JP2023521604A

JP2023521604A - 微小管関連タンパク質タウ（ＭＡＰＴ）ｉＲＮＡ剤組成物およびその使用方法

Info

Publication number: JP2023521604A
Application number: JP2022559557A
Authority: JP
Inventors: ミーナクシスンダラパンディアン，マンガラ; ディマキニンチ，ジェイムズ; フィシュレビッチ，エラーネ; カストレノ，アダム; カイタニス，チャラランボス; ケイシュリーゲル，マーク; エドワードファーリー，ジョナサン; ズーバー，ジェフリー
Original assignee: Alnylam Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Alnylam Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2020-03-30
Filing date: 2021-03-30
Publication date: 2023-05-25
Also published as: WO2021202511A3; WO2021202511A2; TW202143984A; KR20230005194A; CN116234585A; US20230203486A1; AU2021246024A1; MX2022012293A; EP4126230A2; BR112022019606A2; CA3178304A1; IL296851A

Abstract

本開示は、微小管関連タンパク質タウ（ＭＡＰＴ）遺伝子を標的化する二本鎖リボ核酸干渉（ｄｓＲＮＡｉ）剤および組成物、ならびにそのようなｄｓＲＮＡｉ剤および組成物を使用して、ＭＡＰＴ遺伝子の発現を阻害する方法、およびＭＡＰＴ関連疾患または障害、例えば、アルツハイマー病、前頭側頭型認知症、進行性核上性麻痺、または他のタウオパチーを有する対象を処置する方法に関する。

Description

関連出願への相互参照
本願は、２０２０年３月３０日に出願された米国特許仮出願第６３／００２，０３０号に対する優先権の利益を主張し、２０２１年３月２２日に出願された米国特許仮出願第６３／１６４，４６７号の利益を主張する。前記出願の内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。

配列リスト
本願は、ＡＳＣＩＩフォーマットにおいて電子的に提出された配列リストを含んでおり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０２１年３月２４日に作成されたＡＳＣＩＩコピーは、Ａ１０８８６８_１０３０ＷＯ_ＳＬ．ｔｘｔと命名され、１，０１８，７５３バイトのサイズである。

微小管関連タンパク質ファミリーのメンバーであるタンパク質Ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ－ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＰｒｏｔｅｉｎＴａｕ（Ｍａｐｔ）をコードする微小管関連タンパク質タウ（ＭＡＰＴ）遺伝子は、染色体領域１７ｑ２１．３１（染色体１７上の塩基対４５，８９４，３８２から４６，０２８，３３４）に位置している。ＭＡＰＴ遺伝子は１６個のエクソンからなる。選択的ｍＲＮＡスプライシングが行われると、合計３５２～４４１個のアミノ酸を有する６種のＭＡＰＴアイソフォームが生じる。６種のＭＡＰＴアイソフォームのうち３種では、ＭＡＰＴの微小管結合ドメインは３つの反復するセグメントを含有するが、他の３種のＭＡＰＴアイソフォームでは、対応するドメインは４つの反復するセグメントを含有する。

ＭＡＰＴ転写物は、全身に差次的に発現し、主として中枢および末梢神経系に発現する。野生型タウは、神経軸索中の微小管の安定化、樹状突起棘（ｄｅｎｄｒｉｃｓｐｉｎｅ）の維持、ならびに軸索輸送、微小管動態、および細胞分裂の制御に関与している。ＭＡＰＴの病原性変異体は、原発性タウオパチーを有する患者のおよそ１０％に見出されている。変異体は主にミスセンス突然変異であり、エクソン９～１３（微小管結合ドメイン）に局在しており、エクソン１０の選択的スプライシングに多くの影響を与えている。

タウオパチーは、脳内でのタウ凝集物の存在によって病理学的に特徴付けられる、異種混合クラスの進行性神経変性障害である。表現型では、タウオパチーは、運動、認知、および行動障害の多様な進行を示す。タウオパチーとしては、アルツハイマー病、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、および進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。タウは、アルツハイマー病の特徴である、神経細胞質における神経原線維変化の主要成分である。タウの凝集および沈着は、パーキンソン病を有する患者の脳のおよそ５０％にも観察された。

ＦＴＤとしては、行動障害型前頭側頭型認知症（ｂｖＦＴＤ）、非流暢性亜型原発性進行性失語（ｎｆｖＰＰＡ）、および皮質基底核症候群（ＣＢＳ）が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。

現在のところ、タウオパチーに対する治療的な療法は存在せず、処置は、症状を緩和し、患者の生活の質を改善することのみを目的としている。したがって、ＭＡＰＴ関連障害、例えば、アルツハイマー病、ＦＴＤ、ＰＳＰ、または別のタウオパチーを有する対象を効率的に処置することができるような、ＭＡＰＴ遺伝子の発現を選択的かつ効果的に阻害または調整することができる薬剤へのニーズが存在する。

本発明の開示は、ＭＡＰＴ遺伝子のＲＮＡ転写物のＲＮＡ誘導型サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）媒介切断を実行する、ＲＮＡｉ組成物を提供する。ＭＡＰＴ遺伝子は、細胞内、例えば、対象、例えばヒト内の細胞にあってもよい。これらのｉＲＮＡの使用は、哺乳動物において、対応する遺伝子（ＭＡＰＴ遺伝子）のｍＲＮＡの標的化された分解を可能にする。

本発明のｉＲＮＡは、ＭＡＰＴ遺伝子、例えば、遺伝子のエクソン中にミスセンスおよび／または欠失突然変異を有し、ヌクレオチド修飾の組合せを有するＭＡＰＴ遺伝子を標的化するように設計された。本発明のｉＲＮＡは、ＭＡＰＴ遺伝子の発現を対照レベルに対して少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％阻害し、センスおよびアンチセンス含有凝集体のレベルを低減させる。理論によって限定されることは意図しないが、これらのｉＲＮＡにおける前述の特性および特異的な標的部位、または特異的な修飾の組合せまたは部分的組合せは、本発明のｉＲＮＡに改善された効能、安定性、効力、耐久性、および安全性を付与すると考えられる。一態様において、本発明は、ＭＡＰＴの発現を阻害するための二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤であって、ｄｓＲＮＡ剤は、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、配列番号１または配列番号３のヌクレオチド配列と３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖は、配列番号２または配列番号４のヌクレオチド配列と３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、ｄｓＲＮＡ剤を提供する。

別の態様において、本発明は、ＭＡＰＴの発現を阻害するためのｄｓＲＮＡ剤であって、ｄｓＲＮＡ剤は、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、タウをコードするｍＲＮＡに対して相補性の領域を含み、相補性の領域は、配列番号２または配列番号４のヌクレオチド配列と３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、ｄｓＲＮＡ剤を提供する。

さらに別の態様において、本発明は、ＭＡＰＴの発現を阻害するための二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤であって、ｄｓＲＮＡ剤は、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、タウをコードするｍＲＮＡに対して相補性の領域を含み、相補性の領域は、表３～８および１６～２８のいずれか１つに記載のアンチセンスヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、ｄｓＲＮＡ剤を提供する。

一実施形態において、センス鎖は、配列番号３のヌクレオチド５１２～５３２、５１３～５３３、５１４～５３４、５１５～５３５、５１６～５３６、５１７～５３７、５１８～５３８、５１９～５３９、５２０～５４０、１０６３～１０８３、１０６７～１０８７、１０７２～１０９２、１０７４～１０９４、１０７５～１０９５、１１２５～１１４５、１１２６～１１４６、１１２７～１１４７、１１２９～１１４９、１１７０～１１９０、１３９５～１４１５、１９０５～１９２５、１９０６～１９２６、１９０９～１９２９、１９１１～１９３１、１９１２～１９３２、１９１３～１９３３、１９１４～１９３４、１９１５～１９３５、１９１６～１９３６、１９１９～１９３９、１９５１～１９７１、１９５４～１９７４、１９５８～１９７８、２３８７～２４０７、２４０９～２４２９、２４１０～２４３０、２４６９～２４８９、２４７１～２４９１、２４７２～２４９２、２４７６～２４９６、２４７７～２４９７、２４７８～２４９８、２４８０～２５００、２４８１～２５０１、２４８２～２５０２、２４８４～２５０４、２７６２～２７８２、２７６４～２７８４、２７６６～２７８６、２７６７～２７８７、２７６８～２７８８、２７６９～２７８９、２８１９～２８３９、２８２１～２８４１、２８２８～２８４８、２９４３～２９６３、２９４４～２９６４、２９４６～２９６６、２９４７～２９６７、３２５２～３２７２、３２７７～３２９７、３２８０～３３００、３２８１～３３０１、３２８２～３３０２、３２８４～３３０４、３２８５～３３０５、３２８６～３３０６、３３３１～３３５１、３３３２～３３５２、３３３３～３３５３、３３３４～３３５４、３３３５～３３５５、３３３６～３３５６、３３３８～３３５８、３３４０～３３６０、３３４２～３３６２、３３４３～３３６３、３３４４～３３６４、３３４５～３３６５、３３４６～３３６６、３３４７～３３６７、３３４９～３３６９、３３５０～３３７０、３３５３～３３７３、３３６４～３３８４、３３６６～３３８６、３３６７～３３８７、３３６８～３３８８、３３６９～３３８９、３３７０～３３９０、３４１２～３４３２、３４１４～３４３４、３４１５～３４３５、３４１６～３４３６、３４１７～３４３７、３４１９～３４３９、３４２０～３４４０、３４２４～３４４４、３４２５～３４４５、３４２６～３４４６、３４２７～３４４７、３４２８～３４４８、３４２９～３４４９、３４３０～３４５０、３４３１～３４５１、３４３４～３４５４、４１３２～４１５２、４１３４～４１５４、４１７９～４１９９、４１８２～４２０２、４１８４～４２０４、４３９５～４４１５、４４２５～４４４５、４４２６～４４４６、４４２９～４４４９、４４６９～４４８９、４４７０～４４９０、４４７１～４４９１、４４７２～４４９２、４４７３～４４９３、４４７４～４４９４、４５６９～４５８９、４５７１～４５９１、４５７２～４５９２、４５９６～４６１６、４６２３～４６４３、４７２１～４７４１、４７２２～４７４２、４７２５～４７４５、４７２６～４７４６、４７６６～４７８６、４７６７～４７８７、４７６８～４７８８、４７６９～４７８９、４７７０～４７９０、４７７９～４７９９、４８０５～４８２５、４８０６～４８２６、４８０７～４８２７、４８０８～４８２８、４８０９～４８２９、４８１２～４８３２、４８１３～４８３３、４８１４～４８３４、４９３６～４９５６、５０７２～５０９２、５０７３～５０９３、５３４５～５３６５、５３４６～５３６６、５３４９～５３６９、５３５０～５３７０、５３５１～５３７１、５４６０～５４８０、５４６１～５４８１、５４６３～５４８３、５４６５～５４８５、５４６７～５４８７、５４６８～５４８８、５４６９～５４８９、５４７０～５４９０、５４７１～５４９１、５５０５～５５２５、５５０６～５５２６、５５０７～５５２７、５５０８～５５２８、５５０９～５５２９、５５１１～５５３１、５５１３～５５３３、５５１４～５５３４、５５４１～５５６１、５５４４～５５６４、５５４６～５５６６、５５４７～５５６７、５５４８～５５６８、５５５０～５５７０、５５５１～５５７１、５５７４～５５９４、５５７６～５５９６、５６１４～５６３４、５２１～５４１、５２２～５４２、５２３～５４３、５２４～５４４、５２５～５４５、５２６～５４６、５２７～５４７、５２８～５４８、５２９～５４９、５３０～５５０、５３１～５５１、５３２～５５２、５３３～５５３、５３４～５５４、５３５～５５５、５３６～５５６、１０３４～１０５４、１０３５～１０５５、１０３６～１０５６、１０３７～１０５７、１０３８～１０５８、１０３９～１０５９、１０４０～１０６０、１０４１～１０６１、１０４２～１０６２、１０４３～１０６３、１０４４～１０６４、１０４５～１０６５、１０４６～１０６６、１０４７～１０６７、１０４８～１０６８、１０４９～１０６９、１０５０～１０７０、１０５１～１０７１、１０５２～１０７２、１０５３～１０７３、１０５４～１０７４、１０６２～１０８２、１０６４～１０８４、１０６５～１０８５、１０６６～１０８６、１０６８～１０８８、１０６９～１０８９、１０７０～１０９０、１０７１～１０９１、１０７３～１０９３、１０７６～１０９６、１０７７～１０９７、１０７８～１０９８、１０７９～１０９９、１０８０～１１００、１０８１～１１０１、１０８２～１１０２、１１２８～１１４８、１１２９～１１４９、１１３０～１１５０、１１３１～１１５１、１１３２～１１５２、１１３３～１１５３、１１３４～１１５４、１１３５～１１５５、１１３６～１１５６、１１３７～１１５７、１１３８～１１５８、１１３９～１１５９、１１４０～１１６０、１１４１～１１６１、１１４２～１１６２、１１４３～１１６３、１１４４～１１６４、１１４５～１１６５、１１４６～１１６６、１１４７～１１６７、１１４８～１１６８、９７５～９９５、９７６～９９６、９７７～９９７、９７８～９９８、９７９～９９９、９８０～１０００、９８１～１００１、９８２～１００２、９８３～１００３、９８４～１００４、９８５～１００５、９８６～１００６、９８７～１００７、９８８～１００８、９８９～１００９、９９０～１０１０、９９１～１０１１、９９２～１０１２、９９３～１０１３、９９４～１０１４、９９５～１０１５、９９６～１０１６、９９７～１０１７、９９８～１０１８、９９９～１０１９、１０００～１０２０、１００１～１０２１、１００２～１０２２、１００３～１０２３、１００４～１０２４、１００５～１０２５、１００６～１０２６、１００７～１０２７、１００８～１０２８、１００９～１０２９、１０１０～１０３０、１０１１～１０３１、１０１２～１０３２、１０１３～１０３３、１０１４～１０３４、１０１５～１０３５、１０１６～１０３６、１０１７～１０３７、１０１８～１０３８、１０１９～１０３９、１０２０～１０４０、１０２１～１０４１、１０２２～１０４２、１０２３～１０４３、１０２４～１０４４、１０２５～１０４５、１０２６～１０４６、１０２７～１０４７、１０２８～１０４８、１０２９～１０４９、１０３０～１０５０、１０３１～１０５１、１０３２～１０５２、１０３３～１０５３、１０３４～１０５４、１０３５～１０５５、１０３６～１０５６、１０３７～１０５７、１０３８～１０５８、１０３９～１０５９、１０４０～１０６０、１０４１～１０６１、１０４２～１０６２、１０４３～１０６３、および１０４５～１０６５のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖は、配列番号４の対応するヌクレオチド配列からの少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。

ある特定の実施形態において、本明細書に開示されるアンチセンスポリヌクレオチドは、標的ＭＡＰＴ配列の断片に対して実質的に相補的であり、ヌクレオチドの群から選択される配列番号４の断片に対してその全長にわたり相補的である連続するヌクレオチド配列を含み、センス鎖は、配列番号３のヌクレオチド５２０～５４１、５２０～５５６、５１０～５３４、５１２～５３６、５１６～５４１、５１６～５４０、５２０～５４４、５２４～５４７、５２６～５５１、５２９～５５６、５３２～５５６、１０６５～１０８９、１０６８～１０９５、１０６８～１０９４、１０７５～１１００、１０７６～１１００、１０７９～１１０３、１１２３～１１４７、１１２７～１１５１、１１３０～１１５５、１９０３～１９３４、１９０３～１９３０、１９１４～１９４０、１９４９～１９７５、２４７０～２４９７、２９４１～２９６５、３２７５～３３０２、３２７８～３３０２、３３２９～３３５３、３３３３～３３５７、３３３８～３３６７、３３３８～３３６６、３３４８～３３９０、３３４８～３３８８、３３５１～３３８５、５５０７～５５６２、および５５４９～５５９７のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖は、配列番号４の対応するヌクレオチド配列からの少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。

一実施形態において、センス鎖は、配列番号１のヌクレオチド９７７～９９７、９８０～１０００、９７３～９９３、９８８～１００８、９８７～１００７、９７２～９９２、９７９～９９９、１００１～１０２１、９７６～９９６、９９４～１０１４、１００２～１０２２、９７８～９９８、９７４～９９４、５２０～５４０、５２１～５４１、５４６４～５４８４、１８１３～１８３３、２３７８～２３９８、３２４２～３２６２、５４４２～５４６２、１６６５～１６８５、５２４～５４４、５２０７～５２２７、４６７０～４６９０、３４２０～３４４０、３３２８～３３４８、５４０９～５４２９、５４３９～５４５９、４５２７～４５４７、５４４１～５４６１、５４１０～５４３０、および５４４６～５４６６のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖は、配列番号２の対応するヌクレオチド配列からの少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。

一実施形態において、アンチセンス鎖は、ＡＤ－５２３７９９.１、ＡＤ－５２３８０２．１、ＡＤ－５２３７９５．１、ＡＤ－５２３８１０．１、ＡＤ－５２３８０９．１、ＡＤ－１０１９３３１．１、ＡＤ－５２３８０１．１、ＡＤ－５２３８２３．１、ＡＤ－５２３７９８．１、ＡＤ－５２３８１６．１、ＡＤ－５２３８２４．１、ＡＤ－５２３８００．１、ＡＤ－５２３７９６．１、ＡＤ－５３５０９４．１、ＡＤ－５３５０９４．１、ＡＤ－５３５０９５．１、ＡＤ－５３８６４７．１、ＡＤ－５３５９２２．１、ＡＤ－５３６３１７．１、ＡＤ－５３６９１１．１、ＡＤ－５３８６２６．１、ＡＤ－５３５８６４．１、ＡＤ－５２３５６１．１、ＡＤ－５２３５６５．１、ＡＤ－５２３５６２．１、ＡＤ－５２６９１４．１、ＡＤ－５２６３９４．１、ＡＤ－３９５４５２．１、ＡＤ－５２５３４３．１、ＡＤ－５２４２７４．１、ＡＤ－５２６９５６．１、ＡＤ－５２６９８６．１、ＡＤ－５２６２９６．１、ＡＤ－５２６９８８．１、ＡＤ－５２６９５７．１、ＡＤ－５２６９９３．１、ＡＤ－１３９７０７０．１、ＡＤ－１３９７０７０．２、ＡＤ－１３９７０７１．１、ＡＤ－１３９７０７１．２、ＡＤ－１３９７０７２．１、ＡＤ－１３９７０７２．２、ＡＤ－１３９７０７３．１、ＡＤ－１３９７０７３．２、ＡＤ－１３９７０７４．１、ＡＤ－１３９７０７４．２、ＡＤ－１３９７０７５．１、ＡＤ－１３９７０７５．２、ＡＤ－１３９７０７６．１、ＡＤ－１３９７０７６．２、ＡＤ－１３９７０７７．１、ＡＤ－１３９７０７７．２、ＡＤ－１３９７０７８．１、ＡＤ－１３９７０７８．２、ＡＤ－１３９７２５０．１、ＡＤ－１３９７２５１．１、ＡＤ－１３９７２５２．１、ＡＤ－１３９７２５３．１、ＡＤ－１３９７２５４．１、ＡＤ－１３９７２５５．１、ＡＤ－１３９７２５６．１、ＡＤ－１３９７２５７．１、ＡＤ－１３９７２５８．１、ＡＤ－１３９７２５９．１、ＡＤ－１３９７２６０．１、ＡＤ－１３９７２６１．１、ＡＤ－１３９７２６２．１、ＡＤ－１３９７２６３．１、ＡＤ－１３９７２６４．１、ＡＤ－１３９７２６５．１、ＡＤ－１４２３２４２．１、ＡＤ－１４２３２４３．１、ＡＤ－１４２３２４４．１、ＡＤ－１４２３２４５．１、ＡＤ－１４２３２４６．１、ＡＤ－１４２３２４７．１、ＡＤ－１４２３２４８．１、ＡＤ－１４２３２４９．１、ＡＤ－１４２３２５０．１、ＡＤ－１４２３２５１．１、ＡＤ－１４２３２５２．１、ＡＤ－１４２３２５３．１、ＡＤ－１４２３２５４．１、ＡＤ－１４２３２５５．１、ＡＤ－１４２３２５６．１、ＡＤ－１４２３２５７．１、ＡＤ－１４２３２５８．１、ＡＤ－１４２３２５９．１、ＡＤ－１４２３２６０．１、ＡＤ－１４２３２６１．１、ＡＤ－１４２３２６２．１、ＡＤ－１４２３２６３．１、ＡＤ－１４２３２６４．１、ＡＤ－１４２３２６５．１、ＡＤ－１４２３２６６．１、ＡＤ－１４２３２６７．１、ＡＤ－１４２３２６８．１、ＡＤ－１４２３２６９．１、ＡＤ－１４２３２７０．１、ＡＤ－１４２３２７１．１、ＡＤ－１４２３２７２．１、ＡＤ－１４２３２７３．１、ＡＤ－１４２３２７４．１、ＡＤ－１４２３２７５．１、ＡＤ－１４２３２７６．１、ＡＤ－１４２３２７７．１、ＡＤ－１４２３２７８．１、ＡＤ－１４２３２７９．１、ＡＤ－１４２３２８０．１、ＡＤ－１４２３２８１．１、ＡＤ－１４２３２８２．１、ＡＤ－１４２３２８３．１、ＡＤ－１４２３２８４．１、ＡＤ－１４２３２８５．１、ＡＤ－１４２３２８６．１、ＡＤ－１４２３２８７．１、ＡＤ－１４２３２８８．１、ＡＤ－１４２３２８９．１、ＡＤ－１４２３２９０．１、ＡＤ－１４２３２９１．１、ＡＤ－１４２３２９２．１、ＡＤ－１４２３２９３．１、ＡＤ－１４２３２９４．１、ＡＤ－１４２３２９５．１、ＡＤ－１４２３２９６．１、ＡＤ－１４２３２９７．１、ＡＤ－１４２３２９８．１、ＡＤ－１４２３２９９．１、ＡＤ－１４２３３００．１、ＡＤ－１３９７２６６．１、ＡＤ－１３９７２６６．２、ＡＤ－１３９７２６７．１、ＡＤ－１４２３３０１．１、ＡＤ－１３９７２６８．１、ＡＤ－１３９７２６８．２、ＡＤ－１３９７２６９．１、ＡＤ－１４２３３０２．１、ＡＤ－１３９７２７０．１、ＡＤ－１３９７２７０．２、ＡＤ－１３９７２７１．１、ＡＤ－１３９７２７１．２、ＡＤ－１３９７２７２．１、ＡＤ－１４２３３０３．１、ＡＤ－１３９７２７３．１、ＡＤ－１４２３３０４．１、ＡＤ－１３９７２７４．１、ＡＤ－１４２３３０５．１、ＡＤ－１３９７２７５．１、ＡＤ－１４２３３０６．１、ＡＤ－１３９７２７６．１、ＡＤ－１３９７２７７．１、ＡＤ－１３９７２７７．２、ＡＤ－１３９７２７８．１、ＡＤ－１３９７２７９．１、ＡＤ－１３９７２８０．１、ＡＤ－１３９７２８１．１、ＡＤ－１３９７２８２．１、ＡＤ－１３９７２８３．１、ＡＤ－１３９７２８４．１、ＡＤ－１３９７２８５．１、ＡＤ－１３９７２８６．１、ＡＤ－１３９７２８７．１、ＡＤ－１３９７０７９．１、ＡＤ－１３９７０７９．２、ＡＤ－１３９７２８８．１、ＡＤ－１３９７２８９．１、ＡＤ－１３９７２９０．１、ＡＤ－１３９７０８０．１、ＡＤ－１３９７０８０．２、ＡＤ－１３９７２９１．１、ＡＤ－１３９７２９２．１、ＡＤ－１３９７２９３．１、ＡＤ－１３９７２９４．１、ＡＤ－１３９７０８１．１、ＡＤ－１３９７０８１．２、ＡＤ－１３９７２９５．１、ＡＤ－１３９７０８２．１、ＡＤ－１３９７０８２．２、ＡＤ－１３９７０８３．１、ＡＤ－１３９７０８３．２、ＡＤ－１３９７２９６．１、ＡＤ－１３９７２９７．１、ＡＤ－１３９７２９８．１、ＡＤ－１３９７２９９．１、ＡＤ－１３９７３００．１、ＡＤ－１３９７３０１．１、ＡＤ－１３９７３０２．１、ＡＤ－１３９７０８４．１、ＡＤ－１３９７０８５．１、ＡＤ－１３９７０８６．１、ＡＤ－１３９７３０３．１、ＡＤ－１３９７０８７．１、ＡＤ－１３９７０８７．２、ＡＤ－１３９７３０４．１、ＡＤ－１３９７３０５．１、ＡＤ－１３９７３０６．１、ＡＤ－１３９７３０７．１、ＡＤ－１３９７３０８．１、ＡＤ－１３９７３０９．１、ＡＤ－１３９７３１０．１、ＡＤ－１３９７３１１．１、ＡＤ－１３９７３１２．１、ＡＤ－１３９７３１３．１、ＡＤ－１３９７３１４．１、ＡＤ－１３９７３１５．１、ＡＤ－１３９７３１６．１、ＡＤ－１３９７３１７．１、ＡＤ－１３９７３１８．１、ＡＤ－１３９７３１９．１、ＡＤ－１３９７３２０．１、ＡＤ－１３９７３２１．１、ＡＤ－１３９７３２２．１、ＡＤ－１３９７０８８．１、ＡＤ－１３９７０８９．１、ＡＤ－１３９７０９０．１、ＡＤ－１３９７０９１．１、ＡＤ－１３９７０９２．１、ＡＤ－１３９７０９３．１、ＡＤ－１３９７０９４．１、ＡＤ－１３９７０９５．１、ＡＤ－１３９７０９６．１、ＡＤ－１３９７０９７．１、ＡＤ－１３９７０９８．１、ＡＤ－１３９７０９９．１、ＡＤ－１３９７１０１．１、ＡＤ－１３９７１０２．１、ＡＤ－１３９７１０３．１、ＡＤ－１３９７１０４．１、ＡＤ－１３９７１０５．１、ＡＤ－１３９７１０６．１、ＡＤ－１３９７１０７．１、ＡＤ－１３９７１０８．１、ＡＤ－１３９７１０９．１、ＡＤ－１３９７１１０．１、ＡＤ－１３９７１１１．１、ＡＤ－１３９７１１２．１、ＡＤ－１３９７１１３．１、ＡＤ－１３９７１１４．１、ＡＤ－１３９７１１５．１、ＡＤ－１３９７１１６．１、ＡＤ－１３９７１１７．１、ＡＤ－１３９７１１８．１、ＡＤ－１３９７１１９．１、ＡＤ－１３９７１２０．１、ＡＤ－１３９７１２１．１、ＡＤ－１３９７１２２．１、ＡＤ－１３９７１２３．１、ＡＤ－１３９７１２４．１、ＡＤ－１３９７１２５．１、ＡＤ－１３９７１２６．１、ＡＤ－１３９７１２７．１、ＡＤ－１３９７１２８．１、ＡＤ－１３９７１２９．１、ＡＤ－１３９７１３０．１、ＡＤ－１３９７１３１．１、ＡＤ－１３９７１３２．１、ＡＤ－１３９７１３３．１、ＡＤ－１３９７１３４．１、ＡＤ－１３９７１３５．１、ＡＤ－１３９７１３６．１、ＡＤ－１３９７１３７．１、ＡＤ－１３９７１３８．１、ＡＤ－１３９７１３９．１、ＡＤ－１３９７１４０．１、ＡＤ－１３９７１４１．１、ＡＤ－１３９７１４２．１、ＡＤ－１３９７１４３．１、ＡＤ－１３９７１４４．１、ＡＤ－１３９７１４５．１、ＡＤ－１３９７１４６．１、ＡＤ－１３９７１４７．１、ＡＤ－１３９７１４８．１、ＡＤ－１３９７１４９．１、ＡＤ－１３９７１５０．１、ＡＤ－１３９７１５１．１、ＡＤ－１３９７１５２．１、ＡＤ－１３９７１５３．１、ＡＤ－１３９７１５４．１、ＡＤ－１３９７１５５．１、ＡＤ－１３９７１５６．１、ＡＤ－１３９７１５７．１、ＡＤ－１３９７１５８．１、ＡＤ－１３９７１５９．１、ＡＤ－１３９７１６０．１、ＡＤ－１３９７１６１．１、ＡＤ－１３９７１６２．１、ＡＤ－１３９７１６３．１、ＡＤ－１３９７１６４．１、ＡＤ－１３９７１６５．１、ＡＤ－１３９７１６６．１、ＡＤ－１３９７１６７．１、ＡＤ－１３９７１６８．１、ＡＤ－１３９７１６９．１、ＡＤ－１３９７１７０．１、ＡＤ－１３９７１７１．１、ＡＤ－１３９７１７２．１、ＡＤ－１３９７１７３．１、ＡＤ－１３９７１７４．１、ＡＤ－１３９７１７５．１、ＡＤ－１３９７１７６．１、ＡＤ－１３９７１７７．１、ＡＤ－１３９７１７８．１、ＡＤ－１３９７１７９．１、ＡＤ－１３９７１８０．１、ＡＤ－１３９７１８１．１、ＡＤ－１３９７１８２．１、ＡＤ－１３９７１８３．１、ＡＤ－１３９７１８４．１、ＡＤ－１３９７１８５．１、ＡＤ－１３９７１８６．１、ＡＤ－１３９７１８７．１、ＡＤ－１３９７１８８．１、ＡＤ－１３９７１８９．１、ＡＤ－１３９７１９０．１、ＡＤ－１３９７１９１．１、ＡＤ－１３９７１９２．１、ＡＤ－１３９７１９３．１、ＡＤ－１３９７１９４．１、ＡＤ－１３９７１９５．１、ＡＤ－１３９７１９６．１、ＡＤ－１３９７１９７．１、ＡＤ－１３９７１９８．１、ＡＤ－１３９７１９９．１、ＡＤ－１３９７２００．１、ＡＤ－１３９７２０１．１、ＡＤ－１３９７２０２．１、ＡＤ－１３９７２０３．１、ＡＤ－１３９７２０４．１、ＡＤ－１３９７２０５．１、ＡＤ－１３９７２０６．１、ＡＤ－１３９７２０７．１、ＡＤ－１３９７２０８．１、ＡＤ－１３９７２０９．１、ＡＤ－１３９７２１０．１、ＡＤ－１３９７２１１．１、ＡＤ－１３９７２１２．１、ＡＤ－１３９７２１３．１、ＡＤ－１３９７２１４．１、ＡＤ－１３９７２１５．１、ＡＤ－１３９７２１６．１、ＡＤ－１３９７２１７．１、ＡＤ－１３９７２１８．１、ＡＤ－１３９７２１９．１、ＡＤ－１３９７２２０．１、ＡＤ－１３９７２２１．１、ＡＤ－１３９７２２２．１、ＡＤ－１３９７２２３．１、ＡＤ－１３９７２２４．１、ＡＤ－１３９７２２５．１、ＡＤ－１３９７２２６．１、ＡＤ－１３９７２２７．１、ＡＤ－１３９７２２８．１、ＡＤ－１３９７２２９．１、ＡＤ－１３９７２３０．１、ＡＤ－１３９７２３１．１、ＡＤ－１３９７２３２．１、ＡＤ－１３９７２３３．１、ＡＤ－１３９７２３４．１、ＡＤ－１３９７２３５．１、ＡＤ－１３９７２３６．１、ＡＤ－１３９７２３７．１、ＡＤ－１３９７２３８．１、ＡＤ－１３９７２３９．１、ＡＤ－１３９７２４０．１、ＡＤ－１３９７２４１．１、ＡＤ－１３９７２４２．１、ＡＤ－１３９７２４３．１、ＡＤ－１３９７２４４．１、ＡＤ－１３９７２４５．１、ＡＤ－１３９７２４６．１、ＡＤ－１３９７２４７．１、ＡＤ－１３９７２４８．１、ＡＤ－１３９７２４９．１、ＡＤ－５２３５６５．１、ＡＤ－１３９７０７２．３、ＡＤ－１３９７０７３．３、ＡＤ－１３９７０７６．３、ＡＤ－１３９７０７７．３、ＡＤ－１３９７０７８．３、ＡＤ－１３９７２５２．２、ＡＤ－１３９７２５７．２、ＡＤ－１３９７２５８．２、ＡＤ－１３９７２５９．２、ＡＤ－１３９７２６３．２、ＡＤ－１３９７２６４．２、ＡＤ－１３９７３０９．２、ＡＤ－６４９５８．１１４、ＡＤ－３９３７５８．４、ＡＤ－１３９７０８０．３、ＡＤ－１３９７２９３．２、ＡＤ－１３９７２９４．２、ＡＤ－１３９７０８１．３、ＡＤ－１３９７０８３．３、ＡＤ－１３９７２９８．２、ＡＤ－１３９７２９９．２、ＡＤ－
１３９７０８４．２、ＡＤ－１３９７０８５．２、ＡＤ－１３９７０８７．３、ＡＤ－１３９７３０６．２、ＡＤ－１３９７３０７．２、ＡＤ－１３９７３０８．２、ＡＤ－１３９７０８８．２、ＡＤ－１５６６２３８、ＡＤ－１５６６２３９、ＡＤ－１５６６２４０、ＡＤ－１５６６２４１、ＡＤ－１５６６２４２、ＡＤ－１５６６２４３、ＡＤ－１５６６２４４、ＡＤ－１５６６２４５、ＡＤ－１５６６２４６、ＡＤ－１０９１９６５、ＡＤ－１５６６２４８、ＡＤ－１５６６２４９、ＡＤ－１５６６２５０、ＡＤ－１０９１９６６、ＡＤ－１５６６２５１、ＡＤ－１５６６２５２、ＡＤ－１５６６２５３、ＡＤ－１５６６２５４、ＡＤ－１５６６２５５、ＡＤ－１５６６２５６、ＡＤ－１５６６２５７、ＡＤ－１５６６２５８、ＡＤ－１５６６２５９、ＡＤ－６９２９０６、ＡＤ－１５６６５７５、ＡＤ－１５６６５７６、ＡＤ－１５６６５７７、ＡＤ－１５６６５８０、ＡＤ－１５６６５８１、ＡＤ－１５６６５８２、ＡＤ－１５６６５８３、ＡＤ－１５６６５８４、ＡＤ－１５６６５８６、ＡＤ－１５６６５８７、ＡＤ－１５６６５８８、ＡＤ－１５６６５９０、ＡＤ－１５６６５９１、ＡＤ－１５６６６３４、ＡＤ－１５６６６３５、ＡＤ－１５６６６３８、ＡＤ－１５６６６３９、ＡＤ－１５６６６４１、ＡＤ－１５６６６４２、ＡＤ－１５６６６４３、ＡＤ－１５６６６７９、ＡＤ－１５６６８６１、ＡＤ－１５６７１５３、ＡＤ－１５６７１５４、ＡＤ－１５６７１５７、ＡＤ－１５６７１５９、ＡＤ－１５６７１６０、ＡＤ－１５６７１６１、ＡＤ－１５６７１６４、ＡＤ－１５６７１６７、ＡＤ－１５６７１９９、ＡＤ－１５６７２０２、ＡＤ－１５６７５５０、ＡＤ－１５６７５５４、ＡＤ－１５６７７８４、ＡＤ－１５６７８９６、ＡＤ－１５６７８９７、ＡＤ－１５６８１０５、ＡＤ－１５６８１０８、ＡＤ－１５６８１０９、ＡＤ－１５６８１３９、ＡＤ－１５６８１４０、ＡＤ－１５６８１４３、ＡＤ－１５６８１４４、ＡＤ－１５６８１４８、ＡＤ－１５６８１５０、ＡＤ－１５６８１５１、ＡＤ－１５６８１５２、ＡＤ－１５６８１５３、ＡＤ－１５６８１５４、ＡＤ－１５６８１５８、ＡＤ－１５６８１６１、ＡＤ－１５６８１７２、ＡＤ－１５６８１７４、ＡＤ－１５６８１７５、ＡＤ－６９２９０８、ＡＤ－１５６８１７６、ＡＤ－１５６９８３０、ＡＤ－１５６９８３２、ＡＤ－１５６９８３４、ＡＤ－１５６９８３５、ＡＤ－１５６９８６２、ＡＤ－１５６９８７２、ＡＤ－１５６９８９０およびＡＤ－１５６９８９２からなる群から選択される二重鎖のアンチセンス鎖ヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。

特定の実施形態において、アンチセンス鎖は、ＡＤ－５２３７９９.１、ＡＤ－５２３８０２．１、ＡＤ－５２３７９５．１、ＡＤ－５２３８１０．１、ＡＤ－５２３８０９．１、ＡＤ－１０１９３３１．１、ＡＤ－５２３８０１．１、ＡＤ－５２３８２３．１、ＡＤ－５２３７９８．１、ＡＤ－５２３８１６．１、ＡＤ－５２３８２４．１、ＡＤ－５２３８００．１、ＡＤ－５２３７９６．１、ＡＤ－５３５０９４．１、ＡＤ－５３５０９４．１、ＡＤ－５３５０９５．１、ＡＤ－５３８６４７．１、ＡＤ－５３５９２２．１、ＡＤ－５３６３１７．１、ＡＤ－５３６９１１．１、ＡＤ－５３８６２６．１、ＡＤ－５３５８６４．１、ＡＤ－５２３５６１．１、ＡＤ－５２３５６５．１、ＡＤ－５２３５６２．１、ＡＤ－５２６９１４．１、ＡＤ－５２６３９４．１、ＡＤ－３９５４５２．１、ＡＤ－５２５３４３．１、ＡＤ－５２４２７４．１、ＡＤ－５２６９５６．１、ＡＤ－５２６９８６．１、ＡＤ－５２６２９６．１、ＡＤ－５２６９８８．１、ＡＤ－５２６９５７．１およびＡＤ－５２６９９３．１からなる群から選択される二重鎖のアンチセンス鎖ヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。一実施形態において、アンチセンス鎖は、ＡＤ－５２３７９９．１、ＡＤ－５２３８０２．１、ＡＤ－５２３７９５．１、ＡＤ－５２３８１０．１、ＡＤ－５２３８０９．１、ＡＤ－１０１９３３１．１、ＡＤ－５２３８０１．１、ＡＤ－５２３８２３．１、ＡＤ－５２３７９８．１、ＡＤ－５２３８１６．１、ＡＤ－５２３８２４．１、ＡＤ－５２３８００．１、およびＡＤ－５２３７９６．１からなる群から選択される二重鎖のアンチセンス鎖のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。

一部の実施形態において、センスおよびアンチセンス鎖のヌクレオチド配列は、表３～８、および１６～２８のいずれか１つに記載のセンスおよびアンチセンス鎖のヌクレオチド配列のいずれか１つを含む。

一実施形態において、センス鎖のヌクレオチド配列は、配列番号１５３３において説明されるＭＡＰＴ遺伝子エクソン１０のセンス鎖配列に対応する少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖はそれに対して相補的な配列を含む。

一態様において、本発明は、ＭＡＰＴの発現を阻害するための二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤であって、ｄｓＲＮＡ剤は、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、配列番号５のヌクレオチド配列と３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖は、配列番号６のヌクレオチド配列と３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、ｄｓＲＮＡ剤を提供する。

別の態様において、本発明は、ＭＡＰＴの発現を阻害するためのｄｓＲＮＡ剤であって、ｄｓＲＮＡ剤は、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、タウをコードするｍＲＮＡに対して相補性の領域を含み、相補性の領域は、配列番号６のヌクレオチド配列と３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、ｄｓＲＮＡ剤を提供する。

さらに別の態様において、本発明は、ＭＡＰＴの発現を阻害するためのｄｓＲＮＡ剤であって、ｄｓＲＮＡ剤は、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、タウをコードするｍＲＮＡに対して相補性の領域を含み、相補性の領域は、表１２～１３のいずれか１つに記載のアンチセンスヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、ｄｓＲＮＡ剤を提供する。

一実施形態において、センス鎖は、配列番号５のヌクレオチド１０６５～１０８５、１１９５～１２１５、１０６６～１０８６、１０６８～１０８８、７０５～７２５、１０６７～１０８７、４５２０～４５４０、３３４１～３３６１、４５１５～４５３５、５２８４～５３０４、５２８５～５３０５、３４４～３６４、５２８３～５３０３、５３５４～５３７４、２４５９～２４７９、１０６１～１０８１、７０６～７２６、９７２～９９２、４５６４～４５８４、９９５～１０１５、４５４６～４５６６、９６８～９８８、１１２７～１１４７、４５３４～４５５４、１５８～１７８、４４９４～４５１４、１６９１～１７１１、３５４４～３５６４、１９８～２１８、９７９～９９９、４５４８～４５６８、４５５１～４５７１、５４３～５６３、７１５～７３５、５４２～５６２、３５２～３７２、３６２～３８２、４５５６～４５７６、４５４７～４５６７、４５４２～４５６２、４５５８～４５７８、４５４９～４５６９、５０７４～５０９４、４５５２～４５７２、５０７３～５０９３、５０７６～５０９６、４５５０～４５７０、および２７５３～２７７３のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖は、配列番号６の対応するヌクレオチド配列からの少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。

一実施形態において、アンチセンス鎖は、ＡＤ－３９３７５８．１、ＡＤ－３９３８８８．１、ＡＤ－３９３７５９．１、ＡＤ－３９３７６１．１、ＡＤ－３９３４９５．１、ＡＤ－３９３７６０．１、ＡＤ－３９６４２５．１、ＡＤ－３９５４４１．１、ＡＤ－３９６４２０．１、ＡＤ－３９７１０３．１、ＡＤ－３９７１０４．１、ＡＤ－３９３２３９．１、ＡＤ－３９７１０２．１、ＡＤ－３９７１６７．１、ＡＤ－３９４７９１．１、ＡＤ－３９３７５４．１、ＡＤ－３９３４９６．１、ＡＤ－３９３６６７．１、ＡＤ－３９６４６７．１、ＡＤ－３９３６９０．１、ＡＤ－３９６４４９．１、ＡＤ－３９３６６３．１、ＡＤ－３９３８２０．１、ＡＤ－３９６４３７．１、ＡＤ－３９３０８４．１、ＡＤ－３９６４０１．１、ＡＤ－３９４２９６．１、ＡＤ－３９５５７４．１、ＡＤ－３９３１２４．１、ＡＤ－３９３６７４．１、ＡＤ－３９６４５１．１、ＡＤ－３９６４５４．１、ＡＤ－３９３３７６．１、ＡＤ－３９３５０５．１、ＡＤ－３９３３７５．１、ＡＤ－３９３２４７．１、ＡＤ－３９３２５７．１、ＡＤ－３９６４５９．１、ＡＤ－３９６４５０．１、ＡＤ－３９６４４５．１、ＡＤ－３９６４６１．１、ＡＤ－３９６４５２．１、ＡＤ－３９６９１３．１、ＡＤ－３９６４５５．１、ＡＤ－３９６９１２．１、ＡＤ－３９６９１５．１、ＡＤ－３９６４５３．１およびＡＤ－３９４９９１．１からなる群から選択される二重鎖のアンチセンス鎖のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。

一実施形態において、本明細書に記載されるセンス鎖、アンチセンス鎖、またはセンス鎖とアンチセンス鎖の両方は、１つまたは複数の親油性部分にコンジュゲートしている。

一実施形態において、親油性部分は、ｄｓＲＮＡ剤の二本鎖領域における１つまたは複数の内部位置にコンジュゲートしている。

一実施形態において、親油性部分は、リンカーまたは担体を介してコンジュゲートしている。

一実施形態において、ｌｏｇＫｏｗによって測定された親油性部分の親油性は、０を超える。

一実施形態において、二本鎖ＲＮＡ剤の血漿タンパク質結合アッセイにおける未結合分画によって測定された二本鎖ＲＮＡ剤の疎水性は、０．２を超える。

一実施形態において、血漿タンパク質結合アッセイは、ヒト血清アルブミンタンパク質を使用する電気泳動移動度シフトアッセイである。

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、少なくとも１つの修飾されたヌクレオチドを含む。

一実施形態において、本発明に記載されるｄｓＲＮＡ剤におけるセンス鎖ヌクレオチドの５個以下およびアンチセンス鎖のヌクレオチドの５個以下は、修飾されていないヌクレオチドである。

一実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤におけるセンス鎖のヌクレオチドの全ておよびアンチセンス鎖のヌクレオチドの全ては、修飾されたヌクレオチドである。

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤の修飾されたヌクレオチドの少なくとも１つは、デオキシヌクレオチド、３’末端デオキシチミジン（ｄＴ）ヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル修飾されたヌクレオチド、２’－フルオロ修飾されたヌクレオチド、２’－デオキシ修飾されたヌクレオチド、ロックドヌクレオチド、非ロックドヌクレオチド、立体配座的に制限されたヌクレオチド、拘束エチルヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、２’－アミノ変性ヌクレオチド、２’－Ｏ－アリル修飾されたヌクレオチド、２’－Ｃ－アルキル修飾されたヌクレオチド、２’－ヒドロキシル（ｈｙｄｒｏｘｌｙ）修飾されたヌクレオチド、２’－メトキシエチル修飾されたヌクレオチド、２’－Ｏ－アルキル修飾されたヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホルアミデート、非天然塩基を含むヌクレオチド、テトラヒドロピラン修飾されたヌクレオチド、１，５－アンヒドロヘキシトール修飾されたヌクレオチド、シクロヘキセニル修飾されたヌクレオチド、５’－ホスホロチオエート基を含むヌクレオチド、５’－メチルホスホネート基を含むヌクレオチド、５’リン酸または５’リン酸ミミックを含むヌクレオチド、ビニルホスホネートを含むヌクレオチド、アデノシン－グリコール核酸（ＧＮＡ）を含むヌクレオチド、チミジン－グリコール核酸（ＧＮＡ）Ｓ－異性体を含むヌクレオチド、２－ヒドロキシメチル－テトラヒドロフラン－５－ホスフェートを含むヌクレオチド、２’－デオキシチミジン－３’ホスフェートを含むヌクレオチド、２’－デオキシグアノシン－３’－ホスフェートを含むヌクレオチド、ならびにコレステリル誘導体およびドデカン酸ビスデシルアミド基に連結された末端ヌクレオチド；ならびにそれらの組合せからなる群から選択される。

一実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤の修飾されたヌクレオチドは、２’－デオキシ－２’－フルオロ修飾されたヌクレオチド、２’－デオキシ修飾されたヌクレオチド、３’末端デオキシチミジンヌクレオチド（ｄＴ）、ロックドヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、２’－アミノ変性ヌクレオチド、２’－アルキル修飾されたヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホルアミデート、および非天然塩基を含むヌクレオチドからなる群から選択される。

一実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤の修飾されたヌクレオチドは、３’末端デオキシチミジンヌクレオチド（ｄＴ）の短い配列を含む。

一実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤のヌクレオチドへの修飾は、２’－Ｏ－メチル、ＧＮＡおよび２’フルオロ修飾である。

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結をさらに含む。

一実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、６～８個のホスホロチオエートインターヌクレオチド連結を含む。

一実施形態において、ｄｓＲＮＡの各鎖は、３０ヌクレオチド以下の長さである。

一実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤の少なくとも１つの鎖は、少なくとも１ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む。別の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤の少なくとも１つの鎖は、少なくとも２ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む。

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤の二本鎖領域は、１５～３０ヌクレオチド対の長さ；１７～２３ヌクレオチド対の長さ；１７～２５ヌクレオチド対の長さ；２３～２７ヌクレオチド対の長さ；１９～２１ヌクレオチド対の長さ；または２１～２３ヌクレオチド対の長さであってもよい。

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡの各鎖は、１９～３０ヌクレオチド；１９～２３ヌクレオチド；または２１～２３ヌクレオチドを有してもよい。

一実施形態において、１つまたは複数の親油性部分は、少なくとも１つの鎖上の１つまたは複数の内部位置に、例えばリンカーまたは担体を介してコンジュゲートしている。

一実施形態において、内部位置は、少なくとも１つの鎖の各末端からの末端の２つの位置を除く全ての位置を含む。

別の実施形態において、内部位置は、少なくとも１つの鎖の各末端からの末端の３つの位置を除く全ての位置を含む。

一実施形態において、内部位置は、センス鎖の切断部位領域を除く。

一実施形態において、内部位置は、センス鎖の５’端から数えて位置９～１２を除く全ての位置を含む。

別の実施形態において、内部位置は、センス鎖の３’端から数えて位置１１～１３を除く全ての位置を含む。

一実施形態において、内部位置は、アンチセンス鎖の切断部位領域を除く。

一実施形態において、内部位置は、アンチセンス鎖の５’端から数えて位置１２～１４を除く全ての位置を含む。

一実施形態において、内部位置は、センス鎖の３’端から数えて位置１１～１３とアンチセンス鎖の５’端から数えて位置１２～１４とを除く全ての位置を含む。

一実施形態において、１つまたは複数の親油性部分は、各鎖の５’端から数えて、センス鎖における位置４～８および１３～１８ならびにアンチセンス鎖における位置６～１０および１５～１８からなる群から選択される内部位置の１つまたは複数にコンジュゲートされる。

別の実施形態において、１つまたは複数の親油性部分は、各鎖の５’端から数えて、センス鎖における位置５、６、７、１５、および１７ならびにアンチセンス鎖における位置１５および１７からなる群から選択される内部位置の１つまたは複数にコンジュゲートされる。

一実施形態において、二本鎖領域における内部位置は、センス鎖の切断部位領域を除く。

一実施形態において、センス鎖は、２１ヌクレオチド長であり、アンチセンス鎖は、２３ヌクレオチド長であり、親油性部分は、センス鎖の位置２１、位置２０、位置１５、位置１、位置７、位置６、もしくは位置２またはアンチセンス鎖の位置１６にコンジュゲートされる。

一実施形態において、親油性部分は、センス鎖の位置２１、位置２０、位置１５、位置１、または位置７にコンジュゲートされる。

別の実施形態において、親油性部分は、センス鎖の２１位、２０位、または１５位にコンジュゲートしている。

さらに別の実施形態において、親油性部分は、センス鎖の２０位または１５位にコンジュゲートしている。

一実施形態において、親油性部分は、アンチセンス鎖の位置１６にコンジュゲートされる。

一実施形態において、親油性部分は、脂肪族化合物、脂環式化合物、または多脂環式化合物である。

一実施形態において、親油性部分は、脂質、コレステロール、レチノイン酸、コール酸、アダマンタン酢酸、１－ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、１，３－ビス－Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシヘキサノール、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メンソール、１，３－プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ミリスチン酸、Ｏ３－（オレオイル）リトコール酸、Ｏ３－（オレオイル）コレン酸、ジメトキシトリチル、またはフェノキサジンからなる群から選択される。

一実施形態において、親油性部分は、飽和または不飽和Ｃ４～Ｃ３０炭化水素鎖と、ヒドロキシル、アミン、カルボン酸、スルホネート、ホスフェート、チオール、アジド、およびアルキンからなる群から選択される適宜の官能基とを含有する。

一実施形態において、親油性部分は、飽和または不飽和Ｃ６～Ｃ１８炭化水素鎖を含有する。

一実施形態において、親油性部分は、飽和または不飽和Ｃ１６炭化水素鎖を含有する。

一実施形態において、飽和または不飽和Ｃ１６炭化水素鎖は、鎖の５’端から数えて位置６にコンジュゲートされる。

一実施形態において、親油性部分は、内部位置または二本鎖領域における１つまたは複数のヌクレオチドに置き換わる担体を介してコンジュゲートされる。

一実施形態において、担体は、ピロリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、［１，３］ジオキソラニル、オキサゾリジニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、キノキサリニル、ピリダジノニル、テトラヒドロフラニル、およびデカリニルからなる群から選択される環状基であるか；またはセリノール骨格もしくはジエタノールアミン骨格に基づく非環状部分である。

一実施形態において、親油性部分は、エーテル、チオエーテル、尿素、カーボネート、アミン、アミド、マレイミド－チオエーテル、ジスルフィド、リン酸ジエステル、スルホンアミド連結、クリック反応の生成物、またはカルバメートを含有するリンカーを介して、二本鎖ｉＲＮＡ剤にコンジュゲートしている。

一実施形態において、親油性部分は、核酸塩基、糖部分、またはヌクレオシド間連結にコンジュゲートされる。

一実施形態において、親油性部分または標的化リガンドは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ジスルフィド、アミド、およびガラクトサミン、グルコサミン、グルコース、ガラクトース、マンノースの官能化された単糖またはオリゴ糖、ならびにそれらの組合せからなる群から選択される生物リンカーを介してコンジュゲートされる。

一実施形態において、センス鎖の３’端は、アミンを有する環状基であるエンドキャップを介して保護され、環状基は、ピロリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、［１，３］ジオキソラニル、オキサゾリジニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、キノキサリニル、ピリダジノニル、テトラヒドロフラニル、およびデカリニルからなる群から選択される。

一実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、神経細胞を標的化する標的化リガンドをさらに含む。

一実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、肝臓細胞を標的化する標的化リガンドをさらに含む。

一実施形態において、標的化リガンドは、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートである。

一実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、Ｓｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の３’端における第１のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾、Ｒｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の５’端における第１のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾、およびＲｐ立体配置またはＳｐ立体配置のどちらかにおいて連結リン原子を有する、センス鎖の５’端における第１のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾をさらに含む。

別の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、Ｓｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の３’端における第１および第２のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾、Ｒｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の５’端における第１のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾、およびＲｐまたはＳｐ立体配置のどちらかにおいて連結リン原子を有する、センス鎖の５’端における第１のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾をさらに含む。

さらに別の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、Ｓｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の３’端における第１、第２、および第３のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾、Ｒｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の５’端における第１のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾、およびＲｐまたはＳｐ立体配置のどちらかにおいて連結リン原子を有する、センス鎖の５’端における第１のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾をさらに含む。

別の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、Ｓｐ配置で連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の３’末端における第１および第２のインターヌクレオチド連結で起こる末端キラル修飾、Ｒｐ配置で連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の３’末端における第３のインターヌクレオチド連結で起こる末端キラル修飾、Ｒｐ配置で連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の５’末端における第１のインターヌクレオチド連結で起こる末端キラル修飾、およびＲｐまたはＳｐ配置のいずれかで連結リン原子を有する、センス鎖の５’末端における第１のインターヌクレオチド連結で起こる末端キラル修飾をさらに含む。

別の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、Ｓｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の３’端における第１および第２のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾、Ｒｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の５’端における第１および第２のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾、およびＲｐまたはＳｐ立体配置のどちらかにおいて連結リン原子を有する、センス鎖の５’端における第１のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾をさらに含む。

一実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、アンチセンス鎖の５’端におけるホスフェートまたはホスフェート模倣物をさらに含む。

一実施形態において、リン酸ミミックは、５’－ビニルホスホネート（ＶＰ）である。

一実施形態において、二重鎖のアンチセンス鎖の５’端の１つの位置の塩基対は、ＡＵ塩基対である。

一実施形態において、センス鎖は、合計２１のヌクレオチドを有し、アンチセンス鎖は、合計２３のヌクレオチドを有する。

本発明はまた、本発明のｄｓＲＮＡ剤と脂質製剤とを含む細胞および医薬組成物も提供する。

本発明はまた、本発明のｄｓＲＮＡ剤を含む、ＭＡＰＴをコードする遺伝子の発現を阻害するための医薬組成物も提供する。

本発明はまた、本発明のｄｓＲＮＡ剤を含む、エクソン１０含有ＭＡＰＴ転写物を選択的に阻害するための医薬組成物も提供する。

一実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、緩衝化されていない溶液、例えば生理食塩水または水中である。

別の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、緩衝溶液、例えば、酢酸塩、クエン酸塩、プロラミン、炭酸塩、もしくはリン酸塩またはそれらのあらゆる組合せを含む緩衝溶液；またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中である。

一態様において、本発明は、細胞におけるＭＡＰＴ遺伝子の発現を阻害する方法であって、細胞を、本発明のｄｓＲＮＡ剤または本発明の医薬組成物と接触させること、それによって細胞におけるＭＡＰＴ遺伝子の発現を阻害することを含む、方法を提供する。

別の態様において、本発明は、細胞におけるエクソン１０含有ＭＡＰＴ転写物を選択的に阻害することを含む方法であって、細胞を、本発明のｄｓＲＮＡ剤または本発明の医薬組成物と接触させること、それによって細胞におけるエクソン１０含有ＭＡＰＴ転写物を選択的に分解することを含む、方法を提供する。

一実施形態において、細胞は、対象内にある。

一実施形態において、対象はヒトである。

一実施形態において、対象は、ＭＡＰＴ関連障害を有する。

一実施形態において、対象は、神経変性障害であるＭＡＰＴ関連障害を有する。

一実施形態において、対象の神経変性障害は、ＭＡＰＴ遺伝子にコードされるタンパク質タウの異常に関連する。

一実施形態において、ＭＡＰＴ遺伝子にコードされるタンパク質タウの異常は、対象の脳内でのタウの凝集を引き起こす。

一実施形態において、神経変性障害は家族性障害である。

一実施形態において、神経変性障害は孤発性障害である。

一実施形態において、ＭＡＰＴ関連障害は、タウオパチー、アルツハイマー病、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、行動障害型前頭側頭型認知症（ｂｖＦＴＤ）、非流暢性亜型原発性進行性失語（ｎｆｖＰＰＡ）、意味型原発性進行性失語（ＰＰＡ－Ｓ）、ロゴペニック型原発性進行性失語（ＰＰＡ－Ｌ）、１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、ピック病（ＰｉＤ）、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、初老期認知症を伴う多系統タウオパチー（ＭＳＴＤ）、球状グリア封入体を伴う白質タウオパチー（ＧＧＩを伴うＦＴＬＤ）、ＭＡＰＴ突然変異を伴うＦＴＬＤ、神経原線維変化（ＮＦＴ）認知症、運動ニューロン疾患を伴うＦＴＤ、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、皮質基底核症候群（ＣＢＳ）、皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、パーキンソン病、脳炎後パーキンソニズム、ニーマン・ピック病、ハンチントン病、筋強直性ジストロフィー１型、およびダウン症候群（ＤＳ）からなる群から選択される。

一部の実施形態において、細胞をｄｓＲＮＡ剤と接触させることは、ＭＡＰＴの発現を対照レベルに対して少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％阻害する。一実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、ＭＡＰＴの発現を少なくとも約２５％阻害する。

一部の実施形態において、ＭＡＰＴの発現を阻害することは、対象の血清中のタウタンパク質レベルを対照レベルに対して少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％減少させる。一実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、対象の血清中のタウタンパク質レベルを少なくとも約２５％減少させる。

一態様において、本発明は、ＭＡＰＴ発現の低減が有益であろう障害を有する対象を処置する方法であって、治療有効量の本発明のｄｓＲＮＡ剤または本発明の医薬組成物を対象に投与すること、それによってＭＡＰＴ発現の低減が有益であろう障害を有する対象を処置することを含む、方法を提供する。

別の態様において、本発明は、ＭＡＰＴ発現の低減が有益であろう障害を有する対象における少なくとも１つの症状を防止する方法であって、予防有効量の本発明のｄｓＲＮＡ剤または本発明の医薬組成物を対象に投与すること、それによってＭＡＰＴ発現の低減が有益であろう障害を有する対象における少なくとも１つの症状を防止することを含む、方法を提供する。

一実施形態において、障害は、ＭＡＰＴ関連障害である。

一実施形態において、障害は、ＭＡＰＴ遺伝子にコードされるタンパク質タウの異常に関連する。

一実施形態において、対象は、ヒトである。

一実施形態において、本発明のｄｓＲＮＡ剤、または本発明の医薬組成物の投与が、対象の脳内でのタウの凝集の減少をもたらす。

一実施形態において、対象への薬剤の投与が、タウの凝集の減少をもたらす。

一実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、約０．０１ｍｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇの用量において対象に投与される。

別の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、髄腔内において対象に投与される。

さらに別の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、対象に大槽内投与される。限定されない例示的な大槽内投与は、後頭下穿刺法による大槽（小脳延髄槽）内への注入を含む。

一実施形態において、本発明の方法は、対象からの試料中のＭＡＰＴのレベルを決定することをさらに含む。

一実施形態において、対象試料におけるＭＡＰＴのレベルは、血液、血清、または髄液試料中のタウタンパク質レベルである。

一実施形態において、本発明の方法は、追加の治療剤を対象に投与することをさらに含む。

一態様において、本発明は、本発明のｄｓＲＮＡ剤または本発明の医薬組成物を含むキットを提供する。

別の態様において、本発明は、本発明のｄｓＲＮＡ剤または本発明の医薬組成物を含むバイアルを提供する。

さらに別の態様において、本発明は、本発明のｄｓＲＮＡ剤または本発明の医薬組成物を含むシリンジを提供する。

別の態様において、本発明は、本発明のｄｓＲＮＡ剤、または本発明の医薬組成物を含む、髄腔内ポンプを提供する。

図１は、ＭＡＰＴ発現に対するＲＮＡｉ組成物の効果を決定するための、肝臓におけるＡＡＶスクリーンを示す。縦軸は、ＰＢＳ投与マウスにおけるＭＡＰＴ発現レベルと比べた、ＲＮＡｉ組成物を投与したマウスにおけるヒトＭＡＰＴ発現を示す。図２は、ヒトＭＡＰＴＲＮＡを発現するマウスにおけるセンス含有凝集体またはアンチセンス含有凝集体の両方のレベルに対する表２５～２６において選択されたｄｓＲＮＡ剤の効果を決定するための、肝臓におけるＡＡＶスクリーンを示す。縦軸は、ＰＢＳ投与マウスにおけるＭＡＰＴ発現レベルと比べた、ＲＮＡｉ組成物を投与したマウスにおけるヒトＭＡＰＴ発現を示す。図３は、ヒトＭＡＰＴＲＮＡを発現するマウスにおけるセンス含有凝集体またはアンチセンス含有凝集体の両方のレベルに対する表２５～２６において選択されたｄｓＲＮＡ剤の効果を決定するための、肝臓におけるＡＡＶスクリーンを示す。縦軸は、ＰＢＳ投与マウスにおけるＭＡＰＴ発現レベルと比べた、ＲＮＡｉ組成物を投与したマウスにおけるヒトＭＡＰＴ発現を示す。

本発明の開示は、ＭＡＰＴ遺伝子のＲＮＡ転写物のＲＮＡ誘導型サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）媒介切断を実行する、ＲＮＡｉ組成物を提供する。ＭＡＰＴ遺伝子は、細胞内、例えば、ヒトなどの対象内の細胞内にあり得る。これらのｉＲＮＡの使用は、哺乳動物における対応する遺伝子（ＭＡＰＴ遺伝子）のｍＲＮＡの標的化された分解を可能にする。

本発明のｉＲＮＡは、ＭＡＰＴ遺伝子、例えば、ヌクレオチド修飾を有するまたは有しないＭＡＰＴ遺伝子を標的化するように設計された。本発明のｉＲＮＡは、ＭＡＰＴ遺伝子の発現を少なくとも約２５％阻害し、センスおよびアンチセンス含有凝集体のレベルを低減させる。理論によって制限されることを意図するわけではないが、先述の特性と、特定の標的部位、またはこれらのｉＲＮＡｓの特定の修飾との組合せまたは部分的組合せは、本発明のｉＲＮＡに、改良された効率、安定性、効力、耐久性、および安全性を付与すると考えられる。

したがって、本開示はまた、ＭＡＰＴ遺伝子の発現を阻害するための、またはＭＡＰＴ遺伝子の発現の阻害もしくは低減が有益であろう障害、例えば、ＭＡＰＴ関連疾患、例えば、アルツハイマー病、ＦＴＤ、ＰＳＰ、もしくは別のタウオパチーを有する対象を処置するための、本開示のＲＮＡｉ組成物の使用方法も提供する。

本開示のＲＮＡｉ剤は、約３０ヌクレオチドまたはそれ未満の長さ、例えば、１５～３０、１５～２９、１５～２８、１５～２７、１５～２６、１５～２５、１５～２４、１５～２３、１５～２２、１５～２１、１５～２０、１５～１９、１５～１８、１５～１７、１８～３０、１８～２９、１８～２８、１８～２７、１８～２６、１８～２５、１８～２４、１８～２３、１８～２２、１８～２１、１８～２０、１９～３０、１９～２９、１９～２８、１９～２７、１９～２６、１９～２５、１９～２４、１９～２３、１９～２２、１９～２１、１９～２０、２０～３０、２０～２９、２０～２８、２０～２７、２０～２６、２０～２５、２０～２４、２０～２３、２０～２２、２０～２１、２１～３０、２１～２９、２１～２８、２１～２７、２１～２６、２１～２５、２１～２４、２１～２３、または２１～２２ヌクレオチドの長さの領域を有するＲＮＡ鎖（アンチセンス鎖）を含み、この領域は、ＭＡＰＴ遺伝子のｍＲＮＡ転写物の少なくとも一部、例えば、ＭＡＰＴエクソンに対して実質的に相補的である。ある特定の実施形態において、本開示のＲＮＡｉ剤は、約２１～２３ヌクレオチド長である領域を有し、領域が、ＭＡＰＴ遺伝子のｍＲＮＡ転写物の少なくとも一部に対して実質的に相補的である、ＲＮＡ鎖（アンチセンス鎖）を含む。

ある特定の実施形態において、本開示のＲＮＡｉ剤は、ＭＡＰＴ遺伝子のｍＲＮＡ転写物の少なくとも一部に対して実質的に相補的である、少なくとも１９の連続するヌクレオチドの領域を有する、より長い長さ、例えば、最大でも６６ヌクレオチドまで、例えば、３６～６６、２６～３６、２５～３６、３１～６０、２２～４３、２７～５３ヌクレオチド長を含むことができる、ＲＮＡ鎖（アンチセンス鎖）を含む。より長い長さのアンチセンス鎖を有するこれらのＲＮＡｉ剤は、好ましくは、２０～６０ヌクレオチド長の第２のＲＮＡ鎖（センス鎖）を含み、この場合、センス鎖およびアンチセンス鎖は、１８～３０の連続するヌクレオチドの二重鎖を形成する。

これらのＲＮＡｉ剤の使用は、哺乳動物におけるＭＡＰＴ遺伝子のｍＲＮＡの標的化された分解および／または阻害を可能にする。したがって、これらのＲＮＡｉ剤を含む方法および組成物は、タウのレベルまたは活性の低減が有益であろう対象、例えば、ＭＡＰＴ関連疾患、例えば、アルツハイマー病、ＦＴＤ、ＰＳＰ、または別のタウオパチーを有する対象を処置するのに有用である。

以下の詳細な説明は、ＭＡＰＴ遺伝子の発現を阻害するためにＲＮＡｉ剤を含有する組成物を作製および使用する方法、ならびに遺伝子の発現の阻害または減少が有益であろう、疾患または障害を有する対象を処置するための組成物または方法を開示する。

Ｉ．定義
本開示がさらに容易に理解され得るために、ある特定の用語が、最初に定義される。加えて、パラメータの値または値の範囲が列記される場合にはいつでも、列記された値の中間の値および範囲も、本開示の一部であることが意図されることが意図される。

冠詞「ａ」および「ａｎ」は、本明細書において、冠詞の文法上の対象の１つまたは２つ以上（すなわち、少なくとも一つ）を意味するために使用される。例えば、「要素（ａｎｅｌｅｍｅｎｔ）」は、１つの要素または２つ以上の要素、例えば、複数の要素を意味する。

用語「を含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」は、語句「を含むが、これらに限定されるわけではない（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｂｕｔｎｏｔｌｉｍｉｔｅｄｔｏ）」を意味するために本明細書において使用され、当該語句と相互互換的に使用される。用語「または」は、文脈において明確に示されない限り、用語「および／または」を意味するために本明細書において使用され、当該語句と相互互換的に使用される。

用語「約」は、当技術分野において、典型的な交差の範囲内であることを意味するために、本明細書において使用される。例えば、「約」は、平均から約２標準偏差として理解することができる。ある特定の実施形態において、約は、±１０％を意味する。ある特定の実施形態において、約は、±５％を意味する。約が、一連の数または範囲の前に存在する場合、「約」は、一連における数または範囲のそれぞれを修飾することができることは理解されよう。

数または一連の数の前の用語「少なくとも」は、文脈から明白な場合、用語「少なくとも」に隣接する数、および論理的に含まれ得るその後の全ての数または整数を含むと理解される。例えば、核酸分子におけるヌクレオチドの数は、整数でなければならない。例えば、「２１ヌクレオチド核酸分子の少なくとも１８ヌクレオチド」は、１８、１９、２０、または２１ヌクレオチドが、示された特性を有することを意味する。少なくとも、なる用語が、一連の数または範囲の前に存在する場合、「少なくとも」は、一連における数および範囲のそれぞれを修飾することができることは理解されよう。

本明細書において使用される場合、「以下」または「未満」は、当該語句に隣接する値およびその値より論理的により小さい値または整数から、文脈から論理的である場合、ゼロまでとして理解される。例えば、「２ヌクレオチド以下」のオーバーハングを有する二重鎖は、２、１、または０ヌクレオチドのオーバーハングを有する。「以下」が、一連の数または範囲の前に存在する場合、「以下」は、一連における数または範囲のそれぞれを修飾することができることは理解されよう。

本明細書において使用される場合、用語「少なくとも約」は、測定可能な値、例えば、パラメータ、量などを指す場合、指定された値から＋／－２０％、好ましくは＋／－１０％、より好ましくは＋／－５％、さらにより好ましくは＋／－１％の偏差を包含することを意味するが、そのような偏差が、開示される発明において機能するのに適切である場合に限られる。例えば、ＭＡＰＴ遺伝子の発現の「少なくとも約２５％」の阻害とは、ＭＡＰＴ遺伝子の発現の阻害が、指定された２５％の＋／－２０％の任意の値、すなわち、２０％、３０％、または２０～３０％の間の任意の中間の値と測定できることを意味する。

本明細書において使用される場合、「対照レベル」は、本明細書に記載されるＲＮＡｉ剤が発現される細胞、組織、または系と同一な、調節されていない細胞、組織、または系における遺伝子の発現のレベル、またはＲＮＡ分子の発現レベル、または１つもしくは複数のタンパク質もしくはタンパク質サブユニットの発現レベルを指す。ＲＮＡｉ剤が発現される細胞、組織、または系は、ＲＮＡｉ剤の非存在下で観察されるものと比べて少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２倍、３倍、４倍、５倍、またはそれ以上の本明細書に記載される遺伝子、ＲＮＡ、および／またはタンパク質の発現を有する。対照レベルに対する％および／または倍の差は、例えば、
［ＲＮＡｉ剤有りの発現－ＲＮＡｉ剤無しの発現］
差（％）＝－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－×１００
ＲＮＡｉ剤無しの発現
であり得る。

本明細書において使用される場合、検出の方法は、存在する分析物の量が方法の検出レベル未満であることの判定を含むことができる。

示された標的部位と、センス鎖またはアンチセンス鎖に対するヌクレオチド配列とが一致しない場合、示された配列が優先する。

化学構造と化学名称が一致しない場合、化学構造が優先する。

用語「ＭＡＰＴ」遺伝子は、「ＤＤＰＡＣ」、「ＦＴＤＰ－１７」、「ＭＡＰＴＬ」、「ＭＳＴＤ」、「ＭＴＢＴ１」、「ＭＴＢＴ２」、「ＰＰＮＤ」、「ＰＰＰ１Ｒ１０３」、「ＴＡＵ」、および「微小管関連タンパク質タウ」としても知られており、微小管関連タンパク質タウ（ＭＡＰＴ）と呼ばれるタンパク質をコードする遺伝子を指す。

ＭＡＰＴｍＲＮＡは、全身に発現し、主として中枢神経系（すなわち、脳および脊髄）および末梢神経系に発現する。野生型タウは、神経軸索中の微小管の安定化、軸索輸送および微小管動態の制御、樹状突起棘の維持、ならびにゲノムＤＮＡの完全性への寄与に関与している。

タウオパチーは、脳内でのタウ凝集物の存在によって病理学的に特徴付けられる、異種混合クラスの進行性神経変性障害である。細胞内および細胞外の神経細胞タウ凝集物は、微小管の解離および軸索変性、シナプス小胞放出の障害、および「シーディング」と呼ばれるタウ凝集物のプリオン様神経細胞間伝播を引き起こす。

表現型では、タウオパチーは、運動、認知、および行動障害の多様な進行を示す。タウオパチーとしては、アルツハイマー病［主に選択的記憶障害から始まり、脳の前頭葉、側頭葉（海馬が含まれる）、および頭頂葉の変性に関連する、最も多い形態の初老期認知症］；前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）（前頭葉および側頭葉の神経細胞の萎縮に関連し、幅広い行動、言語、および運動障害を呈する、２番目に多い形態の初老期認知症）；および進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）［（注視障害、錐体外路症状（四肢の失行、無動／動作緩慢、硬直、および筋緊張異常を含めたパーキンソニズム症状）、および認知機能障害を呈する、脳幹および基底核の変性であり、米国ではおよそ２０，０００人が罹患している）が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。

ＦＴＤとしてさらに、行動障害型前頭側頭型認知症（ｂｖＦＴＤ）（病理学的には前頭前野および前側頭葉における進行性の萎縮に関連し、臨床的には複合思考、人格、および行動の変化に関連し、米国ではおよそ３０，０００人が罹患している）；意味型原発性進行性失語（ＰＰＡ－Ｓ）（言葉の理解における困難、呼称の苦労に関連する、前頭葉および側頭葉の変性）；非流暢性亜型原発性進行性失語（ｎｆｖＰＰＡ）［左後前頭葉および島葉の変性に関与し、失文法および複雑な文章の理解不能を呈し、米国ではおよそ１，０００人が罹患している］；ロゴペニック型原発性進行性失語［ＰＰＡ－Ｌ）（言葉の復唱の困難および頻繁な中断に関連する、左後／上部（ｓｐｕｒ）側頭葉および頭頂葉内側（ｍｅｄｉａｌ）の変性）；１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）（病理学的には前頭葉および側頭葉の変性に関連し、臨床的には発語障害および運動障害に関連する）；ピック病（ＰｉＤ）（言語および思考の困難、ならびに行動の変化に関連する、前頭葉および側頭葉の変性、）；運動ニューロン疾患を伴うＦＴＤ（皮質および運動ニューロンの変性に関与する）；および皮質基底核症候群（ＣＢＳ）［錐体外路症状（パーキンソン病およびＰＳＰにおけるものと同様）および認知機能障害を呈する、後前頭葉および側頭葉ならびに基底核の変性（すなわち、皮質基底核変性症（ＣＢＤ））、米国ではおよそ２，０００人が罹患している］が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。ＭＡＰＴの突然変異は、ｂｖＦＴＤ、ｎｆｖＰＰＡ、ＣＢＳ、およびＰＳＰを有する患者のそれぞれおよそ１０％で報告されている。ＭＡＰＴは、アルツハイマー病の特徴である、神経細胞質における神経原線維変化の主要成分である。ＭＡＰＴの凝集および沈着は、パーキンソン病を有する患者の脳のおよそ５０％にも観察された。タウの関与は、他の疾患の病理発生に示されており、それらとしては、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、初老期認知症を伴う多系統タウオパチー（ＭＳＴＤ）、球状グリア封入体を伴う白質タウオパチー（ＧＧＩを伴うＦＴＬＤ）、ＭＡＰＴ突然変異を伴うＦＴＬＤ、神経原線維変化（ＮＦＴ）認知症、運動ニューロン疾患を伴うＦＴＤ、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、脳炎後パーキンソニズム、ニーマン・ピック病、ハンチントン病、筋強直性ジストロフィー１型、およびダウン症候群（ＤＳ）が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。

ＭＡＰＴ遺伝子は、１６個のエクソン（Ｅ１～Ｅ１６）からなる。Ｅ２、Ｅ３、およびＥ１０の選択的ｍＲＮＡスプライシングによって、６種のタウアイソフォーム（３５２～４４１個のアミノ酸）が生じる。Ｅ１、Ｅ４、Ｅ５、Ｅ７、Ｅ９、Ｅ１１、Ｅ１２、Ｅ１３は、恒常的にスプライスされるエクソンである。Ｅ６およびＥ８は、ヒトの脳では転写されない。Ｅ４ａは、末梢神経系にしか発現しない。Ｅ０（プロモーターの一部）およびＥ１４は非コードエクソンである。

ＭＡＰＴの病原性変異体は、原発性タウオパチーを有する患者のおよそ１０％に見出されている。変異体は主にミスセンスであり、エクソン９～１３（微小管結合ドメイン）に局在しており、エクソン１０の選択的スプライシングに多くの影響を与えている。コード領域の突然変異の例としては、ＭＡＰＴ遺伝子のＥ１におけるＲ５ＨおよびＲ５Ｌ；Ｅ９におけるＫ２５７Ｔ、Ｉ２６０Ｖ、Ｌ２６６Ｖ、Ｇ２７２Ｖ、およびＧ２７３Ｒ；Ｅ１０におけるＮ２７９Ｋ、Ｌ２８４Ｌ、ΔＮ２９６、Ｎ２９６Ｎ、Ｎ２９６Ｈ、ΔＮ２９８、Ｐ３０１Ｌ、Ｐ３０１Ｓ、Ｐ３０１Ｔ、Ｇ３０３Ｖ、Ｇ３０４Ｓ、Ｓ３０５Ｉ、Ｓ３０５Ｎ、およびＳ３０５Ｓ；Ｅ１１におけるＬ３１５Ｒ、Ｋ３１７Ｍ、Ｓ３２０Ｆ、Ｐ３３２Ｓ；Ｅ１２におけるＧ３３５Ｓ、Ｇ３３５Ｖ、Ｑ３３６Ｒ、Ｖ３３７Ｍ、Ｅ３４２Ｖ、Ｓ３５２Ｌ、Ｓ３５６Ｔ、Ｖ３６３Ｉ、Ｐ３６４Ｓ、Ｇ３６６Ｒ、およびＫ３６９Ｉ；Ｅ１３におけるＧ３８９Ｒ、Ｒ４０６Ｗ、およびＴ４２７Ｍが挙げられる。ＭＡＰＴ（タウ）ヌル（－／－）のヒトは、おそらく生きることができない。ＭＡＰＴヘテロ接合体（＋／－）のヒトは、不明瞭または不明な表現型を有する。ＭＡＰＴ過剰発現（＋／＋／＋）のヒトは、早期発症の認知症、ＦＴＤ、ＰＳＰ、およびＣＢＤに関連している。

ＭＡＰＴ（タウ）タンパク質の６種のアイソフォームの各々は、その微小管結合ドメインに３つまたは４つの反復するセグメント（Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４）を含有する。各リピートは、３１または３２アミノ酸の長さである。Ｅ９、Ｅ１０、Ｅ１１、およびＥ１２のスプライシングによって、ＭＡＰＴの微小管結合ドメインに反復するセグメントであるＲ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４がそれぞれ生じる。Ｅ１０がスプライスインされた３種のＭＡＰＴ（タウ）アイソフォームは、４つの反復するセグメント（４Ｒ）を含有し、それに対してＥ１０がスプライスアウトされた他の３種のＭＡＰＴアイソフォームは、３つの反復セグメント（３Ｒ）を含有する。

Ｅ２およびＥ３の翻訳によって、Ｎ１およびＮ２セグメントがそれぞれ生じる。Ｅ２およびＥ３の選択的スプライシングによって、タウのアイソフォーム０Ｎ（Ｅ２およびＥ３がスプライスアウトされるため、Ｎセグメントがなくなる）、１Ｎ（Ｅ２がスプライスインされ、Ｅ３がスプライスアウトされるため、Ｎセグメントが１つとなる）および２Ｎ（Ｅ２およびＥ３がスプライスインされるため、Ｎセグメントが２つとなる）が生じる。したがって、選択的スプライシングの結果生じる６種のＭＡＰＴ（タウ）アイソフォームは、２Ｎ４Ｒ、１Ｎ４Ｒ、０Ｎ４Ｒ、２Ｎ３Ｒ、１Ｎ３Ｒ、および０Ｎ３Ｒである。

健常な個体では、３Ｒおよび４ＲＭＡＰＴ転写物のアイソフォームは１：１の比率で存在する。３Ｒ／４Ｒアイソフォーム比は、病態において歪みがあり、その比によってタウ凝集物の型が予測される。４リピートタウのアセンブリーが線維になることは、ＰＳＰ、ＣＢＤ、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、初老期認知症を伴う多系統タウオパチー（ＭＳＴＤ）、および球状グリア封入体を伴う白質タウオパチー（ＧＧＩを伴うＦＴＤ）に特徴的であり、それらはＦＴＤスペクトラム（４Ｒタウオパチー）に属する。対照的に、ピック病では、神経細胞封入体において３リピートタウが優勢である（３Ｒタウオパチー）。アルツハイマー病、または神経原線維変化を有する他の神経変性疾患（ＮＦＴ認知症）では、３リピートタウアイソフォームと４リピートタウアイソフォームの両方が神経原線維病変を構成する（３／４Ｒタウオパチー）。ＭＡＰＴ突然変異を伴うＦＴＬＤは、３Ｒ、４Ｒ、または３／４Ｒタウオパチーであり得る。

運動ニューロン疾患を伴うＦＴＤは、ＦＴＬＤ－ＴＤＰ４３およびＦＴＬＤ－ＦＵＳの病理に関連している。それは、Ｃ９ＯＲＦ７２、ＦＵＳ、ＴＡＲＤＢＰ、およびＶＣＰの遺伝子突然変異に関連している。

ｂｖＦＴＤは、ＦＴＬＤ－Ｔａｕ（３Ｒ）およびＦＴＬＤ－ＴＤＰ４３の病理に関連している。症例の１０パーセントが、ＭＡＰＴの突然変異に関与している。それは、Ｃ９ＯＲＦ７２、ＧＲＮ、およびＶＣＰの遺伝子突然変異に関連している。

ＰＰＡ－Ｓは、孤発性であり得る。それは、ＦＴＬＤ－ＴＤＰ４３の病理に関連している。

ｎｆｖＰＰＡは、有意性の順に、ＦＴＬＤ－Ｔａｕ（４Ｒ）、アルツハイマー病、およびＦＴＬＤ－ＴＤＰ４３の病理に関連している。症例の１０パーセントが、ＭＡＰＴの突然変異に関与している。ｎｆｖＰＰＡは、ＧＲＮの突然変異にさらに関連している。

ＰＰＡ－Ｌは、孤発性であり得る。それは、有意性の順に、アルツハイマー病およびＦＴＬＤ－Ｔａｕの病理に関連している。

ＣＢＳは、有意性の順に、ＦＴＬＤ－Ｔａｕ（４Ｒ）およびアルツハイマー病の病理に関連している。症例の１０パーセントが、ＭＡＰＴの突然変異に関連している。残りの症例は、孤発性であり得る。

ＰＳＰは、ＦＴＬＤ－Ｔａｕ（４Ｒ）の病理に関与している。症例の１０パーセントが、ＭＡＰＴの突然変異に関連している。症例の残りは、孤発性であり得る。

タウオパチーは一般に、６０～８０歳で始まり、６～１０年の余命に影響を与える。タウオパチーは、表現型が異種混合であり、運動、認知、および行動障害が多様に関与している。特に、運動症状の進行は多様である。

現在のところ、タウオパチーに対する認可された疾患修飾療法は存在しない。利用可能な処置は、症状を緩和し、疾患が進行すると共に患者の生活の質を改善することのみを目的としている。前臨床または臨床開発中の薬物としては、能動および受動免疫療法；Ｏ－脱グリコシル、凝集、キナーゼ、アセチル化、カスパーゼ、またはタウ発現の阻害剤；ホスファターゼ活性化剤；微小管安定剤；および自食作用またはプロテアソーム（ｐｒｏｔｅｏｓｏｍａｌ）分解のモジュレーターが挙げられる。タウオパチーを評価するために臨床試験に使用されるバイオマーカーおよび試験としては、トレオニン１８１でリン酸化されたタウタンパク質（ｐＴａｕ）、総タウタンパク質（ｔＴａｕ）、ニューロフィラメント軽鎖（ＮｆＬ）、および容積測定ＭＲＩ（ｖＭＲＩ）が挙げられる。

ＭＡＰＴの例示的なヌクレオチドおよびアミノ酸配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ_０１６８４１．４［ヒト（Ｈｏｍｏｓａｐｉｅｎｓ）ＭＡＰＴ変異体４、配列番号１、逆相補物、配列番号２］；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ_００５９１０（ヒトＭＡＰＴ変異体２、配列番号３、逆相補物、配列番号４）；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ_００１０３８６０９．２［ハツカネズミ（Ｍｕｓｍｕｓｃｕｌｕｓ）ＭＡＰＴ、配列番号５；逆相補物、配列番号６］；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＸＭ_００５５８４５４０．１［カニクイザル（Ｍａｃａｃａｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）ＭＡＰＴ変異体Ｘ１３、配列番号７、逆相補物、配列番号８］；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＸＭ_００８７６８２７７．２［ラット（Ｒａｔｔｕｓｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）ＭＡＰＴ、変異体Ｘ７、配列番号９、逆相補物、配列番号１０］、およびＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＸＭ_００５６２４１８３．３［ハイイロオオカミ（Ｃａｎｉｓｌｕｐｕｓ）ＭＡＰＴ変異体Ｘ２３、配列番号１１、逆相補物、配列番号１２］に見出すことができる。

ＭＡＰＴ遺伝子を内包するヒト染色体のゲノム領域のヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋで入手可能なＧｅｎｏｍｅＲｅｆｅｒｅｎｃｅＣｏｎｓｏｒｔｉｕｍＨｕｍａｎＢｕｉｌｄ３８（ヒトゲノムｂｕｉｌｄ３８またはＧＲＣｈ３８とも称される）に見出すことができる。ＭＡＰＴ遺伝子を内包するヒト第１７染色体のゲノム領域のヌクレオチド配列はまた、例えば、ヒト第１７染色体のヌクレオチド４５８９４３８２～４６０２８３３４に対応する、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＣ＿００００１７．１１に見出すこともできる。ヒトＭＡＰＴ遺伝子のヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＧ＿００７３９８．２に見出すことができる。

ＭＡＰＴ配列のさらなる例は、公共的に利用可能なデータベース、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ、ＯＭＩＭ、およびＵｎｉＰｒｏｔに見出すことができる。

ＭＡＰＴに関する追加の情報は、例えば、遺伝子１００１２８９７７に言及するＮＣＢＩのウェブサイトに見出すことができる。用語ＭＡＰＴは、本明細書において使用される場合、例えば、臨床変異体データベースに提供される変異体、例えば、用語ｍａｐｔに言及するＮＣＢＩ臨床変異体ウェブサイトに提供される変異体を含めた、ＭＡＰＴ遺伝子のバリエーションも指す。

先述のＧｅｎＢａｎｋ受託番号およびＧｅｎｅデータベース番号のそれぞれの内容全体は、本出願の出願日において参照により本明細書に組み込まれる。

本明細書において使用される場合、「標的配列」は、ＭＡＰＴ遺伝子の転写の際に形成されるｍＲＮＡ分子、例えば、一次転写産物のＲＮＡプロセシングの産物であるｍＲＮＡ（例えば、選択的スプライシングの結果生じるＭＡＰＴｍＲＮＡ）。などのヌクレオチド配列における連続する一部分を意味する。一実施形態において、配列の標的部分は、ＭＡＰＴ遺伝子の転写の際に形成されるｍＲＮＡ分子のヌクレオチド配列の一部分またはその付近におけるＲＮＡｉ依存性切断のための基質として機能するのに、少なくとも十分に長いであろう。

標的配列は、約１５～３０個のヌクレオチドの長さである。例えば、標的配列は、約１５～３０ヌクレオチド長、１５～２９、１５～２８、１５～２７、１５～２６、１５～２５、１５～２４、１５～２３、１５～２２、１５～２１、１５～２０、１５～１９、１５～１８、１５～１７、１８～３０、１８～２９、１８～２８、１８～２７、１８～２６、１８～２５、１８～２４、１８～２３、１８～２２、１８～２１、１８～２０、１９～３０、１９～２９、１９～２８、１９～２７、１９～２６、１９～２５、１９～２４、１９～２３、１９～２２、１９～２１、１９～２０、２０～３０、２０～２９、２０～２８、２０～２７、２０～２６、２０～２５、２０～２４、２０～２３、２０～２２、２０～２１、２１～３０、２１～２９、２１～２８、２１～２７、２１～２６、２１～２５、２１～２４、２１～２３、または２１～２２ヌクレオチド長であり得る。ある特定の実施形態において、標的配列は、１９～２３ヌクレオチド長であり、適宜、２１～２３ヌクレオチド長であってもよい。上記に列記した範囲および長さの中間的な範囲および長さも、本開示の一部であることが想到される。

本明細書において使用される場合、用語「配列を含む鎖」は、標準的ヌクレオチド用語体系を使用して言及される配列によって説明されるヌクレオチドの鎖を含むオリゴヌクレオチドを意味する。

「Ｇ」、「Ｃ」、「Ａ」、「Ｔ」、および「Ｕ」はそれぞれ、一般的に、修飾ヌクレオチドまたは非修飾ヌクレオチドとの関連において、それぞれ塩基としての、グアニン、シトシン、アデニン、チミジン、およびウラシルを含むヌクレオチドを表す。しかしながら、用語「リボヌクレオチド」または「ヌクレオチド」は、以下においてより詳述されるような修飾ヌクレオチド、または代理の置換部分（例えば、表１を参照されたい）も意味することができることは理解されよう。当業者は、グアニン、シトシン、アデニン、チミジン、およびウラシルが、そのような置換部分を有するヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドの塩基対合特性を実質的に変更することなく、他の部分で置き換えることができることを十分に意識している。例えば、これらに限定されるわけではないが、その塩基としてイノシンを含むヌクレオチドは、アデニン、シトシン、またはウラシルを含むヌクレオチドと塩基対を形成することができる。したがって、ウラシル、グアニン、またはアデニンを含むヌクレオチドは、本開示において特徴とされるｄｓＲＮＡのヌクレオチド配列において、例えばイノシンを含むヌクレオチドで置換することができる。別の例において、オリゴヌクレオチドのいずれかにおけるアデニンおよびシトシンは、標的ｍＲＮＡとＧ－ＵＷｏｂｂｌｅ塩基対合を形成するために、それぞれ、グアニンおよびウラシルで置換することができる。そのような置換部分を含む配列は、本開示において特徴とされる組成物および方法にとって好適である。

本明細書において相互互換的に使用される、用語「ｉＲＮＡ」、「ＲＮＡｉ剤」、「ｉＲＮＡ剤」、「ＲＮＡ干渉剤」は、本明細書において用語が定義されるＲＮＡを含有し、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）経路を介して、ＲＮＡ転写における標的化された切断を媒介するような、薬剤を意味する。ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、ｍＲＮＡの配列特異的な分解を指示するプロセスである。ＲＮＡｉは、細胞中で、例えば対象、例えば哺乳類対象内の細胞中で、ＭＡＰＴの発現をモジュレートする、例えば阻害する。

一実施形態において、本開示のＲＮＡｉ剤は、標的ＲＮＡの切断を指示するために、標的ＲＮＡ配列、例えば、ＭＡＰＴ標的ｍＲＮＡ配列と相互作用する一本鎖ＲＮＡｉを含む。理論に束縛されることを望むわけではないが、細胞内に導入された長い二本鎖ＲＮＡは、Ｄｉｃｅｒとして知られるＩＩＩ型エンドヌクレアーゼによって、センス鎖およびアンチセンス鎖を含む二本鎖低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）へと分解されると考えられる［Sharp et al. (2001) Genes Dev. 15:485］。リボヌクレアーゼＩＩＩ様酵素であるＤｉｃｅｒは、このｄｓＲＮＡを、特徴的な２つの塩基３’オーバーハングを有する１９～２３塩基対の低分子干渉ＲＮＡへとプロセシングする［Bernstein, et al., (2001) Nature 409:363］。次いで、これらのｓｉＲＮＡは、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）へと導入され、この場合、１つまたは複数のヘリカーゼが、ｓｉＲＮＡ二重鎖を解き、相補的アンチセンス鎖が標的認識を誘導することを可能にする［Nykanen, et al., (2001) Cell 107:309］。適切な標的ｍＲＮＡへの結合の際に、ＲＩＳＣ内の１つまたは複数のエンドヌクレアーゼは、サイレンシングを誘導するために、標的を切断する［Elbashir, et al., (2001) Genes Dev. 15:188］。したがって、一態様では、本開示は、細胞内において生成され、ＲＩＳＣ複合体の形成を促進し、それとにより標的遺伝子、すなわちＭＡＰＴ遺伝子のサイレンシングを行う、一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）（ｓｉＲＮＡ二重鎖のアンチセンス鎖）に関する。したがって、用語「ｓｉＲＮＡ」は、上記において説明されたＲＮＡｉも意味するために本明細書において使用される。

別の実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、標的ｍＲＮＡを阻害するために細胞または有機体に導入された一本鎖ＲＮＡであり得る。一本鎖ＲＮＡｉ剤は、ＲＩＳＣエンドヌクレアーゼであるアルゴノート２に結合し、次いで、標的ｍＲＮＡを切断する。一本鎖ｓｉＲＮＡは、概して、１５～３０ヌクレオチドであり、化学的に修飾される。一本鎖ＲＮＡの設計および試験は、米国特許第８，１０１，３４８号およびLima et al., (2012) Cell 150:883-894に記載されており、そのそれぞれの内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書において説明されるアンチセンスヌクレオチド配列はいずれも、本明細書において説明される一本鎖ｓｉＲＮＡとして、またはLima et al., (2012) Cell 150:883-894に記載される方法によって化学的に修飾される一本鎖ｓｉＲＮＡとして使用され得る。

別の実施形態において、本開示の組成物および方法における使用のための「ＲＮＡｉ剤」は、二本鎖ＲＮＡであり、本明細書において「二本鎖ＲＮＡｉ剤」、「二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）分子」、「ｄｓＲＮＡ剤」、または「ｄｓＲＮＡ」と呼ばれる。用語「ｄｓＲＮＡ」は、標的ＲＮＡ、すなわち、ＭＡＰＴ遺伝子に関して「センス」または「アンチセンス」配向を有すると言われる、２本の逆平行の実質的に相補的な核酸鎖を含む二重鎖構造を有するリボ核酸分子の複合体を意味する。本開示の一部の実施形態において、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）は、本明細書においてＲＮＡ干渉またはＲＮＡｉと呼ばれる転写後遺伝子サイレンシングメカニズムによって、標的ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡの分解を誘導する。

