘｏｐｈｉａｌａ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）抗原）、カーブラリア属抗原、ビポラリス属抗原、アルタナリア属抗原、Ｌａｃａｚｉａ ｌｏｂｏｉ抗原、Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ ｓｐｐ．抗原（例えば、Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ ｃｏｒｏｎａｔｕｓ抗原、Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ ｉｎｃｏｎｇｒｕｕｓ抗原）、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
いくつかの態様では、第１の病原体タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片である。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２または配列番号４の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸を含む。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドを含む。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、第２の病原体タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片である。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２または配列番号４の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸を含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドを含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２または配列番号４の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸を含み、配列番号２または配列番号４の連続アミノ酸は、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、ポリペプチドは、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。
いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２または配列番号４の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸を含み、配列番号２または配列番号４の連続アミノ酸は、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、ポリペプチドは、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。
いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）またはその抗原性断片である。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸を含む。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドを含む。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）またはその抗原性断片である。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸を含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドを含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）またはその抗原性断片である。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸を含み、配列番号６の連続アミノ酸は、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、ポリペプチドは、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。
いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）またはその抗原性断片である。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸を含み、配列番号６の連続アミノ酸は、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、ポリペプチドは、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。
いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片のＳ１サブユニットである。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号４０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも５５０、少なくとも６００、少なくとも６５０、または少なくとも６６０個の連続アミノ酸を含む。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号４０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドを含む。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号４０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片のＳ１サブユニットである。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号４０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも５５０、少なくとも６００、少なくとも６５０、または少なくとも６６０個の連続アミノ酸を含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号４０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドを含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号４０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片のＳ１サブユニットである。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号４０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも５５０、少なくとも６００、少なくとも６５０、または少なくとも６６０個の連続アミノ酸を含み、配列番号４０の連続アミノ酸は、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号４０のアミノ酸配列を含み、ポリペプチドは、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。
いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片のＳ１サブユニットである。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号４０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも５５０、少なくとも６００、少なくとも６５０、または少なくとも６６０個の連続アミノ酸を含み、配列番号４０の連続アミノ酸は、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号４０のアミノ酸配列を含み、ポリペプチドは、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。
いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓタンパク質、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質のＲＢＤ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＳ１サブユニット、またはそれらの抗原性断片中の１つ以上の変異は、各々、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｌｉ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｍｅｒｇ Ｍｉｃｒｏｂｅｓ Ｉｎｆｅｃｔ．９（１）：２０７６－９０（２０２０）；Ｌｅｅ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｅ Ｎｅｔｗ．２１（１）：ｅ４（２０２１）；Ｙｕ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６９（６５０５）：８０６－１１（２０２０）；Ｃａｔｔｉｎ－Ｏｒｔｏｌａ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ．１２（１）：５３３３（２０２１）；Ｃｏｒｂｅｔｔ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ５８６（７８３０）：５６７－７１（２０２０）；Ｈｓｉｅｈ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６９（６５１０）：１５０１－５（２０２０）；およびＨａｒｖｅｙ，Ｗ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９（７）：４０９－２４（２０２１）において以前に報告された１つ以上の変異を含む。
いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓタンパク質、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質のＲＢＤ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＳ１サブユニット、またはそれらの抗原性断片中の１つ以上の変異は、ΔＭ１－Ｓ１３、Ｓ１２Ｐ、Ｓ１３Ｉ、Ｌ５Ｆ、Ｌ１８Ｆ、Ｔ１９Ｒ、Ｔ２０Ｎ、Ｐ２６Ｓ、Ｑ５２Ｒ、Ａ６７Ｖ、ΔＨ６９－Ｖ７０、Ｇ７５Ｖ、Ｔ７６Ｉ、Ｄ８０Ａ、Ｔ９５Ｉ、Ｒ１０２Ｉ、ΔＤ１１９－Ｆ１２０、Ｃ１３６Ｙ、Ｄ１３８Ｙ、ΔＦ１４０、ΔＬ１４１－Ｙ１４４、ΔＹ１４４、Ｙ１４４Ｓ、Ｙ１４５Ｎ、ΔＨ１４６、Ｎ１４８Ｓ、Ｋ１５０Ｒ、Ｋ１５０Ｅ、Ｋ１５０Ｔ、Ｋ１５０Ｑ、Ｓ１５１Ｐ、Ｗ１５２Ｃ、Ｅ１５４Ｋ、ΔＥ１５６－Ｆ１５７、Ｆ１５７Ｌ、Ｆ１５７Ａ、Ｒ１５８Ｇ、Ｒ１９０Ｓ、ΔＩ２１０、Ｄ２１５Ｇ、Ａ２２２Ｖ、ΔＬ２４１－Ｓ２４３、ΔＬ２４２－Ｌ２４４、ΔＡ２４３－Ｌ２４４、ΔＲ２４６－Ｇ２５２、Ｒ２４６Ｉ、Ｙ２４８およびＬ２４９間の１１－アミノ酸残基挿入、Ｄ２５３Ｇ、Ｄ２５３Ｎ、Ｒ３４６Ｋ、Ｖ３６７Ｆ、Ｅ４０６Ｗ、Ｋ４１７Ｅ、Ｋ４１７Ｖ、Ｋ４１７Ｎ、Ｋ４１７Ｔ、Ｎ４３９Ｋ、Ｋ４４４Ａ、Ｋ４４４Ｒ、Ｋ４４４Ｎ、Ｋ４４４Ｑ、Ｖ４４５Ａ、Ｖ４４５Ｅ、Ｇ４４７Ａ、Ｎ４５０Ｄ、Ｌ４５２Ｒ、Ｌ４５２Ｑ、Ｙ４５３Ｆ、Ｌ４５５Ｆ、Ｎ４６０Ｉ、Ｓ４７７Ｇ、Ｓ４７７Ｎ、Ｓ４７７Ｒ、Ｔ４７８Ｉ、Ｔ４７８Ｋ、Ｖ４８３Ｉ、Ｅ４８４Ｋ、Ｅ４８４Ｑ、Ｇ４８５Ｒ、Ｆ４８６Ａ、Ｆ４８６Ｖ、Ｆ４８６Ｌ、Ｎ４８７Ａ、Ｆ４９０Ｓ、Ｑ４９３Ｅ、Ｑ４９３Ｋ、Ｓ４９４Ｐ、Ｎ５０１Ｙ、Ａ５７０Ｄ、Ｑ６１３Ｈ、Ｄ６１４Ｇ、Ｈ６５５Ｙ、Ｑ６７７Ｈ、Δ６７８－６７９、Δ６８１－６８２、Δ６８１－６８４、Δ６８２－６８５、Ｐ６８１Ｈ、Ｐ６８１Ｒ、Ｒ６８２Ｓ、Ｒ６８２Ａ、Ｒ６８２Ｑ、Ｒ６８３Ｓ、Ｒ６８３Ｇ、Ｒ６８３Ｑ、Ｒ６８５Ｇ、Ｒ６８５Ｑ、Ｉ６９２Ｖ、Ａ７０１Ｖ、Ｔ７１６Ｉ、Ｆ８１７Ｐ、Ｔ８５９Ｎ、Ｆ８８８Ｌ、Ａ８９２Ｐ、Ａ８９９Ｐ、Ａ９４２Ｐ、Ｄ９５０Ｎ、Ｓ９８２Ａ、Ｋ９８６Ｐ、Ｖ９８７Ｐ、Ｔ１０２７Ｉ、Ｑ１０７１Ｈ、Ｄ１１１８Ｈ、Ｖ１１７６Ｆ、Ｍ１２２９Ｉ、ΔＣ１２５３－Ｔ１２７３、ΔＣ１２５４－Ｔ１２７３、ΔＫ１２５５－Ｔ１２７３、Ｄ１２５７Ａ、Ｅ１２５８Ａ、Ｄ１２５９Ａ、Ｄ１２６０Ａ、Ｅ１２６２Ａ、Ｋ１２６９Ａ、Ｈ１２７１Ｋ、Ｔ１２７３Ａ、またはそれらの任意の組み合わせから選択され、アミノ酸位置は、配列番号２または配列番号４に対応する。
いくつかの態様では、１つ以上の変異は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸１～１３に対応するＮ末端シグナルペプチドにおける１つ以上の変異を含む。いくつかの態様では、Ｎ末端シグナルペプチドにおける１つ以上の突然変異はΔＭ１～Ｓ１３であり、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。
いくつかの態様では、１つ以上の変異は、全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＣ末端に１つ以上の変異を含む。いくつかの態様では、全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＣ末端における１つ以上の変異は、Ｃ末端小胞体（ＥＲ）保持ペプチドにおける１つ以上の変異を含み、それは配列番号２または配列番号４のアミノ酸１２５４～１２７３に対応する。いくつかの態様では、Ｃ末端ＥＲ保持ペプチドにおける１つ以上の変異は、Ｄ１２５７Ａ、Ｅ１２５８Ａ、Ｄ１２５９Ａ、Ｄ１２６０Ａ、Ｅ１２６２Ａ、Ｋ１２６９Ａ、Ｈ１２７１Ｋ、Ｔ１２７３Ａ、またはそれらの任意の組み合わせから選択され、アミノ酸位置は、配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、Ｃ末端ＥＲ保持ペプチドにおける１つ以上の変異は、Ｄ１２５７Ａ＋Ｅ１２５８Ａ＋Ｄ１２５９Ａ＋Ｄ１２６０Ａ＋Ｅ１２６２Ａ（すなわち、Ｄ／ＥからＡの変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、Ｃ末端ＥＲ保持ペプチドにおける１つ以上の変異は、ΔＣ１２５３－Ｔ１２７３、ΔＣ１２５４－Ｔ１２７３またはΔＫ１２５５－Ｔ１２７３である。
いくつかの態様では、１つ以上の変異はＫ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、ヘキサ－プロリンＳ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、６８１－ＰＲＲＡＲ／ＳＶＡ－６８８ Ｓ１／Ｓ２フーリン切断部位における１つ以上の変異を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、６８１－ＰＲＲＡＲ／ＳＶＡ－６８８ Ｓ１／Ｓ２フーリン切断部位における１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｓ＋Ｒ６８３Ｓ（すなわち、ＳＳＡＲ変異）、（ｂ）Δ６８１－６８４（すなわち、ΔＰＲＲＡ変異）、（ｃ）Δ６７８－６７９＋Δ６８１－６８２、（ｄ）Ｒ６８２Ａ＋Ｒ６８３Ｇ＋Ｒ６８５Ｇ（すなわち、６８２－ＡＧＡＧ－６８５変異）、（ｅ）Ｒ６８２Ｑ＋Ｒ６８３Ｑ＋Ｒ６８５Ｑ、（ｆ）Ｒ６８２Ｓ＋Ｒ６８５Ｇ、または（ｇ）Δ６８２－６８５（すなわち、ΔＲＲＡＲ変異）であり、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。
いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、ヘキサ－プロリンＳ変異）および（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ａ＋Ｒ６８３Ｇ＋Ｒ６８５Ｇ（すなわち、６８２－ＡＧＡＧ－６８５変異）および（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ａ＋Ｒ６８３Ｇ＋Ｒ６８５Ｇ（すなわち、６８２－ＡＧＡＧ－６８５変異）、（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）、および（ｃ）Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、ヘキサ－プロリンＳ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｑ＋Ｒ６８３Ｑ＋Ｒ６８５Ｑおよび（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含む。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｑ＋Ｒ６８３Ｑ＋Ｒ６８５Ｑ、（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）、および（ｃ）Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、ヘキサ－プロリンＳ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｓ＋Ｒ６８５Ｇおよび（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｓ＋Ｒ６８５Ｇ、（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）、および（ｃ）Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、ヘキサ－プロリンＳ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。
いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｍタンパク質またはその抗原性断片である。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１２０、少なくとも１４０、少なくとも１６０、少なくとも１８０、少なくとも２００、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸を含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドを含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８または配列番号２０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０の、少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１２０、少なくとも１４０、少なくとも１６０、少なくとも１８０、少なくとも２００、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸を含み、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０の連続アミノ酸は、Ａ２Ｓ、Ｆ２８Ｌ、Ｉ４８Ｖ、Ｖ７０Ｌ、Ｉ８２Ｔ、Ｍ８４Ｔ、またはそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の変異を含み、アミノ酸位置は配列番号８に対応する。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０のアミノ酸配列を含み、ここでポリペプチドは、Ａ２Ｓ、Ｆ２８Ｌ、Ｉ４８Ｖ、Ｖ７０Ｌ、Ｉ８２Ｔ、Ｍ８４Ｔ、またはそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の変異を含み、アミノ酸位置は配列番号８に対応する。
いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｅタンパク質またはその抗原性断片である。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２２、配列番号２４または配列番号２６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、または少なくとも７５個の連続アミノ酸を含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２２、配列番号２４または配列番号２６のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドを含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２２、配列番号２４または配列番号２６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎタンパク質またはその抗原性断片である。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２８の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、または少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、または少なくとも４００個の連続アミノ酸を含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドを含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、プロモーター１は、ＣＭＶプロモーター、ＲＳＶプロモーター、Ｍｏ－ＭｕＬＶ ＬＴＲプロモーター、哺乳動物ＥＦ１プロモーター、ＣＫ１８プロモーター、ＣＫ１９プロモーター、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、プロモーター２は、ＣＭＶプロモーター、ＲＳＶプロモーター、Ｍｏ－ＭｕＬＶ ＬＴＲプロモーター、哺乳動物ＥＦ１プロモーター、ＣＫ１８プロモーター、ＣＫ１９プロモーター、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、プロモーターＸは、ＣＭＶプロモーター、ＲＳＶプロモーター、Ｍｏ－ＭｕＬＶ ＬＴＲプロモーター、哺乳動物ＥＦ１プロモーター、ＣＫ１８プロモーター、ＣＫ１９プロモーター、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、プロモーターＹは、ＣＭＶプロモーター、ＲＳＶプロモーター、Ｍｏ－ＭｕＬＶ ＬＴＲプロモーター、哺乳動物ＥＦ１プロモーター、ＣＫ１８プロモーター、ＣＫ１９プロモーター、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、プロモーターＺは、ＣＭＶプロモーター、ＲＳＶプロモーター、Ｍｏ－ＭｕＬＶ ＬＴＲプロモーター、哺乳動物ＥＦ１プロモーター、ＣＫ１８プロモーター、ＣＫ１９プロモーター、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、哺乳動物ＥＦ１プロモーターはｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである。
いくつかの態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号４１と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
５．４ ベクター、ワクチン、組成物および医薬組成物
本明細書に記載または例示される任意のポリヌクレオチドを含むベクターまたは構築物も本明細書で提供され、ベクターは、ＤＮＡプラスミドベクター、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクター、ウイルスベクター、細菌ベクター、コスミドまたは人工染色体である。ベクターの例としては、ＡＡＶベクター、アデノウイルスベクター、レトロウイルスベクター、ポックスウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に記載または例示される任意のポリヌクレオチドを含むＤＮＡプラスミドベクターおよびマルチシストロン性ｍＲＮＡベクターも本明細書で提供される。
本明細書に記載または例示される任意のポリヌクレオチドまたはベクターを含む組成物（例えば、医薬組成物およびワクチン）も本明細書で提供される。いくつかの態様では、組成物（例えば、医薬組成物またはワクチン）は、薬学的に許容される担体をさらに含む。いくつかの態様では、組成物（例えば、医薬組成物またはワクチン）は、ＩＬ－２、ＩＬ－１２ ｐ３５、ＩＬ－１２ ｐ４０、ＩＬ－１２ ｐ７０、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＴＮＦα、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ケモカイン、ＭＨＣ Ｉ、ＭＨＣ ＩＩ、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ８０およびＣＤ８６からなる群から選択される少なくとも１つの免疫修飾因子をコードする第２のポリヌクレオチドをさらに含み、少なくとも１つの免疫修飾因子をコードするポリヌクレオチドは、プロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、組成物（例えば、医薬組成物またはワクチン）は、送達成分（例えば、カチオン性ポリマー、ポリイノシン－ポリシチジル酸、またはポロキサマー）をさらに含む。いくつかの態様では、送達成分は塩化ベンザルコニウムをさらに含む。
いくつかの態様では、ＩＬ－１２ ｐ３５免疫修飾因子は、配列番号４３（マウスＩＬ－１２ ｐ３５）または配列番号４７（ヒトＩＬ－１２ ｐ３５）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１２ ｐ４０免疫修飾因子は、配列番号４５（マウスＩＬ－１２ ｐ４０）または配列番号４９（ヒトＩＬ－１２ ｐ４０）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、第２のポリヌクレオチドは、ＩＬ－１２ ｐ３５、ＩＬ－１２ ｐ４０、またはそれらの組み合わせをコードする。いくつかの態様において、ＩＬ－１２ ｐ３５免疫修飾因子は、配列番号４２（マウスＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸配列）または配列番号４６（ヒトＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸配列）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、ＩＬ－１２ ｐ４０免疫修飾因子は、配列番号４４（マウスＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸配列）または配列番号４８（ヒトＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸配列）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様では、第２のポリヌクレオチドによってコードされる少なくとも１つの免疫修飾因子は、局所炎症応答および／またはインターフェロン応答を減衰させるウイルスタンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２非構造タンパク質１（Ｎｓｐ１）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１３、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ３ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ｂ）を含む。いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、抗原核酸によってコードされるウイルス抗原と同じウイルスに由来する。いくつかの態様では、いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、抗原核酸によってコードされるウイルス抗原と異なるウイルスに由来する。いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、本明細書に開示される病原体抗原によって誘発される局所炎症応答および／またはインターフェロン応答を減衰させる。いくつかの態様では、第２のポリヌクレオチドによってコードされる少なくとも１つの免疫修飾因子は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１３、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ３ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ｂ、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるウイルスタンパク質を含む。いくつかの態様では、少なくとも１つの免疫修飾因子は、非コード５’－Ｃ－ホスファート－Ｇ－３’（ＣｐＧ）ジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーを含む。いくつかの態様では、非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーは、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）シグナル伝達経路を活性化する。いくつかの態様では、非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーは、Ｂａｕｅｒ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３８（１２）：３８９１－９０８（２０１０）；Ｃｏｒｎｅｌｉｅ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７９（１５）：１５１２４－９（２００４）；Ｋｌｉｎｍａｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８（８）：３６３５－９（１９９７）；Ｋｌｉｎｍａｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ １９９（１）：２０１－１６（２００４）；Ｌｕｏ，Ｚ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｍｅｄ Ｒｅｐ．６（６）：１３０９－１４（２０１２）；Ｂｏｄｅ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｖａｃｃｉｎｅｓ １０（４）：４９９－５１１（２０１１）；およびＫｕｏ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ １０：２００８５（２０２０）において以前に報告された非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーを含み、その各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの態様では、組成物（例えば、医薬組成物またはワクチン）は、ＩＬ－２、ＩＬ－１２ ｐ３５、ＩＬ－１２ ｐ４０、ＩＬ－１２ ｐ７０、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＴＮＦα、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ケモカイン、ＭＨＣ Ｉ、ＭＨＣ ＩＩ、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ８０およびＣＤ８６からなる群から選択される少なくとも１つの免疫修飾因子をコードする第３のポリヌクレオチドをさらに含み、少なくとも１つの免疫修飾因子をコードするポリヌクレオチドは、プロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、少なくとも１つの免疫修飾因子をコードする第２のポリヌクレオチドは、ＩＬ－１２ ｐ３５免疫修飾因子をコードし、少なくとも１つの免疫修飾因子をコードする第３のポリヌクレオチドは、ＩＬ－１２ ｐ４０免疫修飾因子をコードする。いくつかの態様において、ＩＬ－１２ ｐ３５修飾因子をコードする第２のポリヌクレオチドは、配列番号４２（マウスＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸配列）または配列番号４６（ヒトＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸配列）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの態様において、ＩＬ－１２ ｐ４０免疫修飾因子をコードする第３のポリヌクレオチドは、配列番号４４（マウスＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸配列）または配列番号４８（ヒトＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸配列）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの態様では、第３のポリヌクレオチドによってコードされる少なくとも１つの免疫修飾因子は、局所炎症応答および／またはインターフェロン応答を減衰させるウイルスタンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２非構造タンパク質１（Ｎｓｐ１）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１３、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ３ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ｂ）を含む。いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、抗原核酸によってコードされるウイルス抗原と同じウイルスに由来する。いくつかの態様では、いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、抗原核酸によってコードされるウイルス抗原と異なるウイルスに由来する。いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、本明細書に開示される病原体抗原によって誘発される局所炎症応答および／またはインターフェロン応答を減衰させる。いくつかの態様では、第３のポリヌクレオチドによってコードされる少なくとも１つの免疫修飾因子は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１３、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ３ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ｂ、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるウイルスタンパク質を含む。いくつかの態様では、少なくとも１つの免疫修飾因子は、非コード５’－Ｃ－ホスファート－Ｇ－３’（ＣｐＧ）ジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーを含む。いくつかの態様では、非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーは、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）シグナル伝達経路を活性化する。いくつかの態様では、非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーは、Ｂａｕｅｒ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３８（１２）：３８９１－９０８（２０１０）；Ｃｏｒｎｅｌｉｅ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７９（１５）：１５１２４－９（２００４）；Ｋｌｉｎｍａｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８（８）：３６３５－９（１９９７）；Ｋｌｉｎｍａｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ １９９（１）：２０１－１６（２００４）；Ｌｕｏ，Ｚ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｍｅｄ Ｒｅｐ．６（６）：１３０９－１４（２０１２）；Ｂｏｄｅ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｖａｃｃｉｎｅｓ １０（４）：４９９－５１１（２０１１）；およびＫｕｏ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ １０：２００８５（２０２０）において以前に報告された非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーを含み、その各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。本明細書に記載または例示される任意のポリヌクレオチド、ベクター、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクターを含む組成物（例えば、医薬組成物またはワクチン）も本明細書で提供される。いくつかの態様では、組成物（例えば、医薬組成物またはワクチン）は、ＩＬ－２、ＩＬ－１２ ｐ３５、ＩＬ－１２ ｐ４０、ＩＬ－１２ ｐ７０、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＴＮＦα、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ケモカイン、ＭＨＣ Ｉ、ＭＨＣ ＩＩ、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ８０およびＣＤ８６からなる群から選択される少なくとも１つの免疫修飾因子をコードする第２のポリヌクレオチドを含み、少なくとも１つの免疫修飾因子をコードするポリヌクレオチドは、プロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、組成物（例えば、医薬組成物またはワクチン）は、ＩＬ－２、ＩＬ－１２ ｐ３５、ＩＬ－１２ ｐ４０、ＩＬ－１２ ｐ７０、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＴＮＦα、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ケモカイン、ＭＨＣ Ｉ、ＭＨＣ ＩＩ、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ８０およびＣＤ８６からなる群から選択される少なくとも１つの免疫修飾因子をコードする第３のポリヌクレオチドをさらに含み、少なくとも１つの免疫修飾因子をコードする第３のポリヌクレオチドは、プロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの態様では、少なくとも１つの免疫修飾因子をコードする第２のポリヌクレオチドはＩＬ－１２ ｐ３５コードし、少なくとも１つの免疫修飾因子をコードする第３のポリヌクレオチドはＩＬ－１２ ｐ４０をコードする。
いくつかの態様では、第２のポリヌクレオチドによってコードされる少なくとも１つの免疫修飾因子は、局所炎症応答および／またはインターフェロン応答を減衰させるウイルスタンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２非構造タンパク質１（Ｎｓｐ１）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１３、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ３ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ｂ）を含む。いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、抗原核酸によってコードされるウイルス抗原と同じウイルスに由来する。いくつかの態様では、いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、抗原核酸によってコードされるウイルス抗原と異なるウイルスに由来する。いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、本明細書に開示される病原体抗原によって誘発される局所炎症応答および／またはインターフェロン応答を減衰させる。いくつかの態様では、第２のポリヌクレオチドによってコードされる少なくとも１つの免疫修飾因子は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１３、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ３ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ｂ、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるウイルスタンパク質を含む。いくつかの態様では、少なくとも１つの免疫修飾因子は、非コード５’－Ｃ－ホスファート－Ｇ－３’（ＣｐＧ）ジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーを含む。いくつかの態様では、非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーは、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）シグナル伝達経路を活性化する。いくつかの態様では、非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーは、Ｂａｕｅｒ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３８（１２）：３８９１－９０８（２０１０）；Ｃｏｒｎｅｌｉｅ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７９（１５）：１５１２４－９（２００４）；Ｋｌｉｎｍａｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８（８）：３６３５－９（１９９７）；Ｋｌｉｎｍａｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ １９９（１）：２０１－１６（２００４）；Ｌｕｏ，Ｚ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｍｅｄ Ｒｅｐ．６（６）：１３０９－１４（２０１２）；Ｂｏｄｅ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｖａｃｃｉｎｅｓ １０（４）：４９９－５１１（２０１１）；およびＫｕｏ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ １０：２００８５（２０２０）において以前に報告された非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーを含み、その各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの態様では、第３のポリヌクレオチドによってコードされる少なくとも１つの免疫修飾因子は、局所炎症応答および／またはインターフェロン応答を減衰させるウイルスタンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２非構造タンパク質１（Ｎｓｐ１）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１３、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ３ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ｂ）を含む。いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、抗原核酸によってコードされるウイルス抗原と同じウイルスに由来する。いくつかの態様では、いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、抗原核酸によってコードされるウイルス抗原と異なるウイルスに由来する。いくつかの態様では、ウイルスタンパク質は、本明細書に開示される病原体抗原によって誘発される局所炎症応答および／またはインターフェロン応答を減衰させる。いくつかの態様では、第３のポリヌクレオチドによってコードされる少なくとも１つの免疫修飾因子は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｓｐ１３、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ３ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ６、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ａ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ｂ、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるウイルスタンパク質を含む。いくつかの態様では、少なくとも１つの免疫修飾因子は、非コード５’－Ｃ－ホスファート－Ｇ－３’（ＣｐＧ）ジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーを含む。いくつかの態様では、非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーは、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）シグナル伝達経路を活性化する。いくつかの態様では、非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーは、Ｂａｕｅｒ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３８（１２）：３８９１－９０８（２０１０）；Ｃｏｒｎｅｌｉｅ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７９（１５）：１５１２４－９（２００４）；Ｋｌｉｎｍａｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８（８）：３６３５－９（１９９７）；Ｋｌｉｎｍａｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ １９９（１）：２０１－１６（２００４）；Ｌｕｏ，Ｚ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｍｅｄ Ｒｅｐ．６（６）：１３０９－１４（２０１２）；Ｂｏｄｅ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｖａｃｃｉｎｅｓ １０（４）：４９９－５１１（２０１１）；およびＫｕｏ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ １０：２００８５（２０２０）において以前に報告された非コードＣｐＧジヌクレオチドの１つ以上のコンカテマーを含み、その各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの態様では、本開示の組成物（例えば、医薬組成物またはワクチン）は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第４のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結されている、第４のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第３のヌクレオチド配列の３’側に位置する第４のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結されている、第４のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３および第４のヌクレオチド配列は、図１に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本開示の組成物（例えば、医薬組成物またはワクチン）は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ Ｉをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；第４のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列、および第５のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第５のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ Ｉをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列の３’側位置する第４のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列；および第４のヌクレオチド配列の３’側位置する第５のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第５のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３、第４および第５のヌクレオチド配列は、図２に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本開示の組成物（例えば、医薬組成物またはワクチン）は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ ＩＩをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；第４のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列、および第５のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第５のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ ＩＩをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列の３’側に位置する第４のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列、および第４のヌクレオチド配列の３’側に位置する第５のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第５のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３、第４および第５のヌクレオチド配列は、図３に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本開示の組成物（例えば、医薬組成物またはワクチン）は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－２をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；および第３のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－２をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；および第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２および第３のヌクレオチド配列は、図４に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本開示の組成物（例えば、医薬組成物またはワクチン）は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－２をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ Ｉをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第４のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－２をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ Ｉをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第３のヌクレオチド配列の３’側に位置する第４のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３および第４のヌクレオチド配列は、図５に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本開示の組成物（例えば、医薬組成物またはワクチン）は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－２をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ ＩＩをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第４のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－２をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ ＩＩをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第３のヌクレオチド配列の３’側に位置する第４のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３および第４のヌクレオチド配列は、図６に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本開示の組成物（例えば、医薬組成物またはワクチン）は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－２をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ３をコードし、プロモーターＸに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ４をコードし、プロモーターＹに作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；第４のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列、および第５のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第５のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－２をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ３をコードし、プロモーターＸに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ４をコードし、プロモーターＹに作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列の３’側に位置する第４のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列、および第４のヌクレオチド配列の３’側に位置する第５のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第５のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３、第４および第５のヌクレオチド配列は、図７に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本開示の組成物（例えば、医薬組成物またはワクチン）は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；および第３のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；および第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２および第３のヌクレオチド配列は、図８に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本開示の組成物（例えば、医薬組成物またはワクチン）は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ Ｉをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第４のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ Ｉをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第３のヌクレオチド配列の３’側に位置する第４のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３および第４のヌクレオチド配列は、図９に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本開示の組成物（例えば、医薬組成物またはワクチン）は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ ＩＩをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第４のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ ＩＩをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第３のヌクレオチド配列の３’側に位置する第４のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３および第４のヌクレオチド配列は、図１０に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本開示の組成物（例えば、医薬組成物またはワクチン）は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ３をコードし、プロモーターＸに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ４をコードし、プロモーターＹに作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；第４のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列、および第５のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第５のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ３をコードし、プロモーターＸに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ４をコードし、プロモーターＹに作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列の３’側に位置する第４のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列、および第４のヌクレオチド配列の３’側に位置する第５のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第５のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３、第４および第５のヌクレオチド配列は、図１１に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本開示の組成物（例えば、医薬組成物またはワクチン）は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ３をコードし、プロモーターＸに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ４をコードし、プロモーターＹに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第４のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ３をコードし、プロモーターＸに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ４をコードし、プロモーターＹに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第３のヌクレオチド配列の３’側に位置する第４のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３および第４のヌクレオチド配列は、図１２に示されるように構成される。
いくつかの態様において、組成物（例えば、医薬組成物またはワクチン）は、送達成分と、図１～図１２のいずれかに例示されるベクター構築物で示されるように構成されたポリヌクレオチドとを含み得、それらは、「Ｃｏｖｉｄ－１９スパイク遺伝子」（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードする第１のヌクレオチド配列）および「Ｃｏｖｉｄ－１９遺伝子－２」（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードする第２のヌクレオチド配列）を、本明細書中に開示される病原体抗原またはその抗原性断片の任意の組み合わせをコードするヌクレオチド配列で置き換えるように修飾され得る。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、ウイルス、細菌または寄生虫に対する抗原をコードする。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、１つ以上のウイルス抗原、１つ以上の細菌抗原、または１つ以上の寄生虫抗原を含む１つ以上の抗原をコードする。
いくつかの態様では、本開示の組成物（例えば、医薬組成物またはワクチン）は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＳ１サブユニット）をコードし、第１のプロモーター（例えば、ｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーター）に作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードし、第２のプロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター）に作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；および第３のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードし、第２のプロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター）に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２および第３のヌクレオチド配列は、図１４Ｃ（ｐＶａｃ ２）に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本開示の組成物（例えば、医薬組成物またはワクチン）は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＳ１サブユニット）をコードし、第１のプロモーター（例えば、ｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーター）に作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、第２の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｍタンパク質）をコードし、ＩＲＥＳ配列を介して第１のプロモーターに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であってＩＬ－１２ ｐ３５をコードし、第２のプロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター）に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第４のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ３４０をコードし、第２のプロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター）に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３および第４のヌクレオチド配列は、図１４Ｄ（ｐＶａｃ ３）に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本開示の組成物（例えば、医薬組成物またはワクチン）は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｄ６１４Ｇ Ｓタンパク質）をコードし、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ－１αプロモーター）に作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードし、第２のプロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター）に作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；および第３のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードし、第２のプロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター）に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２および第３のヌクレオチド配列は、図１４Ｆ（ｐＶａｃ ５）に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本開示の組成物（例えば、医薬組成物またはワクチン）は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｄ６１４Ｇ Ｓタンパク質）をコードし、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ－１αプロモーター）に作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、第２の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｍタンパク質）をコードし、ＩＲＥＳ配列を介して第１のプロモーターに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であってＩＬ－１２ ｐ３５をコードし、第２のプロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター）に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第４のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ３４０をコードし、第２のプロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター）に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３および第４のヌクレオチド配列は、図１４Ｇ（ｐＶａｃ ６）に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本開示の組成物（例えば、医薬組成物またはワクチン）は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＳ１サブユニットまたはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｄ６１４Ｇ Ｓタンパク質）をコードし、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ－１αプロモーター）に作動可能に連結されている第１のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１のヌクレオチド配列は、図１４Ｂ（ｐＶａｃ １）または図１４Ｅ（ｐＶａｃ ４）に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本開示の組成物（例えば、医薬組成物またはワクチン）は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｄ６１４Ｇ Ｓタンパク質）をコードし、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ－１αプロモーター）に作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；および第２のヌクレオチド配列であって、第２の病原体（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｍタンパク質）をコードし、第２のプロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター）に作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１のヌクレオチド配列は、図１４Ｈ（ｐＶａｃ ７）に示されるように構成される。
いくつかの態様では、組成物（例えば、医薬組成物またはワクチン）は、送達成分と、図Ｘ（ｐＶａｃ １～７）のいずれかに例示されるベクター構築物で示されるように構成されたポリヌクレオチドとを含み得、それらは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＳ１サブユニットまたはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｄ６１４Ｇ Ｓタンパク質（第１の病原体タンパク質をコードする第１のヌクレオチド配列）および／またはＳＡＳＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｍタンパク質（第２の病原体タンパク質をコードする第２のヌクレオチド配列）を、本明細書に開示される病原体抗原またはその抗原性断片の任意の組み合わせをコードするヌクレオチド配列で置き換えるように修飾することができる。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、ウイルス、細菌または寄生虫に対する抗原をコードする。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、１つ以上のウイルス抗原、１つ以上の細菌抗原、または１つ以上の寄生虫抗原を含む１つ以上の抗原をコードする。
いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、ペスト菌抗原、結核菌抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上の細菌抗原をコードする。いくつかの態様では、ペスト菌抗原は、ペスト菌莢膜抗原である。いくつかの態様では、ペスト菌莢膜抗原は、Ｆ１－Ａｇまたは病原性抗原（Ｖ－Ａｇ）である。いくつかの態様では、結核菌抗原は、Ａｐａ抗原、ＨＰ６５抗原、ｒＡｇ８５Ａ抗原、それらの任意の抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。
いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、エンテロウイルス抗原、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）抗原、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）抗原、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）抗原、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）抗原、デングウイルス抗原、エボラウイルス抗原、ジカウイルス、チクングニアウイルス抗原、麻疹ウイルス抗原、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上のウイルス抗原をコードする。いくつかの態様では、エンテロウイルス抗原は、エンテロウイルス７１（Ｅ７１）抗原、コクサッキーウイルス（Ｃｏｘ）タンパク質抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、Ｅ７１抗原は、Ｅ７１－ＶＰ１抗原、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）タグ付きＥ７１－ＶＰ１抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、Ｃｏｘタンパク質抗原は、ＧＳＴタグ付きＣｏｘタンパク質抗原である。いくつかの態様では、ＨＳＶ抗原は、ＨＳＶ－１エンベロープ抗原、ＨＳＶ－２エンベロープ抗原、ＨＳＶ－２表面糖タンパク質抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ＨＳＶ－２表面糖タンパク質抗原は、ｇＢ２抗原、ｇＣ２抗原、ｇＤ２抗原、ｇＥ２抗原、またはそれらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ＨＩＶ抗原は、Ｅｎｖ抗原、Ｇａｇ抗原、Ｎｅｆ抗原、Ｐｏｌ抗原、それらの抗原性断片、および、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ＨＰＶ抗原は、マイナーカプシドタンパク質Ｌ２抗原である。いくつかの態様では、マイナーカプシドタンパク質Ｌ２抗原は、マイナーカプシドタンパク質Ｌ２の１つ以上のエピトープドメイン（アミノ酸１０～３６および／またはアミノ酸６５～８９）を含む。いくつかの態様では、ＨＣＶ抗原は、非構造３（ＮＳ３）抗原である。いくつかの態様では、ＲＳＶ抗原は、Ｆ抗原、Ｇ抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、デングウイルス抗原は、Ｅタンパク質抗原、Ｅタンパク質ドメインＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ）抗原、非構造タンパク質１（ＮＳ１）抗原、ＤＥＮ－８０Ｅ抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、エボラウイルス抗原は、スパイク糖タンパク質（ＧＢ）抗原、ＶＰ２４抗原、ＶＰ４０抗原、核タンパク質（ＮＰ）抗原、ＶＰ３０抗原、ＶＰ３５抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ジカウイルス抗原は、エンベロープドメインＩＩＩ抗原、ＣＫＤ抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、チクングニアウイルス抗原は、Ｅ１糖タンパク質サブユニット抗原、ＭＨＣクラスＩエピトープＰＰＦＧＡＧＲＰＧＱＦＧＤＩ（配列番号３４）、ＭＨＣクラスＩエピトープＴＡＥＣＫＤＫＮＬ（配列番号３５）、ＭＨＣクラスＩＩエピトープＶＲＹＫＣＮＣＧＧ（配列番号３６）、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、麻疹ウイルス抗原は、赤血球凝集素タンパク質ＭＶ－Ｈ抗原、融合タンパク質ＭＶ－Ｆ抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ抗原は、スパイク（Ｓ）タンパク質抗原、Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン由来の抗原、Ｓタンパク質の膜融合ドメイン由来の抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ抗原は、スパイク（Ｓ）タンパク質抗原、Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン由来の抗原、Ｓタンパク質の膜融合ドメイン由来の抗原、エンベロープ（Ｅ）タンパク質抗原、Ｍタンパク質抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。
いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、任意のインフルエンザウイルス型またはサブタイプに由来する１つ以上のインフルエンザウイルス抗原をコードする。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルス赤血球凝集素（ＨＡ）抗原、インフルエンザウイルスノイラミニダーゼ（ＮＡ）抗原、インフルエンザウイルスマトリックス－２（Ｍ２）タンパク質抗原、それらの抗原性断片、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＡ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、またはそれらの任意の組み合わせに由来する。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＡ型に由来する。いくつかの態様では、インフルエンザウイルスＡ型に由来する１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、（ａ）Ｈ１～Ｈ１８またはそれらの任意の組み合わせから選択されるＨＡサブタイプ、および（ｂ）Ｎ１～Ｎ１１またはそれらの任意の組み合わせから選択されるＮＡサブタイプを有する。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ１Ｎ１；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ２Ｎ２；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ３Ｎ２；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ５Ｎ１；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ７Ｎ７；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ７Ｎ９；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ９Ｎ２；またはそれらの任意の組み合わせに由来する。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ１Ｎ１；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ３Ｎ２；またはそれらの組み合わせに由来する。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＢ型に由来する。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、本明細書に開示される１つ以上のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原またはその抗原性断片、および本明細書に開示される１つ以上のインフルエンザウイルス抗原またはその抗原性断片をコードする。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、１つ以上の寄生虫抗原をコードし、１つ以上の寄生虫抗原は、１つ以上の原虫抗原を含む。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、トキソプラズマ抗原、熱帯熱マラリア原虫抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の寄生虫抗原をコードする。いくつかの態様では、トキソプラズマ抗原は、抗原ＭＩＣ８である。いくつかの態様では、熱帯熱マラリア原虫抗原は、ＳＥＲＡ５ポリペプチド抗原、サーカムスポロゾイト（ｃｉｒｃｕｍｓｐｏｒｏｚｉｔｅ）タンパク質抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、１つ以上の寄生虫抗原をコードし、１つ以上の寄生虫抗原は、１つ以上の寄生虫または病原性真菌抗原を含む。いくつかの態様では、１つ以上の寄生虫または病原性真菌抗原は、カンジダ種抗原（例えば、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）抗原、カンジダ・グラブラタ（Ｃａｎｄｉｄａ ｇｌａｂｒａｔａ）抗原、カンジダ・パラプシロシス（Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）抗原、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）抗原、カンジダ・ルシタニア（Ｃａｎｄｉｄａ ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ）抗原、カンジダ・クルセイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｅｉ）抗原）、ニューモシスチス種抗原、マラセジア種抗原（例えば、マラセジア・ファーファー抗原）、アスペルギルス・フミガーツス抗原、クリプトコッカス種抗原（例えば、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）抗原、クリプトコッカス・ガティイ（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇａｔｔｉｉ）抗原）、ヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）抗原、ブラストマイセス・デルマチティディシス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）抗原、パラコクシジオイデス種抗原（例えば、パラコクシディオイデス・ブラシリエンシス（Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）抗原、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｌｕｔｚｉｉ抗原）、コクシジオイデス種抗原（例えば、コクシジオイデス・イミティス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）抗原、コクシジオイデス・ポサダシイ（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｐｏｓａｄａｓｉｉ）抗原）、ペニシリウム・マルネフェイ抗原、スポロトリクス・シェンキイ抗原、トリコスポロン・アサヒ抗原、フザリウム種抗原（例えば、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｕｍ抗原、フザリウム・オキシスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）抗原）、アカツブタケ属抗原、シュードアレシェリア・ボイジイ（Ｐｓｅｕｄｏａｌｌｅｓｃｈｅｒｉａ ｂｏｙｄｉｉ）抗原、クラドフィアロフォラ・バンチアナム（Ｃｌａｄｏｐｈｉａｌｐｈｏｒａ ｂａｎｔｉａｎｕｍ）抗原、Ｒａｍｉｃｈｌｏｒｉｄｉｕｍ ｓｐｐ抗原、ダクチィラリア・ガルロパバ（Ｄａｃｔｙｌａｒｉａ ｇａｌｌｏｐａｖａ）抗原、エクソフィアラ属抗原（例えば、エクソフィアラ ジャンセルメイ（Ｅｘｏｐｈｉａｌａ ｊｅａｎｓｅｌｍｅｉ）抗原、エクソフィアラ・デルマチチディス（Ｅｘｏｐｈｉａｌａ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）抗原）、カーブラリア属抗原、ビポラリス属抗原、アルタナリア属抗原、Ｌａｃａｚｉａ ｌｏｂｏｉ抗原、Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ ｓｐｐ．抗原（例えば、Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ ｃｏｒｏｎａｔｕｓ抗原、Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ ｉｎｃｏｎｇｒｕｕｓ抗原）、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
いくつかの態様では、第１または第２抗原核酸は、それぞれ第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質および第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードする。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片である。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２または配列番号４の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸を含む。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片である。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２または配列番号４の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸を含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片である。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２または配列番号４の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸を含み、配列番号２または配列番号４の連続アミノ酸は、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、ポリペプチドは、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。
いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片である。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２または配列番号４の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸を含み、配列番号２または配列番号４の連続アミノ酸は、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、ポリペプチドは、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。
いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）またはその抗原性断片である。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸を含む。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）またはその抗原性断片である。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸を含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸を含み、配列番号６の連続アミノ酸は、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、ポリペプチドは、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。
いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸を含み、配列番号６の連続アミノ酸は、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、ポリペプチドは、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。
いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片のＳ１サブユニットである。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号４０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも５５０、少なくとも６００、少なくとも６５０、または少なくとも６６０個の連続アミノ酸を含む。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号４０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号４０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片のＳ１サブユニットである。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号４０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも５５０、少なくとも６００、少なくとも６５０、または少なくとも６６０個の連続アミノ酸を含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号４０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号４０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号４０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも５５０、少なくとも６００、少なくとも６５０、または少なくとも６６０個の連続アミノ酸を含み、配列番号４０の連続アミノ酸は、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号４０のアミノ酸配列を含み、ポリペプチドは、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。
いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号４０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも５５０、少なくとも６００、少なくとも６５０、または少なくとも６６０個の連続アミノ酸を含み、配列番号４０の連続アミノ酸は、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号４０のアミノ酸配列を含み、ポリペプチドは、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。
いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓタンパク質、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質のＲＢＤ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＳ１サブユニット、またはそれらの抗原性断片中の１つ以上の変異は、各々、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｌｉ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｍｅｒｇ Ｍｉｃｒｏｂｅｓ Ｉｎｆｅｃｔ．９（１）：２０７６－９０（２０２０）；Ｌｅｅ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｅ Ｎｅｔｗ．２１（１）：ｅ４（２０２１）；Ｙｕ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６９（６５０５）：８０６－１１（２０２０）；Ｃａｔｔｉｎ－Ｏｒｔｏｌａ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ．１２（１）：５３３３（２０２１）；Ｃｏｒｂｅｔｔ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ５８６（７８３０）：５６７－７１（２０２０）；Ｈｓｉｅｈ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６９（６５１０）：１５０１－５（２０２０）；およびＨａｒｖｅｙ，Ｗ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９（７）：４０９－２４（２０２１）において以前に報告された１つ以上の変異を含む。
いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓタンパク質、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質のＲＢＤ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＳ１サブユニット、またはそれらの抗原性断片中の１つ以上の変異は、ΔＭ１－Ｓ１３、Ｓ１２Ｐ、Ｓ１３Ｉ、Ｌ５Ｆ、Ｌ１８Ｆ、Ｔ１９Ｒ、Ｔ２０Ｎ、Ｐ２６Ｓ、Ｑ５２Ｒ、Ａ６７Ｖ、ΔＨ６９－Ｖ７０、Ｇ７５Ｖ、Ｔ７６Ｉ、Ｄ８０Ａ、Ｔ９５Ｉ、Ｒ１０２Ｉ、ΔＤ１１９－Ｆ１２０、Ｃ１３６Ｙ、Ｄ１３８Ｙ、ΔＦ１４０、ΔＬ１４１－Ｙ１４４、ΔＹ１４４、Ｙ１４４Ｓ、Ｙ１４５Ｎ、ΔＨ１４６、Ｎ１４８Ｓ、Ｋ１５０Ｒ、Ｋ１５０Ｅ、Ｋ１５０Ｔ、Ｋ１５０Ｑ、Ｓ１５１Ｐ、Ｗ１５２Ｃ、Ｅ１５４Ｋ、ΔＥ１５６－Ｆ１５７、Ｆ１５７Ｌ、Ｆ１５７Ａ、Ｒ１５８Ｇ、Ｒ１９０Ｓ、ΔＩ２１０、Ｄ２１５Ｇ、Ａ２２２Ｖ、ΔＬ２４１－Ｓ２４３、ΔＬ２４２－Ｌ２４４、ΔＡ２４３－Ｌ２４４、ΔＲ２４６－Ｇ２５２、Ｒ２４６Ｉ、Ｙ２４８およびＬ２４９間の１１－アミノ酸残基挿入、Ｄ２５３Ｇ、Ｄ２５３Ｎ、Ｒ３４６Ｋ、Ｖ３６７Ｆ、Ｅ４０６Ｗ、Ｋ４１７Ｅ、Ｋ４１７Ｖ、Ｋ４１７Ｎ、Ｋ４１７Ｔ、Ｎ４３９Ｋ、Ｋ４４４Ａ、Ｋ４４４Ｒ、Ｋ４４４Ｎ、Ｋ４４４Ｑ、Ｖ４４５Ａ、Ｖ４４５Ｅ、Ｇ４４７Ａ、Ｎ４５０Ｄ、Ｌ４５２Ｒ、Ｌ４５２Ｑ、Ｙ４５３Ｆ、Ｌ４５５Ｆ、Ｎ４６０Ｉ、Ｓ４７７Ｇ、Ｓ４７７Ｎ、Ｓ４７７Ｒ、Ｔ４７８Ｉ、Ｔ４７８Ｋ、Ｖ４８３Ｉ、Ｅ４８４Ｋ、Ｅ４８４Ｑ、Ｇ４８５Ｒ、Ｆ４８６Ａ、Ｆ４８６Ｖ、Ｆ４８６Ｌ、Ｎ４８７Ａ、Ｆ４９０Ｓ、Ｑ４９３Ｅ、Ｑ４９３Ｋ、Ｓ４９４Ｐ、Ｎ５０１Ｙ、Ａ５７０Ｄ、Ｑ６１３Ｈ、Ｄ６１４Ｇ、Ｈ６５５Ｙ、Ｑ６７７Ｈ、Δ６７８－６７９、Δ６８１－６８２、Δ６８１－６８４、Δ６８２－６８５、Ｐ６８１Ｈ、Ｐ６８１Ｒ、Ｒ６８２Ｓ、Ｒ６８２Ａ、Ｒ６８２Ｑ、Ｒ６８３Ｓ、Ｒ６８３Ｇ、Ｒ６８３Ｑ、Ｒ６８５Ｇ、Ｒ６８５Ｑ、Ｉ６９２Ｖ、Ａ７０１Ｖ、Ｔ７１６Ｉ、Ｆ８１７Ｐ、Ｔ８５９Ｎ、Ｆ８８８Ｌ、Ａ８９２Ｐ、Ａ８９９Ｐ、Ａ９４２Ｐ、Ｄ９５０Ｎ、Ｓ９８２Ａ、Ｋ９８６Ｐ、Ｖ９８７Ｐ、Ｔ１０２７Ｉ、Ｑ１０７１Ｈ、Ｄ１１１８Ｈ、Ｖ１１７６Ｆ、Ｍ１２２９Ｉ、ΔＣ１２５３－Ｔ１２７３、ΔＣ１２５４－Ｔ１２７３、ΔＫ１２５５－Ｔ１２７３、Ｄ１２５７Ａ、Ｅ１２５８Ａ、Ｄ１２５９Ａ、Ｄ１２６０Ａ、Ｅ１２６２Ａ、Ｋ１２６９Ａ、Ｈ１２７１Ｋ、Ｔ１２７３Ａ、またはそれらの任意の組み合わせから選択され、アミノ酸位置は、配列番号２または配列番号４に対応する。
いくつかの態様では、１つ以上の変異は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸１～１３に対応するＮ末端シグナルペプチドにおける１つ以上の変異を含む。いくつかの態様では、Ｎ末端シグナルペプチドにおける１つ以上の突然変異はΔＭ１～Ｓ１３であり、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。
いくつかの態様では、１つ以上の変異は、全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＣ末端に１つ以上の変異を含む。いくつかの態様では、全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＣ末端における１つ以上の変異は、Ｃ末端小胞体（ＥＲ）保持ペプチドにおける１つ以上の変異を含み、それは配列番号２または配列番号４のアミノ酸１２５４～１２７３に対応する。いくつかの態様では、Ｃ末端ＥＲ保持ペプチドにおける１つ以上の変異は、Ｄ１２５７Ａ、Ｅ１２５８Ａ、Ｄ１２５９Ａ、Ｄ１２６０Ａ、Ｅ１２６２Ａ、Ｋ１２６９Ａ、Ｈ１２７１Ｋ、Ｔ１２７３Ａ、またはそれらの任意の組み合わせから選択され、アミノ酸位置は、配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、Ｃ末端ＥＲ保持ペプチドにおける１つ以上の変異は、Ｄ１２５７Ａ＋Ｅ１２５８Ａ＋Ｄ１２５９Ａ＋Ｄ１２６０Ａ＋Ｅ１２６２Ａ（すなわち、Ｄ／ＥからＡの変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、Ｃ末端ＥＲ保持ペプチドにおける１つ以上の変異は、ΔＣ１２５３－Ｔ１２７３、ΔＣ１２５４－Ｔ１２７３またはΔＫ１２５５－Ｔ１２７３である。
いくつかの態様では、１つ以上の変異はＫ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、ヘキサ－プロリンＳ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、６８１－ＰＲＲＡＲ／ＳＶＡ－６８８ Ｓ１／Ｓ２フーリン切断部位における１つ以上の変異を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、６８１－ＰＲＲＡＲ／ＳＶＡ－６８８ Ｓ１／Ｓ２フーリン切断部位における１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｓ＋Ｒ６８３Ｓ（すなわち、ＳＳＡＲ変異）、（ｂ）Δ６８１－６８４（すなわち、ΔＰＲＲＡ変異）、（ｃ）Δ６７８－６７９＋Δ６８１－６８２、（ｄ）Ｒ６８２Ａ＋Ｒ６８３Ｇ＋Ｒ６８５Ｇ（すなわち、６８２－ＡＧＡＧ－６８５変異）、（ｅ）Ｒ６８２Ｑ＋Ｒ６８３Ｑ＋Ｒ６８５Ｑ、（ｆ）Ｒ６８２Ｓ＋Ｒ６８５Ｇ、または（ｇ）Δ６８２－６８５（すなわち、ΔＲＲＡＲ変異）であり、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。
いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、ヘキサ－プロリンＳ変異）および（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ａ＋Ｒ６８３Ｇ＋Ｒ６８５Ｇ（すなわち、６８２－ＡＧＡＧ－６８５変異）および（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ａ＋Ｒ６８３Ｇ＋Ｒ６８５Ｇ（すなわち、６８２－ＡＧＡＧ－６８５変異）、（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）、および（ｃ）Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、ヘキサ－プロリンＳ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｑ＋Ｒ６８３Ｑ＋Ｒ６８５Ｑおよび（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含む。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｑ＋Ｒ６８３Ｑ＋Ｒ６８５Ｑ、（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）、および（ｃ）Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、ヘキサ－プロリンＳ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｓ＋Ｒ６８５Ｇおよび（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｓ＋Ｒ６８５Ｇ、（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）、および（ｃ）Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、ヘキサ－プロリンＳ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。
いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｍタンパク質またはその抗原性断片である。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１２０、少なくとも１４０、少なくとも１６０、少なくとも１８０、少なくとも２００、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸を含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８または配列番号２０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０の、少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１２０、少なくとも１４０、少なくとも１６０、少なくとも１８０、少なくとも２００、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸を含み、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０の連続アミノ酸は、Ａ２Ｓ、Ｆ２８Ｌ、Ｉ４８Ｖ、Ｖ７０Ｌ、Ｉ８２Ｔ、Ｍ８４Ｔ、またはそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の変異を含み、アミノ酸位置は配列番号８に対応する。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０のアミノ酸配列を含み、ここでポリペプチドは、Ａ２Ｓ、Ｆ２８Ｌ、Ｉ４８Ｖ、Ｖ７０Ｌ、Ｉ８２Ｔ、Ｍ８４Ｔ、またはそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の変異を含み、アミノ酸位置は配列番号８に対応する。
いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｅタンパク質またはその抗原性断片である。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２２、配列番号２４または配列番号２６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、または少なくとも７５個の連続アミノ酸を含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２２、配列番号２４または配列番号２６のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２２、配列番号２４または配列番号２６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎタンパク質またはその抗原性断片である。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２８の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、または少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、または少なくとも４００個の連続アミノ酸を含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、プロモーター１は、ＣＭＶプロモーター、ＲＳＶプロモーター、Ｍｏ－ＭｕＬＶ ＬＴＲプロモーター、哺乳動物ＥＦ１プロモーター、ＣＫ１８プロモーター、ＣＫ１９プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、マウスＵ６プロモーター、骨格α－アクチンプロモーター、β－アクチンプロモーター、マウスＰＧＫ１プロモーター、ヒトＰＧＫ１プロモーター、ＣＡＧプロモーター、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、哺乳動物ＥＦ１プロモーターはｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである。
いくつかの態様では、プロモーター２は、ＣＭＶプロモーター、ＲＳＶプロモーター、Ｍｏ－ＭｕＬＶ ＬＴＲプロモーター、哺乳動物ＥＦ１プロモーター、ＣＫ１８プロモーター、ＣＫ１９プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、マウスＵ６プロモーター、骨格α－アクチンプロモーター、β－アクチンプロモーター、マウスＰＧＫ１プロモーター、ヒトＰＧＫ１プロモーター、ＣＡＧプロモーター、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、哺乳動物ＥＦ１プロモーターはｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである。
いくつかの態様では、プロモーターＸは、ＣＭＶプロモーター、ＲＳＶプロモーター、Ｍｏ－ＭｕＬＶ ＬＴＲプロモーター、哺乳動物ＥＦ１プロモーター、ＣＫ１８プロモーター、ＣＫ１９プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、マウスＵ６プロモーター、骨格α－アクチンプロモーター、β－アクチンプロモーター、マウスＰＧＫ１プロモーター、ヒトＰＧＫ１プロモーター、ＣＡＧプロモーター、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、哺乳動物ＥＦ１プロモーターはｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである。
いくつかの態様では、プロモーターＹは、ＣＭＶプロモーター、ＲＳＶプロモーター、Ｍｏ－ＭｕＬＶ ＬＴＲプロモーター、哺乳動物ＥＦ１プロモーター、ＣＫ１８プロモーター、ＣＫ１９プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、マウスＵ６プロモーター、骨格α－アクチンプロモーター、β－アクチンプロモーター、マウスＰＧＫ１プロモーター、ヒトＰＧＫ１プロモーター、ＣＡＧプロモーター、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、哺乳動物ＥＦ１プロモーターはｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである。
いくつかの態様では、プロモーターＺは、ＣＭＶプロモーター、ＲＳＶプロモーター、Ｍｏ－ＭｕＬＶ ＬＴＲプロモーター、哺乳動物ＥＦ１プロモーター、ＣＫ１８プロモーター、ＣＫ１９プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、マウスＵ６プロモーター、骨格α－アクチンプロモーター、β－アクチンプロモーター、マウスＰＧＫ１プロモーター、ヒトＰＧＫ１プロモーター、ＣＡＧプロモーター、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、哺乳動物ＥＦ１プロモーターはｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである。
いくつかの態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号４１と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
本開示のポリヌクレオチドおよび組成物（例えば、医薬組成物、ワクチン、ベクターおよびＤＮＡプラスミドベクター）は、薬学的に有用な組成物を調製するための公知の方法に従って製剤化することができる。
製剤は、周知であり、当業者に容易に入手可能ないくつかの出典に記載されている。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｍａｒｔｉｎ ＥＷ［１９９５］ Ｅａｓｔｏｎ Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、第１９版。）には、本開示に関連して使用することができる製剤が記載されている。非経口投与に適した製剤には、例えば、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、および組成物を意図するレシピエントの血液と等張にする溶質を含有し得る水性滅菌注射液、ならびに懸濁化剤および増粘剤を含み得る水性および非水性滅菌懸濁液が含まれる。製剤は、単位用量または複数用量容器、例えば密封されたアンプルおよびバイアルで提供されてもよく、使用前に滅菌液体担体、例えば注射用水の状態のみを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保存されてもよい。即時注射溶液および懸濁液は、滅菌粉末、顆粒、錠剤などから調製することができる。詳細な上記の成分に加えて、本開示の製剤は、懸案の製剤の種類を考慮して、当技術分野での従来の他の薬剤を含むことができることを理解されたい。
本開示はまた、一定期間安全に保存し、使用前に再構成することができる凍結乾燥（またはフリーズドライ）組成物またはワクチンを提供する。いくつかの態様では、本開示の組成物、医薬組成物、またはワクチンは、例えば水性成分を実質的に含まない凍結乾燥製品である。いくつかの態様では、凍結乾燥組成物またはワクチンは、例えば投与前に、希釈剤中で再構成される。いくつかの態様では、凍結乾燥組成物またはワクチンは、水中で再構成される。
いくつかの態様は、（１）本明細書に開示される任意のポリヌクレオチドまたはＤＮＡプラスミドベクター、および（２）本明細書に開示される任意の送達成分を含む凍結乾燥組成物またはワクチンを対象とし、組成物は水性成分を実質的に含まない。いくつかの態様では、本開示の組成物またはワクチンは凍結乾燥される。
いくつかの態様では、凍結乾燥組成物またはワクチンは、０℃～５℃で少なくとも約１ヶ月（または３０日間）、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、または１２ヶ月間安定である。いくつかの態様では、凍結乾燥組成物またはワクチンは、０℃～５℃で少なくとも１年、少なくとも２年、少なくとも３年、少なくとも４年または少なくとも５年間安定である。いくつかの態様では、凍結乾燥組成物またはワクチンは、２５℃で少なくとも約７日、約１０日または約１４日間安定である。
いくつかの態様では、凍結乾燥組成物またはワクチンは、投与のために再構成組成物またはワクチン製剤に再構成される。いくつかの態様では、再構成組成物またはワクチンは、希釈剤（例えば、水）による凍結乾燥組成物またはワクチンの再構成後、０℃～５℃で少なくとも約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月または約６ヶ月間安定である。いくつかの態様では、再構成組成物またはワクチンは、希釈剤による凍結乾燥組成物の再構成後、２５℃で少なくとも約２日、約３日、約４日、約５日、約６日または約７日間安定である。いくつかの態様では、希釈剤は水である。
本開示の組成物は、他の成分、例えば薬学的に許容される担体および／またはアジュバントをさらに含むことができる。アジュバントは、代替的なポリヌクレオチド、プラスミド、もしくはベクターで発現されるか、または本開示の組成物と組み合わせてタンパク質として送達される他の遺伝子であり得る。アジュバントは、α－インターフェロン（ＩＦＮ－α）、β－インターフェロン（ＩＦＮ－β）、γ－インターフェロン、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＧＭ－ＣＳＦ、上皮成長因子（ＥＧＦ）、皮膚Ｔ細胞誘引ケモカイン（ＣＴＡＣＫ）、上皮胸腺発現ケモカイン（ＴＥＣＫ）、粘膜関連上皮ケモカイン（ＭＥＣ）、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＭＨＣ、ＣＤ８０、シグナル配列が欠失したＩＬ－１５を含み、場合によりＩｇＥ由来のシグナルペプチドを含むＣＤ８６からなる群より選択され得る。アジュバントは、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２８、ＣＴＡＣＫ、ＴＥＣＫ、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＧＭ－ＣＳＦ、上皮成長因子（ＥＧＦ）、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、またはそれらの組み合わせであり得る。有用なアジュバントであり得る他の遺伝子としては、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１ａ、ＭＩＰ－１ｐ、ＩＬ－８、ＲＡＮＴＥＳ、Ｌ－セレクチン、Ｐ－セレクチン、Ｅ－セレクチン、ＣＤ３４、ＧｌｙＣＡＭ－１、ＭａｄＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１、ＶＬＡ－１、Ｍａｃ－１、ｐ１５０．９５、ＰＥＣＡＭ、ＩＣＡＭ－１、ＩＣＡＭ－２、ＩＣＡＭ－３、ＣＤ２、ＬＦＡ－３、Ｍ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ、ＩＬ－４、ＩＬ－１８の変異型、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、血管成長因子、線維芽細胞成長因子、ＩＬ－７、神経成長因子、血管内皮成長因子、Ｆａｓ、ＴＮＦ受容体、Ｆｌｔ、Ａｐｏ－１、ｐ５５、ＷＳＬ－１、ＤＲ３、ＴＲＡＭＰ、Ａｐｏ－３、ＡＩＲ、ＬＡＲＤ、ＮＧＲＦ、ＤＲ４、ＤＲ５、ＫＩＬＬＥＲ、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２、ＴＲＩＣＫ２、ＤＲ６、カスパーゼＩＣＥ、Ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ、Ｓｐ－１、Ａｐ－１、Ａｐ－２、ｐ３８、ｐ６５Ｒｅｌ、ＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ、ＴＲＡＦ６、ＩｋＢ、不活性ＮＩＫ、ＳＡＰ Ｋ、ＳＡＰ－１、ＪＮＫ、インターフェロン応答遺伝子、ＮＦｋＢ、Ｂａｘ、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬｒｅｃ、ＴＲＡＩＬｒｅｃＤＲＣ５、ＴＲＡＩＬ－Ｒ３、ＴＲＡＩＬ－Ｒ４、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫリガンド、Ｏｘ４０、Ｏｘ４０リガンド、ＮＫＧ２Ｄ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｂ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｆ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、これらの機能性断片、およびこれらの組み合わせをコードするものが挙げられる。
いくつかの態様では、本開示の組成物は、使用される投与様式に従って製剤化することができる。例えば、注射用ワクチン医薬組成物は、無菌、パイロジェンフリーおよび粒子フリーであり得る。等張性製剤または溶液を使用することができる。等張性のための添加剤としては、塩化ナトリウム、デキストロース、マンニトール、ソルビトールおよびラクトースが挙げられ得る。ワクチンは血管収縮剤を含むことができる。等張性溶液は、リン酸緩衝生理食塩水を含むことができる。ワクチンは、ゼラチンおよびアルブミンを含む安定剤をさらに含むことができる。安定剤は、ＬＧＳまたはポリカチオンまたはポリアニオンを含めて、製剤を室温または周囲温度で長期間安定させることができる。
いくつかの態様では、本開示の組成物の治療有効かつ最適な投与量範囲は、当技術分野で公知の方法を使用して決定することができる。例えば、ボランティアの対象または試験動物に、予定された間隔で様々な用量を接種し、試験血液試料を、例えばウエスタンブロット分析によって、血液中に存在する抗体および／またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２中和活性のレベルについて評価することができる。そのような結果を使用して、哺乳動物、特にヒト対象の効果的な免疫化のための最適化された免疫化用量およびスケジュールを改良することができる。
本明細書に記載の任意のポリヌクレオチド、ベクター、ＤＮＡプラスミドベクター、またはワクチンを含む組換え宿主細胞も本明細書で提供される。宿主細胞には、原核細胞、酵母などの下等真核細胞、昆虫細胞などの他の真核細胞、および哺乳動物細胞などの高等真核細胞が含まれる。哺乳動物宿主細胞には、ＣＨＯ、ＶＥＲＯ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ ２９３、ＮＩＨ ３Ｔ３、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２ＯおよびＴ４７Ｄ、ＮＳ０（免疫グロブリン鎖を内因的に産生しないマウス骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１またはＣＯＳ）、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０、ＢＭＴ１０、ＨＢＫ、ＮＳＯ、ＨＴ１０８０およびＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの態様において、組換え宿主細胞は、当業者に容易に利用可能な技術によって、本明細書中に記載されるベクター、ポリヌクレオチドまたはワクチンを細胞に導入することによって調製される。これらには、限定されないが、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介トランスフェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染、リポフェクションおよび他の技術、例えばＳａｍｂｒｏｏｋ．ｅｔ ａｌ．（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ．２ｎｄ．ｅｄ．．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ．ＮＹ（１９８９）に見られるものが含まれる。
５．４．１ 送達成分
いくつかの態様では、開示される組成物、医薬組成物、ワクチン、ベクター、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクター、またはＤＮＡプラスミドベクターは、送達成分をさらに含む。いくつかの態様では、送達成分は、「ネイキッドＤＮＡ」または製剤化プラスミドＤＮＡに基づく非ウイルス送達成分またはシステムである。いくつかの態様では、送達成分またはシステムを使用してｍＲＮＡを送達することができる。いくつかの態様では、非ウイルス送達成分はカチオン性ポリマーである。いくつかの態様では、カチオン性ポリマーは、合成官能化ポリマー、脂質、リポポリマー、またはそれらの化学誘導体である。
「ネイキッドＤＮＡ」または製剤化プラスミドＤＮＡに基づく非ウイルス遺伝子送達成分またはシステムは、使用が簡単であり、特定の免疫応答を誘発しないため、ウイルスベクターよりも潜在的な利点を有する。カチオン性脂質、ペプチドおよびポリマーを含む、いくつかの合成遺伝子送達システムが、ネイキッドＤＮＡの限界を克服するために説明されている。同様に、非ウイルス送達システムをｍＲＮＡの送達に使用することができる。
ポリマーは、それらの優れた分子柔軟性が複雑な修飾および新規化学物質の組み込みを可能にするので、現在のシステムに対する実行可能な代替物として浮上している。カチオン性ポリマー、例えばポリ（Ｌ－リジン）（ＰＬＬ）およびポリ（Ｌ－アルギニン）（ＰＬＡ）、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）は、ＤＮＡを凝縮し、ＤＮＡ安定性および膜貫通送達を促進するそれらの能力のために遺伝子送達候補として広く研究されている。ＰＥＩは、ＤＮＡを分布の狭い、正に荷電した小さな球状複合体に効率的に凝縮し、インビトロおよびインビボで細胞をトランスフェクトすることができる。ＰＥＩは、ＰＥＩのトランスフェクション活性がポリマー／ＤＮＡ比の増加と共に増加するという点で、他のカチオン性ポリマーと類似する。ＰＬＬを上回るＰＥＩの明確な利点は、そのエンドソーム分解活性であり、それによりＰＥＩは高いトランスフェクション効率をもたらすことができる。市販の分岐ＰＥＩは、２５％の第一級アミン、５０％の第二級アミンおよび２５％の第三級アミンから構成される。ＰＥＩの全体的なプロトン化レベルはｐＨ７からｐＨ５に倍増し、これはエンドソーム内でＰＥＩが高度にプロトン化されることを意味する。ＰＥＩのプロトン化は、塩化物のエンドソーム膜を超える流入を誘発し、水が続いてエンドソーム内部の高イオン濃度に対抗し、最終的に浸透膨潤からのエンドソーム破壊および捕捉されたＤＮＡの放出をもたらす。その固有のエンドソーム分解活性のために、ＰＥＩは一般に、トランスフェクションのためのエンドソーム分解剤の添加を必要としない。これらの利点のために、ＰＥＩは、より安全でより効率的な送達システムを作り出すためのポリマー官能化戦略において増々利用されている。
いくつかの態様では、送達成分はカチオン性ポリマーである。いくつかの態様では、カチオン性ポリマーは、合成官能化ポリマー、脂質、リポポリマー、またはそれらの化学誘導体である。いくつかの態様では、カチオン性ポリマーは、ＤＮＡプラスミドベクターまたはマルチシストロン性ｍＲＮＡベクター中のホスファートに対するカチオン性ポリマー中のアミン窒素の比を、約０．１：１～約１００：１にするのに十分な量で存在する。いくつかの態様では、ＤＮＡプラスミドベクターまたはマルチシストロン性ｍＲＮＡベクター中のホスファートに対するカチオン性ポリマー中のアミン窒素の比は、約０．１：１～約１０：１である。いくつかの態様では、組成物、医薬組成物またはワクチンは、カチオン性ポリマーと複合体化した約０．５ｍｇ／ｍｌ～約５．０ｍｇ／ｍｌの核酸を含む。いくつかの態様では、送達成分はポロキサマーまたはその誘導体である。いくつかの態様では、ポロキサマーまたはその誘導体は、ポリヌクレオチド、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクターを含む溶液中、約０．１％～約５％または約０．５％～約５％で存在する。いくつかの態様では、送達成分はβ－アミノエステルである。いくつかの態様では、ポリマーは、ポリヌクレオチド、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクターを含む溶液中、約０．１％～約５％または約０．５％～約５％で存在する。いくつかの態様では、送達成分は、ポリイノシン－ポリシチジル酸である。いくつかの態様では、ポリイノシン－ポリシチジル酸は、ポリヌクレオチド、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクターを含む溶液中、約０．１％～約５％または約０．５％～約５％で存在する。
５．４．１．１ 生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマー
いくつかの態様では、送達成分は、生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマー、例えば米国特許第８，４４５，０１７号に開示されるいずれかの生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーである。いくつかの態様では、生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーは、直鎖ポリ（アルキレンイミン）（ＬＰＡＩ）と親水性リンカーとの生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーであり、前記ＬＰＡＩブロックは、前記親水性リンカーによって生分解性エステル、アミド、ジスルフィド、またはリン酸架橋結合で互いに架橋されている。いくつかの態様では、直鎖ポリ（アルキレンイミン）（ＬＰＡＩ）は、ポリエチレンイミン、ポリプロピレンイミン、アミノグリコシド－ポリアミン、ジデオキシ－ジアミノ－ベータ－シクロデキストリン、スペルミンおよびスペルミジンからなる群から選択されるメンバーである。いくつかの態様では、直鎖ポリ（アルキレンイミン）（ＬＰＡＩ）は、直鎖ポリ（エチレンイミン）（ＬＰＥＩ）である。
いくつかの態様では、架橋カチオン性マルチブロックコポリマーは、生分解性リンカーによって他の部分、例えば蛍光マーカー、脂質アンカーまたはそれらの誘導体、すなわちコレステロール、脂肪酸またはそれらの誘導体に連結される。いくつかの態様では、本開示で使用される直鎖ＰＥＩの分子量は、１，０００～２５，０００ダルトンの範囲内である。いくつかの態様では、直鎖ＰＥＩブロックは、好ましくは、生分解性ジスルフィドジアシド由来リンカー、すなわちジチオジプロピオネート誘導体を利用するジアミド結合を介して互いに連結される。いくつかの態様では、リンカー対ＰＥＩのモル比は１／１～５／１の範囲内であり、脂質アンカー対ＰＥＩのモル比は０／１～３／１である。いくつかの態様では、ポリマーは、好ましくは塩化物対イオンを有するポリアンモニウム塩として製剤化される。ＰＥＩの毒性はその分子量の増加と共に増加するので、分子量が低下したＰＥＩをポリマー中のブロックとして使用すると、哺乳動物細胞のトランスフェクションのための、および遺伝子治療のインビボ適用のための一般的な試薬として使用するための改善された遺伝子担体をもたらす。
いくつかの態様では、生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーは、低分子量直鎖ＰＥＩブロックおよびジチオ酸部分、すなわちジチオジプロピオン酸を生分解性リンカーとして含む。生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーは、生分解性ジスルフィド結合を介して低分子量直鎖ＰＥＩ単位を架橋することによって合成される。これらの生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーは、水溶性であり、単一ブロックポリマーよりもトランスフェクション性に優れている（６８～７０倍高い活性）。米国特許第８，４４５，０１７号を参照されたい。
いくつかの態様では、リンカー対ポリマーの分子量比は、ポリアミンポリマー骨格の希釈を最小限に抑える、０．２未満である。いくつかの態様では、リンカーとポリマーブロックとの間の化学結合は、アミド結合と比較してより容易に生分解され得るジスルフィド結合である。他の生分解性結合も本開示において使用することができ、それには、ホスホエステル、ヒドラゾン、ｃｉｓ－アゾチニル、ウレタンおよびポリ（エチル）が含まれる。いずれのリンカーも段階的に反応するので、異なるブロックまたは同じブロックの異なる領域のいずれかを連結することができる（ループ形成）。後者は、多重ループのため、溶解性が低い軽度に架橋した材料の形成に有利である。米国特許第８，４４５，０１７号に開示されているプロセスは、部分的かつ可逆的な窒素原子の遮断／防御をＬＰＥＩブロック中に組み込むことによってこの問題を解決する。そのようなＬＰＥＩ官能化はまた、ポリマー溶解度を増加させ、ＬＰＥＩブロックの連結を促進する。このプロセスはまた、カチオン性ポリマーへのペンダント補助リガンド（例えば、脂質または蛍光マーカー）の簡便な組み込みを可能にする。
いくつかの態様では、カチオン性ブロックコポリマーは、以下の式：（ＣＰ）ｘＬｙＹｚによって表され、式中ＣＰは、少なくとも１つの第二級アミン基を含有するカチオン性ポリマーを表し、前記ＣＰポリマーは１，０００～２５，０００ダルトンの範囲内の数平均分子量を有し；Ｙは、エステル、アミド、ジスルフィドまたはホスファート結合を含有する二官能性生分解性リンカーを表し；Ｌは、リガンドを表し；ｘは、１から２０の範囲の整数であり；ｙは、０から１００の整数であり；ｚは、０から４０の範囲の整数である。いくつかの態様では、カチオン性ポリマーは、直鎖ポリエチレンイミン（ＬＰＥＩ）を含む。いくつかの態様では、ＬＰＥＩは、以下の式：
，
を有するＢＤ１５－１２であり、ここでＰＥＩは約１５，０００Ｄａであり、ＰＥＩあたり平均１２個の架橋剤が存在する。いくつかの態様では、ＬＰＥＩは、以下の式：
，
を有するＯｍｎｉｆｅｃｔであり、ここでＰＥＩは約３，６００Ｄａであり、ＰＥＩあたり平均３つの架橋剤が存在し、ＰＥＩあたり平均１つのＰＥＧ－脂質が存在する。いくつかの態様では、二官能性生分解性リンカーは親水性であり、ジスルフィド結合を含む生分解性結合を含む。いくつかの態様では、二官能性生分解性リンカーは、ジチオジプロピオニルリンカーである。
いくつかの態様では、生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーは、ＬＰＥＩと、マルチブロックコポリマーを架橋するためのジチオジプロピオニルリンカーとを含み、ＬＰＥＩは１，０００～２５，０００ダルトンの平均分子量を有する。いくつかの態様では、生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーは、少なくとも１つのリガンドに共有結合している。
いくつかの態様では、ＬＰＥＩと本開示のリポポリマーとの生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーは、核酸などのポリアニオン性化合物に静電的に誘引されるアミン基を有する。いくつかの態様では、カチオン性コポリマーはＤＮＡを凝縮し、コンパクトな構造を形成する。さらに、生物活性材料の送達後のモノマー分解産物の低い毒性は、細胞傷害性が低下し、トランスフェクション効率が向上した遺伝子担体をもたらす。
いくつかの態様では、生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーは、直接またはスペーサー分子を介してトレーサー（例えば、蛍光マーカー）またはリガンドとコンジュゲートされる。いくつかの態様では、利用可能なアミノ基のごく一部のみが、リガンドに結合される。ポリマーにコンジュゲートされたリガンドは、ポリマー－核酸複合体が特定の標的細胞に結合し、そのような細胞に浸透するように導く標的化リガンドである。標的化リガンドは、核酸／薬物の移動を特定の好ましい細胞区画（ミトコンドリア、核等）に導くことを可能にする、細胞内標的化要素でもあり得る。ポリマーにコンジュゲートされた標的化リガンドは、ポリマー－核酸複合体が特定の標的細胞に結合し、そのような細胞（例えば、上皮細胞、内皮細胞、造血細胞など）に浸透するように導く。標的リガンドは、核酸／薬物の移動を特定の好ましい細胞区画（ミトコンドリア、核等）に導くことを可能にする、細胞内標的化要素でもあり得る。
いくつかの態様では、標的化リガンドは、ポリペプチド、葉酸および抗原である。いくつかの態様では、ポリペプチドは、糖タンパク質（例えば、トランスフェリンまたはアシアロオロソムコイド（ＡＳＯＲ））、抗体、抗体断片、細胞受容体、サイトカイン受容体、または成長因子受容体（例えば、上皮成長因子受容体）である。いくつかの態様では、抗原は、ウイルス抗原、細菌抗原、または寄生虫抗原である。いくつかの態様では、リガンドは、融合原性物質（ｆｕｓｏｇｅｎｉｃ ａｇｅｎｔ）（例えば、ポリミキシンＢおよびヘマグルチニンＨＡ２）、リソソモトロピック剤または核局在化シグナル（ＮＬＳ）（例えば、Ｔ抗原など）である。いくつかの態様では、リガンドは、アミノ基に結合した糖部分である。いくつかの態様では、糖部分は単糖類またはオリゴ糖類、例えば、ガラクトース、グルコース、フコース、フルクトース、ラクトース、スクロース、マンノース、セロビオース、ニトロース、トリオース、デキストロース、トレハロース、マルトース、ガラクトサミン、グルコサミン、ガラクツロン酸、グルクロン酸、およびグルコン酸である。
いくつかの態様では、生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーは、５００～２０，０００ダルトンの範囲の分子量のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）に共有結合している。いくつかの態様では、生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーは、オレイン酸、パルミチン酸およびステアリン酸からなる群から選択される脂肪アシル鎖に共有結合している。いくつかの態様では、生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーは、ポリアニオン性化合物に静電的に誘引される少なくとも１つのアミン基を含む。いくつかの態様では、ポリアニオン性化合物は核酸であり、生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーは、核酸を凝縮してコンパクトな構造を形成する。
いくつかの態様では、生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーは、以下の式：

