JP2023543671A - 抗原及びｔｌｒ２アゴニストを含むワクチン - Google Patents

抗原及びｔｌｒ２アゴニストを含むワクチン Download PDF

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Abstract

本発明は、ワクチンキット及びこのようなワクチン接種キットを使用するワクチン接種方法を提供する。

Description

本発明は、医科学、免疫学及びワクチンの分野に関する。本発明は、免疫系を、例えば病原性細菌及びウイルスに対して刺激することができるワクチンキット及び組成物を提供する。本発明はまた、個体が病原性細菌及びウイルスから免疫を獲得するようにワクチンを投与する方法を提供する。
細菌及びウイルス感染に由来する疾患を予防するための有効かつ安全な新たなワクチンが必要とされている。ワクチン接種後により良好な免疫応答を達成するための新たなアジュバント及び最適化された投与も必要とされている。このような新たなワクチンは、製品に製剤化された場合の強い免疫応答及び低い毒性を含む特性の魅力的な組み合わせを有することが要求される。特に、ウイルス感染症の分野で、このような新たなワクチンが必要とされており、この２０年間だけで、いくつかのＭＥＲＳ及びＳＡＲＳの発生がいくつかの国に広がっている。このような流行は、ウイルスを引き寄せる個人を超えて、例えば旅行、病院、事業及び社会全般に深刻な影響を及ぼし得る。
したがって、細菌及び特にウイルス感染に由来する疾患を予防するための有効かつ安全な新たなワクチンが必要とされている。
本発明者らは、抗原及びアジュバントとしてのＴＬＲ２アゴニストを含むワクチン接種方法が、特にビタミン、例えばビタミンＡと組み合わせた場合にコロナウイルスに対して良好な効果を有することを発見した。
第１の態様では、本発明は、抗原、Ｔｏｌｌ様受容体２（ＴＬＲ２）アゴニスト及び少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む組成物が、肺又は鼻腔内投与用であり、ビタミンＡが、前記組成物の投与前又は投与後３日以内に少なくとも１回経口投与される、ワクチン接種方法を提供する。
特に、肺及び鼻腔内投与は、肺及び腸を含む粘膜表面に特化した免疫グロブリンであるＩｇＡに向けた免疫グロブリンスイッチを促進すると考えられている。ＴＬＲ２アゴニストは、マクロファージの活性化を促進して、サイトカイン及びインターフェロンを含むケモカインの産生及び放出の増加に加えて、抗原提示能力の増加、ＣＤ８６を含む共刺激分子の発現の増加をもたらすと考えられている。したがって、ＴＬＲ２アゴニストは、増殖性中和Ｂ細胞応答の誘導の成功の基礎であるＴ細胞活性化を促進する。
第２の態様では、本発明は、
－抗原、ＴＬＲ２アゴニスト及び少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む組成物と、
－前記組成物がビタミンＡの同時投与によるワクチン接種に使用されることを知らせるラベルと
を含む、ワクチンキットを提供する。
第３の態様では、本発明は、
－抗原、ＴＬＲ２アゴニスト及び少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む第１の組成物と、
－ビタミンＡを含む第２の組成物と
を含む、ワクチンキットを提供する。
一実施形態では、ＴＬＲ２アゴニストは、式（Ｉ）の化合物：

又はその薬学的に許容される塩である。
別の実施形態では、抗原は、タンパク質もしくはその多量体、ペプチドもしくはその多量体、弱毒化細菌、又は弱毒化ウイルスである。タンパク質又はペプチドの多量体は、少なくとも２つのタンパク質又はペプチドが共有結合して二量体、三量体、四量体等を形成することを意味する。このような多量体は、より良好な抗原特性を有し得る。
別の実施形態では、抗原は、弱毒化ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２又はその成分である。
別の実施形態では、抗原は、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２由来のスパイクタンパク質又はその一部である。
さらに、既知のワクチン組成物と比較して、本発明によるワクチン接種方法は、個体のワクチン接種後に免疫応答を有効に高めるための改善された特性を示し、したがって、将来の細菌又はウイルスの攻撃に対するより良好な防御を提供する。
ＳＩｇＡ産生のための適応免疫の調節におけるビタミンＡの多面的役割を示す図である。これは、適応免疫系によるＩｇＡの産生についての概念図であり、ビタミンＡによって調節されることが知られている主なステップを示している。ビタミンは、抗原取り込みから管腔内のｓＩｇＡ分泌までの、産生ラインに沿った実質的に全てのステップに関与している。ここに示される主な機序には、粘膜ＤＣ（ＣＤ１０３＋ＤＣ）を教育して、ＶＡをＲＡに変換するためのＲＡＬＤＨ酵素の発現を上方制御することによってレチノイン酸を合成すること、Ｔ細胞及びＢ細胞を腸ホーミング受容体（α４β７インテグリン及びケモカイン受容体ＣＣＲ９）でインプリンティングすること、Ｔ細胞を様々な調節性Ｔ細胞サブセット及びエフェクターＴ細胞サブセットに分化させること、Ｂ細胞をＩｇＡ＋抗体分泌細胞（ＩｇＡ＋ＡＳＣ）に有利に分極させること、ならびに最終的に頂端面での分泌のために上皮細胞を横切って完全なｓＩｇＡ分子を輸送することが含まれる。上向きの太い黒色矢印は、ＲＡによって促進されるサブセット（Ｔｒｅｇ、Ｔｈ２、Ｂ細胞及び（ＩｇＡ＋ＡＳＣ）を示し、下向きの破線の細い矢印は、Ｔｈ１７発達に対するその遮断作用を表す。 免疫化後のスパイク（武漢）、ＲＢＤ（南アフリカ）及びＲＢＤ（英国）に対するＩｇＧ力価を示す図である。試料を２８日目に獲得した。免疫化を０日目及び１４日目に実施した。データを幾何平均±幾何ＳＤとして示す。ＩＤ ３６６（６群）は除外した。 免疫化後のスパイク（武漢）、ＲＢＤ（南アフリカ）及びＲＢＤ（英国）に対するＩｇＡ力価を示す図である。試料を２８日目に獲得した。免疫化を０日目及び１４日目に実施した。データを幾何平均±幾何ＳＤとして示す。ＩＤ ３６６（６群）は除外した。 ＢＡＬ中のスパイク（武漢）、ＲＢＤ（南アフリカ）及びＲＢＤ（英国）に対するＩｇＧ力価を示す図である。試料を終了時に獲得した。免疫化を０日目及び１４日目に実施した。データを幾何平均±幾何ＳＤとして示す。ＩＤ ３６６（６群）は除外した。 ＢＡＬ中のスパイク（武漢）、ＲＢＤ（南アフリカ）及びＲＢＤ（英国）に対するＩｇＡ力価を示す図である。試料を終了時に獲得した。免疫化を０日目及び１４日目に実施した。データを幾何平均±幾何ＳＤとして示す。ＩＤ ３６６（６群）は除外した。 例３の試験からの個々の免疫化マウスの血清中の抗ＩｇＧを示す図である。 例３の試験からのマウスの免疫化群からの平均抗ＩｇＧを示す図である。
５つの主要な免疫グロブリンの１つである免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）は、胃腸、呼吸器、及び尿生殖路の粘膜ホメオスタシスにおいて極めて重要な役割を果たし、この役割における免疫の優勢な抗体として機能する。これは、体内に見られる２番目に豊富な免疫グロブリン型であり、結果として、抗原に対する防御において重要な役割を有する。
ＩｇＡは、様々なプロセスによって調節される、Ｉｇのクラススイッチによって産生される。ＣＤ４０－ＣＤ４０Ｌの結合ならびに他のサイトカインＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、及びＩＬ－２１の分泌は、Ｔｈ２細胞の成熟を促進し、異なるＩｇサブタイプへのクラススイッチを促進する。ビタミンＡの代謝産物であるレチノイン酸も、ＩＬ－５及びＩＬ－６と相乗的に作用して、ＩｇＡ分泌を誘導する。
ビタミンＡ（レチノイド）は、生理学的健康を維持するのに十分な量を合成することができないため、実質的に全ての脊椎動物の食事に微量で必要とされることが知られている微量栄養素である。高濃度は、ビタミンＡ及びその代謝産物がアジュバント活性を有することが知られているので、いくらかの治療効果を有し得る。
レチノールは、レチナールデヒドロゲナーゼ（ＲＡＬＤＨ）によってその生物学的に活性な形態の全トランス型レチノイン酸（以下、ＲＡと呼ぶ）に不可逆的に異化される前に、細胞内酵素アルコールデヒドロゲナーゼ（ＡＤＨ）によってレチナールに酸化されなければならない。この生物活性代謝産物は、このような変換に必要なＲＡＬＤＨ酵素を有することが知られている多くの細胞型及び組織（異なる組織、例えば、腸、肺、皮膚及びそれらの流入領域リンパ節由来のＤＣを含む）によって合成され得る。
ビタミンＡは、上皮細胞を横切るＩｇＡ二量体の経細胞輸送を制御することが１９８０年代に既に見出されていた。その後数十年の間に、粘膜固有層（図１）におけるいくつかの免疫細胞及び間質細胞と相互作用するビタミンＡの影響がさらに調べられた。
粘膜免疫細胞の１つの特別な特徴は、ＩｇＡ抗体アイソタイプの産生及び分泌におけるその後のステップで必要とされる特性である、それらの固有の粘膜インプリンティング表現型である（図１）。この特別な特性は、粘膜環境におけるＲＡの存在を必要とするように見える。粘膜免疫応答の調節に対するビタミンＡ（又はＲＡ）の影響に関する重要な知見は、ＲＡがＤＣの分化において中心的な役割を有すること、及び粘膜ＤＣがレチノールをレチノイン酸に代謝することができることであった。
ＲＡの別の重要な機能は、Ｂ細胞からのＩｇＡ抗体分泌細胞のＤＣ依存的生成を促進することであり、このプロセスはＩＬ－５／ＩＬ－６などのＩｇＡ誘導性サイトカインによって強化される。実際、いくつかの動物モデル及びヒト研究からの様々な証拠は全て、リンパ系組織ＤＣ及び他の非免疫細胞によるＲＡの合成がＢ細胞におけるＩｇＡ発現を誘導するのに必要であることに一致している。これらの研究から、ＲＡが、ＩｇＡ＋抗体分泌細胞の分化を促進し、ＴＧＦ－βの存在下でＩｇＡ産生を強化する特異的ＩｇＡアイソタイプスイッチング因子として機能すると結論付けられる。この作用の有効性は、微小環境におけるＩＬ－５又はＩＬ－６の存在による調節を受ける。
第１の態様では、本発明は、抗原、ＴＬＲ２アゴニスト及び少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む組成物が、肺又は鼻腔内投与用であり、ビタミンＡが、前記組成物の投与前又は投与後３日以内に少なくとも１回経口投与される、ワクチン接種方法を提供する。
一実施形態では、ワクチン接種方法は、前記組成物の投与前、投与と同時、又は投与から３日以内のいずれかのビタミンＤの経口投与を含む。
別の実施形態では、ワクチン接種方法は、前記組成物の投与の１週間前～前記組成物の投与の２日後の間の期間のビタミンＤの経口投与を含む。
別の実施形態では、ワクチン接種方法は、前記ビタミンＡが、前記組成物の投与の１日前～前記組成物の投与の２日後の間の期間に少なくとも１回経口投与されることを含む。
ワクチン接種方法の別の実施形態では、前記抗原は、タンパク質もしくはその多量体、ペプチドもしくはその多量体、弱毒化細菌、又は弱毒化ウイルスである。
ワクチン接種方法のある実施形態では、前記抗原は、弱毒化ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２又はその成分である。
ワクチン接種方法の別の実施形態では、前記抗原は、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２由来のスパイクタンパク質又はその一部である。
ワクチン接種方法のさらに別の実施形態では、前記ＴＬＲ２アゴニストは、式（Ｉ）の化合物：