概して、ｄｓＲＮＡ分子は、リボヌクレオチドを含むことができるが、本明細書において詳細に説明されるように、それぞれの鎖または両方の鎖は、１つまたは複数のリボヌクレオチド、例えば、デオキシリボヌクレオチド、修飾ヌクレオチド、も含むことができる。加えて、本明細書において使用される場合、「ＲＮＡｉ剤」は、化学修飾を有するリボヌクレオチドを含み得；ＲＮＡｉ剤は、複数のヌクレオチドにおける実質的な修飾を含み得る。本明細書において使用される場合、用語「修飾ヌクレオチド」は、修飾糖部分、修飾ヌクレオチド間連結、または修飾核酸塩基を独立して有するヌクレオチドを意味する。したがって、修飾ヌクレオチドなる用語は、ヌクレオシド間連結、糖部分、または核酸塩基への、例えば、官能基または原子などの置換、付加、または除去を包含する。本開示の薬剤における使用にとって好適な修飾は、本明細書に開示される修飾または当技術分野で公知の修飾の全てのタイプを包含する。ｓｉＲＮＡタイプの分子において使用される、任意のそのような修飾は、本明細書および特許請求の範囲の目的のために「ＲＮＡｉ剤」によって包含される。

本開示のある特定の実施形態において、ＲＮＡｉ剤内に存在する場合、デオキシヌクレオチドの包含は、修飾ヌクレオチドを構成するとみなすことができる。

二重鎖領域は、ＲＩＳＣ経路による所望の標的ＲＮＡの特異的分解を可能にする任意の長さであり得、ならびに約１５～３６塩基対の長さ、例えば、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、または３６塩基対の長さ、例えば、約１５～３０、１５～２９、１５～２８、１５～２７、１５～２６、１５～２５、１５～２４、１５～２３、１５～２２、１５～２１、１５～２０、１５～１９、１５～１８、１５～１７、１８～３０、１８～２９、１８～２８、１８～２７、１８～２６、１８～２５、１８～２４、１８～２３、１８～２２、１８～２１、１８～２０、１９～３０、１９～２９、１９～２８、１９～２７、１９～２６、１９～２５、１９～２４、１９～２３、１９～２２、１９～２１、１９～２０、２０～３０、２０～２９、２０～２８、２０～２７、２０～２６、２０～２５、２０～２４、２０～２３、２０～２２、２０～２１、２１～３０、２１～２９、２１～２８、２１～２７、２１～２６、２１～２５、２１～２４、２１～２３、または２１～２２の塩基対の長さに及び得る。ある特定の実施形態において、二重鎖領域は、１９～２１塩基対の長さ、例えば、２１塩基対の長さである。上記に列記した範囲および長さの中間的な範囲および長さも、本開示の一部であることが想到される。

二重鎖構造を形成する２つの鎖は、１つのより大きなＲＮＡ分子における異なる一部分であり得るか、またはそれらは、別々のＲＮＡ分子であり得る。２つの鎖が、１つのより大きい分子の一部であり、したがって、１つの鎖の３’端と、二重鎖構造を形成するそれぞれ他の鎖の５’端との間において、割り込まれていないヌクレオチドの鎖によって接続され、その場合、接続するＲＮＡ鎖は、「ヘアピンループ」と呼ばれる。ヘアピンループは、少なくとも１つの無対のヌクレオチドを含むことができる。一部の実施形態において、ヘアピンループは、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも２３またはそれ以上の無対のヌクレオチドまたはｄｓＲＮＡの標的部位を対象としないヌクレオチドを含むことができる。一部の実施形態において、ヘアピンループは、１０以下のヌクレオチドであり得る。一部の実施形態において、ヘアピンループは、８以下の無対のヌクレオチドであり得る。一部の実施形態において、ヘアピンループは、４～１０の無対のヌクレオチドであり得る。一部の実施形態において、ヘアピンループは、４～８の無対のヌクレオチドであり得る。

ｄｓＲＮＡの２つの実質的に相補的な鎖は、別々のＲＮＡ分子に含まれ、それらの分子は、必ずしも必要ではないが、共有結合することができる。２つの鎖が、１つの鎖の３’端と、二重鎖構造を形成するそれぞれ他の鎖の５’端との間において、割り込まれないヌクレオチドの鎖以外の手段によって共有結合される、ある特定の実施形態において、接続構造は、「リンカー」と呼ばれる（本明細書の他の箇所において定義されるある特定の他の構造も「リンカー」と呼ばれ得るが）。ＲＮＡ鎖は、同じまたは異なる数のヌクレオチドを有し得る。塩基対の最大数は、ｄｓＲＮＡの最も短い鎖におけるヌクレオチドの数から二重鎖に存在する全てのオーバーハングを引いた数である。二重鎖構造に加えて、ＲＮＡｉは、１つまたは複数のヌクレオチドオーバーハングを含み得る。ＲＮＡｉ剤の一実施形態において、少なくとも１つの鎖は、少なくとも１ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む。別の実施形態において、少なくとも１つの鎖は、少なくとも２ヌクレオチド、例えば、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む。他の実施形態において、ＲＮＡｉ剤の少なくとも１つの鎖は、少なくとも１ヌクレオチドの５’オーバーハングを含む。ある特定の実施形態において、少なくとも１つの鎖は、少なくとも２ヌクレオチド、例えば、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５ヌクレオチドの５’オーバーハングを含む。さらなる他の実施形態において、ＲＮＡｉ剤の１つの鎖の３’および５’端の両方は、少なくとも１ヌクレオチドのオーバーハングを含む。

一実施形態において、本開示のＲＮＡｉ剤は、ｄｓＲＮＡであり、その各鎖は、独立して、標的ＲＮＡの切断を誘導するために、標的ＲＮＡ配列、例えば、ＭＡＰＴ標的ｍＲＮＡ配列と相互作用する１９～２３ヌクレオチドを含む。

一部の実施形態において、本発明のｉＲＮＡは、標的ＲＮＡ配列、例えば、ＭＡＰＴ標的化ｍＲＮＡ配列と相互作用して標的ＲＮＡの切断を指示する２４～３０ヌクレオチドのｄｓＲＮＡである。

本明細書において使用される場合、用語「ヌクレオチドオーバーハング」は、ＲＮＡｉ剤、例えばｄｓＲＮＡの二重鎖構造から突出する少なくとも１つの無対のヌクレオチドを意味する。例えば、ｄｓＲＮＡの一方の鎖の３’端が、他方の鎖の５’端を越えて延びる場合、その逆の場合も同様に、ヌクレオチドオーバーハングが存在する。ｄｓＲＮＡは、少なくとも１つのヌクレオチドのオーバーハングを含むことができ；あるいは、オーバーハングは、少なくとも２つのヌクレオチド、少なくとも３つのヌクレオチド、少なくとも４つのヌクレオチド、少なくとも５つのヌクレオチド、またはそれ以上のヌクレオチドを含むことができる。ヌクレオチドオーバーハングは、デオキシヌクレオチド／ヌクレオシドなどのヌクレオチド／ヌクレオシドアナログを含み得、またはそれらからなり得る。オーバーハングは、センス鎖、アンチセンス鎖、またはそれらの任意の組合せの上にあり得る。その上、オーバーハングのヌクレオチドは、ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖またはセンス鎖のどちらかの５’端、３’端、またはその両方に存在し得る。

一実施形態において、ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖は、３’端または５’端に１～１０ヌクレオチドオーバーハング、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ヌクレオチドのオーバーハングを有する。一実施形態において、ｄｓＲＮＡのセンス鎖は、３’端または５’端に１～１０ヌクレオチドオーバーハング、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ヌクレオチドのオーバーハングを有する。別の実施形態において、オーバーハングにおけるヌクレオチドの１つまたは複数は、ヌクレオシドチオホスフェートで置き換えられる。

ある特定の実施形態において、ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖は、３’端または５’端に１～１０ヌクレオチドオーバーハング、例えば、０～３、１～３、２～４、２～５、４～１０、５～１０ヌクレオチドオーバーハング、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ヌクレオチドのオーバーハングを有する。一実施形態において、ｄｓＲＮＡのセンス鎖は、３’端または５’端に１～１０ヌクレオチドオーバーハング、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ヌクレオチドのオーバーハングを有する。別の実施形態において、オーバーハングにおけるヌクレオチドの１つまたは複数は、ヌクレオシドチオホスフェートで置き換えられる。

ある特定の実施形態において、センス鎖またはアンチセンス鎖におけるオーバーハングは、１０ヌクレオチドより長い、例えば、１～３０ヌクレオチド長、２～３０ヌクレオチド長、１０～３０ヌクレオチド長、または１０～１５ヌクレオチド長の、伸長された長さを含み得る。ある特定の実施形態において、伸長されたオーバーハングは、二重鎖のセンス鎖にある。ある特定の実施形態において、伸長されたオーバーハングは、二重鎖のセンス鎖の３’端に存在する。ある特定の実施形態において、伸長されたオーバーハングは、二重鎖のセンス鎖の５’端に存在する。ある特定の実施形態において、伸長されたオーバーハングは、二重鎖のアンチセンス鎖にある。ある特定の実施形態において、伸長されたオーバーハングは、二重鎖のアンチセンス鎖の３’端に存在する。ある特定の実施形態において、伸長されたオーバーハングは、二重鎖のアンチセンス鎖の５’端に存在する。ある特定の実施形態において、オーバーハングにおけるヌクレオチドの１つまたは複数は、ヌクレオシドチオホスフェートで置き換えられる。ある特定の実施形態において、オーバーハングは、オーバーハングが、生理学的条件下において安定なヘアピン構造を形成することができるような自己相補性部分を含む。

用語「ブラント（ｂｌｕｎｔ）」または「ブラントエンド（ｂｌｕｎｔｅｎｄｅｄ）」は、ｄｓＲＮＡに関して本明細書において使用される場合、ｄｓＲＮＡの所定の末端において無対ヌクレオチドまたはヌクレオチドアナログが存在しない、すなわち、ヌクレオチドオーバーハングが存在しないことを意味する。ｄｓＲＮＡの片端または両端は、ブラントであり得る。ｄｓＲＮＡの両端がブラントである場合、ｄｓＲＮＡは、ブラントエンドであると言われる。明瞭化のため、「ブラントエンド」ｄｓＲＮＡは、両端がブラントであるｄｓＲＮＡ、すなわち、分子のどちらの末端にもヌクレオチドオーバーハングが存在しないｄｓＲＮＡである。ほとんどの場合、そのような分子は、その全長にわたって二本鎖であろう。

用語「アンチセンス鎖」または「ガイド鎖」は、標的配列、例えば、ＭＡＰＴｍＲＮＡに対して実質的に相補的な領域を含む、ＲＮＡｉ剤、例えば、ｄｓＲＮＡの鎖を意味する。

本明細書において使用される場合、用語「相補性の領域」は、本明細書において定義されるように、配列、例えば、標的配列、例えば、ＭＡＰＴヌクレオチド配列に対して実質的に相補的であるアンチセンス鎖上の領域を意味する。相補性の領域が、標的配列に対して完全には相補的でない場合、そのミスマッチは、分子の内部領域または末端領域においてであり得る。一般に、最も許容できるミスマッチは、末端領域、例えば、ＲＮＡｉ剤の５’末端または３’末端の５、４、３、または２ヌクレオチド以内においてである。一部の実施形態において、本発明の二本鎖ＲＮＡ剤は、アンチセンス鎖におけるヌクレオチドミスマッチを含む。一部の実施形態において、本発明の二本鎖ＲＮＡ剤のアンチセンス鎖は、標的ｍＲＮＡとの４つ以下のミスマッチを含み、例えば、アンチセンス鎖は、標的ｍＲＮＡとの４つ、３つ、２つ、１つ、または０のミスマッチを含む。一部の実施形態において、本発明の二本鎖ＲＮＡ剤のアンチセンス鎖は、センス鎖との４つ以下のミスマッチを含み、例えば、アンチセンス鎖は、センス鎖との４つ、３つ、２つ、１つ、または０のミスマッチを含む。一部の実施形態において、本発明の二本鎖ＲＮＡ剤は、センス鎖におけるヌクレオチドミスマッチを含む。一部の実施形態において、本発明の二本鎖ＲＮＡ剤のセンス鎖は、アンチセンス鎖との４つ以下のミスマッチを含み、例えば、センス鎖は、アンチセンス鎖との４つ、３つ、２つ、１つ、または０のミスマッチを含む。一部の実施形態において、ヌクレオチドミスマッチは、例えば、ｉＲＮＡの３’端から５、４、３ヌクレオチド以内である。別の実施形態において、ヌクレオチドミスマッチは、例えば、ｉＲＮＡ剤の３’末端ヌクレオチドにおいてである。一部の実施形態において、ミスマッチは、シード領域にはない。

したがって、本明細書において説明されるＲＮＡｉ剤は、標的配列に対する１つまたは複数のミスマッチを含むことができる。一実施形態において、本明細書において説明されるＲＮＡｉ剤は、３つ以下のミスマッチ（すなわち、３つ、２つ、１つ、または０のミスマッチ）を含む。一実施形態において、本明細書において説明されるＲＮＡｉ剤は、２つ以下のミスマッチを含む。一実施形態において、本明細書において説明されるＲＮＡｉ剤は、１つ以下のミスマッチを含む。一実施形態において、本明細書において説明されるＲＮＡｉ剤は、０のミスマッチを含む。ある特定の実施形態において、ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖が、標的配列に対してミスマッチを含む場合、ミスマッチは、適宜、相補性の領域の５’端または３’端から最後の５ヌクレオチド以内に制限することもできる。例えば、そのような実施形態において、２３ヌクレオチドのＲＮＡｉ剤の場合、ＭＡＰＴ遺伝子の領域に対して相補的な鎖は、概して、中央の１３ヌクレオチド以内にいかなるミスマッチも含まない。本明細書に記載される方法または当技術分野で公知の方法を使用することにより、標的配列に対するミスマッチを含有するＲＮＡｉ剤が、ＭＡＰＴ遺伝子の発現の阻害において有効であるか否かを判定することができる。例えば、Jackson et al. （Nat. Biotechnol. 2003;21: 635-637）は、ＭＡＰＫ１４ｓｉＲＮＡに対して１２～１８ｎｔのセンス鎖のみで配列同一性を有する小さい遺伝子セットの発現がＭＡＰＫ１４と同様の動態で下方制御された発現プロファイル研究について記載している。同様に、Lin et al., （Nucleic Acids Res. 2005; 33(14): 4527-4535）は、ｑＰＣＲおよびレポーターのアッセイを使用して、ｓｉＲＮＡと標的の間に７ｎｔの相補性があれば標的のｍＲＮＡ分解を引き起こすのに十分であることを示した。とりわけ、ＭＡＰＴ遺伝子における相補性の特定の領域が、集団内での多形配列バリエーションを有することが知られている場合、ＭＡＰＴの発現を阻害するミスマッチを有するＲＮＡｉ剤の有効性を考慮することは重要である。

「ヌクレオチドの実質的に全てが修飾されている」は、本明細書において使用される場合、全部ではないが大部分が修飾されていることであり、例としては、５、４、３、２、または１個以下の修飾されていないヌクレオチドが挙げられる。

用語「センス鎖」または「パッセンジャー鎖」は、本明細書において使用される場合、用語が本明細書において定義されるようなアンチセンス鎖の領域に対して実質的に相補的である領域を含むＲＮＡｉ剤の鎖を意味する。

本明細書において使用される場合、用語「切断領域」は、切断部位に直接隣接して位置される領域を意味する。切断部位は、切断が生じる標的上の部位である。一部の実施形態において、切断領域は、切断部位のどちらかの末端において直接隣接している３つの塩基を含む。一部の実施形態において、切断領域は、切断部位のどちらかの末端において直接隣接している２つの塩基を含む。一部の実施形態において、詳細には、切断部位は、アンチセンス鎖のヌクレオチド１０および１１によって結合される部位において生じ、切断領域は、ヌクレオチド１１、１２、および１３を含む。

本明細書において使用される場合、特に明記されない限り、用語「相補的」は、当業者によって理解されるように、第２のヌクレオチド配列との関連において第１のヌクレオチド配列を説明するために使用される場合、ある特定の条件下において、第２のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドとハイブリダイズして二重鎖を形成する第１のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの能力を意味する。このような条件は、例えば、「ストリンジェントな条件」であってもよく、そのような条件としては、４００ｍＭのＮａＣｌ、４０ｍＭのＰＩＰＥＳｐＨ６．４、１ｍＭのＥＤＴＡ、５０℃または７０℃で１２～１６時間、それに続き洗浄することが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。（例えば、“Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Sambrook, et al. (1989) Cold Spring Harbor Laboratory Pressを参照）。本明細書において使用される場合、「ストリンジェントな条件」または「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」は、その条件下においてアンチセンス化合物はその標的配列にハイブリダイズするが、他の配列には最小限の数である条件を指す。ストリンジェントな条件は配列依存性であり、異なる状況では異なることとなり、アンチセンス化合物が標的配列にハイブリダイズする「ストリンジェントな条件」は、アンチセンス化合物の性質および組成、ならびにそれらが調査されているアッセイによって決定される。他の条件、例えば生物の内部で遭遇し得るような生理的に適切な条件も適用することができる。当業者は、ハイブリダイズしたヌクレオチドの最終的な適用に従って２つの配列の相補性の試験に最も適切な条件のセットを決定することができるであろう。

ＲＮＡｉ剤内、例えば、本明細書において説明されるｄｓＲＮＡ内の相補配列は、一方または両方のヌクレオチド配列の全長にわたっての、第２のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドに対する第１のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの塩基対合を含む。そのような配列は、本明細書において、お互いに関して「完全に相補的」であると呼ぶことができる。しかしながら、本明細書において、第１の配列が、第２の配列に対して「実質的に相補的」であるとみなされる場合、２つの配列は、完全に相補的であり得るか、またはそれらは、３０までの塩基対の二重鎖の場合、ハイブリダイゼーションの際に１つまたは複数、しかし、概して、５、４、３、または２以下のミスマッチの塩基対を形成し得る。一部の実施形態において、本明細書に開示される「実質的に相補的な」配列は、標的ＭＡＰＴ配列の同等の領域に対してその全長にわたり少なくとも約８０％、例えば、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相補的である、連続するヌクレオチド配列を含む。しかしながら、２つのオリゴヌクレオチドが、ハイブリダイゼーションの際に１つまたは複数の一本鎖オーバーハングを形成するように設計される場合、そのようなオーバーハングは、相補性の判定に関して、ミスマッチとはみなされない。例えば、２１ヌクレオチド長の１つのオリゴヌクレオチドと２３ヌクレオチド長の別のオリゴヌクレオチドとを含むｄｓＲＮＡであって、より長いオリゴヌクレオチドが、より短いオリゴヌクレオチドに対して完全に相補的である２１ヌクレオチドの配列を含むようなｄｓＲＮＡは、依然として、本明細書において説明される目的に対して、「完全に相補的」とみなすことができる。

「相補的」配列は、本明細書において使用される場合、ハイブリダイズするそれらの能力に関する上記の要件が満たされる限り、非ワトソン・クリック塩基対、または非天然の修飾ヌクレオチドから形成された塩基対も含み得るか、またはそれらから完全に形成され得る。そのような非ワトソン・クリック塩基対としては、これらに限定されるわけではないが、Ｇ：ＵＷｏｂｂｌｅまたはＨｏｏｇｓｔｅｉｎ塩基対合が挙げられる。

用語「相補的」、「完全に相補的」、および「実質的に相補的」は、本明細書において、それらの使用との関連から理解できるように、ｄｓＲＮＡのセンス鎖とアンチセンス鎖との間、またはＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と標的配列との間における塩基マッチングに関連して使用することができる。

本明細書において使用される場合、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）「の少なくとも一部に対して実質的に相補的」であるポリヌクレオチドは、目的のｍＲＮＡ（例えば、タウをコードするｍＲＮＡ）の連続部分に対して実質的に相補的であるポリヌクレオチドを意味する。例えば、ポリヌクレオチドは、配列が、タウをコードするｍＲＮＡの割り込みされていない部分に対して実質的に相補的である場合、ＭＡＰＴｍＲＮＡの少なくとも一部に対して相補的である。

したがって、一部の実施形態において、本明細書に開示されるアンチセンスポリヌクレオチドは、標的ＭＡＰＴ配列に対して完全に相補的である。他の実施形態において、本明細書に開示されるアンチセンスポリヌクレオチドは、標的ＭＡＰＴ配列に対して実質的に相補的であり、配列番号１、３、５、７、９、および１１のいずれか１つ、または配列番号１、３、５、７、９、および１１のいずれか１つの断片のヌクレオチド配列の同等の領域に対してその全長にわたり少なくとも８０％、例えば、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相補的である、連続するヌクレオチド配列を含む。

一部の実施形態において、本明細書に開示されるアンチセンスポリヌクレオチドは、標的ＭＡＰＴ配列の断片に実質的に相補的であり、その全長にわたり、配列番号１のヌクレオチド９７７～９９７、９８０～１０００、９７３～９９３、９８８～１００８、９８７～１００７、９７２～９９２、９７９～９９９、１００１～１０２１、９７６～９９６、９９４～１０１４、１００２～１０２２、９７８～９９８、９７４～９９４、９８１～１００１、９９５～１０１５、１００３～１０２３、９８９～１００９、１０３１～１０５１、９７５～９９５、９８３～１００３、９９２～１０１２、９８２～１００２、１２３６～１２５６、１０２３～１０４３、９８６～１００６、１０１４～１０３４、１２３７～１２５７、１０３０～１０５０、９９７～１０１７、１００９～１０２９、１０１３～１０３３、１０２７～１０４７、９９８～１０１８、１０２６～１０４６、１０２２～１０４２、１０６５～１０８５、１０２５～１０４５、１０１７～１０３７、１００６～１０２６、１０００～１０２０、９８４～１００４、１０１０～１０３０、１０６４～１０８４、１０１６～１０３６、９９３～１０１３、１０３３～１０５３、９７１～９９１、１００８～１０２８、１０３２～１０５２、１０１５～１０３５、１０６３～１０８３、１０２０～１０４０、９８５～１００５、９９９～１０１９、１００４～１０２４、１０２４～１０４４、１１０４～１１２４、９９０～１０１０、１００５～１０２５、１０２１～１０４１、１０２８～１０４８、９９６～１０１６、１０１１～１０３１、９９１～１０１１、１０１８～１０３８、１２２８～１２４８、１２３０～１２５０、１０２９～１０４９、１０１９～１０３９、１０１２～１０３２、１０６２～１０８２、１２３１～１２５１、１２２９～１２４９、１２２６～１２４６、１２２７～１２４７、９７５～９９７、９７８～１０００、９７１～９９３、９８６～１００８、９８５～１００７、９７７～９９９、９９９～１０２１、９７４～９９６、９９２～１０１４、１０００～１０２２、９７６～９９８、９７２～９９４、９７９～１００１、９９３～１０１５、１００１～１０２３、９８７～１００９、１０２９～１０５１、９７３～９９５、９８１～１００３、９９０～１０１２、９８０～１００２、１２３４～１２５６、１０２１～１０４３、９８４～１００６、１０１２～１０３４、１２３５～１２５７、１０２８～１０５０、９９５～１０１７、１００７～１０２９、１０１１～１０３３、１０２５～１０４７、９９６～１０１８、１０２４～１０４６、１０２０～１０４２、１０６３～１０８５、１０２３～１０４５、１０１５～１０３７、１００４～１０２６、９９８～１０２０、９８２～１００４、１００８～１０３０、１０６２～１０８４、１０１４～１０３６、９９１～１０１３、１０３１～１０５３、１００６～１０２８、１０３０～１０５２、１０１３～１０３５、１０１８～１０４０、９８３～１００５、９９７～１０１９、１００２～１０２４、１０２２～１０４４、９８８～１０１０、１００３～１０２５、１０１９～１０４１、１０２６～１０４８、９９４～１０１６、１００９～１０３１、９８９～１０１１、１０１６～１０３８、１２２６～１２４８、１２２８～１２５０、１０２７～１０４９、１０１７～１０３９、１０１０～１０３２、１２２９～１２５１、１２２７～１２４９、１２２４～１２４６、および１２２５～１２４７の群から選択される配列番号１の断片に、少なくとも８０％相補的な、例えば約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相補的な、連続するヌクレオチド配列を含む。上記の列挙された範囲の間にある範囲も本開示の一部であることが企図される。

一部の実施形態において、本明細書に開示されるアンチセンスポリヌクレオチドは、標的ＭＡＰＴ配列の断片に対して実質的に相補的であり、配列番号１のヌクレオチド５２０～５４０、５２１～５４１、５４６４～５４８４、１８１３～１８３３、２３７８～２３９８、３２４２～３２６２、５４４２～５４６２、１６６５～１６８５、１８１６～１８３６、４６６７～４６８７、３１８３～３２０３、３４２２～３４４２、３３２６～３３４６、２３７９～２３９９、３３３８～３３５８、５４４６～５４６６、５４４０～５４６０、５４１０～５４３０、３２４６～３２６６、３１８１～３２０１、２２９７～２３１７、２３８０～２４００、３３２８～３３４８、５４６０～５４８０、３１８４～３２０４、３４２０～３４４０、３３２１～３３４１、４５２９～４５４９、５４７３～５４９３、５４６６～５４８６、５４３９～５４５９、５３６９～５３８９、４５２８～４５４８、３３３８～３３５８、４６７０～４６９０、３４２１～３４４１、２２９８～２３１８、５４４４～５４６４、５４４８～５４６８、３３３７～３３５７、５４１５～５４３５、３３４０～３３６０、３３１８～３３３８、５２０７～５２２７、１８１２～１８３２、５４０９～５４２９、４６２９～４６４９、４６２８～４６４８、３３４４～３３６４、１８０９～１８２９、５４４３～５４６３、３２４４～３２６４、３１８０～３２００、３３２７～３３４７、４５２２～４５４２、２６６７～２６８７、４６６８～４６８８、４０８３～４１０３、５４４５～５４６５、２２９４～２３１４、４８４２～４８６２、５４３８～５４５８、４０８４～４１０４、２６６８～２６８８、４５２６～４５４６、４５２１～４５４１、５４５９～５４７９、３１８８～３２０８、５４６７～５４８７、５４４１～５４６１、４５１９～４５３９、４６６９～４６８９、５４５０～５４７０、３３４１～３３６１、５４５８～５４７８、４５２０～４５４０、４３２９～４３４９、４５２５～４５４５、４５２４～４５４４、５２０８～５２２８、５３０５～５３２５、４４７５～４４９５、２６６６～２６８６、４０８６～４１０６、４５２３～４５４３、４５２７～４５４７、４０８５～４１０５、５２５９～５２７９、５１８～５４０、５１９～５４１、５４６２～５４８４、１８１１～１８３３、２３７６～２３９８、３２４０～３２６２、５４４０～５４６２、１６６３～１６８５、１８１４～１８３６、４６６５～４６８７、３１８１～３２０３、３４２０～３４４２、３３２４～３３４６、２３７７～２３９９、３３３６～３３５８、５４４４～５４６６、５４３８～５４６０、５４０８～５４３０、３２４４～３２６６、３１７９～３２０１、２２９５～２３１７、２３７８～２４００、３３２６～３３４８、５４５８～５４８０、３１８２～３２０４、３４１８～３４４０、３３１９～３３４１、４５２７～４５４９、５４７１～５４９３、５４６４～５４８６、５４３７～５４５９、５３６７～５３８９、４５２６～４５４８、４６６８～４６９０、３４１９～３４４１、２２９６～２３１８、５４４２～５４６４、５４４６～５４６８、３３３５～３３５７、５４１３～５４３５、３３３８～３３６０、３３１６～３３３８、１８１０～１８３２、５４０７～５４２９、４６２７～４６４９、４６２６～４６４８、３３４２～３３６４、１８０７～１８２９、５４４１～５４６３、３２４２～３２６４、３１７８～３２００、３３２５～３３４７、４５２０～４５４２、２６６５～２６８７、４６６６～４６８８、４０８１～４１０３、５４４３～５４６５、２２９２～２３１４、４８４０～４８６２、５４３６～５４５８、４０８２～４１０４、２６６６～２６８８、４５２４～４５４６、４５１９～４５４１、５４５７～５４７９、３１８６～３２０８、５４６５～５４８７、５４３９～５４６１、４５１７～４５３９、４６６７～４６８９、５４４８～５４７０、３３３９～３３６１、５４５６～５４７８、４５１８～４５４０、４３２７～４３４９、４５２３～４５４５、４５２２～４５４４、５２０６～５２２８、５３０３～５３２５、４４７３～４４９５、２６６４～２６８６、４０８４～４１０６、４５２１～４５４３、４５２５～４５４７、４０８３～４１０５、および５２５７～５２７９の群から選択される配列番号１の断片に対してその全長にわたり少なくとも８０％、例えば、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相補的である、連続するヌクレオチド配列を含む。上記の列挙された範囲の間にある範囲も本開示の一部であることが企図される。

一部の実施形態において、本明細書に開示されるアンチセンスポリヌクレオチドは、標的ＭＡＰＴ配列の断片に対して実質的に相補的であり、配列番号１のヌクレオチド５２０～５４０、５２４～５４４、５２１～５４１、５２０７～５２２７、４６７０～４６９０、３４２０～３４４０、３３２８～３３４８、１６６５～１６８５、５４０９～５４２９、５４３９～５４５９、４５２７～４５４７、５４４１～５４６１、５４１０～５４３０、５４４６～５４６６、５４６７～５４８７、５３６９～５３８９、３４２１～３４４１、５４４２～５４６２、２３７９～２３９９、４７１５～４７３５、５４６４～５４８４、３２４４～３２６４、５４４０～５４６０、１８１２～１８３２、３１８１～３２０１、３３２７～３３４７、５４４８～５４６８、４５２９～４５４９、２３７８～２３９８、４６６８～４６８８、５４３８～５４５８、５４６５～５４８５、３３２６～３３４６、３１８０～３２００、５４５８～５４７８、３３２１～３３４１、３３３８～３３５８、３１８８～３２０８、２２９４～２３１４、４６２８～４６４８、５４１５～５４３５、５４５９～５４７９、３１８４～３２０４、２３７５～２３９５、３４２２～３４４２、３２４６～３２６６、３３３７～３３５７、２２９７～２３１７、４５２８～４５４８、３１８３～３２０３、５４５０～５４７０、５４４４～５４６４、５４６６～５４８６、２３８０～２４００、３２４２～３２６２、４５２０～４５４０、５４４５～５４６５、３３１８～３３３８、１８１６～１８３６、５４４３～５４６３、５４６０～５４８０、４８４２～４８６２、３３３８～３３５８、１８０９～１８２９、３４２３～３４４３、４７２０～４７４０、５２５９～５２７９、４０８４～４１０４、１８１３～１８３３、４５２２～４５４２、４８２２～４８４２、４５２３～４５４３、２２９８～２３１８、４５２１～４５４１、４０８６～４１０６、４５２４～４５４４、２６６８～２６８８、４６６７～４６８７、４０８３～４１０３、４０８５～４１０５、４６２９～４６４９、４３２９～４３４９、２６６７～２６８７、４４７５～４４９５、３３４４～３３６４、４６６９～４６８９、３３４０～３３６０、４５１９～４５３９、２６６６～２６８６、５２０８～５２２８、４５２６～４５４６、４５２５～４５４５、３３４１～３３６１、５１８～５４０、５２２～５４４、５１９～５４１、４６６８～４６９０、３４１８～３４４０、３３２６～３３４８、１６６３～１６８５、５４０７～５４２９、５４３７～５４５９、４５２５～４５４７、５４３９～５４６１、５４０８～５４３０、５４４４～５４６６、５４６５～５４８７、５３６７～５３８９、３４１９～３４４１、５４４０～５４６２、２３７７～２３９９、４７１３～４７３５、５４６２～５４８４、３２４２～３２６４、５４３８～５４６０、１８１０～１８３２、３１７９～３２０１、３３２５～３３４７、５４４６～５４６８、４５２７～４５４９、２３７６～２３９８、４６６６～４６８８、５４３６～５４５８、５４６３～５４８５、３３２４～３３４６、３１７８～３２００、５４５６～５４７８、３３１９～３３４１、３３３６～３３５８、３１８６～３２０８、２２９２～２３１４、４６２６～４６４８、５４１３～５４３５、５４５７～５４７９、３１８２～３２０４、２３７３～２３９５、３４２０～３４４２、３２４４～３２６６、３３３５～３３５７、２２９５～２３１７、４５２６～４５４８、３１８１～３２０３、５４４８～５４７０、５４４２～５４６４、５４６４～５４８６、２３７８～２４００、３２４０～３２６２、４５１８～４５４０、５４４３～５４６５、３３１６～３３３８、１８１４～１８３６、５４４１～５４６３、５４５８～５４８０、４８４０～４８６２、１８０７～１８２９、３４２１～３４４３、４７１８～４７４０、５２５７～５２７９、４０８２～４１０４、１８１１～１８３３、４５２０～４５４２、４８２０～４８４２、４５２１～４５４３、２２９６～２３１８、４５１９～４５４１、４０８４～４１０６、４５２２～４５４４、２６６６～２６８８、４６６５～４６８７、４０８１～４１０３、４０８３～４１０５、４６２７～４６４９、４３２７～４３４９、２６６５～２６８７、４４７３～４４９５、３３４２～３３６４、４６６７～４６８９、３３３８～３３６０、４５１７～４５３９、２６６４～２６８６、５２０６～５２２８、４５２４～４５４６、４５２３～４５４５、および３３３９～３３６１の群から選択される配列番号１の断片に対してその全長にわたり少なくとも８０％、例えば、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相補的である、連続するヌクレオチド配列を含む。上記の列挙された範囲の間にある範囲も本開示の一部であることが企図される。

一部の実施形態において、本明細書に開示されるアンチセンスポリヌクレオチドは、標的ＭＡＰＴ配列の断片に実質的に相補的であり、その全長にわたり、配列番号１のヌクレオチド９７７～９９７、９８０～１０００、９７３～９９３、９８８～１００８、９８７～１００７、９７２～９９２、９７９～９９９、１００１～１０２１、９７６～９９６、９９４～１０１４、１００２～１０２２、９７８～９９８、９７４～９９４、５２０～５４０、５２１～５４１、５４６４～５４８４、１８１３～１８３３、２３７８～２３９８、３２４２～３２６２、５４４２～５４６２、１６６５～１６８５、５２４～５４４、５２０７～５２２７、４６７０～４６９０、３４２０～３４４０、３３２８～３３４８、５４０９～５４２９、５４３９～５４５９、４５２７～４５４７、５４４１～５４６１、５４１０～５４３０、および５４４６～５４６６の群から選択される配列番号１の断片に、少なくとも８０％相補的な、例えば約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相補的な、連続するヌクレオチド配列を含む。上記の列挙された範囲の間にある範囲も本開示の一部であることが企図される。

一部の実施形態において、本明細書に開示されるアンチセンスポリヌクレオチドは、標的ＭＡＰＴ配列の断片に対して実質的に相補的であり、配列番号３のヌクレオチド５１２～５３２、５１３～５３３、５１４～５３４、５１５～５３５、５１６～５３６、５１７～５３７、５１８～５３８、５１９～５３９、５２０～５４０、１０６３～１０８３、１０６７～１０８７、１０７２～１０９２、１０７４～１０９４、１０７５～１０９５、１１２５～１１４５、１１２６～１１４６、１１２７～１１４７、１１２９～１１４９、１１７０～１１９０、１３９５～１４１５、１９０５～１９２５、１９０６～１９２６、１９０９～１９２９、１９１１～１９３１、１９１２～１９３２、１９１３～１９３３、１９１４～１９３４、１９１５～１９３５、１９１６～１９３６、１９１９～１９３９、１９５１～１９７１、１９５４～１９７４、１９５８～１９７８、２３８７～２４０７、２４０９～２４２９、２４１０～２４３０、２４６９～２４８９、２４７１～２４９１、２４７２～２４９２、２４７６～２４９６、２４７７～２４９７、２４７８～２４９８、２４８０～２５００、２４８１～２５０１、２４８２～２５０２、２４８４～２５０４、２７６２～２７８２、２７６４～２７８４、２７６６～２７８６、２７６７～２７８７、２７６８～２７８８、２７６９～２７８９、２８１９～２８３９、２８２１～２８４１、２８２８～２８４８、２９４３～２９６３、２９４４～２９６４、２９４６～２９６６、２９４７～２９６７、３２５２～３２７２、３２７７～３２９７、３２８０～３３００、３２８１～３３０１、３２８２～３３０２、３２８４～３３０４、３２８５～３３０５、３２８６～３３０６、３３３１～３３５１、３３３２～３３５２、３３３３～３３５３、３３３４～３３５４、３３３５～３３５５、３３３６～３３５６、３３３８～３３５８、３３４０～３３６０、３３４２～３３６２、３３４３～３３６３、３３４４～３３６４、３３４５～３３６５、３３４６～３３６６、３３４７～３３６７、３３４９～３３６９、３３５０～３３７０、３３５３～３３７３、３３６４～３３８４、３３６６～３３８６、３３６７～３３８７、３３６８～３３８８、３３６９～３３８９、３３７０～３３９０、３４１２～３４３２、３４１４～３４３４、３４１５～３４３５、３４１６～３４３６、３４１７～３４３７、３４１９～３４３９、３４２０～３４４０、３４２４～３４４４、３４２５～３４４５、３４２６～３４４６、３４２７～３４４７、３４２８～３４４８、３４２９～３４４９、３４３０～３４５０、３４３１～３４５１、３４３４～３４５４、４１３２～４１５２、４１３４～４１５４、４１７９～４１９９、４１８２～４２０２、４１８４～４２０４、４３９５～４４１５、４４２５～４４４５、４４２６～４４４６、４４２９～４４４９、４４６９～４４８９、４４７０～４４９０、４４７１～４４９１、４４７２～４４９２、４４７３～４４９３、４４７４～４４９４、４５６９～４５８９、４５７１～４５９１、４５７２～４５９２、４５９６～４６１６、４６２３～４６４３、４７２１～４７４１、４７２２～４７４２、４７２５～４７４５、４７２６～４７４６、４７６６～４７８６、４７６７～４７８７、４７６８～４７８８、４７６９～４７８９、４７７０～４７９０、４７７９～４７９９、４８０５～４８２５、４８０６～４８２６、４８０７～４８２７、４８０８～４８２８、４８０９～４８２９、４８１２～４８３２、４８１３～４８３３、４８１４～４８３４、４９３６～４９５６、５０７２～５０９２、５０７３～５０９３、５３４５～５３６５、５３４６～５３６６、５３４９～５３６９、５３５０～５３７０、５３５１～５３７１、５４６０～５４８０、５４６１～５４８１、５４６３～５４８３、５４６５～５４８５、５４６７～５４８７、５４６８～５４８８、５４６９～５４８９、５４７０～５４９０、５４７１～５４９１、５５０５～５５２５、５５０６～５５２６、５５０７～５５２７、５５０８～５５２８、５５０９～５５２９、５５１１～５５３１、５５１３～５５３３、５５１４～５５３４、５５４１～５５６１、５５４４～５５６４、５５４６～５５６６、５５４７～５５６７、５５４８～５５６８、５５５０～５５７０、５５５１～５５７１、５５７４～５５９４、５５７６～５５９６、５６１４～５６３４、５２１～５４１、５２２～５４２、５２３～５４３、５２４～５４４、５２５～５４５、５２６～５４６、５２７～５４７、５２８～５４８、５２９～５４９、５３０～５５０、５３１～５５１、５３２～５５２、５３３～５５３、５３４～５５４、５３５～５５５、５３６～５５６、１０３４～１０５４、１０３５～１０５５、１０３６～１０５６、１０３７～１０５７、１０３８～１０５８、１０３９～１０５９、１０４０～１０６０、１０４１～１０６１、１０４２～１０６２、１０４３～１０６３、１０４４～１０６４、１０４５～１０６５、１０４６～１０６６、１０４７～１０６７、１０４８～１０６８、１０４９～１０６９、１０５０～１０７０、１０５１～１０７１、１０５２～１０７２、１０５３～１０７３、１０５４～１０７４、１０６２～１０８２、１０６４～１０８４、１０６５～１０８５、１０６６～１０８６、１０６８～１０８８、１０６９～１０８９、１０７０～１０９０、１０７１～１０９１、１０７３～１０９３、１０７６～１０９６、１０７７～１０９７、１０７８～１０９８、１０７９～１０９９、１０８０～１１００、１０８１～１１０１、１０８２～１１０２、１１２８～１１４８、１１２９～１１４９、１１３０～１１５０、１１３１～１１５１、１１３２～１１５２、１１３３～１１５３、１１３４～１１５４、１１３５～１１５５、１１３６～１１５６、１１３７～１１５７、１１３８～１１５８、１１３９～１１５９、１１４０～１１６０、１１４１～１１６１、１１４２～１１６２、１１４３～１１６３、１１４４～１１６４、１１４５～１１６５、１１４６～１１６６、１１４７～１１６７、１１４８～１１６８、９７５～９９５、９７６～９９６、９７７～９９７、９７８～９９８、９７９～９９９、９８０～１０００、９８１～１００１、９８２～１００２、９８３～１００３、９８４～１００４、９８５～１００５、９８６～１００６、９８７～１００７、９８８～１００８、９８９～１００９、９９０～１０１０、９９１～１０１１、９９２～１０１２、９９３～１０１３、９９４～１０１４、９９５～１０１５、９９６～１０１６、９９７～１０１７、９９８～１０１８、９９９～１０１９、１０００～１０２０、１００１～１０２１、１００２～１０２２、１００３～１０２３、１００４～１０２４、１００５～１０２５、１００６～１０２６、１００７～１０２７、１００８～１０２８、１００９～１０２９、１０１０～１０３０、１０１１～１０３１、１０１２～１０３２、１０１３～１０３３、１０１４～１０３４、１０１５～１０３５、１０１６～１０３６、１０１７～１０３７、１０１８～１０３８、１０１９～１０３９、１０２０～１０４０、１０２１～１０４１、１０２２～１０４２、１０２３～１０４３、１０２４～１０４４、１０２５～１０４５、１０２６～１０４６、１０２７～１０４７、１０２８～１０４８、１０２９～１０４９、１０３０～１０５０、１０３１～１０５１、１０３２～１０５２、１０３３～１０５３、１０３４～１０５４、１０３５～１０５５、１０３６～１０５６、１０３７～１０５７、１０３８～１０５８、１０３９～１０５９、１０４０～１０６０、１０４１～１０６１、１０４２～１０６２、１０４３～１０６３、および１０４５～１０６５の群から選択される配列番号３の断片に対してその全長にわたり少なくとも８０％、例えば、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相補的である、連続するヌクレオチド配列を含む。上記の列挙された範囲の間にある範囲も本開示の一部であることが企図される。

一部の実施形態において、本明細書に開示されるアンチセンスポリヌクレオチドは、標的ＭＡＰＴ配列の断片に実質的に相補的であり、その全長にわたり、配列番号５のヌクレオチド１０６５～１０８５、１１９５～１２１５、１０６６～１０８６、１０６８～１０８８、７０５～７２５、１０６７～１０８７、４５２０～４５４０、３３４１～３３６１、４５１５～４５３５、５２８４～５３０４、５２８５～５３０５、３４４～３６４、５２８３～５３０３、５３５４～５３７４、２４５９～２４７９、１０６１～１０８１、７０６～７２６、９７２～９９２、４５６４～４５８４、９９５～１０１５、４５４６～４５６６、９６８～９８８、１１２７～１１４７、４５３４～４５５４、１５８～１７８、４４９４～４５１４、１６９１～１７１１、３５４４～３５６４、１９８～２１８、９７９～９９９、４５４８～４５６８、４５５１～４５７１、５４３～５６３、７１５～７３５、５４２～５６２、３５２～３７２、３６２～３８２、４５５６～４５７６、４５４７～４５６７、４５４２～４５６２、４５５８～４５７８、４５４９～４５６９、５０７４～５０９４、４５５２～４５７２、５０７３～５０９３、５０７６～５０９６、４５５０～４５７０、および２７５３～２７７３の群から選択される配列番号５の断片に、少なくとも８０％相補的な、例えば約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相補的な、連続するヌクレオチド配列を含む。上記の列挙された範囲の間にある範囲も本開示の一部であることが企図される。

他の実施形態において、本明細書に開示されるアンチセンスポリヌクレオチドは、標的ＭＡＰＴ配列に対して実質的に相補的であり、表３～８、１２、１３、および１６～２８のいずれか１つのいずれか１におけるセンス鎖ヌクレオチド配列のいずれか１つ、または表３～８、１２、１３、および１６～２８のいずれか１つにおけるセンス鎖ヌクレオチド配列のいずれか１つの断片に対してその全長にわたって少なくとも８０％、例えば、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または１００％相補的である、連続するヌクレオチド配列を含む。

一実施形態において、本開示のＲＮＡｉ剤は、標的ＭＡＰＴ配列と同じであるアンチセンスポリヌクレオチドに対して実質的に相補的であるセンス鎖を含み、センス鎖ポリヌクレオチドは、配列番号１、３、５、７、９および１１、または配列番号１、３、５、７、９および１１のいずれか１つの断片の同等の領域に対してその全長にわたって少なくとも約８０％、例えば、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または１００％相補的である、連続するヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態において、本発明のｉＲＮＡは、標的ＭＡＰＴ配列に対して相補的であるアンチセンスポリヌクレオチドに対して実質的に相補的であるセンス鎖を含み、センス鎖ポリヌクレオチドは、表３～８、１２、１３、および１６～２８のいずれか１つのいずれか１つにおけるアンチセンス鎖ヌクレオチド配列のいずれか１つ、または表３～８、および１６～２８のいずれか１つにおけるアンチセンス鎖ヌクレオチド配列のいずれか１つの断片に対してその全長にわたって少なくとも８０％、例えば、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または１００％相補的である、連続するヌクレオチド配列を含む。

特定の実施形態において、センスおよびアンチセンス鎖は、二重鎖ＡＤ－５２３７９９．１、ＡＤ－５２３８０２．１、ＡＤ－５２３７９５．１、ＡＤ－５２３８１０．１、ＡＤ－５２３８０９．１、ＡＤ－１０１９３３１．１、ＡＤ－５２３８０１．１、ＡＤ－５２３８２３．１、ＡＤ－５２３７９８．１、ＡＤ－５２３８１６．１、ＡＤ－５２３８２４．１、ＡＤ－５２３８００．１、ＡＤ－５２３７９６．１、ＡＤ－５２３８０３．１、ＡＤ－５２３８１７．１、ＡＤ－５２３８２５．１、ＡＤ－５２３８１１．１、ＡＤ－５２３８５４．１、ＡＤ－５２３７９７．１、ＡＤ－５２３８０５．１、ＡＤ－５２３８１４．１、ＡＤ－５２３８０４．１、ＡＤ－１０１９３５６．１、ＡＤ－５２３８４６．１、ＡＤ－５２３８０８．１、ＡＤ－５２３８３５．１、ＡＤ－１０１９３５７．１、ＡＤ－５２３８５３．１、ＡＤ－５２３８１９．１、ＡＤ－５２３８３０．１、ＡＤ－５２３８３４．１、ＡＤ－５２３８５０．１、ＡＤ－５２３８２０．１、ＡＤ－５２３８４９．１、ＡＤ－５２３８４５．１、ＡＤ－３９３７５８．３、ＡＤ－５２３８４８．１、ＡＤ－５２３８４０．１、ＡＤ－５２３８２８．１、ＡＤ－５２３８２２．１、ＡＤ－５２３８０６．１、ＡＤ－５２３８３１．１、ＡＤ－３９３７５７．１、ＡＤ－５２３８３９．１、ＡＤ－５２３８１５．１、ＡＤ－５２３８５６．１、ＡＤ－１０１９３３０．１、ＡＤ－５２３８２９．１、ＡＤ－５２３８５５．１、ＡＤ－５２３８３６．１、ＡＤ－１０１９３２９．１、ＡＤ－５２３８４３．１、ＡＤ－５２３８０７．１、ＡＤ－５２３８２１．１、ＡＤ－５２３８２６．１、ＡＤ－５２３８４７．１、ＡＤ－５２３７８６．１、ＡＤ－５２３８１２．１、ＡＤ－５２３８２７．１、ＡＤ－５２３８４４．１、ＡＤ－５２３８５１．１、ＡＤ－５２３８１８．１、ＡＤ－５２３８３２．１、ＡＤ－５２３８１３．１、ＡＤ－５２３８４１．１、ＡＤ－１０１９３５２．１、ＡＤ－１０１９３５４．１、ＡＤ－５２３８５２．１、ＡＤ－５２３８４２．１、ＡＤ－５２３８３３．１、ＡＤ－１０１９３２８．１、ＡＤ－１０１９３５５．１、ＡＤ－１０１９３５３．１、ＡＤ－１０１９３５０．１、およびＡＤ－１０１９３５１．１のいずれか１つから選択される。特定の実施形態において、センスおよびアンチセンス鎖は、二重鎖ＡＤ－５３５０９４．１、ＡＤ－５３５０９４．１、ＡＤ－５３５０９５．１、ＡＤ－５３８６４７．１、ＡＤ－５３５９２２．１、ＡＤ－５３６３１７．１、ＡＤ－５３６９１１．１、ＡＤ－５３８６２６．１およびＡＤ－５３５８６４．１のいずれか１つから選択される。

特定の実施形態において、センスおよびアンチセンス鎖は、二重鎖ＡＤ－５３５０９４．１、ＡＤ－５３５０９４．１、ＡＤ－５３５０９５．１、ＡＤ－５３８６４７．１、ＡＤ－５３５９２２．１、ＡＤ－５３６３１７．１、ＡＤ－５３６９１１．１、ＡＤ－５３８６２６．１、ＡＤ－５３５８６４．１、ＡＤ－５３５９２５．１、ＡＤ－５３８０１２．１、ＡＤ－５３６８７２．１、ＡＤ－５３６９５４．１、ＡＤ－５３６９６４．１、ＡＤ－５３６３１８．１、ＡＤ－５３６９７６．１、ＡＤ－５３８６３０．１、ＡＤ－５３８６２４．１、ＡＤ－５３８５９４．１、ＡＤ－５３６９１５．１、ＡＤ－５３６８７０．１、ＡＤ－５３６２３６．１、ＡＤ－５３６３１９．１、ＡＤ－５３６９６６．１、ＡＤ－５３８６４３．１、ＡＤ－５３６８７３．１、ＡＤ－５３６９５２．１、ＡＤ－５３６９５９．１、ＡＤ－５３７９２１．１、ＡＤ－５３８６５２．１、ＡＤ－５３８６４９．１、ＡＤ－５３８６２３．１、ＡＤ－５３８５７３．１、ＡＤ－５３７９２０．１、ＡＤ－５３６９３９．１、ＡＤ－５３８０１５．１、ＡＤ－５３６９５３．１、ＡＤ－５３６２３７．１、ＡＤ－５３８６２８．１、ＡＤ－５３８６３２．１、ＡＤ－５３６９７５．１、ＡＤ－５３８５９９．１、ＡＤ－５３６９７８．１、ＡＤ－５３６９５６．１、ＡＤ－５３８５７１．１、ＡＤ－５３５９２１．１、ＡＤ－５３８５９３．１、ＡＤ－５３７９７４．１、ＡＤ－５３７９７３．１、ＡＤ－５３６９８２．１、ＡＤ－５３５９１８．１、ＡＤ－５３８６２７．１、ＡＤ－５３６９１３．１、ＡＤ－５３６８６９．１、ＡＤ－５３６９６５．１、ＡＤ－５３７９１４．１、ＡＤ－５３６５０４．１、ＡＤ－５３８０１３．１、ＡＤ－５３７５７９．１、ＡＤ－５３８６２９．１、ＡＤ－５３６２３３．１、ＡＤ－５３８１４１．１、ＡＤ－５３８６２２．１、ＡＤ－５３７５８０．１、ＡＤ－５３６５０５．１、ＡＤ－５３７９１８．１、ＡＤ－５３７９１３．１、ＡＤ－５３８６４２．１、ＡＤ－５３６８７７．１、ＡＤ－５３８６５０．１、ＡＤ－５３８６２５．１、ＡＤ－５３７９１１．１、ＡＤ－５３８０１４．１、ＡＤ－５３８６３４．１、ＡＤ－５３６９７９．１、ＡＤ－５３８６４１．１、ＡＤ－５３７９１２．１、ＡＤ－５３７７６１．１、ＡＤ－５３７９１７．１、ＡＤ－５３７９１６．１、ＡＤ－５３８４３２．１、ＡＤ－５３８５２９．１、ＡＤ－５３７８６７．１、ＡＤ－５３６５０３．１、ＡＤ－５３７５８２．１、ＡＤ－５３７９１５．１、ＡＤ－５３７９１９．１、ＡＤ－５３７５８１．１、およびＡＤ－５３８４８３．１のいずれか１つから選択される。特定の実施形態において、センスおよびアンチセンス鎖は、二重鎖ＡＤ－５３５０９４．１、ＡＤ－５３５０９４．１、ＡＤ－５３５０９５．１、ＡＤ－５３８６４７．１、ＡＤ－５３５９２２．１、ＡＤ－５３６３１７．１、ＡＤ－５３６９１１．１、ＡＤ－５３８６２６．１、およびＡＤ－５３５８６４．１のいずれか１つから選択される。

特定の実施形態において、センスおよびアンチセンス鎖は、二重鎖ＡＤ－５２３５６１．１、ＡＤ－５２３５６５．１、ＡＤ－５２３５６２．１、ＡＤ－５２６９１４．１、ＡＤ－５２６３９４．１、ＡＤ－３９５４５２．１、ＡＤ－５２５３４３．１、ＡＤ－５２４２７４．１、ＡＤ－５２６９５６．１、ＡＤ－５２６９８６．１、ＡＤ－５２６２９６．１、ＡＤ－５２６９８８．１、ＡＤ－５２６９５７．１、ＡＤ－５２６９９３．１、ＡＤ－５２７０１３．１、ＡＤ－５２６９３６．１、ＡＤ－３９５４５３．１、ＡＤ－５２６９８９．１、ＡＤ－５２４７１９．１、ＡＤ－５２６４２３．１、ＡＤ－５２７０１０．１、ＡＤ－５２５３０５．１、ＡＤ－５２６９８７．１、ＡＤ－５２４３３１．１、ＡＤ－５２５２６６．１、ＡＤ－５２５３４２．１、ＡＤ－５２６９９５．１、ＡＤ－５２６２９８．１、ＡＤ－５２４７１８．１、ＡＤ－５２６３９２．１、ＡＤ－５２６９８５．１、ＡＤ－５２７０１１．１、ＡＤ－５２５３４１．１、ＡＤ－５２５２６５．１、ＡＤ－５２７００４．１、ＡＤ－５２５３３６．１、ＡＤ－５２５３５３．１、ＡＤ－５２５２７３．１、ＡＤ－５２４６３８．１、ＡＤ－５２６３５０．１、ＡＤ－５２６９６２．１、ＡＤ－５２７００５．１、ＡＤ－５２５２６９．１、ＡＤ－５２４７１５．１、ＡＤ－３９５４５４．１、ＡＤ－５２５３０７．１、ＡＤ－５２５３５２．１、ＡＤ－５２４６４１．１、ＡＤ－５２６２９７．１、ＡＤ－５２５２６８．１、ＡＤ－５２６９９７．１、ＡＤ－５２６９９１．１、ＡＤ－５２７０１２．１、ＡＤ－５２４７２０．１、ＡＤ－５２５３０３．１、ＡＤ－５２６２８９．１、ＡＤ－５２６９９２．１、ＡＤ－５２５３３３．１、ＡＤ－５２４３３５．１、ＡＤ－５２６９９０．１、ＡＤ－５２７００６．１、ＡＤ－５２６５０５．１、ＡＤ－５２５３０９．１、ＡＤ－５２４３２８．１、ＡＤ－３９５４５５．１、ＡＤ－５２６４２８．１、ＡＤ－５２６８４７．１、ＡＤ－５２５９５７．１、ＡＤ－５２４３３２．１、ＡＤ－５２６２９１．１、ＡＤ－５２６４８５．１、ＡＤ－５２６２９２．１、ＡＤ－５２４６４２．１、ＡＤ－５２６２９０．１、ＡＤ－５２５９５９．１、ＡＤ－５２６２９３．１、ＡＤ－５２４８９９．１、ＡＤ－５２６３９１．１、ＡＤ－５２５９５６．１、ＡＤ－５２５９５８．１、ＡＤ－５２６３５１．１、ＡＤ－５２６１３８．１、ＡＤ－５２４８９８．１、ＡＤ－５２６２４４．１、ＡＤ－５２５３５９．１、ＡＤ－５２６３９３．１、ＡＤ－５２５３５５．１、ＡＤ－５２６２８８．１、ＡＤ－５２４８９７．１、ＡＤ－５２６７９６．１、ＡＤ－５２６２９５．１、ＡＤ－５２６２９４．１、およびＡＤ－５２５３５６．１のいずれか１つから選択される。特定の実施形態において、センスおよびアンチセンス鎖は、二重鎖ＡＤ－５２３５６１．１、ＡＤ－５２３５６５．１、ＡＤ－５２３５６２．１、ＡＤ－５２６９１４．１、ＡＤ－５２６３９４．１、ＡＤ－３９５４５２．１、ＡＤ－５２５３４３．１、ＡＤ－５２４２７４．１、ＡＤ－５２６９５６．１、ＡＤ－５２６９８６．１、ＡＤ－５２６２９６．１、ＡＤ－５２６９８８．１、ＡＤ－５２６９５７．１、およびＡＤ－５２６９９３．１のいずれか１つから選択される。

特定の実施形態において、センスおよびアンチセンス鎖は、二重鎖ＡＤ－３９３７５８．１、ＡＤ－３９３８８８．１、ＡＤ－３９３７５９．１、ＡＤ－３９３７６１．１、ＡＤ－３９３４９５．１、ＡＤ－３９３７６０．１、ＡＤ－３９６４２５．１、ＡＤ－３９５４４１．１、ＡＤ－３９６４２０．１、ＡＤ－３９７１０３．１、ＡＤ－３９７１０４．１、ＡＤ－３９３２３９．１、ＡＤ－３９７１０２．１、ＡＤ－３９７１６７．１、ＡＤ－３９４７９１．１、ＡＤ－３９３７５４．１、ＡＤ－３９３４９６．１、ＡＤ－３９３６６７．１、ＡＤ－３９６４６７．１、ＡＤ－３９３６９０．１、ＡＤ－３９６４４９．１、ＡＤ－３９３６６３．１、ＡＤ－３９３８２０．１、ＡＤ－３９６４３７．１、ＡＤ－３９３０８４．１、ＡＤ－３９６４０１．１、ＡＤ－３９４２９６．１、ＡＤ－３９５５７４．１、ＡＤ－３９３１２４．１、ＡＤ－３９３６７４．１、ＡＤ－３９６４５１．１、ＡＤ－３９６４５４．１、ＡＤ－３９３３７６．１、ＡＤ－３９３５０５．１、ＡＤ－３９３３７５．１、ＡＤ－３９３２４７．１、ＡＤ－３９３２５７．１、ＡＤ－３９６４５９．１、ＡＤ－３９６４５０．１、ＡＤ－３９６４４５．１、ＡＤ－３９６４６１．１、ＡＤ－３９６４５２．１、ＡＤ－３９６９１３．１、ＡＤ－３９６４５５．１、ＡＤ－３９６９１２．１、ＡＤ－３９６９１５．１、ＡＤ－３９６４５３．１、およびＡＤ－３９４９９１．１のいずれか１つから選択される。

一実施形態において、センスおよびアンチセンス鎖は、二重鎖ＡＤ－１３９７０７０．１、ＡＤ－１３９７０７０．２、ＡＤ－１３９７０７１．１、ＡＤ－１３９７０７１．２、ＡＤ－１３９７０７２．１、ＡＤ－１３９７０７２．２、ＡＤ－１３９７０７３．１、ＡＤ－１３９７０７３．２、ＡＤ－１３９７０７４．１、ＡＤ－１３９７０７４．２、ＡＤ－１３９７０７５．１、ＡＤ－１３９７０７５．２、ＡＤ－１３９７０７６．１、ＡＤ－１３９７０７６．２、ＡＤ－１３９７０７７．１、ＡＤ－１３９７０７７．２、ＡＤ－１３９７０７８．１、ＡＤ－１３９７０７８．２、ＡＤ－１３９７２５０．１、ＡＤ－１３９７２５１．１、ＡＤ－１３９７２５２．１、ＡＤ－１３９７２５３．１、ＡＤ－１３９７２５４．１、ＡＤ－１３９７２５５．１、ＡＤ－１３９７２５６．１、ＡＤ－１３９７２５７．１、ＡＤ－１３９７２５８．１、ＡＤ－１３９７２５９．１、ＡＤ－１３９７２６０．１、ＡＤ－１３９７２６１．１、ＡＤ－１３９７２６２．１、ＡＤ－１３９７２６３．１、ＡＤ－１３９７２６４．１、ＡＤ－１３９７２６５．１、ＡＤ－１４２３２４２．１、ＡＤ－１４２３２４３．１、ＡＤ－１４２３２４４．１、ＡＤ－１４２３２４５．１、ＡＤ－１４２３２４６．１、ＡＤ－１４２３２４７．１、ＡＤ－１４２３２４８．１、ＡＤ－１４２３２４９．１、ＡＤ－１４２３２５０．１、ＡＤ－１４２３２５１．１、ＡＤ－１４２３２５２．１、ＡＤ－１４２３２５３．１、ＡＤ－１４２３２５４．１、ＡＤ－１４２３２５５．１、ＡＤ－１４２３２５６．１、ＡＤ－１４２３２５７．１、ＡＤ－１４２３２５８．１、ＡＤ－１４２３２５９．１、ＡＤ－１４２３２６０．１、ＡＤ－１４２３２６１．１、ＡＤ－１４２３２６２．１、ＡＤ－１４２３２６３．１、ＡＤ－１４２３２６４．１、ＡＤ－１４２３２６５．１、ＡＤ－１４２３２６６．１、ＡＤ－１４２３２６７．１、ＡＤ－１４２３２６８．１、ＡＤ－１４２３２６９．１、ＡＤ－１４２３２７０．１、ＡＤ－１４２３２７１．１、ＡＤ－１４２３２７２．１、ＡＤ－１４２３２７３．１、ＡＤ－１４２３２７４．１、ＡＤ－１４２３２７５．１、ＡＤ－１４２３２７６．１、ＡＤ－１４２３２７７．１、ＡＤ－１４２３２７８．１、ＡＤ－１４２３２７９．１、ＡＤ－１４２３２８０．１、ＡＤ－１４２３２８１．１、ＡＤ－１４２３２８２．１、ＡＤ－１４２３２８３．１、ＡＤ－１４２３２８４．１、ＡＤ－１４２３２８５．１、ＡＤ－１４２３２８６．１、ＡＤ－１４２３２８７．１、ＡＤ－１４２３２８８．１、ＡＤ－１４２３２８９．１、ＡＤ－１４２３２９０．１、ＡＤ－１４２３２９１．１、ＡＤ－１４２３２９２．１、ＡＤ－１４２３２９３．１、ＡＤ－１４２３２９４．１、ＡＤ－１４２３２９５．１、ＡＤ－１４２３２９６．１、ＡＤ－１４２３２９７．１、ＡＤ－１４２３２９８．１、ＡＤ－１４２３２９９．１、ＡＤ－１４２３３００．１、ＡＤ－１３９７２６６．１、ＡＤ－１３９７２６６．２、ＡＤ－１３９７２６７．１、ＡＤ－１４２３３０１．１、ＡＤ－１３９７２６８．１、ＡＤ－１３９７２６８．２、ＡＤ－１３９７２６９．１、ＡＤ－１４２３３０２．１、ＡＤ－１３９７２７０．１、ＡＤ－１３９７２７０．２、ＡＤ－１３９７２７１．１、ＡＤ－１３９７２７１．２、ＡＤ－１３９７２７２．１、ＡＤ－１４２３３０３．１、ＡＤ－１３９７２７３．１、ＡＤ－１４２３３０４．１、ＡＤ－１３９７２７４．１、ＡＤ－１４２３３０５．１、ＡＤ－１３９７２７５．１、ＡＤ－１４２３３０６．１、ＡＤ－１３９７２７６．１、ＡＤ－１３９７２７７．１、ＡＤ－１３９７２７７．２、ＡＤ－１３９７２７８．１、ＡＤ－１３９７２７９．１、ＡＤ－１３９７２８０．１、ＡＤ－１３９７２８１．１、ＡＤ－１３９７２８２．１、ＡＤ－１３９７２８３．１、ＡＤ－１３９７２８４．１、ＡＤ－１３９７２８５．１、ＡＤ－１３９７２８６．１、ＡＤ－１３９７２８７．１、ＡＤ－１３９７０７９．１、ＡＤ－１３９７０７９．２、ＡＤ－１３９７２８８．１、ＡＤ－１３９７２８９．１、ＡＤ－１３９７２９０．１、ＡＤ－１３９７０８０．１、ＡＤ－１３９７０８０．２、ＡＤ－１３９７２９１．１、ＡＤ－１３９７２９２．１、ＡＤ－１３９７２９３．１、ＡＤ－１３９７２９４．１、ＡＤ－１３９７０８１．１、ＡＤ－１３９７０８１．２、ＡＤ－１３９７２９５．１、ＡＤ－１３９７０８２．１、ＡＤ－１３９７０８２．２、ＡＤ－１３９７０８３．１、ＡＤ－１３９７０８３．２、ＡＤ－１３９７２９６．１、ＡＤ－１３９７２９７．１、ＡＤ－１３９７２９８．１、ＡＤ－１３９７２９９．１、ＡＤ－１３９７３００．１、ＡＤ－１３９７３０１．１、ＡＤ－１３９７３０２．１、ＡＤ－１３９７０８４．１、ＡＤ－１３９７０８５．１、ＡＤ－１３９７０８６．１、ＡＤ－１３９７３０３．１、ＡＤ－１３９７０８７．１、ＡＤ－１３９７０８７．２、ＡＤ－１３９７３０４．１、ＡＤ－１３９７３０５．１、ＡＤ－１３９７３０６．１、ＡＤ－１３９７３０７．１、ＡＤ－１３９７３０８．１、ＡＤ－１３９７３０９．１、ＡＤ－１３９７３１０．１、ＡＤ－１３９７３１１．１、ＡＤ－１３９７３１２．１、ＡＤ－１３９７３１３．１、ＡＤ－１３９７３１４．１、ＡＤ－１３９７３１５．１、ＡＤ－１３９７３１６．１、ＡＤ－１３９７３１７．１、ＡＤ－１３９７３１８．１、ＡＤ－１３９７３１９．１、ＡＤ－１３９７３２０．１、ＡＤ－１３９７３２１．１、ＡＤ－１３９７３２２．１、ＡＤ－１３９７０８８．１、ＡＤ－１３９７０８９．１、ＡＤ－１３９７０９０．１、ＡＤ－１３９７０９１．１、ＡＤ－１３９７０９２．１、ＡＤ－１３９７０９３．１、ＡＤ－１３９７０９４．１、ＡＤ－１３９７０９５．１、ＡＤ－１３９７０９６．１、ＡＤ－１３９７０９７．１、ＡＤ－１３９７０９８．１、ＡＤ－１３９７０９９．１、ＡＤ－１３９７１０１．１、ＡＤ－１３９７１０２．１、ＡＤ－１３９７１０３．１、ＡＤ－１３９７１０４．１、ＡＤ－１３９７１０５．１、ＡＤ－１３９７１０６．１、ＡＤ－１３９７１０７．１、ＡＤ－１３９７１０８．１、ＡＤ－１３９７１０９．１、ＡＤ－１３９７１１０．１、ＡＤ－１３９７１１１．１、ＡＤ－１３９７１１２．１、ＡＤ－１３９７１１３．１、ＡＤ－１３９７１１４．１、ＡＤ－１３９７１１５．１、ＡＤ－１３９７１１６．１、ＡＤ－１３９７１１７．１、ＡＤ－１３９７１１８．１、ＡＤ－１３９７１１９．１、ＡＤ－１３９７１２０．１、ＡＤ－１３９７１２１．１、ＡＤ－１３９７１２２．１、ＡＤ－１３９７１２３．１、ＡＤ－１３９７１２４．１、ＡＤ－１３９７１２５．１、ＡＤ－１３９７１２６．１、ＡＤ－１３９７１２７．１、ＡＤ－１３９７１２８．１、ＡＤ－１３９７１２９．１、ＡＤ－１３９７１３０．１、ＡＤ－１３９７１３１．１、ＡＤ－１３９７１３２．１、ＡＤ－１３９７１３３．１、ＡＤ－１３９７１３４．１、ＡＤ－１３９７１３５．１、ＡＤ－１３９７１３６．１、ＡＤ－１３９７１３７．１、ＡＤ－１３９７１３８．１、ＡＤ－１３９７１３９．１、ＡＤ－１３９７１４０．１、ＡＤ－１３９７１４１．１、ＡＤ－１３９７１４２．１、ＡＤ－１３９７１４３．１、ＡＤ－１３９７１４４．１、ＡＤ－１３９７１４５．１、ＡＤ－１３９７１４６．１、ＡＤ－１３９７１４７．１、ＡＤ－１３９７１４８．１、ＡＤ－１３９７１４９．１、ＡＤ－１３９７１５０．１、ＡＤ－１３９７１５１．１、ＡＤ－１３９７１５２．１、ＡＤ－１３９７１５３．１、ＡＤ－１３９７１５４．１、ＡＤ－１３９７１５５．１、ＡＤ－１３９７１５６．１、ＡＤ－１３９７１５７．１、ＡＤ－１３９７１５８．１、ＡＤ－１３９７１５９．１、ＡＤ－１３９７１６０．１、ＡＤ－１３９７１６１．１、ＡＤ－１３９７１６２．１、ＡＤ－１３９７１６３．１、ＡＤ－１３９７１６４．１、ＡＤ－１３９７１６５．１、ＡＤ－１３９７１６６．１、ＡＤ－１３９７１６７．１、ＡＤ－１３９７１６８．１、ＡＤ－１３９７１６９．１、ＡＤ－１３９７１７０．１、ＡＤ－１３９７１７１．１、ＡＤ－１３９７１７２．１、ＡＤ－１３９７１７３．１、ＡＤ－１３９７１７４．１、ＡＤ－１３９７１７５．１、ＡＤ－１３９７１７６．１、ＡＤ－１３９７１７７．１、ＡＤ－１３９７１７８．１、ＡＤ－１３９７１７９．１、ＡＤ－１３９７１８０．１、ＡＤ－１３９７１８１．１、ＡＤ－１３９７１８２．１、ＡＤ－１３９７１８３．１、ＡＤ－１３９７１８４．１、ＡＤ－１３９７１８５．１、ＡＤ－１３９７１８６．１、ＡＤ－１３９７１８７．１、ＡＤ－１３９７１８８．１、ＡＤ－１３９７１８９．１、ＡＤ－１３９７１９０．１、ＡＤ－１３９７１９１．１、ＡＤ－１３９７１９２．１、ＡＤ－１３９７１９３．１、ＡＤ－１３９７１９４．１、ＡＤ－１３９７１９５．１、ＡＤ－１３９７１９６．１、ＡＤ－１３９７１９７．１、ＡＤ－１３９７１９８．１、ＡＤ－１３９７１９９．１、ＡＤ－１３９７２００．１、ＡＤ－１３９７２０１．１、ＡＤ－１３９７２０２．１、ＡＤ－１３９７２０３．１、ＡＤ－１３９７２０４．１、ＡＤ－１３９７２０５．１、ＡＤ－１３９７２０６．１、ＡＤ－１３９７２０７．１、ＡＤ－１３９７２０８．１、ＡＤ－１３９７２０９．１、ＡＤ－１３９７２１０．１、ＡＤ－１３９７２１１．１、ＡＤ－１３９７２１２．１、ＡＤ－１３９７２１３．１、ＡＤ－１３９７２１４．１、ＡＤ－１３９７２１５．１、ＡＤ－１３９７２１６．１、ＡＤ－１３９７２１７．１、ＡＤ－１３９７２１８．１、ＡＤ－１３９７２１９．１、ＡＤ－１３９７２２０．１、ＡＤ－１３９７２２１．１、ＡＤ－１３９７２２２．１、ＡＤ－１３９７２２３．１、ＡＤ－１３９７２２４．１、ＡＤ－１３９７２２５．１、ＡＤ－１３９７２２６．１、ＡＤ－１３９７２２７．１、ＡＤ－１３９７２２８．１、ＡＤ－１３９７２２９．１、ＡＤ－１３９７２３０．１、ＡＤ－１３９７２３１．１、ＡＤ－１３９７２３２．１、ＡＤ－１３９７２３３．１、ＡＤ－１３９７２３４．１、ＡＤ－１３９７２３５．１、ＡＤ－１３９７２３６．１、ＡＤ－１３９７２３７．１、ＡＤ－１３９７２３８．１、ＡＤ－１３９７２３９．１、ＡＤ－１３９７２４０．１、ＡＤ－１３９７２４１．１、ＡＤ－１３９７２４２．１、ＡＤ－１３９７２４３．１、ＡＤ－１３９７２４４．１、ＡＤ－１３９７２４５．１、ＡＤ－１３９７２４６．１、ＡＤ－１３９７２４７．１、ＡＤ－１３９７２４８．１、ＡＤ－１３９７２４９．１、ＡＤ－５２３５６５．１、ＡＤ－１３９７０７２．３、ＡＤ－１３９７０７３．３、ＡＤ－１３９７０７６．３、ＡＤ－１３９７０７７．３、ＡＤ－１３９７０７８．３、ＡＤ－１３９７２５２．２、ＡＤ－１３９７２５７．２、ＡＤ－１３９７２５８．２、ＡＤ－１３９７２５９．２、ＡＤ－１３９７２６３．２、ＡＤ－１３９７２６４．２、ＡＤ－１３９７３０９．２、ＡＤ－６４９５８．１１４、ＡＤ－３９３７５８．４、ＡＤ－１３９７０８０．３、ＡＤ－１３９７２９３．２、ＡＤ－１３９７２９４．２、ＡＤ－１３９７０８１．３、ＡＤ－１３９７０８３．３、ＡＤ－１３９７２９８．２、ＡＤ－１３９７２９９．２、ＡＤ－１３９７０８４．２、ＡＤ－１３９７０８５．２、ＡＤ－１３９７０８７．３、ＡＤ－１３９７３０６．２、ＡＤ－１３９７３０７．２、ＡＤ－１３９７３０８．２およびＡＤ－１３９７０８８．２のいずれか１つから選択される。

一実施形態において、ＭＡＰＴ遺伝子の発現の少なくとも部分的な抑制は、ＭＡＰＴｍＲＮＡ、例えば、センスｍＲＮＡ、アンチセンスｍＲＮＡ、総ＭＡＰＴｍＲＮＡの量の低減によって評価され、このようなｍＲＮＡは、ＭＡＰＴ遺伝子が転写されており、ＭＡＰＴ遺伝子の発現が阻害されるように処置された、または処置されている第１の細胞または細胞群から単離することができる、またはそのような細胞または細胞群において検出され、第１の細胞または細胞群に実質的に同一であるが、そのように処置されたまたは処置されていない第２の細胞または細胞群（対照細胞）と比較される。阻害の程度は、以下の単位で表すことができる：

ｄｓＲＮＡなどの「細胞をＲＮＡｉ剤と接触させること」なる語句は、本明細書において使用される場合、任意の可能な手段によって細胞を接触させることを包含する。細胞をＲＮＡｉ剤と接触させることは、細胞をインビトロにおいてＲＮＡｉ剤と接触させることまたは細胞をインビボにおいてＲＮＡｉ剤と接触させることを含む。接触させることは、直接的または間接的に行われ得る。したがって、例えば、ＲＮＡｉ剤は、方法を個別に実施することによって、細胞と物理的に接触させ得るか、あるいはＲＮＡｉ剤は、その後に細胞と接触することを可能にし得るまたは引き起こし得るような状況に置かれ得る。

細胞をインビトロにおいて接触させることは、例えば、細胞をＲＮＡｉ剤と共にインキュベートすることによって為され得る。細胞をインビボ（ｉｎｖｉｖｏ）において接触させることは、例えば、ＲＮＡｉ剤を細胞が位置されている組織中もしくはその付近に注入することによって、または別の領域、例えば、中枢神経系（ＣＮＳ）に、適宜、髄腔内注入、硝子体内注入、大槽内注入、もしくは他の注入によってＲＮＡｉ剤を注入することによって、または薬剤がその後に、接触されるべき細胞が位置されている組織に到達するように、血流もしくは皮下腔にＲＮＡｉ剤を注入することによって、為され得る。例えば、ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡｉ剤を目的の部位、例えば、ＣＮＳに向かわせるかまたは安定化するリガンド、例えば、下記において説明され、例えば、参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０３１１７０においてさらに詳述されるような親油性部分を含み得るかまたはそれにカップリングされ得る。接触させるためのインビトロでの方法およびインビボでの方法の組合せも可能である。例えば、細胞をインビトロにおいてＲＮＡｉ剤と接触させ、その後に対象に移してもよい。

一実施形態において、細胞をＲＮＡｉ剤と接触させることは、細胞内への取り込みまたは吸収を促進または実施することによって「導入すること」または「ＲＮＡｉ剤を細胞内にデリバリーすること」を含む。ＲＮＡｉ剤の吸収または取り込みは、自発的拡散性のもしくは活性な細胞プロセスによって、または助剤もしくはデバイスによって生じ得る。ＲＮＡｉ剤を細胞内に導入することは、インビトロまたはインビボにおいてであり得る。例えば、インビボ導入の場合、ＲＮＡｉ剤は、組織部位に注入され得るかまたは全身的に投与され得る。細胞内へのインビトロ導入としては、当技術分野で公知の方法、例えば、エレクトロポレーションおよびリポフェクションなどが挙げられる。さらなるアプローチは、本明細書の下記において説明されるか、または当技術分野で公知である。

用語「親油性」または「親油性部分」は、脂質に対して親和性を有する任意の化合物または化学部分を広く意味する。親油性部分の親油性を特徴付ける方法の１つは、オクタノール－水分配係数ｌｏｇＫ_ｏｗによってであり、この場合、Ｋ_ｏｗは、平衡状態の２相系における水相の化学物質の濃度に対するオクタノール相の化学物質の濃度の比である。オクタノール－水分配係数は、物質における実験室測定された特性である。しかしながら、それは、第１原理または経験的方法を使用して算出される化学物質の構造成分に起因する係数を使用することによっても予想され得る［例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Tetko et al., J. Chem. Inf. Comput. Sci. 41:1407-21 (2001)を参照されたい］。それは、水よりもむしろ非水性または油性環境を好む物質の傾向の熱力学的尺度（すなわち、親水性／親油性のバランス）を提供する。原則として、化学物質は、ｌｏｇＫ_ｏｗが０を超える場合、親油性の性質である。典型的には、親油性部分は、１を超える、１．５を超える、２を超える、３を超える、４を超える、５を超える、または１０を超えるｌｏｇＫ_ｏｗを有する。例えば、６－アミノヘキサノールのｌｏｇＫ_ｏｗは、およそ０．７であることが予想される。同じ方法を使用することにより、コレステリルＮ－（ヘキサン－６－オール）カルバメートのｌｏｇＫ_ｏｗは、１０．７であることが予想される。

分子の親油性は、分子が有する官能基に関して変更することができる。例えば、親油性部分の末端にヒドロキシル基またはアミン基を加えることにより、親油性部分の分配係数（例えば、ｌｏｇＫ_ｏｗ）値を増加または減少させることができる。

あるいは、１つまたは複数の親油性部分にコンジュゲートされた二本鎖ＲＮＡｉ剤の疎水性は、そのタンパク質結合特性によって測定することができる。例えば、ある特定の実施形態において、二本鎖ＲＮＡｉ剤の血漿タンパク質結合アッセイの非結合分率は、二本鎖ＲＮＡｉ剤のサイレンシング活性に正に相関し得る、二本鎖ＲＮＡｉ剤の相対的疎水性に正に相関することを判定することができる。

一実施形態において、判定される血漿タンパク質結合アッセイは、ヒト血清アルブミンタンパク質を使用する電気泳動移動度シフトアッセイ（ＥＭＳＡ）である。この結合アッセイの例示的プロトコールは、例えば、ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０３１１７０において詳細に説明される。簡潔に述べれば、二重鎖をヒト血清アルブミンと共にインキュベートし、非結合分率を決定した。例示的なアッセイプロトコールは、１０μＭのストック濃度の二重鎖を、１×ＰＢＳ中に０、２０、または９０％の血清を含有する０．５μＭの最終濃度（総体積２０μＬ）に希釈することを含む。試料は、混合し、３０秒間遠心分離し、次に室温で１０分間インキュベートし得る。インキュベーションステップが完了したら、４μＬの６×ＥＭＳＡゲル－ローディング溶液を各試料に添加し、３０秒間遠心分離し、１２μＬの各試料を２６ウェルのＢｉｏＲａｄ１０％ＰＡＧＥ（ポリアクリルアミドゲル電気泳動）にロードし得る。ゲルを１００ボルトで１時間泳動し得る。泳動の完了後に、ゲルをケーシングから取り出し、５０ｍＬの１０％ＴＢＥ（Ｔｒｉｓ塩基、ホウ酸、およびＥＤＴＡ）中で洗浄した。洗浄が完了したら、５μＬのＳＹＢＲＧｏｌｄをゲルに添加し、次いでそれを室温で１０分間インキュベートし、ゲルを５０ｍＬの１０％ＴＢＥ中で再度洗浄し得る。この例示的なアッセイでは、ＧｅｌＤｏｃＸＲ＋ゲルドキュメンテーションシステムを使用して、以下のパラメータを使用してゲルを読み取ってもよい：イメージングアプリケーションはＳＹＢＲＧｏｌｄに設定し、サイズはＢｉｏ－Ｒａｄ基準ゲルに設定し、露出は強いバンドのために自動に設定し、ハイライト飽和ピクセルは１にしてもよく、色はグレーに設定する。検出、分子量分析、および出力は、全て無効にし得る。ゲルの明瞭な写真が得られたら、ＩｍａｇｅＬａｂ５．２を用いて画像を処理し得る。レーンおよびバンドは手動で設定してバンド強度を測定し得る。各試料のバンド強度をＰＢＳに対して正規化して非結合ｓｉＲＮＡフラクションを得ることができる。この測定から相対的疎水性を決定することができる。結合アッセイにおける非結合ｓｉＲＮＡのフラクションによって測定される二本鎖ＲＮＡｉ剤の疎水性は、増強されたｓｉＲＮＡのインビボデリバリーの場合、０．１５を超える、０．２を超える、０．２５を超える、０．３を超える、０．３５を超える、０．４を超える、０．４５を超える、または０．５を超える。

したがって、親油性部分を二本鎖ＲＮＡｉ剤の内部位置にコンジュゲートすることにより、ｓｉＲＮＡにおける増強されたインビボデリバリーに対する最適の疎水性が提供される。

用語「脂質ナノ粒子」または「ＬＮＰ」は、薬学的に活性な分子、例えば、核酸分子、例えば、ＲＮＡｉ剤またはＲＮＡｉ剤の転写元のプラスミドなどを封入する脂質層を含むベシクルである。ＬＮＰは、例えば、米国特許第６，８５８，２２５号、同第６，８１５，４３２、８，１５８，６０１号、および同第８，０５８，０６９号に記載されており、その内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。

本明細書において使用される場合、「対象」は、動物、例えば、哺乳動物、例えば、霊長類（例えば、ヒト、非ヒト霊長類、例えば、サルおよびチンパンジーなど）、または非霊長類（例えば、ラットまたはマウスなど）である。好ましい実施形態において、対象は、ヒトであり、例えばＭＡＰＴ発現の低減が有益であろう疾患、障害、または状態のために処置または評価されたヒト；ＭＡＰＴ発現の低減が有益であろう疾患、障害、または状態のリスクがあるヒト；ＭＡＰＴ発現の低減が有益であろう疾患、障害、または状態を有するヒト；または本明細書に記載されるようにＭＡＰＴ発現の低減が有益であろう疾患、障害、または状態のために処置されたヒトである。一部の実施形態において、対象は、ヒトの女性である。他の実施形態において、対象は、ヒトの男性である。一実施形態において、対象は、ヒトの成人である。一実施形態において、対象は、ヒトの小児である。別の実施形態において、対象は、ヒトの年少者、すなわち、２０歳未満の対象である。

本明細書において使用される場合、用語「処置すること」または「処置」は有益なまたは所望の結果を指し、それらとしては、ＭＡＰＴ関連疾患、例えば、アルツハイマー病、ＦＴＤ、ＰＳＰ、または他のタウオパチーにおけるＭＡＰＴ遺伝子発現またはタウ産生に関連する１つまたは複数の兆候または症状の緩和または改善が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。「処置」は、処置が行われない場合に予想される生存と比較して、生存を延長することも意味し得る。

対象におけるＭＡＰＴのレベルまたは疾患マーカーまたは症状に関連する用語「低下させる（ｌｏｗｅｒ）」は、そのようなレベルの統計的に有意な減少を意味する。減少は、例えば、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上であり得る。特定の実施形態において、減少は、少なくとも２０％である。特定の実施形態において、減少は、疾患マーカー、例えば、センスもしくはアンチセンスを含有する凝集体のレベル、および／または異常なジペプチドリピートタンパク質のレベルにおける少なくとも５０％の減少であり、例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれ多くの減少である。一部の実施形態において、減少は、疾患マーカーにおける少なくとも約２５％の減少であり、例えば、タウタンパク質および／または遺伝子発現レベルは、例えば、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％減少する。対象におけるＭＡＰＴのレベルに関連する場合、「低下させる」は、好ましくは、そのような障害のない個体における正常な範囲内として受け入れられるレベルまで下げることである。ある特定の実施形態において、「低下させる」は、疾患を患っている対象におけるマーカーまたは症状のレベルと、個体が正常な範囲内で受け入れられるレベルとの間の差の減少、例えば、肥満な個体と正常な範囲内で受け入れられる体重を有する個体との間での体重の減少のレベルである。

本明細書において使用される場合、「予防」または「予防すること」は、ＭＡＰＴ遺伝子の発現またはタウの産生の減少が有益であろう疾患、障害、またはそれらの状態に関して使用される場合、対象が、そのような疾患、障害、または状態に関連する症状、例えば、ＭＡＰＴ関連疾患の症状を発症する可能性の減少を意味する。疾患、障害、または状態を発症しないこと、またはそのような疾患、障害、または状態に関連する症状の発症の減少（例えば、その疾患または障害に対して臨床的に受け入れられる規模の少なくとも約１０％の減少）、または遅延された症状の提示の遅延（例えば、数日、数週間、数か月、または数年の遅延）は、有効な予防とみなされる。

本明細書において使用される場合、用語「ＭＡＰＴ関連疾患」または「ＭＡＰＴ関連障害」または「タウオパチー」は、ＭＡＰＴの発現および／または活性の低減が有益であろうあらゆる疾患または障害を含む。例示的なＭＡＰＴ関連疾患としては、アルツハイマー病、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、行動障害型前頭側頭型認知症（ｂｖＦＴＤ）、非流暢性亜型原発性進行性失語（ｎｆｖＰＰＡ）、意味型原発性進行性失語（ＰＰＡ－Ｓ）、ロゴペニック型原発性進行性失語（ＰＰＡ－Ｌ）、１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、ピック病（ＰｉＤ）、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、初老期認知症を伴う多系統タウオパチー（ＭＳＴＤ）、球状グリア封入体を伴う白質タウオパチー（ＧＧＩを伴うＦＴＬＤ）、ＭＡＰＴ突然変異を伴うＦＴＬＤ、神経原線維変化（ＮＦＴ）認知症、運動ニューロン疾患を伴うＦＴＤ、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、皮質基底核症候群（ＣＢＳ）、皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、パーキンソン病、脳炎後パーキンソニズム、ニーマン・ピック病、ハンチントン病、筋強直性ジストロフィー１型、およびダウン症候群（ＤＳ）が挙げられる。

「治療有効量」は、本明細書において使用される場合、ＭＡＰＴ関連疾患を有する対象に投与されたときに、疾患の処置（例えば、既存の疾患または疾患の１つもしくは複数の症状を減少、改善、または維持することによる）を実施するのに十分なＲＮＡ剤の量を含むことが意図される。「治療有効量」は、ＲＮＡｉ剤、薬剤がどのように投与されるか、疾患およびその重症度、ならびに病歴、年齢、体重、家族歴、遺伝子構造、先行または並行する処置のタイプ、存在するのであれば、処置される対象の他の個別の特性に応じて変わり得る。

「予防有効量」は、本明細書において使用される場合、ＭＡＰＴ関連疾患を有する対象に投与されたときに、疾患または疾患の１つまたは複数の症状を予防または改善するのに十分なＲＮＡｉ剤の量を含むことが意図される。疾患の改善は、疾患の経過を鈍化させること、または後で発症する疾患の重症度を減少させることを含む。「予防有効量」は、ＲＮＡｉ剤、薬剤がどのように投与されるか、疾患のリスクの程度、ならびに病歴、年齢、体重、家族歴、遺伝子構造、先行または並行する処置のタイプ、存在するのであれば、処置される患者の他の個別の特性に応じて変わり得る。

「治療有効量」または「予防有効量」は、任意の処置に適用可能な合理的な恩恵／リスク比においていくつかの所望の局所的または全身的効果を生じるＲＮＡｉ剤の量も包含する。本開示の方法において用いられるＲＮＡｉ剤は、そのような処置に適用可能な合理的な恩恵／リスク比を生じるのに十分な量において投与され得る。

語句「薬学的に許容される」は、過度の毒性、刺激性、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症なしに、合理的な恩恵／リスク比に見合う、健全な医学的判断の範囲内でのヒト対象および動物対象の組織との接触における使用にとって好適な、化合物、材料、組成物、または剤形を意味するために本明細書において用いられる。

語句「薬学的に許容される担体」は、本明細書において使用される場合、１つの臓器、または身体の一部分から、他の臓器、例えば、身体の一部分への対象化合物の搬送または輸送に関与する、薬学的に許容される材料、組成物、またはビヒクル、例えば、液体または固体充填剤など、希釈剤、賦形剤、製造助剤（例えば、潤滑剤、タルクマグネシウム、ステアリン酸カルシウムもしくはステアリン酸亜鉛、またはステアリン酸）、または溶媒封入材料を意味する。各担体は、製剤の他の原材料に対して適合性であるという意味において「許容され」なければならず、ならびに処置される対象に対して有害であってはならない。薬学的に許容される担体として機能し得る材料のいくつかの例としては、（１）糖、例えば、ラクトース、グルコース、およびショ糖など；（２）デンプン、例えば、トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプンなど；（３）セルロースおよびその誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、および酢酸セルロースなど；（４）トラガント末；（５）モルト；（６）ゼラチン；（７）潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、およびタルクなど；（８）賦形剤、例えば、ココアバターおよび座剤ワックスなど；（９）オイル、例えば、落花生油、綿実油、サフラワー油、胡麻油、オリーブ油、トウモロコシ油、および大豆油など；（１０）グリコール、例えば、プロピレングリコールなど；（１１）ポリオール、例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコールなど；（１２）エステル、例えば、オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルなど；（１３）寒天；（１４）緩衝剤、例えば、水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなど；（１５）アルギン酸；（１６）発熱物質不含水；（１７）等張食塩水；（１８）リンガー溶液；（１９）エチルアルコール；（２０）ｐＨ緩衝溶液；（２１）ポリエステル、ポリカーボネート、またはポリ無水物；（２２）充填剤（ｂｕｌｋｉｎｇａｇｅｎｔ）、例えば、ポリペプチドおよびアミノ酸など；（２３）血清成分、例えば、血清アルブミン、ＨＤＬ、およびＬＤＬなど；ならびに（２２）医薬製剤に用いられるその他の無毒の親和性物質が挙げられる。

用語「試料」は、本明細書において使用される場合、対象から単離された同様の体液、細胞、または組織、ならびに対象内に存在する体液、細胞、または組織のコレクションを包含する。生体液の例としては、血液、血清、および漿膜液、血漿、髄液、眼液、リンパ液、尿、唾液、などが挙げられる。組織試料は、組織、臓器、または局所領域からの試料を含み得る。例えば、試料は、特定の臓器、臓器の一部、またはそれらの臓器内の体液または細胞から得られ得る。ある特定の実施形態において、試料は、脳（例えば、脳全体または脳におけるあるセグメント、例えば、線状体、または脳におけるあるタイプの細胞、例えば、ニューロンおよびグリア細胞（星状細胞、オリゴデンドロサイト、小グリア細胞））から得られ得る。一部の実施形態において、「対象から得られた試料」は、対象から得られた血液またはそれらから得られた血漿もしくは血清を意味する。さらなる実施形態において、「対象から得られた試料」は、対象から得られた脳組織（またはその副成分）または網膜組織（またはその副成分）を意味する。

用語「置換されている」は、所与の構造における１つまたは複数の水素ラジカルが特定の置換基のラジカルで置き換えられていることを指す。それらとしては、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロシクリル、ハロ、チオール、アルキルチオ、アリールチオ、アルキルチオアルキル、アリールチオアルキル、アルキルスルホニル、アルキルスルホニルアルキル、アリールスルホニルアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、アラルコキシ、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、ハロアルキル、アミノ、トリフルオロメチル、シアノ、ニトロ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アルキルアミノアルキル、アリールアミノアルキル、アミノアルキルアミノ、ヒドロキシ、アルコキシアルキル、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノカルボニルアルキル、アシル、アラルコキシカルボニル、カルボン酸、スルホン酸、スルホニル、ホスホン酸、アリール、ヘテロアリール、複素環式、および脂肪族が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。置換基をさらに置換することができることは理解されよう。

用語「アルキル」は、示された数の炭素原子を含有する、直鎖でも分岐鎖でもよい飽和および不飽和非芳香族炭化水素鎖（これらとしては、限定するものではないが、プロピル、アリル、またはプロパルギルが挙げられる）を指し、それらは、Ｎ、Ｏ、またはＳが挿入されていてもよい。例えば、「（Ｃ１～Ｃ６）アルキル」は、線状または分岐状に配置された１～６個の炭素原子を有するラジカルを意味する。「（Ｃ１～Ｃ６）アルキル」としては、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソ－プロピル、ｎ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ペンチル、およびヘキシルが挙げられる。ある特定の実施形態において、本開示の親油性部分は、Ｃ６～Ｃ１８アルキル炭化水素鎖を含み得る。

用語「アルキレン」は、指定された数の炭素原子を有する、置換されていてもよい飽和脂肪族分岐鎖または直鎖の二価炭化水素ラジカルを指す。例えば、「（Ｃ１～Ｃ６）アルキレン」は、線状に配置された１～６個の炭素原子を有する二価飽和脂肪族ラジカル、例えば、［（ＣＨ_２）_ｎ］（式中、ｎは１～６の整数である）を意味する。「（Ｃ１～Ｃ６）アルキレン」としては、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、およびヘキシレンが挙げられる。あるいは、「（Ｃ１～Ｃ６）アルキレン」は、分岐状に配置された１～６個の炭素原子を有する二価飽和ラジカル、例えば：［（ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）］、［（ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（ＣＨ_３）_２］、［（ＣＨ_２Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＨ（ＣＨ_３））］などを意味する。用語「アルキレンジオキソ」は、構造－Ｏ－Ｒ－Ｏ－（式中、Ｒはアルキレンを表す）の二価の種を指す。

