JP2023521604A - Microtubule-associated protein tau (MAPT) iRNA agent compositions and methods of use thereof - Google Patents

Microtubule-associated protein tau (MAPT) iRNA agent compositions and methods of use thereof Download PDF

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Abstract

本開示は、微小管関連タンパク質タウ（ＭＡＰＴ）遺伝子を標的化する二本鎖リボ核酸干渉（ｄｓＲＮＡｉ）剤および組成物、ならびにそのようなｄｓＲＮＡｉ剤および組成物を使用して、ＭＡＰＴ遺伝子の発現を阻害する方法、およびＭＡＰＴ関連疾患または障害、例えば、アルツハイマー病、前頭側頭型認知症、進行性核上性麻痺、または他のタウオパチーを有する対象を処置する方法に関する。The present disclosure provides double-stranded ribonucleic acid interference (dsRNAi) agents and compositions that target the microtubule-associated protein tau (MAPT) gene, and use such dsRNAi agents and compositions to enhance expression of the MAPT gene. Methods of inhibiting and treating subjects with MAPT-related diseases or disorders, such as Alzheimer's disease, frontotemporal dementia, progressive supranuclear palsy, or other tauopathies.

Description

関連出願への相互参照
本願は、２０２０年３月３０日に出願された米国特許仮出願第６３／００２，０３０号に対する優先権の利益を主張し、２０２１年３月２２日に出願された米国特許仮出願第６３／１６４，４６７号の利益を主張する。前記出願の内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。 CROSS-REFERENCE TO RELATED APPLICATIONS This application claims the benefit of priority to U.S. Provisional Patent Application No. The benefit of Provisional Patent Application No. 63/164,467 is claimed. The entire contents of said application are incorporated herein by reference.

配列リスト
本願は、ＡＳＣＩＩフォーマットにおいて電子的に提出された配列リストを含んでおり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０２１年３月２４日に作成されたＡＳＣＩＩコピーは、Ａ１０８８６８_１０３０ＷＯ_ＳＬ．ｔｘｔと命名され、１，０１８，７５３バイトのサイズである。 SEQUENCE LISTING This application contains a Sequence Listing which has been submitted electronically in ASCII format and is hereby incorporated by reference in its entirety. An ASCII copy made on March 24, 2021 is A108868_1030WO_SL. txt and is 1,018,753 bytes in size.

微小管関連タンパク質ファミリーのメンバーであるタンパク質Ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ－Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔａｕ（Ｍａｐｔ）をコードする微小管関連タンパク質タウ（ＭＡＰＴ）遺伝子は、染色体領域１７ｑ２１．３１（染色体１７上の塩基対４５，８９４，３８２から４６，０２８，３３４）に位置している。ＭＡＰＴ遺伝子は１６個のエクソンからなる。選択的ｍＲＮＡスプライシングが行われると、合計３５２～４４１個のアミノ酸を有する６種のＭＡＰＴアイソフォームが生じる。６種のＭＡＰＴアイソフォームのうち３種では、ＭＡＰＴの微小管結合ドメインは３つの反復するセグメントを含有するが、他の３種のＭＡＰＴアイソフォームでは、対応するドメインは４つの反復するセグメントを含有する。 The microtubule-associated protein tau (MAPT) gene, which encodes the protein Microtubule-Associated Protein Tau (Mapt), a member of the microtubule-associated protein family, is located on chromosome region 17q21.31 (from base pairs 45,894,382 on chromosome 17). 46,028,334). The MAPT gene consists of 16 exons. Alternative mRNA splicing results in six MAPT isoforms with a total of 352-441 amino acids. In 3 of the 6 MAPT isoforms, the microtubule-binding domain of MAPT contains 3 repeating segments, whereas in the other 3 MAPT isoforms the corresponding domain contains 4 repeating segments. do.

ＭＡＰＴ転写物は、全身に差次的に発現し、主として中枢および末梢神経系に発現する。野生型タウは、神経軸索中の微小管の安定化、樹状突起棘（ｄｅｎｄｒｉｃ ｓｐｉｎｅ）の維持、ならびに軸索輸送、微小管動態、および細胞分裂の制御に関与している。ＭＡＰＴの病原性変異体は、原発性タウオパチーを有する患者のおよそ１０％に見出されている。変異体は主にミスセンス突然変異であり、エクソン９～１３（微小管結合ドメイン）に局在しており、エクソン１０の選択的スプライシングに多くの影響を与えている。 MAPT transcripts are differentially expressed throughout the body, primarily in the central and peripheral nervous system. Wild-type tau is involved in stabilization of microtubules in nerve axons, maintenance of dendritic spines, and regulation of axonal transport, microtubule dynamics, and cell division. Pathogenic variants of MAPT have been found in approximately 10% of patients with primary tauopathy. Variants are predominantly missense mutations, localized to exons 9-13 (microtubule binding domain), with many effects on alternative splicing of exon 10.

タウオパチーは、脳内でのタウ凝集物の存在によって病理学的に特徴付けられる、異種混合クラスの進行性神経変性障害である。表現型では、タウオパチーは、運動、認知、および行動障害の多様な進行を示す。タウオパチーとしては、アルツハイマー病、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、および進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。タウは、アルツハイマー病の特徴である、神経細胞質における神経原線維変化の主要成分である。タウの凝集および沈着は、パーキンソン病を有する患者の脳のおよそ５０％にも観察された。 Tauopathies are a heterogeneous class of progressive neurodegenerative disorders that are pathologically characterized by the presence of tau aggregates in the brain. Phenotypically, tauopathies exhibit a variable progression of motor, cognitive, and behavioral deficits. Tauopathies include, but are not limited to, Alzheimer's disease, frontotemporal dementia (FTD), and progressive supranuclear palsy (PSP). Tau is a major component of the neurofibrillary tangles in the neuronal cytoplasm that characterize Alzheimer's disease. Aggregations and deposition of tau have also been observed in approximately 50% of the brains of patients with Parkinson's disease.

ＦＴＤとしては、行動障害型前頭側頭型認知症（ｂｖＦＴＤ）、非流暢性亜型原発性進行性失語（ｎｆｖＰＰＡ）、および皮質基底核症候群（ＣＢＳ）が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。 FTDs include, but are not limited to, behavioral frontotemporal dementia (bvFTD), non-fluent subtype primary progressive aphasia (nfvPPA), and corticobasal syndrome (CBS). isn't it.

現在のところ、タウオパチーに対する治療的な療法は存在せず、処置は、症状を緩和し、患者の生活の質を改善することのみを目的としている。したがって、ＭＡＰＴ関連障害、例えば、アルツハイマー病、ＦＴＤ、ＰＳＰ、または別のタウオパチーを有する対象を効率的に処置することができるような、ＭＡＰＴ遺伝子の発現を選択的かつ効果的に阻害または調整することができる薬剤へのニーズが存在する。 Currently, there is no curative therapy for tauopathy, and treatments are aimed only at relieving symptoms and improving the patient's quality of life. Thus, selectively and effectively inhibiting or modulating MAPT gene expression such that subjects with MAPT-related disorders, such as Alzheimer's disease, FTD, PSP, or other tauopathies can be effectively treated. There is a need for agents that can

本発明の開示は、ＭＡＰＴ遺伝子のＲＮＡ転写物のＲＮＡ誘導型サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）媒介切断を実行する、ＲＮＡｉ組成物を提供する。ＭＡＰＴ遺伝子は、細胞内、例えば、対象、例えばヒト内の細胞にあってもよい。これらのｉＲＮＡの使用は、哺乳動物において、対応する遺伝子（ＭＡＰＴ遺伝子）のｍＲＮＡの標的化された分解を可能にする。 The present disclosure provides RNAi compositions that effect RNA-induced silencing complex (RISC)-mediated cleavage of RNA transcripts of the MAPT gene. The MAPT gene may be intracellular, eg, in a cell within a subject, eg, a human. The use of these iRNAs allows targeted degradation of the mRNA of the corresponding gene (MAPT gene) in mammals.

本発明のｉＲＮＡは、ＭＡＰＴ遺伝子、例えば、遺伝子のエクソン中にミスセンスおよび／または欠失突然変異を有し、ヌクレオチド修飾の組合せを有するＭＡＰＴ遺伝子を標的化するように設計された。本発明のｉＲＮＡは、ＭＡＰＴ遺伝子の発現を対照レベルに対して少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％阻害し、センスおよびアンチセンス含有凝集体のレベルを低減させる。理論によって限定されることは意図しないが、これらのｉＲＮＡにおける前述の特性および特異的な標的部位、または特異的な修飾の組合せまたは部分的組合せは、本発明のｉＲＮＡに改善された効能、安定性、効力、耐久性、および安全性を付与すると考えられる。一態様において、本発明は、ＭＡＰＴの発現を阻害するための二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤であって、ｄｓＲＮＡ剤は、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、配列番号１または配列番号３のヌクレオチド配列と３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖は、配列番号２または配列番号４のヌクレオチド配列と３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、ｄｓＲＮＡ剤を提供する。 The iRNAs of the invention were designed to target MAPT genes, eg, MAPT genes with missense and/or deletion mutations in the exons of the gene and with combinations of nucleotide modifications. The iRNAs of the invention reduce MAPT gene expression by at least about 25%, at least about 30%, at least about 40%, at least about 50%, at least about 60%, at least about 70%, at least about 80% relative to control levels. , at least about 90%, or at least about 95%, and reduce levels of sense- and antisense-containing aggregates. While not intending to be limited by theory, it is believed that combinations or subcombinations of the foregoing properties and specific target sites, or specific modifications, in these iRNAs may give the iRNAs of the invention improved potency, stability, and stability. , is thought to confer efficacy, durability, and safety. In one aspect, the invention provides a double-stranded ribonucleic acid (dsRNA) agent for inhibiting expression of MAPT, the dsRNA agent comprising a sense strand and an antisense strand forming a double-stranded region, the sense The strand comprises at least 15 contiguous nucleotides that differ from the nucleotide sequence of SEQ ID NO:1 or SEQ ID NO:3 by no more than 3 nucleotides, and the antisense strand differs from the nucleotide sequence of SEQ ID NO:2 or SEQ ID NO:4 by no more than 3 A dsRNA agent is provided comprising at least 15 contiguous nucleotides that differ by nucleotides.

別の態様において、本発明は、ＭＡＰＴの発現を阻害するためのｄｓＲＮＡ剤であって、ｄｓＲＮＡ剤は、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、タウをコードするｍＲＮＡに対して相補性の領域を含み、相補性の領域は、配列番号２または配列番号４のヌクレオチド配列と３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、ｄｓＲＮＡ剤を提供する。 In another aspect, the invention provides a dsRNA agent for inhibiting expression of MAPT, the dsRNA agent comprising a sense strand and an antisense strand forming a double-stranded region, the antisense strand comprising tau. a dsRNA agent comprising a region of complementarity to the encoding mRNA, the region of complementarity comprising at least 15 contiguous nucleotides that differ from the nucleotide sequence of SEQ ID NO:2 or SEQ ID NO:4 by no more than 3 nucleotides; offer.

さらに別の態様において、本発明は、ＭＡＰＴの発現を阻害するための二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤であって、ｄｓＲＮＡ剤は、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、タウをコードするｍＲＮＡに対して相補性の領域を含み、相補性の領域は、表３～８および１６～２８のいずれか１つに記載のアンチセンスヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、ｄｓＲＮＡ剤を提供する。 In yet another aspect, the invention provides a double-stranded ribonucleic acid (dsRNA) agent for inhibiting expression of MAPT, the dsRNA agent comprising a sense strand and an antisense strand forming a double-stranded region. , the antisense strand comprises a region of complementarity to a tau-encoding mRNA, wherein the region of complementarity is any of the antisense nucleotide sequences set forth in any one of Tables 3-8 and 16-28 A dsRNA agent is provided comprising at least 15 contiguous nucleotides that differ by no more than 1 and 3 nucleotides.

一実施形態において、センス鎖は、配列番号３のヌクレオチド５１２～５３２、５１３～５３３、５１４～５３４、５１５～５３５、５１６～５３６、５１７～５３７、５１８～５３８、５１９～５３９、５２０～５４０、１０６３～１０８３、１０６７～１０８７、１０７２～１０９２、１０７４～１０９４、１０７５～１０９５、１１２５～１１４５、１１２６～１１４６、１１２７～１１４７、１１２９～１１４９、１１７０～１１９０、１３９５～１４１５、１９０５～１９２５、１９０６～１９２６、１９０９～１９２９、１９１１～１９３１、１９１２～１９３２、１９１３～１９３３、１９１４～１９３４、１９１５～１９３５、１９１６～１９３６、１９１９～１９３９、１９５１～１９７１、１９５４～１９７４、１９５８～１９７８、２３８７～２４０７、２４０９～２４２９、２４１０～２４３０、２４６９～２４８９、２４７１～２４９１、２４７２～２４９２、２４７６～２４９６、２４７７～２４９７、２４７８～２４９８、２４８０～２５００、２４８１～２５０１、２４８２～２５０２、２４８４～２５０４、２７６２～２７８２、２７６４～２７８４、２７６６～２７８６、２７６７～２７８７、２７６８～２７８８、２７６９～２７８９、２８１９～２８３９、２８２１～２８４１、２８２８～２８４８、２９４３～２９６３、２９４４～２９６４、２９４６～２９６６、２９４７～２９６７、３２５２～３２７２、３２７７～３２９７、３２８０～３３００、３２８１～３３０１、３２８２～３３０２、３２８４～３３０４、３２８５～３３０５、３２８６～３３０６、３３３１～３３５１、３３３２～３３５２、３３３３～３３５３、３３３４～３３５４、３３３５～３３５５、３３３６～３３５６、３３３８～３３５８、３３４０～３３６０、３３４２～３３６２、３３４３～３３６３、３３４４～３３６４、３３４５～３３６５、３３４６～３３６６、３３４７～３３６７、３３４９～３３６９、３３５０～３３７０、３３５３～３３７３、３３６４～３３８４、３３６６～３３８６、３３６７～３３８７、３３６８～３３８８、３３６９～３３８９、３３７０～３３９０、３４１２～３４３２、３４１４～３４３４、３４１５～３４３５、３４１６～３４３６、３４１７～３４３７、３４１９～３４３９、３４２０～３４４０、３４２４～３４４４、３４２５～３４４５、３４２６～３４４６、３４２７～３４４７、３４２８～３４４８、３４２９～３４４９、３４３０～３４５０、３４３１～３４５１、３４３４～３４５４、４１３２～４１５２、４１３４～４１５４、４１７９～４１９９、４１８２～４２０２、４１８４～４２０４、４３９５～４４１５、４４２５～４４４５、４４２６～４４４６、４４２９～４４４９、４４６９～４４８９、４４７０～４４９０、４４７１～４４９１、４４７２～４４９２、４４７３～４４９３、４４７４～４４９４、４５６９～４５８９、４５７１～４５９１、４５７２～４５９２、４５９６～４６１６、４６２３～４６４３、４７２１～４７４１、４７２２～４７４２、４７２５～４７４５、４７２６～４７４６、４７６６～４７８６、４７６７～４７８７、４７６８～４７８８、４７６９～４７８９、４７７０～４７９０、４７７９～４７９９、４８０５～４８２５、４８０６～４８２６、４８０７～４８２７、４８０８～４８２８、４８０９～４８２９、４８１２～４８３２、４８１３～４８３３、４８１４～４８３４、４９３６～４９５６、５０７２～５０９２、５０７３～５０９３、５３４５～５３６５、５３４６～５３６６、５３４９～５３６９、５３５０～５３７０、５３５１～５３７１、５４６０～５４８０、５４６１～５４８１、５４６３～５４８３、５４６５～５４８５、５４６７～５４８７、５４６８～５４８８、５４６９～５４８９、５４７０～５４９０、５４７１～５４９１、５５０５～５５２５、５５０６～５５２６、５５０７～５５２７、５５０８～５５２８、５５０９～５５２９、５５１１～５５３１、５５１３～５５３３、５５１４～５５３４、５５４１～５５６１、５５４４～５５６４、５５４６～５５６６、５５４７～５５６７、５５４８～５５６８、５５５０～５５７０、５５５１～５５７１、５５７４～５５９４、５５７６～５５９６、５６１４～５６３４、５２１～５４１、５２２～５４２、５２３～５４３、５２４～５４４、５２５～５４５、５２６～５４６、５２７～５４７、５２８～５４８、５２９～５４９、５３０～５５０、５３１～５５１、５３２～５５２、５３３～５５３、５３４～５５４、５３５～５５５、５３６～５５６、１０３４～１０５４、１０３５～１０５５、１０３６～１０５６、１０３７～１０５７、１０３８～１０５８、１０３９～１０５９、１０４０～１０６０、１０４１～１０６１、１０４２～１０６２、１０４３～１０６３、１０４４～１０６４、１０４５～１０６５、１０４６～１０６６、１０４７～１０６７、１０４８～１０６８、１０４９～１０６９、１０５０～１０７０、１０５１～１０７１、１０５２～１０７２、１０５３～１０７３、１０５４～１０７４、１０６２～１０８２、１０６４～１０８４、１０６５～１０８５、１０６６～１０８６、１０６８～１０８８、１０６９～１０８９、１０７０～１０９０、１０７１～１０９１、１０７３～１０９３、１０７６～１０９６、１０７７～１０９７、１０７８～１０９８、１０７９～１０９９、１０８０～１１００、１０８１～１１０１、１０８２～１１０２、１１２８～１１４８、１１２９～１１４９、１１３０～１１５０、１１３１～１１５１、１１３２～１１５２、１１３３～１１５３、１１３４～１１５４、１１３５～１１５５、１１３６～１１５６、１１３７～１１５７、１１３８～１１５８、１１３９～１１５９、１１４０～１１６０、１１４１～１１６１、１１４２～１１６２、１１４３～１１６３、１１４４～１１６４、１１４５～１１６５、１１４６～１１６６、１１４７～１１６７、１１４８～１１６８、９７５～９９５、９７６～９９６、９７７～９９７、９７８～９９８、９７９～９９９、９８０～１０００、９８１～１００１、９８２～１００２、９８３～１００３、９８４～１００４、９８５～１００５、９８６～１００６、９８７～１００７、９８８～１００８、９８９～１００９、９９０～１０１０、９９１～１０１１、９９２～１０１２、９９３～１０１３、９９４～１０１４、９９５～１０１５、９９６～１０１６、９９７～１０１７、９９８～１０１８、９９９～１０１９、１０００～１０２０、１００１～１０２１、１００２～１０２２、１００３～１０２３、１００４～１０２４、１００５～１０２５、１００６～１０２６、１００７～１０２７、１００８～１０２８、１００９～１０２９、１０１０～１０３０、１０１１～１０３１、１０１２～１０３２、１０１３～１０３３、１０１４～１０３４、１０１５～１０３５、１０１６～１０３６、１０１７～１０３７、１０１８～１０３８、１０１９～１０３９、１０２０～１０４０、１０２１～１０４１、１０２２～１０４２、１０２３～１０４３、１０２４～１０４４、１０２５～１０４５、１０２６～１０４６、１０２７～１０４７、１０２８～１０４８、１０２９～１０４９、１０３０～１０５０、１０３１～１０５１、１０３２～１０５２、１０３３～１０５３、１０３４～１０５４、１０３５～１０５５、１０３６～１０５６、１０３７～１０５７、１０３８～１０５８、１０３９～１０５９、１０４０～１０６０、１０４１～１０６１、１０４２～１０６２、１０４３～１０６３、および１０４５～１０６５のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖は、配列番号４の対応するヌクレオチド配列からの少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。 In one embodiment, the sense strand comprises nucleotides 512-532, 513-533, 514-534, 515-535, 516-536, 517-537, 518-538, 519-539, 520-540 of SEQ ID NO:3, 1063-1083, 1067-1087, 1072-1092, 1074-1094, 1075-1095, 1125-1145, 1126-1146, 1127-1147, 1129-1149, 1170-1190, 1395-1415, 1905-1925, 1 906~ 1926, 1909-1929, 1911-1931, 1912-1932, 1913-1933, 1914-1934, 1915-1935, 1916-1936, 1919-1939, 1951-1971, 1954-1974, 1958-1978, 2387-2 407, 2409-2429, 2410-2430, 2469-2489, 2471-2491, 2472-2492, 2476-2496, 2477-2497, 2478-2498, 2480-2500, 2481-2501, 2482-2502, 2484-2504, 2 762~ 2782, 2764-2784, 2766-2786, 2767-2787, 2768-2788, 2769-2789, 2819-2839, 2821-2841, 2828-2848, 2943-2963, 2944-2964, 2946-2966, 2947-2 967, 3252-3272, 3277-3297, 3280-3300, 3281-3301, 3282-3302, 3284-3304, 3285-3305, 3286-3306, 3331-3351, 3332-3352, 3333-3353, 3334-3354, 3 335~ 3355, 3336-3356, 3338-3358, 3340-3360, 3342-3362, 3343-3363, 3344-3364, 3345-3365, 3346-3366, 3347-3367, 3349-3369, 3350-3370, 3353-3 373, 3364-3384, 3366-3386, 3367-3387, 3368-3388, 3369-3389, 3370-3390, 3412-3432, 3414-3434, 3415-3435, 3416-3436, 3417-3437, 3419-3439, 3 420~ 3440, 3424-3444, 3425-3445, 3426-3446, 3427-3447, 3428-3448, 3429-3449, 3430-3450, 3431-3451, 3434-3454, 4132-4152, 4134-4154, 4179-4 199, 4182-4202, 4184-4204, 4395-4415, 4425-4445, 4426-4446, 4429-4449, 4469-4489, 4470-4490, 4471-4491, 4472-4492, 4473-4493, 4474-4494, 4 569~ 4589, 4571-4591, 4572-4592, 4596-4616, 4623-4643, 4721-4741, 4722-4742, 4725-4745, 4726-4746, 4766-4786, 4767-4787, 4768-4788, 4769-4 789, 5 073~ 5093, 5345-5365, 5346-5366, 5349-5369, 5350-5370, 5351-5371, 5460-5480, 5461-5481, 5463-5483, 5465-5485, 5467-5487, 5468-5488, 5469-5 489, 5470-5490, 5471-5491, 5505-5525, 5506-5526, 5507-5527, 5508-5528, 5509-5529, 5511-5531, 5513-5533, 5514-5534, 5541-5561, 5544-5564, 5 546~ 5566, 5547-5567, 5548-5568, 5550-5570, 5551-5571, 5574-5594, 5576-5596, 5614-5634, 521-541, 522-542, 523-543, 524-544, 525-545, 526-546, 527-547, 528-548, 529-549, 530-550, 531-551, 532-552, 533-553, 534-554, 535-555, 536-556, 1034-1054, 1035- 1055, 1036-1056, 1037-1057, 1038-1058, 1039-1059, 1040-1060, 1041-1061, 1042-1062, 1043-1063, 1044-1064, 1045-1065, 1046-1066, 1047-1 067, 1048-1068, 1049-1069, 1050-1070, 1051-1071, 1052-1072, 1053-1073, 1054-1074, 1062-1082, 1064-1084, 1065-1085, 1066-1086, 1068-1088, 1 069~ 1089, 1070-1090, 1071-1091, 1073-1093, 1076-1096, 1077-1097, 1078-1098, 1079-1099, 1080-1100, 1081-1101, 1082-1102, 1128-1148, 1129-1 149, 1130-1150, 1131-1151, 1132-1152, 1133-1153, 1134-1154, 1135-1155, 1136-1156, 1137-1157, 1138-1158, 1139-1159, 1140-1160, 1141-1161, 1 142~ 1162, 1143-1163, 1144-1164, 1145-1165, 1146-1166, 1147-1167, 1148-1168, 975-995, 976-996, 977-997, 978-998, 979-999, 980-1000, 981-1001, 982-1002, 983-1003, 984-1004, 985-1005, 986-1006, 987-1007, 988-1008, 989-1009, 990-1010, 991-1011, 992-1012, 993- 1013, 994-1014, 995-1015, 996-1016, 997-1017, 998-1018, 999-1019, 1000-1020, 1001-1021, 1002-1022, 1003-1023, 1004-1024, 1005-1025, 1006-1026, 1007-1027, 1008-1028, 1009-1029, 1010-1030, 1011-1031, 1012-1032, 1013-1033, 1014-1034, 1015-1035, 1016-1036, 1017-1037, 1 018~ 1038, 1019-1039, 1020-1040, 1021-1041, 1022-1042, 1023-1043, 1024-1044, 1025-1045, 1026-1046, 1027-1047, 1028-1048, 1029-1049, 1030-1 050, 1031-1051, 1032-1052, 1033-1053, 1034-1054, 1035-1055, 1036-1056, 1037-1057, 1038-1058, 1039-1059, 1040-1060, 1041-1061, 1042-1062, 1 043~ 1063, and 1045-1065, wherein the antisense strand comprises at least 15 contiguous nucleotides that differ by no more than 3 nucleotides from any one of the nucleotide sequences 1063, and 1045-1065; Contains consecutive nucleotides.

ある特定の実施形態において、本明細書に開示されるアンチセンスポリヌクレオチドは、標的ＭＡＰＴ配列の断片に対して実質的に相補的であり、ヌクレオチドの群から選択される配列番号４の断片に対してその全長にわたり相補的である連続するヌクレオチド配列を含み、センス鎖は、配列番号３のヌクレオチド５２０～５４１、５２０～５５６、５１０～５３４、５１２～５３６、５１６～５４１、５１６～５４０、５２０～５４４、５２４～５４７、５２６～５５１、５２９～５５６、５３２～５５６、１０６５～１０８９、１０６８～１０９５、１０６８～１０９４、１０７５～１１００、１０７６～１１００、１０７９～１１０３、１１２３～１１４７、１１２７～１１５１、１１３０～１１５５、１９０３～１９３４、１９０３～１９３０、１９１４～１９４０、１９４９～１９７５、２４７０～２４９７、２９４１～２９６５、３２７５～３３０２、３２７８～３３０２、３３２９～３３５３、３３３３～３３５７、３３３８～３３６７、３３３８～３３６６、３３４８～３３９０、３３４８～３３８８、３３５１～３３８５、５５０７～５５６２、および５５４９～５５９７のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖は、配列番号４の対応するヌクレオチド配列からの少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。 In certain embodiments, the antisense polynucleotides disclosed herein are substantially complementary to a fragment of the target MAPT sequence, to a fragment of SEQ ID NO:4 selected from the group of nucleotides and the sense strand comprises nucleotides 520-541, 520-556, 510-534, 512-536, 516-541, 516-540, 520-520 of SEQ ID NO:3. 544, 524-547, 526-551, 529-556, 532-556, 1065-1089, 1068-1095, 1068-1094, 1075-1100, 1076-1100, 1079-1103, 1123-1147, 1127-1151, 1130-1155, 1903-1934, 1903-1930, 1914-1940, 1949-1975, 2470-2497, 2941-2965, 3275-3302, 3278-3302, 3329-3353, 3333-3357, 3338-3367, 3 338~ an antisense strand comprising at least 15 contiguous nucleotides differing by no more than 3 nucleotides from any one of the nucleotide sequences 3366, 3348-3390, 3348-3388, 3351-3385, 5507-5562, and 5549-5597; contains at least 15 contiguous nucleotides from the corresponding nucleotide sequence of SEQ ID NO:4.

一実施形態において、センス鎖は、配列番号１のヌクレオチド９７７～９９７、９８０～１０００、９７３～９９３、９８８～１００８、９８７～１００７、９７２～９９２、９７９～９９９、１００１～１０２１、９７６～９９６、９９４～１０１４、１００２～１０２２、９７８～９９８、９７４～９９４、５２０～５４０、５２１～５４１、５４６４～５４８４、１８１３～１８３３、２３７８～２３９８、３２４２～３２６２、５４４２～５４６２、１６６５～１６８５、５２４～５４４、５２０７～５２２７、４６７０～４６９０、３４２０～３４４０、３３２８～３３４８、５４０９～５４２９、５４３９～５４５９、４５２７～４５４７、５４４１～５４６１、５４１０～５４３０、および５４４６～５４６６のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖は、配列番号２の対応するヌクレオチド配列からの少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。 In one embodiment, the sense strand comprises nucleotides 977-997, 980-1000, 973-993, 988-1008, 987-1007, 972-992, 979-999, 1001-1021, 976-996 of SEQ ID NO:1, 994-1014, 1002-1022, 978-998, 974-994, 520-540, 521-541, 5464-5484, 1813-1833, 2378-2398, 3242-3262, 5442-5462, 1665-1685, 524- any one of the nucleotide sequences of comprising at least 15 contiguous nucleotides differing by no more than 3 nucleotides, the antisense strand comprising at least 15 contiguous nucleotides from the corresponding nucleotide sequence of SEQ ID NO:2.

一実施形態において、アンチセンス鎖は、ＡＤ－５２３７９９.１、ＡＤ－５２３８０２．１、ＡＤ－５２３７９５．１、ＡＤ－５２３８１０．１、ＡＤ－５２３８０９．１、ＡＤ－１０１９３３１．１、ＡＤ－５２３８０１．１、ＡＤ－５２３８２３．１、ＡＤ－５２３７９８．１、ＡＤ－５２３８１６．１、ＡＤ－５２３８２４．１、ＡＤ－５２３８００．１、ＡＤ－５２３７９６．１、ＡＤ－５３５０９４．１、ＡＤ－５３５０９４．１、ＡＤ－５３５０９５．１、ＡＤ－５３８６４７．１、ＡＤ－５３５９２２．１、ＡＤ－５３６３１７．１、ＡＤ－５３６９１１．１、ＡＤ－５３８６２６．１、ＡＤ－５３５８６４．１、ＡＤ－５２３５６１．１、ＡＤ－５２３５６５．１、ＡＤ－５２３５６２．１、ＡＤ－５２６９１４．１、ＡＤ－５２６３９４．１、ＡＤ－３９５４５２．１、ＡＤ－５２５３４３．１、ＡＤ－５２４２７４．１、ＡＤ－５２６９５６．１、ＡＤ－５２６９８６．１、ＡＤ－５２６２９６．１、ＡＤ－５２６９８８．１、ＡＤ－５２６９５７．１、ＡＤ－５２６９９３．１、ＡＤ－１３９７０７０．１、ＡＤ－１３９７０７０．２、ＡＤ－１３９７０７１．１、ＡＤ－１３９７０７１．２、ＡＤ－１３９７０７２．１、ＡＤ－１３９７０７２．２、ＡＤ－１３９７０７３．１、ＡＤ－１３９７０７３．２、ＡＤ－１３９７０７４．１、ＡＤ－１３９７０７４．２、ＡＤ－１３９７０７５．１、ＡＤ－１３９７０７５．２、ＡＤ－１３９７０７６．１、ＡＤ－１３９７０７６．２、ＡＤ－１３９７０７７．１、ＡＤ－１３９７０７７．２、ＡＤ－１３９７０７８．１、ＡＤ－１３９７０７８．２、ＡＤ－１３９７２５０．１、ＡＤ－１３９７２５１．１、ＡＤ－１３９７２５２．１、ＡＤ－１３９７２５３．１、ＡＤ－１３９７２５４．１、ＡＤ－１３９７２５５．１、ＡＤ－１３９７２５６．１、ＡＤ－１３９７２５７．１、ＡＤ－１３９７２５８．１、ＡＤ－１３９７２５９．１、ＡＤ－１３９７２６０．１、ＡＤ－１３９７２６１．１、ＡＤ－１３９７２６２．１、ＡＤ－１３９７２６３．１、ＡＤ－１３９７２６４．１、ＡＤ－１３９７２６５．１、ＡＤ－１４２３２４２．１、ＡＤ－１４２３２４３．１、ＡＤ－１４２３２４４．１、ＡＤ－１４２３２４５．１、ＡＤ－１４２３２４６．１、ＡＤ－１４２３２４７．１、ＡＤ－１４２３２４８．１、ＡＤ－１４２３２４９．１、ＡＤ－１４２３２５０．１、ＡＤ－１４２３２５１．１、ＡＤ－１４２３２５２．１、ＡＤ－１４２３２５３．１、ＡＤ－１４２３２５４．１、ＡＤ－１４２３２５５．１、ＡＤ－１４２３２５６．１、ＡＤ－１４２３２５７．１、ＡＤ－１４２３２５８．１、ＡＤ－１４２３２５９．１、ＡＤ－１４２３２６０．１、ＡＤ－１４２３２６１．１、ＡＤ－１４２３２６２．１、ＡＤ－１４２３２６３．１、ＡＤ－１４２３２６４．１、ＡＤ－１４２３２６５．１、ＡＤ－１４２３２６６．１、ＡＤ－１４２３２６７．１、ＡＤ－１４２３２６８．１、ＡＤ－１４２３２６９．１、ＡＤ－１４２３２７０．１、ＡＤ－１４２３２７１．１、ＡＤ－１４２３２７２．１、ＡＤ－１４２３２７３．１、ＡＤ－１４２３２７４．１、ＡＤ－１４２３２７５．１、ＡＤ－１４２３２７６．１、ＡＤ－１４２３２７７．１、ＡＤ－１４２３２７８．１、ＡＤ－１４２３２７９．１、ＡＤ－１４２３２８０．１、ＡＤ－１４２３２８１．１、ＡＤ－１４２３２８２．１、ＡＤ－１４２３２８３．１、ＡＤ－１４２３２８４．１、ＡＤ－１４２３２８５．１、ＡＤ－１４２３２８６．１、ＡＤ－１４２３２８７．１、ＡＤ－１４２３２８８．１、ＡＤ－１４２３２８９．１、ＡＤ－１４２３２９０．１、ＡＤ－１４２３２９１．１、ＡＤ－１４２３２９２．１、ＡＤ－１４２３２９３．１、ＡＤ－１４２３２９４．１、ＡＤ－１４２３２９５．１、ＡＤ－１４２３２９６．１、ＡＤ－１４２３２９７．１、ＡＤ－１４２３２９８．１、ＡＤ－１４２３２９９．１、ＡＤ－１４２３３００．１、ＡＤ－１３９７２６６．１、ＡＤ－１３９７２６６．２、ＡＤ－１３９７２６７．１、ＡＤ－１４２３３０１．１、ＡＤ－１３９７２６８．１、ＡＤ－１３９７２６８．２、ＡＤ－１３９７２６９．１、ＡＤ－１４２３３０２．１、ＡＤ－１３９７２７０．１、ＡＤ－１３９７２７０．２、ＡＤ－１３９７２７１．１、ＡＤ－１３９７２７１．２、ＡＤ－１３９７２７２．１、ＡＤ－１４２３３０３．１、ＡＤ－１３９７２７３．１、ＡＤ－１４２３３０４．１、ＡＤ－１３９７２７４．１、ＡＤ－１４２３３０５．１、ＡＤ－１３９７２７５．１、ＡＤ－１４２３３０６．１、ＡＤ－１３９７２７６．１、ＡＤ－１３９７２７７．１、ＡＤ－１３９７２７７．２、ＡＤ－１３９７２７８．１、ＡＤ－１３９７２７９．１、ＡＤ－１３９７２８０．１、ＡＤ－１３９７２８１．１、ＡＤ－１３９７２８２．１、ＡＤ－１３９７２８３．１、ＡＤ－１３９７２８４．１、ＡＤ－１３９７２８５．１、ＡＤ－１３９７２８６．１、ＡＤ－１３９７２８７．１、ＡＤ－１３９７０７９．１、ＡＤ－１３９７０７９．２、ＡＤ－１３９７２８８．１、ＡＤ－１３９７２８９．１、ＡＤ－１３９７２９０．１、ＡＤ－１３９７０８０．１、ＡＤ－１３９７０８０．２、ＡＤ－１３９７２９１．１、ＡＤ－１３９７２９２．１、ＡＤ－１３９７２９３．１、ＡＤ－１３９７２９４．１、ＡＤ－１３９７０８１．１、ＡＤ－１３９７０８１．２、ＡＤ－１３９７２９５．１、ＡＤ－１３９７０８２．１、ＡＤ－１３９７０８２．２、ＡＤ－１３９７０８３．１、ＡＤ－１３９７０８３．２、ＡＤ－１３９７２９６．１、ＡＤ－１３９７２９７．１、ＡＤ－１３９７２９８．１、ＡＤ－１３９７２９９．１、ＡＤ－１３９７３００．１、ＡＤ－１３９７３０１．１、ＡＤ－１３９７３０２．１、ＡＤ－１３９７０８４．１、ＡＤ－１３９７０８５．１、ＡＤ－１３９７０８６．１、ＡＤ－１３９７３０３．１、ＡＤ－１３９７０８７．１、ＡＤ－１３９７０８７．２、ＡＤ－１３９７３０４．１、ＡＤ－１３９７３０５．１、ＡＤ－１３９７３０６．１、ＡＤ－１３９７３０７．１、ＡＤ－１３９７３０８．１、ＡＤ－１３９７３０９．１、ＡＤ－１３９７３１０．１、ＡＤ－１３９７３１１．１、ＡＤ－１３９７３１２．１、ＡＤ－１３９７３１３．１、ＡＤ－１３９７３１４．１、ＡＤ－１３９７３１５．１、ＡＤ－１３９７３１６．１、ＡＤ－１３９７３１７．１、ＡＤ－１３９７３１８．１、ＡＤ－１３９７３１９．１、ＡＤ－１３９７３２０．１、ＡＤ－１３９７３２１．１、ＡＤ－１３９７３２２．１、ＡＤ－１３９７０８８．１、ＡＤ－１３９７０８９．１、ＡＤ－１３９７０９０．１、ＡＤ－１３９７０９１．１、ＡＤ－１３９７０９２．１、ＡＤ－１３９７０９３．１、ＡＤ－１３９７０９４．１、ＡＤ－１３９７０９５．１、ＡＤ－１３９７０９６．１、ＡＤ－１３９７０９７．１、ＡＤ－１３９７０９８．１、ＡＤ－１３９７０９９．１、ＡＤ－１３９７１０１．１、ＡＤ－１３９７１０２．１、ＡＤ－１３９７１０３．１、ＡＤ－１３９７１０４．１、ＡＤ－１３９７１０５．１、ＡＤ－１３９７１０６．１、ＡＤ－１３９７１０７．１、ＡＤ－１３９７１０８．１、ＡＤ－１３９７１０９．１、ＡＤ－１３９７１１０．１、ＡＤ－１３９７１１１．１、ＡＤ－１３９７１１２．１、ＡＤ－１３９７１１３．１、ＡＤ－１３９７１１４．１、ＡＤ－１３９７１１５．１、ＡＤ－１３９７１１６．１、ＡＤ－１３９７１１７．１、ＡＤ－１３９７１１８．１、ＡＤ－１３９７１１９．１、ＡＤ－１３９７１２０．１、ＡＤ－１３９７１２１．１、ＡＤ－１３９７１２２．１、ＡＤ－１３９７１２３．１、ＡＤ－１３９７１２４．１、ＡＤ－１３９７１２５．１、ＡＤ－１３９７１２６．１、ＡＤ－１３９７１２７．１、ＡＤ－１３９７１２８．１、ＡＤ－１３９７１２９．１、ＡＤ－１３９７１３０．１、ＡＤ－１３９７１３１．１、ＡＤ－１３９７１３２．１、ＡＤ－１３９７１３３．１、ＡＤ－１３９７１３４．１、ＡＤ－１３９７１３５．１、ＡＤ－１３９７１３６．１、ＡＤ－１３９７１３７．１、ＡＤ－１３９７１３８．１、ＡＤ－１３９７１３９．１、ＡＤ－１３９７１４０．１、ＡＤ－１３９７１４１．１、ＡＤ－１３９７１４２．１、ＡＤ－１３９７１４３．１、ＡＤ－１３９７１４４．１、ＡＤ－１３９７１４５．１、ＡＤ－１３９７１４６．１、ＡＤ－１３９７１４７．１、ＡＤ－１３９７１４８．１、ＡＤ－１３９７１４９．１、ＡＤ－１３９７１５０．１、ＡＤ－１３９７１５１．１、ＡＤ－１３９７１５２．１、ＡＤ－１３９７１５３．１、ＡＤ－１３９７１５４．１、ＡＤ－１３９７１５５．１、ＡＤ－１３９７１５６．１、ＡＤ－１３９７１５７．１、ＡＤ－１３９７１５８．１、ＡＤ－１３９７１５９．１、ＡＤ－１３９７１６０．１、ＡＤ－１３９７１６１．１、ＡＤ－１３９７１６２．１、ＡＤ－１３９７１６３．１、ＡＤ－１３９７１６４．１、ＡＤ－１３９７１６５．１、ＡＤ－１３９７１６６．１、ＡＤ－１３９７１６７．１、ＡＤ－１３９７１６８．１、ＡＤ－１３９７１６９．１、ＡＤ－１３９７１７０．１、ＡＤ－１３９７１７１．１、ＡＤ－１３９７１７２．１、ＡＤ－１３９７１７３．１、ＡＤ－１３９７１７４．１、ＡＤ－１３９７１７５．１、ＡＤ－１３９７１７６．１、ＡＤ－１３９７１７７．１、ＡＤ－１３９７１７８．１、ＡＤ－１３９７１７９．１、ＡＤ－１３９７１８０．１、ＡＤ－１３９７１８１．１、ＡＤ－１３９７１８２．１、ＡＤ－１３９７１８３．１、ＡＤ－１３９７１８４．１、ＡＤ－１３９７１８５．１、ＡＤ－１３９７１８６．１、ＡＤ－１３９７１８７．１、ＡＤ－１３９７１８８．１、ＡＤ－１３９７１８９．１、ＡＤ－１３９７１９０．１、ＡＤ－１３９７１９１．１、ＡＤ－１３９７１９２．１、ＡＤ－１３９７１９３．１、ＡＤ－１３９７１９４．１、ＡＤ－１３９７１９５．１、ＡＤ－１３９７１９６．１、ＡＤ－１３９７１９７．１、ＡＤ－１３９７１９８．１、ＡＤ－１３９７１９９．１、ＡＤ－１３９７２００．１、ＡＤ－１３９７２０１．１、ＡＤ－１３９７２０２．１、ＡＤ－１３９７２０３．１、ＡＤ－１３９７２０４．１、ＡＤ－１３９７２０５．１、ＡＤ－１３９７２０６．１、ＡＤ－１３９７２０７．１、ＡＤ－１３９７２０８．１、ＡＤ－１３９７２０９．１、ＡＤ－１３９７２１０．１、ＡＤ－１３９７２１１．１、ＡＤ－１３９７２１２．１、ＡＤ－１３９７２１３．１、ＡＤ－１３９７２１４．１、ＡＤ－１３９７２１５．１、ＡＤ－１３９７２１６．１、ＡＤ－１３９７２１７．１、ＡＤ－１３９７２１８．１、ＡＤ－１３９７２１９．１、ＡＤ－１３９７２２０．１、ＡＤ－１３９７２２１．１、ＡＤ－１３９７２２２．１、ＡＤ－１３９７２２３．１、ＡＤ－１３９７２２４．１、ＡＤ－１３９７２２５．１、ＡＤ－１３９７２２６．１、ＡＤ－１３９７２２７．１、ＡＤ－１３９７２２８．１、ＡＤ－１３９７２２９．１、ＡＤ－１３９７２３０．１、ＡＤ－１３９７２３１．１、ＡＤ－１３９７２３２．１、ＡＤ－１３９７２３３．１、ＡＤ－１３９７２３４．１、ＡＤ－１３９７２３５．１、ＡＤ－１３９７２３６．１、ＡＤ－１３９７２３７．１、ＡＤ－１３９７２３８．１、ＡＤ－１３９７２３９．１、ＡＤ－１３９７２４０．１、ＡＤ－１３９７２４１．１、ＡＤ－１３９７２４２．１、ＡＤ－１３９７２４３．１、ＡＤ－１３９７２４４．１、ＡＤ－１３９７２４５．１、ＡＤ－１３９７２４６．１、ＡＤ－１３９７２４７．１、ＡＤ－１３９７２４８．１、ＡＤ－１３９７２４９．１、ＡＤ－５２３５６５．１、ＡＤ－１３９７０７２．３、ＡＤ－１３９７０７３．３、ＡＤ－１３９７０７６．３、ＡＤ－１３９７０７７．３、ＡＤ－１３９７０７８．３、ＡＤ－１３９７２５２．２、ＡＤ－１３９７２５７．２、ＡＤ－１３９７２５８．２、ＡＤ－１３９７２５９．２、ＡＤ－１３９７２６３．２、ＡＤ－１３９７２６４．２、ＡＤ－１３９７３０９．２、ＡＤ－６４９５８．１１４、ＡＤ－３９３７５８．４、ＡＤ－１３９７０８０．３、ＡＤ－１３９７２９３．２、ＡＤ－１３９７２９４．２、ＡＤ－１３９７０８１．３、ＡＤ－１３９７０８３．３、ＡＤ－１３９７２９８．２、ＡＤ－１３９７２９９．２、ＡＤ－
１３９７０８４．２、ＡＤ－１３９７０８５．２、ＡＤ－１３９７０８７．３、ＡＤ－１３９７３０６．２、ＡＤ－１３９７３０７．２、ＡＤ－１３９７３０８．２、ＡＤ－１３９７０８８．２、ＡＤ－１５６６２３８、ＡＤ－１５６６２３９、ＡＤ－１５６６２４０、ＡＤ－１５６６２４１、ＡＤ－１５６６２４２、ＡＤ－１５６６２４３、ＡＤ－１５６６２４４、ＡＤ－１５６６２４５、ＡＤ－１５６６２４６、ＡＤ－１０９１９６５、ＡＤ－１５６６２４８、ＡＤ－１５６６２４９、ＡＤ－１５６６２５０、ＡＤ－１０９１９６６、ＡＤ－１５６６２５１、ＡＤ－１５６６２５２、ＡＤ－１５６６２５３、ＡＤ－１５６６２５４、ＡＤ－１５６６２５５、ＡＤ－１５６６２５６、ＡＤ－１５６６２５７、ＡＤ－１５６６２５８、ＡＤ－１５６６２５９、ＡＤ－６９２９０６、ＡＤ－１５６６５７５、ＡＤ－１５６６５７６、ＡＤ－１５６６５７７、ＡＤ－１５６６５８０、ＡＤ－１５６６５８１、ＡＤ－１５６６５８２、ＡＤ－１５６６５８３、ＡＤ－１５６６５８４、ＡＤ－１５６６５８６、ＡＤ－１５６６５８７、ＡＤ－１５６６５８８、ＡＤ－１５６６５９０、ＡＤ－１５６６５９１、ＡＤ－１５６６６３４、ＡＤ－１５６６６３５、ＡＤ－１５６６６３８、ＡＤ－１５６６６３９、ＡＤ－１５６６６４１、ＡＤ－１５６６６４２、ＡＤ－１５６６６４３、ＡＤ－１５６６６７９、ＡＤ－１５６６８６１、ＡＤ－１５６７１５３、ＡＤ－１５６７１５４、ＡＤ－１５６７１５７、ＡＤ－１５６７１５９、ＡＤ－１５６７１６０、ＡＤ－１５６７１６１、ＡＤ－１５６７１６４、ＡＤ－１５６７１６７、ＡＤ－１５６７１９９、ＡＤ－１５６７２０２、ＡＤ－１５６７５５０、ＡＤ－１５６７５５４、ＡＤ－１５６７７８４、ＡＤ－１５６７８９６、ＡＤ－１５６７８９７、ＡＤ－１５６８１０５、ＡＤ－１５６８１０８、ＡＤ－１５６８１０９、ＡＤ－１５６８１３９、ＡＤ－１５６８１４０、ＡＤ－１５６８１４３、ＡＤ－１５６８１４４、ＡＤ－１５６８１４８、ＡＤ－１５６８１５０、ＡＤ－１５６８１５１、ＡＤ－１５６８１５２、ＡＤ－１５６８１５３、ＡＤ－１５６８１５４、ＡＤ－１５６８１５８、ＡＤ－１５６８１６１、ＡＤ－１５６８１７２、ＡＤ－１５６８１７４、ＡＤ－１５６８１７５、ＡＤ－６９２９０８、ＡＤ－１５６８１７６、ＡＤ－１５６９８３０、ＡＤ－１５６９８３２、ＡＤ－１５６９８３４、ＡＤ－１５６９８３５、ＡＤ－１５６９８６２、ＡＤ－１５６９８７２、ＡＤ－１５６９８９０およびＡＤ－１５６９８９２からなる群から選択される二重鎖のアンチセンス鎖ヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。 In one embodiment, the antisense strand comprises AD-523799.1, AD-523802.1, AD-523795.1, AD-523810.1, AD-523809.1, AD-1019331.1, AD-523801. 1, AD-523823.1, AD-523798.1, AD-523816.1, AD-523824.1, AD-523800.1, AD-523796.1, AD-535094.1, AD-535094.1, AD-535095.1, AD-538647.1, AD-535922.1, AD-536317.1, AD-536911.1, AD-538626.1, AD-535864.1, AD-523561.1, AD- 523565.1, AD-523562.1, AD-526914.1, AD-526394.1, AD-395452.1, AD-525343.1, AD-524274.1, AD-526956.1, AD-526986. 1, AD-526296.1, AD-526988.1, AD-526957.1, AD-526993.1, AD-1397070.1, AD-1397070.2, AD-1397071.1, AD-1397071.2, AD-1397072.1, AD-1397072.2, AD-1397073.1, AD-1397073.2, AD-1397074.1, AD-1397074.2, AD-1397075.1, AD-1397075.2, AD- 1397076.1, AD-1397076.2, AD-1397077.1, AD-1397077.2, AD-1397078.1, AD-1397078.2, AD-1397250.1, AD-1397251.1, AD-1397252. 1, AD-1397253.1, AD-1397254.1, AD-1397255.1, AD-1397256.1, AD-1397257.1, AD-1397258.1, AD-1397259.1, AD-1397260.1, AD-1397261.1, AD-1397262.1, AD-1397263.1, AD-1397264.1, AD-1397265.1, AD-1423242.1, AD-1423243.1, AD-1423244.1, AD- 1423245.1, AD-1423246.1, AD-1423247.1, AD-1423248.1, AD-1423249.1, AD-1423250.1, AD-1423251.1, AD-1423252.1, AD-1423253. 1, AD-1423254.1, AD-1423255.1, AD-1423256.1, AD-1423257.1, AD-1423258.1, AD-1423259.1, AD-1423260.1, AD-1423261.1, AD-1423262.1, AD-1423263.1, AD-1423264.1, AD-1423265.1, AD-1423266.1, AD-1423267.1, AD-1423268.1, AD-1423269.1, AD- 1423270.1, AD-1423271.1, AD-1423272.1, AD-1423273.1, AD-1423274.1, AD-1423275.1, AD-1423276.1, AD-1423277.1, AD-1423278. 1, AD-1423279.1, AD-1423280.1, AD-1423281.1, AD-1423282.1, AD-1423283.1, AD-1423284.1, AD-1423285.1, AD-1423286.1, AD-1423287.1, AD-1423288.1, AD-1423289.1, AD-1423290.1, AD-1423291.1, AD-1423292.1, AD-1423293.1, AD-1423294.1, AD- 1423295.1, AD-1423296.1, AD-1423297.1, AD-1423298.1, AD-1423299.1, AD-1423300.1, AD-1397266.1, AD-1397266.2, AD-1397267. 1, AD-1423301.1, AD-1397268.1, AD-1397268.2, AD-1397269.1, AD-1423302.1, AD-1397270.1, AD-1397270.2, AD-1397271.1, AD-1397271.2, AD-1397272.1, AD-1423303.1, AD-1397273.1, AD-1423304.1, AD-1397274.1, AD-1423305.1, AD-1397275.1, AD- 1423306.1, AD-1397276.1, AD-1397277.1, AD-1397277.2, AD-1397278.1, AD-1397279.1, AD-1397280.1, AD-1397281.1, AD-1397282. 1, AD-1397283.1, AD-1397284.1, AD-1397285.1, AD-1397286.1, AD-1397287.1, AD-1397079.1, AD-1397079.2, AD-1397288.1, AD-1397289.1, AD-1397290.1, AD-1397080.1, AD-1397080.2, AD-1397291.1, AD-1397292.1, AD-1397293.1, AD-1397294.1, AD- 1397081.1, AD-1397081.2, AD-1397295.1, AD-1397082.1, AD-1397082.2, AD-1397083.1, AD-1397083.2, AD-1397296.1, AD-1397297. 1, AD-1397298.1, AD-1397299.1, AD-1397300.1, AD-1397301.1, AD-1397302.1, AD-1397084.1, AD-1397085.1, AD-1397086.1, AD-1397303.1, AD-1397087.1, AD-1397087.2, AD-1397304.1, AD-1397305.1, AD-1397306.1, AD-1397307.1, AD-1397308.1, AD- 1397309.1, AD-1397310.1, AD-1397311.1, AD-1397312.1, AD-1397313.1, AD-1397314.1, AD-1397315.1, AD-1397316.1, AD-1397317. 1, AD-1397318.1, AD-1397319.1, AD-1397320.1, AD-1397321.1, AD-1397322.1, AD-1397088.1, AD-1397089.1, AD-1397090.1, AD-1397091.1, AD-1397092.1, AD-1397093.1, AD-1397094.1, AD-1397095.1, AD-1397096.1, AD-1397097.1, AD-1397098.1, AD- 1397099.1, AD-1397101.1, AD-1397102.1, AD-1397103.1, AD-1397104.1, AD-1397105.1, AD-1397106.1, AD-1397107.1, AD-1397108. 1, AD-1397109.1, AD-1397110.1, AD-1397111.1, AD-1397112.1, AD-1397113.1, AD-1397114.1, AD-1397115.1, AD-1397116.1, AD-1397117.1, AD-1397118.1, AD-1397119.1, AD-1397120.1, AD-1397121.1, AD-1397122.1, AD-1397123.1, AD-1397124.1, AD- 1397125.1, AD-1397126.1, AD-1397127.1, AD-1397128.1, AD-1397129.1, AD-1397130.1, AD-1397131.1, AD-1397132.1, AD-1397133. 1, AD-1397134.1, AD-1397135.1, AD-1397136.1, AD-1397137.1, AD-1397138.1, AD-1397139.1, AD-1397140.1, AD-1397141.1, AD-1397142.1, AD-1397143.1, AD-1397144.1, AD-1397145.1, AD-1397146.1, AD-1397147.1, AD-1397148.1, AD-1397149.1, AD- 1397150.1, AD-1397151.1, AD-1397152.1, AD-1397153.1, AD-1397154.1, AD-1397155.1, AD-1397156.1, AD-1397157.1, AD-1397158. 1, AD-1397159.1, AD-1397160.1, AD-1397161.1, AD-1397162.1, AD-1397163.1, AD-1397164.1, AD-1397165.1, AD-1397166.1, AD-1397167.1, AD-1397168.1, AD-1397169.1, AD-1397170.1, AD-1397171.1, AD-1397172.1, AD-1397173.1, AD-1397174.1, AD- 1397175.1, AD-1397176.1, AD-1397177.1, AD-1397178.1, AD-1397179.1, AD-1397180.1, AD-1397181.1, AD-1397182.1, AD-1397183. 1, AD-1397184.1, AD-1397185.1, AD-1397186.1, AD-1397187.1, AD-1397188.1, AD-1397189.1, AD-1397190.1, AD-1397191.1, AD-1397192.1, AD-1397193.1, AD-1397194.1, AD-1397195.1, AD-1397196.1, AD-1397197.1, AD-1397198.1, AD-1397199.1, AD- 1397200.1, AD-1397201.1, AD-1397202.1, AD-1397203.1, AD-1397204.1, AD-1397205.1, AD-1397206.1, AD-1397207.1, AD-1397208. 1, AD-1397209.1, AD-1397210.1, AD-1397211.1, AD-1397212.1, AD-1397213.1, AD-1397214.1, AD-1397215.1, AD-1397216.1, AD-1397217.1, AD-1397218.1, AD-1397219.1, AD-1397220.1, AD-1397221.1, AD-1397222.1, AD-1397223.1, AD-1397224.1, AD- 1397225.1, AD-1397226.1, AD-1397227.1, AD-1397228.1, AD-1397229.1, AD-1397230.1, AD-1397231.1, AD-1397232.1, AD-1397233. 1, AD-1397234.1, AD-1397235.1, AD-1397236.1, AD-1397237.1, AD-1397238.1, AD-1397239.1, AD-1397240.1, AD-1397241.1, AD-1397242.1, AD-1397243.1, AD-1397244.1, AD-1397245.1, AD-1397246.1, AD-1397247.1, AD-1397248.1, AD-1397249.1, AD- 523565.1, AD-1397072.3, AD-1397073.3, AD-1397076.3, AD-1397077.3, AD-1397078.3, AD-1397252.2, AD-1397257.2, AD-1397258. 2, AD-1397259.2, AD-1397263.2, AD-1397264.2, AD-1397309.2, AD-64958.114, AD-393758.4, AD-1397080.3, AD-1397293.2, AD-1397294.2, AD-1397081.3, AD-1397083.3, AD-1397298.2, AD-1397299.2, AD-
1397084.2, AD-1397085.2, AD-1397087.3, AD-1397306.2, AD-1397307.2, AD-1397308.2, AD-1397088.2, AD-1566238, AD-1566239, AD- 1566240, AD-1566241, AD-1566242, AD-1566243, AD-1566244, AD-1566245, AD-1566246, AD-1091965, AD-1566248, AD-1566249, AD-1566250, AD-1091966, AD-1 566251, AD -1566252, AD -1566253, AD -1566254, AD -1566255, AD -1566256, AD -1566257, AD -1566258, AD -1566259, AD -1566259, AD -692906, AD -1566575, AD - 1566576, AD -1566577, AD- 1566580, AD-1566581, AD-1566582, AD-1566583, AD-1566584, AD-1566586, AD-1566587, AD-1566588, AD-1566590, AD-1566591, AD-1566634, AD-1566635, AD-1 566638, AD-1566639, AD-1566641, AD-1566642, AD-1566643, AD-1566679, AD-1566861, AD-1567153, AD-1567154, AD-1567157, AD-1567159, AD-1567160, AD-1567161, AD - 1567164, AD-1567167, AD-1567199, AD-1567202, AD-1567550, AD-1567554, AD-1567784, AD-1567896, AD-1567897, AD-1568105, AD-1568108, AD-1568109, AD-1 568139, AD-1568140, AD-1568143, AD-1568144, AD-1568148, AD-1568150, AD-1568151, AD-1568152, AD-1568153, AD-1568154, AD-1568158, AD-1568161, AD-1568172, AD - 1568174, AD -1568175, AD -692908, AD -1568176, AD -1569830, AD -1569832, AD -1569834, AD -1569835, AD -1569862, AD -1569872, AD -1569, AD -1569 Select from a group consisting of 890 and AD -1569892 at least 15 contiguous nucleotides that differ by no more than 3 nucleotides from any one of the antisense strand nucleotide sequences of the double-stranded duplex.

特定の実施形態において、アンチセンス鎖は、ＡＤ－５２３７９９.１、ＡＤ－５２３８０２．１、ＡＤ－５２３７９５．１、ＡＤ－５２３８１０．１、ＡＤ－５２３８０９．１、ＡＤ－１０１９３３１．１、ＡＤ－５２３８０１．１、ＡＤ－５２３８２３．１、ＡＤ－５２３７９８．１、ＡＤ－５２３８１６．１、ＡＤ－５２３８２４．１、ＡＤ－５２３８００．１、ＡＤ－５２３７９６．１、ＡＤ－５３５０９４．１、ＡＤ－５３５０９４．１、ＡＤ－５３５０９５．１、ＡＤ－５３８６４７．１、ＡＤ－５３５９２２．１、ＡＤ－５３６３１７．１、ＡＤ－５３６９１１．１、ＡＤ－５３８６２６．１、ＡＤ－５３５８６４．１、ＡＤ－５２３５６１．１、ＡＤ－５２３５６５．１、ＡＤ－５２３５６２．１、ＡＤ－５２６９１４．１、ＡＤ－５２６３９４．１、ＡＤ－３９５４５２．１、ＡＤ－５２５３４３．１、ＡＤ－５２４２７４．１、ＡＤ－５２６９５６．１、ＡＤ－５２６９８６．１、ＡＤ－５２６２９６．１、ＡＤ－５２６９８８．１、ＡＤ－５２６９５７．１およびＡＤ－５２６９９３．１からなる群から選択される二重鎖のアンチセンス鎖ヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。一実施形態において、アンチセンス鎖は、ＡＤ－５２３７９９．１、ＡＤ－５２３８０２．１、ＡＤ－５２３７９５．１、ＡＤ－５２３８１０．１、ＡＤ－５２３８０９．１、ＡＤ－１０１９３３１．１、ＡＤ－５２３８０１．１、ＡＤ－５２３８２３．１、ＡＤ－５２３７９８．１、ＡＤ－５２３８１６．１、ＡＤ－５２３８２４．１、ＡＤ－５２３８００．１、およびＡＤ－５２３７９６．１からなる群から選択される二重鎖のアンチセンス鎖のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。 In certain embodiments, the antisense strand is AD-523823.1, AD-523798.1, AD-523816.1, AD-523824.1, AD-523800.1, AD-523796.1, AD-535094.1, AD-535094.1 , AD-535095.1, AD-538647.1, AD-535922.1, AD-536317.1, AD-536911.1, AD-538626.1, AD-535864.1, AD-523561.1, AD -523565.1, AD-523562.1, AD-526914.1, AD-526394.1, AD-395452.1, AD-525343.1, AD-524274.1, AD-526956.1, AD-526986 any one and no more than three double-stranded antisense strand nucleotide sequences selected from the group consisting of AD-526296.1, AD-526988.1, AD-526957.1 and AD-526993.1. contains at least 15 consecutive nucleotides that differ by nucleotides of In one embodiment, the antisense strand comprises AD-523799.1, AD-523802.1, AD-523795.1, AD-523810.1, AD-523809.1, AD-1019331.1, AD-523801. 1, AD-523823.1, AD-523798.1, AD-523816.1, AD-523824.1, AD-523800.1, and AD-523796.1. It contains at least 15 contiguous nucleotides that differ by no more than 3 nucleotides from any one of the nucleotide sequences of the sense strand.

一部の実施形態において、センスおよびアンチセンス鎖のヌクレオチド配列は、表３～８、および１６～２８のいずれか１つに記載のセンスおよびアンチセンス鎖のヌクレオチド配列のいずれか１つを含む。 In some embodiments, the sense and antisense strand nucleotide sequences comprise any one of the sense and antisense strand nucleotide sequences set forth in any one of Tables 3-8, and 16-28.

一実施形態において、センス鎖のヌクレオチド配列は、配列番号１５３３において説明されるＭＡＰＴ遺伝子エクソン１０のセンス鎖配列に対応する少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖はそれに対して相補的な配列を含む。 In one embodiment, the nucleotide sequence of the sense strand comprises at least 15 contiguous nucleotides corresponding to the sense strand sequence of MAPT gene exon 10 set forth in SEQ ID NO: 1533, and the antisense strand is complementary thereto. Contains arrays.

一態様において、本発明は、ＭＡＰＴの発現を阻害するための二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤であって、ｄｓＲＮＡ剤は、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、配列番号５のヌクレオチド配列と３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖は、配列番号６のヌクレオチド配列と３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、ｄｓＲＮＡ剤を提供する。 In one aspect, the invention provides a double-stranded ribonucleic acid (dsRNA) agent for inhibiting expression of MAPT, the dsRNA agent comprising a sense strand and an antisense strand forming a double-stranded region, the sense The strand comprises at least 15 contiguous nucleotides that differ from the nucleotide sequence of SEQ ID NO:5 by no more than 3 nucleotides, and the antisense strand comprises at least 15 contiguous nucleotides that differ from the nucleotide sequence of SEQ ID NO:6 by no more than 3 nucleotides. A dsRNA agent is provided that comprises contiguous nucleotides.

別の態様において、本発明は、ＭＡＰＴの発現を阻害するためのｄｓＲＮＡ剤であって、ｄｓＲＮＡ剤は、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、タウをコードするｍＲＮＡに対して相補性の領域を含み、相補性の領域は、配列番号６のヌクレオチド配列と３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、ｄｓＲＮＡ剤を提供する。 In another aspect, the invention provides a dsRNA agent for inhibiting expression of MAPT, the dsRNA agent comprising a sense strand and an antisense strand forming a double-stranded region, the antisense strand comprising tau. A dsRNA agent is provided comprising a region of complementarity to the encoding mRNA, wherein the region of complementarity comprises at least 15 contiguous nucleotides that differ from the nucleotide sequence of SEQ ID NO:6 by no more than 3 nucleotides.

さらに別の態様において、本発明は、ＭＡＰＴの発現を阻害するためのｄｓＲＮＡ剤であって、ｄｓＲＮＡ剤は、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、タウをコードするｍＲＮＡに対して相補性の領域を含み、相補性の領域は、表１２～１３のいずれか１つに記載のアンチセンスヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、ｄｓＲＮＡ剤を提供する。 In yet another aspect, the invention provides a dsRNA agent for inhibiting expression of MAPT, the dsRNA agent comprising a sense strand and an antisense strand forming a double-stranded region, the antisense strand comprising tau wherein the region of complementarity differs from any one of the antisense nucleotide sequences set forth in any one of Tables 12-13 by no more than 3 nucleotides at least 15 A dsRNA agent is provided that comprises 10 consecutive nucleotides.

一実施形態において、センス鎖は、配列番号５のヌクレオチド１０６５～１０８５、１１９５～１２１５、１０６６～１０８６、１０６８～１０８８、７０５～７２５、１０６７～１０８７、４５２０～４５４０、３３４１～３３６１、４５１５～４５３５、５２８４～５３０４、５２８５～５３０５、３４４～３６４、５２８３～５３０３、５３５４～５３７４、２４５９～２４７９、１０６１～１０８１、７０６～７２６、９７２～９９２、４５６４～４５８４、９９５～１０１５、４５４６～４５６６、９６８～９８８、１１２７～１１４７、４５３４～４５５４、１５８～１７８、４４９４～４５１４、１６９１～１７１１、３５４４～３５６４、１９８～２１８、９７９～９９９、４５４８～４５６８、４５５１～４５７１、５４３～５６３、７１５～７３５、５４２～５６２、３５２～３７２、３６２～３８２、４５５６～４５７６、４５４７～４５６７、４５４２～４５６２、４５５８～４５７８、４５４９～４５６９、５０７４～５０９４、４５５２～４５７２、５０７３～５０９３、５０７６～５０９６、４５５０～４５７０、および２７５３～２７７３のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖は、配列番号６の対応するヌクレオチド配列からの少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。 In one embodiment, the sense strand comprises nucleotides 1065-1085, 1195-1215, 1066-1086, 1068-1088, 705-725, 1067-1087, 4520-4540, 3341-3361, 4515-4535 of SEQ ID NO:5, 5284-5304, 5285-5305, 344-364, 5283-5303, 5354-5374, 2459-2479, 1061-1081, 706-726, 972-992, 4564-4584, 995-1015, 4546-4566, 968- 988, 1127-1147, 4534-4554, 158-178, 4494-4514, 1691-1711, 3544-3564, 198-218, 979-999, 4548-4568, 4551-4571, 543-563, 715-735, 542-562, 352-372, 362-382, 4556-4576, 4547-4567, 4542-4562, 4558-4578, 4549-4569, 5074-5094, 4552-4572, 5073-5093, 5076-5096, 4550- 4570, and any one of nucleotide sequences 2753-2773, wherein the antisense strand comprises at least 15 contiguous nucleotides that differ by no more than 3 nucleotides from any one of the nucleotide sequences of SEQ ID NO: 6; Contains consecutive nucleotides.

一実施形態において、アンチセンス鎖は、ＡＤ－３９３７５８．１、ＡＤ－３９３８８８．１、ＡＤ－３９３７５９．１、ＡＤ－３９３７６１．１、ＡＤ－３９３４９５．１、ＡＤ－３９３７６０．１、ＡＤ－３９６４２５．１、ＡＤ－３９５４４１．１、ＡＤ－３９６４２０．１、ＡＤ－３９７１０３．１、ＡＤ－３９７１０４．１、ＡＤ－３９３２３９．１、ＡＤ－３９７１０２．１、ＡＤ－３９７１６７．１、ＡＤ－３９４７９１．１、ＡＤ－３９３７５４．１、ＡＤ－３９３４９６．１、ＡＤ－３９３６６７．１、ＡＤ－３９６４６７．１、ＡＤ－３９３６９０．１、ＡＤ－３９６４４９．１、ＡＤ－３９３６６３．１、ＡＤ－３９３８２０．１、ＡＤ－３９６４３７．１、ＡＤ－３９３０８４．１、ＡＤ－３９６４０１．１、ＡＤ－３９４２９６．１、ＡＤ－３９５５７４．１、ＡＤ－３９３１２４．１、ＡＤ－３９３６７４．１、ＡＤ－３９６４５１．１、ＡＤ－３９６４５４．１、ＡＤ－３９３３７６．１、ＡＤ－３９３５０５．１、ＡＤ－３９３３７５．１、ＡＤ－３９３２４７．１、ＡＤ－３９３２５７．１、ＡＤ－３９６４５９．１、ＡＤ－３９６４５０．１、ＡＤ－３９６４４５．１、ＡＤ－３９６４６１．１、ＡＤ－３９６４５２．１、ＡＤ－３９６９１３．１、ＡＤ－３９６４５５．１、ＡＤ－３９６９１２．１、ＡＤ－３９６９１５．１、ＡＤ－３９６４５３．１およびＡＤ－３９４９９１．１からなる群から選択される二重鎖のアンチセンス鎖のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。 In one embodiment, the antisense strand comprises AD-393758.1, AD-393888.1, AD-393759.1, AD-393761.1, AD-393495.1, AD-393760.1, AD-396425. 1, AD-395441.1, AD-396420.1, AD-397103.1, AD-397104.1, AD-393239.1, AD-397102.1, AD-397167.1, AD-394791.1, AD-393754.1, AD-393496.1, AD-393667.1, AD-396467.1, AD-393690.1, AD-396449.1, AD-393663.1, AD-393820.1, AD- 396437.1, AD-393084.1, AD-396401.1, AD-394296.1, AD-395574.1, AD-393124.1, AD-393674.1, AD-396451.1, AD-396454. 1, AD-393376.1, AD-393505.1, AD-393375.1, AD-393247.1, AD-393257.1, AD-396459.1, AD-396450.1, AD-396445.1, The group consisting of AD-396461.1, AD-396452.1, AD-396913.1, AD-396455.1, AD-396912.1, AD-396915.1, AD-396453.1 and AD-394991.1 at least 15 contiguous nucleotides that differ by no more than 3 nucleotides from any one of the nucleotide sequences of the antisense strand of the duplex selected from

一実施形態において、本明細書に記載されるセンス鎖、アンチセンス鎖、またはセンス鎖とアンチセンス鎖の両方は、１つまたは複数の親油性部分にコンジュゲートしている。 In one embodiment, the sense strand, the antisense strand, or both the sense and antisense strands described herein are conjugated to one or more lipophilic moieties.

一実施形態において、親油性部分は、ｄｓＲＮＡ剤の二本鎖領域における１つまたは複数の内部位置にコンジュゲートしている。 In one embodiment, the lipophilic moiety is conjugated to one or more internal positions in the double-stranded region of the dsRNA agent.

一実施形態において、親油性部分は、リンカーまたは担体を介してコンジュゲートしている。 In one embodiment, the lipophilic moiety is conjugated via a linker or carrier.

一実施形態において、ｌｏｇＫｏｗによって測定された親油性部分の親油性は、０を超える。 In one embodiment, the lipophilicity of the lipophilic moiety as measured by log Kow is greater than zero.