又はその薬学的に許容される塩である。
ワクチン接種方法のさらに別の実施形態では、前記ＴＬＲ２アゴニストは、式（Ｉ）の化合物のアナログであり、前記アナログは、式（Ｉａ）の化合物又はその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、互変異性体、エナンチオマーもしくはジアステレオマー：

（式中、ＸはＣ＝Ｏ、－ＮＲ３ＣＨ２－、－ＣＨ２ＮＲ３－、－ＮＲ３（Ｃ＝Ｏ）－、－（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ３－、Ｃ＝ＮＯＨ、及びＣＨ（ＯＨ）－から選択され、Ｒ２は式（ＩＩ）又は式（ＩＩＩ）の糖：

であり、
Ｒ１はアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、アリール及びヘテロアリール部分から選択され、
アルキル部分は、場合により分岐したＣ１～Ｃ６アルキル基から選択され、
ヘテロアルキル部分は、場合により分岐した又は置換された、場合により１個又は複数のヘテロ原子を含むＣ１～Ｃ６アルキル基から選択され、
シクロアルキル部分は、場合により置換された、場合により１個又は複数のヘテロ原子を含むＣ１～Ｃ６環状アルキル基から選択され、
アリール部分は、場合により置換されたＣ６芳香環から選択され、
ヘテロアリール部分は、１個又は複数のヘテロ原子を含む場合により置換されたＣ１～Ｃ５芳香環から選択され、
ヘテロ原子は、Ｏ、Ｎ、Ｐ、及びＳから選択され、
置換基は独立に、アルキル、ＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、ＮＨ２、ＮＨ－アルキル、ＮＨ－アシル、Ｓ－アルキル、Ｓ－アシル、Ｏ－アルキル及びＯ－アシルから選択され、
アシルはＣ１～Ｃ４の場合により分岐したアシル基から選択され、
Ｒ３はＨ及びＭｅから選択され、
Ｒ４はＨ及びＭｅから選択され、
ＲａはＨ及びＣＲ２１Ｒ２２Ｒ２３から選択され、
Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３及びＲ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０は独立に、Ｈ、Ｍｅ、ＮＲ１１Ｒ１２、ＮＯ２及びＯＲ１１から選択され、
Ｒ２３は式（ＩＩ）のＲ４と一緒になって、Ｒ４は式（ＩＩ）のＲ５と一緒になって、Ｒ５は式（ＩＩ）のＲ７と一緒になって、及びＲ７は式（ＩＩ）のＲ９と一緒になって、独立に、結合して各基が結合している炭素原子間に二重結合を残す結合を表し、
Ｒ２１はＲ２２と一緒になって、Ｒ５はＲ６と一緒になって、Ｒ７はＲ８と一緒になって、又はＲ９はＲ１０と一緒になって、カルボニルで置き換えられていてもよく、
Ｒ１１及びＲ１２は独立に、Ｈ及びアルキルから選択され、
Ｒ１３はＨ、ＯＨ及びＯＣＨ３から選択され、
Ｒ１４はＨ及びＯＨから選択され、
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０の１つはＮＲ１１Ｒ１２及びＮＯ２から選択され、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨであり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＨであり、Ｒ６がＯＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＨである場合、ＸはＣ＝Ｏでなくてもよく、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨであり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＯＨであり、Ｒ６がＨであり、Ｒ７がＯＨであり、Ｒ８がＭｅであり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＨである場合、ＸはＣ＝Ｏでなくてもよく、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨであり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＯＨであり、Ｒ６がＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＯＨである場合、ＸはＣ＝Ｏでなくてもよい）
である。
１．ワクチン接種方法のさらに別の実施形態では、前記ＴＬＲ２アゴニストは、



から選択される。
第２の態様では、本発明は、
－抗原、ＴＬＲ２アゴニスト及び少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む組成物と、
－前記組成物がビタミンＡの同時投与によるワクチン接種に使用されることを知らせるラベルと
を含む、ワクチンキットを提供する。
一実施形態では、ワクチンキットは、前記組成物がビタミンＤの同時投与によるワクチン接種に使用されることをさらに知らせる前記ラベルを含む。
さらに別の実施形態では、ワクチンキットは、ビタミンＤが経口投与されることを知らせる前記ラベルを含む。
ワクチンキットの別の実施形態では、前記組成物は、肺又は鼻腔内投与用である。
ワクチンキットの別の実施形態では、前記ラベルは、ビタミンＡが経口投与されることを知らせる。
第３の態様では、本発明は、
－抗原、ＴＬＲ２アゴニスト及び少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む第１の組成物と、
－ビタミンＡを含む第２の組成物と
を含む、ワクチンキットを提供する。
一実施形態では、ワクチンキットは、ビタミンＤを含む前記第２の組成物を有する。
別の実施形態では、ワクチンキットは、ビタミンＤを含む第３の組成物を含む。別の実施形態では、前記第３の組成物は経口投与用である。
別の実施形態では、ワクチンキットは、肺又は鼻腔内投与に適合した前記第１の組成物を有する。
別の実施形態では、ワクチンキットは、経口投与に適合した前記第２の組成物を有する。
ある実施形態では、ワクチンキットは、タンパク質もしくはその多量体、ペプチドもしくはその多量体、弱毒化細菌、又は弱毒化ウイルスである前記抗原を有する。
別の実施形態では、ワクチンキットは、弱毒化ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２又はその成分である前記抗原を有する。さらに別の実施形態では、ワクチンキットは、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２由来のスパイクタンパク質又はその一部である前記抗原を有する。
別の実施形態では、ワクチンキットは、式（Ｉ）の化合物：