を有し、式中、ＡおよびＢは、個々の直鎖ポリエチレンイミン鎖の分子量が５，０００～２５，０００ダルトンであるようなものであり；分子間架橋は、約５～１０％のアミンを連結し；生分解性架橋は、ジチオジプロピオニル（半分それぞれが３個の炭素原子で構成される）であり、１～１０個の炭素原子であり得る。いくつかの態様では、生分解性架橋カチオン性ポリマーは、ジチオプロピオニル結合と共有結合した１０，０００～１５，０００ダルトンの直鎖ＰＥＩを含む（例えば、米国特許第８，４４５，０１７号を参照されたい）。いくつかの態様では、生分解性架橋カチオン性ポリマーは、ジチオプロピオニル結合と共有結合した１０，０００～１５，０００ダルトンの直鎖ＰＥＩを含み（例えば、米国特許第８，４４５，０１７号を参照されたい）、さらに分子量５００～２０，０００ダルトンの範囲のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）にコンジュゲートされる。いくつかの態様では、生分解性架橋カチオン性ポリマーは、ジチオプロピオニル結合と共有結合した１０，０００～１５，０００ダルトンの直鎖ＰＥＩを含み（例えば、米国特許第８，４４５，０１７号を参照されたい）、さらに分子量５００～２０，０００ダルトンの範囲のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）にコンジュゲートされる。いくつかの態様では、生分解性架橋カチオン性ポリマーは、ジチオプロピオニル結合と共有結合した１５，０００～２０，０００ダルトンの直鎖ＰＥＩを含む（例えば、米国特許第８，４４５，０１７号を参照されたい）。いくつかの態様では、生分解性架橋カチオン性ポリマーは、ジチオプロピオニル結合と共有結合した１５，０００～２０，０００ダルトンの直鎖ＰＥＩを含み（例えば、米国特許第８，４４５，０１７号を参照されたい）、さらに分子量５００～２０，０００ダルトンの範囲のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）にコンジュゲートされる
いくつかの態様では、生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーは、生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマー中のアミン窒素の、ポリヌクレオチド、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクター中のホスファートに対する比を約０．０１：１～約５０：１（例えば、約０．０１：１～約４０：１；約０．０１：１～約３０：１；約０．０１：１～約２０：１；約０．０１：１～約１０：１、または約０．０１：１～約５：１）にするのに十分な量で存在する。いくつかの態様では、生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマー中のアミン窒素の、ポリヌクレオチド、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクター中のホスファートに対する比は、約０．１：１～約５０：１（例えば、約０．１：１～約４０：１；約０．１：１～約３０：１；約０．１：１～約２０：１；約０．１：１～約１０：１、または約０．１：１～約５：１）である。いくつかの態様では、ポリヌクレオチド、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクター中のホスファートに対する生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマー中のアミン窒素の比は、約１：１０～約１０：１である。
いくつかの態様では、組成物、医薬組成物またはワクチンは、生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーと複合体化した核酸を約０．１ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌ（例えば、約０．１ｍｇ／ｍｌ～約５ｍｇ／ｍｌ；約０．５ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌ；または約０．５ｍｇ／ｍｌ～約５ｍｇ／ｍｌ）含む。いくつかの態様では、組成物、医薬組成物またはワクチンは、生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーと複合体化した核酸を約１ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌ（例えば、約１ｍｇ／ｍｌ～約６ｍｇ／ｍｌ；約２ｍｇ／ｍｌ～約６ｍｇ／ｍｌ；約５ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌ；または約６ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌ）含む。
５．４．１．２ ＰＥＩ骨格を含むカチオン性リポポリマー
いくつかの態様では、送達成分は、米国特許第７，９６４，５７１号に開示されている、脂質またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）に共有結合したＰＥＩ骨格を含むカチオン性リポポリマーである。いくつかの態様では、ＰＥＩ骨格は、脂質およびＰＥＧに共有結合している。いくつかの態様では、脂質およびＰＥＧは、共有結合によってＰＥＩ骨格に直接結合している。いくつかの態様では、脂質は、ＰＥＧスペーサーを介してＰＥＩ骨格に結合している。いくつかの態様では、ＰＥＧは５０～２０，０００ダルトンの分子量を有する。いくつかの態様では、ＰＥＧ対ＰＥＩのモル比は、０．１：１～５００：１の範囲内である。いくつかの態様では、脂質対ＰＥＩのモル比は、０．１：１～５００：１の範囲内である。いくつかの態様では、脂質は、コレステロール、コレステロール誘導体、Ｃ１２～Ｃ１８脂肪酸、または脂肪酸誘導体である。ＰＥＧの添加は、生物学的環境における核酸／ポリマー複合体の安定性を高め、ＰＰＣ鎖へのリガンド（例えば、標的化リガンド）の組み込みを可能にして、送達の組織選択性を改善する。米国特許第７，９６４，５７１号を参照されたい。
いくつかの態様では、カチオン性リポポリマーは、コレステロールおよびＰＥＧに共有結合したＰＥＩ骨格を含むＰＥＧ：ＰＥＩ：コレステロール（ＰＰＣ）リポポリマーである。いくつかの態様では、ＰＥＩは、コレステロールおよびＰＥＧに共有結合しており、カチオン性リポポリマー中の平均ＰＥＧ：ＰＥＩ：コレステロールモル比は、ＰＥＧ １～５：ＰＥＩ １：コレステロール０．４～１．５の範囲内である。いくつかの態様では、ＰＥＧ－ＰＥＩ－コレステロール（ＰＰＣ）リポポリマーは、２．５：１：０．６の平均ＰＥＧ：ＰＥＩ：コレステロール比を有する。いくつかの態様では、ＰＥＩは、１００～５００，０００ダルトンの分子量を含む、直鎖または分岐構成を有する。
いくつかの態様では、カチオン性リポポリマーは、受容体リガンド、膜透過剤、エンドソーム分解剤、核局在化配列およびｐＨ感受性エンドソーム分解性ペプチドからなる群から選択されるペンダント官能性部分をさらに含む。
いくつかの態様では、カチオン性リポポリマーは、標的化リガンドをさらに含み、標的化リガンドは、ＰＥＩ骨格に直接結合しているか、またはＰＥＧリンカーを介して結合している。いくつかの態様では、標的化リガンドは、糖部分、ポリペプチド、葉酸および抗原からなる群から選択される。いくつかの態様では、糖部分は単糖である。いくつかの態様では、単糖はガラクトースである。いくつかの態様では、糖部分はオリゴ糖である。いくつかの態様では、ポリペプチドは、糖タンパク質、抗体、抗体断片、細胞受容体、サイトカイン受容体、または成長因子受容体である。いくつかの態様では、成長因子受容体は上皮成長因子受容体である。いくつかの態様では、糖タンパク質は、トランスフェリンまたはアシアロオロソムコイド（ＡＳＯＲ）である。いくつかの態様では、抗原は、ウイルス抗原、細菌抗原、または寄生虫抗原である。
いくつかの態様では、カチオン性リポポリマーは、カチオン性ポリマー中のアミン窒素の、ポリヌクレオチド、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクター中のホスファートに対する比を約０．０１：１～約５０：１（例えば、約０．０１：１～約４０：１；約０．０１：１～約３０：１；約０．０１：１～約２０：１；約０．０１：１～約１０：１、または約０．０１：１～約５：１）にするのに十分な量で存在する。いくつかの態様では、カチオン性リポポリマー中のアミン窒素の、ポリヌクレオチド、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクター中のホスファートに対する比は、約０．１：１～約５０：１（例えば、約０．１：１～約４０：１；約０．１：１～約３０：１；約０．１：１～約２０：１；約０．１：１～約１０：１、または約０．１：１～約５：１）である。いくつかの態様では、ポリヌクレオチド、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクター中のホスファートに対するカチオン性リポポリマー中のアミン窒素の比は、約１：１０～約１０：１である。
いくつかの態様では、組成物、医薬組成物またはワクチンは、カチオン性ポリマーと複合体化した核酸を約０．１ｍｇ／ｍｌ～約１０．０ｍｇ／ｍｌ（例えば、約０．１ｍｇ／ｍｌ～約５ｍｇ／ｍｌ；約０．５ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌ；または約０．５ｍｇ／ｍｌ～約５ｍｇ／ｍｌ）含む。いくつかの態様では、組成物、医薬組成物またはワクチンは、カチオン性ポリマーと複合体化した核酸を約１ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌ（例えば、約１ｍｇ／ｍｌ～約６ｍｇ／ｍｌ；約２ｍｇ／ｍｌ～約６ｍｇ／ｍｌ；約５ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌ；または約６ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌ）含む。
５．４．１．３ リポポリアミンおよびその誘導体
いくつかの態様では、組成物、医薬組成物またはワクチンの送達成分は、以下の式を有するリポポリアミンを含む：

