JP2023530484A

JP2023530484A - 組織充填、組織間隔、及び組織バルキング用の絹－ヒアルロン酸組成物

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Publication number: JP2023530484A
Application number: JP2022577743A
Authority: JP
Inventors: アルトマン，グレゴリー，エイチ．; ボスケス，カルロス，ジェイ．; シュー，ペン; ジン，エルレイ; ヤコノ，パトリック; フォティア，ジェイソン
Original assignee: エボルブドバイネイチャー，インコーポレイテッド
Priority date: 2020-06-19
Filing date: 2021-06-19
Publication date: 2023-07-18
Also published as: KR20230119104A; MX2022016521A; CA3183134A1; BR112022025845A2; WO2021258030A1; IL299229A; AU2021293285A1; EP4167949A1; CO2023000559A2

Abstract

ヒアルロン酸及び絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の組織充填剤ならびに同を作製及び使用する方法が、本明細書中で提供される。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年６月１９日に出願された米国仮特許出願第６３／０４１，６７８号、２０２０年６月１９日に出願された米国仮特許出願第６３／０４１，６１６号、及び２０２０年６月１９日に出願された米国仮特許出願第６３／０４１，５８１号の利益を主張する国際出願であり、その各々が、参照によりその全体において本明細書中に組み込まれる。

絹（シルク）は、様々な昆虫及びクモにより産生される天然高分子である。カイコフィブロインは、フィラメントコアタンパク質、絹フィブロイン、及び非フィラメント状タンパク質、セリシンからなる膠状コーティングを含む。絹は、歴史的に、医学分野における使用のために試験されてきた。ヒアルロン酸（ヒアルロナン）は、全身に分布し、結合組織及び上皮組織中で見出されるグリコサミノグリカンである。その生体適合性及び構造的な利点のために、医療機器及び移植材料における有用な成分である。

人体の軟組織は、その構造の一部を、コラーゲン、エラスチン、及びグリコサミノグリカンを含む細胞外マトリックスによって担っている。軟組織欠損が生じると、それによって、軟組織構造が歪んだり、変形したり、又は他の方法で変化したりする。そのような構造は、欠損部位に沈着して欠損を治療し得る組織充填剤の使用を通じて回復し得る。例えば、組織充填剤を顔面の皺部分に置いて、皺を治療することができる。

しかし、当技術分野においては、特定の組織欠損に適合し得る、調整可能な特性を有し、多くの組織欠損を治療する新たな組織充填剤が必要とされている。

一部の実施形態では、本開示は、絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片、ヒアルロン酸（ＨＡ）、及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及び／又はポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）を含み、ＨＡの一部が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、及び第二級アルコールのうちの一つ又は複数を含む、一つ又は複数のリンカー部分により改変又は架橋されており、リンカー部分が、リンカーの一端でＨＡに付着されている生体適合性組織充填剤に関する。一部の実施形態では、絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の一部が、改変又は架橋されている。一部の実施形態では、絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の一部が、ＨＡに架橋されている。一部の実施形態では、絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の一部が、絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片に架橋されている。一部の実施形態では、絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片は、セリシンを実質的に欠いている。

一部の実施形態では、絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の一部は、約１２ｋＤａ、約１３ｋＤａ、約１４ｋＤａ、約１５ｋＤａ、約１６ｋＤａ、約４８ｋＤａ、及び約１００ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有する。一部の実施形態では、絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片は、約１～約５．０の間の多分散を有する。一部の実施形態では、絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片は、約１．５～約３．０の間の多分散を有する。一部の実施形態では、絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の一部は、低分子量、中分子量、又は高分子量を有する。

一部の実施形態では、組織充填剤は、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、又は約１５％の改変度（ＭｏＤ）を有する。一部の実施形態では、改変又は架橋は、架橋剤として、ジエポキシ－ＰＥＧ、ポリグリシジル－ＰＥＧ、ジグリシジル－ＰＥＧ、ジエポキシ－ＰＰＧ、ポリグリシジル－ＰＰＧ、ジグリシジル－ＰＰＧ、又はそれらの任意の組合せを使用して得られる。一部の実施形態では、改変又は架橋は、約２００Ｄａ、約５００Ｄａ、１０００Ｄａ、約２，０００Ｄａ、又は約６０００ＤａのＭＷを有するポリエチレングリコールジグリシジルエーテルを使用して得られる。一部の実施形態では、改変又は架橋は、約３８０Ｄａ、又は約６４０ＤａのＭＷを有するポリプロピレングリコールジグリシジルエーテルを使用して得られる。

一部の実施形態では、組織充填剤は、さらに、リドカインを含む。一部の実施形態では、組織充填剤中のリドカインの濃度は、約０．３％である。

一部の実施形態では、組織充填剤はゲルである。一部の実施形態では、組織充填剤はヒドロゲルである。一部の実施形態では、組織充填剤は、さらに、水を含む。一部の実施形態では、組織充填剤は単相性である。一部の実施形態では、組織充填剤中でのＨＡ及び絹の総濃度は、約１８ｍｇ／ｍＬ、約１９ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２１ｍｇ／ｍＬ、約２２ｍｇ／ｍＬ、約２３ｍｇ／ｍＬ、約２４ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約２６ｍｇ／ｍＬ、約２７ｍｇ／ｍＬ、約２８ｍｇ／ｍＬ、約２９ｍｇ／ｍＬ、又は約３０ｍｇ／ｍＬである。一部の実施形態では、組織充填剤中のＨＡ対絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の比率は、約９２／８、約９３／７、約９４／６、約９５／５、約９６／４、約９７／３、約１８／１２、約２７／３、約２９．４／０．６、約９９／１、約９２．５／７．５、又は約９０／１０である。一部の実施形態では、組織充填剤は皮膚充填剤である。一部の実施形態では、組織充填剤は生分解性である。一部の実施形態では、組織充填剤は注入可能である。一部の実施形態では、組織充填剤は、３０Ｇ又は２７Ｇの針を通して注入可能である。一部の実施形態では、組織充填剤は、約５Ｐａ～約５００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する。一部の実施形態では、組織充填剤は、約５Ｐａ、約６ｐａ、約７Ｐａ、約８Ｐａ、約９Ｐａ、約１０Ｐａ、約１１Ｐａ、約１２Ｐａ、約１３Ｐａ、約１４Ｐａ、約１５Ｐａ、約１６Ｐａ、約１７Ｐａ、約１８Ｐａ、約１９Ｐａ、約２０Ｐａ、約２１Ｐａ、約２２Ｐａ、約２３Ｐａ、約２４Ｐａ、約２５Ｐａ、約２６Ｐａ、約２７Ｐａ、約２８Ｐａ、約２９Ｐａ、約３０Ｐａ、約３１Ｐａ、約３２Ｐａ、約３３Ｐａ、約３４Ｐａ、約３５Ｐａ、約３６Ｐａ、約３７Ｐａ、約３８Ｐａ、約３９Ｐａ、約４０Ｐａ、約４１Ｐａ、約４２Ｐａ、約４３Ｐａ、約４４Ｐａ、約４５Ｐａ、約４６Ｐａ、約４７Ｐａ、約４８Ｐａ、約４９Ｐａ、約５０Ｐａ、約５１Ｐａ、約５２Ｐａ、約５３Ｐａ、約５４Ｐａ、約５５Ｐａ、約５６Ｐａ、約５７Ｐａ、約５８Ｐａ、約５９Ｐａ、約６０Ｐａ、約６１Ｐａ、約６２Ｐａ、約６３Ｐａ、約６４Ｐａ、約６５Ｐａ、約６６Ｐａ、約６７Ｐａ、約６８Ｐａ、約６９Ｐａ、約７０Ｐａ、約７１Ｐａ、約７２Ｐａ、約７３Ｐａ、約７４Ｐａ、約７５Ｐａ、約７６Ｐａ、約７７Ｐａ、約７８Ｐａ、約７９Ｐａ、約８０Ｐａ、約８１Ｐａ、約８２Ｐａ、約８３Ｐａ、約８４Ｐａ、約８５Ｐａ、約８６Ｐａ、約８７Ｐａ、約８８Ｐａ、約８９Ｐａ、約９０Ｐａ、約９１Ｐａ、約９２Ｐａ、約９３Ｐａ、約９４Ｐａ、約９５Ｐａ、約９６Ｐａ、約９７Ｐａ、約９８Ｐａ、約９９Ｐａ、約１００Ｐａ、約１０１Ｐａ、約１０２Ｐａ、約１０３Ｐａ、約１０４Ｐａ、約１０５Ｐａ、約１０６Ｐａ、約１０７Ｐａ、約１０８Ｐａ、約１０９Ｐａ、約１１０Ｐａ、約１１１Ｐａ、約１１２Ｐａ、約１１３Ｐａ、約１１４Ｐａ、約１１５Ｐａ、約１１６Ｐａ、約１１７Ｐａ、約１１８Ｐａ、約１１９Ｐａ、約１２０Ｐａ、約１２１Ｐａ、約１２２Ｐａ、約１２３Ｐａ、約１２４Ｐａ、又は約１２５Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する。一部の実施形態では、Ｇ’は、約１Ｈｚ、約５Ｈｚ、又は約１０Ｈｚの振動応力により測定される。一部の実施形態では、組織充填剤は、約１Ｐａ・ｓ～約１０Ｐａ・ｓの複素粘度を有する。一部の実施形態では、複素粘度は、約１Ｈｚ、約５Ｈｚ、又は約１０Ｈｚの振動応力により測定される。

一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象において状態を治療する方法に関し、対象に、本明細書中に記載される任意の組織充填剤、例えば、絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片、ヒアルロン酸（ＨＡ）、及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及び／又はポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）を含む生体適合性組織充填剤の治療有効量を投与することを含み、ＨＡの一部が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、及び第二級アルコールの一つ又は複数を含む、一つ又は複数のリンカー部分により改変又は架橋されており、リンカー部分が、リンカーの一端でＨＡに付着されている。一部の実施形態では、状態は、皮膚の状態である。一部の実施形態では、皮膚の状態は、皮膚の脱水、皮膚弾力の欠如、肌荒れ、皮膚の張りの欠如、皮膚のストレッチライン、皮膚のストレッチマーク、皮膚の蒼白、皮膚の陥没、頬のこけ、唇の薄さ、眼窩後部の欠損、顔面のひだ、及び皺からなる群から選択される。

一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象における美容的治療の方法に関し、対象に、本明細書中に記載される任意の組織充填剤、例えば、絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片、ヒアルロン酸（ＨＡ）、及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及び／又はポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）を含む生体適合性組織充填剤の治療有効量を投与することを含み、ＨＡの一部が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、及び第二級アルコールの一つ又は複数を含む、一つ又は複数のリンカー部分により改変又は架橋されており、リンカー部分が、リンカーの一端でＨＡに付着されている。

一部の実施形態では、組織充填剤は、対象の皮膚領域中に投与される。一部の実施形態では、本明細書中に記載される方法は、増大、再建、疾患の治療、障害の治療、身体の一部、部分、又は領域の欠損又は不完全性の矯正を含む。一部の実施形態では、本明細書中に記載される方法は、顔面の増大、顔面の再建、顔面の疾患の治療、顔面の障害の治療、顔面の欠損の治療、又は顔面の不完全性の治療を含む。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される方法は、少なくとも約３日間、約７日間、約１４日間、約２１日間、約２８日間、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、又は約６ヶ月間にわたり、生分解、生体侵食（ｂｉｏｅｒｏｓｉｏｎ）、生体吸収、及び／又は生体再吸収に抵抗性を示す組織充填剤を使用することを含む。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される方法は、実質的に類似のＨＡを含む対照組織充填剤により誘導される炎症応答と比較して低下された炎症応答をもたらす組織充填剤の投与を含み、対照組織充填剤は、絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片を含まない。一部の実施形態では、対象への組織充填剤の投与は、実質的に類似のＨＡを含む対照組織充填剤により誘導される炎症応答と比較して低下された炎症応答をもたらし、対照組織充填剤は、絹フィブロインもしくは絹フィブロイン断片及び／又はＰＥＧもしくはＰＰＧを含まない。一部の実施形態では、対象への任意の組織充填剤の投与は、実質的に類似のＨＡを含む対照組織充填剤により誘導されるコラーゲン産生と比較して増加したコラーゲン産生をもたらし、対照組織充填剤は、絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片を含まない、あるいは対照組織充填剤は、絹フィブロインもしくは絹フィブロイン断片及び／又はＰＥＧもしくはＰＰＧを含まない。

一実施形態では、本発明は、ヒアルロン酸（ＨＡ）、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、デンプン、アルギン酸塩、コンドロイチン－４－硫酸塩、コンドロイチン－６－硫酸塩、キサンタンガム、キトサン、ペクチン、寒天、カラゲナン、及びグアルガムからなる群から選択されるグリコサミノグリカン；及び酵素阻害剤、麻酔剤、薬効神経毒、酸化防止剤、抗感染剤、抗炎症剤、紫外（ＵＶ）光遮断剤、染料、ホルモン、免疫抑制剤、及び抗炎症剤からなる群から選択される活性薬剤を含む生体適合性組織充填剤に関し；グリコサミノグリカンの一部分が、アルカン鎖又はアルキル鎖、エーテル基、及び第二級アルコールの一つ以上を含む架橋部分により架橋され；ならびに架橋が、架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤を使用して得られる。一部の実施形態では、グリコサミノグリカンはヒアルロン酸（ＨＡ）である。一部の実施形態では、ＨＡの総量に対する架橋ＨＡの量（％ｗ／ｗ）は、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％である。一部の実施形態では、架橋ＨＡの架橋度は、約１％～約１００％の間である。一部の実施形態では、架橋ＨＡの架橋度は、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％である。一部の実施形態では、架橋ＨＡの架橋度は、約１％～約１５％の間である。一部の実施形態では、架橋ＨＡの架橋度は、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、及び約１５％の一つ又は複数である。

一部の実施形態では、架橋ＨＡは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖を含む架橋部分を含む。一部の実施形態では、架橋剤及び／又は架橋前駆体は、エポキシ基を含む。一部の実施形態では、架橋は、ポリエポキシリンカー、ジエポキシリンカー、ポリエポキシ－ＰＥＧ、ジエポキシ－ＰＥＧ、ポリグリシジル－ＰＥＧ、ジグリシジル－ＰＥＧ、ポリアクリレートＰＥＧ、ジアクリレートＰＥＧ、１，４－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）ブタン、１，４－ビスグリシジルオキシブタン、ジビニルスルホン（ＤＶＳ）、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、ＵＶ光、グルタルアルデヒド、１，２－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）エチレン（ＥＧＤＧＥ）、１，２，７，８－ジエポキシオクタン（ＤＥＯ）、ビスカルボジイミド（ＢＣＤＩ）、ペンタエリスリトールテトラグリシジルエーテル（ＰＥＴＧＥ）、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）、ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート（ＢＳ）、ヘキサメチレンジアミン（ＨＭＤＡ）、１－（２，３－エポキシプロピル）－２，３－エポキシシクロヘキサン、カルボジイミド、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤を使用して得られる。一部の実施形態では、架橋は、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、エチレングリコールジグリシジルエーテル（ＥＧＤＧＥ）、１，６－ヘキサンジオールジグリシジルエーテル、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル、ポリプロピレングリコールジグリシジルエーテル、ポリテトラメチレングリコールジグリシジルエーテル、ネオペンチルグリコールジグリシジルエーテル、ポリグリセロールポリグリシジルエーテル、ジグリセロールポリグリシジルエーテル、グリセロールポリグリシジルエーテル、トリメチロールプロパンポリグリシジルエーテル、ペンタエリスリトールポリグリシジルエーテル、及びソルビトールポリグリシジルエーテルからなる群から選択される多官能性エポキシ化合物を使用して得られる。一部の実施形態では、架橋は、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル、ジエポキシＰＥＧ、ＰＥＧジグリシジルエーテル、ポリオキシエチレンビス－グリシジルエーテル、ＰＥＧＤＥ、及びＰＥＧＤＧＥからなる群から選択される架橋剤及び／又は架橋前駆体を使用して得られる。一部の実施形態では、架橋は、約５００、約１０００、約２０００、又は約６０００の平均Ｍｎを有するポリエチレングリコールジグリシジルエーテルを使用して得られる。一部の実施形態では、架橋は、２～２５個のエチレングリコール基を有するポリエチレングリコールジグリシジルエーテルを使用して得られる。一部の実施形態では、架橋は、ポリエポキシ絹フィブロインリンカー、ジエポキシ絹フィブロインリンカー、ポリエポキシ絹フィブロイン断片リンカー、ジエポキシ絹フィブロイン断片リンカー、ポリグリシジル絹フィブロインリンカー、ジグリシジル絹フィブロインリンカー、ポリグリシジル絹フィブロイン断片リンカー、及びジグリシジル絹フィブロイン断片リンカーからなる群から選択される架橋剤及び／又は架橋前駆体を使用して得られる。

一部の実施形態では、本発明は、有機化合物及び／又は無機化合物をさらに含む組織充填剤に関する。一部の実施形態では、無機化合物はカルシウムヒドロキシアパタイトを含む。一部の実施形態では、カルシウムヒドロキシアパタイトは、約１μｍ～約１００μｍの間、約１μｍ～約１０μｍの間、約２μｍ～約１２μｍの間、約３μｍ～約１０μｍの間、約４μｍ～約１５μｍの間、約８μｍ～約１２μｍの間、約５μｍ～約１０μｍの間、約６μｍ～約１２μｍの間、約７μｍ～約２０μｍの間、約９μｍ～約１８μｍの間、又は約１０μｍ～約２５μｍの間の直径を有する粒子として製剤化される。一部の実施形態では、カルシウムヒドロキシアパタイトの濃度は、約０．００１％～約５％の間である。一部の実施形態では、カルシウムヒドロキシアパタイトの濃度は、約０．００１％、約０．００２％、約０．００３％、約０．００４％、約０．００５％、約０．００６％、約０．００７％、約０．００８％、約０．００９％、約０．０１％、約０．０１１％、約０．０１２％、約０．０１３％、約０．０１４％、約０．０１５％、約０．０１６％、約０．０１７％、約０．０１８％、約０．０１９％、又は約０．０２％である。一部の実施形態では、カルシウムヒドロキシアパタイトの濃度は、約０．０５％、約０．１％、約０．１５％、約０．２％、約０．２５％、約０．３％、約０．３５％、約０．４％、約０．４５％、約０．５％、約０．５５％、約０．６％、約０．６５％、約０．７％、約０．７５％、約０．８％、約０．８５％、約０．９％、約０．９５％、約１％、約１．０５％、約１．１％、約１．１５％、約１．２％、約１．２５％、約１．３％、約１．３５％、約１．４％、約１．４５％、約１．５％、約１．５５％、約１．６％、約１．６５％、約１．７％、約１．７５％、約１．８％、約１．８５％、約１．９％、約１．９５％、又は約２％である。

一部の実施形態では、有機化合物は、グリシン、Ｌ－プロリン、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、及びバリンからなる群から選択されるアミノ酸を含む。

一部の実施形態では、本発明は、ＨＡを含む組織充填剤に関し、ＨＡは、ストレプトコッカス細菌、又はバチルス・スブチリス細菌から得られる。

一実施形態では、本発明は、ヒアルロン酸（ＨＡ）、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、デンプン、アルギン酸塩、コンドロイチン－４－硫酸塩、コンドロイチン－６－硫酸塩、キサンタンガム、キトサン、ペクチン、寒天、カラゲナン、及びグアルガムからなる群から選択されるグリコサミノグリカン；ならびに麻酔剤を含む生体適合性組織充填剤に関し；グリコサミノグリカンの一部分が、アルカン鎖又はアルキル鎖、エーテル基、及び第二級アルコールの一つ以上を含む架橋部分により架橋され；ならびに架橋が、架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤を使用して得られる。一部の実施形態では、麻酔剤はリドカインである。一部の実施形態では、組織充填剤中での麻酔剤の濃度は、約０．００１％～約５％である。一部の実施形態では、組織充填剤中のリドカインの濃度は、約０．３％である。

一実施形態では、本発明は、ヒアルロン酸（ＨＡ）、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、デンプン、アルギン酸塩、コンドロイチン－４－硫酸塩、コンドロイチン－６－硫酸塩、キサンタンガム、キトサン、ペクチン、寒天、カラゲナン、及びグアルガムからなる群から選択されるグリコサミノグリカン；ならびに麻酔剤を含む生体適合性組織充填剤に関し；グリコサミノグリカンの一部分が、アルカン鎖又はアルキル鎖、エーテル基、及び第二級アルコールの一つ以上を含む架橋部分により架橋され；ならびに架橋が、架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤を使用して得られ；組織充填剤がゲルである。一部の実施形態では、組織充填剤はヒドロゲルである。一部の実施形態では、組織充填剤は、さらに、水を含む。一部の実施形態では、組織充填剤中でのＨＡの総濃度は、約１０ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬである。一部の実施形態では、組織充填剤中でのＨＡの総濃度は、約１５ｍｇ／ｍＬ、約１６ｍｇ／ｍＬ、約１７ｍｇ／ｍＬ、約１８ｍｇ／ｍＬ、約１９ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２１ｍｇ／ｍＬ、約２２ｍｇ／ｍＬ、約２３ｍｇ／ｍＬ、約２４ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約２６ｍｇ／ｍＬ、約２７ｍｇ／ｍＬ、約２８ｍｇ／ｍＬ、約２９ｍｇ／ｍＬ、又は約３０ｍｇ／ｍＬである。一部の実施形態では、組織充填剤中での架橋ＨＡの濃度は、約１０ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬである。一部の実施形態では、組織充填剤中での架橋ＨＡの濃度は、約１５ｍｇ／ｍＬ、約１６ｍｇ／ｍＬ、約１７ｍｇ／ｍＬ、約１８ｍｇ／ｍＬ、約１９ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２１ｍｇ／ｍＬ、約２２ｍｇ／ｍＬ、約２３ｍｇ／ｍＬ、約２４ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約２６ｍｇ／ｍＬ、約２７ｍｇ／ｍＬ、約２８ｍｇ／ｍＬ、約２９ｍｇ／ｍＬ、又は約３０ｍｇ／ｍＬである。

一実施形態では、本発明は、ヒアルロン酸（ＨＡ）、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、デンプン、アルギン酸塩、コンドロイチン－４－硫酸塩、コンドロイチン－６－硫酸塩、キサンタンガム、キトサン、ペクチン、寒天、カラゲナン、及びグアルガムからなる群から選択されるグリコサミノグリカン；ならびに麻酔剤を含む生体適合性組織充填剤に関し；グリコサミノグリカンの一部分が、アルカン鎖又はアルキル鎖、エーテル基、及び第二級アルコールの一つ以上を含む架橋部分により架橋され；ならびに架橋が、架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤を使用して得られ；組織充填剤は絹タンパク質又は絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含む。一部の実施形態では、絹タンパク質は絹フィブロインである。一部の実施形態では、絹タンパク質は、セリシンを実質的に欠く絹フィブロインである。一部の実施形態では、ＳＰＦは、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一部の実施形態では、ＳＰＦは、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一部の実施形態では、ＳＰＦは、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一部の実施形態では、ＳＰＦは、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一部の実施形態では、ＳＰＦは、約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一部の実施形態では、ＳＰＦは低分子量を有する。一部の実施形態では、ＳＰＦは中分子量を有する。一部の実施形態では、ＳＰＦは高分子量を有する。一部の実施形態では、絹タンパク質断片（ＳＰＦ）は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する。一部の実施形態では、ＳＰＦは、最大６０％の結晶化度を有する。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部は架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの総量に対する架橋ＳＰＦの％ｗ／ｗ量は、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％である。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦの架橋度は、約１％～約１００％の間である。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦの架橋度は、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％である。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦの架橋度は、約１％～約１５％の間である。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦの架橋度は、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、及び約１５％の一つ又は複数である。

一実施形態では、本発明は、ヒアルロン酸（ＨＡ）、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、デンプン、アルギン酸塩、コンドロイチン－４－硫酸塩、コンドロイチン－６－硫酸塩、キサンタンガム、キトサン、ペクチン、寒天、カラゲナン、及びグアルガムからなる群から選択されるグリコサミノグリカン；ならびに麻酔剤を含む生体適合性組織充填剤に関し；グリコサミノグリカンの一部分が、アルカン鎖又はアルキル鎖、エーテル基、及び第二級アルコールの一つ以上を含む架橋部分により架橋され；並びに架橋が、架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤を使用して得られ；組織充填剤が、絹タンパク質又は絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含み、ＳＰＦの一部分が架橋されている。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦは、アルカン鎖もしくはアルキル鎖、及び／又はエーテル基を含む架橋部分を含む。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖を含む架橋部分を含む。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦは、第二級アルコールを含む架橋部分を含む。一部の実施形態では、架橋は、架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤を使用して得られる。一部の実施形態では、架橋剤及び／又は架橋前駆体は、エポキシ基を含む。一部の実施形態では、架橋は、ポリエポキシリンカー、ジエポキシリンカー、ポリエポキシ－ＰＥＧ、ジエポキシ－ＰＥＧ、ポリグリシジル－ＰＥＧ、ジグリシジル－ＰＥＧ、ポリアクリレートＰＥＧ、ジアクリレートＰＥＧ、１，４－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）ブタン、１，４－ビスグリシジルオキシブタン、ジビニルスルホン（ＤＶＳ）、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、ＵＶ光、グルタルアルデヒド、１，２－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）エチレン（ＥＧＤＧＥ）、１，２，７，８－ジエポキシオクタン（ＤＥＯ）、ビスカルボジイミド（ＢＣＤＩ）、ペンタエリスリトールテトラグリシジルエーテル（ＰＥＴＧＥ）、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）、ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート（ＢＳ）、ヘキサメチレンジアミン（ＨＭＤＡ）、１－（２，３－エポキシプロピル）－２，３－エポキシシクロヘキサン、カルボジイミド、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤を使用して得られる。一部の実施形態では、架橋は、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、エチレングリコールジグリシジルエーテル（ＥＧＤＧＥ）、１，６－ヘキサンジオールジグリシジルエーテル、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル、ポリプロピレングリコールジグリシジルエーテル、ポリテトラメチレングリコールジグリシジルエーテル、ネオペンチルグリコールジグリシジルエーテル、ポリグリセロールポリグリシジルエーテル、ジグリセロールポリグリシジルエーテル、グリセロールポリグリシジルエーテル、トリメチロールプロパンポリグリシジルエーテル、ペンタエリスリトールポリグリシジルエーテル、及びソルビトールポリグリシジルエーテルからなる群から選択される多官能性エポキシ化合物を使用して得られる。一部の実施形態では、架橋は、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル、ジエポキシＰＥＧ、ＰＥＧジグリシジルエーテル、ポリオキシエチレンビスグリシジルエーテル、ＰＥＧＤＥ、及びＰＥＧＤＧＥからなる群から選択される架橋剤及び／又は架橋前駆体を使用して得られる。

一部の実施形態では、架橋は、約５００、約１０００、約２０００、又は約６０００の平均Ｍｎを有するポリエチレングリコールジグリシジルエーテルを使用して得られる。一部の実施形態では、架橋は、２～２５個のエチレングリコール基を有するポリエチレングリコールジグリシジルエーテルを使用して得られる。一部の実施形態では、架橋は、ポリエポキシ絹フィブロインリンカー、ジエポキシ絹フィブロインリンカー、ポリエポキシ絹フィブロイン断片リンカー、ジエポキシ絹フィブロイン断片リンカー、ポリグリシジル絹フィブロインリンカー、ジグリシジル絹フィブロインリンカー、ポリグリシジル絹フィブロイン断片リンカー、及びジグリシジル絹フィブロイン断片リンカーからなる群から選択される架橋剤及び／又は架橋前駆体を使用して得られる。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部は、ＨＡに架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦに架橋されている。一部の実施形態では、組織充填剤はゲルである。一部の実施形態では、組織充填剤はヒドロゲルである。一部の実施形態では、組織充填剤は、さらに、水を含む。一部の実施形態では、組織充填剤中でのＳＰＦの総濃度は、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約１５ｍｇ／ｍＬである。一部の実施形態では、組織充填剤中でのＳＰＦの総濃度は、約０．１ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ、約１．５ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約２．５ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ、約３．５ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ、約４．５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約５．５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約６．５ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約７．５ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約８．５ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約９．５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１０．５ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ、約１１．５ｍｇ／ｍＬ、約１２ｍｇ／ｍＬ、約１２．５ｍｇ／ｍＬ、約１３ｍｇ／ｍＬ、約１３．５ｍｇ／ｍＬ、約１４ｍｇ／ｍＬ、約１４．５ｍｇ／ｍＬ、又は約１５ｍｇ／ｍＬである。一部の実施形態では、組織充填剤中での架橋ＳＰＦの濃度は、約０．１ｍｇ／ｍＬから約１５ｍｇ／ｍＬである。一部の実施形態では、組織充填剤中での架橋ＳＰＦの濃度は、約０．１ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ、約１．５ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約２．５ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ、約３．５ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ、約４．５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約５．５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約６．５ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約７．５ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約８．５ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約９．５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１０．５ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ、約１１．５ｍｇ／ｍＬ、約１２ｍｇ／ｍＬ、約１２．５ｍｇ／ｍＬ、約１３ｍｇ／ｍＬ、約１３．５ｍｇ／ｍＬ、約１４ｍｇ／ｍＬ、約１４．５ｍｇ／ｍＬ、又は約１５ｍｇ／ｍＬである。

一実施形態では、本発明は、ヒアルロン酸（ＨＡ）、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、デンプン、アルギン酸塩、コンドロイチン－４－硫酸塩、コンドロイチン－６－硫酸塩、キサンタンガム、キトサン、ペクチン、寒天、カラゲナン、及びグアルガムからなる群から選択されるグリコサミノグリカン；ならびに麻酔剤を含む生体適合性組織充填剤に関し；グリコサミノグリカンの一部分が、アルカン鎖又はアルキル鎖、エーテル基、及び第二級アルコールの一つ以上を含む架橋部分により架橋され；並びに架橋が、架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤を使用して得られ；組織充填剤が、場合により、絹タンパク質又は絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含み、ＳＰＦの一部分が架橋されている。一部の実施形態では、組織充填剤は皮膚充填剤である。一部の実施形態では、組織充填剤は生分解性である。一部の実施形態では、組織充填剤は注入可能である。一部の実施形態では、組織充填剤は、約２５Ｐａ～約１５００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する。一部の実施形態では、組織充填剤は、約２５Ｐａ、約２６Ｐａ、約２７Ｐａ、約２８Ｐａ、約２９Ｐａ、約３０Ｐａ、約３１Ｐａ、約３２Ｐａ、約３３Ｐａ、約３４Ｐａ、約３５Ｐａ、約３６Ｐａ、約３７Ｐａ、約３８Ｐａ、約３９Ｐａ、約４０Ｐａ、約４１Ｐａ、約４２Ｐａ、約４３Ｐａ、約４４Ｐａ、約４５Ｐａ、約４６Ｐａ、約４７Ｐａ、約４８Ｐａ、約４９Ｐａ、約５０Ｐａ、約５１Ｐａ、約５２Ｐａ、約５３Ｐａ、約５４Ｐａ、約５５Ｐａ、約５６Ｐａ、約５７Ｐａ、約５８Ｐａ、約５９Ｐａ、約６０Ｐａ、約６１Ｐａ、約６２Ｐａ、約６３Ｐａ、約６４Ｐａ、約６５Ｐａ、約６６Ｐａ、約６７Ｐａ、約６８Ｐａ、約６９Ｐａ、約７０Ｐａ、約７１Ｐａ、約７２Ｐａ、約７３Ｐａ、約７４Ｐａ、約７５Ｐａ、約７６Ｐａ、約７７Ｐａ、約７８Ｐａ、約７９Ｐａ、約８０Ｐａ、約８１Ｐａ、約８２Ｐａ、約８３Ｐａ、約８４Ｐａ、約８５Ｐａ、約８６Ｐａ、約８７Ｐａ、約８８Ｐａ、約８９Ｐａ、約９０Ｐａ、約９１Ｐａ、約９２Ｐａ、約９３Ｐａ、約９４Ｐａ、約９５Ｐａ、約９６Ｐａ、約９７Ｐａ、約９８Ｐａ、約９９Ｐａ、約１００Ｐａ、約１０１Ｐａ、約１０２Ｐａ、約１０３Ｐａ、約１０４Ｐａ、約１０５Ｐａ、約１０６Ｐａ、約１０７Ｐａ、約１０８Ｐａ、約１０９Ｐａ、約１１０Ｐａ、約１１１Ｐａ、約１１２Ｐａ、約１１３Ｐａ、約１１４Ｐａ、約１１５Ｐａ、約１１６Ｐａ、約１１７Ｐａ、約１１８Ｐａ、約１１９Ｐａ、約１２０Ｐａ、約１２１Ｐａ、約１２２Ｐａ、約１２３Ｐａ、約１２４Ｐａ、又は約１２５Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する。一部の実施形態では、本明細書中では、Ｇ’は、約０．１～約１０Ｈｚの振動応力によって測定される。一部の実施形態では、Ｇ’は、約１Ｈｚの振動応力によって測定される。一部の実施形態では、Ｇ’は、約５Ｈｚの振動応力によって測定される。一部の実施形態では、Ｇ’は、約１０Ｈｚの振動応力によって測定される。一部の実施形態では、組織充填剤は、約１Ｐａ・ｓ～約１０Ｐａ・ｓの複素粘度を有する。一部の実施形態では、組織充填剤は、約１Ｐａ・ｓ、約１．５Ｐａ・ｓ、約２Ｐａ・ｓ、約２．５Ｐａ・ｓ、約３Ｐａ・ｓ、約３．５Ｐａ・ｓ、約４Ｐａ・ｓ、約４．５Ｐａ・ｓ、約５Ｐａ・ｓ、約５．５Ｐａ・ｓ、約６Ｐａ・ｓ、約６．５Ｐａ・ｓ、約７Ｐａ・ｓ、約７．５Ｐａ・ｓ、約８Ｐａ・ｓ、約８．５Ｐａ・ｓ、約９Ｐａ・ｓ、約９．５Ｐａ・ｓ、又は約１０Ｐａ・ｓの複素粘度を有する。一部の実施形態では、複素粘度は、約０．１～約１０Ｈｚの振動応力によって測定される。一部の実施形態では、複素粘度は、約１Ｈｚの振動応力によって測定される。一部の実施形態では、複素粘度は、約５Ｈｚの振動応力によって測定される。

一実施形態では、本発明は、それを必要とする対象において状態を治療する方法、及び／又はそれを必要とする対象における美容的治療の方法に関し、方法が、ヒアルロン酸（ＨＡ）、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、デンプン、アルギン酸塩、コンドロイチン－４－硫酸塩、コンドロイチン－６－硫酸塩、キサンタンガム、キトサン、ペクチン、寒天、カラゲナン、及びグアルガムからなる群から選択されるグリコサミノグリカン；ならびに麻酔剤を含む生体適合性組織充填剤の治療有効量を対象に投与することを含み；グリコサミノグリカンの一部分が、アルカン鎖又はアルキル鎖、エーテル基、及び第二級アルコールの一つ以上を含む架橋部分により架橋され；並びに架橋が、架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤を使用して得られ；組織充填剤が、場合により、絹タンパク質又は絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含み、ＳＰＦの一部分が架橋されている。一部の実施形態では、状態は、皮膚の状態である。一部の実施形態では、皮膚の状態は、皮膚の脱水、皮膚弾力の欠如、肌荒れ、皮膚の張りの欠如、皮膚のストレッチライン、皮膚のストレッチマーク、皮膚の蒼白、皮膚の陥没、頬のコケ、唇の薄さ、眼窩後部の欠損、顔面のひだ、及び皺からなる群から選択される。一部の実施形態では、組織充填剤は、対象の皮膚領域中に投与される。一部の実施形態では、方法は、増大、再建、疾患の治療、障害の治療、身体の一部、部分、又は領域の欠損又は不完全性の矯正である。一部の実施形態では、方法は、顔面の増大、顔面の再建、顔面の疾患の治療、顔面の障害の治療、顔面の欠損の治療、又は顔面の不完全性の治療である。一部の実施形態では、組織充填剤は、少なくとも約３日間、約７日間、約１４日間、約２１日間、約２８日間、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、又は約６ヶ月間にわたり、生分解、生体侵食（ｂｉｏｅｒｏｓｉｏｎ）、生体吸収、及び／又は生体再吸収に抵抗性を示す。一部の実施形態では、対象への組織充填剤の投与により、多糖及びリドカインを含むが絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含まない対照組織充填剤により誘導される炎症応答と比較して、低下した炎症応答がもたらされる。一部の実施形態では、対象への組織充填剤の投与により、多糖及びリドカインを含むが絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含まない対照組織充填剤により誘導されるコラーゲン産生と比較して、増加したコラーゲン産生がもたらされる。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）及び多糖を含む生体適合性組織充填剤に関する。一部の実施形態では、多糖はヒアルロン酸（ＨＡ）である。一実施形態では、本発明は、絹及びヒアルロン酸から調製することができる組織充填剤を含む。

一部の実施形態では、本発明は、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａの範囲の平均分子量を伴う絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含む生体適合性組織充填剤に関する。一部の実施形態では、本発明は、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａの範囲の平均分子量を伴う絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含む生体適合性組織充填剤に関する。一部の実施形態では、ＳＰＦは、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａの範囲の平均分子量を有する。一部の実施形態では、ＳＰＦは、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａの範囲の平均分子量を有する。一部の実施形態では、ＳＰＦは、約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの範囲の平均分子量を有する。一部の実施形態では、ＳＰＦは、約８０ｋＤａ～約１５０ｋＤａの範囲の平均分子量を有する。

一部の実施形態では、本発明は、最大約０％～１００％ＳＰＦと架橋された、絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含む生体適合性組織充填剤に関する。一部の実施形態では、ＳＰＦは、架橋剤、例えばＢＤＤＥなど、又は本明細書中に記載される他の架橋剤の一つを使用してＳＰＦと架橋させた。一部の実施形態では、架橋度は最大約１００％である。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及びヒアルロン酸（ＨＡ）を含み、ＳＰＦの最大約０％～１００％がＳＰＦと架橋され、ＳＰＦが、架橋剤、例えばＢＤＤＥなど、又は本明細書中に記載される他の架橋剤の一つを使用してＳＰＦと架橋され、ＳＰＦの架橋度は最大約１００％である生体適合性組織充填剤に関する。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及びヒアルロン酸（ＨＡ）を含み、ＨＡの最大１００％が、架橋剤、例えばＢＤＤＥなど、又は本明細書中に記載される他の架橋剤の一つを使用してＨＡに架橋されている生体適合性組織充填剤に関する。一部の実施形態では、ＳＰＦの最大約１００％がＳＰＦと架橋され、ＳＰＦは、架橋剤、例えばＢＤＤＥなど、又は本明細書中に記載される他の架橋剤の一つを使用してＳＰＦと架橋され、ＳＰＦの架橋度は最大約１００％である。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及びヒアルロン酸（ＨＡ）を含み、ＨＡの０％～１００％が非架橋である生体適合性組織充填剤に関する。一部の実施形態では、ＳＰＦの最大約１００％が架橋され、ＳＰＦは、架橋剤、例えばＢＤＤＥなど、又は本明細書中に記載される他の架橋剤の一つを使用して架橋され、ＳＰＦの架橋度は最大約１００％である。一部の実施形態では、ＨＡの全てが非架橋である。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及びヒアルロン酸（ＨＡ）を含み、ＳＰＦの０％～１００％がＨＡに架橋されている生体適合性組織充填剤に関する。一部の実施形態では、ＳＰＦとＨＡを、架橋剤、例えばＢＤＤＥなど、又は本明細書中に記載される架橋剤の一つを使用して架橋させた。一部の実施形態では、ＳＰＦ－ＨＡの架橋度は最大約１００％である。一部の実施形態では、ＨＡの最大１００％がＨＡに架橋されている。一部の実施形態では、ＨＡを、架橋剤、例えばＢＤＤＥなど、又は本明細書中に記載される架橋剤の一つを使用してＨＡに架橋させた。一部の実施形態では、ＨＡの少なくとも０．１％が非架橋である。一部の実施形態では、ＨＡの全てが非架橋である。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及びヒアルロン酸（ＨＡ）を含み、ＨＡの少なくとも０．１％が非架橋である生体適合性組織充填剤に関する。一部の実施形態では、ＳＰＦの最大約１００％が架橋され、ＳＰＦは、架橋剤、例えばＢＤＤＥなど、又は本明細書中に記載される他の架橋剤の一つを使用して架橋され、ＳＰＦの架橋度は最大約１００％である。一部の実施形態では、ＨＡの全てが非架橋である。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及びヒアルロン酸（ＨＡ）を含み、ＳＰＦの少なくとも０．１％がＨＡに架橋されている生体適合性組織充填剤に関する。一部の実施形態では、ＳＰＦとＨＡを、架橋剤、例えばＢＤＤＥなど、又は本明細書中に記載される架橋剤の一つを使用して架橋させた。一部の実施形態では、ＳＰＦ－ＨＡの架橋度は最大約１００％である。一部の実施形態では、ＨＡの最大１００％がＨＡに架橋されている。一部の実施形態では、ＨＡを、架橋剤、例えばＢＤＤＥなど、又は本明細書中に記載される架橋剤の一つを使用してＨＡに架橋させた。一部の実施形態では、ＨＡの少なくとも０．１％が非架橋である。一部の実施形態では、ＨＡの全てが非架橋である。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含み、ＳＰＦが、セリシンを実質的に欠く生体適合性組織充填剤に関する。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含む生体適合性ゲル組織充填剤に関する。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含む生体適合性ヒドロゲル組織充填剤に関する。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、多糖、及び水を含む生体適合性組織充填剤に関する。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含み、ＳＰＦが、約０％～約６０％の結晶化度を有する生体適合性組織充填剤に関する。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含み、さらに活性薬剤を含む生体適合性組織充填剤に関する。一部の実施形態では、活性薬剤は、酵素阻害剤、麻酔剤、薬効神経毒、酸化防止剤、抗感染剤、血管拡張剤、反射剤、抗炎症剤、紫外（ＵＶ）光遮断剤、染料、ホルモン、免疫抑制剤、又は抗炎症剤であることができる。一実施形態では、麻酔剤はリドカインである。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含む注入可能な生体適合性組織充填剤に関する。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）及び多糖を含む生体適合性組織充填剤に関する。一部の実施形態では、Ｇ’は、約０．１～約１０Ｈｚの振動応力によって測定される。一実施形態では、Ｇ’は、約１Ｈｚの振動応力によって測定される。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含む生体適合性組織充填剤を製造する方法であって、ＳＰＦ溶液を提供すること、溶液に、プロトン供与性種であることができるゲル化促進剤を添加することを含む方法に関する。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含む生体適合性組織充填剤を製造する方法であって、ＳＰＦ溶液を提供すること、溶液を機械的励起に供することを含む方法に関する。

一実施形態では、本発明は、それを必要とする対象において状態を治療する方法であって、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含む生体適合性組織充填剤の治療有効量を投与することを含む方法に関する。一部の実施形態では、状態は、皮膚の状態である。一部の実施形態では、皮膚の状態は、皮膚の脱水、皮膚弾力の欠如、肌荒れ、皮膚の張りの欠如、皮膚のストレッチライン、皮膚のストレッチマーク、皮膚の蒼白、皮膚の陥没、頬のこけ、窪んだこめかみ、唇の薄さ、眼窩後部の欠損、顔面のひだ、及び皺であることができる。

一実施形態では、本発明は、それを必要とする対象における美容的治療の方法であって、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含む生体適合性組織充填剤の有効量を対象に投与することを含む方法に関する。

一実施形態では、本発明の方法は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含む生体適合性組織充填剤を対象の皮膚部分中に投与することを含む。

一実施形態では、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含む生体適合性組織充填剤を投与することを含む本発明の方法は、増大、再建、疾患の治療、障害の治療、身体の一部、部分、又は領域の欠損又は不完全性の矯正であることができる。

一実施形態では、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含む生体適合性組織充填剤を投与することを含む本発明の方法は、顔面の増大、顔面の再建、顔面の疾患の治療、顔面の障害の治療、顔面の欠損の治療、又は顔面の不完全性の治療であることができる。

一実施形態では、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含む生体適合性組織充填剤は、投与後の少なくとも約３日間にわたり、生分解、生体吸収、及び／又は生体再吸収に抵抗性を示す。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含み、ＳＰＦが、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａ、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａ、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａ、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａ、又は約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する生体適合性組織充填剤（例、皮膚充填剤）に関する。一部の実施形態では、組織充填剤は生分解性である。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦに架橋されている。一部の実施形態では、多糖の一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、組織充填剤は、さらに、架橋部分、例えば、エポキシ由来架橋部分を含む。一部の実施形態では、架橋の一部が自己架橋である。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、多糖はヒアルロン酸（ＨＡ）である。一部の実施形態では、ＳＰＦは、セリシンを実質的に欠いている。一部の実施形態では、組織充填剤は、さらに、水を含む。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含み、ＳＰＦが、低分子量、中分子量、及び／又は高分子量を有する生体適合性組織充填剤（例、皮膚充填剤）に関する。一部の実施形態では、組織充填剤は生分解性である。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦに架橋されている。一部の実施形態では、多糖の一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、組織充填剤は、さらに、架橋部分、例えば、エポキシ由来架橋部分を含む。一部の実施形態では、架橋の一部が自己架橋である。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、多糖はヒアルロン酸（ＨＡ）である。一部の実施形態では、ＳＰＦは、セリシンを実質的に欠いている。一部の実施形態では、組織充填剤は、さらに、水を含む。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含み、ＳＰＦが、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａ、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａ、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａ、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａ、又は約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する生体適合性組織充填剤（例、皮膚充填剤）に関する。一部の実施形態では、組織充填剤は生分解性である。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦに架橋されている。一部の実施形態では、多糖の一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。一部の実施形態では、架橋の一部が、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。一部の実施形態では、架橋の一部が自己架橋である。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、多糖はヒアルロン酸（ＨＡ）である。一部の実施形態では、ＳＰＦは、セリシンを実質的に欠いている。一部の実施形態では、組織充填剤は、さらに、水を含む。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含み、ＳＰＦが、低分子量、中分子量、及び／又は高分子量を有する生体適合性組織充填剤（例、皮膚充填剤）に関する。一部の実施形態では、組織充填剤は生分解性である。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦに架橋されている。一部の実施形態では、多糖の一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。一部の実施形態では、架橋の一部が、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。一部の実施形態では、架橋の一部が自己架橋である。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、多糖はヒアルロン酸（ＨＡ）である。一部の実施形態では、ＳＰＦは、セリシンを実質的に欠いている。一部の実施形態では、組織充填剤は、さらに、水を含む。

一部の実施形態では、ＳＰＦの総量に対する架橋ＳＰＦの量（％ｗ／ｗ）は、最大約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％である。

一部の実施形態では、ＳＰＦの架橋度は、最大約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％である。

一部の実施形態では、ＨＡの総量に対する架橋ＨＡの量（％ｗ／ｗ）は、最大約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％である。

一部の実施形態では、ＨＡの架橋度は、最大約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％である。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含み、ＳＰＦが、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａ、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａ、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａ、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａ、又は約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する生体適合性組織充填剤（例、皮膚充填剤）に関する。一部の実施形態では、組織充填剤は生分解性である。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦに架橋されている。一部の実施形態では、多糖の一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。一部の実施形態では、架橋の一部が、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。一部の実施形態では、架橋の一部が自己架橋である。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、多糖はヒアルロン酸（ＨＡ）である。一部の実施形態では、架橋は、架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤を使用して得られる。一部の実施形態では、架橋剤及び／又は架橋前駆体は、エポキシ基を含む。一部の実施形態では、ＳＰＦは、セリシンを実質的に欠いている。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含み、ＳＰＦが、低分子量、中分子量、及び／又は高分子量を有する生体適合性組織充填剤（例、皮膚充填剤）に関する。一部の実施形態では、組織充填剤は生分解性である。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦに架橋されている。一部の実施形態では、多糖の一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。一部の実施形態では、架橋の一部が、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。一部の実施形態では、架橋の一部が自己架橋である。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、多糖はヒアルロン酸（ＨＡ）である。一部の実施形態では、架橋は、架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤を使用して得られる。一部の実施形態では、架橋剤及び／又は架橋前駆体は、エポキシ基を含む。一部の実施形態では、ＳＰＦは、セリシンを実質的に欠いている。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含み、ＳＰＦが、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａ、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａ、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａ、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａ、又は約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する生体適合性組織充填剤（例、皮膚充填剤）に関する。一部の実施形態では、組織充填剤は生分解性である。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦに架橋されている。一部の実施形態では、多糖の一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。一部の実施形態では、架橋の一部が、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。一部の実施形態では、架橋の一部が自己架橋である。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、多糖はヒアルロン酸（ＨＡ）である。一部の実施形態では、架橋は、１，４－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）ブタン、１，４－ビスグリシジルオキシブタン、ジビニルスルホン（ＤＶＳ）、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、ＵＶ光、グルタルアルデヒド、１，２－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）エチレン（ＥＧＤＧＥ）、１，２，７，８－ジエポキシオクタン（ＤＥＯ）、ビスカルボジイミド（ＢＣＤＩ）、ペンタエリスリトールテトラグリシジルエーテル（ＰＥＴＧＥ）、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）、ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート（ＢＳ）、ヘキサメチレンジアミン（ＨＭＤＡ）、１－（２，３－エポキシプロピル）－２，３－エポキシシクロヘキサン、カルボジイミド、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤を使用して得られる。一部の実施形態では、ＳＰＦは、セリシンを実質的に欠いている。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含み、ＳＰＦが、低分子量、中分子量、及び／又は高分子量を有する生体適合性組織充填剤（例、皮膚充填剤）に関する。一部の実施形態では、組織充填剤は生分解性である。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦに架橋されている。一部の実施形態では、多糖の一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。一部の実施形態では、架橋の一部が、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。一部の実施形態では、架橋の一部が自己架橋である。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、多糖はヒアルロン酸（ＨＡ）である。一部の実施形態では、架橋は、１，４－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）ブタン、１，４－ビスグリシジルオキシブタン、ジビニルスルホン（ＤＶＳ）、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、ＵＶ光、グルタルアルデヒド、１，２－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）エチレン（ＥＧＤＧＥ）、１，２，７，８－ジエポキシオクタン（ＤＥＯ）、ビスカルボジイミド（ＢＣＤＩ）、ペンタエリスリトールテトラグリシジルエーテル（ＰＥＴＧＥ）、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）、ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート（ＢＳ）、ヘキサメチレンジアミン（ＨＭＤＡ）、１－（２，３－エポキシプロピル）－２，３－エポキシシクロヘキサン、カルボジイミド、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤を使用して得られる。一部の実施形態では、ＳＰＦは、セリシンを実質的に欠いている。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含み、ＳＰＦが、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａ、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａ、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａ、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａ、又は約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する生体適合性組織充填剤ゲル（例、皮膚充填剤ゲル）に関する。一部の実施形態では、組織充填剤は生分解性である。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦに架橋されている。一部の実施形態では、多糖の一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。一部の実施形態では、架橋の一部が、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。一部の実施形態では、架橋の一部が自己架橋である。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、多糖はヒアルロン酸（ＨＡ）である。一部の実施形態では、ゲルは、さらに、水を含む。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含み、ＳＰＦが、低分子量、中分子量、及び／又は高分子量を有する生体適合性組織充填剤ゲル（例、皮膚充填剤ゲル）に関する。一部の実施形態では、組織充填剤は生分解性である。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦに架橋されている。一部の実施形態では、多糖の一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。一部の実施形態では、架橋の一部が、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。一部の実施形態では、架橋の一部が自己架橋である。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、多糖はヒアルロン酸（ＨＡ）である。一部の実施形態では、ゲルは、さらに、水を含む。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含み、ＳＰＦが、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａ、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａ、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａ、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａ、又は約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する生体適合性組織充填剤ヒドロゲル（例、皮膚充填剤ヒドロゲル）に関する。一部の実施形態では、組織充填剤は生分解性である。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦに架橋されている。一部の実施形態では、多糖の一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。一部の実施形態では、架橋の一部が、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。一部の実施形態では、架橋の一部が自己架橋である。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、多糖はヒアルロン酸（ＨＡ）である。一部の実施形態では、ヒドロゲルは、さらに、水を含む。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含み、ＳＰＦが、低分子量、中分子量、及び／又は高分子量を有する生体適合性組織充填剤ヒドロゲル（例、皮膚充填剤ヒドロゲル）に関する。一部の実施形態では、組織充填剤は生分解性である。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦに架橋されている。一部の実施形態では、多糖の一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。一部の実施形態では、架橋の一部が、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。一部の実施形態では、架橋の一部が自己架橋である。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、多糖はヒアルロン酸（ＨＡ）である。一部の実施形態では、ヒドロゲルは、さらに、水を含む。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含み、ＳＰＦが、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａ、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａ、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａ、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａ、又は約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する生体適合性組織充填剤（例、皮膚充填剤）に関する。一部の実施形態では、組織充填剤は生分解性である。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦに架橋されている。一部の実施形態では、多糖の一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。一部の実施形態では、架橋の一部が、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。一部の実施形態では、架橋の一部が自己架橋である。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、多糖はヒアルロン酸（ＨＡ）である。一部の実施形態では、ＳＰＦは、最大約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、又は６０％超の結晶化度を有する。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含み、ＳＰＦが、低分子量、中分子量、及び／又は高分子量を有する生体適合性組織充填剤（例、皮膚充填剤）に関する。一部の実施形態では、組織充填剤は生分解性である。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦに架橋されている。一部の実施形態では、多糖の一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。一部の実施形態では、架橋の一部が、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。一部の実施形態では、架橋の一部が自己架橋である。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、多糖はヒアルロン酸（ＨＡ）である。一部の実施形態では、ＳＰＦは、最大約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、又は６０％超の結晶化度を有する。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含み、ＳＰＦが、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａ、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａ、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａ、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａ、又は約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する生体適合性組織充填剤（例、皮膚充填剤）に関する。一部の実施形態では、組織充填剤は生分解性である。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦに架橋されている。一部の実施形態では、多糖の一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。一部の実施形態では、架橋の一部が、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。一部の実施形態では、架橋の一部が自己架橋である。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、多糖はヒアルロン酸（ＨＡ）である。一部の実施形態では、組織充填剤は、さらに、活性薬剤を含む。一部の実施形態では、活性薬剤は、酵素阻害剤、麻酔剤、薬効神経毒、酸化防止剤、抗感染剤、抗炎症剤、紫外（ＵＶ）光遮断剤、染料、ホルモン、免疫抑制剤、又は抗炎症剤からなる群から選択される。一部の実施形態では、麻酔剤はリドカインである。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含み、ＳＰＦが、低分子量、中分子量、及び／又は高分子量を有する生体適合性組織充填剤（例、皮膚充填剤）に関する。一部の実施形態では、組織充填剤は生分解性である。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦに架橋されている。一部の実施形態では、多糖の一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。一部の実施形態では、架橋の一部が、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。一部の実施形態では、架橋の一部が自己架橋である。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、多糖はヒアルロン酸（ＨＡ）である。一部の実施形態では、組織充填剤は、さらに、活性薬剤を含む。一部の実施形態では、活性薬剤は、酵素阻害剤、麻酔剤、薬効神経毒、酸化防止剤、抗感染剤、抗炎症剤、紫外（ＵＶ）光遮断剤、染料、ホルモン、免疫抑制剤、又は抗炎症剤からなる群から選択される。一部の実施形態では、麻酔剤はリドカインである。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含み、ＳＰＦが、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａ、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａ、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａ、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａ、又は約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する生体適合性の注入可能な組織充填剤（例、注入可能な皮膚充填剤）に関する。一部の実施形態では、組織充填剤は生分解性である。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦに架橋されている。一部の実施形態では、多糖の一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。一部の実施形態では、架橋の一部が、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。一部の実施形態では、架橋の一部が自己架橋である。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、多糖はヒアルロン酸（ＨＡ）である。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含み、ＳＰＦが、低分子量、中分子量、及び／又は高分子量を有する生体適合性の注入可能な組織充填剤（例、注入可能な皮膚充填剤）に関する。一部の実施形態では、組織充填剤は生分解性である。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦに架橋されている。一部の実施形態では、多糖の一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。一部の実施形態では、架橋の一部が、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。一部の実施形態では、架橋の一部が自己架橋である。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、多糖はヒアルロン酸（ＨＡ）である。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含み、ＳＰＦが、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａ、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａ、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａ、又は約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する、約５０Ｐａ～約１５００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する生体適合性組織充填剤（例、約５０Ｐａ～約１５００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する皮膚充填剤）に関する。一部の実施形態では、組織充填剤は生分解性である。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦに架橋されている。一部の実施形態では、多糖の一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。一部の実施形態では、架橋の一部が、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。一部の実施形態では、架橋の一部が自己架橋である。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、多糖はヒアルロン酸（ＨＡ）である。一部の実施形態では、Ｇ’は、約０．１～約１０Ｈｚの振動応力によって測定される。一部の実施形態では、Ｇ’は、約１Ｈｚの振動応力によって測定される。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含み、ＳＰＦが、低分子量、中分子量、及び／又は高分子量を有する、約５０Ｐａ～約１５００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する生体適合性組織充填剤（例、約５０Ｐａ～約１５００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する皮膚充填剤）に関する。一部の実施形態では、組織充填剤は生分解性である。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦに架橋されている。一部の実施形態では、多糖の一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、架橋は化学結合架橋を含む。一部の実施形態では、架橋の一部が、ゼロ長架橋（ｚｅｒｏ－ｌｅｎｇｔｈｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ）である。一部の実施形態では、架橋の一部が自己架橋である。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、多糖はヒアルロン酸（ＨＡ）である。一部の実施形態では、Ｇ’は、約０．１～約１０Ｈｚの振動応力によって測定される。一部の実施形態では、Ｇ’は、約１Ｈｚの振動応力によって測定される。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含み、ＳＰＦが、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａ、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａ、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａ、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａ、又は約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する生体適合性組織充填剤（例、皮膚充填剤）を製造する方法に関し、本方法は、ＳＰＦ及び多糖類を含む組成物を提供すること、並びに溶液に架橋剤、架橋前駆体、活性化剤、又はゲル化促進剤を添加することを含む。一部の実施形態では、組織充填剤は生分解性である。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦに架橋されている。一部の実施形態では、多糖の一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、組織充填剤は、さらに、架橋部分、例えば、エポキシ由来架橋部分を含む。一部の実施形態では、架橋の一部が自己架橋である。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、多糖はヒアルロン酸（ＨＡ）である。一部の実施形態では、ＳＰＦは、セリシンを実質的に欠いている。一部の実施形態では、組織充填剤は、さらに、水を含む。

一部の実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含み、ＳＰＦが、低分子量、中分子量、及び／又は高分子量を有する生体適合性組織充填剤（例、皮膚充填剤）を製造する方法に関し、本方法は、ＳＰＦ及び多糖類を含む組成物を提供すること、並びに溶液に架橋剤、架橋前駆体、活性化剤、又はゲル化促進剤を添加することを含む。一部の実施形態では、組織充填剤は生分解性である。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦに架橋されている。一部の実施形態では、多糖の一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、組織充填剤は、さらに、架橋部分、例えば、エポキシ由来架橋部分を含む。一部の実施形態では、架橋の一部が自己架橋である。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、多糖はヒアルロン酸（ＨＡ）である。一部の実施形態では、ＳＰＦは、セリシンを実質的に欠いている。一部の実施形態では、組織充填剤は、さらに、水を含む。

一実施形態では、本発明は、それを必要とする対象において状態（例、皮膚の状態）を治療する方法に関し、本方法は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含み、ＳＰＦが、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａ、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａ、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａ、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａ、又は約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する生体適合性組織充填剤（例、皮膚充填剤）の治療有効量を対象に投与することを含む。一部の実施形態では、組織充填剤は生分解性である。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦに架橋されている。一部の実施形態では、多糖の一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、組織充填剤は、さらに、架橋部分、例えば、エポキシ由来架橋部分を含む。一部の実施形態では、架橋の一部が自己架橋である。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、多糖はヒアルロン酸（ＨＡ）である。一部の実施形態では、ＳＰＦは、セリシンを実質的に欠いている。一部の実施形態では、組織充填剤は、さらに、水を含む。一部の実施形態では、皮膚の状態は、皮膚の脱水、皮膚弾力の欠如、肌荒れ、皮膚の張りの欠如、皮膚のストレッチライン、皮膚のストレッチマーク、皮膚の蒼白、皮膚の陥没、頬のこけ、唇の薄さ、眼窩後部の欠損、顔面のひだ、及び皺からなる群から選択される。一部の実施形態では、組織充填剤は、対象の皮膚領域中に投与される。一部の実施形態では、方法は、増大、再建、疾患の治療、障害の治療、身体の一部、部分、又は領域の欠損又は不完全性の矯正である。一部の実施形態では、方法は、顔面の増大、顔面の再建、顔面の疾患の治療、顔面の障害の治療、顔面の欠損の治療、又は顔面の不完全性の治療である。一部の実施形態では、組織充填剤は、少なくとも約３日間、約７日間、約１４日間、約２１日間、約２８日間、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、又は約６ヶ月間にわたり、生分解、生体侵食（ｂｉｏｅｒｏｓｉｏｎ）、生体吸収、及び／又は生体再吸収に抵抗性を示す。

一部の実施形態では、本発明は、それを必要とする対象において状態（例、皮膚の状態）を治療する方法に関し、本方法は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含み、ＳＰＦが、低分子量、中分子量、及び／又は高分子量を有する生体適合性組織充填剤（例、皮膚充填剤）の治療有効量を対象に投与することを含む。一部の実施形態では、組織充填剤は生分解性である。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦに架橋されている。一部の実施形態では、多糖の一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、組織充填剤は、さらに、架橋部分、例えば、エポキシ由来架橋部分を含む。一部の実施形態では、架橋の一部が自己架橋である。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、多糖はヒアルロン酸（ＨＡ）である。一部の実施形態では、ＳＰＦは、セリシンを実質的に欠いている。一部の実施形態では、組織充填剤は、さらに、水を含む。一部の実施形態では、皮膚の状態は、皮膚の脱水、皮膚弾力の欠如、肌荒れ、皮膚の張りの欠如、皮膚のストレッチライン、皮膚のストレッチマーク、皮膚の蒼白、皮膚の陥没、頬のこけ、唇の薄さ、眼窩後部の欠損、顔面のひだ、及び皺からなる群から選択される。一部の実施形態では、組織充填剤は、対象の皮膚領域中に投与される。一部の実施形態では、方法は、増大、再建、疾患の治療、障害の治療、身体の一部、部分、又は領域の欠損又は不完全性の矯正である。一部の実施形態では、方法は、顔面の増大、顔面の再建、顔面の疾患の治療、顔面の障害の治療、顔面の欠損の治療、又は顔面の不完全性の治療である。一部の実施形態では、組織充填剤は、少なくとも約３日間、約７日間、約１４日間、約２１日間、約２８日間、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、又は約６ヶ月間にわたり、生分解、生体侵食（ｂｉｏｅｒｏｓｉｏｎ）、生体吸収、及び／又は生体再吸収に抵抗性を示す。

一実施形態では、本発明は、それを必要とする対象における美容的治療の方法に関し、本方法は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含み、ＳＰＦが、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａ、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａ、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａ、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａ、又は約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する生体適合性組織充填剤（例、皮膚充填剤）の治療有効量を対象に投与することを含む。一部の実施形態では、組織充填剤は生分解性である。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦに架橋されている。一部の実施形態では、多糖の一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、組織充填剤は、さらに、架橋部分、例えば、エポキシ由来架橋部分を含む。一部の実施形態では、架橋の一部が自己架橋である。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、多糖はヒアルロン酸（ＨＡ）である。一部の実施形態では、ＳＰＦは、セリシンを実質的に欠いている。一部の実施形態では、組織充填剤は、さらに、水を含む。一部の実施形態では、組織充填剤は、対象の皮膚領域中に投与される。一部の実施形態では、方法は、増大、再建、疾患の治療、障害の治療、身体の一部、部分、又は領域の欠損又は不完全性の矯正である。一部の実施形態では、方法は、顔面の増大、顔面の再建、顔面の疾患の治療、顔面の障害の治療、顔面の欠損の治療、又は顔面の不完全性の治療である。一部の実施形態では、組織充填剤は、少なくとも約３日間、約７日間、約１４日間、約２１日間、約２８日間、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、又は約６ヶ月間にわたり、生分解、生体侵食（ｂｉｏｅｒｏｓｉｏｎ）、生体吸収、及び／又は生体再吸収に抵抗性を示す。

一部の実施形態では、本発明は、それを必要とする対象における美容的治療の方法に関し、本方法は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、及び多糖を含み、ＳＰＦが、低分子量、中分子量、及び／又は高分子量を有する生体適合性組織充填剤（例、皮膚充填剤）の治療有効量を対象に投与することを含む。一部の実施形態では、組織充填剤は生分解性である。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、ＳＰＦの一部がＳＰＦに架橋されている。一部の実施形態では、多糖の一部が多糖に架橋されている。一部の実施形態では、組織充填剤は、さらに、架橋部分、例えば、エポキシ由来架橋部分を含む。一部の実施形態では、架橋の一部が自己架橋である。一部の実施形態では、架橋ＳＰＦの一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、架橋多糖の一部が最大約１００％である。一部の実施形態では、多糖はヒアルロン酸（ＨＡ）である。一部の実施形態では、ＳＰＦは、セリシンを実質的に欠いている。一部の実施形態では、組織充填剤は、さらに、水を含む。一部の実施形態では、組織充填剤は、対象の皮膚領域中に投与される。一部の実施形態では、方法は、増大、再建、疾患の治療、障害の治療、身体の一部、部分、又は領域の欠損又は不完全性の矯正である。一部の実施形態では、方法は、顔面の増大、顔面の再建、顔面の疾患の治療、顔面の障害の治療、顔面の欠損の治療、又は顔面の不完全性の治療である。一部の実施形態では、組織充填剤は、少なくとも約３日間、約７日間、約１４日間、約２１日間、約２８日間、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、又は約６ヶ月間にわたり、生分解、生体侵食（ｂｉｏｅｒｏｓｉｏｎ）、生体吸収、及び／又は生体再吸収に抵抗性を示す。

一部の実施形態では、本発明は、ヒアルロン酸（ＨＡ）及び麻酔剤を含む生体適合性組織充填剤に関し、ＨＡの一部が、アルカン鎖又はアルキル鎖、エーテル基、及び第二級アルコールの一つ又は複数を含む一つ又は複数のリンカー部分により改変されており、リンカー部分が、リンカーの一端でＨＡに付着している。一部の実施形態では、改変は、架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤を使用して得られる。一部の実施形態では、組織充填剤中のＨＡは、約１０．０％、約１０．１％、約１０．２％、約１０．３％、約１０．４％、約１０．５％、約１０．６％、約１０．７％、約１０．８％、約１０．９％、約１１．０％、約１１．１％、約１１．２％、約１１．３％、約１１．４％、約１１．５％、約１１．６％、約１１．７％、約１１．８％、約１１．９％、約１２．０％、約１２．１％、約１２．２％、約１２．３％、約１２．４％、約１２．５％、約１２．６％、約１２．７％、約１２．８％、約１２．９％、約１３．０％、約１３．１％、約１３．２％、約１３．３％、約１３．４％、約１３．５％、約１３．６％、約１３．７％、約１３．８％、約１３．９％、約１４．０％、約１４．１％、約１４．２％、約１４．３％、約１４．４％、約１４．５％、約１４．６％、約１４．７％、約１４．８％、約１４．９％、約１５．０％、約１５．１％、約１５．２％、約１５．３％、約１５．４％、約１５．５％、約１５．６％、約１５．７％、約１５．８％、約１５．９％、約１６．０％、約１６．１％、約１６．２％、約１６．３％、約１６．４％、約１６．５％、約１６．６％、約１６．７％、約１６．８％、約１６．９％、約１７．０％、約１７．１％、約１７．２％、約１７．３％、約１７．４％、約１７．５％、約１７．６％、約１７．７％、約１７．８％、約１７．９％、約１８．０％、約１８．１％、約１８．２％、約１８．３％、約１８．４％、約１８．５％、約１８．６％、約１８．７％、約１８．８％、約１８．９％、約１９．０％、約１９．１％、約１９．２％、約１９．３％、約１９．４％、約１９．５％、約１９．６％、約１９．７％、約１９．８％、約１９．９％、又は約２０．０％の改変度（ＭｏＤ）を有する。一部の実施形態では、組織充填剤中でのＨＡの総量に対する改変ＨＡの量（％ｗ／ｗ）は、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％である。

一部の実施形態では、改変ＨＡは架橋ＨＡを含み、架橋ＨＡの架橋度は、約１％～約１００％の間である。一部の実施形態では、架橋ＨＡの架橋度は、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％である。一部の実施形態では、架橋ＨＡの架橋度は、約１％～約１５％の間である。

一部の実施形態では、改変又は架橋ＨＡは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖を含むリンカー又は架橋部分を含む。一部の実施形態では、架橋剤及び／又は架橋前駆体は、エポキシ基を含む。一部の実施形態では、改変又は架橋は、ポリエポキシリンカー、ジエポキシリンカー、ポリエポキシ－ＰＥＧ、ジエポキシ－ＰＥＧ、ポリグリシジル－ＰＥＧ、ジグリシジル－ＰＥＧ、ポリアクリレートＰＥＧ、ジアクリレートＰＥＧ、１，４－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）ブタン、１，４－ビスグリシジルオキシブタン、ジビニルスルホン（ＤＶＳ）、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、ＵＶ光、グルタルアルデヒド、１，２－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）エチレン（ＥＧＤＧＥ）、１，２，７，８－ジエポキシオクタン（ＤＥＯ）、ビスカルボジイミド（ＢＣＤＩ）、ペンタエリスリトールテトラグリシジルエーテル（ＰＥＴＧＥ）、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）、ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート（ＢＳ）、ヘキサメチレンジアミン（ＨＭＤＡ）、１－（２，３－エポキシプロピル）－２，３－エポキシシクロヘキサン、カルボジイミド、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される架橋剤、架橋前駆体、又は活性化剤を使用して得られる。一部の実施形態では、改変又は架橋は、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、エチレングリコールジグリシジルエーテル（ＥＧＤＧＥ）、１，６－ヘキサンジオールジグリシジルエーテル、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル、ポリプロピレングリコールジグリシジルエーテル、ポリテトラメチレングリコールジグリシジルエーテル、ネオペンチルグリコールジグリシジルエーテル、ポリグリセロールポリグリシジルエーテル、ジグリセロールポリグリシジルエーテル、グリセロールポリグリシジルエーテル、トリメチロールプロパンポリグリシジルエーテル、ペンタエリスリトールポリグリシジルエーテル、及びソルビトールポリグリシジルエーテルからなる群から選択される多官能性エポキシ化合物を使用して得られる。一部の実施形態では、改変又は架橋は、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル、ジエポキシＰＥＧ、ＰＥＧジグリシジルエーテル、ポリオキシエチレンビス－グリシジルエーテル、ＰＥＧＤＥ、及びＰＥＧＤＧＥからなる群から選択される架橋剤及び／又は架橋前駆体を使用して得られる。一部の実施形態では、改変又は架橋は、約５００、約１０００、約２０００、又は約６０００の平均Ｍｎを有するポリエチレングリコールジグリシジルエーテルを使用して得られる。一部の実施形態では、改変又は架橋は、約２～約２５個のエチレングリコール基を有するポリエチレングリコールジグリシジルエーテルを使用して得られる。一部の実施形態では、改変又は架橋は、ポリエポキシ絹フィブロインリンカー、ジエポキシ絹フィブロインリンカー、ポリエポキシ絹フィブロイン断片リンカー、ジエポキシ絹フィブロイン断片リンカー、ポリグリシジル絹フィブロインリンカー、ジグリシジル絹フィブロインリンカー、ポリグリシジル絹フィブロイン断片リンカー、及びジグリシジル絹フィブロイン断片リンカーからなる群から選択される架橋剤及び／又は架橋前駆体を使用して得られる。

一部の実施形態では、組織充填剤は、さらに、有機化合物及び／又は無機化合物を含む。一部の実施形態では、無機化合物はカルシウムヒドロキシアパタイトを含む。一部の実施形態では、カルシウムヒドロキシアパタイトは、約１μｍ～約１００μｍの間、約１μｍ～約１０μｍの間、約２μｍ～約１２μｍの間、約３μｍ～約１０μｍの間、約４μｍ～約１５μｍの間、約８μｍ～約１２μｍの間、約５μｍ～約１０μｍの間、約６μｍ～約１２μｍの間、約７μｍ～約２０μｍの間、約９μｍ～約１８μｍの間、又は約１０μｍ～約２５μｍの間の直径を有する粒子として製剤化される。一部の実施形態では、カルシウムヒドロキシアパタイトの濃度は、約０．００１％～約５％の間である。一部の実施形態では、カルシウムヒドロキシアパタイトの濃度は、約０．００１％、約０．００２％、約０．００３％、約０．００４％、約０．００５％、約０．００６％、約０．００７％、約０．００８％、約０．００９％、約０．０１％、約０．０１１％、約０．０１２％、約０．０１３％、約０．０１４％、約０．０１５％、約０．０１６％、約０．０１７％、約０．０１８％、約０．０１９％、又は約０．０２％である。一部の実施形態では、カルシウムヒドロキシアパタイトの濃度は、約０．０５％、約０．１％、約０．１５％、約０．２％、約０．２５％、約０．３％、約０．３５％、約０．４％、約０．４５％、約０．５％、約０．５５％、約０．６％、約０．６５％、約０．７％、約０．７５％、約０．８％、約０．８５％、約０．９％、約０．９５％、約１％、約１．０５％、約１．１％、約１．１５％、約１．２％、約１．２５％、約１．３％、約１．３５％、約１．４％、約１．４５％、約１．５％、約１．５５％、約１．６％、約１．６５％、約１．７％、約１．７５％、約１．８％、約１．８５％、約１．９％、約１．９５％、又は約２％である。一部の実施形態では、有機化合物は、グリシン、Ｌ－プロリン、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、及びバリンからなる群から選択されるアミノ酸を含む。

一部の実施形態では、ＨＡは、ストレプトコッカス細菌、又はバチルス・スブチリス細菌から得られる。一実施形態では、活性薬剤はリドカインである。一部の実施形態では、組織充填剤中での活性薬剤の濃度は、約０．００１％～約５％である。一部の実施形態では、組織充填剤中のリドカインの濃度は、約０．３％である。

一部の実施形態では、本明細書中で開示される組織充填剤は、ゲルである。一部の実施形態では、組織充填剤はヒドロゲルである。一部の実施形態では、組織充填剤は、さらに、水を含む。一部の実施形態では、組織充填剤中でのＨＡの総濃度は、約１０ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬである。一部の実施形態では、組織充填剤中でのＨＡの総濃度は、約１５ｍｇ／ｍＬ、約１６ｍｇ／ｍＬ、約１７ｍｇ／ｍＬ、約１８ｍｇ／ｍＬ、約１９ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２１ｍｇ／ｍＬ、約２２ｍｇ／ｍＬ、約２３ｍｇ／ｍＬ、約２４ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約２６ｍｇ／ｍＬ、約２７ｍｇ／ｍＬ、約２８ｍｇ／ｍＬ、約２９ｍｇ／ｍＬ、又は約３０ｍｇ／ｍＬである。一部の実施形態では、組織充填剤中での改変又は架橋ＨＡの濃度は、約１０ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬである。一部の実施形態では、組織充填剤中での改変又は架橋ＨＡの濃度は、約１５ｍｇ／ｍＬ、約１６ｍｇ／ｍＬ、約１７ｍｇ／ｍＬ、約１８ｍｇ／ｍＬ、約１９ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍｌ、約２１ｍｇ／ｍＬ、約２２ｍｇ／ｍＬ、約２３ｍｇ／ｍＬ、約２４ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約２６ｍｇ／ｍＬ、約２７ｍｇ／ｍＬ、約２８ｍｇ／ｍＬ、約２９ｍｇ／ｍＬ、又は約３０ｍｇ／ｍＬである。

一部の実施形態では、開示される組織充填剤は、さらに、絹タンパク質又は絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含む。一部の実施形態では、絹タンパク質は絹フィブロインである。一部の実施形態では、絹タンパク質は、セリシンを実質的に欠く絹フィブロインである。一部の実施形態では、ＳＰＦは、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一部の実施形態では、ＳＰＦは、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一部の実施形態では、ＳＰＦは、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一部の実施形態では、ＳＰＦは、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一部の実施形態では、ＳＰＦは、約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一部の実施形態では、ＳＰＦは低分子量を有する。一部の実施形態では、ＳＰＦは中分子量を有する。一部の実施形態では、ＳＰＦは高分子量を有する。一部の実施形態では、絹タンパク質断片（ＳＰＦ）は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する。一部の実施形態では、ＳＰＦは、最大６０％の結晶化度を有する。

一部の実施形態では、本発明は、ＨＡ及びＳＰＦを含み、ＳＰＦの一部が改変又は架橋されている組織充填剤に関する。一部の実施形態では、ＳＰＦの総量に対する改変又は架橋ＳＰＦの量（％ｗ／ｗ）は、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％である。一部の実施形態では、改変又は架橋ＳＰＦの改変度又は架橋度は、約１％～約１００％の間である。一部の実施形態では、改変又は架橋ＳＰＦの改変度又は架橋度は、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％である。一部の実施形態では、改変又は架橋ＳＰＦの改変度又は架橋度は、約１％～約１５％の間である。一部の実施形態では、改変又は架橋ＳＰＦの改変度又は架橋度は、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、及び約１５％の一つ又は複数である。

一部の実施形態では、改変又は架橋ＳＰＦは、アルカン鎖又はアルキル鎖、及び／又はエーテル基を含むリンカー又は架橋部分を含み、リンカー又は架橋部分が、リンカー又は架橋部分の一端でＳＰＦに付着している。一部の実施形態では、改変又は架橋ＳＰＦは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖を含むリンカー又は架橋部分を含む。一部の実施形態では、改変又は架橋ＳＰＦは、第二級アルコールを含むリンカー又は架橋部分を含む。一部の実施形態では、改変又は架橋は、改変もしくは架橋剤、改変もしくは架橋前駆体、又は活性化剤を使用して得られる。一部の実施形態では、改変もしくは架橋剤及び／又は改変もしくは架橋前駆体は、エポキシ基を含む。一部の実施形態では、改変又は架橋は、ポリエポキシリンカー、ジエポキシリンカー、ポリエポキシ－ＰＥＧ、ジエポキシ－ＰＥＧ、ポリグリシジル－ＰＥＧ、ジグリシジル－ＰＥＧ、ポリアクリレートＰＥＧ、ジアクリレートＰＥＧ、１，４－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）ブタン、１，４－ビスグリシジルオキシブタン、ジビニルスルホン（ＤＶＳ）、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、ＵＶ光、グルタルアルデヒド、１，２－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）エチレン（ＥＧＤＧＥ）、１，２，７，８－ジエポキシオクタン（ＤＥＯ）、ビスカルボジイミド（ＢＣＤＩ）、ペンタエリスリトールテトラグリシジルエーテル（ＰＥＴＧＥ）、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）、ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート（ＢＳ）、ヘキサメチレンジアミン（ＨＭＤＡ）、１－（２，３－エポキシプロピル）－２，３－エポキシシクロヘキサン、カルボジイミド、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される改変もしくは架橋剤、改変もしくは架橋前駆体、又は活性化剤を使用して得られる。一部の実施形態では、改変又は架橋は、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、エチレングリコールジグリシジルエーテル（ＥＧＤＧＥ）、１，６－ヘキサンジオールジグリシジルエーテル、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル、ポリプロピレングリコールジグリシジルエーテル、ポリテトラメチレングリコールジグリシジルエーテル、ネオペンチルグリコールジグリシジルエーテル、ポリグリセロールポリグリシジルエーテル、ジグリセロールポリグリシジルエーテル、グリセロールポリグリシジルエーテル、トリメチロールプロパンポリグリシジルエーテル、ペンタエリスリトールポリグリシジルエーテル、及びソルビトールポリグリシジルエーテルからなる群から選択される多官能性エポキシ化合物を使用して得られる。

一部の実施形態では、改変又は架橋は、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル、ジエポキシＰＥＧ、ＰＥＧジグリシジルエーテル、ポリオキシエチレンビス－グリシジルエーテル、ＰＥＧＤＥ、及びＰＥＧＤＧＥからなる群から選択される改変もしくは架橋剤及び／又は改変もしくは架橋前駆体を使用して得られる。一部の実施形態では、改変又は架橋は、約５００、約１０００、約２０００、又は約６０００の平均Ｍｎを有するポリエチレングリコールジグリシジルエーテルを使用して得られる。一部の実施形態では、改変又は架橋は、約２～約２５個のエチレングリコール基を有するポリエチレングリコールジグリシジルエーテルを使用して得られる。一部の実施形態では、改変又は架橋は、ポリエポキシ絹フィブロインリンカー、ジエポキシ絹フィブロインリンカー、ポリエポキシ絹フィブロイン断片リンカー、ジエポキシ絹フィブロイン断片リンカー、ポリグリシジル絹フィブロインリンカー、ジグリシジル絹フィブロインリンカー、ポリグリシジル絹フィブロイン断片リンカー、及びジグリシジル絹フィブロイン断片リンカーからなる群から選択される改変もしくは架橋剤及び／又は改変もしくは架橋前駆体を使用して得られる。

一部の実施形態では、本発明は、ＨＡ及びＳＰＦを含み、ＳＰＦの一部がＨＡに架橋されている組織充填剤に関する。一部の実施形態では、本発明は、ＨＡ及びＳＰＦを含み、ＳＰＦの一部がＳＰＦに架橋されている組織充填剤に関する。一部の実施形態では、組織充填剤はゲルである。一部の実施形態では、組織充填剤はヒドロゲルである。一部の実施形態では、組織充填剤は、さらに、水を含む。一部の実施形態では、組織充填剤中でのＳＰＦの総濃度は、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約１５ｍｇ／ｍＬである。一部の実施形態では、組織充填剤中でのＳＰＦの総濃度は、約０．１ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ、約１．５ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約２．５ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ、約３．５ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ、約４．５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約５．５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約６．５ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約７．５ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約８．５ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約９．５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１０．５ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ、約１１．５ｍｇ／ｍＬ、約１２ｍｇ／ｍＬ、約１２．５ｍｇ／ｍＬ、約１３ｍｇ／ｍＬ、約１３．５ｍｇ／ｍＬ、約１４ｍｇ／ｍＬ、約１４．５ｍｇ／ｍＬ、又は約１５ｍｇ／ｍＬである。一部の実施形態では、組織充填剤中での改変又は架橋ＳＰＦの濃度は、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約１５ｍｇ／ｍＬである。一部の実施形態では、組織充填剤中での改変又は架橋ＳＰＦの濃度は、約０．１ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ、約１．５ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約２．５ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ、約３．５ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ、約４．５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約５．５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約６．５ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約７．５ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約８．５ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約９．５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１０．５ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ、約１１．５ｍｇ／ｍＬ、約１２ｍｇ／ｍＬ、約１２．５ｍｇ／ｍＬ、約１３ｍｇ／ｍＬ、約１３．５ｍｇ／ｍＬ、約１４ｍｇ／ｍＬ、約１４．５ｍｇ／ｍＬ、又は約１５ｍｇ／ｍＬである。

一部の実施形態では、本発明は、改変もしくは架橋ＨＡ、及び／又は改変もしくは架橋ＳＰＦを含み、皮膚充填剤である組織充填剤に関する。一部の実施形態では、組織充填剤は生分解性である。一部の実施形態では、組織充填剤は注入可能である。一部の実施形態では、組織充填剤は、約２５Ｐａ～約１５００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する。一部の実施形態では、組織充填剤は、約２５Ｐａ、約２６Ｐａ、約２７Ｐａ、約２８Ｐａ、約２９Ｐａ、約３０Ｐａ、約３１Ｐａ、約３２Ｐａ、約３３Ｐａ、約３４Ｐａ、約３５Ｐａ、約３６Ｐａ、約３７Ｐａ、約３８Ｐａ、約３９Ｐａ、約４０Ｐａ、約４１Ｐａ、約４２Ｐａ、約４３Ｐａ、約４４Ｐａ、約４５Ｐａ、約４６Ｐａ、約４７Ｐａ、約４８Ｐａ、約４９Ｐａ、約５０Ｐａ、約５１Ｐａ、約５２Ｐａ、約５３Ｐａ、約５４Ｐａ、約５５Ｐａ、約５６Ｐａ、約５７Ｐａ、約５８Ｐａ、約５９Ｐａ、約６０Ｐａ、約６１Ｐａ、約６２Ｐａ、約６３Ｐａ、約６４Ｐａ、約６５Ｐａ、約６６Ｐａ、約６７Ｐａ、約６８Ｐａ、約６９Ｐａ、約７０Ｐａ、約７１Ｐａ、約７２Ｐａ、約７３Ｐａ、約７４Ｐａ、約７５Ｐａ、約７６Ｐａ、約７７Ｐａ、約７８Ｐａ、約７９Ｐａ、約８０Ｐａ、約８１Ｐａ、約８２Ｐａ、約８３Ｐａ、約８４Ｐａ、約８５Ｐａ、約８６Ｐａ、約８７Ｐａ、約８８Ｐａ、約８９Ｐａ、約９０Ｐａ、約９１Ｐａ、約９２Ｐａ、約９３Ｐａ、約９４Ｐａ、約９５Ｐａ、約９６Ｐａ、約９７Ｐａ、約９８Ｐａ、約９９Ｐａ、約１００Ｐａ、約１０１Ｐａ、約１０２Ｐａ、約１０３Ｐａ、約１０４Ｐａ、約１０５Ｐａ、約１０６Ｐａ、約１０７Ｐａ、約１０８Ｐａ、約１０９Ｐａ、約１１０Ｐａ、約１１１Ｐａ、約１１２Ｐａ、約１１３Ｐａ、約１１４Ｐａ、約１１５Ｐａ、約１１６Ｐａ、約１１７Ｐａ、約１１８Ｐａ、約１１９Ｐａ、約１２０Ｐａ、約１２１Ｐａ、約１２２Ｐａ、約１２３Ｐａ、約１２４Ｐａ、又は約１２５Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する。一部の実施形態では、Ｇ’は、約０．１～約１０Ｈｚの振動応力によって測定される。一部の実施形態では、Ｇ’は、約１Ｈｚの振動応力によって測定される。一部の実施形態では、Ｇ’は、約５Ｈｚの振動応力によって測定される。一部の実施形態では、Ｇ’は、約１０Ｈｚの振動応力によって測定される。一部の実施形態では、組織充填剤は、約１Ｐａ・ｓ～約１０Ｐａ・ｓの複素粘度を有する。一部の実施形態では、組織充填剤は、約１Ｐａ・ｓ、約１．５Ｐａ・ｓ、約２Ｐａ・ｓ、約２．５Ｐａ・ｓ、約３Ｐａ・ｓ、約３．５Ｐａ・ｓ、約４Ｐａ・ｓ、約４．５Ｐａ・ｓ、約５Ｐａ・ｓ、約５．５Ｐａ・ｓ、約６Ｐａ・ｓ、約６．５Ｐａ・ｓ、約７Ｐａ・ｓ、約７．５Ｐａ・ｓ、約８Ｐａ・ｓ、約８．５Ｐａ・ｓ、約９Ｐａ・ｓ、約９．５Ｐａ・ｓ、又は約１０Ｐａ・ｓの複素粘度を有する。一部の実施形態では、複素粘度は、約０．１～約１０Ｈｚの振動応力によって測定される。一部の実施形態では、複素粘度は、約１Ｈｚの振動応力によって測定される。一部の実施形態では、複素粘度は、約５Ｈｚの振動応力によって測定される。

一部の実施形態では、本発明は、それを必要とする対象において状態を治療する方法に関し、対象に、改変もしくは架橋ＨＡ及び／又は改変もしくは架橋ＳＰＦを含む組織充填剤の治療有効量を投与することを含む。一部の実施形態では、状態は、皮膚の状態である。一部の実施形態では、皮膚の状態は、皮膚の脱水、皮膚弾力の欠如、肌荒れ、皮膚の張りの欠如、皮膚のストレッチライン、皮膚のストレッチマーク、皮膚の蒼白、皮膚の陥没、頬のこけ、唇の薄さ、眼窩後部の欠損、顔面のひだ、及び皺からなる群から選択される。

一部の実施形態では、本発明は、それを必要とする対象における美容的治療の方法に関し、対象に、改変もしくは架橋ＨＡ及び／又は改変もしくは架橋ＳＰＦを含む組織充填剤の有効量を投与することを含む。一部の実施形態では、組織充填剤は、対象の皮膚領域中に投与される。一部の実施形態では、方法は、増大、再建、疾患の治療、障害の治療、身体の一部、部分、又は領域の欠損又は不完全性の矯正である。一部の実施形態では、方法は、顔面の増大、顔面の再建、顔面の疾患の治療、顔面の障害の治療、顔面の欠損の治療、又は顔面の不完全性の治療である。

本明細書中に記載される方法の一部の実施形態では、組織充填剤は、少なくとも約３日間、約７日間、約１４日間、約２１日間、約２８日間、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、又は約６ヶ月間にわたり、生分解、生体侵食（ｂｉｏｅｒｏｓｉｏｎ）、生体吸収、及び／又は生体再吸収に抵抗性を示す。本明細書中に記載される方法の一部の実施形態では、対象への組織充填剤の投与によって、多糖及びリドカインを含むが絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含まない対照組織充填剤により誘導される炎症応答と比較して、低下した炎症応答がもたらされる。

本明細書中に記載される方法の一部の実施形態では、対象への組織充填剤の投与によって、多糖及びリドカインを含むが絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含まない対照組織充填剤により誘導されるコラーゲン産生と比較して、増加したコラーゲン産生がもたらされる。

一部の実施形態では、本開示は、本明細書中に記載される組成物又は組織充填剤を提供し、限定されないが、軟部組織充填剤を含み、限定されないが、ゲル、及びＳＰＦナノ又はマイクロ粒子を含む本明細書中に記載される全ての使用の方法を含む。一部の実施形態では、粒子はゲル中に組み込まれる。一部の実施形態では、粒子はゲル中に共有結合的に組み込まれる。一部の実施形態では、粒子はゲル中に非共有結合的に組み込まれる。一部の実施形態では、組成物又は組織充填剤は、リドカイン又は本明細書中に記載される任意の他の麻酔薬を含む。一部の実施形態では、組成物又は組織充填剤は、本明細書中に記載される麻酔薬を含まない。

一部の実施形態では、本開示は、本明細書中に記載される組成物又は組織充填剤を提供し、限定されないが、軟部組織充填剤を含み、限定されないが、ゲル、及び本明細書中に記載される全ての使用の方法を含み、当技術分野において公知の任意のナノ及び／又はマイクロ粒子の粒子をさらに含む。一部の実施形態では、ナノ及び／又はマイクロ粒子は、カプロラクトンを含む。一部の実施形態では、ナノ及び／又はマイクロ粒子は、セルロースを含む。一部の実施形態では、ナノ及び／又はマイクロ粒子は、ゲル中に組み込まれる。一部の実施形態では、ナノ及び／又はマイクロ粒子は、共有結合的に付着される。一部の実施形態では、ナノ及び／又はマイクロ粒子は、非共有結合的に付着される。一部の実施形態では、組成物又は組織充填剤は、リドカイン又は本明細書中に記載される任意の他の麻酔薬を含む。一部の実施形態では、組成物又は組織充填剤は、本明細書中に記載される麻酔薬を含まない。

一部の実施形態では、本開示は、本明細書中に記載される組成物又は組織充填剤を提供し、限定されないが、軟組織充填剤を含み、並びに、限定されないが、ゲル、及び本明細書中に記載される全ての使用の方法を含み、ゲル中に組み込まれたナノファイバー又はマイクロファイバーをさらに含む。一部の実施形態では、ナノファイバー又はマイクロファイバーは、共有結合的に付着される。一部の実施形態では、ナノファイバー又はマイクロファイバーは、非共有結合的に付着される。一部の実施形態では、組成物又は組織充填剤は、リドカイン又は本明細書中に記載される任意の他の麻酔薬を含む。一部の実施形態では、組成物又は組織充填剤は、本明細書中に記載される麻酔薬を含まない。一部の実施形態では、ナノファイバー又はマイクロファイバーは、本明細書中に記載されるＳＰＦを含む。一部の実施形態では、ナノファイバー又はマイクロファイバーはカプロラクトンを含む。一部の実施形態では、ナノファイバー又はマイクロファイバーはセルロースを含む。

一部の実施形態では、本開示は、ゲル、例えば、限定されないが、ヒドロゲル、及び、限定されないが、本明細書中に記載される任意の使用の方法における使用のために、ＳＰＦナノ又はマイクロ粒子を含むゲル及び／又はヒドロゲルを提供する。一部の実施形態では、ゲル及び／又はヒドロゲルは、本明細書中に記載されるＨＡを含んでもよい、又は含まなくてもよい。一部の実施形態では、ゲル及び／又はヒドロゲルマトリックスは、マトリックス中に埋め込まれたＳＰＦナノ又はマイクロ粒子を除いて、本明細書中に記載されるＳＰＦを含まない。一部の実施形態では、ゲル及び／又はヒドロゲルは、当技術分野において公知の任意のゲル又はヒドロゲルである。一部の実施形態では、粒子はゲル中に組み込まれる。一部の実施形態では、粒子はゲル中に共有結合的に組み込まれる。一部の実施形態では、粒子はゲル中に非共有結合的に組み込まれる。一部の実施形態では、ゲル又はヒドロゲルは、リドカイン又は本明細書中に記載される任意の他の麻酔薬を含む。一部の実施形態では、ゲル又はヒドロゲルは、本明細書中に記載される麻酔薬を含まない。

一部の実施形態では、本開示は、本明細書中に記載される組成物又は組織充填剤を提供し、限定されないが、軟組織充填剤を含み、並びに、限定されないが、別の分子、化合物、薬剤、及び類似のものを送達するように構成されたゲル、及び本明細書中に記載される全ての使用の方法を含む。一部の実施形態では、分子、化合物、薬物、又は類似のものは、本明細書中に記載される遊離絹及び／又は遊離ＳＰＦを含む。一部の実施形態では、遊離絹及び／又は遊離ＳＰＦは、コラーゲン発現をブーストする。一部の実施形態では、分子、化合物、薬物、又は同様のものは、レチノールを含む。一部の実施形態では、分子、化合物、薬物、又は同様のものは、限定されないが、ビタミンＣを含むビタミンを含む。一部の実施形態では、分子、化合物、薬物、又は同様のものは、炎症性薬剤を含む。一部の実施形態では、分子、化合物、薬物、又は同様のものは、抗炎症剤を含む。一部の実施形態では、分子、化合物、薬物、又は同様のものは、上皮細胞再生を刺激するための一つ又は複数の薬剤を含む。一部の実施形態では、分子、化合物、薬物、又は同様のものは、創傷治癒を刺激するための一つ又は複数の薬剤を含む。一部の実施形態では、分子、化合物、薬物、又は同様のものは、疼痛管理を刺激するための一つ又は複数の薬剤を含む。一部の実施形態では、分子、化合物、薬物、又は同様のものは、持続放出を提供することができる一つ又は複数の薬剤を含む。一部の実施形態では、分子、化合物、薬物、又は同様のものは、一つ又は複数の潤滑剤を含む。

一部の実施形態では、本開示は、本明細書中に記載される組成物又は組織充填剤を提供し、限定されないが、軟組織充填剤を含み、並びに、限定されないが、ゲル、及び本明細書中に記載される全ての使用の方法を含み、イメージング剤をさらに含む。一部の実施形態では、イメージング剤は、ヨウ素、ＤＯＰＡ、及び撮像ナノ粒子から選択される。一部の実施形態では、イメージング剤は、常磁性造影剤及び超常磁性造影剤から選択される。一部の実施形態では、イメージング剤は、ＮＰベースの核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）造影剤、ポジトロン断層法（ＰＥＴ）／単一光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）イメージング剤、超音波活性粒子、及び光学的に活性な（例、発光、蛍光、赤外線）粒子から選択される。一部の実施形態では、イメージング剤は、ＳＰＥＣＴイメージング剤、ＰＥＴイメージング剤、光学イメージング剤、ＭＲＩもしくはＭＲＳイメージング剤、超音波イメージング剤、マルチモーダルイメージング剤、Ｘ線イメージング剤、又はＣＴイメージング剤である。

一部の実施形態では、本開示は、限定されないが、注入領域を含む、特定の領域に関連する薬物を送達するための使用のための、本明細書中に記載される組成物又は組織充填剤を提供し、限定されないが、軟組織充填剤を含み、並びに、限定されないが、ゲル、及び本明細書中に記載される全ての使用方法を含む。

一部の実施形態では、本開示は、本明細書中に記載される組成物又は組織充填剤を提供し、限定されないが、軟組織充填剤を含み、並びに、限定されないが、ゲル、及び本明細書中に記載される全ての使用方法を含み、マイクロ粒子又はマイクロカプセルをさらに含む。一部の実施形態では、マイクロ粒子又はマイクロカプセルは、さらに、薬物を含む。

一部の実施形態では、本開示は、本明細書中に記載される組成物又は組織充填剤を提供し、限定されないが、軟組織充填剤を含み、並びに、限定されないが、ゲル、及び本明細書中に記載される全ての使用方法を含み、ここで、当該組成物又は組織充填剤は、放射線不透過性である。

一部の実施形態では、本開示は、本明細書中に記載される組成物又は組織充填剤を提供し、限定されないが、軟部組織充填剤を含み、並びに、限定されないが、ゲル、及び本明細書中に記載される全ての使用の方法を含み、本明細書中に記載されるＳＰＦを含み、低分子量、中分子量、及び高分子量から選択される平均分子量、並びに、１～約５の間の多分散性を有する実質的に固体の絹組成物をさらに含む。一部の実施形態では、ＳＰＦは、１～約１．５の間の多分散性を有する。一部の実施形態では、ＳＰＦは、約１．５～約２．０の間の多分散性を有する。一部の実施形態では、ＳＰＦは、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する。一部の実施形態では、ＳＰＦは、約２．０～約２．５の間の多分散性を有する。一部の実施形態では、ＳＰＦは、約２．５～約３．０の間の多分散性を有する。一部の実施形態では、組成物は、さらに、ＳＰＦに対して約０．０１％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）のセリシンを含む。一部の実施形態では、ＳＰＦは粒子中に製剤化される。一部の実施形態では、粒子は、約１μｍ～約１０００μｍの間のサイズを有する。一部の実施形態では、実質的に固体の絹組成物中のＳＰＦは、低分子量、中分子量、及び高分子重量から選択される平均重量平均分子量、並びに、１～約５の間の多分散性を有するＳＰＦ断片を含む前駆体溶液から得られる。一部の実施形態では、前駆体溶液中のＳＰＦは、１と約１．５の間の多分散性を有する。一部の実施形態では、前駆体溶液中のＳＰＦは、約１．５～約２．０の間の多分散性を有する。一部の実施形態では、前駆体溶液中のＳＰＦは、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する。一部の実施形態では、前駆体溶液中のＳＰＦは、約２．０～約２．５の間の多分散性を有する。一部の実施形態では、前駆体溶液中のＳＰＦは、約２．５～約３．０の間の多分散性を有する。一部の実施形態では、前駆体溶液は、さらに、前駆体溶液中のＳＰＦに対して約０．０１％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）のセリシンを含む。一部の実施形態では、前駆体溶液中のＳＰＦは、実質的に固体の絹組成物中の絹フィブロイン断片を得る前に、少なくとも１０日間にわたり前駆体溶液中にある場合、自発的又は徐々にゲル化せず、色又は濁りにおいて目に見えるように変化しない。一部の実施形態では、実質的に固体の絹組成物中のＳＰＦは、凍結乾燥プロセス、薄膜蒸発プロセス、塩析プロセス、及びＰＶＡ支援方法から選択されるプロセスにより、前駆体溶液から得られる。一部の実施形態では、実質的に固体の絹組成物は、組成物又は組織充填剤中に、総重量に対して約０．０１重量％～約１０．０重量％で存在する。一部の実施形態では、実質的に固体の絹組成物は、組成物又は組織充填剤中に、総重量に対して約０．０１重量％～約１．０重量％で存在する。一部の実施形態では、実質的に固体の絹組成物は、組成物又は組織充填剤中に、総重量に対して約１．０重量％～約２．０重量％で存在する。一部の実施形態では、実質的に固体の絹組成物は、組成物又は組織充填剤中に、総重量に対して約２．０重量％～約３．０重量％で存在する。一部の実施形態では、実質的に固体の絹組成物は、組成物又は組織充填剤中に、総重量に対して約３．０重量％～約４．０重量％で存在する。一部の実施形態では、実質的に固体の絹組成物は、組成物又は組織充填剤中に、総重量に対して約４．０重量％～約５．０重量％で存在する。一部の実施形態では、実質的に固体の絹組成物は、組成物又は組織充填剤中に、総重量に対して約５．０重量％～約６．０重量％で存在する。

一態様では、本開示は、それを必要とする対象に治療を施すことにより緩和される障害、疾患、又は状態の治療又は予防の方法を含む。一部の実施形態では、方法は、本開示の組成物を対象に投与することを含む。一部の実施形態では、組成物は、本開示の組織充填剤を含む。一部の実施形態では、組成物は注入により投与される。

治療、例えば放射線、凍結療法、又は薬物治療などを施すことにより緩和させることができる任意の疾患、障害、又は状態が、本開示により企図される。疾患、障害、及び状態の非限定的な例は、子宮頸癌、直腸癌、肺腫瘍、縦隔リンパ腫、乳癌、子宮体癌、良性前立腺肥大症（ＢＰＨ）、月経痛、子宮筋腫、及び前立腺腺癌を含む。例えば、ＵＳ８，２５７，７２３、ＵＳ７，７４４，９１３、ＵＳ２０１７００５６６８９、ＵＳ２０１６０３３８７９３、ＵＳ７，７７１，３３９、ＣＡ２，４９８，１６６、及びＵＳ６，７４６，４６５を参照のこと。それらの全てが、参照によりその全体において本明細書中に組み込まれる。

治療の非限定的な例は、凍結手術；放射線治療、限定されないが、外部ビーム放射線治療（例、３Ｄコンフォーマル又は強度変調放射線治療）を含む、間質前立腺小線源治療（例、永久的又は一過性シードの使用、又は高線量率遠隔照射の使用）、ガンマ照射による外部放射線治療、高エネルギー光子線治療、陽子ビーム治療、中性子ビーム治療、重粒子ビーム治療、小線源治療、熱線治療、又はそれらの任意の組み合わせ；及び薬物治療（局所的）、例えばアルコール組織アブレーション又はＮａＣｌ結晶もしくは高浸透圧溶液を使用した高浸透圧アブレーションなど、又は物理的組織操作（例、解離）を含む。別の実施形態は、前立腺癌又は婦人科癌に対する小線源治療放射線治療のための、これらの技術の使用である。小線源治療は、腫瘍、標的臓器、又は他の組織内又はその近くへの放射性同位元素の配置を含む。例えば、小線源治療技術は、前立腺癌の治療のための、前立腺中への永久的なＩ－１２５放射性シードの配置である。婦人科のための適用は、放射線により標的化される別の組織から組織を移動させることを含む実施形態を含む。

一部の実施形態では、組成物は、第一の組織と第二の組織の間に投与される。一部の実施形態では、組成物は、第一の組織と第二の組織との間隙中に投与される。一部の実施形態では、第一の組織は、第二の組織に対して移動される。一部の実施形態では、第一の組織が照射される。一部の実施形態では、第一の組織は、第一の組織が組成物の非存在において受ける放射線量と比較して、実質的に類似した放射線量を受ける。一部の実施形態では、第二の組織が照射される。一部の実施形態では、第二の組織は、第二の組織が組成物の非存在において受ける放射線量と比較して、より低い放射線量を受ける。一部の実施形態では、第二の組織は、実質的に、放射線量を受けない。

一部の実施形態はまた、放射線により身体の組織を治療するための方法を提供する。一実施形態では、方法は、本明細書中に記載される組成物の有効量を、身体の第一の組織（例、前立腺）と第二の組織（例、直腸）との間隙中に注入すること、それは、非常に感受性の臓器とすることができる；及び、放射線により第一の組織を治療すること、それにより、間隙内の組成物によって、第二の組織中への放射線の通過が低下する、の工程を含む。

一態様では、本開示は、組織を移動させて、治療、例えば放射線又は凍結治療などの影響に対して組織を保護する方法を記載する。一実施形態は、治療を受ける組織に対して組織を移動させるために、本明細書中に記載される組成物を使用することを含む。別の実施形態は、第一の組織を放射し、第二の組織を移動させるために本明細書中に記載される組成物を導入することを含む。一部の実施形態では、第一の組織は、第二の組織に近い。別の実施形態では、方法は、本明細書中に記載される組成物を組織間の間隙中に注入する工程を含み；及び、他の組織が、組成物の非存在において有するであろうよりも少ない放射線を受けるように、組織の一つを照射することをさらに含み得る。

組織は、身体の一部、例えば、腫瘍組織、細胞群、細胞群及び間質物質、臓器、臓器の一部、又は身体の解剖学的部分、例えば、直腸、卵巣、前立腺、神経、軟骨、骨、脳、又はその一部を包含する広義の用語である。一部の実施形態では、第一の組織及び第二の組織は、各々が独立して、腫瘍組織、細胞群、細胞及び間質物質群、臓器、臓器の一部、又は身体の解剖学的部分を含む。

一部の実施形態では、用語「第一の組織」及び「第二の組織」は、二つの組織型（例えば、前立腺－直腸、子宮－直腸、子宮－小腸、膀胱－子宮、卵巣－腸、子宮－膀胱、肝臓－胆嚢、肺－縦隔、縦隔－肺、乳腺－胸部壁、食道－脊椎、甲状腺－血管、甲状腺－咽頭及び喉頭、小腸及び大腸－後腹膜、腎臓－肝臓、膵臓－胃、膵臓－脊椎、胃－肝臓、胃－脊椎など）又は同じ組織型の異なる組織領域を表す。後者の場合では、二つの組織領域は、自然に隣接し、線維結合組織（例、肺の葉）により付着でき、切開の導入により分離できることが理解されよう。一部の実施形態では、第一の組織は腫瘍組織を含み、第二の組織は臓器を含む。一部の実施形態では、第一の組織は臓器を含み、第二の組織は臓器を含む。一部の実施形態では、第一の組織は前立腺を含み、第二の組織は直腸を含む。一部の実施形態では、第一の組織は前立腺の一部を含み、第二の組織は直腸の一部を含む。一部の実施形態では、第一の組織は後膣壁／子宮頸管を含み、第二の組織は直腸を含む。一部の実施形態では、第一の組織は直腸を含み、第二の組織は前立腺を含む。一部の実施形態では、第一の組織は肺を含み、第二の組織は縦隔を含む。一部の実施形態では、第一の組織は乳房を含み、第二の組織は腹壁を含む。例えば、ＵＳ２０１６０３３８７９３を参照のこと。参照によりその全体において本明細書中に組み込まれる。

一実施形態では、デノビエ間隙中への、本明細書中に記載される組成物の注入は、前立腺が放射線に曝露された場合に直腸が受ける放射線量を変化させることができる。「デノビエ間隙」は、直腸と前立腺の間に位置する領域である。例えば、ｄｅＣａｓｔｒｏＡｂｒｅｕｅｔａｌ．，２０１４，ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪ．Ｕｒｏｌｏｇｙ２１：４１６－４１８を参照のこと。参照によりその全体において本明細書中に組み込まれる、一部の実施形態では、組成物は、デノビエ間隙中に投与される。

一態様では、本開示は、第一の組織を移動させ、それを必要とする対象において治療の影響に対して第一の組織を保護する方法を記載する。一部の実施形態では、方法は、本開示の組成物を対象に投与することを含む。一部の実施形態では、方法は、第一の組織を第二の組織に対して移動させることを含む。一部の実施形態では、方法は、さらに、組成物を第一の組織と第二の組織の間の間隙中に注入することを含む。一部の実施形態では、方法において、間隙はデノビエ間隙である。一部の実施形態では、方法は、第一の組織と第二の組織の間に組成物を注入して、組織間に間隙を作り出すことを含む。一部の実施形態では、第二の組織が照射される。

一部の実施形態では、第一の組織は、第一の組織が組成物の非存在において受ける放射線量と比較して、より少ない放射線量を受ける。一部の実施形態では、第一の組織及び第二の組織は、各々が独立して、腫瘍組織、細胞群、細胞群及び間質物質、臓器、臓器の一部、又は身体の解剖学的部分から選択される組織を含む。一部の実施形態では、第一の組織は臓器を含み、第二の組織は腫瘍組織を含む。一部の実施形態では、第一の組織は臓器を含み、第二の組織は臓器を含む。一部の実施形態では、第一の組織は直腸を含み、第二の組織は前立腺を含む。

一部の実施形態では、本発明は、標的組織に向けられた治療により誘導される、又はそこからもたらされる、感受性の組織に対する／における副作用を効果的に低下させるための、治療プロトコルの標的である別の身体組織に対して感受性の身体組織を移動させるための方法を含む。一実施形態では、方法は、本明細書中に記載される組成物を、感受性の身体組織（例、直腸）と標的の身体組織（例、前立腺）との間隙中に注入すること；及び、感受性の身体組織が、組成物の存在の結果として、治療によりあまり影響を受けないように、標的身体組織で治療プロトコルを行うことを含む。

