JP2023525269A - コロナウイルス感染の調節及び治療のためのパラポックスウイルス - Google Patents

Abstract

本発明は、コロナウイルス感染の治療及びパラポックスウイルスを投与することによるそのような感染のための対象の調製に関する。この治療は、免疫系がウイルスと闘うのを助け、それによってコロナウイルス疾患の症状を予防し、改善することである。

Description

発明の分野
本発明は、コロナウイルス感染の治療、及びパラポックスウイルスを投与することによるそのような感染のための対象の調製に関する。この治療は、免疫系がウイルスと闘うのを助け、それによってコロナウイルス疾患の症状を予防し、改善することである。

発明の背景
コロナウイルスはエンベロープをもつプラスセンス一本鎖ＲＮＡウイルスであり、哺乳類や鳥類に疾患を引き起こす。ヒトでは、かぜなどの呼吸器感染症を引き起こすが、ＳＡＲＳやＭＥＲＳコロナウイルスなどの一部のウイルスは致死的になる。新しいコロナウイルスは世界中の様々な地域で周期的に出現する。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ（重症急性呼吸器症候群コロナウイルス）は２００２年に発生し、流行中に９１６人が死亡し、死亡率は約１２％であった。ＭＥＲＳ－ＣｏＶ（中東呼吸器症候群コロナウイルス）が２０１２年に出現し、死亡例は５４３例、死亡率は約３９％であった。

近年、中国武漢市でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２と呼ばれるコロナウイルスの集団発生が始まり、世界中に広がっている。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＣＯＶＩＤ－１９（コロナウイルス疾患２０１９）による疾患は、２０２０年３月１１日にＷＨＯによりパンデミックであると宣言された。ＣＯＶＩＤ－１９の重症度は無症候性又は軽度から重度まで様々であり、臨床的に明らかな感染症を有する患者のかなりの部分が重度の疾患を発症する。死亡率は国によって異なり、２％～３％と考えられているが、全症例数は不明であるため、真の死亡率は不明である。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ及びＭＥＲＳ－ＣｏＶよりも死亡率が低いようであるが、感染性が高く、世界中に広がっているようであり、２０２０年５月６日までに約３６６万人が確認され、２５万７，０００人が死亡しており、おそらくはさらに多くの確認されていない死亡例が確認されている。ＣＯＶＩＤ－１９の知識は不完全であり、進化している。

コロナウイルスの流行が繰り返されていることから、これらのウイルスは自然発生的に出現し、容易に拡散し、健康問題のみならず劇的な社会的・経済的影響を含め、人間の生命に重大な影響を及ぼすことが示されている。従って、予防及び治療に対する医学的ニーズは非常に高い。しかし、コロナウイルスは突然変異を起こし、しばしば組換えを起こすことが知られているため、コロナウイルスは疾患制御のための継続的な課題となっている。現在、ヒトコロナウイルス感染を予防又は治療するワクチンも抗ウイルス薬も入手できない。コロナウイルスに対する効果について、世界中で膨大な数の抗ウイルス薬が試験されており、有望な候補は失敗している。

予期せぬことに、本発明者らは、パラポックスウイルスが、コロナウイルス感染のための対象のコンディショニング及び治療に有用であることを見出した。パラポックスウイルスｏｖｉｓ（ＰＰＶＯ）はヤギ及びヒツジにおいて急性皮膚感染を引き起こし、ヒトにおいて重篤な疾患を引き起こさないが、ヒトにおいて複雑な先天性及び適応性免疫応答を誘導し、ＨＢＶ（ＷＯ２０１９／０４８６４０Ａ１）のようないくつかの特異的ウイルスによる感染を治療する。しかし、パラポックスウイルスによって誘導される免疫応答は複雑であり、一般的にウイルス感染の治療には必ずしも有用ではない。従って、パラポックスウイルスは、コロナウイルス感染のための対象のコンディショニング及び治療に有用であるとは期待できなかった。

発明の概要
第１の態様において、本発明は、（ｉ）コロナウイルス感染のために対象をコンディショニング（conditioning）し、又は（ｉｉ）対象におけるコロナウイルス感染を治療するのに使用するためのパラポックスウイルス剤に関する。第２の態様において、本発明は、パラポックスウイルス剤及びコロナウイルス剤を含む組成物又はキットに関する。第３の態様において、本発明は、本発明による医療用パラポックスウイルス剤を含む医薬組成物又はキットに関する。ここで、医薬組成物又はキットは、パラポックスウイルス剤、好ましくはさらなる医薬（medicament）を含む。

不活化パラポックスウイルス（ｉＰＰＶＯ）の刺激は、組み合わせアプローチによって増強されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する抗ウイルス活性を誘導した。全血培養物をｉＰＰＶＯ＋／－５μｇ／ｍｌ ＣｏｎＡで刺激した。ＣｏｎＡを添加しなかった場合、代わりにＰＢＳを添加した。ｉＰＰＶＯ溶媒＋／－ＣｏｎＡ又はＰＢＳ＋／－ＣｏｎＡをそれぞれ対照とした。５μｌ／ｍｌ ＣｏｎＡを共刺激として試験した。培養物を３日間インキュベートし、上清を回収した。上清をＶｅｒｏ－ｅＧＦＰ細胞に移し、２～４時間後にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染させ、それぞれの上清試料の抗ウイルス活性を測定し、５日間インキュベートした。生細胞の測定としてのｅＧＦＰ蛍光を、ＩｍａｇｅＪソフトウエアを用いて分析した。ウイルスを添加しなかった細胞対照の平均値を陽性対照（ＣＣ平均値）とし、１００％とした（上の点線を参照）。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２に感染させたが、処理しなかった細胞は、生きた細胞を最大限に破壊し、平均ウイルスコントロール（ＶＣ平均）として与えた陰性対照として機能した。試料の抗ウイルス活性は、陽性対照ＣＣの平均値と比較して算出し、％で表示した。 ｉＰＰＶＯ Ｄ１７０１及びｉＰＰＶＯ ＮＺ２は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する抗ウイルス活性を刺激する。全血培養をｉＰＰＶＯで刺激した。ｉＰＰＶＯ溶媒を陰性対照とした。ｉＰＰＶＯ Ｄ１７０１を陽性対照とした。培養物を３日間インキュベートし、上清を回収した。上清をＶｅｒｏ－ｅＧＦＰ細胞に移し、２～４時間後にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染させ、それぞれの上清試料中に存在する抗ウイルス活性を測定し、５日間インキュベートした。それぞれの上清中のサイトカインの抗ウイルス活性によりＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して保護された生細胞のための尺度としてのｅＧＦＰ蛍光を、ＩｍａｇｅＪソフトウエアを用いて測定した。陽性対照の抗ウイルス活性を１００％に設定した（上の点線を参照）。試料の抗ウイルス活性を陽性対照と比較して算出し、％で表した。下の点線は陰性対照の値を示す。 ｉＰＰＶＯ ＮＺ２で処理したハムスターの感染性ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２粒子の肺力価。各ドットは、各群の動物を表す。水平線は平均を表す。 ｉＰＰＶＯ Ｄ１７０１で処理し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染させたマウスの生存。人道的エンドポイントに達した動物を安楽死させた。読みやすさを向上させるために、重なり線は部分的にオフセットされる。統計学的評価はＬｏｇ－ｒａｎｋ（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）検定により行い、^＊はｐ≦０．０５で有意差を示した。 ｉＰＰＶＯ Ｄ１７０１で処理し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染させたマウスの体重。人道的エンドポイントに達した動物を安楽死させ、十字（†）で表示した。データは平均値±標準誤差で表示する。統計的評価は多重ｔ検定（Ｈｏｌｍ－Ｓｉｄａｋ補正）により行い、^＊＊はｐ≦０．０１で有意差を示した。 ｉＰＰＶＯ Ｄ１７０１で処理し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染させたマウスの臨床スコア。人道的エンドポイントに達した動物を安楽死させ、十字（†）で表示した。データは平均値±標準誤差で表示する。統計的評価は、多重ｔ検定（Ｈｏｌｍ－Ｓｉｄａｋ補正）、^＊及び^＊＊により、それぞれｐ≦０．０５及びｐ≦０．０１で有意差を示した。 マウスの肺及び脳におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス量の定量。データ点は、各群の幾何平均を用いた各動物のウイルスコピー数を表す。各点は１つのマウスを表します。ｉＰＰＶＯ投与マウス（左）のウイルス量の減少は、プラセボ対照群（右）の１／２であった。データの統計的評価は、プラセボ対照と比較してＭａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｕ検定により実施した（ｎｓ：有意ではない、^＊＊：ｐ≦０．０１）。

発明の詳細な説明
本発明を以下に詳細に説明する前に、本発明は、本明細書に記載される特定の方法、プロトコル、及び試薬に限定されるものではなく、これらが変化し得ることを理解されたい。また、本明細書で使用される用語は、特定の実施形態のみを説明する目的で使用され、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本発明の範囲を限定することを意図しないことも理解されるべきである。別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。

好ましくは、本明細書中で使用される用語は、「生物工学用語の多言語集：（ＩＵＰＡＣ勧告）」、Ｌｅｕｅｎｂｅｒｇｅｒ、Ｈ．Ｇ．Ｗ、Ｎａｇｅｌ、Ｂ．及びＫｏｌｂｌ、Ｈ．ｅｄｓ（１９９５），Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ，ＣＨ－４０１０ Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄに記載されるように定義される。

本明細書の本文中には、いくつかの文献が引用されている。本明細書に引用される各文献（すべての特許、特許出願、科学刊行物、製造業者の仕様、説明書等を含む）は、上述のものであれ下記のものであれ、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

以下、本発明の要素について説明する。これらの要素は、特定の実施形態で列挙されるが、それらは、任意の方法で、任意の数で組み合わされて、追加の実施形態を生成することができることが理解されるべきである。種々の説明された実施例及び好ましい実施形態は、本発明を明示的に説明された実施形態のみに限定するものと解釈されるべきではない。この説明は、明示的に説明された実施形態を、開示された及び／又は好ましい要素の任意の数と組み合わせる実施形態を支持し、包含するものと理解されるべきである。さらに、文脈上別段の指示がない限り、本出願に記載されたすべての要素の置換及び組み合わせは、本出願の明細書によって開示されたものとみなされるべきである。

本明細書及び以下の特許請求の範囲を通して、文脈上別異の解釈が必要とされない限り、用語「含む」及び「含む」及び「含む」などの変形は、整数又は工程の記載された整数又は工程又はグループを含むことを意味するが、整数又は工程又は工程の他の整数又は工程又はグループを除外することは意味しないものと理解されるべきである。好ましい実施形態では、「含む」は、「含む」を意味することができる。本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用されるように、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、その内容が明確に別段の指示をしない限り、複数の基準を含む。

第１の態様において、本発明は、（ｉ）コロナウイルス感染のために対象をコンディショニングするか、又は（ｉｉ）対象におけるコロナウイルス感染を治療するのに使用するためのパラポックスウイルス剤に関する。

パラポックスウイルス剤
パラポックスウイルスは、好ましい態様において、パラポックスウイルスｏｖｉｓ（ＰＰＶＯ）である。これには、任意のＰＰＶＯ株、好ましくは、国際ウイルス分類学委員会（ＩＣＴＶ）によって分類される種ＰＰＶＯの任意の株が含まれる。例示的な菌株は、ＮＺ２、ＮＺ７、ＮＺ１０、Ｄ１７０１、ＯＶ／２０、ＯＶ／７、ＯＶ／Ｃ２、ＯＶ／ｍｉ－９０、ＯＶ－Ｔｏｒｉｎｏ、ＳＡＯＯ、Ｂｏ２９、ｏｒｆ１１、Ｇｒｅｅｋ ｏｒｆ菌株１５５、及びＧｒｅｅｋ ｏｒｆ菌株１７６である。好ましい菌株は、ＮＺ２及びＤ１７０１、特にＮＺ２である。

パラポックスウイルス剤は、好ましい実施形態において、
（ａ）パラポックスウイルス自体若しくはその断片、又は
（ｂ）（ａ）をコードする遺伝情報を含む物質である。

より好ましい実施形態では、
（ｉ）生パラポックスウイルス粒子、
（ｉｉ）不活化パラポックスウイルスビリオン，
（ｉｉｉ）（ｉ）又は（ｉｉ）の断片，
（ｉｖ）（ｉ）から（ｉｉｉ）までのいずれかをコードする核酸、
（ｖ）（ｉｖ）の核酸を含むベクター、又は
（ｖｉ）（ｉｖ）の核酸又は（ｖ）のベクターを含む細胞である。

生パラポックスウイルスビリオンは弱毒化されても、されていなくてもよい。弱毒化パラポックスウイルスビリオン、例えば、ｖｅｇｆ－ｅ及び／又はｇｉｆのような毒性遺伝子を欠くビリオンは、当技術分野で公知である。断片は免疫系によって認識され得、好ましくは免疫応答を刺激し得（すなわち、それは抗原であり、好ましくは免疫原である）、任意の断片であり得るが、好ましくはヒトパターン認識受容体（ＰＲＲ）によって結合される断片である（例えば、Ｔｌｒ９）。１つの実施形態において、パラポックスウイルス断片はパラポックスウイルスタンパク質である。