又はその薬学的に許容される塩である前記ＴＬＲ２アゴニストを有する。
別の実施形態では、ワクチンキットは、式（Ｉ）の化合物のアナログである前記ＴＬＲ２アゴニストを有し、前記アナログは、式（Ｉａ）の化合物又はその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、互変異性体、エナンチオマーもしくはジアステレオマー：

（式中、ＸはＣ＝Ｏ、－ＮＲ３ＣＨ２－、－ＣＨ２ＮＲ３－、－ＮＲ３（Ｃ＝Ｏ）－、－（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ３－、Ｃ＝ＮＯＨ、及びＣＨ（ＯＨ）－から選択され、Ｒ２は式（ＩＩ）又は式（ＩＩＩ）の糖：

であり、
Ｒ１はアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、アリール及びヘテロアリール部分から選択され、
アルキル部分は、場合により分岐したＣ１～Ｃ６アルキル基から選択され、
ヘテロアルキル部分は、場合により分岐した又は置換された、場合により１個又は複数のヘテロ原子を含むＣ１～Ｃ６アルキル基から選択され、
シクロアルキル部分は、場合により置換された、場合により１個又は複数のヘテロ原子を含むＣ１～Ｃ６環状アルキル基から選択され、
アリール部分は、場合により置換されたＣ６芳香環から選択され、
ヘテロアリール部分は、１個又は複数のヘテロ原子を含む場合により置換されたＣ１～Ｃ５芳香環から選択され、
ヘテロ原子は、Ｏ、Ｎ、Ｐ、及びＳから選択され、
置換基は独立に、アルキル、ＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、ＮＨ２、ＮＨ－アルキル、ＮＨ－アシル、Ｓ－アルキル、Ｓ－アシル、Ｏ－アルキル及びＯ－アシルから選択され、
アシルはＣ１～Ｃ４の場合により分岐したアシル基から選択され、
Ｒ３はＨ及びＭｅから選択され、
Ｒ４はＨ及びＭｅから選択され、
ＲａはＨ及びＣＲ２１Ｒ２２Ｒ２３から選択され、
Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３及びＲ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０は独立に、Ｈ、Ｍｅ、ＮＲ１１Ｒ１２、ＮＯ２及びＯＲ１１から選択され、
Ｒ２３は式（ＩＩ）のＲ４と一緒になって、Ｒ４は式（ＩＩ）のＲ５と一緒になって、Ｒ５は式（ＩＩ）のＲ７と一緒になって、及びＲ７は式（ＩＩ）のＲ９と一緒になって、独立に、結合して各基が結合している炭素原子間に二重結合を残す結合を表し、
Ｒ２１はＲ２２と一緒になって、Ｒ５はＲ６と一緒になって、Ｒ７はＲ８と一緒になって、又はＲ９はＲ１０と一緒になって、カルボニルで置き換えられていてもよく、
Ｒ１１及びＲ１２は独立に、Ｈ及びアルキルから選択され、
Ｒ１３はＨ、ＯＨ及びＯＣＨ３から選択され、
Ｒ１４はＨ及びＯＨから選択され、
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０の１つはＮＲ１１Ｒ１２及びＮＯ２から選択され、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨであり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＨであり、Ｒ６がＯＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＨである場合、ＸはＣ＝Ｏでなくてもよく、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨであり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＯＨであり、Ｒ６がＨであり、Ｒ７がＯＨであり、Ｒ８がＭｅであり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＨである場合、ＸはＣ＝Ｏでなくてもよく、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨであり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＯＨであり、Ｒ６がＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＯＨである場合、ＸはＣ＝Ｏでなくてもよい）
である。
さらに別の実施形態では、ワクチンキットは、




から選択される前記ＴＬＲ２アゴニストを有する。
一般的化学方法
当業者であれば、本発明で使用するためのＴＬＲ２アゴニストが、種々の方法で公知の様式で調製され得ることを認識するであろう。以下の経路は、式（Ｉ）の化合物の合成に使用することができるいくつかの方法の単なる例示である。
例えば式（Ｉ）の化合物を調製するための１つの一般的経路では、エリスロマイシンＡを半合成操作に供してアジスロマイシンを生成する。この変換の方法が公知であるが（米国特許第３４７８０１４号明細書；米国特許第４３２８３３４号明細書；米国特許第４４７４７６８号明細書、Ｇｌａｎｓｄｏｒｐら、２００８）、これらの経路の変形又は他の経路を同じ目的に使用することができる。マイカロース／クラジノース及び／又はデソサミンは、グリコシド切断などのさらなる化学的方法によって除去される。手短に言えば、ある方法では、酸で処理することによって糖を除去することができる。アミノ糖の除去を促進するために、ジメチルアミンを酸化してＮ－オキシドを形成し、次いで、これを熱分解によって除去することが最初に必要である。得られた５－Ｏ糖及び３－Ｏ糖を、酸性分解によって除去することができる。適切な方法は、ＬｅＭａｈｉｅｕ（１９７４）及びＤｊｏｋｉｃ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，１９８８によって教示されている。最後に、化合物を、アミノ糖を付加する細菌株を使用して生体内変換する。
本発明のワクチンの一般的使用
本明細書に開示される本発明のワクチン接種方法及びワクチン組成物は、ウイルス因子、特に呼吸器ウイルスに対する免疫を個体に提供するために使用され得る。
本発明のワクチン接種方法に使用するための医薬組成物
本発明はまた、抗原及びＴＬＲ２アゴニストを少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬組成物を含むワクチン接種キットを提供する。本発明はまた、抗原及びＴＬＲ２アゴニストを少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤と共に含む肺又は鼻腔内組成物に関する。
肺投与用の医薬組成物は、蒸気又はエアロゾルとして投与するための液体又は固体製剤であり得る。エアロゾルは、ジェット式又はメッシュ式ネブライザーによって送達され得、メッシュ式ネブライザーは、伝統的なジェット式ネブライザーと比較して高いエアロゾル化効率及び迅速な投与を有する。肺投与用の固体製剤は、乾燥粉末吸入器によって送達され得る。
ワクチン接種方法は、単回投与又はある期間にわたる複数回投与からなり得る。特に、ビタミンＡの経口投与は、複数回の投与からなり得る。
製剤は、都合よく単位剤形を含む適切な剤形で提供してもよく、薬学の分野で周知の方法のいずれかによって調製してもよい。このような方法は、有効成分（抗原）及びＴＬＲ２アゴニストを少なくとも１つの賦形剤と会合させるステップを含む。一般に、製剤は、有効成分を液体担体もしくは細かく分割された固体担体又は両方と均一かつ密接に会合させることによって調製される。
特定のワクチン接種及びワクチン接種される個体、ならびに投与経路に応じて、組成物を、様々な用量及び／又は頻度で投与することができる。
医薬組成物は、製造及び貯蔵の条件下で安定でなければならず、よって、必要に応じて、細菌及び真菌などの微生物の汚染作用から保護されるべきである。液剤、分散剤及び懸濁剤などの液体製剤の場合、担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール及び液体ポリエチレングリコール）、植物油及びそれらの適切な混合物を含有する溶媒又は分散媒であってもよい。固体製剤の場合、乾燥粉末製剤は、通常、微粉化された活性粒子をラクトース又はマンニトールなどのより大きな担体粒子と混合することによって調製される。粉末のエアロゾル化効率は、粒径分布、形状及び表面特性などの担体特徴に大きく依存する。
本発明のワクチン接種方法で使用するための組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤、例えば担体、溶媒、噴射剤、ｐＨ調整剤、安定化剤、界面活性剤、可溶化剤、分散剤、保存剤等を含む。
上で特に言及される成分に加えて、本発明の製剤は、当の製剤型を考慮して、当技術分野で慣用的な他の薬剤を含んでもよいことを理解すべきである。当業者であれば、適切な製剤を選択する方法及びこれを調製する方法を知るだろう（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎの医薬科学）第１８版．又はそれ以降参照）。当業者はまた、適切な投与経路及び投与量を選択する方法を知っているだろう。
ＴＬＲ２アゴニストの薬学的に許容される塩は、薬学的に許容される無機又は有機の酸又は塩基から形成される慣用的な塩、ならびに第四級アンモニウム酸付加塩を含む。適切な酸塩のより具体的な例としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ギ酸、乳酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、パルモイック（ｐａｌｍｏｉｃ）酸、マロン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、ナフタレン－２－スルホン酸、ベンゼンスルホン酸ヒドロキシナフトエ酸、ヨウ化水素酸、リンゴ酸、ステロイック（ｓｔｅｒｏｉｃ）酸、タンニンなどの塩が挙げられる。シュウ酸などの他の酸は、それ自体は薬学的に許容されないが、本発明の化合物及びその薬学的に許容される塩を得る際の中間体として有用な塩の調製に有用であり得る。適切な塩基性塩のより具体的な例としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、マグネシウム、アルミニウム、カルシウム、亜鉛、Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ－メチルグルカミン及びプロカインの塩が挙げられる。
非限定的な実施形態の以下のリストは本発明をさらに説明する：
１．抗原、ＴＬＲ２アゴニスト及び少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む組成物が、肺又は鼻腔内投与用であり、ビタミンＡが、前記組成物の投与前又は投与後３日以内に少なくとも１回経口投与される、ワクチン接種方法。
２．前記抗原は、タンパク質もしくはその多量体、ペプチドもしくはその多量体、弱毒化細菌、又は弱毒化ウイルスである、実施形態１に記載のワクチン接種方法。
３．前記ＴＬＲ２アゴニストは、式（Ｉ）の化合物：

