KR20210144660A

KR20210144660A - 실크-히알루론산 조직 충전제 및 이를 제조하는 방법

Info

Publication number: KR20210144660A
Application number: KR1020217022455A
Authority: KR
Inventors: 그레고리 에이치. 알트만; 레베카 엘. 라쿠트르; 펭 주; 얼레이 진; 카를로스 제이. 보스큐스; 패트릭 야코노; 패트릭 요한손
Original assignee: 이발브드 바이 네이처, 인크.
Priority date: 2018-12-19
Filing date: 2019-12-19
Publication date: 2021-11-30
Also published as: AU2019405953A1; US20230114250A1; CN113677320A; EP3897564A4; CA3124196A1; IL284082A; BR112021012141A2; JP2022514349A; WO2020132331A1; MA54563A; SG11202106411QA; EP3897564A1

Abstract

히알루론산 및 실크 피브로인 또는 실크 피브로인 단편 조직 충전제 및 이를 제조하는 방법이 여기서 제공된다.

Description

실크-히알루론산 조직 충전제 및 이를 제조하는 방법

실크는 다양한 곤충 및 거미에 의해 제조되는 천연 중합체이다. 누에 피브로인은 필라멘트 코어 단백질, 실크 피브로인, 및 비-필라멘트성 단백질, 세리신으로 구성된 풀-형 코팅을 포함한다. 실크는 의료 분야에서의 사용을 위해 역사적으로 연구되었다. 히알루론산 (히알루로난)은 몸 전체를 통해 분포되고 결합 및 상피 조직에서 발견되는 글리코자미노글리칸이다. 히알루론산은 그의 생체적합성 및 구조적 장점으로 인해, 의료 장치 및 이식가능 재료에서 유용한 성분이다.

인간 신체의 연조직은 그의 구조를 콜라겐, 엘라스틴, 및 글리코자미노글리칸을 포함하는 세포외 매트릭스에 부분적으로 의지한다. 연조직 구조를 왜곡, 변형, 또는 변경하는 연조직 결함이 발생할 수 있다. 그러한 구조는 결함을 개선하기 위해 결함 부위에 배치될 수 있는 조직 충전제의 사용을 통해 회복될 수 있다. 예를 들어, 조직 충전제는 주름을 개선하기 위해 얼굴 주름 부위에 배치될 수 있다.

그러나, 조절가능한 특성을 제공하면서 많은 조직 결함을 개선하고, 특이적 조직 결함에 대한 조직 충전제의 맞춤을 허용할 수 있는 신규한 조직 충전제가 업계에서 필요하다.

발명의 요약

일부 구체예에서, 본개시물은 실크 피브로인 또는 실크 피브로인 단편, 히알루론산 (HA), 및 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 및/또는 폴리프로필렌 글리콜 (PPG)를 포함하는 생체적합성 조직 충전제에 관한 것이고, 여기서 HA의 일부는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 폴리프로필렌 글리콜 (PPG), 및 제 2 알콜 중 하나 이상을 포함하는 하나 이상의 링커 모이어티에 의해 개질 또는 가교결합되고, 여기서 링커 모이어티는 링커의 한 말단에서 HA에 부착된다. 일부 구체예에서, 실크 피브로인 또는 실크 피브로인 단편의 일부는 개질 또는 가교결합된다. 일부 구체예에서, 실크 피브로인 또는 실크 피브로인 단편의 일부는 HA에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 실크 피브로인 또는 실크 피브로인 단편의 일부는 실크 피브로인 또는 실크 피브로인 단편에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 실크 피브로인 또는 실크 피브로인 단편은 실질적으로 세리신이 없다.

일부 구체예에서, 실크 피브로인의 일부 또는 실크 피브로인 단편은 약 12 kDa, 약 13 kDa, 약 14 kDa, 약 15 kDa, 약 16 kDa, 약 48 kDa, 및 약 100 kDa로부터 선택되는 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 일부 구체예에서, 실크 피브로인 또는 실크 피브로인 단편은 1 및 약 5.0 사이의 다분산성을 가진다. 일부 구체예에서, 실크 피브로인 또는 실크 피브로인 단편은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 가진다. 일부 구체예에서, 실크 피브로인의 일부 또는 실크 피브로인 단편은 저 분자량, 중 분자량, 또는 고 분자량을 가진다.

일부 구체예에서, 조직 충전제는 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 약 10%, 약 11%, 약 12%, 약 13%, 약 14%, 또는 약 15%의 개질도 (MoD)을 가진다. 일부 구체예에서, 개질 또는 가교결합은 가교결합제로서 디에폭시-PEG, 폴리글리시딜-PEG, 디글리시딜-PEG, 디에폭시-PPG, 폴리글리시딜-PPG, 디글리시딜-PPG, 또는 이의 임의의 조합를 사용하여 얻어진다. 일부 구체예에서, 개질 또는 가교결합은 약 200 Da, 약 500 Da, 1000 Da, 약 2,000 Da, 또는 약 6000 Da의 MW를 갖는 폴리에틸렌 글리콜 디글리시딜 에테르를 사용하여 얻어진다. 일부 구체예에서, 개질 또는 가교결합은 약 380 Da, 또는 약 640 Da의 MW를 갖는 폴리에틸렌 글리콜 디글리시딜 에테르를 사용하여 얻어진다.

일부 구체예에서, 조직 충전제는 리도카인을 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 조직 충전제 내 리도카인의 농도는 약 0.3%이다.

일부 구체예에서, 조직 충전제는 겔이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 하이드로겔이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 물을 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 1상이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제 내 HA 및 실크의 총 농도는 약 18 mg/mL, 약 19 mg/mL, 약 20 mg/mL, 약 21 mg/mL, 약 22 mg/mL, 약 23 mg/mL, 약 24 mg/mL, 약 25 mg/mL, 약 26 mg/mL, 약 27 mg/mL, 약 28 mg/mL, 약 29 mg/mL, 또는 약 30 mg/mL이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제 내 HA 대 실크 피브로인 또는 실크 피브로인 단편의 비는 약 92/8, 약 93/7, 약 94/6, 약 95/5, 약 96/4, 약 97/3, 약 18/12, 약 27/3, 약 29.4/0.6, 약 99/1, 약 92.5/7.5, 또는 약 90/10이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 진피 충전제이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 생분해성이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 주사가능이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 30 G 또는 27 G 니들을 통해 주사가능이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 약 5 Pa 내지 약 500 Pa의 저장 탄성률 (G')을 가진다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 약 5 Pa, 약 6 pa, 약 7 Pa, 약 8 Pa, 약 9 Pa, 약 10 Pa, 약 11 Pa, 약 12 Pa, 약 13 Pa, 약 14 Pa, 약 15 Pa, 약 16 Pa, 약 17 Pa, 약 18 Pa, 약 19 Pa, 약 20 Pa, 약 21 Pa, 약 22 Pa, 약 23 Pa, 약 24 Pa, 약 25 Pa, 약 26 Pa, 약 27 Pa, 약 28 Pa, 약 29 Pa, 약 30 Pa, 약 31 Pa, 약 32 Pa, 약 33 Pa, 약 34 Pa, 약 35 Pa, 약 36 Pa, 약 37 Pa, 약 38 Pa, 약 39 Pa, 약 40 Pa, 약 41 Pa, 약 42 Pa, 약 43 Pa, 약 44 Pa, 약 45 Pa, 약 46 Pa, 약 47 Pa, 약 48 Pa, 약 49 Pa, 약 50 Pa, 약 51 Pa, 약 52 Pa, 약 53 Pa, 약 54 Pa, 약 55 Pa, 약 56 Pa, 약 57 Pa, 약 58 Pa, 약 59 Pa, 약 60 Pa, 약 61 Pa, 약 62 Pa, 약 63 Pa, 약 64 Pa, 약 65 Pa, 약 66 Pa, 약 67 Pa, 약 68 Pa, 약 69 Pa, 약 70 Pa, 약 71 Pa, 약 72 Pa, 약 73 Pa, 약 74 Pa, 약 75 Pa, 약 76 Pa, 약 77 Pa, 약 78 Pa, 약 79 Pa, 약 80 Pa, 약 81 Pa, 약 82 Pa, 약 83 Pa, 약 84 Pa, 약 85 Pa, 약 86 Pa, 약 87 Pa, 약 88 Pa, 약 89 Pa, 약 90 Pa, 약 91 Pa, 약 92 Pa, 약 93 Pa, 약 94 Pa, 약 95 Pa, 약 96 Pa, 약 97 Pa, 약 98 Pa, 약 99 Pa, 약 100 Pa, 약 101 Pa, 약 102 Pa, 약 103 Pa, 약 104 Pa, 약 105 Pa, 약 106 Pa, 약 107 Pa, 약 108 Pa, 약 109 Pa, 약 110 Pa, 약 111 Pa, 약 112 Pa, 약 113 Pa, 약 114 Pa, 약 115 Pa, 약 116 Pa, 약 117 Pa, 약 118 Pa, 약 119 Pa, 약 120 Pa, 약 121 Pa, 약 122 Pa, 약 123 Pa, 약 124 Pa, 또는 약 125 Pa의 저장 탄성률 (G')을 가진다. 일부 구체예에서, G'는 약 1 Hz, 약 5 Hz, 또는 약 10 Hz의 진동 스트레스에 의해 측정된다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 약 1 Paㆍs 내지 약 10 Paㆍs 복합 점도를 가진다. 일부 구체예에서, 복합 점도는 약 1 Hz, 약 5 Hz, 또는 약 10 Hz의 진동 스트레스에 의해 측정된다.

일부 구체예에서, 본개시물은 이를 필요로 하는 개체에서의 병태를 치료하는 방법에 관한 것이고, 이 방법은 상기 개체에게 치료적으로 효과적인 양의 여기서 기술된 조직 충전제, 예를 들어 실크 피브로인 또는 실크 피브로인 단편, 히알루론산 (HA), 및 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 및/또는 폴리프로필렌 글리콜 (PPG)를 포함하는 생체적합성 조직 충전제를 투여하는 것을 포함하고, 여기서 HA의 일부는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 폴리프로필렌 글리콜 (PPG), 및 제 2 알콜 중 하나 이상을 포함하는 하나 이상의 링커 모이어티에 의해 개질 또는 가교결합되고, 여기서 링커 모이어티는 링커의 한 말단에서 HA에 부착된다. 일부 구체예에서, 병태는 피부 병태이다. 일부 구체예에서, 피부 병태는 피부 탈수, 피부 탄성 부족, 피부 거침, 피부 탄력 부족, 피부 튼 선, 피부 튼 자국, 피부 창백, 진피 디보트, 홀쭉한 볼, 얇은 입술, 안구뒤 결함, 얼굴 접힘, 및 주름으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

일부 구체예에서, 본개시물은 이를 필요로 하는 개체에서의 미용 처리 방법에 관한 것이고, 이 방법은 상기 개체에게 효과적인 양의 여기서 기술된 조직 충전제, 예를 들어 실크 피브로인 또는 실크 피브로인 단편, 히알루론산 (HA), 및 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 및/또는 폴리프로필렌 글리콜 (PPG)를 포함하는 생체적합성 조직 충전제를 투여하는 것을 포함하고, 여기서 HA의 일부는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 폴리프로필렌 글리콜 (PPG), 및 제 2 알콜 중 하나 이상을 포함하는 하나 이상의 링커 모이어티에 의해 개질 또는 가교결합되고, 여기서 링커 모이어티는 링커의 한 말단에서 HA에 부착된다.

일부 구체예에서, 조직 충전제는 개체의 진피 영역 내로 투여된다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 확대, 재구성, 질환 치료, 장애 치료, 신체 일부, 영역 또는 면적의 결함 또는 부전의 교정이다. 일부 구체예에서, 방법은 얼굴 확대, 얼굴 재구성, 얼굴 질환 치료, 얼굴 장애 치료, 얼굴 결함 치료, 또는 얼굴 부전 치료이다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 방법은 적어도 약 3 일, 약 7 일, 약 14 일, 약 21 일, 약 28 일, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 또는 약 6 개월 동안 생분해, 생부식, 생흡수, 및/또는 생재흡수에 저항하는 조직 충전제 사용을 포함한다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 방법은 실질적으로 유사한 HA를 포함하는 대조 조직 충전제에 의해 유도된 염증성 반응과 비교하여 감소된 염증성 반응을 유발하는 조직 충전제 투여를 포함하고, 여기서 대조 조직 충전제는 실크 피브로인 또는 실크 피브로인 단편을 포함하지 않는다. 일부 구체예에서, 상기 개체에의 조직 충전제의 투여는 실질적으로 유사한 HA를 포함하는 대조 조직 충전제에 의해 유도된 염증성 반응과 비교하여 감소된 염증성 반응을 유발하는 조직 충전제 투여를 포함하고, 여기서 대조 조직 충전제는 실크 피브로인 또는 실크 피브로인 단편 및/또는 PEG 또는 PPG을 포함하지 않는다. 실질적으로 유사한 HA을 포함하는 대조 조직 충전제에 의해 유도된 콜라겐 생산과 비교하여 증가된 콜라겐 생산을 유발하고, 여기서 대조 조직 충전제는 실크 피브로인 또는 실크 피브로인 단편 및/또는 PEG 또는 PPG을 포함하지 않는다. 일부 구체예에서, 상기 개체에의 조직 충전제의 투여는 실질적으로 유사한 HA을 포함하는 대조 조직 충전제에 의해 유도된 콜라겐 생산과 비교하여 증가된 콜라겐 생산을 유발하고, 여기서 대조 조직 충전제는 실크 피브로인 또는 실크 피브로인 단편을 포함하지 않거나 및/또는 실크 피브로인 또는 실크 피브로인 단편 및/또는 PEG 또는 PPG을 포함하지 않는다.

하나의 구체예에서, 본발명은 다음을 포함하는 생체적합성 조직 충전제에 관한 것이다: 히알루론산 (HA), 카복시메틸 셀룰로오스 (CMC), 전분, 알기네이트, 콘드로이틴-4-설페이트, 콘드로이틴-6-설페이트, 잔탄 검, 키토산, 펙틴, 아가, 카라기난, 및 구아 검으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 글리코자미노글리칸; 및 효소 저해제, 마취제, 의료용 신경독, 항산화제, 항감염제, 항염증제, 자외선 (UV) 광차단제, 염료, 호르몬, 면역억제제, 및 항염증제로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 활성 물질; 여기서 글리코자미노글리칸의 일부는 알칸 또는 알킬 사슬, 에테르 기, 및 2차 알콜 중 하나 이상을 포함하는 가교결합 모이어티에 의해 가교결합되고; 그리고 여기서 가교결합은 가교결합제, 가교결합 전구체, 또는 활성화제를 사용하여 얻어진다. 일부 구체예에서, 글리코자미노글리칸은 히알루론산 (HA)이다. 일부 구체예에서, HA의 총량에 상대적인 가교결합된 HA의 %w/w 양은 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 약 10%, 약 11%, 약 12%, 약 13%, 약 14%, 약 15%, 약 16%, 약 17%, 약 18%, 약 19%, 약 20%, 약 21%, 약 22%, 약 23%, 약 24%, 약 25%, 약 26%, 약 27%, 약 28%, 약 29%, 약 30%, 약 31%, 약 32%, 약 33%, 약 34%, 약 35%, 약 36%, 약 37%, 약 38%, 약 39%, 약 40%, 약 41%, 약 42%, 약 43%, 약 44%, 약 45%, 약 46%, 약 47%, 약 48%, 약 49%, 약 50%, 약 51%, 약 52%, 약 53%, 약 54%, 약 55%, 약 56%, 약 57%, 약 58%, 약 59%, 약 60%, 약 61%, 약 62%, 약 63%, 약 64%, 약 65%, 약 66%, 약 67%, 약 68%, 약 69%, 약 70%, 약 71%, 약 72%, 약 73%, 약 74%, 약 75%, 약 76%, 약 77%, 약 78%, 약 79%, 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 약 100%이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 HA의 가교결합의 정도는 약 1% 및 약 100% 사이이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 HA의 가교결합의 정도는 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 약 10%, 약 11%, 약 12%, 약 13%, 약 14%, 약 15%, 약 16%, 약 17%, 약 18%, 약 19%, 약 20%, 약 21%, 약 22%, 약 23%, 약 24%, 약 25%, 약 26%, 약 27%, 약 28%, 약 29%, 약 30%, 약 31%, 약 32%, 약 33%, 약 34%, 약 35%, 약 36%, 약 37%, 약 38%, 약 39%, 약 40%, 약 41%, 약 42%, 약 43%, 약 44%, 약 45%, 약 46%, 약 47%, 약 48%, 약 49%, 약 50%, 약 51%, 약 52%, 약 53%, 약 54%, 약 55%, 약 56%, 약 57%, 약 58%, 약 59%, 약 60%, 약 61%, 약 62%, 약 63%, 약 64%, 약 65%, 약 66%, 약 67%, 약 68%, 약 69%, 약 70%, 약 71%, 약 72%, 약 73%, 약 74%, 약 75%, 약 76%, 약 77%, 약 78%, 약 79%, 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 약 100%이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 HA의 가교결합의 정도는 약 1% 및 약 15% 사이이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 HA의 가교결합의 정도는 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 약 10%, 약 11%, 약 12%, 약 13%, 약 14%, 및 약 15% 중 하나 이상이다.

일부 구체예에서, 가교결합된 HA는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 사슬을 포함하는 가교결합 모이어티를 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합제 및/또는 가교결합 전구체는 에폭시 기를 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합은 폴리에폭시 링커, 디에폭시 링커, 폴리에폭시-PEG, 디에폭시-PEG, 폴리글리시딜-PEG, 디글리시딜-PEG, 폴리 아크릴레이트 PEG, 디아크릴레이트 PEG, 1,4-비스(2,3-에폭시프로폭시)부탄, 1,4-비스글리시딜옥시부탄, 디비닐 설폰 (DVS), 1,4-부탄디올 디글리시딜 에테르 (BDDE), UV 광, 글루타르알데히드, 1,2-비스(2,3-에폭시프로폭시)에틸렌 (EGDGE), 1,2,7,8-디에폭시옥탄 (DEO), 비스카보디이미드 (BCDI), 펜타에리쓰리톨 테트라글리시딜 에테르 (PETGE), 아디프산 디히드라지드 (ADH), 비스(설포숙신이미딜)수버레이트 (BS), 헥사메틸렌디아민 (HMDA), 1-(2,3-에폭시프로필)-2,3-에폭시시클로헥산, 카보디이미드, 및 그의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 가교결합제, 가교결합 전구체, 또는 활성화제를 사용하여 얻어진다. 일부 구체예에서, 가교결합은 1,4-부탄디올 디글리시딜 에테르 (BDDE), 에틸렌 글리콜 디글리시딜 에테르 (EGDGE), 1,6-헥산디올 디글리시딜 에테르, 폴리에틸렌 글리콜 디글리시딜 에테르, 폴리프로필렌 글리콜 디글리시딜 에테르, 폴리테트라메틸렌 글리콜 디글리시딜 에테르, 네오펜틸 글리콜 디글리시딜 에테르, 폴리글리세롤 폴리글리시딜 에테르, 디글리세롤 폴리글리시딜 에테르, 글리세롤 폴리글리시딜 에테르, 트리-메틸올프로판 폴리글리시딜 에테르, 펜타에리쓰리톨 폴리글리시딜 에테르, 및 솔비톨 폴리글리시딜 에테르로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 다기능성 에폭시 화합물을 사용하여 얻어진다. 일부 구체예에서, 가교결합은 폴리에틸렌 글리콜 디글리시딜 에테르, 디에폭시 PEG, PEG 디글리시딜 에테르, 폴리옥시에틸렌 비스-글리시딜 에테르, PEGDE, 및 PEGDGE로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 가교결합제 및/또는 가교결합 전구체를 사용하여 얻어진다. 일부 구체예에서, 가교결합은 약 500, 약 1000, 약 2000, 또는 약 6000의 평균 Mn를 갖는 폴리에틸렌 글리콜 디글리시딜 에테르를 사용하여 얻어진다. 일부 구체예에서, 가교결합은 2 내지 25 에틸렌 글리콜 기를 갖는 폴리에틸렌 글리콜 디글리시딜 에테르를 사용하여 얻어진다. 일부 구체예에서, 가교결합은 폴리에폭시 실크 피브로인 링커, 디에폭시 실크 피브로인 링커, 폴리에폭시 실크 피브로인 단편 링커, 디에폭시 실크 피브로인 단편 링커, 폴리글리시딜 실크 피브로인 링커, 디글리시딜 실크 피브로인 링커, 폴리글리시딜 실크 피브로인 단편 링커, 및 디글리시딜 실크 피브로인 단편 링커로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 가교결합제 및/또는 가교결합 전구체를 사용하여 얻어진다.

일부 구체예에서, 본발명은 유기 화합물 및/또는 무기 화합물을 추가로 포함하는 조직 충전제에 관한 것이다. 일부 구체예에서, 무기 화합물은 칼슘 히드록시아파타이트를 포함한다. 일부 구체예에서, 칼슘 히드록시아파타이트는 약 1 μm 및 약 100 μm 사이, 약 1 μm 및 약 10 μm 사이, 약 2 μm 및 약 12 μm 사이, 약 3 μm 및 약 10 μm 사이, 약 4 μm 및 약 15 μm 사이, 약 8 μm 및 약 12 μm 사이, 약 5 μm 및 약 10 μm 사이, 약 6 μm 및 약 12 μm 사이, 약 7 μm 및 약 20 μm 사이, 약 9 μm 및 약 18 μm 사이, 또는 약 10 μm 및 약 25 μm 사이 직경을 갖는 입자로서 제제화된다. 일부 구체예에서, 칼슘 히드록시아파타이트의 농도는 약 0.001% 및 약 5% 사이이다. 일부 구체예에서, 칼슘 히드록시아파타이트의 농도는 약 0.001%, 약 0.002%, 약 0.003%, 약 0.004%, 약 0.005%, 약 0.006%, 약 0.007%, 약 0.008%, 약 0.009%, 약 0.01%, 약 0.011%, 약 0.012%, 약 0.013%, 약 0.014%, 약 0.015%, 약 0.016%, 약 0.017%, 약 0.018%, 약 0.019%, 또는 약 0.02%이다. 일부 구체예에서, 칼슘 히드록시아파타이트의 농도는 약 0.05%, 약 0.1%, 약 0.15%, 약 0.2%, 약 0.25%, 약 0.3%, 약 0.35%, 약 0.4%, 약 0.45%, 약 0.5%, 약 0.55%, 약 0.6%, 약 0.65%, 약 0.7%, 약 0.75%, 약 0.8%, 약 0.85%, 약 0.9%, 약 0.95%, 약 1%, 약 1.05%, 약 1.1%, 약 1.15%, 약 1.2%, 약 1.25%, 약 1.3%, 약 1.35%, 약 1.4%, 약 1.45%, 약 1.5%, 약 1.55%, 약 1.6%, 약 1.65%, 약 1.7%, 약 1.75%, 약 1.8%, 약 1.85%, 약 1.9%, 약 1.95%, 또는 약 2%이다. 일부 구체예에서, 유기 화합물은 글리신, L-프롤린, 알라닌, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 시스테인, 글루탐산, 글루타민, 히스티딘, 이소류신, 류신, 라이신, 메티오닌, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신, 및 발린으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산을 포함한다.

일부 구체예에서, 본발명은 HA를 포함하는 조직 충전제에 관한 것이고, 여기서 HA은 스트렙토코쿠스 박테리아, 또는 바실루스서브틸리스 박테리아로부터 얻어진다.

하나의 구체예에서, 본발명은 다음을 포함하는 생체적합성 조직 충전제에 관한 것이다: 히알루론산 (HA), 카복시메틸 셀룰로오스 (CMC), 전분, 알기네이트, 콘드로이틴-4-설페이트, 콘드로이틴-6-설페이트, 잔탄 검, 키토산, 펙틴, 아가, 카라기난, 및 구아 검으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 글리코자미노글리칸; 및 마취제; 여기서 글리코자미노글리칸의 일부는 알칸 또는 알킬 사슬, 에테르 기, 및 2차 알콜 중 하나 이상을 포함하는 가교결합 모이어티에 의해 가교결합되고; 그리고 여기서 가교결합은 가교결합제, 가교결합 전구체, 또는 활성화제를 사용하여 얻어진다. 일부 구체예에서, 마취제는 리도케인이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제 내 마취제의 농도는 약 0.001% 내지 약 5%이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제 내 리도케인의 농도는 약 0.3%이다.

하나의 구체예에서, 본발명은 다음을 포함하는 생체적합성 조직 충전제에 관한 것이다: 히알루론산 (HA), 카복시메틸 셀룰로오스 (CMC), 전분, 알기네이트, 콘드로이틴-4-설페이트, 콘드로이틴-6-설페이트, 잔탄 검, 키토산, 펙틴, 아가, 카라기난, 및 구아 검으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 글리코자미노글리칸; 및 마취제; 여기서 글리코자미노글리칸의 일부는 알칸 또는 알킬 사슬, 에테르 기, 및 2차 알콜 중 하나 이상을 포함하는 가교결합 모이어티에 의해 가교결합되고; 그리고 여기서 가교결합은 가교결합제, 가교결합 전구체, 또는 활성화제를 사용하여 얻어진다; 여기서 조직 충전제는 겔이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 하이드로겔이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 물을 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 조직 충전제 내 HA의 총 농도는 약 10 mg/mL 내지 약 50 mg/mL이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제 내 HA의 총 농도는 약 15 mg/mL, 약 16 mg/mL, 17 mg/mL, 약 18 mg/mL, 약 19 mg/mL, 약 20 mg/mL, 약 21 mg/mL, 약 22 mg/mL, 약 23 mg/mL, 약 24 mg/mL, 약 25 mg/mL, 약 26 mg/mL, 약 27 mg/mL, 약 28 mg/mL, 약 29 mg/mL, 또는 약 30 mg/mL이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제 내 가교결합된 HA의 농도는 약 10 mg/mL 내지 약 50 mg/mL이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제 내 가교결합된 HA의 농도는 약 15 mg/mL, 약 16 mg/mL, 약 17 mg/mL, 약 18 mg/mL, 약 19 mg/mL, 약 20 mg/mL, 약 21 mg/mL, 약 22 mg/mL, 약 23 mg/mL, 약 24 mg/mL, 약 25 mg/mL, 약 26 mg/mL, 약 27 mg/mL, 약 28 mg/mL, 약 29 mg/mL, 또는 약 30 mg/mL이다.

하나의 구체예에서, 본발명은 다음을 포함하는 생체적합성 조직 충전제에 관한 것이다: 히알루론산 (HA), 카복시메틸 셀룰로오스 (CMC), 전분, 알기네이트, 콘드로이틴-4-설페이트, 콘드로이틴-6-설페이트, 잔탄 검, 키토산, 펙틴, 아가, 카라기난, 및 구아 검으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 글리코자미노글리칸; 및 마취제; 여기서 글리코자미노글리칸의 일부는 알칸 또는 알킬 사슬, 에테르 기, 및 2차 알콜 중 하나 이상을 포함하는 가교결합 모이어티에 의해 가교결합되고; 그리고 여기서 가교결합은 가교결합제, 가교결합 전구체, 또는 활성화제를 사용하여 얻어진다; 조직 충전제는 실크 단백질 또는 실크 단백질 단편 (SPF)을 포함한다. 일부 구체예에서, 실크 단백질은 실크 피브로인이다. 일부 구체예에서, 실크 단백질은 세리신이 실질적으로 없는 실크 피브로인이다. 일부 구체예에서, SPF는 약 1 kDa 내지 약 250 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 일부 구체예에서, SPF는 약 5 kDa 내지 약 150 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 일부 구체예에서, SPF는 약 6 kDa 내지 약 17 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 일부 구체예에서, SPF는 약 17 kDa 내지 약 39 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 일부 구체예에서, SPF는 약 39 kDa 내지 약 80 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 일부 구체예에서, SPF는 저 분자량을 가진다. 일부 구체예에서, SPF는 중 분자량을 가진다. 일부 구체예에서, SPF는 고 분자량을 가진다. 일부 구체예에서, 실크 단백질 단편 (SPF)는 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 가진다. 일부 구체예에서, SPF는 최대 60%의 결정성 정도를 가진다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 총량에 상대적인 가교결합된 SPF의 %w/w 양은 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 약 10%, 약 11%, 약 12%, 약 13%, 약 14%, 약 15%, 약 16%, 약 17%, 약 18%, 약 19%, 약 20%, 약 21%, 약 22%, 약 23%, 약 24%, 약 25%, 약 26%, 약 27%, 약 28%, 약 29%, 약 30%, 약 31%, 약 32%, 약 33%, 약 34%, 약 35%, 약 36%, 약 37%, 약 38%, 약 39%, 약 40%, 약 41%, 약 42%, 약 43%, 약 44%, 약 45%, 약 46%, 약 47%, 약 48%, 약 49%, 약 50%, 약 51%, 약 52%, 약 53%, 약 54%, 약 55%, 약 56%, 약 57%, 약 58%, 약 59%, 약 60%, 약 61%, 약 62%, 약 63%, 약 64%, 약 65%, 약 66%, 약 67%, 약 68%, 약 69%, 약 70%, 약 71%, 약 72%, 약 73%, 약 74%, 약 75%, 약 76%, 약 77%, 약 78%, 약 79%, 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 약 100%이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF의 가교결합 정도는 약 1% 및 약 100% 사이이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF의 가교결합 정도는 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 약 10%, 약 11%, 약 12%, 약 13%, 약 14%, 약 15%, 약 16%, 약 17%, 약 18%, 약 19%, 약 20%, 약 21%, 약 22%, 약 23%, 약 24%, 약 25%, 약 26%, 약 27%, 약 28%, 약 29%, 약 30%, 약 31%, 약 32%, 약 33%, 약 34%, 약 35%, 약 36%, 약 37%, 약 38%, 약 39%, 약 40%, 약 41%, 약 42%, 약 43%, 약 44%, 약 45%, 약 46%, 약 47%, 약 48%, 약 49%, 약 50%, 약 51%, 약 52%, 약 53%, 약 54%, 약 55%, 약 56%, 약 57%, 약 58%, 약 59%, 약 60%, 약 61%, 약 62%, 약 63%, 약 64%, 약 65%, 약 66%, 약 67%, 약 68%, 약 69%, 약 70%, 약 71%, 약 72%, 약 73%, 약 74%, 약 75%, 약 76%, 약 77%, 약 78%, 약 79%, 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 약 100%이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF의 가교결합 정도는 약 1% 및 약 15% 사이이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF의 가교결합 정도는 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 약 10%, 약 11%, 약 12%, 약 13%, 약 14%, 및 약 15% 중 하나 이상이다.

하나의 구체예에서, 본발명은 다음을 포함하는 생체적합성 조직 충전제에 관한 것이다: 히알루론산 (HA), 카복시메틸 셀룰로오스 (CMC), 전분, 알기네이트, 콘드로이틴-4-설페이트, 콘드로이틴-6-설페이트, 잔탄 검, 키토산, 펙틴, 아가, 카라기난, 및 구아 검으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 글리코자미노글리칸; 및 마취제; 여기서 글리코자미노글리칸의 일부는 알칸 또는 알킬 사슬, 에테르 기, 및 2차 알콜 중 하나 이상을 포함하는 가교결합 모이어티에 의해 가교결합되고; 그리고 여기서 가교결합은 가교결합제, 가교결합 전구체, 또는 활성화제를 사용하여 얻어진다; 조직 충전제는 실크 단백질 또는 실크 단백질 단편 (SPF)을 포함하고, 여기서 SPF의 일부는 가교결합된다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF는 알칸 또는 알킬 사슬, 및/또는 에테르 기를 포함하는 가교결합 모이어티를 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 사슬을 포함하는 가교결합 모이어티를 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF는 2차 알콜을 포함하는 가교결합 모이어티를 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합은 가교결합제, 가교결합 전구체, 또는 활성화제를 사용하여 얻어진다. 일부 구체예에서, 가교결합제 및/또는 가교결합 전구체는 에폭시 기를 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합은 폴리에폭시 링커, 디에폭시 링커, 폴리에폭시-PEG, 디에폭시-PEG, 폴리글리시딜-PEG, 디글리시딜-PEG, 폴리 아크릴레이트 PEG, 디아크릴레이트 PEG, 1,4-비스(2,3-에폭시프로폭시)부탄, 1,4-비스글리시딜옥시부탄, 디비닐 설폰 (DVS), 1,4-부탄디올 디글리시딜 에테르 (BDDE), UV 광, 글루타르알데히드, 1,2-비스(2,3-에폭시프로폭시)에틸렌 (EGDGE), 1,2,7,8-디에폭시옥탄 (DEO), 비스카보디이미드 (BCDI), 펜타에리쓰리톨 테트라글리시딜 에테르 (PETGE), 아디프산 디히드라지드 (ADH), 비스(설포숙신이미딜)수버레이트 (BS), 헥사메틸렌디아민 (HMDA), 1-(2,3-에폭시프로필)-2,3-에폭시시클로헥산, 카보디이미드, 및 그의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 가교결합제, 가교결합 전구체, 또는 활성화제를 사용하여 얻어진다. 일부 구체예에서, 가교결합은 1,4-부탄디올 디글리시딜 에테르 (BDDE), 에틸렌 글리콜 디글리시딜 에테르 (EGDGE), 1,6-헥산디올 디글리시딜 에테르, 폴리에틸렌 글리콜 디글리시딜 에테르, 폴리프로필렌 글리콜 디글리시딜 에테르, 폴리테트라메틸렌 글리콜 디글리시딜 에테르, 네오펜틸 글리콜 디글리시딜 에테르, 폴리글리세롤 폴리글리시딜 에테르, 디글리세롤 폴리글리시딜 에테르, 글리세롤 폴리글리시딜 에테르, 트리-메틸올프로판 폴리글리시딜 에테르, 펜타에리쓰리톨 폴리글리시딜 에테르, 및 솔비톨 폴리글리시딜 에테르로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 다기능성 에폭시 화합물을 사용하여 얻어진다. 일부 구체예에서, 가교결합은 폴리에틸렌 글리콜 디글리시딜 에테르, 디에폭시 PEG, PEG 디글리시딜 에테르, 폴리옥시에틸렌 비스-글리시딜 에테르, PEGDE, 및 PEGDGE로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 가교결합제 및/또는 가교결합 전구체를 사용하여 얻어진다. 일부 구체예에서, 가교결합은 약 500, 약 1000, 약 2000, 또는 약 6000의 평균 Mn를 갖는 폴리에틸렌 글리콜 디글리시딜 에테르를 사용하여 얻어진다. 일부 구체예에서, 가교결합은 2 내지 25 에틸렌 글리콜 기를 갖는 폴리에틸렌 글리콜 디글리시딜 에테르를 사용하여 얻어진다. 일부 구체예에서, 가교결합은 폴리에폭시 실크 피브로인 링커, 디에폭시 실크 피브로인 링커, 폴리에폭시 실크 피브로인 단편 링커, 디에폭시 실크 피브로인 단편 링커, 폴리글리시딜 실크 피브로인 링커, 디글리시딜 실크 피브로인 링커, 폴리글리시딜 실크 피브로인 단편 링커, 및 디글리시딜 실크 피브로인 단편 링커로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 가교결합제 및/또는 가교결합 전구체를 사용하여 얻어진다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 HA에 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 SPF에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 겔이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 하이드로겔이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 물을 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 조직 충전제 내 SPF의 총 농도는 약 0.1 mg/mL 내지 약 15 mg/mL이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제 내 SPF의 총 농도는 약 0.1 mg/mL, 약 0.5 mg/mL, 약 1 mg/mL, 약 1.5 mg/mL, 약 2 mg/mL, 약 2.5 mg/mL, 약 3 mg/mL, 약 3.5 mg/mL, 약 4 mg/mL, 약 4.5 mg/mL, 약 5 mg/mL, 약 5.5 mg/mL, 약 6 mg/mL, 약 6.5 mg/mL, 약 7 mg/mL, 약 7.5 mg/mL, 약 8 mg/mL, 약 8.5 mg/mL, 약 9 mg/mL, 약 9.5 mg/mL, 약 10 mg/mL, 약 10.5 mg/mL, 약 11 mg/mL, 약 11.5 mg/mL, 약 12 mg/mL, 약 12.5 mg/mL, 약 13 mg/mL, 약 13.5 mg/mL, 약 14 mg/mL, 약 14.5 mg/mL, 또는 약 15 mg/mL이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제 내 가교결합된 SPF의 농도는 약 0.1 mg/mL 내지 약 15 mg/mL이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제 내 가교결합된 SPF의 농도는 약 0.1 mg/mL, 약 0.5 mg/mL, 약 1 mg/mL, 약 1.5 mg/mL, 약 2 mg/mL, 약 2.5 mg/mL, 약 3 mg/mL, 약 3.5 mg/mL, 약 4 mg/mL, 약 4.5 mg/mL, 약 5 mg/mL, 약 5.5 mg/mL, 약 6 mg/mL, 약 6.5 mg/mL, 약 7 mg/mL, 약 7.5 mg/mL, 약 8 mg/mL, 약 8.5 mg/mL, 약 9 mg/mL, 약 9.5 mg/mL, 약 10 mg/mL, 약 10.5 mg/mL, 약 11 mg/mL, 약 11.5 mg/mL, 약 12 mg/mL, 약 12.5 mg/mL, 약 13 mg/mL, 약 13.5 mg/mL, 약 14 mg/mL, 약 14.5 mg/mL, 또는 약 15 mg/mL이다.

하나의 구체예에서, 본발명은 다음을 포함하는 생체적합성 조직 충전제에 관한 것이다: 히알루론산 (HA), 카복시메틸 셀룰로오스 (CMC), 전분, 알기네이트, 콘드로이틴-4-설페이트, 콘드로이틴-6-설페이트, 잔탄 검, 키토산, 펙틴, 아가, 카라기난, 및 구아 검으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 글리코자미노글리칸; 및 마취제; 여기서 글리코자미노글리칸의 일부는 알칸 또는 알킬 사슬, 에테르 기, 및 2차 알콜 중 하나 이상을 포함하는 가교결합 모이어티에 의해 가교결합되고; 그리고 여기서 가교결합은 가교결합제, 가교결합 전구체, 또는 활성화제를 사용하여 얻어진다; 조직 충전제는 실크 단백질 또는 실크 단백질 단편 (SPF)을 임의로 포함하고, 여기서 SPF의 일부는 가교결합된다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 진피 충전제이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 생분해성이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 주사가능이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 약 25 Pa 내지 약 1500 Pa의 저장 탄성률 (G')을 가진다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 약 25 Pa, 약 26 Pa, 약 27 Pa, 약 28 Pa, 약 29 Pa, 약 30 Pa, 약 31 Pa, 약 32 Pa, 약 33 Pa, 약 34 Pa, 약 35 Pa, 약 36 Pa, 약 37 Pa, 약 38 Pa, 약 39 Pa, 약 40 Pa, 약 41 Pa, 약 42 Pa, 약 43 Pa, 약 44 Pa, 약 45 Pa, 약 46 Pa, 약 47 Pa, 약 48 Pa, 약 49 Pa, 약 50 Pa, 약 51 Pa, 약 52 Pa, 약 53 Pa, 약 54 Pa, 약 55 Pa, 약 56 Pa, 약 57 Pa, 약 58 Pa, 약 59 Pa, 약 60 Pa, 약 61 Pa, 약 62 Pa, 약 63 Pa, 약 64 Pa, 약 65 Pa, 약 66 Pa, 약 67 Pa, 약 68 Pa, 약 69 Pa, 약 70 Pa, 약 71 Pa, 약 72 Pa, 약 73 Pa, 약 74 Pa, 약 75 Pa, 약 76 Pa, 약 77 Pa, 약 78 Pa, 약 79 Pa, 약 80 Pa, 약 81 Pa, 약 82 Pa, 약 83 Pa, 약 84 Pa, 약 85 Pa, 약 86 Pa, 약 87 Pa, 약 88 Pa, 약 89 Pa, 약 90 Pa, 약 91 Pa, 약 92 Pa, 약 93 Pa, 약 94 Pa, 약 95 Pa, 약 96 Pa, 약 97 Pa, 약 98 Pa, 약 99 Pa, 약 100 Pa, 약 101 Pa, 약 102 Pa, 약 103 Pa, 약 104 Pa, 약 105 Pa, 약 106 Pa, 약 107 Pa, 약 108 Pa, 약 109 Pa, 약 110 Pa, 약 111 Pa, 약 112 Pa, 약 113 Pa, 약 114 Pa, 약 115 Pa, 약 116 Pa, 약 117 Pa, 약 118 Pa, 약 119 Pa, 약 120 Pa, 약 121 Pa, 약 122 Pa, 약 123 Pa, 약 124 Pa, 또는 약 125 Pa의 저장 탄성률 (G')을 가진다. 일부 구체예에서, 여기서 G'는 약 0.1 내지 약 10 Hz의 진동 스트레스에 의해 측정된다. 일부 구체예에서, G'는 약 1 Hz의 진동 스트레스에 의해 측정된다. 일부 구체예에서, G'는 약 5 Hz의 진동 스트레스에 의해 측정된다. 일부 구체예에서, G'는 약 10 Hz의 진동 스트레스에 의해 측정된다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 약 1 Paㆍs 내지 약 10 Paㆍs 복합 점도를 가진다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 약 1 Paㆍs, 약 1.5 Paㆍs, 약 2 Paㆍs, 약 2.5 Paㆍs, 약 3 Paㆍs, 약 3.5 Paㆍs, 약 4 Paㆍs, 약 4.5 Paㆍs, 약 5 Paㆍs, 약 5.5 Paㆍs, 약 6 Paㆍs, 약 6.5 Paㆍs, 약 7 Paㆍs, 약 7.5 Paㆍs, 약 8 Paㆍs, 약 8.5 Paㆍs, 약 9 Paㆍs, 약 9.5 Paㆍs, 또는 약 10 Paㆍs의 복합 점도를 가진다. 일부 구체예에서, 복합 점도는 약 0.1 내지 약 10 Hz의 진동 스트레스에 의해 측정된다. 일부 구체예에서, 복합 점도는 약 1 Hz의 진동 스트레스에 의해 측정된다. 일부 구체예에서, 복합 점도는 약 5 Hz의 진동 스트레스에 의해 측정된다.

하나의 구체예에서, 본발명은 이를 필요로 하는 개체에서의 병태를 치료하는 방법, 및/또는 이를 필요로 하는 개체에서의 미용 처리 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 상기 개체에게 치료적으로 효과적인 양의 다음을 포함하는 생체적합성 조직 충전제를 투여하는 것을 포함한다: 히알루론산 (HA), 카복시메틸 셀룰로오스 (CMC), 전분, 알기네이트, 콘드로이틴-4-설페이트, 콘드로이틴-6-설페이트, 잔탄 검, 키토산, 펙틴, 아가, 카라기난, 및 구아 검으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 글리코자미노글리칸; 및 마취제; 여기서 글리코자미노글리칸의 일부는 알칸 또는 알킬 사슬, 에테르 기, 및 2차 알콜 중 하나 이상을 포함하는 가교결합 모이어티에 의해 가교결합되고; 그리고 여기서 가교결합은 가교결합제, 가교결합 전구체, 또는 활성화제를 사용하여 얻어진다; 조직 충전제는실크 단백질 또는 실크 단백질 단편 (SPF)을 임의로 포함하고, 여기서 SPF의 일부는 가교결합된다. 일부 구체예에서, 병태는 피부 병태이다. 일부 구체예에서, 피부 병태는 피부 탈수, 피부 탄성 부족, 피부 거침, 피부 탄력 부족, 피부 튼 선, 피부 튼 자국, 피부 창백, 진피 디보트, 홀쭉한 볼, 얇은 입술, 안구뒤 결함, 얼굴 접힘, 및 주름으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 구체예에서 조직 충전제는 개체의 진피 영역 내로 투여된다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 확대, 재구성, 질환 치료, 장애 치료, 신체 일부, 영역 또는 면적의 결함 또는 부전의 교정이다. 일부 구체예에서, 방법은 얼굴 확대, 얼굴 재구성, 얼굴 질환 치료, 얼굴 장애 치료, 얼굴 결함 치료, 또는 얼굴 부전 치료이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 적어도 약 3 일, 약 7 일, 약 14 일, 약 21 일, 약 28 일, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 또는 약 6 개월 동안 생분해, 생부식, 생흡수, 및/또는 생재흡수에 저항한다. 일부 구체예에서, 상기 개체에의 조직 충전제의 투여는 다당류 및 리도케인을 포함하는 대조 조직 충전제에 의해 유도된 염증성 반응과 비교하여 감소된 염증성 반응을 유발하고, 여기서 대조 조직 충전제는 실크 단백질 단편 (SPF)을 포함하지 않는다. 일부 구체예에서, 상기 개체에의 조직 충전제의 투여는 다당류 및 리도케인을 포함하는 대조 조직 충전제에 의해 유도된 콜라겐 생산과 비교하여 증가된 콜라겐 생산을 유발하고, 여기서 대조 조직 충전제는 실크 단백질 단편 (SPF)을 포함하지 않는다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 생체적합성 조직 충전제에 관한 것이다. 일부 구체예에서, 다당류는 히알루론산 (HA)이다. 구체예에서, 본발명은 실크 및 히알루론산으로부터 제조될 수 있는 조직 충전제를 포함한다.

일부 구체예에서, 본발명은 약 1 kDa 내지 약 250 kDa 범위의 평균 분자량을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF)를 포함하는 생체적합성 조직 충전제에 관한 것이다. 일부 구체예에서, 본발명은 약 5 kDa 내지 약 150 kDa 범위의 평균 분자량을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF)를 포함하는 생체적합성 조직 충전제에 관한 것이다. 일부 구체예에서, SPF는 약 6 kDa 내지 약 17 kDa 범위의 평균 분자량을 가진다. 일부 구체예에서, SPF는 약 17 kDa 내지 약 39 kDa 범위의 평균 분자량을 가진다. 일부 구체예에서, SPF는 약 39 kDa 내지 약 80 kDa 범위의 평균 분자량을 가진다. 일부 구체예에서, SPF는 약 80 kDa 내지 약 150 kDa 범위의 평균 분자량을 가진다.

일부 구체예에서, 본발명은 최대 약 0% 내지 100% SPF와 가교결합된 실크 단백질 단편 (SPF)를 포함하는 생체적합성 조직 충전제에 관한 것이다. 일부 구체예에서, SPF는 가교결합제 가령 BDDE, 또는 여기서 기술된 다른 가교결합제 중 하나를 사용하여 SPF에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 가교결합의 정도는 최대 약 100%이다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 히알루론산 (HA)를 포함하는 생체적합성 조직 충전제에 관한 것이고, 여기서 SPF의 최대 약 0% 내지 100%는 SPF에 가교결합되고, SPF는 가교결합제 가령 BDDE, 또는 여기서 기술된 다른 가교결합제 중 하나를 사용하여 SPF에 가교결합되고, SPF 가교결합의 정도는 최대 약 100%이다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 히알루론산 (HA)를 포함하는 생체적합성 조직 충전제에 관한 것이고, 여기서 HA의 최대 100%는 가교결합제 가령 BDDE, 또는 여기서 기술된 다른 가교결합제 중 하나를 사용하여 HA에 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 최대 약 100%는 SPF에 가교결합되고, 여기서 SPF는 가교결합제 가령 BDDE, 또는 여기서 기술된 다른 가교결합제 중 하나를 사용하여 SPF에 가교결합되고, SPF 가교결합의 정도는 최대 약 100%이다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 히알루론산 (HA)를 포함하는 생체적합성 조직 충전제에 관한 것이고, 여기서 HA의 0% 내지 100%는 비-가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 최대 약 100%는 가교결합되고, 여기서 SPF는 가교결합제 가령 BDDE, 또는 여기서 기술된 다른 가교결합제 중 하나를 사용하여 가교결합되고, SPF 가교결합의 정도는 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 모든 HA는 비-가교결합된다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 히알루론산 (HA)를 포함하는 생체적합성 조직 충전제에 관한 것이고, 여기서 SPF의 0% 내지 100%는 HA에 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF 및 HA는 가교결합제 가령 BDDE, 또는 여기서 기술된 가교결합제 중 하나를 사용하여 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF-HA 가교결합의 정도는 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, HA의 최대 100%는 HA에 가교결합된다. 일부 구체예에서, HA는 가교결합제 가령 BDDE, 또는 여기서 기술된 가교결합제 중 하나를 사용하여 HA에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 적어도 0.1%의 HA는 비-가교결합된다. 일부 구체예에서, 모든 HA는 비-가교결합된다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 히알루론산 (HA)를 포함하는 생체적합성 조직 충전제에 관한 것이고, 여기서 적어도 0.1%의 HA는 비-가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 최대 약 100%는 가교결합되고, 여기서 SPF는 가교결합제 가령 BDDE, 또는 여기서 기술된 다른 가교결합제 중 하나를 사용하여 가교결합되고, SPF 가교결합의 정도는 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 모든 HA는 비-가교결합된다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 히알루론산 (HA)를 포함하는 생체적합성 조직 충전제에 관한 것이고, 여기서 적어도 0.1%의 SPF는 HA에 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF 및 HA는 가교결합제 가령 BDDE, 또는 여기서 기술된 가교결합제 중 하나를 사용하여 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF-HA 가교결합의 정도는 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, HA의 최대 100%는 HA에 가교결합된다. 일부 구체예에서, HA는 가교결합제 가령 BDDE, 또는 여기서 기술된 가교결합제 중 하나를 사용하여 HA에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 적어도 0.1%의 HA는 비-가교결합된다. 일부 구체예에서, 모든 HA는 비-가교결합된다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 생체적합성 조직 충전제에 관한 것이고, 여기서 SPF는 세리신이 실질적으로 없다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 생체적합성 겔 조직 충전제에 관한 것이다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 생체적합성 하이드로겔 조직 충전제에 관한 것이다

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 다당류, 및 물을 포함하는 생체적합성 조직 충전제에 관한 것이다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 생체적합성 조직 충전제에 관한 것이고, 여기서 SPF는 약 0% 내지 약 60%의 결정성 정도를 가진다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는, 및 활성 물질을 추가로 포함하는 생체적합성 조직 충전제에 관한 것이다. 일부 구체예에서, 활성 물질은 효소 저해제, 마취제, 의료용 신경독, 항산화제, 항감염제, 혈관확장제, 반사제, 항염증제, 자외선 (UV) 광차단제, 염료, 호르몬, 면역억제제, 또는 항염증제일 수 있다. 하나의 구체예에서, 마취제는 리도케인이다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 주사가능 생체적합성 조직 충전제에 관한 것이다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 생체적합성 조직 충전제에 관한 것이다. 일부 구체예에서, G'는 약 0.1 내지 약 10 Hz의 진동 스트레스에 의해 측정된다. 하나의 구체예에서, G'는 약 1 Hz의 진동 스트레스에 의해 측정된다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 생체적합성 조직 충전제를 제조하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 SPF 용액을 제공하는 것, 및 상기 용액에 프로톤 부여 종일 수 있는 겔화 증가제를 부가하는 것을 포함한다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 생체적합성 조직 충전제를 제조하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 SPF 용액을 제공하는 것, 및 상기 용액을 기계적 자극으로 처리하는 것을 포함한다.

하나의 구체예에서, 본발명은 이를 필요로 하는 개체에서의 병태를 치료하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 상기 개체에게 치료적으로 효과적인 양의 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 생체적합성 조직 충전제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 병태는 피부 병태이다. 일부 구체예에서, 피부 병태는 피부 탈수, 피부 탄성 부족, 피부 거침, 피부 탄력 부족, 피부 튼 선, 피부 튼 자국, 피부 창백, 진피 디보트, 홀쭉한 볼, 홀쭉한 관자놀이, 얇은 입술, 안구뒤 결함, 얼굴 접힘, 또는 주름일 수 있다.

하나의 구체예에서, 본발명은 이를 필요로 하는 개체에서의 미용 처리 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 상기 개체에게 효과적인 양의 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 생체적합성 조직 충전제를 투여하는 것을 포함한다.

일부 구체예에서, 본발명의 방법은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 생체적합성 조직 충전제를, 개체의 진피 영역 내로 투여하는 것을 포함한다.

하나의 구체예에서, 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 생체적합성 조직 충전제를 투여하는 것을 포함하는 본발명의 방법은, 확대, 재구성, 질환 치료, 장애 치료, 신체 일부, 영역 또는 면적의 결함 또는 부전의 교정일 수 있다.

하나의 구체예에서, 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 생체적합성 조직 충전제를 투여하는 것을 포함하는 본발명의 방법은, 얼굴 확대, 얼굴 재구성, 얼굴 질환 치료, 얼굴 장애 치료, 얼굴 결함 치료, 또는 얼굴 부전 치료일 수 있다.

하나의 구체예에서, 본발명의 방법에 따라서 투여된, 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 생체적합성 조직 충전제는, 투여 후 적어도 약 3 일 동안 생분해, 생흡수, 및/또는 생재흡수에 저항한다.

하나의 구체예에서, 본발명은 생체적합성 조직 충전제, 예를 들어 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 진피 충전제에 관한 것이고, SPF 약 1 kDa 내지 약 250 kDa, 약 5 kDa 내지 약 150 kDa, 약 6 kDa 내지 약 17 kDa, 약 17 kDa 내지 약 39 kDa, 또는 약 39 kDa 내지 약 80 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 생분해성이다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 SPF에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 다당류의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 가교결합 모이어티, 예를 들어, 에폭시 유래된 가교결합 모이어티를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 자동-가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 가교결합 다당류의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 다당류는 히알루론산 (HA)이다. 일부 구체예에서, SPF는 세리신이 실질적으로 없다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 물을 추가로 포함한다.

하나의 구체예에서, 본발명은 생체적합성 조직 충전제, 예를 들어 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 진피 충전제에 관한 것이고, SPF는 저 분자량, 중 분자량, 및/또는 고 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 생분해성이다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 SPF에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 다당류의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 가교결합 모이어티, 예를 들어, 에폭시 유래된 가교결합 모이어티를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 자동-가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 가교결합 다당류의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 다당류는 히알루론산 (HA)이다. 일부 구체예에서, SPF는 세리신이 실질적으로 없다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 물을 추가로 포함한다.

하나의 구체예에서, 본발명은 생체적합성 조직 충전제, 예를 들어 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 진피 충전제에 관한 것이고, SPF는 약 1 kDa 내지 약 250 kDa, 약 5 kDa 내지 약 150 kDa, 약 6 kDa 내지 약 17 kDa, 약 17 kDa 내지 약 39 kDa, 또는 약 39 kDa 내지 약 80 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 생분해성이다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 SPF에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 다당류의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 가교결합은 화학적 결합 가교결합을 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 제로-길이 가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 자동-가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 가교결합 다당류의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 다당류는 히알루론산 (HA)이다. 일부 구체예에서, SPF는 세리신이 실질적으로 없다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 물을 추가로 포함한다.

하나의 구체예에서, 본발명은 생체적합성 조직 충전제, 예를 들어 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 진피 충전제에 관한 것이고, SPF는 저 분자량, 중 분자량, 및/또는 고 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 생분해성이다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 SPF에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 다당류의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 가교결합은 화학적 결합 가교결합을 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 제로-길이 가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 자동-가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 가교결합 다당류의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 다당류는 히알루론산 (HA)이다. 일부 구체예에서, SPF는 세리신이 실질적으로 없다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 물을 추가로 포함한다.

일부 구체예에서, SPF의 총량에 상대적인 가교결합된 SPF의 %w/w 양은 최대 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 약 10%, 약 11%, 약 12%, 약 13%, 약 14%, 약 15%, 약 16%, 약 17%, 약 18%, 약 19%, 약 20%, 약 21%, 약 22%, 약 23%, 약 24%, 약 25%, 약 26%, 약 27%, 약 28%, 약 29%, 약 30%, 약 31%, 약 32%, 약 33%, 약 34%, 약 35%, 약 36%, 약 37%, 약 38%, 약 39%, 약 40%, 약 41%, 약 42%, 약 43%, 약 44%, 약 45%, 약 46%, 약 47%, 약 48%, 약 49%, 약 50%, 약 51%, 약 52%, 약 53%, 약 54%, 약 55%, 약 56%, 약 57%, 약 58%, 약 59%, 약 60%, 약 61%, 약 62%, 약 63%, 약 64%, 약 65%, 약 66%, 약 67%, 약 68%, 약 69%, 약 70%, 약 71%, 약 72%, 약 73%, 약 74%, 약 75%, 약 76%, 약 77%, 약 78%, 약 79%, 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 약 100%이다.

일부 구체예에서, SPF의 가교결합 정도는 최대 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 약 10%, 약 11%, 약 12%, 약 13%, 약 14%, 약 15%, 약 16%, 약 17%, 약 18%, 약 19%, 약 20%, 약 21%, 약 22%, 약 23%, 약 24%, 약 25%, 약 26%, 약 27%, 약 28%, 약 29%, 약 30%, 약 31%, 약 32%, 약 33%, 약 34%, 약 35%, 약 36%, 약 37%, 약 38%, 약 39%, 약 40%, 약 41%, 약 42%, 약 43%, 약 44%, 약 45%, 약 46%, 약 47%, 약 48%, 약 49%, 약 50%, 약 51%, 약 52%, 약 53%, 약 54%, 약 55%, 약 56%, 약 57%, 약 58%, 약 59%, 약 60%, 약 61%, 약 62%, 약 63%, 약 64%, 약 65%, 약 66%, 약 67%, 약 68%, 약 69%, 약 70%, 약 71%, 약 72%, 약 73%, 약 74%, 약 75%, 약 76%, 약 77%, 약 78%, 약 79%, 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 약 100%이다.

일부 구체예에서, HA의 총량에 상대적인 가교결합된 HA의 %w/w 양은 최대 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 약 10%, 약 11%, 약 12%, 약 13%, 약 14%, 약 15%, 약 16%, 약 17%, 약 18%, 약 19%, 약 20%, 약 21%, 약 22%, 약 23%, 약 24%, 약 25%, 약 26%, 약 27%, 약 28%, 약 29%, 약 30%, 약 31%, 약 32%, 약 33%, 약 34%, 약 35%, 약 36%, 약 37%, 약 38%, 약 39%, 약 40%, 약 41%, 약 42%, 약 43%, 약 44%, 약 45%, 약 46%, 약 47%, 약 48%, 약 49%, 약 50%, 약 51%, 약 52%, 약 53%, 약 54%, 약 55%, 약 56%, 약 57%, 약 58%, 약 59%, 약 60%, 약 61%, 약 62%, 약 63%, 약 64%, 약 65%, 약 66%, 약 67%, 약 68%, 약 69%, 약 70%, 약 71%, 약 72%, 약 73%, 약 74%, 약 75%, 약 76%, 약 77%, 약 78%, 약 79%, 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 약 100%이다.

일부 구체예에서, HA의 가교결합 정도는 최대 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 약 10%, 약 11%, 약 12%, 약 13%, 약 14%, 약 15%, 약 16%, 약 17%, 약 18%, 약 19%, 약 20%, 약 21%, 약 22%, 약 23%, 약 24%, 약 25%, 약 26%, 약 27%, 약 28%, 약 29%, 약 30%, 약 31%, 약 32%, 약 33%, 약 34%, 약 35%, 약 36%, 약 37%, 약 38%, 약 39%, 약 40%, 약 41%, 약 42%, 약 43%, 약 44%, 약 45%, 약 46%, 약 47%, 약 48%, 약 49%, 약 50%, 약 51%, 약 52%, 약 53%, 약 54%, 약 55%, 약 56%, 약 57%, 약 58%, 약 59%, 약 60%, 약 61%, 약 62%, 약 63%, 약 64%, 약 65%, 약 66%, 약 67%, 약 68%, 약 69%, 약 70%, 약 71%, 약 72%, 약 73%, 약 74%, 약 75%, 약 76%, 약 77%, 약 78%, 약 79%, 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 약 100%이다.

하나의 구체예에서, 본발명은 생체적합성 조직 충전제, 예를 들어 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 진피 충전제에 관한 것이고, SPF는 약 1 kDa 내지 약 250 kDa, 약 5 kDa 내지 약 150 kDa, 약 6 kDa 내지 약 17 kDa, 약 17 kDa 내지 약 39 kDa, 또는 약 39 kDa 내지 약 80 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 생분해성이다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 SPF에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 다당류의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 가교결합은 화학적 결합 가교결합을 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 제로-길이 가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 자동-가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 가교결합 다당류의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 다당류는 히알루론산 (HA)이다. 일부 구체예에서, 가교결합은 가교결합제, 가교결합 전구체, 또는 활성화제를 사용하여 얻어진다. 일부 구체예에서, 가교결합제 및/또는 가교결합 전구체는 에폭시 기를 포함한다. 일부 구체예에서, SPF는 세리신이 실질적으로 없다.

하나의 구체예에서, 본발명은 생체적합성 조직 충전제, 예를 들어 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 진피 충전제에 관한 것이고, SPF는 저 분자량, 중 분자량, 및/또는 고 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 생분해성이다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 SPF에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 다당류의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 가교결합은 화학적 결합 가교결합을 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 제로-길이 가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 자동-가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 가교결합 다당류의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 다당류는 히알루론산 (HA)이다. 일부 구체예에서, 가교결합은 가교결합제, 가교결합 전구체, 또는 활성화제를 사용하여 얻어진다. 일부 구체예에서, 가교결합제 및/또는 가교결합 전구체는 에폭시 기를 포함한다. 일부 구체예에서, SPF는 세리신이 실질적으로 없다.

하나의 구체예에서, 본발명은 생체적합성 조직 충전제, 예를 들어 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 진피 충전제에 관한 것이고, SPF는 약 1 kDa 내지 약 250 kDa, 약 5 kDa 내지 약 150 kDa, 약 6 kDa 내지 약 17 kDa, 약 17 kDa 내지 약 39 kDa, 또는 약 39 kDa 내지 약 80 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 생분해성이다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 SPF에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 다당류의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 가교결합은 화학적 결합 가교결합을 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 제로-길이 가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 자동-가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 가교결합 다당류의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 다당류는 히알루론산 (HA)이다. 일부 구체예에서, 가교결합은 1,4-비스(2,3-에폭시프로폭시)부탄, 1,4-비스글리시딜옥시부탄, 디비닐 설폰 (DVS), 1,4-부탄디올 디글리시딜 에테르 (BDDE), UV 광, 글루타르알데히드, 1,2-비스(2,3-에폭시프로폭시)에틸렌 (EGDGE), 1,2,7,8-디에폭시옥탄 (DEO), 비스카보디이미드 (BCDI), 펜타에리쓰리톨 테트라글리시딜 에테르 (PETGE), 아디프산 디히드라지드 (ADH), 비스(설포숙신이미딜)수버레이트 (BS), 헥사메틸렌디아민 (HMDA), 1-(2,3-에폭시프로필)-2,3-에폭시시클로헥산, 카보디이미드, 및 그의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 가교결합제, 가교결합 전구체, 또는 활성화제를 사용하여 얻어진다. 일부 구체예에서, SPF는 세리신이 실질적으로 없다.

하나의 구체예에서, 본발명은 생체적합성 조직 충전제, 예를 들어 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 진피 충전제에 관한 것이고, SPF는 저 분자량, 중 분자량, 및/또는 고 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 생분해성이다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 SPF에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 다당류의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 가교결합은 화학적 결합 가교결합을 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 제로-길이 가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 자동-가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 가교결합 다당류의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 다당류는 히알루론산 (HA)이다. 일부 구체예에서, 가교결합은 1,4-비스(2,3-에폭시프로폭시)부탄, 1,4-비스글리시딜옥시부탄, 디비닐 설폰 (DVS), 1,4-부탄디올 디글리시딜 에테르 (BDDE), UV 광, 글루타르알데히드, 1,2-비스(2,3-에폭시프로폭시)에틸렌 (EGDGE), 1,2,7,8-디에폭시옥탄 (DEO), 비스카보디이미드 (BCDI), 펜타에리쓰리톨 테트라글리시딜 에테르 (PETGE), 아디프산 디히드라지드 (ADH), 비스(설포숙신이미딜)수버레이트 (BS), 헥사메틸렌디아민 (HMDA), 1-(2,3-에폭시프로필)-2,3-에폭시시클로헥산, 카보디이미드, 및 그의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 가교결합제, 가교결합 전구체, 또는 활성화제를 사용하여 얻어진다. 일부 구체예에서, SPF는 세리신이 실질적으로 없다.

하나의 구체예에서, 본발명은 생체적합성 조직 충전제 겔, 예를 들어, 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 진피 충전제 겔에 관한 것이고, SPF는 약 1 kDa 내지 약 250 kDa, 약 5 kDa 내지 약 150 kDa, 약 6 kDa 내지 약 17 kDa, 약 17 kDa 내지 약 39 kDa, 또는 약 39 kDa 내지 약 80 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 생분해성이다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 SPF에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 다당류의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 가교결합은 화학적 결합 가교결합을 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 제로-길이 가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 자동-가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 가교결합 다당류의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 다당류는 히알루론산 (HA)이다. 일부 구체예에서, 겔은 물을 추가로 포함한다.

하나의 구체예에서, 본발명은 생체적합성 조직 충전제 겔, 예를 들어, 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 진피 충전제 겔에 관한 것이고, SPF는 저 분자량, 중 분자량, 및/또는 고 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 생분해성이다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 SPF에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 다당류의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 가교결합은 화학적 결합 가교결합을 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 제로-길이 가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 자동-가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 가교결합 다당류의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 다당류는 히알루론산 (HA)이다. 일부 구체예에서, 겔은 물을 추가로 포함한다.

하나의 구체예에서, 본발명은 생체적합성 조직 충전제 하이드로겔, 예를 들어, 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 진피 충전제 하이드로겔에 관한 것이고, SPF는 약 1 kDa 내지 약 250 kDa, 약 5 kDa 내지 약 150 kDa, 약 6 kDa 내지 약 17 kDa, 약 17 kDa 내지 약 39 kDa, 또는 약 39 kDa 내지 약 80 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 생분해성이다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 SPF에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 다당류의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 가교결합은 화학적 결합 가교결합을 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 제로-길이 가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 자동-가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 가교결합 다당류의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 다당류는 히알루론산 (HA)이다. 일부 구체예에서, 하이드로겔은 물을 추가로 포함한다.

하나의 구체예에서, 본발명은 생체적합성 조직 충전제 하이드로겔, 예를 들어, 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 진피 충전제 하이드로겔에 관한 것이고, SPF는 저 분자량, 중 분자량, 및/또는 고 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 생분해성이다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 SPF에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 다당류의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 가교결합은 화학적 결합 가교결합을 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 제로-길이 가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 자동-가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 가교결합 다당류의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 다당류는 히알루론산 (HA)이다. 일부 구체예에서, 하이드로겔은 물을 추가로 포함한다.

하나의 구체예에서, 본발명은 생체적합성 조직 충전제, 예를 들어 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 진피 충전제에 관한 것이고, SPF는 약 1 kDa 내지 약 250 kDa, 약 5 kDa 내지 약 150 kDa, 약 6 kDa 내지 약 17 kDa, 약 17 kDa 내지 약 39 kDa, 또는 약 39 kDa 내지 약 80 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 생분해성이다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 SPF에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 다당류의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 가교결합은 화학적 결합 가교결합을 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 제로-길이 가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 자동-가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 가교결합 다당류의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 다당류는 히알루론산 (HA)이다. 일부 구체예에서, SPF는 최대 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 약 10%, 약 11%, 약 12%, 약 13%, 약 14%, 약 15%, 약 16%, 약 17%, 약 18%, 약 19%, 약 20%, 약 21%, 약 22%, 약 23%, 약 24%, 약 25%, 약 26%, 약 27%, 약 28%, 약 29%, 약 30%, 약 31%, 약 32%, 약 33%, 약 34%, 약 35%, 약 36%, 약 37%, 약 38%, 약 39%, 약 40%, 약 41%, 약 42%, 약 43%, 약 44%, 약 45%, 약 46%, 약 47%, 약 48%, 약 49%, 약 50%, 약 51%, 약 52%, 약 53%, 약 54%, 약 55%, 약 56%, 약 57%, 약 58%, 약 59%, 약 60%, 또는 60% 초과의 결정성 정도를 가진다.

하나의 구체예에서, 본발명은 생체적합성 조직 충전제, 예를 들어 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 진피 충전제에 관한 것이고, SPF는 저 분자량, 중 분자량, 및/또는 고 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 생분해성이다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 SPF에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 다당류의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 가교결합은 화학적 결합 가교결합을 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 제로-길이 가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 자동-가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 가교결합 다당류의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 다당류는 히알루론산 (HA)이다. 일부 구체예에서, SPF는 최대 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 약 10%, 약 11%, 약 12%, 약 13%, 약 14%, 약 15%, 약 16%, 약 17%, 약 18%, 약 19%, 약 20%, 약 21%, 약 22%, 약 23%, 약 24%, 약 25%, 약 26%, 약 27%, 약 28%, 약 29%, 약 30%, 약 31%, 약 32%, 약 33%, 약 34%, 약 35%, 약 36%, 약 37%, 약 38%, 약 39%, 약 40%, 약 41%, 약 42%, 약 43%, 약 44%, 약 45%, 약 46%, 약 47%, 약 48%, 약 49%, 약 50%, 약 51%, 약 52%, 약 53%, 약 54%, 약 55%, 약 56%, 약 57%, 약 58%, 약 59%, 약 60%, 또는 60% 초과의 결정성 정도를 가진다.

하나의 구체예에서, 본발명은 생체적합성 조직 충전제, 예를 들어 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 진피 충전제에 관한 것이고, SPF는 약 1 kDa 내지 약 250 kDa, 약 5 kDa 내지 약 150 kDa, 약 6 kDa 내지 약 17 kDa, 약 17 kDa 내지 약 39 kDa, 또는 약 39 kDa 내지 약 80 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 생분해성이다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 SPF에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 다당류의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 가교결합은 화학적 결합 가교결합을 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 제로-길이 가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 자동-가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 가교결합 다당류의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 다당류는 히알루론산 (HA)이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 활성 물질을 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 활성 물질은 효소 저해제, 마취제, 의료용 신경독, 항산화제, 항감염제, 항염증제, 자외선 (UV) 광차단제, 염료, 호르몬, 면역억제제, 및 항염증제로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 마취제는 리도케인이다.

하나의 구체예에서, 본발명은 생체적합성 조직 충전제, 예를 들어 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 진피 충전제에 관한 것이고, SPF는 저 분자량, 중 분자량, 및/또는 고 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 생분해성이다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 SPF에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 다당류의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 가교결합은 화학적 결합 가교결합을 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 제로-길이 가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 자동-가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 가교결합 다당류의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 다당류는 히알루론산 (HA)이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 활성 물질을 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 활성 물질은 효소 저해제, 마취제, 의료용 신경독, 항산화제, 항감염제, 항염증제, 자외선 (UV) 광차단제, 염료, 호르몬, 면역억제제, 및 항염증제로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 마취제는 리도케인이다.

하나의 구체예에서, 본발명은 생체적합성 주사가능 조직 충전제, 예를 들어, 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 주사가능 진피 충전제에 관한 것이고, SPF는 약 1 kDa 내지 약 250 kDa, 약 5 kDa 내지 약 150 kDa, 약 6 kDa 내지 약 17 kDa, 약 17 kDa 내지 약 39 kDa, 또는 약 39 kDa 내지 약 80 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 생분해성이다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 SPF에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 다당류의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 가교결합은 화학적 결합 가교결합을 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 제로-길이 가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 자동-가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 가교결합 다당류의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 다당류는 히알루론산 (HA)이다.

하나의 구체예에서, 본발명은 생체적합성 주사가능 조직 충전제, 예를 들어, 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 주사가능 진피 충전제에 관한 것이고, SPF는 저 분자량, 중 분자량, 및/또는 고 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 생분해성이다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 SPF에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 다당류의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 가교결합은 화학적 결합 가교결합을 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 제로-길이 가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 자동-가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 가교결합 다당류의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 다당류는 히알루론산 (HA)이다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 50 Pa 내지 약 1500 Pa의 저장 탄성률 (G')를 갖는 생체적합성 조직 충전제, 예를 들어, 약 50 Pa 내지 약 1500 Pa의 저장 탄성률 (G')를 갖는 진피 충전제에 관한 것이고, 상기 충전제는 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하고, SPF는 약 5 kDa 내지 약 150 kDa, 약 6 kDa 내지 약 17 kDa, 약 17 kDa 내지 약 39 kDa, 또는 약 39 kDa 내지 약 80 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 생분해성이다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 SPF에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 다당류의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 가교결합은 화학적 결합 가교결합을 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 제로-길이 가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 자동-가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 가교결합 다당류의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 다당류는 히알루론산 (HA)이다. 일부 구체예에서, G'는 약 0.1 내지 약 10 Hz의 진동 스트레스에 의해 측정된다. 일부 구체예에서, G'는 약 1 Hz의 진동 스트레스에 의해 측정된다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 50 Pa 내지 약 1500 Pa의 저장 탄성률 (G')를 갖는생체적합성 조직 충전제, 예를 들어, 약 50 Pa 내지 약 1500 Pa의 저장 탄성률 (G')를 갖는 진피 충전제에 관한 것이고, 상기 충전제는 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하고, SPF는 저 분자량, 중 분자량, 또는 고 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 생분해성이다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 SPF에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 다당류의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 가교결합은 화학적 결합 가교결합을 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 제로-길이 가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 자동-가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 가교결합 다당류의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 다당류는 히알루론산 (HA)이다. 일부 구체예에서, G'는 약 0.1 내지 약 10 Hz의 진동 스트레스에 의해 측정된다. 일부 구체예에서, G'는 약 1 Hz의 진동 스트레스에 의해 측정된다.

일부 구체예에서, 본발명은 생체적합성 조직 충전제, 예를 들어, 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 진피 충전제를 제조하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 SPF 및 다당류를 포함하는 조성물을 제공하는 것, 및 상기 용액에 가교결합제, 가교결합 전구체, 활성화제, 또는 겔화 증가제를 부가하는 것을 포함하고, SPF는 약 1 kDa 내지 약 250 kDa, 약 5 kDa 내지 약 150 kDa, 약 6 kDa 내지 약 17 kDa, 약 17 kDa 내지 약 39 kDa, 또는 약 39 kDa 내지 약 80 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 생분해성이다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 SPF에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 다당류의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 가교결합 모이어티, 예를 들어, 에폭시 유래된 가교결합 모이어티를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 자동-가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 가교결합 다당류의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 다당류는 히알루론산 (HA)이다. 일부 구체예에서, SPF는 세리신이 실질적으로 없다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 물을 추가로 포함한다.

일부 구체예에서, 본발명은 생체적합성 조직 충전제, 예를 들어, 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 진피 충전제를 제조하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 SPF 및 다당류를 포함하는 조성물을 제공하는 것, 및 상기 용액에 가교결합제, 가교결합 전구체, 활성화제, 또는 겔화 증가제를 부가하는 것을 포함하고, SPF는 저 분자량, 중 분자량, 및/또는 고 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 생분해성이다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 SPF에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 다당류의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 가교결합 모이어티, 예를 들어, 에폭시 유래된 가교결합 모이어티를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 자동-가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 가교결합 다당류의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 다당류는 히알루론산 (HA)이다. 일부 구체예에서, SPF는 세리신이 실질적으로 없다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 물을 추가로 포함한다.

일부 구체예에서, 본발명은 이를 필요로 하는 개체에서의 병태, 예를 들어, 피부 병태를 치료하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 상기 개체에게 치료적으로 효과적인 양의 생체적합성 조직 충전제, 예를 들어, 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 진피 충전제를 투여하는 것을 포함하고, SPF는 약 1 kDa 내지 약 250 kDa, 약 5 kDa 내지 약 150 kDa, 약 6 kDa 내지 약 17 kDa, 약 17 kDa 내지 약 39 kDa, 또는 약 39 kDa 내지 약 80 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 생분해성이다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 SPF에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 다당류의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 가교결합 모이어티, 예를 들어, 에폭시 유래된 가교결합 모이어티를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 자동-가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 가교결합 다당류의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 다당류는 히알루론산 (HA)이다. 일부 구체예에서, SPF는 세리신이 실질적으로 없다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 물을 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 피부 병태는 피부 탈수, 피부 탄성 부족, 피부 거침, 피부 탄력 부족, 피부 튼 선, 피부 튼 자국, 피부 창백, 진피 디보트, 홀쭉한 볼, 얇은 입술, 안구뒤 결함, 얼굴 접힘, 및 주름으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 개체의 진피 영역 내로 투여된다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 확대, 재구성, 질환 치료, 장애 치료, 신체 일부, 영역 또는 면적의 결함 또는 부전의 교정이다. 일부 구체예에서, 방법은 얼굴 확대, 얼굴 재구성, 얼굴 질환 치료, 얼굴 장애 치료, 얼굴 결함 치료, 또는 얼굴 부전 치료이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 적어도 약 3 일, 약 7 일, 약 14 일, 약 21 일, 약 28 일, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 또는 약 6 개월 동안 생분해, 생부식, 생흡수, 및/또는 생재흡수에 저항한다.

