JP2023527684A - 神経疾患を治療するための補体成分ｃ１ｓ阻害剤、並びにそれを使用する関連組成物、システム及び方法 - Google Patents

Abstract

本発明は、神経疾患の治療での使用のための補体成分１ｓ（Ｃ１Ｓ）阻害剤に関する。本発明は、特に、Ｃ１Ｓ発現の下方調節のためのＣ１Ｓ阻害剤の使用に関する。本発明はまた、Ｃ１Ｓに相補的であり、Ｃ１Ｓ ｍＲＮＡのレベルを低下させることができる核酸分子に関する。本発明はまた、医薬組成物、並びに神経疾患の治療におけるその使用も含む。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年５月１１日に出願された「Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ Ｃ４ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ Ｆｏｒ Ｔｒｅａｔｉｎｇ Ａ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄｉｓｅａｓｅ，Ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ，Ｓｙｓｔｅｍｓ Ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｏｆ Ｕｓｉｎｇ Ｓａｍｅ」という名称の米国仮出願及び２０２０年５月１１日に出願された「Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ Ｃ１Ｒ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ Ｆｏｒ Ｔｒｅａｔｉｎｇ Ａ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄｉｓｅａｓｅ，Ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ，Ｓｙｓｔｅｍｓ Ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｏｆ Ｕｓｉｎｇ Ｓａｍｅ」という名称の米国仮出願に関連し、その内容は両方とも参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。本出願は、２０２０年５月１１日に出願された「Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ Ｃ１Ｓ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ Ｆｏｒ Ｔｒｅａｔｉｎｇ Ａ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄｉｓｅａｓｅ，Ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ，Ｓｙｓｔｅｍｓ Ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｏｆ Ｕｓｉｎｇ Ｓａｍｅ」という名称の米国仮出願第６３／０２３１２７号の優先権を主張し、その内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０２１年５月６日に作成された該ＡＳＣＩＩコピーの名称はＰ３６０９１－ＷＯ＿Ｃ１Ｓ＿ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔであり、サイズは３３４，８２５バイトである。

本発明は、神経疾患の治療での使用のための補体成分１ｓ（Ｃ１Ｓ）阻害剤に関する。本発明は、特に、Ｃ１Ｓ発現の下方調節のためのＣ１Ｓ阻害剤の使用に関する。本発明はまた、Ｃ１Ｓに相補的であり、Ｃ１Ｓ ｍＲＮＡのレベルを低下させることができる核酸分子に関する。本発明はまた、医薬組成物、並びに神経疾患の治療におけるその使用も含む。

補体系は、食細胞による微生物又は損傷細胞のクリアランスを増強し、炎症を促進する自然免疫系の一部である。補体系はまた、脳におけるシナプス・プルーニングに関与し、補体系の古典的経路はシナプス除去を媒介する。このプロセスは、補体成分１（Ｃ１）複合体（Ｃ１Ｑ、Ｃ１Ｓ及びＣ１Ｒからなる）による古典的経路の開始を伴い、補体成分２（Ｃ２）及び補体成分４（Ｃ４）の切断をもたらし、次いで補体成分３（Ｃ３）の切断をもたらし、続いてミクログリア細胞によるシナプスの貪食をもたらす。初期発生中の正常な脳回路改良における役割の他に、古典的補体経路の異常な活性は、様々な神経疾患におけるシナプス損失及び神経変性を媒介し得ることが十分に確立されている。患者サンプルにおける補体レベルの上昇及びマウスモデルにおける補体成分の減少又は排除の有益な効果の観察により、アルツハイマー病、前頭側頭型認知症、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、パーキンソン病、ウイルス誘発性認知障害、緑内障、黄斑変性、重症筋無力症、ギラン・バレー症候群、視神経脊髄炎、中枢神経系エリテマトーデス及び統合失調症を含む症状における補体の有害な役割が特定されている。

このような症状に対処するための治療剤及び予後診断剤が当技術分野で依然として必要とされている。本発明は、これら及び他の必要性を満たす。
発明の目的

本発明は、Ｃ１Ｓ発現の下方調節並びに神経疾患における予防的及び治療的介入のためにインビボ及びインビトロの両方で使用され得る補体成分１Ｓ（Ｃ１Ｓ）の核酸阻害剤を提供する。本発明はさらに、インビトロ及びインビボでＣ１Ｓの発現を阻害することができる新規な核酸分子、例えばアンチセンスオリゴヌクレオチドを同定する。

本発明は、例えば、Ｃ１Ｓの機能に関連する疾患を治療又は予防するために有用な、核酸を標的とし、Ｃ１Ｓの発現を調節することができるオリゴヌクレオチドに関する。

したがって、第１の態様では、本発明は、タウオパチー又は統合失調症などの神経疾患の治療及び／又は予防に使用するためのＣ１Ｓ阻害剤を提供し、特に、Ｃ１Ｓ阻害剤は、Ｃ１Ｓ ｍＲＮＡ及び／又はＣ１Ｓタンパク質などのＣ１Ｓの量を減少させることができる。そのような阻害剤は、有利には、Ｃ１Ｓ ｍＲＮＡレベルを減少させることができる、１２～６０ヌクレオチド長の核酸分子である。

さらなる態様では、本発明は、哺乳動物Ｃ１Ｓ、例えばヒトＣ１Ｓ、マウスＣ１ｓ１、Ｃ１ｓ２又はカニクイザルＣ１Ｓ、Ｃ１Ｓに少なくとも９０％相補的、例えば９０～９５％、９５～９８％又は完全に相補的である、少なくとも１０ヌクレオチド、特に１６～２０ヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列を含む１２～６０ヌクレオチド、例えば１２～３０ヌクレオチドの核酸分子に関する。そのような核酸分子は、Ｃ１Ｓを発現する細胞におけるＣ１Ｓの発現を阻害することができる。Ｃ１Ｓの阻害は、細胞中に存在するＣ１Ｓの量の減少を可能にする。核酸分子は、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチド、二本鎖ｓｉＲＮＡ分子又はｓｈＲＮＡ核酸分子（特に化学的に生成されたｓｈＲＮＡ分子）から選択することができる。

本発明のさらなる態様は、Ｃ１Ｓの発現及び／又は活性を阻害する一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチド又はｓｉＲＮＡに関する。特に、Ｃ１Ｓ ｍＲＮＡを減少させる１つ又は複数の２’糖修飾ヌクレオシド及び１つ又は複数のホスホロチオエート結合を含む修飾アンチセンスオリゴヌクレオチド又は修飾ｓｉＲＮＡが有利である。

さらなる態様では、本発明は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド又はｓｉＲＮＡなどの本発明のＣ１Ｓ阻害剤と、薬学的に許容され得る賦形剤とを含む、医薬組成物を提供する。

更なる態様では、本発明は、本発明のＣ１Ｓ阻害剤、例えば、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド又は組成物を有効量で細胞に投与することによって、Ｃ１Ｓを発現している標的細胞におけるＣ１Ｓ発現のインビボ又はインビトロ調節を提供する。いくつかの実施形態では、Ｃ１Ｓ発現は、少なくとも５０％、例えば５０～６０％；又は少なくとも６０％、例えば６０～７０％；又は少なくとも７０％、例えば７０～８０％；又は少なくとも８０％、例えば８０～９０％；又は、一債務処理又は対照で処理されたレベルと比較して標的細胞において少なくとも９０％、例えば９０～９５％低下する。

更なる態様では、本発明は、Ｃ１Ｓのインビボ活性に関連する疾患、障害、又は機能障害を治療又は予防するための方法であって、該疾患、障害、又は機能障害に罹患している又は罹患しやすい対象に、治療的又は予防的に有効量の本発明のＣ１Ｓ阻害剤、例えば本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド又はｓｉＲＮＡを投与することを含む、方法を提供する。

定義
化合物
本明細書では、本発明の化合物に関して、「化合物」という用語は、Ｃ１Ｓの発現又は活性を阻害することができる任意の分子を意味する。本発明の特定の化合物は、本発明に係るＲＮＡｉ分子若しくはアンチセンスオリゴヌクレオチドなどの核酸分子、又はそのような核酸分子を含む任意のコンジュゲートである。例えば、本明細書において、化合物は、Ｃ１Ｓを標的とする核酸分子、特にアンチセンスオリゴヌクレオチド又はｓｉＲＮＡであり得る。いくつかの実施形態では、化合物は、本明細書では「阻害剤」又は「Ｃ１Ｓ阻害剤」とも呼ばれる。

オリゴヌクレオチド
本明細書で用いられる「オリゴヌクレオチド」という用語は、例えば２つ以上の共有結合したヌクレオシドを含む分子として当業者に一般に理解されるように定義される。オリゴヌクレオチドは、本明細書では「核酸」又は「核酸分子」とも呼ばれる。このような共有結合したヌクレオシドはまた、核酸分子又はオリゴマーとも称されうる。明細書及び特許請求の範囲に記載されているオリゴヌクレオチドは、概して、７０ヌクレオチド長未満の治療用オリゴヌクレオチドである。オリゴヌクレオチドは、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、若しくはそれを含み得、又は例えばＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アプタマー若しくはリボザイムなどの他の核酸分子であり得る。治療的オリゴヌクレオチド分子は、通常、固相化学合成と、その後の精製及び単離によって、研究室内で作製される。ｓｈＲＮＡは、多くの場合、レンチウイルスベクタを用いて細胞に送達され、次いで転写されて一本鎖ＲＮＡを生成し、これにより、ＲＮＡ干渉機構（ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）を含む）と相互作用することができるステムループ（ヘアピン）ＲＮＡ構造を形成するであろう。本発明の一実施形態では、ｓｈＲＮＡは、化学的に生成されたｓｈＲＮＡ分子である（プラスミド又はウイルスからの細胞ベースの発現に依存しない）。オリゴヌクレオチドの配列に言及する場合には、共有結合したヌクレオチド又はヌクレオシドの核酸塩基部分の配列又は順序、若しくはその修飾が言及される。概して、本発明のオリゴヌクレオチドは、人工であり、化学的に合成され、典型的には精製又は単離される。しかしながら、いくつかの実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチドは標的細胞への侵入時にベクタから転写されるｓｈＲＮＡである。本発明のオリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾ヌクレオシド又はヌクレオチドを含みうる。

いくつかの実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチドという用語は、その薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物及びプロドラッグも含む。

いくつかの実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチドは、１０～７０ヌクレオチド長、例えば１２～６０、例えば１３～５０、例えば１４～４０、例えば１５～３０、例えば１６～２５、例えば１６～２２、例えば１６～２０連続ヌクレオチド長を含むか、又はそれらからなる。したがって、本発明のオリゴヌクレオチドは、いくつかの実施形態では、１２～２５ヌクレオチドの長さを有し得る。あるいは、本発明のオリゴヌクレオチドは、いくつかの実施形態では、１５～２１ヌクレオチドの長さを有し得る。

いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドまたはその連続ヌクレオチド配列は、２４個以下のヌクレオチド、例えば２２個、例えば２０個以下のヌクレオチド、例えば１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０または２１個のヌクレオチドを含むか又はこれからなる。本明細書で提供されるいずれの範囲も、範囲の終点を含むことを理解するべきである。したがって、核酸分子が１５～２０ヌクレオチドを含むと記される場合、１５ヌクレオチド及び２０ヌクレオチド長の両方が含まれる。

いくつかの実施形態では、連続ヌクレオチド配列は、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、又は２２連続ヌクレオチド長を含むか、又はそれらからなる。

オリゴヌクレオチド（複数可）は、哺乳動物又は哺乳動物細胞における標的核酸の発現を調節することができる。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、及びアンチセンスオリゴヌクレオチド等の核酸分子は、標的核酸（複数可）の発現を阻害する。

本発明の一実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡｉ剤、例えばｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡから選択される。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＲＮａｓｅＨと相互作用する高親和性修飾アンチセンスオリゴヌクレオチドなどの、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドである。

いくつかの実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチドは、例えば２’糖修飾ヌクレオシドなどの１つ又は複数の修飾ヌクレオシド又はヌクレオチドを含んでもよい。

いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。

オリゴヌクレオチドのライブラリは、異なるオリゴヌクレオチドのコレクションとして理解されるべきである。オリゴヌクレオチドのライブラリの目的は様々であり得る。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのライブラリは、オリゴヌクレオチドのライブラリ内の強力な配列、例えば最も強力な配列を同定する目的で設計された１つ又は複数の哺乳動物Ｃ１Ｓ標的核酸を標的とする重複する核酸塩基配列を有するオリゴヌクレオチドから構成される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのライブラリは、親又は先祖オリゴヌクレオチドのオリゴヌクレオチド設計バリアント（子核酸分子）のライブラリであって、ここで、該オリゴヌクレオチド設計バリアントは親核酸分子のコア核酸塩基配列、例えば、親の保存された配列を保持する。

アンチセンスオリゴヌクレオチド
本明細書で用いられる「アンチセンスオリゴヌクレオチド」又は「ＡＳＯ」という用語は、標的核酸、特に標的核酸上の連続配列にハイブリダイズ、例えば、対応する標的遺伝子の発現を調節することができるオリゴヌクレオチドとして定義される。一般に、本発明の核酸分子はアンチセンス核酸である。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、本質的に二本鎖ではなく、ｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡである必要はない。好ましくは、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは一本鎖である。本発明の一本鎖オリゴヌクレオチドは、ヘアピン又は分子間二重構造（同じオリゴヌクレオチドの２つの分子間の二重鎖）を形成することができ、例えば、自己内又は自己間の相補性の程度がオリゴヌクレオチドの全長にわたって５０％未満であることが理解される。

有利には、いくつかの実施形態では、本発明の一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヌクレアーゼ耐性を低下させるためＲＮＡヌクレオシドを含まない。

有利には、いくつかの実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチドは、例えば２’糖修飾ヌクレオシドなどの１つ又は複数の修飾ヌクレオシド又はヌクレオチドを含む。さらに、修飾されていないヌクレオシドの一部、大部分、又はすべてがＤＮＡヌクレオシドであり、例えば修飾されていないヌクレオシドの５０％、７５％、９５％、又は１００％がＤＮＡヌクレオシドであることが有利である。

ＲＮＡｉ分子
本明細書では、「ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）分子」という用語は、ＲＮＡヌクレオシドを含有し、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）を介してＲＮＡ転写物の標的化された切断を媒介する短い二本鎖オリゴヌクレオチドを指し、触媒的ＲＩＳＣ成分のアルゴナウトと相互作用する。ＲＮＡｉ分子は、細胞、例えば哺乳動物対象などの対象内の細胞における標的核酸の発現を調節、例えば阻害する。ＲＮＡｉ分子には、一本鎖ＲＮＡｉ分子（Ｌｉｍａ ａｔ ａｌ ２０１２ Ｃｅｌｌ １５０：８８３）及び二本鎖ｓｉＲＮＡ、並びに短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）が含まれる。本発明のいくつかの実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチド、又はその連続ヌクレオチド配列は、ｓｉＲＮＡなどのＲＮＡｉ剤である。