又はその薬学的に許容される塩である、実施形態１から２のいずれかに記載のワクチン接種方法。
４．前記ＴＬＲ２アゴニストは、式（Ｉ）の化合物のアナログであり、前記アナログは、式（Ｉａ）の化合物又はその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、互変異性体、エナンチオマーもしくはジアステレオマー：

（式中、ＸはＣ＝Ｏ、－ＮＲ３ＣＨ２－、－ＣＨ２ＮＲ３－、－ＮＲ３（Ｃ＝Ｏ）－、－（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ３－、Ｃ＝ＮＯＨ、及びＣＨ（ＯＨ）－から選択され、Ｒ２は式（ＩＩ）又は式（ＩＩＩ）の糖：

であり、
Ｒ１はアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、アリール及びヘテロアリール部分から選択され、
アルキル部分は、場合により分岐したＣ１～Ｃ６アルキル基から選択され、
ヘテロアルキル部分は、場合により分岐した又は置換された、場合により１個又は複数のヘテロ原子を含むＣ１～Ｃ６アルキル基から選択され、
シクロアルキル部分は、場合により置換された、場合により１個又は複数のヘテロ原子を含むＣ１～Ｃ６環状アルキル基から選択され、
アリール部分は、場合により置換されたＣ６芳香環から選択され、
ヘテロアリール部分は、１個又は複数のヘテロ原子を含む場合により置換されたＣ１～Ｃ５芳香環から選択され、
ヘテロ原子は、Ｏ、Ｎ、Ｐ、及びＳから選択され、
置換基は独立に、アルキル、ＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、ＮＨ２、ＮＨ－アルキル、ＮＨ－アシル、Ｓ－アルキル、Ｓ－アシル、Ｏ－アルキル及びＯ－アシルから選択され、
アシルはＣ１～Ｃ４の場合により分岐したアシル基から選択され、
Ｒ３はＨ及びＭｅから選択され、
Ｒ４はＨ及びＭｅから選択され、
ＲａはＨ及びＣＲ２１Ｒ２２Ｒ２３から選択され、
Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３及びＲ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０は独立に、Ｈ、Ｍｅ、ＮＲ１１Ｒ１２、ＮＯ２及びＯＲ１１から選択され、
Ｒ２３は式（ＩＩ）のＲ４と一緒になって、Ｒ４は式（ＩＩ）のＲ５と一緒になって、Ｒ５は式（ＩＩ）のＲ７と一緒になって、及びＲ７は式（ＩＩ）のＲ９と一緒になって、独立に、結合して各基が結合している炭素原子間に二重結合を残す結合を表し、
Ｒ２１はＲ２２と一緒になって、Ｒ５はＲ６と一緒になって、Ｒ７はＲ８と一緒になって、又はＲ９はＲ１０と一緒になって、カルボニルで置き換えられていてもよく、
Ｒ１１及びＲ１２は独立に、Ｈ及びアルキルから選択され、
Ｒ１３はＨ、ＯＨ及びＯＣＨ３から選択され、
Ｒ１４はＨ及びＯＨから選択され、
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０の１つはＮＲ１１Ｒ１２及びＮＯ２から選択され、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨであり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＨであり、Ｒ６がＯＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＨである場合、ＸはＣ＝Ｏでなくてもよく、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨであり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＯＨであり、Ｒ６がＨであり、Ｒ７がＯＨであり、Ｒ８がＭｅであり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＨである場合、ＸはＣ＝Ｏでなくてもよく、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨであり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＯＨであり、Ｒ６がＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＯＨである場合、ＸはＣ＝Ｏでなくてもよい）
である、実施形態１から２のいずれかに記載のワクチン接種方法。
５．Ｘは－ＮＲ３ＣＨ２－及びＣＨ２ＮＲ３から選択され、Ｒ２は式（ＩＩ）：

である、
実施形態４に記載のワクチン接種方法。
６．Ｒ１はメチル又はエチルである、実施形態４から５のいずれかに記載の方法。
７．Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７又はＲ８の１つはＮＲ１１Ｒ１２である、実施形態４から６のいずれかに記載の方法。
８．Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３及びＲ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０は独立に、Ｈ、Ｍｅ、ＮＲ１１Ｒ１２、及びＯＲ１１から選択される、実施形態４から７のいずれかに記載の方法。
９．Ｒ１３及びＲ１４はＯＨである、実施形態４から８のいずれかに記載の方法。
１０．Ｘは－ＮＲ３ＣＨ２－及びＣＨ２ＮＲ３から選択され、Ｒ２は式（ＩＩ）：

であり、
Ｒ１はメチル又はエチルであり、
Ｒ３はＨ及びＭｅから選択され、
Ｒ４はＨであり、
Ｒａは－ＣＲ２１Ｒ２２Ｒ２３であり、
Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３及びＲ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０は独立に、Ｈ、Ｍｅ、ＮＲ１１Ｒ１２、ＮＯ２及びＯＲ１１から選択され、
Ｒ１１及びＲ１２は独立に、Ｈ及びアルキルから選択され、アルキル部分は場合により分岐したＣ１～Ｃ６アルキル基から選択され、
Ｒ１３はＨ、ＯＨ及びＯＣＨ３から選択され、
Ｒ１４はＨ及びＯＨから選択され、
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０の１つはＮＲ１１Ｒ１２である、
実施形態４から９のいずれかに記載の方法。
１１．Ｒ２は式ＩＩによる糖であり、ＲａはＨであり、Ｒ４はＭｅであり、Ｒ５はＨであり、Ｒ６はＯＨであり、Ｒ７はＨであり、Ｒ８はＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９はＨであり、Ｒ１０はＨである、実施形態４から１０のいずれかに記載の方法。
１２．Ｒ１１及びＲ１２は独立に、Ｈ、Ｍｅ及びＥｔから選択される、実施形態４から１１のいずれかに記載の方法。
１３．Ｘは－ＮＲ３ＣＨ２－である、実施形態４から１２のいずれかに記載の方法。
１４．Ｒ１はＥｔである、実施形態４から１３のいずれかに記載の方法。
１５．前記ＴＬＲ２アゴニストは、




から選択される、実施形態４から１４のいずれかに記載の方法。
１６．ビタミンＤは、前記組成物の投与前、投与と同時、又は投与から３日以内のいずれかに経口投与される、実施形態１から１５のいずれかに記載のワクチン接種方法。
１７．ビタミンＤは、前記組成物の投与の１週間前～前記組成物の投与の２日後の間の期間に経口投与される、実施形態１６に記載のワクチン接種方法。
１８．前記抗原は、弱毒化ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２又はその成分である、実施形態１から１７のいずれかに記載のワクチン接種方法。
１９．前記抗原は、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２由来のスパイクタンパク質又はその一部である、実施形態１から１８のいずれかに記載のワクチン接種方法。
２０．前記ビタミンＡは、前記組成物の投与の１日前～前記組成物の投与の２日後の間の期間に少なくとも１回経口投与される、実施形態１から１９のいずれかに記載のワクチン接種方法。
２１．前記組成物はポリＩ：Ｃを含む、実施形態１から２０のいずれかに記載のワクチン接種方法。
２２．
－抗原、ＴＬＲ２アゴニスト及び少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む組成物と、
－前記組成物がビタミンＡの同時投与によるワクチン接種に使用されることを知らせるラベルと
を含む、ワクチンキット。
２３．前記抗原は、タンパク質もしくはその多量体、ペプチドもしくはその多量体、弱毒化細菌、又は弱毒化ウイルスである、実施形態２２に記載のワクチンキット。
２４．前記ＴＬＲ２アゴニストは、式（Ｉ）の化合物：

又はその薬学的に許容される塩である、実施形態２２から２３のいずれかに記載のワクチンキット。
２５．前記ＴＬＲ２アゴニストは、式（Ｉ）の化合物のアナログであり、前記アナログは、式（Ｉａ）の化合物又はその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、互変異性体、エナンチオマーもしくはジアステレオマー：