例示的な断片は、（断片の前の括弧内の例示的なコード配列（ＮＺ２株を表す配列番号３のヌクレオチド位置））である：（３～５３９）ＯＲＦＬ１、（７８１～４４９）ＯＲＦＬ２ｒ、（１９３３～１６６４）ＯＲＦＬ３ｒ、（３２６９～２７９０）ＯＲＦＬ４ｒ、（２７９９～３８５１）ＯＲＦＬ５、（２９６２～３７５３）ＯＲＦＬ６、（３７８４～３１２２）ＯＲＦＬ７ｒ、（４３４１～４１２９）ＯＲＦＬ８ｒ、（４９０４～４４２８）ＯＲＦ１ａｒ、（６５１７～４９７０）ＯＲＦ１ｒ、（８０４２～６６８４）ＯＲＦ２ｒ、（９９８９～８０７０）ＯＲＦ３ｒ、（１１１９５～１００６２）ＯＲＦ４ｒ、（１１４９３～１１２２７）ＯＲＦ５ｒ、（１１８０２～１２０３８）ＯＲＦ６、（１２３５８～１２０８０）ＯＲＦ７ｒ、（１３９８０～１２３６４）ＯＲＦ８ｒ、（１４８２６～１４０５３）ＯＲＦ９ａｒ、（１５０８０～１５３９４）ＯＲＦ１０、（１６８３８～１５４２３）ＯＲＦ１１ｒ、（１９０２１～１６８４７）ＯＲＦ１２ｒ、（１９７０４～１９１５６）ＯＲＦ１３ｒ、（２０３１４～１９７３６）ＯＲＦ１４ｒ、（２０４０１～２２１０１）ＯＲＦ１５、（２２１２５～２２９４０）ＯＲＦ６、（２３００３～２３８６６）ＯＲＦ１７、（２６９０８～２３８７３）ＯＲＦ１８ｒ、（２６９２６～２７２１３）ＯＲＦ１９、（２７６２６～２７２１６）ＯＲＦ２０ｒ、（２９７５４～２７６１６）ＯＲＦ２１ｒ、（３２２１７～２９８００）ＯＲＦ２２ｒ、（３３３８０～３２４１８）ＯＲＦ２３ｒ、（３３６０２～３３３９３ＯＲＦ２４ｒ、（３４４６６～３３６１２）ＯＲＦ２５ｒ、（３４７３５～３４５０２）ＯＲＦ２６ｒ、（３５９０５～３４７３９）ＯＲＦ２７ｒ、（３７１９４～３５９０５）ＯＲＦ２８ｒ、（３７２００～３９２４８）ＯＲＦ２９；４１０３７～３９２２９）ＯＲＦ３０ｒ、（４１３７４～４２０６６）ＯＲＦ３１、（４２３３６～４１７３１）ＯＲＦ３２ｒ、（４２４０７～４１９９７）ＯＲＦ３３ｒ、（４２４１０～４３７６５）ＯＲＦ３４、（４３７７０～４３９５８）ＯＲＦ３５、（４３９８０～４４５３４）ＯＲＦ３６、（４５７２７～４４５３７）ＯＲＦ３７ｒ、（４５７６０～４６５５７）ＯＲＦ３８、（４６５６７～４７５６８）ＯＲＦ３９、（４７５７２～４８３０３）ＯＲＦ４０、（４８３５２～４８６２１）ＯＲＦ４１、（４９８８７～４８６３４）ＯＲＦ４２ｒ、（４９９１７～５０７９３）ＯＲＦ４３、（５０７１９～５１１０２）ＯＲＦ４４、（５１０５９～５１５１１）ＯＲＦ４４ａ、（５１５８４～５２５９１）ＯＲＦ４５、（５２５０９～５３０６６）ＯＲＦ４６、（５３５２３～５３０２３）ＯＲＦ４７ｒ、（５３６０７～５７４７３）ＯＲＦ４８、（５８０７０～５７５２８）ＯＲＦ４９ｒ、（５７７００～５８６６２）ＯＲＦ５０、（５９６７４～５８６７３）ＯＲＦ５１ｒ、（６２０８９～５９６７８）ＯＲＦ５２ｒ、（６２１９８～６２８８１）ＯＲＦ５３、（６２９０９～６３８６２）ＯＲＦ５５、（６３８５８～６４２７１）ＯＲＦ５６、（６４３０９～６６８３１）ＯＲＦ５７、（６７２６６～６６７９９）ＯＲＦ５８ｒ、（６７８０３～６７２７３）ＯＲＦ５８ａｒ、（６７９１５～６８６０７）ＯＲＦ５９、（６８６２４～７０９８４）ＯＲＦ６０、（７０９９４～７２８９８）ＯＲＦ６１、（７２９３８～７３５０７）ＯＲＦ６２、（７３５４０～７４２１１）ＯＲＦ６３、（７６１２０～７４２０７）ＯＲＦ６４ｒ、（７６７４９～７６１８６）ＯＲＦ６５ｒ、（７７６９８～７６７９９）ＯＲＦ６６ｒ、（７９３４３～７７７０９）ＯＲＦ６７ｒ、（７９８１６～７９３６７）ＯＲＦ６８ｒ、（８０５２９～７９８５８）ＯＲＦ６９ｒ、（８０７７４～８０５２９ＯＲＦ７０ｒ、（８２８１５～８０７８８）ＯＲＦ７１ｒ、（８３８３５～８２８３４）ＯＲＦ７２ｒ、（８３８７４～８５５８３）ＯＲＦ７３、（８５５３５～８４４０２）ＯＲＦ７４ｒ、（８８０９６～８５５７４）ＯＲＦ７５ｒ、（８７７５９～８８６６７）ＯＲＦ７６、（８８９２０～８８６４２）ＯＲＦ７７ｒ、（９１６５２～８８９３８）ＯＲＦ７８ｒ、（９１６６７～９２６７４）ＯＲＦ７９、（９３４６６～９２６８１）ＯＲＦ８０ｒ、（９３７６１～９３４８６）ＯＲＦ８１ｒ、（９４０６０～９３７８８）ＯＲＦ８２ｒ、（９４２３８～９４０８０）ＯＲＦ８３ｒ、（９４５０８～９４２４２）ＯＲＦ８４ｒ、（９５５７１～９４４９８）ＯＲＦ８５ｒ、（９６１８７～９５６００）ＯＲＦ８６ｒ、（９６２０２～９７６６５）ＯＲＦ８７、（９７９１５～９７６４３）ＯＲＦ８８ｒ、（９８２５１～９９５３７）ＯＲＦ８９、（９９５３７～９９９７４）ＯＲＦ９０、（１００００１～１０１１４０）ＯＲＦ９１、（１０１１６８～１０４６５０ＯＲＦ９２、（１０６３５４～１０４７９５）ＯＲＦ９３ｒ、（１０７９４７～１０６４００）ＯＲＦ９４ｒ、（１０８２５６～１０７９９０）ＯＲＦ９５ｒ、（１０８７１９～１０８３００）ＯＲＦ９６ｒ、（１０９６７９～１０８７３８）ＯＲＦ９７ｒ、（１０９８６１～１０９６８２）ＯＲＦ９８ｒ、（１１０８３０～１００３３）ＯＲＦ９９ｒ、（１１０２０８～１１０４１７）ＯＲＦ１００、（１１０４６９～１１０６５１）ＯＲＦ１００ａ、（１１０９１５～１１１３９７）ＯＲＦ１０１、（１１１４１９～１１１９１３ＯＲＦ１０２、（１１１９４９～１１２４８５）ＯＲＦ１０３、（１１２５９３～１１３４５０）ＯＲＦ１０４、（１１３３２３～１１２９６７）ＯＲＦＩ０５ｒ、（１１３５２６～１１４１５２）ＯＲＦ１０６、（１１４１９９－～１１５２３６）ＯＲＦ１０７、（１１５３５３～１１５７８７ＯＲＦ１０８、（１１５８５９ｏ１１６５５１）ＯＲＦ１０９、（１１６７２９～１１７５２３）ＯＲＦ１１０、（１１７５７２～１１７１１４）ＯＲＦ１１１ｒ、（１１７４２３～１１８０８５）ＯＲＦ１２、（１１８９６８～１１８３７５）ＯＲＦ１１４ｒ、（１１８５０８～１１９１１９）ＯＲＦ’１１５、（１１９５８８～１２０２０２）ＯＲＦ１１６、（１２０３１４～２１２３１）ＯＲＦ１１７、（１２１３８０～１２３９２０）ＯＲＦ１１８、（１２１２８８～１２２２５６）ＯＲＦ１１９、（１２２３５０～１２３９２４）ＯＲＦ１２０、（１２３９６２～１２５５６６）ＯＲＦ１２１、（１２５１９３～１２４５９１）ＯＲＦ１２２ｒ、（１２５６８９～１２３９３５ＯＲＦ１２３ｒ、（１２３８３９～１２３２９７）ＯＲＦ１２３ａｒ、（１２５６５２～１２６１７０）ＯＲＦ１２４、（１２６１２１～１２５６９９）ＯＲＦ１２５ｒ、（１２６２７９～１２７７６９）ＯＲＦ１２６、（１２７８５１～１２８４０８）ＯＲＦ１２７、（１２８５２０～１３００７６）ＯＲＦ１２８、（１３０１０５～１３１７００）ＯＲＦ１２９、（１３１７９０～１３３２８３）ＯＲＦ１３０、（１３３２４６～１３３９２０）ＯＲＦ１３１、（１３３９７２～１３４３７０）ＯＲＦ１３２、（１３４４１８～１３４６９３）ＯＲＦ１３３ａ、（１３４４０２～１３４９９２）ＯＲＦＲ１、（１３４８５３～１３４４１９）ＯＲＦＲ２ｒ、（１３５６２８～１３５８９７）ＯＲＦＲ３、（１３６７８０～１３７１１２）ＯＲＦＲ４、及び（１３７５５８～１３７０２２）ＯＲＦＲ５ｒ。断片のグループは、上述の例示的断片、すなわち、別のパラポックスウイルス（例えば、上述の種又は株）の相同的断片の相同体を含む。それはまた、上記に列挙された例示的断片の機能的変異体（機能は、一般的に上述の断片に対して定義されるようなものである）を含む。従って、断片の群は、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有する変異体を含む。

不活化パラポックスウイルスビリオンは、エンベロープウイルスを不活化するのに適した当該技術分野で知られている任意の手段によって、例えば物理的不活化（例えば、熱、具体的には低温殺菌、又は紫外線への曝露）又は化学的不活化（例えば、低ｐＨ、界面活性剤、エチレンイミン、二成分エチレンイミン、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、２，２’－ジチオジピリジン、又はベータ－プロピオラクトンなどの不活化剤への曝露による）によって得ることができる。好ましい実施形態では、不活化パラポックスウイルス粒子は、エチレンイミネオル二成分エチレンイミン不活化ビリオン、好ましくは二成分エチレンイミン不活化ビリオンである。

パラポックスウイルス剤は、異種性（すなわち、パラポックスウイルスではない）抗原をコードする遺伝情報（ＤＮＡ又はＲＮＡ）及び／又は免疫モジュレーターを含んでもよく、あるいは異種性抗原及び／又は免疫モジュレーターをコードする遺伝情報を含んでもよい。１つの実施形態において、それは、異種抗原をコードする遺伝情報を含まないが、場合により、免疫モジュレーターをコードする遺伝情報を含む。

好ましい態様において、パラポックスウイルス剤は、野生型パラポックスウイルスである。好ましくは、それはＰＰＶＯビリオンであり、より好ましくは不活化されたＰＰＶＯビリオンである。

使用モード
パラポックスウイルス剤は、単独で、又は、（ｉ）コロナウイルス感染のために対象をコンディショニングするか、又は（ｉｉ）対象におけるコロナウイルス感染を治療するためのさらなる治療レジメンと組み合わせて使用することができる。

好ましい態様において、コンディショニング及び治療の両方において、さらなる治療レジメンは、コロナウイルス剤を投与することを含むことができる。

具体的には、コンディショニングのために、さらなる治療レジメンは、さらなる免疫刺激剤（例えば、アジュバント、ＴＬＲアゴニスト、ＰＲＲ、例えば、ＲＩＧ－Ｉ、ＭＤＡ５及びＬＧＰ２を含むＲＩＧ－Ｉ様受容体などのサイトゾルＰＲＲ、又はマイトジェン、特にフィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）、コンカナバリン（Ｃｏｎ）Ａ、小麦胚芽凝集素（ＷＧＡ）、アメリカヤマゴボウマイトジェン（ＰＷＭ）などのＴ細胞マイトジェン又は活性化因子、レクチン又は抗ＣＤ３抗体又は抗原結合断片、又はＰＷＭ、リポ多糖類（ＬＰＳ）などのＢ細胞マイトジェン又はアクチベーター、抗ＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片、又は抗（Ｂ細胞抗原受容体）抗体又はその抗原結合断片である。免疫刺激剤は、好ましくは、抗ウイルス細胞状態を促進する。具体的には、治療のために、さらなる治療レジメンは、コロナウイルスに感染した、又はコロナウイルス疾患を有する対象の治療に適した１種以上のさらなる医薬及び／又は１種以上のさらなる治療（非医薬／薬物治療）を投与することを含むことができる。１種以上のさらなる医薬は、好ましくは、さらなる免疫刺激剤（上に例示した）、抗ウイルス剤、抗生物質、アジュバント、グルココルチコイド、降圧剤（例えば、ＡＣＥ阻害剤）、血糖降下剤、抗ショック薬、及びコロナウイルス疾患の１つ又は複数の症状を治療するのに適した、及び／又は１つ又は複数のさらなる治療に付随するのに適した薬物（例えば、鎮痛剤、鎮静剤、解熱剤、抗炎症剤、例えば、ＩＬ－１０、咳止め薬、免疫抑制剤など）からなる群から選択される。１つ以上のさらなる治療は、好ましくは、酸素療法及び体外臓器支持（ＥＣＯＳ）からなる群から選択される。酸素療法は、受動的（すなわち、対象の呼吸に依存する）であっても能動的（すなわち、対象の呼吸に依存せずに酸素を肺に送達する）であってもよい。受動療法は非加圧酸素療法と加圧酸素療法である。能動療法は、機械的換気及び体外膜型人工肺（ＥＣＭＯ、ＥＣＯＳの特定の形態でもある）である。ＥＣＯＳの例としては、ＥＣＭＯ、持続的腎代替療法（ＣＲＲＴ）、血液濾過（ＨＦ）及び血液灌流（ＨＰ）、例えば炎症性サイトカインを除去するためのもの、及び左室補助が挙げられる。