ｓｉＲＮＡ
「低分子干渉リボ核酸」又は「ｓｉＲＮＡ」という用語は、一般にｍＲＮＡの発現を妨げる低分子干渉リボ核酸ＲＮＡｉ分子を指す。この用語は、当技術分野では短干渉ＲＮＡ又はサイレンシングＲＮＡとしても知られている二本鎖ＲＮＡ分子のクラスを指す。ｓｉＲＮＡは、典型的にはセンス鎖（パッセンジャー鎖とも呼ばれる）及びアンチセンス鎖（ガイド鎖とも呼ばれる）を含み、一方又は両方の鎖は１７～３０ヌクレオチド長、典型的には１９～２５ヌクレオシド長であり、アンチセンス鎖は標的核酸（適切には成熟ｍＲＮＡ配列）に相補的、例えば少なくとも９０％、例えば９０～９５％相補的、又は例えば完全に相補的であり、センス鎖はアンチセンス鎖に相補的であり、したがってセンス鎖及びアンチセンス鎖は二重鎖又は二重鎖領域を形成する。ｓｉＲＮＡ鎖は平滑末端二重鎖を形成してもよく、又は好都合には、センス鎖及び／又はアンチセンス鎖の３’末端は、例えば１、２又は３個のヌクレオシドの３’オーバーハングを形成してもよい（例えば、インビボでＲＩＳＣ基質を形成する、Ｄｉｃｅｒによって産生される産物に類似する）。Ｄｉｃｅｒ基質の有効な拡張形態は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８，３４９，８０９号及び米国特許第８，５１３，２０７号に記載されている。いくつかの実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖の両方は、２ｎｔ ３’オーバーハングを有する。したがって、二重鎖領域は、例えば１７～２５ヌクレオチド長、例えば２１～２３ヌクレオチド長であり得る。

一旦細胞内に入ると、アンチセンス鎖は、標的核酸の標的分解又は標的阻害を媒介するＲＩＳＣ複合体に組み込まれ得る。ｓｉＲＮＡは、典型的には、ＲＮＡヌクレオシドに加えて修飾ヌクレオシドを含む。一実施形態では、ｓｉＲＮＡ分子はまた、修飾ヌクレオチド間結合及び２’糖修飾ヌクレオシド、例えば２’－４’二環式リボース修飾ヌクレオシド（ＬＮＡ及びｃＥＴ又は２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡ、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ（ＭＯＥ）、２’－アミノ－ＤＮＡ、２’－フルオロ－ＤＮＡ、アラビノ核酸（ＡＮＡ）、２’－フルオロ－ＡＮＡのような２’置換修飾を含む）を用いて化学的に修飾されてもよい。特に、２’フルオロ、２’－Ｏ－メチル、又は２’－Ｏ－メトキシエチルをｓｉＲＮＡに組み込むことができる。

いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡセンス（パッセンジャー）鎖のヌクレオチドの一部、大部分、又は全て（例えば、７５～９０％、８０～９５％、９０～９９％、又は１００％）は、ＬＮＡなどの２’糖修飾ヌクレオシドで修飾され得る（例えば、国際公開第２００４／０８３４３０号及び同第２００７／０８５４８５号を参照されたい）。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡのパッセンジャー鎖は不連続であり得る（例えば、国際公開第２００７／１０７１６２号を参照されたい）。いくつかの実施形態において、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖のシード領域における熱不安定化ヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡのオフターゲット活性を低下させるのに有用である（例えば、ＷＯ２０１８／０９８３２８を参照のこと）。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡは、アンチセンス鎖の５’末端に５’リン酸基又は５’リン酸模倣物を含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の５’末端は、ＲＮＡヌクレオシドである。

一実施形態では、ｓｉＲＮＡ分子は、少なくとも１つのホスホロチオエート又はメチルホスホネートのヌクレオシド間結合を更に含む。ホスホロチオエート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｉｅ）若しくはメチルホスホネートのヌクレオシド間結合は一方若しくは両方の鎖の３’末端にあり得る（例えば、アンチセンス鎖及び／又はセンス鎖）か、又はホスホロチオエート若しくはメチルホスホネートのヌクレオシド間結合は一方若しくは両方の鎖の５’末端にあり得る（例えば、アンチセンス鎖及び／又はセンス鎖）か、又はホスホロチオエート若しくはメチルホスホネートのヌクレオシド間結合は一方又は両方の鎖の５’末端及び３’末端の両方にあり得る（例えば、アンチセンス鎖及び／又はセンス鎖）。いくつかの実施形態では、残りのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル結合である。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ分子は、１つ以上のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ｓｉＲＮＡ分子において、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合は、ＲＩＣＳにおけるヌクレアーゼ切断を減少又は阻害し得る。したがって、いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖中のすべてのヌクレオシド間結合が修飾されているわけではなく、例えば、いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖中のヌクレオシド間結合の１０～９０％、２０～８０％、３０～７０％、又は４０～６０％が修飾されている。

ｓｉＲＮＡ分子は、リガンドを更に含むことができる。いくつかの実施形態では、リガンドは、センス鎖の３’末端に結合する。

生物学的分布については、ｓｉＲＮＡを標的リガンドに結合させるか、及び／又は脂質ナノ粒子に製剤化することができる。特定の例では、核酸分子は、脳細胞又はＣＮＳの他の細胞を標的とする部分にコンジュゲートされる。したがって、核酸分子は、血液脳関門を通過する送達を容易にする部分にコンジュゲートされ得る。例えば、核酸分子は、トランスフェリン受容体を標的とする抗体又は抗体フラグメントにコンジュゲートされ得る。

本発明の他の態様は、医薬組成物、特に、治療的使用に適したｓｉＲＮＡ分子などのｄｓＲＮＡを含む医薬組成物、及び、例えば本明細書に開示されている種々の疾患症状の治療のために、本発明のｓｉＲＮＡといったｄｓＲＮＡ分子を投与することによって標的遺伝子の発現を阻害する方法に関する。

ｓｈＲＮＡ
「短ヘアピンＲＮＡ」又は「ｓｈＲＮＡ」という用語は、一般に４０～７０ヌクレオチド長、例えば４５～６５ヌクレオチド長、例えば５０～６０ヌクレオチド長であり、Ｄｉｃｅｒとして知られるエンドヌクレアーゼと相互作用することができるステムループ（ヘアピン）ＲＮＡ構造を形成する分子を指す（特徴的な２塩基３’オーバーハングを有する１９～２３塩基対の短干渉ＲＮＡにｄｓＲＮＡをプロセシングし、次いでＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）に組み込むことができると考えられる）。適切な標的ｍＲＮＡに結合すると、ＲＩＳＣ内の１つ又は複数のエンドヌクレアーゼが標的を切断してサイレンシングを誘導する。ｓｈＲＮＡオリゴヌクレオチドは、修飾ヌクレオチド間結合及び２’糖修飾ヌクレオシド、例えば２’－４’二環式リボース修飾ヌクレオシド（ＬＮＡ及びｃＥＴ又は２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡ、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ（ＭＯＥ）、２’－アミノ－ＤＮＡ、２’－フルオロ－ＤＮＡ、アラビノ核酸（ＡＮＡ）、２’－フルオロ－ＡＮＡのような２’置換修飾を含む）を用いて化学的に修飾されてもよい。いくつかの実施形態では、ｓｈＲＮＡ分子は、１つ又は複数のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ＲＮＡｉ分子において、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合は、ＲＩＣＳにおけるヌクレアーゼ切断を減少又は阻害し得る。したがって、ｓｈＲＮＡのステムループ中のすべてのヌクレオシド間結合が修飾されているわけではなく、例えば、いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖中のヌクレオシド間結合の１０～９０％、２０～８０％、３０～７０％、又は４０～６０％が修飾されている。ホスホロチオエートヌクレオシド間結合は、ｓｈＲＮＡ分子のステムループの３’及び／又は５’末端、特に標的核酸に相補的ではない分子の部分に配置されることが有利であり得る。標的核酸に相補的なｓｈＲＮＡ分子の領域は、しかしながら、例えば、Ｄｉｃｅｒによる切断後に３’末端及び／又は５’末端になると予測される部分における最初の２～３個のヌクレオシド間結合でもまた修飾され得る。

連続ヌクレオチド配列
「連続ヌクレオチド配列」という用語は、標的核酸に相補的な核酸分子の領域を指す。この用語は、本明細書で「連続核酸塩基配列」という用語及び「オリゴヌクレオチドモチーフ配列」という用語と互換的に用いられる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのヌクレオチドが連続ヌクレオチド配列を構成する。いくつかの実施形態では、連続ヌクレオチド配列は、ｓｉＲＮＡ分子のガイド鎖に含まれる。いくつかの実施形態では、連続ヌクレオチド配列は、標的核酸に対して９５％、９８％、９９％又は１００％相補的であるｓｈＲＮＡ分子の一部である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、Ｆ－Ｇ－Ｆ’ギャップマー領域のような連続ヌクレオチド配列を含み、任意に、更なるヌクレオチド（複数可）、例えば、官能基（例えば、標的化のためのコンジュゲート基）を連続ヌクレオチド配列に結合するために使用され得るヌクレオチドリンカー領域を含み得る。ヌクレオチドリンカー領域は、標的核酸に相補的であっても相補的でなくてもよい。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、連続ヌクレオチド配列を構成である。いくつかの実施形態では、連続ヌクレオチド配列は、標的核酸に対して１００％相補的である。

ヌクレオチド及びヌクレオシド
ヌクレオチド及びヌクレオシドは、オリゴヌクレオチド及びポリヌクレオチドの構成単位であり、本発明の目的のために、天然に存在するヌクレオチド及びヌクレオシドと、天然に存在しないヌクレオチド及びヌクレオシドとの両方を含む。本来、ＤＮＡヌクレオチド及びＲＮＡヌクレオチドなどのヌクレオチドは、リボース糖部分、核酸塩基部分、及び１つ以上のリン酸基（ヌクレオシドには存在しない）を含む。ヌクレオシド及びヌクレオチドはまた、互換的に「単位」又は「モノマー」と呼ぶことができる。

修飾ヌクレオシド
本明細書で用いられる「修飾ヌクレオシド」又は「ヌクレオシド修飾」という用語は、糖部分又は（核酸）塩基部分の１つ以上の修飾の導入によって、同等のＤＮＡ又はＲＮＡヌクレオシドと比較して修飾されたヌクレオシドを指す。有利には、いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシドの１つ又は複数は修飾糖部分を含む。「修飾ヌクレオシド」という用語はまた、「ヌクレオシド類似体」又は「修飾ユニット」又は「修飾モノマー」という用語と互換的に使用されてもよい。非修飾ＤＮＡ又はＲＮＡ糖部分を有するヌクレオシドは、本明細書ではＤＮＡ又はＲＮＡヌクレオシドと称される。ＤＮＡ又はＲＮＡヌクレオシドの塩基領域に修飾を有するヌクレオシドは、それらがワトソン・クリック塩基対合可能な場合には、依然として一般的にＤＮＡ又はＲＮＡと称される。

修飾ヌクレオシド間結合
「修飾ヌクレオシド間結合」という用語は、２つのヌクレオシドを共に共有結合する、例えばホスホジエステル（ＰＯ）結合以外の結合として当業者に一般的に理解されるように定義される。したがって、本発明のオリゴヌクレオチドは、１以上のホスホロチオエートのヌクレオシド間結合又は１以上のホスホロジチオエートのヌクレオシド間結合のような、１以上の修飾ヌクレオシド間結合を含むことができる。

本発明のオリゴヌクレオチドでは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、例えば１０～９０％、２０～８０％、３０～７０％、又は４０～６０％のヌクレオシド間結合を使用することが有利であり得る。

ホスホロチオエートヌクレオシド間結合は、ヌクレアーゼ耐性、有益な薬物動態、及び製造の容易さに起因して、特に有用である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド又はその連続ヌクレオチド配列の少なくとも５０％のヌクレオシド間結合がホスホロチオエートであり、オリゴヌクレオチド又はその連続ヌクレオチド配列の少なくとも６０％（６０～８０％など）、例えば少なくとも７０％（７０～８５％など）、例えば少なくとも７５％（７５～９０％など）、例えば少なくとも８０％（８０～９５％など）又は例えば少なくとも９０％（９０～９９％など）のヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエートである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド又はその連続ヌクレオチド配列のヌクレオシド間結合のすべてが、ホスホロチオアートである。

いくつかの有利な実施形態では、オリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列のすべてのヌクレオシド間結合がホスホロチオエートであるか、又はオリゴヌクレオチドのすべてのヌクレオシド間結合がホスホロチオエート結合である。

いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、他のヌクレオシド間結合（ホスホジエステル及びホスホロチオエート以外の）、例えばアルキルホスホネート／メチルホスホネートヌクレオシド間結合を含んでもよく、これは、別のＤＮＡホスホロチオエートのギャップ領域内で耐性であり得る（例えばＥＰ ２ ７４２ １３５）。

核酸塩基
「核酸塩基」という用語は、ヌクレオシド及びヌクレオチドに存在するプリン（例えばアデニン及びグアニン）及びピリミジン（例えばウラシル、チミン及びシトシン）部分を含み、これらは核酸ハイブリダイゼーションにおいて水素結合を形成する。本発明の文脈において、核酸塩基という用語はまた、天然に存在する核酸塩基とは異なっていてもよいが、核酸ハイブリダイゼーション中に機能する修飾核酸塩基も包含する。この文脈において、「核酸塩基」とは、アデニン、グアニン、シトシン、チミジン、ウラシル、キサンチン、及びヒポキサンチンなどの天然に存在する核酸塩基と、天然に存在しないバリアントとの両方を指す。このようなバリアントは、例えば、Ｈｉｒａｏ ｅｔ ａｌ（２０１２）Ａｃｃｏｕｎｔｓ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｖｏｌ ４５ ｐａｇｅ ２０５５及びＢｅｒｇｓｔｒｏｍ（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｓｕｐｐｌ．３７ １．４．１に記載されている。

いくつかの実施形態では、核酸塩基部分は、プリン又はピリミジンを修飾プリン又はピリミジン、例えば置換プリン又は置換ピリミジン、例えばイソシトシン、シュードイソシトシン、５－メチルシトシン、５－チオゾロ－シトシン、５－プロピニル－シトシン、５－プロピニル－ウラシル、５－ブロモウラシル５－チアゾロ－ウラシル、２－チオ－ウラシル、２’－チオ－チミン、イノシン、ジアミノプリン、６－アミノプリン、２－アミノプリン、２，６－ジアミノプリン及び２－クロロ－６－アミノプリンから選択される核酸塩基に変えることにより修飾される。

核酸塩基部分は、対応する各核酸塩基についての文字コード、例えば、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ又はＵにより示されてもよく、ここで、各文字は、任意に等価機能の改変された核酸塩基を含んでもよい。例えば、例示したオリゴヌクレオチドにおいて、核酸塩基部分は、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ、及び５－メチルシトシンから選択される。任意に、ＬＮＡギャップマーについて、５－メチルシトシンＬＮＡヌクレオシドが使用され得る。