（Ｓｔａｒａｍｉｎｅ）
いくつかの態様では、送達成分は、リポポリアミンと、リポポリアミンのアルキル化誘導体との混合物を含む。いくつかの態様では、リポポリアミンのアルキル化誘導体は、ポリオキシアルキレン、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミド、ポリビニルアルコール、デキストラン、ポリ（Ｌ－グルタミン酸）、スチレン無水マレイン酸、ポリ－Ｎ－（２－ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、またはポリジビニルエーテル無水マレイン酸である。いくつかの態様では、リポポリアミンのアルキル化誘導体は、以下の式を有し：

（メトキシポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）修飾Ｓｔａｒａｍｉｎｅ）、
式中、ｎは、それぞれ２～５個の炭素原子を含む１０～１００個の繰り返し単位である。いくつかの態様では、リポポリアミンのアルキル化誘導体は、以下の式を有し：
，
式中、ｎ＝１１である（Ｓｔａｒａｍｉｎｅ－ｍＰＥＧ５１５）。いくつかの態様では、リポポリアミンのアルキル化誘導体は、以下の式を有する：

（Ｓｔａｒａｍｉｎｅ－ｍＰＥＧ１１）。
いくつかの態様では、混合物中のリポポリアミンとリポポリアミンのアルキル化誘導体との比は、１：１～１０：１である。いくつかの態様では、リポポリアミンは、リポポリアミン中のアミン窒素の、ポリヌクレオチド、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクター中のホスファートに対する比を約０．０１：１～約５０：１（例えば、約０．０１：１～約４０：１；約０．０１：１～約３０：１；約０．０１：１～約２０：１；約０．０１：１～約１０：１、または約０．０１：１～約５：１）にするのに十分な量で存在する。いくつかの態様では、リポポリアミン中のアミン窒素の、ポリヌクレオチド、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクター中のホスファートに対する比は、約０．１：１～約５０：１（例えば、約０．１：１～約４０：１；約０．１：１～約３０：１；約０．１：１～約２０：１；約０．１：１～約１０：１、または約０．１：１～約５：１）である。いくつかの態様では、ポリヌクレオチド、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクター中のホスファートに対するリポポリアミン中のアミン窒素の比は、約１：１０～約１０：１である。
いくつかの態様では、組成物、医薬組成物またはワクチンの送達成分は、以下の式を有するリポポリアミンを含む：

（クロスアミン）。
いくつかの態様では、送達成分は、リポポリアミンと、リポポリアミンのアルキル化誘導体との混合物を含む。いくつかの態様では、リポポリアミンのアルキル化誘導体は、ポリオキシアルキレン、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミド、ポリビニルアルコール、デキストラン、ポリ（Ｌ－グルタミン酸）、スチレン無水マレイン酸、ポリ－Ｎ－（２－ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、またはポリジビニルエーテル無水マレイン酸である。いくつかの態様では、混合物中のリポポリアミンとリポポリアミンのアルキル化誘導体との比は、１：１～１０：１である。いくつかの態様では、リポポリアミンは、リポポリアミン中のアミン窒素の、ポリヌクレオチド、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクター中のホスファートに対する比を約０．０１：１～約５０：１（例えば、約０．０１：１～約４０：１；約０．０１：１～約３０：１；約０．０１：１～約２０：１；約０．０１：１～約１０：１、または約０．０１：１～約５：１）にするのに十分な量で存在する。いくつかの態様では、リポポリアミン中のアミン窒素の、ポリヌクレオチド、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクター中のホスファートに対する比は、約０．１：１～約５０：１（例えば、約０．１：１～約４０：１；約０．１：１～約３０：１；約０．１：１～約２０：１；約０．１：１～約１０：１、または約０．１：１～約５：１）である。いくつかの態様では、ポリヌクレオチド、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクター中のホスファートに対するリポポリアミン中のアミン窒素の比は、約１：１０～約１０：１である。
いくつかの態様では、組成物、医薬組成物またはワクチンは、リポポリアミンまたはその誘導体と複合体化した核酸を約０．１ｍｇ／ｍｌ～約１０．０ｍｇ／ｍｌ（例えば、約０．１ｍｇ／ｍｌ～約５ｍｇ／ｍｌ；約０．５ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌ；または約０．５ｍｇ／ｍｌ～約５ｍｇ／ｍｌ）含む。いくつかの態様では、組成物、医薬組成物またはワクチンは、リポポリアミンまたはその誘導体と複合体化した核酸を約１ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌ（例えば、約１ｍｇ／ｍｌ～約６ｍｇ／ｍｌ；約２ｍｇ／ｍｌ～約６ｍｇ／ｍｌ；約５ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌ；または約６ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌ）含む。
いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド、ベクター、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクターは、送達成分、例えばリポポリマーと複合体化されるか、またはそれに封入される。いくつかの態様では、ポリヌクレオチド、ベクター、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクターは、送達成分、例えばリポポリマーによって封入される。いくつかの態様では、ポリヌクレオチド、ベクター、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクター、またはＤＮＡプラスミドベクターの少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％が、送達成分、例えばリポポリマーによって封入される。いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド、ベクター、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクター、またはＤＮＡプラスミドベクターの約２０％～約１００％、約２０％～約８０％、約２０％～約６０％、または約４０％～約８０％が送達成分、例えばリポポリマーによって封入される。いくつかの態様では、送達成分は、ミセル構造を形成する。
５．４．１．４ ポロキサマーおよびその誘導体
いくつかの態様では、送達成分は、ポロキサマー骨格の少なくとも１つの末端に共有結合した金属キレーターを有するポロキサマー骨格を含む（例えばクラウンポロキサマー）。いくつかの態様では、金属キレーターは、ポロキサマー骨格の少なくとも２つの末端に結合している。いくつかの態様では、ポロキサマー骨格は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１０／０００４３１３号に開示されているポロキサマーである。いくつかの態様では、金属キレーターは、米国特許出願公開第２０１０／０００４３１３号に開示される金属キレーターである。いくつかの態様では、組成物、医薬組成物またはワクチンの送達成分は、以下の式：

を有するポリマー、
またはその薬学的に許容される塩を含み、式中、
Ａは、２から１４１の整数を表し、
Ｂは、１６から６７の整数を表し、
Ｃは、２から１４１の整数を表し、
ＲＡおよびＲＣは、同一であるかまたは異なり、Ｒ’－Ｌ－またはＨであり、ＲＡおよびＲＣの少なくとも一方は、Ｒ’－Ｌ－であり、
Ｌは、結合、－ＣＯ－、－ＣＨ２－Ｏ－、または－Ｏ－ＣＯ－であり、
Ｒ’は、金属キレーターである。
いくつかの態様では、金属キレーターは、ＲＮＮＨ－、ＲＮ ２Ｎ－、または（Ｒ”－（Ｎ（Ｒ”）－ＣＨ２ＣＨ２）ｘ）２－Ｎ－ＣＨ２ＣＯ－であり、各ｘは独立して０～２であり、Ｒ”はＨＯ２Ｃ－ＣＨ２－である。
いくつかの態様では、金属キレーターは、１２－クラウン－４、１５－クラウン－５、１８－クラウン－６、２０－クラウン－６、２１－クラウン－７および２４－クラウン－８からなる群から選択されるクラウンエーテルである。いくつかの態様では、クラウンエーテルは置換クラウンエーテルであり、置換クラウンエーテルは、以下を有する：
（１）独立してＮＨまたはＳで置換されたクラウンエーテル酸素の１つまたは複数、
（２）－Ｃ６Ｈ４－、－Ｃ１０Ｈ６－、または－Ｃ６Ｈ１０－で置換されたクラウンエーテル－ＣＨ２－ＣＨ２－部分の１つまたは複数、
（３）－Ｃ４Ｈ２Ｏ－または－Ｃ５Ｈ３Ｎ－で置換されたクラウンエーテル－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－部分の１つまたは複数、または
（４）それらの任意の組み合わせ。
いくつかの態様では、金属キレーターはクリプタンドであり、クリプタンドは、（１，２，２）クリプタンド、（２，２，２）クリプタンド、（２，２，３）クリプタンド、および（２，３，３）クリプタンドからなる群から選択される。いくつかの態様では、クリプタンドは置換クリプタンドであり、置換クリプタンドは、以下を有する：
（１）独立してＮＨまたはＳで置換されたクリプタンドエーテル酸素の１つ以上、
（２）－Ｃ６Ｈ４－、－Ｃ１０Ｈ６－、または－Ｃ６Ｈ１０－で置換されたクラウンエーテル－ＣＨ２－ＣＨ２－部分の１つ以上、
（３）－Ｃ４Ｈ２Ｏ－または－Ｃ５Ｈ３Ｎ－で置換されたクラウンエーテル－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－部分の１つ以上、または
（４）それらの任意の組み合わせ。
いくつかの態様では、送達成分はクラウンポロキサマー（アザ－クラウン結合ポロキサマー）であり、クラウンポロキサマーは、以下の式：