用語「メルカプト」は、－ＳＨラジカルを指す。用語「チオアルコキシ」は、－Ｓ－アルキルラジカルを指す。

用語「ハロ」は、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素のいずれかのラジカルを指す。「ハロゲン」および「ハロ」は、本明細書において相互互換的に使用される。

本明細書において使用される場合、用語「シクロアルキル」は、特に指定されない限り３～１４個の炭素原子を有する、飽和または不飽和非芳香族炭化水素環基を意味する。例えば、「（Ｃ３～Ｃ１０）シクロアルキル」は、（３～１０）員の飽和脂肪族環状炭化水素環の炭化水素ラジカルを意味する。シクロアルキル基の例としては、シクロプロピル、メチル－シクロプロピル、２，２－ジメチル－シクロブチル、２－エチル－シクロペンチル、シクロヘキシルなどが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。シクロアルキルには、複数のスピロ環または縮合環が含まれてもよい。シクロアルキル基は、通常の価数によって許容される限り、任意の位置で一、二、三、四、または五置換されていてもよい。

本明細書において使用される場合、用語「アルケニル」は、少なくとも１個の炭素－炭素二重結合を含有し、特に指定されない限り２～１０個の炭素原子を有する、直鎖状または分岐状の非芳香族炭化水素ラジカルを指す。そのような基には５個までの炭素－炭素二重結合が存在してもよい。例えば、「Ｃ２～Ｃ６」アルケニルは、２～６個の炭素原子を有するアルケニルラジカルとして定義される。アルケニル基の例としては、エテニル、プロペニル、ブテニル、およびシクロヘキセニルが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。アルケニル基の直鎖状、分岐状、または環状部分は、二重結合を含有してもよく、通常の価数によって許容される限り、任意の位置で一、二、三、四、または五置換されていてもよい。用語「シクロアルケニル」は、指定された数の炭素原子を有し、少なくとも１個の炭素－炭素二重結合を有する単環式炭化水素基を意味する。

本明細書において使用される場合、用語「アルキニル」は、特に指定されない限り２～１０個の炭素原子を含有し、少なくとも１個の炭素－炭素三重結合を含有する、直鎖状または分岐状の炭化水素ラジカルを指す。５個までの炭素－炭素三重結合が存在してもよい。したがって、「Ｃ２～Ｃ６アルキニル」は、２～６個の炭素原子を有するアルキニルラジカルを意味する。アルキニル基の例としては、エチニル、２－プロピニル、および２－ブチニルが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。アルキニル基の直鎖状または分岐状部分は、通常の価数によって許容される限り三重結合を含有してもよく、通常の価数によって許容される限り、任意の位置で一、二、三、四、または五置換されていてもよい。

本明細書において使用される場合、「アルコキシル」または「アルコキシ」は、示した数の炭素原子が酸素架橋を通して結合された、上に定義される通りのアルキル基を指す。例えば、「（Ｃ１～Ｃ３）アルコキシ」には、メトキシ、エトキシ、およびプロポキシが含まれる。例えば、「（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ」には、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、およびＣ６アルコキシ基が含まれることが意図される。例えば、「（Ｃ１～Ｃ８）アルコキシ」には、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、およびＣ８アルコキシ基が含まれることが意図される。アルコキシの例としては、メトキシ、エトキシ、ｎ－プロポキシ、ｉ－プロポキシ、ｎ－ブトキシ、ｓ－ブトキシ、ｔ－ブトキシ、ｎ－ペントキシ、ｓ－ペントキシ、ｎ－ヘプトキシ、およびｎ－オクトキシが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。「アルキルチオ」は、硫黄連結原子を通して結合されたアルキルラジカルを意味する。用語「アルキルアミノ」または「アミノアルキル」は、ＮＨ連結を通して結合されたアルキルラジカルを意味する。「ジアルキルアミノ」は、窒素連結原子を通して結合された２個のアルキルラジカルを意味する。アミノ基は、非置換であっても、一置換されていても、または二置換されていてもよい。一部の実施形態において、２個のアルキルラジカルは同じである（例えば、Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノ）。一部の実施形態において、２個のアルキルラジカルは異なっている（例えば、Ｎ－エチル－Ｎ－メチルアミノ）。

本明細書において使用される場合、「アリール」または「芳香族」は、各環に７個までの原子を有する任意の安定な単環式または多環式炭素環であって、少なくとも１個の環が芳香族であるものを意味する。アリール基の例としては、フェニル、ナフチル、アントラセニル、テトラヒドロナフチル、インダニル、およびビフェニルが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。アリール置換基が二環式であり、一方の環が非芳香族である場合、結合が芳香族環を介することは理解されよう。アリール基は、通常の価数によって許容される限り、任意の位置で一、二、三、四、または五置換されていてもよい。用語「アリールアルキル」または用語「アラルキル」は、アリールで置換されているアルキルを指す。用語「アリールアルコキシ」は、アリールで置換されているアルコキシを指す。

「ヘテロ」は、環構造における少なくとも１個の炭素原子が、Ｎ、Ｓ、およびＯから選択される少なくとも１個のヘテロ原子で置き換えられたものを指す。「ヘテロ」は、非環構造における少なくとも１個の炭素原子が置き換えられたものも指す。ヘテロ環構造またはヘテロ非環構造は、例えば、ヘテロ原子によって置き換えられた１、２、または３個の炭素原子を有し得る。

本明細書において使用される場合、用語「ヘテロアリール」は、各環に７個までの原子を有する安定な単環式または多環式環であって、少なくとも１個の環が芳香族であり、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個のヘテロ原子を含有するものを表す。ヘテロアリール基の例としては、アクリジニル、カルバゾリル、シンノリニル、キノキサリニル、ピラゾリル（ｐｙｒｒａｚｏｌｙｌ）、インドリル、ベンゾトリアゾリル、フラニル、チエニル、ベンゾチエニル、ベンゾフラニル、ベンズイミダゾロニル、ベンゾオキサゾロニル、キノリニル、イソキノリニル、ジヒドロイソインドロニル、イミダゾピリジニル、イソインドロニル、インダゾリル、オキサゾリル、オキサジアゾリル、イソオキサゾリル、インドリル、ピラジニル、ピリダジニル、ピリジニル、ピリミジニル、ピロリル、テトラヒドロキノリンが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。「ヘテロアリール」には、任意の窒素含有ヘテロアリールのＮ－オキシド誘導体が含まれることは理解されよう。ヘテロアリール置換基が二環式であり、一方の環が非芳香族であるかヘテロ原子を含有しない場合、結合が、芳香族環を介するか、またはヘテロ原子を含有する環を介することは理解されよう。ヘテロアリール基は、通常の価数によって許容される限り、任意の位置で一、二、三、四、または五置換されていてもよい。

本明細書において使用される場合、用語「複素環」、「複素環式」、または「ヘテロシクリル」は、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個のヘテロ原子を含有する、多環式基を含めた３～１４員の芳香族または非芳香族複素環を意味する。本明細書において使用される場合、用語「複素環式」はまた、用語「複素環」および「ヘテロシクリル」と同義であるとみなされ、それもまた本明細書において説明されるものと同じ定義を有すると理解される。「ヘテロシクリル」には、上述のヘテロアリール、ならびにそのジヒドロおよびテトラヒドロ類似体が含まれる。ヘテロシクリル基の例としては、アゼチジニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾフラザニル、ベンゾピラゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾチオフェニル、ベンゾオキサゾリル、カルバゾリル、カルボリニル、シンノリニル、フラニル、イミダゾリル、インドリニル、インドリル、インドラジニル、インダゾリル、イソベンゾフラニル、イソインドリル、イソキノリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、ナフトピリジニル、オキサジアゾリル、オキソオキサゾリジニル、オキサゾリル、オキサゾリン、オキソピペラジニル、オキソピロリジニル、オキソモルホリニル、イソキサゾリン、オキセタニル、ピラニル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリドピリジニル、ピリダジニル、ピリジル、ピリジノニル、ピリミジル、ピリミジノニル、ピロリル、キナゾリニル、キノリル、キノキサリニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオピラニル、テトラヒドロイソキノリニル、テトラゾリル、テトラゾロピリジル、チアジアゾリル、チアゾリル、チエニル、トリアゾリル、１，４－ジオキサニル、ヘキサヒドロアゼピニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピリジン－２－オニル、ピロリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ジヒドロベンゾイミダゾリル、ジヒドロベンゾフラニル、ジヒドロベンゾチオフェニル、ジヒドロベンゾオキサゾリル、ジヒドロフラニル、ジヒドロイミダゾリル、ジヒドロインドリル、ジヒドロイソオキサゾリル、ジヒドロイソチアゾリル、ジヒドロオキサジアゾリル、ジヒドロオキサゾリル、ジヒドロピラジニル、ジヒドロピラゾリル、ジヒドロピリジニル、ジヒドロピリミジニル、ジヒドロピロリル、ジヒドロキノリニル、ジヒドロテトラゾリル、ジヒドロチアジアゾリル、ジヒドロチアゾリル、ジヒドロチエニル、ジヒドロトリアゾリル、ジヒドロアゼチジニル、ジオキシドチオモルホリニル、メチレンジオキシベンゾイル、テトラヒドロフラニル、およびテトラヒドロチエニル、ならびにそれらのＮ－オキシドが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。ヘテロシクリル置換基の結合は、炭素原子を介するか、またはヘテロ原子を介して生じ得る。ヘテロシクリル基は、通常の価数によって許容される限り、任意の位置で一、二、三、四、または五置換されていてもよい。

「ヘテロシクロアルキル」は、炭素の１～４個が、酸素、窒素、または硫黄などのヘテロ原子によって置き換えられたシクロアルキル残基を指す。ラジカルがヘテロシクリル基である複素環の例としては、テトラヒドロピラン、モルホリン、ピロリジン、ピペリジン、チアゾリジン、オキサゾール、オキサゾリン、イソオキサゾール、ジオキサン、テトラヒドロフランなどが挙げられる。

用語「ヘテロアリール」は、単環式であれば１～３個のヘテロ原子、二環式であれば１～６個のヘテロ原子、または三環式であれば１～９個のヘテロ原子を有し、前記ヘテロ原子が、Ｏ、Ｎ、またはＳから選択される（例えば、炭素原子と、単環式、二環式、または三環式ならばそれぞれ１～３個、１～６個、または１～９個の、Ｎ、Ｏ、またはＳのヘテロ原子とを有する）、芳香族５～８員単環式、８～１２員二環式、または１１～１４員三環式環構造を指し、各環の０、１、２、３、または４個の原子は、置換基によって置換されていてもよい。ヘテロアリール基の例としては、ピリジル、フリルまたはフラニル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、ピリミジニル、チオフェニルまたはチエニル、キノリニル、インドリル、チアゾリルなどが挙げられる。用語「ヘテロアリールアルキル」または用語「ヘテロアラルキル」は、ヘテロアリールで置換されたアルキルを指す。用語「ヘテロアリールアルコキシ」は、ヘテロアリールで置換されたアルコキシを指す。

用語「シクロアルキル」には、本明細書において用いられる場合、３～１２個の炭素、例えば３～８個の炭素、例えば３～６個の炭素を有する、飽和および部分的不飽和の環式炭化水素基が含まれ、該シクロアルキル基は追加的に適宜置換されていてもよい。シクロアルキル基としては、限定するものではないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘプチル、およびシクロオクチルが挙げられる。

用語「アシル」は、アルキルカルボニル、シクロアルキルカルボニル、アリールカルボニル、ヘテロシクリルカルボニル、またはヘテロアリールカルボニル置換基を指し、これらのいずれも置換基によってさらに置換されていてもよい。

本明細書において使用される場合、「ケト」は、カルボニル架橋を通して結合された、本明細書に定義される通りの任意のアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、またはアリール基を指す。

ケト基の例としては、アルカノイル（例えば、アセチル、プロピオニル、ブタノイル、ペンタノイル、ヘキサノイル）、アルケノイル（例えば、アクリロイル）、アルキノイル（例えば、エチノイル、プロピノイル、ブチノイル、ペンチノイル、ヘキシノイル）、アリーロイル（例えば、ベンゾイル）、ヘテロアリーロイル（例えば、ピロロリル、イミダゾロイル、キノリノイル、ピリジノイル）が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。

本明細書において使用される場合、「アルコキシカルボニル」は、カルボニル架橋を通して結合された、上に定義される通りの任意のアルコキシ基（すなわち、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－アルキル）を指す。アルコキシカルボニル基の例としては、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、イソ－プロポキシカルボニル、ｎ－プロポキシカルボニル、ｔ－ブトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、またはｎ－ペントキシカルボニルが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。

本明細書において使用される場合、「アリールオキシカルボニル」は、オキシカルボニル架橋を通して結合された、本明細書に定義される通りの任意のアリール基（すなわち、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－アリール）を指す。アリールオキシカルボニル基の例としては、フェノキシカルボニルおよびナフチルオキシカルボニルが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。

本明細書において使用される場合、「ヘテロアリールオキシカルボニル」は、オキシカルボニル架橋を通して結合された、本明細書に定義される通りの任意のヘテロアリール基（すなわち、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－ヘテロアリール）を指す。ヘテロアリールオキシカルボニル基の例としては、２－ピリジルオキシカルボニル、２－オキサゾリルオキシカルボニル、４－チアゾリルオキシカルボニル、またはピリミジニルオキシカルボニルが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。

用語「オキソ」は、炭素に結合されたときはカルボニルを形成し、窒素に結合されたときはＮ－オキシドを形成し、硫黄に結合されたときはスルホキシドまたはスルホンを形成する、酸素原子を指す。

本明細書に開示される化合物および組成物は、その化合物または組成物が置かれた環境に応じて、特定の原子（例えば、Ｎ、Ｏ、またはＳ原子）がプロトン化または脱プロトン化された状態で有する場合があることを、当業者であれば容易に理解および認識するであろう。したがって、本明細書において使用される場合、本明細書に開示される構造は、ある特定の官能基、例えば、ＯＨ、ＳＨ、またはＮＨなどがプロトン化または脱プロトン化されている場合があることが想定される。本発明における開示は、当業者によって容易に理解されるように、開示される化合物および組成物を、環境のｐＨに基づいたそれらのプロトン化の状態にかかわらず網羅することが意図される。

ＩＩ．本開示のＲＮＡｉ剤
本明細書に記載されるのは、ＭＡＰＴ遺伝子の発現を阻害するＲＮＡｉ剤である。一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、細胞、例えば対象（例えば、哺乳動物、例えば、ＭＡＰＴ関連疾患、例えば、アルツハイマー病、ＦＴＤ、ＰＳＰ、または別のタウオパチーを有するヒト）内の細胞におけるＭＡＰＴ遺伝子の発現を阻害するための二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）分子を含む。ｄｓＲＮＡは、ＭＡＰＴ遺伝子の発現の際に形成されるｍＲＮＡの少なくとも一部に対して相補的である相補性の領域を有するアンチセンス鎖を含む。相補性の領域は、約１５～３０ヌクレオチド長またはそれ以下である。ＭＡＰＴ遺伝子を発現する細胞と接触すると、ＲＮＡｉ剤は、ＭＡＰＴ遺伝子（例えば、ヒト遺伝子、霊長類遺伝子、非霊長類遺伝子）の発現を、ＲＮＡｉ剤と接触していない同様の細胞またはＭＡＰＴ遺伝子と相補的ではないＲＮＡｉ剤と比較して少なくとも２５％または本明細書に記載されるようにそれ以上阻害する。ＭＡＰＴ遺伝子の発現は、例えば、ＰＣＲもしくは分岐ＤＮＡ（ｂＤＮＡ）ベースの方法によって、またはタンパク質ベースの方法によって、例えば、ウェスタンブロッティングもしくはフローサイトメトリー技術を使用する免疫蛍光分析などによってアッセイすることができる。一実施形態において、ノックダウンのレベルは、以下の実施例１に提供されるアッセイ方法を使用して、ＢＥ（２）－Ｃ細胞でアッセイされる。一部の実施形態において、ノックダウンのレベルは、一次マウス肝細胞でアッセイされる。一部の実施形態において、ノックダウンのレベルは、Ｎｅｕｒｏ－２ａ細胞でアッセイされる。

ｄｓＲＮＡは、２つのＲＮＡ鎖を含み、それらは、相補的であり、ｄｓＲＮＡが使用される条件下においてハイブリダイズして二重鎖構造を形成する。ｄｓＲＮＡの一方の鎖（アンチセンス鎖）は、実質的に相補的で、概して標的配列に対して完全に相補的である、相補性の領域を含む。標的配列は、ＭＡＰＴ遺伝子の発現の際に形成されたｍＲＮＡの配列から得ることができる。他方の鎖（センス鎖）は、アンチセンス鎖に対して相補的な領域を含み、それにより、２つの鎖は、好適な条件下で組み合わされた場合、ハイブリダイズして二重鎖構造を形成する。本明細書の他の箇所で説明され、当技術分野で公知であるように、ｄｓＲＮＡの相補配列は、別々のオリゴヌクレオチド上において相対するように、単一の核酸分子の自己相補領域として含ませることもできる。

概して、二重鎖構造は、１５から３０塩基対の長さ、例えば、１５～２９、１５～２８、１５～２７、１５～２６、１５～２５、１５～２４、１５～２３、１５～２２、１５～２１、１５～２０、１５～１９、１５～１８、１５～１７、１８～３０、１８～２９、１８～２８、１８～２７、１８～２６、１８～２５、１８～２４、１８～２３、１８～２２、１８～２１、１８～２０、１９～３０、１９～２９、１９～２８、１９～２７、１９～２６、１９～２５、１９～２４、１９～２３、１９～２２、１９～２１、１９～２０、２０～３０、２０～２９、２０～２８、２０～２７、２０～２６、２０～２５、２０～２４、２０～２３、２０～２２、２０～２１、２１～３０、２１～２９、２１～２８、２１～２７、２１～２６、２１～２５、２１～２４、２１～２３、または２１～２２塩基対の長さである。ある特定の好ましい実施形態において、二重鎖構造は、１８から２５塩基対の長さ、例えば、１８～２５、１８～２４、１８～２３、１８～２２、１８～２１、１８～２０、１９～２５、１９～２４、１９～２３、１９～２２、１９～２１、１９～２０、２０～２５、２０～２４、２０～２３、２０～２２、２０～２１、２１～２５、２１～２４、２１～２３、２１～２２、２２～２５、２２～２４、２２～２３、２３～２５、２３～２４、または２４～２５塩基対の長さ、例えば、１９～２１塩基対の長さである。上記に列記した範囲および長さの中間的な範囲および長さも、本開示の一部であることが想到される。

同様に、標的配列に対する相補性の領域は、１５から３０ヌクレオチド長、例えば、１５～２９、１５～２８、１５～２７、１５～２６、１５～２５、１５～２４、１５～２３、１５～２２、１５～２１、１５～２０、１５～１９、１５～１８、１５～１７、１８～３０、１８～２９、１８～２８、１８～２７、１８～２６、１８～２５、１８～２４、１８～２３、１８～２２、１８～２１、１８～２０、１９～３０、１９～２９、１９～２８、１９～２７、１９～２６、１９～２５、１９～２４、１９～２３、１９～２２、１９～２１、１９～２０、２０～３０、２０～２９、２０～２８、２０～２７、２０～２６、２０～２５、２０～２４、２０～２３、２０～２２、２０～２１、２１～３０、２１～２９、２１～２８、２１～２７、２１～２６、２１～２５、２１～２４、２１～２３、または２１～２２ヌクレオチド長、例えば、１９～２３ヌクレオチド長または２１～２３ヌクレオチド長である。上記に列記した範囲および長さの中間的な範囲および長さも、本開示の一部であることが想到される。

一部の実施形態において、二重鎖構造は、１９から３０塩基対の長さである。同様に、標的配列に対する相補性の領域は、１９から３０ヌクレオチド長である。

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡは、１５から２３ヌクレオチド長、１９から２３ヌクレオチド長、または２５から３０ヌクレオチド長である。概して、ｄｓＲＮＡは、Ｄｉｃｅｒ酵素のための基質として機能するのに十分に長い。例えば、約２１～２３ヌクレオチドより長いｄｓＲＮＡは、Ｄｉｃｅｒのための基質として機能することができることは、当技術分野において周知である。当業者も認識するであろうように、切断のために標的化されるＲＮＡの領域は、ほとんどの場合、より長いＲＮＡ分子、多くの場合、ｍＲＮＡ分子の一部である。関連する場合、ｍＲＮＡ標的の「一部」は、ＲＮＡｉ依存性切断（すなわち、ＲＩＳＣ経路による切断）のための基質であることを可能にするのに十分な長さのｍＲＮＡ標的の連続配列である。

当業者は、二重鎖領域が、ｄｓＲＮＡの一次機能部分、例えば、１５から３６塩基対、例えば、１５～３６、１５～３５、１５～３４、１５～３３、１５～３２、１５～３１、１５～３０、１５～２９、１５～２８、１５～２７、１５～２６、１５～２５、１５～２４、１５～２３、１５～２２、１５～２１、１５～２０、１５～１９、１５～１８、１５～１７、１８～３０、１８～２９、１８～２８、１８～２７、１８～２６、１８～２５、１８～２４、１８～２３、１８～２２、１８～２１、１８～２０、１９～３０、１９～２９、１９～２８、１９～２７、１９～２６、１９～２５、１９～２４、１９～２３、１９～２２、１９～２１、１９～２０、２０～３０、２０～２９、２０～２８、２０～２７、２０～２６、２０～２５、２０～２４、２０～２３、２０～２２、２０～２１、２１～３０、２１～２９、２１～２８、２１～２７、２１～２６、２１～２５、２１～２４、２１～２３、または２１～２２塩基対、例えば、１９～２１塩基対の二重鎖領域であることも認識するであろう。したがって、一実施形態において、切断のために所望のＲＮＡを標的化する、例えば、１５～３０塩基対の、機能的二重鎖へとプロセシングされる限り、３０超の塩基対の二重鎖領域を有するＲＮＡ分子またはＲＮＡ分子の複合体は、ｄｓＲＮＡである。したがって、当業者は、一実施形態において、ｍｉＲＮＡがｄｓＲＮＡであることを認識するであろう。別の実施形態において、ｄｓＲＮＡは、天然に存在するｍｉＲＮＡではない。別の実施形態において、ＭＡＰＴ発現を標的化するために有用なＲＮＡｉ剤は、より大きなｄｓＮＲＡの切断によって標的細胞において生成されない。

本明細書において説明されるｄｓＲＮＡは、例えば、１、２、３、または４ヌクレオチドの、１つまたは複数の一本鎖ヌクレオチドオーバーハングをさらに含むことができる。ヌクレオチドオーバーハングは、デオキシヌクレオチド／ヌクレオシドなどのヌクレオチド／ヌクレオシドアナログを含み得るかまたはそれらからなり得る。オーバーハングは、センス鎖上、アンチセンス鎖上、またはそれらの任意の組合せであり得る。その上、オーバーハングのヌクレオチドは、ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖またはセンス鎖のどちらかの５’端上、３’端上、またはその両方に存在し得る。

ｄｓＲＮＡは、当技術分野で公知の標準的な方法によって合成することができる。本発明の二本鎖ＲＮＡｉ化合物は、二段階手法を使用して調製され得る。最初に、二本鎖ＲＮＡ分子の個々の鎖が、別々に調製される。次いで、当該成分の鎖がアニールされる。ｓｉＲＮＡ化合物の個々の鎖は、溶液相または固相有機合成またはその両方を使用して調製することができる。有機合成は、非天然のヌクレオチドまたは修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド鎖を容易に調製することができるという利点を提供する。同様に、本発明の一本鎖オリゴヌクレオチドは、溶液相または固相有機合成またはその両方を使用して調製することができる。

一態様では、本開示のｄｓＲＮＡは、少なくとも２つのヌクレオチド配列、すなわち、センス鎖およびアンチセンス鎖を含む。ＭＡＰＴに対するセンス鎖配列は、表３～８、１２、１３、および１６～２８のいずれか１つにおいて提供される配列の群から選択され得、ならびにセンス鎖の、アンチセンス鎖の対応するヌクレオチドは、表３～８、１２、１３、および１６～２８のいずれか１つの配列の群から選択され得る。この態様では、２つの配列の一方は、２つの配列の他方に対して相補的であり、この場合、配列の一方は、ＭＡＰＴ遺伝子の発現の際に生じたｍＲＮＡの配列に対して実質的に相補的である。そのため、この態様では、ｄｓＲＮＡは、一方のオリゴヌクレオチドが、表３～８、１２、１３、および１６～２８のいずれか１つにおけるセンス鎖（パッセンジャー鎖）として説明され、第２のオリゴヌクレオチドが、表３～８、１２、１３、および１６～２８のいずれか１つにおけるセンス鎖に対する対応するアンチセンス鎖（ガイド鎖）として説明される、２つのオリゴヌクレオチドを含むであろう。

ある特定の実施形態において、本明細書に開示されるアンチセンスポリヌクレオチドは、標的ＭＡＰＴ配列の断片に対して実質的に相補的であり、ヌクレオチドの群から選択される配列番号４の断片に対してその全長にわたり少なくとも８０％相補的である連続するヌクレオチド配列を含み、センス鎖は、配列番号３のヌクレオチド５２０～５４１、５２０～５５６、５１０～５３４、５１２～５３６、５１６～５４１、５１６～５４０、５２０～５４４、５２４～５４７、５２６～５５１、５２９～５５６、５３２～５５６、１０６５～１０８９、１０６８～１０９５、１０６８～１０９４、１０７５～１１００、１０７６～１１００、１０７９～１１０３、１１２３～１１４７、１１２７～１１５１、１１３０～１１５５、１９０３～１９３４、１９０３～１９３０、１９１４～１９４０、１９４９～１９７５、２４７０～２４９７、２９４１～２９６５、３２７５～３３０２、３２７８～３３０２、３３２９～３３５３、３３３３～３３５７、３３３８～３３６７、３３３８～３３６６、３３４８～３３９０、３３４８～３３８８、３３５１～３３８５、５５０７～５５６２、および５５４９～５５９７のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖は、配列番号４の対応するヌクレオチド配列からの少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。一部の実施形態において、本明細書に開示されるアンチセンスポリヌクレオチドは、標的ＭＡＰＴ配列の断片に対して実質的に相補的であり、ヌクレオチドの群から選択される配列番号４の断片に対してその全長にわたり相補的である連続するヌクレオチド配列を含み、センス鎖は、配列番号３のヌクレオチド５２０～５４１、５２０～５５６、５１０～５３４、５１２～５３６、５１６～５４１、５１６～５４０、５２０～５４４、５２４～５４７、５２６～５５１、５２９～５５６、５３２～５５６、１０６５～１０８９、１０６８～１０９５、１０６８～１０９４、１０７５～１１００、１０７６～１１００、１０７９～１１０３、１１２３～１１４７、１１２７～１１５１、１１３０～１１５５、１９０３～１９３４、１９０３～１９３０、１９１４～１９４０、１９４９～１９７５、２４７０～２４９７、２９４１～２９６５、３２７５～３３０２、３２７８～３３０２、３３２９～３３５３、３３３３～３３５７、３３３８～３３６７、３３３８～３３６６、３３４８～３３９０、３３４８～３３８８、３３５１～３３８５、５５０７～５５６２、および５５４９～５５９７のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖は、配列番号４の対応するヌクレオチド配列からの少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。

一実施形態において、アンチセンス鎖は、ＡＤ－５２３７９９．１、ＡＤ－５２３８０２．１、ＡＤ－５２３７９５．１、ＡＤ－５２３８１０．１、ＡＤ－５２３８０９．１、ＡＤ－１０１９３３１．１、ＡＤ－５２３８０１．１、ＡＤ－５２３８２３．１、ＡＤ－５２３７９８．１、ＡＤ－５２３８１６．１、ＡＤ－５２３８２４．１、ＡＤ－５２３８００．１、ＡＤ－５２３７９６．１、ＡＤ－５３５０９４．１、ＡＤ－５３５０９４．１、ＡＤ－５３５０９５．１、ＡＤ－５３８６４７．１、ＡＤ－５３５９２２．１、ＡＤ－５３６３１７．１、ＡＤ－５３６９１１．１、ＡＤ－５３８６２６．１、ＡＤ－５３５８６４．１、ＡＤ－５２３５６１．１、ＡＤ－５２３５６５．１、ＡＤ－５２３５６２．１、ＡＤ－５２６９１４．１、ＡＤ－５２６３９４．１、ＡＤ－３９５４５２．１、ＡＤ－５２５３４３．１、ＡＤ－５２４２７４．１、ＡＤ－５２６９５６．１、ＡＤ－５２６９８６．１、ＡＤ－５２６２９６．１、ＡＤ－５２６９８８．１、ＡＤ－５２６９５７．１、ＡＤ－５２６９９３．１、ＡＤ－１３９７０７０．１、ＡＤ－１３９７０７０．２、ＡＤ－１３９７０７１．１、ＡＤ－１３９７０７１．２、ＡＤ－１３９７０７２．１、ＡＤ－１３９７０７２．２、ＡＤ－１３９７０７３．１、ＡＤ－１３９７０７３．２、ＡＤ－１３９７０７４．１、ＡＤ－１３９７０７４．２、ＡＤ－１３９７０７５．１、ＡＤ－１３９７０７５．２、ＡＤ－１３９７０７６．１、ＡＤ－１３９７０７６．２、ＡＤ－１３９７０７７．１、ＡＤ－１３９７０７７．２、ＡＤ－１３９７０７８．１、ＡＤ－１３９７０７８．２、ＡＤ－１３９７２５０．１、ＡＤ－１３９７２５１．１、ＡＤ－１３９７２５２．１、ＡＤ－１３９７２５３．１、ＡＤ－１３９７２５４．１、ＡＤ－１３９７２５５．１、ＡＤ－１３９７２５６．１、ＡＤ－１３９７２５７．１、ＡＤ－１３９７２５８．１、ＡＤ－１３９７２５９．１、ＡＤ－１３９７２６０．１、ＡＤ－１３９７２６１．１、ＡＤ－１３９７２６２．１、ＡＤ－１３９７２６３．１、ＡＤ－１３９７２６４．１、ＡＤ－１３９７２６５．１、ＡＤ－１４２３２４２．１、ＡＤ－１４２３２４３．１、ＡＤ－１４２３２４４．１、ＡＤ－１４２３２４５．１、ＡＤ－１４２３２４６．１、ＡＤ－１４２３２４７．１、ＡＤ－１４２３２４８．１、ＡＤ－１４２３２４９．１、ＡＤ－１４２３２５０．１、ＡＤ－１４２３２５１．１、ＡＤ－１４２３２５２．１、ＡＤ－１４２３２５３．１、ＡＤ－１４２３２５４．１、ＡＤ－１４２３２５５．１、ＡＤ－１４２３２５６．１、ＡＤ－１４２３２５７．１、ＡＤ－１４２３２５８．１、ＡＤ－１４２３２５９．１、ＡＤ－１４２３２６０．１、ＡＤ－１４２３２６１．１、ＡＤ－１４２３２６２．１、ＡＤ－１４２３２６３．１、ＡＤ－１４２３２６４．１、ＡＤ－１４２３２６５．１、ＡＤ－１４２３２６６．１、ＡＤ－１４２３２６７．１、ＡＤ－１４２３２６８．１、ＡＤ－１４２３２６９．１、ＡＤ－１４２３２７０．１、ＡＤ－１４２３２７１．１、ＡＤ－１４２３２７２．１、ＡＤ－１４２３２７３．１、ＡＤ－１４２３２７４．１、ＡＤ－１４２３２７５．１、ＡＤ－１４２３２７６．１、ＡＤ－１４２３２７７．１、ＡＤ－１４２３２７８．１、ＡＤ－１４２３２７９．１、ＡＤ－１４２３２８０．１、ＡＤ－１４２３２８１．１、ＡＤ－１４２３２８２．１、ＡＤ－１４２３２８３．１、ＡＤ－１４２３２８４．１、ＡＤ－１４２３２８５．１、ＡＤ－１４２３２８６．１、ＡＤ－１４２３２８７．１、ＡＤ－１４２３２８８．１、ＡＤ－１４２３２８９．１、ＡＤ－１４２３２９０．１、ＡＤ－１４２３２９１．１、ＡＤ－１４２３２９２．１、ＡＤ－１４２３２９３．１、ＡＤ－１４２３２９４．１、ＡＤ－１４２３２９５．１、ＡＤ－１４２３２９６．１、ＡＤ－１４２３２９７．１、ＡＤ－１４２３２９８．１、ＡＤ－１４２３２９９．１、ＡＤ－１４２３３００．１、ＡＤ－１３９７２６６．１、ＡＤ－１３９７２６６．２、ＡＤ－１３９７２６７．１、ＡＤ－１４２３３０１．１、ＡＤ－１３９７２６８．１、ＡＤ－１３９７２６８．２、ＡＤ－１３９７２６９．１、ＡＤ－１４２３３０２．１、ＡＤ－１３９７２７０．１、ＡＤ－１３９７２７０．２、ＡＤ－１３９７２７１．１、ＡＤ－１３９７２７１．２、ＡＤ－１３９７２７２．１、ＡＤ－１４２３３０３．１、ＡＤ－１３９７２７３．１、ＡＤ－１４２３３０４．１、ＡＤ－１３９７２７４．１、ＡＤ－１４２３３０５．１、ＡＤ－１３９７２７５．１、ＡＤ－１４２３３０６．１、ＡＤ－１３９７２７６．１、ＡＤ－１３９７２７７．１、ＡＤ－１３９７２７７．２、ＡＤ－１３９７２７８．１、ＡＤ－１３９７２７９．１、ＡＤ－１３９７２８０．１、ＡＤ－１３９７２８１．１、ＡＤ－１３９７２８２．１、ＡＤ－１３９７２８３．１、ＡＤ－１３９７２８４．１、ＡＤ－１３９７２８５．１、ＡＤ－１３９７２８６．１、ＡＤ－１３９７２８７．１、ＡＤ－１３９７０７９．１、ＡＤ－１３９７０７９．２、ＡＤ－１３９７２８８．１、ＡＤ－１３９７２８９．１、ＡＤ－１３９７２９０．１、ＡＤ－１３９７０８０．１、ＡＤ－１３９７０８０．２、ＡＤ－１３９７２９１．１、ＡＤ－１３９７２９２．１、ＡＤ－１３９７２９３．１、ＡＤ－１３９７２９４．１、ＡＤ－１３９７０８１．１、ＡＤ－１３９７０８１．２、ＡＤ－１３９７２９５．１、ＡＤ－１３９７０８２．１、ＡＤ－１３９７０８２．２、ＡＤ－１３９７０８３．１、ＡＤ－１３９７０８３．２、ＡＤ－１３９７２９６．１、ＡＤ－１３９７２９７．１、ＡＤ－１３９７２９８．１、ＡＤ－１３９７２９９．１、ＡＤ－１３９７３００．１、ＡＤ－１３９７３０１．１、ＡＤ－１３９７３０２．１、ＡＤ－１３９７０８４．１、ＡＤ－１３９７０８５．１、ＡＤ－１３９７０８６．１、ＡＤ－１３９７３０３．１、ＡＤ－１３９７０８７．１、ＡＤ－１３９７０８７．２、ＡＤ－１３９７３０４．１、ＡＤ－１３９７３０５．１、ＡＤ－１３９７３０６．１、ＡＤ－１３９７３０７．１、ＡＤ－１３９７３０８．１、ＡＤ－１３９７３０９．１、ＡＤ－１３９７３１０．１、ＡＤ－１３９７３１１．１、ＡＤ－１３９７３１２．１、ＡＤ－１３９７３１３．１、ＡＤ－１３９７３１４．１、ＡＤ－１３９７３１５．１、ＡＤ－１３９７３１６．１、ＡＤ－１３９７３１７．１、ＡＤ－１３９７３１８．１、ＡＤ－１３９７３１９．１、ＡＤ－１３９７３２０．１、ＡＤ－１３９７３２１．１、ＡＤ－１３９７３２２．１、ＡＤ－１３９７０８８．１、ＡＤ－１３９７０８９．１、ＡＤ－１３９７０９０．１、ＡＤ－１３９７０９１．１、ＡＤ－１３９７０９２．１、ＡＤ－１３９７０９３．１、ＡＤ－１３９７０９４．１、ＡＤ－１３９７０９５．１、ＡＤ－１３９７０９６．１、ＡＤ－１３９７０９７．１、ＡＤ－１３９７０９８．１、ＡＤ－１３９７０９９．１、ＡＤ－１３９７１０１．１、ＡＤ－１３９７１０２．１、ＡＤ－１３９７１０３．１、ＡＤ－１３９７１０４．１、ＡＤ－１３９７１０５．１、ＡＤ－１３９７１０６．１、ＡＤ－１３９７１０７．１、ＡＤ－１３９７１０８．１、ＡＤ－１３９７１０９．１、ＡＤ－１３９７１１０．１、ＡＤ－１３９７１１１．１、ＡＤ－１３９７１１２．１、ＡＤ－１３９７１１３．１、ＡＤ－１３９７１１４．１、ＡＤ－１３９７１１５．１、ＡＤ－１３９７１１６．１、ＡＤ－１３９７１１７．１、ＡＤ－１３９７１１８．１、ＡＤ－１３９７１１９．１、ＡＤ－１３９７１２０．１、ＡＤ－１３９７１２１．１、ＡＤ－１３９７１２２．１、ＡＤ－１３９７１２３．１、ＡＤ－１３９７１２４．１、ＡＤ－１３９７１２５．１、ＡＤ－１３９７１２６．１、ＡＤ－１３９７１２７．１、ＡＤ－１３９７１２８．１、ＡＤ－１３９７１２９．１、ＡＤ－１３９７１３０．１、ＡＤ－１３９７１３１．１、ＡＤ－１３９７１３２．１、ＡＤ－１３９７１３３．１、ＡＤ－１３９７１３４．１、ＡＤ－１３９７１３５．１、ＡＤ－１３９７１３６．１、ＡＤ－１３９７１３７．１、ＡＤ－１３９７１３８．１、ＡＤ－１３９７１３９．１、ＡＤ－１３９７１４０．１、ＡＤ－１３９７１４１．１、ＡＤ－１３９７１４２．１、ＡＤ－１３９７１４３．１、ＡＤ－１３９７１４４．１、ＡＤ－１３９７１４５．１、ＡＤ－１３９７１４６．１、ＡＤ－１３９７１４７．１、ＡＤ－１３９７１４８．１、ＡＤ－１３９７１４９．１、ＡＤ－１３９７１５０．１、ＡＤ－１３９７１５１．１、ＡＤ－１３９７１５２．１、ＡＤ－１３９７１５３．１、ＡＤ－１３９７１５４．１、ＡＤ－１３９７１５５．１、ＡＤ－１３９７１５６．１、ＡＤ－１３９７１５７．１、ＡＤ－１３９７１５８．１、ＡＤ－１３９７１５９．１、ＡＤ－１３９７１６０．１、ＡＤ－１３９７１６１．１、ＡＤ－１３９７１６２．１、ＡＤ－１３９７１６３．１、ＡＤ－１３９７１６４．１、ＡＤ－１３９７１６５．１、ＡＤ－１３９７１６６．１、ＡＤ－１３９７１６７．１、ＡＤ－１３９７１６８．１、ＡＤ－１３９７１６９．１、ＡＤ－１３９７１７０．１、ＡＤ－１３９７１７１．１、ＡＤ－１３９７１７２．１、ＡＤ－１３９７１７３．１、ＡＤ－１３９７１７４．１、ＡＤ－１３９７１７５．１、ＡＤ－１３９７１７６．１、ＡＤ－１３９７１７７．１、ＡＤ－１３９７１７８．１、ＡＤ－１３９７１７９．１、ＡＤ－１３９７１８０．１、ＡＤ－１３９７１８１．１、ＡＤ－１３９７１８２．１、ＡＤ－１３９７１８３．１、ＡＤ－１３９７１８４．１、ＡＤ－１３９７１８５．１、ＡＤ－１３９７１８６．１、ＡＤ－１３９７１８７．１、ＡＤ－１３９７１８８．１、ＡＤ－１３９７１８９．１、ＡＤ－１３９７１９０．１、ＡＤ－１３９７１９１．１、ＡＤ－１３９７１９２．１、ＡＤ－１３９７１９３．１、ＡＤ－１３９７１９４．１、ＡＤ－１３９７１９５．１、ＡＤ－１３９７１９６．１、ＡＤ－１３９７１９７．１、ＡＤ－１３９７１９８．１、ＡＤ－１３９７１９９．１、ＡＤ－１３９７２００．１、ＡＤ－１３９７２０１．１、ＡＤ－１３９７２０２．１、ＡＤ－１３９７２０３．１、ＡＤ－１３９７２０４．１、ＡＤ－１３９７２０５．１、ＡＤ－１３９７２０６．１、ＡＤ－１３９７２０７．１、ＡＤ－１３９７２０８．１、ＡＤ－１３９７２０９．１、ＡＤ－１３９７２１０．１、ＡＤ－１３９７２１１．１、ＡＤ－１３９７２１２．１、ＡＤ－１３９７２１３．１、ＡＤ－１３９７２１４．１、ＡＤ－１３９７２１５．１、ＡＤ－１３９７２１６．１、ＡＤ－１３９７２１７．１、ＡＤ－１３９７２１８．１、ＡＤ－１３９７２１９．１、ＡＤ－１３９７２２０．１、ＡＤ－１３９７２２１．１、ＡＤ－１３９７２２２．１、ＡＤ－１３９７２２３．１、ＡＤ－１３９７２２４．１、ＡＤ－１３９７２２５．１、ＡＤ－１３９７２２６．１、ＡＤ－１３９７２２７．１、ＡＤ－１３９７２２８．１、ＡＤ－１３９７２２９．１、ＡＤ－１３９７２３０．１、ＡＤ－１３９７２３１．１、ＡＤ－１３９７２３２．１、ＡＤ－１３９７２３３．１、ＡＤ－１３９７２３４．１、ＡＤ－１３９７２３５．１、ＡＤ－１３９７２３６．１、ＡＤ－１３９７２３７．１、ＡＤ－１３９７２３８．１、ＡＤ－１３９７２３９．１、ＡＤ－１３９７２４０．１、ＡＤ－１３９７２４１．１、ＡＤ－１３９７２４２．１、ＡＤ－１３９７２４３．１、ＡＤ－１３９７２４４．１、ＡＤ－１３９７２４５．１、ＡＤ－１３９７２４６．１、ＡＤ－１３９７２４７．１、ＡＤ－１３９７２４８．１、ＡＤ－１３９７２４９．１、ＡＤ－５２３５６５．１、ＡＤ－１３９７０７２．３、ＡＤ－１３９７０７３．３、ＡＤ－１３９７０７６．３、ＡＤ－１３９７０７７．３、ＡＤ－１３９７０７８．３、ＡＤ－１３９７２５２．２、ＡＤ－１３９７２５７．２、ＡＤ－１３９７２５８．２、ＡＤ－１３９７２５９．２、ＡＤ－１３９７２６３．２、ＡＤ－１３９７２６４．２、ＡＤ－１３９７３０９．２、ＡＤ－６４９５８．１１４、ＡＤ－３９３７５８．４、ＡＤ－１３９７０８０．３、ＡＤ－１３９７２９３．２、ＡＤ－１３９７２９４．２、ＡＤ－１３９７０８１．３、ＡＤ－１３９７０８３．３、ＡＤ－１３９７２９８．２、ＡＤ－１３９７２９９．２、ＡＤ－
１３９７０８４．２、ＡＤ－１３９７０８５．２、ＡＤ－１３９７０８７．３、ＡＤ－１３９７３０６．２、ＡＤ－１３９７３０７．２、ＡＤ－１３９７３０８．２、ＡＤ－１３９７０８８．２、ＡＤ－１５６６２３８、ＡＤ－１５６６２３９、ＡＤ－１５６６２４０、ＡＤ－１５６６２４１、ＡＤ－１５６６２４２、ＡＤ－１５６６２４３、ＡＤ－１５６６２４４、ＡＤ－１５６６２４５、ＡＤ－１５６６２４６、ＡＤ－１０９１９６５、ＡＤ－１５６６２４８、ＡＤ－１５６６２４９、ＡＤ－１５６６２５０、ＡＤ－１０９１９６６、ＡＤ－１５６６２５１、ＡＤ－１５６６２５２、ＡＤ－１５６６２５３、ＡＤ－１５６６２５４、ＡＤ－１５６６２５５、ＡＤ－１５６６２５６、ＡＤ－１５６６２５７、ＡＤ－１５６６２５８、ＡＤ－１５６６２５９、ＡＤ－６９２９０６、ＡＤ－１５６６５７５、ＡＤ－１５６６５７６、ＡＤ－１５６６５７７、ＡＤ－１５６６５８０、ＡＤ－１５６６５８１、ＡＤ－１５６６５８２、ＡＤ－１５６６５８３、ＡＤ－１５６６５８４、ＡＤ－１５６６５８６、ＡＤ－１５６６５８７、ＡＤ－１５６６５８８、ＡＤ－１５６６５９０、ＡＤ－１５６６５９１、ＡＤ－１５６６６３４、ＡＤ－１５６６６３５、ＡＤ－１５６６６３８、ＡＤ－１５６６６３９、ＡＤ－１５６６６４１、ＡＤ－１５６６６４２、ＡＤ－１５６６６４３、ＡＤ－１５６６６７９、ＡＤ－１５６６８６１、ＡＤ－１５６７１５３、ＡＤ－１５６７１５４、ＡＤ－１５６７１５７、ＡＤ－１５６７１５９、ＡＤ－１５６７１６０、ＡＤ－１５６７１６１、ＡＤ－１５６７１６４、ＡＤ－１５６７１６７、ＡＤ－１５６７１９９、ＡＤ－１５６７２０２、ＡＤ－１５６７５５０、ＡＤ－１５６７５５４、ＡＤ－１５６７７８４、ＡＤ－１５６７８９６、ＡＤ－１５６７８９７、ＡＤ－１５６８１０５、ＡＤ－１５６８１０８、ＡＤ－１５６８１０９、ＡＤ－１５６８１３９、ＡＤ－１５６８１４０、ＡＤ－１５６８１４３、ＡＤ－１５６８１４４、ＡＤ－１５６８１４８、ＡＤ－１５６８１５０、ＡＤ－１５６８１５１、ＡＤ－１５６８１５２、ＡＤ－１５６８１５３、ＡＤ－１５６８１５４、ＡＤ－１５６８１５８、ＡＤ－１５６８１６１、ＡＤ－１５６８１７２、ＡＤ－１５６８１７４、ＡＤ－１５６８１７５、ＡＤ－６９２９０８、ＡＤ－１５６８１７６、ＡＤ－１５６９８３０、ＡＤ－１５６９８３２、ＡＤ－１５６９８３４、ＡＤ－１５６９８３５、ＡＤ－１５６９８６２、ＡＤ－１５６９８７２、ＡＤ－１５６９８９０およびＡＤ－１５６９８９２からなる群から選択される二重鎖のアンチセンス鎖のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。

特定の実施形態において、アンチセンス鎖は、ＡＤ－５２３７９９．１、ＡＤ－５２３８０２．１、ＡＤ－５２３７９５．１、ＡＤ－５２３８１０．１、ＡＤ－５２３８０９．１、ＡＤ－１０１９３３１．１、ＡＤ－５２３８０１．１、ＡＤ－５２３８２３．１、ＡＤ－５２３７９８．１、ＡＤ－５２３８１６．１、ＡＤ－５２３８２４．１、ＡＤ－５２３８００．１、ＡＤ－５２３７９６．１、ＡＤ－５３５０９４．１、ＡＤ－５３５０９４．１、ＡＤ－５３５０９５．１、ＡＤ－５３８６４７．１、ＡＤ－５３５９２２．１、ＡＤ－５３６３１７．１、ＡＤ－５３６９１１．１、ＡＤ－５３８６２６．１、ＡＤ－５３５８６４．１、ＡＤ－５２３５６１．１、ＡＤ－５２３５６５．１、ＡＤ－５２３５６２．１、ＡＤ－５２６９１４．１、ＡＤ－５２６３９４．１、ＡＤ－３９５４５２．１、ＡＤ－５２５３４３．１、ＡＤ－５２４２７４．１、ＡＤ－５２６９５６．１、ＡＤ－５２６９８６．１、ＡＤ－５２６２９６．１、ＡＤ－５２６９８８．１、ＡＤ－５２６９５７．１、およびＡＤ－５２６９９３．１からなる群から選択される二重鎖のアンチセンス鎖のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。一実施形態において、アンチセンス鎖は、ＡＤ－５２３７９９．１、ＡＤ－５２３８０２．１、ＡＤ－５２３７９５．１、ＡＤ－５２３８１０．１、ＡＤ－５２３８０９．１、ＡＤ－１０１９３３１．１、ＡＤ－５２３８０１．１、ＡＤ－５２３８２３．１、ＡＤ－５２３７９８．１、ＡＤ－５２３８１６．１、ＡＤ－５２３８２４．１、ＡＤ－５２３８００．１およびＡＤ－５２３７９６．１からなる群から選択される二重鎖のアンチセンス鎖のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。

一部の実施形態において、本発明は、ＭＡＰＴの発現を阻害するためのｄｓＲＮＡ剤であって、ｄｓＲＮＡ剤は、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、タウをコードするｍＲＮＡに対して相補性の領域を含み、相補性の領域は、表１２～１３のいずれか１つに記載のアンチセンスヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、ｄｓＲＮＡ剤を提供する。

一実施形態において、センス鎖は、配列番号５のヌクレオチド１０６５～１０８５、１１９５～１２１５、１０６６～１０８６、１０６８～１０８８、７０５～７２５、１０６７～１０８７、４５２０～４５４０、３３４１～３３６１、４５１５～４５３５、５２８４～５３０４、５２８５～５３０５、３４４～３６４、５２８３～５３０３、５３５４～５３７４、２４５９～２４７９、１０６１～１０８１、７０６～７２６、９７２～９９２、４５６４～４５８４、９９５～１０１５、４５４６～４５６６、９６８～９８８、１１２７～１１４７、４５３４～４５５４、１５８～１７８、４４９４～４５１４、１６９１～１７１１、３５４４～３５６４、１９８～２１８、９７９～９９９、４５４８～４５６８、４５５１～４５７１、５４３～５６３、７１５～７３５、５４２～５６２、３５２～３７２、３６２～３８２、４５５６～４５７６、４５４７～４５６７、４５４２～４５６２、４５５８～４５７８、４５４９～４５６９、５０７４～５０９４、４５５２～４５７２、５０７３～５０９３、５０７６～５０９６、４５５０～４５７０および２７５３～２７７３のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖は、配列番号６の対応するヌクレオチド配列からの少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。

一実施形態において、ｄｓＲＮＡに対する実質的に相補的な配列は、別々のオリゴヌクレオチドに含まれる。別の実施形態において、ｄｓＲＮＡに対する実質的に相補的な配列は、単一のオリゴヌクレオチドに含まれる。

表６～８、１３、１７、１９、２１、２３、２６および２８における配列は、修飾配列またはコンジュゲートされた配列として説明されるが、本開示のＲＮＡｉ剤のＲＮＡ、例えば、本開示のｄｓＲＮＡは、修飾されていない、コンジュゲートされていない、または説明されるものとは異なって修飾もしくはコンジュゲートされている、表３～８、１２、１３、および１６～２８のいずれか１つにおいて説明される配列のいずれか１つを含み得ることは理解されよう。例えば、本発明の薬剤のセンス鎖は、ＧａｌＮＡｃリガンドにコンジュゲートされてもよいが、これらの薬剤は、デリバリーをＣＮＳに誘導する部分、例えば、本明細書に記載されるようなＣ１６リガンドにコンジュゲートされてもよい。一実施形態において、この親油性部分は、飽和または不飽和Ｃ１６炭化水素鎖（例えば、線状Ｃ１６アルキルまたはアルケニル）を含有する。親油性リガンドは、本願に提供される位置のいずれに含まれてもよい。一部の実施形態において、親油性部分は、二本鎖ｉＲＮＡ剤の核酸塩基、糖部分、またはヌクレオシド間結合にコンジュゲートされる。例えば、Ｃ１６リガンドは、以下の構造に示されるようにリボヌクレオチドの２’－酸素を介してコンジュゲートされてもよい。

（式中、^＊は、隣接するヌクレオチドへの結合を表し、Ｂは、核酸塩基または核酸塩基類似体であり、ここでは、Ｂは、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、またはウラシルであってもよい。本明細書に提供されるリガンドおよびモノマーの設計および合成は、例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１９／２１７４５９、ＷＯ２０２０／１３２２２７、およびＷＯ２０２０／２５７１９４に記載されており、それらの全体は参照により本明細書に組み込まれる。

一部の実施形態において、二本鎖ｉＲＮＡ剤は、アンチセンス鎖の５’端にリン酸またはリン酸ミミックをさらに含む。一実施形態において、リン酸ミミックは、５’－ビニルホスホネート（ＶＰ）である。一部の実施形態において、二本鎖ｉＲＮＡ剤のアンチセンス鎖の５’端は、５’－ビニルホスホネート（ＶＰ）を含有しない。

当業者は、約２０から２３塩基対、例えば、２１塩基対の二重鎖構造を有するｄｓＲＮＡは、ＲＮＡ干渉の導入において特に有効であるとして歓迎されていることを十分に意識している［Elbashir et al., (2001) EMBO J., 20:6877-6888］。しかしながら、他のものは、より短いまたはより長いＲＮＡ二重鎖構造も有効であり得ることを分かっている［Chu and Rana (2007) RNA 14:1714-1719; Kim et al. (2005) Nat Biotech 23:222-226］。上記において説明した実施形態において、本明細書において提供されるオリゴヌクレオチド配列の性質により、本明細書において説明されるｄｓＲＮＡは、最小２１ヌクレオチド長さの少なくとも１つの鎖を含むことができる。片端または両端のいくつかのヌクレオチドを差し引いたより短い二重鎖は、上記において説明されるｄｓＲＮＡと比較して、同様に有効であり得ることは、合理的に予想することができる。したがって、本明細書に提供される配列の１つに由来する少なくとも１５、１６、１７、１８、１９、２０個、またはそれより多くの連続するヌクレオチドの配列を有するｄｓＲＮＡであって、本明細書の実施例に提供されるような、例えばＡ５４９細胞および１０ｎＭの濃度のＲＮＡ剤を用いたインビトロ（ｉｎｖｉｔｒｏ）アッセイならびにＰＣＲアッセイを使用したときに、ＭＡＰＴ遺伝子の発現を対照レベルに対して少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％阻害するそれらの能力が、全長配列を含むｄｓＲＮＡとは異なるｄｓＲＮＡは、本開示の範囲内であることが企図される。一部の実施形態において、全長配列を含むｄｓＲＮＡからの阻害は、一次マウス肝細胞を用いたインビトロアッセイを使用して測定した。

加えて、本明細書において説明されるＲＮＡは、ＲＩＳＣ媒介切断を受けやすいＭＡＰＴ転写物の部位を特定する。そのため、本開示は、この部位内を標的化するＲＮＡｉ剤をさらに特徴とする。本明細書において使用される場合、ＲＮＡｉ剤は、特定の部位内のいずれかにおける転写物の切断を促進する場合、ＲＮＡ転写物の特定の部位内を標的化すると言われる。そのようなＲＮＡｉ剤は、概して、ＭＡＰＴ遺伝子における選択された配列に隣接する領域から取られた追加のヌクレオチド配列にカップリングした本明細書において提供される配列の１つから、少なくとも約１５のヌクレオチド、好ましくは少なくとも１９のヌクレオチドを含むであろう。

ＩＩＩ．本開示の修飾されたＲＮＡｉ剤
一実施形態において、本開示のＲＮＡｉ剤のＲＮＡ、例えば、ｄｓＲＮＡは、未修飾であり、例えば、当技術分野で公知であり、本明細書に記載される化学修飾またはコンジュゲーションを含まない。好ましい実施形態において、本開示のＲＮＡｉ剤のＲＮＡ、例えば、ｄｓＲＮＡは、安定性または他の有益な特徴を増強するように化学修飾される。本開示のある特定の実施形態において、本開示のＲＮＡｉ剤のヌクレオチドの実質的に全てが修飾されている。本開示の他の実施形態において、本開示のＲＮＡｉ剤のヌクレオチドの全てが修飾されている。「ヌクレオチドの実質的に全てが修飾されている」本開示のＲＮＡｉ剤は、全体的にではないが大部分が修飾され、５、４、３、２または未修飾ヌクレオチドを含み得る。本開示のさらに他の実施形態において、本開示のＲＮＡｉ剤は、５、４、３、２または１つの修飾されたヌクレオチドを含み得る。

本開示において特徴とされる核酸は、当技術分野で十分に確立された方法、例えば、参照により本明細書に組み込まれる"Current protocols in nucleic acid chemistry," Beaucage, S.L. et al. (Edrs.), John Wiley & Sons, Inc., New York, NY, USAに記載されるものによって合成または修飾できる。修飾には、例えば、末端修飾、例えば、５’端修飾（リン酸化、コンジュゲーション、逆連結）または３’端修飾（コンジュゲーション、ＤＮＡヌクレオチド、逆連結など）、塩基修飾、例えば、安定化塩基、不安定化塩基もしくは拡大されたレパートリーのパートナーと塩基対形成する塩基との置き換え、塩基の除去（脱塩基ヌクレオチド）またはコンジュゲートされた塩基、糖修飾（例えば、２’位置または４’位置での）もしくは糖の置き換え、またはホスホジエステル結合の修飾もしくは置き換えを含む骨格修飾が含まれる。本明細書に記載される実施形態において有用なＲＮＡｉ剤の具体例として、それだけには限らないが、修飾された骨格を含有する、または天然ヌクレオシド間連結を含有しないＲＮＡが挙げられる。修飾された骨格を有するＲＮＡとして、中でも、骨格中にリン原子を有さないものが挙げられる。本明細書の目的上、時には、当技術分野で言及されるように、そのヌクレオシド間骨格中にリン原子を有さない修飾されたＲＮＡもまた、オリゴヌクレオシドであると考えることができる。一部の実施形態において、修飾されたＲＮＡｉ剤は、そのヌクレオシド間骨格中にリン原子を有する。

修飾されたＲＮＡ骨格として、例えば、ホスホロチオエート、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、メチルホスホネートならびに３’－アルキレンホスホネートおよびキラルホスホネートを含む他のアルキルホスホネート、ホスフィネート、３’－アミノホスホルアミダートおよびアミノアルキルホスホロアミデートを含むホスホロアミデート、チオノホスホロアミデート、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステルおよび通常の３’－５’連結を有するボラノホスフェート、２’－５’連結されたこれらの類似体およびヌクレオシド単位の隣接する対が、３’－５’から５’－３’または２’－５’から５’－２’に連結される逆極性を有するものが挙げられる。種々の塩、混合塩および遊離酸形態も含まれる。本発明の一部の実施形態において、本発明のｄｓＲＮＡ剤は、遊離酸形態である。本発明の他の実施形態において、本発明のｄｓＲＮＡ剤は、塩形態である。一実施形態において、本発明のｄｓＲＮＡ剤は、ナトリウム塩形態である。ある特定の実施形態において、本発明のｄｓＲＮＡ剤がナトリウム塩形態である場合には、ナトリウムイオンが、薬剤中に存在するホスホジエステルおよび／またはホスホロチオエート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏｔａｔｅ）基の実質的に全てに対する対イオンとして薬剤中に存在する。ホスホジエステルおよび／またはホスホロチオエート連結の実質的に全てがナトリウム対イオンを有する薬剤は、５、４、３、２または１つ以下の、ナトリウム対イオンを有さないホスホジエステルおよび／またはホスホロチオエート連結を含む。一部の実施形態において、本発明のｄｓＲＮＡ剤がナトリウム塩形態である場合は、ナトリウムイオンは、薬剤中に存在するホスホジエステルおよび／またはホスホロチオエート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏｔａｔｅ）基の全ての対イオンとして存在する。

上記のリン含有連結の調製を教示する代表的な米国特許として、それだけには限らないが、米国特許第３，６８７，８０８号、同４，４６９，８６３号、同４，４７６，３０１号、同５，０２３，２４３号、同５，１７７，１９５号、同５，１８８，８９７号、同５，２６４，４２３号、同５，２７６，０１９号、同５，２７８，３０２号、同５，２８６，７１７号、同５，３２１，１３１号、同５，３９９，６７６号、同５，４０５，９３９号、同５，４５３，４９６号、同５，４５５，２３３号、同５，４６６，６７７号、同５，４７６，９２５号、同５，５１９，１２６号、同５，５３６，８２１号、同５，５４１，３１６号、同５，５５０，１１１号、同５，５６３，２５３号、同５，５７１，７９９号、同５，５８７，３６１号、同５，６２５，０５０号、同６，０２８，１８８号、同６，１２４，４４５号、同６，１６０，１０９号、同６，１６９，１７０号、同６，１７２，２０９号、同６，２３９，２６５号、同６，２７７，６０３号、同６，３２６，１９９号、同６，３４６，６１４号、同６，４４４，４２３号、同６，５３１，５９０号、同６，５３４，６３９号、同６，６０８，０３５号、同６，６８３，１６７号、同６，８５８，７１５号、同６，８６７，２９４号、同６，８７８，８０５号、同７，０１５，３１５号、同７，０４１，８１６号、同７，２７３，９３３号、同７，３２１，０２９号および米国再発行特許第ＲＥ３９４６４号が挙げられ、それらの各々の内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。

中にリン原子を含まない修飾されたＲＮＡ骨格は、短鎖アルキルもしくはシクロアルキルヌクレオシド間連結、混合ヘテロ原子およびアルキルもしくはシクロアルキルヌクレオシド間連結または１つもしくは複数の短鎖ヘテロ原子もしくは複素環式ヌクレオシド間連結によって形成される骨格を有する。これらとして、モルホリノ連結（幾分かはヌクレオシドの糖部分から形成される）、シロキサン骨格、スルフィド、スルホキシドおよびスルホン骨格、ホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格、メチレンホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格、アルケン含有骨格、スルファメート骨格、メチレンイミノおよびメチレンヒドラジノ骨格、スルホネートおよびスルホンアミド骨格、アミド骨格を有するものならびに混合Ｎ、Ｏ、ＳおよびＣＨ_２構成成分部分を有する他のものが挙げられる。

上記のオリゴヌクレオシドの調製を教示する代表的な米国特許として、それだけには限らないが、米国特許第５，０３４，５０６号、同５，１６６，３１５号、同５，１８５，４４４号、同５，２１４，１３４号、同５，２１６，１４１号、同５，２３５，０３３号、同５，６４，５６２号、同５，２６４，５６４号、同５，４０５，９３８号、同５，４３４，２５７号、同５，４６６，６７７号、同５，４７０，９６７号、同５，４８９，６７７号、同５，５４１，３０７号、同５，５６１，２２５号、同５，５９６，０８６号、同５，６０２，２４０号、同５，６０８，０４６号、同５，６１０，２８９号、同５，６１８，７０４号、同５，６２３，０７０号、同５，６６３，３１２号、同５，６３３，３６０号、同５，６７７，４３７号および同５，６７７，４３９号が挙げられ、それらの各々の内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。

他の実施形態において、ＲＮＡｉ剤での使用に適したＲＮＡミメティックが企図され、このＲＮＡミメティックでは、ヌクレオチド単位の糖とヌクレオシド間連結の両方、すなわち骨格が代替の基で置き換えられている。塩基単位は、適切な核酸標的化合物とのハイブリダイゼーションのために維持される。１つのこのようなオリゴマー化合物、優れたハイブリダイゼーション特性を有するとわかっているＲＮＡミメティックは、ペプチド核酸（ＰＮＡ）と呼ばれる。ＰＮＡ化合物では、ＲＮＡの糖骨格は、アミド含有骨格、特に、アミノエチルグリシン骨格と置き換えられている。核酸塩基は、保持され、直接的または間接的に骨格のアミド部分のアザ窒素原子に結合される。ＰＮＡ化合物の調製を教示する代表的な米国特許として、それだけには限らないが、米国特許第５，５３９，０８２号、同５，７１４，３３１号および同５，７１９，２６２号が挙げられ、それらの各々の内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。本開示のＲＮＡｉ剤において使用するために適したさらなるＰＮＡ化合物は、例えば、Nielsen et al., Science, 1991, 254, 1497-1500に記載されている。

本開示において特徴とされるいくつかの実施形態には、ホスホロチオエート骨格を有するＲＮＡおよびヘテロ原子骨格、特に、上記で参照された米国特許第５，４８９，６７７号の－－ＣＨ_２－－ＮＨ－－ＣＨ_２－、－－ＣＨ_２－－Ｎ（ＣＨ_３）－－Ｏ－－ＣＨ_２－－［メチレン（メチルイミノ）またはＭＭＩ骨格として知られる］、－－ＣＨ_２－－Ｏ－－Ｎ（ＣＨ_３）－－ＣＨ_２－－、－－ＣＨ_２－－Ｎ（ＣＨ_３）－－Ｎ（ＣＨ_３）－－ＣＨ_２－－および－－Ｎ（ＣＨ_３）－－ＣＨ_２－－［天然のホスホジエステル骨格は、－－Ｏ－－Ｐ－－Ｏ－－ＣＨ_２－－として表される］および上記で参照された米国特許第５，６０２，２４０号のアミド骨格を有するオリゴヌクレオシドが含まれる。一部の実施形態において、本明細書において特徴とされるＲＮＡは、上記で参照されたＵＳ５，０３４，５０６のモルホリノ骨格構造を有する。

修飾されたＲＮＡはまた、１つまたは複数の置換された糖部分を含有し得る。本明細書において特徴とされるＲＮＡｉ剤、例えば、ｄｓＲＮＡは、２’位置に以下：ＯＨ；Ｆ；Ｏ－、Ｓ－もしくはＮ－アルキル；Ｏ－、Ｓ－もしくはＮ－アルケニル；Ｏ－、Ｓ－もしくはＮ－アルキニルまたはＯ－アルキル－Ｏ－アルキルのうち１つを含む場合があり、アルキル、アルケニルおよびアルキニルは、置換または非置換Ｃ_１～Ｃ_１０アルキルまたはＣ_２～Ｃ_１０アルケニルおよびアルキニルであり得る。例示的な適した修飾として、Ｏ［（ＣＨ_２）_ｎＯ］_ｍＣＨ_３、Ｏ（ＣＨ_２）．_ｎＯＣＨ_３、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＮＨ_２、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＯＮＨ_２およびＯ（ＣＨ_２）_ｎＯＮ［（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３）］_２が挙げられ、式中、ｎおよびｍは、１～約１０である。他の実施形態において、ｄｓＲＮＡは、２’位置に以下：Ｃ_１～Ｃ_１０低級アルキル、置換低級アルキル、アルカリル、アラルキル、Ｏ－アルカリルまたはＯ－アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ_３、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＣＦ_３、ＯＣＦ_３、ＳＯＣＨ_３、ＳＯ_２ＣＨ_３、ＯＮＯ_２、ＮＯ_２、Ｎ_３、ＮＨ_２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、ＲＮＡ切断基、レポーター基、干渉物質、ＲＮＡｉ剤の薬物動態特性を改善するための基またはＲＮＡｉ剤の薬動力学特性を改善するための基および同様の特性を有する他の置換基のうち１つを含む。一部の実施形態において、修飾は、２’－メトキシエトキシ（２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）または２’－ＭＯＥとしても知られる２’－Ｏ－－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３）（Martin et al., Helv. Chim. Acta, 1995, 78:486-504）、すなわち、アルコキシ－アルコキシ基を含む。別の例示的修飾として、２’－ジメチルアミノオキシエトキシ、すなわち、本明細書において以下に実施例において記載されるような２’－ＤＭＡＯＥとしても知られるＯ（ＣＨ_２）_２ＯＮ（ＣＨ_３）_２基および２’－ジメチルアミノエトキシエトキシ（２’－Ｏ－ジメチルアミノエトキシエチルまたは２’－ＤＭＡＥＯＥとしても当技術分野で公知の）、すなわち、２’－Ｏ－－ＣＨ_２－－Ｏ－－ＣＨ_２－－Ｎ（ＣＨ_２）_２がある。さらなる例示的修飾として、５’－Ｍｅ－２’－Ｆヌクレオチド、５’－Ｍｅ－２’－ＯＭｅヌクレオチド、５’－Ｍｅ－２’－デオキシヌクレオチド（これら３つのファミリー中のＲおよびＳ異性体の両方）、２’－アルコキシアルキルおよび２’－ＮＭＡ（Ｎ－メチルアセトアミド）が挙げられる。

他の修飾として、２’－メトキシ（２’－ＯＣＨ_３）、２’－アミノプロポキシ（２’－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２）、２’－Ｏ－ヘキサデシルおよび２’－フルオロ（２’－Ｆ）が挙げられる。同様の修飾はまた、ＲＮＡｉ剤のＲＮＡ上の他の位置、特に、３’末端ヌクレオチド上または２’－５’連結ｄｓＲＮＡ中の糖の３’位置および５’末端ヌクレオチドの５’位置でも行うことができる。ＲＮＡｉ剤はまた、糖ミメティック、例えば、ペントフラノシル糖の代わりにシクロブチル部分を有し得る。このような修飾された糖構造の調製を教示する代表的な米国特許として、それだけには限らないが、米国特許第４，９８１，９５７号、同５，１１８，８００号、同５，３１９，０８０号、同５，３５９，０４４号、同５，３９３，８７８号、同５，４４６，１３７号、同５，４６６，７８６号、同５，５１４，７８５号、同５，５１９，１３４号、同５，５６７，８１１号、同５，５７６，４２７号、同５，５９１，７２２号、同５，５９７，９０９号、同５，６１０，３００号、同５，６２７，０５３号、同５，６３９，８７３号、同５，６４６，２６５号、同５，６５８，８７３号、同５，６７０，６３３号および同５，７００，９２０号が挙げられ、それらのうちある特定のものは、本出願と共同所有されている。前記のものの各々の内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。

本開示のＲＮＡｉ剤はまた、核酸塩基（当技術分野では簡単に「塩基」と呼ばれることも多い）修飾または置換を含み得る。本明細書において使用される場合、「未修飾の」または「天然の」核酸塩基には、プリン塩基アデニン（Ａ）およびグアニン（Ｇ）、ピリミジン塩基チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）およびウラシル（Ｕ）が含まれる。修飾された核酸塩基には、他の合成および天然核酸塩基、例えば、５－メチルシトシン（５－ｍｅ－Ｃ）、５－ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２－アミノアデニン、アデニンおよびグアニンの６－メチルおよび他のアルキル誘導体、アデニンおよびグアニンの２－プロピルおよび他のアルキル誘導体、２－チオウラシル、２－チオチミンおよび２－チオシトシン、５－ハロウラシルおよびシトシン、５－プロピニルウラシルおよびシトシン、６－アゾウラシル、シトシンおよびチミン、５－ウラシル（シュードウラシル）、４－チオウラシル、８－ハロ、８－アミノ、８－チオール、８－チオアルキル、８－ヒドロキシルおよび（ａｎａｌ）他の８－置換アデニンおよびグアニン、５－ハロ、特に、５－ブロモ、５－トリフルオロメチルおよび他の５－置換ウラシルおよびシトシン、７－メチルグアニンおよび７－メチルアデニン、８－アザグアニンおよび８－アザアデニン、７－デアザグアニンおよび７－デアザアデニン（ｄａａｚａａｄｅｎｉｎｅ）ならびに３－デアザグアニンおよび３－デアザアデニンが含まれる。さらなる核酸塩基には、米国特許第３，６８７，８０８号に開示されるもの、Modified Nucleosides in Biochemistry, Biotechnology and Medicine, Herdewijn, P. ed. Wiley-VCH, 2008において開示されるもの、The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering, pages 858-859, Kroschwitz, J. L, ed. John Wiley & Sons, 1990において開示されるもの、Englisch et al., (1991) Angewandte Chemie, International Edition, 30:613によって開示されるものおよびSanghvi, Y S., Chapter 15, dsRNA Research and Applications, pages 289-302, Crooke, S. T. and Lebleu, B., Ed., CRC Press, 1993によって開示されるものが含まれる。これらの核酸塩基のうちある特定のものは、本開示において特徴とされるオリゴマー化合物の結合親和性を増大するために特に有用である。これらには、５－置換ピリミジン、６－アザピリミジンならびに２－アミノプロピルアデニン、５－プロピニルウラシルおよび５－プロピニルシトシンを含むＮ－２、Ｎ－６および０－６置換プリンが含まれる。５－メチルシトシン置換は、核酸二重鎖安定性を０．６～１．２℃だけ増大するとわかっており（Sanghvi, Y. S., Crooke, S. T. and Lebleu, B., Eds., dsRNA Research and Applications, CRC Press, Boca Raton, 1993, pp. 276-278）、さらにより詳しくは、２’－Ｏ－メトキシエチル糖修飾と組み合わせた場合に例示的塩基置換である。

上記の修飾された核酸塩基ならびに他の修飾された核酸塩基のある特定のものの調製を教示する代表的な米国特許として、それだけには限らないが、上記の米国特許第３，６８７，８０８号、同４，８４５，２０５号、同５，１３０，３０号、同５，１３４，０６６号、同５，１７５，２７３号、同５，３６７，０６６号、同５，４３２，２７２号、同５，４５７，１８７号、同５，４５９，２５５号、同５，４８４，９０８号、同５，５０２，１７７号、同５，５２５，７１１号、同５，５５２，５４０号、同５，５８７，４６９号、同５，５９４，１２１号、同５，５９６，０９１号、同５，６１４，６１７号、同５，６８１，９４１号、同５，７５０，６９２号、同６，０１５，８８６号、同６，１４７，２００号、同６，１６６，１９７号、同６，２２２，０２５号、同６，２３５，８８７号、同６，３８０，３６８号、同６，５２８，６４０号、同６，６３９，０６２号、同６，６１７，４３８号、同７，０４５，６１０号、同７，４２７，６７２号および同７，４９５，０８８号が挙げられ、それらの各々の内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。

本開示のＲＮＡｉ剤をまた、１つまたは複数のロックド核酸（ＬＮＡ）を含むように修飾できる。ロックド核酸は、リボース部分が２’および４’炭素を接続する追加の架橋を含む、修飾されたリボース部分を有するヌクレオチドである。この構造は、リボースを３’－エンド構造立体配座に効率的に「ロックする」。ｓｉＲＮＡへのロックド核酸の付加は、血清におけるｓｉＲＮＡ安定性を増大し、オフターゲット効果を低減するとわかっている［Elmen, J. et al., (2005) Nucleic Acids Research 33(1):439-447、Mook, OR. et al., (2007) Mol anc Ther 6(3):833-843、Grunweller, A. et al., (2003) Nucleic Acids Research 31(12):3185-3193］。

本開示のＲＮＡｉ剤をまた、１つまたは複数の二環式糖部分を含むように修飾できる。「二環式糖」は、２つの原子を架橋することによって修飾されたフラノシル環である。「二環式ヌクレオシド」（「ＢＮＡ」）は、糖環の２つの炭素原子を接続し、それによって二環式環構造を形成する架橋を含む糖部分を有するヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、架橋は、糖環の４’－炭素と２’－炭素を接続する。したがって、一部の実施形態において、本開示の薬剤は、１つまたは複数のロックド核酸（ＬＮＡ）を含み得る。ロックド核酸は、リボース部分が２’および４’炭素を接続する追加の架橋を含む、修飾されたリボース部分を有するヌクレオチドである。言い換えれば、ＬＮＡは、４’－ＣＨ２－Ｏ－２’架橋を含む二環式糖部分を含むヌクレオチドである。この構造は、リボースを３’－エンド構造立体配座に効率的に「ロックする」。ｓｉＲＮＡへのロックド核酸の付加は、血清におけるｓｉＲＮＡ安定性を増大し、オフターゲット効果を低減するとわかっている［Elmen, J. et al., (2005) Nucleic Acids Research 33(1):439-447、Mook, OR. et al., (2007) Mol Canc Ther 6(3):833-843、Grunweller, A. et al., (2003) Nucleic Acids Research 31(12):3185-3193］。本開示のポリヌクレオチドにおいて使用するための二環式ヌクレオシドの例として、制限するものではないが、４’と２’リボシル環原子の間の架橋を含むヌクレオシドが挙げられる。ある特定の実施形態において、本開示のアンチセンスポリヌクレオチド剤として、４’から２’への架橋を含む１つまたは複数の二環式ヌクレオシドが挙げられる。このような４’から２’へ架橋された二環式ヌクレオシドの例として、それだけには限らないが、４’－（ＣＨ２）－Ｏ－２’（ＬＮＡ）、４’－（ＣＨ２）－Ｓ－２’、４’－（ＣＨ２）２－Ｏ－２’（ＥＮＡ）、４’－ＣＨ（ＣＨ３）－Ｏ－２’（「拘束エチル」または「ｃＥｔ」とも呼ばれる）および４’－ＣＨ（ＣＨ２ＯＣＨ３）－Ｏ－２’（およびその類似体、例えば、米国特許第７，３９９，８４５号を参照されたい）、４’－Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ３）－Ｏ－２’（およびその類似体、例えば、米国特許第８，２７８，２８３号を参照されたい）、４’－ＣＨ２－Ｎ（ＯＣＨ３）－２’（およびその類似体、例えば、米国特許第８，２７８，４２５号を参照されたい）、４’－ＣＨ２－Ｏ－Ｎ（ＣＨ３）－２’（例えば、米国特許公開第２００４／０１７１５７０号を参照されたい）、４’－ＣＨ２－Ｎ（Ｒ）－Ｏ－２’（式中、Ｒは、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１２アルキルまたは保護基である）（例えば、米国特許第７，４２７，６７２号を参照されたい）、４’－ＣＨ２－Ｃ（Ｈ）（ＣＨ３）－２’（例えば、Chattopadhyaya et al., J. Org. Chem., 2009, 74, 118-134を参照されたい）および４’－ＣＨ２－Ｃ（－ＣＨ２）－２’（およびその類似体、例えば、米国特許第８，２７８，４２６号を参照されたい）が挙げられる。前記の各々の内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。

ロックド核酸ヌクレオチドの調製を教示するさらなる代表的な米国特許および米国特許公開として、それだけには限らないが、以下：米国特許第６，２６８，４９０号、同６，５２５，１９１号、同６，６７０，４６１号、同６，７７０，７４８号、同６，７９４，４９９号、同６，９９８，４８４号、同７，０５３，２０７号、同７，０３４，１３３号、同７，０８４，１２５号、同７，３９９，８４５号、同７，４２７，６７２号、同７，５６９，６８６号、同７，７４１，４５７号、同８，０２２，１９３号、同８，０３０，４６７号、同８，２７８，４２５号、同８，２７８，４２６号、同８，２７８，２８３号、ＵＳ２００８／００３９６１８およびＵＳ２００９／００１２２８１が挙げられ、それらの各々の内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。

例えば、α－Ｌ－リボフラノースおよびβ－Ｄ－リボフラノースを含む１つまたは複数の立体化学的糖立体配置を有する前記の二環式ヌクレオシドのいずれも、調製できる（ＷＯ９９／１４２２６を参照されたい）。

本開示のＲＮＡｉ剤をまた、１または複数の拘束エチルヌクレオチドを含むように修飾できる。本明細書において使用される場合、「拘束エチルヌクレオチド」または「ｃＥｔ」は、４’－ＣＨ（ＣＨ３）－０～２’架橋を含む二環式糖部分を含むロックド核酸である。一実施形態において、拘束エチルヌクレオチドは、Ｓ立体配座にあり、本明細書において「Ｓ－ｃＥｔ」と呼ばれる。

本開示のＲＮＡｉ剤はまた、１つまたは複数の「立体配座制限ヌクレオチド」（「ＣＲＮ」）を含み得る。ＣＲＮは、リボースのＣ２’とＣ４’炭素を、またはリボースのＣ３と－Ｃ５’炭素を接続するリンカーを有するヌクレオチド類似体である。ＣＲＮは、リボース環を安定な立体配座にロックし、ｍＲＮＡに対するハイブリダイゼーション親和性を増大する。リンカーは、酸素を安定性および親和性のために最適な位置に配置するのに十分な長さのものであり、その結果、リボース環パッカリングを少なくなる。

上記のＣＲＮのある特定のものの調製を教示する代表的な刊行物として、それだけには限らないが、ＵＳ２０１３／０１９０３８３およびＷＯ２０１３／０３６８６８が挙げられ、それらの各々の内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。

一部の実施形態において、本開示のＲＮＡｉ剤は、ＵＮＡ（非ロックド核酸）ヌクレオチドである１つまたは複数のモノマーを含む。ＵＮＡは、非ロックド非環式核酸であり、糖の結合のいずれも除去されており、非ロックド「糖」残基を形成する。一例では、ＵＮＡはまた、Ｃ１’－Ｃ４’の間の結合（すなわち、Ｃ１’とＣ４’炭素の間の共有結合の炭素－酸素－炭素結合）が除去されているモノマーも包含する。別の例では、糖のＣ２’－Ｃ３’結合（すなわち、Ｃ２’とＣ３’炭素の間の共有結合の炭素－炭素結合）が除去されている［参照により本明細書に組み込まれる、Nuc. Acids Symp. Series, 52, 133-134 (2008)およびFluiter et al., Mol. Biosyst., 2009, 10, 1039を参照されたい］。

ＵＮＡの調製を教示する代表的な米国の刊行物として、それだけには限らないが、ＵＳ８，３１４，２２７および米国特許公開第２０１３／００９６２８９号、同２０１３／００１１９２２号および同２０１１／０３１３０２０号が挙げられ、それらの各々の内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。

本開示のＲＮＡｉ剤は、１つまたは複数の「シクロヘキセン核酸」または（「ＣｅＮＡ」）も含んでもよい。ＣｅＮＡは、ＤＮＡのフラノース部分がシクロヘキセン環に置き換えられたヌクレオチド類似体である。ＤＮＡ鎖にシクロヘキセニルヌクレオシドを組み込むと、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッドの安定性が増大する。ＣｅＮＡは血清中での分解に対して安定であり、ＣｅＮＡ／ＲＮＡハイブリッドは、大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）ＲＮａｓｅＨを活性化し、それによってＲＮＡ鎖を切断することができる。（参照により本明細書に組み込まれる、Wang et al., Am. Chem. Soc. 2000, 122, 36, 8595-8602を参照されたい）。

ＲＮＡ分子の末端への潜在的に安定化する修飾として、Ｎ－（アセチルアミノカプロイル）－４－ヒドロキシプロリノール（Ｈｙｐ－Ｃ６－ＮＨＡｃ）、Ｎ－（カプロイル－４－ヒドロキシプロリノール（Ｈｙｐ－Ｃ６）、Ｎ－（アセチル－４－ヒドロキシプロリノール（Ｈｙｐ－ＮＨＡｃ）、チミジン－２’－０－デオキシチミジン（エーテル）、Ｎ－（アミノカプロイル）－４－ヒドロキシプロリノール（Ｈｙｐ－Ｃ６－アミノ）、２－ドコサノイル－ウリジン－３”－ホスフェート、逆塩基ｄＴ（ｉｄＴ）および他のものを挙げることができる。この修飾の開示内容は、ＷＯ２０１１／００５８６１に見出すことができる。

本開示のＲＮＡｉ剤の他の修飾として、５’ホスフェートまたは５’ホスフェートミミック、例えば、ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖上の５’末端ホスフェートまたはホスフェートミミックが挙げられる。適したホスフェートミミックは、例えば、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれるＵＳ２０１２／０１５７５１１に開示されている。

Ａ．本開示のモチーフを含む修飾されたＲＮＡｉ剤
本開示のある特定の態様では、本開示の二本鎖ＲＮＡｉ剤は、例えば、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１３／０７５０３５において開示されるような化学修飾を有する薬剤を含む。本明細書に、およびＷＯ２０１３／０７５０３５において示されるように、３連続ヌクレオチド上の３つの同一修飾の１つまたは複数のモチーフを、切断部位でまたはその付近でＲＮＡｉ剤のセンス鎖またはアンチセンス鎖中に導入することによって優れた結果を得ることができる。一部の実施形態において、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖は、そうでなければ完全に修飾され得る。これらのモチーフの導入は、存在する場合にはセンスまたはアンチセンス鎖の修飾パターンを妨げる。ＲＮＡｉ剤を、親油性リガンド、例えば、センス鎖上の例えば、Ｃ１６リガンドとコンジュゲートしてもよい。ＲＮＡｉ剤を、例えば、アンチセンス鎖の１つまたは複数の残基で（Ｓ）－グリコール核酸（ＧＮＡ）修飾で修飾してもよい。得られたＲＮＡｉ剤は、優れた遺伝子サイレンシング活性を示す。

したがって、本開示は、インビボで標的遺伝子（すなわち、ＭＡＰＴ遺伝子）の発現を阻害可能な二本鎖ＲＮＡｉ剤を提供する。ＲＮＡｉ剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含む。ＲＮＡｉ剤の各鎖は、１５～３０ヌクレオチド長であり得る。例えば、各鎖は、１６～３０ヌクレオチド長、１７～３０ヌクレオチド長、２５～３０ヌクレオチド長、２７～３０ヌクレオチド長、１７～２３ヌクレオチド長、１７～２１ヌクレオチド長、１７～１９ヌクレオチド長、１９～２５ヌクレオチド長、１９～２３ヌクレオチド長、１９～２１ヌクレオチド長、２１～２５ヌクレオチド長または２１～２３ヌクレオチド長であり得る。ある特定の実施形態において、各鎖は、１９～２３ヌクレオチド長である。

センス鎖およびアンチセンス鎖は通常、「ＲＮＡｉ剤」とも本明細書において呼ばれる二重鎖の二本鎖ＲＮＡ（「ｄｓＲＮＡ」）を形成する。ＲＮＡｉ剤の二重鎖領域は、１５～３０ヌクレオチド対の長さであり得る。例えば、二重鎖領域は、１６～３０ヌクレオチド対の長さ、１７～３０ヌクレオチド対の長さ、２７～３０ヌクレオチド対の長さ、１７～２３ヌクレオチド対の長さ、１７～２１ヌクレオチド対の長さ、１７～１９ヌクレオチド対の長さ、１９～２５ヌクレオチド対の長さ、１９～２３ヌクレオチド対の長さ、１９～２１ヌクレオチド対の長さ、２１～２５ヌクレオチド対の長さまたは２１～２３ヌクレオチド対の長さであり得る。別の例では、二重鎖領域は、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６および２７ヌクレオチド長から選択される。好ましい実施形態において、二重鎖領域は、１９～２１ヌクレオチド対の長さである。

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、一方または両方の鎖の３’端、５’端または両端に１つまたは複数のオーバーハング領域またはキャッピング基を含有し得る。オーバーハングは、１～６ヌクレオチド長、例えば、２～６ヌクレオチド長、１～５ヌクレオチド長、２～５ヌクレオチド長、１～４ヌクレオチド長、２～４ヌクレオチド長、１～３ヌクレオチド長、２～３ヌクレオチド長または１～２ヌクレオチド長であり得る。好ましい実施形態において、ヌクレオチドオーバーハング領域は、２ヌクレオチド長である。オーバーハングは、一方の鎖が他方よりも長い結果または同一の長さの２つの鎖がねじれ形である結果であり得る。オーバーハングは、標的ｍＲＮＡとミスマッチを形成し得る、または標的化される遺伝子配列と相補的であり得る、または別の配列であり得る。また、第１のおよび第２の鎖を、例えば、ヘアピンを形成する追加の塩基によって、または他の非塩基リンカーによってつなぐこともできる。

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤のオーバーハング領域中のヌクレオチドは各々独立に、２’－糖修飾された、例えば、２－Ｆ、２’－Ｏ－メチル、チミジン（Ｔ）およびそれらの任意の組合せを含むがそれに限定されるわけではない、修飾されたまたは未修飾のヌクレオチドであり得る。

例えば、ＴＴは、いずれかの鎖上のいずれかの末端のオーバーハング配列であり得る。オーバーハングは、標的ｍＲＮＡとミスマッチを形成し得る、または標的化される遺伝子配列と相補的であり得る、または別の配列であり得る。

ＲＮＡｉ剤のセンス鎖、アンチセンス鎖または両鎖の５’－または３’－オーバーハングは、リン酸化され得る。一部の実施形態において、オーバーハング領域（複数可）は、２つのヌクレオチドの間にホスホロチオエートを有する２つのヌクレオチドを含有し、２つのヌクレオチドは、同一である場合も、異なる場合もある。一実施形態において、オーバーハングは、センス鎖、アンチセンス鎖または両鎖の３’端に存在する。一実施形態において、この３’－オーバーハングは、アンチセンス鎖中に存在する。一実施形態において、この３’－オーバーハングは、センス鎖中に存在する。

ＲＮＡｉ剤は、その安定性全体に影響を及ぼすことなくＲＮＡｉの干渉活性を強化できる単一のオーバーハングのみを含有し得る。例えば、一本鎖オーバーハングは、センス鎖の３’末端に、あるいは、アンチセンス鎖の３’末端に位置し得る。ＲＮＡｉはまた、アンチセンス鎖の５’端（またはセンス鎖の３’端）に位置する平滑末端を有し得る、または逆も同じである。一般に、ＲＮＡｉのアンチセンス鎖は、３’端にヌクレオチドオーバーハングを有し、５’端は平滑である。理論に捉われようとは思わないが、非対称のアンチセンス鎖の５’端の平滑末端およびアンチセンス鎖の３’端オーバーハングは、ＲＩＳＣプロセスへのガイド鎖積み込みに好都合である。

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、両端が平滑末端化され、１９ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、５’端から位置７、８、９の３連続ヌクレオチド上に３つの２’－Ｆ修飾を有する少なくとも１つのモチーフを含有する。アンチセンス鎖は、５’端から位置１１、１２、１３の３連続ヌクレオチド上に３つの２’－Ｏ－メチル修飾を有する少なくとも１つのモチーフを含有する。

別の実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、両端が平滑末端化され、２０ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、５’端から位置８、９、１０の３連続ヌクレオチド上の３つの２’－Ｆ修飾の少なくとも１つのモチーフを含有する。アンチセンス鎖は、５’端から位置１１、１２、１３の３連続ヌクレオチド上の３つの２’－Ｏ－メチル修飾の少なくとも１つのモチーフを含有する。

さらに別の実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、両端が平滑末端化され、２１ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、５’端から位置９、１０、１１の３連続ヌクレオチド上の３つの２’－Ｆ修飾の少なくとも１つのモチーフを含有する。アンチセンス鎖は、５’端から位置１１、１２、１３の３連続ヌクレオチド上の３つの２’－Ｏ－メチル修飾の少なくとも１つのモチーフを含有する。

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、２１ヌクレオチドのセンス鎖および２３ヌクレオチドのアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、５’端から位置９、１０、１１の３連続ヌクレオチド上の３つの２’－Ｆ修飾の少なくとも１つのモチーフを含有し、アンチセンス鎖は、５’端から位置１１、１２、１３の３連続ヌクレオチド上の３つの２’－Ｏ－メチル修飾の少なくとも１つのモチーフを含有し、ＲＮＡｉ剤の一方の末端は、平滑であり、もう一方の末端は、２ヌクレオチドのオーバーハングを含む。好ましくは、２ヌクレオチドのオーバーハングは、アンチセンス鎖の３’端にある。２ヌクレオチドのオーバーハングが、アンチセンス鎖の３’端にある場合には、末端の３つのヌクレオチドの間に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結がある場合があり、３つのヌクレオチドのうち２つは、オーバーハングヌクレオチドであり、３番目のヌクレオチドは、オーバーハングヌクレオチドの次の対形成されたヌクレオチドである。一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、センス鎖の５’端およびアンチセンス鎖の５’端の両方で末端の３つのヌクレオチドの間に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結をさらに有する。一実施形態において、モチーフの一部であるヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖中のどのヌクレオチドも、修飾されたヌクレオチドである。一実施形態において、各残基は独立に、例えば、交互モチーフ中で２’－Ｏ－メチルまたは３’－フルオロで修飾されている。ＲＮＡｉ剤は、リガンド（例えば、親油性リガンド、適宜、Ｃ１６リガンド）をさらに含んでもよい。

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、センスおよびアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、２５～３０ヌクレオチド残基の長さであり、５’末端ヌクレオチド（位置１）から開始して、第１の鎖の位置１～２３は、少なくとも８のリボヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖は、３６～６６ヌクレオチド残基の長さであり、３’末端ヌクレオチドから開始して、センス鎖の位置１～２３と対形成する位置に少なくとも８のリボヌクレオチドを含んで、二本鎖を形成し、アンチセンス鎖の少なくとも３’末端ヌクレオチドは、センス鎖と対形成せず、最大６つの連続３’末端ヌクレオチドは、センス鎖と対形成せず、それによって、１～６ヌクレオチドの３’一本鎖オーバーハングを形成し、アンチセンス鎖の５’末端は、センス鎖と対形成しない１０～３０の連続ヌクレオチドを含み、それによって、１０～３０ヌクレオチドの一本鎖５’オーバーハングを形成し、少なくともセンス鎖５’末端および３’末端ヌクレオチドは、センスおよびアンチセンス鎖が最大相補性のためにアラインされる場合に、アンチセンス鎖のヌクレオチドと対形成される塩基であり、それによって、センスおよびアンチセンス鎖の間に実質的に二本鎖の領域を形成し、アンチセンス鎖は、アンチセンス鎖の長さの少なくとも１９リボヌクレオチドに沿って標的ＲＮＡと十分に相補的であり、二本鎖核酸が哺乳動物細胞中に導入される場合に標的遺伝子発現を低減させ、センス鎖は、３連続ヌクレオチド上の３つの２’－Ｆ修飾の少なくとも１つのモチーフを含有し、モチーフのうち少なくとも１つは、切断部位でまたはその付近で生じる。アンチセンス鎖は、切断部位にまたはその付近に３連続ヌクレオチド上の３つの２’－Ｏ－メチル修飾の少なくとも１つのモチーフを含有する。

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、センスおよびアンチセンス鎖を含み、ＲＮＡｉ剤は、少なくとも２５かつ多くとも２９ヌクレオチドである長さを有する第１の鎖と、多くとも３０ヌクレオチドである長さを有し、５’端から位置１１、１２、１３の３連続ヌクレオチド上の３つの２’－Ｏ－メチル修飾の少なくとも１つのモチーフを有する第２の鎖とを含み、第１の鎖の３’端と、第２の鎖の５’端は平滑末端を形成し、第２の鎖は、第１の鎖よりもその３’端で１～４ヌクレオチド長く、二重鎖領域は、少なくとも２５ヌクレオチド長であり、第２の鎖は、少なくとも１９ヌクレオチドの第２の鎖の長さに沿って標的ｍＲＮＡと十分に相補的であり、ＲＮＡｉ剤が哺乳動物細胞中に導入される場合に標的遺伝子発現を低減させ、ＲＮＡｉ剤のダイサー切断は、第２の鎖の３’端を含むｓｉＲＮＡを優先的にもたらし、それによって、哺乳動物において標的遺伝子の発現を低減する。適宜、ＲＮＡｉ剤は、リガンドをさらに含んでもよい。