修飾オリゴヌクレオチド
「修飾オリゴヌクレオチド」という用語は、１つ又は複数の糖修飾ヌクレオシド及び／又は修飾ヌクレオシド間結合及び／又は修飾核酸塩基を含むオリゴヌクレオチドを表す。「キメラオリゴヌクレオチド」という用語は、修飾ヌクレオシド及びＤＮＡヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドを記述するために文献で使用されている用語である。本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、有利にはキメラオリゴヌクレオチドである。

相補性
「相補性」又は「相補的」という用語は、ヌクレオシド／ヌクレオチドのＷａｔｓｏｎ－Ｃｒｉｃｋ塩基対形成の能力を表す。ワトソン・クリック塩基対は、グアニン（Ｇ）－シトシン（Ｃ）及びアデニン（Ａ）－チミン（Ｔ）／ウラシル（Ｕ）である。オリゴヌクレオチドは修飾核酸塩基を有するヌクレオシドを含んでいてもよく、例えば５－メチルシトシンは、しばしばシトシンの代わりに用いられ、したがって、相補性という用語は、非修飾核酸塩基と修飾核酸塩基との間のワトソン・クリック塩基対合を包含することが理解されよう（例えば、Ｈｉｒａｏ ｅｔ ａｌ（２０１２）Ａｃｃｏｕｎｔｓ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｖｏｌ ４５ ｐａｇｅ ２０５５ ａｎｄ Ｂｅｒｇｓｔｒｏｍ（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｓｕｐｐｌ．３７ １．４．１を参照されたい）。

用語「％相補的」とは、本明細書で使用される場合、連続ヌクレオチド配列にわたって参照配列（例えば、標的配列又は配列モチーフ）に相補的である、核酸分子（例えば、オリゴヌクレオチド）の連続ヌクレオチド配列のヌクレオチドの割合（パーセント）を指す。したがって、相補性のパーセンテージは、２つの配列間（標的配列５’－３’と３’－５’からのオリゴヌクレオチド配列とを整列させた場合）で相補的である（ワトソン・クリック塩基対から）整列した核酸塩基の数を数え、その数をオリゴヌクレオチド中のヌクレオチドの総数で割り、１００を掛けることによって計算される。このような比較において、整列（塩基対を形成）しない核酸塩基／ヌクレオチドは、ミスマッチと称される。挿入及び欠失は、連続ヌクレオチド配列の％相補性の計算において許容されない。相補性の決定において、核酸塩基の化学的修飾は、核酸塩基がワトソン・クリック塩基対合を形成する機能的能力が保持される限り、無視されることが理解されるであろう（例えば、５－メチルシトシンは、％同一性の計算の目的のために、シトシンと同一であると見なされる）。

「完全に相補的な」という用語は、１００％の相補性を指す。

同一性
本明細書で使用される「同一性」という用語は、連続ヌクレオチド配列にわたって参照配列（例えば、配列モチーフ）と同一である、核酸分子（例えば、オリゴヌクレオチド）内の連続ヌクレオチド配列のヌクレオチドの割合（パーセントで表される）を指す。したがって、同一性のパーセンテージは、２つの配列（本発明の化合物の連続ヌクレオチド配列及び参照配列における）の間で同一の（一致する）整列された核酸塩基の数を数え、その数をオリゴヌクレオチドのヌクレオチドの総数で割り、１００を掛けることにより計算される。したがって、同一性の百分率＝（一致数×１００）／整列領域（例えば、連続ヌクレオチド配列）の長さ。挿入及び欠失は、連続ヌクレオチド配列の同一性の百分率の計算において許容されない。同一性の決定において、核酸塩基の化学的修飾は、核酸塩基がＷａｔｓｏｎ Ｃｒｉｃｋ塩基対を形成する機能的能力が保持される限り、無視されることが理解されよう（例えば、５－メチルシトシンは、同一性％の計算の目的のために、シトシンと同一であると見なされる）。

ハイブリダイゼーション
本明細書で用いられる「ハイブリダイズ」又は「ハイブリダイズする」という用語は、対向する鎖上の塩基対間に水素結合を形成することにより二重鎖を形成する２つの核酸鎖（例えば、オリゴヌクレオチド及び標的核酸）を指すと理解されるべきである。２つの核酸鎖の間の結合の親和性は、ハイブリダイゼーションの強度である。これは、度々、オリゴヌクレオチドの半分が標的核酸と二重鎖を形成する温度として定義される、融解温度（Ｔｍ）の観点から説明される。生理学的条件では、Ｔｍは、親和性に厳密に比例しない（Ｍｅｒｇｎｙ ａｎｄ Ｌａｃｒｏｉｘ，２００３，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ １３：５１５－５３７）。標準状態ギブス自由エネルギーΔＧ°は、結合親和性をより正確に表し、ΔＧ°＝－ＲＴｌｎ（Ｋｄ）によって反応の解離定数（Ｋｄ）に関連付けられ、ここでＲは気体定数であり、Ｔは絶対温度である。したがって、オリゴヌクレオチドと標的核酸との間の反応の非常に低いΔＧ°は、オリゴヌクレオチドと標的核酸との間の強いハイブリダイゼーションを反映している。ΔＧ°は、水性濃度が１Ｍ、ｐＨが７、温度が３７℃での反応に関連したエネルギーである。標的核酸に対するオリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションは、自発的反応であり、自発的反応では、ΔＧ°はゼロ未満である。ΔＧ°は、例えば、Ｈａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９６５，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．３６－３８及びＨｏｌｄｇａｔｅ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ．に記載されているように、例えば等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）法を使用することによって、実験的に測定することができる。当業者は、ΔＧ°測定のために市販の装置が入手可能であることを知るであろう。ΔＧ°は、ＳａｎｔａＬｕｃｉａ，１９９８，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．９５：１４６０－１４６５に記載の最近接モデル（ｎｅａｒｅｓｔ ｎｅｉｇｈｂｏｒ ｍｏｄｅｌ）を用いて、Ｓｕｇｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３４：１１２１１－１１２１６及びＭｃＴｉｇｕｅ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４３：５３８８－５４０５に記載される適切に得られる熱力学的パラメータを使用し、数値的に推定し得る。核酸標的をハイブリダイゼーションによって調節する可能性を確保するために、本発明のオリゴヌクレオチドは、１０～３０ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドに対して－１０ｋｃａｌ／ｍｏｌ未満の概算ΔＧ°値で標的核酸にハイブリダイズする。幾つかの実施形態では、ハイブリダイゼーションの程度又は強度は、標準状態でのギブスの自由エネルギーΔＧ°によって測定される。オリゴヌクレオチドは、８～３０ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドについて、－１０ｋｃａｌ／ｍｏｌ未満、例えば－１５ｋｃａｌ／ｍｏｌ未満、例えば－２０ｋｃａｌ／ｍｏｌ未満、及び例えば－２５ｋｃａｌ／ｍｏｌ未満の推定ΔＧ°値で標的核酸にハイブリダイズし得る。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、－１０から－６０ｋｃａｌ／ｍｏｌ、例えば－１２から－４０、例えば－１５から－３０ｋｃａｌ／ｍｏｌ、又は－１６から－２７ｋｃａｌ／ｍｏｌ、例えば－１８から－２５ｋｃａｌ／ｍｏｌの範囲内の推定ΔＧ°値で、標的核酸にハイブリダイズする。

標的核酸
本発明によれば、標的核酸は、哺乳動物Ｃ１Ｓをコードする核酸であり、例えば遺伝子、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、及びプレｍＲＮＡ、成熟ｍＲＮＡ又はｃＤＮＡ配列であり得る。したがって、標的は、Ｃ１Ｓ標的核酸と称することができる。

本発明の治療用オリゴヌクレオチドは、例えば、哺乳動物Ｃ１Ｓのエクソン領域（特に、ｓｉＲＮＡ及びｓｈＲＮＡであるが、アンチセンスオリゴヌクレオチドでもある）を標的とすることができるか、又は例えば、Ｃ１ＳプレｍＲＮＡ（特に、アンチセンスオリゴヌクレオチド）の任意のイントロン領域を標的とすることができる。

表１ａは、配列番号３、すなわちヒトＣ１ＳプレｍＲＮＡ配列の予測エクソン及びイントロン領域を列挙する。

いくつかの実施形態では、標的核酸は、Ｃ１Ｓタンパク質、特にヒトＣ１Ｓタンパク質などの哺乳動物Ｃ１Ｓタンパク質をコードする。例えば、ヒト、カニクイザル及びマウスＣ１Ｓのゲノム配列（表２）、並びにヒト、サル及びマウスＣ１ＳのプレｍＲＮＡ配列並びにヒトＣ１Ｓの成熟ｍＲＮＡの概要（表３）を提供する表２及び表３を参照されたい。

いくつかの実施形態では、標的核酸は、配列番号１、２、３、４、５、及び６、又はその天然に存在するバリアント（例えば、哺乳動物Ｃ１Ｓをコードする配列）からなる群から選択される。

本発明の核酸分子を研究又は診断に使用する場合、標的核酸は、ｃＤＮＡ、又はＤＮＡ若しくはＲＮＡに由来する合成核酸であり得る。

インビボ又はインビトロ用途に関して、本発明の治療用核酸分子は、典型的には、Ｃ１Ｓ標的核酸を発現する細胞内で、Ｃ１Ｓ標的核酸の発現を阻害することが可能である。本発明の核酸分子の核酸塩基の連続配列は、任意に１つ又は２つのミスマッチを除き、核酸分子の長さにわたって測定して、典型的にはＣ１Ｓ標的核酸の保存領域に相補的である。いくつかの実施形態では、標的核酸は、マウスＣ１ｓ１などの哺乳動物Ｃ１Ｓタンパク質、例えば配列番号１として開示されるものなどのマウスＣ１ｓ１プレｍＲＮＡ配列、配列番号３として開示されるものなどのヒトＣ１ＳプレｍＲＮＡ配列、又は配列番号４として開示されるものなどのカニクイザルＣ１ＳプレｍＲＮＡ配列、又は配列番号６として開示されるヒト成熟ｍＲＮＡのものなどの成熟Ｃ１Ｓ ｍＲＮＡをコードするプレｍＲＮＡなどのメッセンジャーＲＮＡである。いくつかの実施形態では、標的核酸は、マウスＣ１ｓ２などの哺乳動物Ｃ１Ｓタンパク質、例えば配列番号２として開示されるものなどのマウスＣ１ｓ２プレｍＲＮＡ配列、配列番号３として開示されるものなどのヒトＣ１ＳプレｍＲＮＡ配列、又は配列番号５として開示されるものなどのカニクイザルＣ１ＳプレｍＲＮＡ配列、又は配列番号６として開示されるヒト成熟ｍＲＮＡのものなどの成熟Ｃ１Ｓ ｍＲＮＡをコードするプレｍＲＮＡなどのメッセンジャーＲＮＡである。配列番号１、２、３、４、５及び６はＤＮＡ配列である。標的ＲＮＡ配列は、チミジン塩基（Ｔ）の代わりに、ウラシル（Ｕ）塩基を有することが理解されよう。

上記配列の異なる、すなわちより短い注釈付きｍＲＮＡアイソフォームが存在することが知られている。アイソフォームは当技術分野で周知であり、既知の配列データベースから誘導することができる。

例示的な標的核酸に関する更なる情報は、表２及び３に提供される。

いくつかの実施形態では、標的核酸は、配列番号１である。

いくつかの実施形態では、標的核酸は、配列番号２である。

いくつかの実施形態では、標的核酸は、配列番号３である。

いくつかの実施形態では、標的核酸は、配列番号４である。

いくつかの実施形態では、標的核酸は、配列番号５である。

いくつかの実施形態では、標的核酸は、配列番号６である。

標的
本明細書で使用される「標的」という用語は、本開示の文脈においてＣ１Ｓであり得る補体成分１ｓ（Ｃ１Ｓ）を指す。Ｃ１Ｓは、しばしばＥＤＳＰＤ２又は補体Ｃ１ｓとも呼ばれる。さらに、「標的」という用語は、Ｃ１Ｓ標的核酸並びにＣ１Ｓタンパク質を指すことができる。

標的配列
本明細書で使用される用語「標的配列」は、本発明のオリゴヌクレオチド又は核酸分子に相補的な核酸塩基配列を含む、標的核酸中に存在するヌクレオチドの配列を指す。いくつかの実施形態では、標的配列は、本発明のオリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列に相補的な核酸塩基配列を有する標的核酸上の領域を含むか、又はそれからなる。標的核酸のこの領域は、互換的に標的ヌクレオチド配列、標的配列、又は標的領域と称され得る。いくつかの実施形態では、標的配列は、本発明の核酸分子の相補的配列よりも長く、例えば、本発明のいくつかの核酸分子により標的とされ得る標的核酸の好ましい領域を表し得る。Ｃ１Ｓ遺伝子が個体間で高レベルの変動性を示すことは当技術分野で周知である。「標的配列」という用語は、Ｃ１Ｓのすべての公的に注釈が付けられたバリアントを包含する。

いくつかの実施形態では、標的配列は、ヒトＣ１Ｓ ｍＲＮＡエクソン、例えばＥａ１～Ｅａ１６からなる群から選択されるヒトＣ１Ｓ ｍＲＮＡエクソンからなる群から選択される配列である（例えば上記の表１ａ参照）
したがって、本発明は、Ｅａ１～Ｅａ１６（表１ａ参照）からなる群から選択される配列番号３のエクソン領域に少なくとも９０％相補的、例えば９０～９５％又は完全に相補的な連続配列を含むオリゴヌクレオチドを提供する。

いくつかの実施形態では、標的配列は、ヒトＣ１Ｓ ｍＲＮＡエクソン、例えばＩａ１～Ｉａ１５からなる群から選択されるヒトＣ１Ｓ ｍＲＮＡイントロンからなる群から選択される配列である（例えば上記の表１ａ参照）
したがって、本発明は、Ｉａ１～Ｉａ１５（表１ａ参照）からなる群から選択される配列番号３のイントロン領域に少なくとも９０％相補的、例えば９０～９５％又は完全に相補的な連続配列を含むオリゴヌクレオチドを提供する。

いくつかの実施形態では、標的配列は配列番号６である。いくつかの実施形態では、本明細書で言及される連続ヌクレオチド配列は、配列番号６の標的配列に少なくとも９０％（例えば、９０～９５％）相補的、例えば少なくとも９５％（例えば、９５～９８）相補的である。いくつかの実施形態では、連続ヌクレオチド配列は、配列番号６の標的配列に、完全に相補性である。

本発明のオリゴヌクレオチドは、標的核酸上の領域、例えば本明細書に記載される標的配列に相補的又はハイブリダイズする連続ヌクレオチド配列を含む。

オリゴヌクレオチドが相補的であるか又はハイブリダイズする標的核酸配列は、一般に、少なくとも１０ヌクレオチドの連続する核酸塩基のストレッチを含む。連続ヌクレオチド配列は、１２～７０ヌクレオチド、例えば１２～５０、例えば１３～３０、例えば１４～２５、例えば１５～２１の連続ヌクレオチドである。