（式中、ＸはＣ＝Ｏ、－ＮＲ３ＣＨ２－、－ＣＨ２ＮＲ３－、－ＮＲ３（Ｃ＝Ｏ）－、－（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ３－、Ｃ＝ＮＯＨ、及びＣＨ（ＯＨ）－から選択され、Ｒ２は式（ＩＩ）又は式（ＩＩＩ）の糖：

であり、
Ｒ１はアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、アリール及びヘテロアリール部分から選択され、
アルキル部分は、場合により分岐したＣ１～Ｃ６アルキル基から選択され、
ヘテロアルキル部分は、場合により分岐した又は置換された、場合により１個又は複数のヘテロ原子を含むＣ１～Ｃ６アルキル基から選択され、
シクロアルキル部分は、場合により置換された、場合により１個又は複数のヘテロ原子を含むＣ１～Ｃ６環状アルキル基から選択され、
アリール部分は、場合により置換されたＣ６芳香環から選択され、
ヘテロアリール部分は、１個又は複数のヘテロ原子を含む場合により置換されたＣ１～Ｃ５芳香環から選択され、
ヘテロ原子は、Ｏ、Ｎ、Ｐ、及びＳから選択され、
置換基は独立に、アルキル、ＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、ＮＨ２、ＮＨ－アルキル、ＮＨ－アシル、Ｓ－アルキル、Ｓ－アシル、Ｏ－アルキル及びＯ－アシルから選択され、
アシルはＣ１～Ｃ４の場合により分岐したアシル基から選択され、
Ｒ３はＨ及びＭｅから選択され、
Ｒ４はＨ及びＭｅから選択され、
ＲａはＨ及びＣＲ２１Ｒ２２Ｒ２３から選択され、
Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３及びＲ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０は独立に、Ｈ、Ｍｅ、ＮＲ１１Ｒ１２、ＮＯ２及びＯＲ１１から選択され、
Ｒ２３は式（ＩＩ）のＲ４と一緒になって、Ｒ４は式（ＩＩ）のＲ５と一緒になって、Ｒ５は式（ＩＩ）のＲ７と一緒になって、及びＲ７は式（ＩＩ）のＲ９と一緒になって、独立に、結合して各基が結合している炭素原子間に二重結合を残す結合を表し、
Ｒ２１はＲ２２と一緒になって、Ｒ５はＲ６と一緒になって、Ｒ７はＲ８と一緒になって、又はＲ９はＲ１０と一緒になって、カルボニルで置き換えられていてもよく、
Ｒ１１及びＲ１２は独立に、Ｈ及びアルキルから選択され、
Ｒ１３はＨ、ＯＨ及びＯＣＨ３から選択され、
Ｒ１４はＨ及びＯＨから選択され、
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０の１つはＮＲ１１Ｒ１２及びＮＯ２から選択され、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨであり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＨであり、Ｒ６がＯＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＨである場合、ＸはＣ＝Ｏでなくてもよく、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨであり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＯＨであり、Ｒ６がＨであり、Ｒ７がＯＨであり、Ｒ８がＭｅであり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＨである場合、ＸはＣ＝Ｏでなくてもよく、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨであり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＯＨであり、Ｒ６がＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＯＨである場合、ＸはＣ＝Ｏでなくてもよい）
である、実施形態２２から２３のいずれかに記載のワクチンキット。
２６．前記ＴＬＲ２アゴニストは、




から選択される、実施形態２５に記載のワクチンキット。
２７．前記ラベルは、前記組成物がビタミンＤの同時投与によるワクチン接種に使用されることをさらに知らせる、実施形態２２から２６のいずれかに記載のワクチンキット。
２８．前記組成物は、肺又は鼻腔内投与用である、実施形態２２から２７のいずれかに記載のワクチンキット。
２９．前記ラベルは、ビタミンＡが経口投与されることを知らせる、実施形態２２から２８のいずれかに記載のワクチンキット。
３０．前記ラベルは、ビタミンＤが経口投与されることを知らせる、実施形態２７から２９のいずれかに記載のワクチンキット。
３１．前記抗原は、弱毒化ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２又はその成分である、実施形態２２から３０のいずれかに記載のワクチンキット。
３２．前記抗原は、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２由来のスパイクタンパク質又はその一部である、実施形態２２から３１のいずれかに記載のワクチンキット。
３３．
－抗原、ＴＬＲ２アゴニスト及び少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む第１の組成物と、
－ビタミンＡを含む第２の組成物と
を含む、ワクチンキット。
３４．前記抗原は、タンパク質もしくはその多量体、ペプチドもしくはその多量体、弱毒化細菌、又は弱毒化ウイルスである、実施形態３３に記載のワクチンキット。
３５．前記ＴＬＲ２アゴニストは

の化合物又はその薬学的に許容される塩である、実施形態３３から３４のいずれかに記載のワクチンキット。
３６．前記ＴＬＲ２アゴニストは、式（Ｉ）の化合物のアナログであり、前記アナログは、式（Ｉａ）の化合物又はその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、互変異性体、エナンチオマーもしくはジアステレオマー：

（式中、ＸはＣ＝Ｏ、－ＮＲ３ＣＨ２－、－ＣＨ２ＮＲ３－、－ＮＲ３（Ｃ＝Ｏ）－、－（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ３－、Ｃ＝ＮＯＨ、及びＣＨ（ＯＨ）－から選択され、Ｒ２は式（ＩＩ）又は式（ＩＩＩ）の糖：

であり、
Ｒ１はアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、アリール及びヘテロアリール部分から選択され、
アルキル部分は、場合により分岐したＣ１～Ｃ６アルキル基から選択され、
ヘテロアルキル部分は、場合により分岐した又は置換された、場合により１個又は複数のヘテロ原子を含むＣ１～Ｃ６アルキル基から選択され、
シクロアルキル部分は、場合により置換された、場合により１個又は複数のヘテロ原子を含むＣ１～Ｃ６環状アルキル基から選択され、
アリール部分は、場合により置換されたＣ６芳香環から選択され、
ヘテロアリール部分は、１個又は複数のヘテロ原子を含む場合により置換されたＣ１～Ｃ５芳香環から選択され、
ヘテロ原子は、Ｏ、Ｎ、Ｐ、及びＳから選択され、
置換基は独立に、アルキル、ＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、ＮＨ２、ＮＨ－アルキル、ＮＨ－アシル、Ｓ－アルキル、Ｓ－アシル、Ｏ－アルキル及びＯ－アシルから選択され、
アシルはＣ１～Ｃ４の場合により分岐したアシル基から選択され、
Ｒ３はＨ及びＭｅから選択され、
Ｒ４はＨ及びＭｅから選択され、
ＲａはＨ及びＣＲ２１Ｒ２２Ｒ２３から選択され、
Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３及びＲ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０は独立に、Ｈ、Ｍｅ、ＮＲ１１Ｒ１２、ＮＯ２及びＯＲ１１から選択され、
Ｒ２３は式（ＩＩ）のＲ４と一緒になって、Ｒ４は式（ＩＩ）のＲ５と一緒になって、Ｒ５は式（ＩＩ）のＲ７と一緒になって、及びＲ７は式（ＩＩ）のＲ９と一緒になって、独立に、結合して各基が結合している炭素原子間に二重結合を残す結合を表し、
Ｒ２１はＲ２２と一緒になって、Ｒ５はＲ６と一緒になって、Ｒ７はＲ８と一緒になって、又はＲ９はＲ１０と一緒になって、カルボニルで置き換えられていてもよく、
Ｒ１１及びＲ１２は独立に、Ｈ及びアルキルから選択され、
Ｒ１３はＨ、ＯＨ及びＯＣＨ３から選択され、
Ｒ１４はＨ及びＯＨから選択され、
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０の１つはＮＲ１１Ｒ１２及びＮＯ２から選択され、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨであり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＨであり、Ｒ６がＯＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＨである場合、ＸはＣ＝Ｏでなくてもよく、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨであり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＯＨであり、Ｒ６がＨであり、Ｒ７がＯＨであり、Ｒ８がＭｅであり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＨである場合、ＸはＣ＝Ｏでなくてもよく、
ただし、Ｒ１がＥｔであり、Ｒ２が式（ＩＩ）の糖であり、Ｒ１３がＨ又はＯＨであり、Ｒ１４がＨ又はＯＨであり、ＲａがＨであり、Ｒ４がＭｅであり、Ｒ５がＯＨであり、Ｒ６がＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＯＨである場合、ＸはＣ＝Ｏでなくてもよい）
である、実施形態３３から３４のいずれかに記載のワクチンキット。
３７．前記ＴＬＲ２アゴニストは、