일부 구체예에서, 본발명은 이를 필요로 하는 개체에서의 병태, 예를 들어, 피부 병태를 치료하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 상기 개체에게 치료적으로 효과적인 양의 생체적합성 조직 충전제, 예를 들어, 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 진피 충전제를 투여하는 것을 포함하고, SPF는 저 분자량, 중 분자량, 및/또는 고 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 생분해성이다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 SPF에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 다당류의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 가교결합 모이어티, 예를 들어, 에폭시 유래된 가교결합 모이어티를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 자동-가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 가교결합 다당류의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 다당류는 히알루론산 (HA)이다. 일부 구체예에서, SPF는 세리신이 실질적으로 없다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 물을 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 피부 병태는 피부 탈수, 피부 탄성 부족, 피부 거침, 피부 탄력 부족, 피부 튼 선, 피부 튼 자국, 피부 창백, 진피 디보트, 홀쭉한 볼, 얇은 입술, 안구뒤 결함, 얼굴 접힘, 및 주름으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 개체의 진피 영역 내로 투여된다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 확대, 재구성, 질환 치료, 장애 치료, 신체 일부, 영역 또는 면적의 결함 또는 부전의 교정이다. 일부 구체예에서, 방법은 얼굴 확대, 얼굴 재구성, 얼굴 질환 치료, 얼굴 장애 치료, 얼굴 결함 치료, 또는 얼굴 부전 치료이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 적어도 약 3 일, 약 7 일, 약 14 일, 약 21 일, 약 28 일, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 또는 약 6 개월 동안 생분해, 생부식, 생흡수, 및/또는 생재흡수에 저항한다.

일부 구체예에서, 본발명은 이를 필요로 하는 개체에서의 미용 처리 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 상기 개체에게 효과적인 양의 생체적합성 조직 충전제, 예를 들어, 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 진피 충전제를 투여하는 것을 포함하고, SPF는 약 1 kDa 내지 약 250 kDa, 약 5 kDa 내지 약 150 kDa, 약 6 kDa 내지 약 17 kDa, 약 17 kDa 내지 약 39 kDa, 또는 약 39 kDa 내지 약 80 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 생분해성이다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 SPF에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 다당류의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 가교결합 모이어티, 예를 들어, 에폭시 유래된 가교결합 모이어티를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 자동-가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 가교결합 다당류의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 다당류는 히알루론산 (HA)이다. 일부 구체예에서, SPF는 세리신이 실질적으로 없다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 물을 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 개체의 진피 영역 내로 투여된다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 확대, 재구성, 질환 치료, 장애 치료, 신체 일부, 영역 또는 면적의 결함 또는 부전의 교정이다. 일부 구체예에서, 방법은 얼굴 확대, 얼굴 재구성, 얼굴 질환 치료, 얼굴 장애 치료, 얼굴 결함 치료, 또는 얼굴 부전 치료이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 적어도 약 3 일, 약 7 일, 약 14 일, 약 21 일, 약 28 일, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 또는 약 6 개월 동안 생분해, 생부식, 생흡수, 및/또는 생재흡수에 저항한다.

일부 구체예에서, 본발명은 이를 필요로 하는 개체에서의 미용 처리 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 상기 개체에게 효과적인 양의 생체적합성 조직 충전제, 예를 들어, 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 및 다당류를 포함하는 진피 충전제를 투여하는 것을 포함하고, SPF는 저 분자량, 중 분자량, 및/또는 고 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 생분해성이다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 일부는 SPF에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 다당류의 일부는 다당류에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 가교결합 모이어티, 예를 들어, 에폭시 유래된 가교결합 모이어티를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합의 일부는 자동-가교결합이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 SPF의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 가교결합 다당류의 부분은 최대 약 100%이다. 일부 구체예에서, 다당류는 히알루론산 (HA)이다. 일부 구체예에서, SPF는 세리신이 실질적으로 없다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 물을 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 개체의 진피 영역 내로 투여된다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 확대, 재구성, 질환 치료, 장애 치료, 신체 일부, 영역 또는 면적의 결함 또는 부전의 교정이다. 일부 구체예에서, 방법은 얼굴 확대, 얼굴 재구성, 얼굴 질환 치료, 얼굴 장애 치료, 얼굴 결함 치료, 또는 얼굴 부전 치료이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 적어도 약 3 일, 약 7 일, 약 14 일, 약 21 일, 약 28 일, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 또는 약 6 개월 동안 생분해, 생부식, 생흡수, 및/또는 생재흡수에 저항한다.

일부 구체예에서, 본발명은 생체적합성 조직 충전제에 관한 것이고, 히알루론산 (HA) 및 마취제를 포함하는, 여기서 HA의 일부는 알칸 또는 알킬 사슬, 에테르 기, 및 2차 알콜 중 하나 이상을 포함하는 하나 이상의 링커 모이어티에 의해 개질되고, 여기서 링커 모이어티는 링커의 하나의 말단에서 HA에 부착된다. 일부 구체예에서, 개질은 가교결합제, 가교결합 전구체, 또는 활성화제를 사용하여 얻어진다. 일부 구체예에서, 조직 충전제 내 HA는 약 10.0%, 약 10.1%, 약 10.2%, 약 10.3%, 약 10.4%, 약 10.5%, 약 10.6%, 약 10.7%, 약 10.8%, 약 10.9%, 약 11.0%, 약 11.1%, 약 11.2%, 약 11.3%, 약 11.4%, 약 11.5%, 약 11.6%, 약 11.7%, 약 11.8%, 약 11.9%, 약 12.0%, 약 12.1%, 약 12.2%, 약 12.3%, 약 12.4%, 약 12.5%, 약 12.6%, 약 12.7%, 약 12.8%, 약 12.9%, 약 13.0%, 약 13.1%, 약 13.2%, 약 13.3%, 약 13.4%, 약 13.5%, 약 13.6%, 약 13.7%, 약 13.8%, 약 13.9%, 약 14.0%, 약 14.1%, 약 14.2%, 약 14.3%, 약 14.4%, 약 14.5%, 약 14.6%, 약 14.7%, 약 14.8%, 약 14.9%, 약 15.0%, 약 15.1%, 약 15.2%, 약 15.3%, 약 15.4%, 약 15.5%, 약 15.6%, 약 15.7%, 약 15.8%, 약 15.9%, 약 16.0%, 약 16.1%, 약 16.2%, 약 16.3%, 약 16.4%, 약 16.5%, 약 16.6%, 약 16.7%, 약 16.8%, 약 16.9%, 약 17.0%, 약 17.1%, 약 17.2%, 약 17.3%, 약 17.4%, 약 17.5%, 약 17.6%, 약 17.7%, 약 17.8%, 약 17.9%, 약 18.0%, 약 18.1%, 약 18.2%, 약 18.3%, 약 18.4%, 약 18.5%, 약 18.6%, 약 18.7%, 약 18.8%, 약 18.9%, 약 19.0%, 약 19.1%, 약 19.2%, 약 19.3%, 약 19.4%, 약 19.5%, 약 19.6%, 약 19.7%, 약 19.8%, 약 19.9%, 또는 약 20.0%의 개질 (MoD)의 정도를 가진다. 일부 구체예에서, 조직 충전제 내 HA의 총량에 상대적인 개질 HA의 %w/w 양은 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 약 10%, 약 11%, 약 12%, 약 13%, 약 14%, 약 15%, 약 16%, 약 17%, 약 18%, 약 19%, 약 20%, 약 21%, 약 22%, 약 23%, 약 24%, 약 25%, 약 26%, 약 27%, 약 28%, 약 29%, 약 30%, 약 31%, 약 32%, 약 33%, 약 34%, 약 35%, 약 36%, 약 37%, 약 38%, 약 39%, 약 40%, 약 41%, 약 42%, 약 43%, 약 44%, 약 45%, 약 46%, 약 47%, 약 48%, 약 49%, 약 50%, 약 51%, 약 52%, 약 53%, 약 54%, 약 55%, 약 56%, 약 57%, 약 58%, 약 59%, 약 60%, 약 61%, 약 62%, 약 63%, 약 64%, 약 65%, 약 66%, 약 67%, 약 68%, 약 69%, 약 70%, 약 71%, 약 72%, 약 73%, 약 74%, 약 75%, 약 76%, 약 77%, 약 78%, 약 79%, 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 약 100%이다.

일부 구체예에서, 개질 HA는 가교결합된 HA를 포함하고, 여기서 가교결합된 HA의 가교결합의 정도는 약 1% 및 약 100% 사이이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 HA의 가교결합의 정도는 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 약 10%, 약 11%, 약 12%, 약 13%, 약 14%, 약 15%, 약 16%, 약 17%, 약 18%, 약 19%, 약 20%, 약 21%, 약 22%, 약 23%, 약 24%, 약 25%, 약 26%, 약 27%, 약 28%, 약 29%, 약 30%, 약 31%, 약 32%, 약 33%, 약 34%, 약 35%, 약 36%, 약 37%, 약 38%, 약 39%, 약 40%, 약 41%, 약 42%, 약 43%, 약 44%, 약 45%, 약 46%, 약 47%, 약 48%, 약 49%, 약 50%, 약 51%, 약 52%, 약 53%, 약 54%, 약 55%, 약 56%, 약 57%, 약 58%, 약 59%, 약 60%, 약 61%, 약 62%, 약 63%, 약 64%, 약 65%, 약 66%, 약 67%, 약 68%, 약 69%, 약 70%, 약 71%, 약 72%, 약 73%, 약 74%, 약 75%, 약 76%, 약 77%, 약 78%, 약 79%, 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 약 100%이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 HA의 가교결합의 정도는 약 1% 및 약 15% 사이이다.

일부 구체예에서, 개질 또는 가교결합된 HA는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 사슬을 포함하는 링커 또는 가교결합 모이어티를 포함한다. 일부 구체예에서, 가교결합제 및/또는 가교결합 전구체는 에폭시 기를 포함한다. 일부 구체예에서, 개질 또는 가교결합은 폴리에폭시 링커, 디에폭시 링커, 폴리에폭시-PEG, 디에폭시-PEG, 폴리글리시딜-PEG, 디글리시딜-PEG, 폴리 아크릴레이트 PEG, 디아크릴레이트 PEG, 1,4-비스(2,3-에폭시프로폭시)부탄, 1,4-비스글리시딜옥시부탄, 디비닐 설폰 (DVS), 1,4-부탄디올 디글리시딜 에테르 (BDDE), UV 광, 글루타르알데히드, 1,2-비스(2,3-에폭시프로폭시)에틸렌 (EGDGE), 1,2,7,8-디에폭시옥탄 (DEO), 비스카보디이미드 (BCDI), 펜타에리쓰리톨 테트라글리시딜 에테르 (PETGE), 아디프산 디히드라지드 (ADH), 비스(설포숙신이미딜)수버레이트 (BS), 헥사메틸렌디아민 (HMDA), 1-(2,3-에폭시프로필)-2,3-에폭시시클로헥산, 카보디이미드, 및 그의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 가교결합제, 가교결합 전구체, 또는 활성화제를 사용하여 얻어진다. 일부 구체예에서, 개질 또는 가교결합은 1,4-부탄디올 디글리시딜 에테르 (BDDE), 에틸렌 글리콜 디글리시딜 에테르 (EGDGE), 1,6-헥산디올 디글리시딜 에테르, 폴리에틸렌 글리콜 디글리시딜 에테르, 폴리프로필렌 글리콜 디글리시딜 에테르, 폴리테트라메틸렌 글리콜 디글리시딜 에테르, 네오펜틸 글리콜 디글리시딜 에테르, 폴리글리세롤 폴리글리시딜 에테르, 디글리세롤 폴리글리시딜 에테르, 글리세롤 폴리글리시딜 에테르, 트리-메틸올프로판 폴리글리시딜 에테르, 펜타에리쓰리톨 폴리글리시딜 에테르, 및 솔비톨 폴리글리시딜 에테르로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 다기능성 에폭시 화합물을 사용하여 얻어진다. 일부 구체예에서, 개질 또는 가교결합은 폴리에틸렌 글리콜 디글리시딜 에테르, 디에폭시 PEG, PEG 디글리시딜 에테르, 폴리옥시에틸렌 비스-글리시딜 에테르, PEGDE, 및 PEGDGE로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 가교결합제 및/또는 가교결합 전구체를 사용하여 얻어진다. 일부 구체예에서, 개질 또는 가교결합은 약 500, 약 1000, 약 2000, 또는 약 6000의 평균 Mn를 갖는 폴리에틸렌 글리콜 디글리시딜 에테르를 사용하여 얻어진다. 일부 구체예에서, 개질 또는 가교결합은 약 2 내지 약 25 에틸렌 글리콜 기를 갖는 폴리에틸렌 글리콜 디글리시딜 에테르를 사용하여 얻어진다. 일부 구체예에서, 개질 또는 가교결합은 폴리에폭시 실크 피브로인 링커, 디에폭시 실크 피브로인 링커, 폴리에폭시 실크 피브로인 단편 링커, 디에폭시 실크 피브로인 단편 링커, 폴리글리시딜 실크 피브로인 링커, 디글리시딜 실크 피브로인 링커, 폴리글리시딜 실크 피브로인 단편 링커, 및 디글리시딜 실크 피브로인 단편 링커로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 가교결합제 및/또는 가교결합 전구체를 사용하여 얻어진다.

일부 구체예에서, 조직 충전제는 유기 화합물 및/또는 무기 화합물을 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 무기 화합물은 칼슘 히드록시아파타이트를 포함한다. 일부 구체예에서, 칼슘 히드록시아파타이트는 약 1 μm 및 약 100 μm 사이, 약 1 μm 및 약 10 μm 사이, 약 2 μm 및 약 12 μm 사이, 약 3 μm 및 약 10 μm 사이, 약 4 μm 및 약 15 μm 사이, 약 8 μm 및 약 12 μm 사이, 약 5 μm 및 약 10 μm 사이, 약 6 μm 및 약 12 μm 사이, 약 7 μm 및 약 20 μm 사이, 약 9 μm 및 약 18 μm 사이, 또는 약 10 μm 및 약 25 μm 사이의 직경을 갖는 입자로서 제제화된다. 일부 구체예에서, 칼슘 히드록시아파타이트의 농도는 약 0.001% 및 약 5% 사이이다. 일부 구체예에서, 칼슘 히드록시아파타이트의 농도는 약 0.001%, 약 0.002%, 약 0.003%, 약 0.004%, 약 0.005%, 약 0.006%, 약 0.007%, 약 0.008%, 약 0.009%, 약 0.01%, 약 0.011%, 약 0.012%, 약 0.013%, 약 0.014%, 약 0.015%, 약 0.016%, 약 0.017%, 약 0.018%, 약 0.019%, 또는 약 0.02%이다. 일부 구체예에서, 칼슘 히드록시아파타이트의 농도는 약 0.05%, 약 0.1%, 약 0.15%, 약 0.2%, 약 0.25%, 약 0.3%, 약 0.35%, 약 0.4%, 약 0.45%, 약 0.5%, 약 0.55%, 약 0.6%, 약 0.65%, 약 0.7%, 약 0.75%, 약 0.8%, 약 0.85%, 약 0.9%, 약 0.95%, 약 1%, 약 1.05%, 약 1.1%, 약 1.15%, 약 1.2%, 약 1.25%, 약 1.3%, 약 1.35%, 약 1.4%, 약 1.45%, 약 1.5%, 약 1.55%, 약 1.6%, 약 1.65%, 약 1.7%, 약 1.75%, 약 1.8%, 약 1.85%, 약 1.9%, 약 1.95%, 또는 약 2%이다. 일부 구체예에서, 유기 화합물은 글리신, L-프롤린, 알라닌, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 시스테인, 글루탐산, 글루타민, 히스티딘, 이소류신, 류신, 라이신, 메티오닌, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신, 및 발린으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산을 포함한다.

일부 구체예에서, HA은 스트렙토코쿠스 박테리아, 또는 바실루스서브틸리스 박테리아로부터 얻어진다. 일부 구체예에서, 활성 물질은 리도케인이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제 내 활성 물질의 농도는 약 0.001% 내지 약 5%이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제 내 리도케인의 농도는 약 0.3%이다.

일부 구체예에서, 여기서 개시된 조직 충전제는 겔이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 하이드로겔이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 물을 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 조직 충전제 내 HA의 총 농도는 약 10 mg/mL 내지 약 50 mg/mL이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제 내 HA의 총 농도는 약 15 mg/mL, 약 16 mg/mL, 17 mg/mL, 약 18 mg/mL, 약 19 mg/mL, 약 20 mg/mL, 약 21 mg/mL, 약 22 mg/mL, 약 23 mg/mL, 약 24 mg/mL, 약 25 mg/mL, 약 26 mg/mL, 약 27 mg/mL, 약 28 mg/mL, 약 29 mg/mL, 또는 약 30 mg/mL이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제 내 개질 또는 가교결합된 HA의 농도는 약 10 mg/mL 내지 약 50 mg/mL이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제 내 개질 또는 가교결합된 HA의 농도는 약 15 mg/mL, 약 16 mg/mL, 약 17 mg/mL, 약 18 mg/mL, 약 19 mg/mL, 약 20 mg/mL, 약 21 mg/mL, 약 22 mg/mL, 약 23 mg/mL, 약 24 mg/mL, 약 25 mg/mL, 약 26 mg/mL, 약 27 mg/mL, 약 28 mg/mL, 약 29 mg/mL, 또는 약 30 mg/mL이다.

일부 구체예에서, 개시된 조직 충전제는 실크 단백질 또는 실크 단백질 단편 (SPF)를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 실크 단백질은 실크 피브로인이다. 일부 구체예에서, 실크 단백질은 세리신이 실질적으로 없는 실크 피브로인이다. 일부 구체예에서, SPF는 약 1 kDa 내지 약 250 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 일부 구체예에서, SPF는 약 5 kDa 내지 약 150 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 일부 구체예에서, SPF는 약 6 kDa 내지 약 17 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 일부 구체예에서, SPF는 약 17 kDa 내지 약 39 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 일부 구체예에서, SPF는 약 39 kDa 내지 약 80 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 일부 구체예에서, SPF는 저 분자량을 가진다. 일부 구체예에서, SPF는 중 분자량을 가진다. 일부 구체예에서, SPF는 고 분자량을 가진다. 일부 구체예에서, 실크 단백질 단편 (SPF)는 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 가진다. 일부 구체예에서, SPF는 최대 60%의 결정성 정도를 가진다.

일부 구체예에서, 본발명은 HA 및 SPF를 포함하는 조직 충전제에 관한 것이고, 여기서 SPF의 일부는 개질 또는 가교결합된다. 일부 구체예에서, SPF의 총량에 상대적인 개질 또는 가교결합된 SPF의 %w/w 양은 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 약 10%, 약 11%, 약 12%, 약 13%, 약 14%, 약 15%, 약 16%, 약 17%, 약 18%, 약 19%, 약 20%, 약 21%, 약 22%, 약 23%, 약 24%, 약 25%, 약 26%, 약 27%, 약 28%, 약 29%, 약 30%, 약 31%, 약 32%, 약 33%, 약 34%, 약 35%, 약 36%, 약 37%, 약 38%, 약 39%, 약 40%, 약 41%, 약 42%, 약 43%, 약 44%, 약 45%, 약 46%, 약 47%, 약 48%, 약 49%, 약 50%, 약 51%, 약 52%, 약 53%, 약 54%, 약 55%, 약 56%, 약 57%, 약 58%, 약 59%, 약 60%, 약 61%, 약 62%, 약 63%, 약 64%, 약 65%, 약 66%, 약 67%, 약 68%, 약 69%, 약 70%, 약 71%, 약 72%, 약 73%, 약 74%, 약 75%, 약 76%, 약 77%, 약 78%, 약 79%, 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 약 100%이다. 일부 구체예에서, 개질 또는 가교결합된 SPF의 개질 또는 가교결합의 정도는 약 1% 및 약 100% 사이이다. 일부 구체예에서, 개질 또는 가교결합된 SPF의 개질 또는 가교결합의 정도는 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 약 10%, 약 11%, 약 12%, 약 13%, 약 14%, 약 15%, 약 16%, 약 17%, 약 18%, 약 19%, 약 20%, 약 21%, 약 22%, 약 23%, 약 24%, 약 25%, 약 26%, 약 27%, 약 28%, 약 29%, 약 30%, 약 31%, 약 32%, 약 33%, 약 34%, 약 35%, 약 36%, 약 37%, 약 38%, 약 39%, 약 40%, 약 41%, 약 42%, 약 43%, 약 44%, 약 45%, 약 46%, 약 47%, 약 48%, 약 49%, 약 50%, 약 51%, 약 52%, 약 53%, 약 54%, 약 55%, 약 56%, 약 57%, 약 58%, 약 59%, 약 60%, 약 61%, 약 62%, 약 63%, 약 64%, 약 65%, 약 66%, 약 67%, 약 68%, 약 69%, 약 70%, 약 71%, 약 72%, 약 73%, 약 74%, 약 75%, 약 76%, 약 77%, 약 78%, 약 79%, 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 약 100%이다. 일부 구체예에서, 개질 또는 가교결합된 SPF의 개질 또는 가교결합의 정도는 약 1% 및 약 15% 사이이다. 일부 구체예에서, 개질 또는 가교결합된 SPF의 개질 또는 가교결합의 정도는 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 약 10%, 약 11%, 약 12%, 약 13%, 약 14%, 및 약 15% 중 하나 이상이다.

일부 구체예에서, 개질 또는 가교결합된 SPF는 알칸 또는 알킬 사슬, 및/또는 에테르 기를 포함하는 링커 또는 가교결합 모이어티를 포함하고, 여기서 링커 또는 가교결합 모이어티는 링커 또는 가교결합 모이어티의 하나의 말단에서 SPF에 부착된다. 일부 구체예에서, 개질 또는 가교결합된 SPF는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 사슬을 포함하는 링커 또는 가교결합 모이어티를 포함한다. 일부 구체예에서, 개질 또는 가교결합된 SPF는 2차 알콜을 포함하는 링커 또는 가교결합 모이어티를 포함한다. 일부 구체예에서, 개질 또는 가교결합은 개질 또는 가교결합제, 개질 또는 가교결합 전구체, 또는 활성화제를 사용하여 얻어진다. 일부 구체예에서, 개질 또는 가교결합제 및/또는 개질 또는 가교결합 전구체는 에폭시 기를 포함한다. 일부 구체예에서, 개질 또는 가교결합은 폴리에폭시 링커, 디에폭시 링커, 폴리에폭시-PEG, 디에폭시-PEG, 폴리글리시딜-PEG, 디글리시딜-PEG, 폴리 아크릴레이트 PEG, 디아크릴레이트 PEG, 1,4-비스(2,3-에폭시프로폭시)부탄, 1,4-비스글리시딜옥시부탄, 디비닐 설폰 (DVS), 1,4-부탄디올 디글리시딜 에테르 (BDDE), UV 광, 글루타르알데히드, 1,2-비스(2,3-에폭시프로폭시)에틸렌 (EGDGE), 1,2,7,8-디에폭시옥탄 (DEO), 비스카보디이미드 (BCDI), 펜타에리쓰리톨 테트라글리시딜 에테르 (PETGE), 아디프산 디히드라지드 (ADH), 비스(설포숙신이미딜)수버레이트 (BS), 헥사메틸렌디아민 (HMDA), 1-(2,3-에폭시프로필)-2,3-에폭시시클로헥산, 카보디이미드, 및 그의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 개질 또는 가교결합제, 개질 또는 가교결합 전구체, 또는 활성화제를 사용하여 얻어진다. 일부 구체예에서, 개질 또는 가교결합은 1,4-부탄디올 디글리시딜 에테르 (BDDE), 에틸렌 글리콜 디글리시딜 에테르 (EGDGE), 1,6-헥산디올 디글리시딜 에테르, 폴리에틸렌 글리콜 디글리시딜 에테르, 폴리프로필렌 글리콜 디글리시딜 에테르, 폴리테트라메틸렌 글리콜 디글리시딜 에테르, 네오펜틸 글리콜 디글리시딜 에테르, 폴리글리세롤 폴리글리시딜 에테르, 디글리세롤 폴리글리시딜 에테르, 글리세롤 폴리글리시딜 에테르, 트리-메틸올프로판 폴리글리시딜 에테르, 펜타에리쓰리톨 폴리글리시딜 에테르, 및 솔비톨 폴리글리시딜 에테르로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 다기능성 에폭시 화합물을 사용하여 얻어진다.

일부 구체예에서, 개질 또는 가교결합은 폴리에틸렌 글리콜 디글리시딜 에테르, 디에폭시 PEG, PEG 디글리시딜 에테르, 폴리옥시에틸렌 비스-글리시딜 에테르, PEGDE, 및 PEGDGE로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 개질 또는 가교결합제 및/또는 개질 또는 가교결합 전구체를 사용하여 얻어진다. 일부 구체예에서, 개질 또는 가교결합은 약 500, 약 1000, 약 2000, 또는 약 6000의 평균 Mn를 갖는 폴리에틸렌 글리콜 디글리시딜 에테르를 사용하여 얻어진다. 일부 구체예에서, 개질 또는 가교결합은 약 2 내지 약 25 에틸렌 글리콜 기를 갖는 폴리에틸렌 글리콜 디글리시딜 에테르를 사용하여 얻어진다. 일부 구체예에서, 개질 또는 가교결합은 폴리에폭시 실크 피브로인 링커, 디에폭시 실크 피브로인 링커, 폴리에폭시 실크 피브로인 단편 링커, 디에폭시 실크 피브로인 단편 링커, 폴리글리시딜 실크 피브로인 링커, 디글리시딜 실크 피브로인 링커, 폴리글리시딜 실크 피브로인 단편 링커, 및 디글리시딜 실크 피브로인 단편 링커로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 개질 또는 가교결합제 및/또는 개질 또는 가교결합 전구체를 사용하여 얻어진다.

일부 구체예에서, 본발명은 HA 및 SPF를 포함하는 조직 충전제에 관한 것이고, 여기서 SPF의 일부는 HA에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 본발명은 HA 및 SPF를 포함하는 조직 충전제에 관한 것이고, 여기서 SPF의 일부는 SPF에 가교결합된다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 겔이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 하이드로겔이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 물을 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 조직 충전제 내 SPF의 총 농도는 약 0.1 mg/mL 내지 약 15 mg/mL이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제 내 SPF의 총 농도는 약 0.1 mg/mL, 약 0.5 mg/mL, 약 1 mg/mL, 약 1.5 mg/mL, 약 2 mg/mL, 약 2.5 mg/mL, 약 3 mg/mL, 약 3.5 mg/mL, 약 4 mg/mL, 약 4.5 mg/mL, 약 5 mg/mL, 약 5.5 mg/mL, 약 6 mg/mL, 약 6.5 mg/mL, 약 7 mg/mL, 약 7.5 mg/mL, 약 8 mg/mL, 약 8.5 mg/mL, 약 9 mg/mL, 약 9.5 mg/mL, 약 10 mg/mL, 약 10.5 mg/mL, 약 11 mg/mL, 약 11.5 mg/mL, 약 12 mg/mL, 약 12.5 mg/mL, 약 13 mg/mL, 약 13.5 mg/mL, 약 14 mg/mL, 약 14.5 mg/mL, 또는 약 15 mg/mL이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제 내 개질 또는 가교결합된 SPF의 농도는 약 0.1 mg/mL 내지 약 15 mg/mL이다. 일부 구체예에서 조직 충전제 내 개질 또는 가교결합된 SPF의 농도는 약 0.1 mg/mL, 약 0.5 mg/mL, 약 1 mg/mL, 약 1.5 mg/mL, 약 2 mg/mL, 약 2.5 mg/mL, 약 3 mg/mL, 약 3.5 mg/mL, 약 4 mg/mL, 약 4.5 mg/mL, 약 5 mg/mL, 약 5.5 mg/mL, 약 6 mg/mL, 약 6.5 mg/mL, 약 7 mg/mL, 약 7.5 mg/mL, 약 8 mg/mL, 약 8.5 mg/mL, 약 9 mg/mL, 약 9.5 mg/mL, 약 10 mg/mL, 약 10.5 mg/mL, 약 11 mg/mL, 약 11.5 mg/mL, 약 12 mg/mL, 약 12.5 mg/mL, 약 13 mg/mL, 약 13.5 mg/mL, 약 14 mg/mL, 약 14.5 mg/mL, 또는 약 15 mg/mL이다.

일부 구체예에서, 본발명은 개질 또는 가교결합된 HA, 및/또는 개질 또는 가교결합된 SPF를 포함하는 조직 충전제에 관한 것이고, 여기서 조직 충전제는 진피 충전제이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 생분해성이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 주사가능이다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 약 25 Pa 내지 약 1500 Pa의 저장 탄성률 (G')을 가진다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 약 25 Pa, 약 26 Pa, 약 27 Pa, 약 28 Pa, 약 29 Pa, 약 30 Pa, 약 31 Pa, 약 32 Pa, 약 33 Pa, 약 34 Pa, 약 35 Pa, 약 36 Pa, 약 37 Pa, 약 38 Pa, 약 39 Pa, 약 40 Pa, 약 41 Pa, 약 42 Pa, 약 43 Pa, 약 44 Pa, 약 45 Pa, 약 46 Pa, 약 47 Pa, 약 48 Pa, 약 49 Pa, 약 50 Pa, 약 51 Pa, 약 52 Pa, 약 53 Pa, 약 54 Pa, 약 55 Pa, 약 56 Pa, 약 57 Pa, 약 58 Pa, 약 59 Pa, 약 60 Pa, 약 61 Pa, 약 62 Pa, 약 63 Pa, 약 64 Pa, 약 65 Pa, 약 66 Pa, 약 67 Pa, 약 68 Pa, 약 69 Pa, 약 70 Pa, 약 71 Pa, 약 72 Pa, 약 73 Pa, 약 74 Pa, 약 75 Pa, 약 76 Pa, 약 77 Pa, 약 78 Pa, 약 79 Pa, 약 80 Pa, 약 81 Pa, 약 82 Pa, 약 83 Pa, 약 84 Pa, 약 85 Pa, 약 86 Pa, 약 87 Pa, 약 88 Pa, 약 89 Pa, 약 90 Pa, 약 91 Pa, 약 92 Pa, 약 93 Pa, 약 94 Pa, 약 95 Pa, 약 96 Pa, 약 97 Pa, 약 98 Pa, 약 99 Pa, 약 100 Pa, 약 101 Pa, 약 102 Pa, 약 103 Pa, 약 104 Pa, 약 105 Pa, 약 106 Pa, 약 107 Pa, 약 108 Pa, 약 109 Pa, 약 110 Pa, 약 111 Pa, 약 112 Pa, 약 113 Pa, 약 114 Pa, 약 115 Pa, 약 116 Pa, 약 117 Pa, 약 118 Pa, 약 119 Pa, 약 120 Pa, 약 121 Pa, 약 122 Pa, 약 123 Pa, 약 124 Pa, 또는 약 125 Pa의 저장 탄성률 (G')을 가진다. 일부 구체예에서, G'는 약 0.1 내지 약 10 Hz의 진동 스트레스에 의해 측정된다. 일부 구체예에서, G'는 약 1 Hz의 진동 스트레스에 의해 측정된다. 일부 구체예에서, G'는 약 5 Hz의 진동 스트레스에 의해 측정된다. 일부 구체예에서, G'는 약 10 Hz의 진동 스트레스에 의해 측정된다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 약 1 Paㆍs 내지 약 10 Paㆍs 복합 점도를 가진다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 약 1 Paㆍs, 약 1.5 Paㆍs, 약 2 Paㆍs, 약 2.5 Paㆍs, 약 3 Paㆍs, 약 3.5 Paㆍs, 약 4 Paㆍs, 약 4.5 Paㆍs, 약 5 Paㆍs, 약 5.5 Paㆍs, 약 6 Paㆍs, 약 6.5 Paㆍs, 약 7 Paㆍs, 약 7.5 Paㆍs, 약 8 Paㆍs, 약 8.5 Paㆍs, 약 9 Paㆍs, 약 9.5 Paㆍs, 또는 약 10 Paㆍs의 복합 점도를 가진다. 일부 구체예에서, 복합 점도는 약 0.1 내지 약 10 Hz의 진동 스트레스에 의해 측정된다. 일부 구체예에서, 복합 점도는 약 1 Hz의 진동 스트레스에 의해 측정된다. 일부 구체예에서, 복합 점도는 약 5 Hz의 진동 스트레스에 의해 측정된다.

일부 구체예에서, 본발명은 이를 필요로 하는 개체에서의 병태를 치료하는 방법에 관한 것이고, 이 방법은 상기 개체에게 치료적으로 효과적인 양의 개질 또는 가교결합된 HA, 및/또는 개질 또는 가교결합된 SPF를 포함하는 조직 충전제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 병태는 피부 병태이다. 일부 구체예에서, 피부 병태는 피부 탈수, 피부 탄성 부족, 피부 거침, 피부 탄력 부족, 피부 튼 선, 피부 튼 자국, 피부 창백, 진피 디보트, 홀쭉한 볼, 얇은 입술, 안구뒤 결함, 얼굴 접힘, 및 주름으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

일부 구체예에서, 본발명은 이를 필요로 하는 개체에서의 미용 처리 방법에 관한 것이고, 이 방법은 상기 개체에게 효과적인 양의 개질 또는 가교결합된 HA, 및/또는 개질 또는 가교결합된 SPF를 포함하는 조직 충전제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 개체의 진피 영역 내로 투여된다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 확대, 재구성, 질환 치료, 장애 치료, 신체 일부, 영역 또는 면적의 결함 또는 부전의 교정이다. 일부 구체예에서, 방법은 얼굴 확대, 얼굴 재구성, 얼굴 질환 치료, 얼굴 장애 치료, 얼굴 결함 치료, 또는 얼굴 부전 치료이다.

여기서 기술된 방법의 일부 구체예에서, 조직 충전제는 적어도 약 3 일, 약 7 일, 약 14 일, 약 21 일, 약 28 일, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 또는 약 6 개월 동안 생분해, 생부식, 생흡수, 및/또는 생재흡수에 저항한다. 여기서 기술된 방법의 일부 구체예에서, 상기 개체에의 조직 충전제의 투여는 다당류 및 리도케인을 포함하는 대조 조직 충전제에 의해 유도된 염증성 반응과 비교하여 감소된 염증성 반응을 유발하고, 여기서 대조 조직 충전제는 실크 단백질 단편 (SPF)을 포함하지 않는다.

여기서 기술된 방법의 일부 구체예에서, 상기 개체에의 조직 충전제의 투여는 다당류 및 리도케인을 포함하는 대조 조직 충전제에 의해 유도된 콜라겐 생산과 비교하여 증가된 콜라겐 생산을 유발하고, 여기서 대조 조직 충전제는 실크 단백질 단편 (SPF)을 포함하지 않는다.

본 개시된 구체예는 첨부된 도면을 참조하여 추가로 설명한다. 나타낸 도면은 일반적으로 본 개시된 구체예의 원리를 예시하기 위한 것임을 강조하고, 반드시 축척이 맞는 것은 아니다.
도 1는 본개시물의 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편 (SPFs)를 제조하기 위한 다양한 구체예를 나타내는 흐름 차트이다.
도 2는 추출 및 용해 단계 동안 본개시물의 SPFs를 제조하는 공정 동안 개질될 수 있는 다양한 파라미터를 나타내는 흐름 차트이다.
도 3는 본개시물의 실크 단백질 용액 내 LiBr 및 소듐 카보네이트 (Na₂CO₃) 농도를 요약하는 표이다.
도 4는 본개시물의 실크 단백질 용액 내 LiBr 및 Na₂CO₃ 농도를 요약하는 표이다.
도 5는 본개시물의 실크 단백질 용액의 분자량을 요약하는 표이다.
도 6 및 7는 % 질량 손실에 대한 추출 부피의 효과를 나타내는 그래프이다.
도 8는 LiBr의 상이한 농도 및 상이한 추출 및 용해 크기로부터 용해된 실크의 분자량을 요약하는 표이다.
도 9는 100 ℃ 추출 온도, 100 ℃ LiBr 및 100 ℃ 오븐 용해의 조건 하에서 가공된 실크의 분자량에 대한 추출 시간의 효과를 요약하는 그래프이다 (오븐/용해 시간은 다양했다).
도 10는 100 ℃ 추출 온도, 끓는 LiBr 및 60 ℃ 오븐 용해의 조건 하에서 가공된 실크의 분자량에 대한 추출 시간의 효과를 요약하는 그래프이다 (오븐/용해 시간은 다양했다).
도 11는 100 ℃ 추출 온도, 60 ℃ LiBr 및 60 ℃ 오븐 용해의 조건 하에서 가공된 실크의 분자량에 대한 추출 시간의 효과를 요약하는 그래프이다 (오븐/용해 시간은 다양했다).
도 12는 100 ℃ 추출 온도, 80 ℃ LiBr 및 80 ℃ 오븐 용해의 조건 하에서 가공된 실크의 분자량에 대한 추출 시간의 효과를 요약하는 그래프이다 (오븐/용해 시간은 다양했다).
도 13는 100 ℃ 추출 온도, 80 ℃ LiBr 및 60 ℃ 오븐 용해의 조건 하에서 가공된 실크의 분자량에 대한 추출 시간의 효과를 요약하는 그래프이다 (오븐/용해 시간은 다양했다).
도 14는 100 ℃ 추출 온도, 100 ℃ LiBr 및 60 ℃ 오븐 용해의 조건 하에서 가공된 실크의 분자량에 대한 추출 시간의 효과를 요약하는 그래프이다 (오븐/용해 시간은 다양했다).
도 15는 100 ℃ 추출 온도, 140 ℃ LiBr 및 140 ℃ 오븐 용해의 조건 하에서 가공된 실크의 분자량에 대한 추출 시간의 효과를 요약하는 그래프이다 (오븐/용해 시간은 다양했다).
도 16는 60 분 추출 시간, 100 ℃ LiBr 및 100 ℃ 오븐 용해의 조건 하에서 가공된 실크의 분자량에 대한 추출 온도의 효과를 요약하는 그래프이다 (오븐/용해 시간은 다양했다).
도 17는 60 분 추출 시간, 100 ℃ 추출 온도 및 60 ℃ 오븐 용해의 조건 하에서 가공된 실크의 분자량에 대한 LiBr 온도의 효과를 요약하는 그래프이다 (오븐/용해 시간은 다양했다).
도 18는 30 분 추출 시간, 100 ℃ 추출 온도 및 60 ℃ 오븐 용해의 조건 하에서 가공된 실크의 분자량에 대한 LiBr 온도의 효과를 요약하는 그래프이다 (오븐/용해 시간은 다양했다).
도 19는 100 ℃ 추출 온도, 30 분 추출 시간, 및 100 ℃ 리튬 브로마이드의 조건 하에서 가공된 실크의 분자량에 대한 오븐/용해 온도의 효과를 요약하는 그래프이다 (오븐/용해 시간은 다양했다).
도 20는 100 ℃ 추출 온도, 60 분 추출 시간, 및 100 ℃ 리튬 브로마이드의 조건 하에서 가공된 실크의 분자량에 대한 오븐/용해 온도의 효과를 요약하는 그래프이다. (오븐/용해 시간은 다양했다).
도 21는 100 ℃ 추출 온도, 60 분 추출 시간, 및 140 ℃ 리튬 브로마이드의 조건 하에서 가공된 실크의 분자량에 대한 오븐/용해 온도의 효과를 요약하는 그래프이다 (오븐/용해 시간은 다양했다).
도 22는 100 ℃ 추출 온도, 30 분 추출 시간, 및 140 ℃ 리튬 브로마이드의 조건 하에서 가공된 실크의 분자량에 대한 오븐/용해 온도의 효과를 요약하는 그래프이다 (오븐/용해 시간은 다양했다).
도 23는 100 ℃ 추출 온도, 60 분 추출 시간, 및 80 ℃ 리튬 브로마이드의 조건 하에서 가공된 실크의 분자량에 대한 오븐/용해 온도의 효과를 요약하는 그래프이다 (오븐/용해 시간은 다양했다).
도 24는 추출 시간, 추출 온도, 리튬 브로마이드 (LiBr) 온도, 용해를 위한 오븐 온도, 용해를 위한 오븐 시간을 포함하는 다양한 조건 하에서 가공된 실크의 분자량을 요약하는 그래프이다.
도 25는 오븐/용해 온도가 LiBr 온도와 같은 조건 하에서 가공된 실크의 분자량을 요약하는 그래프이다.
도 26는 다양한 농도에서 물 또는 포스페이트-완충된 식염수 (PBS) 내 실크/HA 제제의 사진이고, 실크/HA 제제가 균질, 불투명 용액을 유발함을 나타낸다. 제 1 비-마킹된 바이알은 대조 바이알이다 (물 내 22 mg/mL HA).
도 27는 시린지 내 배치된 수성 실크/HA 제제의 사진이고, 실크/HA 제제가 균질, 불투명 용액을 유발함을 나타낸다. 대조는 물 내 22 mg/mL HA의 용액이다.
도 28는 실크-HA 및 HA 하이드로겔의 분해 프로파일을 나타내는 차트이다.
도 29는 대조 진피 충전제 (리도케인을 포함하는 상업적으로 이용가능한 HA 충전제)로 주사된 기니피그 내 진피내 영역의 사진이다; 염증의 증가 정도는 육아종 면적의 정도로 반영된다. 상업적으로 이용가능한 충전제는 청색/회색 재료로서 식별된다. 상기 재료와 관련된 육아종 염증은 7 일에서 관찰될 수 있다.
도 30는 대조 진피 충전제 (상업적으로 이용가능한 HA 충전제 리도케인을 포함하는)로 주사된 기니피그 내 진피내 영역의 사진이다; 상업적으로 이용가능한 제품은 청색/회색 재료로서 식별된다. 30 일에서, 섬유증의 염증이 관찰될 수 있다.
도 31는 본발명의 실크-HA 진피 충전제로 주사된 기니피그 내 진피내 영역의 사진이다 (24 mg/ml HA, 9.6 mg/ml 실크, BDDE 가교결합된); 대조 주사제와 비교하여 감소된 육아종 면적은 무시가능한 급성 염증성 반응, 및 대조구와 비교하여 실크-HA 충전제의 더 나은 생분해성을 나타낸다. 7 일에 염증은 매우 작다. 염증은 집중적이고 때로는 발견하기 어렵다. 임플란트 재료는 식별되지 않는다.
도 32는 본발명의 실크-HA 진피 충전제로 주사된 기니피그 내 진피내 영역의 사진이다 (24 mg/ml HA, 9.6 mg/ml 실크, BDDE 가교결합된); 30 일에 염증은 발견하기 극히 어렵고 최소이다. 임플란트 재료는 식별되지 않는다.
도 33는 본발명의 실크-HA 진피 충전제로 주사된 기니피그 내 진피내 영역의 사진이다 (24 mg/ml HA, 0.48 mg/ml 실크, BDDE 가교결합된); 충전제는 7 일 내 집중적 가벼운 염증을 유발한다. 염증은 만성이다. 이 염증은 집중적이고 최소이기에 확인하기 위해 근접 평가를 필요로 했다. 임플란트 재료는 관찰되지 않는다.
도 34는 본발명의 실크-HA 진피 충전제로 주사된 기니피그 내 진피내 영역의 사진이다 (24 mg/ml HA, 0.48 mg/ml 실크, BDDE 가교결합된); 30-일 이미지는 더 작은 염증을 나타낸다. 7 일 임플란트와 비교하여 확인하기가 더욱 어려웠다. 임플란트 재료는 관찰되지 않는다.
도 35는 실크-HA 하이드로겔의 혼탁도 측정을 나타내는 차트이다. 흑색 곡선 (a): 표준 투과도; 적색 곡선 (b): 투과도 플러스 전방 산란.
도 36는 실크가 없는 HA 하이드로겔의 혼탁도 측정을 나타내는 차트이다. 흑색 곡선 (a): 표준 투과도; 적색 곡선 (b): 투과도 플러스 전방 산란.
도 37는 대조 진피 충전제로 주사된 기니피그 내 진피내 영역의 대표적인 조직학 사진이다.
도 38는 본발명의 HA 진피 충전제로 주사된 기니피그 내 진피내 영역의 대표적인 조직학 사진이다 (24 mg/ml HA, PEGDE 가교결합된, 샘플 C4 - 표 25).
도 39는 본발명의 실크-HA 진피 충전제로 주사된 기니피그 내 진피내 영역의 대표적인 조직학 사진이다 (22.8 mg/ml HA, 1.2 mg/ml 실크, PEGDE 가교결합됨, 샘플 L - 표 25).
도 40는 본발명의 실크-HA 진피 충전제로 주사된 기니피그 내 진피내 영역의 대표적인 조직학 사진이다 (23.76 mg/ml HA, 0.24 mg/ml 실크, PEGDE 가교결합됨, 샘플 M - 표 25).
도 41는 본발명의 실크-HA 진피 충전제로 주사된 기니피그 내 진피내 영역의 대표적인 조직학 사진이다 (22.8 mg/ml HA, 1.2 mg/ml 실크, PEGDE 가교결합됨, 샘플 N - 표 25).
도 42는 본발명의 실크-HA 진피 충전제로 주사된 기니피그 내 진피내 영역의 대표적인 조직학 사진이다 (22.8 mg/ml HA, 1.2 mg/ml 실크, PEGDE 가교결합됨, 샘플 O - 표 25).
도 43는 겔 분해에 대한 이식 7-일 후 조직학 결과를 나타내는 그래프이다 (표 25 제제 - BDDE 가교결합된 제제는 거의 분해됨; 점수: 0 - 정상; 1 - 최소; 2 - 가벼움; 3 - 중간; 및 4 - 심함).
도 44는 겔 이동에 대한 이식 7-일 후 조직학 결과를 나타내는 그래프이다 (표 25 제제; 점수: 0 - 정상; 1 - 최소; 2 - 가벼움; 3 - 중간; 및 4 - 심함).
도 45는 염증에 대한 이식 7-일 후 조직학 결과를 나타내는 그래프이다 (표 25 제제 - 대조 제제 및 시험 제제의 일부에 대해 조직 괴사가 관찰되지 않았고, 혈액 응고가 관찰되지 않았고, 최소 콜라겐 침착가 관찰되지 않았다; 점수: 0 - 정상; 1 - 최소; 2 - 가벼움; 3 - 중간; 및 4 - 심함).
도 46는 마크로파지에 대한 이식 7-일 후 조직학 결과를 나타내는 그래프이다 (표 25 제제; 점수: 0 - 정상; 1 - 최소; 2 - 가벼움; 3 - 중간; 및 4 - 심함).
도 47A 및 47B는 투석 전 및 후 다양한 실크 농도를 갖는 하이드로겔의 G'을 나타낸다. 도 47A: 100 gm/ml에서 가교결합된 혼합된 HA, 및 도 47B: 25 mg/ml에서 가교결합된 단일 MW HA.
도 48A 및 48B는 투석 동안 다양한 실크 농도를 갖는 하이드로겔의 팽창 비를 나타낸다. 도 48A: 100 mg/ml에서 가교결합된 혼합된 HA, 및 도 48B: 25 mg/ml에서 가교결합된 단일 MW HA.
도 49A 및 49B는 중간 및 저 분자량 실크 용액, 각각에 대한 검정 곡선을 나타낸다.
도 50A 및 50B는 미지의 실크 농도를 갖는 희석된 실크-HA 겔의 흡수 스펙트럼을 나타낸다; 각각의 실크-HA 겔 샘플에 대한 이론 실크 농도 (mg/ml)를 표 26에 나타낸다.
도 51는 실크가 없는 (적색; 전체 파장 간격에 걸쳐 더 높은 투과도) 및 3 mg/ml 실크를 갖는 (청색; 전체 파장 간격에 걸쳐 더 낮은 투과도) HA 하이드로겔의 혼탁도 측정을 나타낸다; 더 높은 % 투과도는 더 작은 광학 불투명도를 갖는, 덜 혼탁한 샘플을 나타낸다.
도 52는 PEG 가교결합 실크 피브로인 단편의 시그니처 이온을 나타낸다 (LC MS/MS 스펙트럼은 PEG와 가교결합된 실크의 시그니처 이온을 나타낸다).
도 53A-B는 반-정량적 평가 (점수가 낮을수록 우수; 대조 그룹에 대해 6.9의 총 점수 및 시험 그룹에 대해 3.8의 총 점수); 7-일 조직학 이미지: Juvederm® (도 53A) 및 실크 진피 충전제 (도 53B)를 나타낸다.
도 54는 현탁시킨 미세 실크 섬유를 갖는 혼탁한 하이드로겔을 나타내는 1-ml 시린지 내 실크 진피 충전제를 나타낸다.
도 55A-C는 G', MoD 및 주사 힘에 대한 시험 결과를 나타낸다. 실크-HA 하이드로겔의 저장 탄성률 G' (도 55A), 개질 정도 MoD (도 55B), 및 주사 힘 (도 55C, 30 게이지 니들)은 실크 대 제제 내 실크 및 HA의 총량의 비의 함수로서 나타낸다 (% 실크 = 100*(실크 농도)/(실크 및 HA의 조합 농도)). 모든 제제에 대해 HA 농도 = 24.7 mg/ml, 및 PEG은 ~30% w/w에서 존재한다. 도 55A 및 도 55C에 대해 세 개의 샘플의 평균 ± 표준편차가 플로팅되어 있다. 도 55B에서, 다수의 하이드로겔 샘플은 각각의 측정에 대한 조합이었다.
도 56는 100 초과 진피 충전제 후보의 저장 탄성률 G' 및 주사 힘 IF에 대한 시험 결과를 나타낸다. (청색 점), 30G x 1/2 니들을 통해 측정된 IF (오렌지색 점), 27G x 1/2 니들을 통해 측정된 IF. HA 및 실크 총 농도는 범위 15 mg/mL 내지 26 mg/mL.
도 57는 실크와 함께 (실선) 및 실크 없이 (점선) 제제화된 HA 하이드로겔 및 경쟁자 하이드로겔 생성물 (Juvederm® Ultra Plus XC, 파선)의 흡수 스펙트럼을 나타낸다. 각각의 하이드로겔에 대한 세 개의 측정의 평균이 플로팅되어 있다.
도 58A는 AS-V1 (백색) 또는 Juvederm® Ultra Plus XC (흑색)에 대한 시험관내 하이드로겔 가역성을 나타낸다. 대략 1 g의 각각의 하이드로겔을 150 U 히알루로니다제로 37 ℃에서 30 분 동안 소화시키고, 및 잔여 겔의 중량을 측정했다. 이 공정을 총 600 U 히알루로니다제에 대해 120 분에 걸쳐 3회 이상 반복했다. 하이드로겔 분해 정도는 잔여 하이드로겔 대 최초 하이드로겔의 중량 비 (%)로 나타낸다. 각각의 시점에서 세 개의 샘플의 평균 ± 표준편차가 플로팅되어 있다.
도 58B는 AS-V1 (백색) 또는 Juvederm® Ultra Plus XC (흑색)에 대한 생체 내 하이드로겔 가역성을 나타낸다. 대략 0.1 mL의 각각의 주사된 하이드로겔 부위를 0.1 mL 히알루로니다제로 소화시키고 잔여 볼루스에 기초한 역전을 결정하기 위해 30 min 동안 관찰했다. 부가적 가역성 주사의 수는 부가적 히알루로니다제 주사의 수로 나타낸다. AS-V1 및 Juvederm® Ultra Plus XC 경우의 61% 및 47%에서 각각 1회의 가역성 주사를 필요로 했다.
도 59는 AS-V1 (백색) 또는 Juvederm® Ultra Plus XC (흑색)로 주사된 기니피그에 대한 Draize 피부 자극성 시험 결과를 나타낸다. 6 동물을 각각의 시점 (일 1-5 주사-후)에서 시험했다; 각각의 동물은 0.1 mL AS-V1 3 주사 및 Juvederm® Ultra Plus XC 3 주사를 등 피부에서 ~1 cm 이격된 채로 주사했다. 플로팅된 데이터는 일일 평균 점수 ± 표준편차이고; 최대 가능 점수는 8이다.
도 60A-D는 AS-V1 (상단 원, 청색으로 나타냄) 또는 Juvederm® Ultra Plus XC (아래 원, 적색으로 나타냄)를 주사받은 기니피그 내 주사-후 멍에 대한 시험 결과를 나타낸다. 도 60A 및 60B는 3-일 주사후 시험 결과를 나타낸다. 도 60C 및 60D는 4-일 주사후 시험 결과를 나타낸다. 6 동물을 각각의 시점 (주사-후 일 3 및 4)에서 시험했다; 각각의 동물은 0.1 mL AS-V1 3 주사 및 Juvederm® Ultra Plus XC 3 주사를 등 피부에서 ~1 cm 이격된 채로 주사했다. 두 동물로부터의 대표적인 멍 이미지 (도 60A 및 도 60B, 또는 도 60C 및 도 60D)를 나타낸다.
도 61A-D는 AS-V1 (실선) 또는 Juvederm® Ultra Plus XC (파선)로 주사-후 염증 (도 61A), 생체 내 하이드로겔 가역성 (분해, 도 61B 및 61D), 및 하이드로겔 이동 (도 61C 및 61E)에 대한 동물 시험 결과를 나타낸다. 6 동물을 각각의 시점 (7 일, 30 일, 3 개월, 6 개월 및 12 개월 주사-후)에서 시험했다; 각각의 동물은 0.1 mL AS-V1 3 주사 및 Juvederm® Ultra Plus XC 3 주사를 등 피부에서 ~1 cm 이격된 채로 주사했다. 기니피그 등 피부로부터의 조직 섹션을 헤마톡실린 및 에오신으로 염색하고 맹검 병리학자가 대표적인 섹션의 점수를 매겼다. 플로팅된 데이터는 각각의 시점에서 평균 평가 점수 ± 표준편차이다. 염증에 대해, 최대 가능 점수는 28이고, 하이드로겔 분해 및 이동에 대해 최대 가능 점수는 4이다. 도 61F는 AS-V1 (실선s) 또는 Juvederm Ultra Plus XC (파선)를 사용한 염증 반응에 대한 시험 결과를 나타낸다. 6 동물을 각각의 시점 (주사-후 7 일, 30 일, 90 일, 180 일 및 365 일)에서 시험했다; 각각의 동물은 0.1 mL AS-V1 3 주사 및 Juvederm® Ultra Plus XC 3 주사를 등 피부에서 ~1 cm 이격된 채로 주사했다. 기니피그 등 피부로부터의 조직 섹션을 헤마톡실린 및 에오신으로 염색하고 맹검 병리학자가 대표적인 섹션의 점수를 매겼다. 플로팅된 데이터는 각각의 시점에서 평균 평가 점수 ± 표준편차이다. 염증에 대해, 최대 가능 점수는 28이다.
도 62A-J는 AS-V1 (시험) 상단 행 (A, C, E, G, 및 I) 및 Juvederm Ultra Plus XC (대조) 하단 행 (B, D, F, H, 및 J)을 비교하는 GLP 기니피그 연구에 대한 대표적인 조직학 슬라이드를 나타낸다. 샘플 A 및 B은 7 일에서 시험 및 대조 각각을 나타내고, 샘플 C 및 D은 30 일 일에서 시험 및 대조 각각을 나타내고, 샘플 D 및 F은 90 일에서 시험 및 대조 각각을 나타내고, 샘플 G 및 H은 180 일에서 시험 및 대조 각각을 나타내고, 및 샘플 I 및 J은 365 일에서 시험 및 대조 각각을 나타낸다.
도 63A-D는 AS-V1 (도 63 A, B) 또는 Juvederm® Ultra Plus XC (도 63 C, D)로 주사-후3 개월 (도 63A, C) 또는 6 개월 (도 63B, D) 후 진피 조직의 대표적인 조직학을 나타낸다. 기니피그 등 피부로부터의 조직 섹션을 헤마톡실린 및 에오신로 염색했다. 대표적인 섹션은 0.1 mL AS-V1 또는 Juvederm® Ultra Plus XC로 주사된 6 동물로부터였다. 배율 25x.
도 64는 본 개시 내용의 방법 및 겔에 사용된 예시적인 HA의 NMR 스펙트럼을 나타내고, NMR 스펙트럼은 할당된 라벨을 갖고: "a"라고 라벨링된 피크는 3으로 지정되고 정규화되며 3.30에서 4.05까지의 피크 통합은 11이다.
도 65는 피크 통합에 기초한 겔 MoD의 계산을 포함하는 본 개시 내용의 예시적인 겔의 NMR 스펙트럼을 나타낸다.
상기 도면은 본 개시된 구체예를 규정하지만, 이 논의에서 기술된 바와 같이, 다른 구체예도 또한 고려된다. 이 개시물은 예시로서, 및 제한 없이 예시적 구체예를 제시한다. 본 개시된 구체예의 원리의 범위 및 사상 내에 속하는 많은 다른 개질 및 구체예가 본업계에서의 숙련가에 의해 고안될 수 있다.

진피 충전제는 연조직 확대에 혁명을 일으켰으며, 덜 침습적인 미용 시술을 원하는 고령화 미국 (미국) 인구의 증가로 인해 중등도에서 중증의 피부 주름과 주름을 교정하기 위해 최근 몇 년 동안 점점 인기를 얻고 있다. 실제로 지난 30 년 동안 진피 충전제는 의료 및 미용 피부과의 중요한 부분이 되었다. 의학적으로 진피 충전제는 HIV 감염 치료를 받는 환자의 악화 흉터, 형태학적 비대칭 및 안면 지방 위축을 교정하기 위해 사용된다. 미용적으로 진피 충전제를 사용하여 피부 주름을 최소화하고 얼굴 윗면, 중간 및 아랫면의 눌린 흉터를 들어 올려 미세한 이마 선과 눈가 주름을 제거한다. 진피 충전제는 볼륨과 양력을 회복하고, 말라 지방 패드의 하강을 교정하고, 팔자 주름을 부드럽게 하여 이러한 효과를 역전시킨다. 진피 충전제 사용의 인기가 높아지고, 모든 적응증에 적용할 수 있는 제품이 하나도 없기 때문에 단지 지난 ~ 5 년 이내에 연조직 확대용 신제품 5 개를 FDA 승인을 받아 사용 가능한 진피 충전제 제품도 증가했다. 처음에는, 자가 조직과 동물 유래 콜라겐을 사용할 수 있었다; 이제 진피 충전제 옵션은 생중합체와 합성 임플란트를 포함한다. 진피 충전제는 임시 (비영구), 반영구 및 영구의 세 가지 유형으로 제한없이 분류된다. 콜라겐, 히알루론산 (HA) 및 기타 생물학적-기초 및 생분해성 충전제는 일시적이며 효과는 몇 개월에서 2 년까지 지속된다. 반영구 충전제는 몇 년 동안 지속되는 효과를 가지며 생분해성 폴리-L- 락트산 및 칼슘 하이드록시아파타이트-기초 제품을 포함한다; 영구 충전제 제품은 5 년 이상 지속될 수 있으며 비-생분해성 폴리메틸메타크릴레이트 (PMMA), 폴리아크릴아미드 하이드로겔 및 액체 실리콘을 포함한다.

안타깝게도 수십 년간의 연구와 개발 후에도 현재의 진피 충전제에는 한계가 있다. 일부 환자에서 현재 이용가능한 진피 충전제 제품의 주사으로 인한 부작용이 보고되었다. 이는 즉각적인 통증, 과민증 및 아나필락시스, 초기 주사 후 부종, 홍반, 감염, 과다교정 및 괴사, 주사 후 후기 포진 (HSV) 활성화, 청색 피부 변색 (틴달 효과로 설명됨), 결절 또는 육아종 형성 그리고 영구적인 주사 후 흉터를 포함한다. 일반적으로 더 영구적인 충전제 제품은 이러한 반응 중 더 심각한 원인이 되는 반면, HA-기초 충전제와 같은 일시적인 제품은 덜 심각한 반응으로 이어진다. 한편 대중은 더 오래 지속되는 결과를 제공하고 종종 해결하기 어려운 합병증을 피하는 제품을 선호할 가능성이 높다. 이 목표를 달성하기 위한 한 가지 전략은 지속성을 늘리기 위해 히알루론산 (HA)-기초 하이드로겔을 개질하는 것이다. 피부에서 자연적으로 발견되는 HA는 체내 회전율이 높기 때문에 HA를 오래 지속되는 진피 충전제로 사용하기가 어렵다. 임상 지속성을 개선하기 위해 HA 사슬의 가교를 통해 진피 충전제에서 HA의 안정성을 향상시킬 수 있다. 가교결합은 효소 히알루로니다제 및 활성 산소 종 (예를 들어 슈퍼옥사이드)과 같은 분해 인자가 개별 HA 사슬에 접근하는 것을 제한하여 분해로부터 보호한다. 더욱이, 하나의 특정 방법 - VyCross ™ 기술을 통해 가교결합된 HA는 최근 진피 충전제에서 볼 수 있는 보다 심각한 부작용 중 하나인 지연-온셋 펌(firm) 병변의 발생 증가와 관련이 있다. 진피 충전제로 사용하기 위해, 하이드로겔 재료는 적절한 점탄성 및 변형에 대한 저항성 (G '이 더 높은 "더 단단한" 재료), 주사 중 유동 용이성 (낮은 IF) 및 생체 내 분해에 대한 지속성 또는 저항성을 나타내는 것이 바람직한다 (일반적으로 더 높은 MoD로 달성됨).

이러한 이유로 HA-기초 하이드로 겔을 개질하고 최적화하기 위한 다른 전략이 연구 중에 있다; 내구성을 유지하면서 부작용을 피할 수 있는 잠재력이 더 클 것으로 예상된다. 피부 결찰을 위해 수세기 동안 사용된 최초의 이식가능한 생체 재료인 실크 피브로인은 잘 확립된 사용 역사와 인간 피부와의 호환성을 자랑한다. 또한, 실크 피브로인 단백질은 배양시 섬유 아세포에 의한 콜라겐 생성을 유도하고 섬유 아세포 세포 밀도를 증가시킨다. 따라서, 실크 피브로인을 진피 충전제에 통합하면 처리된 피부 조직에서 콜라겐 생성을 촉진할 수 있는 잠재력이 있으며, 결과적으로 재생 및 미용 유용성을 갖는 제품이 생성된다. 실크 피브로인 단백질의 사용은 다른 장점도 자랑한다: 다른 생체 재료에 비해 뛰어난 강도와 인성을 제공하고 다양한 구조적 형태를 채택할 수 있는 고유한 능력을 가진 고유한 구조로 인해 피브로인 단위는 유기체에 해로운 영향을 미치는 용매, 가소제 또는 촉매가 필요없는 고차 중합체의 수십 개의 서로 다른 형태로 자체 조립할 수 있다. HA-기초 하이드로 겔에 실크 피브로인을 추가하는 것 외에도 생체적합성이 입증된 중합체인 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 사용하면 실크-HA 진피 충전제 겔의 기계적 특성 제어에서 추가적인 이점이 있다. 수십 년 동안 PEG는 생물 활성제를 전달하기 위한 다른 캐리어/코팅의 변형으로 사용되어 왔으며, 나노캐리어의 생체적합성, 친수성, 안정성 및 생분해성을 향상시키고 종종 생물 활성 물질 및 캐리어의 독성을 효과적으로 감소시킨다. 본 개시물은 최근 진피 충전제 시장에서 볼 수 있는 부작용 문제를 피하는 새로운 치료 옵션을 제공하기 위해 새로운 실크-기초 진피 충전제 제제 및 제품을 제공한다. 생체적합성 프로파일을 유지하면서 상이한 에스테틱 및 의학적 적응증의 호스트의 요구를 개별적으로 충족시키는 상이한 특성을 갖는 본원에 기재된 실크-함유 진피 충전제를 제조할 수 있다.

실크-HA 복합재는 조직 공학에서 스캐폴드로서 다양한 용도에 대해 연구되었지만 진피 충전제로서의 용도에 대한 탐색은 실크-HA 하이드로 겔의 사용 가능성을 확대하고 에스테틱 시장에 대한 상당한 가능성을 가지고 있는 진피 충전제의 제제에 대한 새로운 접근 방식의 기초를 나타낸다. 본 개시물은 제품 지속성을 촉진하는 특성(높은 MoD)을 유지하면서 다양한 적응증을 위한 진피 충전제 제품의 개발에 중요한 저장 탄성률 (G ')이 다양한 실크 함입 HA 하이드로 겔의 제제를 위한 새로운 플랫폼 - 활성화된 실크 하이드로 겔 플랫폼- 확립을 설명한다. 실제로, 주요 후보 (AS-V1)는 작동가능한 IF 및 바람직한 G '에서 높은 MoD와 함께 피내 조직 충전제 적용에 적합한 특성을 보여주는 유망한 시험관 내 및 생체 내 성능을 보여주었다 (아래 실시예 32-35 참조).

실크를 HA 기초 진피 충전제에 함입하면 여러 면에서 유리한 선택을 할 수 있다. 실크 단백질의 함입은 현재 진피 충전제 제품에서 발생하는 부작용 중 일부를 피하기 위해 도움이 될 수 있다. 예를 들어, AS-V1은 시중에서 판매되는 제품에 비해 UV 내지 청색 가시 광선에 대한 흡수가 증가한 것으로 나타났는데, 이는 환자 피부에 틴달 유형의 청색 현상이 발생할 가능성이 적어 표재 에스테틱 교정에 더 적합할 수 있음을 나타낸다. 일부 충전제 제품에서 병변/결절 형성이 관찰되었는데, 이는 잠재적으로 VyCrossTM 기술에서 발생하는 것과 같은 높은 수준의 가교결합 또는 HA의 여러 크기 (분자량) 사용의 결과이다. 이것은 단일 크기의 HA가 사용되기 때문에 실크 함유 하이드로 겔로 피할 수 있으며 MoD는 쉽게 조절할 수 있다.

또한 AS-V1은 안전성 및 효능 시험 분야에서 현재 시장의 리더와 동등하거나 더 나은 성능을 발휘한다. 생체적합성 시험은 생체 내 사용을 위한 세 가지 겔 구성 요소 모두의 입증된 안전성을 바탕으로 세워진 예상을 확인했다: (1) 피부의 점탄성 세포외 매트릭스의 천연 성분인 HA; (2) 피부 조직 재구성을 포함하여 역사 전반에 걸쳐 다양한 생의학 응용 분야에서 사용된 실크; 및 (3) 생체적합성 중합체로서의 PEG (하기 실시예 32-35 참조). 실제로 AS-V1은 ISO 10993 생체적합성 연구의 모든 기준을 충족했으며, 생체 내 연구에서 최소의 주사-후 자극과 멍, 및 시판 제품과 비슷하거나 더 낮은 수준의 염증을 유발했다. 지속성, 분해, 이동 및 가역성의 생체 내 하이드로 겔 성능 특성도 AS-V1과 시판 제품 간에 유사했다. 특히, AS-V1 진피 충전제는 팔자 주름 치료로 12 개월 지속한다고 알려진 Juvederm Ultra Plus XC와 비교하여 주사 후 12 개월 동안 남아 있는 겔 부피로 소정의 지속성 기준을 충족한다 (아래 도 61D-E 및 도 62A-J). 또한 실크-HA 겔은 Juvederm Ultra Plus XC보다 피부의 콜라겐 매트릭스에 더 매끄럽게 함입되고 (도 63A-D 아래); 이것은 두 겔 사이의 점도 차이 및/또는 실크 단백질 포함의 결과일 수 있고, 가설은 향후 연구에서 시험될 것이다.

실크를 HA-기초 진피 충전제에 함입시키는 전략은 다양한 에스테틱 및 의학적 적응증에 적합한 진피 충전제 제품의 제품군을 생성할 수 있는 잠재력을 지닌 개발된 제제 플랫폼의 다양성에서부터, 결과적인 겔의 우수한 생체적합성에 이르기까지 다양한 측면에서 유리한다.

실크를 HA 기초 진피 충전제에 함입하여 얻을 수 있는 주요 이점은 다음과 같다: (1) 다양한 표적 응용 분야에서 진피 충전제 제품은 다양한 기계적 특성, 지속성 및 가역성 프로필을 필요로 한다. 실크 피브로인은 수십 개의 서로 다른 고도로 정렬된 중합체/구조 형태로 자가 조립할 수 있고 온도, 수분 및 pH의 변화에 대해 회복력이 있기 때문에, 물에 결합하는 능력 (팽윤 가능성)을 포함한 하이드로 겔의 물리화학적 및 기계적 특성은, 상이한 HA 형태의 혼합 또는 가교결합제의 농도의 다양화 대신 단일의 더 작은 HA 사슬과 조합하여 실크 농도의 다양화를 통해 제어할 수 있다. 이것은 본원에 기술된 플랫폼이 다양한 실크-HA 진피 충전제 제제를 생성하는 능력을 가리킨다; (2) 실크-HA 하이드로 겔은 틴달 효과를 피할 수 있는 가능성을 나타내는 특성을 가지고 있고, 현재 이용 가능한 HA-기초 제품과 유사한 가역성 프로파일을 가지며, 비독성, 생체적합성 정제된 실크 피브로인 단백질 및 PEG 가교결합제를 함입하기 때문에 사용에 의해 부작용을 일으키는 가능성이 상대적으로 낮다.

여기에 설명된 활성화된 실크 하이드로 겔 플랫폼은 수십 개의 서로 다른 고도로 정렬된 중합체/구조 형태로 자가 조립되는 실크 피브로인의 고유한 능력, 및 온도, 수분 및 pH 변화에 대한 실크 피브로인의 자연 회복력을 활용한다. 이 플랫폼을 통해 물을 결합하는 능력 (팽창 가능성) 및 피부와의 상호 작용을 포함한 하이드로 겔의 생물물리적 특성은 상이한 HA 형태의 혼합 또는 가교결합제의 농도 다양화 대신 하나의 더 작은 HA 체인과 조합하여 실크의 농도 다양화를 통해 제어할 수 있다. 사실, Activated Silk Hydrogel 플랫폼은 이미 다양한 구조적 특성을 가진 제품 라이브러리를 생성하기 위해 활용되었으며 (아래 도 56), 이로부터 기계적 특성 및 지속성과 같이 환자에서의 성능에 결정적으로 중요한 겔 특성이 다양한 표적 응용용도에 대해 최적화될 수 있다. AS-V1 제품의 우수한 성능 특성에 기초하여, 다양한 에스테틱 및 의학적 적응증의 호스트에 적합한 실크-함유 진피 충전제가 출시되어, 부작용 문제를 방지할 가능성이 낮은 새로운 치료 옵션을 제공할 것으로 기대한다.

실크 단백질 단편 (SPF)을 포함하는 조직 충전제가 본원에 개시된다. 일부 구체예에서, 본 개시물은 히알루론산 기초 하이드로 겔의 개질에 초점을 맞추어, 합병증을 피하면서 더 오래 지속되는 결과를 제공하는 진피 충전제를 설명한다. 일부 구체예에서, 본 개시물은 실크 피브로인이 히알루론산 기초 하이드로 겔에 성공적으로 통합되어, 하이드로 겔의 기계적, 광학적 및 지속성 특성의 효율적인 최적화를 가능하게 하는 활성화된 실크 하이드로 겔 플랫폼을 설명한다. 일부 구체예에서, 본 개시물은 히알루론산, 실크 피브로인 및 폴리에틸렌 글리콜의 혼합물을 사용하여 활성화된 실크 하이드로 겔 플랫폼을 사용하여 실크-HA 하이드로 겔을 제조하는 방법을 설명한다.

일부 구체예에서, 본 개시물은 실크 피브로인/히알루론산/폴리에틸렌 글리콜 하이드로 겔 시스템을 설명한다. 일부 구체예에서, 본 개시물은 다양한 미용 및 의학적 적응증에 진피 충전제로서 적용하기에 적합한 물리화학적 특성 (예를 들어, 기계적 강도, 탄성, 하이드로 겔의 수분 함량은 연조직과 유사함)을 나타내는 실크-HA 하이드로 겔을 설명한다.

일부 구체예에서, 조직 충전제는 SPF 및 히알루론산 (HA)를 포함할 수 있는 여기서 기술된 조성물로부터 제조된다. 일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 진피 충전제일 수 있다.

일부 구체예에서, 진피 충전제는 약 5 kDa 및 약 5 MDa 사이, 약 100 kDa 및 약 4 MDa 사이, 또는 약 500 kDa 및 약 3 MDa 사이의 MW를 갖는 HA를 사용함에 의해 여기서 기술된 공정에 의해 제조된다. 일부 구체예에서, 진피 충전제는 약 50 kDa, 약 100 kDa, 약 150 kDa, 약 200 kDa, 약 250 kDa, 약 300 kDa, 약 350 kDa, 약 400 kDa, 약 450 kDa, 약 500 kDa, 약 550 kDa, 약 600 kDa, 약 650 kDa, 약 700 kDa, 약 750 kDa, 약 800 kDa, 약 850 kDa, 약 900 kDa, 약 950 kDa, 약 1000 kDa, 약 1050 kDa, 약 1100 kDa, 약 1150 kDa, 약 1200 kDa, 약 1250 kDa, 약 1300 kDa, 약 1350 kDa, 약 1400 kDa, 약 1450 kDa, 약 1500 kDa, 약 1550 kDa, 약 1600 kDa, 약 1650 kDa, 약 1700 kDa, 약 1750 kDa, 약 1800 kDa, 약 1850 kDa, 약 1900 kDa, 약 1950 kDa, 약 2000 kDa, 약 2050 kDa, 약 2100 kDa, 약 2150 kDa, 약 2200 kDa, 약 2250 kDa, 약 2300 kDa, 약 2350 kDa, 약 2400 kDa, 약 2450 kDa, 약 2500 kDa, 약 2550 kDa, 약 2600 kDa, 약 2650 kDa, 약 2700 kDa, 약 2750 kDa, 약 2800 kDa, 약 2850 kDa, 약 2900 kDa, 약 2950 kDa, 약 3000 kDa, 약 3050 kDa, 약 3100 kDa, 약 3150 kDa, 약 3200 kDa, 약 3250 kDa, 약 3300 kDa, 약 3350 kDa, 약 3400 kDa, 약 3450 kDa, 약 3500 kDa, 약 3550 kDa, 약 3600 kDa, 약 3650 kDa, 약 3700 kDa, 약 3750 kDa, 약 3800 kDa, 약 3850 kDa, 약 3900 kDa, 약 3950 kDa, 또는 약 4000 kDa의 MW를 갖는 HA를 사용함에 의해 여기서 기술된 공정에 의해 제조된다. HA의 상기 MW 중 어느 것은 어느 가능한 비율로, HA의 상기 MW의 다른 것과 혼합될 수 있다. 일부 구체예에서, 진피 충전제는 높은 MW HA을 낮은 MW HA와 혼합하여 제조되고, 여기서 높은 MW HA는 약 0.01%, 또는 약 0.1%, 또는 약 0.2%, 또는 약 0.3%, 또는 약 0.4%, 또는 약 0.5%, 또는 약 0.6%, 또는 약 0.7%, 또는 약 0.8%, 또는 약 0.9%, 또는 약 1%, 또는 약 2%, 또는 약 3%, 또는 약 4%, 또는 약 5%, 또는 약 6%, 또는 약 7%, 또는 약 8%, 또는 약 9%, 또는 약 10%, 또는 약 11%, 또는 약 12%, 또는 약 13%, 또는 약 14%, 또는 약 15%, 또는 약 16%, 또는 약 17%, 또는 약 18%, 또는 약 19%, 또는 약 20%, 또는 약 21%, 또는 약 22%, 또는 약 23%, 또는 약 24%, 또는 약 25%, 또는 약 26%, 또는 약 27%, 또는 약 28%, 또는 약 29%, 또는 약 30%, 또는 약 31%, 또는 약 32%, 또는 약 33%, 또는 약 34%, 또는 약 35%, 또는 약 36%, 또는 약 37%, 또는 약 38%, 또는 약 39%, 또는 약 40%, 또는 약 41%, 또는 약 42%, 또는 약 43%, 또는 약 44%, 또는 약 45%, 또는 약 46%, 또는 약 47%, 또는 약 48%, 또는 약 49%, 또는 약 50%, 또는 약 51%, 또는 약 52%, 또는 약 53%, 또는 약 54%, 또는 약 55%, 또는 약 56%, 또는 약 57%, 또는 약 58%, 또는 약 59%, 또는 약 60%, 또는 약 61%, 또는 약 62%, 또는 약 63%, 또는 약 64%, 또는 약 65%, 또는 약 66%, 또는 약 67%, 또는 약 68%, 또는 약 69%, 또는 약 70%, 또는 약 71%, 또는 약 72%, 또는 약 73%, 또는 약 74%, 또는 약 75%, 또는 약 76%, 또는 약 77%, 또는 약 78%, 또는 약 79%, 또는 약 80%, 또는 약 81%, 또는 약 82%, 또는 약 83%, 또는 약 84%, 또는 약 85%, 또는 약 86%, 또는 약 87%, 또는 약 88%, 또는 약 89%, 또는 약 90%, 또는 약 91%, 또는 약 92%, 또는 약 93%, 또는 약 94%, 또는 약 95%, 또는 약 96%, 또는 약 97%, 또는 약 98%, 또는 약 99%, 또는 약 99.5%, 또는 약 99.9%의 비율이다.

일부 구체예에서, 진피 충전제는 약 5 kDa 및 약 35 kDa 사이 MW를 갖는 실크 SPF를 사용함에 의해 여기서 기술된 공정에 의해 제조된다. 일부 구체예에서, 진피 충전제는 약 5 kDa, 또는 약 6 kDa, 또는 약 7 kDa, 또는 약 8 kDa, 또는 약 9 kDa, 또는 약 10 kDa, 또는 약 11 kDa, 또는 약 12 kDa, 또는 약 13 kDa, 또는 약 14 kDa, 또는 약 15 kDa, 또는 약 16 kDa, 또는 약 17 kDa, 또는 약 19 kDa, 또는 약 19 kDa, 또는 약 20 kDa, 또는 약 21 kDa, 또는 약 22 kDa, 또는 약 23 kDa, 또는 약 24 kDa, 또는 약 25 kDa, 또는 약 26 kDa, 또는 약 27 kDa, 또는 약 28 kDa, 또는 약 29 kDa, 또는 약 30 kDa의 MW를 갖는 실크 SPF를 사용함에 의해 여기서 기술된 공정에 의해 제조된다.