本開示の一態様では、本明細書中に記載される組成物は、生分解性である。一部の実施形態では、組成物は、加水分解、タンパク質分解、酵素分解、身体における細胞の作用、又はそれらの組み合わせにより、生分解性である。一部の実施形態では、組成物は、酵素分解により生分解性である。一部の実施形態では、酵素はヒアルロニダーゼである。生分解は、患者中への導入後の組成物の容積における変化を検出するために、触知又は他の観察により測定され得る。一部の実施形態では、生分解が生じるのに適切な長さは、身体中への組成物の導入後１日～１２ヶ月の間である。一部の実施形態では、組成物は、１週間～３ヶ月及び２～８週間を含む、他の期間にわたり、定位置に留まり得る。一部の実施形態では、本明細書中に記載される組成物は、前立腺から直腸組織を移動させる場合について好ましいように、移植後約２ヶ月以内に生分解されることができる。特定の使用のための生分解性のための時間は、放射線の経過を完了するのに要求される時間により決定されてもよく、これは、当業者により理解され得るように、異なる放射線適用及び放射線治療の完全な経過を施すための異なる要件について変動し得る。一部の実施形態では、組成物は、対象において生分解により除去される。

一態様では、本開示は、対象から本開示の組成物を除去する方法を記載する。非限定的な例では、組織に投与される組成物は、後に、組成物を分解させることにより除去することができる。一実施形態では、組成物は分解により除去される。一実施形態では、組成物は、対象において生分解により除去される。一態様では、本明細書中に記載される方法は、さらに、組成物が、対象において生分解により除去される工程を含む。一部の実施形態では、除去工程は、生体分解を起こす組成物を対象に投与することを含む。一部の実施形態では、生分解は、加水分解、タンパク質分解、酵素分解、身体における細胞の作用、又はそれらの組み合わせである。一部の実施形態では、除去工程は、酵素を含む組成物を対象に投与することを含む。一部の実施形態では、組成物は、ヒアルロニダーゼ酵素分解により生分解性である。

本開示の一態様では、本明細書中に記載される組成物は、放射線不透過性である。本明細書中で使用される場合、用語「放射線不透過性」は、Ｘ線又は他の形態の放射線に対して透過性ではない材料を記載するために使用される。一部の実施形態では、組成物は、別の組織に投与される放射線を遮断することにより組織を保護する。一部の実施形態では、組成物は、放射線の約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約１００％を遮断する。一部の実施形態では、組織は、本明細書中に記載される組成物の非存在において有するであろうよりも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約１００％少ない放射線を受ける。

本開示の一態様では、本明細書中に記載される組成物を身体に送達するためのデバイスが記載されている。一部の実施形態では、デバイスは、本明細書中に記載される組成物が充填され、組成物は、好ましくは、身体において第一及び第二の組織の間の距離がそれにより増加するように、身体中に導入される。さらなる工程は、放射線量を組織に投与することを含み、好ましくは、第二の組織が、第一の組織と第二の組織の間の距離が増加されていない場合に受けるであろうよりも少ない放射線量を受けるようにする。さらなる工程はまた、第一もしくは第二の組織又は近くの組織への低温処置の投与であり得る。放射線は、代わりに、第一の組織又は第二の組織が、他の組織からの分離の結果としてより低い放射線量を受けるように、第三の組織に向けられてもよい。第一の組織及び第二の組織は、身体において互いに隣接してもよく、又は他の組織により互いに分離していてもよい。多くの場合では、そのような分離は、第一及び第二の組織の間の分離を達成する有益な効果を低下させない。

当業者により理解され得るように、組織を分離するための組成物容積は、治療される組織及び互いに分離される組織の構成に依存的である。多くの場合では、約２０立方センチメートル（ｃｃ又はｍＬ）の容積が適切である。他の実施形態では、わずか１ｃｃが必要とされ得る。他の容積は、５～１０００ｃｃの範囲、ならびに、その間の全ての範囲、例えば、５～４００ｃｃ、１０～３０ｃｃ、１５～２５ｃｃ、１０～１５０ｃｃ、２０～２００ｃｃ、１５～５００ｃｃ、５０～１０００ｃｃ、及び３０～２００ｃｃ中である。一部の実施形態では、本明細書中に記載される組成物は、組織が伸張して、組成物を収容し、それにより、そうでなければ容易に可能になるであろうよりも大きな容積の組成物を受けることができるように、異なる時間で２用量で投与される。

送達デバイスの例は、シリンジである。本明細書中に記載される組成物は、シリンジ中に充填され、針を通して身体中に注入されることができる。別の例は、例えば、折り畳まれた、脱膨潤された、又は圧延された組成物を受容し、針又はカテーテルを通して組成物を身体中に押し出す押し出し機構を提供するデバイスである。押し出しは、例えば、ハンドル、プランジャー、ガス、又は液体力により得る。

別の実施形態は、本明細書中に記載される組成物を身体中に導入するためのキットである。キットは、組成物及び組成物を身体に送達するためのデバイスを含み得る。実施形態は、使用のための説明書を含む。実施形態は、組成物と混合された又はそこから分離された麻酔薬を含む。実施形態は、送達デバイスがシリンジであるキットを含み、他の実施形態は、シリンジ用の針を含み、組成物及び／又は麻酔薬を投与するための針を含み得る。

説明書はキットに含まれ得る。説明書は、キットの使用においてユーザーに指示する言葉を含み得る。説明書は、キットに完全又は部分的に含まれ得るが、添付文書として、ラベル上、パッケージ上、パンフレット、セミナー資料、セミナーディスプレイ、インターネット教育コース中、又はインターネットもしくはイントラネットウェブサイト上を含む。例えば、キット上のラベルは、説明書を有するインターネットアドレスを参照することができ得る。説明書は、本明細書中に示される実施形態の説明を含み得る。説明書は、線量ヒストグラム、及び使用のための適切な組成物容積の説明を含み得る。

一部の実施形態では、本開示の方法は、さらに、麻酔薬の投与を含む。一部の実施形態では、麻酔薬は、本明細書中に記載される組成物の投与前に投与される。一部の実施形態では、麻酔薬は、局所麻酔薬、特に、本明細書中に記載される組成物を身体に適用する際での使用のための１％リドカインである。リドカインを使用して、神経ブロックを実施してもよい。一実施形態では、麻酔適用のための針は、短い２２ゲージの針及び７ｃｍの２２ゲージの脊椎針である。一実施形態では、シリンジ注入を介して充填剤を送達するための針は、長さ３．５ｃｍの８ゲージの脊髄針である。キットは麻酔薬を含むことができる。

一態様では、本開示は、それを必要とする対象における障害、疾患、又は状態の治療又は予防の方法を含む。一部の実施形態では、方法は、本開示の組成物を対象に投与することを含む。一部の実施形態では、組成物は組織中に注入される。一部の実施形態では、組成物は、本明細書中に記載される組織充填剤を含む。

一部の実施形態では、組織は、当業者により理解され得るように、障害、疾患、又は状態と関連付けられる。例えば、組織は、本開示の組成物を組織中に投与することが、障害、疾患、又は状態の緩和、治療、予防、又は寛解をもたらす場合、障害、疾患、又は状態と関連付けられることができる。

任意の種類の組織が本開示により企図される。組織は、身体の一部、例えば、腫瘍組織、細胞群、細胞群及び間質物質、臓器、臓器の一部、又は身体の解剖学的部分、例えば、直腸、卵巣、前立腺、神経、軟骨、骨、脳、又はその一部を包含する広義の用語である。例えば、ＵＳ８，２５７，７２３を参照のこと。その全体において参照により本明細書中に組み込まれる。

一部の実施形態では、組織は臓器である。一部の実施形態では、組織は臓器の一部である。組織の非限定的な例は、尿道、尿道括約筋、下部食道括約筋、横隔膜、直腸、声帯、喉頭、及び皮膚を含む。一部の実施形態では、組織は、内臓の壁の一部を含む。一部の実施形態では、組織は、尿道又は尿道括約筋の一部である。一部の実施形態では、組織は、下部食道括約筋又は横隔膜の一部分である。一部の実施形態では、組織は尿道括約筋の一部である。一部の実施形態では、組織は直腸の一部である。一部の実施形態では、組織は声帯又は喉頭の一部である。一部の実施形態では、組織は皮膚の一部である。

一部の実施形態では、組織の増大、バルキング、又はそうでなければ減少した伸展性は、障害、疾患、又は状態の治療又は予防をもたらす。一部の実施形態では、組成物の投与は、組織のバルキングに導く。一部の実施形態では、障害、疾患、又は状態は、組織のバルキングにより治療又は予防される。

一部の実施形態では、組成物は、当業者により理解され得るように、組織の壁中に投与される。一部の実施形態では、組織は、内臓の壁の一部を含む。一部の実施形態では、組成物は直腸壁の領域中に投与される。一部の実施形態では、直腸壁の領域は、肛門括約筋の近傍にある。一部の実施形態では、組成物は、内括約筋の壁中に投与される。一部の実施形態では、組成物は、内括約筋中に投与される。

本開示の組成物を使用して緩和、治療、予防、又は寛解することができる任意の障害、疾患、又は状態が、本開示により企図される。障害、疾患、又は状態の非限定的な例は、尿失禁、胃食道逆流症（ＧＥＲＤ）、膀胱尿管逆流症、皮膚欠損、便失禁、歯組織の欠損、声帯組織の欠損、喉頭の欠損、及び他の非皮膚軟組織の欠損を含む。例えば、ＵＳ９，２９５，６４８、ＵＳ８，９３２，６３７、ＵＳ８，８８２，６５４、ＵＳ９，３０８，３０１、ＵＳ７，７８０，９８０、ＣＡ２，１３３，７５６、ＵＳ６，０６０，０５３、ＵＳ８，３９４，４００、ＵＳ８，８２１，８５７、及びＵＳ６，６６０，３０１を参照のこと。それらの全てが、参照によりその全体において本明細書中に組み込まれる。

一態様では、本開示は、尿失禁を治療する方法を記載する。尿失禁は、地域社会全体及び医療現場の両方において、全ての年齢及び身体的健康のレベルの人々に影響を及ぼす一般的な問題である。医学的には、尿失禁によって、患者が尿路感染症、褥瘡、会陰部の発疹、及び尿路性敗血症に罹りやすくなる。社会的及び心理的には、尿失禁は、困惑、社会的汚名、うつ病に、特に高齢者については、施設収容の増加リスクに関連付けられる（Ｈｅｒｚｏｅｔａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｇｅｒｏｎｔａｌ．Ｇｅｒｉａｔｒｉｃｓ，９：７４（１９８９）を参照のこと）。尿失禁の型の例は、限定されないが、腹圧性失禁、内因性括約筋不全（ＩＳＤ）、切迫性尿失禁、溢流性尿失禁、及び遺尿症を含む。例えば、ＵＳ９，２９５，６４８、ＵＳ９，３０８，３０１、ＵＳ７，７８０，９８０、ＣＡ２，１３３，７５６、ＵＳ６，０６０，０５３、ＵＳ８，３９４，４００、及びＵＳ６，６６０，３０１を参照のこと。それらの全てが、参照によりその全体において本明細書中に組み込まれる。

一部の実施形態では、方法は、それを必要とする対象に、本開示の組成物を投与することを含む。一部の実施形態では、組成物は、尿失禁に関連付けられる組織中に注入される。一部の実施形態では、組織は尿道又は尿道括約筋である。一部の実施形態では、組織は、尿道又は尿道括約筋の一部である。一部の実施形態では、組成物の投与は、尿道もしくは尿道括約筋、又はその一部分のバルキングに導き、尿失禁を治療又は予防する。

一態様では、本開示は、胃食道逆流症（ＧＥＲＤ）を治療する方法を記載する。ＧＥＲＤは、胃から食道への酸性及び酵素的液体の逆流を記載する。それは、胃酸の口又はさらには肺中への逆流を伴い得る、胸骨の背後に灼熱感を起こす。疾患の重症度を定義するＧＥＲＤの合併症は、食道組織びらん、及び正常な上皮が病理学的組織により置換されている食道潰瘍を含む。例えば、ＵＳ９，２９５，６４８、ＵＳ９，３０８，３０１、及びＵＳ６，６６０，３０１を参照のこと。それらの全てが、参照によりその全体において本明細書中に組み込まれる。

一部の実施形態では、方法は、それを必要とする対象に、本開示の組成物を投与することを含む。一部の実施形態では、組成物は、胃食道逆流症に関連付けられる組織中に注入される。一部の実施形態では、組織は、下部食道括約筋又は横隔膜である。一部の実施形態では、組織は、下部食道括約筋又は横隔膜の一部分である。一部の実施形態では、組成物の投与は、尿道もしくは尿道括約筋、又はその一部分のバルキングに導き、胃食道逆流症を治療又は予防する。

一態様では、本開示は、膀胱尿管逆流症（尿逆流性疾患）を治療する方法を記載する。尿逆流性疾患、又はその医学用語における「膀胱尿管逆流症」は、単純に、尿が排尿中に尿管中で逆流することを意味する。この疾患は、しばしば、幼い子供において生じる。尿管は、腎臓と膀胱を接続する管である。尿は、腎臓から膀胱へ一方向に行くことになっている。尿が膀胱から腎臓に上がると、それは、患者にとって健康問題をもたらし得る。例えば、ＵＳ９，２９５，６４８、ＵＳ６，０６０，０５３、及びＵＳ８，３９４，４００を参照のこと。それらの全てが、参照によりその全体において本明細書中に組み込まれる。

一部の実施形態では、方法は、それを必要とする対象に、本開示の組成物を投与することを含む。一部の実施形態では、組成物は、膀胱尿管逆流症に関連付けられる組織中に注入される。一部の実施形態では、組織は尿道括約筋である。一部の実施形態では、組織は尿道括約筋の一部である。一部の実施形態では、組成物の投与は、尿道括約筋、又はその一部のバルキングに導き、膀胱尿管逆流症を治療又は予防する。

一態様では、本開示は、便失禁を治療する方法を記載する。便失禁は、高齢者において最も多く、直腸中に便を保持するための随意的制御の喪失である。大半の場合では、便失禁は、不随意の内肛門括約筋の障害の結果である。内括約筋は、弛緩又は断絶に起因して無能力であり得る。内肛門括約筋の断絶、又は断裂は、多数の異なる筋損傷により起こされ得る。例えば、ＵＳ８，８８２，６５４、ＵＳ９，３０８，３０１、及びＵＳ８，３９４，４００を参照のこと。それらの全てが、参照によりその全体において本明細書中に組み込まれる。

一部の実施形態では、方法は、それを必要とする対象に、本開示の組成物を投与することを含む。一部の実施形態では、組成物は、便失禁に関連付けられる組織中に注入される。一部の実施形態では、組織は直腸である。一部の実施形態では、組織は直腸の一部である。一部の実施形態では、組成物は直腸壁の領域中に投与される。一部の実施形態では、直腸壁の領域は、肛門括約筋の近傍にある。一部の実施形態では、組成物は、内括約筋中に投与される。一部の実施形態では、組成物の投与は、直腸、直腸壁、もしくは内括約筋、又はその一部のバルキングに導き、便失禁を治療又は予防する。

一態様では、本開示は、声帯組織の欠損又は喉頭の欠損を治療する方法を記載する。声帯組織の欠損又は喉頭の欠損の非限定的な例は、声門機能不全、片側声帯麻痺、両側声帯麻痺、麻痺性発声障害、非麻痺性発声障害、痙攣性発声障害、又はそれらの組み合わせを含む。他の実施形態では、本開示の方法はまた、例えば、声帯の不完全麻痺（「不全麻痺」）、一般的に衰弱した声帯、例えば、加齢に伴う（「老喉（ｐｒｅｓｂｙｌａｒｙｎｇｉｓ）」）、及び／又は声帯の瘢痕（例、以前の手術又は放射線療法からの）など、不適切に閉じる声帯をもたらす疾患、障害、又は他の異常を管理又は治療するために使用されうる。例えば、ＵＳ９，２９５，６４８、及びＵＳ８，８２１，８５７を参照のこと。それらの全てが、参照によりその全体において本明細書中に組み込まれる。

一部の実施形態では、方法は、それを必要とする対象に、本開示の組成物を投与することを含む。一部の実施形態では、組成物は、声帯組織の欠損又は喉頭の欠損に関連する組織中に注入される。一部の実施形態では、組織は声帯又は喉頭である。一部の実施形態では、組織は声帯又は喉頭の一部である。一部の実施形態では、組成物の投与は、声帯もしくは喉頭、又はその一部分のバルキングに導き、声帯組織欠損又は喉頭欠損を治療又は予防する。

一態様では、本開示は、皮膚欠損を治療する方法を記載する。老化、太陽及び他の要素への環境曝露、体重減少、妊娠、疾患、例えばざ瘡及び癌など、並びに手術に起因する皮膚への損傷は、しばしば、皮膚輪郭欠損及び他の皮膚異常をもたらす。皮膚欠損の非限定的な例は、ざ瘡及び癌を含む。一部の実施形態では、皮膚欠損は皮膚輪郭欠損である。皮膚輪郭欠損の例は、限定されないが、眉間のライン、額のライン、皺、目尻の皺、マリネットライン、ストレッチマーク、及び傷害、創傷、咬傷、手術、及び事故から生じる内又は外瘢痕を含む。例えば、ＵＳ９，２９５，６４８、ＵＳ８，９３２，６３７、ＵＳ８，８２１，８５７、及びＵＳ６，６６０，３０１を参照のこと。それらの全てが、参照によりその全体において本明細書中に組み込まれる。

一部の実施形態では、方法は、それを必要とする対象に、本開示の組成物を投与することを含む。一部の実施形態では、組成物は、皮膚欠損に関連付けられる組織中に注入される。一部の実施形態では、組織は皮膚である。一部の実施形態では、組織は皮膚の一部である。一部の実施形態では、組成物の投与は、皮膚、又はその一部の膨張に導き、皮膚欠損を治療又は予防する。

一態様では、本開示は、それを必要とする対象において皮膚増大を起こす方法を記載する。一部の実施形態では、方法は、本開示の組成物を対象に投与することを含む。一部の実施形態では、組成物は、皮膚中に又は皮膚の一部中に注入される。一部の実施形態では、本開示の皮膚増大方法は、特に、皮膚輪郭欠損の治療のために適切である。

一態様では、本開示は、対象において組織膨張を起こす方法を記載する。一部の実施形態では、方法は、それを必要とする対象に、本開示の組成物を投与することを含む。一部の実施形態では、組成物は、組織膨張を必要とする対象の領域中に注入される。一部の実施形態では、組織膨張は、対象における障害、疾患、又は状態を治療又は予防する。

本開示の一態様では、本明細書中に記載される組成物は、生分解性である。一部の実施形態では、組成物は、加水分解、タンパク質分解、酵素分解、身体における細胞の作用、又はそれらの組み合わせにより、生分解性である。一部の実施形態では、組成物は、酵素分解により生分解性である。一部の実施形態では、酵素はヒアルロニダーゼである。生分解は、患者中への導入後の組成物の容積における変化を検出するために、触知又は他の観察により測定され得る。一部の実施形態では、生分解が生じるのに適切な長さは、身体中への組成物の導入後１日～１２ヶ月の間である。一部の実施形態では、組成物は、１週間～３ヶ月及び２～８週間を含む、他の期間にわたり、定位置に留まり得る。一部の実施形態では、本明細書中に記載される組成物は、移植後約２ヶ月以内に生分解され得る。一部の実施形態では、組成物は、対象において生分解により除去される。

一態様では、本開示は、組織デバルキングの方法を記載する。非限定的な例では、本開示の生分解性組成物でバルキングされた組織は、組成物を分解させることによりデバルキングすることができる。一態様では、本明細書中に記載される方法は、さらに、組織デバルキング工程を含む。一部の実施形態では、デバルキング工程は、生体分解を起こす組成物を対象に投与することを含む。一部の実施形態では、組成物は、加水分解、タンパク質分解、酵素分解、身体における細胞の作用、又はそれらの組み合わせを起こす。一部の実施形態では、デバルキング工程は、酵素を含む組成物を対象に投与することを含む。一部の実施形態では、酵素はヒアルロニダーゼである。

本開示の一態様では、本明細書中に記載される組成物は、放射線不透過性である。本明細書中で使用される場合、用語「放射線不透過性」は、Ｘ線又は他の形態の放射線に対して透過性ではない材料を記載するために使用される。一部の実施形態では、組成物は、別の組織に投与される放射線を遮断することにより組織を保護する。一部の実施形態では、組成物は、放射線の約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約１００％を遮断する。一部の実施形態では、組織は、それが本明細書中に記載される組成物の非存在において有するであろうよりも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約１００％少ない放射線を受ける。

当業者により理解され得るように、本明細書中に記載される方法内で投与するための組成物の容積は、治療される組織及び互いから分離される組織の構成に依存的である。多くの場合では、約２０立方センチメートル（ｃｃ又はｍＬ）の容積が適切である。他の実施形態では、わずか１ｃｃが必要とされ得る。他の容積は、５～１０００ｃｃの範囲、並びに、その間の全ての範囲、例えば、５～４００ｃｃ、１０～３０ｃｃ、１５～２５ｃｃ、１０～１５０ｃｃ、２０～２００ｃｃ、１５～５００ｃｃ、５０～１０００ｃｃ、及び３０～２００ｃｃ中である。一部の実施形態では、本明細書中に記載される組成物は、組織が伸張して、充填剤を収容し、それにより、そうでなければ容易に可能でありうるよりも大きな容積の組成物を受けることが可能であるように、異なる時間で２用量で投与される。

送達デバイスの例は、シリンジである。本明細書中に記載される組成物は、シリンジ中に充填され、針を通して身体中に注入されることができる。別の例は、例えば、折り畳まれた、脱膨潤された、又は圧延された充填剤を受容し、針又はカテーテルを通して組成物を身体中に押し出す押し出し機構を提供するデバイスである。押し出しは、例えば、ハンドル、プランジャー、ガス、又は液体力により得る。

別の実施形態は、本明細書中に記載される組成物を身体中に導入するためのキットである。キットは、充填剤を身体に送達するための組成物及びデバイスを含み得る。実施形態は、使用のための説明書を含む。実施形態は、組成物と混合された又はそれから分離された麻酔薬を含む。実施形態は、送達デバイスがシリンジであるキットを含み、他の実施形態は、シリンジ用の針を含み、組成物及び／又は麻酔薬を投与するための針を含み得る。

説明書はキットに含まれ得る。説明書は、キットの使用においてユーザーに指示する言葉を含み得る。説明書は、キットに完全又は部分的に含まれ得るが、添付文書として、ラベル上、パッケージ上、パンフレット、セミナー資料、セミナーディスプレイ、インターネット教育コース中、又はインターネットもしくはイントラネットウェブサイト上を含む。例えば、キット上のラベルは、説明書を有するインターネットアドレスを参照することができ得る。説明書は、本明細書中に示される実施形態の説明を含み得る。説明書は、線量ヒストグラム、及び使用のための適切な充填剤容積の説明を含み得る。

一部の実施形態では、本開示は、炎症を低下させるために有用な組成物を提供する。一部の実施形態では、組成物は、さらに、抗炎症剤を含む。抗炎症剤の非限定的な例は、シクロスポリン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、デキサメタゾン、デキサメタゾン２１－リン酸、フルオシノロン、メドリゾン、プレドニゾロン、プレドニゾロン２１－リン酸、酢酸プレドニゾロン、フルオロメタロン、ベタメタゾン、及びトリアムシノロンを含む。一部の実施形態では、抗炎症剤はシクロスポリンである。

一部の実施形態では、本開示は、創傷治癒のために有用な組成物を提供する。一部の実施形態では、組成物は、さらに、創傷治癒剤を含む。創傷治癒剤の例は、抗生物質、消毒剤、創傷治癒剤、及び同様のものを含む。活性薬物の例は、フシン酸、センテリアアジアチカ、ムチロシン、ネオマイシン、バシトラシン、ゲンタマイシン、（ＦＧＦ）、肝線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、肝線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、肝線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、肝細胞増殖因子、増殖促進剤、例えば増殖因子（ＨＧＦ）及び指標細胞増殖因子（ＥＧＦ）など、及び同様のもの、好ましくはフシン酸又はその医薬的に許容可能な塩、アクリノール、及びトリクロサンを含む。

本開示の一態様では、本明細書中に記載される組成物は、生分解性である。一部の実施形態では、生分解は、加水分解、タンパク質分解、酵素分解、身体における細胞の作用、又はそれらの組み合わせによりもたらされる。一部の実施形態では、組成物は、酵素分解により生分解性である。一部の実施形態では、酵素分解は、ヒアルロニダーゼ酵素分解である。生分解は、患者中への導入後の組成物の容積における変化を検出するために、触知又は他の観察により測定され得る。一部の実施形態では、生分解が生じるのに適切な長さは、身体中への組成物の導入後１日～１２ヶ月の間である。一部の実施形態では、組成物は、１週間～３ヶ月及び２～８週間を含む、他の期間にわたり、定位置に留まり得る。一部の実施形態では、本明細書中に記載される組成物は、移植後約２ヶ月以内に生分解され得る。一部の実施形態では、組成物は、対象において生分解により除去される。一部の実施形態では、組成物は、インビボで生分解性である。

本開示の一態様では、組成物は、さらに、潤滑剤を含む。潤滑剤の非限定的な例は、グリセリン、ポリエチレングリコール４００（ＰＥＧ４００）、及びプロピレングリコールを含む。一部の実施形態では、潤滑剤は持続性潤滑剤である。一部の実施形態では、潤滑剤は、絹フィブロインもしくは絹フィブロイン断片又は絹フィブロインもしくは絹フィブロイン断片の一部を含む。

一部の実施形態では、絹フィブロインベースのタンパク質断片組成物は、さらに、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、シクロデキストリン、デキストラン、ゼラチン、カルボキシメチルセルロース、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ポリソルベート８０、ポリビニルアルコール、ポビドン、スクロース、フルクトース、マルトース、カラゲナン、キトサン、アルギン酸、ヒアルロン酸、アラビアゴム、ガラクトマンナン、ペクチン、及びそれらの組み合わせの群から選択される増粘剤又はゲル剤を含む。増粘剤を伴わないと、Ｏ／Ｗ乳剤は、一度、乳剤液滴の半径が０．５マイクロメートル超になると、クリーム化に対して不安定になる。

一部の実施形態では、絹フィブロインベースのタンパク質断片組成物は、約０．０１重量％～約１０．０重量％の増粘剤／ゲル化剤を含む。一部の実施形態では、絹フィブロインベースのタンパク質断片組成物は、約０．２重量％～約２．０重量％の増粘剤／ゲル化剤を含む。一部の実施形態では、絹フィブロインベースのタンパク質断片組成物は、絹フィブロインベースのタンパク質断片組成物に基づく約０．０１重量％、約０．１重量％、約０．２重量％、約０．３重量％、約０．４重量％、約０．５重量％、約０．６重量％、約０．７重量％、約０．８重量％、約０．９重量％、約１．０重量％、約１．１重量％、約１．２重量％、約１．３重量％、約１．４重量％、約１．５重量％、約１．６重量％、約１．７重量％、約１．８重量％、約１．９重量％、約２．０重量％、約２．１重量％、約２．２重量％、約２．３重量％、約２．４重量％、約２．５重量％、約２．６重量％、約２．７重量％、約２．８重量％、約２．９重量％、約３．０重量％、約３．１重量％、約３．２重量％、約３．３重量％、約３．４重量％、約３．５重量％、約３．６重量％、約３．７重量％、約３．８重量％、約３．９重量％、約４．０重量％、約４．１重量％、約４．２重量％、約４．３重量％、約４．４重量％、約４．５重量％、約４．６重量％、約４．７重量％、約４．８重量％、約４．９重量％、約５．０重量％、約５．１重量％、約５．２重量％、約５．３重量％、約５．４重量％、約５．５重量％、約５．６重量％、約５．７重量％、約５．８重量％、約５．９重量％、約６．０重量％、約６．１重量％、約６．２重量％、約６．３重量％、約６．４重量％、約６．５重量％、約６．６重量％、約６．７重量％、約６．８重量％、約６．９重量％、約７．０重量％、約７．１重量％、約７．２重量％、約７．３重量％、約７．４重量％、約７．５重量％、約７．６重量％、約７．７重量％、約７．８重量％、約７．９重量％、約８．０重量％、約８．１重量％、約８．２重量％、約８．３重量％、約８．４重量％、約８．５重量％、約８．６重量％、約８．７重量％、約８．８重量％、約８．９重量％、約９．０重量％、約９．１重量％、約９．２重量％、約９．３重量％、約９．４重量％、約９．５重量％、約９．６重量％、約９．７重量％、約９．８重量％、約９．９重量％、及び約１０．０重量％の群から選択される量で増粘剤／ゲル化剤を含む。

一部の実施形態では、増粘剤／ゲル化剤は、絹フィブロインベースのタンパク質断片組成物の総重量による約０．２重量％のヒアルロン酸である。

一部の実施形態では、絹ゲルを産生する場合、酸が、ゲル化の促進を助けるために使用される。一実施形態では、中性又は塩基性の分子及び／又は治療用薬剤を含む絹ゲルを産生する場合、酸を添加して、ゲル化を促進させることができる。一実施形態では、絹ゲルを産生する場合、ｐＨを増加させる（ゲルをより塩基性にする）ことによって、ゲルの保管安定性が増加する。一実施形態では、絹ゲルを産生する場合、ｐＨを増加させる（ゲルをより塩基性にする）ことによって、より多量の酸性分子をゲル中にロードすることが可能になる。

一部の実施形態では、絹ゲルは、絹フィブロインタンパク質ベースの断片及び本明細書中に記載される天然乳化剤により形成される、多層液晶ゲルネットワークを含む。多層液晶は生体模倣であり、バリア及び水保持機能としての役割を果たす。多層液晶ネットワークは、高ＨＬＢ一次乳化剤（例、親水性界面活性剤）と第二の低～中ＨＬＢ共乳化剤（例、疎水性界面活性剤）とを組み合わせることにより、水中油型乳化剤中に形成することができる。高ＨＬＢ一次乳化剤は、界面張力を低下させて、外側水相中での小さなオイル液滴の形成を促進する。低ＨＬＢ共乳化剤は、ゲルネットワークを形成する。このネットワーク構造は、オイル液滴のクリーム化及び合体を防止することにより、並びに粘度を構築することにより、エマルジョンを安定化する。

一部の実施形態では、エマルジョンの多層液晶ゲルネットワークは、さらに、アクリル酸ポリマー、カラギーナン、キサンタンガム、グアーガム、及びケイ酸アルミニウムマグネシウム、並びにそれらの組み合わせの群から選択される増粘剤を含む。一部の実施形態では、増粘剤は、カラギーナン、キサンタンガム、及びグアーガムである。一部の実施形態では、増粘剤は、エマルジョンの総重量による、約０．０５重量％～約０．５重量％の範囲の量でエマルジョン中に存在する。

一部の実施形態では、絹フィブロインベースのタンパク質断片は、絹ゲルの総重量による、約０．００１重量％～約１０．０重量％の範囲の重量で絹ゲル中に存在する。一部の実施形態では、絹フィブロインベースのタンパク質断片は、絹ゲルの総重量による、約０．００１重量％～約５．０重量％の範囲の重量で絹ゲル中に存在する。一部の実施形態では、絹フィブロインベースのタンパク質断片は、絹ゲルの総重量による、約０．００１重量％～約１．０重量％の範囲の重量で絹ゲル中に存在する。一部の実施形態では、絹フィブロインベースのタンパク質断片は、絹ゲルの総重量による、約１０重量％の範囲の重量で絹ゲル中に存在する。

一態様では、本開示は、それを必要とする対象における障害、疾患、又は状態の治療又は予防の方法を記載する。一部の実施形態では、本方法は、本開示の組成物を対象に投与することを含む。

本明細書中で開示される実施形態を、さらに、添付の図面を参照して説明する。示した図面は必ずしもスケール通りではなく、代わり、一般的に、本明細書中で開示される実施形態の原理を例証する際に強調がなされている。

図１は、本開示の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片（ＳＰＦ）を産生するための様々な実施形態を示すフローチャートである。図２は、抽出及び溶解工程の間に、本開示のＳＰＦを産生するプロセスの間に改変することができる様々なパラメータを示すフローチャートである。図３は、本開示の絹タンパク質溶液中でのＬｉＢｒ及び炭酸ナトリウム（Ｎａ_２ＣＯ_３）の濃度をまとめた表である。図４は、本開示の絹タンパク質溶液中でのＬｉＢｒ及びＮａ_２ＣＯ_３の濃度をまとめた表である。図５は、本開示の絹タンパク質溶液の分子量をまとめた表である。図６は、質量損失％に対する抽出容積の効果を表すグラフである。図７は、質量損失％に対する抽出容積の効果を表すグラフである。図８は、異なる濃度のＬｉＢｒ、並びに異なる抽出及び溶解サイズから溶解された絹の分子量をまとめた表である。図９は、１００℃の抽出温度、１００℃のＬｉＢｒ、及び１００℃のオーブン溶解の条件下で処理された絹の分子量に対する抽出時間の効果をまとめたグラフである（オーブン／溶解時間を変動させた）。図１０は、１００℃の抽出温度、沸騰ＬｉＢｒ、及び６０℃のオーブン溶解の条件下で処理された絹の分子量に対する抽出時間の効果をまとめたグラフである（オーブン／溶解時間を変動させた）。図１１は、１００℃の抽出温度、６０℃のＬｉＢｒ、及び６０℃のオーブン溶解の条件下で処理された絹の分子量に対する抽出時間の効果をまとめたグラフである（オーブン／溶解時間を変動させた）。図１２は、１００℃の抽出温度、８０℃のＬｉＢｒ、及び８０℃のオーブン溶解の条件下で処理された絹の分子量に対する抽出時間の効果をまとめたグラフである（オーブン／溶解時間を変動させた）。図１３は、１００℃の抽出温度、８０℃のＬｉＢｒ、及び６０℃のオーブン溶解の条件下で処理された絹の分子量に対する抽出時間の効果をまとめたグラフである（オーブン／溶解時間を変動させた）。図１４は、１００℃の抽出温度、１００℃のＬｉＢｒ、及び６０℃のオーブン溶解の条件下で処理された絹の分子量に対する抽出時間の効果をまとめたグラフである（オーブン／溶解時間を変動させた）。図１５は、１００℃の抽出温度、１４０℃のＬｉＢｒ、及び１４０℃のオーブン溶解の条件下で処理された絹の分子量に対する抽出時間の効果をまとめたグラフである（オーブン／溶解時間を変動させた）。図１６は、６０分間の抽出時間、１００℃のＬｉＢｒ、及び１００℃のオーブン溶解の条件下で処理された絹の分子量に対する抽出温度の効果をまとめたグラフである（オーブン／溶解時間を変動させた）。図１７は、６０分間の抽出時間、１００℃の抽出温度、及び６０℃のオーブン溶解の条件下で処理された絹の分子量に対するＬｉＢｒ温度の効果をまとめたグラフである（オーブン／溶解時間を変動させた）。図１８は、３０分間の抽出時間、１００℃の抽出温度、及び６０℃のオーブン溶解の条件下で処理された絹の分子量に対するＬｉＢｒ温度の効果をまとめたグラフである（オーブン／溶解時間を変動させた）。図１９は、１００℃の抽出温度、３０分間の抽出時間、及び１００℃の臭化リチウムの条件下で処理された絹の分子量に対するオーブン／溶解温度の効果をまとめたグラフである（オーブン／溶解時間を変動させた）。図２０は、１００℃の抽出温度、６０分間の抽出時間、及び１００℃の臭化リチウムの条件下で処理された絹の分子量に対するオーブン／溶解温度の効果をまとめたグラフである。（オーブン／溶解時間を変動させた）。図２１は、１００℃の抽出温度、６０分間の抽出時間、及び１４０℃の臭化リチウムの条件下で処理された絹の分子量に対するオーブン／溶解温度の効果をまとめたグラフである（オーブン／溶解時間を変動させた）。図２２は、１００℃の抽出温度、３０分間の抽出時間、及び１４０℃の臭化リチウムの条件下で処理された絹の分子量に対するオーブン／溶解温度の効果をまとめたグラフである（オーブン／溶解時間を変動させた）。図２３は、１００℃の抽出温度、６０分間の抽出時間、及び８０℃の臭化リチウムの条件下で処理された絹の分子量に対するオーブン／溶解温度の効果をまとめたグラフである（オーブン／溶解時間を変動させた）。図２４は、抽出時間、抽出温度、臭化リチウム（ＬｉＢｒ）温度、溶解のためのオーブン温度、溶解のためのオーブン時間を含む、変動する条件下で処理された絹の分子量をまとめたグラフである。図２５は、オーブン／溶解温度がＬｉＢｒ温度に等しい条件下で処理された絹の分子量をまとめたグラフである。図２６は、水又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中の様々な濃度での絹／ＨＡ水性製剤の写真であり、絹／ＨＡ製剤が、均質で不透明な溶液をもたらすことを実証している。最初のマークのないバイアルが、対照バイアル（水中２２ｍｇ／ｍＬのＨＡ）である。図２７は、シリンジ中に沈着された絹／ＨＡ水性製剤の写真であり、絹／ＨＡ製剤が、均質で不透明な溶液をもたらすことを実証している。対照は、水中２２ｍｇ／ｍＬのＨＡの溶液である。図２８は、絹－ＨＡ及びＨＡヒドロゲルの分解プロファイルを描写するチャートである。図２９は、対照皮膚充填剤（リドカインを含む商業的に入手可能なＨＡ充填剤）を注入したモルモットにおける皮内領域の写真である；増加した炎症の程度は、肉芽腫領域の範囲により反映される。商業的に入手可能な充填剤は、青色／灰色の物質として記述される。この物質に関連付けられる肉芽腫性炎症は、７日目に観察することができる。図３０は、対照皮膚充填剤（リドカインを含む商業的に入手可能なＨＡ充填剤）を注入したモルモットにおける皮内領域の写真である；商業的に入手可能な製品は、青色／灰色の物質として記述される。３０日目に、線維症を伴う炎症を観察することができる。図３１は、本発明の絹－ＨＡ皮膚充填剤を注入したモルモットにおける皮内領域の写真である（２４ｍｇ／ｍｌのＨＡ、９．６ｍｇ／ｍｌの絹、ＢＤＤＥ架橋）；対照注入と比較した肉芽腫性領域の低下は、無視できるほどの急性炎症応答、及び、対照と比較して、絹－ＨＡ充填剤のより良好な生分解性を示す。７日目ではほとんど炎症がない。炎症は局所的であり、時折、見つけるのが困難である。インプラント材料は記述されない。図３２は、本発明の絹－ＨＡ皮膚充填剤を注入したモルモットにおける皮内領域の写真である（２４ｍｇ／ｍｌのＨＡ、９．６ｍｇ／ｍｌの絹、ＢＤＤＥ架橋）；３０日目、炎症は見つけるのが極めて困難で、最小限である。インプラント材料は記述されない。図３３は、本発明の絹－ＨＡ皮膚充填剤を注入したモルモットにおける皮内領域の写真である（２４ｍｇ／ｍｌのＨＡ、０．４８ｍｇ／ｍｌの絹、ＢＤＤＥ架橋）；充填剤は、７日間で局所的な軽度の炎症をもたらす。炎症は慢性的である。この炎症は、それが局所的で最小限あったため、同定するために綿密な評価を要求した。インプラント材料は観察されない。図３４は、本発明の絹－ＨＡ皮膚充填剤を注入したモルモットにおける皮内領域の写真である（２４ｍｇ／ｍｌのＨＡ、０．４８ｍｇ／ｍｌの絹、ＢＤＤＥ架橋）；３０日目の画像は、さらに少ない炎症を実証する。７日目のインプラントと比較し、同定することがさらにより困難であった。インプラント材料は観察されない。図３５は、絹－ＨＡヒドロゲルの濁度測定値を描写するチャートである。黒色曲線（ａ）：標準透過；赤色曲線（ｂ）：透過＋前方散乱。図３６は、絹を伴わないＨＡヒドロゲルの濁度測定値を描写するチャートである。黒色曲線（ａ）：標準透過；赤色曲線（ｂ）：透過＋前方散乱。図３７は、対照皮膚充填剤を注入したモルモットにおける皮内領域の代表的な組織学的写真である。図３８は、本発明のＨＡ皮膚充填剤を注入したモルモットにおける皮内領域の代表的な組織学的写真である（２４ｍｇ／ｍｌのＨＡ、ＰＥＧＤＥ架橋、サンプルＣ４－表２５）。図３９は、本発明の絹－ＨＡ皮膚充填剤を注入したモルモットにおける皮内領域の代表的な組織学的写真である（２２．８ｍｇ／ｍｌのＨＡ、１．２ｍｇ／ｍｌの絹、ＰＥＧＤＥ架橋、サンプルＬ－表２５）。図４０は、本発明の絹－ＨＡ皮膚充填剤を注入したモルモットにおける皮内領域の代表的な組織学的写真である（２３．７６ｍｇ／ｍｌのＨＡ、０．２４ｍｇ／ｍｌの絹、ＰＥＧＤＥ架橋、サンプルＭ－表２５）。図４１は、本発明の絹－ＨＡ皮膚充填剤を注入したモルモットにおける皮内領域の代表的な組織学的写真である（２２．８ｍｇ／ｍｌのＨＡ、１．２ｍｇ／ｍｌの絹、ＰＥＧＤＥ架橋、サンプルＮ－表２５）。図４２は、本発明の絹－ＨＡ皮膚充填剤を注入したモルモットにおける皮内領域の代表的な組織学的写真である（２２．８ｍｇ／ｍｌのＨＡ、１．２ｍｇ／ｍｌの絹、ＰＥＧＤＥ架橋、サンプルＯ－表２５）。図４３は、ゲル分解についての、移植後７日間目の組織学的結果を示すグラフである（表２５の製剤－ＢＤＤＥ架橋製剤は大部分が分解される；スコア：０－正常；１－最小；２－軽度；３－中程度；及び４－重度）。図４４は、ゲル移動についての、移植後７日間目の組織学的結果を示すグラフである（表２５の製剤－スコア：０－正常；１－最小；２－軽度；３－中程度；及び４－重度）。図４５は、炎症についての、移植後７日間目の組織学的結果を示すグラフである（表２５の製剤－組織壊死は観察されなかった。血液凝固は観察されなかった。及び、最小限のコラーゲン沈着が、対照製剤及びテスト製剤の一部で観察された；スコア：０－正常；１－最小；２－軽度；３－中程度；及び４－重度）。図４６は、マクロファージについての、移植後７日目の組織学的結果を示すグラフである（表２５の製剤－スコア：０－正常；１－最小；２－軽度；３－中程度；及び４－重度）。図４７Ａは、透析前後の、様々な絹濃度を伴うヒドロゲルのＧ’を示す。図４７Ａ：１００ｍｇ／ｍｌで架橋された混合ＨＡ、及び図４７Ｂ：２５ｍｇ／ｍｌで架橋された単一ＭＷＨＡ。図４７Ｂは、透析前後の、様々な絹濃度を伴うヒドロゲルのＧ’を示す。図４７Ａ：１００ｍｇ／ｍｌで架橋された混合ＨＡ、及び図４７Ｂ：２５ｍｇ／ｍｌで架橋された単一ＭＷＨＡ。図４８Ａは、透析の間での様々な絹濃度を伴うヒドロゲルの膨潤比を示す。図４８Ａ：１００ｍｇ／ｍｌで架橋された混合ＨＡ、及び図４８Ｂ：２５ｍｇ／ｍｌで架橋された単一ＭＷＨＡ。図４８Ｂは、透析の間での様々な絹濃度を伴うヒドロゲルの膨潤比を示す。図４８Ａ：１００ｍｇ／ｍｌで架橋された混合ＨＡ、及び図４８Ｂ：２５ｍｇ／ｍｌで架橋された単一ＭＷＨＡ。図４９Ａは、それぞれ、中分子量及び低分子量の絹溶液についての較正曲線を示す。図４９Ｂは、それぞれ、中分子量及び低分子量の絹溶液についての較正曲線を示す。図５０Ａは、未知の絹濃度を伴う、希釈された絹－ＨＡゲルの吸光度スペクトルを示す；理論上の絹濃度（ｍｇ／ｍｌ）が、表２６中の各々の絹－ＨＡゲルサンプルについて示されている。図５０Ｂは、未知の絹濃度を伴う、希釈された絹－ＨＡゲルの吸光度スペクトルを示す；理論上の絹濃度（ｍｇ／ｍｌ）が、表２６中の各々の絹－ＨＡゲルサンプルについて示されている。図５１は、絹を伴わない（赤色；全波長間隔にわたるより高い透過率）及び３ｍｇ／ｍＬの絹を伴う（青色；全波長間隔にわたるより低い透過率）ＨＡヒドロゲルの濁度測定を示し；より高い透過率は、濁りがより少ないサンプルを示し、より少ない光学的不透明度を伴う。図５２は、ＰＥＧで架橋された絹フィブロイン断片のシグニチャーイオンを例証する（ＬＣＭＳ／ＭＳスペクトルは、ＰＥＧで架橋された絹のシグニチャーイオンを示す）。図５３Ａは、半定量的評価を例証する（より低いスコアほど良い；対照群での合計スコア６．９及びテスト群での合計スコア３．８）；７日間の組織学的画像：Ｊｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）（図５３Ａ）及び絹皮膚充填剤（図５３Ｂ）。図５３Ｂは、半定量的評価を例証する（より低いスコアほど良い；対照群での合計スコア６．９及びテスト群での合計スコア３．８）；７日間の組織学的画像：Ｊｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）（図５３Ａ）及び絹皮膚充填剤（図５３Ｂ）。図５４は、１ｍｌシリンジ中の絹皮膚充填剤を示し、細い絹線維が懸濁された混濁ヒドロゲルを示す。図５５Ａは、Ｇ’についてのテスト結果及び注入力を例証する。絹－ＨＡヒドロゲルの貯蔵弾性率Ｇ’（図５５Ａ）、改変度ＭｏＤ（図５５Ｂ）、及び注入力（図５５Ｃ、３０ゲージ針）は、製剤中の絹及びＨＡの総量に対する絹の比率の関数として表される（％絹＝１００＊（絹濃度）／（絹及びＨＡの合計濃度））。全ての製剤についてＨＡ濃度＝２４．７ｍｇ／ｍｌであり、ＰＥＧは、～３０％ｗ／ｗで存在する。図５５Ａ及び図５５Ｃについて、三つのサンプルの平均±標準偏差をプロットしている。図５５Ｂでは、複数のヒドロゲルサンプルを、各々の測定値について組み合わせた。図５５Ｂは、Ｇ’についてのテスト結果及び注入力を例証する。絹－ＨＡヒドロゲルの貯蔵弾性率Ｇ’（図５５Ａ）、改変度ＭｏＤ（図５５Ｂ）、及び注入力（図５５Ｃ、３０ゲージ針）は、製剤中の絹及びＨＡの総量に対する絹の比率の関数として表される（％絹＝１００＊（絹濃度）／（絹及びＨＡの合計濃度））。全ての製剤についてＨＡ濃度＝２４．７ｍｇ／ｍｌであり、ＰＥＧは、～３０％ｗ／ｗで存在する。図５５Ａ及び図５５Ｃについて、三つのサンプルの平均±標準偏差をプロットしている。図５５Ｂでは、複数のヒドロゲルサンプルを、各々の測定値について組み合わせた。図５５Ｃは、Ｇ’についてのテスト結果及び注入力を例証する。絹－ＨＡヒドロゲルの貯蔵弾性率Ｇ’（図５５Ａ）、改変度ＭｏＤ（図５５Ｂ）、及び注入力（図５５Ｃ、３０ゲージ針）は、製剤中の絹及びＨＡの総量に対する絹の比率の関数として表される（％絹＝１００＊（絹濃度）／（絹及びＨＡの合計濃度））。全ての製剤についてＨＡ濃度＝２４．７ｍｇ／ｍｌであり、ＰＥＧは、～３０％ｗ／ｗで存在する。図５５Ａ及び図５５Ｃについて、三つのサンプルの平均±標準偏差をプロットしている。図５５Ｂでは、複数のヒドロゲルサンプルを、各々の測定値について組み合わせた。図５６は、１００超の皮膚充填剤候補の貯蔵弾性率Ｇ’及び注入力ＩＦについてのテスト結果を例証する。（青色の点）：３０Ｇ×１／２針を通して測定されたＩＦ、（オレンジ色の点）：２７Ｇ×１／２針を通して測定したＩＦ。ＨＡ及び絹の総濃度は、１５ｍｇ／ｍＬ～２６ｍｇ／ｍＬの範囲である。図５７は、絹を伴って（実線）及び絹を伴わず（点線）製剤化されたＨＡヒドロゲル、並びに競合ヒドロゲル製品（Ｊｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ、破線）の吸収スペクトルを例証する。各々のヒドロゲルについての三つの測定値の平均をプロットしている。図５８Ａは、ＡＳ－Ｖ１（白色）又はＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（黒色）について、インビトロでのヒドロゲルの可逆性を例証する。各々のヒドロゲル約１ｇを、１５０Ｕヒアルロニダーゼで、３７℃で３０分間にわたり消化し、残存ゲルの重量を測定した。このプロセスを、１２０分間にわたり合計６００Ｕのヒアルロニダーゼについて、さらに三回繰り返した。ヒドロゲルの分解度は、元のヒドロゲルに対する残存ヒドロゲルの重量比（％）により表される。各々の時点での３サンプルの平均±標準偏差がプロットされている。図５８Ｂは、ＡＳ－Ｖ１（白色）又はＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（黒色）について、インビトロでのヒドロゲルの可逆性を例証する。各々のヒドロゲル注入部位の０．１ｍＬを、０．１ｍＬのヒアルロニダーゼで消化し、３０分間にわたり観察して、残りのボーラスに基づいて可逆性を判定した。追加の可逆性注入の回数は、追加のヒアルロニダーゼ注入の回数により表した。例の６１％及び４７％で、ＡＳ－Ｖ１及びＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣは、それぞれ１回の可逆性注入だけが必要であった。図５９は、ＡＳ－Ｖ１（白色）又はＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（黒色）を注入したモルモットについて、Ｄｒａｉｚｅ皮膚刺激性テストの結果を例証する。６匹の動物を各々の時点でテストした（注入後１～５日目）；各々の動物は、背部真皮において約１ｃｍの間隔で、０．１ｍＬのＡＳ－Ｖ１の３回の注入及びＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣの３回の注入を受けた。プロットされたデータは、毎日の平均スコア±標準偏差である；最大可能スコアは８である。図６０Ａは、ＡＳ－Ｖ１（上の円、青色で示される）又はＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（下の円、赤色で示される）を注入されたモルモットにおける注入後のあざについてのテスト結果を例証する。図６０Ａ及び６０Ｂは、注入後３日目のテスト結果を示す。図６０Ｃ及び６０Ｄは、注入後４日目のテスト結果を示す。６匹の動物を各々の時点でテストした（注入後３及び４日目）；各々の動物は、背部真皮において１ｃｍの間隔で、０．１ｍＬのＡＳ－Ｖ１の３回の注入及びＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣの３回の注入を受けた。２匹の動物からの代表的な打撲像（図６０Ａ及び図６０Ｂ、又は図６０Ｃ及び図６０Ｄ）を示している。図６０Ｂは、ＡＳ－Ｖ１（上の円、青色で示される）又はＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（下の円、赤色で示される）を注入されたモルモットにおける注入後のあざについてのテスト結果を例証する。図６０Ａ及び６０Ｂは、注入後３日目のテスト結果を示す。図６０Ｃ及び６０Ｄは、注入後４日目のテスト結果を示す。６匹の動物を各々の時点でテストした（注入後３及び４日目）；各々の動物は、背部真皮において１ｃｍの間隔で、０．１ｍＬのＡＳ－Ｖ１の３回の注入及びＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣの３回の注入を受けた。２匹の動物からの代表的な打撲像（図６０Ａ及び図６０Ｂ、又は図６０Ｃ及び図６０Ｄ）を示している。図６０Ｃは、ＡＳ－Ｖ１（上の円、青色で示される）又はＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（下の円、赤色で示される）を注入されたモルモットにおける注入後のあざについてのテスト結果を例証する。図６０Ａ及び６０Ｂは、注入後３日目のテスト結果を示す。図６０Ｃ及び６０Ｄは、注入後４日目のテスト結果を示す。６匹の動物を各々の時点でテストした（注入後３及び４日目）；各々の動物は、背部真皮において１ｃｍの間隔で、０．１ｍＬのＡＳ－Ｖ１の３回の注入及びＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣの３回の注入を受けた。２匹の動物からの代表的な打撲像（図６０Ａ及び図６０Ｂ、又は図６０Ｃ及び図６０Ｄ）を示している。図６０Ｄは、ＡＳ－Ｖ１（上の円、青色で示される）又はＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（下の円、赤色で示される）を注入されたモルモットにおける注入後のあざについてのテスト結果を例証する。図６０Ａ及び６０Ｂは、注入後３日目のテスト結果を示す。図６０Ｃ及び６０Ｄは、注入後４日目のテスト結果を示す。６匹の動物を各々の時点でテストした（注入後３及び４日目）；各々の動物は、背部真皮において１ｃｍの間隔で、０．１ｍＬのＡＳ－Ｖ１の３回の注入及びＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣの３回の注入を受けた。２匹の動物からの代表的な打撲像（図６０Ａ及び図６０Ｂ、又は図６０Ｃ及び図６０Ｄ）を示している。図６１Ａ～Ｄは、炎症（図６１Ａ）、インビボヒドロゲル可逆性（分解、図６１Ｂ及び６１Ｄ）、及びＡＳ－Ｖ１（実線）又はＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（破線）での注入後のヒドロゲル移動（図６１Ｃ及び６１Ｅ）についての動物テスト結果を例証する。６匹の動物を、各々の時点でテストした（注入後７日、３０日、３ヶ月、６ヶ月、及び１２ヶ月）；各々の動物は、背部真皮において約１ｃｍの間隔で、０．１ｍＬのＡＳ－Ｖ１の３回の注入及びＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣの３回の注入を受けた。モルモットの背部真皮からの組織切片を、ヘマトキシリン及びエオシンで染色し、代表的な切片を、盲検化された病理医によりスコア化した。プロットされたデータは、各々の時点での平均評価スコア±標準偏差である。炎症については、最大可能スコアは２８であり、ヒドロゲル分解及び移動については、最大可能スコアは４である。図６１Ｆは、ＡＳ－Ｖ１（実線）又はＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（破線）を用いた炎症応答についてのテスト結果を例証する。６匹の動物を、各々の時点でテストした（注入後７日、３０日、９０日、１８０日、及び３６５日）；各々の動物は、背部真皮において～１ｃｍの間隔で、０．１ｍＬのＡＳ－Ｖ１の３回の注入及びＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣの３回の注入を受けた。モルモットの背部真皮からの組織切片を、ヘマトキシリン及びエオシンで染色し、代表的な切片を、盲検化された病理医によりスコア化した。プロットされたデータは、各々の時点での平均評価スコア±標準偏差である。炎症については、最大可能スコアは２８である。図６１Ｂは、炎症（図６１Ａ）、インビボヒドロゲル可逆性（分解、図６１Ｂ及び６１Ｄ）、及びＡＳ－Ｖ１（実線）又はＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（破線）での注入後のヒドロゲル移動（図６１Ｃ及び６１Ｅ）についての動物テスト結果を例証する。６匹の動物を、各々の時点でテストした（注入後７日、３０日、３ヶ月、６ヶ月、及び１２ヶ月）；各々の動物は、背部真皮において約１ｃｍの間隔で、０．１ｍＬのＡＳ－Ｖ１の３回の注入及びＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣの３回の注入を受けた。モルモットの背部真皮からの組織切片を、ヘマトキシリン及びエオシンで染色し、代表的な切片を、盲検化された病理医によりスコア化した。プロットされたデータは、各々の時点での平均評価スコア±標準偏差である。炎症については、最大可能スコアは２８であり、ヒドロゲル分解及び移動については、最大可能スコアは４である。図６１Ｆは、ＡＳ－Ｖ１（実線）又はＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（破線）を用いた炎症応答についてのテスト結果を例証する。６匹の動物を、各々の時点でテストした（注入後７日、３０日、９０日、１８０日、及び３６５日）；各々の動物は、背部真皮において～１ｃｍの間隔で、０．１ｍＬのＡＳ－Ｖ１の３回の注入及びＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣの３回の注入を受けた。モルモットの背部真皮からの組織切片を、ヘマトキシリン及びエオシンで染色し、代表的な切片を、盲検化された病理医によりスコア化した。プロットされたデータは、各々の時点での平均評価スコア±標準偏差である。炎症については、最大可能スコアは２８である。図６１Ｃは、炎症（図６１Ａ）、インビボヒドロゲル可逆性（分解、図６１Ｂ及び６１Ｄ）、及びＡＳ－Ｖ１（実線）又はＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（破線）での注入後のヒドロゲル移動（図６１Ｃ及び６１Ｅ）についての動物テスト結果を例証する。６匹の動物を、各々の時点でテストした（注入後７日、３０日、３ヶ月、６ヶ月、及び１２ヶ月）；各々の動物は、背部真皮において約１ｃｍの間隔で、０．１ｍＬのＡＳ－Ｖ１の３回の注入及びＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣの３回の注入を受けた。モルモットの背部真皮からの組織切片を、ヘマトキシリン及びエオシンで染色し、代表的な切片を、盲検化された病理医によりスコア化した。プロットされたデータは、各々の時点での平均評価スコア±標準偏差である。炎症については、最大可能スコアは２８であり、ヒドロゲル分解及び移動については、最大可能スコアは４である。図６１Ｆは、ＡＳ－Ｖ１（実線）又はＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（破線）を用いた炎症応答についてのテスト結果を例証する。６匹の動物を、各々の時点でテストした（注入後７日、３０日、９０日、１８０日、及び３６５日）；各々の動物は、背部真皮において～１ｃｍの間隔で、０．１ｍＬのＡＳ－Ｖ１の３回の注入及びＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣの３回の注入を受けた。モルモットの背部真皮からの組織切片を、ヘマトキシリン及びエオシンで染色し、代表的な切片を、盲検化された病理医によりスコア化した。プロットされたデータは、各々の時点での平均評価スコア±標準偏差である。炎症については、最大可能スコアは２８である。図６１Ｄは、炎症（図６１Ａ）、インビボヒドロゲル可逆性（分解、図６１Ｂ及び６１Ｄ）、及びＡＳ－Ｖ１（実線）又はＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（破線）での注入後のヒドロゲル移動（図６１Ｃ及び６１Ｅ）についての動物テスト結果を例証する。６匹の動物を、各々の時点でテストした（注入後７日、３０日、３ヶ月、６ヶ月、及び１２ヶ月）；各々の動物は、背部真皮において約１ｃｍの間隔で、０．１ｍＬのＡＳ－Ｖ１の３回の注入及びＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣの３回の注入を受けた。モルモットの背部真皮からの組織切片を、ヘマトキシリン及びエオシンで染色し、代表的な切片を、盲検化された病理医によりスコア化した。プロットされたデータは、各々の時点での平均評価スコア±標準偏差である。炎症については、最大可能スコアは２８であり、ヒドロゲル分解及び移動については、最大可能スコアは４である。図６１Ｆは、ＡＳ－Ｖ１（実線）又はＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（破線）を用いた炎症応答についてのテスト結果を例証する。６匹の動物を、各々の時点でテストした（注入後７日、３０日、９０日、１８０日、及び３６５日）；各々の動物は、背部真皮において～１ｃｍの間隔で、０．１ｍＬのＡＳ－Ｖ１の３回の注入及びＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣの３回の注入を受けた。モルモットの背部真皮からの組織切片を、ヘマトキシリン及びエオシンで染色し、代表的な切片を、盲検化された病理医によりスコア化した。プロットされたデータは、各々の時点での平均評価スコア±標準偏差である。炎症については、最大可能スコアは２８である。図６１Ｅは、炎症（図６１Ａ）、インビボヒドロゲル可逆性（分解、図６１Ｂ及び６１Ｄ）、及びＡＳ－Ｖ１（実線）又はＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（破線）での注入後のヒドロゲル移動（図６１Ｃ及び６１Ｅ）についての動物テスト結果を例証する。６匹の動物を、各々の時点でテストした（注入後７日、３０日、３ヶ月、６ヶ月、及び１２ヶ月）；各々の動物は、背部真皮において約１ｃｍの間隔で、０．１ｍＬのＡＳ－Ｖ１の３回の注入及びＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣの３回の注入を受けた。モルモットの背部真皮からの組織切片を、ヘマトキシリン及びエオシンで染色し、代表的な切片を、盲検化された病理医によりスコア化した。プロットされたデータは、各々の時点での平均評価スコア±標準偏差である。炎症については、最大可能スコアは２８であり、ヒドロゲル分解及び移動については、最大可能スコアは４である。図６１Ｆは、ＡＳ－Ｖ１（実線）又はＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（破線）を用いた炎症応答についてのテスト結果を例証する。６匹の動物を、各々の時点でテストした（注入後７日、３０日、９０日、１８０日、及び３６５日）；各々の動物は、背部真皮において～１ｃｍの間隔で、０．１ｍＬのＡＳ－Ｖ１の３回の注入及びＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣの３回の注入を受けた。モルモットの背部真皮からの組織切片を、ヘマトキシリン及びエオシンで染色し、代表的な切片を、盲検化された病理医によりスコア化した。プロットされたデータは、各々の時点での平均評価スコア±標準偏差である。炎症については、最大可能スコアは２８である。図６１Ｆは、炎症（図６１Ａ）、インビボヒドロゲル可逆性（分解、図６１Ｂ及び６１Ｄ）、及びＡＳ－Ｖ１（実線）又はＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（破線）での注入後のヒドロゲル移動（図６１Ｃ及び６１Ｅ）についての動物テスト結果を例証する。６匹の動物を、各々の時点でテストした（注入後７日、３０日、３ヶ月、６ヶ月、及び１２ヶ月）；各々の動物は、背部真皮において約１ｃｍの間隔で、０．１ｍＬのＡＳ－Ｖ１の３回の注入及びＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣの３回の注入を受けた。モルモットの背部真皮からの組織切片を、ヘマトキシリン及びエオシンで染色し、代表的な切片を、盲検化された病理医によりスコア化した。プロットされたデータは、各々の時点での平均評価スコア±標準偏差である。炎症については、最大可能スコアは２８であり、ヒドロゲル分解及び移動については、最大可能スコアは４である。図６１Ｆは、ＡＳ－Ｖ１（実線）又はＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（破線）を用いた炎症応答についてのテスト結果を例証する。６匹の動物を、各々の時点でテストした（注入後７日、３０日、９０日、１８０日、及び３６５日）；各々の動物は、背部真皮において～１ｃｍの間隔で、０．１ｍＬのＡＳ－Ｖ１の３回の注入及びＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣの３回の注入を受けた。モルモットの背部真皮からの組織切片を、ヘマトキシリン及びエオシンで染色し、代表的な切片を、盲検化された病理医によりスコア化した。プロットされたデータは、各々の時点での平均評価スコア±標準偏差である。炎症については、最大可能スコアは２８である。図６２Ａ～Ｊは、ＡＳ－Ｖ１（テスト）上列（Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｇ、及びＩ）とＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（対照）下列（Ｂ、Ｄ、Ｆ、Ｈ、及びＪ）を比較するＧＬＰモルモット試験での代表的な組織学スライドを例証する。サンプルＡ及びＢは、それぞれ７日目のテスト及び対照を表し、サンプルＣ及びＤは、それぞれ３０日目のテスト及び対照を表し、サンプルＤ及びＦは、それぞれ９０日目のテスト及び対照を表し、サンプルＧ及びＨは、それぞれ１８０日目のテスト及び対照を表し、ならびにサンプルＩ及びＪは、それぞれ３６５日目のテスト及び対照を表す。図６２Ｂは、ＡＳ－Ｖ１（テスト）上列（Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｇ、及びＩ）とＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（対照）下列（Ｂ、Ｄ、Ｆ、Ｈ、及びＪ）を比較するＧＬＰモルモット試験での代表的な組織学スライドを例証する。サンプルＡ及びＢは、それぞれ７日目のテスト及び対照を表し、サンプルＣ及びＤは、それぞれ３０日目のテスト及び対照を表し、サンプルＤ及びＦは、それぞれ９０日目のテスト及び対照を表し、サンプルＧ及びＨは、それぞれ１８０日目のテスト及び対照を表し、ならびにサンプルＩ及びＪは、それぞれ３６５日目のテスト及び対照を表す。図６２Ｃは、ＡＳ－Ｖ１（テスト）上列（Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｇ、及びＩ）とＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（対照）下列（Ｂ、Ｄ、Ｆ、Ｈ、及びＪ）を比較するＧＬＰモルモット試験での代表的な組織学スライドを例証する。サンプルＡ及びＢは、それぞれ７日目のテスト及び対照を表し、サンプルＣ及びＤは、それぞれ３０日目のテスト及び対照を表し、サンプルＤ及びＦは、それぞれ９０日目のテスト及び対照を表し、サンプルＧ及びＨは、それぞれ１８０日目のテスト及び対照を表し、ならびにサンプルＩ及びＪは、それぞれ３６５日目のテスト及び対照を表す。図６２Ｄは、ＡＳ－Ｖ１（テスト）上列（Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｇ、及びＩ）とＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（対照）下列（Ｂ、Ｄ、Ｆ、Ｈ、及びＪ）を比較するＧＬＰモルモット試験での代表的な組織学スライドを例証する。サンプルＡ及びＢは、それぞれ７日目のテスト及び対照を表し、サンプルＣ及びＤは、それぞれ３０日目のテスト及び対照を表し、サンプルＤ及びＦは、それぞれ９０日目のテスト及び対照を表し、サンプルＧ及びＨは、それぞれ１８０日目のテスト及び対照を表し、ならびにサンプルＩ及びＪは、それぞれ３６５日目のテスト及び対照を表す。図６２Ｅは、ＡＳ－Ｖ１（テスト）上列（Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｇ、及びＩ）とＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（対照）下列（Ｂ、Ｄ、Ｆ、Ｈ、及びＪ）を比較するＧＬＰモルモット試験での代表的な組織学スライドを例証する。サンプルＡ及びＢは、それぞれ７日目のテスト及び対照を表し、サンプルＣ及びＤは、それぞれ３０日目のテスト及び対照を表し、サンプルＤ及びＦは、それぞれ９０日目のテスト及び対照を表し、サンプルＧ及びＨは、それぞれ１８０日目のテスト及び対照を表し、ならびにサンプルＩ及びＪは、それぞれ３６５日目のテスト及び対照を表す。図６２Ｆは、ＡＳ－Ｖ１（テスト）上列（Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｇ、及びＩ）とＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（対照）下列（Ｂ、Ｄ、Ｆ、Ｈ、及びＪ）を比較するＧＬＰモルモット試験での代表的な組織学スライドを例証する。サンプルＡ及びＢは、それぞれ７日目のテスト及び対照を表し、サンプルＣ及びＤは、それぞれ３０日目のテスト及び対照を表し、サンプルＤ及びＦは、それぞれ９０日目のテスト及び対照を表し、サンプルＧ及びＨは、それぞれ１８０日目のテスト及び対照を表し、ならびにサンプルＩ及びＪは、それぞれ３６５日目のテスト及び対照を表す。図６２Ｇは、ＡＳ－Ｖ１（テスト）上列（Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｇ、及びＩ）とＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（対照）下列（Ｂ、Ｄ、Ｆ、Ｈ、及びＪ）を比較するＧＬＰモルモット試験での代表的な組織学スライドを例証する。サンプルＡ及びＢは、それぞれ７日目のテスト及び対照を表し、サンプルＣ及びＤは、それぞれ３０日目のテスト及び対照を表し、サンプルＤ及びＦは、それぞれ９０日目のテスト及び対照を表し、サンプルＧ及びＨは、それぞれ１８０日目のテスト及び対照を表し、ならびにサンプルＩ及びＪは、それぞれ３６５日目のテスト及び対照を表す。図６２Ｈは、ＡＳ－Ｖ１（テスト）上列（Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｇ、及びＩ）とＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（対照）下列（Ｂ、Ｄ、Ｆ、Ｈ、及びＪ）を比較するＧＬＰモルモット試験での代表的な組織学スライドを例証する。サンプルＡ及びＢは、それぞれ７日目のテスト及び対照を表し、サンプルＣ及びＤは、それぞれ３０日目のテスト及び対照を表し、サンプルＤ及びＦは、それぞれ９０日目のテスト及び対照を表し、サンプルＧ及びＨは、それぞれ１８０日目のテスト及び対照を表し、ならびにサンプルＩ及びＪは、それぞれ３６５日目のテスト及び対照を表す。図６２Ｉは、ＡＳ－Ｖ１（テスト）上列（Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｇ、及びＩ）とＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（対照）下列（Ｂ、Ｄ、Ｆ、Ｈ、及びＪ）を比較するＧＬＰモルモット試験での代表的な組織学スライドを例証する。サンプルＡ及びＢは、それぞれ７日目のテスト及び対照を表し、サンプルＣ及びＤは、それぞれ３０日目のテスト及び対照を表し、サンプルＤ及びＦは、それぞれ９０日目のテスト及び対照を表し、サンプルＧ及びＨは、それぞれ１８０日目のテスト及び対照を表し、ならびにサンプルＩ及びＪは、それぞれ３６５日目のテスト及び対照を表す。図６２Ｊは、ＡＳ－Ｖ１（テスト）上列（Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｇ、及びＩ）とＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（対照）下列（Ｂ、Ｄ、Ｆ、Ｈ、及びＪ）を比較するＧＬＰモルモット試験での代表的な組織学スライドを例証する。サンプルＡ及びＢは、それぞれ７日目のテスト及び対照を表し、サンプルＣ及びＤは、それぞれ３０日目のテスト及び対照を表し、サンプルＤ及びＦは、それぞれ９０日目のテスト及び対照を表し、サンプルＧ及びＨは、それぞれ１８０日目のテスト及び対照を表し、ならびにサンプルＩ及びＪは、それぞれ３６５日目のテスト及び対照を表す。図６３Ａは、ＡＳ－Ｖ１（図６３Ａ、Ｂ）又はＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（図６３Ｃ、Ｄ）での注入後３ヶ月（図６３Ａ、Ｃ）又は６ヶ月（図６３Ｂ、Ｄ）目の皮膚組織の代表的な組織学を例証する。モルモットの背側真皮からの組織切片を、ヘマトキシリン及びエオシンで染色した。代表的な切片は、０．１ｍＬのＡＳ－Ｖ１又はＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣが注入された６匹の動物からであった。倍率２５×。図６３Ｂは、ＡＳ－Ｖ１（図６３Ａ、Ｂ）又はＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（図６３Ｃ、Ｄ）での注入後３ヶ月（図６３Ａ、Ｃ）又は６ヶ月（図６３Ｂ、Ｄ）目の皮膚組織の代表的な組織学を例証する。モルモットの背側真皮からの組織切片を、ヘマトキシリン及びエオシンで染色した。代表的な切片は、０．１ｍＬのＡＳ－Ｖ１又はＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣが注入された６匹の動物からであった。倍率２５× 図６３Ｃは、ＡＳ－Ｖ１（図６３Ａ、Ｂ）又はＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（図６３Ｃ、Ｄ）での注入後３ヶ月（図６３Ａ、Ｃ）又は６ヶ月（図６３Ｂ、Ｄ）目の皮膚組織の代表的な組織学を例証する。モルモットの背側真皮からの組織切片を、ヘマトキシリン及びエオシンで染色した。代表的な切片は、０．１ｍＬのＡＳ－Ｖ１又はＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣが注入された６匹の動物からであった。倍率２５× 図６３Ｄは、ＡＳ－Ｖ１（図６３Ａ、Ｂ）又はＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（図６３Ｃ、Ｄ）での注入後３ヶ月（図６３Ａ、Ｃ）又は６ヶ月（図６３Ｂ、Ｄ）目の皮膚組織の代表的な組織学を例証する。モルモットの背側真皮からの組織切片を、ヘマトキシリン及びエオシンで染色した。代表的な切片は、０．１ｍＬのＡＳ－Ｖ１又はＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣが注入された６匹の動物からであった。倍率２５× 図６４は、本開示の方法及びゲルにおいて使用される例示的ＨＡのＮＭＲスペクトル、割り当てられた標識を伴うＮＭＲスペクトルを例証する；「ａ」と標識されたピークは、３として割り当て、正規化され、３．３０～４．０５のピークの積分は、１１である。図６５は、ピーク積分に基づくゲルＭｏＤの計算を含む、本開示の例示的なゲルのＮＭＲスペクトルを例証する。図６６Ａは、異なる段階の粉砕での、本明細書中に記載される凍結乾燥からもたらされる低ＭＷ絹固体を例証する。図６６Ａは、凍結乾燥ボトルからの除去直後の低ＭＷ絹固体の粗い粒子を例証する。図６６Ｂは、粉砕を通じた中間部の低下したサイズ粒子を例証する。図６６Ｃは、完了粉砕時に均等なサイズ分布を伴う微細粒子を例証する。図６６Ｂは、異なる段階の粉砕での、本明細書中に記載される凍結乾燥からもたらされる低ＭＷ絹固体を例証する。図６６Ａは、凍結乾燥ボトルからの除去直後の低ＭＷ絹固体の粗い粒子を例証する。図６６Ｂは、粉砕を通じた中間部の低下したサイズ粒子を例証する。図６６Ｃは、完了粉砕時に均等なサイズ分布を伴う微細粒子を例証する。図６６Ｃは、異なる段階の粉砕での、本明細書中に記載される凍結乾燥からもたらされる低ＭＷ絹固体を例証する。図６６Ａは、凍結乾燥ボトルからの除去直後の低ＭＷ絹固体の粗い粒子を例証する。図６６Ｂは、粉砕を通じた中間部の低下したサイズ粒子を例証する。図６６Ｃは、完了粉砕時に均等なサイズ分布を伴う微細粒子を例証する。図６７は、中間ＭＷ絹固体の固体粒子を例証する。図６８は、本明細書中に記載される薄膜蒸発の間に形成された二つの異なる粒子サイズの固体絹粒子の例を例証する。図６９Ａは、本明細書中に記載される溶液沈殿プロセスにより調製された微粒子の例を例証する。図６９Ｂは、本明細書中に記載される溶液沈殿プロセスにより調製された微粒子の例を例証する。図７０は、本明細書中に記載される使用のための粉砕された絹粉末を例証する。図７１は、ＳＭＡ皮膚充填剤注入力（ＩＦ）対貯蔵弾性率（Ｇ’）を例証する。図７２は、ＳＭＡ皮膚充填剤注入力（ＩＦ）対損失弾性率（Ｇ’’）を例証する。図７３は、ＳＭＡ皮膚充填剤の貯蔵弾性率（Ｇ’）対Ｔａｎ（δ）を例証する。図７４は、ＳＭＡ皮膚充填剤の注入力（ＩＦ）対複素粘度η（＊）を例証する。図７５は、ＳＭＡ皮膚充填剤の貯蔵弾性率（Ｇ’）対損失弾性率（Ｇ’’）を例証する。図７６は、ＳＭＡ皮膚充填剤の貯蔵弾性率（Ｇ’）対絹＋ＨＡ濃度を例証する。

上に特定した図面によって、本発明で開示した実施形態を示す一方で、他の実施形態がまた、考察において述べたように、熟慮される。本開示は、代表的であり、限定的ではない例証的な実施形態を提示する。多数の他の改変及び実施形態が、当業者により案出されうるが、それらは、本発明で開示される実施形態の原理の範囲及び趣旨内に入る。

皮膚充填剤は軟組織の増大に革命をもたらし、低侵襲の美容的治療を望む高齢化する米国（ＵＳ）人での増加する需要に起因して、中等度から重度の皮膚の皺及びひだの矯正用に、近年ますますポピュラーになっている。事実、過去３０年間にわたり、皮膚充填剤は、医療及び美容皮膚科の両方の重要な部分になっている。医学的には、皮膚充填剤は、ＨＩＶ感染症のための治療下の患者において衰弱性瘢痕（ｄｅｂｉｌｉｔａｔｉｎｇｓｃａｒｓ）、形態学的非対称性、及び顔面脂肪萎縮症を矯正するために使用される。美容的には、皮膚充填剤は、皮膚の皺を最小限にして、顔の上面、中央、下面の全体の陥没した瘢痕を隆起させるために使用され、細かい額のライン及び目尻の小皺を取り除く。皮膚充填剤は、ボリューム及び隆起を回復させることにより、頬骨脂肪パッドの下降を矯正し、鼻唇溝を柔らかくすることにより、これらの効果を逆転させる。皮膚充填剤の使用の人気が高まるにつれ、全ての適応症について適用可能な製品がないため、利用可能な皮膚充填剤製品の数も増加し、わずか、過去～５年間で軟組織増大用の５つの新製品がＦＤＡにより承認された。当初、自己組織及び動物由来コラーゲンが使用可能であった；現在、皮膚充填剤の選択肢は、バイオポリマー及び合成インプラントを含む。皮膚充填剤は、限定されないが、三つのタイプに分類される：一時的（非永久的）、半永久的、及び永久的。コラーゲン、ヒアルロン酸（ＨＡ）、及び他の生物学的ベース及び生分解性充填剤が一時的であり、効果は数ヶ月から２年間持続する；半永久充填剤は、数年間持続する効果を有し、生分解性ポリ－Ｌ－乳酸及びヒドロキシアパタイトベースのカルシウム製品を含む；永久充填剤製品は、５年以上持続することができ、非生分解性ポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）、ポリアクリルアミドヒドロゲル、及び液体シリコンを含む。

残念なことに、数十年の研究開発後、現在の皮膚充填剤には依然として制約が存在する。有害反応は、一部の患者において現在入手可能な皮膚充填剤製品の注入に起因することが報告されている。これらは、即時の痛み、過敏症、及びアナフィラキシー、注入後の初期の腫れ、紅斑、感染、過矯正、及び壊死、注入後の後期ヘルペス（ＨＳＶ）の活性化、青みがかった皮膚変色（チンダル効果として記載される）、結節又は肉芽腫形成、及び注入後の永久的な瘢痕を含む。一般的に、より永久的な充填剤製品が、これらの反応のより深刻な原因となる一方で、より一時的な製品、例えばＨＡベースの充填剤などは、それほど深刻ではない反応に導く。一方、一般の人々は、より持続性が高い結果を与えて、並びに、これらの、しばしば対処困難な合併症を回避する製品を好む可能性が高い。この目標に達するための一つの戦略は、ヒアルロン酸（ＨＡ）ベースのヒドロゲルを改変して、それらの寿命を延ばすことである。ＨＡは、皮膚中で天然に見出され、身体において高い代謝回転率を有し、持続性が高い皮膚充填剤としてＨＡを使用することを困難にしている。その臨床的持続性を改善するために、皮膚充填剤中のＨＡの安定性を、ＨＡ鎖の架橋を介して増強させることができる。架橋は、分解因子、例えば酵素ヒアルロニダーゼ及び反応性酸素種（例、スーパーオキシド）などが、個々のＨＡ鎖にアクセスすることを制限し、分解から保護する。さらに、一つの特定の方法であるＶｙＣｒｏｓｓ（登録商標）技術を介して架橋されたＨＡは、最近、皮膚充填剤で見られるより深刻な副反応の一つである、遅発性の硬い病変の発生における増加に関連付けられる。皮膚充填剤として使用するためには、ヒドロゲル材料は、適した粘弾性及び変形に対する抵抗性（より高いＧ’を伴う「より硬い」材料）、注入の間での流動の容易性（低ＩＦ）、及びインビボでの分解に対する寿命又は抵抗性（典型的には、より高いＭｏＤで達成される）を示すことが望ましい。

これらの理由から、ＨＡベースのヒドロゲルを改変及び最適化するための他の戦略が試験中である；これらは、耐久性を維持しながら、有害事象を回避するためのより大きな可能性を有することが期待されている。絹フィブロインタンパク質の使用は、多くの利点を誇っている：他の生体材料と比較し、その顕著な強度及び靭性を与える固有の構造を伴い、異なる構造的な立体構造を採用する固有の能力を有しており、フィブロイン単位は、溶媒、可塑剤、又は生体に対してしばしば有害な効果を有する触媒についての必要性なく、数十種類の異なる高次ポリマー中に自己構築することができる。ＨＡベースのヒドロゲルへの絹フィブロインの添加の先を見ると、証明された生体適合性を伴うポリマーであるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の使用によって、絹－ＨＡ皮膚充填剤ゲルの機械的特性を制御する際に、追加の利益が与えられる。数十年にわたり、ＰＥＧはそれ自体で、又は他の担体／コーティングのための改変として使用されており、生物活性薬剤を送達し、ナノ担体の生体適合性、親水性、安定性、及び生分解性を増強し、しばしば、生物活性物質及び担体の毒性を効果的に低下させる。本開示は、皮膚充填剤の市場において最近見られる有害事象の問題を回避する、新たな治療オプションを提供するために、新規の絹ベースの組織及び／又は皮膚充填剤製剤及び製品を提供する。異なる特徴を伴う、本明細書中に記載される絹含有組織及び／又は皮膚充填剤を製造することができ、それらによって、生体適合性プロファイルを維持しながら、多くの異なる審美的及び医学的適応症のニーズを個別に満たし得る。

絹－ＨＡ複合体は、組織工学における足場として様々な使用のために試験されているが、組織及び／又は皮膚充填剤としてのそれらの使用の探求は、絹－ＨＡヒドロゲルの可能な使用を拡大させ、かなりの見込みを伴う、組織及び／又は皮膚充填剤の製剤への新たなアプローチの基礎を表す。本開示は、製品の寿命を延ばす特徴（高ＭｏＤ）を維持しながら、異なる適応症のための組織及び／又は皮膚充填剤製品の開発のために重要である、貯蔵弾性率（Ｇ’）において変動する絹結合型ＨＡヒドロゲルの製剤化のための新規プラットフォーム（活性化絹ヒドロゲルプラットフォーム）の確立を記載する。実際に、リード候補（ＡＳ－Ｖ１）は、有望なインビトロ及びインビボ性能を示し、皮内組織充填剤適用のための適切な特性を実証し、操作可能なＩＦでの高いＭｏＤ及び望ましいＧ’を伴った（以下の実施例３２～３５を参照のこと）。

ＨＡベースの皮膚充填剤中への絹の組込みによって、多くの面で有利な選択が提供される。絹タンパク質の組込みは、現在の皮膚充填剤製品で生じる有害効果の一部を回避するのに役立ち得る。例えば、ＡＳ－Ｖ１は、商業的に入手可能な製品と比較して、青色可視光に対するＵＶの吸光度の増加を実証し、それが、患者の皮膚のチンダル型の青みをもたらす可能性が低く、このように、表面的な審美的矯正のためにより適用可能であり得ることを示している。病変／結節形成は、ＶｙＣｒｏｓｓ（商標）技術において生じるような、潜在的には、高い架橋度の又は複数サイズ（分子量）のＨＡを使用することの結果として、一部の充填剤製品で観察されている。これは、絹含有ヒドロゲルでは回避され得る。なぜなら、単一サイズのＨＡが使用され、ＭｏＤを簡単に調節できるからである。

さらに、ＡＳ－Ｖ１は、安全性及び有効性テストにおいて、現在のマーケットリーダーと等価の又はより良好な性能を発揮する。生体適合性テストによって、インビボ使用のための全ての三つのゲル成分での実証された安全性に基づいて築かれた期待が確認された：（１）皮膚の粘弾性細胞外マトリックスの天然成分としてのＨＡ；（２）皮膚組織の再構築用を含む、歴史を通して異なる生物医学的適用において使用されてきた絹；及び（３）生体適合性ポリマーとしてのＰＥＧ（以下の実施例３２～３５を参照のこと）。実際に、ＡＳ－Ｖ１は、ＩＳＯ１０９９３生体適合性試験における全ての基準を満たし、インビボ試験によって、最小限の注入後の刺激及びあざが起こり、炎症は、市販製品と類似の又はそれより低いレベルであった。寿命、分解、移動、及び可逆性のインビボでのヒドロゲル性能特性がまた、ＡＳ－Ｖ１と市販製品の間で類似していた。特に、ＡＳ－Ｖ１皮膚充填剤は、望ましい寿命基準を満たしており、ゲル容量は注入後１２ヶ月に残存しており、ほうれい線治療として１２ヶ月間持続することが公知である市販製品のＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（以下の図６１Ｄ～Ｅ及び図６２Ａ～Ｊ）と同等である。さらに、絹－ＨＡゲルは、ＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣよりも滑らかに皮膚のコラーゲンマトリックス中に組み込まれた（以下の図６３Ａ－Ｄを参照のこと）；これは、二つのゲル間の粘度差、及び／又は絹タンパク質の含有、将来の試験においてテストされる仮説の結果であり得る。

ＨＡベースの皮膚充填剤中に絹を組み込むという戦略は、様々な美的及び医学的適応症のための適した一連の皮膚充填剤製品を生成する可能性を持つ、開発された製剤プラットフォームの多様性から、結果として得られるゲルの優れた生体適合性までにおいて有利である。

ＨＡベースの皮膚充填剤中に絹を組み込むことからもたらされる重要な利点は、以下の通りである：（１）異なる目標適用で、組織及び／又は皮膚充填剤製品は、異なる機械的特性、寿命、及び可逆性プロファイルを必要とする。絹フィブロインは、数十の異なる高次ポリマー／構造的コンフォメーション中に自己組織化でき、温度、湿度、及びｐＨにおける変化に対して天然で順応性があるため、ヒドロゲルの物理化学的及び機械的特性、例えば、水と結合する能力（膨潤のための能力）を、異なるＨＡ形態又は変動する濃度の架橋剤を混合することに代えて、単一のより小さなＨＡ鎖との組み合わせにおいて絹の濃度を変動させることを通じて制御することができる。このことは、本明細書中に記載されるプラットフォームが、様々な絹－ＨＡ皮膚充填剤製剤を生成する能力を示している；（２）絹－ＨＡヒドロゲルは、チンダル効果を回避する可能性を示す特性を有し、現在利用可能なＨＡベースの製品と類似の可逆性プロファイルを有し、非毒性で生体適合性のある精製絹フィブロインタンパク質及びＰＥＧ架橋剤を組み込むため、それらの使用が有害事象を起こす可能性は、比較的低い。

本明細書中に記載される活性化された絹ヒドロゲルプラットフォームは、数十の異なる高次ポリマー／構造的コンフォメーションに自己組織化するという絹フィブロインのユニークな能力、並びに温度、湿度、及びｐＨにおける変化に対するその天然の順応性を利用する。このプラットフォームを介して、水に結合するその能力（膨潤のための能力）及び皮膚とのその相互作用を含む、ヒドロゲルの生物物理学的特性を、異なるＨＡ形態又は変動する濃度の架橋剤を混合することに代えて、単一のより小さなＨＡ鎖との組み合わせにおいて絹の濃度を変動させることを通じて制御することができる。実際に、活性化された絹ヒドロゲルプラットフォームは、様々な構造的特徴を伴う製品のライブラリを生成するために既に活用されており（以下の図５６）、患者における性能のために非常に重要なゲル特性、例えば機械的特性及び寿命などを、様々な目標適用について最適化することができる。

ＳＰＦの定義及び特性
本明細書中で使用されるように、「絹タンパク質断片」（ＳＰＦ）は、以下の一つ又は複数を含む：本明細書中で定義される「絹フィブロイン断片」；本明細書中で定義される「組換え絹断片」；本明細書中で定義される「クモ絹断片」；本明細書中で定義される「絹フィブロイン様タンパク質断片」；及び／又は本明細書中で定義される「化学的に改変された絹断片」。ＳＰＦは、本明細書中に記載される任意の分子量の値又は範囲、及び本明細書中に記載される任意の多分散度の値又は範囲を有し得る。本明細書中で使用されるように、一部の実施形態では、用語「絹タンパク質断片」はまた、天然絹ポリペプチドもしくはそれらのバリエーション、天然絹ポリペプチドのアミノ酸配列、又は両方の組み合わせから各々が独立して選択される、少なくとも二つの同一の反復単位を含む、又はそれからなる絹タンパク質を指す。

ＳＰＦ分子量及び多分散性
一実施形態では、本開示の組成物は、約１～約５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約５～約１０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約１０～約１５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約１５～約２０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約１４～約３０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約２０～約２５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約２５～約３０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約３０～約３５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約３５～約４０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約３９～約５４ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約４０～約４５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約４５～約５０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約５０～約５５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約５５～約６０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約６０～約６５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約６５～約７０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。

一実施形態では、本開示の組成物は、約７０～約７５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約７５～約８０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約８０～約８５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約８５～約９０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約９０～約９５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約９５～約１００ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約１００～約１０５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約１０５～約１１０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約１１０～約１１５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約１１５～約１２０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約１２０～約１２５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約１２５～約１３０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約１３０～約１３５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約１３５～約１４０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約１４０～約１４５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。

一実施形態では、本開示の組成物は、約１４５～約１５０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約１５０～約１５５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約１５５～約１６０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約１６０～約１６５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約１６５～約１７０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約１７０～約１７５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約１７５～約１８０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約１８０～約１８５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約１８５～約１９０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約１９０～約１９５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約１９５～約２００ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約２００～約２０５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約２０５～約２１０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約２１０～約２１５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約２１５～約２２０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約２２０～約２２５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約２２５～約２３０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約２３０～約２３５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約２３５～約２４０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約２４０～約２４５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約２４５～約２５０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約２５０～約２５５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約２５５～約２６０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約２６０～約２６５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約２６５～約２７０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約２７０～約２７５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約２７５～約２８０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約２８０～約２８５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約２８５～約２９０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約２９０～約２９５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約２９５～約３００ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。

一実施形態では、本開示の組成物は、約３００～約３０５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約３０５～約３１０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約３１０～約３１５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約３１５～約３２０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約３２０～約３２５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約３２５～約３３０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約３３０～約３３５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約３３５～約３４０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約３４０～約３４５ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。一実施形態では、本開示の組成物は、約３４５～約３５０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含む。

一部の実施形態では、本開示の組成物は、組成物＃１００１～＃２４５０から選択され、約１ｋＤａ～約１４５ｋＤａから選択される重量平均分子量を有し、１～約５の間（限定されないが、１の多分散性を含む）、１～約１．５の間（限定されないが、１の多分散性を含む）、約１．５～約２の間、約１．５～約３の間、約２～約２．５の間、約２．５～約３の間、約３～約３．５の間、約３．５～約４の間、約４～約４．５の間、及び約４．５～約５から選択される多分散性を有するＳＰＦ組成物を含む。

（外１）

本明細書中で使用される場合、「低分子量」、「低ＭＷ（ｌｏｗＭＷ）」、又は「低ＭＷ（ｌｏｗ－ＭＷ）」のＳＰＦは、重量平均分子量、又は約５ｋＤａ～約３８ｋＤａ、約１４ｋＤａ～約３０ｋＤａ、もしくは約６ｋＤａ～約１７ｋＤａから選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含み得る。一部の実施形態では、特定のＳＰＦの標的低分子量は、約５ｋＤａ、約６ｋＤａ、約７ｋＤａ、約８ｋＤａ、約９ｋＤａ、約１０ｋＤａ、約１１ｋＤａ、約１２ｋＤａ、約１３ｋＤａ、約１４ｋＤａ、約１５ｋＤａ、約１６ｋＤａ、約１７ｋＤａ、約１８ｋＤａ、約１９ｋＤａ、約２０ｋＤａ、約２１ｋＤａ、約２２ｋＤａ、約２３ｋＤａ、約２４ｋＤａ、約２５ｋＤａ、約２６ｋＤａ、約２７ｋＤａ、約２８ｋＤａ、約２９ｋＤａ、約３０ｋＤａ、約３１ｋＤａ、約３２ｋＤａ、約３３ｋＤａ、約３４ｋＤａ、約３５ｋＤａ、約３６ｋＤａ、約３７ｋＤａ、又は約３８ｋＤａの重量平均分子量であり得る。

本明細書中で使用される場合、「中分子量」、「中ＭＷ（ｍｅｄｉｕｍＭＷ）」、又は「中ＭＷ（ｍｉｄ－ＭＷ）」のＳＰＦは、重量平均分子量、又は約３１ｋＤａ～約５５ｋＤａ、もしくは約３９ｋＤａ～約５４ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含み得る。一部の実施形態では、特定のＳＰＦについての標的中分子量は、約３１ｋＤａ、約３２ｋＤａ、約３３ｋＤａ、約３４ｋＤａ、約３５ｋＤａ、約３６ｋＤａ、約３７ｋＤａ、約３８ｋＤａ、約３９ｋＤａ、約４０ｋＤａ、約４１ｋＤａ、約４２ｋＤａ、約４３ｋＤａｋＤａ、約４４ｋＤａ、約４５ｋＤａ、約４６ｋＤａ、約４７ｋＤａ、約４８ｋＤａ、約４９ｋＤａ、約５０ｋＤａ、約５１ｋＤａ、約５２ｋＤａ、約５３ｋＤａ、約５４ｋＤａ、又は約５５ｋＤａの重量平均分子量であり得る。

本明細書中で使用される場合、「高分子量」、「高ＭＷ（ｈｉｇｈＭＷ）」、又は「高ＭＷ（ｈｉｇｈ－ＭＷ）」のＳＰＦは、重量平均分子量、又は約５５ｋＤａ～約１５０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有するＳＰＦを含み得る。一部の実施形態では、特定のＳＰＦについての標的高分子量は、約５５ｋＤａ、約５６ｋＤａ、約５７ｋＤａ、約５８ｋＤａ、約５９ｋＤａ、約６０ｋＤａ、約６１ｋＤａ、約６２ｋＤａ、約６３ｋＤａ、約６４ｋＤａ、約６５ｋＤａ、約６６ｋＤａ、約６７ｋＤａ、約６８ｋＤａ、約６９ｋＤａ、約７０ｋＤａ、約７１ｋＤａ、約７２ｋＤａ、約７３ｋＤａ、約７４ｋＤａ、約７５ｋＤａ、約７６ｋＤａ、約７７ｋＤａ、約７８ｋＤａ、約７９ｋＤａ、又は約８０ｋＤａであり得る。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される分子量（例、低分子量絹、中分子量絹、高分子量絹）は、当業者により理解され得るように、それぞれのＳＰＦ内に含まれるアミノ酸のおよその数に変換され得る。例えば、アミノ酸の平均重量は、約１１０ダルトン（即ち、１１０ｇ／ｍｏｌ）であり得る。従って、一部の実施形態では、直鎖状タンパク質の分子量を１１０ダルトンにより除すことを、その中に含まれるアミノ酸残基数の近似に使用することができる。

一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、１～約５．０の間から選択される多分散性を有し、限定されないが、１の多分散性を含む。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約１．５～約３．０の間から選択される多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、１～約１．５の間から選択される多分散性を有し、限定されないが、１の多分散性を含む。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約１．５～約２．０の間から選択される多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約２．０～約２．５の間から選択される多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約２．５～約３．０の間から選択される多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約３．０～約３．５の間から選択される多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約３．５～約４．０の間から選択される多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約４．０～約４．５の間から選択される多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約４．５～約５．０の間から選択される多分散性を有する。

一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、１の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約１．１の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約１．２の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約１．３の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約１．４の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約１．５の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約１．６の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約１．７の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約１．８の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約１．９の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約２．０の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約２．１の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約２．２の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約２．３の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約２．４の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約２．５の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約２．６の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約２．７の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約２．８の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約２．９の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約３．０の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約３．１の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約３．２の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約３．３の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約３．４の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約３．５の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約３．６の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約３．７の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約３．８の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約３．９の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約４．０の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約４．１の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約４．２の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約４．３の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約４．４の多分散性を有する。

一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約４．５の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約４．６の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約４．７の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約４．８の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約４．９の多分散性を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＳＰＦは、約５．０の多分散性を有する。

一部の実施形態では、低、中、及び／又は高分子量ＳＰＦの組み合わせを有する、本明細書中に記載される組成物において、そのような低、中、及び／又は高分子量ＳＰＦは、同一又は異なる多分散性を有してもよい。

絹フィブロイン断片
絹フィブロイン又は絹フィブロインタンパク質断片を作製する方法、及び様々な分野におけるそれらの適用は公知であり、例えば、米国特許第９，１８７，５３８号、第９，５１１，０１２号、第９，５１７，１９１号、第９，５２２，１０７号、第９，５２２，１０８号、第９，５４５，３６９号、及び第１０，１６６，１７７号、第１０，２８７，７２８号及び第１０，３０１，７６８号において記載されており、それら全てが、それらの全体において本明細書中に組み込まれる。カイコのボンビクス・モリ（Ｂｏｍｂｙｘｍｏｒｉ）由来の未加工の絹は、二つの主要タンパク質で構成される：絹フィブロイン（約７５％）及びセリシン（約２５％）。絹フィブロインは、剛性及び強度を提供する半結晶構造を伴う線維性タンパク質である。本明細書中で使用されるように、用語「絹フィブロイン」は、約３７０，０００Ｄａの重量平均分子量を有するボンビクス・モリの繭の線維を意味する。粗製カイコ線維は、フィブロインの二重糸からなる。これらの二重線維を一緒に保持している接着物質がセリシンである。絹フィブロインは、約３５万Ｄａの重量平均分子量を有する重鎖（Ｈ鎖）、及び約２５，０００Ｄａの重量平均分子量を有する軽鎖（Ｌ鎖）で構成される。絹フィブロインは、高分子量を有するポリマーの主要成分を占める、大きな疎水性ドメインを伴う両親媒性ポリマーである。疎水性領域は、小さな親水性スペーサーにより中断され、鎖のＮ及びＣ末端がまた、高度に親水性である。Ｈ鎖の疎水性ドメインは、Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒの反復ヘキサペプチド配列及びＧｌｙ－Ａｌａ／Ｓｅｒ／Ｔｙｒジペプチドのリピートを含み、それは、安定な逆平行シート結晶子を形成することができる。Ｌ鎖のアミノ酸配列は非反復的であり、そのため、Ｌ鎖はより親水性であり、比較的弾性である。絹フィブロイン分子中の親水性（Ｔｙｒ、Ｓｅｒ）及び疎水性（Ｇｌｙ、Ａｌａ）鎖セグメントは、絹フィブロイン分子の自己構築を可能にするように代替的に配置される。

本明細書中では、多様な適用のために、複数の業界にわたって使用され得る、純粋で高度にスケーラブルな絹フィブロイン－タンパク質断片混合溶液を産生するための方法が提供される。任意の特定の理論により拘束されることを望まないが、これらの方法は、限定されないが、組換え絹タンパク質、及び絹様又はフィブロイン様タンパク質の断片化を含む、本明細書中に記載される任意のＳＰＦの断片化に等しく適用可能であると考えられる。

本明細書中で使用されるように、用語「フィブロイン」は、カイコフィブロイン及び昆虫又はクモ絹タンパク質を含む。一実施形態では、フィブロインは、ボンビクス・モリから得られる。ボンビクス・モリ由来の未加工の絹は、二つの一次タンパク質で構成される：絹フィブロイン（約７５％）及びセリシン（約２５％）。絹フィブロインは、剛性及び強度を提供する半結晶構造を伴う線維性タンパク質である。本明細書中で使用されるように、用語「絹フィブロイン」は、約３７０，０００Ｄａの重量平均分子量を有するボンビクス・モリの繭の線維を意味する。水溶性絹フィブロインタンパク質断片への、これらの不溶性絹フィブロイン線維の変換には、濃縮中性塩（例、８～１０Ｍの臭化リチウム）の添加が必要であり、これは、分子間及び分子内イオン結合ならびに水素結合に干渉し、それらは、そうでなければ、フィブロインタンパク質を水に不溶性にする。絹フィブロインタンパク質断片、及び／又はその組成物を作製する方法は、公知であり、例えば、米国特許第９，１８７，５３８号、第９，５１１，０１２号、第９，５１７，１９１号、第９，５２２，１０７号、第９，５２２，１０８号、第９，５４５，３６９号、及び第１０，１６６，１７７号において記載されている。

カイコであるボンビクス・モリからの未加工の絹繭を、小片に切断した。小片の絹繭を、Ｎａ_２ＣＯ_３の水溶液中で約１００℃で約６０分間にわたり処理して、セリシンを除去した（脱ガム）。使用される水の容量は、約０．４×未加工の絹重量と等しく、Ｎａ_２ＣＯ_３の量は、未加工の絹繭小片の重量の約０．８４８×である。結果として得られる、脱ガムされた絹繭小片を、約６０℃で脱イオン水で三回リンスした（２０分／リンス）。各々のサイクルについてのリンス水の容量は、０．２Ｌ×未加工の絹繭小片の重量であった。脱ガムされた絹繭小片からの過剰な水を除去した。ＤＩ水洗浄工程の後、湿潤の、脱ガムされた絹繭小片を室温で乾燥させた。脱ガムされた絹繭小片をＬｉＢｒ溶液と混合し、混合物を約１００℃まで加熱した。温めた混合物を乾燥オーブン中に入れ、約１００℃で約６０分間にわたり加熱し、天然絹タンパク質の完全な溶解を達成した。結果として得られる絹フィブロイン溶液を濾過し、接線流濾過（ＴＦＦ）及び脱イオン水に対する１０ｋＤａ膜を使用して７２時間にわたり透析した。結果として得られる絹フィブロイン水溶液は、約８．５重量％の濃度を有する。次に、８．５％絹溶液を水で希釈し、１．０％ｗ／ｖの絹溶液をもたらした。ＴＦＦを次に使用して、純粋な絹溶液を、水に対して２０．０％ｗ／ｗの濃度の絹にさらに濃縮することができる。

一連の水の変化を通じて絹を透析することは、手作業であり、時間集中的なプロセスであり、特定のパラメータを変化させること、例えば、透析前に絹溶液を希釈することにより加速することができる。透析プロセスは、半自動装置、例えば、接線流濾過システムを使用することにより、製造のために増減させることができる。

一部の実施形態では、絹溶液は、様々な調製条件パラメータ、例えば、９０℃３０分間、９０℃６０分間、１００℃３０分間、及び１００℃６０分間などの下で調製される。簡単には、９．３ＭのＬｉＢｒを調製し、室温で少なくとも３０分間にわたり放置した。５ｍＬのＬｉＢｒ溶液を１．２５ｇの絹に添加して、６０℃のオーブン中に入れた。各々のセットからのサンプルを、４、６、８、１２、２４、１６８、及び１９２時間で除去した。

一部の実施形態では、絹溶液は、様々な調製条件パラメータ、例えば、９０℃３０分間、９０℃６０分間、１００℃３０分間、及び１００℃６０分間などの下で調製される。簡単には、９．３ＭのＬｉＢｒ溶液を四つの温度：６０℃、８０℃、１００℃、又は沸騰の一つまで加熱した。５ｍＬの高温ＬｉＢｒ溶液を１．２５ｇの絹に添加し、６０℃のオーブン中に入れた。各々のセットからのサンプルを、１、４、及び６時間で除去した。

一部の実施形態では、絹溶液は、様々な調製条件パラメータの下で調製される。例えば：四つの異なる絹抽出の組み合わせを使用した：９０℃３０分間、９０℃６０分間、１００℃３０分間、及び１００℃６０分間。簡単には、９．３ＭのＬｉＢｒ溶液を四つの温度：６０℃、８０℃、１００℃、又は沸騰の一つまで加熱した。５ｍＬの高温ＬｉＢｒ溶液を１．２５ｇの絹に添加し、ＬｉＢｒの同温度でオーブン中に入れた。各々のセットからのサンプルを、１、４、及び６時間で除去した。１ｍＬの各々のサンプルを、７．５ｍＬの９．３ＭＬｉＢｒに添加し、粘度テストのために冷蔵した。

一部の実施形態では、ＳＰＦは、未加工の未研磨、部分的研磨、又は研磨のカイコ線維を中性臭化リチウム塩で溶解することにより得られる。未加工のカイコ絹は、すべてのセリシンを除去し、断片混合物の所望の重量平均分子量（Ｍ_Ｗ）及び多分散性（ＰＤ）を達成するために、選択された温度及びその他の条件下で処理される。プロセスパラメータの選択は、使用目的に依存して、異なる最終絹タンパク質断片の特徴を達成するように変更することができる。結果として得られる最終断片溶液は、プロセス汚染物質の検出不能なレベル、医薬、医療、及び消費者アイケア市場において許容可能なレベルの１００万分の１（ＰＰＭ）を伴う純粋な絹フィブロインタンパク質断片及び水である。ＳＰＦの濃度、サイズ、及び多分散性は、所望の使用及び性能要件に依存して、さらに変更することができる。

図１は、本開示の純粋な絹フィブロインタンパク質断片（ＳＰＦ）を産生するための様々な実施形態を示すフローチャートである。例証される工程の全てが、必ずしも、本開示の全ての絹溶液を製作するために必要とされるわけではないことを理解すべきである。図１、工程Ａにおいて例証するように、繭（熱処理又は非熱処理）、絹線維、絹粉末、クモ絹、又は組換えクモ絹を、絹供給源として使用することができる。ボンビクス・モリからの未加工の絹繭から出発した場合、その繭を切断して小さな小片、例えば、ほぼ等しいサイズの小片にすることができる（工程Ｂ１）。未加工の絹を次に抽出し、リンスしてセリシンを除去する（工程Ｃ１ａ）。これによって、セリシンを実質的に含まない未加工の絹がもたらされる。一実施形態では、水を８４℃～１００℃の間の温度（理想的には沸点）まで加熱し、次にＮａ_２ＣＯ_３（炭酸ナトリウム）を、Ｎａ_２ＣＯ_３が完全に溶解するまで沸騰水に添加する。未加工の絹を沸騰水／Ｎａ_２ＣＯ_３（１００℃）に添加し、約１５～９０分間にわたり浸漬させ、より長期の時間にわたる沸騰によって、より小さな絹タンパク質断片がもたらされる。一実施形態では、水の容積は約０．４×未加工の絹重量に等しく、Ｎａ_２ＣＯ_３の容積は約０．８４８×未加工の絹の重量に等しい。一実施形態では、水の容積は０．１×未加工の絹重量に等しく、Ｎａ_２ＣＯ_３の容積は２．１２ｇ／Ｌで維持される。

その後、水に溶解したＮａ_２ＣＯ_３溶液を排出させ、過剰の水／Ｎａ_２ＣＯ_３を、絹フィブロイン線維から除去する（例、手動、機械を使用した脱水サイクルなどによりフィブロイン抽出物をリングアウトする（ｒｉｎｇｏｕｔ））。結果として得られる絹フィブロイン抽出物を、典型的には約４０℃～約８０℃の温度範囲で、水の容積を少なくとも１回変化させ（必要な回数だけ繰り返す）、温水～熱水でリンスし、すべての残りの吸着セリシン又は汚染物質を除去する。結果として得られる絹フィブロイン抽出物は、実質的にセリシンが欠乏した絹フィブロインである。一実施形態では、結果として得られる絹フィブロイン抽出物は、約６０℃の温度で水でリンスされる。一実施形態では、各々のサイクルについてのリンス水の量は、０．１Ｌ～０．２Ｌ×未加工の絹の重量に等しい。リンス効果を最大にするために、リンス水を掻き混ぜる、回転させる、又は循環させると有利であり得る。リンス後、過剰の水を、抽出された絹フィブロイン線維から除去する（例、手動によるか、又は機械を使用してフィブロイン抽出物ををリングアウトする）。あるいは、当業者に公知の方法、例えば圧力、温度、もしくは他の試薬、又はそれらの組合せなどを、セリシン抽出の目的のために使用することができる。あるいは、絹糸腺（１００％セリシン不含の絹タンパク質）を、カイコ（ｗｏｒｍ）から直接除去することができる。これは、タンパク質構造のいかなる変化も伴わずに、セリシンを含まない液体絹タンパク質をもたらし得る。

抽出されたフィブロイン線維を次に、完全に乾燥させる。一度、乾燥したら、抽出された絹フィブロインを、周囲～沸騰温度の間で、絹フィブロインに添加された溶媒を使用して溶解させる（工程Ｃ１ｂ）。一実施形態では、溶媒は、臭化リチウム（ＬｉＢｒ）の溶液である（ＬｉＢｒについての沸点は１４０℃である）。あるいは、抽出されたフィブロイン線維は乾燥されないが、しかし、湿潤であり、溶媒中に置かれ；溶媒濃度を次に変動させて、乾燥絹を溶媒に添加する場合と同様の濃度を達成することができる。ＬｉＢｒ溶媒の最終濃度は、０．１Ｍ～９．３Ｍの範囲であり得る。抽出されたフィブロイン線維の完全な溶解は、溶媒を溶解する濃度と共に、処理時間及び温度を変動させることにより達成することができる。限定されないが、ホスフェートリン酸（ｐｈｏｓｐｈａｔｅｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃａｃｉｄ）、硝酸カルシウム、塩化カルシウム溶液、又は他の無機塩の濃縮水溶液を含む、他の溶媒を使用することができる。完全な溶解を確実にするために、絹線維を、既に加熱されている溶媒溶液内に十分浸漬させ、次に、約６０℃～約１４０℃の範囲の温度で１～１６８時間にわたり維持すべきである。一実施形態では、絹線維を、溶媒溶液内に十分浸漬させ、次に、約１００℃の温度で約１時間にわたり乾燥オーブン中に置くべきである。

絹フィブロイン抽出物をＬｉＢｒ溶液に添加する（又はその逆の）温度は、フィブロインを完全に溶解させるのに要求される時間に対する、並びに結果として得られる、最終ＳＰＦ混合溶液の分子量及び多分散性に対する効果を有する。一実施形態では、絹溶媒溶液濃度は２０％ｗ／ｖ未満又はそれに等しい。また、導入又は溶解の間に撹拌を使用して、変動する温度及び濃度で溶解を促してもよい。ＬｉＢｒ溶液の温度は、作製される絹タンパク質断片混合物の分子量及び多分散性に対する制御を提供する。一実施形態では、より高い温度は、絹をより迅速に溶解させ、絹溶液の増強したプロセススケーラビリティ及び大量生産をもたらす。一実施形態では、８０℃～１４０℃の温度に加熱されたＬｉＢｒ溶液を使用することによって、完全な溶解を達成するために、オーブン中で必要とされる時間が低下する。６０℃又はそれ以上で溶解溶媒の時間及び温度を変動させることによって、元の分子量の天然絹フィブロインタンパク質から形成されるＳＰＦ混合溶液のＭＷ及び多分散性が変化し、制御される。