一実施形態において、二本鎖ＲＮＡ剤の血漿タンパク質結合アッセイにおける未結合分画によって測定された二本鎖ＲＮＡ剤の疎水性は、０．２を超える。 In one embodiment, the hydrophobicity of the double-stranded RNA agent as measured by the unbound fraction in a plasma protein binding assay of the double-stranded RNA agent is greater than 0.2.

一実施形態において、血漿タンパク質結合アッセイは、ヒト血清アルブミンタンパク質を使用する電気泳動移動度シフトアッセイである。 In one embodiment, the plasma protein binding assay is an electrophoretic mobility shift assay using human serum albumin protein.

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、少なくとも１つの修飾されたヌクレオチドを含む。 In some embodiments, the dsRNA agent comprises at least one modified nucleotide.

一実施形態において、本発明に記載されるｄｓＲＮＡ剤におけるセンス鎖ヌクレオチドの５個以下およびアンチセンス鎖のヌクレオチドの５個以下は、修飾されていないヌクレオチドである。 In one embodiment, no more than 5 of the sense strand nucleotides and no more than 5 of the antisense strand nucleotides in the dsRNA agents described in this invention are unmodified nucleotides.

一実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤におけるセンス鎖のヌクレオチドの全ておよびアンチセンス鎖のヌクレオチドの全ては、修飾されたヌクレオチドである。 In one embodiment, all of the sense strand nucleotides and all of the antisense strand nucleotides in the dsRNA agent are modified nucleotides.

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤の修飾されたヌクレオチドの少なくとも１つは、デオキシヌクレオチド、３’末端デオキシチミジン（ｄＴ）ヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル修飾されたヌクレオチド、２’－フルオロ修飾されたヌクレオチド、２’－デオキシ修飾されたヌクレオチド、ロックドヌクレオチド、非ロックドヌクレオチド、立体配座的に制限されたヌクレオチド、拘束エチルヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、２’－アミノ変性ヌクレオチド、２’－Ｏ－アリル修飾されたヌクレオチド、２’－Ｃ－アルキル修飾されたヌクレオチド、２’－ヒドロキシル（ｈｙｄｒｏｘｌｙ）修飾されたヌクレオチド、２’－メトキシエチル修飾されたヌクレオチド、２’－Ｏ－アルキル修飾されたヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホルアミデート、非天然塩基を含むヌクレオチド、テトラヒドロピラン修飾されたヌクレオチド、１，５－アンヒドロヘキシトール修飾されたヌクレオチド、シクロヘキセニル修飾されたヌクレオチド、５’－ホスホロチオエート基を含むヌクレオチド、５’－メチルホスホネート基を含むヌクレオチド、５’リン酸または５’リン酸ミミックを含むヌクレオチド、ビニルホスホネートを含むヌクレオチド、アデノシン－グリコール核酸（ＧＮＡ）を含むヌクレオチド、チミジン－グリコール核酸（ＧＮＡ）Ｓ－異性体を含むヌクレオチド、２－ヒドロキシメチル－テトラヒドロフラン－５－ホスフェートを含むヌクレオチド、２’－デオキシチミジン－３’ホスフェートを含むヌクレオチド、２’－デオキシグアノシン－３’－ホスフェートを含むヌクレオチド、ならびにコレステリル誘導体およびドデカン酸ビスデシルアミド基に連結された末端ヌクレオチド；ならびにそれらの組合せからなる群から選択される。 In some embodiments, at least one of the modified nucleotides of the dsRNA agent is a deoxynucleotide, a 3' terminal deoxythymidine (dT) nucleotide, a 2'-O-methyl modified nucleotide, a 2'-fluoro modified modified nucleotides, 2'-deoxy modified nucleotides, locked nucleotides, non-locked nucleotides, conformationally restricted nucleotides, constrained ethyl nucleotides, abasic nucleotides, 2'-amino modified nucleotides, 2'-O - allyl modified nucleotides, 2'-C-alkyl modified nucleotides, 2'-hydroxyly modified nucleotides, 2'-methoxyethyl modified nucleotides, 2'-O-alkyl modified nucleotides , morpholinonucleotides, phosphoramidates, nucleotides containing unnatural bases, tetrahydropyran-modified nucleotides, 1,5-anhydrohexitol-modified nucleotides, cyclohexenyl-modified nucleotides, 5′-phosphorothioate groups nucleotides containing a 5'-methylphosphonate group; nucleotides containing a 5' phosphate or a 5' phosphate mimic; nucleotides containing a vinyl phosphonate; nucleotides containing adenosine-glycol nucleic acid (GNA); thymidine-glycol nucleic acid (GNA) ) nucleotides containing the S-isomer, nucleotides containing 2-hydroxymethyl-tetrahydrofuran-5-phosphate, nucleotides containing 2′-deoxythymidine-3′-phosphate, nucleotides containing 2′-deoxyguanosine-3′-phosphate, and a terminal nucleotide linked to a cholesteryl derivative and a dodecanoic acid bisdecylamide group; and combinations thereof.

一実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤の修飾されたヌクレオチドは、２’－デオキシ－２’－フルオロ修飾されたヌクレオチド、２’－デオキシ修飾されたヌクレオチド、３’末端デオキシチミジンヌクレオチド（ｄＴ）、ロックドヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、２’－アミノ変性ヌクレオチド、２’－アルキル修飾されたヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホルアミデート、および非天然塩基を含むヌクレオチドからなる群から選択される。 In one embodiment, the modified nucleotides of the dsRNA agent are 2'-deoxy-2'-fluoro modified nucleotides, 2'-deoxy modified nucleotides, 3' terminal deoxythymidine nucleotides (dT), locked nucleotides , abasic nucleotides, 2′-amino modified nucleotides, 2′-alkyl modified nucleotides, morpholino nucleotides, phosphoramidates, and nucleotides containing non-natural bases.

一実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤の修飾されたヌクレオチドは、３’末端デオキシチミジンヌクレオチド（ｄＴ）の短い配列を含む。 In one embodiment, the modified nucleotides of the dsRNA agent comprise a short sequence of 3' terminal deoxythymidine nucleotides (dT).

一実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤のヌクレオチドへの修飾は、２’－Ｏ－メチル、ＧＮＡおよび２’フルオロ修飾である。 In one embodiment, the modifications to the nucleotides of the dsRNA agent are 2'-O-methyl, GNA and 2'fluoro modifications.

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結をさらに含む。 In some embodiments, the dsRNA agent further comprises at least one phosphorothioate internucleotide linkage.

一実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、６～８個のホスホロチオエートインターヌクレオチド連結を含む。 In one embodiment, the dsRNA agent comprises 6-8 phosphorothioate internucleotide linkages.

一実施形態において、ｄｓＲＮＡの各鎖は、３０ヌクレオチド以下の長さである。 In one embodiment, each strand of the dsRNA is 30 nucleotides or less in length.

一実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤の少なくとも１つの鎖は、少なくとも１ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む。別の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤の少なくとも１つの鎖は、少なくとも２ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む。 In one embodiment, at least one strand of the dsRNA agent comprises a 3' overhang of at least 1 nucleotide. In another embodiment, at least one strand of the dsRNA agent comprises a 3' overhang of at least 2 nucleotides.

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤の二本鎖領域は、１５～３０ヌクレオチド対の長さ；１７～２３ヌクレオチド対の長さ；１７～２５ヌクレオチド対の長さ；２３～２７ヌクレオチド対の長さ；１９～２１ヌクレオチド対の長さ；または２１～２３ヌクレオチド対の長さであってもよい。 In some embodiments, the double-stranded region of the dsRNA agent is 15-30 nucleotide pairs long; 17-23 nucleotide pairs long; 17-25 nucleotide pairs long; 23-27 nucleotide pairs long. 19-21 nucleotide pairs long; or 21-23 nucleotide pairs long.

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡの各鎖は、１９～３０ヌクレオチド；１９～２３ヌクレオチド；または２１～２３ヌクレオチドを有してもよい。 In some embodiments, each strand of the dsRNA may have 19-30 nucleotides; 19-23 nucleotides; or 21-23 nucleotides.

一実施形態において、１つまたは複数の親油性部分は、少なくとも１つの鎖上の１つまたは複数の内部位置に、例えばリンカーまたは担体を介してコンジュゲートしている。 In one embodiment, one or more lipophilic moieties are conjugated to one or more internal positions on at least one chain, eg, via a linker or carrier.

一実施形態において、内部位置は、少なくとも１つの鎖の各末端からの末端の２つの位置を除く全ての位置を含む。 In one embodiment, internal positions include all but two positions at the end from each end of at least one strand.

別の実施形態において、内部位置は、少なくとも１つの鎖の各末端からの末端の３つの位置を除く全ての位置を含む。 In another embodiment, internal positions include all but three positions at the end from each end of at least one strand.

一実施形態において、内部位置は、センス鎖の切断部位領域を除く。 In one embodiment, the internal position excludes the cleavage site region of the sense strand.

一実施形態において、内部位置は、センス鎖の５’端から数えて位置９～１２を除く全ての位置を含む。 In one embodiment, internal positions include all positions counting from the 5' end of the sense strand except positions 9-12.

別の実施形態において、内部位置は、センス鎖の３’端から数えて位置１１～１３を除く全ての位置を含む。 In another embodiment, internal positions include all positions counting from the 3' end of the sense strand except positions 11-13.

一実施形態において、内部位置は、アンチセンス鎖の切断部位領域を除く。 In one embodiment, the internal position excludes the cleavage site region of the antisense strand.

一実施形態において、内部位置は、アンチセンス鎖の５’端から数えて位置１２～１４を除く全ての位置を含む。 In one embodiment, internal positions include all positions counting from the 5' end of the antisense strand except positions 12-14.

一実施形態において、内部位置は、センス鎖の３’端から数えて位置１１～１３とアンチセンス鎖の５’端から数えて位置１２～１４とを除く全ての位置を含む。 In one embodiment, internal positions include all positions except positions 11-13 counting from the 3' end of the sense strand and positions 12-14 counting from the 5' end of the antisense strand.

一実施形態において、１つまたは複数の親油性部分は、各鎖の５’端から数えて、センス鎖における位置４～８および１３～１８ならびにアンチセンス鎖における位置６～１０および１５～１８からなる群から選択される内部位置の１つまたは複数にコンジュゲートされる。 In one embodiment, the one or more lipophilic moieties are from positions 4-8 and 13-18 in the sense strand and positions 6-10 and 15-18 in the antisense strand, counting from the 5' end of each strand. conjugated to one or more of the internal locations selected from the group consisting of:

別の実施形態において、１つまたは複数の親油性部分は、各鎖の５’端から数えて、センス鎖における位置５、６、７、１５、および１７ならびにアンチセンス鎖における位置１５および１７からなる群から選択される内部位置の１つまたは複数にコンジュゲートされる。 In another embodiment, the one or more lipophilic moieties are from positions 5, 6, 7, 15, and 17 in the sense strand and positions 15 and 17 in the antisense strand, counting from the 5' end of each strand. conjugated to one or more of the internal locations selected from the group consisting of:

一実施形態において、二本鎖領域における内部位置は、センス鎖の切断部位領域を除く。 In one embodiment, the internal positions in the double-stranded region exclude the cleavage site region of the sense strand.

一実施形態において、センス鎖は、２１ヌクレオチド長であり、アンチセンス鎖は、２３ヌクレオチド長であり、親油性部分は、センス鎖の位置２１、位置２０、位置１５、位置１、位置７、位置６、もしくは位置２またはアンチセンス鎖の位置１６にコンジュゲートされる。 In one embodiment, the sense strand is 21 nucleotides in length, the antisense strand is 23 nucleotides in length, and the lipophilic moiety is at position 21, position 20, position 15, position 1, position 7, position 6, or conjugated to position 2 or position 16 of the antisense strand.

一実施形態において、親油性部分は、センス鎖の位置２１、位置２０、位置１５、位置１、または位置７にコンジュゲートされる。 In one embodiment, the lipophilic moiety is conjugated to position 21, position 20, position 15, position 1, or position 7 of the sense strand.

別の実施形態において、親油性部分は、センス鎖の２１位、２０位、または１５位にコンジュゲートしている。 In another embodiment, the lipophilic moiety is conjugated to positions 21, 20, or 15 of the sense strand.

さらに別の実施形態において、親油性部分は、センス鎖の２０位または１５位にコンジュゲートしている。 In yet another embodiment, the lipophilic moiety is conjugated to position 20 or 15 of the sense strand.

一実施形態において、親油性部分は、アンチセンス鎖の位置１６にコンジュゲートされる。 In one embodiment, the lipophilic moiety is conjugated to position 16 of the antisense strand.

一実施形態において、親油性部分は、脂肪族化合物、脂環式化合物、または多脂環式化合物である。 In one embodiment, the lipophilic moiety is an aliphatic compound, cycloaliphatic compound, or polyalicyclic compound.

一実施形態において、親油性部分は、脂質、コレステロール、レチノイン酸、コール酸、アダマンタン酢酸、１－ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、１，３－ビス－Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシヘキサノール、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メンソール、１，３－プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ミリスチン酸、Ｏ３－（オレオイル）リトコール酸、Ｏ３－（オレオイル）コレン酸、ジメトキシトリチル、またはフェノキサジンからなる群から選択される。 In one embodiment, the lipophilic moiety is lipid, cholesterol, retinoic acid, cholic acid, adamantaneacetic acid, 1-pyrenebutyric acid, dihydrotestosterone, 1,3-bis-O (hexadecyl)glycerol, geranyloxyhexanol, hexadecylglycerol. , borneol, menthol, 1,3-propanediol, heptadecyl group, palmitic acid, myristic acid, O3-(oleoyl)lithocholic acid, O3-(oleoyl)cholenic acid, dimethoxytrityl, or phenoxazine be done.

一実施形態において、親油性部分は、飽和または不飽和Ｃ４～Ｃ３０炭化水素鎖と、ヒドロキシル、アミン、カルボン酸、スルホネート、ホスフェート、チオール、アジド、およびアルキンからなる群から選択される適宜の官能基とを含有する。 In one embodiment, the lipophilic moiety is a saturated or unsaturated C4-C30 hydrocarbon chain and a suitable functional group selected from the group consisting of hydroxyl, amine, carboxylic acid, sulfonate, phosphate, thiol, azide, and alkyne. and

一実施形態において、親油性部分は、飽和または不飽和Ｃ６～Ｃ１８炭化水素鎖を含有する。 In one embodiment, the lipophilic moiety contains a saturated or unsaturated C6-C18 hydrocarbon chain.

一実施形態において、親油性部分は、飽和または不飽和Ｃ１６炭化水素鎖を含有する。 In one embodiment, the lipophilic moiety contains a saturated or unsaturated C16 hydrocarbon chain.

一実施形態において、飽和または不飽和Ｃ１６炭化水素鎖は、鎖の５’端から数えて位置６にコンジュゲートされる。 In one embodiment, a saturated or unsaturated C16 hydrocarbon chain is conjugated at position 6 counting from the 5' end of the chain.

一実施形態において、親油性部分は、内部位置または二本鎖領域における１つまたは複数のヌクレオチドに置き換わる担体を介してコンジュゲートされる。 In one embodiment, the lipophilic moiety is conjugated via a carrier that replaces one or more nucleotides at internal positions or double-stranded regions.

一実施形態において、担体は、ピロリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、［１，３］ジオキソラニル、オキサゾリジニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、キノキサリニル、ピリダジノニル、テトラヒドロフラニル、およびデカリニルからなる群から選択される環状基であるか；またはセリノール骨格もしくはジエタノールアミン骨格に基づく非環状部分である。 In one embodiment, the carrier is pyrrolidinyl, pyrazolidinyl, pyrazolidinyl, imidazolinyl, imidazolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, [1,3]dioxolanyl, oxazolidinyl, isoxazolidinyl, morpholinyl, thiazolidinyl, isothiazolidinyl, quinoxalinyl, pyridazinonyl, a cyclic group selected from the group consisting of tetrahydrofuranyl, and decalinyl; or an acyclic moiety based on a serinol or diethanolamine backbone.

一実施形態において、親油性部分は、エーテル、チオエーテル、尿素、カーボネート、アミン、アミド、マレイミド－チオエーテル、ジスルフィド、リン酸ジエステル、スルホンアミド連結、クリック反応の生成物、またはカルバメートを含有するリンカーを介して、二本鎖ｉＲＮＡ剤にコンジュゲートしている。 In one embodiment, the lipophilic moiety is via linkers containing ethers, thioethers, ureas, carbonates, amines, amides, maleimide-thioethers, disulfides, phosphodiesters, sulfonamide linkages, products of click reactions, or carbamates. and conjugated to a double-stranded iRNA agent.

一実施形態において、親油性部分は、核酸塩基、糖部分、またはヌクレオシド間連結にコンジュゲートされる。 In one embodiment, the lipophilic moiety is conjugated to a nucleobase, sugar moiety, or internucleoside linkage.

一実施形態において、親油性部分または標的化リガンドは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ジスルフィド、アミド、およびガラクトサミン、グルコサミン、グルコース、ガラクトース、マンノースの官能化された単糖またはオリゴ糖、ならびにそれらの組合せからなる群から選択される生物リンカーを介してコンジュゲートされる。 In one embodiment, the lipophilic moiety or targeting ligand is the group consisting of DNA, RNA, disulfides, amides, and functionalized mono- or oligosaccharides of galactosamine, glucosamine, glucose, galactose, mannose, and combinations thereof. is conjugated via a biolinker selected from

一実施形態において、センス鎖の３’端は、アミンを有する環状基であるエンドキャップを介して保護され、環状基は、ピロリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、［１，３］ジオキソラニル、オキサゾリジニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、キノキサリニル、ピリダジノニル、テトラヒドロフラニル、およびデカリニルからなる群から選択される。 In one embodiment, the 3' end of the sense strand is protected via an endcap that is a cyclic group with an amine, wherein the cyclic groups are pyrrolidinyl, pyrazolinyl, pyrazolidinyl, imidazolinyl, imidazolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, [1,3 ] dioxolanyl, oxazolidinyl, isoxazolidinyl, morpholinyl, thiazolidinyl, isothiazolidinyl, quinoxalinyl, pyridazinonyl, tetrahydrofuranyl, and decalinyl.

一実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、神経細胞を標的化する標的化リガンドをさらに含む。 In one embodiment, the dsRNA agent further comprises a targeting ligand that targets neuronal cells.

一実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、肝臓細胞を標的化する標的化リガンドをさらに含む。 In one embodiment, the dsRNA agent further comprises a targeting ligand that targets liver cells.

一実施形態において、標的化リガンドは、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートである。 In one embodiment, the targeting ligand is a GalNAc conjugate.

一実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、Ｓｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の３’端における第１のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾、Ｒｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の５’端における第１のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾、およびＲｐ立体配置またはＳｐ立体配置のどちらかにおいて連結リン原子を有する、センス鎖の５’端における第１のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾をさらに含む。 In one embodiment, the dsRNA agent is a terminal chiral modification that occurs at the first internucleotide linkage at the 3′ end of the antisense strand, with the linking phosphorus atom in the Sp configuration, the anti A terminal chiral modification that occurs at the first internucleotide linkage at the 5' end of the sense strand and a first internucleotide linkage at the 5' end of the sense strand that has the linking phosphorus atom in either the Rp or Sp configuration. Further includes terminal chiral modifications that occur in

別の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、Ｓｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の３’端における第１および第２のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾、Ｒｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の５’端における第１のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾、およびＲｐまたはＳｐ立体配置のどちらかにおいて連結リン原子を有する、センス鎖の５’端における第１のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾をさらに含む。 In another embodiment, the dsRNA agent has a terminal chiral modification that occurs at the first and second internucleotide linkages at the 3′ end of the antisense strand with the linking phosphorus atom in the Sp configuration, the linking phosphorus atom in the Rp configuration and a terminal chiral modification occurring at the first internucleotide linkage at the 5' end of the antisense strand with It further includes terminal chiral modifications that occur during interligation.

さらに別の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、Ｓｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の３’端における第１、第２、および第３のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾、Ｒｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の５’端における第１のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾、およびＲｐまたはＳｐ立体配置のどちらかにおいて連結リン原子を有する、センス鎖の５’端における第１のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾をさらに含む。 In yet another embodiment, the dsRNA agent has a terminal chiral modification that occurs at the first, second, and third internucleotide linkages at the 3′ end of the antisense strand with the linking phosphorus atom in the Sp configuration, the Rp configuration A terminal chiral modification that occurs at the first internucleotide linkage at the 5' end of the antisense strand, with the linking phosphorus atom in the configuration, and the 5' end of the sense strand, with the linking phosphorus atom in either the Rp or Sp configuration. further comprising a terminal chiral modification that occurs at the first internucleotide linkage in

別の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、Ｓｐ配置で連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の３’末端における第１および第２のインターヌクレオチド連結で起こる末端キラル修飾、Ｒｐ配置で連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の３’末端における第３のインターヌクレオチド連結で起こる末端キラル修飾、Ｒｐ配置で連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の５’末端における第１のインターヌクレオチド連結で起こる末端キラル修飾、およびＲｐまたはＳｐ配置のいずれかで連結リン原子を有する、センス鎖の５’末端における第１のインターヌクレオチド連結で起こる末端キラル修飾をさらに含む。 In another embodiment, the dsRNA agent has a terminal chiral modification that occurs at the first and second internucleotide linkages at the 3′ end of the antisense strand, with the linking phosphorus atom in the Sp configuration, the linking phosphorus atom in the Rp configuration. , a terminal chiral modification occurring at the third internucleotide ligation at the 3′ end of the antisense strand, a terminal chiral modification occurring at the first internucleotide ligation at the 5′ end of the antisense strand with the linking phosphorus atom at the Rp configuration, and a terminal chiral modification that occurs at the first internucleotide linkage at the 5' end of the sense strand, with the linking phosphorus atom in either the Rp or Sp configuration.

別の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、Ｓｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の３’端における第１および第２のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾、Ｒｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の５’端における第１および第２のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾、およびＲｐまたはＳｐ立体配置のどちらかにおいて連結リン原子を有する、センス鎖の５’端における第１のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾をさらに含む。 In another embodiment, the dsRNA agent has a terminal chiral modification that occurs at the first and second internucleotide linkages at the 3′ end of the antisense strand with the linking phosphorus atom in the Sp configuration, the linking phosphorus atom in the Rp configuration and a terminal chiral modification occurring at the first and second internucleotide linkages at the 5' end of the antisense strand, with It further includes terminal chiral modifications that occur at single internucleotide linkages.

一実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、アンチセンス鎖の５’端におけるホスフェートまたはホスフェート模倣物をさらに含む。 In one embodiment, the dsRNA agent further comprises a phosphate or phosphate mimetic at the 5' end of the antisense strand.

一実施形態において、リン酸ミミックは、５’－ビニルホスホネート（ＶＰ）である。 In one embodiment, the phosphate mimic is 5'-vinylphosphonate (VP).

一実施形態において、二重鎖のアンチセンス鎖の５’端の１つの位置の塩基対は、ＡＵ塩基対である。 In one embodiment, a base pair at one position at the 5' end of the antisense strand of the duplex is an AU base pair.

一実施形態において、センス鎖は、合計２１のヌクレオチドを有し、アンチセンス鎖は、合計２３のヌクレオチドを有する。 In one embodiment, the sense strand has a total of 21 nucleotides and the antisense strand has a total of 23 nucleotides.

本発明はまた、本発明のｄｓＲＮＡ剤と脂質製剤とを含む細胞および医薬組成物も提供する。 The invention also provides cells and pharmaceutical compositions comprising a dsRNA agent of the invention and a lipid formulation.

本発明はまた、本発明のｄｓＲＮＡ剤を含む、ＭＡＰＴをコードする遺伝子の発現を阻害するための医薬組成物も提供する。 The invention also provides pharmaceutical compositions for inhibiting expression of a gene encoding MAPT, comprising a dsRNA agent of the invention.

本発明はまた、本発明のｄｓＲＮＡ剤を含む、エクソン１０含有ＭＡＰＴ転写物を選択的に阻害するための医薬組成物も提供する。 The invention also provides pharmaceutical compositions for selectively inhibiting exon 10-containing MAPT transcripts comprising the dsRNA agents of the invention.

一実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、緩衝化されていない溶液、例えば生理食塩水または水中である。 In one embodiment, the dsRNA agent is in an unbuffered solution such as saline or water.

別の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、緩衝溶液、例えば、酢酸塩、クエン酸塩、プロラミン、炭酸塩、もしくはリン酸塩またはそれらのあらゆる組合せを含む緩衝溶液；またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中である。 In another embodiment, the dsRNA agent is a buffered solution, such as a buffered solution comprising acetate, citrate, prolamin, carbonate, or phosphate or any combination thereof; or phosphate buffered saline (PBS ).

一態様において、本発明は、細胞におけるＭＡＰＴ遺伝子の発現を阻害する方法であって、細胞を、本発明のｄｓＲＮＡ剤または本発明の医薬組成物と接触させること、それによって細胞におけるＭＡＰＴ遺伝子の発現を阻害することを含む、方法を提供する。 In one aspect, the invention provides a method of inhibiting MAPT gene expression in a cell comprising contacting the cell with a dsRNA agent of the invention or a pharmaceutical composition of the invention, thereby inhibiting expression of the MAPT gene in the cell. A method is provided comprising inhibiting the

別の態様において、本発明は、細胞におけるエクソン１０含有ＭＡＰＴ転写物を選択的に阻害することを含む方法であって、細胞を、本発明のｄｓＲＮＡ剤または本発明の医薬組成物と接触させること、それによって細胞におけるエクソン１０含有ＭＡＰＴ転写物を選択的に分解することを含む、方法を提供する。 In another aspect, the invention provides a method comprising selectively inhibiting exon 10-containing MAPT transcripts in a cell, comprising contacting the cell with a dsRNA agent of the invention or a pharmaceutical composition of the invention. , thereby selectively degrading exon 10-containing MAPT transcripts in cells.

一実施形態において、細胞は、対象内にある。 In one embodiment, the cell is within a subject.

一実施形態において、対象はヒトである。 In one embodiment, the subject is human.

一実施形態において、対象は、ＭＡＰＴ関連障害を有する。 In one embodiment, the subject has a MAPT-related disorder.

一実施形態において、対象は、神経変性障害であるＭＡＰＴ関連障害を有する。 In one embodiment, the subject has a MAPT-related disorder that is a neurodegenerative disorder.

一実施形態において、対象の神経変性障害は、ＭＡＰＴ遺伝子にコードされるタンパク質タウの異常に関連する。 In one embodiment, the subject's neurodegenerative disorder is associated with abnormalities in the protein tau encoded by the MAPT gene.

一実施形態において、ＭＡＰＴ遺伝子にコードされるタンパク質タウの異常は、対象の脳内でのタウの凝集を引き起こす。 In one embodiment, the abnormality in the protein tau encoded by the MAPT gene causes aggregation of tau in the brain of the subject.

一実施形態において、神経変性障害は家族性障害である。 In one embodiment, the neurodegenerative disorder is a familial disorder.

一実施形態において、神経変性障害は孤発性障害である。 In one embodiment, the neurodegenerative disorder is a sporadic disorder.

一実施形態において、ＭＡＰＴ関連障害は、タウオパチー、アルツハイマー病、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、行動障害型前頭側頭型認知症（ｂｖＦＴＤ）、非流暢性亜型原発性進行性失語（ｎｆｖＰＰＡ）、意味型原発性進行性失語（ＰＰＡ－Ｓ）、ロゴペニック型原発性進行性失語（ＰＰＡ－Ｌ）、１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、ピック病（ＰｉＤ）、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、初老期認知症を伴う多系統タウオパチー（ＭＳＴＤ）、球状グリア封入体を伴う白質タウオパチー（ＧＧＩを伴うＦＴＬＤ）、ＭＡＰＴ突然変異を伴うＦＴＬＤ、神経原線維変化（ＮＦＴ）認知症、運動ニューロン疾患を伴うＦＴＤ、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、皮質基底核症候群（ＣＢＳ）、皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、パーキンソン病、脳炎後パーキンソニズム、ニーマン・ピック病、ハンチントン病、筋強直性ジストロフィー１型、およびダウン症候群（ＤＳ）からなる群から選択される。 In one embodiment, the MAPT-related disorder is tauopathy, Alzheimer's disease, frontotemporal dementia (FTD), behavioral frontotemporal dementia (bvFTD), non-fluent subtype primary progressive aphasia (nfvPPA ), semantic primary progressive aphasia (PPA-S), logopenic primary progressive aphasia (PPA-L), frontotemporal dementia with parkinsonism linked to chromosome 17 (FTDP-17), Pick's disease (PiD), argyrid granulopathy (AGD), multisystem tauopathy with presenile dementia (MSTD), leukopathy with globular glial inclusions (FTLD with GGI), FTLD with MAPT mutation, neurology fibrillary tangle (NFT) dementia, FTD with motor neuron disease, amyotrophic lateral sclerosis (ALS), corticobasal ganglia syndrome (CBS), corticobasal degeneration (CBD), progressive supranuclear palsy (PSP), Parkinson's disease, post-encephalitic parkinsonism, Niemann-Pick disease, Huntington's disease, myotonic dystrophy type 1, and Down's syndrome (DS).

一部の実施形態において、細胞をｄｓＲＮＡ剤と接触させることは、ＭＡＰＴの発現を対照レベルに対して少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％阻害する。一実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、ＭＡＰＴの発現を少なくとも約２５％阻害する。 In some embodiments, contacting the cell with a dsRNA agent reduces expression of MAPT by at least about 25%, at least about 30%, at least about 40%, at least about 50%, at least about 60% relative to control levels. , at least about 70%, at least about 80%, at least about 90%, or at least about 95%. In one embodiment, the dsRNA agent inhibits expression of MAPT by at least about 25%.

一部の実施形態において、ＭＡＰＴの発現を阻害することは、対象の血清中のタウタンパク質レベルを対照レベルに対して少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％減少させる。一実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、対象の血清中のタウタンパク質レベルを少なくとも約２５％減少させる。 In some embodiments, inhibiting expression of MAPT reduces tau protein levels in the serum of the subject by at least about 25%, at least about 30%, at least about 40%, at least about 50%, relative to control levels, Reduce by at least about 60%, at least about 70%, at least about 80%, at least about 90%, or at least about 95%. In one embodiment, the dsRNA agent reduces tau protein levels in the subject's serum by at least about 25%.

一態様において、本発明は、ＭＡＰＴ発現の低減が有益であろう障害を有する対象を処置する方法であって、治療有効量の本発明のｄｓＲＮＡ剤または本発明の医薬組成物を対象に投与すること、それによってＭＡＰＴ発現の低減が有益であろう障害を有する対象を処置することを含む、方法を提供する。 In one aspect, the invention provides a method of treating a subject having a disorder for which reduced MAPT expression would be beneficial, comprising administering to the subject a therapeutically effective amount of a dsRNA agent of the invention or a pharmaceutical composition of the invention. and treating a subject with a disorder by which reduced MAPT expression would be beneficial.

別の態様において、本発明は、ＭＡＰＴ発現の低減が有益であろう障害を有する対象における少なくとも１つの症状を防止する方法であって、予防有効量の本発明のｄｓＲＮＡ剤または本発明の医薬組成物を対象に投与すること、それによってＭＡＰＴ発現の低減が有益であろう障害を有する対象における少なくとも１つの症状を防止することを含む、方法を提供する。 In another aspect, the invention provides a method of preventing at least one symptom in a subject having a disorder for which reduced MAPT expression would be beneficial, comprising a prophylactically effective amount of a dsRNA agent of the invention or a pharmaceutical composition of the invention. Methods are provided comprising administering an agent to a subject, thereby preventing at least one symptom in a subject having a disorder for which reduced MAPT expression would be beneficial.

一実施形態において、障害は、ＭＡＰＴ関連障害である。 In one embodiment, the disorder is a MAPT-related disorder.

一実施形態において、障害は、ＭＡＰＴ遺伝子にコードされるタンパク質タウの異常に関連する。 In one embodiment, the disorder is associated with an abnormality of the protein tau encoded by the MAPT gene.

一実施形態において、ＭＡＰＴ遺伝子にコードされるタンパク質タウの異常は、対象の脳内でのタウの凝集を引き起こす。 In one embodiment, the abnormality in the protein tau encoded by the MAPT gene causes aggregation of tau in the brain of the subject.

一実施形態において、ＭＡＰＴ関連障害は、タウオパチー、アルツハイマー病、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、行動障害型前頭側頭型認知症（ｂｖＦＴＤ）、非流暢性亜型原発性進行性失語（ｎｆｖＰＰＡ）、意味型原発性進行性失語（ＰＰＡ－Ｓ）、ロゴペニック型原発性進行性失語（ＰＰＡ－Ｌ）、１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、ピック病（ＰｉＤ）、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、初老期認知症を伴う多系統タウオパチー（ＭＳＴＤ）、球状グリア封入体を伴う白質タウオパチー（ＧＧＩを伴うＦＴＬＤ）、ＭＡＰＴ突然変異を伴うＦＴＬＤ、神経原線維変化（ＮＦＴ）認知症、運動ニューロン疾患を伴うＦＴＤ、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、皮質基底核症候群（ＣＢＳ）、皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、パーキンソン病、脳炎後パーキンソニズム、ニーマン・ピック病、ハンチントン病、筋強直性ジストロフィー１型、およびダウン症候群（ＤＳ）からなる群から選択される。 In one embodiment, the MAPT-related disorder is tauopathy, Alzheimer's disease, frontotemporal dementia (FTD), behavioral frontotemporal dementia (bvFTD), non-fluent subtype primary progressive aphasia (nfvPPA ), semantic primary progressive aphasia (PPA-S), logopenic primary progressive aphasia (PPA-L), frontotemporal dementia with parkinsonism linked to chromosome 17 (FTDP-17), Pick's disease (PiD), argyrid granulopathy (AGD), multisystem tauopathy with presenile dementia (MSTD), leukopathy with globular glial inclusions (FTLD with GGI), FTLD with MAPT mutation, neurology fibrillary tangle (NFT) dementia, FTD with motor neuron disease, amyotrophic lateral sclerosis (ALS), corticobasal ganglia syndrome (CBS), corticobasal degeneration (CBD), progressive supranuclear palsy (PSP), Parkinson's disease, post-encephalitic parkinsonism, Niemann-Pick disease, Huntington's disease, myotonic dystrophy type 1, and Down's syndrome (DS).

一実施形態において、対象は、ヒトである。 In one embodiment, the subject is human.

一実施形態において、本発明のｄｓＲＮＡ剤、または本発明の医薬組成物の投与が、対象の脳内でのタウの凝集の減少をもたらす。 In one embodiment, administration of a dsRNA agent of the invention, or a pharmaceutical composition of the invention results in a reduction of tau aggregation in the brain of the subject.

一実施形態において、対象への薬剤の投与が、タウの凝集の減少をもたらす。 In one embodiment, administering the agent to the subject results in a decrease in tau aggregation.

一実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、約０．０１ｍｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇの用量において対象に投与される。 In one embodiment, the dsRNA agent is administered to the subject at a dose of about 0.01 mg/kg to about 50 mg/kg.

別の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、髄腔内において対象に投与される。 In another embodiment, the dsRNA agent is administered to the subject intrathecally.

さらに別の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、対象に大槽内投与される。限定されない例示的な大槽内投与は、後頭下穿刺法による大槽（小脳延髄槽）内への注入を含む。 In yet another embodiment, the dsRNA agent is administered intracisternally to the subject. A non-limiting exemplary intracisternal administration includes injection into the cisterna magna (cerebellar cisternae) by suboccipital puncture.

一実施形態において、本発明の方法は、対象からの試料中のＭＡＰＴのレベルを決定することをさらに含む。 In one embodiment, the methods of the invention further comprise determining the level of MAPT in the sample from the subject.

一実施形態において、対象試料におけるＭＡＰＴのレベルは、血液、血清、または髄液試料中のタウタンパク質レベルである。 In one embodiment, the level of MAPT in the subject sample is the tau protein level in a blood, serum, or spinal fluid sample.

一実施形態において、本発明の方法は、追加の治療剤を対象に投与することをさらに含む。 In one embodiment, the methods of the invention further comprise administering an additional therapeutic agent to the subject.

一態様において、本発明は、本発明のｄｓＲＮＡ剤または本発明の医薬組成物を含むキットを提供する。 In one aspect, the invention provides kits comprising a dsRNA agent of the invention or a pharmaceutical composition of the invention.

別の態様において、本発明は、本発明のｄｓＲＮＡ剤または本発明の医薬組成物を含むバイアルを提供する。 In another aspect, the invention provides a vial comprising a dsRNA agent of the invention or a pharmaceutical composition of the invention.

さらに別の態様において、本発明は、本発明のｄｓＲＮＡ剤または本発明の医薬組成物を含むシリンジを提供する。 In yet another aspect, the invention provides a syringe comprising a dsRNA agent of the invention or a pharmaceutical composition of the invention.

別の態様において、本発明は、本発明のｄｓＲＮＡ剤、または本発明の医薬組成物を含む、髄腔内ポンプを提供する。 In another aspect, the invention provides an intrathecal pump comprising a dsRNA agent of the invention, or a pharmaceutical composition of the invention.

図１は、ＭＡＰＴ発現に対するＲＮＡｉ組成物の効果を決定するための、肝臓におけるＡＡＶスクリーンを示す。縦軸は、ＰＢＳ投与マウスにおけるＭＡＰＴ発現レベルと比べた、ＲＮＡｉ組成物を投与したマウスにおけるヒトＭＡＰＴ発現を示す。FIG. 1 shows an AAV screen in liver to determine the effect of RNAi compositions on MAPT expression. The vertical axis shows human MAPT expression in mice dosed with the RNAi composition relative to MAPT expression levels in mice dosed with PBS. 図２は、ヒトＭＡＰＴ ＲＮＡを発現するマウスにおけるセンス含有凝集体またはアンチセンス含有凝集体の両方のレベルに対する表２５～２６において選択されたｄｓＲＮＡ剤の効果を決定するための、肝臓におけるＡＡＶスクリーンを示す。縦軸は、ＰＢＳ投与マウスにおけるＭＡＰＴ発現レベルと比べた、ＲＮＡｉ組成物を投与したマウスにおけるヒトＭＡＰＴ発現を示す。FIG. 2 depicts an AAV screen in liver to determine the effect of dsRNA agents selected in Tables 25-26 on the levels of both sense- or antisense-containing aggregates in mice expressing human MAPT RNA. show. The vertical axis shows human MAPT expression in mice dosed with the RNAi composition relative to MAPT expression levels in mice dosed with PBS. 図３は、ヒトＭＡＰＴ ＲＮＡを発現するマウスにおけるセンス含有凝集体またはアンチセンス含有凝集体の両方のレベルに対する表２５～２６において選択されたｄｓＲＮＡ剤の効果を決定するための、肝臓におけるＡＡＶスクリーンを示す。縦軸は、ＰＢＳ投与マウスにおけるＭＡＰＴ発現レベルと比べた、ＲＮＡｉ組成物を投与したマウスにおけるヒトＭＡＰＴ発現を示す。FIG. 3 depicts an AAV screen in liver to determine the effect of dsRNA agents selected in Tables 25-26 on the levels of both sense- or antisense-containing aggregates in mice expressing human MAPT RNA. show. The vertical axis shows human MAPT expression in mice dosed with the RNAi composition relative to MAPT expression levels in mice dosed with PBS.

本発明の開示は、ＭＡＰＴ遺伝子のＲＮＡ転写物のＲＮＡ誘導型サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）媒介切断を実行する、ＲＮＡｉ組成物を提供する。ＭＡＰＴ遺伝子は、細胞内、例えば、ヒトなどの対象内の細胞内にあり得る。これらのｉＲＮＡの使用は、哺乳動物における対応する遺伝子（ＭＡＰＴ遺伝子）のｍＲＮＡの標的化された分解を可能にする。 The present disclosure provides RNAi compositions that effect RNA-induced silencing complex (RISC)-mediated cleavage of RNA transcripts of the MAPT gene. The MAPT gene can be intracellular, eg, intracellular within a subject, such as a human. The use of these iRNAs allows targeted degradation of the mRNA of the corresponding gene (MAPT gene) in mammals.

本発明のｉＲＮＡは、ＭＡＰＴ遺伝子、例えば、ヌクレオチド修飾を有するまたは有しないＭＡＰＴ遺伝子を標的化するように設計された。本発明のｉＲＮＡは、ＭＡＰＴ遺伝子の発現を少なくとも約２５％阻害し、センスおよびアンチセンス含有凝集体のレベルを低減させる。理論によって制限されることを意図するわけではないが、先述の特性と、特定の標的部位、またはこれらのｉＲＮＡｓの特定の修飾との組合せまたは部分的組合せは、本発明のｉＲＮＡに、改良された効率、安定性、効力、耐久性、および安全性を付与すると考えられる。 The iRNAs of the invention were designed to target the MAPT gene, eg, the MAPT gene with or without nucleotide modifications. The iRNAs of the invention inhibit MAPT gene expression by at least about 25% and reduce the levels of sense- and antisense-containing aggregates. While not intending to be bound by theory, it is believed that combinations or subcombinations of the foregoing properties with specific target sites or specific modifications of these iRNAs may result in improved iRNAs of the invention. It is believed to impart efficiency, stability, efficacy, durability, and safety.

したがって、本開示はまた、ＭＡＰＴ遺伝子の発現を阻害するための、またはＭＡＰＴ遺伝子の発現の阻害もしくは低減が有益であろう障害、例えば、ＭＡＰＴ関連疾患、例えば、アルツハイマー病、ＦＴＤ、ＰＳＰ、もしくは別のタウオパチーを有する対象を処置するための、本開示のＲＮＡｉ組成物の使用方法も提供する。 Accordingly, the present disclosure also provides methods for inhibiting MAPT gene expression, or for disorders in which inhibition or reduction of MAPT gene expression would be beneficial, such as MAPT-related diseases such as Alzheimer's disease, FTD, PSP, or otherwise. Also provided are methods of using the RNAi compositions of the present disclosure to treat a subject with tauopathy.

本開示のＲＮＡｉ剤は、約３０ヌクレオチドまたはそれ未満の長さ、例えば、１５～３０、１５～２９、１５～２８、１５～２７、１５～２６、１５～２５、１５～２４、１５～２３、１５～２２、１５～２１、１５～２０、１５～１９、１５～１８、１５～１７、１８～３０、１８～２９、１８～２８、１８～２７、１８～２６、１８～２５、１８～２４、１８～２３、１８～２２、１８～２１、１８～２０、１９～３０、１９～２９、１９～２８、１９～２７、１９～２６、１９～２５、１９～２４、１９～２３、１９～２２、１９～２１、１９～２０、２０～３０、２０～２９、２０～２８、２０～２７、２０～２６、２０～２５、２０～２４、２０～２３、２０～２２、２０～２１、２１～３０、２１～２９、２１～２８、２１～２７、２１～２６、２１～２５、２１～２４、２１～２３、または２１～２２ヌクレオチドの長さの領域を有するＲＮＡ鎖（アンチセンス鎖）を含み、この領域は、ＭＡＰＴ遺伝子のｍＲＮＡ転写物の少なくとも一部、例えば、ＭＡＰＴエクソンに対して実質的に相補的である。ある特定の実施形態において、本開示のＲＮＡｉ剤は、約２１～２３ヌクレオチド長である領域を有し、領域が、ＭＡＰＴ遺伝子のｍＲＮＡ転写物の少なくとも一部に対して実質的に相補的である、ＲＮＡ鎖（アンチセンス鎖）を含む。 RNAi agents of the present disclosure are about 30 nucleotides or less in length, e.g. , 15-22, 15-21, 15-20, 15-19, 15-18, 15-17, 18-30, 18-29, 18-28, 18-27, 18-26, 18-25, 18 ~24, 18-23, 18-22, 18-21, 18-20, 19-30, 19-29, 19-28, 19-27, 19-26, 19-25, 19-24, 19-23 , 19-22, 19-21, 19-20, 20-30, 20-29, 20-28, 20-27, 20-26, 20-25, 20-24, 20-23, 20-22, 20 RNA strands having a region that is ~21, 21-30, 21-29, 21-28, 21-27, 21-26, 21-25, 21-24, 21-23, or 21-22 nucleotides in length ( antisense strand), which region is substantially complementary to at least a portion of the MAPT gene mRNA transcript, eg, the MAPT exons. In certain embodiments, the RNAi agents of this disclosure have a region that is about 21-23 nucleotides in length, the region being substantially complementary to at least a portion of the MAPT gene mRNA transcript. , including the RNA strand (antisense strand).

ある特定の実施形態において、本開示のＲＮＡｉ剤は、ＭＡＰＴ遺伝子のｍＲＮＡ転写物の少なくとも一部に対して実質的に相補的である、少なくとも１９の連続するヌクレオチドの領域を有する、より長い長さ、例えば、最大でも６６ヌクレオチドまで、例えば、３６～６６、２６～３６、２５～３６、３１～６０、２２～４３、２７～５３ヌクレオチド長を含むことができる、ＲＮＡ鎖（アンチセンス鎖）を含む。より長い長さのアンチセンス鎖を有するこれらのＲＮＡｉ剤は、好ましくは、２０～６０ヌクレオチド長の第２のＲＮＡ鎖（センス鎖）を含み、この場合、センス鎖およびアンチセンス鎖は、１８～３０の連続するヌクレオチドの二重鎖を形成する。 In certain embodiments, RNAi agents of the present disclosure have a longer length region of at least 19 contiguous nucleotides that is substantially complementary to at least a portion of the mRNA transcript of the MAPT gene. an RNA strand (antisense strand), which can comprise, eg, up to 66 nucleotides, eg, 36-66, 26-36, 25-36, 31-60, 22-43, 27-53 nucleotides long include. Those RNAi agents with longer antisense strand lengths preferably comprise a second RNA strand (sense strand) of 20-60 nucleotides in length, where the sense and antisense strands are 18 to 60 nucleotides in length. Forms a duplex of 30 consecutive nucleotides.

これらのＲＮＡｉ剤の使用は、哺乳動物におけるＭＡＰＴ遺伝子のｍＲＮＡの標的化された分解および／または阻害を可能にする。したがって、これらのＲＮＡｉ剤を含む方法および組成物は、タウのレベルまたは活性の低減が有益であろう対象、例えば、ＭＡＰＴ関連疾患、例えば、アルツハイマー病、ＦＴＤ、ＰＳＰ、または別のタウオパチーを有する対象を処置するのに有用である。 The use of these RNAi agents allows targeted degradation and/or inhibition of MAPT gene mRNA in mammals. Thus, methods and compositions comprising these RNAi agents are useful in subjects who would benefit from reduced levels or activity of tau, e.g., subjects with a MAPT-related disease, e.g., Alzheimer's disease, FTD, PSP, or another tauopathy. is useful for treating

以下の詳細な説明は、ＭＡＰＴ遺伝子の発現を阻害するためにＲＮＡｉ剤を含有する組成物を作製および使用する方法、ならびに遺伝子の発現の阻害または減少が有益であろう、疾患または障害を有する対象を処置するための組成物または方法を開示する。 The following detailed description provides methods of making and using compositions containing RNAi agents to inhibit MAPT gene expression, as well as subjects with diseases or disorders that would benefit from inhibition or reduction of expression of the gene. Disclosed are compositions or methods for treating

Ｉ．定義
本開示がさらに容易に理解され得るために、ある特定の用語が、最初に定義される。加えて、パラメータの値または値の範囲が列記される場合にはいつでも、列記された値の中間の値および範囲も、本開示の一部であることが意図されることが意図される。 I. Definitions In order that this disclosure may be more readily understood, certain terms will first be defined. In addition, whenever a value or range of values for a parameter is recited, it is intended that values and ranges intermediate to the recited values are also intended to be part of the disclosure.

冠詞「ａ」および「ａｎ」は、本明細書において、冠詞の文法上の対象の１つまたは２つ以上（すなわち、少なくとも一つ）を意味するために使用される。例えば、「要素（ａｎ ｅｌｅｍｅｎｔ）」は、１つの要素または２つ以上の要素、例えば、複数の要素を意味する。 The articles "a" and "an" are used herein to mean one or more than one (ie, at least one) of the grammatical object of the article. For example, "an element" means one element or more than one element, eg, a plurality of elements.

用語「を含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」は、語句「を含むが、これらに限定されるわけではない（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｂｕｔ ｎｏｔ ｌｉｍｉｔｅｄ ｔｏ）」を意味するために本明細書において使用され、当該語句と相互互換的に使用される。用語「または」は、文脈において明確に示されない限り、用語「および／または」を意味するために本明細書において使用され、当該語句と相互互換的に使用される。 The term "including" is used herein to mean the phrase "including but not limited to" and is interchangeable with the phrase used for The term "or" is used herein to mean the term "and/or" and is used interchangeably with such terms, unless the context clearly dictates otherwise.

用語「約」は、当技術分野において、典型的な交差の範囲内であることを意味するために、本明細書において使用される。例えば、「約」は、平均から約２標準偏差として理解することができる。ある特定の実施形態において、約は、±１０％を意味する。ある特定の実施形態において、約は、±５％を意味する。約が、一連の数または範囲の前に存在する場合、「約」は、一連における数または範囲のそれぞれを修飾することができることは理解されよう。 The term "about" is used herein to mean within the typical intersections in the art. For example, "about" can be understood as about 2 standard deviations from the mean. In certain embodiments, about means ±10%. In certain embodiments, about means ±5%. It will be understood that when about precedes a series of numbers or ranges, "about" can modify each number or range in the series.

数または一連の数の前の用語「少なくとも」は、文脈から明白な場合、用語「少なくとも」に隣接する数、および論理的に含まれ得るその後の全ての数または整数を含むと理解される。例えば、核酸分子におけるヌクレオチドの数は、整数でなければならない。例えば、「２１ヌクレオチド核酸分子の少なくとも１８ヌクレオチド」は、１８、１９、２０、または２１ヌクレオチドが、示された特性を有することを意味する。少なくとも、なる用語が、一連の数または範囲の前に存在する場合、「少なくとも」は、一連における数および範囲のそれぞれを修飾することができることは理解されよう。 The term "at least" preceding a number or series of numbers, where clear from the context, is understood to include the numbers adjacent to the term "at least" and all subsequent numbers or integers that may be logically included. For example, the number of nucleotides in a nucleic acid molecule must be an integer. For example, "at least 18 nucleotides of a 21 nucleotide nucleic acid molecule" means that 18, 19, 20, or 21 nucleotides have the indicated property. It will be understood that when the term at least precedes a series of numbers or ranges, "at least" can modify each of the numbers and ranges in the series.

本明細書において使用される場合、「以下」または「未満」は、当該語句に隣接する値およびその値より論理的により小さい値または整数から、文脈から論理的である場合、ゼロまでとして理解される。例えば、「２ヌクレオチド以下」のオーバーハングを有する二重鎖は、２、１、または０ヌクレオチドのオーバーハングを有する。「以下」が、一連の数または範囲の前に存在する場合、「以下」は、一連における数または範囲のそれぞれを修飾することができることは理解されよう。 As used herein, "less than or equal to" or "less than" is understood from the value adjacent to the term and a value or integer logically less than that value to zero, where logical from the context. be. For example, a duplex with an overhang of "2 nucleotides or less" has an overhang of 2, 1, or 0 nucleotides. It will be understood that when "less than or equal to" precedes a series of numbers or ranges, "less than or equal to" can modify each number or range in the series.

本明細書において使用される場合、用語「少なくとも約」は、測定可能な値、例えば、パラメータ、量などを指す場合、指定された値から＋／－２０％、好ましくは＋／－１０％、より好ましくは＋／－５％、さらにより好ましくは＋／－１％の偏差を包含することを意味するが、そのような偏差が、開示される発明において機能するのに適切である場合に限られる。例えば、ＭＡＰＴ遺伝子の発現の「少なくとも約２５％」の阻害とは、ＭＡＰＴ遺伝子の発現の阻害が、指定された２５％の＋／－２０％の任意の値、すなわち、２０％、３０％、または２０～３０％の間の任意の中間の値と測定できることを意味する。 As used herein, the term "at least about" when referring to a measurable value, such as a parameter, amount, etc., is +/-20%, preferably +/-10%, from the specified value, More preferably +/−5%, even more preferably +/−1% deviations are meant to be included, so long as such deviations are appropriate to function in the disclosed invention. be done. For example, "at least about 25%" inhibition of MAPT gene expression means that the inhibition of MAPT gene expression is any value +/- 20% of the specified 25%, i.e., 20%, 30%, Or any intermediate value between 20 and 30% can be measured.

本明細書において使用される場合、「対照レベル」は、本明細書に記載されるＲＮＡｉ剤が発現される細胞、組織、または系と同一な、調節されていない細胞、組織、または系における遺伝子の発現のレベル、またはＲＮＡ分子の発現レベル、または１つもしくは複数のタンパク質もしくはタンパク質サブユニットの発現レベルを指す。ＲＮＡｉ剤が発現される細胞、組織、または系は、ＲＮＡｉ剤の非存在下で観察されるものと比べて少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２倍、３倍、４倍、５倍、またはそれ以上の本明細書に記載される遺伝子、ＲＮＡ、および／またはタンパク質の発現を有する。対照レベルに対する％および／または倍の差は、例えば、
［ＲＮＡｉ剤有りの発現－ＲＮＡｉ剤無しの発現］
差（％）＝－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－×１００
ＲＮＡｉ剤無しの発現
であり得る。 As used herein, a "control level" is the same unregulated cell, tissue or system in which the RNAi agent described herein is expressed. or the level of expression of an RNA molecule, or the level of expression of one or more proteins or protein subunits. A cell, tissue, or system in which the RNAi agent is expressed is at least 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, Have 70%, 80%, 90%, 100%, 2-fold, 3-fold, 4-fold, 5-fold or more expression of the genes, RNA and/or proteins described herein. The % and/or fold difference relative to the control level is e.g.
[Expression with RNAi agent-Expression without RNAi agent]
Difference (%) =－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－×100
It can be expression without an RNAi agent.

本明細書において使用される場合、検出の方法は、存在する分析物の量が方法の検出レベル未満であることの判定を含むことができる。 As used herein, a method of detection can include determining that the amount of analyte present is below the detection level of the method.

示された標的部位と、センス鎖またはアンチセンス鎖に対するヌクレオチド配列とが一致しない場合、示された配列が優先する。 In the event of a mismatch between the indicated target site and the nucleotide sequence for the sense or antisense strand, the indicated sequence prevails.

化学構造と化学名称が一致しない場合、化学構造が優先する。 If the chemical structure and chemical name conflict, the chemical structure controls.

用語「ＭＡＰＴ」遺伝子は、「ＤＤＰＡＣ」、「ＦＴＤＰ－１７」、「ＭＡＰＴＬ」、「ＭＳＴＤ」、「ＭＴＢＴ１」、「ＭＴＢＴ２」、「ＰＰＮＤ」、「ＰＰＰ１Ｒ１０３」、「ＴＡＵ」、および「微小管関連タンパク質タウ」としても知られており、微小管関連タンパク質タウ（ＭＡＰＴ）と呼ばれるタンパク質をコードする遺伝子を指す。 The term "MAPT" gene includes "DDPAC", "FTDP-17", "MAPTL", "MSTD", "MTBT1", "MTBT2", "PPND", "PPP1R103", "TAU", and "microtubule-associated Also known as "protein tau", it refers to the gene that encodes a protein called microtubule-associated protein tau (MAPT).

ＭＡＰＴ ｍＲＮＡは、全身に発現し、主として中枢神経系（すなわち、脳および脊髄）および末梢神経系に発現する。野生型タウは、神経軸索中の微小管の安定化、軸索輸送および微小管動態の制御、樹状突起棘の維持、ならびにゲノムＤＮＡの完全性への寄与に関与している。 MAPT mRNA is expressed systemically, primarily in the central nervous system (ie, brain and spinal cord) and peripheral nervous system. Wild-type tau is involved in stabilizing microtubules in neuronal axons, controlling axonal transport and microtubule dynamics, maintaining dendritic spines, and contributing to genomic DNA integrity.

タウオパチーは、脳内でのタウ凝集物の存在によって病理学的に特徴付けられる、異種混合クラスの進行性神経変性障害である。細胞内および細胞外の神経細胞タウ凝集物は、微小管の解離および軸索変性、シナプス小胞放出の障害、および「シーディング」と呼ばれるタウ凝集物のプリオン様神経細胞間伝播を引き起こす。 Tauopathies are a heterogeneous class of progressive neurodegenerative disorders that are pathologically characterized by the presence of tau aggregates in the brain. Intracellular and extracellular neuronal tau aggregates cause microtubule dissociation and axonal degeneration, impaired synaptic vesicle release, and prion-like interneuronal propagation of tau aggregates called 'seeding'.

表現型では、タウオパチーは、運動、認知、および行動障害の多様な進行を示す。タウオパチーとしては、アルツハイマー病［主に選択的記憶障害から始まり、脳の前頭葉、側頭葉（海馬が含まれる）、および頭頂葉の変性に関連する、最も多い形態の初老期認知症］；前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）（前頭葉および側頭葉の神経細胞の萎縮に関連し、幅広い行動、言語、および運動障害を呈する、２番目に多い形態の初老期認知症）；および進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）［（注視障害、錐体外路症状（四肢の失行、無動／動作緩慢、硬直、および筋緊張異常を含めたパーキンソニズム症状）、および認知機能障害を呈する、脳幹および基底核の変性であり、米国ではおよそ２０，０００人が罹患している）が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。 Phenotypically, tauopathies exhibit a variable progression of motor, cognitive, and behavioral deficits. Tauopathies include Alzheimer's disease [the most common form of presenile dementia, which begins primarily with selective memory impairment and is associated with degeneration of the frontal, temporal (including the hippocampus), and parietal lobes of the brain]; Temporal dementia (FTD), the second most common form of presenile dementia associated with atrophy of neurons in the frontal and temporal lobes and presenting with a wide range of behavioral, speech, and movement deficits; and progressive nuclei Superior palsy (PSP) [(brain stem and degeneration of the ganglia basalis, which affects approximately 20,000 people in the United States), but is not limited to.

ＦＴＤとしてさらに、行動障害型前頭側頭型認知症（ｂｖＦＴＤ）（病理学的には前頭前野および前側頭葉における進行性の萎縮に関連し、臨床的には複合思考、人格、および行動の変化に関連し、米国ではおよそ３０，０００人が罹患している）；意味型原発性進行性失語（ＰＰＡ－Ｓ）（言葉の理解における困難、呼称の苦労に関連する、前頭葉および側頭葉の変性）；非流暢性亜型原発性進行性失語（ｎｆｖＰＰＡ）［左後前頭葉および島葉の変性に関与し、失文法および複雑な文章の理解不能を呈し、米国ではおよそ１，０００人が罹患している］；ロゴペニック型原発性進行性失語［ＰＰＡ－Ｌ）（言葉の復唱の困難および頻繁な中断に関連する、左後／上部（ｓｐｕｒ）側頭葉および頭頂葉内側（ｍｅｄｉａｌ）の変性）；１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）（病理学的には前頭葉および側頭葉の変性に関連し、臨床的には発語障害および運動障害に関連する）；ピック病（ＰｉＤ）（言語および思考の困難、ならびに行動の変化に関連する、前頭葉および側頭葉の変性、）；運動ニューロン疾患を伴うＦＴＤ（皮質および運動ニューロンの変性に関与する）；および皮質基底核症候群（ＣＢＳ）［錐体外路症状（パーキンソン病およびＰＳＰにおけるものと同様）および認知機能障害を呈する、後前頭葉および側頭葉ならびに基底核の変性（すなわち、皮質基底核変性症（ＣＢＤ））、米国ではおよそ２，０００人が罹患している］が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。ＭＡＰＴの突然変異は、ｂｖＦＴＤ、ｎｆｖＰＰＡ、ＣＢＳ、およびＰＳＰを有する患者のそれぞれおよそ１０％で報告されている。ＭＡＰＴは、アルツハイマー病の特徴である、神経細胞質における神経原線維変化の主要成分である。ＭＡＰＴの凝集および沈着は、パーキンソン病を有する患者の脳のおよそ５０％にも観察された。タウの関与は、他の疾患の病理発生に示されており、それらとしては、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、初老期認知症を伴う多系統タウオパチー（ＭＳＴＤ）、球状グリア封入体を伴う白質タウオパチー（ＧＧＩを伴うＦＴＬＤ）、ＭＡＰＴ突然変異を伴うＦＴＬＤ、神経原線維変化（ＮＦＴ）認知症、運動ニューロン疾患を伴うＦＴＤ、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、脳炎後パーキンソニズム、ニーマン・ピック病、ハンチントン病、筋強直性ジストロフィー１型、およびダウン症候群（ＤＳ）が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。 FTD also includes behavioral frontotemporal dementia (bvFTD), pathologically associated with progressive atrophy in the prefrontal and anterior temporal lobes and clinically altered in complex thinking, personality, and behavior. associated with approximately 30,000 people in the United States); Primary Progressive Semantic Aphasia (PPA-S) (frontal and temporal lobe associated with difficulty in understanding words, difficulty with names); non-fluent subtype primary progressive aphasia (nfvPPA) [involves degeneration of the left posterior frontal and insular lobes, presenting with agrammar and inability to comprehend complex sentences, affecting approximately 1,000 people in the United States logopenic primary progressive aphasia [PPA-L] (degeneration of left posterior/superior (spur) temporal and medial parietal lobes associated with difficulty in repeating words and frequent pauses) ); frontotemporal dementia with parkinsonism linked to chromosome 17 (FTDP-17) (pathologically associated with degeneration of the frontal and temporal lobes; clinically, speech and movement disorders Pick's disease (PiD) (degeneration of the frontal and temporal lobes, associated with language and thinking difficulties and behavioral changes); FTD with motor neuron disease (involves cortical and motor neuron degeneration) and corticobasal ganglia syndrome (CBS) [degeneration of the posterior and temporal lobes and basal ganglia (i.e., corticobasal ganglia) presenting with extrapyramidal symptoms (similar to those in Parkinson's disease and PSP) and cognitive dysfunction. degenerative disease (CBD), which affects approximately 2,000 people in the United States], but is not limited to these. MAPT mutations have been reported in approximately 10% each of patients with bvFTD, nfvPPA, CBS, and PSP. MAPT is a major component of the neurofibrillary tangles in the neuronal cytoplasm that characterize Alzheimer's disease. MAPT aggregation and deposition was also observed in approximately 50% of the brains of patients with Parkinson's disease. Tau involvement has been implicated in the pathogenesis of other diseases, including argyrophilic granulopathy (AGD), multisystem tauopathy with presenile dementia (MSTD), white matter tauopathy with globular glial inclusions. (FTLD with GGI), FTLD with MAPT mutations, neurofibrillary tangle (NFT) dementia, FTD with motor neuron disease, amyotrophic lateral sclerosis (ALS), postencephalitic parkinsonism, Niemann-Pick disease, Huntington's disease, myotonic dystrophy type 1, and Down's syndrome (DS).

ＭＡＰＴ遺伝子は、１６個のエクソン（Ｅ１～Ｅ１６）からなる。Ｅ２、Ｅ３、およびＥ１０の選択的ｍＲＮＡスプライシングによって、６種のタウアイソフォーム（３５２～４４１個のアミノ酸）が生じる。Ｅ１、Ｅ４、Ｅ５、Ｅ７、Ｅ９、Ｅ１１、Ｅ１２、Ｅ１３は、恒常的にスプライスされるエクソンである。Ｅ６およびＥ８は、ヒトの脳では転写されない。Ｅ４ａは、末梢神経系にしか発現しない。Ｅ０（プロモーターの一部）およびＥ１４は非コードエクソンである。 The MAPT gene consists of 16 exons (E1-E16). Alternative mRNA splicing of E2, E3, and E10 gives rise to six tau isoforms (352-441 amino acids). E1, E4, E5, E7, E9, E11, E12, E13 are constitutively spliced exons. E6 and E8 are not transcribed in the human brain. E4a is only expressed in the peripheral nervous system. E0 (part of the promoter) and E14 are non-coding exons.

ＭＡＰＴの病原性変異体は、原発性タウオパチーを有する患者のおよそ１０％に見出されている。変異体は主にミスセンスであり、エクソン９～１３（微小管結合ドメイン）に局在しており、エクソン１０の選択的スプライシングに多くの影響を与えている。コード領域の突然変異の例としては、ＭＡＰＴ遺伝子のＥ１におけるＲ５ＨおよびＲ５Ｌ；Ｅ９におけるＫ２５７Ｔ、Ｉ２６０Ｖ、Ｌ２６６Ｖ、Ｇ２７２Ｖ、およびＧ２７３Ｒ；Ｅ１０におけるＮ２７９Ｋ、Ｌ２８４Ｌ、ΔＮ２９６、Ｎ２９６Ｎ、Ｎ２９６Ｈ、ΔＮ２９８、Ｐ３０１Ｌ、Ｐ３０１Ｓ、Ｐ３０１Ｔ、Ｇ３０３Ｖ、Ｇ３０４Ｓ、Ｓ３０５Ｉ、Ｓ３０５Ｎ、およびＳ３０５Ｓ；Ｅ１１におけるＬ３１５Ｒ、Ｋ３１７Ｍ、Ｓ３２０Ｆ、Ｐ３３２Ｓ；Ｅ１２におけるＧ３３５Ｓ、Ｇ３３５Ｖ、Ｑ３３６Ｒ、Ｖ３３７Ｍ、Ｅ３４２Ｖ、Ｓ３５２Ｌ、Ｓ３５６Ｔ、Ｖ３６３Ｉ、Ｐ３６４Ｓ、Ｇ３６６Ｒ、およびＫ３６９Ｉ；Ｅ１３におけるＧ３８９Ｒ、Ｒ４０６Ｗ、およびＴ４２７Ｍが挙げられる。ＭＡＰＴ（タウ）ヌル（－／－）のヒトは、おそらく生きることができない。ＭＡＰＴヘテロ接合体（＋／－）のヒトは、不明瞭または不明な表現型を有する。ＭＡＰＴ過剰発現（＋／＋／＋）のヒトは、早期発症の認知症、ＦＴＤ、ＰＳＰ、およびＣＢＤに関連している。 Pathogenic variants of MAPT have been found in approximately 10% of patients with primary tauopathy. The variants are predominantly missense, localized to exons 9-13 (microtubule binding domain), and have many effects on alternative splicing of exon 10. Examples of coding region mutations include R5H and R5L in E1 of the MAPT gene; K257T, I260V, L266V, G272V, and G273R in E9; P301T, G303V, G304S, S305I, S305N, and S305S; L315R, K317M, S320F, P332S in E11; G335S, G335V, Q336R, V337M, E342V, S352L, S356T, V363I, P364 in E12 S, G366R, and K369I; in E13 G389R, R406W, and T427M. MAPT (tau) null (-/-) humans are probably not viable. MAPT heterozygous (+/-) humans have an ambiguous or unclear phenotype. Humans with MAPT overexpression (+/+/+) are associated with early onset dementia, FTD, PSP, and CBD.

ＭＡＰＴ（タウ）タンパク質の６種のアイソフォームの各々は、その微小管結合ドメインに３つまたは４つの反復するセグメント（Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４）を含有する。各リピートは、３１または３２アミノ酸の長さである。Ｅ９、Ｅ１０、Ｅ１１、およびＥ１２のスプライシングによって、ＭＡＰＴの微小管結合ドメインに反復するセグメントであるＲ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４がそれぞれ生じる。Ｅ１０がスプライスインされた３種のＭＡＰＴ（タウ）アイソフォームは、４つの反復するセグメント（４Ｒ）を含有し、それに対してＥ１０がスプライスアウトされた他の３種のＭＡＰＴアイソフォームは、３つの反復セグメント（３Ｒ）を含有する。 Each of the six isoforms of MAPT (tau) protein contains three or four repeating segments (R1, R2, R3, and R4) in its microtubule-binding domain. Each repeat is 31 or 32 amino acids long. Splicing of E9, E10, E11, and E12 produces R1, R2, R3, and R4, segments that repeat in the microtubule-binding domain of MAPT, respectively. The three MAPT(tau) isoforms with E10 spliced in contain four repeating segments (4R), whereas the other three MAPT isoforms with E10 spliced out contain three It contains a repeat segment (3R).

Ｅ２およびＥ３の翻訳によって、Ｎ１およびＮ２セグメントがそれぞれ生じる。Ｅ２およびＥ３の選択的スプライシングによって、タウのアイソフォーム０Ｎ（Ｅ２およびＥ３がスプライスアウトされるため、Ｎセグメントがなくなる）、１Ｎ（Ｅ２がスプライスインされ、Ｅ３がスプライスアウトされるため、Ｎセグメントが１つとなる）および２Ｎ（Ｅ２およびＥ３がスプライスインされるため、Ｎセグメントが２つとなる）が生じる。したがって、選択的スプライシングの結果生じる６種のＭＡＰＴ（タウ）アイソフォームは、２Ｎ４Ｒ、１Ｎ４Ｒ、０Ｎ４Ｒ、２Ｎ３Ｒ、１Ｎ３Ｒ、および０Ｎ３Ｒである。 Translation of E2 and E3 yields N1 and N2 segments, respectively. Alternative splicing of E2 and E3 results in tau isoforms 0N (E2 and E3 are spliced out, so no N segments), 1N (E2 is spliced in and E3 is spliced out, so N segments are lost). 1) and 2N (2 N segments because E2 and E3 are spliced in). Thus, the six MAPT(tau) isoforms resulting from alternative splicing are 2N4R, 1N4R, 0N4R, 2N3R, 1N3R, and 0N3R.

健常な個体では、３Ｒおよび４Ｒ ＭＡＰＴ転写物のアイソフォームは１：１の比率で存在する。３Ｒ／４Ｒアイソフォーム比は、病態において歪みがあり、その比によってタウ凝集物の型が予測される。４リピートタウのアセンブリーが線維になることは、ＰＳＰ、ＣＢＤ、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、初老期認知症を伴う多系統タウオパチー（ＭＳＴＤ）、および球状グリア封入体を伴う白質タウオパチー（ＧＧＩを伴うＦＴＤ）に特徴的であり、それらはＦＴＤスペクトラム（４Ｒタウオパチー）に属する。対照的に、ピック病では、神経細胞封入体において３リピートタウが優勢である（３Ｒタウオパチー）。アルツハイマー病、または神経原線維変化を有する他の神経変性疾患（ＮＦＴ認知症）では、３リピートタウアイソフォームと４リピートタウアイソフォームの両方が神経原線維病変を構成する（３／４Ｒタウオパチー）。ＭＡＰＴ突然変異を伴うＦＴＬＤは、３Ｒ、４Ｒ、または３／４Ｒタウオパチーであり得る。 In healthy individuals, the 3R and 4R MAPT transcript isoforms are present in a 1:1 ratio. The 3R/4R isoform ratio is skewed in pathology and predicts the type of tau aggregates. Fibrillar assembly of 4-repeat tau is associated with PSP, CBD, argyrid granulopathy (AGD), multisystem tauopathy with presenile dementia (MSTD), and white matter tauopathy with globular glial inclusions (GGI). FTD) and they belong to the FTD spectrum (4R tauopathy). In contrast, in Pick's disease, 3-repeat tau predominates in neuronal inclusions (3R tauopathy). In Alzheimer's disease, or other neurodegenerative diseases with neurofibrillary tangles (NFT dementia), both 3- and 4-repeat tau isoforms constitute neurofibrillary lesions (3/4R tauopathy). FTLD with MAPT mutations can be 3R, 4R, or 3/4R tauopathies.