일부 구체예에서, 진피 충전제는 약 80 mg/ml, 또는 약 81 mg/ml, 또는 약 82 mg, ml, 또는 약 83 mg/ml, 또는 약 84 mg/ml, 또는 약 85 mg/ml, 또는 약 86 mg/ml, 또는 약 87 mg/ml, 또는 약 88 mg/ml, 또는 약 89 mg/ml, 또는 약 90 mg/ml, 또는 약 91 mg/ml, 또는 약 92 mg/ml, 또는 약 93 mg/ml, 또는 약 94 mg/ml, 또는 약 95 mg/ml, 또는 약 96 mg/ml, 또는 약 97 mg/ml, 또는 약 98 mg/ml, 또는 약 99 mg/ml, 또는 약 100 mg/ml, 또는 약 101 mg/ml, 또는 약 102 mg/ml, 또는 약 103 mg/ml, 또는 약 104 mg/ml, 또는 약 105 mg/ml, 또는 약 106 mg/ml, 또는 약 107 mg/ml, 또는 약 108 mg/ml, 또는 약 109 mg/ml, 또는 약 110 mg/ml, 또는 약 111 mg/ml, 또는 약 112 mg/ml, 또는 약 113 mg/ml, 또는 약 114 mg/ml, 또는 약 115 mg/ml, 또는 약 116 mg/ml, 또는 약 117 mg/ml, 또는 약 118 mg/ml, 또는 약 119 mg/ml, 또는 약 120 mg/ml, 또는 더 높은 HA의 초기 농도를 사용함에 의해 여기서 기술된 공정에 의해 제조된다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 진피 충전제는 총 HA 및 실크 SPF의 약 0.1%, 또는 약 0.2%, 또는 약 0.3%, 또는 약 0.4%, 또는 약 0.5%, 또는 약 0.6%, 또는 약 0.7%, 또는 약 0.8%, 또는 약 0.9%, 또는 약 1%, 또는 약 1.1%, 또는 약 1.2%, 또는 약 1.3%, 또는 약 1.4%, 또는 약 1.5%, 또는 약 1.6%, 또는 약 1.7%, 또는 약 1.8%, 또는 약 1.9%, 또는 약 2%, 또는 약 2.1%, 또는 약 2.2%, 또는 약 2.3%, 또는 약 2.4%, 또는 약 2.5%, 또는 약 2.6%, 또는 약 2.7%, 또는 약 2.8%, 또는 약 2.9%, 또는 약 3%, 또는 약 3.1%, 또는 약 3.2%, 또는 약 3.3%, 또는 약 3.4%, 또는 약 3.5%, 또는 약 3.6%, 또는 약 3.7%, 또는 약 3.8%, 또는 약 3.9%, 또는 약 4%, 또는 약 4.1%, 또는 약 4.2%, 또는 약 4.3%, 또는 약 4.4%, 또는 약 4.5%, 또는 약 4.6%, 또는 약 4.7%, 또는 약 4.8%, 또는 약 4.9%, 또는 약 5%의 실크 SPF 농도를 가진다.

일부 구체예에서, 진피 충전제는 약 100, 약 200, 약 300, 약 400, 약 500, 약 600, 약 700, 약 800, 약 900, 약 1000, 약 1100, 또는 약 1200의 Mn를 갖는 PEGDE 가교결합제를 사용함에 의해 여기서 기술된 공정에 의해 제조된다.

일부 구체예에서, 진피 충전제는 약 35 ℃, 약 36 ℃, 약 37 ℃, 약 38 ℃, 약 39 ℃, 약 40 ℃, 약 41 ℃, 약 42 ℃, 약 43 ℃, 약 44 ℃, 약 45 ℃, 약 46 ℃, 약 47 ℃, 약 48 ℃, 약 49 ℃, 약 50 ℃, 약 51 ℃, 약 52 ℃, 약 53 ℃, 약 54 ℃, 또는 약 55 ℃에서 가교결합 단계를 포함하는 반응 조건을 사용함에 의해 여기서 기술된 공정에 의해 제조된다. 일부 구체예에서, 진피 충전제는 약 15 분, 약 16 분, 약 17 분, 약 18 분, 약 19 분, 약 20 분, 약 21 분, 약 22 분, 약 23 분, 약 24 분, 약 25 분, 약 26 분, 약 27 분, 약 28 분, 약 29 분, 약 30 분, 약 31 분, 약 32 분, 약 33 분, 약 34 분, 약 35 분, 약 36 분, 약 37 분, 약 38 분, 약 39 분, 약 40 분, 약 41 분, 약 42 분, 약 43 분, 약 44 분, 약 45 분, 약 46 분, 약 47 분, 약 48 분, 약 49 분, 약 50 분, 약 51 분, 약 52 분, 약 53 분, 약 54 분, 약 55 분, 약 56 분, 약 57 분, 약 58 분, 약 59 분, 약 60 분, 약 61 분, 약 62 분, 약 63 분, 약 64 분, 또는 약 65 분의 가교결합 단계를 포함하는 반응 조건을 사용함에 의해 여기서 기술된 공정에 의해 제조된다.

일부 구체예에서, 진피 충전제는 유리 HA, 예를 들어 비-가교결합된 HA를 포함한다. 일부 구체예에서, 진피 충전제는 총 HA (가교결합된 HA 및 비-가교결합된 HA)의 약 0.1%, 또는 약 0.2%, 또는 약 0.3%, 또는 약 0.4%, 또는 약 0.5%, 또는 약 0.6%, 또는 약 0.7%, 또는 약 0.8%, 또는 약 0.9%, 또는 약 1%, 또는 약 1.1%, 또는 약 1.2%, 또는 약 1.3%, 또는 약 1.4%, 또는 약 1.5%, 또는 약 1.6%, 또는 약 1.7%, 또는 약 1.8%, 또는 약 1.9%, 또는 약 2%, 또는 약 2.1%, 또는 약 2.2%, 또는 약 2.3%, 또는 약 2.4%, 또는 약 2.5%, 또는 약 2.6%, 또는 약 2.7%, 또는 약 2.8%, 또는 약 2.9%, 또는 약 3%, 또는 약 3.1%, 또는 약 3.2%, 또는 약 3.3%, 또는 약 3.4%, 또는 약 3.5%, 또는 약 3.6%, 또는 약 3.7%, 또는 약 3.8%, 또는 약 3.9%, 또는 약 4%, 또는 약 4.1%, 또는 약 4.2%, 또는 약 4.3%, 또는 약 4.4%, 또는 약 4.5%, 또는 약 4.6%, 또는 약 4.7%, 또는 약 4.8%, 또는 약 4.9%, 또는 약 5%, 약 5.1%, 또는 약 5.2%, 또는 약 5.3%, 또는 약 5.4%, 또는 약 5.5%, 또는 약 5.6%, 또는 약 5.7%, 또는 약 5.8%, 또는 약 5.9%, 또는 약 6%, 또는 약 6.1%, 또는 약 6.2%, 또는 약 6.3%, 또는 약 6.4%, 또는 약 6.5%, 또는 약 6.6%, 또는 약 6.7%, 또는 약 6.8%, 또는 약 6.9%, 또는 약 7%, 또는 약 7.1%, 또는 약 7.2%, 또는 약 7.3%, 또는 약 7.4%, 또는 약 7.5%, 또는 약 7.6%, 또는 약 7.7%, 또는 약 7.8%, 또는 약 7.9%, 또는 약 8%, 또는 약 8.1%, 또는 약 8.2%, 또는 약 8.3%, 또는 약 8.4%, 또는 약 8.5%, 또는 약 8.6%, 또는 약 8.7%, 또는 약 8.8%, 또는 약 8.9%, 또는 약 9%, 또는 약 9.1%, 또는 약 9.2%, 또는 약 9.3%, 또는 약 9.4%, 또는 약 9.5%, 또는 약 9.6%, 또는 약 9.7%, 또는 약 9.8%, 또는 약 9.9%, 또는 약 10%를 포함한다. 일부 구체예에서, 진피 충전제는 유리 HA을 포함하지 않는다.

일부 구체예에서, 진피 충전제는 약 10 mg/ml, 약 11 mg/ml, 약 12 mg/ml, 약 13 mg/ml, 약 14 mg/ml, 약 15 mg/ml, 약 16 mg/ml, 약 17 mg/ml, 약 18 mg/ml, 약 19 mg/ml, 약 20 mg/ml, 약 21 mg/ml, 약 22 mg/ml, 약 23 mg/ml, 약 24 mg/ml, 약 25 mg/ml, 약 26/mg/ml, 약 27 mg/ml, 약 28 mg/ml, 약 29 mg/ml, 또는 약 30 mg/ml에서 HA를 포함한다.

일부 구체예에서, 진피 충전제는 약 10.0%, 약 10.1%, 약 10.2%, 약 10.3%, 약 10.4%, 약 10.5%, 약 10.6%, 약 10.7%, 약 10.8%, 약 10.9%, 약 11.0%, 약 11.1%, 약 11.2%, 약 11.3%, 약 11.4%, 약 11.5%, 약 11.6%, 약 11.7%, 약 11.8%, 약 11.9%, 약 12.0%, 약 12.1%, 약 12.2%, 약 12.3%, 약 12.4%, 약 12.5%, 약 12.6%, 약 12.7%, 약 12.8%, 약 12.9%, 약 13.0%, 약 13.1%, 약 13.2%, 약 13.3%, 약 13.4%, 약 13.5%, 약 13.6%, 약 13.7%, 약 13.8%, 약 13.9%, 약 14.0%, 약 14.1%, 약 14.2%, 약 14.3%, 약 14.4%, 약 14.5%, 약 14.6%, 약 14.7%, 약 14.8%, 약 14.9%, 약 15.0%, 약 15.1%, 약 15.2%, 약 15.3%, 약 15.4%, 약 15.5%, 약 15.6%, 약 15.7%, 약 15.8%, 약 15.9%, 약 16.0%, 약 16.1%, 약 16.2%, 약 16.3%, 약 16.4%, 약 16.5%, 약 16.6%, 약 16.7%, 약 16.8%, 약 16.9%, 약 17.0%, 약 17.1%, 약 17.2%, 약 17.3%, 약 17.4%, 약 17.5%, 약 17.6%, 약 17.7%, 약 17.8%, 약 17.9%, 약 18.0%, 약 18.1%, 약 18.2%, 약 18.3%, 약 18.4%, 약 18.5%, 약 18.6%, 약 18.7%, 약 18.8%, 약 18.9%, 약 19.0%, 약 19.1%, 약 19.2%, 약 19.3%, 약 19.4%, 약 19.5%, 약 19.6%, 약 19.7%, 약 19.8%, 약 19.9%, 또는 약 20.0%의 MoD를 가진다.

일부 구체예에서, 진피 충전제는 약 5 N, 약 6 N, 약 7 N, 약 8 N, 약 9 N, 약 10 N, 약 11 N, 약 12 N, 약 13 N, 약 14 N, 약 15 N, 약 16 N, 약 17 N, 약 18 N, 약 19 N, 약 20 N, 약 21 N, 약 22 N, 약 23 N, 약 24 N, 또는 약 25 N의 주사 힘을 가진다. 일부 구체예에서, 주사 힘은 30 G 니들을 통한 주사제에 관련된다.

여기서 제공된 조직 충전제는 하나 이상의 성분 가령 SPF, 예를 들어 가교결합된 SPF 및/또는 비-가교결합된 SPF, 히알루론산, 예를 들어 가교결합된 HA 및/또는 비-가교결합된 HA를 추가로 포함하는 조성물을 포함한다. 여기서 사용된, 가교결합된 SPF는 동일 또는 비-동일 SPF와 가교결합된 SPF를 지칭한다. 가교결합된 SPF는 호모-가교결합된 SPF로 또한 지칭될 수 있다. 여기서 사용된, 가교결합된 HA는 동일 또는 비-동일 HA와 가교결합된 HA를 지칭한다. 가교결합된 HA는 호모-가교결합된 HA로 또한 지칭될 수 있다. 여기서 제공된 조직 충전제는 HA에 가교결합된 SPF, 및/또는 SPF에 가교결합된 HA를 또한 포함할 수 있다. HA에 가교결합된 SPF, 및/또는 SPF에 가교결합된 HA는 가교결합된 SPF-HA, 또는 헤테로-가교결합된 SPF-HA로 또한 지칭될 수 있다.

일부 구체예에서, 본발명의 조성물은 1상이다. 일부 구체예에서, 본발명의 조성물은 2상, 또는 다상이다. 일부 구체예에서, 본발명의 조성물은 비-가교결합된 중합체 상, 예를 들어 비-가교결합된 SPF, 및/또는 비-가교결합된 HA를 포함한다. 일부 구체예에서, 본발명의 조성물은 가교결합된 상, 예를 들어 가교결합된 SPF, 및/또는 가교결합된 HA를 포함한다. 일부 구체예에서, 본발명의 조성물은 액체 상, 예를 들어 물, 및/또는 수성 용액을 포함한다. 일부 구체예에서, 수성 용액은 SPF를 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 수성 상은 HA를 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 액체 상은 비-가교결합된 중합체 가령 비-가교결합된 HA 및/또는 비-가교결합된 SPF를 포함할 수 있다.

일부 구체예에서, 본발명의 조성물은 캐리어 상을 포함한다. 이와 같이, 개시된 조성물은 1상 또는 다상 조성물일 수 있다. 여기서 사용된, 용어 "캐리어 상"은 "캐리어"와 동의어이고 하이드로겔의 유동성을 증가시키기 위해 사용된 재료를 지칭한다. 캐리어는 유리하게는 생리학적으로-허용가능한 캐리어이고 약제학적 조성물 내에서 유용한 하나 이상의 종래의 부형제를 포함할 수 있다. 여기서 사용된, 용어 "생리학적으로-허용가능한 캐리어"는 살아 있는 유기체의 정상 기능에 따르는 캐리어, 또는 이의 특징적인 캐리어를 지칭한다. 이와 같이, 하이드로겔 및 캐리어를 포함하는 조성물의 투여는 포유동물에 투여된 때 장기 또는 영구 치명적 효과가 실질적으로 없다. 본 조직 충전제는 여기서 대부분의 부피가 물 또는 식염수인 캐리어를 포함한다. 그러나, 다른 유용한 캐리어는 니들을 통한 또는 표적 호스트 환경 내로의 하이드로겔의 압출성 또는 침입성에 의해 개선되는 생리학적으로 허용가능한 재료를 포함한다. 잠재적인 캐리어는 비제한적으로 생리학적 완충제 용액, 혈청, 다른 단백질 용액, 단백질, 당단백질, 프로테오글리칸, 또는 다당류를 포함하는 중합체로 구성된 겔을 포함할 수 있다. 표시된 잠재적인 캐리어 중 어느 것은 천연 유래, 완전히 합성, 또는 그의 조합일 수 있다.

하나의 구체예에서, 여기서 제공된 조성물은 개질 SPF, 가교결합된 SPF, 비-가교결합된 SPF, 개질 HA, 가교결합된 HA, 비-가교결합된 HA, 호모-가교결합된 SPF, 호모-가교결합된 HA, 및 헤테로-가교결합된 SPF-HA 다음 중 하나 이상:을 포함한다.

일부 구체예에서, 여기서 제공된 조성물은 가교결합된 SPF 및 비-가교결합된 SPF를 포함한다. 일부 구체예에서, 여기서 제공된 조성물은 가교결합된 SPF 및 비-가교결합된 HA를 포함한다. 일부 구체예에서, 여기서 제공된 조성물은 가교결합된 SPF 및 가교결합된 SPF-HA를 포함한다.

일부 구체예에서, 여기서 제공된 조성물은 비-가교결합된 SPF 및 비-가교결합된 HA를 포함한다. 일부 구체예에서, 여기서 제공된 조성물은 비-가교결합된 SPF 및 가교결합된 HA를 포함한다. 일부 구체예에서, 여기서 제공된 조성물은 비-가교결합된 SPF 및 가교결합된 SPF-HA를 포함한다.

일부 구체예에서, 여기서 제공된 조성물은 가교결합된 SPF, 비-가교결합된 SPF, 및 비-가교결합된 HA를 포함한다. 일부 구체예에서, 여기서 제공된 조성물은 가교결합된 SPF, 비-가교결합된 SPF, 및 가교결합된 HA를 포함한다. 일부 구체예에서, 여기서 제공된 조성물은 가교결합된 SPF, 비-가교결합된 SPF, 및 가교결합된 SPF-HA를 포함한다.

일부 구체예에서, 여기서 제공된 조성물은 가교결합된 SPF, 가교결합된 HA, 및 비-가교결합된 HA를 포함한다. 일부 구체예에서, 여기서 제공된 조성물은 가교결합된 SPF, 가교결합된 HA, 및 가교결합된 SPF-HA를 포함한다. 일부 구체예에서, 여기서 제공된 조성물은 가교결합된 SPF, 비-가교결합된 HA, 및 가교결합된 SPF-HA를 포함한다.

일부 구체예에서, 여기서 제공된 조성물은 비-가교결합된 SPF, 가교결합된 HA, 및 비-가교결합된 HA를 포함한다. 일부 구체예에서, 여기서 제공된 조성물은 비-가교결합된 SPF, 가교결합된 HA, 및 가교결합된 SPF-HA를 포함한다. 일부 구체예에서, 여기서 제공된 조성물은 비-가교결합된 SPF, 비-가교결합된 HA, 및 가교결합된 SPF-HA를 포함한다.

일부 구체예에서, 여기서 제공된 조성물은 가교결합된 SPF, 비-가교결합된 SPF, 가교결합된 HA, 및 비-가교결합된 HA를 포함한다. 일부 구체예에서, 여기서 제공된 조성물은 가교결합된 SPF, 비-가교결합된 SPF, 가교결합된 HA, 및 가교결합된 SPF-HA를 포함한다. 일부 구체예에서, 여기서 제공된 조성물은 가교결합된 SPF, 비-가교결합된 SPF, 비-가교결합된 HA, 및 가교결합된 SPF-HA를 포함한다.

일부 구체예에서, 여기서 제공된 조성물은 가교결합된 SPF, 가교결합된 HA, 비-가교결합된 HA, 및 가교결합된 SPF-HA를 포함한다. 일부 구체예에서, 여기서 제공된 조성물은 비-가교결합된 SPF, 가교결합된 HA, 비-가교결합된 HA, 및 가교결합된 SPF-HA를 포함한다.

일부 구체예에서, 여기서 제공된 조성물은 가교결합된 SPF, 비-가교결합된 SPF, 가교결합된 HA, 비-가교결합된 HA, 및 가교결합된 SPF-HA를 포함한다.

일부 구체예에서, 여기서 제공된 조성물은 가교결합된 SPF를 포함한다. 일부 구체예에서, 여기서 제공된 조성물은 SPF 및 히알루론산 (HA)를 포함한다. 하나의 양상에서, 여기서 기술된 SPF/HA 기초 조성물은 HA 가교결합된 모이어티를 포함한다. 일부 구체예에서, 조성물은 SPF-HA 가교결합된 모이어티를 포함한다. 일부 구체예에서, 조성물은 비-가교결합된 HA를 포함한다. 일부 구체예에서, 조성물은 비-가교결합된 SPF를 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 조성물은 적어도 하나의 부가적 물질을 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 조성물은 가변적 안정성을 갖는 가교결합된 SPF-SPF, SPF-HA, 및 또는 HA-HA를 포함하고, 생흡수성, 및/또는 생재흡수성의 다양한 정도의 조성물을 유발한다.

일부 구체예에서, HA는 매트릭스 내로 가교결합된다. 일부 구체예에서, HA 매트릭스는 하나 이상의 SPF를 봉입시키거나 또는 반-봉입시킨다. 일부 구체예에서, HA는 하나 이상의 SPF와 가교결합된다.

일부 구체예에서, 조직 충전제, 또는 그의 일부는 생체적합성, 생분해성, 생흡수가능한, 생재흡수가능한, 또는 그의 조합이다. 일부 구체예에서, 여기서 제공된 조직 충전제는 유체 성분, 예를 들어 실질적으로 하나 이상의 유체를 포함하는 단일 유체 또는 용액을 포함한다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 물 또는 수성 용액을 포함한다. 일부 구체예에서, 조직 충전제는 본업계에서 공지된 수단 가령, 예를 들어, 이후의 외과적 조직 절제에 의해 피부 하에 주사가능, 이식가능, 또는 송달가능하다. 일부 구체예에서, 조성물은 진피 충전제이다. 일부 구체예에서, 조성물은 살균성이다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 약 1% (w/w) SPF 및 약 0.3% (w/w) 리도케인을 포함할 수 있다.

실크 단백질 단편 (SPFs) 및 히알루론산 (HA)을 포함하는 조성물을 제조하는 방법, SPF 및 HA를 포함하는 조성물의 송달 방법, 및 SPF 및 HA를 포함하는 조성물을 사용하는 처리 방법이 여기서 제공된다.

정의

달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 숙련자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본 명세서에 언급된 모든 특허 및 간행물은 그 전체가 참고로 포함된다.

본 명세서에서 사용된 백분율 기호 "%"는 "wt. % "또는 % w/w, % v/v 또는 % w/v를 포함한다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "a", "an" 또는 "the"는 일반적으로 단수 및 복수 형태를 모두 포함하는 것으로 해석된다.

본원에 사용된 용어 "약"은 일반적으로 당업자에 의해 결정된 허용 가능한 오차 범위 내에 있는 특정 숫자 값을 지칭하며, 이는 부분적으로 숫자 값이 측정 또는 결정되는 방법, 즉 측정 시스템의 한계에 따라 달라질 것이다. 예를 들어 "약"은 주어진 숫자 값의 ± 20 %, ± 10 % 또는 ± 5 % 범위를 의미할 수 있다.

본원에 사용된 용어 "피브로인"또는 "실크 단백질"은 실크를 생산하는 특정 거미 및 곤충 종에 의해 생산된 구조 단백질 유형을 의미한다 (WIPO Pearl-WIPO의 Multilingual Terminology Portal 데이터베이스, https : // wipopearl.wipo.int/en/linguistic에 제공된 정의 참조). 피브로인은 누에 피브로인, 곤충 또는 거미 실크 단백질 (예를 들어 스피드로인), 재조합 거미 단백질, 다른 거미 실크 유형에 존재하는 실크 단백질, 예를 들어 투불리폼 실크 단백질 (TuSP), 편모 실크 단백질, 소수 앰풀 레이트 실크 단백질, 아시니폼(aciniform) 실크 단백질, 피리폼 실크 단백질, 응집 실크 접착제), 유전자 변형 누에가 생산하는 누에 피브로인 또는 재조합 누에 피브로인을 포함할 수 있다.

본원에 사용된 용어 "실크 피브로인"은 누에 피브로인, 유전자 변형 누에에 의해 생성된 실크 피브로인 또는 재조합 누에 피브로인을 지칭한다 ((1) Narayan Ed., Encyclopedia of Biomedical Engineering, Vol. 2, Elsevier, 2019; (2) Kobayashi et al. Eds, Encyclopedia of Polymeric Nanomaterials, Springer, 2014, https://link.springer.com/referenceworkentry/10.1007%2F978-3-642-36199-9_323-1 참조). 한 구체예에서, 실크 피브로인은 Bombyx mori로부터 수득된다.

본원에 사용된 용어 "실크 피브로인 펩티드", "실크 피브로인 단백질-기초 단편" 및 "실크 피브로인 단편"은 상호교환적으로 사용된다. 분자량 또는 아미노산 단위 수는 분자 크기가 중요한 매개 변수가 될 때 정의된다.

본원에 사용된 용어 중합체 "다분산성 (PD)"은 일반적으로 중합체의 분자량 분포의 폭의 측정치로서 사용되며, 식 다분산성 PD = Mw/Mn으로 정의된다.

본원에 사용된 용어 "저 분자량 실크 피브로인 단백질 기초 단편"(저 분자량 실크)은 약 200 Da 내지 약 25 kDa 또는 약 28 kDa 미만, 또는 약 15 kDa 내지 약 28 kDa 사이 중량 평균 분자량 (Mw)을 갖는 실크 피브로인 단편을 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "중 분자량 실크 피브로인 단편" (Med-MW 실크)은 약 25 kDa 내지 약 60 kDa, 또는 약 39 kDa 내지 약 54 kDa 범위의 중량 평균 분자량을 갖는 실크 피브로인 단편을 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "겔화"는 탄성 특성의 점진적인 향상을 수반하는 점도의 지속적인 증가를 수반하는 공정을 의미한다. 중합체 시스템에서 겔화의 주요 원인은 용해된 중합체 또는 그 응집체 간의 상호 작용 향상이다. 미셀화와 달리 겔화는 반-희석에서 고농도의 블록 공중합체 용액으로 발생하며 정렬된 미셀의 배열로 인해 발생한다.

본원에 사용된 용어 "하이드로 겔"은 용해되지 않고 액체에서 팽윤되는 가교결합된 친수성 또는 양친매성 중합체로 만들어진 3 차원 네트워크를 의미한다. 하이드로 겔은 다량의 물을 흡수할 수 있다. 하이드로 겔은 물 또는 수성 매체로 채워진 중간 공극이 있는 분자, 섬유 또는 입자의 저용량 분율 3D 네트워크이다. 하이드로 겔은 두 가지 등급으로 분류할 수 있다: 한 등급은 고분자 사슬의 물리적 결합으로 인한 물리적 겔이고 다른 등급은 네트워크가 공유 결합으로 연결된 화학적 겔 (또는 비가역적 겔)이다. 펜던트 기 또는 3D 네트워크의 백본에 작용기를 포함하면 온도, 전자기장, 화학 물질 및 생체 분자를 포함한 다양한 자극에 반응하여 팽창하는 하이드로 겔 합성이 가능한다. 일 구체예에서, 본원에 기재된 실크-HA 하이드로 겔의 물리적 형태는 마이크로 겔 (하이드로 겔 마이크로 입자) 및 벌크 하이드로 겔을 포함할 수 있다.

여기서 사용된, 용어 "실질적으로 세리신이 없는" 또는 "세리신이 실질적으로 없는"은 대부분의 세리신 단백질이 제거된 실크 섬유, 및/또는 대부분의 세리신 단백질이 제거된 실크 섬유로부터 제조된 SPF를 지칭한다. 구체예에서, 세리신이 실질적으로 없는 실크 피브로인 및 SPF는 약 0.01% (w/w) 및 약 10.0% (w/w) 사이 세리신을 갖는 실크 피브로인 및 SPF를 지칭한다. 구체예에서, 세리신이 실질적으로 없는 실크 피브로인 및 SPF는 약 0.01% (w/w) 및 약 9.0% (w/w) 사이 세리신을 갖는 실크 피브로인 및 SPF를 지칭한다. 구체예에서, 세리신이 실질적으로 없는 실크 피브로인 및 SPF는 약 0.01% (w/w) 및 약 8.0% (w/w) 사이 세리신을 갖는 실크 피브로인 및 SPF를 지칭한다. 구체예에서, 세리신이 실질적으로 없는 실크 피브로인 및 SPF는 약 0.01% (w/w) 및 약 7.0% (w/w) 사이 세리신을 갖는 실크 피브로인 및 SPF를 지칭한다. 구체예에서, 세리신이 실질적으로 없는 실크 피브로인 및 SPF는 약 0.01% (w/w) 및 약 6.0% (w/w) 사이 세리신을 갖는 실크 피브로인 및 SPF를 지칭한다. 구체예에서, 세리신이 실질적으로 없는 실크 피브로인 및 SPF는 약 0.01% (w/w) 및 약 5.0% (w/w) 사이 세리신을 갖는 실크 피브로인 및 SPF를 지칭한다. 구체예에서, 세리신이 실질적으로 없는 실크 피브로인 및 SPF는 약 0% (w/w) 및 약 4.0% (w/w) 사이 세리신을 갖는 실크 피브로인 및 SPF를 지칭한다. 구체예에서, 세리신이 실질적으로 없는 실크 피브로인 및 SPF는 약 0.05% (w/w) 및 약 4.0% (w/w) 사이 세리신을 갖는 실크 피브로인 및 SPF를 지칭한다. 구체예에서, 세리신이 실질적으로 없는 실크 피브로인 및 SPF는 약 0.1% (w/w) 및 약 4.0% (w/w) 사이 세리신을 갖는 실크 피브로인 및 SPF를 지칭한다. 구체예에서, 세리신이 실질적으로 없는 실크 피브로인 및 SPF는 약 0.5% (w/w) 및 약 4.0% (w/w) 사이 세리신을 갖는 실크 피브로인 및 SPF를 지칭한다. 구체예에서, 세리신이 실질적으로 없는 실크 피브로인 및 SPF는 약 1.0% (w/w) 및 약 4.0% (w/w) 사이 세리신을 갖는 실크 피브로인 및 SPF를 지칭한다. 구체예에서, 세리신이 실질적으로 없는 실크 피브로인 및 SPF는 약 1.5% (w/w) 및 약 4.0% (w/w) 사이 세리신을 갖는 실크 피브로인 및 SPF를 지칭한다. 구체예에서, 세리신이 실질적으로 없는 실크 피브로인 및 SPF는 약 2.0% (w/w) 및 약 4.0% (w/w) 사이 세리신을 갖는 실크 피브로인 및 SPF를 지칭한다. 구체예에서, 세리신이 실질적으로 없는 실크 피브로인 및 SPF는 약 2.5% (w/w) 및 약 4.0% (w/w) 사이 세리신을 갖는 실크 피브로인 및 SPF를 지칭한다. 구체예에서, 세리신이 실질적으로 없는 실크 피브로인 및 SPF는 약 0.01% (w/w) 및 약 0.1 % (w/w) 사이 세리신 함량을 갖는 실크 피브로인 및 SPF를 지칭한다. 구체예에서, 세리신이 실질적으로 없는 실크 피브로인 및 SPF는 약 0.1 % (w/w) 아래의 세리신 함량을 갖는 실크 피브로인 및 SPF를 지칭한다. 구체예에서, 세리신이 실질적으로 없는 실크 피브로인 및 SPF는 약 0.05% (w/w) 아래의 세리신 함량을 갖는 실크 피브로인 및 SPF를 지칭한다. 구체예에서, 실크 공급원이 약 30 분 내지 약 60 분 사이의 처리 시간 동안 소듐 카보네이트의 끓는 (100 ℃) 수성 용액에 부가된 때, 약 26 wt.% 내지 약 31 wt.%의 정련 손실이 얻어진다.

여기서 사용된, 용어 "실질적으로 균질"은 확인된 분자량에 대해 정상 분포로 분포된 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편을 지칭할 수 있다. 여기서 사용된, 용어 "실질적으로 균질"은, 본개시물의 조성물 전체를 통해 첨가제, 예를 들어 리도케인의 균일 분포를 지칭할 수 있다.

여기서 사용된, 용어 "무기 잔류물이 실질적으로 없는"은 0.1 % (w/w) 이하의 잔류물을 나타내는 조성물을 의미한다. 구체예에서, 무기 잔류물이 실질적으로 없는은 0.05% (w/w) 이하의 잔류물을 나타내는 조성물을 지칭한다. 구체예에서, 무기 잔류물이 실질적으로 없는은 0.01% (w/w) 이하의 잔류물을 나타내는 조성물을 지칭한다. 구체예에서, 무기 잔류물의 양은 0 ppm ("비-검출가능" 또는 "ND") 및 1000 ppm 사이이다. 구체예에서, 무기 잔류물의 양은 ND 내지 약 500 ppm이다. 구체예에서, 무기 잔류물의 양은 ND 내지 약 400 ppm이다. 구체예에서, 무기 잔류물의 양은 ND 내지 약 300 ppm이다. 구체예에서, 무기 잔류물의 양은 ND 내지 약 200 ppm이다. 구체예에서, 무기 잔류물의 양은 ND 내지 약 100 ppm이다. 구체예에서, 무기 잔류물의 양은 10 ppm 및 1000 ppm 사이이다.

여기서 사용된, 용어 "유기 잔류물이 실질적으로 없는"은 상기 조성물이 0.1% (w/w) 이하의 잔류물을 나타냄을 의미한다. 구체예에서, 유기 잔류물이 실질적으로 없는은 0.05% (w/w) 이하의 잔류물을 나타내는 조성물을 지칭한다. 구체예에서, 유기 잔류물이 실질적으로 없는은 0.01% (w/w) 이하의 잔류물을 나타내는 조성물을 지칭한다. 구체예에서, 유기 잔류물의 양은 0 ppm ("비-검출가능" 또는 "ND") 및 1000 ppm 사이이다. 구체예에서, 유기 잔류물의 양은 ND 내지 약 500 ppm이다. 구체예에서, 유기 잔류물의 양은 ND 내지 약 400 ppm이다. 구체예에서, 유기 잔류물의 양은 ND 내지 약 300 ppm이다. 구체예에서, 유기 잔류물의 양은 ND 내지 약 200 ppm이다. 구체예에서, 유기 잔류물의 양은 ND 내지 약 100 ppm이다. 구체예에서, 유기 잔류물의 양은 10 ppm 및 1000 ppm 사이이다.

여기서 사용된, 용어 "비-가교결합된"은 개별 매트릭스 중합체 분자, 거대분자, 및/또는 단량체 사슬을 결합시키는 분자간 결합의 결여를 지칭한다. 이와 같이, 비-가교결합된 매트릭스 중합체는 분자간 결합에 의해 다른 매트릭스 중합체에 연결되지 않는다.

본개시물의 조직 충전제, 조성물, 또는 그의 일부는 "생체적합성"을 나타내거나 또는 "생체적합성"이고 상기 조성물이 실질적으로 독성, 유해성, 또는 생리학적으로 반응성이 아니고 면역학적 거부를 유발하지 않음에 의해 살아 있는 조직 또는 살아 있는 시스템과 적합성임을 의미한다. 용어 "생체적합성"은 여기서 정의된 용어 "생흡수가능한," "생재흡수가능한," 및 "생분해성"을 포함한다.

본개시물의 조직 충전제, 조성물, 또는 그의 일부는 "생흡수가능한," "생재흡수가능한," 및/또는 "생분해성"일 수 있다. 여기서 사용된, 용어 "생흡수가능한"는 소멸이 일어날 수 있는 메커니즘, 가령 용해, 분해, 흡수 및 배설과 독립적으로, 신체 내 이식에 의해 소멸하는 재료 또는 물질을 지칭한다. 여기서 사용된, 용어 "생재흡수가능한"은 몸이 흡수가능함을 의미한다. 여기서 사용된, 용어 "생분해성"은 생리학적 조건 하에서 부산물로 분해할 수 있는 재료를 지칭한다. 그러한 생리학적 조건은, 예를 들어, 가수분해 (분해를 통해 가수분해적 분해), 효소적 촉매작용 (효소적 분해), 기계적 상호작용, 등을 포함한다. 여기서 사용된, 용어 "생분해성"은, 생리학적 조건 하에서 호스트-유기체 내로의 생재흡수를 격는 생성물로 분해, 즉, 호스트 유기체의 생화학적 시스템의 대사체로 되는 재료 또는 물질을 기술하는 용어 "생재흡수가능한"을 또한 포함한다. 여기서 사용된, 용어 "생재흡수가능한" 및 "생재흡수"는 본업계에서 숙련가에 의해 이해되는 바와 같이 공정 가령 생재흡수가능한 중합체의 세포-매개 분해, 효소적 분해 및/또는 가수분해적 분해, 및/또는 살아 있는 조직으로부터의 생재흡수가능한 중합체의 제거를 포함한다. 일부 구체예에서, 여기서 기술된 SPF-HA 조성물 및 재료는 생체적합성, 생재흡수가능한, 생흡수가능한, 및/또는 생분해성일 수 있다.

여기서 기술된 조직 충전제가 생분해성 또는 생재흡수가능한 경우, 이들은 적어도 약 1 일, 또는 적어도 약 2 일, 또는 적어도 약 3 일, 또는 적어도 약 4 일, 적어도 약 5 일, 또는 적어도 약 10 일, 또는 적어도 약 15 일, 또는 적어도 약 20 일, 또는 적어도 약 25 일, 또는 적어도 약 30 일, 또는 적어도 약 35 일, 또는 적어도 약 40 일, 또는 적어도 약 45 일, 또는 적어도 약 50 일, 또는 적어도 약 60 일, 또는 적어도 약 70 일, 또는 적어도 약 80 일, 또는 적어도 약 90 일, 또는 적어도 약 100 일, 또는 적어도 약 110 일, 또는 적어도 약 120 일, 또는 적어도 약 130 일, 또는 적어도 약 140 일, 또는 적어도 약 140 일, 또는 적어도 약 150 일, 또는 적어도 약 160 일, 또는 적어도 약 170 일, 또는 적어도 약 180 일, 또는 적어도 약 190 일, 또는 적어도 약 200 일, 또는 적어도 약 250 일, 또는 적어도 약 300 일, 또는 적어도 약 1 년, 또는 적어도 약 2 년 동안 생분해 또는 생재흡수에 저항할 수 있고 또는 이들은 약 5 일 미만, 또는 최대 약 10 일, 또는 최대 약 15 일, 또는 최대 약 20 일, 또는 최대 약 25 일, 또는 최대 약 30 일, 또는 최대 약 35 일, 또는 최대 약 40 일, 또는 최대 약 45 일, 또는 최대 약 50 일, 또는 최대 약 60 일, 또는 최대 약 70 일, 또는 최대 약 80 일, 또는 최대 약 90 일, 또는 최대 약 100 일, 또는 최대 약 110 일, 또는 최대 약 120 일, 또는 최대 약 130 일, 또는 최대 약 140 일, 또는 최대 약 140 일, 또는 최대 약 150 일, 또는 최대 약 160 일, 또는 최대 약 170 일, 또는 최대 약 180 일, 또는 최대 약 190 일, 또는 최대 약 200 일, 또는 최대 약 250 일, 또는 최대 약 300 일, 또는 최대 약 1 년, 또는 최대 약 2 년 동안 생분해에 저항할 수 있다.

여기서 기술된 조직 충전제가 생흡수가능한 경우 이들은 적어도 약 1 일, 또는 적어도 약 2 일, 또는 적어도 약 3 일, 또는 적어도 약 4 일, 적어도 약 5 일, 또는 적어도 약 10 일, 또는 적어도 약 15 일, 또는 적어도 약 20 일, 또는 적어도 약 25 일, 또는 적어도 약 30 일, 또는 적어도 약 35 일, 또는 적어도 약 40 일, 또는 적어도 약 45 일, 또는 적어도 약 50 일, 또는 적어도 약 60 일, 또는 적어도 약 70 일, 또는 적어도 약 80 일, 또는 적어도 약 90 일, 또는 적어도 약 100 일, 또는 적어도 약 110 일, 또는 적어도 약 120 일, 또는 적어도 약 130 일, 또는 적어도 약 140 일, 또는 적어도 약 140 일, 또는 적어도 약 150 일, 또는 적어도 약 160 일, 또는 적어도 약 170 일, 또는 적어도 약 180 일, 또는 적어도 약 190 일, 또는 적어도 약 200 일, 또는 적어도 약 250 일, 또는 적어도 약 300 일, 또는 적어도 약 1 년, 또는 적어도 약 2 년 또는 동안 생흡수에 저항할 수 있다. 이들은 약 5 일 미만, 또는 최대 약 10 일, 또는 최대 약 15 일, 또는 최대 약 20 일, 또는 최대 약 25 일, 또는 최대 약 30 일, 또는 최대 약 35 일, 또는 최대 약 40 일, 또는 최대 약 45 일, 또는 최대 약 50 일, 또는 최대 약 60 일, 또는 최대 약 70 일, 또는 최대 약 80 일, 또는 최대 약 90 일, 또는 최대 약 100 일, 또는 최대 약 110 일, 또는 최대 약 120 일, 또는 최대 약 130 일, 또는 최대 약 140 일, 또는 최대 약 140 일, 또는 최대 약 150 일, 또는 최대 약 160 일, 또는 최대 약 170 일, 또는 최대 약 180 일, 또는 최대 약 190 일, 또는 최대 약 200 일, 또는 최대 약 250 일, 또는 최대 약 300 일, 또는 최대 약 1 년, 또는 최대 약 2 년 동안 생흡수에 저항할 수 있다.

여기서 기술된 바와 같이, 생분해, 생흡수, 및 생재흡수의 정도는, 예를 들어, 여기서 기술된 조성물에 생분해, 생흡수, 및/또는 생재흡수를 지연시키는 하나 이상의 물질을 부가하는 것에 의해 개질 및/또는 제어될 수 있다. 또한, 생분해, 생흡수, 및 생재흡수의 정도는 여기서 기술된 중합성 재료 내에 존재하는 중합성 가교결합의 정도를 증가시킴 또는 감소시킴에 의해 개질 및/또는 제어될 수 있다. 예를 들어, 여기서 기술된 조성물의 생분해, 생흡수, 및/또는 생재흡수의 속도는 여기서 기술된 중합성 재료 내 가교결합의 양을 감소시킴에 의해 증가될 수 있다. 대안적으로, 여기서 기술된 조직 충전제 및 조성물의 생분해, 생흡수, 및/또는 생재흡수의 속도는 여기서 기술된 중합성 재료 내 가교결합의 양을 증가시킴에 의해 감소될 수 있다.

본개시물의 조직 충전제 및 조성물은 "저자극성"인데 상대적으로 알레르기 반응을 유발할 가능성이 적음을 의미한다. 그러한 저자극성은 본개시물의 조성물을 연장된 기간 동안 그의 피부에 외용 적용한 참여자에 의해 입증될 수 있다. 구체예에서, 연장된 기간은 약 3 일이다. 구체예에서, 연장된 기간은 약 7 일이다. 구체예에서, 연장된 기간은 약 14 일이다. 구체예에서, 연장된 기간은 약 21 일이다. 구체예에서, 연장된 기간은 약 30 일이다. 구체예에서, 연장된 기간는 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 및 무기한으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

여기서 사용된, "저 분자량" 실크는 약 5 kDa 내지 약 20 kDa, 또는 약 200 Da 내지 약 25 kDa, 또는 약 28 kDa 미만, 또는 약 15 kDa 및 약 28 kDa 사이의 범위 내 분자량을 갖는 실크 단백질 단편을 지칭한다. 일부 구체예에서, 특정 실크 단백질 단편에 대한 표적 저 분자량은 약 11 kDa일 수 있다. 일부 구체예에서, 특정 실크 단백질 단편에 대한 표적 저 분자량은 약 12 kDa일 수 있다. 일부 구체예에서, 특정 실크 단백질 단편에 대한 표적 저 분자량은 약 13 kDa일 수 있다. 일부 구체예에서 특정 실크 단백질 단편에 대한 표적 저 분자량은 약 14 kDa일 수 있다. 일부 구체예에서, 특정 실크 단백질 단편에 대한 표적 저 분자량은 약 15 kDa일 수 있다. 일부 구체예에서, 특정 실크 단백질 단편에 대한 표적 저 분자량은 약 16 kDa일 수 있다.

여기서 사용된, "중 분자량" 실크는 약 20 kDa 내지 약 55 kDa, 또는 약 25 kDa 내지 약 60 kDa, 또는 약 39 kDa 내지 약 54 kDa의 범위 내 분자량을 갖는 실크 단백질 단편을 지칭한다. 일부 구체예에서, 특정 실크 단백질 단편에 대한 표적 저 분자량은 약 40 kDa일 수 있다. 일부 구체예에서, 특정 실크 단백질 단편에 대한 표적 중 분자량은 약 48 kDa일 수 있다.

여기서 사용된, "고 분자량" 실크는 약 55 kDa 내지 약 150 kDa의 범위 내 분자량을 갖는 실크 단백질 단편을 지칭한다. 일부 구체예에서, 특정 실크 단백질 단편에 대한 표적 저 분자량은 약 100 kDa 내지 약 145 kDa일 수 있다. 일부 구체예에서, 특정 실크 단백질 단편에 대한 표적 고분자량은 약 100 kDa일 수 있다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 분자량, 예를 들어, 저 분자량 SPF, 중 분자량 SPF, 고 분자량 SPF는 본업계에서의 통상의 숙련가에 의해 이해되는 바와 같이 각각의 천연 또는 재조합 단백질, 가령 천연 또는 재조합 실크 단백질 내 함유된 아미노산의 근사치로 전환될 수 있다. 예를 들어, 아미노산의 평균 중량은 약 110 달톤, 즉, 110 g/mol일 수 있다. 따라서, 일부 구체예에서, 선형 단백질의 분자량의 110 달톤으로 나누기는 거기에 함유된 아미노산 잔기의 수의 근사치로서 사용될 수 있다.

여기서 사용된, 용어 "다분산성"은 주어진 중합체 샘플 내 분자량 분포의 측정치를 지칭한다. 다분산성은 중량 평균 분자량 (Mw)의 수 평균 분자량 (Mn)에 의한 나눔으로 계산될 수 있다. 여기서 사용된, 용어 "중량 평균 분자량" (Mw)는 일반적으로 그의 크기에 따르는 중합체 분자의 분포에 의존하는 분자량 측정치를 지칭한다. 중량 평균 분자량은 다음 식에 의해 정의될 수 있다:

, 여기서 M_i은 사슬의 분자량이고 N_i은 그 분자량 사슬의 수이다. 여기서 사용된, 용어 "수 평균 분자량" (Mn)은 일반적으로 샘플 내 모든 중합체 분자의 총 중량을 샘플 내 중합체 분자의 총 수로 나눔에 의해 계산되는 분자량 측정치를 지칭한다. 수 평균 분자량은 다음 식에 의해 정의될 수 있다:

, 여기서 M_i은 사슬의 분자량이고 N_i은 그 분자량 사슬의 수이다. 예를 들어, 모든 중합체 사슬이 동일한 단분산 중합체는 1의 다분산성 (Mw/Mn)을 가진다. 일반적으로, 분자량 평균은 겔 투과 크로마토그래피 (GPC) 및 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의해 결정될 수 있다. 다분산성 지수가 클수록, 분자량이 더 넓다.

여기서 사용된, 용어 "조직 충전제"는 부피를 부가, 지지를 부가, 또는 연조직 결핍을 처리하기 위해 연조직 내 및 근처에 제공될 수 있는 재료를 널리 지칭한다. 용어 "조직 충전제"는 또한 진피 충전제를 포함한다; 그러나, 용어 "진피 충전제"는 그러한 충전제의 송달의 위치 및 타입에 어떠한 제한을 부과하는 것으로 간주되어서는 안된다. 그러나, 여기서 기술된 진피 충전제는 진피 아래의 여러 수준에서 일반적으로 그러한 진피 충전제의 사용 및 송달을 포함할 수 있다. 여기서 사용된, 용어 "연조직"은 몸의 다른 구조 및 장기를 연결, 지지, 또는 감싸는 조직을 지칭할 수 있다. 예를 들어, 여기서 기술된 연조직은, 제한 없이, 피부, 진피 조직, 피하 조직, 피부 조직, 피하 조직, 경막내 조직, 근육, 힘줄, 인대, 섬유성 조직, 지방, 혈관 및 동맥, 신경, 및 활막 (진피내) 조직을 포함할 수 있다.

여기서 사용된, "자동 가교결합"은 a) 유사한 화학적 특성의 중합체의 두 가닥 사이의 가교결합, 예를 들어 히알루론산의 두 가닥 사이의 가교결합, 또는 SPFs의 두 가닥 사이의 가교결합, 또는 b) 환상 에스테르 (락톤), 환상 아미드, 가교결합 모이어티를 포함하는 환상 구조물 등을 형성하기 위해 동일 중합체 가닥 상의 가교결합 기 사이의 가교결합, 예를 들어 히알루론산의 동일 가닥 상 두 기 사이의 가교결합, 또는 동일 SPF 가닥 상 두 기 사이의 가교결합을 지칭한다.

여기서 사용된, "제로-길이 가교결합," 및/또는 "결합을 포함하는 가교결합," 및/또는 "활성화제를 사용하는 가교결합"은 별개의 중합체 가닥, 또는 동일 중합체 가닥 상 두 기 사이의 가교결합을 지칭하고, 여기서 두 기는 서로 직접 반응하고, 그 사이에 부가적 가교결합 모이어티가 삽입되지 않는다. 카복실산 기 및 아민 또는 알콜 사이의 가교결합, 여기서 기 중 하나는 활성화제, 예를 들어 카보디이미드에 의해 활성화됨,은 제로-길이 가교결합의 예시이다.

여기서 사용된, 용어 "에폭시 유래된 가교결합제"는 동일 또는 별개의 중합체 사슬 내 두 모이어티 사이의 분자 다리를 지칭하고, 중합체 사슬은 에폭사이드 기, 예를 들어 1,4-부탄디올 디글리시딜 에테르 (BDDE), 폴리에틸렌 글리콜 디글리시딜 에테르 (PEGDE, 또는 PEGDGE), 또는 실크 피브로인 또는 실크 피브로인 단편 폴리에폭시 링커를 포함하는 가교결합 전구체를 사용하여 얻어진다. 특정 이론에 속박되는 것을 의도하지 않으면서, 중합체의 측쇄 내를 포함하는, 중합체 사슬 내 반응성 중심과 반응시킴에 의해 에폭사이드 링은 개방되어 2차 알콜 및 신규한 결합을 형성한다 (반응식 1). 반응성 기는, 비제한적으로, 친핵성 기 가령 카복실 기, 아미노 기, 또는 히드록실 기를 포함한다.

반응식 1

여기서 사용된, "틴달 효과," 및/또는 "틴달링" 조직 충전제로 투여된 일부 환자에서 발생하는 부작용이다. 틴달 조직 충전제가 주사된 피부 부위에서의 청색 탈색 외관을 특징으로 하고, 이는 반투명 표피를 통해 보이는 가시적 진피 충전제 조성물을 나타낸다. 틴달 효과는 입자 단면이 통상 가시광선 파장의 다소 아래 또는 근처인 특이적 범위 내인 때, 광-산란 입자가 그 외-광-투과인 매체 내에서 분산된 때 보일 수 있다. 틴달 효과 하에서, 더 긴-파장 광 (예를 들어, 적색)은 매체를 통해 더 큰 정도로 투과되고, 더 짧은-파장 광 (예를 들어, 청색)은 반사 산란을 통해 더 큰 정도로 반사되어, 매체가 착색된 청색인 전체적 인상을 부여한다.

실크 단백질 단편

일부 구체예에서, 실크 단백질-기초 조성물 및 실크 단백질 단편, 또는 이를 제조하는 방법은 U.S. 특허출원 공개 번호 2015/00933340, 2015/0094269, 2016/0193130, 2016/0022560, 2016/0022561, 2016/0022562, 2016/0022563, 및 2016/0222579, 2016/0281294, 및 U.S. 특허 번호 9,187,538, 9,522,107, 9,517,191, 9,522,108, 9,511,012, 및 9,545,369에서 기술된 것을 포함할 수 있고, 그 전체가 여기서 참고로서 포함된다.

여기서 사용된, 실크 단백질 단편 (SPFs)은 실크로부터 유래하는 펩티드 및/또는 단백질의 혼합물, 조성물, 또는 집단을 일반적으로 지칭한다. 일부 구체예에서, SPFs는 다양한 용도에 대해 많은 산업에 걸쳐 사용될 수 있는 실질적으로 순수한 및 매우 확장가능한(scalable) SPF 혼합물 용액으로서 제조된다. 상기 용액은 순수한 무결 실크 단백질 원료로부터 형성되고 세리신을 제거하고 단편 혼합물의 소정의 중량 평균 분자량 (MW) 및 다분산성을 달성하기 위해 가공된다. 선택 방법 파라미터는 의도된 용도에 따르는 별개의 최종 실크 단백질 단편 특징을 달성하도록 변경될 수 있다. 얻어진 최종 단편 용액은 순수한 실크 단백질 단편 및 공정 오염물의 비-검출가능 수준, 약제, 의료 및 소비자 미용 시장에서 허용가능한 수준의 PPM을 갖는 물이다. 상기 용액 내 실크 단백질 단편의 농도, 크기 및 다분산성은 소정의 용도 및 성능 요구조건에 따라서 추가로 변경될 수 있다. 구체예에서, 상기 용액 내 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 세리신이 실질적으로 없고, 약 1 kDa 내지 약 250 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가지고, 약 1.5 및 약 3.0 범위의 다분산성을 가진다. 구체예에서, 상기 용액 내 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 세리신이 실질적으로 없고, 약 5 kDa 내지 약 150 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가지고, 약 1.5 및 약 3.0 범위의 다분산성을 가진다. 구체예에서, 상기 용액 내 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 세리신이 실질적으로 없고, 약 6 kDa 내지 약 17 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가지고, 약 1.5 및 약 3.0 범위의 다분산성을 가진다. 구체예에서, 상기 용액 내 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 세리신이 실질적으로 없고, 약 17 kDa 내지 약 39 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가지고, 약 1.5 및 약 3.0 범위의 다분산성을 가진다. 구체예에서, 상기 용액 내 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 세리신이 실질적으로 없고, 약 39 kDa 내지 약 80 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가지고, 약 1.5 및 약 3.0 범위의 다분산성을 가진다. 구체예에서, 상기 용액 내 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 세리신이 실질적으로 없고, 약 80 kDa 내지 약 150 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가지고, 약 1.5 및 약 3.0 범위의 다분산성을 가진다.

구체예에서, 여기서 기술된 실크 단백질 단편은 용액 또는 고체로서 제조될 수 있고, 여기서 고체는 생리학적 용액 (예를 들어, 물, 식염수, 등) 또는, 여기서 기술된 바와 같은 HA의 겔 내에 현탁된다. 일부 구체예에서, 여기서 기술된 실크 단백질 단편은 HA의 겔 내 침착 전 리포좀 또는 마이크로스피어로 제조될 수 있다.

구체예에서, 본개시물의 실크 용액은 여기서 기술된 조직 충전제 조성물을 형성하기 위해 사용될 수 있다. 구체예에서, 상기 용액은 여기서 기술된 조직 충전제를 제조하기 위해 HA 및 부가적 물질로 균질화될 수 있는 겔을 형성하기 위해 사용될 수 있다. 사용된 실크 용액 및 필름 또는 겔을 주조하기 위한 방법에 따라서, 다양한 특성이 달성된다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내 중량 기준 퍼센트 SPF 함량은 적어도 0.01%, 또는 적어도 0.1%, 또는 적어도 0.2%, 또는 적어도 0.3%, 또는 적어도 0.4%, 또는 적어도 0.5%, 또는 적어도 0.6%, 또는 적어도 0.7%, 또는 적어도 0.8%, 또는 적어도 0.9%, 또는 적어도 1%, 또는 적어도 2%, 또는 적어도 3%, 또는 적어도 4%, 또는 적어도 5%, 또는 적어도 6%, 또는 적어도 7%, 또는 적어도 8%, 또는 적어도 9%, 또는 적어도 10%, 또는 적어도 11%, 또는 적어도 12%, 또는 적어도 13%, 또는 적어도 14%, 또는 적어도 15%, 또는 적어도 16%, 또는 적어도 17%, 또는 적어도 18%, 또는 적어도 19%, 또는 적어도 20%, 또는 적어도 21%, 또는 적어도 22%, 또는 적어도 23%, 또는 적어도 24%, 또는 적어도 25%, 또는 적어도 26%, 또는 적어도 27%, 또는 적어도 28%, 또는 적어도 29%, 또는 적어도 30%, 또는 적어도 31%, 또는 적어도 32%, 또는 적어도 33%, 또는 적어도 34%, 또는 적어도 35%, 또는 적어도 36%, 또는 적어도 37%, 또는 적어도 38%, 또는 적어도 39%, 또는 적어도 40%, 또는 적어도 41%, 또는 적어도 42%, 또는 적어도 43%, 또는 적어도 44%, 또는 적어도 45%, 또는 적어도 46%, 또는 적어도 47%, 또는 적어도 48%, 또는 적어도 49%, 또는 적어도 50%, 또는 적어도 51%, 또는 적어도 52%, 또는 적어도 53%, 또는 적어도 54%, 또는 적어도 55%, 또는 적어도 56%, 또는 적어도 57%, 또는 적어도 58%, 또는 적어도 59%, 또는 적어도 60%, 또는 적어도 61%, 또는 적어도 62%, 또는 적어도 63%, 또는 적어도 64%, 또는 적어도 65%, 또는 적어도 66%, 또는 적어도 67%, 또는 적어도 68%, 또는 적어도 69%, 또는 적어도 70%, 또는 적어도 71%, 또는 적어도 72%, 또는 적어도 73%, 또는 적어도 74%, 또는 적어도 75%, 또는 적어도 76%, 또는 적어도 77%, 또는 적어도 78%, 또는 적어도 79%, 또는 적어도 80%, 또는 적어도 81%, 또는 적어도 82%, 또는 적어도 83%, 또는 적어도 84%, 또는 적어도 85%, 또는 적어도 86%, 또는 적어도 87%, 또는 적어도 88%, 또는 적어도 89%, 또는 적어도 90%, 또는 적어도 91%, 또는 적어도 92%, 또는 적어도 93%, 또는 적어도 94%, 또는 적어도 95%, 또는 적어도 96%, 또는 적어도 97%, 또는 적어도 98%, 또는 적어도 99%, 또는 적어도 99.5%, 또는 적어도 99.9%이다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내 중량 기준 퍼센트 SPF 함량은 최대 0.01%, 또는 최대 0.1%, 또는 최대 0.2%, 또는 최대 0.3%, 또는 최대 0.4%, 또는 최대 0.5%, 또는 최대 0.6%, 또는 최대 0.7%, 또는 최대 0.8%, 또는 최대 0.9%, 또는 최대 1%, 또는 최대 2%, 또는 최대 3%, 또는 최대 4%, 또는 최대 5%, 또는 최대 6%, 또는 최대 7%, 또는 최대 8%, 또는 최대 9%, 또는 최대 10%, 또는 최대 11%, 또는 최대 12%, 또는 최대 13%, 또는 최대 14%, 또는 최대 15%, 또는 최대 16%, 또는 최대 17%, 또는 최대 18%, 또는 최대 19%, 또는 최대 20%, 또는 최대 21%, 또는 최대 22%, 또는 최대 23%, 또는 최대 24%, 또는 최대 25%, 또는 최대 26%, 또는 최대 27%, 또는 최대 28%, 또는 최대 29%, 또는 최대 30%, 또는 최대 31%, 또는 최대 32%, 또는 최대 33%, 또는 최대 34%, 또는 최대 35%, 또는 최대 36%, 또는 최대 37%, 또는 최대 38%, 또는 최대 39%, 또는 최대 40%, 또는 최대 41%, 또는 최대 42%, 또는 최대 43%, 또는 최대 44%, 또는 최대 45%, 또는 최대 46%, 또는 최대 47%, 또는 최대 48%, 또는 최대 49%, 또는 최대 50%, 또는 최대 51%, 또는 최대 52%, 또는 최대 53%, 또는 최대 54%, 또는 최대 55%, 또는 최대 56%, 또는 최대 57%, 또는 최대 58%, 또는 최대 59%, 또는 최대 60%, 또는 최대 61%, 또는 최대 62%, 또는 최대 63%, 또는 최대 64%, 또는 최대 65%, 또는 최대 66%, 또는 최대 67%, 또는 최대 68%, 또는 최대 69%, 또는 최대 70%, 또는 최대 71%, 또는 최대 72%, 또는 최대 73%, 또는 최대 74%, 또는 최대 75%, 또는 최대 76%, 또는 최대 77%, 또는 최대 78%, 또는 최대 79%, 또는 최대 80%, 또는 최대 81%, 또는 최대 82%, 또는 최대 83%, 또는 최대 84%, 또는 최대 85%, 또는 최대 86%, 또는 최대 87%, 또는 최대 88%, 또는 최대 89%, 또는 최대 90%, 또는 최대 91%, 또는 최대 92%, 또는 최대 93%, 또는 최대 94%, 또는 최대 95%, 또는 최대 96%, 또는 최대 97%, 또는 최대 98%, 또는 최대 99%, 또는 최대 99.5%, 또는 최대 99.9%이다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내 중량 기준 퍼센트 SPF 함량은 약 0.01%, 또는 약 0.1%, 또는 약 0.2%, 또는 약 0.3%, 또는 약 0.4%, 또는 약 0.5%, 또는 약 0.6%, 또는 약 0.7%, 또는 약 0.8%, 또는 약 0.9%, 또는 약 1%, 또는 약 2%, 또는 약 3%, 또는 약 4%, 또는 약 5%, 또는 약 6%, 또는 약 7%, 또는 약 8%, 또는 약 9%, 또는 약 10%, 또는 약 11%, 또는 약 12%, 또는 약 13%, 또는 약 14%, 또는 약 15%, 또는 약 16%, 또는 약 17%, 또는 약 18%, 또는 약 19%, 또는 약 20%, 또는 약 21%, 또는 약 22%, 또는 약 23%, 또는 약 24%, 또는 약 25%, 또는 약 26%, 또는 약 27%, 또는 약 28%, 또는 약 29%, 또는 약 30%, 또는 약 31%, 또는 약 32%, 또는 약 33%, 또는 약 34%, 또는 약 35%, 또는 약 36%, 또는 약 37%, 또는 약 38%, 또는 약 39%, 또는 약 40%, 또는 약 41%, 또는 약 42%, 또는 약 43%, 또는 약 44%, 또는 약 45%, 또는 약 46%, 또는 약 47%, 또는 약 48%, 또는 약 49%, 또는 약 50%, 또는 약 51%, 또는 약 52%, 또는 약 53%, 또는 약 54%, 또는 약 55%, 또는 약 56%, 또는 약 57%, 또는 약 58%, 또는 약 59%, 또는 약 60%, 또는 약 61%, 또는 약 62%, 또는 약 63%, 또는 약 64%, 또는 약 65%, 또는 약 66%, 또는 약 67%, 또는 약 68%, 또는 약 69%, 또는 약 70%, 또는 약 71%, 또는 약 72%, 또는 약 73%, 또는 약 74%, 또는 약 75%, 또는 약 76%, 또는 약 77%, 또는 약 78%, 또는 약 79%, 또는 약 80%, 또는 약 81%, 또는 약 82%, 또는 약 83%, 또는 약 84%, 또는 약 85%, 또는 약 86%, 또는 약 87%, 또는 약 88%, 또는 약 89%, 또는 약 90%, 또는 약 91%, 또는 약 92%, 또는 약 93%, 또는 약 94%, 또는 약 95%, 또는 약 96%, 또는 약 97%, 또는 약 98%, 또는 약 99%, 또는 약 99.5%, 또는 약 99.9%이다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내 중량 기준 퍼센트 SPF 함량은 약 0.01% 내지 약 100%, 또는 약 0.01% 내지 약 99.9%, 또는 약 0.01% 내지 약 75%; 또는 약 0.1% 내지 약 95%, 또는 약 1% 내지 약 95%, 또는 약 10% 내지 약 95% 사이; 또는 약 0.1% 내지 약 1%, 또는 약 0.1% 내지 약 2%, 또는 약 0.1% 내지 약 3%, 또는 약 0.1% 내지 약 4%, 또는 약 0.1% 내지 약 5%, 또는 약 0.1% 내지 약 6%, 또는 약 0.1% 내지 약 7%, 또는 약 0.1% 내지 약 8%, 또는 약 0.1% 내지 약 9%, 또는 약 0.1% 내지 약 10%, 또는 약 0.1% 내지 약 11%, 또는 약 0.1% 내지 약 12%, 또는 약 0.1% 내지 약 13%, 또는 약 0.1% 내지 약 14%, 또는 약 0.1% 내지 약 15%, 또는 약 0.1% 내지 약 16%, 또는 약 0.1% 내지 약 17%, 또는 약 0.1% 내지 약 18%, 또는 약 0.1% 내지 약 19%, 또는 약 0.1% 내지 약 20%, 또는 약 0.1% 내지 약 21%, 또는 약 0.1% 내지 약 22%, 또는 약 0.1% 내지 약 23%, 또는 약 0.1% 내지 약 24%, 또는 약 0.1% 내지 약 25% 사이; 또는 약 1% 내지 약 2%, 또는 약 1% 내지 약 3%, 또는 약 1% 내지 약 4%, 또는 약 1% 내지 약 5%, 또는 약 1% 내지 약 6%, 또는 약 1% 내지 약 7%, 또는 약 1% 내지 약 8%, 또는 약 1% 내지 약 9%, 또는 약 1% 내지 약 10%, 또는 약 1% 내지 약 11%, 또는 약 1% 내지 약 12%, 또는 약 1% 내지 약 13%, 또는 약 1% 내지 약 14%, 또는 약 1% 내지 약 15%, 또는 약 1% 내지 약 16%, 또는 약 1% 내지 약 17%, 또는 약 1% 내지 약 18%, 또는 약 1% 내지 약 19%, 또는 약 1% 내지 약 20%, 또는 약 1% 내지 약 21%, 또는 약 1% 내지 약 22%, 또는 약 1% 내지 약 23%, 또는 약 1% 내지 약 24%, 또는 약 1% 내지 약 25% 사이; 또는 약 10% 내지 약 20%, 또는 약 10% 내지 약 25%, 또는 약 10% 내지 약 30%, 또는 약 10% 내지 약 35%, 또는 약 10% 내지 약 40%, 또는 약 10% 내지 약 45%, 또는 약 10% 내지 약 50%, 또는 약 10% 내지 약 55%, 또는 약 10% 내지 약 60%, 또는 약 10% 내지 약 65%, 또는 약 10% 내지 약 70%, 또는 약 10% 내지 약 75%, 또는 약 10% 내지 약 80%, 또는 약 10% 내지 약 85%, 또는 약 10% 내지 약 90%, 또는 약 10% 내지 약 100% 사이이다.

여기서 기술된 SPF는 SPF 펩티드 및/또는 단백질의 결정성 정도에 따라서 다양한 기계적 및 물리적 특성을 가질 수 있다. 구체예에서, 본개시물의 SPF 조성물은 상기 단백질의 결정성으로 인해 수성 용액 내에서 가용성이 아니다. 구체예에서, 본개시물의 SPF 조성물은 수성 용액 내에서 가용성이다. 구체예에서, 본개시물의 조성물의 SPFs는 약 2/3의 결정성 부분 및 약 1/3의 비정형 영역을 포함한다. 구체예에서, 본개시물의 조성물의 SPFs는 약 1/2의 결정성 부분 및 약 1/2의 비정형 영역을 포함한다. 구체예에서, 본개시물의 조성물의 SPFs는 99% 결정성 부분 및 1% 비정형 영역을 포함한다. 구체예에서, 본개시물의 조성물의 SPFs는 95% 결정성 부분 및 5% 비정형 영역을 포함한다. 구체예에서, 본개시물의 조성물의 SPFs는 90% 결정성 부분 및 10% 비정형 영역을 포함한다. 구체예에서, 본개시물의 조성물의 SPFs는 85% 결정성 부분 및 15% 비정형 영역을 포함한다. 구체예에서, 본개시물의 조성물의 SPFs는 80% 결정성 부분 및 20% 비정형 영역을 포함한다. 구체예에서, 본개시물의 조성물의 SPFs는 75% 결정성 부분 및 25% 비정형 영역을 포함한다. 구체예에서, 본개시물의 조성물의 SPFs는 70% 결정성 부분 및 30% 비정형 영역을 포함한다. 구체예에서, 본개시물의 조성물의 SPFs는 65% 결정성 부분 및 35% 비정형 영역을 포함한다. 구체예에서, 본개시물의 조성물의 SPFs는 60% 결정성 부분 및 40% 비정형 영역을 포함한다. 구체예에서, 본개시물의 조성물의 SPFs는 50% 결정성 부분 및 50% 비정형 영역을 포함한다. 구체예에서, 본개시물의 조성물의 SPFs는 40% 결정성 부분 및 60% 비정형 영역을 포함한다. 구체예에서, 본개시물의 조성물의 SPFs는 35% 결정성 부분 및 65% 비정형 영역을 포함한다. 구체예에서, 본개시물의 조성물의 SPFs는 30% 결정성 부분 및 70% 비정형 영역을 포함한다. 구체예에서, 본개시물의 조성물의 SPFs는 25% 결정성 부분 및 75% 비정형 영역을 포함한다. 구체예에서, 본개시물의 조성물의 SPFs는 20% 결정성 부분 및 80% 비정형 영역을 포함한다. 구체예에서, 본개시물의 조성물의 SPFs는 15% 결정성 부분 및 85% 비정형 영역을 포함한다. 구체예에서, 본개시물의 조성물의 SPFs는 10% 결정성 부분 및 90% 비정형 영역을 포함한다. 구체예에서, 본개시물의 조성물의 SPFs는 5% 결정성 부분 및 90% 비정형 영역을 포함한다. 구체예에서, 본개시물의 조성물의 SPFs는 1% 결정성 부분 및 99% 비정형 영역을 포함한다.

일부 구체예에서, SPF의 물리적 및 기계적 특성은 α-나선 및/또는 랜덤 코일 영역의 SPF 조성물 내 존재의 정도에 따라 다양하다. 일부 구체예에서, 여기서 개시된 SPF 하이드로겔은 α-나선 및 랜덤 코일 영역 이 실질적으로-없는 단백질 구조를 가진다. 이들 구체예의 양상에서, 하이드로겔은, 예를 들어, 약 5% α-나선 및 랜덤 코일 영역, 약 10% α-나선 및 랜덤 코일 영역, 약 15% α-나선 및 랜덤 코일 영역, 약 20% α-나선 및 랜덤 코일 영역, 약 25% α-나선 및 랜덤 코일 영역, 약 30% α-나선 및 랜덤 코일 영역, 약 35% α-나선 및 랜덤 코일 영역, 약 40% α-나선 및 랜덤 코일 영역, 약 45% α-나선 및 랜덤 코일 영역, 또는 약 50% α-나선 및 랜덤 코일 영역을 포함하는 단백질 구조를 가진다. 이들 구체예의 다른 양상에서, 하이드로겔은, 예를 들어, 최대 5% α-나선 및 랜덤 코일 영역, 최대 10% α-나선 및 랜덤 코일 영역, 최대 15% α-나선 및 랜덤 코일 영역, 최대 20% α-나선 및 랜덤 코일 영역, 최대 25% α-나선 및 랜덤 코일 영역, 최대 30% α-나선 및 랜덤 코일 영역, 최대 35% α-나선 및 랜덤 코일 영역, 최대 40% α-나선 및 랜덤 코일 영역, 최대 45% α-나선 및 랜덤 코일 영역, 또는 최대 50% α-나선 및 랜덤 코일 영역을 포함하는 단백질 구조를 가진다. 이들 구체예의 여전히 다른 양상에서, 하이드로겔은, 예를 들어, 약 5% 내지 약 10% α-나선 및 랜덤 코일 영역, 약 5% 내지 약 15% α-나선 및 랜덤 코일 영역, 약 5% 내지 약 20% α-나선 및 랜덤 코일 영역, 약 5% 내지 약 25% α-나선 및 랜덤 코일 영역, 약 5% 내지 약 30% α-나선 및 랜덤 코일 영역, 약 5% 내지 약 40% α-나선 및 랜덤 코일 영역, 약 5% 내지 약 50% α-나선 및 랜덤 코일 영역, 약 10% 내지 약 20% α-나선 및 랜덤 코일 영역, 약 10% 내지 약 30% α-나선 및 랜덤 코일 영역, 약 15% 내지 약 25% α-나선 및 랜덤 코일 영역, 약 15% 내지 약 30% α-나선 및 랜덤 코일 영역, 또는 약 15% 내지 약 35% α-나선 및 랜덤 코일 영역을 포함하는 단백질 구조를 가진다.

일부 구체예에서, 본개시물의 SPF 용액 조성물은 저장 안정성을 가지고, 즉, 저장 조건, 실크 퍼센트, 및 배송 수 및 배송 조건에 따라서10 일 내지 3 년의 시간 경과에 따라 단편의 겉보기 응집 및/또는 분자량 증가 없이 수성 용액 내 저장시 천천히 또는 즉석에서 겔화하지 않는다. 부가적으로, pH는 실크의 미성숙 폴딩 및 응집을 방지함으로써 저장-지속성을 연장 및/또는 배송 조건을 지지하도록 변경될 수 있다. 구체예에서, 본개시물의 SPF 용액 조성물은 실온 (RT)에서 최대 2 주 동안 저장 안정성을 가진다. 구체예에서, 본개시물의 SPF 용액 조성물은 RT에서 최대 4 주 동안 저장 안정성을 가진다. 구체예에서, 본개시물의 SPF 용액 조성물은 RT에서 최대 6 주 동안 저장 안정성을 가진다. 구체예에서, 본개시물의 SPF 용액 조성물은 RT에서 최대 8 주 동안 저장 안정성을 가진다. 구체예에서, 본개시물의 SPF 용액 조성물은 RT에서 최대 10 주 동안 저장 안정성을 가진다. 구체예에서, 본개시물의 SPF 용액 조성물은 RT에서 최대 12 주 동안 저장 안정성을 가진다. 구체예에서, 본개시물의 SPF 용액 조성물은 RT에서 약 4 주 내지 약 52 주 범위의 저장 안정성을 가진다. 아래의 표 1은 본개시물의 SPF 조성물의 구체예에 대한 저장 안정성 시험 결과를 나타낸다.

표 1. 본개시물의 SPF 조성물의 저장 안정성
% 실크	온도	겔화까지의 시간
2	RT	4 주
2	4 ℃	>9 주
4	RT	4 주
4	4 ℃	>9 주
6	RT	2 주
6	4 ℃	>9 주

공지된 첨가제 가령 비타민 (예를 들어, 비타민 C)은 실온 (RT)에서 10 일 내지 3 년 안정한 겔을 형성하기 위해 본개시물의 SPF 용액 조성물에 부가될 수 있다. SPF 조성물 및 첨가제를 함유한 SPF 조성물은 둘 다 저장 및 배송 조건에 따라서10 일 내지 10 년 범위의 증가된 저장 제어 동안 동결건조될 수 있다. 동결건조 실크 분말은 의료, 소비자, 및 전자제품 시장에서 원료 성분으로서 또한 사용될 수 있다. 부가적으로, 동결건조 실크 분말은 초기 제조된 것보다 더 높은 농도 용액을 포함하는 다양한 농도의 실크 용액을 형성하기 위해 저장 이후 물, HFIP, 또는 유기 용액 내 재현탁될 수 있다. 또다른 구체예에서, 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 질량 기준10% 미만 물을 함유하는 건조 단백질을 형성하기 위해 회전 증발기 또는 본업계에서 공지된 다른 방법을 사용하여 건조된다.

여기서 개시된 조직 충전제 및 방법 내 사용된 SPFs은 다양한 방식, 예를 들어 여기서 기술된 조직 충전제 조성물을 제조하기 위해 다른 재료 (예를 들어, HA)와 조합될 수 있는 용액의 형태로 제조 및 포함될 수 있다. 본개시물의 실크 용액의 제조에서의 다양한 파라미터에 대한 적당한 범위의 비-제한적 예시가 다음이다. 본개시물의 실크 용액은 반드시 전부가 아닌 하나 이상의 이들 파라미터를 포함할 수 있고 그러한 파라미터의 범위의 다양한 조합을 사용하여 제조될 수 있다.

구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 30% 미만이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 25% 미만이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 20% 미만이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 19% 미만이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 18% 미만이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 17% 미만이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 16% 미만이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 15% 미만이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 14% 미만이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 13% 미만이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 12% 미만이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 11% 미만이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 10% 미만이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 9% 미만이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 8% 미만이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 7% 미만이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 6% 미만이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 5% 미만이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 4% 미만이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 3% 미만이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 2% 미만이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 1% 미만이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.9% 미만이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.8%. 미만이다 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.7% 미만이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.6% 미만이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.5% 미만이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.4% 미만이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.3%. 미만이다 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.2% 미만이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.1% 미만이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.1% 초과이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.2%. 초과이다 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.3% 초과이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.4% 초과이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.5% 초과이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.6% 초과이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.7% 초과이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.8% 초과이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.9% 초과이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 1 초과이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 2 초과이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 3 초과이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 4 초과이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 5 초과이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 6 초과이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 7 초과이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 8 초과이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 9 초과이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 10 초과이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 11 초과이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 12 초과이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 13 초과이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 14 초과이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 15 초과이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 16 초과이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 17 초과이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 18 초과이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 19 초과이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 20 초과이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 25 초과이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.1% 및 30% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.1% 및 25% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.1% 및 20% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.1% 및 15% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.1% 및 10% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.1% 및 9% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.1% 및 8% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.1% 및 7% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.1% 및 6.5% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.1% 및 6% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.1% 및 5.5% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.1% 및 5% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.1% 및 4.5% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.1% 및 4% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.1% 및 3.5% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.1% 및 3% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.1% 및 2.5% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.1% 및 2.0% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.1% 및 2.4% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.5% 및 5% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.5% 및 4.5% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.5% 및 4% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.5% 및 3.5% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.5% 및 3% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.5% 및 2.5% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 1 및 4% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 1 및 3.5% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 1 및 3% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 1 및 2.5% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 1 및 2.4% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 1 및 2% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 20% 및 30% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 0.1% 및 6% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 6% 및 10% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 6% 및 8% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 6% 및 9% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 10% 및 20% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 11% 및 19% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 12% 및 18%. 사이이다 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 13% 및 17% 사이이다. 구체예에서, 상기 용액 내 실크 퍼센트는 14% 및 16% 사이이다.