いくつかの実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチドは、表４ａに示される領域を標的とする。

標的細胞
本明細書で使用される用語「標的細胞」は、標的核酸を発現する細胞を指す。本発明の治療的使用のためには、標的細胞が脳細胞であることが有利である。いくつかの実施形態では、脳細胞は、ニューロン及びミクログリア細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、標的細胞は、インビボ又はインビトロであり得る。いくつかの実施形態では、標的細胞は、哺乳動物細胞、例えばげっ歯類細胞、例えばマウス細胞若しくはラット細胞、若しくはウッドチャック細胞、又は霊長類細胞、例えばサル細胞（例えば、カニクイザル細胞）若しくはヒト細胞である。

いくつかの実施形態では、標的細胞は、Ｃ１ＳプレｍＲＮＡ又はＣ１Ｓ成熟ｍＲＮＡなどのＣ１Ｓ ｍＲＮＡを発現する。Ｃ１Ｓ ｍＲＮＡのポリＡテールは、典型的には、アンチセンスオリゴヌクレオチド標的化では無視される。

天然に存在するバリアント
用語「天然に存在するバリアント」は、標的核酸と同じ遺伝子座に由来するが、例えば、同じアミノ酸をコードする多数のコドンを生じる遺伝コードの縮重によって、又はｐｒｅ－ｍＲＮＡの選択的スプライシング、若しくは単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）などの多型の存在のために異なり得る、Ｃ１Ｓ遺伝子又は転写産物のバリアント、及び対立遺伝子バリアントを指す。オリゴヌクレオチドの十分な相補的な配列の存在に基づいて、本発明のオリゴヌクレオチドは、したがって、標的核酸及びその天然に存在するバリアントを標的とし得る。

いくつかの実施形態では、天然に存在するバリアントは、哺乳動物Ｃ１Ｓ標的核酸、例えば配列番号３及び／又は配列番号４に対して少なくとも９５％（９５～９８％など）、例えば少なくとも９８％（９９～９９％など）、又は少なくとも９９％（９９～１００％など）の相同性を有する。いくつかの実施形態では、天然に存在するバリアントは、配列番号３のヒトＣ１Ｓ標的核酸に対して少なくとも９９％（９９～１００％など）の相同性を有する。いくつかの実施形態では、天然に存在するバリアントは、哺乳動物Ｃ１Ｓ標的核酸、例えば配列番号３及び／又は配列番号５に対して少なくとも９５％（９５～９８％など）、例えば少なくとも９８％（９８～９９％など）、又は少なくとも９９％（９９～１００％など）の相同性を有する。いくつかの実施形態では、天然に存在するバリアントは、既知の多型である。

発現の阻害
本明細書で使用される「発現の阻害」という用語は、標的細胞においてＣ１Ｓの量又は活性を阻害するＣ１Ｓ阻害剤能力の全体的な用語として理解されるべきである。発現又は活性の阻害は、Ｃ１ＳプレｍＲＮＡ若しくはＣ１Ｓ ｍＲＮＡのレベルを測定することによって、又は細胞中のＣ１Ｓタンパク質若しくは活性のレベルを測定することによって決定され得る。発現の阻害は、インビトロ又はインビボで決定され得る。阻害は、対照を参照することによって決定される。対照は、生理食塩水組成物で処理された個々の細胞又は標的細胞であることが一般に理解される。

「阻害剤」、「阻害」又は「阻害する」という用語は、Ｃ１Ｓの量、発現、及び／又は活性を下方調節する、減少させる、抑制する、減らす、低下させる、又は低減させるとも呼ばれ得る。

Ｃ１Ｓの発現の阻害は、例えばプレｍＲＮＡ又はｍＲＮＡの分解によって、例えばＲＮＡ干渉経路を介して機能するギャップマー又は核酸分子、例えばｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡなどのオリゴヌクレオチドを動員するＲＮａｓｅ Ｈを使用して起こり得る。あるいは、本発明の阻害剤は、Ｃ１Ｓ ｍＲＮＡ又はポリペプチドに結合し、Ｃ１Ｓの活性を阻害するか、又は他の分子へのその結合を妨げ得る。

いくつかの実施形態では、Ｃ１Ｓ標的核酸の発現又はＣ１Ｓタンパク質の活性の阻害は、標的細胞中のＣ１Ｓタンパク質の量の低減をもたらす。好ましくは、Ｃ１Ｓタンパク質の量は、対照と比較して低減する。いくつかの実施形態では、Ｃ１Ｓタンパク質の量の低減は、対照と比較して、少なくとも２０％、少なくとも３０％である。いくつかの実施形態では、標的細胞中のＣ１Ｓタンパク質の量は、対照と比較して、少なくとも５０％、例えば５０～６０％、又は少なくとも６０％、例えば６０～７０％、又は少なくとも７０％、例えば７０～８０％、少なくとも８０％、例えば８０～９０％、又は少なくとも９０％、例えば９０～９５％減少する。

糖修飾
本発明のオリゴヌクレオチドは、修飾された糖部分、すなわち、ＤＮＡ及びＲＮＡに見られるリボース糖部分と比較した場合の糖部分の修飾を有する１つ又は複数のヌクレオシドを含み得る。

リボース糖部分の修飾を有する数多くのヌクレオシドは、親和性及び／又はヌクレアーゼ耐性などのオリゴヌクレオチドのある特定の性質を改善することを主な目的として作製されてきた。

このような修飾には、例えば、ヘキソース環（ＨＮＡ）、又は典型的にはリボース環（ＬＮＡ）上のＣ２炭素とＣ４炭素との間にビラジカル架橋を有する二環式環、又は典型的にはＣ２炭素とＣ３炭素との間の結合を欠く非結合リボース環（例えば、ＵＮＡ）で置き換えることにより、リボース環構造が修飾されているものが含まれる。他の糖修飾ヌクレオシドには、例えばビシクロヘキソース核酸（国際公開第２０１１／０１７５２１号）又は三環式核酸（国際公開第２０１３／１５４７９８号）が含まれる。修飾ヌクレオシドにはまた、糖部分が例えばペプチド核酸（ＰＮＡ）又はモルホリノ核酸の場合には非糖部分で置き換えられているヌクレオシドが含まれる。

糖修飾にはまた、リボース環上の１つ又は複数の置換基を、水素以外の基、又はＤＮＡ及びＲＮＡヌクレオシド中に天然に存在する２’－ＯＨ基に変更することによってなされる修飾も含まれる。置換基は、例えば２’、３’、４’、又は５’位で導入され得る。

高親和性修飾ヌクレオシド
「高親和性修飾ヌクレオシド」は、修飾ヌクレオチドであり、これは、オリゴヌクレオチドに組み込まれる場合、例えば融解温度（Ｔｍ）によって測定されるように、その相補的標的に対するオリゴヌクレオチドの親和性を高める。本発明の高親和性修飾ヌクレオシドは、好ましくは、修飾ヌクレオシドあたり＋０．５～＋１２Ｃの範囲内、より好ましくは＋１．５～＋１０^ｏＣの範囲内、最も好ましくは＋３～＋８^ｏＣの範囲内の融解温度の上昇をもたらす。数多くの高親和性修飾ヌクレオシドが当該技術分野において知られており、例えば、多くの２’置換ヌクレオシド及びロックド核酸（ＬＮＡ）が挙げられる（例えば、Ｆｒｅｉｅｒ＆Ａｌｔｍａｎｎ；Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．，１９９７，２５，４４２９－４４４３及びＵｈｌｍａｎｎ；Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２０００，３（２），２９３－２１３を参照されたい）。

２’糖修飾ヌクレオシド
２’糖修飾ヌクレオシドは、２’位にＨ又は－ＯＨ以外の置換基を有するか（２’置換ヌクレオシド）、又は２’炭素とリボース環上の第２の炭素との間に架橋を形成することができる２’結合ビラジカルを含むヌクレオシド、例えばＬＮＡ（２’－４’ビラジカル架橋）ヌクレオシドである。

実際、２’糖置換ヌクレオシドの開発には多くの注目が集まっており、数多くの２’置換ヌクレオシドが、オリゴヌクレオチドに組み込まれた際に有益な特性を有することが見出されている。例えば、２’修飾糖は、高められた結合親和性及び／又は増大されたヌクレアーゼ耐性をオリゴヌクレオチドにもたらすことができる。２’置換修飾ヌクレオシドの例は、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡ、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ（ＭＯＥ）、２’－アミノ－ＤＮＡ、２’－フルオロ－ＲＮＡ及び２’－Ｆ－ＡＮＡヌクレオシドである。更なる例については、例えばＦｒｅｉｅｒ＆Ａｌｔｍａｎｎ；Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．，１９９７，２５，４４２９－４４４３及びＵｈｌｍａｎｎ；Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２０００，３（２），２９３－２１３、及びＤｅｌｅａｖｅｙ ａｎｄ Ｄａｍｈａ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２０１２，１９，９３７を参照されたい。以下は、幾つかの２’置換修飾ヌクレオシドの例示である。

本発明に関して、２’置換糖修飾ヌクレオシドは、ＬＮＡのような２’架橋ヌクレオシドを含まない。

ロックド核酸ヌクレオシド（ＬＮＡヌクレオシド）
「ＬＮＡヌクレオシド」は、上記ヌクレオシドのリボース糖環のＣ２’とＣ４’とを結合するバイラジカル（「２’－４’架橋」とも称される）を含む２’修飾ヌクレオシドであり、これはリボース環のコンホメーションを制限又は固定する。これらのヌクレオシドはまた、文献において、架橋核酸又は二環式核酸（ＢＮＡ）とも称されている。リボースの立体配座の固定は、ＬＮＡが相補的ＲＮＡ又はＤＮＡ分子のオリゴヌクレオチドに組み込まれる場合、ハイブリダイゼーションの親和性の向上（二重鎖の安定化）に関連している。これは、オリゴヌクレオチド／相補二重鎖の融解温度を測定することによって、日常的に決定されうる。

非限定的で例示的なＬＮＡヌクレオシドは、国際公開第９９／０１４２２６、国際公開第００／６６６０４、国際公開第９８／０３９３５２、国際公開第２００４／０４６１６０、国際公開第００／０４７５９９、国際公開第２００７／１３４１８１、国際公開第２０１０／０７７５７８、国際公開第２０１０／０３６６９８、国際公開第２００７／０９００７１、国際公開第２００９／００６４７８、国際公開第２０１１／１５６２０２、国際公開第２００８／１５４４０１、国際公開第２００９／０６７６４７、国際公開第２００８／１５０７２９、Ｍｏｒｉｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１２，７３－７６、Ｓｅｔｈ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２０１０，Ｖｏｌ ７５（５）ｐｐ．１５６９－８１、及びＭｉｔｓｕｏｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００９，３７（４），１２２５－１２３８、及びＷａｎ ａｎｄ Ｓｅｔｈ，Ｊ．Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２０１６，５９，９６４５－９６６７に開示されている。

本発明のＬＮＡヌクレオシドの特定の例がスキーム１に示されている（ここで、Ｂは上記定義されたとおりである）。
スキーム１：

本発明の分子における使用のための特定のＬＮＡヌクレオシドは、ベータ－Ｄ－オキシ－ＬＮＡ、６’－メチル－ベータ－Ｄ－オキシＬＮＡ、例えば（Ｓ）－６’－メチル－ベータ－Ｄ－オキシ－ＬＮＡ（ＳｃＥＴ）及びＥＮＡである。特定の有利なＬＮＡは、ベータ－Ｄ－オキシ－ＬＮＡである。

ＲＮａｓｅ Ｈの活性及び動員
アンチセンスオリゴヌクレオチドのＲＮａｓｅ Ｈ活性とは、相補的ＲＮＡ分子との二重鎖にあるときにＲＮａｓｅ Ｈを動員する能力を指す。例えば、国際公開第０１／２３６１３号は、ＲＮａｓｅ Ｈを動員する能力を決定するために使用され得る、ＲＮａｓｅ Ｈ活性を決定するためのインビトロ方法を提供する。典型的には、オリゴヌクレオチドは、相補的な標的核酸が提供された場合、ｐｍｏｌ／ｌ／分で測定して、試験されている修飾オリゴヌクレオチドと同じ塩基配列を有するが、ＤＮＡモノマーのみを含み、オリゴヌクレオチドの全モノマー間にホスホロチオエート結合を有するオリゴヌクレオチドを使用し、また国際公開第０１／２３６１３号（参照により本明細書に組み込まれる）の実施例９１～９５により提供される方法論を使用したときに決定された初期率の少なくとも５％、例えば少なくとも１０％～１５％又は２０％超、例えば２０～２５％、又は２０～３０％を有する場合に、ＲＮａｓｅ Ｈを動員することができると見なされる。ＲＮａｓｅ Ｈ活性の決定での使用について、組換えヒトＲＮａｓｅ Ｈ１は、Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｍａｒｔ（登録商標）（大腸菌で発現したＨｉｓタグと融合した組換えヒトＲＮａｓｅ Ｈ１）から入手できる。

ギャップマー
本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド又はその連続ヌクレオチド配列はギャップマーであってもよく、また、ギャップマーオリゴヌクレオチド又はギャップマー設計とも称され得る。アンチセンスギャップマーは、通常、ＲＮａｓｅ Ｈ媒介分解を介した標的核酸の阻害に用いられる。ギャップマーオリゴヌクレオチドは、少なくとも３つの区別される構造領域、５’－フランク、ギャップ、及び３’－フランク、Ｆ－Ｇ－Ｆ’を、５’－＞３’配向で含む。「ギャップ」領域（Ｇ）は、オリゴヌクレオチドがＲＮａｓｅ Ｈを動員することを可能にする連続ＤＮＡヌクレオチドのストレッチを含む。ギャップ領域は、１つ又は複数の糖修飾ヌクレオシド、有利には高親和性糖修飾ヌクレオシドを含む５’隣接領域（Ｆ）と、１つ又は複数の糖修飾ヌクレオシド、有利には高親和性糖修飾ヌクレオシドを含む３’隣接領域（Ｆ’）が隣接する。領域Ｆ及びＦ’の１つ又は複数の糖修飾ヌクレオシドは、標的核酸に対するオリゴヌクレオチドの親和性を向上させる（すなわち、親和性向上糖修飾ヌクレオシドである）。いくつかの実施形態では、領域Ｆ及びＦ’の１つ又は複数の糖修飾ヌクレオシドは、例えばＬＮＡ及び２’－ＭＯＥから独立して選択される、高親和性２’糖修飾などの２’糖修飾ヌクレオシドである。

ギャップマー設計において、ギャップ領域の最も５’及び３’のヌクレオシドはＤＮＡヌクレオシドであり、それぞれ、５’（Ｆ）及び／又は３’（Ｆ’）領域の糖修飾ヌクレオシドに隣接して配置されている。フランクはさらに、ギャップ領域から最も遠い端、即ち５’フランクの５’末端及び３’フランクの３’末端に少なくとも１つの糖修飾ヌクレオシドを有することによって定義されてもよい。

領域Ｆ－Ｇ－Ｆ’は、連続ヌクレオチド配列を形成する。本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド又はその連続ヌクレオチド配列は、式Ｆ－Ｇ－Ｆ’のギャップマー領域を含み得る。