コンディショニング及び治療のためのさらなる医薬の特定の例は、イベルメクチン、ＴＭＰＲＳＳ２阻害剤（例えば、塩化アンモニウム、セリンプロテアーゼ阻害剤カモスタットメシル酸塩）（場合によりＣａｔＢ／Ｌ阻害剤（例えば、Ｅ－６４ｄ）を伴う）、ファビピラビル、ピモディビル、バロキサビル（場合によりマルボキシルを伴う）、ＩＬ－６ブロッカー（例えば、サリルマブ、トシリズマブ）、サリルマブ、ジティブクマブ、ロピナビル（場合によりリトナビルを友舞う）、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、レムデシビル、α－ケトアミド（例えば、シクロペンチルメチル、シクロヘキシルメチル又はα－ケトアミド１３ｂ）、サリドマイド、マラビロック、テノホビル（場合によりジソプロキシルを伴う）、ドルテグラビル、ネルフィナビル、ラルテグラビル、チプラナビル、Ｉ型インターフェロン（ＩＦＮ－Ｉ、具体的にはＩＦＮ－β１）である。好ましい例は、レムデシビル及びサリドマイドである。

パラポックスウイルス剤は、静脈内、筋肉内、経口、非経口、局所、皮内、又は皮下経路を含むがこれらに限定されない任意の経路によって投与することができる。具体的な実施形態では、気道、好ましくは下気道、より好ましくは肺に直接投与することができる（肺送達）。このように、エーロゾルとして、及び／又は吸入によって投与することができる。

パラポックスウイルス剤（実際には、さらなる免疫刺激剤、さらなる医薬、及びコロナウイルス剤を含む、本明細書中に記載される全ての薬剤）の用量は、当業者によって決定され得る薬学的に有効な用量である。例えば、薬剤がビリオン（生又は不活化）である場合、それは１０^６～１０^１０の粒子であり得る。投与量は、例えば、１２週間未満、６週間未満、４週間未満、２週間未満、又は１週間未満の期間にわたって、１回又は複数回投与することができる。

コロナウイルス
コロナウイルスは、好ましい態様において、α－コロナウイルス又はβ－コロナウイルスである。より好ましくは、それは呼吸器コロナウイルス、すなわち呼吸器疾患を引き起こすコロナウイルスである。α－コロナウイルスの例は、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ及びＣｏＶ－ＮＬ６３であり、β－コロナウイルスの例は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１及びＨＣｏＶ－ＯＣ４３である。コロナウイルスは、ＭＥＲＳ又はＳＡＲＳコロナウイルスであることが好ましく、好ましくは、ＳＡＲＳコロナウイルスは、国際ウイルス分類学委員会（ＩＣＴＶ）によって分類される種「重症急性呼吸器症候群関連コロナウイルス」のウイルスである。最も好ましい実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である。

当業者は、コロナウイルスが突然変異し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の新株が毎日分離され、４６１株が２０２０年４月６日までに分離されたことを認識している。したがって、配列の定義に関して、本発明の好ましいウイルスは、配列番号１（２０１９年アウトブレイク「重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２分離株Ｗｕｈａｎ－Ｈｕ－１」、ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ＮＣ ０４５５１２．２、２０２０年３月３０日バージョン）、又は少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は好ましくは少なくとも９９％配列同一性のその変異体を含むか又はそれからなるゲノムを有する。あるいは、又はそれに加えて、本発明の好ましいウイルスは、配列番号２（１５３ゲノムアセンブリのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２コンセンサス配列）に従う配列、又はその変異体を含み、又はそれからなるゲノムを有し、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有する。この変異体は、国際ウイルス分類学委員会（ＩＣＴＶ）によってＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株として分類されることが好ましい。

コロナウイルス剤
コロナウイルス剤は、一般に、コロナウイルス感染を治療するのに適した薬剤である。それは、（ａ）コロナウイルス自体又はその断片であって、免疫応答（例えば、抗原、好ましくは免疫原）によって認識され、好ましくは刺激するもの、（ｂ）（ａ）をコードする遺伝情報を含む薬剤、又は（ｃ）細胞内でのコロナウイルスによる細胞の感染又はコロナウイルスの複製を妨害する薬剤（治療状況下では：コロナウイルスに感染した対象に有効量を投与して、コロナウイルスによる細胞の感染又は細胞内でのコロナウイルスの複製を妨害することができる）であり得る。コロナウイルス剤は、好ましくは、以下からなる群から選択される：
（ｉ）不活化コロナウイルス、
（ｉｉ）コロナウイルスの抗原性、好ましくは免疫原性断片（例えば、スパイクタンパク質又はその断片）、
（ｉｉｉ）（ｉ）又は（ｉｉ）をコードする核酸、
（ｉｖ）（ｉｉｉ）の核酸を含むベクター、
（ｖ）（ｉｉｉ）の核酸又は（ｉｖ）のベクターを含む細胞、
（ｖｉ）コロナウイルス又はその断片、好ましくはエンベロープに結合する抗体又はその抗原結合断片、
（ｖｉｉ）ヌクレオチド／ヌクレオシド類似体、好ましくはコロナウイルス特異的、
（ｖｉｉｉ）コロナウイルス特異的ＲＮＡｉ分子
（ｉｘ）コロナウイルスタンパク質と対象タンパク質との間のタンパク質－タンパク質相互作用部位（ＰＰＩ）に結合する小分子、抗体又はその抗原結合断片、ならびに
（ｘ）コロナウイルス感染から、好ましくはコロナウイルス疾患から回復した対象の血漿。

コロナウイルスは、上記パラポックスウイルスについて記載したように不活化することができる。

（ｉｘ）のＰＰＩは、好ましくは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質又は別のコロナウイルスのその相同体と、次の中から選択された主題タンパク質（各主題タンパク質のＵｎｉｐｒｏｔタンパク質ＩＤは＜以下に列挙する＞ ＨＵＭＡＮである）との相互作用である。
－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ Ｅ及びＡＰ３Ｂ１、ＢＲＤ４、ＢＲＤ２、ＣＷＣ２７、ＺＣＨ１８又はＣＴＬ２；
－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２Ｍ及びＭＰＰＢ、ＹＩＦ１Ａ、ＡＴ１Ｂ１、ＡＣＡＤＭ、ＥＴＦＡ、ＳＴＯＭ、ＶＫＧＣ、ＶＡＴＡ、ＰＳＭＤ８、ＲＥＥＰ５、ＭＰＰＡ、ＡＮＯ６、ＰＲＥＰ、ＺＮＴ９、ＦＡＫＤ５、ＺＮＴ７、ＧＣＰ３、ＣＯＱ８Ｂ、ＳＡＡＬ１、ＲＥＥＰ６、ＩＮＴ４、ＯＤＣ、ＧＣＰ２、ＳＹＴＭ、ＲＴＮ４、ＦＡ８Ａ１、ＡＡＳＳ、ＡＫＰ８Ｌ、ＡＡＲ２又はＢＺＷ２；
－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２Ｎ及びＵ３ＩＰ２、ＰＡＢＰ１、ＣＳＫ２２、ＣＳＫ２Ｂ、Ｇ３ＢＰ１、ＰＡＢＰ４、ＬＡＲＰ１、ＦＡ９８Ａ、ＳＮＩＰ１、ＲＥＮＴ１、ＭＯＶ１０、Ｇ３ＢＰ２、ＤＤＸ２１、ＲＢＭ２８又はＲＬ３６；
－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２スパイク及びＡＣＥ２、ＧＯＧＡ７又はＺＤＨＣ５；
－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ ｎｓｐ１及びＤＰＯＬＡ、ＰＲＩ１、ＰＲＩ２、ＤＰＯＡ２、ＧＴ２５１又はＰＫＰ２；
－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ ｎｓｐ１０及びＡＰ２Ａ２、ＡＬＲ、ＥＲＧＩ１、ＡＰ２Ｍ１又はＧＲＰＥ１；
－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ ｎｓｐ１１及びＴＢＣＡ；
－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ ｎｓｐ１２及びＳＢＮＯ１、ＢＣＫＤ、ＡＫＡＰ８、ＭＹＣＢ２、ＳＬＵ７、ＲＩＰＫ１、ＵＢＰ２Ｌ、ＴＹＳＤ１、ＰＤＺ１１、ＰＲＣ２Ｂ、ＵＢＡＰ２、ＺＮ３１８、ＣＲＴＣ３、ＵＢＰ５４、Ｚ３Ｈ７Ａ、ＬＡＲ４Ｂ、ＲＢＭ４１、ＨＴＦ４、ＰＰＩＬ３又はＰＫＨＡ５；
－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ ｎｓｐ１３及びＴＢＫＢ１、ＣＴＲＯ、ＨＳＢＰ１、ＰＣＮＴ、ＦＲ１ＯＰ、ＫＡＰ２、ＫＡＰＣＡ、ＫＡＰ３、ＲＡＤＩ、ＣＥＮＰＦ、ＴＬＥ１、ＴＬＥ３、ＴＬＥ５、ＧＯＧＡ３、ＧＯＧＡ２、ＧＯＧＢ１、ＧＲＡＰ１、ＣＥ３５０、ＭＹＯＭＥ、ＣＰ１３５、ＣＥＰ６８、ＣＮＴＲＬ、ＲＢ６Ｉ２、ＧＣＣ２、ＣＬＩＰ４、ＮＩＮ、ＣＥ１１２、ＭＩＰＯ１、ＵＢＰ１３、ＧＣＣ１、ＪＫＩＰ１、ＣＫ５Ｐ２、ＡＫＡＰ９、ＧＯＲＳ１、ＦＹＣＯ１、ＣＡ０５０、ＣＰ２５０、ＴＢＫ１、ＨＯＯＫ１又はＮＩＮＬ；
－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ ｎｓｐ１４及びＡＧＡＬ、ＩＭＤＨ２又はＳＩＲ５；
－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ ｎｓｐ１５ ＮＴＦ２、ＡＲＦ６又はＲＮＦ４１；
－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ ｎｓｐ２及びＳ２７Ａ２、ＩＦ４Ｅ２、ＮＣＰＲ、ＧＤＳ１、ＷＡＳＣ４、ＦＫＢ１５又はＧＧＹＦ２；
－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ ｎｓｐ４及びＩＤＥ、ＴＩＭ１０、ＡＬＧ１１、ＰＯ２１０、ＴＩＭ２９、ＤＪＣ１１、Ｔ１０Ｂ又はＴＩＭ９；
－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ ｎｓｐ５及びＨＤＡＣ２；
－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ ｎｓｐ５＿Ｃ１４５Ａ及びＧＰＸ１又はＴＲＭ１；
－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ ｎｓｐ６及びＡＴＰ５Ｌ、ＶＡＳ１、ＳＧＭＲ１又はＡＴ１３３；
－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ ｎｓｐ７及びＡＤＡＳ、ＣＹＢ５Ｂ、ＡＣＳＬ３、ＮＢ５Ｒ３、ＲＡＬＡ、ＣＯＭＴ、ＲＡＢ５Ｃ、ＲＡＢ７Ａ、ＲＡＢ８Ａ、ＲＡＢ２Ａ、ＲＡＢ１０、ＲＡＢ１４、ＲＨＯＡ、ＲＡＢ１Ａ、ＧＢＢ１、ＧＢＧ５、ＬＭＡＮ２、ＭＯＧＳ、ＴＯＩＰ１、ＭＡＲＣ１、ＱＳＯＸ２、ＨＳ２ＳＴ、ＮＤＵＦ２、ＳＣＰＤＬ、ＳＣＲＢ１、ＮＡＴ１４、ＤＣＡＫＤ、Ｆ１６２Ａ、ＴＩＭ１４、ＳＥＬＳ、ＰＧＥＳ２又はＲＡＢ１８；
－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ ｎｓｐ８及びＭＰＰ１０、ＳＲＰ７２、ＡＴＥ１、ＮＳＤ２、ＳＲＰ１９、ＳＲＰ５４、ＲＴ２５、ＤＤＸ１０、ＬＡＲＰ７、ＭＥＰＣＥ、ＮＧＤＮ、ＥＸＯＳ８、ＳＹＮＭ、ＮＯＬ１０、ＣＣＤ８６、ＳＰＣＳ、ＥＸＯＳ５、ＥＸＯＳ３、ＡＡＴＦ、ＨＥＣＤ１、ＲＴ０２、ＲＴ０５、ＥＸＯＳ２又はＲＴ２７；
－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ ｎｓｐ９及びＴ２ＦＢ、ＦＢＮ１、ＦＢＮ２、ＮＵ２１４、ＮＵＰ６２、ＤＣＡＦ７、ＩＦ４Ｈ、ＮＵＰ５４、ＭＩＢ１、ＮＥＫ９、ＺＮ５０３、ＮＵＰ８８、ＮＵＰ５８、ＭＡＴ２Ｂ又はＦＢＬＮ５；
－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ ｏｒｆ１０及びＰＰＴ１、ＣＵＬ２、ＭＡ７Ｄ１、ＴＨＴＰＡ、ＺＹ１１Ｂ、ＴＩＭ８Ｂ、ＲＢＸ１、ＥＬＯＣ又はＥＬＯＢ；
－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ ｏｒｆ３ａ及びＨＭＯＸ１、ＴＲＩ５９、ＡＲ６Ｐ６、ＶＰＳ３９、ＣＬＣＣ１、ＶＰＳ１１、ＳＵＮ２又はＡＬＧ５；
－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２又はｆ３ｂ及びＳＴＭＬ２；
－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ ｏｒｆ６及びＮＵＰ９８、ＲＡＥ１Ｌ又はＭＴＣＨ１；
－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２又はｆ７ａ及びＨＥＡＴ３又はＭＤＮ１；
－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ ｏｒｆ８及びＰＬＯＤ２、ＴＯＲ１Ａ、ＳＴＣ２、ＴＰＡ、ＩＴＢ１、ＣＩＳＤ３、ＣＯ６Ａ１、ＰＶＲ、ＤＮＭＴ１、ＬＹＯＸ、ＰＣＳＫ６、ＩＮＨＢＥ、ＮＰＣ２、ＭＦＧＭ、ＯＳ９、ＮＰＴＸ１、ＰＬＧＴ２、ＰＬＧＴ３、ＥＲＯ１Ｂ、ＰＬＤ３、ＦＸＲＤ２、ＣＨＳＳ２、ＰＵＳＬ１、ＥＭＣ１、ＧＧＨ、ＥＲＬＥＣ、Ｉ１７ＲＡ、ＮＧＬＹ１、Ｈ６ＳＴ２、ＳＤＦ２、ＮＥＵＲ１、ＧＤＦ１５、ＴＭ２Ｄ３、ＥＲＰ４４、ＥＤＥＭ３、ＳＩＬ１、ＯＦＵＴ１、ＳＭＯＣ１、ＰＫＨＦ２、ＦＸＬ１２、ＵＧＧＧ２、ＣＨＰＦ２、ＡＴＳ１、ＨＹＯＵ１、ＦＫＢＰ７、ＡＤＡＭ９又はＦＫＢ１０；
－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ ｏｒｆ９ｂ及びＮＨＲＦ１、ＣＨＭ２Ａ、ＣＳＤＥ１、ＴＯＭ７０、ＭＡＲＫ３、ＭＡＲＫ２、ＤＰＨ５、ＤＣＴＰ１、ＭＡＲＫ１、ＰＴＢＰ２又はＢＡＧ５；
－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ ｏｒｆ９ｃ及びＵＢＸＮ８、ＧＰＡＡ１、ＷＦＳ１、ＭＲＰ１、ＰＡＲ２、ＳＣＡＰ、Ｄ１９Ｌ１、ＳＧＭＲ２、ＺＮＴ６、ＴＡＰＴ１、ＥＲＭＰ１、ＮＬＲＸ１、ＲＥＴＲ３、ＰＩＧＯ、ＦＡＣＲ２、ＥＣＳＩＴ、ＡＬＧ８、ＴＭ３９Ｂ、ＧＨＩＴＭ、ＡＣＡＤ９、ＮＦＩＰ２、ＢＣＳ１、ＣＩＡ３０、ＴＭＥＤ５、ＮＤＵＢ９又はＰＩＧＳ。