あるいは、繭全体を、抽出をバイパスすることにより、溶媒、例えばＬｉＢｒなどの中に直接入れることができる（工程Ｂ２）。これは、疎水性及び親水性のタンパク質を分離するために当技術分野において公知の方法、例えばカラム分離及び／又はクロマトグラフィー、イオン交換、塩及び／又はｐＨでの化学沈殿、ならびに／あるいは酵素消化及び濾過又は抽出など（全ての方法は、標準的なタンパク質分離法のための一般的な例であり、これらに限定されない）を使用する、絹及び溶媒溶液からのカイコ粒子のその後の濾過及びセリシン除去を必要とする（工程Ｃ２）。カイコが除去されている非熱処理繭を、代わりに、抽出をバイパスして、溶媒、例えばＬｉＢｒなどの中に直接入れてもよい。上に記載される方法は、セリシン分離のために使用することができ、非熱処理繭が、有意に少ないカイコの残骸を含むという利点を伴う。

透析を使用して、結果として得られる溶解したフィブロインタンパク質断片溶液から溶解溶媒を、その溶液をある容積の水に対して透析させることにより除去することができる（工程Ｅ１）。透析前の前濾過は、絹及びＬｉＢｒ溶液からすべての残骸（即ち、カイコの残遺物）を除去するのに有用である（工程Ｄ）。一例では、３μｍ又は５μｍフィルターを２００～３００ｍＬ／分の流量で使用して、所望の場合には、透析及び潜在的な濃縮の前に０．１％～１．０％の絹－ＬｉＢｒ溶液まで濾過する。本明細書中で開示される方法は、上に記載されるように、特に、スケーラブルなプロセス方法を作製することを考慮した場合、濾過及び下流での透析を促進するために、濃度を９．３ＭＬｉＢｒから０．１Ｍ～９．３Ｍの範囲まで減少させるための時間及び／又は温度を使用することである。あるいは、追加の時間又は温度の使用を伴わずに、９．３ＭＬｉＢｒ－絹タンパク質断片溶液を水で希釈して、残骸の濾過及び透析を促進させてもよい。所望の時間及び温度の濾過での溶解の結果は、公知のＭＷ及び多分散性の、半透明な、粒子不含の室温での保管安定性のある絹タンパク質断片ＬｉＢｒ溶液である。溶媒が除去されるまで、透析水を定期的に変える（例えば、１時間、４時間後に水を変え、次に、１２時間毎に合計６回水を変える）ことが有利である。水容量交換の総数は、絹タンパク質の溶解及び断片化のために使用される溶媒の、結果として得られる濃度に基づいて変動させることができる。透析後、最終絹溶液をさらに濾過して、すべての残る残骸（即ち、カイコの残遺物）を除去することができる。

あるいは、接線流濾過（ＴＦＦ）は、生体分子の分離及び精製のための迅速で効率的な方法であり、結果として得られる溶解フィブロイン溶液から溶媒を除去するために使用することができる（工程Ｅ２）。ＴＦＦは、高度に純粋な絹タンパク質断片水溶液を提供し、制御された反復可能な様式において大容積の溶液を産生するために、プロセスのスケーラビリティを可能にする。絹及びＬｉＢｒの溶液を、ＴＦＦの前に希釈することができる（水か又はＬｉＢｒのいずれかの中で２０％～０．１％絹）。ＴＦＦ処理の前での、上に記載されるような前濾過によって、フィルター効率を維持することができ、残骸粒子の存在の結果としての、フィルターの表面上での絹ゲル境界層の形成を潜在的に回避する。ＴＦＦの前の前濾過はまた、結果として得られる水だけの溶液の自然発生的な又は長期的なゲル化を起こし得る絹及びＬｉＢｒ溶液からすべての残る残骸（即ち、カイコの残遺物）を除去するために有用である（工程Ｄ）。ＴＦＦ（循環又はシングルパス）は、０．１％～３０．０％の絹（より好ましくは０．１％～６．０％の絹）の水－絹タンパク質断片溶液の作製のために使用することができる。異なるカットオフサイズのＴＦＦ膜が、溶液中での絹タンパク質断片混合物の所望の濃度、分子量、及び多分散性に基づいて必要とされ得る。１～１００ｋＤａの範囲の膜は、例えば、抽出沸騰時間の長さ、又は溶解溶媒（例、ＬｉＢｒ）中での時間及び温度を変動させることにより作製される分子量絹溶液を変動させために必要であり得る。一実施形態では、ＴＦＦ５又は１０ｋＤａ膜は、絹タンパク質断片混合溶液を精製し、最終的な所望の絹と水の比率をもたらすために使用される。その上に、ＴＦＦシングルパス、ＴＦＦ、及び当技術分野において公知の他の方法、例えば流下膜式蒸発器などを、溶解溶媒（例、ＬｉＢｒ）の除去後に溶液を濃縮するために使用することができる（結果として得られる０．１％～３０％絹の範囲の所望濃度を伴う）。これは、水ベースの溶液を作製するために、当技術分野において公知の標準的なＨＦＩＰ濃縮方法の代替法として使用することができる。より大きい細孔膜をまた、小さな絹タンパク質断片を濾別し、より厳格な多分散性の値を伴う及び／又は伴わない、より高分子量の絹の溶液を作製するために利用することができる。

ＬｉＢｒ及びＮａ_２ＣＯ_３検出のためのアッセイは、蒸発光散乱検出器（ＥＬＳＤ）を備えたＨＰＬＣシステムを使用して実施することができる。計算は、濃度に対してプロットされた、分析物についての結果として得られるピーク面積の線形回帰により実施した。本開示の多数の製剤の二つ以上のサンプルを、サンプル調製及び分析のために使用した。一般的に、異なる処方物の四つのサンプルを、１０ｍＬ容量フラスコ中に直接量り取った。サンプルを５ｍＬの２０ｍＭギ酸アンモニウム（ｐＨ３．０）中に懸濁し、時々振盪しながら２～８℃で２時間にわたり維持して、フィルムから分析物を抽出した。２時間後、溶液を２０ｍＭギ酸アンモニウム（ｐＨ３．０）で希釈した。メスフラスコからのサンプル溶液を、ＨＰＬＣバイアル中に移し、炭酸ナトリウム及び臭化リチウムの推定のためにＨＰＬＣ－ＥＬＳＤシステム中に注入した。

絹タンパク質製剤中のＮａ_２ＣＯ_３及びＬｉＢｒの定量化のために開発された分析方法は、１０～１６５μｇ／ｍＬの範囲で線形であることが見出されたが、注入精度についてのＲＳＤは、炭酸ナトリウム及び臭化リチウムについて、それぞれ、面積については２％及び１％、並びに保持時間については０．３８％及び０．１９％であった。この分析方法は、絹タンパク質製剤中の炭酸ナトリウム及び臭化リチウムの定量的決定のために適用することができる。

図２は、抽出及び溶解工程の間に、本開示の絹タンパク質断片溶液を産生するプロセスの間に改変することができる様々なパラメータを示すフローチャートである。選択方法のパラメータは、使用目的、例えば、分子量及び多分散性に依存して、明確な最終溶液の特徴を達成するように変更することができる。例証される工程の全てが、必ずしも、本開示の全ての絹溶液を製作するために必要とされるわけではないことを理解すべきである。

一実施形態では、幅広い適用のために有用な絹タンパク質断片溶液は、以下の工程に従って調製される：ボンビクス・モリのカイコからの絹繭の小片を形成すること；Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液中で約１００℃で約６０分間にわたり小片を抽出することであって、ここで、水の容量が、未加工の絹重量の約０．４倍に等しく、及びＮａ_２ＣＯ_３の量が、小片の重量の約０．８４８倍であり、絹フィブロイン抽出物を形成する；絹フィブロイン抽出物を、約６０℃で、リンス水の容量中での１回のリンス当たり約２０分間にわたり三回リンスし、ここで、各々のサイクルについてのリンス水が、約０．２Ｌ倍の小片の重量に等しい；絹フィブロイン抽出物から過剰な水を除去すること；絹フィブロイン抽出物を乾燥すること；乾燥絹フィブロイン抽出物をＬｉＢｒ溶液中に溶解すること、ここで、ＬｉＢｒ溶液がまず約１００℃に加熱されて、絹及びＬｉＢｒ溶液を作製し、維持される；絹及びＬｉＢｒ溶液を、約１００℃で約６０分間にわたり乾燥オーブン中に入れ、天然絹タンパク質構造の完全な溶解及びさらなる断片化を、所望の分子量及び多分散性を伴う混合物中に達成すること；溶液を濾過して、カイコからのすべての残る残骸を除去すること；溶液を水で希釈して、１．０重量％絹溶液をもたらすこと；及び接線流濾過（ＴＦＦ）を使用して溶液から溶媒を除去すること。一実施形態では、１０ｋＤａの膜を利用して絹溶液を精製し、最終的な所望の絹と水の比をもたらす。ＴＦＦを次に使用して、絹溶液を、水中の２．０重量％絹の濃度までさらに濃縮することができる。任意の特定の理論により拘束されることを望まないが、抽出（即ち、時間及び温度）、ＬｉＢｒ（即ち、絹フィブロイン抽出物に添加される、又はその逆の場合でのＬｉＢｒ溶液の温度）、及び溶解（即ち、時間及び温度）パラメータを変動させると、異なる粘度、均一性、及び色を伴う溶媒及び絹溶液がもたらされる。また、任意の特定の理論により拘束されることを望まないが、抽出のための温度を増加させること、抽出時間を延長すること、絹を溶解させる場合に、出現時に及び長期にわたって、より高い温度のＬｉＢｒ溶液を使用すること（例、本明細書中に示すようなオーブン中、又は代替の熱源）の温度での時間を増加させることは、全て、より低い粘性の、より均一な溶媒及び絹溶液をもたらした。

抽出工程は、６０℃～１００℃での又はその間の温度を維持することができる、より大きな容器、例えば、工業用洗浄機械中で完了することができる。リンス工程を、また、工業用洗浄機械において完了することができ、手動でのリンスサイクルを排除する。ＬｉＢｒ溶液中での絹の溶解は、対流式オーブン以外の容器、例えば、撹拌槽型反応器中で生じ得る。一連の水の変化を通じて絹を透析することは、手作業であり、時間集中的なプロセスであり、特定のパラメータを変化させること、例えば、透析前に絹溶液を希釈することにより加速することができる。透析プロセスは、半自動装置、例えば、接線流濾過システムを使用することにより、製造のために増減させることができる。

抽出（即ち、時間及び温度）、ＬｉＢｒ（即ち、絹フィブロイン抽出物に添加される又はその逆の場合でのＬｉＢｒ溶液の温度）、及び溶解（即ち、時間及び温度）パラメータを変動させると、異なる粘度、均一性、及び色を伴う溶媒及び絹溶液がもたらされる。抽出のための温度を増加させること、抽出時間を延長すること、絹を溶解させる場合に、出現時及び長期にわたって、より高い温度のＬｉＢｒ溶液を使用すること、及び（例、本明細書中に示すようなオーブン中、又は代替の熱源）の温度での時間を増加させることは、全て、粘性がより低く、より均一な溶媒及び絹溶液をもたらす。ほとんど全てのパラメータが、実行可能な絹溶液をもたらす一方で、完全な溶解を４～６時間より短い時間で達成させるような方法が、プロセススケーラビリティのために好ましい。

一実施形態では、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａの間から選択される重量平均を有する絹フィブロインタンパク質断片の溶液を、以下の工程に従って調製する：約３０分間～約６０分間の間の処理時間にわたり、絹供給源を、沸騰（１００℃）する炭酸ナトリウムの水溶液に添加することにより、絹供給源を脱ガムすること；溶液からセリシンを除去して、非検出レベルのセリシンを含む絹フィブロイン抽出物を産生すること；絹フィブロイン抽出物から溶液を排出すること；絹フィブロイン抽出物を、約６０℃～約１４０℃の範囲の臭化リチウム溶液中での絹フィブロイン抽出物の配置時に、開始温度を有する臭化リチウムの溶液中に溶解すること；約１４０℃の温度を有するオーブン中の絹フィブロイン－臭化リチウムの溶液を、最大で１時間にわたり維持すること；絹フィブロイン抽出物から臭化リチウムを除去すること；及び絹タンパク質断片の水溶液を産生することであって、水溶液が、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａの間から選択される重量平均分子量、及び１～約５の間、又は約１．５～約３．０の間の多分散度を有する断片を含む。本方法は、さらに、溶解工程の前に、絹フィブロイン抽出物を乾燥させることを含み得る。絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー臭化リチウムアッセイを使用して測定される３００ｐｐｍ未満の臭化リチウム残渣を含み得る。絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー炭酸ナトリウムアッセイを使用して測定される１００ｐｐｍ未満の炭酸ナトリウム残渣を含み得る。絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、凍結乾燥してもよい。一部の実施形態では、絹フィブロインタンパク質断片溶液は、ゲル、粉末、及びナノファイバーを含む様々な形態中にさらに加工されてもよい。

一実施形態では、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａの間から選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインタンパク質断片の溶液を、以下の工程に従って調製する：脱ガムをもたらすように、約３０分間～約６０分間の間の処置時間にわたり、炭酸ナトリウムの沸騰（１００℃）水溶液に絹供給源を添加すること；この溶液からセリシンを除去して、検出不可能なレベルのセリシンを含む絹フィブロイン抽出物を産生すること；絹フィブロイン抽出物から溶液を排出すること；約８０℃～約１４０℃の範囲の臭化リチウム溶液中での絹フィブロイン抽出物の配置時に、開始温度を有する臭化リチウム溶液中に絹フィブロイン抽出物を溶解すること；絹フィブロイン－臭化リチウムの溶液を、約６０℃～約１００℃の範囲中の温度を有する乾燥オーブン中で、最大で１時間の期間にわたり維持すること；絹フィブロイン抽出物から臭化リチウムを除去すること；及び、絹フィブロインタンパク質断片の水溶液を産生することであって、ここで、絹フィブロインタンパク質断片の水溶液が、約１０ｐｐｍ～約３００ｐｐｍの間の臭化リチウム残渣を含み、ここで、絹タンパク質断片の水溶液が、約１０ｐｐｍ～約１００ｐｐｍの間の炭酸ナトリウム残渣を含み、ここで、絹フィブロインタンパク質断片の水溶液が、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａの間から選択される重量平均分子量及び１～約５の間、又は約１．５～約３．０の間の多分散性を有する断片を含む。本方法は、さらに、溶解工程の前に、絹フィブロイン抽出物を乾燥させることを含み得る。絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー臭化リチウムアッセイを使用して測定される３００ｐｐｍ未満の臭化リチウム残渣を含み得る。絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー炭酸ナトリウムアッセイを使用して測定される１００ｐｐｍ未満の炭酸ナトリウム残渣を含み得る。

一部の実施形態では、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有する絹フィブロインタンパク質断片の水溶液を調製するための方法は、約３０分間～約６０分間の間の処理時間にわたり、絹供給源を、炭酸ナトリウムの沸騰（１００℃）水溶液に添加することにより、絹供給源を脱ガムする工程を含む。この溶液からセリシンを除去して、検出不可能なレベルのセリシンを含む絹フィブロイン抽出物を産生すること；絹フィブロイン抽出物から溶液を排出すること；絹フィブロイン抽出物を、約６０℃～約１４０℃の範囲の臭化リチウム溶液中での絹フィブロイン抽出物の配置時に、開始温度を有する臭化リチウムの溶液中に溶解すること；約１４０℃の温度を有するオーブン中で、絹フィブロイン－臭化リチウムの溶液を少なくとも１時間の期間にわたり維持すること；絹フィブロイン抽出物から臭化リチウムを除去すること；及び、絹タンパク質断片の水溶液を産生することであって、水溶液は、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量及び１～約５の間、又は約１．５～約３．０の間の多分散性を有する断片を含む。本方法は、さらに、溶解工程の前に、絹フィブロイン抽出物を乾燥させることを含み得る。純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー臭化リチウムアッセイを使用して測定される３００ｐｐｍ未満の臭化リチウム残渣を含み得る。純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー炭酸ナトリウムアッセイを使用して測定される１００ｐｐｍ未満の炭酸ナトリウム残渣を含み得る。本方法は、さらに、治療用薬剤を、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。本方法は、さらに、酸化防止剤又は酵素の一つから選択される分子を、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。本方法は、さらに、ビタミンを、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。このビタミンは、ビタミンＣ又はその誘導体であってよい。純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、凍結乾燥してもよい。本方法は、さらに、アルファヒドロキシ酸を、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。アルファヒドロキシ酸は、グリコール酸、乳酸、酒石酸、及びクエン酸からなる群から選択することができる。本方法は、さらに、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液に、約０．５％～約１０．０％の濃度でヒアルロン酸又はその塩形態を添加することを含むことができる。本方法は、さらに、酸化亜鉛又は二酸化チタンの少なくとも一つを添加することを含み得る。フィルムを、本方法により産生される純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液から作製してもよい。フィルムは、約１．０重量％～約５０．０重量％のビタミンＣ又はその誘導体を含み得る。フィルムは、約２．０重量％～約２０．０重量％の範囲の水含量を有し得る。フィルムは、約３０．０重量％～約９９．５重量％の純粋な絹フィブロインタンパク質断片を含み得る。ゲルを、本方法により産生される純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液から作製することができる。ゲルは、約０．５重量％～約２０．０重量％のビタミンＣ又はその誘導体を含み得る。ゲルは、少なくとも２％の絹含量及び少なくとも２０％のビタミン含量を有し得る。

一部の実施形態では、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有する絹フィブロインタンパク質断片の水溶液を調製するための方法は、以下の工程を含む：脱ガムをもたらすために、約３０分間～約６０分間の間の処置時間にわたり絹供給源を、炭酸ナトリウムの沸騰（１００℃）水溶液に添加すること；この溶液からセリシンを除去して、検出不可能なレベルのセリシンを含む絹フィブロイン抽出物を産生すること；絹フィブロイン抽出物から溶液を排出すること；約８０℃～約１４０℃の範囲の臭化リチウム溶液中での絹フィブロイン抽出物の配置時に、開始温度を有する臭化リチウム溶液中に絹フィブロイン抽出物を溶解すること；約６０℃～約１００℃の間の範囲の温度を有するオーブン中で、絹フィブロイン－臭化リチウムの溶液を少なくとも１時間の期間にわたり維持すること；絹フィブロイン抽出物から臭化リチウムを除去すること；及び、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液を産生することであって、ここで、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、約１０ｐｐｍ～約３００ｐｐｍの間の臭化リチウム残留物を含み、ここで、絹タンパク質断片の水溶液は、約１０ｐｐｍ～約１００ｐｐｍの間の炭酸ナトリウム残留物を含み、ここで、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量、及び１～約５の間、又は約１．５～約３．０の間の多分散性を有する断片を含む。本方法は、さらに、溶解工程の前に、絹フィブロイン抽出物を乾燥させることを含み得る。純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー臭化リチウムアッセイを使用して測定される３００ｐｐｍ未満の臭化リチウム残渣を含み得る。純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー炭酸ナトリウムアッセイを使用して測定される１００ｐｐｍ未満の炭酸ナトリウム残渣を含み得る。本方法は、さらに、治療用薬剤を、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。本方法は、さらに、酸化防止剤又は酵素の一つから選択される分子を、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。本方法は、さらに、ビタミンを、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。このビタミンは、ビタミンＣ又はその誘導体であってよい。純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、凍結乾燥してもよい。本方法は、さらに、アルファヒドロキシ酸を、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。アルファヒドロキシ酸は、グリコール酸、乳酸、酒石酸、及びクエン酸からなる群から選択することができる。本方法は、さらに、約０．５％～約１０．０％の濃度のヒアルロン酸又はその塩形態を、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。本方法は、さらに、酸化亜鉛又は二酸化チタンの少なくとも一つを添加することを含み得る。フィルムを、本方法により産生される純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液から作製してもよい。フィルムは、約１．０重量％～約５０．０重量％のビタミンＣ又はその誘導体を含み得る。フィルムは、約２．０重量％～約２０．０重量％の範囲の水含量を有し得る。フィルムは、約３０．０重量％～約９９．５重量％の純粋な絹フィブロインタンパク質断片を含み得る。ゲルを、本方法により産生される純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液から作製することができる。ゲルは、約０．５重量％～約２０．０重量％のビタミンＣ又はその誘導体を含み得る。ゲルは、少なくとも２％の絹含量及び少なくとも２０％のビタミン含量を有し得る。

一実施形態では、約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの間から選択される重量平均分子量を有する絹フィブロインタンパク質断片の溶液は、以下の工程に従って調製される：脱ガムをもたらすために、約３０分間の処置時間にわたり絹供給源を、炭酸ナトリウムの沸騰（１００℃）水溶液に添加すること；この溶液からセリシンを除去して、検出不可能なレベルのセリシンを含む絹フィブロイン抽出物を産生すること；絹フィブロイン抽出物から溶液を排出すること；約８０℃～約１４０℃の範囲の臭化リチウム溶液中での絹フィブロイン抽出物の配置時に、開始温度を有する臭化リチウム溶液中に絹フィブロイン抽出物を溶解すること；絹フィブロイン－臭化リチウムの溶液を、約６０℃～約１００℃の範囲中の温度を有する乾燥オーブン中で、最大で１時間の期間にわたり維持すること；絹フィブロイン抽出物から臭化リチウムを除去すること；及び、絹フィブロインタンパク質断片の水溶液を産生することであって、ここで、絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、約１０ｐｐｍ～約３００ｐｐｍの間の臭化リチウム残留物、約１０ｐｐｍ～約１００ｐｐｍの間の炭酸ナトリウム残留物、約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの間から選択される重量平均分子量、及び１～約５の間、又は約１．５～約３．０の間の多分散性を有する断片を含む。本方法は、さらに、溶解工程の前に、絹フィブロイン抽出物を乾燥させることを含み得る。絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー臭化リチウムアッセイを使用して測定される３００ｐｐｍ未満の臭化リチウム残渣を含み得る。絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー炭酸ナトリウムアッセイを使用して測定される１００ｐｐｍ未満の炭酸ナトリウム残渣を含み得る。一部の実施形態では、本方法は、さらに、活性薬剤（例、治療用薬剤）を、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液に添加することを含むことができる。本方法は、さらに、酸化防止剤又は酵素の一つから選択される活性薬剤を、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。本方法は、さらに、ビタミンを、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。このビタミンは、ビタミンＣ又はその誘導体であってよい。純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液は、凍結乾燥してもよい。本方法は、さらに、アルファヒドロキシ酸を、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。アルファヒドロキシ酸は、グリコール酸、乳酸、酒石酸、及びクエン酸からなる群から選択することができる。本方法は、さらに、約０．５％～約１０．０％の濃度のヒアルロン酸又はその塩形態を、純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。フィルムを、本方法により産生される純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液から作製してもよい。フィルムは、約１．０重量％～約５０．０重量％のビタミンＣ又はその誘導体を含み得る。フィルムは、約２．０重量％～約２０．０重量％の範囲の水含量を有し得る。フィルムは、約３０．０重量％～約９９．５重量％の純粋な絹フィブロインタンパク質断片を含み得る。ゲルを、本方法により産生される純粋な絹フィブロインタンパク質断片の水溶液から作製することができる。ゲルは、約０．５重量％～約２０．０重量％のビタミンＣ又はその誘導体を含み得る。ゲルは、少なくとも２重量％の絹含量及び少なくとも２０重量％のビタミン含量を有し得る。

絹タンパク質断片の分子量は、抽出時間及び温度を含む、抽出工程の間に利用される特定のパラメータ；臭化リチウム中への絹の浸漬の時間でのＬｉＢｒ温度及び溶液が特定の温度で維持される時間を含む、溶解工程の間に利用される特定のパラメータ；並びに濾過工程の間に利用される特定のパラメータに基づいて制御され得る。本開示の方法を使用してプロセスパラメータを制御することにより、５ｋＤａ～２００ｋＤａの間、又は１０ｋＤａ～８０ｋＤａの間から選択される様々な異なる分子量で、２．５と等しい又はそれより低い多分散性を伴う絹フィブロインタンパク質断片溶液を作製することが可能である。異なる分子量を伴う絹溶液を達成するためにプロセスパラメータを変更することにより、所望の性能要件に基づき、２．５と等しい又はそれより低い、望ましい多分散性を伴う断片混合物最終産物の範囲を標的とすることができる。例えば、眼科用薬物を含む高分子量絹フィルムは、より低分子量のフィルムと比較して、制御された徐放速度を有してもよく、アイケア製品における送達賦形剤のために理想的となる。加えて、２．５を超える多分散性を伴う絹フィブロインタンパク質断片溶液を達成することができる。さらに、異なる平均分子量及び多分散性を伴う二つの溶液を混合して、組合せ溶液を作製することができる。あるいは、カイコから直接除去された液体絹糸腺（１００％セリシン不含絹タンパク質）を、本開示の絹フィブロインタンパク質断片溶液のいずれかとの組み合わせにおいて使用することができる。純粋な絹フィブロインタンパク質断片組成物の分子量を、屈折率検出器（ＲＩＤ）を伴う高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用して決定した。多分散性を、ＣｉｒｒｕｓＧＰＣオンラインＧＰＣ／ＳＥＣソフトウェアバージョン３．３（Ａｇｉｌｅｎｔ）を使用して算出した。

処理パラメータにおける差は、分子量、及びペプチド鎖サイズ分布（多分散性、ＰＤ）において変動する再生絹フィブロインをもたらし得る。これは、次に、機械的強度、水可溶性などを含む、再生絹フィブロインの性能に影響を及ぼす。

パラメータを、未加工の絹繭を処理して絹溶液にする間に変動させた。これらのパラメータを変動させることによって、結果として得られる絹溶液のＭＷに影響を及ぼした。操作されたパラメータは、（ｉ）抽出の時間及び温度、（ｉｉ）ＬｉＢｒの温度、（ｉｉｉ）溶解オーブンの温度、及び（ｉｖ）溶解時間を含んだ。実験を、抽出時間を変動させることの効果を決定するために行った。表１～７に結果をまとめる。以下がまとめである：
－３０分間のセリシン抽出時間は、６０分間のセリシン抽出時間より大きい分子量をもたらした。
－分子量はオーブン中で時間の経過とともに減少する。
－１４０℃ＬｉＢｒ及びオーブンは、９５００Ｄａの分子量を下回る信頼区間の下限をもたらした
－１時間目及び４時間目での３０分間の抽出では、未消化の絹を有する。
－１時間目での３０分間の抽出は、３５，０００Ｄａである信頼区間の下限を伴う、有意に高い分子量をもたらした。
－信頼区間の上限に達した分子量の範囲は、１８０００～２１６０００Ｄａ（特定の上限値を伴う溶液を提供するために重要である）であった。

実験を、抽出温度を変動させた効果を決定するために行った。表７に結果をまとめる。以下がまとめである：
－９０℃でのセリシン抽出は、１００℃抽出でのセリシン抽出より高いＭＷをもたらした
－９０℃及び１００℃の両方が、オーブン中での経時的なＭＷの減少を示す。

実験を行って、絹に添加された場合の臭化リチウム（ＬｉＢｒ）温度を変動させた効果を決定した。表８～９に結果をまとめる。以下がまとめである：
－分子量又は信頼区間に対する影響はなし（全て、ＣＩ約１０５００～６５００Ｄａ）
－試験によって、ＬｉＢｒが添加され、溶解を始めると、ＬｉＢｒ－絹溶解の温度が、室温でその質量の大部分が絹であることに起因して、元のＬｉＢｒ温度を下まわって迅速に下落することが例証される。

実験を、オーブン／溶解温度の効果を決定するために行った。表１０～１４に結果をまとめる。以下がまとめである：
－オーブン温度は、３０分間抽出された絹より、６０分間抽出された絹に対して、より少ない効果を有する。理論により拘束されることを望まないが、３０分間抽出された絹は、抽出の間にそれほど分解されず、従って、オーブン温度は、より大きなＭＷに対してより多くの効果を有しており、絹の分解部分がより少ないと考えられる。
－６０℃対１４０℃オーブンについて、３０分間抽出された絹は、より高いオーブン温度で、より低いＭＷの非常に有意な効果を示した一方で、６０分間抽出された絹は、効果を有したが、しかし、それはずっと少なかった。
－１４０℃オーブンは、～６０００Ｄａで信頼区間における加減をもたらした。

カイコのボンビクス・モリからの未加工の絹繭が、小片に切断された。未加工の絹繭の小片を、Ｎａ_２ＣＯ_３（約１００℃）の水溶液中で約３０分間～約６０分間の間の時間にわたり沸騰させて、セリシンを除去した（脱ガム）。使用される水の容量は、約０．４×未加工の絹重量と等しく、Ｎａ_２ＣＯ_３の量は、未加工の絹繭小片の重量の約０．８４８×である。結果として得られる、脱ガムされた絹繭小片を、約６０℃で脱イオン水で三回リンスした（２０分／リンス）。各々のサイクルについてのリンス水の容量は、０．２Ｌ×未加工の絹繭小片の重量であった。脱ガムされた絹繭小片からの過剰な水を除去した。ＤＩ水洗浄工程の後、湿潤の、脱ガムされた絹繭小片を室温で乾燥させた。脱ガムされた絹繭小片をＬｉＢｒ溶液と混合し、混合物を約１００℃まで加熱した。温めた混合物を乾燥オーブン中に入れ、約６０℃～約１４０℃の範囲の温度で約６０分間にわたり加熱して、天然絹タンパク質の完全な溶解を達成した。結果として得られる溶液を室温まで冷却し、次に、３，５００ＤａのＭＷＣＯ膜を使用してＬｉＢｒ塩を除去するために透析した。複数の交換を、オクトンブロマイド（Ｂｒ^－）二重接合イオン選択電極上の加水分解フィブロイン溶液リードにおいて決定されたように、Ｂｒ^－イオンが１ｐｐｍ未満になるまで、Ｄｉ水中で実施した。

結果として得られる絹フィブロイン水溶液は、約６ｋＤａ～約１６ｋＤａ、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａ、及び約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量、並びに約１．５～約３．０の多分散性を有する純粋な絹フィブロインタンパク質断片を含む約８．０％ｗ／ｖの濃度を有する。８．０％ｗ／ｖをＤＩ水で希釈し、１．０％ｗ／ｖ、２．０％ｗ／ｖ、３．０％ｗ／ｖ、４．０％ｗ／ｖ、５．０％ｗ／ｖコーティング溶液を提供した。

様々な％の絹濃度が、接線流濾過（ＴＦＦ）の使用を通じて産生されている。全ての場合において、１％絹溶液を入力フィードとして使用した。１％絹溶液７５０～１８，０００ｍＬの範囲を、開始容積として使用した。溶液をＴＦＦにおいて透析濾過し、臭化リチウムを除去する。一度、残留ＬｉＢｒの指定レベルを下回ると、溶液は、限外濾過を受けて、水の除去を通じて濃度を増加させる。以下の例を参照のこと。

６つの絹溶液を、標準的な絹構造において利用し、以下の結果を伴った：
溶液＃１は、５．９重量％の絹濃度、１９．８ｋＤａの平均ＭＷ、及び２．２ＰＤＩである（６０分間の沸騰抽出、１時間にわたる１００℃のＬｉＢｒ溶解で作製）。
溶液＃２は、６．４重量％の絹濃度である（３０分間の沸騰抽出、４時間にわたる６０℃のＬｉＢｒ溶解で作製）。
溶液＃３は、６．１７重量％の絹濃度である（３０分間の沸騰抽出、１時間にわたる１００℃のＬｉＢｒ溶解で作製）。
溶液＃４は、７．３０重量％の絹濃度である：７．３０％のシルク溶液を、１バッチ当たり１００ｇの絹繭の３０分間抽出バッチから産生した。抽出された絹線維を次に、１００℃の９．３ＭＬｉＢｒを使用して、１００℃のオーブン中で１時間にわたり溶解した。１００ｇの絹線維を１バッチ当たりに溶解し、ＬｉＢｒ中の２０％絹を作製した。ＬｉＢｒ中に溶解された絹を次に、１％の絹に希釈し、５μｍフィルターを通して濾過し、大きな残骸を除去した。１５，５００ｍＬの１％濾過絹溶液を、ＴＦＦの開始容積／透析濾過容積として使用した。一度、ＬｉＢｒが除去されれば、この溶液を１３００ｍＬ前後の容積に限外濾過した。１２６２ｍＬの７．３０％絹を次に回収した。水を供給液に添加し、残りの溶液を除去するのを助け、５４７ｍＬの３．９１％絹を次に回収した。
溶液＃５は、６．４４重量％の絹濃度である。：６．４４重量％の絹溶液を、１バッチ当たり２５、３３、５０、７５、及び１００ｇの絹繭の混合物の６０分間抽出バッチで開始して産生した。抽出された絹線維を次に、１００℃の９．３ＭＬｉＢｒを使用して、１００℃のオーブン中で１時間にわたり溶解した。絹線維の１バッチ当たり３５、４２、５０、及び７１ｇを溶解して、ＬｉＢｒ中の２０％絹を作製し、合わせた。ＬｉＢｒ中の溶解された絹を次に、１％の絹に希釈し、５μｍフィルターを通して濾過し、大きな残骸を除去した。１７，０００ｍＬの１％濾過絹溶液を、ＴＦＦの開始容積／透析濾過容積として使用した。一度、ＬｉＢｒが除去されれば、この溶液を３０００ｍＬ前後の容積に限外濾過した。１４９０ｍＬの６．４４％絹を次に回収した。水を供給液に添加し、残りの溶液を除去するのを助け、１４５４ｍＬの４．８８％絹を次に回収した。
溶液＃６は、２．７０重量％の絹濃度である：２．７０％の絹溶液を、１バッチ当たり２５ｇの絹繭の６０分間抽出バッチで開始して産生した。抽出された絹線維を次に、１００℃の９．３ＭＬｉＢｒを使用して、１００℃のオーブン中で１時間にわたり溶解した。３５．４８ｇの絹線維を１バッチ当たり溶解し、ＬｉＢｒ中の２０％の絹を作製した。ＬｉＢｒ中に溶解された絹を次に、１％の絹に希釈し、５μｍフィルターを通して濾過し、大きな残骸を除去した。１０００ｍＬの１％濾過絹溶液を、ＴＦＦの開始容積／透析濾過容積として使用した。一度、ＬｉＢｒが除去されれば、この溶液を３００ｍＬ前後の容積に限外濾過した。３１２ｍＬの２．７％の絹を次に回収した。

高分子量を伴う絹フィブロイン溶液の調製を表１５中に与える。

線維への適用のための絹水性コーティング組成物を、以下の表１６及び１７中に与える。

３つの絹溶液をフィルム製造において利用し、以下の結果を伴った：
溶液＃１は、５．９％の絹濃度、１９．８ｋＤａの平均ＭＷ、及び２．２ＰＤ（６０分間の沸騰抽出、１時間にわたる１００℃のＬｉＢｒ溶解で作製）である。
溶液＃２は、６．４％の絹濃度（３０分間の沸騰抽出、４時間にわたる６０°℃のＬｉＢｒ溶解で作製）である。
溶液＃３は、６．１７％の絹濃度（３０分間の沸騰抽出、１時間にわたる１００℃のＬｉＢｒ溶解で作製）である。

フィルムは、Ｒｏｃｋｗｏｏｄｅｔａｌ．（ＮａｔｕｒｅＰｒｏｔｏｃｏｌｓ；Ｖｏｌ．６；Ｎｏ．１０；オンライン公開日：２０１１年９月２２日、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｐｒｏｔ．２０１１．３７９）に従って作製した。４ｍＬの１％又は２％（重量／容積）の絹水溶液を１００ｍｍのペトリ皿中に添加し（絹の容積は、より厚い又はより薄いフィルムについて変動することができ、重要ではない）、覆いのない状態で一晩乾燥させた。真空デシケーターの底部を水で満たした。乾燥フィルムをデシケーター中に置き、真空適用して、ディッシュからの除去の前にフィルムを４時間にわたり水アニーリングさせた。溶液＃１から成型されたフィルムは、構造的に連続的なフィルムをもたらさなかった；フィルムはいくつかの小片に割れていた。これらのフィルムの小片は、水アニーリング処理にもかかわらず水中に溶解した。

様々な分子量の絹溶液及び／又は分子量の組み合わせは、ゲル適用のために最適化することができる。以下は、本プロセスの例を提供するが、しかし、それは、適用又は製剤化において限定することを意図しない。３つの絹溶液をゲル作製において利用し、以下の結果を伴った：
溶液＃１は、５．９％の絹濃度、１９．８ｋＤａの平均ＭＷ、及び２．２ＰＤ（６０分間の沸騰抽出、１時間にわたる１００℃のＬｉＢｒ溶解で作製）である。
溶液＃２は、６．４％の絹濃度（３０分間の沸騰抽出、４時間にわたる６０°℃のＬｉＢｒ溶解で作製）である。
溶液＃３は、６．１７％の絹濃度（３０分間の沸騰抽出、１時間にわたる１００℃のＬｉＢｒ溶解で作製）である。

「Ｅｇｅｌ」は、Ｒｏｃｋｗｏｏｄｏｆａｌ．において記載されているようなエレクトロゲル化プロセスである。簡潔には、１０ｍｌの絹水溶液を、５０ｍｌの円錐形チューブに添加し、一対の白金線電極を絹溶液中に浸漬させた。２０ボルトの電位を、プラチナ電極に５分間にわたり印加し、電源をオフにしてゲルを回収した。溶液＃１は、５分間の印加電流にわたってＥＧＥＬを形成しなかった。

溶液＃２及び＃３を、公開された西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）プロトコルに従ってゲル化した。挙動は、公開された溶液に典型であるように思われた。

材料及び方法：以下の装置及び材料が、絹分子量の決定において使用される：ｃｈｅｍｓｔａｔｉｏｎソフトウェアｖｅｒ．１０．０１を伴うＡｇｉｌｅｎｔ１１００；屈折率検出器（ＲＩＤ）；分析バランス；メスフラスコ（１０００ｍＬ、１０ｍＬ、及び５ｍＬ）；ＨＰＬＣグレードの水；ＡＣＳグレードの塩化ナトリウム、ＡＣＳグレードのリン酸ナトリウム二塩基性七水和物；リン酸；デキストランＭＷ標準－公称分子量５ｋＤａ、１１．６ｋＤａ、２３．８ｋＤａ、４８．６ｋＤａ、及び１４８ｋＤａ；５０ｍＬＰＥＴ又はポリプロピレン製ディスポーザブル遠心チューブ；目盛り付きピペット；テフロン性キャップを伴う褐色ガラスＨＰＬＣバイアル；ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＰｏｌｙＧＦＣＰ－４０００カラム（サイズ：７．８ｍｍ×３００ｍｍ）。

手順工程：
Ａ）１Ｌ移動相（０．０１２５Ｍリン酸ナトリウム緩衝液中の０．１Ｍ塩化ナトリウム溶液）の調製。
２５０ｍＬの清潔な乾燥したビーカーを取り、それをバランス上に置き、風袋の重さを量る。約３．３５０９ｇのリン酸ナトリウム二塩基性七水和物をビーカーに添加する。リン酸ナトリウム二塩基の正確な重量を量ったことを書き留める。１００ｍＬのＨＰＬＣ水をビーカー中に添加することにより、秤量されたリン酸ナトリウムを溶解する。ビーカーの内容物をこぼさないように注意する。溶液を、清潔で乾燥した１０００ｍＬのメスフラスコ中に注意深く移す。ビーカーをリンスし、リンス液をメスフラスコ中に移す。リンスを４～５回繰り返す。別個の清潔で乾燥した２５０ｍＬのビーカー中に、正確に約５．８４４０ｇの塩化ナトリウムを秤量する。秤量した塩化ナトリウムを５０ｍＬの水中に溶解し、溶液を、メスフラスコ中のリン酸ナトリウム溶液に移す。ビーカーをリンスし、リンス液をメスフラスコ中に移す。リン酸を用いて、溶液のｐＨを７．０±０．２に調整する。ＨＰＬＣ水でメスフラスコ中の容積を１０００ｍＬにして、激しく撹拌し、溶液を均一に混合する。この溶液を、０．４５μｍのポリアミド膜フィルターを通して濾過する。この溶液を清潔な乾燥溶媒ボトルに移し、ボトルにラベルを付ける。この溶液の容積は、リン酸ナトリウム二塩基性七水和物及び塩化ナトリウムの量を対応するように変動させることにより、要件に対して変動させることができる。

Ｂ）デキストラン分子量標準液の調製
少なくとも五つの異なる分子量標準が、テストされるサンプルの期待値が、使用される標準の値により挟まれるように、実行されるサンプルの各々のバッチについて使用される。六本の２０ｍＬシンチレーションガラスバイアルを、分子量標準に対してそれぞれラベルする。約５ｍｇの各々のデキストラン分子量標準を正確に秤量し、重量を記録する。デキストラン分子量標準を５ｍＬの移動相中に溶解し、１ｍｇ／ｍＬの標準溶液を作製する。

Ｃ）サンプル溶液の調製
サンプル溶液を調製する際に、利用可能なサンプルの量に限界がある場合、調製物は、比率が維持されている限り調整してもよい。サンプルの種類及びサンプル中の絹タンパク質含量に依存して、５０ｍＬの使い捨て遠心管中の十分なサンプルを、分析用の１ｍｇ／ｍＬサンプル溶液を作製するために、分析バランスで秤量する。サンプルを等容積の移動相中で溶解し、１ｍｇ／ｍＬ溶液を作製する。チューブを固くキャップし、サンプルを混合する（溶液中）。サンプル溶液を室温で３０分間にわたり放置する。サンプル溶液を再度１分間にわたり穏やかに混合し、４０００ＲＰＭで１０分間にわたり遠心分離する。

Ｄ）サンプルのＨＰＬＣ分析
１．０ｍＬの全ての標準及びサンプル溶液を個々のＨＰＬＣバイアル中に移す。分子量標準（各々１回注入）及び各々のサンプルを２回ずつ注入する。以下のＨＰＬＣ条件を使用して、全ての標準及びサンプル溶液を分析する。

（外２）

Ｅ）データ分析及び計算－ＣｉｒｒｕｓＳｏｆｔｗａｒｅを使用した平均分子量の計算。
標準及び分析サンプルのクロマトグラフィーデータファイルを、ＣｉｒｒｕｓＳＥＣデータ収集及び分子量分析ソフトウェア中にアップロードする。サンプルの各々の注入についての重量平均分子量（Ｍｗ）、数平均分子量（Ｍｎ）、ピーク平均分子量（Ｍｐ）、及び多分散性を計算する。

クモ絹断片
クモ絹は、三つのドメイン：タンパク質鎖を支配する反復中間コアドメイン、並びに非反復Ｎ末端ドメイン及びＣ末端ドメインからなる天然ポリマーである。大きなコアドメインは、ブロック共重合体様配置において組織化され、それにおいて、二つの基本配列、結晶性〔ポリ（Ａ）又はポリ（ＧＡ）］及びより少ない結晶性（ＧＧＸ又はＧＰＧＸＸ）ポリペプチドが交互に現れる。ドラッグライン絹は、大瓶状腺ドラッグライン絹タンパク質１（ＭａＳｐ１）及び大瓶状腺ドラッグライン絹タンパク質２（ＭａＳｐ２）で構成されるタンパク質複合体である。両方の絹が、約３５００アミノ酸長である。ＭａＳｐ１はファイバーコア及び周辺部において見出すことができるのに対し、ＭａＳｐ２は特定のコア領域中でクラスタを形成する。ＭａＳｐ１及びＭａＳｐ２の大きな中心ドメインは、ブロック共重合体様配置において組織化され、それにおいて、二つの基本配列、結晶性〔ポリ（Ａ）又はポリ（ＧＡ）］、及びより少ない結晶性（ＧＧＸ又はＧＰＧＸＸ）ポリペプチドが、コアドメイン中で交互に現れる。特定の二次構造が、ポリ（Ａ）／（ＧＡ）、ＧＧＸ、及びＧＰＧＸＸモチーフに割り当てられ、それぞれ、βシート、βヘリックス、及びβスパイラルを含む。反復コアドメインの一次配列、組成物、及び二次構造エレメントは、クモの絹の機械的特性に関与する；それに対して、非反復Ｎ及びＣ末端ドメインは、管腔中での液体絹ドープの保存及びスピニングダクト中での線維形成のために不可欠である。

ＭａＳｐ１とＭａＳｐ２の間での主な違いは、ＭａＳｐ２中の総アミノ酸含量の１５％を占めるプロリン（Ｐ）残基の存在であるのに対し、ＭａＳｐ１はプロリン不含である。Ｎ．クラビペスドラッグライン絹中のプロリン残基の数を算出することにより、線維中の二つのタンパク質の存在を推定することが可能である；８１％のＭａＳｐ１及び１９％のＭａＳｐ２。異なるクモは、ＭａＳｐ１及びＭａＳｐ２の異なる比率を有する。例えば、オーブウィーバーＡｒｇｉｏｐｅａｕｒａｎｔｉａからのドラッグライン絹線維は、４１％ＭａＳｐ１及び５９％のＭａＳｐ２を含む。大瓶状腺絹の比率におけるそのような変化は、絹線維の性能を左右し得る。

少なくとも七種類の異なる種類の絹タンパク質が、一つのオーブウィーバー種のクモについて公知である。絹は、一次配列、物理的特性及び機能において異なる。例えば、フレーム、半径、及びライフラインを構築するために使用されるドラッグライン絹は、強度、靭性、及び弾性を含む、顕著な機械的特性のため公知である。等重量ベースで、クモ絹は、鋼及びケブラーよりも高い靭性を有する。捕捉スパイラルにおいて見出される鞭状腺絹は、最大５００％の拡張性を有する。小瓶状腺絹は、オーブウェブの補助スパイラル及び捕食において見出され、大瓶状腺絹とほぼ同様の高い靭性及び強度を持つが、しかし、水中では超収縮しない。

クモ絹は、それらの高い張力強度及び靭性について公知である。組換え絹タンパク質はまた、特に、保湿作用又は軟化作用、良好なフィルム形成特性、及び低表面密度を改善することができるように、美容組成物又は皮膚学的組成物に有利な特性を付与する。多様で固有の生体力学的特性は、生体適合性及び遅い分解速度を一緒に、クモ絹を、組織工学、誘導組織修復、及び薬物送達のための生体材料、美容製品（例、爪及び毛髪強化剤、皮膚ケア製品）、及び産業材料（例えば、ナノワイヤ、ナノファイバー、表面コーティング）用の優れた候補にする。

一実施形態では、絹タンパク質は、天然クモ絹タンパク質から由来するポリペプチドを含み得る。ポリペプチドは、特に、それが、天然のクモ絹タンパク質から由来する限り限定されず、ポリペプチドの例は、天然クモ絹タンパク質及び組換えクモ絹タンパク質、例えば天然クモ絹タンパク質の変異体、類似体、誘導体、又は同様のものを含む。優れた粘り強さに関して、ポリペプチドは、クモの大瓶状腺腺において産生されるメジャードラッグライン絹タンパク質から由来し得る。メジャードラッグライン絹タンパク質の例は、ネフィラ・クラビペスからの大瓶状腺スピドロインＭａＳｐ１及びＭａＳｐ２、並びにアラネウス・ディアデマトゥスからのＡＤＦ３及びＡＤＦ４などを含む。主要なドラッグライン絹タンパク質から由来するポリペプチドの例は、主要なドラッグライン絹タンパク質の変異体、類似体、誘導体又は同様のものを含む。さらに、ポリペプチドは、クモの鞭状腺において産生される鞭状腺絹タンパク質から由来し得る。鞭状腺絹タンパク質の例は、ネフィラ・クラビペス（Ｎｅｐｈｉｌａｃｌａｖｉｐｅｓ）などから由来する鞭状腺絹タンパク質を含む。

メジャードラッグライン絹タンパク質から由来するポリペプチドの例は、式１：ＲＥＰ１－ＲＥＰ２（１）により表されるアミノ酸配列の二つ又はそれ以上の単位を含むポリペプチド、好ましくはその五つ又はそれ以上の単位を含むポリペプチド、及びより好ましくはその１０又はそれ以上の単位を含むポリペプチドを含む。あるいは、メジャードラッグライン絹タンパク質から由来するポリペプチドは、式１：ＲＥＰ１－ＲＥＰ２（１）により表されるアミノ酸配列の単位を含むポリペプチドであってもよく、それは、Ｃ末端に、米国特許第９，０５１，４５３号の配列番号１～３のいずれかにより表されるアミノ酸配列又は米国特許第９，０５１，４５３号の配列番号１～３のいずれかにより表されるアミノ酸配列と９０％又はそれ以上の相同性を有するアミノ酸配列を有する。主要なドラッグライン絹タンパク質から由来するポリペプチドにおいて、式１：ＲＥＰ１－ＲＥＰ２（１）により表されるアミノ酸配列の単位は、同一であってもよく、又は互いに異なっていてもよい。宿主として微生物、例えば大腸菌などを使用して組換えタンパク質を産生する場合では、主要なドラッグライン絹タンパク質から由来するポリペプチドの分子量は、生産性の観点から、５００ｋＤａ以下、又は３００ｋＤａ以下、又は２００ｋＤａ以下である。

式（１）では、ＲＥＰ１はポリアラニンを示す。ＲＥＰ１において、連続で配置されるアラニン残基の数は、好ましくは２以上、より好ましくは３以上、さらに好ましくは４以上、及び特に好ましくは５以上である。さらに、ＲＥＰ１において、連続で配置されるアラニン残基の数は、好ましくは２０以下、より好ましくは１６以下、さらに好ましくは１２以下、及び特に好ましくは１０以下である。式（１）では、ＲＥＰ２は、１０～２００アミノ酸残基で構成されるアミノ酸配列である。アミノ酸配列中に含まれるグリシン、セリン、グルタミン、及びアラニン残基の総数は、その中に含まれるアミノ酸残基の総数に対して４０％以上、好ましくは６０％以上、及びより好ましくは７０％以上である。

メジャードラッグライン絹では、ＲＥＰ１は、結晶性βシートが形成される線維中の結晶領域に対応し、ＲＥＰ２は、部品の大半が規則的な構成を欠き、より多くの柔軟性を有する線維中の非晶質領域に対応する。さらに、［ＲＥＰ１－ＲＥＰ２］は、結晶領域及び非結晶領域で構成される反復領域（反復配列）に対応し、これは、ドラッグライン絹タンパク質の特徴的な配列である。

組換え絹断片
一部の実施形態では、組換え絹タンパク質は、組換えクモ絹ポリペプチド、組換え昆虫絹ポリペプチド、又は組換えムール貝絹ポリペプチドを指す。一部の実施形態では、本明細書中に開示される組換え絹タンパク質断片は、アラネイダもしくはアラネオイドの組換えクモ絹ポリペプチド、又はボンビクス・モリの組換え昆虫絹ポリペプチドを含む。一部の実施形態では、本明細書中に開示される組換え絹タンパク質断片は、アラネイダもしくはアラネオイドの組換えクモ絹ポリペプチドを含む。一部の実施形態では、本明細書中に開示される組換え絹タンパク質断片は、アラネイダもしくはアラネオイドの天然クモ絹ポリペプチドから由来する反復単位を有するブロック共重合体を含む。一部の実施形態では、本明細書中に開示される組換え絹タンパク質断片は、アラネイダもしくはアラネオイドのクモ絹ポリペプチドから由来する合成反復単位を有するブロック共重合体、及びアラネイダもしくはアラネオイドのクモ絹ポリペプチドの天然反復単位から由来する非反復単位を含む。

遺伝子工学における最近の進歩は、様々な種類の組換え絹タンパク質を産生するための経路を提供している。組換えＤＮＡ技術は、より実用的な絹タンパク質の供給源を提供するために使用されている。本明細書中で使用されるように、「組換え絹タンパク質」は、遺伝子工学方法を使用して原核生物又は真核生物発現系において異種的に産生される合成タンパク質を指す。

組換え絹ペプチドを合成するための様々な方法が公知であり、Ａｕｓｕｂｅｌｅｔａｌ．，ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ §８（ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ１９８７，（１９９０））により記載されており、参照により本明細書中に組み込まれる。グラム陰性の桿状細菌である大腸菌は、タンパク質の産業規模の生産のための十分に確立された宿主である。従って、組換え絹の大部分は、大腸菌において生産されてきた。操作が簡単である大腸菌は、短い世代時間を有し、比較的低コストであり、多量のタンパク質産生のためにスケールアップすることができる。

組換え絹タンパク質は、絹タンパク質について、このタンパク質の断片について、又はそのようなタンパク質の類似体についてコードするｃＤＮＡを含む、形質転換された原核生物又は真核生物系により産生されることができる。組換えＤＮＡアプローチは、プログラムされた配列、二次構造、構造、及び正確な分子量を伴う組換え絹の産生を可能にする。このプロセスにおいて四つの主な工程がある：（ｉ）遺伝子「カセット」中への合成絹様遺伝子の設計及び組立、（ｉｉ）ＤＮＡ組換えベクター中へのこのセグメントの挿入、（ｉｉｉ）宿主細胞中へのこの組換えＤＮＡ分子の形質転換、ならびに（ｉｖ）選択されたクローンの発現及び精製。

用語「組換えベクター」は、本明細書中で使用されるように、プラスミドベクター、コスミドベクター、ファージベクター、例えばラムダファージなど、ウイルスベクター、例えばアデノウイルスもしくはバキュロウイルスベクターなど、又は人工染色体ベクター、例えば細菌人工染色体（ＢＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、もしくはＰ１人工染色体（ＰＡＣ）などを含む、当業者に公知の任意のベクターを含む。当該ベクターは、発現ベクターならびにクローニングベクターを含む。発現ベクターは、プラスミドならびにウイルスベクターを含み、一般的に、特定の宿主生物体（例、細菌、酵母、又は植物）において又はインビトロ発現系における動作可能に連結されたコード配列の発現のために必要な所望のコード配列及び適したＤＮＡ配列を含む。クローニングベクターは、一般的に、特定の所望のＤＮＡ断片を操作及び増幅するために使用され、所望のＤＮＡ断片の発現のために必要な機能的配列を欠き得る。

原核生物系は、グラム陰性細菌又はグラム陽性細菌を含む。原核生物発現ベクターは、宿主生物体により認識されることができる複製起点、当該宿主において機能的である相同又は異種プロモーター、クモ絹タンパク質について、このタンパク質の断片について、又は類似タンパク質についてコードするＤＮＡ配列を含むことができる。原核性発現生物の非限定的な例は、エシェリヒア・コリ、バチルス・サブチリス、バチルス・メガテリウム、コリネバクテリウム・グルタミカム、アナベナ、カウロバクター、グルコノバクター、ロドバクター、シュードモナス、パラコッカス、バチルス（例、バチルス・サブチリス）、ブレビバクテリウム、コリネバクテリウム、リゾビウム（シノリゾビウム）、フラボバクテリウム、クレブシエラ、エンテロバクター、ラクトバチルス、ラクトコッカス、メチロバクテリウム、プロピオニバクテリウム、スタフィロコッカス、又はストレプトマイセスの細胞である。

真核生物系は、酵母及び昆虫、哺乳類、又は植物の細胞を含む。この場合では、発現ベクターは、酵母プラスミドの複製起源又は自律複製配列、プロモーター、クモ絹タンパク質について、断片について、又は類似タンパク質についてコードするＤＮＡ配列、ポリアデニル化配列、転写終結部位、及び、最後に、選択遺伝子を含み得る。真核発現生物の非限定的な例は、酵母、例えばサッカロミセス・セレビシエ、ピキア・パストリス、担子胞子性、子嚢胞子性など、糸状菌、例えばアスペルギルス・ニジェール、アスペルギルス・オリゼ、アスペルギルス・ニデュランス、トリコデルマ・リーセイ、アクレモニウム・クリソゲナム、カンジダ、ハンゼヌラ、クルイベロミセス、サッカロミセス（例、サッカロミセス・セレビシエ）、シゾサッカロミセス、ピキア（例、ピキア・パストリス）又はヤロウィア細胞、哺乳類細胞、例えばＨｅＬａ細胞、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞など、昆虫細胞、例えばＳｆ９細胞、ＭＥＬ細胞など、「昆虫宿主細胞」、例えばスポドプテラ・フルギペルダ又はトリコプルシア・ニ細胞などを含む。ＳＦ９細胞、ＳＦ－２１細胞、又はＨｉｇｈ－Ｆｉｖｅ細胞、ここで、ＳＦ－９及びＳＦ－２１は、スポドプテラ・フルギペルダからの卵巣細胞であり、Ｈｉｇｈ－Ｆｉｖｅ細胞は、トリコプルシア・ニ、「植物宿主細胞」、例えばタバコ、ジャガイモ、又はエンドウ豆細胞などからの卵細胞である。

様々な異種宿主系が、異なる型の組換え絹を産生するために探索されてきた。組換え部分的スピドロインならびに操作された絹は、クローニングされ、細菌（エシェリヒア・コリ）、酵母（ピキア・パストリス）、昆虫（カイコの幼虫）、植物（タバコ、大豆、ジャガイモ、シロイヌナズナ）、哺乳類細胞株（ＢＨＴ／ハムスター）、及びトランスジェニック動物（マウス、ヤギ）において発現されている。絹タンパク質の大半が、Ｎ末端又はＣ末端のＨｉｓタグを伴って産生され、精製を単純化し、十分な量のタンパク質を産生する。

一部の実施形態では、異種系を使用して組換えクモ絹タンパク質を発現するために適切な宿主は、トランスジェニック動物及び植物を含み得る。一部の実施形態では、異種系を使用して組換えクモ絹タンパク質を発現するために適切な宿主は、細菌、酵母、哺乳類細胞株を含む。一部の実施形態では、異種系を使用して組換えクモ絹タンパク質を発現するために適切な宿主は、大腸菌を含む。一部の実施形態では、異種系を使用して組換えクモ絹タンパク質を発現するために適切な宿主は、ゲノム編集技術（例、ＣＲＩＳＰＲ）を使用して生成されたトランスジェニックＢ．モリカイコを含む。

本開示中の組換え絹タンパク質は、天然絹タンパク質の反復単位に基づく合成タンパク質を含む。合成反復絹タンパク質配列の他、これらは、追加的に、一つ又は複数の天然非反復絹タンパク質配列を含むことができる。

一部の実施形態では、「組換え絹タンパク質」は、組換えカイコ絹タンパク質又はその断片を指す。絹フィブロイン及び絹セリシンの組換え産生が報告されている。様々な宿主が産生のために使用され、大腸菌、サクロミセス・セレビシエ、シュードモナス属、ロドシュードモナス属、バチルス属、及びストレポミセス属を含む。ＥＰ０２３０７０２を参照のこと。それは、参照によりその全体において本明細書中に組み込まれる。

本明細書中では、また、Ｂ．モリ絹重鎖（Ｈ鎖）の反復ドメインから由来するＧＡＧＡＧＸヘキサペプチド（ＸはＡ、Ｙ、Ｖ、又はＳである）を含む、絹フィブロインタンパク質様マルチブロックポリマーの設計及び生物学的合成が提供される。

一部の実施形態では、本開示は、ＧＡＧＡＧＳヘキサペプチド反復ユニットを含むＢ．モリ絹重鎖（Ｈ鎖）の反復ドメインから由来する、絹タンパク質様マルチブロックポリマーを提供する。ＧＡＧＡＧＳヘキサペプチドは、Ｈ鎖のコアユニットであり、結晶性ドメインの形成において重要な役割を果たしている。ＧＡＧＡＧＳヘキサペプチド反復ユニットを含む絹タンパク質様マルチブロックポリマーは、天然絹フィブロインタンパク質と同様に、自発的に、βシート構造中に凝集し、ここで、絹タンパク質様マルチブロックポリマー中では、本明細書中に記載される任意の重量平均分子量を有する。

一部の実施形態では、本開示は、Ｂ．モリの絹重鎖のＨ鎖から誘導されたＧＡＧＡＧＳヘキサペプチド反復断片及び大腸菌により産生される哺乳類エラスチンＶＰＧＶＧモチーフで構成される絹ペプチド様マルチブロック共重合体を提供する。一部の実施形態では、本開示は、Ｂ．モリの絹重鎖のＨ鎖から誘導されたＧＡＧＡＧＳヘキサペプチド反復断片及び大腸菌により産生されるＧＶＧＶＰで構成される融合絹フィブロインタンパク質を提供し、ここで、本明細書中に記載される任意の重量平均分子量を有する絹タンパク質様マルチブロックポリマー中である。

一部の実施形態では、本開示は、（ＧＡＧＡＧＳ）_１６反復断片で構成されるＢ．モリカイコ組換えタンパク質を提供する。一部の実施形態では、本開示は、大腸菌により産生される、（ＧＡＧＡＧＳ）_１６反復断片及び非反復（ＧＡＧＡＧＳ）_１６－Ｆ－ＣＯＯＨ、（ＧＡＧＡＧＳ）_１６－Ｆ－Ｆ－ＣＯＯＨ、（ＧＡＧＡＧＳ）_１６－Ｆ－Ｆ－Ｆ－ＣＯＯＨ、（ＧＡＧＡＧＳ）_１６－Ｆ－Ｆ－Ｆ－Ｆ－ＣＯＯＨ、（ＧＡＧＡＧＳ）_１６－Ｆ－Ｆ－Ｆ－Ｆ－Ｆ－Ｆ－Ｆ－Ｆ－ＣＯＯＨ、（ＧＡＧＡＧＳ）_１６－Ｆ－Ｆ－Ｆ－Ｆ－Ｆ－Ｆ－Ｆ－Ｆ－Ｆ－Ｆ－Ｆ－Ｆ－ＣＯＯＨで構成される組換えタンパク質を提供し、式中、Ｆは、以下のアミノ酸配列ＳＧＦＧＰＶＡＮＧＧＳＧＥＡＳＳＥＳＤＦＧＳＳＧＦＧＰＶＡＮＡＳＳＧＥＡＳＳＥＳＤＦＡＧを有し、本明細書中に記載される任意の重量平均分子量を有する絹タンパク質様マルチブロックポリマー中にある。

一部の実施形態では、「組換え絹タンパク質」は、組換えクモ絹タンパク質又はその断片を指す。部分的ｃＤＮＡクローンに基づく組換えクモ絹タンパク質の産生が報告されている。そのようなものとして産生される組換えクモ絹タンパク質は、クモのネフィラ・クラビペスからの、ドラッグラインクモ絹タンパク質スピドロイン１から由来する反復配列の一部を含む。Ｘｕｅｔａｌ．（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８７：７１２０－７１２４（１９９０）を参照のこと。ネフィラ・クラビペスのドラッグライン絹からの第二のフィブロインタンパク質スピドロイン２の反復配列の一部分をコードするｃＤＮＡクローン及びその組換え合成は、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９２，ｖｏｌｕｍｅ２６７，ｐｐ．１９３２０－１９３２４において記載されている。形質転換された大腸菌からのネフィラ・クラビペスのタンパク質断片及び変異体を含むクモ絹タンパク質の組換え合成が、米国第５，７２８，８１０号及び第５，９８９，８９４号において記載されている。小瓶状腺クモ絹タンパク質をコードするｃＤＮＡクローン及びその発現が、第５，７３３，７７１号及び第５，７５６，６７７号において記載されている。オーブウェブスピニングクモからの鞭状腺絹タンパク質をコードするｃＤＮＡクローンが、米国特許第５，９９４，０９９号において記載されている。米国特許第６，２６８，１６９号は、大腸菌、バチルス・サブチリス、及びピキア・パストリス組換え発現系による、ネフィラ・クラビペスの天然クモドラッグラインにおいて見出される反復ペプチド配列から由来するクモ絹様タンパク質の組換え合成を記載する。ＷＯ０３／０２０９１６には、ネフィラ・マダガスカリエンシス、ネフィラ・セネガレンシス、テトラグナタ・カウアイエンシス、テトラグナタ・バーシカラー、アルギオペ・オーランティア、アルギオペ・トリファシアータ、ガステラカンサ・マンモサ、及びラトロデクトス・ゲオメトリクスの大瓶状腺、アルギオペ・トリファシアタの鞭状腺、ドロメデス・テネブロススの瓶状腺、プレクトリューリス・トリスティスからの二組の絹腺、及びマイガロモルフ・ユーアグルス・チソセウスの絹腺から由来する反復配列を有するクモクモ絹タンパク質をコードするｃＤＮＡクローン及びその組換え産生が記載されている。上の参考文献の各々が、参照によりその全体において本明細書中に組み込まれる。

一部の実施形態では、組換えクモ絹タンパク質は、クモ絹タンパク質及び昆虫絹タンパク質、クモ絹タンパク質及びコラーゲン、クモ絹タンパク質及びレシリン、又はクモ絹タンパク質及びケラチンのハイブリッドタンパク質である。クモ絹反復単位は、天然大瓶状腺ポリペプチド、例えばドラッグラインクモ絹ポリペプチド、小瓶状腺ポリペプチド、鞭状腺ポリペプチド、凝集腺クモ絹ポリペプチド、ブドウ状腺クモ絹ポリペプチド、又は梨状腺クモ絹ポリペプチドなどの内で反復的に生じる少なくとも一つのペプチドモチーフを含む、又はそれからなる領域のアミノ酸配列を含む、又はそれからなる。

一部の実施形態では、本開示における組換えクモ絹タンパク質は、天然クモ絹タンパク質の反復単位、コンセンサス配列、及び、場合により、一つ又は複数の天然非反復クモ絹タンパク質配列から由来する合成クモ絹タンパク質を含む。天然クモ絹ポリペプチドの反復単位は、アラネイダ又はアラネオイドのドラッグラインクモ絹ポリペプチド又は鞭状腺クモ絹ポリペプチドを含み得る。

本明細書中で使用されるように、クモ絹「反復単位」は、天然大瓶状腺ポリペプチド、例えばドラッグラインクモ絹ポリペプチド、小瓶状腺腺ポリペプチド、鞭状腺ポリペプチド、凝集腺クモ絹ポリペプチド、ブドウ状腺クモ絹ポリペプチド、又は梨状腺クモ絹ポリペプチドなどの内で反復的に生じる少なくとも一つのペプチドモチーフを含む、又はそれからなる。「反復単位」は、アミノ酸配列において、天然の絹ポリペプチド（例、ＭａＳｐＩ、ＡＤＦ－３，ＡＤＦ－４、又はＦｌａｇ）（即ち、同一のアミノ酸配列）内で反復的に生じる、少なくとも一つのペプチドモチーフ（例、ＡＡＡＡＡＡ）又はＧＰＧＱＱ）を含む、又はそれからなる領域に、又はそれらと実質的に類似したアミノ酸配列（即ち、変異アミノ酸配列）に対応する領域を指す。天然絹ポリペプチド内の対応するアミノ酸配列と「実質的に類似」しているアミノ酸配列を有する「反復単位」（即ち、野生型反復単位）はまた、その特性に関して類似しており、例えば、「実質的に類似した反復単位」を含む絹タンパク質は、依然として不溶性であり、その不溶性を保持する。例えば、天然絹ポリペプチドのアミノ酸配列と「同一」であるアミノ酸配列を有する「反復単位」は、ＭａＳｐＩ、ＭａＳｐＩＩ、ＡＤＦ－３、及び／又はＡＤＦ－４の一つ又は複数のペプチドモチーフに対応する絹ポリペプチドの一部であることができる。例えば、天然絹ポリペプチドのアミノ酸配列と「実質的に類似」しているアミノ酸配列を有する「反復単位」は、ＭａＳｐＩ、ＭａＳｐＩＩ、ＡＤＦ－３、及び／又はＡＤＦ－４の一つ又は複数のペプチドモチーフに対応するが、しかし、特定のアミノ酸位置で一つ又は複数のアミノ酸置換を有する絹ポリペプチドの一部であることができる。

本明細書中で使用されるように、用語「コンセンサスペプチド配列」は、特定の位置（例、Ｇ）において頻繁に生じるアミノ酸を含むアミノ酸配列を指し、ここで、さらに決定されない他のアミノ酸は、プレースホルダー「Ｘ」により置換される。一部の実施形態では、コンセンサス配列は、（ｉ）ＧＰＧＸＸ、ここで、Ｘは、Ａ、Ｓ、Ｇ、Ｙ、Ｐ、及びＱから選択されるアミノ酸である；（ｉｉ）ＧＧＸ、ここで、Ｘは、Ｙ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ａ、Ｔ、Ｎ、及びＱ、好ましくはＹ、Ｐ、及びＱから選択されるアミノ酸である；（ｉｉｉ）Ａ_ｘ、ここで、ｘは５～１０からの整数である、のうちの少なくとも一つである。

コンセンサスペプチド配列ＧＰＧＸＸ及びＧＧＸ、即ち、グリシンリッチモチーフは、絹ポリペプチド、及び、このように、当該モチーフを含む絹タンパク質から形成される糸に柔軟性を提供する。詳細には、反復されたＧＰＧＸＸモチーフは、ターンらせん構造を形成し、絹ポリペプチドに弾性を付与する。大瓶状腺及び鞭状腺絹は両方ともＧＰＧＸＸモチーフを有する。反復されたＧＧＸモチーフは、１ターン当たり三つのアミノ酸を有するらせん構造に関連付けられ、大半のクモの絹において見出される。ＧＧＸモチーフは、絹に追加的な弾性特性を提供し得る。反復されたポリアラニンＡｘ（ペプチド）モチーフは、例えば、ＷＯ０３／０５７７２７において記載されるように、絹ポリペプチドに強度を提供する結晶性βシート構造を形成する。

一部の実施形態では、本開示における組換えクモ絹タンパク質は、二つの同一の反復単位を含み、各々が、レジリンから由来するＧＧＲＰＳＤＴＹＧ及びＧＧＲＰＳＳＹＧからなる群から選択される少なくとも一つの、好ましくは一つのアミノ酸配列を含む。レシリンは、大半の節足動物において見出されるエラストマータンパク質であり、低い剛性及び高い強度を提供する。

本明細書中で使用されるように、「非反復単位」は、米国特許第８，３６７，８０３号において記載されるように、好ましくは、クモアラネウス・ダイアデマトゥスのＡＤＦ－３（配列番号１）、ＡＤＦ－４（配列番号２）、ＮＲ３（配列番号４１）、ＮＲ４（配列番号４２）、ＡＤＦ－４内の天然ドラグラインポリペプチド内の対応する非反復（カルボキシ末端）アミノ酸配列（即ち、野生型非反復（カルボキシ末端）単位）と「実質的に類似」しているアミノ酸配列を指し、Ｃ１６ペプチド（クモ絹タンパク質ｅＡＤＦ４、分子量４７．７ｋＤａ、ＡＭＳｉｌｋ）は、Ａ．ダイアデマトゥスからのＡＤＦ４の天然配列から適合されたアミノ酸配列である、配列ＧＳＳＡＡＡＡＡＡＡＡＳＧＰＧＧＹＧＰＥＮＱＧＰＳＧＰＧＧＹＧＰＧＧＰの１６反復を含む。非反復ＡＤＦ－４及びその変異体は、効率的な組立挙動を呈する。

合成クモ絹タンパク質の間で、本開示における組換え絹タンパク質は、一部の実施形態では、米国特許第８２８８５１２号において記載されるポリペプチド配列配列番号１を有するＣ１６タンパク質を含む。配列番号１において示されるポリペプチド配列の他に、特に、この配列の機能的等価物、機能的誘導体、及び塩も含まれる。

本明細書中で使用されるように、「機能的等価物」は、上記のアミノ酸配列の少なくとも一つの配列位置において、具体的に言及されるアミノ酸以外のアミノ酸を有する変異体を指す。

一部の実施形態では、本開示における組換えクモ絹タンパク質は、Ｘｕｅｔａｌ．，ＰＮＡＳ，ＵＳＡ，８７，７１２０，（１９９０）により記載されているスピドロインメジャー１、ＨｉｎｍａｎａｎｄＬｅｗｉｓ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６７，１９３２０，（１９２２）により記載されているスピドロインメジャー２、米国特許出願第２０１６／０２２２１７４号及び米国特許第９，０５１，４５３号、第９，６１７，３１５号、第９，６８９，０８９号、第８，１７３，７７２号、第８，６４２，７３４号、第８，３６７，８０３号、第８，０９７，５８３号、第８，０３０，０２４号、第７，７５４，８５１号、第７，１４８，０３９号、第７，０６０，２６０号において記載されている組換えクモ絹タンパク質、又は、あるいは、特許出願ＷＯ９５／２５１６５において記載されているマイナースピドロインに対応するクモ絹タンパク質を含む少なくとも一つの天然又は組換え絹タンパク質を有効量で含む。上で引用された参考文献の各々は、その全体において参照により本明細書中に組み込まれる。本開示の組換えＲＳＰＦのために適切な追加の組換えクモ絹タンパク質は、アラネウス・ダイアデマトゥスの「大瓶状」腺からのＡＤＦ３及びＡＤＦ４を含む。

組換え絹はまた、他の特許及び特許出願において記載されており、参照により本明細書中に組み込まれる：米国２００４５９０１９６、米国７，７５４，８５１、米国２００７６５４４７０、米国７，９５１，９０８、米国２０１０７８５９６０、米国８，０３４，８９７、米国２００９０２６３４３０、米国２００８２２６８５４、米国２００９０１２３９６７、米国２００５７１２０９５、米国２００７９９１０３７、米国２００９０１６２８９６、米国２００８８５２６６、米国８，３７２，４３６、米国２００７９８９９０７、米国２００９２６７５９６、米国２０１０３１９５４２、米国２００９２６５３４４、米国２０１２６８４６０７、米国２００４５８３２２７、米国８，０３０，０２４、米国２００６６４３５６９、米国７，８６８，１４６、米国２００７９９１９１６、米国８，０９７，５８３、米国２００６６４３２００、米国８，７２９，２３８、米国８，８７７，９０３、米国２０１９００６２５５７、米国２０１６０２８０９６０、米国２０１１０２０１７８３、米国２００８９９１９１６、米国２０１１９８６６６２、米国２０１２６９７７２９、米国２０１５０３２８３６３、米国９，０３４，８１６、米国２０１３０１７２４７８、米国９，２１７，０１７、米国２０１７０２０２９９５、米国８，７２１，９９１、米国２００８２２７４９８、米国９，２３３，０６７、米国８，２８８，５１２、米国２００８１６１３６４、米国７，１４８，０３９、米国１９９９２４７８０６、米国２００１８６１５９７、米国２００４８８７１００、米国９，４８１，７１９、米国８，７６５，６８８、米国２００８８０７０５、米国２０１０８０９１０２、米国８，３６７，８０３、米国２０１０６６４９０２、米国７，５６９，６６０、米国１９９９１３８８３３、米国２０００５９１６３２、米国２０１２００６５１２６、米国２０１００２７８８８２、米国２００８１６１３５２、米国２０１０００１５０７０、米国２００９５１３７０９、米国２００９０１９４３１７、米国２００４５５９２８６、米国２００５８９５５１、米国２００８１８７８２４、米国２００５０２６６２４２、米国２００５０２２７３２２、及び米国２００４４４１８。

組換え絹はまた、他の特許及び特許出願において記載されており、参照により本明細書中に組み込まれる：米国２０１９００６２５５７、米国２０１５０２８４５６５、米国２０１３０２２５４７６、米国２０１３０１７２４７８、米国２０１３０１３６７７９、米国２０１３０１０９７６２、米国２０１２０２５２２９４、米国２０１１０２３０９１１、米国２０１１０２０１７８３、米国２０１００２９８８７７、米国１０，４７８，５２０、米国１０，２５３，２１３、米国１０，０７２，１５２、米国９，２３３，０６７、米国９，２１７，０１７、米国９，０３４，８１６、米国８，８７７，９０３、米国８，７２９，２３８、米国８，７２１，９９１、米国８，０９７，５８３、米国８，０３４，８９７、米国８，０３０，０２４、米国７，９５１，９０８、米国７，８６８，１４６、及び米国７，７５４，８５１。

一部の実施形態では、本開示における組換えクモ絹タンパク質は、２～８０の反復単位を含む、又はそれらから成り、各々が、本明細書中に定義されるＧＰＧＸＸ、ＧＧＸ、及びＡ_ｘから独立して選択される。

一部の実施形態では、本開示の組換えクモ絹タンパク質は、反復単位を含む、又はそれらから成り、各々が、独立して、ＧＰＧＡＳ、ＧＰＧＳＧ、ＧＰＧＧＹ、ＧＰＧＧＰ、ＧＰＧＧＡ、ＧＰＧＱＱ、ＧＰＧＧＧ、ＧＰＧＱＧ、ＧＰＧＧＳ、ＧＧＹ、ＧＧＰ、ＧＧＡ、ＧＧＲ、ＧＧＳ、ＧＧＴ、ＧＧＮ、ＧＧＱ、ＡＡＡＡＡ、ＡＡＡＡＡＡ、ＡＡＡＡＡＡＡ、ＡＡＡＡＡＡＡＡ、ＡＡＡＡＡＡＡＡＡ、ＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ、ＧＧＲＰＳＤＴＹＧ、及びＧＧＲＰＳＳＳＹＧ、（ｉ）ＧＰＹＧＰＧＡＳＡＡＡＡＡＡＧＧＹＧＰＧＳＧＱＱ、（ｉｉ）ＧＳＳＡＡＡＡＡＡＡＡＳＧＰＧＧＹＧＰＥＮＱＧＰＳＧＰＧＧＹＧＰＧＧＰ、（ｉｉｉ）ＧＰＧＱＱＧＰＧＱＱＧＰＧＱＱＧＰＧＱＱ：（ｉｖ）ＧＰＧＧＡＧＧＰＹＧＰＧＧＡＧＧＰＹＧＰＧＧＡＧＧＰＹ、（ｖ）ＧＧＴＴＩＩＥＤＬＤＩＴＩＤＧＡＤＧＰＩＴＩＳＥＥＬＴＩ、（ｖｉ）ＰＧＳＳＡＡＡＡＡＡＡＡＳＧＰＧＱＧＱＧＱＧＱＧＱＧＧＲＰＳＤＴＹＧ、（ｖｉｉ）ＳＡＡＡＡＡＡＡＡＧＰＧＧＧＮＧＧＲＰＳＤＴＹＧＡＰＧＧＧＮＧＧＲＰＳＳＳＹＧ、（ｖｉｉｉ）ＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＳＧＧＡＧＧＳ（配列番号２７）、（ｉｘ）ＧＰＧＧＡＧＰＧＧＹＧＰＧＧＳＧＰＧＧＹＧＰＧＧＳＧＰＧＧＹ、（ｘ）ＧＰＹＧＰＧＡＳＡＡＡＡＡＡＧＧＹＧＰＧＣＧＱＱ、（ｘｉ）ＧＰＹＧＰＧＡＳＡＡＡＡＡＡＧＧＹＧＰＧＫＧＱＱ、（ｘｉｉ）ＧＳＳＡＡＡＡＡＡＡＡＳＧＰＧＧＹＧＰＥＮＱＧＰＣＧＰＧＧＹＧＰＧＧＰ、（ｘｉｉｉ）ＧＳＳＡＡＡＡＡＡＡＡＳＧＰＧＧＹＧＰＫＮＱＧＰＳＧＰＧＧＹＧＰＧＧＰ、（ｘｉｖ）ＧＳＳＡＡＡＡＡＡＡＡＳＧＰＧＧＹＧＰＫＮＱＧＰＳＧＰＧＧＹＧＰＧＧＰ又は米国特許第８，８７７，９０３号において記載されるそれらの変異体、例えば、ペプチド鎖中のＧＰＧＡＳ、ＧＧＹ、ＧＰＧＳＧの連続順序、又はペプチド鎖中のＡＡＡＡＡＡＡＡ、ＧＰＧＧＹ、ＧＰＧＧＰの連続順序、ペプチド鎖中のＡＡＡＡＡＡＡＡ、ＧＰＧＱＧ、ＧＧＲの連続順序を有する合成クモペプチドからなる群から選択される。

一部の実施形態では、本開示は、天然クモ絹タンパク質から由来するアミノ酸の反復単位、例えばスピドロインメジャー１ドメイン、スピドロインメジャー２ドメイン、又はスピドロインマイナー１ドメインなどを模倣する絹タンパク質様マルチブロックペプチド及び三次元立体構造の改変を伴わない反復単位間のバリエーションのプロファイルを提供し、ここで、これらの絹タンパク質様マルチブロックペプチドは、以下の配列（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、及び／又は（ＩＶ）の一つに対応するアミノ酸の反復単位を含む。

［（ＸＧＧ）_ｗ（ＸＧＡ）（ＧＸＧ）_ｘ（ＡＧＡ）_ｙ（Ｇ）_ｚＡＧ］_ｐ式（Ｉ）。式中、Ｘはチロシンに又はグルタミンに相当し、ｗは２又は３に等しい整数であり、ｘは１～３の整数であり、ｙは５～７の整数であり、ｚは１又は２に等しい整数であり、及びｐは整数であり、本明細書中に記載される任意の重量平均分子量を有し、ならびに／あるいは
［（ＧＰＧ_２ＹＧＰＧＱ_２）_ａ（Ｘ’）_２Ｓ（Ａ）_ｂ〕_ｐ式（ＩＩ）。式中、Ｘ’はアミノ酸配列ＧＰＳ又はＧＰＧに対応し、ａは２又は３に等しく、ｂは７～１０の整数であり、及びｐは整数であり、本明細書中に記載される任意の重量平均分子量を有し、ならびに／あるいは
［（ＧＲ）（ＧＡ）_ｌ（Ａ）_ｍ（ＧＧＸ）_ｎ（ＧＡ）_ｎ（Ａ）_ｍ〕_ｐ式（ＩＩＩ）及び／又は［（ＧＧＸ）_ｎ（ＧＡ）_ｍ（Ａ）_ｌ〕_ｐ式（ＩＶ）。式中、Ｘ”はチロシン、グルタミン、又はアラニンに対応し、ｌは１～６の整数であり、ｍは０～４の整数であり、ｎは１～４の整数であり、及びｐは整数である。

一部の実施形態では、組換えクモ絹タンパク質又は配列（Ｖ）のアミノ酸反復単位を含むクモ絹タンパク質の類似体：
［（ＸａａＧｌｙＧｌｙ）_ｗ（ＸａａＧｌｙＡｌａ）（ＧｌｙＸａａＧｌｙ）_ｘ（ＡｌａＧｌｙＡｌａ）_ｙ（Ｇｌｙ）ｚＡｌａＧｌｙ］_ｐ式（Ｖ）、式中、Ｘａａａはチロシン又はグルタミンであり、ｗは２又は３に等しい整数であり、ｘは１～３の整数であり、ｙは５～７の整数であり、ｚは１又は２に等しい整数であり、及びｐは整数である。

一部の実施形態では、本開示中の組換えクモ絹タンパク質は、米国特許第８，３６７，８０３号において記載されているように、ＡＤＦ－３又はその変異体、ＡＤＦ－４又はその変異体、ＭａＳｐＩ（配列番号４３）又はその変異体、ＭａＳｐＩＩ（配列番号４４）又はその変異体からなる群から選択される。

一部の実施形態では、本開示は、哺乳類細胞において産生される水溶性の組換えクモ絹タンパク質を提供する。哺乳類細胞において産生されるクモ絹タンパク質の溶解性は、これらのタンパク質中のＣＯＯＨ末端の存在に起因し、それによって、それらはより親水性になる。これらのＣＯＯＨ末端アミノ酸は、微生物宿主において発現されるクモ絹タンパク質中には存在しない。

一部の実施形態では、本開示における組換えクモ絹タンパク質は、ＧＣＧＧＧＧＧＧ、ＧＫＧＧＧＧＧＧ、ＧＣＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ、ＧＫＧＧＧＧＧＧＳＧＧ、及びＧＣＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧからなるアミノ酸配列から選択されるアミノ末端又はカルボキシル末端で改変された水溶性組換えクモ絹タンパク質Ｃ１６を含む。一部の実施形態では、本開示における組換えクモ絹タンパク質は、タンパク質の分子量が、本明細書中に記載される範囲であるように、Ｃ_１６ＮＲ_４、Ｃ_３２ＮＲ_４、Ｃ_１６、Ｃ_３２、ＮＲ_４Ｃ_１６ＮＲ_４、ＮＲ_４Ｃ_３２ＮＲ_４、ＮＲ_３Ｃ_１６ＮＲ_３、又はＮＲ_３Ｃ_３２ＮＲ_３を含む。

一部の実施形態では、本開示中の組換えクモ絹タンパク質は、米国特許第８，８７７，９０３号において記載されているように、ＡダイアデマトゥスからのＡＤＦ４の天然配列から適合された合成反復ペプチドセグメント及びアミノ酸配列を有する組換えクモ絹タンパク質を含む。一部の実施形態では、本開示中のＲＳＰＦは、天然クモ絹タンパク質から由来する反復ペプチド単位、例えばスピドロインメジャー１ドメイン、スピドロインメジャー２ドメイン、又はスピドロインマイナー１ドメインなどを有する組換えクモ絹タンパク質を含み、ここで、反復ペプチド配列は、米国特許第８，３６７，８０３号において記載されているように、ＧＳＳＡＡＡＡＡＡＡＡＳＧＰＧＱＧＱＧＱＧＱＧＱＧＧＲＰＳＤＴＹＧ又はＳＡＡＡＡＡＡＡＡＧＰＧＧＧＮＧＧＲＰＳＤＴＹＧＡＰＧＧＧＮＧＧＲＰＳＳＳＹＧである。

一部の実施形態では、本開示は、ＧＰＧＧＡＧＰＧＧＹＧＰＧＧＳＧＰＧＧＹＧＰＧＧＳＧＰＧＧＹ反復断片で構成され、本明細書中に記載される分子量を有する組換えクモタンパク質を提供する。

本明細書中で使用されるように、用語「組換え絹」は、組換えクモ及び／又はカイコ絹タンパク質あるいはその断片を指す。一実施形態では、クモ絹タンパク質は、帯状絹（ブドウ状腺絹）、卵嚢絹（円柱腺絹）、卵ケース絹（管状腺絹）、非粘着性ドラッグライン絹（大瓶状腺絹）、付着糸絹（梨状腺絹）、粘着性絹コア線維（鞭状腺絹）、及び粘着性絹外線維（凝集腺絹）からなる群から選択される。例えば、組換えクモ絹タンパク質は、本明細書中に記載されるように、米国特許出願第２０１６／０２２２１７４号ならびに米国特許第９，０５１，４５３号、第９，６１７，３１５号、第９，６８９，０８９号、第８，１７３，７７２号、及び第８，６４２，７３４号において記載されるタンパク質を含む。

一部の生物は、固有の配列、構造エレメント、及び機械的特性を伴う複数の絹線維を作製する。例えば、オーブウィービングクモは、環境又はライフサイクルニッチに適合するように調整された線維中に重合された、異なる絹ポリペプチド配列を産生する六つの固有の種類の腺を有する。線維は、それらが由来する腺にちなんで名付けられ、ポリペプチドは、腺の略語（例、「Ｍａ」）及びスピドロインについての「Ｓｐ」（クモフィブロインについての略）で標識される。ｏｒｂウィーバーでは、これらの種類は、大瓶状腺（ＭａＳｐ、ドラッグラインとも呼ばれる）、小瓶状腺（ＭｉＳｐ）、鞭状腺（Ｆｌａｇ）、ブドウ状腺（ＡｃＳｐ）、管状腺（ＴｕＳｐ）、及び梨状腺（ＰｙＳｐ）を含む。異なる属及び生物種の間の線維の種類、ドメイン、及び変動にわたるポリペプチド配列のこの組み合わせは、組換え線維の商業産生により利用することができる、幅広い潜在的な特性に導く。今日まで、組換え絹を用いた研究の大部分が、大瓶状腺スピドロイン（ＭａＳｐ）に焦点を当ててきた。

ブドウ状腺（ＡｃＳｐ）絹は、中程度に高い強度及び中程度に高い伸張性とを合わせた結果、高い靭性を有する傾向がある。ＡｃＳｐ絹は、ポリセリン及びＧＰＸのモチーフをしばしば組み込む、大きなブロック（「アンサンブルリピート」）サイズにより特徴付けられる。管状腺（ＴｕＳｐ又は円筒形）絹は、大きな直径を有する傾向があり、中程度の強度及び高い伸張性を伴う。ＴｕＳｐ絹は、それらのポリセリン及びポリトレオニン含量、ならびにポリアラニンの短い管により特徴付けられる。大瓶状（ＭａＳｐ）絹は、高い強度及び中程度の伸張性を有する傾向がある。ＭａＳｐ絹は、二つのサブタイプの一つであることができる：ＭａＳｐ１及びＭａＳｐ２。ＭａＳｐ１絹は、一般的に、ＭａＳｐ２絹よりも伸張性が低く、ポリアラニン、ＧＸ、及びＧＧＸモチーフにより特徴付けられる。ＭａＳｐ２絹は、ポリアラニン、ＧＧＸ、及びＧＰＸモチーフにより特徴付けられる。小瓶状腺（ＭｉＳｐ）絹は、中程度の強度及び中程度の伸張性を有する傾向がある。ＭｉＳｐ絹は、ＧＧＸ、ＧＡ、及びポリＡモチーフにより特徴付けられ、しばしば、約１００アミノ酸のスペーサーエレメントを含む。鞭状腺（Ｆｌａｇ）絹は、非常に高い伸張性及び中程度の強度を有する傾向がある。Ｆｌａｇ絹は通常、ＧＰＧ、ＧＧＸ、及び短いスペーサーモチーフにより特徴付けられる。

絹ポリペプチドは、非反復領域（例、Ｃ末端ドメイン及びＮ末端ドメイン）により隣接された反復ドメイン（ＲＥＰ）で特徴的に構成されている。一実施形態では、Ｃ末端ドメイン及びＮ末端ドメインの両方が、７５～３５０アミノ酸長である。反復ドメインは、階層構造を示す。反復ドメインは、一連のブロック（反復ユニットとも呼ばれる）を含む。ブロックは、絹反復ドメイン全体にわたって、時々完全で、時々不完全に（準反復ドメインを形成する）反復される。ブロックの長さ及び組成は、異なる絹の種類の間で、及び異なる種にわたり変動する。米国公開出願第２０１６／０２２２１７４号の表１は、その全体が本明細書中に組み込まれ、選択された種及び絹型からのブロック配列の例を列挙し、さらなる例が、Ｒｉｓｉｎｇ，Ａ．ｅｔａｌ．，Ｓｐｉｄｅｒｓｉｌｋｐｒｏｔｅｉｎｓ：ｒｅｃｅｎｔａｄｖａｎｃｅｓｉｎｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ－ｆｕｎｃｔｉｏｎｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓａｎｄｂｉｏｍｅｄｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ＣｅｌｌＭｏｌ．ＬｉｆｅＳｃｉ．，６８：２，ｐｇ１６９－１８４（２０１１）；及びＧａｔｅｓｙ，Ｊ．ｅｔａｌ．，Ｅｘｔｒｅｍｅｄｉｖｅｒｓｉｔｙ，ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ，ａｎｄｃｏｎｖｅｒｇｅｎｃｅｏｆｓｐｉｄｅｒｓｉｌｋｆｉｂｒｏｉｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９１：５５１３，ｐｇ．２６０３－２６０５（２００１）において提示されている。一部の場合では、ブロックは規則的なパターンにおいて配置され、絹配列の反復ドメイン中に複数回（通常、２～８）現れるより大きなマクロリピートを形成する。反復ドメイン又はマクロリピート内の反復ブロック、及び反復ドメイン内の反復マクロリピートは、スペーシングエレメントにより分離されうる。

本開示の特定の実施形態に従った、ブロック及び／又はマクロリピートドメインからの特定のクモ絹ブロック共重合体ポリペプチドの構造が、米国特許出願公開第２０１６／０２２２１７４号において例証されている。

組換え原核生物又は真核生物系における遺伝子発現により産生されるクモ絹配列に基づく組換えブロック共重合体ポリペプチドは、当技術分野において公知の方法に従って精製することができる。好ましい実施形態では、商業的に入手可能な発現／分泌系を使用することができ、それにより、組換えポリペプチドが発現され、その後、宿主細胞から分泌され、周囲の培地から簡単に精製される。発現／分泌ベクターを使用しない場合、代替的なアプローチは、ポリペプチドが発現された原核細胞又は真核細胞から由来する細胞可溶化物（細胞の完全性の破壊後の細胞の残り）から組換えブロック共重合体ポリペプチドを精製することを含む。そのような細胞可溶化物の生成のための方法は、当業者に公知である。一部の実施形態では、組換えブロック共重合体ポリペプチドは、細胞培養上清から単離される。

組換えブロック共重合体ポリペプチドは、親和性分離により、例えば、それらのＮ末端又はＣ末端の６～８のヒスチジン残基でタグ付けされた組換えポリペプチドの単離用の組換えポリペプチド又はニッケルカラムに特異的に結合する抗体との免疫学的相互作用により精製されてもよい。代替タグは、ＦＬＡＧエピトープ又はヘマグルチニンエピトープを含み得る。そのような方法は、当業者により一般的に使用される。

そのようなポリペプチド（即ち、組換え絹タンパク質）の溶液を次に、本明細書中に記載されるように調製し、使用してもよい。

別の実施形態では、組換え絹タンパク質は、米国特許第８，６４２，７３４号において記載される方法に従って調製してもよく、その全体が本明細書中に組み込まれ、本明細書中に記載されるように使用される。

一実施形態では、組換えクモ絹タンパク質が提供される。クモ絹タンパク質は、典型的には、１７０～７６０アミノ酸残基、例えば１７０～６００アミノ酸残基など、好ましくは２８０～６００アミノ酸残基、例えば３００～４００アミノ酸残基など、より好ましくは３４０～３８０アミノ酸残基からなる。小さなサイズが有利である。なぜなら、より長いクモ絹タンパク質は、非結晶性凝集体を形成する傾向があり、それは、可溶化及び重合のために厳しい溶媒の使用が必要となるためである。組換えクモ絹タンパク質は、特に、クモ絹タンパク質が、クモ絹タンパク質のＮ末端部分から由来する三つ以上の断片を含む場合では、７６０を上回る残基を含んでもよい。クモ絹タンパク質は、クモ絹タンパク質の対応する部分から由来する少なくとも一つの断片（ＮＴ）、及びクモ絹タンパク質の対応する内部断片から由来する反復断片（ＲＥＰ）からなるＮ末端断片を含む。場合により、クモ絹タンパク質は、クモ絹タンパク質の対応する断片から由来するＣ末端断片（ＣＴ）を含む。クモ絹タンパク質は、典型的には、クモ絹タンパク質のＮ末端部分から由来する単一断片（ＮＴ）を含むが、しかし、好ましい実施形態では、Ｎ末端断片は、少なくとも二つ、例えばクモ絹タンパク質のＮ末端部分から由来する二つの断片（ＮＴ）などを含む。このように、スピドロインは、式ＮＴ_ｍ－ＲＥＰ、及び代替的にＮＴ_ｍ－ＲＥＰ－ＣＴにより模式的に表すことができ、ｍは、１又はそれ以上、例えば２又はそれ以上など、好ましくは１～２、１～４、１～６、２～４、又は２～６の範囲内の整数である。好ましいスピドロインは、式ＮＴ_２－ＲＥＰ又はＮＴ－ＲＥＰ、及び代替的にＮＴ_２－ＲＥＰ－ＣＴ又はＮＴ－ＲＥＰ－ＣＴにより模式的に表すことができる。タンパク質断片は、典型的には、ペプチド結合を介して共有結合される。一実施形態では、クモ絹タンパク質は、ＲＥＰ断片に結合されたＮＴ断片から成り、そのＲＥＰ断片は、場合により、ＣＴ断片に結合される。

一実施形態では、単離されたクモ絹タンパク質のポリマーを産生する方法の第一の工程は、適切な宿主、例えば大腸菌などにおける、クモ絹タンパク質をコードするポリ核酸分子の発現を含む。このようにして得られたタンパク質は、標準的な手順を使用して単離される。場合により、リポ多糖類及び他の発熱性物質は、この段階で積極的に除去される。

単離されたクモ絹タンパク質のポリマーを産生する方法の第二の工程では、液体媒体中のクモ絹タンパク質の溶液が提供される。用語「可溶性」及び「溶液中」は、タンパク質が目に見えるように凝集せず、６０，０００×ｇで溶媒から沈殿しないことを意味する。液体媒体は、任意の適切な媒体、例えば水性媒体など、好ましくは生理学的媒体、典型的には、緩衝水性媒体、例えば１０～５０ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ緩衝液又はリン酸緩衝液などであることができる。液体媒体は、６．４又はそれ以上のｐＨ及び／又はクモ絹タンパク質の重合を防止するイオン組成物を有する。すなわち、液体媒体は、ｐＨ６．４又はそれ以上、あるいはクモ絹タンパク質の重合を防止するイオン組成物のいずれか、又はその両方を有する。

クモ絹タンパク質の重合を防止するイオン組成物は、本明細書中に開示される方法を利用して、当業者により容易に調製されることができる。クモ絹タンパク質の重合を防止する好ましいイオン組成物は、３００ｍＭ超のイオン強度を有する。クモ絹タンパク質の重合を防止するイオン組成物の特定の例は、３００ｍＭ超のＮａＣｌ、１００ｍＭのリン酸塩、及びクモ絹タンパク質の重合に対する所望の予防効果を有するこれらのイオンの組み合わせ、例えば、１０ｍＭのリン酸塩及び３００ｍＭのＮａＣｌとの組み合せを含む。

ＮＴ断片の存在によって、溶液の安定性が改善され、これらの条件下でのポリマー形成が防止される。これは、即時の重合が望ましくないであろう場合、例えば、タンパク質精製の間、大バッチの調製中、又は他の条件を最適化する必要がある場合に有利であり得る。液体媒体のｐＨは、クモ絹タンパク質の高い溶解性を達成するために、６．７又はそれ以上、例えば７．０又はそれ以上など、あるいはさらに８．０又はそれ以上、例えば最大１０．５などまで調整されることが好ましい。また、液体媒体のｐＨは、６．４～６．８の範囲に調整されることが有利であり得るが、それによって、クモ絹タンパク質の十分な溶解性が提供されるが、しかし、その後のｐＨ調整が６．３又はそれ以下まで促進される。

第三の工程では、液体媒体の特性は、６．３又はそれ以下のｐＨ及び重合を可能にするイオン組成物に調整される。すなわち、クモ絹タンパク質が溶解される液体媒体が、６．４又はそれ以上のｐＨを有する場合、ｐＨは６．３又はそれ以下まで減少される。当業者は、典型的には、強酸又は弱酸の添加を含め、これを達成するための様々な方法を十分に認識している。クモ絹タンパク質が溶解される液体媒体が、重合を防止するイオン組成物を有する場合、イオン組成物は、重合を可能にするように変化する。当業者は、これを達成するための様々な方法、例えば、希釈、透析、又はゲル濾過を十分に認識している。必要な場合、この工程は、液体媒体のｐＨを６．３又はそれ以下に減少させること、及び重合を可能にするためにイオン組成物を変化させることを含む。液体媒体のｐＨは、６．２又はそれ以下、例えば６．０又はそれ以下などに調整されることが好ましい。特に、先行工程における６．４又は６．４～６．８からのｐＨ降下を、この工程において６．３又は６．０～６．３、例えば、６．２に限定することは、実用的な観点から有利であり得る。好ましい実施形態では、この工程の液体媒体のｐＨは、３又はそれ以上、例えば４．２以上などである。結果として得られるｐＨ範囲、例えば、４．２～６．３によって、迅速な重合が促進される。

第四の工程では、クモ絹タンパク質は、６．３又はそれ以下のｐＨ及びクモ絹タンパク質の重合を可能にするイオン組成物を有する液体媒体中で重合することができる。ＮＴ断片の存在によって、６．４又はそれ以上のｐＨでのクモ絹タンパク質の溶解性、及び／又はクモ絹タンパク質の重合を防止するイオン組成物が改善されるが、それは、イオン組成物がクモ絹タンパク質の重合を可能にする場合、６．３又はそれ以下のｐＨでのポリマー形成を加速させる。結果として得られるポリマーは、好ましくは、固体及び肉眼的であり、それらは、６．３又はそれ以下のｐＨ及びクモ絹タンパク質の重合を可能にするイオン組成物を有する液体媒体中で形成される。好ましい実施形態では、この工程の液体媒体のｐＨは、３又はそれ以上、例えば４．２以上などである。結果として得られるｐＨ範囲、例えば、４．２～６．３によって、迅速な重合が促進される。結果として得られるポリマーは、本明細書中に記載される分子量で提供され、物品コーティングのために必要な場合に使用され得る溶液形態として調製されてもよい。

クモ絹タンパク質の重合を可能にするイオン組成物は、本明細書中に開示される方法を利用して、当業者により容易に調製されることができる。クモ絹タンパク質の重合を可能にする好ましいイオン組成物は、３００ｍＭ未満のイオン強度を有する。クモ絹タンパク質の重合を可能にするイオン組成物の具体的な例は、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのリン酸塩、２０ｍＭのリン酸塩、及びクモ絹タンパク質の重合に対する予防効果を欠くこれらのイオンの組み合わせ、例えば、１０ｍＭのリン酸塩又は２０ｍＭのリン酸塩及び１５０ｍＭのＮａＣｌの組み合せを含む。この液体媒体のイオン強度は、１～２５０ｍＭの範囲に調整されることが好ましい。

任意の特定の理論に限定されることを望まないが、ＮＴ断片は反対に荷電した極を有し、ｐＨにおける環境変化は、タンパク質の表面上の荷電バランスに影響を及ぼし、重合が続き、他方で塩は同じ事象を阻害することが想定される。

中性ｐＨでは、酸性極の過剰な負電荷を埋めるエネルギッシュなコストによって、重合が防止されると予測されうる。しかし、二量体が、より低いｐＨでその等電点に近づくにつれて、誘引性の静電力が最終的に支配的となり、観察された塩ならびにＮＴ及びＮＴ含有ミニスピドロインのｐＨ依存的な重合挙動が説明される。一部の実施形態では、ｐＨ誘導性ＮＴ重合、及びＮＴ－ミニスピドロインの線維アセンブリの効率増加が、表面静電電位変化に起因していること、ならびに、ＮＴの一つの極での酸性残基のクラスタリングによって、その電荷バランスがシフトして、重合転移が、６．３又はそれ以下のｐＨ値で生じることが提案されている。

第五の工程では、結果として得られる、好ましくは固体のクモ絹タンパク質ポリマーは、当該液体媒体から単離される。場合により、この工程は、リポ多糖類及び他の発熱性物質をスピドロインポリマーから積極的に除去することを含む。

任意の特定の理論に限定されることを望まないが、スピドロインポリマーの形成は、水溶性スピドロイン二量体の形成を介して進行することが観察されている。本開示はまた、このように、単離されたクモ絹タンパク質の二量体を産生する方法を提供し、第一の二つの方法工程は、上に記載されるとおりである。クモ絹タンパク質は、６．４又はそれ以上のｐＨ及び／又は当該クモ絹タンパク質の重合を防止するイオン組成での液体媒体中の二量体として存在する。第三の工程は、第二の工程において得られた二量体を単離することを含み、場合により、リポ多糖類及び他の発熱性物質の除去を含む。好ましい実施形態では、本開示のクモ絹タンパク質ポリマーは、重合したタンパク質二量体からなる。本開示は、このように、クモ絹タンパク質の二量体を産生するための、クモ絹タンパク質の新規使用、好ましくは、本明細書中に開示されるものを提供する。

別の態様によれば、本開示は、本明細書中に開示されるクモ絹タンパク質のポリマーを提供する。一実施形態では、このタンパク質のポリマーは、本開示に従った方法のいずれか一つにより取得可能である。このように、本開示は、組換え絹ベースのコーティングとしてクモ絹タンパク質のポリマーを産生するための、組換えクモ絹タンパク質の様々な使用、好ましくは、本明細書中に開示されるものを提供する。一実施形態によれば、本開示は、組換え絹ベースのコーティングとして単離クモ絹タンパク質のポリマーを産生するための、クモ絹タンパク質の二量体の新規使用、好ましくは本明細書中に開示されるものを提供する。これらの使用において、ポリマーは、６．３又はそれ以下のｐＨ及び当該クモ絹タンパク質の重合を可能にするイオン組成を有する液体媒体中で産生されることが好ましい。一実施形態では、液体媒体のｐＨは、３又はそれ以上、例えば４．２以上などである。結果として得られるｐＨ範囲、例えば、４．２～６．３によって、迅速な重合が促進される。

本開示の方法を使用して、重合プロセスを制御することが可能であり、これによって、所望の特性及び形状を伴う絹ポリマーを得るためのパラメータの最適化が可能となる。

一実施形態では、本明細書中に記載される組換え絹タンパク質は、米国特許第８，６４２，７３４号において記載されているものを含み、その全体が参照により組み込まれる。

別の実施形態では、本明細書中に記載される組換え絹タンパク質は、米国特許第９，０５１，４５３号において記載されている方法に従って調製されてもよく、その全体が参照により本明細書中に組み込まれる。

米国特許第９，０５１，４５３号の配列番号１により表されるアミノ酸配列は、Ｃ末端でのＡＤＦ３のアミノ酸配列の５０のアミノ酸残基で構成されるアミノ酸配列と同一である（ＮＣＢＩ登録番号：ＡＡＣ４７０１０、ＧＩ：１２６３２８７）。米国特許第９，０５１，４５３号の配列番号２により表されるアミノ酸配列は、２０の残基がＣ末端から除去された、米国特許第９，０５１，４５３号の配列番号１により表されるアミノ酸配列と同一である。米国特許第９，０５１，４５３号の配列番号３により表されるアミノ酸配列は、２９の残基がＣ末端から除去された、配列番号１により表されるアミノ酸配列と同一である。

式１：ＲＥＰ１－ＲＥＰ２（１）により表されるアミノ酸配列の単位を含み、Ｃ末端に配列番号１～３のいずれかにより表されるアミノ酸配列又は米国特許第９，０５１，４５３号の配列番号１～３のいずれかにより表されるアミノ酸配列と９０％又はそれ以上の相同性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドの例は、米国特許第９，０５１，４５３号の配列番号８により表されるアミノ酸配列を有するポリペプチドである。米国特許第９，０５１，４５３号の配列番号８により表されるアミノ酸配列を有するポリペプチドは、以下の変異により得られる：ＡＤＦ３（ＮＣＢＩアクセッション番号：ＡＡＣ４７０１０、ＧＩ：１２６３２８７）のアミノ酸配列において、そのＮ－末端に開始コドン、Ｈｉｓ１０タグ、及びＨＲＶ３Ｃプロテアーゼ（ヒトライノウイルス３Ｃプロテアーゼ）認識部位で構成されるアミノ酸配列（米国特許第９，０５１，４５３号の配列番号５）が付加されており、１～１３番目の反復領域が約二倍になっており、翻訳が１１５４番目のアミノ酸残基で終了する。米国特許第９，０５１，４５３号の配列番号８により表されるアミノ酸配列を有するポリペプチドにおいて、Ｃ末端配列は、配列番号３により表されるアミノ酸配列と同一である。

さらに、式１：ＲＥＰ１－ＲＥＰ２（１）により表されるアミノ酸配列の単位を含み、Ｃ末端に、米国特許第９，０５１，４５３号の配列番号１～３のいずれかにより表されるアミノ酸配列又は米国特許第９，０５１，４５３号の配列番号１～３のいずれかにより表されるアミノ酸配列と９０％又はそれ以上の相同性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドは、米国特許第９，０５１，４５３号の配列番号８により表されるアミノ酸配列を有し、それにおいて、一つ又は複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加されており、結晶領域及び非晶質領域で構成される反復領域を有するタンパク質であり得る。

さらに、式１：ＲＥＰ１－ＲＥＰ２（１）により表されるアミノ酸配列の二つ又はそれ以上の単位を含むポリペプチドの例は、米国特許第９，０５１，４５３号の配列番号１５により表されるアミノ酸配列を有するＡＤＦ４から由来する組換えタンパク質である。米国特許第９，０５１，４５３号の配列番号１５により表されるアミノ酸配列は、ＮＣＢＩデータベース（ＮＣＢＩ受入番号：ＡＡＣ４７０１１，ＧＩ：１２６３２８９）から得られたＡＤＦ４の部分アミノ酸配列のＮ末端に、開始コドン、Ｈｉｓ１０タグ、ＨＲＶ３Ｃプロテアーゼ（ヒトライノウイルス３Ｃプロテアーゼ）認識部位で構成されるアミノ酸配列（米国特許第９，０５１，４５３号の配列番号５）を付加することにより得られたアミノ酸配列である。さらに、式１：ＲＥＰ１－ＲＥＰ２（１）により表されるアミノ酸配列を二つ又はそれ以上の単位を含むポリペプチドは、米国特許第９，０５１，４５３号の配列番号１５により表されるアミノ酸配列を有し、それにおいて、一つ又は複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加されており、ならびに結晶領域及び非晶質領域で構成される領域を有するポリペプチドであり得る。さらに、式１：ＲＥＰ１－ＲＥＰ２（１）により表されるアミノ酸配列の二つ又はそれ以上の単位を含むポリペプチドの例は、米国特許第９，０５１，４５３号の配列番号１７により表されるアミノ酸配列を有するＭａＳｐ２から由来する組換えタンパク質である。米国特許第９，０５１，４５３号の配列番号１７により表されるアミノ酸配列は、ＮＣＢＩウェブデータベース（ＮＣＢＩ受入番号：ＡＡＴ７５３１３，ＧＩ：５０３６３１４７）から得られたＭａＳｐ２の部分配列のＮ末端に、開始コドン、Ｈｉｓ１０タグ、及びＨＲＶ３Ｃプロテアーゼ（ヒトライノウイルス３Ｃプロテアーゼ）認識部位で構成されるアミノ酸配列（米国特許第９，０５１，４５３号の配列番号５）を付加することにより得られるアミノ酸配列である。さらに、式１：ＲＥＰ１－ＲＥＰ２（１）により表されるアミノ酸配列の二つ又はそれ以上の単位を含むポリペプチドは、米国特許第９，０５１，４５３号の配列番号１７により表されるアミノ酸配列を有し、それにおいて、一つ又は複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加されており、ならびに結晶領域及び非晶質領域で構成される領域を有するポリペプチドであり得る。