運動ニューロン疾患を伴うＦＴＤは、ＦＴＬＤ－ＴＤＰ４３およびＦＴＬＤ－ＦＵＳの病理に関連している。それは、Ｃ９ＯＲＦ７２、ＦＵＳ、ＴＡＲＤＢＰ、およびＶＣＰの遺伝子突然変異に関連している。 FTD with motor neuron disease is associated with FTLD-TDP43 and FTLD-FUS pathologies. It is associated with genetic mutations in C9ORF72, FUS, TARDBP, and VCP.

ｂｖＦＴＤは、ＦＴＬＤ－Ｔａｕ（３Ｒ）およびＦＴＬＤ－ＴＤＰ４３の病理に関連している。症例の１０パーセントが、ＭＡＰＴの突然変異に関与している。それは、Ｃ９ＯＲＦ７２、ＧＲＮ、およびＶＣＰの遺伝子突然変異に関連している。 bvFTD is associated with FTLD-Tau(3R) and FTLD-TDP43 pathology. Ten percent of cases involve MAPT mutations. It is associated with genetic mutations in C9ORF72, GRN, and VCP.

ＰＰＡ－Ｓは、孤発性であり得る。それは、ＦＴＬＤ－ＴＤＰ４３の病理に関連している。 PPA-S can be sporadic. It is associated with the pathology of FTLD-TDP43.

ｎｆｖＰＰＡは、有意性の順に、ＦＴＬＤ－Ｔａｕ（４Ｒ）、アルツハイマー病、およびＦＴＬＤ－ＴＤＰ４３の病理に関連している。症例の１０パーセントが、ＭＡＰＴの突然変異に関与している。ｎｆｖＰＰＡは、ＧＲＮの突然変異にさらに関連している。 nfvPPA is associated with FTLD-Tau(4R), Alzheimer's disease, and FTLD-TDP43 pathology in order of significance. Ten percent of cases involve MAPT mutations. nfvPPA is further associated with GRN mutations.

ＰＰＡ－Ｌは、孤発性であり得る。それは、有意性の順に、アルツハイマー病およびＦＴＬＤ－Ｔａｕの病理に関連している。 PPA-L can be sporadic. It is associated with Alzheimer's disease and FTLD-Tau pathology in order of significance.

ＣＢＳは、有意性の順に、ＦＴＬＤ－Ｔａｕ（４Ｒ）およびアルツハイマー病の病理に関連している。症例の１０パーセントが、ＭＡＰＴの突然変異に関連している。残りの症例は、孤発性であり得る。 CBS is associated with FTLD-Tau(4R) and Alzheimer's disease pathology in order of significance. Ten percent of cases are associated with MAPT mutations. The remaining cases may be sporadic.

ＰＳＰは、ＦＴＬＤ－Ｔａｕ（４Ｒ）の病理に関与している。症例の１０パーセントが、ＭＡＰＴの突然変異に関連している。症例の残りは、孤発性であり得る。 PSP is involved in the pathology of FTLD-Tau(4R). Ten percent of cases are associated with MAPT mutations. The remainder of cases may be sporadic.

タウオパチーは一般に、６０～８０歳で始まり、６～１０年の余命に影響を与える。タウオパチーは、表現型が異種混合であり、運動、認知、および行動障害が多様に関与している。特に、運動症状の進行は多様である。 Tauopathy generally begins between the ages of 60 and 80 and affects 6 to 10 years of life expectancy. Tauopathies are phenotypically heterogeneous and involve multiple motor, cognitive, and behavioral deficits. In particular, the progression of motor symptoms is variable.

現在のところ、タウオパチーに対する認可された疾患修飾療法は存在しない。利用可能な処置は、症状を緩和し、疾患が進行すると共に患者の生活の質を改善することのみを目的としている。前臨床または臨床開発中の薬物としては、能動および受動免疫療法；Ｏ－脱グリコシル、凝集、キナーゼ、アセチル化、カスパーゼ、またはタウ発現の阻害剤；ホスファターゼ活性化剤；微小管安定剤；および自食作用またはプロテアソーム（ｐｒｏｔｅｏｓｏｍａｌ）分解のモジュレーターが挙げられる。タウオパチーを評価するために臨床試験に使用されるバイオマーカーおよび試験としては、トレオニン１８１でリン酸化されたタウタンパク質（ｐＴａｕ）、総タウタンパク質（ｔＴａｕ）、ニューロフィラメント軽鎖（ＮｆＬ）、および容積測定ＭＲＩ（ｖＭＲＩ）が挙げられる。 Currently, there are no approved disease-modifying therapies for tauopathy. Available treatments are aimed solely at relieving symptoms and improving the patient's quality of life as the disease progresses. Drugs in preclinical or clinical development include active and passive immunotherapies; inhibitors of O-deglycosylation, aggregation, kinases, acetylation, caspases, or tau expression; phosphatase activators; Included are modulators of phagocytosis or proteosomal degradation. Biomarkers and tests used in clinical trials to assess tauopathy include tau protein phosphorylated on threonine 181 (pTau), total tau protein (tTau), neurofilament light chain (NfL), and volumetric MRI (vMRI).

ＭＡＰＴの例示的なヌクレオチドおよびアミノ酸配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ_０１６８４１．４［ヒト（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）ＭＡＰＴ変異体４、配列番号１、逆相補物、配列番号２］；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ_００５９１０（ヒトＭＡＰＴ変異体２、配列番号３、逆相補物、配列番号４）；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ_００１０３８６０９．２［ハツカネズミ（Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ）ＭＡＰＴ、配列番号５；逆相補物、配列番号６］；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＸＭ_００５５８４５４０．１［カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）ＭＡＰＴ変異体Ｘ１３、配列番号７、逆相補物、配列番号８］；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＸＭ_００８７６８２７７．２［ラット（Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）ＭＡＰＴ、変異体Ｘ７、配列番号９、逆相補物、配列番号１０］、およびＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＸＭ_００５６２４１８３．３［ハイイロオオカミ（Ｃａｎｉｓ ｌｕｐｕｓ）ＭＡＰＴ変異体Ｘ２３、配列番号１１、逆相補物、配列番号１２］に見出すことができる。 Exemplary nucleotide and amino acid sequences of MAPT are, for example, GenBank Accession No. NM_016841.4 [Human (Homo sapiens) MAPT Variant 4, SEQ ID NO: 1, reverse complement, SEQ ID NO: 2]; GenBank Accession No. NM_005910 (Human MAPT Mutant 2, SEQ ID NO:3, reverse complement, SEQ ID NO:4); GenBank accession number NM_001038609.2 [Mus musculus MAPT, SEQ ID NO:5; reverse complement, SEQ ID NO:6]; GenBank accession number: XM_005584540. 1 [Cynomolgus monkey (Macaca fascicularis) MAPT variant X13, SEQ ID NO: 7, reverse complement, SEQ ID NO: 8]; GenBank accession number: XM_008768277. SEQ ID NO: 10], and GenBank Accession No: XM_005624183.3 [Gray Wolf (Canis lupus) MAPT Mutant X23, SEQ ID NO: 11, reverse complement, SEQ ID NO: 12].

ＭＡＰＴ遺伝子を内包するヒト染色体のゲノム領域のヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋで入手可能なＧｅｎｏｍｅ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ Ｈｕｍａｎ Ｂｕｉｌｄ ３８（ヒトゲノムｂｕｉｌｄ３８またはＧＲＣｈ３８とも称される）に見出すことができる。ＭＡＰＴ遺伝子を内包するヒト第１７染色体のゲノム領域のヌクレオチド配列はまた、例えば、ヒト第１７染色体のヌクレオチド４５８９４３８２～４６０２８３３４に対応する、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＣ＿００００１７．１１に見出すこともできる。ヒトＭＡＰＴ遺伝子のヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＧ＿００７３９８．２に見出すことができる。 The nucleotide sequence of the genomic region of the human chromosome harboring the MAPT gene can be found, for example, in Genome Reference Consortium Human Build 38 (also referred to as Human Genome build 38 or GRCh38) available at GenBank. The nucleotide sequence of the genomic region of human chromosome 17 harboring the MAPT gene can also be found, for example, at GenBank Accession No. NC_000017.11, which corresponds to nucleotides 45894382-46028334 of human chromosome 17. The nucleotide sequence of the human MAPT gene can be found, for example, in GenBank Accession No. NG_007398.2.

ＭＡＰＴ配列のさらなる例は、公共的に利用可能なデータベース、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ、ＯＭＩＭ、およびＵｎｉＰｒｏｔに見出すことができる。 Additional examples of MAPT sequences can be found in publicly available databases such as GenBank, OMIM, and UniProt.

ＭＡＰＴに関する追加の情報は、例えば、遺伝子１００１２８９７７に言及するＮＣＢＩのウェブサイトに見出すことができる。用語ＭＡＰＴは、本明細書において使用される場合、例えば、臨床変異体データベースに提供される変異体、例えば、用語ｍａｐｔに言及するＮＣＢＩ臨床変異体ウェブサイトに提供される変異体を含めた、ＭＡＰＴ遺伝子のバリエーションも指す。 Additional information regarding MAPT can be found, for example, on the NCBI website referring to gene 100128977. The term MAPT, as used herein, is MAPT, including, for example, variants provided in the Clinical Variants Database, e.g., variants provided on the NCBI Clinical Variants website referring to the term mapt Also refers to genetic variation.

先述のＧｅｎＢａｎｋ受託番号およびＧｅｎｅデータベース番号のそれぞれの内容全体は、本出願の出願日において参照により本明細書に組み込まれる。 The entire contents of each of the aforementioned GenBank accession numbers and Gene database numbers are hereby incorporated by reference as of the filing date of this application.

本明細書において使用される場合、「標的配列」は、ＭＡＰＴ遺伝子の転写の際に形成されるｍＲＮＡ分子、例えば、一次転写産物のＲＮＡプロセシングの産物であるｍＲＮＡ（例えば、選択的スプライシングの結果生じるＭＡＰＴ ｍＲＮＡ）。などのヌクレオチド配列における連続する一部分を意味する。一実施形態において、配列の標的部分は、ＭＡＰＴ遺伝子の転写の際に形成されるｍＲＮＡ分子のヌクレオチド配列の一部分またはその付近におけるＲＮＡｉ依存性切断のための基質として機能するのに、少なくとも十分に長いであろう。 As used herein, a "target sequence" is an mRNA molecule formed upon transcription of the MAPT gene, e.g., an mRNA that is a product of RNA processing of the primary transcript (e.g., resulting from alternative splicing MAPT mRNA). means a contiguous portion of a nucleotide sequence such as. In one embodiment, the target portion of the sequence is at least long enough to serve as a substrate for RNAi-dependent cleavage at or near a portion of the nucleotide sequence of the mRNA molecule formed upon transcription of the MAPT gene. would be

標的配列は、約１５～３０個のヌクレオチドの長さである。例えば、標的配列は、約１５～３０ヌクレオチド長、１５～２９、１５～２８、１５～２７、１５～２６、１５～２５、１５～２４、１５～２３、１５～２２、１５～２１、１５～２０、１５～１９、１５～１８、１５～１７、１８～３０、１８～２９、１８～２８、１８～２７、１８～２６、１８～２５、１８～２４、１８～２３、１８～２２、１８～２１、１８～２０、１９～３０、１９～２９、１９～２８、１９～２７、１９～２６、１９～２５、１９～２４、１９～２３、１９～２２、１９～２１、１９～２０、２０～３０、２０～２９、２０～２８、２０～２７、２０～２６、２０～２５、２０～２４、２０～２３、２０～２２、２０～２１、２１～３０、２１～２９、２１～２８、２１～２７、２１～２６、２１～２５、２１～２４、２１～２３、または２１～２２ヌクレオチド長であり得る。ある特定の実施形態において、標的配列は、１９～２３ヌクレオチド長であり、適宜、２１～２３ヌクレオチド長であってもよい。上記に列記した範囲および長さの中間的な範囲および長さも、本開示の一部であることが想到される。 Target sequences are about 15-30 nucleotides in length. For example, the target sequence is about 15-30 nucleotides in length, ~20, 15~19, 15~18, 15~17, 18~30, 18~29, 18~28, 18~27, 18~26, 18~25, 18~24, 18~23, 18~22 , 18-21, 18-20, 19-30, 19-29, 19-28, 19-27, 19-26, 19-25, 19-24, 19-23, 19-22, 19-21, 19 ~20, 20-30, 20-29, 20-28, 20-27, 20-26, 20-25, 20-24, 20-23, 20-22, 20-21, 21-30, 21-29 , 21-28, 21-27, 21-26, 21-25, 21-24, 21-23, or 21-22 nucleotides in length. In certain embodiments, the target sequence is 19-23 nucleotides in length, optionally 21-23 nucleotides in length. Ranges and lengths intermediate to those recited above are also contemplated to be part of this disclosure.

本明細書において使用される場合、用語「配列を含む鎖」は、標準的ヌクレオチド用語体系を使用して言及される配列によって説明されるヌクレオチドの鎖を含むオリゴヌクレオチドを意味する。 As used herein, the term "sequence-comprising strand" means an oligonucleotide comprising a strand of nucleotides described by a referenced sequence using standard nucleotide nomenclature.

「Ｇ」、「Ｃ」、「Ａ」、「Ｔ」、および「Ｕ」はそれぞれ、一般的に、修飾ヌクレオチドまたは非修飾ヌクレオチドとの関連において、それぞれ塩基としての、グアニン、シトシン、アデニン、チミジン、およびウラシルを含むヌクレオチドを表す。しかしながら、用語「リボヌクレオチド」または「ヌクレオチド」は、以下においてより詳述されるような修飾ヌクレオチド、または代理の置換部分（例えば、表１を参照されたい）も意味することができることは理解されよう。当業者は、グアニン、シトシン、アデニン、チミジン、およびウラシルが、そのような置換部分を有するヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドの塩基対合特性を実質的に変更することなく、他の部分で置き換えることができることを十分に意識している。例えば、これらに限定されるわけではないが、その塩基としてイノシンを含むヌクレオチドは、アデニン、シトシン、またはウラシルを含むヌクレオチドと塩基対を形成することができる。したがって、ウラシル、グアニン、またはアデニンを含むヌクレオチドは、本開示において特徴とされるｄｓＲＮＡのヌクレオチド配列において、例えばイノシンを含むヌクレオチドで置換することができる。別の例において、オリゴヌクレオチドのいずれかにおけるアデニンおよびシトシンは、標的ｍＲＮＡとＧ－ＵＷｏｂｂｌｅ塩基対合を形成するために、それぞれ、グアニンおよびウラシルで置換することができる。そのような置換部分を含む配列は、本開示において特徴とされる組成物および方法にとって好適である。 "G", "C", "A", "T", and "U" are generally guanine, cytosine, adenine, thymidine, respectively, as bases in the context of modified or unmodified nucleotides , and represent nucleotides containing uracil. However, it is understood that the term "ribonucleotide" or "nucleotide" can also refer to modified nucleotides, or surrogate replacement moieties (see, e.g., Table 1), as described in more detail below. . One skilled in the art will appreciate that guanine, cytosine, adenine, thymidine, and uracil can be replaced with other moieties without substantially altering the base-pairing properties of oligonucleotides containing nucleotides with such replacement moieties. fully aware of For example, but not limited to, a nucleotide containing inosine as its base can base pair with nucleotides containing adenine, cytosine, or uracil. Thus, nucleotides containing uracil, guanine, or adenine can be replaced with nucleotides containing, for example, inosine in the nucleotide sequences of the dsRNAs featured in this disclosure. In another example, adenine and cytosine in either of the oligonucleotides can be replaced with guanine and uracil, respectively, to form G-U Wobble base-pairing with the target mRNA. Sequences containing such replacement moieties are suitable for the compositions and methods featured in this disclosure.

本明細書において相互互換的に使用される、用語「ｉＲＮＡ」、「ＲＮＡｉ剤」、「ｉＲＮＡ剤」、「ＲＮＡ干渉剤」は、本明細書において用語が定義されるＲＮＡを含有し、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）経路を介して、ＲＮＡ転写における標的化された切断を媒介するような、薬剤を意味する。ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、ｍＲＮＡの配列特異的な分解を指示するプロセスである。ＲＮＡｉは、細胞中で、例えば対象、例えば哺乳類対象内の細胞中で、ＭＡＰＴの発現をモジュレートする、例えば阻害する。 The terms "iRNA," "RNAi agent," "iRNA agent," and "RNA interfering agent," as used interchangeably herein, contain RNA as the terms are defined herein and It refers to those agents that mediate targeted cleavage in RNA transcripts via the silencing complex (RISC) pathway. RNA interference (RNAi) is the process that directs the sequence-specific degradation of mRNA. RNAi modulates, eg, inhibits, MAPT expression in a cell, eg, a cell within a subject, eg, a mammalian subject.

一実施形態において、本開示のＲＮＡｉ剤は、標的ＲＮＡの切断を指示するために、標的ＲＮＡ配列、例えば、ＭＡＰＴ標的ｍＲＮＡ配列と相互作用する一本鎖ＲＮＡｉを含む。理論に束縛されることを望むわけではないが、細胞内に導入された長い二本鎖ＲＮＡは、Ｄｉｃｅｒとして知られるＩＩＩ型エンドヌクレアーゼによって、センス鎖およびアンチセンス鎖を含む二本鎖低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）へと分解されると考えられる［Sharp et al. (2001) Genes Dev. 15:485］。リボヌクレアーゼＩＩＩ様酵素であるＤｉｃｅｒは、このｄｓＲＮＡを、特徴的な２つの塩基３’オーバーハングを有する１９～２３塩基対の低分子干渉ＲＮＡへとプロセシングする［Bernstein, et al., (2001) Nature 409:363］。次いで、これらのｓｉＲＮＡは、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）へと導入され、この場合、１つまたは複数のヘリカーゼが、ｓｉＲＮＡ二重鎖を解き、相補的アンチセンス鎖が標的認識を誘導することを可能にする［Nykanen, et al., (2001) Cell 107:309］。適切な標的ｍＲＮＡへの結合の際に、ＲＩＳＣ内の１つまたは複数のエンドヌクレアーゼは、サイレンシングを誘導するために、標的を切断する［Elbashir, et al., (2001) Genes Dev. 15:188］。したがって、一態様では、本開示は、細胞内において生成され、ＲＩＳＣ複合体の形成を促進し、それとにより標的遺伝子、すなわちＭＡＰＴ遺伝子のサイレンシングを行う、一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）（ｓｉＲＮＡ二重鎖のアンチセンス鎖）に関する。したがって、用語「ｓｉＲＮＡ」は、上記において説明されたＲＮＡｉも意味するために本明細書において使用される。 In one embodiment, an RNAi agent of the disclosure comprises a single-stranded RNAi that interacts with a target RNA sequence, eg, a MAPT target mRNA sequence, to direct cleavage of the target RNA. Without wishing to be bound by theory, long double-stranded RNAs introduced into cells undergo interference with small double-stranded molecules, including the sense and antisense strands, by a type III endonuclease known as Dicer. It is believed to be degraded into RNA (siRNA) [Sharp et al. (2001) Genes Dev. 15:485]. Dicer, a ribonuclease III-like enzyme, processes this dsRNA into small interfering RNAs of 19-23 base pairs with a characteristic two-base 3' overhang [Bernstein, et al., (2001) Nature 409:363]. These siRNAs are then introduced into the RNA-induced silencing complex (RISC), where one or more helicases unwind the siRNA duplex and the complementary antisense strand induces target recognition. [Nykanen, et al., (2001) Cell 107:309]. Upon binding to the appropriate target mRNA, one or more endonucleases within RISC cleave the target to induce silencing [Elbashir, et al., (2001) Genes Dev. 15: 188]. Thus, in one aspect, the present disclosure provides single-stranded RNA (ssRNA) (siRNA duplexes) produced intracellularly to promote formation of the RISC complex, thereby silencing a target gene, namely the MAPT gene. strand antisense strand). Accordingly, the term "siRNA" is used herein to also mean RNAi as described above.

別の実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、標的ｍＲＮＡを阻害するために細胞または有機体に導入された一本鎖ＲＮＡであり得る。一本鎖ＲＮＡｉ剤は、ＲＩＳＣエンドヌクレアーゼであるアルゴノート２に結合し、次いで、標的ｍＲＮＡを切断する。一本鎖ｓｉＲＮＡは、概して、１５～３０ヌクレオチドであり、化学的に修飾される。一本鎖ＲＮＡの設計および試験は、米国特許第８，１０１，３４８号およびLima et al., (2012) Cell 150:883-894に記載されており、そのそれぞれの内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書において説明されるアンチセンスヌクレオチド配列はいずれも、本明細書において説明される一本鎖ｓｉＲＮＡとして、またはLima et al., (2012) Cell 150:883-894に記載される方法によって化学的に修飾される一本鎖ｓｉＲＮＡとして使用され得る。 In another embodiment, an RNAi agent can be single-stranded RNA introduced into a cell or organism to inhibit target mRNA. Single-stranded RNAi agents bind to the RISC endonuclease Argonaute 2, which then cleaves the target mRNA. Single-stranded siRNAs are generally 15-30 nucleotides and are chemically modified. The design and testing of single-stranded RNA is described in U.S. Pat. No. 8,101,348 and Lima et al., (2012) Cell 150:883-894, the entire contents of each of which are incorporated herein by reference. incorporated into the specification. Any of the antisense nucleotide sequences described herein can be synthesized as single-stranded siRNAs described herein or by the methods described in Lima et al., (2012) Cell 150:883-894. can be used as a single-stranded siRNA that is selectively modified.

別の実施形態において、本開示の組成物および方法における使用のための「ＲＮＡｉ剤」は、二本鎖ＲＮＡであり、本明細書において「二本鎖ＲＮＡｉ剤」、「二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）分子」、「ｄｓＲＮＡ剤」、または「ｄｓＲＮＡ」と呼ばれる。用語「ｄｓＲＮＡ」は、標的ＲＮＡ、すなわち、ＭＡＰＴ遺伝子に関して「センス」または「アンチセンス」配向を有すると言われる、２本の逆平行の実質的に相補的な核酸鎖を含む二重鎖構造を有するリボ核酸分子の複合体を意味する。本開示の一部の実施形態において、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）は、本明細書においてＲＮＡ干渉またはＲＮＡｉと呼ばれる転写後遺伝子サイレンシングメカニズムによって、標的ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡの分解を誘導する。 In another embodiment, the "RNAi agent" for use in the compositions and methods of the present disclosure is double-stranded RNA, herein referred to as "double-stranded RNAi agent", "double-stranded RNA (dsRNA ) molecule”, “dsRNA agent”, or “dsRNA”. The term "dsRNA" refers to a target RNA, i.e., a duplex structure comprising two antiparallel, substantially complementary nucleic acid strands, said to have a "sense" or "antisense" orientation with respect to the MAPT gene. A complex of ribonucleic acid molecules with In some embodiments of the present disclosure, double-stranded RNA (dsRNA) induces target RNA, eg, mRNA, degradation by a post-transcriptional gene silencing mechanism referred to herein as RNA interference or RNAi.

概して、ｄｓＲＮＡ分子は、リボヌクレオチドを含むことができるが、本明細書において詳細に説明されるように、それぞれの鎖または両方の鎖は、１つまたは複数のリボヌクレオチド、例えば、デオキシリボヌクレオチド、修飾ヌクレオチド、も含むことができる。加えて、本明細書において使用される場合、「ＲＮＡｉ剤」は、化学修飾を有するリボヌクレオチドを含み得；ＲＮＡｉ剤は、複数のヌクレオチドにおける実質的な修飾を含み得る。本明細書において使用される場合、用語「修飾ヌクレオチド」は、修飾糖部分、修飾ヌクレオチド間連結、または修飾核酸塩基を独立して有するヌクレオチドを意味する。したがって、修飾ヌクレオチドなる用語は、ヌクレオシド間連結、糖部分、または核酸塩基への、例えば、官能基または原子などの置換、付加、または除去を包含する。本開示の薬剤における使用にとって好適な修飾は、本明細書に開示される修飾または当技術分野で公知の修飾の全てのタイプを包含する。ｓｉＲＮＡタイプの分子において使用される、任意のそのような修飾は、本明細書および特許請求の範囲の目的のために「ＲＮＡｉ剤」によって包含される。 Generally, a dsRNA molecule can comprise ribonucleotides, but as detailed herein, each strand or both strands may contain one or more ribonucleotides, e.g., deoxyribonucleotides, modified Nucleotides can also be included. Additionally, as used herein, an "RNAi agent" can include ribonucleotides with chemical modifications; an RNAi agent can include substantial modifications at multiple nucleotides. As used herein, the term "modified nucleotide" means a nucleotide that independently has a modified sugar moiety, a modified internucleotide linkage, or a modified nucleobase. Thus, the term modified nucleotides encompasses substitutions, additions, or removals of, for example, functional groups or atoms, to internucleoside linkages, sugar moieties, or nucleobases. Modifications suitable for use in the medicaments of the present disclosure include all types of modifications disclosed herein or known in the art. Any such modifications used in siRNA-type molecules are encompassed by "RNAi agents" for the purposes of this specification and claims.

本開示のある特定の実施形態において、ＲＮＡｉ剤内に存在する場合、デオキシヌクレオチドの包含は、修飾ヌクレオチドを構成するとみなすことができる。 In certain embodiments of the present disclosure, the inclusion of deoxynucleotides, when present within an RNAi agent, can be considered to constitute modified nucleotides.

二重鎖領域は、ＲＩＳＣ経路による所望の標的ＲＮＡの特異的分解を可能にする任意の長さであり得、ならびに約１５～３６塩基対の長さ、例えば、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、または３６塩基対の長さ、例えば、約１５～３０、１５～２９、１５～２８、１５～２７、１５～２６、１５～２５、１５～２４、１５～２３、１５～２２、１５～２１、１５～２０、１５～１９、１５～１８、１５～１７、１８～３０、１８～２９、１８～２８、１８～２７、１８～２６、１８～２５、１８～２４、１８～２３、１８～２２、１８～２１、１８～２０、１９～３０、１９～２９、１９～２８、１９～２７、１９～２６、１９～２５、１９～２４、１９～２３、１９～２２、１９～２１、１９～２０、２０～３０、２０～２９、２０～２８、２０～２７、２０～２６、２０～２５、２０～２４、２０～２３、２０～２２、２０～２１、２１～３０、２１～２９、２１～２８、２１～２７、２１～２６、２１～２５、２１～２４、２１～２３、または２１～２２の塩基対の長さに及び得る。ある特定の実施形態において、二重鎖領域は、１９～２１塩基対の長さ、例えば、２１塩基対の長さである。上記に列記した範囲および長さの中間的な範囲および長さも、本開示の一部であることが想到される。 The duplex region can be of any length that allows specific degradation of the desired target RNA by the RISC pathway, and is about 15-36 base pairs long, eg, about 15, 16, 17, 18 , 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, or 36 base pairs in length, such as about 15-30, 15-29, 15-28, 15-27, 15-26, 15-25, 15-24, 15-23, 15-22, 15-21, 15-20, 15-19, 15-18, 15- 17, 18-30, 18-29, 18-28, 18-27, 18-26, 18-25, 18-24, 18-23, 18-22, 18-21, 18-20, 19-30, 19-29, 19-28, 19-27, 19-26, 19-25, 19-24, 19-23, 19-22, 19-21, 19-20, 20-30, 20-29, 20- 28, 20-27, 20-26, 20-25, 20-24, 20-23, 20-22, 20-21, 21-30, 21-29, 21-28, 21-27, 21-26, It can range in length from 21-25, 21-24, 21-23, or 21-22 base pairs. In certain embodiments, the double-stranded region is 19-21 base pairs in length, eg, 21 base pairs in length. Ranges and lengths intermediate to those recited above are also contemplated to be part of this disclosure.

二重鎖構造を形成する２つの鎖は、１つのより大きなＲＮＡ分子における異なる一部分であり得るか、またはそれらは、別々のＲＮＡ分子であり得る。２つの鎖が、１つのより大きい分子の一部であり、したがって、１つの鎖の３’端と、二重鎖構造を形成するそれぞれ他の鎖の５’端との間において、割り込まれていないヌクレオチドの鎖によって接続され、その場合、接続するＲＮＡ鎖は、「ヘアピンループ」と呼ばれる。ヘアピンループは、少なくとも１つの無対のヌクレオチドを含むことができる。一部の実施形態において、ヘアピンループは、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも２３またはそれ以上の無対のヌクレオチドまたはｄｓＲＮＡの標的部位を対象としないヌクレオチドを含むことができる。一部の実施形態において、ヘアピンループは、１０以下のヌクレオチドであり得る。一部の実施形態において、ヘアピンループは、８以下の無対のヌクレオチドであり得る。一部の実施形態において、ヘアピンループは、４～１０の無対のヌクレオチドであり得る。一部の実施形態において、ヘアピンループは、４～８の無対のヌクレオチドであり得る。 The two strands that form the duplex structure can be different portions of one larger RNA molecule, or they can be separate RNA molecules. Two strands are part of one larger molecule and are therefore interrupted between the 3' end of one strand and the 5' end of each other strand forming a duplex structure. The connecting RNA strands are then called "hairpin loops". A hairpin loop can comprise at least one unpaired nucleotide. In some embodiments, the hairpin loop comprises at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 20, at least 23 or more unpaired nucleotides or the target site of the dsRNA. can include nucleotides not intended for In some embodiments, the hairpin loop can be 10 nucleotides or less. In some embodiments, the hairpin loop can be 8 or fewer unpaired nucleotides. In some embodiments, the hairpin loop can be 4-10 unpaired nucleotides. In some embodiments, the hairpin loop can be 4-8 unpaired nucleotides.

ｄｓＲＮＡの２つの実質的に相補的な鎖は、別々のＲＮＡ分子に含まれ、それらの分子は、必ずしも必要ではないが、共有結合することができる。２つの鎖が、１つの鎖の３’端と、二重鎖構造を形成するそれぞれ他の鎖の５’端との間において、割り込まれないヌクレオチドの鎖以外の手段によって共有結合される、ある特定の実施形態において、接続構造は、「リンカー」と呼ばれる（本明細書の他の箇所において定義されるある特定の他の構造も「リンカー」と呼ばれ得るが）。ＲＮＡ鎖は、同じまたは異なる数のヌクレオチドを有し得る。塩基対の最大数は、ｄｓＲＮＡの最も短い鎖におけるヌクレオチドの数から二重鎖に存在する全てのオーバーハングを引いた数である。二重鎖構造に加えて、ＲＮＡｉは、１つまたは複数のヌクレオチドオーバーハングを含み得る。ＲＮＡｉ剤の一実施形態において、少なくとも１つの鎖は、少なくとも１ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む。別の実施形態において、少なくとも１つの鎖は、少なくとも２ヌクレオチド、例えば、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む。他の実施形態において、ＲＮＡｉ剤の少なくとも１つの鎖は、少なくとも１ヌクレオチドの５’オーバーハングを含む。ある特定の実施形態において、少なくとも１つの鎖は、少なくとも２ヌクレオチド、例えば、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５ヌクレオチドの５’オーバーハングを含む。さらなる他の実施形態において、ＲＮＡｉ剤の１つの鎖の３’および５’端の両方は、少なくとも１ヌクレオチドのオーバーハングを含む。 The two substantially complementary strands of the dsRNA are contained in separate RNA molecules, which molecules can, but need not, be covalently linked. Two strands are covalently linked between the 3' end of one strand and the 5' end of each other strand forming a duplex structure by means other than a strand of uninterrupted nucleotides In certain embodiments, connecting structures are referred to as "linkers" (although certain other structures defined elsewhere herein may also be referred to as "linkers"). RNA strands can have the same or different numbers of nucleotides. The maximum number of base pairs is the number of nucleotides in the shortest strand of the dsRNA minus any overhangs present in the duplex. In addition to the duplex structure, RNAi may contain one or more nucleotide overhangs. In one embodiment of the RNAi agent, at least one strand comprises a 3' overhang of at least 1 nucleotide. In another embodiment, at least one strand has a 3' overhang of at least 2 nucleotides, such as 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 12, 13, 14, or 15 nucleotides. including. In other embodiments, at least one strand of the RNAi agent comprises a 5' overhang of at least 1 nucleotide. In certain embodiments, at least one strand has a 5' overhang of at least 2 nucleotides, e.g. Including hang. In still other embodiments, both the 3' and 5' ends of one strand of the RNAi agent comprise overhangs of at least 1 nucleotide.

一実施形態において、本開示のＲＮＡｉ剤は、ｄｓＲＮＡであり、その各鎖は、独立して、標的ＲＮＡの切断を誘導するために、標的ＲＮＡ配列、例えば、ＭＡＰＴ標的ｍＲＮＡ配列と相互作用する１９～２３ヌクレオチドを含む。 In one embodiment, an RNAi agent of the present disclosure is a dsRNA, each strand of which independently interacts with a target RNA sequence, e.g., a MAPT target mRNA sequence, to induce cleavage of the target RNA. Contains ~23 nucleotides.

一部の実施形態において、本発明のｉＲＮＡは、標的ＲＮＡ配列、例えば、ＭＡＰＴ標的化ｍＲＮＡ配列と相互作用して標的ＲＮＡの切断を指示する２４～３０ヌクレオチドのｄｓＲＮＡである。 In some embodiments, the iRNA of the invention is a 24-30 nucleotide dsRNA that interacts with a target RNA sequence, eg, a MAPT-targeting mRNA sequence to direct cleavage of the target RNA.

本明細書において使用される場合、用語「ヌクレオチドオーバーハング」は、ＲＮＡｉ剤、例えばｄｓＲＮＡの二重鎖構造から突出する少なくとも１つの無対のヌクレオチドを意味する。例えば、ｄｓＲＮＡの一方の鎖の３’端が、他方の鎖の５’端を越えて延びる場合、その逆の場合も同様に、ヌクレオチドオーバーハングが存在する。ｄｓＲＮＡは、少なくとも１つのヌクレオチドのオーバーハングを含むことができ；あるいは、オーバーハングは、少なくとも２つのヌクレオチド、少なくとも３つのヌクレオチド、少なくとも４つのヌクレオチド、少なくとも５つのヌクレオチド、またはそれ以上のヌクレオチドを含むことができる。ヌクレオチドオーバーハングは、デオキシヌクレオチド／ヌクレオシドなどのヌクレオチド／ヌクレオシドアナログを含み得、またはそれらからなり得る。オーバーハングは、センス鎖、アンチセンス鎖、またはそれらの任意の組合せの上にあり得る。その上、オーバーハングのヌクレオチドは、ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖またはセンス鎖のどちらかの５’端、３’端、またはその両方に存在し得る。 As used herein, the term "nucleotide overhang" means at least one unpaired nucleotide overhanging the duplex structure of an RNAi agent, eg, dsRNA. For example, if the 3' end of one strand of the dsRNA extends beyond the 5' end of the other strand, and vice versa, there is a nucleotide overhang. The dsRNA can comprise an overhang of at least one nucleotide; alternatively, the overhang comprises at least 2 nucleotides, at least 3 nucleotides, at least 4 nucleotides, at least 5 nucleotides, or more nucleotides. can be done. Nucleotide overhangs may comprise or consist of nucleotide/nucleoside analogs such as deoxynucleotides/nucleosides. Overhangs can be on the sense strand, the antisense strand, or any combination thereof. Moreover, overhanging nucleotides can be present at the 5' end, 3' end, or both of either the antisense or sense strands of the dsRNA.

一実施形態において、ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖は、３’端または５’端に１～１０ヌクレオチドオーバーハング、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ヌクレオチドのオーバーハングを有する。一実施形態において、ｄｓＲＮＡのセンス鎖は、３’端または５’端に１～１０ヌクレオチドオーバーハング、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ヌクレオチドのオーバーハングを有する。別の実施形態において、オーバーハングにおけるヌクレオチドの１つまたは複数は、ヌクレオシドチオホスフェートで置き換えられる。 In one embodiment, the antisense strand of the dsRNA has a 1-10 nucleotide overhang at the 3' or 5' end, such as 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 nucleotides. overhang. In one embodiment, the sense strand of the dsRNA has a 1-10 nucleotide overhang at the 3' or 5' end, e.g. have overhangs. In another embodiment, one or more of the nucleotides in the overhangs are replaced with nucleoside thiophosphates.

ある特定の実施形態において、ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖は、３’端または５’端に１～１０ヌクレオチドオーバーハング、例えば、０～３、１～３、２～４、２～５、４～１０、５～１０ヌクレオチドオーバーハング、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ヌクレオチドのオーバーハングを有する。一実施形態において、ｄｓＲＮＡのセンス鎖は、３’端または５’端に１～１０ヌクレオチドオーバーハング、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ヌクレオチドのオーバーハングを有する。別の実施形態において、オーバーハングにおけるヌクレオチドの１つまたは複数は、ヌクレオシドチオホスフェートで置き換えられる。 In certain embodiments, the antisense strand of the dsRNA has a 1-10 nucleotide overhang at the 3′ or 5′ end, eg, 0-3, 1-3, 2-4, 2-5, 4-10 , has 5-10 nucleotide overhangs, eg, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 nucleotide overhangs. In one embodiment, the sense strand of the dsRNA has a 1-10 nucleotide overhang at the 3' or 5' end, e.g. have overhangs. In another embodiment, one or more of the nucleotides in the overhangs are replaced with nucleoside thiophosphates.

ある特定の実施形態において、センス鎖またはアンチセンス鎖におけるオーバーハングは、１０ヌクレオチドより長い、例えば、１～３０ヌクレオチド長、２～３０ヌクレオチド長、１０～３０ヌクレオチド長、または１０～１５ヌクレオチド長の、伸長された長さを含み得る。ある特定の実施形態において、伸長されたオーバーハングは、二重鎖のセンス鎖にある。ある特定の実施形態において、伸長されたオーバーハングは、二重鎖のセンス鎖の３’端に存在する。ある特定の実施形態において、伸長されたオーバーハングは、二重鎖のセンス鎖の５’端に存在する。ある特定の実施形態において、伸長されたオーバーハングは、二重鎖のアンチセンス鎖にある。ある特定の実施形態において、伸長されたオーバーハングは、二重鎖のアンチセンス鎖の３’端に存在する。ある特定の実施形態において、伸長されたオーバーハングは、二重鎖のアンチセンス鎖の５’端に存在する。ある特定の実施形態において、オーバーハングにおけるヌクレオチドの１つまたは複数は、ヌクレオシドチオホスフェートで置き換えられる。ある特定の実施形態において、オーバーハングは、オーバーハングが、生理学的条件下において安定なヘアピン構造を形成することができるような自己相補性部分を含む。 In certain embodiments, the overhangs on the sense or antisense strand are greater than 10 nucleotides in length, such as 1-30 nucleotides in length, 2-30 nucleotides in length, 10-30 nucleotides in length, or 10-15 nucleotides in length. , may include the stretched length. In certain embodiments, the extended overhang is on the sense strand of the duplex. In certain embodiments, an extended overhang is present at the 3'end of the sense strand of the duplex. In certain embodiments, an extended overhang is present at the 5'end of the sense strand of the duplex. In certain embodiments, the extended overhang is on the antisense strand of the duplex. In certain embodiments, an extended overhang is present at the 3' end of the antisense strand of the duplex. In certain embodiments, an extended overhang is present at the 5' end of the antisense strand of the duplex. In certain embodiments, one or more of the nucleotides in the overhangs are replaced with nucleoside thiophosphates. In certain embodiments, the overhangs contain self-complementary portions such that the overhangs can form stable hairpin structures under physiological conditions.

用語「ブラント（ｂｌｕｎｔ）」または「ブラントエンド（ｂｌｕｎｔ ｅｎｄｅｄ）」は、ｄｓＲＮＡに関して本明細書において使用される場合、ｄｓＲＮＡの所定の末端において無対ヌクレオチドまたはヌクレオチドアナログが存在しない、すなわち、ヌクレオチドオーバーハングが存在しないことを意味する。ｄｓＲＮＡの片端または両端は、ブラントであり得る。ｄｓＲＮＡの両端がブラントである場合、ｄｓＲＮＡは、ブラントエンドであると言われる。明瞭化のため、「ブラントエンド」ｄｓＲＮＡは、両端がブラントであるｄｓＲＮＡ、すなわち、分子のどちらの末端にもヌクレオチドオーバーハングが存在しないｄｓＲＮＡである。ほとんどの場合、そのような分子は、その全長にわたって二本鎖であろう。 The term "blunt" or "blunt ended" as used herein with respect to a dsRNA means that there are no unpaired nucleotides or nucleotide analogues at a given end of the dsRNA, i.e., nucleotide overhangs does not exist. One or both ends of the dsRNA can be blunt. A dsRNA is said to be blunt-ended if both ends of the dsRNA are blunt. For the sake of clarity, a "blunt-ended" dsRNA is a dsRNA that is blunt at both ends, ie, a dsRNA that has no nucleotide overhangs at either end of the molecule. In most cases, such molecules will be double-stranded over their entire length.

用語「アンチセンス鎖」または「ガイド鎖」は、標的配列、例えば、ＭＡＰＴ ｍＲＮＡに対して実質的に相補的な領域を含む、ＲＮＡｉ剤、例えば、ｄｓＲＮＡの鎖を意味する。 The terms "antisense strand" or "guide strand" refer to a strand of an RNAi agent, eg, dsRNA, that contains a region substantially complementary to a target sequence, eg, MAPT mRNA.

本明細書において使用される場合、用語「相補性の領域」は、本明細書において定義されるように、配列、例えば、標的配列、例えば、ＭＡＰＴヌクレオチド配列に対して実質的に相補的であるアンチセンス鎖上の領域を意味する。相補性の領域が、標的配列に対して完全には相補的でない場合、そのミスマッチは、分子の内部領域または末端領域においてであり得る。一般に、最も許容できるミスマッチは、末端領域、例えば、ＲＮＡｉ剤の５’末端または３’末端の５、４、３、または２ヌクレオチド以内においてである。一部の実施形態において、本発明の二本鎖ＲＮＡ剤は、アンチセンス鎖におけるヌクレオチドミスマッチを含む。一部の実施形態において、本発明の二本鎖ＲＮＡ剤のアンチセンス鎖は、標的ｍＲＮＡとの４つ以下のミスマッチを含み、例えば、アンチセンス鎖は、標的ｍＲＮＡとの４つ、３つ、２つ、１つ、または０のミスマッチを含む。一部の実施形態において、本発明の二本鎖ＲＮＡ剤のアンチセンス鎖は、センス鎖との４つ以下のミスマッチを含み、例えば、アンチセンス鎖は、センス鎖との４つ、３つ、２つ、１つ、または０のミスマッチを含む。一部の実施形態において、本発明の二本鎖ＲＮＡ剤は、センス鎖におけるヌクレオチドミスマッチを含む。一部の実施形態において、本発明の二本鎖ＲＮＡ剤のセンス鎖は、アンチセンス鎖との４つ以下のミスマッチを含み、例えば、センス鎖は、アンチセンス鎖との４つ、３つ、２つ、１つ、または０のミスマッチを含む。一部の実施形態において、ヌクレオチドミスマッチは、例えば、ｉＲＮＡの３’端から５、４、３ヌクレオチド以内である。別の実施形態において、ヌクレオチドミスマッチは、例えば、ｉＲＮＡ剤の３’末端ヌクレオチドにおいてである。一部の実施形態において、ミスマッチは、シード領域にはない。 As used herein, the term "region of complementarity" is substantially complementary to a sequence, e.g., a target sequence, e.g., a MAPT nucleotide sequence, as defined herein. A region on the antisense strand. Where the regions of complementarity are not perfectly complementary to the target sequence, the mismatches can be in internal or terminal regions of the molecule. Generally, the most acceptable mismatches are in terminal regions, e.g., within 5, 4, 3, or 2 nucleotides of the 5'or 3'end of the RNAi agent. In some embodiments, the double-stranded RNA agents of the invention contain nucleotide mismatches in the antisense strand. In some embodiments, the antisense strand of a double-stranded RNA agent of the invention contains no more than 4 mismatches with the target mRNA, e.g., the antisense strand has 4, 3, Contains 2, 1, or 0 mismatches. In some embodiments, the antisense strand of a double-stranded RNA agent of the invention contains no more than 4 mismatches with the sense strand, e.g., the antisense strand has 4, 3, Contains 2, 1, or 0 mismatches. In some embodiments, the double-stranded RNA agents of the invention contain nucleotide mismatches in the sense strand. In some embodiments, the sense strand of a double-stranded RNA agent of the invention contains no more than 4 mismatches with the antisense strand, e.g., the sense strand has 4, 3, Contains 2, 1, or 0 mismatches. In some embodiments, the nucleotide mismatch is, for example, within 5, 4, 3 nucleotides from the 3' end of the iRNA. In another embodiment, the nucleotide mismatch is, eg, at the 3' terminal nucleotide of the iRNA agent. In some embodiments, the mismatch is not in the seed region.

したがって、本明細書において説明されるＲＮＡｉ剤は、標的配列に対する１つまたは複数のミスマッチを含むことができる。一実施形態において、本明細書において説明されるＲＮＡｉ剤は、３つ以下のミスマッチ（すなわち、３つ、２つ、１つ、または０のミスマッチ）を含む。一実施形態において、本明細書において説明されるＲＮＡｉ剤は、２つ以下のミスマッチを含む。一実施形態において、本明細書において説明されるＲＮＡｉ剤は、１つ以下のミスマッチを含む。一実施形態において、本明細書において説明されるＲＮＡｉ剤は、０のミスマッチを含む。ある特定の実施形態において、ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖が、標的配列に対してミスマッチを含む場合、ミスマッチは、適宜、相補性の領域の５’端または３’端から最後の５ヌクレオチド以内に制限することもできる。例えば、そのような実施形態において、２３ヌクレオチドのＲＮＡｉ剤の場合、ＭＡＰＴ遺伝子の領域に対して相補的な鎖は、概して、中央の１３ヌクレオチド以内にいかなるミスマッチも含まない。本明細書に記載される方法または当技術分野で公知の方法を使用することにより、標的配列に対するミスマッチを含有するＲＮＡｉ剤が、ＭＡＰＴ遺伝子の発現の阻害において有効であるか否かを判定することができる。例えば、Jackson et al. （Nat. Biotechnol. 2003;21: 635-637）は、ＭＡＰＫ１４ ｓｉＲＮＡに対して１２～１８ｎｔのセンス鎖のみで配列同一性を有する小さい遺伝子セットの発現がＭＡＰＫ１４と同様の動態で下方制御された発現プロファイル研究について記載している。同様に、Lin et al., （Nucleic Acids Res. 2005; 33(14): 4527-4535）は、ｑＰＣＲおよびレポーターのアッセイを使用して、ｓｉＲＮＡと標的の間に７ｎｔの相補性があれば標的のｍＲＮＡ分解を引き起こすのに十分であることを示した。とりわけ、ＭＡＰＴ遺伝子における相補性の特定の領域が、集団内での多形配列バリエーションを有することが知られている場合、ＭＡＰＴの発現を阻害するミスマッチを有するＲＮＡｉ剤の有効性を考慮することは重要である。 Thus, the RNAi agents described herein can contain one or more mismatches to the target sequence. In one embodiment, the RNAi agents described herein contain no more than 3 mismatches (ie, 3, 2, 1, or 0 mismatches). In one embodiment, the RNAi agents described herein contain no more than two mismatches. In one embodiment, the RNAi agents described herein contain no more than one mismatch. In one embodiment, the RNAi agents described herein contain 0 mismatches. In certain embodiments, if the antisense strand of the RNAi agent contains mismatches to the target sequence, the mismatches are limited to within the last 5 nucleotides from the 5' or 3' end of the region of complementarity, as appropriate. You can also For example, in such embodiments, for a 23 nucleotide RNAi agent, the strand complementary to the region of the MAPT gene generally does not contain any mismatches within the middle 13 nucleotides. Determining whether an RNAi agent containing mismatches to a target sequence is effective in inhibiting expression of the MAPT gene by using methods described herein or known in the art can be done. For example, Jackson et al. (Nat. Biotechnol. 2003;21: 635-637) reported that the expression of a small gene set with only 12-18 nt sense-strand sequence identity to MAPK14 siRNA showed similar kinetics to MAPK14. describes an expression profiling study of down-regulation in . Similarly, Lin et al., (Nucleic Acids Res. 2005; 33(14): 4527-4535) used qPCR and reporter assays to detect target was sufficient to cause mRNA degradation of In particular, given that particular regions of complementarity in the MAPT gene are known to have polymorphic sequence variations within the population, the efficacy of RNAi agents with mismatches to inhibit expression of MAPT can be considered. is important.

「ヌクレオチドの実質的に全てが修飾されている」は、本明細書において使用される場合、全部ではないが大部分が修飾されていることであり、例としては、５、４、３、２、または１個以下の修飾されていないヌクレオチドが挙げられる。 "Substantially all of the nucleotides are modified", as used herein, is that most but not all of the nucleotides are modified, examples being 5, 4, 3, 2 , or one or less unmodified nucleotides.

用語「センス鎖」または「パッセンジャー鎖」は、本明細書において使用される場合、用語が本明細書において定義されるようなアンチセンス鎖の領域に対して実質的に相補的である領域を含むＲＮＡｉ剤の鎖を意味する。 The terms "sense strand" or "passenger strand" as used herein include a region that is substantially complementary to a region of the antisense strand as the term is defined herein. A strand of an RNAi agent is meant.

本明細書において使用される場合、用語「切断領域」は、切断部位に直接隣接して位置される領域を意味する。切断部位は、切断が生じる標的上の部位である。一部の実施形態において、切断領域は、切断部位のどちらかの末端において直接隣接している３つの塩基を含む。一部の実施形態において、切断領域は、切断部位のどちらかの末端において直接隣接している２つの塩基を含む。一部の実施形態において、詳細には、切断部位は、アンチセンス鎖のヌクレオチド１０および１１によって結合される部位において生じ、切断領域は、ヌクレオチド１１、１２、および１３を含む。 As used herein, the term "cleavage region" means the region located immediately adjacent to the cleavage site. A cleavage site is the site on the target where cleavage occurs. In some embodiments, the cleavage region includes three bases immediately adjacent at either end of the cleavage site. In some embodiments, the cleavage region comprises two bases immediately adjacent at either end of the cleavage site. In some embodiments, the cleavage site specifically occurs at the site bounded by nucleotides 10 and 11 of the antisense strand, and the cleavage region includes nucleotides 11, 12, and 13.

本明細書において使用される場合、特に明記されない限り、用語「相補的」は、当業者によって理解されるように、第２のヌクレオチド配列との関連において第１のヌクレオチド配列を説明するために使用される場合、ある特定の条件下において、第２のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドとハイブリダイズして二重鎖を形成する第１のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの能力を意味する。このような条件は、例えば、「ストリンジェントな条件」であってもよく、そのような条件としては、４００ｍＭのＮａＣｌ、４０ｍＭのＰＩＰＥＳ ｐＨ６．４、１ｍＭのＥＤＴＡ、５０℃または７０℃で１２～１６時間、それに続き洗浄することが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。（例えば、“Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Sambrook, et al. (1989) Cold Spring Harbor Laboratory Pressを参照）。本明細書において使用される場合、「ストリンジェントな条件」または「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」は、その条件下においてアンチセンス化合物はその標的配列にハイブリダイズするが、他の配列には最小限の数である条件を指す。ストリンジェントな条件は配列依存性であり、異なる状況では異なることとなり、アンチセンス化合物が標的配列にハイブリダイズする「ストリンジェントな条件」は、アンチセンス化合物の性質および組成、ならびにそれらが調査されているアッセイによって決定される。他の条件、例えば生物の内部で遭遇し得るような生理的に適切な条件も適用することができる。当業者は、ハイブリダイズしたヌクレオチドの最終的な適用に従って２つの配列の相補性の試験に最も適切な条件のセットを決定することができるであろう。 As used herein, unless otherwise specified, the term "complementary" is used to describe a first nucleotide sequence in the context of a second nucleotide sequence, as understood by those of skill in the art. means the ability of an oligonucleotide or polynucleotide comprising a first nucleotide sequence to hybridize to form a duplex with an oligonucleotide or polynucleotide comprising a second nucleotide sequence under certain conditions do. Such conditions may, for example, be "stringent conditions", such conditions include 400 mM NaCl, 40 mM PIPES pH 6.4, 1 mM EDTA, 50°C or 70°C for 12-12 hours. Examples include, but are not limited to, 16 hours followed by washing. (See, e.g., "Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Sambrook, et al. (1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press). As used herein, "stringent conditions" or "stringent hybridization "Conditions" refers to those conditions under which an antisense compound will hybridize to its target sequence, but to a minimal number of other sequences. Stringent conditions are sequence dependent and will be different in different circumstances, and the "stringent conditions" under which an antisense compound will hybridize to a target sequence will depend on the nature and composition of the antisense compounds and the conditions under which they are investigated. Determined by assays available. Other conditions may also apply, such as physiologically relevant conditions as may be encountered inside an organism. Those skilled in the art will be able to determine the most appropriate set of conditions for testing the complementarity of two sequences according to the final application of the hybridized nucleotides.

ＲＮＡｉ剤内、例えば、本明細書において説明されるｄｓＲＮＡ内の相補配列は、一方または両方のヌクレオチド配列の全長にわたっての、第２のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドに対する第１のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの塩基対合を含む。そのような配列は、本明細書において、お互いに関して「完全に相補的」であると呼ぶことができる。しかしながら、本明細書において、第１の配列が、第２の配列に対して「実質的に相補的」であるとみなされる場合、２つの配列は、完全に相補的であり得るか、またはそれらは、３０までの塩基対の二重鎖の場合、ハイブリダイゼーションの際に１つまたは複数、しかし、概して、５、４、３、または２以下のミスマッチの塩基対を形成し得る。一部の実施形態において、本明細書に開示される「実質的に相補的な」配列は、標的ＭＡＰＴ配列の同等の領域に対してその全長にわたり少なくとも約８０％、例えば、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相補的である、連続するヌクレオチド配列を含む。しかしながら、２つのオリゴヌクレオチドが、ハイブリダイゼーションの際に１つまたは複数の一本鎖オーバーハングを形成するように設計される場合、そのようなオーバーハングは、相補性の判定に関して、ミスマッチとはみなされない。例えば、２１ヌクレオチド長の１つのオリゴヌクレオチドと２３ヌクレオチド長の別のオリゴヌクレオチドとを含むｄｓＲＮＡであって、より長いオリゴヌクレオチドが、より短いオリゴヌクレオチドに対して完全に相補的である２１ヌクレオチドの配列を含むようなｄｓＲＮＡは、依然として、本明細書において説明される目的に対して、「完全に相補的」とみなすことができる。 Complementary sequences within an RNAi agent, e.g., within a dsRNA described herein, direct a first nucleotide sequence to an oligonucleotide or polynucleotide, including a second nucleotide sequence, over the entire length of one or both nucleotide sequences. including base pairing of oligonucleotides or polynucleotides comprising. Such sequences can be referred to herein as being "fully complementary" with respect to each other. However, where a first sequence is considered herein to be "substantially complementary" to a second sequence, the two sequences may be fully complementary or can form one or more, but generally no more than 5, 4, 3, or 2, mismatched base pairs upon hybridization for a duplex of up to 30 base pairs. In some embodiments, a "substantially complementary" sequence disclosed herein is at least about 80%, e.g., about 85%, about comprising a contiguous nucleotide sequence that is 90%, about 91%, about 92%, about 93%, about 94%, about 95%, about 96%, about 97%, about 98%, or about 99% complementary . However, if two oligonucleotides are designed to form one or more single-stranded overhangs upon hybridization, such overhangs are not considered mismatches for purposes of determining complementarity. not. For example, a dsRNA comprising one oligonucleotide that is 21 nucleotides in length and another that is 23 nucleotides in length, wherein the longer oligonucleotide is a 21 nucleotide sequence that is completely complementary to the shorter oligonucleotide. Such dsRNAs can still be considered "fully complementary" for the purposes described herein.

「相補的」配列は、本明細書において使用される場合、ハイブリダイズするそれらの能力に関する上記の要件が満たされる限り、非ワトソン・クリック塩基対、または非天然の修飾ヌクレオチドから形成された塩基対も含み得るか、またはそれらから完全に形成され得る。そのような非ワトソン・クリック塩基対としては、これらに限定されるわけではないが、Ｇ：ＵＷｏｂｂｌｅまたはＨｏｏｇｓｔｅｉｎ塩基対合が挙げられる。 "Complementary" sequences, as used herein, are non-Watson-Crick base pairs, or base pairs formed from non-naturally modified nucleotides, as long as the above requirements regarding their ability to hybridize are met. may also include or be formed entirely therefrom. Such non-Watson-Crick base pairs include, but are not limited to, G:UWobble or Hoogstein base pairs.

用語「相補的」、「完全に相補的」、および「実質的に相補的」は、本明細書において、それらの使用との関連から理解できるように、ｄｓＲＮＡのセンス鎖とアンチセンス鎖との間、またはＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と標的配列との間における塩基マッチングに関連して使用することができる。 The terms "complementary," "fully complementary," and "substantially complementary," as used herein, are understood in relation to their use in the sense and antisense strands of dsRNA. or in connection with base matching between the antisense strand of the RNAi agent and the target sequence.

本明細書において使用される場合、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）「の少なくとも一部に対して実質的に相補的」であるポリヌクレオチドは、目的のｍＲＮＡ（例えば、タウをコードするｍＲＮＡ）の連続部分に対して実質的に相補的であるポリヌクレオチドを意味する。例えば、ポリヌクレオチドは、配列が、タウをコードするｍＲＮＡの割り込みされていない部分に対して実質的に相補的である場合、ＭＡＰＴ ｍＲＮＡの少なくとも一部に対して相補的である。 As used herein, a polynucleotide that is “substantially complementary to at least a portion of” a messenger RNA (mRNA) is a contiguous portion of the mRNA of interest (e.g., the mRNA encoding tau). A polynucleotide that is substantially complementary to a polynucleotide. For example, a polynucleotide is complementary to at least a portion of a MAPT mRNA if the sequence is substantially complementary to the uninterrupted portion of the mRNA encoding tau.

したがって、一部の実施形態において、本明細書に開示されるアンチセンスポリヌクレオチドは、標的ＭＡＰＴ配列に対して完全に相補的である。他の実施形態において、本明細書に開示されるアンチセンスポリヌクレオチドは、標的ＭＡＰＴ配列に対して実質的に相補的であり、配列番号１、３、５、７、９、および１１のいずれか１つ、または配列番号１、３、５、７、９、および１１のいずれか１つの断片のヌクレオチド配列の同等の領域に対してその全長にわたり少なくとも８０％、例えば、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相補的である、連続するヌクレオチド配列を含む。 Thus, in some embodiments, the antisense polynucleotides disclosed herein are fully complementary to the target MAPT sequence. In other embodiments, the antisense polynucleotides disclosed herein are substantially complementary to a target MAPT sequence and are any of SEQ ID NOs: 1, 3, 5, 7, 9, and 11 at least 80%, e.g., about 85%, about 90%, over its entire length to an equivalent region of the nucleotide sequence of one, or a fragment of any one of SEQ ID NOs: 1, 3, 5, 7, 9, and 11 , about 91%, about 92%, about 93%, about 94%, about 95%, about 96%, about 97%, about 98%, or about 99% complementary contiguous nucleotide sequences.

一部の実施形態において、本明細書に開示されるアンチセンスポリヌクレオチドは、標的ＭＡＰＴ配列の断片に実質的に相補的であり、その全長にわたり、配列番号１のヌクレオチド９７７～９９７、９８０～１０００、９７３～９９３、９８８～１００８、９８７～１００７、９７２～９９２、９７９～９９９、１００１～１０２１、９７６～９９６、９９４～１０１４、１００２～１０２２、９７８～９９８、９７４～９９４、９８１～１００１、９９５～１０１５、１００３～１０２３、９８９～１００９、１０３１～１０５１、９７５～９９５、９８３～１００３、９９２～１０１２、９８２～１００２、１２３６～１２５６、１０２３～１０４３、９８６～１００６、１０１４～１０３４、１２３７～１２５７、１０３０～１０５０、９９７～１０１７、１００９～１０２９、１０１３～１０３３、１０２７～１０４７、９９８～１０１８、１０２６～１０４６、１０２２～１０４２、１０６５～１０８５、１０２５～１０４５、１０１７～１０３７、１００６～１０２６、１０００～１０２０、９８４～１００４、１０１０～１０３０、１０６４～１０８４、１０１６～１０３６、９９３～１０１３、１０３３～１０５３、９７１～９９１、１００８～１０２８、１０３２～１０５２、１０１５～１０３５、１０６３～１０８３、１０２０～１０４０、９８５～１００５、９９９～１０１９、１００４～１０２４、１０２４～１０４４、１１０４～１１２４、９９０～１０１０、１００５～１０２５、１０２１～１０４１、１０２８～１０４８、９９６～１０１６、１０１１～１０３１、９９１～１０１１、１０１８～１０３８、１２２８～１２４８、１２３０～１２５０、１０２９～１０４９、１０１９～１０３９、１０１２～１０３２、１０６２～１０８２、１２３１～１２５１、１２２９～１２４９、１２２６～１２４６、１２２７～１２４７、９７５～９９７、９７８～１０００、９７１～９９３、９８６～１００８、９８５～１００７、９７７～９９９、９９９～１０２１、９７４～９９６、９９２～１０１４、１０００～１０２２、９７６～９９８、９７２～９９４、９７９～１００１、９９３～１０１５、１００１～１０２３、９８７～１００９、１０２９～１０５１、９７３～９９５、９８１～１００３、９９０～１０１２、９８０～１００２、１２３４～１２５６、１０２１～１０４３、９８４～１００６、１０１２～１０３４、１２３５～１２５７、１０２８～１０５０、９９５～１０１７、１００７～１０２９、１０１１～１０３３、１０２５～１０４７、９９６～１０１８、１０２４～１０４６、１０２０～１０４２、１０６３～１０８５、１０２３～１０４５、１０１５～１０３７、１００４～１０２６、９９８～１０２０、９８２～１００４、１００８～１０３０、１０６２～１０８４、１０１４～１０３６、９９１～１０１３、１０３１～１０５３、１００６～１０２８、１０３０～１０５２、１０１３～１０３５、１０１８～１０４０、９８３～１００５、９９７～１０１９、１００２～１０２４、１０２２～１０４４、９８８～１０１０、１００３～１０２５、１０１９～１０４１、１０２６～１０４８、９９４～１０１６、１００９～１０３１、９８９～１０１１、１０１６～１０３８、１２２６～１２４８、１２２８～１２５０、１０２７～１０４９、１０１７～１０３９、１０１０～１０３２、１２２９～１２５１、１２２７～１２４９、１２２４～１２４６、および１２２５～１２４７の群から選択される配列番号１の断片に、少なくとも８０％相補的な、例えば約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相補的な、連続するヌクレオチド配列を含む。上記の列挙された範囲の間にある範囲も本開示の一部であることが企図される。 In some embodiments, the antisense polynucleotides disclosed herein are substantially complementary to a fragment of the target MAPT sequence, extending over its entire length from nucleotides 977-997, 980-1000 of SEQ ID NO:1. , 973-993, 988-1008, 987-1007, 972-992, 979-999, 1001-1021, 976-996, 994-1014, 1002-1022, 978-998, 974-994, 981-1001, 995 ~1015, 1003-1023, 989-1009, 1031-1051, 975-995, 983-1003, 992-1012, 982-1002, 1236-1256, 1023-1043, 986-1006, 1014-1034, 1237-1257 . 00 ~1020, 984-1004, 1010-1030, 1064-1084, 1016-1036, 993-1013, 1033-1053, 971-991, 1008-1028, 1032-1052, 1015-1035, 1063-1083, 1020-1040 ,985-1005,999-1019,1004-1024,1024-1044,1104-1124,990-1010,1005-1025,1021-1041,1028-1048,996-1016,1011-1031,991-1011,1018 ～１０３８、１２２８～１２４８、１２３０～１２５０、１０２９～１０４９、１０１９～１０３９、１０１２～１０３２、１０６２～１０８２、１２３１～１２５１、１２２９～１２４９、１２２６～１２４６、１２２７～１２４７、９７５～９９７、９７８～１０００ , 971-993, 986-1008, 985-1007, 977-999, 999-1021, 974-996, 992-1014, 1000-1022, 976-998, 972-994, 979-1001, 993-1015, 1001 ~1023, 987-1009, 1029-1051, 973-995, 981-1003, 990-1012, 980-1002, 1234-1256, 1021-1043, 984-1006, 1012-1034, 1235-1257, 1028-1050 , 995-1017, 107-1029, 1011-1033, 1025-1077, 996-1018, 1024-1046, 1024-1042, 1020-1085, 1023-1085, 1023-1045, 1015-1037, 1026, 1020, 1020, 1020 ~ 1004, 1008-1030, 1062-1084, 1014-1036, 991-1013, 1031-1053, 106-1028, 1030-1052, 1013-1035, 1018-1040, 983-1005, 997-1002, 1024 . 7 at least 80% complementary, such as about 85%, about 90 %, about 91%, about 92%, about 93%, about 94%, about 95%, about 96%, about 97%, about 98%, or about 99% complementary contiguous nucleotide sequence. Ranges between the above recited ranges are also contemplated as being part of this disclosure.

一部の実施形態において、本明細書に開示されるアンチセンスポリヌクレオチドは、標的ＭＡＰＴ配列の断片に対して実質的に相補的であり、配列番号１のヌクレオチド５２０～５４０、５２１～５４１、５４６４～５４８４、１８１３～１８３３、２３７８～２３９８、３２４２～３２６２、５４４２～５４６２、１６６５～１６８５、１８１６～１８３６、４６６７～４６８７、３１８３～３２０３、３４２２～３４４２、３３２６～３３４６、２３７９～２３９９、３３３８～３３５８、５４４６～５４６６、５４４０～５４６０、５４１０～５４３０、３２４６～３２６６、３１８１～３２０１、２２９７～２３１７、２３８０～２４００、３３２８～３３４８、５４６０～５４８０、３１８４～３２０４、３４２０～３４４０、３３２１～３３４１、４５２９～４５４９、５４７３～５４９３、５４６６～５４８６、５４３９～５４５９、５３６９～５３８９、４５２８～４５４８、３３３８～３３５８、４６７０～４６９０、３４２１～３４４１、２２９８～２３１８、５４４４～５４６４、５４４８～５４６８、３３３７～３３５７、５４１５～５４３５、３３４０～３３６０、３３１８～３３３８、５２０７～５２２７、１８１２～１８３２、５４０９～５４２９、４６２９～４６４９、４６２８～４６４８、３３４４～３３６４、１８０９～１８２９、５４４３～５４６３、３２４４～３２６４、３１８０～３２００、３３２７～３３４７、４５２２～４５４２、２６６７～２６８７、４６６８～４６８８、４０８３～４１０３、５４４５～５４６５、２２９４～２３１４、４８４２～４８６２、５４３８～５４５８、４０８４～４１０４、２６６８～２６８８、４５２６～４５４６、４５２１～４５４１、５４５９～５４７９、３１８８～３２０８、５４６７～５４８７、５４４１～５４６１、４５１９～４５３９、４６６９～４６８９、５４５０～５４７０、３３４１～３３６１、５４５８～５４７８、４５２０～４５４０、４３２９～４３４９、４５２５～４５４５、４５２４～４５４４、５２０８～５２２８、５３０５～５３２５、４４７５～４４９５、２６６６～２６８６、４０８６～４１０６、４５２３～４５４３、４５２７～４５４７、４０８５～４１０５、５２５９～５２７９、５１８～５４０、５１９～５４１、５４６２～５４８４、１８１１～１８３３、２３７６～２３９８、３２４０～３２６２、５４４０～５４６２、１６６３～１６８５、１８１４～１８３６、４６６５～４６８７、３１８１～３２０３、３４２０～３４４２、３３２４～３３４６、２３７７～２３９９、３３３６～３３５８、５４４４～５４６６、５４３８～５４６０、５４０８～５４３０、３２４４～３２６６、３１７９～３２０１、２２９５～２３１７、２３７８～２４００、３３２６～３３４８、５４５８～５４８０、３１８２～３２０４、３４１８～３４４０、３３１９～３３４１、４５２７～４５４９、５４７１～５４９３、５４６４～５４８６、５４３７～５４５９、５３６７～５３８９、４５２６～４５４８、４６６８～４６９０、３４１９～３４４１、２２９６～２３１８、５４４２～５４６４、５４４６～５４６８、３３３５～３３５７、５４１３～５４３５、３３３８～３３６０、３３１６～３３３８、１８１０～１８３２、５４０７～５４２９、４６２７～４６４９、４６２６～４６４８、３３４２～３３６４、１８０７～１８２９、５４４１～５４６３、３２４２～３２６４、３１７８～３２００、３３２５～３３４７、４５２０～４５４２、２６６５～２６８７、４６６６～４６８８、４０８１～４１０３、５４４３～５４６５、２２９２～２３１４、４８４０～４８６２、５４３６～５４５８、４０８２～４１０４、２６６６～２６８８、４５２４～４５４６、４５１９～４５４１、５４５７～５４７９、３１８６～３２０８、５４６５～５４８７、５４３９～５４６１、４５１７～４５３９、４６６７～４６８９、５４４８～５４７０、３３３９～３３６１、５４５６～５４７８、４５１８～４５４０、４３２７～４３４９、４５２３～４５４５、４５２２～４５４４、５２０６～５２２８、５３０３～５３２５、４４７３～４４９５、２６６４～２６８６、４０８４～４１０６、４５２１～４５４３、４５２５～４５４７、４０８３～４１０５、および５２５７～５２７９の群から選択される配列番号１の断片に対してその全長にわたり少なくとも８０％、例えば、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相補的である、連続するヌクレオチド配列を含む。上記の列挙された範囲の間にある範囲も本開示の一部であることが企図される。 In some embodiments, the antisense polynucleotides disclosed herein are substantially complementary to a fragment of the target MAPT sequence, nucleotides 520-540, 521-541, 5464 of SEQ ID NO:1. ~5484, 1813-1833, 2378-2398, 3242-3262, 5442-5462, 1665-1685, 1816-1836, 4667-4687, 3183-3203, 3422-3442, 3326-3346, 2379-2399, 3338-3 358 . 4529 ~4549, 5473-5493, 5466-5486, 5439-5459, 5369-5389, 4528-4548, 3338-3358, 4670-4690, 3421-3441, 2298-2318, 5444-5464, 5448-5468, 3337-3 357 ,5415-5435,3340-3360,3318-3338,5207-5227,1812-1832,5409-5429,4629-4649,4628-4648,3344-3364,1809-1829,5443-5463,3244-3264, 3180 ~3200, 3327~3347, 4522~4542, 2667~2687, 4668~4688, 4083~4103, 5445~5465, 2294~2314, 4842~4862, 5438~5458, 4084~4104, 2668~2688, 4526~4 546 and 4525 ~4545, 4524~4544, 5208~5228, 5305~5325, 4475~4495, 2666~2686, 4086~4106, 4523~4543, 4527~4547, 4085~4105, 5259~5279, 518~540, 519~541 ,5462-5484,1811-1833,2376-2398,3240-3262,5440-5462,1663-1685,1814-1836,4665-4687,3181-3203,3420-3442,3324-3346,2377-2399, 3336 ~3358, 5444~5466, 5438~5460, 5408~5430, 3244~3266, 3179~3201, 2295~2317, 2378~2400, 3326~3348, 5458~5480, 3182~3204, 3418~3440, 3319~3 341 and 5413 ~5435, 3338~3360, 3316~3338, 1810~1832, 5407~5429, 4627~4649, 4626~4648, 3342~3364, 1807~1829, 5441~5463, 3242~3264, 3178~3200, 3325~3 347 ,4520-4542,2665-2687,4666-4688,4081-4103,5443-5465,2292-2314,4840-4862,5436-5458,4082-4104,2666-2688,4524-4546,4519-4541, 5457 ~5479, 3186-3208, 5465-5487, 5439-5461, 4517-4539, 4667-4689, 5448-5470, 3339-3361, 5456-5478, 4518-4540, 4327-4349, 4523-4545, 4522-4 544 , 5206-5228, 5303-5325, 4473-4495, 2664-2686, 4084-4106, 4521-4543, 4525-4547, 4083-4105, and 5257-5279. at least 80% over its entire length, such as about 85%, about 90%, about 91%, about 92%, about 93%, about 94%, about 95%, about 96%, about 97%, about 98%, or a contiguous nucleotide sequence that is about 99% complementary. Ranges between the above recited ranges are also contemplated as being part of this disclosure.