を有するポリマー
またはその薬学的に許容される塩を含み、式中、
ａは、約１０単位の整数を表し、
ｂは、約２１単位の整数を表し、
ポリマーの総分子量は、約２，０００Ｄａ～約２，２００Ｄａである。
いくつかの態様では、ポリマーは、ポリヌクレオチド、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクターまたはＤＮＡプラスミドベクターを含む溶液中、約０．１％～約５％または約０．５％～約５％で存在する。
いくつかの態様では、送達成分は塩化ベンザルコニウム（ＢＡＫ）をさらに含む。
いくつかの態様では、送達成分はＢＤ１５－１２を含む。いくつかの態様では、ヌクレオチド対ＢＤ１５－１２ポリマー（Ｎ：Ｐ）の比は５：１である。
いくつかの態様では、送達成分はＯｍｎｉｆｅｃｔを含む。いくつかの態様では、ヌクレオチド対Ｏｍｎｉｆｅｃｔポリマー（Ｎ：Ｐ）の比は１０：１である。
いくつかの態様では、送達成分は、クラウンポロキサマー（アザ－クラウン結合ポロキサマー）を含む。いくつかの態様では、ヌクレオチド対クラウンポロキサマーの比（Ｎ：Ｐ）は５：１である。いくつかの態様では、送達成分は、クラウンポロキサマーおよびＰＥＧ－ＰＥＩ－コレステロール（ＰＰＣ）リポポリマーを含む。いくつかの態様では、送達成分は、クラウンポロキサマーおよび塩化ベンザルコニウムを含む。いくつかの態様では、送達成分は、クラウンポロキサマーおよびＯｍｎｉｆｅｃｔを含む。いくつかの態様では、送達成分は、クラウンポロキサマーおよび直鎖ポリエチレンイミン（ＬＰＥＩ）を含む。いくつかの態様では、送達成分は、クラウンポロキサマーおよびＢＤ１５－１２を含む。
いくつかの態様では、送達成分は、ＳｔａｒａｍｉｎｅおよびｍＰＥＧ修飾Ｓｔａｒａｍｉｎｅを含む。いくつかの態様では、ｍＰＥＧ修飾Ｓｔａｒａｍｉｎｅは、Ｓｔａｒａｍｉｎｅ－ｍＰＥＧ５１５である。いくつかの態様では、ｍＰＥＧ修飾Ｓｔａｒａｍｉｎｅは、Ｓｔａｒａｍｉｎｅ－ｍＰＥＧ１１である。いくつかの態様では、Ｓｔａｒａｍｉｎｅ対ｍＰＥＧ修飾Ｓｔａｒａｍｉｎｅの比は１０：１である。いくつかの態様では、ヌクレオチド対ポリマー比（Ｎ：Ｐ）は５：１である。いくつかの態様では、送達成分は、Ｓｔａｒａｍｉｎｅ、ｍＰＥＧ修飾Ｓｔａｒａｍｉｎｅおよびクラウンポロキサマーを含む。いくつかの態様では、送達成分は、Ｓｔａｒａｍｉｎｅ、Ｓｔａｒａｍｉｎｅ－ｍＰＥＧ５１５およびクラウンポロキサマーを含む。いくつかの態様では、送達成分は、Ｓｔａｒａｍｉｎｅ、Ｓｔａｒａｍｉｎｅ－ｍＰＥＧ１１およびクラウンポロキサマーを含む。
５．５ キットおよび容器
本開示はまた、本明細書に記載および例示される任意のポリヌクレオチド、ベクター、ワクチン、組成物または医薬組成物を含む容器を特徴とする。いくつかの態様では、容器はガラスバイアルである。
本開示はまた、本明細書に記載および例示される任意のポリヌクレオチド、ベクター、ワクチン、組成物または医薬組成物を含むキットを特徴とする。キットは、とりわけ、診断、基礎研究、または治療方法で使用するためのポリヌクレオチド、ベクター、ワクチン、組成物、医薬組成物、および他の薬剤を供給するために使用することができる。いくつかの態様において、キットは、本明細書中に記載または例示されるポリヌクレオチド、ベクター、ワクチン、組成物または医薬組成物のいずれか１つ以上、および対象において免疫応答を誘導するための方法において１つ以上のポリヌクレオチド、ベクター、ワクチン、組成物または医薬組成物を使用するための説明書を含む。いくつかの態様において、キットは、本明細書中に記載または例示されるポリヌクレオチド、ベクター、ワクチン、組成物または医薬組成物のいずれか１つ以上、および対象におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を予防、その発生を低減、軽減または治療するための方法において１つ以上のポリヌクレオチド、ベクター、ワクチン、組成物または医薬組成物を使用するための説明書を含む。
５．６ 使用および方法
本開示はまた、対象において免疫応答を誘導することを特徴とし、方法は、有効量の本明細書に記載または例示される任意のポリヌクレオチド、ベクター、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクター、ＤＮＡプラスミドベクター、組成物または医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの態様では、免疫応答は、本明細書に開示される１つ以上の病原体抗原、例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス抗原に対するものである。
いくつかの態様では、免疫応答は、１つ以上のウイルス抗原、１つ以上の細菌抗原、または１つ以上の寄生虫抗原を含む１つ以上の抗原に対する。
いくつかの態様では、免疫応答は、ペスト菌抗原または結核菌抗原から選択される細菌抗原に対する。いくつかの態様では、ペスト菌抗原は、ペスト菌莢膜抗原である。いくつかの態様では、ペスト菌莢膜抗原は、Ｆ１－Ａｇまたは病原性抗原（Ｖ－Ａｇ）である。いくつかの態様では、結核菌抗原は、Ａｐａ抗原、ＨＰ６５抗原またはｒＡｇ８５Ａ抗原である。
いくつかの態様では、免疫応答は、エンテロウイルス抗原、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）抗原、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）抗原、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）抗原、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）抗原、デングウイルス抗原、エボラウイルス抗原、ジカウイルス、チクングニアウイルス抗原、麻疹ウイルス抗原、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）抗原、またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ抗原から選択されるウイルス抗原に対する。いくつかの態様では、エンテロウイルス抗原は、エンテロウイルス７１（Ｅ７１）抗原またはコクサッキーウイルス（Ｃｏｘ）タンパク質抗原である。いくつかの態様では、Ｅ７１抗原は、Ｅ７１－ＶＰ１抗原またはグルタチオンＳ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）タグ付きＥ７１－ＶＰ１抗原である。いくつかの態様では、Ｃｏｘタンパク質抗原は、ＧＳＴタグ付きＣｏｘタンパク質抗原である。いくつかの態様では、ＨＳＶ抗原は、ＨＳＶ－１エンベロープ抗原、ＨＳＶ－２エンベロープ抗原、またはＨＳＶ－２表面糖タンパク質抗原である。いくつかの態様では、ＨＳＶ－２表面糖タンパク質抗原は、ｇＢ２抗原、ｇＣ２抗原、ｇＤ２抗原、またはｇＥ２抗原ある。いくつかの態様では、ＨＩＶ抗原は、Ｅｎｖ抗原、Ｇａｇ抗原、Ｎｅｆ抗原、またはＰｏｌ抗原である。いくつかの態様では、ＨＰＶ抗原は、マイナーカプシドタンパク質Ｌ２抗原である。いくつかの態様では、マイナーカプシドタンパク質Ｌ２抗原は、マイナーカプシドタンパク質Ｌ２の１つ以上のエピトープドメイン（アミノ酸１０～３６および／またはアミノ酸６５～８９）を含む。いくつかの態様では、ＨＣＶ抗原は、非構造３（ＮＳ３）抗原である。いくつかの態様では、ＲＳＶ抗原は、Ｆ抗原またはＧ抗原である。いくつかの態様では、デングウイルス抗原は、Ｅタンパク質抗原、Ｅタンパク質ドメインＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ）抗原、非構造タンパク質１（ＮＳ１）抗原、またはＤＥＮ－８０Ｅ抗原である。いくつかの態様では、エボラウイルス抗原は、スパイク糖タンパク質（ＧＢ）抗原、ＶＰ２４抗原、ＶＰ４０抗原、核タンパク質（ＮＰ）抗原、ＶＰ３０抗原、またはＶＰ３５抗原である。いくつかの態様では、ジカウイルス抗原は、エンベロープドメインＩＩＩ抗原またはＣＫＤ抗原である。いくつかの態様では、チクングニアウイルス抗原は、Ｅ１糖タンパク質サブユニット抗原、ＭＨＣクラスＩエピトープＰＰＦＧＡＧＲＰＧＱＦＧＤＩ（配列番号３４）、ＭＨＣクラスＩエピトープＴＡＥＣＫＤＫＮＬ（配列番号３５）、またはＭＨＣクラスＩＩエピトープＶＲＹＫＣＮＣＧＧ（配列番号３６）である。いくつかの態様では、麻疹ウイルス抗原は、赤血球凝集素タンパク質ＭＶ－Ｈ抗原、または融合タンパク質ＭＶ－Ｆ抗原である。いくつかの態様では、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ抗原は、スパイク（Ｓ）タンパク質抗原、Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン由来の抗原、またはＳタンパク質の膜融合ドメイン由来の抗原である。いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ抗原は、スパイク（Ｓ）タンパク質抗原、Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン由来の抗原、Ｓタンパク質の膜融合ドメイン由来の抗原、エンベロープ（Ｅ）タンパク質抗原、またはＭタンパク質抗原である。
いくつかの態様では、免疫応答は、任意のインフルエンザウイルス型またはサブタイプに由来する１つ以上のインフルエンザウイルス抗原に対する。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルス赤血球凝集素（ＨＡ）抗原、インフルエンザウイルスノイラミニダーゼ（ＮＡ）抗原、インフルエンザウイルスマトリックス－２（Ｍ２）タンパク質抗原、それらの抗原性断片、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＡ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、またはそれらの任意の組み合わせに由来する。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＡ型に由来する。いくつかの態様では、インフルエンザウイルスＡ型に由来する１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、（ａ）Ｈ１～Ｈ１８またはそれらの任意の組み合わせから選択されるＨＡサブタイプ、および（ｂ）Ｎ１～Ｎ１１またはそれらの任意の組み合わせから選択されるＮＡサブタイプを有する。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ１Ｎ１；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ２Ｎ２；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ３Ｎ２；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ５Ｎ１；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ７Ｎ７；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ７Ｎ９；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ９Ｎ２；またはそれらの任意の組み合わせに由来する。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ１Ｎ１；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ３Ｎ２；またはそれらの組み合わせに由来する。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＢ型に由来する。いくつかの態様では、免疫応答は、本明細書に開示される１つ以上のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原またはその抗原性断片、および本明細書に開示される１つ以上のインフルエンザウイルス抗原またはその抗原性断片に対する。いくつかの態様では、免疫応答は、寄生虫抗原に対するものであり、寄生虫抗原は原虫抗原である。いくつかの態様では、免疫応答は、トキソプラズマ抗原または熱帯熱マラリア原虫抗原からなる群から選択される寄生虫抗原に対するものである。いくつかの態様では、トキソプラズマ抗原は、抗原ＭＩＣ８である。いくつかの態様では、熱帯熱マラリア原虫抗原は、ＳＥＲＡ５ポリペプチド抗原、またはサーカムスポロゾイト（ｃｉｒｃｕｍｓｐｏｒｏｚｉｔｅ）タンパク質抗原である。いくつかの態様では、免疫応答は、寄生虫抗原に対するものであり、寄生虫抗原は、寄生虫または病原性真菌抗原である。いくつかの態様では、寄生虫または病原性真菌抗原は、カンジダ種抗原（例えば、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）抗原、カンジダ・グラブラタ（Ｃａｎｄｉｄａ ｇｌａｂｒａｔａ）抗原、カンジダ・パラプシロシス（Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）抗原、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）抗原、カンジダ・ルシタニア（Ｃａｎｄｉｄａ ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ）抗原、カンジダ・クルセイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｅｉ）抗原）、ニューモシスチス種抗原、マラセジア種抗原（例えば、マラセジア・ファーファー抗原）、アスペルギルス・フミガーツス抗原、クリプトコッカス種抗原（例えば、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）抗原、クリプトコッカス・ガティイ（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇａｔｔｉｉ）抗原）、ヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）抗原、ブラストマイセス・デルマチティディシス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）抗原、パラコクシジオイデス種抗原（例えば、パラコクシディオイデス・ブラシリエンシス（Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）抗原、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｌｕｔｚｉｉ抗原）、コクシジオイデス種抗原（例えば、コクシジオイデス・イミティス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）抗原、コクシジオイデス・ポサダシイ（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｐｏｓａｄａｓｉｉ）抗原）、ペニシリウム・マルネフェイ抗原、スポロトリクス・シェンキイ抗原、トリコスポロン・アサヒ抗原、フザリウム種抗原（例えば、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｕｍ抗原、フザリウム・オキシスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）抗原）、アカツブタケ属抗原、シュードアレシェリア・ボイジイ（Ｐｓｅｕｄｏａｌｌｅｓｃｈｅｒｉａ ｂｏｙｄｉｉ）抗原、クラドフィアロフォラ・バンチアナム（Ｃｌａｄｏｐｈｉａｌｐｈｏｒａ ｂａｎｔｉａｎｕｍ）抗原、Ｒａｍｉｃｈｌｏｒｉｄｉｕｍ ｓｐｐ抗原、ダクチィラリア・ガルロパバ（Ｄａｃｔｙｌａｒｉａ ｇａｌｌｏｐａｖａ）抗原、エクソフィアラ属抗原（例えば、エクソフィアラ ジャンセルメイ（Ｅｘｏｐｈｉａｌａ ｊｅａｎｓｅｌｍｅｉ）抗原、エクソフィアラ・デルマチチディス（Ｅｘｏｐｈｉａｌａ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）抗原）、カーブラリア属抗原、ビポラリス属抗原、アルタナリア属抗原、Ｌａｃａｚｉａ ｌｏｂｏｉ抗原、Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ ｓｐｐ．抗原（例えば、Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ ｃｏｒｏｎａｔｕｓ抗原、Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ ｉｎｃｏｎｇｒｕｕｓ抗原）、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
対象におけるウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）、細菌または寄生虫感染症を予防、発生を低減、軽減または治療する方法も本明細書で提供される。
本開示はまた、対象におけるウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）、細菌または寄生虫感染症を予防、発生の低減、軽減または治療する方法を特徴とし、方法は、有効量の本明細書に記載または例示される任意のポリヌクレオチド、ベクター、マルチシストロン性ｍＲＮＡベクター、ＤＮＡプラスミドベクター、組成物または医薬組成物を対象に投与することを含む。
いくつかの態様では、本開示の方法は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第４のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む組成物の投与に関する。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第３のヌクレオチド配列の３’側に位置する第４のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結されている、第４のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３および第４のヌクレオチド配列は、図１に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本開示の方法は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ Ｉをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；第４のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列、および第５のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第５のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む組成物の投与に関する。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ Ｉをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列の３’側位置する第４のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列；および第４のヌクレオチド配列の３’側位置する第５のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第５のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３、第４および第５のヌクレオチド配列は、図２に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本開示の方法は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ ＩＩをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；第４のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列、および第５のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第５のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む組成物の投与に関する。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ ＩＩをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列の３’側に位置する第４のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列、および第４のヌクレオチド配列の３’側に位置する第５のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第５のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３、第４および第５のヌクレオチド配列は、図３に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本開示の方法は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－２をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；および第３のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む組成物の投与に関する。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－２をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；および第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２および第３のヌクレオチド配列は、図４に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本開示の方法は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－２をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ Ｉをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第４のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む組成物の投与に関する。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－２をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ Ｉをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第３のヌクレオチド配列の３’側に位置する第４のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３および第４のヌクレオチド配列は、図５に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本開示の方法は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－２をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ ＩＩをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第４のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む組成物の投与に関する。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－２をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ ＩＩをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第３のヌクレオチド配列の３’側に位置する第４のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３および第４のヌクレオチド配列は、図６に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本開示の方法は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－２をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ３をコードし、プロモーターＸに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ４をコードし、プロモーターＹに作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；第４のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列、および第５のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第５のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む組成物の投与に関する。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－２をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ３をコードし、プロモーターＸに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ４をコードし、プロモーターＹに作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列の３’側に位置する第４のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列、および第４のヌクレオチド配列の３’側に位置する第５のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第５のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３、第４および第５のヌクレオチド配列は、図７に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本開示の方法は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；および第３のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む組成物の投与に関する。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；および第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２および第３のヌクレオチド配列は、図８に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本開示の方法は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ Ｉをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第４のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む組成物の投与に関する。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ Ｉをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第３のヌクレオチド配列の３’側に位置する第４のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３および第４のヌクレオチド配列は、図９に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本開示の方法は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ ＩＩをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第４のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む組成物の投与に関する。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、ＭＨＣ ＩＩをコードし、プロモーターＺに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第３のヌクレオチド配列の３’側に位置する第４のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３および第４のヌクレオチド配列は、図１０に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本開示の方法は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ３をコードし、プロモーターＸに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ４をコードし、プロモーターＹに作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；第４のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列、および第５のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第５のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む組成物の投与に関する。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１５をコードし、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ３をコードし、プロモーターＸに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ４をコードし、プロモーターＹに作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列の３’側に位置する第４のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列、および第４のヌクレオチド配列の３’側に位置する第５のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第５のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３、第４および第５のヌクレオチド配列は、図１１に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本開示の方法は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ３をコードし、プロモーターＸに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ４をコードし、プロモーターＹに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第４のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む組成物の投与に関する。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、５’第１のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ３をコードし、プロモーターＸに作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第１のヌクレオチド配列の３’側に位置する第２のヌクレオチド配列であって、ＣＣＬ４をコードし、プロモーターＹに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列の３’側に位置する第３のヌクレオチド配列であって、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター１に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第３のヌクレオチド配列の３’側に位置する第４のヌクレオチド配列であって、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードし、プロモーター２に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３および第４のヌクレオチド配列は、図１２に示されるように構成される。
いくつかの態様において、方法は、送達成分と、「Ｃｏｖｉｄ－１９スパイク遺伝子」（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードする第１のヌクレオチド配列）および「Ｃｏｖｉｄ－１９遺伝子－２」（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質をコードする第２のヌクレオチド配列）を、本明細書中に開示される病原体抗原またはその抗原性断片の任意の組み合わせをコードするヌクレオチド配列で置き換えるように修飾され得る、図１～図１２のいずれかに例示されるベクター構築物で示されるように構成されたポリヌクレオチドとを含む医薬組成物またはワクチンを投与することを含み得る。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、ウイルス、細菌または寄生虫に対する抗原をコードする。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、１つ以上のウイルス抗原、１つ以上の細菌抗原、または１つ以上の寄生虫抗原を含む１つ以上の抗原をコードする。
いくつかの態様では、本開示の方法は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＳ１サブユニット）をコードし、第１のプロモーター（例えば、ｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーター）に作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードし、第２のプロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター）に作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；および第３のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードし、第２のプロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター）に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む組成物の投与に関する。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２および第３のヌクレオチド配列は、図１４Ｃ（ｐＶａｃ ２）に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本開示の方法は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＳ１サブユニット）をコードし、第１のプロモーター（例えば、ｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーター）に作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、第２の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｍタンパク質）をコードし、ＩＲＥＳ配列を介して第１のプロモーターに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であってＩＬ－１２ ｐ３５をコードし、第２のプロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター）に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第４のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ３４０をコードし、第２のプロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター）に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む組成物の投与に関する。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３および第４のヌクレオチド配列は、図１４Ｄ（ｐＶａｃ ３）に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本開示の方法は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｄ６１４Ｇ Ｓタンパク質）をコードし、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ－１αプロモーター）に作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードし、第２のプロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター）に作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；および第３のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードし、第２のプロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター）に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む組成物の投与に関する。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２および第３のヌクレオチド配列は、図１４Ｆ（ｐＶａｃ ５）に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本開示の方法は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｄ６１４Ｇ Ｓタンパク質）をコードし、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ－１αプロモーター）に作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；第２のヌクレオチド配列であって、第２の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｍタンパク質）をコードし、ＩＲＥＳ配列を介して第１のプロモーターに作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列；第３のヌクレオチド配列であってＩＬ－１２ ｐ３５をコードし、第２のプロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター）に作動可能に連結された第３のヌクレオチド配列；および第４のヌクレオチド配列であって、ＩＬ－１２ ｐ３４０をコードし、第２のプロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター）に作動可能に連結された第４のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む組成物の投与に関する。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１、第２、第３および第４のヌクレオチド配列は、図１４Ｇ（ｐＶａｃ ６）に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本開示の方法は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＳ１サブユニットまたはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｄ６１４Ｇ Ｓタンパク質）をコードし、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ－１αプロモーター）に作動可能に連結されている第１のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む組成物の投与に関する。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１のヌクレオチド配列は、図１４Ｂ（ｐＶａｃ １）または図１４Ｅ（ｐＶａｃ ４）に示されるように構成される。
いくつかの態様では、本開示の方法は、送達成分と、第１のヌクレオチド配列であって、第１の病原体タンパク質（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｄ６１４Ｇ Ｓタンパク質）をコードし、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ－１αプロモーター）に作動可能に連結された第１のヌクレオチド配列；および第２のヌクレオチド配列であって、第２の病原体（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｍタンパク質）をコードし、第２のプロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター）に作動可能に連結された第２のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとを含む組成物の投与に関する。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドの第１のヌクレオチド配列は、図１４Ｈ（ｐＶａｃ ７）に示されるように構成される。
いくつかの態様では、方法は、送達成分と、図１４Ａ～図１４Ｈのいずれかに例示されるベクター構築物で示されるように構成されたポリヌクレオチドとを含む医薬組成物またはワクチンを投与することを含み得、それらは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＳ１サブユニットまたはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｄ６１４Ｇ Ｓタンパク質（第１の病原体タンパク質をコードする第１のヌクレオチド配列）および／またはＳＡＳＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｍタンパク質（第２の病原体タンパク質をコードする第２のヌクレオチド配列）を、本明細書に開示される病原体抗原またはその抗原性断片の任意の組み合わせをコードするヌクレオチド配列で置き換えるように修飾することができる。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、ウイルス、細菌または寄生虫に対する抗原をコードする。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、１つ以上のウイルス抗原、１つ以上の細菌抗原、または１つ以上の寄生虫抗原を含む１つ以上の抗原をコードする。
いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、ペスト菌抗原、結核菌抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上の細菌抗原をコードする。いくつかの態様では、ペスト菌抗原は、ペスト菌莢膜抗原である。いくつかの態様では、ペスト菌莢膜抗原は、Ｆ１－Ａｇまたは病原性抗原（Ｖ－Ａｇ）である。いくつかの態様では、結核菌抗原は、Ａｐａ抗原、ＨＰ６５抗原、ｒＡｇ８５Ａ抗原、それらの任意の抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。
いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、エンテロウイルス抗原、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）抗原、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）抗原、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）抗原、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）抗原、デングウイルス抗原、エボラウイルス抗原、ジカウイルス、チクングニアウイルス抗原、麻疹ウイルス抗原、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上のウイルス抗原をコードする。いくつかの態様では、エンテロウイルス抗原は、エンテロウイルス７１（Ｅ７１）抗原、コクサッキーウイルス（Ｃｏｘ）タンパク質抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、Ｅ７１抗原は、Ｅ７１－ＶＰ１抗原、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）タグ付きＥ７１－ＶＰ１抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、Ｃｏｘタンパク質抗原は、ＧＳＴタグ付きＣｏｘタンパク質抗原である。いくつかの態様では、ＨＳＶ抗原は、ＨＳＶ－１エンベロープ抗原、ＨＳＶ－２エンベロープ抗原、ＨＳＶ－２表面糖タンパク質抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ＨＳＶ－２表面糖タンパク質抗原は、ｇＢ２抗原、ｇＣ２抗原、ｇＤ２抗原、ｇＥ２抗原、またはそれらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ＨＩＶ抗原は、Ｅｎｖ抗原、Ｇａｇ抗原、Ｎｅｆ抗原、Ｐｏｌ抗原、それらの抗原性断片、および、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ＨＰＶ抗原は、マイナーカプシドタンパク質Ｌ２抗原である。いくつかの態様では、マイナーカプシドタンパク質Ｌ２抗原は、マイナーカプシドタンパク質Ｌ２の１つ以上のエピトープドメイン（アミノ酸１０～３６および／またはアミノ酸６５～８９）を含む。いくつかの態様では、ＨＣＶ抗原は、非構造３（ＮＳ３）抗原である。いくつかの態様では、ＲＳＶ抗原は、Ｆ抗原、Ｇ抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、デングウイルス抗原は、Ｅタンパク質抗原、Ｅタンパク質ドメインＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ）抗原、非構造タンパク質１（ＮＳ１）抗原、ＤＥＮ－８０Ｅ抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、エボラウイルス抗原は、スパイク糖タンパク質（ＧＢ）抗原、ＶＰ２４抗原、ＶＰ４０抗原、核タンパク質（ＮＰ）抗原、ＶＰ３０抗原、ＶＰ３５抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ジカウイルス抗原は、エンベロープドメインＩＩＩ抗原、ＣＫＤ抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、チクングニアウイルス抗原は、Ｅ１糖タンパク質サブユニット抗原、ＭＨＣクラスＩエピトープＰＰＦＧＡＧＲＰＧＱＦＧＤＩ（配列番号３４）、ＭＨＣクラスＩエピトープＴＡＥＣＫＤＫＮＬ（配列番号３５）、ＭＨＣクラスＩＩエピトープＶＲＹＫＣＮＣＧＧ（配列番号３６）、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、麻疹ウイルス抗原は、赤血球凝集素タンパク質ＭＶ－Ｈ抗原、融合タンパク質ＭＶ－Ｆ抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ抗原は、スパイク（Ｓ）タンパク質抗原、Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン由来の抗原、Ｓタンパク質の膜融合ドメイン由来の抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ抗原は、スパイク（Ｓ）タンパク質抗原、Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン由来の抗原、Ｓタンパク質の膜融合ドメイン由来の抗原、エンベロープ（Ｅ）タンパク質抗原、Ｍタンパク質抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。
いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、任意のインフルエンザウイルス型またはサブタイプに由来する１つ以上のインフルエンザウイルス抗原をコードする。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルス赤血球凝集素（ＨＡ）抗原、インフルエンザウイルスノイラミニダーゼ（ＮＡ）抗原、インフルエンザウイルスマトリックス－２（Ｍ２）タンパク質抗原、それらの抗原性断片、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＡ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、またはそれらの任意の組み合わせに由来する。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＡ型に由来する。いくつかの態様では、インフルエンザウイルスＡ型に由来する１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、（ａ）Ｈ１～Ｈ１８またはそれらの任意の組み合わせから選択されるＨＡサブタイプ、および（ｂ）Ｎ１～Ｎ１１またはそれらの任意の組み合わせから選択されるＮＡサブタイプを有する。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ１Ｎ１；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ２Ｎ２；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ３Ｎ２；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ５Ｎ１；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ７Ｎ７；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ７Ｎ９；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ９Ｎ２；またはそれらの任意の組み合わせに由来する。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ１Ｎ１；インフルエンザウイルスＡ型、サブタイプＨ３Ｎ２；またはそれらの組み合わせに由来する。いくつかの態様では、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルスＢ型に由来する。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、本明細書に開示される１つ以上のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原またはその抗原性断片、および本明細書に開示される１つ以上のインフルエンザウイルス抗原またはその抗原性断片をコードする。
いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、１つ以上の寄生虫抗原をコードし、１つ以上の寄生虫抗原は、１つ以上の原虫抗原を含む。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、トキソプラズマ抗原、熱帯熱マラリア原虫抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の寄生虫抗原をコードする。いくつかの態様では、トキソプラズマ抗原は、抗原ＭＩＣ８である。いくつかの態様では、熱帯熱マラリア原虫抗原は、ＳＥＲＡ５ポリペプチド抗原、サーカムスポロゾイト（ｃｉｒｃｕｍｓｐｏｒｏｚｉｔｅ）タンパク質抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、１つ以上の寄生虫抗原をコードし、１つ以上の寄生虫抗原は、１つ以上の寄生虫または病原性真菌抗原を含む。いくつかの態様では、１つ以上の寄生虫または病原性真菌抗原は、カンジダ種抗原（例えば、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）抗原、カンジダ・グラブラタ（Ｃａｎｄｉｄａ ｇｌａｂｒａｔａ）抗原、カンジダ・パラプシロシス（Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）抗原、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）抗原、カンジダ・ルシタニア（Ｃａｎｄｉｄａ ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ）抗原、カンジダ・クルセイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｅｉ）抗原）、ニューモシスチス種抗原、マラセジア種抗原（例えば、マラセジア・ファーファー抗原）、アスペルギルス・フミガーツス抗原、クリプトコッカス種抗原（例えば、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）抗原、クリプトコッカス・ガティイ（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇａｔｔｉｉ）抗原）、ヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）抗原、ブラストマイセス・デルマチティディシス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）抗原、パラコクシジオイデス種抗原（例えば、パラコクシディオイデス・ブラシリエンシス（Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）抗原、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｌｕｔｚｉｉ抗原）、コクシジオイデス種抗原（例えば、コクシジオイデス・イミティス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）抗原、コクシジオイデス・ポサダシイ（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｐｏｓａｄａｓｉｉ）抗原）、ペニシリウム・マルネフェイ抗原、スポロトリクス・シェンキイ抗原、トリコスポロン・アサヒ抗原、フザリウム種抗原（例えば、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｕｍ抗原、フザリウム・オキシスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）抗原）、アカツブタケ属抗原、シュードアレシェリア・ボイジイ（Ｐｓｅｕｄｏａｌｌｅｓｃｈｅｒｉａ ｂｏｙｄｉｉ）抗原、クラドフィアロフォラ・バンチアナム（Ｃｌａｄｏｐｈｉａｌｐｈｏｒａ ｂａｎｔｉａｎｕｍ）抗原、Ｒａｍｉｃｈｌｏｒｉｄｉｕｍ ｓｐｐ抗原、ダクチィラリア・ガルロパバ（Ｄａｃｔｙｌａｒｉａ ｇａｌｌｏｐａｖａ）抗原、エクソフィアラ属抗原（例えば、エクソフィアラ ジャンセルメイ（Ｅｘｏｐｈｉａｌａ ｊｅａｎｓｅｌｍｅｉ）抗原、エクソフィアラ・デルマチチディス（Ｅｘｏｐｈｉａｌａ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）抗原）、カーブラリア属抗原、ビポラリス属抗原、アルタナリア属抗原、Ｌａｃａｚｉａ ｌｏｂｏｉ抗原、Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ ｓｐｐ．抗原（例えば、Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ ｃｏｒｏｎａｔｕｓ抗原、Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ ｉｎｃｏｎｇｒｕｕｓ抗原）、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
いくつかの態様では、第１の核酸および第２の核酸は、それぞれ第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原および第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原をコードする。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片である。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２または配列番号４の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸を含む。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片である。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２または配列番号４の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸を含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２または配列番号４の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸を含み、配列番号２または配列番号４の連続アミノ酸は、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、ポリペプチドは、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。
いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２または配列番号４の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸を含み、配列番号２または配列番号４の連続アミノ酸は、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含み、ポリペプチドは、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。
いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）またはその抗原性断片である。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸を含む。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）またはその抗原性断片である。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸を含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸を含み、配列番号６の連続アミノ酸は、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、ポリペプチドは、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。
いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸を含み、配列番号６の連続アミノ酸は、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、ポリペプチドは、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。
いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片のＳ１サブユニットである。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号４０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも５５０、少なくとも６００、少なくとも６５０、または少なくとも６６０個の連続アミノ酸を含む。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号４０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片のＳ１サブユニットである。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号４０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも５５０、少なくとも６００、少なくとも６５０、または少なくとも６６０個の連続アミノ酸を含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号４０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号４０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも５５０、少なくとも６００、少なくとも６５０、または少なくとも６６０個の連続アミノ酸を含み、配列番号４０の連続アミノ酸は、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、第１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号４０のアミノ酸配列を含み、ポリペプチドは、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。
いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号４０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも５５０、少なくとも６００、少なくとも６５０、または少なくとも６６０個の連続アミノ酸を含み、配列番号４０の連続アミノ酸は、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号４０のアミノ酸配列を含み、ポリペプチドは、１つ以上の変異（すなわち、１つ以上の置換、欠失、挿入、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む。
いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓタンパク質、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質のＲＢＤ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＳ１サブユニット、またはそれらの抗原性断片中の１つ以上の変異は、各々、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｌｉ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｍｅｒｇ Ｍｉｃｒｏｂｅｓ Ｉｎｆｅｃｔ．９（１）：２０７６－９０（２０２０）；Ｌｅｅ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｅ Ｎｅｔｗ．２１（１）：ｅ４（２０２１）；Ｙｕ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６９（６５０５）：８０６－１１（２０２０）；Ｃａｔｔｉｎ－Ｏｒｔｏｌａ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ．１２（１）：５３３３（２０２１）；Ｃｏｒｂｅｔｔ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ５８６（７８３０）：５６７－７１（２０２０）；Ｈｓｉｅｈ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６９（６５１０）：１５０１－５（２０２０）；およびＨａｒｖｅｙ，Ｗ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９（７）：４０９－２４（２０２１）において以前に報告された１つ以上の変異を含む。
いくつかの態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓタンパク質、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質のＲＢＤ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＳ１サブユニット、またはそれらの抗原性断片中の１つ以上の変異は、ΔＭ１－Ｓ１３、Ｓ１２Ｐ、Ｓ１３Ｉ、Ｌ５Ｆ、Ｌ１８Ｆ、Ｔ１９Ｒ、Ｔ２０Ｎ、Ｐ２６Ｓ、Ｑ５２Ｒ、Ａ６７Ｖ、ΔＨ６９－Ｖ７０、Ｇ７５Ｖ、Ｔ７６Ｉ、Ｄ８０Ａ、Ｔ９５Ｉ、Ｒ１０２Ｉ、ΔＤ１１９－Ｆ１２０、Ｃ１３６Ｙ、Ｄ１３８Ｙ、ΔＦ１４０、ΔＬ１４１－Ｙ１４４、ΔＹ１４４、Ｙ１４４Ｓ、Ｙ１４５Ｎ、ΔＨ１４６、Ｎ１４８Ｓ、Ｋ１５０Ｒ、Ｋ１５０Ｅ、Ｋ１５０Ｔ、Ｋ１５０Ｑ、Ｓ１５１Ｐ、Ｗ１５２Ｃ、Ｅ１５４Ｋ、ΔＥ１５６－Ｆ１５７、Ｆ１５７Ｌ、Ｆ１５７Ａ、Ｒ１５８Ｇ、Ｒ１９０Ｓ、ΔＩ２１０、Ｄ２１５Ｇ、Ａ２２２Ｖ、ΔＬ２４１－Ｓ２４３、ΔＬ２４２－Ｌ２４４、ΔＡ２４３－Ｌ２４４、ΔＲ２４６－Ｇ２５２、Ｒ２４６Ｉ、Ｙ２４８およびＬ２４９間の１１－アミノ酸残基挿入、Ｄ２５３Ｇ、Ｄ２５３Ｎ、Ｒ３４６Ｋ、Ｖ３６７Ｆ、Ｅ４０６Ｗ、Ｋ４１７Ｅ、Ｋ４１７Ｖ、Ｋ４１７Ｎ、Ｋ４１７Ｔ、Ｎ４３９Ｋ、Ｋ４４４Ａ、Ｋ４４４Ｒ、Ｋ４４４Ｎ、Ｋ４４４Ｑ、Ｖ４４５Ａ、Ｖ４４５Ｅ、Ｇ４４７Ａ、Ｎ４５０Ｄ、Ｌ４５２Ｒ、Ｌ４５２Ｑ、Ｙ４５３Ｆ、Ｌ４５５Ｆ、Ｎ４６０Ｉ、Ｓ４７７Ｇ、Ｓ４７７Ｎ、Ｓ４７７Ｒ、Ｔ４７８Ｉ、Ｔ４７８Ｋ、Ｖ４８３Ｉ、Ｅ４８４Ｋ、Ｅ４８４Ｑ、Ｇ４８５Ｒ、Ｆ４８６Ａ、Ｆ４８６Ｖ、Ｆ４８６Ｌ、Ｎ４８７Ａ、Ｆ４９０Ｓ、Ｑ４９３Ｅ、Ｑ４９３Ｋ、Ｓ４９４Ｐ、Ｎ５０１Ｙ、Ａ５７０Ｄ、Ｑ６１３Ｈ、Ｄ６１４Ｇ、Ｈ６５５Ｙ、Ｑ６７７Ｈ、Δ６７８－６７９、Δ６８１－６８２、Δ６８１－６８４、Δ６８２－６８５、Ｐ６８１Ｈ、Ｐ６８１Ｒ、Ｒ６８２Ｓ、Ｒ６８２Ａ、Ｒ６８２Ｑ、Ｒ６８３Ｓ、Ｒ６８３Ｇ、Ｒ６８３Ｑ、Ｒ６８５Ｇ、Ｒ６８５Ｑ、Ｉ６９２Ｖ、Ａ７０１Ｖ、Ｔ７１６Ｉ、Ｆ８１７Ｐ、Ｔ８５９Ｎ、Ｆ８８８Ｌ、Ａ８９２Ｐ、Ａ８９９Ｐ、Ａ９４２Ｐ、Ｄ９５０Ｎ、Ｓ９８２Ａ、Ｋ９８６Ｐ、Ｖ９８７Ｐ、Ｔ１０２７Ｉ、Ｑ１０７１Ｈ、Ｄ１１１８Ｈ、Ｖ１１７６Ｆ、Ｍ１２２９Ｉ、ΔＣ１２５３－Ｔ１２７３、ΔＣ１２５４－Ｔ１２７３、ΔＫ１２５５－Ｔ１２７３、Ｄ１２５７Ａ、Ｅ１２５８Ａ、Ｄ１２５９Ａ、Ｄ１２６０Ａ、Ｅ１２６２Ａ、Ｋ１２６９Ａ、Ｈ１２７１Ｋ、Ｔ１２７３Ａ、またはそれらの任意の組み合わせから選択され、アミノ酸位置は、配列番号２または配列番号４に対応する。
いくつかの態様では、１つ以上の変異は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸１～１３に対応するＮ末端シグナルペプチドにおける１つ以上の変異を含む。いくつかの態様では、Ｎ末端シグナルペプチドにおける１つ以上の突然変異はΔＭ１～Ｓ１３であり、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。
いくつかの態様では、１つ以上の変異は、全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＣ末端に１つ以上の変異を含む。いくつかの態様では、全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＣ末端における１つ以上の変異は、Ｃ末端小胞体（ＥＲ）保持ペプチドにおける１つ以上の変異を含み、それは配列番号２または配列番号４のアミノ酸１２５４～１２７３に対応する。いくつかの態様では、Ｃ末端ＥＲ保持ペプチドにおける１つ以上の変異は、Ｄ１２５７Ａ、Ｅ１２５８Ａ、Ｄ１２５９Ａ、Ｄ１２６０Ａ、Ｅ１２６２Ａ、Ｋ１２６９Ａ、Ｈ１２７１Ｋ、Ｔ１２７３Ａ、またはそれらの任意の組み合わせから選択され、アミノ酸位置は、配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、Ｃ末端ＥＲ保持ペプチドにおける１つ以上の変異は、Ｄ１２５７Ａ＋Ｅ１２５８Ａ＋Ｄ１２５９Ａ＋Ｄ１２６０Ａ＋Ｅ１２６２Ａ（すなわち、Ｄ／ＥからＡの変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、Ｃ末端ＥＲ保持ペプチドにおける１つ以上の変異は、ΔＣ１２５３－Ｔ１２７３、ΔＣ１２５４－Ｔ１２７３またはΔＫ１２５５－Ｔ１２７３である。
いくつかの態様では、１つ以上の変異はＫ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、ヘキサ－プロリンＳ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、６８１－ＰＲＲＡＲ／ＳＶＡ－６８８ Ｓ１／Ｓ２フーリン切断部位における１つ以上の変異を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、６８１－ＰＲＲＡＲ／ＳＶＡ－６８８ Ｓ１／Ｓ２フーリン切断部位における１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｓ＋Ｒ６８３Ｓ（すなわち、ＳＳＡＲ変異）、（ｂ）Δ６８１－６８４（すなわち、ΔＰＲＲＡ変異）、（ｃ）Δ６７８－６７９＋Δ６８１－６８２、（ｄ）Ｒ６８２Ａ＋Ｒ６８３Ｇ＋Ｒ６８５Ｇ（すなわち、６８２－ＡＧＡＧ－６８５変異）、（ｅ）Ｒ６８２Ｑ＋Ｒ６８３Ｑ＋Ｒ６８５Ｑ、（ｆ）Ｒ６８２Ｓ＋Ｒ６８５Ｇ、または（ｇ）Δ６８２－６８５（すなわち、ΔＲＲＡＲ変異）であり、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。
いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、ヘキサ－プロリンＳ変異）および（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ａ＋Ｒ６８３Ｇ＋Ｒ６８５Ｇ（すなわち、６８２－ＡＧＡＧ－６８５変異）および（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ａ＋Ｒ６８３Ｇ＋Ｒ６８５Ｇ（すなわち、６８２－ＡＧＡＧ－６８５変異）、（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）、および（ｃ）Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、ヘキサ－プロリンＳ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｑ＋Ｒ６８３Ｑ＋Ｒ６８５Ｑおよび（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含む。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｑ＋Ｒ６８３Ｑ＋Ｒ６８５Ｑ、（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）、および（ｃ）Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、ヘキサ－プロリンＳ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｓ＋Ｒ６８５Ｇおよび（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。いくつかの態様では、１つ以上の変異は、（ａ）Ｒ６８２Ｓ＋Ｒ６８５Ｇ、（ｂ）Ｋ９８６Ｐ＋Ｖ９８７Ｐ（すなわち、Ｓ－２Ｐ変異）、および（ｃ）Ｆ８１７Ｐ＋Ａ８９２Ｐ＋Ａ８９９Ｐ＋Ａ９４２Ｐ（すなわち、ヘキサ－プロリンＳ変異）を含み、アミノ酸位置は配列番号２または配列番号４に対応する。
いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｍタンパク質またはその抗原性断片である。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１２０、少なくとも１４０、少なくとも１６０、少なくとも１８０、少なくとも２００、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸を含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８または配列番号２０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０の、少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１２０、少なくとも１４０、少なくとも１６０、少なくとも１８０、少なくとも２００、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸を含み、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０の連続アミノ酸は、Ａ２Ｓ、Ｆ２８Ｌ、Ｉ４８Ｖ、Ｖ７０Ｌ、Ｉ８２Ｔ、Ｍ８４Ｔ、またはそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の変異を含み、アミノ酸位置は配列番号８に対応する。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０のアミノ酸配列を含み、ここでポリペプチドは、Ａ２Ｓ、Ｆ２８Ｌ、Ｉ４８Ｖ、Ｖ７０Ｌ、Ｉ８２Ｔ、Ｍ８４Ｔ、またはそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の変異を含み、アミノ酸位置は配列番号８に対応する。
いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｅタンパク質またはその抗原性断片である。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２２、配列番号２４または配列番号２６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、または少なくとも７５個の連続アミノ酸を含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２２、配列番号２４または配列番号２６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎタンパク質またはその抗原性断片である。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２８の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、または少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、または少なくとも４００個の連続アミノ酸を含む。いくつかの態様では、第２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、配列番号２８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、プロモーター１は、ＣＭＶプロモーター、ＲＳＶプロモーター、Ｍｏ－ＭｕＬＶ ＬＴＲプロモーター、哺乳動物ＥＦ１プロモーター、ＣＫ１８プロモーター、ＣＫ１９プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、マウスＵ６プロモーター、骨格α－アクチンプロモーター、β－アクチンプロモーター、マウスＰＧＫ１プロモーター、ヒトＰＧＫ１プロモーター、ＣＡＧプロモーター、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、哺乳動物ＥＦ１プロモーターはｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである。
いくつかの態様では、プロモーター２は、ＣＭＶプロモーター、ＲＳＶプロモーター、Ｍｏ－ＭｕＬＶ ＬＴＲプロモーター、哺乳動物ＥＦ１プロモーター、ＣＫ１８プロモーター、ＣＫ１９プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、マウスＵ６プロモーター、骨格α－アクチンプロモーター、β－アクチンプロモーター、マウスＰＧＫ１プロモーター、ヒトＰＧＫ１プロモーター、ＣＡＧプロモーター、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、哺乳動物ＥＦ１プロモーターはｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである。
いくつかの態様では、プロモーターＸは、ＣＭＶプロモーター、ＲＳＶプロモーター、Ｍｏ－ＭｕＬＶ ＬＴＲプロモーター、哺乳動物ＥＦ１プロモーター、ＣＫ１８プロモーター、ＣＫ１９プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、マウスＵ６プロモーター、骨格α－アクチンプロモーター、β－アクチンプロモーター、マウスＰＧＫ１プロモーター、ヒトＰＧＫ１プロモーター、ＣＡＧプロモーター、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、哺乳動物ＥＦ１プロモーターはｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである。
いくつかの態様では、プロモーターＹは、ＣＭＶプロモーター、ＲＳＶプロモーター、Ｍｏ－ＭｕＬＶ ＬＴＲプロモーター、哺乳動物ＥＦ１プロモーター、ＣＫ１８プロモーター、ＣＫ１９プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、マウスＵ６プロモーター、骨格α－アクチンプロモーター、β－アクチンプロモーター、マウスＰＧＫ１プロモーター、ヒトＰＧＫ１プロモーター、ＣＡＧプロモーター、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、哺乳動物ＥＦ１プロモーターはｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである。
いくつかの態様では、プロモーターＺは、ＣＭＶプロモーター、ＲＳＶプロモーター、Ｍｏ－ＭｕＬＶ ＬＴＲプロモーター、哺乳動物ＥＦ１プロモーター、ＣＫ１８プロモーター、ＣＫ１９プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、マウスＵ６プロモーター、骨格α－アクチンプロモーター、β－アクチンプロモーター、マウスＰＧＫ１プロモーター、ヒトＰＧＫ１プロモーター、ＣＡＧプロモーター、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、哺乳動物ＥＦ１プロモーターはｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである。
いくつかの態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号４１と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
投与プロセスは、１つ以上の薬剤、および所望の効果に応じて変えることができる。したがって、投与プロセスは、治療剤（例えば、本明細書中に開示される任意のポリヌクレオチド、ベクター、ワクチン、組成物または医薬組成物）をそのような治療を必要とする患者に投与することを含む。ＤＮＡワクチンを含む組成物を送達する方法は、米国特許第４，９４５，０５０号および第５，０３６，００６号に記載されている。
投与は、治療剤に適切な任意の手段によって、例えば、非経口、粘膜、肺、局所、カテーテルベース、または経口送達手段によって達成することができる。非経口送達には、例えば、皮下、静脈内、筋肉内、動脈内、腹腔内、リンパ内、および器官の組織への注射が含まれ得る。粘膜送達には、例えば、好ましくは患者の気道、すなわち、鼻、副鼻腔、喉、肺へ、例えば点鼻薬として、噴霧、気化、または当技術分野で公知の他の方法によって投与される鼻腔内送達が含まれ得る。経口送達または鼻腔内送達は、推進剤の投与を含み得る。肺送達は、薬剤の吸入を含み得る。カテーテルベースの送達は、イオン導入カテーテルベースの送達による送達を含み得る。経口送達は、コーティング丸剤の送達、または経口による液体の投与を含み得る。投与は、一般に、当技術分野で公知の方法に従って、薬学的に許容される担体、例えば、緩衝液、ポリペプチド、ペプチド、多糖コンジュゲート、リポソームおよび／または脂質を用いた送達も含み得る。
肺送達は、薬剤の吸入を含み得る。カテーテルベースの送達は、イオン導入カテーテルベースの送達による送達を含み得る。経口送達は、コーティング丸剤の送達、または経口による液体の投与を含み得る。投与は、一般に、当技術分野で公知の方法に従って、薬学的に許容される担体、例えば、緩衝液、ポリペプチド、ペプチド、多糖コンジュゲート、リポソームおよび／または脂質を用いた送達も含み得る。
いくつかの態様では、本開示のウイルスベクターは、ウイルスベクターのＰＦＵとして計算される、対象あたり１０２～１０１４ ＰＦＵ、１０５～１０１２ ＰＦＵ、または１０６～１０１０ ＰＦＵにほぼ相当する量で投与される。いくつかの態様では、本開示のウイルスベクターは、ウイルスベクターをＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）または生理食塩水に懸濁して調製したウイルスベクター懸濁液を局所部位に（例えば、肺組織、肝臓、筋肉または脳に）直接注射することによって、経鼻もしくは呼吸器吸入によって、または血管内（例えば、動脈内、静脈内、および門脈）、リンパ内、皮下、皮内、皮内、または腹腔内投与によって投与される。
本開示はまた、本明細書に記載または例示される任意の組成物、医薬組成物またはワクチンを製造する方法を特徴とし、方法は、（ａ）本明細書に開示される送達成分を本明細書に開示されるポリヌクレオチドと組み合わせる工程、（ｂ）組み合わせた送達成分およびポリヌクレオチドを粉末に凍結乾燥する工程、および（ｃ）粉末を希釈剤で再構成して、送達成分と複合体を形成した核酸の溶液を形成する工程を含む。
本開示の実施は、別段の指示がない限り、当業者の技術の範囲内にある、細胞生物学、細胞培養、分子生物学、トランスジェニック生物学、微生物学、組換えＤＮＡおよび免疫学の従来の技術を使用する。そのような技術は、文献で十分に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版；Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．編（１９９２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＮＹ）；Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ編（１９８５）ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ ａｎｄ ＩＩ；Ｇａｉｔ，ｅｄ．（１９８４）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；Ｍｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．米国特許第４，６８３，１９５号；Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ編（１９８４）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ；Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ編（１９８４）Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ（１９８７）Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ Ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ）（１９８６）；Ｐｅｒｂａｌ（１９８４）Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ；ｔｈｅ ｔｒｅａｔｉｓｅ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．）；Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｃａｌｏｓ編（１９８７）Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）；Ｗｕ ｅｔ ａｌ．編，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．１５４および１５５；Ｍａｙｅｒ ａｎｄ Ｗａｌｋｅｒ編（１９８７）Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｃｅｌｌ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ）；Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編（１９８６）Ｈａｎｄｂｏｏｋ Ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ－ＩＶ；Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｏｕｓｅ Ｅｍｂｒｙｏ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，（１９８６）；）；Ｃｒｏｏｋｓ，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｄｒｕｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，第２版 ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ（２００７）およびＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ．）を参照されたい。
上記で引用されたすべての参考文献、ならびに本明細書で引用されたすべての参考文献およびアミノ酸またはヌクレオチド配列（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ番号および／またはＵｎｉｐｒｏｔ番号）は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
以下の例は、限定ではなく例示として提供される。
例
６．１ ベクター構築
ＤＮＡプラスミドベクターは、図１～図１２に示されるような要素で構築される。ベクター構築に使用される出発プラスミド骨格は、ＤＮＡプラスミド構築物を生成するために、所望の発現カセットをサブクローニングするために利用される複数の制限部位を含む。ベクターにクローニングされる各発現カセットは、機能タンパク質または抗原（例えば、プロモーター配列、遺伝子配列、ポリＡテール配列）を発現させるために必要なすべての必要成分を含有する。一般的な方法論は、出発ＤＮＡプラスミド骨格を適切な制限消化酵素で消化することからなる。挿入配列は、適切な制限消化酵素を使用して第２のＤＮＡプラスミドから遺伝子配列を単離し、ゲル精製することから得られる。あるいは、プラスミドベクターに挿入される配列は、合成的に生成されるか、または先の２つのアプローチの組み合わせを使用することができる。出発骨格および挿入配列を一緒に混合し、ＤＮＡリガーゼを用いて連結する。次いで、得られたＤＮＡプラスミドを、標準的なプロトコルを使用して大腸菌に形質転換し、適切な抗生物質を含有するＬＢ寒天プレート上にストリークする。プラスミドが精製され、正確なプラスミドを有するコロニーを同定するために制限消化およびゲル電気泳動によってスクリーニングされ得るように、その後細菌コロニーを単離し、培地中で増殖させる。
６．２ 送達成分を含むベクター製剤
本開示は、以下の式：