鞭状腺絹タンパク質から由来するポリペプチドの例は、式２：ＲＥＰ３（２）により表されるアミノ酸配列の１０又はそれ以上の単位を含むポリペプチド、好ましくはその２０又はそれ以上の単位を含むポリペプチド、及びより好ましくはその３０又はそれ以上の単位を含むポリペプチドを含む。宿主として微生物、例えばエシェリヒア・コリなどを使用して組換えタンパク質を産生する場合では、鞭状腺絹タンパク質から由来するポリペプチドの分子量は、生産性の観点から、好ましくは５００ｋＤａ又はそれ以下、より好ましくは３００ｋＤａ又はそれ以下、さらに好ましくは２００ｋＤａ又はそれ以下である。

式（２）では、ＲＥＰ３は、Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｘで構成されるアミノ酸配列を示し、ここで、Ｘは、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｙｒ、及びＶａｌからなる群から選択されるアミノ酸を示す。

クモ絹の主要な特徴は、鞭状腺絹が結晶領域を有しないが、しかし、非晶質領域で構成される反復領域を有することである。主要なドラッグライン絹及び同様のものは、結晶領域及び非結晶領域で構成される反復領域を有するため、それらは高い応力及び伸縮性の両方を有すると予想される。一方、鞭状腺絹に関しては、応力はメジャードラッグライン絹のそれよりも劣るが、伸縮性は高い。これについての理由は、鞭状腺絹の大半が非結晶性領域で構成されることであると考えられる。

式２：ＲＥＰ３（２）により表されるアミノ酸配列の１０又はそれ以上の単位を含むポリペプチドの例は、米国特許第９，０５１，４５３号の配列番号１９により表されるアミノ酸配列を有する鞭状腺絹タンパク質から由来する組換えタンパク質である。米国特許第９，０５１，４５３号の配列番号１９により表されるアミノ酸配列は、ＮＣＢＩデータベース（ＮＣＢＩ受入番号：ＡＡＦ３６０９０，ＧＩ：７１０６２２４）から得られたネフィラ・クラビペスの鞭状腺絹タンパク質の部分配列、具体的には、反復部分及びモチーフに対応するＮ末端から１２２０残基から１６５９残基までのそのアミノ酸配列（ＰＲ１配列として言及する）を、ＮＣＢＩデータベース（ＮＣＢＩ受入番号：ＡＡＣ３８８４７，ＧＩ：２８３３６４９）から得られたネフィラ・クラビペスの鞭状腺絹タンパク質の部分配列、具体的には、Ｃ末端から８１６残基から９０７残基までのＣ末端アミノ酸配列を組み合わせて、その後に、開始コドン、Ｈｉｓ１０タグ、及びＨＲＶ３Ｃプロテアーゼ認識部位で構成されるアミノ酸配列（米国特許第９，０５１，４５３号の配列番号５）を、組み合わせた配列のＮ末端に付加することにより得られたアミノ酸配列である。さらに、式２：ＲＥＰ３（２）により表されるアミノ酸配列の１０又はそれ以上の単位を含むポリペプチドは、一つ又は複数のアミノ酸が、置換、欠失、挿入、及び／又は付加され、非結晶性領域で構成される反復領域を有する、米国特許第９，０５１，４５３号の配列番号１９により表されるアミノ酸配列を有するポリペプチドであり得る。

ポリペプチドは、ポリペプチドをコードする遺伝子を含む発現ベクターにより形質転換された宿主を使用して産生することができる。遺伝子を産生するための方法は、特に限定されないが、それは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）など、及びそれをクローニングすることにより、クモから由来する細胞から天然クモ絹タンパク質をコードする遺伝子を増幅することにより産生されてもよく、又は化学的に合成されてもよい。また、遺伝子を化学的に合成する方法は、特に限定されないが、それは、例えば、以下のとおりに合成することができる：ＮＣＢＩウェブデータベースなどから得られた天然クモ絹タンパク質のアミノ酸配列の情報に基づいて、ＡＫＴＡオリゴパイロットプラス１０／１００（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＪａｐａｎＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）で自動的に合成されたオリゴヌクレオチドが、ＰＣＲなどにより連結される。この時点で、タンパク質の精製及び観察を促進するために、上記のアミノ酸配列のアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする遺伝子を、開始コドン及びＨｉｓ１０タグで構成されるアミノ酸配列が付加されたＮ末端に合成することが可能である。

発現ベクターの例は、ＤＮＡ配列に基づいてタンパク質を発現することができるプラスミド、ファージ、ウイルス及び同様のものを含む。プラスミド型発現ベクターは、それによって、標的遺伝子を宿主細胞中で発現することができ、それ自体が増幅することができる限り、特に限定されない。例えば、宿主として大腸菌ロゼッタ（ＤＥ３）を使用する場合において、ｐＥＴ２２ｂ（＋）プラスミドベクター、ｐＣｏｌｄプラスミドベクター、及び同様のものを使用することができる。これらの間で、タンパク質の生産性に関しては、ｐＥＴ２２ｂ（＋）プラスミドベクターを使用することが好ましい。宿主の例は、動物細胞、植物細胞、微生物などを含む。

本開示中で使用されるポリペプチドは、好ましくは、ＡＤＦ３から由来するポリペプチドであり、それは、アラネウス・ダイアデマトゥスの二つの主要なドラッグライン絹タンパク質の一つである。このポリペプチドは、基本的に高い強度‐伸張性及び強靭性を有し、簡単に合成されるという利点を有する。

したがって、本明細書中に記載される実施形態、物品、及び／又は方法に従って使用される組換え絹タンパク質（例、組換えクモ絹ベースのタンパク質）は、上に記載される、又は米国特許第８，１７３，７７２号、第８，２７８，４１６号、第８，６１８，２５５号、第８，６４２，７３４号、第８，６９１，５８１号、第８，７２９，２３５号、第９，１１５，２０４号、第９，１５７，０７０号、第９，３０９，２９９号、第９，６４４，０１２号、第９，７０８，３７６号、第９，０５１，４５３号、第９，６１７，３１５号、第９，９６８，６８２号、第９，６８９，０８９号、第９，７３２，１２５号、第９，８５６，３０８号、第９，９２６，３４８号、第１０，０６５，９９７号、第１０，３１６，０６９号、及び第１０，３２９，３３２号；及び米国特許公開第２００９／０２２６９６９号、第２０１１／０２８１２７３号、第２０１２／００４１１７７号、第２０１３／００６５２７８号、第２０１３／０１１５６９８号、第２０１３／０３１６３７６号、第２０１４／００５８０６６号、第２０１４／００７９６７４号、第２０１４／０２４５９２３号、第２０１５／００８７０４６号、第２０１５／０１１９５５４号、第２０１５／０１４１６１８号、第２０１５／０２９１６７３号、第２０１５／０２９１６７４号、第２０１５／０２３９５８７号、第２０１５／０３４４５４２号、第２０１５／０３６１１４４号、第２０１５／０３７４８３３号、第２０１５／０３７６２４７号、第２０１６／００２４４６４号、第２０１７／００６６８０４号、第２０１７／００６６８０５号、第２０１５／０２９３０７６号、第２０１６／０２２２１７４号、第２０１７／０２８３４７４号、第２０１７／００８８６７５号、第２０１９／０１３５８８０号、第２０１５／０３２９５８７号、第２０１９／００４０１０９号、第２０１９／０１３５８８１号、第２０１９／０１７７３６３号、第２０１９／０２２５６４６号、第２０１９／０２３３４８１号、第２０１９／００３１８４２号、第２０１８／０３５５１２０号、第２０１９／０１８６０５０号、第２０１９／０００２６４４号、第２０２０／００３１８８７号、第２０１８／０２７３５９０号、第２０１９１／０９４４０３号、第２０１９／００３１８４３号、第２０１８／０２５１５０１号、第２０１７／００６６８０５号、第２０１８／０１２７５５３号、第２０１９／０３２９５２６号、第２０２０／００３１８８６号、第２０１８／００８０１４７号、第２０１９／０３５２３４９号、第２０２０／００４３０８５号、第２０１９／０１４４８１９号、第２０１９／０２２８４４９号、第２０１９／０３４０６６６号、第２０２０／０００００９１号、第２０１９／０１９４７１０号、第２０１９／０１５１５０５号、第２０１８／０２６５５５５号、第２０１９／０３５２３３０号、第２０１９／０２４８８４７号、及び第２０１９／０３７８１９１号において記述される一つ又は複数の組換え絹タンパク質を含み得るが、それらの全体が参照により本明細書中に組み込まれる。

絹フィブロイン様タンパク質断片
本開示中の組換え絹タンパク質は、天然絹タンパク質の反復単位に基づく合成タンパク質を含む。合成反復絹タンパク質配列の他、これらは、追加的に、一つ又は複数の天然非反復絹タンパク質配列を含むことができる。本明細書中で使用される場合、「絹フィブロイン様タンパク質断片」は、本明細書中で定義される分子量及び多分散性、ならびに天然絹タンパク質、フィブロイン重鎖、フィブロイン軽鎖、あるいは一つ又は複数のＧＡＧＡＧＳヘキサアミノ酸反復単位を含む任意のタンパク質から選択されるタンパク質とある程度の相同性を有するタンパク質断片を指す。一部の実施形態では、相同性の程度は、約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９４％、約９３％、約９２％、約９１％、約９０％、約８９％、約８８％、約８７％、約８６％、約８５％、約８４％、約８３％、約８２％、約８１％、約８０％、約７９％、約７８％、約７７％、約７６％、約７５％、又は７５％未満から選択される。

本明細書中に記載されるように、タンパク質、例えば天然絹タンパク質、フィブロイン重鎖、フィブロイン軽鎖、あるいは一つ又は複数のＧＡＧＡＧＳヘキサアミノ酸反復単位を含む任意のタンパク質などは、約９％～約４５％の間のグリシン、又は約９％のグリシン、又は約１０％のグリシン、約４３％のグリシン、約４４％のグリシン、約４５％のグリシン、又は約４６％のグリシンを含む。本明細書中に記載されるように、タンパク質、例えば天然絹タンパク質、フィブロイン重鎖、フィブロイン軽鎖、あるいは一つ又は複数のＧＡＧＡＧＳヘキサアミノ酸反復単位を含む任意のタンパク質などは、約１３％～約３０％の間のアラニン、又は約１３％のアラニン、又は約２８％のアラニン、又は約２９％のアラニン、又は約３０％のアラニン、又は約３１％のアラニンを含む。本明細書中に記載されるように、タンパク質、例えば天然絹タンパク質、フィブロイン重鎖、フィブロイン軽鎖、あるいは一つ又は複数のＧＡＧＡＧＳヘキサアミノ酸反復単位を含む任意のタンパク質などは、９％～約１２％の間のセリン、又は約９％のセリン、又は約１０％のセリン、又は約１１％のセリン、又は約１２％のセリンを含む。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される絹フィブロイン様タンパク質は、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、又は約５５％のグリシンを含む。一部の実施形態では、本明細書中に記載される絹フィブロイン様タンパク質は、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、又は約３９％のアラニンを含む。一部の実施形態では、本明細書中に記載される絹フィブロイン様タンパク質は、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、又は約２２％のセリンを含む。一部の実施形態では、本明細書中に記載される絹フィブロイン様タンパク質は、独立して、天然フィブロイン中に含まれることが公知である任意のアミノ酸を含み得る。一部の実施形態では、本明細書中に記載される絹フィブロイン様タンパク質は、独立して、天然フィブロイン中に含まれることが公知である任意のアミノ酸を除外し得る。一部の実施形態では、本明細書中に記載される絹フィブロイン様タンパク質中の平均で６つのアミノ酸中２つ、６つのアミノ酸中３つ、又は６つのアミノ酸中４つが、グリシンである。一部の実施形態では、本明細書中に記載される絹フィブロイン様タンパク質中の平均で６つのアミノ酸中１つ、６つのアミノ酸中２つ、又は６つのアミノ酸中３つが、アラニンである。一部の実施形態では、本明細書中に記載される絹フィブロイン様タンパク質中の平均で６つのアミノ酸中０、６つのアミノ酸中１つ、又は６つのアミノ酸中２つが、セリンである。

ＳＰＦの他の特性
本開示の組成物は、「生体適合性」である又は「生体適合性」を示し、組成物が、毒性がない、有毒でない、生理学的反応性がない、及び免疫拒絶を起こさないことにより、生体組織又は生体システムと適合することを意味する。そのような生体適合性は、参加者が、局所的に、長期間にわたり彼らの皮膚上に本開示の組成物を適用することにより証明することができる。一実施形態では、延長期間は約３日間である。一実施形態では、延長期間は約７日間である。一実施形態では、延長期間は約１４日間である。一実施形態では、延長期間は約２１日間である。一実施形態では、延長期間は約３０日間である。一実施形態では、延長期間は、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間、約７ヶ月間、約８ヶ月間、約９ヶ月間、約１０ヶ月間、約１１ヶ月間、約１２ヶ月間、及び無期限からなる群から選択される。例えば、一部の実施形態では、本明細書中に記載されるコーティングは、生体適合性コーティングである。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組成物は、生体適合性組成物（例、絹を含む生体適合性コーティング）であってもよく、評価されて、「Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｍｅｄｉｃａｌｄｅｖｉｃｅｓ－Ｐａｒｔ１：Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎａｎｄｔｅｓｔｉｎｇｗｉｔｈｉｎａｒｉｓｋｍａｎａｇｅｍｅｎｔｐｒｏｃｅｓｓ」と題される国際規格ＩＳＯ１０９９３－１に準拠し得る。一部の実施形態では、本明細書中に記載される組成物は、生体適合性組成物であってもよく、細胞傷害性、感作性、血液適合性、発熱性、移植性、遺伝毒性、癌原性、生殖発生毒性、及び分解の一つ又は複数について、ＩＳＯ１０６９９３－１の下で評価されてもよい。

本開示の組成物は、「低アレルギー性」であり、アレルギー反応を起こす可能性が比較的低いことを意味する。そのような低アレルギー性は、参加者が、局所的に、長期間にわたり彼らの皮膚上に本開示の組成物を適用することにより証明することができる。一実施形態では、延長期間は約３日間である。一実施形態では、延長期間は約７日間である。一実施形態では、延長期間は約１４日間である。一実施形態では、延長期間は約２１日間である。一実施形態では、延長期間は約３０日間である。一実施形態では、延長期間は、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間、約７ヶ月間、約８ヶ月間、約９ヶ月間、約１０ヶ月間、約１１ヶ月間、約１２ヶ月間、及び無期限からなる群から選択される。

一実施形態では、本開示の組成物の安定性は約１日である。一実施形態では、本開示の組成物の安定性は約２日である。一実施形態では、本開示の組成物の安定性は約３日である。一実施形態では、本開示の組成物の安定性は約４日である。一実施形態では、本開示の組成物の安定性は約５日である。一実施形態では、本開示の組成物の安定性は約６日である。一実施形態では、本開示の組成物の安定性は約７日である。一実施形態では、本開示の組成物の安定性は約８日である。一実施形態では、本開示の組成物の安定性は約９日である。一実施形態では、本開示の組成物の安定性は約１０日である。

一実施形態では、本開示の組成物の安定性は、約１１日、約１２日、約１３日、約１４日、約１５日、約１６日、約１７日、約１８日、約１９日、約２０日、約２１日、約２２日、約２３日、約２４日、約２５日、約２６日、約２７日、約２８日、約２９日、又は約３０日である。

一実施形態では、本開示の組成物の安定性は１０日～６ヶ月である。一実施形態では、本開示の組成物の安定性は６ヶ月～１２ヶ月である。一実施形態では、本開示の組成物の安定性は１２ヶ月～１８ヶ月である。一実施形態では、本開示の組成物の安定性は１８ヶ月～２４ヶ月である。一実施形態では、本開示の組成物の安定性は２４ヶ月～３０ヶ月である。一実施形態では、本開示の組成物の安定性は３０ヶ月～３６ヶ月である。一実施形態では、本開示の組成物の安定性は３６ヶ月～４８ヶ月である。一実施形態では、本開示の組成物の安定性は４８ヶ月～６０ヶ月である。

一実施形態では、本開示のＳＰＦ組成物は、タンパク質の結晶性に起因して、水溶液中で可溶性ではない。一実施形態では、本開示のＳＰＦ組成物は、水溶液中で可溶性である。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、約３分の２の結晶性部分及び約３分の１のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、約半分の結晶性部分及び約半分のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、９９％の結晶性部分及び１％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、９５％の結晶性部分及び５％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、９０％の結晶性部分及び１０％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、８５％の結晶性部分及び１５％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、８０％の結晶性部分及び２０％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、７５％の結晶性部分及び２５％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、７０％の結晶性部分及び３０％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、６５％の結晶性部分及び３５％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、６０％の結晶性部分及び４０％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、５０％の結晶性部分及び５０％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、４０％の結晶性部分及び６０％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、３５％の結晶性部分及び６５％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、３０％の結晶性部分及び７０％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、２５％の結晶性部分及び７５％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、２０％の結晶性部分及び８０％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、１５％の結晶性部分及び８５％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、１０％の結晶性部分及び９０％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、５％の結晶性部分及び９０％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、１％の結晶性部分及び９９％のアモルファス領域を含む。

本明細書中で使用されるように、用語「無機残渣を実質的に含まない」は、組成物が０．１％（ｗ／ｗ）又はそれ以下の残渣を示すことを意味する。一実施形態では、「無機残渣を実質的に含まない」は、０．０５％（ｗ／ｗ）又はそれ以下の残渣を示す組成物を指す。一実施形態では、「無機残渣を実質的に含まない」は、０．０１％（ｗ／ｗ）又はそれ以下の残渣を示す組成物を指す。一実施形態では、無機残渣の量は、０ｐｐｍ（「検出不能」又は「ＮＤ」）～１０００ｐｐｍの間である。一実施形態では、無機残渣の量は、ＮＤ～約５００ｐｐｍである。一実施形態では、無機残渣の量は、ＮＤ～約４００ｐｐｍである。一実施形態では、無機残渣の量は、ＮＤ～約３００ｐｐｍである。一実施形態では、無機残渣の量は、ＮＤ～約２００ｐｐｍである。一実施形態では、無機残渣の量は、ＮＤ～約１００ｐｐｍである。一実施形態では、無機残渣の量は、１０ｐｐｍ～１０００ｐｐｍの間である。

本明細書中で使用されるように、用語「無機残渣を実質的に含まない」は、組成物が０．１％（ｗ／ｗ）又はそれ以下の残渣を示すことを意味する。一実施形態では、「無機残渣を実質的に含まない」は、０．０５％（ｗ／ｗ）又はそれ以下の残渣を示す組成物を指す。一実施形態では、「無機残渣を実質的に含まない」は、０．０１％（ｗ／ｗ）又はそれ以下の残渣を示す組成物を指す。一実施形態では、有機残渣の量は、０ｐｐｍ（「検出不能」又は「ＮＤ」）～１０００ｐｐｍの間である。一実施形態では、有機残渣の量は、ＮＤ～約５００ｐｐｍである。一実施形態では、有機残渣の量は、ＮＤ～約４００ｐｐｍである。一実施形態では、有機残渣の量は、ＮＤ～約３００ｐｐｍである。一実施形態では、有機残渣の量は、ＮＤ～約２００ｐｐｍである。一実施形態では、有機残渣の量は、ＮＤ～約１００ｐｐｍである。一実施形態では、有機残渣の量は、１０ｐｐｍ～１０００ｐｐｍの間である。

本開示の組成物は、「生体適合性」を示し、組成物が、毒性がない、有毒でない、又は生理学的反応性がない、及び免疫拒絶を起こさないことにより、生体組織又は生体システムと適合することを意味する。そのような生体適合性は、参加者が、局所的に、長期間にわたり彼らの皮膚上に本開示の組成物を適用することにより証明することができる。一実施形態では、延長期間は約３日間である。一実施形態では、延長期間は約７日間であり、一実施形態では、延長期間は約１４日間であり、一実施形態では、延長期間は約２１日間である。一実施形態では、延長期間は約３０日間である。一実施形態では、延長期間は、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間、約７ヶ月間、約８ヶ月間、約９ヶ月間、約１０ヶ月間、約１１ヶ月間、約１２ヶ月間、及び無期限からなる群から選択される。

以下は、本開示の絹溶液の調製における及びそのための様々なパラメータの適切な範囲の非限定的な例である。本開示の絹溶液は、これらのパラメータの一つ又は複数（しかし、必ずしも全てではない）を含み得るが、そのようなパラメータの範囲の様々な組合せを使用して調製され得る。

一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、３０．０重量％未満である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、２５．０重量％未満である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、２０．０重量％未満である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、１９．０重量％未満である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、１８．０重量％未満である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、１７．０重量％未満である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、１６．０重量％未満である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、１５．０重量％未満である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、１４．０重量％未満である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、１３．０重量％未満である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、１２．０重量％未満である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、１１．０重量％未満である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、１０．０重量％未満である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、９．０重量％未満である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、８．０重量％未満である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、７．０重量％未満である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、６．０重量％未満である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、５．０重量％未満である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、４．０重量％未満である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、３．０重量％未満である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、２．０重量％未満である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、１．０重量％未満である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、０．９重量％未満である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、０．８重量％未満である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、０．７重量％未満である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、０．６重量％未満である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、０．５重量％未満である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、０．４重量％未満である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、０．３重量％未満である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、０．２重量％未満である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、０．１重量％未満である。

一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、０．１重量％超である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、０．２重量％超である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、０．３重量％超である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、０．４重量％超である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、０．５重量％超である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、０．６重量％超である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、０．７重量％超である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、０．８重量％超である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、０．９重量％超である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、１．０重量％超である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、２．０重量％超である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、３．０重量％超である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、４．０重量％超である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、５．０重量％超である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、６．０重量％超である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、７．０重量％超である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、８．０重量％超である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、９．０重量％超である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、１０．０重量％超である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、１１．０重量％超である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、１２．０重量％超である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、１３．０重量％超である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、１４．０重量％超である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、１５．０重量％超である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、１６．０重量％超である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、１７．０重量％超である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、１８．０重量％超である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、１９．０重量％超である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、２０．０重量％超である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、２５．０重量％超である。

一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約０．１重量％～約３０．０重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約０．１重量％～約２５．０重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約０．１重量％～約２０．０重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約０．１重量％～約１５．０重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約０．１重量％～約１０．０重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約０．１重量％～約９．０重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約０．１重量％～約８．０重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約０．１重量％～約７．０重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約０．１重量％～約６．５重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約０．１重量％～約６．０重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約０．１重量％～約５．５重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約０．１重量％～約５．０重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約０．１重量％～約４．５重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約０．１重量％～約４．０重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約０．１重量％～約３．５重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約０．１重量％～約３．０重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約０．１重量％～約２．５重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約０．１重量％～約２．０重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約０．１重量％～約２．４重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約０．５重量％～約５．０重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約０．５重量％～約４．５重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約０．５重量％～約４．０重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約０．５重量％～約３．５重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約０．５重量％～約３．０重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約０．５重量％～約２．５重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約１．０重量％～約４．０重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約１．０重量％～約３．５重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約１．０重量％～約３．０重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約１．０重量％～約２．５重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約１．０重量％～約２．４重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約１．０重量％～約２．０重量％の範囲である。

一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約２０．０重量％～約３０．０重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約０．１重量％～約１０．０重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約１．０重量％～約１０．０重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約２重量％～約１０．０重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約０．１重量％～約６．０重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約６．０重量％～約１０．０重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約６．０重量％～約８．０重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約６．０重量％～約９．０重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約１０．０重量％～約２０．０重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約１１．０重量％～約１９．０重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約１２．０重量％～約１８．０重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約１３．０重量％～約１７．０重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約１４．０重量％～約１６．０重量％の範囲である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約１．０重量％である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約１．５重量％である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約２．０重量％である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約２．４重量％である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約３．０重量％である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約３．５重量％である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約４．０重量％である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約４．５重量％である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約５．０重量％である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約５．５重量％である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約６．０重量％である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約６．５重量％である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約７．０重量％である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約７．５重量％である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約８．０重量％である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約８．５重量％である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約９．０重量％である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約９．５重量％である。一実施形態では、溶液中のＳＰＦ（％）は、約１０．０重量％である。

一実施形態では、溶液中のセリシン（％）は、検出不能～２５．０重量％である。一実施形態では、溶液中のセリシン（％）は、検出不能～５．０重量％である。一実施形態では、溶液中のセリシン（％）は、１．０重量％である。一実施形態では、溶液中のセリシン（％）は、２．０重量％である。一実施形態では、溶液中のセリシン（％）は、３．０重量％である。一実施形態では、溶液中のセリシン（％）は、４．０重量％である。一実施形態では、溶液中のセリシン（％）は、５．０重量％である。一実施形態では、溶液中のセリシン（％）は、１０．０重量％である。一実施形態では、溶液中のセリシン（％）は、２５．０重量％である。

一部の実施形態では、本開示のＳＰＦ溶液組成物は、貯蔵条件、ＳＰＦのパーセント、ならびに出荷の数及び出荷条件に依存して、１０日間～３年間の保管安定性を有する（それらは、水溶液中で貯蔵した場合に、ゆっくりと又は自然発生的にゲル化することはなく、断片の凝集はなく、従って、経時的な分子量における増加はない）。加えて、ｐＨを変化させて、絹の未熟な折り畳み及び凝集を防止することにより、保管寿命を延長させることができる及び／又は出荷条件を支援することができる。一実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は０～１年間である。一実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は０～２年間である。一実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は０～３年間である。一実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は０～４年間である。一実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は０～５年間である。一実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は１～２年間である。一実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は１～３年間である。一実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は１～４年間である。一実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は１～５年間である。一実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は２～３年間である。一実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は２～４年間である。一実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は２～５年間である。一実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は３～４年間である。一実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は３～５年間である。一実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は４～５年間である。

一実施形態では、ＳＰＦを有する本開示の組成物は、検出不可能なレベルのＬｉＢｒ残渣を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残渣の量は、１０ｐｐｍ～１０００ｐｐｍである。一実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残渣の量は、１０ｐｐｍ～３００ｐｐｍである。一実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残渣の量は、２５ｐｐｍ未満である。一実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残渣の量は、５０ｐｐｍ未満である。一実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残渣の量は、７５ｐｐｍ未満である。一実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残渣の量は、１００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残渣の量は、２００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残渣の量は、３００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残渣の量は、４００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残渣の量は、５００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残渣の量は、６００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残渣の量は、７００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残渣の量は、８００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残渣の量は、９００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残渣の量は、１０００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残渣の量は、検出不能～５００ｐｐｍである。一実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残渣の量は、検出不能～４５０ｐｐｍである。一実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残基の量は、検出不能～４００ｐｐｍである。一実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残渣の量は、検出不能～３５０ｐｐｍである。一実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残渣の量は、検出不能～３００ｐｐｍである。一実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残渣の量は、検出不能～２５０ｐｐｍである。一実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残渣の量は、検出不能～２００ｐｐｍである。一実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残渣の量は、検出不能～１５０ｐｐｍである。一実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残渣の量は、検出不能～１００ｐｐｍである。一実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残渣の量は、１００ｐｐｍ～２００ｐｐｍである。一実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残渣の量は、２００ｐｐｍ～３００ｐｐｍである。一実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残渣の量は、３００ｐｐｍ～４００ｐｐｍである。一実施形態では、本開示の組成物中のＬｉＢｒ残渣の量は、４００ｐｐｍ～５００ｐｐｍである。

一実施形態では、ＳＰＦを有する本開示の組成物は、検出不能なレベルのＮａ_２ＣＯ_３残渣を有する。一実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、１００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、２００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、３００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、４００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、５００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、６００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、７００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、８００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、９００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、１０００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、検出不能～５００ｐｐｍである。一実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、検出不能～４５０ｐｐｍである。一実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、検出不能～４００ｐｐｍである。一実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、検出不能～３５０ｐｐｍである。一実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、検出不能～３００ｐｐｍである。一実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、検出不能～２５０ｐｐｍである。一実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、検出不能～２００ｐｐｍである。一実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、検出不能～１５０ｐｐｍである。一実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、検出不能～１００ｐｐｍである。一実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、１００ｐｐｍ～２００ｐｐｍである。一実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、２００ｐｐｍ～３００ｐｐｍである。一実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、３００ｐｐｍ～４００ｐｐｍである。一実施形態では、本開示の組成物中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、４００ｐｐｍ～５００ｐｐｍである。

本開示のＳＰＦ溶液組成物のユニークな特色は、貯蔵条件、絹のパーセント、ならびに出荷の数及び出荷条件に依存して、１０日間～３年間の保管安定性である（それらは、水溶液中で貯蔵した場合に、ゆっくりと又は自然発生的にゲル化することはなく、断片の凝集はなく、従って、経時的な分子量における増加はない）。加えて、ｐＨを変化させて、絹の未熟な折り畳み及び凝集を防止することにより、保管寿命を延長させることができる及び／又は出荷条件を支援することができる。一実施形態では、本開示のＳＰＦ溶液組成物は、室温（ＲＴ）で、最大２週間にわたる保管安定性を有する。一実施形態では、本開示のＳＰＦ溶液組成物は、ＲＴで、最大４週間にわたる保管安定性を有する。一実施形態では、本開示のＳＰＦ溶液組成物は、ＲＴで、最大６週間にわたる保管安定性を有する。一実施形態では、本開示のＳＰＦ溶液組成物は、ＲＴで、最大８週間にわたる保管安定性を有する。一実施形態では、本開示のＳＰＦ溶液組成物は、ＲＴで、最大１０週間にわたる保管安定性を有する。一実施形態では、本開示のＳＰＦ溶液組成物は、ＲＴで、最大１２週間にわたる保管安定性を有する。一実施形態では、本開示のＳＰＦ溶液組成物は、ＲＴで、約４週間～約５２週間の範囲の保管安定性を有する。

以下の表１８は、本開示のＳＰＦ組成物の実施形態についての保管安定性試験結果を示す。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される絹フィブロインタンパク質断片から由来する絹フィルムの水溶性は、溶媒アニーリング（水アニーリング又はメタノールアニーリング）、化学架橋、酵素架橋、及び熱処理によって改変することができる。

一部の実施形態では、アニーリングのプロセスは、コーティング材料として使用される絹フィブロインタンパク質断片溶液中でベータシート形成を誘導することを含み得る。絹フィブロインタンパク質ベースの断片のアニーリング（例、増加した結晶化度）又は他の方法での「分子充填」を促進する技術が記載されている。一部の実施形態では、非結晶性絹フィルムは、水又は有機溶媒の群から選択される溶媒の存在においてベータシートを導入するためにアニールされる。一部の実施形態では、非結晶性絹フィルムは、水の存在においてベータシートを導入するためにアニールされる（水アニーリングプロセス）。一部の実施形態では、非結晶性絹フィブロインタンパク質断片フィルムは、メタノールの存在においてベータシートを導入するためにアニールされる。一部の実施形態では、アニーリング（例、ベータシート形成）は、有機溶媒の添加により誘導される。適切な有機溶媒は、以下に限定されないが、メタノール、エタノール、アセトン、イソプロパノール、又はそれらの組み合わせを含む。

一部の実施形態では、アニーリングは、いわゆる「水アニーリング」又は「水蒸気アニーリング」により行われ、それにおいて、水蒸気が、ベータシートのパッキングを促すために、中間可塑剤又は触媒として使用される。一部の実施形態では、水アニーリングのプロセスは、真空下で実施され得る。適切なそのような方法が、ＪｉｎＨ－Ｊｅｔａｌ．（２００５）、Ｗａｔｅｒ－ｓｔａｂｌｅＳｉｌｋＦｉｌｍｓｗｉｔｈＲｅｄｕｃｅｄＢｅｔａ－ＳｈｅｅｔＣｏｎｔｅｎｔ、ＡｄｖａｎｃｅｄＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＭａｔｅｒｉａｌｓ、１５：１２４１－１２４７；ＸｉａｏＨ．ｅｔａｌ．（２０１１）、ＲｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＳｉｌｋＭａｔｅｒｉａｌＳｔｒｕｃｔｕｒｅｂｙＴｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ－ＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄＷａｔｅｒＶａｐｏｒＡｎｎｅａｌｉｎｇ、Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｅｓ、１２（５）：１６８６－１６９６において記載されている。

水アニーリングプロセスの重要な特色は、絹フィブロインタンパク質断片ペプチド鎖において結晶性ベータシートの形成を駆動して、絹フィブロインを連続フィルム中に自己構築させることである。一部の実施形態では、絹フィブロインタンパク質断片フィルムの結晶性は、水蒸気の温度及びアニーリングの期間を制御することにより制御される。一部の実施形態では、アニーリングは、約６５℃～約１１０℃の範囲の温度で実施される。一部の実施形態では、水の温度は、約８０℃に維持される。一部の実施形態では、アニーリングは、約６５℃、約７０℃、約７５℃、約８０℃、約８５℃、約９０℃、約９５℃、約１００℃、約１０５℃、及び約１１０℃の群から選択される温度で実施される。

一部の実施形態では、アニーリングプロセスが、約１分間～約４０分間、約１分間～約５０分間、約１分間～約６０分間、約１分間～約７０分間、約１分間～約８０分間、約１分間～約９０分間、約１分間～約１００分間、約１分間～約１１０分間、約１分間～約１２０分間、約１分間～約１３０分間、約５分間～約４０分間、約５分間～約５０分間、約５分間～約６０分間、約５分間～約７０分間、約５分間～約８０分間、約５分間～約９０分間、約５分間～約１００分間、約５分間～約１１０分間、約５分間～約１２０分間、約５分間～約１３０分間、約１０分間～約４０分間、約１０分間～約５０分間、約１０分間～約６０分間、約１０分間～約７０分間、約１０分間～約８０分間、約１０分間～約９０分間、約１０分間～約１００分間、約１０分間～約１１０分間、約１０分間～約１２０分間、約１０分間～約１３０分間、約１５分間～約４０分間、約１５分間～約５０分間、約１５分間～約６０分間、約１５分間～約７０分間、約１５分間～約８０分間、約１５分間～約９０分間、約１５分間～約１００分間、約１５分間～約１１０分間、約１５分間～約１２０分間、約１５分間～約１３０分間、約２０分間～約４０分間、約２０分間～約５０分間、約２０分間～約６０分間、約２０分間～約７０分間、約２０分間～約８０分間、約２０分間～約９０分間、約２０分間～約１００分間、約２０分間～約１１０分間、約２０分間～約１２０分間、約２０分間～約１３０分間、約２５分間～約４０分間、約２５分間～約５０分間、約２５分間～約６０分間、約２５分間～約７０分間、約２５分間～約８０分間、約２５分間～約９０分間、約２５分間～約１００分間、約２５分間～約１１０分間、約２５分間～約１２０分間、約２５分間～約１３０分間、約３０分間～約４０分間、約３０分間～約５０分間、約３０分間～約６０分間、約３０分間～約７０分間、約３０分間～約８０分間、約３０分間～約９０分間、約３０分間～約１００分間、約３０分間～約１１０分間、約３０分間～約１２０分間、約３０分間～約１３０分間、約３５分間～約４０分間、約３５分間～約５０分間、約３５分間～約６０分間、約３５分間～約７０分間、約３５分間～約８０分間、約３５分間～約９０分間、約３５分間～約１００分間、約３５分間～約１１０分間、約３５分間～約１２０分間、約３５分間～約１３０分間、約４０分間～約５０分間、約４０分間～約６０分間、約４０分間～約７０分間、約４０分間～約８０分間、約４０分間～約９０分間、約４０分間～約１００分間、約４０分間～約１１０分間、約４０分間～約１２０分間、約４０分間～約１３０分間、約４５分間～約５０分間、約４５分間～約６０分間、約４５分間～約７０分間、約４５分間～約８０分間、約４５分間～約９０分間、約４５分間～約１００分間、約４５分間～約１１０分間、約４５分間～約１２０分間、及び約４５分間～約１３０分間の群から選択される期間持続する。一部の実施形態では、アニーリングプロセスは、約１分間～約６０分間の範囲の期間持続する。一部の実施形態では、アニーリングプロセスは、約４５分間～約６０分間の範囲の期間持続する。処理後のより長い水のアニーリングは、絹フィブロインタンパク質断片の増加した結晶性に対応した。

一部の実施形態では、アニーリングされた絹フィブロインタンパク質断片膜によって、湿潤絹フィブロインタンパク質断片膜が、１００％メタノール中で、室温で６０分間にわたり浸漬される。メタノールアニーリングによって、絹フィブロインタンパク質断片膜の組成物が、主に非晶質のランダムコイルから結晶性抗平行ベータシート構造に変化した。

一部の実施形態では、本明細書中に記載されるＳＰＦを使用して、ＳＰＦ粉末、ナノ粒子、及び／又はマイクロ粒子を産生することができる。絹マイクロ粒子は、例えば、ＷＯ２０１６／１１０８７３に記載されており、参照によりその全体において本明細書中に組み込まれる。これは、絹溶液を、適した温度（例、室温）で、水及び他の揮発性物質が蒸発して（約１．０重量％～約１０重量％の水分含量）、微細なＳＰＦ粉末が残るまで、約１００ミリトール（ｍｔｏｒｒ）未満の圧力で凍結乾燥機中に置くことにより達成することができる。凍結乾燥からもたらされる固体絹粉末を次に粉砕して、所望の粒子サイズの微細粉末を形成する。

一部の実施形態では、ＳＰＦ溶液は、基材上に成型されて、乾燥後に絹フィブロインタンパク質断片を含む絹膜を形成することができる。絹フィルムを次に粉砕して、微細粉末を形成する。

一部の実施形態では、ＳＰＦ溶液は、薄膜蒸発プロセス（ロトサームとしても公知）に供することにより乾燥させることができ、その後にミリングが続く。絹溶液を、低下した圧力、穏やかな加熱下で薄膜蒸発器中に入れて、水が水溶液から連続的に除去されて、可変粒子サイズの固体がもたらされる。粒子サイズは、圧力、温度、シリンダの回転速度、蒸発器中での液体膜の厚さを含む、蒸発プロセスパラメータを制御することにより変動させることができる。ロトサーム蒸発からもたらされた乾燥タンパク質粉末は、１０．０重量％未満の水分含量を含む。

一部の実施形態では、ＳＰＦ溶液を使用して、メタノールでの沈殿によりＳＰＦマイクロ粒子を調製することができる。

代替的なフラッシュ乾燥、流動床乾燥、スプレー乾燥、又は真空乾燥を適用して、ＳＰＦ溶液から水を除去することができる。

一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末、ナノ粒子、及び／又はマイクロ粒子は、冷蔵又は他の特別な取り扱い手順を伴うことなく、保存及び取り扱うことができる。

一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末、ナノ粒子、及び／又はマイクロ粒子は、低分子量絹フィブロインタンパク質断片を含む。一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末、ナノ粒子、及び／又はマイクロ粒子は、中分子量絹フィブロインタンパク質断片を含む。一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末、ナノ粒子、及び／又はマイクロ粒子は、低分子量絹フィブロインタンパク質断片と中分子量絹フィブロインタンパク質断片の混合物を含む。

一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は、１．０μｍ～１０００μｍの範囲のメディアン粒子径を有する固体粒子である。一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は、１．０μｍ～５００μｍの範囲のメディアン粒子径を有するマイクロ粒子である。一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は、１．０μｍ～３００μｍの範囲のメディアン粒子径を有するマイクロ粒子である。一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は、１．０μｍ～２５０μｍの範囲のメディアン粒子径を有するマイクロ粒子である。一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は、１．０μｍ～２００μｍの範囲のメディアン粒子径を有するマイクロ粒子である。一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は、１．０μｍ～１００μｍの範囲のメディアン粒子径を有するマイクロ粒子である。一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は、１．０μｍ～５０．０μｍの範囲のメディアン粒子径を有するマイクロ粒子である。一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は、１．０μｍ～２５．０μｍの範囲のメディアン粒子径を有するマイクロ粒子である。一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は、１．０μｍ～１０．０μｍの範囲のメディアン粒子径を有するマイクロ粒子である。一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は、３０．０μｍ～５０．０μｍの範囲のメディアン粒子径を有するマイクロ粒子である。一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は、３５．０μｍ～４５．０μｍの範囲のメディアン粒子径を有するマイクロ粒子である。一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は、３５．０μｍ～５５．０μｍの範囲のメディアン粒子径を有するマイクロ粒子である。一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は、２５．０μｍ～４５．０μｍの範囲のメディアン粒子径を有するマイクロ粒子である。一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は、１．０μｍ、２．０μｍ、３．０μｍ、４．０μｍ、５．０μｍ、６．０μｍ、７．０μｍ、８．０μｍ、９．０μｍ、１０．０μｍ、１１．０μｍ、１２．０μｍ、１３．０μｍ、１４．０μｍ、１５．０μｍ、１６．０μｍ、１７．０μｍ、１８．０μｍ、１９．０μｍ、２０．０μｍ、２１．０μｍ、２２．０μｍ、２３．０μｍ、２４．０μｍ、２５．０μｍ、２６．０μｍ、２７．０μｍ、２８．０μｍ、２９．０μｍ、３０．０μｍ、３１．０μｍ、３２．０μｍ、３３．０μｍ、３４．０μｍ、３５．０μｍ、３６．０μｍ、３７．０μｍ、３８．０μｍ、３９．０μｍ、４０．０μｍ、４１．０μｍ、４２．０μｍ、４３．０μｍ、４４．０μｍ、４５．０μｍ、４６．０μｍ、４７．０μｍ、４８．０μｍ、４９．０μｍ、５０．０μｍ、５１．０μｍ、５２．０μｍ、５３．０μｍ、５４．０μｍ、５５．０μｍ、５６．０μｍ、５７．０μｍ、５８．０μｍ、５９．０μｍ、６０．０μｍ、６１．０μｍ、６２．０μｍ、６３．０μｍ、６４．０μｍ、６５．０μｍ、６６．０μｍ、６７．０μｍ、６８．０μｍ、６９．０μｍ、７０．０μｍ、７１．０μｍ、７２．０μｍ、７３．０μｍ、７４．０μｍ、７５．０μｍ、７６．０μｍ、７７．０μｍ、７８．０μｍ、７９．０μｍ、８０．０μｍ、８１．０μｍ、８２．０μｍ、８３．０μｍ、８４．０μｍ、８５．０μｍ、８６．０μｍ、８７．０μｍ、８８．０μｍ、８９．０μｍ、９０．０μｍ、９１．０μｍ、９２．０μｍ、９３．０μｍ、９４．０μｍ、９５．０μｍ、９６．０μｍ、９７．０μｍ、９８．０μｍ、９９．０μｍ、１００．０μｍ、１１０μｍ、１２０μｍ、１３０μｍ、１４０μｍ、１５０μｍ、１６０μｍ、１７０μｍ、１８０μｍ、１９０μｍ、２００μｍ、２１０μｍ、２２０μｍ、２３０μｍ、２４０μｍ、２５０μｍ、２６０μｍ、２７０μｍ、２８０μｍ、２９０μｍ、３００μｍ、３１０μｍ、３２０μｍ、３３０μｍ、３４０μｍ、３５０μｍ、３６０μｍ、３７０μｍ、３８０μｍ、３９０μｍ、４００μｍ、４１０μｍ、４２０μｍ、４３０μｍ、４４０μｍ、４５０μｍ、４６０μｍ、４７０μｍ、４８０μｍ、４９０μｍ、５００μｍ、５１０μｍ、５２０μｍ、５３０μｍ、５４０μｍ、５５０μｍ、５６０μｍ、５７０μｍ、５８０μｍ、５９０μｍ、６００μｍ、６１０μｍ、６２０μｍ、６３０μｍ、６４０μｍ、６５０μｍ、６６０μｍ、６７０μｍ、６８０μｍ、６９０μｍ、７００μｍ、７１０μｍ、７２０μｍ、７３０μｍ、７４０μｍ、７５０μｍ、７６０μｍ、７７０μｍ、７８０μｍ、７９０μｍ、８００μｍ、８１０μｍ、８２０μｍ、８３０μｍ、８４０μｍ、８５０μｍ、８６０μｍ、８７０μｍ、８８０μｍ、８９０μｍ、９００μｍ、９１０μｍ、９２０μｍ、９３０μｍ、９４０μｍ、９５０μｍ、９６０μｍ、９７０μｍ、９８０μｍ、９９０μｍ、及び１０００μｍからなる群から選択される粒子サイズ中央値を有するマイクロ粒子である。

一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は、５００μｍ未満のメディアン粒子径を有するマイクロ粒子である。一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は、３２５μｍ未満のメディアン粒子径を有するマイクロ粒子である。一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は、２５０μｍ未満のメディアン粒子径を有するマイクロ粒子である。一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は、１００μｍ未満のメディアン粒子径を有するマイクロ粒子である。一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は、５０μｍ未満のメディアン粒子径を有するマイクロ粒子である。一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は、１０μｍ未満のメディアン粒子径を有するマイクロ粒子である。

一部の実施形態では、本明細書中に記載されるＳＰＦ粉末、ナノ粒子、及び／又はマイクロ粒子は、治療用活性薬剤のための送達システム、例えば、薬物の持続放出のための送達システムとしての適用を見出し得る。

一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末、ナノ粒子、及び／又はマイクロ粒子は、組成物の総量による、約０．００１重量％、０．０１重量％、約０．１重量％、約０．２重量％、約０．３重量％、約０．４重量％、約０．５重量％、約０．６重量％、約０．７重量％、約０．８重量％、約０．９重量％、約１．０重量％、約１．１重量％、約１．２重量％、約１．３重量％、約１．４重量％、約１．５重量％、約１．６重量％、約１．７重量％、約１．８重量％、約１．９重量％、約２．０重量％、約２．１重量％、約２．２重量％、約２．３重量％、約２．４重量％、約２．５重量％、約２．６重量％、約２．７重量％、約２．８重量％、約２．９重量％、約３．０重量％、約３．１重量％、約３．２重量％、約３．３重量％、約３．４重量％、約３．５重量％、約３．６重量％、約３．７重量％、約３．８重量％、約３．９重量％、約４．０重量％、約４．１重量％、約４．２重量％、約４．３重量％、約４．４重量％、約４．５重量％、約４．６重量％、約４．７重量％、約４．８重量％、約４．９重量％、約５．０重量％、約５．１重量％、約５．２重量％、約５．３重量％、約５．４重量％、約５．５重量％、約５．６重量％、約５．７重量％、約５．８重量％、約５．９重量％、約６．０重量％、約６．１重量％、約６．２重量％、約６．３重量％、約６．４重量％、約６．５重量％、約６．６重量％、約６．７重量％、約６．８重量％、約６．９重量％、約７．０重量％、約７．１重量％、約７．２重量％、約７．３重量％、約７．４重量％、約７．５重量％、約７．６重量％、約７．７重量％、約７．８重量％、約７．９重量％、約８．０重量％、約８．１重量％、約８．２重量％、約８．３重量％、約８．４重量％、約８．５重量％、約８．６重量％、約８．７重量％、約８．８重量％、約８．９重量％、約９．０重量％、約９．１重量％、約９．２重量％、約９．３重量％、約９．４重量％、約９．５重量％、約９．６重量％、約９．７重量％、約９．８重量％、約９．９重量％、約１０．０重量％からなる群から選択される量で、本明細書中に記載される組成物中に存在する。

一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末、ナノ粒子、及び／又はマイクロ粒子は、約０．１ｍｇ／ｍＬ、約０．２ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ、約０．４ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ、約０．６ｍｇ／ｍＬ、約０．７ｍｇ／ｍＬ、約０．８ｍｇ／ｍＬ、約０．９ｍｇ／ｍＬ、約１．０ｍｇ／ｍＬ、約１．１ｍｇ／ｍＬ、約１．２ｍｇ／ｍＬ、約１．３ｍｇ／ｍＬ、約１．４ｍｇ／ｍＬ、約１．５ｍｇ／ｍＬ、約１．６ｍｇ／ｍＬ、約１．７ｍｇ／ｍＬ、約１．８ｍｇ／ｍＬ、約１．９ｍｇ／ｍＬ、約２．０ｍｇ／ｍＬ、約２．１ｍｇ／ｍＬ、約２．２ｍｇ／ｍＬ、約２．３ｍｇ／ｍＬ、約２．４ｍｇ／ｍＬ、約２．５ｍｇ／ｍＬ、約２．６ｍｇ／ｍＬ、約２．７ｍｇ／ｍＬ、約２．８ｍｇ／ｍＬ、約２．９ｍｇ／ｍＬ、及び約３．０ｍｇ／ｍＬからなる群から選択される量で、本明細書中に記載される組成物中に存在する。

一部の実施形態では、本明細書中に記載されるＳＰＦ溶液を使用して、メタノールでの沈殿によりＳＰＦマイクロ粒子を調製することができる。代替的なフラッシュ乾燥、流動床乾燥、スプレー乾燥、又は真空乾燥を適用して、絹溶液から水を除去することができる。ＳＰＦ粉末は次に、冷蔵又は他の特別な取り扱い手順を伴うことなく、保存及び取り扱うことができる。一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は低分子量絹フィブロインタンパク質断片を含む。一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は中分子量絹フィブロインタンパク質断片を含む。一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は、低分子量絹フィブロインタンパク質断片と中分子量絹フィブロインタンパク質断片の混合物を含む。

一部の実施形態では、本開示は、本明細書中に記載される組成物又は組織充填剤ＳＰＦを提供し、限定されないが、軟部組織充填剤を使用して、ＳＰＦ粉末、ナノ粒子を産生することができ、限定されないが、ＳＰＦナノ又はマイクロ粒子を含む、ゲル、及び本明細書中に記載される全ての使用の方法を含む。これは、絹溶液を、適した温度（例、室温）で、水及び他の揮発性物質が蒸発して（約１．０重量％～約１０重量％の水分含量）、微細なＳＰＦ粉末が残るまで、約１００ミリトール（ｍｔｏｒｒ）未満の圧力で凍結乾燥機中に置くことにより達成することができる。凍結乾燥からもたらされる固体絹粉末を次に粉砕して、所望の粒子サイズの微細粉末を形成する。

一部の実施形態では、粒子はゲル中に組み込まれる。ＳＰＦ溶液は、基材上に成型されて、乾燥後に絹フィブロインタンパク質断片を含む絹膜を形成することができる。絹フィルムを次に粉砕して、微細粉末を形成する。

一部の実施形態では、粒子はゲル中に共有結合的に組み込まれる。ＳＰＦ溶液は、薄膜蒸発プロセス（ロトサームとしても公知）に供することにより乾燥させることができ、その後にミリングが続く。絹溶液を、低下した圧力、穏やかな加熱下で薄膜蒸発器中に入れて、水が水溶液から連続的に除去されて、可変粒子サイズの固体がもたらされる。粒子サイズは、圧力、温度、シリンダの回転速度、蒸発器中での液体膜の厚さを含む、蒸発プロセスパラメータを制御することにより変動させることができる。ロトサーム蒸発からもたらされた乾燥タンパク質粉末は、１０．０重量％未満の水分含量を含む。

一部の実施形態では、粒子はゲル中に非共有結合的に組み込まれる。一部の実施形態では、組成物又は組織充填剤は、リドカイン又は本明細書中に記載される任意の他の麻酔薬を含む。一部の実施形態では、組成物又は組織充填剤は、本明細書中に記載される麻酔薬を含まない。ＳＰＦ溶液を使用して、メタノールでの沈殿によりＳＰＦマイクロ粒子を調製することができる。

一部の実施形態では、本開示は、本明細書中に記載される組成物又は組織充填剤を提供し、限定されないが、軟組織充填剤を含み、ならびに、限定されないが、ゲル、及び本明細書中に記載される全ての使用の方法を含み、ゲル中に組み込まれたナノファイバー又はマイクロファイバーをさらに含む。一部の実施形態では、ナノファイバー又はマイクロファイバーは、共有結合的に付着される。一部の実施形態では、ナノファイバー又はマイクロファイバーは、非共有結合的に付着される。一部の実施形態では、組成物又は組織充填剤は、リドカイン又は本明細書中に記載される任意の他の麻酔薬を含む。一部の実施形態では、組成物又は組織充填剤は、本明細書中に記載される麻酔薬を含まない。一部の実施形態では、ナノファイバー又はマイクロファイバーは、本明細書中に記載されるＳＰＦを含む。一部の実施形態では、ナノファイバー又はマイクロファイバーはカプロラクトンを含む。一部の実施形態では、ナノファイバー又はマイクロファイバーはセルロースを含む。

一部の実施形態では、本開示は、本明細書中に記載される組成物又は組織充填剤を提供し、限定されないが、軟組織充填剤を含み、ならびに、限定されないが、別の分子、化合物、薬剤、及び類似のものを送達するように構成されたゲル、及び本明細書中に記載される全ての使用の方法を含む。一部の実施形態では、分子、化合物、薬物、又は類似のものは、本明細書中に記載される遊離絹及び／又は遊離ＳＰＦを含む。一部の実施形態では、遊離絹及び／又は遊離ＳＰＦは、コラーゲン発現をブーストする。一部の実施形態では、分子、化合物、薬物、又は同様のものは、レチノールを含む。一部の実施形態では、分子、化合物、薬物、又は同様のものは、限定されないが、ビタミンＣを含むビタミンを含む。一部の実施形態では、分子、化合物、薬物、又は同様のものは、炎症性薬剤を含む。一部の実施形態では、分子、化合物、薬物、又は同様のものは、抗炎症剤を含む。一部の実施形態では、分子、化合物、薬物、又は同様のものは、上皮細胞再生を刺激するための一つ又は複数の薬剤を含む。一部の実施形態では、分子、化合物、薬物、又は同様のものは、創傷治癒を刺激するための一つ又は複数の薬剤を含む。一部の実施形態では、分子、化合物、薬物、又は同様のものは、疼痛管理を刺激するための一つ又は複数の薬剤を含む。一部の実施形態では、分子、化合物、薬物、又は同様のものは、持続放出を提供することができる一つ又は複数の薬剤を含む。一部の実施形態では、分子、化合物、薬物、又は同様のものは、一つ又は複数の潤滑剤を含む。

一部の実施形態では、本開示は、本明細書中に記載される組成物又は組織充填剤を提供し、限定されないが、軟組織充填剤を含み、ならびに、限定されないが、ゲル、及び本明細書中に記載される全ての使用の方法を含み、イメージング剤をさらに含む。一部の実施形態では、イメージング剤は、ヨウ素、ＤＯＰＡ、及び撮像ナノ粒子から選択される。一部の実施形態では、イメージング剤は、常磁性造影剤及び超常磁性造影剤から選択される。一部の実施形態では、イメージング剤は、ＮＰベースの核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）造影剤、ポジトロン断層法（ＰＥＴ）／単一光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）イメージング剤、超音波活性粒子、及び光学的に活性な（例、発光、蛍光、赤外線）粒子から選択される。一部の実施形態では、イメージング剤は、ＳＰＥＣＴイメージング剤、ＰＥＴイメージング剤、光学イメージング剤、ＭＲＩもしくはＭＲＳイメージング剤、超音波イメージング剤、マルチモーダルイメージング剤、Ｘ線イメージング剤、又はＣＴイメージング剤
である。

一部の実施形態では、本開示は、限定されないが、注入領域を含む、特定の領域に関連する薬物を送達するための使用のための、本明細書中に記載される組成物又は組織充填剤を提供し、限定されないが、軟組織充填剤を含み、ならびに、限定されないが、ゲル、及び本明細書中に記載される全ての使用方法を含む。

一部の実施形態では、本開示は、本明細書中に記載される組成物又は組織充填剤を提供し、限定されないが、軟組織充填剤を含み、ならびに、限定されないが、ゲル、及び本明細書中に記載される全ての使用方法を含み、マイクロ粒子又はマイクロカプセルをさらに含む。一部の実施形態では、マイクロ粒子又はマイクロカプセルは、さらに、薬物を含む。

一部の実施形態では、本開示は、本明細書中に記載される組成物又は組織充填剤を提供し、限定されないが、軟組織充填剤を含み、ならびに、限定されないが、ゲル、及び本明細書中に記載される全ての使用方法を含み、ここで、当該組成物又は組織充填剤は、放射線不透過性である。

一部の実施形態では、本開示は、本明細書中に記載される組成物又は組織充填剤を提供し、限定されないが、軟部組織充填剤を含み、並びに、限定されないが、ゲル、及び本明細書中に記載される全ての使用の方法を含み、本明細書中に記載されるＳＰＦを含み、低分子量、中分子量、及び高分子量から選択される平均分子量、ならびに１～約５の間の多分散性を有する実質的に固体の絹組成物をさらに含む。一部の実施形態では、ＳＰＦは、１～約１．５の間の多分散性を有する。一部の実施形態では、ＳＰＦは、約１．５～約２．０の間の多分散性を有する。一部の実施形態では、ＳＰＦは、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する。一部の実施形態では、ＳＰＦは、約２．０～約２．５の間の多分散性を有する。一部の実施形態では、ＳＰＦは、約２．５～約３．０の間の多分散性を有する。一部の実施形態では、組成物は、さらに、ＳＰＦに対して約０．０１％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）のセリシンを含む。一部の実施形態では、ＳＰＦは粒子中に製剤化される。一部の実施形態では、粒子は、約１μｍ～約１０００μｍの間のサイズを有する。一部の実施形態では、実質的に固体の絹組成物中のＳＰＦは、低分子量、中分子量、及び高分子重量から選択される平均重量平均分子量、ならびに１～約５の間の多分散性を有するＳＰＦ断片を含む前駆体溶液から得られる。一部の実施形態では、前駆体溶液中のＳＰＦは、１と約１．５の間の多分散性を有する。一部の実施形態では、前駆体溶液中のＳＰＦは、約１．５～約２．０の間の多分散性を有する。一部の実施形態では、前駆体溶液中のＳＰＦは、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する。一部の実施形態では、前駆体溶液中のＳＰＦは、約２．０～約２．５の間の多分散性を有する。一部の実施形態では、前駆体溶液中のＳＰＦは、約２．５～約３．０の間の多分散性を有する。一部の実施形態では、前駆体溶液は、さらに、前駆体溶液中のＳＰＦに対して約０．０１％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）のセリシンを含む。一部の実施形態では、前駆体溶液中のＳＰＦは、実質的に固体の絹組成物中の絹フィブロイン断片を得る前に少なくとも１０日間にわたり前駆体溶液中にある場合、自発的又は徐々にゲル化せず、色又は濁りにおいて目に見えるように変化しない。一部の実施形態では、実質的に固体の絹組成物中のＳＰＦは、凍結乾燥プロセス、薄膜蒸発プロセス、塩析プロセス、及びＰＶＡ支援方法から選択されるプロセスにより、前駆体溶液から得られる。一部の実施形態では、実質的に固体の絹組成物は、組成物又は組織充填剤中に、総重量に対して約０．０１重量％～約１０．０重量％で存在する。一部の実施形態では、実質的に固体の絹組成物は、組成物又は組織充填剤中に、総重量に対して約０．０１重量％～約１．０重量％で存在する。一部の実施形態では、実質的に固体の絹組成物は、組成物又は組織充填剤中に、総重量に対して約１．０重量％～約２．０重量％で存在する。

一部の実施形態では、実質的に固体の絹組成物は、組成物又は組織充填剤中に、総重量に対して約２．０重量％～約３．０重量％で存在する。一部の実施形態では、実質的に固体の絹組成物は、組成物又は組織充填剤中に、総重量に対して約３．０重量％～約４．０重量％で存在する。一部の実施形態では、実質的に固体の絹組成物は、組成物又は組織充填剤中に、総重量に対して約４．０重量％～約５．０重量％で存在する。一部の実施形態では、実質的に固体の絹組成物は、組成物又は組織充填剤中に、総重量に対して約５．０重量％～約６．０重量％で存在する。

一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は、１．０μｍ～１０００μｍの範囲のメディアン粒子径を有する固体粒子である。一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は、１．０μｍ～５００μｍの範囲のメディアン粒子径を有するマイクロ粒子である。一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は、１．０μｍ～３００μｍの範囲のメディアン粒子径を有するマイクロ粒子である。一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は、１．０μｍ～２５０μｍの範囲のメディアン粒子径を有するマイクロ粒子である。一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は、１．０μｍ～２００μｍの範囲のメディアン粒子径を有するマイクロ粒子である。一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は、１．０μｍ～１００μｍの範囲のメディアン粒子径を有するマイクロ粒子である。一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は、１．０μｍ～５０．０μｍの範囲のメディアン粒子径を有するマイクロ粒子である。一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は、１．０μｍ～２５．０μｍの範囲のメディアン粒子径を有するマイクロ粒子である。一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は、１．０μｍ～１０．０μｍの範囲のメディアン粒子径を有するマイクロ粒子である。一部の実施形態では、ＳＰＦ粉末は、１．０μｍ、２．０μｍ、３．０μｍ、４．０μｍ、５．０μｍ、６．０μｍ、７．０μｍ、８．０μｍ、９．０μｍ、１０．０μｍ、１１．０μｍ、１２．０μｍ、１３．０μｍ、１４．０μｍ、１５．０μｍ、１６．０μｍ、１７．０μｍ、１８．０μｍ、１９．０μｍ、２０．０μｍ、２１．０μｍ、２２．０μｍ、２３．０μｍ、２４．０μｍ、２５．０μｍ、２６．０μｍ、２７．０μｍ、２８．０μｍ、２９．０μｍ、３０．０μｍ、３１．０μｍ、３２．０μｍ、３３．０μｍ、３４．０μｍ、３５．０μｍ、３６．０μｍ、３７．０μｍ、３８．０μｍ、３９．０μｍ、４０．０μｍ、４１．０μｍ、４２．０μｍ、４３．０μｍ、４４．０μｍ、４５．０μｍ、４６．０μｍ、４７．０μｍ、４８．０μｍ、４９．０μｍ、５０．０μｍ、５１．０μｍ、５２．０μｍ、５３．０μｍ、５４．０μｍ、５５．０μｍ、５６．０μｍ、５７．０μｍ、５８．０μｍ、５９．０μｍ、６０．０μｍ、６１．０μｍ、６２．０μｍ、６３．０μｍ、６４．０μｍ、６５．０μｍ、６６．０μｍ、６７．０μｍ、６８．０μｍ、６９．０μｍ、７０．０μｍ、７１．０μｍ、７２．０μｍ、７３．０μｍ、７４．０μｍ、７５．０μｍ、７６．０μｍ、７７．０μｍ、７８．０μｍ、７９．０μｍ、８０．０μｍ、８１．０μｍ、８２．０μｍ、８３．０μｍ、８４．０μｍ、８５．０μｍ、８６．０μｍ、８７．０μｍ、８８．０μｍ、８９．０μｍ、９０．０μｍ、９１．０μｍ、９２．０μｍ、９３．０μｍ、９４．０μｍ、９５．０μｍ、９６．０μｍ、９７．０μｍ、９８．０μｍ、９９．０μｍ、１００．０μｍ、１１０μｍ、１２０μｍ、１３０μｍ、１４０μｍ、１５０μｍ、１６０μｍ、１７０μｍ、１８０μｍ、１９０μｍ、２００μｍ、２１０μｍ、２２０μｍ、２３０μｍ、２４０μｍ、２５０μｍ、２６０μｍ、２７０μｍ、２８０μｍ、２９０μｍ、３００μｍ、３１０μｍ、３２０μｍ、３３０μｍ、３４０μｍ、３５０μｍ、３６０μｍ、３７０μｍ、３８０μｍ、３９０μｍ、４００μｍ、４１０μｍ、４２０μｍ、４３０μｍ、４４０μｍ、４５０μｍ、４６０μｍ、４７０μｍ、４８０μｍ、４９０μｍ、５００μｍ、５１０μｍ、５２０μｍ、５３０μｍ、５４０μｍ、５５０μｍ、５６０μｍ、５７０μｍ、５８０μｍ、５９０μｍ、６００μｍ、６１０μｍ、６２０μｍ、６３０μｍ、６４０μｍ、６５０μｍ、６６０μｍ、６７０μｍ、６８０μｍ、６９０μｍ、７００μｍ、７１０μｍ、７２０μｍ、７３０μｍ、７４０μｍ、７５０μｍ、７６０μｍ、７７０μｍ、７８０μｍ、７９０μｍ、８００μｍ、８１０μｍ、８２０μｍ、８３０μｍ、８４０μｍ、８５０μｍ、８６０μｍ、８７０μｍ、８８０μｍ、８９０μｍ、９００μｍ、９１０μｍ、９２０μｍ、９３０μｍ、９４０μｍ、９５０μｍ、９６０μｍ、９７０μｍ、９８０μｍ、９９０μｍ、及び１０００μｍからなる群から選択されるメディアン粒子径を有するマイクロ粒子である。

絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含む組織充填剤が本明細書中に開示される。一部の実施形態では、本開示は、合併症を回避しながら、より長い持続性の結果を与える皮膚充填剤について記載し、ヒアルロン酸ベースのヒドロゲルの改変に焦点を当てている。一部の実施形態では、本開示は、絹フィブロインがヒアルロン酸ベースのヒドロゲル中に成功裏に組み込まれ、ヒドロゲルの機械的特性、光学的特性、及び寿命特性の効率的な最適化を可能にする活性化絹ヒドロゲルプラットフォームを記載する。一部の実施形態では、本開示は、ヒアルロン酸、絹フィブロイン、及びポリエチレングリコールの混合物を使用する活性化絹ヒドロゲルプラットフォームを使用して、絹－ＨＡヒドロゲルを製造する方法を記載する。

一部の実施形態では、本開示は、絹フィブロイン／ヒアルロン酸／ポリエチレングリコールヒドロゲルシステムを記載する。一部の実施形態では、本開示は、多種多様な美容的及び医学的適応症への皮膚充填剤としての適用のために適切な物理化学的特性（例、ヒドロゲルの機械的強度、弾性、含水量が、軟組織に類似している）を示す絹ＨＡヒドロゲルを記載する。

一部の実施形態では、組織充填剤は、ＳＰＦ及びヒアルロン酸（ＨＡ）を含み得る、本明細書中に記載される組成物から調製される。一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、皮膚充填剤であり得る。

一部の実施形態では、組織及び／又は皮膚充填剤は、約５ｋＤａ～約５ＭＤａの間、約１００ｋＤａ～約４ＭＤａの間、又は約５００ｋＤａ～約３ＭＤａの間のＭＷを有するＨＡを使用することにより、本明細書中に記載されるプロセスにより作製される。一部の実施形態では、組織及び／又は皮膚充填剤は、約５０ｋＤａ、約１００ｋＤａ、約１５０ｋＤａ、約２００ｋＤａ、約２５０ｋＤａ、約３００ｋＤａ、約３５０ｋＤａ、約４００ｋＤａ、約４５０ｋＤａ、約５００ｋＤａ、約５５０ｋＤａ、約６００ｋＤａ、約６５０ｋＤａ、約７００ｋＤａ、約７５０ｋＤａ、約８００ｋＤａ、約８５０ｋＤａ、約９００ｋＤａ、約９５０ｋＤａ、約１０００ｋＤａ、約１０５０ｋＤａ、約１１００ｋＤａ、約１１５０ｋＤａ、約１２００ｋＤａ、約１２５０ｋＤａ、約１３００ｋＤａ、約１３５０ｋＤａ、約１４００ｋＤａ、約１４５０ｋＤａ、約１５００ｋＤａ、約１５５０ｋＤａ、約１６００ｋＤａ、約１６５０ｋＤａ、約１７００ｋＤａ、約１７５０ｋＤａ、約１８００ｋＤａ、約１８５０ｋＤａ、約１９００ｋＤａ、約１９５０ｋＤａ、約２０００ｋＤａ、約２０５０ｋＤａ、約２１００ｋＤａ、約２１５０ｋＤａ、約２２００ｋＤａ、約２２５０ｋＤａ、約２３００ｋＤａ、約２３５０ｋＤａ、約２４００ｋＤａ、約２４５０ｋＤａ、約２５００ｋＤａ、約２５５０ｋＤａ、約２６００ｋＤａ、約２６５０ｋＤａ、約２７００ｋＤａ、約２７５０ｋＤａ、約２８００ｋＤａ、約２８５０ｋＤａ、約２９００ｋＤａ、約２９５０ｋＤａ、約３０００ｋＤａ、約３０５０ｋＤａ、約３１００ｋＤａ、約３１５０ｋＤａ、約３２００ｋＤａ、約３２５０ｋＤａ、約３３００ｋＤａ、約３３５０ｋＤａ、約３４００ｋＤａ、約３４５０ｋＤａ、約３５００ｋＤａ、約３５５０ｋＤａ、約３６００ｋＤａ、約３６５０ｋＤａ、約３７００ｋＤａ、約３７５０ｋＤａ、約３８００ｋＤａ、約３８５０ｋＤａ、約３９００ｋＤａ、約３９５０ｋＤａ、又は約４０００ｋＤａのＭＷを有するＨＡを使用することにより、本明細書中に記載されるプロセスにより作製される。ＨＡの上記ＭＷのいずれかを、任意の可能な割合で、ＨＡの上記ＭＷのいずれかの他と混合することができる。一部の実施形態では、組織及び／又は皮膚充填剤を、高ＭＷのＨＡを低ＭＷのＨＡと混合することにより作製し、ここで、高ＭＷのＨＡは、約０．０１％、又は約０．１％、又は約０．２％、又は約０．３％、又は約０．４％、又は約０．５％、又は約０．６％、又は約０．７％、又は約０．８％、又は約０．９％、又は約１％、又は約２％、又は約３％、又は約４％、又は約５％、又は約６％、又は約７％、又は約８％、又は約９％、又は約１０％、又は約１１％、又は約１２％、又は約１３％、又は約１４％、又は約１５％、又は約１６％、又は約１７％、又は約１８％、又は約１９％、又は約２０％、又は約２１％、又は約２２％、又は約２３％、又は約２４％、又は約２５％、又は約２６％、又は約２７％、又は約２８％、又は約２９％、又は約３０％、又は約３１％、又は約３２％、又は約３３％、又は約３４％、又は約３５％、又は約３６％、又は約３７％、又は約３８％、又は約３９％、又は約４０％、又は約４１％、又は約４２％、又は約４３％、又は約４４％、又は約４５％、又は約４６％、又は約４７％、又は約４８％、又は約４９％、又は約５０％、又は約５１％、又は約５２％、又は約５３％、又は約５４％、又は約５５％、又は約５６％、又は約５７％、又は約５８％、又は約５９％、又は約６０％、又は約６１％、又は約６２％、又は約６３％、又は約６４％、又は約６５％、又は約６６％、又は約６７％、又は約６８％、又は約６９％、又は約７０％、又は約７１％、又は約７２％、又は約７３％、又は約７４％、又は約７５％、又は約７６％、又は約７７％、又は約７８％、又は約７９％、又は約８０％、又は約８１％、又は約８２％、又は約８３％、又は約８４％、又は約８５％、又は約８６％、又は約８７％、又は約８８％、又は約８９％、又は約９０％、又は約９１％、又は約９２％、又は約９３％、又は約９４％、又は約９５％、又は約９６％、又は約９７％、又は約９８％、又は約９９％、又は約９９．５％、又は約９９．９％の割合である。

一部の実施形態では、皮膚及び／又は皮膚充填剤は、約５ｋＤａ～約３５ｋＤａの間のＭＷを有する絹ＳＰＦを使用することにより、本明細書中に記載されるプロセスにより作製される。一部の実施形態では、組織及び／又は皮膚充填剤は、約５ｋＤａ、又は約６ｋＤａ、又は約７ｋＤａ、又は約８ｋＤａ、又は約９ｋＤａ、又は約１０ｋＤａ、又は約１１ｋＤａ、又は約１２ｋＤａ、又は約１３ｋＤａ、又は約１４ｋＤａ、又は約１５ｋＤａ、又は約１６ｋＤａ、又は約１７ｋＤａ、又は約１９ｋＤａ、又は約１９ｋＤａ、又は約２０ｋＤａ、又は約２１ｋＤａ、又は約２２ｋＤａ、又は約２３ｋＤａ、又は約２４ｋＤａ、又は約２５ｋＤａ、又は約２６ｋＤａ、又は約２７ｋＤａ、又は約２８ｋＤａ、又は約２９ｋＤａ、又は約３０ｋＤａのＭＷを有する絹ＳＰＦを使用することにより、本明細書中に記載されるプロセスにより作製される。

一部の実施形態では、組織及び／又は皮膚充填剤は、約８０ｍｇ／ｍｌ、又は約８１ｍｇ／ｍｌ、又は約８２ｍｇ／ｍｌ、又は約８３ｍｇ／ｍｌ、又は約８４ｍｇ／ｍｌ、又は約８５ｍｇ／ｍｌ、又は約８６ｍｇ／ｍｌ、又は約８７ｍｇ／ｍｌ、又は約８８ｍｇ／ｍｌ、又は約８９ｍｇ／ｍｌ、又は約９０ｍｇ／ｍｌ、又は約９１ｍｇ／ｍｌ、又は約９２ｍｇ／ｍｌ、又は約９３ｍｇ／ｍｌ、又は約９４ｍｇ／ｍｌ、又は約９５ｍｇ／ｍｌ、又は約９６ｍｇ／ｍｌ、又は約９７ｍｇ／ｍｌ、又は約９８ｍｇ／ｍｌ、又は約９９ｍｇ／ｍｌ、又は約１００ｍｇ／ｍｌ、又は約１０１ｍｇ／ｍｌ、又は約１０２ｍｇ／ｍｌ、又は約１０３ｍｇ／ｍｌ、又は約１０４ｍｇ／ｍｌ、又は約１０５ｍｇ／ｍｌ、又は約１０６ｍｇ／ｍｌ、又は約１０７ｍｇ／ｍｌ、又は約１０８ｍｇ／ｍｌ、又は約１０９ｍｇ／ｍｌ、又は約１１０ｍｇ／ｍｌ、又は約１１１ｍｇ／ｍｌ、又は約１１２ｍｇ／ｍｌ、又は約１１３ｍｇ／ｍｌ、又は約１１４ｍｇ／ｍｌ、又は約１１５ｍｇ／ｍｌ、又は約１１６ｍｇ／ｍｌ、又は約１１７ｍｇ／ｍｌ、又は約１１８ｍｇ／ｍｌ、又は約１１９ｍｇ／ｍｌ、又は約１２０ｍｇ／ｍｌ、又はそれより高いＨＡの初期濃度を使用することにより、本明細書中に記載されるプロセスにより作製される。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織及び／又は皮膚充填剤は、約０．１％、又は約０．２％、又は約０．３％、又は約０．４％、又は約０．５％、又は約０．６％、又は約０．７％、又は約０．８％、又は約０．９％、又は約１％、又は約１．１％、又は約１．２％、又は約１．３％、又は約１．４％、又は約１．５％、又は約１．６％、又は約１．７％、又は約１．８％、又は約１．９％、又は約２％、又は約２．１％、又は約２．２％、又は約２．３％、又は約２．４％、又は約２．５％、又は約２．６％、又は約２．７％、又は約２．８％、又は約２．９％、又は約３％、又は約３．１％、又は約３．２％、又は約３．３％、又は約３．４％、又は約３．５％、又は約３．６％、又は約３．７％、又は約３．８％、又は約３．９％、又は約４％、又は約４．１％、又は約４．２％、又は約４．３％、又は約４．４％、又は約４．５％、又は約４．６％、又は約４．７％、又は約４．８％、又は約４．９％、又は約５％の全ＨＡ及び絹ＳＰＦの絹ＳＰＦ濃度を有する。

一部の実施形態では、組織及び／又は皮膚充填剤は、約１００、約２００、約３００、約４００、約５００、約６００、約７００、約８００、約９００、約１０００、約１１００、又は約１２００のＭｎを有するＰＥＧＤＥ架橋剤を使用することにより、本明細書中に記載されるプロセスにより作製される。

一部の実施形態では、組織及び／又は皮膚充填剤は、約３５℃、約３６℃、約３７℃、約３８℃、約３９℃、約４０℃、約４１℃、約４２℃、約４３℃、約４４℃、約４５℃、約４６℃、約４７℃、約４８℃、約４９℃、約５０℃、約５１℃、約５２℃、約５３℃、約５４℃、又は約５５℃での架橋工程を含む反応条件を使用することにより、本明細書中に記載されるプロセスにより作製される。一部の実施形態では、組織及び／又は皮膚充填剤は、約１５分間、約１６分間、約１７分間、約１８分間、約１９分間、約２０分間、約２１分間、約２２分間、約２３分間、約２４分間、約２５分間、約２６分間、約２７分間、約２８分間、約２９分間、約３０分間、約３１分間、約３２分間、約３３分間、約３４分間、約３５分間、約３６分間、約３７分間、約３８分間、約３９分間、約４０分間、約４１分間、約４２分間、約４３分間、約４４分間、約４５分間、約４６分間、約４７分間、約４８分間、約４９分間、約５０分間、約５１分間、約５２分間、約５３分間、約５４分間、約５５分間、約５６分間、約５７分間、約５８分間、約５９分間、約６０分間、約６１分間、約６２分間、約６３分間、約６４分間、又は約６５分間の架橋工程を含む反応条件を使用することにより、本明細書中に記載されるプロセスにより作製される。

一部の実施形態では、組織及び／又は皮膚充填剤は、遊離ＨＡ、例えば、非架橋ＨＡを含む。一部の実施形態では、組織及び／又は皮膚充填剤が、約０．１％、又は約０．２％、又は約０．３％、又は約０．４％、又は約０．５％、又は約０．６％、又は約０．７％、又は約０．８％、又は約０．９％、又は約１％、又は約１．１％、又は約１．２％、又は約１．３％、又は約１．４％、又は約１．５％、又は約１．６％、又は約１．７％、又は約１．８％、又は約１．９％、又は約２％、又は約２．１％、又は約２．２％、又は約２．３％、又は約２．４％、又は約２．５％、又は約２．６％、又は約２．７％、又は約２．８％、又は約２．９％、又は約３％、又は約３．１％、又は約３．２％、又は約３．３％、又は約３．４％、又は約３．５％、又は約３．６％、又は約３．７％、又は約３．８％、又は約３．９％、又は約４％、又は約４．１％、又は約４．２％、又は約４．３％、又は約４．４％、又は約４．５％、又は約４．６％、又は約４．７％、又は約４．８％、又は約４．９％、又は約５％、約５．１％、又は約５．２％、又は約５．３％、又は約５．４％、又は約５．５％、又は約５．６％、又は約５．７％、又は約５．８％、又は約５．９％、又は約６％、又は約６．１％、又は約６．２％、又は約６．３％、又は約６．４％、又は約６．５％、又は約６．６％、又は約６．７％、又は約６．８％、又は約６．９％、又は約７％、又は約７．１％、又は約７．２％、又は約７．３％、又は約７．４％、又は約７．５％、又は約７．６％、又は約７．７％、又は約７．８％、又は約７．９％、又は約８％、又は約８．１％、又は約８．２％、又は約８．３％、又は約８．４％、又は約８．５％、又は約８．６％、又は約８．７％、又は約８．８％、又は約８．９％、又は約９％、又は約９．１％、又は約９．２％、又は約９．３％、又は約９．４％、又は約９．５％、又は約９．６％、又は約９．７％、又は約９．８％、又は約９．９％、又は約１０％の全ＨＡ（架橋ＨＡと非架橋ＨＡ）を含む。一部の実施形態では、組織及び／又は皮膚充填剤は、遊離ＨＡを含まない。

一部の実施形態では、組織及び／又は皮膚充填剤は、約１０ｍｇ／ｍｌ、約１１ｍｇ／ｍｌ、約１２ｍｇ／ｍｌ、約１３ｍｇ／ｍｌ、約１４ｍｇ／ｍｌ、約１５ｍｇ／ｍｌ、約１６ｍｇ／ｍｌ、約１７ｍｇ／ｍｌ、約１８ｍｇ／ｍｌ、約１９ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ、約２１ｍｇ／ｍｌ、約２２ｍｇ／ｍｌ、約２３ｍｇ／ｍｌ、約２４ｍｇ／ｍｌ、約２５ｍｇ／ｍｌ、約２６ｍｇ／ｍｌ、約２７ｍｇ／ｍｌ、約２８ｍｇ／ｍｌ、約２９ｍｇ／ｍｌ、又は約３０ｍｇ／ｍｌでＨＡを含む。

一部の実施形態では、組織及び／又は皮膚充填剤が、約１０．０％、約１０．１％、約１０．２％、約１０．３％、約１０．４％、約１０．５％、約１０．６％、約１０．７％、約１０．８％、約１０．９％、約１１．０％、約１１．１％、約１１．２％、約１１．３％、約１１．４％、約１１．５％、約１１．６％、約１１．７％、約１１．８％、約１１．９％、約１２．０％、約１２．１％、約１２．２％、約１２．３％、約１２．４％、約１２．５％、約１２．６％、約１２．７％、約１２．８％、約１２．９％、約１３．０％、約１３．１％、約１３．２％、約１３．３％、約１３．４％、約１３．５％、約１３．６％、約１３．７％、約１３．８％、約１３．９％、約１４．０％、約１４．１％、約１４．２％、約１４．３％、約１４．４％、約１４．５％、約１４．６％、約１４．７％、約１４．８％、約１４．９％、約１５．０％、約１５．１％、約１５．２％、約１５．３％、約１５．４％、約１５．５％、約１５．６％、約１５．７％、約１５．８％、約１５．９％、約１６．０％、約１６．１％、約１６．２％、約１６．３％、約１６．４％、約１６．５％、約１６．６％、約１６．７％、約１６．８％、約１６．９％、約１７．０％、約１７．１％、約１７．２％、約１７．３％、約１７．４％、約１７．５％、約１７．６％、約１７．７％、約１７．８％、約１７．９％、約１８．０％、約１８．１％、約１８．２％、約１８．３％、約１８．４％、約１８．５％、約１８．６％、約１８．７％、約１８．８％、約１８．９％、約１９．０％、約１９．１％、約１９．２％、約１９．３％、約１９．４％、約１９．５％、約１９．６％、約１９．７％、約１９．８％、約１９．９％、又は約２０．０％のＭｏＤを有する。

一部の実施形態では、組織及び／又は皮膚充填剤は、約５Ｎ、約６Ｎ、約７Ｎ、約８Ｎ、約９Ｎ、約１０Ｎ、約１１Ｎ、約１２Ｎ、約１３Ｎ、約１４Ｎ、約１５Ｎ、約１６Ｎ、約１７Ｎ、約１８Ｎ、約１９Ｎ、約２０Ｎ、約２１Ｎ、約２２Ｎ、約２３Ｎ、約２４Ｎ、又は２５Ｎの注入力を有する。一部の実施形態では、組織及び／又は皮膚充填剤は、約２６Ｎ、約２７Ｎ、約２８Ｎ、約２９Ｎ、約３０Ｎ、約３１Ｎ、約３２Ｎ、約３３Ｎ、約３４Ｎ、約３５Ｎ、約３６Ｎ、約３７Ｎ、約３８Ｎ、約３９Ｎ、約４０Ｎ、約４１Ｎ、約４２Ｎ、約４３Ｎ、約４４Ｎ、約４５Ｎ、約４６Ｎ、約４７Ｎ、約４８Ｎ、約４９Ｎ、又は約５０Ｎの注入力を有する。一部の実施形態では、注入力は、３０Ｇ針を通した注入に関する。

本明細書中で提供される組織充填剤は、一つ又は複数の成分、例えばＳＰＦ、例えば、架橋ＳＰＦ及び／又は非架橋ＳＰＦ（例、遊離ＳＰＦ）、ヒアルロン酸、例えば、架橋ＨＡ及び／又は非架橋ＨＡなどをさらに含む組成物を含む。本明細書中で使用されるように、架橋ＳＰＦは、同一又は非同一ＳＰＦと架橋されたＳＰＦを指す。架橋ＳＰＦはまた、ホモ架橋ＳＰＦとして言及することができる。本明細書中で使用されるように、架橋ＨＡは、同一又は非同一のＨＡに架橋されたＨＡを指す。架橋ＨＡはまた、ホモ架橋ＨＡとして言及することができる。本明細書中で提供される組織充填剤はまた、ＨＡに架橋されたＳＰＦ及び／又はＳＰＦに架橋されたＨＡを含むことができる。ＨＡに架橋されたＳＰＦ、及び／又はＳＰＦに架橋されたＨＡをまた、架橋ＳＰＦ－ＨＡ、又はヘテロ架橋ＳＰＦ－ＨＡとして言及することができる。

一部の実施形態では、本発明の組成物は、単相である。一部の実施形態では、本発明の組成物は、二相、又は多相である。一部の実施形態では、本発明の組成物は、非架橋ポリマー相、例えば、非架橋ＳＰＦ、及び／又は非架橋ＨＡを含む。一部の実施形態では、本発明の組成物は、架橋相、例えば、架橋ＳＰＦ、及び／又は架橋ＨＡを含む。一部の実施形態では、本発明の組成物は、液相、例えば、水、及び／又は水溶液を含む。一部の実施形態では、水溶液は、ＳＰＦを含むことができる。一部の実施形態では、水相は、ＨＡを含むことができる。一部の実施形態では、液相は、非架橋ポリマー、例えば非架橋ＨＡ及び／又は非架橋ＳＰＦなどを含み得る。

一部の実施形態では、本発明の組成物は、担体相を含む。そのようなものとして、開示される組成物は、単相又は多相の組成物であることができる。本明細書中で使用されるように、用語「担体相」は、「担体」と同義であり、ヒドロゲルの流動性を増加させるために使用される材料を指す。担体は、有利には、生理学的に許容可能な担体であり、医薬組成物において有用な一つ又は複数の従来の賦形剤を含み得る。本明細書中で使用されるように、用語「生理学的に許容可能な担体」は、生物の正常な機能に合った、又はそれを特徴とする担体を指す。そのようなものとして、ヒドロゲル及び担体を含む組成物の投与は、哺乳動物に投与された場合に、長期的又は永久的に有害な効果を実質的に有さない。本発明の組織充填剤は、その容積の主要部が水又は生理食塩水である担体を含む。しかし、他の有用な担体は、針を通じた、又は標的宿主環境中へのヒドロゲルの押出性又は侵入性を改善する、任意の生理学的に許容される材料を含む。潜在的な担体は、限定されないが、生理的緩衝溶液、血清、他のタンパク質溶液、タンパク質、糖タンパク質、プロテオグリカン、又は多糖を含むポリマーで構成されるゲルを含む。示される潜在的な担体はのいずれも、天然由来であっても、全合成物であっても、又はそれらの組合せのいずれであってもよい。

一実施形態では、本明細書中で提供される組成物は、改変ＳＰＦ、架橋ＳＰＦ、非架橋ＳＰＦ、改変ＨＡ、架橋ＨＡ、非架橋ＨＡ、ホモ架橋ＳＰＦ、ホモ架橋ＨＡ、及びヘテロ架橋ＳＰＦ－ＨＡの一つ又は複数を含む。

一部の実施形態では、本明細書中で提供される組成物は、架橋ＳＰＦ及び非架橋ＳＰＦを含む。一部の実施形態では、本明細書中で提供される組成物は、架橋ＳＰＦ及び非架橋ＨＡを含む。一部の実施形態では、本明細書中で提供される組成物は、架橋ＳＰＦ及び架橋ＨＡを含む。一部の実施形態では、本明細書中で提供される組成物は、架橋ＳＰＦ及び架橋ＳＰＦ－ＨＡを含む。

一部の実施形態では、本明細書中で提供される組成物は、非架橋ＳＰＦ及び非架橋ＨＡを含む。一部の実施形態では、本明細書中で提供される組成物は、非架橋ＳＰＦ及び架橋ＨＡを含む。一部の実施形態では、本明細書中で提供される組成物は、非架橋ＳＰＦ及び架橋ＳＰＦ－ＨＡを含む。

一部の実施形態では、本明細書中で提供される組成物は、架橋ＳＰＦ、非架橋ＳＰＦ、及び非架橋ＨＡを含む。一部の実施形態では、本明細書中で提供される組成物は、架橋ＳＰＦ、非架橋ＳＰＦ、及び架橋ＨＡを含む。一部の実施形態では、本明細書中で提供される組成物は、架橋ＳＰＦ、非架橋ＳＰＦ、及び架橋ＳＰＦ－ＨＡを含む。

一部の実施形態では、本明細書中で提供される組成物は、架橋ＳＰＦ、架橋ＨＡ、及び非架橋ＨＡを含む。一部の実施形態では、本明細書中で提供される組成物は、架橋ＳＰＦ、架橋ＨＡ、及び架橋ＳＰＦ－ＨＡを含む。一部の実施形態では、本明細書中で提供される組成物は、架橋ＳＰＦ、非架橋ＨＡ、及び架橋ＳＰＦ－ＨＡを含む。

一部の実施形態では、本明細書中で提供される組成物は、非架橋ＳＰＦ、架橋ＨＡ、及び非架橋ＨＡを含む。一部の実施形態では、本明細書中で提供される組成物は、非架橋ＳＰＦ、架橋ＨＡ、及び架橋ＳＰＦ－ＨＡを含む。一部の実施形態では、本明細書中で提供される組成物は、非架橋ＳＰＦ、非架橋ＨＡ、及び架橋ＳＰＦ－ＨＡを含む。

一部の実施形態では、本明細書中で提供される組成物は、架橋ＳＰＦ、非架橋ＳＰＦ、架橋ＨＡ、及び非架橋ＨＡを含む。一部の実施形態では、本明細書中で提供される組成物は、架橋ＳＰＦ、非架橋ＳＰＦ、架橋ＨＡ、及び架橋ＳＰＦ－ＨＡを含む。一部の実施形態では、本明細書中で提供される組成物は、架橋ＳＰＦ、非架橋ＳＰＦ、非架橋ＨＡ、及び架橋ＳＰＦ－ＨＡを含む。

一部の実施形態では、本明細書中で提供される組成物は、架橋ＳＰＦ、架橋ＨＡ、非架橋ＨＡ、及び架橋ＳＰＦ－ＨＡを含む。一部の実施形態では、本明細書中で提供される組成物は、非架橋ＳＰＦ、架橋ＨＡ、非架橋ＨＡ、及び架橋ＳＰＦ－ＨＡを含む。

一部の実施形態では、本明細書中で提供される組成物は、架橋ＳＰＦ、非架橋ＳＰＦ、架橋ＨＡ、非架橋ＨＡ、及び架橋ＳＰＦ－ＨＡを含む。

一部の実施形態では、本明細書中で提供される組成物は、架橋ＳＰＦを含む。一部の実施形態では、本明細書中で提供される組成物は、ＳＰＦ及びヒアルロン酸（ＨＡ）を含む。一態様では、本明細書中で記載されるＳＰＦ／ＨＡベースの組成物は、ＨＡ架橋部分を含む。一部の実施形態では、組成物は、ＳＰＦ－ＨＡ架橋部分を含む。一部の実施形態では、組成物は、非架橋ＨＡを含む。一部の実施形態では、組成物は、非架橋ＳＰＦを含むことができる。一部の実施形態では、組成物は、少なくとも一つの追加の薬剤を含み得る。一部の実施形態では、組成物は、架橋ＳＰＦ－ＳＰＦ、ＳＰＦ－ＨＡ、及び／又はＨＡ－ＨＡを含み、様々な程度の生体吸収性、及び／又は生体再吸収性の組成物をもたらす。

一部の実施形態では、ＨＡは、マトリックス中に架橋される。一部の実施形態では、ＨＡマトリックスは、一つ又は複数のＳＰＦを封入又は半封入する。一部の実施形態では、ＨＡは、一つ又は複数のＳＰＦと架橋されている。

一部の実施形態では、組織充填剤、又はその一部は、生体適合性、生分解性、生体吸収性、生体再吸収性、又はそれらの組合せである。一部の実施形態では、本明細書中で提供される組織充填剤は、流体成分、例えば、単一の流体、又は実質的に一つ又は複数の流体を含む溶液を含む。一部の実施形態では、組織充填剤は、水又は水溶液を含む。一部の実施形態では、組織充填剤は、当技術分野において公知の任意の手段により、例えば、組織の外科的切除後などに、皮膚下に注入可能、移植可能、又は送達可能である。一部の実施形態では、組成物は、組織及び／又は皮膚充填剤である。一部の実施形態では、組成物は無菌である。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、約１％（ｗ／ｗ）ＳＰＦ及び約０．３％（ｗ／ｗ）リドカインを含み得る。

絹タンパク質断片（ＳＰＦ）及びヒアルロン酸（ＨＡ）を含む組成物を製造する方法、ＳＰＦ及びＨＡを含む組成物の送達方法、ならびにＳＰＦ及びＨＡを含む組成物を使用する治療の方法が、本明細書中に提供される。

定義
他に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者により通常理解されるのと同じ意味を有する。本明細書中で言及される全ての特許及び刊行物が、参照によりそれらの全体において本明細書中に組み入れられる。

本明細書中で使用されるパーセンテージ記号は、「重量％」、又は％ｗ／ｗ、％ｖ／ｖ、又は％ｗ／ｖを含む。

本明細書中で使用されるように、用語「ａ」、「ａｎ」、又は「ｔｈｅ」は、一般的に、単数形及び複数形の両方を包含すると解釈される。

本明細書中で使用されるように、用語「約」は、一般的に、当業者により決定される許容可能な誤差範囲内にある特定の数値を指し、それは、数値がどのように測定又は決定されるか、即ち、測定系の限度に一部依存する。例えば、「約」は、所与の数値の±２０％、±１０％、又は±５％の範囲を意味する。

本明細書中で使用されるように、用語「フィブロイン」又は「絹タンパク質」は、絹を産生する特定のクモ及び昆虫種により産生される構造タンパク質の種類を指す（ＷＩＰＯＰｅａｒｌ－ＷＩＰＯ’ｓＭｕｌｔｉｌｉｎｇｕａｌＴｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙＰｏｒｔａｌｄａｔａｂａｓｅ，ｈｔｔｐｓ：／／ｗｉｐｏｐｅａｒｌ．ｗｉｐｏ．ｉｎｔ／ｅｎ／ｌｉｎｇｕｉｓｔｉｃにおいて提供される定義を参照のこと）。フィブロインは、カイコフィブロイン、昆虫又はクモの絹タンパク質（例、スピドロイン）、組換えクモタンパク質、他のクモ絹種において存在する絹タンパク質、例えば、管状腺絹タンパク質（ＴｕＳＰ）、鞭状腺絹タンパク質、小瓶状腺絹タンパク質、ブドウ状腺絹タンパク質、梨状腺絹タンパク質、凝集腺絹グルー、遺伝子組換えカイコにより産生されたカイコフィブロイン、又は組換えカイコフィブロインを含み得る。

本明細書中で使用されるように、用語「絹フィブロイン」は、カイコフィブロイン、遺伝子改変カイコにより産生される絹フィブロイン、又は遺伝子組換えカイコフィブロインを指す（（１）ＮａｒａｙａｎＥｄ．，ＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａｏｆＢｉｏｍｅｄｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｖｏｌ．２，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，２０１９；（２）Ｋｏｂａｙａｓｈｉｅｔａｌ．Ｅｄｓ，ＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａｏｆＰｏｌｙｍｅｒｉｃＮａｎｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，２０１４，ｈｔｔｐｓ：／／ｌｉｎｋ．ｓｐｒｉｎｇｅｒ．ｃｏｍ／ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｗｏｒｋｅｎｔｒｙ／１０．１００７％２Ｆ９７８－３－６４２－３６１９９－９＿３２３－１を参照のこと）。一実施形態では、絹フィブロインは、ボンビクス・モリから得られる。

本明細書中で使用されるように、用語「絹フィブロインペプチド」、「絹フィブロインタンパク質ベースの断片」、及び「絹フィブロイン断片」は、互換的に使用される。分子量又はアミノ酸単位の数は、分子サイズが重要なパラメータになる時に定義される。

本明細書中で使用されるように、ポリマーの用語「多分散性（ＰＤ）」は、一般的に、ポリマーの分子量分布の広さの尺度として使用され、多分散性の式ＰＤ＝Ｍｗ／Ｍｎにより定義される。

本明細書中で使用されるように、用語「低分子量絹フィブロインタンパク質ベースの断片」（低ＭＷ絹）は、約２００Ｄａ～約２５ｋＤａ、又は約２８ｋＤａ未満、又は約１５ｋＤａ～約２８ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する絹フィブロイン断片を指す。

本明細書中で使用されるように、用語「中分子量絹フィブロイン断片」（中ＭＷ絹）は、約２５ｋＤａ～約６０ｋＤａ、又は約３９ｋＤａ～約５４ｋＤａの範囲の重量平均分子量を有する絹フィブロイン断片を指す。

本明細書中で使用される用語「ゲル化」は、弾性特性の徐々の増強により伴われる、粘度における連続的な増加を含むプロセスを指す。ポリマー系におけるゲル化の主な原因は、溶解したポリマー又はそれらの凝集体間の相互作用の増強である。ミセル化とは対照的に、ゲル化は、半希釈から高濃度のブロック共重合体溶液で生じ、規則的なミセルの配置からもたらされる。

本明細書中で使用される用語「ヒドロゲル」は、溶解することを伴わずに、液体中で膨潤する、架橋された親水性又は両親媒性のポリマーで作製される三次元ネットワークを指す。ヒドロゲルは、大量の水を吸収する能力を有する。ヒドロゲルは、水又は水性媒体で満たされた、中間ボイドを伴う、分子、線維、又は粒子の低容量分率の３Ｄネットワークである。ヒドロゲルは、二つのクラス中に分類することができる：一つのクラスは、ポリマー鎖の物理的な会合からもたらされる物理的ゲルであり、他のクラスは、共有結合により、そのネットワークが連結された化学的ゲル（又は不可逆的ゲル）である。ペンダント基としての、又は３Ｄネットワークの骨格上での官能基の含有によって、温度、電磁界、化学物質、及び生体分子を含む、様々な刺激に応答して膨潤するヒドロゲルの合成が可能になる。一実施形態では、本明細書中に記載される絹－ＨＡヒドロゲルの物理的形態は、マイクロゲル（ヒドロゲルマイクロ粒子）及びバルクヒドロゲルを含み得る。

本明細書中で使用されるように、用語「セリシンを実質的に含まない」又は「セリシンを実質的に欠いている」は、セリシンタンパク質の大部分が除去された絹線維、及び／又はセリシンタンパク質の大部分が除去された絹線維から作製されたＳＰＦを指す。一実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約１０．０％（ｗ／ｗ）の間のセリシンを有する絹フィブロイン及びＳＰＦを指す。一実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約９．０％（ｗ／ｗ）の間のセリシンを有する絹フィブロイン及びＳＰＦを指す。一実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約８．０％（ｗ／ｗ）の間のセリシンを有する絹フィブロイン及びＳＰＦを指す。一実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約７．０％（ｗ／ｗ）の間のセリシンを有する絹フィブロイン及びＳＰＦを指す。一実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約６．０％（ｗ／ｗ）の間のセリシンを有する絹フィブロイン及びＳＰＦを指す。一実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約５．０％（ｗ／ｗ）の間のセリシンを有する絹フィブロイン及びＳＰＦを指す。一実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約０％（ｗ／ｗ）～約４．０％（ｗ／ｗ）の間のセリシンを有する絹フィブロイン及びＳＰＦを指す。一実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約０．０５％（ｗ／ｗ）～約４．０％（ｗ／ｗ）の間のセリシンを有する絹フィブロイン及びＳＰＦを指す。一実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約０．１％（ｗ／ｗ）～約４．０％（ｗ／ｗ）の間のセリシンを有する絹フィブロイン及びＳＰＦを指す。一実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約０．５％（ｗ／ｗ）～約４．０％（ｗ／ｗ）の間のセリシンを有する絹フィブロイン及びＳＰＦを指す。一実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約１．０％（ｗ／ｗ）～約４．０％（ｗ／ｗ）の間のセリシンを有する絹フィブロイン及びＳＰＦを指す。一実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約１．５％（ｗ／ｗ）～約４．０％（ｗ／ｗ）の間のセリシンを有する絹フィブロイン及びＳＰＦを指す。一実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約２．０％（ｗ／ｗ）～約４．０％（ｗ／ｗ）の間のセリシンを有する絹フィブロイン及びＳＰＦを指す。一実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約２．５％（ｗ／ｗ）～約４．０％（ｗ／ｗ）の間のセリシンを有する絹フィブロイン及びＳＰＦを指す。一実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．１％（ｗ／ｗ）の間のセリシン含量を有する絹フィブロイン及びＳＰＦを指す。一実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約０．１％（ｗ／ｗ）を下回るセリシン含量を有する絹フィブロイン及びＳＰＦを指す。一実施形態では、セリシンを実質的に欠いている絹フィブロイン及びＳＰＦは、約０．０５％（ｗ／ｗ）を下回るセリシン含量を有する絹フィブロイン及びＳＰＦを指す。一実施形態では、絹供給源が、沸騰している（１００℃）炭酸ナトリウムの水溶液に、約３０分間～約６０分間の処理時間にわたり添加される場合に、約２６重量％～約３１重量％の脱ガム損失（ｄｅｇｕｍｍｉｎｇｌｏｓｓ）が得られる。

本明細書中で使用される用語「実質的に均質な」は、同定された分子量の周りに正規分布中で分布している純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片を指し得る。本明細書中で使用されるように、用語「実質的に均質な」は、本開示の組成物全体を通して、例えば、リドカインの添加剤の均一な分布を指し得る。

本明細書中で使用されるように、用語「無機残渣を実質的に含まない」は、組成物が０．１％（ｗ／ｗ）又はそれ以下の残渣を示すことを意味する。一実施形態では、「無機残渣を実質的に含まない」は、０．０５％（ｗ／ｗ）又はそれ以下の残渣を示す組成物を指す。一実施形態では、実質的に無機残渣がないは、０．０１％（ｗ／ｗ）又はそれ以下の残渣を示す組成物を指す。一実施形態では、無機残渣の量は、０ｐｐｍ（「検出不能」又は「ＮＤ」）～１０００ｐｐｍの間である。一実施形態では、無機残渣の量は、ＮＤ～約５００ｐｐｍである。一実施形態では、無機残渣の量は、ＮＤ～約４００ｐｐｍである。一実施形態では、無機残渣の量は、ＮＤ～約３００ｐｐｍである。一実施形態では、無機残渣の量は、ＮＤ～約２００ｐｐｍである。一実施形態では、無機残渣の量は、ＮＤ～約１００ｐｐｍである。一実施形態では、無機残渣の量は、１０ｐｐｍ～１０００ｐｐｍの間である。

本明細書中で使用するように、用語「実質的に有機残渣を含まない」は、組成物が０．１％（ｗ／ｗ）又はそれ以下の残渣を示すことを意味する。一実施形態では、「実質的に有機残渣を含まない」は、０．０５％（ｗ／ｗ）又はそれ以下の残渣を示す組成物を指す。一実施形態では、「無機残渣を実質的に含まない」は、０．０１％（ｗ／ｗ）又はそれ以下の残渣を示す組成物を指す。一実施形態では、有機残渣の量は、０ｐｐｍ（「検出不能」又は「ＮＤ」）～１０００ｐｐｍの間である。一実施形態では、有機残渣の量は、ＮＤ～約５００ｐｐｍである。一実施形態では、有機残渣の量は、ＮＤ～約４００ｐｐｍである。一実施形態では、有機残渣の量は、ＮＤ～約３００ｐｐｍである。一実施形態では、有機残渣の量は、ＮＤ～約２００ｐｐｍである。一実施形態では、有機残渣の量は、ＮＤ～約１００ｐｐｍである。一実施形態では、有機残渣の量は、１０ｐｐｍ～１０００ｐｐｍの間である。

本明細書中で使用されるように、用語「非架橋」は、個々のマトリックスポリマー分子、高分子、及び／又は単量体鎖を結合する分子間結合の欠如を指す。そのようなものとして、非架橋マトリックスポリマーは、分子間結合により、任意の他のマトリックスポリマーに連結されていない。

本開示の組織充填剤、組成物、又はその一部は、「生体適合性」を示す、又は「生体適合性」であり、組成物が、実質的に毒性がない、有毒でない、生理学的反応がなく、免疫拒絶を起こさないことにより、生体組織又は生体システムと適合することを意味する。用語「生体適合性」は、本明細書中に定義される、用語「生体吸収性」、「生体再吸収性」、及び「生分解性」を包含する。

本開示の組織充填剤、組成物、又はその一部は、「生体吸収性」、「生体再吸収性」、及び／又は「生分解性」であり得る。本明細書中で使用されるように、用語「生体吸収性」は、消失が生じ得る機構、例えば溶解、分解、吸収、及び排泄などに非依存的に、体内での移植時に消失する材料又は物質を指す。本明細書中で使用されるように、用語「生体再吸収性」は、体により吸収されることが可能であることを意味する。本明細書中で使用されるように、用語「生分解性」は、生理学的条件下で副生成物に分解することができる材料を指す。そのような生理学的条件は、例えば、加水分解（加水分解を介する分解）、酵素触媒（酵素分解）、機械的相互作用及び同様のものを含む。本明細書中で使用されるように、用語「生分解性」はまた、用語「生体再吸収性」を包含し、生理学的条件下で分解して、宿主生物中への生体再吸収を受ける生成物に分解される、即ち、宿主生物の生化学系の代謝産物となる材料又は物質を記載する。本明細書中で使用されるように、用語「生体再吸収性」及び「生体再吸収」は、当業者により理解されるように、プロセス、例えば細胞媒介性分解、酵素分解、及び／又は生体再吸収性ポリマーの加水分解、及び／又は生体組織からの生体再吸収性ポリマーの除去などを包含する。一部の実施形態では、本明細書中に記載されるＳＰＦ－ＨＡ組成物及び材料は、生体適合性、生体再吸収性、生体吸収性、及び／又は生分解性であり得る。

本明細書中に記載される組織充填剤が生分解性又は生体再吸収性である場合、それらは、少なくとも約１日間、又は少なくとも約２日間、又は少なくとも約３日間、又は少なくとも約４日間、少なくとも５日間、又は少なくとも約１０日間、又は少なくとも約１５日間、又は少なくとも約２０日間、又は少なくとも約２５日間、又は少なくとも約３０日間、又は少なくとも約３５日間、又は少なくとも約４０日間、又は少なくとも約４５日間、又は少なくとも約５０日間、又は少なくとも約６０日間、又は少なくとも約７０日間、又は少なくとも約８０日間、又は少なくとも約９０日間、又は少なくとも約１００日間、又は少なくとも約１１０日間、又は少なくとも約１２０日間、又は少なくとも約１３０日間、又は少なくとも約１４０日間、又は少なくとも約１４０日間、又は少なくとも約１５０日間、又は少なくとも約１６０日間、又は少なくとも約１７０日間、又は少なくとも約１８０日間、又は少なくとも約１９０日間、又は少なくとも約２００日間、又は少なくとも約２５０日間、又は少なくとも約３００日間、又は少なくとも約１年間、又は少なくとも約２年間にわたり生分解又は生体吸収に抵抗し得る、あるいは、それらは、５日間、又は最大約１０日間、又は最大約１５日間、又は最大約２０日間、又は最大約２５日間、又は最大約３０日間、又は最大約３５日間、又は最大約４０日間、又は最大約４５日間、又は最大約５０日間、又は最大約６０日間、又は最大約７０日間、又は最大約８０日間、又は最大約９０日間、又は最大約１００日間、又は最大約１１０日間、又は最大約１２０日間、又は最大約１３０日間、又は最大約１４０日間、又は最大約１４０日間、又は最大約１５０日間、又は最大約１６０日間、又は最大約１７０日間、又は最大約１８０日間、又は最大約１９０日間、又は最大約２００日間、又は最大約２５０日間、又は最大約３００日間、又は最大約１年間、又は最大２年間にわたり生分解に抵抗し得る。

本明細書中に記載される組織充填剤が生体吸収性である場合、それらは、少なくとも約１日間、又は少なくとも約２日間、又は少なくとも約３日間、又は少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、又は少なくとも約１０日間、又は少なくとも約１５日間、又は少なくとも約２０日間、又は少なくとも約２５日間、又は少なくとも約３０日間、又は少なくとも約３５日間、又は少なくとも約４０日間、又は少なくとも約４５日間、又は少なくとも約５０日間、又は少なくとも約６０日間、又は少なくとも約７０日間、又は少なくとも約８０日間、又は少なくとも約９０日間、又は少なくとも約１００日間、又は少なくとも約１１０日間、又は少なくとも約１２０日間、又は少なくとも約１３０日間、又は少なくとも約１４０日間、又は少なくとも約１４０日間、又は少なくとも約１５０日間、又は少なくとも約１６０日間、又は少なくとも約１７０日間、又は少なくとも約１８０日間、又は少なくとも約１９０日間、又は少なくとも約２００日間、又は少なくとも約２５０日間、又は少なくとも約３００日間、又は少なくとも約１年間、又は少なくとも約２年間にわたり生体吸収に抵抗し得る、あるいは、それらは、約５日間未満、又は最大約１０日間、又は最大約１５日間、又は最大約２０日間、又は最大約２５日間、又は最大約３０日間、又は最大約３５日間、又は最大約４０日間、又は最大約４５日間、又は最大約５０日間、又は最大約６０日間、又は最大約７０日間、又は最大約８０日間、又は最大約９０日間、又は最大約１００日間、又は最大約１１０日間、又は最大約１２０日間、又は最大約１３０日間、又は最大約１４０日間、又は最大約１４０日間、又は最大約１５０日間、又は最大約１６０日間、又は最大約１７０日間、又は最大約１８０日間、又は最大約１９０日間、又は最大約２００日間、又は最大約２５０日間、又は最大約３００日間、又は最大約１年間、又は最大約２年間にわたり生体吸収に抵抗し得る。