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、３連続ヌクレオチド上の３つの同一の修飾の少なくとも１つのモチーフを含有し、モチーフのうち１つは、センス鎖中の切断部位に生じる。

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖もまた、３連続ヌクレオチド上の３つの同一の修飾の少なくとも１つのモチーフを含有することができ、モチーフのうち１つは、アンチセンス鎖中の切断部位にまたはその付近に生じる。

１７～２３ヌクレオチド長の二重鎖領域を有するＲＮＡｉ剤について、アンチセンス鎖の切断部位は通常、５’端からおよそ位置１０、１１および１２である。したがって、３つの同一の修飾のモチーフは、アンチセンス鎖の位置９、１０、１１、位置１０、１１、１２、位置１１、１２、１３、位置１２、１３、１４または位置１３、１４、１５に生じる場合がある、数はアンチセンス鎖の５’端から最初のヌクレオチドから開始する、または数はアンチセンス鎖の５’端から二重鎖領域内の最初の対形成されたヌクレオチドから開始する。アンチセンス鎖中の切断部位はまた、５’端からのＲＮＡｉの二重鎖領域の長さに応じて変化し得る。

ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、鎖の切断部位に３連続ヌクレオチド上の３つの同一の修飾の少なくとも１つのモチーフを含有し得る、アンチセンス鎖は、鎖の切断部位にまたはその付近に３連続ヌクレオチド上の３つの同一の修飾の少なくとも１つのモチーフを有し得る。センス鎖およびアンチセンス鎖がｄｓＲＮＡ二本鎖を形成する場合には、センス鎖およびアンチセンス鎖を、センス鎖上の３つのヌクレオチドの１つのモチーフおよびアンチセンス鎖上の３つのヌクレオチドの１つのモチーフが、少なくとも１つのヌクレオチド重複を有するように、すなわち、センス鎖中のモチーフの３つのヌクレオチドの少なくとも１つが、アンチセンス鎖中のモチーフの３つのヌクレオチドの少なくとも１つと塩基対を形成するように配列できる。あるいは、少なくとも２つのヌクレオチドが重複する場合がある、または３つのヌクレオチド全てが重複する場合がある。

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、３連続ヌクレオチド上の３つの同一の修飾の２つ以上のモチーフを含有し得る。第１のモチーフは、鎖の切断部位にまたはその付近に生じる場合があり、他のモチーフは、ウイング修飾であり得る。本明細書において「ウイング修飾」という用語は、同一の鎖の切断部位のまたはその付近のモチーフから離れている鎖の別の部分に生じるモチーフを指す。ウイング修飾は、第１のモチーフに隣接しているか、または少なくとも１つもしくはより多くのヌクレオチドだけ離れている。モチーフが互いにすぐ隣接する場合には、モチーフの化学は、互いに別個であり、モチーフが１つまたは複数のヌクレオチドだけ離れている場合には、化学は、同一である場合も異なっている場合もある。２以上のウイング修飾が存在する場合もある。例えば、２つのウイング修飾が存在する場合には、各ウイング修飾は、切断部位にもしくはその付近にある第１のモチーフに対して１つの末端に、またはリードモチーフのいずれかの側に生じ得る。

センス鎖と同様に、ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、３連続ヌクレオチド上の３つの同一の修飾の２つ以上のモチーフを含有する場合があり、モチーフの少なくとも１つは鎖の切断部位にまたはその付近に生じる。このアンチセンス鎖はまた、センス鎖上に存在し得るウイング修飾と同様の配列で１つまたは複数のウイング修飾を含有し得る。

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖またはアンチセンス鎖上のウイング修飾は通常、鎖の３’端、５’端または両端に最初の１つまたは２つの末端ヌクレオチドを含まない。

別の実施形態において、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖またはアンチセンス鎖上のウイング修飾は通常、鎖の３’端、５’端または両端に二重鎖領域内の最初の１つまたは２つの対形成されるヌクレオチドを含まない。

ＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖が各々、少なくとも１つのウイング修飾を含有する場合には、ウイング修飾は、二重鎖領域の同一末端に入る場合があり、１、２または３つのヌクレオチドの重複を有する。

ＲＮＡｉ剤のセンス鎖またはアンチセンス鎖が各々、少なくとも２つのウイング修飾を含有する場合には、センス鎖およびアンチセンス鎖を、１つの鎖に由来する２つの修飾が各々、二重鎖領域の１つの末端に入り、１、２または３つのヌクレオチドの重複を有し、１つの鎖に由来する２つの修飾が各々、二重鎖領域のもう一方の末端に入り、１、２または３つのヌクレオチドの重複を有し、２つの修飾１つの鎖がリードモチーフの各側に入り、二重鎖領域中に１、２または３つのヌクレオチドの重複を有するように配列できる。

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、標的との、二本鎖内のミスマッチ（複数可）またはそれらの組合せを含む。ミスマッチは、オーバーハング領域または二重鎖領域中に生じ得る。塩基対は、解離または融解を促進するその傾向に基づいてランク付けできる（例えば、特定の対形成の会合または解離の自由エネルギーで、最も簡単なアプローチは、個々の対に基づいて対を調べることであるが、次の隣接分析または同様の分析も使用できる）。解離の促進の点では：Ａ：ＵはＧ：Ｃを上回って好ましく、Ｇ：ＵはＧ：Ｃを上回って好ましく、Ｉ：ＣはＧ：Ｃを上回って好ましい（Ｉ＝イノシン）。ミスマッチ、例えば、非正準対形成または正準対形成以外のもの（本明細書において別の場所で記載されるような）は、正準（Ａ：Ｔ、Ａ：Ｕ、Ｇ：Ｃ）対形成を上回って好ましく、ユニバーサル塩基を含む対形成は正準対形成を上回って好ましい。

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、二本鎖の５’端でのアンチセンス鎖の解離を促進するために、Ａ：Ｕ、Ｇ：Ｕ、Ｉ：Ｃおよびミスマッチ対、例えば、非正準対形成または正準対形成以外のものまたはユニバーサル塩基を含む対形成の群から独立に選択される、アンチセンス鎖の５’端から二重鎖領域内の最初の１、２、３、４または５つの塩基対のうち少なくとも１つを含む。

一実施形態において、アンチセンス鎖中の５’端から二重鎖領域内の１位置のヌクレオチドは、Ａ、ｄＡ、ｄＵ、ＵおよびｄＴからなる群から選択される。あるいは、アンチセンス鎖の５’端から二重鎖領域内の最初の１、２または３つの塩基対のうち少なくとも１つは、ＡＵ塩基対である。例えば、アンチセンス鎖の５’端から二重鎖領域内の最初の塩基対は、ＡＵ塩基対である。

別の実施形態において、センス鎖の３’端のヌクレオチドは、デオキシ－チミン（ｄＴ）である。別の実施形態において、アンチセンス鎖の３’端のヌクレオチドは、デオキシ－チミン（ｄＴ）である。一実施形態において、デオキシ－チミンヌクレオチドの短い配列、例えば、センスまたはアンチセンス鎖の３’端の２つのｄＴヌクレオチドがある。

一実施形態において、センス鎖配列は、式（Ｉ）：
５’ｎ_ｐ－Ｎ_ａ－（ＸＸ）_ｉ－Ｎ_ｂ－ＹＹ－Ｎ_ｂ－（Ｚ）_ｊ－Ｎ_ａ－ｎ_ｑ３’ （Ｉ）
［式中、
ｉおよびｊは各々独立に、０または１であり、
ｐおよびｑは各々独立に、０～６であり、
各Ｎ_ａは独立に、０～２５の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表し、各配列は、少なくとも２つの異なって修飾されたヌクレオチドを含み、
各Ｎ_ｂは独立に、０～１０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表し、
各ｎ_ｐおよびｎ_ｑは独立に、オーバーハングヌクレオチドを表し、
ＮｂおよびＹは、同一修飾を有さず、ならびに
ＸＸＸ、ＹＹＹおよびＺＺＺは各々独立に、３連続ヌクレオチド上の３つの同一の修飾の１つのモチーフを表す］
によって表すことができる。好ましくは、ＹＹＹは、全て２’－Ｆ修飾されたヌクレオチドである。

一実施形態において、Ｎ_ａまたはＮ_ｂは、交互パターンの修飾を含む。

一実施形態において、ＹＹＹモチーフは、センス鎖の切断部位にまたはその付近に生じる。例えば、ＲＮＡｉ剤が１７～２３ヌクレオチド長の二重鎖領域を有する場合には、ＹＹＹモチーフは、センス鎖の切断部位にまたはその近傍に生じ得る（例えば、位置６、７、８、７、８、９、８、９、１０、９、１０、１１、１０、１１、１２または１１、１２、１３に生じ得る）、数は５’端から最初のヌクレオチドから開始する、または適宜、数は５’端から二重鎖領域内の最初の対形成されたヌクレオチドで開始してもよい。

一実施形態において、ｉは１であり、ｊは０である、またはｉは０であり、ｊは１である、またはｉおよびｊは両方とも１である。したがって、センス鎖は、以下の式：
５’ ｎ_ｐ－Ｎ_ａ－ＹＹＹ－Ｎ_ｂ－ＺＺＺ－Ｎ_ａ－ｎ_ｑ３’ （Ｉｂ）、
５’ ｎ_ｐ－Ｎ_ａ－ＸＸＸ－Ｎ_ｂ－ＹＹＹ－Ｎ_ａ－ｎ_ｑ３’ （Ｉｃ）、または
５’ ｎ_ｐ－Ｎ_ａ－ＸＸＸ－Ｎ_ｂ－ＹＹＹ－Ｎ_ｂ－ＺＺＺ－Ｎ_ａ－ｎ_ｑ３’ （Ｉｄ）
によって表すことができる。

センス鎖が式（Ｉｂ）によって表される場合は、Ｎ_ｂは、０～１０、０～７、０～５、０～４、０～２または０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。

各Ｎ_ａは独立に、２～２０、２～１５または２～１０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表すことができる。

センス鎖が式（Ｉｃ）として表される場合は、Ｎ_ｂは、０～１０、０～７、０～１０、０～７、０～５、０～４、０～２または０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。各Ｎ_ａは、独立に、２～２０、２～１５または２～１０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す場合もある。

センス鎖が、式（Ｉｄ）として表される場合には、各Ｎ_ｂは独立に、０～１０、０～７、０～５、０～４、０～２または０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。好ましくは、Ｎ_ｂは、０、１、２、３、４、５または６である。各Ｎ_ａは独立に、２～２０、２～１５または２～１０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す場合もある。

Ｘ、ＹおよびＺの各々は、互いに同一である場合も、異なっている場合もある。

他の実施形態において、ｉは０であり、ｊは０であり、センス鎖は、次式：
５’ ｎ_ｐ－Ｎ_ａ－ＹＹＹ－Ｎ_ａ－ｎ_ｑ３’ （Ｉａ）
によって表すことができる。

センス鎖が、式（Ｉａ）によって表される場合には、各Ｎ_ａは独立に、２～２０、２～１５または２～１０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を含み得る。

一実施形態において、ＲＮＡｉのアンチセンス鎖配列は、式（ＩＩ）：
５’ ｎ_ｑ’－Ｎ_ａ’－（Ｚ’Ｚ’Ｚ’）_ｋ－Ｎ_ｂ’－Ｙ’Ｙ’Ｙ’－Ｎ_ｂ’－（Ｘ’Ｘ’Ｘ’）_ｌ－Ｎ’_ａ－ｎ_ｐ’ ３’ （ＩＩ）
［式中、
ｋおよびｌは各々独立に、０または１であり、
ｐ’およびｑ’は各々独立に、０～６であり、
各Ｎ_ａ’は独立に、０～２５の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表し、各配列は、少なくとも２つの異なって修飾されたヌクレオチドを含み、
各Ｎ_ｂ’独立に、０～１０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表し、
各ｎ_ｐ’およびｎ_ｑ’は独立に、オーバーハングヌクレオチドを表し、
Ｎ_ｂ’およびＹ’は、同一修飾を有さず、
Ｘ’Ｘ’Ｘ’、Ｙ’Ｙ’Ｙ’およびＺ’Ｚ’Ｚ’は各々独立に、３連続ヌクレオチド上の３つの同一の修飾の１つのモチーフを表す］
によって表すことができる。

一実施形態において、Ｎ_ａ’またはＮ_ｂ’は、交互パターンの修飾を含む。

Ｙ’Ｙ’Ｙ’モチーフは、センス鎖の切断部位にまたはその付近に生じる。例えば、ＲＮＡｉ剤が、１７～２３ヌクレオチド長の二重鎖領域を有する場合には、Ｙ’Ｙ’Ｙ’モチーフは、アンチセンス鎖の位置９、１０、１１、位置１０、１１、１２、位置１１、１２、１３、位置１２、１３、１４または一１３、１４、１５で生じる場合があり、数は５’端から最初のヌクレオチドから開始する、または適宜、数は５’端から二重鎖領域内の最初の対形成されたヌクレオチドで開始してもよい。好ましくは、Ｙ’Ｙ’Ｙ’モチーフは、位置１１、１２、１３で生じる。

一実施形態において、Ｙ’Ｙ’Ｙ’モチーフは、全て２’－ＯＭｅ修飾されたヌクレオチドである。

一実施形態において、ｋは１であり、ｌは０であるか、またはｋは０であり、ｌは１であるか、またはｋおよびｌは両方とも１である。

したがって、アンチセンス鎖は、次式：
５’ ｎ_ｑ’－Ｎ_ａ’－Ｚ’Ｚ’Ｚ’－Ｎ_ｂ’－Ｙ’Ｙ’Ｙ’－Ｎ_ａ’－ｎ_ｐ’ ３’ （ＩＩｂ）、
５’ ｎ_ｑ’－Ｎ_ａ’－Ｙ’Ｙ’Ｙ’－Ｎ_ｂ’－Ｘ’Ｘ’Ｘ’－ｎ_ｐ’ ３’ （ＩＩｃ）、または
５’ ｎ_ｑ’－Ｎ_ａ’－Ｚ’Ｚ’Ｚ’－Ｎ_ｂ’－Ｙ’Ｙ’Ｙ’－Ｎ_ｂ’－Ｘ’Ｘ’Ｘ’－Ｎ_ａ’－ｎ_ｐ’ ３’ （ＩＩｄ）
によって表すことができる。

アンチセンス鎖が式（ＩＩｂ）によって表される場合には、Ｎ_ｂ ^’は、０～１０、０～７、０～１０、０～７、０～５、０～４、０～２または０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。各Ｎ_ａ’は独立に、２～２０、２～１５または２～１０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。

アンチセンス鎖が式（ＩＩｃ）として表される場合には、Ｎ_ｂ’は、０～１０、０～７、０～１０、０～７、０～５、０～４、０～２または０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。各Ｎ_ａ’は独立に、２～２０、２～１５または２～１０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。

アンチセンス鎖が式（ＩＩｄ）として表される場合には、各Ｎ_ｂ’は独立に、０～１０、０～７、０～１０、０～７、０～５、０～４、０～２または０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。各Ｎ_ａ’は独立に、２～２０、２～１５または２～１０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。好ましくは、Ｎ_ｂは、０、１、２、３、４、５または６である。

他の実施形態において、ｋは０であり、ｌは０であり、アンチセンス鎖は、次式：
５’ ｎ_ｐ’－Ｎ_ａ’－Ｙ’Ｙ’Ｙ’－Ｎ_ａ’－ｎ_ｑ’ ３’ （Ｉａ）
によって表すことができる。

アンチセンス鎖が、式（ＩＩａ）として表される場合には、各Ｎ_ａ’は独立に、２～２０、２～１５または２～１０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。

Ｘ’、Ｙ’およびＺ’の各々は、互いに同一である場合も、異なっている場合もある。

センス鎖およびアンチセンス鎖の各ヌクレオチドは、ＬＮＡ、ＨＮＡ、ＣｅＮＡ、２’－メトキシエチル、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－アリル、２’－Ｃ－アリル、２’－ヒドロキシルまたは２’－フルオロで独立に修飾され得る。例えば、センス鎖およびアンチセンス鎖の各ヌクレオチドは、２’－Ｏ－メチルまたは２’－フルオロで独立に修飾される。各Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｘ’、Ｙ’およびＺ’は、特に、２’－Ｏ－メチル修飾または２’－フルオロ修飾を表す場合がある。

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、二重鎖領域が２１ｎｔである場合に、鎖の位置９、１０および１１で生じるＹＹＹモチーフを含有し得る、数は５’端から最初のヌクレオチドから開始する、または適宜、数は５’端から二重鎖領域内の最初の対形成されたヌクレオチドで開始してもよく、Ｙは、２’－Ｆ修飾を表す。センス鎖は、二重鎖領域の対向端にウイング修飾としてＸＸＸモチーフまたはＺＺＺモチーフをさらに含有する場合があり、ＸＸＸおよびＺＺＺは各々独立に、２’－ＯＭｅ修飾または２’－Ｆ修飾を表す。

一実施形態において、アンチセンス鎖は、鎖の位置１１、１２、１３で生じるＹ’Ｙ’Ｙ’モチーフを含有し得る、数は５’端から最初のヌクレオチドから開始する、または適宜、数は５’端から二重鎖領域内の最初の対形成されたヌクレオチドで開始してもよく、Ｙ’は、２’－Ｏ－メチル修飾を表す。アンチセンス鎖は、二重鎖領域の対向端にウイング修飾としてＸ’Ｘ’Ｘ’モチーフまたはＺ’Ｚ’Ｚ’モチーフをさらに含有する場合があり、Ｘ’Ｘ’Ｘ’およびＺ’Ｚ’Ｚ’は各々独立に、２’－ＯＭｅ修飾または２’－Ｆ修飾を表す。

上記の式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）および（Ｉｄ）のいずれか１つによって表されるセンス鎖は、それぞれ式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）および（ＩＩｄ）のいずれか１つによって表されるアンチセンス鎖と二重鎖を形成する。

したがって、本開示の方法において使用するためのＲＮＡｉ剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むことができ、各鎖は、１４～３０ヌクレオチドを有し、ＲＮＡｉ二重鎖は、式（ＩＩＩ）：
センス：５’ ｎ_ｐ－Ｎ_ａ－（ＸＸＸ）_ｉ－Ｎ_ｂ－ＹＹＹ－Ｎ_ｂ－（ＺＺＺ）_ｊ－Ｎ_ａ－ｎ_ｑ３’
アンチセンス：３’ ｎ_ｐ ^’－Ｎ_ａ ^’－（Ｘ’Ｘ’Ｘ’）_ｋ－Ｎ_ｂ ^’－Ｙ’Ｙ’Ｙ’－Ｎ_ｂ ^’－（Ｚ’Ｚ’Ｚ’）_ｌ－Ｎ_ａ ^’－ｎ_ｑ ^’ ５’ （ＩＩＩ）
［式中、
ｉ、ｊ、ｋおよびｌは各々独立に、０または１であり、
ｐ、ｐ’、ｑおよびｑ’は各々独立に、０～６であり、
各Ｎ_ａおよびＮ_ａ ^’は独立に、０～２５の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表し、各配列は、少なくとも２つの異なって修飾されたヌクレオチドを含み、
各Ｎ_ｂおよびＮ_ｂ ^’は独立に、０～１０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表し、
各ｎ_ｐ’、ｎ_ｐ、ｎ_ｑ’およびｎ_ｑは、それらの各々は存在する場合も存在しない場合もあるが、オーバーハングヌクレオチドを独立に表し、
ＸＸＸ、ＹＹＹ、ＺＺＺ、Ｘ’Ｘ’Ｘ’、Ｙ’Ｙ’Ｙ’およびＺ’Ｚ’Ｚ’は各々独立に、３連続ヌクレオチド上の３つの同一の修飾の１つのモチーフを表す］
によって表される。

一実施形態において、ｉは０であり、ｊは０であるか、またはｉは１であり、ｊは０であるか、またはｉは０であり、ｊは１であるか、またはｉおよびｊは両方とも０であるか、またはｉおよびｊは両方とも１である。別の実施形態において、ｋは０であり、ｌは０であるか、またはｋは１であり、ｌは０であり、ｋは０であり、ｌは１であるか、またはｋおよびｌは両方とも０であるか、またはｋおよびｌは両方とも１である。

ＲＮＡｉ二重鎖を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖の例示的組合せは、以下の式：
５’ ｎ_ｐ－Ｎ_ａ－ＹＹＹ－Ｎ_ａ－ｎ_ｑ３’
３’ ｎ_ｐ ^’－Ｎ_ａ ^’－Ｙ’Ｙ’Ｙ’ －Ｎ_ａ ^’ｎ_ｑ ^’ ５’ （ＩＩＩａ）
５’ ｎ_ｐ－Ｎ_ａ－ＹＹＹ－Ｎ_ｂ－ＺＺＺ－Ｎ_ａ－ｎ_ｑ３’
３’ ｎ_ｐ ^’－Ｎ_ａ ^’－Ｙ’Ｙ’Ｙ’－Ｎ_ｂ ^’－Ｚ’Ｚ’Ｚ’－Ｎ_ａ ^’ｎ_ｑ ^’５’
（ＩＩＩｂ）
５’ ｎ_ｐ－Ｎ_ａ－ＸＸＸ－Ｎ_ｂ－ＹＹＹ－Ｎ_ａ－ｎ_ｑ３’
３’ ｎ_ｐ ^’－Ｎ_ａ ^’－Ｘ’Ｘ’Ｘ’－Ｎ_ｂ ^’－Ｙ’Ｙ’Ｙ’－Ｎ_ａ ^’－ｎ_ｑ ^’ ５’ （ＩＩＩｃ）
５’ ｎ_ｐ－Ｎ_ａ－ＸＸＸ－Ｎ_ｂ－ＹＹＹ－Ｎ_ｂ－ＺＺＺ－Ｎ_ａ－ｎ_ｑ３’
３’ ｎ_ｐ ^’－Ｎ_ａ ^’－Ｘ’Ｘ’Ｘ’－Ｎ_ｂ ^’－Ｙ’Ｙ’Ｙ’－Ｎ_ｂ ^’－Ｚ’Ｚ’Ｚ’－Ｎ_ａ－ｎ_ｑ ^’ ５’
（ＩＩＩｄ）
を含む。

ＲＮＡｉ剤が式（ＩＩＩａ）によって表される場合には、各Ｎ_ａは独立に、２～２０、２～１５または２～１０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。

ＲＮＡｉ剤が式（ＩＩＩｂ）によって表される場合には、各Ｎ_ｂは独立に、１～１０、１～７、１～５または１～４の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。各Ｎ_ａは独立に、２～２０、２～１５、または２～１０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。

ＲＮＡｉ剤が式（ＩＩＩｃ）として表される場合には、各Ｎ_ｂ、Ｎ_ｂ’は独立に、０～１０、０～７、０～１０、０～７、０～５、０～４、０～２または０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。各Ｎ_ａは独立に、２～２０、２～１５または２～１０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。

ＲＮＡｉ剤が式（ＩＩＩｄ）として表される場合には、各Ｎ_ｂ、Ｎ_ｂ’は独立に、０～１０、０～７、０～１０、０～７、０～５、０～４、０～２または０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。各Ｎ_ａ、Ｎ_ａ ^’は独立に、２～２０、２～１５または２～１０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。Ｎ_ａ、Ｎ_ａ’、Ｎ_ｂおよびＮ_ｂ ^’の各々は独立に、交互パターンの修飾を含む。

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤が式（ＩＩＩｄ）によって表される場合には、Ｎ_ａ修飾は、２’－Ｏ－メチルまたは２’－フルオロ修飾である。別の実施形態において、ＲＮＡｉ剤が式（ＩＩＩｄ）によって表される場合には、Ｎ_ａ修飾は、２’－Ｏ－メチルまたは２’－フルオロ修飾であり、ｎ_ｐ’＞０であり、少なくとも１つのｎ_ｐ’は、ホスホロチオエート連結を介して隣接するヌクレオチドに連結される。さらに別の実施形態において、ＲＮＡｉ剤が式（ＩＩＩｄ）によって表される場合には、Ｎ_ａ修飾は、２’－Ｏ－メチルまたは２’－フルオロ修飾であり、ｎ_ｐ’＞０であり、少なくとも１つのｎ_ｐ’は、ホスホロチオエート連結を介して隣接するヌクレオチドに連結され、センス鎖は、二価または三価の分岐リンカー（以下に記載される）によって付着された１つまたは複数のＣ１６（または関連）部分にコンジュゲートされる。別の実施形態において、ＲＮＡｉ剤が式（ＩＩＩｄ）によって表される場合には、Ｎ_ａ修飾は、２’－Ｏ－メチルまたは２’－フルオロ修飾であり、ｎ_ｐ’＞０であり、少なくとも１つのｎ_ｐ’は、ホスホロチオエート連結を介して隣接するヌクレオチドに連結され、センス鎖は、少なくとも１つのホスホロチオエート連結を含み、センス鎖は、二価または三価の分岐リンカーによって付着されてもよい、１つまたは複数の親油性の、例えば、Ｃ１６（または関連）部分にコンジュゲートされる。

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤が式（ＩＩＩａ）によって表される場合には、Ｎ_ａ修飾は、２’－Ｏ－メチルまたは２’－フルオロ修飾であり、ｎ_ｐ’＞０であり、少なくとも１つのｎ_ｐ’は、ホスホロチオエート連結を介して隣接するヌクレオチドに連結され、センス鎖は、少なくとも１つのホスホロチオエート連結を含み、センス鎖は、二価または三価の分岐リンカーによって付着された１つまたは複数の親油性の、例えば、Ｃ１６（または関連）部分にコンジュゲートされる。

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｃ）および（ＩＩＩｄ）によって表される少なくとも２つの二重鎖を含有する多量体であり、二重鎖は、リンカーによって接続される。リンカーは、切断可能である場合も、切断可能でない場合もある。多量体は、リガンドをさらに含んでもよい。二重鎖の各々は、同一の遺伝子を標的化する場合も、２つの異なる遺伝子を標的化する場合もあり、または二重鎖の各々は、２つの異なる標的部位の同一遺伝子を標的化する場合もある。

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｃ）および（ＩＩＩｄ）によって表される、３、４、５、６またはそれより多い二重鎖を含有する多量体であり、二重鎖は、リンカーによって接続される。リンカーは、切断可能である場合も、切断可能でない場合もある。多量体は、リガンドをさらに含んでもよい。二重鎖の各々は、同一の遺伝子を標的化する場合も、２つの異なる遺伝子を標的化する場合もあり、または二重鎖の各々は、２つの異なる標的部位の同一遺伝子を標的化する場合もある。

一実施形態において、式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｃ）および（ＩＩＩｄ）によって表される２つのＲＮＡｉ剤は、５’端で互いに連結され、３’端の一方または両方は、リガンドにコンジュゲートされてもよい。薬剤の各々は、同一の遺伝子を標的化する場合も、２つの異なる遺伝子を標的化する場合もあり、または薬剤の各々は、２つの異なる標的部位の同一遺伝子を標的化する場合もある。

種々の刊行物には、本開示の方法において使用され得る多量体ＲＮＡｉ剤が記載されている。このような刊行物には、ＷＯ２００７／０９１２６９、ＷＯ２０１０／１４１５１１、ＷＯ２００７／１１７６８６、ＷＯ２００９／０１４８８７およびＷＯ２０１１／０３１５２０ならびにＵＳ７８５８７６９が含まれ、それらの各々の内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。

ある特定の実施形態において、本開示の組成物および方法は、本明細書に記載されるようなＲＮＡｉ剤のビニルホスホネート（ＶＰ）修飾を含む。例示的実施形態において、本開示のビニルホスホネートは、以下の構造：

を有する。

本開示のビニルホスホネートは、本開示のｄｓＲＮＡのアンチセンスまたはセンス鎖のいずれかに付着させることができる。ある特定の実施形態において、本開示のビニルホスホネートを、適宜、ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖の５’端でｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖に付着させる。ｄｓＲＮＡ剤は、センス鎖またはアンチセンス鎖の５’端にリン含有基を含むことができる。５’端リン含有基は、５’端リン酸（５’－Ｐ）、５’端ホスホロチオエート（５’－ＰＳ）、５’端ホスホロジチオエート（５’－ＰＳ２）、５’端ビニルホスホネート（５’－ＶＰ）、５’端メチルホスホネート（ＭｅＰｈｏｓ）、または５’－デオキシ－５’－Ｃ－マロニルであり得る。５’端リン含有基が５’端ビニルホスホネート（５’－ＶＰ）であるとき、５’－ＶＰは、５’－Ｅ－ＶＰ異性体（すなわち、ｔｒａｎｓ－ビニルホスフェート、その異性体（すなわち、ｃｉｓ－ビニルホスフェート）、またはそれらの混合物であり得る。

例えば、リン酸ミミックが５’－ビニルホスホネート（ＶＰ）であるとき、５’末端ヌクレオチドは、以下の構造

を有し得る（式中、^＊は、隣接するヌクレオチドの５’位への結合位置を示し；
Ｒは、水素、ヒドロキシ、メトキシ、またはフルオロ（例えば、ヒドロキシ）であり；
Ｂは、核酸塩基または修飾核酸塩基であり、ここでは、Ｂは、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、またはウラシルであってもよい）。

本開示の組成物および方法のためにビニルホスフェート修飾も企図される。例示的ビニルホスフェート構造として：

がある。

ｉ．熱的不安定化修飾
ある特定の実施形態において、アンチセンス鎖のシード領域（すなわち、アンチセンス鎖の５’端の位置２～９）中に熱的不安定化修飾を組み込んで、オフターゲット遺伝子サイレンシングを低減または阻害することによって、ｄｓＲＮＡ分子をＲＮＡ干渉のために最適化できる。アンチセンス鎖の５’端から数えて最初の９ヌクレオチド位置内に二重鎖の少なくとも１つの熱的不安定化修飾を含むアンチセンス鎖を有するｄｓＲＮＡが、オフターゲット遺伝子サイレンシング活性を低減したことが発見されている。したがって、一部の実施形態において、アンチセンス鎖は、アンチセンス鎖の５’領域の最初の９ヌクレオチド位置内に少なくとも１つの（例えば、１、２、３、４、５またはそれより多い）二重鎖の熱的不安定化修飾を含む。一部の実施形態において、１つまたは複数の二重鎖の熱的不安定化修飾は、アンチセンス鎖の５’端から位置２～９、または好ましくは、位置４～８中に位置する。一部のさらなる実施形態において、二重鎖の熱的不安定化修飾（複数可）は、アンチセンス鎖の５’端から位置６、７または８に位置する。さらに一部のさらなる実施形態において、二重鎖の熱的不安定化修飾は、アンチセンス鎖の５’端から位置７に位置する。「熱的不安定化修飾（複数可）」という用語は、より低い全体の融解温度（Ｔｍ）を有するｄｓＲＮＡをもたらすであろう修飾（複数可）を含む（好ましくは、このような修飾（複数可）を有さないｄｓＲＮＡのＴｍよりも１、２、３または４度低い。一部の実施形態において、二重鎖の熱的不安定化修飾は、アンチセンス鎖の５’端から位置２、３、４、５または９に位置する。

熱的不安定化修飾として、それだけには限らないが、脱塩基修飾、対向する鎖における対向するヌクレオチドとのミスマッチ、および糖修飾、例えば、２’－デオキシ修飾または非環式ヌクレオチド、例えば、非ロックド核酸（ＵＮＡ）またはグリコール核酸（ＧＮＡ）を挙げることができる。

例示される脱塩基修飾として、それだけには限らないが、以下：

［式中、Ｒ＝Ｈ、Ｍｅ、ＥｔまたはＯＭｅ；Ｒ’＝Ｈ、Ｍｅ、ＥｔまたはＯＭｅ；Ｒ”＝Ｈ、Ｍｅ、ＥｔまたはＯＭｅ］

［式中、Ｂは、修飾されたまたは未修飾の核酸塩基である］
が挙げられる。

例示される糖修飾として、それだけには限らないが、以下：

一部の実施形態において、二重鎖の熱的不安定化修飾は、以下：

［式中、Ｂは、修飾されたまたは未修飾の核酸塩基であり、各構造上のアスタリスクは、Ｒ、Ｓまたはラセミのいずれかを表す］
からなる群から選択される。

「非環式ヌクレオチド」という用語は、例えば、リボース炭素間の結合のいずれか（例えば、Ｃ１’－Ｃ２’、Ｃ２’－Ｃ３’、Ｃ３’－Ｃ４’、Ｃ４’－Ｏ４’またはＣ１’－Ｏ４’）が存在しないか、またはリボース炭素もしくは酸素のうち少なくとも１つ（例えば、Ｃ１’、Ｃ２’、Ｃ３’、Ｃ４’またはＯ４’）が独立に、もしくは組み合わせてヌクレオチドに存在しない、非環式リボース糖を有する任意のヌクレオチドを指す。一部の実施形態において、非環式ヌクレオチドは、

［式中、Ｂは、修飾されたまたは未修飾の核酸塩基であり、Ｒ^１およびＲ^２は独立に、Ｈ、ハロゲン、ＯＲ_３またはアルキルであり；ならびにＲ_３は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリールまたは糖である］。非環式誘導体は、ワトソン－クリック対形成に影響を及ぼすことなく、より大きな骨格柔軟性を提供する。非環式ヌクレオチドは、２’－５’または３’－５’連結を介して連結され得る。

「ＧＮＡ」という用語は、ＤＮＡまたはＲＮＡと類似のポリマーであるが、ホスホジエステル結合によって連結された反復するグリセロール単位から構成される点でその「骨格」の組成が異なっているグリコール核酸を指す：

二重鎖の熱的不安定化修飾は、熱的不安定化ヌクレオチドと、ｄｓＲＮＡ二本鎖内の対向鎖中の対向するヌクレオチドの間のミスマッチ（すなわち、非相補的塩基対）であり得る。例示的ミスマッチ塩基対として、Ｇ：Ｇ、Ｇ：Ａ、Ｇ：Ｕ、Ｇ：Ｔ、Ａ：Ａ、Ａ：Ｃ、Ｃ：Ｃ、Ｃ：Ｕ、Ｃ：Ｔ、Ｕ：Ｕ、Ｔ：Ｔ、Ｕ：Ｔまたはそれらの組合せが挙げられる。当技術分野で公知の他のミスマッチ塩基対形成も本発明に適している。ミスマッチは、天然に存在するヌクレオチドまたは修飾されたヌクレオチドのいずれかであるヌクレオチドの間に生じ得る、すなわち、ミスマッチ塩基対形成は、ヌクレオチドのリボース糖上の修飾とは独立してそれぞれのヌクレオチドに由来する核酸塩基間で生じ得る。ある特定の実施形態において、ｄｓＲＮＡ分子は、２’－デオキシ核酸塩基である、ミスマッチ対形成中の少なくとも１つの核酸塩基を含有する、例えば、２’－デオキシ核酸塩基は、センス鎖中にある。

一部の実施形態において、アンチセンス鎖のシード領域中の二重鎖の熱的不安定化修飾は、標的ｍＲＮＡ上の相補的塩基とのＷ－ＣＨ結合が損なわれたヌクレオチド、例えば：

を含む。

脱塩基ヌクレオチド、非環式ヌクレオチド修飾（ＵＮＡおよびＧＮＡを含む）およびミスマッチ修飾のより多くの例は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＷＯ２０１１／１３３８７６に詳細に記載されている。

熱的不安定化修飾はまた、対向する塩基と水素結合を形成する能力が低減または消失したユニバーサル塩基およびリン酸修飾を含み得る。

一部の実施形態において、二重鎖の熱的不安定化修飾には、非正準塩基を有するヌクレオチド、例えば、それだけには限らないが、対向鎖中の塩基と水素結合を形成する能力が損なわれた、または完全に消失した核酸塩基修飾が含まれる。これらの核酸塩基修飾は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＷＯ２０１０／００１１８９５に記載されるように、ｄｓＲＮＡ二重鎖の中心領域の不安定化について評価されている。例示的核酸塩基修飾として、以下：

がある。

一部の実施形態において、アンチセンス鎖のシード領域における二重鎖の熱的不安定化修飾には、標的ｍＲＮＡ上の塩基と相補的である１つまたは複数のα－ヌクレオチド、例えば、以下：

［式中、Ｒは、Ｈ、ＯＨ、ＯＣＨ_３、Ｆ、ＮＨ_２、ＮＨＭｅ、ＮＭｅ_２またはＯ－アルキルである］
が含まれる。

天然のホスホジエステル結合と比較して、ｄｓＲＮＡ二重鎖の熱的安定性を低下させると知られている例示的リン酸修飾として：

Ｒ＝アルキル
がある。

Ｒ基のアルキルは、Ｃ_１～Ｃ_６アルキルであり得る。Ｒ基の具体的なアルキルとして、それだけには限らないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ペンチルおよびヘキシルが挙げられる。

当業者は認識するであろうが、核酸塩基の機能的役割が本開示のＲＮＡｉ剤の特異性を定義していることを考慮して、核酸塩基修飾は、例えば、オフターゲット効果に対してオンターゲット効果を増強する目的のために、例えば、本開示のＲＮＡｉ剤中に不安定化修飾を導入するために、本明細書に記載されるような種々の方法で実施できるが、利用可能な、一般に、本開示のＲＮＡｉ剤上に存在する修飾の範囲は、非核酸塩基修飾、例えば、ポリリボヌクレオチドの糖基またはリン酸骨格への修飾についてより大きいものとなる傾向がある。このような修飾は、本開示の他の節においてより詳細に記載されており、上記または本明細書において他の場所で記載されるような、天然の核酸塩基または修飾された核酸塩基のいずれかを有する本開示のＲＮＡｉ剤のために明確に企図される。

熱的不安定化修飾を含むアンチセンス鎖に加えて、ｄｓＲＮＡはまた、１または複数の安定化修飾を含み得る。例えば、ｄｓＲＮＡは、少なくとも２つの（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより多い）安定化修飾を含み得る。制限するものではないが、安定化修飾は全て、一方の鎖中に存在する場合がある。一部の実施形態において、センスおよびアンチセンス鎖両方が、少なくとも２つの安定化修飾を含む。安定化修飾は、センス鎖またはアンチセンス鎖の任意のヌクレオチドで生じ得る。例えば、安定化修飾は、センス鎖もしくはアンチセンス鎖上のどのヌクレオチドでも生じる場合があり、各安定化修飾は、センス鎖もしくはアンチセンス鎖上で交互パターンで生じる場合があり、またはセンス鎖もしくはアンチセンス鎖は、両方とも交互パターンで安定化修飾を含む。センス鎖上の安定化修飾の交互パターンは、アンチセンス鎖と同一である場合も異なっている場合もあり、センス鎖上の安定化修飾の交互パターンは、アンチセンス鎖上の安定化修飾の交互パターンと比較してシフトを有する場合がある。

一部の実施形態において、アンチセンス鎖は、少なくとも２つ（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより多い）の安定化修飾を含む。制限するものではないが、アンチセンス鎖中の安定化修飾は、任意の位置に存在し得る。一部の実施形態において、アンチセンスは、５’端から位置２、６、８、９、１４および１６に安定化修飾を含む。一部の他の実施形態において、アンチセンスは、５’端から位置２、６、１４および１６に安定化修飾を含む。さらに一部の他の実施形態において、アンチセンスは、５’端から位置２、１４および１６に安定化修飾を含む。

一部の実施形態において、アンチセンス鎖は、不安定化修飾に隣接する少なくとも１つの安定化修飾を含む。例えば、安定化修飾は、不安定化修飾の５’端または３’端の、すなわち、不安定化修飾の位置から位置－１または＋１のヌクレオチドであり得る。一部の実施形態において、アンチセンス鎖は、不安定化修飾の５’端および３’端の各々、すなわち、不安定化修飾の位置から位置－１および＋１に安定化修飾を含む。

一部の実施形態において、アンチセンス鎖は、不安定化修飾の３’端に、すなわち、不安定化修飾の位置から位置＋１および＋２に少なくとも２つの安定化修飾を含む。

一部の実施形態において、センス鎖は、少なくとも２つ（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより多い）の安定化修飾を含む。制限するものではないが、センス鎖中の安定化修飾は、任意の位置に存在し得る。一部の実施形態において、センス鎖は、５’端から位置７、１０および１１に安定化修飾を含む。一部の他の実施形態において、センス鎖は、５’端から位置７、９、１０および１１に安定化修飾を含む。一部の実施形態において、センス鎖は、アンチセンス鎖の５’端から数えてアンチセンス鎖の位置１１、１２および１５に対して対向するまたは相補的な位置に安定化修飾を含む。一部の他の実施形態において、センス鎖は、アンチセンス鎖の５’端から数えてアンチセンス鎖の位置１１、１２、１３および１５に対して対向するまたは相補的な位置に安定化修飾を含む。一部の実施形態において、センス鎖は、２、３または４つの安定化修飾のブロックを含む。

一部の実施形態において、センス鎖は、アンチセンス鎖中の二重鎖の熱的不安定化修飾に対抗するまたは相補的な位置に安定化修飾を含まない。

例示的な熱的安定化修飾として、それだけには限らないが、２’－フルオロ修飾が挙げられる。他の熱的安定化修飾として、それだけには限らないが、ＬＮＡが挙げられる。

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡは、少なくとも４つの（例えば、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより多い）２’－フルオロヌクレオチドを含む。制限するものではないが、２’－フルオロヌクレオチドは全て、一方の鎖中に存在する場合がある。一部の実施形態において、センスおよびアンチセンス鎖両方が、少なくとも２つの２’－フルオロヌクレオチドを含む。２’－フルオロ修飾は、センス鎖またはアンチセンス鎖の任意のヌクレオチドで生じ得る。例えば、２’－フルオロ修飾は、センス鎖もしくはアンチセンス鎖上のどのヌクレオチドでも生じる場合があり、各２’－フルオロ修飾は、センス鎖もしくはアンチセンス鎖上で交互パターンで生じる場合があり、またはセンス鎖もしくはアンチセンス鎖は、両方とも交互パターンで２’－フルオロ修飾を含む。センス鎖上の２’－フルオロ修飾の交互パターンは、アンチセンス鎖と同一である場合も異なっている場合もあり、センス鎖上の２’－フルオロ修飾の交互パターンは、アンチセンス鎖上の２’－フルオロ修飾の交互パターンと比較してシフトを有する場合がある。

一部の実施形態において、アンチセンス鎖は、少なくとも２つ（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより多い）の２’－フルオロヌクレオチドを含む。制限するものではないが、アンチセンス鎖中の２’－フルオロ修飾は、任意の位置に存在し得る。一部の実施形態において、アンチセンスは、５’端から位置２、６、８、９、１４および１６に２’－フルオロヌクレオチドを含む。一部の他の実施形態において、アンチセンスは、５’端から位置２、６、１４および１６に２’－フルオロヌクレオチドを含む。さらに一部の他の実施形態において、アンチセンスは、５’端から位置２、１４および１６に２’－フルオロヌクレオチドを含む。

一部の実施形態において、アンチセンス鎖は、不安定化修飾に隣接する少なくとも１つの２’－フルオロヌクレオチドを含む。例えば、２’－フルオロヌクレオチドは、不安定化修飾の５’端または３’端の、すなわち、不安定化修飾の位置から位置－１または＋１のヌクレオチドであり得る。一部の実施形態において、アンチセンス鎖は、不安定化修飾の５’端および３’端の各々、すなわち、不安定化修飾の位置から位置－１および＋１に２’－フルオロヌクレオチドを含む。

一部の実施形態において、アンチセンス鎖は、不安定化修飾の３’端に、すなわち、不安定化修飾の位置から位置＋１および＋２に少なくとも２つの２’－フルオロヌクレオチドを含む。

一部の実施形態において、センス鎖は、少なくとも２つ（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより多い）の２’－フルオロヌクレオチドを含む。制限するものではないが、センス中の２’－フルオロ修飾は、任意の位置に存在し得る。一部の実施形態において、アンチセンスは、５’端から位置７、１０および１１に２’－フルオロヌクレオチドを含む。一部の他の実施形態において、センス鎖は、５’端から位置７、９、１０および１１に２’－フルオロヌクレオチドを含む。一部の実施形態において、センス鎖は、アンチセンス鎖の５’端から数えてアンチセンス鎖の位置１１、１２および１５に対して対向するまたは相補的な位置に２’－フルオロヌクレオチドを含む。一部の他の実施形態において、センス鎖は、アンチセンス鎖の５’端から数えてアンチセンス鎖の位置１１、１２、１３および１５に対して対向するまたは相補的な位置に２’－フルオロヌクレオチドを含む。一部の実施形態において、センス鎖は、２、３または４つの２’－フルオロヌクレオチドのブロックを含む。

一部の実施形態において、センス鎖は、アンチセンス鎖中の二重鎖の熱的不安定化修飾に対抗するまたは相補的な位置に２’－フルオロヌクレオチドを含まない。

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、２１ヌクレオチド（ｎｔ）のセンス鎖および２３ヌクレオチド（ｎｔ）のアンチセンスを含み、アンチセンス鎖は、少なくとも１つの熱的不安定化ヌクレオチドを含有し、少なくとも１つの熱的不安定化ヌクレオチドは、アンチセンス鎖のシード領域中に（すなわち、アンチセンス鎖の５’端の位置２～９に）生じ、ｄｓＲＮＡの一方の末端は平滑であり、もう一方の末端は２ｎｔのオーバーハングを含み、ｄｓＲＮＡは、以下の特徴のうち少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、６または７つ全て）をさらに有してもよい：（ｉ）アンチセンスは、２、３、４、５または６つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｉｉ）アンチセンスは、１、２、３、４または５つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含む、（ｉｉｉ）センス鎖は、リガンドとコンジュゲートされる、（ｉｖ）センス鎖は、２、３、４または５つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｖ）センス鎖は、１、２、３、４または５つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含む、（ｖｉ）ｄｓＲＮＡは、少なくとも４つの２’－フルオロ修飾を含む、および（ｖｉｉ）ｄｓＲＮＡは、アンチセンス鎖の５’端に平滑末端を含む。好ましくは、２ｎｔのオーバーハングは、アンチセンスの３’端にある。

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センスおよびアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、２５～３０ヌクレオチド残基の長さであり、５’末端ヌクレオチド（位置１）から開始して、前記センス鎖の位置１～２３は、少なくとも８のリボヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖は、３６～６６ヌクレオチド残基の長さであり、３’末端ヌクレオチドから開始して、センス鎖の位置１～２３と対形成される位置中の少なくとも８のリボヌクレオチドは、二本鎖を形成し、アンチセンス鎖の少なくとも３’末端ヌクレオチドは、センス鎖と対形成せず、最大６つの連続３’末端ヌクレオチドは、センス鎖と対形成せず、それによって、１～６ヌクレオチドの３’一本鎖オーバーハングを形成し、アンチセンス鎖の５’末端は、センス鎖と対形成しない１０～３０の連続ヌクレオチドを含み、それによって、１０～３０ヌクレオチドの一本鎖５’オーバーハングを形成し、少なくともセンス鎖５’末端および３’末端ヌクレオチドは、センスおよびアンチセンス鎖が最大相補性のためにアラインされる場合に、アンチセンス鎖のヌクレオチドと対形成される塩基であり、それによって、センスおよびアンチセンス鎖の間に実質的に二本鎖の領域を形成し、アンチセンス鎖は、アンチセンス鎖の長さの少なくとも１９リボヌクレオチドに沿って標的ＲＮＡと十分に相補的であり、二本鎖核酸が哺乳動物細胞中に導入される場合に標的遺伝子発現を低減させ、アンチセンス鎖は、少なくとも１つの熱的不安定化ヌクレオチドを含有し、少なくとも１つの熱的不安定化ヌクレオチドは、アンチセンス鎖のシード領域中（すなわち、アンチセンス鎖の５’端の位置２～９に）にある。例えば、熱的不安定化ヌクレオチドは、センス鎖の５’端の位置１４～１７に対抗するまたは相補的な位置の間に生じ、ｄｓＲＮＡは、以下の特徴のうち少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、６または７つ全て）をさらに有してもよい：（ｉ）アンチセンスは、２、３、４、５または６つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｉｉ）アンチセンスは、１、２、３、４または５つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含む、（ｉｉｉ）センス鎖は、リガンドとコンジュゲートされる、（ｉｖ）センス鎖は、２、３、４または５つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｖ）センス鎖は、１、２、３、４または５つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含む、（ｖｉ）ｄｓＲＮＡは、少なくとも４つの２’－フルオロ修飾を含む、および（ｖｉｉ）ｄｓＲＮＡは、１２～３０ヌクレオチド対の長さの二重鎖領域を含む。

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センスおよびアンチセンス鎖を含み、前記ｄｓＲＮＡ分子は、少なくとも２５かつ多くとも２９ヌクレオチドである長さを有するセンス鎖と、多くとも３０ヌクレオチドである長さを有するアンチセンス鎖を含み、センス鎖は５’端から位置１１に酵素分解に対して感受性である修飾されたヌクレオチドを含み、前記センス鎖の３’端と前記アンチセンス鎖の５’端は平滑末端を形成し、前記アンチセンス鎖は、センス鎖よりもその３’端で１～４ヌクレオチド長く、二重鎖領域は少なくとも２５ヌクレオチド長であり、前記アンチセンス鎖は、少なくとも１９ヌクレオチドの前記アンチセンス鎖の長さに沿って標的ｍＲＮＡと十分に相補的であり、前記ｄｓＲＮＡ分子が哺乳動物細胞中に導入される場合に標的遺伝子発現を低減させ、前記ｄｓＲＮＡのダイサー切断は、前記アンチセンス鎖の３’端を含むｓｉＲＮＡを優先的にもたらし、それによって、哺乳動物において標的遺伝子の発現を低減し、アンチセンス鎖は、少なくとも１つの熱的不安定化ヌクレオチドを含有し、少なくとも１つの熱的不安定化ヌクレオチドは、アンチセンス鎖のシード領域中（すなわち、アンチセンス鎖の５’端の位置２～９）にあり、ｄｓＲＮＡは、以下の特徴のうち少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、６または７つ全て）をさらに有してもよい：（ｉ）アンチセンスは、２、３、４、５または６つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｉｉ）アンチセンスは、アンチセンスは、２、３、４、５または６つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｉｉ）アンチセンスは、１、２、３、４または５つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含む、（ｉｉｉ）センス鎖は、リガンドとコンジュゲートされる、（ｉｖ）センス鎖は、２、３、４または５つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｖ）センス鎖は、１、２、３、４または５つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含む、（ｖｉ）ｄｓＲＮＡは、少なくとも４つの２’－フルオロ修飾を含む、および（ｖｉｉ）ｄｓＲＮＡは、１２～２９ヌクレオチド対の長さの二重鎖領域を有する。

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ分子のセンス鎖およびアンチセンス鎖中のどのヌクレオチドも修飾され得る。各ヌクレオチドは、非連結性リン酸酸素の、または連結性リン酸酸素の１つもしくは複数の一方または両方の１つまたは複数の変更、リボース糖の構成成分の、例えば、リボース糖上の２’ヒドロキシルの変更、リン酸部分の「デホスホ」リンカーとの大規模な置き換え、天然に存在する塩基の修飾または置き換え、およびリボース－リン酸骨格の置き換えまたは修飾を含み得る同一または異なる修飾で修飾され得る。

核酸はサブユニットのポリマーであるので、修飾の多くは、核酸内で反復される位置で生じる、例えば、塩基またはリン酸部分またはリン酸部分の非連結性Ｏの修飾。一部の場合には、修飾は、核酸中の対象位置の全てで生じるが、多くの場合、生じない。例として、修飾は、３’または５’末端位置でのみ生じる場合があり、末端領域においてのみ、例えば、鎖の末端ヌクレオチド上の位置で、または最後の２、３、４、５もしくは１０ヌクレオチドにおいて生じる場合がある。修飾は、二本鎖領域、一本鎖領域または両方において生じる場合がある。修飾は、ＲＮＡの二本鎖領域においてのみ生じる場合があり、またはＲＮＡの一本鎖領域においてのみ生じる場合がある。例えば、非連結性Ｏ位置でのホスホロチオエート修飾は、一方または両方の末端でのみ生じる場合があり、末端領域においてのみ、例えば、鎖の末端ヌクレオチド上の位置で、または最後の２、３、４、５もしくは１０ヌクレオチドにおいて生じる場合があり、または二本鎖および一本鎖領域において、特に、末端で生じる場合がある。５’端または両端がリン酸化され得る。

例えば、安定性を増強すること、オーバーハング中に特定の塩基を含めること、または一本鎖オーバーハング中、例えば、５’もしくは３’オーバーハング中、または両方中に修飾されたヌクレオチドもしくはヌクレオチド代替物を含めることが可能であり得る。例えば、オーバーハング中にプリンヌクレオチドを含めることが望ましいものであり得る。一部の実施形態において、３’または５’オーバーハング中の塩基の全てまたは一部が、例えば、本明細書に記載される修飾で修飾され得る。修飾は、例えば、当技術分野で公知である修飾でのリボース糖の２’位置での修飾の使用、例えば、核酸塩基のリボ糖の代わりに、２’－デオキシ－２’－フルオロ（２’－Ｆ）または２’－Ｏ－メチル修飾された、デオキシリボヌクレオチドの使用、およびリン酸基における修飾、例えば、ホスホロチオエート修飾を含み得る。オーバーハングは、標的配列と相同である必要はない。

一部の実施形態において、センス鎖およびアンチセンス鎖の各残基は、ロックド核酸（ＬＮＡ）、非ロックド核酸（ＵＮＡ）、シクロヘキセン核酸（ＣｅＮＡ）、２’－メトキシエチル、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－アリル、２’－Ｃ－アリル、２’－デオキシ、または２’－フルオロで独立に修飾される。鎖は、２以上の修飾を含有し得る。一部の実施形態において、センス鎖およびアンチセンス鎖の各残基は、２’－Ｏ－メチルまたは２’－フルオロで独立に修飾される。これらの修飾は、アンチセンス鎖中に存在する二重鎖の少なくとも１つの熱的不安定化修飾に追加されるということは理解されるべきである。

少なくとも２つの異なる修飾は通常、センス鎖およびアンチセンス鎖上に存在する。それらの２つの修飾は、２’－デオキシ、２’－Ｏ－メチルまたは２’－フルオロ修飾、非環式ヌクレオチドなどであり得る。一部の実施形態において、センス鎖およびアンチセンス鎖は各々、２’－Ｏ－メチルまたは２’－デオキシから選択される２つの異なって修飾されたヌクレオチドを含む。一部の実施形態において、センス鎖およびアンチセンス鎖の各残基は、２’－Ｏ－メチルヌクレオチド、２’－デオキシヌクレオチド、２’－デオキシ－２’－フルオロヌクレオチド、２’－Ｏ－Ｎ－メチルアセトアミド（２’－Ｏ－ＮＭＡ）ヌクレオチド、２’－Ｏ－ジメチルアミノエトキシエチル（２’－Ｏ－ＤＭＡＥＯＥ）ヌクレオチド、２’－Ｏ－アミノプロピル（２’－Ｏ－ＡＰ）ヌクレオチドまたは２’－アラ－Ｆヌクレオチドで独立に修飾される。やはり、これらの修飾は、アンチセンス鎖中に存在する二重鎖の少なくとも１つの熱的不安定化修飾に追加されるということは理解されるべきである。

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、特に、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ１’、Ｂ２’、Ｂ３’、Ｂ４’領域における交互パターンの修飾を含む。「交互モチーフ」または「交互パターン」という用語は、本明細書において使用される場合、１つまたは複数の修飾を有するモチーフを指し、各修飾は、１つの鎖の交互ヌクレオチドで生じる。交互ヌクレオチドとは、１つおきのヌクレオチド毎に１つまたは３ヌクレオチド毎に１つまたは同様のパターンを指す場合がある。例えば、Ａ、ＢおよびＣが各々、ヌクレオチドへの修飾の１つのタイプを表す場合には、交互モチーフは、「ＡＢＡＢＡＢＡＢＡＢＡＢ…」、「ＡＡＢＢＡＡＢＢＡＡＢＢ…」、「ＡＡＢＡＡＢＡＡＢＡＡＢ…」、「ＡＡＡＢＡＡＡＢＡＡＡＢ…」、「ＡＡＢＢＢＡＡＡＢＢＢ…」または「ＡＢＣＡＢＣＡＢＣＡＢＣ…」などであり得る。

交互モチーフ中に含有される修飾のタイプは、同一である場合も、異なっている場合もある。例えば、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄが各々、ヌクレオチド上の修飾の１つのタイプを表す場合には、交互ターン、すなわち、１つおきのヌクレオチド上の修飾は、同一である場合があるが、センス鎖またはアンチセンス鎖の各々は、「ＡＢＡＢＡＢ…」、「ＡＣＡＣＡＣ…」、「ＢＤＢＤＢＤ…」または「ＣＤＣＤＣＤ…」などといった交互モチーフ内の修飾のいくつかの可能性から選択され得る。

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、アンチセンス鎖上の交互モチーフの修飾パターンに対してシフトされているセンス鎖上の交互モチーフの修飾パターンを含む。シフトは、センス鎖のヌクレオチドの修飾された基が、アンチセンス鎖のヌクレオチドの異なって修飾された基に対応するようなものであり得る、逆もまた同様。例えば、センス鎖は、ｄｓＲＮＡ二本鎖中のアンチセンス鎖と対形成される場合には、センス鎖中の交互モチーフは、鎖の５’－３’から「ＡＢＡＢＡＢ」で開始する場合があり、アンチセンス鎖中の交互モチーフは、二重鎖領域内の鎖の３’－５’から「ＢＡＢＡＢＡ」で開始する場合がある。別の例として、センス鎖中の交互モチーフは、鎖の５’－３’から「ＡＡＢＢＡＡＢＢ」で開始する場合があり、アンチセンス鎖中の交互モチーフは、二重鎖領域内の鎖の３’－５’に「ＢＢＡＡＢＢＡＡ」で開始する場合があり、その結果、センス鎖とアンチセンス鎖の間で修飾パターンの完全なまたは部分的なシフトがある。

本開示のｄｓＲＮＡ分子は、少なくとも１つのホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結をさらに含み得る。ホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結修飾は、鎖の任意の位置においてセンス鎖またはアンチセンス鎖または両方の任意のヌクレオチドで生じ得る。例えば、ヌクレオチド間連結修飾は、センス鎖もしくはアンチセンス鎖上のどのヌクレオチドでも生じる可能性があり、各ヌクレオチド間連結修飾は、センス鎖もしくはアンチセンス鎖上で交互パターンで生じ得る、またはセンス鎖もしくはアンチセンス鎖は、交互パターンで両方のヌクレオチド間連結修飾を含む。センス鎖上のヌクレオチド間連結修飾の交互パターンは、アンチセンス鎖と同一である場合も、異なっている場合もあり、センス鎖上のヌクレオチド間連結修飾の交互パターンは、アンチセンス鎖上のヌクレオチド間連結修飾の交互パターンに対してシフトを有する場合がある。

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ分子は、オーバーハング領域中にホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結修飾を含む。例えば、オーバーハング領域は、２つのヌクレオチドの間にホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結を有する２つのヌクレオチドを含む。ヌクレオチド間連結修飾はまた、オーバーハングヌクレオチドを二重鎖領域内の末端の対形成されるヌクレオチドと連結するように行われ得る。例えば、少なくとも２、３、４または全てのオーバーハングヌクレオチドを、ホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結によって連結でき、オーバーハングヌクレオチドを、オーバーハングヌクレオチドと隣接する対形成されるヌクレオチドと連結するさらなるホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結があってもよい。例えば、３ヌクレオチドのうち２つがオーバーハングヌクレオチドであり、３番目は、オーバーハングヌクレオチドに隣接する対形成されるヌクレオチドである、末端の３ヌクレオチドの間に少なくとも２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結があり得る。好ましくは、これらの末端の３ヌクレオチドは、アンチセンス鎖の３’端であり得る。

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ分子のセンス鎖は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６のリン酸ヌクレオチド間連結によってわけられる、２～１０のホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結の１～１０のブロックを含み、ホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結の１つは、オリゴヌクレオチド配列中の任意の位置に配置され、前記センス鎖は、ホスホロチオエート、メチルホスホネートおよびリン酸ヌクレオチド間連結の任意の組合せを含むアンチセンス鎖と、またはホスホロチオエートもしくはメチルホスホネートもしくはリン酸連結のいずれかを含むアンチセンス鎖と対形成される。

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ分子のアンチセンス鎖は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７または１８のリン酸ヌクレオチド間連結によってわけられる、２つのホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結の２つのブロックを含み、ホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結のうち１つは、オリゴヌクレオチド配列中の任意の位置に配置され、前記アンチセンス鎖は、ホスホロチオエート、メチルホスホネートおよびリン酸ヌクレオチド間連結の任意の組合せを含むセンス鎖と、ホスホロチオエートもしくはメチルホスホネートもしくはリン酸連結のいずれかを含むアンチセンス鎖と対形成される。

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ分子のアンチセンス鎖は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６のリン酸ヌクレオチド間連結によってわけられる、３つのホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結の２つのブロックを含み、ホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結のうち１つは、オリゴヌクレオチド配列中の任意の位置に配置され、前記アンチセンス鎖は、ホスホロチオエート、メチルホスホネートおよびリン酸ヌクレオチド間連結の任意の組合せを含むセンス鎖と、またはホスホロチオエートもしくはメチルホスホネートもしくはリン酸連結のいずれかを含むアンチセンス鎖と対形成される。

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ分子のアンチセンス鎖は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３または１４のリン酸ヌクレオチド間連結によってわけられる、４つのホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結の２つのブロックを含み、ホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結のうち１つは、オリゴヌクレオチド配列中の任意の位置に配置され、前記アンチセンス鎖は、ホスホロチオエート、メチルホスホネートおよびリン酸ヌクレオチド間連結の任意の組合せを含むセンス鎖と、またはホスホロチオエートもしくはメチルホスホネートもしくはリン酸連結のいずれかを含むアンチセンス鎖と対形成される。

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ分子のアンチセンス鎖は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２のリン酸ヌクレオチド間連結によってわけられる、５つのホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結の２つのブロックを含み、ホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結のうち１つは、オリゴヌクレオチド配列中の任意の位置に配置され、前記アンチセンス鎖は、ホスホロチオエート、メチルホスホネートおよびリン酸ヌクレオチド間連結の任意の組合せを含むセンス鎖と、またはホスホロチオエートもしくはメチルホスホネートもしくはリン酸連結のいずれかを含むアンチセンス鎖と対形成される。

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ分子のアンチセンス鎖は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０のリン酸ヌクレオチド間連結によってわけられる、６つのホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結の２つのブロックを含み、ホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結のうち１つは、オリゴヌクレオチド配列中の任意の位置に配置され、前記アンチセンス鎖は、ホスホロチオエート、メチルホスホネートおよびリン酸ヌクレオチド間連結の任意の組合せを含むセンス鎖と、またはホスホロチオエートもしくはメチルホスホネートもしくはリン酸連結のいずれかを含むアンチセンス鎖と対形成される。

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ分子のアンチセンス鎖は、１、２、３、４、５、６、７または８つのリン酸ヌクレオチド間連結によってわけられる、７つのホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結の２つのブロックを含み、ホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結のうち１つは、オリゴヌクレオチド配列中の任意の位置に配置され、前記アンチセンス鎖は、ホスホロチオエート、メチルホスホネートおよびリン酸ヌクレオチド間連結の任意の組合せを含むセンス鎖と、またはホスホロチオエートもしくはメチルホスホネートもしくはリン酸連結のいずれかを含むアンチセンス鎖と対形成される。

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ分子のアンチセンス鎖は、１、２、３、４、５または６つのリン酸ヌクレオチド間連結によってわけられる、８つのホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結の２つのブロックを含み、ホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結のうち１つは、オリゴヌクレオチド配列中の任意の位置に配置され、前記アンチセンス鎖は、ホスホロチオエート、メチルホスホネートおよびリン酸ヌクレオチド間連結の任意の組合せを含むセンス鎖と、またはホスホロチオエートもしくはメチルホスホネートもしくはリン酸連結のいずれかを含むアンチセンス鎖と対形成される。

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ分子のアンチセンス鎖は、１、２、３または４つのリン酸ヌクレオチド間連結によってわけられる、９つのホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結の２つのブロックを含み、ホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結のうち１つは、オリゴヌクレオチド配列中の任意の位置に配置され、前記アンチセンス鎖は、ホスホロチオエート、メチルホスホネートおよびリン酸ヌクレオチド間連結の任意の組合せを含むセンス鎖と、またはホスホロチオエートもしくはメチルホスホネートもしくはリン酸連結のいずれかを含むアンチセンス鎖と対形成される。

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センスまたはアンチセンス鎖の１～１０の末端位置内に１つまたは複数のホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結修飾をさらに含む。例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９または１０ヌクレオチドが、センスまたはアンチセンス鎖の一方の末端または両端でホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結によって連結され得る。

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センスまたはアンチセンス鎖の各々の二重鎖の内部領域の１～１０内に１つまたは複数のホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結修飾をさらに含む。例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９または１０ヌクレオチドが、センス鎖の５’端から数えて二重鎖領域の位置８～１６でホスホロチオエートメチルホスホネートヌクレオチド間連結によって連結され得る。ｄｓＲＮＡ分子は、１～１０の末端位置内に１つまたは複数のホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結修飾をさらに含んでもよい。

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１～５内に１～５つのホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に１～５つのホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１および２に１～５つのホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に１～５つ（５’端から数えて）をさらに含む。

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１～５内に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に１つのホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１または２に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に２つのホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）をさらに含む。

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１～５内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１または２に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）をさらに含む。

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１～５内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１または２に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）をさらに含む。

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１～５内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１または２に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）をさらに含む。

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１～５内に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１および２に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）をさらに含む。

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１～５内に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に１つ（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１および２に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）をさらに含む。

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１～５内に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１および２に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）をさらに含む。

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１～５内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１または２に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）をさらに含む。

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１～５内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に１つ（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１および２に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）をさらに含む。

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１～５内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１および２に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）をさらに含む。

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１および２に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置２０および２１に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置２１に１つ（５’端から数えて）をさらに含む。

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置２１に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１および２に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置２０および２１に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）をさらに含む。

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１および２に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置２１および２２に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置２１に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）をさらに含む。

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置２１に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１および２に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置２１および２２に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）をさらに含む。

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１および２に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置２２および２３に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置２１に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）をさらに含む。

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置２１に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１および２に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置２３および２３に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）をさらに含む。

一部の実施形態において、本開示の化合物は、骨格キラル中心のパターンを含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも５つのヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも６つのヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも７つのヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも８つのヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも９つのヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも１０のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも１１のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも１２のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも１３のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも１４のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも１５のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも１６のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも１７のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも１８のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも１９のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｒｐ立体配置において８つ以下のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｒｐ立体配置において７つ以下のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｒｐ立体配置において６つ以下のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｒｐ立体配置において５つ以下のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｒｐ立体配置において４つ以下のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｒｐ立体配置において３つ以下のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｒｐ立体配置において２つ以下のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｒｐ立体配置において１つ以下のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、８つ以下のキラルではないヌクレオチド間連結を含む（限定されるわけではない例として、ホスホジエステル）。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、７つ以下のキラルではないヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、６つ以下のキラルではないヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、５つ以下のキラルではないヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、４つ以下のキラルではないヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、３つ以下のキラルではないヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、２つ以下のキラルではないヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、１つ以下のキラルではないヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも１０のヌクレオチド間連結および８つ以下のキラルではないヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも１１のヌクレオチド間連結および７つ以下のキラルではないヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも１２のヌクレオチド間連結および６つ以下のキラルではないヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも１３のヌクレオチド間連結および６つ以下のキラルではないヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも１４のヌクレオチド間連結および５つ以下のキラルではないヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも１５のヌクレオチド間連結および４つ以下のキラルではないヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、Ｓｐ立体配置におけるヌクレオチド間連結は、連続であってもよく、連続でなくてもよい。一部の実施形態において、Ｒｐ立体配置におけるヌクレオチド間連結は、連続であってもよく、連続でなくてもよい。一部の実施形態において、キラルではないヌクレオチド間連結は、連続であってもよく、連続でなくてもよい。

一部の実施形態において、本開示の化合物は、立体化学ブロックであるブロックを含む。一部の実施形態において、ブロックは、ブロックの各ヌクレオチド間連結がＲｐである点でＲｐブロックである。一部の実施形態において、５’－ブロックは、Ｒｐブロックである。一部の実施形態において、３’－ブロックは、Ｒｐブロックである。一部の実施形態において、ブロックは、ブロックの各ヌクレオチド間連結がＳｐである点でＳｐブロックである。一部の実施形態において、５’－ブロックは、Ｓｐブロックである。一部の実施形態において、３’－ブロックは、Ｓｐブロックである。一部の実施形態において、提供されるオリゴヌクレオチドは、ＲｐおよびＳｐブロックの両方を含む。一部の実施形態において、提供されたオリゴヌクレオチドは、１つまたは複数のＲｐを含むが、Ｓｐブロックを含まない。一部の実施形態において、提供されるオリゴヌクレオチドは、１つまたは複数のＳｐを含むが、Ｒｐブロックを含まない。一部の実施形態において、提供されるオリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の、各ヌクレオチド間連結が天然リン酸連結であるＰＯブロックを含む。

一部の実施形態において、本開示の化合物は、各糖部分が２’－Ｆ修飾を含むＳｐブロックである５’－ブロックを含む。一部の実施形態において、５’－ブロックは、ヌクレオチド間連結の各々が、修飾されたヌクレオチド間連結であり、各糖部分が、２’－Ｆ修飾を含むＳｐブロックである。一部の実施形態において、５’－ブロックは、ヌクレオチド間連結の各々が、ホスホロチオエート連結であり、各糖部分が、２’－Ｆ修飾を含むＳｐブロックである。一部の実施形態において、５’－ブロックは、４以上のヌクレオシド単位を含む。一部の実施形態において、５’－ブロックは、５以上のヌクレオシド単位を含む。一部の実施形態において、５’－ブロックは、６以上のヌクレオシド単位を含む。一部の実施形態において、５’－ブロックは、７以上のヌクレオシド単位を含む。一部の実施形態において、３’－ブロックは、各糖部分が、２’－Ｆ修飾を含むＳｐブロックである。一部の実施形態において、３’－ブロックは、ヌクレオチド間連結の各々が、修飾されたヌクレオチド間連結であり、各糖部分が、２’－Ｆ修飾を含むＳｐブロックである。一部の実施形態において、３’－ブロックは、ヌクレオチド間連結の各々が、ホスホロチオエート連結であり、各糖部分が２’－Ｆ修飾を含むＳｐブロックである。一部の実施形態において、３’－ブロックは、４以上のヌクレオシド単位を含む。一部の実施形態において、３’－ブロックは、５以上のヌクレオシド単位を含む。一部の実施形態において、３’－ブロックは、６以上のヌクレオシド単位を含む。一部の実施形態において、３’－ブロックは、７以上のヌクレオシド単位を含む。

一部の実施形態において、本開示の化合物は、領域中にあるタイプのヌクレオシドを含み、またはオリゴヌクレオチドに、特定のタイプのヌクレオチド間連結、例えば、天然のリン酸連結、修飾されたヌクレオチド間連結、Ｒｐキラルヌクレオチド間連結、Ｓｐキラルヌクレオチド間連結などが続く。一部の実施形態において、Ａに、Ｓｐが続く。一部の実施形態において、Ａに、Ｒｐが続く。一部の実施形態において、Ａに、天然のリン酸連結（ＰＯ）が続く。一部の実施形態において、Ｕに、Ｓｐが続く。一部の実施形態において、Ｕに、Ｒｐが続く。一部の実施形態において、Ｕに、天然のリン酸連結（ＰＯ）が続く。一部の実施形態において、Ｃに、Ｓｐが続く。一部の実施形態において、Ｃに、Ｒｐが続く。一部の実施形態において、Ｃに、天然のリン酸連結（ＰＯ）が続く。一部の実施形態において、Ｇに、Ｓｐが続く。一部の実施形態において、Ｇに、Ｒｐが続く。一部の実施形態において、Ｇに、天然のリン酸連結（ＰＯ）が続く。一部の実施形態において、ＣおよびＵに、Ｓｐが続く。一部の実施形態において、ＣおよびＵに、Ｒｐが続く。一部の実施形態において、ＣおよびＵに、天然のリン酸連結（ＰＯ）が続く。一部の実施形態において、ＡおよびＧに、Ｓｐが続く。一部の実施形態において、ＡおよびＧに、Ｒｐが続く。

一部の実施形態において、アンチセンス鎖は、ヌクレオチド位置２１と２２の間およびヌクレオチド位置２２と２３の間にホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含み、アンチセンス鎖は、アンチセンス鎖のシード領域に（すなわち、アンチセンス鎖の５’端の位置２～９に）位置する二重鎖の少なくとも１つの熱的不安定化修飾を含有し、ｄｓＲＮＡは、以下の特徴のうち少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、６、７または８つ全て）をさらに有してもよい：（ｉ）アンチセンスは、２、３、４、５または６つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｉｉ）アンチセンスは、３、４または５つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含む、（ｉｉｉ）センス鎖は、リガンドとコンジュゲートされる、（ｉｖ）センス鎖は、２、３、４または５つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｖ）センス鎖は、１、２、３、４または５つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含む、（ｖｉ）ｄｓＲＮＡは、少なくとも４つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｖｉｉ）ｄｓＲＮＡは、１２～４０ヌクレオチド対の長さの二重鎖領域を含む、および（ｖｉｉｉ）ｄｓＲＮＡは、アンチセンス鎖の５’端に平滑末端を有する。

一部の実施形態において、アンチセンス鎖は、ヌクレオチド位置１と２の間、ヌクレオチド位置２と３の間、ヌクレオチド位置２１と２２の間およびヌクレオチド位置２２と２３の間にホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含み、アンチセンス鎖は、アンチセンス鎖のシード領域に（すなわち、アンチセンス鎖の５’端の位置２～９に）位置する二重鎖の少なくとも１つの熱的不安定化修飾を含有し、ｄｓＲＮＡは、以下の特徴のうち少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、６、７または８つ全て）をさらに有してもよい：（ｉ）アンチセンスは、２、３、４、５または６つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｉｉ）センス鎖は、リガンドとコンジュゲートされる、（ｉｉｉ）センス鎖は、２、３、４または５つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｉｖ）センス鎖は、１、２、３、４または５つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含む、（ｖ）ｄｓＲＮＡは、少なくとも４つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｖｉ）ｄｓＲＮＡは、１２～４０ヌクレオチド対の長さの二重鎖領域を含む、（ｖｉｉ）ｄｓＲＮＡは、１２～４０ヌクレオチド対の長さの二重鎖領域を含む、および（ｖｉｉｉ）ｄｓＲＮＡは、アンチセンス鎖の５’端に平滑末端を有する。

一部の実施形態において、センス鎖は、ヌクレオチド位置１と２の間、ヌクレオチド位置２と３の間にホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含み、アンチセンス鎖は、アンチセンス鎖のシード領域に（すなわち、アンチセンス鎖の５’端の位置２～９に）位置する二重鎖の少なくとも１つの熱的不安定化修飾を含有し、ｄｓＲＮＡは、以下の特徴のうち少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、６、７または８つ全て）をさらに有してもよい：（ｉ）アンチセンスは、２、３、４、５または６つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｉｉ）アンチセンスは、１、２、３、４または５つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含む、（ｉｉｉ）センス鎖は、リガンドとコンジュゲートされる、（ｉｖ）センス鎖は、２、３、４または５つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｖ）センス鎖は、３、４または５つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含む、（ｖｉ）ｄｓＲＮＡは、少なくとも４つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｖｉｉ）ｄｓＲＮＡは、１２～４０ヌクレオチド対の長さの二重鎖領域を含む、および（ｖｉｉｉ）ｄｓＲＮＡは、アンチセンス鎖の５’端に平滑末端を有する。

一部の実施形態において、センス鎖は、ヌクレオチド位置１と２の間およびヌクレオチド位置２と３の間にホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含み、アンチセンス鎖は、ヌクレオチド位置１と２の間、ヌクレオチド位置２と３の間、ヌクレオチド位置２１と２２の間およびヌクレオチド位置２２と２３の間にホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含み、アンチセンス鎖は、アンチセンス鎖のシード領域に（すなわち、アンチセンス鎖の５’端の位置２～９に）位置する二重鎖の少なくとも１つの熱的不安定化修飾を含有し、ｄｓＲＮＡは、以下の特徴のうち少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、６または７つ全て）をさらに有してもよい：（ｉ）アンチセンスは、２、３、４、５または６つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｉｉ）センス鎖は、リガンドとコンジュゲートされる、（ｉｉｉ）センス鎖は、２、３、４または５つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｉｖ）センス鎖は、３、４または５つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含む、（ｖ）ｄｓＲＮＡは、少なくとも４つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｖｉ）ｄｓＲＮＡは、１２～４０ヌクレオチド対の長さの二重鎖領域を含む、および（ｖｉｉ）ｄｓＲＮＡは、アンチセンス鎖の５’端に平滑末端を有する。

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、標的との、二本鎖内のミスマッチ（複数可）またはそれらの組合せを含む。ミスマッチは、オーバーハング領域または二重鎖領域中に生じ得る。塩基対は、解離または融解を促進するその傾向に基づいてランク付けできる（例えば、特定の対形成の会合または解離の自由エネルギーで、最も簡単なアプローチは、個々の対に基づいて対を調べることであるが、次の隣接分析または同様の分析も使用できる）。解離の促進の点では：Ａ：ＵはＧ：Ｃを上回って好ましく、Ｇ：ＵはＧ：Ｃを上回って好ましく、Ｉ：ＣはＧ：Ｃを上回って好ましい（Ｉ＝イノシン）。ミスマッチ、例えば、非正準対形成または正準対形成以外のもの（本明細書において別の場所で記載されるような）は、正準（Ａ：Ｔ、Ａ：Ｕ、Ｇ：Ｃ）対形成を上回って好ましく、ユニバーサル塩基を含む対形成は正準対形成を上回って好ましい。

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、二本鎖の５’端でのアンチセンス鎖の解離を促進するために、Ａ：Ｕ、Ｇ：Ｕ、Ｉ：Ｃおよびミスマッチ対、例えば、非正準対形成または正準対形成以外のものまたはユニバーサル塩基を含む対形成の群から独立に選択され得る、アンチセンス鎖の５’端から二重鎖領域内の最初の１、２、３、４または５つの塩基対のうち少なくとも１つを含む。

一部の実施形態において、アンチセンス鎖中の５’端から二重鎖領域内の１位置のヌクレオチドは、Ａ、ｄＡ、ｄＵ、ＵおよびｄＴからなる群から選択される。あるいは、アンチセンス鎖の５’端から二重鎖領域内の最初の１、２または３つの塩基対のうち少なくとも１つは、ＡＵ塩基対である。例えば、アンチセンス鎖の５’端から二重鎖領域内の最初の塩基対は、ＡＵ塩基対である。

一本鎖または二本鎖オリゴヌクレオチドの任意の位置で、ジヌクレオチドのホスホジエステル（ＰＯ）、ホスホロチオエート（ＰＳ）またはホスホロジチオエート（ＰＳ２）連結の３’端に、４’－修飾されたまたは５’－修飾されたヌクレオチドを導入することは、ヌクレオチド間連結に対して立体的効果を発揮し、ひいては、それをヌクレアーゼから保護し、安定化できるということが見出された。一部の実施形態において、４’－修飾されたまたは５’－修飾されたヌクレオチドをジヌクレオチドのＰＯ、ＰＳ、またはＰＳ２連結の３’端に導入することは、ジヌクレオチド対における第２のヌクレオチドを修飾する。他の実施形態において、４’－修飾されたまたは５’－修飾されたヌクレオチドをジヌクレオチドのＰＯ、ＰＳ、またはＰＳ２連結の３’端に導入することは、ジヌクレオチド対の３’端でヌクレオチドを修飾する。

一部の実施形態において、５’－修飾されたヌクレオシドが、一本鎖または二本鎖ｓｉＲＮＡの任意の位置でジヌクレオチドの３’端に導入される。例えば、５’－アルキル化ヌクレオシドを、一本鎖または二本鎖ｓｉＲＮＡの任意の位置でジヌクレオチドの３’端に導入できる。リボース糖の５’位置のアルキル基は、ラセミ体またはキラル的に純粋なＲもしくはＳ異性体であり得る。例示的な５’－アルキル化ヌクレオシドとして、５’－メチルヌクレオシドがある。５’－メチルは、ラセミ体またはキラル的に純粋なＲもしくはＳ異性体のいずれかであり得る。

一部の実施形態において、４’－修飾されたヌクレオシドが、一本鎖または二本鎖ｓｉＲＮＡの任意の位置でジヌクレオチドの３’端に導入される。例えば、４’－アルキル化ヌクレオシドを、一本鎖または二本鎖ｓｉＲＮＡの任意の位置でジヌクレオチドの３’端に導入できる。リボース糖の５’位置のアルキル基は、ラセミ体またはキラル的に純粋なＲもしくはＳ異性体であり得る。例示的な４’－アルキル化ヌクレオシドとして、４’－メチルヌクレオシドがある。４’－メチルは、ラセミ体またはキラル的に純粋なＲもしくはＳ異性体のいずれかであり得る。あるいは、４’－Ｏ－アルキル化ヌクレオシドを、一本鎖または二本鎖ｓｉＲＮＡの任意の位置でジヌクレオチドの３’端に導入できる。リボース糖の４’－Ｏ－アルキルは、ラセミ体またはキラル的に純粋なＲもしくはＳ異性体であり得る。例示的４’－Ｏ－アルキル化ヌクレオシドとして、４’－Ｏ－メチルヌクレオシドがある。４’－Ｏ－メチルは、ラセミ体またはキラル的に純粋なＲもしくはＳ異性体のいずれかであり得る。

一部の実施形態において、５’－アルキル化ヌクレオシドが、ｄｓＲＮＡのセンス鎖またはアンチセンス鎖の任意の位置で導入され、このような修飾は、ｄｓＲＮＡの効力を維持または改良する。５’－アルキルは、ラセミ体またはキラル的に純粋なＲもしくはＳ異性体のいずれかであり得る。例示的５’－アルキル化ヌクレオシドとして、５’－メチルヌクレオシドがある。５’－メチルは、ラセミ体またはキラル的に純粋なＲもしくはＳ異性体のいずれかであり得る。

一部の実施形態において、４’－アルキル化ヌクレオシドが、ｄｓＲＮＡのセンス鎖またはアンチセンス鎖の任意の位置で導入され、このような修飾は、ｄｓＲＮＡの効力を維持または改良する。４’－アルキルは、ラセミ体またはキラル的に純粋なＲもしくはＳ異性体のいずれかであり得る。例示的４’－アルキル化ヌクレオシドとして、４’－メチルヌクレオシドがある。４’－メチルは、ラセミ体またはキラル的に純粋なＲもしくはＳ異性体のいずれかであり得る。

一部の実施形態において、４’－Ｏ－アルキル化ヌクレオシドは、ｄｓＲＮＡのセンス鎖またはアンチセンス鎖の任意の位置で導入され、このような修飾は、ｄｓＲＮＡの効力を維持または改良する。５’－アルキルは、ラセミ体またはキラル的に純粋なＲもしくはＳ異性体のいずれかであり得る。例示的４’－Ｏ－アルキル化ヌクレオシドとして、４’－Ｏ－メチルヌクレオシドがある。４’－Ｏ－メチルは、ラセミ体またはキラル的に純粋なＲもしくはＳ異性体のいずれかであり得る。

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、２’－５’連結（２’－Ｈ、２’－ＯＨおよび２’－ＯＭｅを有し、Ｐ＝ＯまたはＰ＝Ｓである）を含み得る。例えば、２’－５’連結修飾を、ヌクレアーゼ耐性を促進するために、もしくはセンスのアンチセンス鎖への結合を阻害するために使用できる、またはＲＩＳＣによるセンス鎖活性化を避けるためにセンス鎖の５’端で使用できる。

別の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、Ｌ糖（例えば、２’－Ｈ、２’－ＯＨおよび２’－ＯＭｅを有するＬリボース、Ｌ－アラビノース）を含み得る。例えば、これらのＬ糖修飾を、ヌクレアーゼ耐性を促進するために、もしくはセンスのアンチセンス鎖への結合を阻害するために使用できる、またはＲＩＳＣによるセンス鎖活性化を避けるためにセンス鎖の５’端で使用できる。

種々の刊行物に多量体ｓｉＲＮＡが記載されており、これらは全て、本開示のｄｓＲＮＡとともに使用できる。このような刊行物には、その全体が本明細書に組み込まれるＷＯ２００７／０９１２６９、ＵＳ７８５８７６９、ＷＯ２０１０／１４１５１１、ＷＯ２００７／１１７６８６、ＷＯ２００９／０１４８８７およびＷＯ２０１１／０３１５２０が含まれる。

以下により詳細に記載されるように、ＲＮＡｉ剤への１つまたは複数の炭水化物部分のコンジュゲーションを含有するＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡｉ剤の１つまたは複数の特性を最適化できる。多くの場合、炭水化物部分を、ＲＮＡｉ剤の修飾されたサブユニットに付着させる。例えば、ｄｓＲＮＡ剤の１つまたは複数のリボヌクレオチドサブユニットのリボース糖を別の部分、例えば、炭水化物リガンドが付着される非炭水化物（好ましくは、環式）担体と置き換えることができる。サブユニットのリボース糖がそのように置き換えられているリボヌクレオチドサブユニットは、本明細書において、リボース置き換え修飾サブユニット（ＲＲＭＳ）と呼ばれる。環式担体は、炭素環系であり得る、すなわち、全ての環原子は、炭素原子であるか、または複素環式環構造、すなわち、１つまたは複数の環原子は、ヘテロ原子、例えば、窒素、酸素、硫黄であり得る。環式担体は、単環式環構造であり得る、または２つ以上の環、例えば、縮合環を含有し得る。環式担体は、完全飽和環構造であり得る、または１つもしくは複数の二重結合を含有し得る。

リガンドは、担体を介してポリヌクレオチドに付着させることができる。担体は、（ｉ）少なくとも１つの「骨格付着点」、好ましくは、２つの「骨格付着点」ならびに（ｉｉ）少なくとも１つの「繋留付着点」を含む。「骨格付着点」とは、本明細書において使用される場合、官能基、例えば、ヒドロキシル基、または、一般的に、骨格、例えば、リボ核酸のリン酸または修飾されたリン酸、例えば、硫黄含有骨格への担体の組み込みのために利用可能な、およびそれに適している結合を指す。「繋留付着点」（ＴＡＰ）とは、一部の実施形態において、選択された部分を接続する環式担体の構成物環原子、例えば、炭素原子またはヘテロ原子（骨格付着点を提供する原子とは別個）を指す。部分は、例えば、炭水化物、例えば、単糖、二糖、三糖、四糖、オリゴ糖および多糖であり得る。選択された部分は、介在するテザーによって環式担体に接続されてもよい。したがって、環式担体は、官能基、例えば、アミノ基を含む、または一般的に、構成物環への、別の化学実体、例えば、リガンドの組み込みもしくは繋留に適している結合を提供することが多いであろう。

ＲＮＡｉ剤は、担体を介してリガンドにコンジュゲートされる場合があり、担体は、環式基または非環式基であり得る、好ましくは、環式基は、ピロリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、［１，３］ジオキソラン、オキサゾリジニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、キノキサリニル、ピリダジノニル、テトラヒドロフリルおよびデカリンから選択され、好ましくは、非環式群は、セリノール骨格またはジエタノールアミン骨格から選択される。

ある特定の具体的実施形態において、本開示の方法において使用するためのＲＮＡｉ剤は、表２～５、９もしくは１０のいずれか１つにおいて列挙される薬剤の群から選択される薬剤である。

ＩＶ．リガンドにコンジュゲートされたｉＲＮＡ
本発明のｉＲＮＡのＲＮＡの別の修飾は、ｉＲＮＡを１つまたは複数のリガンド、ｉＲＮＡの活性、細胞分布または例えば、細胞への細胞取り込みを増強する部分またはコンジュゲートと化学的に連結することを含む。このような部分として、それだけには限らないが、コレステロール部分などの脂質部分（Letsinger et al., Proc. Natl. Acid. Sci. USA, 1989, 86: 6553-6556)、コール酸（Manoharan et al., Biorg. Med. Chem. Let., 1994, 4:1053-1060）、チオエーテル、例えば、ベリル－Ｓ－トリチルチオール（Manoharan et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 1992, 660:306-309; Manoharan et al., Biorg. Med. Chem. Let., 1993, 3:2765-2770）、チオコレステロール（Oberhauser et al., Nucl. Acids Res., 1992, 20:533-538）、脂肪鎖、例えば、ドデカンジオールまたはウンデシル残基（Saison-Behmoaras et al., EMBO J, 1991, 10:1111-1118、Kabanov et al., FEBS Lett., 1990, 259:327-330、Svinarchuk et al., Biochimie, 1993, 75:49-54）、リン脂質、例えば、ジ－ヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロールまたはトリエチル－アンモニウム１，２－ジ－Ｏ－ヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロ－３－ホスホネート（Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651-3654、Shea et al., Nucl. Acids Res., 1990, 18:3777-3783）、ポリアミンまたはポリエチレングリコール鎖（Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14:969-973）またはアダマンタン酢酸（Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651-3654）、パルミチル部分（Mishra et al., Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264:229-237）またはオクタデシルアミンまたはヘキシルアミノ－カルボニルオキシコレステロール部分（Crooke et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277:923-937）が挙げられる。

ある特定の実施形態において、リガンドは、それが組み込まれるｉＲＮＡ剤の分布、標的化または寿命を変更する。一部の実施形態において、リガンドは、例えば、このようなリガンドが存在しない種と比較されるように、選択された標的、例えば、分子、細胞または細胞種、コンパートメント、例えば、細胞のまたは臓器のコンパートメント、組織、器官または身体の領域に対する親和性の増強を提供する。通常のリガンドは、二本鎖核酸において二重鎖対形成に関与しない。

リガンドとして、天然に存在する物質、例えば、タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）またはグロブリン）、炭水化物（例えば、デキストラン、プルラン、キチン、キトサン、イヌリン、シクロデキストリンまたはヒアルロン酸）または脂質を挙げることができる。リガンドはまた、組換えまたは合成分子、例えば、合成ポリマー、例えば、合成ポリアミノ酸であり得る。ポリアミノ酸の例として、ポリリジン（ＰＬＬ）、ポリＬ－アスパラギン酸、ポリＬ－グルタミン酸であるポリアミノ酸、スチレン－無水マレイン酸共重合体、ポリ（Ｌ－ラクチド－ｃｏ－グリコリド（ｇｌｙｃｏｌｉｅｄ））共重合体、ジビニルエーテル－無水マレイン酸共重合体、Ｎ－（２－ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド共重合体（ＨＭＰＡ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリウレタン、ポリ（２－エチルアクリル酸（ｅｔｈｙｌａｃｒｙｌｌｉｃａｃｉｄ））、Ｎ－イソプロピルアクリルアミドポリマーまたはポリホスファジンが挙げられる。ポリアミンの例として、ポリエチレンイミン、ポリリジン（ＰＬＬ）、スペルミン、スペルミジン、ポリアミン、シュードペプチド－ポリアミン、ペプチドミメティックポリアミン、デンドリマーポリアミン、アルギニン、アミジン、プロタミン、カチオン性脂質、カチオン性ポルフィリン、ポリアミンの第四級塩またはαヘリックスペプチドが挙げられる。

リガンドにはまた、標的化基、例えば、細胞または組織標的化剤、例えば、レクチン、糖タンパク質、脂質またはタンパク質、例えば、特定の細胞種、例えば、腎臓細胞に結合する抗体が含まれ得る。標的化基は、甲状腺刺激ホルモン、メラニン細胞刺激ホルモン、レクチン、糖タンパク質、界面活性剤プロテインＡ、ムチン炭水化物、多価ラクトース、多価ガラクトース、Ｎ－アセチル－ガラクトサミン、Ｎ－アセチル－グルコサミン多価マンノース、多価フコース、グリコシル化ポリアミノ酸、多価ガラクトース、トランスフェリン、ビスホスホネート、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、脂質、コレステロールステロイド、胆汁酸、葉酸、ビタミンＢ１２、ビオチンまたはＲＧＤペプチドもしくはＲＧＤペプチドミメティックであり得る。ある特定の実施形態において、リガンドは、多価ガラクトース、例えば、Ｎ－アセチル－ガラクトサミンである。

リガンドの他の例として、色素、インターカレート剤（例えば、アクリジン）、架橋剤（例えば、プソラレン、マイトマイシンＣ）、ポルフィリン（ＴＰＰＣ４、テキサフィリン、サッフィリン（Ｓａｐｐｈｙｒｉｎ））、多環式芳香族炭化水素（例えば、フェナジン、ジヒドロフェナジン）、人工エンドヌクレアーゼ（例えば、ＥＤＴＡ）、親油性分子、例えば、コレステロール、コール酸、アダマンタン酢酸、１－ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、１，３－ビス－Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メントール、１，３－プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ミリスチン酸、Ｏ３－（オレオイル）リトコール酸、Ｏ３－（オレオイル）コレン酸、ジメトキシトリチルまたはフェノキサジン）およびペプチドコンジュゲート（例えば、アンテナペディアペプチド、Ｔａｔペプチド）、アルキル化剤、リン酸、アミノ、メルカプト、ＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ－４０Ｋ）、ＭＰＥＧ、［ＭＰＥＧ］_２、ポリアミノ、アルキル、置換アルキル、放射標識マーカー、酵素、ハプテン（例えば、ビオチン）、輸送／吸収促進物質（例えば、アスピリン、ビタミンＥ、葉酸）、合成リボヌクレアーゼ（例えば、イミダゾール、ビスイミダゾール、ヒスタミン、イミダゾールクラスター、アクリジン－イミダゾールコンジュゲート、テトラアザ大環状分子のＥｕ３＋複合体）、ジニトロフェニル、ＨＲＰまたはＡＰが挙げられる。

リガンドは、タンパク質、例えば、糖タンパク質またはペプチド、例えば、共リガンドに対して特異的親和性を有する分子または抗体、例えば、がん細胞、内皮細胞または骨細胞などの特定の細胞種に結合する抗体であり得る。リガンドにはまた、ホルモンおよびホルモン受容体が含まれ得る。それらにはまた、非ペプチド種、例えば、脂質、レクチン、炭水化物、ビタミン、補助因子、多価ラクトース、多価ガラクトース、Ｎ－アセチル－ガラクトサミン、Ｎ－アセチル－グルコサミン多価マンノースまたは多価フコースが含まれ得る。リガンドは、例えば、リポ多糖、ｐ３８ＭＡＰキナーゼのアクチベーターまたはＮＦ－κＢのアクチベーターであり得る。