一部の実施形態において、本明細書に開示されるアンチセンスポリヌクレオチドは、標的ＭＡＰＴ配列の断片に対して実質的に相補的であり、配列番号１のヌクレオチド５２０～５４０、５２４～５４４、５２１～５４１、５２０７～５２２７、４６７０～４６９０、３４２０～３４４０、３３２８～３３４８、１６６５～１６８５、５４０９～５４２９、５４３９～５４５９、４５２７～４５４７、５４４１～５４６１、５４１０～５４３０、５４４６～５４６６、５４６７～５４８７、５３６９～５３８９、３４２１～３４４１、５４４２～５４６２、２３７９～２３９９、４７１５～４７３５、５４６４～５４８４、３２４４～３２６４、５４４０～５４６０、１８１２～１８３２、３１８１～３２０１、３３２７～３３４７、５４４８～５４６８、４５２９～４５４９、２３７８～２３９８、４６６８～４６８８、５４３８～５４５８、５４６５～５４８５、３３２６～３３４６、３１８０～３２００、５４５８～５４７８、３３２１～３３４１、３３３８～３３５８、３１８８～３２０８、２２９４～２３１４、４６２８～４６４８、５４１５～５４３５、５４５９～５４７９、３１８４～３２０４、２３７５～２３９５、３４２２～３４４２、３２４６～３２６６、３３３７～３３５７、２２９７～２３１７、４５２８～４５４８、３１８３～３２０３、５４５０～５４７０、５４４４～５４６４、５４６６～５４８６、２３８０～２４００、３２４２～３２６２、４５２０～４５４０、５４４５～５４６５、３３１８～３３３８、１８１６～１８３６、５４４３～５４６３、５４６０～５４８０、４８４２～４８６２、３３３８～３３５８、１８０９～１８２９、３４２３～３４４３、４７２０～４７４０、５２５９～５２７９、４０８４～４１０４、１８１３～１８３３、４５２２～４５４２、４８２２～４８４２、４５２３～４５４３、２２９８～２３１８、４５２１～４５４１、４０８６～４１０６、４５２４～４５４４、２６６８～２６８８、４６６７～４６８７、４０８３～４１０３、４０８５～４１０５、４６２９～４６４９、４３２９～４３４９、２６６７～２６８７、４４７５～４４９５、３３４４～３３６４、４６６９～４６８９、３３４０～３３６０、４５１９～４５３９、２６６６～２６８６、５２０８～５２２８、４５２６～４５４６、４５２５～４５４５、３３４１～３３６１、５１８～５４０、５２２～５４４、５１９～５４１、４６６８～４６９０、３４１８～３４４０、３３２６～３３４８、１６６３～１６８５、５４０７～５４２９、５４３７～５４５９、４５２５～４５４７、５４３９～５４６１、５４０８～５４３０、５４４４～５４６６、５４６５～５４８７、５３６７～５３８９、３４１９～３４４１、５４４０～５４６２、２３７７～２３９９、４７１３～４７３５、５４６２～５４８４、３２４２～３２６４、５４３８～５４６０、１８１０～１８３２、３１７９～３２０１、３３２５～３３４７、５４４６～５４６８、４５２７～４５４９、２３７６～２３９８、４６６６～４６８８、５４３６～５４５８、５４６３～５４８５、３３２４～３３４６、３１７８～３２００、５４５６～５４７８、３３１９～３３４１、３３３６～３３５８、３１８６～３２０８、２２９２～２３１４、４６２６～４６４８、５４１３～５４３５、５４５７～５４７９、３１８２～３２０４、２３７３～２３９５、３４２０～３４４２、３２４４～３２６６、３３３５～３３５７、２２９５～２３１７、４５２６～４５４８、３１８１～３２０３、５４４８～５４７０、５４４２～５４６４、５４６４～５４８６、２３７８～２４００、３２４０～３２６２、４５１８～４５４０、５４４３～５４６５、３３１６～３３３８、１８１４～１８３６、５４４１～５４６３、５４５８～５４８０、４８４０～４８６２、１８０７～１８２９、３４２１～３４４３、４７１８～４７４０、５２５７～５２７９、４０８２～４１０４、１８１１～１８３３、４５２０～４５４２、４８２０～４８４２、４５２１～４５４３、２２９６～２３１８、４５１９～４５４１、４０８４～４１０６、４５２２～４５４４、２６６６～２６８８、４６６５～４６８７、４０８１～４１０３、４０８３～４１０５、４６２７～４６４９、４３２７～４３４９、２６６５～２６８７、４４７３～４４９５、３３４２～３３６４、４６６７～４６８９、３３３８～３３６０、４５１７～４５３９、２６６４～２６８６、５２０６～５２２８、４５２４～４５４６、４５２３～４５４５、および３３３９～３３６１の群から選択される配列番号１の断片に対してその全長にわたり少なくとも８０％、例えば、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相補的である、連続するヌクレオチド配列を含む。上記の列挙された範囲の間にある範囲も本開示の一部であることが企図される。 In some embodiments, the antisense polynucleotides disclosed herein are substantially complementary to a fragment of the target MAPT sequence, nucleotides 520-540, 524-544, 521 of SEQ ID NO:1. ~541, 5207~5227, 4670~4690, 3420~3440, 3328~3348, 1665~1685, 5409~5429, 5439~5459, 4527~4547, 5441~5461, 5410~5430, 5446~5466, 5467~54 87 , 5369-5389,3421-3441,5442-5462,2379-2399,4715-4735,5464-5484,3244-3264,5440-5460,1812-1832,3181-3201,3327-3347,5448-5468, 4529 ~4549, 2378-2398, 4668-4688, 5438-5458, 5465-5485, 3326-3346, 3180-3200, 5458-5478, 3321-3341, 3338-3358, 3188-3208, 2294-2314, 4628-4 648 . 5466 ~5486, 2380~2400, 3242~3262, 4520~4540, 5445~5465, 3318~3338, 1816~1836, 5443~5463, 5460~5480, 4842~4862, 3338~3358, 1809~1829, 3423~3 443 ,4720-4740,5259-5279,4084-4104,1813-1833,4522-4542,4822-4842,4523-4543,2298-2318,4521-4541,4086-4106,4524-4544,2668-2688, 4667 ~4687, 4083-4103, 4085-4105, 4629-4649, 4329-4349, 2667-2687, 4475-4495, 3344-3364, 4669-4689, 3340-3360, 4519-4539, 2666-2686, 5208-5 228 , 4526-4546, 4525-4545, 3341-3361, 518-540, 522-544, 519-541, 4668-4690, 3418-3440, 3326-3348, 1663-1685, 5407-5429, 5437-5459, 4525 ~4547, 5439~5461, 5408~5430, 5444~5466, 5465~5487, 5367~5389, 3419~3441, 5440~5462, 2377~2399, 4713~4735, 5462~5484, 3242~3264, 5438~5 460 and 3319 ~3341, 3336~3358, 3186~3208, 2292~2314, 4626~4648, 5413~5435, 5457~5479, 3182~3204, 2373~2395, 3420~3442, 3244~3266, 3335~3357, 2295~2 317 , 4526-4548, 3181-3203, 5448-5470, 5442-5464, 5464-5486, 2378-2400, 3240-3262, 4518-4540, 5443-5465, 3316-3338, 1814-1836, 5441-5463 5458 ~5480, 4840~4862, 1807~1829, 3421~3443, 4718~4740, 5257~5279, 4082~4104, 1811~1833, 4520~4542, 4820~4842, 4521~4543, 2296~2318, 4519~4 541 ,4084-4106,4522-4544,2666-2688,4665-4687,4081-4103,4083-4105,4627-4649,4327-4349,2665-2687,4473-4495,3342-3364,4667-4689, 3338 at least 80% over its entire length for a fragment of SEQ ID NO: 1 selected from the group of -3360, 4517-4539, 2664-2686, 5206-5228, 4524-4546, 4523-4545, and 3339-3361, for example about 85%, about 90%, about 91%, about 92%, about 93%, about 94%, about 95%, about 96%, about 97%, about 98% or about 99% complementary contains a nucleotide sequence that Ranges between the above recited ranges are also contemplated as being part of this disclosure.

一部の実施形態において、本明細書に開示されるアンチセンスポリヌクレオチドは、標的ＭＡＰＴ配列の断片に実質的に相補的であり、その全長にわたり、配列番号１のヌクレオチド９７７～９９７、９８０～１０００、９７３～９９３、９８８～１００８、９８７～１００７、９７２～９９２、９７９～９９９、１００１～１０２１、９７６～９９６、９９４～１０１４、１００２～１０２２、９７８～９９８、９７４～９９４、５２０～５４０、５２１～５４１、５４６４～５４８４、１８１３～１８３３、２３７８～２３９８、３２４２～３２６２、５４４２～５４６２、１６６５～１６８５、５２４～５４４、５２０７～５２２７、４６７０～４６９０、３４２０～３４４０、３３２８～３３４８、５４０９～５４２９、５４３９～５４５９、４５２７～４５４７、５４４１～５４６１、５４１０～５４３０、および５４４６～５４６６の群から選択される配列番号１の断片に、少なくとも８０％相補的な、例えば約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相補的な、連続するヌクレオチド配列を含む。上記の列挙された範囲の間にある範囲も本開示の一部であることが企図される。 In some embodiments, the antisense polynucleotides disclosed herein are substantially complementary to a fragment of the target MAPT sequence, extending over its entire length from nucleotides 977-997, 980-1000 of SEQ ID NO:1. , 973-993, 988-1008, 987-1007, 972-992, 979-999, 1001-1021, 976-996, 994-1014, 1002-1022, 978-998, 974-994, 520-540, 521 ~ 541, 5464-5484, 1813-1833, 2378-398, 3242-3262, 5442-5462, 1665-685, 5207-544, 5207-527, 4670-4690, 3420-3440, 3328, 548, 548 ~ 5429 , 5439-5459, 4527-4547, 5441-5461, 5410-5430, and 5446-5466, at least 80% complementary, such as about 85%, about 90%, to a fragment of SEQ ID NO: 1 selected from the group It comprises about 91%, about 92%, about 93%, about 94%, about 95%, about 96%, about 97%, about 98%, or about 99% complementary contiguous nucleotide sequence. Ranges between the above recited ranges are also contemplated as being part of this disclosure.

一部の実施形態において、本明細書に開示されるアンチセンスポリヌクレオチドは、標的ＭＡＰＴ配列の断片に対して実質的に相補的であり、配列番号３のヌクレオチド５１２～５３２、５１３～５３３、５１４～５３４、５１５～５３５、５１６～５３６、５１７～５３７、５１８～５３８、５１９～５３９、５２０～５４０、１０６３～１０８３、１０６７～１０８７、１０７２～１０９２、１０７４～１０９４、１０７５～１０９５、１１２５～１１４５、１１２６～１１４６、１１２７～１１４７、１１２９～１１４９、１１７０～１１９０、１３９５～１４１５、１９０５～１９２５、１９０６～１９２６、１９０９～１９２９、１９１１～１９３１、１９１２～１９３２、１９１３～１９３３、１９１４～１９３４、１９１５～１９３５、１９１６～１９３６、１９１９～１９３９、１９５１～１９７１、１９５４～１９７４、１９５８～１９７８、２３８７～２４０７、２４０９～２４２９、２４１０～２４３０、２４６９～２４８９、２４７１～２４９１、２４７２～２４９２、２４７６～２４９６、２４７７～２４９７、２４７８～２４９８、２４８０～２５００、２４８１～２５０１、２４８２～２５０２、２４８４～２５０４、２７６２～２７８２、２７６４～２７８４、２７６６～２７８６、２７６７～２７８７、２７６８～２７８８、２７６９～２７８９、２８１９～２８３９、２８２１～２８４１、２８２８～２８４８、２９４３～２９６３、２９４４～２９６４、２９４６～２９６６、２９４７～２９６７、３２５２～３２７２、３２７７～３２９７、３２８０～３３００、３２８１～３３０１、３２８２～３３０２、３２８４～３３０４、３２８５～３３０５、３２８６～３３０６、３３３１～３３５１、３３３２～３３５２、３３３３～３３５３、３３３４～３３５４、３３３５～３３５５、３３３６～３３５６、３３３８～３３５８、３３４０～３３６０、３３４２～３３６２、３３４３～３３６３、３３４４～３３６４、３３４５～３３６５、３３４６～３３６６、３３４７～３３６７、３３４９～３３６９、３３５０～３３７０、３３５３～３３７３、３３６４～３３８４、３３６６～３３８６、３３６７～３３８７、３３６８～３３８８、３３６９～３３８９、３３７０～３３９０、３４１２～３４３２、３４１４～３４３４、３４１５～３４３５、３４１６～３４３６、３４１７～３４３７、３４１９～３４３９、３４２０～３４４０、３４２４～３４４４、３４２５～３４４５、３４２６～３４４６、３４２７～３４４７、３４２８～３４４８、３４２９～３４４９、３４３０～３４５０、３４３１～３４５１、３４３４～３４５４、４１３２～４１５２、４１３４～４１５４、４１７９～４１９９、４１８２～４２０２、４１８４～４２０４、４３９５～４４１５、４４２５～４４４５、４４２６～４４４６、４４２９～４４４９、４４６９～４４８９、４４７０～４４９０、４４７１～４４９１、４４７２～４４９２、４４７３～４４９３、４４７４～４４９４、４５６９～４５８９、４５７１～４５９１、４５７２～４５９２、４５９６～４６１６、４６２３～４６４３、４７２１～４７４１、４７２２～４７４２、４７２５～４７４５、４７２６～４７４６、４７６６～４７８６、４７６７～４７８７、４７６８～４７８８、４７６９～４７８９、４７７０～４７９０、４７７９～４７９９、４８０５～４８２５、４８０６～４８２６、４８０７～４８２７、４８０８～４８２８、４８０９～４８２９、４８１２～４８３２、４８１３～４８３３、４８１４～４８３４、４９３６～４９５６、５０７２～５０９２、５０７３～５０９３、５３４５～５３６５、５３４６～５３６６、５３４９～５３６９、５３５０～５３７０、５３５１～５３７１、５４６０～５４８０、５４６１～５４８１、５４６３～５４８３、５４６５～５４８５、５４６７～５４８７、５４６８～５４８８、５４６９～５４８９、５４７０～５４９０、５４７１～５４９１、５５０５～５５２５、５５０６～５５２６、５５０７～５５２７、５５０８～５５２８、５５０９～５５２９、５５１１～５５３１、５５１３～５５３３、５５１４～５５３４、５５４１～５５６１、５５４４～５５６４、５５４６～５５６６、５５４７～５５６７、５５４８～５５６８、５５５０～５５７０、５５５１～５５７１、５５７４～５５９４、５５７６～５５９６、５６１４～５６３４、５２１～５４１、５２２～５４２、５２３～５４３、５２４～５４４、５２５～５４５、５２６～５４６、５２７～５４７、５２８～５４８、５２９～５４９、５３０～５５０、５３１～５５１、５３２～５５２、５３３～５５３、５３４～５５４、５３５～５５５、５３６～５５６、１０３４～１０５４、１０３５～１０５５、１０３６～１０５６、１０３７～１０５７、１０３８～１０５８、１０３９～１０５９、１０４０～１０６０、１０４１～１０６１、１０４２～１０６２、１０４３～１０６３、１０４４～１０６４、１０４５～１０６５、１０４６～１０６６、１０４７～１０６７、１０４８～１０６８、１０４９～１０６９、１０５０～１０７０、１０５１～１０７１、１０５２～１０７２、１０５３～１０７３、１０５４～１０７４、１０６２～１０８２、１０６４～１０８４、１０６５～１０８５、１０６６～１０８６、１０６８～１０８８、１０６９～１０８９、１０７０～１０９０、１０７１～１０９１、１０７３～１０９３、１０７６～１０９６、１０７７～１０９７、１０７８～１０９８、１０７９～１０９９、１０８０～１１００、１０８１～１１０１、１０８２～１１０２、１１２８～１１４８、１１２９～１１４９、１１３０～１１５０、１１３１～１１５１、１１３２～１１５２、１１３３～１１５３、１１３４～１１５４、１１３５～１１５５、１１３６～１１５６、１１３７～１１５７、１１３８～１１５８、１１３９～１１５９、１１４０～１１６０、１１４１～１１６１、１１４２～１１６２、１１４３～１１６３、１１４４～１１６４、１１４５～１１６５、１１４６～１１６６、１１４７～１１６７、１１４８～１１６８、９７５～９９５、９７６～９９６、９７７～９９７、９７８～９９８、９７９～９９９、９８０～１０００、９８１～１００１、９８２～１００２、９８３～１００３、９８４～１００４、９８５～１００５、９８６～１００６、９８７～１００７、９８８～１００８、９８９～１００９、９９０～１０１０、９９１～１０１１、９９２～１０１２、９９３～１０１３、９９４～１０１４、９９５～１０１５、９９６～１０１６、９９７～１０１７、９９８～１０１８、９９９～１０１９、１０００～１０２０、１００１～１０２１、１００２～１０２２、１００３～１０２３、１００４～１０２４、１００５～１０２５、１００６～１０２６、１００７～１０２７、１００８～１０２８、１００９～１０２９、１０１０～１０３０、１０１１～１０３１、１０１２～１０３２、１０１３～１０３３、１０１４～１０３４、１０１５～１０３５、１０１６～１０３６、１０１７～１０３７、１０１８～１０３８、１０１９～１０３９、１０２０～１０４０、１０２１～１０４１、１０２２～１０４２、１０２３～１０４３、１０２４～１０４４、１０２５～１０４５、１０２６～１０４６、１０２７～１０４７、１０２８～１０４８、１０２９～１０４９、１０３０～１０５０、１０３１～１０５１、１０３２～１０５２、１０３３～１０５３、１０３４～１０５４、１０３５～１０５５、１０３６～１０５６、１０３７～１０５７、１０３８～１０５８、１０３９～１０５９、１０４０～１０６０、１０４１～１０６１、１０４２～１０６２、１０４３～１０６３、および１０４５～１０６５の群から選択される配列番号３の断片に対してその全長にわたり少なくとも８０％、例えば、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相補的である、連続するヌクレオチド配列を含む。上記の列挙された範囲の間にある範囲も本開示の一部であることが企図される。 In some embodiments, the antisense polynucleotides disclosed herein are substantially complementary to a fragment of the target MAPT sequence, nucleotides 512-532, 513-533, 514 of SEQ ID NO:3. ~534, 515~535, 516~536, 517~537, 518~538, 519~539, 520~540, 1063~1083, 1067~1087, 1072~1092, 1074~1094, 1075~1095, 1125~1145 ,1126-1146,1127-1147,1129-1149,1170-1190,1395-1415,1905-1925,1906-1926,1909-1929,1911-1931,1912-1932,1913-1933,1914-1934, 1915 ~1935, 1916~1936, 1919~1939, 1951~1971, 1954~1974, 1958~1978, 2387~2407, 2409~2429, 2410~2430, 2469~2489, 2471~2491, 2472~2492, 2476~2 496 and 2819 ~2839, 2821~2841, 2828~2848, 2943~2963, 2944~2964, 2946~2966, 2947~2967, 3252~3272, 3277~3297, 3280~3300, 3281~3301, 3282~3302, 3284~3 304 ,3285-3305,3286-3306,3331-3351,3332-3352,3333-3353,3334-3354,3335-3355,3336-3356,3338-3358,3340-3360,3342-3362,3343-3363, 3344 ~3364, 3345-3365, 3346-3366, 3347-3367, 3349-3369, 3350-3370, 3353-3373, 3364-3384, 3366-3386, 3367-3387, 3368-3388, 3369-3389, 3370-3 390 ,3412-3432,3414-3434,3415-3435,3416-3436,3417-3437,3419-3439,3420-3440,3424-3444,3425-3445,3426-3446,3427-3447,3428-3448, 3429 ~3449, 3430-3450, 3431-3451, 3434-3454, 4132-4152, 4134-4154, 4179-4199, 4182-4202, 4184-4204, 4395-4415, 4425-4445, 4426-4446, 4429-4 449 ,4469-4489,4470-4490,4471-4491,4472-4492,4473-4493,4474-4494,4569-4589,4571-4591,4572-4592,4596-4616,4623-4643,4721-4741, 4722 ~4742, 4725-4745, 4726-4746, 4766-4786, 4767-4787, 4768-4788, 4769-4789, 4770-4790, 4779-4799, 4805-4825, 4806-4826, 4807-4827, 4808-4 828 ,4809-4829,4812-4832,4813-4833,4814-4834,4936-4956,5072-5092,5073-5093,5345-5365,5346-5366,5349-5369,5350-5370,5351-5371, 5460 ~5480, 5461~5481, 5463~5483, 5465~5485, 5467~5487, 5468~5488, 5469~5489, 5470~5490, 5471~5491, 5505~5525, 5506~5526, 5507~5527, 5508~5 528 ,5509-5529,5511-5531,5513-5533,5514-5534,5541-5561,5544-5564,5546-5566,5547-5567,5548-5568,5550-5570,5551-5571,5574-5594, 5576 ~5596, 5614~5634, 521~541, 522~542, 523~543, 524~544, 525~545, 526~546, 527~547, 528~548, 529~549, 530~550, 531~551 , 532-552, 533-553, 534-554, 535-555, 536-556, 1034-1054, 1035-1055, 1036-1056, 1037-1057, 1038-1058, 1039-1059, 1040-1060, 1041 ~1061, 1042-1062, 1043-1063, 1044-1064, 1045-1065, 1046-1066, 1047-1067, 1048-1068, 1049-1069, 1050-1070, 1051-1071, 1052-1072, 1053-1 073 ,1054-1074,1062-1082,1064-1084,1065-1085,1066-1086,1068-1088,1069-1089,1070-1090,1071-1091,1073-1093,1076-1096,1077-1097, 1078 ~1098, 1079-1099, 1080-1100, 1081-1101, 1082-1102, 1128-1148, 1129-1149, 1130-1150, 1131-1151, 1132-1152, 1133-1153, 1134-1154, 1135-1 155 ,1136-1156,1137-1157,1138-1158,1139-1159,1140-1160,1141-1161,1142-1162,1143-1163,1144-1164,1145-1165,1146-1166,1147-1167, 1148 ~1168, 975-995, 976-996, 977-997, 978-998, 979-999, 980-1000, 981-1001, 982-1002, 983-1003, 984-1004, 985-1005, 986-1006 , 987-1007, 988-1008, 989-1009, 990-1010, 991-1011, 992-1012, 993-1013, 994-1014, 995-1015, 996-1016, 997-1017, 998-1018, 999 ~1019, 1000-1020, 1001-1021, 1002-1022, 1003-1023, 1004-1024, 1005-1025, 1006-1026, 1007-1027, 1008-1028, 1009-1029, 1010-1030, 1011-1 031 ,1012-1032,1013-1033,1014-1034,1015-1035,1016-1036,1017-1037,1018-1038,1019-1039,1020-1040,1021-1041,1022-1042,1023-1043, 1024 ~1044, 1025-1045, 1026-1046, 1027-1047, 1028-1048, 1029-1049, 1030-1050, 1031-1051, 1032-1052, 1033-1053, 1034-1054, 1035-1055, 1036-1 056 , 1037-1057, 1038-1058, 1039-1059, 1040-1060, 1041-1061, 1042-1062, 1043-1063, and 1045-1065 over its entire length at least 80%, such as about 85%, about 90%, about 91%, about 92%, about 93%, about 94%, about 95%, about 96%, about 97%, about 98%, or about 99% It includes a contiguous nucleotide sequence that is complementary. Ranges between the above recited ranges are also contemplated as being part of this disclosure.

一部の実施形態において、本明細書に開示されるアンチセンスポリヌクレオチドは、標的ＭＡＰＴ配列の断片に実質的に相補的であり、その全長にわたり、配列番号５のヌクレオチド１０６５～１０８５、１１９５～１２１５、１０６６～１０８６、１０６８～１０８８、７０５～７２５、１０６７～１０８７、４５２０～４５４０、３３４１～３３６１、４５１５～４５３５、５２８４～５３０４、５２８５～５３０５、３４４～３６４、５２８３～５３０３、５３５４～５３７４、２４５９～２４７９、１０６１～１０８１、７０６～７２６、９７２～９９２、４５６４～４５８４、９９５～１０１５、４５４６～４５６６、９６８～９８８、１１２７～１１４７、４５３４～４５５４、１５８～１７８、４４９４～４５１４、１６９１～１７１１、３５４４～３５６４、１９８～２１８、９７９～９９９、４５４８～４５６８、４５５１～４５７１、５４３～５６３、７１５～７３５、５４２～５６２、３５２～３７２、３６２～３８２、４５５６～４５７６、４５４７～４５６７、４５４２～４５６２、４５５８～４５７８、４５４９～４５６９、５０７４～５０９４、４５５２～４５７２、５０７３～５０９３、５０７６～５０９６、４５５０～４５７０、および２７５３～２７７３の群から選択される配列番号５の断片に、少なくとも８０％相補的な、例えば約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相補的な、連続するヌクレオチド配列を含む。上記の列挙された範囲の間にある範囲も本開示の一部であることが企図される。 In some embodiments, the antisense polynucleotides disclosed herein are substantially complementary to a fragment of the target MAPT sequence, extending over its entire length from nucleotides 1065-1085, 1195-1215 of SEQ ID NO:5. , 1066-1086, 1068 ~ 1088, 705-725, 1067-087, 4520-4540, 3341-3361, 4515-4535, 5284, 5304, 5285-5305, 344-364, 5374-5374-5374-5374 , 2459 ~2479, 1061-1081, 706-726, 972-992, 4564-4584, 995-1015, 4546-4566, 968-988, 1127-1147, 4534-4554, 158-178, 4494-4514, 1691-1711 , 3544-3564, 198-218, 979-999, 4548-4568, 4551-4571, 543-563, 715-735, 542-562, 352-372, 362-382, 4556-4576, 4547-4567, 4542 at least 80 fragments of SEQ ID NO:5 selected from the group of % complementary, such as about 85%, about 90%, about 91%, about 92%, about 93%, about 94%, about 95%, about 96%, about 97%, about 98%, or about 99% It includes complementary, contiguous nucleotide sequences. Ranges between the above recited ranges are also contemplated as being part of this disclosure.

他の実施形態において、本明細書に開示されるアンチセンスポリヌクレオチドは、標的ＭＡＰＴ配列に対して実質的に相補的であり、表３～８、１２、１３、および１６～２８のいずれか１つのいずれか１におけるセンス鎖ヌクレオチド配列のいずれか１つ、または表３～８、１２、１３、および１６～２８のいずれか１つにおけるセンス鎖ヌクレオチド配列のいずれか１つの断片に対してその全長にわたって少なくとも８０％、例えば、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または１００％相補的である、連続するヌクレオチド配列を含む。 In other embodiments, the antisense polynucleotides disclosed herein are substantially complementary to a target MAPT sequence, any one of Tables 3-8, 12, 13, and 16-28. any one of the sense strand nucleotide sequences in any one of Tables 3-8, 12, 13, and 16-28, or any one fragment of the sense strand nucleotide sequences in any one of Tables 3-8, 12, 13, and 16-28 at least 80%, such as about 85%, about 90%, about 91%, about 92%, about 93%, about 94%, about 95%, about 96%, about 97%, about 98%, about 99% , or a contiguous nucleotide sequence that is 100% complementary.

一実施形態において、本開示のＲＮＡｉ剤は、標的ＭＡＰＴ配列と同じであるアンチセンスポリヌクレオチドに対して実質的に相補的であるセンス鎖を含み、センス鎖ポリヌクレオチドは、配列番号１、３、５、７、９および１１、または配列番号１、３、５、７、９および１１のいずれか１つの断片の同等の領域に対してその全長にわたって少なくとも約８０％、例えば、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または１００％相補的である、連続するヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態において、本発明のｉＲＮＡは、標的ＭＡＰＴ配列に対して相補的であるアンチセンスポリヌクレオチドに対して実質的に相補的であるセンス鎖を含み、センス鎖ポリヌクレオチドは、表３～８、１２、１３、および１６～２８のいずれか１つのいずれか１つにおけるアンチセンス鎖ヌクレオチド配列のいずれか１つ、または表３～８、および１６～２８のいずれか１つにおけるアンチセンス鎖ヌクレオチド配列のいずれか１つの断片に対してその全長にわたって少なくとも８０％、例えば、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または１００％相補的である、連続するヌクレオチド配列を含む。 In one embodiment, an RNAi agent of the present disclosure comprises a sense strand that is substantially complementary to an antisense polynucleotide that is the same as the target MAPT sequence, wherein the sense strand polynucleotides are SEQ ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9 and 11, or at least about 80%, e.g., about 85%, about Contiguous nucleotides that are 90%, about 91%, about 92%, about 93%, about 94%, about 95%, about 96%, about 97%, about 98%, about 99%, or 100% complementary Contains arrays. In some embodiments, an iRNA of the invention comprises a sense strand that is substantially complementary to an antisense polynucleotide that is complementary to a target MAPT sequence, wherein the sense strand polynucleotide comprises a sequence according to Table 3. any one of the antisense strand nucleotide sequences in any one of any one of -8, 12, 13, and 16-28, or the antisense in any one of Tables 3-8, and 16-28 at least 80%, e.g., about 85%, about 90%, about 91%, about 92%, about 93%, about 94%, about 95%, about It includes contiguous nucleotide sequences that are 96%, about 97%, about 98%, about 99%, or 100% complementary.

特定の実施形態において、センスおよびアンチセンス鎖は、二重鎖ＡＤ－５２３７９９．１、ＡＤ－５２３８０２．１、ＡＤ－５２３７９５．１、ＡＤ－５２３８１０．１、ＡＤ－５２３８０９．１、ＡＤ－１０１９３３１．１、ＡＤ－５２３８０１．１、ＡＤ－５２３８２３．１、ＡＤ－５２３７９８．１、ＡＤ－５２３８１６．１、ＡＤ－５２３８２４．１、ＡＤ－５２３８００．１、ＡＤ－５２３７９６．１、ＡＤ－５２３８０３．１、ＡＤ－５２３８１７．１、ＡＤ－５２３８２５．１、ＡＤ－５２３８１１．１、ＡＤ－５２３８５４．１、ＡＤ－５２３７９７．１、ＡＤ－５２３８０５．１、ＡＤ－５２３８１４．１、ＡＤ－５２３８０４．１、ＡＤ－１０１９３５６．１、ＡＤ－５２３８４６．１、ＡＤ－５２３８０８．１、ＡＤ－５２３８３５．１、ＡＤ－１０１９３５７．１、ＡＤ－５２３８５３．１、ＡＤ－５２３８１９．１、ＡＤ－５２３８３０．１、ＡＤ－５２３８３４．１、ＡＤ－５２３８５０．１、ＡＤ－５２３８２０．１、ＡＤ－５２３８４９．１、ＡＤ－５２３８４５．１、ＡＤ－３９３７５８．３、ＡＤ－５２３８４８．１、ＡＤ－５２３８４０．１、ＡＤ－５２３８２８．１、ＡＤ－５２３８２２．１、ＡＤ－５２３８０６．１、ＡＤ－５２３８３１．１、ＡＤ－３９３７５７．１、ＡＤ－５２３８３９．１、ＡＤ－５２３８１５．１、ＡＤ－５２３８５６．１、ＡＤ－１０１９３３０．１、ＡＤ－５２３８２９．１、ＡＤ－５２３８５５．１、ＡＤ－５２３８３６．１、ＡＤ－１０１９３２９．１、ＡＤ－５２３８４３．１、ＡＤ－５２３８０７．１、ＡＤ－５２３８２１．１、ＡＤ－５２３８２６．１、ＡＤ－５２３８４７．１、ＡＤ－５２３７８６．１、ＡＤ－５２３８１２．１、ＡＤ－５２３８２７．１、ＡＤ－５２３８４４．１、ＡＤ－５２３８５１．１、ＡＤ－５２３８１８．１、ＡＤ－５２３８３２．１、ＡＤ－５２３８１３．１、ＡＤ－５２３８４１．１、ＡＤ－１０１９３５２．１、ＡＤ－１０１９３５４．１、ＡＤ－５２３８５２．１、ＡＤ－５２３８４２．１、ＡＤ－５２３８３３．１、ＡＤ－１０１９３２８．１、ＡＤ－１０１９３５５．１、ＡＤ－１０１９３５３．１、ＡＤ－１０１９３５０．１、およびＡＤ－１０１９３５１．１のいずれか１つから選択される。特定の実施形態において、センスおよびアンチセンス鎖は、二重鎖ＡＤ－５３５０９４．１、ＡＤ－５３５０９４．１、ＡＤ－５３５０９５．１、ＡＤ－５３８６４７．１、ＡＤ－５３５９２２．１、ＡＤ－５３６３１７．１、ＡＤ－５３６９１１．１、ＡＤ－５３８６２６．１およびＡＤ－５３５８６４．１のいずれか１つから選択される。 In certain embodiments, the sense and antisense strands are double stranded AD-523799.1, AD-523802.1, AD-523795.1, AD-523810.1, AD-523809.1, AD-1019331. 1, AD-523801.1, AD-523823.1, AD-523798.1, AD-523816.1, AD-523824.1, AD-523800.1, AD-523796.1, AD-523803.1, AD-523817.1, AD-523825.1, AD-523811.1, AD-523854.1, AD-523797.1, AD-523805.1, AD-523814.1, AD-523804.1, AD- 1019356.1, AD-523846.1, AD-523808.1, AD-523835.1, AD-1019357.1, AD-523853.1, AD-523819.1, AD-523830.1, AD-523834. 1, AD-523850.1, AD-523820.1, AD-523849.1, AD-523845.1, AD-393758.3, AD-523848.1, AD-523840.1, AD-523828.1, AD-523822.1, AD-523806.1, AD-523831.1, AD-393757.1, AD-523839.1, AD-523815.1, AD-523856.1, AD-1019330.1, AD- 523829.1, AD-523855.1, AD-523836.1, AD-1019329.1, AD-523843.1, AD-523807.1, AD-523821.1, AD-523826.1, AD-523847. 1, AD-523786.1, AD-523812.1, AD-523827.1, AD-523844.1, AD-523851.1, AD-523818.1, AD-523832.1, AD-523813.1, AD-523841.1, AD-1019352.1, AD-1019354.1, AD-523852.1, AD-523842.1, AD-523833.1, AD-1019328.1, AD-1019355.1, AD- 1019353.1, AD-1019350.1, and AD-1019351.1. In certain embodiments, the sense and antisense strands are double stranded AD-535094.1, AD-535094.1, AD-535095.1, AD-538647.1, AD-535922.1, AD-536317. 1, AD-536911.1, AD-538626.1 and AD-535864.1.

特定の実施形態において、センスおよびアンチセンス鎖は、二重鎖ＡＤ－５３５０９４．１、ＡＤ－５３５０９４．１、ＡＤ－５３５０９５．１、ＡＤ－５３８６４７．１、ＡＤ－５３５９２２．１、ＡＤ－５３６３１７．１、ＡＤ－５３６９１１．１、ＡＤ－５３８６２６．１、ＡＤ－５３５８６４．１、ＡＤ－５３５９２５．１、ＡＤ－５３８０１２．１、ＡＤ－５３６８７２．１、ＡＤ－５３６９５４．１、ＡＤ－５３６９６４．１、ＡＤ－５３６３１８．１、ＡＤ－５３６９７６．１、ＡＤ－５３８６３０．１、ＡＤ－５３８６２４．１、ＡＤ－５３８５９４．１、ＡＤ－５３６９１５．１、ＡＤ－５３６８７０．１、ＡＤ－５３６２３６．１、ＡＤ－５３６３１９．１、ＡＤ－５３６９６６．１、ＡＤ－５３８６４３．１、ＡＤ－５３６８７３．１、ＡＤ－５３６９５２．１、ＡＤ－５３６９５９．１、ＡＤ－５３７９２１．１、ＡＤ－５３８６５２．１、ＡＤ－５３８６４９．１、ＡＤ－５３８６２３．１、ＡＤ－５３８５７３．１、ＡＤ－５３７９２０．１、ＡＤ－５３６９３９．１、ＡＤ－５３８０１５．１、ＡＤ－５３６９５３．１、ＡＤ－５３６２３７．１、ＡＤ－５３８６２８．１、ＡＤ－５３８６３２．１、ＡＤ－５３６９７５．１、ＡＤ－５３８５９９．１、ＡＤ－５３６９７８．１、ＡＤ－５３６９５６．１、ＡＤ－５３８５７１．１、ＡＤ－５３５９２１．１、ＡＤ－５３８５９３．１、ＡＤ－５３７９７４．１、ＡＤ－５３７９７３．１、ＡＤ－５３６９８２．１、ＡＤ－５３５９１８．１、ＡＤ－５３８６２７．１、ＡＤ－５３６９１３．１、ＡＤ－５３６８６９．１、ＡＤ－５３６９６５．１、ＡＤ－５３７９１４．１、ＡＤ－５３６５０４．１、ＡＤ－５３８０１３．１、ＡＤ－５３７５７９．１、ＡＤ－５３８６２９．１、ＡＤ－５３６２３３．１、ＡＤ－５３８１４１．１、ＡＤ－５３８６２２．１、ＡＤ－５３７５８０．１、ＡＤ－５３６５０５．１、ＡＤ－５３７９１８．１、ＡＤ－５３７９１３．１、ＡＤ－５３８６４２．１、ＡＤ－５３６８７７．１、ＡＤ－５３８６５０．１、ＡＤ－５３８６２５．１、ＡＤ－５３７９１１．１、ＡＤ－５３８０１４．１、ＡＤ－５３８６３４．１、ＡＤ－５３６９７９．１、ＡＤ－５３８６４１．１、ＡＤ－５３７９１２．１、ＡＤ－５３７７６１．１、ＡＤ－５３７９１７．１、ＡＤ－５３７９１６．１、ＡＤ－５３８４３２．１、ＡＤ－５３８５２９．１、ＡＤ－５３７８６７．１、ＡＤ－５３６５０３．１、ＡＤ－５３７５８２．１、ＡＤ－５３７９１５．１、ＡＤ－５３７９１９．１、ＡＤ－５３７５８１．１、およびＡＤ－５３８４８３．１のいずれか１つから選択される。特定の実施形態において、センスおよびアンチセンス鎖は、二重鎖ＡＤ－５３５０９４．１、ＡＤ－５３５０９４．１、ＡＤ－５３５０９５．１、ＡＤ－５３８６４７．１、ＡＤ－５３５９２２．１、ＡＤ－５３６３１７．１、ＡＤ－５３６９１１．１、ＡＤ－５３８６２６．１、およびＡＤ－５３５８６４．１のいずれか１つから選択される。 In certain embodiments, the sense and antisense strands are double stranded AD-535094.1, AD-535094.1, AD-535095.1, AD-538647.1, AD-535922.1, AD-536317. 1, AD-536911.1, AD-538626.1, AD-535864.1, AD-535925.1, AD-538012.1, AD-536872.1, AD-536954.1, AD-536964.1, AD-536318.1, AD-536976.1, AD-538630.1, AD-538624.1, AD-538594.1, AD-536915.1, AD-536870.1, AD-536236.1, AD- 536319.1, AD-536966.1, AD-538643.1, AD-536873.1, AD-536952.1, AD-536959.1, AD-537921.1, AD-538652.1, AD-538649. 1, AD-538623.1, AD-538573.1, AD-537920.1, AD-536939.1, AD-538015.1, AD-536953.1, AD-536237.1, AD-538628.1, AD-538632.1, AD-536975.1, AD-538599.1, AD-536978.1, AD-536956.1, AD-538571.1, AD-535921.1, AD-538593.1, AD- 537974.1, AD-537973.1, AD-536982.1, AD-535918.1, AD-538627.1, AD-536913.1, AD-536869.1, AD-536965.1, AD-537914. 1, AD-536504.1, AD-538013.1, AD-537579.1, AD-538629.1, AD-536233.1, AD-538141.1, AD-538622.1, AD-537580.1, AD-536505.1, AD-537918.1, AD-537913.1, AD-538642.1, AD-536877.1, AD-538650.1, AD-538625.1, AD-537911.1, AD- 538014.1, AD-538634.1, AD-536979.1, AD-538641.1, AD-537912.1, AD-537761.1, AD-537917.1, AD-537916.1, AD-538432. 1, AD-538529.1, AD-537867.1, AD-536503.1, AD-537582.1, AD-537915.1, AD-537919.1, AD-537581.1, and AD-538483.1 is selected from any one of In certain embodiments, the sense and antisense strands are double stranded AD-535094.1, AD-535094.1, AD-535095.1, AD-538647.1, AD-535922.1, AD-536317. 1, AD-536911.1, AD-538626.1, and AD-535864.1.

特定の実施形態において、センスおよびアンチセンス鎖は、二重鎖ＡＤ－５２３５６１．１、ＡＤ－５２３５６５．１、ＡＤ－５２３５６２．１、ＡＤ－５２６９１４．１、ＡＤ－５２６３９４．１、ＡＤ－３９５４５２．１、ＡＤ－５２５３４３．１、ＡＤ－５２４２７４．１、ＡＤ－５２６９５６．１、ＡＤ－５２６９８６．１、ＡＤ－５２６２９６．１、ＡＤ－５２６９８８．１、ＡＤ－５２６９５７．１、ＡＤ－５２６９９３．１、ＡＤ－５２７０１３．１、ＡＤ－５２６９３６．１、ＡＤ－３９５４５３．１、ＡＤ－５２６９８９．１、ＡＤ－５２４７１９．１、ＡＤ－５２６４２３．１、ＡＤ－５２７０１０．１、ＡＤ－５２５３０５．１、ＡＤ－５２６９８７．１、ＡＤ－５２４３３１．１、ＡＤ－５２５２６６．１、ＡＤ－５２５３４２．１、ＡＤ－５２６９９５．１、ＡＤ－５２６２９８．１、ＡＤ－５２４７１８．１、ＡＤ－５２６３９２．１、ＡＤ－５２６９８５．１、ＡＤ－５２７０１１．１、ＡＤ－５２５３４１．１、ＡＤ－５２５２６５．１、ＡＤ－５２７００４．１、ＡＤ－５２５３３６．１、ＡＤ－５２５３５３．１、ＡＤ－５２５２７３．１、ＡＤ－５２４６３８．１、ＡＤ－５２６３５０．１、ＡＤ－５２６９６２．１、ＡＤ－５２７００５．１、ＡＤ－５２５２６９．１、ＡＤ－５２４７１５．１、ＡＤ－３９５４５４．１、ＡＤ－５２５３０７．１、ＡＤ－５２５３５２．１、ＡＤ－５２４６４１．１、ＡＤ－５２６２９７．１、ＡＤ－５２５２６８．１、ＡＤ－５２６９９７．１、ＡＤ－５２６９９１．１、ＡＤ－５２７０１２．１、ＡＤ－５２４７２０．１、ＡＤ－５２５３０３．１、ＡＤ－５２６２８９．１、ＡＤ－５２６９９２．１、ＡＤ－５２５３３３．１、ＡＤ－５２４３３５．１、ＡＤ－５２６９９０．１、ＡＤ－５２７００６．１、ＡＤ－５２６５０５．１、ＡＤ－５２５３０９．１、ＡＤ－５２４３２８．１、ＡＤ－３９５４５５．１、ＡＤ－５２６４２８．１、ＡＤ－５２６８４７．１、ＡＤ－５２５９５７．１、ＡＤ－５２４３３２．１、ＡＤ－５２６２９１．１、ＡＤ－５２６４８５．１、ＡＤ－５２６２９２．１、ＡＤ－５２４６４２．１、ＡＤ－５２６２９０．１、ＡＤ－５２５９５９．１、ＡＤ－５２６２９３．１、ＡＤ－５２４８９９．１、ＡＤ－５２６３９１．１、ＡＤ－５２５９５６．１、ＡＤ－５２５９５８．１、ＡＤ－５２６３５１．１、ＡＤ－５２６１３８．１、ＡＤ－５２４８９８．１、ＡＤ－５２６２４４．１、ＡＤ－５２５３５９．１、ＡＤ－５２６３９３．１、ＡＤ－５２５３５５．１、ＡＤ－５２６２８８．１、ＡＤ－５２４８９７．１、ＡＤ－５２６７９６．１、ＡＤ－５２６２９５．１、ＡＤ－５２６２９４．１、およびＡＤ－５２５３５６．１のいずれか１つから選択される。特定の実施形態において、センスおよびアンチセンス鎖は、二重鎖ＡＤ－５２３５６１．１、ＡＤ－５２３５６５．１、ＡＤ－５２３５６２．１、ＡＤ－５２６９１４．１、ＡＤ－５２６３９４．１、ＡＤ－３９５４５２．１、ＡＤ－５２５３４３．１、ＡＤ－５２４２７４．１、ＡＤ－５２６９５６．１、ＡＤ－５２６９８６．１、ＡＤ－５２６２９６．１、ＡＤ－５２６９８８．１、ＡＤ－５２６９５７．１、およびＡＤ－５２６９９３．１のいずれか１つから選択される。 In certain embodiments, the sense and antisense strands are double stranded AD-523561.1, AD-523565.1, AD-523562.1, AD-526914.1, AD-526394.1, AD-395452. 1, AD-525343.1, AD-524274.1, AD-526956.1, AD-526986.1, AD-526296.1, AD-526988.1, AD-526957.1, AD-526993.1, AD-527013.1, AD-526936.1, AD-395453.1, AD-526989.1, AD-524719.1, AD-526423.1, AD-527010.1, AD-525305.1, AD- 526987.1, AD-524331.1, AD-525266.1, AD-525342.1, AD-526995.1, AD-526298.1, AD-524718.1, AD-526392.1, AD-526985. 1, AD-527011.1, AD-525341.1, AD-525265.1, AD-527004.1, AD-525336.1, AD-525353.1, AD-525273.1, AD-524638.1, AD-526350.1, AD-526962.1, AD-527005.1, AD-525269.1, AD-524715.1, AD-395454.1, AD-525307.1, AD-525352.1, AD- 524641.1, AD-526297.1, AD-525268.1, AD-526997.1, AD-526991.1, AD-527012.1, AD-524720.1, AD-525303.1, AD-526289. 1, AD-526992.1, AD-525333.1, AD-524335.1, AD-526990.1, AD-527006.1, AD-526505.1, AD-525309.1, AD-524328.1, AD-395455.1, AD-526428.1, AD-526847.1, AD-525957.1, AD-524332.1, AD-526291.1, AD-526485.1, AD-526292.1, AD- 524642.1, AD-526290.1, AD-525959.1, AD-526293.1, AD-524899.1, AD-526391.1, AD-525956.1, AD-525958.1, AD-526351. 1, AD-526138.1, AD-524898.1, AD-526244.1, AD-525359.1, AD-526393.1, AD-525355.1, AD-526288.1, AD-524897.1, is selected from any one of AD-526796.1, AD-526295.1, AD-526294.1, and AD-525356.1; In certain embodiments, the sense and antisense strands are double stranded AD-523561.1, AD-523565.1, AD-523562.1, AD-526914.1, AD-526394.1, AD-395452. 1, AD-525343.1, AD-524274.1, AD-526956.1, AD-526986.1, AD-526296.1, AD-526988.1, AD-526957.1, and AD-526993.1 is selected from any one of

特定の実施形態において、センスおよびアンチセンス鎖は、二重鎖ＡＤ－３９３７５８．１、ＡＤ－３９３８８８．１、ＡＤ－３９３７５９．１、ＡＤ－３９３７６１．１、ＡＤ－３９３４９５．１、ＡＤ－３９３７６０．１、ＡＤ－３９６４２５．１、ＡＤ－３９５４４１．１、ＡＤ－３９６４２０．１、ＡＤ－３９７１０３．１、ＡＤ－３９７１０４．１、ＡＤ－３９３２３９．１、ＡＤ－３９７１０２．１、ＡＤ－３９７１６７．１、ＡＤ－３９４７９１．１、ＡＤ－３９３７５４．１、ＡＤ－３９３４９６．１、ＡＤ－３９３６６７．１、ＡＤ－３９６４６７．１、ＡＤ－３９３６９０．１、ＡＤ－３９６４４９．１、ＡＤ－３９３６６３．１、ＡＤ－３９３８２０．１、ＡＤ－３９６４３７．１、ＡＤ－３９３０８４．１、ＡＤ－３９６４０１．１、ＡＤ－３９４２９６．１、ＡＤ－３９５５７４．１、ＡＤ－３９３１２４．１、ＡＤ－３９３６７４．１、ＡＤ－３９６４５１．１、ＡＤ－３９６４５４．１、ＡＤ－３９３３７６．１、ＡＤ－３９３５０５．１、ＡＤ－３９３３７５．１、ＡＤ－３９３２４７．１、ＡＤ－３９３２５７．１、ＡＤ－３９６４５９．１、ＡＤ－３９６４５０．１、ＡＤ－３９６４４５．１、ＡＤ－３９６４６１．１、ＡＤ－３９６４５２．１、ＡＤ－３９６９１３．１、ＡＤ－３９６４５５．１、ＡＤ－３９６９１２．１、ＡＤ－３９６９１５．１、ＡＤ－３９６４５３．１、およびＡＤ－３９４９９１．１のいずれか１つから選択される。 In certain embodiments, the sense and antisense strands are double stranded AD-393758.1, AD-393888.1, AD-393759.1, AD-393761.1, AD-393495.1, AD-393760. 1, AD-396425.1, AD-395441.1, AD-396420.1, AD-397103.1, AD-397104.1, AD-393239.1, AD-397102.1, AD-397167.1, AD-394791.1, AD-393754.1, AD-393496.1, AD-393667.1, AD-396467.1, AD-393690.1, AD-396449.1, AD-393663.1, AD- 393820.1, AD-396437.1, AD-393084.1, AD-396401.1, AD-394296.1, AD-395574.1, AD-393124.1, AD-393674.1, AD-396451. 1, AD-396454.1, AD-393376.1, AD-393505.1, AD-393375.1, AD-393247.1, AD-393257.1, AD-396459.1, AD-396450.1, AD-396445.1, AD-396461.1, AD-396452.1, AD-396913.1, AD-396455.1, AD-396912.1, AD-396915.1, AD-396453.1, and AD -394991.1.

一実施形態において、センスおよびアンチセンス鎖は、二重鎖ＡＤ－１３９７０７０．１、ＡＤ－１３９７０７０．２、ＡＤ－１３９７０７１．１、ＡＤ－１３９７０７１．２、ＡＤ－１３９７０７２．１、ＡＤ－１３９７０７２．２、ＡＤ－１３９７０７３．１、ＡＤ－１３９７０７３．２、ＡＤ－１３９７０７４．１、ＡＤ－１３９７０７４．２、ＡＤ－１３９７０７５．１、ＡＤ－１３９７０７５．２、ＡＤ－１３９７０７６．１、ＡＤ－１３９７０７６．２、ＡＤ－１３９７０７７．１、ＡＤ－１３９７０７７．２、ＡＤ－１３９７０７８．１、ＡＤ－１３９７０７８．２、ＡＤ－１３９７２５０．１、ＡＤ－１３９７２５１．１、ＡＤ－１３９７２５２．１、ＡＤ－１３９７２５３．１、ＡＤ－１３９７２５４．１、ＡＤ－１３９７２５５．１、ＡＤ－１３９７２５６．１、ＡＤ－１３９７２５７．１、ＡＤ－１３９７２５８．１、ＡＤ－１３９７２５９．１、ＡＤ－１３９７２６０．１、ＡＤ－１３９７２６１．１、ＡＤ－１３９７２６２．１、ＡＤ－１３９７２６３．１、ＡＤ－１３９７２６４．１、ＡＤ－１３９７２６５．１、ＡＤ－１４２３２４２．１、ＡＤ－１４２３２４３．１、ＡＤ－１４２３２４４．１、ＡＤ－１４２３２４５．１、ＡＤ－１４２３２４６．１、ＡＤ－１４２３２４７．１、ＡＤ－１４２３２４８．１、ＡＤ－１４２３２４９．１、ＡＤ－１４２３２５０．１、ＡＤ－１４２３２５１．１、ＡＤ－１４２３２５２．１、ＡＤ－１４２３２５３．１、ＡＤ－１４２３２５４．１、ＡＤ－１４２３２５５．１、ＡＤ－１４２３２５６．１、ＡＤ－１４２３２５７．１、ＡＤ－１４２３２５８．１、ＡＤ－１４２３２５９．１、ＡＤ－１４２３２６０．１、ＡＤ－１４２３２６１．１、ＡＤ－１４２３２６２．１、ＡＤ－１４２３２６３．１、ＡＤ－１４２３２６４．１、ＡＤ－１４２３２６５．１、ＡＤ－１４２３２６６．１、ＡＤ－１４２３２６７．１、ＡＤ－１４２３２６８．１、ＡＤ－１４２３２６９．１、ＡＤ－１４２３２７０．１、ＡＤ－１４２３２７１．１、ＡＤ－１４２３２７２．１、ＡＤ－１４２３２７３．１、ＡＤ－１４２３２７４．１、ＡＤ－１４２３２７５．１、ＡＤ－１４２３２７６．１、ＡＤ－１４２３２７７．１、ＡＤ－１４２３２７８．１、ＡＤ－１４２３２７９．１、ＡＤ－１４２３２８０．１、ＡＤ－１４２３２８１．１、ＡＤ－１４２３２８２．１、ＡＤ－１４２３２８３．１、ＡＤ－１４２３２８４．１、ＡＤ－１４２３２８５．１、ＡＤ－１４２３２８６．１、ＡＤ－１４２３２８７．１、ＡＤ－１４２３２８８．１、ＡＤ－１４２３２８９．１、ＡＤ－１４２３２９０．１、ＡＤ－１４２３２９１．１、ＡＤ－１４２３２９２．１、ＡＤ－１４２３２９３．１、ＡＤ－１４２３２９４．１、ＡＤ－１４２３２９５．１、ＡＤ－１４２３２９６．１、ＡＤ－１４２３２９７．１、ＡＤ－１４２３２９８．１、ＡＤ－１４２３２９９．１、ＡＤ－１４２３３００．１、ＡＤ－１３９７２６６．１、ＡＤ－１３９７２６６．２、ＡＤ－１３９７２６７．１、ＡＤ－１４２３３０１．１、ＡＤ－１３９７２６８．１、ＡＤ－１３９７２６８．２、ＡＤ－１３９７２６９．１、ＡＤ－１４２３３０２．１、ＡＤ－１３９７２７０．１、ＡＤ－１３９７２７０．２、ＡＤ－１３９７２７１．１、ＡＤ－１３９７２７１．２、ＡＤ－１３９７２７２．１、ＡＤ－１４２３３０３．１、ＡＤ－１３９７２７３．１、ＡＤ－１４２３３０４．１、ＡＤ－１３９７２７４．１、ＡＤ－１４２３３０５．１、ＡＤ－１３９７２７５．１、ＡＤ－１４２３３０６．１、ＡＤ－１３９７２７６．１、ＡＤ－１３９７２７７．１、ＡＤ－１３９７２７７．２、ＡＤ－１３９７２７８．１、ＡＤ－１３９７２７９．１、ＡＤ－１３９７２８０．１、ＡＤ－１３９７２８１．１、ＡＤ－１３９７２８２．１、ＡＤ－１３９７２８３．１、ＡＤ－１３９７２８４．１、ＡＤ－１３９７２８５．１、ＡＤ－１３９７２８６．１、ＡＤ－１３９７２８７．１、ＡＤ－１３９７０７９．１、ＡＤ－１３９７０７９．２、ＡＤ－１３９７２８８．１、ＡＤ－１３９７２８９．１、ＡＤ－１３９７２９０．１、ＡＤ－１３９７０８０．１、ＡＤ－１３９７０８０．２、ＡＤ－１３９７２９１．１、ＡＤ－１３９７２９２．１、ＡＤ－１３９７２９３．１、ＡＤ－１３９７２９４．１、ＡＤ－１３９７０８１．１、ＡＤ－１３９７０８１．２、ＡＤ－１３９７２９５．１、ＡＤ－１３９７０８２．１、ＡＤ－１３９７０８２．２、ＡＤ－１３９７０８３．１、ＡＤ－１３９７０８３．２、ＡＤ－１３９７２９６．１、ＡＤ－１３９７２９７．１、ＡＤ－１３９７２９８．１、ＡＤ－１３９７２９９．１、ＡＤ－１３９７３００．１、ＡＤ－１３９７３０１．１、ＡＤ－１３９７３０２．１、ＡＤ－１３９７０８４．１、ＡＤ－１３９７０８５．１、ＡＤ－１３９７０８６．１、ＡＤ－１３９７３０３．１、ＡＤ－１３９７０８７．１、ＡＤ－１３９７０８７．２、ＡＤ－１３９７３０４．１、ＡＤ－１３９７３０５．１、ＡＤ－１３９７３０６．１、ＡＤ－１３９７３０７．１、ＡＤ－１３９７３０８．１、ＡＤ－１３９７３０９．１、ＡＤ－１３９７３１０．１、ＡＤ－１３９７３１１．１、ＡＤ－１３９７３１２．１、ＡＤ－１３９７３１３．１、ＡＤ－１３９７３１４．１、ＡＤ－１３９７３１５．１、ＡＤ－１３９７３１６．１、ＡＤ－１３９７３１７．１、ＡＤ－１３９７３１８．１、ＡＤ－１３９７３１９．１、ＡＤ－１３９７３２０．１、ＡＤ－１３９７３２１．１、ＡＤ－１３９７３２２．１、ＡＤ－１３９７０８８．１、ＡＤ－１３９７０８９．１、ＡＤ－１３９７０９０．１、ＡＤ－１３９７０９１．１、ＡＤ－１３９７０９２．１、ＡＤ－１３９７０９３．１、ＡＤ－１３９７０９４．１、ＡＤ－１３９７０９５．１、ＡＤ－１３９７０９６．１、ＡＤ－１３９７０９７．１、ＡＤ－１３９７０９８．１、ＡＤ－１３９７０９９．１、ＡＤ－１３９７１０１．１、ＡＤ－１３９７１０２．１、ＡＤ－１３９７１０３．１、ＡＤ－１３９７１０４．１、ＡＤ－１３９７１０５．１、ＡＤ－１３９７１０６．１、ＡＤ－１３９７１０７．１、ＡＤ－１３９７１０８．１、ＡＤ－１３９７１０９．１、ＡＤ－１３９７１１０．１、ＡＤ－１３９７１１１．１、ＡＤ－１３９７１１２．１、ＡＤ－１３９７１１３．１、ＡＤ－１３９７１１４．１、ＡＤ－１３９７１１５．１、ＡＤ－１３９７１１６．１、ＡＤ－１３９７１１７．１、ＡＤ－１３９７１１８．１、ＡＤ－１３９７１１９．１、ＡＤ－１３９７１２０．１、ＡＤ－１３９７１２１．１、ＡＤ－１３９７１２２．１、ＡＤ－１３９７１２３．１、ＡＤ－１３９７１２４．１、ＡＤ－１３９７１２５．１、ＡＤ－１３９７１２６．１、ＡＤ－１３９７１２７．１、ＡＤ－１３９７１２８．１、ＡＤ－１３９７１２９．１、ＡＤ－１３９７１３０．１、ＡＤ－１３９７１３１．１、ＡＤ－１３９７１３２．１、ＡＤ－１３９７１３３．１、ＡＤ－１３９７１３４．１、ＡＤ－１３９７１３５．１、ＡＤ－１３９７１３６．１、ＡＤ－１３９７１３７．１、ＡＤ－１３９７１３８．１、ＡＤ－１３９７１３９．１、ＡＤ－１３９７１４０．１、ＡＤ－１３９７１４１．１、ＡＤ－１３９７１４２．１、ＡＤ－１３９７１４３．１、ＡＤ－１３９７１４４．１、ＡＤ－１３９７１４５．１、ＡＤ－１３９７１４６．１、ＡＤ－１３９７１４７．１、ＡＤ－１３９７１４８．１、ＡＤ－１３９７１４９．１、ＡＤ－１３９７１５０．１、ＡＤ－１３９７１５１．１、ＡＤ－１３９７１５２．１、ＡＤ－１３９７１５３．１、ＡＤ－１３９７１５４．１、ＡＤ－１３９７１５５．１、ＡＤ－１３９７１５６．１、ＡＤ－１３９７１５７．１、ＡＤ－１３９７１５８．１、ＡＤ－１３９７１５９．１、ＡＤ－１３９７１６０．１、ＡＤ－１３９７１６１．１、ＡＤ－１３９７１６２．１、ＡＤ－１３９７１６３．１、ＡＤ－１３９７１６４．１、ＡＤ－１３９７１６５．１、ＡＤ－１３９７１６６．１、ＡＤ－１３９７１６７．１、ＡＤ－１３９７１６８．１、ＡＤ－１３９７１６９．１、ＡＤ－１３９７１７０．１、ＡＤ－１３９７１７１．１、ＡＤ－１３９７１７２．１、ＡＤ－１３９７１７３．１、ＡＤ－１３９７１７４．１、ＡＤ－１３９７１７５．１、ＡＤ－１３９７１７６．１、ＡＤ－１３９７１７７．１、ＡＤ－１３９７１７８．１、ＡＤ－１３９７１７９．１、ＡＤ－１３９７１８０．１、ＡＤ－１３９７１８１．１、ＡＤ－１３９７１８２．１、ＡＤ－１３９７１８３．１、ＡＤ－１３９７１８４．１、ＡＤ－１３９７１８５．１、ＡＤ－１３９７１８６．１、ＡＤ－１３９７１８７．１、ＡＤ－１３９７１８８．１、ＡＤ－１３９７１８９．１、ＡＤ－１３９７１９０．１、ＡＤ－１３９７１９１．１、ＡＤ－１３９７１９２．１、ＡＤ－１３９７１９３．１、ＡＤ－１３９７１９４．１、ＡＤ－１３９７１９５．１、ＡＤ－１３９７１９６．１、ＡＤ－１３９７１９７．１、ＡＤ－１３９７１９８．１、ＡＤ－１３９７１９９．１、ＡＤ－１３９７２００．１、ＡＤ－１３９７２０１．１、ＡＤ－１３９７２０２．１、ＡＤ－１３９７２０３．１、ＡＤ－１３９７２０４．１、ＡＤ－１３９７２０５．１、ＡＤ－１３９７２０６．１、ＡＤ－１３９７２０７．１、ＡＤ－１３９７２０８．１、ＡＤ－１３９７２０９．１、ＡＤ－１３９７２１０．１、ＡＤ－１３９７２１１．１、ＡＤ－１３９７２１２．１、ＡＤ－１３９７２１３．１、ＡＤ－１３９７２１４．１、ＡＤ－１３９７２１５．１、ＡＤ－１３９７２１６．１、ＡＤ－１３９７２１７．１、ＡＤ－１３９７２１８．１、ＡＤ－１３９７２１９．１、ＡＤ－１３９７２２０．１、ＡＤ－１３９７２２１．１、ＡＤ－１３９７２２２．１、ＡＤ－１３９７２２３．１、ＡＤ－１３９７２２４．１、ＡＤ－１３９７２２５．１、ＡＤ－１３９７２２６．１、ＡＤ－１３９７２２７．１、ＡＤ－１３９７２２８．１、ＡＤ－１３９７２２９．１、ＡＤ－１３９７２３０．１、ＡＤ－１３９７２３１．１、ＡＤ－１３９７２３２．１、ＡＤ－１３９７２３３．１、ＡＤ－１３９７２３４．１、ＡＤ－１３９７２３５．１、ＡＤ－１３９７２３６．１、ＡＤ－１３９７２３７．１、ＡＤ－１３９７２３８．１、ＡＤ－１３９７２３９．１、ＡＤ－１３９７２４０．１、ＡＤ－１３９７２４１．１、ＡＤ－１３９７２４２．１、ＡＤ－１３９７２４３．１、ＡＤ－１３９７２４４．１、ＡＤ－１３９７２４５．１、ＡＤ－１３９７２４６．１、ＡＤ－１３９７２４７．１、ＡＤ－１３９７２４８．１、ＡＤ－１３９７２４９．１、ＡＤ－５２３５６５．１、ＡＤ－１３９７０７２．３、ＡＤ－１３９７０７３．３、ＡＤ－１３９７０７６．３、ＡＤ－１３９７０７７．３、ＡＤ－１３９７０７８．３、ＡＤ－１３９７２５２．２、ＡＤ－１３９７２５７．２、ＡＤ－１３９７２５８．２、ＡＤ－１３９７２５９．２、ＡＤ－１３９７２６３．２、ＡＤ－１３９７２６４．２、ＡＤ－１３９７３０９．２、ＡＤ－６４９５８．１１４、ＡＤ－３９３７５８．４、ＡＤ－１３９７０８０．３、ＡＤ－１３９７２９３．２、ＡＤ－１３９７２９４．２、ＡＤ－１３９７０８１．３、ＡＤ－１３９７０８３．３、ＡＤ－１３９７２９８．２、ＡＤ－１３９７２９９．２、ＡＤ－１３９７０８４．２、ＡＤ－１３９７０８５．２、ＡＤ－１３９７０８７．３、ＡＤ－１３９７３０６．２、ＡＤ－１３９７３０７．２、ＡＤ－１３９７３０８．２およびＡＤ－１３９７０８８．２のいずれか１つから選択される。 In one embodiment, the sense and antisense strands are double stranded , AD-1397073.1, AD-1397073.2, AD-1397074.1, AD-1397074.2, AD-1397075.1, AD-1397075.2, AD-1397076.1, AD-1397076.2, AD -1397077.1, AD-1397077.2, AD-1397078.1, AD-1397078.2, AD-1397250.1, AD-1397251.1, AD-1397252.1, AD-1397253.1, AD-1397254 AD-1397255.1, AD-1397256.1, AD-1397257.1, AD-1397258.1, AD-1397259.1, AD-1397260.1, AD-1397261.1, AD-1397262.1 , AD-1397263.1, AD-1397264.1, AD-1397265.1, AD-1423242.1, AD-1423243.1, AD-1423244.1, AD-1423245.1, AD-1423246.1, AD -1423247.1, AD-1423248.1, AD-1423249.1, AD-1423250.1, AD-1423251.1, AD-1423252.1, AD-1423253.1, AD-1423254.1, AD-1423255 AD-1423256.1, AD-1423257.1, AD-1423258.1, AD-1423259.1, AD-1423260.1, AD-1423261.1, AD-1423262.1, AD-1423263.1 , AD-1423264.1, AD-1423265.1, AD-1423266.1, AD-1423267.1, AD-1423268.1, AD-1423269.1, AD-1423270.1, AD-1423271.1, AD -1423272.1, AD-1423273.1, AD-1423274.1, AD-1423275.1, AD-1423276.1, AD-1423277.1, AD-1423278.1, AD-1423279.1, AD-1423280 AD-1423281.1, AD-1423282.1, AD-1423283.1, AD-1423284.1, AD-1423285.1, AD-1423286.1, AD-1423287.1, AD-1423288.1 , AD-1423289.1, AD-1423290.1, AD-1423291.1, AD-1423292.1, AD-1423293.1, AD-1423294.1, AD-1423295.1, AD-1423296.1, AD -1423297.1, AD-1423298.1, AD-1423299.1, AD-1423300.1, AD-1397266.1, AD-1397266.2, AD-1397267.1, AD-1423301.1, AD-1397268 AD-1397268.2, AD-1397269.1, AD-1423302.1, AD-1397270.1, AD-1397270.2, AD-1397271.1, AD-1397271.2, AD-1397272.1 , AD-1423303.1, AD-1397273.1, AD-1423304.1, AD-1397274.1, AD-1423305.1, AD-1397275.1, AD-1423306.1, AD-1397276.1, AD -1397277.1, AD-1397277.2, AD-1397278.1, AD-1397279.1, AD-1397280.1, AD-1397281.1, AD-1397282.1, AD-1397283.1, AD-1397284 AD-1397285.1, AD-1397286.1, AD-1397287.1, AD-1397079.1, AD-1397079.2, AD-1397288.1, AD-1397289.1, AD-1397290.1 , AD-1397080.1, AD-1397080.2, AD-1397291.1, AD-1397292.1, AD-1397293.1, AD-1397294.1, AD-1397081.1, AD-1397081.2, AD -1397295.1, AD-1397082.1, AD-1397082.2, AD-1397083.1, AD-1397083.2, AD-1397296.1, AD-1397297.1, AD-1397298.1, AD-1397299 AD-1397300.1, AD-1397301.1, AD-1397302.1, AD-1397084.1, AD-1397085.1, AD-1397086.1, AD-1397303.1, AD-1397087.1 , AD-1397087.2, AD-1397304.1, AD-1397305.1, AD-1397306.1, AD-1397307.1, AD-1397308.1, AD-1397309.1, AD-1397310.1, AD -1397311.1, AD-1397312.1, AD-1397313.1, AD-1397314.1, AD-1397315.1, AD-1397316.1, AD-1397317.1, AD-1397318.1, AD-1397319 AD-1397320.1, AD-1397321.1, AD-1397322.1, AD-1397088.1, AD-1397089.1, AD-1397090.1, AD-1397091.1, AD-1397092.1 , AD-1397093.1, AD-1397094.1, AD-1397095.1, AD-1397096.1, AD-1397097.1, AD-1397098.1, AD-1397099.1, AD-1397101.1, AD -1397102.1, AD-1397103.1, AD-1397104.1, AD-1397105.1, AD-1397106.1, AD-1397107.1, AD-1397108.1, AD-1397109.1, AD-1397110 AD-1397111.1, AD-1397112.1, AD-1397113.1, AD-1397114.1, AD-1397115.1, AD-1397116.1, AD-1397117.1, AD-1397118.1 , AD-1397119.1, AD-1397120.1, AD-1397121.1, AD-1397122.1, AD-1397123.1, AD-1397124.1, AD-1397125.1, AD-1397126.1, AD -1397127.1, AD-1397128.1, AD-1397129.1, AD-1397130.1, AD-1397131.1, AD-1397132.1, AD-1397133.1, AD-1397134.1, AD-1397135 AD-1397136.1, AD-1397137.1, AD-1397138.1, AD-1397139.1, AD-1397140.1, AD-1397141.1, AD-1397142.1, AD-1397143.1 , AD-1397144.1, AD-1397145.1, AD-1397146.1, AD-1397147.1, AD-1397148.1, AD-1397149.1, AD-1397150.1, AD-1397151.1, AD -1397152.1, AD-1397153.1, AD-1397154.1, AD-1397155.1, AD-1397156.1, AD-1397157.1, AD-1397158.1, AD-1397159.1, AD-1397160 AD-1397161.1, AD-1397162.1, AD-1397163.1, AD-1397164.1, AD-1397165.1, AD-1397166.1, AD-1397167.1, AD-1397168.1 , AD-1397169.1, AD-1397170.1, AD-1397171.1, AD-1397172.1, AD-1397173.1, AD-1397174.1, AD-1397175.1, AD-1397176.1, AD -1397177.1, AD-1397178.1, AD-1397179.1, AD-1397180.1, AD-1397181.1, AD-1397182.1, AD-1397183.1, AD-1397184.1, AD-1397185 AD-1397186.1, AD-1397187.1, AD-1397188.1, AD-1397189.1, AD-1397190.1, AD-1397191.1, AD-1397192.1, AD-1397193.1 , AD-1397194.1, AD-1397195.1, AD-1397196.1, AD-1397197.1, AD-1397198.1, AD-1397199.1, AD-1397200.1, AD-1397201.1, AD -1397202.1, AD-1397203.1, AD-1397204.1, AD-1397205.1, AD-1397206.1, AD-1397207.1, AD-1397208.1, AD-1397209.1, AD-1397210 AD-1397211.1, AD-1397212.1, AD-1397213.1, AD-1397214.1, AD-1397215.1, AD-1397216.1, AD-1397217.1, AD-1397218.1 , AD-1397219.1, AD-1397220.1, AD-1397221.1, AD-1397222.1, AD-1397223.1, AD-1397224.1, AD-1397225.1, AD-1397226.1, AD -1397227.1, AD-1397228.1, AD-1397229.1, AD-1397230.1, AD-1397231.1, AD-1397232.1, AD-1397233.1, AD-1397234.1, AD-1397235 AD-1397236.1, AD-1397237.1, AD-1397238.1, AD-1397239.1, AD-1397240.1, AD-1397241.1, AD-1397242.1, AD-1397243.1 , AD-1397244.1, AD-1397245.1, AD-1397246.1, AD-1397247.1, AD-1397248.1, AD-1397249.1, AD-523565.1, AD-1397072.3, AD -1397073.3, AD-1397076.3, AD-1397077.3, AD-1397078.3, AD-1397252.2, AD-1397257.2, AD-1397258.2, AD-1397259.2, AD-1397263 .2, AD-1397264.2, AD-1397309.2, AD-64958.114, AD-393758.4, AD-1397080.3, AD-1397293.2, AD-1397294.2, AD-1397081.3 , AD-1397083.3, AD-1397298.2, AD-1397299.2, AD-1397084.2, AD-1397085.2, AD-1397087.3, AD-1397306.2, AD-1397307.2, AD -1397308.2 and AD-1397088.2.