から選択される、実施形態３６に記載のワクチンキット。
３８．前記第２の組成物はビタミンＤを含む、実施形態３３から３７のいずれかに記載のワクチンキット。
３９．前記ワクチンキットはビタミンＤを含む第３の組成物を含む、実施形態３３から３７のいずれかに記載のワクチンキット。
４０．前記第３の組成物は経口投与用である、実施形態３９に記載のワクチンキット。
４１．前記第１の組成物は、肺又は鼻腔内投与用である、実施形態３３から４０のいずれかに記載のワクチンキット。
４２．前記第２の組成物は経口投与用である、実施形態３３から４１のいずれかに記載のワクチンキット。
４３．前記抗原は、弱毒化ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２又はその成分である、実施形態３３から４２のいずれかに記載のワクチンキット。
４４．前記抗原は、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２由来のスパイクタンパク質又はその一部である、実施形態３３から４３のいずれかに記載のワクチンキット。
実験
ＴＬＲ２アッセイ
試料及び対照を、標準アッセイ条件を使用して、Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎの細胞レポーターアッセイを使用して、組換えＨＥＫ－２９３－ＴＬＲ細胞株で２連で試験した。これらの細胞株は、ヒトＴＬＲ２タンパク質ならびに分泌型アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）であるレポーター遺伝子を機能的に過剰発現する。このレポーター遺伝子の産生は、ＮＦｋＢ誘導性プロモーターによって駆動される。ＴＬＲレポーター細胞株活性化の結果を、光学濃度値（ＯＤ）として示す。
２０μｌの各試験物を使用して、２００μｌの最終反応体積でｈＴＬＲ２レポーター細胞株を刺激した。２０ｕＭと１０ｕＭの少なくとも２つの濃度で試験して、試料を２連で試験した。
例１－化合物１の生成
ａｚ－ＡＧの生成
文献（Ｄｊｏｋｉｃ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，１９８８）に記載されている方法を使用して、アジスロマイシンアグリコンを生成した。手短に言えば、アジスロマイシンを３－Ｏ及び５－Ｏ糖の酸性除去によってアジスロマイシンアグリコンに変換する。５－Ｏアミノ糖を最初に酸化し、熱分解して切断を促進する。
エリスロマイシンアグリコン（エリスロノリド）をグリコシル化することができる生体内変換株の作製
Ｓ．エリスラエア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）１８Ａ１（ｐＡＥＳ５２）の作製
ａｃｔＩＩ－ＯＲＦ４ ｐａｃｔＩ／ＩＩＩ発現系（Ｒｏｗｅ ｅｔ ａｌ．１９９８）と共に、ａｎｇＡＩ、ａｎｇＡＩＩ、ａｎｇＣＶＩ、ａｎｇ－ｏｒｆ１４、ａｎｇＭＩＩＩ、ａｎｇＢ、ａｎｇＭＩ及びａｎｇＭＩＩからなる発現プラスミドであるｐＡＥＳ５２を、以下の通り作製した。
アンゴラマイシン糖生合成遺伝子を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（マナサス、バージニア州、米国）から得たＳ．エウリテルムス（Ｓ．ｅｕｒｙｔｈｅｒｍｕｓ）ＡＴＣＣ２３９５６株のコスミドライブラリーから増幅した。生合成遺伝子クラスター配列は、ＥＵ０３８２７２、ＥＵ２２０２８８及びＥＵ２３２６９３として寄託された（Ｓｃｈｅｌｌ，２００８）。
生合成遺伝子カセットを前記のようにベクターｐＳＧ１４４にアセンブルし（Ｓｃｈｅｌｌ，２００８，ＥＳＩ）、糖生合成に必要な８つが得られるまで連続遺伝子を付加し、プラスミドｐＡＥＳ５２を作製した。
ｐＡＥＳ５２を１８Ａ１株に形質転換した（国際公開第２００５０５４２６５号パンフレット）。
ｐＡＥＳ５２のＳ．エリスラエア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）１８Ａ１への形質転換
ｐＡＥＳ５２を、標準的な方法（Ｋｉｅｓｅｒ ｅｔ ａｌ ２０００、Ｇａｉｓｓｅｒ ｅｔ ａｌ．１９９７）を使用してプロトプラストによりＳ．エリスラエア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）１８Ａ１に形質転換した。得られた菌株はＩＳＯＭ－４５２２と命名され、これは２０１７年１月２４日にＮＣＩＭＢに寄託番号：ＮＣＩＭＢ ４２７１８で寄託されている。
Ｓ．エリスラエア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）ＳＧＴ２（ｐＡＥＳ５４）の作製
ａｃｔＩＩ－ＯＲＦ４ ｐａｃｔＩ／ＩＩＩ発現系（Ｒｏｗｅ ｅｔ ａｌ．１９９８）と共に、ａｎｇＡＩ、ａｎｇＡＩＩ、ａｎｇＣＶＩ、ａｎｇ－ｏｒｆ１４、ａｎｇＭＩＩＩ、ａｎｇＢ、ａｎｇＭＩ及びａｎｇＭＩＩからなる発現プラスミドであるｐＡＥＳ５４を、以下の通り作製した。
アンゴラマイシン糖生合成遺伝子を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（マナサス、バージニア州、米国）から得たＳ．エウリテルムス（Ｓ．ｅｕｒｙｔｈｅｒｍｕｓ）ＡＴＣＣ２３９５６株のコスミドライブラリーから増幅した。生合成遺伝子クラスター配列は、ＥＵ０３８２７２、ＥＵ２２０２８８及びＥＵ２３２６９３として寄託された（Ｓｃｈｅｌｌ，２００８）。
生合成遺伝子カセットを前記のようにベクターｐＳＧ１４４にアセンブルし（Ｓｃｈｅｌｌ，２００８，ＥＳＩ）、糖生合成に必要な８つが得られるまで連続遺伝子を付加し、プラスミドｐＡＥＳ５２を作製した。
ａｃｔＩＩ－ＯＲＦ４ ｐａｃｔＩ／ＩＩＩプロモーター系を含む１１５４１ｂｐ ＳｐｅＩ－ＮｈｅＩフラグメントを連結することによってプラスミドｐＡＥＳ５４を作製し、８ ａｎｇ遺伝子を、ストレプトマイセスに導入するためのアプラマイシン耐性遺伝子、ｏｒｉＣ、ｏｒｉＴ、及び組込み形質転換のためのａｔｔＰ部位を有するｐｈｉＢＴ１インテグラーゼを含む、ｐＧＰ９からの５０８７ｂｐ Ｘｂａｌ－Ｓｐｅｌフラグメントを有するｐＡＥＳ５２から切除した。（適合性のＮｈｅＩ及びＸｂａＩ部位を、ライゲーション中に排除した。）
次いで、ｐＡＥＳ５４をＳ．エリスラエア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）ＳＧＴ２に形質転換した（Ｇａｉｓｓｅｒら２０００、国際公開第２００５０５４２６５号パンフレット）。
ｐＡＥＳ５４のＳ．エリスラエア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）ＳＧＴ２への形質転換
ｐＡＥＳ５４を、標準的な方法を使用してＳ．エリスラエア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）ＳＧＴ２への連結によって移した。手短に言えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＥＴ１２５６７ ｐＵＺ８００２を標準的手順を介してｐＡＥＳ５４で形質転換し、アプラマイシン（５０μｇ／ｍＬ）、カナマイシン（５０μｇ／ｍＬ）及びクロラムフェニコール（３３μｇ／ｍＬ）選択により２ＴＹ上に広げた。このプレートを３７℃で一晩インキュベートした。これからのコロニーを使用して、新鮮な液体２ＴＹ培養物を設定し、後期の対数期に達するまで３７℃でインキュベートした。細胞を収穫し、洗浄し、Ｓ．エリスラエア（Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅａ）ＳＧＴ２の胞子と混合し、Ｒ６のプレートに広げ、２８℃でインキュベートした。２４時間後、これらのプレートを、３ｍｇのアプラマイシン及び２．５ｍｇのナリジクス酸を含有する１ｍＬの滅菌水で覆い、２８℃でさらに５～７日間インキュベートした。このプレート上の接合完了体を、アプラマイシン（１００μｇ／ｍＬ）を含有するＲ６の新しいプレートに移した。
代替生体内変換株
あるいは、これはアンゴロサミンをエリスロノリドに追加するが、ＢＩＯＴ－２９４５（Ｓｃｈｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，２００８）を生体内変換株として使用することもできる。
アジスロマイシンアグリコンの生体内変換
ＳＶ２培地（４０ｍＬ）及び８μＬのチオストレプトン（２５ｍｇ／ｍＬ）を含有するＥｒｌｅｎｍｅｙｅｒフラスコ（２５０ｍＬ）に、０．２ｍＬの菌株ＩＳＯＭ－４５２２の胞子ストックを接種し、３０℃でインキュベートし、２．５ｃｍ行程で３００ｒｐｍで４８時間振盪した。
ＥｒｙＰＰ培地（７ｍＬ）を含有する栓をした滅菌ファルコンチューブ（５０ｍＬ）を準備し、抗生物質を用いないで種フラスコの培養物を（ファルコンチューブ１本あたり０．５ｍＬ）を接種した。ファルコンを３０℃でインキュベートし、２．５ｃｍ行程で３００ｒｐｍで２４時間振盪した。
２４時間後、アジスロマイシンアグリコン（ＤＭＳＯ中０．５ｍＭ、５０μＬ）を各ファルコンチューブに添加し、２．５ｃｍ行程で３００ｒｐｍでさらに６日間インキュベーションを続けた。
化合物１の単離
全ブロスをｐＨ９．５に調整し、１容量の酢酸エチルで２回抽出した。遠心分離（３５００ｒｐｍ、２５分）後、吸引によって有機層を回収した。有機層を合わせ、真空下で減量すると、化合物１を含有する茶色ゴムが現れた。この抽出物を酢酸エチル（２００ｍｌ）と塩化アンモニウム水溶液（２０ｍｌの５０％濃縮溶液）に分配した。分離後、有機層をさらなる容量（２００ｍｌ）の塩化アンモニウム水溶液で抽出した。次いで、合わせた水層を水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ９．０に調整し、１容量当量の酢酸エチルで２回抽出した。有機層を合わせ、真空下で減量すると、茶色固体になった。次いで、この抽出物をシリカカラムにアプライし、以下により段階的に（５００ｍｌロットで）溶出した：
化合物１は主にＦ及びＧ中にあった。これらの溶媒を合わせ、真空中で減量させると、化合物１を含有する茶色固体が得られた。次いで、この物質を分取ＨＰＬＣ（２０ｍＭ酢酸アンモニウム及びアセトニトリルを溶媒として使用したＣ１８ Ｇｅｍｉｎｉ ＮＸカラム、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）によって精製した。標的化合物を含有する画分をプールし、乾燥させ、引き続いて、Ｃ１８ ＳＰＥカートリッジで脱塩した。
例２－マウスにおけるＣＯＶＩＤ－１９ワクチンの有効性
本試験の目的は、ｈＡＣＥ２トランスジェニックマウスにおける新規なＣＯＶＩＤ－１９ワクチンの有効性を評価することであった。
５５匹の雌ＡＣ７０ ｈＡＣＥ２トランスジェニックマウスを、ストックホルムの地域動物倫理委員会によって認可された試験に含めた（２０２０～２０２１）。動物を７又は８匹／群の７つの群に分けて、以下のようにワクチンで免疫化した：
・１群：１０μｇの三量体スパイク＋１０μｇのポリＩ：Ｃ＋４０μｇのビタミンＡ；皮下（ｎ＝７）
・２群：ワクチンなし（ｎ＝８）
・３群：１００μｇの三量体スパイク＋１０μｇのポリＩ：Ｃ＋４０μｇのビタミンＡ、皮下（ｎ＝８）
・４群：１０μｇの三量体スパイク＋１０μｇのポリＩ：Ｃ＋４０μｇのビタミンＡ、鼻腔内（ｎ＝８）
・５群：８０μｇの三量体スパイク＋１０μｇのポリＩ：Ｃ＋４０μｇのビタミンＡ、鼻腔内（ｎ＝８）
・６群：１０μｇの三量体スパイク＋１０μｇのポリＩ：Ｃ＋４０μｇのビタミンＡ、気管内（ｎ＝８）
・７群：８０μｇの三量体スパイク＋１０μｇのポリＩ：Ｃ＋４０μｇのビタミンＡ、気管内（ｎ＝８）
ポリＩ：ＣをＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（ｖａｃ－ｐｉｃ）から入手した。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２三量体スパイクタンパク質をＩｃｏｓａｇｅｎから入手した。
動物の体重を測定し、０日目及び１４日目（３～７群）又は１５日目（１群）に免疫化した。２８日目に、動物に、鼻腔内投与を介して１．８７５×１０５個のＴＣＩＤ５０ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を接種した。動物の体重を測定し、３８～３９日目まで毎日健康状態の変化を監視し、その後、安楽死させた。体重の２０％を喪失したか、又は健康状態の深刻な低下を示した動物を、この実験を管理する倫理的許可に従って早期に安楽死させた。
血清を単離するための血液試料を、－３日目、１４日目、２８日目及び終了時に獲得した。終了時の採血後、動物を安楽死させ、気管支肺胞洗浄を実施し、液（ＢＡＬ）を回収した。脾臓、肺及び気管を切除し、ウイルス力価を分析するために脾臓、肺（下気道）及び気管（上気道）の切片をＲＮＡＬａｔｅｒ及びＴＲＩｚｏｌに保存した。肺及び頭蓋骨（脳及び鼻咽頭組織について）を組織病理学的分析のために４％ホルムアルデヒドに保存した。
１匹（ＩＤ ３４３、３群）が０日目に不完全な皮下用量を受けた。
１匹（ＩＤ ３６６、６群）が、試験品の欠如により、最初の免疫化を受けなかった。最初の免疫化後に３匹（ＩＤ ３７１、３７３及び３７５、７群）が死亡した：１匹は麻酔薬の過剰投与のために死亡し、残りの２匹は気管内投与技術によって引き起こされる合併症のために安楽死させた。ＩｓｏＣａｇｅをラックに適切に挿入できなかったことにより酸素が不足したため、２回目の免疫化後に１匹（ＩＤ ３４１、３群）が死亡したことが分かった。
ワクチン投与自体は、動物の体重に過度に影響しなかった。０日目～１４日目の間で７群の動物では体重のわずかな減少が自明であった；しかしながら、全ての群が２回目のワクチン接種後に体重の全体的な増加を示した。
非ワクチン接種動物へのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の投与は、体重の有意な減少をもたらした；動物は、３２日目までに接種前の体重の８５．７±０．７％まで低下していた。ワクチン接種は感染によって誘導される体重減少に有意に影響し、全てのワクチン接種群で相対体重の著しい減少はなかった。しかしながら、６群の１匹（ＩＤ ３６６）は、非ワクチン接種動物と同様に、体重の著しい減少を示した。上記のように、この動物は１回の免疫化しか受けていなかった（１４日目）。
ワクチン接種群間で体重の差がさらに自明であった。１群（低用量皮下）及び４群（低用量鼻腔内）の相対体重は、５、６及び７群の相対体重より有意に低かった。
ワクチン投与は、動物の健康状態に明白には影響せず、呼吸機能に対する観察可能な効果を及ぼさなかった。対照的に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の接種は、接種の４日後から健康状態の悪化を伴った。動物は、猫背姿勢、立毛及び運動の減少を呈した。２匹は攻撃性の徴候を示し、２匹は異常な運動行動、すなわち後肢で立って前後に揺れ動く行動を示した。健康状態の悪化ならびに体重減少のために、２群の動物を３２日目に安楽死させた。
ワクチン接種動物は、明白な健康状態の変化をほとんど示さなかった。６群の１匹（ＩＤ ３６６）は３２日目に症状を呈したので、結果として、安楽死させた。１群の３匹を、猫背姿勢、立毛、運動の増加、硬直及び振戦の呈示のために３２目又は３４日目に安楽死させた。残りのワクチン接種動物については明白な症状が自明でなかった。
ワクチン投与は生存を有意に改善した。非ワクチン接種動物の生存期間中央値は４日であり、これは他の全ての群の動物の生存期間と有意に異なっていた。１群の動物の生存期間中央値は６日であった；残りのワクチン接種群は、動物を健康状態の低下によらず終了日に安楽死させたので、生存期間が未定義であった。
スパイク（武漢）及びスパイク受容体結合ドメイン、ＲＢＤ（南アフリカ及び英国）に対する循環ＩｇＧ力価が、２８日目に全てのワクチン接種群で検出された；増加は用量依存的であり、高用量スパイクを受けた動物はより強い免疫応答を示した。比較すると、スパイク及びＲＢＤに対するＩｇＡ力価は、鼻腔内又は気管内経路を介してワクチン接種された群でのみ検出された。特に、鼻腔内投与がＩｇＡ力価の有意な増加と関連していた。ＩｇＧと比較して、用量依存性は自明ではなかった。
ワクチン接種動物の末期ＢＡＬ試料でＩｇＧ及びＩｇＡ抗体力価が検出された。最も強い応答は、気管内及び鼻腔内経路を介してワクチン接種した動物で自明であり、用量依存的応答が自明であった。特にスパイク及びＲＢＤ（英国）に対するＩｇＧ応答が優勢であった。
中和抗体価は、ワクチン接種動物の気管支肺胞洗浄において様々なレベルで観察された。皮下投与は、最低レベルの中和抗体と関連しており、３匹のみが低い又は部分的な力価を示した。鼻腔内又は気管内経路を介してワクチン接種した動物は、より高いレベルの中和抗体価を示した；高用量鼻腔内投与後に最高レベルが検出された。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスは、全ての非ワクチン接種対照動物においてＢＡＬで検出可能であり、感染の成功を示した。皮下ワクチン接種を受けた３匹では低いウイルス力価が検出されたが、鼻腔内又は気管内投与を介してワクチン接種された動物では検出できなかった。
組織病理学的分析により、全ての群で気道の炎症性変化が明らかになった。しかしながら、興味深いことに、下気道（気管、気管分岐部及び肺）における炎症性細胞浸潤は、非ワクチン接種動物では検出されなかったか、又はより低い重症度で検出された。血管周囲から傍気管支及び肺胞から間質への炎症性細胞浸潤が、１群ではより高度に観察され（ＬＤ ｓ．ｃ．）、５群（ＨＤ ｉ．ｎ．）及び７群（ＨＤ ｉ．ｔ．）でわずかに高かった。非ワクチン接種対照では、最小限の変化しか観察されなかった。比較すると、炎症細胞浸潤及び細動脈の管腔の減少、ならびに細気管支破片が、試験品を皮下注射した群において最も高い程度で観察された。これらの変化は、鼻腔内又は気管内免疫化を受けた動物ではそれほど観察されず、非ワクチン接種対照では観察されなかった。炎症は非ワクチン接種対照で最小であったので、炎症性変化は、ワクチンによって駆動される抗ウイルス免疫応答の証拠となり得る。
特に、中枢神経系、すなわち線条体においても炎症性変化が観察され、これは一部の動物で観察された異常な運動行動を説明し得る。非ワクチン接種動物、及び皮下経路を介してワクチン接種した動物の髄膜及び実質において、梨状葉皮質におけるニューロン壊死、ならびに血管周囲炎症性細胞浸潤が観察された。これらの変化は残りの群では観察されず、ワクチンの気管内投与又は鼻腔内投与がＣＮＳへのウイルス浸潤を妨げることを示唆した。
試験の結果を以下の表２～３及び図２～５に示す。