구체예에서, 여기서 기술된 실크 조성물은 조직 충전제 조성물을 형성하기 위해 HA와 조합될 수 있다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 30% 미만이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 25% 미만이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 20% 미만이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 19% 미만이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 18% 미만이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 17% 미만이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 16% 미만이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 15% 미만이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 14% 미만이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 13% 미만이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 12% 미만이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 11% 미만이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 10% 미만이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 9% 미만이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 8% 미만이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 7% 미만이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 6% 미만이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 5% 미만이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 4% 미만이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 3% 미만이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 2% 미만이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 1% 미만이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.9% 미만이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.8% 미만이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.7% 미만이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.6% 미만이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.5% 미만이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.4% 미만이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.3% 미만이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.2% 미만이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.1% 미만이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.1% 초과이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.2% 초과이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.3% 초과이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.4% 초과이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.5% 초과이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.6% 초과이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.7% 초과이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.8% 초과이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.9% 초과이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 1% 초과이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 2% 초과이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 3% 초과이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 4% 초과이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 5% 초과이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 6% 초과이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 7% 초과이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 8% 초과이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 9% 초과이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 10% 초과이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 11% 초과이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 12% 초과이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 13% 초과이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 14% 초과이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 15% 초과이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 16% 초과이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 17% 초과이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 18% 초과이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 19% 초과이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 20% 초과이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 25% 초과이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.1% 및 30% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.1% 및 25% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.1% 및 20% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.1% 및 15% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.1% 및 10% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.1% 및 9% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.1% 및 8% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.1% 및 7% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.1% 및 6.5% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.1% 및 6% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.1% 및 5.5% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.1% 및 5% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.1% 및 4.5% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.1% 및 4% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.1% 및 3.5% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.1% 및 3% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.1% 및 2.5% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 사이이다 0.1% 및 2.0%. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.1% 및 2.4% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.5% 및 5% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.5% 및 4.5% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.5% 및 4% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.5% 및 3.5% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.5% 및 3% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.5% 및 2.5% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 1 및 4% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 1 및 3.5% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 1 및 3% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 1 및 2.5% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 1 및 2.4% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 1 및 2% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 20% 및 30% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 0.1% 및 6% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 6% 및 10% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 6% 및 8% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 6% 및 9% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 10% 및 20% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 11% 및 19% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 12% 및 18% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 13% 및 17% 사이이다. 구체예에서, 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 실크 퍼센트는 14% 및 16% 사이이다.

구체예에서, 상기 용액 또는 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 세리신은 30%까지 비-검출가능이다. 구체예에서, 상기 용액 또는 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 세리신은 5%까지 비-검출가능이다. 구체예에서, 상기 용액 또는 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 세리신은 1%이다. 구체예에서, 상기 용액 또는 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 세리신은 2%이다. 구체예에서, 상기 용액 또는 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 세리신은 3%이다. 구체예에서, 상기 용액 또는 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 세리신은 4%이다. 구체예에서, 상기 용액 또는 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 세리신은 5%이다. 구체예에서, 상기 용액 또는 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 세리신은 10%이다. 구체예에서, 상기 용액 또는 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 세리신은 30%이다.

구체예에서, LiBr-실크 단편 용액의 안정성은 0 내지 1 년이다. 구체예에서, LiBr-실크 단편 용액의 안정성은 0 내지 2 년이다. 구체예에서, LiBr-실크 단편 용액의 안정성은 0 내지 3 년이다. 구체예에서, LiBr-실크 단편 용액의 안정성은 0 내지 4 년이다. 구체예에서, LiBr-실크 단편 용액의 안정성은 0 내지 5 년이다. 구체예에서, LiBr-실크 단편 용액의 안정성은 1 내지 2 년이다. 구체예에서, LiBr-실크 단편 용액의 안정성은 1 내지 3 년이다. 구체예에서, LiBr-실크 단편 용액의 안정성은 1 내지 4 년이다. 구체예에서, LiBr-실크 단편 용액의 안정성은 1 내지 5 년이다. 구체예에서, LiBr-실크 단편 용액의 안정성은 2 내지 3 년이다. 구체예에서, LiBr-실크 단편 용액의 안정성은 2 내지 4 년이다. 구체예에서, LiBr-실크 단편 용액의 안정성은 2 내지 5 년이다. 구체예에서, LiBr-실크 단편 용액의 안정성은 3 내지 4 년이다. 구체예에서, LiBr-실크 단편 용액의 안정성은 3 내지 5 년이다. 구체예에서, LiBr-실크 단편 용액의 안정성은 4 내지 5 년이다.

구체예에서, 본개시물의 조직 충전제 내에 포함될 수 있는 실크-피브로인 기초 단백질 단편 조성물의 안정성은 10 일 내지 6 개월이다. 구체예에서, 본개시물의 조직 충전제 내에 포함될 수 있는 실크-피브로인 기초 단백질 단편 조성물의 안정성은 6 개월 내지 12 개월이다. 구체예에서, 본개시물의 조직 충전제 내에 포함될 수 있는 실크-피브로인 기초 단백질 단편 조성물의 안정성은 12 개월 내지 18 개월이다. 구체예에서, 본개시물의 조직 충전제 내에 포함될 수 있는 실크-피브로인 기초 단백질 단편 조성물의 안정성은 18 개월 내지 24 개월이다. 구체예에서, 본개시물의 조직 충전제 내에 포함될 수 있는 실크-피브로인 기초 단백질 단편 조성물의 안정성은 24 개월 내지 30 개월이다. 구체예에서, 본개시물의 조직 충전제 내에 포함될 수 있는 실크-피브로인 기초 단백질 단편 조성물의 안정성은 30 개월 내지 36 개월이다. 구체예에서, 본개시물의 조직 충전제 내에 포함될 수 있는 실크-피브로인 기초 단백질 단편 조성물의 안정성은 36 개월 내지 48 개월이다. 구체예에서, 본개시물의 조직 충전제 내에 포함될 수 있는 실크-피브로인 기초 단백질 단편 조성물의 안정성은 48 개월 내지 60 개월이다.

구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 1 kDa 내지 250 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 5 kDa 내지 150 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 1 kDa 내지 6 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 6 kDa 내지 17 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 17 kDa 내지 39 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 39 kDa 내지 80 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 80 kDa 내지 150 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다.

구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 1 kDa 내지 250 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 1 kDa 내지 240 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 1 kDa 내지 230 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 1 kDa 내지 220 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 1 kDa 내지 210 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 1 kDa 내지 200 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 1 kDa 내지 190 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 1 kDa 내지 180 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 1 kDa 내지 170 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 1 kDa 내지 160 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 1 kDa 내지 150 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 1 kDa 내지 140 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 1 kDa 내지 130 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 1 kDa 내지 120 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 1 kDa 내지 110 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 1 kDa 내지 100 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 1 kDa 내지 90 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 1 kDa 내지 80 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 1 kDa 내지 70 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 1 kDa 내지 60 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 1 kDa 내지 50 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 1 kDa 내지 40 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 1 kDa 내지 30 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 1 kDa 내지 20 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 1 kDa 내지 10 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다.

구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 1 내지 5 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 5 내지 10 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 10 내지 15 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 15 내지 20 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 20 내지 25 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 25 내지 30 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 30 내지 35 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 35 내지 40 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 40 내지 45 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 45 내지 50 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 50 내지 55 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 55 내지 60 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 60 내지 65 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 65 내지 70 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 70 내지 75 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 75 내지 80 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 80 내지 85 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 85 내지 90 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 90 내지 95 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 95 내지 100 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 100 내지 105 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 105 내지 110 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다 110 내지 115 kDa. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 115 내지 120 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 120 내지 125 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 125 내지 130 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 130 내지 135 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 135 내지 140 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 140 내지 145 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 145 내지 150 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 150 내지 155 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 155 내지 160 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 160 내지 165 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 165 내지 170 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 170 내지 175 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 175 내지 180 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 180 내지 185 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 185 내지 190 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 190 내지 195 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 195 내지 200 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 200 내지 205 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 205 내지 210 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 210 내지 215 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 215 내지 220 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 220 내지 225 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 225 내지 230 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 230 내지 235 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 235 내지 240 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 240 내지 245 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 245 내지 250 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 250 내지 255 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 255 내지 260 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 260 내지 265 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 265 내지 270 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 270 내지 275 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 275 내지 280 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 280 내지 285 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 285 내지 290 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 290 내지 295 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 295 내지 300 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 300 내지 305 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 305 내지 310 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 310 내지 315 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 315 내지 320 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 320 내지 325 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 325 내지 330 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 330 내지 335 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 35 내지 340 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 340 내지 345 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 345 내지 350 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 가진다.

구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 저 분자량 실크, 중 분자량 실크, 및 고 분자량 실크 중 하나 이상을 포함하는 실크 단백질을 포함할 수 있다.

구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 저 분자량 실크, 중 분자량 실크, 및 고 분자량 실크 중 하나 이상을 포함하는 실크 단백질을 포함할 수 있다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 저 분자량 실크 및 중 분자량 실크를 포함하는 실크 단백질을 포함할 수 있다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 저 분자량 실크 및 고 분자량 실크를 포함하는 실크 단백질을 포함할 수 있다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 중 분자량 실크 및 고 분자량 실크를 포함하는 실크 단백질을 포함할 수 있다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 저 분자량 실크, 중 분자량 실크, 및 고 분자량 실크를 포함하는 실크 단백질을 포함할 수 있다.

구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 저 분자량 실크 및 중 분자량 실크를 포함하는 실크 단백질을 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 저 분자량 실크 및 중 분자량 실크 사이의 w/w 비는 약 99:1 내지 약 1:99 사이, 약 95:5 내지 약 5:95 사이, 약 90:10 내지 약 10:90 사이, 약 75:25 내지 약 25:75 사이, 약 65:35 내지 약 35:65 사이, 또는 약 55:45 내지 약 45:55 사이이다. 일부 구체예에서, 저 분자량 실크 및 중 분자량 실크 사이의 w/w 비는 약 99:1 내지 약 55:45 사이, 약 95:5 내지 약 45:55 사이, 약 90:10 내지 약 35:65 사이, 약 75:25 내지 약 15:85 사이, 약 65:35 내지 약 10:90 사이, 또는 약 55:45 내지 약 1:99 사이이다. 구체예에서, 저 분자량 실크 및 중 분자량 실크 사이의 w/w 비는 약 99:1, 약 98:2, 약 97:3, 약 96:4, 약 95:5, 약 94:6, 약 93:7, 약 92:8, 약 91:9, 약 90:10, 약 89:11, 약 88:12, 약 87:13, 약 86:14, 약 85:15, 약 84:16, 약 83:17, 약 82:18, 약 81:19, 약 80:20, 약 79:21, 약 78:22, 약 77:23, 약 76:24, 약 75:25, 약 74:26, 약 73:27, 약 72:28, 약 71:29, 약 70:30, 약 69:31, 약 68:32, 약 67:33, 약 66:34, 약 65:35, 약 64:36, 약 63:37, 약 62:38, 약 61:39, 약 60:40, 약 59:41, 약 58:42, 약 57:43, 약 56:44, 약 55:45, 약 54:46, 약 53:47, 약 52:48, 약 51:49, 약 50:50, 약 49:51, 약 48:52, 약 47:53, 약 46:54, 약 45:55, 약 44:56, 약 43:57, 약 42:58, 약 41:59, 약 40:60, 약 39:61, 약 38:62, 약 37:63, 약 36:64, 약 35:65, 약 34:66, 약 33:67, 약 32:68, 약 31:69, 약 30:70, 약 29:71, 약 28:72, 약 27:73, 약 26:74, 약 25:75, 약 24:76, 약 23:77, 약 22:78, 약 21:79, 약 20:80, 약 19:81, 약 18:82, 약 17:83, 약 16:84, 약 15:85, 약 14:86, 약 13:87, 약 12:88, 약 11:89, 약 10:90, 약 9:91, 약 8:92, 약 7:93, 약 6:94, 약 5:95, 약 4:96, 약 3:97, 약 2:98, 또는 약 1:99이다. 구체예에서, 저 분자량 실크 및 중 분자량 실크 사이의 w/w 비는 약 9:1, 약 8:1, 약 7:1, 약 6:1, 약 5:1, 약 4:1, 약 3:1, 약 2:1, 또는 약 1:1이다. 구체예에서, 저 분자량 실크 및 중 분자량 실크 사이의 w/w 비는 약 1:9, 약 1:8, 약 1:7, 약 1:6, 약 1:5, 약 1:4, 약 1:3, 약 1:2, 또는 약 1:1이다.

구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 저 분자량 실크 및 고 분자량 실크를 포함하는 실크 단백질을 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 저 분자량 실크 및 고 분자량 실크 사이의 w/w 비는 약 99:1 내지 약 1:99 사이, 약 95:5 내지 약 5:95 사이, 약 90:10 내지 약 10:90 사이, 약 75:25 내지 약 25:75 사이, 약 65:35 내지 약 35:65 사이, 또는 약 55:45 내지 약 45:55 사이이다. 일부 구체예에서, 저 분자량 실크 및 고 분자량 실크 사이의 w/w 비는 약 99:1 내지 약 55:45 사이, 약 95:5 내지 약 45:55 사이, 약 90:10 내지 약 35:65 사이, 약 75:25 내지 약 15:85 사이, 약 65:35 내지 약 10:90 사이, 또는 약 55:45 내지 약 1:99 사이이다. 구체예에서, 저 분자량 실크 및 고 분자량 실크 사이의 w/w 비는 약 99:1, 약 98:2, 약 97:3, 약 96:4, 약 95:5, 약 94:6, 약 93:7, 약 92:8, 약 91:9, 약 90:10, 약 89:11, 약 88:12, 약 87:13, 약 86:14, 약 85:15, 약 84:16, 약 83:17, 약 82:18, 약 81:19, 약 80:20, 약 79:21, 약 78:22, 약 77:23, 약 76:24, 약 75:25, 약 74:26, 약 73:27, 약 72:28, 약 71:29, 약 70:30, 약 69:31, 약 68:32, 약 67:33, 약 66:34, 약 65:35, 약 64:36, 약 63:37, 약 62:38, 약 61:39, 약 60:40, 약 59:41, 약 58:42, 약 57:43, 약 56:44, 약 55:45, 약 54:46, 약 53:47, 약 52:48, 약 51:49, 약 50:50, 약 49:51, 약 48:52, 약 47:53, 약 46:54, 약 45:55, 약 44:56, 약 43:57, 약 42:58, 약 41:59, 약 40:60, 약 39:61, 약 38:62, 약 37:63, 약 36:64, 약 35:65, 약 34:66, 약 33:67, 약 32:68, 약 31:69, 약 30:70, 약 29:71, 약 28:72, 약 27:73, 약 26:74, 약 25:75, 약 24:76, 약 23:77, 약 22:78, 약 21:79, 약 20:80, 약 19:81, 약 18:82, 약 17:83, 약 16:84, 약 15:85, 약 14:86, 약 13:87, 약 12:88, 약 11:89, 약 10:90, 약 9:91, 약 8:92, 약 7:93, 약 6:94, 약 5:95, 약 4:96, 약 3:97, 약 2:98, 또는 약 1:99이다.

구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 중 분자량 실크 및 고 분자량 실크를 포함하는 실크 단백질을 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 중 분자량 실크 및 고 분자량 실크 사이의 w/w 비는 약 99:1 내지 약 1:99 사이, 약 95:5 내지 약 5:95 사이, 약 90:10 내지 약 10:90 사이, 약 75:25 내지 약 25:75 사이, 약 65:35 내지 약 35:65 사이, 또는 약 55:45 내지 약 45:55 사이이다. 일부 구체예에서, 중 분자량 실크 및 고 분자량 실크 사이의 w/w 비는 약 99:1 내지 약 55:45 사이, 약 95:5 내지 약 45:55 사이, 약 90:10 내지 약 35:65 사이, 약 75:25 내지 약 15:85 사이, 약 65:35 내지 약 10:90 사이, 또는 약 55:45 내지 약 1:99 사이이다. 구체예에서, 중 분자량 실크 및 고 분자량 실크 사이의 w/w 비는 약 99:1, 약 98:2, 약 97:3, 약 96:4, 약 95:5, 약 94:6, 약 93:7, 약 92:8, 약 91:9, 약 90:10, 약 89:11, 약 88:12, 약 87:13, 약 86:14, 약 85:15, 약 84:16, 약 83:17, 약 82:18, 약 81:19, 약 80:20, 약 79:21, 약 78:22, 약 77:23, 약 76:24, 약 75:25, 약 74:26, 약 73:27, 약 72:28, 약 71:29, 약 70:30, 약 69:31, 약 68:32, 약 67:33, 약 66:34, 약 65:35, 약 64:36, 약 63:37, 약 62:38, 약 61:39, 약 60:40, 약 59:41, 약 58:42, 약 57:43, 약 56:44, 약 55:45, 약 54:46, 약 53:47, 약 52:48, 약 51:49, 약 50:50, 약 49:51, 약 48:52, 약 47:53, 약 46:54, 약 45:55, 약 44:56, 약 43:57, 약 42:58, 약 41:59, 약 40:60, 약 39:61, 약 38:62, 약 37:63, 약 36:64, 약 35:65, 약 34:66, 약 33:67, 약 32:68, 약 31:69, 약 30:70, 약 29:71, 약 28:72, 약 27:73, 약 26:74, 약 25:75, 약 24:76, 약 23:77, 약 22:78, 약 21:79, 약 20:80, 약 19:81, 약 18:82, 약 17:83, 약 16:84, 약 15:85, 약 14:86, 약 13:87, 약 12:88, 약 11:89, 약 10:90, 약 9:91, 약 8:92, 약 7:93, 약 6:94, 약 5:95, 약 4:96, 약 3:97, 약 2:98, 또는 약 1:99이다.

구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 저 분자량 실크, 중 분자량 실크, 및 고 분자량 실크를 포함하는 실크 단백질을 포함할 수 있다. 구체예에서, 저 분자량 실크, 중 분자량 실크, 및 고 분자량 실크 사이의 w/w 비는 약 1:1:8, 1:2:7, 1:3:6, 1:4:5, 1:5:4, 1:6:3, 1:7:2, 1:8:1, 2:1:7, 2:2:6, 2:3:5, 2:4:4, 2:5:3, 2:6:2, 2:7:1, 3:1:6, 3:2:5, 3:3:4, 3:4:3, 3:5:2, 3:6:1, 4:1:5, 4:2:4, 4:3:3, 4:4:2, 4:5:1, 5:1:4, 5:2:3, 5:3:2, 5:4:1, 6:1:3, 6:2:2, 6:3:1, 7:1:2, 7:2:1, 또는 8:1:1이다. 구체예에서, 저 분자량 실크, 중 분자량 실크, 및 고 분자량 실크 사이의 w/w 비는 약 3:0.1:0.9, 3:0.2:0.8, 3:0.3:0.7, 3:0.4:0.6, 3:0.5:0.5, 3:0.6:0.4, 3:0.7:0.3, 3:0.8:0.2, 또는 3:0.9:0.1이다.

구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 약 1 내지 약 5.0 범위의 다분산성을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 약 1.5 내지 약 3.0 범위의 다분산성을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 약 1 내지 약 1.5 범위의 다분산성을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 약 1.5 내지 약 2.0. 범위의 다분산성을 가진다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내에 포함되는 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 약 2.0 내지 약 2.5 범위의 다분산성을 가진다. 구체예에서, 본개시물의 조성물을 갖는 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 약 2.0 내지 약 3.0 범위의 다분산성을 가진다. 구체예에서, 본개시물의 조성물을 갖는 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편은 약 2.5 내지 약 3.0 범위의 다분산성을 가진다.

구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제는 LiBr 잔류물의 비-검출가능 수준을 가진다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 LiBr 잔류물의 양은 10 ppm 및 1000 ppm 사이이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 LiBr 잔류물의 양은 10 ppm 및 300 ppm 사이이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 LiBr 잔류물의 양은 25 ppm 미만이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 LiBr 잔류물의 양은 50 ppm 미만이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 LiBr 잔류물의 양은 75 ppm 미만이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 LiBr 잔류물의 양은 100 ppm 미만이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 LiBr 잔류물의 양은 200 ppm 미만이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 LiBr 잔류물의 양은 300 ppm 미만이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 LiBr 잔류물의 양은 400 ppm 미만이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 LiBr 잔류물의 양은 500 ppm 미만이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 LiBr 잔류물의 양은 600 ppm 미만이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 LiBr 잔류물의 양은 700 ppm 미만이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 LiBr 잔류물의 양은 800 ppm 미만이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 LiBr 잔류물의 양은 900 ppm 미만이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 LiBr 잔류물의 양은 1000 ppm 미만이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 LiBr 잔류물의 양은 500 ppm까지 비-검출가능이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 LiBr 잔류물의 양은 450 ppm까지 비-검출가능이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 LiBr 잔류물의 양은 400 ppm까지 비-검출가능이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 LiBr 잔류물의 양은 350 ppm까지 비-검출가능이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 LiBr 잔류물의 양은 300 ppm까지 비-검출가능이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 LiBr 잔류물의 양은 250 ppm까지 비-검출가능이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 LiBr 잔류물의 양은 200 ppm까지 비-검출가능이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 LiBr 잔류물의 양은 150 ppm까지 비-검출가능이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 LiBr 잔류물의 양은 100 ppm까지 비-검출가능이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 LiBr 잔류물의 양은 100 ppm 내지 200 ppm이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 LiBr 잔류물의 양은 200 ppm 내지 300 ppm이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 LiBr 잔류물의 양은 300 ppm 내지 400 ppm이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 LiBr 잔류물의 양은 400 ppm 내지 500 ppm이다.

구체예에서, SPF를 포함하는 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편을 갖는 여기서 기술된 조직 충전제는 Na₂CO₃ 잔류물의 비-검출가능 수준을 가진다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 Na₂CO₃ 잔류물의 양은 100 ppm 미만이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 Na₂CO₃ 잔류물의 양은 200 ppm 미만이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 Na₂CO₃ 잔류물의 양은 300 ppm 미만이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 Na₂CO₃ 잔류물의 양은 400 ppm 미만이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 Na₂CO₃ 잔류물의 양은 500 ppm 미만이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 Na₂CO₃ 잔류물의 양은 600 ppm 미만이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 Na₂CO₃ 잔류물의 양은 700 ppm 미만이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 Na₂CO₃잔류물의 양은 800 ppm 미만이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 Na₂CO₃ 잔류물의 양은 900 ppm 미만이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 Na₂CO₃ 잔류물의 양은 1000 ppm 미만이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 Na₂CO₃ 잔류물의 양은 500 ppm까지 비-검출가능이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 Na₂CO₃ 잔류물의 양은 450 ppm까지 비-검출가능이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 Na₂CO₃ 잔류물의 양은 400 ppm까지 비-검출가능이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 Na₂CO₃ 잔류물의 양은 350 ppm까지 비-검출가능이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 Na₂CO₃ 잔류물의 양은 300 ppm까지 비-검출가능이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 Na₂CO₃ 잔류물의 양은 250 ppm까지 비-검출가능이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 Na₂CO₃ 잔류물의 양은 200 ppm까지 비-검출가능이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 Na₂CO₃ 잔류물의 양은 150 ppm까지 비-검출가능이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 Na₂CO₃ 잔류물의 양은 100 ppm까지 비-검출가능이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 Na₂CO₃ 잔류물의 양은 100 ppm 내지 200 ppm이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 Na₂CO₃ 잔류물의 양은 200 ppm 내지 300 ppm이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 Na₂CO₃ 잔류물의 양은 300 ppm 내지 400 ppm이다. 구체예에서, SPF를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제 내 Na₂CO₃ 잔류물의 양은 400 ppm 내지 500 ppm이다.

구체예에서, 본개시물의 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 물 용해도는 50 내지 100%이다. 구체예에서, 본개시물의 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 물 용해도는 60 내지 100%이다. 구체예에서, 본개시물의 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 물 용해도는 70 내지 100%이다. 구체예에서, 본개시물의 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 물 용해도는 80 내지 100%이다. 구체예에서, 물 용해도는 90 내지 100%이다. 구체예에서, 본개시물의 실크 피브로인-기초 단편은 수성 용액 내에서 비-가용성이다.

구체예에서, 유기 용액 내 본개시물의 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 용해도는 50 내지 100%이다. 구체예에서, 유기 용액 내 본개시물의 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 용해도는 60 내지 100%이다. 구체예에서, 유기 용액 내 본개시물의 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 용해도는 70 내지 100%이다. 구체예에서, 유기 용액 내 본개시물의 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 용해도는 80 내지 100%이다. 구체예에서, 유기 용액 내 본개시물의 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 용해도는 90 내지 100%이다. 구체예에서, 본개시물의 실크 피브로인-기초 단편은 유기 용액 내 비-가용성이다.

본개시물의 조성물에서 사용되는 실크 단백질 단편을 제조하는 방법은 U.S. 특허출원 공개 번호 2015/00933340, 2015/0094269, 2016/0193130, 2016/0022560, 2016/0022561, 2016/0022562, 2016/0022563, 및 2016/0222579, 2016/0281294, 및 U.S. 특허 번호 9,187,538, 9,522,107, 9,517,191, 9,522,108, 9,511,012, 및 9,545,369에서 예시되고, 그 전체가 여기서 참고로서 포함된다. 그러나, 예시적 상기 방법은 본개시물의 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편 (SPFs)를 제조하기 위한 다양한 구체예를 나타내는 흐름 차트인 도 1에서 예시된다. 예시된 모든 단계가 모든 본개시물의 실크 용액을 제조하기 위해 반드시 필요한 것이 아님이 이해되어야 한다. 도 1, 단계 A에서 예시된 바와 같이, 고치 (가열-처리된 또는 비-가열-처리된), 실크 섬유, 실크 분말 또는 거미 실크가 실크 공급원으로서 사용될 수 있다. 누에나방(Bombyx mori)로부터의 원료 실크 고치로부터 시작한다면, 고치를 작은 조각, 예를 들어 대략 같은 크기 조각으로 절단할 수 있다, 단계 B1. 원료 실크를 이후 추출하고 헹궈서 세리신을 제거한다, 단계 C1a. 이는 실질적으로 세리신이 없는 원료 실크를 유발한다. 구체예에서, 물을 84 ℃ 및 100 ℃ 사이 온도 (이상적으로는 끓는)까지 가열하고 이후 Na₂CO₃ (소듐 카보네이트)을 Na₂CO₃가 완전히 용해될 때까지 끓는 물에 부가한다. 원료 실크를 끓는 물/Na₂CO₃ (100 ℃)에 부가하고 대략 15 - 90 분 동안 담그고, 여기서 더 긴 시간 동안의 끓임은 더 작은 실크 단백질 단편을 유발한다. 구체예에서, 물 부피는 약 0.4 x 원료 실크 중량과 같고 Na₂CO₃ 부피는 약 0.848 x 원료 실크 중량과 같다. 구체예에서, 물 부피는 0.1 x 원료 실크 중량과 같고 Na₂CO₃ 부피는 2.12 g/L에서 유지된다. 이는 도 6 및 도 7에서 예시된다: 실크 질량 (x-축)은 추출 용액의 동일 부피 (즉, 동일 부피의 물 및 Na₂CO₃의 농도)에서 다양하였고 26 내지 31 퍼센트 (y-축)의 전체적 실크 질량 손실에 의해 예시되는 바와 같이 세리신 제거 (실질적으로 세리신이 없는)를 달성한다. 연이어, 물 용해된 Na₂CO₃ 용액을 배출하고 과량 물/Na₂CO₃을 실크 피브로인 섬유로부터 제거한다 (예를 들어, 기계, 등을 사용하여 손, 스핀 사이클에 의해 피브로인 추출물을 제거). 얻어진 실크 피브로인 추출물을 전형적으로 약 40 ℃ 내지 약 80 ℃의 온도 범위에서 따듯한 내지 뜨거운 물로 헹궈서 잔존 흡착된 세리신 또는 오염물을 제거하고, 물 부피를 적어도 한번 변경한다 (필요한 만큼 여러 번 반복). 얻어진 실크 피브로인 추출물은 실질적으로 세리신-제거된 실크 피브로인이다. 구체예에서, 얻어진 실크 피브로인 추출물을 약 60 ℃의 온도에서 물로 헹군다. 구체예에서, 각각의 사이클에 대한 헹굼 물의 부피는 0.1 L 내지 0.2 L x 원료 실크 중량과 같다. 헹굼 효과를 최대화하기 위해 헹굼 물을 교반하거나, 꺼꾸로 흔들거나 돌리는 것이 유리할 수 있다. 헹굼 후, 과량 물을 추출된 실크 피브로인 섬유로부터 제거한다 (예를 들어, 손으로 또는 기계를 사용하여 피브로인 추출물 제거). 대안적으로, 세리신 추출 목적으로 본업계에서 숙련가에게 공지된 방법 가령 압력, 온도, 또는 다른 시약 또는 그의 조합이 사용될 수 있다. 대안적으로, 실크 선 (100% 세리신이 없는 실크 단백질)을 직접 유충으로부터 제거할 수 있다. 이는 상기 단백질 구조의 변경 없이, 세리신이 없은 액체 실크 단백질을 유발한다.

추출된 피브로인 섬유를 이후 완전히 건조하도록 방치한다. 건조 후, 추출된 실크 피브로인을 주변 및 끓는 점 사이 온도에서 실크 피브로인에 부가된 용매를 사용하여 용해한다, 단계 C1b. 구체예에서, 용매는 리튬 브로마이드의 용액 (LiBr)이다 (LiBr에 대한 끓는점은 140 ℃). 대안적으로, 추출된 피브로인 섬유는 건조되지 않고 습윤상태이고 용매 내에 배치되고; 용매 농도는 이후 용매에 건조된 실크를 부가할 때와 유사한 농도를 달성하기 위해 다양할 수 있다. LiBr 용매의 최종 농도는 0.1 M 내지 9.3 M 범위일 수 있다. 도 8는 리튬 브로마이드 (LiBr)의 상이한 농도 및 상이한 추출 및 용해 크기로부터 용해된 실크의 분자량을 요약하는 표이다. 추출된 피브로인 섬유의 완전 용해는 용해 용매의 농도와 함께 다양한 처리 시간 및 온도를 변화시켜 달성될 수 있다. 비제한적으로, 포스페이트 인산, 칼슘 니트레이트, 칼슘 클로라이드 용액 또는 다른 무기 염의 농축 수성 용액을 포함하는 다른 용매가 사용될 수 있다. 완전 용해를 보장하기 위해, 실크 섬유를 이미 가열시킨 용매 용액 내에 완전히 담그고 이후 1-168 hrs 동안 약 60 ℃ 내지 약 140 ℃ 범위의 온도에서 유지해야만 한다. 구체예에서, 실크 섬유를 용매 용액 내 완전히 담그고 이후 약 1 시간 동안 약 100 ℃의 온도에서 건조 오븐 내로 배치해야만 한다.

실크 피브로인 추출물을 LiBr 용액에 부가하는 (또는 반대) 온도는 피브로인을 완전히 용해시키기 위해 필요한 시간에 대해 및 얻어진 최종 SPF 혼합물 용액의 분자량 및 다분산성에 대해 영향을 미친다. 구체예에서, 실크 용매 용액 농도는 20% w/v 이하이다. 또한, 다양한 온도 및 농도에서의 용해를 촉진하기 위해 도입 또는 용해 동안 교반이 사용될 수 있다. LiBr 용액의 온도는 형성되는 실크 단백질 단편 혼합물 분자량 및 다분산성에 대한 제어를 제공한다. 구체예에서, 더 높은 온도는 더욱 신속히 실크를 용해시켜 증가된 공정 확장성 및 실크 용액의 대량 생산을 제공한다. 구체예에서, 80 ℃ - 140 ℃ 사이 온도까지 가열시킨 LiBr 용액 사용은 완전 용해를 달성하기 위해 오븐 내에서 필요한 시간을 감소시킨다. 다양한 시간 및 용해 용매의 60 ℃ 이상의 온도는 원래 실크 피브로인 단백질의 최초 분자량으로부터 형성된 SPF 혼합물 용액의 MW 및 다분산성을 변경 및 제어한다.

대안적으로, 추출, 단계 B2를 생략하고, 전체 고치를 용매, 가령 LiBr 내로 직접 배치할 수 있다. 이는 실크로부터의 누에 입자 및 용매 용액의 연이은 여과 및 소수성 및 친수성 단백질을 분리하기 위해 본업계에서 공지된 방법 가령 칼럼 분리 및/또는 크로마토그래피, 이온 교환, 염 및/또는 pH을 사용한 화학적 침전, 및 또는 효소적 소화 및 여과 또는 추출을 사용한 세리신 제거를 필요로 하고, 모든 방법은 표준 단백질 분리 방법에 대해 제한 없이 흔한 예시이다, 단계 C2. 누에가 제거된 비-가열 처리된 고치는, 대안적으로 추출을 생략하고 용매 가령 LiBr 내에 배치될 수 있다. 세리신 분리를 위해 위에서 기술된 방법이 사용될 수 있고, 비-가열 처리된 고치가 상당히 더 적은 유충 잔해를 함유한다는 장점을 가진다.

얻어진 용해된 피브로인 단백질 단편 용액으로부터 용해 용매를 제거하기 위해, 상기 용액을 물 부피에 대해 투석함으로써 투석이 사용될 수 있다, 단계 E1. 실크 및 LiBr 용액으로부터의 잔해 (즉, 누에 찌꺼기)를 제거하기 위해 투석 이전에 예비여과가 도움이된이다, 단계 D. 하나의 예시에서, 투석 및 필요시 잠재적인 농축 이전에0.1% 내지 1.0% 실크-LiBr 용액을 여과하기 위해 200-300 mL/min 흐름-속도로3 μm 또는 5 μm 필터가 사용된다. 상기한 바와 같이 여기서 개시된 방법은, 확장가능한 공정 방법 형성을 고려할 때 여과 및 하류 투석을 촉진하기 위해, 농도를 9.3 M LiBr로부터 0.1 M 내지 9.3 M 범위로 감소시키기 위한 시간 및/또는 온도를 사용한다. 대안적으로, 부가적 시간 또는 온화한 사용 없이, 9.3 M LiBr-실크 단백질 단편 용액을 잔해 여과 및 투석을 촉진하기 위해 물로 희석할 수 있다. 소정의 시간에서의 용해 및 온화한 여과의 결과는 공지된 MW 및 다분산성의 반투명 입자-유리 실온 저장-안정한 실크 단백질 단편-LiBr 용액이다. 용매가 제거될 때까지 투석수를 규칙적으로 교체하는 것이 유리하다 (예를 들어, 총 6번 물 교체를 위해 1 시간, 4 시간, 및 이후 매 12 시간 후 물 교체). 물 부피 교체의 총 수는 실크 단백질 용해 및 단편화에 사용된 얻어진 용매 농도에 기초하여 다양할 수 있다. 투석 후, 최종 실크 용액은 잔존 잔해 (즉, 누에 찌꺼기)를 제거하기 위해 추가로 여과될 수 있다.

대안적으로, 얻어진 용해된 피브로인 용액으로부터 용매를 제거하기 위해 생분자의 분리 및 정제를 위한 신속하고 효과적인 방법인 탄젠트 흐름 여과 (TFF)가 사용될 수 있다, 단계 E2. TFF는 매우 순수한 수성 실크 단백질 단편 용액을 부여하고 제어 및 반복가능한 방식으로 상기 용액의 큰 부피를 제조하기 위한 공정의 대량생산을 가능하게 한다. 실크 및 LiBr 용액은 TFF 이전에 희석될 수 있다 (물 또는 LiBr 내 20% 내지 0.1% 실크). TFF 가공 이전의, 상기한 바와 같은 예비여과는 필터 효율을 유지하고 잔해 입자의 존재의 결과로서의, 필터의 표면 상의 실크 겔 경계 층의 형성을 잠재적으로 회피할 수 있다. TFF 이전의 예비여과는 얻어진 물만의 용액의 즉석 또는 장기 겔화를 유발할 수 있는, 실크 및 LiBr 용액으로부터의 잔존 잔해 (즉, 누에 찌꺼기)를 제거하는이데 또한 도움이된이다, 단계 D. 0.1% 실크 내지 30.0% 실크 (더욱 바람직하게는, 0.1% - 6.0% 실크) 범위의 물-실크 단백질 단편 용액의 형성을 위해 TFF, 재순환 또는 단일 통과가 사용될 수 있다. 용액 내 실크 단백질 단편 혼합물의 소정의 농도, 분자량 및 다분산성에 기초하여 상이한 컷오프 크기 TFF 막이 필요할 수 있다. 예를 들어 추출 끓임 시간의 길이 또는 용해 용매 (예를 들어, LiBr) 내 시간 및 온도를 다양화함에 의해 형성된 다양한 분자량 실크 용액에 대해 1-100 kDa 범위의 막이 필요할 수 있다. 구체예에서, 실크 단백질 단편 혼합물 용액을 정제하고 최종 소정의 실크-대-물 비를 형성하기 위해 TFF 5 또는 10 kDa 막이 사용된다. 또한, 용해 용매 (예를 들어, LiBr)의 제거 이후 상기 용액을 농축시키기 위해 TFF 단일 통과, TFF, 및 본업계에서 공지된 다른 방법, 가령 낙하 필름 증발기가 사용될 수 있다 (0.1% 내지 30% 실크 범위의 얻어진 소정의 농도로). 이는 물-기초 용액을 형성하기 위해 본업계에서 공지된 표준 HFIP 농도 방법에 대한 대안으로서 사용될 수 있다. 작은 실크 단백질 단편을 여과제거하고 더 좁은 다분산성 값으로 및/또는 없이 더 고 분자량 실크의 용액을 형성하기 위해 보다 큰 포어 막이 또한 사용될 수 있다. 도 5는 본개시물의 실크 단백질 용액의 일부 구체예에 대한 분자량을 요약하는 표이다. 실크 단백질 용액 가공 조건은 다음과 같다: 20 min 동안 100 ℃ 추출, 실온 헹굼, 4-6 시간 동안 60 ℃ 오븐 내 LiBr. 물-가용성 필름에 대한 TFF 가공 조건은 다음과 같다: 60 min 동안 100 ℃ 추출, 60 ℃ 헹굼, 60 min 동안100 ℃ 오븐 내 100 ℃ LiBr. 도 12-23는 추출 시간, LiBr 용해 조건, 및 TFF 가공 및 결과적인 예시 분자량 및 다분산성의 조절을 추가로 나타낸다. 이들 예시는 제한적이 아니고, 특이적 분자량 실크 단편 용액에 대한 파라미터를 특정하는 가능성을 예시한다고 의도된다.

HPLC 시스템을 구비한 증발성 광 산란 검출기 (ELSD)를 사용하여 LiBr 및 Na₂CO₃ 검출을 위한 어세이를 수행했다. 농도에 대해 플로팅된 피분석물에 대한 얻어진 피크 면적의 선형 회귀에 의해 계산을 수행했다. 샘플 제조 및 분석을 위해 본개시물의 많은 제제 중 하나 초과의 샘플을 사용했다. 일반적으로, 10 mL 부피 플라스크 내에 상이한 제제의 네 개의 샘플을 직접 칭량했다. 샘플을 5 mL 20 mM 암모늄 포르메이트 (pH 3.0) 내에 현탁하고 가끔 흔들면서 2 시간 동안 2-8 ℃에서 유지하여 필름으로부터 피분석물을 추출했다. 2 시간 후 상기 용액을 20 mM 암모늄 포르메이트 (pH 3.0)로 희석했다. 부피 플라스크로부터의 샘플 용액을 HPLC 바이알 내로 옮기고 소듐 카보네이트 및 리튬 브로마이드의 측정을 위해 HPLC-ELSD 시스템 내로 주사했다.

실크 단백질 제제 내 Na₂CO₃ 및 LiBr의 정량화를 위해 개발된 분석 방법은 소듐 카보네이트 및 리튬 브로마이드 각각에 대해, 면적에 대해 2% 및 1%이고 체류 시간에 대해 0.38% 및 0.19%로서의 주사제 정확성에 대한 RSD로, 10 - 165 μg/mL 범위에서 선형으로 발견되었다. 분석 방법은 실크 단백질 제제 내 소듐 카보네이트 및 리튬 브로마이드의 정량적 결정을 위해 적용될 수 있다.

최종 실크 단백질 단편 용액은 순수한 실크 단백질 단편 및 PPM을 LiBr 및 Na₂CO₃를 포함하는, 입자 잔해 및/또는 공정 오염물의 불검출가능 수준으로 갖는 물이다. 도 3 및 도 4는 본개시물의 용액 내 LiBr 및 Na₂CO₃ 농도를 요약하는 표이다. 도 3에서, 가공 조건은 60 min 동안 100 ℃ 추출, 60 ℃ 헹굼, 100 ℃ 오븐 내 60 min 동안100 ℃ LiBr를 포함했다. 압력 차이 및 정용여과 부피의 수를 포함하는 TFF 조건은 다양했다. 도 4에서, 가공 조건은 60 min 동안100 ℃ 끓임, 60 ℃ 헹굼, 4-6 시간 동안 60 ℃ 오븐 내 LiBr를 포함했다.

실크 단편-물 용액, 동결건조 실크 단백질 단편 혼합물, SPFs를 포함하는 다른 조성물은 여과, 가열, 조사 또는 e-빔에 제한되지 않는 본업계에서의 표준 방법에 따라서 살균될 수 있다. 실크 단백질 단편 혼합물은, 그의 더 짧은 단백질 중합체 길이로 인해, 본업계에서 기술된 무결 실크 단백질 용액보다 더 잘 살균을 견딜 것이라고 예상된다. 부가적으로, 여기서 기술된 SPF 혼합물로부터 형성된 실크 물품은 용도에 맞게 적절히 살균될 수 있다. 예를 들어, 개방 상처/절개를 갖는 의료 용도에서 사용되는 분자로 로딩되는 SPF 진피 충전제는 표준 방법 가령 조사 또는 e-빔에 의해 살균될 수 있다.

도 2는 추출 및 용해 단계 동안 본개시물의 실크 단백질 단편 용액을 제조하는 공정 동안 개질될 수 있는 다양한 파라미터를 나타내는 흐름 차트이다. 선택 방법 파라미터는 의도된 용도에 따르는 별개의 최종 용액 특징, 예를 들어, 분자량 및 다분산성을 달성하기 위해 변경될 수 있다. 모든 본개시물의 실크 용액을 제조하기 위해 예시된 모든 단계가 반드시 필요한 것이 아님이 이해되어야 한다.

구체예에서, 본개시물의 실크 단백질 단편 용액을 제조하기 위한 공정은 누에나방(Bombyx mori) 누에로부터 실크 고치의 조각을 형성하는 단계; 물 및 Na₂CO₃의 용액 내 약 100 ℃에서 약 60 분 동안 상기 조각을 추출하여, 여기서 물의 부피는 약 0.4 x 원료 실크 중량과 같고 Na₂CO₃의 양은 상기 조각의 약 0.848 x 중량임, 실크 피브로인 추출물을 형성하는 단계; 헹굼 물의 부피 내 헹굼 당 약 20 분 동안 약 60 ℃에서 실크 피브로인 추출물을 세 번 헹구는 단계, 여기서 각각의 사이클에 대한 헹굼 물은 약 0.2 L x 상기 조각의 중량과 같음; 실크 피브로인 추출물로부터 과량 물을 제거하는 단계; 실크 피브로인 추출물을 건조시키는 단계; 건조 실크 피브로인 추출물을 LiBr 용액 내 용해시키는 단계, 여기서 LiBr 용액은 실크 및 LiBr 용액을 형성하기 위해 우선 약 100 ℃까지 가열되고 유지됨; 실크 및 LiBr 용액을 건조 오븐 내에 약 100 ℃에서 약 60 분 동안 배치하여 완전 용해 및 원래 실크 단백질 구조의, 소정의 분자량 및 다분산성을 갖는 혼합물로의 추가 단편화을 달성하는 단계; 누에로부터 잔존 잔해를 제거하기 위해 상기 용액을 여과 하는 단계; 상기 용액을 1% 실크 용액을 유발하기 위해 물로 희석 하는 단계; 및 탄젠트 흐름 여과 (TFF)를 사용하여 상기 용액으로부터 용매를 제거하는 단계를 포함한다. 구체예에서, 실크 용액을 정제하고 최종 소정의 실크-대-물 비를 형성하기 위해10 kDa 막이 사용된다. 이후 순수한 실크 용액을 물에 대해 2% 실크의 농도로 추가로 농축하기 위해 TFF가 사용될 수 있다.

원료 고치로부터 투석까지의 각각의 공정 단계는 제조 효율을 증가시키기 위해 확장가능이다. 전체 고치를 현재 원료 재료로서 구입하지만, 유충 제거로 최소 잔해만 남은 예비세척된 고치 또는 비-가열 처리된 고치도 또한 사용되었다. 고치 제거 및 세척은 수제 공정이지만, 그러나 확장성을 위해 이 공정은 예를 들어, 유충 및 입자를 제거 하기 위해 압축 공기와 조합된 자동화된 기계를 사용하여, 또는 고치를 더 작은 조각으로 절단하기 위해 절단 밀을 사용하여, 덜 노동 소모적으로 될 수 있다. 작은 배치로 현재 수행되는 추출 단계는 보다 큰 용기, 예를 들어 60 ℃ 내지 100 ℃ 또는 그 사이에서 온도가 유지될 수 있는 공업 세척 기계 내에서 완료될 수 있다. 헹굼 단계는 수동 헹굼 사이클을 제거하고, 공업 세척 기계 내에서 또한 완료될 수 있다. LiBr 용액 내 실크의 용해는 컨벡션 오븐이 아닌 용기, 예를 들어 교반 탱크 반응기 내에서 발생할 수 있다. 일련의 물 교체를 통한 실크 투석은 수동 및 시간 소모적 공정이고, 특정 파라미터 변경, 예를 들어 투석 이전에 실크 용액의 희석에 의해 가속화될 수 있다. 투석 공정은 반-자동화된 장비, 예를 들어 탄젠트 흐름 여과 시스템을 사용함에 의해 제조에 대해 확장될 수 있다.

다양한 추출 (즉, 시간 및 온도), LiBr (즉, 실크 피브로인 추출물에 부가된 때 또는 반대에서 LiBr 용액의 온도) 및 용해 (즉, 시간 및 온도) 파라미터는 상이한 점도, 균일성, 및 색상을 갖는 용매 및 실크 용액을 유발한다. 추출 온도 증가, 추출 시간 연장, 실크 용해시 담금 및 시간 경과에 따라 더 높은 온도 LiBr 용액 사용 및 온도에서 시간 증가 (예를 들어, 여기서 나타낸 오븐, 또는 대안적 가열 공급원 내)는 모두 덜 점성이고 더욱 균질인 용매 및 실크 용액을 유발했다. 거의 모든 파라미터가 생존가능한 실크 용액을 유발하였지만, 4 내지 6 시간 미만 내에 완전 용해가 달성되는 것을 허용하는 방법이 공정 확장성을 위해 바람직하다.

실크 단백질 단편의 분자량은, 추출 시간 및 온도를 포함하는 추출 단계 동안 사용된 특이적 파라미터; 리튬 브로마이드 내 실크 침지시 LiBr 온도 및 특이적 온도에서 상기 용액을 유지하는 시간을 포함하는 용해 단계 동안 사용된 특이적 파라미터; 및 여과 단계 동안 사용된 특이적 파라미터에 기초하여 제어될 수 있다. 개시된 방법을 사용하여 공정 파라미터를 제어함으로써, 1 kDa 내지 250 kDa, 5 kDa 내지 200 kDa, 5 kDa 내지 150 kDa, 10 kDa 내지 150 kDa, 또는 10 kDa 내지 80 kDa 범위의 다양한 상이한 분자량에서 2.5 이하의 다분산성을 갖는 SPF 혼합물 용액을 형성하는 것이 가능하다. 상이한 분자량을 갖는 실크 용액을 달성하기 위해 공정 파라미터를 변경시킴으로써, 2.5 이하의 소정의 다분산성을 갖는 단편 혼합물 최종 제품의 범위가 소정의 성능 요구조건에 기초하여 표적화될 수 있다. 예를 들어 약물을 함유하는, 더 저 분자량 실크 필름은 더 고 분자량 SPF 제제와 비교하여 더 빠른 방출 속도를 가질 수 있다. 부가적으로, 2.5 초과의 다분산성을 갖는 SPF 혼합물 용액을 달성할 수 있다. 추가로, 조합 용액을 형성하기 위해 상이한 평균 분자량 및 다분산성을 갖는 두 용액을 혼합할 수 있다. 대안적으로, 유충으로부터 직접 제거된 액체 실크 선 (100% 세리신이 없는 실크 단백질)이 본개시물의 SPF 혼합물 용액 중 어느 것과 조합하여 사용될 수 있다. 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편 조성물의 분자량을 굴절률 검출기 (RID)를 갖는 고압 액체 크로마토그래피 (HPLC)를 사용하여 결정했다. Cirrus GPC Online GPC/SEC Software Version 3.3 (Agilent)를 사용하여 다분산성을 계산했다.

원료 실크 고치의 실크 용액으로의 가공 동안 파라미터는 다양했다. 다양한 이들 파라미터는 얻어진 실크 용액의 MW에 영향을 미쳤다. 조절된 파라미터는 (i) 추출 시간 및 온도, (ii) LiBr 온도, (iii) 용해 오븐 온도, 및 (iv) 용해 시간을 포함했다. 질량 spec을 사용하여 도 9-25에 나타낸 바와 같이 분자량을 결정했다.

다양한 추출 시간의 효과를 결정하기 위해 실험을 수행했다. 도 9-15는 이들 결과를 나타내는 그래프이고, 표 2-8는 그 결과를 요약한다. 아래는 요약이다:

- 30 분의 세리신 추출 시간은 60 분의 세리신 추출 시간보다 큰 MW을 유발했다

- MW는 오븐 내 시간과 함께 감소한다

- 140 ℃ LiBr 및 오븐은 신뢰 간격의 낮은 말단이 9500 Da의 MW 아래인 것을 유발했다

- 1 시간 및 4 시간 시점에서의 30 min 추출은 비-소화된 실크를 가진다

- 1 시간 시점에서의 30 min 추출은 35,000 Da인 신뢰 간격의 낮은 말단을 갖는 상당히 고 분자량을 유발했다

- MW의 범위는 18000 내지 216000 Da인 신뢰 간격의 높은 말단에 도달 했다 (특정된 상한으로 용액을 부여하기 위해 중요)

표 2. 100 ℃ 추출 온도, 100 ℃ 리튬 브로마이드 (LiBr) 및 100 ℃ 오븐 용해 (오븐/용해 시간은 다양했다)의 조건 하에서 가공된 실크의 분자량에 대한 추출 시간 (30 min 대 60 min)의 효과.
끓임 시간	오븐 시간	평균 Mw	표준 편차	신뢰 간격		PD
30	1	57247	12780	35093	93387	1.63
60	1	31520	1387	11633	85407	2.71
30	4	40973	2632	14268	117658	2.87
60	4	25082	1248	10520	59803	2.38
30	6	25604	1405	10252	63943	2.50
60	6	20980	1262	10073	43695	2.08

표 3. 100 ℃ 추출 온도, 끓는 리튬 브로마이드 (LiBr) 및 60 ℃ 오븐 용해 4 hr의 조건 하에서 가공된 실크의 분자량에 대한 추출 시간 (30 min 대 60 min)의 효과.
샘플	끓임 시간	평균 Mw	표준 편차	신뢰 간격		PD
30 min, 4 hr	30	49656	4580	17306	142478	2.87
60 min, 4 hr	60	30042	1536	11183	80705	2.69

표 4. 100 ℃ 추출 온도, 60 ℃ 리튬 브로마이드 (LiBr) 및 60 ℃ 오븐 용해 (오븐/용해 시간은 다양했다)의 조건 하에서 가공된 실크의 분자량에 대한 추출 시간 (30 min 대 60 min)의 효과.
샘플	끓임 시간	오븐 시간	평균 Mw	표준 편차	신뢰 간격		PD
30 min, 1 hr	30	1	58436		22201	153809	2.63
60 min, 1 hr	60	1	31700		11931	84224	2.66
30 min, 4 hr	30	4	61956.5	13337	21463	178847	2.89
60 min, 4 hr	60	4	25578.5	2446	9979	65564	2.56

표 5. 100 ℃ 추출 온도, 80 ℃ 리튬 브로마이드 (LiBr) 및 80 ℃ 오븐 용해 6 hr의 조건 하에서 가공된 실크의 분자량에 대한 추출 시간 (30 min 대 60 min)의 효과.
샘플	끓임 시간	평균 Mw	표준 편차	신뢰 간격		PD
30 min, 6 hr	30	63510		18693	215775	3.40
60 min, 6 hr	60	25164	238	9637	65706	2.61

표 6. 100 ℃ 추출 온도, 80 ℃ 리튬 브로마이드 (LiBr) 및 60 ℃ 오븐 용해 (오븐/용해 시간은 다양했다)의 조건 하에서 가공된 실크의 분자량에 대한 추출 시간 (30 min 대 60 min)의 효과.
샘플	끓임 시간	오븐 시간	평균 Mw	표준 편차	신뢰 간격		PD
30 min, 4 hr	30	4	59202	14028	19073	183760	3.10
60 min, 4 hr	60	4	26312.5	637	10266	67442	2.56
30 min, 6 hr	30	6	46824		18076	121293	2.59
60 min, 6 hr	60	6	26353		10168	68302	2.59

표 7. 100 ℃ 추출 온도, 100 ℃ 리튬 브로마이드 (LiBr) 및 60 ℃ 오븐 용해 (오븐/용해 시간은 다양했다)의 조건 하에서 가공된 실크의 분자량에 대한 추출 시간 (30 min 대 60 min)의 효과.
샘플	끓임 시간	오븐 시간	평균 Mw	표준 편차	신뢰 간격		PD
30 min, 4 hr	30	4	47853		19758	115900	2.42
60 min, 4 hr	60	4	25082	1248	10520	59804	2.38
30 min, 6 hr	30	6	55421	8992	19153	160366	2.89
60 min, 6 hr	60	6	20980	1262	10073	43694	2.08

표 8. 100 ℃ 추출 온도, 140 ℃ 리튬 브로마이드 (LiBr) 및 140 ℃ 오븐 용해 (오븐/용해 시간은 다양했다)의 조건 하에서 가공된 실크의 분자량에 대한 추출 시간 (30 min 대 60 min)의 효과.
샘플	끓임 시간	오븐 시간	평균 Mw	표준 편차	신뢰 간격		PD
30 min, 4 hr	30	4	9024.5	1102	4493	18127	2.00865
60 min, 4 hr	60	4	15548		6954	34762	2.2358
30 min, 6 hr	30	6	13021		5987	28319	2.1749
60 min, 6 hr	60	6	10888		5364	22100	2.0298

다양한 추출 온도의 효과를 결정하기 위해 실험을 수행했다. 도 16는 이들 결과를 나타내는 그래프이고, 표 9는 그 결과를 요약한다. 아래는 요약이다:

- 90 ℃ 세리신 추출은 100 ℃ 추출 세리신 추출보다 더 높은 MW을 유발했다

- 90 ℃ 및 100 ℃는 둘 다 오븐 내 시간 경과에 따라 MW를 감소시킴을 나타낸다

표 9. 60 min. 추출 온도, 100 ℃ 리튬 브로마이드 (LiBr) 및 100 ℃ 오븐 용해 (오븐/용해 시간은 다양했다)의 조건 하에서 가공된 실크의 분자량에 대한 추출 온도 (90 ℃ 대. 100 ℃)의 효과.
샘플	끓임 시간	오븐 시간	평균 Mw	표준 편차	신뢰 간격		PD
90 ℃, 4 hr	60	4	37308	4204	13368	104119	2.79
100 ℃, 4 hr	60	4	25082	1248	10520	59804	2.38
90 ℃, 6 hr	60	6	34224	1135	12717	92100	2.69
100 ℃, 6 hr	60	6	20980	1262	10073	43694	2.08

실크에 부가된 때 다양한 리튬 브로마이드 (LiBr) 온도의 효과를 결정하기 위해 실험을 수행했다. 도 17-18는 이들 결과를 나타내는 그래프이고, 표 10-11는 그 결과를 요약한다. 아래는 요약이다:

- MW 또는 신뢰 간격에 영향 없음 (모든 CI ~10500-6500 Da)

- 연구는, LiBr가 부가되고 용해를 시작함에 따라서, 실온에서 대부분의 질량이 실크임으로 인해 LiBr-실크 용해의 온도는 최초 LiBr 온도 아래로 급속히 떨어진다는 것을 나타냈다

표 10. 60 min. 추출 시간., 100 ℃ 추출 온도 및 60 ℃ 오븐 용해 (오븐/용해 시간은 다양했다)의 조건 하에서 가공된 실크의 분자량에 대한 리튬 브로마이드 (LiBr) 온도의 효과.
샘플	LiBr Temp (℃)	오븐 시간	평균 Mw	표준 편차	신뢰 간격		PD
60 ℃ LiBr, 1 hr	60	1	31700		11931	84223	2.66
100 ℃ LiBr, 1 hr	100	1	27907	200	10735	72552	2.60
RT LiBr, 4 hr	RT	4	29217	1082	10789	79119	2.71
60 ℃ LiBr, 4 hr	60	4	25578	2445	9978	65564	2.56
80 ℃ LiBr,4 hr	80	4	26312	637	10265	67441	2.56
100 ℃ LiBr, 4 hr	100	4	27681	1729	11279	67931	2.45
끓임 LiBr, 4 hr	끓임	4	30042	1535	11183	80704	2.69
RT LiBr,6 hr	RT	6	26543	1893	10783	65332	2.46
80 ℃ LiBr, 6 hr	80	6	26353		10167	68301	2.59
100 ℃ LiBr, 6 hr	100	6	27150	916	11020	66889	2.46

표 11. 30 min. 추출 시간, 100 ℃ 추출 온도 및 60 ℃ 오븐 용해 (오븐/용해 시간은 다양했다)의 조건 하에서 가공된 실크의 분자량에 대한 리튬 브로마이드 (LiBr) 온도의 효과.
샘플	LiBr Temp (℃)	오븐 시간	평균 Mw	표준 편차	신뢰 간격		PD
60 ℃ LiBr, 4 hr	60	4	61956	13336	21463	178847	2.89
80 ℃ LiBr, 4 hr	80	4	59202	14027	19073	183760	3.10
100 ℃ LiBr,4 hr	100	4	47853		19757	115899	2.42
80 ℃ LiBr, 6 hr	80	6	46824		18075	121292	2.59
100 ℃ LiBr, 6 hr	100	6	55421	8991	19152	160366	2.89

오븐/용해 온도의 효과를 결정하기 위해 실험을 수행했다. 도 19-23는 이들 결과를 나타내는 그래프이고, 표 12-16는 그 결과를 요약한다. 아래는 요약이다:

- 오븐 온도는 30 min 추출된 실크보다60 min 추출된 실크에 대해 더 작은 효과를 가진다. 이론에 구속되기를 원하는 의도가 아니면서, 30 min 실크는 추출 동안 덜 분해되고 따라서 오븐 온도는 보다 큰 MW, 실크의 덜 분해된 부분에 대해 더욱 효과를 가진다고 생각된다.

- 60 ℃ 대. 140 ℃ 오븐에 대해 30 min 추출된 실크는 더 높은 오븐 temp에서의 더 낮은 MW보다 매우 상당한 효과를 나타냈고, 반면 60 min 추출된 실크는 훨씬 작은 효과를 가졌다

- 140 ℃ 오븐은 ~6000 Da에서 신뢰 간격의 낮은 말단을 유발했다

표 12. 100 ℃ 추출 온도, 30 min. 추출 시간, 및 100 ℃ 리튬 브로마이드 (LiBr) (오븐/용해 시간은 다양했다)의 조건 하에서 가공된 실크의 분자량에 대한 오븐/용해 온도의 효과.
끓임 시간	오븐 Temp (℃)	오븐 시간	평균 Mw	표준 편차	신뢰 간격		PD
30	60	4	47853		19758	115900	2.42
30	100	4	40973	2632	14268	117658	2.87
30	60	6	55421	8992	19153	160366	2.89
30	100	6	25604	1405	10252	63943	2.50

표 13. 100 ℃ 추출 온도, 60 min. 추출 시간, 및 100 ℃ 리튬 브로마이드 (LiBr) (오븐/용해 시간은 다양했다)의 조건 하에서 가공된 실크의 분자량에 대한 오븐/용해 온도의 효과.
끓임 시간	오븐 Temp (℃)	오븐 시간	평균 Mw	표준 편차	신뢰 간격		PD
60	60	1	27908	200	10735	72552	2.60
60	100	1	31520	1387	11633	85407	2.71
60	60	4	27681	1730	11279	72552	2.62
60	100	4	25082	1248	10520	59803	2.38
60	60	6	27150	916	11020	66889	2.46
60	100	6	20980	1262	10073	43695	2.08

표 14. 100 ℃ 추출 온도, 60 min. 추출 시간, 및 140 ℃ 리튬 브로마이드 (LiBr) (오븐/용해 시간은 다양했다)의 조건 하에서 가공된 실크의 분자량에 대한 오븐/용해 온도의 효과.
끓임 시간	오븐 Temp(℃)	오븐 시간	평균 Mw	표준 편차	신뢰 간격		PD
60	60	4	30042	1536	11183	80705	2.69
60	140	4	15548		7255	33322	2.14

표 15. 100 ℃ 추출 온도, 30 min. 추출 시간, 및 140 ℃ 리튬 브로마이드 (LiBr) (오븐/용해 시간은 다양했다)의 조건 하에서 가공된 실크의 분자량에 대한 오븐/용해 온도의 효과.
끓임 시간	오븐 Temp (℃)	오븐 시간	평균 Mw	표준 편차	신뢰 간격		PD
30	60	4	49656	4580	17306	142478	2.87
30	140	4	9025	1102	4493	18127	2.01
30	60	6	59383	11640	17641	199889	3.37
30	140	6	13021		5987	28319	2.17

표 16. 100 ℃ 추출 온도, 60 min. 추출 시간, 및 80 ℃ 리튬 브로마이드 (LiBr) (오븐/용해 시간은 다양했다)의 조건 하에서 가공된 실크의 분자량에 대한 오븐/용해 온도의 효과.
끓임 시간	오븐 Temp (℃)	오븐 시간	평균 Mw	표준 편차	신뢰 간격		PD
60	60	4	26313	637	10266	67442	2.56
60	80	4	30308	4293	12279	74806	2.47
60	60	6	26353		10168	68302	2.59
60	80	6	25164	238	9637	65706	2.61

구체예에서, 여기서 개시된 방법은 비제한적으로 다음을 포함하는, 제조 동안 제어될 수 있는 특징을 갖는 용액을 유발한다: MW - 추출 및/또는 용해 시간 및 온도 (예를 들어, LiBr 온도), 압력, 및 여과 (예를 들어, 크기 배제 크로마토그래피)를 변경시켜 다양할 수 있다; 구조 -피브로인 단백질 중합체의 무거운 또는 가벼운 사슬의 제거 또는 분해; 순도 - 실크 단편 단백질 혼합물 용액의 저장 안정성에 나쁜 영향을 미치는 개선된 세리신 제거를 위한 고온 헹굼 온도 또는 개선된 입자 제거를 위한 필터 능력; 색상 -상기 용액의 색상은 예를 들어, LiBr 온도 및 시간; 점도; 투명성; 및 용액의 안정성으로 제어될 수 있다. 상기 용액의 결과적인 pH는 전형적으로 약 7이고 저장 요구조건에 따라 적절한 산 또는 염기를 사용하여 변경될 수 있다.

상기-기술된 SPF 혼합물 용액은, 여기서 기술된 바와 같이 조직 충전제를 함유하는 SPF를 제조하기 위해 사용될 수 있다.

약 1 kDa 내지 약 250 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 갖는 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액을 제조하기 위한 방법은 다음 단계를 포함한다: 약 30 분 내지 약 60 분 사이의 처리 시간 동안 소듐 카보네이트의 끓는 (100 ℃) 수성 용액에 실크 공급원을 부가하는 것에 의해 실크 공급원을 정련하는 것; 상기 용액으로부터 세리신을 제거하여 비-검출가능 수준 세리신을 포함하는 실크 피브로인 추출물을 제조하는 것; 실크 피브로인 추출물로부터 상기 용액을 따라내는 것; 리튬 브로마이드 용액 내 실크 피브로인 추출물의 배치에 의해 약 60 ℃ 내지 약 140 ℃ 범위의 출발 온도를 갖는 리튬 브로마이드의 용액 내에 리튬 브로마이드 용액 내 실크 피브로인 추출물을 용해시키는 것; 적어도 1 시간의 기간 동안 약 140 ℃의 온도를 갖는 오븐 내에 실크 피브로인-리튬 브로마이드의 용액을 유지시키는 것; 실크 피브로인 추출물로부터 리튬 브로마이드를 제거하는 것; 및 실크 단백질 단편의 수성 용액을 제조하는 것, 이 수성 용액은 다음을 포함함: 약 1 kDa 내지 약 250 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 갖는 단편, 및 여기서 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 포함함. 상기 방법은 용해 단계 이전에 실크 피브로인 추출물을 건조시키는 것을 추가로 포함할 수 있다. 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액은 고-성능 액체 크로마토그래피 리튬 브로마이드 어세이를 사용하여 측정된 300 ppm 미만의 리튬 브로마이드 잔류물을 포함할 수 있다. 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액은 고-성능 액체 크로마토그래피 소듐 카보네이트 어세이를 사용하여 측정된 100 ppm 미만의 소듐 카보네이트 잔류물을 포함할 수 있다. 상기 방법은 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액에 치료제를 부가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 상기 방법은 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액에 항산화제 또는 효소 중 하나로부터 선택된 분자를 부가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 상기 방법은 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액에 비타민을 부가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 비타민은 비타민 C 또는 그의 유도체일 수 있다. 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액은 동결건조될 수 있다. 상기 방법은 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액에 알파 히드록시 산을 부가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 알파 히드록시산은 글리콜산, 젖산, 타르타르산 및 시트르산으로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다. 상기 방법은 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액에 약 0.5% 내지 약 10.0%의 농도에서 히알루론산 또는 그의 염 형태를 부가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 상기 방법은 산화아연 또는 티타늄 디옥사이드 중 적어도 하나를 부가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 이 방법에 의해 제조된 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액으로부터 필름을 제조할 수 있다. 필름은 약 1.0 wt. % 내지 약 50.0 wt. %의 비타민 C 또는 그의 유도체를 포함할 수 있다. 필름은 약 2.0 wt. % 내지 약 20.0 wt. % 범위의 물 함량을 가질 수 있다. 필름은 약 30.0 wt. % 내지 약 99.5 wt. %의 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편을 포함할 수 있다. 이 방법에 의해 제조된 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액으로부터 겔을 제조할 수 있다. 겔은 약 0.5 wt. % 내지 약 20.0 wt. %의 비타민 C 또는 그의 유도체를 포함할 수 있다. 겔은 적어도 2%의 실크 함량 및 적어도 20%의 비타민 함량을 가질 수 있다.

약 5 kDa 내지 약 150 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 갖는 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액을 제조하기 위한 방법은 다음 단계를 포함한다: 약 30 분 내지 약 60 분 사이의 처리 시간 동안 소듐 카보네이트의 끓는 (100 ℃) 수성 용액에 실크 공급원을 부가하는 것에 의해 실크 공급원을 정련하는 것; 상기 용액으로부터 세리신을 제거하여 비-검출가능 수준 세리신을 포함하는 실크 피브로인 추출물을 제조하는 것; 실크 피브로인 추출물로부터 상기 용액을 따라내는 것; 리튬 브로마이드 용액 내 실크 피브로인 추출물의 배치에 의해 약 60 ℃ 내지 약 140 ℃ 범위의 출발 온도를 갖는 리튬 브로마이드의 용액 내에 리튬 브로마이드 용액 내 실크 피브로인 추출물을 용해시키는 것; 적어도 1 시간의 기간 동안 약 140 ℃의 온도를 갖는 오븐 내에 실크 피브로인-리튬 브로마이드의 용액을 유지시키는 것; 실크 피브로인 추출물로부터 리튬 브로마이드를 제거하는 것; 및 실크 단백질 단편의 수성 용액을 제조하는 것, 이 수성 용액은 다음을 포함함: 약 5 kDa 내지 약 150 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 갖는 단편, 및 여기서 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 포함함. 상기 방법은 용해 단계 이전에 실크 피브로인 추출물을 건조시키는 것을 추가로 포함할 수 있다. 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액은 고-성능 액체 크로마토그래피 리튬 브로마이드 어세이를 사용하여 측정된 300 ppm 미만의 리튬 브로마이드 잔류물을 포함할 수 있다. 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액은 고-성능 액체 크로마토그래피 소듐 카보네이트 어세이를 사용하여 측정된 100 ppm 미만의 소듐 카보네이트 잔류물을 포함할 수 있다. 상기 방법은 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액에 치료제를 부가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 상기 방법은 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액에 항산화제 또는 효소 중 하나로부터 선택된 분자를 부가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 상기 방법은 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액에 비타민을 부가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 비타민은 비타민 C 또는 그의 유도체일 수 있다. 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액은 동결건조될 수 있다. 상기 방법은 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액에 알파 히드록시 산을 부가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 알파 히드록시산은 글리콜산, 젖산, 타르타르산 및 시트르산으로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다. 상기 방법은 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액에 약 0.5% 내지 약 10.0%의 농도에서 히알루론산 또는 그의 염 형태를 부가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 상기 방법은 산화아연 또는 티타늄 디옥사이드 중 적어도 하나를 부가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 이 방법에 의해 제조된 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액으로부터 필름을 제조할 수 있다. 필름은 약 1.0 wt. % 내지 약 50.0 wt. %의 비타민 C 또는 그의 유도체를 포함할 수 있다. 필름은 약 2.0 wt. % 내지 약 20.0 wt. % 범위의 물 함량을 가질 수 있다. 필름은 약 30.0 wt. % 내지 약 99.5 wt. %의 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편을 포함할 수 있다. 이 방법에 의해 제조된 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액으로부터 겔을 제조할 수 있다. 겔은 약 0.5 wt. % 내지 약 20.0 wt. %의 비타민 C 또는 그의 유도체를 포함할 수 있다. 겔은 적어도 2%의 실크 함량 및 적어도 20%의 비타민 함량을 가질 수 있다.

약 6 kDa 내지 약 17 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 갖는 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액을 제조하기 위한 방법은 다음 단계를 포함한다: 약 30 분 내지 약 60 분 사이의 처리 시간 동안 소듐 카보네이트의 끓는 (100 ℃) 수성 용액에 실크 공급원을 부가하는 것에 의해 실크 공급원을 정련하는 것; 상기 용액으로부터 세리신을 제거하여 비-검출가능 수준 세리신을 포함하는 실크 피브로인 추출물을 제조하는 것; 실크 피브로인 추출물로부터 상기 용액을 따라내는 것; 리튬 브로마이드 용액 내 실크 피브로인 추출물의 배치에 의해 약 60 ℃ 내지 약 140 ℃ 범위의 출발 온도를 갖는 리튬 브로마이드의 용액 내에 리튬 브로마이드 용액 내 실크 피브로인 추출물을 용해시키는 것; 적어도 1 시간의 기간 동안 약 140 ℃의 온도를 갖는 오븐 내에 실크 피브로인-리튬 브로마이드의 용액을 유지시키는 것; 실크 피브로인 추출물로부터 리튬 브로마이드를 제거하는 것; 및 실크 단백질 단편의 수성 용액을 제조하는 것, 이 수성 용액은 다음을 포함함: 약 6 kDa 내지 약 17 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 갖는 단편, 및 여기서 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 포함함. 상기 방법은 용해 단계 이전에 실크 피브로인 추출물을 건조시키는 것을 추가로 포함할 수 있다. 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액은 고-성능 액체 크로마토그래피 리튬 브로마이드 어세이를 사용하여 측정된 300 ppm 미만의 리튬 브로마이드 잔류물을 포함할 수 있다. 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액은 고-성능 액체 크로마토그래피 소듐 카보네이트 어세이를 사용하여 측정된 100 ppm 미만의 소듐 카보네이트 잔류물을 포함할 수 있다. 상기 방법은 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액에 치료제를 부가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 상기 방법은 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액에 항산화제 또는 효소 중 하나로부터 선택된 분자를 부가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 상기 방법은 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액에 비타민을 부가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 비타민은 비타민 C 또는 그의 유도체일 수 있다. 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액은 동결건조될 수 있다. 상기 방법은 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액에 알파 히드록시 산을 부가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 알파 히드록시산은 글리콜산, 젖산, 타르타르산 및 시트르산으로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다. 상기 방법은 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액에 약 0.5% 내지 약 10.0%의 농도에서 히알루론산 또는 그의 염 형태를 부가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 상기 방법은 산화아연 또는 티타늄 디옥사이드 중 적어도 하나를 부가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 이 방법에 의해 제조된 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액으로부터 필름을 제조할 수 있다. 필름은 약 1.0 wt. % 내지 약 50.0 wt. %의 비타민 C 또는 그의 유도체를 포함할 수 있다. 필름은 약 2.0 wt. % 내지 약 20.0 wt. % 범위의 물 함량을 가질 수 있다. 필름은 약 30.0 wt. % 내지 약 99.5 wt. %의 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편을 포함할 수 있다. 이 방법에 의해 제조된 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액으로부터 겔을 제조할 수 있다. 겔은 약 0.5 wt. % 내지 약 20.0 wt. %의 비타민 C 또는 그의 유도체를 포함할 수 있다. 겔은 적어도 2%의 실크 함량 및 적어도 20%의 비타민 함량을 가질 수 있다.

순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액을 제조하기 위한 방법을 갖는 약 17 kDa 내지 약 39 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량은 다음 단계를 포함한다: 정련을 유발하도록 약 30 분 내지 약 60 분 사이의 처리 시간 동안 소듐 카보네이트의 끓는 (100 ℃) 수성 용액에 실크 공급원을 부가하는 것; 상기 용액으로부터 세리신을 제거하여 비-검출가능 수준 세리신을 포함하는 실크 피브로인 추출물을 제조하는 것; 실크 피브로인 추출물로부터 상기 용액을 따라내는 것; 리튬 브로마이드 용액 내에 실크 피브로인 추출물의 배치에 의해 약 80 ℃ 내지 약 140 ℃ 범위의 출발 온도를 갖는 리튬 브로마이드의 용액 내에 실크 피브로인 추출물을 용해시키는 것; 약 60 ℃ 내지 약 100 ℃ 사이의 범위 내 온도를 갖는 건조 오븐 내에 적어도 1 시간의 기간 동안 실크 피브로인-리튬 브로마이드의 용액을 유지시키는 것; 실크 피브로인 추출물로부터 리튬 브로마이드를 제거하는 것; 및 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액을 제조하는 것, 여기서 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액은 약 10 ppm 및 약 300 ppm 사이의 리튬 브로마이드 잔류물을 포함하고, 여기서 실크 단백질 단편의 수성 용액은 약 10 ppm 및 약 100 ppm 사이의 소듐 카보네이트 잔류물을 포함하고, 여기서 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액은 약 17 kDa 내지 약 39 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 갖는 단편을 포함하고, 여기서 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 포함함. 상기 방법은 용해 단계 이전에 실크 피브로인 추출물을 건조시키는 것을 추가로 포함할 수 있다. 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액은 고-성능 액체 크로마토그래피 리튬 브로마이드 어세이를 사용하여 측정된 300 ppm 미만의 리튬 브로마이드 잔류물을 포함할 수 있다. 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액은 고-성능 액체 크로마토그래피 소듐 카보네이트 어세이를 사용하여 측정된 100 ppm 미만의 소듐 카보네이트 잔류물을 포함할 수 있다. 상기 방법은 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액에 치료제를 부가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 상기 방법은 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액에 항산화제 또는 효소 중 하나로부터 선택된 분자를 부가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 상기 방법은 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액에 비타민을 부가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 비타민은 비타민 C 또는 그의 유도체일 수 있다. 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액은 동결건조될 수 있다. 상기 방법은 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액에 알파 히드록시 산을 부가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 알파 히드록시산은 글리콜산, 젖산, 타르타르산 및 시트르산으로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다. 상기 방법은 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액에 약 0.5% 내지 약 10.0%의 농도에서 히알루론산 또는 그의 염 형태를 부가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 상기 방법은 산화아연 또는 티타늄 디옥사이드 중 적어도 하나를 부가하는 것을 추가로 포함할 수 있다.

이 방법에 의해 제조된 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액으로부터 겔을 제조할 수 있다. 겔은 약 0.5 wt. % 내지 약 20.0 wt. %의 비타민 C 또는 그의 유도체를 포함할 수 있다. 겔은 적어도 2%의 실크 함량 및 적어도 20%의 비타민 함량을 가질 수 있다.

여기서 예시된 양상에 따르면, 약 39 kDa 내지 약 80 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 갖는 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액을 제조하기 위한 방법이 개시되고, 상기 방법은 다음 단계를 포함한다: 정련을 유발하도록 약 30 분의 처리 시간 동안 소듐 카보네이트의 끓는 (100 ℃) 수성 용액에 실크 공급원을 부가하는 것; 상기 용액으로부터 세리신을 제거하여 비-검출가능 수준 세리신을 포함하는 실크 피브로인 추출물을 제조하는 것; 실크 피브로인 추출물로부터 상기 용액을 따라내는 것; 약 80 ℃ 내지 약 140 ℃ 범위의 출발 온도를 갖는 리튬 브로마이드 용액 내에 실크 피브로인 추출물의 배치에 의해 리튬 브로마이드의 용액 내에 실크 피브로인 추출물을 용해시키는 것; 약 60 ℃ 내지 약 100 ℃ 사이의 범위 내 온도를 갖는 건조 오븐 내에 적어도 1 시간의 기간 동안 실크 피브로인-리튬 브로마이드의 용액을 유지시키는 것; 실크 피브로인 추출물로부터 리튬 브로마이드를 제거하는 것; 및 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액을 제조하는 것, 여기서 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액은 약 10 ppm 및 약 300 ppm 사이의 리튬 브로마이드 잔류물, 약 10 ppm 및 약 100 ppm 사이의 소듐 카보네이트 잔류물, 약 40 kDa 내지 약 65 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 갖는 단편을 포함하고, 여기서 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 포함함. 상기 방법은 용해 단계 이전에 실크 피브로인 추출물을 건조시키는 것을 추가로 포함할 수 있다. 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액은 고-성능 액체 크로마토그래피 리튬 브로마이드 어세이를 사용하여 측정된 300 ppm 미만의 리튬 브로마이드 잔류물을 포함할 수 있다. 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액은 고-성능 액체 크로마토그래피 소듐 카보네이트 어세이를 사용하여 측정된 100 ppm 미만의 소듐 카보네이트 잔류물을 포함할 수 있다. 상기 방법은 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액에 치료제를 부가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 상기 방법은 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액에 항산화제 또는 효소 중 하나로부터 선택된 분자를 부가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 상기 방법은 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액에 비타민을 부가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 비타민은 비타민 C 또는 그의 유도체일 수 있다. 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액은 동결건조될 수 있다. 상기 방법은 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액에 알파 히드록시 산을 부가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 알파 히드록시산은 글리콜산, 젖산, 타르타르산 및 시트르산으로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다. 상기 방법은 순수한 실크 피브로인-기초 단백질 단편의 수성 용액에 약 0.5% 내지 약 10.0%의 농도에서 히알루론산 또는 그의 염 형태를 부가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 상기 방법은 산화아연 또는 티타늄 디옥사이드 중 적어도 하나를 부가하는 것을 추가로 포함할 수 있다.