一実施形態において、ＭＡＰＴ遺伝子の発現の少なくとも部分的な抑制は、ＭＡＰＴ ｍＲＮＡ、例えば、センスｍＲＮＡ、アンチセンスｍＲＮＡ、総ＭＡＰＴ ｍＲＮＡの量の低減によって評価され、このようなｍＲＮＡは、ＭＡＰＴ遺伝子が転写されており、ＭＡＰＴ遺伝子の発現が阻害されるように処置された、または処置されている第１の細胞または細胞群から単離することができる、またはそのような細胞または細胞群において検出され、第１の細胞または細胞群に実質的に同一であるが、そのように処置されたまたは処置されていない第２の細胞または細胞群（対照細胞）と比較される。阻害の程度は、以下の単位で表すことができる： In one embodiment, at least partial suppression of MAPT gene expression is assessed by a reduction in the amount of MAPT mRNA, e.g., sense mRNA, antisense mRNA, total MAPT mRNA, wherein such mRNA is transcribed by the MAPT gene. and can be isolated from or detected in a first cell or group of cells that has been or has been treated such that expression of the MAPT gene is inhibited; A second cell or group of cells that is substantially identical to the first cell or group of cells, but which has or has not been so treated (control cells) is compared. The degree of inhibition can be expressed in units of:

Figure 2023521604000002
Figure 2023521604000002

ｄｓＲＮＡなどの「細胞をＲＮＡｉ剤と接触させること」なる語句は、本明細書において使用される場合、任意の可能な手段によって細胞を接触させることを包含する。細胞をＲＮＡｉ剤と接触させることは、細胞をインビトロにおいてＲＮＡｉ剤と接触させることまたは細胞をインビボにおいてＲＮＡｉ剤と接触させることを含む。接触させることは、直接的または間接的に行われ得る。したがって、例えば、ＲＮＡｉ剤は、方法を個別に実施することによって、細胞と物理的に接触させ得るか、あるいはＲＮＡｉ剤は、その後に細胞と接触することを可能にし得るまたは引き起こし得るような状況に置かれ得る。 The phrase "contacting a cell with an RNAi agent," such as dsRNA, as used herein includes contacting a cell by any possible means. Contacting the cell with the RNAi agent includes contacting the cell with the RNAi agent in vitro or contacting the cell with the RNAi agent in vivo. Contacting can be done directly or indirectly. Thus, for example, the RNAi agent may be brought into physical contact with the cell by performing the method separately, or the RNAi agent may subsequently be allowed or caused to contact the cell. can be placed

細胞をインビトロにおいて接触させることは、例えば、細胞をＲＮＡｉ剤と共にインキュベートすることによって為され得る。細胞をインビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）において接触させることは、例えば、ＲＮＡｉ剤を細胞が位置されている組織中もしくはその付近に注入することによって、または別の領域、例えば、中枢神経系（ＣＮＳ）に、適宜、髄腔内注入、硝子体内注入、大槽内注入、もしくは他の注入によってＲＮＡｉ剤を注入することによって、または薬剤がその後に、接触されるべき細胞が位置されている組織に到達するように、血流もしくは皮下腔にＲＮＡｉ剤を注入することによって、為され得る。例えば、ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡｉ剤を目的の部位、例えば、ＣＮＳに向かわせるかまたは安定化するリガンド、例えば、下記において説明され、例えば、参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０３１１７０においてさらに詳述されるような親油性部分を含み得るかまたはそれにカップリングされ得る。接触させるためのインビトロでの方法およびインビボでの方法の組合せも可能である。例えば、細胞をインビトロにおいてＲＮＡｉ剤と接触させ、その後に対象に移してもよい。 Contacting the cells in vitro can be done, for example, by incubating the cells with the RNAi agent. Contacting a cell in vivo can be, for example, by injecting an RNAi agent into or near the tissue in which the cell is located, or into another area, such as the central nervous system (CNS). Optionally, by injecting the RNAi agent by intrathecal, intravitreal, intracisternal, or other injection, or so that the agent subsequently reaches the tissue where the cells to be contacted are located. Alternatively, it can be done by injecting the RNAi agent into the bloodstream or subcutaneous space. For example, the RNAi agent can be a ligand that directs or stabilizes the RNAi agent to a site of interest, e.g., the CNS, e.g., described below and further in e.g. It may contain or be coupled to a lipophilic moiety as detailed. A combination of in vitro and in vivo methods for contacting is also possible. For example, cells may be contacted with an RNAi agent in vitro and then transferred to a subject.

一実施形態において、細胞をＲＮＡｉ剤と接触させることは、細胞内への取り込みまたは吸収を促進または実施することによって「導入すること」または「ＲＮＡｉ剤を細胞内にデリバリーすること」を含む。ＲＮＡｉ剤の吸収または取り込みは、自発的拡散性のもしくは活性な細胞プロセスによって、または助剤もしくはデバイスによって生じ得る。ＲＮＡｉ剤を細胞内に導入することは、インビトロまたはインビボにおいてであり得る。例えば、インビボ導入の場合、ＲＮＡｉ剤は、組織部位に注入され得るかまたは全身的に投与され得る。細胞内へのインビトロ導入としては、当技術分野で公知の方法、例えば、エレクトロポレーションおよびリポフェクションなどが挙げられる。さらなるアプローチは、本明細書の下記において説明されるか、または当技術分野で公知である。 In one embodiment, contacting a cell with an RNAi agent includes "introducing" or "delivering the RNAi agent into the cell" by promoting or effecting uptake or absorption into the cell. Absorption or uptake of an RNAi agent can occur by spontaneous diffusive or active cellular processes or by auxiliary agents or devices. Introducing the RNAi agent into the cell can be in vitro or in vivo. For example, for in vivo introduction, the RNAi agent can be injected into a tissue site or administered systemically. In vitro introduction into cells includes methods known in the art, such as electroporation and lipofection. Additional approaches are described herein below or known in the art.

用語「親油性」または「親油性部分」は、脂質に対して親和性を有する任意の化合物または化学部分を広く意味する。親油性部分の親油性を特徴付ける方法の１つは、オクタノール－水分配係数ｌｏｇＫｏｗによってであり、この場合、Ｋｏｗは、平衡状態の２相系における水相の化学物質の濃度に対するオクタノール相の化学物質の濃度の比である。オクタノール－水分配係数は、物質における実験室測定された特性である。しかしながら、それは、第１原理または経験的方法を使用して算出される化学物質の構造成分に起因する係数を使用することによっても予想され得る［例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Tetko et al., J. Chem. Inf. Comput. Sci. 41:1407-21 (2001)を参照されたい］。それは、水よりもむしろ非水性または油性環境を好む物質の傾向の熱力学的尺度（すなわち、親水性／親油性のバランス）を提供する。原則として、化学物質は、ｌｏｇＫｏｗが０を超える場合、親油性の性質である。典型的には、親油性部分は、１を超える、１．５を超える、２を超える、３を超える、４を超える、５を超える、または１０を超えるｌｏｇＫｏｗを有する。例えば、６－アミノヘキサノールのｌｏｇＫｏｗは、およそ０．７であることが予想される。同じ方法を使用することにより、コレステリルＮ－（ヘキサン－６－オール）カルバメートのｌｏｇＫｏｗは、１０．７であることが予想される。 The term "lipophilic" or "lipophilic moiety" broadly refers to any compound or chemical moiety that has an affinity for lipids. One way to characterize the lipophilicity of a lipophilic moiety is by the octanol-water partition coefficient log K ow , where K ow is the ratio of the octanol phase to the concentration of a chemical in the aqueous phase in a two-phase system at equilibrium. It is the ratio of chemical concentrations. The octanol-water partition coefficient is a laboratory-measured property in substances. However, it can also be predicted by using coefficients attributable to the chemical's structural composition calculated using first principles or empirical methods [e.g. , Tetko et al., J. Chem. Inf. Comput. Sci. 41:1407-21 (2001)]. It provides a thermodynamic measure of a substance's tendency to prefer a non-aqueous or oily environment (ie, hydrophilic/lipophilic balance) rather than water. As a general rule, a chemical is lipophilic in nature if its log Kow is greater than zero. Typically, the lipophilic moiety has a log Kow greater than 1, greater than 1.5, greater than 2, greater than 3, greater than 4, greater than 5, or greater than 10. For example, the log Kow for 6-aminohexanol is expected to be approximately 0.7. Using the same method, the log Kow for cholesteryl N-(hexan-6-ol)carbamate is expected to be 10.7.

分子の親油性は、分子が有する官能基に関して変更することができる。例えば、親油性部分の末端にヒドロキシル基またはアミン基を加えることにより、親油性部分の分配係数（例えば、ｌｏｇＫｏｗ）値を増加または減少させることができる。 The lipophilicity of a molecule can be altered with respect to the functional groups it possesses. For example, the addition of hydroxyl or amine groups at the ends of the lipophilic moiety can increase or decrease the partition coefficient (eg, log Kow ) value of the lipophilic moiety.

あるいは、１つまたは複数の親油性部分にコンジュゲートされた二本鎖ＲＮＡｉ剤の疎水性は、そのタンパク質結合特性によって測定することができる。例えば、ある特定の実施形態において、二本鎖ＲＮＡｉ剤の血漿タンパク質結合アッセイの非結合分率は、二本鎖ＲＮＡｉ剤のサイレンシング活性に正に相関し得る、二本鎖ＲＮＡｉ剤の相対的疎水性に正に相関することを判定することができる。 Alternatively, the hydrophobicity of a double-stranded RNAi agent conjugated to one or more lipophilic moieties can be measured by its protein binding properties. For example, in certain embodiments, the unbound fraction of a plasma protein binding assay of a double-stranded RNAi agent can be positively correlated to the silencing activity of the double-stranded RNAi agent. It can be determined to correlate positively with hydrophobicity.

一実施形態において、判定される血漿タンパク質結合アッセイは、ヒト血清アルブミンタンパク質を使用する電気泳動移動度シフトアッセイ（ＥＭＳＡ）である。この結合アッセイの例示的プロトコールは、例えば、ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０３１１７０において詳細に説明される。簡潔に述べれば、二重鎖をヒト血清アルブミンと共にインキュベートし、非結合分率を決定した。例示的なアッセイプロトコールは、１０μＭのストック濃度の二重鎖を、１×ＰＢＳ中に０、２０、または９０％の血清を含有する０．５μＭの最終濃度（総体積２０μＬ）に希釈することを含む。試料は、混合し、３０秒間遠心分離し、次に室温で１０分間インキュベートし得る。インキュベーションステップが完了したら、４μＬの６×ＥＭＳＡゲル－ローディング溶液を各試料に添加し、３０秒間遠心分離し、１２μＬの各試料を２６ウェルのＢｉｏＲａｄ １０％ＰＡＧＥ（ポリアクリルアミドゲル電気泳動）にロードし得る。ゲルを１００ボルトで１時間泳動し得る。泳動の完了後に、ゲルをケーシングから取り出し、５０ｍＬの１０％ＴＢＥ（Ｔｒｉｓ塩基、ホウ酸、およびＥＤＴＡ）中で洗浄した。洗浄が完了したら、５μＬのＳＹＢＲ Ｇｏｌｄをゲルに添加し、次いでそれを室温で１０分間インキュベートし、ゲルを５０ｍＬの１０％ＴＢＥ中で再度洗浄し得る。この例示的なアッセイでは、Ｇｅｌ Ｄｏｃ ＸＲ＋ゲルドキュメンテーションシステムを使用して、以下のパラメータを使用してゲルを読み取ってもよい：イメージングアプリケーションはＳＹＢＲ Ｇｏｌｄに設定し、サイズはＢｉｏ－Ｒａｄ基準ゲルに設定し、露出は強いバンドのために自動に設定し、ハイライト飽和ピクセルは１にしてもよく、色はグレーに設定する。検出、分子量分析、および出力は、全て無効にし得る。ゲルの明瞭な写真が得られたら、Ｉｍａｇｅ Ｌａｂ ５．２を用いて画像を処理し得る。レーンおよびバンドは手動で設定してバンド強度を測定し得る。各試料のバンド強度をＰＢＳに対して正規化して非結合ｓｉＲＮＡフラクションを得ることができる。この測定から相対的疎水性を決定することができる。結合アッセイにおける非結合ｓｉＲＮＡのフラクションによって測定される二本鎖ＲＮＡｉ剤の疎水性は、増強されたｓｉＲＮＡのインビボデリバリーの場合、０．１５を超える、０．２を超える、０．２５を超える、０．３を超える、０．３５を超える、０．４を超える、０．４５を超える、または０．５を超える。 In one embodiment, the plasma protein binding assay determined is an electrophoretic mobility shift assay (EMSA) using human serum albumin protein. An exemplary protocol for this binding assay is described in detail, for example, in PCT/US2019/031170. Briefly, duplexes were incubated with human serum albumin and the unbound fraction determined. An exemplary assay protocol calls for diluting a 10 μM stock concentration of duplex to a final concentration of 0.5 μM (20 μL total volume) containing 0, 20, or 90% serum in 1×PBS. include. Samples can be mixed, centrifuged for 30 seconds, then incubated at room temperature for 10 minutes. Upon completion of the incubation step, 4 μL of 6×EMSA gel-loading solution was added to each sample, centrifuged for 30 seconds, and 12 μL of each sample was loaded onto a 26-well BioRad 10% PAGE (polyacrylamide gel electrophoresis). obtain. Gels can be run at 100 volts for 1 hour. After completion of the run, the gel was removed from the casing and washed in 50 mL of 10% TBE (Tris base, boric acid and EDTA). Once washing is complete, 5 μL of SYBR Gold can be added to the gel, which is then incubated at room temperature for 10 minutes, and the gel washed again in 50 mL of 10% TBE. In this exemplary assay, a Gel Doc XR+ gel documentation system may be used to read gels using the following parameters: imaging application set to SYBR Gold, size set to Bio-Rad reference gel. However, the exposure is set to auto for the strong bands, the highlight saturated pixels may be 1, and the color is set to gray. Detection, molecular weight analysis, and output can all be disabled. Once a clear picture of the gel is obtained, the image can be processed using Image Lab 5.2. Lanes and bands can be set manually to measure band intensities. The band intensity of each sample can be normalized to PBS to obtain the unbound siRNA fraction. Relative hydrophobicity can be determined from this measurement. The hydrophobicity of the double-stranded RNAi agent, as measured by the fraction of unbound siRNA in the binding assay, is greater than 0.15, greater than 0.2, greater than 0.25, for enhanced in vivo delivery of siRNA, Greater than 0.3, greater than 0.35, greater than 0.4, greater than 0.45, or greater than 0.5.

したがって、親油性部分を二本鎖ＲＮＡｉ剤の内部位置にコンジュゲートすることにより、ｓｉＲＮＡにおける増強されたインビボデリバリーに対する最適の疎水性が提供される。 Thus, conjugating a lipophilic moiety to an internal position of a double-stranded RNAi agent provides optimal hydrophobicity for enhanced in vivo delivery in siRNA.

用語「脂質ナノ粒子」または「ＬＮＰ」は、薬学的に活性な分子、例えば、核酸分子、例えば、ＲＮＡｉ剤またはＲＮＡｉ剤の転写元のプラスミドなどを封入する脂質層を含むベシクルである。ＬＮＰは、例えば、米国特許第６，８５８，２２５号、同第６，８１５，４３２、８，１５８，６０１号、および同第８，０５８，０６９号に記載されており、その内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。 The term "lipid nanoparticle" or "LNP" is a vesicle comprising a lipid layer encapsulating a pharmaceutically active molecule, such as a nucleic acid molecule, such as an RNAi agent or a plasmid from which an RNAi agent is transcribed. LNPs are described, for example, in U.S. Pat. Nos. 6,858,225, 6,815,432, 8,158,601, and 8,058,069, the entire contents of which are incorporated herein by reference.

本明細書において使用される場合、「対象」は、動物、例えば、哺乳動物、例えば、霊長類（例えば、ヒト、非ヒト霊長類、例えば、サルおよびチンパンジーなど）、または非霊長類（例えば、ラットまたはマウスなど）である。好ましい実施形態において、対象は、ヒトであり、例えばＭＡＰＴ発現の低減が有益であろう疾患、障害、または状態のために処置または評価されたヒト；ＭＡＰＴ発現の低減が有益であろう疾患、障害、または状態のリスクがあるヒト；ＭＡＰＴ発現の低減が有益であろう疾患、障害、または状態を有するヒト；または本明細書に記載されるようにＭＡＰＴ発現の低減が有益であろう疾患、障害、または状態のために処置されたヒトである。一部の実施形態において、対象は、ヒトの女性である。他の実施形態において、対象は、ヒトの男性である。一実施形態において、対象は、ヒトの成人である。一実施形態において、対象は、ヒトの小児である。別の実施形態において、対象は、ヒトの年少者、すなわち、２０歳未満の対象である。 As used herein, a "subject" is an animal, e.g., mammal, e.g., primate (e.g., human, non-human primate, e.g., monkey, chimpanzee, etc.), or non-primate (e.g., rat or mouse). In preferred embodiments, the subject is a human, e.g., a human being treated or evaluated for a disease, disorder, or condition in which reduced MAPT expression would be beneficial; or a human at risk of a condition; a human having a disease, disorder, or condition that would benefit from reduced MAPT expression; or a disease, disorder that would benefit from reduced MAPT expression as described herein. , or a human being treated for the condition. In some embodiments, the subject is a human female. In other embodiments, the subject is a human male. In one embodiment, the subject is a human adult. In one embodiment, the subject is a human child. In another embodiment, the subject is a juvenile human, ie, a subject under the age of 20.

本明細書において使用される場合、用語「処置すること」または「処置」は有益なまたは所望の結果を指し、それらとしては、ＭＡＰＴ関連疾患、例えば、アルツハイマー病、ＦＴＤ、ＰＳＰ、または他のタウオパチーにおけるＭＡＰＴ遺伝子発現またはタウ産生に関連する１つまたは複数の兆候または症状の緩和または改善が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。「処置」は、処置が行われない場合に予想される生存と比較して、生存を延長することも意味し得る。 As used herein, the terms "treating" or "treatment" refer to beneficial or desired results, including MAPT-related diseases such as Alzheimer's disease, FTD, PSP, or other tauopathies. including, but not limited to, alleviation or amelioration of one or more signs or symptoms associated with MAPT gene expression or tau production in . "Treatment" can also mean prolonging survival as compared to expected survival if not treating.

対象におけるＭＡＰＴのレベルまたは疾患マーカーまたは症状に関連する用語「低下させる（ｌｏｗｅｒ）」は、そのようなレベルの統計的に有意な減少を意味する。減少は、例えば、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上であり得る。特定の実施形態において、減少は、少なくとも２０％である。特定の実施形態において、減少は、疾患マーカー、例えば、センスもしくはアンチセンスを含有する凝集体のレベル、および／または異常なジペプチドリピートタンパク質のレベルにおける少なくとも５０％の減少であり、例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれ多くの減少である。一部の実施形態において、減少は、疾患マーカーにおける少なくとも約２５％の減少であり、例えば、タウタンパク質および／または遺伝子発現レベルは、例えば、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％減少する。対象におけるＭＡＰＴのレベルに関連する場合、「低下させる」は、好ましくは、そのような障害のない個体における正常な範囲内として受け入れられるレベルまで下げることである。ある特定の実施形態において、「低下させる」は、疾患を患っている対象におけるマーカーまたは症状のレベルと、個体が正常な範囲内で受け入れられるレベルとの間の差の減少、例えば、肥満な個体と正常な範囲内で受け入れられる体重を有する個体との間での体重の減少のレベルである。 The term "lower" in reference to levels of MAPT or disease markers or symptoms in a subject means a statistically significant decrease in such levels. The reduction is, for example, at least 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, %, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, It can be 85%, 90%, 95%, or more. In certain embodiments, the reduction is at least 20%. In certain embodiments, the reduction is at least a 50% reduction in the level of disease markers, e.g., sense- or antisense-containing aggregates, and/or the level of aberrant dipeptide repeat proteins, e.g., 50%, A reduction of 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% or more. In some embodiments, the reduction is at least about a 25% reduction in disease markers, e.g., tau protein and/or gene expression levels, e.g., at least about 25%, at least about 30%, at least about 40% , at least about 50%, at least about 60%, at least about 70%, at least about 80%, at least about 90%, or at least about 95%. "Reduce," when referring to the level of MAPT in a subject, preferably to a level accepted as within the normal range in individuals without such disorders. In certain embodiments, "reduce" is a reduction in the difference between the level of a marker or symptom in a subject suffering from a disease and a level accepted within the normal range by an individual, e.g., an obese individual It is the level of weight loss between weight loss and an individual with an acceptable body weight within the normal range.

本明細書において使用される場合、「予防」または「予防すること」は、ＭＡＰＴ遺伝子の発現またはタウの産生の減少が有益であろう疾患、障害、またはそれらの状態に関して使用される場合、対象が、そのような疾患、障害、または状態に関連する症状、例えば、ＭＡＰＴ関連疾患の症状を発症する可能性の減少を意味する。疾患、障害、または状態を発症しないこと、またはそのような疾患、障害、または状態に関連する症状の発症の減少（例えば、その疾患または障害に対して臨床的に受け入れられる規模の少なくとも約１０％の減少）、または遅延された症状の提示の遅延（例えば、数日、数週間、数か月、または数年の遅延）は、有効な予防とみなされる。 As used herein, "prevention" or "preventing" when used in reference to a disease, disorder, or condition where reduction in MAPT gene expression or tau production would be beneficial, when the subject means a decreased likelihood of developing symptoms associated with such diseases, disorders or conditions, eg, symptoms of a MAPT-related disease. Not developing a disease, disorder or condition, or reducing the development of symptoms associated with such disease, disorder or condition (e.g., at least about 10% of the clinically acceptable magnitude for the disease or disorder) ), or a delayed presentation of symptoms (eg, a delay of days, weeks, months, or years) is considered effective prophylaxis.

本明細書において使用される場合、用語「ＭＡＰＴ関連疾患」または「ＭＡＰＴ関連障害」または「タウオパチー」は、ＭＡＰＴの発現および／または活性の低減が有益であろうあらゆる疾患または障害を含む。例示的なＭＡＰＴ関連疾患としては、アルツハイマー病、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、行動障害型前頭側頭型認知症（ｂｖＦＴＤ）、非流暢性亜型原発性進行性失語（ｎｆｖＰＰＡ）、意味型原発性進行性失語（ＰＰＡ－Ｓ）、ロゴペニック型原発性進行性失語（ＰＰＡ－Ｌ）、１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、ピック病（ＰｉＤ）、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、初老期認知症を伴う多系統タウオパチー（ＭＳＴＤ）、球状グリア封入体を伴う白質タウオパチー（ＧＧＩを伴うＦＴＬＤ）、ＭＡＰＴ突然変異を伴うＦＴＬＤ、神経原線維変化（ＮＦＴ）認知症、運動ニューロン疾患を伴うＦＴＤ、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、皮質基底核症候群（ＣＢＳ）、皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、パーキンソン病、脳炎後パーキンソニズム、ニーマン・ピック病、ハンチントン病、筋強直性ジストロフィー１型、およびダウン症候群（ＤＳ）が挙げられる。 As used herein, the term "MAPT-related disease" or "MAPT-related disorder" or "tauopathy" includes any disease or disorder in which reduction of MAPT expression and/or activity would be beneficial. Exemplary MAPT-related diseases include Alzheimer's disease, frontotemporal dementia (FTD), behavioral frontotemporal dementia (bvFTD), non-fluent subtype primary progressive aphasia (nfvPPA), semantic primary progressive aphasia (PPA-S), logopenic primary progressive aphasia (PPA-L), frontotemporal dementia linked to chromosome 17 and parkinsonism (FTDP-17), Pick's disease ( PiD), argyria granulopathy (AGD), multisystem tauopathy with presenile dementia (MSTD), white matter tauopathy with globular glial inclusions (FTLD with GGI), FTLD with MAPT mutations, neurofibrillary tangles (NFT) Dementia, FTD with Motor Neuron Disease, Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS), Corticobasal Syndrome (CBS), Corticobasal Degeneration (CBD), Progressive Supranuclear Palsy (PSP) , Parkinson's disease, post-encephalitis parkinsonism, Niemann-Pick disease, Huntington's disease, myotonic dystrophy type 1, and Down's syndrome (DS).

「治療有効量」は、本明細書において使用される場合、ＭＡＰＴ関連疾患を有する対象に投与されたときに、疾患の処置（例えば、既存の疾患または疾患の１つもしくは複数の症状を減少、改善、または維持することによる）を実施するのに十分なＲＮＡ剤の量を含むことが意図される。「治療有効量」は、ＲＮＡｉ剤、薬剤がどのように投与されるか、疾患およびその重症度、ならびに病歴、年齢、体重、家族歴、遺伝子構造、先行または並行する処置のタイプ、存在するのであれば、処置される対象の他の個別の特性に応じて変わり得る。 A “therapeutically effective amount,” as used herein, is the treatment of a disease (e.g., reducing an existing disease or one or more symptoms of a disease, It is intended to include an amount of RNA agent sufficient to effect (by improving or maintaining). A "therapeutically effective amount" includes an RNAi agent, how the agent is administered, the disease and its severity, as well as medical history, age, weight, family history, genetic makeup, type of prior or concurrent treatment, as present. It may vary, if any, depending on other individual characteristics of the subject being treated.

「予防有効量」は、本明細書において使用される場合、ＭＡＰＴ関連疾患を有する対象に投与されたときに、疾患または疾患の１つまたは複数の症状を予防または改善するのに十分なＲＮＡｉ剤の量を含むことが意図される。疾患の改善は、疾患の経過を鈍化させること、または後で発症する疾患の重症度を減少させることを含む。「予防有効量」は、ＲＮＡｉ剤、薬剤がどのように投与されるか、疾患のリスクの程度、ならびに病歴、年齢、体重、家族歴、遺伝子構造、先行または並行する処置のタイプ、存在するのであれば、処置される患者の他の個別の特性に応じて変わり得る。 A “prophylactically effective amount,” as used herein, is an RNAi agent sufficient to prevent or ameliorate the disease or one or more symptoms of the disease when administered to a subject with a MAPT-related disease. is intended to include the amount of Amelioration of a disease includes slowing the course of the disease or reducing the severity of later-onset disease. A "prophylactically effective amount" includes an RNAi agent, how the agent is administered, degree of risk of disease, as well as medical history, age, weight, family history, genetic makeup, type of prior or concurrent treatment, as present. It may vary, if any, depending on other individual characteristics of the patient being treated.

「治療有効量」または「予防有効量」は、任意の処置に適用可能な合理的な恩恵／リスク比においていくつかの所望の局所的または全身的効果を生じるＲＮＡｉ剤の量も包含する。本開示の方法において用いられるＲＮＡｉ剤は、そのような処置に適用可能な合理的な恩恵／リスク比を生じるのに十分な量において投与され得る。 A “therapeutically effective amount” or “prophylactically effective amount” also encompasses that amount of an RNAi agent that produces some desired local or systemic effect at a reasonable benefit/risk ratio applicable to any treatment. The RNAi agents used in the disclosed methods can be administered in amounts sufficient to produce a reasonable benefit/risk ratio applicable to such treatment.

語句「薬学的に許容される」は、過度の毒性、刺激性、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症なしに、合理的な恩恵／リスク比に見合う、健全な医学的判断の範囲内でのヒト対象および動物対象の組織との接触における使用にとって好適な、化合物、材料、組成物、または剤形を意味するために本明細書において用いられる。 The phrase "pharmaceutically acceptable" means within the scope of sound medical judgment, commensurate with a reasonable benefit/risk ratio, without undue toxicity, irritation, allergic reaction, or other problems or complications. is used herein to mean any compound, material, composition, or dosage form suitable for use in contact with tissue of human and animal subjects.

語句「薬学的に許容される担体」は、本明細書において使用される場合、１つの臓器、または身体の一部分から、他の臓器、例えば、身体の一部分への対象化合物の搬送または輸送に関与する、薬学的に許容される材料、組成物、またはビヒクル、例えば、液体または固体充填剤など、希釈剤、賦形剤、製造助剤（例えば、潤滑剤、タルクマグネシウム、ステアリン酸カルシウムもしくはステアリン酸亜鉛、またはステアリン酸）、または溶媒封入材料を意味する。各担体は、製剤の他の原材料に対して適合性であるという意味において「許容され」なければならず、ならびに処置される対象に対して有害であってはならない。薬学的に許容される担体として機能し得る材料のいくつかの例としては、（１）糖、例えば、ラクトース、グルコース、およびショ糖など；（２）デンプン、例えば、トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプンなど；（３）セルロースおよびその誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、および酢酸セルロースなど；（４）トラガント末；（５）モルト；（６）ゼラチン；（７）潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、およびタルクなど；（８）賦形剤、例えば、ココアバターおよび座剤ワックスなど；（９）オイル、例えば、落花生油、綿実油、サフラワー油、胡麻油、オリーブ油、トウモロコシ油、および大豆油など；（１０）グリコール、例えば、プロピレングリコールなど；（１１）ポリオール、例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコールなど；（１２）エステル、例えば、オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルなど；（１３）寒天；（１４）緩衝剤、例えば、水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなど；（１５）アルギン酸；（１６）発熱物質不含水；（１７）等張食塩水；（１８）リンガー溶液；（１９）エチルアルコール；（２０）ｐＨ緩衝溶液；（２１）ポリエステル、ポリカーボネート、またはポリ無水物；（２２）充填剤（ｂｕｌｋｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、例えば、ポリペプチドおよびアミノ酸など；（２３）血清成分、例えば、血清アルブミン、ＨＤＬ、およびＬＤＬなど；ならびに（２２）医薬製剤に用いられるその他の無毒の親和性物質が挙げられる。 The phrase "pharmaceutically acceptable carrier," as used herein, is involved in carrying or transporting a subject compound from one organ, or part of the body, to another organ, e.g., part of the body. pharmaceutically acceptable materials, compositions or vehicles such as liquid or solid fillers, diluents, excipients, manufacturing aids such as lubricants, magnesium talc, calcium stearate or zinc stearate , or stearic acid), or a solvent-encapsulating material. Each carrier must be "acceptable" in the sense of being compatible with the other ingredients of the formulation, and not deleterious to the subject being treated. Some examples of materials that can serve as pharmaceutically acceptable carriers include (1) sugars such as lactose, glucose, and sucrose; (2) starches such as corn starch and potato starch; (3) Cellulose and its derivatives, such as sodium carboxymethylcellulose, ethylcellulose, and cellulose acetate; (4) tragacanth powder; (5) malt; (6) gelatin; (7) lubricants, such as magnesium stearate, lauryl (8) excipients such as cocoa butter and suppository waxes; (9) oils such as peanut oil, cottonseed oil, safflower oil, sesame oil, olive oil, corn oil, and soybean oil. (10) glycols, such as propylene glycol; (11) polyols, such as glycerin, sorbitol, mannitol, and polyethylene glycol; (12) esters, such as ethyl oleate and ethyl laurate; (13) (14) buffering agents such as magnesium hydroxide and aluminum hydroxide; (15) alginic acid; (16) pyrogen-free water; (17) isotonic saline; (18) Ringer's solution; (20) pH buffer solutions; (21) polyesters, polycarbonates, or polyanhydrides; (22) bulking agents such as polypeptides and amino acids; (23) serum components such as serum albumin, HDL, and LDL, etc.; and (22) other non-toxic affinity substances used in pharmaceutical formulations.

用語「試料」は、本明細書において使用される場合、対象から単離された同様の体液、細胞、または組織、ならびに対象内に存在する体液、細胞、または組織のコレクションを包含する。生体液の例としては、血液、血清、および漿膜液、血漿、髄液、眼液、リンパ液、尿、唾液、などが挙げられる。組織試料は、組織、臓器、または局所領域からの試料を含み得る。例えば、試料は、特定の臓器、臓器の一部、またはそれらの臓器内の体液または細胞から得られ得る。ある特定の実施形態において、試料は、脳（例えば、脳全体または脳におけるあるセグメント、例えば、線状体、または脳におけるあるタイプの細胞、例えば、ニューロンおよびグリア細胞（星状細胞、オリゴデンドロサイト、小グリア細胞））から得られ得る。一部の実施形態において、「対象から得られた試料」は、対象から得られた血液またはそれらから得られた血漿もしくは血清を意味する。さらなる実施形態において、「対象から得られた試料」は、対象から得られた脳組織（またはその副成分）または網膜組織（またはその副成分）を意味する。 The term "sample," as used herein, encompasses a collection of similar bodily fluids, cells, or tissues isolated from a subject as well as bodily fluids, cells, or tissues present within a subject. Examples of biological fluids include blood, serum and serous fluid, plasma, spinal fluid, ocular fluid, lymph, urine, saliva, and the like. Tissue samples can include samples from tissues, organs, or localized areas. For example, samples can be obtained from particular organs, portions of organs, or fluids or cells within those organs. In certain embodiments, the sample is the brain (e.g., the whole brain or a segment of the brain, e.g., the striatum, or certain types of cells in the brain, e.g., neurons and glial cells (astrocytes, oligodendrocytes). , microglial cells)). In some embodiments, "sample obtained from a subject" refers to blood obtained from a subject or plasma or serum obtained therefrom. In further embodiments, "sample obtained from a subject" refers to brain tissue (or subcomponents thereof) or retinal tissue (or subcomponents thereof) obtained from a subject.

用語「置換されている」は、所与の構造における１つまたは複数の水素ラジカルが特定の置換基のラジカルで置き換えられていることを指す。それらとしては、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロシクリル、ハロ、チオール、アルキルチオ、アリールチオ、アルキルチオアルキル、アリールチオアルキル、アルキルスルホニル、アルキルスルホニルアルキル、アリールスルホニルアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、アラルコキシ、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、ハロアルキル、アミノ、トリフルオロメチル、シアノ、ニトロ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アルキルアミノアルキル、アリールアミノアルキル、アミノアルキルアミノ、ヒドロキシ、アルコキシアルキル、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノカルボニルアルキル、アシル、アラルコキシカルボニル、カルボン酸、スルホン酸、スルホニル、ホスホン酸、アリール、ヘテロアリール、複素環式、および脂肪族が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。置換基をさらに置換することができることは理解されよう。 The term "substituted" refers to the replacement of one or more hydrogen radicals in a given structure with the radical of a specified substituent. They include alkyl, alkenyl, alkynyl, aryl, heterocyclyl, halo, thiol, alkylthio, arylthio, alkylthioalkyl, arylthioalkyl, alkylsulfonyl, alkylsulfonylalkyl, arylsulfonylalkyl, alkoxy, aryloxy, aralkoxy, aminocarbonyl, alkylaminocarbonyl, arylaminocarbonyl, alkoxycarbonyl, aryloxycarbonyl, haloalkyl, amino, trifluoromethyl, cyano, nitro, alkylamino, arylamino, alkylaminoalkyl, arylaminoalkyl, aminoalkylamino, hydroxy, alkoxyalkyl, carboxyalkyl, alkoxycarbonylalkyl, aminocarbonylalkyl, acyl, aralkoxycarbonyl, carboxylic acid, sulfonic acid, sulfonyl, phosphonic acid, aryl, heteroaryl, heterocyclic, and aliphatic. not. It is understood that substituents can be further substituted.

用語「アルキル」は、示された数の炭素原子を含有する、直鎖でも分岐鎖でもよい飽和および不飽和非芳香族炭化水素鎖（これらとしては、限定するものではないが、プロピル、アリル、またはプロパルギルが挙げられる）を指し、それらは、Ｎ、Ｏ、またはＳが挿入されていてもよい。例えば、「（Ｃ１～Ｃ６）アルキル」は、線状または分岐状に配置された１～６個の炭素原子を有するラジカルを意味する。「（Ｃ１～Ｃ６）アルキル」としては、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソ－プロピル、ｎ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ペンチル、およびヘキシルが挙げられる。ある特定の実施形態において、本開示の親油性部分は、Ｃ６～Ｃ１８アルキル炭化水素鎖を含み得る。 The term "alkyl" includes saturated and unsaturated non-aromatic hydrocarbon chains, which may be straight or branched, containing the indicated number of carbon atoms, including, but not limited to, propyl, allyl, or propargyl), which may be N, O, or S inserted. For example, "(C1-C6)alkyl" means a radical having from 1 to 6 carbon atoms arranged in a linear or branched manner. "(C1-C6)alkyl" includes, for example, methyl, ethyl, propyl, iso-propyl, n-butyl, tert-butyl, pentyl and hexyl. In certain embodiments, lipophilic moieties of the present disclosure may comprise C6-C18 alkyl hydrocarbon chains.

用語「アルキレン」は、指定された数の炭素原子を有する、置換されていてもよい飽和脂肪族分岐鎖または直鎖の二価炭化水素ラジカルを指す。例えば、「（Ｃ１～Ｃ６）アルキレン」は、線状に配置された１～６個の炭素原子を有する二価飽和脂肪族ラジカル、例えば、［（ＣＨ２）ｎ］（式中、ｎは１～６の整数である）を意味する。「（Ｃ１～Ｃ６）アルキレン」としては、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、およびヘキシレンが挙げられる。あるいは、「（Ｃ１～Ｃ６）アルキレン」は、分岐状に配置された１～６個の炭素原子を有する二価飽和ラジカル、例えば：［（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）］、［（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２］、［（ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ（ＣＨ３））］などを意味する。用語「アルキレンジオキソ」は、構造－Ｏ－Ｒ－Ｏ－（式中、Ｒはアルキレンを表す）の二価の種を指す。 The term "alkylene" refers to an optionally substituted saturated aliphatic branched or straight chain divalent hydrocarbon radical having the specified number of carbon atoms. For example, “(C1-C6)alkylene” refers to a divalent saturated aliphatic radical having from 1 to 6 linearly arranged carbon atoms, such as [(CH 2 ) n ], where n is 1 is an integer from ~6). "(C1-C6) alkylene" includes methylene, ethylene, propylene, butylene, pentylene, and hexylene. Alternatively, "(C1-C6)alkylene" is a divalent saturated radical having from 1 to 6 carbon atoms in a branched arrangement, such as: [(CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH(CH 3 )] , [( CH2CH2CH2CH2C ( CH3 ) 2 ], [( CH2C ( CH3 ) 2CH ( CH3 ))], etc. The term "alkylenedioxo" refers to the structure Refers to a divalent species of -ORO-, where R represents alkylene.

用語「メルカプト」は、－ＳＨラジカルを指す。用語「チオアルコキシ」は、－Ｓ－アルキルラジカルを指す。 The term "mercapto" refers to the -SH radical. The term "thioalkoxy" refers to the -S-alkyl radical.

用語「ハロ」は、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素のいずれかのラジカルを指す。「ハロゲン」および「ハロ」は、本明細書において相互互換的に使用される。 The term "halo" refers to any radical of fluorine, chlorine, bromine, or iodine. "Halogen" and "halo" are used interchangeably herein.

本明細書において使用される場合、用語「シクロアルキル」は、特に指定されない限り３～１４個の炭素原子を有する、飽和または不飽和非芳香族炭化水素環基を意味する。例えば、「（Ｃ３～Ｃ１０）シクロアルキル」は、（３～１０）員の飽和脂肪族環状炭化水素環の炭化水素ラジカルを意味する。シクロアルキル基の例としては、シクロプロピル、メチル－シクロプロピル、２，２－ジメチル－シクロブチル、２－エチル－シクロペンチル、シクロヘキシルなどが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。シクロアルキルには、複数のスピロ環または縮合環が含まれてもよい。シクロアルキル基は、通常の価数によって許容される限り、任意の位置で一、二、三、四、または五置換されていてもよい。 As used herein, the term "cycloalkyl" means a saturated or unsaturated non-aromatic hydrocarbon ring radical having from 3 to 14 carbon atoms unless otherwise specified. For example, “(C3-C10)cycloalkyl” means a hydrocarbon radical of a (3-10) membered saturated aliphatic cyclic hydrocarbon ring. Examples of cycloalkyl groups include, but are not limited to, cyclopropyl, methyl-cyclopropyl, 2,2-dimethyl-cyclobutyl, 2-ethyl-cyclopentyl, cyclohexyl, and the like. Cycloalkyls can include multiple spiro rings or fused rings. Cycloalkyl groups can be mono-, di-, tri-, tetra- or penta-substituted at any position as permitted by the usual valences.

本明細書において使用される場合、用語「アルケニル」は、少なくとも１個の炭素－炭素二重結合を含有し、特に指定されない限り２～１０個の炭素原子を有する、直鎖状または分岐状の非芳香族炭化水素ラジカルを指す。そのような基には５個までの炭素－炭素二重結合が存在してもよい。例えば、「Ｃ２～Ｃ６」アルケニルは、２～６個の炭素原子を有するアルケニルラジカルとして定義される。アルケニル基の例としては、エテニル、プロペニル、ブテニル、およびシクロヘキセニルが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。アルケニル基の直鎖状、分岐状、または環状部分は、二重結合を含有してもよく、通常の価数によって許容される限り、任意の位置で一、二、三、四、または五置換されていてもよい。用語「シクロアルケニル」は、指定された数の炭素原子を有し、少なくとも１個の炭素－炭素二重結合を有する単環式炭化水素基を意味する。 As used herein, the term “alkenyl” refers to a straight or branched chain containing at least one carbon-carbon double bond and having from 2 to 10 carbon atoms unless otherwise specified. Refers to non-aromatic hydrocarbon radicals. Up to 5 carbon-carbon double bonds may be present in such groups. For example, "C2-C6" alkenyl is defined as an alkenyl radical having 2-6 carbon atoms. Examples of alkenyl groups include, but are not limited to, ethenyl, propenyl, butenyl, and cyclohexenyl. The linear, branched or cyclic portion of the alkenyl group may contain double bonds and may be mono-, di-, tri-, tetra- or penta-substituted at any position as permitted by customary valences. may have been The term "cycloalkenyl" means a monocyclic hydrocarbon group having the specified number of carbon atoms and having at least one carbon-carbon double bond.

本明細書において使用される場合、用語「アルキニル」は、特に指定されない限り２～１０個の炭素原子を含有し、少なくとも１個の炭素－炭素三重結合を含有する、直鎖状または分岐状の炭化水素ラジカルを指す。５個までの炭素－炭素三重結合が存在してもよい。したがって、「Ｃ２～Ｃ６アルキニル」は、２～６個の炭素原子を有するアルキニルラジカルを意味する。アルキニル基の例としては、エチニル、２－プロピニル、および２－ブチニルが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。アルキニル基の直鎖状または分岐状部分は、通常の価数によって許容される限り三重結合を含有してもよく、通常の価数によって許容される限り、任意の位置で一、二、三、四、または五置換されていてもよい。 As used herein, the term “alkynyl,” unless otherwise specified, means a straight or branched chain containing from 2 to 10 carbon atoms and containing at least one carbon-carbon triple bond. Refers to hydrocarbon radicals. Up to 5 carbon-carbon triple bonds may be present. Thus, "C2-C6 alkynyl" means an alkynyl radical having 2-6 carbon atoms. Examples of alkynyl groups include, but are not limited to, ethynyl, 2-propynyl, and 2-butynyl. The straight or branched portion of the alkynyl group may contain triple bonds as long as their normal valences permit, and may be 1, 2, 3, 1, 2, 3 at any position as permitted by their normal valences. It may be tetra- or penta-substituted.

本明細書において使用される場合、「アルコキシル」または「アルコキシ」は、示した数の炭素原子が酸素架橋を通して結合された、上に定義される通りのアルキル基を指す。例えば、「（Ｃ１～Ｃ３）アルコキシ」には、メトキシ、エトキシ、およびプロポキシが含まれる。例えば、「（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ」には、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、およびＣ６アルコキシ基が含まれることが意図される。例えば、「（Ｃ１～Ｃ８）アルコキシ」には、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、およびＣ８アルコキシ基が含まれることが意図される。アルコキシの例としては、メトキシ、エトキシ、ｎ－プロポキシ、ｉ－プロポキシ、ｎ－ブトキシ、ｓ－ブトキシ、ｔ－ブトキシ、ｎ－ペントキシ、ｓ－ペントキシ、ｎ－ヘプトキシ、およびｎ－オクトキシが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。「アルキルチオ」は、硫黄連結原子を通して結合されたアルキルラジカルを意味する。用語「アルキルアミノ」または「アミノアルキル」は、ＮＨ連結を通して結合されたアルキルラジカルを意味する。「ジアルキルアミノ」は、窒素連結原子を通して結合された２個のアルキルラジカルを意味する。アミノ基は、非置換であっても、一置換されていても、または二置換されていてもよい。一部の実施形態において、２個のアルキルラジカルは同じである（例えば、Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノ）。一部の実施形態において、２個のアルキルラジカルは異なっている（例えば、Ｎ－エチル－Ｎ－メチルアミノ）。 As used herein, "alkoxyl" or "alkoxy" refer to an alkyl group as defined above with the indicated number of carbon atoms attached through an oxygen bridge. For example, "(C1-C3)alkoxy" includes methoxy, ethoxy and propoxy. For example, "(C1-C6)alkoxy" is meant to include C1, C2, C3, C4, C5, and C6 alkoxy groups. For example, "(C1-C8)alkoxy" is meant to include C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, and C8 alkoxy groups. Examples of alkoxy include methoxy, ethoxy, n-propoxy, i-propoxy, n-butoxy, s-butoxy, t-butoxy, n-pentoxy, s-pentoxy, n-heptoxy, and n-octoxy , but not limited to these. "Alkylthio" means an alkyl radical attached through a sulfur linking atom. The term "alkylamino" or "aminoalkyl" means an alkyl radical attached through an NH-linkage. "Dialkylamino" means two alkyl radicals joined through a nitrogen linking atom. Amino groups can be unsubstituted, monosubstituted or disubstituted. In some embodiments, the two alkyl radicals are the same (eg, N,N-dimethylamino). In some embodiments, the two alkyl radicals are different (eg, N-ethyl-N-methylamino).

本明細書において使用される場合、「アリール」または「芳香族」は、各環に７個までの原子を有する任意の安定な単環式または多環式炭素環であって、少なくとも１個の環が芳香族であるものを意味する。アリール基の例としては、フェニル、ナフチル、アントラセニル、テトラヒドロナフチル、インダニル、およびビフェニルが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。アリール置換基が二環式であり、一方の環が非芳香族である場合、結合が芳香族環を介することは理解されよう。アリール基は、通常の価数によって許容される限り、任意の位置で一、二、三、四、または五置換されていてもよい。用語「アリールアルキル」または用語「アラルキル」は、アリールで置換されているアルキルを指す。用語「アリールアルコキシ」は、アリールで置換されているアルコキシを指す。 As used herein, an "aryl" or "aromatic" is any stable monocyclic or polycyclic carbocyclic ring having up to 7 atoms in each ring and at least one It means that the ring is aromatic. Examples of aryl groups include, but are not limited to, phenyl, naphthyl, anthracenyl, tetrahydronaphthyl, indanyl, and biphenyl. It will be understood that when the aryl substituent is bicyclic and one ring is non-aromatic, attachment is via the aromatic ring. Aryl groups can be mono-, di-, tri-, tetra-, or penta-substituted at any position as permitted by the usual valences. The term "arylalkyl" or the term "aralkyl" refers to alkyl substituted with aryl. The term "arylalkoxy" refers to aryl-substituted alkoxy.

「ヘテロ」は、環構造における少なくとも１個の炭素原子が、Ｎ、Ｓ、およびＯから選択される少なくとも１個のヘテロ原子で置き換えられたものを指す。「ヘテロ」は、非環構造における少なくとも１個の炭素原子が置き換えられたものも指す。ヘテロ環構造またはヘテロ非環構造は、例えば、ヘテロ原子によって置き換えられた１、２、または３個の炭素原子を有し得る。 "Hetero"refers to a ring structure in which at least one carbon atom has been replaced with at least one heteroatom selected from N, S, and O. "Hetero" also refers to those in which at least one carbon atom in the non-cyclic structure has been replaced. A heterocyclic or heteroacyclic structure can have, for example, 1, 2, or 3 carbon atoms replaced by heteroatoms.

本明細書において使用される場合、用語「ヘテロアリール」は、各環に７個までの原子を有する安定な単環式または多環式環であって、少なくとも１個の環が芳香族であり、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個のヘテロ原子を含有するものを表す。ヘテロアリール基の例としては、アクリジニル、カルバゾリル、シンノリニル、キノキサリニル、ピラゾリル（ｐｙｒｒａｚｏｌｙｌ）、インドリル、ベンゾトリアゾリル、フラニル、チエニル、ベンゾチエニル、ベンゾフラニル、ベンズイミダゾロニル、ベンゾオキサゾロニル、キノリニル、イソキノリニル、ジヒドロイソインドロニル、イミダゾピリジニル、イソインドロニル、インダゾリル、オキサゾリル、オキサジアゾリル、イソオキサゾリル、インドリル、ピラジニル、ピリダジニル、ピリジニル、ピリミジニル、ピロリル、テトラヒドロキノリンが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。「ヘテロアリール」には、任意の窒素含有ヘテロアリールのＮ－オキシド誘導体が含まれることは理解されよう。ヘテロアリール置換基が二環式であり、一方の環が非芳香族であるかヘテロ原子を含有しない場合、結合が、芳香族環を介するか、またはヘテロ原子を含有する環を介することは理解されよう。ヘテロアリール基は、通常の価数によって許容される限り、任意の位置で一、二、三、四、または五置換されていてもよい。 As used herein, the term "heteroaryl" refers to a stable monocyclic or polycyclic ring having up to 7 atoms in each ring, wherein at least one ring is aromatic. , O, N, and S containing 1 to 4 heteroatoms. Examples of heteroaryl groups include acridinyl, carbazolyl, cinnolinyl, quinoxalinyl, pyrazolyl, indolyl, benzotriazolyl, furanyl, thienyl, benzothienyl, benzofuranyl, benzimidazolonyl, benzoxazolonyl, quinolinyl, isoquinolinyl. , dihydroisoindolyl, imidazopyridinyl, isoindolonyl, indazolyl, oxazolyl, oxadiazolyl, isoxazolyl, indolyl, pyrazinyl, pyridazinyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrrolyl, tetrahydroquinoline. It is understood that "heteroaryl" includes the N-oxide derivative of any nitrogen-containing heteroaryl. It is understood that when a heteroaryl substituent is bicyclic and one ring is non-aromatic or contains no heteroatoms, attachment is either through the aromatic ring or through the ring containing the heteroatom. let's be Heteroaryl groups may be mono-, di-, tri-, tetra- or penta-substituted at any position as permitted by the usual valences.

本明細書において使用される場合、用語「複素環」、「複素環式」、または「ヘテロシクリル」は、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個のヘテロ原子を含有する、多環式基を含めた３～１４員の芳香族または非芳香族複素環を意味する。本明細書において使用される場合、用語「複素環式」はまた、用語「複素環」および「ヘテロシクリル」と同義であるとみなされ、それもまた本明細書において説明されるものと同じ定義を有すると理解される。「ヘテロシクリル」には、上述のヘテロアリール、ならびにそのジヒドロおよびテトラヒドロ類似体が含まれる。ヘテロシクリル基の例としては、アゼチジニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾフラザニル、ベンゾピラゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾチオフェニル、ベンゾオキサゾリル、カルバゾリル、カルボリニル、シンノリニル、フラニル、イミダゾリル、インドリニル、インドリル、インドラジニル、インダゾリル、イソベンゾフラニル、イソインドリル、イソキノリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、ナフトピリジニル、オキサジアゾリル、オキソオキサゾリジニル、オキサゾリル、オキサゾリン、オキソピペラジニル、オキソピロリジニル、オキソモルホリニル、イソキサゾリン、オキセタニル、ピラニル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリドピリジニル、ピリダジニル、ピリジル、ピリジノニル、ピリミジル、ピリミジノニル、ピロリル、キナゾリニル、キノリル、キノキサリニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオピラニル、テトラヒドロイソキノリニル、テトラゾリル、テトラゾロピリジル、チアジアゾリル、チアゾリル、チエニル、トリアゾリル、１，４－ジオキサニル、ヘキサヒドロアゼピニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピリジン－２－オニル、ピロリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ジヒドロベンゾイミダゾリル、ジヒドロベンゾフラニル、ジヒドロベンゾチオフェニル、ジヒドロベンゾオキサゾリル、ジヒドロフラニル、ジヒドロイミダゾリル、ジヒドロインドリル、ジヒドロイソオキサゾリル、ジヒドロイソチアゾリル、ジヒドロオキサジアゾリル、ジヒドロオキサゾリル、ジヒドロピラジニル、ジヒドロピラゾリル、ジヒドロピリジニル、ジヒドロピリミジニル、ジヒドロピロリル、ジヒドロキノリニル、ジヒドロテトラゾリル、ジヒドロチアジアゾリル、ジヒドロチアゾリル、ジヒドロチエニル、ジヒドロトリアゾリル、ジヒドロアゼチジニル、ジオキシドチオモルホリニル、メチレンジオキシベンゾイル、テトラヒドロフラニル、およびテトラヒドロチエニル、ならびにそれらのＮ－オキシドが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。ヘテロシクリル置換基の結合は、炭素原子を介するか、またはヘテロ原子を介して生じ得る。ヘテロシクリル基は、通常の価数によって許容される限り、任意の位置で一、二、三、四、または五置換されていてもよい。 As used herein, the terms “heterocycle,” “heterocyclic,” or “heterocyclyl” contain 1-4 heteroatoms selected from the group consisting of O, N, and S , means a 3- to 14-membered aromatic or non-aromatic heterocyclic ring, including polycyclic groups. As used herein, the term "heterocyclic" is also considered synonymous with the terms "heterocycle" and "heterocyclyl", which also have the same definitions as set forth herein. It is understood to have "Heterocyclyl" includes the above mentioned heteroaryls, as well as dihydro and tetrathydro analogs thereof. Examples of heterocyclyl groups include azetidinyl, benzimidazolyl, benzofuranyl, benzofurazanyl, benzopyrazolyl, benzotriazolyl, benzothiophenyl, benzoxazolyl, carbazolyl, carbolinyl, cinnolinyl, furanyl, imidazolyl, indolinyl, indolyl, indrazinyl, indazolyl, isobenzofuranyl, isoindolyl, isoquinolyl, isothiazolyl, isoxazolyl, naphthopyridinyl, oxadiazolyl, oxoxazolidinyl, oxazolyl, oxazoline, oxopiperazinyl, oxopyrrolidinyl, oxomorpholinyl, isoxazoline, oxetanyl, pyranyl, pyrazinyl, pyrazolyl, pyridazinyl, pyridopyridinyl, pyridazinyl, pyridyl, pyridinonyl, pyrimidyl, pyrimidinonyl, pyrrolyl, quinazolinyl, quinolyl, quinoxalinyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, tetrahydrothiopyranyl, tetrahydroisoquinolinyl, tetrazolyl, tetrazolopyridyl, thiadiazolyl, Thiazolyl, thienyl, triazolyl, 1,4-dioxanyl, hexahydroazepinyl, piperazinyl, piperidinyl, pyridin-2-onyl, pyrrolidinyl, morpholinyl, thiomorpholinyl, dihydrobenzimidazolyl, dihydrobenzofuranyl, dihydrobenzothiophenyl, dihydrobenzoxa zolyl, dihydrofuranyl, dihydroimidazolyl, dihydroindolyl, dihydroisoxazolyl, dihydroisothiazolyl, dihydrooxadiazolyl, dihydrooxazolyl, dihydropyrazinyl, dihydropyrazolyl, dihydropyridinyl, dihydropyrimidinyl , dihydropyrrolyl, dihydroquinolinyl, dihydrotetrazolyl, dihydrothiadiazolyl, dihydrothiazolyl, dihydrothienyl, dihydrotriazolyl, dihydroazetidinyl, dioxidothiomorpholinyl, methylenedioxybenzoyl, Examples include, but are not limited to, tetrahydrofuranyl, and tetrahydrothienyl, and their N-oxides. Attachment of a heterocyclyl substituent can occur via a carbon atom or via a heteroatom. Heterocyclyl groups may be mono-, di-, tri-, tetra- or penta-substituted at any position as permitted by the usual valences.

「ヘテロシクロアルキル」は、炭素の１～４個が、酸素、窒素、または硫黄などのヘテロ原子によって置き換えられたシクロアルキル残基を指す。ラジカルがヘテロシクリル基である複素環の例としては、テトラヒドロピラン、モルホリン、ピロリジン、ピペリジン、チアゾリジン、オキサゾール、オキサゾリン、イソオキサゾール、ジオキサン、テトラヒドロフランなどが挙げられる。 "Heterocycloalkyl" refers to cycloalkyl residues in which 1-4 carbons have been replaced by heteroatoms such as oxygen, nitrogen or sulfur. Examples of heterocycles in which the radical is a heterocyclyl group include tetrahydropyran, morpholine, pyrrolidine, piperidine, thiazolidine, oxazole, oxazoline, isoxazole, dioxane, tetrahydrofuran, and the like.

用語「ヘテロアリール」は、単環式であれば１～３個のヘテロ原子、二環式であれば１～６個のヘテロ原子、または三環式であれば１～９個のヘテロ原子を有し、前記ヘテロ原子が、Ｏ、Ｎ、またはＳから選択される（例えば、炭素原子と、単環式、二環式、または三環式ならばそれぞれ１～３個、１～６個、または１～９個の、Ｎ、Ｏ、またはＳのヘテロ原子とを有する）、芳香族５～８員単環式、８～１２員二環式、または１１～１４員三環式環構造を指し、各環の０、１、２、３、または４個の原子は、置換基によって置換されていてもよい。ヘテロアリール基の例としては、ピリジル、フリルまたはフラニル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、ピリミジニル、チオフェニルまたはチエニル、キノリニル、インドリル、チアゾリルなどが挙げられる。用語「ヘテロアリールアルキル」または用語「ヘテロアラルキル」は、ヘテロアリールで置換されたアルキルを指す。用語「ヘテロアリールアルコキシ」は、ヘテロアリールで置換されたアルコキシを指す。 The term “heteroaryl” includes 1 to 3 heteroatoms if monocyclic, 1 to 6 heteroatoms if bicyclic, or 1 to 9 heteroatoms if tricyclic. and said heteroatoms are selected from O, N, or S (for example, carbon atoms and 1 to 3, 1 to 6 if monocyclic, bicyclic, or tricyclic, respectively; or 1-9 N, O, or S heteroatoms), an aromatic 5-8 membered monocyclic, 8-12 membered bicyclic, or 11-14 membered tricyclic ring structure 0, 1, 2, 3, or 4 atoms of each ring may be substituted by a substituent. Examples of heteroaryl groups include pyridyl, furyl or furanyl, imidazolyl, benzimidazolyl, pyrimidinyl, thiophenyl or thienyl, quinolinyl, indolyl, thiazolyl, and the like. The term "heteroarylalkyl" or the term "heteroaralkyl" refers to alkyl substituted with heteroaryl. The term "heteroarylalkoxy" refers to heteroaryl-substituted alkoxy.

用語「シクロアルキル」には、本明細書において用いられる場合、３～１２個の炭素、例えば３～８個の炭素、例えば３～６個の炭素を有する、飽和および部分的不飽和の環式炭化水素基が含まれ、該シクロアルキル基は追加的に適宜置換されていてもよい。シクロアルキル基としては、限定するものではないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘプチル、およびシクロオクチルが挙げられる。 The term "cycloalkyl," as used herein, includes saturated and partially unsaturated cyclic groups having 3-12 carbons, such as 3-8 carbons, such as 3-6 carbons. Hydrocarbon groups are included, and the cycloalkyl groups may additionally be optionally substituted. Cycloalkyl groups include, but are not limited to, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclopentenyl, cyclohexyl, cyclohexenyl, cycloheptyl, and cyclooctyl.

用語「アシル」は、アルキルカルボニル、シクロアルキルカルボニル、アリールカルボニル、ヘテロシクリルカルボニル、またはヘテロアリールカルボニル置換基を指し、これらのいずれも置換基によってさらに置換されていてもよい。 The term "acyl" refers to an alkylcarbonyl, cycloalkylcarbonyl, arylcarbonyl, heterocyclylcarbonyl, or heteroarylcarbonyl substituent, any of which may be further substituted with substituents.

本明細書において使用される場合、「ケト」は、カルボニル架橋を通して結合された、本明細書に定義される通りの任意のアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、またはアリール基を指す。 As used herein, "keto" is any alkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, cycloalkenyl, heterocyclyl, heteroaryl, or as defined herein attached through a carbonyl bridge. Refers to an aryl group.

ケト基の例としては、アルカノイル（例えば、アセチル、プロピオニル、ブタノイル、ペンタノイル、ヘキサノイル）、アルケノイル（例えば、アクリロイル）、アルキノイル（例えば、エチノイル、プロピノイル、ブチノイル、ペンチノイル、ヘキシノイル）、アリーロイル（例えば、ベンゾイル）、ヘテロアリーロイル（例えば、ピロロリル、イミダゾロイル、キノリノイル、ピリジノイル）が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。 Examples of keto groups include alkanoyl (e.g. acetyl, propionyl, butanoyl, pentanoyl, hexanoyl), alkenoyl (e.g. acryloyl), alkinoyl (e.g. ethinoyl, propynoyl, butynoyl, pentynoyl, hexynoyl), aryloyl (e.g. benzoyl). , heteroaryloyl (eg, pyrrolyl, imidazoloyl, quinolinoyl, pyridinoyl).

本明細書において使用される場合、「アルコキシカルボニル」は、カルボニル架橋を通して結合された、上に定義される通りの任意のアルコキシ基（すなわち、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－アルキル）を指す。アルコキシカルボニル基の例としては、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、イソ－プロポキシカルボニル、ｎ－プロポキシカルボニル、ｔ－ブトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、またはｎ－ペントキシカルボニルが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。 As used herein, "alkoxycarbonyl" refers to any alkoxy group as defined above attached through a carbonyl bridge (ie, -C(O)O-alkyl). Examples of alkoxycarbonyl groups include, but are not limited to, methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, iso-propoxycarbonyl, n-propoxycarbonyl, t-butoxycarbonyl, benzyloxycarbonyl, or n-pentoxycarbonyl. isn't it.

本明細書において使用される場合、「アリールオキシカルボニル」は、オキシカルボニル架橋を通して結合された、本明細書に定義される通りの任意のアリール基（すなわち、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－アリール）を指す。アリールオキシカルボニル基の例としては、フェノキシカルボニルおよびナフチルオキシカルボニルが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。 As used herein, "aryloxycarbonyl" refers to any aryl group as defined herein attached through an oxycarbonyl bridge (ie, -C(O)O-aryl). Point. Examples of aryloxycarbonyl groups include, but are not limited to, phenoxycarbonyl and naphthyloxycarbonyl.

本明細書において使用される場合、「ヘテロアリールオキシカルボニル」は、オキシカルボニル架橋を通して結合された、本明細書に定義される通りの任意のヘテロアリール基（すなわち、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－ヘテロアリール）を指す。ヘテロアリールオキシカルボニル基の例としては、２－ピリジルオキシカルボニル、２－オキサゾリルオキシカルボニル、４－チアゾリルオキシカルボニル、またはピリミジニルオキシカルボニルが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。 As used herein, "heteroaryloxycarbonyl" refers to any heteroaryl group as defined herein attached through an oxycarbonyl bridge (ie, -C(O)O-hetero aryl). Examples of heteroaryloxycarbonyl groups include, but are not limited to, 2-pyridyloxycarbonyl, 2-oxazolyloxycarbonyl, 4-thiazolyloxycarbonyl, or pyrimidinyloxycarbonyl.

用語「オキソ」は、炭素に結合されたときはカルボニルを形成し、窒素に結合されたときはＮ－オキシドを形成し、硫黄に結合されたときはスルホキシドまたはスルホンを形成する、酸素原子を指す。 The term "oxo" refers to an oxygen atom that forms a carbonyl when attached to carbon, an N-oxide when attached to nitrogen, and a sulfoxide or sulfone when attached to sulfur. .

本明細書に開示される化合物および組成物は、その化合物または組成物が置かれた環境に応じて、特定の原子（例えば、Ｎ、Ｏ、またはＳ原子）がプロトン化または脱プロトン化された状態で有する場合があることを、当業者であれば容易に理解および認識するであろう。したがって、本明細書において使用される場合、本明細書に開示される構造は、ある特定の官能基、例えば、ＯＨ、ＳＨ、またはＮＨなどがプロトン化または脱プロトン化されている場合があることが想定される。本発明における開示は、当業者によって容易に理解されるように、開示される化合物および組成物を、環境のｐＨに基づいたそれらのプロトン化の状態にかかわらず網羅することが意図される。 The compounds and compositions disclosed herein have certain atoms (e.g., N, O, or S atoms) protonated or deprotonated, depending on the environment in which the compound or composition is placed. Those skilled in the art will readily understand and appreciate what may have to do with the situation. Thus, as used herein, the structures disclosed herein may have certain functional groups such as OH, SH, or NH protonated or deprotonated. is assumed. The disclosure in the present invention is intended to cover the disclosed compounds and compositions regardless of their state of protonation based on the pH of the environment, as will be readily appreciated by those skilled in the art.

ＩＩ．本開示のＲＮＡｉ剤
本明細書に記載されるのは、ＭＡＰＴ遺伝子の発現を阻害するＲＮＡｉ剤である。一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、細胞、例えば対象（例えば、哺乳動物、例えば、ＭＡＰＴ関連疾患、例えば、アルツハイマー病、ＦＴＤ、ＰＳＰ、または別のタウオパチーを有するヒト）内の細胞におけるＭＡＰＴ遺伝子の発現を阻害するための二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）分子を含む。ｄｓＲＮＡは、ＭＡＰＴ遺伝子の発現の際に形成されるｍＲＮＡの少なくとも一部に対して相補的である相補性の領域を有するアンチセンス鎖を含む。相補性の領域は、約１５～３０ヌクレオチド長またはそれ以下である。ＭＡＰＴ遺伝子を発現する細胞と接触すると、ＲＮＡｉ剤は、ＭＡＰＴ遺伝子（例えば、ヒト遺伝子、霊長類遺伝子、非霊長類遺伝子）の発現を、ＲＮＡｉ剤と接触していない同様の細胞またはＭＡＰＴ遺伝子と相補的ではないＲＮＡｉ剤と比較して少なくとも２５％または本明細書に記載されるようにそれ以上阻害する。ＭＡＰＴ遺伝子の発現は、例えば、ＰＣＲもしくは分岐ＤＮＡ（ｂＤＮＡ）ベースの方法によって、またはタンパク質ベースの方法によって、例えば、ウェスタンブロッティングもしくはフローサイトメトリー技術を使用する免疫蛍光分析などによってアッセイすることができる。一実施形態において、ノックダウンのレベルは、以下の実施例１に提供されるアッセイ方法を使用して、ＢＥ（２）－Ｃ細胞でアッセイされる。一部の実施形態において、ノックダウンのレベルは、一次マウス肝細胞でアッセイされる。一部の実施形態において、ノックダウンのレベルは、Ｎｅｕｒｏ－２ａ細胞でアッセイされる。 II. RNAi Agents of the Present Disclosure Described herein are RNAi agents that inhibit expression of the MAPT gene. In one embodiment, the RNAi agent affects the expression of the MAPT gene in cells, e.g., cells within a subject (e.g., a mammal, e.g., a human with a MAPT-related disease, e.g., Alzheimer's disease, FTD, PSP, or another tauopathy). including double-stranded ribonucleic acid (dsRNA) molecules for inhibiting A dsRNA includes an antisense strand that has a region of complementarity that is complementary to at least a portion of the mRNA formed upon expression of the MAPT gene. A region of complementarity is about 15-30 nucleotides in length or less. Upon contact with a cell expressing the MAPT gene, the RNAi agent complements the expression of the MAPT gene (e.g., human gene, primate gene, non-primate gene) with similar cells not contacted with the RNAi agent or with the MAPT gene. inhibit by at least 25% or more as described herein compared to non-targeted RNAi agents. MAPT gene expression can be assayed, for example, by PCR or branched DNA (bDNA)-based methods, or by protein-based methods, such as immunofluorescence analysis using Western blotting or flow cytometry techniques. In one embodiment, the level of knockdown is assayed in BE(2)-C cells using the assay method provided in Example 1 below. In some embodiments, the level of knockdown is assayed in primary mouse hepatocytes. In some embodiments, the level of knockdown is assayed in Neuro-2a cells.