ギャップマー設計Ｆ－Ｇ－Ｆ’の全長は、例えば１２～３２ヌクレオシド、例えば１３～２４、例えば１４～２２ヌクレオシド、例えば１５～２１ヌクレオシドでありうる。

例として、本発明のギャップマーオリゴヌクレオチドは、以下の式によって表すことができる：
Ｆ_１－８－Ｇ_５－１６－Ｆ’_１－８、例えば
Ｆ_１－８－Ｇ_７－１６－Ｆ’_２－８
ただし、ギャップマー領域Ｆ－Ｇ－Ｆ’の全長は、少なくとも１２（１２～１５ヌクレオチドなど）、例えば少なくとも１４ヌクレオチド（１４～２０ヌクレオチド）の長さであることを条件とする。

本発明の一態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチド又はその連続ヌクレオチド配列は、式５’－Ｆ－Ｇ－Ｆ’－３’のギャップマーからなるか又はそれを含み、式中、領域Ｆ及びＦ’が独立して１～８個のヌクレオシドを含むか又はそれらからなり、そのうち１～４個が２’糖修飾され、Ｆ及びＦ’領域の５’及び３’末端をそれぞれ規定し、ＧがＲＮａｓｅ Ｈを動員することができる６個と１６個の間のヌクレオシドの領域である。

本発明の一態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチド又はその連続ヌクレオチド配列は、式５’－Ｆ－Ｇ－Ｆ’－３’のギャップマーからなるか又はそれを含み、式中、領域Ｆ及びＦ’が独立して１～８個のヌクレオシドを含むか又はそれらからなり、そのうち１～４個が２’糖修飾され、Ｆ及びＦ’領域の５’及び３’末端をそれぞれ規定し、Ｇが、ＲＮａｓｅ Ｈを動員することができる６個と１８個の間のヌクレオシドの領域である。いくつかの実施形態では、Ｇ領域はＤＮＡヌクレオシドからなる。

いくつかの実施形態では、領域Ｆ及びＦ’は、独立して、糖修飾ヌクレオシドの連続する配列からなるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、領域Ｆの糖修飾ヌクレオシドは、独立して、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ単位、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡ、２’－アミノ－ＤＮＡ単位、２’－フルオロ－ＤＮＡ単位、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、ＭＯＥ単位、ＬＮＡ単位、アラビノ核酸（ＡＮＡ）単位及び２’－フルオロ－ＡＮＡ単位から選択されてもよい。

幾つかの実施形態では、領域Ｆ及びＦ’は、独立して、ＬＮＡと２’置換糖修飾ヌクレオチドの両方を含む（混合ウィング設計）。いくつかの実施形態では、２’置換糖修飾ヌクレオチドは、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ単位、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡ、２’－アミノ－ＤＮＡ単位、２’－フルオロ－ＤＮＡ単位、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、ＭＯＥ単位、アラビノ核酸（ＡＮＡ）単位及び２’－フルオロ－ＡＮＡ単位からなる群から独立して選択されてもよい。

幾つかの実施形態では、領域Ｆ及びＦ’の全修飾ヌクレオシドが、例えばβ－Ｄ－オキシＬＮＡ、ＥＮＡ、又はＳｃＥＴヌクレオシドから独立して選択されるＬＮＡヌクレオシドであり、領域Ｆ又はＦ’、若しくはＦ及びＦ’は、任意に、ＤＮＡヌクレオシドを含んでいてもよい。幾つかの実施形態では、領域Ｆ及びＦ’の全修飾ヌクレオシドがβ－Ｄ－オキシＬＮＡヌクレオシドであり、ここで、領域Ｆ又はＦ’、若しくはＦ及びＦ’は、任意に、ＤＮＡヌクレオシドを含んでいてもよい。このような実施形態では、フランキング領域Ｆ又はＦ’、若しくはＦ及びＦ’の両方が少なくとも３つのヌクレオシドを含み、Ｆ及び／又はＦ’領域の最も５’及び３’のヌクレオシドは、ＬＮＡヌクレオシドである。

ＬＮＡギャップマー
「ＬＮＡギャップマー」は、領域Ｆ及びＦ’の一方又は両方に、ＬＮＡヌクレオシドを含むか、若しくはそれからなるギャップマーである。ベータ－Ｄ－オキシギャップマーは、領域Ｆ及びＦ’の一方又は両方に、ベータ－Ｄ－オキシＬＮＡヌクレオシドを含むか、若しくはそれからなるギャップマーである。

いくつかの実施形態では、ＬＮＡギャップマーは、式：［ＬＮＡ］_１－５－［領域Ｇ］_６－１８－［ＬＮＡ］_１－５であり、領域Ｇはギャップマー領域Ｇの定義で定義したとおりである。

ＭＯＥギャップマー
「ＭＯＥギャップマー」は、領域Ｆ及びＦ’がＭＯＥ（メトキシエチル）ヌクレオシドからなるギャップマーである。いくつかの実施形態では、ＭＯＥギャップマーは、設計［ＭＯＥ］_１－８－［領域Ｇ］_５－１６－［ＭＯＥ］_１－８、例えば［ＭＯＥ］_２－７－［領域Ｇ］_６－１４－［ＭＯＥ］_２－７、例えば［ＭＯＥ］_３－６－［領域Ｇ］_８－１２－［ＭＯＥ］_３－６、例えば［ＭＯＥ］_５－［領域Ｇ］_１０－［ＭＯＥ］ _５ のものであり、ここで、領域Ｇはギャップマーの定義に規定した通りである。５－１０－５設計（ＭＯＥ－ＤＮＡ－ＭＯＥ）を有するＭＯＥギャップマーは、当技術分野で広く使用されている。

オリゴヌクレオチド内の領域Ｄ’又はＤ’’
本発明のオリゴヌクレオチドは、いくつかの実施形態では、標的核酸に相補的なオリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列、例えばギャップマー領域Ｆ－Ｇ－Ｆ’を含むか、又はそれからなってもよく、５’及び／又は３’ヌクレオシドをさらに含んでもよい。さらなる５’及び／又は３’ヌクレオシドは、標的核酸に完全に相補的であっても、完全に相補的でなくてもよい。このようなさらなる５’及び／又は３’ヌクレオシドは、本明細書では領域Ｄ’及びＤ’’と称され得る。

領域Ｄ’又はＤ’’の付加は、連続ヌクレオチド配列、例えばギャップマーをコンジュゲート部分又は別の官能基に連結する目的のために使用され得る。連結に用いられる場合、コンジュゲート部分を有する連続ヌクレオチド配列は、生体切断可能なリンカーとしての役割を果たしうる。あるいは、それはエキソヌクレアーゼ保護を提供するために、若しくは合成又は製造を容易にするために使用されてもよい。

領域Ｄ’及びＤ’’は、各々、領域Ｆの５’末端又は領域Ｆ’の３’末端に結合されて、以下の式Ｄ’－Ｆ－Ｇ－Ｆ’、Ｆ－Ｇ－Ｆ’－Ｄ’’、又はＤ’－Ｆ－Ｇ－Ｆ’－Ｄ’’の設計を生成することができる。この場合、Ｆ－Ｇ－Ｆ’はオリゴヌクレオチドのギャップマー部分であり、領域Ｄ’又はＤ’’は、オリゴヌクレオチドの別個の部分を構成する。

領域Ｄ’又はＤ’’は、独立して、１、２、３、４又は５個の追加のヌクレオチドを含むか、又はそれからなり、標的核酸に相補的であっても、相補的でなくてもよい。いくつかの実施形態では、Ｆ又はＦ’領域に隣接するヌクレオチドは、ＤＮＡ又はＲＮＡなどの糖修飾ヌクレオチドではなく、若しくはこれらの塩基修飾バージョンでもない。Ｄ’又はＤ’領域は、ヌクレアーゼ感受性の生体切断可能なリンカーとしての役割を果たしうる（リンカーの定義を参照されたい）。いくつかの実施形態では、追加の５’及び／又は３’末端ヌクレオチドは、ホスホジエステル結合で結合されており、ＤＮＡ又はＲＮＡである。領域Ｄ’又はＤ’’としての使用に好適なヌクレオチドベースの生体切断性リンカーは、例えば、国際公開第２０１４／０７６１９５号に開示されており、これには例としてホスホジエステル結合ＤＮＡジヌクレオチドが含まれる。ポリオリゴヌクレオチド構築物における生体切断可能なリンカーの使用は、例えば、国際公開第ＷＯ２０１５／１１３９２２号に開示されており、それらは複数のアンチセンス構築物（例えば、ギャップマー領域）を単一のオリゴヌクレオチド内で結合するのに使用されている。

一実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチドは、ギャップマーを構成する連続ヌクレオチド配列に加えて、領域Ｄ’及び／又はＤ’’を含む。

幾つかの実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチドは、以下の式の１つ又は複数によって表すことができる：
Ｆ－Ｇ－Ｆ’、特に、Ｆ_１－８－Ｇ_５－１８－Ｆ’_２－８
Ｄ’－Ｆ－Ｇ－Ｆ’、特に、Ｄ’_１－３－Ｆ_１－８－Ｇ_５－１８－Ｆ’_２－８
Ｆ－Ｇ－Ｆ’－Ｄ’’、特に、Ｆ_１－８－Ｇ_５－１８－Ｆ’_２－８－Ｄ’’_１－３
Ｄ’－Ｆ－Ｇ－Ｆ’－Ｄ’’、特に、Ｄ’_１－３－Ｆ_１－８－Ｇ_５－１８－Ｆ’_２－８－Ｄ’’_１－３
いくつかの実施形態では、領域Ｄ’と領域Ｆとの間に位置するヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル結合である。いくつかの実施形態では、領域Ｆ’と領域Ｄ’’との間に位置するヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル結合である。

治療
本明細書で使用される「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、既存の疾患（例えば、本明細書で言及される疾患又は障害）の治療、又は疾患の予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）、すなわち予防法（ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ）の両方を指す。予防法はまた、疾患の発生の可能性を遅延若しくは低下させること、疾患の再発の頻度を遅延若しくは低下させること、及び／又は、対象が最終的に疾患に屈する場合に疾患の重症度若しくは持続期間を低下させることを含む。したがって、本明細書で言及される治療は、いくつかの実施形態において、予防的であり得ることが認識されよう。いくつかの実施形態では、アルツハイマー病、前頭側頭型認知症、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、パーキンソン病、ウイルス誘発性認知障害、緑内障、黄斑変性、重症筋無力症、ギラン・バレー症候群、視神経脊髄炎、中枢神経系エリテマトーデス及び統合失調症からなる群から選択される神経疾患などの補体媒介神経疾患と診断された患者に対して治療が行われる。いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、アルツハイマー病などのタウオパチーの治療に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、統合失調症の治療に使用するためのものである。

患者
本発明の目的について、「対象」（又は「患者」）は、脊椎動物であり得る。本発明に関連して、用語「対象」は、ヒト及び他の動物、特に哺乳動物と、他の生物との両方を含む。したがって、本明細書に提供される手段及び方法は、ヒト治療及び獣医学的用途の両方に適用可能である。好ましくは、対象は、哺乳動物である。より好ましくは、対象は、ヒトである。

本明細書の他の箇所に記載されているように、治療される患者は、神経疾患又は神経変性障害に罹患している又は罹患しやすい可能性がある。疾患又は障害に「罹患しやすい」患者は、疾患又は障害になりやすい、及び／又は、その他の点で疾患又は障害を発症する若しくは再発するリスクがある患者である。罹患しやすい患者は、患者が予防的治療又は介入から利益を得る程度に、疾患又は障害を発症する可能性が高い患者と理解することができる。

「神経疾患」とは、それだけに限らないが、癌に関連する神経学的症状及び神経変性疾患を含む神経系の疾患又は障害を意味する。

「神経変性疾患」とは、アルツハイマー病、前頭側頭型認知症、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、パーキンソン病、ウイルス誘発性認知障害、緑内障、黄斑変性、重症筋無力症、ギラン・バレー症候群、視神経脊髄炎、中枢神経系エリテマトーデス及び統合失調症を含むがこれらに限定されない疾患を意味する。いくつかの実施形態では、治療される患者は、アルツハイマー病などのタウオパチーに罹患している。いくつかの実施形態では、治療される患者は、統合失調症に罹患している。

アルツハイマー病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）（ＡＤ）は、アルツハイマー病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ）又は「アルツハイマー（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ）」とも呼ばれ、典型的には、進行性の認知低下、並びに記憶喪失の増加、言語、判断、及び／又は問題解決の問題を特徴とし、日常の作業を行うことができないこと、最終的には認知症に至り得る慢性神経変性障害である。

シナプス除去及びニューロン損傷は、Ｃ１の活性化によって開始される補体系の古典的経路によって媒介され、Ｃ２及びＣ４の切断をもたらし、次いでＣ３の切断をもたらし、これが食作用並びに炎症及びさらに下流の補体活性化を引き起こすことができる。補体Ｃ１ｒサブコンポーネント（Ｃ１Ｒ）は、補体系に関与するタンパク質である。

Ｃ１Ｒ、Ｃ１Ｑ及びＣ１Ｓは、血清補体系の第１の成分であるＣ１複合体を形成する。Ｃ１Ｒは、別のセリンプロテアーゼであるＣ１Ｓがタンパク質分解切断によってその活性形態になるセリンプロテアーゼである。タンパク質分解的切断の後、Ｃ１ＳはＣ２及びＣ４を活性化し、これはＣ３の切断をもたらす。

本発明との関連において、本発明者らは、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどの核酸分子がＣ１Ｓの発現を阻害することを示した。Ｃ１Ｓの発現の減少は、Ｃ２及びＣ４の切断の減少、したがってＣ３の切断の減少をもたらし、それによって、ミクログリア細胞によるシナプスの貪食及び補体活性化の他の有害な効果の減少をもたらし得る。

本発明の一態様は、神経疾患、特にタウオパチー及び統合失調症から選択される神経疾患の治療及び／又は予防に使用するためのＣ１Ｓ阻害剤である。いくつかの実施形態では、タウオパチーは、アルツハイマー病である。Ｃ１Ｒ阻害剤は、例えば、Ｃ１Ｓタンパク質に特異的に結合する小分子であり得、該阻害剤は、Ｃ２及び／又はＣ４タンパク質の切断を防止又は低減する。

本発明の一実施形態は、Ｃ１Ｓタンパク質の発現を防止又は低減し、それによってＣ２及び／又はＣ４の切断の低減をもたらすことができるＣ１Ｓ阻害剤である。いくつかの実施形態では、Ｃ１Ｓ阻害剤は、ミクログリア細胞によるシナプスの貪食の阻害をもたらす。

神経疾患の治療に使用するためのＣ１Ｓ阻害剤
理論に束縛されるものではないが、Ｃ１Ｓは、Ｃ２及びＣ４の切断に関与し、それによりＣ３の切断をもたらし得ると考えられる。したがって、Ｃ１Ｓは、ミクログリア細胞によるシナプスの貪食に関与していると考えられる。

本発明のいくつかの実施形態では、阻害剤は、抗体、抗体フラグメント又は小分子化合物である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、Ｃ１Ｓタンパク質に特異的に結合する、抗体、抗体フラグメント又は小分子であり得る。いくつかの実施形態では、Ｃ１Ｓタンパク質は、配列番号３、４、５及び６から選択される配列、例えば配列番号３又は配列番号６によってコードされる。