히알루론산 및 히알루론산 겔

본 발명의 생분해성 중합체 성분은 히알루론산 (HA)로서 또한 공지된 히알루로네이트이다. HA는 D-글루쿠론산 및 N-아세틸-D-글루코자민의 교대하는 잔기로 구성된다. 이 물 가용성 중합체는 거의 모든 조직, 특히 세포외 매트릭스, 눈 및 관절의 활막 유체에서 천연적으로 발견된다. HA는 순수한 형태로 상업적으로 이용가능하다. 작은 겔 입자 HA 충전제는 피부의 기계적 스트레칭 및 진피 섬유아세포의 활성화에 의해 유도된다고 추정되는 천연 콜라겐 생산을 자극하기 위해 사용될 수 있다.

본발명의 얻어진 진피 충전제 내 HA 농도는 진피 충전제 강성 및 지속성에 기여한다. 일부 구체예에서, 여기서 기술된 얻어진 진피 충전제 내 HA의 증가된 농도는 비교적 더 작은 HA의 농도를 갖는 진피 충전제와 비교하여 얻어진 진피 충전제의 강성 및/또는 지속성을 증가시킬 수 있다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내 포함된 HA는 100,000 달톤 이상, 150,000 달톤 이상, 1 백만 달톤 이상, 또는 2 백만 달톤 이상의 분자량을 가진다. 일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내 포함된 HA 100,000 달톤 이하, 150,000 달톤 이하, 1 백만 달톤 이하, 또는 2 백만 달톤 이하의 분자량을 가진다. 일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내 포함된 HA는 고 분자량 (예를 들어, HA의 분자량 약 1 MDa 내지 약 4 MDa)을 가진다. 일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내 포함된 HA는 저 분자량 (예를 들어, 약 1 MDa 미만의 HA 분자량)을 가진다.

일부 구체예에서, HA 공급원은 히알루로네이트 염 가령, 예를 들어, 소듐 히알루로네이트일 수 있다. 일부 구체예에서, HA는 가교결합된다. 가교결합된 HA은 다양한 형상, 가령 막, 겔, 반-겔, 스폰지, 또는 마이크로스피어로 제제화될 수 있다. 일부 구체예에서, 가교결합된 HA는 유체 겔 형태, 즉, 그의 용기의 형상을 가진다. HA 겔 또는 반-겔의 점도는 비공액화 HA 및/또는 히알루로네이트의 부가로 변경될 수 있다. 점도는 여기서 기술된 바와 같이 또한 SPF-SPF, SPF-HA, 및/또는 HA-HA 가교결합의 정도를 변화시켜 조절될 수 있다. 일부 구체예에서, 약 4% 내지 약 12%의 HA가 HA-HA 또는 HA-SPF로서 가교결합될 수 있다.

구체예에서, 여기서 기술된 SPF 조성물은 조직 충전제 조성물을 형성하기 위해 HA와 조합될 수 있다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 99% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 98% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 97% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 96% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 95% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 94% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 93% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 92% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 91% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 90% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 85% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 80% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 75% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 70% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 65% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 60% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 55% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 50% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 45% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 40% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 35% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 30% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 25% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 20% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 19% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 18% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 17% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 16% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 15% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 14% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 13% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 12% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 11% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 10% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 9% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 8% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 7% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 6% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 5% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 4% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 3% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 2% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 1% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 0.9% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 0.8% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 0.7% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 0.6% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 0.5% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 0.4% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 0.3% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 0.2% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 0.1% 미만이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 0.1% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 0.2% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 0.3% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 0.4% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 0.5% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 0.6% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 0.7% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 0.8% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 0.9% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 1% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 2% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 3% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 4% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 5% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 6% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 7% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 8% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 9% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 10% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 11% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 12% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 13% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 14% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 15% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 16% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 17% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 18% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 19% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 20% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 25% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 30% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 35% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 40% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 45% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 50% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 55% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 60% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 65% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 70% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 75% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 80% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 85% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 90% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 91% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 92% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 93% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 94% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 95% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 96% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 97% 초과이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 98% 초과이다.

구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 0.1%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 0.2%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 0.3%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 0.4%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 0.5%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 0.6%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 0.7%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 0.8%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 0.9%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 1%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 2%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 3%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 4%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 5%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 6%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 7%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 8%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 9%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 10%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 11%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 12%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 13%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 14%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 15%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 16%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 17%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 18%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 19%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 20%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 25%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 30%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 35%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 40%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 45%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 50%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 55%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 60%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 65%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 70%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 75%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 80%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 85%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 90%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 91%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 92%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 93%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 94%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 95%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 96%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 97%이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA은 약 98%이다.

구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 0.1% 내지 약 1% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 0.5% 내지 약 1.5% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 1% 내지 약 5% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 1.5% 내지 약 5.5% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 2% 내지 약 6% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 2.5% 내지 약 6.5% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 3% 내지 약 7% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 3.5% 내지 약 7.5% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 4% 내지 약 8% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 4.5% 내지 약 8.5% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 5% 내지 약 9% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 5.5% 내지 약 9.5% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 6% 내지 약 10% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 6.5% 내지 약 10.5% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 7% 내지 약 11% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 7.5% 내지 약 11.5% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 8% 내지 약 12% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 8.5% 내지 약 12.5% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 9% 내지 약 13% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 9.5% 내지 약 13.5% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 10% 내지 약 14% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 10.5% 내지 약 14.5% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 11% 내지 약 15% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 11.5% 내지 약 15.5% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 12% 내지 약 16% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 12.5% 내지 약 16.5% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 13% 내지 약 17% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 13.5% 내지 약 17.5% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 14% 내지 약 18% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 14.5% 내지 약 18.5% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 15% 내지 약 19% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 15.5% 내지 약 19.5% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 16% 내지 약 20% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 20% 내지 약 30% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 30% 내지 약 40% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 40% 내지 약 50% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 50% 내지 약 60% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 60% 내지 약 70% 사이이다. 구체예에서, 중량 기준 조직 충전제 조성물 내 퍼센트 HA는 약 80% 내지 약 90% 사이이다

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 조성물 내 중량 기준 퍼센트 HA은 약 1% 내지 약 2%, 또는 약 1% 내지 약 3%, 또는 약 1% 내지 약 4%, 또는 약 1% 내지 약 5%, 또는 약 1% 내지 약 6%, 또는 약 1% 내지 약 7%, 또는 약 1% 내지 약 8%, 또는 약 1% 내지 약 9%, 또는 약 1% 내지 약 10%, 또는 약 1% 내지 약 11%, 또는 약 1% 내지 약 12%, 또는 약 1% 내지 약 13%, 또는 약 1% 내지 약 14%, 또는 약 1% 내지 약 15%, 또는 약 1% 내지 약 16%, 또는 약 1% 내지 약 17%, 또는 약 1% 내지 약 18%, 또는 약 1% 내지 약 19%, 또는 약 1% 내지 약 20%, 또는 약 1% 내지 약 21%, 또는 약 1% 내지 약 22%, 또는 약 1% 내지 약 23%, 또는 약 1% 내지 약 24%, 또는 약 1% 내지 약 25%, 또는 약 1% 내지 약 30%, 또는 약 1% 내지 약 40%, 또는 약 1% 내지 약 50%, 또는 약 1% 내지 약 60%, 또는 약 1% 내지 약 70%, 또는 약 1% 내지 약 80%, 또는 약 1% 내지 약 95%; 또는 약 10% 내지 약 20%, 또는 약 10% 내지 약 25%, 또는 약 10% 내지 약 30%, 또는 약 10% 내지 약 35%, 또는 약 10% 내지 약 40%, 또는 약 10% 내지 약 45%, 또는 약 10% 내지 약 50%, 또는 약 10% 내지 약 55%, 또는 약 10% 내지 약 60%, 또는 약 10% 내지 약 65%, 또는 약 10% 내지 약 70%, 또는 약 10% 내지 약 75%, 또는 약 10% 내지 약 80%, 또는 약 10% 내지 약 85%, 또는 약 10% 내지 약 90%, 또는 약 10% 내지 약 95%이다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 HA는 상업적 공급원으로부터 획득 또는 스트렙토코쿠스 에퀴 박테리아에 의해 제조될 수 있다.

HA를 포함하는 여기서 기술된 조직 충전제는 그의 시험관 내 생물학적 활성 및 생체 내에서 생물학적 활성을 특징으로 할 수 있다. 예를 들어, 세포 독성, 효소적 분해에 대한 저항성, 시린지능력 (예를 들어, 용액 점도, 주사제 흐름 속도, 시린지/니들 직경), 및/또는 입자 형태 분석에 대해 여기서 기술된 조직 충전제의 일부에 대해 시험관 내 어세이가 수행될 수 있다. 예를 들어, Park, et al., J. Eur. Acad. Dermatol. Venerol. (2014) 28:565-568 참조. 초기 형태학적 패턴, 존재하는 총 잔존 충전제, 조직학적 평가를 결정하기 위해 생체 내 어세이가 수행될 수 있고, 육아종 형성 또는 피부 부 반응 검사를 포함할 수 있다. 예를 들어, Park, et al., J. Eur. Acad. Dermatol. Venerol. (2014) 28:565-568; 및 Ramot, et al., Toxicology Pathology (2015) 43: 267-271 참조.

겔화

구체예에서, 실크 겔은 겔화 보조제와 함께 제공될 수 있다. 일부 구체예에서, 겔화 보조제는 산, 전기, 혼합, 및/또는 초음파처리일 수 있다.

구체예에서, 실크 겔 제조시, 여기서 기술된 실크 용액에 겔화 촉진을 돕기 위해 산이 부가될 수 있다. 구체예에서, 중성 또는 염기성 분자 및/또는 치료제를 포함하는 실크 겔 제조시, 겔화 촉진을 위해 산이 부가될 수 있다. 구체예에서, 실크 겔 제조시, pH 증가 (겔을 더욱 염기성으로 만듬)는 겔의 저장 안정성을 증가시킨다. 구체예에서, 실크 겔 제조시, pH 증가 (겔을 더욱 염기성으로 만듬)는 더 큰 양의 산성 분자가 겔 내로 로딩되도록 한다.

구체예에서, 실크 겔 제조시, 여기서 기술된 실크 용액 겔화 촉진을 돕기 위해 전기가 통과될 수 있다.

구체예에서, 실크 겔 제조시, 겔화 촉진을 돕기 위해 여기서 기술된 실크 용액의 혼합이 사용될 수 있다.

구체예에서, 실크 겔 제조시, 겔화 촉진을 돕기 위해 여기서 기술된 실크 용액의은 초음파처리가 사용될 수 있다.

구체예에서, 첨가제를 더욱 안정화시키기 위해 실크 겔에 천연 첨가제가 부가될 수 있다. 예를 들어, 미량 원소 가령 셀레늄 또는 마그네슘 또는 L-메티오닌이 사용될 수 있다. 추가로, 더욱 안정성을 증가시키기 위해 광-차단 용기가 부가될 수 있다.

일부 구체예에서, 겔화 증가제가 SPF 겔화를 가속화하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구체예에서, SPF 용액은 교반, 흔들기 또는 다른 형태의 교반을 통한 혼합을 동반하여 다양 부피 비에서 순수한 알콜 또는 수성 알콜 용액과 혼합될 수 있다. 일부 구체예에서, 이 알콜 용액 증가제는 이후 최종 겔 결과의 추가 증가제로서 부가된 양친성 펩티드의 어느 양을 가질 수 있다. 가속화 정도는 시스템에 보다 큰 또는 작은 증가제 성분을 부가하는 것에 의해 적절한 경우 감소 또는 증가될 수 있다.

일부 구체예에서, 겔화 속도는 겔을 제조하기 위해 사용된 용액 내 SPF의 농도를 증가시킴에 의해 증가될 수 있다. 이를 위해, 비제한적으로 다음을 포함하는 다양한 방법이 사용될 수 있다: 흡습성 종 가령 폴리에틸렌 글리콜을 포함하는 완충제에 대한 중간체 SPF 용액의 투석, 동결건조 단계, 및/또는 증발 단계. 겔화 공정의 증가제로서 증가된 온도가 또한 사용될 수 있다. 또한, 비제한적으로 - 직접 적정 및 가스 교환을 포함하는 방법에 의한 중간체 실크 용액 pH의 조작이 겔화 공정을 증가시키기 위해 사용될 수 있다. 특히 칼슘 및 포타슘를 포함하는 선택 이온성 종의 도입 이 겔화 속도를 가속화시키기 위해 또한 사용될 수 있다.

일부 구체예에서, 겔화는 SPF 중간체 내 가용성 및 불용성 둘 다인 유기 및 무기 종을 포함하는 핵형성제의 사용으로 촉진될 수 있다. 핵형성제는 비제한적으로, 실크 분자를 결합시키는 펩티드 서열, 이전에 겔화된 실크, 및 난용성 β-시트 풍부 구조를 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 겔화 공정을 가속화시키는 추가 수단은 전단 장치, 초음파 장치, 또는 기계적 믹서를 통해 부여될 수 있는 기계적 자극의 도입을 통해서이다.

완전 실크 용액 겔화에 필요한 시간은 상기 언급된 파라미터 값, 또한 SPF 용액 내 발견되는 응집 및 유기체화의 초기 상태에 따라서, 수초 내지 수 시간 또는 일까지 다양할 수 있다. 부가된 증가제의 부피 분획은 총 시스템 부피의 약 0% 내지 약 99%까지 다양할 수 있다 (즉, 둘 중 어느 성분이 큰 과잉의 다른 성분 또는 간격 내 어느 상대 농도로 부가될 수 있다). 사용된 SPF 용액의 농도는 약 1% (w/v), 내지 약 20% (w/v) 범위, 및 다른 적절한 범위일 수 있다. 증가제가 SPF 용액에 부가될 수 있거나 또는 SPF 용액이 증가제에 부가될 수 있다. 형성된 SPF 하이드로겔은 변경된 기계적 특성을 얻기 위해 추가로 화학적으로 또는 물리적으로 가교결합될 수 있다.

일부 구체예에서, 증가제 용액은 SPF 용액에 부가되거나, 또는 그 반대이고, SPF 용액은 약 1% (w/v), 약 2% (w/v), 약 3% (w/v), 약 4% (w/v), 약 5% (w/v), 약 6% (w/v), 약 7% (w/v), 약 8% (w/v), 약 9% (w/v), 약 10% (w/v), 약 12% (w/v), 약 15% (w/v), 약 18% (w/v), 약 20% (w/v), 약 25% (w/v), 또는 약 30% (w/v)의 SPF의 농도를 갖는다. 일부 구체예에서, 증가제 용액은 SPF 용액에 부가되거나, 또는 그 반대이고, SPF 용액은 적어도 1% (w/v), 적어도 2% (w/v), 적어도 3% (w/v), 적어도 4% (w/v), 적어도 5% (w/v), 적어도 6% (w/v), 적어도 7% (w/v), 적어도 8% (w/v), 적어도 9% (w/v), 적어도 10% (w/v), 적어도 12% (w/v), 적어도 15% (w/v), 적어도 18% (w/v), 적어도 20% (w/v), 적어도 25% (w/v), 또는 적어도 30% (w/v)의 SPF의 농도를 갖는다. 일부 구체예에서, 증가제 용액은 SPF 용액에 부가되거나, 또는 그 반대이고, SPF 용액은 약 1% (w/v) 내지 약 5% (w/v), 약 1% (w/v) 내지 약 10% (w/v), 약 1% (w/v) 내지 약 15% (w/v), 약 1% (w/v) 내지 약 20% (w/v), 약 1% (w/v) 내지 약 25% (w/v), 약 1% (w/v) 내지 약 30% (w/v), 약 5% (w/v) 내지 약 10% (w/v), 약 5% (w/v) 내지 약 15% (w/v), 약 5% (w/v) 내지 약 20% (w/v), 약 5% (w/v) 내지 약 25% (w/v), 약 5% (w/v) 내지 약 30% (w/v), 약 10% (w/v) 내지 약 15% (w/v), 약 10% (w/v) 내지 약 20% (w/v), 약 10% (w/v) 내지 약 25% (w/v), 또는 약 10% (w/v) 내지 약 30% (w/v)의 SPF의 농도를 갖는다.

겔 및 하이드로겔 - 개질 및 가교결합

일부 구체예에서, 본발명은 하나 이상의 가교결합된 매트릭스 중합체를 포함하는 하나 이상의 하이드로겔을 포함하는 조성물을 제공한다. 여기서 사용된, 용어 "가교결합된"는 개별 중합체 분자, 거대분자, 및/또는 단량체 사슬을, 겔과 같은 더욱 안정한 구조로 결합시키는 분자간 결합을 지칭한다. 이와 같이, 가교결합된 매트릭스 중합체는 적어도 하나의 개별 중합체 분자를 다른 것에 결합시키는 적어도 하나의 분자간 결합을 가지고, 여기서 제 1 개별 중합체 분자는 서로 유사한, 또는 상이한 화학적 특성을 가질 수 있다. 여기서 개시된 매트릭스 중합체는 제한 없이, 다기능성 PEG-기초 가교결합 물질, 디비닐 설폰, 디글리시딜 에테르, 및 비스-에폭사이드를 포함한다. SPF, 및/또는 HA, 가교결합제의 비-제한적 예시는 디비닐 설폰 (DVS), 1,4-부탄디올 디글리시딜 에테르 (BDDE), UV 광, 글루타르알데히드, 1,2-비스(2,3-에폭시프로폭시)에틸렌 (EGDGE), 1,2,7,8-디에폭시옥탄 (DEO), 비스카보디이미드 (BCD), 펜타에리쓰리톨 테트라글리시딜 에테르 (PETGE), 아디프산 디히드라지드 (ADH), 비스(설포숙신이미딜)수버레이트 (BS), 헥사메틸렌디아민 (HMDA), 1-(2,3-에폭시프로필)-2,3-에폭시시클로헥산, 또는 그의 조합을 포함하는 디알데히드 및 디설파이드 가교결합제를 사용하여 가교결합될 수 있다. 일부 구체예에서, HA 가교결합제는 BDDE 또는 DVS를 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, HA 및/또는 SPF 가교결합제는 여기서 기술된 바와 같이 BDDE, DVS, UV 광, 글루타르알데히드, 또는 카보디이미드일 수 있다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 잔여 가교결합제를 함유할 수 있다. 일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 단지 흔적 양의 가교결합제 가령, 예를 들어, 최대 약 2 ppm, 또는 최대 약 1.9 ppm, 또는 최대 약 1.8 ppm, 또는 최대 약 1.7 ppm, 또는 최대 약 1.6 ppm, 또는 최대 약 1.5 ppm, 또는 최대 약 1.4 ppm, 또는 최대 약 1.3 ppm, 또는 최대 약 1.2 ppm, 또는 최대 약 1.1 ppm, 또는 최대 약 1.0 ppm, 또는 최대 약 0.9 ppm, 또는 최대 약 0.8 ppm, 또는 최대 약 0.7 ppm, 또는 최대 약 0.6 ppm, 또는 최대 약 0.5 ppm, 또는 최대 약 0.4 ppm, 또는 최대 약 0.3 ppm, 또는 최대 약 0.2 ppm, 또는 최대 약 0.1 ppm를 함유할 수 있다. 일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는, 최대 약 2 ppm, 또는 최대 약 1.9 ppm, 또는 최대 약 1.8 ppm, 또는 최대 약 1.7 ppm, 또는 최대 약 1.6 ppm, 또는 최대 약 1.5 ppm, 또는 최대 약 1.4 ppm, 또는 최대 약 1.3 ppm, 또는 최대 약 1.2 ppm, 또는 최대 약 1.1 ppm, 또는 최대 약 1.0 ppm, 또는 최대 약 0.9 ppm, 또는 최대 약 0.8 ppm, 또는 최대 약 0.7 ppm, 또는 최대 약 0.6 ppm, 또는 최대 약 0.5 ppm, 또는 최대 약 0.4 ppm, 또는 최대 약 0.3 ppm, 또는 최대 약 0.2 ppm, 또는 최대 약 0.1 ppm 농도에서 흔적 양 BDDE를 함유할 수 있다. 본업계에서의 통상의 숙련가에 의해 이해되는 바와 같이, 특정 조직 충전제 샘플 내에 존재하는 잔여 가교결합제의 양은 가스 크로마토그래피-질량 분광법에 의해 결정될 수 있다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 매트릭스를 포함할 수 있는 SPF 매트릭스 일부 및 HA 매트릭스 일부를 포함할 수 있고, 여기서 SPF 매트릭스 일부는 가교결합된 및 비-가교결합된 SPF의 혼합물을 포함하고 HA 매트릭스 일부는 가교결합된 및 비-가교결합된 HA의 혼합물을 포함한다.

일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 링커 개질 HA를 포함한다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 링커 개질 SPF를 포함한다. 2기능성 가교결합제는 두 상이한 HA 분자, 두 상이한 SPF 분자, 또는 HA 분자와 SPF 분자를 연결시키기 위해 두 말단 모두에서 반응할 수 있다. 일부 구체예에서, 가교결합제는 단지 하나의 말단에서 HA 분자와 결합하고, 다른 말단 펜던트는 남겨둔다. 일부 구체예에서, 가교결합제는 단지 하나의 결합 말단에서 SPF 분자와 결합하고, 다른 말단 펜던트는 남겨둔다.

여기서 사용된, 개질의 정도 (MoD)는 다음과 같이 정의될 수 있다 (예를 들어 J. Kablik et al., Dermatol Surg, 2009 (35): 302-312 참조):

총 % 개질의 정도 = % 가교결합 + % 펜던트

MoD을 결정하기 위해, 또한 다음과 같이 정의될 수 있다 (예를 들어 L. Kenne et al., 카보를 수화 중합체, 2013 (91): 410- 418 참조):

여기서 n_{연결 가교결합제는} 연결 가교결합제 분자의 수이고, n_{HA 2당류는} HA 내 2당류의 수, 및 n_{SPF 반복 단위}은 SPF 내 반복 단위의 수이다. 이들 수는 가교결합제, HA, 및 SPF의 특징적 화학적 시프트를 사용하여 NMR에 의해 결정될 수 있다 ("Chemical Characterization of Hydrogels Crosslinked with Polyethylene Glycol for Soft Tissue Augmentation," Monticelli et al., Open Access Maced J Med Sci. 2019 Apr 15; 7(7):1077-1081 참조).

Chemical Characterization of Hydrogels Crosslinked with Polyethylene Glycol for Soft Tissue Augmentation

Damiano Monticelli1, V

일부 구체예에서, MoD는 약 1% 및 25% 사이, 약 2% 및 약 20% 사이, 또는 약 3.5% 및 약 17.5% 사이이다. 일부 구체예에서, MoD은 약 1.1%, 약 1.2%, 약 1.3%, 약 1.4%, 약 1.5%, 약 1.6%, 약 1.7%, 약 1.8%, 약 1.9%, 약 2.0%, 약 2.1%, 약 2.2%, 약 2.3%, 약 2.4%, 약 2.5%, 약 2.6%, 약 2.7%, 약 2.8%, 약 2.9%, 약 3.0%, 약 3.1%, 약 3.2%, 약 3.3%, 약 3.4%, 약 3.5%, 약 3.6%, 약 3.7%, 약 3.8%, 약 3.9%, 약 4.0%, 약 4.1%, 약 4.2%, 약 4.3%, 약 4.4%, 약 4.5%, 약 4.6%, 약 4.7%, 약 4.8%, 약 4.9%, 약 5.0%, 약 5.1%, 약 5.2%, 약 5.3%, 약 5.4%, 약 5.5%, 약 5.6%, 약 5.7%, 약 5.8%, 약 5.9%, 약 6.0%, 약 6.1%, 약 6.2%, 약 6.3%, 약 6.4%, 약 6.5%, 약 6.6%, 약 6.7%, 약 6.8%, 약 6.9%, 약 7.0%, 약 7.1%, 약 7.2%, 약 7.3%, 약 7.4%, 약 7.5%, 약 7.6%, 약 7.7%, 약 7.8%, 약 7.9%, 약 8.0%, 약 8.1%, 약 8.2%, 약 8.3%, 약 8.4%, 약 8.5%, 약 8.6%, 약 8.7%, 약 8.8%, 약 8.9%, 약 9.0%, 약 9.1%, 약 9.2%, 약 9.3%, 약 9.4%, 약 9.5%, 약 9.6%, 약 9.7%, 약 9.8%, 약 9.9%, 약 10.0%, 약 10.1%, 약 10.2%, 약 10.3%, 약 10.4%, 약 10.5%, 약 10.6%, 약 10.7%, 약 10.8%, 약 10.9%, 약 11.0%, 약 11.1%, 약 11.2%, 약 11.3%, 약 11.4%, 약 11.5%, 약 11.6%, 약 11.7%, 약 11.8%, 약 11.9%, 약 12.0%, 약 12.1%, 약 12.2%, 약 12.3%, 약 12.4%, 약 12.5%, 약 12.6%, 약 12.7%, 약 12.8%, 약 12.9%, 약 13.0%, 약 13.1%, 약 13.2%, 약 13.3%, 약 13.4%, 약 13.5%, 약 13.6%, 약 13.7%, 약 13.8%, 약 13.9%, 약 14.0%, 약 14.1%, 약 14.2%, 약 14.3%, 약 14.4%, 약 14.5%, 약 14.6%, 약 14.7%, 약 14.8%, 약 14.9%, 약 15.0%, 약 15.1%, 약 15.2%, 약 15.3%, 약 15.4%, 약 15.5%, 약 15.6%, 약 15.7%, 약 15.8%, 약 15.9%, 약 16.0%, 약 16.1%, 약 16.2%, 약 16.3%, 약 16.4%, 약 16.5%, 약 16.6%, 약 16.7%, 약 16.8%, 약 16.9%, 약 17.0%, 약 17.1%, 약 17.2%, 약 17.3%, 약 17.4%, 약 17.5%, 약 17.6%, 약 17.7%, 약 17.8%, 약 17.9%, 약 18.0%, 약 18.1%, 약 18.2%, 약 18.3%, 약 18.4%, 약 18.5%, 약 18.6%, 약 18.7%, 약 18.8%, 약 18.9%, 약 19.0%, 약 19.1%, 약 19.2%, 약 19.3%, 약 19.4%, 약 19.5%, 약 19.6%, 약 19.7%, 약 19.8%, 약 19.9%, 또는 약 20.0%이다.

일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 가교결합된 SPF를 포함한다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 가교결합된 HA를 포함한다. SPF 단편은 또다른 SPF 단편, 또는 HA에 가교결합될 수 있다. SPF-SPF, SPF-HA, 및 HA-HA 가교결합된 종은 제로 길이를 포함하는 다양한 길이의 가교결합제를 사용함에 의해 얻어질 수 있다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 가교결합된 HA 및/또는 가교결합된 SPF를 갖는 하이드로겔의 형태로 제공될 수 있다. 가교결합된 HA 및/또는 가교결합된 SPF (또는 SPF-HA 가교결합된 종)은 측정가능한 가교결합의 정도를 가질 수 있다. 여기서 사용된, 용어 "가교결합의 정도"는 가교결합된 중합체 거대분자 내 단량체 단위의 수에 상대적인 가교결합 단위 (또는 분자 또는 잔기)의 수를 지칭한다. 일부 구체예에서, 단량체 단위는 SPF 내 아미노산이다. 일부 구체예에서, 단량체 단위는 HA의 2당류 단량체 단위이다. 따라서, 4%의 가교결합 정도로 가교결합된 매트릭스 중합체를 가지는 조성물은 매 100 단량체 단위 당 평균 네 개의 가교결합 분자가 있음을 의미한다. 모든 다른 파라미터가 같고, 가교결합의 정도가 커질수록, 겔은 더 단단해진다. 본발명의 어느 하나의 이론에의 제한 없이, HA 및/또는 SPF 내 가교결합의 정도는 그로부터 제조된 얻어진 재료 또는 조성물이 더 단단해짐을 유발한다. 예를 들어, 가교결합의 정도가 커질수록, 더 긴 그러한 재료가 바디 내에 존재할 가능성이 있다. 사실, 어느 하나의 이론에의 제한 없이, 가교결합된 재료를 포함하는 생체적합성 재료는 가교결합의 정도에 따라서 생재흡수, 생흡수, 및/또는 생분해의 다양한 속도를 가지고 여기서 가교결합의 정도는 생재흡수, 생흡수, 및/또는 생분해의 속도에 반비례한다. 또한, 여기서 기술된 조직 충전제 내 더 큰 가교결합은 그러한 조직 충전제의 친수성 및 리프팅 능력을 감소시킬 수 있다.

비-제한적 예시에서, 약 5%의 가교결합의 정도를 가지는 가교결합된 SPF는 가교결합된 SPF 내에 매 100 단량체 단위, 예를 들어, 아미노산에 대해 약 5 가교결합 모이어티를 가진다.

가교결합의 정도의 비-제한적 예시는 약 1% 내지 약 15%, 또는 약 2% 내지 약 14%, 또는 약 1% 내지 약 2%, 약 1.5% 내지 약 2.5%, 또는 약 2% 내지 약 3%, 또는 약 2.5% 내지 약 3.5%, 또는 약 3% 내지 약 4%, 또는 약 3.5% 내지 약 4.5%, 또는 약 4% 내지 약 5%, 또는 약 4.5% 내지 약 5.5%, 또는 약 5% 내지 약 6%, 또는 약 5.5% 내지 약 6.5%, 또는 약 6% 내지 약 7%, 또는 약 6.5% 또는 약 7.5%, 또는 약 7% 내지 약 8%, 또는 약 7.5% 또는 약 8.5%, 또는 약 8% 내지 약 9%, 또는 약 8.5% 내지 약 9.5%, 또는 약 9% 내지 약 10%, 또는 약 9.5% 내지 약 10.5%, 또는 약 10% 내지 약 11%, 또는 약 10.5% 내지 약 11.5%, 또는 약 11% 내지 약 12%, 또는 약 11.5% 내지 약 12.5%, 또는 약 12% 내지 약 13%, 또는 약 12.5% 내지 약 13.5%, 또는 약 13% 내지 약 14%, 또는 약 13.5% 내지 약 14.5%, 또는 약 14% 내지 약 15%를 포함한다.

일부 구체예에서, 가교결합의 정도는 적어도 1%이다. 일부 구체예에서, 가교결합의 정도는 적어도 2%이다. 일부 구체예에서, 가교결합의 정도는 적어도 3%이다. 일부 구체예에서, 가교결합의 정도는 적어도 4%이다. 일부 구체예에서, 가교결합의 정도는 적어도 5%이다. 일부 구체예에서, 가교결합의 정도는 적어도 6%이다. 일부 구체예에서, 가교결합의 정도는 적어도 7%이다. 일부 구체예에서, 가교결합의 정도는 적어도 8%이다. 일부 구체예에서, 가교결합의 정도는 적어도 9%이다. 일부 구체예에서, 가교결합의 정도는 적어도 10%이다. 일부 구체예에서, 가교결합의 정도는 적어도 11%이다. 일부 구체예에서, 가교결합의 정도는 적어도 12%이다. 일부 구체예에서, 가교결합의 정도는 적어도 13%이다. 일부 구체예에서, 가교결합의 정도는 적어도 14%이다. 일부 구체예에서, 가교결합의 정도는 적어도 15%이다.

일부 구체예에서, 본발명의 조성물은 가교결합된 SPF를 포함하고 여기서 가교결합의 정도는 적어도 1%, 적어도 2%, 적어도 3%, 적어도 4%, 적어도 5%, 적어도 6%, 적어도 7%, 적어도 8%, 적어도 9%, 적어도 10%, 적어도 11%, 적어도 12%, 적어도 13%, 적어도 14%, 또는 적어도 15%이다. 일부 구체예에서, 조성물은 가교결합된 SPF를 포함하고 여기서 가교결합의 정도는 최대 1%, 최대 2%, 최대 3%, 최대 4%, 최대 5%, 최대 6%, 최대 7%, 최대 8%, 최대 9%, 최대 10%, 최대 11%, 최대 12%, 최대 13%, 최대 14%, 또는 최대 15%이다. 일부 구체예에서, 조성물은 가교결합된 SPF를 포함하고 여기서 가교결합의 정도는 약 1% 내지 약 15%, 약 2% 내지 약 11%, 약 3% 내지 약 10%, 약 1% 내지 약 5%, 약 10% 내지 약 15%, 약 11% 내지 약 15%, 약 6% 내지 약 10%, 또는 약 6% 내지 약 8%, 또는 약 1% 내지 약 2%, 약 1.5% 내지 약 2.5%, 또는 약 2% 내지 약 3%, 또는 약 2.5% 내지 약 3.5%, 또는 약 3% 내지 약 4%, 또는 약 3.5% 내지 약 4.5%, 또는 약 4% 내지 약 5%, 또는 약 4.5% 내지 약 5.5%, 또는 약 5% 내지 약 6%, 또는 약 5.5% 내지 약 6.5%, 또는 약 6% 내지 약 7%, 또는 약 6.5% 또는 약 7.5%, 또는 약 7% 내지 약 8%, 또는 약 7.5% 또는 약 8.5%, 또는 약 8% 내지 약 9%, 또는 약 8.5% 내지 약 9.5%, 또는 약 9% 내지 약 10%, 또는 약 9.5% 내지 약 10.5%, 또는 약 10% 내지 약 11%, 또는 약 10.5% 내지 약 11.5%, 또는 약 11% 내지 약 12%, 또는 약 11.5% 내지 약 12.5%, 또는 약 12% 내지 약 13%, 또는 약 12.5% 내지 약 13.5%, 또는 약 13% 내지 약 14%, 또는 약 13.5% 내지 약 14.5%, 또는 약 14% 내지 약 15%이다.

일부 구체예에서, 본발명의 조성물은 가교결합된 HA를 포함하고 여기서 가교결합의 정도는 적어도 1%, 적어도 2%, 적어도 3%, 적어도 4%, 적어도 5%, 적어도 6%, 적어도 7%, 적어도 8%, 적어도 9%, 적어도 10%, 적어도 11%, 적어도 12%, 적어도 13%, 적어도 14%, 또는 적어도 15%이다. 일부 구체예에서, 조성물은 가교결합된 HA를 포함하고 여기서 가교결합의 정도는 최대 1%, 최대 2%, 최대 3%, 최대 4%, 최대 5%, 최대 6%, 최대 7%, 최대 8%, 최대 9%, 최대 10%, 최대 11%, 최대 12%, 최대 13%, 최대 14%, 또는 최대 15%이다. 일부 구체예에서, 조성물은 가교결합된 HA를 포함하고 여기서 가교결합의 정도는 약 1% 내지 약 15%, 약 2% 내지 약 11%, 약 3% 내지 약 10%, 약 1% 내지 약 5%, 약 10% 내지 약 15%, 약 11% 내지 약 15%, 약 6% 내지 약 10%, 또는 약 6% 내지 약 8%, 또는 약 1% 내지 약 2%, 약 1.5% 내지 약 2.5%, 또는 약 2% 내지 약 3%, 또는 약 2.5% 내지 약 3.5%, 또는 약 3% 내지 약 4%, 또는 약 3.5% 내지 약 4.5%, 또는 약 4% 내지 약 5%, 또는 약 4.5% 내지 약 5.5%, 또는 약 5% 내지 약 6%, 또는 약 5.5% 내지 약 6.5%, 또는 약 6% 내지 약 7%, 또는 약 6.5% 또는 약 7.5%, 또는 약 7% 내지 약 8%, 또는 약 7.5% 또는 약 8.5%, 또는 약 8% 내지 약 9%, 또는 약 8.5% 내지 약 9.5%, 또는 약 9% 내지 약 10%, 또는 약 9.5% 내지 약 10.5%, 또는 약 10% 내지 약 11%, 또는 약 10.5% 내지 약 11.5%, 또는 약 11% 내지 약 12%, 또는 약 11.5% 내지 약 12.5%, 또는 약 12% 내지 약 13%, 또는 약 12.5% 내지 약 13.5%, 또는 약 13% 내지 약 14%, 또는 약 13.5% 내지 약 14.5%, 또는 약 14% 내지 약 15%이다.

일부 구체예에서, 본발명의 조성물은 가교결합된 SPF-HA를 포함하고 여기서 가교결합의 정도는 적어도 1%, 적어도 2%, 적어도 3%, 적어도 4%, 적어도 5%, 적어도 6%, 적어도 7%, 적어도 8%, 적어도 9%, 적어도 10%, 적어도 11%, 적어도 12%, 적어도 13%, 적어도 14%, 또는 적어도 15%이다. 일부 구체예에서, 조성물은 가교결합된 SPF-HA을 포함하고 여기서 가교결합의 정도는 최대 1%, 최대 2%, 최대 3%, 최대 4%, 최대 5%, 최대 6%, 최대 7%, 최대 8%, 최대 9%, 최대 10%, 최대 11%, 최대 12%, 최대 13%, 최대 14%, 또는 최대 15%이다. 일부 구체예에서, 조성물은 가교결합된 SPF-HA를 포함하고 여기서 가교결합의 정도는 약 1% 내지 약 15%, 약 2% 내지 약 11%, 약 3% 내지 약 10%, 약 1% 내지 약 5%, 약 10% 내지 약 15%, 약 11% 내지 약 15%, 약 6% 내지 약 10%, 또는 약 6% 내지 약 8%, 또는 약 1% 내지 약 2%, 약 1.5% 내지 약 2.5%, 또는 약 2% 내지 약 3%, 또는 약 2.5% 내지 약 3.5%, 또는 약 3% 내지 약 4%, 또는 약 3.5% 내지 약 4.5%, 또는 약 4% 내지 약 5%, 또는 약 4.5% 내지 약 5.5%, 또는 약 5% 내지 약 6%, 또는 약 5.5% 내지 약 6.5%, 또는 약 6% 내지 약 7%, 또는 약 6.5% 또는 약 7.5%, 또는 약 7% 내지 약 8%, 또는 약 7.5% 또는 약 8.5%, 또는 약 8% 내지 약 9%, 또는 약 8.5% 내지 약 9.5%, 또는 약 9% 내지 약 10%, 또는 약 9.5% 내지 약 10.5%, 또는 약 10% 내지 약 11%, 또는 약 10.5% 내지 약 11.5%, 또는 약 11% 내지 약 12%, 또는 약 11.5% 내지 약 12.5%, 또는 약 12% 내지 약 13%, 또는 약 12.5% 내지 약 13.5%, 또는 약 13% 내지 약 14%, 또는 약 13.5% 내지 약 14.5%, 또는 약 14% 내지 약 15%이다.

예를 들어, HA 1 몰에 대해 SPF 1 몰이 가교결합될 수 있고 여기서 HA의 몰은 약 1 kDa 내지 약 2 M kDa의 분자량을 가질 수 있다. 일부 구체예에서, HA의 1 백만 몰에 대해 SPF의 1 몰, 또는 그 반대이고, 여기서 SPF은 100 Da 내지 350 kDa일 수 있고, 여기서 각각의 몰의 퍼센트는 가교결합 또는 유리될 수 있다. 다른 SPF에 SPF를 가교결합시키는 방법은 하나 이상의 단계를 포함할 수 있다. 제 1 단계에서, 에폭사이드, 가령 BDDE은 과량으로 SPF 용액에 부가되고 반응이 진행하도록 방치된다. 에폭사이드는 SPF 거대분자 상 다양한 기, 가령 카복실, 아민, 알콜, 티올, 등과 반응하여, 연결 가령 에스테르, 2차 또는 3차 아민, 에테르, 티오에테르, 등을 유발한다. BDDE의 두 에폭사이드가 모두 하나 이상의 SPF 거대분자 내 기능성 기와 반응한 경우, SPF가 가교결합된다. 구체예에서, HA의 가교결합은 알칼리 조건 하에서 BDDE와의 반응을 통해 수행될 수 있어서

et al., Carbohydrate 폴리mers (2011) 85:469-489에서 기술된 바와 같이 HA 및 가교결합제 사이의 공유결합 연결을 유발한다. 개질 또는 가교결합의 정도는 방법에 따르는 본업계에서 공지된 NMR에 의해 결정될 수 있다 (예를 들어, Edsman et al., Dermatol. Surg. (2012) 38: 1170-1179).

펩티드를 연결시키는 방법은 본업계에서 공지되어 있다. 여기서 규정된 올리고머 및/또는 가교결합된 SPF 펩티드로의 개별 분리된 SPF의 연결은 본업계에서 널리 공지된 화학적 공액화 절차, 가령 펩티드 연결 형성, 축합제 사용, 및 널리 공지된 2기능성 가교결합 시약 사용에 의해 실행될 수 있다. 공액화는 개재 기를 수반하지 않는 연결, 예를 들어, 직접 펩티드 연결을 포함하여 직접적이거나, 또는 간접적일 수 있고, 여기서 연결은 개재 모이어티, 가령 단백질 또는 펩티드, 예를 들어, 혈장 알부민, 또는 다른 스페어서 분자를 함유한다. 예를 들어, 연결은 헤테로2기능성 또는 호모2기능성 가교결합제, 예를 들어, 카보디이미드, 글루타르알데히드, N-숙신이미딜 3-(2-피리딜-디티오)프로피오네이트 (SPDP) 및 유도체, 비스-말레이미드, 4-(N-말레이미도메틸)시클로헥산-1-카복실레이트, 등을 통할 수 있다.

가교결합은 또한 공액화될 분자 상 반응성 기를 이용함으로써 외부 가교결합제 없이 달성될 수 있다. 펩티드 분자를 화학적으로 가교결합시키기 위한 방법은 일반적으로 본업계에서 공지되어 있고, 헤테로- 및 호모2기능성 물질의 수가, 예를 들어, U.S. Pat. Nos. 4,355,023, 4,657,853, 4,676,980, 4,925,921, 및 4,970,156, 및 Immuno Technology Catalogue 및 Handbook, Pierce Chemical Co. (1989)에서 기술되어 있고, 각각은 여기서 참고로서 포함된다. 가교결합을 포함하는 그러한 공액화는 치료제, 및 대상 물질에 결합할 수 있는 모이어티를 포함하는, 펩티드 올리고머 또는 거기에 공액화된 물질의 소정의 기능에 실질적으로 영향을 미치지 않도록 수행되어야 한다.

SPF 펩티드를 연결시키기 위해, 대안적 링커, 예를 들어 화학적 단백질 가교결합제가 사용될 수 있다는 것을 본업계에서 숙련가는 이해한다. 예를 들어 호모2기능성 가교결합제 가령 디숙신이미딜-수베리미데이트-디하이드로클로라이드; 디메틸-아디피미데이트-디하이드로클로라이드; 1,5,-2,4 디니트로벤젠 또는 헤테로2기능성 가교결합제 가령 N-히드록시숙신이미딜 2,3-디브로모프로피오네이트; 1-에틸-3-[3-디메틸아미노프로필]카보디이미드 하이드로클로라이드; 및 숙신이미딜-4-[n-말레이미도메틸]-시클로헥산-1-카복실레이트.

본 발명은 또한 HA에 가교결합된 SPF를 포함하는 조성물을 제공한다. HA에의 SPF 가교결합은 다양한 방법, 예를 들어 에폭사이드 방법, 퍼아이오데이트 방법, 및/또는 트레실 클로라이드 방법에 의해 달성될 수 있다. 일부 구체예에서, SPF는 에폭사이드, 예를 들어 다기능성 에폭사이드를 사용하여 HA에 가교결합된다. 예를 들어, 2기능성 에폭사이드 가령 1,4 부탄디올 디글리시딜 에테르 (BDDE)가 사용될 수 있다. 다른 다기능성 에폭사이드는, 비제한적으로, 폴리글리세롤폴리글리시딜 에테르 (PGPGE), 펜타에리트리톨폴리글리시딜 에테르 (PEPGE) 및 디글리세롤폴리글리시딜 에테르 (DGPGE)를 포함한다. 활성화제를 사용하여 SPF 및 HA 사이의 제로-길이 가교결합이 또한 제공된다.

다른 거대분자, 예를 들어 HA에 SPF를 가교결합시키는 방법은 하나 이상의 단계를 포함할 수 있다. 제 1 단계에서, 에폭사이드, 가령 BDDE은 과량으로 SPF 용액에 부가되고 반응이 진행하도록 방치된다. 에폭사이드는 SPF 거대분자 상 다양한 기, 가령 카복실, 아민, 알콜, 티올, 등과 반응하여, 연결 가령 에스테르, 2차 또는 3차 아민, 에테르, 티오에테르, 등을 유발할 수 있다. 단지 하나의 에폭사이드가 SPF와 반응한 경우, 또다른 SPF, 또는 상이한 거대분자, 예를 들어 HA, 등과의 가교결합을 위해 이용가능한 SPF에 부착된 유리 에폭사이드가 잔존한다. 시약 부가 순서는 다양할 수 있다. 예를 들어 BDDE가 먼저 HA에 부가될 수 있고, 이후 SPF가 부가되어 가교결합된 SPF-HA를 형성한다. 일부 구체예에서, SPF 및 HA은 먼저 혼합될 수 있고, 이후 BDDE가 혼합물에 부가된다. 일부 구체예에서, SPF 및 HA의 혼합물 에의BDDE 부가는 SPF에 가교결합된 SPF, HA에 가교결합된 HA, 및 HA에 가교결합된 SPF를 포함하는 조성물을 유발한다.

일부 구체예에서, 가교결합된 SPF-HA은 하나 이상의 단계를 포함하는 트레실 클로라이드 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 하나의 단계에서, 가교결합된 HA 및/또는 비-가교결합된 HA은 트레실 클로라이드, 즉, 2,2,2-트리플루오로에탄설포닐 클로라이드, 또는 다른 적당한 산 클로라이드로 활성화될 수 있다. 트레실 클로라이드는 예를 들어, 가교결합된 및/또는 비-가교결합된 HA를 함유하는 염기/용매 용액, 예를 들어, 피리딘/아세톤 용액에 한방울씩 부가된다. 일부 구체예에서, 트레실 클로라이드는 가교결합된 및/또는 비-가교결합된 HA의 당 링 상의 모든 네 개의 히드록실 기와 반응성이다. 임의의 단계에서, 얻어진 HA-트레실레이트는 세척된다. 한 단계에서, HA-트레실레이트와 반응하는 SPF 단편이 부가된다.

일부 구체예에서, SPF를 직접 가교결합된 및/또는 비-가교결합된 HA에 부착시키기 위해 트레실 클로라이드 방법이 사용될 수 있다. 다른 구체예에서, 트레실 클로라이드 방법은 SPF를 스페이서, 예를 들어 6-아미노-1-헥산올을 통해 가교결합된 및/또는 비-가교결합된 HA에 부착시키기 위해 사용될 수 있다. 일부 구체예에서, 스페이서는 우선 트레실 활성화 및 커플링을 통해 가교결합된 또는 비-가교결합된 HA에 커플링될 수 있다. 스페이서에 SPF를 커플링시키기 위해, 트레실 활성화 및 커플링을 이후 반복한다. 어떠한 적당한 스페이서, 즉, 6-아미노-1-헥산올과 유사한 적어도 일부 특징을 갖는 스페이서, 즉, SPF의 활성화 및 커플링을 위해 HA-트레실레이트, 및 반응성 기, 예를 들어 히드록실 기에의 커플링을 위한1차 아민이 사용될 수 있다.

일부 구체예에서, 트레실 클로라이드는 HA를 가교결합시키지 않는다. 그러나 트레실 클로라이드 방법에서 사용된 HA 매트릭스는 부가적 안정성을 위해 가교결합될 수 있다. 가교결합은, 예를 들어, 위에서 기술된 바와 같이 다기능성 에폭사이드, 가령 BDDE를 사용함에 의해 실행될 수 있다. 가교결합은 펩티드 커플링 전 또는 후에 수행될 수 있다.

트레실 클로라이드 방법은 매우 온화한 조건 하에서 효과적인 커플링, 활성화 및 커플링 동안 부반응 없음을 포함하는, 다른 고정 방법보다 장점을 가지고 RGD 펩티드는 HA 지지체의 탄소 원자에 직접 결합될 수 있다.

다양한 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 HA-기초 겔 및 하이드로겔을 포함할 수 있다. 여기서 사용된 HA-기초는 가교결합된 HA를 포함하는 조성물 또는 재료 및 가교결합된 HA 플러스 하나 이상의 다른 가교결합된 중합체를 포함하는 조성물을 지칭한다. 또한, HA는 히알루론산 및 비제한적으로, 소듐 히알루로네이트 (NaHA), 포타슘 히알루로네이트, 마그네슘 히알루로네이트, 칼슘 히알루로네이트, 및 그의 조합을 포함하는 그의 히알루로네이트 염 중 어느 것을 지칭할 수 있다. 하나 초과의 생체적합성 중합체의 사용은 특히 본 기술로부터 배제되지 않는다. 겔 및 하이드로겔 형태일 수 있는 여기서 기술된 조직 충전제는 HA 및/또는 SPF 외에 하나 초과의 생체적합성 중합체, 가령, 예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 이상 생체적합성 중합체를 포함할 수 있다. 적당한 생체적합성 중합체는 다당류 (예를 들어, HA, 키토산, 콘드로이틴 설페이트, 알기네이트, 카복시메틸셀룰로오스), 폴리(에틸렌글리콜), 폴리(젖산), 폴리(히드록시에틸메타크릴레이트), 폴리(메틸메타크릴레이트), SPF 외의 단백질 (예를 들어, 엘라스틴 및 콜라겐)을 포함한다.

여기서 기술된 HA는 분자간 가교결합될 수 있다. 일부 구체예에서, 가교결합 HA의 물리적 특성을 안정화시킨다. 일부 구체예에서, 본발명에서 다기능성 에폭사이드를 사용하여 안정한 가교결합된 HA의 형성을 제공한다. 여기서 사용된, 용어 "다기능성" 에폭사이드는 존재하는 두 개 이상 에폭사이드를 갖는 화학적 시약, 가령 더 낮은 지방족 에폭사이드 또는 그의 상응하는 에피할로히드린을 의미한다. 다기능성 에폭사이드의 예시는, 비제한적으로, 디에폭사이드 1,4 부탄디올 디글리시딜 에테르 (BDDE), 폴리글리세롤폴리글리시딜 에테르 (PGPGE), 펜타에리트리톨폴리글리시딜 에테르 (PEPGE) 및 디글리세롤폴리글리시딜 에테르 (DGPGE)를 포함한다. 바람직한 구체예에서, 디에폭사이드 BDDE는 가교결합제로서 사용된다. HA의 당 모이어티는 BDDE의 두 에폭사이드를 통해 가교결합한다. 다른 구체예에서, 가교결합제는 알킬디에폭시 보딘 가령 1,3-부타디엔 디에폭사이드, 1,2,7,8-디에폭시옥탄, 1,5-헥사디엔 디에폭사이드 등, 디글리시딜 에테르 보딘 가령 에틸렌 글리콜 디글리시딜 에테르, 1,4-부탄디올 디글리시딜 에테르, 비스페놀 디글리시딜 에테르 등, 디비닐설폰, 및 에피클로히드린를 포함한다. 이들 중, 특히, 디비닐설폰, 1,4-부탄디올 디글리시딜 에테르, 및 에틸렌 글리콜 디글리시딜 에테르가 적절히 사용될 수 있다. 본 발명에서, 두 이상 종류의 가교결합 물질을 적절히 조합시킴에 의해 사용할 수 있다.

일부 구체예에서, HA는 HA에 가교결합된다. HA에 HA를 가교결합시키는 방법은 하나 이상의 단계를 포함할 수 있다. 제 1 단계에서, 에폭사이드, 가령 BDDE가 과량으로 HA 용액에 부가되고 반응이 진행하도록 방치된다. 에폭사이드는 HA의 당 링 상 하나 내지 네 개의 히드록실 기과 반응하여 하나 내지 네 개의 에테르 연결을 형성한다. 히드록실 기과 반응시킴에 대안적으로, 또는 부가적으로, 에폭사이드는 다당류의 카복실산과 반응하여 에스테르 결합을 형성할 수 있다. 여기서 BDDE 에폭사이드는 둘 다 하나 이상의 HA 거대분자의 당 링 내 기능성 기와 반응하고, HA는 가교결합된다.

일부 구체예에서, 가교결합제는 제로 길이 가교결합제 가령 활성화제 가령 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필) 카보디이미드 (EDC), 또는 BCDI를 사용하여 얻어진 화학적 결합일 수 있다. 일부 구체예에서, 제로-길이 가교결합 활성화제는 N-히드록시숙신이미드 (NHS), 설포-NHS (또는 설포닐-NHS) 또는 4-디메틸아미노피리딘 (DMAP)의 존재 하에서 HA와 반응된다. 일부 구체예에서, 여기서 기술된 겔 및 하이드로겔은 적어도 하나의 가교결합가능한 생체적합성 중합체, 가령 HA 및/또는 단백질, 예를 들어 SPF 단백질, 또는 다른 부가적 단백질을, 적어도 하나의 가교결합 활성화제와 반응시켜 형성된다.

일부 구체예에서, 가교결합된 SPF-SPF, 가교결합된 SPF-HA, 및/또는 가교결합된 HA-HA는 적용 후, 예를 들어 진피 내, 피하, 또는 일반적으로, 진피 충전제로서 주사된 후 가변적 체류 시간을 가질 수 있다. 일부 구체예에서, 체류 시간은 또다른 SPF 거대분자, 또는 HA에의 부착을 위해 이용가능한 SPF 내 반응성 기의 수에 따라서 소듐 퍼아이오데이트 방법으로 영향을 받을 수 있다. HA에 부착될 수 있는 SPF 내 반응성 기의 예시는 1차 아민이다. 두 반응성 기, 가령 두 1차 아민을 함유하는 SPF는, 그 자신이 퍼아이오데이트 방법으로 HA를 가교결합시킬 수 있고, 이에 의해 더욱 안정한 컨쥬게이트를 형성한다. 단지 하나의 반응성 기 가령 단지 하나의 1차 아민가 예를 들어 아미노 말단에서 SPF 내에 존재하는 다른 구체예에서, SPF-HA 가교결합은 더욱 생분해성인 매트릭스를 유발하기 위해 환원된다.

일부 구체예에서, BDDE 가교결합된 HA는 적용 후, 예를 들어 진피 내, 피하, 또는 일반적으로, 진피 충전제로서 주사된 후 가변적 체류 시간을 가질 수 있다. 일부 구체예에서, BDDE 가교결합된 HA은 가교결합의 양에 따라서 1 내지 적어도 30 일 진피 조직 내 어디라도 존재할 수 있다. 가교결합된 HA의 가변적 체류 시간은 에폭사이드 가교결합 동안 가수분해가능한 결합을 도입함에 의해 조절될 수 있다. 일부 구체예에서, 에폭사이드와 가교결합된 재료는 더 낮은 pH에서는 더 큰 양의 에스테르 결합 형성을 가지고 따라서 더욱 신속히 가수분해가능하다.

하나의 구체예에서, 가교결합제는 제로-길이 가교결합 활성화제이다. 일반적으로, 제로-길이 가교결합 활성화제는 부가적 스페이서 암(arm) 원자 부가 없이 중합체를 커플링하고, 따라서 제로-길이 가교결합 활성화제는 가교결합된 중합체 매트릭스 내에 포함되지 않는다. 적당한 제로-길이 가교결합제는 카보디이미드, 가령, 예를 들어, 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필) 카보디이미드 (EDC) 및 BCDI를 포함한다. 비-물 가용성 카보디이미드는 또한 적당할 수 있는 디시클로헥실카보디이미드 (DCC) 및 디이소프로필카보디이미드 (DIC)를 포함한다.

카보디이미드-매개 커플링 사이 카복실레이트 및 알콜 또는 아민 기능성 기는 주변 온도, 중성 pH 및 수성 조건 하에서 쉽게 진행한다. 중성 pH, 예를 들어 사이, 약 6.0 및 약 8.0, 가령 사이 약 6.5 및 약 7.5, 가령 약 7.0일 수 있다. 카복실레이트 및 알콜 사이의 에스테르화 또는 카복실레이트 및 아민 사이의 아미드화를 매개하기 위해 전형적으로 물 내, 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필) 카보디이미드 하이드로클로라이드 (EDC)가 사용될 수 있다. 따라서, 가교결합된 HA는 HA 상에 존재하는 반응성 기 (예를 들어, 카복실레이트 및 알콜)를 이용하여 형성된다. 또한, 단백질, 예를 들어 SPF 단백질 상 아민 기의 높은 반응성의 장점을 이용하여, 단백질의 라이신 측쇄와 HA의 카복실레이트 기 사이의 아미드화가 달성되어 HA-단백질 가교결합된 하이드로겔을 형성한다. 가교결합제 및 미반응 중합체는 투석으로 제거될 수 있다.

일부 구체예에서, 여기서 "NHS"로 포괄적으로 지칭되는 N-히드록시숙신이미드 (NHS) 또는 설포닐-NHS (설포-NHS)와 관련하여 EDC가 사용된다. NHS는 EDC에 의해 형성된 반응성 중간체를 안정화시킨다; 따라서, NHS 부가는 EDC의 커플링 효율을 증가시킬 수 있다. 대안적으로, 커플링 반응을 촉매화하기 위해 4-디메틸아미노피리딘 (DMAP) 이 사용될 수 있다.

일부 구체예에서, 본발명의 HA-기초 조직 충전제는 가교결합된 HA-기초 조성물 및 적어도 부분적으로 가교결합된 HA-기초 조성물을 포함한다. 여기서 사용된 비가교결합된 HA는 정확히 비가교결합된 (예를 들어, "유리") HA 사슬 또한 일반적으로 가용성 액체 형태인 약하게 가교결합된 사슬 및 그의 단편 둘 다를 지칭한다.

일부 구체예에서, 하이드로겔 본발명의 조성물은 HA 및 SPF 사이의 적어도 일부 가교결합을 포함한다.

비-제한적 예시적 구체예

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성 및 약 1 kDa 내지 약 250 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 히알루론산 (HA), 물, 및 약 0.05% 내지 약 0.5% 사이의 리도케인, 예를 들어, 약 0.3% 리도케인을 포함하는 생체적합성 진피 충전제에 관한 것이고; 여기서 SPF의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, HA의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, 가교결합은 SPF 대 SPF, SPF 대 HA, 및 HA 대 HA 다음 중 하나 이상: 사이에서 발생하고; 가교결합은 에폭시 유래된 가교결합제, 예를 들어, BDDE를 사용하는 결과로서, 및 최대 15%의 가교결합 정도로 발생한다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성 및 약 5 kDa 내지 약 150 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 히알루론산 (HA), 물, 및 약 0.05% 내지 약 0.5% 사이의 리도케인, 예를 들어, 약 0.3% 리도케인을 포함하는 생체적합성 진피 충전제에 관한 것이고; 여기서 SPF의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, HA의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, 가교결합은 SPF 대 SPF, SPF 대 HA, 및 HA 대 HA 다음 중 하나 이상: 사이에서 발생하고; 가교결합은 에폭시 유래된 가교결합제, 예를 들어, BDDE를 사용하는 결과로서, 및 최대 15%의 가교결합 정도로 발생한다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성 및 약 6 kDa 내지 약 17 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 히알루론산 (HA), 물, 및 약 0.05% 내지 약 0.5% 사이의 리도케인, 예를 들어, 약 0.3% 리도케인을 포함하는 생체적합성 진피 충전제에 관한 것이고; 여기서 SPF의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, HA의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, 가교결합은 SPF 대 SPF, SPF 대 HA, 및 HA 대 HA 다음 중 하나 이상: 사이에서 발생하고; 가교결합은 에폭시 유래된 가교결합제, 예를 들어, BDDE를 사용하는 결과로서, 및 최대 15%의 가교결합 정도로 발생한다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성 및 약 17 kDa 내지 약 39 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 히알루론산 (HA), 물, 및 약 0.05% 내지 약 0.5% 사이의 리도케인, 예를 들어, 약 0.3% 리도케인을 포함하는 생체적합성 진피 충전제에 관한 것이고; 여기서 SPF의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, HA의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, 가교결합은 SPF 대 SPF, SPF 대 HA, 및 HA 대 HA 다음 중 하나 이상: 사이에서 발생하고; 가교결합은 에폭시 유래된 가교결합제, 예를 들어, BDDE를 사용하는 결과로서, 및 최대 15%의 가교결합 정도로 발생한다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성 및 약 39 kDa 내지 약 80 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 히알루론산 (HA), 물, 및 약 0.05% 내지 약 0.5% 사이의 리도케인, 예를 들어, 약 0.3% 리도케인을 포함하는 생체적합성 진피 충전제에 관한 것이고; 여기서 SPF의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, HA의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, 가교결합은 SPF 대 SPF, SPF 대 HA, 및 HA 대 HA 다음 중 하나 이상: 사이에서 발생하고; 가교결합은 에폭시 유래된 가교결합제, 예를 들어, BDDE를 사용하는 결과로서, 및 최대 15%의 가교결합 정도로 발생한다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 저 분자량 실크 단백질 단편 (SPF), 히알루론산 (HA), 물, 및 약 0.05% 내지 약 0.5% 사이의 리도케인, 예를 들어, 약 0.3% 리도케인을 포함하는 생체적합성 진피 충전제에 관한 것이고; 여기서 SPF의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, HA의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, 가교결합은 SPF 대 SPF, SPF 대 HA, 및 HA 대 HA 다음 중 하나 이상: 사이에서 발생하고; 가교결합은 에폭시 유래된 가교결합제, 예를 들어, BDDE를 사용하는 결과로서, 및 최대 15%의 가교결합 정도로 발생한다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 중 분자량 실크 단백질 단편, 히알루론산 (HA), 물, 및 약 0.05% 내지 약 0.5% 사이의 리도케인, 예를 들어, 약 0.3% 리도케인을 포함하는 생체적합성 진피 충전제에 관한 것이고; 여기서 SPF의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, HA의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, 가교결합은 SPF 대 SPF, SPF 대 HA, 및 HA 대 HA 다음 중 하나 이상: 사이에서 발생하고; 가교결합은 에폭시 유래된 가교결합제, 예를 들어, BDDE를 사용하는 결과로서, 및 최대 15%의 가교결합 정도로 발생한다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 저 분자량 실크 단백질 단편 (SPF), 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 중 분자량 실크 단백질 단편, 히알루론산 (HA), 물, 및 약 0.05% 내지 약 0.5% 사이의 리도케인, 예를 들어, 약 0.3% 리도케인을 포함하는 생체적합성 진피 충전제에 관한 것이고; 여기서 SPF의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, HA의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, 가교결합은 SPF 대 SPF, SPF 대 HA, 및 HA 대 HA 다음 중 하나 이상: 사이에서 발생하고; 가교결합은 에폭시 유래된 가교결합제, 예를 들어, BDDE를 사용하는 결과로서, 및 최대 15%의 가교결합 정도로 발생한다; 여기서 저 분자량 SPF 및 중 분자량 SPF 사이의 w/w 비는 약 3:1이다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 고 분자량 실크 단백질 단편 (SPF), 히알루론산 (HA), 물, 및 약 0.05% 내지 약 0.5% 사이의 리도케인, 예를 들어, 약 0.3% 리도케인을 포함하는 생체적합성 진피 충전제에 관한 것이고; 여기서 SPF의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, HA의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, 가교결합은 SPF 대 SPF, SPF 대 HA, 및 HA 대 HA 다음 중 하나 이상: 사이에서 발생하고; 가교결합은 에폭시 유래된 가교결합제, 예를 들어, BDDE를 사용하는 결과로서, 및 최대 15%의 가교결합 정도로 발생한다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성 및 약 1 kDa 내지 약 250 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 히알루론산 (HA), 물, 및 약 0.05% 내지 약 0.5% 사이의 리도케인, 예를 들어, 약 0.3% 리도케인을 포함하는 생체적합성 진피 충전제에 관한 것이고; 여기서 SPF의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, HA의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, 가교결합은 SPF 대 SPF, SPF 대 HA, 및 HA 대 HA 다음 중 하나 이상: 사이에서 발생하고; 제로-길이 가교결합을 포함하는 가교결합은 활성화제, 예를 들어, BCDI를 사용하는 결과로서, 및 최대 15%의 가교결합 정도로 발생한다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성 및 약 5 kDa 내지 약 150 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 히알루론산 (HA), 물, 및 약 0.05% 내지 약 0.5% 사이의 리도케인, 예를 들어, 약 0.3% 리도케인을 포함하는 생체적합성 진피 충전제에 관한 것이고; 여기서 SPF의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, HA의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, 가교결합은 SPF 대 SPF, SPF 대 HA, 및 HA 대 HA 다음 중 하나 이상: 사이에서 발생하고; 제로-길이 가교결합을 포함하는 가교결합은 활성화제, 예를 들어, BCDI를 사용하는 결과로서, 및 최대 15%의 가교결합 정도로 발생한다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성 및 약 6 kDa 내지 약 17 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 히알루론산 (HA), 물, 및 약 0.05% 내지 약 0.5% 사이의 리도케인, 예를 들어, 약 0.3% 리도케인을 포함하는 생체적합성 진피 충전제에 관한 것이고; 여기서 SPF의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, HA의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, 가교결합은 SPF 대 SPF, SPF 대 HA, 및 HA 대 HA 다음 중 하나 이상: 사이에서 발생하고; 제로-길이 가교결합을 포함하는 가교결합은 활성화제, 예를 들어, BCDI를 사용하는 결과로서, 및 최대 15%의 가교결합 정도로 발생한다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성 및 약 17 kDa 내지 약 39 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 히알루론산 (HA), 물, 및 약 0.05% 내지 약 0.5% 사이의 리도케인, 예를 들어, 약 0.3% 리도케인을 포함하는 생체적합성 진피 충전제에 관한 것이고; 여기서 SPF의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, HA의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, 가교결합은 SPF 대 SPF, SPF 대 HA, 및 HA 대 HA 다음 중 하나 이상: 사이에서 발생하고; 제로-길이 가교결합을 포함하는 가교결합은 활성화제, 예를 들어, BCDI를 사용하는 결과로서, 및 최대 15%의 가교결합 정도로 발생한다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성 및 약 39 kDa 내지 약 80 kDa 범위의 평균 중량 평균 분자량을 갖는 실크 단백질 단편 (SPF), 히알루론산 (HA), 물, 및 약 0.05% 내지 약 0.5% 사이의 리도케인, 예를 들어, 약 0.3% 리도케인을 포함하는 생체적합성 진피 충전제에 관한 것이고; 여기서 SPF의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, HA의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, 가교결합은 SPF 대 SPF, SPF 대 HA, 및 HA 대 HA 다음 중 하나 이상: 사이에서 발생하고; 제로-길이 가교결합을 포함하는 가교결합은 활성화제, 예를 들어, BCDI를 사용하는 결과로서, 및 최대 15%의 가교결합 정도로 발생한다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 저 분자량 실크 단백질 단편 (SPF), 히알루론산 (HA), 물, 및 약 0.05% 내지 약 0.5% 사이의 리도케인, 예를 들어, 약 0.3% 리도케인을 포함하는 생체적합성 진피 충전제에 관한 것이고; 여기서 SPF의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, HA의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, 가교결합은 SPF 대 SPF, SPF 대 HA, 및 HA 대 HA 다음 중 하나 이상: 사이에서 발생하고; 제로-길이 가교결합을 포함하는 가교결합은 활성화제, 예를 들어, BCDI를 사용하는 결과로서, 및 최대 15%의 가교결합 정도로 발생한다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 중 분자량 실크 단백질 단편, 히알루론산 (HA), 물, 및 약 0.05% 내지 약 0.5% 사이의 리도케인, 예를 들어, 약 0.3% 리도케인을 포함하는 생체적합성 진피 충전제에 관한 것이고; 여기서 SPF의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, HA의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, 가교결합은 SPF 대 SPF, SPF 대 HA, 및 HA 대 HA 다음 중 하나 이상: 사이에서 발생하고; 제로-길이 가교결합을 포함하는 가교결합은 활성화제, 예를 들어, BCDI를 사용하는 결과로서, 및 최대 15%의 가교결합 정도로 발생한다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 저 분자량 실크 단백질 단편 (SPF), 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 중 분자량 실크 단백질 단편, 히알루론산 (HA), 물, 및 약 0.05% 내지 약 0.5% 사이의 리도케인, 예를 들어, 약 0.3% 리도케인을 포함하는 생체적합성 진피 충전제에 관한 것이고; 여기서 SPF의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, HA의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, 가교결합은 SPF 대 SPF, SPF 대 HA, 및 HA 대 HA 다음 중 하나 이상: 사이에서 발생하고; 제로-길이 가교결합을 포함하는 가교결합은 활성화제, 예를 들어, BCDI를 사용하는 결과로서, 및 최대 15%의 가교결합 정도로 발생한다; 여기서 저 분자량 SPF 및 중 분자량 SPF 사이의 w/w 비는 약 3:1이다.

하나의 구체예에서, 본발명은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 갖는 고 분자량 실크 단백질 단편 (SPF), 히알루론산 (HA), 물, 및 약 0.05% 내지 약 0.5% 사이의 리도케인, 예를 들어, 약 0.3% 리도케인을 포함하는 생체적합성 진피 충전제에 관한 것이고; 여기서 SPF의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, HA의 최대 100% w/w의 부분이 가교결합되고, 가교결합은 SPF 대 SPF, SPF 대 HA, 및 HA 대 HA 다음 중 하나 이상: 사이에서 발생하고; 제로-길이 가교결합을 포함하는 가교결합은 활성화제, 예를 들어, BCDI를 사용하는 결과로서, 및 최대 15%의 가교결합 정도로 발생한다.

한 구체예에서, 본발명은 표 16-B에서 기술된 생체적합성 진피 충전제 제제에 관한 것이다.

표 16-B

부가적 물질

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 활성 물질, 가령 약물을 포함한다. 일부 구체예에서, 활성 물질은 효소 저해제, 마취제, 의료용 신경독, 항산화제, 항감염제, 항염증제, 혈관확장제, 자외선 (UV) 광차단제, 염료 (예를 들어, 문신 염료, 잉크 또는 안료), 반사제, 호르몬, 면역억제제, 및 그의 조합 중 하나 이상일 수 있다. 여기서 기술된 조직 충전제는 효소 저해제, 마취제, 의료용 신경독 (예를 들어, 보툴리늄 톡신 및 클로스트리듐 톡신), 항산화제, 항감염제 (예를 들어, 항생제), 혈관확장제, 염료 (예를 들어, 문신 잉크 또는 안료), 반사제, 항염증제, 자외선 (UV) 광차단제, 염료, 호르몬, 면역억제제, 및 그의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 활성 물질을 포함할 수 있다.

일부 구체예에서, 면역억제제는 라파마이신, 또는 라파마이신-형 화합물이다.

일부 구체예에서, 활성 물질은 페니실린 (예를 들어, 페니실린 V, 아목시실린), 에리쓰로마이신 (예를 들어, 에리쓰로마이신 스테아레이트), 린코스아미드 (예를 들어, 클린다마이신), 및 세팔로스포린 (예를 들어 세팔렉신), 및 그의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 항생제일 수 있다.

일부 구체예에서, 활성 물질은 니트로글리세린, 라베탈롤, 트라지드, 이소소르비드 디니트레이트, 펜타에리쓰리톨 테트라니트레이트, 디기탈리스, 히드랄라진, 디아족사이드, 암리논, L-아르기닌, 바메탄 설페이트, 벤시클란 푸마레이트, 벤푸로딜 헤미숙시네이트, 벤질 니코티네이트, 부플로메딜 하이드로클로라이드, 부페닌 하이드로클로라이드, 부탈아민 하이드로클로라이드, 세티에딜 시트레이트, 시클로나케이트, 시네파지드 말레에이트, 시클란델레이트, 디이소프로필암모늄 디클로로아세트에이트, 에틸 니코티네이트, 헤프로니케이트, 헥실 니코티네이트, 이펜프로딜 타르트레이트, 이노시톨 니코티네이트, 이속수프린 하이드로클로라이드, 칼리디노게나제, 메틸 니코티네이트, 나프티드로푸릴 옥살레이트, 니카메테이트 시트르에이트, 니세리트롤, 니코복실, 니코푸라노스, 니코티닐 알콜, 니코티닐 알콜 타르트레이트, 나이트릭 옥사이드, 노니바미드, 옥스페티필린, 파파베린, 파파베롤린, 펜티필린, 퍼옥시니트라이트, 피나시딜, 피프라테콜, 프로펜토필틴, 라우바신, 술로티딜, 테아수프린, 티목사 민 하이드로클로라이드, 토코페롤 니코티네이트, 톨라졸린, 잔티놀 니코티네이트, 디아족사이드, 히드랄라진, 미녹시딜, 및 소듐 니트로프루시드, 및 그의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 혈관확장제일 수 있다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 적어도 0.01%, 또는 적어도 0.02%, 또는 적어도 0.03%, 또는 적어도 0.04%, 또는 적어도 0.05%, 또는 적어도 0.06%, 또는 적어도 0.07%, 또는 적어도 0.08%, 또는 적어도 0.09%, 또는 적어도 0.1%, 또는 적어도 0.2%, 또는 적어도 0.3%, 또는 적어도 0.4%, 또는 적어도 0.5%, 또는 적어도 0.6%, 또는 적어도 0.7%, 또는 적어도 0.8%, 또는 적어도 0.9%, 또는 적어도 1.0%, 또는 적어도 1.5%, 또는 적어도 2.0%, 또는 적어도 2.5%, 또는 적어도 3.0%, 또는 적어도 3.5%, 또는 적어도 4.0%, 또는 적어도 4.5%, 또는 적어도 5.0%, 또는 적어도 5.5%, 또는 적어도 6.0%, 또는 적어도 6.5%, 또는 적어도 7.0%, 또는 적어도 7.5%, 또는 적어도 8.0%, 또는 적어도 8.5%, 또는 적어도 9.0%, 또는 적어도 9.5%, 또는 적어도 10%, 또는 적어도 15%, 또는 적어도 20%, 또는 적어도 25%, 또는 적어도 30%, 또는 적어도 35%, 또는 적어도 40%, 또는 적어도 45%, 또는 적어도 50%의 중량 기준 농도에서 활성 물질을 포함할 수 있다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 최대 0.01%, 또는 최대 0.02%, 또는 최대 0.03%, 또는 최대 0.04%, 또는 최대 0.05%, 또는 최대 0.06%, 또는 최대 0.07%, 또는 최대 0.08%, 또는 최대 0.09%, 또는 최대 0.1%, 또는 최대 0.2%, 또는 최대 0.3%, 또는 최대 0.4%, 또는 최대 0.5%, 또는 최대 0.6%, 또는 최대 0.7%, 또는 최대 0.8%, 또는 최대 0.9%, 또는 최대 1.0%, 또는 최대 1.5%, 또는 최대 2.0%, 또는 최대 2.5%, 또는 최대 3.0%, 또는 최대 3.5%, 또는 최대 4.0%, 또는 최대 4.5%, 또는 최대 5.0%, 또는 최대 5.5%, 또는 최대 6.0%, 또는 최대 6.5%, 또는 최대 7.0%, 또는 최대 7.5%, 또는 최대 8.0%, 또는 최대 8.5%, 또는 최대 9.0%, 또는 최대 9.5%, 또는 최대 10%, 또는 최대 15%, 또는 최대 20%, 또는 최대 25%, 또는 최대 30%, 또는 최대 35%, 또는 최대 40%, 또는 최대 45%, 또는 최대 50%의 중량 기준 농도에서 활성 물질을 포함할 수 있다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 약 0.01% 내지 약 0.1%, 또는 약 0.05% 내지 약 0.15%, 또는 약 0.1% 내지 약 0.2%, 또는 약 0.15% 내지 약 0.25%, 또는 약 0.2% 내지 약 0.3%, 또는 약 0.25% 내지 약 0.35%, 또는 약 0.3% 내지 약 0.4%, 또는 약 0.35% 내지 약 0.45%, 또는 약 0.4% 내지 약 0.5%, 또는 약 0.45% 내지 약 0.55%, 또는 약 0.5% 내지 약 0.6%, 또는 약 0.55% 내지 약 0.65%, 또는 약 0.6% 내지 약 0.7%, 또는 약 0.65% 내지 약 0.75%, 또는 약 0.7% 내지 약 0.8%, 또는 약 0.75% 내지 약 0.85%, 또는 약 0.8% 내지 약 0.9%, 또는 약 0.85% 내지 약 0.95%, 또는 약 1% 내지 약 2%, 또는 약 1.5% 내지 약 2.5%, 또는 약 2% 내지 약 3%, 또는 약 2.5% 내지 약 3.5%, 또는 약 3% 내지 약 4%, 또는 약 3.5% 내지 약 4.5%, 또는 약 4% 내지 약 5%, 또는 약 4.5% 내지 약 5.5%, 또는 약 5% 내지 약 6%, 또는 약 5.5% 내지 약 6.5%, 또는 약 6% 내지 약 7%, 또는 약 6.5% 내지 약 7.5%, 또는 약 7% 내지 약 8%, 또는 약 7.5% 내지 약 8.5%, 또는 약 8% 내지 약 9%, 또는 약 8.5% 내지 약 9.5%, 또는 약 9% 내지 약 10%, 또는 약 10% 내지 약 15%, 또는 약 15% 내지 약 20%, 또는 약 20% 내지 약 25%, 또는 약 25% 내지 약 30%, 또는 약 30% 내지 약 35%, 또는 약 35% 내지 약 40%, 또는 약 40% 내지 약 45%, 또는 약 45% 내지 약 50%의 중량 기준 농도에서 활성 물질을 포함할 수 있다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 약 0.01%, 또는 약 0.02%, 또는 약 0.03%, 또는 약 0.04%, 또는 약 0.05%, 또는 약 0.06%, 또는 약 0.07%, 또는 약 0.08%, 또는 약 0.09%, 또는 약 0.1%, 또는 약 0.2%, 또는 약 0.3%, 또는 약 0.4%, 또는 약 0.5%, 또는 약 0.6%, 또는 약 0.7%, 또는 약 0.8%, 또는 약 0.9%, 또는 약 1.0%, 또는 약 1.5%, 또는 약 2.0%, 또는 약 2.5%, 또는 약 3.0%, 또는 약 3.5%, 또는 약 4.0%, 또는 약 4.5%, 또는 약 5.0%, 또는 약 5.5%, 또는 약 6.0%, 또는 약 6.5%, 또는 약 7.0%, 또는 약 7.5%, 또는 약 8.0%, 또는 약 8.5%, 또는 약 9.0%, 또는 약 9.5%, 또는 약 10%, 또는 약 11%, 또는 약 12%, 또는 약 13%, 또는 약 14%, 또는 약 15%, 또는 약 16%, 또는 약 17%, 또는 약 18%, 또는 약 19%, 또는 약 20%, 또는 약 21%, 또는 약 22%, 또는 약 23%, 또는 약 24%, 또는 약 25%, 또는 약 26%, 또는 약 27%, 또는 약 28%, 또는 약 29%, 또는 약 30%, 또는 약 31%, 또는 약 32%, 또는 약 33%, 또는 약 34%, 또는 약 35%, 또는 약 36%, 또는 약 37%, 또는 약 38%, 또는 약 39%, 또는 약 40%, 또는 약 41%, 또는 약 42%, 또는 약 43%, 또는 약 44%, 또는 약 45%, 또는 약 46%, 또는 약 47%, 또는 약 48%, 또는 약 49%, 또는 약 50%의 중량 기준 농도에서 활성 물질을 포함할 수 있다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 섬유증-저해제를 포함한다. 일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 처치 부위 내 또는 주위의 병리학적 과정에 대해 저해 효과를 가지는 작용을 하는 화합물을 추가로 포함할 수 있다. 특정의 양상에서, 활성 물질은 다음 부류의 화합물 중 하나로부터 선택될 수 있다: 항염증제 (예를 들어, 덱사메타손, 코르티손, 플루드로코르티손, 프레드니손, 프레드니솔론, 6α-메틸 프레드니솔론, 트리암시놀론, 베타메타손, 및 아스피린).