ＰＰＩ部位に対する抗体又はその抗原結合断片は、通常の方法によって生成することができる。例えば、相互作用するタンパク質の１つに対する抗体又はその抗原結合断片を作製し、次に、相互作用を妨害するためにスクリーニングすることができる。

（ｉｘ）の小分子は、好ましくは、ロラタジン、ダウノルビシン、ミドスタウリン、ポナチニブ、シルミタセルチブ、バルプロ酸、ハロペリドール、メトホルミン、ミガラスタット、Ｓ－ベラパミル、インドメタシン、ルキソリチニブ、ミコフェノール酸、エンタカポン、リバビリン、Ｅ－５２８６２、メリメポディブ、ＲＶＸ－２０８、ＸＬ４１３、ＡＣ－５５５４１、アピシジン、ＡＺ３４５１、ＡＺ８８３８、バフィロマイシンＡ１、ＣＣＴ ３６５６２３、ＧＢ１１０、Ｈ－８９、ＪＱ１、ＰＢ２８、ＰＤ－１４４４１８、ＲＳ－ＰＰＣＣ、ＴＭＣＢ、ＵＣＰＨ－１０１、ＺＩＮＣ１７７５９６２３６７、ＺＩＮＣ４３２６７１９、ＺＩＮＣ４５１１８５１、ＺＩＮＣ９５５５９５９１、４Ｅ２ＲＣａｔ、ＡＢＢＶ－７４４、カモスタット、カプトプリル、ＣＢ５０８３、クロラムフェニコール、クロロキン、ＰＩ４Ｋ－ＩＩＩβ阻害剤化合物１０（Rutaganira, F. U. et al., J. Med. Chem. 59, 1830-1839 (2016)）、シクロフィリリン阻害剤化合物２（Mackman, R. L. et al., J. Med. Chem. 61, 9473-9499 (2018)）、ＣＰＩ－０６１０、ダブラフェニブ、ＤＢｅＱ、ｄＢＥＴ６、ＩＨＶＲ－１９０２９、リネゾリド、リシノプリル、ミノキシジル、ＭＬ２４０、ＭＺ１、ナファモスタット、ペボネディスタット、ＰＳ３０６１、ラパマイシン（シロリムス）、サングリフェリンＡ、サパニセルチブ（ＩＮＫ１２８／ＭｌＮ１２８）、ＦＫ－５０６（タクロリムス）、テルナチン４（ＤＡ３）、チゲサイクリン、トミボセルチブ（ｅＦＴ－５０８）、Ｖｅｒｄｉｎｅｘｏｒ、ＷＤＢ００２、Ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ、Ｓｅｌｉｎｅｘｏｒ、Ｚｏｔａｔｉｆｉｎ（ｅＦＴ２２６）。からなる群から選択される。

コロナウイルス感染症
コロナウイルス感染は、対象の少なくとも１つの細胞へのコロナウイルスの侵入及び少なくとも１つの細胞におけるその複製によって定義される。好ましくは、感染症は、気道の感染症であり、例えば、上気道（鼻及び鼻腔、副鼻腔、咽頭、ならびに声帯より上の喉頭の部分（コード））、及び下気道（声帯、気管、気管支、細気管支、及び呼吸細気管支、肺胞管、肺胞嚢及び肺胞を含む肺の下の喉頭の部分）である。より好ましくは、それは下気道の感染であり、最も好ましくは肺の感染である（１つ以上の呼吸細気管支、肺胞管、肺胞嚢及び肺胞を含む）。感染は、さらに、少なくとも１つのコロナウイルス－抗原特異的免疫因子、好ましくはＢ細胞、濾胞ヘルパーＴ細胞（Ｔ_ＦＨ細胞）、活性化ＣＤ４^＋Ｔ細胞及びＣＤ８^＋Ｔ細胞（特にＣＤ３８^＋ＨＬＡ－ＤＲ^＋）、ＩｇＭ抗体、及びＩｇＧ抗体からなる群から選択される少なくとも１つのコロナウイルス－抗原－特異的免疫因子の存在によって免疫学的に特徴付けることができる。あるいは、又はそれに加えて、好ましくは血液中又は上記の感染部位（最も好ましくは肺）において、コロナウイルス特異的サイトカインプロファイルによって免疫学的に特徴付けることができる。これらのプロフィールは、例えば、肺から組織試料を採取し、それをコロナウイルスに感染させ、サイトカインの発現を決定することによって、過度の負担なしに、当業者によって決定することができる。コロナウイルス特異的サイトカインプロファイルの例は、（ａ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶについては、ＩＦＮ－Ｉ（例えば、ＩＦＮ－β）、ＩＦＮ－ＩＩ（ＩＦＮ－γ）、ＩＦＮ－ＩＩＩ（ＩＦＮ－λ１、ＩＦＮ－λ２、及びＩＦＮ－λ３）、ＩＬ－１ベータ、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－８、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１アルファ、ＲＡＮＴＥＳ、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ５、及びＣＸＣＬ９のうちの１つ以上、好ましくは全ての上方制御、好ましくＣＸＣＬ１０の上方制御なし；（ｂ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２については、ＩＬ－６、ＭＣＰ－１、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ５、及び／又はＣＸＣＬ１０のうちの１つ以上、好ましく全ての上方制御、好ましくはいずれのＩＦＮ、及び／又はＩＬ－１ベータ、ＩＬ－１２、ＩＬ－８、ＭＩＰ－１アルファ、ＲＡＮＴＥＳ、ＣＸＣＬ２、及びＣＸＣＬ９のいずれか１つ又は全ての上方制御なし。

好ましい対象はヒトである。本発明者らの最良の知識によれば、コロナウイルスはすべてのヒトに等しく感染するが、コロナウイルス感染の危険因子がある：
（ｉ）最近（潜伏期間内、すなわち過去２７、２４、１９日以内、好ましくは１４（ＣＤＣ、ＮＨＣ）又は１０（ＷＨＯ）日以内）に、コロナウイルス感染が進行中の地域で存在するか、又はそこから移動する。この地域は、ＷＨＯによって決定された「影響を受ける地域」であることが望ましい。「最近」とは、コロナウイルスの潜伏期間内、好ましくは過去２７日以内、２４日以内、好ましくは１９日以内、より好ましくは１４日間、最も好ましくは１０日間を意味し得る。
（ｉｉ）コロナウイルスに感染した者、特にコロナウイルス疾患の症状が一以上ある者との接触。「接触」とは、ヒトの呼吸液滴に暴露されることを意味する（例えば、空気中の呼吸液滴の範囲内、又はヒトが触れた表面に接触するか、又は呼吸液滴によって暴露される）。
（ｉｉｉ）危険性の高い職業に従事していること。通常、一般公衆との接触（上記のように定義されている）を定期的に（例えば、少なくとも毎日、又は少なくとも週１回）必要とする。例えば、医療専門家、特に病院であること、ケアワーカー（例えば、小児や高齢者）であること、小売労働者（例えば、スーパーマーケットや薬局で働くこと）である。

コロナウイルス感染は、対象にコロナウイルス疾患の症状を引き起こすこともあれば、引き起こさないこともある。用語「コロナウイルス感染」及び「コロナウイルス疾患」は、本明細書において、少なくとも１つのコロナウイルス疾患症状の存在によって区別される。感染が少なくとも１つのコロナウイルス疾患の症状を伴わない限り、それは無症候性（前症候性を含む）である。本明細書中で使用される用語「コロナウイルス疾患」は、コロナウイルス感染及びコロナウイルス疾患の少なくとも１つの症状（本明細書中では「症候性感染」とも呼ばれる）の存在を必要とする。

コロナウイルスの症状には、乾いた咳、発熱（３７．８℃以上）、鼻水及び／又は鼻づまり、疲労、呼吸困難、肺炎、臓器（心臓、肺、肝臓及び／又は腎臓など）の不全、喉のかゆみ、頭痛、関節痛、吐き気、下痢、震え、リンパ球減少症、嗅覚の喪失及び／又は味覚の喪失が含まれる。好ましくは、コロナウイルス疾患は、２つ以上、３つ以上、又は４つ以上の症状の存在を特徴とし、好ましくは、１つ又は２つ以上の乾いた咳嗽、発熱（３７．８℃以上）、呼吸困難、嗅覚の喪失及び／又は味覚の喪失を含む。

コロナウイルス疾患は、好ましくは呼吸器疾患（例えば、ＳＡＲＳ又はＭＥＲＳ）、より好ましくはＣｏｖｉｄ－１９である。コロナウイルス疾患は軽症（重症ではない）の場合もあれば、重症の場合もある。軽度の経過は、コロナウイルス疾患の１つ以上の軽度の症状（すなわち、重度の症状なし）の存在を特徴とする。軽度の症状は、乾いた咳、軽度の発熱（３７．８℃以上から４０℃未満）、鼻水及び／又は鼻づまり、疲労、喉のかゆみ、頭痛、関節痛、吐き気、下痢、震え、リンパ球減少症、嗅覚の喪失及び味覚の喪失からなる群から選択される。重篤な症状は、呼吸困難、特に急性呼吸窮迫症候群、肺炎、臓器不全（心臓、肺、肝臓、腎臓など）、高熱（≧４０℃）からなる群から選択される。重度の経過は、（ｉ）コロナウイルス疾患の１つ以上の重篤な症状の存在、（ｉｉ）入院の必要性、特に集中治療室（ＩＣＵ）への入院の必要性、及び／又は酸素療法の必要性（上記定義）、特に呼吸マスク（人工呼吸器とも呼ばれる）、及び／又は（ｉｉｉ）対象の死亡の１つ以上によって臨床的に特徴付けられる。入院の必要性は、肺炎の臨床的又は放射線学的証拠、急性呼吸窮迫症候群、及び／又は少なくとも発熱及び持続性の咳嗽（痰を伴う又は伴わない）、特に持続性の咳嗽（例えば、少なくとも３日間）を含む２つ以上の症状の１つ以上を特徴とする。ＩＣＵ入室の必要性は、重度の肺炎及び／又は１つ以上の重度の合併症を特徴とする。重度の肺炎は、頻呼吸（生後２ヵ月未満：６０回以上／分；生後２～１１ヵ月：５０回以上／分；１～５歳：４０回以上／分；５歳以上：３０回以上／分）、呼吸困難、及び／又は不十分な酸素化を特徴とする（例えば、ＳｐＯ_２は成人で９３％以下、小児で９０％以下）。重度の合併症は、治療しないと致死的となる合併症で、敗血症性ショック、急性呼吸窮迫症候群、臓器不全などがある。あるいは、又はそれに加えて、重度の経過は、免疫学的に、例えば、サイトカインストーム、特に肺の存在又は発生によって特徴付けることができる。コロナウイルス・サイトカインストームは、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＴＮＦ－α、ＭＩＰ－１α、ＭＣＰ－１、Ｇ－ＣＳＦ及び／又はＣＸＣＬ１０の１つ以上の増加（感染しているが無症候性の対象に対して、好ましくは潜伏期間後、又はそのような対象の平均又は平均）によって、好ましくは過炎症を特徴とし、この増加は、過剰及び／又は制御されていないと特徴付けることができる。特に、サイトカインストームはＣｏｖｉｄ－１９サイトカインストームである。さらに、サイトカインストームは、好ましくは、上述の感染症（その好ましい部分を含む）に関して定義されるような気道内である。

コロナウイルス疾患は、年齢又は既存の状態にかかわらず、いかなる対象においても重度の経過をとることができるが、それにもかかわらず、コロナウイルス疾患の重度の経過をとる危険因子は、以下を含む：
（ｉ）年齢、例えば４０、５０、６０、７０、８０歳以上で、年齢とともにリスクが増大する；
（ｉｉ）男性；
（ｉｉｉ）喫煙；及び
（ｉｉｉ）１つ以上の共存症を有し、好ましくは心血管疾患、糖尿病、呼吸器疾患（特に慢性）、高血圧、ＡＩＤＳ、癌、肝疾患、腎疾患及び肺疾患からなる群から選択される。危険因子としての特定の共存症は呼吸器疾患である。

対象の調整
対象のコンディショニングは、本発明の医学的使用をもたらす免疫調節によって得られる、コロナウイルス感染のために対象を調製することを意味する。また、「予備的（ｐｒｅｐａｒａｔｏｒｙ）治療」、「予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）治療」、又は本発明に起因する疾患に関しては、「予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）治療」又は「予防的（ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ）治療」と称することもできる。これは必ずしもコロナウイルス感染を予防することを意図したものではない。したがって、対象はまだコロナウイルスに感染していない。