本発明の核酸分子
治療用核酸分子は、Ｃ１Ｓ転写物を標的とし、例えばＲＮＡ干渉経路又はＲＮａｓｅ Ｈ切断のいずれかを介してそれらの分解を促進することができるので、Ｃ１Ｓ阻害剤としての使用が見出される。あるいは、アプタマーのようなオリゴヌクレオチドもまた、Ｃ１Ｓタンパク質の阻害剤として作用し得る。

本発明の一態様は、神経疾患の治療及び／又は予防に使用するためのＣ１Ｓ標的化核酸分子である。このような核酸分子は、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡからなる群から選択され得る。

本発明のセクションは、神経疾患の治療及び／又は予防に好適な新規の核酸分子を解説する。いくつかの実施形態では、神経疾患は、アルツハイマー病、前頭側頭型認知症、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、パーキンソン病、ウイルス誘発性認知障害、緑内障、黄斑変性、重症筋無力症、ギラン・バレー症候群、視神経脊髄炎、中枢神経系エリテマトーデス及び統合失調症からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、神経疾患は、アルツハイマー病などのタウオパチーである。いくつかの実施形態では、神経疾患は、統合失調症である。

本発明の核酸分子は、インビトロ及びインビボでＣ１Ｓ ｍＲＮＡ及び／又はＣ１Ｓタンパク質の発現を阻害することができる。阻害は、オリゴヌクレオチドをＣ１Ｓタンパク質をコードする標的核酸にハイブリダイズさせることによって達成され得る。いくつかの実施形態では、標的核酸は哺乳動物Ｃ１Ｓ配列であり得る。いくつかの実施形態では、標的核酸は、配列番号３の配列などのヒトＣ１ＳプレｍＲＮＡ配列、又は配列番号６の配列などのヒト成熟Ｃ１Ｓ ｍＲＮＡ配列であり得る。いくつかの実施形態では、標的核酸は、配列番号４の配列などのカニクイザルＣ１Ｓ配列であり得る。いくつかの実施形態では、標的核酸は、配列番号５の配列などのカニクイザルＣ１Ｓ配列であり得る。

いくつかの実施形態では、本発明の核酸分子は、標的の発現を阻害又は下方調節することにより、それを調節することができる。好ましくは、そのような調節は、標的の正常発現レベルと比較して少なくとも２０％（例えば、２０～３０％）の発現の阻害、より好ましくは、標的の正常発現レベルと比較して少なくとも３０％（例えば、３０～４０％）、少なくとも４０％（例えば、４０～５０％）又は少なくとも５０％（例えば、５０～６０％）の阻害をもたらす。いくつかの実施形態では、本発明の核酸は、トランスフェクションのために２０～５０ｎＭの核酸分子を使用することによって、インビトロで、Ｃ１Ｓ ｍＲＮＡの発現レベルを少なくとも（例えば、５０～６０％）又は６０％（例えば、５０～６０％）阻害することができ得る。いくつかの実施形態では、本発明の核酸分子は、ジムノーシスのために５０～３５０ｎＭの核酸分子を使用することによって、インビトロで、Ｃ１Ｓ ｍＲＮＡの発現レベルを少なくとも５０％（例えば、５０～６０％）又は６０％（例えば、５０～６０％）阻害することができ得る。適切には、実施例は、Ｃ１Ｓ ｍＲＮＡ阻害を測定するために使用され得るアッセイを提供する（例えば、実施例１及び「材料及び方法」セクション）。Ｃ１Ｓ阻害は、ｓｉＲＮＡのガイド鎖又はアンチセンスオリゴヌクレオチドのギャップマー領域などのオリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列と標的核酸との間のハイブリダイゼーションによって引き起こされる。いくつかの実施形態では、本発明の核酸分子は、オリゴヌクレオチドと標的核酸との間のミスマッチを含む。ミスマッチにもかかわらず、標的核酸へのハイブリダイゼーションは、Ｃ１Ｓ発現の所望の阻害を示すのに尚充分であり得る。ミスマッチから生じる結合親和性の低下は、標的核酸に相補的なオリゴヌクレオチド内のヌクレオチド数の増加、及び／又は、標的への結合親和性を増加させることができる修飾ヌクレオシドの数、例えばオリゴヌクレオチド配列内に存在する、ＬＮＡを含む２’糖修飾ヌクレオシドの数の増加により有利に補償され得る。

本発明の一態様は、１２～６０ヌクレオチド長の核酸分子であって、少なくとも１２ヌクレオチド長、例えば少なくとも１２～３０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含み、哺乳動物Ｃ１Ｓ標的核酸、特にヒトＣ１Ｓ ｍＲＮＡに対して少なくとも９５％相補的、例えば完全に相補的である、オリゴヌクレオチドに関する。これらの核酸分子はＣ１Ｓ ｍＲＮＡ及び／又はＣ１Ｓタンパク質の発現を阻害することができる。

本発明の一態様は、哺乳動物Ｃ１Ｓ標的配列に対して少なくとも９０％相補的、例えば完全に相補的である、少なくとも１２ヌクレオチド、例えば１２～３０、又は例えば１５～２１ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む、１２～３０ヌクレオチド長の核酸分子に関する。

本発明の更なる態様は、配列番号３の標的配列に対して少なくとも９０％の相補性を有する、例えば完全に相補的である、１４～２２、例えば１５～２１ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む、本発明に係る核酸分子に関する。

いくつかの実施形態では、核酸分子は、１２～３０ヌクレオチド長の連続配列を含み、これは、標的核酸又は標的配列の領域と、少なくとも９０％相補的、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、又は１００％相補的である。

オリゴヌクレオチド、若しくはその連続ヌクレオチド配列が、標的配列の領域に完全に相補性（１００％相補性）である、又は、いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドと標的配列との間に、１つ又は２つのミスマッチを含み得る場合、有利である。

いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド配列は、配列番号３及び／又は配列番号６の標的配列の領域に対して１００％相補的である。

いくつかの実施形態では、本発明の核酸分子又は連続ヌクレオチド配列は、配列番号３の標的核酸に対して少なくとも９０％又は９５％相補性、例えば完全に（又は１００％）相補的である。

いくつかの実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチド又は連続ヌクレオチド配列は、配列番号４及び５及び／又は配列番号６の標的核酸に対して少なくとも９０％又は９５％相補性、例えば完全に（又は１００％）相補的である。

いくつかの実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチド又は連続ヌクレオチド配列は、配列番号１及び２、及び／又は配列番号３、及び／又は配列番号４及び５の標的核酸に対して少なくとも９０％又は９５％相補性、例えば完全に（又は１００％）相補的である。

いくつかの実施形態では、本発明の核酸分子の連続配列は、表４に示す標的領域１Ａ～１４９９Ａからなる群から選択される配列番号３の領域に少なくとも９０％相補的、例えば完全に相補的である。

いくつかの実施形態では、本発明の核酸分子は、１２～６０ヌクレオチド長、例えば１３～５０、例えば１４～３５、例えば１５～３０、例えば１５～２１連続ヌクレオチド長を含むか、又はそれらからなる。好ましい実施形態では、核酸分子は、１５、１６、１７、１８、１９、２０又は２１ヌクレオチド長を含むか又はそれからなる。

いくつかの実施形態では、標的核酸に相補的である核酸分子の連続ヌクレオチド配列は、１２～３０、例えば１３～２５、例えば１５～２１連続ヌクレオチド長を含むか、又はそれらからなる。

いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ及びｓｈＲＮＡからなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、標的配列に相補的であるｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡの連続ヌクレオチド配列は、１８～２８、例えば１９～２６、例えば２０～２４、例えば２１～２３連続ヌクレオチド長を含むか、又はそれらからなる。

いくつかの実施形態では、標的核酸に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列は、１２～２２、例えば１４～２１、例えば１５～２１、例えば１５、１６、１７、１８、１９、２０、又は２１連続ヌクレオチド長を含むか、又はそれらからなる。

いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド又は連続ヌクレオチド配列は、表８に列挙された配列からなる群から選択される配列を含むか又はそれからなる（材料及び方法セクション）。

連続オリゴヌクレオチド配列（モチーフ配列）は、例えばヌクレアーゼ耐性及び／又は標的核酸に対する結合親和性を増大させるために修飾され得ることが理解される。

修飾ヌクレオシド（高親和性修飾ヌクレオシドなど）がオリゴヌクレオチド配列に組み込まれるパターンは、一般にオリゴヌクレオチド設計と称される。

本発明の核酸分子は、修飾ヌクレオシド及びＲＮＡヌクレオシド（特に、ｓｉＲＮＡ及びｓｈＲＮＡ分子）又はＤＮＡヌクレオシド（特に、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチド）を用いて設計することができる。

有利な実施形態では、核酸分子又は連続ヌクレオチド配列は、１つ又は複数の糖修飾ヌクレオシド、例えば２’糖修飾ヌクレオシドを含み、例えば、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡ、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ、２’－アミノ－ＤＮＡ、２’－フルオロ－ＤＮＡ、アラビノ核酸（ＡＮＡ）、２’－フルオロ－ＡＮＡ及びＬＮＡヌクレオシドからなる群から独立して選択される１つ又は複数の２’糖修飾ヌクレオシドを含む。修飾ヌクレオシド（複数可）の１つ又は複数がロックド核酸（ＬＮＡ）である場合、有利である。

いくつかの実施形態では、連続ヌクレオチド配列は、ＬＮＡヌクレオシドを含む。

いくつかの実施形態では、連続ヌクレオチド配列は、ＬＮＡヌクレオシド及びＤＮＡヌクレオシドを含む。

いくつかの実施形態では、連続ヌクレオチド配列は、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’ＭＯＥ）ヌクレオシドを含む。

いくつかの実施形態では、連続ヌクレオチド配列は、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’ＭＯＥ）ヌクレオシド及びＤＮＡヌクレオシドを含む。

有利には、アンチセンスオリゴヌクレオチド、又はその連続ヌクレオチド配列の最も３’側のヌクレオシドは、２’糖修飾ヌクレオシドである。

更なる実施形態では、核酸分子は、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間結合を含む。好適なヌクレオシド間修飾は、「修飾ヌクレオシド間結合」の「定義」セクションに記載されている。

有利には、オリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエート又はホスホロジチオエートなどの少なくとも１つの修飾されたヌクレオシド間結合を含む。

いくつかの実施形態では、連続ヌクレオチド配列中の少なくとも１つのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル・ヌクレオシド間結合である。

オリゴヌクレオチドの５’末端又は３’末端における少なくとも２～３個のヌクレオシド間結合がホスホロチオエートヌクレオシド間結合である場合、有利である。

一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドについて、連続ヌクレオチド配列内の少なくとも７５％、例えば７０～８０％、少なくとも９０％、例えば９０～９５％、又は全てのヌクレオシド間結合がホスホロチオエート結合であれば有利である。いくつかの実施形態では、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドの連続配列中の全ヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート結合である。

本発明の有利な実施形態では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＲＮａｓｅ Ｈ、例えばＲＮａｓｅ Ｈ１を動員することができる。有利な構造設計は、例えば、「ギャップマー」、「ＬＮＡギャップマー」、及び「ＭＯＥギャップマー」の「定義」セクションに記載されているギャップマー設計である。本発明では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドがＦ－Ｇ－Ｆ’設計のギャップマーである場合が有利である。

いくつかの実施形態では、Ｆ－Ｇ－Ｆ’設計は、「オリゴヌクレオチド中の領域Ｄ’又はＤ’’」の「定義」セクションに記載されるように、領域Ｄ’及び／又はＤ’’を更に含み得る。

いくつかの実施形態では、本発明の阻害剤は、（例えば国際公開第２０１４／０８９１２１号に記載されているように）ＲＮＡ干渉のプロセスを誘導することができる核酸である。

製造方法
さらなる態様において、本発明は、本発明のオリゴヌクレオチドを製造するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本方法は、ヌクレオチド単位を反応させ、それによって本発明の核酸分子による配列のオリゴヌクレオチドに含まれる共有結合した連続ヌクレオチド単位を形成することを含む。好ましくは、この方法は、ホスホロアミダイト化学を使用する（例えば、Ｃａｒｕｔｈｅｒｓら（１９８７年）「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」第１５４巻第２８７～３１３頁を参照のこと）。

製造されたオリゴヌクレオチドは、本明細書に記載の１つ又は複数の修飾を含み得る。例えば、製造されたオリゴヌクレオチドは、１つ又は複数の糖修飾ヌクレオシド、１つ又は複数の修飾ヌクレオシド間結合及び／又は１つ又は複数の修飾核酸塩基を含み得る。したがって、本発明のオリゴヌクレオチドを製造するための方法は、オリゴヌクレオチドへのこのような修飾の導入をさらに含み得る。

いくつかの実施形態において、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合などの１つ又は複数の修飾されたヌクレオシド間結合が、オリゴヌクレオチドに導入されてもよい。いくつかの実施形態では、１つ又は複数の糖修飾ヌクレオシド、例えば２’糖修飾ヌクレオシドを導入することができる。いくつかの実施形態では、１つ又は複数の高親和性修飾ヌクレオシド及び／又は１つ又は複数のＬＮＡヌクレオシドをオリゴヌクレオチドに導入することができる。いくつかの実施形態では、本明細書の他の箇所に記載される領域Ｄ’及び／又はＤ’’がオリゴヌクレオチドに付加される。

更なる態様では、本発明のオリゴヌクレオチドを薬学的に許容され得る希釈剤、溶媒、担体、塩、及び／又はアジュバントと混合することを含む、本発明の医薬組成物を製造する方法が提供される。

本明細書の他の箇所でより詳細に記載されるように、本発明のオリゴヌクレオチドは、その薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物の形態で、又はプロドラッグの形態で存在し得る。したがって、そのような形態の本発明のオリゴヌクレオチドを製造するための方法が提供される。

薬学的な塩
本発明による化合物は、その薬学的に許容される塩の形態で存在し得る。「薬学的に許容される塩」という用語は、本発明の化合物の生物学的有効性及び特性を保持する従来の酸付加塩又は塩基付加塩を指す。さらなる態様では、本発明は、核酸分子の薬学的に許容される塩、例えば薬学的に許容され得るナトリウム塩、アンモニウム塩又はカリウム塩を提供する。例として、以下の塩を挙げることができる。アルカリ金属塩、例えばナトリウム塩、カリウム塩又はリチウム塩；アルカリ土類金属塩、例えばカルシウム塩又はマグネシウム塩；金属塩、例えばアルミニウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩；アンモニウム塩等の無機塩、ｔ－オクチルアミン塩、ジベンジルアミン塩、モルホリン塩、グルコサミン塩、フェニルグリシンアルキルエステル塩、エチレンジアミン塩、Ｎ－メチルグルカミン塩、グアニジン塩、ジエチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン塩、クロロプロカイン塩、プロカイン塩、ジエタノールアミン塩、Ｎ－ベンジル－フェネチルアミン塩、ピペラジン塩、テトラメチルアンモニウム塩、又はトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩等の有機塩を含むアミン塩；ハロゲン化水素酸塩、例えばフッ化水素酸塩、塩化水素酸塩、臭化水素酸塩又はヨウ化水素酸塩、硫酸塩又はリン酸塩を含む無機酸塩；メタンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩又はエタンスルホン酸塩などの低級アルカンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩又はｐ－トルエンスルホン酸塩などのアリールスルホン酸塩、酢酸塩、リンゴ酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩又はマレイン酸塩を含む有機酸塩；及び、グリシン塩、リジン塩、アルギニン塩、オルニチン塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩等のアミノ酸塩。これらの塩は、公知の方法により調製することができる。