일부 구체예에서, 활성 물질은, 비제한적으로, 항산화제 및 효소일 수 있다. 구체예에서, 활성 물질은, 비제한적으로, 셀레늄, 유비퀴논 유도체, 티올-기초 항산화제, 당류-를 함유하는 항산화제, 폴리페놀, 식물성 추출물, 카페인산, 아피제닌, 피크노제놀, 레베라트롤, 엽산, 비타민 B12, 비타민 B6, 비타민 B3, 비타민 E, 비타민 C 및 유도체 그의, 비타민 D, 비타민 A, 아스탁사틴, 루테인, 라이코펜, 필수 지방 산 (오메가스 3 및 6), 철, 아연, 마그네슘, 플라보노이드 (대두, 큐커민, 실리마린, 피크논제올), 성장인자, 알로에, 히알루론산, 세포외 매트릭스 단백질, 세포, 핵산, 바이오메이커, 생물학적 시약, 산화아연, 벤조일 퍼옥사이드, 레티노이드, 티타늄, 공지된 용량의 알러젠 (감착화 처리용), 비제한적으로, 레몬그라스 또는 로즈마리 오일, 및 향료를 포함하는 필수 오일을 포함할 수 있다. 활성 물질을 더욱 넓게 고려하면, 활성 물질은 치료제 가령 작은 분자, 약물, 단백질, 펩티드 및 핵산을 포함할 수 있다.

특정 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 조직 충전제 주사 부위에서 통증 또는 불편감을 완화 또는 경감시키는이데 효과적인 양으로 하나 이상의 마취제를 포함할 수 있다. 국소 마취제는 암부카인, 아몰라논, 아밀로칼인, 베녹신에이트, 벤조카인, 베톡시카인, 비펜아민, 부피바카인, 부타카인, 부탐벤, 부타닐리카인, 부테타민, 부톡시카인, 카르티카인, 클로로프로카인, 코카에틸렌, 코카인, 시클로메티카인, 디부카인, 디메티소퀸, 디메토카인, 디페로돈, 디시클로민, 에크고니딘, 에크고닌, 에틸 클로라이드, 디테도카인, 베타-유카인, 유프로신, 페날코민, 포르모 카인, 헥실카인, 히드록시테트라카인, 이소부틸 p-아미노벤조에이트, 류시노 카인 메실에이트, 레복사드롤, 리도케인, 메피바카인, 메프릴카인, 메타부톡시카인, 메틸 클로라이드, 미르테 카인, 나에페인, 옥타카인, 오르토카인, 옥세타자인, 파레톡시카인, 페나카인, 페놀, 피페로카인, 피리도카인, 폴리도카놀, 프라목신, 프릴로칼인, 프로카인, 프로파노카인, 프로파라카인, 프로피포카인, 프로폭시카인, 슈도코 카인, 피로카인, 로피바카인, 살리실 알콜, 테트라카인, 톨리카인, 트리메카인, 졸아민, 및 그의 염의 그룹으로부터 선택될 수 있다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 적어도 0.01%, 또는 적어도 0.02%, 또는 적어도 0.03%, 또는 적어도 0.04%, 또는 적어도 0.05%, 또는 적어도 0.06%, 또는 적어도 0.07%, 또는 적어도 0.08%, 또는 적어도 0.09%, 또는 적어도 0.1%, 또는 적어도 0.2%, 또는 적어도 0.3%, 또는 적어도 0.4%, 또는 적어도 0.5%, 또는 적어도 0.6%, 또는 적어도 0.7%, 또는 적어도 0.8%, 또는 적어도 0.9%, 또는 적어도 1.0%, 또는 적어도 1.5%, 또는 적어도 2.0%, 또는 적어도 2.5%, 또는 적어도 3.0%, 또는 적어도 3.5%, 또는 적어도 4.0%, 또는 적어도 4.5%, 또는 적어도 5.0%, 또는 적어도 5.5%, 또는 적어도 6.0%, 또는 적어도 6.5%, 또는 적어도 7.0%, 또는 적어도 7.5%, 또는 적어도 8.0%, 또는 적어도 8.5%, 또는 적어도 9.0%, 또는 적어도 9.5%, 또는 적어도 10%의 중량 기준 농도에서 리도케인 또는 위에서 언급된 다른 마취제를 포함할 수 있다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 최대 0.01%, 또는 최대 0.02%, 또는 최대 0.03%, 또는 최대 0.04%, 또는 최대 0.05%, 또는 최대 0.06%, 또는 최대 0.07%, 또는 최대 0.08%, 또는 최대 0.09%, 또는 최대 0.1%, 또는 최대 0.2%, 또는 최대 0.3%, 또는 최대 0.4%, 또는 최대 0.5%, 또는 최대 0.6%, 또는 최대 0.7%, 또는 최대 0.8%, 또는 최대 0.9%, 또는 최대 1.0%, 또는 최대 1.5%, 또는 최대 2.0%, 또는 최대 2.5%, 또는 최대 3.0%, 또는 최대 3.5%, 또는 최대 4.0%, 또는 최대 4.5%, 또는 최대 5.0%, 또는 최대 5.5%, 또는 최대 6.0%, 또는 최대 6.5%, 또는 최대 7.0%, 또는 최대 7.5%, 또는 최대 8.0%, 또는 최대 8.5%, 또는 최대 9.0%, 또는 최대 9.5%, 또는 최대 10%의 중량 기준 농도에서 리도케인 또는 위에서 언급된 다른 마취제를 포함할 수 있다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 약 0.01%, 또는 약 0.02%, 또는 약 0.03%, 또는 약 0.04%, 또는 약 0.05%, 또는 약 0.06%, 또는 약 0.07%, 또는 약 0.08%, 또는 약 0.09%, 또는 약 0.1%, 또는 약 0.2%, 또는 약 0.3%, 또는 약 0.4%, 또는 약 0.5%, 또는 약 0.6%, 또는 약 0.7%, 또는 약 0.8%, 또는 약 0.9%, 또는 약 1.0%, 또는 약 1.5%, 또는 약 2.0%, 또는 약 2.5%, 또는 약 3.0%, 또는 약 3.5%, 또는 약 4.0%, 또는 약 4.5%, 또는 약 5.0%, 또는 약 5.5%, 또는 약 6.0%, 또는 약 6.5%, 또는 약 7.0%, 또는 약 7.5%, 또는 약 8.0%, 또는 약 8.5%, 또는 약 9.0%, 또는 약 9.5%, 또는 약 10%의 중량 기준 농도에서 리도케인 또는 위에서 언급된 다른 마취제를 포함할 수 있다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 약 0.01% 내지 약 0.02%, 또는 약 0.03% 내지 약 0.04%, 또는 약 0.05% 내지 약 0.06% 내지 약 0.07%, 또는 약 0.08% 내지 약 0.09%, 또는 약 0.1% 내지 약 0.2%, 또는 약 0.3% 내지 약 0.4%, 또는 약 0.5% 내지 약 0.6%, 또는 약 0.7% 내지 약 0.8%, 또는 약 0.9% 내지 약 1.0%, 또는 약 1% 내지 약 1.5%, 또는 약 1.5% 내지 약 2.0%, 또는 약 2.0% 내지 약 2.5%, 또는 약 2.5% 내지 약 3.0%, 또는 약 3.0% 내지 약 3.5%, 또는 약 3.5% 내지 약 4.0%, 또는 약 4.0% 내지 약 4.5%, 또는 약 4.5% 내지 약 5.0%, 또는 약 5.0% 내지 약 5.5%, 또는 약 5.5% 내지 약 6.0%, 또는 약 6.0% 내지 약 6.5%, 또는 약 6.5% 내지 약 7.0%, 또는 약 7.5% 내지 약 8.0%, 또는 약 8.0% 내지 약 8.5%, 또는 약 8.5% 내지 약 9.0%, 또는 약 9.5% 내지 약 10%의 중량 기준 농도에서 리도케인 또는 위에서 언급된 다른 마취제를 포함할 수 있다.

하나의 구체예에서, 마취제는, 가령 리도케인 HCl의 형태인 리도케인이다. 여기서 기술된 조직 충전제는 상기 조성물의 중량 기준 약 0.1% 및 약 5% 사이, 예를 들어, 조직 충전제의 중량 기준 약 0.2% 내지 약 1.0%의 농도로 리도케인 또는 다른 마취제를 가질 수 있다. 하나의 구체예에서, 조직 충전제는 조직 충전제의 중량 기준 (w/w %) 약 0.3%의 농도 리도케인을 가진다. 여기서 기술된 조직 충전제 내 리도케인의 농도는 치료적으로 효과적일 수 있고 농도가 치료적 이익 가령, 예를 들어, 조직 충전제 주사 부위에서의 통증 또는 불편을 완화 또는 경감을 제공하기에 충분함을 의미한다.

광학적 특성

광이 재료를 만날 때, 여러 방식으로 이와 상호작용할 수 있다. 이들 상호작용은 광의 특성, 즉, 그의 파장, 주파수, 에너지, 등, 및 상기 재료의 특성에 의존한다. 광은 반사, 및 굴절을 동반한 투과의 일부 조합에 의해 대상과 상호작용한다. 광학적으로 투명한 재료는 광의 대부분이 투과되고, 반사되는 광이 거의 없는 것을 허용한다. 광 투과를 허용하지 않는 재료는 광학적으로 불투명, 또는 단순히 불투명으로 불린다.

일부 구체예에서, 본발명은 투명성 및/또는 반투명성을 갖는 여기서 기술된 조직 충전제를 제공한다. 투명성 (또한 투명도 또는 투명도로 불리는)은 광이 재료를 통해 통과하는 것을 허용하는 물리적 특성이고, 여기서 반투명성 (또한 반투명성 또는 반투명성으로 불리는)은 단지 광이 확산적으로 통과하는 것만을 허용한다. 반대 특성은 불투명도이다. 투명 재료는 또렷하지만, 반투명 재료는 또렷히 보여질 수 없다. 여기서 개시된 조직 충전제는 광학 특성 가령 투명성 및/또는 반투명성을 나타내거나 나타내지 않을 수 있다. 표면 라인 충전을 위한 방법을 포함하는 일부 구체예에서, 불투명 하이드로겔을 가지는 것이 유리하다. 조직 충전제의 광학 특성을 제어하기 위해 사용되는 인자는, 제한 없이, SPF 농도, 결정의 정도 성, 및/또는 하이드로겔 균질성을 포함한다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 불투명하다.

구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 광학적으로 투명하다. 이 구체예의 양상에서, 여기서 기술된 조직 충전제는, 예를 들어, 약 75%의 광, 약 80%의 광, 약 85%의 광, 약 90%의 광, 약 95%의 광, 또는 약 100%의 광을 투과시킨다. 이 구체예의 다른 양상에서, 여기서 기술된 조직 충전제, 예를 들어, 적어도 75%의 광, 적어도 80%의 광, 적어도 85%의 광, 적어도 90%의 광, 또는 적어도 95%의 광을 투과시킨다. 이 구체예의 여전히 다른 양상에서, 여기서 기술된 조직 충전제는, 예를 들어, 약 75% 내지 약 100%의 광, 약 80% 내지 약 100%의 광, 약 85% 내지 약 100%의 광, 약 90% 내지 약 100%의 광, 또는 약 95% 내지 약 100%의 광을 투과시킨다.

또다른 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 광학적으로 불투명하다. 이 구체예의 양상에서, 여기서 기술된 조직 충전제는, 예를 들어, 약 0.1%의 광, 약 1%의 광, 약 10%의 광, 약 15%의 광, 약 20%의 광, 약 25%의 광, 약 30%의 광, 약 35%의 광, 약 40%의 광, 약 45%의 광, 약 50%의 광, 약 55%의 광, 약 60%의 광, 약 65%의 광, 약 70%의 광, 약 75%의 광, 약 80%의 광, 약 85%의 광, 약 90%의 광, 약 95%의 광, 또는 약 100%의 광을 투과시킨다. 이 구체예의 다른 양상에서, 여기서 기술된 조직 충전제는, 예를 들어, 최대 0.1%의 광, 최대 1%의 광, 최대 10%의 광, 최대 15%의 광, 최대 20%의 광, 최대 25%의 광, 최대 30%의 광, 최대 35%의 광, 최대 40%의 광, 최대 45%의 광, 최대 50%의 광, 최대 55%의 광, 최대 60%의 광, 최대 65%의 광, 최대 70%의 광, 또는 최대 75%의 광을 투과시킨다. 이 구체예의 다른 양상에서, 여기서 기술된 조직 충전제는, 예를 들어, 적어도 0.1%의 광, 적어도 1%의 광, 적어도 10%의 광, 적어도 15%의 광, 적어도 20%의 광, 적어도 25%의 광, 적어도 30%의 광, 적어도 35%의 광, 적어도 40%의 광, 적어도 45%의 광, 적어도 50%의 광, 적어도 55%의 광, 적어도 60%의 광, 적어도 65%의 광, 적어도 70%의 광, 또는 적어도 75%의 광을 투과시킨다. 이 구체예의 다른 양상에서, 여기서 기술된 조직 충전제는, 예를 들어, 약 0.1% 내지 약 15%, 약 0.1% 내지 약 20%, 약 0.1% 내지 약 25%, 약 0.1% 내지 약 30%, 약 0.1% 내지 약 35%, 약 0.1% 내지 약 40%, 약 0.1% 내지 약 45%, 약 0.1% 내지 약 50%, 약 0.1% 내지 약 55%, 약 0.1% 내지 약 60%, 약 0.1% 내지 약 65%, 약 0.1% 내지 약 70%, 약 0.1% 내지 약 75%, 약 1% 내지 약 15%, 약 1% 내지 약 20%, 약 1% 내지 약 25%, 약 1% 내지 약 30%, 약 1% 내지 약 35%, 약 1% 내지 약 40%, 약 1% 내지 약 45%, 약 1% 내지 약 50%, 약 1% 내지 약 55%, 약 1% 내지 약 60%, 약 1% 내지 약 65%, 약 1% 내지 약 70%, 약 1% 내지 약 75%, 약 10% 내지 약 20%, 약 10% 내지 약 25%, 약 10% 내지 약 30%, 약 10% 내지 약 35%, 약 10% 내지 약 40%, 약 10% 내지 약 45%, 약 10% 내지 약 50%, 약 10% 내지 약 55%, 약 10% 내지 약 60%, 약 10% 내지 약 65%, 약 10% 내지 약 70%, 약 10% 내지 약 75%, 약 25% 내지 약 35%, 약 25% 내지 약 40%, 약 25% 내지 약 45%, 약 25% 내지 약 50%, 약 25% 내지 약 55%, 약 25% 내지 약 60%, 약 25% 내지 약 65%, 약 25% 내지 약 70%, 또는 약 25% 내지 약 75%의 광을 투과시킨다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 광학적으로 반투명하다. 이 구체예의 양상에서, 여기서 기술된 조직 충전제는, 예를 들어, 약 75%의 광, 약 80%의 광, 약 85%의 광, 약 90%의 광, 약 95%의 광, 또는 약 100%의 광을 확산적으로 투과시킨다. 이들 구체예의 다른 양상에서, 조직 충전제는, 예를 들어, 적어도 0.1%의 광, 적어도 1%의 광, 적어도 5%의 광, 적어도 10%의 광, 적어도 15%의 광, 적어도 20%의 광, 적어도 25%의 광, 적어도 30%의 광, 적어도 35%의 광, 적어도 40%의 광, 적어도 45%의 광, 적어도 50%의 광, 적어도 55%의 광, 적어도 60%의 광, 적어도 65%의 광, 적어도 70%의 광, 75%의 광, 적어도 80%의 광, 적어도 85%의 광, 적어도 90%의 광, 또는 적어도 95%의 광을 확산적으로 투과시킨다. 이들 구체예의 다른 양상에서, 조직 충전제는, 예를 들어, 최대 0.1%의 광, 최대 1%의 광, 최대 5%의 광, 최대 10%의 광, 최대 15%의 광, 최대 20%의 광, 최대 25%의 광, 최대 30%의 광, 최대 35%의 광, 최대 40%의 광, 최대 45%의 광, 최대 50%의 광, 최대 55%의 광, 최대 60%의 광, 최대 65%의 광, 최대 70%의 광, 75%의 광, 최대 80%의 광, 최대 85%의 광, 최대 90%의 광, 최대 95%의 광, 또는 최대 100%의 광을 확산적으로 투과시킨다. 이들 구체예의 여전히 다른 양상에서, 조직 충전제는, 예를 들어, 약 0.1% 내지 약 100%의 광, 약 1% 내지 약 100%의 광, 약 5% 내지 약 100%의 광, 약 10% 내지 약 100%의 광, 약 15% 내지 약 100%의 광, 약 20% 내지 약 100%의 광, 약 25% 내지 약 100%의 광, 약 30% 내지 약 100%의 광, 약 35% 내지 약 100%의 광, 약 45% 내지 약 100%의 광, 약 50% 내지 약 100%의 광, 약 55% 내지 약 100%의 광, 약 60% 내지 약 100%의 광, 약 65% 내지 약 100%의 광, 약 70% 내지 약 100%의 광, 약 75% 내지 약 100%의 광, 약 80% 내지 약 100%의 광, 약 85% 내지 약 100%의 광, 약 90% 내지 약 100%의 광, 또는 약 95% 내지 약 100%의 광을 확산적으로 투과시킨다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 광을 산란 또는 흡수하는 재료의 능력의 기술로서 정의되는, 그의 소산 계수에 의해 기술될 수 있다.

조직 충전제 및 피부 특성은 본업계에서 공지된 특정 조직 충전제의 송달 이후 피부에서의 부반응인 틴달 효과 이벤트의 발생에 영향을 미칠 수 있다. 높은 강성 및 탄성을 갖는 충전제는 상기 재료가 중간 및 심부 피부 영역 내에 주사된 때 얼굴 변색의 염려 없이 코입술 주름, 볼, 및 턱과 같은 얼굴 상 영역을 교정하기 위해 사용될 수 있다. 그러나, 충전제가 더욱 표면적 용도, 예를 들어 미세 라인 주름을 교정하기 위해 사용되거나, 또는 피부의 상부 영역 내에 너무 표면적으로 실수로 도포된 때, 피부의 청색 변색이 종종 관찰된다. 틴달 효과의 결과로서 생각되는 이 현상은, 적용 부위의 반-영구 변색을 남긴다. 일부 구체예에서, 이 효과는 충전제 재료를 분해시키기 위해 효소, 예를 들어 히알루로니다제의 투여 후 사라진다. 따라서, 틴달 효과는 표면적 미세 라인 주름에 대해 치료된 환자에서 더욱 흔하다. 전형적으로 충전제가 피부에 잔존하는 동안의 틴달 효과의 연장된 발생은 원하지 않는 부작용이고, 환자에게 걱정을 유발한다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 그의 균질성 및 얻어진 불투명도로 인해 틴달 효과를 완화시킨다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 틴달 효과를 유발하지 않거나, 또는 틴달 효과로부터 얻어진 시각적으로 인식가능한 청색 변색를 유발하지 않는다. 일부 구체예에서, 본발명은 환자의 진피 영역에, 틴달 효과를 나타내지 않거나 미미하게 나타내는 실질적으로 광학적으로 투명한 진피 충전제 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 심미적 외관를 개선시키기 위한 조직 충전제 및 방법에 관한 것이다. 조직 충전제가 주사된 피부 부위에서의 청색 변색의 외관 (틴달 효과)은 일부 진피 충전제 환자가 경험하는 상당한 부작용이다. 틴달 효과는 표면적 미세 라인 주름에 대해 치료된 환자에서 더욱 흔하다. 틴달 효과로 얻어진 청색 변색 없이, 상대적으로 얇은 피부 영역에서도, 미세한 라인 및 주름을 처리하기 위해 표면적으로 주사될 수 있는, 장기 지속 반투명 충전제를 제공하는 본 발명의 구체예가 개발되었다. 미세한 라인 또는 표면적 주름은 피부가 가장 얇은, 즉 피부가 1 mm 미만 피부 두께를 가지는 얼굴의 영역 (이마, 외안각, 버밀리언 경계/입주위 라인)에서 전형적으로 발견되는 피부 주름 또는 주름살이라고 일반적으로 이해된다. 이마 상에서 평균 진피 두께는 정상 피부에 대해 약 0.95 mm 및 주름진 피부에 대해 약 0.81 mm이다. 외안각 주변 피부는 심지어 더욱 얇다 (예를 들어, 정상 피부에 대해 약 0.61 mm 및 주름진 피부에 대해 약 0.41 mm). 30 또는 32 게이지 니들 (미세 라인 겔 적용을 위해 전형적으로 사용되는 니들)의 평균 외부 직경은 약 0.30 및 약 0.24 mm이다.

구체예에서, 여기서 개시된 조직 충전제는 광학적으로 불투명하다. 이 구체예의 양상에서, 여기서 개시된 조직 충전제는, 예를 들어, 약 5%의 광, 약 10%의 광, 약 15%의 광, 약 20%의 광, 약 25%의 광, 약 30%의 광, 약 35%의 광, 약 40%의 광, 약 45%의 광, 약 50%의 광, 약 55%의 광, 약 60%의 광, 약 65%의 광, 또는 약 70%의 광을 투과시킨다. 이 구체예의 다른 양상에서, 여기서 개시된 조직 충전제는, 예를 들어, 최대 5%의 광, 최대 10%의 광, 최대 15%의 광, 최대 20%의 광, 최대 25%의 광, 최대 30%의 광, 최대 35%의 광, 최대 40%의 광, 최대 45%의 광, 최대 50%의 광, 최대 55%의 광, 최대 60%의 광, 최대 65%의 광, 최대 70%의 광, 또는 최대 75%의 광을 투과시킨다. 이 구체예의 다른 양상에서, 여기서 개시된 조직 충전제는, 예를 들어, 약 5% 내지 약 15%, 약 5% 내지 약 20%, 약 5% 내지 약 25%, 약 5% 내지 약 30%, 약 5% 내지 약 35%, 약 5% 내지 약 40%, 약 5% 내지 약 45%, 약 5% 내지 약 50%, 약 5% 내지 약 55%, 약 5% 내지 약 60%, 약 5% 내지 약 65%, 약 5% 내지 약 70%, 약 5% 내지 약 75%, 약 15% 내지 약 20%, 약 15% 내지 약 25%, 약 15% 내지 약 30%, 약 15% 내지 약 35%, 약 15% 내지 약 40%, 약 15% 내지 약 45%, 약 15% 내지 약 50%, 약 15% 내지 약 55%, 약 15% 내지 약 60%, 약 15% 내지 약 65%, 약 15% 내지 약 70%, 약 15% 내지 약 75%, 약 25% 내지 약 35%, 약 25% 내지 약 40%, 약 25% 내지 약 45%, 약 25% 내지 약 50%, 약 25% 내지 약 55%, 약 25% 내지 약 60%, 약 25% 내지 약 65%, 약 25% 내지 약 70%, 또는 약 25% 내지 약 75%의 광을 투과시킨다.

일부 구체예에서, 여기서 개시된 조직 충전제는 틴달링에 있어서, 예를 들어, 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 100% 감소를 나타낸다. 이들 구체예의 다른 양상에서, 여기서 개시된 조직 충전제는, 틴달링에 있어서 예를 들어, 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 100%, 감소를 나타낸다. 이들 구체예의 다른 양상에서, 여기서 개시된 조직 충전제는 틴달링에 있어서, 예를 들어, 약 20% 내지 약 100%, 약 50% 내지 약 100%, 약 70% 내지 약 100%, 약 15% 내지 약 35%, 약 20% 내지 약 40%, 약 25% 내지 약 45%, 약 30% 내지 약 50%, 약 35% 내지 약 55%, 약 40% 내지 약 60%, 약 45% 내지 약 65%, 약 50% 내지 약 70%, 약 55% 내지 약 75%, 약 60% 내지 약 80%, 약 65% 내지 약 85%, 약 70% 내지 약 90%, 약 75% 내지 약 95%, 또는 약 80% 내지 약 100%, 감소를 나타낸다.

물 함량

구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 물을 포함할 수 있다. 예를 들어, 여기서 기술된 일부 조직 충전제는 겔, 가령 하이드로겔일 수 있고, 거기에 흡수, 포집, 또는 침착된 물을 포함할 수 있다.

일부 구체예에서, 가교결합된 실크 -HA 하이드로겔은 저 팽윤 하이드로겔이다. 일부 구체예에서, 가교결합된 실크 -HA 하이드로겔은 고 팽윤성 하이드로겔이다. 일부 구체예에서, 본 개시 내용의 하이드로겔 제제에 대한 팽윤 정도는 가교결합 정도를 조절하거나 HA 함량을 변화시킴으로써 조절 될 수 있다. 하이드로겔에 가교결합 정도가 높을수록 하이드로겔의 팽윤 정도가 낮아지는 것은 하이드로겔 구조가 더 타이트하기 때문이다. 하이드로겔에 HA 함량이 많을수록 HA 구조에 더 많은 수산기 (-OH)가 존재하기 때문에 팽창 정도가 높아진다.

구체예에서, 본개시물의 조직 충전제 내 중량 기준 퍼센트 물 함량은 1% 내지 95%이다. 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내 중량 기준 퍼센트 물 함량은 적어도 1%, 또는 적어도 2%, 또는 적어도 3%, 또는 적어도 4%, 또는 적어도 5%, 또는 적어도 6%, 또는 적어도 7%, 또는 적어도 8%, 또는 적어도 9%, 또는 적어도 10%, 또는 적어도 11%, 또는 적어도 12%, 또는 적어도 13%, 또는 적어도 14%, 또는 적어도 15%, 또는 적어도 16%, 또는 적어도 17%, 또는 적어도 18%, 또는 적어도 19%, 또는 적어도 20%, 또는 적어도 21%, 또는 적어도 22%, 또는 적어도 23%, 또는 적어도 24%, 또는 적어도 25%, 또는 적어도 26%, 또는 적어도 27%, 또는 적어도 28%, 또는 적어도 29%, 또는 적어도 30%, 또는 적어도 31%, 또는 적어도 32%, 또는 적어도 33%, 또는 적어도 34%, 또는 적어도 35%, 또는 적어도 36%, 또는 적어도 37%, 또는 적어도 38%, 또는 적어도 39%, 또는 적어도 40%, 또는 적어도 41%, 또는 적어도 42%, 또는 적어도 43%, 또는 적어도 44%, 또는 적어도 45%, 또는 적어도 46%, 또는 적어도 47%, 또는 적어도 48%, 또는 적어도 49%, 또는 적어도 50%, 또는 적어도 51%, 또는 적어도 52%, 또는 적어도 53%, 또는 적어도 54%, 또는 적어도 55%, 또는 적어도 56%, 또는 적어도 57%, 또는 적어도 58%, 또는 적어도 59%, 또는 적어도 60%, 또는 적어도 61%, 또는 적어도 62%, 또는 적어도 63%, 또는 적어도 64%, 또는 적어도 65%, 또는 적어도 66%, 또는 적어도 67%, 또는 적어도 68%, 또는 적어도 69%, 또는 적어도 70%, 또는 적어도 71%, 또는 적어도 72%, 또는 적어도 73%, 또는 적어도 74%, 또는 적어도 75%, 또는 적어도 76%, 또는 적어도 77%, 또는 적어도 78%, 또는 적어도 79%, 또는 적어도 80%, 또는 적어도 81%, 또는 적어도 82%, 또는 적어도 83%, 또는 적어도 84%, 또는 적어도 85%, 또는 적어도 86%, 또는 적어도 87%, 또는 적어도 88%, 또는 적어도 89%, 또는 적어도 90%, 또는 적어도 91%, 또는 적어도 92%, 또는 적어도 93%, 또는 적어도 94%, 또는 적어도 95%이다.

구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내 중량 기준 퍼센트 물 함량은 최대 1%, 또는 최대 2%, 또는 최대 3%, 또는 최대 4%, 또는 최대 5%, 또는 최대 6%, 또는 최대 7%, 또는 최대 8%, 또는 최대 9%, 또는 최대 10%, 또는 최대 11%, 또는 최대 12%, 또는 최대 13%, 또는 최대 14%, 또는 최대 15%, 또는 최대 16%, 또는 최대 17%, 또는 최대 18%, 또는 최대 19%, 또는 최대 20%, 또는 최대 21%, 또는 최대 22%, 또는 최대 23%, 또는 최대 24%, 또는 최대 25%, 또는 최대 26%, 또는 최대 27%, 또는 최대 28%, 또는 최대 29%, 또는 최대 30%, 또는 최대 31%, 또는 최대 32%, 또는 최대 33%, 또는 최대 34%, 또는 최대 35%, 또는 최대 36%, 또는 최대 37%, 또는 최대 38%, 또는 최대 39%, 또는 최대 40%, 또는 최대 41%, 또는 최대 42%, 또는 최대 43%, 또는 최대 44%, 또는 최대 45%, 또는 최대 46%, 또는 최대 47%, 또는 최대 48%, 또는 최대 49%, 또는 최대 50%, 또는 최대 51%, 또는 최대 52%, 또는 최대 53%, 또는 최대 54%, 또는 최대 55%, 또는 최대 56%, 또는 최대 57%, 또는 최대 58%, 또는 최대 59%, 또는 최대 60%, 또는 최대 61%, 또는 최대 62%, 또는 최대 63%, 또는 최대 64%, 또는 최대 65%, 또는 최대 66%, 또는 최대 67%, 또는 최대 68%, 또는 최대 69%, 또는 최대 70%, 또는 최대 71%, 또는 최대 72%, 또는 최대 73%, 또는 최대 74%, 또는 최대 75%, 또는 최대 76%, 또는 최대 77%, 또는 최대 78%, 또는 최대 79%, 또는 최대 80%, 또는 최대 81%, 또는 최대 82%, 또는 최대 83%, 또는 최대 84%, 또는 최대 85%, 또는 최대 86%, 또는 최대 87%, 또는 최대 88%, 또는 최대 89%, 또는 최대 90%, 또는 최대 91%, 또는 최대 92%, 또는 최대 93%, 또는 최대 94%, 또는 최대 95%이다.

구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내 중량 기준 퍼센트 물 함량은 1% 내지 2%, 또는 2% 내지 3%, 또는 3% 내지 4%, 또는 4% 내지 5%, 또는 5% 내지 6%, 또는 6% 내지 7%, 또는 7% 내지 8%, 또는 8% 내지 9%, 또는 9% 내지 10%, 또는 10% 내지 11%, 또는 11% 내지 12%, 또는 12% 내지 13%, 또는 13% 내지 14%, 또는 14% 내지 15%, 또는 15% 내지 16%, 또는 16% 또는 17%, 또는 17% 내지 18%, 또는 18% 내지 19%, 또는 19% 내지 20%, 또는 20% 내지 21%, 또는 21% 내지 22%, 또는 22% 내지 23%, 또는 23% 내지 24%, 또는 24% 내지 25%, 또는 25% 내지 26%, 또는 26% 내지 27%, 또는 27% 내지 28%, 또는 28% 내지 29%, 또는 30% 내지 31%, 또는 31% 내지 32%, 또는 32% 내지 33%, 또는 33% 내지 34%, 또는 34% 내지 35%, 또는 35% 내지 36%, 또는 36% 내지 37%, 또는 37% 내지 38%, 또는 38% 내지 39%, 또는 39% 내지 40%, 또는 40% 내지 41%, 또는 41% 내지 42%, 또는 42% 내지 43%, 또는 43% 내지 44%, 또는 44% 내지 45%, 또는 45% 내지 46%, 또는 46% 내지 47%, 또는 47% 내지 48%, 또는 48% 내지 49%, 또는 49% 내지 50%, 또는 50% 내지 51%, 또는 51% 내지 52%, 또는 52% 내지 53%, 또는 53% 내지 54%, 또는 54% 내지 55%, 또는 55% 내지 56%, 또는 56% 내지 57%, 또는 57% 내지 58%, 또는 58% 내지 59%, 또는 59% 내지 60%, 또는 60% 내지 61%, 또는 61% 내지 62%, 또는 62% 내지 63%, 또는 63% 내지 64%, 또는 64% 내지 65%, 또는 65% 내지 66%, 또는 66% 내지 67%, 또는 67% 내지 68%, 또는 68% 내지 69%, 또는 69% 내지 70%, 또는 70% 내지 71%, 또는 71% 내지 72%, 또는 72% 내지 73%, 또는 73% 내지 74%, 또는 74% 내지 75%, 또는 75% 내지 76%, 또는 76% 내지 77%, 또는 77% 내지 78%, 또는 78% 내지 79%, 또는 79% 내지 80%, 또는 80% 내지 81%, 또는 81% 내지 82%, 또는 82% 내지 83%, 또는 83% 내지 84%, 또는 84% 내지 85%, 또는 85% 내지 86%, 또는 86% 내지 87%, 또는 87% 내지 88%, 또는 88% 내지 89%, 또는 89% 내지 90%, 또는 90% 내지 91%, 또는 91% 내지 92%, 또는 92% 내지 93%, 또는 93% 내지 94%, 또는 94% 내지 95%, 또는 95% 내지 96%, 또는 96% 내지 97%, 또는 97% 내지 98%이다.

구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제 내 중량 기준 퍼센트 물 함량은 약 1%, 또는 약 2%, 또는 약 3%, 또는 약 4%, 또는 약 5%, 또는 약 6%, 또는 약 7%, 또는 약 8%, 또는 약 9%, 또는 약 10%, 또는 약 11%, 또는 약 12%, 또는 약 13%, 또는 약 14%, 또는 약 15%, 또는 약 16%, 또는 약 17%, 또는 약 18%, 또는 약 19%, 또는 약 20%, 또는 약 21%, 또는 약 22%, 또는 약 23%, 또는 약 24%, 또는 약 25%, 또는 약 26%, 또는 약 27%, 또는 약 28%, 또는 약 29%, 또는 약 30%, 또는 약 31%, 또는 약 32%, 또는 약 33%, 또는 약 34%, 또는 약 35%, 또는 약 36%, 또는 약 37%, 또는 약 38%, 또는 약 39%, 또는 약 40%, 또는 약 41%, 또는 약 42%, 또는 약 43%, 또는 약 44%, 또는 약 45%, 또는 약 46%, 또는 약 47%, 또는 약 48%, 또는 약 49%, 또는 약 50%, 또는 약 51%, 또는 약 52%, 또는 약 53%, 또는 약 54%, 또는 약 55%, 또는 약 56%, 또는 약 57%, 또는 약 58%, 또는 약 59%, 또는 약 60%, 또는 약 61%, 또는 약 62%, 또는 약 63%, 또는 약 64%, 또는 약 65%, 또는 약 66%, 또는 약 67%, 또는 약 68%, 또는 약 69%, 또는 약 70%, 또는 약 71%, 또는 약 72%, 또는 약 73%, 또는 약 74%, 또는 약 75%, 또는 약 76%, 또는 약 77%, 또는 약 78%, 또는 약 79%, 또는 약 80%, 또는 약 81%, 또는 약 82%, 또는 약 83%, 또는 약 84%, 또는 약 85%, 또는 약 86%, 또는 약 87%, 또는 약 88%, 또는 약 89%, 또는 약 90%, 또는 약 91%, 또는 약 92%, 또는 약 93%, 또는 약 94%, 또는 약 95%이다.

기계적 특성

여기서 기술된 조직 충전제, 또는 그의 성분은 선택된 치료법 및 송달 모드에 따라서 많은 물리적 상태로 제공될 수 있다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 유체, 예를 들어 액체이다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 점성 유체이다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 고체이다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 탄성 고체이다.

여기서 기술된 조직 충전제의 검사시, 표 17에서 나타낸 바와 같이 많은 유동학적 특성이 평가될 수 있다:

조직 충전제를 기술하기 위해 사용된 유동학 용어
탄성	변형 후 그의 최초 형상으로 다시 돌아가는 조직 충전제의 능력
탄성 계수	기호 G'로 나타낸 점탄성 재료 내 저장 에너지의의 측정치
점도	조직 충전제의 흐름 특징 (겔 두께)
점성 계수	G"로 나타낸 점탄성 재료 내 소멸된 에너지의 측정치
복합 계수	G' 및 G"의 벡터 합계(G*)에 의해 결정되는 조직 충전제의 변형에의 총 저항성
복합 점도	n*로 나타낸 주파수 점진 변화로부터 계산된 점도
점탄성	탄성 및 점성 특성을 갖는 조직 충전제를 기술
전단력	반대 방향으로 뒤틀리는 두 플레이트 사이에 배치함에 의해 조직 충전제에 평행하게 인가된 외부 힘
전단 유동화	변형 속도를 증가시킴과 함께 조직 충전제 점도를 감소시킴

일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는, 탄성, 및 점성 둘 다인 재료의 기계적 특성을 나타내는 점탄성 재료이다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 겔로서 기술될 수 있다. 재료의 기계적 또는 유동학적 특성 (예를 들어, 점탄성 특성)을 평가하는 방법은 본업계에서 공지되어 있고, 가령 예를 들어 U.S. 특허출원 공개 번호 2006/0105022 및 Stocks, et al., J. Drugs. Dermatol. (2011) 10:974-980에서 기술되고, 그 전체가 여기서 참고로서 포함된다. 재료의 점탄성은 동적 기계적 분석을 사용함에 의해, 예를 들어 샘플에 진동 스트레스를 인가하고 얻어진 스트레인을 측정함을 특징으로 할 수 있다. 탄성 재료는 전형적으로 상 내 스트레스 및 스트레인을 나타내고, 즉, 스트레스 적용은 즉각적 스트레인을 유발한다. 점성 재료에서, 스트레인은 90 정도만큼 스트레스의 인가로부터 탈-상된다. 점탄성 재료에서, 스트레인 및 스트레스 사이 상 차이는 0 초과이고, 90 도 미만이다. 일부 구체예에서, 본발명의 점탄성 SPF의 재료는 저장 탄성률 G' (또한 탄성 계수로 지칭), 및 손실 계수 G" (또한 점성 계수로 지칭)를 포함하는 복합 동적 계수 G을 측정함을 특징으로 할 수 있다:

여기서 i² = -1,

, 및

, σ₀는 스트레스 진폭, ε₀는 스트레인 진폭, 및 δ는 상 시프트이다.

탄성 계수 G' 및 손실 계수 G"는 SPF 겔 샘플에 회전, 또는 전단 유량계 내 진동 스트레스로 처리하는 것에 의해 측정된다. 샘플은 두 플레이트 사이에 배치되고, 하나는 고정되고 하나는 주어진 주파수로 회전, 또는 진동할 수 있다. 탄성 계수 G' 및 손실 계수 G"의 값은 주파수 의존적이다. 탄성 계수 G' 및 손실 계수 G" 측정에서 사용된 주파수 범위는 전형적으로, 비제한적으로, 0.1 내지 10 Hz 사이이다. 일부 구체예에서, 탄성 계수 G' 및 손실 계수 G"는 1 Hz 진동 주파수에서 측정된다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제의 유동학적 특성, 예를 들어, G' 및 G"은 진동 평행 플레이트 유량계로 측정될 수 있다. 다양한 직경, 예를 들어 25 mm의 플레이트가 다양한 거리, 예를 들어 1 mm의 플레이트 사이의 갭 높이에서 사용될 수 있다. 측정은 다양한 온도에서 수행될 수 있다. 일부 구체예에서, 측정은 25 ℃ 일정 온도에서 수행된다. 일부 구체예에서, 측정은, 특이적 스트레인 값, 예를 들어 2%의 일정 스트레인에서 두 주파수 값, 예를 들어 1 내지 10 Hz 사이의 주파수 점진 변화를 포함한다. 일부 구체예에서, 측정은 주파수의 대수적 증가, 이후 스트레인에서의 대수적 증가와 함께 일정 주파수, 예를 들어 5 Hz에서 예를 들어 1 내지 300% 사이일 수 있는 스트레인 점진 변화를 포함한다. 일부 구체예에서, 저장 탄성률 G' 및 손실 계수 G"은 특이적 퍼센트 스트레인 값, 예를 들어 1% 스트레인에서의 스트레인 점진 변화로부터 얻어질 수 있다.

일부 구체예에서, 복합 계수 (즉, G' 및 iG"의 합계)는 여기서 기술된 특정 조직 충전제의 변형에 대한 총 저항성의 포괄적 측정치를 제공한다. 복합 계수는 유량계를 사용하여 시험될 수 있고 유량계에서 특정 조직 충전제 (예를 들어, 겔)는 두 평행 원형 플레이트 사이에 배치될 수 있고 다양한 주파수에서 하나의 플레이트를 회전시킴에 의해 가변적 회전 스트레인이 제공된다.

일부 구체예에서, 특정 조직 충전제의 특징은 조직 충전제의 퍼센트 탄성을 통해 검사될 수 있고, 여기서 퍼센트 탄성은 100 X G'/(G' + G")와 같다.

일부 구체예에서, 특정 조직 충전제의 특징은 그 조직 충전제의 회복 계수를 통해 검사될 수 있다:

여기서: 약 1의 회복 계수는 특정 조직 충전제 (예를 들어, 겔)가 인가된 힘에도 불구하고 그의 구조를 유지하였음을 의미하고; 1 초과의 회복 계수는 특정 조직 충전제 (예를 들어, 겔)가 구조적 분해을 경험했음을 의미하고; 및 1 미만 회복 계수는 겔이 증가된 구조적 성능을 경험했음을 의미한다.

본발명의 하나의 이론에의 제한 없이, G' 증가는 형상 변형에 더 잘 저항하는 재료의 능력의 상대적 증가를 유발하고 상기 재료는 더 낮은 G'를 갖는 재료 (예를 들어, 겔 조직 충전제)보다 더 퍼밍, 강함, 탄성이라고 기술될 수 있다. 따라서, G' 증가는 구조적 지지 및/또는 부피화를 제공하는 재료의 능력에서의 상응하는 증가를 유발할 수 있다.

본발명의 하나의 이론에의 제한 없이, G" 증가는 더 낮은 G"를 갖는 재료와 비교하여 더욱 점성 재료 (예를 들어, 겔)를 유발한다. 또한, 더 높은 G"로 재료에 대한 열 소멸로 더 큰 에너지 손실이 있다. 일부 구체예에서, 가교결합의 정도 증가에 따라서 G'가 증가한다. 일부 구체예에서, 가교결합의 정도 증가에 따라서 G"가 증가한다. 일부 구체예에서, 가교결합의 정도 증가에 따라서 G' 및 G"가 둘 다 증가한다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 50 Pa 미만, 내지 약 15000 Pa 초과 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 50 Pa 내지 약 500,000 Pa G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 100 Pa 내지 약 500,000 Pa G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 75 Pa 내지 약 150 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 100 Pa 내지 약 250 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 150 Pa 내지 약 275 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 150 Pa 내지 약 500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 250 Pa 내지 약 750 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 375 Pa 내지 약 675 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 425 Pa 내지 약 850 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 500 Pa 내지 약 1000 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 650 Pa 내지 약 1050 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 750 Pa 내지 약 1250 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 950 Pa 내지 약 1500 Pa의 G'를 가진다.

일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 50 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 100 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 150 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 200 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 225 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 250 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 275 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 300 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 325 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 350 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 375 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 400 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 425 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 450 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 475 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 500 Pa의 G'를 가진다.

일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 525 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 550 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 575 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 적어도 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 625 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 650 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 675 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 700 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 725 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 750 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 775 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 800 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 825 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 850 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 875 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 900 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 925 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 950 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 975 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 1000 Pa의 G'를 가진다.

일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 1050 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 1100 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 1150 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 1200 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 1250 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 1300 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 1350 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 1400 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 1450 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 1500 Pa의 G'를 가진다.

일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 50 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 100 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 150 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 200 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 225 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 250 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 275 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 300 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 325 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 350 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 375 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 400 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 425 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 450 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 475 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 500 Pa의 G'를 가진다.

일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 525 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 550 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 575 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 625 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 650 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 675 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 700 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 725 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 750 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 775 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 800 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 825 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 850 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 875 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 900 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 925 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 950 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 975 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 1000 Pa의 G'를 가진다.

일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 1050 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 1100 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 1150 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 1200 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 1250 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 1300 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 1350 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 1400 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 1450 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 1500 Pa의 G'를 가진다.

일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 50 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 100 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 150 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 200 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 225 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 250 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 275 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 300 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 325 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 350 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 375 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 400 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 425 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 450 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 475 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 500 Pa의 G'를 가진다.

일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 525 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 550 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 575 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 600 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 625 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 650 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 675 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 700 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 725 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 750 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 775 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 800 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 825 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 850 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 875 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 900 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 925 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 950 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 975 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 1000 Pa의 G'를 가진다.

일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 1050 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 1100 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 1150 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 1200 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 1250 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 1300 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 1350 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 1400 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 1450 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 1500 Pa의 G'를 가진다.

일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 2000 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 2250 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 2500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 2750 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 3000 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 3250 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 3500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 3750 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 4000 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 4250 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 4500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 4750 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 5000 Pa의 G'를 가진다.

일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 5250 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 5500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 5750 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 적어도 6000 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 6250 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 6500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 6750 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 7000 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 7250 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 7500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 7750 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 8000 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 8250 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 8500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 8750 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 9000 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 9250 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 9500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 9750 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 10000 Pa의 G'를 가진다.

일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 10500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 11000 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 11500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 12000 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 12500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 13000 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 13500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 14000 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 14500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 15000 Pa의 G'를 가진다.

일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 2000 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 2250 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 2500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 2750 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 3000 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 3250 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 3500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 3750 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 4000 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 4250 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 4500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 4750 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 5000 Pa의 G'를 가진다.

일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 5250 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 5500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 5750 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 6000 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 6250 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 6500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 6750 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 7000 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 7250 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 7500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 7750 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 8000 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 8250 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 8500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 8750 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 9000 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 9250 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 9500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 9750 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 10000 Pa의 G'를 가진다.

일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 10500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 11000 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 11500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 12000 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 12500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 13000 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 13500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 14000 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 14500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 15000 Pa의 G'를 가진다.

일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 2000 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 2250 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 2500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 2750 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 3000 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 3250 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 3500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 3750 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 4000 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 4250 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 4500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 4750 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 5000 Pa의 G'를 가진다.

일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 5250 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 5500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 5750 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 6000 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 6250 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 6500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 6750 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 7000 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 7250 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 7500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 7750 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 8000 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 8250 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 8500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 8750 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 9000 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 9250 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 9500 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 9750 Pa의 G'를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 10000 Pa의 G'를 가진다.

일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 5 Pa 미만, 내지 약 초과 200 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 5 Pa 내지 약 200 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 5 Pa 내지 약 25 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 15 Pa 내지 약 35 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 10 Pa 내지 약 50 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 15 Pa 내지 약 75 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 20 Pa 내지 약 85 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 25 Pa 내지 약 100 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 35 Pa 내지 약 125 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 45 Pa 내지 약 115 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 75 Pa 내지 약 150 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 100 Pa 내지 약 175 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 115 Pa 내지 약 200 Pa의 G"를 가진다.

일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 5 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 10 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 15 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 20 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 25 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 30 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 35 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 40 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 45 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 50 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 55 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 60 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 65 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 70 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 75 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 80 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 85 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 90 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 95 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 100 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 105 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 110 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 115 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 120 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 125 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 130 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 135 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 140 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 145 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 150 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 155 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 160 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 165 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 170 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 175 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 180 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 185 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 190 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 195 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 적어도 200 Pa의 G"를 가진다.

일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는의 G"를 가진다 최대 5 Pa. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 10 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 15 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 20 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 25 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 30 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 35 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 40 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 45 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 50 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 55 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 60 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 65 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 70 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 75 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 80 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 85 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 90 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 95 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 100 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 105 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 110 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 115 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 120 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 125 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 130 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 135 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 140 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 145 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 150 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 155 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 160 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 165 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 170 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 175 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 180 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 185 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 190 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 195 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 최대 200 Pa의 G"를 가진다.

일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 5 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 10 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 15 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 20 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 25 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 30 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 35 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 40 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 45 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 50 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 55 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 60 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 65 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 70 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 75 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 80 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 85 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 90 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 95 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 100 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 105 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 110 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 115 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 120 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 125 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 130 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 135 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 140 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 145 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 150 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 155 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 160 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 165 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 170 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 175 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 180 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 185 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 190 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 195 Pa의 G"를 가진다. 일부 구체예에서, 본발명의 조직 충전제는 약 200 Pa의 G"를 가진다.

일부 구체예에서, 여기서 개시된 조직 충전제는 동적 점도를 나타낸다. 점도는 전단 스트레스 또는 인장 스트레스에 의해 유발된 전단 또는 흐름에 대한 유체의 저항성이다. 점도는 유체의 층을 서로 섞으려고 할 때 생기는 분자간 마찰로 유발된 흐름에 대한 유체의 내부 저항성을 기술하고 유체 마찰의 측정치로서 생각될 수 있다. 유체가 덜 점성일수록, 그의 운동 용이성 (유동성)이 더 커진다.

점도는 두 가지로 정의될 수 있다; 동적 점도 (μ; η가 종종 사용됨) 또는 운동학적 점도 (v). 절대 또는 복합 점도로서 또한 공지된 동적 점도는, 유체로부터 단위 거리만큼 떨어져 유지시킨 때 단위 속도에서 하나의 수평 면을 다른수평 면에 대해 이동시키기 위해 필요한 단위 면적 당 탄젠트 힘이다. 동적 점도의 SI 물리적 단위는 파스칼-초 (Pas)인데, 이는 Nm-²s와 동일하다. 동적 점도는 τ = μ dvx/dz로 표현될 수 있고, 여기서 τ = 전단 스트레스, μ = 동적 점도, 및 dvx/dz는 시간 경과에 따른 속도 구배이다. 예를 들어, 1 Paㆍs의 점도를 갖는 유체가 두 플레이트 사이에 배치되고, 하나의 플레이트가 1 파스칼의 전단 스트레스로 옆으로 밀리면, 1 초 내에 플레이트 사이의 층의 두께와 같은 거리로 이동한다. 운동학적 점도 (v)는 밀도에 대한 동적 점도의 비이고, 힘이 수반되지 않은 양이고, 다음과 같이 정의된다: v = μ/ρ, 여기서 μ는 동적 점도, 및 ρ는 밀도 (kg/m³)이다. 운동학적 점도는 유리 모세관 점도계에 의해 측정되고 m²/s의 SI 단위를 가진다. 유체 점도는 온도 의존적이고, 따라서 동적 및 운동학적 점도는 온도와 함께 보고된다.

일부 구체예에서, 여기서 개시된 조직 충전제는, 예를 들어, 적어도 10 Paㆍs, 적어도 20 Paㆍs, 적어도 30 Paㆍs, 적어도 40 Paㆍs, 적어도 50 Paㆍs, 적어도 60 Paㆍs, 적어도 70 Paㆍs, 적어도 80 Paㆍs, 적어도 90 Paㆍs, 적어도 100 Paㆍs, 적어도 125 Paㆍs, 적어도 150 Paㆍs, 적어도 175 Paㆍs, 적어도 200 Paㆍs, 적어도 225 Paㆍs, 적어도 250 Paㆍs, 적어도 275 Paㆍs, 적어도 300 Paㆍs, 적어도 400 Paㆍs, 적어도 500 Paㆍs, 적어도 600 Paㆍs, 적어도 700 Paㆍs, 적어도 750 Paㆍs, 적어도 800 Paㆍs, 적어도 900 Paㆍs, 적어도 1,000 Paㆍs, 적어도 1,100 Paㆍs, 또는 적어도 1,200 Paㆍs의 동적 점도를 나타낸다. 일부 구체예에서, 여기서 개시된 조직 충전제는, 예를 들어, 최대 10 Paㆍs, 최대 20 Paㆍs, 최대 30 Paㆍs, 최대 40 Paㆍs, 최대 50 Paㆍs, 최대 60 Paㆍs, 최대 70 Paㆍs, 최대 80 Paㆍs, 최대 90 Paㆍs, 최대 100 Paㆍs, 최대 125 Paㆍs, 최대 150 Paㆍs, 최대 175 Paㆍs, 최대 200 Paㆍs, 최대 225 Paㆍs, 최대 250 Paㆍs, 최대 275 Paㆍs, 최대 300 Paㆍs, 최대 400 Paㆍs, 최대 500 Paㆍs, 최대 600 Paㆍs, 최대 700 Paㆍs, 최대 750 Paㆍs, 최대 800 Paㆍs, 최대 900 Paㆍs, 또는 최대 1000 Paㆍs의 동적 점도를 나타낸다. 일부 구체예에서, 여기서 개시된 조직 충전제는, 예를 들어, 약 10 Paㆍs 내지 약 100 Paㆍs, 약 10 Paㆍs 내지 약 150 Paㆍs, 약 10 Paㆍs 내지 약 250 Paㆍs, 약 50 Paㆍs 내지 약 100 Paㆍs, 약 50 Paㆍs 내지 약 150 Paㆍs, 약 50 Paㆍs 내지 약 250 Paㆍs, 약 100 Paㆍs 내지 약 500 Paㆍs, 약 100 Paㆍs 내지 약 750 Paㆍs, 약 100 Paㆍs 내지 약 1,000 Paㆍs, 약 100 Paㆍs 내지 약 1,200 Paㆍs, 약 300 Paㆍs 내지 약 500 Paㆍs, 약 300 Paㆍs 내지 약 750 Paㆍs, 약 300 Paㆍs 내지 약 1,000 Paㆍs, 또는 약 300 Paㆍs 내지 약 1,200 Paㆍs의 동적 점도를 나타낸다.

구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 적어도 1 일, 또는 적어도 2 일, 또는 적어도 3 일, 또는 적어도 4 일, 또는 적어도 5 일, 또는 적어도 6 일, 또는 적어도 1 주, 또는 적어도 2 주, 또는 적어도 3 주, 또는 적어도 1 개월, 또는 적어도 2 개월, 또는 적어도 3 개월, 또는 적어도 4 개월, 또는 적어도 5 개월, 또는 적어도 6 개월, 또는 적어도 7 개월, 또는 적어도 8 개월, 또는 적어도 9 개월, 또는 적어도 10 개월, 또는 적어도 11 개월, 또는 적어도 1 년 동안 생체 내에서 그의 G' 및/또는 G"를 실질적으로 유지할 수 있다.

구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 최대 1 일, 또는 최대 2 일, 또는 최대 3 일, 또는 최대 4 일, 또는 최대 5 일, 또는 최대 6 일, 또는 최대 1 주, 또는 최대 2 주, 또는 최대 3 주, 또는 최대 1 개월, 또는 최대 2 개월, 또는 최대 3 개월, 또는 최대 4 개월, 또는 최대 5 개월, 또는 최대 6 개월, 또는 최대 7 개월, 또는 최대 8 개월, 또는 최대 9 개월, 또는 최대 10 개월, 또는 최대 11 개월, 또는 최대 1 년 동안 생체 내에서 그의 G' 및/또는 G"를 실질적으로 유지할 수 있다.

구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 약 1 일, 또는 약 2 일, 또는 약 3 일, 또는 약 4 일, 또는 약 5 일, 또는 약 6 일, 또는 약 1 주, 또는 약 2 주, 또는 약 3 주, 또는 약 1 개월, 또는 약 2 개월, 또는 약 3 개월, 또는 약 4 개월, 또는 약 5 개월, 또는 약 6 개월, 또는 약 7 개월, 또는 약 8 개월, 또는 약 9 개월, 또는 약 10 개월, 또는 약 11 개월, 또는 약 1 년 동안 생체 내에서 그의 G' 및/또는 G"를 실질적으로 유지할 수 있다.

구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 적어도 1 일, 또는 적어도 2 일, 또는 적어도 3 일, 또는 적어도 4 일, 또는 적어도 5 일, 또는 적어도 6 일, 또는 적어도 1 주, 또는 적어도 2 주, 또는 적어도 3 주, 또는 적어도 1 개월, 또는 적어도 2 개월, 또는 적어도 3 개월, 또는 적어도 4 개월, 또는 적어도 5 개월, 또는 적어도 6 개월, 또는 적어도 7 개월, 또는 적어도 8 개월, 또는 적어도 9 개월, 또는 적어도 10 개월, 또는 적어도 11 개월, 또는 적어도 1 년 동안 생체 내에서 그의 탄성을 실질적으로 유지할 수 있다.

구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 최대 1 일, 또는 최대 2 일, 또는 최대 3 일, 또는 최대 4 일, 또는 최대 5 일, 또는 최대 6 일, 또는 최대 1 주, 또는 최대 2 주, 또는 최대 3 주, 또는 최대 1 개월, 또는 최대 2 개월, 또는 최대 3 개월, 또는 최대 4 개월, 또는 최대 5 개월, 또는 최대 6 개월, 또는 최대 7 개월, 또는 최대 8 개월, 또는 최대 9 개월, 또는 최대 10 개월, 또는 최대 11 개월, 또는 최대 1 년 동안 생체 내에서 그의 탄성을 실질적으로 유지할 수 있다.

구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 약 1 일, 또는 약 2 일, 또는 약 3 일, 또는 약 4 일, 또는 약 5 일, 또는 약 6 일, 또는 약 1 주, 또는 약 2 주, 또는 약 3 주, 또는 약 1 개월, 또는 약 2 개월, 또는 약 3 개월, 또는 약 4 개월, 또는 약 5 개월, 또는 약 6 개월, 또는 약 7 개월, 또는 약 8 개월, 또는 약 9 개월, 또는 약 10 개월, 또는 약 11 개월, 또는 약 1 년 동안 생체 내에서 그의 탄성을 실질적으로 유지할 수 있다.

구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 적어도 1 일, 또는 적어도 2 일, 또는 적어도 3 일, 또는 적어도 4 일, 또는 적어도 5 일, 또는 적어도 6 일, 또는 적어도 1 주, 또는 적어도 2 주, 또는 적어도 3 주, 또는 적어도 1 개월, 또는 적어도 2 개월, 또는 적어도 3 개월, 또는 적어도 4 개월, 또는 적어도 5 개월, 또는 적어도 6 개월, 또는 적어도 7 개월, 또는 적어도 8 개월, 또는 적어도 9 개월, 또는 적어도 10 개월, 또는 적어도 11 개월, 또는 적어도 1 년 동안 생체 내에서 그의 점도를 실질적으로 유지할 수 있다.

구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 최대 1 일, 또는 최대 2 일, 또는 최대 3 일, 또는 최대 4 일, 또는 최대 5 일, 또는 최대 6 일, 또는 최대 1 주, 또는 최대 2 주, 또는 최대 3 주, 또는 최대 1 개월, 또는 최대 2 개월, 또는 최대 3 개월, 또는 최대 4 개월, 또는 최대 5 개월, 또는 최대 6 개월, 또는 최대 7 개월, 또는 최대 8 개월, 또는 최대 9 개월, 또는 최대 10 개월, 또는 최대 11 개월, 또는 최대 1 년 동안 생체 내에서 그의 점도를 실질적으로 유지할 수 있다.

구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 약 1 일, 또는 약 2 일, 또는 약 3 일, 또는 약 4 일, 또는 약 5 일, 또는 약 6 일, 또는 약 1 주, 또는 약 2 주, 또는 약 3 주, 또는 약 1 개월, 또는 약 2 개월, 또는 약 3 개월, 또는 약 4 개월, 또는 약 5 개월, 또는 약 6 개월, 또는 약 7 개월, 또는 약 8 개월, 또는 약 9 개월, 또는 약 10 개월, 또는 약 11 개월, 또는 약 1 년 동안 생체 내에서 그의 점도를 실질적으로 유지할 수 있다.

구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 적어도 1 일, 또는 적어도 2 일, 또는 적어도 3 일, 또는 적어도 4 일, 또는 적어도 5 일, 또는 적어도 6 일, 또는 적어도 1 주, 또는 적어도 2 주, 또는 적어도 3 주, 또는 적어도 1 개월, 또는 적어도 2 개월, 또는 적어도 3 개월, 또는 적어도 4 개월, 또는 적어도 5 개월, 또는 적어도 6 개월, 또는 적어도 7 개월, 또는 적어도 8 개월, 또는 적어도 9 개월, 또는 적어도 10 개월, 또는 적어도 11 개월, 또는 적어도 1 년 동안 생체 내에서 그의 부피를 실질적으로 유지할 수 있다.

구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 최대 1 일, 또는 최대 2 일, 또는 최대 3 일, 또는 최대 4 일, 또는 최대 5 일, 또는 최대 6 일, 또는 최대 1 주, 또는 최대 2 주, 또는 최대 3 주, 또는 최대 1 개월, 또는 최대 2 개월, 또는 최대 3 개월, 또는 최대 4 개월, 또는 최대 5 개월, 또는 최대 6 개월, 또는 최대 7 개월, 또는 최대 8 개월, 또는 최대 9 개월, 또는 최대 10 개월, 또는 최대 11 개월, 또는 최대 1 년 동안 생체 내에서 그의 부피를 실질적으로 유지할 수 있다.

구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 약 1 일, 또는 약 2 일, 또는 약 3 일, 또는 약 4 일, 또는 약 5 일, 또는 약 6 일, 또는 약 1 주, 또는 약 2 주, 또는 약 3 주, 또는 약 1 개월, 또는 약 2 개월, 또는 약 3 개월, 또는 약 4 개월, 또는 약 5 개월, 또는 약 6 개월, 또는 약 7 개월, 또는 약 8 개월, 또는 약 9 개월, 또는 약 10 개월, 또는 약 11 개월, 또는 약 1 년 동안 생체 내에서 그의 부피를 실질적으로 유지할 수 있다.

제조 방법

여기서 제공된 조직 충전제는 SPF 기초 성분을 부가적 물질과 함께 또는 없이 HA 기초 성분과 조합시킴에 의해 제조될 수 있다. 특정 구체예에서, SPF 및 HA 중 하나 또는 둘 다는 조합 이전에 가교결합될 수 있다. 일부 구체예에서, SPF 및 HA는 조합될 수 있고 이후 여기서 기술된 바와 같은 가교결합제와 가교결합될 수 있다. 일부 구체예에서, SPF는 가교결합제와 가교결합되고 이후 가교결합되거나 되지 않을 수 있는 HA에 부가되고, 이후 그의 조합은 부가적 가교결합으로 처리될 수 있다. 일부 구체예에서, HA는 가교결합제와 가교결합되고 이후 가교결합되거나 되지 않을 수 있는 SPF에 부가되고, 이후 그의 조합은 부가적 가교결합으로 처리될 수 있다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 상기한 바와 같이 SPF 기초 성분, 및 HA 기초 성분, 및 부가적 물질을 조합시킴에 의해 제조될 수 있다. 그러한 구체예에서, SPF 및 HA 중 하나 또는 둘 다는 조합 이전에 가교결합될 수 있다. 일부 구체예에서, SPF 및 HA는 부가적 물질와 조합될 수 있고 이후 여기서 기술된 바와 같이 가교결합제와 가교결합될 수 있다. 일부 구체예에서, SPF 및 HA를 조합시킨 후 부가적 물질이 부가될 수 있다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 중량 비로 0.1:1 내지 0.1:10, 또는 0.1:1 내지 0.1:100, 또는 0.1:1000; 1:1 내지 1:10, 또는 1:1 내지 1:100, 또는 1:1 내지 1:1000의 SPF 및 HA 중량 비 (SPF:HA)를 포함할 수 있다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 중량 비로 0.1:1 내지 0.1:10, 또는 0.1:1 내지 0.1:100, 또는 0.1:1000; 1:1 내지 1:10, 또는 1:1 내지 1:100, 또는 1:1 내지 1:1000의 SPF 및 HA(HA:SPF)를 포함할 수 있다.

일부 구체예에서, 얻어진 HA/SPF 조합 (가교결합된 또는 비-가교결합된)는 가령 초기 가교결합된 HA 및/또는 SPF의 기계적 블렌딩를 통해 균질화될 수 있다.

일부 구체예에서, SPF의 용액은 제공되고 가교결합제로 가교결합되어 가교결합된 SPF를 얻을 수 있고, 여기에 HA가 그의 가교결합된 형태, 비-가교결합된 형태, 또는 그의 혼합물로 부가될 수 있다. 얻어진 혼합물은 이후 균질화되고 부가적 물질 (예를 들어, 리도케인)이 부가될 수 있다.

일부 구체예에서, SPF의 용액은 제공되고 HA의 존재 하에 가교결합제로 가교결합되어 가교결합된 SPF-HA 조성물을 얻을 수 있고, 여기에 HA가 그의 비-가교결합된 형태로 부가되거나 부가되지 않을 수 있다. 얻어진 혼합물은 이후 균질화되고 부가적 물질 (예를 들어, 리도케인)이 부가될 수 있다.

일부 구체예에서 여기서 제공된 특이적 SPF 제제는 HA와 조합될 수 있거나, 또는 U.S. 특허 번호 8,288,347 또는 8,450,475, 또는 U.S. 특허출원 공개 번호 2006/0105022, 2016/0376382, 또는 2017/0315828에 규정된 제조 방법을 사용하여, 가교결합 절차를 사용할 수 있고, 이들은 그 전체가 여기서 참고로서 포함된다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 방법 살균 단계를 포함할 수 있고 여기서 조직 충전제 또는 그의 일부는, 예를 들어, 약 1 내지 약 15 분의 시간 동안 120 ℃ 내지 약 130 ℃의 온도 및 제곱 인치 당 약 12 내지 약 20 파운드의 압력에 노출된다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 방법은 탈기 단계를 포함할 수 있고 여기서 얻어진 조직 충전제 제조에서 사용된, 여기서 기술된 SPF, HA, 또는 SPF/HA 용액이 탈기된다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 실시예 5 내지 20에서 기술된 일반적 방법에 따라서 제조될 수 있다. 거기에 기술된 방법에서, 실크는 수성 용액, 수성/알콜 용액으로 제조될 수 있고, 여기서 알콜은 예를 들어 에탄올 또는 메탄올일 수 있다. 거기에 기술된 방법에서, 업계에서의 통상의 숙련가에 의해 이해되는 바와 같이 SPF에 SPF를, HA에 SPF를, 또는 HA에 HA를 가교결합시키기 위해, 가능하다면 여기서 기술된 가교결합 물질 중 어느 것이 사용될 수 있다.

치료 방법

구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 이를 필요로 하는 환자에서 하나 이상의 병태를 치료하는 방법에서 제공될 수 있다. 일부 구체예에서, 치료적으로 효과적인 양의 조직 충전제는 병태 또는 다른 조직 결핍을 치료하기 위해 이를 필요로 하는 환자의 조직 내로 송달될 수 있다.

여기서 사용된, 용어 "치료", "치료하는", 또는 "치료하는"은 환자에서 병태의 미용 또는 임상적 증상, 가령 연조직 병태의 감소 또는 제거, 또는 개체에서 병태의 미용 또는 임상적 증상의 온셋의 지연 또는 예방을 지칭한다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제에 의해 치료되는 병태는 연조직 병태를 포함할 수 있다. 연조직 병태는, 제한 없이, 신체 일부, 영역 또는 면적의 확대, 재구성, 질환, 장애, 결함, 또는 부전을 포함한다. 하나의 양상에서, 개시된 조직 충전제에 의해 치료되는 연조직 병태는, 제한 없이, 얼굴 확대, 얼굴 재구성, 얼굴 질환, 얼굴 장애, 얼굴 결함, 또는 얼굴 부전을 포함한다. 일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제에 의해 치료되는 연조직 병태는, 제한 없이, 피부 탈수, 피부 탄성 부족, 피부 거침, 피부 탄력 부족, 피부 튼 선 또는 자국, 피부 창백, 진피 디보트, 홀쭉한 볼, 홀쭉한 관자놀이, 얇은 입술, 요도 결함, 피부 결함, 유방 결함, 안구뒤 결함, 얼굴 접힘, 또는 주름을 포함한다. 일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제에 의해 치료되는 연조직 병태는, 제한 없이, 유방 부전, 결함, 질환 및/또는 장애, 가령, 예를 들어, 유방 확대, 유방 재구성, 유방 고정술, 소유방증, 흉부 형성저하, Poland의 증후군, 임플란트 합병증으로 인한 결함 가령 섬유막 수축 및/또는 파열; 얼굴 부전, 결함, 질환 또는 장애, 가령, 예를 들어, 얼굴 확대, 얼굴 재구성, Parry-Romberg 증후군, 루푸스 지방층염, 진피 디보트, 홀쭉한 볼, 홀쭉한 관자놀이, 얇은 입술, 코 부전 또는 결함, 안구뒤 부전 또는 결함, 얼굴 접힘, 라인 및/또는 주름 가령 미간 라인, 코입술 라인, 입주위 라인, 및/또는 마리오네트 라인, 및/또는 다른 얼굴의 윤곽 변형 또는 부전; 목 부전, 결함, 질환 또는 장애; 피부 부전, 결함, 질환 및/또는 장애; 다른 연조직 부전, 결함, 질환 및/또는 장애, 가령, 예를 들어, 상부 팔, 하부 팔, 손, 어깨, 등, 배를 포함하는, 엉덩이 몸통, 상부 다리, 종아리를 포함하는 하부 다리, 발바닥 지방 패드를 포함하는 발, 눈, 생식기, 또는 다른 신체 일부, 영역 또는 면적의 확대 또는 재구성, 또는 이들 신체 일부, 영역 또는 면적에 영향을 미치는 질환 또는 장애; 요실금, 변실금, 실금의 다른 형태; 및 위식도역류 질환 (GERD)를 포함한다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는, 제한 없이 피부, 진피 조직, 피하 조직, 피부 조직, 피하 조직, 경막내 조직, 근육, 힘줄, 인대, 섬유성 조직, 지방, 혈관 및 동맥, 신경, 및 활막 (진피내) 조직을 포함하는 연조직에 송달될 수 있다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 세포 부착, 이동, 및 증식 신호와 함께 인공적 생분해성 매트릭스를 제공함에 의해 치료를 돕기 위해 상처 내에 직접 배치될 수 있다. 일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 생분해성 메쉬 또는 다른 이식 재료 상 코팅될 수 있고, 또는 그 자체가 시트 또는 다른 구조 내로 성형될 수 있거나, 또는 수화된 형태로 유지될 수 있다.

일부 구체예에서, 여기서 개시된 방법 중 어느 것과 함께 사용된 조성물의 양은 소정의 변경 및/또는 개선, 소정의 병태 증상의 감소 및/또는 제거, 개인 및/또는 의사가 원하는 임상적 및/또는 미용 효과, 및 치료될 신체 일부 또는 영역에 기초하여 결정된다. 조성물 투여의 효과는 다음 임상적 및/또는 미용 측정 중 하나 이상에 의해 발현될 수 있다: 변경 및/또는 개선된 연조직 형상, 변경 및/또는 개선된 연조직 크기, 변경 및/또는 개선된 연조직 윤곽, 변경된 및/또는 개선된 조직 기능, 조직 내성장 지지 및/또는 신규한 콜라겐 침착, 조직 충전제의 지연된 접목, 개선된 환자 만족 및/또는 삶의 질, 및 이식가능 외부 재료의 사용 감소. 예를 들어, 유방 확대 절차에 대해, 상기 조성물및 방법의 효과는 다음 임상적 및/또는 미용 측정 중 하나 이상에 의해 발현될 수 있다: 증가된 유방 크기, 변경된 유방 형상, 변경된 유방 윤곽, 지연된 접목, 섬유막 수축 리스크 감소, 지방괴사성 낭포 형성 속도 감소, 개선된 환자 만족 및/또는 삶의 질, 및 유방 임플란트의 사용 감소.

일부 구체예에서, 얼굴 연조직 치료에서의 조직 충전제 및 방법의 효과는 다음 임상적 및/또는 미용 측정 중 하나 이상에 의해 발현될 수 있다: 얼굴 특징의 증가된 크기, 형상, 및/또는 윤곽 가령 입술, 볼, 관자놀이, 또는 눈 영역의 증가된 크기, 형상, 및/또는 윤곽; 얼굴 특징의 변경된 크기, 형상, 및/또는 윤곽 가령 입술, 볼, 관자놀이, 또는 눈 영역 형상의 변경된 크기, 형상, 및/또는 윤곽; 피부 내 주름, 접힘 또는 라인의 감소 또는 제거; 피부 내 주름, 접힘 또는 라인에 대한 저항성; 피부의 재수화; 피부에 대한 증가된 탄성; 피부 거침의 감소 또는 제거; 피부 탄력 증가 및/또는 개선; 튼 선 또는 자국의 감소 또는 제거; 피부 톤, 빛남 및/또는 광채의 증가 및/또는 개선; 피부 색상의 증가 및/또는 개선, 피부 창백의 감소 또는 제거; 조성물의 지연된 접목; 감소 부작용; 환자 만족 및/또는 삶의 질의 개선.

일부 구체예에서, 본발명은 조직 충전제 및 진피 영역을 수반하는 치료 방법을 제공한다. 여기서 사용된, 용어 "진피 영역"은 상피-진피 접합부를 포함하는 피부 및 표면적 피부 (유두 영역) 및 심부 피부 (망상 영역)를 포함하는 피부의 영역을 지칭한다. 피부는 세 개의 1차 층으로 구성된다: 표피, 감염에 대한 장벽을 제공함; 피부, 피부 부속기관에 대한 위치로서 작용; 및 피하 (피하 지방 층). 표피는 혈관을 함유하지 않고, 피부로부터의 확산에 의해 영향을 공급받는다. 표피를 구성하는 세포의 주요 타입은 각질 세포, 멜라닌세포, Langerhans 세포, 및 Merkels 세포이다.

피부는 결합 조직으로 구성되고 스트레스 및 스트레인으로부터 몸은 완충시키는 표피 아래의 피부 층이다. 피부는 기저막에 의해 표피에 단단히 연결된다. 피부는 또한 촉각 및 열을 제공하는 많은 기계적 자극의 수용기/신경을 가진다. 피부는 모낭, 땀샘, 피지선, 아포크린샘, 람프관 및 혈관을 함유한다. 피부 내 혈관은 영양 그 자신의 세포로부터 및 표피의 기저층으로부터 노폐물 제거를 제공한다. 피부는 구조적으로 두 영역으로 나뉜다: 유두 영역으로 불리는, 표피에 인접한 표면 영역 및 망상 영역으로서 공지된 심부의 더 두꺼운 영역.

유두 영역은 느슨한 유륜 결합 조직으로 구성된다. 유두 영역은 그의 손가락 가령 표피을 연장하는 돌기로 불리는 돌출부에 대해 명명된 것이다. 돌기는 피부에 표피와 서로 맞물린 "울퉁불퉁한" 표면을 제공하고, 피부의 두 층 사이의 연결을 강화시킨다. 망상 영역은 유두 영역보다 깊이 위치하고 통상 훨씬 더 두껍다. 망상 영역은 밀집한 불규칙 결합 조직으로 구성되고, 그 전체를 통해 짜는 콜라겐성, 탄성, 및 망상 섬유의 밀집 농축으로부터 그 이름이 유래한다. 이들 단백질 섬유는 피부에 강도, 연장성 및 탄성의 그의 특성을 부여한다. 또한, 모근, 피지선, 땀샘, 수용체, 손톱 및 혈관이 망상 영역 내에 위치한다. 임신으로 인한 튼 자국은 예를 들어 피부 내 위치한다.