したがって、コンディショニングは、１つ以上の免疫学的効果を有することができ、又は（好ましくは）、１つ以上の臨床効果を有することができ、両方とも対象が感染された後である。これらの免疫学的効果は、好ましくは、以下からなる群から選択される：
（Ｉ－ｉ）対象又は対象の一部におけるコロナウイルス－抗原－特異的免疫因子（上記定義）の１つ以上の数を増加させ、
（Ｉ－ｉｉ）対象又は対象の一部におけるコロナウイルス複製を阻害（すなわち、減少又は停止）すること、
（Ｉ－ｉｉ）対象又は対象の一部におけるコロナウイルス量を減少させること。
（Ｉ－ｉｖ）対象又は対象の一部において、コロナウイルス特異的サイトカインプロファイル又はサイトカインストーム（上記定義）を予防又は改善すること。

ここで、対象の部分は、好ましくは気道（上気道又は好ましくは下気道、より好ましくは肺）である。（Ｉ－ｉｉ）は（Ｉ－ｉ）よりも好ましく、（Ｉ－ｉｉｉ）は（Ｉ－ｉｉ）よりも好ましい。さらに（Ｉ－ｉｉ）は、（Ｉ－ｉ）を含むことができ、（Ｉ－ｉｉｉ）は、（Ｉ－ｉ）及び／又は（Ｉ－ｉｉ）を含むことができる。（Ｉ－ｉｖ）は一般に望ましい。

臨床効果は、好ましくは、以下からなる群から選択される：
（Ｃ－ｉ）伝染性を低下させ、
（Ｃ－ｉｉ）コロナウイルス疾患の発症を遅らせ、
（Ｃ－ｉｉｉ）コロナウイルス疾患の１つ以上の予想的な症状、好ましくは１つ以上の予想的な重症コロナウイルス疾患の症状の程度を軽減し、
（Ｃ－ｉｖ）コロナウイルス疾患の１つ以上の症状、好ましくはコロナウイルス疾患の１つ以上の重症症状を予防し、
（Ｃ－ｖ）コロナウイルス疾患の重症化を予防し、
（Ｃ－ｖｉ）コロナウイルス疾患を予防する。

したがって、（Ｃ－ｉｉ）は（Ｃ－ｉ）よりも好ましく、（Ｃ－ｉｉｉ）は（Ｃ－ｉｉ）よりも好ましく、（Ｃ－ｉｖ）はよりも（Ｃ－ｉｉｉ）よりも好ましく、（Ｃ－ｖ）は（Ｃ－ｉｖ）よりも好ましく、（Ｃ－ｖｉ）は（Ｃ－ｖ）よりも好ましい。

予想的な症状とは、まだ症状が現れていないが、現れることもあれば、現れることもある症状のことである。したがって、予想的な症状の程度の減少は、症状の予防的治療を意味する。

従って、パラポックスウイルス剤は、コロナウイルスにまだ感染していない対象における（Ｉ－ｉ）～（Ｉ－ｉｖ）及び／又は（Ｃ－ｉ）～（Ｃ－ｖｉ）の１つ以上において使用することができる。換言すれば、パラポックスウイルス剤は、（Ｉ－ｉ）～（Ｉ－ｉｖ）及び／又は（Ｃ－ｉ）～（Ｃ－ｖｉ）の１つ以上を達成するために、有効量の投与時に能力を有する。

好ましい態様において、条件づけされる対象は、コロナウイルス感染を発症するための１つ以上の危険因子、及び／又はコロナウイルス疾患の重度の経過を有するための１つ以上の危険因子によって特徴付けられる。

別の実施形態では、コンディショニングされる対象は、以下に記載される本発明の対応するさらなる態様による方法によって選択される。

対象の治療
コロナウイルス感染症（すなわち、感染した対象）の治療は、必ずしもコロナウイルス疾患を治療又は予防することを意味しないが、コロナウイルス感染症を治療又は予防することが好ましい。このように、治療は、無症候性感染（すなわち、症状を有さない感染対象）又はコロナウイルス疾患（すなわち、１つ以上の症状を有する感染対象）であり得る。

治療は、１つ以上の免疫学的効果を有することができ、又は（好ましくは）１つ以上の臨床効果を有することができる。これらの免疫学的効果は、好ましくは、上記のコンディショニング、無症候性感染又は疾患のいずれかについて定義されるように定義される。無症候性感染に対する臨床効果は、好ましくは、前述のコンディショニングのために定義されるように、（Ｃ－ｉ）～（Ｃ－ｖｉ）からなる群から選択される。症候性感染（すなわち、コロナウイルス疾患）に対する臨床効果は、好ましくは、以下からなる群から選択される：
（Ｃ－ｉ）、（Ｃ－ｖｉ）、両方は前述のコンディショニングのために定義され，
（Ｃ－ｉｉ）コロナウイルス疾患の１つ以上の（又は理想的にはすべての）症状を改善し、
（Ｃ－ｉｉｉ）コロナウイルス疾患の１つ以上の（又は理想的にはすべての）さらなる症状の予防、及び
（Ｃ－ｉｘ）は、コロナウイルス疾患の重度の経過を改善し、好ましくは予防する。

したがって、「さらなる症状」とは、まだ症候性感染を特徴づけていない症状である。

したがって、パラポックスウイルス剤は、コロナウイルスに感染した対象における（Ｉ－ｉ）～（Ｉ－ｉｖ）及び／又は（Ｃ－ｉ）～（Ｃ－ｉｘ）の１つ以上において使用することができる。換言すれば、パラポックスウイルスは、（Ｉ－ｉ）から（Ｉ－ｉｖ）及び／又は（Ｃ－ｉ）から（Ｃ－ｉｘ）の１つ以上を達成するために、有効量を投与すると、その能力を有する。好ましい態様において、パラポックスウイルス剤は、コロナウイルス疾患の予防又は治療に使用される。

上述のように、治療対象の対象は無症候性であってもよい。あるいは、治療される対象は、コロナウイルス疾患を有し得る。コロナウイルス疾患を有する対象は、いかなる重篤な症状も有さないことがあり、例えば、１つ又は複数の軽度の症状しか有さない。別の実施形態では、それは、コロナウイルス疾患の重度の経過（（ｉｉｉ）死亡を除く；好ましくは、（ｉ）１つ以上の重度の症状）を有し得る。好ましい実施形態において、治療される対象（例えば、コロナウイルス疾患の重度の経過をすでに有する対象を除き、前記対象のいずれか）は、コロナウイルス疾患の重度の経過を有するための１つ以上の危険因子によって特徴付けられる。

さらなる好ましい実施形態において、対象は、以下のうちの少なくとも１つによって特徴付けられる：
（ｉ）肺にサイトカインストームがなく、サイトカインストームがまったくないことが望ましい；
（ｉｉ）７５歳以下、７０歳以下、好ましくは６５歳以下、より好ましくは１８～６５歳以下、及び／又は
（ｉｉｉ）ＨＳコアが１６９以下、好ましくは１５０以下、１３０以下又は１１０以下であること。
好ましくは、対象は、（ｉｉ）及び／又は（ｉｉｉ）、（ｉｉ）及びＨＳコア１６９以下、又は（ｉｉｉ）及び１８～６５歳を特徴とする。

ＨＳコアは、コロナウイルス疾患と類似したサイトカインストーム・プロファイルを伴う過炎症症候群（Pehta et al., The Lancet Vol 395 March 28, 2020）である二次性血球貪食性リンパ組織球増加症（ｓＨＬＨ）の存在の可能性を生み出す。１６９を超えるＨＳｃｏｒｅはｓＨＬＨに対して９３％の感度と８６％の特異度を示す。ＨＳｃｏｒｅは次の基準を使用して計算される：体温（＜３８．４℃：０ポイント、３８．４～３９．４℃：３３ポイント、＞３９．４℃：４９ポイント）、臓器肥大（なし：０ポイント、肝腫大又は脾腫：２３ポイント、肝腫大及び脾腫：３８ポイント）、血球減少症の数^＊（１つの血統；０ポイント、２つの血統：２４ポイント、３つの血統：３４ポイント）、トリグリセリド（＜１．５ｍｍｏｌ／ｌ：０ポイント、１．５～４．０ｍｍｏｌ／ｌ：４４ポイント、＞４．０ｍｍｏｌ／ｌ：６４ポイント）、フィブリノーゲン（＞２．５ｇ／Ｌ：０ポイント、≦２．５ｇ／Ｌ：３０ポイント）、フェリチン（＜２０００ｎｇ／ｍｌ：０ポイント、２０００～６００００ｎｇ／ｍｌ：３５ポイント、＞６０００ｎｇ／ｍｌ：５０ポイント）、血清アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（＜３０ＩＵ／Ｌ：０点、≧３０ＩＵ／Ｌ：１９点）、骨髄吸引液での血球貪食（なし：０点、はい：３５ポイント）、及び既知の免疫抑制†（いいえ：０ポイント、はい：１８ポイント）。^＊ヘモグロビン濃度が９．２ｇ／ｄＬ以下（≦５．７１ｍｍｏｌ／Ｌ）、白血球数が５０００個／ｍｍ^３以下、血小板数が１１万個／ｍｍ^３以下、又はこれらの基準をすべて組み合わせたものと定義する。†ＨＩＶ陽性又は長期免疫抑制療法（例えば、１種以上のグルココルチコイド、シクロスポリン及び／又はアザチオプリン）を受けている。

別の実施形態では、治療される対象は、以下に記載される本発明の対応するさらなる態様による方法によって選択される。

さらなる医学的使用
さらなる医学的使用態様において、本発明は、対象（ｉ）コロナウイルス感染を有する対象、又は（ｉｉ）コロナウイルス感染を発症する１つ以上の危険因子及び／又はコロナウイルス疾患の重篤な経過を有する１つ以上の危険因子を特徴とする、抗ウイルス（好ましくは抗コロナウイルス）細胞状態を促進する医薬として使用するパラポックスウイルス剤に関する。

一実施形態において、コロナウイルス感染を発症するための１つ以上の危険因子は、上記で定義された因子（ｉ）及び（ｉｉ）から選択される。

別の実施形態では、コロナウイルス疾患の重度の経過を有するための１つ以上の危険因子は、上述のように、少なくとも（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）、又は（ｉｉ）及び（ｉｖ）を含むか、又は呼吸器疾患（特に慢性）及び肺疾患から選択される少なくとも共存症を含む。さらに、対象の年齢は、好ましくは、少なくとも６０歳、少なくとも７０歳、又はより好ましくは少なくとも８０歳である。

「抗ウイルス細胞状態を促進する」という語句は、宿主防御タンパク質をコードする細胞性抗ウイルス遺伝子の転写の促進を意味し、例えば、ＩＦＮ－α及び／又はβによって促進される。好ましくは、それは、細胞内でのウイルス複製を阻害（すなわち、少なくとも減少）し、及び／又はアポトーシスを誘導し（細胞内でのさらなるウイルス複製を防止するため）、より好ましくは、それは、医薬によって抗ウイルス細胞状態が促進されなかった細胞と比較して、感染細胞によって放出された感染性ビリオンの量を減少させる。それによって、ウイルスの増殖を停止させるか、少なくとも遅らせる。「促進する」には、誘導（例えば、抗ウイルス状態にない細胞）及び強化（すなわち、増強）（例えば、既に抗ウイルス状態にある細胞）が含まれる。これに限定されるものではないが、前者は、コロナウイルス感染を有さない（まだ）対象、例えば、前述の１つ以上の危険因子によって特徴付けられる対象に好ましく、後者は、コロナウイルス感染を有する対象に好ましい。

治療方法
本発明は、さらに、以下の方法に関する。
（ｉｉ）コロナウイルス感染を発症するための１つ以上の危険因子、及び／又はコロナウイルス疾患の重度の経過を有するための１つ以上の危険因子によって特徴付けられる、（ｉ）コロナウイルス感染を有する対象に、パラポックスウイルス剤を投与する方法。

（ｉｉ）コロナウイルス感染を発症するための１つ以上の危険因子、及び／又はコロナウイルス疾患の重度の経過を有するための１つ以上の危険因子によって特徴付けられる、（ｉ）コロナウイルス感染を有する対象における抗ウイルス（好ましくは抗コロナウイルス）細胞状態を促進する方法であって、パラポックスウイルス剤を対象に投与することを含む方法。

（ｉ）コロナウイルス感染のために対象をコンディショニングするか、又は（ｉｉ）対象におけるコロナウイルス感染を治療するための方法であって、パラポックスウイルス剤を対象に投与することを含む方法。

対象においてコロナウイルス疾患を治療する方法であって、前記対象にパラポックスウイルス剤を投与する工程を含む方法。

以下に記載される定義及び実施形態、特に「本発明の定義及びさらなる実施形態」のヘッダーの下で説明される実施形態は、本発明の第１の態様に適用される。

第２の態様において、本発明は、パラポックスウイルス剤及びコロナウイルス剤を含む組成物又はキットに関する。

好ましい実施形態において、組成物又はキットは、１つ以上の薬学的に許容される希釈剤、担体、及び／又は保存剤をさらに含み；及び／又はそれは医薬組成物又はキットである。薬学的に許容される希釈剤、担体、及び／又は保存剤は、以下に記載され、それに加えて、パラポックスウイルス、特に不活化パラポックスウイルス、又はこの培地の凍結乾燥物を構造的に維持するのに適した（例えば、水性）培地を含んでもよい。具体的には、組成物又はキットは、本明細書に記載される本発明の医療用途のいずれかのためであってもよい。

組成物は、上記で定義したように、任意の投与経路のために処方することができる。また、パラポックスウイルス剤及びコロナウイルス剤の同時又は別々の投与のため、又は同時又は別々の放出のために製剤化することもできる。