さらなる態様では、本発明は、本発明の核酸分子の薬学的に許容される塩、例えば薬学的に許容され得るナトリウム塩、アンモニウム塩又はカリウム塩を提供する。

溶媒和物
本発明による化合物は、溶媒和物の形態で存在し得る。「溶媒和物」という用語は、本明細書では、本発明のオリゴヌクレオチドと１つ又は複数の薬学的に許容され得る溶媒分子、例えばエタノール又は水とを含む分子複合体を説明するために使用される。溶媒が水である場合、溶媒和物は「水和物」である。本発明の意味の範囲内で薬学的に許容され得る溶媒和物には、水和物及び他の溶媒和物が含まれる。

プロドラッグ
さらに、本発明による化合物は、プロドラッグの形態で投与され得る。プロドラッグは、インビボで変換を受けて親活性薬物を生じる化合物として定義される。細胞膜は本質的に親油性であるため、オリゴヌクレオチドの細胞取り込みは、中性又は親油性の等価物と比較して低下することが多い。１つの解決策は、プロドラッグ手法を使用することである（例えば、Ｃｒｏｏｋｅ，Ｒ．Ｍ．（１９９８）ｉｎ Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ，ｖｏｌ．１３１，ｐｐ．１０３－１４０を参照のこと）。そのようなプロドラッグの例には、アミド、エステル、カルバメート、カーボネート、ウレイド及びホスフェートが含まれるが、これらに限定されない。これらのプロドラッグは、公知の方法により調製することができる。

医薬組成物
さらなる態様では、本発明は、本発明の化合物のいずれか、特に前述の核酸分子又はその塩と、薬学的に許容され得る希釈剤、担体、塩及び／又はアジュバントとを含む、医薬組成物を提供する。薬学的に許容され得る希釈剤としては、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられるが、これに限定されない。薬学的に許容される塩としては、ナトリウム塩及びカリウム塩が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、薬学的に許容され得る希釈剤は、無菌リン酸緩衝生理食塩水である。いくつかの実施形態では、核酸分子は、５０～３００μＭの溶液の濃度で薬学的に許容され得る希釈剤中で使用される。本発明での使用に適した製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａ．，１７ｔｈ ｅｄ．，１９８５に見られる。薬物送達の方法の簡単なレビューについては、例えば、Ｌａｎｇｅｒ（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３，１９９０）を参照のこと。国際公開第２００７／０３１０９１号は、例えば、薬学的に許容され得る希釈剤、担体及びアジュバントの適切で好ましいさらなる例を提供する（参照により本明細書に組み込まれる）。適切な用量、製剤、投与経路、組成物、剤形、他の治療薬との組み合わせ、プロドラッグ製剤などもまた、例えば国際公開第２００７／０３１０９１号に提供されている。いくつかの実施形態では、本発明の核酸分子、又はその薬学的に許容される塩は、粉末、例えば凍結乾燥粉末などの固体形態である。本発明の化合物又は核酸分子は、医薬組成物又は製剤の調製のために、薬学的に許容され得る活性又は不活性物質と混合されてもよい。医薬組成物の調製のための組成物及び方法は、限定されるものではないが、投与経路、疾患の程度、又は投与される用量を含む多くの基準に依存する。これらの組成物は、従来の滅菌技術によって滅菌されても、又は滅菌フィルタにかけられてもよい。得られた水溶液は、そのまま使用するために包装するか、又は凍結乾燥することができ、凍結乾燥された調製物は、投与前に滅菌水性担体と組み合わされる。調製物のｐＨは、典型的には３～１１、より好ましくは５～９又は６～８、最も好ましくは７～８、例えば７～７．５であろう。得られた固体形態の組成物は、錠剤又はカプセルの密封パッケージなどのように、各々が上記の薬剤又は薬剤群の固定量を含む複数の単回用量単位で包装することができる。固体形態の組成物はまた、局所適用可能なクリーム又は軟膏用に設計された絞り出し可能なチューブなどの柔軟な量の容器に包装することもできる。

投与
本発明のオリゴヌクレオチド又は医薬組成物は、非経口（静脈内、皮下、筋肉内、鼻腔内、脳内、脳室内、眼内、又は髄腔内投与など）を介して投与することができる。

いくつかの実施形態では、投与は髄腔内投与によるものであり、例えば腰椎穿刺によるものである。

有利には、例えば神経学的障害の治療のために、本発明のオリゴヌクレオチド又は医薬組成物は、髄腔内又は頭蓋内に、例えば脳内又は脳室内投与を介して投与される。

本発明はまた、皮下投与用の剤形である医薬の製造のための、本発明の薬学的塩又は組成物などのオリゴヌクレオチド又はそのコンジュゲートの使用を提供する。

本発明はまた、髄腔内投与用の剤形である薬品の製造のための、本発明の薬学的塩又は組成物などの、本発明のオリゴヌクレオチド又はそのコンジュゲートの使用を提供する。

いくつかの実施形態において、治療有効量又は予防有効量の本発明のオリゴヌクレオチド又は医薬組成物が投与される。

送達プラットフォーム
標的組織へのオリゴヌクレオチドの送達は、カチオン性リポソーム、シクロデキストリン、ポルフィリン誘導体、分枝鎖デンドリマー、ポリエチレンイミンポリマー、ナノ粒子、細胞透過性ペプチド、及びミクロスフェア（例えば、Ｄａｓｓ，Ｃ Ｒ．Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ２００２；５４（１）：３－２７を参照）を含むがこれらに限定されない担体媒介送達によって増強され得る。

いくつかの実施形態において、本発明の阻害剤（本発明のオリゴヌクレオチドなど）は、脳を標的とする。例えば、脳への送達は、トランスフェリン受容体を標的とする抗体又は抗体フラグメントなどの血液脳関門を通過する送達を容易にする部分に該阻害剤を結合させることによって達成され得る。

併用療法
いくつかの実施形態では、本発明の核酸分子、核酸分子コンジュゲート、薬学的に許容される塩、又は医薬組成物などの本発明の阻害剤は、別の治療剤との併用治療で使用するためのものである。治療剤は、例えば、上記の疾患又は障害の標準ケアであり得る。

例として、本発明の阻害剤は、ヌクレオチド配列依存的作用様式を介して作用する他の活性物質、例えば、オリゴヌクレオチドに基づく治療剤（例えば、配列特異的オリゴヌクレオチドに基づく治療剤）と組み合わせて使用され得る。

さらなる例として、本発明の阻害剤は、１つ又は複数のアセチルコリンエステラーゼ阻害剤及び／又は１つ又は複数のＮＭＤＡ受容体アンタゴニストと組み合わせて使用され得る。コリンエステラーゼ阻害剤は、例えば、ドネペジル、タクリン、ガランタミン又はリバスチグミンであり得る。ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストは、例えばメマンチンであり得る。

さらなる例として、本発明の阻害剤は、１つ又は複数の典型的な抗精神病薬及び／又は１つ又は複数の非典型的な抗精神病薬と組み合わせて使用され得る。典型的な抗精神病薬は、例えば、クロルプロマジン、フルフェナジン、ハロペリドール、ペルフェナジン、チオリダジン、チオチキセン、又はトリフルオロペラジンであり得る。非典型的な抗精神病薬は、例えば、アリピプラゾール、アリピプラゾールラウロキシル、アセナピン、ブレキシピプラゾール、カリプラジン、クロザピン、イロペリドン、ルマテペロントシレート、ルラシドン、オランザピン、パリペリドン、パルミチン酸アリペリドン、又はジプラシドンであり得る。

いくつかの実施形態において、本発明の阻害剤は、以下のうちの１つ又は複数と組み合わせて使用される：Ｃ９ＯＲＴ７２を標的とするアンチセンス化合物（例えば、国際公開第２０１４／０６２７３６号に記載）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、アプタマー、ｍｉＲＮＡ、リボザイム、又は、Ｃ３コンバターゼ、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８及びＣ９の１つ若しくは複数の発現を遮断するｓｉＲＮＡ（例えば、国際公開第２００８／０４４９２８号に記載）；Ｃ３コンバターゼ、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８及びＣ９の１つ又は複数の活性を遮断する抗体（例えば、国際公開第２００８／０４４９２８号に記載）；補体カスケードの活性を低下させるアンチセンス又は二本鎖ＲＮＡ（例えば、国際公開第２００５／０６０６６７号に記載）；Ｃ１ｓタンパク質に結合して、例えば、Ｃ１ｓのタンパク質分解活性を阻害する抗体（例えば、国際公開第２０１４／０６６７４４号に記載）。

いくつかの実施形態において、本発明の阻害剤は、補体Ｃ４又はＣ４のＣ４ｂ部分に結合する抗体と組み合わせて使用される（例えば、国際公開第２０１７／１９６９６９号に記載）。

いくつかの実施形態では、本発明の阻害剤は、２０２０年５月１１日に出願された「Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ Ｃ４ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ Ｆｏｒ Ｔｒｅａｔｉｎｇ Ａ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄｉｓｅａｓｅ，Ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ，Ｓｙｓｔｅｍｓ Ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｏｆ Ｕｓｉｎｇ Ｓａｍｅ」という名称の米国仮出願及び２０２０年５月１１日に出願された「Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ Ｃ１Ｒ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ Ｆｏｒ Ｔｒｅａｔｉｎｇ Ａ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄｉｓｅａｓｅ，Ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ，Ｓｙｓｔｅｍｓ Ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｏｆ Ｕｓｉｎｇ Ｓａｍｅ」という名称の米国仮出願に開示された１つ又は複数の核酸分子と組み合わせて使用される。

用途
本発明の核酸分子は、例えば、診断のための、並びに治療及び予防法のための研究試薬として利用され得る。

研究では、そのような核酸分子を使用して、細胞（例えば、インビトロ細胞培養物）及び動物モデルにおけるＣ１Ｓタンパク質の合成を特異的に調節し、それによって標的の機能分析又は治療的介入の標的としてのその有用性の評価を促進し得る。典型的には、標的調節は、タンパク質に対応するｍＲＮＡを分解又は阻害し、それによりタンパク質形成を防止することによって、又はタンパク質を生成する遺伝子若しくはｍＲＮＡのモジュレータを分解若しくは阻害することによって達成される。

本発明の核酸分子を研究又は診断に使用する場合、標的核酸は、ｃＤＮＡ、又はＤＮＡ若しくはＲＮＡに由来する合成核酸であり得る。

検出又は診断の方法
本発明には、さらに以下が包含される：神経疾患を有することが疑われる患者における神経疾患を診断するための方法であって、
ａ）対象からのサンプル中の１つ又は複数のＣ１Ｓ核酸、例えばＣ１Ｓ ｍＲＮＡ又はＣ１Ｓ ｍＲＮＡに由来するｃＤＮＡの量を決定する工程であって、決定が本発明の１つ又は複数のオリゴヌクレオチドとサンプルを接触させることを含む、決定する工程、
ｂ）工程ａ）において決定された量を、基準量と比較する工程、及び
ｃ）工程ｂ）の結果に基づいて、対象が神経疾患に罹患しているか否かを診断する工程を含む、方法。

いくつかの実施形態では、神経疾患を診断する方法はインビトロ法である。

「神経疾患」という用語は、本明細書の他の箇所で定義されている。この定義は適宜、適用される。いくつかの実施形態では、診断される神経疾患は、アルツハイマー病などのタウオパチーである。いくつかの実施形態では、診断される神経疾患は統合失調症である。

「サンプル」という用語は、体液のサンプル、分離された細胞のサンプル、又は組織若しくは器官由来のサンプルを指す。体液のサンプルは、周知の技術によって採取することができ、血液、血漿、血清、尿、リンパ液、痰、腹水、唾液、及び涙液のサンプルが含まれる。いくつかの実施形態において、サンプルは、脳脊髄液サンプルである。

組織又は器官のサンプルは、例えば生検によって、任意の組織又は器官から入手し得る。いくつかの実施形態では、サンプルは、脳組織サンプル又は脊髄サンプル等の神経組織サンプルである。

いくつかの実施形態では、サンプルは、ニューロン、星状膠細胞、乏突起膠細胞及び／又はミクログリア細胞を含む。

対象は哺乳動物であり得る。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。いくつかの実施形態では、対象はカニクイザルである。

前述の方法の工程ａ）において、サンプル中に存在するＣ１Ｓ核酸の量を決定するものとする。決定されるＣ１Ｓ核酸は、Ｃ１Ｓタンパク質をコードする核酸であるものとする。いくつかの実施形態では、Ｃ１Ｓ核酸は哺乳動物Ｃ１Ｓ核酸である。いくつかの実施形態では、Ｃ１Ｓ核酸はヒトＣ１Ｓ核酸である。

Ｃ１Ｓ核酸は、例えば、遺伝子、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ及びプレｍＲＮＡ、成熟ｍＲＮＡ又はｃＤＮＡ配列であり得る。一実施形態では、核酸は、Ｃ１Ｓ ｍＲＮＡなどである。別の実施形態では、Ｃ１Ｓ核酸は、Ｃ１Ｓ ｍＲＮＡに由来するｃＤＮＡである。

前述の方法の工程ｂ）において、Ｃ１Ｓ核酸の量を、基準（すなわち基準量）と比較するものとする。「基準量」又は「基準」という用語は、当業者によく理解されている。適切な基準量は、原則として、統計学の標準的な方法を適用することによって、所定のバイオマーカーの平均又は平均値に基づいて、対象のコホートについて算出することができる。適切な基準は、神経疾患の診断を可能にするものとする。したがって、基準は、神経疾患に罹患している患者と神経疾患に罹患していない対象とを区別することを可能にするものとする。いくつかの実施形態では、基準は、予め定義された値である。

いくつかの実施形態では、基準量よりも多いＣ１Ｓ転写物の量は、神経疾患に罹患している患者を示し、基準量よりも少ないＣ１Ｓ転写物の量は、神経疾患に罹患していない患者を示す。

工程ａ）における１つ又は複数の核酸の量の決定は、本発明の１つ又は複数のオリゴヌクレオチドとサンプルを接触させることを含むものとする。例えば、サンプルは、サンプル中に存在する１つ又は複数のＣ１Ｓ核酸（Ｃ１Ｓ ｍＲＮＡなど）への１つ又は複数のオリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションを可能にする条件下で１つ又は複数のオリゴヌクレオチドと接触し、それによって該オリゴヌクレオチド及び該Ｃ１Ｓ核酸の二重鎖を形成する。いくつかの実施形態では、１つ又は複数のＣ１Ｓ核酸の量は、例えば検出可能な標識を介して、形成された二重鎖の量を決定することによって決定される。したがって、上記の方法で使用される１つ又は複数のオリゴヌクレオチドは、検出可能な標識を含み得る。