피하는 피부 아래에 위치한다. 그의 목적은 피부의 진피 영역을 아래의 뼈 및 근육에 부착시키고 또한 피부에 혈관 및 신경을 공급하는 것이다. 피하는 느슨한 결합 조직 및 엘라스틴으로 구성된다. 주요 세포 타입은 섬유아세포, 마크로파지 및 지방세포이다 (피하는 50%의 신체 지방을 함유한다). 지방은 몸에 대한 패딩과 절연체로서 작용한다.

일부 구체예에서, 여기서 개시된 조직 충전제는 진피 영역 또는 피하 영역 내로의 주사에 의해 개체의 피부 영역 내로 투여된다. 일부 구체예에서, 여기서 개시된 조직 충전제는, 예를 들어, 상피-진피 접합부 영역, 유두 영역, 망상 영역, 또는 그의 조합 내로의 주사에 의해 개체의 진피 영역 내로 투여된다.

일부 구체예에서, 본발명은, 개체의 연조직 병태의 부위에 하나 이상의 여기서 개시된 조직 충전제를 투여하는 것을 포함하는, 개체의 연조직 병태를 치료하는 방법을 제공하고 여기서 상기 조성물의 투여는 연조직 병태를 개선시키고, 이에 의해 연조직 병태를 치료한다. 일부 구체예에서, 연조직 병태는 유방 조직 병태, 얼굴 조직 병태, 목 병태, 피부 병태, 상부 팔 병태, 하부 팔 병태, 손 병태, 어깨 병태, 등 병태, 복부를 포함하는 몸통 병태, 엉덩이 병태, 상부 다리 병태, 종아리 병태를 포함하는 하부 다리 병태, 발바닥 지방 패드 병태, 눈 병태를 포함하는 발 병태, 생식기 병태, 또는 또다른 신체 일부, 영역 또는 면적에서의 병태이다.

일부 구체예에서, 본발명은 피부 병태에 걸린 개체에게 하나 이상의 여기서 개시된 조직 충전제를 투여하는 것을 포함하는 피부 병태를 치료하는 방법을 제공하고, 여기서 조직 충전제의 투여는 피부 병태를 개선시키고, 이에 의해 피부 병태를 치료한다. 일부 구체예에서, 피부 병태는 피부 탈수를 포함하고, 상기 치료 방법은 피부 탈수에 걸린 개체에게 하나 이상의 여기서 개시된 조직 충전제를 투여하는 것을 포함하고, 여기서 조직 충전제의 투여는 피부를 재수화시키고, 이에 의해 피부 탈수를 치료한다. 이들 구체예의 또다른 양상에서, 피부 탄성 부족를 치료하는 방법은 피부 탄성 부족에 걸린 개체에게 여기서 개시된 조직 충전제를 투여하는 것을 포함하고, 여기서 조직 충전제의 투여는 피부 탄성을 증가시키고, 이에 의해 피부 탄성 부족을 치료한다. 이들 구체예의 여전히 또다른 양상에서, 피부 거침을 치료하는 방법은 피부 거침에 걸린 개체에게 여기서 개시된 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서 상기 조성물의 투여는 피부 거침을 감소시키고, 이에 의해 피부 거침을 치료한다. 일부 구체예에서, 피부 탄력 부족를 치료하는 방법은 피부 탄력 부족에 걸린 개체에게 여기서 개시된 조직 충전제를 투여하는 것을 포함하고, 여기서 조직 충전제의 투여는 피부를 더 팽팽하게 만들고, 이에 의해 피부 탄력 부족을 치료한다.

일부 구체예에서, 본발명은 피부 튼 선 또는 자국에 걸린 개체에게 하나 이상의 여기서 개시된 조직 충전제를 투여하는 것을 포함하는, 피부 튼 선 또는 자국를 치료하는 방법을 제공하고, 여기서 하나 이상의 조직 충전제의 투여는 피부 튼 선 또는 자국를 감소시키고 또는 제거하고, 이에 의해 피부 튼 선 또는 자국을 치료한다. 일부 구체예에서, 피부 창백을 치료하는 방법은 피부 창백에 걸린 개체에게 여기서 개시된 조직 충전제를 투여하는 것을 포함하고, 여기서 조직 충전제의 투여는 피부 톤 또는 광채를 증가시키고, 이에 의해 피부 창백을 치료한다. 일부 구체예에서, 피부 주름을 치료하는 방법은 피부 주름에 걸린 개체에게 여기서 개시된 조직 충전제를 투여하는 것을 포함하고, 여기서 조직 충전제의 투여는 피부 주름을 감소시키고 또는 제거하고, 이에 의해 피부 주름을 치료한다. 이들 구체예의 여전히 또다른 양상에서, 피부 주름을 치료하는 방법은 개체에게 여기서 개시된 조직 충전제를 투여하는 것을 포함하고, 여기서 조직 충전제의 투여는 피부가 피부 주름에 저항하도록 만들고, 이에 의해 피부 주름을 치료한다.

일부 구체예에서, 본발명은 여기서 개시된 조성물의 투여를 제공하고 여기서 그러한 투여는 신규한 콜라겐 침착 또는 형성을 촉진한다. 여기서 기술된 조직 충전제는 조직 내성장 및 콜라겐의 신규한 침착 또는 형성을 지지할 수 있다.

본발명의 하나의 이론에의 제한 없이, 여기서 기술된 조직 충전제 제조에서 사용된 SPFs의 분자량은 초기 염증성 반응을 뒤따르는 조직 증식 및 성숙 반응을 통해 얻어진 콜라겐의 침착 또는 형성을 개시하기 위해 선택된 조직에서 가벼운 염증성 반응을 제공하도록 조정될 수 있다. 사실, 더 고 분자량 SPFs는 증가된 염증성 반응을 유발할 수 있고 더 저 분자량 SPFs는 염증성 반응을 거의 또는 전혀 유발하지 않을 수 있다.

본발명의 하나의 이론에의 제한 없이, 여기서 기술된 조직 충전제는 결과적인 염증성 반응에 예상 외의 기여를 제공하고 이에 의해 증식 및 성숙 조직 반응을 통한 콜라겐 형성은 조절될 수 있는데 여기서 SPF 용액은 넓지 않은 좁은 다분산성을 가지기 때문이다. 구체예에서, 여기서 개시된 조직 충전제의 투여는 신규한 콜라겐 침착을 증가시킨다.

일부 구체예에서, 여기서 개시된 조직의 투여는 신규한 콜라겐 침착 또는 형성을 동일 또는 유사한, HA를 포함하지만 SPF가 없는 조직 충전제에 상대적으로 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 약 10%, 약 11%, 약 12%, 약 13%, 약 14%, 약 15%, 약 16%, 약 17%, 약 18%, 약 19%, 약 20%, 약 21%, 약 22%, 약 23%, 약 24%, 약 25%, 약 26%, 약 27%, 약 28%, 약 29%, 약 30%, 약 31%, 약 32%, 약 33%, 약 34%, 약 35%, 약 36%, 약 37%, 약 38%, 약 39%, 약 40%, 약 41%, 약 42%, 약 43%, 약 44%, 약 45%, 약 46%, 약 47%, 약 48%, 약 49%, 약 50%, 약 51%, 약 52%, 약 53%, 약 54%, 약 55%, 약 56%, 약 57%, 약 58%, 약 59%, 약 60%, 약 61%, 약 62%, 약 63%, 약 64%, 약 65%, 약 66%, 약 67%, 약 68%, 약 69%, 약 70%, 약 71%, 약 72%, 약 73%, 약 74%, 약 75%, 약 76%, 약 77%, 약 78%, 약 79%, 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 약 100% 만큼 증가시킨다.

일부 구체예에서, 여기서 개시된 조직 충전제의 투여는 신규한 콜라겐 침착 또는 형성을 동일 또는 유사한, HA를 포함하지만 SPF가 없는 조직 충전제에 상대적으로 적어도 1%, 적어도 2%, 적어도 3%, 적어도 4%, 적어도 5%, 적어도 6%, 적어도 7%, 적어도 8%, 적어도 9%, 적어도 10%, 적어도 11%, 적어도 12%, 적어도 13%, 적어도 14%, 적어도 15%, 적어도 16%, 적어도 17%, 적어도 18%, 적어도 19%, 적어도 20%, 적어도 21%, 적어도 22%, 적어도 23%, 적어도 24%, 적어도 25%, 적어도 26%, 적어도 27%, 적어도 28%, 적어도 29%, 적어도 30%, 적어도 31%, 적어도 32%, 적어도 33%, 적어도 34%, 적어도 35%, 적어도 36%, 적어도 37%, 적어도 38%, 적어도 39%, 적어도 40%, 적어도 41%, 적어도 42%, 적어도 43%, 적어도 44%, 적어도 45%, 적어도 46%, 적어도 47%, 적어도 48%, 적어도 49%, 적어도 50%, 적어도 51%, 적어도 52%, 적어도 53%, 적어도 54%, 적어도 55%, 적어도 56%, 적어도 57%, 적어도 58%, 적어도 59%, 적어도 60%, 적어도 61%, 적어도 62%, 적어도 63%, 적어도 64%, 적어도 65%, 적어도 66%, 적어도 67%, 적어도 68%, 적어도 69%, 적어도 70%, 적어도 71%, 적어도 72%, 적어도 73%, 적어도 74%, 적어도 75%, 적어도 76%, 적어도 77%, 적어도 78%, 적어도 79%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 적어도 100%, 적어도 125%, 적어도 150%, 적어도 175%, 적어도 200%, 적어도 225%, 적어도 250%, 적어도 275%, 또는 적어도 300% 만큼 증가시킨다.

일부 구체예에서, 여기서 개시된 조직 충전제의 투여는 신규한 콜라겐 침착 또는 형성을 동일 또는 유사한, HA를 포함하지만 SPF가 없는 조직 충전제에 상대적으로 최대 1%, 최대 2%, 최대 3%, 최대 4%, 최대 5%, 최대 6%, 최대 7%, 최대 8%, 최대 9%, 최대 10%, 최대 11%, 최대 12%, 최대 13%, 최대 14%, 최대 15%, 최대 16%, 최대 17%, 최대 18%, 최대 19%, 최대 20%, 최대 21%, 최대 22%, 최대 23%, 최대 24%, 최대 25%, 최대 26%, 최대 27%, 최대 28%, 최대 29%, 최대 30%, 최대 31%, 최대 32%, 최대 33%, 최대 34%, 최대 35%, 최대 36%, 최대 37%, 최대 38%, 최대 39%, 최대 40%, 최대 41%, 최대 42%, 최대 43%, 최대 44%, 최대 45%, 최대 46%, 최대 47%, 최대 48%, 최대 49%, 최대 50%, 최대 51%, 최대 52%, 최대 53%, 최대 54%, 최대 55%, 최대 56%, 최대 57%, 최대 58%, 최대 59%, 최대 60%, 최대 61%, 최대 62%, 최대 63%, 최대 64%, 최대 65%, 최대 66%, 최대 67%, 최대 68%, 최대 69%, 최대 70%, 최대 71%, 최대 72%, 최대 73%, 최대 74%, 최대 75%, 최대 76%, 최대 77%, 최대 78%, 최대 79%, 최대 80%, 최대 81%, 최대 82%, 최대 83%, 최대 84%, 최대 85%, 최대 86%, 최대 87%, 최대 88%, 최대 89%, 최대 90%, 최대 91%, 최대 92%, 최대 93%, 최대 94%, 최대 95%, 최대 96%, 최대 97%, 최대 98%, 최대 99%, 최대 100%, 최대 125%, 최대 150%, 최대 175%, 최대 200%, 최대 225%, 최대 250%, 최대 275%, 또는 최대 300% 만큼 증가시킨다.

일부 구체예에서, 여기서 개시된 조직 충전제의 투여는 신규한 콜라겐 침착 또는 형성을 동일 또는 유사한, HA를 포함하지만 SPF가 없는 조직 충전제에 상대적으로 약 1% 내지 약 10%, 약 10% 내지 약 50%, 약 10% 내지 약 100%, 약 50% 내지 약 150%, 약 100% 내지 약 200%, 약 150% 내지 약 250%, 약 200% 내지 약 300%, 약 350% 내지 약 450%, 약 400% 내지 약 500%, 약 550% 내지 약 650%, 약 600% 내지 약 700% 만큼 증가시킨다.

일부 구체예에서, 여기서 개시된 방법 중 어느 것에서 사용된 조직 충전제의 양은 전형적으로 치료적으로 효과적인 양이다. 여기서 사용된, 용어 "치료적으로 효과적인 양"은 "효과적인 양", "치료적으로 효과적인 투여량", 및/또는 "효과적인 투여량"과 동의어이고 이를 필요로 하는 환자에서 기대되는 생물학적, 미용, 또는 임상적 반응을 유도하는 조직 충전제의 양을 지칭한다. 비-제한적 예시로서, 효과적인 양은 여기서 개시된 임상적 및/또는 미용 측정치 중 하나 이상을 달성하기에 충분한 양이다. 개시된 방법의 특정 용도에 대해 투여되는 적절한 효과적인 양은 여기서 제공된 안내를 사용하여 본업계에서의 숙련가에 의해 결정될 수 있다. 예를 들어, 효과적인 양은 여기서 기술된 바와 같이 어느 및 모든 시험관 내 및 생체 내 어세이로부터 외삽될 수 있다. 본업계에서 숙련가는 개체의 병태를 치료법 과정 전체를 통해 모니터링할 수 있고 여기서 개시된 조성물의 효과적인 투여되는 양은 따라서 조정될 수 있음을 이해한다.

일부 구체예에서, 투여되는 조직 충전제의 양은 적어도 0.001 g, 또는 적어도 0.002 g, 또는 적어도 0.003 g, 또는 적어도 0.004 g, 또는 적어도 0.005 g, 또는 적어도 0.006 g, 또는 적어도 0.007 g, 또는 적어도 0.008 g, 또는 적어도 0.009 g, 또는 적어도 0.01 g, 또는 적어도 0.02 g, 또는 적어도 0.03 g, 또는 적어도 0.04 g, 또는 적어도 0.05 g, 또는 적어도 0.06 g, 또는 적어도 0.07 g, 또는 적어도 0.08 g, 또는 적어도 0.09 g, 또는 적어도 0.1 g, 또는 적어도 0.2 g, 또는 적어도 0.3 g, 또는 적어도 0.4 g, 또는 적어도 0.5 g, 또는 적어도 0.6 g, 또는 적어도 0.7 g, 또는 적어도 0.8 g, 또는 적어도 0.9 g, 또는 적어도 1 g, 또는 적어도 2 g, 또는 적어도 3 g, 또는 적어도 4 g, 또는 적어도 5 g, 또는 적어도 6 g, 또는 적어도 7 g, 또는 적어도 8 g, 또는 적어도 9 g, 또는 적어도 10 g, 또는 적어도 11 g, 또는 적어도 12 g, 또는 적어도 13 g, 또는 적어도 14 g, 또는 적어도 15 g, 또는 적어도 20 g, 또는 적어도 25 g, 또는 적어도 30 g, 또는 적어도 35 g, 또는 적어도 40 g, 또는 적어도 45 g, 또는 적어도 50 g, 또는 적어도 55 g, 또는 적어도 60 g, 또는 적어도 65 g, 또는 적어도 70 g, 또는 적어도 75 g, 또는 적어도 80 g, 또는 적어도 85 g, 또는 적어도 90 g, 또는 적어도 95 g, 또는 적어도 100 g이다.

일부 구체예에서, 투여되는 조직 충전제의 양은 최대 0.001 g, 또는 최대 0.002 g, 또는 최대 0.003 g, 또는 최대 0.004 g, 또는 최대 0.005 g, 또는 최대 0.006 g, 또는 최대 0.007 g, 또는 최대 0.008 g, 또는 최대 0.009 g, 또는 최대 0.01 g, 또는 최대 0.02 g, 또는 최대 0.03 g, 또는 최대 0.04 g, 또는 최대 0.05 g, 또는 최대 0.06 g, 또는 최대 0.07 g, 또는 최대 0.08 g, 또는 최대 0.09 g, 또는 최대 0.1 g, 또는 최대 0.2 g, 또는 최대 0.3 g, 또는 최대 0.4 g, 또는 최대 0.5 g, 또는 최대 0.6 g, 또는 최대 0.7 g, 또는 최대 0.8 g, 또는 최대 0.9 g, 또는 최대 1 g, 또는 최대 2 g, 또는 최대 3 g, 또는 최대 4 g, 또는 최대 5 g, 또는 최대 6 g, 또는 최대 7 g, 또는 최대 8 g, 또는 최대 9 g, 또는 최대 10 g, 또는 최대 11 g, 또는 최대 12 g, 또는 최대 13 g, 또는 최대 14 g, 또는 최대 15 g, 또는 최대 20 g, 또는 최대 25 g, 또는 최대 30 g, 또는 최대 35 g, 또는 최대 40 g, 또는 최대 45 g, 또는 최대 50 g, 또는 최대 55 g, 또는 최대 60 g, 또는 최대 65 g, 또는 최대 70 g, 또는 최대 75 g, 또는 최대 80 g, 또는 최대 85 g, 또는 최대 90 g, 또는 최대 95 g, 또는 최대 100 g이다.

일부 구체예에서, 투여되는 조직 충전제의 양은 약 0.001 g, 또는 약 0.002 g, 또는 약 0.003 g, 또는 약 0.004 g, 또는 약 0.005 g, 또는 약 0.006 g, 또는 약 0.007 g, 또는 약 0.008 g, 또는 약 0.009 g, 또는 약 0.01 g, 또는 약 0.02 g, 또는 약 0.03 g, 또는 약 0.04 g, 또는 약 0.05 g, 또는 약 0.06 g, 또는 약 0.07 g, 또는 약 0.08 g, 또는 약 0.09 g, 또는 약 0.1 g, 또는 약 0.2 g, 또는 약 0.3 g, 또는 약 0.4 g, 또는 약 0.5 g, 또는 약 0.6 g, 또는 약 0.7 g, 또는 약 0.8 g, 또는 약 0.9 g, 또는 약 1 g, 또는 약 2 g, 또는 약 3 g, 또는 약 4 g, 또는 약 5 g, 또는 약 6 g, 또는 약 7 g, 또는 약 8 g, 또는 약 9 g, 또는 약 10 g, 또는 약 11 g, 또는 약 12 g, 또는 약 13 g, 또는 약 14 g, 또는 약 15 g, 또는 약 20 g, 또는 약 25 g, 또는 약 30 g, 또는 약 35 g, 또는 약 40 g, 또는 약 45 g, 또는 약 50 g, 또는 약 55 g, 또는 약 60 g, 또는 약 65 g, 또는 약 70 g, 또는 약 75 g, 또는 약 80 g, 또는 약 85 g, 또는 약 90 g, 또는 약 95 g, 또는 약 100 g이다.

일부 구체예에서, 투여되는 조직 충전제의 양은 0.001 g 내지 0.01 g, 또는 0.01 g 내지 0.1 g, 또는 0.1 g 내지 1 g, 또는 1 g 내지 10 g, 또는 10 g 내지 20 g, 또는 20 g 내지 30 g, 또는 30 g 내지 40 g, 또는 40 g 내지 50 g, 또는 50 g 내지 60 g, 또는 60 g 내지 70 g, 또는 70 g 내지 80 g, 또는 80 g 내지 90 g, 또는 90 g 내지 100 g이다.

일부 구체예에서, 투여되는 조직 충전제의 부피는 적어도 0.01 mL, 또는 적어도 0.02 mL, 또는 적어도 0.03 mL, 또는 적어도 0.04 mL, 또는 적어도 0.05 mL, 또는 적어도 0.06 mL, 또는 적어도 0.07 mL, 또는 적어도 0.08 mL, 또는 적어도 0.09 mL, 또는 적어도 0.10 mL, 또는 적어도 0.15 mL, 또는 적어도 0.20 mL, 또는 적어도 0.25 mL, 또는 적어도 0.30 mL, 또는 적어도 0.35 mL, 또는 적어도 0.40 mL, 또는 적어도 0.45 mL, 또는 적어도 0.50 mL, 또는 적어도 0.55 mL, 또는 적어도 0.60 mL, 또는 적어도 0.65 mL, 또는 적어도 0.70 mL, 또는 적어도 0.75 mL, 또는 적어도 0.80 mL, 또는 적어도 0.85 mL, 또는 적어도 0.90 mL, 또는 적어도 0.95 mL, 또는 적어도 1 mL, 또는 적어도 2 mL, 또는 적어도 3 mL, 또는 적어도 4 mL, 또는 적어도 5 mL, 또는 적어도 6 mL, 또는 적어도 7 mL, 또는 적어도, 8 mL, 또는 적어도 9 mL, 또는 적어도 10 mL, 또는 적어도 15 mL, 또는 적어도 20 mL, 또는 적어도 25 mL, 또는 적어도 30 mL, 또는 적어도 35 mL, 또는 적어도 40 mL, 또는 적어도 45 mL, 또는 적어도 50 mL, 또는 적어도 55 mL, 또는 적어도 60 mL, 또는 적어도 65 mL, 또는 적어도 70 mL, 또는 적어도 75 mL, 또는 적어도 80 mL, 또는 적어도 85 mL, 또는 적어도 90 mL, 또는 적어도 95 mL, 또는 적어도 100 mL, 또는 적어도 110 mL, 또는 적어도 120 mL, 또는 적어도 130 mL, 또는 적어도 140 mL, 또는 적어도 150 mL, 또는 적어도 160 mL, 또는 적어도 170 mL, 또는 적어도 180 mL, 또는 적어도 190 mL, 또는 적어도 200 mL, 또는 적어도 210 mL, 또는 적어도 220 mL, 또는 적어도 230 mL, 또는 적어도 240 mL, 또는 적어도 250 mL, 또는 적어도 260 mL, 또는 적어도 270 mL, 또는 적어도 280 mL, 또는 적어도 290 mL, 또는 적어도 300 mL, 또는 적어도 325, 350 mL, 또는 적어도 375 mL, 또는 적어도 400 mL, 또는 적어도 425 mL, 또는 적어도 450 mL, 또는 적어도 475 mL, 또는 적어도 500 mL, 또는 적어도 525 mL, 또는 적어도 550 mL, 또는 적어도 575 mL, 또는 적어도 600 mL, 또는 적어도 625 mL, 또는 적어도 650 mL, 또는 적어도 675 mL, 또는 적어도 700 mL, 또는 적어도 725 mL, 또는 적어도 750 mL, 또는 적어도 775 mL, 또는 적어도 800 mL, 또는 적어도 825 mL, 또는 적어도 850 mL, 또는 적어도 875 mL, 또는 적어도 900 mL, 또는 적어도 925 mL, 또는 적어도 950 mL, 또는 적어도 975 mL, 또는 적어도 1000 mL이다.

일부 구체예에서, 투여되는 조직 충전제의 부피는 최대 0.01 mL, 또는 최대 0.02 mL, 또는 최대 0.03 mL, 또는 최대 0.04 mL, 또는 최대 0.05 mL, 또는 최대 0.06 mL, 또는 최대 0.07 mL, 또는 최대 0.08 mL, 또는 최대 0.09 mL, 또는 최대 0.10 mL, 또는 최대 0.15 mL, 또는 최대 0.20 mL, 또는 최대 0.25 mL, 또는 최대 0.30 mL, 또는 최대 0.35 mL, 또는 최대 0.40 mL, 또는 최대 0.45 mL, 또는 최대 0.50 mL, 또는 최대 0.55 mL, 또는 최대 0.60 mL, 또는 최대 0.65 mL, 또는 최대 0.70 mL, 또는 최대 0.75 mL, 또는 최대 0.80 mL, 또는 최대 0.85 mL, 또는 최대 0.90 mL, 또는 최대 0.95 mL, 또는 최대 1 mL, 또는 최대 2 mL, 또는 최대 3 mL, 또는 최대 4 mL, 또는 최대 5 mL, 또는 최대 6 mL, 또는 최대 7 mL, 또는 최대, 8 mL, 또는 최대 9 mL, 또는 최대 10 mL, 또는 최대 15 mL, 또는 최대 20 mL, 또는 최대 25 mL, 또는 최대 30 mL, 또는 최대 35 mL, 또는 최대 40 mL, 또는 최대 45 mL, 또는 최대 50 mL, 또는 최대 55 mL, 또는 최대 60 mL, 또는 최대 65 mL, 또는 최대 70 mL, 또는 최대 75 mL, 또는 최대 80 mL, 또는 최대 85 mL, 또는 최대 90 mL, 또는 최대 95 mL, 또는 최대 100 mL, 또는 최대 110 mL, 또는 최대 120 mL, 또는 최대 130 mL, 또는 최대 140 mL, 또는 최대 150 mL, 또는 최대 160 mL, 또는 최대 170 mL, 또는 최대 180 mL, 또는 최대 190 mL, 또는 최대 200 mL, 또는 최대 210 mL, 또는 최대 220 mL, 또는 최대 230 mL, 또는 최대 240 mL, 또는 최대 250 mL, 또는 최대 260 mL, 또는 최대 270 mL, 또는 최대 280 mL, 또는 최대 290 mL, 또는 최대 300 mL, 또는 최대 325, 350 mL, 또는 최대 375 mL, 또는 최대 400 mL, 또는 최대 425 mL, 또는 최대 450 mL, 또는 최대 475 mL, 또는 최대 500 mL, 또는 최대 525 mL, 또는 최대 550 mL, 또는 최대 575 mL, 또는 최대 600 mL, 또는 최대 625 mL, 또는 최대 650 mL, 또는 최대 675 mL, 또는 최대 700 mL, 또는 최대 725 mL, 또는 최대 750 mL, 또는 최대 775 mL, 또는 최대 800 mL, 또는 최대 825 mL, 또는 최대 850 mL, 또는 최대 875 mL, 또는 최대 900 mL, 또는 최대 925 mL, 또는 최대 950 mL, 또는 최대 975 mL, 또는 최대 1000 mL이다.

일부 구체예에서, 투여되는 조직 충전제의 부피는 약 0.01 mL, 또는 약 0.02 mL, 또는 약 0.03 mL, 또는 약 0.04 mL, 또는 약 0.05 mL, 또는 약 0.06 mL, 또는 약 0.07 mL, 또는 약 0.08 mL, 또는 약 0.09 mL, 또는 약 0.10 mL, 또는 약 0.15 mL, 또는 약 0.20 mL, 또는 약 0.25 mL, 또는 약 0.30 mL, 또는 약 0.35 mL, 또는 약 0.40 mL, 또는 약 0.45 mL, 또는 약 0.50 mL, 또는 약 0.55 mL, 또는 약 0.60 mL, 또는 약 0.65 mL, 또는 약 0.70 mL, 또는 약 0.75 mL, 또는 약 0.80 mL, 또는 약 0.85 mL, 또는 약 0.90 mL, 또는 약 0.95 mL, 또는 약 1 mL, 또는 약 2 mL, 또는 약 3 mL, 또는 약 4 mL, 또는 약 5 mL, 또는 약 6 mL, 또는 약 7 mL, 또는 약, 8 mL, 또는 약 9 mL, 또는 약 10 mL, 또는 약 11 mL, 또는 약 12 mL, 또는 약 13 mL, 또는 약 14 mL, 또는 약 15 mL, 또는 약 16 mL, 또는 약 17 mL, 또는 약 18 mL, 또는 약 19 mL, 또는 약 20 mL, 또는 약 21 mL, 또는 약 22 mL, 또는 약 23 mL, 또는 약 24 mL, 또는 약 25 mL, 또는 약 26 mL, 또는 약 27 mL, 또는 약 28 mL, 또는 약 30 mL, 또는 약 35 mL, 또는 약 36 mL, 또는 약 37 mL, 또는 약 38 mL, 또는 약 39 mL, 또는 약 40 mL, 또는 약 41 mL, 또는 약 42 mL, 또는 약 43 mL, 또는 약 44 mL, 또는 약 45 mL, 또는 약 46 mL, 또는 약 47 mL, 또는 약 48 mL, 또는 약 49 mL, 또는 약 50 mL, 또는 약 51 mL, 또는 약 52 mL, 또는 약 53 mL, 또는 약 54 mL, 또는 약 55 mL, 또는 약 56 mL, 또는 약 57 mL, 또는 약 58 mL, 또는 약 59 mL, 또는 약 60 mL, 또는 약 61 mL, 또는 약 62 mL, 또는 약 63 mL, 또는 약 64 mL, 또는 약 65 mL, 또는 약 66 mL, 또는 약 67 mL, 또는 약 68 mL, 또는 약 69 mL, 또는 약 70 mL, 또는 약 71 mL, 또는 약 72 mL, 또는 약 73 mL, 또는 약 74 mL, 또는 약 75 mL, 또는 약 76 mL, 또는 약 77 mL, 또는 약 78 mL, 또는 약 79 mL, 또는 약 80 mL, 또는 약 81 mL, 또는 약 82 mL, 또는 약 83 mL, 또는 약 84 mL, 또는 약 85 mL, 또는 약 86 mL, 또는 약 87 mL, 또는 약 88 mL, 또는 약 89 mL, 또는 약 90 mL, 또는 약 91 mL, 또는 약 92 mL, 또는 약 93 mL, 또는 약 94 mL, 또는 약 95 mL, 또는 약 96 mL, 또는 약 97 mL, 또는 약 98 mL, 또는 약 99 mL, 또는 약 100 mL, 또는 약 110 mL, 또는 약 120 mL, 또는 약 130 mL, 또는 약 140 mL, 또는 약 150 mL, 또는 약 160 mL, 또는 약 170 mL, 또는 약 180 mL, 또는 약 190 mL, 또는 약 200 mL, 또는 약 210 mL, 또는 약 220 mL, 또는 약 230 mL, 또는 약 240 mL, 또는 약 250 mL, 또는 약 260 mL, 또는 약 270 mL, 또는 약 280 mL, 또는 약 290 mL, 또는 약 300 mL, 또는 약 310 mL, 또는 약 320 mL, 또는 약 330 mL, 또는 약 340 mL, 또는 약 350 mL, 또는 약 360 mL, 또는 약 370 mL, 또는 약 380 mL, 또는 약 390 mL, 또는 약 400 mL, 또는 약 410 mL, 또는 약 420 mL, 또는 약 430 mL, 또는 약 440 mL, 또는 약 450 mL, 또는 약 460 mL, 또는 약 470 mL, 또는 약 480 mL, 또는 약 490 mL, 또는 약 500 mL, 또는 약 510 mL, 또는 약 520 mL, 또는 약 530 mL, 또는 약 540 mL, 또는 약 550 mL, 또는 약 560 mL, 또는 약 570 mL, 또는 약 580 mL, 또는 약 590 mL, 또는 약 600 mL, 또는 약 610 mL, 또는 약 620 mL, 또는 약 630 mL, 또는 약 640 mL, 또는 약 650 mL, 또는 약 660 mL, 또는 약 670 mL, 또는 약 680 mL, 또는 약 690 mL, 또는 약 700 mL, 또는 약 710 mL, 또는 약 720 mL, 또는 약 730 mL, 또는 약 740 mL, 또는 약 750 mL, 또는 약 760 mL, 또는 약 770 mL, 또는 약 780 mL, 또는 약 790 mL, 또는 약 800 mL, 또는 약 810 mL, 또는 약 820 mL, 또는 약 830 mL, 또는 약 840 mL, 또는 약 850 mL, 또는 약 860 mL, 또는 약 870 mL, 또는 약 880 mL, 또는 약 890 mL, 또는 약 900 mL, 또는 약 910 mL, 또는 약 920 mL, 또는 약 930 mL, 또는 약 940 mL, 또는 약 950 mL, 또는 약 960 mL, 또는 약 970 mL, 또는 약 980 mL, 또는 약 990 mL, 또는 약 1000 mL이다.

일부 구체예에서, 투여되는 조직 충전제의 부피는 0.01 mL 내지 0.10 mL, 또는 0.10 mL 내지 1 mL, 또는 1 mL 내지 10 mL, 또는 10 mL 내지 100 mL, 또는 50 mL 내지 100 mL, 또는 100 mL 내지 150 mL, 또는 150 mL 내지 200 mL, 또는 200 mL 내지 250 mL, 또는 250 mL 내지 300 mL, 또는 300 mL 내지 350 mL, 또는 350 mL 내지 400 mL, 또는 400 mL 내지 450 mL, 또는 450 mL 내지 500 mL, 또는 500 mL 내지 550 mL, 또는 550 mL 내지 600 mL, 또는 600 mL 내지 650 mL, 또는 650 mL 내지 700 mL, 또는 700 mL 내지 750 mL, 또는 750 mL 내지 800 mL, 또는 800 mL 내지 850 mL, 또는 850 mL 내지 900 mL, 또는 900 mL 내지 950 mL, 또는 950 mL 내지 1000 mL, 또는 1 mL 내지 25 mL, 또는 1 mL 내지 50 mL, 또는 1 mL 내지 75 mL, 또는 1 mL 내지 100 mL, 또는 10 mL 내지 25 mL, 또는 10 mL 50 mL, 또는 10 mL 내지 75 mL, 또는 100 mL 내지 250 mL, 또는 100 mL 내지 500 mL, 또는 100 mL 내지 750 mL, 또는 100 mL 내지 1000 mL이다.

일부 구체예에서, 본발명은 여기서 개시된 조직 충전제를 투여하는 것을 제공한다. 여기서 사용된, 용어 "투여하는 것"은 임상적으로, 치료적으로, 또는 실험적으로 유익한 결과를 잠재적으로 유발하는 여기서 개시된 조직 충전제를 개체에게 제공하는 송달 메카니즘을 의미한다. 조직 충전제를 개체에게 투여하기 위해 사용된 실제 송달 메카니즘은, 제한 없이, 병태 타입, 병태 위치, 병태 원인, 병태 경중도, 소정의 완화 정도, 소정의 완화 지속시간, 사용된 특정 조직 충전제, 사용된 특정 조직 충전제의 생분해성의 속도, 생흡수성, 생재흡수성, 등, 사용된 특정 조직 충전제 내 포함된 성분의 특성, 특정 투여 경로, 특정 특징, 환자의 이력 및 리스크 인자, 가령, 예를 들어, 연령, 중량, 일반적 건강 등, 또는 그의 조합을 포함하는 인자를 고려하여, 본업계에서 숙련가에 의해 결정될 수 있다. 이 구체예의 양상에서, 여기서 개시된 조직 충전제는 주사에 의해 환자의 영역에 투여되고, 여기서 영역은 피부, 진피 조직, 피하 조직, 피부 조직, 피하 조직, 경막내 조직, 근육, 힘줄, 인대, 섬유성 조직, 지방, 혈관 및 동맥, 신경, 또는 활막 (진피내) 조직 내일 수 있다.

일부 구체예에서, 환자에게 투여되는 조직 충전제의 투여 경로는 환자 및/또는 의사 및 처리된 신체 일부 또는 영역에 필요한 미용 및/또는 임상적 효과에 기초하여 결정된다. 여기서 개시된 조직 충전제는 제한 없이, 니들을 갖는 시린지, 카테터, 외용적으로, 또는 직접 외과적 이식을 포함하는 본업계에서의 숙련가에게 공지된 어느 수단에 의해 투여될 수 있다. 여기서 개시된 조직 충전제는 피부 영역 가령, 예를 들어, 진피 영역 또는 피하 영역 내로 투여될 수 있다. 또한, 여기서 개시된 조직 충전제는 특이적 치료법에 필요한 만큼 1회, 2회, 3회 또는 다회 투여될 수 있다.

일부 구체예에서, 여기서 개시된 조직 충전제는 주사가능하다. 여기서 사용된, 용어 "주사가능"은 니들 가령, 예를 들어, 미세 니들을 갖는 주사제 장치를 사용하여 개체의 피부 영역 내로 조직 충전제를 투여하기 위해 필요한 특성을 갖는 조직 재료를 지칭한다. 여기서 사용된, 용어 "미세 니들"는 27 게이지 이하인 니들을 지칭한다. 일부 구체예에서, 미세 니들은 27 게이지 내지 30 게이지 니들일 수 있다. 여기서 개시된 조직 충전제의 주사능력은 예를 들어, 가교결합의 정도, 아니면 다양한 G' 및/또는 G" 파라미터 조정, 비-가교결합된 중합체 (예를 들어, SPF 또는 HA) 부가, 등에 의해 여기서 개시된 조직 충전제의 특정 파라미터를 다양화하여 달성할 수 있다.

일부 구체예에서, 여기서 개시된 조직 충전제는 미세 니들을 통해 주사가능하다. 일부 구체예에서, 여기서 개시된 조직 충전제는, 예를 들어, 20 게이지, 또는 21 게이지, 또는 22 게이지, 또는 23 게이지, 또는 24 게이지, 또는 25 게이지, 또는 26 게이지, 또는 27 게이지, 또는 28 게이지, 또는 29 게이지, 또는 30 게이지, 또는 31 게이지, 또는 32 게이지, 또는 33 게이지, 또는 34 게이지의 니들을 통해 주사가능하다. 일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 20 게이지, 또는 21 게이지, 또는 22 게이지, 또는 23 게이지, 또는 24 게이지, 또는 25 게이지, 또는 26 게이지, 또는 27 게이지, 또는 28 게이지, 또는 29 게이지, 또는 30 게이지의 니들을 통해 주사가능하다.

일부 구체예에서, 여기서 개시된 조직 충전제는 약 0.8 내지 약 1.0 mL의 부피를 갖는 시린지로 주사가능하다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 예를 들어, 조직 확대 (예를 들어, 유방 또는 엉덩이 확대)의 목적으로 연조직 내 또는 주변의 빈 공간으로 송달될 수 있다. 여기서 기술된 조직 충전제를 그러한 빈 공간으로 송달할 때, 보다 큰 시린지 및 니들이 사용될 수 있다 (예를 들어, 27 게이지 이상인 니들).

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 상처 또는 상처에 인접한 의료 장치를 덮기 위해 니들 사용 없이 상처에 적용될 수 있다.

일부 구체예에서, 여기서 기술된 조직 충전제는 의료 장치의 표면에 적용될 수 있다.

이하의 실시예는 기술된 구체예의 제조 및 사용방법에 대한 완전한 개시 및 기술을 본업계에서의 숙련가에게 제공하기 위한 것이고, 발명자가 생각하는 그의 발명의 범위를 제한하는 것을 의도하지 않고 아래의 실험이 수행된 모든 또는 유일한 실험임의 나타내는 의도가 아니다. 사용된 수 (예를 들어 양, 온도, 등)에 대한 정확성을 보장하기 위해 노력을 기울였으나 일부 실험적 오차 및 편차가 고려되어야만 한다. 다르게 나타내지 않는 한, 부는 중량부이고, 분자량은 중량 평균 분자량이고, 온도는 섭씨이고, 압력은 대기압 또는 그 근처이다.

실시예

재료 및 방법

재료

히알루론산 (HA) 소듐 염 (분자량 750kDa - 1000kDa)은 Lifecore Biomedical (Chaska, MN)에서 구입했다. 상표 Juvederm® Ultra Plus XC (소량의 국소 마취제 (리도카인)를 포함하는 무색 히알루론산 겔)로 판매되는 주사 가능한 HA 겔은 Allergan (Irvine, CA)에서 구입했다. 실크 피브로인은 현장에서 처리되었다 (Medford, MA). 폴리 (에틸렌 글리콜) 디글리시딜 에테르 (PEGDE) 및 히알루로니다제 (Hylenex™)는 Sigma-Aldrich (St Louis, MO)에서 구입했다. 리도카인 하이드로클로라이드는 Spectrum Chemical (New Brunswick, NJ)에서 구입했다. 다양한 농도의 실크 용액을 위에서 설명한 방법에 따라 제조했다. 다른 모든 화학 물질과 시약은 VWR (Radnor, PA)에서 구입하여 받은대로 사용했다.

실크 -HA 하이드로 겔 제조를 위한 일반적인 방법

히알루론산은 실크 피브로인 단백질 기초 단편 및 가교제를 함유하는 0.1N 소듐 히드록사이드 용액에 다양한 하이드로 겔 제형에 따라 다양한 양으로 용해되었다. 혼합물을 55 ℃에서 75 분 동안 유지하여 가교결합 반응이 완료되도록 했다. 생성된 하이드로 겔을 실온으로 냉각시키고 진한 염산으로 pH 7.4로 조정한 다음 중화시키고 1x PBS로 밤새 희석시켰다. 이어서 하이드로 겔을 1x PBS에 대해 3 일 동안 투석하여 잔류 유리 가교제를 제거했다. 리도카인 하이드로클로라이드를 정제 된 하이드로 겔에 0.3 % w/w로 첨가했다. 실크 피브로인 단백질 기초 단편 및 HA의 최종 총 농도는 각 하이드로 겔에 대해 1x PBS로 26mg/ml로 조정되었다. 준비된 실크 -HA 하이드로 겔은 멸균 및 특성화를 위해 준비된 1mL 주사기에 분취되었다.

실시예 1: 겔의 틴달 평가

시각적 관찰을 추가로 지지하고 진피 충전제의 비교 성능 분석을 수행하기 위해, 틴달 효과의 정량적 분석을 수행한다. 광 산란 및 피부와의 광 상호작용에 대한 기존 과학 이해에 기초하여, 피부 내 틴달 효과를 정량하기 위해 (a) 비색법, 및 (b) 분광학에 기초한 두 별개의 접근법을 사용한다. 생체 내에서 틴달 효과를 측정 하기 위해 세 개의 별개의 정량적 파라미터 (아래에 요약)에 기초하여 이들 기술이 정의된다.

틴달 효과 시각적 점수:

스케일은 0.5씩 증가하는 1 내지 5의 범위를 가진다. 정상 피부 톤 및 청색 변색 없음인 주사 부위에 점수 1이 주어진다. 짙은 및 현저한 청색 변색에 최대 점수 5이 주어진다. 세 명의 독립적 관찰자가 점수 시험 샘플을 채점하기 위해 블라인드 스케일에 대해 훈련된다.

피부 색상의 청색 성분 -"b": 다양한 충전제로 주사된 피부 부위로부터 방출된 광의 청색 색상 성분을 정량하기 위해 색도계가 사용된다. 이는 L-a-b 색상 스케일의 "b" 성분을 사용함에 의해 달성된다.

피부로부터 방출된 "% 청색 광": 총 가시광선 범위 내에서 피부로부터 방출된 % 청색 광을 정량하기 위해 휴대용 분광 광도계가 사용된다. 이는 스펙트럼 400-490 nm 사이의 가시광선 하에서 면적을 적분하고 스펙트럼 (400-700 nm) 하에서 총 면적에 의해 정상화하여 달성된다.

본개시물의 겔 및 상업적으로 이용가능한 겔을, 선형 쓰레딩(threading) 기술을 사용하여 2 개월령 무모 래트의 대퇴부 내로 적절한 니들을 통해 진피내 주사한다. 임상적 미세 라인 절차를 모방하기 위해 겔을 표면적으로 이식한다. 겔 이식 48 h 후 틴달시험을 수행한다. 틴달 시험 수행 전, 틴달 효과의 대조를 개선시키기 위해 동물을 인간적으로 안락사시킨다.

0.5씩 증가하는1-5의 시각적 점수가 주사 부위 채점에 사용된다. 점수 1의 주사 부위는 피부 변색 없음을 나타내고, 점수 5의 주사 부위는 피부의 심한 청색 변색을 나타낸다. 색도계의 도움으로 주사 부위에 대한 분광학적 분석을 또한 수행한다. 피부 색상의 청색 성분 "b", 및 피부로부터 방출된 (400-700 nm) 청색 광의 %를 독립적으로 측정한다.

실시예 2: 생체 내에서 조직 충전제 시험

상기 기술에 따라서 제조된 조직 충전제를 진피내 이식, 근육 이식, 및 피하 주사 이후 시험할 수 있다.

예를 들어, 조직 충전제의 투여량을 시린지 내로 로딩하고 니들을 통해 주사 부위로의 조직 충전제의 흐름을 허용하는 적절히 크기 시린지를 사용하여 진피내, 근육내, 또는 피하 주사할 수 있다.

초기 주사제 대 대조 (예를 들어, 물 및/또는 시판 HA 기초 조직 충전제 가령 Juvederm) 이후, 주사 부위는 1 주 또는 2 주 간격으로 모니터링할 수 있고 여기서 세포독성, 발열성, 엔도톡신 형성, 급성 시스템 독성, 아만성 독성, 진피내 반응성, 유전독성, 및 피부 감작을 포함하는 생체적합성 문제에 대해 환자를 관찰한다.

또한, 주사 부위에서의 틴달링 또는 부피 손실, 탄성, 또는 퍼밍의 존재를 검사하여 조직 충전제의 물리적 특성을 모니터링할 수 있다.

실시예 3: 조직 충전제 유동학의 검사

여기서 기술된 조직 충전제의 유동학적 특성을 측정하기 위해 진동 평행 플레이트 유량계 (Anton Paar Physica MCR 301)를 사용할 수 있다. 1 mm 갭 높이에서 25 mm의 플레이트 직경을 사용할 수 있다. 25 ℃ 일정 온도에서 측정을 수행할 수 있다. 각각의 측정은 2%의 일정 스트레인 및 주파수의 대수적 증가에서 1 내지 10 Hz의 주파수 점진 변화, 이후 5 Hz의 일정 주파수와 스트레인의 대수적 증가에서 1 내지 300%의 스트레인 점진 변화로 구성될 수 있다. 그러한 분석의 결과로 각각의 시험된 조직 충전제의 저장 탄성률 G' 및 손실 계수 G'을 제공한다.

실시예 4: 실크/HA 용액 불투명도의 검사

표 18에 따라서 물 또는 포스페이트-완충된 식염수 내 HA 및 실크의 용액을 제조했다.

낮은 MW = 0 초과 및 약 25 kDa 사이 또는 여기서 다른 곳에서 정의된 바와 같은 실크 분자량;

중간 MW = 약 25 kDa 내지 약 60 kDa 또는 여기서 다른 곳에서 정의된 바와 같은 실크 분자량;

상기-표에서 기술된 상기 용액 결과를 도 26 및 27에 나타낸다. 도 26 및 27에서의 대조구 (도 26에서 비-라벨링된 플라스크 및 도 27에서 대조구 시린지)는 물 내 HA의 용액 (22 mg/mL)이었다. 도 26 및 27에 예시된 바와 같이, 실크/HA 용액은 HA 단독과 비교하여 균질하고 시각적으로 불투명했다.

실시예 5: 조직 충전제 제조 방법

여기서 기술된 바와 같은 실크/HA 조직 충전제는 다음 일반적 방법에 따라서 제조될 수 있다:

단계 a: 히알루론산은 NaOH 용액 내에 용해될 수 있고 여기서 기술된 바와 같은 실크의 용액에 부가;

단계 b: NaOH 내에 용해된 BDDE를 실크/HA/NaOH 용액에 부가;

단계 c: 가열을 동반한 혼합에 의해 가교결합;

단계 d: 금속 메쉬를 통해 통과시키고 물 내 팽창하도록 방치;

단계 e: 팽창시킨 겔을 에탄올 내 침전시킴;

단계 f: 에탄올, 물, 및 NaOH 용액으로 세척;

단계 g: 가열하면서 (50 ℃) 에탄올/NaOH의 용액 내에서 약 2 시간 동안 가교결합을 마무리;

단계 h: 용액 pH를 7로 중성화;

단계 i: 침전물을 세척 및 건조;

단계 j: 얻어진 건조 분말을 겔로 팽창하도록 완충된 0.9% NaCl 용액 내에 방치; 및

단계 k: 겔을 시린지 내로 충전하고 오토클레이브하여 얻어진 조직 충전제를 제공한다.

실시예 6: 조직 충전제 제조 방법

단계 a: 히알루론산은 NaOH 용액 내에 용해될 수 있고;

단계 b: NaOH 용액 내 실크 실크의 용액에 부가, 및 이후 NaOH 내에 용해된 BDDE를 실크/HA/NaOH 용액에 부가;

단계 c: 가열을 동반한 혼합에 의해 가교결합;

단계 e: 팽창시킨 겔을 에탄올 내 침전시킴;

단계 f: 에탄올, 물, 및 NaOH 용액으로 세척;

단계 h: 용액 pH를 7로 중성화;

단계 i: 침전물을 세척 및 건조;

실시예 7: 조직 충전제 제조 방법

단계 a: 히알루론산은 NaOH 용액 내에 용해될 수 있고;

단계 b: NaOH 내에 용해된 BDDE를 HA/NaOH 용액에 부가;

단계 c: 실크 용액을 단계 b의 용액에 부가 및 가열을 동반한 혼합에 의해 가교결합;

단계 e: 팽창시킨 겔을 에탄올 내 침전시킴;

단계 f: 에탄올, 물, 및 NaOH 용액으로 세척;

단계 h: 용액 pH를 7로 중성화;

단계 i: 침전물을 세척 및 건조;

실시예 8: 조직 충전제 제조 방법

단계 a: 히알루론산은 NaOH 용액 내에 용해될 수 있고;

단계 b: NaOH 내에 용해된 BDDE를 HA/NaOH 용액에 부가;

단계 c: 가열을 동반한 혼합에 의해 가교결합;

단계 d: 실크 용액을 가교결합된 HA/NaOH 용액에 부가, 및 금속 메쉬를 통해 통과시키고 물 내 팽창하도록 방치;

단계 e: 팽창시킨 겔을 에탄올 내 침전시킴;

단계 f: 에탄올, 물, 및 NaOH 용액으로 세척;

단계 h: 용액 pH를 7로 중성화;

단계 i: 침전물을 세척 및 건조;

실시예 9: 조직 충전제 제조 방법

단계 a: 히알루론산은 NaOH 용액 내에 용해될 수 있고;

단계 b: NaOH 내에 용해된 BDDE를 HA/NaOH 용액에 부가;

단계 c: 가열을 동반한 혼합에 의해 가교결합;

단계 e: 팽창시킨 겔을 에탄올 내 침전시킴;

단계 f: 에탄올, 물, 및 NaOH 용액으로 세척;

단계 g: 단계 f에서 제조된 재료에 실크 용액을 부가 및 가열하면서 (50 ℃) 에탄올/NaOH의 용액 내에서 약 2 시간 동안 가교결합을 마무리;

단계 h: 용액 pH를 7로 중성화;

단계 i: 침전물을 세척 및 건조;

단계 j: 얻어진 건조 분말을 겔로 팽창하도록 완충된 0.9% NaCl 용액 내에 방치;

실시예 10: 조직 충전제 제조 방법

단계 a: 소듐 히알루로네이트는 NaOH 용액 및 여기서 기술된 바와 같은 실크의 용액과 혼합될 수 있다;

단계 b: BDDE을 단계 a의 용액에 부가할 수 있다;

단계 c: 단계 b의 생성물을 반응하도록 방치;

단계 d: 암모니아를 단계 c의 혼합물에 부가하고 혼합물을 페트리 접시 내에 붓는다;

단계 e: 단계 d의 생성물을 필름으로 건조되도록 방치한다;

단계 f: 단계 e의 필름을 입자로 분할하고 식염수 내에서 팽창시킨다;

단계 g; 단계 f의 생성물을 시린지 및 오토클레이브에 부가한다;

단계 h (임의적): 단계 f의 생성물은 BDDE의 용액, 또는 여기서 기술된 다른 가교결합제를 사용하여 제 2, 최종 가교결합 절차로 처리할 수 있고, 세척한다.

실시예 11: 조직 충전제 제조 방법

단계 a: 소듐 히알루로네이트를 NaOH 용액과 혼합할 수 있다;

단계 b: 실크 용액을 단계 a의 용액에 부가할 수 있고 BDDE를 부가할 수 있다;

단계 c: 단계 b의 생성물을 반응하도록 방치;

단계 e: 단계 d의 생성물을 필름으로 건조되도록 방치한다;

실시예 12: 조직 충전제 제조 방법

단계 a: 소듐 히알루로네이트를 NaOH 용액과 혼합할 수 있다;

*567단계 b: BDDE을 단계 a의 용액에 부가할 수 있다;

단계 c: 단계 b의 생성물을 실크 용액에 부가하고 반응하도록 방치한다;

단계 e: 단계 d의 생성물을 필름으로 건조되도록 방치한다;

단계 h (임의적): 단계 f의 생성물을 BDDE의 용액, 또는 여기서 기술된 다른 가교결합제를 사용하여 제 2, 최종 가교결합 절차로 처리할 수 있고, 세척한다.

실시예 13: 조직 충전제 제조 방법

단계 a: 소듐 히알루로네이트를 NaOH 용액과 혼합할 수 있다;

*577단계 b: BDDE을 단계 a의 용액에 부가할 수 있다;

단계 c: 단계 b의 생성물을 반응하도록 방치;

단계 d: 단계 c의 생성물을 실크 용액에 부가하고 이후 암모니아를 그의 투석된 혼합물에 부가하고 혼합물을 페트리 접시 내에 붓는다;

단계 e: 단계 d의 생성물을 필름으로 건조되도록 방치한다;

실시예 14: 조직 충전제 제조 방법

단계 a: 실크 용액을 여기서 기술된 바와 같이 제조할 수 있고, 거기에 물 내 BDDE를 부가할 수 있다;

단계 b: HA을 단계 a의 용액에 부가할 수 있다;

단계 c: 단계 b의 혼합물을 교반할 수 있고 (예를 들어, 5 분) 및 약 1 일 동안 방치한다;

단계 d: 단계 c로부터 얻어진 겔은 1 주 동안 식염수 내 방치하여 얻어진 조직 충전제를 제공할 수 있다.

실시예 15: 조직 충전제 제조 방법

단계 a: BDDE를 물에 부가할 수 있다;

단계 b: 실크 용액을 단계 a의 용액에 부가할 수 있고, 거기에 HA를 이후 부가할 수 있다;

실시예 16: 조직 충전제 제조 방법

단계 a: BDDE를 물에 부가할 수 있다;

단계 b: HA을 단계 a의 용액에 부가할 수 있다;

단계 c: 실크 용액을 단계 b의 혼합물에 부가할 수 있고 얻어진 혼합물을 교반 (예를 들어, 5 분)할 수 있고 및 약 1 일 동안 방치한다;

실시예 17: 조직 충전제 제조 방법

단계 a: 여기서 기술된 바와 같은 실크 용액에 NaOH 용액 내 용해된 HA를 부가할 수 있다 (400 rpm에서 약 12 시간 동안 혼합);

단계 b: 단계 a의 용액을 탈기할 수 있다;

단계 c: 상기 단계 b의 용액을 여기서 기술된 가교결합제 (예를 들어, BDDE)와 50 ℃에서 약 10-20 분 동안 혼합할 수 있다;

단계 d: 가교결합된 겔을 리도케인 HCl와 혼합한다;

단계 e: 조정된, 가교결합된 용액의 투석을 3 일, 이후 PBS로 2 일, 이후 물로 1일 수행할 수 있다;

단계 f: 여과된 얻어진 생성물을 이후 동결건조하여 고체를 얻는다;

단계 g: 상기 고체를 PBS 내에 용해시키고 이후 배양한다;

단계 h (임의적): 단계 g의 생성물에 유리 HA을 부가할 수 있다;

단계 i: 단계 g 또는 h의 얻어진 생성물을 스팀 오토클레이빙에 의해 살균할 수 있다.

실시예 18: 조직 충전제 제조 방법

단계 a: HA는 NaOH 용액 내 용해될 수 있다 (400 rpm에서 약 12 시간 동안 혼합);

단계 b: 실크 용액을 단계 a의 용액에 부가할 수 있고 얻어진 혼합물을 탈기할 수 있다;

단계 d: 가교결합된 겔을 리도케인 HCl와 혼합한다;

단계 g: 상기 고체를 PBS 내에 용해시키고 이후 배양한다;

실시예 19: 조직 충전제 제조 방법

단계 a: HA를 NaOH 용액 내 용해시킬 수 있다 (400 rpm에서 약 12 시간 동안 혼합);

단계 b: 단계 a의 용액을 탈기할 수 있다;

단계 c: 실크 용액을 부가할 수 있다의 용액에 단계 b 및 얻어진 혼합물을 50 oC에서 약 10-20 분 동안 여기서 기술된 가교결합제 (예를 들어, BDDE)와 혼합할 수 있다;

단계 d: 가교결합된 겔을 리도케인 HCl와 혼합한다;

단계 g: 상기 고체를 PBS 내에 용해시키고 이후 배양한다;

실시예 20: 조직 충전제 제조 방법

단계 a: HA는 NaOH 용액 내 용해시킬 수 있다 (400 rpm에서 약 12 시간 동안 혼합);

단계 b: 단계 a의 용액을 탈기할 수 있다;

단계 d: 실크 용액을 단계 c의 생성물에 부가할 수 있고 혼합물을 리도케인 HCl와 혼합할 수 있다;

단계 g: 상기 고체를 PBS 내에 용해시키고 이후 배양한다;

실시예 21: 실크 및 BDDE로 가교결합된 히알루론산으로 구성된 진피 충전제 제제

재료: 1,4-부탄디올 디글리시딜 에테르 (BDDE; Sigma-Aldrich); 소듐 히알루로네이트 (HA; Lifecore); 실크, 6% 용액 (실크 Therapeutics); 소듐 히드록사이드, 0.1 N 용액 (BDH); 염산, 5 N (Ricca Chemical); 포스페이트 완충된 식염수 (PBS; 20x; VWR Life Science).

가변적 제제: 실크 분자량: 중간 및 낮은 MW 실크 용액 (6%); HA 분자량: 1.5 MDa 및 2.2 MDa; 실크 농도: 1%_v/v (0.6 mg/ml), 2%_v/v (6 mg/ml) 5%_v/v (3 mg/ml) 및 20%_v/v (12 mg/ml).

하이드로겔 가교결합: (a) 6% 실크 용액을 0.1 N 소듐 히드록사이드에 부가; (b) HA 분말을 위에서 제조된 용액에, 실크 함량에 따라서 200-400 rpm의 속도에서, 오버헤드 교반 하에서 점차 부가; 너무 많은 기포가 생기지 않도록 부드럽게 교반; HA가 완전히 용해될 때까지 교반 유지; (c) 1%_w/w BDDE을 상기 용액에 부가; (d) 50 ℃까지 가열 및 100-200 rpm에서 30 분 동안 교반 유지; (e) 가교결합된 겔을 30 ℃ 아래로 냉각; (f) 5N 염산 부가로 pH를 내지 7.0-7.4로 조정.

하이드로겔 투석: (a) 투석 카세트를 2 분 동안 수화; 과량 물을 닦아내고 빈 카세트의 총 질량 측정; (b) 대략 18 g 하이드로겔의 제제를 투석 카세트 내로 부가; 겔 로딩 후 카세트의 총 질량 측정; (c) 투석 카세트를 2 L의 1x PBS 완충제 내에 현탁 및 자기 교반을 200 rpm에서 설정; 투석이 시작하는 시간 기록 및 투석 4 hrs, 24 hrs, 및 48 hrs 후 PBS 완충제 교체; 72 hrs 후 겔 수집.

특성화: 전단 저장 탄성률 (G') 및 점도; 효소적 분해; 잔여 BDDE; 가교결합 밀도; 30-일 동물 연구; 세포독성; 박테리아 엔도톡신; 혼탁도.

점탄성 특성: 진피 충전제 제제의 저장 탄성률 (G') 및 복합 점도 (η)을 결정하기 위해 Discovery HR-1 하이브리드 유량계 (TA Instruments)을 사용했다. 디케이드 (decade) 간격 당 10 데이터 포인트로 0.1 Hz 내지 10 Hz 진동 주파수를 스윕(swip)함으로써 샘플을 시험했다. 5 Hz 전단 속도에서 데이터를 기록하고 비교했다. 일정 HA 농도 및 가변적 실크 농도를 갖는 하이드로겔 제제 (투석 후)에 대한 G' 및 γ 데이터를 표 19에 나타낸다. 이 배치에서, 1.5 MDa 분자량 HA을 사용했다.

HA 및 실크의 30 mg/ml의 일정 총 농도를 갖는 하이드로겔 제제 (투석 후)에 대한 G' 및 γ 데이터를 표 20에 요약한다.

하이드로겔 가변성: 실크 단백질을 갖는 및 없는 하이드로겔을 제조 및 투석했다. 최종 조성물은 각각 실크-HA 하이드로겔에 대해 33.3 mg/ml HA + 8 mg/ml 실크이고 HA 하이드로겔에 대해 HA의 33.3 mg/ml였다. 1 g ± 100 g의 위에서 제조된 하이드로겔을 20 ml 유리 바이알에 부가하고 이후 3 ml의 1x PBS 내 16 U/ml 히알루로니다제를 부가했다. 샘플을 37 ℃에서 3 일 배양한다. 대조 샘플을 또한 히알루로니다제 부가 없이 HA 하이드로겔을 사용하여 제조했다. 분해 프로파일을 도 28에 나타낸다. 히알루로니다제가 없는 대조 샘플은 3 일 배양 동안 분해되지 않았다. 배양의 첫 6 시간 이내, 하이드로겔은 완충제를 흡수하고 팽창하여 퍼센트 질량 증가를 유발했다. 실크-HA 하이드로겔 및 HA 하이드로겔은 3 일 배양 후 완전히 분해했다. 실크의 존재 하에, 하이드로겔은 순수한 HA 하이드로겔보다 더 빨리 소화되었다. 배양12 시간 후, 대략 90%의 실크-HA 하이드로겔이 효소에 의해 소화되었다.

잔여 가교결합제 (BDDE): 표 19에 나열한 샘플을 Millennium Research Laboratories, Inc. (MRL)에 의한 GC-FID를 사용하여 BDDE 잔류물에 대해 시험했다. MRL 시험 보고 MRL18JAN06은 모든 샘플 내 잔여 BDDE는 검출가능하지 않았고, 2 ppm 이하의 허용 기준을 충족하였음을 나타냈다.

가교결합 밀도: 표 19에 나열한 샘플을 히알루로니다제에 의해 추가로 완전히 소화시키고 퍼센트 개질의 면에서 가교결합 밀도를 결정하기 위해 NMR를 사용하여 분석했다. 시험 결과를 표 21에 나열한다 (MRL 시험 보고 MRL18JAN07).

동물 연구: 제품 안전성 문제를 해결하기 위해 WuXi AppTec Minneapolis, MN 시설에서 기니피그 모델를 사용하여 30-일 동물 연구를 수행했다. 조직 반응을 평가하기 위해 이 연구에서 두 종결 시점, 7 일 및 30 일이 있었다. 연구를 WuXi AppTec 보고 D28195 (Project C19879)에 요약한다. 진피내 주사제에 대해 두 대조 샘플 (표 19에서 Juvederm Ultra Plus 및 샘플 C2) 및 6 제제 (표 19에서 샘플 A - F)을 사용했다. 샘플 A - F 및 대조 샘플 C2을 주사 이전에 Nelson Laboratories, LLC에서 스팀 살균했다 (프로토콜 201707289). 간략한 연구 절차: 지속시간 당 24 마리 동물 12을 이 연구에서 사용했다. 각각의 동물은 쓰레딩(threading) 기술 (볼루스 대신 라인 주사)를 사용하여 6회 등에 진피내 주사를 맞았다: 척추의 한 측면에 하나의 대조 부위, 반대측면에 두 번째 대조 부위 (측면은 동물마다 택일적으로 할당됨) 및 주어진 시험 물품의 최대 하나의 주사로 네 개의 시험 부위 (동물 중 좌측 및 우측이 택일적으로 할당됨). 일반적 건강을 평가하기 위해 연구 전체를 통해 동물을 매일 관찰했다. 예정된 종결일에 동물을 인간적으로 안락사시켰다. 모든 동물로부터 임플란트 부위 및 둘러싸는 조직을 절개하고, 포르말린 내에 배치하고, 파라핀 블록으로 가공하고 이후 조직학적 평가를 수행했다. 대표적인 조직학 이미지 및 병리학적 발견을 표 22에 요약한다. 전체적으로, 임플란트 부위 중 어느 것에서도 패혈증 또는 면역학적 반응의 암시가 없었다.

박테리아 엔도톡신: 박테리아 엔도톡신 시험에 대해 세 개의 후 살균 샘플 (샘플 A, 샘플 E 및 샘플 C2)을 동물 연구에서 사용된7 제제로부터 선택했다 (표 19에 나열). 엔도톡신 수준을 결정하기 위해 역학적 탁도계 방법을 사용했다. 시험 결과를 표 23에 나열하고, 20 EU/ml (Nelson Labs 연구 보고 1006775-S01)의 허용 기준 미만이다.

생체적합성 - 세포독성: ISO-10993-5 세포독성 시험 (ISO MEM Elution를 사용하여 L-929 Mouse Fibroblast Cells)에 대해 네 개의 후 살균 샘플 (샘플 A, 샘플 B, 샘플 D 및 샘플 E)을 동물 연구에서 사용된7 제제 (표 19에 나열한)로부터 선택했다. 이들 샘플은 시험된 진피 충전제 제제에서 중 분자량 실크 및 저 분자량 실크의 최고 최저 실크 함량을 나타냈다. 시험 보고는 모든 시험 샘플이 비-세포독성을 의미하는 등급 0임을 나타냈다 (Wuxi AppTec Reports D28287-1, D28287-2, D28287-3, D28287-4).

혼탁도: 순수한 HA 하이드로겔은 천연 광 하에서 투명하다. HA을 실크 단백질과 가교결합시킨 때, 하이드로겔은 약하게 혼탁하게 되고 (cloudy) 혼탁도는 제제 내 총 실크 농도에 의존적이다. 혼탁도를 표준 투과 광 외에 전방 산란 광을 수집하는 능력을 가진 InGaAs 적분구를 구비한 Lambda X50S UV-Vis 분광 광도계 (PerkinElmer)로 측정했다. 실크-HA 하이드로겔의 혼탁도 측정치를 도 35에 나타낸다. 흑색 곡선은 표준 투과도이고 적색 곡선은 상당한 전방 산란을 나타내는 구에 의해 수집했다. 대조 샘플로서 실크가 없는 순수한 HA 하이드로겔을 사용했다. 도 36 내 곡선은 거의 동일하여 순수한 HA 겔의 매우 작은 산란을 나타낸다. 혼탁도 측정은 실크-HA 하이드로겔이 진피 충전제로서 사용된 때 틴달 효과를 제거할 수 있는 산란 광의 능력을 가짐을 암시했다.

결론: 다양한 실크 함량 및 일정 총 농도로 일정 HA 농도에 기초하여 진피 충전제 제제를 개발했다. 이들 제제는 다양한 용도로 유도하는 넓은 범위의 저장 탄성률, 점도 및 가교결합 밀도를 제공했다. 실크-HA 하이드로겔은 효소적으로 가역적이었다. 하이드로겔의 제제 투석 후 잔여 가교결합제는 허용 기준을 만족시켰다. 세포독성 시험은 실크 함량이 0.48 mg/ml 내지 9.6 mg/ml 범위의 실크-HA 하이드로겔은 세포독성이 없고 생체적합성임을 나타냈다. 30-일 동물 연구는 최대 9.6 mg/ml 실크 함량을 갖는 모든 제제는 패혈증을 유발하지 않았고 면역학적 반응이 없음을 입증했다.

실시예 22: 실크 및 PEGDE (PEGDGE)로 가교결합된 히알루론산으로 구성된 진피 충전제 제제

가교결합제: 폴리(에틸렌 글리콜) 디글리시딜 에테르 (PEGDE), 평균 분자량 Mn=500. 반응 조건: BDDE 가교결합 (실시예 21)과 동일. PEGDE의 총량은 몰로 BDDE과 동일.

실시예 23: 동물 연구 C20419

동물 연구 C20419에 대한 샘플의 제제 및 특성화를 표 25에 나타낸다:

도 37 - 46는 연구 결과를 나타낸다. 도 37는 대조 진피 충전제로 주사된 기니피그 내 진피내 영역의 대표적인 조직학 사진이다. 도 38는 본발명의 HA 진피 충전제로 주사된 기니피그 내 진피내 영역의 대표적인 조직학 사진이다 (24 mg/ml HA, PEGDE 가교결합된, 샘플 C4 - 표 25). 도 39는 본발명의 실크-HA 진피 충전제로 주사된 기니피그 내 진피내 영역의 대표적인 조직학 사진이다 (22.8 mg/ml HA, 1.2 mg/ml 실크, PEGDE 가교결합됨, 샘플 L - 표 25). 도 40는 본발명의 실크-HA 진피 충전제로 주사된 기니피그 내 진피내 영역의 대표적인 조직학 사진이다 (23.76 mg/ml HA, 0.24 mg/ml 실크, PEGDE 가교결합됨, 샘플 M - 표 25). 도 41는 본발명의 실크-HA 진피 충전제로 주사된 기니피그 내 진피내 영역의 대표적인 조직학 사진이다 (22.8 mg/ml HA, 1.2 mg/ml 실크, PEGDE 가교결합됨, 샘플 N - 표 25). 도 42는 본발명의 실크-HA 진피 충전제로 주사된 기니피그 내 진피내 영역의 대표적인 조직학 사진이다 (22.8 mg/ml HA, 1.2 mg/ml 실크, PEGDE 가교결합됨, 샘플 O - 표 25).

도 43 - 46는 이식 7-일 후 표 25 제제에 대한 조직학 결과의 그래프 도면이다 (점수: 0 - 정상; 1 - 최소; 2 - 가벼움; 3 - 중간; 및 4 - 심한). 도 43는 겔 분해에 대한 이식 7-일 후 조직학 결과를 나타내는 그래프이다; BDDE 가교결합된 제제는 거의 분해되어 있다. 도 44는 겔 이동에 대한 이식 7-일 후 조직학 결과를 나타내는 그래프이다. 도 45는 염증에 대한 이식 7-일 후 조직학 결과를 나타내는 그래프이다; 조직 괴사가 관찰되지 않았고, 혈액 응고가 관찰되지 않았고, 대조 제제 및 시험 제제의 일부에 대해 최소 콜라겐 침착이 관찰되었다. 도 46는 마크로파지에 대한 이식 7-일 후 조직학 결과를 나타내는 그래프이다.

실시예 24: PEGDE 가교결합된 실크-HA 하이드로겔의 특성: 1) 전단 저장 탄성률 (G'), 및 2) 투석 동안 팽창 비

진피 충전제 제조, 재료: 폴리(에틸렌 글리콜) 디글리시딜 에테르 (PEGDE), Mn = 500, Sigma-Aldrich; 소듐 히알루로네이트 (HA), Lifecore; 실크, 6% 용액, 실크 Inc.; 소듐 히드록사이드, 0.1 N 용액, BDH; 염산, 5 N, Ricca Chemical; 포스페이트 완충된 식염수 (PBS), 20x, VWR Life Science.

가변적 진피 충전제 제제: 실크 분자량: 중간 및 낮은 MW 실크 용액 (6%); HA 분자량: 700 KDa 및 1.5 MDa; 실크 농도 (초기): 0 - 15 mg/ml.

높은 농도에서의 하이드로겔 가교결합: 0.1 N 소듐 히드록사이드에 6% 실크 용액 부가; HA가 완전히 용해될 때까지 부드러운 교반 하에서 상기 제조된 용액에 100 mg/ml의 혼합된 분자량 HA (700 KDa/ 1.5 MDa = 90/10) 점차 부가; 상기 용액에 PEGDE 부가; 수조를 40 ℃로 가열 및 수조 내 45 분 동안 가교결합 유지; 가교결합된 겔을 30 ℃ 아래로 냉각; 5N 염산을 1x PBS에 부가, 겔을 40 mg/ml로 희석 및 최종 pH를 7.0-7.4로 조정.

낮은 농도에서의 하이드로겔 가교결합: 6% 실크 용액을 0.1 N 소듐 히드록사이드에 부가; 25 mg/ml의 1.5 MDa HA를 HA가 완전히 용해될 때까지 부드러운 교반 하에서 위에서 제조된 용액에 점차 부가; 상기 용액에 PEGDE 부가; 수조를 40 ℃로 가열 및 수조 내 45 분 동안 가교결합 유지; 가교결합된 겔을 30 ℃ 아래로 냉각; 5N 염산을 가교결합된 겔에 부가, 및 최종 pH를 7.0-7.4로 조정.

하이드로겔 투석: 투석 카세트(20 KDa MWCO)를 2 분 동안 수화; 과량 물을 닦아내고 빈 카세트의 총 질량 측정; 대략 18 g 하이드로겔의 제제를 투석 카세트 내로 부가; 겔 로딩 후 카세트의 총 질량 측정; 투석 카세트를 2 L의 1x PBS 완충제 내에 현탁 및 자기 교반을 200 rpm에서 설정; 투석 72 hrs 후 겔 수집.

점탄성 특성

진피 충전제 제제의 저장 탄성률 (G') 및 복합 점도 (η)을 결정하기 위해 Discovery HR-1 하이브리드 유량계 (TA Instruments)을 사용했다. 디케이드 (decade) 간격 당 10 데이터 포인트로 0.1 Hz 내지 10 Hz 진동 주파수를 스윕(swip)함으로써 샘플을 시험했다. 5 Hz 전단 속도에서 데이터를 기록하고 비교했다. 일정 HA 농도 및 가변적 실크 농도를 갖는 하이드로겔 제제 (투석 후)에 대한 G'를 도 47A 및 47B 표 19에 나타낸다. 높은 초기 HA 농도에서 PEGDE에 의해 가교결합된 하이드로겔에 대해, G'에 대한 실크 농도의 영향은 상대적으로 낮은 실크 대 총 HA의 비로 인해 최소이다. 이는 또한 실크 농도의 교체에 감수성이 없는 90%의 저 분자량 (700 KDa)를 함유하는 혼합된 HA에도 계속될 수 있다. 낮은 초기 HA 농도에서 PEGDE에 의해 가교결합된 하이드로겔에 대해, G'는 실크가 제제에 더 많이 부가될수록 증가했다. 실크 농도 변화는 초기 HA 농도가 낮을 때 G'에 더욱 영향을 미쳤고 또한 고 분자량 HA (1.5 MDa)에 더욱 영향을 미쳤다. 가교결합 절차 둘 다에 대해 G'에 대한 실크 분자량의 상당한 영향이 관찰되지 않았다.

투석 동안 팽창 비: 하이드로겔 제제에 부가된 실크의 양이 가교결합 절차 둘 다에 대해 투석 동안 겔 팽창에 영향을 미쳤음을 보여주는 뚜렷한 경향은 없었고 중 분자량 및 저 분자량 실크 사이의 상당한 차이가 없었다 (도 48A 및 48B).

하이드로겔 제제 내 실크 농도는 혼합된 HA을 높은 초기 HA 농도에서 PEGDE에 의해 가교결합된다면 G'에 최소 영향을 미치지만, 단일 높은 MW HA가 낮은 초기 HA 농도에서 가교결합된다면 G'에 비례한다. 겔 제제 내 실크의 분자량은 HA가 PEGDE에 의해 가교결합된다면 그 기여도를 G' 및 팽창에 비교시 상당한 차이를 가지지 않았다.

실시예 25: 실크-HA 진피 충전제 제제 내 실크 농도

재료: 실크, 6% 용액, 실크, Inc.; 포스페이트 완충된 식염수 (PBS), 20x, VWR Life Science; 가교결합된 히알루론산 (HA) 겔.

장비: 수분 분석기 HE53, Mettler Toledo; Cary 100 UV/Vis 분광 광도계.

검정 표준 곡선: 실크 용액의 실제 건조 함량 (mg/ml)을 결정하기 위해 중간 및 저 분자량 6% 실크 용액 둘 다에 대해 건조 함량을 측정; 1X PBS를 사용하여6% 실크 용액을 희석하여 일련의 표준 실크 용액을 형성 (예를 들어, 1 mg/ml 실크, 0.75 mg/ml 실크, 0.5 mg/ml 실크, 0.25 mg/ml 실크, 및 0 mg/ml 실크); 석영 큐벳 내에서 275 nm에서 각각의 표준 용액의 흡수 측정 - 흡수 측정은 스캔 200-800 nm, 5 nm 데이터 간격, 및 0.1 초의 평균 수집으로 수행될 수 있다; 실크 농도 (mg/ml)에 대해 275 nm에서 흡수를 플로팅하여 표준 곡선을 형성.

실크 농도의 측정치: 275 nm에서의 흡수가 0 및 1.0 사이가 되도록 HA 겔 샘플을 1X PBS로 희석 (예를 들어, 샘플은 겔 대 1X PBS의 1:12 비, 즉, 1200% 희석로 희석될 수 있다); 1X PBS 기준에 대해 200 nm - 800 nm 사이에서 실크-HA 겔 샘플에 대한 흡수 스캔을 수행, 각각의 겔 샘플에 대해 275 nm에서 흡수 피크 측정; 겔 샘플에 대한 흡수 신호를 실크가 없는 샘플에 대한 흡수 신호 사이의 차이 및 검정 곡선의 절편에 의해 교정, 실크가 없는 샘플이 0 mg/ml의 실크 농도를 가지도록 설정; 실크-HA 겔 샘플 내 실크 농도는 검정 곡선 및 희석 인자로부터 계산될 수 있다.

0 mg/ml 내지 1 mg/ml 범위의 실크의 상이한 농도를 갖는 일련의 표준 샘플에 대해 275 nm에서의 흡수를 측정함에 의해 검정 곡선을 형성했다. 중간 및 저 분자량 실크 용액에 대한 검정 곡선을 도 49A 및 49B에 나타낸다. 중 분자량 실크에 대해0.99947 및 저 분자량 실크에 대해 0.99949의 R² 값은 검정 곡선이 0-1 mg/ml의 실크 농도의 작용 범위 내에서 선형임을 입증한다. 이들 곡선은 겔 샘플 내 실크 농도를 결정하기 위해 사용될 수 있다.

HA-실크 하이드로겔의 실크 농도 결정: 희석된 실크-HA 하이드로겔의 275 nm에서의 흡수를 도 50A 및 50B에 나타낸 각각의 샘플에 대해 측정했다. 각각의 샘플의 실크 농도를 검정 곡선 및 희석 인자로 계산하고, 표 26에 요약한다.