要約すると、１．８７５×１０５ ＴＣＩＤ５０ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の鼻腔内接種は、体重の減少及び健康状態の悪化をもたらし、感染の４日以内に早期安楽死をもたらした。これは、下気道におけるウイルス力価の増加に関連していた。三量体スパイク（１０μｇ～８０μｇ）、ポリＩ：Ｃ（１０μｇ）及び全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）（４０μｇ）の鼻腔内及び気管内投与は、健康状態に全体的な効果を及ぼさなかった。ワクチン接種動物は、スパイク及びＲＢＤに対するＩｇＧ及びＩｇＡ抗体の全身及び局所産生、ならびに中和抗体の局所産生を有し、用量依存的な血清学的応答を示した。これは、肺におけるウイルス複製の欠如、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２によって駆動される脳炎の阻害、及びＣＯＶＩＤ－１９疾患進行の予防に関連していた。
結論として、この試験は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２三量体スパイクタンパク質（１０～８０μｇ）、ポリＩ：Ｃ（１０μｇ）及びビタミンＡによる鼻腔内及び気管内ワクチン接種が、２回で、１．８７５×１０５ ＴＣＩＤ５０でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染から完全に防御することを示した。
例３－アジュバント及びビタミンＡと共にビーズに連結したスパイクタンパク質を使用したＣＯＶＩＤ－１９ワクチン。
この試験の目的は、ＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるＣＯＶＩＤ－１９に対する新規なワクチンの免疫原性を評価することであった。
試験品１：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質及び式（Ｉ）の化合物。
試験品２：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質。
試験品３：カルシトリオール（ビタミンＤ）、ＡＴＲＡ（ビタミンＡ）ミックス。混合物を調製し、非常に感光性であるため慎重に取り扱う。試験品３の濃度は、１００μｇ／ｍＬカルシトリオール及び２０ｍｇ／ｍＬ ＡＴＲＡである。
６～７週齢の２０匹の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスの体重を測定し、以下のように１群あたり５匹の４つの群に分けた：
１、２及び４群（ｉ．ｐ．注射、１００μＬ×１５匹）には、マウス１匹あたり１００ｎｇのカルシトリオール及び２０μｇのＡＴＲＡを投与する。
１及び２群（ｓ．ｃ．又はｉ．ｎ．投与、２５μＬ×１０匹）には、マウス１匹あたり１００ｎｇのカルシトリオール及び２０μｇのＡＴＲＡを投与する。
４群（ｉ．ｎ．投与、２５μＬ×５匹）には、マウス１匹あたり１００ｎｇのカルシトリオール及び２０μｇのＡＴＲＡを投与する。
０日目、１０日目及び２０日目に皮下又は鼻腔内送達によって動物を免疫化した。１、２及び４群には、免疫化の直前に、２０マイクログラムのＡＴＲＡ及び１００ナノグラムのカルシトリオール（試験品３）を腹腔内注射した。血清の単離及びその後の血清学的評価のための血液試料（１５０μＬ）を０日目（免疫化前）、１０日目、２０日目及び３０日目に採取した。血液試料を１０回反転させ、室温で３０分間放置し、次いで、４℃で１０分間、２０００×ｇで遠心分離した。次いで、血清をエッペンドルフチューブに分注し、さらなる分析まで－２０℃で保存した。
２群（スパイク、ＩＳＲ５０及びビタミンＡ＆Ｄ）及び３群（スパイク及びＩＳＲ５０）から３０日目に回収した血清からの抗ＩｇＧ応答は、ビタミンＡ及びＤの投与からも正の効果を示した。図６及び図７は、群の動物からの血清中の抗ＩｇＧを示す（それぞれ、個々のマウス及び平均）。
特許及び特許出願を含む本出願で言及される全ての参考文献は、可能な限り最大限に参照により本明細書に組み込まれる。
１．ワクチン接種方法のさらに別の実施形態では、前記ＴＬＲ２アゴニストは、