の生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーと複合体化した核酸（例えば、ＤＮＡプラスミドベクターまたはマルチシストロン性ｍＲＮＡベクター）を含むことができ、
式中：ＡおよびＢは、個々の直鎖ポリエチレンイミン鎖の分子量が５，０００～２０，０００ダルトンであるようなものであり；分子間架橋は、約５～１０％のアミンを連結し；生分解性架橋は、ジチオジプロピオニル（半分それぞれが３個の炭素原子で構成される）であり、１～１０個の炭素原子であり得る。
いくつかの態様では、生分解性架橋カチオン性ポリマーは、ジチオプロピオニル結合と共有結合した１０，０００～１５，０００ダルトンの直鎖ＰＥＩを含む（例えば、米国特許第８，４４５，０１７号を参照されたい）。ポリマーを滅菌水に溶解して、３ｍｇ／ｍｌの最終濃度を得る。ＤＮＡを滅菌水に溶解して、１ｍｇ／ｍｌの最終濃度を得る。ポリマー／ＤＮＡ複合体を作製するために、２つの成分を５％グルコースでそれぞれ１５０ｕＬの体積に別々に希釈し、次いで、プラスミドＤＮＡ溶液をポリマー溶液に添加する。
いくつかの態様では、生分解性架橋カチオン性ポリマーは、ジチオプロピオニル結合と共有結合した１０，０００～１５，０００ダルトンの直鎖ＰＥＩを含み（例えば、米国特許第８，４４５，０１７号を参照されたい）、さらに分子量５００～２０，０００ダルトンの範囲のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）にコンジュゲートされる。得られたポリマーを滅菌水に溶解して、３ｍｇ／ｍｌの最終濃度を得る。ＤＮＡを滅菌水に溶解して、１ｍｇ／ｍｌの最終濃度を得る。ポリマー／ＤＮＡ複合体を作製するために、２つの成分を５％グルコースでそれぞれ１５０ｕＬの体積に別々に希釈し、次いで、プラスミドＤＮＡ溶液をポリマー溶液に添加する。
いくつかの態様では、生分解性架橋カチオン性ポリマーは、ジチオプロピオニル結合と共有結合した１０，０００～１５，０００ダルトンの直鎖ＰＥＩを含み（例えば、米国特許第８，４４５，０１７号を参照されたい）、さらに分子量５００～２０，０００ダルトンの範囲のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）にコンジュゲートされる。得られたポリマーを滅菌水に溶解して、３ｍｇ／ｍｌの最終濃度を得る。ＤＮＡを滅菌水に溶解して、１ｍｇ／ｍｌの最終濃度を得る。ポリマー／ＤＮＡ複合体を作製するために、２つの成分を５％グルコースでそれぞれ１５０ｕＬの体積に別々に希釈し、次いで、プラスミドＤＮＡ溶液をポリマー溶液に添加する。
いくつかの態様では、生分解性架橋カチオン性ポリマーは、ジチオプロピオニル結合と共有結合した１５，０００～２０，０００ダルトンの直鎖ＰＥＩを含む（例えば、米国特許第８，４４５，０１７号を参照されたい）。ポリマーを滅菌水に溶解して、３ｍｇ／ｍｌの最終濃度を得る。ＤＮＡを滅菌水に溶解して、１ｍｇ／ｍｌの最終濃度を得る。ポリマー／ＤＮＡ複合体を作製するために、２つの成分を５％グルコースでそれぞれ１５０ｕＬの体積に別々に希釈し、次いで、プラスミドＤＮＡ溶液をポリマー溶液に添加する。
いくつかの態様では、生分解性架橋カチオン性ポリマーは、ジチオプロピオニル結合と共有結合した１５，０００～２０，０００ダルトンの直鎖ＰＥＩを含み（例えば、米国特許第８，４４５，０１７号を参照されたい）、さらに分子量５００～２０，０００ダルトンの範囲のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）にコンジュゲートされる得られたポリマーを滅菌水に溶解して、３ｍｇ／ｍｌの最終濃度を得る。ＤＮＡを滅菌水に溶解して、１ｍｇ／ｍｌの最終濃度を得る。ポリマー／ＤＮＡ複合体を作製するために、２つの成分を５％グルコースでそれぞれ１５０ｕＬの体積に別々に希釈し、次いで、プラスミドＤＮＡ溶液をポリマー溶液に添加する。
複合体の形成を室温で１５分間進行させる。遺伝子導入に対する電荷比の効果を研究するために、生分解性架橋カチオン性ポリマーとのＤＮＡ複合体を、１／１５／１、１０／１、および２０／１の異なる窒素／ホスファート比（Ｎ／Ｐ）で調製することができる。複合体形成後、複合体の粒径および電位を測定するために、複合体をキュベットで希釈する。試料の電気泳動移動度は、パーティクルサイザーを用いて、２５℃、波長６５７ｎｍ、一定角度９０°で測定することができる。
６．３ 送達担体ＰＰＣを含むベクター製剤
カチオン性リポポリマーを含む完全凝縮核酸の高濃度液体製剤のベンチスケール製品を調製する。これは、カチオン性ポリマーとの核酸複合体の調製、その後の凍結乾燥および等張性溶液への再構成を含む。使用される核酸はプラスミドＤＮＡであり、ポリマーは、ＰＥＧおよびコレステロールに共有結合したＰＥＩ骨格（ＰＥＧ－ＰＥＩ－コレステロール（「ＰＰＣ」））を含む。ＰＥＧとＰＥＩとのモル比、およびコレステロールとＰＥＩとのモル比は、それぞれ０．５～１０および０．１～１０である。最初に、ＤＮＡ溶液およびＰＰＣ溶液を注射用水中５ｍｇ／ｍｌで別々に調製し、続いて３％ラクトース中０．３ｍｇ／ｍｌ（ＤＮＡ）および１．１０８ｍｇ／ｍｌ（ＰＰＣ）に希釈する。ラクトース溶液中のＤＮＡを、窒素対ホスファート（Ｎ：Ｐ）比が１１：１になるまでラクトース溶液中のＰＰＣにマイクロピペットを使用して添加し、製剤を室温で１５分間インキュベートして複合体を形成させる。３％ラクトース中のＰＰＣ／ＤＮＡ複合体を、ＬＡＢＣＯＮＣＯ Ｃｏｒｐ．（Ｋａｎｓａｓ Ｃｉｔｙ，Ｍｏ）製のＦＲＥＥＺＯＮＥ凍結乾燥システムを用いて凍結乾燥する。５００ ｕｌの調製された製剤を２ｍｌのホウケイ酸ガラスバイアルに添加し、次いで、以下のセグメントからなる凍結乾燥プログラムを使用して凍結乾燥させた：
１）冷凍セグメント（毎分０．２５℃上昇させ、３４℃で４時間保持）、
２）一次乾燥セグメント（３４℃で２４時間保持）、
３）二次乾燥セグメント（２０℃まで上昇させ、２４時間保持）、および
４）毎分０．２５℃で４℃まで上昇。
得られた凍結乾燥粉末を１５０μｌの注射用水で再構成し、０．５ｍｇ／ｍｌのＤＮＡを作製する。
６．４ 送達担体ポロキサマーを含むベクター製剤
ポロキサマーを、水または生理食塩水（０．１５Ｍ）中の１ｍｇ／ｍｌの核酸と様々な濃度で穏やかに混合する。製剤化されたポロキサマー（５％）／プラスミド溶液を、製剤化されたプラスミドとポロキサマーとの間の相互作用を検証するためにゲル電気泳動によって分析する。非製剤化プラスミドＤＮＡと、ポロキサマーと共に製剤化されたＤＮＡとの間の比較は、ゲルを通した同様の動きを有し、したがって、プラスミドＤＮＡおよびポロキサマー間の結合がないことを示す。ポロキサマーを含む製剤化されたプラスミドは、哺乳動物細胞または組織における遺伝子導入のために使用される。
６．５ アザ－クラウン結合ポロキサマー（クラウンポロキサマー）の合成