リガンドは、例えば、細胞の細胞骨格を破壊することによって、例えば、細胞の微小管、微小線維または中間径線維を破壊することによってｉＲＮＡ剤の細胞への取り込みを増大し得る物質、例えば、薬物であり得る。薬物は、例えば、タキソン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、サイトカラシン、ノコダゾール、ジャスプラキノリド、ラトルンクリンＡ、ファロイジン、スウィンホリドＡ、インダノシンまたはミオセルビンであり得る。

一部の実施形態において、本明細書に記載されるようなｉＲＮＡに付着されるリガンドは、薬物動態モジュレーター（ＰＫモジュレーター）として作用する。ＰＫモジュレーターには、親油性物質、胆汁酸、ステロイド、リン脂質類似体、ペプチド、タンパク質結合剤、ＰＥＧ、ビタミンなどが含まれる。例示的ＰＫモジュレーターとして、それだけには限らないが、コレステロール、脂肪酸、コール酸、リトコール酸、ジアルキルグリセリド、ジアシルグリセリド、リン脂質、スフィンゴ脂質、ナプロキセン、イブプロフェン、ビタミンＥ、ビオチンなどが挙げられる。いくつかのホスホロチオエート連結を含むオリゴヌクレオチドはまた、血清タンパク質に結合すると知られており、従って、短いオリゴヌクレオチド、例えば、骨格中に複数のホスホロチオエート連結を含む、約５塩基、１０塩基、１５塩基または２０塩基のオリゴヌクレオチドはまた、リガンドとして（例えば、ＰＫモジュレーティングリガンドとして）本発明に適している。さらに、血清構成成分（例えば、血清タンパク質）に結合するアプタマーも、本明細書に記載される実施形態においてＰＫモジュレーティングリガンドとして使用するのに適している。

本発明のリガンドがコンジュゲートされたｉＲＮＡは、ペンダント反応性官能性を有する、例えば、オリゴヌクレオチド上への連結分子の付着に由来する（以下に記載される）オリゴヌクレオチドの使用によって合成できる。この反応性オリゴヌクレオチドを、市販のリガンド、種々の保護基のいずれかを有する合成されているリガンドまたはそれに付着された連結部分を有するリガンドと直接反応させることができる。

本発明のコンジュゲートにおいて使用されるオリゴヌクレオチドは、固相合成の公知の技術によって好都合に、日常的に作製できる。このような合成のための機器は、例えば、ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（登録商標）（カリフォルニア州、フォスターシティ）を含むいくつかのベンダーによって販売されている。当技術分野で公知のこのような合成のための任意の他の手段をさらに、または代わりに使用してもよい。他のオリゴヌクレオチド、例えば、ホスホロチオエートおよびアルキル化誘導体を調製するために同様の技術を使用することも公知である。

本発明のリガンドがコンジュゲートされたオリゴヌクレオチドおよびリガンド－配列特異的な連結されたヌクレオシドを有する分子では、オリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオシドを、標準ヌクレオチドもしくはヌクレオシド前駆体または連結部分をすでに有するヌクレオチドもしくはヌクレオシドコンジュゲート前駆体、リガンド分子をすでに有するリガンド－ヌクレオチドもしくはヌクレオシドコンジュゲート前駆体またはビルディングブロックを有する非ヌクレオシドリガンドを利用して適したＤＮＡシンセサイザーで組み立てることができる。

連結部分をすでに有するヌクレオチド－コンジュゲート前駆体を使用する場合には、配列特異的な連結されたヌクレオシドの合成が通常完了され、次いで、リガンド分子が連結部分と反応されて、リガンドがコンジュゲートされたオリゴヌクレオチドが形成される。一部の実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドまたは連結されたヌクレオシドは、市販されており、オリゴヌクレオチド合成において日常的に使用される標準ホスホラミダイトおよび非標準ホスホラミダイトに加えて、リガンド－ヌクレオシドコンジュゲートに由来するホスホラミダイトを使用して自動化シンセサイザーによって合成される。

Ａ．脂質コンジュゲート
ある特定の実施形態において、リガンドまたはコンジュゲートは、脂質または脂質ベースの分子である。このような脂質または脂質ベースの分子は、通常、血清タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）に結合できる。ＨＳＡ結合性リガンドは、身体の標的組織、例えば、非腎臓標的組織へのコンジュゲートの分布を可能にする。例えば、標的組織は、肝臓の実質細胞を含む肝臓であり得る。ＨＳＡに結合できる他の分子も、リガンドとして使用できる。例えば、ナプロキセンまたはアスピリンを使用できる。脂質または脂質ベースのリガンドは、（ａ）コンジュゲートの分解に対する耐性を増大できる、（ｂ）標的細胞もしくは細胞膜中への標的化もしくは輸送を増大できる、または（ｃ）血清タンパク質、例えば、ＨＳＡへの結合を調整できる。

脂質ベースのリガンドを使用して、コンジュゲートの標的組織への結合をモジュレート、例えば、管理（例えば、阻害）できる。例えば、より強力にＨＳＡに結合する脂質または脂質ベースのリガンドは、腎臓へ標的化される可能性が低く、したがって、身体から排除される可能性が低くなる。あまり強力にＨＳＡに結合しない脂質または脂質ベースのリガンドは、コンジュゲートを腎臓に標的化するために使用できる。

ある特定の実施形態において、脂質ベースのリガンドは、ＨＳＡに結合する。例えば、リガンドは、十分な親和性でＨＳＡに結合でき、その結果、非腎臓組織へのコンジュゲートの分布が増強される。しかし、親和性は、通常、ＨＳＡ－リガンド結合を元に戻すことができないほど強力ではない。

ある特定の実施形態において、脂質ベースのリガンドは、ＨＳＡに弱く結合するか、全く結合せず、その結果、腎臓へのコンジュゲートの分布が増強される。脂質ベースのリガンドの代わりに、またはそれに加えて、腎臓細胞を標的化する他の部分も使用できる。

別の態様では、リガンドは、標的細胞、例えば、増殖している細胞によって取り込まれる部分、例えば、ビタミンである。これらは、例えば、悪性または非悪性種、例えば、がん細胞の望まれない細胞増殖を特徴とする障害の処置にとって特に有用である。例示的ビタミンとして、ビタミンＡ、ＥおよびＫが挙げられる。他の例示的ビタミンとして、Ｂビタミン、例えば、葉酸、Ｂ１２、リボフラビン、ビオチン、ピリドキサールまたはがん細胞によって取り込まれる他のビタミンもしくは栄養素が挙げられる。また、ＨＳＡおよび低比重リポタンパク質（ＬＤＬ）も含まれる。

Ｂ．細胞透過剤
別の態様では、リガンドは、細胞透過剤、例えば、ヘリックス細胞透過剤である。ある特定の実施形態において、これらの細胞透過剤は、両親媒性である。例示的細胞透過剤として、ペプチド、例えば、ｔａｔまたはアンテナペディア（ａｎｔｅｎｎｏｐｅｄｉａ）がある。薬剤がペプチドである場合は、修飾される場合があり、ぺプチジルミメティック、逆転異性体、非ペプチドまたはシュードペプチド連結およびＤ－アミノ酸の使用を含む。ヘリックス剤は、通常、α－ヘリックス剤であり、親油性および疎油性相を有し得る。

リガンドは、ペプチドまたはペプチドミメティックであり得る。ペプチドミメティック（本明細書においてオリゴペプチドミメティックとも呼ばれる）は、天然ペプチドと類似する規定の三次元構造にフォールディング可能な分子である。ペプチドおよびペプチドミメティックのｉＲＮＡ剤への付着は、細胞認識および吸収を増強することなどによって、ｉＲＮＡの薬物動態分布に影響を及ぼし得る。ペプチドまたはペプチドミメティック部分は、約５～５０アミノ酸長、例えば、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５または５０アミノ酸長であり得る。

ペプチドまたはペプチドミメティックは、例えば、細胞透過ペプチド、カチオン性ペプチド、両親媒性ペプチドまたは疎水性ペプチド（例えば、主にＴｙｒ、ＴｒｐまたはＰｈｅからなる）であり得る。ペプチド部分は、デンドリマーペプチド、拘束ペプチドまたは架橋ペプチドであり得る。別の代替法では、ペプチド部分は、疎水性膜移行配列（ＭＴＳ）を含み得る。例示的な疎水性ＭＴＳ含有ペプチドとして、アミノ酸配列ＡＡＶＡＬＬＰＡＶＬＬＡＬＬＡＰ（配列番号１５３４）を有するＲＦＧＦがある。疎水性ＭＴＳを含有するＲＦＧＦ類似体（例えば、アミノ酸配列ＡＡＬＬＰＶＬＬＡＡＰ（配列番号１５３５））も、標的化部分であり得る。ペプチド部分は、細胞膜を横切ってペプチド、オリゴヌクレオチドおよびタンパク質を含む大きな極性分子を運ぶことができる、「送達」ペプチドであり得る。例えば、ＨＩＶＴａｔタンパク質に由来する配列（ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲＰＰＱ（配列番号１５３６））およびショウジョウバエアンテナペディアタンパク質に由来する配列（ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ（配列番号１５３７））は、送達ペプチドとして機能化能であると見出されている。ペプチドまたはペプチドミメティックは、ファージディスプレイライブラリーまたは１－ビーズ－１－化合物（ＯＢＯＣ）コンビナトリアルライブラリー（Lam et al., Nature, 354:82-84, 1991）から同定されるペプチドなどの、ＤＮＡのランダム配列によってコードされ得る。通常、組み込まれたモノマー単位を介してｄｓＲＮＡ剤に繋留されるペプチドまたはペプチドミメティックとして、細胞標的化ペプチド、例えば、アルギニン－グリシン－アスパラギン酸（ＲＧＤ）－ペプチドまたはＲＧＤミミックがある。ペプチド部分は、約５アミノ酸～約４０アミノ酸長の範囲であり得る。ペプチド部分は、例えば、安定性または直接的な立体配座特性を増大する構造修飾を有し得る。以下に記載される構造修飾のいずれも利用できる。

本発明の組成物および方法において使用するためのＲＧＤペプチドは、線状である場合も、環状である場合もあり、特定の組織（複数可）への標的化を促進するように修飾される、例えば、グリコシル化またはメチル化される場合もある。ＲＧＤ含有ペプチドおよびペプチドミメティック（ｐｅｐｔｉｄｉｏｍｉｍｅｍｔｉｃｓ）は、Ｄ－アミノ酸ならびに合成ＲＧＤミミックを含み得る。ＲＧＤに加えて、インテグリンリガンドを標的化する他の部分を使用できる。このリガンドの好ましいコンジュゲートは、ＰＥＣＡＭ－１またはＶＥＧＦを標的化する。

ＲＧＤペプチド部分を、特定の細胞種、例えば、腫瘍細胞、例えば、内皮腫瘍細胞または乳がん腫瘍細胞を標的化するために使用できる（Zitzmann et al., Cancer Res., 62:5139-43, 2002）。ＲＧＤペプチドは、ｄｓＲＮＡ剤の肺、腎臓、脾臓または肝臓を含むさまざまな他の組織の腫瘍への標的化を促進できる（Aoki et al., Cancer Gene Therapy 8:783-787, 2001）。通常、ＲＧＤペプチドは、ｉＲＮＡ剤の腎臓への標的化を促進する。ＲＧＤペプチドは、線状である場合も、環状である場合もあり、特定の組織（複数可）への標的化を促進するように修飾される、例えば、グリコシル化またはメチル化される場合もある。例えば、グリコシル化ＲＧＤペプチドは、ｉＲＮＡ剤をα_Ｖβ_３を発現する腫瘍細胞に送達できる（Haubner et al., Jour. Nucl. Med., 42:326-336, 2001）。

「細胞透過ペプチド」は、細胞、例えば、微生物細胞、例えば、細菌もしくは真菌細胞または哺乳動物細胞、例えば、ヒト細胞に透過可能である。微生物細胞透過性ペプチドは、例えば、α－ヘリックス線状ペプチド（例えば、ＬＬ－３７またはセロピンＰ１）、ジスルフィド結合含有ペプチド（例えば、α－デフェンシン、β－デフェンシンまたはバクテネシン）または１つもしくは２つの優性アミノ酸のみを含有するペプチド（例えば、ＰＲ－３９またはインドリシジン）であり得る。細胞透過ペプチドはまた、核局在性シグナル（ＮＬＳ）を含み得る。例えば、細胞透過ペプチドは、例えば、ＨＩＶ－１ｇｐ４１とＳＶ４０ラージＴ抗原のＮＬＳの融合ペプチドドメインに由来するＭＰＧなどの二分両親媒性ペプチドであり得る（Simeoni et al., Nucl. Acids Res. 31:2717-2724, 2003）。

Ｃ．炭水化物コンジュゲート
本発明の組成物および方法の一部の実施形態において、ｉＲＮＡは、炭水化物をさらに含む。炭水化物がコンジュゲートされたｉＲＮＡは、本明細書に記載されるような、核酸ならびにインビボ治療的使用に適した組成物のインビボ送達にとって有利である。本明細書において使用される場合、「炭水化物」とは、各炭素原子に結合された酸素、窒素もしくは硫黄原子とともに少なくとも６個の炭素原子（線状、分岐または環状であり得る）を有する１つもしくは複数の単糖単位で構成されている炭水化物自体またはその一部として、各炭素原子に結合された酸素、窒素もしくは硫黄原子とともに各々少なくとも６個の炭素原子（線状、分岐または環状であり得る）を有する１または複数の単糖単位で構成されている炭水化物部分を有する化合物のいずれかである化合物を指す。代表的な炭水化物として、糖（単糖、二糖、三糖および約４、５、６、７、８または９つの単糖単位を含有するオリゴ糖）ならびに多糖、例えば、デンプン、グリコーゲン、セルロースおよび多糖ゴムが挙げられる。特定の単糖として、Ｃ５が挙げられ、上記の（例えば、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７またはＣ８）糖、二糖および三糖は、２つまたは３つの単糖単位有する糖（例えば、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７またはＣ８）を含む。

ある特定の実施形態において、炭水化物コンジュゲートは、単糖を含む。

ある特定の実施形態において、単糖は、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）である。１つまたは複数のＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）誘導体を含むＧａｌＮＡｃコンジュゲートは、例えば、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれるＵＳ８，１０６，０２２に記載されている。一部の実施形態において、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートは、ｉＲＮＡを特定の細胞に標的化するリガンドとして働く。一部の実施形態において、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートは、例えば、肝臓細胞（例えば、肝細胞）のアシアロ糖タンパク質受容体のリガンドとして働くことによってｉＲＮＡを肝臓細胞に標的化する。

一部の実施形態において、炭水化物コンジュゲートは、１つまたは複数のＧａｌＮＡｃ誘導体を含む。ＧａｌＮＡｃ誘導体は、リンカー、例えば、二価または三価分岐リンカーを介して付着させることができる。一部の実施形態において、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートは、センス鎖の３’端にコンジュゲートされる。一部の実施形態において、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートは、リンカー、例えば、本明細書に記載されるようなリンカーを介してｉＲＮＡ剤に（例えば、センス鎖の３’端に）コンジュゲートされる。一部の実施形態において、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートは、センス鎖の５’端にコンジュゲートされる。一部の実施形態において、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートは、リンカー、例えば、本明細書に記載されるようなリンカーを介してｉＲＮＡ剤に（例えば、センス鎖の５’端に）コンジュゲートされる。

本発明のある特定の実施形態において、ＧａｌＮＡｃまたはＧａｌＮＡｃ誘導体を、一価リンカーを介して本発明のｉＲＮＡ剤に付着させる。一部の実施形態において、ＧａｌＮＡｃまたはＧａｌＮＡｃ誘導体を、二価リンカーを介して本発明のｉＲＮＡ剤に付着させる。本発明のさらに他の実施形態において、ＧａｌＮＡｃまたはＧａｌＮＡｃ誘導体を、三価リンカーを介して本発明のｉＲＮＡ剤に付着させる。本発明の他の実施形態において、ＧａｌＮＡｃまたはＧａｌＮＡｃ誘導体を、四価リンカーを介して本発明のｉＲＮＡ剤に付着させる。

ある特定の実施形態において、本発明の二本鎖ＲＮＡｉ剤は、ｉＲＮＡ剤に付着された１つのＧａｌＮＡｃまたはＧａｌＮＡｃ誘導体を含む。ある特定の実施形態において、本発明の二本鎖ＲＮＡｉ剤は、複数の一価リンカーを介して二本鎖ＲＮＡｉ剤の複数のヌクレオチドに各々独立に付着された、複数の（例えば、２、３、４、５または６つの）ＧａｌＮＡｃまたはＧａｌＮＡｃ誘導体を含む。

一部の実施形態において、例えば、本発明のｉＲＮＡ剤の２つの鎖が、複数の対形成されないヌクレオチドを含むヘアピンループを形成する、一方の鎖の３’端と、それぞれのもう一方の鎖の５’端の間のヌクレオチドの中断されない鎖によって接続された１つの大きな分子の一部である場合には、ヘアピンループ内の対形成されないヌクレオチドは各々、一価リンカーを介して付着されたＧａｌＮＡｃまたはＧａｌＮＡｃ誘導体を独立に含み得る。ヘアピンループはまた、二本鎖のうち１つの鎖における延長されたオーバーハングによって形成される場合もある。

一部の実施形態において、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートは、

式ＩＩ
である。

一部の実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、以下の模式図で示されるようにリンカーを介して炭水化物コンジュゲートに付着され、式中、Ｘは、ＯまたはＳである。

一部の実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、表１において定義され、以下に示されるようにＬ９６にコンジュゲートされる：

ある特定の実施形態において、本発明の組成物および方法において使用するための炭水化物コンジュゲートは、以下からなる群から選択される：

［式中、Ｙは、ＯまたはＳであり、ｎは、３～６である］（式ＸＸＩＶ）、

［式中、Ｙは、ＯまたはＳであり、ｎは、３～６である］（式ＸＸＶ）、

［式中、Ｘは、ＯまたはＳである］（式ＸＸＶＩＩ）、

（式ＸＸＸＩＶ）

ある特定の実施形態において、本発明の組成物および方法において使用するための炭水化物コンジュゲートは、単糖である。ある特定の実施形態において、単糖は、Ｎ－アセチルガラクトサミン、

式ＩＩ
である。

本明細書に記載される実施形態において使用するための別の代表的な炭水化物コンジュゲートとして、それだけには限らないが、

（式ＸＸＸＶＩ）
［式中、ＸまたはＹのうち一方は、オリゴヌクレオチドであり、もう一方は、水素である］
が挙げられる。

一部の実施形態において、適したリガンドは、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１９／０５５６３３において開示されるリガンドである。一実施形態において、リガンドは、以下の構造：

を含む。

ある特定の実施形態において、本開示のＲＮＡｉ剤は、ＧａｌＮＡｃリガンドを、このようなＧａｌＮＡｃリガンドが現在、本開示の好ましい髄腔内／ＣＮＳ送達経路（複数可）にとって限定された価値のものであると予測されている場合であっても含み得る。

本発明のある特定の実施形態において、ＧａｌＮＡｃまたはＧａｌＮＡｃ誘導体を、一価リンカーを介して本発明のｉＲＮＡ剤に付着させる。一部の実施形態において、ＧａｌＮＡｃまたはＧａｌＮＡｃ誘導体を、二価リンカーを介して本発明のｉＲＮＡ剤に付着させる。本発明のさらに他の実施形態において、ＧａｌＮＡｃまたはＧａｌＮＡｃ誘導体を、三価リンカーを介して本発明のｉＲＮＡ剤に付着させる。

一実施形態において、本発明の二本鎖ＲＮＡｉ剤は、ｉＲＮＡ剤に付着された１つまたは複数のＧａｌＮＡｃまたはＧａｌＮＡｃ誘導体を含む。ＧａｌＮＡｃは、センス鎖またはアンチセンス（ａｎｔｓｉｓｅｎｓｅ）鎖上のリンカーを介して任意のヌクレオチドに付着させることができる。ＧａｌＮａｃは、センス鎖の５’端、センス鎖の３’端、アンチセンス鎖の５’端またはアンチセンス鎖の３’端に付着させることができる。一実施形態において、ＧａｌＮＡｃを、例えば、三価リンカーを介してセンス鎖の３’端に付着させる。

他の実施形態において、本発明の二本鎖ＲＮＡｉ剤は、複数のリンカー、例えば、一価リンカーを介して二本鎖ＲＮＡｉ剤の複数のヌクレオチド各々独立に付着された、複数の（例えば、２、３、４、５または６つの）ＧａｌＮＡｃまたはＧａｌＮＡｃ誘導体を含む。

一部の実施形態において、例えば、本発明のｉＲＮＡ剤の２つの鎖が、複数の対形成されないヌクレオチドを含むヘアピンループを形成する、一方の鎖の３’端と、それぞれのもう一方の鎖の５’端の間のヌクレオチドの中断されない鎖によって接続された１つの大きな分子の一部である場合には、ヘアピンループ内の対形成されないヌクレオチドは各々、一価リンカーを介して付着されたＧａｌＮＡｃまたはＧａｌＮＡｃ誘導体を独立に含み得る。

一部の実施形態において、炭水化物コンジュゲートは、それだけには限らないが、ＰＫモジュレーターまたは細胞透過ペプチドなどの、上記のような１または複数のさらなるリガンドをさらに含む。

本発明において使用するのに適したさらなる炭水化物コンジュゲートおよびリンカーとして、各々の内容全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１４／１７９６２０およびＷＯ２０１４／１７９６２７に記載されるものが挙げられる。

Ｄ．リンカー
一部の実施形態において、本明細書に記載されるコンジュゲートまたはリガンドを、切断可能である場合も、切断可能でない場合もある種々のリンカーを用いてｉＲＮＡオリゴヌクレオチドに付着させることができる。

「リンカー」または「連結基」という用語は、化合物の２つの部分を接続する、例えば、化合物の２つの部分を共有結合によって付着させる有機部分を意味する。リンカーは、通常、直接結合または酸素もしくは硫黄などの原子、ＮＲ８、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、ＳＯ、ＳＯ_２、ＳＯ_２ＮＨなどの単位またはそれだけには限らないが、１つもしくは複数のメチレンがＯ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、ＳＯ_２、Ｎ（Ｒ８）、Ｃ（Ｏ）によって中断または終結され得る、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換アルキニル、アリールアルキル、アリールアルケニル、アリールアルキニル、ヘテロアリールアルキル、へテロアリールアルケニル、へテロアリールアルキニル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロシクリルアルケニル、ヘテロシクリルアルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アルキルアリールアルキル、アルキルアリールアルケニル、アルキルアリールアルキニル、アルケニルアリールアルキル、アルケニルアリールアルケニル、アルケニルアリールアルキニル、アルキニルアリールアルキル、アルキニルアリールアルケニル、アルキニルアリールアルキニル、アルキルヘテロアリールアルキル、アルキルヘテロアリールアルケニル、アルキルヘテロアリールアルキニル、アルケニルヘテロアリールアルキル、アルケニルヘテロアリールアルケニル、アルケニルヘテロアリールアルキニル、アルキニルヘテロアリールアルキル、アルキニルヘテロアリールアルケニル、アルキニルヘテロアリールアルキニル、アルキルヘテロシクリルアルキル、アルキルヘテロシクリルアルケニル、アルキルヘテロシクリルアルキニル（ａｌｋｙｌｈｅｒｅｒｏｃｙｃｌｙｌａｌｋｙｎｙｌ）、アルケニルヘテロシクリルアルキル、アルケニルヘテロシクリルアルケニル、アルケニルヘテロシクリルアルキニル、アルキニルヘテロシクリルアルキル、アルキニルヘテロシクリルアルケニル、アルキニルヘテロシクリルアルキニル、アルキルアリール、アルケニルアリール、アルキニルアリール、アルキルヘテロアリール、アルケニルヘテロアリール、アルキニルヘテロアリール（ａｌｋｙｎｙｌｈｅｒｅｒｏａｒｙｌ）、Ｒ８が、水素、アシル、脂肪族もしくは置換脂肪族である、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ヘテロアリール、置換もしくは非置換複素環式などの原子の鎖を含む。ある特定の実施形態において、リンカーは、約１～２４個原子、２～２４、３～２４、４～２４、５～２４、６～２４、６～１８、７～１８、８～１８個の原子、７～１７、８～１７、６～１６、７～１６または８～１６個の原子である。

切断可能な連結基とは、細胞の外側で十分に安定であるが、標的細胞中に入ると、切断されて、リンカーが一緒に保持している２つの部分を放出するものである。好ましい実施形態において、切断可能な連結基は、対象の血液において、または第２の参照条件下（血液または血清において見出される条件を模倣または表すように選択され得る）よりも、標的細胞において、または第１の参照条件下（例えば、細胞内条件を模倣または表すように選択され得る）で、少なくとも約１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍またはそれより多く、または少なくとも約１００倍速く切断される。

切断可能な連結基は、切断剤、例えば、ｐＨ、酸化還元電位または分解性分子の存在の影響を受けやすい。一般に、切断剤は、血清または血液においてよりも細胞の内側で、より一般的であるか、またはより高いレベルもしくは活性で見出される。このような分解剤の例として、特定の基質のために選択される、または基質特異性を有さない酸化還元剤が挙げられ、例えば、酸化酵素もしくは還元酵素または還元によって酸化還元切断可能な連結基を分解できる、細胞中に存在する、メルカプタンなどの還元剤、エステラーゼ、エンドソームまたは酸性環境を作出できる薬剤、例えば、５以下のｐＨをもたらすもの、一般酸、ペプチダーゼ（基質特異的であり得る）およびホスファターゼとして作用することによって酸切断可能な連結基を加水分解もしくは分解できる酵素を含む。

切断可能な連結基、例えば、ジスルフィド結合は、ｐＨの影響を受けやすい場合がある。ヒト血清のｐＨは７．４であるが、平均細胞内ｐＨはわずかに低く、約７．１～７．３の範囲である。エンドソームは、５．５～６．０の範囲のより酸性のｐＨを有し、リソソームは、およそ５．０のさらにより酸性のｐＨを有する。いくつかのリンカーは、好ましいｐＨで切断され、それによって、細胞の内側でリガンドからカチオン性脂質を細胞の所望のコンパートメント中に放出する切断可能な連結基を有するであろう。

リンカーは、特定の酵素によって切断可能である切断可能な連結基を含み得る。リンカー中に組み込まれる切断可能な連結基の種類は、標的化されるべき細胞に応じて変わり得る。例えば、肝臓標的化リガンドを、エステル基を含むリンカーを介してカチオン性脂質に連結できる。肝臓細胞は、エステラーゼが豊富であり、したがって、リンカーは、肝臓細胞において、エステラーゼが豊富ではない細胞種よりも効率的に切断される。エステラーゼが豊富な他の細胞種として、肺、腎皮質および精巣の細胞が挙げられる。

肝臓細胞および滑膜細胞などのペプチダーゼが豊富な細胞種を標的化する場合には、ペプチド結合を含有するリンカーを使用できる。

一般に、候補の切断可能な連結基の適合性は、分解剤（または条件）の、候補連結基を切断する能力を試験することによって評価できる。また、血液中で、または他の非標的組織と接触する場合に、切断に抵抗する能力について候補の切断可能な連結基を試験することも望ましいであろう。したがって、第１および第２の条件の間の切断に対する相対的感受性を決定でき、第１のものは、標的細胞において切断を示すように選択され、第２のものは、他の組織または生物学的流体、例えば、血液もしくは血清において切断を示すように選択される。評価は、無細胞系において、細胞において、細胞培養物において、臓器においてまたは組織培養物において、または動物全体において実施できる。細胞不含または培養条件において最初の評価を行うことおよび動物全体におけるさらなる評価によって確認することは、有用であり得る。好ましい実施形態において、有用な候補化合物は、血液もしくは血清（または細胞外条件を模倣するように選択されたインビトロ条件下で）と比較して、細胞において（または細胞内条件を模倣するように選択されたインビトロ条件下で）少なくとも約２、４、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または約１００倍速く切断される。

ｉ．酸化還元切断可能な連結基
ある特定の実施形態において、切断可能な連結基は、還元または酸化の際に切断される酸化還元切断可能な連結基である。還元的に切断可能な連結基の例として、ジスルフィド連結基（－Ｓ－Ｓ－）がある。候補の切断可能な連結基が適した「還元的に切断可能な連結基」であるか、または、例えば、特定のｉＲＮＡ部分および特定の標的化剤とともに使用するのに適しているか否かを決定するために、本明細書に記載される方法に目を向けることができる。例えば、細胞、例えば、標的細胞において観察されるであろう切断の速度を模倣する、当技術分野で公知の試薬を使用してジチオトレイトール（ＤＴＴ）または他の還元剤とともにインキュベートすることによって、候補を評価できる。候補はまた、血液または血清条件を模倣するように選択された条件下で評価できる。あるものでは、候補化合物は、血液において最大で約１０％切断される。他の実施形態において、有用な候補化合物は、血液（または細胞外条件を模倣するように選択されたインビトロ条件下）と比較して、細胞において（または細胞内条件を模倣するように選択されたインビトロ条件下で）少なくとも約２、４、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または約１００倍速く分解される。候補化合物の切断の速度は、細胞外媒体を模倣するように選択された条件と比較して、細胞内媒体を模倣するように選択された条件下で標準酵素動態学アッセイを使用して決定できる。

ｉｉ．リン酸ベースの切断可能な連結基
ある特定の実施形態において、切断可能なリンカーは、リン酸ベースの切断可能な連結基を含む。リン酸ベースの切断可能な連結基は、リン酸基を分解または加水分解する薬剤によって切断される。細胞中のリン酸基を切断する薬剤の例として、細胞中のホスファターゼなどの酵素がある。リン酸ベースの連結基の例として、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲｋ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＯＲｋ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＳＲｋ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲｋ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲｋ）－Ｓ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲｋ）－Ｓ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＯＲｋ）－Ｓ－、－Ｓ－Ｐ（Ｓ）（ＯＲｋ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（Ｒｋ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（Ｒｋ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（Ｒｋ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｓ）（Ｒｋ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（Ｒｋ）－Ｓ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（Ｒｋ）－Ｓ－がある。好ましい実施形態として、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＯＨ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＳＨ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－Ｓ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－Ｓ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＯＨ）－Ｓ－、－Ｓ－Ｐ（Ｓ）（ＯＨ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（Ｈ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（Ｈ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（Ｈ）－Ｏ、－Ｓ－Ｐ（Ｓ）（Ｈ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（Ｈ）－Ｓ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（Ｈ）－Ｓ－がある。好ましい実施形態として、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－Ｏ－がある。これらの候補は、上記のものと類似の方法を使用して評価できる。

ｉｉｉ．酸切断可能な連結基
ある特定の実施形態において、切断可能なリンカーは、酸切断可能な連結基を含む。酸切断可能な連結基は、酸性条件下で切断される連結基である。好ましい実施形態において、酸切断可能な連結基は、約６．５以下の（例えば、約６．０、５．７５、５．５、５．２５、５．０またはそれより低い）ｐＨを有する酸性環境において、または一般酸として作用できる酵素などの薬剤によって切断される。細胞では、特定の低ｐＨオルガネラ、例えば、エンドソームおよびリソソームは、酸切断可能な連結基のための切断環境を提供できる。酸切断可能な連結基の例として、それだけには限らないが、ヒドラゾン、エステルおよびアミノ酸のエステルが挙げられる。酸切断可能な基は、一般式－Ｃ＝ＮＮ－、Ｃ（Ｏ）Ｏまたは－ＯＣ（Ｏ）を有し得る。好ましい実施形態は、エステルの酸素と結合している炭素（アルコキシ基）が、アリール基、置換アルキル基または第三級アルキル基、例えば、ジメチルペンチルもしくはｔ－ブチルである場合である。これらの候補は、上記のものと類似の方法を使用して評価できる。

ｉｖ．エステルベースの切断可能な連結基
ある特定の実施形態において、切断可能なリンカーは、エステルベースの切断可能な連結基を含む。エステルベースの切断可能な連結基は、細胞中のエステラーゼおよびアミダーゼなどの酵素によって切断される。エステルベースの切断可能な連結基の例として、それだけには限らないが、アルキレン、アルケニレンおよびアルキニレン基のエステルが挙げられる。エステル切断可能な連結基は、一般式－Ｃ（Ｏ）Ｏ－または－ＯＣ（Ｏ）－を有する。これらの候補は、上記のものと類似の方法を使用して評価できる。

ｖ．ペプチドベースの切断可能な連結基
さらに別の実施形態において、切断可能なリンカーは、ペプチドベースの切断可能な連結基を含む。ペプチドベースの切断可能な連結基は、細胞中のペプチダーゼおよびプロテアーゼなどの酵素によって切断される。ペプチドベースの切断可能な連結基は、アミノ酸の間で形成され、オリゴペプチド（例えば、ジペプチド、トリペプチドなど）およびポリペプチドをもたらすペプチド結合である。ペプチドベースの切断可能な基は、アミド基（－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－）を含まない。アミド基は、任意のアルキレン、アルケニレンまたはアルキネレンの間で形成され得る。ペプチド結合は、アミノ酸の間で形成され、ペプチドおよびタンパク質をもたらすアミド結合の特別なタイプである。ペプチドベースの切断基は、一般に、アミノ酸の間で形成され、ペプチドおよびタンパク質をもたらす、ペプチド結合（すなわち、アミド結合）に限定され、アミド官能基全体を含まない。ペプチドベースの切断可能な連結基は、一般式－ＮＨＣＨＲＡＣ（Ｏ）ＮＨＣＨＲＢＣ（Ｏ）－、（式中、ＲＡおよびＲＢは、２つの隣接するアミノ酸のＲ基である）を有する。これらの候補は、上記のものと類似の方法を使用して評価できる。

一部の実施形態において、本発明のｉＲＮＡは、リンカーを介して炭水化物にコンジュゲートされる。本発明の組成物および方法のリンカーを有するｉＲＮＡ炭水化物コンジュゲートの限定されるわけではない例として、それだけには限らないが、

［ＸまたはＹのうち一方が、オリゴヌクレオチドである場合は、もう一方は、水素である］
が挙げられる。

本発明の組成物および方法のある特定の実施形態において、リガンドは、二価または三価分岐リンカーを介して付着された１つまたは複数の「ＧａｌＮＡｃ」（Ｎ－アセチルガラクトサミン）誘導体である。

ある特定の実施形態において、本発明のｄｓＲＮＡは、式（ＸＬＶ）～（ＸＬＶＩ）のいずれかで示される構造の群から選択される二価または三価分岐リンカーにコンジュゲートされる：

［式中、
ｑ２Ａ、ｑ２Ｂ、ｑ３Ａ、ｑ３Ｂ、ｑ４Ａ、ｑ４Ｂ、ｑ５Ａ、ｑ５Ｂおよびｑ５Ｃは、各出現について独立に、０～２０を表し、反復単位は、同一である場合も、異なる場合もあり、
Ｐ^２Ａ、Ｐ^２Ｂ、Ｐ^３Ａ、Ｐ^３Ｂ、Ｐ^４Ａ、Ｐ^４Ｂ、Ｐ^５Ａ、Ｐ^５Ｂ、Ｐ^５Ｃ、Ｔ^２Ａ、Ｔ^２Ｂ、Ｔ^３Ａ、Ｔ^３Ｂ、Ｔ^４Ａ、Ｔ^４Ｂ、Ｔ^４Ａ、Ｔ^５Ｂ、Ｔ^５Ｃは、各出現について各々独立に、存在しない、ＣＯ、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、ＯＣ（Ｏ）、ＮＨＣ（Ｏ）、ＣＨ_２、ＣＨ_２ＮＨまたはＣＨ_２Ｏであり、
Ｑ^２Ａ、Ｑ^２Ｂ、Ｑ^３Ａ、Ｑ^３Ｂ、Ｑ^４Ａ、Ｑ^４Ｂ、Ｑ^５Ａ、Ｑ^５Ｂ、Ｑ^５Ｃは、各出現について独立に、存在しない、アルキレン、置換アルキレンであり、１つまたは複数のメチレンは、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、ＳＯ_２、Ｎ（Ｒ^Ｎ）、Ｃ（Ｒ’）＝Ｃ（Ｒ’’）、Ｃ≡ＣまたはＣ（Ｏ）のうち１つまたは複数によって中断または終結され得る、
Ｒ^２Ａ、Ｒ^２Ｂ、Ｒ^３Ａ、Ｒ^３Ｂ、Ｒ^４Ａ、Ｒ^４Ｂ、Ｒ^５Ａ、Ｒ^５Ｂ、Ｒ^５Ｃは、各出現について各々独立に、存在しない、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、ＣＨ_２、Ｃ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、ＮＨＣＨ（Ｒ^ａ）Ｃ（Ｏ）、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒ^ａ）－ＮＨ－、ＣＯ、ＣＨ＝Ｎ－Ｏ、

またはヘテロシクリルであり、
Ｌ^２Ａ、Ｌ^２Ｂ、Ｌ^３Ａ、Ｌ^３Ｂ、Ｌ^４Ａ、Ｌ^４Ｂ、Ｌ^５Ａ、Ｌ^５ＢおよびＬ^５Ｃは、リガンド、すなわち、各出現について各々独立に、単糖（ＧａｌＮＡｃなど）、二糖、三糖、四糖、オリゴ糖または多糖を表し、Ｒ^ａは、Ｈまたはアミノ酸側鎖である]。三価コンジュゲート性ＧａｌＮＡｃ誘導体は、標的遺伝子、例えば、式（ＸＬＩＸ）のもの：

［式中、Ｌ^５Ａ、Ｌ^５ＢおよびＬ^５Ｃは、単糖、例えば、ＧａｌＮＡｃ誘導体を表す］
の発現を阻害するために、ＲＮＡｉ剤とともに使用するために特に有用である。

ＧａｌＮＡｃ誘導体をコンジュゲートする適した二価および三価分岐リンカー基の例として、それだけには限らないが、式ＩＩ、ＶＩＩ、ＸＩ、ＸおよびＸＩＩＩのような上記で列挙された構造が挙げられる。

ＲＮＡコンジュゲートの調製を教示する代表的な米国特許として、それだけには限らないが、米国特許第４，８２８，９７９号、同４，９４８，８８２号、同５，２１８，１０５号、同５，５２５，４６５号、同５，５４１，３１３号、同５，５４５，７３０号、同５，５５２，５３８号、同５，５７８，７１７号、同５，５８０，７３１号、同５，５９１，５８４号、同５，１０９，１２４号、同５，１１８，８０２号、同５，１３８，０４５号、同５，４１４，０７７号、同５，４８６，６０３号、同５，５１２，４３９号、同５，５７８，７１８号、同５，６０８，０４６号、同４，５８７，０４４号、同４，６０５，７３５号、同４，６６７，０２５号、同４，７６２，７７９号、同４，７８９，７３７号、同４，８２４，９４１号、同４，８３５，２６３号、同４，８７６，３３５号、同４，９０４，５８２号、同４，９５８，０１３号、同５，０８２，８３０号、同５，１１２，９６３号、同５，２１４，１３６号、同５，０８２，８３０号、同５，１１２，９６３号、同５，２１４，１３６号、同５，２４５，０２２号、同５，２５４，４６９号、同５，２５８，５０６号、同５，２６２，５３６号、同５，２７２，２５０号、同５，２９２，８７３号、同５，３１７，０９８号、同５，３７１，２４１号、同５，３９１，７２３号、同５，４１６，２０３号、同５，４５１，４６３号、同５，５１０，４７５号、同５，５１２，６６７号、同５，５１４，７８５号、同５，５６５，５５２号、同５，５６７，８１０号、同５，５７４，１４２号、同５，５８５，４８１号、同５，５８７，３７１号、同５，５９５，７２６号、同５，５９７，６９６号、同５，５９９，９２３号、同５，５９９，９２８号、同５，６８８，９４１号、同６，２９４，６６４号、同６，３２０，０１７号、同６，５７６，７５２号、同６，７８３，９３１号、同６，９００，２９７号、同７，０３７，６４６号および同８，１０６，０２２号が挙げられ、それらの各々の内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。

所与の化合物において全ての位置について均一に修飾される必要はなく、実際、前記修飾のうち２つ以上を単一化合物中に、またはさらにｉＲＮＡ内の単一ヌクレオシドに組み込むことができる。本発明はまた、キメラ化合物であるｉＲＮＡ化合物を含む。

本発明との関連で「キメラ」ｉＲＮＡ化合物または「キメラ」とは、各々、少なくとも１つのモノマー単位、すなわち、ｄｓＲＮＡ化合物の場合にはヌクレオチドで構成されている、２つ以上の化学的に別個の領域を含有する、ｉＲＮＡ化合物、好ましくは、ｄｓＲＮＡ剤である。これらのｉＲＮＡは通常、ｉＲＮＡに、ヌクレアーゼ分解に対する耐性の増大、細胞取り込みの増大または標的核酸に対する結合親和性の増大を付与するようにＲＮＡが修飾される少なくとも１つの領域を含有する。ｉＲＮＡのさらなる領域は、ＲＮＡ：ＤＮＡまたはＲＮＡ：ＲＮＡハイブリッドを切断可能な酵素の基質として働くことができる。例として、ＲＮアーゼＨは、ＲＮＡ：ＤＮＡ二本鎖のＲＮＡ鎖を切断する細胞性エンドヌクレアーゼである。したがって、ＲＮアーゼＨの活性化は、ＲＮＡ標的の切断をもたらし、それによって、遺伝子発現のｉＲＮＡ阻害の効率を大きく増強する。結果的に、同一標的領域にハイブリダイズするホスホロチオエートデオキシｄｓＲＮＡと比較して、キメラｄｓＲＮＡが使用される場合により短いｉＲＮＡで比較できる結果を得ることができることが多い。ＲＮＡ標的の切断は、ゲル電気泳動、必要に応じて、当技術分野で公知の関連する核酸ハイブリダイゼーション技術によって日常的に検出できる。

ある特定の例では、ｉＲＮＡのＲＮＡは、非リガンド基によって修飾できる。ｉＲＮＡの活性、細胞分布または細胞取り込みを増強するために、いくつかの非リガンド分子がｉＲＮＡにコンジュゲートされており、このようなコンジュゲーションを実施するための手順は、科学文献において利用可能である。このような非リガンド部分には、コレステロールなどの脂質部分［Kubo, T. et al., Biochem. Biophys. Res. Comm., 2007, 365(1):54-61、Letsinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86:6553］、コール酸（Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1994, 4:1053）、チオエーテル、例えば、ヘキシル－Ｓ－トリチルチオール（Manoharan et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 1992, 660:306、Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Let., 1993, 3:2765）、チオコレステロール（Oberhauser et al., Nucl. Acids Res., 1992, 20:533）、脂肪鎖、例えば、ドデカンジオールもしくはウンデシル残基（Saison-Behmoaras et al., EMBO J., 1991, 10:111、Kabanov et al., FEBS Lett., 1990, 259:327; Svinarchuk et al., Biochimie, 1993, 75:49）、リン脂質、例えば、ジ－ヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロールもしくはトリエチルアンモニウム１，２－ジ－Ｏ－ヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロ－３－Ｈ－ホスホネート（Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651、Shea et al., Nucl. Acids Res., 1990, 18:3777）、ポリアミンもしくはポリエチレングリコール鎖（Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14:969）またはアダマンタン酢酸（Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651）、パルミチル部分（Mishra et al., Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264:229）またはオクタデシルアミンもしくはヘキシルアミノ－カルボニル－オキシコレステロール部分（Crooke et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277:923）が含まれていた。このようなＲＮＡコンジュゲートの調製を教示する代表的な米国特許は、上記で列挙されている。通常のコンジュゲーションプロトコールは、配列の１つまたは複数の位置にアミノリンカーを有するＲＮＡの合成を含む。次いで、適切なカップリングまたは活性化試薬を使用して、アミノ基が、コンジュゲートされている分子と反応する。コンジュゲーション反応は、ＲＮＡがまだ固体支持体に結合している状態で、または溶液相でＲＮＡが切断された後に実施できる。ＨＰＬＣによるＲＮＡコンジュゲートの精製によって、通常、純粋なコンジュゲートが得られる。

Ｖ．本開示のＲＮＡｉ剤のデリバリー

細胞、例えば、対象内の細胞、例えば、ヒト対象（例えば、それを必要とする対象、例えば、ＭＡＰＴ関連障害、例えば、アルツハイマー病、ＦＴＤ、ＰＳＰ、または別のタウオパチーを有する対象）内の細胞への本開示のＲＮＡｉ剤のデリバリーは、いくつかの異なる方法において達成することができる。例えば、デリバリーは、細胞をインビトロまたはインビボのどちらかにおいて本開示のＲＮＡｉ剤と接触させることによって実施され得る。インビボデリバリーは、ＲＮＡｉ剤、例えば、ｄｓＲＮＡを含む組成物を対象に投与することによって直接的に実施してもよい。あるいは、インビボデリバリーは、ＲＮＡｉ剤をコードしその発現を誘導する１つまたは複数のベクターを投与することによって間接的に実施してもよい。これらの代替策は、下記においてさらに説明される。

概して、核酸分子をデリバリーする任意の方法（インビトロまたはインビボ）は、本開示のＲＮＡｉ剤の使用に適合させることができる［例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Akhtar S. and Julian RL., (1992) Trends Cell. Biol. 2(5):139-144およびＷＯ９４／０２５９５を参照されたい］。インビボデリバリーの場合、ＲＮＡｉ剤をデリバリーするために考慮する要因としては、例えば、デリバリーされた薬剤の生物学的安定性、非特異的効果の防止、および標的組織におけるデリバリーされた薬剤の蓄積が挙げられる。ＲＮＡｉ剤の非特異的効果は、局所投与、例えば、組織への直接注入もしくは移植または調製物の局所投与によって最小限に抑えることができる。処置部位への局所投与は、薬剤の局所濃度を最大化し、薬剤によって害され得るかまたは薬剤を分解することができる全身組織への薬剤の曝露を制限し、投与されるＲＮＡｉ剤のより少ない合計用量を可能にする。いくつかの研究は、ＲＮＡｉ剤が局所的に投与された場合での遺伝子産物のノックダウンの成功を示している。例えば、カニクイザルでの硝子体注入によるＶＥＧＦｄｓＲＮＡの眼内デリバリー［Tolentino, MJ. et al., (2004) Retina 24:132-138］およびマウスでの網膜下注入［Reich, SJ. et al. (2003) Mol. Vis. 9:210-216］は、両方とも、加齢黄斑変性症の実験モデルにおいて、新生血管形成を予防することが示された。加えて、マウスへのｄｓＲＮＡの直接的腫瘍内注入は、腫瘍体積を減少させ［Pille, J. et al. (2005) Mol. Ther. 11:267-274］、ならびに腫瘍を有するマウスの生存を長引かせることができる［Kim, WJ. et al., (2006) Mol. Ther. 14:343-350; Li, S. et al., (2007) Mol. Ther. 15:515-523］。ＲＮＡ干渉は、直接注入によるＣＮＳへの［Dorn, G. et al., (2004) Nucleic Acids 32:e49; Tan, PH. et al. (2005) Gene Ther. 12:59-66; Makimura, H. et al. (2002) BMC Neurosci. 3:18; Shishkina, GT., et al. (2004) Neuroscience 129:521-528; Thakker, ER., et al. (2004) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101:17270-17275; Akaneya,Y., et al. (2005) J. Neurophysiol. 93 :594-602］、および鼻腔内投与による肺への［Howard, KA. et al., (2006) Mol. Ther. 14:476-484; Zhang, X. et al., (2004) J. Biol. Chem. 279:10677-10684; Bitko, V. et al., (2005) Nat. Med. 11:50-55］、局所デリバリーによる成功も示している。疾患の処置のためにＲＮＡｉ剤を全身投与する場合、ＲＮＡを修飾することができ、またはその代わりに、薬物デリバリーシステムを使用してデリバリーすることができ；両方の方法は、インビボでのエンドヌクレアーゼおよびエクソヌクレアーゼによるｄｓＲＮＡの急速な分解を防ぐように機能する。ＲＮＡまたは医薬担体の修飾も、標的組織へのＲＮＡｉ剤の標的化を可能にすることができ、望ましくないオフターゲット効果を避けることができる（例えば、理論に束縛されることを望むわけではないが、本明細書において説明されるＧＮＡの使用は、ｄｓＲＮＡのシード領域を不安定化することが特定されており、そのようなオフターゲット効果は、そのようなシード領域の不安定化によって著しく弱められるため、結果として、オフターゲット効果と比較したときのオンターゲットの有効性に対する、そのようなｄｓＲＮＡの優先性を高める）。ＲＮＡｉ剤は、細胞取り込みを増強し、分解を防ぐように、コレステロールなどの親油性基への化学的コンジュゲーションによって修飾することができる。例えば、親油性コレステロール部分にコンジュゲートさせたＡｐｏＢへと誘導されたＲＮＡｉ剤を、マウスに全身的に注入したところ、結果として、肝臓および空腸の両方においてａｐｏＢｍＲＮＡのノックダウンを生じた［Soutschek, J. et al., (2004) Nature 432:173-178］。アプタマーへのＲＮＡｉ剤のコンジュゲーションは、前立腺がんのマウスモデルにおいて腫瘍の成長を阻害し、腫瘍縮小を媒介することが分かっている［McNamara, JO. et al., (2006) Nat. Biotechnol. 24:1005-1015］。代替の実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、薬物デリバリーシステム、例えば、ナノ粒子、デンドリマー、ポリマー、リポソーム、またはカチオン性デリバリーシステムなどを使用してデリバリーすることができる。正に帯電したカチオン性デリバリーシステムは、分子ＲＮＡｉ剤（負に帯電した）の結合を促進し、負に帯電した細胞膜での相互作用も高め、それにより、細胞によるＲＮＡｉ剤の効率的な取り込みを可能にする。カチオン性脂質、デンドリマー、またはポリマーは、ＲＮＡｉ剤に結合することができるか、またはＲＮＡｉ剤を封入するベシクルまたはミセルを形成するように誘導することができる［例えば、Kim SH. et al., (2008) Journal of Controlled Release 129(2):107-116を参照されたい］。ベシクルまたはミセルの形成はさらに、全身投与したときのＲＮＡｉ剤の分解を防ぐ。カチオン性ＲＮＡｉ剤複合体を作製および投与する方法は、十分に当業者の能力の範囲内である［例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Sorensen, DR., et al. (2003) J. Mol. Biol 327:761-766; Verma, UN. et al., (2003) Clin. Cancer Res. 9:1291-1300; Arnold, AS et al. (2007) J. Hypertens. 25:197-205を参照されたい］。ＲＮＡｉ剤の全身デリバリーにとって有用な薬物デリバリーシステムのいくつかの非限定的な例としては、ＤＯＴＡＰ［Sorensen, DR., et al (2003), supra; Verma, UN. et al., (2003), supra］、オリゴフェクタミン（Ｏｌｉｇｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ）、「固体核酸脂質粒子」［Zimmermann, TS. et al., (2006) Nature 441:111-114］、カルジオリピン［Chien, PY. et al., (2005) Cancer Gene Ther. 12:321-328; Pal, A. et al., (2005) Int J. Oncol. 26:1087-1091］、ポリエチレンミン［Bonnet ME. et al., (2008) Pharm. Res. Aug 16 Epub ahead of print; Aigner, A. (2006) J. Biomed. Biotechnol. 71659］、Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ（ＲＧＤ）ペプチド［Liu, S. (2006) Mol. Pharm. 3:472-487］、およびポリアミドアミン［Tomalia, DA. et al., (2007) Biochem. Soc. Trans. 35:61-67; Yoo, H. et al., (1999) Pharm. Res. 16:1799-1804］が挙げられる。一部の実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、全身投与のためにシクロデキストリンと複合体を形成する。投与の方法およびＲＮＡｉ剤とシクロデキストリンとによる医薬組成物は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第７，４２７，６０５号に見出すことができる。

本開示のある特定の態様は、細胞においてＭＡＰＴ標的遺伝子の発現を減少させる方法であって、細胞を本開示の二本鎖ＲＮＡｉ剤と接触させることを含む方法に関する。一実施形態において、細胞は、肝外細胞、適宜、ＣＮＳ細胞である。他の実施形態において、細胞は肝細胞（ｈｅｐｔｉｃｃｅｌｌ）である。

本開示の別の態様は、対象においてＭＡＰＴ標的遺伝子の発現を減少させる方法であって、対象に本開示の二本鎖ＲＮＡｉ剤を投与することを含む方法に関する。

本開示の別の態様は、ＣＮＳ障害（神経変性障害）を有する対象を処置する方法であって、治療有効量の本開示の二本鎖ＭＡＰＴ標的化ＲＮＡｉ剤を対象に投与すること、それによって対象を処置することを含む方法に関する。対象の神経変性障害は、ＭＡＰＴ遺伝子にコードされるタンパク質タウの異常に関連している。ＭＡＰＴ遺伝子にコードされるタンパク質タウの異常は、対象の脳内でのタウの凝集を引き起こすおそれがある。

本開示の方法によって処置することができる例示的なＣＮＳ障害としては、ＭＡＰＴ関連疾患ＣＮＳ障害、例えば、タウオパチー、アルツハイマー病、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、行動障害型前頭側頭型認知症（ｂｖＦＴＤ）、非流暢性亜型原発性進行性失語（ｎｆｖＰＰＡ）、意味型原発性進行性失語（ＰＰＡ－Ｓ）、ロゴペニック型原発性進行性失語（ＰＰＡ－Ｌ）、１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、ピック病（ＰｉＤ）、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、初老期認知症を伴う多系統タウオパチー（ＭＳＴＤ）、球状グリア封入体を伴う白質タウオパチー（ＧＧＩを伴うＦＴＬＤ）、ＭＡＰＴ突然変異を伴うＦＴＬＤ、神経原線維変化（ＮＦＴ）認知症、運動ニューロン疾患を伴うＦＴＤ、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、皮質基底核症候群（ＣＢＳ）、皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、パーキンソン病、脳炎後パーキンソニズム、ニーマン・ピック病、ハンチントン病、筋強直性ジストロフィー１型、およびダウン症候群（ＤＳ）が挙げられる。

一実施形態において、二本鎖ＲＮＡｉ剤は、髄腔内投与される。二本鎖ＲＮＡｉ剤の髄腔内投与によって、方法は、脳（例えば、線条体）または脊柱組織、例えば、皮質、小脳、頚椎、腰椎、および胸椎、免疫細胞、例えば、単球およびＴ細胞でのＭＡＰＴ標的遺伝子の発現を低減させることができる。

解説の容易さのために、このセクションにおける製剤、組成物、および方法は、主に、修飾されたｓｉＲＮＡ化合物に関して説明される。しかしながら、これらの製剤、組成物、および方法は、他のｓｉＲＮＡ化合物、例えば、未修飾ｓｉＲＮＡ化合物によって実践することができ、そのような実践は、本開示内であることは理解され得る。ＲＮＡｉ剤を含む組成物は、様々な経路によって対象にデリバリーすることができる。例示的経路としては、髄腔内、静脈内、局所、経直腸、経肛門、経膣、経鼻、経肺、および経眼が挙げられる。

本開示のＲＮＡｉ剤は、投与にとって好適な医薬組成物に組み込むことができる。そのような組成物は、通常、１種または複数種のＲＮＡｉ剤と薬学的に許容される担体とを含む。本明細書において使用される場合、語句「薬学的に許容される担体」は、医薬投与に適合性の、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング剤、抗真菌剤および防かび剤、等張剤および吸収遅延剤、ならびに同様のものを含むことが意図される。薬学的に活性な物質のためのそのような媒質および薬剤の使用は、当技術分野において周知である。任意の従来的な媒質または薬剤が活性成分と不適合性である場合を除き、組成物におけるそれらの使用は想到される。補足の有効成分もまた組成物に組み込まれ得る。

本開示の医薬組成物は、局所処置または全身処置のどちらが所望されるか、ならびに処置されるエリアに応じて、いくつかの方法において投与され得る。投与は、局所（例えば、点眼、経膣、経直腸、鼻腔内、経皮など）、髄腔内、経口、または非経口投与であり得る。非経口投与は、点滴、皮下、腹腔内、もしくは筋肉注射、または髄腔内または脳室内投与を含む。

投与の経路および部位は、標的化を増強するように選択され得る。例えば、神経または脊柱組織を標的化するためには、髄腔内注射が論理的な選択であろう。肺細胞は、エアゾール形態でのＲＮＡｉ剤の投与によって標的化され得る。血管内皮細胞は、ＲＮＡｉ剤によるバルーンカテーテルのコーティングおよびＲＮＡの機械的導入によって標的化され得る。

局所投与用製剤は、経皮パッチ、軟膏剤、ローション剤、クリーム剤、ゲル剤、滴剤、坐剤、噴霧剤、溶液剤、および散剤を含み得る。従来の医薬用担体、水性、粉末、または油状基剤、増粘剤なども必要であり得、または望ましくあり得る。被覆したコンドーム、手袋なども有用であり得る。

経口投与用組成物は、散剤または顆粒剤、水中における懸濁剤または溶液剤、シロップ剤、エキシル剤または非水性媒体、タブレット剤、カプセル剤、ドロップ剤、またはトローチ剤を含む。錠剤の場合、使用できる担体としては、ラクトース、クエン酸ナトリウム、およびリン酸の塩が挙げられる。様々な崩壊剤、例えば、デンプンなど、および潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、およびタルクなどが、錠剤において一般的に使用される。カプセル形態での経口投与の場合、有用な希釈剤は、ラクトースおよび高分子量ポリエチレングリコールである。経口投与に水性懸濁液が必要な場合、核酸組成物は、乳化剤および懸濁剤と組み合わせることができる。所望の場合、ある特定の甘味剤または風味剤を加えることができる。

髄腔内または脳室内投与用の組成物は、緩衝液、希釈剤、および他の好適な添加剤も含有し得る無菌水溶液を含み得る。

非経口投与用の製剤は、緩衝液、希釈剤、および他の好適な添加剤も含有し得る無菌水溶液を含み得る。脳室内注射は、例えばリザーバーに取り付けられた、脳室内カテーテルによって促進され得る。静脈内使用の場合、溶質の総濃度は、調製物を等張にするように制御され得る。

一実施形態において、ｓｉＲＮＡ化合物、例えば、二本鎖ｓｉＲＮＡ化合物、またはｓｓｉＲＮＡ化合物、組成物の投与は、非経口、例えば、静脈内（例えば、ボーラスとして、または拡散性注入として）、皮内、腹腔内、筋肉内、髄腔内、心室内、脳内、皮下、経粘膜、頬側、舌下、内視鏡下、経直腸、経口、経膣、局所、経肺、鼻腔内、経尿道、または経眼である。投与は、本人によって、または他の人、例えば、医療提供者などによって提供され得る。医薬品は、測定された用量において、または秤量された用量をデリバリーするディスペンサーにおいて提供することができる。選択されたデリバリーのモードは、下記においてより詳細に説明される。

Ａ．髄腔内投与
一実施形態において、二本鎖ＲＮＡｉ剤は、髄腔内注入（すなわち、脳および脊髄組織を浸す髄液への注入）によってデリバリーされる。髄液へのＲＮＡｉ剤の髄腔内注入は、ボーラス注入として、または、皮下に注入することができるミニポンプによって、実施することができ、それにより、髄液中へのｓｉＲＮＡの規則正しい一定のデリバリーを提供することができる。髄液が産生される脈絡叢からの髄液の循環は、脊髄および後根神経節の周りを下り、その後、小脳を通過して、クモ膜顆粒へと皮質を越え、そこで、体液はＣＮＳを出ることができ、注入された化合物のサイズ、安定性、および溶解性に応じて、髄腔内によりデリバリーされる分子は、ＣＮＳ全体を通して標的を攻撃することができる。

一部の実施形態において、髄腔内投与は、ポンプを介して行われる。ポンプは、外科手術によって移植された浸透圧ポンプであり得る。一実施形態において、浸透圧ポンプは、髄腔内投与を容易にするために、脊柱管の髄腔内に移植される。

一部の実施形態において、髄腔内投与は、ある量の医薬品を収容するリザーバーおよびリザーバーに収容された医薬品の一部をデリバリーするように構成されたポンプを含む、製薬品の髄腔内デリバリーシステムを介して行われる。この髄腔内デリバリーシステムについてのさらなる詳細は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１５／１１６６５８に見出され得る。

髄腔内注入されたＲＮＡｉ剤の量は、一方の標的遺伝子から別の標的遺伝子へと変わり得、ならびに適用されるべき適切な量は、各標的遺伝子に対して個別に決定しなければならない場合がある。典型的には、この量は、１０μｇから２ｍｇ、好ましくは５０μｇから１５００μｇ、より好ましくは１００μｇから１０００μｇの範囲である。

Ｂ．本開示のベクターコードＲＮＡｉ剤
ＭＡＰＴ遺伝子を標的化するＲＮＡｉ剤は、ＤＮＡまたはＲＮＡベクターに挿入された転写物ユニットから発現され得る［例えば、Couture, A, et al., TIG. (1996), 12:5-10; WO 00/22113、WO 00/22114、およびUS 6,054,299を参照されたい］。発現は、好ましくは、使用される特定のコンストラクトならびに標的組織または細胞タイプに応じて継続される（数か月またはそれ以上）。これらの導入遺伝子は、直鎖状コンストラクト、環状プラスミド、またはウイルスベクターとして導入することができ、それらは、統合ベクターまたは非統合ベクターであり得る。導入遺伝子は、染色体外プラスミドとして継代されることを可能にするように構築することもできる［Gassmann, et al., (1995) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:1292］。

ＲＮＡｉ剤の個々の鎖は、発現ベクター上のプロモーターから転写させることができる。２つの別々の鎖が、例えば、ｄｓＲＮＡを産生するように発現される場合、２つの別々の発現ベクターを、標的細胞中に共導入することができる（例えば、トランスフェクションまたは感染によって）。あるいは、ｄｓＲＮＡのそれぞれ個別の鎖を、両方が同じ発現プラスミド上に位置されたプロモーターによって転写させることができる。一実施形態において、ｄｓＲＮＡは、ｄｓＲＮＡがステム－アンド－ループ構造を有するようにリンカーポリヌクレオチド配列によって連結された逆方向反復ポリヌクレオチドとして発現される。

ＲＮＡｉ剤発現ベクターは、一般的に、ＤＮＡプラスミドまたはウイルスベクターである。真核細胞に対して適合性の発現ベクター、好ましくは脊椎動物細胞に対して適合性の発現ベクターを使用することにより、本明細書において説明されるＲＮＡｉ剤の発現のための組換えコンストラクトを生成することができる。ＲＮＡｉ剤発現ベクターのデリバリーは、例えば、静脈内または筋肉内投与によって、患者から外植された標的細胞への投与とその後の患者への再導入によって、または所望の標的細胞への導入を可能にする任意の他の手段によって、全身性であり得る。

本明細書において説明される方法および組成物と共に用いることができるウイルスベクターシステムとしては、これらに限定されるわけではないが、（ａ）アデノウィルスベクター；（ｂ）レトロウイルスベクター、例えば、これらに限定されるわけではないが、レンチウイルスベクター、モロニーマウス白血病ウイルスなど；（ｃ）アデノ随伴ウイルスベクター；（ｄ）単純ヘルペスウイルスベクター；（ｅ）ＳＶ４０ベクター；（ｆ）ポリオームウイルスベクター；（ｇ）パピローマウイルスベクター；（ｈ）ピコルナウイルスベクター；（ｉ）水泡ウイルスベクター、例えば、オルソポックス、例えば、種痘疹ウイルスベクターなど、または鳥ポックス（ａｖｉｐｏｘ）、例えば、カナリア痘または家禽ジフテリアなど；ならびに（ｊ）ヘルパー依存性またはガットレス（ｇｕｔｌｅｓｓ）アデノウィルスが挙げられる。複製欠損ウイルスも有利であり得る。異なるベクターは、細胞のゲノムの中に組み込まれるかまたは組み込まれないであろう。コンストラクトは、所望の場合、トランスフェクションのためのウイルス配列を含ませることができる。あるいは、コンストラクトは、エピソーム複製が可能なベクター、例えば、ＥＰＶおよびＥＢＶベクターなどに組み込むことができる。ＲＮＡｉ剤の組換え発現のためのコンストラクトは、概して、標的細胞におけるＲＮＡｉ剤の発現を確実にするために、調節要素、例えば、プロモーター、エンハンサー、などを必要とするであろう。ベクターおよびコンストラクトを考慮する他の態様は、当技術分野で公知である。

ＶＩ．本発明の医薬組成物
本開示は、本開示のＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物および製剤も含む。一実施形態において、本明細書において説明されるＲＮＡｉ剤と、薬学的に許容される担体と
を含む医薬組成物が本明細書において提供される。ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物は、ＭＡＰＴの発現または活性に関連する疾患または障害、例えば、ＭＡＰＴ関連疾患の処置にとって有用である。

一部の実施形態において、本発明の医薬組成物は、エクソン１０含有ＭＡＰＴ転写物を選択的に阻害するためのｄｓＲＮＡ剤である。

一部の実施形態において、本発明の医薬組成物は、無菌である。別の実施形態において、本発明の医薬組成物は、パイロジェンフリーである。

そのような医薬組成物は、デリバリーのモードに基づいて製剤化される。一例は、非経口デリバリー、例えば、静脈内（ＩＶ）、筋肉内（ＩＭ）、または皮下（ｓｕｂＱ）デリバリーによる全身投与のために製剤化される組成物である。別の例は、例えば、注入の髄腔内または硝子体内経路、適宜、脳（例えば、線状体）内への注入、例えば、連続ポンプ注入などによる、ＣＮＳ内への直接デリバリーのために製剤化された組成物である。

本開示の医薬組成物は、ＭＡＰＴ遺伝子の発現を阻害するのに十分な投薬量において投与され得る。概して、本開示のＲＮＡｉ剤の好適な用量は、１日あたりレシピエントの体重１キログラムあたり約０．００１ミリグラムから約２００．０ミリグラムの範囲、概して、１日あたり体重１キログラムあたり約１ｍｇから５０ｍｇの範囲であろう。

反復投薬計画は、定期的な、例えば、月１回から６か月毎に１回などのＲＮＡｉ剤の治療量の投与を含み得る。ある特定の実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、四半期に約１回（すなわち、３か月毎に約１回）から１年に約２回、投与される。

初期処置計画（例えば、初回負荷量）の後、処置は、低頻度において投与することができる。

他の実施形態において、医薬組成物の単回投与は、継続することができ、それにより、その後の用量は、１か月以下、２か月以下、３か月以下、もしくは４か月以下、またはそれ以上の間隔において投与される。本開示の一部の実施形態において、本開示の医薬組成物の単回投与は、月１回投与される。本開示の他の実施形態において、本開示の医薬組成物の単回投与は、四半期に１回から年に２回において投与される。

当業者は、ある特定の要因、例えば、これらに限定されるわけではないが、疾患または障害の重症度、以前の処置、対象の健康全般または年齢、および他の存在する疾患など、は、対象を効果的に処置するために必要な投薬量および投薬のタイミングに影響を及ぼし得ることを理解するだろう。その上、治療有効量の組成物による対象の処置は、単一の処置または一連の処置を含み得る。

マウス遺伝学における進歩は、様々なヒト疾患、例えば、ＭＡＰＴの発現の減少が有益であろうＡＬＳおよびＦＴＤなどの研究のための多くのマウスモデルを生み出した。そのようなモデルは、ＲＮＡｉ剤のインビボ試験のため、ならびに治療有効用量を決定するために使用することができる。好適な齧歯類モデルは、当技術分野で公知であり、例えば、Cepeda, et al. (ASN Neuro (2010) 2(2):e00033)およびPouladi, et al. (Nat Reviews (2013) 14:708)に記載されるものなどが挙げられる。

本開示の医薬組成物は、局所処置または全身処置のどちらが所望されるか、および処置されるエリアに応じて、いくつかの方法において投与することができる。投与は、局所（例えば、経皮貼布による）、経肺、（例えば、ネブライザーなどによる散剤またはエアゾール剤の吸入または吹送による）；気管内、鼻腔内、表皮および経皮、経口または非経口であり得る。非経口投与は、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内、もしくは筋肉内注射もしくは注入；皮下（例えば、移植されたデバイスによる）、または脳内（例えば、実質内、髄腔内、または心室内投与による）を含む。

ＲＮＡｉ剤は、特定の組織、例えば、ＣＮＳ（例えば、脳のニューロン、膠細胞、または維管束組織）などを標的化する方式においてデリバリーすることができる。

局所投与用の医薬組成物および製剤は、経皮パッチ、軟膏剤、ローション剤、クリーム剤、ゲル剤、滴剤、坐剤、噴霧剤、液剤、および散剤を含み得る。従来の、医薬担体、水性、粉末状、または油性基剤、増粘剤などは、必要であり得るか、または望ましくあり得る。被覆されたコンドーム、手袋なども有用であり得る。好適な局所用製剤としては、本開示において特徴とされるＲＮＡｉ剤が、局所デリバリー剤、例えば、脂質、リポソーム、脂肪酸、脂肪酸エステル、ステロイド、キレート化剤、および界面活性物質との混合物であるような製剤が挙げられる。好適な脂質およびリポソームとしては、中性（例えば、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミンＤＯＰＥ、ジミリストイルホスファチジルコリンＤＭＰＣ、ジステアロイルホスファチジルコリン）、陰性（例えば、ジミリストイルホスファチジルグリセロールＤＭＰＧ）、およびカチオン性（例えば、ジオレオイルテトラメチルアミノプロピルＤＯＴＡＰおよびジオレオイルホスファチジルエタノールアミンＤＯＴＭＡ）が挙げられる。本開示において特徴とされるＲＮＡｉ剤は、リポソーム内においてカプセル化することができ、またはリポソーム、特にカチオン性リポソームに対して複合体を形成することができる。あるいは、ＲＮＡｉ剤は、脂質、特にカチオン性脂質に対して複合体化することができる。好適な脂肪酸およびエステルとしては、これらに限定されるわけではないが、アラキドン酸、オレイン酸、エイコサン酸、ラウリン酸、カプリル酸、カプリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、リノレン酸、ジカプロエート、トリカプロエート、モノオレイン、ジラウリン、グリセリル１－モノカプロエート、１－ドデシルアザシクロヘプタナ－２－オン、アシルカルニチン、アシルコリン、またはＣ_１～２０アルキルエステル（例えば、イソプロピルミリステートＩＰＭ）、モノグリセライド、ディグリセライド、またはそれらの薬学的に許容される塩が挙げられる。局所用製剤は、参照により本明細書に組み込まれる、ＵＳ６，７４７，０１４において詳細に説明されている。

Ａ．膜分子アセンブリを含むＲＮＡｉ剤製剤
本開示の組成物および方法における使用のためのＲＮＡｉ剤は、膜分子アセンブリ、例えば、リポソームまたはミセルでのデリバリー用に製剤化することができる。本明細書において使用される場合、用語「リポソーム」は、少なくとも１つの二層、例えば、１つの二層または複数の二層において整列された両親媒性脂質で構成されたベシクルを意味する。リポソームは、親油性材料から形成された膜と水性内部とを有する単層および多層ラメラベシクルを含む。水性部分は、ＲＮＡｉ剤組成物を含有する。親油性材料は、水性内部を、典型的にはＲＮＡｉ剤組成物を含まない（いくつかの例では、含む場合もある）水性外部から隔離する。リポソームは、作用部位への活性成分の移送およびデリバリーにとって有用である。リポソーム膜は、生体膜と構造的に似ているため、リポソームが組織に適用される場合、リポソーム二層は、細胞膜の二層と融合する。リポソームと細胞の併合が進行するため、ＲＮＡｉ剤を含む内部水性内容物は、細胞内へとデリバリーされ、そこで、ＲＮＡｉ剤は、標的ＲＮＡに特異的に結合することができ、ＲＮＡｉを媒介することができる。場合によって、リポソームはまた、例えば、ＲＮＡｉ剤を特定の細胞タイプに誘導するために、特異的に標的化される。

ＲＮＡｉ剤を含有するリポソームは、様々な方法によって調製することができる。一例において、リポソームの脂質成分が界面活性剤に溶解され、それにより、脂質成分によってミセルが形成される。例えば、脂質成分は、両親媒性カチオン性脂質または脂質コンジュゲートであり得る。界面活性剤は、高い臨界ミセル濃度を有することができ、非イオン性であり得る。例示的界面活性剤としては、コレート、ＣＨＡＰＳ、オクチルグルコシド、デオキシコレート、およびラウロイルサルコシンが挙げられる。次いで、ＲＮＡｉ剤が、脂質成分を含むミセルに加えられる。脂質上のカチオン性基は、ＲＮＡｉ剤と相互作用し、ＲＮＡｉ剤の周りに凝縮してリポソームを形成する。凝縮後、界面活性剤は、ＲＮＡｉ剤のリポソーム調製物を得るために、例えば、透析などによって除去される。

必要であれば、凝集反応の際に、例えば、制御された添加によって、凝集を補助する担体化合物を加えることもできる。例えば、担体化合物は、核酸以外のポリマーであり得る（例えば、スペルミン、またはスペルミジン）。凝縮を支持するために、ｐＨも調整することができる。

デリバリービヒクルの構造要素としてポリヌクレオチド／カチオン性脂質複合体を組み込む、安定なポリヌクレオチドデリバリービヒクルを生成する方法は、例えば、ＷＯ９６／３７１９４においてより詳細に説明されており、その内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。リポソームの形成は、Felgner, P. L. et al., (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 8:7413-7417；米国特許第４，８９７，３５５号；国特許第５，１７１，６７８号；Bangham et al., (1965) M. Mol. Biol. 23:238; Olson et al., (1979) Biochim. Biophys. Acta 557:9; Szoka et al., (1978) Proc. Natl. Acad. Sci. 75: 4194; Mayhew et al., (1984) Biochim. Biophys. Acta 775:169; Kim et al., (1983) Biochim. Biophys. Acta 728:339; and Fukunaga et al., (1984) Endocrinol. 115:757において説明される例示的方法の１つまたは複数の態様も含むことができる。デリバリービヒクルとしての使用のために適切なサイズの脂質集合体を調製するために一般的に使用される方法としては、超音波処理ならびに凍結融解および押出加工が挙げられる［例えば、Mayer et al., (1986) Biochim. Biophys. Acta 858:161を参照されたい］。一貫して小さくて（５０ｎｍから２００ｎｍ）比較的均一な集合体が所望される場合、顕微溶液化を使用することができる［Mayhew et al., (1984) Biochim. Biophys. Acta 775:169］。これらの方法は、ＲＮＡｉ剤調製物をリポソーム内にパッキングすることに容易に適合される。

リポソームは、２つの広いクラスに分類される。カチオン性リポソームは、正に帯電したリポソームであり、負に帯電した核酸分子と相互作用して、安定な複合体を形成する。正に帯電した核酸／リポソーム複合体は、負に帯電した細胞表面に結合し、エンドソームに内在化される。エンドソーム内の酸性ｐＨにより、リポソームは破裂して、その内容物を細胞質中へと放出する［Wang et al. (1987) Biochem. Biophys. Res. Commun., 147:980-985］。

リポソームは、ｐＨ感応性（ｐＨ－ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ）であるかまたは負に帯電しており、それらとの複合体ではなく核酸を捕捉する。核酸および脂質の両方が、同じように荷電されるため、複合体形成ではなく反発が生じる。それにもかかわらず、いくらかの核酸は、これらのリポソームの水性内部へと捕捉される。チミジンキナーゼ遺伝子をコードする核酸を培養中の細胞単層にデリバリーするために、ｐＨ感応性リポソームが使用されている。外因性遺伝子の発現が、標的遺伝子において検出された［Zhou et al. (1992) Journal of Controlled Release, 19:269-274］。

リポソーム組成物の主要なタイプの１つは、天然由来のホスファチジルコリン以外のリン脂質を含む。中性リポソーム組成物は、例えば、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）またはジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）から形成することができる。アニオン性リポソーム組成物は、概して、ジミリストイルホスファチジルグリセロールから形成され、その一方で、アニオン性融合リポソームは、主に、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）から形成される。別のタイプのリポソーム組成物は、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、例えば、大豆ＰＣおよび卵ＰＣなど、から形成される。別のタイプは、リン脂質またはホスファチジルコリンまたはコレステロールの混合物から形成される。

インビトロおよびインビボにおいてリポソームを細胞に導入する他の方法の例としては、米国特許第５，２８３，１８５号；米国特許第５，１７１，６７８号；ＷＯ９４／００５６９；ＷＯ９３／２４６４０；ＷＯ９１／１６０２４；Felgner, (1994) J. Biol. Chem. 269:2550; Nabel, (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. 90:11307; Nabel, (1992) Human Gene Ther. 3:649; Gershon, (1993) Biochem. 32:7143; and Strauss, (1992) EMBO J. 11:417が挙げられる。

非イオン性リポソーム系、特に、非イオン性界面活性剤とコレステロールとを含む系も、皮膚への薬物のデリバリーにおけるそれらの有用性を判定するために調べられている。ノバソーム（Ｎｏｖａｓｏｍｅ）（商標）Ｉ（ジラウリン酸グリセリル／コレステロール／ポリオキシエチレン－１０－ステアリルエーテル）およびノバソーム（商標）ＩＩ（ジステアリン酸グリセリル／コレステロール／ポリオキシエチレン－１０－ステアリルエーテル）を含む非イオン性リポソーム製剤が、マウスの皮膚の真皮中にシクロスポリン－Ａをデリバリーするために使用された。結果は、そのような非イオン性リポソーム系が、皮膚の異なる層中へのシクロスポリン－Ａの蓄積を促進することにおいて有効であることを示した［Hu et al., (1994) S.T.P.Pharma. Sci., 4(6):466］。

リポソームは、「立体的に安定化された」リポソームも含み、当該用語は、本明細書において使用される場合、リポソームに組み込まれた場合に、結果としてそのような特化された脂質を欠くリポソームと比較して増強された循環寿命を生じるような１つまたは複数の特化された脂質を含むリポソームを意味する。立体的に安定化されたリポソームの例は、リポソームのベシクル形成脂質部分の一部が、（Ａ）１つまたは複数の糖脂質、例えば、モノシアロガングリオシドＧ_Ｍ１を含むもの、または（Ｂ）：１つまたは複数の親水性ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分などによって誘導体化されるものである。いかなる特定の理論にも束縛されることを望まないが、少なくとも、ガングリオシド、スフィンゴミエリン、またはＰＥＧ誘導体化脂質を含む立体的に安定化されたリポソームの場合、これらの立体的に安定化されたリポソームの増強された循環半減期は、細網内皮系（ＲＥＳ）の細胞内への減少した取り込みに由来すると、当技術分野において考えられる［Allen et al., (1987) FEBS Letters, 223:42; Wu et al., (1993) Cancer Research, 53:3765］。

１つまたは複数の糖脂質を含む様々なリポソームが、当技術分野で公知である。Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓら［Ann. N.Y. Acad. Sci., (1987), 507:64］は、リポソームの血液半減期を改善する、モノシアロガングリオシドＧＭ１、硫酸ガラクトセレブロシドサルフェート、およびホスファチジルイノシトールの能力について報告している。これらの知見は、Ｇａｂｉｚｏｎら［Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., (1988), 85,:6949］によって解説されている。米国特許第４，８３７，０２８号およびＷＯ８８／０４９２４（両方ともＡｌｌｅｎらによる）では、（１）スフィンゴミエリン、および（２）ガングリオシドＧＭ１またはガラクトセレブロシド硫酸エステルを含むリポソームが開示されている。米国特許第５，５４３，１５２号（Ｗｅｂｂら）では、スフィンゴミエリンを含むリポソームについて開示されている。１，２－ｓｎ－ジミリストイルホスファチジルコリンを含むリポソームが、ＷＯ９７／１３４９９（Ｌｉｍら）において開示されている。

一実施形態において、カチオン性リポソームが使用される。カチオン性リポソームは、細胞膜に融合することができるという利点を有する。非カチオン性リポソームは、原形質膜と効率的には融合することができないが、インビボにおいてマクロファージによって取り込まれるため、ＲＮＡｉ剤をマクロファージにデリバリーするために使用することができる。

リポソームのさらなる利点としては、天然のリン脂質から得られるリポソームが生体適合性および生分解性であること；リポソームは、様々な水および脂質溶解性薬物を組み込むことができること；リポソームは、それらの内部コンパートメント内のカプセル化されたＲＮＡｉ剤を、代謝および劣化から保護することができることが挙げられる［Rosoff, in "Pharmaceutical Dosage Forms," Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, volume 1, p. 245］。リポソーム製剤の調製における重要な考慮すべき事柄は、脂質表面の電荷、ベシクルのサイズ、およびリポソームの水の量である。

正に帯電した合成カチオン性脂質であるＮ－［１－（２，３－ジオレイルオキシ）プロピル］－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチル塩化アンモニウム（ＤＯＴＭＡ）は、小さいリポソームを形成するために使用することができ、リポソームは、自然に核酸と相互作用して、組織培養細胞の細胞膜の負に帯電した脂質と融合することができる脂質－核酸複合体を形成し、それにより、結果としてＲＮＡｉ剤のデリバリーをもたらす（例えば、ＤＯＴＭＡおよびＤＮＡによるその使用の説明は、Felgner, P. L. et al., (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 8:7413-7417、および米国特許第４，８９７，３５５号を参照されたい）。

ＤＯＴＭＡアナログである１，２－ビス（オレオイルオキシ）－３－（トリメチルアンモニア）プロパン（ＤＯＴＡＰ）は、リン脂質と組み合わせて使用することにより、ＤＮＡ複合体化ベシクルを形成することができる。リポフェクチン（商標）（ＢｅｔｈｅｓｄａＲｅｓｅａｒｃｈＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ゲイザースバーグ、メリーランド州）は、負に帯電したポリヌクレオチドと自然に相互作用して複合体を形成する正に帯電したＤＯＴＭＡリポソームを含む、生きた組織培養細胞内への高いアニオン性の核酸のデリバリーのための有効な薬剤である。十分に正に帯電したリポソームが使用される場合、結果として得られる複合体上の正味電荷も正である。この方法において調製された正に帯電した複合体は、負に帯電した細胞表面に自然に付着し、原形質膜と融合して、機能的核酸を、例えば、組織培養細胞内へと効率的にデリバリーする。別の市販のカチオン性脂質である１，２－ビス（オレオイルオキシ）－３，３－（トリメチルアンモニア）プロパン（「ＤＯＴＡＰ」）（ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ、インディアナポリス、インディアナ）は、オレオイル部分が、エーテル連結ではなくエステルによって連結されている点においてＤＯＴＭＡとは異なっている。

他の報告されたカチオン性脂質化合物としては、様々な部分にコンジュゲートしているもの、例えば、２つのタイプの脂質の一方にコンジュゲートしているカルボキシスペルミンなど、ならびに５－カルボキシスペルミルグリシンジオクタオレオイルアミド（「ＤＯＧＳ」）（トランスフェクタム（商標）、Ｐｒｏｍｅｇａ、マディソン、ウィスコンシン州）およびジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン５－カルボキシスペルミル－アミド（「ＤＰＰＥＳ」）などの化合物が挙げられる（例えば、米国特許第５，１７１，６７８号を参照されたい）。

別のカチオン性脂質コンジュゲートは、ＤＯＰＥと組み合わせてリポソーム中へと製剤化されているコレステロールによる脂質の誘導体化（「ＤＣ－Ｃｈｏｌ」）を含む［Gao, X. and Huang, L., (1991) Biochim. Biophys. Res. Commun. 179:280を参照されたい］。ポリリジンをＤＯＰＥにコンジュゲートさせることによって作製されたリポポリリジンは、血清の存在下でのトランスフェクションにとって効果的であることが報告されている［Zhou, X. et al., (1991) Biochim. Biophys. Acta 1065:8］。ある特定の細胞系にとって、コンジュゲートしたカチオン性脂質を含むこれらのリポソームは、低い毒性を示すと言われており、ＤＯＴＭＡ含有組成物よりもより効率的なトランスフェクションを提供する。他の市販のカチオン性脂質製品としては、ＤＭＲＩＥおよびＤＭＲＩＥ－ＨＰ（Ｖｉｃａｌ、ラ・ホーヤ、カリフォルニア）およびリポフェクタミン（ＤＯＳＰＡ）（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．、ゲイザースバーグ、メリーランド州）が挙げられる。オリゴヌクレオチドのデリバリーにとって好適な他のカチオン性脂質は、ＷＯ９８／３９３５９およびＷＯ９６／３７１９４に記載されている。

リポソーム製剤は、局所性投与に対して特に適しており、リポソームは、他の製剤に勝るいくつかの利点を提示する。そのような利点としては、投与された薬物の高い体内吸収に関連する副作用の減少、所望の標的での投与された薬物の累積の増加、およびＲＮＡｉ剤を皮膚に投与する能力が挙げられる。いくつかの実践形態において、リポソームは、ＲＮＡｉ剤を上皮細胞にデリバリーするため、および皮膚組織内、例えば、皮膚内へのＲＮＡｉ剤の浸透を増強するためにも、使用される。例えば、リポソームは、局所的に適用することができる。リポソームとして製剤化された薬物の皮膚への局所デリバリーは、文献に報告されている［例えば、Weiner et al., (1992) Journal of Drug Targeting, vol. 2,405-410 and du Plessis et al., (1992) Antiviral Research, 18:259-265; Mannino, R. J. and Fould-Fogerite, S., (1998) Biotechniques 6:682-690; Itani, T. et al., (1987) Gene 56:267-276; Nicolau, C. et al. (1987) Meth. Enzymol. 149:157-176; Straubinger, R. M. and Papahadjopoulos, D. (1983) Meth. Enzymol. 101:512-527; Wang, C. Y. and Huang, L., (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:7851-7855を参照されたい］。

非イオン性リポソーム系、特に、非イオン性界面活性剤とコレステロールを含む系、も、皮膚への薬物のデリバリーにおけるそれらの有用性を判定するためにも調べられている。マウスの皮膚の真皮内に薬物をデリバリーするために、ノバソームＩ（ジラウリン酸グリセリル／コレステロール／ポリオキシエチレン－１０－ステアリルエーテル）およびノバソームＩＩ（ジステアリン酸グリセリル／コレステロール／ポリオキシエチレン－１０－ステアリルエーテル）を含む非イオン性リポソーム製剤が使用された。ＲＮＡｉ剤を伴うそのような製剤は、皮膚科障害を処置するために有用である。

ＲＮＡｉ剤を含むリポソームは、非常に変形可能に作製することができる。そのような変形能は、リポソームがリポソームの平均半径より小さい孔を通って浸透することを可能にする。例えば、トランスファーソーム（ｔｒａｎｓｆｅｒｓｏｍｅ）は、変形可能なタイプのリポソームである。トランスファーソームは、表面エッジ活性化剤（ｓｕｒｆａｃｅｅｄｇｅａｃｔｉｖａｔｏｒ）、通常は界面活性剤を標準的リポソーム組成物に加えることによって作製することができる。ＲＮＡｉ剤を含むトランスファーソームは、ＲＮＡｉ剤を皮膚のケラチン生成細胞にデリバリーするために、感染によって、例えば皮下に、デリバリーすることができる。無傷の哺乳動物の皮膚を横断するために、脂質ベシクルは、好適な経皮勾配の影響下において、それぞれが５０ｎｍ未満の直径を有する一連の微細な孔を通過しなければならない。加えて、脂質特性に起因して、これらのトランスファーソームは、自己最適性（例えば皮膚などにおける孔の形状に適応性のある）、自己修復性であり得、ならびに断片化することなく頻繁にそれらの標的に達することができ、多くの場合、自己装填することができる。

本開示に適した他の製剤は、２００８年１月２日に出願された米国特許仮出願第６１／０１８，６１６号；２００８年１月２日に出願された米国特許仮出願第６１／０１８，６１１号；２００８年３月２６日に出願された米国特許仮出願第６１／０３９，７４８号；２００８年４月２２日に出願された米国特許仮出願第６１／０４７，０８７号；および２００８年５月８日に出願された米国特許仮出願第６１／０５１，５２８号に記載される。２００７年１０月３日に出願されたＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０８０３３１号にも、本開示に適した製剤について記載されている。

トランスファーソームは、別のタイプのリポソームであり、薬物デリバリーシステムの魅力的な候補である、非常に変形可能な脂質集合体である。トランスファーソームは、非常に変形可能であるため、脂質滴より小さい孔を通って容易に浸透することができる、脂質滴として説明することができる。トランスファーソームは、それらが使用される環境に適応し、例えば、それらは、自己最適性（皮膚における孔の形状に適応性のある）であり、自己修復性であり、断片化することなく頻繁にそれらの標的に達し、多くの場合、自動装填性である。トランスファーソームを作製するために、表面エッジ活性化剤、通常は界面活性剤を標準的リポソーム組成物に加えることができる。トランスファーソームは、皮膚に血清アルブミンをデリバリーするために使用されてきた。血清アルブミンのトランスファーソーム媒介デリバリーは、血清アルブミンを含有する溶液の皮下注入と同じくらい有効であることが分かっている。

界面活性剤は、本明細書において説明されるような製剤において、特にエマルション（マイクロエマルションを含む）において、広い応用を見い出す。天然および合成の、多くの異なるタイプの界面活性剤の特性を分類および格付けする最も一般的な方法は、親水性／親油性バランス（ＨＬＢ）の使用による方法である。親水性基（「ヘッド」としても知られる）の性質は、製剤に使用される様々な界面活性剤をカテゴライズするための最も有用な手段を提供する（Rieger, in Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., 1988, p. 285）。

界面活性剤分子がイオン化されない場合、それらは、非イオン性界面活性剤として分類される。非イオン性界面活性剤は、医薬品および化粧製品において広い応用を見い出し、広い範囲のｐＨ値において使用可能である。概して、それらのＨＬＢ値は、それらの構造に応じて２から約１８の範囲である。非イオン性界面活性剤としては、非イオン性エステル、例えば、エチレングリコールエステル、プロピレングリコールエステル、グリセリルエステル、ポリグリセリルエステル、ソルビタンエステル、スクロースエステル、およびエトキシル化エステルなどが挙げられる。非イオン性アルカノールアミドおよびエーテル、例えば、脂肪族アルコールエトキシレート、プロポキシル化アルコール、およびエトキシル化／プロポキシル化ブロックポリマーなど、も、このクラスに含まれる。ポリオキシエチレン界面活性剤は、非イオン性界面活性剤のクラスの最も一般的なメンバーである。

水に溶解または分散されたときに、界面活性剤分子が負電荷を保持する場合、界面活性剤は、アニオン性として分類される。アニオン性界面活性剤としては、カルボキシレート、例えば、石鹸など、アシルラクチレ－ト、アミノ酸のアシルアミド、硫酸のエステル、例えば、アルキル硫酸エステルおよびエトキシ化アルキル硫酸エステルなど、スルホネート、例えば、アキルベンゼンスルホネート、など、アシルイセチオネート、アシルタウレート、ならびにスルホスクシネートおよびホスフェートが挙げられる。アニオン性界面活性剤のクラスの最も一般的なメンバーは、アルキル硫酸エステルおよび石鹸である。

水に溶解または分散されたときに、界面活性剤分子が正電荷を保持する場合、界面活性剤は、カチオン性として分類される。カチオン性界面活性剤としては、第四級アンモニウム塩およびエトキシ化アミンが挙げられる。第四級アンモニウム塩は、このクラスの最も使用されるメンバーである。

界面活性剤分子が、正電荷または負電荷のどちらかを保持する能力を有する場合、界面活性剤は、両性として分類される。両性界面活性剤としては、アクリル酸誘導体、置換アルキルアミド、Ｎ－アルキルベタインおよびホスファチドが挙げられる。薬品、製剤、およびエマルションにおける界面活性剤の使用は、概説されている（Rieger, in Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., 1988, p. 285）。

本開示の方法での使用のためのＲＮＡｉ剤は、ミセル製剤としても提供することができる。「ミセル」は、本明細書において、分子の全ての疎水性基が内側を向くように両親媒性分子が球状構造において整列され、それにより、親水性部分を周囲の水相に接触させたままにする、特定のタイプの分子アセンブリとして定義される。環境が疎水性の場合、逆の配置も存在する。

経皮的な膜によるデリバリーにとって好適な混合ミセル製剤は、ｓｉＲＮＡ組成物の水溶液と、アルカリ金属のＣ_８からＣ_２２アルキル硫酸塩と、ミセル形成化合物とを混合することによって調製され得る。例示的ミセル形成化合物としては、レシチン、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸の薬学的に許容される塩、グリコール酸、乳酸、カモミール抽出物、キュウリ抽出物、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、モノオレイン、モノオレエート、モノラウレート、ルリチシャ油、月見草油、メンソール、トリヒドロキシオキソコラニルグリシンおよびその薬学的に許容される塩、グリセリン、ポリグリセリン、リシン、ポリリジン、トリオレイン、ポリオキシエチレンエーテルおよびそのアナログ、ポリドカノールアルキルエーテルおよびそのアナログ、ケノデオキシコレート（ｃｈｅｎｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ）、デオキシコレート、ならびにそれらの混合物が挙げられる。ミセル形成化合物は、アルカリ金属のアルキル硫酸塩と同時に加えてもよく、またはそれらを加えた後に加えてもよい。混合ミセルは、原材料の、実質的に任意の種類の混合によって形成されるであろうが、より小さいサイズのミセルを提供するために、激しい混合によって形成されるであろう。

一方法において、第１のミセル組成物は、ｓｉＲＮＡ組成物と少なくともアルカリ金属アルキル塩酸塩とを含むように調製される。第１のミセル組成物は、次いで、少なくとも３つのミセル形成化合物と混合され、混合ミセル組成物を形成する。別の方法において、ミセル組成物は、ｓｉＲＮＡ組成物とアルカリ金属アルキル硫酸塩と、ミセル形成化合物のうちの少なくとも１つとを混合し、その後に、激しく混合しながら、残りのミセル形成化合物を加えることによって調製される。

製剤を安定化させるため、および細菌増殖から保護するために、フェノールまたはｍ－クレゾールを混合ミセル組成物に加えてもよい。あるいは、フェノールまたはｍ－クレゾールを、ミセル形成原材料と共に加えてもよい。グリセリンなどの等張剤を、混合ミセル組成物の形成後に加えてもよい。

噴霧剤としてのミセル製剤のデリバリーのために、製剤を、エアゾールディスペンサーに入れることができ、ディスペンサーは、発射薬を装填される。加圧下の発射薬は、ディスペンサー内において液体状態である。原材料の比率は、水相および発射薬相が１つになるように、すなわち、１つの相が存在するように調整される。２つの相が存在する場合、例えば、計量式バルブなどによって、内容物の一部を分配する前に、ディスペンサーを振盪する必要がある。医薬品の分配用量が、微細な噴霧において計量式バルブから射出される。