から選択される。
さらに別の実施形態では、ワクチンキットは、




から選択される前記ＴＬＲ２アゴニストを有する。

Claims (15)

  1. ワクチン接種方法であって、抗原、ＴＬＲ２アゴニスト及び少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む組成物が、肺又は鼻腔内投与用であり、かつビタミンＡが、該組成物の投与前３日以内又は投与後３日以内に少なくとも１回経口投与される、上記ワクチン接種方法。
  2. 前記抗原が、タンパク質もしくはその多量体、ペプチドもしくはその多量体、弱毒化細菌、又は弱毒化ウイルスである、請求項１に記載のワクチン接種方法。
  3. 前記ＴＬＲ２アゴニストが、式（Ｉ）の化合物：

    又はその薬学的に許容される塩である、請求項１又は２に記載のワクチン接種方法。
  4. ビタミンＤが、前記組成物の投与前、投与と同時、又は投与から３日以内のいずれかに経口投与される、請求項１から３のいずれか一項に記載のワクチン接種方法。
  5. ビタミンＤが、前記組成物の投与の１週間前～前記組成物の投与の２日後の間の期間に経口投与される、請求項４に記載のワクチン接種方法。
  6. 前記抗原が、弱毒化ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２又はその成分である、請求項１から５のいずれか一項に記載のワクチン接種方法。
  7. 前記抗原が、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２由来のスパイクタンパク質又はその一部である、請求項１から６のいずれか一項に記載のワクチン接種方法。
  8. 前記ビタミンＡが、前記組成物の投与の１日前～前記組成物の投与の２日後の間の期間に少なくとも１回経口投与される、請求項１から７のいずれか一項に記載のワクチン接種方法。
  9. －抗原、ＴＬＲ２アゴニスト及び少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む組成物と、
    －該組成物がビタミンＡの同時投与によるワクチン接種に使用されることを知らせるラベルと
    を含む、ワクチンキット。
  10. 前記組成物が、肺又は鼻腔内投与用である、請求項９から１２のいずれか一項に記載のワクチンキット。
  11. 前記ラベルが、組成物がビタミンＤの同時投与によるワクチン接種に使用されることをさらに知らせる、請求項９から１１のいずれか一項に記載のワクチンキット。
  12. －抗原、ＴＬＲ２アゴニスト及び少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む第１の組成物と、
    －ビタミンＡを含む第２の組成物と
    を含む、ワクチンキット。
  13. 前記第１の組成物が、肺又は鼻腔内投与用である、請求項１２に記載のワクチンキット。
  14. 前記抗原が、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２由来のスパイクタンパク質又はその一部である、請求項９から１３のいずれか一項に記載のワクチンキット。
  15. 前記ＴＬＲ２アゴニストが、式（Ｉ）の化合物：

    又はその薬学的に許容される塩である、請求項９から１４のいずれか一項に記載のワクチンキット。
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