好ましい実施形態において、キットは、第２の態様の組成物を含む。

別の実施形態では、キットは、好ましくは本明細書に記載される医療用途に従った、パラポックスウイルス剤及びコロナウイルス剤、又は第２の態様の組成物の使用のための説明書を備えたリーフレットを含む。

第１の態様に関して記載された定義及び実施形態は、適用可能な限り、第２の態様にも適用される。また、以下に記載される定義及び実施形態、特に「本発明の定義及びさらなる実施形態」のヘッダーの下で記載される実施形態は、第２の態様の組成物又はキットに適用される。

第３の態様において、本発明は、本明細書に記載される本発明の医療用途のいずれかのための医薬組成物又はキットに関する。ここで、医薬組成物又はキットは、パラポックスウイルス剤、好ましくは、さらなる医薬を含む。医薬組成物は、通常、１つ以上の薬学的に許容される希釈剤、担体、及び／又は保存剤を含む。

好ましい態様において、キットは、第３の態様の組成物を含む。

別の実施形態では、キットは、パラポックスウイルス剤及びさらなる医薬の使用のための説明書を備えたリーフレット、又は第３の態様の組成物を含み、好ましくは、本明細書に記載の医療用途による。

第１及び第２の態様（例えば、製剤）に関して記載された定義及び実施形態は、それらが適用可能な限り、第３の態様にも適用される。また、以下に記載される定義及び実施形態、特に「本発明の定義及びさらなる実施形態」のヘッダーの下で記載される実施形態は、第３の態様の組成物又はキットに適用される。

さらなる態様において、本発明は、本明細書に記載される本発明の医療用途のいずれかのために対象を選択する方法に関し、本方法は、（ｉ）対象におけるサイトカインストームの存在又は非存在を決定する工程、及び（ｉｉ）サイトカインストームが存在しない場合に対象を選択する工程を含む。

一実施形態では、工程（ｉ）は、対象のＨＳコアを決定する工程を含み、工程（ｉｉ）は、ＨＳコアが１６９以下である場合に対象を選択する工程を含む。

別の実施形態では、工程（ｉ）は、対象の生物学的試料において、過炎症の１つ以上の徴候を検出することを含み、工程（ｉｉ）は、過炎症の徴候が検出可能でない場合、対象を選択することを含む。その中の過炎症は、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＴＮＦ－α、ＭＩＰ－１α、ＭＣＰ－１、Ｇ－ＣＳＦ及び／又はＸＣＬ１０のうちの１以上の、あるいはＩＬ－６、フェリチン、血小板数及び／又は赤血球沈降速度（ＥＳＲ）のうちの１以上の（感染しているが無症候性の対象に対して、好ましくは潜伏期間後、又は複数のそのような対象の平均（ａｖｅｒａｇｅ）又は平均（ｍｅａｎ）））上昇したレベル、例えば、過剰及び／又は制御不能レベルである。生物学的試料は、好ましくは、血液又は血液由来の試料（例えば、血漿又は血清）、痰、唾液、及び肺由来の試料（例えば、気管支洗浄、気管支肺胞洗浄、気管支ブラッシング、及び気管支擦過を含む気管支鏡によって）からなる群から選択される。

第４の態様の方法は、好ましくはエクスビボ法である。

第１、第２、及び第３の態様に関して記載された定義及び実施形態は、適用可能な限り、第４の態様にも適用される。また、以下に説明する定義及び実施形態、特にヘッダー「本発明の定義及びさらなる実施形態」の下で説明する定義及び実施形態は、第４の態様の方法に適用される。

ディスクレーマー
選択実施形態では、以下のディスクレーマーの１つ以上が本発明に適用される：
－パラポックスウイルスはイヌジステンパーウイルス（ＣＤＶ）ではなく、
－コロナウイルスはブタ流行性下痢ウイルス（ＰＥＤＶ）ではなく、及び／又は
－対象はブタ（雌ブタ及び子ブタを含むブタ）ではない。

本発明の定義及びさらなる実施形態
明細書は、以下に定義される一定の意味を有する、様々な用語及び語句を使用する。好ましい意味は、本明細書に記載される本発明の態様の好ましい実施形態として解釈されるべきである。したがって、それら及び以下に記載されるさらなる実施形態は、本発明の態様の任意の実施形態、及び上述される本発明の態様の任意の好ましい実施形態と組み合わせることができる。

ポリヌクレオチド配列の文脈における用語「同一」又は「同一の」は、最大一致のために整列されたときに同一である２つの配列中の残基の数を指す。具体的には、２つの配列の配列同一性パーセントは、２つのアラインメントされた配列間の正確なマッチの数を、より短い配列の長さで割って、１００を掛けたものである。２つの配列を整列させるために使用することができる整列ツールは、当業者に周知であり、例えば、ワールドワイドウェブ上で入手することができ、Ｎｅｅｄｌｅ（ＥＭＢＯＳＳ）（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａ／ｅｍｂｏｓｓ ｎｅｅｄｌｅ／）、ＭＵＳＣＬＥ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｍｓａ／ｍｕｓｃｌｅ／）、ＭＡＦＦＴ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｍｓａ／ｍａｆｆｔ／）又はＷＡＴＥＲ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａ／Ｅｍｂｏｓｓ Ｗａｔｅｒ／））が挙げられる。２つの配列間のアラインメントは、デフォルトパラメータ設定を用いて行うことができ、例えば、Ｎｅｅｄｌｅでは、好ましくはＭＡＴＲＩＸ：ＢＬＯＳＵＭ６２、Ｇａｐオープン：１０．０、Ｇａｐ伸長：０．５、ＭＡＦＦＴについては、好ましくはＭａｔｒｉｘ：Ｂｌｏｓｕｍ６２、Ｇａｐオープン１．５３、Ｇａｐ伸長０．１２３、ＷＡＴＥＲポリヌクレオチドについては、好ましくはＭＡＴＲＩＸ：ＤＮＡＦＵＬＬ、Ｇａｐ Ｏｐｅｎ：１０．０、Ｇａｐ伸長０．５、及びＷＡＴＥＲポリペプチドについては、好ましはＭＡＴＲＩＸ：ＢＬＯＳＵＭ６２、Ｇａｐオープン：１０．０、Ｇａｐ伸長：０．５が挙げられる。当業者は、満足のいくアラインメントを生成するために、いずれかの配列にギャップを導入することが必要であることを理解する。「最良の配列アラインメント」は、最小数のギャップを有する一方で、アラインメントされた同一残基の最大数を生成するアラインメントとして定義される。好ましくは、それは、アラインメント中の全ての配列中の全ての残基を含むグローバルアラインメントである。

用語「変異体」は、一般に、ポリヌクレオチドの修飾されたバージョン、例えば、突然変異を指し、したがって、ポリヌクレオチドの１つ以上のヌクレオチドが突然変異され得る。 一般に、変異体は、機能的であり、例えば、ウイルスが宿主細胞に感染することができるウイルスに関して意味する。機能性は、一般に、変種が由来するポリヌクレオチドについて記載されているものである。「突然変異」は、ヌクレオチド置換、欠失及び／又は挿入（「及び」は、複数の突然変異が存在する場合に適用され得る）であり得る。好ましくは、それは置換である。

用語「抗原」は、抗体、Ｂ細胞受容体及び／又はＴ細胞受容体によって結合することができる任意の物質、例えば、タンパク質又はペプチドを指す。抗原は、好ましくは少なくとも８個のアミノ酸を含み、より好ましくは８個から１７個のアミノ酸を含む少なくとも１個のエピトープを含む。エピトープは、Ｔ細胞及び／又はＢ細胞エピトープであり得る。Ｔ細胞エピトープは、抗原提示細胞の表面に提示することができるエピトープであり、そこでＭＨＣ分子に結合する。ヒトでは、プロ抗原提示細胞はＭＨＣクラスＩＩペプチドを提示するように特殊化しているが、有核体細胞のほとんどはＭＨＣクラスＩペプチドを提示する。ＭＨＣクラスＩ分子によって提示されるＴ細胞エピトープは、典型的には、長さが８～１１アミノ酸の間のペプチドであるが、一方、ＭＨＣクラスＩＩ分子は長いペプチド、例えば、長さが１３～１７アミノ酸を提示する。Ｂ細胞エピトープは、Ｂ細胞による天然抗原の表面上の三次元構造として認識されるエピトープである。エピトープは、インシリコツール、例えば、ＩＥＤＢ分析リソースのオンラインＢｏｒ Ｔ細胞予測ツールを用いて予測することができる。

用語「免疫原」は、免疫応答を誘導することができる抗原を指す。

本明細書で使用される「パターン認識受容体」又は「ＰＲＲ」とは、病原体に特異的な病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）及び／又は細胞損傷又は死の間に放出される宿主細胞の成分に特異的な損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）を検出する生殖細胞系にコードされた宿主センサを指す。ＰＲＲは、膜結合型ＰＲＲ（細胞表面ＰＲＲ）でもサイトゾルＰＲＲでもよい。

「アジュバント」とは、抗原／免疫原に対する免疫応答の質及び／又は強度を、抗原単独の投与と比較して、加速、延長及び／又は増強し、従って、必要な抗原／免疫原の量、及び／又は関心のある抗原／免疫原に対する適切な免疫応答を生成するために必要な注射の頻度を減少させる物質である。本発明による組成物に関して使用できるアジュバントの例は、水酸化アルミニウム（ミョウバン）のゲル状沈殿物；ＡｌＰＯ_４；アルヒドロゲル；グラム陰性菌の外膜からの細菌生成物、特にモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）、リポ多糖類（ＬＰＳ）、ムラミルジペプチド及びそれらの誘導体；フロイントの不完全アジュバント；リポソーム、特に中性リポソーム、組成物及び任意にサイトカインを含むリポソーム；非イオン性ブロック共重合体；ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸアジュバント（Ｄｒａｎｅ ｅｔａｌ．，２００７）；ＣｐＧジヌクレオチド（ＣｐＧモチーフ）を含む非メチル化ＤＮＡ、特にホスホロチオエート（ＰＴＯ）骨格を有するＣｐＧ ＯＤＮ（ＣｐＧ ＰＴＯ ＯＤＮ）、又はホスホジエステル（ＰＯ）骨格を有するＣｐＧ ＯＤＮ（ＣｐＧ ＰＯ ＯＤＮ）；合成リポペプチド誘導体、特にＰａｍ_３Ｃｙｓ；リポアラビノマンナン；ペプチドグリカン；ザイモサン；熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）、特にＨＳＰ７０；ｄｓＲＮＡ及びその合成誘導体、特にＰｏｌｙＩ：Ｃ；ポリカチオン性ペプチド、特にポリ－Ｌ－アルギニン；タキソール；フィブロネクチン；フラジェリン；イミダゾキノリン；アジュバント活性を有するサイトカイン、特にＧＭ－ＣＳＦ、インターロイキン－（ＩＬ－）２、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１８、Ｉ型及びＩＩ型インターフェロン、特にＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α；２５－ジヒドロキシビタミンＤ３（カルシトリオール）；及び合成オリゴペプチド、特にＭＨＣ－ＩＩ提示ペプチドである。ポリオキシエチレン（ＰＯＥ）及びポリオキシプロピレン（ＰＯＰ）を含有する非イオンブロックポリマー、例えばＰＯＥ－ＰＯＰ－ＰＯＥブロック共重合体をアジュバントとして使用することができる（Ｎｅｗｍａｎら、１９９８）。このタイプのアジュバントは、活性成分として核酸を含む組成物に対して特に有用である。

用語「組換え体」は、特に、そのゲノム中に異種ポリヌクレオチド配列を含むように修飾されたウイルスを指す。

用語「免疫モジュレーター」は、対象における免疫応答を誘導、増強、抑制及び／又は弱めることによって免疫系を調節又は正常化するために使用される薬物（「及び」とは、免疫系のある部分が選択的に誘導又は増強され、他の部分が選択的に抑制又は弱化されることを意味する）を指す。例は、サイトカイン、サイトカイン受容体の非サイトカインアゴニスト又はアンタゴニスト（例えば、抗体又は小化合物）、抗体又は小化合物結合（好ましくは中和）サイトカイン、及び可溶性サイトカイン受容体（例えば、サイトカインを捕捉するための）である。それは抗原を含まない。

本明細書で使用される「ベクター」という用語は、当業者に知られている任意のベクターを含み、プラスミドベクター、コスミドベクター、ファージベクター、例えば、ラムダファージ、ウイルスベクター、例えばアデノウイルス（Ａｄ）ベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アルファウイルスベクター（例えば、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥ）、シンドビスウイルス（ＳＩＮ）、セムリキ森林ウイルス（ＳＦＶ）、ＶＥＥ－ＳＩＮキメラ）、ヘルペスウイルスベクター、麻疹ウイルスベクター、ポックスウイルスベクター（ワクシニアウイルス、改変ワクシニアウイルスアンカラ（ＭＶＡ）、ＮＹＶＡＣ（ワクシニアのコペンハーゲン株由来）、及びアビポックスベクター：カナリア痘（ＡＬＶＡＣ）及び鶏痘（ＦＰＶ）ベクター）、及び水疱性口内炎ウイルスベクター、又はウイルス様粒子が含まれる。本明細書で使用される場合、用語「ウイルス様粒子」又は「ＶＬＰ」は、複製しない空のウイルス殻を指す。ＶＬＰは、一般に、カプシド、コート、シェル、表面及び／又はエンベロープタンパク質と呼ばれるタンパク質などの１つ以上のウイルスタンパク質から構成されるが、これらに限定されない。ウイルスは、ウイルスの細胞侵入に関与する機能性ウイルスタンパク質を含み、効率的な細胞侵入を保証する。特定のＶＬＰを製造する方法は、当技術分野において公知である。

用語「マイトジェン」は、細胞分裂を開始させる薬剤、例えば、ペプチド又はタンパク質を指す。用語「細胞活性化剤」は、例えば、Ｔ細胞受容体又はＢ細胞受容体などの細胞受容体に結合し架橋するペプチド又はタンパク質などの薬剤を指す。