ｄｓＲＮＡは、２つのＲＮＡ鎖を含み、それらは、相補的であり、ｄｓＲＮＡが使用される条件下においてハイブリダイズして二重鎖構造を形成する。ｄｓＲＮＡの一方の鎖（アンチセンス鎖）は、実質的に相補的で、概して標的配列に対して完全に相補的である、相補性の領域を含む。標的配列は、ＭＡＰＴ遺伝子の発現の際に形成されたｍＲＮＡの配列から得ることができる。他方の鎖（センス鎖）は、アンチセンス鎖に対して相補的な領域を含み、それにより、２つの鎖は、好適な条件下で組み合わされた場合、ハイブリダイズして二重鎖構造を形成する。本明細書の他の箇所で説明され、当技術分野で公知であるように、ｄｓＲＮＡの相補配列は、別々のオリゴヌクレオチド上において相対するように、単一の核酸分子の自己相補領域として含ませることもできる。 A dsRNA comprises two RNA strands that are complementary and hybridize to form a duplex structure under the conditions in which the dsRNA is used. One strand of the dsRNA (the antisense strand) contains a region of complementarity that is substantially complementary, generally perfectly complementary to the target sequence. A target sequence can be obtained from the sequence of the mRNA formed upon expression of the MAPT gene. The other strand (the sense strand) contains a region complementary to the antisense strand, whereby the two strands hybridize to form a duplex structure when combined under suitable conditions. do. As described elsewhere herein and known in the art, the complementary sequences of the dsRNA are contained as self-complementary regions of a single nucleic acid molecule to face each other on separate oligonucleotides. can also

概して、二重鎖構造は、１５から３０塩基対の長さ、例えば、１５～２９、１５～２８、１５～２７、１５～２６、１５～２５、１５～２４、１５～２３、１５～２２、１５～２１、１５～２０、１５～１９、１５～１８、１５～１７、１８～３０、１８～２９、１８～２８、１８～２７、１８～２６、１８～２５、１８～２４、１８～２３、１８～２２、１８～２１、１８～２０、１９～３０、１９～２９、１９～２８、１９～２７、１９～２６、１９～２５、１９～２４、１９～２３、１９～２２、１９～２１、１９～２０、２０～３０、２０～２９、２０～２８、２０～２７、２０～２６、２０～２５、２０～２４、２０～２３、２０～２２、２０～２１、２１～３０、２１～２９、２１～２８、２１～２７、２１～２６、２１～２５、２１～２４、２１～２３、または２１～２２塩基対の長さである。ある特定の好ましい実施形態において、二重鎖構造は、１８から２５塩基対の長さ、例えば、１８～２５、１８～２４、１８～２３、１８～２２、１８～２１、１８～２０、１９～２５、１９～２４、１９～２３、１９～２２、１９～２１、１９～２０、２０～２５、２０～２４、２０～２３、２０～２２、２０～２１、２１～２５、２１～２４、２１～２３、２１～２２、２２～２５、２２～２４、２２～２３、２３～２５、２３～２４、または２４～２５塩基対の長さ、例えば、１９～２１塩基対の長さである。上記に列記した範囲および長さの中間的な範囲および長さも、本開示の一部であることが想到される。 Generally, the duplex structure is 15 to 30 base pairs in length, e.g. , 15-21, 15-20, 15-19, 15-18, 15-17, 18-30, 18-29, 18-28, 18-27, 18-26, 18-25, 18-24, 18 ~23, 18-22, 18-21, 18-20, 19-30, 19-29, 19-28, 19-27, 19-26, 19-25, 19-24, 19-23, 19-22 , 19-21, 19-20, 20-30, 20-29, 20-28, 20-27, 20-26, 20-25, 20-24, 20-23, 20-22, 20-21, 21 ~30, 21-29, 21-28, 21-27, 21-26, 21-25, 21-24, 21-23, or 21-22 base pairs in length. In certain preferred embodiments, the duplex structure is 18 to 25 base pairs in length, e.g. ~25, 19-24, 19-23, 19-22, 19-21, 19-20, 20-25, 20-24, 20-23, 20-22, 20-21, 21-25, 21-24 , 21-23, 21-22, 22-25, 22-24, 22-23, 23-25, 23-24, or 24-25 base pairs in length, such as 19-21 base pairs in length. be. Ranges and lengths intermediate to those recited above are also contemplated to be part of this disclosure.

同様に、標的配列に対する相補性の領域は、１５から３０ヌクレオチド長、例えば、１５～２９、１５～２８、１５～２７、１５～２６、１５～２５、１５～２４、１５～２３、１５～２２、１５～２１、１５～２０、１５～１９、１５～１８、１５～１７、１８～３０、１８～２９、１８～２８、１８～２７、１８～２６、１８～２５、１８～２４、１８～２３、１８～２２、１８～２１、１８～２０、１９～３０、１９～２９、１９～２８、１９～２７、１９～２６、１９～２５、１９～２４、１９～２３、１９～２２、１９～２１、１９～２０、２０～３０、２０～２９、２０～２８、２０～２７、２０～２６、２０～２５、２０～２４、２０～２３、２０～２２、２０～２１、２１～３０、２１～２９、２１～２８、２１～２７、２１～２６、２１～２５、２１～２４、２１～２３、または２１～２２ヌクレオチド長、例えば、１９～２３ヌクレオチド長または２１～２３ヌクレオチド長である。上記に列記した範囲および長さの中間的な範囲および長さも、本開示の一部であることが想到される。 Similarly, the region of complementarity to the target sequence is 15 to 30 nucleotides long, eg, 15-29, 15-28, 15-27, 15-26, 15-25, 15-24, 15-23, 15- 22, 15-21, 15-20, 15-19, 15-18, 15-17, 18-30, 18-29, 18-28, 18-27, 18-26, 18-25, 18-24, 18-23, 18-22, 18-21, 18-20, 19-30, 19-29, 19-28, 19-27, 19-26, 19-25, 19-24, 19-23, 19- 22, 19-21, 19-20, 20-30, 20-29, 20-28, 20-27, 20-26, 20-25, 20-24, 20-23, 20-22, 20-21, 21-30, 21-29, 21-28, 21-27, 21-26, 21-25, 21-24, 21-23, or 21-22 nucleotides long, such as 19-23 nucleotides long or 21-23 Nucleotide length. Ranges and lengths intermediate to those recited above are also contemplated to be part of this disclosure.

一部の実施形態において、二重鎖構造は、１９から３０塩基対の長さである。同様に、標的配列に対する相補性の領域は、１９から３０ヌクレオチド長である。 In some embodiments, the duplex structure is 19 to 30 base pairs in length. Similarly, the region of complementarity to the target sequence is 19-30 nucleotides long.

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡは、１５から２３ヌクレオチド長、１９から２３ヌクレオチド長、または２５から３０ヌクレオチド長である。概して、ｄｓＲＮＡは、Ｄｉｃｅｒ酵素のための基質として機能するのに十分に長い。例えば、約２１～２３ヌクレオチドより長いｄｓＲＮＡは、Ｄｉｃｅｒのための基質として機能することができることは、当技術分野において周知である。当業者も認識するであろうように、切断のために標的化されるＲＮＡの領域は、ほとんどの場合、より長いＲＮＡ分子、多くの場合、ｍＲＮＡ分子の一部である。関連する場合、ｍＲＮＡ標的の「一部」は、ＲＮＡｉ依存性切断（すなわち、ＲＩＳＣ経路による切断）のための基質であることを可能にするのに十分な長さのｍＲＮＡ標的の連続配列である。 In some embodiments, the dsRNA is 15 to 23 nucleotides in length, 19 to 23 nucleotides in length, or 25 to 30 nucleotides in length. Generally the dsRNA is long enough to serve as a substrate for the Dicer enzyme. For example, it is well known in the art that dsRNAs longer than about 21-23 nucleotides can serve as substrates for Dicer. As those skilled in the art will also appreciate, the region of RNA targeted for cleavage is most often part of a longer RNA molecule, often an mRNA molecule. As relevant, a "portion" of an mRNA target is a contiguous sequence of the mRNA target of sufficient length to allow it to be a substrate for RNAi-dependent cleavage (i.e., cleavage by the RISC pathway). .

当業者は、二重鎖領域が、ｄｓＲＮＡの一次機能部分、例えば、１５から３６塩基対、例えば、１５～３６、１５～３５、１５～３４、１５～３３、１５～３２、１５～３１、１５～３０、１５～２９、１５～２８、１５～２７、１５～２６、１５～２５、１５～２４、１５～２３、１５～２２、１５～２１、１５～２０、１５～１９、１５～１８、１５～１７、１８～３０、１８～２９、１８～２８、１８～２７、１８～２６、１８～２５、１８～２４、１８～２３、１８～２２、１８～２１、１８～２０、１９～３０、１９～２９、１９～２８、１９～２７、１９～２６、１９～２５、１９～２４、１９～２３、１９～２２、１９～２１、１９～２０、２０～３０、２０～２９、２０～２８、２０～２７、２０～２６、２０～２５、２０～２４、２０～２３、２０～２２、２０～２１、２１～３０、２１～２９、２１～２８、２１～２７、２１～２６、２１～２５、２１～２４、２１～２３、または２１～２２塩基対、例えば、１９～２１塩基対の二重鎖領域であることも認識するであろう。したがって、一実施形態において、切断のために所望のＲＮＡを標的化する、例えば、１５～３０塩基対の、機能的二重鎖へとプロセシングされる限り、３０超の塩基対の二重鎖領域を有するＲＮＡ分子またはＲＮＡ分子の複合体は、ｄｓＲＮＡである。したがって、当業者は、一実施形態において、ｍｉＲＮＡがｄｓＲＮＡであることを認識するであろう。別の実施形態において、ｄｓＲＮＡは、天然に存在するｍｉＲＮＡではない。別の実施形態において、ＭＡＰＴ発現を標的化するために有用なＲＮＡｉ剤は、より大きなｄｓＮＲＡの切断によって標的細胞において生成されない。 One skilled in the art will appreciate that the duplex region is the primary functional portion of the dsRNA, eg, 15 to 36 base pairs, eg, 15-36, 15-35, 15-34, 15-33, 15-32, 15-31, 15-30, 15-29, 15-28, 15-27, 15-26, 15-25, 15-24, 15-23, 15-22, 15-21, 15-20, 15-19, 15- 18, 15-17, 18-30, 18-29, 18-28, 18-27, 18-26, 18-25, 18-24, 18-23, 18-22, 18-21, 18-20, 19-30, 19-29, 19-28, 19-27, 19-26, 19-25, 19-24, 19-23, 19-22, 19-21, 19-20, 20-30, 20- 29, 20-28, 20-27, 20-26, 20-25, 20-24, 20-23, 20-22, 20-21, 21-30, 21-29, 21-28, 21-27, It will also be appreciated that the duplex region is 21-26, 21-25, 21-24, 21-23, or 21-22 base pairs, eg, 19-21 base pairs. Thus, in one embodiment, a duplex region of greater than 30 base pairs that targets the desired RNA for cleavage, e.g., as long as it is processed into a functional duplex of 15-30 base pairs. is a dsRNA. Accordingly, those skilled in the art will recognize that in one embodiment the miRNA is a dsRNA. In another embodiment, the dsRNA is not a naturally occurring miRNA. In another embodiment, RNAi agents useful for targeting MAPT expression are not generated in target cells by cleavage of larger dsNRAs.

本明細書において説明されるｄｓＲＮＡは、例えば、１、２、３、または４ヌクレオチドの、１つまたは複数の一本鎖ヌクレオチドオーバーハングをさらに含むことができる。ヌクレオチドオーバーハングは、デオキシヌクレオチド／ヌクレオシドなどのヌクレオチド／ヌクレオシドアナログを含み得るかまたはそれらからなり得る。オーバーハングは、センス鎖上、アンチセンス鎖上、またはそれらの任意の組合せであり得る。その上、オーバーハングのヌクレオチドは、ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖またはセンス鎖のどちらかの５’端上、３’端上、またはその両方に存在し得る。 The dsRNA described herein can further comprise one or more single-stranded nucleotide overhangs of, eg, 1, 2, 3, or 4 nucleotides. Nucleotide overhangs may comprise or consist of nucleotide/nucleoside analogues such as deoxynucleotides/nucleosides. Overhangs can be on the sense strand, on the antisense strand, or any combination thereof. Moreover, overhanging nucleotides can be present on the 5' end, the 3' end, or both of either the antisense or sense strands of the dsRNA.

ｄｓＲＮＡは、当技術分野で公知の標準的な方法によって合成することができる。本発明の二本鎖ＲＮＡｉ化合物は、二段階手法を使用して調製され得る。最初に、二本鎖ＲＮＡ分子の個々の鎖が、別々に調製される。次いで、当該成分の鎖がアニールされる。ｓｉＲＮＡ化合物の個々の鎖は、溶液相または固相有機合成またはその両方を使用して調製することができる。有機合成は、非天然のヌクレオチドまたは修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド鎖を容易に調製することができるという利点を提供する。同様に、本発明の一本鎖オリゴヌクレオチドは、溶液相または固相有機合成またはその両方を使用して調製することができる。 dsRNA can be synthesized by standard methods known in the art. Double-stranded RNAi compounds of the invention can be prepared using a two-step procedure. First, the individual strands of a double-stranded RNA molecule are prepared separately. The strands of the component are then annealed. Individual strands of the siRNA compound can be prepared using solution-phase or solid-phase organic synthesis or both. Organic synthesis offers the advantage that oligonucleotide chains containing unnatural or modified nucleotides can be readily prepared. Similarly, single-stranded oligonucleotides of the invention can be prepared using solution-phase or solid-phase organic synthesis or both.

一態様では、本開示のｄｓＲＮＡは、少なくとも２つのヌクレオチド配列、すなわち、センス鎖およびアンチセンス鎖を含む。ＭＡＰＴに対するセンス鎖配列は、表３～８、１２、１３、および１６～２８のいずれか１つにおいて提供される配列の群から選択され得、ならびにセンス鎖の、アンチセンス鎖の対応するヌクレオチドは、表３～８、１２、１３、および１６～２８のいずれか１つの配列の群から選択され得る。この態様では、２つの配列の一方は、２つの配列の他方に対して相補的であり、この場合、配列の一方は、ＭＡＰＴ遺伝子の発現の際に生じたｍＲＮＡの配列に対して実質的に相補的である。そのため、この態様では、ｄｓＲＮＡは、一方のオリゴヌクレオチドが、表３～８、１２、１３、および１６～２８のいずれか１つにおけるセンス鎖（パッセンジャー鎖）として説明され、第２のオリゴヌクレオチドが、表３～８、１２、１３、および１６～２８のいずれか１つにおけるセンス鎖に対する対応するアンチセンス鎖（ガイド鎖）として説明される、２つのオリゴヌクレオチドを含むであろう。 In one aspect, the dsRNA of this disclosure comprises at least two nucleotide sequences, a sense strand and an antisense strand. The sense strand sequence for MAPT can be selected from the group of sequences provided in any one of Tables 3-8, 12, 13, and 16-28, and the corresponding nucleotides of the sense strand, the antisense strand are , Tables 3-8, 12, 13, and 16-28. In this aspect, one of the two sequences is complementary to the other of the two sequences, where one of the sequences is substantially relative to the sequence of the mRNA produced upon expression of the MAPT gene. Complementary. Thus, in this aspect, the dsRNA is described in which one oligonucleotide is the sense strand (passenger strand) in any one of Tables 3-8, 12, 13, and 16-28, and the second oligonucleotide is , the corresponding antisense strand (guide strand) to the sense strand in any one of Tables 3-8, 12, 13, and 16-28.

一実施形態において、センス鎖は、配列番号３のヌクレオチド５１２～５３２、５１３～５３３、５１４～５３４、５１５～５３５、５１６～５３６、５１７～５３７、５１８～５３８、５１９～５３９、５２０～５４０、１０６３～１０８３、１０６７～１０８７、１０７２～１０９２、１０７４～１０９４、１０７５～１０９５、１１２５～１１４５、１１２６～１１４６、１１２７～１１４７、１１２９～１１４９、１１７０～１１９０、１３９５～１４１５、１９０５～１９２５、１９０６～１９２６、１９０９～１９２９、１９１１～１９３１、１９１２～１９３２、１９１３～１９３３、１９１４～１９３４、１９１５～１９３５、１９１６～１９３６、１９１９～１９３９、１９５１～１９７１、１９５４～１９７４、１９５８～１９７８、２３８７～２４０７、２４０９～２４２９、２４１０～２４３０、２４６９～２４８９、２４７１～２４９１、２４７２～２４９２、２４７６～２４９６、２４７７～２４９７、２４７８～２４９８、２４８０～２５００、２４８１～２５０１、２４８２～２５０２、２４８４～２５０４、２７６２～２７８２、２７６４～２７８４、２７６６～２７８６、２７６７～２７８７、２７６８～２７８８、２７６９～２７８９、２８１９～２８３９、２８２１～２８４１、２８２８～２８４８、２９４３～２９６３、２９４４～２９６４、２９４６～２９６６、２９４７～２９６７、３２５２～３２７２、３２７７～３２９７、３２８０～３３００、３２８１～３３０１、３２８２～３３０２、３２８４～３３０４、３２８５～３３０５、３２８６～３３０６、３３３１～３３５１、３３３２～３３５２、３３３３～３３５３、３３３４～３３５４、３３３５～３３５５、３３３６～３３５６、３３３８～３３５８、３３４０～３３６０、３３４２～３３６２、３３４３～３３６３、３３４４～３３６４、３３４５～３３６５、３３４６～３３６６、３３４７～３３６７、３３４９～３３６９、３３５０～３３７０、３３５３～３３７３、３３６４～３３８４、３３６６～３３８６、３３６７～３３８７、３３６８～３３８８、３３６９～３３８９、３３７０～３３９０、３４１２～３４３２、３４１４～３４３４、３４１５～３４３５、３４１６～３４３６、３４１７～３４３７、３４１９～３４３９、３４２０～３４４０、３４２４～３４４４、３４２５～３４４５、３４２６～３４４６、３４２７～３４４７、３４２８～３４４８、３４２９～３４４９、３４３０～３４５０、３４３１～３４５１、３４３４～３４５４、４１３２～４１５２、４１３４～４１５４、４１７９～４１９９、４１８２～４２０２、４１８４～４２０４、４３９５～４４１５、４４２５～４４４５、４４２６～４４４６、４４２９～４４４９、４４６９～４４８９、４４７０～４４９０、４４７１～４４９１、４４７２～４４９２、４４７３～４４９３、４４７４～４４９４、４５６９～４５８９、４５７１～４５９１、４５７２～４５９２、４５９６～４６１６、４６２３～４６４３、４７２１～４７４１、４７２２～４７４２、４７２５～４７４５、４７２６～４７４６、４７６６～４７８６、４７６７～４７８７、４７６８～４７８８、４７６９～４７８９、４７７０～４７９０、４７７９～４７９９、４８０５～４８２５、４８０６～４８２６、４８０７～４８２７、４８０８～４８２８、４８０９～４８２９、４８１２～４８３２、４８１３～４８３３、４８１４～４８３４、４９３６～４９５６、５０７２～５０９２、５０７３～５０９３、５３４５～５３６５、５３４６～５３６６、５３４９～５３６９、５３５０～５３７０、５３５１～５３７１、５４６０～５４８０、５４６１～５４８１、５４６３～５４８３、５４６５～５４８５、５４６７～５４８７、５４６８～５４８８、５４６９～５４８９、５４７０～５４９０、５４７１～５４９１、５５０５～５５２５、５５０６～５５２６、５５０７～５５２７、５５０８～５５２８、５５０９～５５２９、５５１１～５５３１、５５１３～５５３３、５５１４～５５３４、５５４１～５５６１、５５４４～５５６４、５５４６～５５６６、５５４７～５５６７、５５４８～５５６８、５５５０～５５７０、５５５１～５５７１、５５７４～５５９４、５５７６～５５９６、５６１４～５６３４、５２１～５４１、５２２～５４２、５２３～５４３、５２４～５４４、５２５～５４５、５２６～５４６、５２７～５４７、５２８～５４８、５２９～５４９、５３０～５５０、５３１～５５１、５３２～５５２、５３３～５５３、５３４～５５４、５３５～５５５、５３６～５５６、１０３４～１０５４、１０３５～１０５５、１０３６～１０５６、１０３７～１０５７、１０３８～１０５８、１０３９～１０５９、１０４０～１０６０、１０４１～１０６１、１０４２～１０６２、１０４３～１０６３、１０４４～１０６４、１０４５～１０６５、１０４６～１０６６、１０４７～１０６７、１０４８～１０６８、１０４９～１０６９、１０５０～１０７０、１０５１～１０７１、１０５２～１０７２、１０５３～１０７３、１０５４～１０７４、１０６２～１０８２、１０６４～１０８４、１０６５～１０８５、１０６６～１０８６、１０６８～１０８８、１０６９～１０８９、１０７０～１０９０、１０７１～１０９１、１０７３～１０９３、１０７６～１０９６、１０７７～１０９７、１０７８～１０９８、１０７９～１０９９、１０８０～１１００、１０８１～１１０１、１０８２～１１０２、１１２８～１１４８、１１２９～１１４９、１１３０～１１５０、１１３１～１１５１、１１３２～１１５２、１１３３～１１５３、１１３４～１１５４、１１３５～１１５５、１１３６～１１５６、１１３７～１１５７、１１３８～１１５８、１１３９～１１５９、１１４０～１１６０、１１４１～１１６１、１１４２～１１６２、１１４３～１１６３、１１４４～１１６４、１１４５～１１６５、１１４６～１１６６、１１４７～１１６７、１１４８～１１６８、９７５～９９５、９７６～９９６、９７７～９９７、９７８～９９８、９７９～９９９、９８０～１０００、９８１～１００１、９８２～１００２、９８３～１００３、９８４～１００４、９８５～１００５、９８６～１００６、９８７～１００７、９８８～１００８、９８９～１００９、９９０～１０１０、９９１～１０１１、９９２～１０１２、９９３～１０１３、９９４～１０１４、９９５～１０１５、９９６～１０１６、９９７～１０１７、９９８～１０１８、９９９～１０１９、１０００～１０２０、１００１～１０２１、１００２～１０２２、１００３～１０２３、１００４～１０２４、１００５～１０２５、１００６～１０２６、１００７～１０２７、１００８～１０２８、１００９～１０２９、１０１０～１０３０、１０１１～１０３１、１０１２～１０３２、１０１３～１０３３、１０１４～１０３４、１０１５～１０３５、１０１６～１０３６、１０１７～１０３７、１０１８～１０３８、１０１９～１０３９、１０２０～１０４０、１０２１～１０４１、１０２２～１０４２、１０２３～１０４３、１０２４～１０４４、１０２５～１０４５、１０２６～１０４６、１０２７～１０４７、１０２８～１０４８、１０２９～１０４９、１０３０～１０５０、１０３１～１０５１、１０３２～１０５２、１０３３～１０５３、１０３４～１０５４、１０３５～１０５５、１０３６～１０５６、１０３７～１０５７、１０３８～１０５８、１０３９～１０５９、１０４０～１０６０、１０４１～１０６１、１０４２～１０６２、１０４３～１０６３、および１０４５～１０６５のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖は、配列番号４の対応するヌクレオチド配列からの少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。 In one embodiment, the sense strand comprises nucleotides 512-532, 513-533, 514-534, 515-535, 516-536, 517-537, 518-538, 519-539, 520-540 of SEQ ID NO:3, 1063-1083, 1067-1087, 1072-1092, 1074-1094, 1075-1095, 1125-1145, 1126-1146, 1127-1147, 1129-1149, 1170-1190, 1395-1415, 1905-1925, 1 906~ 1926, 1909-1929, 1911-1931, 1912-1932, 1913-1933, 1914-1934, 1915-1935, 1916-1936, 1919-1939, 1951-1971, 1954-1974, 1958-1978, 2387-2 407, 2409-2429, 2410-2430, 2469-2489, 2471-2491, 2472-2492, 2476-2496, 2477-2497, 2478-2498, 2480-2500, 2481-2501, 2482-2502, 2484-2504, 2 762~ 2782, 2764-2784, 2766-2786, 2767-2787, 2768-2788, 2769-2789, 2819-2839, 2821-2841, 2828-2848, 2943-2963, 2944-2964, 2946-2966, 2947-2 967, 3252-3272, 3277-3297, 3280-3300, 3281-3301, 3282-3302, 3284-3304, 3285-3305, 3286-3306, 3331-3351, 3332-3352, 3333-3353, 3334-3354, 3 335~ 3355, 3336-3356, 3338-3358, 3340-3360, 3342-3362, 3343-3363, 3344-3364, 3345-3365, 3346-3366, 3347-3367, 3349-3369, 3350-3370, 3353-3 373, 3364-3384, 3366-3386, 3367-3387, 3368-3388, 3369-3389, 3370-3390, 3412-3432, 3414-3434, 3415-3435, 3416-3436, 3417-3437, 3419-3439, 3 420~ 3440, 3424-3444, 3425-3445, 3426-3446, 3427-3447, 3428-3448, 3429-3449, 3430-3450, 3431-3451, 3434-3454, 4132-4152, 4134-4154, 4179-4 199, 4182-4202, 4184-4204, 4395-4415, 4425-4445, 4426-4446, 4429-4449, 4469-4489, 4470-4490, 4471-4491, 4472-4492, 4473-4493, 4474-4494, 4 569~ 4589, 4571-4591, 4572-4592, 4596-4616, 4623-4643, 4721-4741, 4722-4742, 4725-4745, 4726-4746, 4766-4786, 4767-4787, 4768-4788, 4769-4 789, 5 073~ 5093, 5345-5365, 5346-5366, 5349-5369, 5350-5370, 5351-5371, 5460-5480, 5461-5481, 5463-5483, 5465-5485, 5467-5487, 5468-5488, 5469-5 489, 5470-5490, 5471-5491, 5505-5525, 5506-5526, 5507-5527, 5508-5528, 5509-5529, 5511-5531, 5513-5533, 5514-5534, 5541-5561, 5544-5564, 5 546~ 5566, 5547-5567, 5548-5568, 5550-5570, 5551-5571, 5574-5594, 5576-5596, 5614-5634, 521-541, 522-542, 523-543, 524-544, 525-545, 526-546, 527-547, 528-548, 529-549, 530-550, 531-551, 532-552, 533-553, 534-554, 535-555, 536-556, 1034-1054, 1035- 1055, 1036-1056, 1037-1057, 1038-1058, 1039-1059, 1040-1060, 1041-1061, 1042-1062, 1043-1063, 1044-1064, 1045-1065, 1046-1066, 1047-1 067, 1048-1068, 1049-1069, 1050-1070, 1051-1071, 1052-1072, 1053-1073, 1054-1074, 1062-1082, 1064-1084, 1065-1085, 1066-1086, 1068-1088, 1 069~ 1089, 1070-1090, 1071-1091, 1073-1093, 1076-1096, 1077-1097, 1078-1098, 1079-1099, 1080-1100, 1081-1101, 1082-1102, 1128-1148, 1129-1 149, 1130-1150, 1131-1151, 1132-1152, 1133-1153, 1134-1154, 1135-1155, 1136-1156, 1137-1157, 1138-1158, 1139-1159, 1140-1160, 1141-1161, 1 142~ 1162, 1143-1163, 1144-1164, 1145-1165, 1146-1166, 1147-1167, 1148-1168, 975-995, 976-996, 977-997, 978-998, 979-999, 980-1000, 981-1001, 982-1002, 983-1003, 984-1004, 985-1005, 986-1006, 987-1007, 988-1008, 989-1009, 990-1010, 991-1011, 992-1012, 993- 1013, 994-1014, 995-1015, 996-1016, 997-1017, 998-1018, 999-1019, 1000-1020, 1001-1021, 1002-1022, 1003-1023, 1004-1024, 1005-1025, 1006-1026, 1007-1027, 1008-1028, 1009-1029, 1010-1030, 1011-1031, 1012-1032, 1013-1033, 1014-1034, 1015-1035, 1016-1036, 1017-1037, 1 018~ 1038, 1019-1039, 1020-1040, 1021-1041, 1022-1042, 1023-1043, 1024-1044, 1025-1045, 1026-1046, 1027-1047, 1028-1048, 1029-1049, 1030-1 050, 1031-1051, 1032-1052, 1033-1053, 1034-1054, 1035-1055, 1036-1056, 1037-1057, 1038-1058, 1039-1059, 1040-1060, 1041-1061, 1042-1062, 1 043~ 1063, and 1045-1065, wherein the antisense strand comprises at least 15 contiguous nucleotides that differ by no more than 3 nucleotides from any one of the nucleotide sequences of SEQ ID NO:4, and the antisense strand comprises at least 15 nucleotides from the corresponding nucleotide sequence of SEQ ID NO:4 Contains consecutive nucleotides.

ある特定の実施形態において、本明細書に開示されるアンチセンスポリヌクレオチドは、標的ＭＡＰＴ配列の断片に対して実質的に相補的であり、ヌクレオチドの群から選択される配列番号４の断片に対してその全長にわたり少なくとも８０％相補的である連続するヌクレオチド配列を含み、センス鎖は、配列番号３のヌクレオチド５２０～５４１、５２０～５５６、５１０～５３４、５１２～５３６、５１６～５４１、５１６～５４０、５２０～５４４、５２４～５４７、５２６～５５１、５２９～５５６、５３２～５５６、１０６５～１０８９、１０６８～１０９５、１０６８～１０９４、１０７５～１１００、１０７６～１１００、１０７９～１１０３、１１２３～１１４７、１１２７～１１５１、１１３０～１１５５、１９０３～１９３４、１９０３～１９３０、１９１４～１９４０、１９４９～１９７５、２４７０～２４９７、２９４１～２９６５、３２７５～３３０２、３２７８～３３０２、３３２９～３３５３、３３３３～３３５７、３３３８～３３６７、３３３８～３３６６、３３４８～３３９０、３３４８～３３８８、３３５１～３３８５、５５０７～５５６２、および５５４９～５５９７のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖は、配列番号４の対応するヌクレオチド配列からの少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。一部の実施形態において、本明細書に開示されるアンチセンスポリヌクレオチドは、標的ＭＡＰＴ配列の断片に対して実質的に相補的であり、ヌクレオチドの群から選択される配列番号４の断片に対してその全長にわたり相補的である連続するヌクレオチド配列を含み、センス鎖は、配列番号３のヌクレオチド５２０～５４１、５２０～５５６、５１０～５３４、５１２～５３６、５１６～５４１、５１６～５４０、５２０～５４４、５２４～５４７、５２６～５５１、５２９～５５６、５３２～５５６、１０６５～１０８９、１０６８～１０９５、１０６８～１０９４、１０７５～１１００、１０７６～１１００、１０７９～１１０３、１１２３～１１４７、１１２７～１１５１、１１３０～１１５５、１９０３～１９３４、１９０３～１９３０、１９１４～１９４０、１９４９～１９７５、２４７０～２４９７、２９４１～２９６５、３２７５～３３０２、３２７８～３３０２、３３２９～３３５３、３３３３～３３５７、３３３８～３３６７、３３３８～３３６６、３３４８～３３９０、３３４８～３３８８、３３５１～３３８５、５５０７～５５６２、および５５４９～５５９７のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖は、配列番号４の対応するヌクレオチド配列からの少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。 In certain embodiments, the antisense polynucleotides disclosed herein are substantially complementary to a fragment of the target MAPT sequence, to a fragment of SEQ ID NO:4 selected from the group of nucleotides and the sense strand comprises nucleotides 520-541, 520-556, 510-534, 512-536, 516-541, 516-540 of SEQ ID NO:3. ,520-544,524-547,526-551,529-556,532-556,1065-1089,1068-1095,1068-1094,1075-1100,1076-1100,1079-1103,1123-1147,1127 ~ 1151, 1130 ~ 1155, 1903 ~ 1934, 1903 ~ 1930, 1914 ~ 1940, 1949 ~ 1975, 2470 ~ 2497, 2941 ~ 2965, 3275 ~ 3302, 3278 ~ 3302, 3329 ~ 3353, 3333 ~ 3357, 3338 ~ 3 367 , 3338-3366, 3348-3390, 3348-3388, 3351-3385, 5507-5562, and 5549-5597 with at least 15 contiguous nucleotides that differ by no more than 3 nucleotides from any one of the nucleotide sequences; The antisense strand comprises at least 15 contiguous nucleotides from the corresponding nucleotide sequence of SEQ ID NO:4. In some embodiments, the antisense polynucleotides disclosed herein are substantially complementary to a fragment of the target MAPT sequence, to a fragment of SEQ ID NO:4 selected from the group of nucleotides and the sense strand comprises nucleotides 520-541, 520-556, 510-534, 512-536, 516-541, 516-540, 520-520 of SEQ ID NO:3. 544, 524-547, 526-551, 529-556, 532-556, 1065-1089, 1068-1095, 1068-1094, 1075-1100, 1076-1100, 1079-1103, 1123-1147, 1127-1151, 1130-1155, 1903-1934, 1903-1930, 1914-1940, 1949-1975, 2470-2497, 2941-2965, 3275-3302, 3278-3302, 3329-3353, 3333-3357, 3338-3367, 3 338~ an antisense strand comprising at least 15 contiguous nucleotides differing by no more than 3 nucleotides from any one of the nucleotide sequences 3366, 3348-3390, 3348-3388, 3351-3385, 5507-5562, and 5549-5597; contains at least 15 contiguous nucleotides from the corresponding nucleotide sequence of SEQ ID NO:4.

一実施形態において、センス鎖は、配列番号１のヌクレオチド９７７～９９７、９８０～１０００、９７３～９９３、９８８～１００８、９８７～１００７、９７２～９９２、９７９～９９９、１００１～１０２１、９７６～９９６、９９４～１０１４、１００２～１０２２、９７８～９９８、９７４～９９４、５２０～５４０、５２１～５４１、５４６４～５４８４、１８１３～１８３３、２３７８～２３９８、３２４２～３２６２、５４４２～５４６２、１６６５～１６８５、５２４～５４４、５２０７～５２２７、４６７０～４６９０、３４２０～３４４０、３３２８～３３４８、５４０９～５４２９、５４３９～５４５９、４５２７～４５４７、５４４１～５４６１、５４１０～５４３０、および５４４６～５４６６のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖は、配列番号２の対応するヌクレオチド配列からの少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。 In one embodiment, the sense strand comprises nucleotides 977-997, 980-1000, 973-993, 988-1008, 987-1007, 972-992, 979-999, 1001-1021, 976-996 of SEQ ID NO:1, 994-1014, 1002-1022, 978-998, 974-994, 520-540, 521-541, 5464-5484, 1813-1833, 2378-2398, 3242-3262, 5442-5462, 1665-1685, 524- any one of the nucleotide sequences of comprising at least 15 contiguous nucleotides differing by no more than 3 nucleotides, the antisense strand comprising at least 15 contiguous nucleotides from the corresponding nucleotide sequence of SEQ ID NO:2.

一実施形態において、アンチセンス鎖は、ＡＤ－５２３７９９．１、ＡＤ－５２３８０２．１、ＡＤ－５２３７９５．１、ＡＤ－５２３８１０．１、ＡＤ－５２３８０９．１、ＡＤ－１０１９３３１．１、ＡＤ－５２３８０１．１、ＡＤ－５２３８２３．１、ＡＤ－５２３７９８．１、ＡＤ－５２３８１６．１、ＡＤ－５２３８２４．１、ＡＤ－５２３８００．１、ＡＤ－５２３７９６．１、ＡＤ－５３５０９４．１、ＡＤ－５３５０９４．１、ＡＤ－５３５０９５．１、ＡＤ－５３８６４７．１、ＡＤ－５３５９２２．１、ＡＤ－５３６３１７．１、ＡＤ－５３６９１１．１、ＡＤ－５３８６２６．１、ＡＤ－５３５８６４．１、ＡＤ－５２３５６１．１、ＡＤ－５２３５６５．１、ＡＤ－５２３５６２．１、ＡＤ－５２６９１４．１、ＡＤ－５２６３９４．１、ＡＤ－３９５４５２．１、ＡＤ－５２５３４３．１、ＡＤ－５２４２７４．１、ＡＤ－５２６９５６．１、ＡＤ－５２６９８６．１、ＡＤ－５２６２９６．１、ＡＤ－５２６９８８．１、ＡＤ－５２６９５７．１、ＡＤ－５２６９９３．１、ＡＤ－１３９７０７０．１、ＡＤ－１３９７０７０．２、ＡＤ－１３９７０７１．１、ＡＤ－１３９７０７１．２、ＡＤ－１３９７０７２．１、ＡＤ－１３９７０７２．２、ＡＤ－１３９７０７３．１、ＡＤ－１３９７０７３．２、ＡＤ－１３９７０７４．１、ＡＤ－１３９７０７４．２、ＡＤ－１３９７０７５．１、ＡＤ－１３９７０７５．２、ＡＤ－１３９７０７６．１、ＡＤ－１３９７０７６．２、ＡＤ－１３９７０７７．１、ＡＤ－１３９７０７７．２、ＡＤ－１３９７０７８．１、ＡＤ－１３９７０７８．２、ＡＤ－１３９７２５０．１、ＡＤ－１３９７２５１．１、ＡＤ－１３９７２５２．１、ＡＤ－１３９７２５３．１、ＡＤ－１３９７２５４．１、ＡＤ－１３９７２５５．１、ＡＤ－１３９７２５６．１、ＡＤ－１３９７２５７．１、ＡＤ－１３９７２５８．１、ＡＤ－１３９７２５９．１、ＡＤ－１３９７２６０．１、ＡＤ－１３９７２６１．１、ＡＤ－１３９７２６２．１、ＡＤ－１３９７２６３．１、ＡＤ－１３９７２６４．１、ＡＤ－１３９７２６５．１、ＡＤ－１４２３２４２．１、ＡＤ－１４２３２４３．１、ＡＤ－１４２３２４４．１、ＡＤ－１４２３２４５．１、ＡＤ－１４２３２４６．１、ＡＤ－１４２３２４７．１、ＡＤ－１４２３２４８．１、ＡＤ－１４２３２４９．１、ＡＤ－１４２３２５０．１、ＡＤ－１４２３２５１．１、ＡＤ－１４２３２５２．１、ＡＤ－１４２３２５３．１、ＡＤ－１４２３２５４．１、ＡＤ－１４２３２５５．１、ＡＤ－１４２３２５６．１、ＡＤ－１４２３２５７．１、ＡＤ－１４２３２５８．１、ＡＤ－１４２３２５９．１、ＡＤ－１４２３２６０．１、ＡＤ－１４２３２６１．１、ＡＤ－１４２３２６２．１、ＡＤ－１４２３２６３．１、ＡＤ－１４２３２６４．１、ＡＤ－１４２３２６５．１、ＡＤ－１４２３２６６．１、ＡＤ－１４２３２６７．１、ＡＤ－１４２３２６８．１、ＡＤ－１４２３２６９．１、ＡＤ－１４２３２７０．１、ＡＤ－１４２３２７１．１、ＡＤ－１４２３２７２．１、ＡＤ－１４２３２７３．１、ＡＤ－１４２３２７４．１、ＡＤ－１４２３２７５．１、ＡＤ－１４２３２７６．１、ＡＤ－１４２３２７７．１、ＡＤ－１４２３２７８．１、ＡＤ－１４２３２７９．１、ＡＤ－１４２３２８０．１、ＡＤ－１４２３２８１．１、ＡＤ－１４２３２８２．１、ＡＤ－１４２３２８３．１、ＡＤ－１４２３２８４．１、ＡＤ－１４２３２８５．１、ＡＤ－１４２３２８６．１、ＡＤ－１４２３２８７．１、ＡＤ－１４２３２８８．１、ＡＤ－１４２３２８９．１、ＡＤ－１４２３２９０．１、ＡＤ－１４２３２９１．１、ＡＤ－１４２３２９２．１、ＡＤ－１４２３２９３．１、ＡＤ－１４２３２９４．１、ＡＤ－１４２３２９５．１、ＡＤ－１４２３２９６．１、ＡＤ－１４２３２９７．１、ＡＤ－１４２３２９８．１、ＡＤ－１４２３２９９．１、ＡＤ－１４２３３００．１、ＡＤ－１３９７２６６．１、ＡＤ－１３９７２６６．２、ＡＤ－１３９７２６７．１、ＡＤ－１４２３３０１．１、ＡＤ－１３９７２６８．１、ＡＤ－１３９７２６８．２、ＡＤ－１３９７２６９．１、ＡＤ－１４２３３０２．１、ＡＤ－１３９７２７０．１、ＡＤ－１３９７２７０．２、ＡＤ－１３９７２７１．１、ＡＤ－１３９７２７１．２、ＡＤ－１３９７２７２．１、ＡＤ－１４２３３０３．１、ＡＤ－１３９７２７３．１、ＡＤ－１４２３３０４．１、ＡＤ－１３９７２７４．１、ＡＤ－１４２３３０５．１、ＡＤ－１３９７２７５．１、ＡＤ－１４２３３０６．１、ＡＤ－１３９７２７６．１、ＡＤ－１３９７２７７．１、ＡＤ－１３９７２７７．２、ＡＤ－１３９７２７８．１、ＡＤ－１３９７２７９．１、ＡＤ－１３９７２８０．１、ＡＤ－１３９７２８１．１、ＡＤ－１３９７２８２．１、ＡＤ－１３９７２８３．１、ＡＤ－１３９７２８４．１、ＡＤ－１３９７２８５．１、ＡＤ－１３９７２８６．１、ＡＤ－１３９７２８７．１、ＡＤ－１３９７０７９．１、ＡＤ－１３９７０７９．２、ＡＤ－１３９７２８８．１、ＡＤ－１３９７２８９．１、ＡＤ－１３９７２９０．１、ＡＤ－１３９７０８０．１、ＡＤ－１３９７０８０．２、ＡＤ－１３９７２９１．１、ＡＤ－１３９７２９２．１、ＡＤ－１３９７２９３．１、ＡＤ－１３９７２９４．１、ＡＤ－１３９７０８１．１、ＡＤ－１３９７０８１．２、ＡＤ－１３９７２９５．１、ＡＤ－１３９７０８２．１、ＡＤ－１３９７０８２．２、ＡＤ－１３９７０８３．１、ＡＤ－１３９７０８３．２、ＡＤ－１３９７２９６．１、ＡＤ－１３９７２９７．１、ＡＤ－１３９７２９８．１、ＡＤ－１３９７２９９．１、ＡＤ－１３９７３００．１、ＡＤ－１３９７３０１．１、ＡＤ－１３９７３０２．１、ＡＤ－１３９７０８４．１、ＡＤ－１３９７０８５．１、ＡＤ－１３９７０８６．１、ＡＤ－１３９７３０３．１、ＡＤ－１３９７０８７．１、ＡＤ－１３９７０８７．２、ＡＤ－１３９７３０４．１、ＡＤ－１３９７３０５．１、ＡＤ－１３９７３０６．１、ＡＤ－１３９７３０７．１、ＡＤ－１３９７３０８．１、ＡＤ－１３９７３０９．１、ＡＤ－１３９７３１０．１、ＡＤ－１３９７３１１．１、ＡＤ－１３９７３１２．１、ＡＤ－１３９７３１３．１、ＡＤ－１３９７３１４．１、ＡＤ－１３９７３１５．１、ＡＤ－１３９７３１６．１、ＡＤ－１３９７３１７．１、ＡＤ－１３９７３１８．１、ＡＤ－１３９７３１９．１、ＡＤ－１３９７３２０．１、ＡＤ－１３９７３２１．１、ＡＤ－１３９７３２２．１、ＡＤ－１３９７０８８．１、ＡＤ－１３９７０８９．１、ＡＤ－１３９７０９０．１、ＡＤ－１３９７０９１．１、ＡＤ－１３９７０９２．１、ＡＤ－１３９７０９３．１、ＡＤ－１３９７０９４．１、ＡＤ－１３９７０９５．１、ＡＤ－１３９７０９６．１、ＡＤ－１３９７０９７．１、ＡＤ－１３９７０９８．１、ＡＤ－１３９７０９９．１、ＡＤ－１３９７１０１．１、ＡＤ－１３９７１０２．１、ＡＤ－１３９７１０３．１、ＡＤ－１３９７１０４．１、ＡＤ－１３９７１０５．１、ＡＤ－１３９７１０６．１、ＡＤ－１３９７１０７．１、ＡＤ－１３９７１０８．１、ＡＤ－１３９７１０９．１、ＡＤ－１３９７１１０．１、ＡＤ－１３９７１１１．１、ＡＤ－１３９７１１２．１、ＡＤ－１３９７１１３．１、ＡＤ－１３９７１１４．１、ＡＤ－１３９７１１５．１、ＡＤ－１３９７１１６．１、ＡＤ－１３９７１１７．１、ＡＤ－１３９７１１８．１、ＡＤ－１３９７１１９．１、ＡＤ－１３９７１２０．１、ＡＤ－１３９７１２１．１、ＡＤ－１３９７１２２．１、ＡＤ－１３９７１２３．１、ＡＤ－１３９７１２４．１、ＡＤ－１３９７１２５．１、ＡＤ－１３９７１２６．１、ＡＤ－１３９７１２７．１、ＡＤ－１３９７１２８．１、ＡＤ－１３９７１２９．１、ＡＤ－１３９７１３０．１、ＡＤ－１３９７１３１．１、ＡＤ－１３９７１３２．１、ＡＤ－１３９７１３３．１、ＡＤ－１３９７１３４．１、ＡＤ－１３９７１３５．１、ＡＤ－１３９７１３６．１、ＡＤ－１３９７１３７．１、ＡＤ－１３９７１３８．１、ＡＤ－１３９７１３９．１、ＡＤ－１３９７１４０．１、ＡＤ－１３９７１４１．１、ＡＤ－１３９７１４２．１、ＡＤ－１３９７１４３．１、ＡＤ－１３９７１４４．１、ＡＤ－１３９７１４５．１、ＡＤ－１３９７１４６．１、ＡＤ－１３９７１４７．１、ＡＤ－１３９７１４８．１、ＡＤ－１３９７１４９．１、ＡＤ－１３９７１５０．１、ＡＤ－１３９７１５１．１、ＡＤ－１３９７１５２．１、ＡＤ－１３９７１５３．１、ＡＤ－１３９７１５４．１、ＡＤ－１３９７１５５．１、ＡＤ－１３９７１５６．１、ＡＤ－１３９７１５７．１、ＡＤ－１３９７１５８．１、ＡＤ－１３９７１５９．１、ＡＤ－１３９７１６０．１、ＡＤ－１３９７１６１．１、ＡＤ－１３９７１６２．１、ＡＤ－１３９７１６３．１、ＡＤ－１３９７１６４．１、ＡＤ－１３９７１６５．１、ＡＤ－１３９７１６６．１、ＡＤ－１３９７１６７．１、ＡＤ－１３９７１６８．１、ＡＤ－１３９７１６９．１、ＡＤ－１３９７１７０．１、ＡＤ－１３９７１７１．１、ＡＤ－１３９７１７２．１、ＡＤ－１３９７１７３．１、ＡＤ－１３９７１７４．１、ＡＤ－１３９７１７５．１、ＡＤ－１３９７１７６．１、ＡＤ－１３９７１７７．１、ＡＤ－１３９７１７８．１、ＡＤ－１３９７１７９．１、ＡＤ－１３９７１８０．１、ＡＤ－１３９７１８１．１、ＡＤ－１３９７１８２．１、ＡＤ－１３９７１８３．１、ＡＤ－１３９７１８４．１、ＡＤ－１３９７１８５．１、ＡＤ－１３９７１８６．１、ＡＤ－１３９７１８７．１、ＡＤ－１３９７１８８．１、ＡＤ－１３９７１８９．１、ＡＤ－１３９７１９０．１、ＡＤ－１３９７１９１．１、ＡＤ－１３９７１９２．１、ＡＤ－１３９７１９３．１、ＡＤ－１３９７１９４．１、ＡＤ－１３９７１９５．１、ＡＤ－１３９７１９６．１、ＡＤ－１３９７１９７．１、ＡＤ－１３９７１９８．１、ＡＤ－１３９７１９９．１、ＡＤ－１３９７２００．１、ＡＤ－１３９７２０１．１、ＡＤ－１３９７２０２．１、ＡＤ－１３９７２０３．１、ＡＤ－１３９７２０４．１、ＡＤ－１３９７２０５．１、ＡＤ－１３９７２０６．１、ＡＤ－１３９７２０７．１、ＡＤ－１３９７２０８．１、ＡＤ－１３９７２０９．１、ＡＤ－１３９７２１０．１、ＡＤ－１３９７２１１．１、ＡＤ－１３９７２１２．１、ＡＤ－１３９７２１３．１、ＡＤ－１３９７２１４．１、ＡＤ－１３９７２１５．１、ＡＤ－１３９７２１６．１、ＡＤ－１３９７２１７．１、ＡＤ－１３９７２１８．１、ＡＤ－１３９７２１９．１、ＡＤ－１３９７２２０．１、ＡＤ－１３９７２２１．１、ＡＤ－１３９７２２２．１、ＡＤ－１３９７２２３．１、ＡＤ－１３９７２２４．１、ＡＤ－１３９７２２５．１、ＡＤ－１３９７２２６．１、ＡＤ－１３９７２２７．１、ＡＤ－１３９７２２８．１、ＡＤ－１３９７２２９．１、ＡＤ－１３９７２３０．１、ＡＤ－１３９７２３１．１、ＡＤ－１３９７２３２．１、ＡＤ－１３９７２３３．１、ＡＤ－１３９７２３４．１、ＡＤ－１３９７２３５．１、ＡＤ－１３９７２３６．１、ＡＤ－１３９７２３７．１、ＡＤ－１３９７２３８．１、ＡＤ－１３９７２３９．１、ＡＤ－１３９７２４０．１、ＡＤ－１３９７２４１．１、ＡＤ－１３９７２４２．１、ＡＤ－１３９７２４３．１、ＡＤ－１３９７２４４．１、ＡＤ－１３９７２４５．１、ＡＤ－１３９７２４６．１、ＡＤ－１３９７２４７．１、ＡＤ－１３９７２４８．１、ＡＤ－１３９７２４９．１、ＡＤ－５２３５６５．１、ＡＤ－１３９７０７２．３、ＡＤ－１３９７０７３．３、ＡＤ－１３９７０７６．３、ＡＤ－１３９７０７７．３、ＡＤ－１３９７０７８．３、ＡＤ－１３９７２５２．２、ＡＤ－１３９７２５７．２、ＡＤ－１３９７２５８．２、ＡＤ－１３９７２５９．２、ＡＤ－１３９７２６３．２、ＡＤ－１３９７２６４．２、ＡＤ－１３９７３０９．２、ＡＤ－６４９５８．１１４、ＡＤ－３９３７５８．４、ＡＤ－１３９７０８０．３、ＡＤ－１３９７２９３．２、ＡＤ－１３９７２９４．２、ＡＤ－１３９７０８１．３、ＡＤ－１３９７０８３．３、ＡＤ－１３９７２９８．２、ＡＤ－１３９７２９９．２、ＡＤ－
１３９７０８４．２、ＡＤ－１３９７０８５．２、ＡＤ－１３９７０８７．３、ＡＤ－１３９７３０６．２、ＡＤ－１３９７３０７．２、ＡＤ－１３９７３０８．２、ＡＤ－１３９７０８８．２、ＡＤ－１５６６２３８、ＡＤ－１５６６２３９、ＡＤ－１５６６２４０、ＡＤ－１５６６２４１、ＡＤ－１５６６２４２、ＡＤ－１５６６２４３、ＡＤ－１５６６２４４、ＡＤ－１５６６２４５、ＡＤ－１５６６２４６、ＡＤ－１０９１９６５、ＡＤ－１５６６２４８、ＡＤ－１５６６２４９、ＡＤ－１５６６２５０、ＡＤ－１０９１９６６、ＡＤ－１５６６２５１、ＡＤ－１５６６２５２、ＡＤ－１５６６２５３、ＡＤ－１５６６２５４、ＡＤ－１５６６２５５、ＡＤ－１５６６２５６、ＡＤ－１５６６２５７、ＡＤ－１５６６２５８、ＡＤ－１５６６２５９、ＡＤ－６９２９０６、ＡＤ－１５６６５７５、ＡＤ－１５６６５７６、ＡＤ－１５６６５７７、ＡＤ－１５６６５８０、ＡＤ－１５６６５８１、ＡＤ－１５６６５８２、ＡＤ－１５６６５８３、ＡＤ－１５６６５８４、ＡＤ－１５６６５８６、ＡＤ－１５６６５８７、ＡＤ－１５６６５８８、ＡＤ－１５６６５９０、ＡＤ－１５６６５９１、ＡＤ－１５６６６３４、ＡＤ－１５６６６３５、ＡＤ－１５６６６３８、ＡＤ－１５６６６３９、ＡＤ－１５６６６４１、ＡＤ－１５６６６４２、ＡＤ－１５６６６４３、ＡＤ－１５６６６７９、ＡＤ－１５６６８６１、ＡＤ－１５６７１５３、ＡＤ－１５６７１５４、ＡＤ－１５６７１５７、ＡＤ－１５６７１５９、ＡＤ－１５６７１６０、ＡＤ－１５６７１６１、ＡＤ－１５６７１６４、ＡＤ－１５６７１６７、ＡＤ－１５６７１９９、ＡＤ－１５６７２０２、ＡＤ－１５６７５５０、ＡＤ－１５６７５５４、ＡＤ－１５６７７８４、ＡＤ－１５６７８９６、ＡＤ－１５６７８９７、ＡＤ－１５６８１０５、ＡＤ－１５６８１０８、ＡＤ－１５６８１０９、ＡＤ－１５６８１３９、ＡＤ－１５６８１４０、ＡＤ－１５６８１４３、ＡＤ－１５６８１４４、ＡＤ－１５６８１４８、ＡＤ－１５６８１５０、ＡＤ－１５６８１５１、ＡＤ－１５６８１５２、ＡＤ－１５６８１５３、ＡＤ－１５６８１５４、ＡＤ－１５６８１５８、ＡＤ－１５６８１６１、ＡＤ－１５６８１７２、ＡＤ－１５６８１７４、ＡＤ－１５６８１７５、ＡＤ－６９２９０８、ＡＤ－１５６８１７６、ＡＤ－１５６９８３０、ＡＤ－１５６９８３２、ＡＤ－１５６９８３４、ＡＤ－１５６９８３５、ＡＤ－１５６９８６２、ＡＤ－１５６９８７２、ＡＤ－１５６９８９０およびＡＤ－１５６９８９２からなる群から選択される二重鎖のアンチセンス鎖のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。 In one embodiment, the antisense strand comprises AD-523799.1, AD-523802.1, AD-523795.1, AD-523810.1, AD-523809.1, AD-1019331.1, AD-523801. 1, AD-523823.1, AD-523798.1, AD-523816.1, AD-523824.1, AD-523800.1, AD-523796.1, AD-535094.1, AD-535094.1, AD-535095.1, AD-538647.1, AD-535922.1, AD-536317.1, AD-536911.1, AD-538626.1, AD-535864.1, AD-523561.1, AD- 523565.1, AD-523562.1, AD-526914.1, AD-526394.1, AD-395452.1, AD-525343.1, AD-524274.1, AD-526956.1, AD-526986. 1, AD-526296.1, AD-526988.1, AD-526957.1, AD-526993.1, AD-1397070.1, AD-1397070.2, AD-1397071.1, AD-1397071.2, AD-1397072.1, AD-1397072.2, AD-1397073.1, AD-1397073.2, AD-1397074.1, AD-1397074.2, AD-1397075.1, AD-1397075.2, AD- 1397076.1, AD-1397076.2, AD-1397077.1, AD-1397077.2, AD-1397078.1, AD-1397078.2, AD-1397250.1, AD-1397251.1, AD-1397252. 1, AD-1397253.1, AD-1397254.1, AD-1397255.1, AD-1397256.1, AD-1397257.1, AD-1397258.1, AD-1397259.1, AD-1397260.1, AD-1397261.1, AD-1397262.1, AD-1397263.1, AD-1397264.1, AD-1397265.1, AD-1423242.1, AD-1423243.1, AD-1423244.1, AD- 1423245.1, AD-1423246.1, AD-1423247.1, AD-1423248.1, AD-1423249.1, AD-1423250.1, AD-1423251.1, AD-1423252.1, AD-1423253. 1, AD-1423254.1, AD-1423255.1, AD-1423256.1, AD-1423257.1, AD-1423258.1, AD-1423259.1, AD-1423260.1, AD-1423261.1, AD-1423262.1, AD-1423263.1, AD-1423264.1, AD-1423265.1, AD-1423266.1, AD-1423267.1, AD-1423268.1, AD-1423269.1, AD- 1423270.1, AD-1423271.1, AD-1423272.1, AD-1423273.1, AD-1423274.1, AD-1423275.1, AD-1423276.1, AD-1423277.1, AD-1423278. 1, AD-1423279.1, AD-1423280.1, AD-1423281.1, AD-1423282.1, AD-1423283.1, AD-1423284.1, AD-1423285.1, AD-1423286.1, AD-1423287.1, AD-1423288.1, AD-1423289.1, AD-1423290.1, AD-1423291.1, AD-1423292.1, AD-1423293.1, AD-1423294.1, AD- 1423295.1, AD-1423296.1, AD-1423297.1, AD-1423298.1, AD-1423299.1, AD-1423300.1, AD-1397266.1, AD-1397266.2, AD-1397267. 1, AD-1423301.1, AD-1397268.1, AD-1397268.2, AD-1397269.1, AD-1423302.1, AD-1397270.1, AD-1397270.2, AD-1397271.1, AD-1397271.2, AD-1397272.1, AD-1423303.1, AD-1397273.1, AD-1423304.1, AD-1397274.1, AD-1423305.1, AD-1397275.1, AD- 1423306.1, AD-1397276.1, AD-1397277.1, AD-1397277.2, AD-1397278.1, AD-1397279.1, AD-1397280.1, AD-1397281.1, AD-1397282. 1, AD-1397283.1, AD-1397284.1, AD-1397285.1, AD-1397286.1, AD-1397287.1, AD-1397079.1, AD-1397079.2, AD-1397288.1, AD-1397289.1, AD-1397290.1, AD-1397080.1, AD-1397080.2, AD-1397291.1, AD-1397292.1, AD-1397293.1, AD-1397294.1, AD- 1397081.1, AD-1397081.2, AD-1397295.1, AD-1397082.1, AD-1397082.2, AD-1397083.1, AD-1397083.2, AD-1397296.1, AD-1397297. 1, AD-1397298.1, AD-1397299.1, AD-1397300.1, AD-1397301.1, AD-1397302.1, AD-1397084.1, AD-1397085.1, AD-1397086.1, AD-1397303.1, AD-1397087.1, AD-1397087.2, AD-1397304.1, AD-1397305.1, AD-1397306.1, AD-1397307.1, AD-1397308.1, AD- 1397309.1, AD-1397310.1, AD-1397311.1, AD-1397312.1, AD-1397313.1, AD-1397314.1, AD-1397315.1, AD-1397316.1, AD-1397317. 1, AD-1397318.1, AD-1397319.1, AD-1397320.1, AD-1397321.1, AD-1397322.1, AD-1397088.1, AD-1397089.1, AD-1397090.1, AD-1397091.1, AD-1397092.1, AD-1397093.1, AD-1397094.1, AD-1397095.1, AD-1397096.1, AD-1397097.1, AD-1397098.1, AD- 1397099.1, AD-1397101.1, AD-1397102.1, AD-1397103.1, AD-1397104.1, AD-1397105.1, AD-1397106.1, AD-1397107.1, AD-1397108. 1, AD-1397109.1, AD-1397110.1, AD-1397111.1, AD-1397112.1, AD-1397113.1, AD-1397114.1, AD-1397115.1, AD-1397116.1, AD-1397117.1, AD-1397118.1, AD-1397119.1, AD-1397120.1, AD-1397121.1, AD-1397122.1, AD-1397123.1, AD-1397124.1, AD- 1397125.1, AD-1397126.1, AD-1397127.1, AD-1397128.1, AD-1397129.1, AD-1397130.1, AD-1397131.1, AD-1397132.1, AD-1397133. 1, AD-1397134.1, AD-1397135.1, AD-1397136.1, AD-1397137.1, AD-1397138.1, AD-1397139.1, AD-1397140.1, AD-1397141.1, AD-1397142.1, AD-1397143.1, AD-1397144.1, AD-1397145.1, AD-1397146.1, AD-1397147.1, AD-1397148.1, AD-1397149.1, AD- 1397150.1, AD-1397151.1, AD-1397152.1, AD-1397153.1, AD-1397154.1, AD-1397155.1, AD-1397156.1, AD-1397157.1, AD-1397158. 1, AD-1397159.1, AD-1397160.1, AD-1397161.1, AD-1397162.1, AD-1397163.1, AD-1397164.1, AD-1397165.1, AD-1397166.1, AD-1397167.1, AD-1397168.1, AD-1397169.1, AD-1397170.1, AD-1397171.1, AD-1397172.1, AD-1397173.1, AD-1397174.1, AD- 1397175.1, AD-1397176.1, AD-1397177.1, AD-1397178.1, AD-1397179.1, AD-1397180.1, AD-1397181.1, AD-1397182.1, AD-1397183. 1, AD-1397184.1, AD-1397185.1, AD-1397186.1, AD-1397187.1, AD-1397188.1, AD-1397189.1, AD-1397190.1, AD-1397191.1, AD-1397192.1, AD-1397193.1, AD-1397194.1, AD-1397195.1, AD-1397196.1, AD-1397197.1, AD-1397198.1, AD-1397199.1, AD- 1397200.1, AD-1397201.1, AD-1397202.1, AD-1397203.1, AD-1397204.1, AD-1397205.1, AD-1397206.1, AD-1397207.1, AD-1397208. 1, AD-1397209.1, AD-1397210.1, AD-1397211.1, AD-1397212.1, AD-1397213.1, AD-1397214.1, AD-1397215.1, AD-1397216.1, AD-1397217.1, AD-1397218.1, AD-1397219.1, AD-1397220.1, AD-1397221.1, AD-1397222.1, AD-1397223.1, AD-1397224.1, AD- 1397225.1, AD-1397226.1, AD-1397227.1, AD-1397228.1, AD-1397229.1, AD-1397230.1, AD-1397231.1, AD-1397232.1, AD-1397233. 1, AD-1397234.1, AD-1397235.1, AD-1397236.1, AD-1397237.1, AD-1397238.1, AD-1397239.1, AD-1397240.1, AD-1397241.1, AD-1397242.1, AD-1397243.1, AD-1397244.1, AD-1397245.1, AD-1397246.1, AD-1397247.1, AD-1397248.1, AD-1397249.1, AD- 523565.1, AD-1397072.3, AD-1397073.3, AD-1397076.3, AD-1397077.3, AD-1397078.3, AD-1397252.2, AD-1397257.2, AD-1397258. 2, AD-1397259.2, AD-1397263.2, AD-1397264.2, AD-1397309.2, AD-64958.114, AD-393758.4, AD-1397080.3, AD-1397293.2, AD-1397294.2, AD-1397081.3, AD-1397083.3, AD-1397298.2, AD-1397299.2, AD-
1397084.2, AD-1397085.2, AD-1397087.3, AD-1397306.2, AD-1397307.2, AD-1397308.2, AD-1397088.2, AD-1566238, AD-1566239, AD- 1566240, AD-1566241, AD-1566242, AD-1566243, AD-1566244, AD-1566245, AD-1566246, AD-1091965, AD-1566248, AD-1566249, AD-1566250, AD-1091966, AD-1 566251, AD -1566252, AD -1566253, AD -1566254, AD -1566255, AD -1566256, AD -1566257, AD -1566258, AD -1566259, AD -1566259, AD -692906, AD -1566575, AD - 1566576, AD -1566577, AD- 1566580, AD-1566581, AD-1566582, AD-1566583, AD-1566584, AD-1566586, AD-1566587, AD-1566588, AD-1566590, AD-1566591, AD-1566634, AD-1566635, AD-1 566638, AD-1566639, AD-1566641, AD-1566642, AD-1566643, AD-1566679, AD-1566861, AD-1567153, AD-1567154, AD-1567157, AD-1567159, AD-1567160, AD-1567161, AD - 1567164, AD-1567167, AD-1567199, AD-1567202, AD-1567550, AD-1567554, AD-1567784, AD-1567896, AD-1567897, AD-1568105, AD-1568108, AD-1568109, AD-1 568139, AD-1568140, AD-1568143, AD-1568144, AD-1568148, AD-1568150, AD-1568151, AD-1568152, AD-1568153, AD-1568154, AD-1568158, AD-1568161, AD-1568172, AD - 1568174, AD -1568175, AD -692908, AD -1568176, AD -1569830, AD -1569832, AD -1569834, AD -1569835, AD -1569862, AD -1569872, AD -1569, AD -1569 Select from a group consisting of 890 and AD -1569892 at least 15 contiguous nucleotides that differ by no more than 3 nucleotides from any one of the nucleotide sequences of the antisense strand of the double-stranded duplex.

特定の実施形態において、アンチセンス鎖は、ＡＤ－５２３７９９．１、ＡＤ－５２３８０２．１、ＡＤ－５２３７９５．１、ＡＤ－５２３８１０．１、ＡＤ－５２３８０９．１、ＡＤ－１０１９３３１．１、ＡＤ－５２３８０１．１、ＡＤ－５２３８２３．１、ＡＤ－５２３７９８．１、ＡＤ－５２３８１６．１、ＡＤ－５２３８２４．１、ＡＤ－５２３８００．１、ＡＤ－５２３７９６．１、ＡＤ－５３５０９４．１、ＡＤ－５３５０９４．１、ＡＤ－５３５０９５．１、ＡＤ－５３８６４７．１、ＡＤ－５３５９２２．１、ＡＤ－５３６３１７．１、ＡＤ－５３６９１１．１、ＡＤ－５３８６２６．１、ＡＤ－５３５８６４．１、ＡＤ－５２３５６１．１、ＡＤ－５２３５６５．１、ＡＤ－５２３５６２．１、ＡＤ－５２６９１４．１、ＡＤ－５２６３９４．１、ＡＤ－３９５４５２．１、ＡＤ－５２５３４３．１、ＡＤ－５２４２７４．１、ＡＤ－５２６９５６．１、ＡＤ－５２６９８６．１、ＡＤ－５２６２９６．１、ＡＤ－５２６９８８．１、ＡＤ－５２６９５７．１、およびＡＤ－５２６９９３．１からなる群から選択される二重鎖のアンチセンス鎖のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。一実施形態において、アンチセンス鎖は、ＡＤ－５２３７９９．１、ＡＤ－５２３８０２．１、ＡＤ－５２３７９５．１、ＡＤ－５２３８１０．１、ＡＤ－５２３８０９．１、ＡＤ－１０１９３３１．１、ＡＤ－５２３８０１．１、ＡＤ－５２３８２３．１、ＡＤ－５２３７９８．１、ＡＤ－５２３８１６．１、ＡＤ－５２３８２４．１、ＡＤ－５２３８００．１およびＡＤ－５２３７９６．１からなる群から選択される二重鎖のアンチセンス鎖のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。 In certain embodiments, the antisense strand is AD-523823.1, AD-523798.1, AD-523816.1, AD-523824.1, AD-523800.1, AD-523796.1, AD-535094.1, AD-535094.1 , AD-535095.1, AD-538647.1, AD-535922.1, AD-536317.1, AD-536911.1, AD-538626.1, AD-535864.1, AD-523561.1, AD -523565.1, AD-523562.1, AD-526914.1, AD-526394.1, AD-395452.1, AD-525343.1, AD-524274.1, AD-526956.1, AD-526986 .1, AD-526296.1, AD-526988.1, AD-526957.1, and AD-526993.1 and any one of the nucleotide sequences of the double-stranded antisense strand selected from the group consisting of: Contain at least 15 contiguous nucleotides that differ by no more than 15 nucleotides. In one embodiment, the antisense strand comprises AD-523799.1, AD-523802.1, AD-523795.1, AD-523810.1, AD-523809.1, AD-1019331.1, AD-523801. 1, a duplex antisense selected from the group consisting of AD-523823.1, AD-523798.1, AD-523816.1, AD-523824.1, AD-523800.1 and AD-523796.1 Contain at least 15 contiguous nucleotides that differ by no more than 3 nucleotides from any one of the nucleotide sequences of the strand.

一部の実施形態において、本発明は、ＭＡＰＴの発現を阻害するためのｄｓＲＮＡ剤であって、ｄｓＲＮＡ剤は、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、タウをコードするｍＲＮＡに対して相補性の領域を含み、相補性の領域は、表１２～１３のいずれか１つに記載のアンチセンスヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、ｄｓＲＮＡ剤を提供する。 In some embodiments, the invention provides a dsRNA agent for inhibiting expression of MAPT, the dsRNA agent comprising a sense strand and an antisense strand forming a double-stranded region, the antisense strand comprising: comprising a region of complementarity to a tau-encoding mRNA, wherein the region of complementarity differs from any one of the antisense nucleotide sequences set forth in any one of Tables 12-13 by no more than 3 nucleotides. A dsRNA agent is provided comprising 15 contiguous nucleotides.

一実施形態において、センス鎖は、配列番号５のヌクレオチド１０６５～１０８５、１１９５～１２１５、１０６６～１０８６、１０６８～１０８８、７０５～７２５、１０６７～１０８７、４５２０～４５４０、３３４１～３３６１、４５１５～４５３５、５２８４～５３０４、５２８５～５３０５、３４４～３６４、５２８３～５３０３、５３５４～５３７４、２４５９～２４７９、１０６１～１０８１、７０６～７２６、９７２～９９２、４５６４～４５８４、９９５～１０１５、４５４６～４５６６、９６８～９８８、１１２７～１１４７、４５３４～４５５４、１５８～１７８、４４９４～４５１４、１６９１～１７１１、３５４４～３５６４、１９８～２１８、９７９～９９９、４５４８～４５６８、４５５１～４５７１、５４３～５６３、７１５～７３５、５４２～５６２、３５２～３７２、３６２～３８２、４５５６～４５７６、４５４７～４５６７、４５４２～４５６２、４５５８～４５７８、４５４９～４５６９、５０７４～５０９４、４５５２～４５７２、５０７３～５０９３、５０７６～５０９６、４５５０～４５７０および２７５３～２７７３のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖は、配列番号６の対応するヌクレオチド配列からの少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。 In one embodiment, the sense strand comprises nucleotides 1065-1085, 1195-1215, 1066-1086, 1068-1088, 705-725, 1067-1087, 4520-4540, 3341-3361, 4515-4535 of SEQ ID NO:5, 5284-5304, 5285-5305, 344-364, 5283-5303, 5354-5374, 2459-2479, 1061-1081, 706-726, 972-992, 4564-4584, 995-1015, 4546-4566, 968- 988, 1127-1147, 4534-4554, 158-178, 4494-4514, 1691-1711, 3544-3564, 198-218, 979-999, 4548-4568, 4551-4571, 543-563, 715-735, 542-562, 352-372, 362-382, 4556-4576, 4547-4567, 4542-4562, 4558-4578, 4549-4569, 5074-5094, 4552-4572, 5073-5093, 5076-5096, 4550- comprising at least 15 contiguous nucleotides that differ by no more than 3 nucleotides from any one of nucleotide sequences 4570 and 2753-2773, wherein the antisense strand comprises at least 15 contiguous nucleotides from the corresponding nucleotide sequence of SEQ ID NO:6 contains nucleotides that

一実施形態において、アンチセンス鎖は、ＡＤ－３９３７５８．１、ＡＤ－３９３８８８．１、ＡＤ－３９３７５９．１、ＡＤ－３９３７６１．１、ＡＤ－３９３４９５．１、ＡＤ－３９３７６０．１、ＡＤ－３９６４２５．１、ＡＤ－３９５４４１．１、ＡＤ－３９６４２０．１、ＡＤ－３９７１０３．１、ＡＤ－３９７１０４．１、ＡＤ－３９３２３９．１、ＡＤ－３９７１０２．１、ＡＤ－３９７１６７．１、ＡＤ－３９４７９１．１、ＡＤ－３９３７５４．１、ＡＤ－３９３４９６．１、ＡＤ－３９３６６７．１、ＡＤ－３９６４６７．１、ＡＤ－３９３６９０．１、ＡＤ－３９６４４９．１、ＡＤ－３９３６６３．１、ＡＤ－３９３８２０．１、ＡＤ－３９６４３７．１、ＡＤ－３９３０８４．１、ＡＤ－３９６４０１．１、ＡＤ－３９４２９６．１、ＡＤ－３９５５７４．１、ＡＤ－３９３１２４．１、ＡＤ－３９３６７４．１、ＡＤ－３９６４５１．１、ＡＤ－３９６４５４．１、ＡＤ－３９３３７６．１、ＡＤ－３９３５０５．１、ＡＤ－３９３３７５．１、ＡＤ－３９３２４７．１、ＡＤ－３９３２５７．１、ＡＤ－３９６４５９．１、ＡＤ－３９６４５０．１、ＡＤ－３９６４４５．１、ＡＤ－３９６４６１．１、ＡＤ－３９６４５２．１、ＡＤ－３９６９１３．１、ＡＤ－３９６４５５．１、ＡＤ－３９６９１２．１、ＡＤ－３９６９１５．１、ＡＤ－３９６４５３．１およびＡＤ－３９４９９１．１からなる群から選択される二重鎖のアンチセンス鎖のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。 In one embodiment, the antisense strand is AD-393758.1, AD-393888.1, AD-393759.1, AD-393761.1, AD-393495.1, AD-393760.1, AD-396425. 1, AD-395441.1, AD-396420.1, AD-397103.1, AD-397104.1, AD-393239.1, AD-397102.1, AD-397167.1, AD-394791.1, AD-393754.1, AD-393496.1, AD-393667.1, AD-396467.1, AD-393690.1, AD-396449.1, AD-393663.1, AD-393820.1, AD- 396437.1, AD-393084.1, AD-396401.1, AD-394296.1, AD-395574.1, AD-393124.1, AD-393674.1, AD-396451.1, AD-396454. 1, AD-393376.1, AD-393505.1, AD-393375.1, AD-393247.1, AD-393257.1, AD-396459.1, AD-396450.1, AD-396445.1, The group consisting of AD-396461.1, AD-396452.1, AD-396913.1, AD-396455.1, AD-396912.1, AD-396915.1, AD-396453.1 and AD-394991.1 at least 15 contiguous nucleotides that differ by no more than 3 nucleotides from any one of the nucleotide sequences of the antisense strand of the duplex selected from

一実施形態において、センス鎖のヌクレオチド配列は、配列番号１５３３において説明されるＭＡＰＴ遺伝子エクソン１０のセンス鎖配列に対応する少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖はそれに対して相補的な配列を含む。 In one embodiment, the nucleotide sequence of the sense strand comprises at least 15 contiguous nucleotides corresponding to the sense strand sequence of MAPT gene exon 10 set forth in SEQ ID NO: 1533, and the antisense strand is complementary thereto. Contains arrays.