発射薬は、含水素クロロフルオロカーボン、含水素フルオロカーボン、ジメチルエーテル、およびジエチルエーテルを含み得る。ある特定の実施形態において、ＨＦＡ１３４ａ（１，１，１，２テトラフルオロエタン）が使用され得る。

必須の原材料の特定の濃度は、比較的簡単な実験によって決定することができる。口腔による吸収のために、射出のためまたは胃腸管を通る投与のために、投薬量を、例えば、少なくとも二倍または三倍に増加させることは、多くの場合、望ましい。

Ｂ．脂質粒子
ＲＮＡｉ剤、例えば、本開示のｄｓＲＮＡは、脂質製剤、例えば、ＬＮＰなど、または他の核酸－脂質粒子において、完全にカプセル化され得る。

本明細書において使用される場合、用語「ＬＮＰ」は、安定な核酸－脂質粒子を意味する。ＬＮＰは、典型的には、カチオン性脂質、非カチオン性脂質、および粒子の凝集を防ぐ脂質（例えば、ＰＥＧ－脂質コンジュゲート）を含む。ＬＮＰは、静脈内注射（ｉ．ｖ．）後に、延長された循環寿命を示し、遠位部位（例えば、投与部位から物理的に分離された部位）において蓄積するため、全身投与にとって非常に有用である。ＬＮＰは、「ｐＳＰＬＰ」を含み、それは、ＷＯ００／０３６８３において詳しく説明されるようなカプセル化された縮合剤－核酸複合体を含む。本開示の粒子は、典型的には、約５０ｎｍから約１５０ｎｍ、より典型的には約６０ｎｍから約１３０ｎｍ、より典型的には約７０ｎｍから約１１０ｎｍ、最も典型的には約７０ｎｍから約９０ｎｍの平均直径を有し、実質的に非毒性である。加えて、核酸は、本開示の核酸－脂質粒子中に存在する場合、水溶液中において、ヌクレアーゼによる分解に対して抵抗性を有する。核酸－脂質粒子およびその調製方法は、例えば、米国特許第５，９７６，５６７号；同第５，９８１，５０１号；同第６，５３４，４８４号；同第６，５８６，４１０号；同第６，８１５，４３２号；米国特許出願公開第２０１０／０３２４１２０号、およびＷＯ９６／４０９６４において開示されている。

一実施形態において、脂質と薬物の比率（質量／質量比）（例えば、脂質とｄｓＲＮＡの比率）は、約１：１から約５０：１、約１：１から約２５：１、約３：１から約１５：１、約４：１から約１０：１、約５：１から約９：１、または約６：１から約９：１の範囲であるだろう。上記に列記した範囲の中間的な範囲も、本開示の一部であることが想到される。

ＲＮＡｉ剤のデリバリーのためのある特定のＬＮＰ製剤は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２００８／０４２９７３などにおいて説明されるような「ＬＮＰ０１」製剤など、当技術分野において説明されている。

追加の例示的脂質－ｄｓＲＮＡ製剤は、下記の表２において特定される。

表1

ＤＳＰＣ：ジステアロイルホスファチジルコリン；ＤＰＰＣ：ジパルミトイルホスファチジルコリン；ＰＥＧ－ＤＭＧ：ＰＥＧ－ジジミリストイルグリセロール（Ｃ１４－ＰＥＧ、またはＰＥＧ－Ｃ１４）（ＰＥＧは２０００の平均分子量を有する）；ＰＥＧ－ＤＳＧ：ＰＥＧ－ジスチリルグリセロール（Ｃ１８－ＰＥＧ、またはＰＥＧ－Ｃ１８）（ＰＥＧは２０００の平均分子量を有する）；ＰＥＧ－ｃＤＭＡ：ＰＥＧ－カルバモイル－１，２－ジミリスチルオキシプロピルアミン（ＰＥＧは２０００の平均分子量を有する）およびＳＮＡＬＰ（１，２－ジリノレニルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＭＡ））を含む製剤は、参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２００９／１２７０６０に記載されている。

ＸＴＣを含む製剤は、ＷＯ２０１０／０８８５３７に記載されており、その内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。ＭＣ３を含む製剤は、例えば、米国特許出願公開第２０１０／０３２４１２０号に記載されており、その内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。

ＡＬＮＹ－１００を含む製剤は、ＷＯ２０１０／０５４４０６に記載されており、その内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。

Ｃ１２－２００を含む製剤は、ＷＯ２０１０／１２９７０９に記載されており、その内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。

経口投与用の組成物および製剤としては、粉末剤または粒剤、マイクロ粒子、ナノ粒子、水または非水性媒体における懸濁剤または溶液剤、カプセル剤、ゲルカプセル剤、サッシェ、錠剤またはミニ錠剤が挙げられる。増粘剤、矯臭剤、希釈剤、乳化剤、分散助剤、または結合剤は、望ましくあり得る。一部の実施形態において、経口製剤は、本開示において特徴とされるｄｓＲＮＡが、１つまたは複数の浸透促進剤、界面活性剤、およびキレート化剤と併せて投与される、製剤である。好適な界面活性剤としては、脂肪酸またはエステルまたはそれらの塩、胆汁酸またはそれらの塩が挙げられる。好適な胆汁酸／塩としては、ケノデオキシコール酸（ＣＤＣＡ）およびウルソデオキシケノデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）、コール酸、デヒドロコール酸、デオキシコール酸、グルコール酸（ｇｌｕｃｈｏｌｉｃａｃｉｄ）、グリコール酸（ｇｌｙｃｈｏｌｉｃａｃｉｄ）、グリコデオキシコール酸、タウロコール酸、タウロデオキシコール酸、タウロ－２４，２５－ジヒドロ－フシジン酸ナトリウムおよびグリコジヒドロフシジン酸ナトリウムが挙げられる。好適な脂肪酸としては、アラキドン酸、ウンデカン酸、オレイン酸、ラウリン酸、カプリル酸、カプリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸リノール酸、リノレン酸、ジカプロエート、トリカプロエート、モノオレイン、ジラウリン、グリセリル１－モノカプロエート、１－ドデシルアザシクロヘプタナ－２－オン、アシルカルニチン、アシルコリン、またはモノグリセライド、ジグリセリド、またはその薬学的に許容される塩（例えば、ナトリウム）が挙げられる。一部の実施形態において、浸透促進剤の組合せ、例えば、胆汁酸／塩と組み合わされた脂肪酸／塩などが使用される。例示的組合せの１つは、ラウリン酸、カプリン酸、およびＵＤＣＡのナトリウム塩である。さらに、浸透促進剤としては、ポリオキシエチレン－９－ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン－２０－セチルエーテルが挙げられる。本開示において特徴とされるｄｓＲＮＡは、噴霧された乾燥粒子などの粒状において、経口によりデリバリーすることができ、またはマイクロ粒子またはナノ粒子を形成するために複合体化することができる。ｄｓＲＮＡ複合剤としては、ポリ－アミノ酸；ポリイミン；ポリアクリレート；ポリアルキルアクリレート、ポリアルキルアクリレート、ポリアルキルシアノアクリレート；カチオン化されたゼラチン、アルブミン、デンプン、アクリレート、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、およびデンプン；ポリアルキルシアノアクリレート；ＤＥＡＥ誘導体化ポリイミン、プルラン（ｐｏｌｌｕｌａｎ）、セルロース、およびデンプンが挙げられる。好適な複合剤としては、キトサン、Ｎ－トリメチルキトサン、ポリーＬリジン、ポリヒスチジン、ポリオルニチン、ポリスペルミン、プロタミン、ポリビニルピリジン、ポリチオジエチルアミノメチルエチレンＰ（ＴＤＡＥ）、ポリアミノスチレン（例えば、ｐ－アミノ）、ポリ（メチルシアノアクリレート）、ポリ（エチルシアノアクリレート）、ポリ（ブチルシアノアクリレート）、ポリ（イソブチルシアノアクリレート）、ポリ（イソヘキシルシアノアクリレート）、ＤＥＡＥ－メタクリレート、ＤＥＡＥ－ヘキシルアクリレート、ＤＥＡＥ－アクリルアミド、ＤＥＡＥ－アルブミン、およびＤＥＡＥデキストラン、ポリメチルアクリレート、ポリヘキシルアクリレート、ポリ（Ｄ，Ｌ－乳酸）、ポリ（ＤＬ－乳酸－コ－グリコール酸（ＰＬＧＡ）、アルギネート、およびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられる。ｄｓＲＮＡのための経口製剤およびその調製は、米国特許第６，８８７，９０６号、米国特許出願公開第２００３／００２７７８０号、および米国特許第６，７４７，０１４号において詳細に説明されており、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる。

非経口、実質内（脳内へ）、髄腔内、脳室内、または肝内投与のための組成物および製剤は、緩衝剤、希釈剤、および他の好適な添加剤、例えば、これらに限定されるわけではないが、浸透促進剤、担体化合物、他の薬学的に許容される担体または賦形剤などを含むことができる滅菌水溶液を含むことができる。

本開示の医薬組成物は、溶液、エマルション、およびリポソームを含有する製剤を含む。これらの組成物は、これらに限定されるわけではないが、予め形成された液体、自己乳化性固体、および自己乳化性半固体を含む様々な成分から生成することができる。特に好ましいのは、ＭＡＰＴ関連疾患または障害を処置する場合において脳を標的化する製剤である。

本開示の医薬製剤は、単位剤形において簡便に提示することができ、製薬産業において周知の従来技術に従って調製することができる。そのような技術は、活性成分を医薬担体または賦形剤と混合する工程を含む。概して、製剤は、活性成分を液体担体または微粉化された固体担体またはその両方と均一にかつ密接に混合し、次いで、必要であれば、生成物を成形することによって調製される。

本開示の組成物は、例えば、これらに限定されるわけではないが、錠剤、カプセル剤、ゲルカプセル剤、液体シロップ、軟質ゲル、坐剤、および浣腸剤などの多くの可能な剤形のいずれかへと製剤化することができる。本開示の組成物は、水性媒質、非水性媒質、または混合媒質における懸濁液としても製剤化することができる。水懸濁液は、懸濁液の粘度を増加させる物質、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストランなどをさらに含有することができる。懸濁液は、安定化剤も含有することができる。

Ｃ．さらなる製剤
ｉ．エマルション
本開示の組成物は、エマルションとして調製および製剤化することができる。エマルションは、典型的には、一方の液体が通常は直径０．１μｍを超える液滴の形態において別の液体に分散された不均質系である［例えば、Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199; Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Volume 1, p. 245; Block in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 2, p. 335; Higuchi et al., in Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1985, p. 301を参照されたい］。エマルションは、多くの場合、お互いに十分に混合され分散された２つの不混和性液相を含む二相系である。一般的に、エマルションは、油中水（ｗ／ｏ）種または水中油（ｏ／ｗ）種のどちらかであり得る。水相が、微細化されて微細な液滴として大量の油相中に分散されている場合、結果として得られる組成物は、油中水（ｗ／ｏ）エマルションと呼ばれる。あるいは、油相が、微細化されて微細な液滴として大量の水相中に分散されている場合、結果として得られる組成物は、水中油（ｏ／ｗ）エマルションと呼ばれる。エマルションは、分散相および、水相中また油相中のどちらかの溶液としてまたはそれ自体別々の相として存在し得る活性薬物に加えて、追加の成分を含有することができる。乳化剤、安定化剤、染料、および抗酸化剤などの医薬品賦形剤も、必要であれば、エマルション中に存在していてもよい。医薬エマルションは、例えば、油中水中油（ｏ／ｗ／ｏ）および水中油中水（ｗ／ｏ／ｗ）エマルションの場合など、３相以上で構成される多相エマルションでもあってもよい。そのような複合製剤は、多くの場合、単純な二相エマルションでは提供することができないある特定の利点を提供する。ｏ／ｗエマルションの個々の油滴が小さい水滴を封入する多相エマルションは、ｗ／ｏ／ｗエマルションを構成する。同様に、連続油相中において安定化された水の小滴中に封入された油滴の系は、ｏ／ｗ／ｏエマルションを提供する。

エマルションは、熱力学的安定性がほとんどないかまたは全くないことによって特徴付けられる。多くの場合、エマルションの分散相または不連続相は、外部相または連続相中によく分散されており、乳化剤または製剤の粘度によってこの形態に維持される。エマルション様式の軟膏基剤およびクリーム剤の場合と同様に、エマルションの相のいずれかは、半固体または固体であってもよい。エマルションを安定化するその他の手段は、乳化剤の使用を伴い、それらは、エマルションのいずれかの相に組み込まれ得る。乳化剤は、以下の４つのカテゴリ：合成界面活性剤、天然乳化剤、吸収基剤、および微細分散固体に大きく分類することができる［例えば、Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199を参照されたい］。

表面活性剤としても知られる合成界面活性剤は、エマルションの製剤化において広い適用可能性を見出しており、文献において概説されている［例えば、Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Rieger, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 285; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., 1988, volume 1, p. 199を参照されたい］。界面活性剤は、典型的には両親媒性であり、親水性部分および疎水性部分を含む。界面活性剤の疎水性性質に対する親水性性質の比は、親水性／親油性バランス（ＨＬＢ）と命名されており、製剤の調製において界面活性剤を分類および選択する際の有益なツールである。界面活性剤は、親水性基の性質に基づいて以下の異なるクラス：非イオン性、アニオン性、カチオン性、および両性に分類することができる［例えば、Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY Rieger, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 285を参照されたい］。

エマルション製剤において使用される天然の乳化剤としては、ラノリン、蜜蝋、ホスファチド、レシチン、およびアカシアが挙げられる。脱水ラノリンおよび親水性ワセリンなどの吸収基剤は、親水特性を有し、そのため、それらは、水を吸い上げてｗ／ｏエマルションを形成し、それでもなお、それらの半固体の稠度を維持することができる。微粒子固体も、とりわけ界面活性剤との組合せにおいて、および粘性調製物において、良好な乳化剤として使用されている。これらは、極性無機固体、例えば、重金属水酸化物など、膨潤クレー、例えば、ベントナイト、アタパルジャイト、ヘクトライト、カオリン、モンモリロナイト、コロイド状ケイ酸アルミニウムおよびコロイド状ケイ酸アルミニウムマグネシウムなど、顔料、および非極性固体、例えば、炭素またはトリステアリン酸グリセリンなどを含む。

非常に多様な非乳化材料も、エマルション製剤に含まれ、エマルションの特性に貢献する。そのようなものとしては、脂肪、油、ワックス、脂肪酸、脂肪アルコール、脂肪エステル、湿潤剤、親水性コロイド、保存料、および抗酸化剤が挙げられる［Block, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 335; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199］。

親水性コロイドまたはハイドロコロイドとしては、天然ゴムおよび合成ポリマー、例えば、多糖（例えば、アカシア、寒天、アルギン酸、カラゲナン、グアーゴム、カラヤゴム、およびトラガカント）、セルロース誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースおよびカルボキシプロピルセルロース）、および合成ポリマー（例えば、カルボマー、セルロースエーテル、およびカルボキシビニルポリマー）などが挙げられる。これらは、水に分散または膨潤して、コロイド状溶液を形成し、それは、分散相液滴の周囲に強力な界面フィルムを形成すること、および外部相の粘度を増加することによって、エマルションを安定化する。

エマルションは、多くの場合、微生物の増殖を容易に支援することができる多くの成分、例えば、炭水化物、タンパク質、ステロール、およびホスファチドなどを含有するため、これらの製剤は、多くの場合、保存料が組み込まれている。エマルション製剤に含まれる一般的に使用される保存料としては、メチルパラベン、プロピルパラベン、４級アンモニウム塩、塩化ベンザルコニウム、ｐ－ヒドロキシ安息香酸のエステル、およびホウ酸が挙げられる。製剤の劣化を防ぐために、抗酸化剤も、一般的に、エマルション製剤に加えられる。使用される抗酸化剤は、フリーラジカル捕捉剤、例えば、トコフェロール、没食子酸アルキル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエンなど、または還元剤、例えば、アスコルビン酸およびメタ重亜硫酸ナトリウムなど、ならびに酸化防止相乗剤、例えば、クエン酸、酒石酸、およびレシチンなどであり得る。

皮膚、経口、および非経口経路によるエマルション製剤の適用ならびにそれらの製造方法は、文献において概説されている［例えば、Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199を参照されたい］。経口デリバリー用のエマルション製剤は、製剤の容易さ、ならびに吸収およびバイオアベイラビリティの見地からの有効性により、非常に広く使用されている［例えば、Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 245; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199を参照されたい］。鉱油系緩下剤、脂溶性ビタミン、および高脂肪栄養製剤は、ｏ／ｗエマルションとして一般的に経口投与されている材料の１つである。

ｉｉ．マイクロエマルション
本開示の一実施形態において、ＲＮＡｉ剤および核酸の組成物は、マイクロエマルションとして製剤化される。マイクロエマルションは、単一の光学的に等方性で熱力学的に安定な液体溶液である、水、油、および両親媒性物質の系として定義することができる［例えば、Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 245を参照されたい］。典型的には、マイクロエマルションは、油を界面活性剤水溶液に分散させ、次いで、十分な量の第４の成分、概して中鎖長のアルコールを加えて透明な系を形成することによって調製される系である。したがって、マイクロエマルションは、表面活性分子の界面フィルムによって安定化される、２つの不混和性液体の熱力学的に安定で等方的に澄明な分散液として説明されている（Leung and Shah, in: Controlled Release of Drugs: Polymers and Aggregate Systems, Rosoff, M., Ed., 1989, VCH Publishers, New York, pages 185-215）。マイクロエマルションは、一般的に、油、水、界面活性剤、補助界面活性剤、および電解質を含む３つから５つの成分を組み合わせることによって調製される。マイクロエマルションが油中水（ｗ／ｏ）タイプまたは水中油（ｏ／ｗ）タイプのどちらであるかは、使用される油および界面活性剤の特性、ならびに界面活性剤分子の極性ヘッドおよび炭化水素テールの構造および幾何学的パッキングに依存する（Schott, in Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1985, p. 271）。

状態図を利用する現象論的アプローチが、広く研究されており、それは、マイクロエマルションをどのようにして製剤化するかの包括的な知識を当業者にもたらした［例えば、Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 245; Block, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 335を参照されたい］。従来のエマルションと比較して、マイクロエマルションは、水不溶性薬物を、自然発生的に形成された熱力学的に安定な液滴の製剤に可溶化するという利点を提供する。

マイクロエマルションの調製において使用される界面活性剤としては、これらに限定されるわけではないが、単独での、または補助界面活性剤と組み合わせた、イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、Ｂｒｉｊ９６、ポリオキシエチレンオレイルエーテル、ポリグリセロール脂肪酸エステル、テトラグリセロールモノラウレート（ＭＬ３１０）、テトラグリセロールモノオレエート（ＭＯ３１０）、ヘキサグリセロールモノオレエート（ＰＯ３１０）、ヘキサグリセロールペンタオレエート（ＰＯ５００）、デカグリセロールモノカプロエート（ＭＣＡ７５０）、デカグリセロールモノオレエート（ＭＯ７５０）、デカグリセロールセスキオレエート（ＳＯ７５０）、デカグリセロールデカオレエート（ＤＡＯ７５０）が挙げられる。補助界面活性剤は、通常はエタノール、１－プロパノール、および１－ブタノールなどの短鎖アルコールであり、界面活性剤フィルムに浸透し、その結果、界面活性剤分子の間に生じるボイドスペースにより、乱れたフィルムを作り出すことによって、界面の流動性を増加させる役割を果たす。しかしながら、マイクロエマルションは、補助界面活性剤を用いずに調製することもでき、アルコール不含自己乳化性マイクロエマルション系は、当技術分野で公知である。水相は、典型的には、これらに限定されるわけではないが、水、薬物の水溶液、グリセロール、ＰＥＧ３００、ＰＥＧ４００、ポリグリセロール、プロピレングリコール、およびエチレングリコールの誘導体であり得る。油相は、これらに限定されるわけではないが、Ｃａｐｔｅｘ３００、Ｃａｐｔｅｘ３５５、ＣａｐｍｕｌＭＣＭ、脂肪酸エステル、中鎖（Ｃ８～Ｃ１２）モノ、ジ、およびトリグリセリド、ポリオキシエチル化グリセリル脂肪酸エステル、脂肪アルコール、ポリグリコール化グリセリド、飽和ポリグリコール化Ｃ８～Ｃ１０グリセリド、植物油、およびシリコーン油などの材料を含むことができる。

マイクロエマルションは、薬物可溶化および薬物の吸収増強の見地から、特に興味深い。脂質系マイクロエマルション（ｏ／ｗおよびｗ／ｏの両方）は、ペプチドなどの薬物の経口バイオアベイラビリティを増強すると提唱されている（例えば、米国特許第６，１９１，１０５号；同第７，０６３，８６０号；同第７，０７０，８０２号；同第７，１５７，０９９号；Constantinides et al., Pharmaceutical Research, 1994, 11, 1385-1390; Ritschel, Meth. Find. Exp. Clin. Pharmacol., 1993, 13, 205を参照されたい）。マイクロエマルションは、薬物の可溶化の向上、酵素加水分解からの薬物の保護、界面活性剤によって誘導される膜流動性および浸透性の変化に起因する、薬物吸収における可能な増強、調製の容易さ、固体剤形よりも経口投与の容易さ、臨床効力の向上、および毒性の減少の利点を提供する（例えば、米国特許第６，１９１，１０５号；同第７，０６３，８６０号；同第７，０７０，８０２号；同第７，１５７，０９９号；Constantinides et al., Pharmaceutical Research, 1994, 11, 1385; Ho et al., J. Pharm. Sci., 1996, 85, 138-143を参照されたい）。多くの場合、マイクロエマルションは、それらの成分が周囲温度において一緒にされたとき、自然発生的に形成され得る。これは、昜熱分解性の薬物であるペプチドまたはＲＮＡｉ剤を製剤化する場合に、特に有利であり得る。さらに、マイクロエマルションは、美容および医薬的適用の両方における、活性成分の経皮デリバリーにとっても効果的であった。本開示のマイクロエマルション組成物および製剤は、胃腸管からのＲＮＡｉ剤および核酸の全身吸収の増加、ならびにＲＮＡｉ剤および核酸の局所細胞取り込みの向上を促進するであろうことが予想される。

本開示のマイクロエマルションは、製剤の性質を向上させるため、および本開示のＲＮＡｉ剤および核酸の吸収を高めるために、追加の成分および添加剤、例えば、ソルビタンモノステアレート（Ｇｒｉｌｌ３）、ラブラソール（Ｌａｂｒａｓｏｌ）、および浸透促進剤など、も含有することができる。本開示のマイクロエマルションにおいて使用される浸透促進剤は、５つのカテゴリ：界面活性剤、脂肪酸、胆汁酸塩、キレート化剤、および非キレート化非界面活性剤のうちの１つに属するとして分類することができる（Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p. 92）。これらのクラスのそれぞれは、上記において説明されている。

ｉｉｉ．マイクロ粒子
本開示のＲＮＡｉ剤は、粒子、例えば、マイクロ粒子などに組み込まれ得る。マイクロ粒子は、噴霧乾燥によって生成することができるが、凍結乾燥、蒸発、流動層乾燥、真空乾燥、またはこれらの技術の組合せなどの他の方法によっても生成され得る。

ｉｖ．浸透促進剤
一実施形態において、本開示は、動物の皮膚への、核酸、特にＲＮＡｉ剤の効率的なデリバリーを実施するために、様々な浸透促進剤を採用する。ほとんどの薬物は、イオン化状態および非イオン化状態の両方において存在する。しかしながら、通常、脂溶性または親油性薬物のみが、細胞膜を容易に横断する。横断される膜が、浸透促進剤で処置されている場合、非親油性薬物も、細胞膜を横断することができることが分かっている。非親油性薬物が細胞膜を横断して拡散するのを支援することに加えて、浸透促進剤も、親油性薬物の透過性を高める。

浸透促進剤は、５つの広いカテゴリ、すなわち、界面活性剤、脂肪酸、胆汁酸塩、キレート化剤、および非キレート化非界面活性剤のうちの１つに属するとして分類することができる（例えば、Malmsten, M. Surfactants and polymers in drug delivery, Informa Health Care, New York, NY, 2002; Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p.92を参照されたい）。浸透促進剤の上記において言及されたクラスのそれぞれについては、以下においてより詳細に説明される。

界面活性剤（または「表面活性剤」」は、水溶液中に溶解されたとき、溶液の表面張力または水溶液と別の液体との間の界面張力を減少させ、結果として、粘膜を通過するＲＮＡｉ剤の吸収を高める化学物質である。胆汁塩および脂肪酸に加えて、これらの浸透促進剤としては、例えば、ラウリル硫酸ナトリウム、ポリオキシエチレン－９－ラウリルエーテル、およびポリオキシエチレン－２０－セチルエーテルが挙げられる（例えば、Malmsten, M. Surfactants and polymers in drug delivery, Informa Health Care, New York, NY, 2002; Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p.92); and perfluorochemical emulsions, such as FC-43. Takahashi et al., J. Pharm. Pharmacol., 1988, 40, 252を参照されたい）。

浸透促進剤としての役割を果たす様々な脂肪酸およびその誘導体としては、例えば、オレイン酸、ラウリン酸、カプリン酸（ｎ－デカン酸）、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、リノレン酸、ジカプロエート、トリカプロエート、モノオレイン（１－モノオレオイル－ｒａｃ－グリセロール）、ジラウリン、カプリル酸、アラキドン酸、グリセロール１－モノカプロエート、１－ドデシルアザシクロヘプタナ－２－オン、アシルカルニチン、アシルコリン、それらのＣ_１～２０アルキルエステル（例えば、メチル、イソプロピル、およびｔ－ブチル）、ならびにそれらのモノ－およびジ－グリセリド（すなわち、オレエート、ラウレート、カプロエート、ミリステート、パルミテート、ステアレート、リノレエートなど）が挙げられる（例えば、Touitou, E., et al. Enhancement in Drug Delivery, CRC Press, Danvers, MA, 2006; Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p.92; Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33; El Hariri et al., J. Pharm. Pharmacol., 1992, 44, 651-654を参照されたい）。

胆汁の生理的役割としては、脂質および脂溶性ビタミンの分散および吸収の促進が挙げられる（例えば、Malmsten, M. Surfactants and polymers in drug delivery, Informa Health Care, New York, NY, 2002; Brunton, Chapter 38 in: Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9th Ed., Hardman et al. Eds., McGraw-Hill, New York, 1996, pp. 934-935を参照されたい）。様々な天然の胆汁塩、およびそれらの合成誘導体が、浸透促進剤としての役割を果たす。したがって、用語「胆汁塩」は、胆汁の天然に存在する成分の全て、ならびにそれらの合成誘導体の全てを包含する。好適な胆汁塩としては、例えば、コール酸（またはその薬学的に許容されるナトリウム塩、コール酸ナトリウム）、デヒドロコール酸（デヒドロコール酸ナトリウム）、デオキシコール酸（デオキシコール酸ナトリウム）、グルコール酸（グルコール酸ナトリウム）、グリコール酸（グリココール酸ナトリウム）、グリコデオキシコール酸（グリコデオキシコール酸ナトリウム）、タウロコール酸（タウロコール酸ナトリウム）、タウロデオキシコール酸（タウロデオキシコール酸ナトリウム）、ケノデオキシコール酸（ケノデオキシコール酸ナトリウム）、ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）、タウロ－２４，２５－ジヒドロ－フシジン酸ナトリウム（ＳＴＤＨＦ）、グリコジヒドロフシジン酸ナトリウム、およびポリオキシエチレン－９－ラウリルエーテル（ＰＯＥ）が挙げられる（例えば、Malmsten, M. Surfactants and polymers in drug delivery, Informa Health Care, New York, NY, 2002; Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, page 92; Swinyard, Chapter 39 In: Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1990, pages 782-783; Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33; Yamamoto et al., J. Pharm. Exp. Ther., 1992, 263, 25; Yamashita et al., J. Pharm. Sci., 1990, 79, 579-583を参照されたい）。

キレート化剤は、本開示に関連して使用される場合、金属イオンとの複合体を形成することによって溶液から金属イオンを除去し、結果として、粘膜を通るＲＮＡｉ剤の吸収を高める化合物として定義することができる。本開示における浸透促進剤としての使用に関して、ほとんどの特徴的なＤＮＡヌクレアーゼは、触媒作用のために二価金属イオンを必要とし、結果として、キレート化剤によって阻害されるため、キレート化剤は、ＤＮａｓｅ阻害剤としても機能するさらなる利点を有する（Jarrett, J. Chromatogr., 1993, 618, 315-339Jarrett, J. Chromatogr., 1993, 618, 315-339）。好適なキレート化剤としては、これらに限定されるわけではないが、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム（ＥＤＴＡ）、クエン酸、サリチレート（例えば、サリチル酸ナトリウム、５－メトキシサリチレート、およびホモバニレート（ｈｏｍｏｖａｎｉｌａｔｅ））、コラーゲンのＮ－アシル誘導体、ラウレス－９、およびβ－ジケトンのＮ－アミノアシル誘導体（エナミン）が挙げられる（例えば、Katdare, A. et al., Excipient development for pharmaceutical, biotechnology, and drug delivery, CRC Press, Danvers, MA, 2006; Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, page 92; Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33; Buur et al., J. Control Rel., 1990, 14, 43-51を参照されたい）。

本明細書において使用される場合、非キレート化非界面活性剤である浸透促進化合物は、キレート化剤または界面活性剤としてはわずかな活性しか示さないが、それにもかかわらず消化器粘膜を通してのＲＮＡｉ剤の吸収を高める化合物として定義することができる（例えば、Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33を参照されたい）。このクラスの浸透促進剤としては、例えば、不飽和環状尿素、１－アルキル－および１－アルケニルアザシクロ－アルカノン誘導体（Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, page 92）；ならびに非ステロイド性抗炎症剤、例えば、ジクロフェナクナトリウム、インドメタシン、およびフェニルブタゾンなどが挙げられる（Yamashita et al., J. Pharm. Pharmacol., 1987, 39, 621-626）。

細胞レベルでのＲＮＡｉ剤の取り込みを増強する薬剤も、本開示の医薬組成物および他の組成物に加えることができる。例えば、カチオン性脂質、例えば、リポフェクチンなど（Junichi et al, U.S. Pat. No. 5,705,188）、カチオン性グリセロール誘導体、およびポリカチオン性分子、例えば、ポリリジンなど（ＷＯ９７／３０７３１）も、ｄｓＲＮＡの細胞取り込みを増強することが知られている。

投与された核酸の浸透を高めるために、他の薬剤、例えば、グリコール、例えば、エチレングリコールおよびプロピレングリコールなど、ピロール、例えば、２－ピロールなど、アゾン、ならびにテルペン、例えば、リモネンおよびメントンなどを用いることができる。

ｖ．賦形剤
担体化合物とは対照的に、「医薬担体」または「賦形剤」は、１つまたは複数の核酸を動物にデリバリーするための、薬学的に許容される溶媒、懸濁剤、または任意の他の薬理学的に不活性なビヒクルである。賦形剤は、液体または固体であり得、ならびに、核酸および所定の医薬組成物お他の成分を組み合わせたときに、所望の体積、稠度などを提供するように計画された投与の様式を念頭において選択される。典型的な医薬担体としては、これらに限定されるわけではないが、結着剤（例えば、予めゼラチン化されたウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン、またはヒドロキシプロピルメチルセルロースなど）；充填剤（例えば、ラクトースおよび他の糖、微結晶性セルロース、ペクチン、ゼラチン、硫酸カルシウム、エチルセルロース、ポリアクリレート、またはリン酸水素カルシウムなど）；潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、シリカ、コロイド状二酸化ケイ素、ステアリン酸、金属ステアリン酸塩、硬化植物油、コーンスターチ、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウムなど）；崩壊剤（例えば、デンプン、デンプングリコール酸ナトリウムなど）；および湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウムなど）が挙げられる。

核酸と有害に反応しない、非経静脈投与にとって好適な薬学的に許容される有機または無機賦形剤も、本開示の組成物を製剤化するために使用することができる。好適な薬学的に許容される担体としては、これらに限定されるわけではないが、水、塩溶液、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドンなどが挙げられる。

核酸の局所投与用の製剤は、滅菌および非滅菌水溶液、アルコールなどの一般的な溶媒における非水溶液、または液体もしくは固体油基剤における核酸の溶液を含むことができる。溶液は、緩衝剤、希釈剤、および他の好適な添加剤も含有することができる。核酸と有害に反応しない、非経静脈投与にとって好適な薬学的に許容される有機または無機賦形剤を、使用することができる。

好適な薬学的に許容される賦形剤としては、これらに限定されるわけではないが、水、塩溶液、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドンなどが挙げられる。

ｖｉ．他の成分
本開示の組成物は、さらに、医薬組成物中に従来的に見出される他の補助成分を、確立されたそれらの使用レベルにおいて含有することができる。したがって、例えば、組成物は、追加の適合性の、薬学的に活性な材料、例えば、止痒剤、収斂剤、局部麻酔薬、もしくは抗炎症剤などを含有することができ、または、本開示の組成物の様々な剤形を物理的に製剤化する際に有用な追加の材料、例えば、染料、矯臭剤、防腐剤、酸化防止剤、乳白剤、増粘剤、および安定化剤などを含有することができる。ただし、そのような材料は、添加したときに、本開示の組成物の成分の生物活性を過度に妨害すべきではない。製剤は、滅菌することができ、所望の場合は、製剤の核酸と有害に相互作用しない助剤、例えば、潤滑剤、防腐剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を及ぼすための塩、緩衝剤、着色剤、風味剤、または芳香族物質などと混合することができる。

水性懸濁液は、懸濁液の粘度を増加する物質、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストランなどを含有することができる。懸濁液は、安定化剤も含有することができる。

一部の実施形態において、本開示において特徴とされる医薬組成物は、（ａ）１つまたは複数のＲＮＡｉ剤、および（ｂ）非ＲＮＡｉメカニズムによって機能し、ＭＡＰＴ関連障害を使用する際に有用である、１つまたは複数の薬剤を含む。そのような薬剤の例としては、コリンエステラーゼ阻害剤、メマンチン、モノアミン阻害剤、レセルピン、抗痙攣薬、抗精神病薬、および抗鬱薬が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。

そのような化合物の毒性および治療有効性は、例えば、５０％致死量（集団の５０％に致死的である用量）およびＥＤ５０（集団の５０％において治療的有効な用量）を判定するために、細胞培養物または実験動物における標準的な薬学的手法によって判定することができる。毒性と治療有効性との間の用量比は、治療指数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０の比として示すことができる。高い治療指数を示す化合物が好ましい。

細胞培養アッセイおよび動物研究から得たデータは、ヒトにおける使用のために様々な投薬量を製剤化する際に使用することができる。本開示における本明細書において特徴とされる組成物の投薬量は、概して、わずかな毒性かまたは毒性が全くないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内である。投薬量は、用いられる剤形および利用される投与経路に応じて、この範囲内で変更することができる。本開示において特徴とされる方法で使用される任意の化合物に対して、最初に、細胞培養アッセイから治療有効用量を見積もることができる。細胞培養において決定されたＩＣ５０（すなわち、症状の１／２最大阻害を達成する試験化合物の濃度）を含む、化合物、または、適切な場合には、標的配列のポリペプチド産物の循環血漿濃度範囲を達成する（例えば、ポリペプチドの濃度減少を達成する）ように、用量を動物モデルにおいて製剤化することができる。そのような情報は、ヒトにおける有用な用量をより正確に判定するために使用することができる。血漿中のレベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィーによって、測定することができる。

本開示において特徴とされるＲＮＡｉ剤は、上記において説明されるようなそれらの投与以外に、ヌクレオチドリピートの発現によって媒介される病理学的プロセスの処置において有効な他の既知の薬物と併用して投与することもできる。いずれにしても、投与する医師は、当技術分野で公知であるかまたは本明細書において説明された、有効性の標準的尺度を使用して観察された結果に基づいて、ＲＮＡｉ剤投与の量およびタイミングを調整することができる。

ＶＩＩ．キット
ある特定の態様では、本開示は、ｓｉＲＮＡ化合物、例えば、二本鎖ｓｉＲＮＡ化合物、またはｓｓｉＲＮＡ化合物（例えば、前駆体、例えば、ｓｓｉＲＮＡ化合物へとプロセシングすることができるより大きなｓｉＲＮＡ化合物、またはｓｉＲＮＡ化合物、例えば、二本鎖ｓｉＲＮＡ化合物、もしくはｓｓｉＲＮＡ化合物をコードするＤＮＡ、またはその前駆体）の医薬製剤を収容する好適な容器を含むキットを提供する。

そのようなキットは、１つまたは複数のｄｓＲＮＡ剤と、使用のための使用説明書、例えば、予防有効量または治療有効量のｄｓＲＮＡ剤を投与するための使用説明書とを含む。ｄｓＲＮＡ剤は、バイアル瓶または予め充填された注射器にあり得る。適宜、キットは、ｄｓＲＮＡ剤を投与するための手段（例えば、予め充填された注射器または髄腔内ポンプなどの注入デバイス）またはＭＡＰＴの阻害を測定するための手段（例えば、ＭＡＰＴｍＲＮＡ、タウ、および／またはＭＡＰＴ活性の阻害を測定するための手段）をさらに含んでもよい。ＭＡＰＴの阻害を測定するためのそのような手段は、対象から試料、例えば、ＣＳＦおよび／または血漿試料を得るための手段を含み得る。適宜、本発明のキットは、治療有効量または予防有効量を判定するための手段をさらに含んでもよい。

ある特定の実施形態において、医薬製剤の個々の成分は、１つの容器において提供され得る。あるいは、医薬製剤の成分を別々に２つ以上の容器において、例えば、ｓｉＲＮＡ化合物調製物のための１つの容器と、担体化合物のための少なくとも別の容器において提供することは、望ましくあり得る。キットは、単一の箱における１つまたは複数の容器など、多数の異なる構成においてパッケージしてもよい。異なる成分は、例えば、キットと共に提供される使用説明書に従って、組み合わせることができる。成分は、医薬組成物を調製および投与するために、本明細書において説明される方法に従って組み合わせることができる。キットは、デリバリーデバイスも含むことができる。

ＶＩＩＩ．ＭＡＰＴ発現を阻害する方法
本開示はまた、細胞においてＭＡＰＴ遺伝子の発現を阻害する方法を提供する。本方法は、細胞を、細胞におけるＭＡＰＴの発現および／または活性を阻害するのに有効な量のＲＮＡｉ剤、例えば、二本鎖ＲＮＡｉ剤と接触させること、それによって、細胞におけるＭＡＰＴの発現および／または活性を阻害することを含む。本開示はまた、細胞におけるエクソン１０含有ＭＡＰＴ転写物を選択的に阻害する方法も提供する。本方法は、細胞を、本開示のｄｓＲＮＡ剤、または本開示の医薬組成物と接触させること、それによって細胞におけるエクソン１０含有ＭＡＰＴ転写物を選択的に分解することを含む。ある特定の実施形態において、細胞は対象内である。ある特定の実施形態において、対象はヒトである。ある特定の実施形態において、対象は、ＭＡＰＴ関連障害を有する。ある特定の実施形態において、ＭＡＰＴ関連障害は、神経変性障害である。ある特定の実施形態において、神経変性障害は、ＭＡＰＴ遺伝子にコードされるタンパク質タウの異常に関連する。ある特定の実施形態において、ＭＡＰＴ遺伝子にコードされるタンパク質タウの異常は、対象の脳内でのタウの凝集を引き起こす。

本開示のある特定の実施形態において、ＭＡＰＴの発現および／または活性は、ＣＮＳ（例えば、脳）細胞において優先的に少なくとも３０％阻害される。特定の実施形態において、ＭＡＰＴの発現および／または活性は、少なくとも３０％阻害される。ある特定の実施形態において、対象の血清中のタウタンパク質レベルは、少なくとも３０％阻害される。本開示のある特定の他の実施形態において、ＭＡＰＴの発現および／または活性は、肝細胞において優先的に少なくとも３０％阻害される。

細胞の、ＲＮＡｉ剤、例えば、二本鎖ＲＮＡｉ剤との接触は、インビトロまたはインビボで行うことができる。インビボで細胞を、ＲＮＡｉ剤と接触させることは、対象、例えば、ヒト対象内の細胞または細胞の群を、ＲＮＡｉ剤と接触させることを含む。細胞を接触させるインビトロおよびインビボ法の組合せも可能である。A108868_1030US_P2_Specification

細胞を接触させることは、上記で論じたように直接的である場合も間接的である場合もある。さらに、細胞を接触させることは、本明細書に記載される、または当技術分野で公知の任意のリガンドを含む標的化リガンドを介して達成できる。一部の実施形態において、標的化リガンドは、炭水化物部分、例えば、ＧａｌＮＡｃリガンドまたはＲＮＡｉ剤を目的の部位に向ける任意の他のリガンドである。

「阻害すること」という用語は、本明細書において使用される場合、「低減すること」、「サイレンシングすること」、「下方制御すること」、「抑制すること」および他の同様の用語と同義的に使用され、阻害の任意のレベルを含む。ある特定の実施形態において、例えば、本開示のＲＮＡｉ剤の阻害のレベルは、例えば、細胞培養物中の細胞が、リポフェクタミン（商標）媒介性トランスフェクションによってトランスフェクトされる細胞培養条件において、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下などの細胞の近傍における濃度で評価できる。所与のＲＮＡｉ剤のノックダウンは、細胞培養物において前処置されたレベル対細胞培養物において後処置されたレベルの比較によって決定でき、また、スクランブルされたまたは他の形態の対照ＲＮＡｉ剤を用いて並行して処置された細胞に対して比較してもよい。例えば、少なくとも約３０％の細胞培養物におけるノックダウンは、それによって、「阻害すること」または「低減すること」、「下方制御すること」または「抑制すること」などが生じたことを示すと同定され得る。標的化されたｍＲＮＡまたはコードされるタンパク質レベル（および従って、本開示のＲＮＡｉ剤によって引き起こされる「阻害すること」などの程度）の評価も、当技術分野において記載されるような適切に制御された条件下で本開示のＲＮＡｉ剤のインビボ系において評価できるということは明確に企図される。

語句「ＭＡＰＴを阻害すること」、「ＭＡＰＴ遺伝子の発現を阻害すること」、または「ＭＡＰＴの発現を阻害すること」は、本明細書において使用される場合、任意のＭＡＰＴ遺伝子（例えば、マウスＭＡＰＴ遺伝子、ラットＭＡＰＴ遺伝子、サルＭＡＰＴ遺伝子、またはヒトＭＡＰＴ遺伝子など）、ならびにタウをコードするＭＡＰＴ遺伝子の変異体または突然変異体の発現の阻害を含む。したがって、ＭＡＰＴ遺伝子は、遺伝子操作された細胞、細胞の群または生物との関連で、野生型ＭＡＰＴ遺伝子、突然変異体ＭＡＰＴ遺伝子またはトランスジェニックＭＡＰＴ遺伝子であり得る。

「ＭＡＰＴ遺伝子の発現を阻害すること」は、任意のレベルのＭＡＰＴ遺伝子の阻害、例えば、ＭＡＰＴ遺伝子の発現の少なくとも部分的抑制、例えば、少なくとも約２５％までの阻害を含む。ある特定の実施形態において、阻害は、対照レベルに対して少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％である。ＭＡＰＴの阻害は、例えば、本明細書における実施例に提供されるようなＡ５４９細胞および１０ｎＭの濃度のＲＮＡ剤を用いたインビトロアッセイならびにＰＣＲアッセイを使用して測定することができ、本開示の範囲内であることが企図される。一部の実施形態において、ＭＡＰＴの阻害は、ＢＥ（２）－Ｃ細胞を用いたインビトロアッセイを使用して測定することができる。一部の実施形態において、ＭＡＰＴの阻害は、Ｎｅｕｒｏ－２ａ細胞を用いたインビトロアッセイを使用して測定することができる。別の実施形態において、ＭＡＰＴの阻害は、Ｃｏｓ－７（Ｄｕａｌ－ＬｕｃｉｆｅｒａｓｅｐｓｉＣＨＥＣＫ２ベクター）を用いたインビトロアッセイを使用して測定することができる。さらに別の実施形態において、ＭＡＰＴの阻害は、一次マウス肝細胞を用いたインビトロアッセイを使用して測定することができる。

ＭＡＰＴ遺伝子の発現は、ＭＡＰＴ遺伝子の発現に付随する任意の変数のレベル、例えばＭＡＰＴｍＲＮＡのレベル（例えばセンスｍＲＮＡ、アンチセンスｍＲＮＡ、総ＭＡＰＴｍＲＮＡ、センスＭＡＰＴリピート含有ｍＲＮＡ、および／またはアンチセンスＭＡＰＴリピート含有ｍＲＮＡ）、またはタウのレベル（例えば総タウ、野生型タウタンパク質、または伸張されたリピートを含有するタンパク質）、または例えばセンスもしくはアンチセンス含有凝集体のレベルおよび／または異常なジペプチドリピートタンパク質のレベルに基づいて評価してよい。

阻害は、対照レベルと比較した、これらの変数のうち１つまたは複数の絶対または相対レベルの低下によって評価できる。対照レベルは、当技術分野で利用される任意の種類の対照レベル、例えば、投与前ベースラインレベルまたは未処置であるか、もしくは対照（例えば、バッファーのみの対照または不活性の薬剤対照など）を用いて処置された同様の対象、細胞もしくは試料から決定されるレベルであり得る。

例えば、本開示の方法の一部の実施形態において、ＭＡＰＴ遺伝子の発現（例えば、センスもしくはアンチセンス含有凝集体および／または異常なジペプチドリピートタンパク質レベルによって評価される）は、対照レベルに対して少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、もしくは９５％阻害されるか、またはアッセイの検出レベル未満まで阻害される。本開示の方法の他の実施形態において、ＭＡＰＴ遺伝子の発現（例えば、ｍＲＮＡまたはタンパク質発現レベルによって評価される）は、対照レベルに対して少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％阻害される。ある特定の実施形態において、方法は、例えば、ＭＡＰＴの発現を低減する薬剤を用いる対象の処置後の臨床的に関連するアウトカムによって実証されるような、ＭＡＰＴの発現の臨床的に関連する阻害を含む。

ＭＡＰＴ遺伝子の発現の阻害は、第１の細胞または細胞の群と実質的に同一であるが、そのように処置されていない第２の細胞または細胞の群（ＲＮＡｉ剤で処置されていない、または目的の遺伝子に標的化されるＲＮＡｉ剤を用いて処置されていない対照細胞（複数可））と比較して、ＭＡＰＴ遺伝子の発現が阻害されるように、ＭＡＰＴ遺伝子が転写され、処置（例えば、細胞（単数または複数）を本開示のＲＮＡｉ剤と接触させることによって、または本開示のＲＮＡｉ剤を、細胞が存在しているもしくは存在していた対象に投与することによって）されている第１の細胞または細胞の群（このような細胞は、例えば、対象に由来する試料中に存在し得る）によって発現されるｍＲＮＡの量の低減によって示される場合もある。阻害の程度は、以下の点で表すことができる：

他の実施形態において、ＭＡＰＴ遺伝子の発現の阻害は、ＭＡＰＴ遺伝子の発現に機能的に関連するパラメータ、例えばタウの発現、センスもしくはアンチセンス含有凝集体および／または異常なジペプチドリピートタンパク質のレベルの低減の観点で評価してよい。ＭＡＰＴ遺伝子のサイレンシングは、発現コンストラクトから内因性または異種性のＭＡＰＴを発現する任意の細胞において、当技術で既知の任意のアッセイによって決定してよい。

ＭＡＰＴ遺伝子の発現の阻害は、細胞または細胞の群によって発現されるタウタンパク質のレベル（例えば、対象に由来する試料中に発現されるタンパク質のレベル）の低減（または機能性パラメータ、例えば、微小管アセンブリーの低減）によって明らかにすることができる。上記で説明されたように、ｍＲＮＡ抑制の評価のために、処置された細胞または細胞の群におけるタンパク質発現レベルの阻害を、対照細胞または細胞の群におけるタンパク質のレベルのパーセンテージとして同様に表すことができる。一部の実施形態において、語句「ＭＡＰＴを阻害すること」はまた、タウタンパク質発現の阻害、例えば、タウ発現の少なくとも部分的抑制、例えば少なくとも約２５％の阻害も含むことができる。ある特定の実施形態において、ＭＡＰＴの活性の阻害は、対照レベルに対して少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％である。タウタンパク質レベルは、例えば、（Rubenstein et al.(2015) J. Neurotrauma 2015 Mar1: 32 (5):342-352; Lim et al. (2014) Comput Struct Biotechnol J. 2014;12(20-21):7-13）に記載されるアッセイを用いたインビトロアッセイを使用して測定することができる。ＭＡＰＴの発現は、例えば、（Caillet-Boudin et al. (2015) Mol Neurodegener. 2015; 10:28; Hefti et al. (2018) PLoS ONE 13(4): e0195771）に記載されるアッセイを用いたインビトロアッセイを使用して測定することができる。

ＭＡＰＴ遺伝子の発現の阻害を評価するために使用できる対照細胞または細胞の群には、本開示のＲＮＡｉ剤とまだ接触していない細胞または細胞の群が含まれる。例えば、対照細胞または細胞の群は、ＲＮＡｉ剤を用いる対照の処置の前の個々の対象（例えば、ヒトまたは動物対象）に由来し得る。

細胞または細胞の群によって発現されたＭＡＰＴｍＲＮＡのレベルは、ｍＲＮＡ発現を評価するための当技術分野で公知の任意の方法を使用して決定できる。一実施形態において、試料中のＭＡＰＴの発現のレベルは、転写されたポリヌクレオチドまたはその一部、例えば、ＭＡＰＴ遺伝子のｍＲＮＡを検出することによって決定される。ＲＮＡは、例えば、酸フェノール／グアニジンイソチオシアネート抽出（ＲＮＡｚｏｌＢ；Ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ）、ＲＮｅａｓｙ（商標）ＲＮＡ調製キット（Ｑｉａｇｅｎ（登録商標））またはＰＡＸｇｅｎｅ（ＰｒｅＡｎａｌｙｔｉｘ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を使用することを含む、ＲＮＡ抽出技術を使用して細胞から抽出できる。リボ核酸ハイブリダイゼーションを利用する通常のアッセイ形式には、核ランオンアッセイ、ＲＴ－ＰＣＲ、ＲＮアーゼ保護アッセイ、ノーザンブロッティング、インサイツハイブリダイゼーションおよびマイクロアレイ分析が含まれる。鎖特異的なＭＡＰＴｍＲＮＡは、例えば上記Jiang, et al.、上記Lagier-Tourenne, et al.、および上記Jiang, et al.に記載されている定量的ＲＴ－ＰＣＲおよび／または液滴デジタルＰＣＲ法を使用して検出してよい。循環するＭＡＰＴｍＲＮＡは、ＷＯ２０１２／１７７９０６に記載されている方法を使用して検出してよく、その全内容はこれにより参照により本明細書に組み込まれる。

一部の実施形態において、ＭＡＰＴの発現のレベルは、核酸プローブを使用して決定される。「プローブ」という用語は、本明細書において使用される場合、特定のＭＡＰＴ核酸またはタンパク質もしくはその断片に選択的に結合可能である任意の分子を指す。プローブは、当業者によって合成できる、または適切な生物学的調製物から誘導できる。プローブは、標識されるように具体的に設計できる。プローブとして利用できる分子の例として、それだけには限らないが、ＲＮＡ、ＤＮＡ、タンパク質、抗体および有機分子が挙げられる。

単離されたｍＲＮＡは、それだけには限らないが、サザンまたはノーザン分析、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）分析およびプローブアレイを含む、ハイブリダイゼーションまたは増幅アッセイにおいて使用できる。ｍＲＮＡレベルを決定する１つの方法は、単離されたｍＲＮＡを、ＭＡＰＴｍＲＮＡとハイブリダイズできる核酸分子（プローブ）と接触させることを含む。一実施形態において、例えば、単離されたｍＲＮＡをアガロースゲル上に流すことおよびｍＲＮＡをゲルからメンブレン、例えば、ニトロセルロースにトランスファーすることによって、ｍＲＮＡを固体表面上に固定化し、プローブと接触させる。代替実施形態において、プローブ（複数可）を固体表面上に固定化し、例えば、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ（登録商標）遺伝子チップアレイにおいてｍＲＮＡをプローブ（複数可）と接触させる。当業者ならば、公知のｍＲＮＡ検出方法を、ＭＡＰＴｍＲＮＡのレベルの決定において使用するために容易に適応させることができる。

試料中のＭＡＰＴの発現のレベルを決定するための代替方法は、例えば、ＲＴ－ＰＣＲ（Ｍｕｌｌｉｓ、１９８７年、米国特許第４，６８３，２０２号に示された実験の実施形態）、リガーゼ連鎖反応［Barany (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:189-193］、自家持続配列複製法［Guatelli et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:1874-1878］、転写増幅システム［Kwoh et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:1173-1177］、Ｑ－ベータレプリカーゼ［Lizardi et al. (1988) Bio/Technology 6:1197］、ローリングサークル複製（Lizardi et al.、米国特許第５，８５４，０３３号）または任意のその他の核酸増幅法による、例えば、試料中のｍＲＮＡの核酸増幅または逆転写酵素（ｃＤＮＡを調製するための）のプロセスと、それに続く、当業者に公知の技術を使用する増幅された分子の検出を含む。これらの検出スキームは、このような分子が、極めて少数で存在する場合には、核酸分子の検出のために特に有用である。本開示の特定の態様では、ＭＡＰＴの発現のレベルは、定量的蛍光発生的ＲＴ－ＰＣＲ（すなわち、ＴａｑＭａｎ（商標）システム）によって、Ｄｕａｌ－Ｇｌｏ（登録商標）ルシフェラーゼアッセイによって、またはＭＡＰＴ発現もしくはｍＲＮＡレベルの測定のための他の技術分野によって認識された方法によって決定される。

ＭＡＰＴｍＲＮＡの発現レベルは、メンブレンブロット（例えば、ノーザン、サザン、ドットなどといったハイブリダイゼーション分析において使用される）またはマイクロウェル、試料チューブ、ゲル、ビーズまたはファイバー（または結合している核酸を含む任意の固相支持体）を使用してモニタリングできる。参照によって本明細書に組み込まれる、米国特許第５，７７０，７２２号、同５，８７４，２１９号、同５，７４４，３０５号、同５，６７７，１９５号および同５，４４５，９３４号を参照されたい。ＭＡＰＴ発現レベルの決定はまた、溶液中で核酸プローブを使用することを含み得る。

一部の実施形態において、ｍＲＮＡ発現のレベルは、分岐ＤＮＡ（ｂＤＮＡ）アッセイまたはリアルタイムＰＣＲ（ｑＰＣＲ）を使用して評価される。このＰＣＲ方法の使用は、本明細書において示される実施例において記載され、例示されている。このような方法はまた、ＭＡＰＴ核酸の検出のために使用できる。

タウ発現のレベルは、タンパク質レベルの測定のための当技術分野で公知の任意の方法を使用して決定できる。このような方法には、例えば、電気泳動、キャピラリー電気泳動、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、超拡散クロマトグラフィー、流体またはゲル沈降素反応、吸収分光法、比色アッセイ、分光光度的アッセイ、フローサイトメトリー、免疫拡散法（一元または二元）、免疫電気泳動、ウエスタンブロッティング、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、免疫蛍光アッセイ、電気化学発光アッセイなどが含まれる。このようなアッセイはまた、タウの存在または複製を示すタンパク質の検出のために使用できる。タウタンパク質レベルは、例えば、（Rubenstein et al.(2015) J. Neurotrauma 2015 Mar1: 32 (5):342-352; Lim et al. (2014) Comput Struct Biotechnol J. 2014;12(20-21):7-13）に記載されるアッセイを用いたインビトロアッセイを使用して測定することができる。

センスまたはアンチセンス含有凝集体のレベルおよび異常なジペプチドリピートタンパク質のレベルは、例えば蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）、免疫組織化学および免疫アッセイを含む当業者には周知の方法を使用して評価してよい（例えば上記Jiang, et al.を参照）。一部の実施形態において、ＭＡＰＴ関連疾患の処置における本開示の方法の有効性は、ＭＡＰＴｍＲＮＡレベルの低下によって（例えば、ＭＡＰＴレベルについてのＣＳＦ試料および／または血漿試料の評価によって、脳生検または別の方法によって）評価される。

本開示の方法の一部の実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡｉ剤が、対象内の特定の部位に送達されるように対象に投与される。ＭＡＰＴの発現の阻害は、ＭＡＰＴｍＲＮＡ（例えばセンスｍＲＮＡ、アンチセンスｍＲＮＡ、総ＭＡＰＴｍＲＮＡ）、タウタンパク質（例えば総タウタンパク質、野生型タウタンパク質）、センス含有凝集体、アンチセンス含有凝集体、対象の中の特定の部位、例えばＣＮＳ細胞から誘導された試料中の異常なジペプチドリピートタンパク質のレベルまたはレベルの変化の測定を使用して評価してよい。ある特定の実施形態において、方法は、例えば、ＭＡＰＴの発現を低減する薬剤を用いる対象の処置後の臨床的に関連するアウトカム、例えば、尾状核萎縮（例えば、容積測定ＭＲＩ（ｖＭＲＩ）によって評価されるような）の安定化または阻害、対象から得たＣＳＦ試料中の神経細線維軽鎖（Ｎｆｌ）レベルの安定化または低減、突然変異体ＭＡＰＴｍＲＮＡまたは切断された突然変異体タウ、例えば、全長突然変異体ＭＡＰＴｍＲＮＡもしくはタンパク質および切断された突然変異体ＭＡＰＴｍＲＮＡもしくはタンパク質の一方もしくは両方の低減などによって実証されるような、ＭＡＰＴの発現の臨床的に関連する阻害を含む。

本明細書において使用される場合、分析物のレベルを検出することまたは決定することという用語は、材料、例えば、タンパク質、ＲＮＡが存在するか否かを決定する工程を実施することを意味すると理解される。本明細書において使用される場合、検出するまたは決定する方法は、使用される方法の検出のレベルを下回る分析物レベルの検出または決定を含む。

ＩＸ．ＭＡＰＴ関連疾患を処置または予防する方法
本開示はまた、細胞においてＭＡＰＴ発現を低減または阻害するために本開示のＲＮＡｉ剤または本開示のＲＮＡｉ剤を含有する組成物を使用する方法を提供する。方法は、細胞を本開示のｄｓＲＮＡと接触させることおよび細胞をＭＡＰＴ遺伝子のｍＲＮＡ転写物の分解を得るのに十分な時間の間維持し、それによって、細胞においてＭＡＰＴ遺伝子の発現を阻害することを含む。

さらに、本開示はまた、細胞におけるセンスおよびアンチセンス含有凝集体のレベルを低減させるおよび／またはその形成を阻害するために、本開示のＲＮＡｉ剤または本開示のＲＮＡｉ剤を含有する組成物を使用する方法も提供する。本方法は、細胞を本開示のｄｓＲＮＡと接触させること、それによって細胞におけるＭＡＰＴセンスおよびアンチセンス含有凝集体のレベルを低減させることを含む。

本開示はまた、細胞における異常なジペプチドリピートタンパク質を低減させるおよび／またはその形成を阻害するために、本開示のＲＮＡｉ剤または本開示のＲＮＡｉ剤を含有する組成物を使用する方法も提供する。本方法は、細胞を本開示のｄｓＲＮＡと接触させること、それによって細胞における異常なジペプチドリピートタンパク質のレベルを低減させることを含む。

ＭＡＰＴセンスおよびアンチセンス含有凝集体および／または異常なジペプチドリピートタンパク質の遺伝子発現、レベルの低減は、当技術分野で公知の任意の方法によって評価することができる。例えば、ＭＡＰＴの発現の低減は、当業者に常用される方法、例えば、ノーザンブロッティング、ｑＲＴ－ＰＣＲを使用してＭＡＰＴのｍＲＮＡ発現レベルを決定することによって；当業者に常用される方法、例えば、ウェスタンブロッティング、免疫学的技術を使用してＭＡＰＴのタンパク質レベルを決定することによって、決定してもよい。

本開示の方法では、細胞をインビトロまたはインビボで接触させることができる、すなわち、細胞は、対象内であり得る。対象は、ヒトであり得る。対象は、ＭＡＰＴ関連障害を有し得る。ＭＡＰＴ関連障害は、神経変性障害であり得る。対象の神経変性障害は、ＭＡＰＴ遺伝子にコードされるタンパク質タウの異常に関連し得る。ＭＡＰＴ遺伝子にコードされるタンパク質タウの異常は、対象の脳内でのタウの凝集を引き起こすおそれがある。

本開示の方法を使用する処置のために好適な細胞は、ＭＡＰＴ遺伝子を発現する任意の細胞であってよい。本開示の方法における使用にとって適した細胞は、哺乳動物細胞、例えば、霊長類細胞（ヒト細胞または非ヒト霊長類細胞、例えば、サル細胞またはチンパンジー細胞など）、非霊長類細胞（ラット細胞またはマウス細胞など）であり得る。一実施形態において、細胞は、ヒト細胞、例えば、ヒトＣＮＳ細胞である。

ＭＡＰＴの発現（例えば、センスｍＲＮＡ、アンチセンスｍＲＮＡ、総ＭＡＰＴｍＲＮＡ、総タウタンパク質によって評価される）は、対照細胞における発現に対して、細胞において約２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、または５０％阻害される。ある特定の実施形態において、ＭＡＰＴの発現は、対照レベルに対して少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％阻害される。

好ましい実施形態において、ＭＡＰＴの発現は、細胞において少なくとも３０％阻害される。特定の実施形態において、ＭＡＰＴの発現の阻害は、対象の血清中のタウタンパク質レベルを少なくとも３０％減少させることができる。

センスもしくはアンチセンス含有凝集体および／または異常なジペプチドリピートタンパク質レベルによって評価される阻害は、細胞内において少なくとも２０％、３０％、４０％、好ましくは少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、またはアッセイの検出レベル未満にまで阻害される。

本開示のインビボ法は、対象に、ＲＮＡｉ剤を含有する組成物を投与することを含むことができ、ＲＮＡｉ剤は、処置されるべき哺乳動物のＭＡＰＴ遺伝子のＲＮＡ転写物の少なくとも一部と相補的であるヌクレオチド配列を含む。処置されるべき生物が哺乳動物、例えば、ヒトである場合には、組成物は、それだけには限らないが、経口、腹腔内または頭蓋内（例えば、脳室内、実質内および髄腔内）、静脈内の、筋肉内の、硝子体内、皮下、経皮、気道（エアロゾル）、鼻腔、直腸および局所（頬側および舌下を含む）投与を含む非経口経路を含む、当技術分野で公知の任意の手段によって投与され得る。ある特定の実施形態において、組成物は、静脈内注入または注射によって投与される。ある特定の実施形態において、組成物は、皮下注射によって投与される。ある特定の実施形態において、組成物は、髄腔内注射によって投与される。

一部の実施形態において、投与は、デポー注射によってである。デポー注射は、長時間にわたって一貫した方法でＲＮＡｉ剤を放出し得る。したがって、デポー注射は、所望の効果、例えば、所望のＭＡＰＴの阻害または治療的もしくは予防的効果を得るために必要とされる投薬の頻度を低減し得る。デポー注射はまた、より一貫した血清濃度を提供し得る。デポー注射は、皮下注射または筋肉内注射を含み得る。好ましい実施形態において、デポー注射は、皮下注射である。

一部の実施形態において、投与は、ポンプによってである。ポンプは、外部ポンプまたは外科的に埋め込まれたポンプであり得る。ある特定の実施形態において、ポンプは、皮下に埋め込まれた浸透圧ポンプである。他の実施形態において、ポンプは、注入ポンプである。注入ポンプは、頭蓋内、静脈内、皮下、動脈性または硬膜外注入のために使用され得る。好ましい実施形態において、注入ポンプは、皮下注入ポンプである。他の実施形態において、ポンプは、ＲＮＡｉ剤をＣＮＳに送達する外科的に埋め込まれたポンプである。

投与様式は、局所処置が望まれるか、または全身処置が望まれるかに基づいて、また処置されるべき領域に基づいて選択できる。投与の経路および部位は、標的化を増強するように選択できる。

一態様では、本開示はまた、哺乳動物においてＭＡＰＴ遺伝子の発現を阻害する方法を提供する。方法は、哺乳動物に、哺乳動物の細胞においてＭＡＰＴ遺伝子を標的化するｄｓＲＮＡを含む組成物を投与し、それによって、細胞においてＭＡＰＴ遺伝子の発現を阻害することを含む。遺伝子発現の低減は、当技術分野で公知の任意の方法によって、また本明細書に記載される方法、例えば、ｑＲＴ－ＰＣＲによって評価できる。タンパク質産生の低減は、当技術分野で公知の任意の方法によって、また本明細書に記載される方法、例えば、ＥＬＩＳＡによって評価できる。一実施形態において、ＣＮＳ生検試料または脳脊髄液（ＣＳＦ）試料は、ＭＡＰＴ遺伝子またはタンパク質発現の（またはしたがって、プロキシの）低減をモニタリングするための組織材料として働く。

本開示は、それを必要とする対象の処置の方法をさらに提供する。本開示の処置方法は、対象、例えば、ＭＡＰＴの発現の阻害が有益であろう対象、例えば、ＭＡＰＴ遺伝子にミスセンスおよび／または欠失突然変異を有する対象に、ＭＡＰＴ遺伝子を標的化するＲＮＡｉ剤またはＭＡＰＴ遺伝子を標的化するＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物の治療有効量で、本開示のＲＮＡｉ剤を投与することを含む。

さらに、本開示は、対象におけるＭＡＰＴ関連疾患または障害（例えば、アルツハイマー病、ＦＴＤ、ＰＳＰ、または別のタウオパチー）を防止する、処置する、またはその進行を阻害する方法を提供する。本方法は、対象に、治療有効量の本明細書に提供されるＲＮＡｉ剤のいずれか、例えば、ｄｓＲＮＡ剤、または医薬組成物を投与すること、それによって対象におけるＭＡＰＴ関連疾患または障害を防止する、処置する、またはその進行を阻害することを含む。本開示の方法によって防止することができるＭＡＰＴ関連疾患または障害は、ＭＡＰＴ遺伝子にコードされるタンパク質タウの異常に関連し得る。ＭＡＰＴ遺伝子にコードされるタンパク質タウの異常は、対象の脳内でのタウの凝集を引き起こす。対象はヒトであり得る。本開示のｄｓＲＮＡ剤または本開示の医薬組成物の投与は、対象の脳内でのタウの凝集の減少をもたらすことができる。

本開示のＲＮＡｉ剤は、「遊離ＲＮＡｉ剤」として投与される場合がある。遊離ＲＮＡｉ剤は、医薬組成物の不在下で投与される。裸のＲＮＡｉ剤は、適したバッファー溶液中にある場合がある。バッファー溶液は、酢酸塩、クエン酸塩、プロラミン、炭酸塩またはリン鎖塩またはそれらの任意の組合せを含み得る。一実施形態において、バッファー溶液は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）である。ＲＮＡｉ剤を含有するバッファー溶液のｐＨおよび浸透圧は、対象へ投与することに適しているように調整できる。

あるいは、本開示のＲＮＡｉ剤は、医薬組成物、例えば、ｄｓＲＮＡリポソーム製剤として投与され得る。

ＭＡＰＴ遺伝子の発現の低減または阻害が有益であろう対象は、ＭＡＰＴ関連疾患を有する対象である。例示的なＭＡＰＴ関連疾患としては、タウオパチー、アルツハイマー病、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、行動障害型前頭側頭型認知症（ｂｖＦＴＤ）、非流暢性亜型原発性進行性失語（ｎｆｖＰＰＡ）、意味型原発性進行性失語（ＰＰＡ－Ｓ）、ロゴペニック型原発性進行性失語（ＰＰＡ－Ｌ）、１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、ピック病（ＰｉＤ）、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、初老期認知症を伴う多系統タウオパチー（ＭＳＴＤ）、球状グリア封入体を伴う白質タウオパチー（ＧＧＩを伴うＦＴＬＤ）、ＭＡＰＴ突然変異を伴うＦＴＬＤ、神経原線維変化（ＮＦＴ）認知症、運動ニューロン疾患を伴うＦＴＤ、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、皮質基底核症候群（ＣＢＳ）、皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、パーキンソン病、脳炎後パーキンソニズム、ニーマン・ピック病、ハンチントン病、筋強直性ジストロフィー１型、およびダウン症候群（ＤＳ）が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。

本開示は、例えば、ＭＡＰＴ発現の低減もしくは阻害が有益であろう対象、例えば、ＭＡＰＴ関連障害を有する対象を処置するための、他の医薬または他の治療方法と、例えば、公知の医薬または公知の治療方法、例えば、これらの障害を処置するために現在使用されているものなどと組み合わせた、ＲＮＡｉ剤またはその医薬組成物の使用のための方法をさらに提供する。例えば、ある特定の実施形態において、ＭＡＰＴを標的化するＲＮＡｉ剤は、例えば、本明細書において別の場所に記載されるような、またはそうではなく当技術分野で公知のような、ＭＡＰＴ関連障害の処置において有用な薬剤と組み合わせて投与される。例えば、ＭＡＰＴ発現の低減が有益であろう対象、例えば、ＭＡＰＴ関連障害を有する対象を処置するのに適した追加の薬剤は、ＭＡＰＴ関連疾患の症状を処置するために現在使用されている薬剤を含み得る。ＲＮＡｉ剤および追加の治療薬は、同時にまたは同一組合せで、例えば、髄腔内に投与してもよく、または追加の治療薬は、別個の組成物の一部として、または別個の時間で、または当技術分野で公知のもしくは本明細書に記載される別の方法によって投与できる。

例示的な追加の治療薬として、例えば、モノアミン阻害剤、例えば、テトラベナジン（Ｘｅｎａｚｉｎｅ）、デュテトラベナジン（Ａｕｓｔｅｄｏ）およびレセルピン、抗痙攣剤、例えば、バルプロ酸（Ｄｅｐａｋｏｔｅ、Ｄｅｐａｋｅｎｅ、Ｄｅｐａｃｏｎ）およびクロナゼパム（Ｋｌｏｎｏｐｉｎ）、抗精神病剤、例えば、リスペリドン（Ｒｉｓｐｅｒｄａｌ）およびハロペリドール（Ｈａｌｄｏｌ）および抗うつ剤、例えば、パロキセチン（Ｐａｘｉｌ）が挙げられる。

一実施形態において、方法は、標的ＭＡＰＴ遺伝子の発現が少なくとも１か月間低下されるように本明細書において特徴とされる組成物を投与することを含む。好ましい実施形態において、発現は、少なくとも２か月、３か月または６か月間低下される。

好ましくは、本明細書において特徴とされる方法および組成物にとって有用なＲＮＡｉ剤は、標的ＭＡＰＴ遺伝子のＲＮＡ（一次またはプロセシングされた）を特異的に標的化する。ＲＮＡｉ剤を使用してこれらの遺伝子の発現を阻害する組成物および方法は、本明細書に記載されるように調製および実施できる。

本開示の方法によるｄｓＲＮＡの投与は、ＭＡＰＴ関連障害を有する患者においてこのような疾患または障害の重症度、徴候、症状またはマーカーの低減をもたらし得る。これに関連して「低減」とは、このようなレベルの統計的に有意なまたは臨床的に有意な低下を意味する。低減は、例えば、対照レベルに対して少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％または約１００％であり得る。疾患の処置または予防の有効性は、例えば、疾患進行、疾患緩解、症状の重症度、疼痛の低減、生活の質、処置効果を持続するために必要とされる投薬の用量、疾患マーカーまたは処置されているまたは予防のために標的化される所与の疾患にとって適切な任意の他の測定可能なパラメータのレベルを測定することによって評価できる。このようなパラメータのうち任意の１つまたはパラメータの任意の組合せを測定することによって、処置または予防の有効性をモニタリングすることは、十分に当業者の能力の範囲内である。例えば、ＭＡＰＴ関連障害の処置の有効性は、例えば、対象のものの定期的なモニタリングによって評価できる。後の読み取り値を、最初の読み取り値と比較することによって、処置が有効であるか否かの指標が医師に提供される。このようなパラメータのうち任意の１つまたはパラメータの任意の組合せを測定することによって、処置または予防の有効性をモニタリングすることは、十分に当業者の能力の範囲内である。ＭＡＰＴを標的化するＲＮＡｉ剤またはその医薬組成物の投与に関連して、ＭＡＰＴ関連障害「に対して有効な」は、臨床的に適切な方法での投与が、少なくとも統計的に有意な割合の患者にとって有益な効果、例えば、症状の改善、治癒、疾患の低減、寿命の延長、生活の質の改善またはＭＡＰＴ関連障害および関連原因の処置に精通している医師によって肯定的であると一般的に認識される他の効果をもたらすことを示す。

処置または予防的効果は、疾患状態の１つまたは複数のパラメータにおいて統計的に有意な改善がある場合に、または悪化しなかったこともしくはそうでなければ予測される症状を発症しなかったことによって明らかである。例として、疾患の測定可能なパラメータにおける少なくとも１０％の好都合な変化、好ましくは、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％またはそれより多くが、有効な処置を示し得る。所与のＲＮＡｉ剤薬物またはその薬物の製剤の有効性はまた、当技術分野で公知のように、所与の疾患の実験動物モデルを使用して判断できる。実験動物モデルを使用する場合には、処置の有効性は、マーカーまたは症状の統計的に有意な低減が観察される場合に証明される。

あるいは、有効性は、臨床的に許容された疾患重症度類別スケールに基づいて、診断の当業者によって決定されるような疾患の重症度の低減によって測定できる。例えば、適切なスケールを使用して測定される疾患の重症度の減少をもたらす任意の肯定的な変化は、本明細書に記載されるようなＲＮＡｉ剤またはＲＮＡｉ剤製剤を使用する妥当な処置を表す。

ある特定の実施形態において、対象には、ｄｓＲＮＡの治療量、例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約２００ｍｇ／ｋｇを投与することができる。他の実施形態において、対象には、ｄｓＲＮＡの治療量、例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約５００ｍｇ／ｋｇを投与することができる。さらに他の実施形態において、対象には、約５００ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上のｄｓＲＮＡの治療量を投与することができる。

ＲＮＡｉ剤は、一定期間にわたって定期的に、髄腔内に、硝子体内注射を介して、または静脈内注入によって投与できる。ある特定の実施形態において、最初の処置レジメン後に、より少ない頻度で処置を投与できる。ＲＮＡｉ剤の投与は、例えば、患者の細胞、組織、血液、ＣＳＦ試料または他のコンパートメントにおいてＭＡＰＴレベルを低減できる。一実施形態において、ＲＮＡｉ剤の投与は、例えば、患者の細胞、組織、血液、ＣＳＦ試料または他のコンパートメントにおいてＭＡＰＴレベルを対照レベルに対して少なくとも約２５％、例えば約２５％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％低減できる。

ＲＮＡｉ剤の全用量の投与の前に、患者により少ない用量、例えば、５％の注入反応を投与し、有害作用、例えば、アレルギー反応についてモニタリングできる。別の例では、患者を、望まれない免疫賦活性効果、例えば、サイトカイン（例えば、ＴＮＦ－アルファまたはＩＮＦ－アルファ）レベルの増大についてモニタリングできる。

あるいは、ＲＮＡｉ剤を、皮下に、すなわち、皮下注射によって投与できる。ＲＮＡｉ剤の所望の、例えば、毎月の用量を対象に送達するために、１回または複数回の注射を使用できる。一定期間にわたって、注射を反復できる。投与を定期的に反復できる。ある特定の実施形態において、最初の処置レジメン後に、より少ない頻度で処置を投与できる。反復用量レジメンは、定期的な、例えば、毎月の、または四半期に１回、年に２回、年に１回に延長する、ＲＮＡｉ剤の治療量の投与を含み得る。ある特定の実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、月に約１回～四半期に約１回（すなわち、３か月毎に約１回）投与される。

別段の定義がない限り、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載されているものと類似または同等の方法および材料を、本発明において特徴とされるＲＮＡｉ剤および方法の実施または試験に使用できるが、適した方法および材料を以下に記載する。本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許および他の参考文献は、それらの全体が参照により組み込まれる。矛盾する場合には、定義を含む本明細書が支配する。さらに、材料、方法および例は、単に例示的なものであり、制限であるように意図されない。

非公式な配列表が本明細書と共に提出され、出願される明細書の一部を形成する。

［実施例１］
ＲＮＡｉ剤設計、合成、選択およびインビトロ評価
この実施例は、ＭＡＰＴＲＮＡｉ剤の設計、合成、選択およびインビトロ評価のための方法を記載する。

試薬の供給源
試薬の供給源が本明細書に具体的に与えられない場合には、このような試薬は、分子生物学において適用するための品質／純度基準で分子生物学のための試薬の任意の供給者から得ることができる。

生物情報科学
ヒトＭＡＰＴ転写物[ヒト（Ｈｏｍｏｓａｐｉｅｎｓ）微小管関連タンパク質タウ（ＭＡＰＴ）、転写物変異体４、ｍＲＮＡ、ＮＣＢＩｒｅｆｓｅｑＩＤＮＭ＿０１６８４１．４；ＮＣＢＩＧｅｎｅＩＤ：４１３７およびヒト微小管関連タンパク質タウ（ＭＡＰＴ）、転写物変異体２、ｍＲＮＡ、ＮＣＢＩｒｅｆｓｅｑＩＤＮＭ＿００５９１０．６；ＮＣＢＩＧｅｎｅＩＤ：４１３７]を標的化するｓｉＲＮＡを、カスタムＲおよびＰｙｔｈｏｎスクリプトを使用して設計した。ヒトＮＭ＿０１６８４１．４ｍＲＮＡは、５５４４塩基の長さを有する。ヒトＮＭ＿００５９１０．６ｍＲＮＡは、５６３９塩基の長さを有する。

ヒトＭＡＰＴ転写物を標的化する未修飾のＭＡＰＴセンスおよびアンチセンス鎖ヌクレオチド配列の詳細なリストは、表３～５、１６、１８、２０、２２、２５、および２７に示されている。ヒトＭＡＰＴ転写物を標的化する修飾されたＭＡＰＴセンスおよびアンチセンス鎖ヌクレオチド配列の詳細なリストは、表６～８、１７、１９、２１、２３、２６、および２８に示されている。

マウスＭＡＰＴ転写物[ハツカネズミ（Ｍｕｓｍｕｓｃｕｌｕｓ）微小管関連タンパク質タウ（Ｍａｐｔ）、ｍＲＮＡ、ＮＣＢＩｒｅｆｓｅｑＩＤＮＭ＿００１０３８６０９；ＮＣＢＩＧｅｎｅＩＤ：１７７６２]を標的化するｓｉＲＮＡを、カスタムＲおよびＰｙｔｈｏｎスクリプトを使用して設計した。マウスＮＭ＿００１０３８６０９．２ｍＲＮＡは、５３９６塩基の長さを有する。

マカクＭＡＰＴ転写物[カニクイザル（Ｍａｃａｃａｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）微小管関連タンパク質タウ（ＭＡＰＴ）、転写物変異体Ｘ１３、ＮＣＢＩｒｅｆｓｅｑＩＤＸＭ＿００５５８４５４０．１；ＮＣＢＩＧｅｎｅＩＤ：１０２１１９４１４]を標的化するｓｉＲＮＡを、カスタムＲおよびＰｙｔｈｏｎスクリプトを使用して設計した。マウスＸＭ＿００５５８４５４０．１ｍＲＮＡは、５７９０塩基の長さを有する。

マウスＭＡＰＴ転写物を標的化する未修飾のＭＡＰＴセンスおよびアンチセンス鎖ヌクレオチド配列の詳細なリストは、表１２に示されている。マウスＭＡＰＴ転写物を標的化する修飾されたＭＡＰＴセンスおよびアンチセンス鎖ヌクレオチド配列の詳細なリストは、表１３に示されている。

本出願を通じて、小数点のない二重鎖名は、単に二本鎖のバッチ番号を言及する小数点を有する二重鎖名と同等であるということは理解されるべきである。例えば、ＡＤ－５２３５６１は、ＡＤ－５２３５６１．１と同等である。

ＢＥ（２）－ＣおよびＮｅｕｒｏ－２ａ細胞におけるインビトロ（ｉｎｖｉｔｒｏ）スクリーニング
ｉ．細胞培養およびトランスフェクション：
３８４ウェルプレートで、各ｓｉＲＮＡ二重鎖につき４ウェルごと、ウェルあたり５μｌのｓｉＲＮＡ二重鎖にウェルあたり５μｌのＯｐｔｉ－ＭＥＭおよび０．１μｌのリポフェクタミンＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州、カールスバッドカタログ番号１３７７８－１５０）を添加することによって、ＢＥ（２）－Ｃ（ＡＴＣＣ）をトランスフェクトし、室温で１５分間インキュベートした。次いで、ｓｉＲＮＡ混合物に約５×１０^３個の細胞を含有する４０μｌの最小必須培地およびＦ１２培地の１：１混合物（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を添加した。細胞を２４時間インキュベートした後にＲＮＡ精製を行った。ＢＥ（２）－Ｃ細胞における表３～８および１２～１３に列記されるｄｓＲＮＡ剤のスクリーニングの結果は、それぞれ表９～１１および表１４に示されている。表９に示されるスクリーン１では、４つの用量の実験を５０ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、および０．１ｎＭにおいて行った。表１０～１１に示されるスクリーン２～３では、３つの用量の実験を１０ｎＭ、１ｎＭ、および０．１ｎＭにおいて行った。表１４に示されるスクリーン４では、２つの用量の実験を１０ｎＭおよび０．１ｎＭにおいて行った。ＢＥ（２）－Ｃ細胞における表１６～２３に列記されるスクリーン５～８でのｄｓＲＮＡ剤のスクリーニングの結果は表２４に示されている。スクリーン５～８では、３つの用量の実験を１０ｎＭ、１ｎＭ、および０．１ｎＭにおいて行った。

３８４ウェルプレートで、各ｓｉＲＮＡ二重鎖につき４ウェルごと、ウェルあたり５μｌのｓｉＲＮＡ二重鎖にウェルあたり５μｌのＯｐｔｉ－ＭＥＭおよび０．１μｌのリポフェクタミンＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州、カールスバッドカタログ番号１３７７８－１５０）を添加することによって、Ｎｅｕｒｏ－２ａ（ＡＴＣＣ）をトランスフェクトし、室温で１５分間インキュベートした。次いで、ｓｉＲＮＡ混合物に約５×１０^３個の細胞を含有する４０μｌの最小必須培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を添加した。細胞を２４時間インキュベートした後にＲＮＡ精製を行った。Ｎｅｕｒｏ－２ａ（マウス）細胞における表１２～１３に列記されるｄｓＲＮＡ剤のスクリーニングの結果は表１５に示されている。表１５に示されるスクリーン４では、２つの用量の実験を１０ｎＭおよび０．１ｎＭにおいて行った。

ｉｉ．ＤＹＮＡＢＥＡＤＳｍＲＮＡ単離キットを使用する総ＲＮＡ単離
ＤＹＮＡＢＥＡＤ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号６１０１２）を使用するＢｉｏＴｅｋ－ＥＬ４０６プラットフォームで自動化プロトコールを使用してＲＮＡを単離した。手短には、細胞を有するプレートに、７０μＬの溶解／結合バッファーおよび３μＬの磁性ビーズを含有する１０μＬの溶解バッファーを添加した。プレートを、電磁シェーカー上で室温で１０分間インキュベートし、次いで、磁性ビーズを捕捉し、上清を除去した。次いで、ビーズが結合しているＲＮＡを、１５０μＬの洗浄バッファーＡを用いて２回および洗浄バッファーＢを用いて１回洗浄した。次いで、１５０μＬの溶出バッファーを用いてビーズを洗浄し、再捕捉し、上清を除去した。

ｉｉｉＡＢＩ大容量ｃＤＮＡ逆転写キット（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カリフォルニア州、フォスターシティ、カタログ番号４３６８８１３）を使用するｃＤＮＡ合成
上記で単離されたＲＮＡに、反応あたり１μＬの１０×バッファー、０．４μＬの２５× ｄＮＴＰ、１μＬの１０×ランダムプライマー、０．５μＬの逆転写酵素、０．５μＬのＲＮアーゼ阻害剤および６．６μＬのＨ_２Ｏを含有する１０μＬのマスターミックスを添加した。プレートを密閉し、混合し、電磁シェーカー上で室温で１０分間インキュベートし、続いて、３７℃で２時間インキュベートした。

ｉｖ．リアルタイムＰＣＲ
３８４ウェルプレート（Ｒｏｃｈｅカタログ番号０４８８７３０１００１）中のウェルあたり、２μｌのｃＤＮＡおよび５μｌのＬｉｇｈｔｃｙｃｌｅｒ４８０ｐｒｏｂｅｍａｓｔｅｒｍｉｘ（Ｒｏｃｈｅカタログ番号０４８８７３０１００１）を、０．５μｌのＨｕｍａｎＧＡＰＤＨＴａｑＭａｎＰｒｏｂｅ（４３２６３１７Ｅ）および０．５μｌのｈｕｍａｎＭＡＰＴｐｒｏｂｅ（ｈｓ００９０２１９４＿ｍ１、Ｔｈｅｒｍｏ）または０．５μｌのＭｏｕｓｅＧＡＰＤＨＴａｑＭａｎＰｒｏｂｅ（４３５２３３９Ｅ）および０．５μｌのｍｏｕｓｅＭＡＰＴｐｒｏｂｅ（Ｍｍ００５２１９８８＿ｍ１、Ｔｈｅｒｍｏ）のいずれかに添加した。リアルタイムＰＣＲをＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ４８０ＲｅａｌＴｉｍｅＰＣＲｓｙｓｔｅｍ（Ｒｏｃｈｅ）において行った。各二重鎖を少なくとも２回試験し、非標的化対照ｓｉＲＮＡをトランスフェクトされた細胞に対してデータを正規化した。相対変化倍数を算出するために、ΔΔＣｔ法を使用してリアルタイムデータを分析し、非標的化対照ｓｉＲＮＡでトランスフェクトされた細胞を用いて実施されたアッセイに対して正規化した。

表2. 核酸配列表現において使用されるヌクレオチドモノマーの略称。これらのモノマーは、オリゴヌクレオチド中に存在する場合、5'-3'-ホスホジエステル結合により互いに連結されることが理解されるであろう。また、ヌクレオチドが2'-フルオロ修飾を含む場合、次いでフルオロが、親ヌクレオチドの当該位置におけるヒドロキシに取って換わっていることが理解される(すなわち、ヌクレオチドは、2'-デオキシ-2'-フルオロヌクレオチドである)。

表3. MAPT dsRNA剤の未修飾センスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン1

表4. MAPT dsRNA剤の未修飾センスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン2

表5. MAPT dsRNA剤の未修飾センスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン3

表6. MAPT dsRNA剤の修飾されたセンスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン1

表7. MAPT dsRNA剤の修飾されたセンスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン2

表8. MAPT dsRNAの修飾されたセンスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン3

表9. BE(2)C細胞におけるMAPT単回用量スクリーン-スクリーン1

表10. BE(2)C細胞におけるMAPT単回用量スクリーン-スクリーン2

表11. BE(2)C細胞におけるMAPT単回用量スクリーン-スクリーン3

表12. MAPT dsRNA剤の未修飾センスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン4

表13. MAPT dsRNA剤の修飾されたセンスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン4

表14. BE(2)C (ヒト)細胞におけるMAPT単回用量スクリーン-スクリーン4

表15. NEuro2a (マウス)細胞におけるMAPT単回用量スクリーン-スクリーン4

表16. MAPT dsRNA剤の未修飾センスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン5

表17. MAPT dsRNA剤の修飾されたセンスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン5

表18. MAPT dsRNA剤の未修飾センスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン6

表19. MAPT dsRNA剤の修飾されたセンスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン6

表20. MAPT dsRNA剤の未修飾センスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン7

表21. MAPT dsRNA剤の修飾されたセンスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン7

表22. MAPT dsRNA剤の未修飾センスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン8

表23. MAPT dsRNA剤の修飾されたセンスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン8

表24. BE(2)C細胞におけるMAPT単回用量スクリーン-スクリーン5～8

表25. MAPT dsRNA剤の未修飾センスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン9

表26. MAPT dsRNA剤の修飾されたセンスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン9

表27. MAPT dsRNA剤の未修飾センスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン10

表28. MAPT dsRNA剤の修飾されたセンスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン10

［実施例２］

トランスジェニックマウスにおけるインビボ（ｉｎｖｉｖｏ）評価
この実施例は、ヒトＭＡＰＴＲＮＡを発現するトランスジェニックマウスにおけるＭＡＰＴＲＮＡｉ剤のインビボ評価の方法を記載する。

実施例１において設計およびアッセイされた選択されたｄｓＲＮＡ剤の能力を、ヒトＭＡＰＴＲＮＡを発現するマウスにおいてセンス含有凝集体またはアンチセンス含有凝集体の両方のレベルを低減させる能力について評価する。

簡潔に述べれば、上記のインビトロ研究から特定され、表２～７および１１～１２に示される目的の二重鎖を、インビボにおいて評価した。詳細には、投与１４日前に、野生型の８週齢雌マウス（Ｃ５７ＢＬ／６）に、ヒトＭＡＰＴ遺伝子の一部を発現するＡＡＶの２×１０^１０ゲノムコピーを後眼窩に投与することによって形質導入した。詳細には、ＮＭ＿０１６８４１．４のヒトＭＡＰＴ遺伝子コード配列の一部（３２３～１６４８）および３’ＵＴＲ（４４７３～５８１１）の部分をコードするＡＡＶをマウスに投与し、そこでクローニングした。

２週後および０日目に、マウスに、３ｍｇ／Ｋｇの目的のｄｓＲＮＡ剤のうちの１つまたはＰＢＳ対照の単回用量を皮下投与する。投与する二重鎖は、ＡＤ－３９３７５２、ＡＤ－３９６４２０、ＡＤ－３９６４２５、ＡＤ－３９３２３９、ＡＤ－３９７１６７、ＡＤ－５２３５６１、ＡＤ－５２３５６５、ＡＤ－５２３５６２、およびＡＤ－５３５０９４から選択する。二重鎖投与の２週後および１４日目に、動物を屠殺し、肝臓試料を収集し、液体窒素中で瞬間凍結した。組織ｍＲＮＡを抽出し、ヒトＭＡＰＴ発現についてＲＴ－ＱＰＣＲ法により分析した。

ヒトＭＡＰＴｍＲＮＡレベルを、ハウスキーピング遺伝子ＧＡＰＤＨと比較した。次いで、ＰＢＳ媒体対照群の平均に対して値を正規化した。データを、ベースライン値のパーセントとして表し、平均値および標準偏差として示した。表２９に列記し、図１に示した結果は、試験された例示的な二重鎖薬剤が、インビボにおいてヒトＭＡＰＴｍＲＮＡのレベルを効果的に低減させることを実証している。

表29.

［実施例３］

マウスにおけるＭＡＰＴｍＲＮＡ抑制のインビボ評価
この実施例は、ヒトＭＡＰＴＲＮＡを発現するトランスジェニックマウスにおけるＭＡＰＴＲＮＡｉ剤のインビボ評価の方法を記載する。

実施例１の表２５～２６において設計およびアッセイされた選択されたｄｓＲＮＡ剤の能力を、ヒトＭＡＰＴＲＮＡを発現するマウスにおけるセンス含有凝集体またはアンチセンス含有凝集体の両方のレベルを低減させる能力について評価する。

簡潔に述べれば、上記のインビトロ研究から特定され、表２５～２６に示された目的の二重鎖を、インビボにおいて評価した。詳細には、第１の研究には、投与前日にヒトＭＡＰＴ遺伝子の一部を発現するＡＡＶの２×１０^１０ゲノムコピーを後眼窩に投与することによって形質導入された野生型６～８週齢雌マウス（Ｃ５７ＢＬ／６）７２匹が含まれた。第２の研究には、投与前日にヒトＭＡＰＴ遺伝子の一部を発現するＡＡＶの２×１０^１０ゲノムコピーを後眼窩に投与することによって形質導入された野生型６～８週齢雌マウス（Ｃ５７ＢＬ／６）６０匹が含まれた。第１および第２の研究の両方において、ＮＭ＿００５９１０のヒトＭＡＰＴ遺伝子コード配列の一部をコードするＡＡＶをマウスに投与し、そこでクローニングした。

２週後および０日目に、１群当たり３匹の１６群に分けた第１の研究の４８匹のマウスに、３ｍｇ／Ｋｇの目的のｄｓＲＮＡ剤のうちの１つまたはＰＢＳ対照の単回用量を皮下投与した。投与する二重鎖は、ＡＤ－３９７１６７．１、ＡＤ－５２３５６５．１、ＡＤ－１３９７０７２．３、ＡＤ－１３９７０７３．３、ＡＤ－１３９７０７６．３、ＡＤ－１３９７０７７．３、ＡＤ－１３９７０７８．３、ＡＤ－１３９７２５２．２、ＡＤ－１３９７２５７．２、ＡＤ－１３９７２５８．２、ＡＤ－１３９７２５９．２、ＡＤ－１３９７２６３．２、ＡＤ－１３９７２６４．２、ＡＤ－１３９７３０９．２、およびＡＤ－６４９５８．１１４から選択する。同様に、０日目に、１群当たり３匹の１８群に分けた第２の研究の５４匹のマウスに、３ｍｇ／Ｋｇの目的のｄｓＲＮＡ剤のうちの１つまたはＰＢＳ対照の単回用量を皮下投与した。投与する二重鎖は、ＡＤ－３９７１６７．１、ＡＤ－３９３７５８．４、ＡＤ－１３９７０８０．３、ＡＤ－１３９７２９３．２、ＡＤ－１３９７２９４．２、ＡＤ－１３９７０８１．３、ＡＤ－１３９７０８３．３、ＡＤ－１３９７２９８．２、ＡＤ－１３９７２９９．２、ＡＤ－１３９７０８４．２、ＡＤ－１３９７０８５．２、ＡＤ－１３９７０８７．３、ＡＤ－１３９７３０６．２、ＡＤ－１３９７３０７．２、ＡＤ－１３９７３０８．２、およびＡＤ－１３９７０８８．２から選択する。二重鎖投与の２週後および１４日目に、両方の研究の動物を屠殺し、肝臓試料を収集し、液体窒素中で瞬間凍結した。組織ｍＲＮＡを抽出し、ヒトＭＡＰＴ発現についてＲＴ－ＱＰＣＲ法により分析した。

ヒトＭＡＰＴｍＲＮＡレベルを、ハウスキーピング遺伝子ＧＡＰＤＨと比較し、対応するＰＢＳ媒体対照群におけるレベルの平均に対して正規化した。データは、ベースライン値のパーセントとして表し、平均値および標準偏差として示した。結果は、それぞれ表２９および３０に列記し、それぞれ図２および３に示した。結果は、選択された試験された例示的な二重鎖薬剤がインビボにおいてヒトＭＡＰＴｍＲＮＡのレベルを効果的に低減させることを実証している。

表29.