本明細書中に記載されるように、生分解性、生体吸収性、及び生体再吸収性の程度は、例えば、生分解、生体吸収、及び／又は生体再吸収を遅らせる一つ又は複数の薬剤を、本明細書中に記載される組成物に添加することにより、改変及び／又は制御され得る。また、生分解性、生体吸収性、及び生体再吸収性の程度は、本明細書中に記載されるポリマー材料中に存在するポリマー架橋の程度を増加又は減少させることにより改変及び／又は制御され得る。例えば、本明細書中に記載される組成物の生分解、生体吸収、及び／又は生体再吸収の速度は、本明細書中に記載されるポリマー材料中の架橋の量を低下させることにより増加され得る。あるいは、本明細書中に記載される組織充填剤及び組成物の生分解、生体吸収、及び／又は生体再吸収の速度は、本明細書中に記載されるポリマー材料中の架橋の量を増加させることにより減少され得る。

本開示の組織充填剤及び組成物は、「低アレルギー性」であり、アレルギー反応を起こす可能性が比較的低いことを意味する。そのような低アレルギー性は、参加者が、局所的に、長期間にわたり彼らの皮膚上に本開示の組成物を適用することにより証明することができる。一実施形態では、延長期間は約３日間である。一実施形態では、延長期間は約７日間である。一実施形態では、延長期間は約１４日間である。一実施形態では、延長期間は約２１日間である。一実施形態では、延長期間は約３０日間である。一実施形態では、延長期間は、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間、約７ヶ月間、約８ヶ月間、約９ヶ月間、約１０ヶ月間、約１１ヶ月間、約１２ヶ月間、及び無期限からなる群から選択される。

本明細書中で使用されるように、「低分子量」絹は、約５ｋＤａ～約２０ｋＤａ、又は約２００Ｄａ～約２５ｋＤａ、又は約２８ｋＤａ未満、又は約１５ｋＤａ～約２８ｋＤａの間の範囲の分子量を有する絹タンパク質断片を指す。一部の実施形態では、特定の絹タンパク質断片についての目標低分子量は、約１１ｋＤａであることができる。一部の実施形態では、特定の絹タンパク質断片についての目標低分子量は、約１２ｋＤａであることができる。一部の実施形態では、特定の絹タンパク質断片についての目標低分子量は、約１３ｋＤａであることができる。一部の実施形態では、特定の絹タンパク質断片についての目標低分子量は、約１４ｋＤａであることができる。一部の実施形態では、特定の絹タンパク質断片についての目標低分子量は、約１５ｋＤａであることができる。一部の実施形態では、特定の絹タンパク質断片についての目標低分子量は、約１６ｋＤａであることができる。

本明細書中で使用される「中分子量」絹は、約２０ｋＤａ～約５５ｋＤａ、又は約２５ｋＤａ～約６０ｋＤａ、又は約３９ｋＤａ～約５４ｋＤａの範囲の分子量を有する絹タンパク質断片を指す。一部の実施形態では、特定の絹タンパク質断片についての目標低分子量は、約４０ｋＤａであることができる。一部の実施形態では、特定の絹タンパク質断片についての目標低分子量は、約４８ｋＤａであることができる。

本明細書中で使用されるように、「高分子量」絹は、約５５ｋＤａ～約１５０ｋＤａの範囲の分子量を有する絹タンパク質断片を指す。一部の実施形態では、特定の絹タンパク質断片についての目標低分子量は、約１００ｋＤａ～約１４５ｋＤａであることができる。一部の実施形態では、特定の絹タンパク質断片についての目標低分子量は、約１００ｋＤａであることができる。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される分子量、例えば、低分子量ＳＰＦ、中分子量ＳＰＦ、高分子量ＳＰＦは、当業者により理解され得るように、それぞれ天然又は組換えタンパク質、例えば天然又は組換え絹タンパク質などの内に含まれるアミノ酸のおよその数に変換することができる。例えば、アミノ酸の平均重量は、約１１０ダルトン、即ち、１１０ｇ／ｍｏｌであり得る。従って、一部の実施形態では、直鎖状タンパク質の分子量を１１０ダルトンにより除すことを、その中に含まれるアミノ酸残基数の近似に使用することができる。

本明細書中で使用されるように、用語「多分散性」は、所与のポリマーサンプルにおける分子量の分布の尺度を指す。多分散性は、重量平均分子量（Ｍｗ）を平均分子量数（Ｍｎ）で除することにより算出することができる。本明細書中で使用されるように、用語「重量平均分子量」（Ｍｗ）は、一般的に、それらのサイズに従った、ポリマー分子の寄与に依存する分子量測定値を指す。重量平均分子量は、以下の式により定義され得る：

式中、Ｍ_ｉは、鎖の分子量であり、Ｎ_ｉは、その分子量の鎖の数である。本明細書中で使用されるように、用語「数平均分子量」（Ｍｎ）は、一般的に、サンプル中の全てのポリマー分子の総重量を、サンプル中のポリマー分子の総数で除することにより計算される分子量測定値を指す。数平均分子量は、以下の式により定義され得る：

式中、Ｍ_ｉは、鎖の分子量であり、Ｎ_ｉは、その分子量の鎖の数である。例えば、単分散ポリマーは、全てのポリマー鎖が等しく、１の多分散性（Ｍｗ／Ｍｎ）を有する。一般的に、分子量平均は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）及びサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により決定され得る。多分散性指数が大きいほど、分子量はより広い。

本明細書中で使用されるように、用語「組織充填剤」は、容積を加える、支持を加える、又は他の方法で軟組織欠損を治療するために、軟組織の中又はその周辺に提供され得る材料を広く指す。用語「組織充填剤」はまた、組織及び／又は皮膚充填剤を包含する；しかし、用語「皮膚充填剤」は、そのような充填剤の送達の場所及びタイプに関して任意の限定を課すとして解釈されるべきではない。それにもかかわらず、本明細書中に記載される皮膚充填剤は、一般的に、真皮下の複数レベルでの、そのような皮膚充填剤の使用及び送達を包含し得る。本明細書中で使用されるように、用語「軟組織」は、体の他の構造及び臓器を結合、支持、又は囲むものを指し得る。例えば、本明細書中に記載される軟組織は、限定されないが、皮膚、真皮組織、真皮下組織（ｓｕｂｄｅｒｍａｌｔｉｓｓｕｅｓ）、皮膚組織、皮下組織、硬膜内組織、筋肉、腱、靭帯、線維組織、脂肪、血管及び動脈、ならびに神経、ならびに滑膜（皮内）組織を含み得る。

本明細書中で使用されるように、「自動架橋」は、ａ）類似の化学的性質のポリマーの二つの鎖間で架橋すること、例えば、ヒアルロン酸の二つの鎖間で架橋すること、もしくはＳＰＦの二本の鎖の間で架橋すること、又はｂ）同じポリマー鎖上の架橋基間で架橋して、環状エステル（ラクトン）、環状アミド、架橋部分を含む環状構築物又は同様のものを作製すること、例えば、ヒアルロン酸の同じ鎖上の二つの基間で架橋すること、もしくは同じＳＰＦ鎖上の二つの基間で架橋すること、のいずれかを指す。

本明細書中で使用されるように、「ゼロ長架橋」、及び／又は「結合を含む架橋」、及び／又は「活性化剤を用いる架橋」は、別々のポリマー鎖上又は同じポリマー鎖上のいずれかの二つの基間での架橋を指し、当該基が互いに直接的に反応し、及び追加の架橋部分がそれらの間に挿入されない。カルボン酸基とアミン又はアルコールの間での架橋は、基の一つが、活性化剤、例えば、カルボジイミドにより活性化される、ゼロ長架橋の一例である。

本明細書中で使用されるように、用語「エポキシ由来の架橋剤」は、同じ又は別々のポリマー鎖中の二つの部分間での分子ブリッジを指し、それは、エポキシド基を含む架橋前駆体、例えば、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル（ＰＥＧＤＥ、もしくはＰＥＧＤＧＥ）、又は絹フィブロインもしくは絹フィブロイン断片ポリエポキシリンカーを用いることにより得られる。任意の特定の理論により拘束されることを望まないが、ポリマーの側鎖に含む、ポリマー鎖中の反応中心と反応することにより、エポキシド環が開環して、第二級アルコール及び新たな結合を形成する（スキーム１）。反応性基は、限定されないが、求核基、例えばカルボキシル基、アミノ基、又はヒドロキシル基などを含む。

スキーム１

本明細書中で使用されるように、「チンダル効果」及び／又は「チンダリング」は、組織充填剤を投与された一部の患者において生じる有害事象である。チンダル効果は、組織充填剤が注入された皮膚部位での青色変色の出現により特徴付けられ、これは、半透明の表皮を通して見える可視の皮膚充填剤組成物を表す。チンダル効果は、粒子の断面が特定の範囲内にあり、通常、可視光の波長をいくらか下回る又はそれに近い場合、光散乱微粒子状物質が、光透過性媒体中に分散された場合に観察することができる。チンダル効果の下では、より長い波長の光（例、赤色）が媒体を通じてより大きな程度まで透過される一方で、より短波長の光（例、青色）が散乱を介してより大きい程度まで反射され、媒体が青色に着色されているという全体的な印象を与える。

絹タンパク質断片
一部の実施形態では、絹タンパク質ベース組成物と絹タンパク質断片、又はその製造方法は、米国特許出願公開第２０１５／００９３３３４０号、第２０１５／００９４２６９号、第２０１６／０１９３１３０号、第２０１６／００２２５６０号、第２０１６／００２２５６１号、第２０１６／００２２５６２号、第２０１６／００２２５６３号、及び第２０１６／０２２２５７９号、第２０１６／０２８１２９４号、ならびに米国特許第９，１８７，５３８号、第９，５２２，１０７号、第９，５１７，１９１号、第９，５２２，１０８号、第９，５１１，０１２号、及び第９，５４５，３６９号において記載されるものを含み得るが、それらの全体が、参照により本明細書中に組み込まれる。

本明細書中で使用されるように、絹タンパク質断片（ＳＰＦ）は、一般的に、絹から由来するペプチド及び／又はタンパク質の混合物、組成物、又は集団を指す。一部の実施形態では、ＳＰＦは、様々な適用のために複数の産業にわたって使用され得る、実質的に純粋で高度にスケーラブルなＳＰＦ混合溶液として産生される。溶液は、未加工の純粋で無傷の絹タンパク質材料から生成され、すべてのセリシンを除去し、断片混合物の所望の重量平均分子量（Ｍｗ）及び多分散性を達成するために加工される。選択した方法のパラメータは、使用目的に依存して異なる最終絹タンパク質断片の特徴を達成するように変更され得る。結果として得られる最終断片溶液は、プロセス汚染物質の検出不能なレベル、医薬、医療、及び消費者化粧品市場において許容可能なレベルまでのＰＰＭを伴う純粋な絹タンパク質断片及び水である。溶液中の絹タンパク質断片の濃度、サイズ、及び多分散性は、所望の使用及び性能要件に依存してさらに変更され得る。一実施形態では、溶液中の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片は、セリシンを実質的に欠いており、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有し、約１．５～約３．０の範囲の多分散性を有する。一実施形態では、溶液中の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片は、セリシンを実質的に欠いており、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有し、約１．５～約３．０の範囲の多分散性を有する。一実施形態では、溶液中の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片は、セリシンを実質的に欠いており、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有し、約１．５～約３．０の範囲の多分散性を有する。一実施形態では、溶液中の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片は、セリシンを実質的に欠いており、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有し、約１．５～約３．０の範囲の多分散性を有する。一実施形態では、溶液中の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片は、セリシンを実質的に欠いており、約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有し、約１．５～約３．０の範囲の多分散性を有する。一実施形態では、溶液中の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片は、セリシンを実質的に欠いており、約８０ｋＤａ～約１５０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有し、約１．５～約３．０の範囲の多分散性を有する。

一実施形態では、本明細書中に記載される絹タンパク質断片は、溶液中で又は固体として調製され得るが、それにより、固体は、本明細書中に記載されるように、生理的溶液（例、水、生理食塩水、及び同様のもの）又はＨＡのゲル中に懸濁させる。一部の実施形態では、本明細書中に記載される絹タンパク質断片は、ＨＡのゲル中に同を沈着させる前に、リポソーム又はマイクロスフェア中で調製され得る。

一実施形態では、本開示の絹溶液は、本明細書中に記載される組織充填剤組成物を生成するために使用され得る。一実施形態では、この溶液は、本明細書中に記載される組織充填剤を調製するためにＨＡ及び追加の薬剤とホモジナイズされ得るゲルを生成するために使用され得る。利用される絹溶液及び膜又はゲルを成型するための方法に依存して、様々な特性が達成される。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤におけるＳＰＦ含量（重量％）は、少なくとも０．０１％、又は少なくとも０．１％、又は少なくとも０．２％、又は少なくとも０．３％、又は少なくとも０．４％、又は少なくとも０．５％、又は少なくとも０．６％、又は少なくとも０．７％、又は少なくとも０．８％、又は少なくとも０．９％、又は少なくとも１％、又は少なくとも２％、又は少なくとも３％、又は少なくとも４％、又は少なくとも５％、又は少なくとも６％、又は少なくとも７％、又は少なくとも８％、又は少なくとも９％、又は少なくとも１０％、又は少なくとも１１％、又は少なくとも１２％、又は少なくとも１３％、又は少なくとも１４％、又は少なくとも１５％、又は少なくとも１６％、又は少なくとも１７％、又は少なくとも１８％、又は少なくとも１９％、又は少なくとも２０％、又は少なくとも２１％、又は少なくとも２２％、又は少なくとも２３％、又は少なくとも２４％、又は少なくとも２５％、又は少なくとも２６％、又は少なくとも２７％、又は少なくとも２８％、又は少なくとも２９％、又は少なくとも３０％、又は少なくとも３１％、又は少なくとも３２％、又は少なくとも３３％、又は少なくとも３４％、又は少なくとも３５％、又は少なくとも３６％、又は少なくとも３７％、又は少なくとも３８％、又は少なくとも３９％、又は少なくとも４０％、又は少なくとも４１％、又は少なくとも４２％、又は少なくとも４３％、又は少なくとも４４％、又は少なくとも４５％、又は少なくとも４６％、又は少なくとも４７％、又は少なくとも４８％、又は少なくとも４９％、又は少なくとも５０％、又は少なくとも５１％、又は少なくとも５２％、又は少なくとも５３％、又は少なくとも５４％、又は少なくとも５５％、又は少なくとも５６％、又は少なくとも５７％、又は少なくとも５８％、又は少なくとも５９％、又は少なくとも６０％、又は少なくとも６１％、又は少なくとも６２％、又は少なくとも６３％、又は少なくとも６４％、又は少なくとも６５％、又は少なくとも６６％、又は少なくとも６７％、又は少なくとも６８％、又は少なくとも６９％、又は少なくとも７０％、又は少なくとも７１％、又は少なくとも７２％、又は少なくとも７３％、又は少なくとも７４％、又は少なくとも７５％、又は少なくとも７６％、又は少なくとも７７％、又は少なくとも７８％、又は少なくとも７９％、又は少なくとも８０％、又は少なくとも８１％、又は少なくとも８２％、又は少なくとも８３％、又は少なくとも８４％、又は少なくとも８５％、又は少なくとも８６％、又は少なくとも８７％、又は少なくとも８８％、又は少なくとも８９％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９１％、又は少なくとも９２％、又は少なくとも９３％、又は少なくとも９４％、又は少なくとも９５％、又は少なくとも９６％、又は少なくとも９７％、又は少なくとも９８％、又は少なくとも９９％、又は少なくとも９９．５％、又は少なくとも９９．９％である。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤におけるＳＰＦ含量（重量％）は、最大０．０１％、又は最大０．１％、又は最大０．２％、又は最大０．３％、又は最大０．４％、又は最大０．５％、又は最大０．６％、又は最大０．７％、又は最大０．８％、又は最大０．９％、又は最大１％、又は最大２％、又は最大３％、又は最大４％、又は最大５％、又は最大６％、又は最大７％、又は最大８％、又は最大９％、又は最大１０％、又は最大１１％、又は最大１２％、又は最大１３％、又は最大１４％、又は最大１５％、又は最大１６％、又は最大１７％、又は最大１８％、又は最大１９％、又は最大２０％、又は最大２１％、又は最大２２％、又は最大２３％、又は最大２４％、又は最大２５％、又は最大２６％、又は最大２７％、又は最大２８％、又は最大２９％、又は最大３０％、又は最大３１％、又は最大３２％、又は最大３３％、又は最大３４％、又は最大３５％、又は最大３６％、又は最大３７％、又は最大３８％、又は最大３９％、又は最大４０％、又は最大４１％、又は最大４２％、又は最大４３％、又は最大４４％、又は最大４５％、又は最大４６％、又は最大４７％、又は最大４８％、又は最大４９％、又は最大５０％、又は最大５１％、又は最大５２％、又は最大５３％、又は最大５４％、又は最大５５％、又は最大５６％、又は最大５７％、又は最大５８％、又は最大５９％、又は最大６０％、又は最大６１％、又は最大６２％、又は最大６３％、又は最大６４％、又は最大６５％、又は最大６６％、又は最大６７％、又は最大６８％、又は最大６９％、又は最大７０％、又は最大７１％、又は最大７２％、又は最大７３％、又は最大７４％、又は最大７５％、又は最大７６％、又は最大７７％、又は最大７８％、又は最大７９％、又は最大８０％、又は最大８１％、又は最大８２％、又は最大８３％、又は最大８４％、又は最大８５％、又は最大８６％、又は最大８７％、又は最大８８％、又は最大８９％、又は最大９０％、又は最大９１％、又は最大９２％、又は最大９３％、又は最大９４％、又は最大９５％、又は最大９６％、又は最大９７％、又は最大９８％、又は最大９９％、又は最大９９．５％、又は最大９９．９％である。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤におけるＳＰＦ含量（重量％）は、約０．０１％、又は約０．１％、又は約０．２％、又は約０．３％、又は約０．４％、又は約０．５％、又は約０．６％、又は約０．７％、又は約０．８％、又は約０．９％、又は約１％、又は約２％、又は約３％、又は約４％、又は約５％、又は約６％、又は約７％、又は約８％、又は約９％、又は約１０％、又は約１１％、又は約１２％、又は約１３％、又は約１４％、又は約１５％、又は約１６％、又は約１７％、又は約１８％、又は約１９％、又は約２０％、又は約２１％、又は約２２％、又は約２３％、又は約２４％、又は約２５％、又は約２６％、又は約２７％、又は約２８％、又は約２９％、又は約３０％、又は約３１％、又は約３２％、又は約３３％、又は約３４％、又は約３５％、又は約３６％、又は約３７％、又は約３８％、又は約３９％、又は約４０％、又は約４１％、又は約４２％、又は約４３％、又は約４４％、又は約４５％、又は約４６％、又は約４７％、又は約４８％、又は約４９％、又は約５０％、又は約５１％、又は約５２％、又は約５３％、又は約５４％、又は約５５％、又は約５６％、又は約５７％、又は約５８％、又は約５９％、又は約６０％、又は約６１％、又は約６２％、又は約６３％、又は約６４％、又は約６５％、又は約６６％、又は約６７％、又は約６８％、又は約６９％、又は約７０％、又は約７１％、又は約７２％、又は約７３％、又は約７４％、又は約７５％、又は約７６％、又は約７７％、又は約７８％、又は約７９％、又は約８０％、又は約８１％、又は約８２％、又は約８３％、又は約８４％、又は約８５％、又は約８６％、又は約８７％、又は約８８％、又は約８９％、又は約９０％、又は約９１％、又は約９２％、又は約９３％、又は約９４％、又は約９５％、又は約９６％、又は約９７％、又は約９８％、又は約９９％、又は約９９．５％、又は約９９．９％である。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤におけるＳＰＦ含量（重量％）は、約０．０１％～約１００％、又は約０．０１％～約９９．９％、又は約０．０１％～約７５％の間；あるいは約０．１％～約９５％、又は約１％～約９５％、又は約１０％～約９５％の間；あるいは約０．１％～約１％、又は約０．１％～約２％、又は約０．１％～約３％、又は約０．１％～約４％、又は約０．１％～約５％、又は約０．１％～約６％、又は約０．１％～約７％、又は約０．１％～約８％、又は約０．１％～約９％、又は約０．１％～約１０％、又は約０．１％～約１１％、又は約０．１％～約１２％、又は約０．１％～約１３％、又は約０．１％～約１４％、又は約０．１％～約１５％、又は約０．１％～約１６％、又は約０．１％～約１７％、又は約０．１％～約１８％、又は約０．１％～約１９％、又は約０．１％～約２０％、又は約０．１％～約２１％、又は約０．１％～約２２％、又は約０．１％～約２３％、又は約０．１％～約２４％、又は約０．１％～約２５％の間；あるいは約１％～約２％、又は約１％～約３％、又は約１％～約４％、又は約１％～約５％、又は約１％～約６％、又は約１％～約７％、又は約１％～約８％、又は約１％～約９％、又は約１％～約１０％、又は約１％～約１１％、又は約１％～約１２％、又は約１％～約１３％、又は約１％～約１４％、又は約１％～約１５％、又は約１％～約１６％、又は約１％～約１７％、又は約１％～約１８％、又は約１％～約１９％、又は約１％～約２０％、又は約１％～約２１％、又は約１％～約２２％、又は約１％～約２３％、又は約１％～約２４％、又は約１％～約２５％の間；あるいは約１０％～約２０％、又は約１０％～約２５％、又は約１０％～約３０％、又は約１０％～約３５％、又は約１０％～約４０％、又は約１０％～約４５％、又は約１０％～約５０％、又は約１０％～約５５％、又は約１０％～約６０％、又は約１０％～約６５％、又は約１０％～約７０％、又は約１０％～約７５％、又は約１０％～約８０％、又は約１０％～約８５％、又は約１０％～約９０％、又は約１０％～約１００％の間である。

本明細書中に記載されるＳＰＦは、ＳＰＦのペプチド及び／又はタンパク質の結晶化度に依存して、様々な機械的及び物理的特性を有することができる。一実施形態では、本開示のＳＰＦ組成物は、タンパク質の結晶性に起因して、水溶液中で可溶性ではない。一実施形態では、本開示のＳＰＦ組成物は、水溶液中で可溶性である。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、約３分の２の結晶性部分及び約３分の１のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、約半分の結晶性部分及び約半分のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、９９％の結晶性部分及び１％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、９５％の結晶性部分及び５％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、９０％の結晶性部分及び１０％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、８５％の結晶性部分及び１５％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、８０％の結晶性部分及び２０％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、７５％の結晶性部分及び２５％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、７０％の結晶性部分及び３０％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、６５％の結晶性部分及び３５％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、６０％の結晶性部分及び４０％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、５０％の結晶性部分及び５０％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、４０％の結晶性部分及び６０％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、３５％の結晶性部分及び６５％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、３０％の結晶性部分及び７０％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、２５％の結晶性部分及び７５％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、２０％の結晶性部分及び８０％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、１５％の結晶性部分及び８５％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、１０％の結晶性部分及び９０％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、５％の結晶性部分及び９０％のアモルファス領域を含む。一実施形態では、本開示の組成物のＳＰＦは、１％の結晶性部分及び９９％のアモルファス領域を含む。

一部の実施形態では、ＳＰＦの物理的及び機械的特性は、αヘリックス領域及び／又はランダムコイル領域のＳＰＦ組成物中での存在の程度で変動する。一部の実施形態では、本明細書中に開示されるＳＰＦヒドロゲルは、αヘリックス領域及びランダムコイル領域を実質的に含まないタンパク質構造を有する。これらの実施形態の態様では、ヒドロゲルは、例えば、約５％のαヘリックス領域及びランダムコイル領域、約１０％のαヘリックス領域及びランダムコイル領域、約１５％のαヘリックス領域及びランダムコイル領域、約２０％のαヘリックス領域及びランダムコイル領域、約２５％のαヘリックス領域及びランダムコイル領域、約３０％のαヘリックス領域及びランダムコイル領域、約３５％のαヘリックス領域及びランダムコイル領域、約４０％のαヘリックス領域及びランダムコイル領域、約４５％のαヘリックス領域及びランダムコイル領域、又は約５０％のαヘリックス領域及びランダムコイル領域を含むタンパク質構造を有する。これらの実施形態の他の態様では、ヒドロゲルは、例えば、最大５％のαヘリックス領域及びランダムコイル領域、最大１０％のαヘリックス領域及びランダムコイル領域、最大１５％のαヘリックス領域及びランダムコイル領域、最大２０％のαヘリックス領域及びランダムコイル領域、最大２５％のαヘリックス領域及びランダムコイル領域、最大３０％のαヘリックス領域及びランダムコイル領域、最大３５％のヘリックス領域及びランダムコイル領域、最大４０％のαヘリックス領域及びランダムコイル領域、最大４５％のαヘリックス領域及びランダムコイル領域、又は最大５０％のαヘリックス領域及びランダムコイル領域を含むタンパク質構造を有する。これらの実施形態のさらに他の態様では、ヒドロゲルは、例えば、約５％～約１０％のαヘリックス領域及びランダムコイル領域、約５％～約１５％のαヘリックス領域及びランダムコイル領域、約５％～約２０％のαヘリックス領域及びランダムコイル領域、約５％～約２５％のαヘリックス領域及びランダムコイル領域、約５％～約３０％のαヘリックス領域及びランダムコイル領域、約５％～約４０％のαヘリックス領域及びランダムコイル領域、約５％～約５０％のαヘリックス領域及びランダムコイル領域、約１０％～約２０％のαヘリックス領域及びランダムコイル領域、約１０％～約３０％のαヘリックス領域及びランダムコイル領域、約１５％～約２５％のαヘリックス領域及びランダムコイル領域、約１５％～約３０％のαヘリックス領域及びランダムコイル領域、又は約１５％～約３５％のαヘリックス領域及びランダムコイル領域を含むタンパク質構造を有する。

一部の実施形態では、本開示のＳＰＦ溶液組成物は、貯蔵条件、絹のパーセント、ならびに出荷の数及び出荷条件に依存して、１０日間～３年間の保管安定性を有する（即ち、それらは、水溶液中で貯蔵した場合、徐々に又は自然発生的にゲル化することはなく、断片の明らかな凝集及び／又は経時的な分子量の増加を伴わない）。加えて、ｐＨを変化させて、絹の未熟な折り畳み及び凝集を防止することにより、保管寿命を延長させることができ及び／又は出荷条件を支持することができる。一実施形態では、本開示のＳＰＦ溶液組成物は、室温（ＲＴ）で、最大２週間にわたる保管安定性を有する。一実施形態では、本開示のＳＰＦ溶液組成物は、ＲＴで、最大４週間にわたる保管安定性を有する。一実施形態では、本開示のＳＰＦ溶液組成物は、ＲＴで、最大６週間にわたる保管安定性を有する。一実施形態では、本開示のＳＰＦ溶液組成物は、ＲＴで、最大８週間にわたる保管安定性を有する。一実施形態では、本開示のＳＰＦ溶液組成物は、ＲＴで、最大１０週間にわたる保管安定性を有する。一実施形態では、本開示のＳＰＦ溶液組成物は、ＲＴで、最大１２週間にわたる保管安定性を有する。一実施形態では、本開示のＳＰＦ溶液組成物は、ＲＴで、約４週間～約５２週間の範囲の保管安定性を有する。以下の表１は、本開示のＳＰＦ組成物の実施形態についての保管安定性試験結果を示す。

（外３）

公知の添加剤、例えばビタミン（例、ビタミンＣ）などを、本開示のＳＰＦ液組成物に添加して、室温（ＲＴ）で１０日間～３年間安定であるゲルを作製することができる。両方の例、ＳＰＦ組成物及び添加剤を伴うＳＰＦ組成物を、貯蔵及び出荷条件に依存して、１０日間～１０年間の範囲で、増強された保管制御のために凍結乾燥することができる。凍結乾燥された絹パウダーはまた、医療、消費者、及び電子市場における原料として使用することができる。加えて、凍結乾燥絹粉末は、保管後、水、ＨＦＩＰ、又は有機溶液中に再懸濁して、最初に産生されるものよりも高い濃度の溶液を含む、変動する濃度の絹溶液を作製することができる。別の実施形態では、絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１０質量％未満の水を含む乾燥タンパク質形態を作製するために、ロトサームエバポレータ又は当技術分野において公知の他の方法を使用して乾燥される。

本明細書中に開示される組織充填剤及び方法において使用されるＳＰＦは、様々な方法において、例えば、溶液の形態で操作する及び組み入れることができ、それを、他の材料（例、ＨＡ）と組み合わせて、本明細書中に記載される組織充填剤組成物を調製してもよい。以下は、本開示の絹溶液の調製における及びそのための様々なパラメータの適切な範囲の非限定的な例である。本開示の絹溶液は、これらのパラメータの一つ又は複数（しかし、必ずしも全てではない）を含み得るが、そのようなパラメータの範囲の様々な組合せを使用して調製され得る。

一実施形態では、溶液中の絹（％）は３０％未満である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は２５％未満である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は２０％未満である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１９％未満である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１８％未満である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１７％未満である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１６％未満である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１５％未満である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１４％未満である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１３％未満である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１２％未満である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１１％未満である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１０％未満である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は９％未満である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は８％未満である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は７％未満である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は６％未満である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は５％未満である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は４％未満である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は３％未満である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は２％未満である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１％未満である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．９％未満である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．８％未満である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．７％未満である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．６％未満である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．５％未満である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．４％未満である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．３％未満である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．２％未満である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．１％未満である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．１％超である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．２％超である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．３％超である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．４％超である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．５％超である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．６％超である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．７％超である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．８％超である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．９％超である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１％超である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は２％超である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は３％超である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は４％超である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は５％超である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は６％超である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は７％超である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は８％超である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は９％超である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１０％超である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１１％超である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１２％超である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１３％超である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１４％超である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１５％超である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１６％超である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１７％超である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１８％超である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１９％超である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は２０％超である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は２５％超である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．１％～３０％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．１％～２５％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．１％～２０％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．１％～１５％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．１％～１０％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．１％～９％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．１％～８％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．１％～７％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．１％～６．５％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．１％～６％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．１％～５．５％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．１％～５％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．１％～４．５％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．１％～４％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．１％～３．５％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．１％～３％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．１％～２．５％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．１％～２．０％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．１％～２．４％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．５％～５％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．５％～４．５％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．５％～４％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．５％～３．５％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．５％～３％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．５％～２．５％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１～４％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１～３．５％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１～３％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１～２．５％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１～２．４％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１～２％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は２０％～３０％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は０．１％～６％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は６％～１０％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は６％～８％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は６％～９％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１０％～２０％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１１％～１９％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１２％～１８％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１３％～１７％の間である。一実施形態では、溶液中の絹（％）は１４％～１６％の間である。

一実施形態では、本明細書中に記載される絹組成物は、ＨＡと組み合わせて、組織充填剤組成物を形成し得る。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は３０％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は２５％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は２０％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１９％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１８％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１７％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１６％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１５％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１４％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１３％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１２％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１１％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１０％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は９％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は８％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は７％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は６％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は５％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は４％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は３％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は２％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．９％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．８％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．７％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．６％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．５％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．４％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．３％未満である。

一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．２％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．１％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．１％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．２％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．３％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．４％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．５％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．６％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．７％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．８％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．９％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は２％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は３％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は４％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は５％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は６％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は７％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は８％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は９％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１０％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１１％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１２％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１３％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１４％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１５％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１６％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１７％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１８％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１９％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は２０％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は２５％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．１％～３０％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．１％～２５％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．１％～２０％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．１％～１５％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．１％～１０％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．１％～９％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．１％～８％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．１％～７％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．１％～６．５％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．１％～６％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．１％～５．５％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．１％～５％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．１％～４．５％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．１％～４％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．１％～３．５％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．１％～３％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．１％～２．５％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．１％～２．０％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．１％～２．４％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．５％～５％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．５％～４．５％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．５％～４％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．５％～３．５％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．５％～３％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．５％～２．５％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１％～４％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１％～３．５％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１％～３％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１％～２．５％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１％～２．４％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１％～２％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は２０％～３０％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は０．１％～６％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は６％～１０％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は６％～８％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は６％～９％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１０％～２０％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１１％～１９％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１２％～１８％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１３％～１７％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中の絹（重量％）は１４％～１６％の間である。

一実施形態では、溶液又は組織充填剤組成物中のセリシン（％）は検出不能～３０％である。一実施形態では、溶液又は組織充填剤組成物中のセリシン（％）は検出不能～５％である。一実施形態では、溶液又は組織充填剤組成物中のセリシン（％）は１％である。一実施形態では、溶液又は組織充填剤組成物中のセリシン（％）は２％である。一実施形態では、溶液又は組織充填剤組成物中のセリシン（％）は３％である。一実施形態では、溶液又は組織充填剤組成物中のセリシン（％）は４％である。一実施形態では、溶液又は組織充填剤組成物中のセリシン（％）は５％である。一実施形態では、溶液又は組織充填剤組成物中のセリシン（％）は１０％である。一実施形態では、溶液又は組織充填剤組成物中のセリシン（％）は３０％である。

一実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は０～１年間である。一実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は０～２年間である。一実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は０～３年間である。一実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は０～４年間である。一実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は０～５年間である。一実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は１～２年間である。一実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は１～３年間である。一実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は１～４年間である。一実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は１～５年間である。一実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は２～３年間である。一実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は２～４年間である。一実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は２～５年間である。一実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は３～４年間である。一実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は３～５年間である。一実施形態では、ＬｉＢｒ－絹断片溶液の安定性は４～５年間である。

一実施形態では、本開示の組織充填剤中に含まれてもよい絹フィブロインベースのタンパク質断片の組成物の安定性は、１０日間～６ヶ月間である。一実施形態では、本開示の組織充填剤中に含まれてもよい絹フィブロインベースのタンパク質断片の組成物の安定性は、６ヶ月間～１２ヶ月間である。一実施形態では、本開示の組織充填剤中に含まれてもよい絹フィブロインベースのタンパク質断片の組成物の安定性は、１２ヶ月間～１８ヶ月間である。一実施形態では、本開示の組織充填剤中に含まれてもよい絹フィブロインベースのタンパク質断片の組成物の安定性は、１８ヶ月間～２４ヶ月間である。一実施形態では、本開示の組織充填剤中に含まれてもよい絹フィブロインベースのタンパク質断片の組成物の安定性は、２４ヶ月間～３０ヶ月間である。一実施形態では、本開示の組織充填剤中に含まれてもよい絹フィブロインベースのタンパク質断片の組成物の安定性は、３０ヶ月間～３６ヶ月間である。一実施形態では、本開示の組織充填剤中に含まれてもよい絹フィブロインベースのタンパク質断片の組成物の安定性は、３６ヶ月間～４８ヶ月間である。一実施形態では、本開示の組織充填剤中に含まれてもよい絹フィブロインベースのタンパク質断片の組成物の安定性は、４８ヶ月間～６０ヶ月間である。

一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～２５０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、５ｋＤａ～１５０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～６ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、６ｋＤａ～１７ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１７ｋＤａ～３９ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、３９ｋＤａ～８０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、８０ｋＤａ～１５０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。

一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～２５０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～２４０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～２３０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～２２０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～２１０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～２００ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～１９０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～１８０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～１７０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～１６０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～１５０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～１４０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～１３０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～１２０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～１１０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～１００ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～９０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～８０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～７０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。

一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～６０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～５０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～４０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～３０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～２０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１ｋＤａ～１０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。

一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１～５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、５～１０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１０～１５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１５～２０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２０～２５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２５～３０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、３０～３５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、３５～４０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、４０～４５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、４５～５０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、５０～５５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、５５～６０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、６０～６５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、６５～７０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、７０～７５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、７５～８０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、８０～８５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、８５～９０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、９０～９５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、９５～１００ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１００～１０５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１０５～１１０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１１０～１１５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１１５～１２０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１２０～１２５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１２５～１３０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１３０～１３５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１３５～１４０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１４０～１４５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１４５～１５０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１５０～１５５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１５５～１６０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１６０～１６５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１６５～１７０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１７０～１７５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１７５～１８０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１８０～１８５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１８５～１９０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１９０～１９５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、１９５～２００ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２００～２０５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２０５～２１０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２１０～２１５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２１５～２２０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２２０～２２５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２２５～２３０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２３０～２３５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２３５～２４０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２４０～２４５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２４５～２５０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２５０～２５５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２５５～２６０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２６０～２６５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２６５～２７０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２７０～２７５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２７５～２８０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２８０～２８５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２８５～２９０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２９０～２９５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、２９５～３００ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、３００～３０５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、３０５～３１０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、３１０～３１５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、３１５～３２０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一
実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、３２０～３２５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、３２５～３３０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、３３０～３３５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、３５～３４０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、３４０～３４５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、３４５～３５０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する。

一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、低分子量の絹、中分子量の絹、及び高分子量の絹の一つ又は複数を含む絹タンパク質を含むことができる。

一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、低分子量の絹、中分子量の絹、及び高分子量の絹の一つ又は複数を含む絹タンパク質を含むことができる。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、低分子量の絹及び中分子量の絹を含む絹タンパク質を含むことができる。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、低分子量の絹及び高分子量の絹を含む絹タンパク質を含むことができる。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、中分子量の絹及び高分子量の絹を含む絹タンパク質を含むことができる。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、低分子量の絹、中分子量の絹、及び高分子量の絹を含む絹タンパク質を含むことができる。

一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、低分子量の絹及び中分子量の絹を含む絹タンパク質を含むことができる。一部の実施形態では、低分子量の絹と中分子量の絹の間のｗ／ｗ比は、約９９：１～約１：９９の間、約９５：５～約５：９５の間、約９０：１０～約１０：９０の間、約７５：２５～約２５：７５の間、約６５：３５～約３５：６５の間、又は約５５：４５～約４５：５５の間である。一部の実施形態では、低分子量の絹と中分子量の絹の間のｗ／ｗ比は、約９９：１～約５５：４５の間、約９５：５～約４５：５５の間、約９０：１０～約３５：６５の間、約７５：２５～約１５：８５の間、約６５：３５～約１０：９０の間、又は約５５：４５～約１：９９の間である。一実施形態では、低分子量の絹と中分子量の絹の間のｗ／ｗ比は、約９９：１、約９８：２、約９７：３、約９６：４、約９５：５、約９４：６、約９３：７、約９２：８、約９１：９、約９０：１０、約８９：１１、約８８：１２、約８７：１３、約８６：１４、約８５：１５、約８４：１６、約８３：１７、約８２：１８、約８１：１９、約８０：２０、約７９：２１、約７８：２２、約７７：２３、約７６：２４、約７５：２５、約７４：２６、約７３：２７、約７２：２８、約７１：２９、約７０：３０、約６９：３１、約６８：３２、約６７：３３、約６６：３４、約６５：３５、約６４：３６、約６３：３７、約６２：３８、約６１：３９、約６０：４０、約５９：４１、約５８：４２、約５７：４３、約５６：４４、約５５：４５、約５４：４６、約５３：４７、約５２：４８、約５１：４９、約５０：５０、約４９：５１、約４８：５２、約４７：５３、約４６：５４、約４５：５５、約４４：５６、約４３：５７、約４２：５８、約４１：５９、約４０：６０、約３９：６１、約３８：６２、約３７：６３、約３６：６４、約３５：６５、約３４：６６、約３３：６７、約３２：６８、約３１：６９、約３０：７０、約２９：７１、約２８：７２、約２７：７３、約２６：７４、約２５：７５、約２４：７６、約２３：７７、約２２：７８、約２１：７９、約２０：８０、約１９：８１、約１８：８２、約１７：８３、約１６：８４、約１５：８５、約１４：８６、約１３：８７、約１２：８８、約１１：８９、約１０：９０、約９：９１、約８：９２、約７：９３、約６：９４、約５：９５、約４：９６、約３：９７、約２：９８、又は約１：９９である。一実施形態では、低分子量の絹と中分子量の絹の間のｗ／ｗ比は、約９：１、約８：１、約７：１、約６：１、約５：１、約４：１、約３：１、約２：１、又は約１：１である。一実施形態では、低分子量の絹と中分子量の絹の間のｗ／ｗ比は、約１：９、約１：８、約１：７、約１：６、約１：５、約１：４、約１：３、約１：２、又は約１：１である。

一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、低分子量の絹及び高分子量の絹を含む絹タンパク質を含むことができる。一部の実施形態では、低分子量の絹と高分子量の絹の間のｗ／ｗ比は、約９９：１～約１：９９の間、約９５：５～約５：９５の間、約９０：１０～約１０：９０の間、約７５：２５～約２５：７５の間、約６５：３５～約３５：６５の間、又は約５５：４５～約４５：５５の間である。一部の実施形態では、低分子量の絹と高分子量の絹の間のｗ／ｗ比は、約９９：１～約５５：４５の間、約９５：５～約４５：５５の間、約９０：１０～約３５：６５の間、約７５：２５～約１５：８５の間、約６５：３５～約１０：９０の間、又は約５５：４５～約１：９９の間である。一実施形態では、低分子量の絹と高分子量の絹の間のｗ／ｗ比は、約９９：１、約９８：２、約９７：３、約９６：４、約９５：５、約９４：６、約９３：７、約９２：８、約９１：９、約９０：１０、約８９：１１、約８８：１２、約８７：１３、約８６：１４、約８５：１５、約８４：１６、約８３：１７、約８２：１８、約８１：１９、約８０：２０、約７９：２１、約７８：２２、約７７：２３、約７６：２４、約７５：２５、約７４：２６、約７３：２７、約７２：２８、約７１：２９、約７０：３０、約６９：３１、約６８：３２、約６７：３３、約６６：３４、約６５：３５、約６４：３６、約６３：３７、約６２：３８、約６１：３９、約６０：４０、約５９：４１、約５８：４２、約５７：４３、約５６：４４、約５５：４５、約５４：４６、約５３：４７、約５２：４８、約５１：４９、約５０：５０、約４９：５１、約４８：５２、約４７：５３、約４６：５４、約４５：５５、約４４：５６、約４３：５７、約４２：５８、約４１：５９、約４０：６０、約３９：６１、約３８：６２、約３７：６３、約３６：６４、約３５：６５、約３４：６６、約３３：６７、約３２：６８、約３１：６９、約３０：７０、約２９：７１、約２８：７２、約２７：７３、約２６：７４、約２５：７５、約２４：７６、約２３：７７、約２２：７８、約２１：７９、約２０：８０、約１９：８１、約１８：８２、約１７：８３、約１６：８４、約１５：８５、約１４：８６、約１３：８７、約１２：８８、約１１：８９、約１０：９０、約９：９１、約８：９２、約７：９３、約６：９４、約５：９５、約４：９６、約３：９７、約２：９８、又は約１：９９である。

一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、中分子量の絹及び高分子量の絹を含む絹タンパク質を含むことができる。一部の実施形態では、中分子量の絹と高分子量の絹の間のｗ／ｗ比は、約９９：１～約１：９９の間、約９５：５～約５：９５の間、約９０：１０～約１０：９０の間、約７５：２５～約２５：７５の間、約６５：３５～約３５：６５の間、又は約５５：４５～約４５：５５の間である。一部の実施形態では、中分子量の絹と高分子量の絹の間のｗ／ｗ比は、約９９：１～約５５：４５の間、約９５：５～約４５：５５の間、約９０：１０～約３５：６５の間、約７５：２５～約１５：８５の間、約６５：３５～約１０：９０の間、又は約５５：４５～約１：９９の間である。一実施形態では、中分子量の絹と高分子量の絹の間のｗ／ｗ比は、約９９：１、約９８：２、約９７：３、約９６：４、約９５：５、約９４：６、約９３：７、約９２：８、約９１：９、約９０：１０、約８９：１１、約８８：１２、約８７：１３、約８６：１４、約８５：１５、約８４：１６、約８３：１７、約８２：１８、約８１：１９、約８０：２０、約７９：２１、約７８：２２、約７７：２３、約７６：２４、約７５：２５、約７４：２６、約７３：２７、約７２：２８、約７１：２９、約７０：３０、約６９：３１、約６８：３２、約６７：３３、約６６：３４、約６５：３５、約６４：３６、約６３：３７、約６２：３８、約６１：３９、約６０：４０、約５９：４１、約５８：４２、約５７：４３、約５６：４４、約５５：４５、約５４：４６、約５３：４７、約５２：４８、約５１：４９、約５０：５０、約４９：５１、約４８：５２、約４７：５３、約４６：５４、約４５：５５、約４４：５６、約４３：５７、約４２：５８、約４１：５９、約４０：６０、約３９：６１、約３８：６２、約３７：６３、約３６：６４、約３５：６５、約３４：６６、約３３：６７、約３２：６８、約３１：６９、約３０：７０、約２９：７１、約２８：７２、約２７：７３、約２６：７４、約２５：７５、約２４：７６、約２３：７７、約２２：７８、約２１：７９、約２０：８０、約１９：８１、約１８：８２、約１７：８３、約１６：８４、約１５：８５、約１４：８６、約１３：８７、約１２：８８、約１１：８９、約１０：９０、約９：９１、約８：９２、約７：９３、約６：９４、約５：９５、約４：９６、約３：９７、約２：９８、又は約１：９９である。

一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、低分子量の絹、中分子量の絹、及び高分子量の絹を含む絹タンパク質を含むことができる。一実施形態では、一実施形態では、低分子量の絹、中分子量の絹、及び高分子量の絹の間のｗ／ｗ比は、約１：１：８、１：２：７、１：３：６、１：４：５、１：５：４、１：６：３、１：７：２、１：８：１、２：１：７、２：２：６、２：３：５、２：４：４、２：５：３、２：６：２、２：７：１、３：１：６、３：２：５、３：３：４、３：４：３、３：５：２、３：６：１、４：１：５、４：２：４、４：３：３、４：４：２、４：５：１、５：１：４、５：２：３、５：３：２、５：４：１、６：１：３、６：２：２、６：３：１、７：１：２、７：２：１、又は８：１：１である。一実施形態では、低分子量の絹、中分子量の絹、及び高分子量の絹の間のｗ／ｗ比は、約３：０．１：０．９、３：０．２：０．８、３：０．３：０．７、３：０．４：０．６、３：０．５：０．５、３：０．６：０．４、３：０．７：０．３、３：０．８：０．２、又は３：０．９：０．１である。

一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、約１～約５．０の範囲の多分散性を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、約１．５～約３．０の範囲の多分散性を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、約１～約１．５の範囲の多分散性を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、約１．５～約２．０の範囲の多分散性を有する。一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中に組み込まれる絹フィブロインベースのタンパク質断片は、約２．０～約２．５の範囲の多分散性を有する。一実施形態では、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片を有する、本開示の組成物は、約２．０～約３．０の範囲の多分散性を有する。一実施形態では、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片を有する、本開示の組成物は、約２．５～約３．０の範囲の多分散性を有する。

一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤は、検出不能なレベルのＬｉＢｒ残渣を含む。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＬｉＢｒ残渣の量は、１０ｐｐｍ～１０００ｐｐｍの間である。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＬｉＢｒ残渣の量は、１０ｐｐｍ～３００ｐｐｍの間である。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＬｉＢｒ残渣の量は、２５ｐｐｍ未満である。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＬｉＢｒ残渣の量は、５０ｐｐｍ未満である。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＬｉＢｒ残渣の量は、７５ｐｐｍ未満である。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＬｉＢｒ残渣の量は、１００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＬｉＢｒ残渣の量は、２００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＬｉＢｒ残渣の量は、３００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＬｉＢｒ残渣の量は、４００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＬｉＢｒ残渣の量は、５００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＬｉＢｒ残渣の量は、６００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＬｉＢｒ残渣の量は、７００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＬｉＢｒ残渣の量は、８００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＬｉＢｒ残渣の量は、９００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＬｉＢｒ残渣の量は、１０００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＬｉＢｒ残渣の量は、検出不能～５００ｐｐｍである。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＬｉＢｒ残渣の量は、検出不能～４５０ｐｐｍである。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＬｉＢｒ残渣の量は、検出不能～４００ｐｐｍである。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＬｉＢｒ残渣の量は、検出不能～３５０ｐｐｍである。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＬｉＢｒ残渣の量は、検出不能～３００ｐｐｍである。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＬｉＢｒ残渣の量は、検出不能～２５０ｐｐｍである。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＬｉＢｒ残渣の量は、検出不能～２００ｐｐｍである。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＬｉＢｒ残渣の量は、検出不能～１５０ｐｐｍである。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＬｉＢｒ残渣の量は、検出不能～１００ｐｐｍである。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＬｉＢｒ残渣の量は、１００ｐｐｍ～２００ｐｐｍである。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＬｉＢｒ残渣の量は、２００ｐｐｍ～３００ｐｐｍである。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＬｉＢｒ残渣の量は、３００ｐｐｍ～４００ｐｐｍである。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＬｉＢｒ残渣の量は、４００ｐｐｍ～５００ｐｐｍである。

一実施形態では、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片を有するＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤は、検出不能なレベルのＮａ_２ＣＯ_３残渣を含む。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、１００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、２００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、３００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、４００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、５００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、６００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、７００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、８００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、９００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、１０００ｐｐｍ未満である。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、検出不能～５００ｐｐｍである。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、検出不能～４５０ｐｐｍである。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、検出不能～４００ｐｐｍである。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、検出不能～３５０ｐｐｍである。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、検出不能～３００ｐｐｍである。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、検出不能～２５０ｐｐｍである。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、検出不能～２００ｐｐｍである。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、検出不能～１５０ｐｐｍである。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、検出不能～１００ｐｐｍである。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、１００ｐｐｍ～２００ｐｐｍである。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、２００ｐｐｍ～３００ｐｐｍである。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、３００ｐｐｍ～４００ｐｐｍである。一実施形態では、ＳＰＦを含む本明細書中に記載される組織充填剤中のＮａ_２ＣＯ_３残渣の量は、４００ｐｐｍ～５００ｐｐｍである。

一実施形態では、本開示の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶解度は、５０～１００％である。一実施形態では、本開示の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶解度は、６０～１００％である。一実施形態では、本開示の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶解度は、７０～１００％である。一実施形態では、本開示の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶解度は、８０～１００％である。一実施形態では、水溶解度は９０～１００％である。一実施形態では、本開示の絹フィブロインベースの断片は、水溶液中で非可溶性である。

一実施形態では、有機溶液中での、本開示の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の溶解度は、５０～１００％である。一実施形態では、有機溶液中での、本開示の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の溶解度は、６０～１００％である。一実施形態では、有機溶液中での、本開示の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の溶解度は、７０～１００％である。一実施形態では、有機溶液中での、本開示の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の溶解度は、８０～１００％である。一実施形態では、有機溶液中での、本開示の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の溶解度は、９０～１００％である。一実施形態では、本開示の絹フィブロインベースの断片は、有機溶液中で非可溶性である。

本開示の組成物中で使用される絹タンパク質断片を作製する方法は、米国特許出願公開第２０１５／００９３３３４０号明細書、同第２０１５／００９４２６９号明細書、同第２０１６／０１９３１３０号明細書、同第２０１６／００２２５６０号明細書、同第２０１６／００２２５６１号明細書、同第２０１６／００２２５６２号明細書、同第２０１６／００２２５６３号明細書、及び同第２０１６／０２２２５７９号明細書、同第２０１６／０２８１２９４号明細書、並びに米国特許第９，１８７，５３８号明細書、同第９，５２２，１０７号明細書、同第９，５１７，１９１号明細書、同第９，５２２，１０８号明細書、同第９，５１１，０１２号明細書、及び同第９，５４５，３６９号明細書に実証されており、これらの全体が、参照により本明細書中に組み込まれる。しかし、例示的な方法が図１において実証されており、それは、本開示の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片（ＳＰＦ）を産生するための様々な実施形態を示すフローチャートである。例証される工程の全てが、必ずしも、本開示の全ての絹溶液を製作するために必要とされるわけではないことを理解すべきである。図１、工程Ａ中に例証されるように、繭（熱処理又は非熱処理済み）、絹線維、絹粉末、又はクモ絹を、絹供給源として使用することができる。ボンビクス・モリからの未加工の絹繭から出発した場合、その繭を切断して小さな小片、例えば、ほぼ等しいサイズの小片にすることができる（工程Ｂ１）。未加工の絹を次に抽出し、リンスしてセリシンを除去する（工程Ｃ１ａ）。これによって、セリシンを実質的に含まない未加工の絹がもたらされる。一実施形態では、水を８４℃～１００℃の間の温度（理想的には沸点）まで加熱し、次にＮａ_２ＣＯ_３（炭酸ナトリウム）を、Ｎａ_２ＣＯ_３が完全に溶解するまで沸騰水に添加する。未加工の絹を沸騰水／Ｎａ_２ＣＯ_３（１００℃）に添加し、約１５～９０分間にわたり浸漬させ、より長期の時間にわたる沸騰によって、より小さな絹タンパク質断片がもたらされる。一実施形態では、水の容積は約０．４×未加工の絹重量に等しく、Ｎａ_２ＣＯ_３の容積は約０．８４８×未加工の絹の重量に等しい。一実施形態では、水の容量は０．１×未加工の絹の重量に等しく、Ｎａ_２ＣＯ_３の容量は２．１２ｇ／Ｌに維持される。これを図６及び図７において実証する：絹質量（ｘ軸）を、２６～３１パーセントの全般的な絹質量損失（ｙ軸）により実証されるように、同じ容積の抽出溶液（即ち、同じ容積の水及び濃度のＮａ_２ＣＯ_３）中で変動させ、セリシン除去（セリシンを実質的に含まない）を達成した。その後、水に溶解したＮａ_２ＣＯ_３溶液を排出させ、過剰の水／Ｎａ_２ＣＯ_３を、絹フィブロイン線維から除去する（例、手動、機械を使用した脱水サイクルなどによりフィブロイン抽出物をリングアウトする（ｒｉｎｇｏｕｔ））。結果として得られる絹フィブロイン抽出物を、典型的には約４０℃～約８０℃の温度範囲で、水の容積を少なくとも１回変化させ（必要な回数だけ繰り返す）、温水～熱水でリンスし、すべての残りの吸着セリシン又は汚染物質を除去する。結果として得られる絹フィブロイン抽出物は、実質的にセリシンが欠乏した絹フィブロインである。一実施形態では、結果として得られる絹フィブロイン抽出物は、約６０℃の温度で水でリンスされる。一実施形態では、各々のサイクルについてのリンス水の量は、０．１Ｌ～０．２Ｌ×未加工の絹の重量に等しい。リンス効果を最大にするために、リンス水を掻き混ぜる、回転させる、又は循環させると有利であり得る。リンス後、過剰の水を、抽出された絹フィブロイン線維から除去する（例、手動によるか、又は機械を使用してフィブロイン抽出物ををリングアウトする）。あるいは、当業者に公知の方法、例えば圧力、温度、もしくは他の試薬、又はそれらの組合せなどを、セリシン抽出の目的のために使用することができる。あるいは、絹糸腺（１００％セリシン不含の絹タンパク質）を、カイコ（ｗｏｒｍ）から直接除去することができる。これは、タンパク質構造のいかなる変化も伴わずに、セリシンを含まない液体絹タンパク質をもたらし得る。

抽出されたフィブロイン線維を次に、完全に乾燥させる。一度、乾燥したら、抽出された絹フィブロインを、周囲～沸騰温度の間で、絹フィブロインに添加された溶媒を使用して溶解させる（工程Ｃ１ｂ）。一実施形態では、溶媒は、臭化リチウム（ＬｉＢｒ）の溶液である（ＬｉＢｒについての沸点は１４０℃である）。あるいは、抽出されたフィブロイン線維は乾燥されないが、しかし、湿潤であり、溶媒中に置かれ；溶媒濃度を次に変動させて、乾燥絹を溶媒に添加する場合と同様の濃度を達成することができる。ＬｉＢｒ溶媒の最終濃度は、０．１Ｍから９．３Ｍの範囲でありうる。図８は、異なる濃度の臭化リチウム（ＬｉＢｒ）から、ならびに異なる抽出サイズ及び溶解サイズから溶解された絹の分子量を要約した表である。抽出されたフィブロイン線維の完全な溶解は、溶解溶媒の濃度と共に処理時間及び温度を変動させることにより達成することができる。限定されないが、ホスフェートリン酸（ｐｈｏｓｐｈａｔｅｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃａｃｉｄ）、硝酸カルシウム、塩化カルシウム溶液、又は他の無機塩の濃縮水溶液を含む、他の溶媒を使用することができる。完全な溶解を確実にするために、絹線維を、既に加熱されている溶媒溶液内に十分浸漬させ、次に、約６０℃～約１４０℃の範囲の温度で１～１６８時間にわたり維持すべきである。一実施形態では、絹線維を、溶媒溶液内に十分浸漬させ、次に、約１００℃の温度で約１時間にわたり乾燥オーブン中に置くべきである。

絹フィブロイン抽出物をＬｉＢｒ溶液に添加する（又はその逆の）温度は、フィブロインを完全に溶解させるのに要求される時間に対する、並びに結果として得られる、最終ＳＰＦ混合溶液の分子量及び多分散性に対する効果を有する。一実施形態では、絹溶媒溶液濃度は２０％ｗ／ｖ未満又はそれに等しい。また、導入又は溶解の間に撹拌を使用して、変動する温度及び濃度で溶解を促してもよい。ＬｉＢｒ溶液の温度は、作製される絹タンパク質断片混合物の分子量及び多分散性に対する制御を提供する。一実施形態では、より高い温度は、絹をより迅速に溶解させ、絹溶液の増強したプロセススケーラビリティ及び大量生産をもたらす。一実施形態では、８０℃～１４０℃の間の温度まで加熱されたＬｉＢｒ溶液を使用することによって、完全な溶解を達成するために、オーブン中で必要とされる時間が低下する。６０℃又はそれ以上で溶解溶媒の時間及び温度を変動させることによって、元の分子量の天然絹フィブロインタンパク質から形成されるＳＰＦ混合溶液のＭＷ及び多分散性が変化し、制御される。

透析を使用して、結果として得られる溶解したフィブロインタンパク質断片溶液から溶解溶媒を、その溶液をある容積の水に対して透析させることにより除去することができる（工程Ｅ１）。透析前の前濾過は、絹及びＬｉＢｒ溶液からすべての残骸（即ち、カイコの残遺物）を除去するのに有用である（工程Ｄ）。一例では、３μｍ又は５μｍフィルターを２００～３００ｍＬ／分の流量で使用して、所望の場合に、透析及び潜在的な濃縮の前に０．１％～１．０％絹－ＬｉＢｒ溶液を濾過する。本明細書中で開示される方法は、上に記載されるように、特に、スケーラブルなプロセス方法を作製することを考慮した場合、濾過及び下流での透析を促進するために、濃度を９．３ＭＬｉＢｒから０．１Ｍ～９．３Ｍの範囲まで減少させるための時間及び／又は温度を使用することである。あるいは、追加の時間又は温度の使用を伴わずに、９．３ＭＬｉＢｒ－絹タンパク質断片溶液を水で希釈して、残骸の濾過及び透析を促進させてもよい。所望の時間及び温度の濾過での溶解の結果は、公知のＭＷ及び多分散性の、半透明な、粒子不含の室温での保管安定性のある絹タンパク質断片ＬｉＢｒ溶液である。溶媒が除去されるまで、透析水を定期的に変える（例えば、１時間、４時間後に水を変え、次に、１２時間毎に合計６回水を変える）ことが有利である。水容量交換の総数は、絹タンパク質の溶解及び断片化のために使用される溶媒の、結果として得られる濃度に基づいて変動させることができる。透析後、最終絹溶液をさらに濾過して、すべての残る残骸（即ち、カイコの残遺物）を除去することができる。

あるいは、接線流濾過（ＴＦＦ）は、生体分子の分離及び精製のための迅速で効率的な方法であり、結果として得られる溶解フィブロイン溶液から溶媒を除去するために使用することができる（工程Ｅ２）。ＴＦＦは、高度に純粋な絹タンパク質断片水溶液を提供し、制御された反復可能な様式において大容積の溶液を産生するために、プロセスのスケーラビリティを可能にする。絹及びＬｉＢｒ溶液をＴＦＦの前に希釈することができる（水又はＬｉＢｒのいずれかの中で２０％から０．１％の絹に下げる）。ＴＦＦ処理の前での、上に記載されるような前濾過によって、フィルター効率を維持することができ、残骸粒子の存在の結果としての、フィルターの表面上での絹ゲル境界層の形成を潜在的に回避する。ＴＦＦの前の前濾過はまた、結果として得られる水だけの溶液の自然発生的又は長期的なゲル化を起こし得る、絹及びＬｉＢｒ溶液からのすべての残る残骸（即ち、カイコの残遺物）を除去する助けになる（工程Ｄ）。ＴＦＦは、再循環又はシングルパスで、０．１％絹から３０．０％絹（より好ましくは０．１％～６．０％絹）の範囲の水－絹タンパク質断片溶液の作製のために使用することができる。異なるカットオフサイズのＴＦＦ膜が、溶液中での絹タンパク質断片混合物の所望の濃度、分子量、及び多分散性に基づいて必要とされ得る。１～１００ｋＤａの範囲の膜は、例えば、抽出沸騰時間の長さ、又は溶解溶媒（例、ＬｉＢｒ）中での時間及び温度を変動させることにより作製される分子量絹溶液を変動させために必要であり得る。一実施形態では、ＴＦＦ５又は１０ｋＤａ膜は、絹タンパク質断片混合溶液を精製し、最終的な所望の絹と水の比率をもたらすために使用される。その上に、ＴＦＦシングルパス、ＴＦＦ、及び当業界において公知の他の方法、例えば流下膜式蒸発器などを、溶解溶媒（例、ＬｉＢｒ）の除去に続いて、溶液を濃縮するために使用することができる（０．１％～３０％絹の範囲の所望濃度がもたらされる）。これは、水ベースの溶液を作製するために、当技術分野において公知の標準的なＨＦＩＰ濃縮方法の代替法として使用することができる。より大きい細孔膜をまた、小さな絹タンパク質断片を濾別し、より厳格な多分散性の値を伴う及び／又は伴わない、より高分子量の絹の溶液を作製するために利用することができる。図５は、本開示の絹タンパク質溶液の一部の実施形態での分子量をまとめた表である。絹タンパク質溶液の処理条件は以下の通りであった：２０分間にわたる１００℃抽出、室温リンス、６０℃オーブン中での４～６時間にわたるＬｉＢｒ。水溶性フィルムについてのＴＦＦ処理条件は以下の通りであった：６０分間にわたる１００℃抽出、６０℃リンス、１００℃オーブン中での６０分間にわたるＬｉＢｒ。図１２～図２３は、さらに、抽出時間、ＬｉＢｒ溶解条件及びＴＦＦ処理の操作、ならびに結果としての例示的な分子量及び多分散性を実証する。これらの例は、限定することではなく、しかし、むしろ、特定の分子量絹断片溶液についてのパラメータを特定する可能性を実証することを意図する。

ＬｉＢｒ及びＮａ_２ＣＯ_３検出のためのアッセイを、蒸発光散乱検出器（ＥＬＳＤ）を備えたＨＰＬＣシステムを使用して実施した。計算は、濃度に対してプロットされた、分析物についての結果として得られるピーク面積の線形回帰により実施した。本開示の多数の製剤の二つ以上のサンプルを、サンプル調製及び分析のために使用した。一般的に、異なる処方物の四つのサンプルを、１０ｍＬ容量フラスコ中に直接量り取った。サンプルを５ｍＬの２０ｍＭギ酸アンモニウム（ｐＨ３．０）中に懸濁し、時々振盪しながら２～８℃で２時間にわたり維持して、フィルムから分析物を抽出した。２時間後、溶液を２０ｍＭギ酸アンモニウム（ｐＨ３．０）で希釈した。メスフラスコからのサンプル溶液を、ＨＰＬＣバイアル中に移し、炭酸ナトリウム及び臭化リチウムの推定のためにＨＰＬＣ－ＥＬＳＤシステム中に注入した。

絹タンパク質製剤中のＮａ_２ＣＯ_３及びＬｉＢｒの定量化のために開発された分析方法は、１０～１６５μｇ／ｍＬの範囲中で線形であることが見出されたが、炭酸ナトリウム及び臭化リチウムについて、それぞれ、注入精度でのＲＳＤは、面積については２％及び１％及び保持時間については０．３８％及び０．１９％であった。この分析方法は、絹タンパク質製剤中の炭酸ナトリウム及び臭化リチウムの定量的決定のために適用することができる。

最終絹タンパク質断片溶液は、ＬｉＢｒ及びＮａ_２ＣＯ_３を含む、ＰＰＭから検出不可能なレベルの粒子状の残骸及び／又はプロセス汚染物質を伴う、純粋な絹タンパク質断片及び水である。図３及び図４は、本開示の溶液中でのＬｉＢｒ及びＮａ_２ＣＯ_３濃度をまとめた表である。図３において、処理条件は、６０分間にわたる１００℃抽出、６０℃リンス、１００℃オーブン中での６０分間にわたる１００℃ＬｉＢｒを含む。圧力差及びダイアフィルトレーション容積の数を含むＴＦＦ条件を変動させた。図４において、処理条件は、６０分間にわたる１００℃沸騰、６０℃リンス、６０℃オーブン中での４～６時間にわたるＬｉＢｒを含んだ。

絹断片水溶液、凍結乾燥絹タンパク質断片混合物、又はＳＰＦを含む任意の他の組成物のいずれかを、濾過、加熱、放射線、又は電子ビームに限定されない、当業界における標準的な方法に従って殺菌することができる。絹タンパク質断片混合物は、そのより短いタンパク質ポリマー長のため、当業界において記載されているインタクトな絹タンパク質溶液よりも良好に殺菌に耐えられことが予測される。さらに、本明細書中に記載されるＳＰＦ混合物から作製された絹物品を、適用に対して適するように殺菌することができる。例えば、開放創／切開を伴う医療適用において使用される分子が充填されたＳＰＦ組織及び／又は皮膚充填剤は、標準的な方法、例えば放射線又は電子ビームなどにより滅菌することができる。

一実施形態では、本開示の絹タンパク質断片溶液を産生するためのプロセスは、ボンビクス・モリカイコから絹繭の小片を形成すること；小片を約１００℃で、水及びＮａ_２ＣＯ_３の溶液中で約６０分間にわたり抽出すること、ここで、水の容積が、約０．４×未加工の絹重量と等しく、Ｎａ_２ＣＯ_３の量が、約０．８４８×小片の重量であり、絹フィブロイン抽出物を形成する；絹フィブロイン抽出物をリンス水の容量中で、リンス１回当たり約６０℃で約２０分間にわたり、三回リンスすること、ここで、各々のサイクルについてのリンス水が、約０．２Ｌ×小片の重量と等しい；絹フィブロイン抽出物から過剰な水を除去すること；絹フィブロイン抽出物を乾燥すること；乾燥絹フィブロイン抽出物をＬｉＢｒ溶液中に溶解すること、ここで、ＬｉＢｒ溶液がまず約１００℃に加熱されて、絹及びＬｉＢｒ溶液を作製し、維持される；絹及びＬｉＢｒ溶液を、約１００℃で約６０分間にわたり乾燥オーブン中に入れ、天然絹タンパク質構造の完全な溶解及びさらなる断片化を、所望の分子量及び多分散性を伴う混合物中に達成すること；溶液を濾過して、カイコからのすべての残る残骸を除去すること；溶液を水で希釈して、１％絹溶液をもたらすこと；及び接線流濾過（ＴＦＦ）を使用して溶液から溶媒を除去すること。一実施形態では、１０ｋＤａの膜を利用して絹溶液を精製し、最終的な所望の絹と水の比をもたらす。ＴＦＦを次に使用して、純粋な絹溶液を、水に対して２％の濃度の絹にさらに濃縮することができる。

未加工の繭から透析までの各々のプロセス工程は、製造における効率を増加させるために拡大可能である。全部の繭が、現在、原材料として購入されているが、しかし、予め清浄化された繭又は熱処理されていない繭も使用されている（カイコ除去によって微量の残骸が残る）。繭を切断及び清浄化することは、手作業のプロセスであるが、しかし、拡張性のために、例えば、自動機械を、圧縮空気との組み合わせにおいて使用してカイコ及び任意の微粒子を除去する、又は、その繭をより小さな小片に切断するために切断ミルを使用することにより、このプロセスをより非労働集約的にすることができる。抽出工程は、現在小さなバッチで実行されており、６０℃～１００℃の又はその間の温度を維持することができるより大きな容器、例えば、工業用洗浄機械中で完了することができる。リンス工程を、また、工業用洗浄機械において完了することができ、手動でのリンスサイクルを排除する。ＬｉＢｒ溶液中での絹の溶解は、対流式オーブン以外の容器、例えば、撹拌槽型反応器中で生じ得る。一連の水の変化を通じて絹を透析することは、手作業であり、時間集中的なプロセスであり、特定のパラメータを変化させること、例えば、透析前に絹溶液を希釈することにより加速することができる。透析プロセスは、半自動装置、例えば、接線流濾過システムを使用することにより、製造のために増減させることができる。

絹タンパク質断片の分子量は、抽出時間及び温度を含む、抽出工程の間に利用される特定のパラメータ；臭化リチウム中への絹の浸漬の時間でのＬｉＢｒ温度及び溶液が特定の温度で維持される時間を含む、溶解工程の間に利用される特定のパラメータ；ならびに濾過工程の間に利用される特定のパラメータに基づいて制御され得る。本開示の方法を使用してプロセスパラメータを制御することにより、１ｋＤａ～２５０ｋＤａ、５ｋＤａ～２００ｋＤａ、５ｋＤａ～１５０ｋＤａ、１０ｋＤａ～１５０ｋＤａ、又は１０ｋＤａ～８０ｋＤａの範囲の様々な異なる分子量で、２．５と等しい又はそれより低い多分散性を伴うＳＰＦ混合溶液を作製することが可能である。異なる分子量を伴う絹溶液を達成するためにプロセスパラメータを変更することにより、所望の性能要件に基づき、２．５と等しい又はそれより低い、望ましい多分散性を伴う断片混合物最終産物の範囲を標的とすることができる。例えば、薬物を含む、より低分子量の絹フィルムは、より高分子量のＳＰＦ調製物と比較して、より速い放出速度を有し得る。加えて、２．５より大きい多分散性を伴うＳＰＦ混合溶液を達成することができる。さらに、異なる平均分子量及び多分散性を伴う二つの溶液を混合して、組合せ溶液を作製することができる。あるいは、カイコから直接取り出された液体絹腺（１００％セリシン不含絹タンパク質）を、本開示のＳＰＦ混合溶液のいずれかとの組み合わせにおいて使用することができる。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片組成物の分子量を、屈折率検出器（ＲＩＤ）を伴う高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用して決定した。多分散性を、ＣｉｒｒｕｓＧＰＣオンラインＧＰＣ／ＳＥＣソフトウェアバージョン３．３（Ａｇｉｌｅｎｔ）を使用して算出した。

パラメータを、未加工の絹繭を処理して絹溶液にする際に変動させた。これらのパラメータを変動させることによって、結果として得られる絹溶液のＭＷに影響を及ぼした。操作されたパラメータは、（ｉ）抽出の時間及び温度、（ｉｉ）ＬｉＢｒの温度、（ｉｉｉ）溶解オーブンの温度、及び（ｉｖ）溶解時間を含んだ。分子量は、図９～２５中に示されるように、質量分析計で決定した。

実験を、抽出時間を変動させることの効果を決定するために行った。図９～１５はこれらの結果を示すグラフであり、表２～８にその結果をまとめる。以下がまとめである：
－３０分間のセリシン抽出時間は、６０分間のセリシン抽出時間より大きいＭＷをもたらした。
－ＭＷは、オーブン中での時間とともに減少する。
－１４０℃ＬｉＢｒ及びオーブンは、９５００ＤａのＭＷを下回る信頼区間の下限をもたらした。
－１時間目及び４時間目での３０分間の抽出では、未消化の絹を有する。
－１時間目での３０分間の抽出は、３５，０００Ｄａである信頼区間の下限を伴う、有意に高い分子量をもたらした。
－信頼区間の上限に達したＭＷの範囲は、１８０００～２１６０００Ｄａ（特定の上限値を伴う溶液を提供するために重要である）であった。

（外４）

（外５）

（外６）

（外７）

（外８）

（外９）

（外１０）

実験を、抽出温度を変動させた効果を決定するために行った。図１６はこれらの結果を示すグラフであり、表９にその結果をまとめる。以下がまとめである：
－９０℃でのセリシン抽出は、１００℃抽出でのセリシン抽出より高いＭＷをもたらした。
－９０℃及び１００℃の両方が、オーブン中で経時的にＭＷを減少させることを示している。

（外１１）

実験を行って、絹に添加された場合の臭化リチウム（ＬｉＢｒ）温度を変動させた効果を決定した。図１７～１８はこれらの結果を示すグラフであり、表１０～１１にその結果をまとめる。以下がまとめである：
－ＭＷ又は信頼区間に対する影響はなし（全て、ＣＩ約１０５００～６５００Ｄａ）
－試験によって、ＬｉＢｒが添加され、溶解し始めると、室温でその質量の大部分が絹であるため、ＬｉＢｒ－絹溶解の温度は元のＬｉＢｒ温度を下まわって迅速に下落することが例証される。

（外１２）

（外１３）

実験を行って、オーブン／溶解温度の効果を決定した。図１９～２３はこれらの結果を示すグラフであり、表１２～１６にその結果をまとめる。以下がまとめである：
－オーブン温度は、３０分間抽出された絹より、６０分間抽出された絹に対して、より少ない効果を有する。理論により拘束されることを望まないが、３０分間抽出された絹は、抽出の間にそれほど分解されず、従って、オーブン温度は、より大きなＭＷに対してより多くの効果を有しており、絹の分解部分がより少ないと考えられる。
－６０℃対１４０℃オーブンについて、３０分間抽出された絹は、より高いオーブン温度で、より低いＭＷの非常に有意な効果を示した一方で、６０分間抽出された絹は、効果を有したが、しかし、それはずっと少なかった。
－１４０℃オーブンは、～６０００Ｄａで信頼区間における下限をもたらした。

（外１４）

（外１５）

（外１６）

（外１７）

（外１８）

一実施形態では、本明細書中に開示される方法は、限定されないが、ＭＷを含む、製造の間に制御され得る特徴を伴う溶液をもたらし、抽出及び／又は溶解時間、ならびに温度（例、ＬｉＢｒ温度）、圧力、及び濾過（例、サイズ排除クロマトグラフィー）を変化させることにより変動し得る。構造－フィブロインタンパク質ポリマーの重鎖又は軽鎖の除去又は切断；純度－絹断片タンパク質混合溶液の保管安定性に悪影響を及ぼす、改善された粒子除去のための改善されたセリシン除去又はフィルター能力のための温水リンス温度；色－溶液の色は、例えば、ＬｉＢｒ温度及び時間；粘度；透明性；ならびに溶液の安定性とともに制御することができる。結果として得られる溶液のｐＨは、典型的には、約７であり、保管要件に対して適するように、酸又は塩基を使用して変化させることができる。

上記ＳＰＦ混合溶液を利用して、本明細書中に記載されるように、ＳＰＦ含有組織充填剤を産生することができる。

約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液を調製するための方法は、以下の工程を含む：約３０分間～約６０分間の間の処理時間にわたり、絹供給源を沸騰（１００℃）炭酸ナトリウム水溶液に添加することにより絹供給源を脱ガムすること；この溶液からセリシンを除去して、検出不可能なレベルのセリシンを含む絹フィブロイン抽出物を産生すること；絹フィブロイン抽出物から溶液を排出すること；絹フィブロイン抽出物を、約６０℃～約１４０℃の範囲の臭化リチウム溶液中での絹フィブロイン抽出物の配置時に、開始温度を有する臭化リチウムの溶液中に溶解すること；約１４０℃の温度を有するオーブン中で、絹フィブロイン－臭化リチウムの溶液を少なくとも１時間の期間にわたり維持すること；絹フィブロイン抽出物から臭化リチウムを除去すること；及び、絹タンパク質断片の水溶液を産生すること、水溶液が、約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する断片を含み、それにおいて、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液が、約１．５～約３．０の間の多分散性を含む。本方法は、さらに、溶解工程の前に、絹フィブロイン抽出物を乾燥させることを含み得る。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー臭化リチウムアッセイを使用して測定される３００ｐｐｍ未満の臭化リチウム残渣を含み得る。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー炭酸ナトリウムアッセイを使用して測定される１００ｐｐｍ未満の炭酸ナトリウム残渣を含み得る。本方法は、さらに、治療用薬剤を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。本方法は、さらに、酸化防止剤又は酵素の一つから選択される分子を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。本方法は、さらに、ビタミンを、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。このビタミンは、ビタミンＣ又はその誘導体であってよい。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、凍結乾燥してもよい。本方法は、さらに、アルファヒドロキシ酸を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。アルファヒドロキシ酸は、グリコール酸、乳酸、酒石酸、及びクエン酸からなる群から選択することができる。本方法は、さらに、約０．５％～１０．０％の濃度のヒアルロン酸又はその塩形態を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。本方法は、さらに、酸化亜鉛又は二酸化チタンの少なくとも一つを添加することを含み得る。フィルムを、本方法により産生される純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液から作製することができる。フィルムは、約１．０重量％～約５０．０重量％のビタミンＣ又はその誘導体を含み得る。フィルムは、約２．０重量％～約２０．０重量％の範囲の水含量を有し得る。フィルムは、約３０．０重量％～約９９．５重量％の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片を含み得る。ゲルを、本方法により産生される純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液から作製することができる。ゲルは、約０．５重量％～約２０．０重量％のビタミンＣ又はその誘導体を含み得る。ゲルは、少なくとも２％の絹含量及び少なくとも２０％のビタミン含量を有し得る。

約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液を調製するための方法は、以下の工程を含む：約３０分間～約６０分間の間の処理時間にわたり、絹供給源を沸騰（１００℃）炭酸ナトリウム水溶液に添加することにより絹供給源を脱ガムすること；この溶液からセリシンを除去して、検出不可能なレベルのセリシンを含む絹フィブロイン抽出物を産生すること；絹フィブロイン抽出物から溶液を排出すること；絹フィブロイン抽出物を、約６０℃～約１４０℃の範囲の臭化リチウム溶液中での絹フィブロイン抽出物の配置時に、開始温度を有する臭化リチウムの溶液中に溶解すること；約１４０℃の温度を有するオーブン中で、絹フィブロイン－臭化リチウムの溶液を少なくとも１時間の期間にわたり維持すること；絹フィブロイン抽出物から臭化リチウムを除去すること；及び、絹タンパク質断片の水溶液を産生すること、水溶液が、約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する断片を含み、それにおいて、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液が、約１．５～約３．０の間の多分散性を含む。本方法は、さらに、溶解工程の前に、絹フィブロイン抽出物を乾燥させることを含み得る。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー臭化リチウムアッセイを使用して測定される３００ｐｐｍ未満の臭化リチウム残渣を含み得る。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー炭酸ナトリウムアッセイを使用して測定される１００ｐｐｍ未満の炭酸ナトリウム残渣を含み得る。本方法は、さらに、治療用薬剤を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。本方法は、さらに、酸化防止剤又は酵素の一つから選択される分子を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。本方法は、さらに、ビタミンを、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。このビタミンは、ビタミンＣ又はその誘導体であってよい。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、凍結乾燥してもよい。本方法は、さらに、アルファヒドロキシ酸を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。アルファヒドロキシ酸は、グリコール酸、乳酸、酒石酸、及びクエン酸からなる群から選択することができる。本方法は、さらに、約０．５％～１０．０％の濃度のヒアルロン酸又はその塩形態を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。本方法は、さらに、酸化亜鉛又は二酸化チタンの少なくとも一つを添加することを含み得る。フィルムを、本方法により産生される純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液から作製することができる。フィルムは、約１．０重量％～約５０．０重量％のビタミンＣ又はその誘導体を含み得る。フィルムは、約２．０重量％～約２０．０重量％の範囲の水含量を有し得る。フィルムは、約３０．０重量％～約９９．５重量％の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片を含み得る。ゲルを、本方法により産生される純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液から作製することができる。ゲルは、約０．５重量％～約２０．０重量％のビタミンＣ又はその誘導体を含み得る。ゲルは、少なくとも２％の絹含量及び少なくとも２０％のビタミン含量を有し得る。

約６ｋＤａ～約１７ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液を調製するための方法は、以下の工程を含む：約３０分間～約６０分間の間の処理時間にわたり、絹供給源を沸騰（１００℃）炭酸ナトリウム水溶液に添加することにより絹供給源を脱ガムすること；この溶液からセリシンを除去して、検出不可能なレベルのセリシンを含む絹フィブロイン抽出物を産生すること；絹フィブロイン抽出物から溶液を排出すること；絹フィブロイン抽出物を、約６０℃～約１４０℃の範囲の臭化リチウム溶液中での絹フィブロイン抽出物の配置時に、開始温度を有する臭化リチウムの溶液中に溶解すること；約１４０℃の温度を有するオーブン中で、絹フィブロイン－臭化リチウムの溶液を少なくとも１時間の期間にわたり維持すること；絹フィブロイン抽出物から臭化リチウムを除去すること；及び、絹タンパク質断片の水溶液を産生すること、水溶液が、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する断片を含み、それにおいて、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液が、約１．５～約３．０の間の多分散性を含む。本方法は、さらに、溶解工程の前に、絹フィブロイン抽出物を乾燥させることを含み得る。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー臭化リチウムアッセイを使用して測定される３００ｐｐｍ未満の臭化リチウム残渣を含み得る。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー炭酸ナトリウムアッセイを使用して測定される１００ｐｐｍ未満の炭酸ナトリウム残渣を含み得る。本方法は、さらに、治療用薬剤を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。本方法は、さらに、酸化防止剤又は酵素の一つから選択される分子を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。本方法は、さらに、ビタミンを、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。このビタミンは、ビタミンＣ又はその誘導体であってよい。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、凍結乾燥してもよい。本方法は、さらに、アルファヒドロキシ酸を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。アルファヒドロキシ酸は、グリコール酸、乳酸、酒石酸、及びクエン酸からなる群から選択することができる。本方法は、さらに、約０．５％～１０．０％の濃度のヒアルロン酸又はその塩形態を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。本方法は、さらに、酸化亜鉛又は二酸化チタンの少なくとも一つを添加することを含み得る。フィルムを、本方法により産生される純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液から作製することができる。フィルムは、約１．０重量％～約５０．０重量％のビタミンＣ又はその誘導体を含み得る。フィルムは、約２．０重量％～約２０．０重量％の範囲の水含量を有し得る。フィルムは、約３０．０重量％～約９９．５重量％の純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片を含み得る。ゲルを、本方法により産生される純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液から作製することができる。ゲルは、約０．５重量％～約２０．０重量％のビタミンＣ又はその誘導体を含み得る。ゲルは、少なくとも２％の絹含量及び少なくとも２０％のビタミン含量を有し得る。

約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液を調製するための方法は、以下の工程を含む：約３０分間～約６０分間の間の処理時間にわたり、絹供給源を沸騰（１００℃）炭酸ナトリウム水溶液に添加することにより絹供給源を脱ガムすること；この溶液からセリシンを除去して、検出不可能なレベルのセリシンを含む絹フィブロイン抽出物を産生すること；絹フィブロイン抽出物から溶液を排出すること；約８０℃～約１４０℃の範囲の臭化リチウム溶液中での絹フィブロイン抽出物の配置時に、開始温度を有する臭化リチウム溶液中に絹フィブロイン抽出物を溶解すること；約６０℃～約１００℃の間の範囲の温度を有するオーブン中で、絹フィブロイン－臭化リチウムの溶液を少なくとも１時間の期間にわたり維持すること；絹フィブロイン抽出物から臭化リチウムを除去すること；及び、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液を産生すること、それにおいて、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、約１０ｐｐｍ～３００ｐｐｍの間の臭化リチウム残渣を含み、それにおいて、絹タンパク質断片の水溶液は、約１０ｐｐｍ～１００ｐｐｍの間の炭酸ナトリウム残渣を含み、それにおいて、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、約１７ｋＤａから約３９ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する断片を含み、及び、それにおいて、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液が、約１．５～約３．０の間の多分散性を含む。本方法は、さらに、溶解工程の前に、絹フィブロイン抽出物を乾燥させることを含み得る。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー臭化リチウムアッセイを使用して測定される３００ｐｐｍ未満の臭化リチウム残渣を含み得る。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー炭酸ナトリウムアッセイを使用して測定される１００ｐｐｍ未満の炭酸ナトリウム残渣を含み得る。本方法は、さらに、治療用薬剤を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。本方法は、さらに、酸化防止剤又は酵素の一つから選択される分子を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。本方法は、さらに、ビタミンを、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。ビタミンはビタミンＣ又はその誘導体であってよい。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、凍結乾燥してもよい。本方法は、さらに、アルファヒドロキシ酸を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。アルファヒドロキシ酸は、グリコール酸、乳酸、酒石酸、及びクエン酸からなる群から選択することができる。本方法は、さらに、約０．５％～１０．０％の濃度のヒアルロン酸又はその塩形態を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。本方法は、さらに、酸化亜鉛又は二酸化チタンの少なくとも一つを添加することを含み得る。

ゲルを、本方法により産生される純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液から作製することができる。ゲルは、約０．５重量％～約２０．０重量％のビタミンＣ又はその誘導体を含み得る。ゲルは、少なくとも２％の絹含量及び少なくとも２０％のビタミン含量を有し得る。

本明細書中で例証される態様によれば、約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液を調製するための方法が開示されており、本方法は以下の工程を含む：脱ガムをもたらすように、約３０分間の処理時間にわたり絹供給源を沸騰（１００℃）炭酸ナトリウム水溶液に添加すること；この溶液からセリシンを除去して、検出不可能なレベルのセリシンを含む絹フィブロイン抽出物を産生すること；絹フィブロイン抽出物から溶液を排出すること；約８０℃～約１４０℃の範囲の臭化リチウム溶液中での絹フィブロイン抽出物の配置時に、開始温度を有する臭化リチウム溶液中に絹フィブロイン抽出物を溶解すること；約６０℃～約１００℃の間の範囲の温度を有するオーブン中で、絹フィブロイン－臭化リチウムの溶液を少なくとも１時間の期間にわたり維持すること；絹フィブロイン抽出物から臭化リチウムを除去すること；及び、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液を産生すること、それにおいて、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、約１０ｐｐｍ～３００ｐｐｍの間の臭化リチウム残渣、約１０ｐｐｍ～１００ｐｐｍの間の炭酸ナトリウム残渣、約４０ｋＤａから約６５ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量を有する断片を含み、及び、それにおいて、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液が、約１．５～約３．０の間の多分散性を含む。本方法は、さらに、溶解工程の前に、絹フィブロイン抽出物を乾燥させることを含み得る。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー臭化リチウムアッセイを使用して測定される３００ｐｐｍ未満の臭化リチウム残渣を含み得る。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、高速液体クロマトグラフィー炭酸ナトリウムアッセイを使用して測定される１００ｐｐｍ未満の炭酸ナトリウム残渣を含み得る。本方法は、さらに、治療用薬剤を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。本方法は、さらに、酸化防止剤又は酵素の一つから選択される分子を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。本方法は、さらに、ビタミンを、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。このビタミンは、ビタミンＣ又はその誘導体であってよい。純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液は、凍結乾燥してもよい。本方法は、さらに、アルファヒドロキシ酸を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。アルファヒドロキシ酸は、グリコール酸、乳酸、酒石酸、及びクエン酸からなる群から選択することができる。本方法は、さらに、約０．５％～１０．０％の濃度のヒアルロン酸又はその塩形態を、純粋な絹フィブロインベースのタンパク質断片の水溶液に添加することを含み得る。本方法は、さらに、酸化亜鉛又は二酸化チタンの少なくとも一つを添加することを含み得る。

ヒアルロン酸及びヒアルロン酸ゲル
本発明の生分解性ポリマー成分は、ヒアルロン酸（ＨＡ）としても公知である、ヒアルロネートである。ＨＡは、Ｄ－グルクロン酸及びＮ－アセチル－Ｄ－グルコサミンの交互の残基からなる。この水溶性ポリマーは、ほぼ全ての組織中で、特に、細胞外マトリックス、眼球、及び関節の滑液中で天然に見出される。ＨＡは、純粋な形態において商業的に入手可能である。小さなゲル粒子ＨＡ充填剤を使用して天然コラーゲン産生を刺激することができ、これは、真皮の機械的延伸及び真皮線維芽細胞の活性化により誘導されると推定される。

本発明の結果として得られる組織及び／又は皮膚充填剤中のＨＡ濃度は、皮膚充填剤の剛性及び寿命に寄与する。一部の実施形態では、本明細書中に記載される、結果として得られる組織及び／又は皮膚充填剤中のＨＡ濃度の増加によって、ＨＡ濃度が比較的低い組織及び／又は皮膚充填剤と比較して、結果として得られる組織及び／又は皮膚充填剤の剛性及び／又は寿命が増加し得る。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤に組み込まれるＨＡは、１０万ダルトン以上、１５万ダルトン以上、１００万ダルトン以上、又は２００万ダルトン以上の分子量を有する。一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤に組み込まれたＨＡは、１０万ダルトン以下、１５万ダルトン以下、１００万ダルトン以下、又は２００万ダルトン以下の分子量を有する。一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤に組み込まれるＨＡは、高分子量（例えば、約１ＭＤａ～約４ＭＤａのＨＡ分子量）を有する。一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤に組み込まれるＨＡは、低分子量（例えば、約１ＭＤａ未満のＨＡ分子量）を有する。

一部の実施形態では、ＨＡ源は、例えばヒアルロン酸ナトリウムなどのヒアルロン酸塩であってもよい。一部の実施形態では、ＨＡは、架橋されている。架橋ＨＡは、膜、ゲル、半ゲル、スポンジ、又はミクロスフェアなどの各種形状に製することができる。一部の実施形態では、架橋ＨＡは、流体ゲル形態であり、即ち、その容器の形状を呈する。ＨＡゲル又は半ゲルの粘度は、非共役ＨＡ及び／又はヒアルロネートの添加によって変化させることができる。粘度はまた、本明細書中に記載されるように、ＳＰＦ－ＳＰＦ、ＳＰＦ－ＨＡ、及び／又はＨＡ－ＨＡ架橋の程度を変化させることによって調節することができる。一部の実施形態では、ＨＡの約４％～約１２％が架橋されたＨＡ－ＨＡ又はＨＡ－ＳＰＦであることができる。

一実施形態では、本明細書中に記載されるＳＰＦ組成物は、ＨＡと組み合わせて組織充填剤組成物を形成することができる。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、９９％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、９８％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、９７％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、９６％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、９５％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、９４％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、９３％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、９２％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、９１％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、９０％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、８５％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、８０％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、７５％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、７０％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、６５％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、６０％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、５５％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、５０％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、４５％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、４０％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、３５％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、３０％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、２５％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、２０％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、１９％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、１８％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、１７％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、１６％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、１５％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、１４％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、１３％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、１２％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、１１％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、１０％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、９％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、８％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、７％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、６％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、５％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、４％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、３％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、２％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、１％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、０．９％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、０．８％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、０．７％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、０．６％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、０．５％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、０．４％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、０．３％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、０．２％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、０．１％未満である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、０．１％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、０．２％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、０．３％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、０．４％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、０．５％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、０．６％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、０．７％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、０．８％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、０．９％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、１％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、２％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、３％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、４％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、５％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、６％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、７％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、８％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、９％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、１０％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、１１％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、１２％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、１３％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、１４％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、１５％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、１６％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、１７％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、１８％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、１９％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、２０％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、２５％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、３０％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、３５％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、４０％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、４５％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、５０％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、５５％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、６０％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、６５％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、７０％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、７５％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、８０％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、８５％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、９０％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、９１％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、９２％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、９３％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、９４％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、９５％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、９６％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、９７％超である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、９８％超である。

一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約０．１％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約０．２％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約０．３％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約０．４％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約０．５％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約０．６％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約０．７％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約０．８％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約０．９％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約１％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約２％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約３％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約４％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約５％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約６％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約７％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約８％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約９％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約１０％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約１１％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約１２％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約１３％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約１４％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約１５％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約１６％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約１７％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約１８％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約１９％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約２０％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約２５％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約３０％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約３５％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約４０％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約４５％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約５０％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約５５％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約６０％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約６５％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約７０％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約７５％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約８０％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約８５％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約９０％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約９１％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約９２％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約９３％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約９４％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約９５％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約９６％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約９７％である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約９８％である。

一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約０．１％～約１％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約０．５％～約１．５％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約１％～約５％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約１．５％～約５．５％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約２％～約６％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約２．５％～約６．５％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約３％～約７％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約３．５％～約７．５％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約４％～約８％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約４．５％～約８．５％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約５％～約９％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約５．５％～約９．５％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約６％～約１０％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約６．５％～約１０．５％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約７％～約１１％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約７．５％～約１１．５％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約８％～約１２％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約８．５％～約１２．５％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約９％～約１３％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約９．５％～約１３．５％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約１０％～約１４％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約１０．５％～約１４．５％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約１１％～約１５％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約１１．５％～約１５．５％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約１２％～約１６％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約１２．５％～約１６．５％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約１３％～約１７％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約１３．５％～約１７．５％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約１４％～約１８％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約１４．５％～約１８．５％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約１５％～約１９％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約１５．５％～約１９．５％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約１６％～約２０％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約２０％～約３０％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約３０％～約４０％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約４０％～約５０％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約５０％～約６０％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約６０％～約７０％の間である。一実施形態では、組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約８０％～約９０％の間である。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤組成物中のＨＡ（重量％）は、約１％～約２％、又は約１％～約３％、又は約１％～約４％、又は約１％～約５％、又は約１％～約６％、又は約１％～約７％、又は約１％～約８％、又は約１％～約９％、又は約１％～約１０％、又は約１％～約１１％、又は約１％～約１２％、又は約１％～約１３％、又は約１％～約１４％、又は約１％～約１５％、又は約１％～約１６％、又は約１％～約１７％、又は約１％～約１８％、又は約１％～約１９％、又は約１％～約２０％、又は約１％～約２１％、又は約１％～約２２％、又は約１％～約２３％、又は約１％～約２４％、又は約１％～約２５％、又は約１％～約３０％、又は約１％～約４０％、又は約１％～約５０％、又は約１％～約６０％、又は約１％～約７０％、又は約１％～約８０％、又は約１％～約９５％；又は約１０％～約２０％、又は約１０％～約２５％、又は約１０％～約３０％、又は約１０％～約３５％、又は約１０％～約４０％、又は約１０％～約４５％、又は約１０％～約５０％、又は約１０％～約５５％、又は約１０％～約６０％、又は約１０％～約６５％、又は約１０％～約７０％、又は約１０％～約７５％、又は約１０％～約８０％、又は約１０％～約８５％、又は約１０％～約９０％、又は約１０％～約９５％である。

一部の実施形態では、本明細書中に記載されるＨＡは、商業的供給源から取得してもよく、又はストレプトコッカス・エクイ細菌により産生させてもよい。

ＨＡを含む、本明細書中に記載される組織充填剤は、それらのインビトロ生物学的活性及びインビボ生物学的活性により特徴付けることができる。例えば、インビトロアッセイを、細胞毒性、酵素分解に対する抵抗性、シリンジ通過性（例、溶液粘度、注入流速、シリンジ／針の直径）、及び／又は粒子形態分析について、本明細書中に記載される組織充填剤の一部で実施してもよい。例えば、Ｐａｒｋ，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｅｕｒ．Ａｃａｄ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｖｅｎｅｒｏｌ．（２０１４）２８：５６５－５６８を参照のこと。インビボアッセイを実施して、初期の形態学的パターン、充填剤の総残量、組織学的評価を決定してもよく、肉芽腫形成又は皮膚有害反応の検査を含んでもよい。例えば、Ｐａｒｋ，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｅｕｒ．Ａｃａｄ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｖｅｎｅｒｏｌ．（２０１４）２８：５６５－５６８；及びＲａｍｏｔ，ｅｔａｌ．，ＴｏｘｉｃｏｌｏｇｙＰａｔｈｏｌｏｇｙ（２０１５）４３：２６７－２７１を参照のこと。

ゲル化
一実施形態では、絹ゲルを、ゲル化助剤と提供してもよい。一部の実施形態では、ゲル化助剤は、酸、電気、混合、及び／又は超音波処理であることができる。

一実施形態では、絹ゲルを産生する場合、酸を、本明細書中に記載される絹溶液に添加し、ゲル化を促進させるのを助けることができる。一実施形態では、中性又は塩基性の分子及び／又は治療用薬剤を含む絹ゲルを産生する場合、酸を添加して、ゲル化を促進させることができる。一実施形態では、絹ゲルを産生する場合、ｐＨを増加させる（ゲルをより塩基性にする）ことによって、ゲルの保管安定性が増加する。一実施形態では、絹ゲルを産生する場合、ｐＨを増加させる（ゲルをより塩基性にする）ことによって、より多量の酸性分子をゲル中にロードすることが可能になる。

一実施形態では、絹ゲルを産生する場合、電気を、本明細書中に記載される絹溶液に通して、ゲル化を促進させるのを助けることができる。

一実施形態では、絹ゲルを産生する場合、本明細書中に記載される絹溶液の混合によって、ゲル化を促進するのを助けることができる。

一実施形態では、絹ゲルを産生する場合、本明細書中に記載される絹溶液の超音波処理によって、ゲル化を促進するのを助けることができる。

一実施形態では、天然添加物を絹ゲルに添加して、添加剤をさらに安定化させることができる。例えば、微量元素、例えばセレンもしくはマグネシウムなど、又はＬ－メチオニンを使用することができる。さらに、遮光性容器を添加して、安定性をさらに増加させることができる。

一部の実施形態では、ゲル化促進剤を使用してＳＰＦのゲル化を促進させることができる。一部の実施形態では、ＳＰＦ溶液を、変動する容積比で純粋なアルコール又はアルコール水溶液と、混合、撹拌、振盪、又は任意の他の形態のかき混ぜを通じて混合することができる。一部の実施形態では、このアルコール溶液促進剤は、最終的なゲルでの成果のさらなる促進剤として添加された両親媒性ペプチドの量を有してもよい。加速の程度は、より多い又はより少ない促進剤成分をシステムに添加することにより、適宜、高める又は減らすことができる。

一部の実施形態では、ゲル化速度は、ゲルを作製するために使用される、溶液中のＳＰＦの濃度を増加させることにより増強することができる。様々な方法をその目的のために使用することができ、限定されないが、例えば、吸湿性の種、例えばポリエチレングリコールなどを組み入れた緩衝液に対する中間体ＳＰＦ溶液の透析、凍結乾燥工程、及び／又は蒸発工程を含む。増加された温度も、ゲル化プロセスの促進剤として使用することができる。また、限定されないが、直接滴定及びガス交換を含む方法による中間体絹溶液のｐＨの操作を、ゲル化プロセスを増強させるために使用することができる。特にカルシウム及びカリウムを含む、選択されたイオン種の導入も、ゲル化速度を加速させるために使用することができる。

一部の実施形態では、ゲル化を、ＳＰＦ中間体において可溶性及び不溶性の両方の、有機及び無機の種を含む核剤の使用により助けることができる。核剤は、限定されないが、絹分子を結合するペプチド配列、以前にゲル化された絹、及び難溶性のβ－シートリッチ構造を含むことができる。一部の実施形態では、ゲル化プロセスを加速させるさらなる手段は、機械的励起の導入を通じており、それは、剪断デバイス、超音波デバイス、又は機械的混合器を通じて付与され得る。

完全な絹溶液のゲル化のために必要な時間は、上記のパラメータの値ならびにＳＰＦ溶液中で見出される凝集及び組織化の初期状態に依存して、数秒間から数時間又は数日間まで変動し得る。添加された促進剤の容積分率は、全システム容積の約０％～約９９％で変動し得る（即ち、いずれかの成分を、大過剰の他に、又は間隔内の任意の相対濃度で添加することができる）。使用されるＳＰＦ溶液の濃度は、約１％（ｗ／ｖ）～約２０％（ｗ／ｖ）の範囲、及び任意の他の適した範囲であることができる。促進剤をＳＰＦ溶液に添加することができる、又はＳＰＦ溶液を促進剤に添加することができる。形成されたＳＰＦヒドロゲルは、さらに、化学的又は物理的に架橋して、変性された機械的特性を獲得することができる。

一部の実施形態では、エンハンサー溶液はＳＰＦ溶液に添加される、又はその逆であり、ＳＰＦ溶液は、約１％（ｗ／ｖ）、約２％（ｗ／ｖ）、約３％（ｗ／ｖ）、約４％（ｗ／ｖ）、約５％（ｗ／ｖ）、約６％（ｗ／ｖ）、約７％（ｗ／ｖ）、約８％（ｗ／ｖ）、約９％（ｗ／ｖ）、約１０％（ｗ／ｖ）、約１２％（ｗ／ｖ）、約１５％（ｗ／ｖ）、約１８％（ｗ／ｖ）、約２０％（ｗ／ｖ）、約２５％（ｗ／ｖ）、又は約３０％（ｗ／ｖ）のＳＰＦの濃度を有する。一部の実施形態では、エンハンサー溶液はＳＰＦ溶液に添加される、又はその逆であり、ＳＰＦ溶液は、少なくとも１％（ｗ／ｖ）、少なくとも２％（ｗ／ｖ）、少なくとも３％（ｗ／ｖ）、少なくとも４％（ｗ／ｖ）、少なくとも５％（ｗ／ｖ）、少なくとも６％（ｗ／ｖ）、少なくとも７％（ｗ／ｖ）、少なくとも８％（ｗ／ｖ）、少なくとも９％（ｗ／ｖ）、少なくとも１０％（ｗ／ｖ）、少なくとも１２％（ｗ／ｖ）、少なくとも１５％（ｗ／ｖ）、少なくとも１８％（ｗ／ｖ）、少なくとも２０％（ｗ／ｖ）、少なくとも２５％（ｗ／ｖ）、又は少なくとも３０％（ｗ／ｖ）のＳＰＦの濃度を有する。一部の実施形態では、エンハンサー溶液はＳＰＦ溶液に添加される、又はその逆であり、ＳＰＦ溶液は、約１％（ｗ／ｖ）～約５％（ｗ／ｖ）、約１％（ｗ／ｖ）～約１０％（ｗ／ｖ）、約１％（ｗ／ｖ）～約１５％（ｗ／ｖ）、約１％（ｗ／ｖ）～約２０％（ｗ／ｖ）、約１％（ｗ／ｖ）～約２５％（ｗ／ｖ）、約１％（ｗ／ｖ）～約３０％（ｗ／ｖ）、約５％（ｗ／ｖ）～約１０％（ｗ／ｖ）、約５％（ｗ／ｖ）～約１５％（ｗ／ｖ）、約５％（ｗ／ｖ）～約２０％（ｗ／ｖ）、約５％（ｗ／ｖ）～約２５％（ｗ／ｖ）、約５％（ｗ／ｖ）～約３０％（ｗ／ｖ）、約１０％（ｗ／ｖ）～約１５％（ｗ／ｖ）、約１０％（ｗ／ｖ）～約２０％（ｗ／ｖ）、約１０％（ｗ／ｖ）～約２５％（ｗ／ｖ）、又は約１０％（ｗ／ｖ）～約３０％（ｗ／ｖ）のＳＰＦの濃度を有する。

ゲル及びヒドロゲル－改変及び架橋
一部の実施形態では、本発明は、一つ又は複数の架橋されたマトリックスポリマーを含む一つ又は複数のヒドロゲルを含む組成物を提供する。本明細書中で使用されるように、用語「架橋された」は、ゲルのような、より安定な構造中に、個々のポリマー分子、高分子、及び／又は単量体鎖を連結する分子間結合を指す。そのようなものとして、架橋されたマトリックスポリマーは、少なくとも一つの個々のポリマー分子を他に連結する少なくとも一つの分子間結合を有し、ここで、第一の個々のポリマー分子は、化学的性質が他と類似していても、又は異なっていてもよい。本明細書中に開示されるマトリックスポリマーは、ジアルデヒドならびに、限定されないが、多官能性ＰＥＧベースの架橋剤、ジビニルスルホン、ジグリシジルエーテル、及びビス－エポキシドを含むジスルフィド架橋剤を使用して架橋することができる。ＳＰＦ及び／又はＨＡ架橋剤の非限定的な例は、ジビニルスルホン（ＤＶＳ）、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、ＵＶ光、グルタルアルデヒド、１，２－ビス（２，３－エポキシプロポキシ）エチレン（ＥＧＤＧＥ）、１，２，７，８－ジエポキシオクタン（ＤＥＯ）、ビスカルボジイミド（ＢＣＤ）、ペンタエリスリトールテトラグリシジルエーテル（ＰＥＴＧＥ）、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）、ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート（ＢＳ）、ヘキサメチレンジアミン（ＨＭＤＡ）、１－（２，３－エポキシプロピル）－２，３－エポキシシクロヘキサン、又はそれらの組合せを含む。一部の実施形態では、ＨＡ架橋剤は、ＢＤＤＥ又はＤＶＳを含んでもよい。一部の実施形態では、ＨＡ及び／又はＳＰＦ架橋剤は、本明細書中に記載されるように、ＢＤＤＥ、ＤＶＳ、ＵＶ光、グルタルアルデヒド、又はカルボジイミドであってもよい。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、残留架橋剤を含んでもよい。一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、わずかな微量の架橋剤、例えば、約２ｐｐｍ以下、又は約１．９ｐｐｍ以下、又は約１．８ｐｐｍ以下、又は約１．７ｐｐｍ以下、又は約１．６ｐｐｍ以下、又は約１．５ｐｐｍ以下、又は約１．４ｐｐｍ以下、又は約１．３ｐｐｍ以下、又は約１．２ｐｐｍ以下、又は約１．１ｐｐｍ以下、又は約１．０ｐｐｍ以下、又は約０．９ｐｐｍ以下、又は約０．８ｐｐｍ以下、又は約０．７ｐｐｍ以下、又は約０．６ｐｐｍ以下、又は約０．５ｐｐｍ以下、又は約０．４ｐｐｍ以下、又は約０．３ｐｐｍ以下、又は約０．２ｐｐｍ以下、又は約０．１ｐｐｍなどを含み得る。一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、微量ＢＤＤＥを、しかし、約２ｐｐｍ以下、又は約１．９ｐｐｍ以下、又は約１．８ｐｐｍ以下、又は約１．７ｐｐｍ以下、又は約１．６ｐｐｍ以下、又は約１．５ｐｐｍ以下、又は約１．４ｐｐｍ以下、又は約１．３ｐｐｍ以下、又は約１．２ｐｐｍ以下、又は約１．１ｐｐｍ以下、又は約１．０ｐｐｍ以下、又は約０．９ｐｐｍ以下、又は約０．８ｐｐｍ以下、又は約０．７ｐｐｍ以下、又は約０．６ｐｐｍ以下、又は約０．５ｐｐｍ以下、又は約０．４ｐｐｍ以下、又は約０．３ｐｐｍ以下、又は約０．２ｐｐｍ以下、又は約０．１ｐｐｍの濃度で含み得る。当業者により理解されるように、特定の組織充填剤サンプル中に存在する残留架橋剤の量は、ガスクロマトグラフィー－質量分析法により決定することができる。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、ＳＰＦマトリックス部分及びＨＡマトリックス部分を含み得るマトリックスを含み得るが、ここで、ＳＰＦマトリックス部分が架橋及び非架橋ＳＰＦの混合物を含み、ならびにＨＡマトリックス部分が架橋及び非架橋ＨＡの混合物を含む。

一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は、リンカー改変ＨＡを含む。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は、リンカー改変ＳＰＦを含む。二官能性架橋剤は、両端で反応して、二つの異なるＨＡ分子を、二つの異なるＳＰＦ分子を、又はＨＡ分子をＳＰＦ分子に結合することができる。一部の実施形態では、架橋剤は、一端でだけＨＡ分子と結合し、他の一端をペンダントとして残す。一部の実施形態では、架橋剤は、一端でだけＳＰＦ分子と結合し、他の一端をペンダントとして残す。

本明細書中で使用されるように、改変度（ＭｏＤ）を以下のように定義することができる（例えば、Ｊ．Ｋａｂｌｉｋｅｔａｌ．，ＤｅｒｍａｔｏｌＳｕｒｇ，２００９（３５）：３０２－３１２を参照のこと）：
合計％改変度＝％架橋＋％ペンダント
ＭｏＤを決定するために、それはまた、以下のように定義することができる（例えば、Ｌ．Ｋｅｎｎｅｅｔａｌ．，ＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅＰｏｌｙｍｅｒｓ，２０１３（９１）：４１０－４１８を参照）：

式中、ｎ_{連結架橋剤}は、連結された架橋剤分子の数であり、ｎ_ＨＡ二糖は、ＨＡ中の二糖の数であり、ｎ_{ＳＰＦ反復単位}は、ＳＰＦ中の反復単位の数である。これらの数は、架橋剤、ＨＡ、及びＳＰＦの特徴的な化学シフトを使用して、ＮＭＲにより決定することができる（“ＣｈｅｍｉｃａｌＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆＨｙｄｒｏｇｅｌｓＣｒｏｓｓｌｉｎｋｅｄｗｉｔｈＰｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅＧｌｙｃｏｌｆｏｒＳｏｆｔＴｉｓｓｕｅＡｕｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ，”Ｍｏｎｔｉｃｅｌｌｉｅｔａｌ．，ＯｐｅｎＡｃｃｅｓｓＭａｃｅｄＪＭｅｄＳｃｉ．２０１９Ａｐｒ１５；７（７）：１０７７－１０８１を参照のこと）。