一実施形態において、ｄｓＲＮＡに対する実質的に相補的な配列は、別々のオリゴヌクレオチドに含まれる。別の実施形態において、ｄｓＲＮＡに対する実質的に相補的な配列は、単一のオリゴヌクレオチドに含まれる。 In one embodiment, the sequences substantially complementary to the dsRNA are contained in separate oligonucleotides. In another embodiment, the sequences substantially complementary to the dsRNA are contained in a single oligonucleotide.

表６～８、１３、１７、１９、２１、２３、２６および２８における配列は、修飾配列またはコンジュゲートされた配列として説明されるが、本開示のＲＮＡｉ剤のＲＮＡ、例えば、本開示のｄｓＲＮＡは、修飾されていない、コンジュゲートされていない、または説明されるものとは異なって修飾もしくはコンジュゲートされている、表３～８、１２、１３、および１６～２８のいずれか１つにおいて説明される配列のいずれか１つを含み得ることは理解されよう。例えば、本発明の薬剤のセンス鎖は、ＧａｌＮＡｃリガンドにコンジュゲートされてもよいが、これらの薬剤は、デリバリーをＣＮＳに誘導する部分、例えば、本明細書に記載されるようなＣ１６リガンドにコンジュゲートされてもよい。一実施形態において、この親油性部分は、飽和または不飽和Ｃ１６炭化水素鎖（例えば、線状Ｃ１６アルキルまたはアルケニル）を含有する。親油性リガンドは、本願に提供される位置のいずれに含まれてもよい。一部の実施形態において、親油性部分は、二本鎖ｉＲＮＡ剤の核酸塩基、糖部分、またはヌクレオシド間結合にコンジュゲートされる。例えば、Ｃ１６リガンドは、以下の構造に示されるようにリボヌクレオチドの２’－酸素を介してコンジュゲートされてもよい。 The sequences in Tables 6-8, 13, 17, 19, 21, 23, 26 and 28, although described as modified or conjugated sequences, are RNAi agent RNAs of the disclosure, such as dsRNAs of the disclosure. is unmodified, unconjugated, or modified or conjugated differently than described in any one of Tables 3-8, 12, 13, and 16-28 It will be understood that any one of the sequences described herein may be included. For example, the sense strands of the agents of the invention may be conjugated to a GalNAc ligand, while these agents are conjugated to moieties that direct delivery to the CNS, such as the C16 ligand as described herein. May be gated. In one embodiment, the lipophilic moiety contains a saturated or unsaturated C16 hydrocarbon chain (eg, linear C16 alkyl or alkenyl). Lipophilic ligands may be included at any of the positions provided herein. In some embodiments, a lipophilic moiety is conjugated to a nucleobase, sugar moiety, or internucleoside linkage of a double-stranded iRNA agent. For example, a C16 ligand may be conjugated via the 2'-oxygen of a ribonucleotide as shown in the structure below.

Figure 2023521604000003
（式中、＊は、隣接するヌクレオチドへの結合を表し、Ｂは、核酸塩基または核酸塩基類似体であり、ここでは、Ｂは、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、またはウラシルであってもよい。本明細書に提供されるリガンドおよびモノマーの設計および合成は、例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１９／２１７４５９、ＷＯ２０２０／１３２２２７、およびＷＯ２０２０／２５７１９４に記載されており、それらの全体は参照により本明細書に組み込まれる。
Figure 2023521604000003
 (where * represents a bond to the adjacent nucleotide and B is a nucleobase or nucleobase analogue, where B can be adenine, guanine, cytosine, thymine, or uracil The design and synthesis of the ligands and monomers provided herein are described, for example, in PCT Publication Nos. WO2019/217459, WO2020/132227, and WO2020/257194, the entireties of which are incorporated herein by reference. incorporated.

一部の実施形態において、二本鎖ｉＲＮＡ剤は、アンチセンス鎖の５’端にリン酸またはリン酸ミミックをさらに含む。一実施形態において、リン酸ミミックは、５’－ビニルホスホネート（ＶＰ）である。一部の実施形態において、二本鎖ｉＲＮＡ剤のアンチセンス鎖の５’端は、５’－ビニルホスホネート（ＶＰ）を含有しない。 In some embodiments, the double-stranded iRNA agent further comprises a phosphate or phosphate mimic at the 5' end of the antisense strand. In one embodiment, the phosphate mimic is 5'-vinylphosphonate (VP). In some embodiments, the 5' end of the antisense strand of the double-stranded iRNA agent does not contain 5'-vinylphosphonate (VP).

当業者は、約２０から２３塩基対、例えば、２１塩基対の二重鎖構造を有するｄｓＲＮＡは、ＲＮＡ干渉の導入において特に有効であるとして歓迎されていることを十分に意識している［Elbashir et al., (2001) EMBO J., 20:6877-6888］。しかしながら、他のものは、より短いまたはより長いＲＮＡ二重鎖構造も有効であり得ることを分かっている［Chu and Rana (2007) RNA 14:1714-1719; Kim et al. (2005) Nat Biotech 23:222-226］。上記において説明した実施形態において、本明細書において提供されるオリゴヌクレオチド配列の性質により、本明細書において説明されるｄｓＲＮＡは、最小２１ヌクレオチド長さの少なくとも１つの鎖を含むことができる。片端または両端のいくつかのヌクレオチドを差し引いたより短い二重鎖は、上記において説明されるｄｓＲＮＡと比較して、同様に有効であり得ることは、合理的に予想することができる。したがって、本明細書に提供される配列の１つに由来する少なくとも１５、１６、１７、１８、１９、２０個、またはそれより多くの連続するヌクレオチドの配列を有するｄｓＲＮＡであって、本明細書の実施例に提供されるような、例えばＡ５４９細胞および１０ｎＭの濃度のＲＮＡ剤を用いたインビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）アッセイならびにＰＣＲアッセイを使用したときに、ＭＡＰＴ遺伝子の発現を対照レベルに対して少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％阻害するそれらの能力が、全長配列を含むｄｓＲＮＡとは異なるｄｓＲＮＡは、本開示の範囲内であることが企図される。一部の実施形態において、全長配列を含むｄｓＲＮＡからの阻害は、一次マウス肝細胞を用いたインビトロアッセイを使用して測定した。 Those skilled in the art are fully aware that dsRNAs having duplex structures of about 20 to 23 base pairs, e.g., 21 base pairs, are hailed as particularly effective in inducing RNA interference [Elbashir et al. et al., (2001) EMBO J., 20:6877-6888]. However, others have found that shorter or longer RNA duplex structures may also be effective [Chu and Rana (2007) RNA 14:1714-1719; Kim et al. (2005) Nat Biotech 23:222-226]. In the embodiments described above, due to the nature of the oligonucleotide sequences provided herein, the dsRNA described herein can comprise at least one strand with a minimum length of 21 nucleotides. It can reasonably be expected that shorter duplexes minus a few nucleotides at one or both ends would be equally effective compared to the dsRNA described above. Thus, a dsRNA having a sequence of at least 15, 16, 17, 18, 19, 20, or more contiguous nucleotides derived from one of the sequences provided herein, expression of the MAPT gene relative to control levels at least about their ability to inhibit by 25%, at least about 30%, at least about 40%, at least about 50%, at least about 60%, at least about 70%, at least about 80%, at least about 90%, or at least about 95%, dsRNAs that differ from the dsRNA comprising the full-length sequence are contemplated within the scope of this disclosure. In some embodiments, inhibition from dsRNA containing full-length sequences was measured using an in vitro assay with primary mouse hepatocytes.

加えて、本明細書において説明されるＲＮＡは、ＲＩＳＣ媒介切断を受けやすいＭＡＰＴ転写物の部位を特定する。そのため、本開示は、この部位内を標的化するＲＮＡｉ剤をさらに特徴とする。本明細書において使用される場合、ＲＮＡｉ剤は、特定の部位内のいずれかにおける転写物の切断を促進する場合、ＲＮＡ転写物の特定の部位内を標的化すると言われる。そのようなＲＮＡｉ剤は、概して、ＭＡＰＴ遺伝子における選択された配列に隣接する領域から取られた追加のヌクレオチド配列にカップリングした本明細書において提供される配列の１つから、少なくとも約１５のヌクレオチド、好ましくは少なくとも１９のヌクレオチドを含むであろう。 In addition, the RNAs described herein identify sites in MAPT transcripts that are susceptible to RISC-mediated cleavage. As such, this disclosure further features RNAi agents that target within this site. As used herein, an RNAi agent is said to target within a particular site of an RNA transcript if it promotes cleavage of the transcript anywhere within that particular site. Such RNAi agents generally comprise at least about 15 nucleotides from one of the sequences provided herein coupled to additional nucleotide sequences taken from regions flanking the selected sequence in the MAPT gene. , preferably at least 19 nucleotides.

ＩＩＩ．本開示の修飾されたＲＮＡｉ剤
一実施形態において、本開示のＲＮＡｉ剤のＲＮＡ、例えば、ｄｓＲＮＡは、未修飾であり、例えば、当技術分野で公知であり、本明細書に記載される化学修飾またはコンジュゲーションを含まない。好ましい実施形態において、本開示のＲＮＡｉ剤のＲＮＡ、例えば、ｄｓＲＮＡは、安定性または他の有益な特徴を増強するように化学修飾される。本開示のある特定の実施形態において、本開示のＲＮＡｉ剤のヌクレオチドの実質的に全てが修飾されている。本開示の他の実施形態において、本開示のＲＮＡｉ剤のヌクレオチドの全てが修飾されている。「ヌクレオチドの実質的に全てが修飾されている」本開示のＲＮＡｉ剤は、全体的にではないが大部分が修飾され、５、４、３、２または未修飾ヌクレオチドを含み得る。本開示のさらに他の実施形態において、本開示のＲＮＡｉ剤は、５、４、３、２または１つの修飾されたヌクレオチドを含み得る。 III. Modified RNAi Agents of the Disclosure In one embodiment, the RNA, e.g., dsRNA, of the RNAi agents of the disclosure is unmodified, e.g., chemically modified as known in the art and described herein. or without conjugation. In preferred embodiments, the RNA, eg, dsRNA, of the RNAi agents of the present disclosure are chemically modified to enhance stability or other beneficial characteristics. In certain embodiments of this disclosure, substantially all of the nucleotides of the RNAi agents of this disclosure are modified. In other embodiments of this disclosure, all of the nucleotides of the RNAi agents of this disclosure are modified. An RNAi agent of the disclosure in which "substantially all of the nucleotides are modified" can be predominantly but not entirely modified and can contain 5, 4, 3, 2 or unmodified nucleotides. In yet other embodiments of the present disclosure, RNAi agents of the present disclosure may contain 5, 4, 3, 2 or 1 modified nucleotides.

本開示において特徴とされる核酸は、当技術分野で十分に確立された方法、例えば、参照により本明細書に組み込まれる"Current protocols in nucleic acid chemistry," Beaucage, S.L. et al. (Edrs.), John Wiley & Sons, Inc., New York, NY, USAに記載されるものによって合成または修飾できる。修飾には、例えば、末端修飾、例えば、５’端修飾（リン酸化、コンジュゲーション、逆連結）または３’端修飾（コンジュゲーション、ＤＮＡヌクレオチド、逆連結など）、塩基修飾、例えば、安定化塩基、不安定化塩基もしくは拡大されたレパートリーのパートナーと塩基対形成する塩基との置き換え、塩基の除去（脱塩基ヌクレオチド）またはコンジュゲートされた塩基、糖修飾（例えば、２’位置または４’位置での）もしくは糖の置き換え、またはホスホジエステル結合の修飾もしくは置き換えを含む骨格修飾が含まれる。本明細書に記載される実施形態において有用なＲＮＡｉ剤の具体例として、それだけには限らないが、修飾された骨格を含有する、または天然ヌクレオシド間連結を含有しないＲＮＡが挙げられる。修飾された骨格を有するＲＮＡとして、中でも、骨格中にリン原子を有さないものが挙げられる。本明細書の目的上、時には、当技術分野で言及されるように、そのヌクレオシド間骨格中にリン原子を有さない修飾されたＲＮＡもまた、オリゴヌクレオシドであると考えることができる。一部の実施形態において、修飾されたＲＮＡｉ剤は、そのヌクレオシド間骨格中にリン原子を有する。 Nucleic acids featured in this disclosure can be prepared using methods well established in the art, such as "Current protocols in nucleic acid chemistry," Beaucage, S.L. et al. (Edrs.), which is incorporated herein by reference. , John Wiley & Sons, Inc., New York, NY, USA. Modifications include, for example, terminal modifications, such as 5′ end modifications (phosphorylation, conjugation, back ligation) or 3′ end modifications (conjugation, DNA nucleotides, back ligation, etc.), base modifications, such as stabilizing bases. , replacement of destabilizing bases or bases that base pair with partners of an expanded repertoire, removal of bases (abasic nucleotides) or conjugated bases, sugar modifications (e.g., at the 2' or 4' positions) ) or sugar replacements, or backbone modifications including phosphodiester bond modifications or replacements. Specific examples of RNAi agents useful in the embodiments described herein include, but are not limited to, RNAs containing modified backbones or no natural internucleoside linkages. RNAs with modified backbones include, among others, those that do not have phosphorus atoms in the backbone. For the purposes of this specification and sometimes referred to in the art, modified RNAs that do not have a phosphorus atom in their internucleoside backbone can also be considered oligonucleosides. In some embodiments, a modified RNAi agent has a phosphorus atom in its internucleoside backbone.

修飾されたＲＮＡ骨格として、例えば、ホスホロチオエート、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、メチルホスホネートならびに３’－アルキレンホスホネートおよびキラルホスホネートを含む他のアルキルホスホネート、ホスフィネート、３’－アミノホスホルアミダートおよびアミノアルキルホスホロアミデートを含むホスホロアミデート、チオノホスホロアミデート、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステルおよび通常の３’－５’連結を有するボラノホスフェート、２’－５’連結されたこれらの類似体およびヌクレオシド単位の隣接する対が、３’－５’から５’－３’または２’－５’から５’－２’に連結される逆極性を有するものが挙げられる。種々の塩、混合塩および遊離酸形態も含まれる。本発明の一部の実施形態において、本発明のｄｓＲＮＡ剤は、遊離酸形態である。本発明の他の実施形態において、本発明のｄｓＲＮＡ剤は、塩形態である。一実施形態において、本発明のｄｓＲＮＡ剤は、ナトリウム塩形態である。ある特定の実施形態において、本発明のｄｓＲＮＡ剤がナトリウム塩形態である場合には、ナトリウムイオンが、薬剤中に存在するホスホジエステルおよび／またはホスホロチオエート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏｔａｔｅ）基の実質的に全てに対する対イオンとして薬剤中に存在する。ホスホジエステルおよび／またはホスホロチオエート連結の実質的に全てがナトリウム対イオンを有する薬剤は、５、４、３、２または１つ以下の、ナトリウム対イオンを有さないホスホジエステルおよび／またはホスホロチオエート連結を含む。一部の実施形態において、本発明のｄｓＲＮＡ剤がナトリウム塩形態である場合は、ナトリウムイオンは、薬剤中に存在するホスホジエステルおよび／またはホスホロチオエート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏｔａｔｅ）基の全ての対イオンとして存在する。 Modified RNA backbones include, for example, phosphorothioates, chiral phosphorothioates, phosphorodithioates, phosphotriesters, aminoalkylphosphotriesters, methylphosphonates and other alkylphosphonates, including 3′-alkylene phosphonates and chiral phosphonates, phosphinates, 3 phosphoramidates, including '-aminophosphoramidates and aminoalkylphosphoramidates, thionophosphoramidates, thionoalkylphosphonates, thionoalkylphosphotriesters and with conventional 3'-5' linkages Adjacent pairs of boranophosphates, their 2′-5′ linked analogs and nucleoside units are linked 3′-5′ to 5′-3′ or 2′-5′ to 5′-2′ and those having reversed polarities. Various salts, mixed salts and free acid forms are also included. In some embodiments of the invention, the dsRNA agents of the invention are in free acid form. In other embodiments of the invention, the dsRNA agents of the invention are in salt form. In one embodiment, the dsRNA agents of the invention are in the sodium salt form. In certain embodiments, when a dsRNA agent of the invention is in the sodium salt form, the sodium ion is the counterion for substantially all of the phosphodiester and/or phosphorothiotate groups present in the agent. Present in drugs. Agents in which substantially all of the phosphodiester and/or phosphorothioate linkages have sodium counterions include no more than 5, 4, 3, 2, or 1 phosphodiester and/or phosphorothioate linkages with no sodium counterions. . In some embodiments, when a dsRNA agent of the invention is in the sodium salt form, sodium ions are present as counterions for all phosphodiester and/or phosphorothiotate groups present in the agent.

上記のリン含有連結の調製を教示する代表的な米国特許として、それだけには限らないが、米国特許第３，６８７，８０８号、同４，４６９，８６３号、同４，４７６，３０１号、同５，０２３，２４３号、同５，１７７，１９５号、同５，１８８，８９７号、同５，２６４，４２３号、同５，２７６，０１９号、同５，２７８，３０２号、同５，２８６，７１７号、同５，３２１，１３１号、同５，３９９，６７６号、同５，４０５，９３９号、同５，４５３，４９６号、同５，４５５，２３３号、同５，４６６，６７７号、同５，４７６，９２５号、同５，５１９，１２６号、同５，５３６，８２１号、同５，５４１，３１６号、同５，５５０，１１１号、同５，５６３，２５３号、同５，５７１，７９９号、同５，５８７，３６１号、同５，６２５，０５０号、同６，０２８，１８８号、同６，１２４，４４５号、同６，１６０，１０９号、同６，１６９，１７０号、同６，１７２，２０９号、同６，２３９，２６５号、同６，２７７，６０３号、同６，３２６，１９９号、同６，３４６，６１４号、同６，４４４，４２３号、同６，５３１，５９０号、同６，５３４，６３９号、同６，６０８，０３５号、同６，６８３，１６７号、同６，８５８，７１５号、同６，８６７，２９４号、同６，８７８，８０５号、同７，０１５，３１５号、同７，０４１，８１６号、同７，２７３，９３３号、同７，３２１，０２９号および米国再発行特許第ＲＥ３９４６４号が挙げられ、それらの各々の内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。 Representative United States patents teaching the preparation of the above phosphorus-containing linkages include, but are not limited to, United States Patent Nos. 3,687,808; 4,469,863; 5,023,243, 5,177,195, 5,188,897, 5,264,423, 5,276,019, 5,278,302, 5, 286,717, 5,321,131, 5,399,676, 5,405,939, 5,453,496, 5,455,233, 5,466, 677, 5,476,925, 5,519,126, 5,536,821, 5,541,316, 5,550,111, 5,563,253 , Nos. 5,571,799, 5,587,361, 5,625,050, 6,028,188, 6,124,445, 6,160,109, 6,169,170, 6,172,209, 6,239,265, 6,277,603, 6,326,199, 6,346,614, 6, 444,423, 6,531,590, 6,534,639, 6,608,035, 6,683,167, 6,858,715, 6,867, 294, 6,878,805, 7,015,315, 7,041,816, 7,273,933, 7,321,029 and U.S. Reissue Patent No. RE39464 , the entire contents of each of which are incorporated herein by reference.

中にリン原子を含まない修飾されたＲＮＡ骨格は、短鎖アルキルもしくはシクロアルキルヌクレオシド間連結、混合ヘテロ原子およびアルキルもしくはシクロアルキルヌクレオシド間連結または１つもしくは複数の短鎖ヘテロ原子もしくは複素環式ヌクレオシド間連結によって形成される骨格を有する。これらとして、モルホリノ連結（幾分かはヌクレオシドの糖部分から形成される）、シロキサン骨格、スルフィド、スルホキシドおよびスルホン骨格、ホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格、メチレンホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格、アルケン含有骨格、スルファメート骨格、メチレンイミノおよびメチレンヒドラジノ骨格、スルホネートおよびスルホンアミド骨格、アミド骨格を有するものならびに混合Ｎ、Ｏ、ＳおよびＣＨ２構成成分部分を有する他のものが挙げられる。 Modified RNA backbones that do not contain a phosphorus atom in them may have short alkyl or cycloalkyl internucleoside linkages, mixed heteroatoms and alkyl or cycloalkyl internucleoside linkages or one or more short heteroatoms or heterocyclic nucleosides. It has a skeleton formed by interlinkages. These include morpholino linkages (some formed from nucleoside sugar moieties), siloxane backbones, sulfide, sulfoxide and sulfone backbones, formacetyl and thioformacetyl backbones, methyleneformacetyl and thioformacetyl backbones, alkene-containing backbones. , sulfamate backbones, methyleneimino and methylenehydrazino backbones, sulfonate and sulfonamide backbones, those with amide backbones and others with mixed N, O, S and CH2 component moieties.

上記のオリゴヌクレオシドの調製を教示する代表的な米国特許として、それだけには限らないが、米国特許第５，０３４，５０６号、同５，１６６，３１５号、同５，１８５，４４４号、同５，２１４，１３４号、同５，２１６，１４１号、同５，２３５，０３３号、同５，６４，５６２号、同５，２６４，５６４号、同５，４０５，９３８号、同５，４３４，２５７号、同５，４６６，６７７号、同５，４７０，９６７号、同５，４８９，６７７号、同５，５４１，３０７号、同５，５６１，２２５号、同５，５９６，０８６号、同５，６０２，２４０号、同５，６０８，０４６号、同５，６１０，２８９号、同５，６１８，７０４号、同５，６２３，０７０号、同５，６６３，３１２号、同５，６３３，３６０号、同５，６７７，４３７号および同５，６７７，４３９号が挙げられ、それらの各々の内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。 Representative U.S. patents teaching the preparation of the above oligonucleosides include, but are not limited to, U.S. Pat. Nos. 5,034,506; 5,166,315; , 214,134, 5,216,141, 5,235,033, 5,64,562, 5,264,564, 5,405,938, 5,434 , 257, 5,466,677, 5,470,967, 5,489,677, 5,541,307, 5,561,225, 5,596,086 No. 5,602,240, 5,608,046, 5,610,289, 5,618,704, 5,623,070, 5,663,312, 5,633,360, 5,677,437 and 5,677,439, the entire contents of each of which are incorporated herein by reference.

他の実施形態において、ＲＮＡｉ剤での使用に適したＲＮＡミメティックが企図され、このＲＮＡミメティックでは、ヌクレオチド単位の糖とヌクレオシド間連結の両方、すなわち骨格が代替の基で置き換えられている。塩基単位は、適切な核酸標的化合物とのハイブリダイゼーションのために維持される。１つのこのようなオリゴマー化合物、優れたハイブリダイゼーション特性を有するとわかっているＲＮＡミメティックは、ペプチド核酸（ＰＮＡ）と呼ばれる。ＰＮＡ化合物では、ＲＮＡの糖骨格は、アミド含有骨格、特に、アミノエチルグリシン骨格と置き換えられている。核酸塩基は、保持され、直接的または間接的に骨格のアミド部分のアザ窒素原子に結合される。ＰＮＡ化合物の調製を教示する代表的な米国特許として、それだけには限らないが、米国特許第５，５３９，０８２号、同５，７１４，３３１号および同５，７１９，２６２号が挙げられ、それらの各々の内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。本開示のＲＮＡｉ剤において使用するために適したさらなるＰＮＡ化合物は、例えば、Nielsen et al., Science, 1991, 254, 1497-1500に記載されている。 In other embodiments, RNA mimetics suitable for use in RNAi agents are contemplated in which both the sugar and internucleoside linkages of the nucleotide units, ie the backbone, are replaced with alternative groups. Base units are maintained for hybridization with appropriate nucleic acid target compounds. One such oligomeric compound, an RNA mimetic known to have excellent hybridization properties, is called a peptide nucleic acid (PNA). In PNA compounds, the sugar-backbone of RNA is replaced with an amide-containing backbone, in particular an aminoethylglycine backbone. The nucleobases are retained and attached directly or indirectly to the aza nitrogen atoms of the amide moieties of the backbone. Representative U.S. patents that teach the preparation of PNA compounds include, but are not limited to, U.S. Pat. Nos. 5,539,082, 5,714,331 and 5,719,262; The entire contents of each of are incorporated herein by reference. Additional PNA compounds suitable for use in the RNAi agents of the present disclosure are described, for example, in Nielsen et al., Science, 1991, 254, 1497-1500.

本開示において特徴とされるいくつかの実施形態には、ホスホロチオエート骨格を有するＲＮＡおよびヘテロ原子骨格、特に、上記で参照された米国特許第５，４８９，６７７号の－－ＣＨ２－－ＮＨ－－ＣＨ２－、－－ＣＨ２－－Ｎ（ＣＨ３）－－Ｏ－－ＣＨ２－－［メチレン（メチルイミノ）またはＭＭＩ骨格として知られる］、－－ＣＨ２－－Ｏ－－Ｎ（ＣＨ３）－－ＣＨ２－－、－－ＣＨ２－－Ｎ（ＣＨ３）－－Ｎ（ＣＨ３）－－ＣＨ２－－および－－Ｎ（ＣＨ３）－－ＣＨ２－－［天然のホスホジエステル骨格は、－－Ｏ－－Ｐ－－Ｏ－－ＣＨ２－－として表される］および上記で参照された米国特許第５，６０２，２４０号のアミド骨格を有するオリゴヌクレオシドが含まれる。一部の実施形態において、本明細書において特徴とされるＲＮＡは、上記で参照されたＵＳ５，０３４，５０６のモルホリノ骨格構造を有する。 Some embodiments featured in this disclosure include RNAs with phosphorothioate backbones and heteroatom backbones, particularly --CH 2 --NH- of US Pat. No. 5,489,677, referenced above. --CH 2 --, --CH 2 --N(CH 3 )--O--CH 2 --[known as methylene (methylimino) or MMI backbone], --CH 2 --O--N(CH 3 ) --CH 2 --, --CH 2 --N(CH 3 )--N(CH 3 )--CH 2 -- and --N(CH 3 )--CH 2 --[Natural The phosphodiester backbone is represented as --O--P--O--CH 2 --] and oligonucleosides with the amide backbone of US Pat. No. 5,602,240, referenced above. . In some embodiments, the RNA featured herein has the morpholino backbone structure of US Pat. No. 5,034,506 referenced above.

修飾されたＲＮＡはまた、１つまたは複数の置換された糖部分を含有し得る。本明細書において特徴とされるＲＮＡｉ剤、例えば、ｄｓＲＮＡは、２’位置に以下：ＯＨ；Ｆ；Ｏ－、Ｓ－もしくはＮ－アルキル；Ｏ－、Ｓ－もしくはＮ－アルケニル；Ｏ－、Ｓ－もしくはＮ－アルキニルまたはＯ－アルキル－Ｏ－アルキルのうち１つを含む場合があり、アルキル、アルケニルおよびアルキニルは、置換または非置換Ｃ１～Ｃ１０アルキルまたはＣ２～Ｃ１０アルケニルおよびアルキニルであり得る。例示的な適した修飾として、Ｏ［（ＣＨ２）ｎＯ］ｍＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）．ｎＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＮＨ２およびＯ（ＣＨ２）ｎＯＮ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３）］２が挙げられ、式中、ｎおよびｍは、１～約１０である。他の実施形態において、ｄｓＲＮＡは、２’位置に以下：Ｃ１～Ｃ１０低級アルキル、置換低級アルキル、アルカリル、アラルキル、Ｏ－アルカリルまたはＯ－アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ３、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、ＮＨ２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、ＲＮＡ切断基、レポーター基、干渉物質、ＲＮＡｉ剤の薬物動態特性を改善するための基またはＲＮＡｉ剤の薬動力学特性を改善するための基および同様の特性を有する他の置換基のうち１つを含む。一部の実施形態において、修飾は、２’－メトキシエトキシ（２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）または２’－ＭＯＥとしても知られる２’－Ｏ－－ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３）（Martin et al., Helv. Chim. Acta, 1995, 78:486-504）、すなわち、アルコキシ－アルコキシ基を含む。別の例示的修飾として、２’－ジメチルアミノオキシエトキシ、すなわち、本明細書において以下に実施例において記載されるような２’－ＤＭＡＯＥとしても知られるＯ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２基および２’－ジメチルアミノエトキシエトキシ（２’－Ｏ－ジメチルアミノエトキシエチルまたは２’－ＤＭＡＥＯＥとしても当技術分野で公知の）、すなわち、２’－Ｏ－－ＣＨ２－－Ｏ－－ＣＨ２－－Ｎ（ＣＨ２）２がある。さらなる例示的修飾として、５’－Ｍｅ－２’－Ｆヌクレオチド、５’－Ｍｅ－２’－ＯＭｅヌクレオチド、５’－Ｍｅ－２’－デオキシヌクレオチド（これら３つのファミリー中のＲおよびＳ異性体の両方）、２’－アルコキシアルキルおよび２’－ＮＭＡ（Ｎ－メチルアセトアミド）が挙げられる。 Modified RNAs may also contain one or more substituted sugar moieties. RNAi agents, e.g., dsRNA, featured herein have the following at the 2' position: OH; F; O-, S- or N-alkyl; O-, S- or N-alkenyl; - or N-alkynyl or O-alkyl-O-alkyl, where alkyl, alkenyl and alkynyl are substituted or unsubstituted C 1 -C 10 alkyl or C 2 -C 10 alkenyl and alkynyl. could be. Exemplary suitable modifications include O[( CH2 ) nO ] mCH3 , O( CH2 ) . nOCH3 , O( CH2 ) nNH2 , O ( CH2 ) nCH3 , O( CH2 ) nONH2 and O( CH2 ) nON [( CH2 ) nCH3 )] 2 are wherein n and m are from 1 to about 10. In other embodiments, the dsRNA has at the 2′ position: C 1 -C 10 lower alkyl, substituted lower alkyl, alkaryl, aralkyl, O-alkaryl or O-aralkyl, SH, SCH 3 , OCN, Cl, Br, CN, CF3 , OCF3 , SOCH3 , SO2CH3 , ONO2 , NO2 , N3 , NH2 , heterocycloalkyl, heterocycloalkaryl, aminoalkylamino, polyalkylamino , substituted silyl, RNA cleavage a group, a reporter group, an interfering substance, a group for improving the pharmacokinetic properties of an RNAi agent or a group for improving the pharmacokinetic properties of an RNAi agent and one of other substituents with similar properties . In some embodiments, the modification is 2'-O--CH 2 CH 2 OCH 3 , also known as 2'-methoxyethoxy (2'-O-(2-methoxyethyl) or 2'-MOE) ( Martin et al., Helv. Chim. Acta, 1995, 78:486-504), ie, alkoxy-alkoxy groups. Another exemplary modification is 2′-dimethylaminooxyethoxy, ie, O(CH 2 ) 2 ON(CH 3 ), also known as 2′-DMAOE as described herein below in the Examples. 2 groups and 2′-dimethylaminoethoxyethoxy (also known in the art as 2′-O-dimethylaminoethoxyethyl or 2′-DMAEOE), i.e. 2′-O—CH 2 —O— There is CH 2 --N(CH 2 ) 2 . Further exemplary modifications include 5'-Me-2'-F nucleotides, 5'-Me-2'-OMe nucleotides, 5'-Me-2'-deoxynucleotides (R and S isomers in these three families). both), 2′-alkoxyalkyl and 2′-NMA (N-methylacetamide).

他の修飾として、２’－メトキシ（２’－ＯＣＨ３）、２’－アミノプロポキシ（２’－ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）、２’－Ｏ－ヘキサデシルおよび２’－フルオロ（２’－Ｆ）が挙げられる。同様の修飾はまた、ＲＮＡｉ剤のＲＮＡ上の他の位置、特に、３’末端ヌクレオチド上または２’－５’連結ｄｓＲＮＡ中の糖の３’位置および５’末端ヌクレオチドの５’位置でも行うことができる。ＲＮＡｉ剤はまた、糖ミメティック、例えば、ペントフラノシル糖の代わりにシクロブチル部分を有し得る。このような修飾された糖構造の調製を教示する代表的な米国特許として、それだけには限らないが、米国特許第４，９８１，９５７号、同５，１１８，８００号、同５，３１９，０８０号、同５，３５９，０４４号、同５，３９３，８７８号、同５，４４６，１３７号、同５，４６６，７８６号、同５，５１４，７８５号、同５，５１９，１３４号、同５，５６７，８１１号、同５，５７６，４２７号、同５，５９１，７２２号、同５，５９７，９０９号、同５，６１０，３００号、同５，６２７，０５３号、同５，６３９，８７３号、同５，６４６，２６５号、同５，６５８，８７３号、同５，６７０，６３３号および同５，７００，９２０号が挙げられ、それらのうちある特定のものは、本出願と共同所有されている。前記のものの各々の内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。 Other modifications include 2′-methoxy (2′-OCH 3 ), 2′-aminopropoxy (2′-OCH 2 CH 2 CH 2 NH 2 ), 2′-O-hexadecyl and 2′-fluoro (2′ -F). Similar modifications can also be made at other positions on the RNA of the RNAi agent, particularly at the 3′ position of the sugar on the 3′ terminal nucleotide or in 2′-5′ linked dsRNAs and at the 5′ position of the 5′ terminal nucleotide. can be done. RNAi agents may also have sugar mimetics, eg, cyclobutyl moieties in place of the pentofuranosyl sugar. Representative U.S. patents teaching the preparation of such modified sugar structures include, but are not limited to, U.S. Pat. Nos. 4,981,957; 5,118,800; No. 5,359,044, 5,393,878, 5,446,137, 5,466,786, 5,514,785, 5,519,134, 5,567,811, 5,576,427, 5,591,722, 5,597,909, 5,610,300, 5,627,053, 5 , 639,873, 5,646,265, 5,658,873, 5,670,633 and 5,700,920, certain of which are Commonly owned with this application. The entire contents of each of the foregoing are incorporated herein by reference.

本開示のＲＮＡｉ剤はまた、核酸塩基（当技術分野では簡単に「塩基」と呼ばれることも多い）修飾または置換を含み得る。本明細書において使用される場合、「未修飾の」または「天然の」核酸塩基には、プリン塩基アデニン（Ａ）およびグアニン（Ｇ）、ピリミジン塩基チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）およびウラシル（Ｕ）が含まれる。修飾された核酸塩基には、他の合成および天然核酸塩基、例えば、５－メチルシトシン（５－ｍｅ－Ｃ）、５－ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２－アミノアデニン、アデニンおよびグアニンの６－メチルおよび他のアルキル誘導体、アデニンおよびグアニンの２－プロピルおよび他のアルキル誘導体、２－チオウラシル、２－チオチミンおよび２－チオシトシン、５－ハロウラシルおよびシトシン、５－プロピニルウラシルおよびシトシン、６－アゾウラシル、シトシンおよびチミン、５－ウラシル（シュードウラシル）、４－チオウラシル、８－ハロ、８－アミノ、８－チオール、８－チオアルキル、８－ヒドロキシルおよび（ａｎａｌ）他の８－置換アデニンおよびグアニン、５－ハロ、特に、５－ブロモ、５－トリフルオロメチルおよび他の５－置換ウラシルおよびシトシン、７－メチルグアニンおよび７－メチルアデニン、８－アザグアニンおよび８－アザアデニン、７－デアザグアニンおよび７－デアザアデニン（ｄａａｚａａｄｅｎｉｎｅ）ならびに３－デアザグアニンおよび３－デアザアデニンが含まれる。さらなる核酸塩基には、米国特許第３，６８７，８０８号に開示されるもの、Modified Nucleosides in Biochemistry, Biotechnology and Medicine, Herdewijn, P. ed. Wiley-VCH, 2008において開示されるもの、The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering, pages 858-859, Kroschwitz, J. L, ed. John Wiley & Sons, 1990において開示されるもの、Englisch et al., (1991) Angewandte Chemie, International Edition, 30:613によって開示されるものおよびSanghvi, Y S., Chapter 15, dsRNA Research and Applications, pages 289-302, Crooke, S. T. and Lebleu, B., Ed., CRC Press, 1993によって開示されるものが含まれる。これらの核酸塩基のうちある特定のものは、本開示において特徴とされるオリゴマー化合物の結合親和性を増大するために特に有用である。これらには、５－置換ピリミジン、６－アザピリミジンならびに２－アミノプロピルアデニン、５－プロピニルウラシルおよび５－プロピニルシトシンを含むＮ－２、Ｎ－６および０－６置換プリンが含まれる。５－メチルシトシン置換は、核酸二重鎖安定性を０．６～１．２℃だけ増大するとわかっており（Sanghvi, Y. S., Crooke, S. T. and Lebleu, B., Eds., dsRNA Research and Applications, CRC Press, Boca Raton, 1993, pp. 276-278）、さらにより詳しくは、２’－Ｏ－メトキシエチル糖修飾と組み合わせた場合に例示的塩基置換である。 The RNAi agents of the present disclosure can also include nucleobase (often simply referred to in the art as "base") modifications or substitutions. As used herein, "unmodified" or "natural" nucleobases include the purine bases adenine (A) and guanine (G), the pyrimidine bases thymine (T), cytosine (C) and uracil ( U) are included. Modified nucleobases include other synthetic and natural nucleobases such as 5-methylcytosine (5-me-C), 5-hydroxymethylcytosine, xanthine, hypoxanthine, 2-aminoadenine, adenine and guanine. 6-methyl and other alkyl derivatives, 2-propyl and other alkyl derivatives of adenine and guanine, 2-thiouracil, 2-thiothymine and 2-thiocytosine, 5-halouracil and cytosine, 5-propynyluracil and cytosine, 6-azouracil , cytosine and thymine, 5-uracil (pseudouracil), 4-thiouracil, 8-halo, 8-amino, 8-thiol, 8-thioalkyl, 8-hydroxyl and (anal) other 8-substituted adenines and guanines, 5 - halo, especially 5-bromo, 5-trifluoromethyl and other 5-substituted uracils and cytosines, 7-methylguanine and 7-methyladenine, 8-azaguanine and 8-azaadenine, 7-deazaguanine and 7-deazaadenine ( daazaadenine) as well as 3-deazaguanine and 3-deazaadenine. Additional nucleobases include those disclosed in U.S. Pat. No. 3,687,808, those disclosed in Modified Nucleosides in Biochemistry, Biotechnology and Medicine, Herdewijn, P. ed. Wiley-VCH, 2008, The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering, pages 858-859, Kroschwitz, J. L, ed. John Wiley & Sons, 1990, disclosed by Englisch et al., (1991) Angewandte Chemie, International Edition, 30:613 and those disclosed by Sanghvi, Y S., Chapter 15, dsRNA Research and Applications, pages 289-302, Crooke, S. T. and Lebleu, B., Ed., CRC Press, 1993. Certain of these nucleobases are particularly useful for increasing the binding affinity of the oligomeric compounds featured in this disclosure. These include 5-substituted pyrimidines, 6-azapyrimidines and N-2, N-6 and 0-6 substituted purines including 2-aminopropyladenine, 5-propynyluracil and 5-propynylcytosine. 5-methylcytosine substitutions have been shown to increase nucleic acid duplex stability by 0.6-1.2°C (Sanghvi, Y. S., Crooke, S. T. and Lebleu, B., Eds., dsRNA Research and Applications, CRC Press, Boca Raton, 1993, pp. 276-278), and more particularly exemplary base substitutions when combined with 2'-O-methoxyethyl sugar modifications.

上記の修飾された核酸塩基ならびに他の修飾された核酸塩基のある特定のものの調製を教示する代表的な米国特許として、それだけには限らないが、上記の米国特許第３，６８７，８０８号、同４，８４５，２０５号、同５，１３０，３０号、同５，１３４，０６６号、同５，１７５，２７３号、同５，３６７，０６６号、同５，４３２，２７２号、同５，４５７，１８７号、同５，４５９，２５５号、同５，４８４，９０８号、同５，５０２，１７７号、同５，５２５，７１１号、同５，５５２，５４０号、同５，５８７，４６９号、同５，５９４，１２１号、同５，５９６，０９１号、同５，６１４，６１７号、同５，６８１，９４１号、同５，７５０，６９２号、同６，０１５，８８６号、同６，１４７，２００号、同６，１６６，１９７号、同６，２２２，０２５号、同６，２３５，８８７号、同６，３８０，３６８号、同６，５２８，６４０号、同６，６３９，０６２号、同６，６１７，４３８号、同７，０４５，６１０号、同７，４２７，６７２号および同７，４９５，０８８号が挙げられ、それらの各々の内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。 Representative U.S. patents that teach the preparation of certain of the above modified nucleobases as well as other modified nucleobases include, but are not limited to, U.S. Pat. No. 3,687,808, supra; 4,845,205, 5,130,30, 5,134,066, 5,175,273, 5,367,066, 5,432,272, 5, 457,187, 5,459,255, 5,484,908, 5,502,177, 5,525,711, 5,552,540, 5,587, 469, 5,594,121, 5,596,091, 5,614,617, 5,681,941, 5,750,692, 6,015,886 , 6,147,200, 6,166,197, 6,222,025, 6,235,887, 6,380,368, 6,528,640, 6,639,062, 6,617,438, 7,045,610, 7,427,672 and 7,495,088, the entire contents of each of which are incorporated herein by reference incorporated herein by reference.

本開示のＲＮＡｉ剤をまた、１つまたは複数のロックド核酸（ＬＮＡ）を含むように修飾できる。ロックド核酸は、リボース部分が２’および４’炭素を接続する追加の架橋を含む、修飾されたリボース部分を有するヌクレオチドである。この構造は、リボースを３’－エンド構造立体配座に効率的に「ロックする」。ｓｉＲＮＡへのロックド核酸の付加は、血清におけるｓｉＲＮＡ安定性を増大し、オフターゲット効果を低減するとわかっている［Elmen, J. et al., (2005) Nucleic Acids Research 33(1):439-447、Mook, OR. et al., (2007) Mol anc Ther 6(3):833-843、Grunweller, A. et al., (2003) Nucleic Acids Research 31(12):3185-3193］。 The RNAi agents of this disclosure can also be modified to contain one or more locked nucleic acids (LNAs). Locked nucleic acids are nucleotides with modified ribose moieties in which the ribose moieties contain an additional bridge connecting the 2' and 4' carbons. This structure effectively "locks" the ribose into the 3'-end structural conformation. The addition of locked nucleic acids to siRNA has been shown to increase siRNA stability in serum and reduce off-target effects [Elmen, J. et al., (2005) Nucleic Acids Research 33(1):439-447 et al., (2007) Molanc Ther 6(3):833-843; Grunweller, A. et al., (2003) Nucleic Acids Research 31(12):3185-3193].

本開示のＲＮＡｉ剤をまた、１つまたは複数の二環式糖部分を含むように修飾できる。「二環式糖」は、２つの原子を架橋することによって修飾されたフラノシル環である。「二環式ヌクレオシド」（「ＢＮＡ」）は、糖環の２つの炭素原子を接続し、それによって二環式環構造を形成する架橋を含む糖部分を有するヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、架橋は、糖環の４’－炭素と２’－炭素を接続する。したがって、一部の実施形態において、本開示の薬剤は、１つまたは複数のロックド核酸（ＬＮＡ）を含み得る。ロックド核酸は、リボース部分が２’および４’炭素を接続する追加の架橋を含む、修飾されたリボース部分を有するヌクレオチドである。言い換えれば、ＬＮＡは、４’－ＣＨ２－Ｏ－２’架橋を含む二環式糖部分を含むヌクレオチドである。この構造は、リボースを３’－エンド構造立体配座に効率的に「ロックする」。ｓｉＲＮＡへのロックド核酸の付加は、血清におけるｓｉＲＮＡ安定性を増大し、オフターゲット効果を低減するとわかっている［Elmen, J. et al., (2005) Nucleic Acids Research 33(1):439-447、Mook, OR. et al., (2007) Mol Canc Ther 6(3):833-843、Grunweller, A. et al., (2003) Nucleic Acids Research 31(12):3185-3193］。本開示のポリヌクレオチドにおいて使用するための二環式ヌクレオシドの例として、制限するものではないが、４’と２’リボシル環原子の間の架橋を含むヌクレオシドが挙げられる。ある特定の実施形態において、本開示のアンチセンスポリヌクレオチド剤として、４’から２’への架橋を含む１つまたは複数の二環式ヌクレオシドが挙げられる。このような４’から２’へ架橋された二環式ヌクレオシドの例として、それだけには限らないが、４’－（ＣＨ２）－Ｏ－２’（ＬＮＡ）、４’－（ＣＨ２）－Ｓ－２’、４’－（ＣＨ２）２－Ｏ－２’（ＥＮＡ）、４’－ＣＨ（ＣＨ３）－Ｏ－２’（「拘束エチル」または「ｃＥｔ」とも呼ばれる）および４’－ＣＨ（ＣＨ２ＯＣＨ３）－Ｏ－２’（およびその類似体、例えば、米国特許第７，３９９，８４５号を参照されたい）、４’－Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ３）－Ｏ－２’（およびその類似体、例えば、米国特許第８，２７８，２８３号を参照されたい）、４’－ＣＨ２－Ｎ（ＯＣＨ３）－２’（およびその類似体、例えば、米国特許第８，２７８，４２５号を参照されたい）、４’－ＣＨ２－Ｏ－Ｎ（ＣＨ３）－２’（例えば、米国特許公開第２００４／０１７１５７０号を参照されたい）、４’－ＣＨ２－Ｎ（Ｒ）－Ｏ－２’（式中、Ｒは、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１２アルキルまたは保護基である）（例えば、米国特許第７，４２７，６７２号を参照されたい）、４’－ＣＨ２－Ｃ（Ｈ）（ＣＨ３）－２’（例えば、Chattopadhyaya et al., J. Org. Chem., 2009, 74, 118-134を参照されたい）および４’－ＣＨ２－Ｃ（－ＣＨ２）－２’（およびその類似体、例えば、米国特許第８，２７８，４２６号を参照されたい）が挙げられる。前記の各々の内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。 RNAi agents of this disclosure can also be modified to include one or more bicyclic sugar moieties. A "bicyclic sugar" is a furanosyl ring modified by bridging two atoms. A "bicyclic nucleoside" ("BNA") is a nucleoside having a sugar moiety that includes a bridge that connects two carbon atoms of the sugar ring, thereby forming a bicyclic ring structure. In certain embodiments, the bridge connects the 4'-carbon and 2'-carbon of the sugar ring. Accordingly, in some embodiments, agents of the disclosure may comprise one or more locked nucleic acids (LNA). Locked nucleic acids are nucleotides with modified ribose moieties in which the ribose moieties contain an additional bridge connecting the 2' and 4' carbons. In other words, LNAs are nucleotides containing a bicyclic sugar moiety containing a 4'-CH2-O-2' bridge. This structure effectively "locks" the ribose into the 3'-end structural conformation. The addition of locked nucleic acids to siRNA has been shown to increase siRNA stability in serum and reduce off-target effects [Elmen, J. et al., (2005) Nucleic Acids Research 33(1):439-447 et al., (2007) Mol Canc Ther 6(3):833-843; Grunweller, A. et al., (2003) Nucleic Acids Research 31(12):3185-3193]. Examples of bicyclic nucleosides for use in the polynucleotides of the present disclosure include, but are not limited to, nucleosides containing a bridge between the 4' and 2' ribosyl ring atoms. In certain embodiments, antisense polynucleotide agents of the disclosure include one or more bicyclic nucleosides comprising a 4' to 2' bridge. Examples of such 4' to 2' bridged bicyclic nucleosides include, but are not limited to, 4'-(CH2)-O-2'(LNA), 4'-(CH2)-S- 2′, 4′-(CH2)2-O-2′(ENA), 4′-CH(CH3)-O-2′ (also called “constrained ethyl” or “cEt”) and 4′-CH(CH2OCH3 )—O-2′ (and analogues thereof, see, eg, US Pat. No. 7,399,845), 4′-C(CH3)(CH3)—O-2′ (and analogues thereof, See, eg, US Pat. No. 8,278,283), 4′-CH2-N(OCH3)-2′ (and analogues thereof, eg, see US Pat. No. 8,278,425). ), 4′-CH2-ON(CH3)-2′ (see, eg, US Patent Publication No. 2004/0171570), 4′-CH2-N(R)-O-2′ (wherein , R is H, C1-C12 alkyl or a protecting group) (see, eg, US Pat. No. 7,427,672), 4′-CH2-C(H)(CH3)-2′ ( See, e.g., Chattopadhyaya et al., J. Org. Chem., 2009, 74, 118-134) and 4'-CH2-C(-CH2)-2' (and analogues thereof, e.g., US patent 8,278,426). The entire contents of each of the foregoing are incorporated herein by reference.

ロックド核酸ヌクレオチドの調製を教示するさらなる代表的な米国特許および米国特許公開として、それだけには限らないが、以下：米国特許第６，２６８，４９０号、同６，５２５，１９１号、同６，６７０，４６１号、同６，７７０，７４８号、同６，７９４，４９９号、同６，９９８，４８４号、同７，０５３，２０７号、同７，０３４，１３３号、同７，０８４，１２５号、同７，３９９，８４５号、同７，４２７，６７２号、同７，５６９，６８６号、同７，７４１，４５７号、同８，０２２，１９３号、同８，０３０，４６７号、同８，２７８，４２５号、同８，２７８，４２６号、同８，２７８，２８３号、ＵＳ２００８／００３９６１８およびＵＳ２００９／００１２２８１が挙げられ、それらの各々の内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。 Further representative U.S. patents and U.S. patent publications teaching the preparation of locked nucleic acid nucleotides include, but are not limited to: U.S. Pat. Nos. 6,268,490; , 461, 6,770,748, 6,794,499, 6,998,484, 7,053,207, 7,034,133, 7,084,125 No. 7,399,845, 7,427,672, 7,569,686, 7,741,457, 8,022,193, 8,030,467, 8,278,425, 8,278,426, 8,278,283, US2008/0039618 and US2009/0012281, the entire contents of each of which are incorporated herein by reference be

例えば、α－Ｌ－リボフラノースおよびβ－Ｄ－リボフラノースを含む１つまたは複数の立体化学的糖立体配置を有する前記の二環式ヌクレオシドのいずれも、調製できる（ＷＯ９９／１４２２６を参照されたい）。 For example, any of the above bicyclic nucleosides having one or more stereochemical sugar configurations can be prepared, including α-L-ribofuranose and β-D-ribofuranose (see WO99/14226 ).

本開示のＲＮＡｉ剤をまた、１または複数の拘束エチルヌクレオチドを含むように修飾できる。本明細書において使用される場合、「拘束エチルヌクレオチド」または「ｃＥｔ」は、４’－ＣＨ（ＣＨ３）－０～２’架橋を含む二環式糖部分を含むロックド核酸である。一実施形態において、拘束エチルヌクレオチドは、Ｓ立体配座にあり、本明細書において「Ｓ－ｃＥｔ」と呼ばれる。 The RNAi agents of this disclosure can also be modified to contain one or more constrained ethyl nucleotides. As used herein, a "constrained ethyl nucleotide" or "cEt" is a locked nucleic acid containing a bicyclic sugar moiety containing a 4'-CH(CH3)-0-2' bridge. In one embodiment, the constrained ethyl nucleotide is in the S conformation and is referred to herein as "S-cEt."

本開示のＲＮＡｉ剤はまた、１つまたは複数の「立体配座制限ヌクレオチド」（「ＣＲＮ」）を含み得る。ＣＲＮは、リボースのＣ２’とＣ４’炭素を、またはリボースのＣ３と－Ｃ５’炭素を接続するリンカーを有するヌクレオチド類似体である。ＣＲＮは、リボース環を安定な立体配座にロックし、ｍＲＮＡに対するハイブリダイゼーション親和性を増大する。リンカーは、酸素を安定性および親和性のために最適な位置に配置するのに十分な長さのものであり、その結果、リボース環パッカリングを少なくなる。 RNAi agents of the present disclosure may also include one or more "conformation-restricting nucleotides" ("CRNs"). CRN is a nucleotide analogue with a linker connecting the C2' and C4' carbons of ribose, or the C3 and -C5' carbons of ribose. CRN locks the ribose ring into a stable conformation, increasing hybridization affinity for mRNA. The linkers are of sufficient length to place the oxygens in optimal positions for stability and affinity, resulting in less ribose ring puckering.

上記のＣＲＮのある特定のものの調製を教示する代表的な刊行物として、それだけには限らないが、ＵＳ２０１３／０１９０３８３およびＷＯ２０１３／０３６８６８が挙げられ、それらの各々の内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。 Representative publications teaching the preparation of certain of the above CRNs include, but are not limited to, US2013/0190383 and WO2013/036868, the entire contents of each of which are incorporated herein by reference. incorporated.

一部の実施形態において、本開示のＲＮＡｉ剤は、ＵＮＡ（非ロックド核酸）ヌクレオチドである１つまたは複数のモノマーを含む。ＵＮＡは、非ロックド非環式核酸であり、糖の結合のいずれも除去されており、非ロックド「糖」残基を形成する。一例では、ＵＮＡはまた、Ｃ１’－Ｃ４’の間の結合（すなわち、Ｃ１’とＣ４’炭素の間の共有結合の炭素－酸素－炭素結合）が除去されているモノマーも包含する。別の例では、糖のＣ２’－Ｃ３’結合（すなわち、Ｃ２’とＣ３’炭素の間の共有結合の炭素－炭素結合）が除去されている［参照により本明細書に組み込まれる、Nuc. Acids Symp. Series, 52, 133-134 (2008)およびFluiter et al., Mol. Biosyst., 2009, 10, 1039を参照されたい］。 In some embodiments, RNAi agents of this disclosure comprise one or more monomers that are UNA (unlocked nucleic acid) nucleotides. UNA is a non-locked acyclic nucleic acid in which any sugar linkages have been removed, forming a non-locked "sugar" residue. In one example, UNA also includes monomers in which the bond between C1'-C4' (ie, the covalent carbon-oxygen-carbon bond between the C1' and C4' carbons) has been removed. In another example, the C2'-C3' bond of the sugar (ie, the covalent carbon-carbon bond between the C2' and C3' carbons) has been removed [herein incorporated by reference, Nuc. Series, 52, 133-134 (2008) and Fluiter et al., Mol. Biosyst., 2009, 10, 1039].

ＵＮＡの調製を教示する代表的な米国の刊行物として、それだけには限らないが、ＵＳ８，３１４，２２７および米国特許公開第２０１３／００９６２８９号、同２０１３／００１１９２２号および同２０１１／０３１３０２０号が挙げられ、それらの各々の内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。 Representative US publications teaching the preparation of UNA include, but are not limited to, US 8,314,227 and US Patent Publication Nos. 2013/0096289, 2013/0011922 and 2011/0313020. , the entire contents of each of which are incorporated herein by reference.

本開示のＲＮＡｉ剤は、１つまたは複数の「シクロヘキセン核酸」または（「ＣｅＮＡ」）も含んでもよい。ＣｅＮＡは、ＤＮＡのフラノース部分がシクロヘキセン環に置き換えられたヌクレオチド類似体である。ＤＮＡ鎖にシクロヘキセニルヌクレオシドを組み込むと、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッドの安定性が増大する。ＣｅＮＡは血清中での分解に対して安定であり、ＣｅＮＡ／ＲＮＡハイブリッドは、大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）ＲＮａｓｅ Ｈを活性化し、それによってＲＮＡ鎖を切断することができる。（参照により本明細書に組み込まれる、Wang et al., Am. Chem. Soc. 2000, 122, 36, 8595-8602を参照されたい）。 RNAi agents of the present disclosure may also include one or more "cyclohexene nucleic acids" or ("CeNA"). CeNA is a nucleotide analogue in which the furanose moiety of DNA has been replaced with a cyclohexene ring. Incorporation of cyclohexenyl nucleosides into the DNA strand increases the stability of DNA/RNA hybrids. CeNA is stable to degradation in serum, and CeNA/RNA hybrids can activate E. coli RNase H, thereby cleaving the RNA strand. (See Wang et al., Am. Chem. Soc. 2000, 122, 36, 8595-8602, incorporated herein by reference).

ＲＮＡ分子の末端への潜在的に安定化する修飾として、Ｎ－（アセチルアミノカプロイル）－４－ヒドロキシプロリノール（Ｈｙｐ－Ｃ６－ＮＨＡｃ）、Ｎ－（カプロイル－４－ヒドロキシプロリノール（Ｈｙｐ－Ｃ６）、Ｎ－（アセチル－４－ヒドロキシプロリノール（Ｈｙｐ－ＮＨＡｃ）、チミジン－２’－０－デオキシチミジン（エーテル）、Ｎ－（アミノカプロイル）－４－ヒドロキシプロリノール（Ｈｙｐ－Ｃ６－アミノ）、２－ドコサノイル－ウリジン－３”－ホスフェート、逆塩基ｄＴ（ｉｄＴ）および他のものを挙げることができる。この修飾の開示内容は、ＷＯ２０１１／００５８６１に見出すことができる。 Potentially stabilizing modifications to the ends of RNA molecules include N-(acetylaminocaproyl)-4-hydroxyprolinol (Hyp-C6-NHAc), N-(caproyl-4-hydroxyprolinol (Hyp- C6), N-(acetyl-4-hydroxyprolinol (Hyp-NHAc), thymidine-2′-0-deoxythymidine (ether), N-(aminocaproyl)-4-hydroxyprolinol (Hyp-C6- amino), 2-docosanoyl-uridine-3″-phosphate, reverse base dT (idT) and others. A disclosure of this modification can be found in WO2011/005861.

本開示のＲＮＡｉ剤の他の修飾として、５’ホスフェートまたは５’ホスフェートミミック、例えば、ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖上の５’末端ホスフェートまたはホスフェートミミックが挙げられる。適したホスフェートミミックは、例えば、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれるＵＳ２０１２／０１５７５１１に開示されている。 Other modifications of RNAi agents of the present disclosure include 5' phosphates or 5' phosphate mimics, e.g., 5' terminal phosphates or phosphate mimics on the antisense strand of the RNAi agent. Suitable phosphate mimics are disclosed, for example, in US2012/0157511, the entire contents of which are incorporated herein by reference.

Ａ．本開示のモチーフを含む修飾されたＲＮＡｉ剤
本開示のある特定の態様では、本開示の二本鎖ＲＮＡｉ剤は、例えば、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１３／０７５０３５において開示されるような化学修飾を有する薬剤を含む。本明細書に、およびＷＯ２０１３／０７５０３５において示されるように、３連続ヌクレオチド上の３つの同一修飾の１つまたは複数のモチーフを、切断部位でまたはその付近でＲＮＡｉ剤のセンス鎖またはアンチセンス鎖中に導入することによって優れた結果を得ることができる。一部の実施形態において、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖は、そうでなければ完全に修飾され得る。これらのモチーフの導入は、存在する場合にはセンスまたはアンチセンス鎖の修飾パターンを妨げる。ＲＮＡｉ剤を、親油性リガンド、例えば、センス鎖上の例えば、Ｃ１６リガンドとコンジュゲートしてもよい。ＲＮＡｉ剤を、例えば、アンチセンス鎖の１つまたは複数の残基で（Ｓ）－グリコール核酸（ＧＮＡ）修飾で修飾してもよい。得られたＲＮＡｉ剤は、優れた遺伝子サイレンシング活性を示す。 A. Modified RNAi Agents Comprising Motifs of the Disclosure In certain aspects of the disclosure, double-stranded RNAi agents of the disclosure are disclosed, for example, in WO2013/075035, the entire contents of which are incorporated herein by reference. Includes drugs that have chemical modifications such as As shown herein and in WO2013/075035, one or more motifs of three identical modifications on three consecutive nucleotides are introduced in the sense or antisense strand of an RNAi agent at or near the cleavage site. excellent results can be obtained by introducing In some embodiments, the sense and antisense strands of the RNAi agent can be otherwise fully modified. The introduction of these motifs, if present, interferes with the pattern of modification of the sense or antisense strand. An RNAi agent may be conjugated to a lipophilic ligand, eg, a C16 ligand, eg, on the sense strand. RNAi agents may be modified, for example, with (S)-glycol nucleic acid (GNA) modifications at one or more residues of the antisense strand. The resulting RNAi agents exhibit excellent gene silencing activity.

したがって、本開示は、インビボで標的遺伝子（すなわち、ＭＡＰＴ遺伝子）の発現を阻害可能な二本鎖ＲＮＡｉ剤を提供する。ＲＮＡｉ剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含む。ＲＮＡｉ剤の各鎖は、１５～３０ヌクレオチド長であり得る。例えば、各鎖は、１６～３０ヌクレオチド長、１７～３０ヌクレオチド長、２５～３０ヌクレオチド長、２７～３０ヌクレオチド長、１７～２３ヌクレオチド長、１７～２１ヌクレオチド長、１７～１９ヌクレオチド長、１９～２５ヌクレオチド長、１９～２３ヌクレオチド長、１９～２１ヌクレオチド長、２１～２５ヌクレオチド長または２１～２３ヌクレオチド長であり得る。ある特定の実施形態において、各鎖は、１９～２３ヌクレオチド長である。 Accordingly, the present disclosure provides double-stranded RNAi agents capable of inhibiting target gene (ie, MAPT gene) expression in vivo. RNAi agents include a sense strand and an antisense strand. Each strand of the RNAi agent can be 15-30 nucleotides in length. For example, each strand is 16-30 nucleotides long, 17-30 nucleotides long, 25-30 nucleotides long, 27-30 nucleotides long, 17-23 nucleotides long, 17-21 nucleotides long, 17-19 nucleotides long, 19-30 nucleotides long, It can be 25 nucleotides long, 19-23 nucleotides long, 19-21 nucleotides long, 21-25 nucleotides long or 21-23 nucleotides long. In certain embodiments, each strand is 19-23 nucleotides in length.

センス鎖およびアンチセンス鎖は通常、「ＲＮＡｉ剤」とも本明細書において呼ばれる二重鎖の二本鎖ＲＮＡ（「ｄｓＲＮＡ」）を形成する。ＲＮＡｉ剤の二重鎖領域は、１５～３０ヌクレオチド対の長さであり得る。例えば、二重鎖領域は、１６～３０ヌクレオチド対の長さ、１７～３０ヌクレオチド対の長さ、２７～３０ヌクレオチド対の長さ、１７～２３ヌクレオチド対の長さ、１７～２１ヌクレオチド対の長さ、１７～１９ヌクレオチド対の長さ、１９～２５ヌクレオチド対の長さ、１９～２３ヌクレオチド対の長さ、１９～２１ヌクレオチド対の長さ、２１～２５ヌクレオチド対の長さまたは２１～２３ヌクレオチド対の長さであり得る。別の例では、二重鎖領域は、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６および２７ヌクレオチド長から選択される。好ましい実施形態において、二重鎖領域は、１９～２１ヌクレオチド対の長さである。 The sense and antisense strands typically form a double-stranded double-stranded RNA (“dsRNA”), also referred to herein as the “RNAi agent”. The duplex region of an RNAi agent can be 15-30 nucleotide pairs in length. For example, the duplex region can be 16-30 nucleotide pairs long, 17-30 nucleotide pairs long, 27-30 nucleotide pairs long, 17-23 nucleotide pairs long, 17-21 nucleotide pairs long. length, 17-19 nucleotide pairs long, 19-25 nucleotide pairs long, 19-23 nucleotide pairs long, 19-21 nucleotide pairs long, 21-25 nucleotide pairs long or 21- It can be 23 nucleotide pairs long. In another example, the double stranded region is selected from 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 and 27 nucleotides in length. In preferred embodiments, the double-stranded region is 19-21 nucleotide pairs in length.

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、一方または両方の鎖の３’端、５’端または両端に１つまたは複数のオーバーハング領域またはキャッピング基を含有し得る。オーバーハングは、１～６ヌクレオチド長、例えば、２～６ヌクレオチド長、１～５ヌクレオチド長、２～５ヌクレオチド長、１～４ヌクレオチド長、２～４ヌクレオチド長、１～３ヌクレオチド長、２～３ヌクレオチド長または１～２ヌクレオチド長であり得る。好ましい実施形態において、ヌクレオチドオーバーハング領域は、２ヌクレオチド長である。オーバーハングは、一方の鎖が他方よりも長い結果または同一の長さの２つの鎖がねじれ形である結果であり得る。オーバーハングは、標的ｍＲＮＡとミスマッチを形成し得る、または標的化される遺伝子配列と相補的であり得る、または別の配列であり得る。また、第１のおよび第２の鎖を、例えば、ヘアピンを形成する追加の塩基によって、または他の非塩基リンカーによってつなぐこともできる。 In one embodiment, an RNAi agent may contain one or more overhanging regions or capping groups at the 3' end, 5' end, or both ends of one or both strands. The overhang is 1-6 nucleotides in length, such as 2-6 nucleotides in length, 1-5 nucleotides in length, 2-5 nucleotides in length, 1-4 nucleotides in length, 2-4 nucleotides in length, 1-3 nucleotides in length, 2- It can be 3 nucleotides long or 1-2 nucleotides long. In preferred embodiments, the nucleotide overhang region is 2 nucleotides in length. Overhangs can be the result of one strand being longer than the other or the result of two strands of the same length being twisted. The overhangs can form mismatches with the target mRNA, can be complementary to the targeted gene sequence, or can be another sequence. The first and second strands can also be joined by additional bases, eg, to form hairpins, or by other non-basic linkers.

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤のオーバーハング領域中のヌクレオチドは各々独立に、２’－糖修飾された、例えば、２－Ｆ、２’－Ｏ－メチル、チミジン（Ｔ）およびそれらの任意の組合せを含むがそれに限定されるわけではない、修飾されたまたは未修飾のヌクレオチドであり得る。 In one embodiment, each nucleotide in the overhang region of the RNAi agent is independently 2'-sugar modified, e.g., 2-F, 2'-O-methyl, thymidine (T) and any combination thereof It may be a modified or unmodified nucleotide, including but not limited to.

例えば、ＴＴは、いずれかの鎖上のいずれかの末端のオーバーハング配列であり得る。オーバーハングは、標的ｍＲＮＡとミスマッチを形成し得る、または標的化される遺伝子配列と相補的であり得る、または別の配列であり得る。 For example, TT can be an overhanging sequence at either end on either strand. The overhangs can form mismatches with the target mRNA, can be complementary to the targeted gene sequence, or can be another sequence.

ＲＮＡｉ剤のセンス鎖、アンチセンス鎖または両鎖の５’－または３’－オーバーハングは、リン酸化され得る。一部の実施形態において、オーバーハング領域（複数可）は、２つのヌクレオチドの間にホスホロチオエートを有する２つのヌクレオチドを含有し、２つのヌクレオチドは、同一である場合も、異なる場合もある。一実施形態において、オーバーハングは、センス鎖、アンチセンス鎖または両鎖の３’端に存在する。一実施形態において、この３’－オーバーハングは、アンチセンス鎖中に存在する。一実施形態において、この３’－オーバーハングは、センス鎖中に存在する。 The 5'- or 3'-overhangs of the sense strand, the antisense strand, or both strands of the RNAi agent can be phosphorylated. In some embodiments, the overhang region(s) contains two nucleotides with a phosphorothioate between the two nucleotides, and the two nucleotides can be the same or different. In one embodiment, overhangs are present on the 3' ends of the sense strand, the antisense strand, or both strands. In one embodiment, this 3'-overhang is present in the antisense strand. In one embodiment, this 3'-overhang is present in the sense strand.

ＲＮＡｉ剤は、その安定性全体に影響を及ぼすことなくＲＮＡｉの干渉活性を強化できる単一のオーバーハングのみを含有し得る。例えば、一本鎖オーバーハングは、センス鎖の３’末端に、あるいは、アンチセンス鎖の３’末端に位置し得る。ＲＮＡｉはまた、アンチセンス鎖の５’端（またはセンス鎖の３’端）に位置する平滑末端を有し得る、または逆も同じである。一般に、ＲＮＡｉのアンチセンス鎖は、３’端にヌクレオチドオーバーハングを有し、５’端は平滑である。理論に捉われようとは思わないが、非対称のアンチセンス鎖の５’端の平滑末端およびアンチセンス鎖の３’端オーバーハングは、ＲＩＳＣプロセスへのガイド鎖積み込みに好都合である。 An RNAi agent may contain only a single overhang that can enhance the interfering activity of RNAi without affecting its overall stability. For example, a single-stranded overhang can be located at the 3' end of the sense strand or at the 3' end of the antisense strand. RNAi can also have a blunt end located at the 5' end of the antisense strand (or the 3' end of the sense strand), or vice versa. Generally, the antisense strand of RNAi has a nucleotide overhang at the 3'end and is blunt at the 5'end. While not wishing to be bound by theory, the blunt end of the 5' end of the asymmetric antisense strand and the 3' overhang of the antisense strand favor guide strand loading into the RISC process.