表30.

均等物
当業者であれば、本明細書において説明される特定の実施形態および方法に対する多くの均等物を認識し、または日常的な実験法だけを使用して確かめることができるであろう。そのような均等物は、以下の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。

ＭＡＰＴ配列
配列番号１
＞ＮＭ＿０１６８４１．４ヒト微小管関連タンパク質タウ（ＭＡＰＴ）、転写物変異体４、ｍＲＮＡ
GGACGGCCGAGCGGCAGGGCGCTCGCGCGCGCCCACTAGTGGCCGGAGGAGAAGGCTCCCGCGGAGGCCG
CGCTGCCCGCCCCCTCCCCTGGGGAGGCTCGCGTTCCCGCTGCTCGCGCCTGCGCCGCCCGCCGGCCTCA
GGAACGCGCCCTCTTCGCCGGCGCGCGCCCTCGCAGTCACCGCCACCCACCAGCTCCGGCACCAACAGCA
GCGCCGCTGCCACCGCCCACCTTCTGCCGCCGCCACCACAGCCACCTTCTCCTCCTCCGCTGTCCTCTCC
CGTCCTCGCCTCTGTCGACTATCAGGTGAACTTTGAACCAGGATGGCTGAGCCCCGCCAGGAGTTCGAAG
TGATGGAAGATCACGCTGGGACGTACGGGTTGGGGGACAGGAAAGATCAGGGGGGCTACACCATGCACCA
AGACCAAGAGGGTGACACGGACGCTGGCCTGAAAGCTGAAGAAGCAGGCATTGGAGACACCCCCAGCCTG
GAAGACGAAGCTGCTGGTCACGTGACCCAAGCTCGCATGGTCAGTAAAAGCAAAGACGGGACTGGAAGCG
ATGACAAAAAAGCCAAGGGGGCTGATGGTAAAACGAAGATCGCCACACCGCGGGGAGCAGCCCCTCCAGG
CCAGAAGGGCCAGGCCAACGCCACCAGGATTCCAGCAAAAACCCCGCCCGCTCCAAAGACACCACCCAGC
TCTGGTGAACCTCCAAAATCAGGGGATCGCAGCGGCTACAGCAGCCCCGGCTCCCCAGGCACTCCCGGCA
GCCGCTCCCGCACCCCGTCCCTTCCAACCCCACCCACCCGGGAGCCCAAGAAGGTGGCAGTGGTCCGTAC
TCCACCCAAGTCGCCGTCTTCCGCCAAGAGCCGCCTGCAGACAGCCCCCGTGCCCATGCCAGACCTGAAG
AATGTCAAGTCCAAGATCGGCTCCACTGAGAACCTGAAGCACCAGCCGGGAGGCGGGAAGGTGCAAATAG
TCTACAAACCAGTTGACCTGAGCAAGGTGACCTCCAAGTGTGGCTCATTAGGCAACATCCATCATAAACC
AGGAGGTGGCCAGGTGGAAGTAAAATCTGAGAAGCTTGACTTCAAGGACAGAGTCCAGTCGAAGATTGGG
TCCCTGGACAATATCACCCACGTCCCTGGCGGAGGAAATAAAAAGATTGAAACCCACAAGCTGACCTTCC
GCGAGAACGCCAAAGCCAAGACAGACCACGGGGCGGAGATCGTGTACAAGTCGCCAGTGGTGTCTGGGGA
CACGTCTCCACGGCATCTCAGCAATGTCTCCTCCACCGGCAGCATCGACATGGTAGACTCGCCCCAGCTC
GCCACGCTAGCTGACGAGGTGTCTGCCTCCCTGGCCAAGCAGGGTTTGTGATCAGGCCCCTGGGGCGGTC
AATAATTGTGGAGAGGAGAGAATGAGAGAGTGTGGAAAAAAAAAGAATAATGACCCGGCCCCCGCCCTCT
GCCCCCAGCTGCTCCTCGCAGTTCGGTTAATTGGTTAATCACTTAACCTGCTTTTGTCACTCGGCTTTGG
CTCGGGACTTCAAAATCAGTGATGGGAGTAAGAGCAAATTTCATCTTTCCAAATTGATGGGTGGGCTAGT
AATAAAATATTTAAAAAAAAACATTCAAAAACATGGCCACATCCAACATTTCCTCAGGCAATTCCTTTTG
ATTCTTTTTTCTTCCCCCTCCATGTAGAAGAGGGAGAAGGAGAGGCTCTGAAAGCTGCTTCTGGGGGATT
TCAAGGGACTGGGGGTGCCAACCACCTCTGGCCCTGTTGTGGGGGTGTCACAGAGGCAGTGGCAGCAACA
AAGGATTTGAAACTTGGTGTGTTCGTGGAGCCACAGGCAGACGATGTCAACCTTGTGTGAGTGTGACGGG
GGTTGGGGTGGGGCGGGAGGCCACGGGGGAGGCCGAGGCAGGGGCTGGGCAGAGGGGAGAGGAAGCACAA
GAAGTGGGAGTGGGAGAGGAAGCCACGTGCTGGAGAGTAGACATCCCCCTCCTTGCCGCTGGGAGAGCCA
AGGCCTATGCCACCTGCAGCGTCTGAGCGGCCGCCTGTCCTTGGTGGCCGGGGGTGGGGGCCTGCTGTGG
GTCAGTGTGCCACCCTCTGCAGGGCAGCCTGTGGGAGAAGGGACAGCGGGTAAAAAGAGAAGGCAAGCTG
GCAGGAGGGTGGCACTTCGTGGATGACCTCCTTAGAAAAGACTGACCTTGATGTCTTGAGAGCGCTGGCC
TCTTCCTCCCTCCCTGCAGGGTAGGGGGCCTGAGTTGAGGGGCTTCCCTCTGCTCCACAGAAACCCTGTT
TTATTGAGTTCTGAAGGTTGGAACTGCTGCCATGATTTTGGCCACTTTGCAGACCTGGGACTTTAGGGCT
AACCAGTTCTCTTTGTAAGGACTTGTGCCTCTTGGGAGACGTCCACCCGTTTCCAAGCCTGGGCCACTGG
CATCTCTGGAGTGTGTGGGGGTCTGGGAGGCAGGTCCCGAGCCCCCTGTCCTTCCCACGGCCACTGCAGT
CACCCCGTCTGCGCCGCTGTGCTGTTGTCTGCCGTGAGAGCCCAATCACTGCCTATACCCCTCATCACAC
GTCACAATGTCCCGAATTCCCAGCCTCACCACCCCTTCTCAGTAATGACCCTGGTTGGTTGCAGGAGGTA
CCTACTCCATACTGAGGGTGAAATTAAGGGAAGGCAAAGTCCAGGCACAAGAGTGGGACCCCAGCCTCTC
ACTCTCAGTTCCACTCATCCAACTGGGACCCTCACCACGAATCTCATGATCTGATTCGGTTCCCTGTCTC
CTCCTCCCGTCACAGATGTGAGCCAGGGCACTGCTCAGCTGTGACCCTAGGTGTTTCTGCCTTGTTGACA
TGGAGAGAGCCCTTTCCCCTGAGAAGGCCTGGCCCCTTCCTGTGCTGAGCCCACAGCAGCAGGCTGGGTG
TCTTGGTTGTCAGTGGTGGCACCAGGATGGAAGGGCAAGGCACCCAGGGCAGGCCCACAGTCCCGCTGTC
CCCCACTTGCACCCTAGCTTGTAGCTGCCAACCTCCCAGACAGCCCAGCCCGCTGCTCAGCTCCACATGC
ATAGTATCAGCCCTCCACACCCGACAAAGGGGAACACACCCCCTTGGAAATGGTTCTTTTCCCCCAGTCC
CAGCTGGAAGCCATGCTGTCTGTTCTGCTGGAGCAGCTGAACATATACATAGATGTTGCCCTGCCCTCCC
CATCTGCACCCTGTTGAGTTGTAGTTGGATTTGTCTGTTTATGCTTGGATTCACCAGAGTGACTATGATA
GTGAAAAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAGGACGCATGTATCTTGAAATGCTTGTAAAGAGGTTTCTAACCCA
CCCTCACGAGGTGTCTCTCACCCCCACACTGGGACTCGTGTGGCCTGTGTGGTGCCACCCTGCTGGGGCC
TCCCAAGTTTTGAAAGGCTTTCCTCAGCACCTGGGACCCAACAGAGACCAGCTTCTAGCAGCTAAGGAGG
CCGTTCAGCTGTGACGAAGGCCTGAAGCACAGGATTAGGACTGAAGCGATGATGTCCCCTTCCCTACTTC
CCCTTGGGGCTCCCTGTGTCAGGGCACAGACTAGGTCTTGTGGCTGGTCTGGCTTGCGGCGCGAGGATGG
TTCTCTCTGGTCATAGCCCGAAGTCTCATGGCAGTCCCAAAGGAGGCTTACAACTCCTGCATCACAAGAA
AAAGGAAGCCACTGCCAGCTGGGGGGATCTGCAGCTCCCAGAAGCTCCGTGAGCCTCAGCCACCCCTCAG
ACTGGGTTCCTCTCCAAGCTCGCCCTCTGGAGGGGCAGCGCAGCCTCCCACCAAGGGCCCTGCGACCACA
GCAGGGATTGGGATGAATTGCCTGTCCTGGATCTGCTCTAGAGGCCCAAGCTGCCTGCCTGAGGAAGGAT
GACTTGACAAGTCAGGAGACACTGTTCCCAAAGCCTTGACCAGAGCACCTCAGCCCGCTGACCTTGCACA
AACTCCATCTGCTGCCATGAGAAAAGGGAAGCCGCCTTTGCAAAACATTGCTGCCTAAAGAAACTCAGCA
GCCTCAGGCCCAATTCTGCCACTTCTGGTTTGGGTACAGTTAAAGGCAACCCTGAGGGACTTGGCAGTAG
AAATCCAGGGCCTCCCCTGGGGCTGGCAGCTTCGTGTGCAGCTAGAGCTTTACCTGAAAGGAAGTCTCTG
GGCCCAGAACTCTCCACCAAGAGCCTCCCTGCCGTTCGCTGAGTCCCAGCAATTCTCCTAAGTTGAAGGG
ATCTGAGAAGGAGAAGGAAATGTGGGGTAGATTTGGTGGTGGTTAGAGATATGCCCCCCTCATTACTGCC
AACAGTTTCGGCTGCATTTCTTCACGCACCTCGGTTCCTCTTCCTGAAGTTCTTGTGCCCTGCTCTTCAG
CACCATGGGCCTTCTTATACGGAAGGCTCTGGGATCTCCCCCTTGTGGGGCAGGCTCTTGGGGCCAGCCT
AAGATCATGGTTTAGGGTGATCAGTGCTGGCAGATAAATTGAAAAGGCACGCTGGCTTGTGATCTTAAAT
GAGGACAATCCCCCCAGGGCTGGGCACTCCTCCCCTCCCCTCACTTCTCCCACCTGCAGAGCCAGTGTCC
TTGGGTGGGCTAGATAGGATATACTGTATGCCGGCTCCTTCAAGCTGCTGACTCACTTTATCAATAGTTC
CATTTAAATTGACTTCAGTGGTGAGACTGTATCCTGTTTGCTATTGCTTGTTGTGCTATGGGGGGAGGGG
GGAGGAATGTGTAAGATAGTTAACATGGGCAAAGGGAGATCTTGGGGTGCAGCACTTAAACTGCCTCGTA
ACCCTTTTCATGATTTCAACCACATTTGCTAGAGGGAGGGAGCAGCCACGGAGTTAGAGGCCCTTGGGGT
TTCTCTTTTCCACTGACAGGCTTTCCCAGGCAGCTGGCTAGTTCATTCCCTCCCCAGCCAGGTGCAGGCG
TAGGAATATGGACATCTGGTTGCTTTGGCCTGCTGCCCTCTTTCAGGGGTCCTAAGCCCACAATCATGCC
TCCCTAAGACCTTGGCATCCTTCCCTCTAAGCCGTTGGCACCTCTGTGCCACCTCTCACACTGGCTCCAG
ACACACAGCCTGTGCTTTTGGAGCTGAGATCACTCGCTTCACCCTCCTCATCTTTGTTCTCCAAGTAAAG
CCACGAGGTCGGGGCGAGGGCAGAGGTGATCACCTGCGTGTCCCATCTACAGACCTGCAGCTTCATAAAA
CTTCTGATTTCTCTTCAGCTTTGAAAAGGGTTACCCTGGGCACTGGCCTAGAGCCTCACCTCCTAATAGA
CTTAGCCCCATGAGTTTGCCATGTTGAGCAGGACTATTTCTGGCACTTGCAAGTCCCATGATTTCTTCGG
TAATTCTGAGGGTGGGGGGAGGGACATGAAATCATCTTAGCTTAGCTTTCTGTCTGTGAATGTCTATATA
GTGTATTGTGTGTTTTAACAAATGATTTACACTGACTGTTGCTGTAAAAGTGAATTTGGAAATAAAGTTA
TTACTCTGATTAAA
配列番号２
＞配列番号１の逆相補物
TTTAATCAGAGTAATAACTTTATTTCCAAATTCACTTTTACAGCAACAGTCAGTGTAAATCATTTGTTAAAACACACAATACACTATATAGACATTCACAGACAGAAAGCTAAGCTAAGATGATTTCATGTCCCTCCCCCCACCCTCAGAATTACCGAAGAAATCATGGGACTTGCAAGTGCCAGAAATAGTCCTGCTCAACATGGCAAACTCATGGGGCTAAG
TCTATTAGGAGGTGAGGCTCTAGGCCAGTGCCCAGGGTAACCCTTTTCAAAGCTGAAGAGAAATCAGAAG
TTTTATGAAGCTGCAGGTCTGTAGATGGGACACGCAGGTGATCACCTCTGCCCTCGCCCCGACCTCGTGG
CTTTACTTGGAGAACAAAGATGAGGAGGGTGAAGCGAGTGATCTCAGCTCCAAAAGCACAGGCTGTGTGT
CTGGAGCCAGTGTGAGAGGTGGCACAGAGGTGCCAACGGCTTAGAGGGAAGGATGCCAAGGTCTTAGGGA
GGCATGATTGTGGGCTTAGGACCCCTGAAAGAGGGCAGCAGGCCAAAGCAACCAGATGTCCATATTCCTA
CGCCTGCACCTGGCTGGGGAGGGAATGAACTAGCCAGCTGCCTGGGAAAGCCTGTCAGTGGAAAAGAGAA
ACCCCAAGGGCCTCTAACTCCGTGGCTGCTCCCTCCCTCTAGCAAATGTGGTTGAAATCATGAAAAGGGT
TACGAGGCAGTTTAAGTGCTGCACCCCAAGATCTCCCTTTGCCCATGTTAACTATCTTACACATTCCTCC
CCCCTCCCCCCATAGCACAACAAGCAATAGCAAACAGGATACAGTCTCACCACTGAAGTCAATTTAAATG
GAACTATTGATAAAGTGAGTCAGCAGCTTGAAGGAGCCGGCATACAGTATATCCTATCTAGCCCACCCAA
GGACACTGGCTCTGCAGGTGGGAGAAGTGAGGGGAGGGGAGGAGTGCCCAGCCCTGGGGGGATTGTCCTC
ATTTAAGATCACAAGCCAGCGTGCCTTTTCAATTTATCTGCCAGCACTGATCACCCTAAACCATGATCTT
AGGCTGGCCCCAAGAGCCTGCCCCACAAGGGGGAGATCCCAGAGCCTTCCGTATAAGAAGGCCCATGGTG
CTGAAGAGCAGGGCACAAGAACTTCAGGAAGAGGAACCGAGGTGCGTGAAGAAATGCAGCCGAAACTGTT
GGCAGTAATGAGGGGGGCATATCTCTAACCACCACCAAATCTACCCCACATTTCCTTCTCCTTCTCAGAT
CCCTTCAACTTAGGAGAATTGCTGGGACTCAGCGAACGGCAGGGAGGCTCTTGGTGGAGAGTTCTGGGCC
CAGAGACTTCCTTTCAGGTAAAGCTCTAGCTGCACACGAAGCTGCCAGCCCCAGGGGAGGCCCTGGATTT
CTACTGCCAAGTCCCTCAGGGTTGCCTTTAACTGTACCCAAACCAGAAGTGGCAGAATTGGGCCTGAGGC
TGCTGAGTTTCTTTAGGCAGCAATGTTTTGCAAAGGCGGCTTCCCTTTTCTCATGGCAGCAGATGGAGTT
TGTGCAAGGTCAGCGGGCTGAGGTGCTCTGGTCAAGGCTTTGGGAACAGTGTCTCCTGACTTGTCAAGTC
ATCCTTCCTCAGGCAGGCAGCTTGGGCCTCTAGAGCAGATCCAGGACAGGCAATTCATCCCAATCCCTGC
TGTGGTCGCAGGGCCCTTGGTGGGAGGCTGCGCTGCCCCTCCAGAGGGCGAGCTTGGAGAGGAACCCAGT
CTGAGGGGTGGCTGAGGCTCACGGAGCTTCTGGGAGCTGCAGATCCCCCCAGCTGGCAGTGGCTTCCTTT
TTCTTGTGATGCAGGAGTTGTAAGCCTCCTTTGGGACTGCCATGAGACTTCGGGCTATGACCAGAGAGAA
CCATCCTCGCGCCGCAAGCCAGACCAGCCACAAGACCTAGTCTGTGCCCTGACACAGGGAGCCCCAAGGG
GAAGTAGGGAAGGGGACATCATCGCTTCAGTCCTAATCCTGTGCTTCAGGCCTTCGTCACAGCTGAACGG
CCTCCTTAGCTGCTAGAAGCTGGTCTCTGTTGGGTCCCAGGTGCTGAGGAAAGCCTTTCAAAACTTGGGA
GGCCCCAGCAGGGTGGCACCACACAGGCCACACGAGTCCCAGTGTGGGGGTGAGAGACACCTCGTGAGGG
TGGGTTAGAAACCTCTTTACAAGCATTTCAAGATACATGCGTCCTTTTTTTTTTTTTTTTTTCTTTTCAC
TATCATAGTCACTCTGGTGAATCCAAGCATAAACAGACAAATCCAACTACAACTCAACAGGGTGCAGATG
GGGAGGGCAGGGCAACATCTATGTATATGTTCAGCTGCTCCAGCAGAACAGACAGCATGGCTTCCAGCTG
GGACTGGGGGAAAAGAACCATTTCCAAGGGGGTGTGTTCCCCTTTGTCGGGTGTGGAGGGCTGATACTAT
GCATGTGGAGCTGAGCAGCGGGCTGGGCTGTCTGGGAGGTTGGCAGCTACAAGCTAGGGTGCAAGTGGGG
GACAGCGGGACTGTGGGCCTGCCCTGGGTGCCTTGCCCTTCCATCCTGGTGCCACCACTGACAACCAAGA
CACCCAGCCTGCTGCTGTGGGCTCAGCACAGGAAGGGGCCAGGCCTTCTCAGGGGAAAGGGCTCTCTCCA
TGTCAACAAGGCAGAAACACCTAGGGTCACAGCTGAGCAGTGCCCTGGCTCACATCTGTGACGGGAGGAG
GAGACAGGGAACCGAATCAGATCATGAGATTCGTGGTGAGGGTCCCAGTTGGATGAGTGGAACTGAGAGT
GAGAGGCTGGGGTCCCACTCTTGTGCCTGGACTTTGCCTTCCCTTAATTTCACCCTCAGTATGGAGTAGG
TACCTCCTGCAACCAACCAGGGTCATTACTGAGAAGGGGTGGTGAGGCTGGGAATTCGGGACATTGTGAC
GTGTGATGAGGGGTATAGGCAGTGATTGGGCTCTCACGGCAGACAACAGCACAGCGGCGCAGACGGGGTG
ACTGCAGTGGCCGTGGGAAGGACAGGGGGCTCGGGACCTGCCTCCCAGACCCCCACACACTCCAGAGATG
CCAGTGGCCCAGGCTTGGAAACGGGTGGACGTCTCCCAAGAGGCACAAGTCCTTACAAAGAGAACTGGTT
AGCCCTAAAGTCCCAGGTCTGCAAAGTGGCCAAAATCATGGCAGCAGTTCCAACCTTCAGAACTCAATAA
AACAGGGTTTCTGTGGAGCAGAGGGAAGCCCCTCAACTCAGGCCCCCTACCCTGCAGGGAGGGAGGAAGA
GGCCAGCGCTCTCAAGACATCAAGGTCAGTCTTTTCTAAGGAGGTCATCCACGAAGTGCCACCCTCCTGC
CAGCTTGCCTTCTCTTTTTACCCGCTGTCCCTTCTCCCACAGGCTGCCCTGCAGAGGGTGGCACACTGAC
CCACAGCAGGCCCCCACCCCCGGCCACCAAGGACAGGCGGCCGCTCAGACGCTGCAGGTGGCATAGGCCT
TGGCTCTCCCAGCGGCAAGGAGGGGGATGTCTACTCTCCAGCACGTGGCTTCCTCTCCCACTCCCACTTC
TTGTGCTTCCTCTCCCCTCTGCCCAGCCCCTGCCTCGGCCTCCCCCGTGGCCTCCCGCCCCACCCCAACC
CCCGTCACACTCACACAAGGTTGACATCGTCTGCCTGTGGCTCCACGAACACACCAAGTTTCAAATCCTT
TGTTGCTGCCACTGCCTCTGTGACACCCCCACAACAGGGCCAGAGGTGGTTGGCACCCCCAGTCCCTTGA
AATCCCCCAGAAGCAGCTTTCAGAGCCTCTCCTTCTCCCTCTTCTACATGGAGGGGGAAGAAAAAAGAAT
CAAAAGGAATTGCCTGAGGAAATGTTGGATGTGGCCATGTTTTTGAATGTTTTTTTTTAAATATTTTATT
ACTAGCCCACCCATCAATTTGGAAAGATGAAATTTGCTCTTACTCCCATCACTGATTTTGAAGTCCCGAG
CCAAAGCCGAGTGACAAAAGCAGGTTAAGTGATTAACCAATTAACCGAACTGCGAGGAGCAGCTGGGGGC
AGAGGGCGGGGGCCGGGTCATTATTCTTTTTTTTTCCACACTCTCTCATTCTCTCCTCTCCACAATTATT
GACCGCCCCAGGGGCCTGATCACAAACCCTGCTTGGCCAGGGAGGCAGACACCTCGTCAGCTAGCGTGGC
GAGCTGGGGCGAGTCTACCATGTCGATGCTGCCGGTGGAGGAGACATTGCTGAGATGCCGTGGAGACGTG
TCCCCAGACACCACTGGCGACTTGTACACGATCTCCGCCCCGTGGTCTGTCTTGGCTTTGGCGTTCTCGC
GGAAGGTCAGCTTGTGGGTTTCAATCTTTTTATTTCCTCCGCCAGGGACGTGGGTGATATTGTCCAGGGA
CCCAATCTTCGACTGGACTCTGTCCTTGAAGTCAAGCTTCTCAGATTTTACTTCCACCTGGCCACCTCCT
GGTTTATGATGGATGTTGCCTAATGAGCCACACTTGGAGGTCACCTTGCTCAGGTCAACTGGTTTGTAGA
CTATTTGCACCTTCCCGCCTCCCGGCTGGTGCTTCAGGTTCTCAGTGGAGCCGATCTTGGACTTGACATT
CTTCAGGTCTGGCATGGGCACGGGGGCTGTCTGCAGGCGGCTCTTGGCGGAAGACGGCGACTTGGGTGGA
GTACGGACCACTGCCACCTTCTTGGGCTCCCGGGTGGGTGGGGTTGGAAGGGACGGGGTGCGGGAGCGGC
TGCCGGGAGTGCCTGGGGAGCCGGGGCTGCTGTAGCCGCTGCGATCCCCTGATTTTGGAGGTTCACCAGA
GCTGGGTGGTGTCTTTGGAGCGGGCGGGGTTTTTGCTGGAATCCTGGTGGCGTTGGCCTGGCCCTTCTGG
CCTGGAGGGGCTGCTCCCCGCGGTGTGGCGATCTTCGTTTTACCATCAGCCCCCTTGGCTTTTTTGTCAT
CGCTTCCAGTCCCGTCTTTGCTTTTACTGACCATGCGAGCTTGGGTCACGTGACCAGCAGCTTCGTCTTC
CAGGCTGGGGGTGTCTCCAATGCCTGCTTCTTCAGCTTTCAGGCCAGCGTCCGTGTCACCCTCTTGGTCT
TGGTGCATGGTGTAGCCCCCCTGATCTTTCCTGTCCCCCAACCCGTACGTCCCAGCGTGATCTTCCATCA
CTTCGAACTCCTGGCGGGGCTCAGCCATCCTGGTTCAAAGTTCACCTGATAGTCGACAGAGGCGAGGACG
GGAGAGGACAGCGGAGGAGGAGAAGGTGGCTGTGGTGGCGGCGGCAGAAGGTGGGCGGTGGCAGCGGCGC
TGCTGTTGGTGCCGGAGCTGGTGGGTGGCGGTGACTGCGAGGGCGCGCGCCGGCGAAGAGGGCGCGTTCC
TGAGGCCGGCGGGCGGCGCAGGCGCGAGCAGCGGGAACGCGAGCCTCCCCAGGGGAGGGGGCGGGCAGCG
CGGCCTCCGCGGGAGCCTTCTCCTCCGGCCACTAGTGGGCGCGCGCGAGCGCCCTGCCGCTCGGCCGTCC
配列番号３
＞ＮＭ＿００５９１０．６ヒト微小管関連タンパク質タウ（ＭＡＰＴ）、転写物変異体２、ｍＲＮＡ
GGACGGCCGAGCGGCAGGGCGCTCGCGCGCGCCCACTAGTGGCCGGAGGAGAAGGCTCCCGCGGAGGCCG
CGCTGCCCGCCCCCTCCCCTGGGGAGGCTCGCGTTCCCGCTGCTCGCGCCTGCGCCGCCCGCCGGCCTCA
GGAACGCGCCCTCTTCGCCGGCGCGCGCCCTCGCAGTCACCGCCACCCACCAGCTCCGGCACCAACAGCA
GCGCCGCTGCCACCGCCCACCTTCTGCCGCCGCCACCACAGCCACCTTCTCCTCCTCCGCTGTCCTCTCC
CGTCCTCGCCTCTGTCGACTATCAGGTGAACTTTGAACCAGGATGGCTGAGCCCCGCCAGGAGTTCGAAG
TGATGGAAGATCACGCTGGGACGTACGGGTTGGGGGACAGGAAAGATCAGGGGGGCTACACCATGCACCA
AGACCAAGAGGGTGACACGGACGCTGGCCTGAAAGAATCTCCCCTGCAGACCCCCACTGAGGACGGATCT
GAGGAACCGGGCTCTGAAACCTCTGATGCTAAGAGCACTCCAACAGCGGAAGATGTGACAGCACCCTTAG
TGGATGAGGGAGCTCCCGGCAAGCAGGCTGCCGCGCAGCCCCACACGGAGATCCCAGAAGGAACCACAGC
TGAAGAAGCAGGCATTGGAGACACCCCCAGCCTGGAAGACGAAGCTGCTGGTCACGTGACCCAAGCTCGC
ATGGTCAGTAAAAGCAAAGACGGGACTGGAAGCGATGACAAAAAAGCCAAGGGGGCTGATGGTAAAACGA
AGATCGCCACACCGCGGGGAGCAGCCCCTCCAGGCCAGAAGGGCCAGGCCAACGCCACCAGGATTCCAGC
AAAAACCCCGCCCGCTCCAAAGACACCACCCAGCTCTGGTGAACCTCCAAAATCAGGGGATCGCAGCGGC
TACAGCAGCCCCGGCTCCCCAGGCACTCCCGGCAGCCGCTCCCGCACCCCGTCCCTTCCAACCCCACCCA
CCCGGGAGCCCAAGAAGGTGGCAGTGGTCCGTACTCCACCCAAGTCGCCGTCTTCCGCCAAGAGCCGCCT
GCAGACAGCCCCCGTGCCCATGCCAGACCTGAAGAATGTCAAGTCCAAGATCGGCTCCACTGAGAACCTG
AAGCACCAGCCGGGAGGCGGGAAGGTGCAGATAATTAATAAGAAGCTGGATCTTAGCAACGTCCAGTCCA
AGTGTGGCTCAAAGGATAATATCAAACACGTCCCGGGAGGCGGCAGTGTGCAAATAGTCTACAAACCAGT
TGACCTGAGCAAGGTGACCTCCAAGTGTGGCTCATTAGGCAACATCCATCATAAACCAGGAGGTGGCCAG
GTGGAAGTAAAATCTGAGAAGCTTGACTTCAAGGACAGAGTCCAGTCGAAGATTGGGTCCCTGGACAATA
TCACCCACGTCCCTGGCGGAGGAAATAAAAAGATTGAAACCCACAAGCTGACCTTCCGCGAGAACGCCAA
AGCCAAGACAGACCACGGGGCGGAGATCGTGTACAAGTCGCCAGTGGTGTCTGGGGACACGTCTCCACGG
CATCTCAGCAATGTCTCCTCCACCGGCAGCATCGACATGGTAGACTCGCCCCAGCTCGCCACGCTAGCTG
ACGAGGTGTCTGCCTCCCTGGCCAAGCAGGGTTTGTGATCAGGCCCCTGGGGCGGTCAATAATTGTGGAG
AGGAGAGAATGAGAGAGTGTGGAAAAAAAAAGAATAATGACCCGGCCCCCGCCCTCTGCCCCCAGCTGCT
CCTCGCAGTTCGGTTAATTGGTTAATCACTTAACCTGCTTTTGTCACTCGGCTTTGGCTCGGGACTTCAA
AATCAGTGATGGGAGTAAGAGCAAATTTCATCTTTCCAAATTGATGGGTGGGCTAGTAATAAAATATTTA
AAAAAAAACATTCAAAAACATGGCCACATCCAACATTTCCTCAGGCAATTCCTTTTGATTCTTTTTTCTT
CCCCCTCCATGTAGAAGAGGGAGAAGGAGAGGCTCTGAAAGCTGCTTCTGGGGGATTTCAAGGGACTGGG
GGTGCCAACCACCTCTGGCCCTGTTGTGGGGGTGTCACAGAGGCAGTGGCAGCAACAAAGGATTTGAAAC
TTGGTGTGTTCGTGGAGCCACAGGCAGACGATGTCAACCTTGTGTGAGTGTGACGGGGGTTGGGGTGGGG
CGGGAGGCCACGGGGGAGGCCGAGGCAGGGGCTGGGCAGAGGGGAGAGGAAGCACAAGAAGTGGGAGTGG
GAGAGGAAGCCACGTGCTGGAGAGTAGACATCCCCCTCCTTGCCGCTGGGAGAGCCAAGGCCTATGCCAC
CTGCAGCGTCTGAGCGGCCGCCTGTCCTTGGTGGCCGGGGGTGGGGGCCTGCTGTGGGTCAGTGTGCCAC
CCTCTGCAGGGCAGCCTGTGGGAGAAGGGACAGCGGGTAAAAAGAGAAGGCAAGCTGGCAGGAGGGTGGC
ACTTCGTGGATGACCTCCTTAGAAAAGACTGACCTTGATGTCTTGAGAGCGCTGGCCTCTTCCTCCCTCC
CTGCAGGGTAGGGGGCCTGAGTTGAGGGGCTTCCCTCTGCTCCACAGAAACCCTGTTTTATTGAGTTCTG
AAGGTTGGAACTGCTGCCATGATTTTGGCCACTTTGCAGACCTGGGACTTTAGGGCTAACCAGTTCTCTT
TGTAAGGACTTGTGCCTCTTGGGAGACGTCCACCCGTTTCCAAGCCTGGGCCACTGGCATCTCTGGAGTG
TGTGGGGGTCTGGGAGGCAGGTCCCGAGCCCCCTGTCCTTCCCACGGCCACTGCAGTCACCCCGTCTGCG
CCGCTGTGCTGTTGTCTGCCGTGAGAGCCCAATCACTGCCTATACCCCTCATCACACGTCACAATGTCCC
GAATTCCCAGCCTCACCACCCCTTCTCAGTAATGACCCTGGTTGGTTGCAGGAGGTACCTACTCCATACT
GAGGGTGAAATTAAGGGAAGGCAAAGTCCAGGCACAAGAGTGGGACCCCAGCCTCTCACTCTCAGTTCCA
CTCATCCAACTGGGACCCTCACCACGAATCTCATGATCTGATTCGGTTCCCTGTCTCCTCCTCCCGTCAC
AGATGTGAGCCAGGGCACTGCTCAGCTGTGACCCTAGGTGTTTCTGCCTTGTTGACATGGAGAGAGCCCT
TTCCCCTGAGAAGGCCTGGCCCCTTCCTGTGCTGAGCCCACAGCAGCAGGCTGGGTGTCTTGGTTGTCAG
TGGTGGCACCAGGATGGAAGGGCAAGGCACCCAGGGCAGGCCCACAGTCCCGCTGTCCCCCACTTGCACC
CTAGCTTGTAGCTGCCAACCTCCCAGACAGCCCAGCCCGCTGCTCAGCTCCACATGCATAGTATCAGCCC
TCCACACCCGACAAAGGGGAACACACCCCCTTGGAAATGGTTCTTTTCCCCCAGTCCCAGCTGGAAGCCA
TGCTGTCTGTTCTGCTGGAGCAGCTGAACATATACATAGATGTTGCCCTGCCCTCCCCATCTGCACCCTG
TTGAGTTGTAGTTGGATTTGTCTGTTTATGCTTGGATTCACCAGAGTGACTATGATAGTGAAAAGAAAAA
AAAAAAAAAAAAAGGACGCATGTATCTTGAAATGCTTGTAAAGAGGTTTCTAACCCACCCTCACGAGGTG
TCTCTCACCCCCACACTGGGACTCGTGTGGCCTGTGTGGTGCCACCCTGCTGGGGCCTCCCAAGTTTTGA
AAGGCTTTCCTCAGCACCTGGGACCCAACAGAGACCAGCTTCTAGCAGCTAAGGAGGCCGTTCAGCTGTG
ACGAAGGCCTGAAGCACAGGATTAGGACTGAAGCGATGATGTCCCCTTCCCTACTTCCCCTTGGGGCTCC
CTGTGTCAGGGCACAGACTAGGTCTTGTGGCTGGTCTGGCTTGCGGCGCGAGGATGGTTCTCTCTGGTCA
TAGCCCGAAGTCTCATGGCAGTCCCAAAGGAGGCTTACAACTCCTGCATCACAAGAAAAAGGAAGCCACT
GCCAGCTGGGGGGATCTGCAGCTCCCAGAAGCTCCGTGAGCCTCAGCCACCCCTCAGACTGGGTTCCTCT
CCAAGCTCGCCCTCTGGAGGGGCAGCGCAGCCTCCCACCAAGGGCCCTGCGACCACAGCAGGGATTGGGA
TGAATTGCCTGTCCTGGATCTGCTCTAGAGGCCCAAGCTGCCTGCCTGAGGAAGGATGACTTGACAAGTC
AGGAGACACTGTTCCCAAAGCCTTGACCAGAGCACCTCAGCCCGCTGACCTTGCACAAACTCCATCTGCT
GCCATGAGAAAAGGGAAGCCGCCTTTGCAAAACATTGCTGCCTAAAGAAACTCAGCAGCCTCAGGCCCAA
TTCTGCCACTTCTGGTTTGGGTACAGTTAAAGGCAACCCTGAGGGACTTGGCAGTAGAAATCCAGGGCCT
CCCCTGGGGCTGGCAGCTTCGTGTGCAGCTAGAGCTTTACCTGAAAGGAAGTCTCTGGGCCCAGAACTCT
CCACCAAGAGCCTCCCTGCCGTTCGCTGAGTCCCAGCAATTCTCCTAAGTTGAAGGGATCTGAGAAGGAG
AAGGAAATGTGGGGTAGATTTGGTGGTGGTTAGAGATATGCCCCCCTCATTACTGCCAACAGTTTCGGCT
GCATTTCTTCACGCACCTCGGTTCCTCTTCCTGAAGTTCTTGTGCCCTGCTCTTCAGCACCATGGGCCTT
CTTATACGGAAGGCTCTGGGATCTCCCCCTTGTGGGGCAGGCTCTTGGGGCCAGCCTAAGATCATGGTTT
AGGGTGATCAGTGCTGGCAGATAAATTGAAAAGGCACGCTGGCTTGTGATCTTAAATGAGGACAATCCCC
CCAGGGCTGGGCACTCCTCCCCTCCCCTCACTTCTCCCACCTGCAGAGCCAGTGTCCTTGGGTGGGCTAG
ATAGGATATACTGTATGCCGGCTCCTTCAAGCTGCTGACTCACTTTATCAATAGTTCCATTTAAATTGAC
TTCAGTGGTGAGACTGTATCCTGTTTGCTATTGCTTGTTGTGCTATGGGGGGAGGGGGGAGGAATGTGTA
AGATAGTTAACATGGGCAAAGGGAGATCTTGGGGTGCAGCACTTAAACTGCCTCGTAACCCTTTTCATGA
TTTCAACCACATTTGCTAGAGGGAGGGAGCAGCCACGGAGTTAGAGGCCCTTGGGGTTTCTCTTTTCCAC
TGACAGGCTTTCCCAGGCAGCTGGCTAGTTCATTCCCTCCCCAGCCAGGTGCAGGCGTAGGAATATGGAC
ATCTGGTTGCTTTGGCCTGCTGCCCTCTTTCAGGGGTCCTAAGCCCACAATCATGCCTCCCTAAGACCTT
GGCATCCTTCCCTCTAAGCCGTTGGCACCTCTGTGCCACCTCTCACACTGGCTCCAGACACACAGCCTGT
GCTTTTGGAGCTGAGATCACTCGCTTCACCCTCCTCATCTTTGTTCTCCAAGTAAAGCCACGAGGTCGGG
GCGAGGGCAGAGGTGATCACCTGCGTGTCCCATCTACAGACCTGCAGCTTCATAAAACTTCTGATTTCTC
TTCAGCTTTGAAAAGGGTTACCCTGGGCACTGGCCTAGAGCCTCACCTCCTAATAGACTTAGCCCCATGA
GTTTGCCATGTTGAGCAGGACTATTTCTGGCACTTGCAAGTCCCATGATTTCTTCGGTAATTCTGAGGGT
GGGGGGAGGGACATGAAATCATCTTAGCTTAGCTTTCTGTCTGTGAATGTCTATATAGTGTATTGTGTGT
TTTAACAAATGATTTACACTGACTGTTGCTGTAAAAGTGAATTTGGAAATAAAGTTATTACTCTGATTAA
A
配列番号４
＞配列番号３の逆相補物
TTTAATCAGAGTAATAACTTTATTTCCAAATTCACTTTTACAGCACAGTCAGTGTAAATCATTTGTTAAA
ACACACAATACACTATATAGACATTCACAGACAGAAAGCTAAGCTAAGATGATTTCATGTCCCTCCCCCC
ACCCTCAGAATTACCGAAGAAATCATGGGACTTGCAAGTGCCAGAAATAGTCCTGCTCAACATGGCAAAC
TCATGGGGCTAAGTCTATTAGGAGGTGAGGCTCTAGGCCAGTGCCCAGGGTAACCCTTTTCAAAGCTGAA
GAGAAATCAGAAGTTTTATGAAGCTGCAGGTCTGTAGATGGGACACGCAGGTGATCACCTCTGCCCTCGC
CCCGACCTCGTGGCTTTACTTGGAGAACAAAGATGAGGAGGGTGAAGCGAGTGATCTCAGCTCCAAAAGC
ACAGGCTGTGTGTCTGGAGCCAGTGTGAGAGGTGGCACAGAGGTGCCAACGGCTTAGAGGGAAGGATGCC
AAGGTCTTAGGGAGGCATGATTGTGGGCTTAGGACCCCTGAAAGAGGGCAGCAGGCCAAAGCAACCAGAT
GTCCATATTCCTACGCCTGCACCTGGCTGGGGAGGGAATGAACTAGCCAGCTGCCTGGGAAAGCCTGTCA
GTGGAAAAGAGAAACCCCAAGGGCCTCTAACTCCGTGGCTGCTCCCTCCCTCTAGCAAATGTGGTTGAAA
TCATGAAAAGGGTTACGAGGCAGTTTAAGTGCTGCACCCCAAGATCTCCCTTTGCCCATGTTAACTATCT
TACACATTCCTCCCCCCTCCCCCCATAGCACAACAAGCAATAGCAAACAGGATACAGTCTCACCACTGAA
GTCAATTTAAATGGAACTATTGATAAAGTGAGTCAGCAGCTTGAAGGAGCCGGCATACAGTATATCCTAT
CTAGCCCACCCAAGGACACTGGCTCTGCAGGTGGGAGAAGTGAGGGGAGGGGAGGAGTGCCCAGCCCTGG
GGGGATTGTCCTCATTTAAGATCACAAGCCAGCGTGCCTTTTCAATTTATCTGCCAGCACTGATCACCCT
AAACCATGATCTTAGGCTGGCCCCAAGAGCCTGCCCCACAAGGGGGAGATCCCAGAGCCTTCCGTATAAG
AAGGCCCATGGTGCTGAAGAGCAGGGCACAAGAACTTCAGGAAGAGGAACCGAGGTGCGTGAAGAAATGC
AGCCGAAACTGTTGGCAGTAATGAGGGGGGCATATCTCTAACCACCACCAAATCTACCCCACATTTCCTT
CTCCTTCTCAGATCCCTTCAACTTAGGAGAATTGCTGGGACTCAGCGAACGGCAGGGAGGCTCTTGGTGG
AGAGTTCTGGGCCCAGAGACTTCCTTTCAGGTAAAGCTCTAGCTGCACACGAAGCTGCCAGCCCCAGGGG
AGGCCCTGGATTTCTACTGCCAAGTCCCTCAGGGTTGCCTTTAACTGTACCCAAACCAGAAGTGGCAGAA
TTGGGCCTGAGGCTGCTGAGTTTCTTTAGGCAGCAATGTTTTGCAAAGGCGGCTTCCCTTTTCTCATGGC
AGCAGATGGAGTTTGTGCAAGGTCAGCGGGCTGAGGTGCTCTGGTCAAGGCTTTGGGAACAGTGTCTCCT
GACTTGTCAAGTCATCCTTCCTCAGGCAGGCAGCTTGGGCCTCTAGAGCAGATCCAGGACAGGCAATTCA
TCCCAATCCCTGCTGTGGTCGCAGGGCCCTTGGTGGGAGGCTGCGCTGCCCCTCCAGAGGGCGAGCTTGG
AGAGGAACCCAGTCTGAGGGGTGGCTGAGGCTCACGGAGCTTCTGGGAGCTGCAGATCCCCCCAGCTGGC
AGTGGCTTCCTTTTTCTTGTGATGCAGGAGTTGTAAGCCTCCTTTGGGACTGCCATGAGACTTCGGGCTA
TGACCAGAGAGAACCATCCTCGCGCCGCAAGCCAGACCAGCCACAAGACCTAGTCTGTGCCCTGACACAG
GGAGCCCCAAGGGGAAGTAGGGAAGGGGACATCATCGCTTCAGTCCTAATCCTGTGCTTCAGGCCTTCGT
CACAGCTGAACGGCCTCCTTAGCTGCTAGAAGCTGGTCTCTGTTGGGTCCCAGGTGCTGAGGAAAGCCTT
TCAAAACTTGGGAGGCCCCAGCAGGGTGGCACCACACAGGCCACACGAGTCCCAGTGTGGGGGTGAGAGA
CACCTCGTGAGGGTGGGTTAGAAACCTCTTTACAAGCATTTCAAGATACATGCGTCCTTTTTTTTTTTTT
TTTTTCTTTTCACTATCATAGTCACTCTGGTGAATCCAAGCATAAACAGACAAATCCAACTACAACTCAA
CAGGGTGCAGATGGGGAGGGCAGGGCAACATCTATGTATATGTTCAGCTGCTCCAGCAGAACAGACAGCA
TGGCTTCCAGCTGGGACTGGGGGAAAAGAACCATTTCCAAGGGGGTGTGTTCCCCTTTGTCGGGTGTGGA
GGGCTGATACTATGCATGTGGAGCTGAGCAGCGGGCTGGGCTGTCTGGGAGGTTGGCAGCTACAAGCTAG
GGTGCAAGTGGGGGACAGCGGGACTGTGGGCCTGCCCTGGGTGCCTTGCCCTTCCATCCTGGTGCCACCA
CTGACAACCAAGACACCCAGCCTGCTGCTGTGGGCTCAGCACAGGAAGGGGCCAGGCCTTCTCAGGGGAA
AGGGCTCTCTCCATGTCAACAAGGCAGAAACACCTAGGGTCACAGCTGAGCAGTGCCCTGGCTCACATCT
GTGACGGGAGGAGGAGACAGGGAACCGAATCAGATCATGAGATTCGTGGTGAGGGTCCCAGTTGGATGAG
TGGAACTGAGAGTGAGAGGCTGGGGTCCCACTCTTGTGCCTGGACTTTGCCTTCCCTTAATTTCACCCTC
AGTATGGAGTAGGTACCTCCTGCAACCAACCAGGGTCATTACTGAGAAGGGGTGGTGAGGCTGGGAATTC
GGGACATTGTGACGTGTGATGAGGGGTATAGGCAGTGATTGGGCTCTCACGGCAGACAACAGCACAGCGG
CGCAGACGGGGTGACTGCAGTGGCCGTGGGAAGGACAGGGGGCTCGGGACCTGCCTCCCAGACCCCCACA
CACTCCAGAGATGCCAGTGGCCCAGGCTTGGAAACGGGTGGACGTCTCCCAAGAGGCACAAGTCCTTACA
AAGAGAACTGGTTAGCCCTAAAGTCCCAGGTCTGCAAAGTGGCCAAAATCATGGCAGCAGTTCCAACCTT
CAGAACTCAATAAAACAGGGTTTCTGTGGAGCAGAGGGAAGCCCCTCAACTCAGGCCCCCTACCCTGCAG
GGAGGGAGGAAGAGGCCAGCGCTCTCAAGACATCAAGGTCAGTCTTTTCTAAGGAGGTCATCCACGAAGT
GCCACCCTCCTGCCAGCTTGCCTTCTCTTTTTACCCGCTGTCCCTTCTCCCACAGGCTGCCCTGCAGAGG
GTGGCACACTGACCCACAGCAGGCCCCCACCCCCGGCCACCAAGGACAGGCGGCCGCTCAGACGCTGCAG
GTGGCATAGGCCTTGGCTCTCCCAGCGGCAAGGAGGGGGATGTCTACTCTCCAGCACGTGGCTTCCTCTC
CCACTCCCACTTCTTGTGCTTCCTCTCCCCTCTGCCCAGCCCCTGCCTCGGCCTCCCCCGTGGCCTCCCG
CCCCACCCCAACCCCCGTCACACTCACACAAGGTTGACATCGTCTGCCTGTGGCTCCACGAACACACCAA
GTTTCAAATCCTTTGTTGCTGCCACTGCCTCTGTGACACCCCCACAACAGGGCCAGAGGTGGTTGGCACC
CCCAGTCCCTTGAAATCCCCCAGAAGCAGCTTTCAGAGCCTCTCCTTCTCCCTCTTCTACATGGAGGGGG
AAGAAAAAAGAATCAAAAGGAATTGCCTGAGGAAATGTTGGATGTGGCCATGTTTTTGAATGTTTTTTTT
TAAATATTTTATTACTAGCCCACCCATCAATTTGGAAAGATGAAATTTGCTCTTACTCCCATCACTGATT
TTGAAGTCCCGAGCCAAAGCCGAGTGACAAAAGCAGGTTAAGTGATTAACCAATTAACCGAACTGCGAGG
AGCAGCTGGGGGCAGAGGGCGGGGGCCGGGTCATTATTCTTTTTTTTTCCACACTCTCTCATTCTCTCCT
CTCCACAATTATTGACCGCCCCAGGGGCCTGATCACAAACCCTGCTTGGCCAGGGAGGCAGACACCTCGT
CAGCTAGCGTGGCGAGCTGGGGCGAGTCTACCATGTCGATGCTGCCGGTGGAGGAGACATTGCTGAGATG
CCGTGGAGACGTGTCCCCAGACACCACTGGCGACTTGTACACGATCTCCGCCCCGTGGTCTGTCTTGGCT
TTGGCGTTCTCGCGGAAGGTCAGCTTGTGGGTTTCAATCTTTTTATTTCCTCCGCCAGGGACGTGGGTGA
TATTGTCCAGGGACCCAATCTTCGACTGGACTCTGTCCTTGAAGTCAAGCTTCTCAGATTTTACTTCCAC
CTGGCCACCTCCTGGTTTATGATGGATGTTGCCTAATGAGCCACACTTGGAGGTCACCTTGCTCAGGTCA
ACTGGTTTGTAGACTATTTGCACACTGCCGCCTCCCGGGACGTGTTTGATATTATCCTTTGAGCCACACT
TGGACTGGACGTTGCTAAGATCCAGCTTCTTATTAATTATCTGCACCTTCCCGCCTCCCGGCTGGTGCTT
CAGGTTCTCAGTGGAGCCGATCTTGGACTTGACATTCTTCAGGTCTGGCATGGGCACGGGGGCTGTCTGC
AGGCGGCTCTTGGCGGAAGACGGCGACTTGGGTGGAGTACGGACCACTGCCACCTTCTTGGGCTCCCGGG
TGGGTGGGGTTGGAAGGGACGGGGTGCGGGAGCGGCTGCCGGGAGTGCCTGGGGAGCCGGGGCTGCTGTA
GCCGCTGCGATCCCCTGATTTTGGAGGTTCACCAGAGCTGGGTGGTGTCTTTGGAGCGGGCGGGGTTTTT
GCTGGAATCCTGGTGGCGTTGGCCTGGCCCTTCTGGCCTGGAGGGGCTGCTCCCCGCGGTGTGGCGATCT
TCGTTTTACCATCAGCCCCCTTGGCTTTTTTGTCATCGCTTCCAGTCCCGTCTTTGCTTTTACTGACCAT
GCGAGCTTGGGTCACGTGACCAGCAGCTTCGTCTTCCAGGCTGGGGGTGTCTCCAATGCCTGCTTCTTCA
GCTGTGGTTCCTTCTGGGATCTCCGTGTGGGGCTGCGCGGCAGCCTGCTTGCCGGGAGCTCCCTCATCCA
CTAAGGGTGCTGTCACATCTTCCGCTGTTGGAGTGCTCTTAGCATCAGAGGTTTCAGAGCCCGGTTCCTC
AGATCCGTCCTCAGTGGGGGTCTGCAGGGGAGATTCTTTCAGGCCAGCGTCCGTGTCACCCTCTTGGTCT
TGGTGCATGGTGTAGCCCCCCTGATCTTTCCTGTCCCCCAACCCGTACGTCCCAGCGTGATCTTCCATCA
CTTCGAACTCCTGGCGGGGCTCAGCCATCCTGGTTCAAAGTTCACCTGATAGTCGACAGAGGCGAGGACG
GGAGAGGACAGCGGAGGAGGAGAAGGTGGCTGTGGTGGCGGCGGCAGAAGGTGGGCGGTGGCAGCGGCGC
TGCTGTTGGTGCCGGAGCTGGTGGGTGGCGGTGACTGCGAGGGCGCGCGCCGGCGAAGAGGGCGCGTTCC
TGAGGCCGGCGGGCGGCGCAGGCGCGAGCAGCGGGAACGCGAGCCTCCCCAGGGGAGGGGGCGGGCAGCG
CGGCCTCCGCGGGAGCCTTCTCCTCCGGCCACTAGTGGGCGCGCGCGAGCGCCCTGCCGCTCGGCCGTCC
配列番号５
＞ＮＭ＿００１０３８６０９．２ハツカネズミ微小管関連タンパク質タウ（Ｍａｐｔ）、転写物変異体１、ｍＲＮＡ
CCGCCGGCCTCCAGAACGCGCTTTCTCGGCCGCGCGCGCTCTCAGTCTCCGCCACCCACCAGCTCCAGCA
CCAGCAGCAGCGCCGCCGCCACCGCCCACCTTCTGCCGCCGCCGCCACAACCACCTTCTCCTCCGCTGTC
CTCTTCTGTCCTCGCCTTCTGTCGATTATCAGGCTTTGAACCAGTATGGCTGACCCTCGCCAGGAGTTTG
ACACAATGGAAGACCATGCTGGAGATTACACTCTGCTCCAAGACCAAGAAGGAGACATGGACCATGGCTT
AAAAGAGTCTCCCCCACAGCCCCCCGCCGATGATGGAGCGGAGGAACCAGGGTCGGAGACCTCCGATGCT
AAGAGCACTCCAACTGCTGAAGACGTGACTGCGCCCCTAGTGGATGAGAGAGCTCCCGACAAGCAGGCCG
CTGCCCAGCCCCACACGGAGATCCCAGAAGGAATTACAGCCGAAGAAGCAGGCATCGGAGACACCCCGAA
CCAGGAGGACCAAGCCGCTGGGCATGTGACTCAAGCTCGTGTGGCCAGCAAAGACAGGACAGGAAATGAC
GAGAAGAAAGCCAAGGGCGCTGATGGCAAAACCGGGGCGAAGATCGCCACACCTCGGGGAGCAGCCTCTC
CGGCCCAGAAGGGCACGTCCAACGCCACCAGGATCCCGGCCAAGACCACGCCCAGCCCTAAGACTCCTCC
AGGGTCAGGTGAACCACCAAAATCCGGAGAACGAAGCGGCTACAGCAGCCCCGGCTCTCCCGGAACGCCT
GGCAGTCGCTCGCGCACCCCATCCCTACCAACACCGCCCACCCGGGAGCCCAAGAAGGTGGCAGTGGTCC
GCACTCCCCCTAAGTCACCATCAGCTAGTAAGAGCCGCCTGCAGACTGCCCCTGTGCCCATGCCAGACCT
AAAGAATGTCAGGTCGAAGATTGGCTCTACTGAGAACCTGAAGCACCAGCCAGGAGGTGGCAAGGTGCAG
ATAATTAATAAGAAGCTGGATCTTAGCAACGTCCAGTCCAAGTGTGGCTCGAAGGATAATATCAAACACG
TCCCGGGTGGAGGCAGTGTGCAAATAGTCTACAAGCCGGTGGACCTGAGCAAAGTGACCTCCAAGTGTGG
CTCGTTAGGGAACATCCATCACAAGCCAGGAGGTGGCCAGGTGGAAGTAAAATCAGAGAAGCTGGACTTC
AAGGACAGAGTCCAGTCGAAGATTGGCTCCTTGGATAATATCACCCACGTCCCTGGAGGAGGGAATAAGA
AGATTGAAACCCACAAGCTGACCTTCAGGGAGAATGCCAAAGCCAAGACAGACCATGGAGCAGAAATTGT
GTATAAGTCACCCGTGGTGTCTGGGGACACATCTCCACGGCACCTCAGCAATGTGTCTTCCACGGGCAGC
ATCGACATGGTGGACTCACCACAGCTTGCCACACTAGCCGATGAAGTGTCTGCTTCCTTGGCCAAGCAGG
GTTTGTGATCAGGCTCCCAGGGCAGTCAATAATCATGGAGAGAAGAGAGAGTGAGAGTGTGGAAAAAAAA
AAAAAAAAAGAATGATCTGGCCCCTTGCCCTCTGCCCTCCCCGCTGCTCCTCATAGACAGGCTGACCTGC
TTGTCACCTAACCTGCTTTTGTGGCTCGGATTTGGCTCGGGACTTCAAAATCAGTGATGGGAAAAGTACA
TTTCATCTTTCCAAATTGATTTGTGGGCTAAAAATAAAACATATTTAAGGGAAAAAAAAACATGTAAAAA
CATGGCCAAAAAATTTCCTTGGGCAATTGCTAATTGATTTCCCCCCCCTGACCCCGCCCTCCCTCTCTGA
GTATTAGAGGGTGAAGAAGGCTCTGGAGGCTGCTTCTGGGGAGTGGCTGAGGGACTAGGGCAGCTAATTG
CCCATAGCCCCATCCTAGGGGCTTCAGGGACAGTGGCAGCAATGAGAGATTTGAGACTTGGTGTGTTCGT
GGGGCCGTAGGCAGGTGCTGTTAACTTGTGTGGGTGTGAGTGGGGACTGAAACAGCGACAGCGAAGGCTG
AGAGATGGATGGGTGGACTGAGTTAGAGGACAGAGGTGAGGAAGGCAGGTTGGGAGAGGGGACACTGGCT
CCTTGCCAAGTAGCTTGGGGAGGACAGGGTGCTGCAGCTGCCTGCAGCAGTCCTAGCTAGCTCAGATGCC
TGCTTGATAAAGCACTGTGGGGGTAACGTGGGTGTGTGTGCCCCTTCTGCAGGGCAGCCTGTGGGAGAAG
GGGTATTGGGCAGAAGGAAGGTAAGCCAGCAGGTGGTACCTTGTAGATTGGTTCTCTTGAAGGCTGCTCT
TGACATCCCAGGGCACTGGCTTCTTCCTCCCTCCCCGCAAGGTGGGAGGTCCTGAGCGAGGTGTTTCCCT
TCGCTCCCACAGGAAAAGCTGCTTTACTGAGTTCTCAAGTTTGGAACTACAGCCATGATTTGGCCACCAT
TACAGACCTGGGACTTTAGGGCTAACCAGATCTTTGTAAGGACTTGTGCCTCTTGGGGGACCTCTGCCTG
TTCTCATGCTTGGCCCTCTGGCACTTCTGTAGTGGGAGGGATGGGGGGTGGTATTCTGGGATGTGGGTCC
CAGGCCTCCCATCCCTCACACAGCCACTGTATCCCCTCTCTCTGTCCTATCATGCCCACGTCTGCCACGA
GAGCTAGTCACTGCCGTCCGTACATCACGTCTCACTGTCCTGAGTGCCATGCCTCTCCCAGCCCCCATCC
CTGGCCCCTGGGTAGATATGGGCAATATCTGCTCTACACTAGGGGTTGGAGTCCAGGGAAGGCAAAGATT
TGGGCCTCAGTCTCTAGTCCTACGTTCCACGAATCCAACCAGTGTGCCTCCCACAAGGAACCTTACGACC
TTGTTTGGTTCACTCCATTACTTCCTATCCTGGATGGGAACTGGTGTGTGCCTGCCTGGGGATGACCTTG
GACCTCTGCCTTTTCTTTTATCTAAGTGGATGCCTCCTAGGCCTGACTCCTTGTGTTGAGCTGGAGGCAG
CCAAGTCAGGTGCCAATGTCTTGGCATCAGTAAGAACAGTCAAGAGTCCCAGGGCAGGGCCACACTTCTC
CCATCTTTCGCTTCCACCCCAGCTTGTGATCGCTAGCCTCCCAGAGCTCAGCTGCCATTAAGTCCCCATG
CACGTAATCAGTCTCCACACCCCAGTTTGGGGAACATACCCCCTTGATTGAAGTGTTTTTTTCCTCCGGT
CCCATGGAAACCATGCTGCCTGCCCTGCTGGAGCAGACGGCCACCTCCATAGATGCAGCCCTTTCTTTCC
CGTCTTCGCCCTGTTACGTTGTAGTTGGATTTGTCTGTTTGTCTGGGTTCACCAGAGTGACTATGATAGT
GAAAAGAAAAGAAAGAAAAAGAAAAAAAAAAAAAAAAAGAAAAAGAAAAAGGAAAAAAAAAAGGACGCAT
GTATCTTGAAATATTTGTCAAAAGGTTCTAGCCCACCACGTGATGGAGAGTCTGGATATCTCCTTCCTGA
CGTGGCTCCAGGCCAGTGCAGTGCTAACCTGCTGGGACATCCCATGTTTTGAAGGGTTTCTTCTGCATCT
GGGACCTCACAGACACTGGATTGTGACATTGGAGGTCTGTGACATTGGAGGTCAATGGCATTGGCCAAGG
CCTGAAGCACAGGACCAGCTAGAGGCAGCAGGCTCCGAGTGCCAGGGAGAGCTTGTGGCTGGCCTGTTTT
GTATGAAGATGGTCCTTTCTGATCACGACTTCAAATCCCACAGTAGCCCTGAAAGACATCTAAGAACTCC
TGCATCACAAGAGAAAAGGACACCAGTACCAGCAGGGAGAGCTGTGACCCTAGAAATTCCATGACGACCC
AGTAGATATCCTTGGGCCCTCTCCAAGCCTGGGCCTTTTCACCATAGAGTTTGGGATGGACTGTCCCACT
GATGAAGGGGACATCTTAGGAGACTCCCTTGGTTTCCAAGCTGTCAGCCCCCTGAACTTGCACGACCTCC
TACAGCTTCAGGGACTAGGCCTTTGAAGATTAGGAACCTCAGGCCCACATCAGCCACTTCTGATGTACAG
TTAAGGACAATGTGGAGACTAGGAGGAAGCAGCCAGCCTTTCCCATTAAAGAACTCTTGAGTGCCCAGGG
CTACCTATTGTGAGCTTCCCCACTGATAAGACTTTAGCTGTCCATAGAAGTGAGTCCGAGGGAGGAAAAG
TGTGGTTTCTTCATCATGGTTACCTGTCGTGGTTCTCTCTCTTACACCCATTTACCCATCCCGCAGTTCC
TGTCCTTGAATGGGGGGTGGGGTGCTCTGCCTATCTCTTGTGGGGTGATCAGCCCAAAAATCATGATTTG
GAGTGATCTGATCAGTGCTGATAGGCAGTTTACAAAGGGATTCTGGCTTGTGACTTCAGTGAGGACAATC
CCCCAGGGCCCTTTCTTTCCATGCCTCTCCAACTCAGAGCCAATGTCTTTGGGTGGGCTAGATAGATAGG
GCATACAATTGGCCTGGTTCCTCCAAGCTCTTAATTCACTTTATCAATAGTTCCATTTAAATTGACTTCA
ATGATAAGAGTGTATCCCATTTGAGATTGCTTGCGTTGTGGGGGAGGGGGAGGAGGAACACATTAAGATA
ATTCACATGGGCAAAGGGAGGTCTTGGAGTGTAGCCGTTAAGCCATCTTGTAACCCCATTCATGATTTTG
ACCACCTGCTAGAGAGAAGAGGTGCCAAGAGACTAGAACTTGGAGGCTTGGCTGTCCCACTAATAGGCTT
TCGCAAGGCAGAGGTAGCCAGCTAGGTCCCTGCCTTCCCAGCCAGGTACAGCTCTCAGGTTTGTGGAGGT
AATCTGTGAACTTCTCTTCCTGCTGCCTTCTTGTGATGTCCAGAGCCCACAGTCAAATACCTCCTAAGAA
CCCTGGCTTCCTTCCCTCTAATCCACTGGCACATGACTATCACCTCTGGATTGACCTCAGATCCATAGCC
TACACACTGCTAGCAGTGGCCAAGATCACTTCCTTTATCTCCATCTGTTCTGTTCTCCAGGAAAGTAAGT
GGGGATGAGGGTGGAGGTGGTAATCAACTGTAGATCTGTGGCTTTATGAGCCTTCAGACTTCTCTCTGGC
TTCTTCTGGAAGGGTTACTATTGGCAGTATTGCAATCTCACCCTCCTGATGAACTGTAGCCTGTGCCGTT
ACTGTGCTGGGCATGATCTCCAGTGCTTGCAAGTCCCATGATTTCTTTGGTGATTTTGAGGGTGGGGGGA
GGGACACAAATCAGCTTAGCTTAGCTTCCTGTCTGTGAATGTCCATATAGTGTATTGTGTTTTAACAAAT
GATCTACACTGACTGTTGCTGTAAAAGTGAATTTGGAAATAAAGTTATTACTCTGAATAAAAAAAAAAAA
AAAAAA
配列番号６
＞配列番号５の逆相補物
TTTTTTTTTTTTTTTTTTATTCAGAGTAATAACTTTATTTCCAAATTCACTTTTACAGCAACAGTCAGTGTAGATC
ATTTGTTAAAACACAATACACTATATGGACATTCACAGACAGGAAGCTAAGCTAAGCTGATTTGTGTCCC
TCCCCCCACCCTCAAAATCACCAAAGAAATCATGGGACTTGCAAGCACTGGAGATCATGCCCAGCACAGT
AACGGCACAGGCTACAGTTCATCAGGAGGGTGAGATTGCAATACTGCCAATAGTAACCCTTCCAGAAGAA
GCCAGAGAGAAGTCTGAAGGCTCATAAAGCCACAGATCTACAGTTGATTACCACCTCCACCCTCATCCCC
ACTTACTTTCCTGGAGAACAGAACAGATGGAGATAAAGGAAGTGATCTTGGCCACTGCTAGCAGTGTGTA
GGCTATGGATCTGAGGTCAATCCAGAGGTGATAGTCATGTGCCAGTGGATTAGAGGGAAGGAAGCCAGGG
TTCTTAGGAGGTATTTGACTGTGGGCTCTGGACATCACAAGAAGGCAGCAGGAAGAGAAGTTCACAGATT
ACCTCCACAAACCTGAGAGCTGTACCTGGCTGGGAAGGCAGGGACCTAGCTGGCTACCTCTGCCTTGCGA
AAGCCTATTAGTGGGACAGCCAAGCCTCCAAGTTCTAGTCTCTTGGCACCTCTTCTCTCTAGCAGGTGGT
CAAAATCATGAATGGGGTTACAAGATGGCTTAACGGCTACACTCCAAGACCTCCCTTTGCCCATGTGAAT
TATCTTAATGTGTTCCTCCTCCCCCTCCCCCACAACGCAAGCAATCTCAAATGGGATACACTCTTATCAT
TGAAGTCAATTTAAATGGAACTATTGATAAAGTGAATTAAGAGCTTGGAGGAACCAGGCCAATTGTATGC
CCTATCTATCTAGCCCACCCAAAGACATTGGCTCTGAGTTGGAGAGGCATGGAAAGAAAGGGCCCTGGGG
GATTGTCCTCACTGAAGTCACAAGCCAGAATCCCTTTGTAAACTGCCTATCAGCACTGATCAGATCACTC
CAAATCATGATTTTTGGGCTGATCACCCCACAAGAGATAGGCAGAGCACCCCACCCCCCATTCAAGGACA
GGAACTGCGGGATGGGTAAATGGGTGTAAGAGAGAGAACCACGACAGGTAACCATGATGAAGAAACCACA
CTTTTCCTCCCTCGGACTCACTTCTATGGACAGCTAAAGTCTTATCAGTGGGGAAGCTCACAATAGGTAG
CCCTGGGCACTCAAGAGTTCTTTAATGGGAAAGGCTGGCTGCTTCCTCCTAGTCTCCACATTGTCCTTAA
CTGTACATCAGAAGTGGCTGATGTGGGCCTGAGGTTCCTAATCTTCAAAGGCCTAGTCCCTGAAGCTGTA
GGAGGTCGTGCAAGTTCAGGGGGCTGACAGCTTGGAAACCAAGGGAGTCTCCTAAGATGTCCCCTTCATC
AGTGGGACAGTCCATCCCAAACTCTATGGTGAAAAGGCCCAGGCTTGGAGAGGGCCCAAGGATATCTACT
GGGTCGTCATGGAATTTCTAGGGTCACAGCTCTCCCTGCTGGTACTGGTGTCCTTTTCTCTTGTGATGCA
GGAGTTCTTAGATGTCTTTCAGGGCTACTGTGGGATTTGAAGTCGTGATCAGAAAGGACCATCTTCATAC
AAAACAGGCCAGCCACAAGCTCTCCCTGGCACTCGGAGCCTGCTGCCTCTAGCTGGTCCTGTGCTTCAGG
CCTTGGCCAATGCCATTGACCTCCAATGTCACAGACCTCCAATGTCACAATCCAGTGTCTGTGAGGTCCC
AGATGCAGAAGAAACCCTTCAAAACATGGGATGTCCCAGCAGGTTAGCACTGCACTGGCCTGGAGCCACG
TCAGGAAGGAGATATCCAGACTCTCCATCACGTGGTGGGCTAGAACCTTTTGACAAATATTTCAAGATAC
ATGCGTCCTTTTTTTTTTCCTTTTTCTTTTTCTTTTTTTTTTTTTTTTTCTTTTTCTTTCTTTTCTTTTC
ACTATCATAGTCACTCTGGTGAACCCAGACAAACAGACAAATCCAACTACAACGTAACAGGGCGAAGACG
GGAAAGAAAGGGCTGCATCTATGGAGGTGGCCGTCTGCTCCAGCAGGGCAGGCAGCATGGTTTCCATGGG
ACCGGAGGAAAAAAACACTTCAATCAAGGGGGTATGTTCCCCAAACTGGGGTGTGGAGACTGATTACGTG
CATGGGGACTTAATGGCAGCTGAGCTCTGGGAGGCTAGCGATCACAAGCTGGGGTGGAAGCGAAAGATGG
GAGAAGTGTGGCCCTGCCCTGGGACTCTTGACTGTTCTTACTGATGCCAAGACATTGGCACCTGACTTGG
CTGCCTCCAGCTCAACACAAGGAGTCAGGCCTAGGAGGCATCCACTTAGATAAAAGAAAAGGCAGAGGTC
CAAGGTCATCCCCAGGCAGGCACACACCAGTTCCCATCCAGGATAGGAAGTAATGGAGTGAACCAAACAA
GGTCGTAAGGTTCCTTGTGGGAGGCACACTGGTTGGATTCGTGGAACGTAGGACTAGAGACTGAGGCCCA
AATCTTTGCCTTCCCTGGACTCCAACCCCTAGTGTAGAGCAGATATTGCCCATATCTACCCAGGGGCCAG
GGATGGGGGCTGGGAGAGGCATGGCACTCAGGACAGTGAGACGTGATGTACGGACGGCAGTGACTAGCTC
TCGTGGCAGACGTGGGCATGATAGGACAGAGAGAGGGGATACAGTGGCTGTGTGAGGGATGGGAGGCCTG
GGACCCACATCCCAGAATACCACCCCCCATCCCTCCCACTACAGAAGTGCCAGAGGGCCAAGCATGAGAA
CAGGCAGAGGTCCCCCAAGAGGCACAAGTCCTTACAAAGATCTGGTTAGCCCTAAAGTCCCAGGTCTGTA
ATGGTGGCCAAATCATGGCTGTAGTTCCAAACTTGAGAACTCAGTAAAGCAGCTTTTCCTGTGGGAGCGA
AGGGAAACACCTCGCTCAGGACCTCCCACCTTGCGGGGAGGGAGGAAGAAGCCAGTGCCCTGGGATGTCA
AGAGCAGCCTTCAAGAGAACCAATCTACAAGGTACCACCTGCTGGCTTACCTTCCTTCTGCCCAATACCC
CTTCTCCCACAGGCTGCCCTGCAGAAGGGGCACACACACCCACGTTACCCCCACAGTGCTTTATCAAGCA
GGCATCTGAGCTAGCTAGGACTGCTGCAGGCAGCTGCAGCACCCTGTCCTCCCCAAGCTACTTGGCAAGG
AGCCAGTGTCCCCTCTCCCAACCTGCCTTCCTCACCTCTGTCCTCTAACTCAGTCCACCCATCCATCTCT
CAGCCTTCGCTGTCGCTGTTTCAGTCCCCACTCACACCCACACAAGTTAACAGCACCTGCCTACGGCCCC
ACGAACACACCAAGTCTCAAATCTCTCATTGCTGCCACTGTCCCTGAAGCCCCTAGGATGGGGCTATGGG
CAATTAGCTGCCCTAGTCCCTCAGCCACTCCCCAGAAGCAGCCTCCAGAGCCTTCTTCACCCTCTAATAC
TCAGAGAGGGAGGGCGGGGTCAGGGGGGGGAAATCAATTAGCAATTGCCCAAGGAAATTTTTTGGCCATG
TTTTTACATGTTTTTTTTTCCCTTAAATATGTTTTATTTTTAGCCCACAAATCAATTTGGAAAGATGAAA
TGTACTTTTCCCATCACTGATTTTGAAGTCCCGAGCCAAATCCGAGCCACAAAAGCAGGTTAGGTGACAA
GCAGGTCAGCCTGTCTATGAGGAGCAGCGGGGAGGGCAGAGGGCAAGGGGCCAGATCATTCTTTTTTTTT
TTTTTTTTCCACACTCTCACTCTCTCTTCTCTCCATGATTATTGACTGCCCTGGGAGCCTGATCACAAAC
CCTGCTTGGCCAAGGAAGCAGACACTTCATCGGCTAGTGTGGCAAGCTGTGGTGAGTCCACCATGTCGAT
GCTGCCCGTGGAAGACACATTGCTGAGGTGCCGTGGAGATGTGTCCCCAGACACCACGGGTGACTTATAC
ACAATTTCTGCTCCATGGTCTGTCTTGGCTTTGGCATTCTCCCTGAAGGTCAGCTTGTGGGTTTCAATCT
TCTTATTCCCTCCTCCAGGGACGTGGGTGATATTATCCAAGGAGCCAATCTTCGACTGGACTCTGTCCTT
GAAGTCCAGCTTCTCTGATTTTACTTCCACCTGGCCACCTCCTGGCTTGTGATGGATGTTCCCTAACGAG
CCACACTTGGAGGTCACTTTGCTCAGGTCCACCGGCTTGTAGACTATTTGCACACTGCCTCCACCCGGGA
CGTGTTTGATATTATCCTTCGAGCCACACTTGGACTGGACGTTGCTAAGATCCAGCTTCTTATTAATTAT
CTGCACCTTGCCACCTCCTGGCTGGTGCTTCAGGTTCTCAGTAGAGCCAATCTTCGACCTGACATTCTTT
AGGTCTGGCATGGGCACAGGGGCAGTCTGCAGGCGGCTCTTACTAGCTGATGGTGACTTAGGGGGAGTGC
GGACCACTGCCACCTTCTTGGGCTCCCGGGTGGGCGGTGTTGGTAGGGATGGGGTGCGCGAGCGACTGCC
AGGCGTTCCGGGAGAGCCGGGGCTGCTGTAGCCGCTTCGTTCTCCGGATTTTGGTGGTTCACCTGACCCT
GGAGGAGTCTTAGGGCTGGGCGTGGTCTTGGCCGGGATCCTGGTGGCGTTGGACGTGCCCTTCTGGGCCG
GAGAGGCTGCTCCCCGAGGTGTGGCGATCTTCGCCCCGGTTTTGCCATCAGCGCCCTTGGCTTTCTTCTC
GTCATTTCCTGTCCTGTCTTTGCTGGCCACACGAGCTTGAGTCACATGCCCAGCGGCTTGGTCCTCCTGG
TTCGGGGTGTCTCCGATGCCTGCTTCTTCGGCTGTAATTCCTTCTGGGATCTCCGTGTGGGGCTGGGCAG
CGGCCTGCTTGTCGGGAGCTCTCTCATCCACTAGGGGCGCAGTCACGTCTTCAGCAGTTGGAGTGCTCTT
AGCATCGGAGGTCTCCGACCCTGGTTCCTCCGCTCCATCATCGGCGGGGGGCTGTGGGGGAGACTCTTTT
AAGCCATGGTCCATGTCTCCTTCTTGGTCTTGGAGCAGAGTGTAATCTCCAGCATGGTCTTCCATTGTGT
CAAACTCCTGGCGAGGGTCAGCCATACTGGTTCAAAGCCTGATAATCGACAGAAGGCGAGGACAGAAGAG
GACAGCGGAGGAGAAGGTGGTTGTGGCGGCGGCGGCAGAAGGTGGGCGGTGGCGGCGGCGCTGCTGCTGG
TGCTGGAGCTGGTGGGTGGCGGAGACTGAGAGCGCGCGCGGCCGAGAAAGCGCGTTCTGGAGGCCGGCGG
配列番号７
＞予想されるＸＭ＿００５５８４５４０．１：カニクイザル微小管関連タンパク質タウ（ＭＡＰＴ）、転写物変異体Ｘ１３、ｍＲＮＡ
GCCGAGCGGCAGGGCGCTCGCGCGCGCCCACTGGTGGCCGGAGGAGAAGGCTCCCGCGGAGGCCGGGCTG
CCCGCCCCCTCCCCTGGGGAGGCTCGCGCTCCCGCTGCTCGCGCCTGCGCCGCCTGCCGGCCTCGGGAAC
GCGCCCTCTTCCCCGGCGCGCGCCCTCGCAGTCACCGCCACCCACCAGCTCCGGCACCAACAGCAGCGCC
GCTGCCACCGCCCACCTTCTGCCGCCGCCACCACAGCCACCTTCTCCTCCTCCGCTGTCCTCTCCCGTCC
TCGCCTCTGTCGACTATCAGGCGAGCCTTGAACCAGGATGGCTGAGCCCCGCCAGGAGTTCGATGTGATG
GAAGATCACGCTGGGACGTACGGGTTGGGGGACAGGAAAGATCAAGAGGGCTACACCATGCTCCAAGACC
AAGAGGGTGACACGGACGCTGGCCTGAAAGAATCTCCCCTGCAGACCCCCGCTGAGGATGGATCTGAGGA
ACTGGGCTCTGAAACCTCTGATGCTAAGAGCACTCCAACGGCGGAAGATGTGACAGCGCCCTTAGTGGAT
GAGAGAGCTCCCGGCGAGCAGGCTGCCGCCCAGCCCCACATGGAGATCCCAGAAGGAACCACAGCTGAGG
AAGCAGGCATCGGAGACACCCCCAGCCTGGAAGACGAAGCTGCTGGTCACGTGACCCAAGCTCGCATGGT
CAGTAAAAGCAAAGACGGGACTGGAAGCGATGACAAAAAAGCCAAGGGGGCTGATGGGAAAACGAAGATC
GCCACACCCCGGGGAGCGGCCCCTCCAGGCCAGAAGGGCCAAGCCAACGCCACCAGGATTCCAGCAAAAA
CCCCGCCCGCCCCAAAGACACCACCCAGCTCTGGTGAACCTCCAAAATCAGGGGATCGCAGTGGCTACAG
CAGCCCCGGCTCCCCGGGCACTCCCGGCAGCCGCTCCCGCACCCCGTCCCTTCCAACCCCTCCAGCCCGG
GAGCCCAAGAAGGTGGCGGTGGTCCGTACTCCACCTAAGTCGCCGTCTTCCGCCAAGAGCCGCCTGCAGA
CAGCCCCCGTGCCCATGCCAGACCTGAAGAACGTCAAGTCCAAGATCGGCTCCACCGAGAACCTGAAGCA
CCAGCCGGGAGGCGGGAAGGTGCAGATAATTAATAAGAAGCTGGATCTTAGCAACGTCCAGTCCAAGTGT
GGCTCAAAGGATAATATCAAACACGTCCCGGGAGGCGGCAGTGTGCAAATAGTCTACAAACCAGTTGACC
TGAGCAAGGTGACCTCCAAGTGTGGCTCATTAGGCAACATCCATCATAAACCAGGAGGTGGCCAGGTGGA
AGTAAAATCTGAGAAGCTGGACTTCAAGGACAGAGTGCAGTCGAAGATCGGGTCCCTGGACAATATCACC
CATGTCCCTGGCGGAGGAAATAAAAAGATTGAAACCCACAAGCTGACCTTCCGCGAGAACGCCAAAGCCA
AGACAGACCACGGGGCGGAAATCGTGTACAAGTCGCCGGTGGTGTCTGGGGACACGTCTCCACGGCACCT
CAGCAATGTCTCCTCCACCGGCAGCATCGACATGGTAGACTCGCCCCAGCTCGCCACGCTAGCCGACGAG
GTGTCTGCCTCCCTGGCCAAGCAGGGTTTGTGATCAGGCCCCCGGGGCGGTCAATAATCGTGGAGAGAAG
AGAGAGTGAGAGTGTGGAAAAAAAAAGAATAATGACCCGGCCCCGCCCTCTGCCCCCAGCTGCTCCTCGC
AGTTCGGTTAATCGGTTCATCACTTAACCGGCTTTTATCGCTCGGCTTTGGCTCGGGACTTCAAAATCAG
TGATGGGAATAAGAGCAAATTGCATCTTTCCAAATTGATCGGTGGGCTAATAATAAAATATTTTTTAAAA
AACATTCAAAAACATGGCCACACCCAACATTTCCTCGGGCAATTCCTTTTGATTCTTTTTTTTTCCCCCT
CCATGTAGAAGAGGGAGAAGGAGAGGCTGTGAAAGCTGCTTCGGGGGGATTTCAAGAGACTGGGGGTGCC
CACCGCCTCTGGCCCTGTCGTGGGGGTGTCACAGAGGCAGCGGCAGCAACAAAGGATTTGAAACTTGGTG
TGTTCGTGGAGCCACAGGCAGACGATGTCAACCTTGTGTGAGTGTGACGGGTGGGGGTGGGGCGGGAGGC
CATGGGGGAGGCCAAGGCAGGGGCTGGGCAGAGGGGAGAGGAAGGACGAGAAGGGGGAGTGGGAGAGGAA
GCCACATGCTGGAGAGGAGATGCCCTCCTCCGCGCCACTGGGAGGGCCAAGGCCTCCGCCACCTGCAGTG
TCTCAGACTGAGCGGCTGCCTGTCCTTGGTGGCCAGGGTCTGCTGCGAGTTGATGTGCCACCCTCTGCAG
GGCAGCCTGTGGGAGAAGGGGCGGCGGGTAAGAAGAGAAGGCAAGCTGGCGGGAGGGTGGCACCCCGTGG
ATGACCTCCTTGGAAAAGACTGACCTTGATGTCGGAGGGCGCTGGCCTCTTCCTCCCTCCCTGCAGGGTA
GGGGGCCTGAGCCGAGGGGCTTCCCTCTGCTCCACAGAAACCCTGTTTTATTGAGTTCTGAAGGTTGGAA
CTGCAGCCATGATTTTGGCCACTTTGCAGACCTGGGACTTTAGGGCTAACCAGTTCTCTTTGTAAGGACT
TGTGCCTCTTGGGAGACGTCCACCCGTTTCCAAGCCTGGGCCACCGGCATCTCTGGAGTGTGCAGGGGTC
TGGGAGGCGGGTCCCGAGCCCCCTGTCCTTCCCACGGCCACTGCAGTCACCCCTGTCTGCCCCACTGTGC
TGTCGTCTGCCATGAGAACCCAGTCACTGCCTATACCCCTCATCACGTCACAATGTCCAAATTCCCAGCC
TCACCACCCCCCTTCTCAGTAAGGACCCTGGTTGGCTGTGGGAGGCACCTACTCCATACTGAGGGTGAAA
TTAAGGGAAGGTAAAGTCCAGGCACAAGAGTGGGACCCCAGCCTCTCACTCTCAGTTCCACTCATCCAAC
TGGGTCCCTCACCACGAATCTCACGACCTGATTCGGTTCCCTGCCTCCTCCTCCCATCACAGATGTGAGC
CAGGGCACTGCTCAGCTGTGACCCTCGGTGTTTCTGCCTTGTTGACATAGAGAGAGCCCTTTCCCCCCGA
GAAGGCCTGGCCCCTTCCTGTGCTGAGCCCGCAGCAGGAGGCTGGGTGTCCTGGTTGTCGGTGACGGCAC
CAGGATGGGCGGGCAAGGCACCCAGGGCAGGCCCACAGTCCCGCTGTCCCCCACTTGCACCCCAGCTTGT
GGCTGCCAGCCTCCCAGACAGCCCAGCCCGCTGCTCAGCTCCACATGCATAGAATCAGCCCTCCACATCC
CAAAAAGGGGAACACACCCCCTTCGAAATGGTTTTCTCCCCGGTCCCAGCTGGAAGCCATGCTGTCTGTT
CTGCTGGAGCAGCTGAACATATACATAGATGTTGCCCTGCCCTCCCCATCTGCACCCTGTTGCGTTGTAG
TTGGATTTGTCTGTTTATGCTTGGATTCACCAGAGTGACTATGATAGTGAAAAGAAAAAAAAAAAAAAAA
AAAGGACGCATGTATCTTGAAATGCTTGTAAAGAGGTTTCTAACCCACCCTCACAAGGTGTCTCTCACCC
CCACGCTGGGACGCGTGTGGCCTGTGTGGCGCCGCCCTGCTGGGGCCTCCCAAGGTTTGAAAGGCTTTCC
TCAGCATCCGGGACCCAACAGAGACCAGATTCTAGCATCTAAGGAGGCCGTTCAGCTGTGAAGAAGGCCT
GAAGCACAGGATTAGGACTGAAGCGATGACATCTCCTTCCCTACTTCCCCTTGGGGCTCTCTGTGTCAGG
GCAGAGAGTAGGTCTTGTGGCTGGTCTGGCTTGCGGCACGAGGATGGTTCTCTCTGGTCACAGCCCGAAG
TCCCACAGCAGTCCTAAAGGAGGCTTACAACTCCTGCATCACAAGAAGAAGGAAGCCAGTGCCAGCTGGG
GGGATCTGCAGCTCCCAGAAGCTCCATGAGCCTCAGCCACCCCGCAGACTGGGTTCCTCGCCAAGCTCGC
CCTCTGGAGGGGCAGCCAGCCTCCCACCAAGGGCCCTGCGACCACAGCAGGGATTGGGATGAATGGCCTA
TCCTGGATCTGCTCCAGAGGCCCGAGCCACCTGCCTGAGGAAGGATAAGTCAGGAGACACCGTTCCCAAA
GCCTTGACCAGAGCACCTCAGCCCACTGACCTTGCACAAACTCCATCTGCTGCCATGAGAAAAGGGAAGC
CGCCTTTGCAAAAAATTGCTGCCTAAAGAAACTCAGCAGCCTCAGGCTCAATTCTGCCGCTTCTGGTTTG
GGTACAGTTAAAGGCAACCCTGAGGGACTTGGCAGTAGAAATCCAGGGCATCCCCTAGGGCTGGCAACTT
CGTGTGCAGCTAGAGCTTTCCCTGCAAGAAGTTTCTGGGCCCAGAACTCTCCACCAGGAAGCTCCCTGCT
GTTCGCTAAGTCCCAGCAATTCTCTAAGTGAAGGGATCTGAGAATGAGGAGGAAATGTGGGGTAGAGATT
TGGTGGTGGTTAGAGACATGCCCCCCTCATTACTGCCAACAGTTTCGGCTGCATTTTTCACGTACCTCGG
TTCCTCTTCCTGAAGTTCTTGTGCCCTGCTCTTCAGCACCGTGGGCCTTATCCGGTAGGCTCTGGGATCT
CCCCCTTGTGGGGCAGGCTCTTGGGGCCAGCCTAAGATCATGGTTTAGGGTGATCAGTGCTGGCAGATAA
ATTGCAAAGGCACGCTGGCTTGTGACCTCAAATGACAATCCCCCCAGGGCTGGGCACTCCTCCCCTCCCC
TCACTTCTCCCACCTGCAGAGCCAGTGTCCGTGGGTGGGCTAGATAGGATATACTGTATGCCGGCTCCTT
CAAGCTGTTGACTCACTTTATCAATAGTTCCATTTAAATTGACTTCAATGGTGAGACTGTATCCTGTTTG
CTATTGCTTATTGTGCTATGGGGGGAGGGGGGAGGAATGTGTAACATAGTTAACATGGGTAAAGGGAGAT
CTTGGGGTGCAGCACTTCAATTGCCTCGTAACCCTTTTCATCATTTCAACCACATTTGCTAAAGGGAGGG
AGCAGCCACGCGGTTAGAGGCCCTTGGGGTTTCTCTTTTCCACTGACAGCCTTTCCCAGGCAGCTGGCCA
GTTCCCCATTCCCTCCCCAGCCAGGTGCAGGCGTAGCAATATGGACATCTGGTTGCTTTGGCCTGCTGCC
CTCTTTCAGGGGTCCTAAGCCCACAATCATGCCTCCCTAAGACCCTGGCATCCTTCCTTTTAAGCCGTTG
GCACCTCTGTGCCACCTCTCACACTGGCTCCAGACACAGCCTGTGCTTCTGGCAGCTGAGATCACTCACT
TCCCCCTCCTCATCTTTGTTGGAGCTCCAAGTCAAGCCACGAGGTCAGGGCGAGGGCAGAGGTGGTCACC
AGCGTGTCCCATCTACAGACCTGTGGCTTCGTAAGACTTCTGATTTCTCTTCAGCTTTGAAAAGGGTTAC
CCTGGGCACTGGCCTAGAGTCTCACCTCCTAATAGACTTACCCCCATGAGTTTGCCATGTTGAGCAGGAC
AATTTCTGGCACTTGCAAGTCCCATGATTTCTTCGGTAATTGTGAGGGTGGGGGGAGGGACATGAAATCA
TCTTAGCTTAGCTTCCTGTCTGTGAATGTCTATATAGTGTATTGTGTGTTTTAACAAATGATTTACACTG
ACTGTTGCCGTAAAAGTGAATTTGGAAATAAAGTTATTACTCTGATTAAA
配列番号８
＞配列番号７の逆相補物
TTTAATCAGAGTAATAACTTTATTTCCAAATTCACTTTTACGGCAACAGT
CAGTGTAAATCATTTGTTAAAACACACAATACACTATATAGACATTCACAGACAGGAAGCTAAGCTAAGA
TGATTTCATGTCCCTCCCCCCACCCTCACAATTACCGAAGAAATCATGGGACTTGCAAGTGCCAGAAATT
GTCCTGCTCAACATGGCAAACTCATGGGGGTAAGTCTATTAGGAGGTGAGACTCTAGGCCAGTGCCCAGG
GTAACCCTTTTCAAAGCTGAAGAGAAATCAGAAGTCTTACGAAGCCACAGGTCTGTAGATGGGACACGCT
GGTGACCACCTCTGCCCTCGCCCTGACCTCGTGGCTTGACTTGGAGCTCCAACAAAGATGAGGAGGGGGA
AGTGAGTGATCTCAGCTGCCAGAAGCACAGGCTGTGTCTGGAGCCAGTGTGAGAGGTGGCACAGAGGTGC
CAACGGCTTAAAAGGAAGGATGCCAGGGTCTTAGGGAGGCATGATTGTGGGCTTAGGACCCCTGAAAGAG
GGCAGCAGGCCAAAGCAACCAGATGTCCATATTGCTACGCCTGCACCTGGCTGGGGAGGGAATGGGGAAC
TGGCCAGCTGCCTGGGAAAGGCTGTCAGTGGAAAAGAGAAACCCCAAGGGCCTCTAACCGCGTGGCTGCT
CCCTCCCTTTAGCAAATGTGGTTGAAATGATGAAAAGGGTTACGAGGCAATTGAAGTGCTGCACCCCAAG
ATCTCCCTTTACCCATGTTAACTATGTTACACATTCCTCCCCCCTCCCCCCATAGCACAATAAGCAATAG
CAAACAGGATACAGTCTCACCATTGAAGTCAATTTAAATGGAACTATTGATAAAGTGAGTCAACAGCTTG
AAGGAGCCGGCATACAGTATATCCTATCTAGCCCACCCACGGACACTGGCTCTGCAGGTGGGAGAAGTGA
GGGGAGGGGAGGAGTGCCCAGCCCTGGGGGGATTGTCATTTGAGGTCACAAGCCAGCGTGCCTTTGCAAT
TTATCTGCCAGCACTGATCACCCTAAACCATGATCTTAGGCTGGCCCCAAGAGCCTGCCCCACAAGGGGG
AGATCCCAGAGCCTACCGGATAAGGCCCACGGTGCTGAAGAGCAGGGCACAAGAACTTCAGGAAGAGGAA
CCGAGGTACGTGAAAAATGCAGCCGAAACTGTTGGCAGTAATGAGGGGGGCATGTCTCTAACCACCACCA
AATCTCTACCCCACATTTCCTCCTCATTCTCAGATCCCTTCACTTAGAGAATTGCTGGGACTTAGCGAAC
AGCAGGGAGCTTCCTGGTGGAGAGTTCTGGGCCCAGAAACTTCTTGCAGGGAAAGCTCTAGCTGCACACG
AAGTTGCCAGCCCTAGGGGATGCCCTGGATTTCTACTGCCAAGTCCCTCAGGGTTGCCTTTAACTGTACC
CAAACCAGAAGCGGCAGAATTGAGCCTGAGGCTGCTGAGTTTCTTTAGGCAGCAATTTTTTGCAAAGGCG
GCTTCCCTTTTCTCATGGCAGCAGATGGAGTTTGTGCAAGGTCAGTGGGCTGAGGTGCTCTGGTCAAGGC
TTTGGGAACGGTGTCTCCTGACTTATCCTTCCTCAGGCAGGTGGCTCGGGCCTCTGGAGCAGATCCAGGA
TAGGCCATTCATCCCAATCCCTGCTGTGGTCGCAGGGCCCTTGGTGGGAGGCTGGCTGCCCCTCCAGAGG
GCGAGCTTGGCGAGGAACCCAGTCTGCGGGGTGGCTGAGGCTCATGGAGCTTCTGGGAGCTGCAGATCCC
CCCAGCTGGCACTGGCTTCCTTCTTCTTGTGATGCAGGAGTTGTAAGCCTCCTTTAGGACTGCTGTGGGA
CTTCGGGCTGTGACCAGAGAGAACCATCCTCGTGCCGCAAGCCAGACCAGCCACAAGACCTACTCTCTGC
CCTGACACAGAGAGCCCCAAGGGGAAGTAGGGAAGGAGATGTCATCGCTTCAGTCCTAATCCTGTGCTTC
AGGCCTTCTTCACAGCTGAACGGCCTCCTTAGATGCTAGAATCTGGTCTCTGTTGGGTCCCGGATGCTGA
GGAAAGCCTTTCAAACCTTGGGAGGCCCCAGCAGGGCGGCGCCACACAGGCCACACGCGTCCCAGCGTGG
GGGTGAGAGACACCTTGTGAGGGTGGGTTAGAAACCTCTTTACAAGCATTTCAAGATACATGCGTCCTTT
TTTTTTTTTTTTTTTTCTTTTCACTATCATAGTCACTCTGGTGAATCCAAGCATAAACAGACAAATCCAA
CTACAACGCAACAGGGTGCAGATGGGGAGGGCAGGGCAACATCTATGTATATGTTCAGCTGCTCCAGCAG
AACAGACAGCATGGCTTCCAGCTGGGACCGGGGAGAAAACCATTTCGAAGGGGGTGTGTTCCCCTTTTTG
GGATGTGGAGGGCTGATTCTATGCATGTGGAGCTGAGCAGCGGGCTGGGCTGTCTGGGAGGCTGGCAGCC
ACAAGCTGGGGTGCAAGTGGGGGACAGCGGGACTGTGGGCCTGCCCTGGGTGCCTTGCCCGCCCATCCTG
GTGCCGTCACCGACAACCAGGACACCCAGCCTCCTGCTGCGGGCTCAGCACAGGAAGGGGCCAGGCCTTC
TCGGGGGGAAAGGGCTCTCTCTATGTCAACAAGGCAGAAACACCGAGGGTCACAGCTGAGCAGTGCCCTG
GCTCACATCTGTGATGGGAGGAGGAGGCAGGGAACCGAATCAGGTCGTGAGATTCGTGGTGAGGGACCCA
GTTGGATGAGTGGAACTGAGAGTGAGAGGCTGGGGTCCCACTCTTGTGCCTGGACTTTACCTTCCCTTAA
TTTCACCCTCAGTATGGAGTAGGTGCCTCCCACAGCCAACCAGGGTCCTTACTGAGAAGGGGGGTGGTGA
GGCTGGGAATTTGGACATTGTGACGTGATGAGGGGTATAGGCAGTGACTGGGTTCTCATGGCAGACGACA
GCACAGTGGGGCAGACAGGGGTGACTGCAGTGGCCGTGGGAAGGACAGGGGGCTCGGGACCCGCCTCCCA
GACCCCTGCACACTCCAGAGATGCCGGTGGCCCAGGCTTGGAAACGGGTGGACGTCTCCCAAGAGGCACA
AGTCCTTACAAAGAGAACTGGTTAGCCCTAAAGTCCCAGGTCTGCAAAGTGGCCAAAATCATGGCTGCAG
TTCCAACCTTCAGAACTCAATAAAACAGGGTTTCTGTGGAGCAGAGGGAAGCCCCTCGGCTCAGGCCCCC
TACCCTGCAGGGAGGGAGGAAGAGGCCAGCGCCCTCCGACATCAAGGTCAGTCTTTTCCAAGGAGGTCAT
CCACGGGGTGCCACCCTCCCGCCAGCTTGCCTTCTCTTCTTACCCGCCGCCCCTTCTCCCACAGGCTGCC
CTGCAGAGGGTGGCACATCAACTCGCAGCAGACCCTGGCCACCAAGGACAGGCAGCCGCTCAGTCTGAGA
CACTGCAGGTGGCGGAGGCCTTGGCCCTCCCAGTGGCGCGGAGGAGGGCATCTCCTCTCCAGCATGTGGC
TTCCTCTCCCACTCCCCCTTCTCGTCCTTCCTCTCCCCTCTGCCCAGCCCCTGCCTTGGCCTCCCCCATG
GCCTCCCGCCCCACCCCCACCCGTCACACTCACACAAGGTTGACATCGTCTGCCTGTGGCTCCACGAACA
CACCAAGTTTCAAATCCTTTGTTGCTGCCGCTGCCTCTGTGACACCCCCACGACAGGGCCAGAGGCGGTG
GGCACCCCCAGTCTCTTGAAATCCCCCCGAAGCAGCTTTCACAGCCTCTCCTTCTCCCTCTTCTACATGG
AGGGGGAAAAAAAAAGAATCAAAAGGAATTGCCCGAGGAAATGTTGGGTGTGGCCATGTTTTTGAATGTT
TTTTAAAAAATATTTTATTATTAGCCCACCGATCAATTTGGAAAGATGCAATTTGCTCTTATTCCCATCA
CTGATTTTGAAGTCCCGAGCCAAAGCCGAGCGATAAAAGCCGGTTAAGTGATGAACCGATTAACCGAACT
GCGAGGAGCAGCTGGGGGCAGAGGGCGGGGCCGGGTCATTATTCTTTTTTTTTCCACACTCTCACTCTCT
CTTCTCTCCACGATTATTGACCGCCCCGGGGGCCTGATCACAAACCCTGCTTGGCCAGGGAGGCAGACAC
CTCGTCGGCTAGCGTGGCGAGCTGGGGCGAGTCTACCATGTCGATGCTGCCGGTGGAGGAGACATTGCTG
AGGTGCCGTGGAGACGTGTCCCCAGACACCACCGGCGACTTGTACACGATTTCCGCCCCGTGGTCTGTCT
TGGCTTTGGCGTTCTCGCGGAAGGTCAGCTTGTGGGTTTCAATCTTTTTATTTCCTCCGCCAGGGACATG
GGTGATATTGTCCAGGGACCCGATCTTCGACTGCACTCTGTCCTTGAAGTCCAGCTTCTCAGATTTTACT
TCCACCTGGCCACCTCCTGGTTTATGATGGATGTTGCCTAATGAGCCACACTTGGAGGTCACCTTGCTCA
GGTCAACTGGTTTGTAGACTATTTGCACACTGCCGCCTCCCGGGACGTGTTTGATATTATCCTTTGAGCC
ACACTTGGACTGGACGTTGCTAAGATCCAGCTTCTTATTAATTATCTGCACCTTCCCGCCTCCCGGCTGG
TGCTTCAGGTTCTCGGTGGAGCCGATCTTGGACTTGACGTTCTTCAGGTCTGGCATGGGCACGGGGGCTG
TCTGCAGGCGGCTCTTGGCGGAAGACGGCGACTTAGGTGGAGTACGGACCACCGCCACCTTCTTGGGCTC
CCGGGCTGGAGGGGTTGGAAGGGACGGGGTGCGGGAGCGGCTGCCGGGAGTGCCCGGGGAGCCGGGGCTG
CTGTAGCCACTGCGATCCCCTGATTTTGGAGGTTCACCAGAGCTGGGTGGTGTCTTTGGGGCGGGCGGGG
TTTTTGCTGGAATCCTGGTGGCGTTGGCTTGGCCCTTCTGGCCTGGAGGGGCCGCTCCCCGGGGTGTGGC
GATCTTCGTTTTCCCATCAGCCCCCTTGGCTTTTTTGTCATCGCTTCCAGTCCCGTCTTTGCTTTTACTG
ACCATGCGAGCTTGGGTCACGTGACCAGCAGCTTCGTCTTCCAGGCTGGGGGTGTCTCCGATGCCTGCTT
CCTCAGCTGTGGTTCCTTCTGGGATCTCCATGTGGGGCTGGGCGGCAGCCTGCTCGCCGGGAGCTCTCTC
ATCCACTAAGGGCGCTGTCACATCTTCCGCCGTTGGAGTGCTCTTAGCATCAGAGGTTTCAGAGCCCAGT
TCCTCAGATCCATCCTCAGCGGGGGTCTGCAGGGGAGATTCTTTCAGGCCAGCGTCCGTGTCACCCTCTT
GGTCTTGGAGCATGGTGTAGCCCTCTTGATCTTTCCTGTCCCCCAACCCGTACGTCCCAGCGTGATCTTC
CATCACATCGAACTCCTGGCGGGGCTCAGCCATCCTGGTTCAAGGCTCGCCTGATAGTCGACAGAGGCGA
GGACGGGAGAGGACAGCGGAGGAGGAGAAGGTGGCTGTGGTGGCGGCGGCAGAAGGTGGGCGGTGGCAGC
GGCGCTGCTGTTGGTGCCGGAGCTGGTGGGTGGCGGTGACTGCGAGGGCGCGCGCCGGGGAAGAGGGCGC
GTTCCCGAGGCCGGCAGGCGGCGCAGGCGCGAGCAGCGGGAGCGCGAGCCTCCCCAGGGGAGGGGGCGGG
CAGCCCGGCCTCCGCGGGAGCCTTCTCCTCCGGCCACCAGTGGGCGCGCGCGAGCGCCCTGCCGCTCGGC
配列番号９
＞予想されるＸＭ＿００８７６８２７７．２：ドブネズミ（Ｒａｔｔｕｓｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）微小管関連タンパク質タウ（Ｍａｐｔ）、転写物変異体Ｘ７、ｍＲＮＡ
ACCGCCCACCTTCTGCTGTCGCCGCCGCCACAACCACCTTCCCCTCCGCTGTCCTCTTCTGTCCTCGCCT
CCTGTCGATTATCAGGCTTTGAAGCAGCATGGCTGAACCCCGCCAGGAGTTTGACACAATGGAAGACCAG
GCCGGAGATTACACTATGCTCCAAGACCAAGAAGGAGACATGGACCATGGCTTAAAAGAGTCTCCCCCAC
AGCCCCCAGCCGATGATGGATCAGAAGAACCAGGGTCGGAGACCTCTGATGCTAAGAGCACTCCAACTGC
TGAAGACGTGACTGCGCCCCTAGTGGAAGAGAGAGCTCCCGACAAGCAGGCGACTGCCCAGTCCCACACG
GAGATCCCAGAAGGCACCACAGCTGAAGAAGCAGGCATCGGAGACACCCCGAACATGGAGGACCAAGCTG
CTGGGCATGTGACTCAAGCTCGAGTGGCCGGCGTAAGCAAAGACAGGACAGGAAATGACGAGAAGAAAGC
CAAGGGCGCCGATGGCAAAACGGGGGCGAAGATCGCCACACCTCGGGGAGCAGCCACTCCGGGCCAGAAA
GGCACATCCAATGCCACCAGGATCCCAGCCAAGACCACACCCAGCCCAAAGACTCCTCCAGGATCAGGTG
AACCACCAAAATCCGGAGAACGAAGCGGCTACAGCAGCCCCGGCTCGCCCGGAACCCCTGGCAGTCGCTC
CCGTACCCCATCCCTACCAACGCCGCCCACCCGAGAGCCCAAAAAGGTGGCAGTGGTTCGCACTCCCCCT
AAGTCACCGTCTGCCAGTAAGAGCCGCCTACAGACTGCCCCTGTGCCCATGCCAGACCTAAAGAACGTCA
GGTCCAAGATTGGCTCCACTGAGAACCTGAAGCACCAGCCGGGAGGCGGCAAGGTGCAGATAATTAATAA
GAAGCTGGATCTTAGCAACGTCCAGTCCAAGTGTGGCTCAAAGGACAATATCAAACACGTCCCGGGCGGA
GGCAGTGTGCAAATAGTCTACAAGCCAGTGGACCTGAGCAAGGTGACCTCCAAGTGTGGTTCCTTAGGGA
ACATCCATCACAAGCCAGGAGGTGGCCAGGTAGAAGTAAAATCAGAGAAGCTGGACTTCAAGGATAGAGT
CCAGTCGAAGATTGGCTCCTTGGATAACATCACCCATGTCCCTGGAGGAGGGAATAAGAAGATTGAAACC
CACAAGCTGACCTTCAGGGAGAATGCCAAAGCCAAGACAGACCATGGAGCAGAAATCGTGTACAAGTCAC
CTGTGGTGTCTGGGGACACATCTCCACGGCACCTCAGCAACGTCTCCTCCACGGGCAGCATCGACATGGT
GGACTCTCCACAGCTTGCCACGTTAGCCGATGAAGTGTCCGCCTCTTTGGCCAAGCAGGGTTTGTGATCA
GGCCCCTGGGGCCGTCACTGATCATGGAGAGAAGAGAGAGTGAGAGTGTGGAAAAAAAAAAAAAAAAAAG
AATGACCTGGCCCCTCACCCTCTGCCCTCCCCGCTGCTCCTCATAGACAGGCTGACCAGCTTGTCACCTA
ACCTGCTTTTGTGGCTCGGGTTTGGCTCGGGACTTCAAAATCAGTGATGGGAAAAAGTAAATTTCATCTT
TCCAAATTGATTTGTGGGCTAGTAATAAAATATTTTTAAGGAAGGAAAAAAAAAAAAACACGTAAAACCA
TGGCCAAACAAAACCCAACATTTCCTTGGCAATTGTTATTGACCCCGCCCCCCCCCTCTGAGTTTTAGAG
GGTGAAGGAGGCTTTGGATGGAGGCTGCTTCTGGGGATTGGCTGAGGGACTAGGGCAACTAATTGCCCAC
AGCCCCATCTTAGGGGCATCAGGGACAGCGGCAGCAATGAAAGACTTGGGACTTGGTGTGTTTGTGGAGC
CGTAGGCAGGTGATGTTAACTTTGTGTGGGTTTGAGGGAGGACTGTGATAGTGAAGGCTGAGAGATGGGT
GGGCTGGGAGTCAGAGGAGAGAGGTGAGGAAGACAGGTTGGGAGAGGGGACATTGGCTCCTTGCCAAGGA
GCTTGGGAAGCACAGGTAGCCCTGGCTGCCTGCAGCAGTCTTAGCTAGCACAGATGCCTGCCTGAGAAAG
CACAGTGGGGTACAGTGGGTGTGTGTGCCCCTTCTGAAGGGCAGCCCATGGGAGAAGGGGTATTGGGCAG
AAGGAAGGTAGGCCAGAAGGTGGCACCTTGTAGATTGGTTCTCTGAAGGCTGACCTTGCCATCCCAGGGC
ACTGGCTCCCACCCTCCAGGGAGGGAGGTCCTGAGCTGAGGAGCTTCCCTTTGCTCTCACAGGAAAACCT
GTGTTACTGAGTTCTGAAGTTTGGAACTACAGCCATGATTTTGGCCACCATACAGACCTGGGACTTTAGG
GCTAACCAGTTCTTTGTAAGGACTTGTGCCTCTTGCGGGAACATCTGCCTGTTCTCAAGCCTGGTCCTCT
GGCACTTCTGCAGTGTGAGGGATGGGGGTGGTAATTCTGGGATGTGGGTCCCAGGCCTCCCATCCTCGCA
CAGCCACTGTATCCCCTCTACCTGTCCTATCATGCCCACGTCTGCCATGAGAGCCAGTCACTGCCGTCCG
TACATCACGTCTCACCGTCCTGAGTGCCCAGCCTCCCCAAGCCCCATCCCTGGCCCCTGGGTAGTTATGG
CCAATATCTGCTCTACACTAGGGGTTGGAGTCCAGGGAAGGCAAAGATTTGGGCCTTGGTCTCTAGTCCT
ACGTTGCACGAATCCAACCAGTGTGCCTCCCACAAGGAACCTTACAACCTTGTTTGGTTTGCTCCATCAT
TTCCCATCGTGGATGGGAGTCCGTGTGTGCCTGGAGATTACCCTGGACACCTCTGCTTTTTTTTTTTTAC
TTTAGCGGTTGCCTCCTAGGCCTGACTCCTTCCCATGTTGAACTGGAGGCAGCCACGTTAGGTGTCAATG
TCCTGGCATCAGTATGAACAGTCAGTAGTCCCAGGGCAGGGCCACACTTCTCCCATCTTCTGCTTCCACC
CCAGCTTGTGATTGCTAGCCTCCCAGAGCTCAGCCGCCATTAAGTCCCCATGCACGTAATCAGCCCTTCA
TACCCCAATTTGGGGAACATACCCCTTGATTGAAATGTTTTCCCTCCAGTCCTATGGAAGCGGTGCTGCC
TGCCCTGCTGGAGCAGCCAGCCATCTCCAGAGACGCAGCCCTTTCTCTCCTGTCCGCACCCTGTTGCGCT
GTAGTCGGATTCGTCTGTTTGTCTGGGTTCACCAGAGTGACTATGATAGTGAAAAGAAAAAGAAAAAGAA
AAAAGAAAAAAGAAAAAAAAAAAAGGACGCATGTTATCTTGAAATATTTGTCAAAAGGTTGTAGCCCACC
GCAGGGATTGGAGGGCCTGGATATTCCTTGTCTTCTTCGTGACTTAGGTCCAGGCCGGTGCAGTGCTACC
CTGCTGGGACATCCCATGTTTTGAAGGGTTTCTTCTTCATCTGGGACCCTGCAGACACTGGATTGTGACA
TTGGAGGTCTATGACATTGGCCAAGGCCTGAAGCACAGGACCCGTTAGAGGCAGCAGGCTCCGACTGTCA
GGGAGAGCTTGTGGCTGGCCTGTTTCTCTGAGTGAAGATGGTCCTCTCTAATCACAACTTCAAGTCCCAC
AGCAGCCCTGGCAGACATCTAAGAACTCCTGCATCACAAGAGAAAAGGACACTAGTACCAGCAGGGAGAG
CTGTGGCCCTAGAAATTCCATGACTCTCCACTACATATCCGTGGGTCCTTTCCAAGCCTTGGCCTCGTCA
CCAAGGGCTTGGGATGGACTGCCCCACTGATGAAAGGGACATCTTTGGAGACCCCCTTGGTTTCCAAGGC
GTCAGCCCCCTGACCTTGCATGACCTCCTACAGCTGTAAGGATGAGGCCTTTAAAGATTAGGAACCTCAG
GCCCAGGTCGGCCACTTTGGGCTTGGGTACAGTTAGGGACGATGCGGTAGAAGGAGGTGGCCAACCTTTC
CCATATAAGAGTTCTGTGTGCCCAGAGCTACCCTATTGTGAGCTCCCCACTGCTGATGGACTTTAGCTGT
CCTTAGAAGTGAAGAGTCCAACGGAGGAAAAGGAAGTGTGGTTTGATGGTCTGTGGTCCCTTCATCATGG
TTACCTGTTGTGGTTTTCTCTCGTATACCCATTTACCCATCCTGCAGTTCCTGTCCTTGAATAGGGGTGG
GGGTACTCTGCCATATCTCTTGTAGGGCAGTCAGCCCCCAAGTCATAGTTTGGAGTGATCTGGTCAGTGC
TAATAGGCAGTTTACAAAGGAATTCTGGCTTGTTACTTCAGTGAGGACAATCCCCCAAGGGCCCTGGCAC
CTGTCCTGTCTTTCCATGGCTCTCCACTGCAGAGCCAATGTCTTTGGGTGGGCTAGATAGGGTGTACAAT
TTGCCTGGTTCCTCCAAGCTCTTAATCCACTTTATCAATAGTTCCATTTAAATTGACTTCAATGATAAGA
GTGTATCCCATTTGAGATTGCTTGTGTTGTGGGGTAAAGGGGGGAGGAGGAACATGTTAAGATAATTGAC
ATGGGCAAGGGGAAGTCTTGAAGTGTAGCAGTTAAACCATCTTGTAGCCCCATTCATGATGTTGACCACT
TGCTAGAGAGAAGAGGTGCCATAAGGCTAGAACCTAGAGGCTTGGCTGTCCCACCAACAGGCAGGCTTTT
GCAAGGCAGAGGCAGCCAGCTAGGTCCCTGACTTCCCAGCCAGGTGCAGCTCTAAGAACTGCTCTTGCCT
GCTGCCTTCTTGTGGTGTCCAGAGCCCACAGCCAATGCCTCCTCAAAACCCTGGCTTCCTTCCTTCTAAT
CCACTGGCACATCAGCATCACCTCCGGATTGACTTCAGATCCACAGCCTACACTACTAGCAGTGGGTAAG
ACCACTTCCTTTGTCCTTGTCTGTTCTCCAGAAAAGTGGGCATGGAGGCGGTGTTAATAACTATAGGTCT
GTGGCTTTATGAGCCTTCAAACTTCTCTCTAGCTTCTGAAAGGGTTACTTTTGGGCAGTATTGCAGTCTC
ACCCTCCCGATGGGCTGTAGCCTGTGCAGTTGCTGTACTGGGCATGATCTCCAGTGCTTGCAAGTCCCAT
GATTTCTTTGGTGATTTTGAGGGTGGGGGGAGGGACATGAATCATCTTAGCTTAGCTTCCTGTCTGTGAA
TGTCCATATAGTGTACTGTGTTTTAACAAACGATTTACACTGACTGTTGCTGTACAAGTGAATTTGGAAA
TAAAGTTATTACTCTGATTAAA
配列番号１０
＞配列番号９の逆相補物
TTTAATCAGAGTAATAACTTTA
TTTCCAAATTCACTTGTACAGCAACAGTCAGTGTAAATCGTTTGTTAAAACACAGTACACTATATGGACA
TTCACAGACAGGAAGCTAAGCTAAGATGATTCATGTCCCTCCCCCCACCCTCAAAATCACCAAAGAAATC
ATGGGACTTGCAAGCACTGGAGATCATGCCCAGTACAGCAACTGCACAGGCTACAGCCCATCGGGAGGGT
GAGACTGCAATACTGCCCAAAAGTAACCCTTTCAGAAGCTAGAGAGAAGTTTGAAGGCTCATAAAGCCAC
AGACCTATAGTTATTAACACCGCCTCCATGCCCACTTTTCTGGAGAACAGACAAGGACAAAGGAAGTGGT
CTTACCCACTGCTAGTAGTGTAGGCTGTGGATCTGAAGTCAATCCGGAGGTGATGCTGATGTGCCAGTGG
ATTAGAAGGAAGGAAGCCAGGGTTTTGAGGAGGCATTGGCTGTGGGCTCTGGACACCACAAGAAGGCAGC
AGGCAAGAGCAGTTCTTAGAGCTGCACCTGGCTGGGAAGTCAGGGACCTAGCTGGCTGCCTCTGCCTTGC
AAAAGCCTGCCTGTTGGTGGGACAGCCAAGCCTCTAGGTTCTAGCCTTATGGCACCTCTTCTCTCTAGCA
AGTGGTCAACATCATGAATGGGGCTACAAGATGGTTTAACTGCTACACTTCAAGACTTCCCCTTGCCCAT
GTCAATTATCTTAACATGTTCCTCCTCCCCCCTTTACCCCACAACACAAGCAATCTCAAATGGGATACAC
TCTTATCATTGAAGTCAATTTAAATGGAACTATTGATAAAGTGGATTAAGAGCTTGGAGGAACCAGGCAA
ATTGTACACCCTATCTAGCCCACCCAAAGACATTGGCTCTGCAGTGGAGAGCCATGGAAAGACAGGACAG
GTGCCAGGGCCCTTGGGGGATTGTCCTCACTGAAGTAACAAGCCAGAATTCCTTTGTAAACTGCCTATTA
GCACTGACCAGATCACTCCAAACTATGACTTGGGGGCTGACTGCCCTACAAGAGATATGGCAGAGTACCC
CCACCCCTATTCAAGGACAGGAACTGCAGGATGGGTAAATGGGTATACGAGAGAAAACCACAACAGGTAA
CCATGATGAAGGGACCACAGACCATCAAACCACACTTCCTTTTCCTCCGTTGGACTCTTCACTTCTAAGG
ACAGCTAAAGTCCATCAGCAGTGGGGAGCTCACAATAGGGTAGCTCTGGGCACACAGAACTCTTATATGG
GAAAGGTTGGCCACCTCCTTCTACCGCATCGTCCCTAACTGTACCCAAGCCCAAAGTGGCCGACCTGGGC
CTGAGGTTCCTAATCTTTAAAGGCCTCATCCTTACAGCTGTAGGAGGTCATGCAAGGTCAGGGGGCTGAC
GCCTTGGAAACCAAGGGGGTCTCCAAAGATGTCCCTTTCATCAGTGGGGCAGTCCATCCCAAGCCCTTGG
TGACGAGGCCAAGGCTTGGAAAGGACCCACGGATATGTAGTGGAGAGTCATGGAATTTCTAGGGCCACAG
CTCTCCCTGCTGGTACTAGTGTCCTTTTCTCTTGTGATGCAGGAGTTCTTAGATGTCTGCCAGGGCTGCT
GTGGGACTTGAAGTTGTGATTAGAGAGGACCATCTTCACTCAGAGAAACAGGCCAGCCACAAGCTCTCCC
TGACAGTCGGAGCCTGCTGCCTCTAACGGGTCCTGTGCTTCAGGCCTTGGCCAATGTCATAGACCTCCAA
TGTCACAATCCAGTGTCTGCAGGGTCCCAGATGAAGAAGAAACCCTTCAAAACATGGGATGTCCCAGCAG
GGTAGCACTGCACCGGCCTGGACCTAAGTCACGAAGAAGACAAGGAATATCCAGGCCCTCCAATCCCTGC
GGTGGGCTACAACCTTTTGACAAATATTTCAAGATAACATGCGTCCTTTTTTTTTTTTCTTTTTTCTTTT
TTCTTTTTCTTTTTCTTTTCACTATCATAGTCACTCTGGTGAACCCAGACAAACAGACGAATCCGACTAC
AGCGCAACAGGGTGCGGACAGGAGAGAAAGGGCTGCGTCTCTGGAGATGGCTGGCTGCTCCAGCAGGGCA
GGCAGCACCGCTTCCATAGGACTGGAGGGAAAACATTTCAATCAAGGGGTATGTTCCCCAAATTGGGGTA
TGAAGGGCTGATTACGTGCATGGGGACTTAATGGCGGCTGAGCTCTGGGAGGCTAGCAATCACAAGCTGG
GGTGGAAGCAGAAGATGGGAGAAGTGTGGCCCTGCCCTGGGACTACTGACTGTTCATACTGATGCCAGGA
CATTGACACCTAACGTGGCTGCCTCCAGTTCAACATGGGAAGGAGTCAGGCCTAGGAGGCAACCGCTAAA
GTAAAAAAAAAAAAGCAGAGGTGTCCAGGGTAATCTCCAGGCACACACGGACTCCCATCCACGATGGGAA
ATGATGGAGCAAACCAAACAAGGTTGTAAGGTTCCTTGTGGGAGGCACACTGGTTGGATTCGTGCAACGT
AGGACTAGAGACCAAGGCCCAAATCTTTGCCTTCCCTGGACTCCAACCCCTAGTGTAGAGCAGATATTGG
CCATAACTACCCAGGGGCCAGGGATGGGGCTTGGGGAGGCTGGGCACTCAGGACGGTGAGACGTGATGTA
CGGACGGCAGTGACTGGCTCTCATGGCAGACGTGGGCATGATAGGACAGGTAGAGGGGATACAGTGGCTG
TGCGAGGATGGGAGGCCTGGGACCCACATCCCAGAATTACCACCCCCATCCCTCACACTGCAGAAGTGCC
AGAGGACCAGGCTTGAGAACAGGCAGATGTTCCCGCAAGAGGCACAAGTCCTTACAAAGAACTGGTTAGC
CCTAAAGTCCCAGGTCTGTATGGTGGCCAAAATCATGGCTGTAGTTCCAAACTTCAGAACTCAGTAACAC
AGGTTTTCCTGTGAGAGCAAAGGGAAGCTCCTCAGCTCAGGACCTCCCTCCCTGGAGGGTGGGAGCCAGT
GCCCTGGGATGGCAAGGTCAGCCTTCAGAGAACCAATCTACAAGGTGCCACCTTCTGGCCTACCTTCCTT
CTGCCCAATACCCCTTCTCCCATGGGCTGCCCTTCAGAAGGGGCACACACACCCACTGTACCCCACTGTG
CTTTCTCAGGCAGGCATCTGTGCTAGCTAAGACTGCTGCAGGCAGCCAGGGCTACCTGTGCTTCCCAAGC
TCCTTGGCAAGGAGCCAATGTCCCCTCTCCCAACCTGTCTTCCTCACCTCTCTCCTCTGACTCCCAGCCC
ACCCATCTCTCAGCCTTCACTATCACAGTCCTCCCTCAAACCCACACAAAGTTAACATCACCTGCCTACG
GCTCCACAAACACACCAAGTCCCAAGTCTTTCATTGCTGCCGCTGTCCCTGATGCCCCTAAGATGGGGCT
GTGGGCAATTAGTTGCCCTAGTCCCTCAGCCAATCCCCAGAAGCAGCCTCCATCCAAAGCCTCCTTCACC
CTCTAAAACTCAGAGGGGGGGGGCGGGGTCAATAACAATTGCCAAGGAAATGTTGGGTTTTGTTTGGCCA
TGGTTTTACGTGTTTTTTTTTTTTTCCTTCCTTAAAAATATTTTATTACTAGCCCACAAATCAATTTGGA
AAGATGAAATTTACTTTTTCCCATCACTGATTTTGAAGTCCCGAGCCAAACCCGAGCCACAAAAGCAGGT
TAGGTGACAAGCTGGTCAGCCTGTCTATGAGGAGCAGCGGGGAGGGCAGAGGGTGAGGGGCCAGGTCATT
CTTTTTTTTTTTTTTTTTTCCACACTCTCACTCTCTCTTCTCTCCATGATCAGTGACGGCCCCAGGGGCC
TGATCACAAACCCTGCTTGGCCAAAGAGGCGGACACTTCATCGGCTAACGTGGCAAGCTGTGGAGAGTCC
ACCATGTCGATGCTGCCCGTGGAGGAGACGTTGCTGAGGTGCCGTGGAGATGTGTCCCCAGACACCACAG
GTGACTTGTACACGATTTCTGCTCCATGGTCTGTCTTGGCTTTGGCATTCTCCCTGAAGGTCAGCTTGTG
GGTTTCAATCTTCTTATTCCCTCCTCCAGGGACATGGGTGATGTTATCCAAGGAGCCAATCTTCGACTGG
ACTCTATCCTTGAAGTCCAGCTTCTCTGATTTTACTTCTACCTGGCCACCTCCTGGCTTGTGATGGATGT
TCCCTAAGGAACCACACTTGGAGGTCACCTTGCTCAGGTCCACTGGCTTGTAGACTATTTGCACACTGCC
TCCGCCCGGGACGTGTTTGATATTGTCCTTTGAGCCACACTTGGACTGGACGTTGCTAAGATCCAGCTTC
TTATTAATTATCTGCACCTTGCCGCCTCCCGGCTGGTGCTTCAGGTTCTCAGTGGAGCCAATCTTGGACC
TGACGTTCTTTAGGTCTGGCATGGGCACAGGGGCAGTCTGTAGGCGGCTCTTACTGGCAGACGGTGACTT
AGGGGGAGTGCGAACCACTGCCACCTTTTTGGGCTCTCGGGTGGGCGGCGTTGGTAGGGATGGGGTACGG
GAGCGACTGCCAGGGGTTCCGGGCGAGCCGGGGCTGCTGTAGCCGCTTCGTTCTCCGGATTTTGGTGGTT
CACCTGATCCTGGAGGAGTCTTTGGGCTGGGTGTGGTCTTGGCTGGGATCCTGGTGGCATTGGATGTGCC
TTTCTGGCCCGGAGTGGCTGCTCCCCGAGGTGTGGCGATCTTCGCCCCCGTTTTGCCATCGGCGCCCTTG
GCTTTCTTCTCGTCATTTCCTGTCCTGTCTTTGCTTACGCCGGCCACTCGAGCTTGAGTCACATGCCCAG
CAGCTTGGTCCTCCATGTTCGGGGTGTCTCCGATGCCTGCTTCTTCAGCTGTGGTGCCTTCTGGGATCTC
CGTGTGGGACTGGGCAGTCGCCTGCTTGTCGGGAGCTCTCTCTTCCACTAGGGGCGCAGTCACGTCTTCA
GCAGTTGGAGTGCTCTTAGCATCAGAGGTCTCCGACCCTGGTTCTTCTGATCCATCATCGGCTGGGGGCT
GTGGGGGAGACTCTTTTAAGCCATGGTCCATGTCTCCTTCTTGGTCTTGGAGCATAGTGTAATCTCCGGC
CTGGTCTTCCATTGTGTCAAACTCCTGGCGGGGTTCAGCCATGCTGCTTCAAAGCCTGATAATCGACAGG
AGGCGAGGACAGAAGAGGACAGCGGAGGGGAAGGTGGTTGTGGCGGCGGCGACAGCAGAAGGTGGGCGGT
配列番号１１
＞予想されるＸＭ＿００５６２４１８３．３：イヌ（Ｃａｎｉｓｌｕｐｕｓｆａｍｉｌｉａｒｉｓ）微小管関連タンパク質タウ（ＭＡＰＴ）、転写物変異体Ｘ２３、ｍＲＮＡ
CGCGCTCGCGCTCTCAGCCACCCACCAGCTCCCGCACCAGCAGCAGCAGCGCCGCCGCCGCCGCCGCCGC
CGCCGCCGCCCACCTTCTGCTGCCGCCACCACAGCCACTTTCTCCTCTTTCCTCTCCTGTCCTCGCCCTC
TGTCGACTATCAGGTGGGCCTTGACCTAGGATGGCTGAGCCCCGCCAGGAGTTCACTGTGATGGAAGATC
ATGCTGGGACATACGGGAAAGATCTCCCCTCTCAGGGGGGCTACACCCTGCTGCAAGACCATGAGGGGGA
CGTGGATCACGGCCTGAAAGCTGAAGAAGCAGGCATTGGAGACACCCCCAACCTGGAAGACCAAGCTGCT
GGACATGTGACTCAAGCTCGCATGGTCAGTAAAGGCAAAGATGGGACTGGAACCGATGACAAAAAAGCCA
AGGGGGCTGATGGTAAAACTGGAACGAAGATCGCCACACCCCGGGGAGCGACCCCTTCAGGCCAGAAAGG
CCAGGCCAATGCCACCAGGATTCCAGCGAAAACCACGCCCTCCCCCAAGACCCCACCGGGCGGTGAATCT
GGAAAATCTGGGGATCGCAGTGGCTACAGCAGCCCCGGCTCCCCAGGCACTCCTGGCAGCCGCTCCCGCA
CCCCGTCCCTGCCAACCCCACCCACCCGGGAGCCCAAGAAGGTGGCGGTGGTCCGCACCCCACCCAAGTC
GCCGTCTGCAGCCAAGAGTCGCCTGCAGACCGCCCCTGTGCCCATGCCAGACCTAAAGAACGTCAGATCC
AAGATCGGCTCCACTGAAAACCTGAAGCACCAGCCAGGAGGTGGGAAGGTGCAAATAGTGTACAAACCAG
TGGATCTGAGCAAGGTGACCTCCAAGTGCGGCTCATTAGGCAACATCCATCATAAGCCAGGAGGCGGTCA
GGTGGAAGTCAAATCTGAGAAGCTGGACTTCAAGGACAGAGTCCAGTCGAAGATCGGGTCCCTGGACAAC
ATCACCCACGTCCCTGGCGGAGGGAATAAAAAGATCGAAACCCACAAGCTGACCTTCCGTGAGAACGCCA
AAGCCAAGACCGACCACGGGGCGGAGATCGTGTACAAGTCGCCCGTGGTGTCCGGGGACACGTCTCCGCG
GCACCTGAGCAACGTGTCCTCCACGGGCAGCATCGACATGGTCGACTCGCCCCAGCTCGCCACGCTAGCC
GACGAAGTGTCCGCCTCCCTGGCCAAGCAGGGTTTGTGATCAGGCCCCCGGGGCGGTCAATGATCGTGGA
GAGAAGAGAGTGTGGAAAAAAAAAGAATAATGATCTGGCCCTTCTCGCCCTCTGCCCTCCCCCAGCTGCT
CCTCACAGACCGGTTAATCGGTTAATCACTTAACCTGCTTTTGTCGCTCGGCTCTGGCTCGGGACTTCAA
AATCAGTGACGGGAAAAAGCAAATTTCATCTTTCCAAATTGATGGGTGGGCTAATAATAATAAAATATTT
TTAAAACCATTTAAAAA
配列番号１２
＞配列番号１１の逆相補物
TTTTTAAATGGTTTTAA
AAATATTTTATTATTATTAGCCCACCCATCAATTTGGAAAGATGAAATTTGCTTTTTCCCGTCACTGATT
TTGAAGTCCCGAGCCAGAGCCGAGCGACAAAAGCAGGTTAAGTGATTAACCGATTAACCGGTCTGTGAGG
AGCAGCTGGGGGAGGGCAGAGGGCGAGAAGGGCCAGATCATTATTCTTTTTTTTTCCACACTCTCTTCTC
TCCACGATCATTGACCGCCCCGGGGGCCTGATCACAAACCCTGCTTGGCCAGGGAGGCGGACACTTCGTC
GGCTAGCGTGGCGAGCTGGGGCGAGTCGACCATGTCGATGCTGCCCGTGGAGGACACGTTGCTCAGGTGC
CGCGGAGACGTGTCCCCGGACACCACGGGCGACTTGTACACGATCTCCGCCCCGTGGTCGGTCTTGGCTT
TGGCGTTCTCACGGAAGGTCAGCTTGTGGGTTTCGATCTTTTTATTCCCTCCGCCAGGGACGTGGGTGAT
GTTGTCCAGGGACCCGATCTTCGACTGGACTCTGTCCTTGAAGTCCAGCTTCTCAGATTTGACTTCCACC
TGACCGCCTCCTGGCTTATGATGGATGTTGCCTAATGAGCCGCACTTGGAGGTCACCTTGCTCAGATCCA
CTGGTTTGTACACTATTTGCACCTTCCCACCTCCTGGCTGGTGCTTCAGGTTTTCAGTGGAGCCGATCTT
GGATCTGACGTTCTTTAGGTCTGGCATGGGCACAGGGGCGGTCTGCAGGCGACTCTTGGCTGCAGACGGC
GACTTGGGTGGGGTGCGGACCACCGCCACCTTCTTGGGCTCCCGGGTGGGTGGGGTTGGCAGGGACGGGG
TGCGGGAGCGGCTGCCAGGAGTGCCTGGGGAGCCGGGGCTGCTGTAGCCACTGCGATCCCCAGATTTTCC
AGATTCACCGCCCGGTGGGGTCTTGGGGGAGGGCGTGGTTTTCGCTGGAATCCTGGTGGCATTGGCCTGG
CCTTTCTGGCCTGAAGGGGTCGCTCCCCGGGGTGTGGCGATCTTCGTTCCAGTTTTACCATCAGCCCCCT
TGGCTTTTTTGTCATCGGTTCCAGTCCCATCTTTGCCTTTACTGACCATGCGAGCTTGAGTCACATGTCC
AGCAGCTTGGTCTTCCAGGTTGGGGGTGTCTCCAATGCCTGCTTCTTCAGCTTTCAGGCCGTGATCCACG
TCCCCCTCATGGTCTTGCAGCAGGGTGTAGCCCCCCTGAGAGGGGAGATCTTTCCCGTATGTCCCAGCAT
GATCTTCCATCACAGTGAACTCCTGGCGGGGCTCAGCCATCCTAGGTCAAGGCCCACCTGATAGTCGACA
GAGGGCGAGGACAGGAGAGGAAAGAGGAGAAAGTGGCTGTGGTGGCGGCAGCAGAAGGTGGGCGGCGGCG
GCGGCGGCGGCGGCGGCGGCGCTGCTGCTGCTGGTGCGGGAGCTGGTGGGTGGCTGAGAGCGCGAGCGCG
配列番号１５３３
＞ＭＡＰＴ（ＮＭ＿００５９１０）エクソン１０
GTGCAAATAGTCTACAAACCAGTTGACCTGAGCAAGGTGACCTCCAAGTGTGGCTCATTA
GGCAACATCCATCATAAACCAG