一部の実施形態では、ＭｏＤは、約１％～２５％の間、約２％～約２０％の間、又は約３．５％～約１７．５％の間である。一部の実施形態では、ＭｏＤは約１．１％、約１．２％、約１．３％、約１．４％、約１．５％、約１．６％、約１．７％、約１．８％、約１．９％、約２．０％、約２．１％、約２．２％、約２．３％、約２．４％、約２．５％、約２．６％、約２．７％、約２．８％、約２．９％、約３．０％、約３．１％、約３．２％、約３．３％、約３．４％、約３．５％、約３．６％、約３．７％、約３．８％、約３．９％、約４．０％、約４．１％、約４．２％、約４．３％、約４．４％、約４．５％、約４．６％、約４．７％、約４．８％、約４．９％、約５．０％、約５．１％、約５．２％、約５．３％、約５．４％、約５．５％、約５．６％、約５．７％、約５．８％、約５．９％、約６．０％、約６．１％、約６．２％、約６．３％、約６．４％、約６．５％、約６．６％、約６．７％、約６．８％、約６．９％、約７．０％、約７．１％、約７．２％、約７．３％、約７．４％、約７．５％、約７．６％、約７．７％、約７．８％、約７．９％、約８．０％、約８．１％、約８．２％、約８．３％、約８．４％、約８．５％、約８．６％、約８．７％、約８．８％、約８．９％、約９．０％、約９．１％、約９．２％、約９．３％、約９．４％、約９．５％、約９．６％、約９．７％、約９．８％、約９．９％、約１０．０％、約１０．１％、約１０．２％、約１０．３％、約１０．４％、約１０．５％、約１０．６％、約１０．７％、約１０．８％、約１０．９％、約１１．０％、約１１．１％、約１１．２％、約１１．３％、約１１．４％、約１１．５％、約１１．６％、約１１．７％、約１１．８％、約１１．９％、約１２．０％、約１２．１％、約１２．２％、約１２．３％、約１２．４％、約１２．５％、約１２．６％、約１２．７％、約１２．８％、約１２．９％、約１３．０％、約１３．１％、約１３．２％、約１３．３％、約１３．４％、約１３．５％、約１３．６％、約１３．７％、約１３．８％、約１３．９％、約１４．０％、約１４．１％、約１４．２％、約１４．３％、約１４．４％、約１４．５％、約１４．６％、約１４．７％、約１４．８％、約１４．９％、約１５．０％、約１５．１％、約１５．２％、約１５．３％、約１５．４％、約１５．５％、約１５．６％、約１５．７％、約１５．８％、約１５．９％、約１６．０％、約１６．１％、約１６．２％、約１６．３％、約１６．４％、約１６．５％、約１６．６％、約１６．７％、約１６．８％、約１６．９％、約１７．０％、約１７．１％、約１７．２％、約１７．３％、約１７．４％、約１７．５％、約１７．６％、約１７．７％、約１７．８％、約１７．９％、約１８．０％、約１８．１％、約１８．２％、約１８．３％、約１８．４％、約１８．５％、約１８．６％、約１８．７％、約１８．８％、約１８．９％、約１９．０％、約１９．１％、約１９．２％、約１９．３％、約１９．４％、約１９．５％、約１９．６％、約１９．７％、約１９．８％、約１９．９％、又は約２０．０％である。

一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は、架橋ＳＰＦを含む。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は、架橋ＨＡを含む。ＳＰＦ断片は、別のＳＰＦ断片に、又はＨＡと架橋することができる。ＳＰＦ－ＳＰＦ、ＳＰＦ－ＨＡ、及びＨＡ－ＨＡ架橋種は、ゼロ長を含む、様々な長さの架橋剤を使用することにより得ることができる。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、架橋ＨＡ及び／又は架橋ＳＰＦを有するヒドロゲルの形態で提供することができる。架橋ＨＡ及び／又は架橋ＳＰＦ（又はＳＰＦ－ＨＡ架橋種）は、測定可能な架橋度を有することができる。本明細書中で使用されるように、用語「架橋度」は、架橋されたポリマー高分子中の単量体単位の数に対する、架橋単位（又は分子もしくは残基）の数を指す。一部の実施形態では、単量体単位は、ＳＰＦ中のアミノ酸である。一部の実施形態では、単量体単位は、ＨＡの二糖単量体単位である。このように、４％の架橋度を伴う架橋マトリックスポリマーを有する組成物は、１００の単量体単位毎に四つの架橋分子が平均してあることを意味する。すべての他のパラメータが等しい場合、架橋度が大きいほど、より硬いゲルとなる。本発明のいずれか一つの理論に限定されないが、ＨＡ及び／又はＳＰＦにおける架橋度によって、それから調製される、より強固な材料又は組成物が結果としてもたらされ得る。例えば、架橋度が高いほど、そのような材料は、身体中でより長く持続する可能性が高い。実際に、任意の一つの理論に限定されないが、架橋材料を含む生体適合性材料は、架橋度に依存して、変動する速度の生体再吸収性、生体吸収性、及び／又は生分解性を有し、ここで、架橋度は、生体再吸収、生体吸収、及び／又は生分解の速度に反比例する。さらに、本明細書中に記載される組織充填剤中のより大きな架橋度によって、そのような組織充填剤の親水性及び引き上げ能力（ｌｉｆｔｉｎｇｃａｐａｂｉｌｉｔｙ）が低下し得る。

非限定的な例では、約５％の架橋度を有する架橋ＳＰＦは、架橋ＳＰＦ中で、１００の単量体単位、例えば、アミノ酸毎に約５つの架橋部分を有する。

架橋度の非限定的な例は、約１％～約１５％、又は約２％～約１４％、又は約１％～約２％、約１．５％～約２．５％、又は約２％～約３％、又は約２．５％～約３．５％、又は約３％～約４％、又は約３．５％～約４．５％、又は約４％～約５％、又は約４．５％～約５．５％、又は約５％～約６％、又は約５．５％～約６．５％、又は約６％～約７％、又は約６．５％もしくは約７．５％、又は約７％～約８％、又は約７．５％もしくは約８．５％、又は約８％～約９％、又は約８．５％～約９．５％、又は約９％～約１０％、又は約９．５％～約１０．５％、又は約１０％～約１１％、又は約１０．５％～約１１．５％、又は約１１％～約１２％、又は約１１．５％～約１２．５％、又は約１２％～約１３％、又は約１２．５％～約１３．５％、又は約１３％～約１４％、又は約１３．５％～約１４．５％、又は約１４％～約１５％を含む。

一部の実施形態では、架橋度は、少なくとも１％である。一部の実施形態では、架橋度は、少なくとも２％である。一部の実施形態では、架橋度は、少なくとも３％である。一部の実施形態では、架橋度は、少なくとも４％である。一部の実施形態では、架橋度は、少なくとも５％である。一部の実施形態では、架橋度は、少なくとも６％である。一部の実施形態では、架橋度は、少なくとも７％である。一部の実施形態では、架橋度は、少なくとも８％である。一部の実施形態では、架橋度は、少なくとも９％である。一部の実施形態では、架橋度は、少なくとも１０％である。一部の実施形態では、架橋度は、少なくとも１１％である。一部の実施形態では、架橋度は、少なくとも１２％である。一部の実施形態では、架橋度は、少なくとも１３％である。一部の実施形態では、架橋度は、少なくとも１４％である。一部の実施形態では、架橋度は、少なくとも１５％である。

一部の実施形態では、本発明の組成物は、架橋ＳＰＦを含み、その架橋度は、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、少なくとも１３％、少なくとも１４％、又は少なくとも１５％である。一部の実施形態では、組成物は架橋ＳＰＦを含み、その架橋度は、最大１％、最大２％、最大３％、最大４％、最大５％、最大６％、最大７％、最大８％、最大９％、最大１０％、最大１１％、最大１２％、最大１３％、最大１４％、又は最大１５％である。一部の実施形態では、組成物は架橋ＳＰＦを含み、架橋度が約１％～約１５％、約２％～約１１％、約３％～約１０％、約１％～約５％、約１０％～約１５％、約１１％～約１５％、約６％～約１０％、又は約６％～約８％、又は約１％～約２％、約１．５％～約２．５％、又は約２％～約３％、又は約２．５％～約３．５％、又は約３％～約４％、又は約３．５％～約４．５％、又は約４％～約５％、又は約４．５％～約５．５％、又は約５％～約６％、又は約５．５％～約６．５％、又は約６％～約７％、又は約６．５％もしくは約７．５％、又は約７％～約８％、又は約７．５％もしくは約８．５％、又は約８％～約９％、又は約８．５％～約９．５％、又は約９％～約１０％、又は約９．５％～約１０．５％、又は約１０％～約１１％、又は約１０．５％～約１１．５％、又は約１１％～約１２％、又は約１１．５％～約１２．５％、又は約１２％～約１３％、又は約１２．５％～約１３．５％、又は約１３％～約１４％、又は約１３．５％～約１４．５％、又は約１４％～約１５％である。

一部の実施形態では、本発明の組成物は、架橋ＨＡを含み、その架橋度は、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、少なくとも１３％、少なくとも１４％、又は少なくとも１５％である。一部の実施形態では、組成物は架橋ＨＡを含み、その架橋度は、最大１％、最大２％、最大３％、最大４％、最大５％、最大６％、最大７％、最大８％、最大９％、最大１０％、最大１１％、最大１２％、最大１３％、最大１４％、又は最大１５％である。一部の実施形態では、組成物は架橋ＨＡを含み、その架橋度は、約１％～約１５％、約２％～約１１％、約３％～約１０％、約１％～約５％、約１０％～約１５％、約１１％～約１５％、約６％～約１０％、又は約６％～約８％、又は約１％～約２％、約１．５％～約２．５％、又は約２％～約３％、又は約２．５％～約３．５％、又は約３％～約４％、又は約３．５％～約４．５％、又は約４％～約５％、又は約４．５％～約５．５％、又は約５％～約６％、又は約５．５％～約６．５％、又は約６％～約７％、又は約６．５％もしくは約７．５％、又は約７％～約８％、又は約７．５％もしくは約８．５％、又は約８％～約９％、又は約８．５％～約９．５％、又は約９％～約１０％、又は約９．５％～約１０．５％、又は約１０％～約１１％、又は約１０．５％～約１１．５％、又は約１１％～約１２％、又は約１１．５％～約１２．５％、又は約１２％～約１３％、又は約１２．５％～約１３．５％、又は約１３％～約１４％、又は約１３．５％～約１４．５％、又は約１４％～約１５％である。

一部の実施形態では、本発明の組成物は、架橋ＳＰＦ－ＨＡを含み、その架橋度は、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、少なくとも１３％、少なくとも１４％、又は少なくとも１５％である。一部の実施形態では、組成物は架橋ＳＰＦ－ＨＡを含み、その架橋度は、最大１％、最大２％、最大３％、最大４％、最大５％、最大６％、最大７％、最大８％、最大９％、最大１０％、最大１１％、最大１２％、最大１３％、最大１４％、又は最大１５％である。一部の実施形態では、組成物は架橋ＳＰＦ－ＨＡを含み、その架橋度は、約１％～約１５％、約２％～約１１％、約３％～約１０％、約１％～約５％、約１０％～約１５％、約１１％～約１５％、約６％～約１０％、又は約６％～約８％、又は約１％～約２％、約１．５％～約２．５％、又は約２％～約３％、又は約２．５％～約３．５％、又は約３％～約４％、又は約３．５％～約４．５％、又は約４％～約５％、又は約４．５％～約５．５％、又は約５％～約６％、又は約５．５％～約６．５％、又は約６％～約７％、又は約６．５％もしくは約７．５％、又は約７％～約８％、又は約７．５％もしくは約８．５％、又は約８％～約９％、又は約８．５％～約９．５％、又は約９％～約１０％、又は約９．５％～約１０．５％、又は約１０％～約１１％、又は約１０．５％～約１１．５％、又は約１１％～約１２％、又は約１１．５％～約１２．５％、又は約１２％～約１３％、又は約１２．５％～約１３．５％、又は約１３％～約１４％、又は約１３．５％～約１４．５％、又は約１４％～約１５％である。

例えば、１モルのＨＡに対する１モルのＳＰＦを架橋することができ、このモルのＨＡは、約１ｋＤａ～約２ＭｋＤａの分子量を有することができる。一部の実施形態では、１００万モルのＨＡのに対する１モルのＳＰＦ（又はその逆）を架橋することができ、ここで、ＳＰＦは１００Ｄａ～３５０ｋＤａであることができ、それにより、各々のモルの任意のパーセンテージを架橋又は遊離させることができる。他のＳＰＦにＳＰＦを架橋させる方法は、一つ又は複数の工程を含むことができる。第一の工程では、エポキシド、例えばＢＤＤＥなどを、ＳＰＦ溶液に過剰で添加し、反応を進行させる。エポキシドは、ＳＰＦ高分子上の様々な基、例えばカルボキシル、アミン、アルコール、チオール、及び同様のものなどと反応して、連結、例えばエステル、第二級又は第三級アミン、エーテル、チオエーテル、及び同様のものなどをもたらすことができる。ＢＤＤＥの両方のエポキシドが、一つ又は複数のＳＰＦ高分子中の官能基と反応する場合、ＳＰＦは架橋される。一実施形態では、ＨＡの架橋は、Ｓｃｈａｎｔｅら、ＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅＰｏｌｙｍｅｒｓ（２０１１）８５：４６９－４８９において記載されるように、アルカリ性条件下でのＢＤＤＥとの反応を介して実施してもよく、ＨＡと架橋剤の間に共有結合をもたらす。改変度又は架橋度は、当技術分野において公知の方法に従って、ＮＭＲにより決定することができる（例、Ｅｄｓｍａｎｅｔａｌ．，Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｓｕｒｇ．（２０１２）３８：１１７０－１１７９）。

ペプチドを連結させる方法は、当技術分野において公知である。本明細書中に示されるオリゴマー及び／又は架橋ＳＰＦペプチド中への個々の単離ＳＰＦの結合は、当技術分野において周知の化学的コンジュゲーション手順により、例えば、ペプチド結合を作製することにより、縮合剤の使用、及び周知の二官能性架橋試薬を用いることにより行うことができる。コンジュゲーションは、いかなる介在基も含まない結合を含み、直接的（例、直接のペプチド結合）であることができる、又は結合が介在部分、例えばタンパク質又はペプチド（例、血漿アルブミン）、又は他のスペーサー分子を含み、間接的であることができる。例えば、結合は、ヘテロ二官能性又はホモ二官能性架橋剤、例えば、カルボジイミド、グルタルアルデヒド、Ｎ－スクシンイミジル３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）及び誘導体、ビス－マレイミド、４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート、及び同様のものを介することができる。

架橋はまた、コンジュゲートされる分子上の反応性基を利用することにより、外因性架橋剤を伴うことなく達成することができる。ペプチド分子を化学的に架橋するための方法は、当技術分野において一般的に公知であり、多数のヘテロ及びホモ二官能性薬剤が、例えば、米国特許第４，３５５，０２３号、第４，６５７，８５３号、第４，６７６，９８０号、第４，９２５，９２１号、及び第４，９７０，１５６号、ならびにＩｍｍｕｎｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣａｔａｌｏｇｕｅａｎｄＨａｎｄｂｏｏｋ、ＰｉｅｒｃｅＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．（１９８９）において記載されており、これらの各々が、参照により本明細書中に組み入れられる。架橋を含むそのようなコンジュゲーションは、ペプチドオリゴマー又はそれにコンジュゲートされるエンティティ、例えば、治療用薬剤、及び目的の物質を結合することが可能な部分などの所望の機能に実質的に影響を及ぼさないように、実施されるべきである。

当業者であれば、代わりのリンカーを、ＳＰＦペプチドを結合するために使用することができ、例えば、化学的なタンパク質架橋剤の使用を理解するであろう。例えば、ホモ二官能性架橋剤、例えばジスクシンイミジル－スベリミデート－ジヒドロクロライド；ジメチル－アジピミデート－ジヒドロクロライド；１，５，－２，４ジニトロベンゼンなど、又はヘテロ二官能性架橋剤、例えばＮ－ヒドロキシスクシンイミジル２，３－ジブロモプロピオネート；１－エチル－３－［３－ジメチルアミノプロピル］カルボジイミドジヒドロクロライド；及びスクシンイミジル－４－［ｎ－マレイミドメチル］－シクロヘキサン－１－カルボキシレートなど。

本発明はまた、ＨＡに架橋されたＳＰＦを含む組成物を提供する。ＨＡへのＳＰＦの架橋は、様々な方法、例えば、エポキシド方法、過ヨウ素酸方法、及び／又はトレシルクロライド方法により達成することができる。一部の実施形態では、ＳＰＦは、エポキシド、例えば、多官能性エポキシドを使用してＨＡに架橋される。例えば、二官能性エポキシド、例えば１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）などを使用することができる。他の多官能性エポキシドは、限定されないが、ポリグリセロールポリグリシジルエーテル（ＰＧＰＧＥ）、ペンタエリスリトールポリグリシジルエーテル（ＰＥＰＧＥ）、及びジグリセロールポリグリシジルエーテル（ＤＧＰＧＥ）を含む。ＳＰＦとＨＡの間のゼロ長架橋はまた、活性化剤を使用して提供される。

他の高分子、例えば、ＨＡにＳＰＦを架橋する方法は、一つ又は複数の工程を含むことができる。第一の工程では、エポキシド、例えばＢＤＤＥなどを、ＳＰＦ溶液に過剰で添加し、反応を進行させる。エポキシドは、ＳＰＦ高分子上の様々な基、例えばカルボキシル、アミン、アルコール、チオール、及び同様のものなどと反応して、連結、例えばエステル、第二級又は第三級アミン、エーテル、チオエーテル、及び同様のものなどをもたらすことができる。一つだけのエポキシドがＳＰＦと反応した場合、別のＳＰＦ、又は異なる高分子、例えば、ＨＡ、又は同様のものとの架橋のために利用可能なＳＰＦに付着される遊離エポキシドが依然として存在する。試薬を添加する順序は、変動させることができる。例えば、ＢＤＤＥを最初に、ＨＡに添加することができ、次に、ＳＰＦを添加して、架橋ＳＰＦ－ＨＡを形成する。一部の実施形態では、ＳＰＦ及びＨＡを最初に混合することができ、次に、ＢＤＤＥを混合物に添加する。一部の実施形態では、ＳＰＦ及びＨＡの混合物にＢＤＤＥを添加することによって、ＳＰＦに対する架橋ＳＰＦ、ＨＡに対する架橋ＨＡ、及びＨＡに対する架橋ＳＰＦを含む組成物がもたらされる。

一部の実施形態では、架橋ＳＰＦ－ＨＡは、一つ又は複数の工程を含むトレシルクロライド方法を使用して調製することができる。一つの工程において、架橋ＨＡ及び／又は非架橋ＨＡは、トレシルクロライド、即ち、２，２，２－トリフルオロエタンスルフォニルクロライド、又は任意の他の適切な酸塩化物を用いて活性化することができる。トレシルクロライドは、例えば、架橋及び／又は非架橋ＨＡを含む、塩基／溶媒溶液、例えば、ピリジン／アセトン溶液に滴下される。一部の実施形態では、トレシルクロライドは、架橋及び／又は非架橋ＨＡの糖環上のヒドロキシル基の四つ全てと反応性である。任意の工程において、結果として得られるＨＡ－トレシレートを洗浄する。工程において、ＳＰＦ断片を添加し、これはＨＡ－トレシレートと反応する。

一部の実施形態では、トレシルクロライド方法は、架橋及び／又は非架橋ＨＡにＳＰＦを直接付着させるために使用することができる。他の実施形態では、トレシルクロライド方法は、スペーサー、例えば、６－アミノ－１－ヘキサノールを介して架橋及び／又は非架橋ＨＡにＳＰＦを付着させるために使用することができる。一部の実施形態では、スペーサーを、最初に、トレシル活性化及びカップリングを介して架橋又は非架橋ＨＡにカップリングさせることができる。スペーサーにＳＰＦをカップリングさせるために、トレシル活性化及びカップリングをその後に繰り返す。任意の適切なスペーサー、即ち、６－アミノ－１－ヘキサノールに類似した少なくともいくつかの特徴を有するスペーサー、即ち、ＨＡ－トレシレートにカップリングするための一級アミン、ならびに反応基、例えば、ＳＰＦの活性化及びカップリングのためのヒドロキシル基を使用することができる。

一部の実施形態では、トレシルクロライドは、ＨＡを架橋しない。しかし、トレシルクロライド方法において使用されるＨＡマトリックスは、追加の安定性のために架橋されてもよい。架橋は、上に記載されるように、多官能性エポキシド、例えばＢＤＤＥなどを使用することによりもたらすことができる。架橋は、ペプチドカップリングの前又は後のいずれかに行うことができる。

トレシルクロライド方法は、他の固定化方法を上回る利点を有し、例えば、非常に穏やかな条件下での効率的なカップリング、活性化及びカップリングの間での副反応がないことを含み、ＲＧＤペプチドを、ＨＡ支持体の炭素原子に直接結合することができる。

様々な実施形態において、本明細書中に記載される組織充填剤は、ＨＡベースであるゲル及びヒドロゲルを含み得る。本明細書中で使用されるＨＡベースは、架橋ＨＡを含む組成物又は材料、及び架橋ＨＡと一つ又は複数の他の架橋ポリマーを含む組成物を指す。また、ＨＡは、ヒアルロン酸及びそのヒアルロン酸塩のいずれかを指すことができ、限定されないが、ヒアルロン酸ナトリウム（ＮａＨＡ）、ヒアルロン酸カリウム、ヒアルロン酸マグネシウム、ヒアルロン酸カルシウム、及びこれらの組合せを含む。二つ以上の生体適合性ポリマーの使用は、特に、本明細書から除外されない。本明細書中に記載される組織充填剤は、ゲル及びヒドロゲルの形態であることができ、ＨＡ及び／又はＳＰＦに加えて、二つ以上の生体適合性ポリマー、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、又はそれ以上の生体適合性ポリマーを含むことができる。適切な生体適合性ポリマーは、多糖（例、ＨＡ、キトサン、コンドロイチン硫酸、アルギン酸、カルボキシメチルセルロース）、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（乳酸）、ポリ（ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（メチルメタクリレート）、ＳＰＦ以外のタンパク質（例、エラスチン及びコラーゲン）を含む。

本明細書中に記載されるＨＡは、分子間架橋されていてもよい。一部の実施形態では、架橋は、ＨＡの物理的特性を安定化させる。一部の実施形態では、本発明は、多官能性エポキシドを使用して安定した架橋ＨＡの形成を提供する。本明細書中で使用されるように、用語「多官能性」エポキシドは、存在する二つ又はそれ以上のエポキシド、例えば低級脂肪族エポキシド又はそれらの対応するエピハロヒドリンなどを有する化学試薬を意味する。多官能性エポキシドの例は、限定されないが、ジエポキシド、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、ポリグリセロールポリグリシジルエーテル（ＰＧＰＧＥ）、ペンタエリスリオールポリグリシジルエーテル（ＰＥＰＧＥ）、及びジグリセロールポリグリシジルエーテル（ＤＧＰＧＥ）を含む。好ましい実施形態では、ジエポキシドＢＤＤＥは、架橋剤として使用される。ＨＡの糖部分は、ＢＤＤＥの二つのエポキシドを介して架橋する。他の実施形態では、架橋剤は、アルキルジエポキシ体、例えば１，３－ブタジエンジエポキシド、１，２，７，８－ジエポキシオクタン、１，５－ヘキサジエンジエポキシド及び同様のものなど、ジグリシジルエーテル体、例えばエチレングリコールジグリシジルエーテル、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル、ビスフェノールＡジグリシジルエーテル及び同様のものなど、ジビニルスルホン、ならびにエピクロロヒドリンを含む。これらの間で、特に、ジビニルスルホン、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル、及びエチレングリコールジグリシジルエーテルを適切に使用することができる。本発明において、二つ又はそれ以上の架橋剤を、適宜それらを組み合わせることにより使用してもよい。

一部の実施形態では、ＨＡは、ＨＡに架橋されている。ＨＡをＨＡに架橋する方法は、一つ又は複数の工程を含むことができる。第一の工程では、エポキシド、例えばＢＤＤＥなどをＨＡ溶液に過剰で添加し、反応を進行させる。エポキシドは、ＨＡの糖環上の１～４のヒドロキシル基と反応して、１～４のエーテル結合を形成することができる。ヒドロキシル基と反応させることに代えて、又はそれに加えて、エポキシドは、多糖のカルボン酸と反応し、エステル結合を形成することができる。ＢＤＤＥの両方のエポキシドが、一つ又は複数のＨＡ高分子の糖環中の官能基と反応する場合、ＨＡは架橋される。

一部の実施形態では、架橋剤は、ゼロ長架橋、例えば、活性化剤、例えば１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）、又はＢＣＤＩなどを用いることにより得られる化学結合などであることができる。一部の実施形態では、ゼロ長架橋活性化剤は、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）、スルホ－ＮＨＳ（又はスルホニル－ＮＨＳ）又は４－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の存在においてＨＡと反応させる。一部の実施形態では、本明細書中に記載されるゲル及びヒドロゲルは、少なくとも一つの架橋可能な生体適合性ポリマー、例えばＨＡ及び／又はタンパク質など、例えば、ＳＰＦタンパク質、又は任意の他の追加のタンパク質などを、少なくとも一つの架橋活性化剤と反応させることにより形成される。

一部の実施形態では、架橋ＳＰＦ－ＳＰＦ、架橋ＳＰＦ－ＨＡ、及び／又は架橋ＨＡ－ＨＡは、適用後、例えば、組織充填剤として、皮内、皮下、又は一般的に、皮膚充填剤として注入された後に、様々な滞留時間を有することができる。一部の実施形態では、滞留時間は、別のＳＰＦ巨大分子への、又はＨＡへの付着のために利用可能である、ＳＰＦ中の反応基の数に依存して、過ヨウ素酸ナトリウム方法において影響され得る。ＨＡに付着することができる、ＳＰＦ中の反応性基の例は、第一級アミンである。二つの反応性基、例えば二つの第一級アミンなどを含むＳＰＦは、それ自体で、過ヨウ素酸方法においてＨＡを架橋し、それにより、より安定なコンジュゲートを作製することができる。他の実施形態では、一つだけの反応基がＳＰＦ中に、例えば、一つだけの第一級アミンが、例えば、アミノ末端に存在している場合、ＳＰＦ－ＨＡ架橋が低下し、より生分解性のマトリックスがもたらされる。

一部の実施形態では、ＢＤＤＥ架橋ＨＡは、適用後、例えば、組織充填剤、皮内、皮下、又は一般的に皮膚充填剤として注入された後、変動する滞留時間を有することができる。一部の実施形態では、ＢＤＤＥ架橋ＨＡは、架橋の量に依存して、１日間～少なくとも３０日間、組織及び／又は皮膚組織中に存続することができる。架橋ＨＡの変動する滞留時間は、エポキシド架橋の間に加水分解可能な結合を導入することにより調節することができる。一部の実施形態では、より低いｐＨでエポキシドと架橋された材料は、より大きな量のエステル結合形成を有し、従って、より迅速に加水分解可能である。

一実施形態では、架橋剤は、ゼロ長架橋活性化剤である。一般的に、ゼロ長架橋活性化剤は、任意の追加のスペーサーアーム原子を添加することを伴わずに、ポリマーをカップリングさせ、従って、ゼロ長架橋活性化剤は、架橋ポリマーマトリックス中に組み入れられない。適切なゼロ長架橋剤は、カルボジイミド、例えば、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）及びＢＣＤなどを含む。非水溶性カルボジイミドは、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）及びジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）を含み、それらも適切であり得る。

カルボキシレートとアルコール又はアミン官能基の間のカルボジイミド媒介カップリングは、周囲温度、中性ｐＨ、及び水性条件下で容易に進行する。中性ｐＨは、例えば、約６．０～約８．０の間、例えば約６．５～約７．５の間、例えば約７．０などであることができる。典型的には、水中で、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を使用して、カルボキシレートとアルコールの間のエステル化、又はカルボキシレートとアミンの間のアミド化を媒介することができる。このように、架橋ＨＡは、ＨＡ上に存在する反応性基を（例、カルボキシレート及びアルコール）を利用することにより形成される。また、タンパク質、例えば、ＳＰＦタンパク質上のアミン基の高い反応性を利用して、ＨＡのカルボキシレート基を伴うタンパク質のリジン側鎖間のアミド化が達成されて、ＨＡタンパク質架橋ヒドロゲルを形成する。架橋剤及び未反応ポリマーは、透析により除去することができる。

一部の実施形態では、ＥＤＣが、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）又はスルホニル－ＮＨＳ（スルホ－ＮＨＳ）（本明細書中では、まとめて「ＮＨＳ」として言及する）との組み合わせにおいて使用される。ＮＨＳは、ＥＤＣにより形成される反応性中間体を安定化させる；このように、ＮＨＳの添加によって、ＥＤＣのカップリング効率を増加させることができる。あるいは、４－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）を使用して、カップリング反応を触媒することができる。

一部の実施形態では、本発明のＨＡベースの組織充填剤は、架橋ＨＡベースの組成物及び少なくとも部分的に架橋されたＨＡベース組成物を含む。本明細書中で使用される非架橋ＨＡは、真の非架橋（例、「遊離」）ＨＡ鎖、ならびに、一般的には可溶性液体の形態中にある軽度に架橋された鎖及びそれらの断片を指す。

一部の実施形態では、本発明のヒドロゲル組成物は、ＨＡとＳＰＦの間に少なくともいくらかの架橋を含む。

非限定的な例示的な実施形態
一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性、及び約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量、ヒアルロン酸（ＨＡ）、水、及び約０．０５％～約０．５％の間のリドカイン、例えば、約０．３％リドカインを有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含む生体適合性組織及び／又は皮膚充填剤に関し；ここで、最大１００％ｗ／ｗのＳＰＦの部分が架橋され、ならびに最大１００％ｗ／ｗのＨＡの部分が架橋され、この架橋が、ＳＰＦからＳＰＦ、ＳＰＦからＨＡ、及びＨＡからＨＡの一つ又は複数の間で生じ；この架橋は、エポキシ由来架橋剤、例えば、ＢＤＤＥを使用した結果として生じ、最大１５％の架橋度を伴った。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性、及び約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量、ヒアルロン酸（ＨＡ）、水、及び約０．０５％～約０．５％の間のリドカイン、例えば、約０．３％リドカインを有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含む生体適合性組織及び／又は皮膚充填剤に関し；ここで、最大１００％ｗ／ｗのＳＰＦの部分が架橋され、ならびに最大１００％ｗ／ｗのＨＡの部分が架橋され、この架橋が、ＳＰＦからＳＰＦ、ＳＰＦからＨＡ、及びＨＡからＨＡの一つ又は複数の間で生じ；この架橋は、エポキシ由来架橋剤、例えば、ＢＤＤＥを使用した結果として生じ、最大１５％の架橋度を伴った。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性、及び約６ｋＤａ～約１７ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量、ヒアルロン酸（ＨＡ）、水、及び約０．０５％～約０．５％の間のリドカイン、例えば、約０．３％リドカインを有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含む生体適合性組織及び／又は皮膚充填剤に関し；ここで、最大１００％ｗ／ｗのＳＰＦの部分が架橋され、ならびに最大１００％ｗ／ｗのＨＡの部分が架橋され、この架橋が、ＳＰＦからＳＰＦ、ＳＰＦからＨＡ、及びＨＡからＨＡの一つ又は複数の間で生じ；この架橋は、エポキシ由来架橋剤、例えば、ＢＤＤＥを使用した結果として生じ、最大１５％の架橋度を伴った。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性、及び約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量、ヒアルロン酸（ＨＡ）、水、及び約０．０５％～約０．５％の間のリドカイン、例えば、約０．３％リドカインを有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含む生体適合性組織及び／又は皮膚充填剤に関し；ここで、最大１００％ｗ／ｗのＳＰＦの部分が架橋され、ならびに最大１００％ｗ／ｗのＨＡの部分が架橋され、この架橋が、ＳＰＦからＳＰＦ、ＳＰＦからＨＡ、及びＨＡからＨＡの一つ又は複数の間で生じ；この架橋は、エポキシ由来架橋剤、例えば、ＢＤＤＥを使用した結果として生じ、最大１５％の架橋度を伴った。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性、及び約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量、ヒアルロン酸（ＨＡ）、水、及び約０．０５％～約０．５％の間のリドカイン、例えば、約０．３％リドカインを有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含む生体適合性組織及び／又は皮膚充填剤に関し；ここで、最大１００％ｗ／ｗのＳＰＦの部分が架橋され、ならびに最大１００％ｗ／ｗのＨＡの部分が架橋され、この架橋が、ＳＰＦからＳＰＦ、ＳＰＦからＨＡ、及びＨＡからＨＡの一つ又は複数の間で生じ；この架橋は、エポキシ由来架橋剤、例えば、ＢＤＤＥを使用した結果として生じ、最大１５％の架橋度を伴った。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性、ヒアルロン酸（ＨＡ）、水、及び約０．０５％～約０．５％の間のリドカイン、例えば、約０．３％リドカインを有する低分子量絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含む生体適合性組織及び／又は皮膚充填剤に関し；ここで、最大１００％ｗ／ｗのＳＰＦの部分が架橋され、ならびに最大１００％ｗ／ｗのＨＡの部分が架橋され、この架橋が、ＳＰＦからＳＰＦ、ＳＰＦからＨＡ、及びＨＡからＨＡの一つ又は複数の間で生じ；この架橋は、エポキシ由来架橋剤、例えば、ＢＤＤＥを使用した結果として生じ、最大１５％の架橋度を伴った。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性、ヒアルロン酸（ＨＡ）、水、及び約０．０５％～約０．５％の間のリドカイン、例えば、約０．３％リドカインを有する中分子量絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含む生体適合性組織及び／又は皮膚充填剤に関し；ここで、最大１００％ｗ／ｗのＳＰＦの部分が架橋され、ならびに最大１００％ｗ／ｗのＨＡの部分が架橋され、この架橋が、ＳＰＦからＳＰＦ、ＳＰＦからＨＡ、及びＨＡからＨＡの一つ又は複数の間で生じ；この架橋は、エポキシ由来架橋剤、例えば、ＢＤＤＥを使用した結果として生じ、最大１５％の架橋度を伴った。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する低分子量絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、約１．５～約３．０の間の多分散性、ヒアルロン酸（ＨＡ）、水、及び約０．０５％～約０．５％の間のリドカイン、例えば、約０．３％リドカインを有する中分子量絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含む生体適合性組織及び／又は皮膚充填剤に関し；ここで、最大１００％ｗ／ｗのＳＰＦの部分が架橋され、ならびに最大１００％ｗ／ｗのＨＡの部分が架橋され、この架橋が、ＳＰＦからＳＰＦ、ＳＰＦからＨＡ、及びＨＡからＨＡの一つ又は複数の間で生じ；この架橋は、エポキシ由来架橋剤、例えば、ＢＤＤＥを使用した結果として生じ、最大１５％の架橋度を伴い；ここで、低分子量ＳＰＦと中分子量ＳＰＦの間のｗ／ｗ比が、約３：１である。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性、ヒアルロン酸（ＨＡ）、水、及び約０．０５％～約０．５％の間のリドカイン、例えば、約０．３％リドカインを有する高分子量絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含む生体適合性組織及び／又は皮膚充填剤に関し；ここで、最大１００％ｗ／ｗのＳＰＦの部分が架橋され、ならびに最大１００％ｗ／ｗのＨＡの部分が架橋され、この架橋が、ＳＰＦからＳＰＦ、ＳＰＦからＨＡ、及びＨＡからＨＡの一つ又は複数の間で生じ；この架橋は、エポキシ由来架橋剤、例えば、ＢＤＤＥを使用した結果として生じ、最大１５％の架橋度を伴った。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性、及び約１ｋＤａ～約２５０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量、ヒアルロン酸（ＨＡ）、水、及び約０．０５％～約０．５％の間のリドカイン、例えば、約０．３％リドカインを有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含む生体適合性組織及び／又は皮膚充填剤に関し；ここで、最大１００％ｗ／ｗのＳＰＦの部分が架橋され、ならびに最大１００％ｗ／ｗのＨＡの部分が架橋され、この架橋が、ＳＰＦからＳＰＦ、ＳＰＦからＨＡ、及びＨＡからＨＡの一つ又は複数の間で生じ；この架橋は、活性化剤、例えば、ＢＣＤＩを使用した結果として生じるゼロ長架橋を含み、最大１５％の架橋度を伴った。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性、及び約５ｋＤａ～約１５０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量、ヒアルロン酸（ＨＡ）、水、及び約０．０５％～約０．５％の間のリドカイン、例えば、約０．３％リドカインを有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含む生体適合性組織及び／又は皮膚充填剤に関し；ここで、最大１００％ｗ／ｗのＳＰＦの部分が架橋され、ならびに最大１００％ｗ／ｗのＨＡの部分が架橋され、この架橋が、ＳＰＦからＳＰＦ、ＳＰＦからＨＡ、及びＨＡからＨＡの一つ又は複数の間で生じ；この架橋は、活性化剤、例えば、ＢＣＤＩを使用した結果として生じるゼロ長架橋を含み、最大１５％の架橋度を伴った。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性、及び約６ｋＤａ～約１７ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量、ヒアルロン酸（ＨＡ）、水、及び約０．０５％～約０．５％の間のリドカイン、例えば、約０．３％リドカインを有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含む生体適合性組織及び／又は皮膚充填剤に関し；ここで、最大１００％ｗ／ｗのＳＰＦの部分が架橋され、ならびに最大１００％ｗ／ｗのＨＡの部分が架橋され、この架橋が、ＳＰＦからＳＰＦ、ＳＰＦからＨＡ、及びＨＡからＨＡの一つ又は複数の間で生じ；この架橋は、活性化剤、例えば、ＢＣＤＩを使用した結果として生じるゼロ長架橋を含み、最大１５％の架橋度を伴った。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性、及び約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量、ヒアルロン酸（ＨＡ）、水、及び約０．０５％～約０．５％の間のリドカイン、例えば、約０．３％リドカインを有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含む生体適合性組織及び／又は皮膚充填剤に関し；ここで、最大１００％ｗ／ｗのＳＰＦの部分が架橋され、ならびに最大１００％ｗ／ｗのＨＡの部分が架橋され、この架橋が、ＳＰＦからＳＰＦ、ＳＰＦからＨＡ、及びＨＡからＨＡの一つ又は複数の間で生じ；この架橋は、活性化剤、例えば、ＢＣＤＩを使用した結果として生じるゼロ長架橋を含み、最大１５％の架橋度を伴った。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性、及び約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの範囲の平均重量平均分子量、ヒアルロン酸（ＨＡ）、水、及び約０．０５％～約０．５％の間のリドカイン、例えば、約０．３％リドカインを有する絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含む生体適合性組織及び／又は皮膚充填剤に関し；ここで、最大１００％ｗ／ｗのＳＰＦの部分が架橋され、ならびに最大１００％ｗ／ｗのＨＡの部分が架橋され、この架橋が、ＳＰＦからＳＰＦ、ＳＰＦからＨＡ、及びＨＡからＨＡの一つ又は複数の間で生じ；この架橋は、活性化剤、例えば、ＢＣＤＩを使用した結果として生じるゼロ長架橋を含み、最大１５％の架橋度を伴った。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性、ヒアルロン酸（ＨＡ）、水、及び約０．０５％～約０．５％の間のリドカイン、例えば、約０．３％リドカインを有する低分子量絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含む生体適合性組織及び／又は皮膚充填剤に関し；ここで、最大１００％ｗ／ｗのＳＰＦの部分が架橋され、ならびに最大１００％ｗ／ｗのＨＡの部分が架橋され、この架橋が、ＳＰＦからＳＰＦ、ＳＰＦからＨＡ、及びＨＡからＨＡの一つ又は複数の間で生じ；この架橋は、活性化剤、例えば、ＢＣＤＩを使用した結果として生じるゼロ長架橋を含み、最大１５％の架橋度を伴った。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性、ヒアルロン酸（ＨＡ）、水、及び約０．０５％～約０．５％の間のリドカイン、例えば、約０．３％リドカインを有する中分子量絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含む生体適合性組織及び／又は皮膚充填剤に関し；ここで、最大１００％ｗ／ｗのＳＰＦの部分が架橋され、ならびに最大１００％ｗ／ｗのＨＡの部分が架橋され、この架橋が、ＳＰＦからＳＰＦ、ＳＰＦからＨＡ、及びＨＡからＨＡの一つ又は複数の間で生じ；この架橋は、活性化剤、例えば、ＢＣＤＩを使用した結果として生じるゼロ長架橋を含み、最大１５％の架橋度を伴った。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する低分子量絹タンパク質断片（ＳＰＦ）、約１．５～約３．０の間の多分散性、ヒアルロン酸（ＨＡ）、水、及び約０．０５％～約０．５％の間のリドカイン、例えば、約０．３％リドカインを有する中分子量絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含む生体適合性組織及び／又は皮膚充填剤に関し；ここで、最大１００％ｗ／ｗのＳＰＦの部分が架橋され、ならびに最大１００％ｗ／ｗのＨＡの部分が架橋され、この架橋が、ＳＰＦからＳＰＦ、ＳＰＦからＨＡ、及びＨＡからＨＡの一つ又は複数の間で生じ；この架橋は、活性化剤、例えば、ＢＣＤＩを使用した結果として生じるゼロ長架橋を含み、最大１５％の架橋度を伴い；ここで、低分子量ＳＰＦと中分子量ＳＰＦの間のｗ／ｗ比が、約３：１である。

一実施形態では、本発明は、約１．５～約３．０の間の多分散性、ヒアルロン酸（ＨＡ）、水、及び約０．０５％～約０．５％の間のリドカイン、例えば、約０．３％リドカインを有する高分子量絹タンパク質断片（ＳＰＦ）を含む生体適合性組織及び／又は皮膚充填剤に関し；ここで、最大１００％ｗ／ｗのＳＰＦの部分が架橋され、ならびに最大１００％ｗ／ｗのＨＡの部分が架橋され、この架橋が、ＳＰＦからＳＰＦ、ＳＰＦからＨＡ、及びＨＡからＨＡの一つ又は複数の間で生じ；この架橋は、活性化剤、例えば、ＢＣＤＩを使用した結果として生じるゼロ長架橋を含み、最大１５％の架橋度を伴った。

一実施形態では、本発明は、表１６Ｂ中に記載される生体適合性組織及び／又は皮膚充填剤製剤に関する。

（外１９）

追加の薬剤
一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、活性薬剤、例えば薬物などを含む。一部の実施形態では、活性薬剤は、酵素阻害剤、麻酔剤、医療用神経毒、酸化防止剤、抗感染剤、抗炎症剤、血管拡張剤、紫外（ＵＶ）光遮断剤（例、入れ墨用染料、インク、又は顔料）、反射剤、ホルモン、免疫抑制剤、及びこれらの組合せの一つ又は複数であることができる。本明細書中に記載される組織充填剤は、酵素阻害剤、麻酔剤、医療用神経毒（例、ボツリヌス毒素及びクロストリジウム毒素）、酸化防止剤、抗感染剤（例、抗生物質）、血管拡張剤、染料（例、入れ墨用インク又は顔料）、反射剤、抗炎症剤、紫外（ＵＶ）光遮断剤、染料、ホルモン、免疫抑制剤、及びこれらの組合せからなる群から選択される活性薬剤を含むことができる。

一部の実施形態では、免疫抑制剤は、ラパマイシン、又はラパマイシン様化合物である。

一部の実施形態では、活性薬剤は、ペニシリン（例、ペニシリンＶ、アモキシシリン）、エリスロマイシン（例、エリスロマイシンステアリン酸）、リンコサミド（例、クリンダマイシン）、及びセファロスポリン（例、セファレキシン）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される抗生物質であってもよい。

一部の実施形態では、活性薬剤は、ニトログリセリン、ラベタロール、トラジド、硝酸イソソルビド、四硝酸ペンタエリスリトール、ジギタリス、ヒドララジン、ジアゾキシド、アムリノン、Ｌ－アルギニン、硫酸バメタン、フマル酸ベンシクラン、ヘミコハク酸ベンフロジル、ニコチン酸ベンジル、塩酸ブフロメジル、塩酸ブフェニン、塩酸ブタラミン、クエン酸セチエジル、マレイン酸シネパジド、シクランデレート、ジクロロ酢酸ジイソプロピルアンモニウム、ニコチン酸エチル、ヘプロニケート、ニコチン酸ヘキシル、酒石酸イフェンプロジル、ニコチン酸イノシトール、塩酸イソクスプリン、カリジノゲナーゼ、ニコチン酸メチル、シュウ酸ナフチドロフリル、クエン酸ニカメタ酸、ニセリトロール、ニコボキシル、ニコフラノース、ニコチニルアルコール、ニコチニルアルコール、一酸化窒素、ノニバミド、オキシペンチリン、パパベリン、パパベロリン、ペンチフィリン、ペルオキシナイトライト、ピナシジル、ピプラテコール、プロペントフィチン、ラウバシン、スロクチジル、ティースプリン、チモキサミン塩酸塩、ニコチン酸トコフェロール、トラゾリン、ニコチン酸キサンチノール、ジアゾキシド、ヒドララジン、ミノキシジル、ニトロプルシドナトリウム、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される血管拡張剤であってもよい。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、重量による、少なくとも０．０１％、又は少なくとも０．０２％、又は少なくとも０．０３％、又は少なくとも０．０４％、又は少なくとも０．０５％、又は少なくとも０．０６％、又は少なくとも０．０７％、又は少なくとも０．０８％、又は少なくとも０．０９％、又は少なくとも０．１％、又は少なくとも０．２％、又は少なくとも０．３％、又は少なくとも０．４％、又は少なくとも０．５％、又は少なくとも０．６％、又は少なくとも０．７％、又は少なくとも０．８％、又は少なくとも０．９％、又は少なくとも１．０％、又は少なくとも１．５％、又は少なくとも２．０％、又は少なくとも２．５％、又は少なくとも３．０％、又は少なくとも３．５％、又は少なくとも４．０％、又は少なくとも４．５％、又は少なくとも５．０％、又は少なくとも５．５％、又は少なくとも６．０％、又は少なくとも６．５％、又は少なくとも７．０％、又は少なくとも７．５％、又は少なくとも８．０％、又は少なくとも８．５％、又は少なくとも９．０％、又は少なくとも９．５％、又は少なくとも１０％、又は少なくとも１５％、又は少なくとも２０％、又は少なくとも２５％、又は少なくとも３０％、又は少なくとも３５％、又は少なくとも４０％、又は少なくとも４５％、又は少なくとも５０％の一濃度で活性薬剤を含んでもよい。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、重量による、最大０．０１％、又は最大０．０２％、又は最大０．０３％、又は最大０．０４％、又は最大０．０５％、又は最大０．０６％、又は最大０．０７％、又は最大０．０８％、又は最大０．０９％、又は最大０．１％、又は最大０．２％、又は最大０．３％、又は最大０．４％、又は最大０．５％、又は最大０．６％、又は最大０．７％、又は最大０．８％、又は最大０．９％、又は最大１．０％、又は最大１．５％、又は最大２．０％、又は最大２．５％、又は最大３．０％、又は最大３．５％、又は最大４．０％、又は最大４．５％、又は最大５．０％、又は最大５．５％、又は最大６．０％、又は最大６．５％、又は最大７．０％、又は最大７．５％、又は最大８．０％、又は最大８．５％、又は最大９．０％、又は最大９．５％、又は最大１０％、又は最大１５％、又は最大２０％、又は最大２５％、又は最大３０％、又は最大３５％、又は最大４０％、又は最大４５％、又は最大５０％の一濃度で活性薬剤を含んでもよい。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、重量による、約０．０１％～約０．１％、又は約０．０５％～約０．１５％、又は約０．１％～約０．２％、又は約０．１５％～約０．２５％、又は約０．２％～約０．３％、又は約０．２５％～約０．３５％、又は約０．３％～約０．４％、又は約０．３５％～約０．４５％、又は約０．４％～約０．５％、又は約０．４５％～約０．５５％、又は約０．５％～約０．６％、又は約０．５５％～約０．６５％、又は約０．６％～約０．７％、又は約０．６５％～約０．７５％、又は約０．７％～約０．８％、又は約０．７５％～約０．８５％、又は約０．８％～約０．９％、又は約０．８５％～約０．９５％、又は約１％～約２％、又は約１．５％～約２．５％、又は約２％～約３％、又は約２．５％～約３．５％、又は約３％～約４％、又は約３．５％～約４．５％、又は約４％～約５％、又は約４．５％～約５．５％、又は約５％～約６％、又は約５．５％～約６．５％、又は約６％～約７％、又は約６．５％～約７．５％、又は約７％～約８％、又は約７．５％～約８．５％、又は約８％～約９％、又は約８．５％～約９．５％、又は約９％～約１０％、又は約１０％～約１５％、又は約１５％～約２０％、又は約２０％～約２５％、又は約２５％～約３０％、又は約３０％～約３５％、又は約３５％～約４０％、又は約４０％～約４５％、又は約４５％～約５０％の一濃度で活性薬剤を含んでもよい。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、重量による、約０．０１％、又は約０．０２％、又は約０．０３％、又は約０．０４％、又は約０．０５％、又は約０．０６％、又は約０．０７％、又は約０．０８％、又は約０．０９％、又は約０．１％、又は約０．２％、又は約０．３％、又は約０．４％、又は約０．５％、又は約０．６％、又は約０．７％、又は約０．８％、又は約０．９％、又は約１．０％、又は約１．５％、又は約２．０％、又は約２．５％、又は約３．０％、又は約３．５％、又は約４．０％、又は約４．５％、又は約５．０％、又は約５．５％、又は約６．０％、又は約６．５％、又は約７．０％、又は約７．５％、又は約８．０％、又は約８．５％、又は約９．０％、又は約９．５％、又は約１０％、又は約１１％、又は約１２％、又は約１３％、又は約１４％、又は約１５％、又は約１６％、又は約１７％、又は約１８％、又は約１９％、又は約２０％、又は約２１％、又は約２２％、又は約２３％、又は約２４％、又は約２５％、又は約２６％、又は約２７％、又は約２８％、又は約２９％、又は約３０％、又は約３１％、又は約３２％、又は約３３％、又は約３４％、又は約３５％、又は約３６％、又は約３７％、又は約３８％、又は約３９％、又は約４０％、又は約４１％、又は約４２％、又は約４３％、又は約４４％、又は約４５％、又は約４６％、又は約４７％、又は約４８％、又は約４９％、又は約５０％の一濃度で活性薬剤を含んでもよい。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、線維症阻害剤を含む。一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤はさらに、治療部位中又はその周りの病理学的プロセスに対する阻害効果を有するように作用する化合物を含み得る。特定の態様では、活性薬剤は、以下の化合物のクラスの一つから選択され得る：抗炎症剤（例、デキサメタゾン、コルチゾン、フルドロコルチゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、６α－メチルプレドニゾロン、トリアムシノロン、ベタメタゾン、及びアスピリン）。

一部の実施形態では、活性薬剤は、限定されないが、酸化防止剤及び酵素であり得る。一実施形態では、活性薬剤は、限定されないが、セレン、ユビキノン誘導体、チオール系酸化防止剤、糖含有酸化防止剤、ポリフェノール類、植物抽出物、コーヒー酸、アピゲニン、ピクノジェノール、レスベラトロール、葉酸、ビタミンＢ１２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ３、ビタミンＥ、ビタミンＣ及びその誘導体、ビタミンＤ、ビタミンＡ、アスタキサンチン、ルテイン、リコピン、必須脂肪酸（オメガ３及び６）、鉄、亜鉛、マグネシウム、フラボノイド（大豆、クルクミン、シリマリン、ピクノジェノール）、成長因子、アロエ、ヒアルロン酸、細胞外マトリックスタンパク質、細胞、核酸、バイオマーカー、生物学的試薬、酸化亜鉛、過酸化ベンゾイル、レチノイド、チタン、公知の用量のアレルゲン（感作処置用）、エッセンシャルオイル（限定されないが、レモングラス又はローズマリー油を含む）、及び香料を含む。活性薬剤をより広く考えると、活性薬剤は、治療用薬剤、例えば低分子、薬物、タンパク質、ペプチド、及び核酸などを含み得る。

特定の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、組織充填剤注入部位の痛み又は不快感を寛解又は軽減するのに有効な量の一つ又は複数の麻酔剤を含むことができる。局部麻酔薬は、アンブカイン、アモラノン、アミロカイン、ベノキシネート、ベンゾカイン、ベトキシカイン、ビフェナミン、ブピバカイン、ブタカイン、ブタンベン、ブタニリカイン、ブテタミン、ブトキシカイン、カルチカイン、クロロプロカイン、コカエチレン、コカイン、シクロメチカイン、ジブカイン、ジメチソキン、ジメトカイン、ジペロドン、ジサイクロミン、エクゴニジン、エクゴニン、塩化エチル、エチドカイン、ベータ－ユーカイン、ユープロシン、フェナルコミン、フォルモカイン、ヘキシルカイン、ヒドロキシテトラカイン、イソブチル－ｐ－アミノベンゾエート、ロイシノカインメシレート、レボキサドロール、リドカイン、メピバカイン、メプリルカイン、メタブトキシカイン、塩化メチル、ミルテカイン、ネパイン、オクタカイン、オルトカイン、オキセサゼイン、パレトキシカイン、フェナカイン、フェノール、ピペロカイン、ピリドカイン、ポリドカノール、プラモキシン、プリロカイン、プロカイン、プロパノカイン、プロパラカイン、プロピポカイン、プロポキシカイン、シュードカイン、ピロカイン、ロピバカイン、サリチルアルコール、テトラカイン、トリカイン、トリメカイン、ゾラミン、及びそれらの塩からなる群から選択することができる。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、重量による、少なくとも０．０１％、又は少なくとも０．０２％、又は少なくとも０．０３％、又は少なくとも０．０４％、又は少なくとも０．０５％、又は少なくとも０．０６％、又は少なくとも０．０７％、又は少なくとも０．０８％、又は少なくとも０．０９％、又は少なくとも０．１％、又は少なくとも０．２％、又は少なくとも０．３％、又は少なくとも０．４％、又は少なくとも０．５％、又は少なくとも０．６％、又は少なくとも０．７％、又は少なくとも０．８％、又は少なくとも０．９％、又は少なくとも１．０％、又は少なくとも１．５％、又は少なくとも２．０％、又は少なくとも２．５％、又は少なくとも３．０％、又は少なくとも３．５％、又は少なくとも４．０％、又は少なくとも４．５％、又は少なくとも５．０％、又は少なくとも５．５％、又は少なくとも６．０％、又は少なくとも６．５％、又は少なくとも７．０％、又は少なくとも７．５％、又は少なくとも８．０％、又は少なくとも８．５％、又は少なくとも９．０％、又は少なくとも９．５％、又は少なくとも１０％の一濃度でリドカイン又は上に列挙する他の麻酔薬を含み得る。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、重量による、最大０．０１％、又は最大０．０２％、又は最大０．０３％、又は最大０．０４％、又は最大０．０５％、又は最大０．０６％、又は最大０．０７％、又は最大０．０８％、又は最大０．０９％、又は最大０．１％、又は最大０．２％、又は最大０．３％、又は最大０．４％、又は最大０．５％、又は最大０．６％、又は最大０．７％、又は最大０．８％、又は最大０．９％、又は最大１．０％、又は最大１．５％、又は最大２．０％、又は最大２．５％、又は最大３．０％、又は最大３．５％、又は最大４．０％、又は最大４．５％、又は最大５．０％、又は最大５．５％、又は最大６．０％、又は最大６．５％、又は最大７．０％、又は最大７．５％、又は最大８．０％、又は最大８．５％、又は最大９．０％、又は最大９．５％、又は最大１０％の一濃度でリドカイン又は上に列挙する他の麻酔薬を含み得る。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、重量による、約０．０１％、又は約０．０２％、又は約０．０３％、又は約０．０４％、又は約０．０５％、又は約０．０６％、又は約０．０７％、又は約０．０８％、又は約０．０９％、又は約０．１％、又は約０．２％、又は約０．３％、又は約０．４％、又は約０．５％、又は約０．６％、又は約０．７％、又は約０．８％、又は約０．９％、又は約１．０％、又は約１．５％、又は約２．０％、又は約２．５％、又は約３．０％、又は約３．５％、又は約４．０％、又は約４．５％、又は約５．０％、又は約５．５％、又は約６．０％、又は約６．５％、又は約７．０％、又は約７．５％、又は約８．０％、又は約８．５％、又は約９．０％、又は約９．５％、又は約１０％の一濃度でリドカイン又は上に列挙する他の麻酔薬を含み得る。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、重量による、約０．０１％～約０．０２％、又は約０．０３％～約０．０４％、又は約０．０５％～約０．０６％～約０．０７％、又は約０．０８％～約０．０９％、又は約０．１％～約０．２％、又は約０．３％～約０．４％、又は約０．５％～約０．６％、又は約０．７％～約０．８％、又は約０．９％～約１．０％、又は約１％～約１．５％、又は約１．５％～約２．０％、又は約２．０％～約２．５％、又は約２．５％～約３．０％、又は約３．０％～約３．５％、又は約３．５％～約４．０％、又は約４．０％～約４．５％、又は約４．５％～約５．０％、又は約５．０％～約５．５％、又は約５．５％～約６．０％、又は約６．０％～約６．５％、又は約６．５％～約７．０％、又は約７．５％～約８．０％、又は約８．０％～約８．５％、又は約８．５％～約９．０％、又は約９．５％～約１０％の一濃度でリドカイン又は上に列挙する他の麻酔薬を含み得る。

一実施形態では、麻酔剤は、リドカイン、例えばリドカインＨＣｌの形態などのである。本明細書中に記載される組織充填剤は、組成物の約０．１重量％～約５重量％、例えば、組織充填剤の約０．２重量％～約１．０重量％の間の濃度でリドカイン又は他の麻酔薬を有し得る。一実施形態では、組織充填剤は、組織充填剤の約０．３重量％（ｗ／ｗ％）のリドカイン濃度を有する。本明細書中に記載される組織充填剤中のリドカインの濃度は、治療的に有効であることができ、濃度が、治療的な利益、例えば、組織充填剤注入部位の痛み又は不快感を寛解又は軽減することなど、を提供するのに十分であることを意味する。

光学特性
光が材料に遭遇する場合、光は、いくつかの方法で材料と相互作用し得る。これらの相互作用は、光の性質、即ち、その波長、周波数、エネルギーなど、及び材料の性質に依存する。光は、反射、及び屈折を伴う透過の特定の組合せにより、物体と相互作用する。光学的に透明な材料は、それに当たる光の大部分を透過させ、反射される光はほとんどない。光を透過させない材料は、光学的に不透明、又は単に不透明と呼ばれる。

一部の実施形態では、本発明は、透明性及び／又は半透明性を有する、本明細書中に記載される組織充填剤を提供する。透明性（透明性（ｐｅｌｌｕｃｉｄｉｔｙ）又は透明性（ｄｉａｐｈａｎｅｉｔｙ）とも呼ばれる）は、光が材料を通過することを可能にする物理的特性であるのに対し、半透明性（半透明性（ｔｒａｎｓｌｕｃｅｎｃｅ）又は半透明性（ｔｒａｎｓｌｕｃｉｄｉｔｙ）とも呼ばれる）は、光が散乱して通過することを可能にするだけである。反対の性質は不透明性である。透明な材料がクリアである一方で、半透明のものは、はっきりと透けて見えることはできない。本明細書中に開示される組織充填剤は、光学特性、例えば透明性及び／又は半透明性などを示しても、示さなくてもよい。一部の実施形態では、表層線充填のための方法を含み、不透明ヒドロゲルを有することが有利であろう。組織充填剤の光学的特性を制御するために使用される因子は、限定されないが、ＳＰＦ濃度、結晶化度、及び／又はヒドロゲルの均質性を含む。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は不透明である。

一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、光学的に透明である。この実施形態の態様では、本明細書中に記載される組織充填剤は、例えば、光の約７５％、光の約８０％、光の約８５％、光の約９０％、光の約９５％、又は光の約１００％を透過する。この実施形態の他の態様では、本明細書中に記載される組織充填剤、例えば、光の少なくとも７５％、光の少なくとも８０％、光の少なくとも８５％、光の少なくとも９０％、又は光の少なくとも９５％。この実施形態のさらに他の態様では、本明細書中に記載される組織充填剤は、例えば、光の約７５％～約１００％、光の約８０％～約１００％、光の約８５％～約１００％、光の約９０％～約１００％、又は光の約９５％～約１００％を透過する。

別の実施形態において、本明細書中に記載される組織充填剤は、光学的に不透明である。この実施形態の態様では、本明細書中に記載される組織充填剤は、例えば、光の約０．１％、光の約１％、光の約１０％、光の約１５％、光の約２０％、光の約２５％、光の約３０％、光の約３５％、光の約４０％、光の約４５％、光の約５０％、光の約５５％、光の約６０％、光の約６５％、光の約７０％、光の約７５％、光の約８０％、光の約８５％、光の約９０％、光の約９５％、又は光の約１００％を透過する。この実施形態の他の態様では、本明細書中に記載される組織充填剤は、例えば、光の最大０．１％、光の最大１％、光の最大１０％、光の最大１５％、光の最大２０％、光の最大２５％、光の最大３０％、光の最大３５％、光の最大４０％、光の最大４５％、光の最大５０％、光の最大５５％、光の最大６０％、光の最大６５％、光の最大７０％、又は光の最大７５％を透過する。この実施形態の他の態様では、本明細書中に記載される組織充填剤は、例えば、光の少なくとも０．１％、光の少なくとも１％、光の少なくとも１０％、光の少なくとも１５％、光の少なくとも２０％、光の少なくとも２５％、光の少なくとも３０％、光の少なくとも３５％、光の少なくとも４０％、光の少なくとも４５％、光の少なくとも５０％、光の少なくとも５５％、光の少なくとも６０％、光の少なくとも６５％、光の少なくとも７０％、又は光の少なくとも７５％を透過する。この実施形態の他の態様では、本明細書中に記載される組織充填剤は、例えば、光の約０．１％～約１５％、約０．１％～約２０％、約０．１％～約２５％、約０．１％～約３０％、約０．１％～約３５％、約０．１％～約４０％、約０．１％～約４５％、約０．１％～約５０％、約０．１％～約５５％、約０．１％～約６０％、約０．１％～約６５％、約０．１％～約７０％、約０．１％～約７５％、約１％～約１５％、約１％～約２０％、約１％～約２５％、約１％～約３０％、約１％～約３５％、約１％～約４０％、約１％～約４５％、約１％～約５０％、約１％～約５５％、約１％～約６０％、約１％～約６５％、約１％～約７０％、約１％～約７５％、約１０％～約２０％、約１０％～約２５％、約１０％～約３０％、約１０％～約３５％、約１０％～約４０％、約１０％～約４５％、約１０％～約５０％、約１０％～約５５％、約１０％～約６０％、約１０％～約６５％、約１０％～約７０％、約１０％～約７５％、約２５％～約３５％、約２５％～約４０％、約２５％～約４５％、約２５％～約５０％、約２５％～約５５％、約２５％～約６０％、約２５％～約６５％、約２５％～約７０％、又は約２５％～約７５％を透過する。

実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、光学的に半透明である。この実施形態の態様では、本明細書中に記載される組織充填剤は、例えば、光の約７５％、光の約８０％、光の約８５％、光の約９０％、光の約９５％、又は光の約１００％を散乱透過する。これらの実施形態の他の態様では、組織充填剤は、例えば、光の少なくとも０．１％、光の少なくとも１％、光の少なくとも５％、光の少なくとも１０％、光の少なくとも１５％、光の少なくとも２０％、光の少なくとも２５％、光の少なくとも３０％、光の少なくとも３５％、光の少なくとも４０％、光の少なくとも４５％、光の少なくとも５０％、光の少なくとも５５％、光の少なくとも６０％、光の少なくとも６５％、光の少なくとも７０％、光の少なくとも７５％、光の少なくとも８０％、光の少なくとも８５％、光の少なくとも９０％、又は光の少なくとも９５％を散乱透過する。これらの実施形態の他の態様では、組織充填剤は、例えば、光の最大０．１％、光の最大１％、光の最大５％、光の最大１０％、光の最大１５％、光の最大２０％、光の最大２５％、光の最大３０％、光の最大３５％、光の最大４０％、光の最大４５％、光の最大５０％、光の最大５５％、光の最大６０％、光の最大６５％、光の最大７０％、光の最大７５％、光の最大８０％、光の最大８５％、光の最大９０％、光の最大９５％、又は光の最大１００％を散乱透過する。これらの実施形態のさらに他の態様では、組織充填剤は、例えば、光の約０．１％～約１００％、光の約１％～約１００％、光の約５％～約１００％、光の約１０％～約１００％、光の約１５％～約１００％、光の約２０％～約１００％、光の約２５％～約１００％、光の約３０％～約１００％、光の約３５％～約１００％、光の約４５％～約１００％、光の約５０％～約１００％、光の約５５％～約１００％、光の約６０％～約１００％、光の約６５％～約１００％、光の約７０％～約１００％、光の約７５％～約１００％、光の約８０％～約１００％、光の約８５％～約１００％、光の約９０％～約１００％、又は光の約９５％～約１００％を散乱透過する。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、その減衰係数により記載され得るが、それは、光を散乱又は吸収する材料の能力の記載として定義される。

組織充填剤及び皮膚特性は、当技術分野において公知の特定の組織充填剤の送達後の皮膚における有害なチンダル効果イベントの発現に影響を与え得ることができる。高い剛性及び弾性を伴う充填剤を使用して、この材料を中間及び深部真皮領域中に注入して、顔の変色の恐れなしに、顔面上の領域、例えば鼻唇溝、頬、及び顎などを矯正することができる。しかし、充填剤は、より表層での適用、例えば、細かい皺の線を矯正するために使用される、又は真皮の上部領域において誤って極端に表層に適用される場合、皮膚の青みがかった変色がしばしば観察される。この現象は、チンダル効果の結果であると考えられ、適用部位に半永久的な変色が残る。一部の実施形態では、この効果は、充填剤材料を分解するために、酵素、例えば、ヒアルロニダーゼの投与後に消失する。結果的に、チンダル効果は、表層の細かい皺の線について治療された患者においてより一般的である。チンダル効果の長期発現は、典型的には、充填剤が皮膚において継続する限り、望ましくない副作用及び患者での懸念の原因である。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、それらの均質性及び結果として得られる不透明性に起因して、チンダル効果を軽減する。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、チンダル効果をもたらさない、又はチンダル効果からもたらされる任意の視覚的に知覚可能な青色変色をもたらさない。一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、チンダル効果をもたらさない、又はチンダル効果からもたらされる任意の視覚的に知覚可能な青色変色をもたらさない。一部の実施形態では、本発明は、審美的外観を改善するための組織充填剤及び方法に関し、患者の皮膚領域に、チンダル効果がない、又はほんのわずかしか示さない、実質的に光学的に透明な皮膚充填剤組成物を投与することを含む。組織充填剤が注入された皮膚部位での青色変色の外観（チンダル効果）は、一部の皮膚充填剤患者により経験される重大な有害事象である。チンダル効果は、表層の細かい皺の線について治療された患者においてより一般的である。本発明の実施形態が開発されており、チンダル効果からの青色変色をもたらすことなく、比較的薄い皮膚の領域においてでさえ、表層に注入して細い線及び皺を治療することができる、長期間持続する半透明の充填剤を提供する。細い線又は表層の皺は、皮膚が最も薄い、すなわち、皮膚が１ｍｍ未満の真皮の厚さを有する、典型的には顔面の領域（前頭、外側眼角、縁／口囲線）において見出される、皮膚における皺又はひだであることが一般的に理解される。前額部では、平均の皮膚厚みは、正常な皮膚では約０．９５ｍｍ及び皺のある皮膚では約０．８１ｍｍである。外眼角の周りの真皮はさらに薄い（例、正常な皮膚では約０．６１ｍｍ及び皺のある皮膚では約０．４１ｍｍ）。３０又は３２ゲージ針（細線ゲル塗布用に典型的に使用される針）の平均外径は、約０．３０ｍｍ及び約０．２４ｍｍである。一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、チンダル効果をもたらさない、又はチンダル効果によりもたらされる視覚的に認識できる青色変色をもたらさない。

一実施形態では、本明細書中に開示される組織充填剤は、光学的に不透明である。この実施形態の態様では、本明細書中に開示される組織充填剤は、例えば、光の約５％、光の約１０％、光の約１５％、光の約２０％、光の約２５％、光の約３０％、光の約３５％、光の約４０％、光の約４５％、光の約５０％、光の約５５％、光の約６０％、光の約６５％、又は光の約７０％を透過する。この実施形態の他の態様では、本明細書中に開示される組織充填剤は、例えば、光の最大５％、光の最大１０％、光の最大１５％、光の最大２０％、光の最大２５％、光の最大３０％、光の最大３５％、光の最大４０％、光の最大４５％、光の最大５０％、光の最大５５％、光の最大６０％、光の最大６５％、光の最大７０％、又は光の最大７５％を透過する。この実施形態の他の態様では、本明細書中に開示される組織充填剤は、例えば、光の約５％～約１５％、約５％～約２０％、約５％～約２５％、約５％～約３０％、約５％～約３５％、約５％～約４０％、約５％～約４５％、約５％～約５０％、約５％～約５５％、約５％～約６０％、約５％～約６５％、約５％～約７０％、約５％～約７５％、約１５％～約２０％、約１５％～約２５％、約１５％～約３０％、約１５％～約３５％、約１５％～約４０％、約１５％～約４５％、約１５％～約５０％、約１５％～約５５％、約１５％～約６０％、約１５％～約６５％、約１５％～約７０％、約１５％～約７５％、約２５％～約３５％、約２５％～約４０％、約２５％～約４５％、約２５％～約５０％、約２５％～約５５％、約２５％～約６０％、約２５％～約６５％、約２５％～約７０％、又は約２５％～約７５％を透過する。

一部の実施形態では、本明細書中に開示される組織充填剤は、例えば、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％のチンダリングにおける低下を示す。これらの実施形態の他の態様では、本明細書中に開示される組織充填剤は、例えば、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも１００％のチンダリングにおける低下を示す。これらの実施形態の他の態様では、本明細書中に開示される組織充填剤は、例えば、約２０％～約１００％、約５０％～約１００％、約７０％～約１００％、約１５％～約３５％、約２０％～約４０％、約２５％～約４５％、約３０％～約５０％、約３５％～約５５％、約４０％～約６０％、約４５％～約６５％、約５０％～約７０％、約５５％～約７５％、約６０％～約８０％、約６５％～約８５％、約７０％～約９０％、約７５％～約９５％、又は約８０％～約１００％のチンダリングにおける低下を示す。

含水量
一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、水を含み得る。例えば、本明細書中に記載される一部の組織充填剤は、ゲル、例えばヒドロゲルなどであり得るが、吸収、捕捉、又は他の配置方法で水を内部に含み得る。

一部の実施形態では、架橋絹ＨＡヒドロゲルは、低膨潤性ヒドロゲルである。一部の実施形態では、架橋絹ＨＡヒドロゲルは、高膨潤性ヒドロゲルである。一部の実施形態では、本開示のヒドロゲル製剤についての膨潤度は、架橋度を制御することにより、又はＨＡ含量を変動させることにより調節され得る。より高い架橋度がヒドロゲル中に存在するほど、ヒドロゲルの膨潤度は、より密なヒドロゲル構造に起因してより低くなる。より多いＨＡ含量がヒドロゲル中に存在するほど、膨潤度は、ＨＡ構造中のより多い水酸基（－ＯＨ）の存在に起因してより高くなる。

一実施形態では、本開示の組織充填剤中での含水率（重量％）は、１％～９５％である。実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中の含水率（重量％）は、少なくとも１％、又は少なくとも２％、又は少なくとも３％、又は少なくとも４％、又は少なくとも５％、又は少なくとも６％、又は少なくとも７％、又は少なくとも８％、又は少なくとも９％、又は少なくとも１０％、又は少なくとも１１％、又は少なくとも１２％、又は少なくとも１３％、又は少なくとも１４％、又は少なくとも１５％、又は少なくとも１６％、又は少なくとも１７％、又は少なくとも１８％、又は少なくとも１９％、又は少なくとも２０％、又は少なくとも２１％、又は少なくとも２２％、又は少なくとも２３％、又は少なくとも２４％、又は少なくとも２５％、又は少なくとも２６％、又は少なくとも２７％、又は少なくとも２８％、又は少なくとも２９％、又は少なくとも３０％、又は少なくとも３１％、又は少なくとも３２％、又は少なくとも３３％、又は少なくとも３４％、又は少なくとも３５％、又は少なくとも３６％、又は少なくとも３７％、又は少なくとも３８％、又は少なくとも３９％、又は少なくとも４０％、又は少なくとも４１％、又は少なくとも４２％、又は少なくとも４３％、又は少なくとも４４％、又は少なくとも４５％、又は少なくとも４６％、又は少なくとも４７％、又は少なくとも４８％、又は少なくとも４９％、又は少なくとも５０％、又は少なくとも５１％、又は少なくとも５２％、又は少なくとも５３％、又は少なくとも５４％、又は少なくとも５５％、又は少なくとも５６％、又は少なくとも５７％、又は少なくとも５８％、又は少なくとも５９％、又は少なくとも６０％、又は少なくとも６１％、又は少なくとも６２％、又は少なくとも６３％、又は少なくとも６４％、又は少なくとも６５％、又は少なくとも６６％、又は少なくとも６７％、又は少なくとも６８％、又は少なくとも６９％、又は少なくとも７０％、又は少なくとも７１％、又は少なくとも７２％、又は少なくとも７３％、又は少なくとも７４％、又は少なくとも７５％、又は少なくとも７６％、又は少なくとも７７％、又は少なくとも７８％、又は少なくとも７９％、又は少なくとも８０％、又は少なくとも８１％、又は少なくとも８２％、又は少なくとも８３％、又は少なくとも８４％、又は少なくとも８５％、又は少なくとも８６％、又は少なくとも８７％、又は少なくとも８８％、又は少なくとも８９％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９１％、又は少なくとも９２％、又は少なくとも９３％、又は少なくとも９４％、又は少なくとも９５％である。

一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中の含水率（重量％）は、最大１％、又は最大２％、又は最大３％、又は最大４％、又は最大５％、又は最大６％、又は最大７％、又は最大８％、又は最大９％、又は最大１０％、又は最大１１％、又は最大１２％、又は最大１３％、又は最大１４％、又は最大１５％、又は最大１６％、又は最大１７％、又は最大１８％、又は最大１９％、又は最大２０％、又は最大２１％、又は最大２２％、又は最大２３％、又は最大２４％、又は最大２５％、又は最大２６％、又は最大２７％、又は最大２８％、又は最大２９％、又は最大３０％、又は最大３１％、又は最大３２％、又は最大３３％、又は最大３４％、又は最大３５％、又は最大３６％、又は最大３７％、又は最大３８％、又は最大３９％、又は最大４０％、又は最大４１％、又は最大４２％、又は最大４３％、又は最大４４％、又は最大４５％、又は最大４６％、又は最大４７％、又は最大４８％、又は最大４９％、又は最大５０％、又は最大５１％、又は最大５２％、又は最大５３％、又は最大５４％、又は最大５５％、又は最大５６％、又は最大５７％、又は最大５８％、又は最大５９％、又は最大６０％、又は最大６１％、又は最大６２％、又は最大６３％、又は最大６４％、又は最大６５％、又は最大６６％、又は最大６７％、又は最大６８％、又は最大６９％、又は最大７０％、又は最大７１％、又は最大７２％、又は最大７３％、又は最大７４％、又は最大７５％、又は最大７６％、又は最大７７％、又は最大７８％、又は最大７９％、又は最大８０％、又は最大８１％、又は最大８２％、又は最大８３％、又は最大８４％、又は最大８５％、又は最大８６％、又は最大８７％、又は最大８８％、又は最大８９％、又は最大９０％、又は最大９１％、又は最大９２％、又は最大９３％、又は最大９４％、又は最大９５％である。

一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中の含水率（重量％）は、１％～２％、又は２％～３％、又は３％～４％、又は４％～５％、又は５％～６％、又は６％～７％、又は７％～８％、又は８％～９％、又は９％～１０％、又は１０％～１１％、又は１１％～１２％、又は１２％～１３％、又は１３％～１４％、又は１４％～１５％、又は１５％～１６％、又は１６％～１７％、又は１７％～１８％、又は１８％～１９％、又は１９％～２０％、又は２０％～２１％、又は２１％～２２％、又は２２％～２３％、又は２３％～２４％、又は２４％～２５％、又は２５％～２６％、又は２６％～２７％、又は２７％～２８％、又は２８％～２９％、又は３０％～３１％、又は３１％～３２％、又は３２％～３３％、又は３３％～３４％、又は３４％～３５％、又は３５％～３６％、又は３６％～３７％、又は３７％～３８％、又は３８％～３９％、又は３９％～４０％、又は４０％～４１％、又は４１％～４２％、又は４２％～４３％、又は４３％～４４％、又は４４％～４５％、又は４５％～４６％、又は４６％～４７％、又は４７％～４８％、又は４８％～４９％、又は４９％～５０％、又は５０％～５１％、又は５１％～５２％、又は５２％～５３％、又は５３％～５４％、又は５４％～５５％、又は５５％～５６％、又は５６％～５７％、又は５７％～５８％、又は５８％～５９％、又は５９％～６０％、又は６０％～６１％、又は６１％～６２％、又は６２％～６３％、又は６３％～６４％、又は６４％～６５％、又は６５％～６６％、又は６６％～６７％、又は６７％～６８％、又は６８％～６９％、又は６９％～７０％、又は７０％～７１％、又は７１％～７２％、又は７２％～７３％、又は７３％～７４％、又は７４％～７５％、又は７５％～７６％、又は７６％～７７％、又は７７％～７８％、又は７８％～７９％、又は７９％～８０％、又は８０％～８１％、又は８１％～８２％、又は８２％～８３％、又は８３％～８４％、又は８４％～８５％、又は８５％～８６％、又は８６％～８７％、又は８７％～８８％、又は８８％～８９％、又は８９％～９０％、又は９０％～９１％、又は９１％～９２％、又は９２％～９３％、又は９３％～９４％、又は９４％～９５％、又は９５％～９６％、又は９６％～９７％、又は９７％～９８％である。

一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤中の含水率（重量％）は、約１％、又は約２％、又は約３％、又は約４％、又は約５％、又は約６％、又は約７％、又は約８％、又は約９％、又は約１０％、又は約１１％、又は約１２％、又は約１３％、又は約１４％、又は約１５％、又は約１６％、又は約１７％、又は約１８％、又は約１９％、又は約２０％、又は約２１％、又は約２２％、又は約２３％、又は約２４％、又は約２５％、又は約２６％、又は約２７％、又は約２８％、又は約２９％、又は約３０％、又は約３１％、又は約３２％、又は約３３％、又は約３４％、又は約３５％、又は約３６％、又は約３７％、又は約３８％、又は約３９％、又は約４０％、又は約４１％、又は約４２％、又は約４３％、又は約４４％、又は約４５％、又は約４６％、又は約４７％、又は約４８％、又は約４９％、又は約５０％、又は約５１％、又は約５２％、又は約５３％、又は約５４％、又は約５５％、又は約５６％、又は約５７％、又は約５８％、又は約５９％、又は約６０％、又は約６１％、又は約６２％、又は約６３％、又は約６４％、又は約６５％、又は約６６％、又は約６７％、又は約６８％、又は約６９％、又は約７０％、又は約７１％、又は約７２％、又は約７３％、又は約７４％、又は約７５％、又は約７６％、又は約７７％、又は約７８％、又は約７９％、又は約８０％、又は約８１％、又は約８２％、又は約８３％、又は約８４％、又は約８５％、又は約８６％、又は約８７％、又は約８８％、又は約８９％、又は約９０％、又は約９１％、又は約９２％、又は約９３％、又は約９４％、又は約９５％である。

機械的特性
本明細書中に記載される組織充填剤又はその成分は、選択された治療及び送達の様式に依存して多数の物理的状態で提供され得る。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は、流体、例えば、液体である。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は粘性流体である。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は固体である。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は弾性固体である。

多数のレオロジー特性を、本明細書中に記載される組織充填剤を検証する場合に、表１７中に示すように評価してもよい。

（外２０）

一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は粘弾性材料であり、弾性材料及び粘性材料の両方の機械的特性を示す。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は、ゲルとして記載され得る。材料の機械的特性又はレオロジー特性（例、粘弾性特性）を評価するための方法が、当技術分野において公知であり、例えば、米国特許出願公開第２００６／０１０５０２２号及びＳｔｏｃｋｓ，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｄｒｕｇｓ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．（２０１１）１０：９７４－９８０において記載されており、それらの全体が参照により本明細書中に組み込まれる。材料の粘弾性は、動的機械分析を使用して、例えば、サンプルに振動応力を適用し、結果として得られる歪みを測定することにより特徴付けることができる。弾性材料は、典型的には、同相応力及び歪みを示す、即ち、応力の適用によって、即時の歪みがもたらされる。粘性材料において、歪みは、応力の適用から９０度位相がずれる。粘弾性材料において、歪みと応力の間の位相差は、０より大きいが、しかし、９０度未満である。一部の実施形態では、本発明のＳＰＦ材料の粘弾性は、複素動的弾性率Ｇにより特徴付けることができ、それは、貯蔵弾性率Ｇ’（弾性率としても言及される）、及び損失弾性率Ｇ’’（粘性率としても言及される）を含む：

式中、ｉ^２＝－１であり、

は応力の振幅、ε_０はゆがみの振幅、及びδは位相シフトである。

貯蔵弾性率Ｇ’及び損失弾性率Ｇ’’は、回転式又は剪断レオメータにおいて、ＳＰＦゲルサンプルを振動応力に供することにより測定される。サンプルは、二つのプレート間に配置され、一つが固定され、一つが回転でき、又は所与の周波数で振動できる。貯蔵弾性率Ｇ’及び損失弾性率Ｇ’’の値は、周波数依存的である。貯蔵弾性率Ｇ’及び損失弾性率Ｇ’’を測定する際に使用される周波数の範囲は、典型的には、限定されないが、０．１～１０Ｈｚの間である。一部の実施形態では、貯蔵弾性率Ｇ’及び損失弾性率Ｇ’’は、１Ｈｚの振動周波数で測定される。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤のレオロジー特性、例えば、Ｇ’及びＧ’’は、振動平行板レオメータを用いて測定することができる。様々の直径（例えば、２５ｍｍ）のプレートを、様々な距離（例えば、１ｍｍ）のプレート間のギャップ高さで使用することができる。測定は、様々な温度で実施することができる。一部の実施形態では、測定は、２５℃の一定温度で実施される。一部の実施形態では、測定は、特定の歪み値（例えば、２％の一定の歪み）で、例えば、１～１０Ｈｚの二つの周波数値間の周波数掃引を含む。一部の実施形態では、測定値は、周波数の対数増加、それに続く歪み掃引を含み、これは、例えば、一定の周波数（例えば、５Ｈｚ）で、歪みにおける対数増加を伴って、１～３００％の間であり得る。一部の実施形態では、貯蔵弾性率Ｇ’及び損失弾性率Ｇ’’は、特定のパーセンテージの歪み値で（例えば、１％歪みで）歪み掃引から得ることができる。

一部の実施形態では、複素弾性率（即ち、Ｇ’及びｉＧ’’の和）は、本明細書中に記載される特定の組織充填剤の変形に対して、全抵抗の包括的測定を提供する。複素弾性率は、レオメータを使用してテストしてもよく、ここで、特定の組織充填剤（例、ゲル）を二つの平行円形プレート間で圧搾でき、可変の回転歪みが、様々な周波数で一方のプレートを回転させることにより提供される。

一部の実施形態では、特定の組織充填剤の特性は、組織充填剤の弾性（％）を介して検証してもよく、ここで、弾性（％）は、１００×Ｇ’／（Ｇ’＋Ｇ’’）に等しい。

一部の実施形態では、特定の組織充填剤の特性は、組織充填剤の回復係数を介して検証してもよく；

式中、約１の回復係数は、特定の組織充填剤（例、ゲル）が、適用された力にもかかわらず、その構造を保持することを意味し；１より大きい回復係数は、特定の組織充填剤（例、ゲル）が構造破壊を経験したことを；１未満の回復係数は、ゲルが増加した構造性能を経験したことを意味する。

本発明のいずれか一つの理論に限定されることを望まないが、増加するＧ’は、形状における変化に対して、より良好に抵抗する材料の能力の相対的増加をもたらし、材料は、より低いＧ’を伴う材料（例、ゲル組織充填剤）よりも、堅い、硬い、又は弾性であると記載され得る。したがって、増加するＧ’は、材料の能力における対応する増加をもたらし、構造的支持及び／又はボリューム化をもたらし得る。

本発明のいずれか一つの理論に限定されることを望まないが、増加するＧ’’の増加は、より低いＧ’’を有する材料と比較して、より粘性の高い材料（例、ゲル）をもたらす。さらに、より高いＧ’’を伴う材料についての放散熱としてより大きなエネルギー損失がある。一部の実施形態では、Ｇ’が、増加する架橋度に伴って増加する。一部の実施形態では、Ｇ’’が、増加する架橋度に伴って増加する。一部の実施形態では、Ｇ’及びＧ’’の両方が、増加する架橋度に伴って増加する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約５０Ｐａ未満～約１５０００Ｐａ超のＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約５０Ｐａ～約５００，０００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１００Ｐａ～約５００，０００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約７５Ｐａ～約１５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１００Ｐａ～約２５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１５０Ｐａ～約２７５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１５０Ｐａ～約５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約２５０Ｐａ～約７５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約３７５Ｐａ～約６７５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約４２５Ｐａ～約８５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約５００Ｐａ～約１０００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約６５０Ｐａ～約１０５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約７５０Ｐａ～約１２５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約９５０Ｐａ～約１５００ＰａのＧ’を有する。

一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも２００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも２２５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも２５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも２７５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも３００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも３２５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも３５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも３７５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも４００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも４２５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも４５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも４７５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも５００ＰａのＧ’を有する。

一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも５２５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも５５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも５７５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約少なくともＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約６２５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも６５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも６７５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも７００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも７２５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも７５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも７７５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも８００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも８２５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも８５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも８７５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも９００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも９２５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも９５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも９７５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１０００ＰａのＧ’を有する。

一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１０５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１１００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１１５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１２００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１２５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１３００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１３５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１４００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１４５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１５００ＰａのＧ’を有する。

一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大２００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大２２５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大２５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大２７５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大３００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大３２５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大３５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大３７５ＰａのＧ’を有する。

一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大４００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大４２５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大４５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大４７５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大５００ＰａのＧ’を有する。

一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大５２５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大５５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大５７５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約６２５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大６５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大６７５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大７００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大７２５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大７５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大７７５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大８００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大８２５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大８５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大８７５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大９００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大９２５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大９５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大９７５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１０００ＰａのＧ’を有する。

一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１０５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１１００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１１５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１２００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１２５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１３００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１３５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１４００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１４５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１５００ＰａのＧ’を有する。

一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約２００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約２２５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約２５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約２７５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約３００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約３２５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約３５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約３７５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約４００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約４２５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約４５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約４７５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約５００ＰａのＧ’を有する。

一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約５２５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約５５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約５７５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約６００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約６２５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約６５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約６７５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約７００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約７２５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約７５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約７７５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約８００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約８２５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約８５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約８７５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約９００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約９２５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約９５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約９７５ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１０００ＰａのＧ’を有する。

一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１０５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１１００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１１５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１２００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１２５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１３００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１３５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１４００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１４５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１５００ＰａのＧ’を有する。

一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも２０００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも２２５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも２５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも２７５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも３０００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも３２５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも３５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも３７５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも４０００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも４２５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも４５００ＰａのＧ’を有する。

一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも４７５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも５０００ＰａのＧ’を有する。

一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも５２５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも５５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも５７５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約、少なくとも６０００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約６２５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも６５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも６７５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも７０００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも７２５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも７５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも７７５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも８０００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも８２５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも８５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも８７５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも９０００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも９２５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも９５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも９７５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１００００ＰａのＧ’を有する。

一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１０５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１１０００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１１５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１２０００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１２５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１３０００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１３５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１４０００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１４５００ＰａのＧ’を有する。

一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１５０００ＰａのＧ’を有する。

一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大２０００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大２２５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大２５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大２７５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大３０００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大３２５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大３５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大３７５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大４０００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大４２５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大４５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大４７５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大５０００ＰａのＧ’を有する。

一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大５２５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大５５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大５７５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大６０００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約６２５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大６５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大６７５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大７０００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大７２５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大７５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大７７５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大８０００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大８２５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大８５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大８７５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大９０００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大９２５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大９５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大９７５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１００００ＰａのＧ’を有する。

一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１０５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１１０００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１１５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１２０００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１２５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１３０００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１３５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１４０００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１４５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１５０００ＰａのＧ’を有する。

一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約２０００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約２２５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約２５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約２７５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約３０００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約３２５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約３５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約３７５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約４０００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約４２５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約４５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約４７５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約５０００ＰａのＧ’を有する。

一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約５２５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約５５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約５７５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約６０００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約６２５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約６５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約６７５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約７０００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約７２５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約７５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約７７５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約８０００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約８２５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約８５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約８７５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約９０００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約９２５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約９５００ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約９７５０ＰａのＧ’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１００００ＰａのＧ’を有する。

一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約５Ｐａ未満～約２００Ｐａ超のＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約５Ｐａ～約２００ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約５Ｐａ～約２５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１５Ｐａ～約３５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１０Ｐａ～約５０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１５Ｐａ～約７５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約２０Ｐａ～約８５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約２５Ｐａ～約１００ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約３５Ｐａ～約１２５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約４５Ｐａ～約１１５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約７５Ｐａ～約１５０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１００Ｐａ～約１７５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１１５Ｐａ～約２００ＰａのＧ’’を有する。

一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも２０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも２５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも３０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも３５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも４０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも４５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも５０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも５５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも６０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも６５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも７０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも７５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも８０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも８５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも９０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも９５ＰａのＧ”を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１００ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１０５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１１０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１１５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１２０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１２５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１３０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１３５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１４０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１４５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１５０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１５５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１６０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１６５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１７０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１７５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１８０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１８５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１９０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも１９５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は少なくとも２００ＰａのＧ’’を有する。

一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大２０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大２５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大３０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大３５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大４０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大４５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大５０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大５５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大６０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大６５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大７０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大７５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大８０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大８５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大９０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大９５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１００ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１０５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１１０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１１５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１２０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１２５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１３０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１３５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１４０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１４５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１５０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１５５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１６０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１６５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１７０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１７５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１８０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１８５ＰａのＧ”を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１９０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大１９５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は最大２００ＰａのＧ’’を有する。

一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約２０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約２５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約３０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約３５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約４０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約４５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約５０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約５５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約６０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約６５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約７０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約７５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約８０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約８５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約９０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約９５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１００ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１０５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１１０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１１５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１２０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１２５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１３０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１３５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１４０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１４５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１５０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１５５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１６０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１６５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１７０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１７５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１８０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１８５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１９０ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約１９５ＰａのＧ’’を有する。一部の実施形態では、本発明の組織充填剤は約２００ＰａのＧ’’を有する。

一部の実施形態では、本明細書中に開示される組織充填剤は動的粘度を示す。粘度は、剪断に対する、又は剪断応力もしくは引張応力のいずれかによって起こされる流れに対する流体の抵抗である。粘度は、流体の層が互いにずれようとするときに発揮される分子間摩擦により起こされる流れに対する流体の内部抵抗を記載し、流体摩擦の尺度と考えてもよい。流体の粘性が低いほど、その運動性（流動性）の容易さが大きくなる。

粘度は、二つの方法で定義することができる：動的粘度（μ；ηが時折使用される）又は運動粘度（ｖ）。動的粘度はまた、絶対又は複素粘度として公知であり、流体により離間される単位距離を維持した場合に、単位速度で他方に対して一つの水平平面を移動させるのに要求される単位面積当たりの接線力である。動的粘度のＳＩ物理単位は、パスカル－秒（Ｐａｓ）であり、これは、Ｎｍ^－２ｓと同一である。動的粘度は、τ＝μｄｖｘ／ｄｚで表すことができ、式中、τ＝剪断応力、μ＝動的粘度、及びｄｖｘ／ｄｚが経時的な速度勾配である。例えば、１Ｐａ・ｓの粘度を伴う流体が二つのプレート間に配置され、一つのプレートを１パスカルの剪断応力で横方向に押す場合、それは１秒間でプレート間の層の厚みに等しい距離を移動させる。動粘性率（Ｖ）は、密度に対する動的粘度の比率であり、力が含まれない量であり、以下のように定義される：ν＝μ／ρ、式中、μは動的粘度であり、ρは密度（ｋｇ／ｍ^３）である。動粘性率は、通常、ガラスキャピラリー粘度計により測定され、ｍ^２／ｓのＳＩ単位を有する。流体の粘度は温度依存的であり、そのため、動的粘度及び動粘性率は、温度に関連して報告される。

一部の実施形態では、本明細書中に開示される組織充填剤は、例えば、少なくとも１０Ｐａ・ｓ、少なくとも２０Ｐａ・ｓ、少なくとも３０Ｐａ・ｓ、少なくとも４０Ｐａ・ｓ、少なくとも５０Ｐａ・ｓ、少なくとも６０Ｐａ・ｓ、少なくとも７０Ｐａ・ｓ、少なくとも８０Ｐａ・ｓ、少なくとも９０Ｐａ・ｓ、少なくとも１００Ｐａ・ｓ、少なくとも１２５Ｐａ・ｓ、少なくとも１５０Ｐａ・ｓ、少なくとも１７５Ｐａ・ｓ、少なくとも２００Ｐａｓ、少なくとも２２５Ｐａ・ｓ、少なくとも２５０Ｐａ・ｓ、少なくとも２７５Ｐａ・ｓ、少なくとも３００Ｐａ・ｓ、少なくとも４００Ｐａ・ｓ、少なくとも５００Ｐａ・ｓ、少なくとも６００Ｐａ・ｓ、少なくとも７００Ｐａ・ｓ、少なくとも７５０Ｐａ・ｓ、少なくとも８００Ｐａ・ｓ、少なくとも９００Ｐａ・ｓ、少なくとも１，０００Ｐａ・ｓ、少なくとも１，１００Ｐａ・ｓ、又は少なくとも１，２００Ｐａ・ｓの動的粘度を示す。一部の実施形態では、本明細書中に開示される組織充填剤は、例えば、最大１０Ｐａ・ｓ、最大２０Ｐａ・ｓ、最大３０Ｐａ・ｓ、最大４０Ｐａ・ｓ、最大５０Ｐａ・ｓ、最大６０Ｐａ・ｓ、最大７０Ｐａ・ｓ、最大８０Ｐａ・ｓ、最大９０Ｐａ・ｓ、最大１００Ｐａ・ｓ、最大１２５Ｐａ・ｓ、最大１５０Ｐａ・ｓ、最大１７５Ｐａ・ｓ、最大２００Ｐａ・ｓ、最大２２５Ｐａ・ｓ、最大２５０Ｐａ・ｓ、最大２７５Ｐａ・ｓ、最大３００Ｐａ・ｓ、最大４００Ｐａ・ｓ、最大５００Ｐａ・ｓ、最大６００Ｐａ・ｓ、最大７００Ｐａ・ｓ、最大７５０Ｐａ・ｓ、最大８００Ｐａ・ｓ、最大９００Ｐａ・ｓ、又は最大１０００Ｐａ・ｓの動的粘度を示す。一部の実施形態では、本明細書中に開示される組織充填剤は、例えば、約１０Ｐａ・ｓ～約１００Ｐａ・ｓ、約１０Ｐａ・ｓ～約１５０Ｐａ・ｓ、約１０Ｐａ・ｓ～約２５０Ｐａ・ｓ、約５０Ｐａ・ｓ～約１００Ｐａ・ｓ、約５０Ｐａ・ｓ～約１５０Ｐａ・ｓ、約５０Ｐａ・ｓ～約２５０Ｐａ・ｓ、約１００Ｐａ・ｓ～約５００Ｐａ・ｓ、約１００Ｐａ・ｓ～約７５０Ｐａ・ｓ、約１００Ｐａ・ｓ～約１，０００Ｐａ・ｓ、約１００Ｐａ・ｓ～約１，２００Ｐａ・ｓ、約３００Ｐａ・ｓ～約５００Ｐａ・ｓ、約３００Ｐａ・ｓ～約７５０Ｐａ・ｓ、約３００Ｐａ・ｓ～約１，０００Ｐａ・ｓ、又は約３００Ｐａ・ｓ～約１，２００Ｐａ・ｓの動的粘度を示す。

一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、インビボでのそれらのＧ’及び／又はＧ’’を、少なくとも１日間、又は少なくとも２日間、又は少なくとも３日間、又は少なくとも４日間、又は少なくとも５日間、又は少なくとも６日間、又は少なくとも１週間、又は少なくとも２週間、又は少なくとも３週間、又は少なくとも１ヶ月間、又は少なくとも２ヶ月間、又は少なくとも３ヶ月間、又は少なくとも４ヶ月間、又は少なくとも５ヶ月間、又は少なくとも６ヶ月間、又は少なくとも７ヶ月間、又は少なくとも８ヶ月間、又は少なくとも９ヶ月間、又は少なくとも１０ヶ月間、又は少なくとも１１ヶ月間、又は少なくとも１年間にわたり実質的に維持し得る。

一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、インビボでのそれらのＧ’及び／又はＧ’’を、最大１日間、又は最大２日間、又は最大３日間、又は最大４日間、又は最大５日間、又は最大６日間、又は最大１週間、又は最大２週間、又は最大３週間、又は最大１ヶ月間、又は最大２ヶ月間、又は最大３ヶ月間、又は最大４ヶ月間、又は最大５ヶ月間、又は最大６ヶ月間、又は最大７ヶ月間、又は最大８ヶ月間、又は最大９ヶ月間、又は最大１０ヶ月間、又は最大１１ヶ月間、又は最大１年間にわたり実質的に維持し得る。

一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、インビボでのそれらのＧ’及び／又はＧ’’を、約１日間、又は約２日間、又は約３日間、又は約４日間、又は約５日間、又は約６日間、又は約１週間、又は約２週間、又は約３週間、又は約１ヶ月間、又は約２ヶ月間、又は約３ヶ月間、又は約４ヶ月間、又は約５ヶ月間、又は約６ヶ月間、又は約７ヶ月間、又は約８ヶ月間、又は約９ヶ月間、又は約１０ヶ月間、又は約１１ヶ月間、又は約１年間にわたり実質的に維持し得る。

一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、インビボでのそれらの弾性を、少なくとも１日間、又は少なくとも２日間、又は少なくとも３日間、又は少なくとも４日間、又は少なくとも５日間、又は少なくとも６日間、又は少なくとも１週間、又は少なくとも２週間、又は少なくとも３週間、又は少なくとも１ヶ月間、又は少なくとも２ヶ月間、又は少なくとも３ヶ月間、又は少なくとも４ヶ月間、又は少なくとも５ヶ月間、又は少なくとも６ヶ月間、又は少なくとも７ヶ月間、又は少なくとも８ヶ月間、又は少なくとも９ヶ月間、又は少なくとも１０ヶ月間、又は少なくとも１１ヶ月間、又は少なくとも１年間にわたり実質的に維持し得る。

一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、インビボでのそれらの弾性を、最大１日間、又は最大２日間、又は最大３日間、又は最大４日間、又は最大５日間、又は最大６日間、又は最大１週間、又は最大２週間、又は最大３週間、又は最大１ヶ月間、又は最大２ヶ月間、又は最大３ヶ月間、又は最大４ヶ月間、又は最大５ヶ月間、又は最大６ヶ月間、又は最大７ヶ月間、又は最大８ヶ月間、又は最大９ヶ月間、又は最大１０ヶ月間、又は最大１１ヶ月間、又は最大１年間にわたり実質的に維持し得る。

一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、インビボでのそれらの弾性を、約１日間、又は約２日間、又は約３日間、又は約４日間、又は約５日間、又は約６日間、又は約１週間、又は約２週間、又は約３週間、又は約１ヶ月間、又は約２ヶ月間、又は約３ヶ月間、又は約４ヶ月間、又は約５ヶ月間、又は約６ヶ月間、又は約７ヶ月間、又は約８ヶ月間、又は約９ヶ月間、又は約１０ヶ月間、又は約１１ヶ月間、又は約１年間にわたり実質的に維持し得る。

一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、インビボでのそれらの粘性を、少なくとも１日間、又は少なくとも２日間、又は少なくとも３日間、又は少なくとも４日間、又は少なくとも５日間、又は少なくとも６日間、又は少なくとも１週間、又は少なくとも２週間、又は少なくとも３週間、又は少なくとも１ヶ月間、又は少なくとも２ヶ月間、又は少なくとも３ヶ月間、又は少なくとも４ヶ月間、又は少なくとも５ヶ月間、又は少なくとも６ヶ月間、又は少なくとも７ヶ月間、又は少なくとも８ヶ月間、又は少なくとも９ヶ月間、又は少なくとも１０ヶ月間、又は少なくとも１１ヶ月間、又は少なくとも１年間にわたり実質的に維持し得る。

一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、インビボでのそれらの粘性を、最大１日間、又は最大２日間、又は最大３日間、又は最大４日間、又は最大５日間、又は最大６日間、又は最大１週間、又は最大２週間、又は最大３週間、又は最大１ヶ月間、又は最大２ヶ月間、又は最大３ヶ月間、又は最大４ヶ月間、又は最大５ヶ月間、又は最大６ヶ月間、又は最大７ヶ月間、又は最大８ヶ月間、又は最大９ヶ月間、又は最大１０ヶ月間、又は最大１１ヶ月間、又は最大１年間にわたり実質的に維持し得る。

一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、インビボでのそれらの粘性を、約１日間、又は約２日間、又は約３日間、又は約４日間、又は約５日間、又は約６日間、又は約１週間、又は約２週間、又は約３週間、又は約１ヶ月間、又は約２ヶ月間、又は約３ヶ月間、又は約４ヶ月間、又は約５ヶ月間、又は約６ヶ月間、又は約７ヶ月間、又は約８ヶ月間、又は約９ヶ月間、又は約１０ヶ月間、又は約１１ヶ月間、又は約１年間にわたり実質的に維持し得る。

一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、インビボでのそれらの容積を、少なくとも１日間、又は少なくとも２日間、又は少なくとも３日間、又は少なくとも４日間、又は少なくとも５日間、又は少なくとも６日間、又は少なくとも１週間、又は少なくとも２週間、又は少なくとも３週間、又は少なくとも１ヶ月間、又は少なくとも２ヶ月間、又は少なくとも３ヶ月間、又は少なくとも４ヶ月間、又は少なくとも５ヶ月間、又は少なくとも６ヶ月間、又は少なくとも７ヶ月間、又は少なくとも８ヶ月間、又は少なくとも９ヶ月間、又は少なくとも１０ヶ月間、又は少なくとも１１ヶ月間、又は少なくとも１年間にわたり実質的に維持し得る。

一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、インビボでのそれらの容積を、最大１日間、又は最大２日間、又は最大３日間、又は最大４日間、又は最大５日間、又は最大６日間、又は最大１週間、又は最大２週間、又は最大３週間、又は最大１ヶ月間、又は最大２ヶ月間、又は最大３ヶ月間、又は最大４ヶ月間、又は最大５ヶ月間、又は最大６ヶ月間、又は最大７ヶ月間、又は最大８ヶ月間、又は最大９ヶ月間、又は最大１０ヶ月間、又は最大１１ヶ月間、又は最大１年間にわたり実質的に維持し得る。

一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、インビボでのそれらの容積を、約１日間、又は約２日間、又は約３日間、又は約４日間、又は約５日間、又は約６日間、又は約１週間、又は約２週間、又は約３週間、又は約１ヶ月間、又は約２ヶ月間、又は約３ヶ月間、又は約４ヶ月間、又は約５ヶ月間、又は約６ヶ月間、又は約７ヶ月間、又は約８ヶ月間、又は約９ヶ月間、又は約１０ヶ月間、又は約１１ヶ月間、又は約１年間にわたり実質的に維持し得る。

製造の方法
本明細書中で提供される組織充填剤は、任意の追加の薬剤を伴って又は伴わずに、ＳＰＦベースの成分をＨＡベース成分と組み合わせることにより調製することができる。特定の実施形態では、ＳＰＦ及びＨＡの一方又は両方を、組み合わせる前に架橋してもよい。一部の実施形態では、ＳＰＦ及びＨＡを組み合わせて、次に、本明細書中に記載される架橋剤で架橋してもよい。一部の実施形態では、ＳＰＦを架橋剤で架橋して、次に、架橋してもしていなくてもよいＨＡに添加し、次に、それらの組み合せを追加の架橋に供してもよい。一部の実施形態では、ＨＡを架橋剤で架橋して、次に、架橋してもしていなくてもよいＳＰＦに添加し、次に、それらの組み合せを追加の架橋に供してもよい。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、上に記載されるように、ＳＰＦベース成分、及びＨＡベースの成分、及び追加の薬剤を組み合わせることにより調製することができる。そのような実施形態では、ＳＰＦ及びＨＡの一方又は両方を、組み合わせる前に架橋してもよい。一部の実施形態では、ＳＰＦ及びＨＡを追加の薬剤と組み合わせて、次に、本明細書中に記載される架橋剤で架橋してもよい。一部の実施形態では、追加の薬剤は、ＳＰＦ及びＨＡを組み合わせた後に添加してもよい。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、０．１：１～０．１：１０、又は０．１：１～０．１：１００、又は０．１：１０００；１：１～１：１０、又は１：１～１：１００、又は１：１～１：１０００の重量比（ＳＰＦ：ＨＡ）のＳＰＦ及びＨＡを含み得る。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、０．１：１～０．１：１０、又は０．１：１～０．１：１００、又は０．１：１０００；１：１～１：１０、又は１：１～１：１００、又は１：１～１：１０００の重量比（ＨＡ：ＳＰＦ）のＳＰＦ及びＨＡを含み得る。

一部の実施形態では、結果として得られるＨＡ／ＳＰＦの組合せ（架橋又は非架橋を問わず）を、例えば、最初に架橋されたＨＡ及び／又はＳＰＦの機械的ブレンドなどにより均質化することができる。

一部の実施形態では、ＳＰＦの溶液を提供し、架橋剤で架橋して架橋ＳＰＦをもたらし、これに、ＨＡを、その架橋形態、非架橋形態、又はその混合物のいずれかで添加することができる。結果として得られる混合物を次に均質化することができ、任意の追加の薬剤（例、リドカインを添加することができる）。

一部の実施形態では、ＳＰＦの溶液を提供し、ＨＡの存在において架橋剤で架橋して架橋ＳＰＦ－ＨＡ組成物をもたらし、これに、ＨＡを、その非架橋形態で添加しても、しなくてもよい。結果として得られる混合物を次に均質化することができ、任意の追加の薬剤（例、リドカインを添加することができる）。

一部の実施形態では、本明細書中に提供される特定のＳＰＦ製剤は、米国特許第８，２８８，３４７号もしくは第８，４５０，４７５号、又は米国特許出願公開第２００６／０１０５０２２号、第２０１６／０３７６３８２号、もしくは第２０１７／０３１５８２８号において示される調製物を使用して、ＨＡと組み合わせてもよく、又は架橋手順を利用してもよく、その全体が参照により本明細書中に組み込まれる。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される方法は、滅菌工程を含み得るが、そこで、組織充填剤又はその一部が、例えば、１２０℃～約１３０℃の温度、及び約１～１５分間の時間にわたる、１平方インチ当たり約１２～約２０ポンドの圧力に曝露される。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される方法は、脱ガス工程を含んでもよく、それにおいて、結果として得られる組織充填剤を調製する際に使用される、本明細書中に記載されるＳＰＦ、ＨＡ、又はＳＰＦ／ＨＡ溶液が脱ガスされる。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、実施例５～２０において記載される一般的な方法に従って調製されてもよい。本明細書中に記載される方法では、絹を水溶液、水性／アルコール溶液中で調製することができ、それにおいて、アルコールは、例えば、エタノール又はメタノールであることができる。本明細書中に記載される方法では、本明細書中に記載される架橋剤のいずれかを、当業者により理解されるように、ＳＰＦとＳＰＦ、ＳＰＦとＨＡ、又はＨＡとＨＡを架橋させるために適用可能として使用することができる。

治療の方法
一実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、それを必要とする患者における一つ又は複数の状態を治療する方法において提供することができる。一部の実施形態では、組織充填剤の治療有効量は、状態又は他の組織欠損を治療するために、それを必要とする患者の組織中に送達することができる。