표 26 - 검정 곡선으로부터 미지의 실크 농도를 갖는 실크-HA 겔에 대한 계산된 실크 농도

겔 샘플	이론 실크 농도 (mg/ml)	계산 실크 농도 (mg/ml)
XHA15M00SX17110201	0	0
XHA15M01SL17103001	0.6	0.49
XHA15M02SL17110201	1.2	1.26
XHA15M05SL17110201	3	3.08
XHA15M01SM17103001	0.6	0.57
XHA15M10SM17103001	6	6.21
XHA15M20SM17103001	12	13.83

실시예 26: 실크-HA 진피 충전제 제제: 겔 불투명도

재료: 가교결합된 히알루론산 (HA) 겔; 포스페이트 완충된 식염수 (PBS), 20x, VWR Life Science.

장비: Cary 100 UV/Vis 분광 광도계.

샘플 제조: 샘플 내에 최소 양의 기포가 있도록 약 2 mL HA의 겔을 깨끗한 석영 큐벳 내로 주사; 18 G 니들을 사용하는 주사제는 샘플 내 거품의 양 감소를 도울 수 있다; 1X PBS의 블랭크 기준 샘플을 제 2 깨끗한 석영 큐벳에 부가할 수 있다 (주의: 불투명도 측정을 위해, 플라스틱 큐벳이 사용될 수 있는데 플라스틱 큐벳은 가시적 범위, 400 nm-800 nm 내에서 흡수를 가지지 않기 때문이다).

겔 불투명도의 측정치: 5 nm 데이터 간격 및 0.1 초의 평균 시간으로 X-스캔 범위 200 nm 내지 800 nm을 설정; Y-모드를 투과 광의 측정치에 대해 %T로 선택 (주의: 흡수가 또한 측정될 수 있고 %T은 흡수 값으로부터 계산될 수 있다); 1X PBS 기준 표준에 대해 겔 샘플에 대해 스캔 수행; 데이터는 csv 파일로서 저장될 수 있고 스펙트럼이 플로팅될 수 있다.

표준 투과 광에 대해 UV/Vis 분광 광도계를 사용하여 겔 불투명도를 측정할 수 있다. 광학적으로 투명한 샘플은 100%의 광을 투과하고, 반면 약간 혼탁 또는 뿌연 샘플은 단지 광의 일부를 투과시킬 수 있다. 도 51은 실크를 갖는 및 실크가 없는 HA 하이드로겔의 혼탁도 측정을 나타낸다. 청색 곡선은 3 mg/mL 실크 및 26 mg/ml HA를 갖는 실크-HA 겔 샘플에 대한 투과 광에 대한 % 투과도를 나타낸다. 적색 곡선은 실크가 없는 및 20 mg/ml HA를 갖는 샘플에 대한 투과 광을 나타내고, 실크를 갖는 샘플보다 더 많은 광 투과를 나타낸다. 혼탁도 측정은 실크-HA 겔이 실크가 없는 HA 겔보다 더 많은 가시광선을 산란시키는 능력을 가진다는 것을 암시한다.

실시예 27: NMR에 의해 결정된 HA 하이드로겔의 개질 (MoD)의 정도

개질 (MoD)의 정도는 HA 반복 단위의 몰에 대한 모든 연결 가교결합제 분자의 화학양론적 비로서 정의된다. 가교- 및 모노-연결 링커는 둘 다 MoD 내에 포함된다. MoD는 2.1 ppm에서 HA 내 N-아세틸 기 및 1.7 ppm에서 BDDE 가교결합제, 또는 3.0-4.5 ppm에서 PEGDE 가교결합제로부터의 신호를 적분하여 ¹H NMR 스펙트럼으로부터 결정된다.

효소적 분해 이전에, HA 하이드로겔을 우선 다시 PBS (1X, 2 L x 5) 용액에 대해 투석하여 유리 가교결합제를 제거했다. Slide-A-Lyzer 투석 카세트 (MWCO 3.5 K, Thermo Scientific, Rockford, IL)을 사용하였고, PBS 용액을 RT에서 72 h 동안 교반했다. 투석 후, 1 mL의 HA 하이드로겔 용액을 취하고 Labconco FreeZone 동결건조기 (2.5 L) 내에서 동결건조하여 건조 분말을 얻었다.

NMR 샘플을 제조하기 위해, 10 mg의 건조 분말을 NMR 튜브 (5 mm, Wilmad- LabGlass) 내로 배치하고 0.6 mL의 중수소 옥사이드 (D₂O, Alfa Aesar, Ward Hill, MA) 내 히알루로니다제 (MP Biomedicals, Solon, OH) 용액을 부가했다. 히알루로니다제의 양은 1 mg HA 당 5 U였다. NMR 튜브를 37 ℃ 밤새 배양하여 모든 HA가 분해되도록 했다. Varian MR 400 MHz 자동화된 NMR 시스템 상에 NMR 스펙트럼을 기록했다. 완화 지연 시간은 1 s이고 스캔의 수는 256이다. 모든 데이터를 MestReNova 소프트웨어 (에디션 12.0.2)를 사용하여 가공했다.

실시예 28: 실크-HA 2-단계 가교결합 공정

HA에 대한 실크 결합의 효율을 개선시키기 위해 2-단계 가교결합 공정으로 실크-HA 하이드로겔이 형성될 수 있다. 주어진 제제에 대해, 제 1 단계에서, 모든 실크 단백질 및 저 분자량 HA의 작은 일부를 pH 10에서 NaOH 용액에 부가하고, 이후 가교결합제의 일부와 반응시킨다. 특정 이론에 속박되는 것을 의도하지 않으면서, 이 단계 동안, 가능한 많은 실크가 가교결합제와 반응한다고 생각된다. 제 2단계에서, 단계-1로부터의 생성물을 희석하고 pH를 13으로 증가시키기 위해 NaOH 용액을 부가한다. 잔존 저 분자량 HA, 모든 고 분자량 HA, 및 잔존 가교결합제를 이후 상기 용액에 부가하고, 가교결합 반응을 완성한다.

실시예 29: HA 하이드로겔 합성

HA 하이드로겔은 상이한 HA 분자량, 가교결합제, 반응 시간, 반응 온도, HA 농도, 가교결합제 비, 혼합 공정 및 교반 방법을 사용하여 합성했다. 표 27 및 28는 사용된 다양한 반응 조건 및 얻어진 다양한 하이드로겔을 나타낸다.

HA MW	700 k, 1.5 M, 2.2 M, 3M, 또는 임의의 비에서 상이한 MW를 갖는 혼합물
가교결합제	PEG500DE, 및 BDDE
반응 시간	30 min, 60 min, 90 min, 120 min, 또는 240 min
반응 온도	40 ℃, 또는 50 ℃
HA 농도	30 mg/ml, 90 mg/ml, 100 mg/ml, 및 140 mg/ml
가교결합제 비	7 Wt.% 또는 10 Wt.%
혼합 공정	HA 및 가교결합제를 함께 예비혼합 또는 가교결합제를 HA 용액 내로 조금씩 부가
교반	기계적 교반과 함께 또는 없이

실시예 29: 실크/HA 하이드로겔 합성

실크 진피 충전제는 가교결합된 히알루론산(HA)과 실크 피브로인 단편이 HA에 공유 결합되어 구성된다. 가교결합제는 생체적합성 및 생체 흡수성 기능화된 폴리 (에틸렌 글리콜) (PEG)이다. 가교결합제는 HA 분자와 실크 피브로인을 HA 분자에 연결하여 주사 가능한 하이드로 겔을 형성한다. 주사 중 불편함을 줄이기 위해 리도카인도 제제에 추가된다. 진피 충전제는 1mL 주사기에 로딩되고 멸균 가능하며 임상 연구에서 30G 또는 27G 니들을 통해 주사할 수 있다.

HA는 콜라겐 침착을 촉진하지 않는 최소한의 국소 조직 반응을 유도한다. 실크 단백질은 이식의 결과로 일시적이고 가벼운 염증 반응을 유도하여 국소 이식 주변의 대식세포 및 섬유아세포를 모집 및 활성화할 수 있다. 이러한 일시적인 현상은 궁극적으로 콜라겐과 새로운 내인성 조직의 침착으로 이어진다. 진피 충전제에서 이 과정은 피부 윤곽을 개선하고 흉터, 부상 또는 선으로 인한 피부의 함몰을 줄일 수 있는 가능성이 있다.

실크 피브로인 단편은 틴달 효과에 영향을 줄 수 있다. 틴달 효과는 콜로이드 또는 현탁액의 미세 입자에 의한 빛의 산란을 나타낸다. 산란광의 세기는 파장의 4승에 반비례한다. 청색광은 파장이 짧고 강도가 높아 산란되기 때문에 산란된 빛은 파란색으로 보이다. 틴달 효과는 때때로 진피 충전제를 적용한 후 사람에게서 관찰된다. 틴달 효과는 표재 피부에 주사하거나 피부색이 창백할 때 더욱 현저한다. HA의 하이드로 겔 입자 현탁액은 UV 및 가시적 흡수가 없다. 실크 진피 충전제는 약 275nm의 UV 흡수 대역과 가시 범위의 넓은 흡수를 갖는 실크 피브로인 단편과 실크 섬유를 포함한다. 이들은 틴달 효과를 완화하거나 궁극적으로 제거하기 위해 도움이 될 수 있다.

특정 이론에 얽매이지 않고 실크 진피 충전제의 점탄성 특성은 공유 결합된 실크 피브로인 단편에 의해 또한 제어될 수 있다고 생각된다. 기존의 HA 진피 충전제 제품은 가교결합 HA의 농도를 변경하는 등 점탄성 특성(저장 탄성률 및 손실 탄성률)을 제어하는 방법이 제한되어 있다. 유리 HA를 추가하면 주사 중 힘이 감소할 수 있지만 유리 HA는 생체 내에서 빠르게 분해되므로 점탄성을 제어하는데 도움이 되지 않다. 실크 진피 충전제는 HA에 공유 결합된 실크 피브로인 단편을 포함한다. 복합 실크 피브로인 단편은 규칙적인 가교결합 HA 3D 네트워크를 변경하는 보다 복잡한 구조를 형성한다. 이것은 다른 분자량(분자 사슬 길이) 또는 실크 피브로인 단편의 다른 백분율을 갖는 실크 피브로인 단편의 가교에 의해 제어될 수 있다.

실크 진피 충전제의 점탄성과 생체 내 지속성은 가교결합제의 분자량(반복 단위)을 변경하여 제어할 수도 있다. 기존의 진피 충전제 제품은 가교결합제로 1,4-부탄디올 디글리시딜 에테르(BDDE)를 사용한다. BDDE는 진피 충전제의 점탄성과 생체 내 진피 충전제의 지속성을 좌우하는 변형 정도(MoD)를 제어할 수 있는 유연성이 없는 저분자 디에폭시이다. 실크 진피 충전제는 생체적합성 폴리 (에틸렌 글리콜) 디글리시딜 에테르 (PEGDE)를 가교결합제로 사용한다. PEGDE는 디에폭시 기능화된 선형 올리고머이다. BDDE보다 분자 사슬이 더 길고 실크 피브로인 단편으로 HA 분자와 HA 사이의 거리를 변경하여 하이드로겔 구조를 제어할 수 있는 유연성을 제공하는 EO 반복 단위의 수를 변경하여 조정할 수 있다. 다른 수의 에틸렌 옥사이드(EO) 반복 단위는 MoD를 제어할 수 있는 HA 및 실크 피브로인 단편에 접근하고 반응하는 에폭시 그룹의 능력을 변경한다.

실크 진피 충전제는 주사 가능한 하이드로겔이다. 95:5의 일정한 질량비로 HA와 실크 피브로인 단편으로 구성되어 있다. HA의 분자량은 약 850KDa이고 실크 피브로인 단편의 분자량은 약 14kDa이다. 하이드로겔은 PEGDE에 의해 가교결합된다. PEGDE의 분자량은 약 500 Da이다. 최종 제품에는 약 26mg/mL의 총 HA 및 실크 피브로인 단편과 1x PBS에 0.3% 리도카인이 포함되어 있다.

실크 진피 충전제 제제에서 HA 분자는 가교되고 실크 피브로인 단편은 또한 PEG 브릿지를 통해 하이드록실 그룹의 HA 분자에 공유 결합된다. 실크 피브로인 단편의 PEGDE 브리지에 대한 공유 접합은 LC MS/MS 방법으로 입증된다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 진피 충전제의 조성을 분석하여 겔에서 가교결합된 실크의 존재를 결정했다. 젤의 HA는 먼저 히알루로니다제를 사용하여 소화된 다음 프로테아제의 조합(트립신/Lys-C, 키모트립신, Glu-C)을 사용하여 소화되었다. 그런 다음 혼합물을 Q Exactive 질량 분석기에서 수행된 MS/MS 분석과 함께 Ultimate3000 HPLC 시스템에서 C18 역상(RP) 컬럼을 사용하여 분석했다.

도 52에 나타낸 바와 같이, PEG 가교결합제는 m/z가 89.06, 133.08 및 177.11인 1차 이온을 갖는 반면, 실크 단편의 1차 이온은 136.07 및 182.08이다. 임의의 특정 이론에 얽매이기를 바라지 않고, 적어도 일부 구체예에서 LC 스펙트럼은 유리 PEG 단편 및/또는 유리 실크 피브로인 단편을 명확하게 나타낼 수 없다고 생각된다. 또한 임의의 특정 이론에 얽매이지 않고, 적어도 일부 구체예에서, 겔 내의 실크는 모두 PEG와 공유적으로 접합될 수 있다고 생각된다. 또한 임의의 특정 이론에 구속되기를 바라지 않고, 적어도 일부 구체예에서 23.22분의 체류 시간(m/z 435.64, 강조 표시)에서 피크의 MS/MS 스펙트럼이 PEG 및 실크 피브로인 단편 모두의 강한 신호를 나타내고, 이는 실크가 PEG와 가교되어 있음을 추가로 증명한다고 생각된다.

본 명세서에 기재된 바와 같이 제조된 하이드로겔을 1-mL 주사기에 로딩하고, 과열수로 멸균하고, 기계적 특성을 특성화했다. 저장 탄성률(G')는 콘-플레이트 기하학을 갖는 TA Instruments Discovery HR-1 Rheometer 를 사용하여 측정되었다. 약 0.8mL의 하이드로겔 샘플을 전체 샘플 플레이트를 덮도록 로딩했다. 5Hz의 진동 주파수에서 측정된 G'는 약 150Pa이다. MoD는 HA 이당류 단위의 총 수에 대한 연결된 가교결합제 분자 수의 백분율로 정의된다. 이것은 가교결합제와 HA의 특징적인 화학적 이동을 사용하여 NMR에 의해 결정할 수 있다. 상기 제조된 하이드로겔의 MoD는 약 9%이다. 주사힘(IF)은 Brookfield Engineering Texture Analyzer를 사용하여 측정되었다. 샘플 주사기 배럴을 고정 장치에 장착했다. 플런저 로드는 피스톤에 의해 구동되어 10mm 이동 거리에 대해 0.2mm/s의 속도로 30G 니들을 통해 하이드로겔을 압출했다. 피스톤에 가해진 힘은 지속적으로 기록되었다. 상기 제조된 하이드로겔의 평균 주사힘은 약 39N이다.

제품 안전 문제를 해결하기 위해 기니피그 모델을 사용한 12개월 동물 연구가 수행되었다(WuXi AppTec, Minneapolis, MN). 본 연구에서는 7일, 30일, 90일, 180일, 365일의 5가지 종료 시점을 가지고 상기 제조된 실크 진피 충전제에 대한 조직 반응을 평가했다. Juvederm Ultra Plus XC를 대조군으로 사용했다. 간략한 연구 절차: 기간당 4마리의 동물이 이 연구에 사용되었다. 각 동물은 스레딩 기술(볼루스 대신 라인 주사)을 사용하여 척추 한쪽에 3개의 대조군 부위와 반대쪽에 3개의 시험 샘플 부위에: 6개의 등, 피내 주사를 받았다. 동물은 전반적인 건강을 평가하기 위해 연구 내내 매일 관찰되었다. 동물은 예정된 종료 날짜에 인도적으로 안락사되었다. 모든 동물의 이식 부위와 주변 조직을 절제하고 포르말린에 넣고 파라핀 블록으로 가공한 후 조직 병리학적 평가를 수행했다. 7일 조직병리학 데이터가 여기에 설명되어 있다(도 53A의 조직학 이미지). 반정량적 평가(점수가 낮을수록 좋음)는 대조군 6.9점, 시험군 3.8점으로 나타났다.

임플란트 후 7일째에 병리학적 소견이 나타났으며, 시험 임플란트 재료는 대조군 임플란트보다 반응이 더 적었다. 여기에는 시험 물질에서 관찰되지 않은 대조 물질과 함께 궤양 및 근육층을 통한 확산 이동이 포함되었다. 시험 물질의 2-3개 부위에서 대조군에 비해 상당히 낮은 정도로 근육층 내로 또는 근육층을 통한 최소 이동이 있었다. 시험물질로는 궤양이 확인되지 않았다. 이물질 대식세포 반응과 콜라겐 분리는 궤양이 없는 대조군과 시험 임플란트 사이에서 유사했다.

일부 구체예에서, 순수한 HA 히드로겔은 자연광 하에서 투명하다. 일부 구체예에서, HA가 실크 피브로인 단편과 가교결합될 때, 겔은 매우 희미한 황색을 나타내고 실크 단백질 섬유는 시각적으로 관찰될 수 있다(도 54A 참조). 겔은 가시 범위에서 넓은 흡광도와 뚜렷한 산란을 나타낸다. 이는 표준 투과광 외에 전방 산란광을 수집할 수 있는 InGaAs 적분구가 장착된 Lambda X50S UV-Vis 분광 광도계 (PerkinElmer)로 측정된다. 탁도 측정은 실크-HA 하이드로겔이 진피 충전제로 사용되면 잠재적으로 틴달 효과를 제거할 수 있는 빛을 산란시키는 능력이 있음을 시사한다.

실크 분자량이 하이드로겔의 점탄성 특성(저장 탄성률 G' 및 복합 점도 η)에 미치는 영향을 이해하기 위해 다양한 분자량의 실크 피브로인 단편으로 두 개의 샘플을 제조했다. 샘플은 24mg/ml의 HA 및 실크의 총 농도와 95:5의 일정한 HA/실크 비율로 제조되었다. 약 48kDa의 중간 분자 실크를 샘플 A에 첨가하고 약 14kDa의 저분자 실크를 샘플 B에 첨가했다. 두 샘플 모두 50℃에서 30분 동안 가교결합시킨 후 1x PBS에 대해 72시간 동안 투석했다. 투석 후 샘플을 분석했다. 데이터는 표 29에 나와 있다. 중 분자량 실크로 가교결합된 샘플 A는 G' 및 η가 더 낮았으며, 이는 특정 이론에 얽매이지 않고 더 긴 실크 피브로인 단편이 HA 겔 구조에 더 많은 영향을 미친다는 것을 시사한다. 제제에서 실크 피브로인 단편의 비율의 영향도 평가되었다. 다양한 실크 함량을 가진 3개의 샘플을 제조했다. HA 및 실크의 총 농도는 30 mg/ml로 유지되었다. 샘플을 50℃에서 30분 동안 가교시킨 후 1x PBS에 대해 72시간 동안 투석했다. 투석 후 샘플을 G' 및 η에 대해 분석했다(표 30). 결과는 하이드로겔에서 실크 농도가 증가함에 따라 감소된 G' 및 η를 나타냈다. 따라서, 임의의 특정 이론에 얽매이지 않고, 가교결합 공정 동안 제제에서 실크 피브로인 단편의 분자량 및 백분율을 변화시킴으로써 하이드로겔의 점탄성 특성을 제어할 수 있다고 생각된다.

표 29: 상이한 실크 분자량을 갖는 하이드로겔의 점탄성 특성

샘플	총 농도 (mg/ml)	HA 농도 (mg/ml)	실크 농도 (mg/ml)	실크 MW	5 Hz에서 G' (Pa)	5 Hz에서 η (Paㆍs)
A	24	22.8	1.2	중간	96.1	3.6
B	24	22.8	1.2	저	126.2	4.4

표 30: 상이한 제제 내 실크 함량을 갖는 하이드로겔의 점탄성 특성

샘플	총 농도 (mg/ml)	HA 농도 (mg/ml)	실크 농도 (mg/ml)	실크 MW	5 Hz에서 G' (Pa)	5 Hz에서 η (Paㆍs)
C	30	29.4	0.6	저	176.3	7.5
D	30	27	3	저	85.1	4.0
E	30	18	12	저	36.0	1.8
F	26	24.7	1.3	저	204.2	7.2
G	26	24.96	1.04	저	151.5	5.4
H	26	25.28	0.72	저	173.8	6.2

실크 진피 충전제는 다음 절차에 따라 제조할 수 있다.

(1) 10mL 배치 크기의 경우 6% 저분자량 실크 용액 1.167ml와 PEGDE 385mg을 0.1N 수산화나트륨 용액 8.833mL가 들어 있는 비커에 추가한다. 1330mg의 HA를 40분 이내에 위의 제조된 용액에 조금씩 추가한다. HA 수화 및 용해를 촉진하기 위해 HA를 추가하면서 주걱을 사용하여 부드럽게 교반한다. 비이커를 55 ℃ 물 배치에 75분 동안 넣어 가교결합을 허용한다. 가교결합된 하이드로겔을 < 28 ℃로 냉각시킨다. 1x PBS 5mL에 145μl의 6N 염산을 추가한다. PBS 용액을 하이드로겔에 붓고 비커를 밀봉한 다음 4 ℃ 냉장고에 넣어 밤새 하이드로겔을 중화하고 희석한다. PBS가 하이드로겔에 의해 완전히 흡수되면 희석된 하이드로겔에 1x PBS 10mL를 추가하고 4℃ 냉장고에 넣어 밤새 더 희석한다. 희석된 하이드로겔을 20kDa MWCO 투석 튜브에 채우고 실온에서 72시간 동안 1x PBS(4L)에 대해 투석한다. 6시간, 24시간 및 48시간에 PBS를 변경한다. 투석 후, 리도카인과 추가 1x PBS를 추가하여 0.3% 리도카인으로 최종 농도를 26 mg/mL로 조정한다. 하이드로겔을 1mL 주사기에 넣고 과열된 물을 사용하여 멸균한다. 대안적으로, 제조 절차에서 0.1N 수산화나트륨 대신 0.15N 수산화나트륨 용액을 사용할 수 있다. 대안적으로, 제조 절차에서 0.1N 수산화나트륨 대신 0.25N 수산화나트륨 용액을 사용할 수 있다.

(2) 10mL 배치 크기의 경우 6% 저분자량 실크 용액 1.167ml와 PEGDE 96 mg을 0.1N 수산화나트륨 용액 8.833mL가 들어 있는 비커에 추가한다. 266mg의 HA를 위의 제조된 용액에 추가한다. HA가 완전히 녹을 때까지 주걱을 사용하여 부드럽게 교반한다. 비이커를 55 ℃ 물 배치에 60 동안 넣어 제 1 단계 가교결합을 허용한다. 비이커를 실온으로 냉각한다. 289mg의 PEGDE를 비커에 넣고 완전히 녹을 때까지 교반한다. 그런 다음 30분 이내에 1064mg의 HA를 조금씩 추가한다. HA 수화 및 용해를 촉진하기 위해 HA를 추가하면서 주걱을 사용하여 부드럽게 교반한다. 비이커를 55 ℃ 물 배치에 60 동안 넣어 제 2 단계 가교결합을 허용한다. 1x PBS 5mL에 145μl의 6N 염산을 추가한다. PBS 용액을 하이드로겔에 붓고 비커를 밀봉한 다음 4 ℃ 냉장고에 넣어 밤새 하이드로겔을 중화하고 희석한다. PBS가 하이드로겔에 의해 완전히 흡수되면 희석된 하이드로겔에 1x PBS 10mL를 추가하고 4℃ 냉장고에 넣어 밤새 더 희석한다. 희석된 하이드로겔을 20kDa MWCO 투석 튜브에 채우고 실온에서 72시간 동안 1x PBS(4L)에 대해 투석한다. 6시간, 24시간 및 48시간에 PBS를 변경한다. 투석 후, 리도카인과 추가 1x PBS를 추가하여 0.3% 리도카인으로 최종 농도를 26 mg/mL로 조정한다. 하이드로겔을 1mL 주사기에 넣고 과열된 물을 사용하여 멸균한다. 대안적으로, 제조 절차에서 0.1N 수산화나트륨 대신 0.15N 수산화나트륨 용액을 사용할 수 있다. 대안적으로, 제조 절차에서 0.1N 수산화나트륨 대신 0.25N 수산화나트륨 용액을 사용할 수 있다.

본 명세서에 언급된 모든 특허, 특허출원 및 간행물은 그 전체가 참고로 포함된다. 본 개시내용의 방법이 그의 특정 구체예와 관련하여 설명되었지만, 추가로 변형될 수 있음을 이해할 것이다. 또한, 본 출원은 본 개시내용의 방법이 속하는 기술분야에서 공지되거나 관례적인 관행 내에 있는 본 개시내용으로부터의 그러한 이탈을 포함하여, 본 개시내용의 방법의 임의의 변형, 사용 또는 적응을 포함하도록 의도된다.

실시예 30: 실크-HA 하이드로겔의 물리화학적 특성 G', IF 및 MoD의 특성화 방법

폴리에틸렌 글리콜 가교결합제의 사용과 함께 히알루론산 하이드로겔에 실크 피브로인의 함입은 진피 충전제 제제를 위한 새로운 플랫폼을 나타낸다. HA 농도, 실크 퍼센트 및 PEGDE:HA 비율, 제제 반응 조건을 변경함으로써, 이 플랫폼을 통한 스크리닝을 위해 100개 이상의 진피 충전제 후보를 제조했다. 생성된 실크-HA 하이드로겔의 물리화학적 및 기계적 특성 시험은 저장 탄성률(G'), 가교결합 또는 변형 정도(MoD), 주사힘(IF) 및 각 하이드로겔의 스펙트럼 흡수를 이러한 특성으로 결정하기 위해 중점을 두는데, 이들 특성은 바람직한 특성을 가진 진피 충전제 제품의 생성에 특히 중요하기 때문이다.

실시예 30a. 저장 탄성률

각 하이드로겔의 저장 탄성률(G')는 Discovery HR-1 Rheometer(TA Instruments, New Castle, DE)를 사용하여 결정되었다. 측정(하이드로겔 제제당 3개)은 5Hz의 진동 주파수에서 콘 플레이트 기하학을 사용하여 수행되었다.

실시예 30b. 개질 정도

NMR 시스템 작동 절차

장비: Varian INOVA 500MHz NMR; 피펫, 1000μl, 200 μl및 20μl(Eppendorf, Research Plus); 피펫 컨트롤러(VWR, Powerpette Plus, 613-4442); NMR 튜브(Wilmad, WG-1235-7); NMR 튜브 캡(Kimble, 897095-0081); 수조 인큐베이터(Benchmark Scientific, B2000-4); 20mL 유리 바이알(VWR, VW74515-20); 칭량 보트(VWR Cat # 10770-440); 오븐(Quincy Lab, 12-140AE); 동결건조기(LabConco, Cat# 700201000); Kimwipes(Kimberly-Clark Professional); 파라필름 M(Bemis, PM 996); 분석 저울(Mettler Toledo, XS204 DeltaRange).

재료: 중수소수(Alfa Aesar, 14764); 클로로포름-D(Alfa Aesar, 41389); 실크, 6% 용액(Silk Medical Aesthetics, Inc.); 폴리(에틸렌 글리콜) 디글리시딜 에테르, (SinoPEG, 기술/의료 등급); 소듐 히알루로네이트, 850KDa(HTL Biotechnology, 제약 등급); 히알루로니다제(MP Biomedicals, Cat# 100740); PBS 20 x(VWR, E703-1L); 물(RICCA, Cat# 9150-5); 리도카인 HCl(스펙트럼, LI103)

방법: 각 하이드로겔의 MoD를 결정하기 위해 600~800mg의 하이드로겔을 1x PBS에서 약 275 IU/mL 또는 약 340 IU/ml 히알루로니다제 0.8mL와 혼합했다. 혼합물을 37℃에서 16시간 내지 24시간 동안 배양하여 가교결합된 하이드로겔의 완전한 소화를 허용했다. 소화된 하이드로겔 용액의 샘플 600μl 를 50℃에서 2시간 내지 4시간 동안 공기 건조시키고, 건조된 샘플 10mg을 NMR 튜브에 중수 600μL에 용해시키고 양성자 NMR 스펙트럼을 Varian INOVA 500MHz NMR 기기(Palo Alto, CA)에서 기록했다.

NMR 샘플의 제조

PEGDE 샘플 제조: 냉동고에서 PEGDE 샘플을 꺼내고 샘플을 실온에서 약 30분에서 1시간 동안 둔다. PEGDE는 녹아서 액체가 된다. 피펫을 사용하여 5 μl의 PEGDE를 측정하고 NMR 튜브에 추가한다. NMR 튜브에 600 μl의 중수소 또는 클로로포름-D를 추가한다. 샘플은 2시간 이내에 NMR 스캔해야 한다.

HA 샘플 제조: 냉동고에서 HA 샘플을 꺼내고 샘플을 실온에서 약 30분에서 1시간 동안 둔다. 20ml 유리 바이알에 20mg의 HA를 칭량한다. 20x PBS 1 부분를 19 부분의 물에 추가하여 20x PBS를 1x PBS로 희석한다. 별도의 20ml 유리 바이알에 340 IU의 히알루로니다제를 칭량한다. 히알루로니다제를 용해시키기 위해 유리병에 1x PBS 1.1 ml를 추가한다. 진행하기 전에 히알루로니다제가 용해되었는지 확인한다. HA 바이알에 1ml의 히알루로니다제/PBS 용액을 추가한다. HA 바이알을 37℃ 수조 인큐베이터에 넣고 16-24시간 동안 배양한다. 피펫을 사용하여 HA PBS 용액 600 μl를 측정하고 칭량 보트에 넣는다. 칭량 보트를 2-4시간 동안 50℃ 오븐에 넣는다. 용매가 건조되면 샘플이 흰색 시트가 되고 계량 보트 바닥에 달라붙다. 건조된 HA 샘플 10mg의 무게를 측정하고 샘플을 NMR 튜브에 넣는다. NMR 튜브에 중수소 물 600 μl를 추가한다. 실온에서 NMR 튜브를 보관한다. 샘플은 1주일 이내에 NMR 스캔해야 한다.

실크 샘플 제조: 피펫을 사용하여 실크 용액 1ml를 측정하고 20ml 유리 바이알에 추가한다. 유리병을 Kimwipe 조각으로 덮고 Kimwipe를 Parafilm으로 밀봉한다. 유리병 상단이 Parafilm으로 덮이지 않았는지 확인한다. 바이알을 4-6시간 동안 냉동실에 넣는다. 냉동실에서 바이알을 꺼내 동결건조기의 챔버에 넣는다. 샘플을 24-48시간 동안 동결건조한다. 동결건조기에서 건조된 샘플을 꺼내고 건조된 실크 10mg의 무게를 잰다. 10 mg의 건조 실크를 NMR 튜브에 넣는다. NMR 튜브에 중수소 물 600 μl를 추가한다. 실온에서 NMR 튜브를 보관한다. 샘플은 1주일 이내에 NMR 스캔해야 한다.

리도카인 샘플 제조: 리도카인 HCl 샘플 5mg의 무게를 측정하고 NMR 튜브에 추가한다. NMR 튜브에 중수소 물 600 μl를 추가한다. 실온에서 NMR 튜브를 보관한다. 샘플은 1주일 이내에 NMR 스캔해야 한다.

겔 샘플 제조: 20ml 유리 바이알에 600 - 800mg의 겔을 칭량한다. 20x PBS 1 부분을 19 부분의 물에 추가하여 20x PBS를 1x PBS로 희석한다. 20ml 유리 바이알에 340 IU의 히알루로니다제를 칭량한다. 히알루로니다제를 용해시키기 위해 유리병에 1x PBS 1 ml를 추가한다. 진행하기 전에 히알루로니다제가 용해되었는지 확인한다. 겔 바이알에 히알루로니다제/PBS 용액 0.8ml를 추가한다. 겔 바이알을 37℃ 수조 인큐베이터에 넣고 16-24시간 동안 배양한다. 피펫을 사용하여 겔/ PBS 용액 600 μl를 측정하고 칭량 보트에 넣는다. 칭량 보트를 2-4시간 동안 50℃ 오븐에 넣는다. 용매가 건조되면 샘플이 흰색 시트가 되고 계량 보트 바닥에 달라붙다. 건조된 HA 샘플 10mg의 무게를 측정하고 샘플을 NMR 튜브에 넣는다. NMR 튜브에 중수소 물 600 μl를 추가한다. 실온에서 NMR 튜브를 보관한다. 샘플은 1주일 이내에 NMR 스캔해야 한다.

NMR 시험 실행: 주어진 샘플에 대해 NMR 양성자 시험을 실행하고 스캔 수를 선택한다. 리도카인 및 PEGDE의 경우 64개 스캔을 선택한다. 다른 모든 샘플의 경우 256개 스캔을 선택한다. 올바른 용매 유형이 선택되었는지 확인한다. 여러 샘플 시험에 대해 필요에 따라 반복한다.

NMR 데이터 처리: MestReNova 소프트웨어 또는 이에 상응하는 NMR 소프트웨어는 .fid 파일을 로드하고 처리하기 위해 사용된다. 모든 샘플에 대해 다음 보정이 수행된다: 기준선 보정: 기준선을 보정하기 위해 다항식 차수 값 3이 적용된다. 위상 보정: 위상 보정을 위해서는 모든 피크가 대칭이어야 한다. 용매 피크 보정: 용매 피크의 화학적 이동을 보정하기 위해 중수소는 4.79ppm이고 클로로포름-d는 7.27ppm이다. 적분: 이전 보정 후 각 화학 물질에 대해 다음 적분이 수행된다: PEGDE의 경우 화학적 이동의 피크: 2.77-2.81ppm, 2.96-2.99ppm, 3.33-3.38ppm, 3.38-3.44ppm, 3.68-3.80ppm 및 3.95-3.40ppm가 적분된다. 리도카인의 경우 화학적 이동의 피크: 1.35-1.46ppm, 2.21-2.27ppm, 3.34-3.48ppm, 4.32-4.39ppm 및 7.21-7.33ppm이 적분된다. 실크의 경우 화학적 이동의 피크: 1.32-1.5ppm 및 3.77-4.09ppm가 적분된다. HA의 경우 화학적 이동의 피크: 2.0-2.1ppm 및 3.30-4.05ppm가 적분된다. 최종 겔의 경우 화학적 이동의 피크: 1.20-1.28ppm, 1.35-1.48ppm, 2.0-2.1ppm 및 3.30-4.05ppm이 적분된다. 각 피크는 화학적 이동 범위를 보여야 한다. 적분 값은 이 줄 아래에 있어야 한다.

적분 정규화: MoD를 계산하려면 각 스펙트럼의 적분 값을 정규화해야 한다. 피크의 적분 값을 정규화하기 위해: PEGDE의 경우 2.77-2.81ppm의 적분을 2로 정규화한다. 리도카인의 경우 1.35-1.46ppm의 적분을 6으로 정규화한다. 실크의 경우 1.32-1.5ppm의 적분을 2로 정규화한다. HA의 경우 2.0-2.1ppm의 적분을 3으로 정규화한다. 최종 겔의 경우 2.0-2.1ppm의 적분을 3으로 정규화한다.

하이드로겔의 변형 정도(MoD)는 다음 중 하나로 정의된다:

또는

하이드로겔 합성 동안 사용되는 SPF 및/또는 가교결합제의 농도와 같은 여러 변수에 따라 달라짐, 여기서 n은 분자의 수임, 이는 가교결합제, HA, SPF 및/또는 국소 마취제와 같은 기타 선택적 성분의 특징적인 화학적 이동을 사용하여 NMR에 의해 결정할 수 있다.

하이드로겔 샘플의 MoD는 다음 방정식을 사용하여 NMR 스펙트럼(예: 도 64 및 65 참조)에서 계산되었다("Chemical Characterization of Hydrogels Crosslinked with Polyethylene Glycol for Soft Tissue Augmentation," Monticelli et al., Open Access Maced J Med Sci. 2019 Apr 15; 7(7):1077-1081) 참조):

NMR 스펙트럼에서 각 PEG 사슬의 평균 양성자 수(N_PEG-H)는 다음 방정식을 사용하여 계산되었다. N_PEG-H = (δ _3.68-3.80 × 치환%) + 10, 여기서 δ _3.68-3.80 은 2.77-2.81 ppm의 적분을 2로 정규화한 후의 적분 값; "치환%"는 링커 PEGDE 링커당 글리시딜 기의 평균 수를 측정한 것이다. 예를 들어 100% 치환은 각 PEGDE 링커에 2개의 말단 글리시딜 기가 있음을 의미하는 반면, 100% 미만의 숫자는 샘플 내 평균적으로, 전부가 아닌 단일 PEGDE 링커가 2개의 글리시딜 기로 완전히 치환됨을 의미하고; 그리고 "10"은 2개의 글리시딜 기 내 양성자에 대해 추가된다.

특정 이론에 얽매이지 않고, 겔 NMR 스펙트럼에서 다음과 같은 화학적 이동은 다음의 각각의 양성자에 해당하는 것으로 여겨진다:

3.30-4.05: HA 잔기, PEG 링커, 실크(SPF) 및 리도카인의 양성자의 혼합;

리도카인에 있는 2개의 말단 메틸기; 및

1.35-1.48: 실크 피브로인 단백질 단편(SPF)의 양성자 혼합.

MoD 방정식의 분자에서 "11" 값은 스펙트럼의 3.30-4.05 영역에서 HA 양성자의 적분을 나타낸다.

실시예 30c. 주사힘 (IF)

30G 니들이 장착된 1mL 주사기에서 각 하이드로겔을 분배하기 위해 필요한 주사힘은 Brookfield CT3 10K 텍스처 분석기(AMETEK Brookfield, Middleboro, MA)를 사용하여 측정했다. 각 샘플 주사기는 고정 장치에 고정되었다. 주사기 플런저는 1cm의 총 이동 거리에 대해 0.2mm/초의 속도로 피스톤에 의해 압축되었다. 피스톤에 가해진 힘은 0.05초(또는 0.01mm)마다 기록되었다. 각 샘플에 대한 평균 힘과 최대 힘을 기록하고 3개 샘플의 전체 평균을 보고했다.

실크-HA 하이드로겔에 대한 물리화학적 특성 특성화 및 실크 농도가 G', IF 및 MoD에 미치는 영향에 대한 결과는 다음과 같이 요약된다. 동일한 농도의 HA 및 PEG 가교결합제 대 HA의 비율(약 30% w/w), 상이한 피브로인 단백질의 농도로 제제화된 다중 하이드로겔의 G', IF 및 MoD를 측정했다. 결과는 제제에서 실크의 농도가 증가함에 따라 하이드로겔의 G' 및 IF 둘 모두가 감소한 반면, MoD는 상대적으로 변하지 않은 채로 유지되었음을 입증했다(도 55A-C). 중요하게도, 이러한 결과는 G'가 실크 농도를 변경하여, MoD를 변경하지 않고도 조절될 수 있음을 나타내며, 이 두 가지 중요한 겔 특성의 최적화를 가능하게 한다. 즉, 실크-HA 겔 제제 플랫폼은 제품 지속성(높은 MoD) 및 사용성(작동 가능 IF)을 촉진하는 특성을 유지하면서도 다양한 적응증에 대한 제품 개발에 중요한 저장 탄성률(G')가 다양한 하이드로겔의 생성을 허용한다.

평가된 다양한 실크-HA 하이드로겔 제제의 다양한 기계적 특성을 기초로, 5.0% 실크 피브로인 단백질 기초 단편과 PEG 가교결합제를 사용하는 실크-HA 겔 제제가 잠재적 진피 충전제 후보로 선택되었으며 ISO 10993 생체적합성 시험을 포함한 추가 연구에서 평가되었다. 주요 후보로 선택된 하이드로겔 제제인 AS-V1은 G'(144 ± 24 Pa)에서 높은 MoD(8.9 ± 0.2 %), 30 게이지 니들을 사용하여 작동 가능한 IF(39.2 ± 3.4 N) 및 생리적 삼투압 농도 (264 mOsmol/kg)를 나타냈다. AS-V1은 95:5 중량비(26mg/mL)의 히알루론산과 실크 피브로인으로 구성되며 실크-HA 하이드로겔의 총 중량을 기준으로 약 30% w/w 및 0.3% w/w 리도카인의 PEG 가교결합제를 포함한다. 저분자 실크(<28kDa) 및 850kDa의 HA가 사용되었다.

이러한 제품에서, 적절한 점탄성 및 변형 저항성(더 높은 G'를 갖는 "더 단단한" 물질), 주사 중 흐름 용이성(낮은 IF) 및 생체 내 분해에 대한 내성 또는 지속성(일반적으로 더 높은 MoD로 달성됨)을 나타내는 겔 물질이 하이드로겔 제품 후보를 선택하기 위해 사용된다. 하이드로겔 후보의 최종 농도는 15mg/mL에서 26mg/mL(실크 + HA) 범위이다. 하이드로겔 후보는 40~700Pa 범위의 G'와 10N 내지 >100N 범위의 IF를 포함한 기계적 특성을 나타낸다(도 56). 이러한 하이드로겔의 MoD는 모두 시판 HA 기초 진피 충전제와 유사하거나 더 높았다.

실시예 31: 인장 특성

실크-HA 하이드로겔의 광학적 특성은 UMS 통합구가 장착된 Cary 7000 UV-vis-NIR(Agilent Technologies, Santa Clara, CA)을 사용하여 특성화되었다. 각 하이드로겔의 세 가지 샘플을 측정했다.

시판되는 진피 충전제 제품을 주사하면 일부 환자에서 틴달 효과로 설명되는 피부 청색증을 유발한다고 알려져 있다. 실크 피브로인이 HA 기초 하이드로겔의 광학 특성에 미치는 영향과 틴달 효과를 상쇄하는 잠재력은 두 가지 방식으로 측정되었다.

먼저 실크를 사용하거나 사용하지 않고 생성된 HA 기초 하이드로겔의 굴절률을 서로 비교하고 시중에 판매되는 진피 충전제 제품(Juvederm® Ultra Plus XC)의 굴절률과 비교했다. 시험된 모든 하이드로겔 제제는 1.34의 굴절률을 갖는 것으로 밝혀졌으며, 이는 다양한 겔 및 그 표면과 상호작용할 때 유사한 빛의 전파를 나타낸다.

둘째, 실크가 통합된 진피 충전제 후보(AS-V1)의 흡광도를 평가하고 HA 기초 하이드로겔(실크가 없는) 및 시판 진피 충전제와 비교했다. AS-V1은 실크가 없는 하이드로겔과 시판 진피 충전제보다 가시광선의 UV 및 청색 파장의 더 높은 흡광도를 나타냈다(도 57).

AS-V1에 의해 입증된 청색광에 대한 UV의 증가된 흡광도는 환자에서 청색증 효과를 일으킬 가능성이 더 낮고, 따라서 창백한 피부에서 상대적으로 피상적인 에스테틱 교정에 잠재적인 유용성을 시사한다.

실시예 32: ISO 10993에 따른 동물에서의 GLP 생체적합성 시험

국소 조직 반응의 평가를 위한 ISO 10993 기초 GLP 동물 연구는 기니피그를 사용하여 수행되었다.

알비노 기니피그(Cavia porcellus), Hartley 균주(특정 병원체 없음)가 이 연구에 사용되었다. 모든 절차는 기관 동물 관리 및 사용 위원회(Institutional Animal Care and Use Committee)의 승인을 받았다. 동물은 "실험실 동물의 관리 및 사용에 대한 지침(Guide for the Care and Use of Laboratory Animals)"에 보고된 NIH 지침에 따라 처리되었다.

잠재적인 진피 충전제 제품으로 추가 개발을 위해 선택된 하이드로겔 제제(Activated Silk Hydrogel-V1, AS-V1)은 의료 기기의 생물학적 평가를 위해 국제 표준화 기구(International Organization for Standardization)에서 설정한 ISO 10993 표준에 따라서, 및 영구 임플란트, 조직/뼈 접촉을 위한 클래스 III 의료 기기 범주에서 FDA 지침에 따라서 생체적합성 시험을 거쳤다. 주요 후보 하이드로겔 제제 AS-V1은 생체적합성 시험에서 우수한 특성을 보여 안전성 문제의 위험이 낮고 환자 집단에서 부작용 발생률이 낮을 수 있다.

생체적합성 시험 결과는 생체 내 사용을 위한 세 가지 겔 구성 요소 모두의 입증된 안전성에 기초한 기대치를 확인했다: (1) 피부의 점탄성 세포내 기질의 천연 성분인 HA; (2) 피부 조직 재구성을 포함하여 역사를 통해 다양한 생의학 응용 분야에 사용된 실크; 및 (3) 생체적합성 중합체로서의 PEG. AS-V1에 대한 ISO 10993 생체적합성 분석은 모든 허용 기준을 충족했다.

실시예 33: 시험관 내 및 생체 내 가역성 시험

실시예 33a. 실크-HA 하이드로겔의 시험관 내 분해 시험

약 1g의 각 하이드로겔(AS-V1 또는 Juvederm® Ultra Plus XC)을 150 U/ml 히알루로니다제를 함유하는 PBS(0.2M, pH 6.2) 1ml와 함께 3개의 각각의 바이알에 넣고 37℃에서 30 분 배양했다. 배양 후, 상청액을 완전히 제거하고 겔의 남은 중량을 측정했다. 이 과정을 120분에 걸쳐 총 4 ml (600 U)의 히알루로니다제에 대해 3회 더 반복했다. 하이드로겔 분해 정도는 원래 하이드로겔에 대한 잔여 하이드로겔의 중량비(%)로 나타내었다.

실시예 33b. 생체 내 가역성 시험

이 연구에는 12마리의 동물이 사용되었다. 각 동물은 위에서 설명한 것처럼 척추의 각 측면에 3개의 부위가 있는 등쪽으로 6개의 피내 주사를 받았다. 실크-HA 하이드로겔(시험품) 또는 Juvederm® Ultra Plus XC(대조품) 주사 후 60 ± 30분 이내에 성형외과 의사의 지시에 따라 히알루로니다제로 효소 분해하여 시험물질 및 대조물질의 역전을 시도했다. 15개 단위로 시작하여 히알루로니다제(HylenexTM, 150U/ml)를 각 시험 또는 대조 물질 트랙을 따라 여러 위치에 소량으로 피내 및/또는 피하 주사하고 해당 부위 내로 부드럽게 마사지했다. 약 30분 간격으로 각 시험 부위 또는 대조군 부위에 최대 0.4ml의 히알루로니다제를 주사했다. 시험 또는 대조 물질의 용해/분해는 육안 관찰 및 촉진에 의해 평가되었다.

동물을 한 달 동안 매일 관찰하여 일반적인 건강과 잔류 물질의 존재 여부를 평가했다. 마지막 효소 처리 후 65 ± 5분, 24 ± 2시간, 7 ± 0.5일 및 30 ± 1일:의 마지막 효소 처리 후 4개의 시점 각각에서 3마리의 동물을 안락사시켰다. 이식 부위와 주변 조직을 절제하고, 포르말린으로 고정하고, 파라핀을 포매하고, 절편하고, 헤마톡실린과 에오신으로 염색했다. 다형핵 세포, 림프구, 형질 세포, 대식세포, 거대 세포, 조직 괴사, 전반적인 염증, 신생혈관, 섬유증, 지방 침윤, 혈액 응고, 콜라겐 침착, 겔 분해 및 이동의 존재에 대해 슬라이드를 맹검 병리학자가 평가했다.

실시예 33c. 생체 내 가역성 시험

각 하이드로겔(AS-V1 또는 Juvederm Ultra Plus XC)의 ~1g을 3회 반복하여 30분 동안 37℃에서 150U 히알루로니다제로 분해했다. 배양 후, 겔의 잔여 중량을 측정했다. 이 과정을 120분에 걸쳐 총 600U의 히알루로니다제에 대해 3회 더 반복했다. 시험관내 하이드로겔 분해 정도는 원래 하이드로겔에 대한 잔여 하이드로겔의 중량비(%)로 나타내었다.

생체내 가역성 시험을 위해, 12 마리의 각 동물은 위에서 설명한 것처럼 척추의 각 측면에 3개의 부위가 있는 등쪽으로 6개의 피내 주사를 받았다. 하이드로겔 주사 후 1시간 이내에 성형외과 의사의 지시에 따라 히알루로니다제로 효소 분해하여 시험물질 및 대조물질의 역전을 시도했다. 15개 단위로 시작하여 최대 60 U의 히알루로니다제를 각 시험 또는 대조 물질 트랙을 따라 피내 및/또는 피하 주사하고 ~30분 간격으로 해당 부위에 부드럽게 마사지했다. 시험 또는 대조 물질의 용해/분해는 육안 관찰 및 촉진에 의해 평가되었다.

동물을 한 달 동안 매일 관찰하여 전반적인 건강 상태를 평가하였고, 마지막 효소 처리 후 65±5분, 24±2시간, 7±0.5일, 30±1일에 3마리를 안락사시켰다. 이식 부위와 주변 조직을 절제하고, 포르말린으로 고정하고, 파라핀을 포매하고, 절편하고, 헤마톡실린과 에오신으로 염색했다. 다형핵 세포, 림프구, 형질 세포, 대식세포, 거대 세포, 조직 괴사, 전반적인 염증, 신생혈관, 섬유증, 지방 침윤, 혈액 응고, 콜라겐 침착, 겔 분해 및 이동의 존재에 대해 슬라이드를 맹검 병리학자가 평가했다.

다른 시판 HA 기초 겔에서 볼 수 있는 것과 유사한 방식으로 히알루로니다제에 의해 분해되는 AS-V1의 능력이 평가되었다. 히알루로니다제에 의해 분해되는 HA 기초 겔의 능력은 HA 기초 진피 충전제 제품의 중요한 이점으로, 성형 외과 의사가 좋지 않은 결과나 부작용의 경우에 주사를 신속하게 되돌릴 수 있도록 한다. 시험관 내 및 생체 내 시험 모두에서 AS-V1을 효소적으로 분해하는 히알루로니다제의 능력이 손상되지 않았음을 입증했다. 따라서 필요한 경우 AS-V1 피부 주사를 "역전"하는 능력은 실크가 있는 상태에서 유지된다. 시험관 내 시험에서 AS-V1이 히알루로니다제와 함께 단일 30분 배양 후에 Juvederm® Ultra Plus XC 겔보다 덜 분해되었지만 AS-V1은 60분 이상 효소와 함께 배양한 후에 동등하게 분해되었음을 보여주었다(도 58A).

생체 내 시험의 경우, 히알루로니다제 주사 부위에서 채취한 조직 절편은 주사 후 1시간에 AS-V1 주사 부위의 61% 및 Juvederm Ultra Plus XC 주사 부위의 47%에 대해 히알루로니다제를 단일 1:1 부피 주사한 후 하이드로겔 물질의 거의 완전한 분해("역전")를 보여주었다 (도 58B). 또한, AS-V1은 Juvederm Ultra Plus XC보다 완전한 역전을 달성하기 위해 더 적은 히알루로니다제 주사를 필요로 했다(도 58B). 따라서, 시험관내 및 생체내 시험 둘 다, AS-V1 피부 주사를 "역전"시키는 히알루로니다제의 능력이 필요하다면 실크의 존재하에 유지된다는 것이 입증되었다.

시험관내 결과는 생체내 가역성 연구에서 얻은 데이터와 상당한 상관관계가 있었다. 여기에서 3마리의 동물은 이전과 같이 처리되었으며, 각각 0.1mL AS-V1의 피내 주사 3회와 등 진피에서 1cm 간격으로 Juvederm® Ultra Plus XC의 3회 주사를 받았다. 히알루로니다제 주사 부위에서 채취한 조직 절편에서, AS-V1 및 Juvederm® Ultra Plus XC(데이터는 표시되지 않음) 모두 주사 후 60 ± 30분에 히알루로니다제를 단일 1:1 부피 주사한 후 하이드로겔 물질의 거의 완전한 분해("역전")가 확인되었다; 그러나 일부 부위는 하이드로겔을 완전히 제거하기 위해 최대 3회의 추가 역전 주사가 필요했다. 전반적으로 AS-V1은 생체 내 기니피그 연구 및 시험관 시험 설정에서 입증된 바와 같이 Juvederm® Ultra Plus XC와 유사한 가역성 프로파일을 가지고 있다.

실크-HA 하이드로겔 제제 AS-V1은 (1) 더 오래 지속되는 치료로 이어질 수 있는 내구성 시험; 및 (2) 제공자와 환자 모두에게 사용 중 안심을 제공해야 하는 가역성 시험에서 우수한 특성을 입증했다.

하이드로겔 분해, 이동 및 가역성에 대한 생체내 평가를 위해 이 실시예에서 설명된 결과는 AS-V1 하이드로겔 제제를 시판 제품과 비교할 때 유사했으며, 이는 후보 실크-HA 하이드로겔 진피 충전제 AS-V1이 시판 제품과 유사한 지속성과 성능 특성을 가지며 필요할 때 생체 내에서 완전한 가역성을 나타내는 유사한 능력을 나타냄음을 나타낸다.

실시예 34: AS-V1에 대한 단기 국소 조직 반응의 평가

주사 가능한 진피 충전제 제품으로서의 잠재력과 직접적으로 관련된 조건에서 AS-V1 하이드로겔 제제의 안전성과 국소 조직 반응을 조사하기 위해 피내 주사 후 AS-V1 하이드로겔의 안전성과 효능을 입증하는 포괄적인 시험을 수행했다.

기니피그에 등쪽 피내 주사(임플란트) 후 진피 충전제에 대한 국소 조직 반응은 ISO 10993-6 요구 조건에 따라 주사 후 최대 6 개월까지 연장되는 시점에서 평가되었다. 각 시점에서 6 마리의 동물을 평가했다. 각 동물의 등(등쪽) 털을 제거하고 마취시킨 후 주사 부위를 무균적으로 제조했다. 각 동물은 척추 한쪽에 AS-V1 실크-HA 하이드로겔 3개, 반대쪽에 Juvederm® Ultra Plus XC 3개 등 6개의 피내 주사(이식)를 받았다. 각 주사는 각 주사 부위 사이에 최소 1 cm를 두고 부위당 0.1 mL의 부피를 전달했다. 주사 부위는 수술용 피부 마커 펜으로 식별되었다. 주사 부위는 주사 전 홍반 및 부종에 대해 점수를 매겼다. 동물은 Draize 점수(피부 자극)에 대해 주사 후 7일 동안, 및 멍에 대해 주사 후 3일 및 4일에 매일 관찰되었다. 동물을 조직 검사를 위해 주사 후 7일, 30일, 90±1일, 180±2일 및 365±3일에 인도적으로 안락사시켰다. 이식 부위와 주변 조직을 절제하고, 포르말린으로 고정하고, 파라핀을 포매하고, 절편하고, 헤마톡실린과 에오신으로 염색했다. 연구 조건에 대해 맹검인 병리학자는 염증 반응, 겔 분해, 겔 이동 및 콜라겐 침착을 포함한 국소 조직 반응의 증거에 대해 슬라이드를 평가했다.

모든 분석은 기니피그의 등 진피에 0.1mL AS-V1을 주사한 후 수행되었으며, 결과는 1,4-부탄디올 디글리시딜 에테르(BDDE) 가교결합 HA 겔로 구성된 FDA 승인 진피 충전제인 Juvederm® Ultra Plus XC를 주사한 후 얻은 결과와 비교되었다. AS-V1은 주사 후 1일에서 6개월 사이의 모든 시험에서 Juvederm® Ultra Plus XC와 유사하거나 더 나은 성능을 보였다.

Draize 피부 자극 시험(급성 자극)는 주사 후 1일부터 5일까지 수행되었다. AS-V1(시험 품목) 및 Juvederm® Ultra Plus XC(FDA 승인 대조약) 모두에 대해 모든 시점에서 3점 이하(가능한 8점 만점)의 점수와 함께 무시할 수 있는 자극이 관찰되었고(도 60A- D), 주사 후 최소한의 원치 않는 조직 반응을 나타낸다. 실제로 실크-HA 하이드로겔은 Juvederm® Ultra Plus XC와 마찬가지로 Draize 시험에서 유사한 점수를 받았으며, 이는 기니피그 모델에서 주사 후 최대 5일 동안 유발하는 즉각적인 자극이 실크 성분이 포함되지 않은 FDA-승인된 제품에서 관찰된 것과 유사함을 나타낸다. AS-V1이 Juvederm® Ultra Plus XC보다 자극이 덜하다는 결론을 뒷받침하는 것은 AS-V1에서 볼 수 있는 주사 후 멍이 최소화된다는 것이다; 이 멍은 주사 후 3일과 4일에 Juvederm® Ultra Plus XC를 사용하는 동일한 동물에서 관찰된 것보다 적거나 동일한다(그림 60A-B).

이 실시예의 시험 결과는 AS-V1 하이드로겔이 시판 제품 Juvederm® Ultra Plus XC에서 볼 수 있는 수준과 유사하거나 더 낮은 수준에서 즉각 및 중기 주사 후 자극, 멍, 염증을 유발함을 보여주었다.

또한 AS-V1에 대한 요약 독성학적 평가는 독립적인 위원회-인증 독성학자에 의해 수행되었다.

실시예 35: 장기 염증 및 겔 성능 평가

기니피그에 대한 추가 조직학적 평가는 주사 후 최대 12개월까지 AS-V1의 생체적합성 및 성능에 대한 지원을 연장했다. 이러한 평가는 피내 주사 후 제자리에서 겔의 분해 및 이동뿐만 아니라 염증 반응을 조사했다.

최소 염증이 관찰되었으며 AS-V1 및 비교(Juvederm® Ultra Plus XC) 겔 모두에 대해 모든 시점에서 약 4점 이하(가능한 28점 중)의 점수가 관찰되었으며, 이는 주사후 제품에 대한 유해한 조직 반응이 최소화되었음을 나타낸다 (도 61A). 피부 조직 매트릭스에서 하이드로겔 분해(도 61B 및 61D) 및 이동(도 61C 및 61E) 모두에 대해 AS-V1 및 Juvederm® Ultra Plus XC에서 유사한 프로파일이 관찰되었다. 여기서, 더 높은 점수(최대 4)는 더 많은 분해 또는 겔의 이동을 나타낸다; 둘 다 진피 충전제에 바람직하지 않다. 분해의 경우 AS-V1 점수는 1.5 미만으로 유지되어 바람직한 낮은 수준의 분해 및 우수한 조직 내 겔 지속성 프로파일을 나타낸다. 이동의 경우 AS-V1 점수는 2 미만으로 유지되어 바람직한 낮은 수준의 겔 이동 및 우수한 조직 내 배치/위치 안정성 프로필을 나타낸다. 또한, 이러한 결과는 겔 이동/분해 및 조직 반응 관점 모두에서 기니피그의 피내 연구에서 AS-V1이 Juvederm® Ultra Plus XC와 동등한 성능을 발휘한다는 것을 보여준다.

AS-V1 및 Juvederm Ultra Plus XC에 대한 비교 가능한 단기 성능 프로필을 고려하여 장기 프로필을 평가했다. 이러한 평가는 피내 주사 후 제자리에서 겔의 내구성, 염증 반응, 분해 및 이동을 조사했다. 내구성과 관련하여 겔(밝은 청색/회색)은 주사 후 12개월에 콜라겐 기질(분홍색) 주위에 여전히 통합된 것으로 분명히 관찰되어(도 62A-J), 기니피그 모델에서 최대 1년 동안 AS-V1 및 Juvederm Ultra Plus XC의 내구성을 확인했다.

주사 후 3개월 및 6개월에 조직학적 검사는 충전제 겔의, 대표적인 등쪽 진피 조직 절편으로의 바람직한 통합을 나타내었다. 사실, AS-V1 제품은 Juvederm® Ultra Plus XC가 주사된 조직에서 볼 수 있는 콜라겐 구조와 잘 통합되지 않는 것처럼 보이는 임플란트 덩어리와 달리 두 시점 모두에서 피부의 콜라겐 매트릭스와 원활하게 통합된다(도 63A-D). 관찰된 염증성 또는 기타 바람직하지 않은 조직 반응 병리의 결여는 유리한 생체적합성 및 AS-V1에 의한 콜라겐의 통합을 자극하는 능력을 나타낸다. 이러한 평가에서 Juvederm® Ultra Plus XC와 비교하여 AS-V1의 유사하거나 더 나은 성능은 유망한 진피 충전제 제품으로서 AS-V1의 추가 개발을 뒷받침한다.

또한, 1년 연구에 걸쳐 AS-V1 및 Juvederm Ultra Plus XC에서 피부 조직 매트릭스의 겔 분해(도 61D) 및 이동(도 61E)에 대한 유사한 프로파일이 관찰되었다. 분해의 경우 AS-V1 점수가 낮게 유지되어 조직 내 겔 지속성 프로파일이 양호함을 나타낸다. 이동의 경우 AS-V1 점수는 Juvederm Ultra Plus XC와 일치하여 바람직한 낮은 수준의 겔 이동과 우수한 조직 내 배치/위치 안정성 프로필을 나타낸다. 주사 후 3, 6 및 12개월에서의 조직학적 검사는 충전제 겔의 대표적인 등쪽 진피 조직 절편으로의 소정의 통합을 나타내었다(도 63A-D).

사실, AS-V1 제품은 Juvederm Ultra Plus XC가 주사된 조직에서 볼 수 있는 덜 잘 통합된 임플란트 덩어리와 대조적으로, 세 시점 모두에서 피부의 콜라겐 매트릭스와 매끄럽게 통합되었다(도 63A-D). 마지막으로, 관찰된 염증성 또는 기타 바람직하지 않은 조직 반응 병리의 결여는 유리한 생체적합성 및 AS-V1의 콜라겐과 통합되는 능력을 나타낸다(도 62A-J 및 도 63A-D).

이것은 도 61F에서 확인되며, 이는 AS-V1 및 비교(Juvederm Ultra Plus XC) 겔 둘 다에 대해 모든 시점에서 최소 염증이 관찰되었음을 나타내며, 이는 주사 후 제품에 대한 최소 유해 조직 반응을 나타낸다(도 61F).

일반적으로 나타나는 특정 부작용과 관련하여 실크 피브로인을 HA 기초 진피 충전제에 포함시키면, 현재 시판되는 충전제 제품보다 제품 성능이 더 좋을 수 있는 여러 영역이 있다. AS-V1 하이드로겔에 의해 입증된 낮은 수준의 자극, 멍 및 염증은 통증, 과민성, 부기, 홍반 및 괴사와 같은 낮은 수준의 즉각적 및 초기 주사 후 부작용과 상관관계가 있을 것으로 예상된다. 또한 일부 충전제 제품에서 병변/결절 형성이 관찰되었는데, 이는 VyCross™ 기술에서 발생하는 것과 같이 잠재적으로 높은 수준의 가교결합 또는 다양한 크기(분자량)의 HA를 사용하기 때문이다. 이것은 단일 크기의 HA가 사용되고 MoD가 쉽게 조절될 수 있기 때문에 여기에 설명된 실크 함유 하이드로겔로 잠재적으로 회피될 수 있다. 마지막으로, 결과는 진피 충전제에 실크 단백질을 통합하면 다른 진피 충전제 제품에서 종종 발생하는 바람직하지 않은 틴달 효과를 방지하기 위해 도움이 될 수 있음을 나타낸다.

AS-V1은 모든 ISO 10993 시험에서 우수한 프로필을 보여주었으며 이 제품에서 세포독성, 과민성, 자극, 발열성, 유전독성(Ames 및 MLA), 중기 국소 조직 염증 반응 또는 급성 또는 아만성 전신 독성이 관찰되지 않았음을 입증했다.

ISO 10993 시험와 추가 안전성 및 효능 결과에 따르면 AS-V1은 현재까지 시험된 모든 측면에서 현재 시장 리더인 Juvederm® Ultra Plus XC와 동등하거나 더 나은 성능을 보였다. 또한 위에서 설명한 시험에서는 Juvederm® Ultra Plus XC보다 실크-HA 겔이 피부의 콜라겐 매트릭스에 더 매끄럽게 함입되는 것으로 나타났다. 현재 이러한 결과는 기니피그 모델을 사용한 주사 후 6개월 데이터로 확인되었다.

실시예 35: 예시적인 실크-히알루론산 조직 충전제

HA 및 실크는 0.1 - 1.0N 수산화나트륨 용액에서 95:5의 HA 대 실크 비율로 90 - 140mg/ml의 총 HA 및 실크의 초기 농도에서 PEGDE와 혼합되었다. HA의 분자량은 850kDa이다. 실크의 분자량은 저분자량(MW < 28kDa)이다. 제품 1의 경우, 가교결합 반응을 55℃에서 75분 동안 수행했다. 제품 2 및 3의 경우, 가교결합 반응을 주위 온도(20℃)에서 8-24시간 동안 수행했다. 가교결합 후, 하이드로겔을 중화하고 40 - 56 mg/ml로 희석하고 3-4일 동안 1x PBS에 대해 투석했다. 0.3% w/w 리도카인 히드로클로라이드를 투석된 히드로겔에 첨가했다. 생성물 내 총 HA 및 실크의 최종 농도는 15 - 28 mg/ml로 추가로 희석되었다(표 31). 보다 구체적으로, 다음 표는 제품 1과 제품 2 및 3에 대한 현재 공식 설정이다(설계 고정 아님).

일부 구체예에서, 심부 제품은 볼 확대를 위한 심부(피하 및/또는 골막상) 주사에 대해 처방된다. 일부 구체예에서, 주사 부위는 12개월 기간에 걸쳐 기준선에 비해 개선된 외관을 유지한다. 일부 구체예에서, 생성물은 가역적 생성물이고, 생성물은 히알루로니다제로 용해될 수 있다.

일부 구체예에서, 표재 제품은 입주위 주름(입술 주위의 주름)의 교정을 위한 입술 확대 및 진피 이식을 위해 표시된다. 일부 구체예에서, 주사 부위는 12개월 기간에 걸쳐 기준선에 비해 개선된 외관을 유지한다. 일부 구체예에서, 생성물은 가역적 생성물이고, 생성물은 히알루로니다제로 용해될 수 있다.

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Claims

실크 피브로인 또는 실크 피브로인 단편, 히알루론산 (HA), 및 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 및/또는 폴리프로필렌 글리콜 (PPG)를 포함하는 생체적합성 조직 충전제,
여기서 HA의 일부는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 폴리프로필렌 글리콜 (PPG), 및 제 2 알콜 중 하나 이상을 포함하는 하나 이상의 링커 모이어티에 의해 개질 또는 가교결합되고, 여기서 링커 모이어티는 링커의 한 말단에서 HA에 부착됨.
제 1항에 있어서, 실크 피브로인 또는 실크 피브로인 단편의 일부는 개질 또는 가교결합되는 조직 충전제.
제 1 또는 2항 중 어느 한 항에 있어서, 실크 피브로인 또는 실크 피브로인 단편의 일부는 HA에 가교결합되는 조직 충전제.
제 1 내지 3항 중 어느 한 항에 있어서, 실크 피브로인 또는 실크 피브로인 단편의 일부는 실크 피브로인 또는 실크 피브로인 단편에 가교결합되는 조직 충전제.
제 1 내지 4항 중 어느 한 항에 있어서, 실크 피브로인 또는 실크 피브로인 단편은 실질적으로 세리신이 없는 조직 충전제.
제 1 내지 5항 중 어느 한 항에 있어서, 실크 피브로인의 일부 또는 실크 피브로인 단편은 약 12 kDa, 약 13 kDa, 약 14 kDa, 약 15 kDa, 약 16 kDa, 약 48 kDa, 및 약 100 kDa로부터 선택되는 평균 중량 평균 분자량을 가지는 조직 충전제.
제 1 내지 5항 중 어느 한 항에 있어서, 실크 피브로인의 일부 또는 실크 피브로인 단편은 28 kDa 미만 평균 중량 평균 분자량을 가지는 조직 충전제.
제 1 내지 5항 중 어느 한 항에 있어서, 실크 피브로인의 일부 또는 실크 피브로인 단편은 저 분자량, 중 분자량, 또는 고 분자량을 가지는 조직 충전제.
제 1 내지 8항 중 어느 한 항에 있어서, 실크 피브로인 또는 실크 피브로인 단편은 1 및 약 5.0 사이의 다분산성을 가지는 조직 충전제.
조직 충전제 제 1 내지 8항 중 어느 한 항에 있어서, 실크 피브로인 또는 실크 피브로인 단편은 약 1.5 및 약 3.0 사이의 다분산성을 가지는 조직 충전제.
제 1 내지 10항 중 어느 한 항에 있어서, 조직 충전제는 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 약 10%, 약 11%, 약 12%, 약 13%, 약 14%, 또는 약 15%의 개질도 (MoD)을 가지는 조직 충전제.
제 1 내지 11항 중 어느 한 항에 있어서, 개질 또는 가교결합은 가교결합제로서 모노에폭시- 또는 디에폭시-PEG, 모노글리시딜-, 디글리시딜-, 또는 폴리글리시딜-PEG, 모노글리시딜- 또는 디글리시딜-PEG, 모노에폭시- 또는 디에폭시-PPG, 모노글리시딜-, 디글리시딜-, 또는 폴리글리시딜-PPG, 모노글리시딜- 또는 디글리시딜-PPG, 또는 이의 임의의 조합를 사용하여 얻어지는 조직 충전제.
제 1 내지 11항 중 어느 한 항에 있어서, 개질 또는 가교결합은 약 200 Da, 약 500 Da, 1000 Da, 약 2,000 Da, 또는 약 6000 Da의 MW를 갖는 폴리에틸렌 글리콜 디글리시딜 에테르를 사용하여 얻어지는 조직 충전제.
제 1 내지 11항 중 어느 한 항에 있어서, 개질 또는 가교결합은 약 380 Da, 또는 약 640 Da의 MW를 갖는 폴리프로필렌 글리콜 디글리시딜 에테르를 사용하여 얻어지는 조직 충전제.
제 1 내지 14항 중 어느 한 항에 있어서, 리도카인을 추가로 포함하는 조직 충전제.
제 15항에 있어서, 조직 충전제 내 리도카인의 농도는 약 0.3%인 조직 충전제.
제 1 내지 16항 중 어느 한 항에 있어서, 조직 충전제는 겔인 조직 충전제.
제 1 내지 16항 중 어느 한 항에 있어서, 조직 충전제는 하이드로겔인 조직 충전제.
제 1 내지 16항 중 어느 한 항에 있어서, 조직 충전제는 물을 추가로 포함하는 조직 충전제.
제 1 내지 19항 중 어느 한 항에 있어서, 조직 충전제는 1상인 조직 충전제.
제 1 내지 20항 중 어느 한 항에 있어서, 조직 충전제 내 HA 및 실크 피브로인 또는 실크 피브로인 단편의 총 농도는 약 15 mg/mL, 약 16 mg/mL, 약 17 mg/mL, 약 18 mg/mL, 약 19 mg/mL, 약 20 mg/mL, 약 21 mg/mL, 약 22 mg/mL, 약 23 mg/mL, 약 24 mg/mL, 약 25 mg/mL, 약 26 mg/mL, 약 27 mg/mL, 약 28 mg/mL, 약 29 mg/mL, 약 30 mg/mL, 약 31 mg/mL, 약 32 mg/mL, 약 33 mg/mL, 약 34 mg/mL, 약 35 mg/mL, 약 36 mg/mL, 약 37 mg/mL, 약 38 mg/mL, 약 39 mg/mL, 또는 약 40 mg/mL인 조직 충전제.
제 1 내지 21항 중 어느 한 항에 있어서, 조직 충전제 내 HA 대 실크 피브로인 또는 실크 피브로인 단편의 비는 약 91/9, 약 92/8, 약 93/7, 약 94/6, 약 95/5, 약 96/4, 약 97/3, 약 18/12, 약 27/3, 약 29.4/0.6, 약 99/1, 약 92.5/7.5, 또는 약 90/10인 조직 충전제.
제 1 내지 22항 중 어느 한 항에 있어서, 조직 충전제는 진피 충전제인 조직 충전제.
제 1 내지 22항 중 어느 한 항에 있어서, 조직 충전제는 생분해성인 조직 충전제.
제 1 내지 24항 중 어느 한 항에 있어서, 조직 충전제는 주사가능인 조직 충전제.
제 25항에 있어서, 조직 충전제는 30 G 또는 27 G 니들을 통해 주사가능인 조직 충전제.
제 1 내지 26항 중 어느 한 항에 있어서, 조직 충전제는 약 5 Pa 내지 약 500 Pa의 저장 탄성률 (G')을 가지는 조직 충전제.
제 1 내지 26항 중 어느 한 항에 있어서, 조직 충전제는 약 15 Pa 내지 약 50 Pa의 저장 탄성률 (G')을 가지는 조직 충전제.
제 1 내지 26항 중 어느 한 항에 있어서, 조직 충전제는 약 50 Pa 내지 약 100 Pa의 저장 탄성률 (G')을 가지는 조직 충전제.
제 1 내지 26항 중 어느 한 항에 있어서, 조직 충전제는 약 100 Pa 내지 약 200 Pa의 저장 탄성률 (G')을 가지는 조직 충전제.
제 1 내지 26항 중 어느 한 항에 있어서, 조직 충전제는 약 200 Pa 내지 약 300 Pa의 저장 탄성률 (G')을 가지는 조직 충전제.
제 27 내지 31항 중 어느 한 항에 있어서, G'는 약 1 Hz, 약 5 Hz, 또는 약 10 Hz의 진동 스트레스에 의해 측정되는 조직 충전제.
제 1 내지 32항 중 어느 한 항에 있어서, 조직 충전제는 약 1 Paㆍs 내지 약 10 Paㆍs의 복합 점도를 가지는 조직 충전제.
제 33항에 있어서, 복합 점도는 약 1 Hz, 약 5 Hz, 또는 약 10 Hz의 진동 스트레스에 의해 측정되는 조직 충전제.
제 1 내지 34항 중 어느 한 항에 있어서, 조직 충전제는 심부 조직 충전제인 조직 충전제.
제 1 내지 34항 중 어느 한 항에 있어서, 조직 충전제는 표재 조직 충전제인 조직 충전제.
치료적으로 효과적인 양의 제 1 내지 36항 중 어느 한 항의 조직 충전제를 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 개체에서의 병태 치료 방법.
제 37항에 있어서, 병태는 피부 병태인 방법.
제 37항에 있어서, 피부 병태는 피부 탈수, 피부 탄성 부족, 피부 거침, 피부 탄력 부족, 피부 튼 선, 피부 튼 자국, 피부 창백, 진피 디보트, 홀쭉한 볼, 얇은 입술, 안구뒤 결함, 얼굴 접힘, 및 주름으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방법.
개체에게 치료적으로 효과적인 양의, 제 1 내지 36항 중 어느 한 항에 있어서의 조직 충전제를 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 개체에서의 미용 처리 방법.
제 37 내지 40항 중 어느 한 항에 있어서, 조직 충전제는 개체의 진피 영역 내로 투여되는 방법.
제 37 내지 40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 확대, 재구성, 질환 치료, 장애 치료, 신체 일부, 영역 또는 면적의 결함 또는 부전의 교정인 방법.
제 37 내지 40항 중 어느 한 항에 있어서, 방법은 얼굴 확대, 얼굴 재구성, 얼굴 질환 치료, 얼굴 장애 치료, 얼굴 결함 치료, 또는 얼굴 부전 치료인 방법.
제 37 내지 40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 심부 피하 및/또는 심부 상위 골막 투여를 포함하는 방법.
제 37 내지 40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 볼 확대를 포함하는 방법.
제 37 내지 40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 입술 확대를 포함하는 방법.
제 37 내지 40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 진피 이식를 포함하는 방법.
제 37 내지 40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 입술 주위의 굵은 주름 교정을 포함하는 방법.
제 37 내지 40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 코입술 주름 교정을 포함하는 방법.
제 37 내지 49항 중 어느 한 항에 있어서, 조직 충전제는 적어도 약 3 일, 약 7 일, 약 14 일, 약 21 일, 약 28 일, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 또는 약 6 개월 동안 생분해, 생부식, 생흡수, 및/또는 생재흡수에 저항하는 방법.
제 37 내지 49항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체에의 조직 충전제의 투여는 실질적으로 유사한 HA인을 포함하는 대조 조직 충전제에 의해 유도된 염증성 반응과 비교하여 감소된 염증성 반응을 유발하고, 여기서 대조 조직 충전제는 실크 피브로인 또는 실크 피브로인 단편을 포함하지 않는 방법.
제 37 내지 49항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체에의 조직 충전제의 투여는 실질적으로 유사한 HA를 포함하는 대조 조직 충전제에 의해 유도된 염증성 반응과 비교하여 감소된 염증성 반응을 유발하고, 여기서 대조 조직 충전제는 실크 피브로인 또는 실크 피브로인 단편 및/또는 PEG 또는 PPG을 포함하지 않는 방법.
제 37 내지 49항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체에의 조직 충전제의 투여는 실질적으로 유사한 HA을 포함하는 대조 조직 충전제에 의해 유도된 콜라겐 생산과 비교하여 증가된 또는 감소된 콜라겐 생산을 유발하고, 여기서 대조 조직 충전제는 실크 피브로인 또는 실크 피브로인 단편을 포함하지 않거나, 또는 대조 조직 충전제는 실크 피브로인 또는 실크 피브로인 단편 및/또는 PEG 또는 PPG을 포함하지 않는 방법.