Claims

ＭＡＰＴの発現を阻害するための二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤であって、ｄｓＲＮＡ剤は、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、
センス鎖は、配列番号１および配列番号３からなる群から選択されるヌクレオチド配列と３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖は、配列番号２および配列番号４からなる群から選択されるヌクレオチド配列と３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、ｄｓＲＮＡ剤。
ＭＡＰＴの発現を阻害するための二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤であって、ｄｓＲＮＡ剤は、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、
アンチセンス鎖は、タウをコードするｍＲＮＡに対して相補性の領域を含み、相補性の領域は、配列番号２および配列番号４からなる群から選択されるヌクレオチド配列と３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、ｄｓＲＮＡ剤。
ＭＡＰＴの発現を阻害するための二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤であって、ｄｓＲＮＡ剤は、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、
アンチセンス鎖は、タウをコードするｍＲＮＡに対して相補性の領域を含み、相補性の領域は、表３～８および１６～２８のいずれか１つに記載のアンチセンスヌクレオチド配列と３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、ｄｓＲＮＡ剤。
センス鎖が、配列番号３のヌクレオチド５１２～５３２、５１３～５３３、５１４～５３４、５１５～５３５、５１６～５３６、５１７～５３７、５１８～５３８、５１９～５３９、５２０～５４０、１０６３～１０８３、１０６７～１０８７、１０７２～１０９２、１０７４～１０９４、１０７５～１０９５、１１２５～１１４５、１１２６～１１４６、１１２７～１１４７、１１２９～１１４９、１１７０～１１９０、１３９５～１４１５、１９０５～１９２５、１９０６～１９２６、１９０９～１９２９、１９１１～１９３１、１９１２～１９３２、１９１３～１９３３、１９１４～１９３４、１９１５～１９３５、１９１６～１９３６、１９１９～１９３９、１９５１～１９７１、１９５４～１９７４、１９５８～１９７８、２３８７～２４０７、２４０９～２４２９、２４１０～２４３０、２４６９～２４８９、２４７１～２４９１、２４７２～２４９２、２４７６～２４９６、２４７７～２４９７、２４７８～２４９８、２４８０～２５００、２４８１～２５０１、２４８２～２５０２、２４８４～２５０４、２７６２～２７８２、２７６４～２７８４、２７６６～２７８６、２７６７～２７８７、２７６８～２７８８、２７６９～２７８９、２８１９～２８３９、２８２１～２８４１、２８２８～２８４８、２９４３～２９６３、２９４４～２９６４、２９４６～２９６６、２９４７～２９６７、３２５２～３２７２、３２７７～３２９７、３２８０～３３００、３２８１～３３０１、３２８２～３３０２、３２８４～３３０４、３２８５～３３０５、３２８６～３３０６、３３３１～３３５１、３３３２～３３５２、３３３３～３３５３、３３３４～３３５４、３３３５～３３５５、３３３６～３３５６、３３３８～３３５８、３３４０～３３６０、３３４２～３３６２、３３４３～３３６３、３３４４～３３６４、３３４５～３３６５、３３４６～３３６６、３３４７～３３６７、３３４９～３３６９、３３５０～３３７０、３３５３～３３７３、３３６４～３３８４、３３６６～３３８６、３３６７～３３８７、３３６８～３３８８、３３６９～３３８９、３３７０～３３９０、３４１２～３４３２、３４１４～３４３４、３４１５～３４３５、３４１６～３４３６、３４１７～３４３７、３４１９～３４３９、３４２０～３４４０、３４２４～３４４４、３４２５～３４４５、３４２６～３４４６、３４２７～３４４７、３４２８～３４４８、３４２９～３４４９、３４３０～３４５０、３４３１～３４５１、３４３４～３４５４、４１３２～４１５２、４１３４～４１５４、４１７９～４１９９、４１８２～４２０２、４１８４～４２０４、４３９５～４４１５、４４２５～４４４５、４４２６～４４４６、４４２９～４４４９、４４６９～４４８９、４４７０～４４９０、４４７１～４４９１、４４７２～４４９２、４４７３～４４９３、４４７４～４４９４、４５６９～４５８９、４５７１～４５９１、４５７２～４５９２、４５９６～４６１６、４６２３～４６４３、４７２１～４７４１、４７２２～４７４２、４７２５～４７４５、４７２６～４７４６、４７６６～４７８６、４７６７～４７８７、４７６８～４７８８、４７６９～４７８９、４７７０～４７９０、４７７９～４７９９、４８０５～４８２５、４８０６～４８２６、４８０７～４８２７、４８０８～４８２８、４８０９～４８２９、４８１２～４８３２、４８１３～４８３３、４８１４～４８３４、４９３６～４９５６、５０７２～５０９２、５０７３～５０９３、５３４５～５３６５、５３４６～５３６６、５３４９～５３６９、５３５０～５３７０、５３５１～５３７１、５４６０～５４８０、５４６１～５４８１、５４６３～５４８３、５４６５～５４８５、５４６７～５４８７、５４６８～５４８８、５４６９～５４８９、５４７０～５４９０、５４７１～５４９１、５５０５～５５２５、５５０６～５５２６、５５０７～５５２７、５５０８～５５２８、５５０９～５５２９、５５１１～５５３１、５５１３～５５３３、５５１４～５５３４、５５４１～５５６１、５５４４～５５６４、５５４６～５５６６、５５４７～５５６７、５５４８～５５６８、５５５０～５５７０、５５５１～５５７１、５５７４～５５９４、５５７６～５５９６、５６１４～５６３４、５２１～５４１、５２２～５４２、５２３～５４３、５２４～５４４、５２５～５４５、５２６～５４６、５２７～５４７、５２８～５４８、５２９～５４９、５３０～５５０、５３１～５５１、５３２～５５２、５３３～５５３、５３４～５５４、５３５～５５５、５３６～５５６、１０３４～１０５４、１０３５～１０５５、１０３６～１０５６、１０３７～１０５７、１０３８～１０５８、１０３９～１０５９、１０４０～１０６０、１０４１～１０６１、１０４２～１０６２、１０４３～１０６３、１０４４～１０６４、１０４５～１０６５、１０４６～１０６６、１０４７～１０６７、１０４８～１０６８、１０４９～１０６９、１０５０～１０７０、１０５１～１０７１、１０５２～１０７２、１０５３～１０７３、１０５４～１０７４、１０６２～１０８２、１０６４～１０８４、１０６５～１０８５、１０６６～１０８６、１０６８～１０８８、１０６９～１０８９、１０７０～１０９０、１０７１～１０９１、１０７３～１０９３、１０７６～１０９６、１０７７～１０９７、１０７８～１０９８、１０７９～１０９９、１０８０～１１００、１０８１～１１０１、１０８２～１１０２、１１２８～１１４８、１１２９～１１４９、１１３０～１１５０、１１３１～１１５１、１１３２～１１５２、１１３３～１１５３、１１３４～１１５４、１１３５～１１５５、１１３６～１１５６、１１３７～１１５７、１１３８～１１５８、１１３９～１１５９、１１４０～１１６０、１１４１～１１６１、１１４２～１１６２、１１４３～１１６３、１１４４～１１６４、１１４５～１１６５、１１４６～１１６６、１１４７～１１６７、１１４８～１１６８、９７５～９９５、９７６～９９６、９７７～９９７、９７８～９９８、９７９～９９９、９８０～１０００、９８１～１００１、９８２～１００２、９８３～１００３、９８４～１００４、９８５～１００５、９８６～１００６、９８７～１００７、９８８～１００８、９８９～１００９、９９０～１０１０、９９１～１０１１、９９２～１０１２、９９３～１０１３、９９４～１０１４、９９５～１０１５、９９６～１０１６、９９７～１０１７、９９８～１０１８、９９９～１０１９、１０００～１０２０、１００１～１０２１、１００２～１０２２、１００３～１０２３、１００４～１０２４、１００５～１０２５、１００６～１０２６、１００７～１０２７、１００８～１０２８、１００９～１０２９、１０１０～１０３０、１０１１～１０３１、１０１２～１０３２、１０１３～１０３３、１０１４～１０３４、１０１５～１０３５、１０１６～１０３６、１０１７～１０３７、１０１８～１０３８、１０１９～１０３９、１０２０～１０４０、１０２１～１０４１、１０２２～１０４２、１０２３～１０４３、１０２４～１０４４、１０２５～１０４５、１０２６～１０４６、１０２７～１０４７、１０２８～１０４８、１０２９～１０４９、１０３０～１０５０、１０３１～１０５１、１０３２～１０５２、１０３３～１０５３、１０３４～１０５４、１０３５～１０５５、１０３６～１０５６、１０３７～１０５７、１０３８～１０５８、１０３９～１０５９、１０４０～１０６０、１０４１～１０６１、１０４２～１０６２、１０４３～１０６３、および１０４５～１０６５のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖が、配列番号４の対応するヌクレオチド配列からの少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
センス鎖が、配列番号３のヌクレオチド５２０～５４１、５２０～５５６、５１０～５３４、５１２～５３６、５１６～５４１、５１６～５４０、５２０～５４４、５２４～５４７、５２６～５５１、５２９～５５６、５３２～５５６、１０６５～１０８９、１０６８～１０９５、１０６８～１０９４、１０７５～１１００、１０７６～１１００、１０７９～１１０３、１１２３～１１４７、１１２７～１１５１、１１３０～１１５５、１９０３～１９３４、１９０３～１９３０、１９１４～１９４０、１９４９～１９７５、２４７０～２４９７、２９４１～２９６５、３２７５～３３０２、３２７８～３３０２、３３２９～３３５３、３３３３～３３５７、３３３８～３３６７、３３３８～３３６６、３３４８～３３９０、３３４８～３３８８、３３５１～３３８５、５５０７～５５６２、および５５４９～５５９７のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖が、配列番号４の対応するヌクレオチド配列からの少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
センス鎖が、配列番号１のヌクレオチド９７７～９９７、９８０～１０００、９７３～９９３、９８８～１００８、９８７～１００７、９７２～９９２、９７９～９９９、１００１～１０２１、９７６～９９６、９９４～１０１４、１００２～１０２２、９７８～９９８、９７４～９９４、５２０～５４０、５２１～５４１、５４６４～５４８４、１８１３～１８３３、２３７８～２３９８、３２４２～３２６２、５４４２～５４６２、１６６５～１６８５、５２４～５４４、５２０７～５２２７、４６７０～４６９０、３４２０～３４４０、３３２８～３３４８、５４０９～５４２９、５４３９～５４５９、４５２７～４５４７、５４４１～５４６１、５４１０～５４３０、および５４４６～５４６６のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖が、配列番号２の対応するヌクレオチド配列からの少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
アンチセンス鎖が、ＡＤ－５２３７９９．１、ＡＤ－５２３８０２．１、ＡＤ－５２３７９５．１、ＡＤ－５２３８１０．１、ＡＤ－５２３８０９．１、ＡＤ－１０１９３３１．１、ＡＤ－５２３８０１．１、ＡＤ－５２３８２３．１、ＡＤ－５２３７９８．１、ＡＤ－５２３８１６．１、ＡＤ－５２３８２４．１、ＡＤ－５２３８００．１、ＡＤ－５２３７９６．１、ＡＤ－５３５０９４．１、ＡＤ－５３５０９４．１、ＡＤ－５３５０９５．１、ＡＤ－５３８６４７．１、ＡＤ－５３５９２２．１、ＡＤ－５３６３１７．１、ＡＤ－５３６９１１．１、ＡＤ－５３８６２６．１、ＡＤ－５３５８６４．１、ＡＤ－５２３５６１．１、ＡＤ－５２３５６５．１、ＡＤ－５２３５６２．１、ＡＤ－５２６９１４．１、ＡＤ－５２６３９４．１、ＡＤ－３９５４５２．１、ＡＤ－５２５３４３．１、ＡＤ－５２４２７４．１、ＡＤ－５２６９５６．１、ＡＤ－５２６９８６．１、ＡＤ－５２６２９６．１、ＡＤ－５２６９８８．１、ＡＤ－５２６９５７．１、ＡＤ－５２６９９３．１、ＡＤ－１３９７０７０．１、ＡＤ－１３９７０７０．２、ＡＤ－１３９７０７１．１、ＡＤ－１３９７０７１．２、ＡＤ－１３９７０７２．１、ＡＤ－１３９７０７２．２、ＡＤ－１３９７０７３．１、ＡＤ－１３９７０７３．２、ＡＤ－１３９７０７４．１、ＡＤ－１３９７０７４．２、ＡＤ－１３９７０７５．１、ＡＤ－１３９７０７５．２、ＡＤ－１３９７０７６．１、ＡＤ－１３９７０７６．２、ＡＤ－１３９７０７７．１、ＡＤ－１３９７０７７．２、ＡＤ－１３９７０７８．１、ＡＤ－１３９７０７８．２、ＡＤ－１３９７２５０．１、ＡＤ－１３９７２５１．１、ＡＤ－１３９７２５２．１、ＡＤ－１３９７２５３．１、ＡＤ－１３９７２５４．１、ＡＤ－１３９７２５５．１、ＡＤ－１３９７２５６．１、ＡＤ－１３９７２５７．１、ＡＤ－１３９７２５８．１、ＡＤ－１３９７２５９．１、ＡＤ－１３９７２６０．１、ＡＤ－１３９７２６１．１、ＡＤ－１３９７２６２．１、ＡＤ－１３９７２６３．１、ＡＤ－１３９７２６４．１、ＡＤ－１３９７２６５．１、ＡＤ－１４２３２４２．１、ＡＤ－１４２３２４３．１、ＡＤ－１４２３２４４．１、ＡＤ－１４２３２４５．１、ＡＤ－１４２３２４６．１、ＡＤ－１４２３２４７．１、ＡＤ－１４２３２４８．１、ＡＤ－１４２３２４９．１、ＡＤ－１４２３２５０．１、ＡＤ－１４２３２５１．１、ＡＤ－１４２３２５２．１、ＡＤ－１４２３２５３．１、ＡＤ－１４２３２５４．１、ＡＤ－１４２３２５５．１、ＡＤ－１４２３２５６．１、ＡＤ－１４２３２５７．１、ＡＤ－１４２３２５８．１、ＡＤ－１４２３２５９．１、ＡＤ－１４２３２６０．１、ＡＤ－１４２３２６１．１、ＡＤ－１４２３２６２．１、ＡＤ－１４２３２６３．１、ＡＤ－１４２３２６４．１、ＡＤ－１４２３２６５．１、ＡＤ－１４２３２６６．１、ＡＤ－１４２３２６７．１、ＡＤ－１４２３２６８．１、ＡＤ－１４２３２６９．１、ＡＤ－１４２３２７０．１、ＡＤ－１４２３２７１．１、ＡＤ－１４２３２７２．１、ＡＤ－１４２３２７３．１、ＡＤ－１４２３２７４．１、ＡＤ－１４２３２７５．１、ＡＤ－１４２３２７６．１、ＡＤ－１４２３２７７．１、ＡＤ－１４２３２７８．１、ＡＤ－１４２３２７９．１、ＡＤ－１４２３２８０．１、ＡＤ－１４２３２８１．１、ＡＤ－１４２３２８２．１、ＡＤ－１４２３２８３．１、ＡＤ－１４２３２８４．１、ＡＤ－１４２３２８５．１、ＡＤ－１４２３２８６．１、ＡＤ－１４２３２８７．１、ＡＤ－１４２３２８８．１、ＡＤ－１４２３２８９．１、ＡＤ－１４２３２９０．１、ＡＤ－１４２３２９１．１、ＡＤ－１４２３２９２．１、ＡＤ－１４２３２９３．１、ＡＤ－１４２３２９４．１、ＡＤ－１４２３２９５．１、ＡＤ－１４２３２９６．１、ＡＤ－１４２３２９７．１、ＡＤ－１４２３２９８．１、ＡＤ－１４２３２９９．１、ＡＤ－１４２３３００．１、ＡＤ－１３９７２６６．１、ＡＤ－１３９７２６６．２、ＡＤ－１３９７２６７．１、ＡＤ－１４２３３０１．１、ＡＤ－１３９７２６８．１、ＡＤ－１３９７２６８．２、ＡＤ－１３９７２６９．１、ＡＤ－１４２３３０２．１、ＡＤ－１３９７２７０．１、ＡＤ－１３９７２７０．２、ＡＤ－１３９７２７１．１、ＡＤ－１３９７２７１．２、ＡＤ－１３９７２７２．１、ＡＤ－１４２３３０３．１、ＡＤ－１３９７２７３．１、ＡＤ－１４２３３０４．１、ＡＤ－１３９７２７４．１、ＡＤ－１４２３３０５．１、ＡＤ－１３９７２７５．１、ＡＤ－１４２３３０６．１、ＡＤ－１３９７２７６．１、ＡＤ－１３９７２７７．１、ＡＤ－１３９７２７７．２、ＡＤ－１３９７２７８．１、ＡＤ－１３９７２７９．１、ＡＤ－１３９７２８０．１、ＡＤ－１３９７２８１．１、ＡＤ－１３９７２８２．１、ＡＤ－１３９７２８３．１、ＡＤ－１３９７２８４．１、ＡＤ－１３９７２８５．１、ＡＤ－１３９７２８６．１、ＡＤ－１３９７２８７．１、ＡＤ－１３９７０７９．１、ＡＤ－１３９７０７９．２、ＡＤ－１３９７２８８．１、ＡＤ－１３９７２８９．１、ＡＤ－１３９７２９０．１、ＡＤ－１３９７０８０．１、ＡＤ－１３９７０８０．２、ＡＤ－１３９７２９１．１、ＡＤ－１３９７２９２．１、ＡＤ－１３９７２９３．１、ＡＤ－１３９７２９４．１、ＡＤ－１３９７０８１．１、ＡＤ－１３９７０８１．２、ＡＤ－１３９７２９５．１、ＡＤ－１３９７０８２．１、ＡＤ－１３９７０８２．２、ＡＤ－１３９７０８３．１、ＡＤ－１３９７０８３．２、ＡＤ－１３９７２９６．１、ＡＤ－１３９７２９７．１、ＡＤ－１３９７２９８．１、ＡＤ－１３９７２９９．１、ＡＤ－１３９７３００．１、ＡＤ－１３９７３０１．１、ＡＤ－１３９７３０２．１、ＡＤ－１３９７０８４．１、ＡＤ－１３９７０８５．１、ＡＤ－１３９７０８６．１、ＡＤ－１３９７３０３．１、ＡＤ－１３９７０８７．１、ＡＤ－１３９７０８７．２、ＡＤ－１３９７３０４．１、ＡＤ－１３９７３０５．１、ＡＤ－１３９７３０６．１、ＡＤ－１３９７３０７．１、ＡＤ－１３９７３０８．１、ＡＤ－１３９７３０９．１、ＡＤ－１３９７３１０．１、ＡＤ－１３９７３１１．１、ＡＤ－１３９７３１２．１、ＡＤ－１３９７３１３．１、ＡＤ－１３９７３１４．１、ＡＤ－１３９７３１５．１、ＡＤ－１３９７３１６．１、ＡＤ－１３９７３１７．１、ＡＤ－１３９７３１８．１、ＡＤ－１３９７３１９．１、ＡＤ－１３９７３２０．１、ＡＤ－１３９７３２１．１、ＡＤ－１３９７３２２．１、ＡＤ－１３９７０８８．１、ＡＤ－１３９７０８９．１、ＡＤ－１３９７０９０．１、ＡＤ－１３９７０９１．１、ＡＤ－１３９７０９２．１、ＡＤ－１３９７０９３．１、ＡＤ－１３９７０９４．１、ＡＤ－１３９７０９５．１、ＡＤ－１３９７０９６．１、ＡＤ－１３９７０９７．１、ＡＤ－１３９７０９８．１、ＡＤ－１３９７０９９．１、ＡＤ－１３９７１０１．１、ＡＤ－１３９７１０２．１、ＡＤ－１３９７１０３．１、ＡＤ－１３９７１０４．１、ＡＤ－１３９７１０５．１、ＡＤ－１３９７１０６．１、ＡＤ－１３９７１０７．１、ＡＤ－１３９７１０８．１、ＡＤ－１３９７１０９．１、ＡＤ－１３９７１１０．１、ＡＤ－１３９７１１１．１、ＡＤ－１３９７１１２．１、ＡＤ－１３９７１１３．１、ＡＤ－１３９７１１４．１、ＡＤ－１３９７１１５．１、ＡＤ－１３９７１１６．１、ＡＤ－１３９７１１７．１、ＡＤ－１３９７１１８．１、ＡＤ－１３９７１１９．１、ＡＤ－１３９７１２０．１、ＡＤ－１３９７１２１．１、ＡＤ－１３９７１２２．１、ＡＤ－１３９７１２３．１、ＡＤ－１３９７１２４．１、ＡＤ－１３９７１２５．１、ＡＤ－１３９７１２６．１、ＡＤ－１３９７１２７．１、ＡＤ－１３９７１２８．１、ＡＤ－１３９７１２９．１、ＡＤ－１３９７１３０．１、ＡＤ－１３９７１３１．１、ＡＤ－１３９７１３２．１、ＡＤ－１３９７１３３．１、ＡＤ－１３９７１３４．１、ＡＤ－１３９７１３５．１、ＡＤ－１３９７１３６．１、ＡＤ－１３９７１３７．１、ＡＤ－１３９７１３８．１、ＡＤ－１３９７１３９．１、ＡＤ－１３９７１４０．１、ＡＤ－１３９７１４１．１、ＡＤ－１３９７１４２．１、ＡＤ－１３９７１４３．１、ＡＤ－１３９７１４４．１、ＡＤ－１３９７１４５．１、ＡＤ－１３９７１４６．１、ＡＤ－１３９７１４７．１、ＡＤ－１３９７１４８．１、ＡＤ－１３９７１４９．１、ＡＤ－１３９７１５０．１、ＡＤ－１３９７１５１．１、ＡＤ－１３９７１５２．１、ＡＤ－１３９７１５３．１、ＡＤ－１３９７１５４．１、ＡＤ－１３９７１５５．１、ＡＤ－１３９７１５６．１、ＡＤ－１３９７１５７．１、ＡＤ－１３９７１５８．１、ＡＤ－１３９７１５９．１、ＡＤ－１３９７１６０．１、ＡＤ－１３９７１６１．１、ＡＤ－１３９７１６２．１、ＡＤ－１３９７１６３．１、ＡＤ－１３９７１６４．１、ＡＤ－１３９７１６５．１、ＡＤ－１３９７１６６．１、ＡＤ－１３９７１６７．１、ＡＤ－１３９７１６８．１、ＡＤ－１３９７１６９．１、ＡＤ－１３９７１７０．１、ＡＤ－１３９７１７１．１、ＡＤ－１３９７１７２．１、ＡＤ－１３９７１７３．１、ＡＤ－１３９７１７４．１、ＡＤ－１３９７１７５．１、ＡＤ－１３９７１７６．１、ＡＤ－１３９７１７７．１、ＡＤ－１３９７１７８．１、ＡＤ－１３９７１７９．１、ＡＤ－１３９７１８０．１、ＡＤ－１３９７１８１．１、ＡＤ－１３９７１８２．１、ＡＤ－１３９７１８３．１、ＡＤ－１３９７１８４．１、ＡＤ－１３９７１８５．１、ＡＤ－１３９７１８６．１、ＡＤ－１３９７１８７．１、ＡＤ－１３９７１８８．１、ＡＤ－１３９７１８９．１、ＡＤ－１３９７１９０．１、ＡＤ－１３９７１９１．１、ＡＤ－１３９７１９２．１、ＡＤ－１３９７１９３．１、ＡＤ－１３９７１９４．１、ＡＤ－１３９７１９５．１、ＡＤ－１３９７１９６．１、ＡＤ－１３９７１９７．１、ＡＤ－１３９７１９８．１、ＡＤ－１３９７１９９．１、ＡＤ－１３９７２００．１、ＡＤ－１３９７２０１．１、ＡＤ－１３９７２０２．１、ＡＤ－１３９７２０３．１、ＡＤ－１３９７２０４．１、ＡＤ－１３９７２０５．１、ＡＤ－１３９７２０６．１、ＡＤ－１３９７２０７．１、ＡＤ－１３９７２０８．１、ＡＤ－１３９７２０９．１、ＡＤ－１３９７２１０．１、ＡＤ－１３９７２１１．１、ＡＤ－１３９７２１２．１、ＡＤ－１３９７２１３．１、ＡＤ－１３９７２１４．１、ＡＤ－１３９７２１５．１、ＡＤ－１３９７２１６．１、ＡＤ－１３９７２１７．１、ＡＤ－１３９７２１８．１、ＡＤ－１３９７２１９．１、ＡＤ－１３９７２２０．１、ＡＤ－１３９７２２１．１、ＡＤ－１３９７２２２．１、ＡＤ－１３９７２２３．１、ＡＤ－１３９７２２４．１、ＡＤ－１３９７２２５．１、ＡＤ－１３９７２２６．１、ＡＤ－１３９７２２７．１、ＡＤ－１３９７２２８．１、ＡＤ－１３９７２２９．１、ＡＤ－１３９７２３０．１、ＡＤ－１３９７２３１．１、ＡＤ－１３９７２３２．１、ＡＤ－１３９７２３３．１、ＡＤ－１３９７２３４．１、ＡＤ－１３９７２３５．１、ＡＤ－１３９７２３６．１、ＡＤ－１３９７２３７．１、ＡＤ－１３９７２３８．１、ＡＤ－１３９７２３９．１、ＡＤ－１３９７２４０．１、ＡＤ－１３９７２４１．１、ＡＤ－１３９７２４２．１、ＡＤ－１３９７２４３．１、ＡＤ－１３９７２４４．１、ＡＤ－１３９７２４５．１、ＡＤ－１３９７２４６．１、ＡＤ－１３９７２４７．１、ＡＤ－１３９７２４８．１、ＡＤ－１３９７２４９．１、ＡＤ－５２３５６５．１、ＡＤ－１３９７０７２．３、ＡＤ－１３９７０７３．３、ＡＤ－１３９７０７６．３、ＡＤ－１３９７０７７．３、ＡＤ－１３９７０７８．３、ＡＤ－１３９７２５２．２、ＡＤ－１３９７２５７．２、ＡＤ－１３９７２５８．２、ＡＤ－１３９７２５９．２、ＡＤ－１３９７２６３．２、ＡＤ－１３９７２６４．２、ＡＤ－１３９７３０９．２、ＡＤ－６４９５８．１１４、ＡＤ－３９３７５８．４、ＡＤ－１３９７０８０．３、ＡＤ－１３９７２９３．２、ＡＤ－１３９７２９４．２、ＡＤ－１３９７０８１．３、ＡＤ－１３９７０８３．３、ＡＤ－１３９７２９８．２、ＡＤ－１３９７２９９．２、ＡＤ－１３９７０８４．２、
ＡＤ－１３９７０８５．２、ＡＤ－１３９７０８７．３、ＡＤ－１３９７３０６．２、ＡＤ－１３９７３０７．２、ＡＤ－１３９７３０８．２、ＡＤ－１３９７０８８．２、ＡＤ－１５６６２３８、ＡＤ－１５６６２３９、ＡＤ－１５６６２４０、ＡＤ－１５６６２４１、ＡＤ－１５６６２４２、ＡＤ－１５６６２４３、ＡＤ－１５６６２４４、ＡＤ－１５６６２４５、ＡＤ－１５６６２４６、ＡＤ－１０９１９６５、ＡＤ－１５６６２４８、ＡＤ－１５６６２４９、ＡＤ－１５６６２５０、ＡＤ－１０９１９６６、ＡＤ－１５６６２５１、ＡＤ－１５６６２５２、ＡＤ－１５６６２５３、ＡＤ－１５６６２５４、ＡＤ－１５６６２５５、ＡＤ－１５６６２５６、ＡＤ－１５６６２５７、ＡＤ－１５６６２５８、ＡＤ－１５６６２５９、ＡＤ－６９２９０６、ＡＤ－１５６６５７５、ＡＤ－１５６６５７６、ＡＤ－１５６６５７７、ＡＤ－１５６６５８０、ＡＤ－１５６６５８１、ＡＤ－１５６６５８２、ＡＤ－１５６６５８３、ＡＤ－１５６６５８４、ＡＤ－１５６６５８６、ＡＤ－１５６６５８７、ＡＤ－１５６６５８８、ＡＤ－１５６６５９０、ＡＤ－１５６６５９１、ＡＤ－１５６６６３４、ＡＤ－１５６６６３５、ＡＤ－１５６６６３８、ＡＤ－１５６６６３９、ＡＤ－１５６６６４１、ＡＤ－１５６６６４２、ＡＤ－１５６６６４３、ＡＤ－１５６６６７９、ＡＤ－１５６６８６１、ＡＤ－１５６７１５３、ＡＤ－１５６７１５４、ＡＤ－１５６７１５７、ＡＤ－１５６７１５９、ＡＤ－１５６７１６０、ＡＤ－１５６７１６１、ＡＤ－１５６７１６４、ＡＤ－１５６７１６７、ＡＤ－１５６７１９９、ＡＤ－１５６７２０２、ＡＤ－１５６７５５０、ＡＤ－１５６７５５４、ＡＤ－１５６７７８４、ＡＤ－１５６７８９６、ＡＤ－１５６７８９７、ＡＤ－１５６８１０５、ＡＤ－１５６８１０８、ＡＤ－１５６８１０９、ＡＤ－１５６８１３９、ＡＤ－１５６８１４０、ＡＤ－１５６８１４３、ＡＤ－１５６８１４４、ＡＤ－１５６８１４８、ＡＤ－１５６８１５０、ＡＤ－１５６８１５１、ＡＤ－１５６８１５２、ＡＤ－１５６８１５３、ＡＤ－１５６８１５４、ＡＤ－１５６８１５８、ＡＤ－１５６８１６１、ＡＤ－１５６８１７２、ＡＤ－１５６８１７４、ＡＤ－１５６８１７５、ＡＤ－６９２９０８、ＡＤ－１５６８１７６、ＡＤ－１５６９８３０、ＡＤ－１５６９８３２、ＡＤ－１５６９８３４、ＡＤ－１５６９８３５、ＡＤ－１５６９８６２、ＡＤ－１５６９８７２、ＡＤ－１５６９８９０およびＡＤ－１５６９８９２からなる群から選択される二重鎖のアンチセンス鎖ヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、請求項１～６のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
センスおよびアンチセンス鎖のヌクレオチド配列が、表３～８および１６～２８のいずれか１つに記載のセンスおよびアンチセンス鎖ヌクレオチド配列のいずれか１つを含む、請求項１または２に記載のｄｓＲＮＡ剤。
センス鎖のヌクレオチド配列が、配列番号１５３３において説明されるＭＡＰＴ遺伝子エクソン１０のセンス鎖配列に対応する少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖がそれに対して相補的な配列を含む、請求項１または２に記載のｄｓＲＮＡ剤。
ＭＡＰＴの発現を阻害するための二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤であって、ｄｓＲＮＡ剤は、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、
センス鎖は、配列番号５のヌクレオチド配列と３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖は、配列番号６のヌクレオチド配列と３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、ｄｓＲＮＡ剤。
ＭＡＰＴの発現を阻害するための二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤であって、ｄｓＲＮＡ剤は、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、
アンチセンス鎖は、タウをコードするｍＲＮＡに対して相補性の領域を含み、相補性の領域は、配列番号６のヌクレオチド配列と３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、ｄｓＲＮＡ剤。
ＭＡＰＴの発現を阻害するための二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤であって、ｄｓＲＮＡ剤は、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、
アンチセンス鎖は、タウをコードするｍＲＮＡに対して相補性の領域を含み、相補性の領域は、表１２～１３のいずれか１つに記載のアンチセンスヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、ｄｓＲＮＡ剤。
センス鎖が、配列番号５のヌクレオチド１０６５～１０８５、１１９５～１２１５、１０６６～１０８６、１０６８～１０８８、７０５～７２５、１０６７～１０８７、４５２０～４５４０、３３４１～３３６１、４５１５～４５３５、５２８４～５３０４、５２８５～５３０５、３４４～３６４、５２８３～５３０３、５３５４～５３７４、２４５９～２４７９、１０６１～１０８１、７０６～７２６、９７２～９９２、４５６４～４５８４、９９５～１０１５、４５４６～４５６６、９６８～９８８、１１２７～１１４７、４５３４～４５５４、１５８～１７８、４４９４～４５１４、１６９１～１７１１、３５４４～３５６４、１９８～２１８、９７９～９９９、４５４８～４５６８、４５５１～４５７１、５４３～５６３、７１５～７３５、５４２～５６２、３５２～３７２、３６２～３８２、４５５６～４５７６、４５４７～４５６７、４５４２～４５６２、４５５８～４５７８、４５４９～４５６９、５０７４～５０９４、４５５２～４５７２、５０７３～５０９３、５０７６～５０９６、４５５０～４５７０、および２７５３～２７７３のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖が、配列番号６の対応するヌクレオチド配列からの少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、請求項１０～１２のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
アンチセンス鎖が、ＡＤ－３９３７５８．１、ＡＤ－３９３８８８．１、ＡＤ－３９３７５９．１、ＡＤ－３９３７６１．１、ＡＤ－３９３４９５．１、ＡＤ－３９３７６０．１、ＡＤ－３９６４２５．１、ＡＤ－３９５４４１．１、ＡＤ－３９６４２０．１、ＡＤ－３９７１０３．１、ＡＤ－３９７１０４．１、ＡＤ－３９３２３９．１、ＡＤ－３９７１０２．１、ＡＤ－３９７１６７．１、ＡＤ－３９４７９１．１、ＡＤ－３９３７５４．１、ＡＤ－３９３４９６．１、ＡＤ－３９３６６７．１、ＡＤ－３９６４６７．１、ＡＤ－３９３６９０．１、ＡＤ－３９６４４９．１、ＡＤ－３９３６６３．１、ＡＤ－３９３８２０．１、ＡＤ－３９６４３７．１、ＡＤ－３９３０８４．１、ＡＤ－３９６４０１．１、ＡＤ－３９４２９６．１、ＡＤ－３９５５７４．１、ＡＤ－３９３１２４．１、ＡＤ－３９３６７４．１、ＡＤ－３９６４５１．１、ＡＤ－３９６４５４．１、ＡＤ－３９３３７６．１、ＡＤ－３９３５０５．１、ＡＤ－３９３３７５．１、ＡＤ－３９３２４７．１、ＡＤ－３９３２５７．１、ＡＤ－３９６４５９．１、ＡＤ－３９６４５０．１、ＡＤ－３９６４４５．１、ＡＤ－３９６４６１．１、ＡＤ－３９６４５２．１、ＡＤ－３９６９１３．１、ＡＤ－３９６４５５．１、ＡＤ－３９６９１２．１、ＡＤ－３９６９１５．１、ＡＤ－３９６４５３．１およびＡＤ－３９４９９１．１からなる群から選択される二重鎖のアンチセンス鎖ヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、請求項１０～１３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
センス鎖、アンチセンス鎖、またはセンス鎖とアンチセンス鎖の両方が、１つまたは複数の親油性部分にコンジュゲートしている、請求項１～１４のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
親油性部分が、ｄｓＲＮＡ剤の二本鎖領域中の１つまたは複数の内部位置にコンジュゲートしている、請求項１５に記載のｄｓＲＮＡ剤。
親油性部分が、リンカーまたは担体を介してコンジュゲートしている、請求項１５または１６に記載のｄｓＲＮＡ剤。
ｌｏｇＫｏｗによって測定された親油性部分の親油性が、０を超える、請求項１５～１７のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
二本鎖ＲＮＡｉ剤の血漿タンパク質結合アッセイにおいて未結合画分によって測定される二本鎖ＲＮＡｉ剤の疎水性が、０．２を超える、請求項１～１８のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
血漿タンパク質結合アッセイが、ヒト血清アルブミンタンパク質を使用する電気泳動移動度シフトアッセイである、請求項１９に記載のｄｓＲＮＡ剤。
ｄｓＲＮＡ剤が、少なくとも１つの修飾されたヌクレオチドを含む、請求項１～２０のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
センス鎖ヌクレオチドの５個以下およびアンチセンス鎖のヌクレオチドの５個以下が、修飾されていないヌクレオチドである、請求項２１に記載のｄｓＲＮＡ剤。
センス鎖のヌクレオチドの全ておよびアンチセンス鎖のヌクレオチドの全てが、修飾されたヌクレオチドである、請求項２１に記載のｄｓＲＮＡ剤。
修飾されたヌクレオチドの少なくとも１つが、デオキシヌクレオチド、３’末端デオキシチミジン（ｄＴ）ヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル修飾されたヌクレオチド、２’－フルオロ修飾されたヌクレオチド、２’－デオキシ修飾されたヌクレオチド、ロックドヌクレオチド、非ロックドヌクレオチド、立体配座的に制限されたヌクレオチド、拘束エチルヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、２’－アミノ変性ヌクレオチド、２’－Ｏ－アリル修飾されたヌクレオチド、２’－Ｃ－アルキル修飾されたヌクレオチド、２’－ヒドロキシル（ｈｙｄｒｏｘｌｙ）修飾されたヌクレオチド、２’－メトキシエチル修飾されたヌクレオチド、２’－Ｏ－アルキル修飾されたヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホルアミデート、非天然塩基を含むヌクレオチド、テトラヒドロピラン修飾されたヌクレオチド、１，５－アンヒドロヘキシトール修飾されたヌクレオチド、シクロヘキセニル修飾されたヌクレオチド、５’－ホスホロチオエート基を含むヌクレオチド、５’－メチルホスホネート基を含むヌクレオチド、５’リン酸または５’リン酸ミミックを含むヌクレオチド、ビニルホスホネートを含むヌクレオチド、アデノシン－グリコール核酸（ＧＮＡ）を含むヌクレオチド、チミジン－グリコール核酸（ＧＮＡ）Ｓ－異性体を含むヌクレオチド、２－ヒドロキシメチル－テトラヒドロフラン－５－ホスフェートを含むヌクレオチド、２’－デオキシチミジン－３’ホスフェートを含むヌクレオチド、２’－デオキシグアノシン－３’－ホスフェートを含むヌクレオチド、ならびにコレステリル誘導体およびドデカン酸ビスデシルアミド基に連結された末端ヌクレオチド；ならびにそれらの組合せからなる群から選択される、請求項２１～２３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
修飾されたヌクレオチドが、２’－デオキシ－２’－フルオロ修飾されたヌクレオチド、２’－デオキシ修飾されたヌクレオチド、３’末端デオキシチミジンヌクレオチド（ｄＴ）、ロックドヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、２’－アミノ変性ヌクレオチド、２’－アルキル修飾されたヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホルアミデート、および非天然塩基を含むヌクレオチドからなる群から選択される、請求項２４に記載のｄｓＲＮＡ剤。
修飾されたヌクレオチドが、３’末端デオキシチミジンヌクレオチド（ｄＴ）の短い配列を含む、請求項２４に記載のｄｓＲＮＡ剤。
ヌクレオチドへの修飾が、２’－Ｏ－メチル、ＧＮＡおよび２’フルオロ修飾である、請求項２４に記載のｄｓＲＮＡ剤。
少なくとも１つのホスホロチオエートインターヌクレオチド連結をさらに含む、請求項１～２７のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
６～８個のホスホロチオエートインターヌクレオチド連結を含む、請求項２８に記載のｄｓＲＮＡ剤。
各鎖が、３０個以下のヌクレオチドの長さである、請求項１～２９のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
少なくとも１つの鎖が、少なくとも１ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む、請求項１～３０のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
少なくとも１つの鎖が、少なくとも２ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む、請求項１～３１のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
二本鎖領域が、１５～３０ヌクレオチド対の長さである、請求項１～３２のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
二本鎖領域が、１７～２３ヌクレオチド対の長さである、請求項３３に記載のｄｓＲＮＡ剤。
二本鎖領域が、１７～２５ヌクレオチド対の長さである、請求項３３に記載のｄｓＲＮＡ剤。
二本鎖領域が、２３～２７ヌクレオチド対の長さである、請求項３３に記載のｄｓＲＮＡ剤。
二本鎖領域が、１９～２１ヌクレオチド対の長さである、請求項３３に記載のｄｓＲＮＡ剤。
二本鎖領域が、２１～２３ヌクレオチド対の長さである、請求項３３に記載のｄｓＲＮＡ剤。
各鎖が、１９～３０ヌクレオチドを有する、請求項１～３８のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
各鎖が、１９～２３ヌクレオチドを有する、請求項１～３７のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
各鎖が、２１～２３ヌクレオチドを有する、請求項１～３８のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
１つまたは複数の親油性部分が、少なくとも１つの鎖における１つまたは複数の内部位置にコンジュゲートしている、請求項１６～４１のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
１つまたは複数の親油性部分が、リンカーまたは担体を介して少なくとも１つの鎖における１つまたは複数の内部位置にコンジュゲートされる、請求項４２に記載のｄｓＲＮＡ剤。
内部位置が、少なくとも１つの鎖の各端から末端の２つの位置を除く全ての位置を含む、請求項４３に記載のｄｓＲＮＡ剤。
内部位置が、少なくとも１つの鎖の各端から末端の３つの位置を除く全ての位置を含む、請求項４３に記載のｄｓＲＮＡ剤。
内部位置が、センス鎖の切断部位領域を除く、請求項４３～４５のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
内部位置が、センス鎖の５’端から数えて位置９～１２を除く全ての位置を含む、請求項４６に記載のｄｓＲＮＡ剤。
内部位置が、センス鎖の３’端から数えて位置１１～１３を除く全ての位置を含む、請求項４６に記載のｄｓＲＮＡ剤。
内部位置が、アンチセンス鎖の切断部位領域を除く、請求項４３～４５のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
内部位置が、アンチセンス鎖の５’端から数えて位置１２～１４を除く全ての位置を含む、請求項４９に記載のｄｓＲＮＡ剤。
内部位置が、３’端から数えて位置１１～１３および５’端から数えて位置１２～１４を除く全ての位置を含む、請求項４３～４５のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
１つまたは複数の親油性部分が、各鎖の５’末端から数えて、センス鎖における４～８位および１３～１８位、ならびにアンチセンス鎖における６～１０位および１５～１８位からなる群から選択される内部位置の１つまたは複数にコンジュゲートしている、請求項１６～５１のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
１つまたは複数の親油性部分が、各鎖の５’末端から数えて、センス鎖における５、６、７、１５、および１７位、ならびにアンチセンス鎖における１５および１７位からなる群から選択される内部位置の１つまたは複数にコンジュゲートしている、請求項５２に記載のｄｓＲＮＡ剤。
二本鎖領域中の内部位置が、センス鎖の切断部位領域を排除している、請求項１６に記載のｄｓＲＮＡ剤。
センス鎖が、２１ヌクレオチド長であり、アンチセンス鎖が、２３ヌクレオチド長であり、親油性部分が、センス鎖の位置２１、位置２０、位置１５、位置１、位置７、位置６、もしくは位置２またはアンチセンス鎖の位置１６にコンジュゲートされる、請求項１５～５４のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
親油性部分が、センス鎖の２１位、２０位、１５位、１位、または７位にコンジュゲートしている、請求項５５に記載のｄｓＲＮＡ剤。
親油性部分が、センス鎖の２１位、２０位、または１５位にコンジュゲートしている、請求項５５に記載のｄｓＲＮＡ剤。
親油性部分が、センス鎖の２０位または１５位にコンジュゲートしている、請求項５５に記載のｄｓＲＮＡ剤。
親油性部分が、アンチセンス鎖の１６位にコンジュゲートしている、請求項５５に記載のｄｓＲＮＡ剤。
親油性部分が、脂肪族化合物、脂環式化合物、または多脂環式化合物である、請求項１５～５９のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
親油性部分が、脂質、コレステロール、レチノイン酸、コール酸、アダマンタン酢酸、１－ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、１，３－ビス－Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシヘキサノール、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メンソール、１，３－プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ミリスチン酸、Ｏ３－（オレオイル）リトコール酸、Ｏ３－（オレオイル）コレン酸、ジメトキシトリチル、またはフェノキサジンからなる群から選択される、請求項６０に記載のｄｓＲＮＡ剤。
親油性部分が、飽和または不飽和Ｃ４～Ｃ３０炭化水素鎖と、ヒドロキシル、アミン、カルボン酸、スルホネート、ホスフェート、チオール、アジド、およびアルキンからなる群から選択される適宜の官能基とを含有する、請求項６０に記載のｄｓＲＮＡ剤。
親油性部分が、飽和または不飽和Ｃ６～Ｃ１８炭化水素鎖を含有する、請求項６２に記載のｄｓＲＮＡ剤。
親油性部分が、飽和または不飽和Ｃ１６炭化水素鎖を含有する、請求項６２に記載のｄｓＲＮＡ剤。
飽和または不飽和Ｃ１６炭化水素鎖が、鎖の５’端から数えて位置６にコンジュゲートされる、請求項６４に記載のｄｓＲＮＡ剤。
親油性部分が、内部位置または二本鎖領域における１つまたは複数のヌクレオチドに置き換わる担体を介してコンジュゲートされる、請求項１５～６５のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
担体が、ピロリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、［１，３］ジオキソラニル、オキサゾリジニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、キノキサリニル、ピリダジノニル、テトラヒドロフラニル、およびデカリニルからなる群から選択される環状基であるか、あるいはセリノール骨格またはジエタノールアミン骨格に基づく非環状部分である、請求項６６に記載のｄｓＲＮＡ剤。
親油性部分が、エーテル、チオエーテル、尿素、カーボネート、アミン、アミド、マレイミド－チオエーテル、ジスルフィド、ホスホジエステル、スルホアミド連結、クリック反応の生成物、またはカルバメートを含有するリンカーを介して二本鎖ｉＲＮＡ剤にコンジュゲートされる、請求項１５～６５のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
親油性部分が、核酸塩基、糖部分、またはヌクレオシド間連結にコンジュゲートされる、請求項１５～６８のいずれか一項に記載の二本鎖ｉＲＮＡ剤。
親油性部分または標的化リガンドが、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ジスルフィド、アミド、ガラクトサミン、グルコサミン、グルコース、ガラクトース、マンノースの官能化された単糖またはオリゴ糖、およびそれらの組合せからなる群から選択される生物切断性リンカーを介してコンジュゲートされる、請求項１５～６９のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
センス鎖の３’端が、アミンを有する環状基であるエンドキャップを介して保護され、前記環状基が、ピロリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、［１，３］ジオキソラニル、オキサゾリジニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、キノキサリニル、ピリダジノニル、テトラヒドロフラニル、およびデカリニルからなる群から選択される、請求項１５～７０のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
神経細胞を標的化する標的化リガンドをさらに含む、請求項１５～６９のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
肝臓細胞を標的化する標的化リガンドをさらに含む、請求項１５～６９のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
標的化リガンドが、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートである、請求項７３に記載のｄｓＲＮＡ剤。
Ｓｐ立体配置で連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の３’末端における第１のインターヌクレオチド連結に存在する末端のキラル修飾、Ｒｐ立体配置で連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の５’末端における第１のインターヌクレオチド連結に存在する末端のキラル修飾、およびＲｐ立体配置またはＳｐ立体配置のいずれかで連結リン原子を有する、センス鎖の５’末端における第１のインターヌクレオチド連結に存在する末端のキラル修飾をさらに含む、請求項１～７４のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
Ｓｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の３’端における第１および第２のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾
Ｒｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の５’端における第１のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾、および
ＲｐまたはＳｐ立体配置のどちらかにおいて連結リン原子を有する、センス鎖の５’端における第１のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾
をさらに含む、請求項１～７４のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
Ｓｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の３’端における第１、第２、および第３のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾
Ｒｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の５’端における第１のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾、および
ＲｐまたはＳｐ立体配置のどちらかにおいて連結リン原子を有する、センス鎖の５’端における第１のヌクレオチド間連結において生じる、末端キラル修飾
をさらに含む、請求項１～７４のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
Ｓｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の３’端における第１および第２のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾
Ｒｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の３’端における第３のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾
Ｒｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の５’端における第１のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾、および
ＲｐまたはＳｐ立体配置のどちらかにおいて連結リン原子を有する、センス鎖の５’端における第１のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾
をさらに含む、請求項１～７４のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
Ｓｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の３’端における第１および第２のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾
Ｒｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の５’端における第１および第２のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾、および
ＲｐまたはＳｐ立体配置のどちらかにおいて連結リン原子を有する、センス鎖の５’端における第１のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾
をさらに含む、請求項１～７４のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
アンチセンス鎖の５’端におけるホスフェートまたはホスフェート模倣物をさらに含む、請求項１～７９のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
ホスフェート模倣物が、５’－ビニルホスホネート（ＶＰ）である、請求項８０に記載のｄｓＲＮＡ剤。
二重鎖のアンチセンス鎖の５’端の１つの位置における塩基対が、ＡＵ塩基対である、請求項１～７９のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
センス鎖が、合計２１ヌクレオチドを有し、アンチセンス鎖が、合計２３ヌクレオチドを有する、請求項１～７９のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。
請求項１～８３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤を含有する細胞。
請求項１～８３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤を含む、ＭＡＰＴをコードする遺伝子の発現を阻害するための医薬組成物。
請求項１～８３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤と脂質製剤とを含む医薬組成物。
請求項１～８３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤を含む、エクソン１０含有ＭＡＰＴ転写物を選択的に阻害するための医薬組成物。
ｄｓＲＮＡ剤が、緩衝化されていない溶液中である、請求項８５～８７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
緩衝化されていない溶液が、生理食塩水または水である、請求項８８に記載の医薬組成物。
前記ｄｓＲＮＡ剤が、緩衝溶液中である、請求項８５～８７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
緩衝溶液が、酢酸塩、クエン酸塩、プロラミン、炭酸塩、もしくはリン酸塩またはそれらのあらゆる組合せを含む、請求項９０に記載の医薬組成物。
緩衝溶液が、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）である、請求項９０に記載の医薬組成物。
細胞におけるＭＡＰＴ遺伝子の発現を阻害する方法であって、細胞を、請求項１～８３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤または請求項８５～９２のいずれか一項に記載の医薬組成物と接触させること、それによって細胞におけるＭＡＰＴ遺伝子の発現を阻害することを含む、方法。
細胞におけるエクソン１０含有ＭＡＰＴ転写物を選択的に阻害する方法であって、細胞を、請求項１～８３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤または請求項８５～９２のいずれか一項に記載の医薬組成物と接触させること、それによって細胞におけるエクソン１０含有ＭＡＰＴ転写物を選択的に分解することを含む、方法。
細胞が、対象内にある、請求項９４に記載の方法。
対象がヒトである、請求項９５に記載の方法。
対象が、ＭＡＰＴ関連障害を有する、請求項９６に記載の方法。
ＭＡＰＴ関連障害が神経変性障害である、請求項９７に記載の方法。
神経変性障害が、ＭＡＰＴ遺伝子にコードされるタンパク質タウの異常に関連する、請求項９８に記載の方法。
ＭＡＰＴ遺伝子にコードされるタンパク質タウの異常が、対象の脳内でのタウの凝集を引き起こす、請求項９９に記載の方法。
神経変性障害が家族性障害である、請求項９９に記載の方法。
神経変性障害が孤発性障害である、請求項９９に記載の方法。
障害が、タウオパチー、アルツハイマー病、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、行動障害型前頭側頭型認知症（ｂｖＦＴＤ）、非流暢性亜型原発性進行性失語（ｎｆｖＰＰＡ）、意味型原発性進行性失語（ＰＰＡ－Ｓ）、ロゴペニック型原発性進行性失語（ＰＰＡ－Ｌ）、１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、ピック病（ＰｉＤ）、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、初老期認知症を伴う多系統タウオパチー（ＭＳＴＤ）、球状グリア封入体を伴う白質タウオパチー（ＧＧＩを伴うＦＴＬＤ）、ＭＡＰＴ突然変異を伴うＦＴＬＤ、神経原線維変化（ＮＦＴ）認知症、運動ニューロン疾患を伴うＦＴＤ、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、皮質基底核症候群（ＣＢＳ）、皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、パーキンソン病、脳炎後パーキンソニズム、ニーマン・ピック病、ハンチントン病、筋強直性ジストロフィー１型、およびダウン症候群（ＤＳ）からなる群から選択される、請求項９７に記載の方法。
細胞をｄｓＲＮＡ剤と接触させることが、ＭＡＰＴの発現を少なくとも２５％阻害する、請求項９３～１０３のいずれか一項に記載の方法。
ＭＡＰＴの発現を阻害することが、対象の血清中のタウタンパク質レベルを少なくとも２５％減少させる、請求項９３～１０３のいずれか一項に記載の方法。
ＭＡＰＴ遺伝子発現の低減が有益であろう障害を有する対象を処置する方法であって、治療有効量の請求項１～８３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤または請求項８５～９２のいずれか一項に記載の医薬組成物を対象に投与すること、それによってＭＡＰＴ発現の低減が有益であろう障害を有する対象を処置することを含む、方法。
ＭＡＰＴ発現の低減が有益であろう障害を有する対象における少なくとも１つの症状を防止する方法であって、予防有効量の請求項１～８３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤または請求項８５～９２のいずれか一項に記載の医薬組成物を対象に投与すること、それによってＭＡＰＴ発現の低減が有益であろう障害を有する対象における少なくとも１つの症状を防止することを含む、方法。
障害が、ＭＡＰＴ遺伝子にコードされるタンパク質タウの異常に関連する、請求項１０６または１０７に記載の方法。
ＭＡＰＴ遺伝子にコードされるタンパク質タウの異常が、対象の脳内でのタウの凝集を引き起こす、請求項１０８に記載の方法。
障害が、タウオパチー、アルツハイマー病、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、行動障害型前頭側頭型認知症（ｂｖＦＴＤ）、非流暢性亜型原発性進行性失語（ｎｆｖＰＰＡ）、意味型原発性進行性失語（ＰＰＡ－Ｓ）、ロゴペニック型原発性進行性失語（ＰＰＡ－Ｌ）、１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、ピック病（ＰｉＤ）、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、初老期認知症を伴う多系統タウオパチー（ＭＳＴＤ）、球状グリア封入体を伴う白質タウオパチー（ＧＧＩを伴うＦＴＬＤ）、ＭＡＰＴ突然変異を伴うＦＴＬＤ、神経原線維変化（ＮＦＴ）認知症、運動ニューロン疾患を伴うＦＴＤ、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、皮質基底核症候群（ＣＢＳ）、皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、パーキンソン病、脳炎後パーキンソニズム、ニーマン・ピック病、ハンチントン病、筋強直性ジストロフィー１型、およびダウン症候群（ＤＳ）からなる群から選択される、請求項１０８に記載の方法。
対象が、ヒトである、請求項１０７～１１０のいずれか一項に記載の方法。
ｄｓＲＮＡ剤、または医薬組成物の投与が、対象の脳内でのタウの凝集の減少をもたらす、請求項１１１に記載の方法。
ｄｓＲＮＡ剤が、約０．０１ｍｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇの用量において対象に投与される、請求項１０６～１１２のいずれか一項に記載の方法。
ｄｓＲＮＡ剤が、対象に髄腔内投与される、請求項１０６～１１３のいずれか一項に記載の方法。
ｄｓＲＮＡ剤が、対象に大槽内投与される、請求項１０６～１１３のいずれか一項に記載の方法。
対象からの試料中のＭＡＰＴのレベルを決定することをさらに含む、請求項１０６～１１５のいずれか一項に記載の方法。
対象試料中のＭＡＰＴのレベルが、髄液試料中のタウタンパク質レベルである、請求項１１６に記載の方法。
追加の治療剤を対象に投与することをさらに含む、請求項９８～１１７のいずれか一項に記載の方法。
請求項１～８３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤または請求項８５～９２のいずれか一項に記載の医薬組成物を含むキット。
請求項１～８３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤または請求項８５～９２のいずれか一項に記載の医薬組成物を含むバイアル。
請求項１～８３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤または請求項８５～９２のいずれか一項に記載の医薬組成物を含むシリンジ。
請求項１～８３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤、または請求項８５～９２のいずれか一項に記載の医薬組成物を含む、髄腔内ポンプ。