本明細書中で使用されるように、用語「治療している（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、「治療する（ｔｒｅａｔ）」、又は「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、患者において、状態、例えば軟組織の状態などの美容的又は臨床的症状を低下又は排除する、あるいは、個体において、状態の美容的又は臨床的症状の発症を遅延又は予防することを指す。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤により治療される状態は、軟部組織状態を含み得る。軟組織の状態は、限定されないが、身体の一部、部分、又は領域の増大、再建、疾患、障害、欠損、又は不完全性を含む。一態様では、開示される組織充填剤により治療される軟組織状態は、限定されないが、顔面の増大、顔面の再建、顔面の疾患、顔面の障害、顔面の欠損、又は顔面の不完全性を含む。一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤により治療される軟組織状態は、限定されないが、皮膚の脱水、皮膚弾力の欠如、肌荒れ、皮膚の張りの欠如、皮膚のストレッチライン又はマーク、皮膚の蒼白、皮膚の陥没、頬のこけ、窪んだこめかみ、唇の薄さ、尿道の欠損、皮膚の欠損、乳房の欠損、眼窩後部の欠損、顔面のひだ、又は皺を含む。一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤により治療される軟組織状態は、限定されないが、乳房の不完全性、欠損、疾患、及び／又は障害、例えば、乳房の増大、乳房の再建、乳房固定術、小乳房症、胸椎低形成症、ポーランド症候群、被膜収縮及び／又は破裂などのインプラント合併症に起因する欠損；顔面の不完全性、欠損、疾患、又は障害、例えば、顔面の増大、顔面の再建、Ｐａｒｒｙ－Ｒｏｍｂｅｒｇ症候群、エリテマトーデスの隆起、皮膚の陥没、陥没した頬、陥没したこめかみ、唇の薄さ、鼻の不完全性又は欠損、後眼窩の不完全性又は欠損、顔面のひだ、線、及び／又は眉間線などの皺、鼻唇溝、口周囲線、及び／又はマリオネットライン、及び／又は顔の他の輪郭の変形もしくは不完全性；首の不完全性、欠損、疾患、又は障害；皮膚の不完全性、欠損、疾患、及び／又は障害；他の軟部組織の不完全性、欠損、疾患、及び／又は障害、例えば、上腕、下肢、手、肩、背中、腹部を含む胴体、殿部、上腿、ふくらはぎを含む下腿、足底脂肪パッドを含む足、眼、生殖器、又は他の身体部分、部位、もしくは領域の増大又は再構成、あるいはこれらの身体部分、部位、もしくは領域に影響を及ぼす疾患もしくは障害など；尿失禁、便失禁、他の型の失禁；及び胃食道逆流症（ＧＥＲＤ）を含む。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、限定されないが、皮膚、真皮組織、真皮下組織、皮膚組織、皮下組織、硬膜内組織、筋肉、腱、靭帯、線維組織、脂肪、血管及び動脈、神経、ならびに滑膜（皮内）組織を含む軟組織に送達することができる。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、細胞付着、移動、及び増殖シグナルと共に人工生分解性マトリックスを提供することにより治癒を助けるために、創傷中に直接配置することができる。一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤を、生分解性メッシュもしくは他の移植された材料上に被覆することができ、又はそれ自体をシートもしくは他の構造中に形成することができ、又は水和形態で維持することができる。

一部の実施形態では、本明細書中に開示される方法のいずれかと共に使用される組成物の量は、所望の変化及び／又は改善、所望の状態の症状の低下及び／又は除去、個人及び／又は医師により望まれる臨床及び／又は美容効果、ならびに治療される身体部分又は領域に基づいて決定される。組成物投与の有効性は、以下の臨床的及び／又は美容的尺度の一つ又は複数により表すことができる：変化及び／又は改善した軟組織形状、変化及び／又は改善した軟組織サイズ、変化及び／又は改善した軟組織輪郭、変化及び／又は改善した組織機能、組織内部成長サポート、及び／又は新たなコラーゲン沈着、組織充填剤の持続生着、改善した患者の満足度及び／又は生活の質、ならびに移植可能異物の減少した使用。例えば、乳房増大の手順について、組成物及び方法の有効性は、以下の臨床的及び／又は美容的尺度の一つ又は複数により表すことができる：増加した乳房サイズ、変化した乳房形状、変化した乳房輪郭、持続生着、莢膜収縮のリスクにおける低下、脂肪壊死性嚢胞形成の減少した速度、改善した患者の満足度及び／又は生活の質、ならびに乳房インプラントの減少した使用。

一部の実施形態では、顔面軟部組織を治療する際での組織充填剤及び方法の有効性は、以下の臨床的及び／又は美容的尺度の一つ又は複数により明らかにされ得る：唇、頬、こめかみ、又は眼領域の増加したサイズ、形状、及び／又は輪郭など、顔面特色の増加したサイズ、形状、及び／又は輪郭；唇、頬、こめかみ、又は眼領域の形状の変化したサイズ、形状、及び／又は輪郭など、顔面特色の変化したサイズ、形状、及び／又は輪郭；皮膚の皺、ひだ、又はラインの低下又は除去；皮膚の皺、ひだ、又はラインに対する抵抗性；皮膚の再水和；皮膚に対する増加した弾性；皮膚の粗さの低下又は除去；増加及び／又は改善された皮膚張り；ストレッチライン又はマークの低下又は除去；増加及び／又は改善された皮膚の色合い、ツヤ、明るさ、及び／又は輝き；増加及び／又は改善された皮膚の色、皮膚蒼白の低下又は除去；組成物の持続的な生着；減少された副作用；改善された患者の満足度及び／又は生活の質。

一部の実施形態では、本発明は、組織充填剤及び真皮領域を含む治療の方法を提供する。本明細書中で使用されるように、用語「真皮領域」は、表皮真皮接合部ならびに表在真皮（乳頭領域）及び深部真皮（網状領域）を含む真皮を含む皮膚の領域を指す。皮膚は三つの一次層で構成される：防水性を提供し、感染に対するバリアとして機能する表皮；皮膚の付属物のための場所としての役目を果たす真皮；及び皮下組織（皮下脂肪層）。表皮は血管を含まず、真皮からの拡散により栄養供給される。表皮を構成する細胞の主な種類は、ケラチノサイト、メラノサイト、ランゲルハンス細胞、及びメルケル細胞である。

真皮は、結合組織からなり、応力及び歪みからの身体のクッションとなる、表皮の下の皮膚の層である。真皮は、基底膜により表皮に堅固に結合されている。また、触覚及び熱の感覚を提供する多くの機械受容体／神経終末を持つ。それは、毛包、汗腺、皮脂腺、アポクリン腺、リンパ管、及び血管を含む。真皮中の血管は、それ自体の細胞からの、ならびに表皮の基底層からの栄養分供給及び廃棄物除去を提供する。真皮は、構造的に二つの領域中に分割される：表皮に隣接する表在領域（乳頭領域と呼ばれる）及びより深部のより厚い領域（網状領域として公知）。

乳頭領域は、疎性の乳輪結合組織で構成されている。それは、表皮に向かって延びる乳頭と呼ばれるその指状突出部にちなんで命名されている。乳頭は、表皮と互いに組み合わせられる「でこぼこ」表面を真皮に提供して、皮膚の二つの層の間の接続を強化する。網状領域は乳頭領域中の深くにあり、通常、ずっと厚い。それは、密で不規則な結合組織で構成され、その全体を通して織られている、高密度のコラーゲン線維、弾性線維、及び網状線維からその名を受けている。これらのタンパク質線維は、強度、拡張性、及び弾力性というその性質を真皮に与える。また、毛根、皮脂腺、汗腺、受容体、爪、及び血管が、網状領域内に位置付けられる。妊娠からのストレッチマークが、例えば、真皮中に位置付けられる。

皮下組織は、真皮の下にある。その目的は、皮膚の真皮領域をその下部に存在する骨及び筋肉に付着させ、ならびに、それに血管及び神経を供給することである。それは、疎性結合組織及びエラスチンからなる。主な細胞種は、線維芽細胞、マクロファージ、及び脂肪細胞（皮下組織は、体脂肪の５０％を含む）である。脂肪は、身体のためのパディング及び絶縁体としての役割を果たす。

一部の実施形態では、本明細書中に開示される組織充填剤は、真皮領域又は真皮組織領域中への注入により個体の皮膚領域に投与される。一部の実施形態では、本明細書中に開示される組織充填剤は、例えば、表皮真皮接合領域、乳頭領域、網状領域、又はそれらの任意の組合せへの注入により、個体の真皮領域中に投与される。

一部の実施形態では、本発明は、個体の軟組織状態を治療する方法を提供し、本明細書中に開示される一つ又は複数の組織充填剤を、個体の軟組織状態の部位に投与することを含み、組成物の投与が、軟組織状態を改善させて、それにより、軟組織状態を治療することを含む。一部の実施形態では、軟組織状態は、乳房組織の状態、顔面組織の状態、頸部の状態、皮膚の状態、上腕の状態、下腕の状態、手部の状態、肩部の状態、背部の状態、胴部（腹部を含む）の状態、臀部の状態、大腿の状態、下腿の状態（ふくらはぎの状態を含む）、足部の状態（足底脂肪パッドの状態を含む）、眼の状態、生殖器の状態、又は他の身体の一部、部分、もしくは領域に影響を及ぼす状態である。

一部の実施形態では、本発明は、皮膚状態を治療する方法を提供し、本明細書中に開示される一つ又は複数の組織充填剤を、皮膚状態を罹患した個体に投与することを含み、組織充填剤の投与が、皮膚状態を改善させて、それにより、皮膚状態を治療することを含む。一部の実施形態では、皮膚状態は、皮膚脱水を含み、治療の方法は、本明細書中に開示される一つ又は複数の組織充填剤を、皮膚脱水に罹患している個体に投与することを含み、組織充填剤の投与は、皮膚を再水和し、それにより、皮膚脱水を治療する。これらの実施形態の別の態様では、皮膚弾力の欠如を治療する方法は、本明細書中に開示される組織充填剤を、皮膚弾力の欠如に罹患している個体に投与することを含み、組織充填剤の投与が、皮膚の弾力を増加させて、それにより、皮膚弾力を治療する。これらの実施形態のさらに別の態様では、肌荒れを治療する方法は、本明細書中に開示される組成物を、肌荒れに罹患している個体に投与することを含み、組成物の投与が、肌荒れを減少させて、それにより、肌荒れを治療する。一部の実施形態では、皮膚の張りの欠如を治療する方法は、本明細書中に開示される組織充填剤を、皮膚の張りの欠如に罹患している個体に投与することを含み、組織充填剤の投与が、皮膚の張りを向上させて、それにより、皮膚の張りの欠如を治療する。

一部の実施形態では、本発明は、皮膚のストレッチライン又はマークを治療する方法を提供し、本明細書中に開示される一つ又は複数の組織充填剤を、皮膚のストレッチライン又はマークに罹患している個体に投与することを含み、一つ又は複数の組織充填剤の投与が、皮膚のストレッチライン又はマークを低下又は排除して、それにより、皮膚のストレッチライン又はマークを治療することを含む。一部の実施形態では、皮膚蒼白を治療する方法は、本明細書中に開示される組織充填剤を、皮膚蒼白に罹患している個体に投与することを含み、組織充填剤の投与が、皮膚の色調又は輝きを増加させて、それにより、皮膚蒼白を治療する。一部の実施形態では、皮膚の皺を治療する方法は、本明細書中に開示される組織充填剤を、皮膚の皺に罹患している個体に投与することを含み、組織充填剤の投与が、皮膚の皺を低下又は排除して、それにより、皮膚の皺を治療する。これらの実施形態のさらに別の態様では、皮膚の皺を治療する方法は、本明細書中に開示される組織充填剤を個体に投与することを含み、組織充填剤の投与が、皮膚の皺に対して皮膚を抵抗性にして、それにより、皮膚の皺を治療する。

一部の実施形態では、本発明は、本明細書中に開示される組成物の投与を提供し、そのような投与は、新たなコラーゲンの沈着又は形成を促進させる。本明細書中に記載される組織充填剤は、組織の内部成長及びコラーゲンの新たな沈着又は生成をサポートすることができる。

本発明のいずれか一つの理論に限定されないが、本明細書中に記載される組織充填剤の調製において使用されるＳＰＦの分子量は、結果として得られる組織の増殖及び初期の炎症応答に続く成熟化応答を通じてコラーゲンの沈着又は形成を誘発させるために、選択された組織で軽度の炎症応答を提供するように調整することができる。実際に、より高い分子量のＳＰＦが、増加した炎症応答をもたらし得る一方で、より低い分子量のＳＰＦは、ほとんど又は全く炎症応答をもたらさないことがある。

本発明のいずれか一つの理論に限定されないが、本明細書中に記載される組織充填剤は、結果として得られる炎症応答、ならびに、それにより、増殖及び成熟化組織応答を通じたコラーゲン形成を調節できるという予想外の属性を提供する。なぜなら、本明細書中で使用されるＳＰＦ溶液が、広いというよりはむしろ狭い多分散性を有するからである。一実施形態では、本明細書中に開示される組織充填剤の投与は、新たなコラーゲン沈着を増加させる。

一部の実施形態では、本明細書中に開示される組織の投与は、ＨＡを含むがＳＰＦを欠く同じ又は類似の組織充填剤と比べて、新たなコラーゲンの沈着又は形成を約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％だけ増加させる。

一部の実施形態では、本明細書中に開示される組織充填剤の投与は、ＨＡを含むがＳＰＦを欠く同じ又は類似の組織充填剤と比べて、新たなコラーゲンの沈着又は形成を少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、少なくとも１３％、少なくとも１４％、少なくとも１５％、少なくとも１６％、少なくとも１７％、少なくとも１８％、少なくとも１９％、少なくとも２０％、少なくとも２１％、少なくとも２２％、少なくとも２３％、少なくとも２４％、少なくとも２５％、少なくとも２６％、少なくとも２７％、少なくとも２８％、少なくとも２９％、少なくとも３０％、少なくとも３１％、少なくとも３２％、少なくとも３３％、少なくとも３４％、少なくとも３５％、少なくとも３６％、少なくとも３７％、少なくとも３８％、少なくとも３９％、少なくとも４０％、少なくとも４１％、少なくとも４２％、少なくとも４３％、少なくとも４４％、少なくとも４５％、少なくとも４６％、少なくとも４７％、少なくとも４８％、少なくとも４９％、少なくとも５０％、少なくとも５１％、少なくとも５２％、少なくとも５３％、少なくとも５４％、少なくとも５５％、少なくとも５６％、少なくとも５７％、少なくとも５８％、少なくとも５９％、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも１００％、少なくとも１２５％、少なくとも１５０％、少なくとも１７５％、少なくとも２００％、少なくとも２２５％、少なくとも２５０％、少なくとも２７５％、又は少なくとも３００％だけ増加させる。

一部の実施形態では、本明細書中に開示される組織充填剤の投与は、ＨＡを含むがＳＰＦを欠く同じ又は類似の組織充填剤と比べて、新たなコラーゲンの沈着又は形成を最大１％、最大２％、最大３％、最大４％、最大５％、最大６％、最大７％、最大８％、最大９％、最大１０％、最大１１％、最大１２％、最大１３％、最大１４％、最大１５％、最大１６％、最大１７％、最大１８％、最大１９％、最大２０％、最大２１％、最大２２％、最大２３％、最大２４％、最大２５％、最大２６％、最大２７％、最大２８％、最大２９％、最大３０％、最大３１％、最大３２％、最大３３％、最大３４％、最大３５％、最大３６％、最大３７％、最大３８％、最大３９％、最大４０％、最大４１％、最大４２％、最大４３％、最大４４％、最大４５％、最大４６％、最大４７％、最大４８％、最大４９％、最大５０％、最大５１％、最大５２％、最大５３％、最大５４％、最大５５％、最大５６％、最大５７％、最大５８％、最大５９％、最大６０％、最大６１％、最大６２％、最大６３％、最大６４％、最大６５％、最大６６％、最大６７％、最大６８％、最大６９％、最大７０％、最大７１％、最大７２％、最大７３％、最大７４％、最大７５％、最大７６％、最大７７％、最大７８％、最大７９％、最大８０％、最大８１％、最大８２％、最大８３％、最大８４％、最大８５％、最大８６％、最大８７％、最大８８％、最大８９％、最大９０％、最大９１％、最大９２％、最大９３％、最大９４％、最大９５％、最大９６％、最大９７％、最大９８％、最大９９％、最大１００％、最大１２５％、最大１５０％、最大１７５％、最大２００％、最大２２５％、最大２５０％、最大２７５％、又は最大３００％だけ増加させる。

一部の実施形態では、本明細書中に開示される組織充填剤の投与は、ＨＡを含むがＳＰＦを欠く同じ又は類似の組織充填剤と比べて、新たなコラーゲンの沈着又は形成を約１％～約１０％、約１０％～約５０％、約１０％～約１００％、約５０％～約１５０％、約１００％～約２００％、約１５０％～約２５０％、約２００％～約３００％、約３５０％～約４５０％、約４００％～約５００％、約５５０％～約６５０％、約６００％～約７００％だけ増加させる。

一部の実施形態では、本明細書中に開示される方法のいずれかと使用される組織充填剤の量は、典型的には、治療有効量である。本明細書中で使用されるように、用語「治療有効量」は、「有効量」、「治療有効用量」、及び／又は「有効用量」と同義であり、それを必要とする患者において、予測される生物学的、美容的、又は臨床的応答を誘発する組織充填剤の量を指す。非限定的な例として、有効量は、本明細書に開示された臨床的及び／又は美容的対策の一つ又は複数を達成するのに十分な量である。開示される方法の特定の適用のために投与される適した有効量が、本明細書中に提供される指針を使用して、当業者により決定されることができる。例えば、有効量は、本明細書中に記載される任意の及び全てのインビトロ及びインビボアッセイから推定することができる。当業者は、個体の状態を治療の経過を通してモニタリングすることができること、及び投与される、本明細書中に開示される組成物の有効量を適宜調節することができることを認識する。

一部の実施形態では、投与される組織充填剤の量は、少なくとも０．００１ｇ、又は少なくとも０．００２ｇ、又は少なくとも０．００３ｇ、又は少なくとも０．００４ｇ、又は少なくとも０．００５ｇ、又は少なくとも０．００６ｇ、又は少なくとも０．００７ｇ、又は少なくとも０．００８ｇ、又は少なくとも０．００９ｇ、又は少なくとも０．０１ｇ、又は少なくとも０．０２ｇ、又は少なくとも０．０３ｇ、又は少なくとも０．０４ｇ、又は少なくとも０．０５ｇ、又は少なくとも０．０６ｇ、又は少なくとも０．０７ｇ、又は少なくとも０．０８ｇ、又は少なくとも０．０９ｇ、又は少なくとも０．１ｇ、又は少なくとも０．２ｇ、又は少なくとも０．３ｇ、又は少なくとも０．４ｇ、又は少なくとも０．５ｇ、又は少なくとも０．６ｇ、又は少なくとも０．７ｇ、又は少なくとも０．８ｇ、又は少なくとも０．９ｇ、又は少なくとも１ｇ、又は少なくとも２ｇ、又は少なくとも３ｇ、又は少なくとも４ｇ、又は少なくとも５ｇ、又は少なくとも６ｇ、又は少なくとも７ｇ、又は少なくとも８ｇ、又は少なくとも９ｇ、又は少なくとも１０ｇ、又は少なくとも１１ｇ、又は少なくとも１２ｇ、又は少なくとも１３ｇ、又は少なくとも１４ｇ、又は少なくとも１５ｇ、又は少なくとも２０ｇ、又は少なくとも２５ｇ、又は少なくとも３０ｇ、又は少なくとも３５ｇ、又は少なくとも４０ｇ、又は少なくとも４５ｇ、又は少なくとも５０ｇ、又は少なくとも５５ｇ、又は少なくとも６０ｇ、又は少なくとも６５ｇ、又は少なくとも７０ｇ、又は少なくとも７５ｇ、又は少なくとも８０ｇ、又は少なくとも８５ｇ、又は少なくとも９０ｇ、又は少なくとも９５ｇ、又は少なくとも１００ｇである。

一部の実施形態では、投与される組織充填剤の量は、最大０．００１ｇ、又は最大０．００２ｇ、又は最大０．００３ｇ、又は最大０．００４ｇ、又は最大０．００５ｇ、又は最大０．００６ｇ、又は最大０．００７ｇ、又は最大０．００８ｇ、又は最大０．００９ｇ、又は最大０．０１ｇ、又は最大０．０２ｇ、又は最大０．０３ｇ、又は最大０．０４ｇ、又は最大０．０５ｇ、又は最大０．０６ｇ、又は最大０．０７ｇ、又は最大０．０８ｇ、又は最大で０．０９ｇ、又は最大で０．１ｇ、又は最大で０．２ｇ、又は最大で０．３ｇ、又は最大で０．４ｇ、又は最大で０．５ｇ、又は最大で０．６ｇ、又は最大で０．７ｇ、又は最大０．８ｇ、又は最大０．９ｇ、又は最大１ｇ、又は最大２ｇ、又は最大３ｇ、又は最大４ｇ、又は最大５ｇ、又は最大６ｇ、又は最大７ｇ、又は最大８ｇ、又は最大９ｇ、又は最大１０ｇ、又は最大１１ｇ、又は最大１２ｇ、又は最大１３ｇ、又は最大１４ｇ、又は最大１５ｇ、又は最大２０ｇ、又は最大２５ｇ、又は最大３０ｇ、又は最大３５ｇ、又は最大４０ｇ、又は最大４５ｇ、又は最大５０ｇ、又は最大５５ｇ、又は最大６０ｇ、又は最大６５ｇ、又は最大７０ｇ、又は最大７５ｇ、又は最大８０ｇ、又は最大８５ｇ、又は最大９０ｇ、又は最大９５ｇ、又は最大１００ｇである。

一部の実施形態では、投与される組織充填剤の量は、約０．００１ｇ、又は約０．００２ｇ、又は約０．００３ｇ、又は約０．００４ｇ、又は約０．００５ｇ、又は約０．００６ｇ、又は約０．００７ｇ、又は約０．００８ｇ、又は約０．００９ｇ、又は約０．０１ｇ、又は約０．０２ｇ、又は約０．０３ｇ、又は約０．０４ｇ、又は約０．０５ｇ、又は約０．０６ｇ、又は約０．０７ｇ、又は約０．０８ｇ、又は約０．０９ｇ、又は約０．１ｇ、又は約０．２ｇ、又は約０．３ｇ、又は約０．４ｇ、又は約０．５ｇ、又は約０．６ｇ、又は約０．７ｇ、又は約０．８ｇ、又は約０．９ｇ、又は約１ｇ、又は約２ｇ、又は約３ｇ、又は約４ｇ、又は約５ｇ、又は約６ｇ、又は約７ｇ、又は約８ｇ、又は約９ｇ、又は約１０ｇ、又は約１１ｇ、又は約１２ｇ、又は約１３ｇ、又は約１４ｇ、又は約１５ｇ、又は約２０ｇ、又は約２５ｇ、又は約３０ｇ、又は約３５ｇ、又は約４０ｇ、又は約４５ｇ、又は約５０ｇ、又は約５５ｇ、又は約６０ｇ、又は約６５ｇ、又は約７０ｇ、又は約７５ｇ、又は約８０ｇ、又は約８５ｇ、又は約９０ｇ、又は約９５ｇ、又は約１００ｇである。

一部の実施形態では、投与される組織充填剤の量は、０．００１ｇ～０．０１ｇ、又は０．０１ｇ～０．１ｇ、又は０．１ｇ～１ｇ、又は１ｇ～１０ｇ、又は１０ｇ～２０ｇ、又は２０ｇ～３０ｇ、又は３０ｇ～４０ｇ、又は４０ｇ～５０ｇ、又は５０ｇ～６０ｇ、又は６０ｇ～７０ｇ、又は７０ｇ～８０ｇ、又は８０ｇ～９０ｇ、又は９０ｇ～１００ｇである。

一部の実施形態では、投与される組織充填剤の容積は、少なくとも０．０１ｍＬ、又は少なくとも０．０２ｍＬ、又は少なくとも０．０３ｍＬ、又は少なくとも０．０４ｍＬ、又は少なくとも０．０５ｍＬ、又は少なくとも０．０６ｍＬ、又は少なくとも０．０７ｍＬ、又は少なくとも０．０８ｍＬ、又は少なくとも０．０９ｍＬ、又は少なくとも０．１０ｍＬ、又は少なくとも０．１５ｍＬ、又は少なくとも０．２０ｍＬ、又は少なくとも０．２５ｍＬ、又は少なくとも０．３０ｍＬ、又は少なくとも０．３５ｍＬ、又は少なくとも０．４０ｍＬ、又は少なくとも０．４５ｍＬ、又は少なくとも０．５０ｍＬ、又は少なくとも０．５５ｍＬ、又は少なくとも０．６０ｍＬ、又は少なくとも０．６５ｍＬ、又は少なくとも０．７０ｍＬ、又は少なくとも０．７５ｍＬ、又は少なくとも０．８０ｍＬ、又は少なくとも０．８５ｍＬ、又は少なくとも０．９０ｍＬ、又は少なくとも０．９５ｍＬ、又は少なくとも１ｍＬ、又は少なくとも２ｍＬ、又は少なくとも３ｍＬ、又は少なくとも４ｍＬ、又は少なくとも５ｍＬ、又は少なくとも６ｍＬ、又は少なくとも７ｍＬ，又は少なくとも８ｍＬ、又は少なくとも９ｍＬ、又は少なくとも１０ｍＬ、又は少なくとも１５ｍＬ、又は少なくとも２０ｍＬ、又は少なくとも２５ｍＬ、又は少なくとも３０ｍＬ、又は少なくとも３５ｍＬ、又は少なくとも４０ｍＬ、又は少なくとも４５ｍＬ、又は少なくとも５０ｍＬ、又は少なくとも５５ｍＬ、又は少なくとも６０ｍＬ、又は少なくとも６５ｍＬ、又は少なくとも７０ｍＬ、又は少なくとも７５ｍＬ、又は少なくとも８０ｍＬ、又は少なくとも８５ｍＬ、又は少なくとも９０ｍＬ、又は少なくとも９５ｍＬ、又は少なくとも１００ｍＬ、又は少なくとも１１０ｍＬ、又は少なくとも１２０ｍＬ、又は少なくとも１３０ｍＬ、又は少なくとも１４０ｍＬ、又は少なくとも１５０ｍＬ、又は少なくとも１６０ｍＬ、又は少なくとも１７０ｍＬ、又は少なくとも１８０ｍＬ、又は少なくとも１９０ｍＬ、又は少なくとも２００ｍＬ、又は少なくとも２１０ｍＬ、又は少なくとも２２０ｍＬ、又は少なくとも２３０ｍＬ、又は少なくとも２４０ｍＬ、又は少なくとも２５０ｍＬ、又は少なくとも２６０ｍＬ、又は少なくとも２７０ｍＬ、又は少なくとも２８０ｍＬ、又は少なくとも２９０ｍＬ、又は少なくとも３００ｍＬ、又は少なくとも３２５，３５０ｍＬ、又は少なくとも３７５ｍＬ、又は少なくとも４００ｍＬ、又は少なくとも４２５ｍＬ、又は少なくとも４５０ｍＬ、又は少なくとも４７５ｍＬ、又は少なくとも５００ｍＬ、又は少なくとも５２５ｍＬ、又は少なくとも５５０ｍＬ、又は少なくとも５７５ｍＬ、又は少なくとも６００ｍＬ、又は少なくとも６２５ｍＬ、又は少なくとも６５０ｍＬ、又は少なくとも６７５ｍＬ、又は少なくとも７００ｍＬ、又は少なくとも７２５ｍＬ、又は少なくとも７５０ｍＬ、又は少なくとも７７５ｍＬ、又は少なくとも８００ｍＬ、又は少なくとも８２５ｍＬ、又は少なくとも８５０ｍＬ、又は少なくとも８７５ｍＬ、又は少なくとも９００ｍＬ、又は少なくとも９２５ｍＬ、又は少なくとも９５０ｍＬ、又は少なくとも９７５ｍＬ、又は少なくとも１０００ｍＬである。

一部の実施形態では、投与される組織充填剤の容積は、最大０．０１ｍＬ、又は最大０．０２ｍＬ、又は最大０．０３ｍＬ、又は最大０．０４ｍＬ、又は最大０．０５ｍＬ、又は最大０．０６ｍＬ、又は最大０．０７ｍＬ、又は最大０．０８ｍＬ、又は最大０．０９ｍＬ、又は最大０．１０ｍＬ、又は最大０．１５ｍＬ、又は最大０．２０ｍＬ、又は最大０．２５ｍＬ、又は最大０．３０ｍＬ、又は最大０．３５ｍＬ、又は最大０．４０ｍＬ、又は最大０．４５ｍＬ、又は最大０．５０ｍＬ、又は最大０．５５ｍＬ、又は最大０．６０ｍＬ、又は最大０．６５ｍＬ、又は最大０．７０ｍＬ、又は最大０．７５ｍＬ、又は最大０．８０ｍＬ、又は最大０．８５ｍＬ、又は最大０．９０ｍＬ、又は最大０．９５ｍＬ、又は最大１ｍＬ、又は最大２ｍＬ、又は最大３ｍＬ、又は最大４ｍＬ、又は最大５ｍＬ、又は最大６ｍＬ、又は最大７ｍＬ、又は最大８ｍＬ、又は最大９ｍＬ、又は最大１０ｍＬ、又は最大１５ｍＬ、又は最大２０ｍＬ、又は最大２５ｍＬ、又は最大３０ｍＬ、又は最大３５ｍＬ、又は最大４０ｍＬ、又は最大４５ｍＬ、又は最大５０ｍＬ、又は最大５５ｍＬ、又は最大６０ｍＬ、又は最大６５ｍＬ、又は最大７０ｍＬ、又は最大７５ｍＬ、又は最大８０ｍＬ、又は最大８５ｍＬ、又は最大９０ｍＬ、又は最大９５ｍＬ、又は最大１００ｍＬ、又は最大１１０ｍＬ、又は最大１２０ｍＬ、又は最大１３０ｍＬ、又は最大１４０ｍＬ、又は最大１５０ｍＬ、又は最大１６０ｍＬ、又は最大１７０ｍＬ、又は最大１８０ｍＬ、又は最大１９０ｍＬ、又は最大２００ｍＬ、又は最大２１０ｍＬ、又は最大２２０ｍＬ、又は最大２３０ｍＬ、又は最大２４０ｍＬ、又は最大２５０ｍＬ、又は最大２６０ｍＬ、又は最大２７０ｍＬ、又は最大２８０ｍＬ、又は最大２９０ｍＬ、又は最大３００ｍＬ、又は最大３２５，３５０ｍＬ、又は最大３７５ｍＬ、又は最大４００ｍＬ、又は最大４２５ｍＬ、又は最大４５０ｍＬ、又は最大４７５ｍＬ、又は最大５００ｍＬ、又は最大５２５ｍＬ、又は最大５５０ｍＬ、又は最大５７５ｍＬ、又は最大６００ｍＬ、又は最大６２５ｍＬ、又は最大６５０ｍＬ、又は最大６７５ｍＬ、又は最大７００ｍＬ、又は最大７２５ｍＬ、又は最大７５０ｍＬ、又は最大７７５ｍＬ、又は最大８００ｍＬ、又は最大８２５ｍＬ、又は最大８５０ｍＬ、又は最大８７５ｍＬ、又は最大９００ｍＬ、又は最大９２５ｍＬ、又は最大９５０ｍＬ、又は最大９７５ｍＬ、又は最大１０００ｍＬである。

一部の実施形態では、投与される組織充填剤の容積は、約０．０１ｍＬ、又は約０．０２ｍＬ、又は約０．０３ｍＬ、又は約０．０４ｍＬ、又は約０．０５ｍＬ、又は約０．０６ｍＬ、又は約０．０７ｍＬ、又は約０．０８ｍＬ、又は約０．０９ｍＬ、又は約０．１０ｍＬ、又は約０．１５ｍＬ、又は約０．２０ｍＬ、又は約０．２５ｍＬ、又は約０．３０ｍＬ、又は約０．３５ｍＬ、又は約０．４０ｍＬ、又は約０．４５ｍＬ、又は約０．５０ｍＬ、又は約０．５５ｍＬ、又は約０．６０ｍＬ、又は約０．６５ｍＬ、又は約０．７０ｍＬ、又は約０．７５ｍＬ、又は約０．８０ｍＬ、又は約０．８５ｍＬ、又は約０．９０ｍＬ、又は約０．９５ｍＬ、又は約１ｍＬ、又は約２ｍＬ、又は約３ｍＬ、又は約４ｍＬ、又は約５ｍＬ、又は約６ｍＬ、又は約７ｍＬ、又は約８ｍＬ、又は約９ｍＬ、又は約１０ｍＬ、又は約１１ｍＬ、又は約１２ｍＬ、又は約１３ｍＬ、又は約１４ｍＬ、又は約１５ｍＬ、又は約１６ｍＬ、又は約１７ｍＬ、又は約１８ｍＬ、又は約１９ｍＬ、又は約２０ｍＬ、又は約２１ｍＬ、又は約２２ｍＬ、又は約２３ｍＬ、又は約２４ｍＬ、又は約２５ｍＬ、又は約２６ｍＬ、又は約２７ｍＬ、又は約２８ｍＬ、又は約３０ｍＬ、又は約３５ｍＬ、又は約３６ｍＬ、又は約３７ｍＬ、又は約３８ｍＬ、又は約３９ｍＬ、又は約４０ｍＬ、又は約４１ｍＬ、又は約４２ｍＬ、又は約４３ｍＬ、又は約４４ｍＬ、又は約４５ｍＬ、又は約４６ｍＬ、又は約４７ｍＬ、又は約４８ｍＬ、又は約４９ｍＬ、又は約５０ｍＬ、又は約５１ｍＬ、又は約５２ｍＬ、又は約５３ｍＬ、又は約５４ｍＬ、又は約５５ｍＬ、又は約５６ｍＬ、又は約５７ｍＬ、又は約５８ｍＬ、又は約５９ｍＬ、又は約６０ｍＬ、又は約６１ｍＬ、又は約６２ｍＬ、又は約６３ｍＬ、又は約６４ｍＬ、又は約６５ｍＬ、又は約６６ｍＬ、又は約６７ｍＬ、又は約６８ｍＬ、又は約６９ｍＬ、又は約７０ｍＬ、又は約７１ｍＬ、又は約７２ｍＬ、又は約７３ｍＬ、又は約７４ｍＬ、又は約７５ｍＬ、又は約７６ｍＬ、又は約７７ｍＬ、又は約７８ｍＬ、又は約７９ｍＬ、又は約８０ｍＬ、又は約８１ｍＬ、又は約８２ｍＬ、又は約８３ｍＬ、又は約８４ｍＬ、又は約８５ｍＬ、又は約８６ｍＬ、又は約８７ｍＬ、又は約８８ｍＬ、又は約８９ｍＬ、又は約９０ｍＬ、又は約９１ｍＬ、又は約９２ｍＬ、又は約９３ｍＬ、又は約９４ｍＬ、又は約９５ｍＬ、又は約９６ｍＬ、又は約９７ｍＬ、又は約９８ｍＬ、又は約９９ｍＬ、又は約１００ｍＬ、又は約１１０ｍＬ、又は約１２０ｍＬ、又は約１３０ｍＬ、又は約１４０ｍＬ、又は約１５０ｍＬ、又は約１６０ｍＬ、又は約１７０ｍＬ、又は約１８０ｍＬ、又は約１９０ｍＬ、又は約２００ｍＬ、又は約２１０ｍＬ、又は約２２０ｍＬ、又は約２３０ｍＬ、又は約２４０ｍＬ、又は約２５０ｍＬ、又は約２６０ｍＬ、又は約２７０ｍＬ、又は約２８０ｍＬ、又は約２９０ｍＬ、又は約３００ｍＬ、又は約３１０ｍＬ、又は約３２０ｍＬ、又は約３３０ｍＬ、又は約３４０ｍＬ、又は約３５０ｍＬ、又は約３６０ｍＬ、又は約３７０ｍＬ、又は約３８０ｍＬ、又は約３９０ｍＬ、又は約４００ｍＬ、又は約４１０ｍＬ、又は約４２０ｍＬ、又は約４３０ｍＬ、又は約４４０ｍＬ、又は約４５０ｍＬ、又は約４６０ｍＬ、又は約４７０ｍＬ、又は約４８０ｍＬ、又は約４９０ｍＬ、又は約５００ｍＬ、又は約５１０ｍＬ、又は約５２０ｍＬ、又は約５３０ｍＬ、又は約５４０ｍＬ、又は約５５０ｍＬ、又は約５６０ｍＬ、又は約５７０ｍＬ、又は約５８０ｍＬ、又は約５９０ｍＬ、又は約６００ｍＬ、又は約６１０ｍＬ、又は約６２０ｍＬ、又は約６３０ｍＬ、又は約６４０ｍＬ、又は約６５０ｍＬ、又は約６６０ｍＬ、又は約６７０ｍＬ、又は約６８０ｍＬ、又は約６９０ｍＬ、又は約７００ｍＬ、又は約７１０ｍＬ、又は約７２０ｍＬ、又は約７３０ｍＬ、又は約７４０ｍＬ、又は約７５０ｍＬ、又は約７６０ｍＬ、又は約７７０ｍＬ、又は約７８０ｍＬ、又は約７９０ｍＬ、又は約８００ｍＬ、又は約８１０ｍＬ、又は約８２０ｍＬ、又は約８３０ｍＬ、又は約８４０ｍＬ、又は約８５０ｍＬ、又は約８６０ｍＬ、又は約８７０ｍＬ、又は約８８０ｍＬ、又は約８９０ｍＬ、又は約９００ｍＬ、又は約９１０ｍＬ、又は約９２０ｍＬ、又は約９３０ｍＬ、又は約９４０ｍＬ、又は約９５０ｍＬ、又は約９６０ｍＬ、又は約９７０ｍＬ、又は約９８０ｍＬ、又は約９９０ｍＬ、又は約１０００ｍＬである。

一部の実施形態では、投与される組織充填剤の容積は、０．０１ｍＬ～０．１０ｍＬ、又は０．１０ｍＬ～１ｍＬ、又は１ｍＬ～１０ｍＬ、又は１０ｍＬ～１００ｍＬ、又は５０ｍＬ～１００ｍＬ、又は１００ｍＬ～１５０ｍＬ、又は１５０ｍＬ～２００ｍＬ、又は２００ｍＬ～２５０ｍＬ、又は２５０ｍＬ～３００ｍＬ、又は３００ｍＬ～３５０ｍＬ、又は３５０ｍＬ～４００ｍＬ、又は４００ｍＬ～４５０ｍＬ、又は４５０ｍＬ～５００ｍＬ、又は５００ｍＬ～５５０ｍＬ、又は５５０ｍＬ～６００ｍＬ、又は６００ｍＬ～６５０ｍＬ、又は６５０ｍＬ～７００ｍＬ、又は７００ｍＬ～７５０ｍＬ、又は７５０ｍＬ～８００ｍＬ、又は８００ｍＬ～８５０ｍＬ、又は８５０ｍＬ～９００ｍＬ、又は９００ｍＬ～９５０ｍＬ、又は９５０ｍＬ～１０００ｍＬ、又は１ｍＬ～２５ｍＬ、又は１ｍＬ～５０ｍＬ、又は１ｍＬ～７５ｍＬ、又は１ｍＬ～１００ｍＬ、又は１０ｍＬ～２５ｍＬ、又は１０ｍＬ～５０ｍＬ、又は１０ｍＬ～７５ｍＬ、又は１００ｍＬ～２５０ｍＬ、又は１００ｍＬ～５００ｍＬ、又は１００ｍＬ～７５０ｍＬ、又は１００ｍＬ～１０００ｍＬである。

一部の実施形態では、本発明は、本明細書中に開示される組織充填剤を投与することを提供する。本明細書中で使用されるように、用語「投与する」は、臨床的、治療的、又は実験的に有益な結果を潜在的にもたらす、本明細書中に開示される組織充填剤を個体に提供する任意の送達機構を意味する。組織充填剤を個体へ投与するために使用される実際の送達機構は、要因、例えば、限定されないが、状態の種類、状態の位置、状態の原因、状態の重症度、所望の緩和の程度、所望の緩和の期間、使用される特定の組織充填剤、使用される特定の組織充填剤の生分解性、生体吸収性、生体再吸収性、及び同様のものの速度、使用される特定の組織充填剤中に含まれる成分の性質、特定の投与経路、患者の特定の特徴、病歴、及び危険因子、例えば、年齢、体重、一般的健康状態、及び同様のもの、又はそれらの任意の組合せなどを考慮することにより当業者により決定することができる。この実施形態の態様では、本明細書中に開示される組織充填剤は、注入により患者の部分に投与され、当該部分は、皮膚、真皮組織、真皮下組織、皮膚組織、皮下組織、硬膜内組織、筋肉、腱、靭帯、線維組織、脂肪、血管及び動脈、神経、又は滑膜（真皮内）組織中にあることができる。

一部の実施形態では、患者に投与される組織充填剤の投与の経路は、患者及び／又は医師により所望される美容的及び／又は臨床的効果、ならびに治療されている身体の一部又は領域に基づき決定される。本明細書中に開示される組織充填剤は、当業者に公知の任意の手段により投与することができ、限定されないが、針付き注入器、カテーテル、局所的、又は直接的外科移植により投与することができる。本明細書中に開示される組織充填剤は、皮膚領域、例えば真皮領域又は皮下組織領域などの中に投与することができる。また、本明細書中に開示される組織充填剤は、特定の治療により要求されるように、一回、二回、三回、又は複数回投与することができる。

一部の実施形態では、本明細書中に開示される組織充填剤は、注入可能である。本明細書中で使用されるように、用語「注入可能」は、針、例えば微細針などを伴う注入デバイスを使用して、個体の皮膚領域中に組織充填剤を投与するために必要な特性を有する組織材料を指す。本明細書中で使用されるように、用語「微細針」は、２７ゲージ又はそれより小さい針を刺す。一部の実施形態では、微細針は、２７ゲージ～３０ゲージの針であることができる。本明細書中に開示される組織充填剤の注入可能性は、例えば、本明細書中に開示される組織充填剤の特定のパラメータを変動させることにより、例えば、架橋度を調整すること、他ではＧ’及び／又はＧ’’を変動させること、非架橋ポリマー（例、ＳＰＦ又はＨＡ）を添加すること、及び同様のことにより達成できる。

一部の実施形態では、本明細書中に開示される組織充填剤は、微細針を通じて注入可能である。一部の実施形態では、本明細書中に開示される組織充填剤は、例えば、２０ゲージ、又は２１ゲージ、又は２２ゲージ、又は２３ゲージ、又は２４ゲージ、又は２５ゲージ、又は２６ゲージ、又は２７ゲージ、又は２８ゲージ、又は２９ゲージ、又は３０ゲージ、又は３１ゲージ、又は３２ゲージ、又は３３ゲージ、又は３４ゲージの針を通して注入可能である。一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、２０ゲージ、又は２１ゲージ、又は２２ゲージ、又は２３ゲージ、又は２４ゲージ、又は２５ゲージ、又は２６ゲージ、又は２７ゲージ、又は２８ゲージ、又は２９ゲージ、又は３０ゲージの針を通して注入可能である。

一部の実施形態では、本明細書中に開示される組織充填剤は、約０．８～約１．０ｍＬの容積を有するシリンジで注入可能である。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、例えば、組織増大（例、乳房又は殿部増大）の目的のために、軟部組織中又はその周りの空隙に送達されてもよい。本明細書中に記載される組織充填剤を、そのような空隙に送達する場合、より大きなシリンジ及び針を使用することができる（例、２７ゲージ又はそれより大きな針）。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤を、創傷、又は創傷に近接する医療デバイスを被覆するために、針を使用することなく、創傷に適用することができる。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組織充填剤は、医療デバイスの表面に適用することができる。

一態様では、本開示は、それを必要とする対象に治療を施すことにより緩和される障害、疾患、又は状態の治療又は予防の方法を含む。一部の実施形態では、方法は、本開示の組成物を対象に投与することを含む。一部の実施形態では、組成物は組織中に注入される。一部の実施形態では、組成物は、本開示の組織充填剤を含む。一部の実施形態では、組成物は、本明細書中に記載されるように、注入により投与される。

一部の実施形態では、組織は、当業者により理解され得るように、投与することにより緩和することができる障害、疾患、又は状態に関連付けられる。例えば、治療、例えば放射線、凍結療法、又は薬物治療組織などは、本開示の組成物を組織中に投与する場合に、障害、疾患、又は状態に関連付けられ、障害、疾患、又は状態の軽減、治療、予防、又は寛解をもたらす。

任意の種類の組織が本開示により企図される。組織は、身体の一部、例えば、腫瘍組織、細胞群、細胞群、間質物質、臓器、臓器の一部、又は身体の解剖学的部分、例えば、直腸、卵巣、前立腺及び同様のものを包含する広義の用語である。疾患、障害、状態の非限定的な例は、子宮頸癌、直腸癌、肺腫瘍、縦隔リンパ腫、乳癌、子宮体癌、膵臓癌、頭頸部癌、肺癌、肝臓癌、膣癌、良性前立腺過形成（ＢＰＨ）、月経過多、子宮筋腫腺癌を含む。熱／サーマルアブレーション（高周波又はマイクロ波）；及び薬物治療（局所的）、例えばアルコール組織アブレーション又はＮａＣｌ結晶もしくは高浸透圧溶液使用した高浸透圧アブレーション、神経、軟骨、骨、脳、又はその一部など。例えば、ＵＳ８，２５７，７２３を参照のこと。その全体において参照により本明細書中に組み込まれる。

一部の実施形態では、組織は臓器である。一部の実施形態では、組織は臓器の一部である。組織の非限定的な例は、尿道、尿道括約筋、下部食道括約筋、横隔膜、直腸、声帯、及び喉頭を含む。

一部の実施形態では、組成物は直腸壁の領域中に投与される。一部の実施形態では、直腸壁の領域は、肛門括約筋の近傍にある。一部の実施形態では、組成物は、内括約筋の壁中に投与される。一部の実施形態では、組成物は、内括約筋中に投与される。

本開示の組成物を使用して緩和、治療、予防、又は寛解することができる任意の障害、疾患、又は状態が、本開示により企図される。一部の実施形態では、障害、疾患、又は症状は、婦人科関連、泌尿器関連、消化器関連、又は癌関連である。障害、疾患、又は状態の非限定的な例は、尿失禁、胃食道逆流症（ＧＥＲＤ）、膀胱尿管逆流症、便失禁、歯組織の欠損、声帯組織の欠損、喉頭の欠損、及び他の非皮膚軟部組織の欠損を含む。

一部の実施形態では、組成物は、身体中への組成物の導入後１日～１２カ月の間にわたりその場所に残り得る。一部の実施形態では、組成物は、１週間～３ヶ月及び２～８週間を含む、他の期間にわたり、定位置に留まり得る。一部の実施形態では、本明細書中に記載される組成物は、移植後約２ヶ月以内に生分解され得る。一部の実施形態では、組成物は、対象において生分解により除去される。

当業者により理解され得るように、本明細書中に記載される方法内で投与するための組成物の容積は、治療される組織及び互いから分離される組織の構成に依存的である。多くの場合では、約２０立方センチメートル（ｃｃ又はｍＬ）の容積が適切である。

一部の実施形態では、本明細書中に記載される組成物を身体中に導入するためのキットである。キットは、充填剤を身体に送達するための組成物及びデバイスを含み得る。実施形態は、送達デバイスがシリンジであるキットを含み、他の実施形態は、シリンジ用の針を含み、組成物及び／又は麻酔薬を投与するための針を含み得る。

以下の条項は、特定の実施形態を記載するものである。

第１ａ項
絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片、ヒアルロン酸（ＨＡ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及び／又はポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）を含む生体適合性組成物であって、ＨＡの一部が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、及び第二級アルコールの一つ又は複数を含む、一つ又は複数のリンカー部分により改変又は架橋されている、生体適合性組成物。

第１ｂ項
絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片、ヒアルロン酸（ＨＡ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及び／又はポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）を含む生体適合性組成物であって、ＨＡの一部が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、及び第二級アルコールの一つ又は複数を含む、一つ又は複数のリンカー部分により改変又は架橋されており、及び絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の一部が、遊離している及び／又は架橋されていない、生体適合性組成物。

第２項
絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の一部が、改変又は架橋されている、第１項に記載の組成物。

第３項
絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の一部が、ＨＡに架橋されている、第１又は２項のいずれか一項に記載の組成物。

第４項
絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の一部が、絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片に架橋されている、第１～３項のいずれか一項に記載の組成物。

第５項
絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片が、実質的にセリシンを欠いている、第１～４項のいずれか一項に記載の組織充填剤。

第６ａ項
絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の一部が、低分子量、中分子量、又は高分子量から選択される平均重量平均分子量を有する、第１～５項のいずれか一項に記載の組成物。

第６ｂ項
絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の一部分が、約１ｋＤａ～約５ｋＤａの間、約５ｋＤａ～約１０ｋＤａの間、約６ｋＤａ～約１７ｋＤａの間、約１０ｋＤａ～約１５ｋＤａの間、約１４ｋＤａ～約３０ｋＤａの間、約１５ｋＤａ～約２０ｋＤａの間、約１７ｋＤａ～約３９ｋＤａの間、約２０ｋＤａ～約２５ｋＤａの間、約２５ｋＤａ～約３０ｋＤａの間、約３０ｋＤａ～約３５ｋＤａの間、約３５ｋＤａ～約４０ｋＤａの間、約３９ｋＤａ～約５４ｋＤａの間、約３９ｋＤａ～約８０ｋＤａの間、約４０ｋＤａ～約４５ｋＤａの間、約４５ｋＤａ～約５０ｋＤａの間、約５０ｋＤａ～約５５ｋＤａの間、約５５ｋＤａ～約６０ｋＤａの間、約６０ｋＤａ～約１００ｋＤａ、又は約８０ｋＤａ～約１４４ｋＤａの間から選択される平均重量平均分子量を有する、第１項～第５項のいずれか一項に記載の組成物。

第７ａ項
絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片が、１～５．０の間の多分散性を有する、第１～６項のいずれか一項に記載の組成物。

第７ｂ項
絹フィブロイン断片又は絹フィブロイン断片が、１～約１．５、約１．５～約２．０、約２．０～約２．５、約２．５～約３．０、約３．０～約３．５、約３．５～約４．０、約４．０～約４．５、又は約４．５～約５．０の多分散性を有する、第１～６項のいずれか一項に記載の組成物。

第８項
絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片が、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する、第１～６項のいずれか一項に記載の組成物。

第９ａ項
組成物が、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、又は約１５％の改変度（ＭｏＤ）を有する、第１～８項のいずれか一項に記載の組成物。

第９ｂ項
組成物が、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、又は約２５％の改変度（ＭｏＤ）を有する、第１～８項のいずれか一項に記載の組成物。

第１０項
改変又は架橋が、架橋剤として、モノエポキシ－又はジエポキシ－ＰＥＧ、モノグリシジル－、ジグリシジル－、又はポリグリシジル－ＰＥＧ、モノグリシジル－又はジグリシジル－ＰＥＧ、モノエポキシ－又はジエポキシ－ＰＰＧ、モノグリシジル－、ジグリシジル－、又はポリグリシジル－ＰＰＧ、モノグリシジル－又はジグリシジル－ＰＰＧ、又はそれらの任意の組み合わせを使用して得られる、第１～９項のいずれか一項に記載の組成物。

第１１ａ項
リドカインをさらに含む、第１～１０項のいずれか一項に記載の組成物。

第１１ｂ項
約０．１％、約０．２％、約０．３％、約０．４％、約０．５％、約０．６％、約０．７％、約０．８％、約０．９％、又は約１％の濃度でリドカインをさらに含む、第１～１０項のいずれか一項に記載の組成物。

第１２項
組成物がゲル又はヒドロゲルである、第１～１１項のいずれか一項に記載の組成物。

第１３項
組成物中のＨＡ及び絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の総濃度が、約７ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ、約１２ｍｇ／ｍＬ、約１３ｍｇ／ｍＬ、約１４ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約１６ｍｇ／ｍＬ、約１７ｍｇ／ｍＬ、約１８ｍｇ／ｍＬ、約１９ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２１ｍｇ／ｍＬ、約２２ｍｇ／ｍＬ、約２３ｍｇ／ｍＬ、約２４ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約２６ｍｇ／ｍＬ、約２７ｍｇ／ｍＬ、約２８ｍｇ／ｍＬ、約２９ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約３１ｍｇ／ｍＬ、約３２ｍｇ／ｍＬ、約３３ｍｇ／ｍＬ、約３４ｍｇ／ｍＬ、約３５ｍｇ／ｍＬ、約３６ｍｇ／ｍＬ、約３７ｍｇ／ｍＬ、約３８ｍｇ／ｍＬ、約３９ｍｇ／ｍＬ、又は約４０ｍｇ／ｍＬである、第１～１２項のいずれか一項に記載の組成物。

第１４項
組成物中のＨＡと絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片との比率が、約９１／９、約９２／８、約９３／７、約９４／６、約９５／５、約９６／４、約９７／３、約１８／１２、約２７／３、約２９．４／０．６、約９９／１、約９２．５／７．５、約９０／１０、約８０／２０、約７０／３０、約６０／４０、又は約５０／５０である、第１～１３項のいずれか一項に記載の組成物。

第１５項
組成物中のＨＡと絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片との比率が、約５０／５０、約５１／４９、約５２／４８、約５３／４７、約５４／４６、約５５／４５、約５６／４４、約５７／４３、約５８／４２、約５９／４１、約６０／４０、約６１／３９、約６２／３８、約６３／３７、約６４／３６、約６５／３５、約６６／３４、約６７／３３、約６８／３２、約６９／３１、約７０／３０、約７１／２９、約７２／２８、約７３／２７、約７４／２６、約７５／２５、約７６／２４、約７７／２３、約７８／２２、約７９／２１、約８０／２０、約８１／１９、約８２／１８、約８３／１７、約８４／１６、約８５／１５、約８６／１４、約８７／１３、約８８／１２、約８９／１１、約９０／１０、約９１／９、約９２／８、約９３／７、約９４／６、約９５／５、約９６／４、約９７／３、約９８／２、又は約９９／１である、第１～１３項のいずれか一項に記載の組成物。

第１６項
組成物中の遊離及び／又は非架橋絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の総濃度が、約１ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、又は約８ｍｇ／ｍＬである、第１～１７項のいずれか一項に記載の組成物。

第１７項
遊離及び／又は非架橋絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の一部が、１．０μｍ～５０．０μｍ、１．０μｍ～２５．０μｍ、１．０μｍ～１０．０μｍ、３０．０μｍ～５０．０μｍ、３５．０μｍ～４５．０μｍ、３５．０μｍ～５５．０μｍ、又は２５．０μｍ～４５．０μｍの範囲の粒子サイズ中央値を有する絹マイクロ粒子を含む、第１～１６項のいずれか一項に記載の組成物。

第１８項
組成物が、３０Ｇ又は２７Ｇ針を通して注入可能であり、約１０Ｎ～約８０Ｎの間に３０Ｇ針を通した注入力を有する、第１から１７項のいずれか一項に記載の組成物。

第１９項
組成物が、約１Ｎ、約２Ｎ、約３Ｎ、約４Ｎ、約５Ｎ、約６Ｎ、約７Ｎ、約８Ｎ、約９Ｎ、約１０Ｎ、約１１Ｎ、約１２Ｎ、約１３Ｎ、約１４Ｎ、約１５Ｎ、約１６Ｎ、約１７Ｎ、約１８Ｎ、約１９Ｎ、約２０Ｎ、約２１Ｎ、約２２Ｎ、約２３Ｎ、約２４Ｎ、約２５Ｎ、約２６Ｎ、約２７Ｎ、約２８Ｎ、約２９Ｎ、約３０Ｎ、約３１Ｎ、約３２Ｎ、約３３Ｎ、約３４Ｎ、約３５Ｎ、約３６Ｎ、約３７Ｎ、約３８Ｎ、約３９Ｎ、約４０Ｎ、約４１Ｎ、約４２Ｎ、約４３Ｎ、約４４Ｎ、約４５Ｎ、約４６Ｎ、約４７Ｎ、約４８Ｎ、約４９Ｎ、約５０Ｎ、約５１Ｎ、約５２Ｎ、約５３Ｎ、約５４Ｎ、約５５Ｎ、約５６Ｎ、約５７Ｎ、約５８Ｎ、約５９Ｎ、約６０Ｎ、約６１Ｎ、約６２Ｎ、約６３Ｎ、約６４Ｎ、約６５Ｎ、約６６Ｎ、約６７Ｎ、約６８Ｎ、約６９Ｎ、約７０Ｎ、約７１Ｎ、約７２Ｎ、約７３Ｎ、約７４Ｎ、約７５Ｎ、約７６Ｎ、約７７Ｎ、約７８Ｎ、約７９Ｎ、約８０Ｎ、約８１Ｎ、約８２Ｎ、約８３Ｎ、約８４Ｎ、約８５Ｎ、約８６Ｎ、約８７Ｎ、約８８Ｎ、約８９Ｎ、約９０Ｎ、約９１Ｎ、約９２Ｎ、約９３Ｎ、約９４Ｎ、約９５Ｎ、約９６Ｎ、約９７Ｎ、約９８Ｎ、約９９Ｎ、又は約１００Ｎの注入力を伴い、３０Ｇ針を通じて注入可能である、第１～１７項のいずれか一項に記載の組成物。

第２０項
組成物が、約５Ｐａ～約５００Ｐａ、約１５Ｐａ～約５０Ｐａ、約５０Ｐａ～約１００Ｐａ、約１００Ｐａ～約２００Ｐａ、約２００Ｐａ～約３００Ｐａ、約３００Ｐａ～約３５０Ｐａ、約３５０Ｐａ～約４００Ｐａ、約４００Ｐａ～約４５０Ｐａ、又は約４５０Ｐａ～約５００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第２１項
組成物が、約５Ｐａ～約５００Ｐａ、約１５Ｐａ～約５０Ｐａ、約５０Ｐａ～約１００Ｐａ、約１００Ｐａ～約２００Ｐａ、約２００Ｐａ～約３００Ｐａ、約３００Ｐａ～約３５０Ｐａ、約３５０Ｐａ～約４００Ｐａ、約４００Ｐａ～約４５０Ｐａ、又は約４５０Ｐａ～約５００Ｐａの損失弾性率（Ｇ’’）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第２２項
組成物が、０～約０．２の間、約０．２～約０．４の間、約０．４～約０．６の間、約０．６～約０．８の間、約０．８～約１．０の間、又は約１．０～約１．２の間のＴａｎ（δ）（Ｇ’’／Ｇ’）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第２３項
組成物が、０～約５Ｐａ・ｓの間、約５Ｐａ・ｓ～約１０Ｐａ・ｓの間、約１０Ｐａ・ｓ～約１５Ｐａ・ｓの間、約１５Ｐａ・ｓ～約２０Ｐａ・ｓの間、又は約２０Ｐａ・ｓ～約２５Ｐａ・ｓの間の複素粘度（η＊）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第２４ａ項
組成物が、約５０Ｐａ～約４００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）、及び約１０Ｎ～約７０Ｎの間の注入力（２７Ｇ）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第２４ｂ項
組成物が、約１００Ｐａ～約１５０Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）、及び約４０Ｎ～約６０Ｎの間の注入力（２７Ｇ）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第２４ｃ項
組成物が、約５０Ｐａ～約１５０Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）、及び約１０Ｎ～約４０Ｎの間の注入力（２７Ｇ）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第２４ｄ項
組成物が、約２５０Ｐａ～約３５０Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）、及び約１０Ｎ～約３０Ｎの間の注入力（２７Ｇ）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第２５ａ項
組成物が、約１０Ｐａ～約３５０Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）、及び約５Ｎ～約７０Ｎの間の注入力（３０Ｇ）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第２５ｂ項
組成物が、約５０Ｐａ～約２００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）、及び約４０Ｎ～約６０Ｎの間の注入力（３０Ｇ）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第２５ｃ項
組成物が、約２００Ｐａ～約３５０Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）、及び約４０Ｎ～約７０Ｎの間の注入力（３０Ｇ）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第２５ｄ項
組成物が、約１０Ｐａ～約１００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）、及び約５Ｎ～約３５Ｎの間の注入力（３０Ｇ）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第２６ａ項
組成物が、約２５Ｐａ～約３５０Ｐａの損失弾性率（Ｇ’’）、及び約１０Ｎ～約７０Ｎの間の注入力（２７Ｇ）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第２６ｂ項
組成物が、約２５Ｐａ～約１００Ｐａの損失弾性率（Ｇ’’）、及び約４０Ｎ～約７０Ｎの間の注入力（２７Ｇ）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第２６ｃ項
組成物が、約２５Ｐａ～約１００Ｐａの損失弾性率（Ｇ’’）、及び約１０Ｎ～約３５Ｎの間の注入力（２７Ｇ）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第２６ｄ項
組成物が、約１５０Ｐａ～約３５０Ｐａの損失弾性率（Ｇ’’）、及び約１０Ｎ～約６０Ｎの間の注入力（２７Ｇ）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第２７ａ項
組成物が、約１０Ｐａ～約４００Ｐａの損失弾性率（Ｇ’’）、及び約５Ｎ～約７０Ｎの間の注入力（３０Ｇ）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第２７ｂ項
組成物が、約５０Ｐａ～約１００Ｐａの損失弾性率（Ｇ’’）、及び約４０Ｎ～約６０Ｎの間の注入力（３０Ｇ）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第２７ｃ項
組成物が、約１０Ｐａ～約７５Ｐａの損失弾性率（Ｇ’’）、及び約５Ｎ～約３５Ｎの間の注入力（３０Ｇ）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第２７ｄ項
組成物が、約１５０Ｐａ～約３００Ｐａの損失弾性率（Ｇ’’）、及び約４０Ｎ～約７０Ｎの間の注入力（３０Ｇ）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第２８ａ項
組成物が、約２５Ｐａ～約４００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）、及び０～約１．２の間のＴａｎ（δ）（Ｇ’’／Ｇ’）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第２８ｂ項
組成物が、約５０Ｐａ～約２００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）、及び０．２～約０．６の間のＴａｎ（δ）（Ｇ’’／Ｇ’）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第２８ｃ項
組成物が、約２００Ｐａ～約４００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）、及び０～約０．２の間のＴａｎ（δ）（Ｇ’’／Ｇ’）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第２８ｄ項
組成物が、約２５Ｐａ～約４００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）、及び０．８～約１．２の間のＴａｎ（δ）（Ｇ’’／Ｇ’）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第２９ａ項
組成物が、約２．５～約２５Ｐａ・ｓの間の複素粘度（η＊）、及び約１０Ｎ～約７０Ｎの間の注入力（２７Ｇ）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第２９ｂ項
組成物が、約２．５～約１５Ｐａ・ｓの間の複素粘度（η＊）、及び約１０Ｎ～約３５Ｎの間の注入力（２７Ｇ）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第２９ｃ項
組成物が、約２．５～約１５Ｐａ・ｓの間の複素粘度（η＊）、及び約４０Ｎ～約７０Ｎの間の注入力（２７Ｇ）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。
第２９ｄ項
組成物が、約１５～約２５Ｐａ・ｓの間の複素粘度（η＊）、及び約２５Ｎ～約７０Ｎの間の注入力（２７Ｇ）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第３０ａ項
組成物が、約１～約２０Ｐａ・ｓの間の複素粘度（η＊）、及び約５Ｎ～約７５Ｎの間の注入力（３０Ｇ）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。
第３０ｂ項
組成物が、約１～約５Ｐａ・ｓの間の複素粘度（η＊）、及び約５Ｎ～約５０Ｎの間の注入力（３０Ｇ）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第３０ｃ項
組成物が、約５～約１７Ｐａ・ｓの間の複素粘度（η＊）、及び約４０Ｎ～約７５Ｎの間の注入力（３０Ｇ）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第３１ａ項
組成物が、約５Ｐａ～約４００Ｐａの損失弾性率（Ｇ’’）、及び約１Ｐａ～約４００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第３１ｂ項
組成物が、約５Ｐａ～約１５０Ｐａの損失弾性率（Ｇ’’）、及び約１Ｐａ～約２５０Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第３１ｃ項
組成物が、約５Ｐａ～約１５０Ｐａの損失弾性率（Ｇ’’）、及び約２５０Ｐａ～約４００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第３１ｄ項
組成物が、約１５０Ｐａ～約２００Ｐａの損失弾性率（Ｇ’’）、及び約２５０Ｐａ～約３５０Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第３１ｅ項
組成物が、約２５０Ｐａ～約３７５Ｐａの損失弾性率（Ｇ’’）、及び約２５０Ｐａ～約３５０Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第３２ａ項
組成物中のＨＡ及び絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の総濃度が約１５ｍｇ／ｍＬであり、組成物が約１Ｐａ～約３５０Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第３２ｂ項
組成物中のＨＡ及び絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の総濃度が約１５ｍｇ／ｍＬであり、組成物が約１Ｐａ～約２００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第３２ｃ項
組成物中のＨＡ及び絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の総濃度が約１５ｍｇ／ｍＬであり、組成物が約２００Ｐａ～約３５０Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第３３ａ項
組成物中のＨＡ及び絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の総濃度が約１８ｍｇ／ｍＬであり、組成物が約５０Ｐａ～約３５０Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第３３ｂ項
組成物中のＨＡ及び絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の総濃度が約１８ｍｇ／ｍＬであり、組成物が約５０Ｐａ～約１５０Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第３３ｃ項
組成物中のＨＡ及び絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の総濃度が約１８ｍｇ／ｍＬであり、組成物が約１５０Ｐａ～約３５０Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第３４ａ項
組成物中のＨＡ及び絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の総濃度が約２０ｍｇ／ｍＬであり、組成物が約２０Ｐａ～約４００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第３４ｂ項
組成物中のＨＡ及び絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の総濃度が約２０ｍｇ／ｍＬであり、組成物が約２０Ｐａ～約２００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第３４ｃ項
組成物中のＨＡ及び絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の総濃度が約２０ｍｇ／ｍＬであり、組成物が約２００Ｐａ～約４００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第３５ａ項
組成物中のＨＡ及び絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の総濃度が約２２ｍｇ／ｍＬであり、組成物が約２５Ｐａ～約２００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第３５ｂ項
組成物中のＨＡ及び絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の総濃度が約２２ｍｇ／ｍＬであり、組成物が約２５Ｐａ～約１００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第３５ｃ項
組成物中のＨＡ及び絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の総濃度が約２２ｍｇ／ｍＬであり、組成物が約１００Ｐａ～約２００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第３６ａ項
組成物中のＨＡ及び絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の総濃度が約２４ｍｇ／ｍＬであり、組成物が約５０Ｐａ～約３５０Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第３６ｂ項
組成物中のＨＡ及び絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の総濃度が約２４ｍｇ／ｍＬであり、組成物が約５０Ｐａ～約２５０Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第３６ｃ項
組成物中のＨＡ及び絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の総濃度が約２４ｍｇ／ｍＬであり、組成物が約２５０Ｐａ～約３５０Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第３７ａ項
組成物中のＨＡ及び絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の総濃度が約２６ｍｇ／ｍＬであり、組成物が約５０Ｐａ～約４００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第３７ｂ項
組成物中のＨＡ及び絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の総濃度が約２６ｍｇ／ｍＬであり、組成物が約５０Ｐａ～約２００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第３７ｃ項
組成物中のＨＡ及び絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の総濃度が約２６ｍｇ／ｍＬであり、組成物が約２００Ｐａ～約４００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第３８項
組成物中のＨＡ及び絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の総濃度が約２８ｍｇ／ｍＬであり、組成物が約１５０Ｐａ～約３００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、第１～１９項のいずれか一項に記載の組成物。

第３９項
イメージング剤をさらに含む、第１～３８項のいずれか一項に記載の組成物。

第４０項
イメージング剤が、ヨウ素、ＤＯＰＡ、及び撮像ナノ粒子から選択される、第３９項に記載の組成物。

第４１項
イメージング剤が、常磁性造影剤及び超常磁性造影剤から選択される、第３９項に記載の組成物。

第４２項
イメージング剤が、ＮＰベースの核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）造影剤、ポジトロン断層法（ＰＥＴ）／単一光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）イメージング剤、超音波活性粒子、及び光学的に活性な（例、発光、蛍光、赤外線）粒子から選択される、第３９項に記載の組成物。

第４３項
前記イメージング剤が、ＳＰＥＣＴイメージング剤、ＰＥＴイメージング剤、光学イメージング剤、ＭＲＩもしくはＭＲＳイメージング剤、超音波イメージング剤、マルチモーダルイメージング剤、Ｘ線イメージング剤、又はＣＴイメージング剤、第３９項に記載の組成物。

第４４項
第１～４３項のいずれか一項に記載の組成物を対象に投与することを含む、それを必要とする対象における障害、疾患、又は状態の治療又は予防の方法。

第４５項
状態が、皮膚の脱水、皮膚の弾力性の欠如、肌荒れ、皮膚の張りの欠如、皮膚のストレッチライン、皮膚のストレッチマーク、皮膚蒼白、皮膚の陥没、頬のこけ、唇の薄さ、眼窩後部の欠損、顔面のひだ、及び皺から選択される皮膚の状態である、第４４項に記載の方法。

第４６項
組成物が、対象の真皮領域中に投与される、第４４項又は第４５項に記載の方法。

第４７項
方法が、増大、再建、疾患の治療、障害の治療、身体の一部、部分、又は領域の欠損又は不完全性の矯正である、第４４～４６項のいずれかに記載の方法。

第４８項
方法が、顔面の増大、顔面の再建、顔面の疾患の治療、顔面の障害の治療、顔面の欠損の治療、又は顔面の不完全性の治療である、第４４～４７項のいずれか一項に記載の方法。

第４９項
方法が、深部皮下及び／又は深部骨膜上投与を含む、第４４～４８項のいずれか一項に記載の方法。

第５０項
方法が、頬の増大、口唇の増大、皮膚移植、口周囲の皺の矯正、及び／又は鼻唇溝の矯正を含む、第４４～４９項のいずれか一項に記載の方法。

第５１項
組成物が組織中に注入される、第４４項に記載の方法。

第５２項
組織が、障害、疾患、又は状態と関連している、第５１項に記載の方法。

第５３項
組成物が、組織の壁中に投与される、第５１項又は第５２項に記載の方法。

第５４項
組織が、内臓の壁の一部分を含む、第５１～５３項のいずれか一項に記載の方法。

第５５項
組成物の投与が、組織のバルキングを起こす、第５１～５４項のいずれか一項に記載の方法。

第５６項
障害、疾患、又は状態が、組織のバルキングにより治療又は予防される、第５５項に記載の方法。

第５７項
障害、疾患、又は状態が、尿失禁、胃食道逆流症（ＧＥＲＤ）、膀胱尿管逆流症、便失禁、歯組織の欠損、声帯組織の欠損、喉頭の欠損、及び他の非皮膚軟組織の欠損から選択される、第５１～５６項のいずれか一項に記載の方法。

第５８項
障害、疾患、又は状態が尿失禁である、第５１～５６項のいずれかに一項に記載の方法。

第５９項
尿失禁が、内因性括約筋不全（ＩＳＤ）、腹圧性失禁、内因性括約筋欠損症（ＩＳＤ）、切迫性尿失禁、溢流性尿失禁、又は遺尿である、第５８項に記載の方法。

第６０項
組織が尿道又は尿道括約筋の一部分である、第５８又は５９項に記載の方法。

第６１項
障害、疾患、又は状態が胃食道逆流症（ＧＥＲＤ）である、第５１～５６項のいずれかに一項に記載の方法。

第６２項
組織が、下部食道括約筋又は横隔膜の一部である、第６１項に記載の方法。

第６３項
障害、疾患、又は状態が膀胱尿管逆流症である、第５１～５６項のいずれかに一項に記載の方法。

第６４項
組織が尿道括約筋の一部である、第６３項に記載の方法。

第６５項
障害、疾患、又は状態が便失禁である、第５１～５６項のいずれかに一項に記載の方法。

第６６項
組織が直腸の一部である、第６５項に記載の方法。

第６７項
組成物が、直腸壁の領域中に投与される、第６５項又は第６６項に記載の方法。

第６８項
直腸壁の領域が、肛門括約筋の近傍にある、第６７項に記載の方法。

第６９項
組成物が内括約筋中に投与される、第６８項に記載の方法。

第７０項
障害、疾患、又は状態が、声帯組織の欠損又は喉頭の欠損である、第５１～５６項のいずれか一項に記載の方法。

第７１項
声帯組織の欠損又は喉頭の欠損が、声門機能不全、片側声帯麻痺、両側声帯麻痺、麻痺性発声障害、非麻痺性発声障害、痙攣性発声障害、声帯の不完全麻痺（不全麻痺）、声帯の一般的な衰弱、声帯の瘢痕化、及びそれらの任意の組み合わせから選択される、第７０項に記載の方法。

第７２項
組織が声帯又は喉頭の一部である、第７０項又は第７１項に記載の方法。

第７３項
抗癌治療を施すことをさらに含み、障害、疾患、又は状態が、子宮頸癌、直腸癌、肺腫瘍、縦隔リンパ腫、乳癌、子宮体癌、膵臓癌、頭頸部癌、肺癌、肝臓癌、膣癌、前立腺肥大症（ＢＰＨ）、月経痛、子宮筋腫、前立腺腺癌、膵臓癌、頭頸部癌、肺癌、肝臓癌、及び膣癌から選択される、第４４項に記載の方法。

第７４項
抗癌治療が、放射線治療（ＲＴ）、凍結療法、薬物治療、熱及び／又はサーマルアブレーション、高周波及び／又はマイクロ波、あるいは凍結療法の一つ又は複数を施すことを含む、第７３項に記載の方法。

第７５項
放射線治療が、外部ビーム放射線療法、３Ｄコンフォーマル変調放射線療法、強度変調放射線療法、間質性前立腺小線源療法、永久シーズを使用した間質性前立腺小線源療法、一過性シードを使用した間質性前立腺小線源療法、高線量率遠隔照射による間質性前立腺小線源療法、ガンマ線照射による外部放射線治療、高エネルギー光子線治療、陽子線治療、中性子線治療、重粒子線治療、小線源療法、熱線治療、又はそれらの任意の組み合わせの一つ又は複数を含む、第７４項に記載の方法。

第７６項
組成物が、第一の組織と第二の組織との間に、又は第一の組織と第二の組織との間隙もしくは仮想間隙中に投与される、第７３～７５項のいずれか一項に記載の方法。

第７７項
組成物の投与時に、第一の組織が第二の組織に対して移動する、第７６項に記載の方法。

第７８項
間隙又は仮想間隙が、Ｄｅｎｏｎｖｉｌｉｅｒｓ間隙又はＤｅｎｏｎｖｉｌｉｅｒｓ筋膜に隣接する間隙又は仮想間隙である、第７６項又は第７７項に記載の方法。

第７９項
第一の組織が、組成物の投与後に抗癌治療を受ける、第７６～７８項のいずれか一項に記載の方法。

第８０項
第一の組織は、第一の組織が組成物の非存在において受ける抗癌治療用量と比較して、実質的に類似した用量の抗癌治療を受ける、第７９項に記載の方法。

第８１項
第二の組織が、抗癌治療を受ける、第７６～８０項のいずれか一項に記載の方法。

第８２項
第二の組織は、第二の組織が組成物の非存在において受けるであろう抗癌治療用量と比較して、より低い抗癌治療用量を受ける、第８１項に記載の方法。

第８３項
第二の組織が、実質的に抗癌治療用量を受けない、第７６～８２項のいずれか一項に記載の方法。

第８４項
第一の組織及び第二の組織が、各々独立して、腫瘍組織、細胞群、細胞群及び間質物質、臓器、臓器の一部、又は身体の解剖学的部分を含む、第７６～８３項のいずれかに記載の方法。

第８５項
第一の組織が腫瘍組織を含み、第二の組織が臓器を含む、第７６～８３項のいずれか一項に記載の方法。

第８６項
第一の組織が臓器を含み、第二の組織が臓器を含む、第７６～８３項のいずれか一項に記載の方法。

第８６項
第一の組織が前立腺の一部を含み、第二の組織が直腸の一部を含む、第８６項に記載の方法。

第８７項
方法が、さらに、麻酔薬を投与することを含む、第４４～８６項のいずれか一項に記載の方法。

第８８項
対象における組成物の生分解をさらに含む、第４４～８７項のいずれかに記載の方法。

第８９項
生分解が、加水分解、タンパク質分解、酵素分解、身体における細胞の作用、又はそれらの組み合わせである、第８８項に記載の方法。

第９０項
組成物が、ヒアルロニダーゼ酵素分解により生分解される、第８８項に記載の方法。

以下の実施例を、記載される実施形態をいかに作製し、使用するかの完全な開示及び説明を当業者に提供するために示すが、本発明者らが、彼らの発明と見なすものの範囲を限定することを意図せず、また、彼らは、以下の実験が、実施された全ての又は唯一の実験であることを表すことを意図しない。使用される数字（例、量、温度など）に関して、精度を保証するように努めてきたが、しかし、一部の実験誤差及び偏差を算入すべきである。他に示さない限り、部分は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏温度であり、及び圧力は大気圧又はその近傍である。

材料及び方法
材料
ヒアルロン酸（ＨＡ）ナトリウム塩（分子量７５０ｋＤａ～１０００ｋＤａ）は、ＬｉｆｅｃｏｒｅＢｉｏｍｅｄｉｃａｌ（ミネソタ州チャスカ）から取得した。Ｊｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣの商標下で販売されている注入可能なＨＡゲル（少量の局所麻酔薬（リドカイン）を含む無色のヒアルロン酸ゲル）は、Ａｌｌｅｒｇａｎ（カリフォルニア州アーバイン）から取得した。絹フィブロインは、現場で処理した（マサチューセッツ州メドフォード）。ポリ（エチレングリコール）ジグリシジルエーテル（ＰＥＧＤＥ）及びヒアルロニダーゼ（Ｈｙｌｅｎｅｘ（商標））は、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（ミズーリ州セントルイス）から取得した。リドカイン塩酸塩は、ＳｐｅｃｔｒｕｍＣｈｅｍｉｃａｌ（ニュージャージー州ニューブランズウィック）から取得した。様々な濃度の絹溶液を、上に記載される方法に従って調製した。全ての他の化学薬品及び試薬は、ＶＷＲ（ペンシルベニア州ラドノール）から購入し、そのまま使用した。

絹－ＨＡヒドロゲル調製のための一般的な方法
ヒアルロン酸を、異なるヒドロゲル製剤について変動する量で絹フィブロインタンパク質ベースの断片及び架橋剤を含む０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液中に溶解した。この混合物を、５５℃で７５分間にわたり維持して、架橋反応を完了させた。次に、結果として得られるヒドロゲルを室温まで冷却し、濃塩酸でｐＨ７．４に調整し、次に中和し、１×ＰＢＳで一晩希釈した。次に、ヒドロゲルを１×ＰＢＳに対して３日間にわたり透析し、残留遊離架橋剤を除去した。リドカイン塩酸塩を精製ヒドロゲルに０．３％ｗ／ｗまで添加した。絹フィブロインタンパク質ベースの断片及びＨＡの最終総濃度を、各々のヒドロゲルについて、１×ＰＢＳで２６ｍｇ／ｍｌに調整した。調製した絹－ＨＡヒドロゲルを１ｍＬシリンジ中に分注し、滅菌及び特徴付けの準備をした。

実施例１：ゲルのチンダル評価
視覚的観察をさらに裏付けて、皮膚充填剤の比較性能分析を行うために、チンダル効果の定量分析を実施する。光散乱及び光と皮膚との相互作用に関する既存の科学的理解に基づき、（ａ）比色分析、及び（ｂ）分光分析に基づく二つの異なるアプローチを用いて、皮膚におけるチンダル効果を定量化する。これらの技術に基づき、三つの異なる定量的パラメータ（以下に概説）を、インビボでのチンダル効果を測定するために定義する。

チンダル効果の視覚スコア：
スケールは、増分０．５を伴う１～５の範囲を有する。１のスコアは、正常な皮膚色調で、青色変色がない注入部位に与えられる。最大スコア５は、濃い顕著な青色変色に与えられる。三名の独立した観測者が、テストサンプルを盲検的にスコア化する前に、スケールに関し訓練された。

皮膚色の青色成分－「ｂ」：色彩色差計を使用して、様々な充填剤が注入された皮膚部位から放出された光の青色成分を定量化する。これは、Ｌａｂカラースケールの「ｂ」成分を使用することにより達成される。

皮膚から放出される「％青色光」：ポータブル分光光度計を使用して、全可視光領域における皮膚から放出される％青色光を定量化する。これは、４００～４９０ｎｍの間の可視光スペクトル下の面積を積分し、それをスペクトル（４００～７００ｎｍ）下の総面積により正規化することにより達成される。

本開示のゲル及び商業的に入手可能なゲルは、２ヶ月齢の無毛ラットの大腿部中に線形スレッディング（ｔｈｒｅａｄｉｎｇ）技術を使用して、適切な針を通して皮内注入される。ゲルを表面的に移植し、臨床細線手順（ｃｌｉｎｉｃａｌｆｉｎｅｌｉｎｅｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ）を模倣する。チンダルについてのテストを、ゲル移植後の４８時間に実施する。チンダルテストを実施する前に、動物を人道的に安楽死させ、チンダル効果のコントラストを改善させる。

０．５の増分を伴う１～５の視覚スコアを使用して、注入部位をスコア化する。１のスコアを伴う注入部位は、皮膚変色を示さない一方で、５のスコアを伴う注入部位は、皮膚の重度の青色変色を示す。分光分析をまた、色彩色差計を用いて注入部位で実施する。皮膚色の青色成分「ｂ」、及び皮膚から放出される％青色光（４００～７００ｎｍ）は、独立して測定される。

実施例２：インビボ組織充填剤テスト
前述の説明にしたがって調製した組織充填剤を、皮内移植、筋肉移植、及び皮下注入後にテストすることができた。

例えば、組織充填剤の用量は、シリンジに充填され、注入部位への針を通じた組織充填剤の流れを可能にする適したサイズのシリンジを使用して、皮内、筋肉内、又は皮下のいずれかで注入され得る。

対照（例、水及び／又は市販ＨＡベースの組織充填剤、例えばＪｕｖｅｄｅｒｍなど）に対する最初の注入の後、注入部位を１週間又は２週間の間隔でモニターしてもよく、ここで患者は、細胞毒性、発熱性、エンドトキシン形成、急性システム毒性、亜慢性毒性、皮内反応性、遺伝毒性、及び皮膚感作を含む、生体適合性の懸念について観察される。

また、組織充填剤の物理的属性は、チンダリングの存在又は注入部位での容積、弾性、又は硬度における損失を検討することによりモニターされ得る。

実施例３：組織充填剤レオロジーの検討
振動式平行板レオメータ（ＡｎｔｏｎＰａａｒＰｈｙｓｉｃａＭＣＲ３０１）を使用して、本明細書中に記載される組織充填剤のレオロジー特性を測定することができた。板径２５ｍｍを１ｍｍのギャップ高さで使用することができた。測定は、２５℃の一定温度で実施することができた。各々の測定は、２％の一定歪み及び周波数の対数増加での１～１０Ｈｚの周波数掃引、それに続く、歪みにおける対数増加を伴う、５Ｈｚの一定周波数での１～３００％の歪み掃引からなり得る。そのような分析の結果は、各々のテストされた組織充填剤の貯蔵弾性率Ｇ’及び損失弾性率Ｇ’’を提供し得る。

実施例４：絹／ＨＡ溶液の不透明性の検討。
ＨＡ及び絹の溶液を、表１８に従って、水又はリン酸緩衝生理食塩水中で調製した。

（外２１）

上記の表中に記載する溶液の結果を、図２６及び図２７中に示す。図２６及び図２７中の対照（図２６中の非標識フラスコ、図２７中の対照シリンジ）は、ＨＡの水溶液（２２ｍｇ／ｍＬ）であった。図２６及び図２７中に例証されるように、絹／ＨＡ溶液は、ＨＡ単独と比較して、均質であり、視覚的に不透明であった。

実施例５：組織充填剤調製方法。
本明細書中に記載される絹／ＨＡ組織充填剤は、以下の一般的方法に従って調製することができた：
工程ａ：ヒアルロン酸を、本明細書中に記載されるように、ＮａＯＨ溶液中に溶解して、絹の溶液に添加してもよい；
工程ｂ：ＮａＯＨ中の溶解ＢＤＤＥを絹／ＨＡ／ＮａＯＨ溶液に添加する；
工程ｃ：加熱を伴って混合させることにより架橋させる；
工程ｄ：金属メッシュを通過させて、水中で膨潤させる；
工程ｅ：エタノール中で膨潤ゲルを沈殿させる；
工程ｆ：エタノール、水、及びＮａＯＨ溶液で洗浄する；
工程ｇ：加熱（５０℃）を伴って、約２時間にわたりエタノール／ＮａＯＨの溶液中で架橋を完了させる；
工程ｈ：溶液のｐＨを７に中和する；
工程ｉ：沈殿物を洗浄し、乾燥させる；
工程ｊ：結果として得られる乾燥粉末を、緩衝化０．９％ＮａＣｌ溶液中でゲルに膨潤させた；及び
工程ｋ：ゲルをシリンジ中に充填し、オートクレーブし、結果として組織充填剤を提供する。

実施例６：組織充填剤調製方法。
本明細書中に記載される絹／ＨＡ組織充填剤は、以下の一般的方法に従って調製することができた：
工程ａ：ヒアルロン酸をＮａＯＨ溶液中に溶解してもよい；
工程ｂ：ＮａＯＨ溶液中の絹を、絹の溶液中に添加し、次にＮａＯＨ中の溶解ＢＤＤＥを絹／ＨＡ／ＮａＯＨ溶液に添加する；
工程ｃ：加熱を伴って混合させることにより架橋させる；
工程ｄ：金属メッシュを通過させて、水中で膨潤させる；
工程ｅ：エタノール中で膨潤ゲルを沈殿させる；
工程ｆ：エタノール、水、及びＮａＯＨ溶液で洗浄する；
工程ｇ：加熱（５０℃）を伴って、約２時間にわたりエタノール／ＮａＯＨの溶液中で架橋を完了させる；
工程ｈ：溶液のｐＨを７に中和する；
工程ｉ：沈殿物を洗浄し、乾燥させる；
工程ｊ：結果として得られる乾燥粉末を、緩衝化０．９％ＮａＣｌ溶液中でゲルに膨潤させた；及び
工程ｋ：ゲルをシリンジ中に充填し、オートクレーブし、結果として組織充填剤を提供する。

実施例７：組織充填剤調製方法。
本明細書中に記載される絹／ＨＡ組織充填剤は、以下の一般的方法に従って調製することができた：
工程ａ：ヒアルロン酸をＮａＯＨ溶液中に溶解してもよい；
工程ｂ：ＮａＯＨ中の溶解ＢＤＤＥをＨＡ／ＮａＯＨ溶液に添加する；
工程ｃ：絹溶液を、工程ｂの溶液に添加し、加熱を伴って混合することにより架橋させる；
工程ｄ：金属メッシュを通過させて、水中で膨潤させる；
工程ｅ：エタノール中で膨潤ゲルを沈殿させる；
工程ｆ：エタノール、水、及びＮａＯＨ溶液で洗浄する；
工程ｇ：加熱（５０℃）を伴って、約２時間にわたりエタノール／ＮａＯＨの溶液中で架橋を完了させる；
工程ｈ：溶液のｐＨを７に中和する；
工程ｉ：沈殿物を洗浄し、乾燥させる；
工程ｊ：結果として得られる乾燥粉末を、緩衝化０．９％ＮａＣｌ溶液中でゲルに膨潤させた；及び
工程ｋ：ゲルをシリンジ中に充填し、オートクレーブし、結果として組織充填剤を提供する。

実施例８：組織充填剤調製方法。
本明細書中に記載される絹／ＨＡ組織充填剤は、以下の一般的方法に従って調製することができた：
工程ａ：ヒアルロン酸をＮａＯＨ溶液中に溶解してもよい；
工程ｂ：ＮａＯＨ中の溶解ＢＤＤＥをＨＡ／ＮａＯＨ溶液に添加する；
工程ｃ：加熱を伴って混合させることにより架橋させる；
工程ｄ：絹溶液を架橋ＨＡ／ＮａＯＨ溶液に添加し、金属メッシュを通過させて、水中で膨潤させる。
工程ｅ：エタノール中で膨潤ゲルを沈殿させる；
工程ｆ：エタノール、水、及びＮａＯＨ溶液で洗浄する；
工程ｇ：加熱（５０℃）を伴って、約２時間にわたりエタノール／ＮａＯＨの溶液中で架橋を完了させる；
工程ｈ：溶液のｐＨを７に中和する；
工程ｉ：沈殿物を洗浄し、乾燥させる；
工程ｊ：結果として得られる乾燥粉末を、緩衝化０．９％ＮａＣｌ溶液中でゲルに膨潤させた；及び
工程ｋ：ゲルをシリンジ中に充填し、オートクレーブし、結果として組織充填剤を提供する。

実施例９：組織充填剤調製方法。
本明細書中に記載される絹／ＨＡ組織充填剤は、以下の一般的方法に従って調製することができた：
工程ａ：ヒアルロン酸をＮａＯＨ溶液中に溶解してもよい；
工程ｂ：ＮａＯＨ中の溶解ＢＤＤＥをＨＡ／ＮａＯＨ溶液に添加する；
工程ｃ：加熱を伴って混合させることにより架橋させる；
工程ｄ：金属メッシュを通過させて、水中で膨潤させる；
工程ｅ：エタノール中で膨潤ゲルを沈殿させる；
工程ｆ：エタノール、水、及びＮａＯＨ溶液で洗浄する；
工程ｇ：絹溶液を、工程ｆにおいて調製した材料に添加し、加熱（５０℃）を伴って、約２時間にわたりエタノール／ＮａＯＨ溶液中で架橋を完了させる；
工程ｈ：溶液のｐＨを７に中和する；
工程ｉ：沈殿物を洗浄し、乾燥させる；
工程ｊ：結果として得られる乾燥粉末を、緩衝化０．９％ＮａＣｌ溶液中でゲルに膨潤させた；
工程ｋ：ゲルをシリンジ中に充填し、オートクレーブし、結果として組織充填剤を提供する。

実施例１０：組織充填剤調製方法。
本明細書中に記載される絹／ＨＡ組織充填剤は、以下の一般的方法に従って調製することができた：
工程ａ：ヒアルロン酸ナトリウムを、本明細書中に記載されるように、ＮａＯＨ溶液及び絹の溶液と混合してもよい；
工程ｂ：ＢＤＤＥを工程ａの溶液に添加してもよい；
工程ｃ：工程ｂの生成物を反応させる；
工程ｄ：アンモニアを工程ｃの透析混合物に添加し、混合物をペトリ皿中に注ぐ；
工程ｅ：工程ｄの生成物を膜中に乾燥させる；
工程ｆ：工程ｅの膜を粒子中に分割し、生理食塩水中で膨潤させる；
工程ｇ；工程ｆの生成物をシリンジ中に添加し、オートクレーブする；
工程ｈ（任意）：工程ｆの生成物を、ＢＤＤＥの溶液、又は本明細書中に記載される他の架橋剤を用いた第二の最終的な架橋手順に供し、洗浄することができる。

実施例１１：組織充填剤調製方法。
本明細書中に記載される絹／ＨＡ組織充填剤は、以下の一般的方法に従って調製することができた：
工程ａ：ヒアルロン酸ナトリウムをＮａＯＨ溶液と混合してもよい；
工程ｂ：絹溶液を、工程ａの溶液に添加してもよく、ＢＤＤＥを添加してもよい；
工程ｃ：工程ｂの生成物を反応させる；
工程ｄ：アンモニアを工程ｃの透析混合物に添加し、混合物をペトリ皿中に注ぐ；
工程ｅ：工程ｄの生成物を膜中に乾燥させる；
工程ｆ：工程ｅの膜を粒子中に分割し、生理食塩水中で膨潤させる；
工程ｇ；工程ｆの生成物をシリンジ中に添加し、オートクレーブする；
工程ｈ（任意）：工程ｆの生成物を、ＢＤＤＥの溶液、又は本明細書中に記載される他の架橋剤を用いた第二の最終的な架橋手順に供し、洗浄することができる。

実施例１２：組織充填剤調製方法。
本明細書中に記載される絹／ＨＡ組織充填剤は、以下の一般的方法に従って調製することができた：
工程ａ：ヒアルロン酸ナトリウムをＮａＯＨ溶液と混合してもよい；
工程ｂ：ＢＤＤＥを工程ａの溶液に添加してもよい；
工程ｃ：工程ｂの生成物を絹溶液に添加し、反応させる；
工程ｄ：アンモニアを工程ｃの透析混合物に添加し、混合物をペトリ皿中に注ぐ；
工程ｅ：工程ｄの生成物を膜中に乾燥させる；
工程ｆ：工程ｅの膜を粒子中に分割し、生理食塩水中で膨潤させる；
工程ｇ；工程ｆの生成物をシリンジ中に添加し、オートクレーブする；
工程ｈ（任意）：工程ｆの生成物を、ＢＤＤＥの溶液、又は本明細書中に記載される他の架橋剤を用いた第二の最終的な架橋手順に供し、洗浄することができる。

実施例１３：組織充填剤調製方法。
本明細書中に記載される絹／ＨＡ組織充填剤は、以下の一般的方法に従って調製することができた：
工程ａ：ヒアルロン酸ナトリウムをＮａＯＨ溶液と混合してもよい；
工程ｂ：ＢＤＤＥを工程ａの溶液に添加してもよい；
工程ｃ：工程ｂの生成物を反応させる；
工程ｄ：工程ｃの生成物を絹溶液に添加し、次にアンモニアをその透析混合物に添加し、混合物をペトリ皿中に注ぐ；
工程ｅ：工程ｄの生成物を膜中に乾燥させる；
工程ｆ：工程ｅの膜を粒子中に分割し、生理食塩水中で膨潤させる；
工程ｇ；工程ｆの生成物をシリンジ中に添加し、オートクレーブする；
工程ｈ（任意）：工程ｆの生成物を、ＢＤＤＥの溶液、又は本明細書中に記載される他の架橋剤を用いた第二の最終的な架橋手順に供し、洗浄することができる。

実施例１４：組織充填剤調製方法。
本明細書中に記載される絹／ＨＡ組織充填剤は、以下の一般的方法に従って調製することができた：
工程ａ：絹溶液を、本明細書中に記載されるよう調製してもよく、それに、ＢＤＤＥ水溶液を添加してもよい；
工程ｂ：ＨＡを、工程ａの溶液に添加してもよい；
工程ｃ：工程ｂの混合物を撹拌（例、５分間）し、約１日間にわたり放置してもよい；
工程ｄ：工程ｃからの、結果として得られるゲルを、１週間にわたり生理食塩水中に放置し、結果として得られる組織充填剤を提供してもよい。

実施例１５：組織充填剤調製方法。
本明細書中に記載される絹／ＨＡ組織充填剤は、以下の一般的方法に従って調製することができた：
工程ａ：ＢＤＤＥを水に添加してもよい；
工程ｂ：絹溶液を、工程ａの溶液に添加してもよく、それに、ＨＡを次に、添加してもよい；
工程ｃ：工程ｂの混合物を撹拌（例、５分間）し、約１日間にわたり放置してもよい；
工程ｄ：工程ｃからの、結果として得られるゲルを、１週間にわたり生理食塩水中に放置し、結果として得られる組織充填剤を提供してもよい。

実施例１６：組織充填剤調製方法。
本明細書中に記載される絹／ＨＡ組織充填剤は、以下の一般的方法に従って調製することができた：
工程ａ：ＢＤＤＥを水に添加してもよい；
工程ｂ：ＨＡを、工程ａの溶液に添加してもよい；
工程ｃ：絹溶液を、工程ｂの混合物に添加してもよく、結果として得られる混合物を撹拌（例、５分間）し、約１日間にわたり放置してもよい；
工程ｄ：工程ｃからの、結果として得られるゲルを、１週間にわたり生理食塩水中に放置し、結果として得られる組織充填剤を提供してもよい。

実施例１７：組織充填剤調製方法。
本明細書中に記載される絹／ＨＡ組織充填剤は、以下の一般的方法に従って調製することができた：
工程ａ：絹溶液に、本明細書中に記載されるように、ＮａＯＨ溶液中に溶解させたＨＡ（４００ｒｐｍで約１２時間にわたり混合）を添加してもよい。
工程ｂ：工程ａの溶液を脱ガスしてもよい；
工程ｃ：工程ｂの溶液を、５０℃で約１０～２０分間にわたり、本明細書中に記載される架橋剤（例、ＢＤＤＥ）と混合してもよい；
工程ｄ：架橋ゲルをリドカインＨＣｌと混合する；
工程ｅ：調整された架橋溶液の透析を３日間にわたり、次にＰＢＳで２日間、次に水で１日間行ってもよい；
工程ｆ：濾過した、結果として得られる生成物を次に、凍結乾燥して固体を得る；
工程ｇ：固体をＰＢＳ中に溶解し、次にインキュベートする；
工程ｈ（任意）：遊離ＨＡを、工程ｇの生成物に添加してもよい；
工程ｉ：工程ｇ又はｈの、結果として得られる生成物を、蒸気オートクレーブにより滅菌してもよい。

実施例１８：組織充填剤調製方法。
本明細書中に記載される絹／ＨＡ組織充填剤は、以下の一般的方法に従って調製することができた：
工程ａ：ＨＡをＮａＯＨ溶液中に溶解させてもよい（４００ｒｐｍで約１２時間にわたり混合）。
工程ｂ：絹溶液を、工程ａの溶液に添加してもよく、結果として得られる混合物を脱ガスしてもよい；
工程ｃ：工程ｂの溶液を、５０℃で約１０～２０分間にわたり、本明細書中に記載される架橋剤（例、ＢＤＤＥ）と混合してもよい；
工程ｄ：架橋ゲルをリドカインＨＣｌと混合する；
工程ｅ：調整された架橋溶液の透析を３日間にわたり、次にＰＢＳで２日間、次に水で１日間行ってもよい；
工程ｆ：濾過した、結果として得られる生成物を次に、凍結乾燥して固体を得る；
工程ｇ：固体をＰＢＳ中に溶解し、次にインキュベートする；
工程ｈ（任意）：遊離ＨＡを、工程ｇの生成物に添加してもよい；
工程ｉ：工程ｇ又はｈの、結果として得られる生成物を、蒸気オートクレーブにより滅菌してもよい。

実施例１９：組織充填剤調製方法。
本明細書中に記載される絹／ＨＡ組織充填剤は、以下の一般的方法に従って調製することができた：
工程ａ：ＨＡをＮａＯＨ溶液中に溶解させてもよい（４００ｒｐｍで約１２時間にわたり混合）。
工程ｂ：工程ａの溶液を脱ガスしてもよい；
工程ｃ：絹溶液を、工程ｂの溶液に添加してもよく、結果として得られる混合物を、５０℃で約１０～２０分間にわたり、本明細書中に記載される架橋剤（例、ＢＤＤＥ）と混合してもよい；
工程ｄ：架橋ゲルをリドカインＨＣｌと混合する；
工程ｅ：調整された架橋溶液の透析を３日間にわたり、次にＰＢＳで２日間、次に水で１日間行ってもよい；
工程ｆ：濾過した、結果として得られる生成物を次に、凍結乾燥して固体を得る；
工程ｇ：固体をＰＢＳ中に溶解し、次にインキュベートする；
工程ｈ（任意）：遊離ＨＡを、工程ｇの生成物に添加してもよい；
工程ｉ：工程ｇ又はｈの、結果として得られる生成物を、蒸気オートクレーブにより滅菌してもよい。

実施例２０：組織充填剤調製方法。
本明細書中に記載される絹／ＨＡ組織充填剤は、以下の一般的方法に従って調製することができた：
工程ａ：ＨＡをＮａＯＨ溶液中に溶解させてもよい（４００ｒｐｍで約１２時間にわたり混合）。
工程ｂ：工程ａの溶液を脱ガスしてもよい；
工程ｃ：工程ｂの溶液を、５０℃で約１０～２０分間にわたり、本明細書中に記載される架橋剤（例、ＢＤＤＥ）と混合してもよい；
工程ｄ：絹溶液を、工程ｃの生成物に添加してもよく、混合物をリドカインＨＣｌと混合してもよい；
工程ｅ：調整された架橋溶液の透析を３日間にわたり、次にＰＢＳで２日間、次に水で１日間行ってもよい；
工程ｆ：濾過した、結果として得られる生成物を次に、凍結乾燥して固体を得る；
工程ｇ：固体をＰＢＳ中に溶解し、次にインキュベートする；
工程ｈ（任意）：遊離ＨＡを、工程ｇの生成物に添加してもよい；
工程ｉ：工程ｇ又はｈの、結果として得られる生成物を、蒸気オートクレーブにより滅菌してもよい。

実施例２１：ＢＤＤＥで架橋された絹及びヒアルロン酸で構成される組織及び／又は皮膚充填剤製剤
材料：１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）；ヒアルロン酸ナトリウム（ＨＡ；Ｌｉｆｅｃｏｒｅ）；絹、６％溶液（ＳｉｌｋＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）；水酸化ナトリウム、０．１Ｎ溶液（ＢＤＨ）；塩酸、５Ｎ（ＲｉｃｃａＣｈｅｍｉｃａｌ）；リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ；２０ｘ；ＶＷＲＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ）。

製剤変数：絹分子量：中及び低ＭＷ絹溶液（６％）；ＨＡ分子量：１．５ＭＤａ及び２．２ＭＤａ；絹濃度：１％ｖ／ｖ（０．６ｍｇ／ｍｌ）、２％ｖ／ｖ（６ｍｇ／ｍｌ）５％ｖ／ｖ（３ｍｇ／ｍｌ）、及び２０％ｖ／ｖ（１２ｍｇ／ｍｌ）。

ヒドロゲル架橋：（ａ）６％絹溶液を０．１Ｎ水酸化ナトリウムに添加する；（ｂ）絹含量に依存して、２００～４００ｒｐｍの速度でのオーバーヘッド撹拌下で、ＨＡ粉末を上の調製溶液に徐々に添加する；多過ぎる気泡の生成を回避するために、穏やかに撹拌する；ＨＡが完全に溶解するまで撹拌し続ける；（ｃ）上の溶液に１％ｗ／ｗのＢＤＤＥを添加する；（ｄ）５０℃に加熱し、１００～２００ｒｐｍで３０分間にわたり撹拌し続ける；（ｅ）架橋ゲルを３０℃以下に冷却する；（ｆ）５Ｎ塩酸を添加してｐＨを７．０～７．４に調整する。

ヒドロゲル透析：（ａ）透析カセットを２分間にわたり水和する；過剰な水を拭き取り、空のカセットの総質量を測定する；（ｂ）約１８ｇのヒドロゲル製剤を透析カセット中に添加する；ゲルが装填された後、カセットの総質量を測定する；（ｃ）透析カセットを２Ｌの１×ＰＢＳ緩衝液中に懸濁し、磁気撹拌を２００ｒｐｍに設定する；透析が開始する時間を記録し、４時間、２４時間、及び４８時間後にＰＢＳ緩衝液を変える；７２時間後にゲルを回収する。

特徴付け：剪断貯蔵弾性率（Ｇ’）及び粘度；酵素分解；ＢＤＤＥ残渣；架橋密度；３０日間の動物試験；細胞傷害性；細菌エンドトキシン；濁度。

粘弾特性：ＤｉｓｃｏｖｅｒｙＨＲ－１ハイブリッドレオメータ（ＴＡＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を使用して、皮膚／皮膚充填剤製剤の貯蔵弾性率（Ｇ’）及び複素粘度（η）を測定した。サンプルを、１０年間隔当たり１０のデータ点を用いて、０．１Ｈｚ～１０Ｈｚの振動周波数を掃引することによりテストした。データを記録し、５Ｈｚの剪断速度で比較した。一定のＨＡ濃度及び可変絹濃度を伴うヒドロゲル製剤（透析後）についてのＧ’及びγデータを、表１９中に示す。このバッチでは、１．５ＭＤａ分子量のＨＡを使用した。

（外２２）

３０ｍｇ／ｍｌのＨＡ及び絹の一定の総濃度を伴うヒドロゲル製剤（透析後）のＧ’及びγデータを、表２０中にまとめる。

（外２３）

ヒドロゲルの可逆性：絹タンパク質を伴う及び伴わないヒドロゲルを調製し、透析した。最終組成物は、それぞれ、絹－ＨＡヒドロゲルについては３３．３ｍｇ／ｍｌのＨＡ＋８ｍｇ／ｍｌ及びＨＡヒドロゲルについては３３．３ｍｇ／ｍｌのＨＡであった。１ｇ±上で調製したヒドロゲル１００ｇを、２０ｍｌのガラスバイアルに添加して、１×ＰＢＳ中の３ｍｌの１６Ｕ／ｍｌのヒアルロニダーゼが続いた。サンプルを３日間にわたり３７℃でインキュベートした。対照サンプルをまた、ヒアルロニダーゼを添加することなく、ＨＡヒドロゲルを使用して調製した。分解プロファイルを図２８中に示す。ヒアルロニダーゼを伴わない対照サンプルは、３日間のインキュベーションの過程の間に分解されなかった。インキュベーションの最初の６時間以内に、ヒドロゲルは緩衝液を吸収して膨潤して、パーセンテージ質量の増加をもたらした。絹－ＨＡヒドロゲル及びＨＡヒドロゲルは、３日間のインキュベーション後に完全に分解された。絹が存在では、ヒドロゲルは、純粋なＨＡヒドロゲルよりも速く消化された。１２時間のインキュベーション後、絹－ＨＡヒドロゲルの約９０％が酵素により消化された。

架橋剤（ＢＤＤＥ）残渣：表１９中に列挙するサンプルを、ＭｉｌｌｅｎｎｉｕｍＲｅｓｅａｒｃｈＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．（ＭＲＬ）によるＧＣ－ＦＩＤを使用して、ＢＤＤＥ残渣についてテストした。ＭＲＬテストレポートＭＲＬ１８ＪＡＮ０６は、全てのサンプル中のＢＤＤＥ残渣がいずれも検出可能ではないことを示したが、２ｐｐｍと等しい又はそれ未満の許容基準を満たしている。

架橋密度：表１９中に列挙されるサンプルを、ヒアルロニダーゼによりさらに完全に消化し、ＮＭＲを使用して分析し、架橋密度をパーセンテージ改変に関して測定した。テスト結果を表２１中に列挙する（ＭＲＬテストレポートＭＲＬ１８ＪＡＮ０７）。

（外２４）

動物試験：モルモットモデルを使用した３０日間の動物試験を、ＷｕＸｉＡｐｐＴｅｃＭｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ施設で行い、製品安全性の懸念に対処した。組織応答を評価するために、本試験では、２つの終了時点、７日目及び３０日目があった。試験は、ＷｕＸｉＡｐｐＴｅｃレポートＤ２８１９５（プロジェクトＣ１９８７９）にまとめられた。二つの対照サンプル（ＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓ及び表１９中のサンプルＣ２）及び６つの製剤（表１９中のサンプルＡ～Ｆ）を、皮内注入用に使用した。サンプルＡ～Ｆ及び対照サンプルＣ２は、注入前にＮｅｌｓｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，ＬＬＣで蒸気滅菌した（プロトコル２０１７０７２８９）。簡単な試験手順：２４頭の動物（１期間当たり１２頭）を本試験において使用した。各々の動物は、スレッディング技術（ボーラスの代わりにラインを注入する）を使用した、６箇所の背側の皮内注入を受けた：脊椎の一つの側の一つの対照部位、その反対側の第二の対照部位（側は、動物ごとに交互に割り当てられる）、及び所与のテスト物質の一つ又は複数の注入を伴う４箇所のテスト部位（右側及び左側は動物間で交互に割り当てられる）。動物は、一般的な健康状態を評価するために、試験を通して毎日観察した。動物を終了予定日に人道的に安楽死させた。全ての動物からの移植部位及び周囲組織を切除し、ホルマリン中に入れ、パラフィンブロックに加工し、組織病理学的評価が続いた。代表的な組織学的画像及び病理学的所見を表２２中にまとめた。全体的に、移植部位のいずれにおいても敗血症又は免疫応答を示唆するものはなかった。

（外２５）

細菌エンドトキシン：三つの滅菌後サンプル（サンプルＡ、サンプルＥ、及びサンプルＣ２）を、（表１９中に列挙された）動物試験において使用される７つの製剤から、細菌エンドトキシンテストのために選択した。動的比濁法を使用して、エンドトキシンレベルを決定した。テスト結果を表２３中に列挙するが、許容基準の２０ＥＵ／ｍｌ（ＮｅｌｓｏｎＬａｂｓ試験レポート１００６７７５－Ｓ０１）を下回っている。

（外２６）

生体適合性－細胞毒性：四つの滅菌後サンプル（サンプルＡ、サンプルＢ、サンプルＤ、及びサンプルＥ）を、（表１９中に列挙された）動物試験において使用される７つの製剤から、ＩＳＯ－１０９９３－５細胞毒性テスト（Ｌ－９２９マウス線維芽細胞を使用したＩＳＯＭＥＭ溶出）のために選択した。これらのサンプルは、テストされた組織及び／又は皮膚充填剤製剤において中分子量絹及び低分子量絹の最高及び最低含量を示した。テストレポートは、全てのテストサンプルが、非細胞傷害性を意味するグレード０のスコアであることを示した（ＷｕｘｉＡｐｐＴｅｃＤ２８２８７－１、Ｄ２８２８７－２、Ｄ２８２８７－３、Ｄ２８２８７－４）。

濁度：純粋なＨＡヒドロゲルは、自然光の下で透明である。ＨＡは、絹タンパク質と架橋された場合、ヒドロゲルがわずかに濁り（曇り）、その濁度は、製剤中の総絹濃度に依存的である。濁度は、標準透過光に加えて、前方散乱光を集める能力を有する、ＩｎＧａＡｓ積分球を備えたＬａｍｂｄａＸ５０Ｓ紫外可視分光光度計（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）により測定した。絹－ＨＡヒドロゲルの濁度測定を図３５中に示す。黒色曲線は、標準透過率であり、赤色曲線は、有意な前方散乱を示す球により集められた。絹を伴わない純粋なＨＡヒドロゲルを、対照サンプルとして使用した。図３６中の曲線はほぼ同一であり、純粋なＨＡゲルの散乱をほとんど示さない。濁度測定は、絹－ＨＡヒドロゲルが、皮膚充填剤として使用された場合に、チンダル効果を排除することができる、光を散乱する能力を有することを示唆した。

結論：充填剤製剤は、一定のＨＡ濃度と、様々な絹含量及び一定の総濃度に基づいて開発された。これらの製剤は、様々な適用に導き得る、広範囲の貯蔵弾性率、粘度、及び架橋密度を提供した。絹－ＨＡヒドロゲルは酵素的に可逆的であった。ヒドロゲル製剤の透析後の架橋剤残渣は、許容基準を満たした。細胞毒性テストは、０．４８ｍｇ／ｍＬ～９．６ｍｇ／ｍＬの範囲の絹含量を伴う絹－ＨＡヒドロゲルが、細胞毒性がなく及び生体適合性であることを示した。３０日間の動物試験によって、絹含量が最大９．６ｍｇ／ｍＬの全ての製剤が、敗血症を起こさず、免疫応答を有さなかったことが実証された。