アザ－クラウン結合ポロキサマー（クラウンポロキサマー）は、以下のように構築される。ポロキサマー１２４（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ－４４；５００ｍｇ、２２０μｍｏｌ）をトルエン（３ｍｌ）に溶解し、得られた溶液をトルエン中の２Ｍホスゲン溶液２ｍｌ（４ｍｍｏｌ）で処理した。室温で３時間後、混合物を真空中で濃縮し、残渣をトルエン３ｍｌに再溶解し、再び濃縮した。残渣を乾燥クロロホルム（５ｍｌ）に溶解した。この溶液に、アザ－１８－クラウン－６［ｌ－アザ－４，７，１０，１３，１６－ペンタオキサシクロオクタデカン（１２５ｍｇ、５００μｍｏｌ）およびヒューニッヒ塩基（１００μｌ、５７４μｍｏｌ）を添加した。７０時間後、反応混合物を真空中で濃縮し、残渣を蒸留水に再溶解し、蒸留水に対して透析した［膜カットオフ１０００ Ｄａ］。透析液を濃縮すると、標記化合物４１０ｍｇが得られた。プロトンＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：４．２０ｐｐｍ（ｔ、ＣＨ２ＯＣ＝Ｏ）；３．７～３．５ｐｐｍ［（－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－）、クラウンおよびポロキサマーの両方］；３．４ｐｐｍ（ｍ、クラウンＣＨ２Ｎ）；１．１ｐｐｍ（ｍ，ポロキサマー－（ＣＨ３）ＣＨ－ＣＨ２－）。
６．６ ｐＶａｃベクター構築
ウイルス抗原を発現させるためのＤＮＡベクター構築物を調製した。詳細には、ｐＶａｃ １－７と呼ばれるベクターを作成して、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質のＳ１サブユニット（全長Ｓタンパク質のアミノ酸１５～６９５に対応するＳＰ１またはスパイク１）、またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓタンパク質（ＳＡＲＳ２Ｓ－Ｄ６１４Ｇ；１２７３アミノ酸長）を発現させ、これらは両方ともＤ６１４Ｇ置換を含む（図１３Ａ）。各ベクターのＳタンパク質コード配列は、哺乳動物ＥＦ－１αプロモーターの制御下にある。プラスミドｐＶａｃ３、ｐＶａｃ６およびｐＶａｃ７を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｍ抗原を共発現するように設計した。ｐＶａｃ３およびｐＶａｃ６プラスミドは、ウイルス抗原間の内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列を含んでいた。ｐＶａｃ２、ｐＶａｃ３およびｐＶａｃ５プラスミドを、ヒトヘテロ二量体サイトカインＩＬ１２をさらに共発現するように設計した。ＩＬ－１２ ｐ３５およびＩＬ－１２ ｐ４０サブユニットのコード配列は、２つのＣＭＶプロモーターの制御下にある（図１３Ｂ）。全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質を含む未修飾ｐＵＮＯスパイクも試験した（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ））。
ｐＶａｃ３（図１４Ｄ）の構築は、ＴＬＯ１００１－ＳＰ１－ＵｎｉＲＥベクターおよび断片ＭＨｉｓＰＡ－ｕｎｑＲＥ（ＴＷＩＳＴ，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ；配列番号６６）の使用を含んだ。最初に、ｐ２ＣＭＶベクターを、２つのＣＭＶプロモーターからＩＬ－１２ ｐ３５およびＩＬ－１２ ｐ４０、ならびにｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターからＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｄ６１４Ｇ Ｓタンパク質（ｐ２ＣＭＶ ｍＩＬ－１２＋ＳＡＲＳ２Ｓ－Ｄ６１４Ｇ）を発現するように操作した。得られたｐ２ＣＭＶ ｍＩＬ－１２＋ＳＡＲＳ２Ｓ－Ｄ６１４Ｇベクターを、主鎖としてＡｇｅＩ／ＳａｐＩ（７６７７＋４２５６ ｂｐ）によって切断した。ＡｇｅＩｍＨｉｓＰＡインサートのＰＣＲを、プライマーＡｇｅＩＭｈｉｓ－Ｆ（配列番号５１）およびｐＡｃｅｌｓｉｏｎ－Ｒ（配列番号５２）を有するＭＨｉｓｐＡ固有のＲＥ鋳型を使用して完了した。ＰＣＲに続いて、Ｇｉｂｓｏｎ ａｓｓｅｍｂｌｙクローニングを使用して、ｐ２ＣＭＶ ｍＩＬ－１２＋ＳＡＲＳ２Ｓ－Ｄ６１４ＧおよびＭＨｉｓｐＡ固有ＲＥを含む中間ベクターを組み立てた。ｐＶａｃ ３構築を完了するために、中間ベクターをＡｇｅＩ／ＳａｌＩ－ＨＦ（８６５３＋４６ｂｐ）によって消化した。ＡｇｅＩｓｐＩＲＥＳＳａｌＩ ＰＣＲ産物を、プライマーＣｅｌｓｉｏｎＡｇｅＩｓｐ１－Ｆ（配列番号５３）およびＩＲＥＳＳａｌＩ－Ｒ（配列番号５４）を使用してＴＬＯ１００１－ＳＰ１－ＵｎｉＲＥ鋳型から増幅した。次いで、ＡｇｅＩｓｐＩＲＥＳＳａｌＩ ＰＣＲ産物をＡｇｅＩ／ＳａｌＩ－ＨＦによって消化し、Ｔ４リガーゼによって結合した。
ｐＶａｃ ２（図１４Ｃ）の構築は、ｐＶａｃ ３ベクター（ｐ２ＣＭＶ ｍＩＬ－１２＋スパイク１－ＩＲＥＳ－Ｍ－Ｈｉｓ－ｐＡ）のＰｓｐＸＩ／ＳａｐＩ（９７８２＋１６１３ｂｐ）による消化、その後のＣＩＰ処理およびカラム精製を含んだ。インサートのＰＣＲは、ｐＶａｃ３鋳型（ｐ２ＣＭＶ ｍＩＬ－１２＋スパイク１－ＩＲＥＳ－Ｍ－Ｈｉｓ－ｐＡ）およびＰｓｐＸＩ－ＳＶ４０ｐＡ－Ｆ（配列番号５６）およびＣｌｓ－ＳａｐＩ－Ｒ（配列番号５７）プライマーを用いて、ＫＯＤホットスタートＤＮＡポリメラーゼを使用して行った。
ｐＶａｃ １ベクター（図１４Ｂ）を、骨格としてｐ２ＣＭＶ－ｖ４ベクターを使用して構築した。ｐ２ＣＭＶ－ｖ４ベクターを図１４Ｉに示す。ｐ２ＣＭＶｖ４ベクターをＢｇｌＩＩ／ＸｍｎＩ（連続消化：４６９３＋４００ｂｐ）で切断し、次いでＣＩＰ処理およびカラム精製を行った。鋳型としてｐ２ＣＭＶ ｍＩＬ－１２＋スパイク１－ｐＡ固有ＲＥベクターを使用して、ＫＯＤホットスタートＤＮＡポリメラーゼを使用して、Ｃｌｓ－ＢｇｌＩＩ－Ｒ－２（配列番号５８）およびＣｌｓ－ＸｍｎＩ－Ｒ（配列番号５９）プライマーを用いてＰＣＲを行った。次いで、Ｇｉｂｓｏｎ Ａｓｓｅｍｂｌｙを使用してベクターを完成させた。
ｐＶａｃ ５（図１４Ｆ）を構築するために、完全スパイク１－Ｄ６１４Ｇ－ＯＰ、スパイク１－ＫａｎＲを有する中間ベクターを合成した。次に、中間ベクターをＡｇｅＩ－ＨＦ／ＰｓｐＸＩによって消化して、３８４８、１７７２および４４５ｂｐの構築物を得た。さらに、ｐＶａｃ３（ｐ２ＣＭＶ ｍＩＬ－１２＋スパイク１－ｐＡ固有ＲＥ）工程１からの鋳型もＡｇｅＩ－ＨＦ／ＰｓｐＸＩ（Ｃｕｔｓｍａｒｔ）によって消化し、７９２７および２１０５ｂｐの構築物を得た。得られた構築物をＴ４ ＤＮＡリガーゼによって結合し、クローンをサンガーシーケンシングによって検証した。
ｐＶａｃ ４（図１４Ｇ）を構築するために、完全スパイク１－Ｄ６１４Ｇ－ＯＰ、スパイク１－ＫａｎＲを有する中間ベクターを合成した。次に、中間ベクターをＡｇｅＩ－ＨＦ／ＰｓｐＸＩによって消化して、３８４８、１７７２および４４５ｂｐの構築物を得た。さらに、ｐＶａｃ３ ｐ２ＣＭＶ ｍＩＬ－１２＋スパイク１－ＩＲＥＳ－Ｍ－Ｈｉｓ－ｐＡ固有ＲＥからの鋳型もＡｇｅＩ－ＨＦ／ＰｓｐＸＩによって消化し、７９２７および２１０５ｂｐの構築物を得た。得られた構築物をＴ４ ＤＮＡリガーゼによって結合し、クローンをサンガーシーケンシングによって検証した。
ｐＶａｃ６（図１４Ｇ）を構築するために、ヒトコドン最適化Ｍタンパク質ＤＮＡ断片を合成した。ベクターｐ２ＣＭＶ ｍＩＬ－１２＋スパイク１－Ｄ６１４Ｇ－ＯＰ－ｐＡ固有をＰｓｐＸＩによって消化し、ＣＩＰによって処理した。ＣＬＳ－ＰｓｐＸＩ－ＩＲＥＳ－Ｆ（配列番号６０）およびＩＲＥＳｃｅｌｓｉｏｎ－Ｒ（配列番号６１）プライマーを使用して、ｐ２ＣＭＶ ｍＩＬ－１２＋スパイク１－ＩＲＥＳ－Ｍ－Ｈｉｓ－ｐＡ由来のＩＲＥＳ断片のＰＣＲを完了した。合成された断片由来のＭタンパク質のＰＣＲを、Ｍｈｉｓｃｅｌｓｉｏｎ－Ｆ（配列番号６２）およびＣＬＳ－Ｍ－Ｒ（配列番号６３）プライマーを使用して行った。Ｇｉｂｓｏｎ Ａｓｓｅｍｂｌｙを２つのインサートと共に使用してベクターを作製した。
ｐＶａｃ７（図１４Ｈ）を構築するために、ｐ２ＣＭＶ－Ｖ４－スパイク１－Ｄ６１４Ｇ－ＯＰ－ｐＡ固有ＲＥ（ｐＶａｃ３中間体ベクター）をＭｌｕＩ－ＨＦによって消化し、ＣＩＰによって処理した。合成された断片由来のＭタンパク質のＰＣＲを、ＣＬＳ－ＸｂａＩ－Ｍ－Ｆ（配列番号６４）およびＣＬＳ－ＭｌｕＩ－Ｍ－Ｒ（配列番号６５）プライマーを使用して行った。Ｇｉｂｓｏｎ Ａｓｓｅｍｂｌｙを２つのインサートと共に使用してベクターを作製した。
６．７ インビトロ発現
ＣＯＳ－１または２９３Ｔ細胞のインビトロトランスフェクション後に、スパイクタンパク質の発現レベルおよびｍＩＬ－１２レベルを評価した。細胞株を、ウェルあたり１５０，０００細胞で１０％ ＦＢＳを含む１ ｍＬのＤＭＥＭ中にトランスフェクションする１日前に、１２ウェルプレートにプレーティングした。翌日、１～１．５ｍｇのプラスミドＤＮＡをＯｍｎｉｆｅｃｔと混合し、プラスミドＤＮＡを例に記載したように混合した。Ｏｍｎｉｆｅｃｔ／プラスミド混合物を１０％ ＦＢＳの存在下で培養プレート中の細胞に添加した。各ウェルにさらなる細胞培養培地を追加することによって、各ウェル中のプラスミドＤＮＡの濃度を１００～２００ｐＭに調整した。トランスフェクションした細胞を、ＣＯ２インキュベーター中３７℃で４８時間インキュベートした。インキュベーション期間が終了したら、細胞培養培地を各ウェルから１．５ｍＬチューブに回収し、細胞をリン酸緩衝生理食塩水で洗浄し、ＴＥＮＴ緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－Ｃｌ［ｐＨ８．０］２ｍＭ ＥＤＴＡ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００）、またはベータメルカプトエタノール（Ｑｉａｇｅｎ，Ｈｉｌｄｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を含むＲＮＡ溶解緩衝液で溶解した。スパイクタンパク質発現レベルを、自社開発スパイクタンパク質ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロットおよびｑＰＣＲを使用して細胞培養培地および細胞溶解物において評価した。ｍＩＬ－１２タンパク質発現を、Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓから購入したｍＩＬ－１２ ＥＬＩＳＡ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ；カタログ番号Ｍ１２７０）によって細胞培養培地において測定した。総タンパク質レベルは、ＢＣＡタンパク質アッセイキット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ；カタログ番号２３２２５）を使用して決定した。
ウエスタンブロット
４℃、１０，０００ｒｐｍで５分間の遠心分離によって全タンパク質を単離した。溶解物タンパク質濃度をＢＣＡアッセイキット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ；カタログ番号２３２２５）によって決定した。総タンパク質濃度を正規化し、タンパク質をＬｅａｍｍｌｉ緩衝液およびベータメルカプトエタノールと混合し、９５℃で５分間煮沸した。このトリスグリシン４～１２％プレキャストゲルにタンパク質をロードし、１００ Ｖで２．５時間実行した。ｉＢｌｏｔ２乾式転写システムを使用してゲルをＰＶＤＦ膜に転写し、その後、膜をＴＢＳＴ中５％脱脂乳で室温で１時間ブロックした。この後、一次抗体を所望の濃度で添加し、膜を４℃で一晩インキュベートした。膜をＴＢＳＴで３回洗浄し、次いで、推奨濃度の二次抗体と室温で４５分間インキュベートした。その後、膜をＴＢＳＴで５分間３回洗浄し、膜をＬｉｃｏｒ Ｃ－ＤｉＧｉｔブロットスキャナー上にＥＣＬ溶液を用いて展開した。
２９３Ｔ細胞におけるｐＶａｃ１のトランスフェクション後に、スパイクＳ１タンパク質の発現を確認した（図１５Ａ）。さらに、ＰＮＧａｓｅ－Ｆによる消化は、予想された分子量の低下をもたらした（図１５Ａ）。ｐＶａｃ１、ｐＶａｃ２またはｐＶａｃ３のいずれかによるトランスフェクション後に、２９３Ｔ細胞溶解物におけるスパイクＳ１タンパク質発現も確認された（図１５Ｂ）。
ｑＰＣＲ
目的のベクターによるトランスフェクション後のウイルスｍＲＮＡの相対発現を評価するために、定量的ＰＣＲアッセイを展開した。手短に言えば、２９３Ｔ細胞に、ビヒクル対照または目的のベクターのいずれかを２４時間トランスフェクションした。次に、細胞をＰＢＳで洗浄し、ベータメルカプトエタノール（Ｑｉａｇｅｎ，Ｈｉｌｄｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を添加したＲＮＡ溶解緩衝液で溶解した。ＲＮＡを、Ｑｉａｇｅｎ（Ｈｉｌｄｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）製のＲＮｅａｓｙキットを使用して単離した。分光光度法を用いてＲＮＡ定量を行い、Ｖｅｒｓｏ ｃＤＮＡ合成キット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を用いてｃＤＮＡを合成した。この後、ｃＤＮＡを分子生物学グレードの水で１：５に希釈し、５μＬの試料に、Ｔａｑｍａｎケミストリーを用いて２５μＬのマスターミックスをロードした。ｑＰＣＲ反応は、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ製のＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ５を使用して、正規化された内因性対照１８Ｓに対して比較ΔΔＣｔ値を測定する、ｆａｓｔ ａｄｖａｎｃｅｄ ｔａｑｍａｎマスターミックス条件を使用して行った。ＲＡＷ Ｃｔ分析と共に、統計分析を実施して相対倍率変化を計算した。スパイクＳ１は、ｐＶａｃ１（３３６７．１相対定量［ＲＱ］）またはｐＶａｃ２（５５３８ ＲＱ）のいずれかによるトランスフェクション後に２９３Ｔ細胞溶解物において相対発現の増加を示した（増幅データは示さず）。さらに、スパイクＳ１、膜および１８Ｓ ｍＲＮＡは、ｐＶａｃ３によるトランスフェクション後に２９３Ｔ細胞溶解物において相対発現の増加を示した（１３４１２．５ ＲＱ；データは示さず）。
スパイクタンパク質ＥＬＩＳＡ
スパイクタンパク質の発現レベルを、細胞培養培地および細胞溶解物において評価した。細胞培養培地を１．５ｍＬエッペンドルフチューブに回収し、１０，０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上清を回収し、短期保存用に４℃、および／または長期保存用（２４時間超）に－２０℃で保存した。細胞をリン酸緩衝生理食塩水で洗浄し、ＴＥＮＴ緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－Ｃｌ［ｐＨ ８．０］２ｍＭ ＥＤＴＡ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００）で溶解した。溶解物を１．５ｍＬエッペンドルフチューブに回収し、１０，０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上清を回収し、短期保存用に４℃、および／または長期保存用（２４時間超）に－２０℃で保存した。スパイクタンパク質ＥＬＩＳＡを行うために、９６ウェル、Ｎｕｎｃを、Ｓｉｎｏ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌの一次スパイクタンパク質抗体（カタログ番号４０１５０－Ｄ００３）１μｇ／ｍｌで４℃で一晩コーティングした。一晩インキュベートした後、ウェルを吸引し、３００μｌの洗浄緩衝液（ＰＢＳ中０．０５％ Ｔｗｅｅｎ－２０、ｐＨ７．２～７．４）で４回洗浄した。洗浄工程後、３００μＬのブロッキング緩衝液（洗浄緩衝液中２％ ＢＳＡ）を各ウェルに添加し、室温で１時間インキュベートし、次いで、吸引／洗浄工程を繰り返した。Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ（４０５８９－Ｖ０８Ｂ１）のスパイクタンパク質標準の段階希釈物を希釈緩衝液で調製し（４０，０００～６２５ｐｇ／ｍＬ）、各標準希釈物１００μｌ、細胞溶解物および細胞培養培地を標準ウェルおよび試料ウェルに添加し、室温で２時間インキュベートし、次いで、吸引／洗浄工程を繰り返した。１００μＬの１μｇ／ｍＬ二次抗体（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、カタログ番号４１５０－Ｄ００１Ｈ）を９６ウェルそれぞれに添加し、室温で１時間インキュベートし、次いで、吸引／洗浄工程を繰り返した。等体積の標準希釈緩衝液を含むＤＭＳＯ中の１００μＬの基質溶液ＴＭＢ（テトラメチルベンジジン）を各ウェルに添加し、暗所で室温にて２０分間インキュベートした。１００μＬの停止液（１Ｍリン酸）を各ウェルに添加した。４５０ｎｍに設定したマイクロプレートリーダーを使用して、２０分以内に各ウェルの光学密度を決定した。
上記のＥＬＩＳＡ法を用いて、ｐＶａｃ２およびｐＶａｃ ３の両方のトランスフェクション後に、細胞溶解物（図１５Ｃ）および細胞培地（図１５Ｄ）の両方でスパイクタンパク質をインビトロで確認し、ｍＩＬ１２発現を細胞培地（図１５Ｅ）で確認し、スパイクタンパク質発現をｐＶａｃ１、ｐＶａｃ４およびｐＶａｃ５（図１５Ｆ）で確認した。
６．８ インビボ発現
分泌アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）アッセイ
インビボ抗原発現の動態および量を評価するために、ＳＥＡＰをコードするレポーター遺伝子を含むプラスミドＤＮＡを、０．５％ｗ／ｖのクラウンポロキサマー（ＣＰ）製剤と共に筋肉内注射によってマウスに投与した。８～１０週齢の５匹の健常雌ＢＡＬＢ／ｃマウスの群を、ＳＥＡＰをコードし、ＣＰまたはＰＢＳと共に製剤化されたプラスミドＤＮＡ（ｐＤＮＡ）で免疫した。各マウスの四頭筋に１００ ｕｌ用量（５０ｕｌ／部位）を投与した。注射の１、３および７日後に血液試料を採取した。採取直後の血液から血清を分離し、使用するまで－８０℃で保存した。化学発光ＳＥＡＰアッセイＰｈｏｓｐｈａ－Ｌｉｇｈｔ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、血清中のＳＥＡＰ酵素活性を検出した。免疫マウス由来の血清を１×Ｐｈｏｓｐｈａ－Ｌｉｇｈｔ反応緩衝希釈液で１：２０に希釈した。試料をアルミニウム封止箔で封止した水浴に入れ、ドライヒートブロック中６５℃で３０分間熱不活性化した。氷上で３分間冷却し、室温に平衡化した後、５０ｕＬのＰｈｏｓｐｈａＬｉｇｈｔアッセイ緩衝液をウェルに添加し、試料を室温で５分間放置した。次いで、１：２０ ＣＳＰＤＲ（化学発光アルカリ性ホスファート基質）基質を含有する５０ｕＬの反応緩衝液を添加し、室温で２０分間インキュベートした後に発光を測定した。ウェルあたり積分１秒のＥＬ８０８ ＵＬＴＲＡマイクロプレートリーダールミノメーターＢｉｏ－Ｔｅｋ（Ｗｉｎｏｏｓｋｉ、ＶＴ）で発光を測定した。各試料中のＳＥＡＰの活性を２回繰り返して測定し、これら２つの測定値の平均を取った。
１群当たり５匹のマウスの血清ＳＥＡＰレベルを、筋肉内ワクチン接種後０日で相対光単位（ＲＬＵ）によって測定した。１日目、３日目および７日目にＳＥＡＰ分析のために血清を採取し、ＣＰ送達ありおよびなしの筋肉内ワクチン接種後に酵素活性について測定した。これらの結果は、ＳＥＡＰを発現するプラスミドＤＮＡ（ｐＤＮＡ ＳＥＡＰ）送達が、ＣＰを含むプラスミドの製剤化によって、対照送達と比較して改善されたことを示す（図１６）。データは、群あたり５個体のマウスの算術平均力価として表される。すべての構築物は、クラウンポロキサマー（ＣＰ）と共に製剤化されたｐＤＮＡ ＳＥＡＰでワクチン接種されたマウスの血清中で測定可能なレベルのＳＥＡＰを産生し、特に７日目の時点で発現レベルを増加させた。
６．９ ワクチン製剤
ＰＰＣ／ｐワクチン製剤
５％デキストロース溶液中でプラスミドＤＮＡをポリマーと（１１：１）および（０．５：１）（Ｎ：Ｐ）比で混合することによって、ＰＥＧ－ＰＥＩ－コレステロール（ＰＰＣ；ＭＷ ４．２ ｋＤ）を含むワクチンプラスミドＤＮＡを０．１ｍｇ／ｍＬで最初に調製し、混合物を室温で１０分間インキュベートしてナノ複合体を形成させた。次いで、Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ遠心式フィルター（Ｕｌｔｒａｃｅｌ－３Ｋ ＭＷＣＯ）を使用して、ｐＤＮＡ／ＰＰＣナノ複合体を１～５ｍｇ／ｍＬに濃縮した。
ＰＰＣ／ＤＮＡ複合体の電気泳動移動度は、７０Ｖで１時間のアガロースゲル電気泳動によって決定した。複合体中のＤＮＡ完全性は、複合体を５０μｇの硫酸デキストランまたはｔｒｉｔｏｎ－Ｘと室温で１０分間インキュベートし、続いて１００ボルトで１時間ゲル電気泳動することによって決定した。Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水中のナノ複合体の粒径は、Ｍａｌｖｅｒｎ粒径分析器を使用して、動的光散乱法によって９０°の一定角度で６５７ｎｍで決定した。Ｆｉｓｋｅ２１０マイクロサンプル浸透圧計を使用して製剤の浸透圧を決定し、分光光度計を使用してＤＮＡ定量化を行い、Ａｃｃｕｍｅｔ ｒｅｓｅａｒｃｈ ＡＲ１５ ｐＨ計を使用して製剤ｐＨを測定した。
ＢＤ１５－１２／ｐワクチン製剤
５％デキストロース溶液中でプラスミドＤＮＡをポリマーと１０：１および０．５：１のＮ：Ｐ比で混合することによって、ＰＥＩベースコポリマー、ＢＤ１５－１２（１５ｋＤ直鎖ＰＥＩ；ＭＷ ２６．５ ｋＤ）を含むワクチンプラスミドＤＮＡを０．１ｍｇ／ｍＬで最初に調製し、混合物を室温で１０分間インキュベートしてナノ複合体を形成させた。次いで、Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ遠心式フィルター（Ｕｌｔｒａｃｅｌ－３Ｋ ＭＷＣＯ）を使用して、ＢＤ１５－１２／ｐＤＮＡナノ複合体を２．５～５ｍｇ／ｍＬに濃縮した。
ＢＤ１５－１２／ＤＮＡ複合体の電気泳動移動度は、７０Ｖで１時間のアガロースゲル電気泳動によって決定した。Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水中のナノ複合体の粒径は、Ｍａｌｖｅｒｎ粒径分析器を使用して、動的光散乱法によって９０°の一定角度で６５７ｎｍで決定した。プラスミドＤＮＡとＢＤ１５－１２との複合体化は、ＤＮＡのナノ粒子中への凝縮をもたらし、アガロースゲル上でのＤＮＡ移動を妨げた（データは示さず）。Ｆｉｓｋｅ ２１０マイクロサンプル浸透圧計を使用して製剤の浸透圧を決定し、分光光度計を使用してＤＮＡ定量化を行い、Ａｃｃｕｍｅｔ ｒｅｓｅａｒｃｈ ＡＲ１５ ｐＨ計を使用して製剤ｐＨを測定した（表１）。
Ｓｔａｒａｍｉｎｅ：Ｓｔａｒ－ｍＰＥＧ／ｐＶａｃｃｉｎｅ製剤：
Ｓｔａｒａｍｉｎｅ：ポリ（エチレングリコール）メチルエーテル（ｍＰＥＧ）／ｐワクチン製剤は、Ｓｔａｒａｍｉｎｅ（０．６３５ｋＤ）リポソームおよびプラスミドＤＮＡで構成される。Ｓｔａｒａｍｉｎｅ単独またはＳｔａｒａｍｉｎｅ（Ｓｔａｒ）とＳｔａｒ－ＰＥＧ５１５（１．２ｋＤ）との１０：１混合物を、フィルムへと回転蒸発させた。リポソームフィルムのフラスコを高真空下で一晩保持した。注射用水をフィルムに添加して所望のＳｔａｒａｍｉｎｅ濃度を得て、Ｂｒａｎｓｏｎ Ｗａｔｅｒ Ｂａｔｈ Ｓｏｎｉｃａｔｏｒモデル２５１０を使用して約３０分間浴超音波処理し、続いて（５～１０ワット（ｒｍｓ）の出力ワット数で連続パルス超音波処理を使用して）５分間プローブ超音波処理した（モデル１００；Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｓｏｎｉｃ Ｄｅｓｍｅｍｂｒａｔｏｒ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇ，ＰＡ）。リポソーム溶液を０．２μｍフィルターに通して濾過し、５％デキストロースで希釈し、所望量のプラスミドと混合した。複合体の粒径は、Ｍａｌｖｅｒｎ粒径アナライザーサイザーで測定した。複合体形成効率をゲル遅延度アッセイ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）によって決定した。１％アガロースゲルにＳｔａｒａｍｉｎｅ／プラスミドＤＮＡをロードし、１００ Ｖで１時間電気泳動することによって、ゲル遅延度アッセイを実施した。Ｓｔａｒａｍｉｎｅナノ粒子からプラスミドＤＮＡを放出させるために、１０％ ＴｒｉｔｏｎＸ－１００を複合体に添加し、溶液をアガロースゲルにロードした。プラスミドＤＮＡとＳｔａｒａｍｉｎｅ：Ｓｔａｒａｍｉｎｅ－ＰＥＧとの複合体化は、ＤＮＡのナノ粒子中への凝縮をもたらし、アガロースゲル上でのＤＮＡ移動を妨げた（データは示さず）。製剤化手順は、ＤＮＡおよびｓｔａｒａｍｉｎｅ複合体の凝集をもたらさなかった。硫酸デキストランおよびトリトンを添加すると、ＤＮＡがｓｔａｒａｍｉｎｅから脱複合体化され、アガロースゲル上でＤＮＡの自由移動が生じる。脱複合体化ＤＮＡ製剤のアガロースゲル上のＤＮＡバンドの外観がインタクトであることは、ＤＮＡが製剤化プロセス中に分解されなかったことを示唆している。Ｆｉｓｋｅ２１０マイクロサンプル浸透圧計を使用して製剤の浸透圧を決定し、分光光度計を使用してＤＮＡ定量化を行い、Ａｃｃｕｍｅｔ ｒｅｓｅａｒｃｈ ＡＲ１５ ｐＨ計を使用して製剤ｐＨを測定した（表１）。
Ｏｍｎｉｆｅｃｔ／ｐワクチン製剤
５％デキストロース溶液中でプラスミドＤＮＡをポリマーと１０：１および０．５：１のＮ：Ｐ比で混合することによって、Ｏｍｎｉｆｅｃｔ（ＭＷ ７．３ ｋＤ）を含むワクチンプラスミドＤＮＡを０．１ｍｇ／ｍＬで最初に調製し、混合物を室温で１０分間インキュベートしてナノ複合体を形成させた。次いで、Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ遠心式フィルター（Ｕｌｔｒａｃｅｌ－３Ｋ ＭＷＣＯ）を使用して、Ｏｍｎｉｆｅｃｔ／ｐＤＮＡナノ複合体を２．５～５ｍｇ／ｍＬに濃縮した。
Ｏｍｎｉｆｅｃｔ／ＤＮＡ複合体の電気泳動移動度は、７０Ｖで１時間のアガロースゲル電気泳動によって決定した。Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水中のナノ複合体の粒径は、Ｍａｌｖｅｒｎ粒径分析器を使用して、動的光散乱法によって９０°の一定角度で６５７ｎｍで決定した。複合体中のＤＮＡ完全性は、複合体を５０μｇの硫酸デキストランまたはｔｒｉｔｏｎ－Ｘと室温で１０分間インキュベートし、続いて１００ボルトで１時間ゲル電気泳動することによって決定した。プラスミドＤＮＡとＯｍｎｉｆｅｃｔとの複合体化は、ＤＮＡのナノ粒子中への凝縮をもたらし、アガロースゲル上でのＤＮＡ移動を妨げた。製剤化手順は、ＤＮＡおよびｓｔａｒａｍｉｎｅ複合体の凝集をもたらさなかった。さらに、硫酸デキストランおよびトリトンを添加すると、ＤＮＡがＯｍｎｉｆｅｃｔから脱複合体化され、アガロースゲル上でＤＮＡの自由移動が生じる。脱複合体化ＤＮＡ製剤のアガロースゲル上のＤＮＡバンドの外観がインタクトであることは、ＤＮＡが製剤化プロセス中に分解されなかったことを示唆している（データは示さず）。Ｆｉｓｋｅ２１０マイクロサンプル浸透圧計を使用して製剤の浸透圧を決定し、分光光度計を使用してＤＮＡ定量化を行い、Ａｃｃｕｍｅｔ ｒｅｓｅａｒｃｈ ＡＲ１５ ｐＨ計を使用して製剤ｐＨを測定した（表１）。
クラウンポロキサマー／ｐＶａｃｃｉｎｅ製剤
１～５ｍｇ／ｍｌの最終濃度を生成するために必要なプラスミドＤＮＡの濃度をＰＢＳまたはＮａＣｌで作製し、混合物を低速ボルテックスによって混合し、必要な量のクラウンポロキサマー（ＭＷ ２．２Ｋｄ）をＤＮＡ溶液に添加して、０．１～５％の最終濃度を生成した。
製剤を－２０℃で保存するために、または凍結乾燥目的のために、製剤をＰＢＳまたはＮａＣｌの代わりに２０ｍＭ Ｔｒｉｓ－８％スクロースで作製した。Ｆｉｓｋｅ２１０マイクロサンプル浸透圧計を使用して製剤の浸透圧を決定し、分光光度計を使用してＤＮＡ定量化を行い、Ａｃｃｕｍｅｔ ｒｅｓｅａｒｃｈ ＡＲ１５ ｐＨ計を使用して製剤ｐＨを測定した（表１）。
クラウンポロキサマー／カチオン性担体アジュバント／ｐワクチン製剤
最終濃度を０．１～０．５ｍｇ／ｍｌにするために必要な濃度のプラスミドＤＮＡを５％デキストロースまたはＰＢＳで作製し、混合物を低速ボルテックスによって混合し、必要な量のカチオン性アジュバント担体（Ｓｔａｒａｍｉｎｅ、ＢＤ１５－１２、ＰＰＣ、Ｏｍｎｉｆｅｃｔ、塩化ベンザルコニウム（ＢＡＫ））をプラスミドＤＮＡに添加した。Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ遠心式フィルター（Ｕｌｔｒａｃｅｌ－３Ｋ ＭＷＣＯ）を使用して、ｐＤＮＡ／ＰＰＣナノ複合体を１～５ｍｇ／ｍＬに濃縮した。次いで、クラウンポロキサマー（すなわち、アザ－クラウン結合ポロキサマー）をＤＮＡ溶液に添加して、０．１～５％の最終濃度を得た。ＣＰ－カチオン性担体－ｐＤＮＡ複合体の粒径は、Ｍａｌｖｅｒｎ粒径アナライザーサイザーで測定した。クラウンポロキサマーをプラスミドＤＮＡと混合しても、粒径測定またはゲル電気泳動によって検出可能なナノ粒子は形成されなかった。しかしながら、カチオン性送達システムをクラウンポロキサマー／ＤＮＡ製剤に添加すると、製剤中に測定可能なナノ粒子が観察された。複合体形成効率をゲル遅延度アッセイ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）によって決定した。１％アガロースゲルに製剤化プラスミドＤＮＡをロードし、１００Ｖで１時間電気泳動することによって、ゲル遅延度アッセイを実施した。クラウンポロキサマー／ＤＮＡ製剤のアガロースゲル上のＤＮＡバンドの外観がインタクトであることは、クラウンポロキサマーが製剤化プロセス中にＤＮＡを結合または分解しないことを示唆した。しかしながら、カチオン性送達システムをクラウンポロキサマー／ＤＮＡ製剤に添加した場合、ＤＮＡバンドにシフトが観察され、ＤＮＡとカチオン性送達システムとの間の相互作用が示唆された。
Ｆｉｓｋｅ２１０マイクロサンプル浸透圧計を使用して製剤の浸透圧を決定し、分光光度計を使用してＤＮＡ定量化を行い、Ａｃｃｕｍｅｔ ｒｅｓｅａｒｃｈ ＡＲ１５ ｐＨ計を使用して製剤ｐＨを測定した（表２）。
凍結乾燥サイクル
各製剤１ｍｌを２ｍｌガラスバイアルに分注し、凍結乾燥機（ＬＡＢＣＯＮＣＯ Ｃｏｒｐ．（Ｋａｎｓａｓ Ｃｉｔｙ，ＭＯ．）製のＦＲＥＥＺＯＮＥ Ｔｒｉａｄ凍結乾燥システム）に入れた。バイアルを－４５℃に１６時間冷却し、次いで、温度を－１５℃に上げてから一次乾燥を開始した。２４時間後、シェルフ温度を０℃に上げ、さらに２４時間真空下に保った。最後に、シェルフ温度を２５℃に７２時間上昇させ、二次乾燥セグメントの終わりにバイアルに真空下で蓋をした。
６．１０ ワクチン製剤に対する免疫応答
動物免疫化手順
ワクチンプラスミドの免疫原性試験は、交配ＢＡＬＢ／Ｃマウスで実施した。すべての動物の試験および研究は、すべての関連する倫理規定を遵守し、研究は、機関ＩＡＣＵＣ委員会による倫理承認を受けた。雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（約５～６週齢）を研究に使用した（Ｅｎｖｉｇｏ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ）。０日目に、０．５％クラウンポロキサマーを含む２５０ｕｇの製剤化ＤＮＡプラスミドを筋肉内（四頭筋）注射した。最初の免疫化の２週間後、動物に最初のブースター用量を与えた。１４日目（２ｗｐ１）および３５日目（３ｗｐ２）に動物から血液を採取した。さらに、脾臓細胞からのＩＦＮ応答を３５日目に評価した。
製剤なしでプラスミドを送達するために、脛骨筋に注射し、続いてエレクトロポレーションを行った。パルス数２（１／秒）、パルス持続時間２５ｍｓ、およびパルス強度３７５／ｃｍを使用した。製剤を含まないＤＮＡプラスミドの場合、５０ｕｇ用量をＩＭ注射に使用した。
２回の免疫化の有効性を３回の免疫化と比較する研究も行った。この研究では、５～６週齢のマウスを、０．５％クラウンポロキサマーを含む２５０ｕｇの製剤化ＤＮＡプラスミドで２週間間隔で筋肉内免疫化した。分析された血液および脾臓を最終注射の３週間後に分析した。
ＩｇＧ抗原Ｓ特異的ＥＬＩＳＡ
個体の血清試料を、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によってＳ特異的ＩｇＧの存在についてアッセイした。ＥＬＩＳＡプレート（９６ウェル、Ｎｕｎｃ）を、ＰＢＳ中の１μｇ／ｍｌの精製Ｓ１抗原で４℃で一晩コーティングした。洗浄後（Ｔｗｅｅｎ－２０を０．０５％含むＰＢＳ）、プレートを室温で２時間、ＣｈｏｎＢｌｏｃｋ ＥＬＩＳＡ緩衝液（Ｃｈｏｎｄｒｅｘ，Ｉｎｃ）でブロッキングした。ブロッキング後、プレートを洗浄し、ＣｈｏｎＢｌｏｃｋ ＥＬＩＳＡ緩衝液で血清の段階希釈を別々のプレートで行った。段階希釈血清をアッセイプレートに添加し、室温で２時間インキュベートした。洗浄後、プレートを、ＰＢＳで１：５００に希釈した抗マウスＩｇＧ、ペルオキシダーゼ結合種特異的全抗体（ヒツジ由来）二次抗体（Ｃｙｔｉｖａ）と共に室温で１時間インキュベートした。最後に、プレートを洗浄し、ＴＭＢペルオキシダーゼ基質溶液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）をウェルに添加した。１Ｍ Ｈ３ＰＯ４（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）の添加によって反応を停止し、Ｇｅｎ ５ ＥＬＩＳＡソフトウェアを備えたＥＬ８０８ ＵＬＴＲＡマイクロプレートリーダールミノメーター（Ｗｉｎｏｏｓｋｉ、ＶＴ）で、ウェルあたり１秒間の積分を使用して吸光度を４５０ｎｍで読み取った。各血清試料について、逆数血清希釈度の対数に対する光学密度（ＯＤ）のプロットを非線形回帰によって生成した（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ）。力価を、（すべてのプレートに含まれる標準的なマウス抗Ｓモノクローナル抗体に対して正規化された）約０．５のＯＤでの逆数血清希釈度として定義した。
マウスＴ細胞機能アッセイ
マウスＴ細胞機能アッセイを、ＩＦＮγ ＥＬＩＳＰＯＴアッセイを使用することによって行った。免疫化マウスからの脾臓を、１×グルタミンおよびＰｅｎｓｔｒｅｐを補充したＣＴＬ試験培地（Ｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔ カタログ番号ＣＴＬＴ－００５）培地を含有する滅菌チューブに回収した。穏やかなＭａｃｓ Ｏｃｔｏ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ａｕｂｕｒｎ ＣＡ）で脾臓を解離させることによって、細胞懸濁液を調製した。次いで、細胞懸濁液を７０μｍセルストレーナーで濾過した。細胞を、遠心分離機において３００ｇで１０分間、４Ｃで遠心分離することによってペレット化した。ペレットを、１×グルタミンおよびＰｅｎｓｔｒｅｐを補充したＣＴＬ培地に再懸濁した。細胞を、ＣＴＬ細胞計数プログラムを使用して計数した。細胞溶液を希釈して、各ウェルにつき２５０，０００細胞／１００μｌを含有させた。
９６ウェルマウスＩＦＮ ＥＬＩＳＰＯＴキット（Ｍａｂｔｅｃｈ ＵＳＡ）のプレコートプレートをこのアッセイに使用した。使用前に、プレートを滅菌ＰＢＳで４回水和した（２００μｌ／ウェル）。プレートは次いで、ＣＴＬ培地（脾細胞の単離に使用したものと同じ）で室温で少なくとも３０分間馴化された。２５０，０００個のマウス脾細胞を各ウェルにプレーティングし、表面糖タンパク質のＮ末端Ｓ１ドメインを覆う１５ｍｅｒペプチドのプールで２０時間刺激した。ｐｅｐｔｉｖａｔｏｒ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｐｒｏｔは、表面糖タンパク質のａａ配列１－６９２を含む（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、カタログ番号１３０－１２７－０４１）。スポットは、製造者の説明書に基づいて開発された。ＣＴＬ培地およびＰＭＡ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を陰性対照および陽性対照にそれぞれ使用した。スポットを走査し、Ｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔ ＣＴＬリーダーＳ６（ＣＴＬ、ＵＳＡ）によって定量した。２５０，０００細胞あたりのスポット形成単位を計算し、重複ウェルから平均した。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルス中和アッセイ
ｈＡＣＥ２およびＴＭＰＲＳＳ２を安定に発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ）を９６ウェルプレートに１６時間播種した。ワクチン接種群およびナイーブ群からのマウス血清を、別個の希釈プレートにおいて、細胞培地中で１：１０希釈から開始して３重で段階希釈した。希釈した血清を、ＢＰＳ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から入手した固定濃度のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ ｅＧＦＰレポーター（Ｄ６１４Ｇ）シュードタイプ化レンチウイルスと共に３７℃で１時間インキュベートした。次いで、マウス血清およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓシュードタイプ化ウイルス混合物を、細胞を含有する９６ウェルプレートに移し、標準的なインキュベーター（湿度３７％、５％ ＣＯ２）内で４８時間インキュベートした。ＧＦＰ陽性細胞をＩｍｍｕｎｏｓｐｏｔ Ｓ６ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ）で感染後に画像化し、明視野画像を使用して各ウェル中の細胞の存在を確認した。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓシュードウイルスは、ｈＡＣＥ２およびＴＲＭＰＳＳ２タンパク質なしでは正常な２９３Ｔ細胞に感染することができなかった。中和力価を、ＧＦＰ陽性細胞の数がウイルス対照ウェルと比較して５０％減少した血清希釈度として計算した。
クラウンポロキサマーの有無による中和および免疫原性（ｐＶａｃ１）
図１７Ａは、エレクトロポレーション（ＥＰ）によって送達されたｐＶａｃ１で免疫化されたマウスからの血清が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ ｅＧＦＰレポーター（Ｄ６１４Ｇ）シュードタイプレンチウイルスを部分的に中和することができることを示す。さらに、クラウンポロキサマー（ＣＰ）を用いて送達した場合、ｐＶａｃ１は、ＩｇＧ抗原Ｓ特異的ＥＬＩＳＡで測定される通り、１４日および３５日の両方で抗原依存性応答を確立した（図１７Ｂ）。マウスＴ細胞機能アッセイを使用して、エレクトロポレーションの有無にかかわらず、ｐＵＮＯおよびｐＶａｃ１のＴ細胞応答を測定した（図１７Ｃ）。ＣＰと共に送達されたｐＶａｃ１およびｐＵＮＯの両方が、エレクトロポレーションによる送達と比較してＴ細胞応答を増加させた。図１７Ｃの各柱は、４つの脾臓のプールの複製の平均を表す。
クラウンポロキサマー（ＣＰ）と共に送達したｐＵＮＯ Ｓで免疫化したマウスの血清を中和アッセイで分析した（図１８）。ＣＰと共に送達される場合、ｐＵＮＯ Ｓは、ウイルス保護を示すスパイク－シュードウイルス侵入を阻止することができる。
クラウンポロキサマーの有無による免疫原性（ｐＶａｃ２およびＰＶａｃ３）
マウスＴ細胞機能アッセイを使用して、エレクトロポレーションありおよびなしで、ｐＵＮＯ、ｐＶａｃ２およびｐＶａｃ３のＴ細胞応答を測定した（図１９）。エレクトロポレーション（ＥＰ）またはクラウンポロキサマー（ＣＰ）のいずれかによって送達されたｐＵＮＯ、ｐＶａｃ２およびｐＶａｃ３は、１５ｍｅｒのＳ重複ペプチドライブラリーの存在下でＴ細胞応答（すなわち、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）産生）を誘発した。図１９の各柱は、４つの脾臓のプールの複製の平均を表す。
ワクチン製剤および投与レジメンに対する免疫応答
マウスＴ細胞機能アッセイを使用して、２回および３回の免疫注射によるｐＵＮＯおよびｐＶａｃ１のＴ細胞応答を測定した（図２０Ａ）。ｐＶａｃ１による３回の免疫化は、ｐＵＮＯによる２回および３回の免疫化の両方よりも高いＴ細胞応答を誘発した。すべての免疫スケジュールは、対照と比較してＴ細胞応答を誘発した。各柱は、４つの脾臓のプールの複製の平均を表す。エラーバーは標準偏差を表す。
２回の免疫または３回の免疫後のＤＮＡワクチン（ｐＶａｃ１およびｐＵＮＯ ２５０ｕｇ、ＩＭ）に対するＢ細胞応答を測定した（図２０Ｂ）。力価は、２回免疫化した群と比較して、３回免疫化した群のほうが高い。予想外にも、ｐＶａｃ１で３回免疫化したマウスにおいて、ｐＵＮＯでの３回の免疫化と比較して改善された細胞応答が観察された。各柱は、４つの脾臓のプールの複製点の平均を表す。エラーバーは標準偏差を表す。
６．１１ 将来の前臨床免疫研究
理想的なブースト間隔時間を評価するために、０．５％クラウンポロキサマーを含む２５０ｕｇの製剤化ＤＮＡプラスミドによるブーストＩＭ注射を２週間、３週間、および４週間の間隔で投与する。注射の３週間後に血液および脾臓を単離して、ＩｇＧ応答およびＴ細胞応答を評価し、続いてＳＡＲ－ＣｏＶ２シュードウイルス中和アッセイを行う。
製剤化ＤＮＡプラスミドワクチンの有効性を評価するために、皮下および皮内経路をＤＮＡプラスミドの評価に使用する。ＩｇＧ応答およびＴ細胞応答を、これらの研究のすべてについて評価し、続いて、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２シュードウイルス中和アッセイを行う。