サンプル中、例えば上記で定義したようなサンプル中の１つ又は複数のＣ１Ｓ核酸を検出するための方法が、本発明によってさらに包含される。この方法は、サンプルを上記の本発明の１つ又は複数のオリゴヌクレオチドと接触させることを含み得る。いくつかの実施形態では、サンプルは、神経疾患を有するか、又は有することが疑われる患者に由来する。

本発明はまた、Ｃ１Ｓを発現している標的細胞においてＣ１Ｓ発現を調節するためのインビボ又はインビトロの方法であって、有効量の本発明の核酸分子、コンジュゲート化合物、又は医薬組成物を該細胞に投与することを含む、方法も、包含する。

いくつかの実施形態では、標的細胞は、哺乳動物細胞、特にヒト細胞である。標的細胞は、哺乳動物の組織の一部を形成するインビトロ細胞培養物又はインビボ細胞であってよい。好ましい実施形態では、標的細胞は脳内に存在する。標的細胞は脳細胞であり得る。いくつかの実施形態では、脳細胞は、ニューロン及びミクログリア細胞からなる群から選択される。

本発明の一態様は、医薬として使用する本発明の核酸分子又は医薬組成物に関する。

本発明の一態様では、本発明の核酸分子又は医薬組成物などのＣ１Ｓ阻害剤は、Ｃ１Ｓを発現する細胞中のＣ１Ｓの量を減少させることができる。

例えば、Ｃ１Ｓ発現を阻害する核酸分子は、対照と比較して、罹患細胞のＣ１Ｓタンパク質を少なくとも５０％（例えば、５０～６０％）、又は少なくとも６０％（例えば、６０～７０％）、又は少なくとも７０％（例えば、７０～８０％）、少なくとも８０％（例えば、８０～９０％）、又は少なくとも９０％（例えば、９０～９５％）減少させ得る。対照は、未処理の細胞若しくは動物、又は適切な対照で治療された細胞若しくは動物であり得る。

Ｃ１Ｓ発現の阻害は、例えば、材料及び方法のセクションに記載されるように、ＲＴ－ｑＰＣＲによって測定され得る。

Ｃ１Ｓレベルの低下により、本発明の核酸分子又は医薬組成物は、神経疾患の発症を阻害するために、又は神経疾患の治療において、使用することができる。

したがって、本発明の一態様は、神経疾患を有する又は罹患しやすい個体においてＣ１Ｓタンパク質を減少させるための、本発明の核酸分子又は医薬組成物などのＣ１Ｓ阻害剤の使用に関する。

本発明の核酸分子又は医薬組成物などのＣ１Ｓ阻害剤で治療される対象（又は本発明の核酸分子又は医薬組成物を予防的に受容する対象）は、好ましくはヒト、より好ましくは神経疾患を有するヒト患者、さらにより好ましくはタウオパチーを有するヒト患者、さらにより好ましくはアルツハイマー病を有するヒト患者である。いくつかの実施形態では、ヒト患者は統合失調症を有する。

したがって、本発明は、有効量の、本発明の核酸分子又は医薬組成物などのＣ１Ｓ阻害剤を投与することを含む、神経疾患を治療する方法に関する。本発明はさらに、神経疾患を予防する方法に関する。一実施形態では、本発明のＣ１Ｓ阻害剤は、神経疾患の治療を意図するものではなく、その予防のみを意図する。

いくつかの実施形態では、治療される対象は、心血管障害又は疾患を有さない（例えば、国際公開第２０１４／０８９１２１号に記載されている）。いくつかの実施形態では、治療される対象は、疼痛の治療を必要としない（例えば、国際公開第２００５／０６０６６７号に記載されている）。

本発明はまた、医薬、特に神経疾患の治療での使用のための医薬の製造のためのＣ１Ｓ阻害剤、例えば本発明の核酸分子又は医薬組成物の使用を提供する。好ましい実施形態では、医薬は、髄腔内投与又は頭蓋内投与のための剤形で製造される。

本発明はまた、医薬を製造するための本発明の核酸分子又は医薬組成物の使用を提供し、医薬は静脈内投与用の剤形である。

キット
本発明はまた、本発明の核酸分子又は医薬組成物などの本発明のＣ１Ｓ阻害剤、及びＣ１Ｓ阻害剤を投与するための説明書を含むキットを提供する。説明書は、Ｃ１Ｓ阻害剤が、アルツハイマー病又は統合失調症などの本明細書で言及される神経疾患又は神経変性障害の治療に使用され得ることを示し得る。

本明細書で使用される「キット」という用語は、本発明のＣ１Ｓ阻害剤を投与するための構成要素を含む包装製品を指す。キットは、キットの構成要素を保持する箱又は容器を含み得る。キットはまた、本発明のＣ１Ｓ阻害剤を投与するための説明書を含み得る。

材料及び方法
実施例１：初代マウス肝細胞におけるＣ１Ｓを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドのインビトロ有効性の試験
供給業者によって推奨されるように、細胞を加湿インキュベータ内で維持した。ベンダー及び推奨される培養条件を表５に報告する。

アッセイのために、細胞を培養培地中で９６マルチウェルプレートに播種し、表５に記載のようにインキュベートした後、ＰＢＳに溶解したオリゴヌクレオチドを添加した。細胞の播種密度を表５に報告する。

オリゴヌクレオチドを表７に報告されている濃度で添加した。オリゴヌクレオチドを添加してから７２時間後に細胞を回収した（表５参照）。ＲＮｅａｓｙ ９６キット（Ｑｉａｇｅｎ）を製造者の説明書に従って使用してＲＮＡを抽出し、２００μＬの水に溶出した。その後、ＲＮＡを９０°Ｃに１分間加熱した。

遺伝子発現解析では、Ｏｎｅ Ｓｔｅｐ ＲＴ－ｑＰＣＲを、二重鎖セットアップで、ｑＳｃｒｉｐｔ（商標）ＸＬＴ Ｏｎｅ－Ｓｔｅｐ ＲＴ－ｑＰＣＲ ＴｏｕｇｈＭｉｘ（登録商標）、Ｌｏｗ ＲＯＸ（商標）（Ｑｕａｎｔａｂｉｏ）を使用して実施した。ｑＰＣＲに使用したプライマーアッセイを、標的及び内因性対照の両方について表６にまとめる。

表７の相対的なマウスＣ１ｓ１及びマウスＣ１ｓ２ ｍＲＮＡ発現レベルを、対照（ＰＢＳ処理細胞）のパーセントとして示す。試験した化合物に関するさらなる情報を表８に見出すことができる。

表７から、Ｃ１Ｓプールは、異なる濃度でＣ１Ｓ ｍＲＮＡを効率的に減少させることができると考えることができる。

本発明は、以下のオリゴヌクレオチド化合物（表８）を提供する：

表中、大文字はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡヌクレオシドであり、小文字はＤＮＡヌクレオシドであり、全てのＬＮＡ Ｃが５－メチルシトシンであり、全てのヌクレオシド間結合がホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。

Claims (34)

1. 神経疾患の治療での使用のためのオリゴヌクレオチドＣ１Ｓ阻害剤。
2. 神経疾患が、タウオパチー又は統合失調症から選択される、請求項１に記載の、使用のためのＣ１Ｓ阻害剤。
3. Ｃ１Ｓ阻害剤が、Ｃ１Ｓの量を減少させることができる、請求項１又は２に記載の、使用のためのＣ１Ｓ阻害剤。
4. 阻害剤が、哺乳動物Ｃ１Ｓ標的配列、特にヒトＣ１Ｓ標的配列に少なくとも９５％相補的、例えば完全に相補的である、少なくとも１２ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む１２～６０ヌクレオチド長の核酸分子であり、Ｃ１Ｓ ｍＲＮＡの発現をＣ１Ｓ ｍＲＮＡを発現する細胞において減少させることができる、請求項１～３のいずれか一項に記載の、使用のためのＣ１Ｓ阻害剤。
5. 前記阻害剤が、一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ及びｓｈＲＮＡからなる群から選択される、請求項１～４のいずれか一項に記載の、使用のためのＣ１Ｓ阻害剤。
6. 哺乳動物Ｃ１Ｓ標的配列が、配列番号３及び／又は６からなる群から選択される、請求項１～５のいずれか一項に記載の、使用のためのＣ１Ｓ阻害剤。
7. 連続ヌクレオチド配列が、配列番号３の標的配列に少なくとも９８％相補的、例えば完全に相補的である、請求項４～６のいずれか一項に記載の、使用のためのＣ１Ｓ阻害剤。
8. Ｃ１Ｓ ｍＲＮＡが少なくとも６０％、例えば６０～７０％減少する、請求項４～７のいずれか一項に記載の使用のためのＣ１Ｓ阻害剤。
9. 哺乳動物Ｃ１Ｓ標的配列、特にヒトＣ１Ｓ標的配列に９５％相補的、例えば完全に相補的な少なくとも１２ヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列を含む１２～３０ヌクレオチド長の核酸分子であって、Ｃ１Ｓ ｍＲＮＡの発現を阻害することができる、核酸分子。
10. 連続ヌクレオチド配列が、配列番号３及び６からなる群から選択される配列に完全に相補的である、請求項９に記載の核酸分子。
11. 核酸分子が、１２～２５ヌクレオチド長、例えば１６～２０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む、請求項９又は１０に記載の核酸分子。
12. 核酸分子が、二本鎖ｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡのガイド鎖などのＲＮＡｉ分子である、請求項９～１１のいずれか一項に記載の核酸分子。
13. 核酸分子が一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項９～１１のいずれか一項に記載の核酸分子。
14. 一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドが、ＲＮａｓｅ Ｈを動員することができる、請求項１３に記載の核酸分子。
15. 核酸分子が、１つ又は複数の２’糖修飾ヌクレオシドを含む、請求項９～１４のいずれか一項に記載の核酸分子。
16. １つ又は複数の２’糖修飾ヌクレオシドが、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡ、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ、２’－アミノ－ＤＮＡ、２’－フルオロ－ＤＮＡ、アラビノ核酸（ＡＮＡ）、２’－フルオロ－ＡＮＡ及びＬＮＡヌクレオシドからなる群から独立して選択される、請求項１５に記載の核酸分子。
17. １つ又は複数の２’糖修飾ヌクレオシドがＬＮＡヌクレオシドである、請求項１５又は１６に記載の核酸分子。
18. 連続ヌクレオチド配列が、少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む、請求項９～１７のいずれか一項に記載の核酸分子。
19. 連続ヌクレオチド配列内のヌクレオシド間結合の少なくとも９０％又は９０～９５％が、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請求項１８に記載の核酸分子。
20. 核酸分子又はその連続ヌクレオチド配列が、式５’－Ｆ－Ｇ－Ｆ’－３’のギャップマーを含み、式中、領域Ｆ及びＦ’が独立して１～４個の２’糖修飾ヌクレオシドを含み、Ｇが、ＲＮａｓｅＨを動員することが可能な６個と１８個の間のヌクレオシドの領域、例えば６個と１８個の間のＤＮＡヌクレオシドを含む領域である、請求項９～１９のいずれか一項に記載の核酸分子。
21. 請求項９～２０のいずれか一項に記載の核酸分子の薬学的に許容される塩。
22. 請求項９～２０のいずれか一項に記載の核酸分子、又は請求項２１に記載の薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
23. Ｃ１Ｓを発現している標的細胞におけるＣ１Ｓ発現を阻害するためのインビボ又はインビトロ方法であって、請求項９～２０のいずれか一項に記載の核酸分子、請求項２１に記載の薬学的に許容される塩、又は請求項２２に記載の医薬組成物を有効量で前記細胞に投与することを含む、方法。
24. 神経疾患に罹患している又は罹患しやすい対象に、治療有効量又は予防有効量の、請求項９～２０のいずれか一項に記載の核酸分子、請求項２１に記載の薬学的に許容される塩、又は請求項２２に記載の医薬組成物を投与することを含む、疾患を治療するための方法。
25. 神経疾患が、タウオパチー及び統合失調症から選択される、請求項２４に記載の方法。
26. 治療剤又は診断剤として使用するための、請求項９～２０のいずれか一項に記載の核酸分子、請求項２１に記載の薬学的に許容される塩、又は請求項２２に記載の医薬組成物。
27. タウオパチー又は統合失調症などの神経疾患の治療での使用のための、請求項９～２０のいずれか一項に記載の核酸分子、請求項２１に記載の薬学的に許容される塩、又は請求項２２に記載の医薬組成物。
28. タウオパチー又は統合失調症などの神経疾患の治療のための医薬の調製のための、請求項９～２０のいずれか一項に記載の核酸分子、請求項２１に記載の薬学的に許容される塩、又は請求項２２に記載の医薬組成物の使用。
29. Ｃ１Ｓ標的配列がＣ１Ｓ標的配列である、請求項１～８のいずれか一項に記載の、使用のためのＣ１Ｓ阻害剤、請求項９～２０及び２６～２８のいずれか一項に記載の核酸分子、請求項２１に記載の薬学的に許容される塩、請求項２２に記載の医薬組成物、又は請求項２３～２５のいずれか一項に記載の方法。
30. 請求項１～８のいずれか一項に記載のＣ１Ｓ阻害剤、請求項９～２０及び２６～２８のいずれか一項に記載の核酸分子、請求項２１に記載の薬学的に許容される塩、又は請求項２２に記載の医薬組成物と、前記Ｃ１Ｓ阻害剤、前記核酸分子、前記薬学的に許容される塩又は前記医薬組成物を投与するための説明書とを含む、キット。
31. 神経疾患を有することが疑われる患者における神経疾患を診断するための方法であって、
    ａ）対象からのサンプル中の１つ又は複数のＣ１Ｓ核酸、例えばＣ１Ｓ ｍＲＮＡ又はＣ１Ｓ ｍＲＮＡに由来するｃＤＮＡの量を決定する工程であって、決定が、請求項９～２０のいずれか一項に記載の１つ又は複数の核酸分子とサンプルを接触させることを含む、１つ又は複数のＣ１Ｓ核酸の量を決定する工程、
    ｂ）工程ａ）において決定された量を、基準量と比較する工程、及び
    ｃ）ｃ）工程ｂ）の結果に基づいて、対象が神経疾患に罹患しているか否かを診断する工程を含む、方法。
32. サンプルが、工程ａ）において、サンプル中に存在する前記１つ又は複数のＣ１Ｓ核酸（例えばＣ１Ｓ ｍＲＮＡ）への前記１つ又は複数の核酸分子のハイブリダイゼーションを可能にする条件下で前記１つ又は複数の核酸分子と接触し、それによって前記核酸分子と前記Ｃ１Ｓ核酸との二重鎖を形成する、請求項３１に記載の方法。
33. ヌクレオチド単位を反応させ、それによって核酸分子に含まれる共有結合した連続ヌクレオチド単位を形成することを含む、請求項９～２０のいずれか一項に記載の核酸分子を製造するための方法。
34. 核酸分子への、１つ又は複数の糖修飾ヌクレオシド、１つ又は複数の修飾ヌクレオシド間結合、及び／又は、１つ又は複数の修飾核酸塩基の導入を含む、請求項３３に記載の方法。