実施例２２：ＰＥＧＤＥ（ＰＥＧＤＧＥ）で架橋された、絹及びヒアルロン酸で構成される組織及び／又は皮膚充填剤製剤
架橋剤：ポリ（エチレングリコール）ジグリシジルエーテル（ＰＥＧＤＥ）、平均分子量Ｍｎ＝５００。反応条件：ＢＤＤＥ架橋と同じ（実施例２１）。ＰＥＧＤＥの総量は、モルにおいてＢＤＤＥと等価であった。

（外２７）

実施例２３：動物試験Ｃ２０４１９
動物試験Ｃ２０４１９用のサンプルの製剤及び特徴付けは、表２５中に示すとおりである。

（外２８）

図３７～４６は、試験の結果を示す。図３７は、対照皮膚充填剤を注入したモルモットにおける皮内領域の代表的な組織学的写真である。図３８は、本発明のＨＡ皮膚充填剤を注入したモルモットにおける皮内領域の代表的な組織学的写真である（２４ｍｇ／ｍｌのＨＡ、ＰＥＧＤＥ架橋、サンプルＣ４－表２５）。図３９は、本発明の絹－ＨＡ皮膚充填剤を注入したモルモットにおける皮内領域の代表的な組織学的写真である（２２．８ｍｇ／ｍｌのＨＡ、１．２ｍｇ／ｍｌの絹、ＰＥＧＤＥ架橋、サンプルＬ－表２５）。図４０は、本発明の絹－ＨＡ皮膚充填剤を注入したモルモットにおける皮内領域の代表的な組織学的写真である（２３．７６ｍｇ／ｍｌのＨＡ、０．２４ｍｇ／ｍｌの絹、ＰＥＧＤＥ架橋、サンプルＭ－表２５）。図４１は、本発明の絹－ＨＡ皮膚充填剤を注入したモルモットにおける皮内領域の代表的な組織学的写真である（２２．８ｍｇ／ｍｌのＨＡ、１．２ｍｇ／ｍｌの絹、ＰＥＧＤＥ架橋、サンプルＮ－表２５）。図４２は、本発明の絹－ＨＡ皮膚充填剤を注入したモルモットにおける皮内領域の代表的な組織学的写真である（２２．８ｍｇ／ｍｌのＨＡ、１．２ｍｇ／ｍｌの絹、ＰＥＧＤＥ架橋、サンプルＯ－表２５）。

図４３～図４６は、移植後７日目の表２５の製剤（スコア：０－正常；１－最小；２－軽度；３－中程度；４－重度）についての組織学的結果のグラフ表示である。図４３は、ゲル分解についての、移植後７日間目の組織学的結果を示すグラフである；ＢＤＤＥ架橋製剤は、大部分が分解される。図４４は、ゲル移動についての、移植後７日間目の組織学的結果を示すグラフである。図４５は、炎症についての、移植後７日間目の組織学的結果を示すグラフである；組織壊死は観察されず、血液凝固は観察されず、及び最小限のコラーゲン沈着が、対照製剤及びテスト製剤の一部で観察された。図４６は、マクロファージについての、移植後７日間目の組織学的結果を示すグラフである。

実施例２４：ＰＥＧＤＥ架橋絹－ＨＡヒドロゲルの特性：１）剪断貯蔵弾性率（Ｇ’）、及び２）透析の間での膨潤率。
充填剤調製物、材料：ポリ（エチレングリコール）ジグリシジルエーテル（ＰＥＧＤＥ）、Ｍｎ＝５００、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ；ヒアルロン酸ナトリウム（ＨＡ）、Ｌｉｆｅｃｏｒｅ；絹、６％溶液、ＳｉｌｋＩｎｃ．、水酸化ナトリウム、０．１Ｎ溶液、ＢＤＨ、塩酸、５Ｎ、ＲｉｃｃａＣｈｅｍｉｃａｌ；リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、２０ｘ、ＶＷＲＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ。

充填剤製剤の変数：絹分子量：中及び低ＭＷ絹溶液（６％）；ＨＡ分子量：７００ｋＤａ及び１．５ＭＤａ；絹濃度（初期）：０～１５ｍｇ／ｍｌ。

高濃度でのヒドロゲル架橋：６％絹溶液を０．１Ｎ水酸化ナトリウムに添加する；ＨＡが完全に溶解するまで穏やかな撹拌下で、１００ｍｇ／ｍｌの混合分子量ＨＡ（７００ＫＤａ／１．５ＭＤａ＝９０／１０）を上の調製溶液に徐々に添加する；ＰＥＧＤＥを上の溶液に添加する；水浴を４０℃に加熱し、水浴中で４５分間にわたり架橋を維持する；架橋ゲルを３０℃以下に冷却する；５Ｎ塩酸を１×ＰＢＳに添加して、ゲルを４０ｍｇ／ｍｌに希釈し、最終ｐＨを７．０～７．４に調整する。

低濃度でのヒドロゲル架橋：６％絹溶液を０．１Ｎ水酸化ナトリウムに添加する；ＨＡが完全に溶解するまで穏やかな撹拌下で、２５ｍｇ／ｍＬの１．５ＭＤａＨＡを上の調製溶液に徐々に添加する；ＰＥＧＤＥを上の溶液に添加する；水浴を４０℃に加熱し、水浴中で４５分間にわたり架橋を維持する；架橋ゲルを３０℃以下に冷却する；５Ｎ塩酸を架橋ゲルに添加して、最終ｐＨを７．０～７．４に調整する。

ヒドロゲル透析：透析カセット（２０ＫＤａＭＷＣＯ）を２分間にわたり水和させる；過剰な水を拭き取り、空のカセットの総質量を測定する；約１８ｇのヒドロゲルを透析カセット中に添加する；ゲルを装填した後、カセットの総質量を測定する；透析カセットを２Ｌの１×ＰＢＳ緩衝液中に懸濁し、磁気撹拌を２００ｒｐｍに設定する；７２時間の透析後にゲルを回収する。

粘弾特性
ＤｉｓｃｏｖｅｒｙＨＲ－１ハイブリッドレオメータ（ＴＡＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を使用して、ヒドロゲル製剤の貯蔵弾性率（Ｇ’）を決定した。サンプルを、１０年間隔当たり１０のデータ点を用いて、０．１Ｈｚ～１０Ｈｚの振動周波数を掃引することによりテストした。データを記録し、５Ｈｚの剪断速度で比較した。一定のＨＡ濃度及び可変絹濃度を伴う透析前後のヒドロゲル製剤のＧ’を、図４７Ａ及び４７Ｂ中に示す。高い初期ＨＡ濃度でＰＥＧＤＥにより架橋されたヒドロゲルについて、Ｇ’に対する絹濃度の影響は、総ＨＡに対する絹の比較的低い比率に起因して、最小である。それはまた、絹濃度の変化に対する感受性のない、９０％の低分子量（７００ｋＤａ）を含む混合ＨＡに起因し得る。低い初期ＨＡ濃度でＰＥＧＤＥにより架橋されたヒドロゲルについて、Ｇ’は、より多くの絹が製剤に添加されるほど上昇した。絹濃度における変化は、初期ＨＡ濃度が低く、また、高分子量ＨＡ（１．５ＭＤａ）に対してより多くの影響を有する場合、Ｇ’に対してより多くの影響を有した。Ｇ’に対する絹分子量の実質的な影響は、両方の架橋手順について観察されなかった。

透析の間での膨潤率：ヒドロゲル製剤に添加される絹の量が、両方の架橋手順について、透析の間でのゲル膨潤に対して任意の影響を有することを示す明確な傾向はなく、中分子量絹と低分子量絹の間で実質的な差はなかった（図４８Ａ及び４８Ｂ）。

ヒドロゲル製剤中の絹濃度は、混合ＨＡが高い初期ＨＡ濃度でＰＥＧＤＥにより架橋される場合、Ｇ’に対する最小の影響を有したが、しかし、単一の高ＭＷＨＡが低い初期ＨＡ濃度で架橋される場合、Ｇ’に比例した。ゲル製剤中での絹の分子量は、ＨＡがＰＥＧＤＥにより架橋された場合、Ｇ’への寄与と膨潤を比較すると、実質的な差を有さなかった。

実施例２５：絹－ＨＡ組織及び／又は皮膚充填剤製剤中の絹濃度
材料：絹、６％溶液、Ｓｉｌｋ，Ｉｎｃ．、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、２０ｘ、ＶＷＲＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ；架橋ヒアルロン酸（ＨＡ）ゲル。

機器：水分分析器ＨＥ５３、ＭｅｔｔｌｅｒＴｏｌｅｄｏ、Ｃａｒｙ１００紫外／可視分光光度計。

較正標準曲線：中分子量及び低分子量の両方の６％絹溶液の乾燥含量を測定し、絹溶液の実際の乾燥含量（ｍｇ／ｍＬ）を決定する；１ＸＰＢＳを使用して６％の絹溶液を希釈することにより、一連の標準的な絹溶液を作製する（例えば、１ｍｇ／ｍｌの絹、０．７５ｍｇ／ｍｌの絹、０．５ｍｇ／ｍｌの絹、０．２５ｍｇ／ｍｌの絹、及び０ｍｇ／ｍｌの絹）；石英キュベット中で、２７５ｎｍでの各々の標準溶液の吸光度を測定する－吸光度測定は、２００～８００ｎｍのスキャン、５ｎｍのデータ間隔、及び０．１秒の平均収集で実施することができる；絹濃度（ｍｇ／ｍｌ）に対して２７５ｎｍでの吸光度をプロットし、標準曲線を作成する。

絹濃度の測定：ＨＡゲルサンプルを１ＸＰＢＳで希釈し、２７５ｎｍでの吸光度が０～１．０の間となるようにする（例えば、サンプルは、１ＸＰＢＳに対するゲルの１：１２比率で希釈することができ、即ち、１２００％希釈）；２００ｎｍ～８００ｎｍの間での、１ＸＰＢＳ参照に対する絹－ＨＡゲルサンプルの吸光度についてスキャンし、各々のゲルサンプルについて２７５ｎｍでの吸光度ピークを測定する；ゲルサンプルについての吸収シグナルが、絹を伴わないサンプルについての吸収シグナルと較正曲線の切片の間での差により補正され、絹を伴わないサンプルが０ｍｇ／ｍｌの絹濃度を有するように設定する；絹－ＨＡゲルサンプル中の絹濃度は、較正曲線及び希釈係数から算出することができる。

較正曲線は、０ｍｇ／ｍＬ～１ｍｇ／ｍＬの範囲の絹の異なる濃度を伴う一連の標準サンプルについて、２７５ｎｍでの吸収を測定することにより作成した。中分子量絹溶液及び低分子量絹溶液についての較正曲線を、図４９Ａ及び４９Ｂ中に示す。中分子量絹での０．９９９４７及び低分子量絹での０．９９９４９のＲ^２値は、較正曲線が、絹濃度０～１ｍｇ／ｍｌの実用範囲内で直線的であることを実証する。これらの曲線を使用して、ゲルサンプル中の絹濃度を決定することができる。

ＨＡ－絹ヒドロゲルの絹濃度の決定：希釈した絹－ＨＡヒドロゲルの２７５ｎｍでの吸収を、図５０Ａ及び５０Ｂ中に示されるように、各々のサンプルについて測定した。各々のサンプルの絹濃度を較正曲線及び希釈倍率で算出し、表２６中にまとめた。

（外２９）

実施例２６：絹－ＨＡ組織及び／又は皮膚充填剤製剤：ゲル不透明度
材料：架橋ヒアルロン酸（ＨＡ）ゲル；リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、２０×、ＶＷＲＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ。
機器：Ｃａｒｙ１００紫外／可視分光光度計。
サンプル調製：約２ｍＬのＨＡゲルを、サンプル中に最小限の量の気泡があるように、清潔な石英キュベット中に注入する；１８Ｇ針を使用した注入は、サンプル中の気泡の量を低下させるのに役立ち得る；１ＸＰＢＳのブランク参照サンプルを、第二の清潔な水晶キュベットに添加することができる（注意：不透明度測定については、プラスチックキュベットを使用することができる。なぜなら、プラスチックキュベットは、可視範囲、４００ｎｍ～８００ｎｍにおいて吸収を有さないためである）。

ゲル不透明度の測定：データ間隔５ｎｍ及び平均時間０．１秒で、Ｘ走査範囲を２００ｎｍ～８００ｎｍに設定する；Ｙモードを、透過光の測定のために％Ｔであるように選択する（注意：吸収も測定することができ、％Ｔは吸収値から算出することができる）；１ＸＰＢＳ参照標準に対してゲルサンプルのスキャンを実施する；データをＣＳＶファイルとして保存することができ、スペクトルをプロットすることができる。

ゲル不透明度は、標準的な透過光用の紫外／可視分光光度計を使用して測定することができる。光学的に透明なサンプルは、１００％の光を透過するのに対して、わずかに濁った又は曇ったサンプルは、その光の一部分だけを透過し得る。図５１は、絹を伴う及び伴わないＨＡヒドロゲルの濁度測定を示す。青色曲線は、３ｍｇ／ｍＬの絹及び２６ｍｇ／ｍＬのＨＡを伴う絹－ＨＡゲルサンプルについての透過光での％透過率を示す。赤色曲線は、絹を伴わず、２０ｍｇ／ｍＬのＨＡを伴うサンプルの透過光を示し、絹を伴うサンプルよりも多い光の透過を示す。濁度測定は、絹－ＨＡゲルが、絹を伴わないＨＡゲルよりも可視光を散乱させる能力を有することを示唆する。

実施例２７：ＮＭＲにより決定されるＨＡヒドロゲルの改変度（ＭｏＤ）
改変度（ＭｏＤ）は、ＨＡ反復単位のモル数に対する、全ての架橋された架橋剤分子の化学量論比として定義される。架橋リンカー及び単連結リンカーの両方が、ＭｏＤ中に含まれる。ＭｏＤは、^１ＨＮＭＲスペクトルから、２．１ｐｐｍのＨＡ中のＮ－アセチル基及び１．７ｐｐｍのＢＤＤＥ架橋剤、又は３．０－４．５ｐｐｍのＰＥＧＤＥ架橋剤からの信号を積分することにより決定される。

酵素分解の前に、ＨＡヒドロゲルをまず、ＰＢＳ（１×、２Ｌ×５）溶液に対して透析し、遊離の架橋剤を除去した。Ｓｌｉｄｅ－Ａ－Ｌｙｚｅｒ透析カセット（ＭＷＣＯ３．５Ｋ、ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、イリノイ州ロックフォード）を使用し、ＰＢＳ溶液を７２時間にわたりＲＴで撹拌した。透析後、１ｍＬのＨＡヒドロゲル溶液を取り出し、ＬａｂｃｏｎｃｏＦｒｅｅＺｏｎｅ凍結乾燥機（２．５Ｌ）で凍結乾燥して乾燥粉末を得た。

ＮＭＲサンプルを調製するために、１０ｍｇの乾燥粉末をＮＭＲチューブ（５ｍｍ、Ｗｉｌｍａｄ－ＬａｂＧｌａｓｓ）中に入れ、重水（Ｄ_２Ｏ、ＡｌｆａＡｅｓａｒ、マサチューセッツ州ワード・ヒル）中の０．６ｍＬのヒアルロニダーゼ（ＭＰＢｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ、オハイオ州ソロン）溶液を添加した。ヒアルロニダーゼの量は、ＨＡ１ｍｇ当たり５Ｕであった。ＮＭＲチューブを３７℃で一晩インキュベートし、全てのＨＡを分解させた。ＮＭＲスペクトルを、ＶａｒｉａｎＭＲ４００ＭＨｚの自動ＮＭＲシステムで記録した。緩和遅延時間は１秒間であり、スキャン数は２５６である。全てのデータを、ＭｅｓｔＲｅＮｏｖａソフトウェア（エディション１２．０．２）を使用して処理した。

実施例２８：絹－ＨＡ２工程架橋プロセス
絹－ＨＡヒドロゲルは、２工程架橋プロセスで形成され、ＨＡに対する絹の結合効率を改善することができる。所与の製剤について、第一の工程で、全ての絹タンパク質及び低分子量ＨＡの少量を、ｐＨ１０のＮａＯＨ溶液に添加し、次に、架橋剤の一部と反応させる。任意の特定の理論により拘束されることを望まないが、この工程の間に、できるだけ多くの絹が架橋剤と反応すると考えられる。第二の工程で、ＮａＯＨ溶液を添加し、工程１からの生成物を希釈し、ｐＨを１３に増加させる。残りの低分子量ＨＡ、全ての高分子量ＨＡ、及び残りの架橋剤を次に、溶液に添加し、架橋反応を完了させる。

実施例２９：ＨＡヒドロゲル合成
ＨＡヒドロゲルを、異なるＨＡ分子量、架橋剤、反応時間、反応温度、ＨＡ濃度、架橋剤比、混合プロセス、及び撹拌方法を使用して合成した。表２７及び２８は、用いられる様々な反応条件、及び得られた様々なヒドロゲルを示す。

（外３０）

（外３１）

実施例２９：絹／ＨＡヒドロゲル合成。
絹充填剤は、ＨＡに共有結合された絹フィブロイン断片を伴う架橋ヒアルロン酸（ＨＡ）で構成される。架橋剤は、生体適合性及び生体再吸収性の官能化ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）である。架橋剤は、ＨＡ分子及び絹フィブロインをＨＡ分子に接続させて、注入可能なヒドロゲルを形成する。リドカインはまた、注入の間での不快感を低下させるために製剤に添加される。充填剤は１ｍＬシリンジ中に充填され、滅菌可能であり、臨床試験においては３０Ｇ又は２７Ｇ針を通して注入することができる。

ＨＡは、最小限の局所組織応答を誘導し、それはコラーゲン沈着を促進しない。絹タンパク質は、インプランテーションの結果として一過性で軽度の炎症応答を誘導し、局所的なインプラントの周辺でのマクロファージ及び線維芽細胞の動員及び活性化に導き得る。これらの一過性のイベントは、究極的には、コラーゲンの沈着及び新たな内因性組織に導く。充填剤中で、このプロセスは、皮膚の輪郭を改善し、傷跡、傷害、又はラインに起因する皮膚の窪みを低下させる能力を有する。

絹フィブロイン断片は、チンダル効果に影響を及ぼし得る。チンダル効果は、コロイド又は懸濁液中の微粒子による光の散乱を指す。散乱光の強度は、波長の４乗に反比例する。青色光はより短い波長を有し、より高い強度を伴って散乱され、従って、散乱光は青色に見える。チンダル効果は、時折、一部の皮膚充填剤の適用後にヒトにおいて観察される。チンダル効果は、表面の皮膚中に注入される、又は皮膚の色が薄い場合にさらにより有意となる。ＨＡのヒドロゲル粒子懸濁液は、ＵＶ及び可視吸収を有さない。絹皮膚充填剤は、２７５ｎｍ前後でのＵＶ吸収帯及び可視範囲における広い吸収を有する絹フィブロイン断片及び絹線維を含む。これらは、チンダル効果の軽減又は最終的な排除に役立つことができる。

任意の特定の理論により拘束されることを望まないが、絹組織及び／又は皮膚充填剤の粘弾性特性はまた、共有結合した絹フィブロイン断片により制御することができると考えられている。既存のＨＡ皮膚充填剤製品は、例えば、架橋ＨＡの濃度を変化させることにより、粘弾性特性（貯蔵弾性率及び損失弾性率）を制御するための限られた方法を有する。遊離ＨＡを添加することによって、注入の間の強制力（ｔｈｅｆｏｒｃｅｄ）を低下させ得るが、遊離ＨＡはインビボで急速に分解するため、粘弾性の制御に役立たない。絹組織及び／又は皮膚充填剤は、ＨＡに共有結合された絹フィブロイン断片を含む。コンジュゲートされた絹フィブロイン断片は、通常の架橋ＨＡ３Ｄネットワークを変える、より複雑化された構造を形成する。それは、異なる分子量（分子鎖長）又は異なるパーセンテージの絹フィブロイン断片を伴う絹フィブロイン断片の架橋により制御することができる。

絹組織及び／又は皮膚充填剤の粘弾性及びインビボでの寿命はまた、架橋剤の分子量（反復単位）を変えることにより制御することができる。既存の皮膚充填剤製品は、架橋剤として１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）を使用している。ＢＤＤＥは、皮膚充填剤の粘弾性、ならびにインビボでの皮膚充填剤の寿命を左右する改変度（ＭｏＤ）を制御する柔軟性を欠く小分子ジエポキシである。絹充填剤は、生体適合性のあるポリ（エチレングリコール）ジグリシジルエーテル（ＰＥＧＤＥ）を架橋剤として使用している。ＰＥＧＤＥは、ジエポキシ官能化線状オリゴマーである。それは、ＢＤＤＥよりも長い分子鎖を有し、ＥＯ反復単位の数を変えることにより調整可能であり、ＨＡ分子間の距離及びＨＡから絹フィブロイン断片までの距離を変化させることにより、ヒドロゲル構造を制御する柔軟性を提供する。エチレンオキシド（ＥＯ）反復単位の異なる数が、ＨＡ及び絹フィブロイン断片にアクセスして反応するエポキシ基の能力を変化させ、それによって、ＭｏＤを制御できる。

絹皮膚充填剤は、注入可能なヒドロゲルである。それは、９５：５の一定の質量比でのＨＡ及び絹フィブロイン断片で構成されている。ＨＡの分子量は、約８５０ＫＤａであり、絹フィブロイン断片の分子量は、約１４ｋＤａである。ヒドロゲルはＰＥＧＤＥにより架橋される。ＰＥＧＤＥの分子量は約５００Ｄａである。最終製品は、約２６ｍｇ／ｍＬの総ＨＡ及び絹フィブロイン断片、ならびに１×ＰＢＳ中の０．３％リドカインを含む。

絹充填剤製剤中では、ＨＡ分子が架橋され、絹フィブロイン断片がまた、ＰＥＧブリッジを通じてヒドロキシル基上のＨＡ分子に共有結合されている。ＰＥＧＤＥブリッジへの絹フィブロイン断片の共有結合的なコンジュゲーションは、ＬＣＭＳ／ＭＳ方法により実証される。例えば、本明細書中に記載される皮膚充填剤の組成を分析して、ゲル中の架橋された絹の存在を決定した。ゲル中のＨＡを、まず、ヒアルロニダーゼ、その後にプロテアーゼ（トリプシン／Ｌｙｓ－Ｃ、キモトリプシン、Ｇｌｕ－Ｃ）の組み合せを使用して消化した。混合物を次に、Ｕｌｔｉｍａｔｅ３０００ＨＰＬＣシステムでのＣ１８逆相（ＲＰ）カラムを使用して分析し、ＭＳ／ＭＳ分析をＱＥｘａｃｔｉｖｅ質量分析計で実施した。

図５２中に示すように、ＰＥＧ架橋剤が、８９．０６、１３３．０８、及び１７７．１１のｍ／ｚを伴う一次イオンを有する一方で、絹断片の一次イオンは１３６．０７及び１８２．０８である。任意の特定の理論により拘束されることを望まないが、少なくとも一部の実施形態では、ＬＣスペクトルは、遊離ＰＥＧ断片及び／又は遊離絹フィブロイン断片を明確に示すことができないと考えられる。また、任意の特定の理論により拘束されることを望まないが、少なくとも一部の実施形態では、ゲル中の絹は全て、ＰＥＧと共有結合的にコンジュゲートされ得ると考えられる。また、任意の特定の理論により拘束されることを望まないが、少なくとも一部の実施形態では、保持時間２３．２２分でのピークのＭＳ／ＭＳスペクトル（ｍ／ｚ４３５．６４、強調）は、ＰＥＧ及び絹フィブロイン断片の両方の強いシグナルを示し、それによって、絹がＰＥＧで架橋されていることがさらに証明されると考えられる。

本明細書中に記載されるように調製されたヒドロゲルは、１ｍＬシリンジ中に充填され、過熱水により滅菌され、その機械的特性について特徴付けされた。貯蔵弾性率（Ｇ’）を、コーンプレート形状を備えたＴＡＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓＤｉｓｃｏｖｅｒｙＨＲ－１レオメータを使用して測定した。約０．８ｍＬのヒドロゲルサンプルを充填して、サンプルプレート全体を覆った。発振周波数５Ｈｚで測定したＧ’は、約１５０Ｐａである。ＭｏＤは、ＨＡ二糖ユニットの総数に対する、連結された架橋剤分子の数のパーセンテージとして定義する。それは、架橋剤及びＨＡの特徴的な化学シフトを使用したＮＭＲにより決定することができる。上の調製したヒドロゲルのＭｏＤは、約９％である。注入力（ＩＦ）を、ＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＴｅｘｔｕｒｅＡｎａｌｙｚｅｒを使用して測定した。サンプルシリンジバレルを固定具に取り付けた。プランジャーロッドをピストンにより駆動させ、０．２ｍｍ／ｓの速度にて、１０ｍｍの移動距離にわたりヒドロゲルを３０Ｇ針を通じて押し出した。ピストンに印加された力を継続的に記録した。上の調製したヒドロゲルの平均注入力は、約３９Ｎである。

製品の安全性の懸念に対処するために、モルモットモデルを使用した１２ヶ月間の動物試験を行う（ＷｕＸｉＡｐｐＴｅｃ、ミネソタ州ミネアポリス）。上の調製した絹皮膚充填剤に対する組織応答を評価するために、７日目、３０日目、９０日目、１８０日目、及び３６５日目の５つの終了時点がこの試験中にあった。ＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣを対照として使用した。テスト手順の概要：１期間当たり４頭の動物をこの試験において使用した。各々の動物は、スレッディング技術を使用して６回の背部皮内注入を受けた（ボーラスの代わりにラインを注入する）：脊椎の片側での三つの対照部位及び反対側での三つのテストサンプル部位。動物は、一般的な健康状態を評価するために、試験を通して毎日観察した。動物を終了予定日に人道的に安楽死させた。全ての動物からの移植部位及び周囲組織を切除し、ホルマリン中に入れ、パラフィンブロックに加工し、組織病理学的評価が続いた。７日間の病理組織データを本明細書中に記載する（図５３Ａ中の組織学的画像）。半定量的評価（スコアが低いほど良好）は、対照群についての総スコア６．９及びテスト群についての総スコア３．８を示した。

インプラント後７日目で示された病理所見では、テストインプラント材料は、対照インプラントよりも少ない反応を実証した。これには、テスト材料においては観察されなかった対照材料による筋層を通した潰瘍形成及びびまん性移動が含まれた。テスト材料における２～３の部位では、筋層中への又は筋層を通る最小限の移動があったが、対照と比較して有意に低い程度であった。潰瘍は、テスト材料では同定されなかった。異物マクロファージ応答及びコラーゲン分離は、対照と、潰瘍形成が存在しなかったテストインプラントの間で類似していた。

一部の実施形態では、純粋なＨＡヒドロゲルは、自然光の下で透明である。一部の実施形態では、ＨＡが絹フィブロイン断片と架橋されると、ゲルは、非常に微かな黄色がかった色を示し、絹タンパク質線維を視覚的に観察することができる（図５４Ａを参照のこと）。ゲルは、可視範囲における広い吸光度及び明確な散乱を示す。これは、標準的な透過光に加えて、前方散乱光を回収する能力を有するＩｎＧａＡｓ積分球を備えたＬａｍｂｄａＸ５０ＳＵＶ－Ｖｉｓ分光光度計（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）により測定される。濁度の測定値は、絹－ＨＡヒドロゲルが、光を散乱させる能力を有することを示唆しており、それによって、一度、皮膚充填剤として使用されると、チンダル効果を潜在的に排除し得る。

ヒドロゲルの粘弾性特性（貯蔵弾性率Ｇ’及び複素粘度η）に対する絹の分子量の影響を理解するために、二つのサンプルを、様々な分子量の絹フィブロイン断片で調製した。サンプルは、ＨＡ及び絹の総濃度２４ｍｇ／ｍｌで、ＨＡ／絹９５：５の一定比で調製した。約４８ｋＤａの中分子量絹をサンプルＡに添加し、約１４ｋＤａの低分子量絹をサンプルＢに添加した。両方のサンプルを５０℃で３０分間にわたり架橋し、１×ＰＢＳに対する７２時間にわたる透析が続いた。サンプルを透析後に分析した。データを表２９中に示す。中分子量の絹で架橋されたサンプルＡは、より低いＧ’及びηを有したが、任意の特定の理論により拘束されることを望まないが、より長い絹フィブロイン断片が、ＨＡゲル構造に対してより大きな影響を有することを示唆している。製剤中の絹フィブロイン断片のパーセンテージの影響も評価した。様々な絹含量を伴う三つのサンプルを調製した。ＨＡ及び絹の総濃度は、３０ｍｇ／ｍｌのままであった。サンプルを５０℃で３０分間にわたり架橋し、１×ＰＢＳに対する７２時間にわたる透析が続いた。サンプルを、Ｇ’及びηについて透析後に分析した（表３０）。結果は、ヒドロゲル中で増加する絹濃度に伴って減少するＧ’及びηを示した。従って、任意の特定の理論に拘束されることを望まないが、ヒドロゲルの粘弾性特性は、架橋プロセスの間に製剤中の絹フィブロイン断片の分子量及びパーセンテージを変動させることにより制御できると考えられる。

（外３２）

（外３３）

絹充填剤は、以下の手順により調製することができる。
（１）１０－ｍＬのバッチサイズについては、１．１６７ｍＬの６％低分子量絹溶液及び３８５ｍｇのＰＥＧＤＥを、８．８３３ｍＬの０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を含むビーカー中に添加する。１３３０ｍｇのＨＡを、上の調製溶液中に４０分間以内で少量ずつ添加する。ＨＡを添加しながらスパチュラを使用して穏やかに撹拌し、ＨＡの水和と溶解を促進する。ビーカーを５５℃の水浴中に７５分間にわたり入れて、架橋させる。架橋ヒドロゲルを＜２８℃まで冷却させる。１４５μｌの６Ｎ塩酸を５ｍＬの１×ＰＢＳ中に添加する。ＰＢＳ溶液をヒドロゲル中に注ぎ、ビーカーを封止し、４℃の冷蔵庫に入れて、ヒドロゲルを一晩中和及び希釈させる。ＰＢＳがヒドロゲルにより完全に吸収されたら、希釈したヒドロゲルに、さらに１０ｍＬの１×ＰＢＳを添加し、４℃の冷蔵庫に入れて一晩さらに希釈する。希釈したヒドロゲルを２０ｋＤａのＭＷＣＯ透析チューブ中に充填し、１×ＰＢＳ（４Ｌ）に対して室温で７２時間にわたり透析する。６時間、２４時間、及び４８時間でＰＢＳを交換する。透析後、リドカイン及び追加の１×ＰＢＳを添加して、最終濃度を０．３％リドカインを伴う２６ｍｇ／ｍＬに調整する。ヒドロゲルを１ｍＬシリンジ中に充填し、過熱水を使用して滅菌する。あるいは、０．１５Ｎ水酸化ナトリウム溶液を、０．１Ｎ水酸化ナトリウムの代わりに、製造手順において使用することができる。あるいは、０．２５Ｎ水酸化ナトリウム溶液を、０．１Ｎ水酸化ナトリウムの代わりに、製造手順において使用することができる。

（２）１０－ｍＬのバッチサイズについては、１．１６７ｍＬの６％低分子量絹溶液及び９６ｍｇのＰＥＧＤＥを、８．８３３ｍＬの０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を含むビーカー中に添加する。２６６ｍｇのＨＡを当該調製溶液中に添加する。ＨＡが完全に溶解するまでスパチュラを使用して穏やかに撹拌する。ビーカーを５５℃の水浴中に６０分間にわたり入れて、第一の工程の架橋を行う。ビーカーを室温まで冷却させる。２８９ｍｇのＰＥＧＤＥをビーカー中に添加し、完全に溶解するまで撹拌する。次に、１０６４ｍｇのＨＡを、３０分間以内で少量ずつ添加する。ＨＡを添加しながらスパチュラを使用して穏やかに撹拌し、ＨＡの水和と溶解を促進する。ビーカーを５５℃の水浴中に６０分間にわたり入れて、第二の架橋工程を行う。１４５μＬの６Ｎ塩酸を５ｍＬの１×ＰＢＳ中に添加する。ＰＢＳ溶液をヒドロゲル中に注ぎ、ビーカーを封止し、４℃の冷蔵庫に入れて、ヒドロゲルを一晩中和及び希釈させる。ＰＢＳがヒドロゲルにより完全に吸収されたら、希釈したヒドロゲルに、別の１０ｍＬの１×ＰＢＳを添加し、４℃の冷蔵庫に入れて一晩さらに希釈する。希釈したヒドロゲルを２０ｋＤａのＭＷＣＯ透析チューブ中に充填し、１×ＰＢＳ（４Ｌ）に対してＲＴで７２時間にわたり透析する。６時間、２４時間、及び４８時間でＰＢＳを交換する。透析後、リドカイン及び追加の１×ＰＢＳを添加して、最終濃度を０．３％リドカインを伴う２６ｍｇ／ｍＬに調整する。ヒドロゲルを１ｍＬシリンジ中に充填し、過熱水を使用して滅菌する。あるいは、０．１５Ｎ水酸化ナトリウム溶液を、０．１Ｎ水酸化ナトリウムの代わりに、製造手順において使用することができる。あるいは、０．２５Ｎ水酸化ナトリウム溶液を、０．１Ｎ水酸化ナトリウムの代わりに、製造手順において使用することができる。

本明細書中で引用される全ての特許、特許出願、及び公開されている参考文献が、それらの全体において参照により本明細書中に組み込まれる。本開示の方法は、その特定の実施形態との関連において記載されてきた一方で、さらなる改変が可能であることが理解されるであろう。さらに、本出願は、本開示の方法が関係する当技術分野における公知又は慣用的な実務内にあるような、本開示からのそのような逸脱を含む、本開示の方法の任意のバリエーション、使用、又は適応を対象とすることを意図する。

実施例３０．絹－ＨＡヒドロゲルの物理化学的特性Ｇ’、ＩＦ、及びＭｏＤの特徴付けのための方法
ヒアルロン酸ヒドロゲル中での絹フィブロインの組込みは、ポリエチレングリコール架橋剤の使用との併用において、充填剤の製剤化のための新規プラットフォームを表す。ＨＡ濃度、絹のパーセンテージ、ＰＥＧＤＥ：ＨＡ比、ならびに製剤反応条件を変動させることにより、１００を上回る皮膚充填剤候補を、このプラットフォームを介したスクリーニング用に調製した。生成された絹－ＨＡヒドロゲルの物理化学的及び機械的特性のテストは、各々のヒドロゲルの貯蔵弾性率（Ｇ’）、架橋度又は改変度（ＭｏＤ）、注入力（ＩＦ）、及びスペクトル吸収を決定することに焦点が当てられた。なぜなら、これらの特性は，望ましい特徴を伴う製品の生成において特に重要であるからである。

実施例３０ａ．貯蔵弾性率
各々のヒドロゲルの貯蔵弾性率（Ｇ’）を、ＤｉｓｃｏｖｅｒｙＨＲ－１Ｒｈｅｏｍｅｔｅｒ（ＴＡＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、デラウェア州ニューキャッスル）を使用して決定した。測定（ヒドロゲル製剤当たり三回）を、５Ｈｚの振動周波数でコーンプレート形状を使用して実施した。

実施例３０ｂ．改変度
ＮＭＲシステムの操作手順
機器：ＶａｒｉａｎＩＮＯＶＡ５００ＭＨｚＮＭＲ；ピペット、１０００μｌ、２００μｌ及び２０μｌ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ、ＲｅｓｅａｒｃｈＰｌｕｓ）；ピペットコントローラ（ＶＷＲ、ＰｏｗｅｒｐｅｔｔｅＰｌｕｓ、６１３－４４４２）；ＮＭＲチューブ（Ｗｉｌｍａｄ、ＷＧ－１２３５－７）；ＮＭＲチューブキャップ（Ｋｉｍｂｌｅ、８９７０９５－００８１）；水浴インキュベーター（ＢｅｎｃｈｍａｒｋＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｂ２０００－４）；２０ｍＬガラスバイアル（ＶＷＲ、ＶＷ７４５１５－２０）；秤量ボート（ＶＷＲカタログ番号１０７７０－４４０）；オーブン（ＱｕｉｎｃｙＬａｂ、１２－１４０ＡＥ）；凍結乾燥剤（ＬａｂＣｏｎｃｏ、カタログ番号７００２０１０００）；キムワイプ（Ｋｉｍｂｅｒｌｙ－ＣｌａｒｋＰｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ）；パラフィルムＭ（Ｂｅｍｉｓ，ＰＭ９９６）；分析バランス（ＭｅｔｔｌｅｒＴｏｌｅｄｏ、ＸＳ２０４ＤｅｌｔａＲａｎｇｅ）。
材料：重水素水（ＡｌｆａＡｅｓａｒ，１４７６４）；クロロホルム－Ｄ（ＡｌｆａＡｅｓａｒ、４１３８９）；絹、６％溶液（ＳｉｌｋＭｅｄｉｃａｌＡｅｓｔｈｅｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．）；ポリ（エチレングリコール）ジグリシジルエーテル、（ＳｉｎｏＰＥＧ、技術／医療グレード）；ヒアルロン酸ナトリウム、８５０ＫＤａ（ＨＴＬＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、医薬グレード）；ヒアルロニダーゼ（ＭＰＢｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ、カタログ番号１００７４０）；ＰＢＳ２０×（ＶＷＲ、Ｅ７０３－１Ｌ）；水（ＲＩＣＣＡ、カタログ番号９１５０－５）；リドカインＨＣｌ（スペクトル、ＬＩ１０３）
方法：各々のヒドロゲルのＭｏＤを決定するために、６００～８００ｍｇのヒドロゲルを１×ＰＢＳ中の０．８ｍＬの約２７５ＩＵ／ｍＬ又は約３４０ＩＵ／ｍｌヒアルロニダーゼと混合した。混合物を、３７℃で１６時間～２４時間にわたりインキュベートして、架橋ヒドロゲルを完全に消化させた。消化されたヒドロゲル溶液の６００μｌのサンプルを、５０℃で２時間～４時間にわたり風乾し、１０ｍｇの乾燥サンプルをＮＭＲチューブ内の６００μＬの重水素化水に溶解させ、プロトンＮＭＲスペクトルを、ＶａｒｉａｎＩＮＯＶＡ５００ＭＨｚＮＭＲ機器（ＰａｌｏＡｌｔｏ，ＣＡ）で記録した。

ＮＭＲサンプルの調製
ＰＥＧＤＥサンプルの調製：冷凍庫からＰＥＧＤＥサンプルを取り出し、サンプルを室温で約３０分間～１時間にわたり放置する。ＰＥＧＤＥは溶解して液体になる。ピペットを使用して５μｌのＰＥＧＤＥを測定し、ＮＭＲチューブに添加する。６００μｌの重水素水又はクロロホルム－ＤをＮＭＲチューブに添加する。サンプルは、２時間以内にＮＭＲスキャンしなければならない。

ＨＡサンプルの調製：冷凍庫からＨＡサンプルを取り出し、サンプルを室温で約３０分間～１時間にわたり放置する。２０ｍｌのガラスバイアル中にＨＡ２０ｍｇを秤量する。２０×ＰＢＳの１部を１９部の水に添加することにより、２０×ＰＢＳを１×ＰＢＳに希釈する。別の２０ｍｌガラスバイアル中に３４０ＩＵのヒアルロニダーゼを秤量する。１．１ｍｌの１×ＰＢＳをバイアルに添加し、ヒアルロニダーゼを溶解させる。ヒアルロニダーゼが溶解していること確認してから、手順を進める。１ｍｌのヒアルロニダーゼ／ＰＢＳ溶液をＨＡバイアルに添加する。ＨＡバイアルを３７℃の水浴インキュベーター中に入れ、１６～２４時間にわたりインキュベートする。ピペットを使用して、６００μｌのＨＡのＰＢＳ溶液を測定し、計量ボート中に入れる。計量ボートを５０℃のオーブン中に２～４時間にわたり入れる。一度、溶媒が乾燥すると、サンプルは白色シートになり、計量ボートの底に付着する。乾燥したＨＡサンプル１０ｍｇを秤量し、サンプルをＮＭＲチューブ中に入れる。６００μｌの重水素水をＮＭＲチューブに添加する。ＮＭＲチューブを室温で保存する。サンプルは、１週間以内にＮＭＲスキャンしなければならない。

絹サンプルの調製：ピペットを使用して、１ｍｌの絹溶液を測定し、２０ｍｌのガラスバイアルに添加する。ガラスバイアルをＫｉｍｗｉｐｅの小片で覆い、ＫｉｍｗｉｐｅをＰａｒａｆｉｌｍで封止する。ガラスバイアルの上部がＰａｒａｆｉｌｍにより覆われていないことを確認する。バイアルを冷凍庫中に４～６時間にわたり入れる。バイアルを冷凍庫から取り出し、凍結乾燥機のチャンバー中に入れる。サンプルを２４～４８時間にわたり凍結乾燥する。凍結乾燥機から乾燥サンプルを取り出し、乾燥した絹１０ｍｇを秤量する。乾燥した絹１０ｍｇをＮＭＲチューブ中に入れる。６００μｌの重水素水をＮＭＲチューブに添加する。ＮＭＲチューブを室温で保存する。サンプルは、１週間以内にＮＭＲスキャンしなければならない。

リドカインサンプルの調製：５ｍｇのリドカインＨＣｌサンプルを秤量し、ＮＭＲチューブ中に加える。６００μｌの重水素水をＮＭＲチューブに添加する。ＮＭＲチューブを室温で保存する。サンプルは、１週間以内にＮＭＲスキャンしなければならない。

ゲルサンプルの調製：２０ｍｌのガラスバイアル中にゲル６００～８００ｍｇを秤量する。２０×ＰＢＳの１部を１９部の水に添加することにより、２０×ＰＢＳを１×ＰＢＳに希釈する。２０ｍｌガラスバイアル中に３４０ＩＵのヒアルロニダーゼを秤量する。１ｍｌの１×ＰＢＳをバイアルに添加し、ヒアルロニダーゼを溶解させる。ヒアルロニダーゼが溶解していること確認してから、手順を進める。０．８ｍｌのヒアルロニダーゼ／ＰＢＳ溶液をゲルバイアルに添加する。ゲルバイアルを３７℃の水浴インキュベーター中に入れ、１６～２４時間にわたりインキュベートする。ピペットを使用して、６００μｌのゲル／ＰＢＳ溶液を測定し、計量ボート中に入れる。計量ボートを５０℃のオーブン中に２～４時間にわたり入れる。一度、溶媒が乾燥すると、サンプルは白色シートになり、計量ボートの底に付着する。乾燥したＨＡサンプル１０ｍｇを秤量し、サンプルをＮＭＲチューブ中に入れる。６００μｌの重水素水をＮＭＲチューブに添加する。ＮＭＲチューブを室温で保存する。サンプルは、１週間以内にＮＭＲスキャンしなければならない。

ＮＭＲテストの実行：所与のサンプルについてＮＭＲプロトンテストを実行し、スキャン数を選択する。リドカイン及びＰＥＧＤＥについては、６４スキャンを選ぶ。全ての他のサンプルについては、２５６スキャンを選ぶ。正しい溶媒種が考慮されていることを確認する。複数のサンプルテストについて、必要に応じて繰り返す。

ＮＭＲデータの処理：ＭｅｓｔＲｅＮｏｖａソフトウェア又は等価のＮＭＲソフトウェアを使用して、．ｆｉｄファイルをロード及び処理する。以下の補正を、すべてのサンプルについて実施する：ベースライン補正：ベースラインを補正するために、多項式順序値３が適用される。位相補正：位相補正については、全てのピークが対称である必要がある。溶媒ピーク補正：溶媒ピークの化学シフトを補正するために、重水素水は４．７９ｐｐｍであり、クロロホルム－ｄは７．２７ｐｐｍである。積分：以前の補正後、以下の積分が、各々の化学物質について実施される：ＰＥＧＤＥについては、化学シフトでのピーク：２．７７～２．８１ｐｐｍ、２．９６～２．９９ｐｐｍ、３．３３～３．３８ｐｐｍ、３．３８～３．４４ｐｐｍ、３．６８～３．８０ｐｐｍ、及び３．９５～３．４０ｐｐｍが積分される。リドカインについては、化学シフトでのピーク：１．３５～１．４６ｐｐｍ、２．２１～２．２７ｐｐｍ、３．３４～３．４８ｐｐｍ、４．３２～４．３９ｐｐｍ、及び７．２１～７．３３ｐｐｍが積分される。絹については、化学シフトでのピーク：１．３２～１．５ｐｐｍ及び３．７７～４．０９ｐｐｍが積分される。ＨＡについては、化学シフトでのピーク：２．０～２．１ｐｐｍ及び３．３０～４．０５ｐｐｍが積分される。最終ゲルについては、化学シフトでのピーク：１．２０～１．２８ｐｐｍ、１．３５～１．４８ｐｐｍ、２．０～２．１ｐｐｍ、及び３．３０～４．０５ｐｐｍが積分される。各々のピークは、化学シフト範囲を示さなければならない。積分値は、このラインの下方になければならない。

積分の規格化：各々のスペクトルの積分値を、ＭｏＤを算出するために、規格化しなければならない。ピークの積分値を規格化するには：ＰＥＧＤＥについては、２．７７～２．８１ｐｐｍの積分を２として規格化する。リドカインについては、１．３５～１．４６ｐｐｍの積分を６として規格化する。絹については、１．３２～１．５ｐｐｍの積分を２として規格化する。ＨＡについては、２．０～２．１ｐｐｍの積分を３として規格化する。最終ゲルについては、２．０～２．１ｐｐｍの積分を３として規格化する。

ヒドロゲルの改変度（ＭｏＤ）は、以下のいずれかとして定義される：

又は

いくつかの変数、例えばヒドロゲル合成の間に使用されるＳＰＦ及び／又は架橋剤の濃度などに依存し、ここで、ｎは分子の数であり、それは、架橋剤、ＨＡ、ＳＰＦ、及び／又は任意の他のオプションの成分、例えば局所麻酔薬などの特徴的な化学シフトを使用したＮＭＲにより決定することができる。

ヒドロゲルサンプルのＭｏＤは、以下の式を使用して、ＮＭＲスペクトル（例えば、図６４及び６５を参照のこと）から算出した（また、“ＣｈｅｍｉｃａｌＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆＨｙｄｒｏｇｅｌｓＣｒｏｓｓｌｉｎｋｅｄｗｉｔｈＰｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅＧｌｙｃｏｌｆｏｒＳｏｆｔＴｉｓｓｕｅＡｕｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ，”Ｍｏｎｔｉｃｅｌｌｉｅｔａｌ．，ＯｐｅｎＡｃｃｅｓｓＭａｃｅｄＪＭｅｄＳｃｉ．２０１９Ａｐｒ１５；７（７）：１０７７－１０８１を参照のこと）；

ＮＭＲスペクトルからの各々のＰＥＧ鎖中のプロトンの平均数（Ｎ_{ＰＥＧ－Ｈ}）を、式：Ｎ_{ＰＥＧ－Ｈ}＝（δ_{３．６８～３．８０}×置換％）＋１０を使用して計算し、式中、δ_{、３．６８～３．８０}は、２．７７～２．８１ｐｐｍの積分を２として規格化した後の積分値であり；「置換％」は、リンカーＰＥＧＤＥリンカー当たりのグリシジル基の平均数の測定値であり、例えば、１００％置換は、各々のＰＥＧＤＥリンカーが二つの末端グリシジル基を有することを意味する一方で、１００％未満の数は、平均で、サンプル中のすべての単一のＰＥＧＤＥリンカーが二つのグリシジル基で完全に置換されているわけではないことを意味する；及び、「１０」が、二つのグリシジル基中のプロトンについて加えられる。

任意の特定の理論により拘束されることを望まないが、ゲルＮＭＲスペクトルにおける以下の化学シフトは、以下のそれぞれのプロトンに対応すると考えられる：
３．３０～４．０５：ＨＡ残基、ＰＥＧリンカー、絹（ＳＰＦ）、及びリドカインからのプロトンの混合；
１．２０～１．２８：リドカインにおける二つの末端メチル基；及び
１．３５～１．４８：絹フィブロインタンパク質断片（ＳＰＦ）中のプロトンの混合。

ＭｏＤの式中の分子における「１１」の値は、スペクトルの３．３０～４．０５領域中のＨＡプロトンの積分を表す。

実施例３０ｃ．注入力（ＩＦ）
３０Ｇの針を備えた１ｍＬのシリンジから各々のヒドロゲルを分注するために必要とされる注入力を、ＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄＣＴ３１０ＫＴｅｘｔｕｒｅＡｎａｌｙｚｅｒ（ＡＭＥＴＥＫＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄ、マサチューセッツ州ミドルバラ）を使用して測定した。各々のサンプルシリンジを固定具において固定した。シリンジプランジャーを、ピストンにより、０．２ｍｍ／秒の速度で、総移動距離１ｃｍで圧縮した。ピストンに適用された力を、０．０５秒（又は０．０１ｍｍ）毎に記録した。各々のサンプルについての平均力及びピーク力を記録し、３つのサンプルの全体的な平均値を報告した。

物理化学的特性の特徴付けについての結果ならびに絹－ＨＡヒドロゲルについてのＧ’、ＩＦ、及びＭｏＤに対する絹濃度の影響を、以下にまとめる。同じＨＡの濃度及びＨＡに対するＰＥＧ架橋剤の比（約３０％ｗ／ｗ）、しかし、異なる濃度のフィブロインタンパク質で製剤化された複数のヒドロゲルのＧ’、ＩＦ、及びＭｏＤを測定した。結果は、ヒドロゲルのＧ’及びＩＦの両方が、製剤中の絹の濃度が増加するにつれて減少する一方で、ＭｏＤは、比較的変化しないままであることを実証する（図５５Ａ～Ｃ）。重要なことに、これらの結果は、絹濃度を変動させることにより、ＭｏＤを変化させることなく、Ｇ’を調整することができることを示しており、これらの二つの重要なゲル特徴の最適化を可能にする。すなわち、絹－ＨＡゲル製剤プラットフォームは、製品寿命（高ＭｏＤ）及び有用性（操作可能なＩＦ）を促進させる特徴を維持しながら、異なる適応症のための製品の開発のために重要である貯蔵弾性率（Ｇ’）において変動するヒドロゲルの生成を可能とする。

評価された様々な絹－ＨＡヒドロゲル製剤の異なる機械的特性に基づいて、５．０％絹フィブロインタンパク質ベースの断片及びＰＥＧ架橋剤を使用した絹－ＨＡゲル製剤が、潜在的な皮膚充填剤候補として選択され、ＩＳＯ１０９９３生体適合性テストを含む、さらなる試験において評価された。リード候補として選択されたヒドロゲル製剤ＡＳ－Ｖ１は、Ｇ’（１４４±２４Ｐａ）で高いＭｏＤ（８．９±０．２％）、３０ゲージの針を使用した操作可能なＩＦ（３９．２±３．４Ｎ）、及び生理的浸透圧（２６４ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）を示した。それは、９５：５の重量比でのヒアルロン酸及び絹フィブロインで構成され（２６ｍｇ／ｍＬ）、絹－ＨＡヒドロゲルの総重量により、約３０％ｗ／ｗのＰＥＧ架橋剤及び０．３％ｗ／ｗのリドカインを伴う。低分子量絹（＜２８ｋＤａ）及び８５０ｋＤａのＨＡを使用した。

そのような製品では、適した粘弾性ならびに変形に対する抵抗性（より高いＧ’を伴う「より硬い」材料）、注入の間での流動の容易性（低ＩＦ）、及びインビボでの寿命又は分解に対する抵抗性（典型的には、より高いＭｏＤで達成される）を示すゲル材料が、ヒドロゲル製品の候補を選択するために使用される。ヒドロゲル候補の最終濃度は、１５ｍｇ／ｍＬ～２６ｍｇ／ｍＬである（絹＋ＨＡ）。ヒドロゲル候補は、４０～７００Ｐａの範囲のＧ’及び１０Ｎ～＞１００Ｎの範囲のＩＦを含む機械的特性を示す（図５６）。これらのヒドロゲルのＭｏＤは全て、市販のＨＡベースの皮膚充填剤と類似していたか又はそれらより高かった。

実施例３１．光学特性
絹－ＨＡヒドロゲルの光学特性は、ＵＭＳ積分球を備えたＣａｒｙ７０００ＵＶ－ｖｉｓ－ＮＩＲ（ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カリフォルニア州サンタクララ）を使用して特徴付けした。各々のヒドロゲルの三つのサンプルを測定した。

商業的に入手可能な皮膚充填剤製品での注入は、一部の患者において、チンダル効果として記載される、皮膚の青みを起こすことが公知である。ＨＡベースのヒドロゲルの光学特性に対する絹フィブロインの効果及びチンダル効果を相殺する可能性を、二つの方法において測定した。

第一に、絹を用いて、及び用いずに生成されたＨＡベースのヒドロゲルの屈折率を互いに、ならびに商業的に入手可能な皮膚充填剤製品（Ｊｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ）の屈折率と比較した。全てのテストされたヒドロゲル製剤が、１．３４の屈折率を有することが見出されたが、それが、様々なゲル及びそれらの表面と相互作用する際での類似の光の伝播を示している。

第二に、絹一体型皮膚充填剤候補（ＡＳ－Ｖ１）の吸光度を評価し、ＨＡベースのヒドロゲル（絹を伴わない）ならびに市販の皮膚充填剤と比較した。ＡＳ－Ｖ１は、絹を伴わないヒドロゲル及び市販の皮膚充填剤よりも、可視光のＵＶ及び青色波長のより高い吸光度を実証した（図５７）。

ＡＳ－Ｖ１により実証される青色光へのＵＶの吸収増加は、患者において青みがかった効果を起こすより低い可能性、及び、このように、薄い肌における比較的表面的な審美的矯正におけるその潜在的有用性を示唆する。

実施例３２．ＩＳＯ１０９９３下の動物におけるＧＬＰ生体適合性テスト
局所組織応答の評価のためのＩＳＯ１０９９３に基づくＧＬＰ動物試験を、モルモットを使用して実施した。

アルビノモルモット（Ｃａｖｉａｐｏｒｃｅｌｌｕｓ）、ハートレー株（特定病原体フリー）をこれらの試験において使用した。全ての手順が、ＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌＡｎｉｍａｌＣａｒｅａｎｄＵｓｅＣｏｍｍｉｔｔｅｅにより承認された。動物は、「ＧｕｉｄｅｆｏｒｔｈｅＣａｒｅａｎｄＵｓｅｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎｉｍａｌｓ」において報告されているＮＩＨガイドラインに従って処置した。

潜在的な皮膚充填剤製品としての、さらなる開発のために選択されたヒドロゲル製剤（活性化絹ヒドロゲル－Ｖ１、ＡＳ－Ｖ１）を、医療機器の生物学的評価のための国際標準化機構により設定されたＩＳＯ１０９９３基準、及び永久インプラント、組織／骨接触用のクラスＩＩＩ医療機器のカテゴリー下の、ＦＤＡのガイダンスに従って生体適合性についてテストした。リード候補のヒドロゲル製剤ＡＳ－Ｖ１は、生体適合性テストにおいて優れた特徴を実証し、それによって、安全性の懸念の低リスク及び患者集団における有害事象の低率に導き得る。

生体適合性テストの結果によって、インビボでの使用のための全ての三つのゲル成分の実証された安全性に基づいて構築された予測が確認された：（１）皮膚の粘弾性細胞内マトリックスの天然成分としてのＨＡ；（２）皮膚組織の再構築を含む、歴史を通して多くの異なる生物医学的な適用において使用されてきた絹；及び（３）生体適合性ポリマーとしてのＰＥＧ。ＡＳ－Ｖ１に対するＩＳＯ１０９９３生体適合性アッセイは、全ての受け入れ基準を満たした。

実施例３３．インビトロ及びインビボでの可逆性テスト
実施例３３ａ．絹－ＨＡヒドロゲルのインビトロ分解テスト。
約１ｇの各々のヒドロゲル（ＡＳ－Ｖ１又はＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ）を、１５０Ｕ／ｍｌのヒアルロニダーゼを含む１ｍｌのＰＢＳ（０．２Ｍ、ｐＨ６．２）と共に、三つのバイアルの各々の中に入れて、３７℃で３０分間にわたりインキュベートした。インキュベーション後、上清を完全に除去し、ゲルの残りの重量を測定した。このプロセスを、合計４ｍｌ（６００Ｕ）のヒアルロニダーゼについて、さらに三回、１２０分間にわたり繰り返した。ヒドロゲルの分解の程度を、元のヒドロゲルに対する残りのヒドロゲルの重量比（％）により表した。

実施例３３ｂ．インビボでの可逆性テスト
十二頭の動物をこの試験において使用した。各々の動物は、背部に、上に記載するように脊椎の各々の側の三つの部位に、六回の皮内注入を受けた。絹－ＨＡヒドロゲル（テスト品）又はＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（対照品）の注入後６０±３０分間以内に、テスト材料及び対照材料の逆転を、形成外科医の指示の下でヒアルロニダーゼでの酵素分解により試みた。１５単位で開始し、ヒアルロニダーゼ（ＨｙｌｅｎｅｘＴＭ，１５０Ｕ／ｍｌ）を、各々のテスト材料又は対照材料トラックに沿った複数の場所に皮内及び／又は皮下に少量注入し、その部位中に優しくマッサージした。最大０．４ｍｌのヒアルロニダーゼを、各々のテスト又は対照部位に約３０分間隔で注入した。テスト材料又は対照材料の溶解／分解を、巨視的観察及び触診により評価した。

動物を１ヶ月間にわたり毎日観察して、一般的健康状態及び残留物質の存在又は非存在を評価した。３頭の動物を、最後の酵素処理後の四つの時点の各々：最後の酵素処理後の６５±５分間、２４±２時間、７±０．５日間、及び３０±１日間に安楽死させた。インプラント部位及び周囲組織を切除し、ホルマリン固定し、パラフィンに包埋し、切片化し、ヘマトキシリン及びエオシンで染色した。スライドは、多形核細胞、リンパ球、血漿細胞、マクロファージ、巨細胞、組織壊死、全体的な炎症、血管新生、線維症、脂肪浸潤、血液凝固、コラーゲン沈着、ならびにゲルの分解及び移動の存在について、盲検化された病理学者により評価された。

実施例３３ｃ．インビボでの可逆性テスト
各々のヒドロゲル（ＡＳ－Ｖ１又はＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ）の～１ｇの三つの複製物を、１５０Ｕのヒアルロニダーゼで３７℃にて３０分間にわたり消化した。インキュベーション後、ゲルの残りの重量を測定した。このプロセスを、１２０分間にわたり、合計６００Ｕのヒアルロニダーゼについて、さらに三回繰り返した。インビトロでのヒドロゲル分解の程度を、元のヒドロゲルに対する残りのヒドロゲルの重量比（％）として表した。

インビボでの可逆性テストのために、１２頭の動物の各々は、背部に、上に記載するように脊椎の各々の側の三つの部位に、六回の皮内注入を受けた。ヒドロゲルの注入後１時間以内に、テスト材料及び対照材料の逆転を、形成外科医の指示の下でヒアルロニダーゼでの酵素分解により試みた。１５単位で開始し、最大６０Ｕのヒアルロニダーゼを、各々のテスト材料又は対照材料トラックに沿って皮内及び／又は皮下に注入し、～３０分間隔でその部位中に優しくマッサージした。テスト材料又は対照材料の溶解／分解を、巨視的観察及び触診により評価した。

動物を１ヶ月間にわたり毎日観察し、一般的な健康状態を評価して、３頭の動物を、最後の酵素処理後の６５±５分間、２４±２時間、７±０．５日間、及び３０±１日間に安楽死させた。インプラント部位及び周囲組織を切除し、ホルマリン固定し、パラフィンに包埋し、切片化し、ヘマトキシリン及びエオシンで染色した。スライドは、多形核細胞、リンパ球、血漿細胞、マクロファージ、巨細胞、組織壊死、全体的な炎症、血管新生、線維症、脂肪浸潤、血液凝固、コラーゲン沈着、ならびにゲルの分解及び移動の存在について、盲検化された病理学者により評価された。

他の市販のＨＡベースのゲルで見られるのと類似の様式においてヒアルロニダーゼにより分解されＡＳ－Ｖ１の能力を評価した。ヒアルロニダーゼによる分解されるＨＡベースのゲルの能力は、ＨＡベースの皮膚充填剤製品にとって重要な利点であり、不良転帰又は有害事象の場合において形成外科医が注入を迅速に元に戻すことを可能にする。インビトロ及びインビボの両方のテストによって、ＡＳ－Ｖ１を酵素的に分解するヒアルロニダーゼの能力が損なわれていないことが実証された。このように、ＡＳ－Ｖ１皮膚注入を「逆転させる」能力は、必要な場合、絹の存在において維持される。インビトロ試験では、ＡＳ－Ｖ１は、ヒアルロニダーゼとの３０分間のインキュベーション後にＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣゲルほど分解されなかったものの、ＡＳ－Ｖ１は、酵素と６０分間以上にわたりインキュベーションされた後に同等に分解されたことが示された（図５８Ａ）。

インビボテストでは、ヒアルロニダーゼ注入部位から採取された組織片は、ヒアルロニダーゼの単回１：１容量注入後、注入後１時間で、ヒドロゲル材料の完全に近い分解（「逆転」）を示し、ＡＳ－Ｖ１注入部位で６１％及びＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ注入部位で４７％であった（図５８Ｂ）。さらに、ＡＳ－Ｖ１は、ＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣよりも、完全な逆転を達成するためにより少ないヒアルロニダーゼ注入を必要とした（図５８Ｂ）。このように、インビトロ及びインビボの両方のテストによって、必要な場合にＡＳ－Ｖ１皮膚注入を「逆転させる」ヒアルロニダーゼの能力が、絹の存在において維持されていることが実証された。

インビトロでの結果は、インビボでの可逆性試験から得られたデータと十分に相関していた。ここでは、三頭の動物を以前のように処置し、各々が、背部皮膚において１ｃｍ間隔で、０．１ｍＬのＡＳ－Ｖ１の３回の皮内注入及びＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣの３回の注入を受けた。ヒアルロニダーゼ注入部位から採取された組織片では、ヒドロゲル材料の完全に近い分解（「逆転」）が、ＡＳ－Ｖ１及びＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣの両方の注入後６０±３０分でのヒアルロニダーゼの単回１：１容量注入後に確認された（データは示さず）；しかし、一部の部位は、ヒドロゲルの完全な除去に達するために、最大三回の追加逆転注入を必要とした。全体的に、ＡＳ－Ｖ１は、インビボでのモルモット試験及びインビトロテスト設定において実証されるように、Ｊｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣと類似の可逆性プロファイルを有する。

絹－ＨＡヒドロゲル製剤ＡＳ－Ｖ１は、（１）耐久性テスト（より持続性の処理に導き得る）；及び（２）可逆性テスト（医療従事者及び患者に同様に使用中に安心感を提供するはずである）において優れた特徴を実証した。

ヒドロゲルの分解、移動、及び可逆性のインビボ評価について、本本実施例において記載される結果は、また、ＡＳ－Ｖ１ヒドロゲル製剤を市販製品と比較した場合に類似しており、候補の絹－ＨＡヒドロゲル皮膚充填剤ＡＳ－Ｖ１が、市販製品と類似の寿命及び性能を有することを示しており、必要な場合に、インビボでの完全な可逆性のための類似の能力を示す。

実施例３４．ＡＳ－Ｖ１に対する短期間の局所組織応答の評価
注入可能な皮膚充填剤製品としてのその可能性に直接関連する条件において、ＡＳ－Ｖ１ヒドロゲル製剤の安全性及び局所組織応答を探索するために、皮内注入後のＡＳ－Ｖ１ヒドロゲルの安全性及び有効性を実証する包括的な一連のテストを実施した。

モルモット中への背部皮内注入（インプラント）後の皮膚充填剤に対する局所組織応答を、ＩＳＯ１０９９３－６の要件に従って、注入後６ヶ月目までの各時点で評価した。６頭の動物を各々の時点で評価した。各々の動物の背中（背側）の毛皮を取り除き、動物に麻酔をし、注入部位を無菌的に調製した。各々の動物は、六回の皮内注入（インプラント）を受けた：脊椎の片側に三回のＡＳ－Ｖ１絹－ＨＡヒドロゲル及び反対側に三回のＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ。各々の注入には、各々の注入部位間を少なくとも１ｃｍ空け、１部位当たり０．１ｍＬの容量を送達させた。注入部位を、外科用皮膚マーカーペンで同定した。注入部位は、注入前に紅斑及び浮腫についてスコア化された；動物を、Ｄｒａｉｚｅスコアリング（皮膚刺激）については注入後７日間にわたり毎日、あざについては注入後３及び４日目に観察した。動物は、組織検査のために、注入後７、３０、９０±１、ならびに１８０±２及び３６５±３日目に人道的に安楽死させた。インプラント部位及び周囲組織を切除し、ホルマリン固定し、パラフィンに包埋し、切片化し、ヘマトキシリン及びエオシンで染色した。試験条件について盲検化された病理医が、炎症応答、ゲル分解、ゲル移動、及びコラーゲン沈着を含む局所組織反応についてのスライドを評価した。

全てのアッセイを、モルモットの背中の皮膚中への０．１ｍＬのＡＳ－Ｖ１の注入後に実施して、結果を、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）架橋ＨＡゲルで構成されるＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（ＦＤＡ承認済みの皮膚充填剤）での注入後に得られた結果と比較した。ＡＳ－Ｖ１は、注入後１日目～６ヶ月目の範囲の時点で、全てのテストにおいて、Ｊｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣと類似の又はより良好な性能を発揮した。

Ｄｒａｉｚｅ皮膚刺激性テスト（急性刺激）を、注入後１日目～５日目に実施した。無視できる刺激が観察されたが、ＡＳ－Ｖ１（テスト品）及びＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ（ＦＤＡ承認の比較品）の両方について、全ての時点でスコア３又はそれ以下（８点中）であり（図６０Ａ～Ｄ）、注入後での最小限の望まない組織応答を示している。事実、絹－ＨＡヒドロゲルは、ＤｒａｉｚｅテストでＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣと類似のスコアを示し、それによって、モルモットモデルにおける注入後の最長５日間にわたり起こされる即時の刺激が、絹成分を含まないＦＤＡ承認製品で見られる刺激と類似していることを示している。ＡＳ－Ｖ１が、Ｊｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣよりも少ない刺激を起こすという結論をさらに支持するのは、ＡＳ－Ｖ１で見られる最小限の注入後のあざである。このあざは、注入後３及び４日に、同じ動物においてＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣで見られるものよりも少ない又は等価である（図６０Ａ～Ｂ）。

この実施例におけるテスト結果は、ＡＳ－Ｖ１ヒドロゲルが、市販製品であるＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣと類似の又はそれより低いレベルで、注入後の即時及び中期の刺激、あざ、及び炎症を起こしたことを実証した。

また、ＡＳ－Ｖ１の総括毒性評価が、独立した理事会承認の毒物学者により行われた。

実施例３５．より長期間の炎症及びゲル性能の評価
モルモットにおける追加の組織学的評価によって、ＡＳ－Ｖ１の生体適合性及び性能についてのサポートが、注入後最大１２ヶ月延長された。これらの評価では、皮内注入後の炎症応答ならびにインサイチュでのゲルの分解及び移動を検討した。

最小限の炎症が観察され、ＡＳ－Ｖ１及び比較品（Ｊｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ）のゲルの両方について、全ての時点で約４又はそれ以下（２８点中）のスコアであったが、注入後の製品に対する最小限の有害な組織応答を示している（図６１Ａ）。類似のプロファイルがまた、ＡＳ－Ｖ１及びＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣについて、皮膚組織マトリックス中でのヒドロゲル分解（図６１Ｂ及び６１Ｄ）及び移動（図６１Ｃ及び６１Ｅ）の両方で見られた。ここで、より高いスコア（最大４）は、ゲルのより多い分解又は移動を示し；両方とも皮膚充填剤用には望ましくない。分解については、ＡＳ－Ｖ１スコアは１．５を下回ったままであったが、望ましい低レベルの分解及び良好な組織内ゲル寿命プロファイルを示している。移動については、ＡＳ－Ｖ１スコアは２を下回ったままであったが、望ましい低レベルのゲル移動及び良好な組織内配置／位置安定性プロファイルを示している。さらに、これらの結果は、ＡＳ－Ｖ１が、ゲルの移動／分解及び組織応答の両方の観点から、モルモットでの皮内試験におけるＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣと同等の性能を発揮していることを実証している。

ＡＳ－Ｖ１及びＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣの同等の短期性能プロファイルを考慮して、長期プロファイルを評価した。これらの評価によって、皮内注入後の耐久性、炎症応答、ならびにゲルの分解及び移動をインサイチュで検討した。耐久性に関しては、ゲル（水色／灰色）が、注入後１２ヶ月でコラーゲンマトリックス（ピンク）の周りに依然として一体化していることが明確に観察され（図６２Ａ～Ｊ）、モルモットモデルにおける最長１年間にわたるＡＳ－Ｖ１及びＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣの耐久性が確認されている。

注入後３及び６ヶ月で、組織学的検査によって、代表的な背部皮膚組織片中への充填剤ゲルの望ましい一体化が示された。事実、ＡＳ－Ｖ１製品は、Ｊｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣで注入された組織において見られるコラーゲン構造で十分に組み込まれていないように見えるインプラントの塊とは対照的に、両方の時点で皮膚のコラーゲンマトリックスでスムーズに組み込まれている（図６３Ａ～Ｄ）。観察された炎症性又は他の望ましくない組織応答病理の欠如は、ＡＳ－Ｖ１によるコラーゲンの一体化を刺激する好ましい生体適合性及び能力を示す。これらの評価におけるＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣと比較したＡＳ－Ｖ１の類似の又はより良好な性能は、有望な皮膚充填剤製品としてのＡＳ－Ｖ１のさらなる開発を支持する。

さらに、皮膚組織マトリックスにおけるゲルの分解（図６１Ｄ）及び移動（図６１Ｅ）の両方についての類似のプロファイルが、１年間の試験にわたり、ＡＳ－Ｖ１及びＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣについて見られた。分解については、ＡＳ－Ｖ１スコアは低いままであったが、良好な組織内ゲルの寿命プロファイルを示している。移動については、ＡＳ－Ｖ１スコアは、ＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣと一致したままであったが、望ましい低レベルのゲル移動及び良好な組織内配置／位置安定性プロファイルを示している。注入後３、６、及び１２ヶ月で、組織学的検査によって、代表的な背部真皮組織片中への充填剤ゲルの望ましい一体化が示された（図６３Ａ～Ｄ）。

事実、ＡＳ－Ｖ１製品は、ＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣを注入した組織中に見られるインプラントの、あまり十分に組み込まれていない塊とは対照的に、全ての三つの時点で皮膚のコラーゲンマトリックスにスムーズに組み込まれた（図６３Ａ～Ｄ）。最後に、観察される炎症性又は他の望ましくない組織応答病理の欠如は、ＡＳ－Ｖ１のコラーゲンと一体化させるための好ましい生体適合性及び能力を示す（図６２Ａ～Ｊ及び図６３Ａ～Ｄ）。

これは、図６１Ｆにおいて確認されており、最小限の炎症が、ＡＳ－Ｖ１ゲル及び比較品（ＪｕｖｅｄｅｒｍＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣ）の両方のゲルについて、全ての時点で観察されたことを示し、注入後の製品に対する最小限の有害な組織応答を示している（図６１Ｆ）。

特定の一般的に見られる有害効果に関して、ＨＡベースの皮膚充填剤中への絹フィブロインの含有によって、現在商業的に入手可能な充填剤製品よりも良好な製品性能がもたらされ得る複数の領域がある。ＡＳ－Ｖ１ヒドロゲルにより実証される低レベルの刺激、あざ、及び炎症は、低レベルの注入直後及び初期の有害効果、例えば痛み、過敏症、腫れ、紅斑、及び壊死などと相関すると予想される。さらに、病変／結節の形成は、ＶｙＣｒｏｓｓ（登録商標）技術において生じるような、高度な架橋又は複数サイズ（分子量）のＨＡを使用することの結果として、一部の充填剤製品で観察されている。これは、本明細書中に記載される絹含有ヒドロゲルで回避することができる。なぜなら、単一サイズのＨＡが使用され、ＭｏＤを容易に調整できるためである。最後に、結果は、皮膚充填剤中での絹タンパク質の組込みが、他の皮膚充填剤製品でしばしば生じる、望ましくないチンダル効果を回避するのに役立ち得ることを示す。

ＡＳ－Ｖ１は、全てのＩＳＯ１０９９３テストにわたり良好なプロファイルを実証し、細胞毒性、刺激性、感作性、発熱性、遺伝毒性（Ａｍｅｓ及びＭＬＡ）、中期局所組織炎症応答、又は急性もしくは亜慢性の全身毒性は、この製品では観察されなかった。

ＩＳＯ１０９９３テストならびにさらなる安全性及び有効性の結果は、ＡＳ－Ｖ１が、これまでにテストされてきた全ての側面について、現在のマーケットリーダーであるＪｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣと等価又はより良好な性能を発揮することを示した。さらに、上に記載するテストによって、絹－ＨＡゲルが、Ｊｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）ＵｌｔｒａＰｌｕｓＸＣよりもスムーズに皮膚のコラーゲンマトリックス中に組み込まれることが実証された。現在、これらの結果は、モルモットモデルを使用した注入後６ヶ月のデータで確認されている。

実施例３５．例示的な絹－ヒアルロン酸組織充填剤。
ＨＡ及び絹は、０．１～１．０Ｎの水酸化ナトリウム溶液中で、９０～１４０ｍｇ／ｍｌのＨＡ及び絹の総初期濃度で、ＨＡ対絹比９５：５でＰＥＧＤＥと混合された。ＨＡの分子量は、８５０ｋＤａである。絹の分子量は、低ＭＷ（ＭＷ＜２８ｋＤａ）である。生成物１については、架橋反応を５５℃で７５分間にわたり行った。生成物２及び３については、架橋反応を周囲温度（２０℃）で８～２４時間にわたり行った。架橋後、ヒドロゲルを中和し、４０～５６ｍｇ／ｍｌに希釈し、１×ＰＢＳに対して３～４日間にわたり透析した。０．３％ｗ／ｗリドカイン塩酸塩を、透析ヒドロゲルに添加した。生成物中の総ＨＡと絹の最終濃度を、さらに１５～２８ｍｇ／ｍｌに希釈した（表３１）。より具体的には、以下の表は、生成物１及び生成物２及び３についての現在の公称設定である（設計の固定ではない）。

（外３４）

一部の実施形態では、深部生成物は、深部（皮下及び／又は骨膜上）注入、又は組織スペーサー適用を適応とする。一部の実施形態では、注入領域は、１２ヶ月の期間にわたり、ベースラインを上回る改善された外観を維持する。一部の実施形態では、生成物は可逆的生成物であり、生成物は、ヒアルロニダーゼで溶解することができる。

一部の実施形態では、表層性生成物は、表層性注入について示されている。一部の実施形態では、注入領域は、１２ヶ月の期間にわたり、ベースラインを上回る改善された外観を維持する。一部の実施形態では、生成物は可逆的生成物であり、生成物は、ヒアルロニダーゼで溶解することができる。

実施例３６．絹フィブロインタンパク質断片（ＳＰＦ粉末）の粉末の調製
実施例３６ａ．凍結乾燥プロセス
上で調製された低ＭＷ及び中ＭＷの絹フィブロインタンパク質断片の６５０ｍＬの水溶液の各々を、１Ｌ丸底ガラスボトルに添加した。絹溶液を充填した二本のボトルを冷凍庫内に入れ、一晩冷凍庫内に留めて、完全に凍結した絹溶液を提供した。凍結した絹溶液を含む二本のボトルを冷凍庫から取り出した。ボトルを開栓したままにし、開口部をＫｉｍｗｉｐｅペーパーティシュで覆い、凍結乾燥機内に置いた。凍結乾燥機内部の圧力は、０．０２ｍｂａｒに低下される。収集器の温度を－６５℃に設定した。２４時間の凍結乾燥後、二本のボトルを凍結乾燥機から取り出し、乾燥絹固体を水分と接触させることを回避するために直ちにキャップをした。凍結乾燥直後の粗い粉末をモルタル及び乳棒で粉砕し、均等な側面分布を伴う絹フィブロインタンパク質断片の微細な粉末を産生した。さらなる粉砕／処理は、所望の粒子サイズを伴う絹固体粒子を産生するように実施されてもよい。

低ＭＷの絹の粗い固体は、モルタル及び乳棒を使用して分解することが非常に簡単で、非常に微細な粉末をもたらした。それが小さくなるにつれて、凍結乾燥された絹は、層状に見える外観（長さ及び幅は約数ミリメートルであるが、しかし、極度に薄く、ほぼ透けている）を明らかにした。これらの小さな粒子は、それらが、光の中で輝く非常に薄いシートであるという意味で、雲母といくらか類似している（図６６Ａ～６６Ｃを参照のこと）。

固体絹がさらに粉砕され、粒子サイズが低下するにつれて、粉末はその光沢を失った。ほんのわずかな空気移動で飛ぶ傾向にある外観及び方法に基づいて、粒子サイズは、数ミクロン～数百ミクロンの間であり得る。

中間ＭＷ絹の固体は、粉砕時に直ちに砕けなかった（低ＭＷ固体の絹の場合と同様）。用いることができる他の絹乾燥方法は、限定されないが、噴霧乾燥、極性乾燥、及び薄膜蒸発を含む。

実施例３６ｂ．薄膜蒸発プロセス
本明細書中で調製された低ＭＷ又は中ＭＷの絹フィブロインタンパク質断片の水性溶液を、薄膜蒸発器内に置いた。穏やかな加熱を使用して、減圧下で薄膜蒸発器内の絹溶液から水を継続的に除去し、可変粒子サイズの固体をもたらした。粒子サイズは、プロセスパラメータ、例えば、以下に限定されないが、圧力、温度、シリンダの回転速度、蒸発器中の液体フィルムの厚さなどを変動させることにより調整することができる。

実施例３６ｃ．水性溶液沈殿プロセスにより調製されたマイクロ粒子
塩析方法：１．０Ｍリン酸緩衝液を調製し、ｐＨ値を８に調整した。５．０ｍｇ／ｍｌ濃度の穏やかに撹拌する絹溶液に、リン酸緩衝液を１：５の比率（ｖ／ｖ）で添加した。サンプルを５分間にわたり反応させ、次に、絹粒子の沈殿を促進するために冷蔵庫内に置いた。結果として得られる絹固体懸濁液を次に遠心分離して、固体粒子を回収した。絹粒子を脱イオン水で三回洗浄し、乾燥させて、絹フィブロインタンパク質断片の固体粒子（ＳＰＦ粉末）を与えた。

ＰＶＡ補助方法：３．０重量％の絹原液を、５．０重量％のポリビニルアルコール（ＰＶＡ）の溶液と１：４の比率（ｖ／ｖ）で混合した。結果として得られる溶液混合物を、２時間にわたり穏やかに撹拌した。溶液混合物を次に超音波処理し、続いて基材に成型して、フィルムの形成を可能にした。フィルムを、最小限の量のＤ．Ｉ．水中で再構成し、遠心分離した。上清を除去し、追加のＤ．Ｉ．水を添加した。このプロセスを２回繰り返した。２回の洗浄後、液体をフラスコから除去し、湿潤な絹マイクロ粒子を提供した。次に、少容量のメタノールを、フラスコ中の湿潤マイクロ粒子に添加した（メタノールアニーリング）。フラスコ内の粒子懸濁液を旋回させた。粒子懸濁液を次に、大きな布フィルター上に注いで、マイクロ粒子を単離した（図６８を参照のこと）。

実施例３７：例示的な絹－ヒアルロン酸組成物及びそれを作製するための方法。
ＳＭＡ－００２手順：
１．ＰＥＧＤＥを清潔なビーカーに添加した。
２．室温で、ＮａＯＨ溶液（０．２５Ｎ）、同容量の絹溶液及びＮａＯＨ溶液（０．５Ｎ）をビーカーに添加し、３０秒間にわたりスパチュラで混合した。
３．ＨＡ線維を混合缶に添加した。
４．工程２において調製された絹／ＮａＯＨ溶液を、ＨＡ線維を含む混合缶に添加し、２０℃で１時間にわたり撹拌した。
５．混合物を２０℃で２３時間にわたり放置した。
６．適切な量のＨＣｌ及びＰＢＳ（１×）溶液を混合缶に添加し、架橋ゲルを中和及び希釈した。混合物を、４℃で３時間にわたり撹拌し、次に４℃で一晩放置した。
７．希釈ゲルを４℃で１時間にわたり撹拌し、次に透析チューブに充填し、ＰＢＳ（１×）で室温で３日間にわたり透析した。
８．透析後のゲルを混合缶に移した。適切な量のリドカインＨＣｌ／ＰＢＳ溶液を混合缶に添加し、ゲルを２０ｍｇ／ｍＬに希釈した。ＮａＯＨ溶液を使用してｐＨを調整した。
９．リドカインＨＣｌを伴うゲルを、４℃で１時間にわたり撹拌し、次に４℃で一晩放置した。
１０．ゲルは、シリンジ充填のための準備が整っていた。

任意の特定の理論により拘束されることを望まないが、ＳＭＡ－００２手順は、ＳＭＡ－００１手順（０．１Ｎ）よりも高い濃度のＮａＯＨ（０．２５Ｎ）の使用；ＳＭＡ－００１手順（１４０ｍｇ／ｍＬ）よりも低い初期ＨＡ濃度（７５ｍｇ／ｍＬ）の使用に起因して、滑らかなＩＦ曲線を生成すると考えられる。結果として、任意の特定の理論により拘束されることを望まないが、ＨＡは、ＳＭＡＳＭＡ－００２手順においてより速く溶解し、工程４の終了時に均質な溶液を生成すると考えられる。ＳＭＡ－００１手順と比較して、ＳＭＡ－００２手順は、工程４及び工程６の両方で、より長い時間又はより速い混合のいずれかで適用した。

ＳＭＰ（絹マイクロ粒子）手順を用いたＳＭＡ－００２ヒドロゲル：
手順は、工程８を除き、絹溶液で製造されたＳＭＡ－００２と同じである。
８．透析後のゲルを混合缶に移した。適切な量のリドカインＨＣｌ／絹マイクロ粒子／ＰＢＳ溶液を混合缶に添加し、ゲルを２０ｍｇ／ｍＬに希釈した。ＮａＯＨ溶液を使用してｐＨを調整した。

注意：ＳＭＰのサイズは３０～５０ｕｍであり、ヒドロゲル中のＳＭＰの最終濃度は１ｍｇ／ｍＬである。
例示的なＳＭＡ－００２（表層充填剤）

（外３５）

（外３６）

（外３７）

実施例３８：ＳＭＡ皮膚充填剤のレオロジー特性。
皮膚充填剤製品の表示は、主にそれらのレオロジー特性に基づいた。製品の性能、例えば、変形に耐える能力、流れる能力、その完全性を保持する能力などは、また、製品の対応する各レオロジーパラメータにより評価された。絹タンパク質の優れた特色を活用することで、ＳＭＡの技術は、絹及びＨＡをハイブリッド皮膚充填剤プラットフォーム中に組込み、広範囲をカバーするレオロジー特性を伴う様々なプロトタイプを送達することができる。より重要なことに、一部の特性は、ヒドロゲルの製剤及びプロセスを変動させることにより、潜在的に分離され得る。以下の図は、９０を上回る異なるプロトタイプからのレオロジー特性をまとめており、この独自の技術プラットフォームの能力及びそれが提供できる多様性の概要を提供した。これらのヒドロゲルプロトタイプ中に含まれる二つの異なる絹分子を評価し、この報告書にまとめた。

貯蔵弾性率（Ｇ’）は、弾性の尺度、又はエネルギーを貯蔵する能力である。典型的な皮膚充填剤製品については、注入力（ＩＦ）は一般的にＧ’に比例する。ＳＭＡヒドロゲルは、ＩＦの狭い範囲（１０～３０Ｎ）内にＧ’の広い範囲（３０～３００Ｐａ）を有し、これは絹含有製剤及びプロセスに起因する。図７１中のデータは、３０Ｇ×１／２”（緑色）又は２７Ｇ×１／２’’（赤色）のいずれかで、針サイズによりグループ化される。これらのデータは、ＩＦを約５０％低下させることができるＣＯＣシリンジを使用する現在のＳＭＡ設計ではなく、ガラスシリンジ中に充填されたサンプルに基づく。図７１：ＳＭＡ皮膚充填剤の注入力（ＩＦ）対貯蔵弾性率（Ｇ’）。

損失弾性率（Ｇ）は、粘度、又はエネルギーを損失する能力の尺度である。Ｇ’と同様に、異なるＳＭＡヒドロゲル製剤のＧ’は、１０～３０Ｎの狭い注入力範囲において、３０～３００Ｐａの広範囲に変動する。図７２中のデータは、３０Ｇ×１／２’’（緑色）又は２７Ｇ×１／２’’（赤色）のいずれかで、針サイズによりグループ化される。これらのデータは、ＩＦを約５０％低下させることができるＣＯＣシリンジを使用する現在のＳＭＡ設計ではなく、ガラスシリンジ中に貯蔵されたサンプルに基づく。図７２：ＳＭＡ皮膚充填剤の注入力（ＩＦ）対損失弾性率（Ｇ）。

Ｔａｎ（δ）は、Ｇ’’／Ｇ’の比率として定義され、減衰特性の尺度である。Ｇ’の所与の範囲、例えば、１００～１５０Ｐａでは、異なるＳＭＡヒドロゲル製剤は、０．１５～０．５５の広範囲のＴａｎ（δ）を示した。Ｔａｎ（δ）の特定の範囲、例えば、０．５～０．６では、ＳＭＡヒドロゲルのＧ’は、最低で５０Ｐａ及び最高で３５０Ｐａであり得る。図７３中のデータは、ＳＭＡヒドロゲルにおけるＧ’及びＴａｎ（δ）の分離の性質を実証する。図７３：ＳＭＡ皮膚充填剤の貯蔵弾性率（Ｇ’）対Ｔａｎ（δ）。

複素粘度（η＊）は、流れに対する抵抗の尺度である。典型的には、粘度が高いほど、注入力は高い。絹含有製剤に起因して、注入力は、一部のＳＭＡヒドロゲルの複素粘度が１０Ｐａ・ｓよりも高い場合でさえ、許容可能なレベルで維持され得る。図７４中のデータは、３０Ｇ×１／２’’（緑色）又は２７Ｇ×１／２’’（赤色）のいずれかで、針サイズによりグループ化される。これらのデータは、ＩＦを約５０％低下させることができるＣＯＣシリンジを使用する現在のＳＭＡ設計ではなく、ガラスシリンジ中に充填されたサンプルに基づく。図７４：ＳＭＡ皮膚充填剤の注入力（ＩＦ）対複素粘度（η＊）。

Ｇ’は通常、Ｇ’の関数として変化する。ヒドロゲル製剤中の絹に起因するため、ＳＭＡヒドロゲルのＧ’は３５０Ｐａ超と高くなり得る一方で、Ｇ’は５０Ｐａ未満と低かった。一部の他の場合では、Ｇ”は、Ｇ’範囲２５０～３００Ｐａで、３０Ｐａ～３００Ｐａで変動する。図７５中のデータは、ＳＭＡヒドロゲルにおけるＧ’及びＧ’の分離の性質を実証する。図７５：ＳＭＡ皮膚充填剤の貯蔵弾性率（Ｇ’）対損失弾性率（Ｇ’）。

多くの皮膚充填剤の製造業者は、製品中のＨＡ濃度を調節することによりＧ’を制御する。ＨＡヒドロゲルを単に希釈することで、Ｇ’を低下させることができる。ＳＭＡの絹－ＨＡプラットフォームは、全絹及びＨＡ濃度に対して製品Ｇ’を独立させた。各々の所与の濃度について、Ｇ’は、最低で５０Ｐａ又は最高で３５０Ｐａであり得る。ＳＭＡは、低濃度で高いＧ’を伴う又は比較的高濃度で低いＧ’を伴う皮膚充填剤製品を開発することができる。図７６：ＳＭＡ皮膚充填剤の貯蔵弾性率（Ｇ’）対絹＋ＨＡ濃度。

ＳＭＡ固有の皮膚充填剤プラットフォームは、絹技術を皮膚充填剤製品に組込み、望ましい機械的特性及びレオロジー特性を伴う新たな皮膚充填剤製品を設計及び開発するための汎用的なツールを提供し、製品ポートフォリオを大幅に拡大させる。

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Claims

絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片、ヒアルロン酸（ＨＡ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及び／又はポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）を含む生体適合性組成物であって、
前記ＨＡの一部が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、及び第二級アルコールの一つ又は複数を含む、一つ又は複数のリンカー部分により改変又は架橋されており、
前記絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の一部が、遊離している及び／又は架橋されていないことを特徴とする生体適合性組成物。
前記絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の一部が、改変又は架橋されている、請求項１に記載の組成物。
前記絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の一部が、ＨＡに架橋されている、請求項１から２のいずれかに記載の組成物。
前記絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の一部が、絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片に架橋されている、請求項１から３のいずれかに記載の組成物。
前記絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片が、実質的にセリシンを欠いている、請求項１から４のいずれかに記載の組織充填剤。
前記絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の一部が、低分子量、中分子量、及び高分子量から選択される平均重量平均分子量を有する、請求項１から５のいずれかに記載の組成物。
前記絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片が、１～５．０の間の多分散性を有する、請求項１から６のいずれかに記載の組成物。
前記絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片が、約１．５～約３．０の間の多分散性を有する、請求項１～６のいずれかに記載の組成物。
前記組成物が、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、又は約１５％の改変度（ＭｏＤ）を有する、請求項１から８のいずれかに記載の組成物。
改変又は架橋が、架橋剤として、モノエポキシ－又はジエポキシ－ＰＥＧ、モノグリシジル－、ジグリシジル－、又はポリグリシジル－ＰＥＧ、モノグリシジル－又はジグリシジル－ＰＥＧ、モノエポキシ－又はジエポキシ－ＰＰＧ、モノグリシジル－、ジグリシジル－、又はポリグリシジル－ＰＰＧ、モノグリシジル－又はジグリシジル－ＰＰＧ、又はそれらの任意の組み合わせを使用して得られる、請求項１から９のいずれかに記載の組成物。
リドカインをさらに含む、請求項１から１０のいずれかに記載の組成物。
前記組成物が、ゲル又はヒドロゲルである、請求項１から１１のいずれかに記載の組成物。
前記組成物中のＨＡ及び絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の合計濃度が、約１５ｍｇ／ｍＬ、約１６ｍｇ／ｍＬ、約１７ｍｇ／ｍＬ、約１８ｍｇ／ｍＬ、約１９ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２１ｍｇ／ｍＬ、約２２ｍｇ／ｍＬ、約２３ｍｇ／ｍＬ、約２４ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約２６ｍｇ／ｍＬ、約２７ｍｇ／ｍＬ、約２８ｍｇ／ｍＬ、約２９ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約３１ｍｇ／ｍＬ、約３２ｍｇ／ｍＬ、約３３ｍｇ／ｍＬ、約３４ｍｇ／ｍＬ、約３５ｍｇ／ｍＬ、約３６ｍｇ／ｍＬ、約３７ｍｇ／ｍＬ、約３８ｍｇ／ｍＬ、約３９ｍｇ／ｍＬ、又は約４０ｍｇ／ｍＬである、請求項１から１２のいずれかに記載の組成物。
前記組成物中のＨＡと、絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片との比率が、約９１／９、約９２／８、約９３／７、約９４／６、約９５／５、約９６／４、約９７／３、約１８／１２、約２７／３、約２９．４／０．６、約９９／１、約９２．５／７．５、約９０／１０、約８０／２０、約７０／３０、約６０／４０、又は約５０／５０である、請求項１から１３のいずれかに記載の組成物。
前記組成物中のＨＡと、絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片との比率が、約５０／５０、約５１／４９、約５２／４８、約５３／４７、約５４／４６、約５５／４５、約５６／４４、約５７／４３、約５８／４２、約５９／４１、約６０／４０、約６１／３９、約６２／３８、約６３／３７、約６４／３６、約６５／３５、約６６／３４、約６７／３３、約６８／３２、約６９／３１、約７０／３０、約７１／２９、約７２／２８、約７３／２７、約７４／２６、約７５／２５、約７６／２４、約７７／２３、約７８／２２、約７９／２１、約８０／２０、約８１／１９、約８２／１８、約８３／１７、約８４／１６、約８５／１５、約８６／１４、約８７／１３、約８８／１２、約８９／１１、約９０／１０、約９１／９、約９２／８、約９３／７、約９４／６、約９５／５、約９６／４、約９７／３、約９８／２、又は約９９／１である、請求項１から１３のいずれかに記載の組成物。
前記組成物中の遊離及び／又は非架橋絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の総濃度が、約１ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、又は約８ｍｇ／ｍＬである、請求項１から１７のいずれかに記載の組成物。
前記遊離及び／又は非架橋絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の一部が、１．０μｍ～５０．０μｍ、１．０μｍ～２５．０μｍ、１．０μｍ～１０．０μｍ、３０．０μｍ～５０．０μｍ、３５．０μｍ～４５．０μｍ、３５．０μｍ～５５．０μｍ、又は２５．０μｍ～４５．０μｍの範囲のメディアン粒子径を有する絹マイクロ粒子を含む、請求項１から１６のいずれかに記載の組成物。
前記組成物が、３０Ｇ又は２７Ｇ針を通して注入可能であり、約１０Ｎ～約８０Ｎの３０Ｇ針を通した注入力を有する、請求項１から１７のいずれかに記載の組成物。
前記組成物が、約１Ｎ、約２Ｎ、約３Ｎ、約４Ｎ、約５Ｎ、約６Ｎ、約７Ｎ、約８Ｎ、約９Ｎ、約１０Ｎ、約１１Ｎ、約１２Ｎ、約１３Ｎ、約１４Ｎ、約１５Ｎ、約１６Ｎ、約１７Ｎ、約１８Ｎ、約１９Ｎ、約２０Ｎ、約２１Ｎ、約２２Ｎ、約２３Ｎ、約２４Ｎ、約２５Ｎ、約２６Ｎ、約２７Ｎ、約２８Ｎ、約２９Ｎ、約３０Ｎ、約３１Ｎ、約３２Ｎ、約３３Ｎ、約３４Ｎ、約３５Ｎ、約３６Ｎ、約３７Ｎ、約３８Ｎ、約３９Ｎ、約４０Ｎ、約４１Ｎ、約４２Ｎ、約４３Ｎ、約４４Ｎ、約４５Ｎ、約４６Ｎ、約４７Ｎ、約４８Ｎ、約４９Ｎ、約５０Ｎ、約５１Ｎ、約５２Ｎ、約５３Ｎ、約５４Ｎ、約５５Ｎ、約５６Ｎ、約５７Ｎ、約５８Ｎ、約５９Ｎ、約６０Ｎ、約６１Ｎ、約６２Ｎ、約６３Ｎ、約６４Ｎ、約６５Ｎ、約６６Ｎ、約６７Ｎ、約６８Ｎ、約６９Ｎ、約７０Ｎ、約７１Ｎ、約７２Ｎ、約７３Ｎ、約７４Ｎ、約７５Ｎ、約７６Ｎ、約７７Ｎ、約７８Ｎ、約７９Ｎ、約８０Ｎ、約８１Ｎ、約８２Ｎ、約８３Ｎ、約８４Ｎ、約８５Ｎ、約８６Ｎ、約８７Ｎ、約８８Ｎ、約８９Ｎ、約９０Ｎ、約９１Ｎ、約９２Ｎ、約９３Ｎ、約９４Ｎ、約９５Ｎ、約９６Ｎ、約９７Ｎ、約９８Ｎ、約９９Ｎ、又は約１００Ｎの注入力を伴う３０Ｇ針を通じて注入可能である、請求項１から１７のいずれかに記載の組成物。
前記組成物が、約５Ｐａ～約５００Ｐａ、約１５Ｐａ～約５０Ｐａ、約５０Ｐａ～約１００Ｐａ、約１００Ｐａ～約２００Ｐａ、約２００Ｐａ～約３００Ｐａ、約３００Ｐａ～約３５０Ｐａ、約３５０Ｐａ～約４００Ｐａ、約４００Ｐａ～約４５０Ｐａ、又は約４５０Ｐａ～約５００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、請求項１から１９のいずれかに記載の組成物。
前記組成物が、約５Ｐａ～約５００Ｐａ、約１５Ｐａ～約５０Ｐａ、約５０Ｐａ～約１００Ｐａ、約１００Ｐａ～約２００Ｐａ、約２００Ｐａ～約３００Ｐａ、約３００Ｐａ～約３５０Ｐａ、約３５０Ｐａ～約４００Ｐａ、約４００Ｐａ～約４５０Ｐａ、又は約４５０Ｐａ～約５００Ｐａの損失弾性率（Ｇ’’）を有する、請求項１から１９のいずれかに記載の組成物。
前記組成物が、０～約０．２、約０．２～約０．４、約０．４～約０．６、約０．６～約０．８、約０．８～約１．０、又は約１．０～約１．２のＴａｎ（δ）（Ｇ’’／Ｇ’）を有する、請求項１から１９のいずれかに記載の組成物。
前記組成物が、０～約５Ｐａ・ｓ、約５Ｐａ・ｓ～約１０Ｐａ・ｓ、約１０Ｐａ・ｓ～約１５Ｐａ・ｓ、約１５Ｐａ・ｓ～約２０Ｐａ・ｓ、又は約２０Ｐａ・ｓ～約２５Ｐａ・ｓの複素粘度（η＊）を有する、請求項１～１９のいずれかに記載の組成物。
前記組成物が、約５０Ｐａ～約４００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）、及び約１０Ｎ～約７０Ｎの間の注入力（２７Ｇ）を有する、請求項１から１９のいずれかに記載の組成物。
前記組成物が、約１０Ｐａ～約３５０Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）、及び約５Ｎ～約７０Ｎの間の注入力（３０Ｇ）を有する、請求項１から１９のいずれかに記載の組成物。
前記組成物が、約２５Ｐａ～約３５０Ｐａの損失弾性率（Ｇ’’）、及び約１０Ｎ～約７０Ｎの間の注入力（２７Ｇ）を有する、請求項１から１９のいずれかに記載の組成物。
前記組成物が、約１０Ｐａ～約４００Ｐａの損失弾性率（Ｇ’’）、及び約１０Ｎ～約７０Ｎの間の注入力（３０Ｇ）を有する、請求項１から１９のいずれかに記載の組成物。
前記組成物が、約２５Ｐａ～約４００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）、及び０～約１．２の間のＴａｎ（δ）（Ｇ’’／Ｇ’）を有する、請求項１から１９のいずれかに記載の組成物。
前記組成物が、約２．５～約２５Ｐａ・ｓの複素粘度（η＊）、及び約１０Ｎ～約７０Ｎの間の注入力（２７Ｇ）を有する、請求項１から１９のいずれかに記載の組成物。
前記組成物が、約１～約２０Ｐａ・ｓの間の複素粘度（η＊）、及び約５Ｎ～約７５Ｎの間の注入力（３０Ｇ）を有する、請求項１から１９のいずれかに記載の組成物。
前記組成物が、約５Ｐａ～約４００Ｐａの損失弾性率（Ｇ’’）、及び約１Ｐａ～約４００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、請求項１から１９のいずれかに記載の組成物。
前記組成物中のＨＡ及び絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の総濃度が、約１５ｍｇ／ｍＬであり、
前記組成物が、約１Ｐａ～約３５０Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、請求項１から１９のいずれかに記載の組成物。
前記組成物中のＨＡ及び絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の総濃度が、約１８ｍｇ／ｍＬであり、
前記組成物が、約５０Ｐａ～約３５０Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、請求項１から１９のいずれかに記載の組成物。
前記組成物中のＨＡ及び絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の総濃度が、約２０ｍｇ／ｍＬであり、
前記組成物が、約２０Ｐａ～約４００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、請求項１から１９のいずれかに記載の組成物。
前記組成物中のＨＡ及び絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の総濃度が、約２２ｍｇ／ｍＬであり、
前記組成物が、約２５Ｐａ～約２００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、請求項１から１９のいずれかに記載の組成物。
前記組成物中のＨＡ及び絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の総濃度が、約２４ｍｇ／ｍＬであり、
前記組成物が、約５０Ｐａ～約３５０Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、請求項１から１９のいずれかに記載の組成物。
前記組成物中のＨＡ及び絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の総濃度が、約２６ｍｇ／ｍＬであり、
前記組成物が、約５０Ｐａ～約４００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、請求項１から１９のいずれかに記載の組成物。
前記組成物中のＨＡ及び絹フィブロイン又は絹フィブロイン断片の総濃度が、約２８ｍｇ／ｍＬであり、
前記組成物が、約１５０Ｐａ～約３００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する、請求項１から１９のいずれかに記載の組成物。
イメージング剤をさらに含む、請求項１から３８のいずれかに記載の組成物。
前記イメージング剤が、ヨウ素、ＤＯＰＡ、及び撮像ナノ粒子から選択される、請求項３９に記載の組成物。
前記イメージング剤が、常磁性造影剤、及び超常磁性造影剤から選択される、請求項３９に記載の組成物。
前記イメージング剤が、ＮＰベースの核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）造影剤、ポジトロン断層法（ＰＥＴ）／単一光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）イメージング剤、超音波活性粒子、及び光学的に活性な（例、発光、蛍光、赤外線）粒子から選択される、請求項３９に記載の組成物。
前記イメージング剤が、ＳＰＥＣＴイメージング剤、ＰＥＴイメージング剤、光学イメージング剤、ＭＲＩもしくはＭＲＳイメージング剤、超音波イメージング剤、マルチモーダルイメージング剤、Ｘ線イメージング剤、又はＣＴイメージング剤である、請求項３９に記載の組成物。
請求項１から４３のいずれかに記載の組成物を対象に投与することを含む、それを必要とする前記対象における障害、疾患、又は状態の治療又は予防の方法。
前記状態が、皮膚の脱水、皮膚の弾力性の欠如、肌荒れ、皮膚の張りの欠如、皮膚のストレッチライン、皮膚のストレッチマーク、皮膚蒼白、皮膚の陥没、頬のこけ、唇の薄さ、眼窩後部の欠損、顔面のひだ、及び皺から選択される皮膚の状態である、請求項４４に記載の方法。
前記組成物が、前記対象の真皮領域中に投与される、請求項４４から４５のいずれかに記載の方法。
前記方法が、増大、再建、疾患の治療、障害の治療、身体の一部、部分、又は領域の欠損又は不完全性の矯正である、請求項４４から４６のいずれかに記載の方法。
前記方法が、顔面の増大、顔面の再建、顔面の疾患の治療、顔面の障害の治療、顔面の欠損の治療、又は顔面の不完全性の治療である、請求項４４から４７のいずれかに記載の方法。
前記方法が、深部皮下投与及び／又は深部骨膜上投与を含む、請求項４４から４８のいずれかに記載の方法。
前記方法が、頬の増大、口唇の増大、皮膚移植、口周囲の皺の矯正、及び／又は鼻唇溝の矯正を含む、請求項４４から４９のいずれかに記載の方法。
前記組成物が組織中に注入される、請求項４４に記載の方法。
前記組織が、前記障害、疾患、又は状態に関連している、請求項５１に記載の方法。
前記組成物が、前記組織の壁中に投与される、請求項５１から５２のいずれかに記載の方法。
前記組織が、内臓の壁の一部分を含む、請求項５１から５３のいずれかに記載の方法。
前記組成物の投与が、前記組織のバルキングを起こす、請求項５１から５４のいずれかに記載の方法。
前記障害、疾患、又は状態が、前記組織の前記バルキングにより治療又は予防される、請求項５５に記載の方法。
前記障害、疾患、又は状態が、尿失禁、胃食道逆流症（ＧＥＲＤ）、膀胱尿管逆流症、便失禁、歯組織の欠損、声帯組織の欠損、喉頭の欠損、及び他の非皮膚軟組織の欠損から選択される、請求項５１から５６のいずれかに記載の方法。
前記障害、疾患、又は状態が尿失禁である、請求項５１から５６のいずれかに記載の方法。
前記尿失禁が、腹圧性失禁、内因性括約筋不全（ＩＳＤ）、腹圧性失禁、内因性括約筋欠損症（ＩＳＤ）、切迫性尿失禁、溢流性尿失禁、又は遺尿である、請求項５８に記載の方法。
前記組織が、尿道又は尿道括約筋の一部分である、請求項５８から５９のいずれかに記載の方法。
前記障害、疾患、又は状態が、胃食道逆流症（ＧＥＲＤ）である、請求項５１から５６のいずれかに記載の方法。
前記組織が、下部食道括約筋又は横隔膜の一部である、請求項６１に記載の方法。
前記障害、疾患、又は状態が、膀胱尿管逆流症である、請求項５１から５６のいずれかに記載の方法。
前記組織が、尿道括約筋の一部である、請求項６３に記載の方法。
前記障害、疾患、又は状態が、便失禁である、請求項５１から５６のいずれかに記載の方法。
前記組織が、直腸の一部である、請求項６５に記載の方法。
前記組成物が、直腸壁の領域中に投与される、請求項６５から６６のいずれかに記載の方法。
前記直腸壁の前記領域が、肛門括約筋の近傍である、請求項６７に記載の方法。
前記組成物が、内括約筋中に投与される、請求項６８に記載の方法。
前記障害、疾患、又は状態が、声帯組織の欠損又は喉頭の欠損である、請求項５１から５６のいずれかに記載の方法。
前記声帯組織の欠損又は喉頭の欠損が、声門機能不全、片側声帯麻痺、両側声帯麻痺、麻痺性発声障害、非麻痺性発声障害、痙攣性発声障害、声帯の不完全麻痺（不全麻痺）、声帯の一般的な衰弱、声帯の瘢痕化、及びそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項７０に記載の方法。
前記組織が、声帯又は喉頭の一部である、請求項７０から７１のいずれかに記載の方法。
抗癌治療を施すことをさらに含み、
前記障害、疾患、又は状態が、子宮頸癌、直腸癌、肺腫瘍、縦隔リンパ腫、乳癌、子宮体癌、膵臓癌、頭頸部癌、肺癌、肝臓癌、膣癌、前立腺肥大症（ＢＰＨ）、月経痛、子宮筋腫、前立腺腺癌、膵臓癌、頭頸部癌、肺癌、肝臓癌、及び膣癌から選択される、請求項４４に記載の方法。
前記抗癌治療が、放射線治療（ＲＴ）、凍結療法、薬物治療、熱及び／又はサーマルアブレーション、高周波波及び／又はマイクロ波、あるいは凍結療法の一つ又は複数を施すことを含む、請求項７３に記載の方法。
前記放射線治療が、外部ビーム放射線療法、３Ｄコンフォーマル変調放射線療法、強度変調放射線療法、間質性前立腺小線源療法、永久シーズを使用した間質性前立腺小線源療法、一過性シードを使用した間質性前立腺小線源療法、高線量率遠隔照射による間質性前立腺小線源療法、ガンマ線照射による外部放射線治療、高エネルギー光子線治療、陽子線治療、中性子線治療、重粒子線治療、小線源療法、熱線治療、又はそれらの任意の組み合わせの一つ又は複数を含む、請求項７４に記載の方法。
前記組成物が、第一の組織と第二の組織との間に、又は第一の組織と第二の組織との間隙もしくは仮想間隙中に投与される、請求項７３から７５のいずれかに記載の方法。
前記組成物の投与時に、前記第一の組織が前記第二の組織に対して移動する、請求項７６に記載の方法。
前記間隙又は仮想間隙が、Ｄｅｎｏｎｖｉｌｉｅｒｓ間隙又はＤｅｎｏｎｖｉｌｉｅｒｓ筋膜に隣接する間隙又は仮想間隙である、請求項７６から７７のいずれかに記載の方法。
前記第一の組織が、前記組成物の投与後に前記抗癌治療を受ける、請求項７６から７８のいずれかに記載の方法。
前記第一の組織は、前記第一の組織が前記組成物の非存在において受ける抗癌治療用量と比較して、実質的に類似した用量の抗癌治療を受ける、請求項７９に記載の方法。
前記第二の組織が、前記抗癌治療を受ける、請求項７６から８０のいずれかに記載の方法。
前記第二の組織は、前記第二の組織が前記組成物の非存在において受ける抗癌治療用量と比較して、より低い抗癌治療用量を受ける、請求項８１に記載の方法。
前記第二の組織が、実質的に抗癌治療用量を受けない、請求項７６から８２のいずれかに記載の方法。
前記第一の組織及び前記第二の組織は、各々独立して、腫瘍組織、細胞群、細胞群及び間質物質、臓器、臓器の一部、又は身体の解剖学的部分を含む、請求項７６から８３のいずれかに記載の方法。
前記第一の組織が、腫瘍組織を含み、
前記第二の組織が、臓器を含む、請求項７６から８３のいずれかに記載の方法。
前記第一の組織が、臓器を含み、
前記第二の組織が、臓器を含む、請求項７６から８３のいずれかに記載の方法。
前記第一の組織が、前立腺の一部を含み、
前記第二の組織が、直腸の一部を含む、請求項８６に記載の方法。
前記方法が、麻酔薬を投与することを含む、請求項４４から８６のいずれかに記載の方法。
前記対象における前記組成物の生分解をさらに含む、請求項４４から８７のいずれかに記載の方法。
前記生分解が、加水分解、タンパク質分解、酵素分解、身体における細胞の作用、又はそれらの組み合わせである、請求項８８に記載の方法。
前記組成物が、ヒアルロニダーゼ酵素分解により生分解される、請求項８８に記載の方法。