表３：配列
配列表１～２ ＜２２３＞ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ タンパク質
配列表３～４ ＜２２３＞ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｄ６１４Ｇ Ｓタンパク質
配列表５～６ ＜２２３＞ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ Ｓタンパク質
配列表７～８ ＜２２３＞ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｍタンパク質
配列表９～１０ ＜２２３＞ＷＡ９－ＵＷ６バリアント Ｍ タンパク質
配列表１１～１２ ＜２２３＞ＮＩＨＥバリアントＭタンパク質
配列表１３～１４ ＜２２３＞Ｗｕｈａｎ＿ＩＭＥ＿ＢＪＯ７ バリアントＭタンパク質
配列表１５～１６ ＜２２３＞ＷＡ－ＵＷ－１７５３バリアントＭタンパク質
配列表１７～１８ ＜２２３＞ＷＡ ＵＷ－１７５５ バリアントＭタンパク質
配列表１９～２０ ＜２２３＞ＵＳＡ＿ＳＣ＿３５７２ バリアントＭタンパク質
配列表２１～２２ ＜２２３＞ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｅ タンパク質
配列表２３～２４ ＜２２３＞ＵＳＡ＿ＷＡ－ＵＷ－１５８８バリアントＥタンパク質
配列表２５～２６ ＜２２３＞ＳＮＵ０１バリアントＥタンパク質
配列表２７～２８ ＜２２３＞ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎタンパク質
配列表２９ ＜２２３＞ＳＶ４０ ｐ（Ａ）テール
配列表３０ ＜２２３＞ｂＧＨ ｐ（Ａ）テール
配列表３１ ＜２２３＞ヒトＣＭＶプロモーター
配列表３２ ＜２２３＞ＳＶ４０プロモーター
配列表３３ ＜２２３＞ＣＡＧプロモーター
配列表３４～３６ ＜２２３＞チクングニアウイルス抗原
配列表３７ ＜２２３＞ＳＶ４０ エンハンサー
配列表３８ ＜２２３＞ｈＥＦ１－ＨＴＬＶ プロモーター
配列表３９ ＜２２３＞ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｄ６１４ＧスパイクトランケートＳ１
配列表４０ ＜２２３＞ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｄ６１４Ｇ スパイクトランケートＳ１
配列表４１ ＜２２３＞ＩＲＥＳブリッジ
配列表４２～４３ ＜２２３＞マウスＩＬ－１２ ｐ３５
配列表４４～４５ ＜２２３＞マウスＩＬ－１２ ｐ４０
配列表４６～４７ ＜２２３＞ヒトＩＬ－１２ ｐ３５
配列表４８～４９ ＜２２３＞ヒトＩＬ－１２ ｐ４０
配列表５１ ＜２２３＞ＡｇｅＩＭｈｉｓ－Ｆ
配列表５２ ＜２２３＞ｐＡｃｅｌｓｉｏｎ－Ｒ
配列表５３ ＜２２３＞ＣｅｌｓｉｏｎＡｇｅＩｓｐ１－Ｆ
配列表５４ ＜２２３＞ＩＲＥＳＳａｌＩ－Ｒ
配列表５６ ＜２２３＞ＰｓｐＸＩ－ＳＶ４０ｐＡ－Ｆ
配列表５７ ＜２２３＞Ｃｌｓ－ＳａｐＩ－Ｒ
配列表５８ ＜２２３＞Ｃｌｓ－ＢｇｌＩＩ－Ｒ－２
配列表５９ ＜２２３＞Ｃｌｓ－ＸｍｎＩ－Ｒ
配列表６０ ＜２２３＞ＣＬＳ－ＰｓｐＸＩ－ＩＲＥＳ－Ｆ
配列表６１ ＜２２３＞ＩＲＥＳｃｅｌｓｉｏｎ－Ｒ
配列表６２ ＜２２３＞Ｍｈｉｓｃｅｌｓｉｏｎ－Ｆ
配列表６３ ＜２２３＞ＣＬＳ－Ｍ－Ｒ
配列表６４ ＜２２３＞ＣＬＳ－ＸｂａＩ－Ｍ－Ｆ
配列表６５ ＜２２３＞ＣＬＳ－ＭｌｕＩ－Ｍ－Ｒ

Claims (298)

  1. （ａ）第１の病原体タンパク質またはその抗原性断片をコードする第１抗原核酸であって、第１のプロモーターに作動可能に連結されている第１抗原核酸；および
    （ｂ）免疫修飾因子をコードする核酸
    を含む、ポリヌクレオチド。
  2. 免疫修飾因子をコードする２つ以上の核酸を含む、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
  3. 免疫修飾因子をコードする前記核酸の各々が、異なる免疫修飾因子をコードする、請求項２に記載のポリヌクレオチド。
  4. 第１の病原体タンパク質をコードする前記第１抗原核酸が、ウイルスタンパク質、細菌タンパク質、寄生虫タンパク質、およびそれらの任意の抗原性断片からなる群から選択される、請求項１～３のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  5. （ｃ）第２の病原体タンパク質またはその抗原性断片をコードする第２抗原核酸
    をさらに含む、請求項１～４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  6. 第２の病原体タンパク質をコードする前記第２抗原核酸が、ウイルスタンパク質、細菌タンパク質、寄生虫タンパク質、およびそれらの任意の抗原性断片からなる群から選択される、請求項５に記載のポリヌクレオチド。
  7. 前記第１の病原体タンパク質および／または前記第２の病原体タンパク質が、ペスト菌抗原、結核菌抗原、エンテロウイルス抗原、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）抗原、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）抗原、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）抗原、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）抗原、デングウイルス抗原、エボラウイルス抗原、ジカウイルス、チクングニアウイルス抗原、麻疹ウイルス抗原、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ抗原、トキソプラズマ抗原、熱帯熱マラリア原虫抗原、それらの抗原性断片、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１～６のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  8. 前記第１の病原体タンパク質および／または前記第２の病原体タンパク質が、ペスト菌Ｆ１－Ａｇ、ペスト菌Ｖ－Ａｇ、結核菌Ａｐａ抗原、結核菌ＨＰ６５抗原、結核菌ｒＡｇ８５Ａ抗原、Ｅ７１ ＶＰ１抗原、ＧＳＴタグ付きＥ７１－ＶＰ１抗原、Ｃｏｘタンパク質抗原、ＧＳＴタグ付きＣｏｘタンパク質抗原、ＨＳＶ－１エンベロープ抗原、ＨＳＶ－２エンベロープ抗原、ＨＳＶ－２ ｇＢ２抗原、ＨＳＶ－２ ｇＣ２抗原、ＨＳＶ－２ ｇＤ２抗原、ＨＳＶ－２ ｇＥ２抗原、ＨＩＶ Ｅｎｖ抗原、ＨＩＶ Ｇａｇ抗原、ＨＩＶ Ｎｅｆ抗原、ＨＩＶ Ｐｏｌ抗原、ＨＰＶマイナーカプシドタンパク質Ｌ２抗原、ＨＣＶ ＮＳ３抗原、ＲＳＶ Ｆ抗原、ＲＳＶ Ｇ抗原、デングウイルスＥタンパク質抗原、デングウイルスＥＤＩＩＩ抗原、デングウイルスＮＳ１抗原、デングウイルスＤＥＮ－８０Ｅ抗原、エボラウイルスＧＢ抗原、エボラウイルスＶＰ２４抗原、エボラウイルスＶＰ４０抗原、エボラウイルスＮＰ抗原、エボラウイルスＶＰ３０抗原、エボラウイルスＶＰ３５抗原、ジカウイルスエンベロープドメインＩＩＩ抗原、ジカウイルスＣＫＤ抗原、チクングニアウイルスＥ１糖タンパク質サブユニット抗原、ＭＨＣクラスＩエピトープＰＰＦＧＡＧＲＰＧＱＦＧＤＩ（配列番号：３４）、ＭＨＣクラスＩエピトープＴＡＥＣＫＤＫＮＬ（配列番号：３５）、ＭＨＣクラスＩＩエピトープＶＲＹＫＣＮＣＧＧ（配列番号：３６）、麻疹ウイルス赤血球凝集素タンパク質ＭＶ－Ｈ抗原、麻疹ウイルス融合タンパク質ＭＶ－Ｆ抗原、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質抗原、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン由来の抗原、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質の膜融合ドメイン由来の抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン由来の抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質の膜融合ドメイン由来の抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｅタンパク質抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｍタンパク質抗原、トキソプラズマＭＩＣ８抗原、熱帯熱マラリア原虫ＳＥＲＡ５ポリペプチド抗原、熱帯熱マラリア原虫サーカムスポロゾイト（ｃｉｒｃｕｍｓｐｏｒｏｚｉｔｅ）タンパク質抗原、それらの抗原性断片、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項７に記載のポリヌクレオチド。
  9. 前記第１の病原体タンパク質および／または前記第２の病原体タンパク質が、インフルエンザウイルス抗原またはその抗原性断片である、請求項１～８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  10. 前記第１の病原体タンパク質および／または前記第２の病原体タンパク質が、インフルエンザウイルス赤血球凝集素（ＨＡ）抗原、インフルエンザウイルスノイラミニダーゼ（ＮＡ）抗原、インフルエンザウイルスマトリックス－２（Ｍ２）タンパク質抗原、それらの抗原性断片、およびそれらの任意の組み合わせである、請求項９に記載のポリヌクレオチド。
  11. 前記第１の病原体タンパク質が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質またはその抗原性断片であり、前記第２の病原体タンパク質が、インフルエンザウイルス赤血球凝集素（ＨＡ）抗原、インフルエンザウイルスノイラミニダーゼ（ＮＡ）抗原、インフルエンザウイルスマトリックス－２（Ｍ２）タンパク質抗原、それらの抗原性断片、およびそれらの任意の組み合わせである、請求項９または１０に記載のポリヌクレオチド。
  12. 前記第１抗原核酸が、ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片をコードする、請求項１～１０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  13. 前記第２の病原体タンパク質またはその抗原性断片が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｍタンパク質またはその抗原性断片、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｅタンパク質またはその抗原性断片、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎタンパク質またはその抗原性断片、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項５～１０および１２のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  14. 前記第１の病原体タンパク質が、ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２膜（Ｍ）タンパク質、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２エンベロープ（Ｅ）タンパク質、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質またはその抗原性断片からなる群から選択されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質またはその抗原性断片であり、前記第２の病原体タンパク質が、ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２膜（Ｍ）タンパク質、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２エンベロープ（Ｅ）タンパク質、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質またはその抗原性断片からなる群から選択されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質またはその抗原性断片である、請求項５に記載のポリヌクレオチド。
  15. 前記第１の病原体タンパク質がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片であり、前記第２の病原体タンパク質がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片であり、第１および第２の病原体タンパク質がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓの異なる株に由来する、請求項１４に記載のポリヌクレオチド。
  16. 前記第２抗原核酸が、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列を介して前記第１のプロモーターに作動可能に連結されている、請求項５～１５のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  17. 前記ＩＲＥＳ配列が、配列番号４１と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項１６に記載のポリヌクレオチド。
  18. １つ以上の第２のプロモーターを含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  19. 前記第２抗原核酸が、前記１つ以上の第２のプロモーターに作動可能に連結されている、請求項１８に記載のポリヌクレオチド。
  20. 免疫修飾因子をコードする前記核酸の１つまたは複数が、前記１つ以上の第２のプロモーターに作動可能に連結されている、請求項１～１９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  21. 第１抗原核酸が、哺乳動物伸長因子１（ＥＦ１）プロモーターに作動可能に連結されており、免疫修飾因子をコードする１つ以上の核酸が、１つ以上のサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターに作動可能に連結されている、請求項２０に記載のポリヌクレオチド。
  22. 前記第１抗原核酸が、哺乳動物ＥＦ１プロモーターに作動可能に連結されており、前記第２抗原核酸が、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列を介して前記ＥＦ１プロモーターに作動可能に連結されており、免疫修飾因子をコードする前記１つ以上の核酸が、１つ以上のサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターに作動可能に連結されている、請求項２０に記載のポリヌクレオチド。
  23. 前記ＩＲＥＳ配列が、配列番号４１と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項２２に記載のポリヌクレオチド。
  24. 前記哺乳動物ＥＦ１プロモーターがｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである、請求項２１～２３のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  25. 免疫修飾因子をコードする前記核酸の１つ以上が、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列を介して前記第１のプロモーターまたは前記１つ以上の第２のプロモーターに作動可能に連結されている、請求項１～２０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  26. 前記ＩＲＥＳ配列が、配列番号４１と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項２５に記載のポリヌクレオチド。
  27. 前記第１のプロモーターまたは前記１つ以上の第２のプロモーターが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、モロニーマウス白血病ウイルス（Ｍｏ－ＭｕＬＶ）長末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーター、哺乳動物伸長因子１（ＥＦ１）プロモーター、サイトケラチン１８（ＣＫ１８）プロモーター、サイトケラチン１９（ＣＫ１９）プロモーター、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）プロモーター、マウスＵ６プロモーター、骨格α－アクチンプロモーター、β－アクチンプロモーター、マウスホスホグリセリン酸キナーゼ１（ＰＧＫ１）プロモーター、ヒトＰＧＫ１プロモーター、ＣＢＡプロモーター、ＣＡＧプロモーター、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１～２６のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  28. 前記第１のプロモーターが前記哺乳動物ＥＦ１プロモーターである、請求項２７に記載のポリヌクレオチド。
  29. 前記哺乳動物ＥＦ１プロモーターがｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである、請求項２７または２８に記載のポリヌクレオチド。
  30. 前記１つ以上の第２のプロモーターが前記ＣＭＶプロモーターである、請求項２７～２９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  31. 免疫修飾因子をコードする前記核酸の各々が、ＣＭＶプロモーター、ＲＳＶプロモーター、Ｍｏ－ＭｕＬＶ ＬＴＲプロモーター、哺乳動物ＥＦ１プロモーター、ＣＫ１８プロモーター、ＣＫ１９プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、マウスＵ６プロモーター、骨格α－アクチンプロモーター、β－アクチンプロモーター、マウスＰＧＫ１プロモーター、ヒトＰＧＫ１プロモーター、ＣＢＡプロモーター、ＣＡＧプロモーター、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるプロモーターの制御下にある、請求項１～１３のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  32. 前記哺乳動物ＥＦ１プロモーターがｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである、請求項３１に記載のポリヌクレオチド。
  33. 前記第２抗原核酸が、ＣＭＶプロモーター、ＲＳＶプロモーター、Ｍｏ－ＭｕＬＶ ＬＴＲプロモーター、哺乳動物ＥＦ１プロモーター、ＣＫ１８プロモーター、ＣＫ１９プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、マウスＵ６プロモーター、骨格α－アクチンプロモーター、β－アクチンプロモーター、マウスＰＧＫ１プロモーター、ヒトＰＧＫ１プロモーター、ＣＢＡプロモーター、ＣＡＧプロモーター、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるプロモーターの制御下にある、請求項５～１３のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  34. 前記哺乳動物ＥＦ１プロモーターがｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである、請求項３３に記載のポリヌクレオチド。
  35. 前記免疫修飾因子が、インターロイキン（ＩＬ）２（ＩＬ－２）、ＩＬ－１２ ｐ３５、ＩＬ－１２ ｐ４０、ＩＬ－１２ ｐ７０、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、インターフェロン（ＩＦＮ）α（ＩＦＮ－α）、ＩＦＮ－β、ケモカイン、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ（ＭＨＣ Ｉ）、ＭＨＣクラスＩＩ（ＭＨＣ ＩＩ）、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）－ＤＲアイソタイプ（ＨＬＡ－ＤＲ）、ＣＤ８０、ＣＤ８６、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１～３４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  36. 前記ケモカインが、Ｃ－Ｃモチーフケモカインリガンド（ＣＣＬ）３（ＣＣＬ３）、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２８、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド（ＣＸＣＬ）１０（ＣＸＣＬ１０）、およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、請求項３５に記載のポリヌクレオチド。
  37. 免疫修飾因子をコードする前記２つ以上の核酸が、（ｉ）インターロイキンをコードする核酸、ならびに（ｉｉ）主要組織適合遺伝子複合体および／またはケモカインをコードする核酸の組み合わせを含む、請求項２～３６のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  38. 免疫修飾因子をコードする前記核酸の１つ以上が、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸、またはそれらの組み合わせを含む、請求項１～３５および３７のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  39. ＩＬ－１２ ｐ３５をコードする前記核酸が、配列番号４６と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項３８に記載のポリヌクレオチド。
  40. 前記ＩＬ－１２ ｐ３５が配列番号４７のアミノ酸配列を含む、請求項３９に記載のポリヌクレオチド。
  41. ＩＬ－１２ ｐ４０をコードする前記核酸が、配列番号４８と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項３８～４０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  42. 前記ＩＬ－１２ ｐ４０が配列番号４９のアミノ酸配列を含む、請求項４１に記載のポリヌクレオチド。
  43. 免疫修飾因子をコードする前記核酸の１つ以上が、ＭＨＣ Ｉをコードする核酸、ＭＨＣ ＩＩをコードする核酸、またはそれらの組み合わせを含む、請求項１～３５および３７～４２のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  44. 免疫修飾因子をコードする前記核酸の１つ以上が、ＩＬ－１２をコードする核酸、ＩＬ－１５をコードする核酸、またはそれらの組み合わせを含む、請求項１～３５および３７のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  45. 免疫修飾因子をコードする前記２つ以上の核酸が、ＩＬ－１２をコードする核酸とＩＬ－１５をコードする核酸との組み合わせを含む、請求項２～３６のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  46. 免疫修飾因子をコードする前記核酸の１つ以上が、ＩＬ－２をコードする核酸、ＩＬ－１５をコードする核酸、またはそれらの組み合わせを含む、請求項１～３５および３７のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  47. 免疫修飾因子をコードする前記核酸の１つ以上が、ＭＨＣ Ｉをコードする核酸、ＭＨＣ ＩＩをコードする核酸、ＣＣＬ３をコードする核酸、ＣＣＬ４をコードする核酸、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、請求項１～４４および４６のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  48. 免疫修飾因子をコードする前記核酸の１つ以上が、ＣＣＬ３をコードする核酸、ＣＣＬ４をコードする核酸、ＩＬ－２をコードする核酸、ＩＬ－１５をコードする核酸、またはそれらの組み合わせを含む、請求項１～４４および４６～４７のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  49. 前記第１抗原核酸が、配列番号２または配列番号４の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸をコードする、請求項１～４８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  50. 前記第１抗原核酸が、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、請求項１～４９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  51. 前記第１抗原核酸が、配列番号１または配列番号３と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項１～５０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  52. 前記第１抗原核酸が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）またはその抗原性断片をコードする、請求項１～４８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  53. 前記第１抗原核酸が、配列番号６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸をコードする、請求項１～４８および５２のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  54. 前記第１抗原核酸が、配列番号６のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、請求項１～４８および５２～５３のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  55. 前記第１抗原核酸が、配列番号５と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項１～４８および５２～５４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  56. 前記第１抗原核酸が、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片のＳ１サブユニットをコードする、請求項１～４８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  57. 前記第１抗原核酸が、配列番号４０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも５５０、少なくとも６００、少なくとも６５０、または少なくとも６６０個の連続アミノ酸をコードする、請求項１～４８および５６のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  58. 前記第１抗原核酸が、配列番号４０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、請求項１～４８および５６～５７のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  59. 前記第１抗原核酸が、配列番号３９と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項１～４８および５６～５８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  60. 前記第２抗原核酸が、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１２０、少なくとも１４０、少なくとも１６０、少なくとも１８０、少なくとも２００、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸をコードする、請求項５～５９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  61. 前記第２抗原核酸が、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８または配列番号２０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、請求項５～６０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  62. 前記第２抗原核酸が、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、または配列番号１９と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項５～６１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  63. 前記第２抗原核酸が、配列番号２２、配列番号２４または配列番号２６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、または少なくとも７５個の連続アミノ酸をコードする、請求項５～５９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  64. 前記第２抗原核酸が、配列番号２２、配列番号２４または配列番号２６のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、請求項５～５９および６３のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  65. 前記第２抗原核酸が、配列番号２１、配列番号２３または配列番号２５と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項５～５９および６３～６４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  66. 前記第２抗原核酸が、配列番号２８の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、または少なくとも４００個の連続アミノ酸をコードする、請求項５～５９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  67. 前記第２抗原核酸が、配列番号２８のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、請求項５～５９および６６のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  68. 前記第２抗原核酸が、配列番号２７と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項５～５９および６６～６７のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  69. 前記第１抗原核酸が、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質のＳ１サブユニットまたはその抗原性断片をコードし、前記第１抗原核酸が、哺乳動物伸長因子１（ＥＦ１）プロモーターに作動可能に連結されており、免疫修飾因子をコードする前記２つ以上の核酸が、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸およびＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸を含み、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードする前記核酸が第１のＣＭＶプロモーターに作動可能に連結されており、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードする前記核酸が第２のＣＭＶプロモーターに作動可能に連結されている、請求項２に記載のポリヌクレオチド。
  70. 前記第１抗原核酸が、配列番号４０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも５５０、少なくとも６００、少なくとも６５０、または少なくとも６６０個の連続アミノ酸をコードする、請求項６９に記載のポリヌクレオチド。
  71. 前記第１抗原核酸が、配列番号４０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、請求項６９または７０に記載のポリヌクレオチド。
  72. 前記第１抗原核酸が、配列番号３９と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項６９～７１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  73. ＩＬ－１２ ｐ３５をコードする前記核酸が、配列番号４６と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項６９～７２のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  74. 前記ＩＬ－１２ ｐ３５が配列番号４７のアミノ酸配列を含む、請求項７３に記載のポリヌクレオチド。
  75. ＩＬ－１２ ｐ４０をコードする前記核酸が、配列番号４８と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項６９～７４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  76. 前記ＩＬ－１２ ｐ４０が配列番号４９のアミノ酸配列を含む、請求項７５に記載のポリヌクレオチド。
  77. 前記第１抗原核酸が、前記ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質の前記Ｓ１サブユニットまたはその抗原性断片をコードし、前記第１抗原核酸が、哺乳動物伸長因子１（ＥＦ１）プロモーターに作動可能に連結されており、前記第２抗原核酸が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２膜（Ｍ）タンパク質またはその抗原性断片をコードし、前記第２抗原核酸が、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列を介して前記ＥＦ１プロモーターに作動可能に連結されており、免疫修飾因子をコードする前記２つ以上の核酸が、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸およびＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸を含み、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードする前記核酸が、第１のＣＭＶプロモーターに作動可能に連結されており、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードする前記核酸が、第２のＣＭＶプロモーターに作動可能に連結されている、請求項５に記載のポリヌクレオチド。
  78. 前記第１抗原核酸が、配列番号４０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも５５０、少なくとも６００、少なくとも６５０、または少なくとも６６０個の連続アミノ酸をコードする、請求項７７に記載のポリヌクレオチド。
  79. 前記第１抗原核酸が、配列番号４０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、請求項７７または７８に記載のポリヌクレオチド。
  80. 前記第１抗原核酸が、配列番号３９と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項７７～７９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  81. 前記第２抗原核酸が、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１２０、少なくとも１４０、少なくとも１６０、少なくとも１８０、少なくとも２００、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸をコードする、請求項７７～８０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  82. 前記第２抗原核酸が、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８または配列番号２０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、請求項７７～８１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  83. 前記第２抗原核酸が、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、または配列番号１９と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項７７～８２のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  84. ＩＬ－１２ ｐ３５をコードする前記核酸が、配列番号４６と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項７７～８３のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  85. 前記ＩＬ－１２ ｐ３５が配列番号４７のアミノ酸配列を含む、請求項８４に記載のポリヌクレオチド。
  86. ＩＬ－１２ ｐ４０をコードする前記核酸が、配列番号４８と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項７７～８５のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  87. 前記ＩＬ－１２ ｐ４０が配列番号４９のアミノ酸配列を含む、請求項８６に記載のポリヌクレオチド。
  88. 前記ＩＲＥＳ配列が、配列番号４１と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項７７～８７のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  89. 前記第１抗原核酸が、全長ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片をコードし、第１抗原核酸が、哺乳動物伸長因子１（ＥＦ１）プロモーターに作動可能に連結されており、免疫修飾因子をコードする前記２つ以上の核酸が、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸およびＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸を含み、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードする前記核酸が第１のＣＭＶプロモーターに作動可能に連結されており、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードする前記核酸が第２のＣＭＶプロモーターに作動可能に連結されている、請求項３に記載のポリヌクレオチド。
  90. 前記第１抗原核酸が、配列番号２または配列番号４の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸をコードする、請求項８９に記載のポリヌクレオチド。
  91. 前記第１抗原核酸が、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、請求項８９または９０に記載のポリヌクレオチド。
  92. 前記第１抗原核酸が、配列番号１または配列番号３と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項８９～９１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  93. ＩＬ－１２ ｐ３５をコードする前記核酸が、配列番号４６と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項８９～９２のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  94. 前記ＩＬ－１２ ｐ３５が配列番号４７のアミノ酸配列を含む、請求項９３に記載のポリヌクレオチド。
  95. ＩＬ－１２ ｐ４０をコードする前記核酸が、配列番号４８と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項８９～９４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  96. 前記ＩＬ－１２ ｐ４０が配列番号４９のアミノ酸配列を含む、請求項９５に記載のポリヌクレオチド。
  97. 前記第１抗原核酸が、全長ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片をコードし、前記第１抗原核酸が、哺乳動物伸長因子１（ＥＦ１）プロモーターに作動可能に連結されており、前記第２抗原核酸が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２膜（Ｍ）タンパク質またはその抗原性断片をコードし、前記第２抗原核酸が、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列を介して前記ＥＦ１プロモーターに作動可能に連結されており、免疫修飾因子をコードする前記２つ以上の核酸が、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードする核酸およびＩＬ－１２ ｐ４０をコードする核酸を含み、ＩＬ－１２ ｐ３５をコードする前記核酸が、第１のＣＭＶプロモーターに作動可能に連結されており、ＩＬ－１２ ｐ４０をコードする前記核酸が、第２のＣＭＶプロモーターに作動可能に連結されている、請求項５に記載のポリヌクレオチド。
  98. 前記第１抗原核酸が、配列番号２または配列番号４の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸をコードする、請求項９７に記載のポリヌクレオチド。
  99. 前記第１抗原核酸が、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、請求項９７または９８に記載のポリヌクレオチド。
  100. 前記第１抗原核酸が、配列番号１または配列番号３と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項９７～９９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  101. 前記第２抗原核酸が、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１２０、少なくとも１４０、少なくとも１６０、少なくとも１８０、少なくとも２００、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸をコードする、請求項９７～１００のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  102. 前記第２抗原核酸が、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８または配列番号２０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、請求項９７～１０１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  103. 前記第２抗原核酸が、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、または配列番号１９と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項９７～１０２のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  104. ＩＬ－１２ ｐ３５をコードする前記核酸が、配列番号４６と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項９７～１０３のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  105. 前記ＩＬ－１２ ｐ３５が配列番号４７のアミノ酸配列を含む、請求項１０４に記載のポリヌクレオチド。
  106. ＩＬ－１２ ｐ４０をコードする前記核酸が、配列番号４８と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項９７～１０５のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  107. 前記ＩＬ－１２ ｐ４０が配列番号４９のアミノ酸配列を含む、請求項１０６に記載のポリヌクレオチド。
  108. 前記ＩＲＥＳ配列が、配列番号４１と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項９７～１０７のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  109. １つ以上の転写後調節エレメントをさらに含む、請求項１～１０８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  110. 前記転写後調節エレメントが、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）である、請求項１０９に記載のポリヌクレオチド。
  111. 前記第１抗原核酸、前記第２抗原核酸、免疫修飾因子をコードする前記核酸、またはそれらの任意の組み合わせに作動可能に連結された少なくとも１つの３’ＵＴＲポリ（ａ）テール配列をさらに含む、請求項１～１１０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  112. 前記３’ＵＴＲポリ（ａ）テール配列が、３’ＵＴＲ ＳＶ４０ポリ（ａ）テール配列、３’ＵＴＲウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）ポリ（Ａ）配列、３’ＵＴＲアクチンポリ（Ａ）テール配列、３’ＵＴＲヘモグロビンポリ（Ａ）配列、またはそれらの組み合わせである、請求項１１１に記載のポリヌクレオチド。
  113. 少なくとも１つのエンハンサー配列をさらに含む、請求項１～１１２のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  114. 前記エンハンサー配列が、ヒトアクチンエンハンサー配列、ヒトミオシンエンハンサー配列、ヒトヘモグロビンエンハンサー配列、ヒト筋クレアチンエンハンサー配列、ウイルスエンハンサー配列、ポリヌクレオチド機能エンハンサー配列、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項１１３に記載のポリヌクレオチド。
  115. 前記エンハンサー配列が、ＣＭＶイントロン配列、β－アクチンイントロン配列、またはそれらの組み合わせである、請求項１１３または１１４に記載のポリヌクレオチド。
  116. 前記エンハンサー配列がＣＭＶイントロン配列である、請求項１１５に記載のポリヌクレオチド。
  117. 前記エンハンサー配列が、ＣＭＶイントロン配列、ＳＶ４０エンハンサー配列、β－アクチンイントロン配列、またはそれらの組み合わせである、請求項１１３または１１４に記載のポリヌクレオチド。
  118. 逆方向末端反復配列（ＩＴＲ）をさらに含む、請求項１～１１７のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  119. 第１のＩＴＲおよび第２のＩＴＲを含む、請求項１１８に記載のポリヌクレオチド。
  120. 前記第１のＩＴＲおよび前記第２のＩＴＲが、両方ともアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）に由来する、請求項１１９に記載のポリヌクレオチド。
  121. ＤＮＡプラスミド、ウイルスベクター、細菌ベクター、コスミドまたは人工染色体である、請求項１～１２０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
  122. 前記ＤＮＡプラスミドベクターが、ｐＶａｃ ２、ｐＶａｃ ３、ｐＶａｃ ５およびｐＶａｃ ６からなる群から選択される、請求項１２１に記載のベクター。
  123. 前記ウイルスベクターが、ＡＡＶベクター、アデノウイルスベクター、レトロウイルスベクター、ポックスウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、またはそれらの組み合わせから選択される、請求項１２１に記載のベクター。
  124. 請求項１～１２０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドまたは請求項１２１～１２３に記載のベクターを含む組成物、医薬組成物またはワクチン。
  125. 薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項１２４に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  126. ＩＬ－２、ＩＬ－１２ ｐ３５、ＩＬ－１２ ｐ４０、ＩＬ－１２ ｐ７０、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＴＮＦα、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ケモカイン、ＭＨＣ Ｉ、ＭＨＣ ＩＩ、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ８０およびＣＤ８６からなる群から選択される少なくとも１つの免疫修飾因子をコードする第２のポリヌクレオチドをさらに含み、前記少なくとも１つの免疫修飾因子をコードする前記ポリヌクレオチドがプロモーターに作動可能に連結されている、請求項１２４または１２５に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  127. 送達成分をさらに含む、請求項１２４～１２６のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  128. 請求項１～１２０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む、ＤＮＡプラスミドベクター。
  129. ｐＶａｃ ２、ｐＶａｃ ３、ｐＶａｃ ５およびｐＶａｃ ６からなる群から選択される、請求項１２８に記載のＤＮＡプラスミドベクター。
  130. （ａ）請求項１～１２０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドまたは請求項１２８もしくは１２９に記載のＤＮＡプラスミドベクター、および（ｂ）送達成分を含む組成物、医薬組成物またはワクチン。
  131. 凍結乾燥される、請求項１２４～１２７および１３０のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  132. ＩＬ－２、ＩＬ－１２ ｐ３５、ＩＬ－１２ ｐ４０、ＩＬ－１２ ｐ７０、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＴＮＦα、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ケモカイン、ＭＨＣ Ｉ、ＭＨＣ ＩＩ、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ８０およびＣＤ８６からなる群から選択される少なくとも１つの免疫修飾因子をコードする第２のポリヌクレオチドをさらに含み、前記少なくとも１つの免疫修飾因子をコードする前記ポリヌクレオチドがプロモーターに作動可能に連結されている、請求項１２４～１２７および１３０～１３１のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物、ワクチンまたは凍結乾燥組成物。
  133. 前記送達成分が、カチオン性ポリマー、ポリイノシン－ポリシチジル酸、またはポロキサマーもしくはその誘導体である、請求項１２４～１２７および１３０～１３２のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物、ワクチン、または凍結乾燥組成物。
  134. （ａ）ポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドを含むベクター、および（ｂ）送達成分を含み、
    前記ポリヌクレオチドが、第１の病原体タンパク質またはその抗原性断片をコードする第１抗原核酸を含み、
    前記第１抗原核酸が、第１のプロモーターに作動可能に連結され、
    場合により前記送達成分が、カチオン性ポリマー、ポリイノシン－ポリシチジル酸、またはポロキサマーもしくはその誘導体である、組成物、医薬組成物またはワクチン。
  135. 第１の病原体タンパク質をコードする前記第１抗原核酸が、ウイルスタンパク質、細菌タンパク質、寄生虫タンパク質、およびそれらの任意の抗原性断片からなる群から選択される、請求項１３４に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  136. 前記ポリヌクレオチドが、第２の病原体タンパク質またはその抗原性断片をコードする第２抗原核酸をさらに含む、請求項１３４または１３５に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  137. 第２の病原体タンパク質をコードする前記第２抗原核酸が、ウイルスタンパク質、細菌タンパク質、寄生虫タンパク質、およびそれらの任意の抗原性断片からなる群から選択される、請求項１３６に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  138. 前記第１の病原体タンパク質および／または前記第２の病原体タンパク質が、ペスト菌抗原、結核菌抗原、エンテロウイルス抗原、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）抗原、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）抗原、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）抗原、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）抗原、デングウイルス抗原、エボラウイルス抗原、ジカウイルス、チクングニアウイルス抗原、麻疹ウイルス抗原、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ抗原、トキソプラズマ抗原、熱帯熱マラリア原虫抗原、インフルエンザウイルス抗原、それらの抗原性断片、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１３４～１３７のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  139. 前記第１の病原体タンパク質および／または前記第２の病原体タンパク質が、ペスト菌Ｆ１－Ａｇ、ペスト菌Ｖ－Ａｇ、結核菌Ａｐａ抗原、結核菌ＨＰ６５抗原、結核菌ｒＡｇ８５Ａ抗原、Ｅ７１ ＶＰ１抗原、ＧＳＴタグ付きＥ７１－ＶＰ１抗原、Ｃｏｘタンパク質抗原、ＧＳＴタグ付きＣｏｘタンパク質抗原、ＨＳＶ－１エンベロープ抗原、ＨＳＶ－２エンベロープ抗原、ＨＳＶ－２ ｇＢ２抗原、ＨＳＶ－２ ｇＣ２抗原、ＨＳＶ－２ ｇＤ２抗原、ＨＳＶ－２ ｇＥ２抗原、ＨＩＶ Ｅｎｖ抗原、ＨＩＶ Ｇａｇ抗原、ＨＩＶ Ｎｅｆ抗原、ＨＩＶ Ｐｏｌ抗原、ＨＰＶマイナーカプシドタンパク質Ｌ２抗原、ＨＣＶ ＮＳ３抗原、ＲＳＶ Ｆ抗原、ＲＳＶ Ｇ抗原、デングウイルスＥタンパク質抗原、デングウイルスＥＤＩＩＩ抗原、デングウイルスＮＳ１抗原、デングウイルスＤＥＮ－８０Ｅ抗原、エボラウイルスＧＢ抗原、エボラウイルスＶＰ２４抗原、エボラウイルスＶＰ４０抗原、エボラウイルスＮＰ抗原、エボラウイルスＶＰ３０抗原、エボラウイルスＶＰ３５抗原、ジカウイルスエンベロープドメインＩＩＩ抗原、ジカウイルスＣＫＤ抗原、チクングニアウイルスＥ１糖タンパク質サブユニット抗原、ＭＨＣクラスＩエピトープＰＰＦＧＡＧＲＰＧＱＦＧＤＩ（配列番号：３４）、ＭＨＣクラスＩエピトープＴＡＥＣＫＤＫＮＬ（配列番号：３５）、ＭＨＣクラスＩＩエピトープＶＲＹＫＣＮＣＧＧ（配列番号：３６）、麻疹ウイルス赤血球凝集素タンパク質ＭＶ－Ｈ抗原、麻疹ウイルス融合タンパク質ＭＶ－Ｆ抗原、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質抗原、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン由来の抗原、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質の膜融合ドメイン由来の抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン由来の抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質の膜融合ドメイン由来の抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｅタンパク質抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｍタンパク質抗原、トキソプラズマＭＩＣ８抗原、熱帯熱マラリア原虫ＳＥＲＡ５ポリペプチド抗原、熱帯熱マラリア原虫サーカムスポロゾイト（ｃｉｒｃｕｍｓｐｏｒｏｚｉｔｅ）タンパク質抗原、インフルエンザウイルス赤血球凝集素（ＨＡ）抗原、インフルエンザウイルスノイラミニダーゼ（ＮＡ）抗原、インフルエンザウイルスマトリックス－２（Ｍ２）タンパク質抗原、それらの抗原性断片、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１３８に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  140. 前記第１抗原核酸が、ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質またはその抗原性断片をコードする、請求項１３４～１３９のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  141. 前記第２の病原体タンパク質またはその抗原性断片が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２膜（Ｍ）タンパク質またはその抗原性断片、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２エンベロープ（Ｅ）タンパク質またはその抗原性断片、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質またはその抗原性断片、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１３６～１４０のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  142. 前記第１の病原体タンパク質が、ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｍタンパク質、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｅタンパク質、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎタンパク質またはその抗原性断片からなる群から選択されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質またはその抗原性断片であり、前記第２の病原体タンパク質が、ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｍタンパク質、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｅタンパク質、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎタンパク質またはその抗原性断片からなる群から選択されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質またはその抗原性断片である、請求項１３６に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  143. 前記第１の病原体タンパク質がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片であり、前記第２の病原体タンパク質がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片であり、第１および第２の病原体タンパク質が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の異なる株に由来する、請求項１４２に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  144. 前記第２抗原核酸が、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列を介して前記第１のプロモーターに作動可能に連結されている、請求項１３６～１４３のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  145. 前記ＩＲＥＳ配列が、配列番号４１と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項１４４に記載のポリヌクレオチド。
  146. 前記ポリヌクレオチドが１つ以上の第２のプロモーターを含む、請求項１３４～１４５のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  147. 前記第２抗原核酸が、前記１つ以上の第２のプロモーターに作動可能に連結されている、請求項１４６に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  148. 前記第１のプロモーターまたは前記１つ以上の第２のプロモーターが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、モロニーマウス白血病ウイルス（Ｍｏ－ＭｕＬＶ）長末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーター、哺乳動物伸長因子１（ＥＦ１）プロモーター、サイトケラチン１８（ＣＫ１８）プロモーター、サイトケラチン１９（ＣＫ１９）プロモーター、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）プロモーター、マウスＵ６プロモーター、骨格α－アクチンプロモーター、β－アクチンプロモーター、マウスホスホグリセリン酸キナーゼ１（ＰＧＫ１）プロモーター、ヒトＰＧＫ１プロモーター、ＣＢＡプロモーター、ＣＡＧプロモーター、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１３４～１４７のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  149. 前記哺乳動物ＥＦ１プロモーターがｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである、請求項１４８に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  150. 前記１つ以上の第２のプロモーターが前記ＣＭＶプロモーターである、請求項１４９に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  151. 前記第２抗原核酸が、ＣＭＶプロモーター、ＲＳＶプロモーター、Ｍｏ－ＭｕＬＶ ＬＴＲプロモーター、哺乳動物ＥＦ１プロモーター、ＣＫ１８プロモーター、ＣＫ１９プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、マウスＵ６プロモーター、骨格α－アクチンプロモーター、β－アクチンプロモーター、マウスＰＧＫ１プロモーター、ヒトＰＧＫ１プロモーター、ＣＢＡプロモーター、ＣＡＧプロモーター、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるプロモーターの制御下にある、請求項１４８～１５０のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  152. 前記哺乳動物ＥＦ１プロモーターがｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである、請求項１５１に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  153. 前記第１抗原核酸が、全長ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片をコードする、請求項１３４～１５２のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  154. 前記第１抗原核酸が、配列番号２または配列番号４の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸をコードする、請求項１５３に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  155. 前記第１抗原核酸が、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、請求項１５４に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  156. 前記第１抗原核酸が、配列番号１または配列番号３と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項１５３～１５５のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  157. 前記第１抗原核酸が、哺乳動物ＥＦ１プロモーターに作動可能に連結されている、請求項１５３～１５６のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  158. 前記哺乳動物ＥＦ１プロモーターがｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである、請求項１５７に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  159. 前記第１抗原核酸が全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片をコードし、前記第２抗原核酸がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２膜（Ｍ）タンパク質またはその抗原性断片をコードする、請求項１３６～１５２のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  160. 前記第１抗原核酸が、配列番号２または配列番号４の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１，０００、または少なくとも１，２５０個の連続アミノ酸をコードし、第２抗原核酸が、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１２０、少なくとも１４０、少なくとも１６０、少なくとも１８０、少なくとも２００、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸をコードする、請求項１５９に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  161. 前記第１抗原核酸が、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、前記第２抗原核酸が、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８または配列番号２０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、請求項１６０に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  162. 前記第１抗原核酸が、配列番号１または配列番号３と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含み、前記第２抗原核酸が、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、または配列番号１９と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項１６１に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  163. 前記第１抗原核酸が哺乳動物ＥＦ１プロモーターに作動可能に連結されており、前記第２抗原核酸がＣＭＶプロモーターに作動可能に連結されている、請求項１５９～１６２のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  164. 前記哺乳動物ＥＦ１プロモーターがｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである、請求項１６３に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  165. 前記第１抗原核酸が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）またはその抗原性断片をコードする、請求項１３４～１５２のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  166. 前記第１抗原核酸が、配列番号６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸をコードする、請求項１３４～１５２および１６５のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  167. 前記第１抗原核酸が、配列番号６のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、請求項１３４～１５２および１６５～１６６のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  168. 前記第１抗原核酸が、配列番号５と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項１３４～１５２および１６５～１６７のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  169. 前記第１抗原核酸が、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質またはその抗原性断片のＳ１サブユニットをコードする、請求項１３４～１５２のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  170. 前記第１抗原核酸が、配列番号４０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも５５０、少なくとも６００、少なくとも６５０、または少なくとも６６０個の連続アミノ酸をコードする、請求項１３４～１５２および１６９のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  171. 前記第１抗原核酸が、配列番号４０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、請求項１３４～１５２および１６９～１７０のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  172. 前記第１抗原核酸が、配列番号３９と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項１３４～１５２および１６９～１７１のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  173. 前記第１抗原核酸が、哺乳動物ＥＦ１プロモーターに作動可能に連結されている、請求項１３４～１７２のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  174. 前記哺乳動物ＥＦ１プロモーターがｈＥＦ１－ＨＴＬＶプロモーターである、請求項１７３に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  175. 前記第２抗原核酸が、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、または配列番号２０の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１２０、少なくとも１４０、少なくとも１６０、少なくとも１８０、少なくとも２００、または少なくとも２２０個の連続アミノ酸をコードする、請求項１３６～１７４のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  176. 前記第２抗原核酸が、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８または配列番号２０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、請求項１３６～１７５のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  177. 前記第２抗原核酸が、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、または配列番号１９と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項１３６～１７６のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  178. 前記第２抗原核酸が、配列番号２２、配列番号２４または配列番号２６の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、または少なくとも７５個の連続アミノ酸をコードする、請求項１３６～１７４のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  179. 前記第２抗原核酸が、配列番号２２、配列番号２４または配列番号２６のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、請求項１３６～１７４および１７８のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  180. 前記第２抗原核酸が、配列番号２１、配列番号２３または配列番号２５と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項１３６～１７４および１７８～１７９のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  181. 前記第２抗原核酸が、配列番号２８の少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、または少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、または少なくとも４００個の連続アミノ酸をコードする、請求項１３６～１７４のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  182. 前記第２抗原核酸が、配列番号２８のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、請求項１３６～１７４および１８１のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  183. 前記第２抗原核酸が、配列番号２７と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項１３６～１７４および１８１～１８２のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  184. 前記ポリヌクレオチドが１つまたは複数の転写後調節エレメントをさらに含む、請求項１３４～１８３のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  185. 前記転写後調節エレメントが、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）である、請求項１８４に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  186. 前記ポリヌクレオチドが、前記第１抗原核酸、前記第２抗原核酸、免疫修飾因子をコードする前記核酸、またはそれらの任意の組み合わせに作動可能に連結された少なくとも１つの３’ＵＴＲポリ（ａ）テール配列をさらに含む、請求項１３４～１８５のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  187. 前記３’ＵＴＲポリ（ａ）テール配列が、３’ＵＴＲ ＳＶ４０ポリ（ａ）テール配列、３’ＵＴＲウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）ポリ（Ａ）配列、３’ＵＴＲアクチンポリ（Ａ）テール配列、３’ＵＴＲヘモグロビンポリ（Ａ）配列、またはそれらの組み合わせである、請求項１８６に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  188. 前記ポリヌクレオチドが少なくとも１つのエンハンサー配列をさらに含む、請求項１３４～１８７のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物、またはワクチン。
  189. 前記エンハンサー配列が、ヒトアクチンエンハンサー配列、ヒトミオシンエンハンサー配列、ヒトヘモグロビンエンハンサー配列、ヒト筋クレアチンエンハンサー配列、ウイルスエンハンサー配列、ポリヌクレオチド機能エンハンサー配列、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項１８８に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  190. 前記エンハンサー配列が、ＣＭＶイントロン配列、β－アクチンイントロン配列、またはそれらの組み合わせである、請求項１８８または１８９に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  191. 前記ポリヌクレオチドが逆方向末端反復配列（ＩＴＲ）をさらに含む、請求項１３４～１９０のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物、またはワクチン。
  192. 前記ポリヌクレオチドが第１のＩＴＲおよび第２のＩＴＲを含む、請求項１９１に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  193. 前記第１のＩＴＲおよび前記第２のＩＴＲが、両方ともアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）に由来する、請求項１９２に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  194. 前記ベクターがＤＮＡプラスミドベクターである、請求項１３４～１９３のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  195. 前記ＤＮＡプラスミドベクターが、ｐＶａｃ １、ｐＶａｃ ４、およびｐＶａｃ ７からなる群から選択される、請求項１９４に記載の組成物、医薬組成物、またはワクチン。
  196. 前記ベクターが、ウイルスベクター、細菌ベクター、コスミドまたは人工染色体である、請求項１３４～１９３のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  197. 前記ウイルスベクターが、ＡＡＶベクター、アデノウイルスベクター、レトロウイルスベクター、ポックスウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、またはそれらの組み合わせから選択される、請求項１９６に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  198. 薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項１３４～１９７のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  199. 凍結乾燥される、請求項１３４～１９８のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  200. 前記カチオン性ポリマーが、合成官能化ポリマー、β－アミノエステル、脂質、リポポリマー、またはそれらの化学誘導体である、請求項１３３～１９９のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物、ワクチン、または凍結乾燥組成物。
  201. 前記合成官能化ポリマーが生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーである、請求項２００に記載の組成物、医薬組成物、ワクチンまたは凍結乾燥組成物。
  202. 前記生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーが、式：（ＣＰ）ｘＬｙＹｚによって表され、式中：
    （ａ）ＣＰが、少なくとも１つの第二級アミン基を含有する、１，０００～２５，０００ダルトンの範囲内の数平均分子量を有するカチオン性ポリマーを表し、
    （ｂ）Ｙが、エステル、アミド、ジスルフィドまたはホスファート架橋を含有する二官能性生分解性リンカーを表し、
    （ｃ）Ｌが、リガンドを表し、
    （ｄ）ｘが、１から２０の範囲の整数であり
    （ｅ）ｙが、０から１００の範囲の整数であり
    （ｆ）ｚが、０から４０の範囲の整数である、
    請求項２０１に記載の組成物、医薬組成物、ワクチンまたは凍結乾燥組成物。
  203. 前記カチオン性ポリマーが生分解性架橋直鎖ポリエチレンイミン（ＬＰＥＩ）を含む、請求項２０２に記載の組成物、医薬組成物、ワクチンまたは凍結乾燥組成物。
  204. 前記二官能性生分解性リンカーが親水性であり、ジスルフィド結合を含む生分解性結合を含む、請求項２０２または２０３に記載の組成物、医薬組成物、ワクチンまたは凍結乾燥組成物。
  205. 前記二官能性生分解性リンカーがジチオジプロピオニルリンカーである、請求項２０２または２０３に記載の組成物、医薬組成物、ワクチンまたは凍結乾燥組成物。
  206. 前記生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーが、ＬＰＥＩと、マルチブロックコポリマーを架橋するためのジチオジプロピオニルリンカーとを含み、前記ＬＰＥＩが１，０００～２５，０００ダルトンの平均分子量を有する、請求項２０１に記載の組成物、医薬組成物、ワクチンまたは凍結乾燥組成物。
  207. 前記生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーが、少なくとも１つのリガンドに共有結合している、請求項２０６に記載の組成物、医薬組成物、ワクチンまたは凍結乾燥組成物。
  208. 前記リガンドが、糖部分、ポリペプチド、葉酸、および抗原からなる群から選択される標的化リガンドである、請求項２０２～２０７のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物、ワクチン、または凍結乾燥組成物。
  209. 前記糖部分が単糖またはオリゴ糖である、請求項２０８に記載の組成物、医薬組成物、ワクチンまたは凍結乾燥組成物。
  210. 前記単糖がガラクトースである、請求項２０９に記載の組成物、医薬組成物、ワクチン、または凍結乾燥組成物。
  211. 前記ポリペプチドが、糖タンパク質、抗体、抗体断片、細胞受容体、サイトカイン受容体または成長因子受容体である、請求項２０８に記載の組成物、医薬組成物、ワクチンまたは凍結乾燥組成物。
  212. 前記成長因子受容体が上皮成長因子受容体である、請求項２１１に記載の組成物、医薬組成物、ワクチンまたは凍結乾燥組成物。
  213. 前記糖タンパク質がトランスフェリンまたはアシアロオロソムコイド（ＡＳＯＲ）である、請求項２１１に記載の組成物、医薬組成物、ワクチンまたは凍結乾燥組成物。
  214. 前記抗原がウイルス抗原、細菌抗原、または寄生虫抗原である、請求項２０８に記載の組成物、医薬組成物、ワクチン、または凍結乾燥組成物。
  215. 前記生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーが、５００～２０，０００ダルトンの範囲の分子量のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）に共有結合している、請求項２０１～２１４のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物、ワクチンまたは凍結乾燥組成物。
  216. 前記生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーが、オレイン酸、パルミチン酸およびステアリン酸からなる群から選択される脂肪アシル鎖に共有結合している、請求項２０１～２１５のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物、ワクチンまたは凍結乾燥組成物。
  217. 前記生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーが、ポリアニオン性化合物に静電的に誘引される少なくとも１つのアミン基を含む、請求項２０１～２１６のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物、ワクチンまたは凍結乾燥組成物。
  218. 前記ポリアニオン性化合物が核酸であり、前記生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーが、核酸を凝縮してコンパクトな構造を形成する、請求項２１７に記載の組成物、医薬組成物、ワクチンまたは凍結乾燥組成物。
  219. 前記リポポリマーが、脂質またはＰＥＧに共有結合したＰＥＩ骨格を含むカチオン性リポポリマーである、請求項２００に記載の組成物、医薬組成物、ワクチンまたは凍結乾燥組成物。
  220. 前記ＰＥＩ骨格が、脂質またはＰＥＧに共有結合している、請求項２１９に記載の組成物、医薬組成物、ワクチンまたは凍結乾燥組成物。
  221. 前記脂質および前記ＰＥＧが共有結合によって前記ＰＥＩ骨格に直接結合している、請求項２２０に記載の組成物、医薬組成物、ワクチンまたは凍結乾燥組成物。
  222. 前記脂質がＰＥＧスペーサーを介して前記ＰＥＩ骨格に結合している、請求項２２０に記載の組成物、医薬組成物、ワクチンまたは凍結乾燥組成物。
  223. 前記ＰＥＧが５０～２０，０００ダルトンの分子量を有する、請求項２１９～２２２のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物、ワクチン、または凍結乾燥組成物。
  224. ＰＥＧ対ＰＥＩのモル比が０．１：１～５００：１の範囲内である、請求項２１９～２２３のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物、ワクチンまたは凍結乾燥組成物。
  225. 前記脂質対前記ＰＥＩのモル比が０．１：１～５００：１の範囲内である、請求項２１９～２２４のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物、ワクチンまたは凍結乾燥組成物。
  226. 前記脂質が、コレステロール、コレステロール誘導体、Ｃ１２～Ｃ１８脂肪酸、または脂肪酸誘導体である、請求項２１９～２２５のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物、ワクチン、または凍結乾燥組成物。
  227. 前記ＰＥＩが、コレステロールおよびＰＥＧに共有結合しており、前記カチオン性リポポリマー中の平均ＰＥＧ：ＰＥＩ：コレステロールモル比が、ＰＥＧ １～５：ＰＥＩ １：コレステロール０．４～１．５の範囲内である、請求項２２６に記載の組成物、医薬組成物、ワクチン、または凍結乾燥組成物。
  228. 前記ＰＥＩが、１００～５００，０００ダルトンの分子量を有する直鎖または分岐構成を有する、請求項２１９～２２７のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物、ワクチンまたは凍結乾燥組成物。
  229. 前記カチオン性リポポリマーが、受容体リガンド、膜透過剤、エンドソーム分解剤、核局在化配列およびｐＨ感受性エンドソーム分解性ペプチドからなる群から選択されるペンダント官能性部分をさらに含む、請求項２１９～２２８のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物、ワクチン、または凍結乾燥組成物。
  230. 前記カチオン性リポポリマーが、標的化リガンドをさらに含み、前記標的化リガンドが、前記ＰＥＩ骨格に直接結合しているか、またはＰＥＧリンカーを介して結合している、請求項２１９～２２９のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物、ワクチン、または凍結乾燥組成物。
  231. 前記標的化リガンドが、糖部分、ポリペプチド、葉酸、および抗原からなる群から選択される、請求項２３０に記載の組成物、医薬組成物、ワクチン、または凍結乾燥組成物。
  232. 前記糖部分が単糖またはオリゴ糖である、請求項２３１に記載の組成物、医薬組成物、ワクチンまたは凍結乾燥組成物。
  233. 前記単糖がガラクトースである、請求項２３２に記載の組成物、医薬組成物、ワクチン、または凍結乾燥組成物。
  234. 前記ポリペプチドが、糖タンパク質、抗体、抗体断片、細胞受容体、サイトカイン受容体または成長因子受容体である、請求項２３１に記載の組成物、医薬組成物、ワクチンまたは凍結乾燥組成物。
  235. 前記成長因子受容体が上皮成長因子受容体である、請求項２３４に記載の組成物、医薬組成物、ワクチンまたは凍結乾燥組成物。
  236. 前記糖タンパク質がトランスフェリンまたはアシアロオロソムコイド（ＡＳＯＲ）である、請求項２３４に記載の組成物、医薬組成物、ワクチンまたは凍結乾燥組成物。
  237. 前記抗原がウイルス抗原、細菌抗原、または寄生虫抗原である、請求項２３１に記載の組成物、医薬組成物、ワクチン、または凍結乾燥組成物。
  238. 前記カチオン性ポリマーが、前記ＤＮＡプラスミドベクター中のホスファートに対する前記カチオン性ポリマー中のアミン窒素の比を、約０．０１：１～約５０：１にするのに十分な量で存在する、請求項１３３～２３７のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物、ワクチン、または凍結乾燥組成物。
  239. 前記ＤＮＡプラスミドベクター中のホスファートに対する前記カチオン性ポリマー中のアミン窒素の比が、約１：１０～約１０：１である、請求項２３８に記載の組成物、医薬組成物、ワクチン、または凍結乾燥組成物。
  240. 前記組成物、医薬組成物またはワクチンが、約０．１ｍｇ／ｍｌ～約１０．０ｍｇ／ｍｌの前記カチオン性ポリマーと複合体化した核酸を含む、請求項１３３～２３９のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物、ワクチン、または凍結乾燥組成物。
  241. 前記送達成分が、以下の式を有するリポポリアミンを含む、請求項１２７、１３０～１３２、および１３４～１９９のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物、ワクチン、または凍結乾燥組成物