用語「ヌクレオシド類似体」とは、核酸類似体及び糖を含有するヌクレオシドを指す。用語「ヌクレオチド類似体」は、１～３個のリン酸を有する核酸類似体、糖及びリン酸基を含むヌクレオチドを指す。用語「核酸アナログ」は、それが異なる塩基対形成及び／又は塩基積層特性を有するように改変された１つ以上のリン酸骨格、ペントース糖及び／又はヌクレオベースを有する点で、ＲＮＡ及びＤＮＡと構造的に類似する化合物を指す。例としては、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、モルホリノ及びロック核酸（ＬＮＡ）、ならびにグリコール核酸（ＧＮＡ）及びトレオース核酸（ＴＮＡ）が挙げられる。

用語「ＲＮＡｉ分子」は、標的配列特異的な様式でｍＲＮＡ分子を中和することができる分子を指す。例としては、ｄｓＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ及びｓｉＲＮＡが挙げられる。

本発明による薬剤の投与のための特別な好ましい薬学的形態は、注射可能な使用に適した形態であり、無菌の水溶液又は分散液及び無菌の注射可能な溶液又は分散液の即時調製のための無菌粉末を含む。典型的には、そのような溶液又は分散液は、溶媒又は分散媒体を含み、例えば、水緩衝水溶液、例えば、生体適合性緩衝液、エタノール、ポリオール、例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、それらの適切な混合物、界面活性剤又は植物油が挙げられる。注入又は注射溶液は、抗菌剤又は抗真菌剤のような保存剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸又はチオマーザールの添加を含むが、これらに限定されない、任意の数の技術分野で認められた技術によって達成することができる。さらに、糖又は塩のような等張剤、特に塩化ナトリウムを注入又は注射溶液に混入することができる。

本発明の好ましい希釈剤は、水、生理学的に許容される緩衝液、生理学的に許容される緩衝塩溶液又は塩溶液である。本発明による薬品の種々の薬学的形態で用いることができる添加剤は、以下の非限定的リストから選択することができる：
ａ）結合剤、例えば、ラクトース、マンニトール、結晶性ソルビトール、二塩基性リン酸塩、リン酸カルシウム、糖類、微結晶性セルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ポリビニルピロリドンなど、
ｂ）潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、水素添加植物油、ロイシン、グリセリド及びステアリルフマル酸ナトリウム、
ｃ）崩壊剤、例えば、デンプン、クロスカラメロース、ナトリウムメチルセルロース、寒天、ベントナイト、アルギン酸、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドンなど。

用語「薬学的に許容される担体」は、薬物投与の選択性、有効性、及び／又は安全性を改善するのに役立つ任意の基質を指す。このような担体は、全身循環中への薬物の放出を制御するために使用することができる。これは、長期間にわたる薬物のゆっくりとした放出（典型的には拡散）によって、又はｐＨの変化、熱の印加、光による活性化などの刺激によって薬物の標的での放出が誘発されることによって達成される。担体はまた、水溶性及び／又は膜透過性が低い多くの薬物の薬物動態特性、特に生物学的利用能を改善するために使用することができる。様々な薬物担体系が開発され、研究されている。例としては、リポソーム、ポリマーミセル、ミクロスフェア、ナノ粒子、ナノファイバー、タンパク質－薬物結合体、赤血球、ビロソーム及びデンドリマーが挙げられる。薬物を担体に結合させる異なる方法を用いることができ、これには、吸着、バルク構造への統合、カプセル化、及び共有結合が含まれる。

本発明の範囲から逸脱することなく、本発明の様々な変更及び変形が当業者に明らかであろう。本発明は、特定の好ましい実施形態に関連して説明されてきたが、請求された本発明は、そのような特定の実施形態に不当に限定されるべきではないことを理解されたい。実際、関連分野の当業者にとって自明な、本発明を実施するための説明されたモードの種々の変更は、本発明によってカバーされることが意図されている。

本発明は、以下の実施例によって説明され、本発明の範囲を単に例示的であり、限定的ではないと解釈される。

実施例１
目的
コロナウイルスに対する不活化パラポックスウイルスｏｒｆ（ｉＰＰＶＯ）ビリオンの抗ウイルス活性を試験すること。ＰＰＶＯビリオンは、免疫系の先天性及び適応性アームを刺激する。

アプローチ
全血では、ＡＰＣ（抗原提示細胞）がｉＰＰＶＯビリオンを取り込み、それが活性化されサイトカインが放出される。その結果、ＮＫ細胞と同様にＴ細胞も活性化され、ＮＫ細胞も増殖し始め、サイトカインを放出する。インキュベーションの３日後、細胞を遠心分離し、サイトカインのような可溶性因子を含む上清を回収する。これらの上清を、コロナウイルスに対するそれらの活性についてアッセイする。

試験物質
－Ｄ１７０１株のｉＰＰＶＯ（Ｐｆｉｚｅｒから入手可能）；２ｍｌの水に再構成された２３０ＩＦＮ単位
－ｉＰＰＶＯベヒクル（ＰＰＶＯ緩衝液のみ、すなわちウイルスを含まない）、陰性対照
－ＰＢＳ、陰性対照
－コンカバリン（Ｃｏｎ）Ａ、共刺激、原液１ｍｇ／ｍｌ ＰＢＳ＝１０×（５μｇ／ｍｌでウェルに使用）

追加材料
－健康なドナーの全血：Ｓａｒｓｔｅｄｔ Ｍｏｎｏｖｅｔｔｅ、Ｌｉ－ヘパリンで新鮮に採取した全血９ｍｌ
－全血インキュベーション用培地：１％ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）及び０．２５ｍＬのヘパリン－ナトリウム（５０００Ｕ）を添加したＲＰＭＩ（５００ｍＬ）
－コロナウイルスアッセイの細胞：ＶｅｒｏＥ６－ＥＧＦＰは、１０％ｖ／ｖ熱不活化ＦＣＳ及び５ｍＬの重炭酸ナトリウム７．５％をＤＭＥＭに添加して調製した増殖培地中で増殖させ、Ｔ１５０ボトル中で培養し、１／４を週２回分裂させた。Ｐｅｎ－ｓｔｒｅｐを直接Ｔ１５０ボトルに１／１００希釈で添加した。
－コロナウイルスアッセイ培地：２％ｖ／ｖ熱不活化ＦＣＳ及び５ｍＬ重炭酸ナトリウム７．５％をＤＭＥＭに添加して調製した。

試料の調製
９６ウェル丸底プレートのウェルあたり：全血インキュベーション用１２０μｌ細胞培地＋２０μｌのＣｏｎＡ又はＰＢＳ＋２０μｌのｉＰＰＶＯ、ｉＰＰＶＯベヒクル又はＰＢＳ＋４０μｌの全血。

プレートを３７℃、５％ＣＯ_２で７２時間インキュベートし、次に２３０ｇで５分間遠心分離した。上清を新しい９６ウェルプレートに分注した（プレートレイアウトを維持）。試料プレートをさらに使用するまで－８０℃で凍結した。

コロナウイルスアッセイ
試料（上記のように調製した試験物質）の希釈液：Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ Ｏｎｅ ６５５０９０プレートのウェルに１００μＬのアッセイ培地を添加し、１５μＬをウェルから再度除去した（このアッセイの対照のためのウェル：ウイルス複製及び細胞への影響を制御するウイルス制御（ＶＣ）及びウイルスなしの細胞生存率を制御するための細胞制御（ＣＣ）を除く）。１５μＬの培地を除去したウェルに、試料プレートのウェルから１５μＬを添加した。

細胞懸濁液の調製：Ｔ１５０ボトル中のＶｅｒｏＥ６－ＥＧＦＰのコンフルエント培養（単層）をＤＰＢＳで洗浄し、１０ｍＬのトリプシン０．２５％トリプシン／ＥＤＴＡを添加した。ボトルを室温で１分間インキュベートし、２ｍＬを除いてトリプシン／ＥＤＴＡを除去した。次に、３７℃で１５分間インキュベートし、インキュベート後、細胞を１０ｍＬのアッセイ培地に再懸濁し、Ｃｅｌｌ Ｓｔｒａｉｎｅｒ（ＦＡＬＣＯＮ ＣＡＴ ＮＯ ３５２３５０）に通し、クルターを用いて計数した（１０ｍＬ中１０μＬの３試料を計数した）。次に、３０００細胞を５０μＬのアッセイ培地に再懸濁し、細胞懸濁液５０μＬをＧｒｅｉｎｅｒプレートの各ウェルに播種した。

アッセイ：上記のように調製した細胞懸濁液を有するプレートを一晩（３７℃／５％ＣＯ_２）インキュベートし、その後、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（株ＢｅｔａＣｏＶ／Ｂｅｌｇｉｕｍ／ＧＨＢ－０３０２１／２０２０、ストック力価４．８×１０^７ ＴＣＩＤ_５０／ｍｌ）を、２００μｌ／ウェル（３０００細胞／ウェル）中の１／２００，００００の最終希釈で、全てのウェル（細胞対照ウェルを除く）に添加し、ＭＯＩは０．０１６ ＴＣＩＤ_５０／ｃｅｌｌとした。プレートを３７℃／５％ＣＯ_２で５日間インキュベートし、その後、全ウェル蛍光、ＨＣＩ（高濃度イメージング）及びＩｍａｇｅＪソフトウエアを用いてＧＦＰシグナルを測定した。ＥＧＦＰ発現の低下は、ウイルス誘発性細胞変性活性のマーカーである。Ｉｖｅｎｓら（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １２９，２００５，５６－６３）も参照されたい。

結果
結果を図１に示す。コロナウイルスに感染していない細胞（ＣＣ平均）は生存し、ｅＧＦＰを発現した。コロナウイルス（ＶＣ平均）に感染した細胞は死亡し、ｅＧＦＰ発現は検出されなかった。ＰＢＳ及びｉＰＰＶＯベヒクル単独の結果は、ＶＣ平均とほぼ同じであった。ＰＢＳ及びｉＰＰＶＯベヒクル単独は、予想されるように、細胞生存率、すなわちコロナウイルスに対する影響を示さなかった。また、５μｇ／ｍｌのＣｏｎＡ単独（ＰＢＳ中）はｅＧＦＰ発現を保持せず、ＰＢＳ中のＣｏｎＡ単独との比較で示されるように、ｉＰＰＶＯベヒクルと共に投与した場合にもｅＧＦＰ発現に影響を及ぼさなかった。ｉＰＰＶＯ Ｄ１７０１単独（ＰＢＳにおいて）も、細胞生存率に明白な正の効果を有し、ｉＰＰＶＯ Ｄ１７０１を５μｇ／ｍｌ ＣｏｎＡと組み合わせて使用した場合（それ自体はこの濃度でｅＧＦＰ発現に影響を示さなかった）、ｅＧＦＰ発現はさらに増加した。したがって、ｉＰＰＶＯとＣｏｎＡは相乗的に作用する。

これらの結果は、コロナウイルスの複製及び増殖を防御し、それによりさらなる細胞の感染を阻害する抗ウイルス細胞状態を促進するパラポックスウイルスの有効性を示す。この効果は、相乗的に作用する、すなわち、ｉＰＰＶＯの効力が組合せアプローチにおいて増強される、ＣｏｎＡのような免疫刺激剤を添加することによって改善することができる。

実施例２
目的
実施例１に示した原理証明がパラポックスウイルス全般に適用されるかどうかを、さらにパラポックスウイルス株のコロナウイルスに対する抗ウイルス活性を試験することによって決定すること。

アプローチ
実施例１を参照されたい。

試験物質
－ＮＺ２株のｉＰＰＶＯ（２種類のエチレンイミン、ＢＥＩにより化学的に不活化）、内名ＡＩＣ６４９、１×１０^９の凍結乾燥ビリオンを１ｍｌ水で再構成される
－Ｄ１７０１株のｉＰＰＶＯ、実施例１参照
－ｉＰＰＶＯ溶媒、陰性対照、実施例１参照

さらなる材料、試料の調製、コロナウイルスアッセイ
実施例１を参照されたい。ｉＰＰＶＯ及びｉＰＰＶＯ溶媒を単独で使用した。実施例１において細胞生存率を増加させることが示されたｉＰＰＶＯ Ｄ１７０１を、実施例２において陽性対照として使用した。

結果
結果を図２に示す。実施例１で有効であることが示されたｉＰＰＶＯ Ｄ１７０１を、陽性対照及び１００％ベンチマークとして使用した。陰性対照との比較により示されるように、ＰＰＶＯ株Ｄ１７０１及びＮＺ２はいずれもコロナウイルスに対して活性である。従って、コロナウイルスに対して効果的な抗ウイルス細胞状態の促進は、実施例１で試験した株のみならず、パラポックスウイルスの一般的な特徴である。

実施例３
目的
パラポックスウイルス添加のタイミングを調べること、具体的には、実施例１及び２に示すパラポックスウイルスの抗ウイルス活性が、異なる時点で上清をコロナウイルスアッセイの細胞に添加することによってどのように調節されるかを決定すること。

アプローチ
実施例１及び２を参照されたい。ただし、試料プレートの上清をコロナウイルスアッセイの細胞に加えるための異なる時点（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２によるＶｅｒｏＥ６－ＥＧＦＰ細胞の感染前又は感染後）。

試験物質
－ＮＺ２株のｉＰＰＶＯ、実施例２参照
－Ｄ１７０１株のｉＰＰＶＯ、実施例１参照
－ｉＰＰＶＯ溶媒、陰性対照、実施例１参照
－ＣｏｎＡ、実施例１参照

さらなる材料、試料の調製、コロナウイルスアッセイ
実施例１及び２を参照されたい。全血をｉＰＰＶＯ又はｉＰＰＶＯ溶媒（単独又はＣｏｎＡとの併用）とインキュベートした。コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）でＶｅｒｏＥ６－ＥＧＦＰ細胞を感染させる前後の異なる時点で上清を作製し、添加した。