    （Ｓｔａｒａｍｉｎｅ）。
  242. 前記送達成分が、前記リポポリアミンと前記リポポリアミンのアルキル化誘導体との混合物を含む、請求項２４１に記載の組成物、医薬組成物、ワクチン、または凍結乾燥組成物。
  243. 前記リポポリアミンのアルキル化誘導体が、ポリオキシアルキレン、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミド、ポリビニルアルコール、デキストラン、ポリ（Ｌ－グルタミン酸）、スチレン無水マレイン酸、ポリ－Ｎ－（２－ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、またはポリジビニルエーテル無水マレイン酸である、請求項２４２に記載の組成物、医薬組成物、ワクチン、または凍結乾燥組成物。
  244. 前記リポポリアミンのアルキル化誘導体が以下の式を有し：

    （メトキシポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）修飾Ｓｔａｒａｍｉｎｅ）、
    式中、ｎが、それぞれ２～５個の炭素原子を含む１０～１００個の整数の繰り返し単位を表す、請求項２４３に記載の組成物、医薬組成物、ワクチン、または凍結乾燥組成物。
  245. 前記混合物中の前記リポポリアミンの前記アルキル化誘導体に対する前記リポポリアミンの比が１：１～１０：１である、請求項２４３または２４４に記載の組成物、医薬組成物、ワクチンまたは凍結乾燥組成物。
  246. 前記リポポリアミンが、前記ＤＮＡプラスミドベクター中のホスファートに対する前記リポポリアミン中のアミン窒素の比を約０．０１：１～約５０：１にするのに十分な量で存在する、請求項２４１～２４５のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物、ワクチン、または凍結乾燥組成物。
  247. 前記リポポリアミンが、前記ＤＮＡプラスミドベクター中のホスファートに対する前記リポポリアミン中のアミン窒素の比を約１：１０～約１０：１にするのに十分な量で存在する、請求項２４６に記載の組成物、医薬組成物、ワクチン、または凍結乾燥組成物。
  248. 前記送達成分が、以下の式を有するリポポリアミンを含む、請求項１２７、１３０～１３２、および１３４～１９９のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物、ワクチン、または凍結乾燥組成物。
  249. 前記送達成分が、前記リポポリアミンと前記リポポリアミンのアルキル化誘導体との混合物を含む、請求項２４８に記載の組成物、医薬組成物、ワクチン、または凍結乾燥組成物。
  250. 前記リポポリアミンのアルキル化誘導体が、ポリオキシアルキレン、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミド、ポリビニルアルコール、デキストラン、ポリ（Ｌ－グルタミン酸）、スチレン無水マレイン酸、ポリ－Ｎ－（２－ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、またはポリジビニルエーテル無水マレイン酸である、請求項２４９に記載の組成物、医薬組成物、ワクチン、または凍結乾燥組成物。
  251. 前記混合物中の前記リポポリアミンの前記アルキル化誘導体に対する前記リポポリアミンの比が１：１～１０：１である、請求項２４９または２５０に記載の組成物、医薬組成物、ワクチンまたは凍結乾燥組成物。
  252. 前記リポリアミン（ｌｉｐｏｌｙａｍｉｎｅ）が、前記ＤＮＡプラスミドベクター中のホスファートに対する前記リポポリアミン中のアミン窒素の比を約０．０１：１～約５０：１にするのに十分な量で存在する、請求項２４８～２５１のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物、ワクチン、または凍結乾燥組成物。
  253. 前記リポリアミン（ｌｉｐｏｌｙａｍｉｎｅ）が、前記ＤＮＡプラスミドベクター中のホスファートに対する前記リポポリアミン中のアミン窒素の比を約１：１０～約１０：１にするのに十分な量で存在する、請求項２５２に記載の組成物、医薬組成物、ワクチン、または凍結乾燥組成物。
  254. 前記送達成分が、以下の式：

    を有するポロキサマー、
    またはその薬学的に許容される塩を含み、式中：
    Ａが、２から１４１の整数を表し、
    Ｂが、１６から６７の整数を表し、
    Ｃが、２から１４１の整数を表し、
    ＲＡおよびＲＣが、同一であるかまたは異なり、Ｒ’－Ｌ－またはＨであり、ＲＡおよびＲＣの少なくとも一方が、Ｒ’－Ｌ－であり、
    Ｌが、結合、－ＣＯ－、－ＣＨ２－Ｏ－、または－Ｏ－ＣＯ－であり、
    Ｒ’が、金属キレーターである、
    請求項１２７、１３０～１３２および１３４～１９９のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物、ワクチン、または凍結乾燥組成物。
  255. 前記金属キレーターが、ＲＮＮＨ－、ＲＮ ２Ｎ－、または（Ｒ”－（Ｎ（Ｒ”）－ＣＨ２ＣＨ２）ｘ）２－Ｎ－ＣＨ２ＣＯ－であり、各ｘが独立して０～２であり、Ｒ”がＨＯ２Ｃ－ＣＨ２－である、請求項２５４に記載の組成物、医薬組成物、ワクチン、または凍結乾燥組成物。
  256. 前記金属キレーターが、クラウンエーテル、置換クラウンエーテル、クリプタンド、または置換クリプタンドである、請求項２５４に記載の組成物、医薬組成物、ワクチン、または凍結乾燥組成物。
  257. 前記ポロキサマーが、前記ポリヌクレオチドまたはＤＮＡプラスミドベクターを含む溶液中に約０．５％～約５％存在する、請求項２５４～２５６のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  258. 前記送達成分がＢＤ１５－１２を含む、請求項２００～２５７のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  259. 前記ヌクレオチド対ポリマー（Ｎ：Ｐ）比が５：１である、請求項２５８に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  260. 前記送達成分がＯｍｎｉｆｅｃｔを含む、請求項２００～２５７のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  261. 前記ヌクレオチド対ポリマー（Ｎ：Ｐ）比が１０：１である、請求項２６０に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  262. 前記送達成分がクラウンポロキサマーを含む、請求項２００～２５７のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  263. 前記ヌクレオチド対ポリマー（Ｎ：Ｐ）比が５：１である、請求項２６２に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  264. 前記送達成分が、ＰＥＧ－ＰＥＩ－コレステロール（ＰＰＣ）リポポリマーをさらに含む、請求項２６２または２６３に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  265. 前記送達成分が塩化ベンザルコニウム（ＢＡＫ）をさらに含む、請求項２６２または２６３に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  266. 前記送達成分がＯｍｎｉｆｅｃｔをさらに含む、請求項２６２または２６３に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  267. 前記送達成分が直鎖ポリエチレンイミン（ＬＰＥＩ）をさらに含む、請求項２６２または２６３に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  268. 前記ＬＰＥＩがＢＤ１５－１２である、２６７に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  269. 前記送達成分がＳｔａｒａｍｉｎｅおよびｍＰＥＧ修飾Ｓｔａｒａｍｉｎｅを含む、請求項２００～２５７のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  270. 前記ｍＰＥＧ修飾Ｓｔａｒａｍｉｎｅが、Ｓｔａｒａｍｉｎｅ－ｍＰＥＧ５１５である、請求項２６９に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  271. 前記ｍＰＥＧ修飾Ｓｔａｒａｍｉｎｅが、Ｓｔａｒａｍｉｎｅ－ｍＰＥＧ１１である、請求項２６９に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  272. Ｓｔａｒａｍｉｎｅ対ｍＰＥＧ修飾Ｓｔａｒａｍｉｎｅの比が１０：１である、請求項２６９～２７１のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  273. 前記ヌクレオチド対ポリマー（Ｎ：Ｐ）比が５：１である、請求項２６９～２７２のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  274. 前記送達成分がクラウンポロキサマーをさらに含む、請求項２６９～２７３のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチン。
  275. ０℃～５℃で少なくとも約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間、約７ヶ月間、約８ヶ月間、約９ヶ月間、約１０ヶ月間、約１１ヶ月間または約１２ヶ月間安定である、請求項１３１～１３３および１９９～２７４のいずれか一項に記載の凍結乾燥組成物。
  276. ２５℃で少なくとも約７日、約１０日または約１４日間安定である、請求項１３１～１３３および１９９～２７４のいずれか一項に記載の凍結乾燥組成物。
  277. 水性成分を実質的に含まない、請求項１３１～１３３および１９９～２７６のいずれか一項に記載の凍結乾燥組成物。
  278. 希釈剤で再構成される、請求項１３１～１３３および１９９～２７６のいずれか一項に記載の凍結乾燥組成物。
  279. 前記希釈剤が水である、請求項２７８に記載の凍結乾燥組成物。
  280. 前記希釈剤で再構成した後、０℃～５℃で少なくとも約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間または約６ヶ月間安定である、請求項２７８または２７９に記載の凍結乾燥組成物。
  281. 前記希釈剤で再構成した後、少なくとも約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間または約７日間、２５℃で安定である、請求項２７８または２７９に記載の凍結乾燥組成物。
  282. 請求項１～１２０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、請求項１２１～１２３のいずれか一項に記載のベクター、請求項１２８もしくは１２９に記載のＤＮＡプラスミドベクター、または請求項１２４～１２７、１３０、１３２～１９８および２００～２７４のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物もしくはワクチンを含む宿主細胞。
  283. 真核生物宿主細胞である、請求項２８２記載の宿主細胞。
  284. ヒト宿主細胞である、請求項２８２記載の宿主細胞。
  285. 請求項１～１２０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、請求項１２１～１２３のいずれか一項に記載のベクター、請求項１２８もしくは１２９に記載のＤＮＡプラスミドベクター、または請求項１２４～１２７および１３０～２８１のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物、ワクチン、凍結乾燥組成物もしくはフリーズドライ組成物を含むキット。
  286. ガラスバイアルをさらに含む、請求項２８５に記載のキット。
  287. 対象において免疫応答を誘導するための方法において前記ポリヌクレオチド、ベクター、ＤＮＡプラスミドベクター、ワクチン、組成物または医薬組成物、または凍結乾燥組成物を使用するための説明書をさらに含む、請求項２８５または２８６に記載のキット。
  288. 対象における感染症を予防、その発生を低減、軽減または治療する方法において、前記ポリヌクレオチド、ベクター、ＤＮＡプラスミドベクター、ワクチン、組成物、医薬組成物、凍結乾燥組成物またはフリーズドライ組成物を使用するための説明書をさらに含む、請求項２８５または２８６に記載のキット。
  289. 前記感染が、ウイルス感染、細菌感染または寄生虫感染である、請求項２８８に記載のキット。
  290. 前記感染がＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２感染である、請求項２８９に記載のキット。
  291. 対象において免疫応答を誘導する方法であって、請求項１～１２０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、請求項１２１～１２３のいずれか一項に記載のベクター、請求項１２８もしくは１２９に記載のＤＮＡプラスミドベクター、または請求項１２４～１２７、１３０、１３２～１９８および２００～２７４のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物もしくはワクチンの有効量を前記対象に投与することを含む方法。
  292. 前記免疫応答が、１つ以上のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原に対するものである、請求項２９１に記載の方法。
  293. 前記免疫応答が防御免疫応答である、請求項２９１または２９２に記載の方法。
  294. 対象における感染症を予防、その発生を低減、軽減または治療する方法であって、請求項１～１２０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、請求項１２１～１２３のいずれか一項に記載のベクター、請求項１２８もしくは１２９に記載のＤＮＡプラスミドベクター、または請求項１２４～１２７、１３０、１３２～１９８および２００～２７４のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物もしくはワクチンの有効量を前記対象に投与することを含む方法。
  295. 前記ポリヌクレオチド、ベクター、ＤＮＡプラスミドベクター、組成物、医薬組成物、またはワクチンが、筋肉内、皮下、リンパ内、または腹腔内投与経路によって前記対象に投与される、請求項２９１～２９４のいずれか一項に記載の方法。
  296. 前記感染が、ウイルス感染、細菌感染または寄生虫感染である、請求項２９４または２９５に記載の方法。
  297. 前記感染がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染である、請求項２９４～２９６のいずれか一項に記載の方法。
  298. 請求項１２４～１２７、１３０、１３２～１９８および２００～２７４のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物またはワクチンを製造する方法であって、（ａ）前記送達成分を前記ポリヌクレオチドと組み合わせる工程、（ｂ）前記組み合わせた送達成分およびポリヌクレオチドを粉末に凍結乾燥する工程、および（ｃ）前記粉末を希釈剤で再構成して、前記送達成分と複合体を形成した核酸の溶液を形成する工程を含む方法。

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