実施例４
目的
さらなる組合せアプローチを試験すること、具体的には、実施例１、２及び３に示されるパラポックスウイルスの抗ウイルス活性の強度が、さらなる組合せパートナー、例えば、本明細書に記載されるような免疫刺激剤又は抗ウイルス剤を用いた組合せアプローチにおいて増強され得ることを確認すること。これには、パラポックスウイルス及び組合せパートナーの添加（血液試料へのパラポックスウイルスの添加及び血液試料への組合せ、又はコロナウイルスアッセイの細胞への直接的な組合せ）のタイミング、すなわち、互いに関連して、及びパラポックスウイルス及び組合せパートナーと比較してコロナウイルスを添加するタイミングを調査することが含まれる。また、パラポックスウイルス及び配合パートナーの濃度の影響も試験する。

アプローチ
実施例１、２、及び３を参照されたい。ただし、コロナウイルスアッセイの細胞（ＶｅｒｏＥ６－ＥＧＦＰ細胞にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を感染させる前又は後）に試料プレートの上清（パラポックスウイルス及び／又はコンビネーションパートナーで処理した血液）を添加するための異なる時点、及びコロナウイルスアッセイの細胞（上清添加及び／又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２添加の前又は後）にコンビネーションパートナーを添加するための異なる時点（まだ血液試料に添加していない場合）を有する。

試験物質
－ＮＺ２株のｉＰＰＶＯ、実施例２参照
－Ｄ１７０１株のｉＰＰＶＯ、実施例１参照
－ｉＰＰＶＯ溶媒、陰性対照、実施例１参照
－ＣｏｎＡ、実施例１（コンビネーションパートナー対象）参照
－サリドマイド（コンビネーションパートナー）
－レムデシバー（コンビネーションパートナー）

さらなる材料、試料の調製、コロナウイルスアッセイ
実施例１及び２を参照されたい。全血をｉＰＰＶＯ又はｉＰＰＶＯ溶媒（単独又は１つ以上の組み合わせパートナーとの組み合わせ）とインキュベートした。上清を、コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）でＶｅｒｏＥ６－ＥＧＦＰ細胞を感染させる前後の異なる時点で添加した。血液試料のインキュベーションに使用されない１つ以上の組合せパートナーを、異なる時点で、ＶｅｒｏＥ６－ＥＧＦＰ細胞に添加した（上清及びコロナウイルスの両方の前、両者の後、又は両者の間）。コンビネーションパートナーの異なる濃度を使用した。

実施例５
目的
ハムスターモデルの肺におけるコロナウイルスの感染性ウイルス負荷に対するパラポックスウイルスの影響を調査する。

アプローチ
Ｂｏｕｄｅｗｉｊｎｓら（STAT2 signaling as double-edged sword restricting viral dissemination but driving severe pneumonia in SARS-CoV-2 infected hamsters. bioRxiv 2020, 2020.04.23.056838）が記載したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のハムスター感染モデルを用いる。６匹のハムスターを腹腔内（ｉ．ｐ．）経路で、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の１日前にｉＰＰＶＯの１．６×１０^９のＶＰで処置する。６匹のハムスターからなる第２群には、代わりにｉＰＰＶＯ溶媒（プラセボ対照）を投与する。感染に対しては、ハムスターをケタミン／キシラジン／アトロピンで麻酔し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（５０μＬ中１．８９×１０^６のＴＣＩＤ_５０）を鼻腔内接種する。感染後４日目（π）に、ハムスターを５００μＬの致死性（ペントバルビタールナトリウム２００ｍｇ／ｍＬ、ベトキノールＳＡ）の腹腔内注射により安楽死させる。肺を採取し、感染性ウイルスをエンドポイントウイルス滴定により定量する。有効性は、感染後４日目の均質化肺組織中のウイルス量に基づいて決定する。

動物
シリアン・ゴールデン・ハムスター、雌、６～１０週齢

ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２
ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２株ＢｅｔａＣｏｖ／Ｂｅｌｇｉｕｍ／ＧＨＢ－０３０２１／２０２０（ＥＰＩ ＩＳＬ １０９ ４０７９７６｜２０２０－０２－０３）は、２０２０年２月初めに中国武漢から帰国した無症候性であることが確認されたＲＴ－ｑＰＣＲ患者から採取した鼻咽頭スワブから回収された。系統解析により、原型Ｗｕｈａｎ－Ｈｕ－１ ２０１９－ｎＣｏＶ（ＧｅｎＢａｎｋ系統１１２番号ＭＮ９０８９４７．３）株との密接な関係を確認した。感染性ウイルスを、ＨｕＨ７及びＶｅｒｏ Ｅ６細胞上での連続継代により単離した（Ｂｏｕｄｅｗｉｊｎｓら、前出）；継代６ウイルスを、本明細書に記載の研究に使用した。ウイルスストックの力価は、Ｒｅｅｄ及びＭｕｅｎｃｈ法（前出）によりＶｅｒｏ Ｅ６細胞上でのエンドポイント希釈により決定した。

試験物質
－ＮＺ２のｉＰＰＶＯ株、実施例２参照
－ｉＰＰＶＯベヒクル（ＰＰＶＯバッファーのみ、すなわちウイルスなし）

エンドポイントウイルス滴定
肺組織を、３５０μＬ最小必須培地中のビーズ破壊（プレセリー）を用いてホモジナイズし、遠心分離（１０，０００ｒｐｍ、５分、４℃）して、細胞残渣をペレット化した。感染性ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２粒子を定量するために、９６ウェルプレート中のコンフルエントＶｅｒｏ Ｅ６細胞でエンドポイント滴定を行った。ウイルス力価はＲｅｅｄ及びＭｕｅｎｃｈ法（Ｒｅｅｄ ａｎｄ Ｍｕｅｎｃｈ，Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｙｇｉｅｎｅ，１９３８，２７（３）：ｐ．４９３－４９７）及びリンデンバッハ計算器を用いて算出した。組織１ｍｇあたり５０％組織培養感染量（ＴＣＩＤ５０）で表した。

結果
ｉＰＰＶＯによる予防的処置は、肺内の感染性ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２粒子数を減少させた：プラセボ投与ハムスターのＴＣＩＤ５０／ｍｇ肺組織の平均値は、ｉＰＰＶＯ投与ハムスターと比較して６．３×１０^５と測定され、ＴＣＩＤ５０／ｍｇ肺組織は２．１×１０^５であった。図３を参照されたい。

実施例６
目的
マウスモデルにおけるコロナウイルス感染に対するパラポックスウイルスの影響を検討する。

アプローチ
１０匹のマウスに、コロナウイルス感染前に１００μｌのｉＰＰＶＯ（５００μｌの供給緩衝液に溶解した１バイアル、これは１×１０^９ウイルス粒子（ＶＰ）／動物の投与量に等しい）を静脈内接種する。第２群のマウス１０匹を感染対照群（１００μｌのｉＰＰＶＯ緩衝液を静脈内接種）とする。投与１日後、両群のマウスをイソフルラン麻酔下（３％イソフルランの吸入）で鼻腔内に感染させ、全容積５０μｌのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ドイツ分離株）９００フォーカス形成単位（ＦＦＵ）を用いた。マウスを毎日スコア化する。感染後１０日目に安楽死が行われる。初期の安楽死は、臨床スコアによって決定された人道的エンドポイントに達したマウスに対して実施される。処置に対する反応は、臨床スコア（感染の臨床症状）及び体重減少によって評価される。また、肺及び脳でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２負荷量を測定する。

動物
トランスジェニックＫ１８－ｈＡＣＥ２マウス

試験物質
－Ｄ１７０１のｉＰＰＶＯ株、実施例１参照
－ｉＰＰＶＯベヒクル（ＰＰＶＯバッファーのみ、すなわちウイルスなし）

臨床スコアの決定
臨床スコアは、以下の表１に従い、各臨床パラメータのスコアを加えて決定した。１つの臨床パラメータ（人道的エンドポイント）について、臨床スコア＞２０又はスコア＞２０に達した時点で動物を安楽死させた。

臓器ウイルス量の決定
臓器を２ｍｌのＰＢＳ中でホモジナイズした。ＱＩＡａｍｐウイルスＲＮＡ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて、１４０μｌのホモジネートからウイルスＲＮＡを単離した。 ＲＴ－ｑＰＣＲ反応は、ＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｆａｓｔ Ｖｉｒｕｓ １－Ｓｔｅｐ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（サーモフィッシャー）及び５μｌの単離ＲＮＡを鋳型として用いて行った。合成ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２－ＲＮＡを、ウイルスコピー数を得るための定量標準として用いた。

結果
ｉＰＰＶＯ処置及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染マウスの生存率は、１０日後に未処置マウスと比較して有意に高く、対照群の２０％と比較してｉＰＰＶＯ処置群では４０％であった。また、死亡率も遅延した。図４を参照されたい。

これに伴い、ｉＰＰＶＯ投与群では体重減少及び臨床徴候／症状の発現が遅延した。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染後４～６日で、体重は対照群と比較してｉＰＰＶＯ処置マウスでより高く、臨床スコアはより低かった。７日目には、対照群のマウスが安楽死させられ、人道的エンドポイントに達した。すなわち、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染により最も影響を受けたマウスであった。これらのマウスは安楽死させた後のデータポイントには含まれなかったため、対照群の平均値には７日目以降の健康なマウスのみを含めた。７日目及び８日目に、ｉＰＰＶＯ投与群のマウスはヒトのエンドポイントに達し、安楽死させなければならなかった。体重及び臨床スコアは、投与群及び対照群（９日目及び１０日目）の生存マウスで同様であった。図５及び６を参照されたい。

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス量は、感染マウスの両肺（対照群と比較して１６倍）及び脳（プラセボと比較して６６４倍）で劇的に減少した。図７を参照されたい。

全体として、これらのデータは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染マウスの臨床転帰に対するＰＰＶＯ処置の有益な効果を明確に示しており、症状の発現の遅れや疾患の軽度の経過など、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染患者の臨床状態の改善を示唆している。

Claims (15)

1. （ｉ）コロナウイルス感染のために対象をコンディショニング（conditioning）するか、又は（ｉｉ）対象におけるコロナウイルス感染を治療するのに使用するためのパラポックスウイルス剤。
2. パラポックスウイルスがパラポックスウイルス・オヴィウス（Parapoxvirus ovis）（ＰＰＶＯ）である、請求項１に記載の使用するためのパラポックスウイルス剤。
3. パラポックスウイルス剤が、
   （ａ）パラポックスウイルス自体若しくはその断片、又は
   （ｂ）（ａ）をコードする遺伝情報を含む薬剤、
   であり、好ましくはパラポックスウイルス剤は不活化ＰＰＶＯビリオンである、請求項１又は２に記載の使用するためのパラポックスウイルス剤。
4. コロナウイルスがＳＡＲＳコロナウイルスである、請求項１～３のいずれか１項に記載の使用するためのパラポックスウイルス剤。
5. コロナウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、又は配列番号１若しくは２と少なくとも８０％の配列同一性を有するその変異体である、請求項１～４のいずれか１項に記載の使用するためのパラポックスウイルス剤。
6. コンディショニングされる対象が、コロナウイルス感染を発症するための１つ以上の危険因子、及び／又はコロナウイルス疾患の重度の経過を有するための１つ以上の危険因子によって特徴付けられる、請求項１～５のいずれか１項に記載の使用するためのパラポックスウイルス剤。
7. 治療される対象が無症候性である、請求項１～５のいずれか１項に記載の使用するためのパラポックスウイルス剤。
8. 治療される対象がコロナウイルス疾患、好ましくはＣｏｖｉｄ－１９を有する、請求項１～５のいずれか１項に記載の使用のためのパラポックスウイルス剤。
9. 対象が、コロナウイルス疾患の重度の症状を有さないか又は重度の経過を有する、請求項８に記載の使用するためのパラポックスウイルス剤。
10. 用途が、（ｉ）又は（ｉｉ）のためのさらなる治療レジメンの投与を含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の使用するためのパラポックスウイルス剤。
11. （ｉ）のためのさらなる治療レジメンが、コロナウイルス剤及び／又は免疫刺激剤を投与することを含み、（ｉｉ）のためのさらなる治療レジメンが、コロナウイルス剤、１種以上のさらなる医薬、及び／又は１種以上のさらなる非薬物治療を投与することを含む、請求項１０に記載の使用するためのパラポックスウイルス剤。
12. コロナウイルス剤が、
    （ａ）コロナウイルス自体又はその断片、
    （ｂ）（ａ）をコードする遺伝情報を含む約字、及び
    （ｃ）コロナウイルスに感染した対象にその有効量を投与することにより、コロナウイルスによる細胞の感染又は細胞内におけるコロナウイルスの複製を妨げることができる薬剤
    からなる群から選択され；
    さらなる医薬が、免疫刺激剤、抗ウイルス剤、抗生物質、アジュバント、グルココルチコイド、降圧薬、血糖降下薬、抗ショック薬、及びコロナウイルス疾患の１以上の症状を治療するのに適した薬剤からなる群から選択され；及び／又は
    １種以上のさらなる治療が、好ましくは、酸素療法及び体外臓器補助（ＥＣＯＳ）からなる群から選択される、請求項１１に記載の使用するためのパラポックスウイルス剤。
13. パラポックスウイルスが、コロナウイルスに感染した対象にその有効量を投与することにより、
    （ｉ）１つ以上のコロナウイルス－抗原特異的免疫因子の数を増加させ、
    （ｉｉ）コロナウイルス複製を阻害し、
    （ｉｉｉ）コロナウイルス量を減少させる、及び／又は
    （ｉｖ）コロナウイルス特異的サイトカインプロファイル又はサイトカインストームを予防又は改善することができる、請求項１～１２のいずれか１項に記載の使用するためのパラポックスウイルス剤。
14. パラポックスウイルス剤、好ましくは請求項３に記載のパラポックスウイルス剤、及びコロナウイルス剤、好ましくは請求項１２に記載のコロナウイルス剤を含む組成物又はキット。
15. （ｉ）コロナウイルス感染のために対象をコンディショニングするか、又は（ｉｉ）対象におけるコロナウイルス感染を治療するのに使用するための医薬組成物又はキットであって、該医薬組成物又はキットが、パラポックスウイルス剤、好ましくは請求項３に記載のパラポックスウイルス剤、好ましくはさらなる医薬、より好ましくは請求項１２に定義されるさらなる医薬を含む、医薬組成物又はキット。

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