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、両端が平滑末端化され、１９ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、５’端から位置７、８、９の３連続ヌクレオチド上に３つの２’－Ｆ修飾を有する少なくとも１つのモチーフを含有する。アンチセンス鎖は、５’端から位置１１、１２、１３の３連続ヌクレオチド上に３つの２’－Ｏ－メチル修飾を有する少なくとも１つのモチーフを含有する。 In one embodiment, the RNAi agent is blunt-ended at both ends and is 19 nucleotides long, and the sense strand comprises three 2'-F sequences on three consecutive nucleotides at positions 7, 8, 9 from the 5' end. It contains at least one motif with a modification. The antisense strand contains at least one motif with three 2'-O-methyl modifications on three consecutive nucleotides at positions 11, 12, 13 from the 5' end.

別の実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、両端が平滑末端化され、２０ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、５’端から位置８、９、１０の３連続ヌクレオチド上の３つの２’－Ｆ修飾の少なくとも１つのモチーフを含有する。アンチセンス鎖は、５’端から位置１１、１２、１３の３連続ヌクレオチド上の３つの２’－Ｏ－メチル修飾の少なくとも１つのモチーフを含有する。 In another embodiment, the RNAi agent is blunt-ended at both ends and is 20 nucleotides long, and the sense strand comprises three 2'- It contains at least one motif of the F modification. The antisense strand contains at least one motif of three 2'-O-methyl modifications on three consecutive nucleotides at positions 11, 12, 13 from the 5' end.

さらに別の実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、両端が平滑末端化され、２１ヌクレオチドの長さであり、センス鎖は、５’端から位置９、１０、１１の３連続ヌクレオチド上の３つの２’－Ｆ修飾の少なくとも１つのモチーフを含有する。アンチセンス鎖は、５’端から位置１１、１２、１３の３連続ヌクレオチド上の３つの２’－Ｏ－メチル修飾の少なくとも１つのモチーフを含有する。 In yet another embodiment, the RNAi agent is blunt-ended at both ends and is 21 nucleotides long, and the sense strand comprises three 2′-chains on three consecutive nucleotides at positions 9, 10, 11 from the 5′-end. -Contains at least one motif of the F modification. The antisense strand contains at least one motif of three 2'-O-methyl modifications on three consecutive nucleotides at positions 11, 12, 13 from the 5' end.

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、２１ヌクレオチドのセンス鎖および２３ヌクレオチドのアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、５’端から位置９、１０、１１の３連続ヌクレオチド上の３つの２’－Ｆ修飾の少なくとも１つのモチーフを含有し、アンチセンス鎖は、５’端から位置１１、１２、１３の３連続ヌクレオチド上の３つの２’－Ｏ－メチル修飾の少なくとも１つのモチーフを含有し、ＲＮＡｉ剤の一方の末端は、平滑であり、もう一方の末端は、２ヌクレオチドのオーバーハングを含む。好ましくは、２ヌクレオチドのオーバーハングは、アンチセンス鎖の３’端にある。２ヌクレオチドのオーバーハングが、アンチセンス鎖の３’端にある場合には、末端の３つのヌクレオチドの間に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結がある場合があり、３つのヌクレオチドのうち２つは、オーバーハングヌクレオチドであり、３番目のヌクレオチドは、オーバーハングヌクレオチドの次の対形成されたヌクレオチドである。一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、センス鎖の５’端およびアンチセンス鎖の５’端の両方で末端の３つのヌクレオチドの間に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結をさらに有する。一実施形態において、モチーフの一部であるヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖中のどのヌクレオチドも、修飾されたヌクレオチドである。一実施形態において、各残基は独立に、例えば、交互モチーフ中で２’－Ｏ－メチルまたは３’－フルオロで修飾されている。ＲＮＡｉ剤は、リガンド（例えば、親油性リガンド、適宜、Ｃ１６リガンド）をさらに含んでもよい。 In one embodiment, the RNAi agent comprises a sense strand of 21 nucleotides and an antisense strand of 23 nucleotides, wherein the sense strand comprises three 2'-F strands on three consecutive nucleotides at positions 9, 10, 11 from the 5' end. containing at least one motif of modification, the antisense strand containing at least one motif of three 2'-O-methyl modifications on three consecutive nucleotides at positions 11, 12, 13 from the 5' end, and One end of the agent is blunt and the other end contains an overhang of 2 nucleotides. Preferably, the 2 nucleotide overhang is at the 3' end of the antisense strand. If a two nucleotide overhang is at the 3' end of the antisense strand, there may be two phosphorothioate internucleotide linkages between the terminal three nucleotides, two of the three nucleotides A hang nucleotide, the third nucleotide is the next paired nucleotide of the overhang nucleotide. In one embodiment, the RNAi agent further has two phosphorothioate internucleotide linkages between the terminal three nucleotides at both the 5' end of the sense strand and the 5' end of the antisense strand. In one embodiment, any nucleotide in the sense and antisense strands of the RNAi agent that contains a nucleotide that is part of the motif is a modified nucleotide. In one embodiment, each residue is independently modified, eg, with 2'-O-methyl or 3'-fluoro in alternating motifs. RNAi agents may further comprise ligands (eg, lipophilic ligands, optionally C16 ligands).

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、センスおよびアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、２５～３０ヌクレオチド残基の長さであり、５’末端ヌクレオチド（位置１）から開始して、第１の鎖の位置１～２３は、少なくとも８のリボヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖は、３６～６６ヌクレオチド残基の長さであり、３’末端ヌクレオチドから開始して、センス鎖の位置１～２３と対形成する位置に少なくとも８のリボヌクレオチドを含んで、二本鎖を形成し、アンチセンス鎖の少なくとも３’末端ヌクレオチドは、センス鎖と対形成せず、最大６つの連続３’末端ヌクレオチドは、センス鎖と対形成せず、それによって、１～６ヌクレオチドの３’一本鎖オーバーハングを形成し、アンチセンス鎖の５’末端は、センス鎖と対形成しない１０～３０の連続ヌクレオチドを含み、それによって、１０～３０ヌクレオチドの一本鎖５’オーバーハングを形成し、少なくともセンス鎖５’末端および３’末端ヌクレオチドは、センスおよびアンチセンス鎖が最大相補性のためにアラインされる場合に、アンチセンス鎖のヌクレオチドと対形成される塩基であり、それによって、センスおよびアンチセンス鎖の間に実質的に二本鎖の領域を形成し、アンチセンス鎖は、アンチセンス鎖の長さの少なくとも１９リボヌクレオチドに沿って標的ＲＮＡと十分に相補的であり、二本鎖核酸が哺乳動物細胞中に導入される場合に標的遺伝子発現を低減させ、センス鎖は、３連続ヌクレオチド上の３つの２’－Ｆ修飾の少なくとも１つのモチーフを含有し、モチーフのうち少なくとも１つは、切断部位でまたはその付近で生じる。アンチセンス鎖は、切断部位にまたはその付近に３連続ヌクレオチド上の３つの２’－Ｏ－メチル修飾の少なくとも１つのモチーフを含有する。 In one embodiment, the RNAi agent comprises a sense and an antisense strand, the sense strand being 25-30 nucleotide residues in length, starting from the 5′ terminal nucleotide (position 1) and contains at least 8 ribonucleotides, and the antisense strand is 36-66 nucleotide residues long, starting at the 3' terminal nucleotide and paired with positions 1-23 of the sense strand. comprising at least 8 ribonucleotides at forming positions to form a duplex, at least the 3' terminal nucleotide of the antisense strand not pairing with the sense strand, and up to 6 consecutive 3' terminal nucleotides of the sense strand strand unpaired thereby forming a 3′ single-stranded overhang of 1-6 nucleotides, the 5′ end of the antisense strand comprising 10-30 contiguous nucleotides unpaired with the sense strand; thereby forming a single-stranded 5' overhang of 10-30 nucleotides, wherein at least the 5' and 3' terminal nucleotides of the sense strand are aligned for maximum complementarity when the sense and antisense strands are aligned for maximum complementarity. A base that pairs with a nucleotide of the antisense strand, thereby forming a substantially double-stranded region between the sense and antisense strands, the antisense strand being at least as long as the antisense strand. Sufficiently complementary to the target RNA along 19 ribonucleotides to reduce target gene expression when the double-stranded nucleic acid is introduced into mammalian cells, the sense strand consisting of three 2's on 3 consecutive nucleotides. It contains at least one motif of a '-F modification, at least one of which occurs at or near the cleavage site. The antisense strand contains at least one motif of three 2'-O-methyl modifications on three consecutive nucleotides at or near the cleavage site.

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、センスおよびアンチセンス鎖を含み、ＲＮＡｉ剤は、少なくとも２５かつ多くとも２９ヌクレオチドである長さを有する第１の鎖と、多くとも３０ヌクレオチドである長さを有し、５’端から位置１１、１２、１３の３連続ヌクレオチド上の３つの２’－Ｏ－メチル修飾の少なくとも１つのモチーフを有する第２の鎖とを含み、第１の鎖の３’端と、第２の鎖の５’端は平滑末端を形成し、第２の鎖は、第１の鎖よりもその３’端で１～４ヌクレオチド長く、二重鎖領域は、少なくとも２５ヌクレオチド長であり、第２の鎖は、少なくとも１９ヌクレオチドの第２の鎖の長さに沿って標的ｍＲＮＡと十分に相補的であり、ＲＮＡｉ剤が哺乳動物細胞中に導入される場合に標的遺伝子発現を低減させ、ＲＮＡｉ剤のダイサー切断は、第２の鎖の３’端を含むｓｉＲＮＡを優先的にもたらし、それによって、哺乳動物において標的遺伝子の発現を低減する。適宜、ＲＮＡｉ剤は、リガンドをさらに含んでもよい。 In one embodiment, the RNAi agent comprises a sense and an antisense strand, wherein the RNAi agent has a first strand having a length that is at least 25 and at most 29 nucleotides and a length that is at most 30 nucleotides. and a second strand having at least one motif of three 2'-O-methyl modifications on three consecutive nucleotides at positions 11, 12, 13 from the 5' end, the 3' end of the first strand with the 5′ end of the second strand forming a blunt end, the second strand being 1-4 nucleotides longer at its 3′ end than the first strand, and the duplex region being at least 25 nucleotides long. and the second strand is sufficiently complementary to the target mRNA along a length of the second strand of at least 19 nucleotides to effect target gene expression when the RNAi agent is introduced into mammalian cells. Dicer cleavage of the RNAi agent preferentially results in siRNA containing the 3' end of the second strand, thereby reducing target gene expression in the mammal. Optionally, the RNAi agent may further comprise a ligand.

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、３連続ヌクレオチド上の３つの同一の修飾の少なくとも１つのモチーフを含有し、モチーフのうち１つは、センス鎖中の切断部位に生じる。 In one embodiment, the sense strand of the RNAi agent contains at least one motif of three identical modifications on three consecutive nucleotides, one of the motifs occurring at the cleavage site in the sense strand.

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖もまた、３連続ヌクレオチド上の３つの同一の修飾の少なくとも１つのモチーフを含有することができ、モチーフのうち１つは、アンチセンス鎖中の切断部位にまたはその付近に生じる。 In one embodiment, the antisense strand of the RNAi agent can also contain at least one motif of three identical modifications on three consecutive nucleotides, one of the motifs being the cleavage site in the antisense strand. occur at or near

１７～２３ヌクレオチド長の二重鎖領域を有するＲＮＡｉ剤について、アンチセンス鎖の切断部位は通常、５’端からおよそ位置１０、１１および１２である。したがって、３つの同一の修飾のモチーフは、アンチセンス鎖の位置９、１０、１１、位置１０、１１、１２、位置１１、１２、１３、位置１２、１３、１４または位置１３、１４、１５に生じる場合がある、数はアンチセンス鎖の５’端から最初のヌクレオチドから開始する、または数はアンチセンス鎖の５’端から二重鎖領域内の最初の対形成されたヌクレオチドから開始する。アンチセンス鎖中の切断部位はまた、５’端からのＲＮＡｉの二重鎖領域の長さに応じて変化し得る。 For RNAi agents with duplex regions 17-23 nucleotides in length, the antisense strand cleavage sites are typically at approximately positions 10, 11 and 12 from the 5' end. Thus, the three identical modification motifs are at positions 9, 10, 11, positions 10, 11, 12, positions 11, 12, 13, positions 12, 13, 14 or positions 13, 14, 15 of the antisense strand. As may occur, the numbers start at the first nucleotide from the 5' end of the antisense strand, or the numbers start at the first paired nucleotide within the duplex region from the 5' end of the antisense strand. The cleavage site in the antisense strand can also vary depending on the length of the RNAi duplex region from the 5' end.

ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、鎖の切断部位に３連続ヌクレオチド上の３つの同一の修飾の少なくとも１つのモチーフを含有し得る、アンチセンス鎖は、鎖の切断部位にまたはその付近に３連続ヌクレオチド上の３つの同一の修飾の少なくとも１つのモチーフを有し得る。センス鎖およびアンチセンス鎖がｄｓＲＮＡ二本鎖を形成する場合には、センス鎖およびアンチセンス鎖を、センス鎖上の３つのヌクレオチドの１つのモチーフおよびアンチセンス鎖上の３つのヌクレオチドの１つのモチーフが、少なくとも１つのヌクレオチド重複を有するように、すなわち、センス鎖中のモチーフの３つのヌクレオチドの少なくとも１つが、アンチセンス鎖中のモチーフの３つのヌクレオチドの少なくとも１つと塩基対を形成するように配列できる。あるいは、少なくとも２つのヌクレオチドが重複する場合がある、または３つのヌクレオチド全てが重複する場合がある。 The sense strand of the RNAi agent may contain at least one motif of three identical modifications on three consecutive nucleotides at the strand cleavage site; can have at least one motif of three identical modifications of When the sense and antisense strands form a dsRNA duplex, the sense and antisense strands are combined with one motif of three nucleotides on the sense strand and one motif of three nucleotides on the antisense strand. has at least one nucleotide overlap, i.e., at least one of the three nucleotides of the motif in the sense strand base-pairs with at least one of the three nucleotides of the motif in the antisense strand. can. Alternatively, at least two nucleotides may overlap, or all three nucleotides may overlap.

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、３連続ヌクレオチド上の３つの同一の修飾の２つ以上のモチーフを含有し得る。第１のモチーフは、鎖の切断部位にまたはその付近に生じる場合があり、他のモチーフは、ウイング修飾であり得る。本明細書において「ウイング修飾」という用語は、同一の鎖の切断部位のまたはその付近のモチーフから離れている鎖の別の部分に生じるモチーフを指す。ウイング修飾は、第１のモチーフに隣接しているか、または少なくとも１つもしくはより多くのヌクレオチドだけ離れている。モチーフが互いにすぐ隣接する場合には、モチーフの化学は、互いに別個であり、モチーフが１つまたは複数のヌクレオチドだけ離れている場合には、化学は、同一である場合も異なっている場合もある。２以上のウイング修飾が存在する場合もある。例えば、２つのウイング修飾が存在する場合には、各ウイング修飾は、切断部位にもしくはその付近にある第１のモチーフに対して１つの末端に、またはリードモチーフのいずれかの側に生じ得る。 In one embodiment, the sense strand of the RNAi agent may contain two or more motifs of three identical modifications on three consecutive nucleotides. The first motif may occur at or near the site of the strand break and the other motif may be a wing modification. As used herein, the term "wing modification" refers to motifs that occur in different parts of the strand away from the motif at or near the cleavage site on the same strand. The wing modifications are adjacent to or separated from the first motif by at least one or more nucleotides. The chemistry of the motifs is distinct from each other when the motifs are immediately adjacent to each other, and may be the same or different when the motifs are separated by one or more nucleotides. . There may be more than one wing modification. For example, if there are two wing modifications, each wing modification can occur one terminus to the first motif at or near the cleavage site, or on either side of the lead motif.

センス鎖と同様に、ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、３連続ヌクレオチド上の３つの同一の修飾の２つ以上のモチーフを含有する場合があり、モチーフの少なくとも１つは鎖の切断部位にまたはその付近に生じる。このアンチセンス鎖はまた、センス鎖上に存在し得るウイング修飾と同様の配列で１つまたは複数のウイング修飾を含有し得る。 Similar to the sense strand, the antisense strand of the RNAi agent may contain two or more motifs of three identical modifications on three consecutive nucleotides, at least one of the motifs being at or at the cleavage site of the strand. occur nearby. The antisense strand may also contain one or more wing modifications in sequence similar to the wing modifications that may be present on the sense strand.

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖またはアンチセンス鎖上のウイング修飾は通常、鎖の３’端、５’端または両端に最初の１つまたは２つの末端ヌクレオチドを含まない。 In one embodiment, wing modifications on the sense or antisense strand of an RNAi agent typically do not include the first one or two terminal nucleotides at the 3' end, 5' end, or both ends of the strand.

別の実施形態において、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖またはアンチセンス鎖上のウイング修飾は通常、鎖の３’端、５’端または両端に二重鎖領域内の最初の１つまたは２つの対形成されるヌクレオチドを含まない。 In another embodiment, the wing modifications on the sense or antisense strand of the RNAi agent are usually paired at the 3′ end, 5′ end or both ends of the strand, the first one or two within the duplex region. does not contain nucleotides that

ＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖が各々、少なくとも１つのウイング修飾を含有する場合には、ウイング修飾は、二重鎖領域の同一末端に入る場合があり、１、２または３つのヌクレオチドの重複を有する。 When the sense and antisense strands of the RNAi agent each contain at least one wing modification, the wing modifications may fall on the same end of the duplex region and overlap by 1, 2 or 3 nucleotides. have

ＲＮＡｉ剤のセンス鎖またはアンチセンス鎖が各々、少なくとも２つのウイング修飾を含有する場合には、センス鎖およびアンチセンス鎖を、１つの鎖に由来する２つの修飾が各々、二重鎖領域の１つの末端に入り、１、２または３つのヌクレオチドの重複を有し、１つの鎖に由来する２つの修飾が各々、二重鎖領域のもう一方の末端に入り、１、２または３つのヌクレオチドの重複を有し、２つの修飾１つの鎖がリードモチーフの各側に入り、二重鎖領域中に１、２または３つのヌクレオチドの重複を有するように配列できる。 When the sense or antisense strand of the RNAi agent each contains at least two wing modifications, the sense and antisense strands are combined so that the two modifications from one strand are each in one of the duplex regions. two ends, with an overlap of 1, 2 or 3 nucleotides, each of the two modifications from one strand entering the other end of the double-stranded region and having an overlap of 1, 2 or 3 nucleotides. With overlap, two modified strands can be arranged on each side of the lead motif, with an overlap of 1, 2 or 3 nucleotides in the duplex region.

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、標的との、二本鎖内のミスマッチ（複数可）またはそれらの組合せを含む。ミスマッチは、オーバーハング領域または二重鎖領域中に生じ得る。塩基対は、解離または融解を促進するその傾向に基づいてランク付けできる（例えば、特定の対形成の会合または解離の自由エネルギーで、最も簡単なアプローチは、個々の対に基づいて対を調べることであるが、次の隣接分析または同様の分析も使用できる）。解離の促進の点では：Ａ：ＵはＧ：Ｃを上回って好ましく、Ｇ：ＵはＧ：Ｃを上回って好ましく、Ｉ：ＣはＧ：Ｃを上回って好ましい（Ｉ＝イノシン）。ミスマッチ、例えば、非正準対形成または正準対形成以外のもの（本明細書において別の場所で記載されるような）は、正準（Ａ：Ｔ、Ａ：Ｕ、Ｇ：Ｃ）対形成を上回って好ましく、ユニバーサル塩基を含む対形成は正準対形成を上回って好ましい。 In one embodiment, the RNAi agent contains mismatch(es) or a combination thereof within the duplex with the target. Mismatches can occur in overhang regions or duplex regions. Base pairs can be ranked based on their propensity to promote dissociation or melting (e.g., the free energy of association or dissociation for a particular pairing; the simplest approach is to examine pairs on the basis of individual pairing but the next neighbor analysis or similar analysis can also be used). In terms of promoting dissociation: A:U is preferred over G:C, G:U is preferred over G:C, I:C is preferred over G:C (I=inosine). Mismatches, e.g., non-canonical pairing or anything other than canonical pairing (as described elsewhere herein) may be Preferred over formation, pairing involving universal bases is preferred over canonical pairing.

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、二本鎖の５’端でのアンチセンス鎖の解離を促進するために、Ａ：Ｕ、Ｇ：Ｕ、Ｉ：Ｃおよびミスマッチ対、例えば、非正準対形成または正準対形成以外のものまたはユニバーサル塩基を含む対形成の群から独立に選択される、アンチセンス鎖の５’端から二重鎖領域内の最初の１、２、３、４または５つの塩基対のうち少なくとも１つを含む。 In one embodiment, the RNAi agent comprises A:U, G:U, I:C and mismatched pairs, e.g., non-canonical pairs, to promote dissociation of the antisense strand at the 5' end of the duplex. The first 1, 2, 3, 4 or 5 in the duplex region from the 5' end of the antisense strand, independently selected from the group of pairings that include non-canonical or universal bases. contains at least one of the three base pairs.

一実施形態において、アンチセンス鎖中の５’端から二重鎖領域内の１位置のヌクレオチドは、Ａ、ｄＡ、ｄＵ、ＵおよびｄＴからなる群から選択される。あるいは、アンチセンス鎖の５’端から二重鎖領域内の最初の１、２または３つの塩基対のうち少なくとも１つは、ＡＵ塩基対である。例えば、アンチセンス鎖の５’端から二重鎖領域内の最初の塩基対は、ＡＵ塩基対である。 In one embodiment, the nucleotide at position 1 within the duplex region from the 5' end in the antisense strand is selected from the group consisting of A, dA, dU, U and dT. Alternatively, at least one of the first 1, 2 or 3 base pairs in the duplex region from the 5' end of the antisense strand is an AU base pair. For example, the first base pair in the duplex region from the 5' end of the antisense strand is an AU base pair.

別の実施形態において、センス鎖の３’端のヌクレオチドは、デオキシ－チミン（ｄＴ）である。別の実施形態において、アンチセンス鎖の３’端のヌクレオチドは、デオキシ－チミン（ｄＴ）である。一実施形態において、デオキシ－チミンヌクレオチドの短い配列、例えば、センスまたはアンチセンス鎖の３’端の２つのｄＴヌクレオチドがある。 In another embodiment, the nucleotide at the 3' end of the sense strand is deoxy-thymine (dT). In another embodiment, the nucleotide at the 3' end of the antisense strand is deoxy-thymine (dT). In one embodiment, there is a short sequence of deoxy-thymine nucleotides, eg, two dT nucleotides at the 3' end of the sense or antisense strand.

一実施形態において、センス鎖配列は、式（Ｉ）：
５’ｎｐ－Ｎａ－（Ｘ Ｘ）ｉ－Ｎｂ－Ｙ Ｙ －Ｎｂ－（Ｚ）ｊ－Ｎａ－ｎｑ ３’ （Ｉ）
［式中、
ｉおよびｊは各々独立に、０または１であり、
ｐおよびｑは各々独立に、０～６であり、
各Ｎａは独立に、０～２５の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表し、各配列は、少なくとも２つの異なって修飾されたヌクレオチドを含み、
各Ｎｂは独立に、０～１０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表し、
各ｎｐおよびｎｑは独立に、オーバーハングヌクレオチドを表し、
ＮｂおよびＹは、同一修飾を有さず、ならびに
ＸＸＸ、ＹＹＹおよびＺＺＺは各々独立に、３連続ヌクレオチド上の３つの同一の修飾の１つのモチーフを表す］
によって表すことができる。好ましくは、ＹＹＹは、全て２’－Ｆ修飾されたヌクレオチドである。 In one embodiment, the sense strand sequence has formula (I):
5′n p —N a —(X X) i —N b —Y Y —N b —(Z) j —N a —n q 3′ (I)
[In the formula,
i and j are each independently 0 or 1;
p and q are each independently 0 to 6;
each Na independently represents an oligonucleotide sequence comprising 0-25 modified nucleotides, each sequence comprising at least two differently modified nucleotides;
each Nb independently represents an oligonucleotide sequence comprising 0-10 modified nucleotides;
each n p and n q independently represents an overhanging nucleotide;
Nb and Y do not have identical modifications, and XXX, YYY and ZZZ each independently represent one motif of three identical modifications on three consecutive nucleotides]
can be represented by Preferably, YYY are all 2'-F modified nucleotides.

一実施形態において、ＮａまたはＮｂは、交互パターンの修飾を含む。 In one embodiment, N a or N b comprises alternating patterns of modifications.

一実施形態において、ＹＹＹモチーフは、センス鎖の切断部位にまたはその付近に生じる。例えば、ＲＮＡｉ剤が１７～２３ヌクレオチド長の二重鎖領域を有する場合には、ＹＹＹモチーフは、センス鎖の切断部位にまたはその近傍に生じ得る（例えば、位置６、７、８、７、８、９、８、９、１０、９、１０、１１、１０、１１、１２または１１、１２、１３に生じ得る）、数は５’端から最初のヌクレオチドから開始する、または適宜、数は５’端から二重鎖領域内の最初の対形成されたヌクレオチドで開始してもよい。 In one embodiment, the YYY motif occurs at or near the cleavage site of the sense strand. For example, if the RNAi agent has a duplex region 17-23 nucleotides in length, the YYY motif may occur at or near the cleavage site of the sense strand (eg, positions 6, 7, 8, 7, 8 , 9, 8, 9, 10, 9, 10, 11, 10, 11, 12 or 11, 12, 13), the number starts at the first nucleotide from the 5' end, or optionally the number is 5 The ' end may start at the first paired nucleotide in the duplex region.

一実施形態において、ｉは１であり、ｊは０である、またはｉは０であり、ｊは１である、またはｉおよびｊは両方とも１である。したがって、センス鎖は、以下の式：
５’ ｎｐ－Ｎａ－ＹＹＹ－Ｎｂ－ＺＺＺ－Ｎａ－ｎｑ ３’ （Ｉｂ）、
５’ ｎｐ－Ｎａ－ＸＸＸ－Ｎｂ－ＹＹＹ－Ｎａ－ｎｑ ３’ （Ｉｃ）、または
５’ ｎｐ－Ｎａ－ＸＸＸ－Ｎｂ－ＹＹＹ－Ｎｂ－ＺＺＺ－Ｎａ－ｎｑ ３’ （Ｉｄ）
によって表すことができる。 In one embodiment, i is 1 and j is 0, or i is 0 and j is 1, or i and j are both 1. Therefore, the sense strand has the following formula:
5′ n p -N a -YYY-N b -ZZZ-N a -n q 3′ (Ib),
5′ n p -N a -XXX-N b -YYY-N a -n q 3′ (Ic), or 5′ n p -N a -XXX-N b -YYY-N b -ZZZ-N a - n q 3' (Id)
can be represented by

センス鎖が式（Ｉｂ）によって表される場合は、Ｎｂは、０～１０、０～７、０～５、０～４、０～２または０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。 When the sense strand is represented by formula (Ib), Nb is an oligonucleotide sequence comprising 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, 0-2 or 0 modified nucleotides. show.

各Ｎａは独立に、２～２０、２～１５または２～１０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表すことができる。 Each N a can independently represent an oligonucleotide sequence containing 2-20, 2-15 or 2-10 modified nucleotides.

センス鎖が式（Ｉｃ）として表される場合は、Ｎｂは、０～１０、０～７、０～１０、０～７、０～５、０～４、０～２または０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。各Ｎａは、独立に、２～２０、２～１５または２～１０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す場合もある。 When the sense strand is represented as Formula (Ic), N b is 0-10, 0-7, 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, 0-2 or 0 modified represents an oligonucleotide sequence comprising the nucleotides of Each N a may independently represent an oligonucleotide sequence containing 2-20, 2-15 or 2-10 modified nucleotides.

センス鎖が、式（Ｉｄ）として表される場合には、各Ｎｂは独立に、０～１０、０～７、０～５、０～４、０～２または０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。好ましくは、Ｎｂは、０、１、２、３、４、５または６である。各Ｎａは独立に、２～２０、２～１５または２～１０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す場合もある。 When the sense strand is represented as Formula (Id), each Nb independently comprises 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, 0-2 or 0 modified nucleotides. Represents the oligonucleotide sequence comprising: Preferably Nb is 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6. Each N a may independently represent an oligonucleotide sequence containing 2-20, 2-15 or 2-10 modified nucleotides.

Ｘ、ＹおよびＺの各々は、互いに同一である場合も、異なっている場合もある。 Each of X, Y and Z may be the same or different from each other.

他の実施形態において、ｉは０であり、ｊは０であり、センス鎖は、次式：
５’ ｎｐ－Ｎａ－ＹＹＹ－Ｎａ－ｎｑ ３’ （Ｉａ）
によって表すことができる。 In other embodiments, i is 0, j is 0, and the sense strand has the formula:
5' n p -N a -YYY-N a -n q 3' (Ia)
can be represented by

センス鎖が、式（Ｉａ）によって表される場合には、各Ｎａは独立に、２～２０、２～１５または２～１０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を含み得る。 When the sense strand is represented by formula (Ia), each N a may independently comprise an oligonucleotide sequence comprising 2-20, 2-15 or 2-10 modified nucleotides.

一実施形態において、ＲＮＡｉのアンチセンス鎖配列は、式（ＩＩ）：
５’ ｎｑ’－Ｎａ’－（Ｚ’Ｚ’Ｚ’）ｋ－Ｎｂ’－Ｙ’Ｙ’Ｙ’－Ｎｂ’－（Ｘ’Ｘ’Ｘ’）ｌ－Ｎ’ａ－ｎｐ’ ３’ （ＩＩ）
［式中、
ｋおよびｌは各々独立に、０または１であり、
ｐ’およびｑ’は各々独立に、０～６であり、
各Ｎａ’は独立に、０～２５の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表し、各配列は、少なくとも２つの異なって修飾されたヌクレオチドを含み、
各Ｎｂ’独立に、０～１０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表し、
各ｎｐ’およびｎｑ’は独立に、オーバーハングヌクレオチドを表し、
Ｎｂ’およびＹ’は、同一修飾を有さず、
Ｘ’Ｘ’Ｘ’、Ｙ’Ｙ’Ｙ’およびＺ’Ｚ’Ｚ’は各々独立に、３連続ヌクレオチド上の３つの同一の修飾の１つのモチーフを表す］
によって表すことができる。 In one embodiment, the RNAi antisense strand sequence has the formula (II):
5'nq' - Na '-(Z'Z'Z') k - Nb' -Y'Y'Y'- Nb '-(X'X'X') l - N'a -n p'3 ' (II)
[In the formula,
k and l are each independently 0 or 1;
p' and q' are each independently 0 to 6;
each N a ' independently represents an oligonucleotide sequence comprising 0-25 modified nucleotides, each sequence comprising at least two differently modified nucleotides;
each N b ' independently represents an oligonucleotide sequence comprising 0-10 modified nucleotides;
each n p ' and n q ' independently represents an overhanging nucleotide;
N b ' and Y' do not have the same modification;
X'X'X', Y'Y'Y' and Z'Z'Z' each independently represent one motif of three identical modifications on three consecutive nucleotides]
can be represented by

一実施形態において、Ｎａ’またはＮｂ’は、交互パターンの修飾を含む。 In one embodiment, N a ' or N b ' includes alternating patterns of modifications.

Ｙ’Ｙ’Ｙ’モチーフは、センス鎖の切断部位にまたはその付近に生じる。例えば、ＲＮＡｉ剤が、１７～２３ヌクレオチド長の二重鎖領域を有する場合には、Ｙ’Ｙ’Ｙ’モチーフは、アンチセンス鎖の位置９、１０、１１、位置１０、１１、１２、位置１１、１２、１３、位置１２、１３、１４または一１３、１４、１５で生じる場合があり、数は５’端から最初のヌクレオチドから開始する、または適宜、数は５’端から二重鎖領域内の最初の対形成されたヌクレオチドで開始してもよい。好ましくは、Ｙ’Ｙ’Ｙ’モチーフは、位置１１、１２、１３で生じる。 The Y'Y'Y' motif occurs at or near the cleavage site of the sense strand. For example, if the RNAi agent has a duplex region that is 17-23 nucleotides in length, the Y'Y'Y' motifs are at positions 9, 10, 11, positions 10, 11, 12, positions 11, 12, 13, positions 12, 13, 14 or -13, 14, 15, numbers starting from the first nucleotide from the 5' end, or numbers starting from the 5' end of the duplex, as appropriate It may start at the first paired nucleotide within the region. Preferably, the Y'Y'Y' motif occurs at positions 11, 12, 13.

一実施形態において、Ｙ’Ｙ’Ｙ’モチーフは、全て２’－ＯＭｅ修飾されたヌクレオチドである。 In one embodiment, the Y'Y'Y' motifs are all 2'-OMe modified nucleotides.

一実施形態において、ｋは１であり、ｌは０であるか、またはｋは０であり、ｌは１であるか、またはｋおよびｌは両方とも１である。 In one embodiment, k is 1 and l is 0, or k is 0 and l is 1, or k and l are both 1.

したがって、アンチセンス鎖は、次式：
５’ ｎｑ’－Ｎａ’－Ｚ’Ｚ’Ｚ’－Ｎｂ’－Ｙ’Ｙ’Ｙ’－Ｎａ’－ｎｐ’ ３’ （ＩＩｂ）、
５’ ｎｑ’－Ｎａ’－Ｙ’Ｙ’Ｙ’－Ｎｂ’－Ｘ’Ｘ’Ｘ’－ｎｐ’ ３’ （ＩＩｃ）、または
５’ ｎｑ’－Ｎａ’－ Ｚ’Ｚ’Ｚ’－Ｎｂ’－Ｙ’Ｙ’Ｙ’－Ｎｂ’－ Ｘ’Ｘ’Ｘ’－Ｎａ’－ｎｐ’ ３’ （ＩＩｄ）
によって表すことができる。 Thus, the antisense strand has the formula:
5' n q' -N a '-Z'Z'Z'-N b '-Y'Y'Y'-N a '-n p' 3' (IIb),
5′ n q′ -N a′ -Y′Y′Y′-N b′ -X′X′X′-n p′ 3′ (IIc), or 5′ n q′ -N a′ -Z′ Z′Z′-N b′ -Y′Y′Y′-N b′ -X′X′X′-N a′ -n p′ 3′ (IId)
can be represented by

アンチセンス鎖が式（ＩＩｂ）によって表される場合には、Ｎｂ ’は、０～１０、０～７、０～１０、０～７、０～５、０～４、０～２または０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。各Ｎａ’は独立に、２～２０、２～１５または２～１０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。 When the antisense strand is represented by formula (IIb), N b ' is 0-10, 0-7, 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, 0-2 or 0 modified nucleotide sequence. Each N a ' independently represents an oligonucleotide sequence containing 2-20, 2-15 or 2-10 modified nucleotides.

アンチセンス鎖が式（ＩＩｃ）として表される場合には、Ｎｂ’は、０～１０、０～７、０～１０、０～７、０～５、０～４、０～２または０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。各Ｎａ’は独立に、２～２０、２～１５または２～１０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。 When the antisense strand is represented as Formula (IIc), N b ' is 0-10, 0-7, 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, 0-2 or 0 modified nucleotide sequence. Each N a ' independently represents an oligonucleotide sequence containing 2-20, 2-15 or 2-10 modified nucleotides.

アンチセンス鎖が式（ＩＩｄ）として表される場合には、各Ｎｂ’は独立に、０～１０、０～７、０～１０、０～７、０～５、０～４、０～２または０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。各Ｎａ’は独立に、２～２０、２～１５または２～１０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。好ましくは、Ｎｂは、０、１、２、３、４、５または６である。 When the antisense strand is represented as Formula (IId), each N b ' is independently 0-10, 0-7, 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, 0- Represents an oligonucleotide sequence containing 2 or 0 modified nucleotides. Each N a ' independently represents an oligonucleotide sequence containing 2-20, 2-15 or 2-10 modified nucleotides. Preferably Nb is 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6.

他の実施形態において、ｋは０であり、ｌは０であり、アンチセンス鎖は、次式：
５’ ｎｐ’－Ｎａ’－Ｙ’Ｙ’Ｙ’－ Ｎａ’－ｎｑ’ ３’ （Ｉａ）
によって表すことができる。 In other embodiments, k is 0, l is 0, and the antisense strand has the formula:
5′ n p′ -N a′ -Y′Y′Y′-N a′- n q′ 3′ (Ia)
can be represented by

アンチセンス鎖が、式（ＩＩａ）として表される場合には、各Ｎａ’は独立に、２～２０、２～１５または２～１０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。 When the antisense strand is represented as formula (IIa), each N a ' independently represents an oligonucleotide sequence containing 2-20, 2-15 or 2-10 modified nucleotides.

Ｘ’、Ｙ’およびＺ’の各々は、互いに同一である場合も、異なっている場合もある。 Each of X', Y' and Z' may be the same or different from each other.

センス鎖およびアンチセンス鎖の各ヌクレオチドは、ＬＮＡ、ＨＮＡ、ＣｅＮＡ、２’－メトキシエチル、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－アリル、２’－Ｃ－アリル、２’－ヒドロキシルまたは２’－フルオロで独立に修飾され得る。例えば、センス鎖およびアンチセンス鎖の各ヌクレオチドは、２’－Ｏ－メチルまたは２’－フルオロで独立に修飾される。各Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｘ’、Ｙ’およびＺ’は、特に、２’－Ｏ－メチル修飾または２’－フルオロ修飾を表す場合がある。 Each nucleotide of the sense and antisense strands is LNA, HNA, CeNA, 2'-methoxyethyl, 2'-O-methyl, 2'-O-allyl, 2'-C-allyl, 2'-hydroxyl or 2 '-Fluoro may be independently modified. For example, each nucleotide of the sense and antisense strands is independently modified with 2'-O-methyl or 2'-fluoro. Each X, Y, Z, X', Y' and Z' may represent a 2'-O-methyl or 2'-fluoro modification, among others.

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、二重鎖領域が２１ｎｔである場合に、鎖の位置９、１０および１１で生じるＹＹＹモチーフを含有し得る、数は５’端から最初のヌクレオチドから開始する、または適宜、数は５’端から二重鎖領域内の最初の対形成されたヌクレオチドで開始してもよく、Ｙは、２’－Ｆ修飾を表す。センス鎖は、二重鎖領域の対向端にウイング修飾としてＸＸＸモチーフまたはＺＺＺモチーフをさらに含有する場合があり、ＸＸＸおよびＺＺＺは各々独立に、２’－ＯＭｅ修飾または２’－Ｆ修飾を表す。 In one embodiment, the sense strand of the RNAi agent may contain YYY motifs occurring at positions 9, 10 and 11 of the strand when the duplex region is 21 nt, numbered from the first nucleotide from the 5' end. Starting, or optionally the number may start at the first paired nucleotide in the duplex region from the 5' end, Y represents a 2'-F modification. The sense strand may further contain XXX or ZZZ motifs as wing modifications at opposite ends of the duplex region, where XXX and ZZZ each independently represent a 2'-OMe or 2'-F modification.

一実施形態において、アンチセンス鎖は、鎖の位置１１、１２、１３で生じるＹ’Ｙ’Ｙ’モチーフを含有し得る、数は５’端から最初のヌクレオチドから開始する、または適宜、数は５’端から二重鎖領域内の最初の対形成されたヌクレオチドで開始してもよく、Ｙ’は、２’－Ｏ－メチル修飾を表す。アンチセンス鎖は、二重鎖領域の対向端にウイング修飾としてＸ’Ｘ’Ｘ’モチーフまたはＺ’Ｚ’Ｚ’モチーフをさらに含有する場合があり、Ｘ’Ｘ’Ｘ’およびＺ’Ｚ’Ｚ’は各々独立に、２’－ＯＭｅ修飾または２’－Ｆ修飾を表す。 In one embodiment, the antisense strand may contain a Y'Y'Y' motif that occurs at positions 11, 12, 13 of the strand, the number starting at the first nucleotide from the 5' end, or optionally the number Starting at the 5' end with the first paired nucleotide in the duplex region, Y' represents a 2'-O-methyl modification. The antisense strand may further contain X'X'X' or Z'Z'Z' motifs as wing modifications at opposite ends of the duplex region, where X'X'X' and Z'Z' Each Z' independently represents a 2'-OMe modification or a 2'-F modification.

上記の式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）および（Ｉｄ）のいずれか１つによって表されるセンス鎖は、それぞれ式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）および（ＩＩｄ）のいずれか１つによって表されるアンチセンス鎖と二重鎖を形成する。 The sense strand represented by any one of Formulas (Ia), (Ib), (Ic) and (Id) above is represented by any one of Formulas (IIa), (IIb), (IIc) and (IId), respectively. or forms a duplex with the antisense strand represented by one.

したがって、本開示の方法において使用するためのＲＮＡｉ剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むことができ、各鎖は、１４～３０ヌクレオチドを有し、ＲＮＡｉ二重鎖は、式（ＩＩＩ）：
センス：５’ ｎｐ －Ｎａ－（Ｘ Ｘ Ｘ）ｉ －Ｎｂ－ Ｙ Ｙ Ｙ －Ｎｂ －（Ｚ Ｚ Ｚ）ｊ－Ｎａ－ｎｑ ３’
アンチセンス：３’ ｎｐ ’－Ｎａ ’－（Ｘ’Ｘ’Ｘ’）ｋ－Ｎｂ ’－Ｙ’Ｙ’Ｙ’－Ｎｂ ’－（Ｚ’Ｚ’Ｚ’）ｌ－Ｎａ ’－ｎｑ ’ ５’ （ＩＩＩ）
［式中、
ｉ、ｊ、ｋおよびｌは各々独立に、０または１であり、
ｐ、ｐ’、ｑおよびｑ’は各々独立に、０～６であり、
各ＮａおよびＮａ ’は独立に、０～２５の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表し、各配列は、少なくとも２つの異なって修飾されたヌクレオチドを含み、
各ＮｂおよびＮｂ ’は独立に、０～１０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表し、
各ｎｐ’、ｎｐ、ｎｑ’およびｎｑは、それらの各々は存在する場合も存在しない場合もあるが、オーバーハングヌクレオチドを独立に表し、
ＸＸＸ、ＹＹＹ、ＺＺＺ、Ｘ’Ｘ’Ｘ’、Ｙ’Ｙ’Ｙ’およびＺ’Ｚ’Ｚ’は各々独立に、３連続ヌクレオチド上の３つの同一の修飾の１つのモチーフを表す］
によって表される。 Thus, an RNAi agent for use in the disclosed methods can include a sense strand and an antisense strand, each strand having 14-30 nucleotides, and the RNAi duplex having the formula (III):
Sense: 5' n p -N a -(X X X) i -N b -Y Y Y -N b -(Z Z Z) j -N a -n q 3'
Antisense: 3'np' - Na ' -(X'X'X') k - Nb' - Y'Y'Y'- Nb ' -(Z'Z'Z') l - Na ' -n q ' 5' (III)
[In the formula,
i, j, k and l are each independently 0 or 1;
p, p', q and q' are each independently 0 to 6;
each N a and N a ' independently represents an oligonucleotide sequence comprising 0-25 modified nucleotides, each sequence comprising at least two differently modified nucleotides;
each N b and N b ′ independently represents an oligonucleotide sequence comprising 0-10 modified nucleotides;
each n p ', n p , n q ' and n q , each of which may or may not be present, independently represents an overhanging nucleotide;
XXX, YYY, ZZZ, X'X'X', Y'Y'Y' and Z'Z'Z' each independently represent one motif of three identical modifications on three consecutive nucleotides]
represented by

一実施形態において、ｉは０であり、ｊは０であるか、またはｉは１であり、ｊは０であるか、またはｉは０であり、ｊは１であるか、またはｉおよびｊは両方とも０であるか、またはｉおよびｊは両方とも１である。別の実施形態において、ｋは０であり、ｌは０であるか、またはｋは１であり、ｌは０であり、ｋは０であり、ｌは１であるか、またはｋおよびｌは両方とも０であるか、またはｋおよびｌは両方とも１である。 In one embodiment, i is 0 and j is 0, or i is 1 and j is 0, or i is 0 and j is 1, or i and j are both 0, or i and j are both 1. In another embodiment, k is 0 and l is 0, or k is 1, l is 0, k is 0, l is 1, or k and l are Either both are 0 or k and l are both 1.

ＲＮＡｉ二重鎖を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖の例示的組合せは、以下の式：
５’ ｎｐ － Ｎａ －Ｙ Ｙ Ｙ －Ｎａ－ｎｑ ３’
３’ ｎｐ ’－Ｎａ ’－Ｙ’Ｙ’Ｙ’ －Ｎａ ’ｎｑ ’ ５’ （ＩＩＩａ）
５’ ｎｐ －Ｎａ －Ｙ Ｙ Ｙ －Ｎｂ －Ｚ Ｚ Ｚ －Ｎａ－ｎｑ ３’
３’ ｎｐ ’－Ｎａ ’－Ｙ’Ｙ’Ｙ’－Ｎｂ ’－Ｚ’Ｚ’Ｚ’－Ｎａ ’ｎｑ ’５’
（ＩＩＩｂ）
５’ ｎｐ－Ｎａ－ Ｘ Ｘ Ｘ －Ｎｂ －Ｙ Ｙ Ｙ － Ｎａ－ｎｑ ３’
３’ ｎｐ ’－Ｎａ ’－Ｘ’Ｘ’Ｘ’－Ｎｂ ’－Ｙ’Ｙ’Ｙ’－Ｎａ ’－ｎｑ ’ ５’ （ＩＩＩｃ）
５’ ｎｐ －Ｎａ －Ｘ Ｘ Ｘ －Ｎｂ－Ｙ Ｙ Ｙ －Ｎｂ－ Ｚ Ｚ Ｚ －Ｎａ－ｎｑ ３’
３’ ｎｐ ’－Ｎａ ’－Ｘ’Ｘ’Ｘ’－Ｎｂ ’－Ｙ’Ｙ’Ｙ’－Ｎｂ ’－Ｚ’Ｚ’Ｚ’－Ｎａ－ｎｑ ’ ５’
（ＩＩＩｄ）
を含む。 An exemplary combination of sense and antisense strands to form an RNAi duplex has the formula:
5′ n p - Na -Y Y Y-N a -n q 3′
3′np′ - N a′ - Y′Y′Y′ - N a′nq′5 ′ (IIIa)
5' n p -N a -Y Y Y -N b -Z Z Z -N a -n q 3'
3' n p ' -N a ' -Y'Y'Y'-N b ' -Z'Z'Z'-N a ' n q ' 5'
(IIIb)
5' n p -N a -X X X -N b -Y Y Y -N a -n q 3'
3' n p ' -N a ' -X'X'X'-N b ' -Y'Y'Y'-N a ' -n q ' 5' (IIIc)
5' n p -N a -X X X -N b -Y Y Y -N b -Z Z Z -N a -n q 3'
3' n p ' -N a ' -X'X'X'-N b ' -Y'Y'Y'-N b ' -Z'Z'Z'-N a -n q ' 5'
(IIId)
including.

ＲＮＡｉ剤が式（ＩＩＩａ）によって表される場合には、各Ｎａは独立に、２～２０、２～１５または２～１０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。 When the RNAi agent is represented by formula (IIIa), each N a independently represents an oligonucleotide sequence comprising 2-20, 2-15 or 2-10 modified nucleotides.

ＲＮＡｉ剤が式（ＩＩＩｂ）によって表される場合には、各Ｎｂは独立に、１～１０、１～７、１～５または１～４の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。各Ｎａは独立に、２～２０、２～１５、または２～１０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。 When the RNAi agent is represented by Formula (IIIb), each Nb independently represents an oligonucleotide sequence comprising 1-10, 1-7, 1-5 or 1-4 modified nucleotides. Each N a independently represents an oligonucleotide sequence containing 2-20, 2-15, or 2-10 modified nucleotides.

ＲＮＡｉ剤が式（ＩＩＩｃ）として表される場合には、各Ｎｂ、Ｎｂ’は独立に、０～１０、０～７、０～１０、０～７、０～５、０～４、０～２または０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。各Ｎａは独立に、２～２０、２～１５または２～１０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。 When the RNAi agent is represented as Formula (IIIc), each N b , N b ' is independently 0-10, 0-7, 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, Represents an oligonucleotide sequence containing 0-2 or 0 modified nucleotides. Each N a independently represents an oligonucleotide sequence containing 2-20, 2-15 or 2-10 modified nucleotides.

ＲＮＡｉ剤が式（ＩＩＩｄ）として表される場合には、各Ｎｂ、Ｎｂ’は独立に、０～１０、０～７、０～１０、０～７、０～５、０～４、０～２または０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。各Ｎａ、Ｎａ ’は独立に、２～２０、２～１５または２～１０の修飾されたヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。Ｎａ、Ｎａ’、ＮｂおよびＮｂ ’の各々は独立に、交互パターンの修飾を含む。 When the RNAi agent is represented by Formula (IIId), each N b , N b ' is independently 0-10, 0-7, 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, Represents an oligonucleotide sequence containing 0-2 or 0 modified nucleotides. Each N a , N a ' independently represents an oligonucleotide sequence containing 2-20, 2-15 or 2-10 modified nucleotides. Each of N a , N a ', N b and N b ' independently includes alternating patterns of modifications.

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤が式（ＩＩＩｄ）によって表される場合には、Ｎａ修飾は、２’－Ｏ－メチルまたは２’－フルオロ修飾である。別の実施形態において、ＲＮＡｉ剤が式（ＩＩＩｄ）によって表される場合には、Ｎａ修飾は、２’－Ｏ－メチルまたは２’－フルオロ修飾であり、ｎｐ’＞０であり、少なくとも１つのｎｐ’は、ホスホロチオエート連結を介して隣接するヌクレオチドに連結される。さらに別の実施形態において、ＲＮＡｉ剤が式（ＩＩＩｄ）によって表される場合には、Ｎａ修飾は、２’－Ｏ－メチルまたは２’－フルオロ修飾であり、ｎｐ’＞０であり、少なくとも１つのｎｐ’は、ホスホロチオエート連結を介して隣接するヌクレオチドに連結され、センス鎖は、二価または三価の分岐リンカー（以下に記載される）によって付着された１つまたは複数のＣ１６（または関連）部分にコンジュゲートされる。別の実施形態において、ＲＮＡｉ剤が式（ＩＩＩｄ）によって表される場合には、Ｎａ修飾は、２’－Ｏ－メチルまたは２’－フルオロ修飾であり、ｎｐ’＞０であり、少なくとも１つのｎｐ’は、ホスホロチオエート連結を介して隣接するヌクレオチドに連結され、センス鎖は、少なくとも１つのホスホロチオエート連結を含み、センス鎖は、二価または三価の分岐リンカーによって付着されてもよい、１つまたは複数の親油性の、例えば、Ｃ１６（または関連）部分にコンジュゲートされる。 In one embodiment, when the RNAi agent is represented by Formula (IIId), the Na modification is a 2'-O-methyl or 2'-fluoro modification. In another embodiment, when the RNAi agent is represented by Formula (IIId), the N a modification is a 2′-O-methyl or 2′-fluoro modification, n p ′>0, and at least One np ' is linked to the adjacent nucleotide via a phosphorothioate linkage. In yet another embodiment, when the RNAi agent is represented by Formula (IIId), the N a modification is a 2′-O-methyl or 2′-fluoro modification, n p ′>0; At least one n p ' is linked to adjacent nucleotides via phosphorothioate linkages, and the sense strand has one or more C16 ( or related) moieties. In another embodiment, when the RNAi agent is represented by Formula (IIId), the N a modification is a 2′-O-methyl or 2′-fluoro modification, n p ′>0, and at least One n p ' is linked to adjacent nucleotides via phosphorothioate linkages, the sense strand comprises at least one phosphorothioate linkage, and the sense strand may be attached by a bivalent or trivalent branched linker. Conjugated to one or more lipophilic, eg, C16 (or related) moieties.

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤が式（ＩＩＩａ）によって表される場合には、Ｎａ修飾は、２’－Ｏ－メチルまたは２’－フルオロ修飾であり、ｎｐ’＞０であり、少なくとも１つのｎｐ’は、ホスホロチオエート連結を介して隣接するヌクレオチドに連結され、センス鎖は、少なくとも１つのホスホロチオエート連結を含み、センス鎖は、二価または三価の分岐リンカーによって付着された１つまたは複数の親油性の、例えば、Ｃ１６（または関連）部分にコンジュゲートされる。 In one embodiment, when the RNAi agent is represented by Formula (IIIa), the N a modification is a 2′-O-methyl or 2′-fluoro modification, n p ′>0, and at least 1 The two np ' are linked to adjacent nucleotides via phosphorothioate linkages, the sense strand comprising at least one phosphorothioate linkage, the sense strand having one or more attached by bivalent or trivalent branched linkers. is conjugated to a lipophilic, eg, C16 (or related) moiety.

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｃ）および（ＩＩＩｄ）によって表される少なくとも２つの二重鎖を含有する多量体であり、二重鎖は、リンカーによって接続される。リンカーは、切断可能である場合も、切断可能でない場合もある。多量体は、リガンドをさらに含んでもよい。二重鎖の各々は、同一の遺伝子を標的化する場合も、２つの異なる遺伝子を標的化する場合もあり、または二重鎖の各々は、２つの異なる標的部位の同一遺伝子を標的化する場合もある。 In one embodiment, the RNAi agent is a multimer containing at least two duplexes represented by Formulas (III), (IIIa), (IIIb), (IIIc) and (IIId), wherein the duplex are connected by a linker. A linker may or may not be cleavable. A multimer may further comprise a ligand. Each of the duplexes may target the same gene, two different genes, or each of the duplexes may target the same gene at two different target sites. There is also

一実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｃ）および（ＩＩＩｄ）によって表される、３、４、５、６またはそれより多い二重鎖を含有する多量体であり、二重鎖は、リンカーによって接続される。リンカーは、切断可能である場合も、切断可能でない場合もある。多量体は、リガンドをさらに含んでもよい。二重鎖の各々は、同一の遺伝子を標的化する場合も、２つの異なる遺伝子を標的化する場合もあり、または二重鎖の各々は、２つの異なる標的部位の同一遺伝子を標的化する場合もある。 In one embodiment, the RNAi agent contains 3, 4, 5, 6 or more duplexes represented by formulas (III), (IIIa), (IIIb), (IIIc) and (IIId) The duplexes are connected by linkers. A linker may or may not be cleavable. A multimer may further comprise a ligand. Each of the duplexes may target the same gene, two different genes, or each of the duplexes may target the same gene at two different target sites. There is also

一実施形態において、式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｃ）および（ＩＩＩｄ）によって表される２つのＲＮＡｉ剤は、５’端で互いに連結され、３’端の一方または両方は、リガンドにコンジュゲートされてもよい。薬剤の各々は、同一の遺伝子を標的化する場合も、２つの異なる遺伝子を標的化する場合もあり、または薬剤の各々は、２つの異なる標的部位の同一遺伝子を標的化する場合もある。 In one embodiment, two RNAi agents represented by Formulas (III), (IIIa), (IIIb), (IIIc) and (IIId) are linked to each other at their 5' ends and one or both at their 3' ends. may be conjugated to a ligand. Each of the agents may target the same gene, two different genes, or each of the agents may target the same gene at two different target sites.

種々の刊行物には、本開示の方法において使用され得る多量体ＲＮＡｉ剤が記載されている。このような刊行物には、ＷＯ２００７／０９１２６９、ＷＯ２０１０／１４１５１１、ＷＯ２００７／１１７６８６、ＷＯ２００９／０１４８８７およびＷＯ２０１１／０３１５２０ならびにＵＳ７８５８７６９が含まれ、それらの各々の内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。 Various publications describe multimeric RNAi agents that can be used in the methods of the present disclosure. Such publications include WO2007/091269, WO2010/141511, WO2007/117686, WO2009/014887 and WO2011/031520 and US7858769, the entire contents of each of which are incorporated herein by reference.

ある特定の実施形態において、本開示の組成物および方法は、本明細書に記載されるようなＲＮＡｉ剤のビニルホスホネート（ＶＰ）修飾を含む。例示的実施形態において、本開示のビニルホスホネートは、以下の構造： In certain embodiments, the compositions and methods of this disclosure comprise vinylphosphonate (VP) modifications of RNAi agents as described herein. In an exemplary embodiment, the vinyl phosphonate of the present disclosure has the structure:

Figure 2023521604000004
を有する。
Figure 2023521604000004
 have

本開示のビニルホスホネートは、本開示のｄｓＲＮＡのアンチセンスまたはセンス鎖のいずれかに付着させることができる。ある特定の実施形態において、本開示のビニルホスホネートを、適宜、ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖の５’端でｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖に付着させる。ｄｓＲＮＡ剤は、センス鎖またはアンチセンス鎖の５’端にリン含有基を含むことができる。５’端リン含有基は、５’端リン酸（５’－Ｐ）、５’端ホスホロチオエート（５’－ＰＳ）、５’端ホスホロジチオエート（５’－ＰＳ２）、５’端ビニルホスホネート（５’－ＶＰ）、５’端メチルホスホネート（ＭｅＰｈｏｓ）、または５’－デオキシ－５’－Ｃ－マロニルであり得る。５’端リン含有基が５’端ビニルホスホネート（５’－ＶＰ）であるとき、５’－ＶＰは、５’－Ｅ－ＶＰ異性体（すなわち、ｔｒａｎｓ－ビニルホスフェート、その異性体（すなわち、ｃｉｓ－ビニルホスフェート）、またはそれらの混合物であり得る。 Vinyl phosphonates of the disclosure can be attached to either the antisense or sense strands of the dsRNA of the disclosure. In certain embodiments, a vinyl phosphonate of the disclosure is attached to the antisense strand of the dsRNA, optionally at the 5' end of the antisense strand of the dsRNA. A dsRNA agent can include a phosphorus-containing group at the 5' end of the sense or antisense strand. 5' terminal phosphorus-containing groups are 5' terminal phosphate (5'-P), 5' terminal phosphorothioate (5'-PS), 5' terminal phosphorodithioate (5'-PS2), 5' terminal vinyl phosphonate (5'-VP), 5' terminal methylphosphonate (MePhos), or 5'-deoxy-5'-C-malonyl. When the 5'-terminal phosphorus-containing group is a 5'-terminal vinyl phosphonate (5'-VP), the 5'-VP can be a 5'-E-VP isomer (i.e., trans-vinyl phosphate, an isomer thereof (i.e., cis-vinyl phosphate), or mixtures thereof.

例えば、リン酸ミミックが５’－ビニルホスホネート（ＶＰ）であるとき、５’末端ヌクレオチドは、以下の構造 For example, when the phosphate mimic is 5'-vinylphosphonate (VP), the 5' terminal nucleotide has the structure

Figure 2023521604000005
を有し得る（式中、＊は、隣接するヌクレオチドの５’位への結合位置を示し；
Ｒは、水素、ヒドロキシ、メトキシ、またはフルオロ（例えば、ヒドロキシ）であり；
Ｂは、核酸塩基または修飾核酸塩基であり、ここでは、Ｂは、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、またはウラシルであってもよい）。
Figure 2023521604000005
 (where * indicates the position of attachment to the 5′ position of the adjacent nucleotide;
R is hydrogen, hydroxy, methoxy, or fluoro (e.g., hydroxy);
B is a nucleobase or modified nucleobase, where B may be adenine, guanine, cytosine, thymine, or uracil).

本開示の組成物および方法のためにビニルホスフェート修飾も企図される。例示的ビニルホスフェート構造として： Vinyl phosphate modifications are also contemplated for the compositions and methods of this disclosure. As an exemplary vinyl phosphate structure:

Figure 2023521604000006
がある。
Figure 2023521604000006
 There is

ｉ．熱的不安定化修飾
ある特定の実施形態において、アンチセンス鎖のシード領域（すなわち、アンチセンス鎖の５’端の位置２～９）中に熱的不安定化修飾を組み込んで、オフターゲット遺伝子サイレンシングを低減または阻害することによって、ｄｓＲＮＡ分子をＲＮＡ干渉のために最適化できる。アンチセンス鎖の５’端から数えて最初の９ヌクレオチド位置内に二重鎖の少なくとも１つの熱的不安定化修飾を含むアンチセンス鎖を有するｄｓＲＮＡが、オフターゲット遺伝子サイレンシング活性を低減したことが発見されている。したがって、一部の実施形態において、アンチセンス鎖は、アンチセンス鎖の５’領域の最初の９ヌクレオチド位置内に少なくとも１つの（例えば、１、２、３、４、５またはそれより多い）二重鎖の熱的不安定化修飾を含む。一部の実施形態において、１つまたは複数の二重鎖の熱的不安定化修飾は、アンチセンス鎖の５’端から位置２～９、または好ましくは、位置４～８中に位置する。一部のさらなる実施形態において、二重鎖の熱的不安定化修飾（複数可）は、アンチセンス鎖の５’端から位置６、７または８に位置する。さらに一部のさらなる実施形態において、二重鎖の熱的不安定化修飾は、アンチセンス鎖の５’端から位置７に位置する。「熱的不安定化修飾（複数可）」という用語は、より低い全体の融解温度（Ｔｍ）を有するｄｓＲＮＡをもたらすであろう修飾（複数可）を含む（好ましくは、このような修飾（複数可）を有さないｄｓＲＮＡのＴｍよりも１、２、３または４度低い。一部の実施形態において、二重鎖の熱的不安定化修飾は、アンチセンス鎖の５’端から位置２、３、４、５または９に位置する。 i. Thermal Destabilizing Modifications In certain embodiments, thermal destabilizing modifications are incorporated in the seed region of the antisense strand (i.e., positions 2-9 at the 5' end of the antisense strand) to target the off-target gene. By reducing or inhibiting silencing, dsRNA molecules can be optimized for RNA interference. that dsRNAs with antisense strands containing at least one thermally destabilizing modification of the duplex within the first 9 nucleotide positions counting from the 5' end of the antisense strand had reduced off-target gene silencing activity has been discovered. Thus, in some embodiments, the antisense strand has at least one (eg, 1, 2, 3, 4, 5 or more) two nucleotide positions within the first 9 nucleotide positions of the 5' region of the antisense strand. Includes thermally destabilizing modifications of the heavy chain. In some embodiments, one or more duplex thermally destabilizing modifications are located in positions 2-9, or preferably in positions 4-8, from the 5' end of the antisense strand. In some further embodiments, the duplex thermally destabilizing modification(s) is located at position 6, 7 or 8 from the 5' end of the antisense strand. In still some further embodiments, the thermal destabilizing modification of the duplex is located at position 7 from the 5' end of the antisense strand. The term "thermally destabilizing modification(s)" includes modification(s) that would result in a dsRNA having a lower overall melting temperature (Tm) (preferably such modification(s) 1, 2, 3, or 4 degrees lower than the Tm of the dsRNA without the dsRNA, In some embodiments, the thermally destabilizing modification of the duplex is at position 2 from the 5' end of the antisense strand. , 3, 4, 5 or 9.

熱的不安定化修飾として、それだけには限らないが、脱塩基修飾、対向する鎖における対向するヌクレオチドとのミスマッチ、および糖修飾、例えば、２’－デオキシ修飾または非環式ヌクレオチド、例えば、非ロックド核酸（ＵＮＡ）またはグリコール核酸（ＧＮＡ）を挙げることができる。 Thermally destabilizing modifications include, but are not limited to, abasic modifications, mismatches with opposing nucleotides in opposite strands, and sugar modifications such as 2'-deoxy modifications or acyclic nucleotides such as non-locked nucleotides. Mention may be made of nucleic acids (UNA) or glycol nucleic acids (GNA).

例示される脱塩基修飾として、それだけには限らないが、以下： Exemplary abasic modifications include, but are not limited to:

Figure 2023521604000007
［式中、Ｒ＝Ｈ、Ｍｅ、ＥｔまたはＯＭｅ；Ｒ’＝Ｈ、Ｍｅ、ＥｔまたはＯＭｅ；Ｒ”＝Ｈ、Ｍｅ、ＥｔまたはＯＭｅ］
Figure 2023521604000007
 [wherein R=H, Me, Et or OMe; R′=H, Me, Et or OMe; R″=H, Me, Et or OMe]

Figure 2023521604000008
［式中、Ｂは、修飾されたまたは未修飾の核酸塩基である］
が挙げられる。
Figure 2023521604000008
 [wherein B is a modified or unmodified nucleobase]
are mentioned.

例示される糖修飾として、それだけには限らないが、以下： Exemplary sugar modifications include, but are not limited to:

Figure 2023521604000009
［式中、Ｂは、修飾されたまたは未修飾の核酸塩基である］
が挙げられる。
Figure 2023521604000009
 [wherein B is a modified or unmodified nucleobase]
are mentioned.

一部の実施形態において、二重鎖の熱的不安定化修飾は、以下： In some embodiments, the thermally destabilizing modifications of the duplex are:

Figure 2023521604000010
［式中、Ｂは、修飾されたまたは未修飾の核酸塩基であり、各構造上のアスタリスクは、Ｒ、Ｓまたはラセミのいずれかを表す］
からなる群から選択される。
Figure 2023521604000010
 [wherein B is a modified or unmodified nucleobase and each structural asterisk represents either R, S or racemic]
selected from the group consisting of

「非環式ヌクレオチド」という用語は、例えば、リボース炭素間の結合のいずれか（例えば、Ｃ１’－Ｃ２’、Ｃ２’－Ｃ３’、Ｃ３’－Ｃ４’、Ｃ４’－Ｏ４’またはＣ１’－Ｏ４’）が存在しないか、またはリボース炭素もしくは酸素のうち少なくとも１つ（例えば、Ｃ１’、Ｃ２’、Ｃ３’、Ｃ４’またはＯ４’）が独立に、もしくは組み合わせてヌクレオチドに存在しない、非環式リボース糖を有する任意のヌクレオチドを指す。一部の実施形態において、非環式ヌクレオチドは、 The term "acyclic nucleotide" refers to, for example, any of the bonds between the ribose carbons (e.g. C1'-C2', C2'-C3', C3'-C4', C4'-O4' or C1'- O4′) is absent, or at least one of the ribose carbons or oxygens (e.g., C1′, C2′, C3′, C4′ or O4′) is absent, either independently or in combination, in the nucleotide. It refers to any nucleotide having the formula ribose sugar. In some embodiments, the acyclic nucleotide is

Figure 2023521604000011
［式中、Ｂは、修飾されたまたは未修飾の核酸塩基であり、Ｒ１およびＲ２は独立に、Ｈ、ハロゲン、ＯＲ３またはアルキルであり；ならびにＲ３は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリールまたは糖である］。非環式誘導体は、ワトソン－クリック対形成に影響を及ぼすことなく、より大きな骨格柔軟性を提供する。非環式ヌクレオチドは、２’－５’または３’－５’連結を介して連結され得る。
Figure 2023521604000011
 [wherein B is a modified or unmodified nucleobase, R 1 and R 2 are independently H, halogen, OR 3 or alkyl; and R 3 is H, alkyl, cycloalkyl , aryl, aralkyl, heteroaryl or sugar]. Acyclic derivatives offer greater backbone flexibility without affecting Watson-Crick pairing. Acyclic nucleotides can be linked via 2'-5' or 3'-5' linkages.

「ＧＮＡ」という用語は、ＤＮＡまたはＲＮＡと類似のポリマーであるが、ホスホジエステル結合によって連結された反復するグリセロール単位から構成される点でその「骨格」の組成が異なっているグリコール核酸を指す： The term "GNA" refers to glycol nucleic acid, a polymer similar to DNA or RNA, but differing in the composition of its "backbone" in that it consists of repeating glycerol units linked by phosphodiester bonds:

Figure 2023521604000012
Figure 2023521604000012

二重鎖の熱的不安定化修飾は、熱的不安定化ヌクレオチドと、ｄｓＲＮＡ二本鎖内の対向鎖中の対向するヌクレオチドの間のミスマッチ（すなわち、非相補的塩基対）であり得る。例示的ミスマッチ塩基対として、Ｇ：Ｇ、Ｇ：Ａ、Ｇ：Ｕ、Ｇ：Ｔ、Ａ：Ａ、Ａ：Ｃ、Ｃ：Ｃ、Ｃ：Ｕ、Ｃ：Ｔ、Ｕ：Ｕ、Ｔ：Ｔ、Ｕ：Ｔまたはそれらの組合せが挙げられる。当技術分野で公知の他のミスマッチ塩基対形成も本発明に適している。ミスマッチは、天然に存在するヌクレオチドまたは修飾されたヌクレオチドのいずれかであるヌクレオチドの間に生じ得る、すなわち、ミスマッチ塩基対形成は、ヌクレオチドのリボース糖上の修飾とは独立してそれぞれのヌクレオチドに由来する核酸塩基間で生じ得る。ある特定の実施形態において、ｄｓＲＮＡ分子は、２’－デオキシ核酸塩基である、ミスマッチ対形成中の少なくとも１つの核酸塩基を含有する、例えば、２’－デオキシ核酸塩基は、センス鎖中にある。 A thermally destabilizing modification of a duplex can be a mismatch (ie, a non-complementary base pair) between a thermally destabilizing nucleotide and the opposing nucleotide in the opposing strand within the dsRNA duplex. Exemplary mismatched base pairs are G:G, G:A, G:U, G:T, A:A, A:C, C:C, C:U, C:T, U:U, T:T , U:T or combinations thereof. Other mismatch base pairings known in the art are also suitable for the present invention. Mismatches can occur between nucleotides that are either naturally occurring nucleotides or modified nucleotides, i.e., mismatched base pairing originates from each nucleotide independently of the modification on the nucleotide's ribose sugar. can occur between two nucleobases. In certain embodiments, the dsRNA molecule contains at least one nucleobase in mismatch pairing that is a 2'-deoxy nucleobase, eg, the 2'-deoxy nucleobase is in the sense strand.

一部の実施形態において、アンチセンス鎖のシード領域中の二重鎖の熱的不安定化修飾は、標的ｍＲＮＡ上の相補的塩基とのＷ－Ｃ Ｈ結合が損なわれたヌクレオチド、例えば： In some embodiments, the duplex thermally destabilizing modification in the seed region of the antisense strand comprises nucleotides with impaired W—C H bonding with complementary bases on the target mRNA, such as:

Figure 2023521604000013
を含む。
Figure 2023521604000013
 including.

脱塩基ヌクレオチド、非環式ヌクレオチド修飾（ＵＮＡおよびＧＮＡを含む）およびミスマッチ修飾のより多くの例は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＷＯ２０１１／１３３８７６に詳細に記載されている。 More examples of abasic nucleotides, acyclic nucleotide modifications (including UNA and GNA) and mismatch modifications are described in detail in WO2011/133876, which is incorporated herein by reference in its entirety.

熱的不安定化修飾はまた、対向する塩基と水素結合を形成する能力が低減または消失したユニバーサル塩基およびリン酸修飾を含み得る。 Thermally destabilizing modifications can also include universal base and phosphate modifications that have reduced or eliminated ability to form hydrogen bonds with opposing bases.

一部の実施形態において、二重鎖の熱的不安定化修飾には、非正準塩基を有するヌクレオチド、例えば、それだけには限らないが、対向鎖中の塩基と水素結合を形成する能力が損なわれた、または完全に消失した核酸塩基修飾が含まれる。これらの核酸塩基修飾は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＷＯ２０１０／００１１８９５に記載されるように、ｄｓＲＮＡ二重鎖の中心領域の不安定化について評価されている。例示的核酸塩基修飾として、以下： In some embodiments, the thermally destabilizing modification of the duplex includes nucleotides with non-canonical bases, such as, but not limited to, impairing the ability to form hydrogen bonds with bases in the opposite strand. nucleobase modifications that have been added or completely eliminated. These nucleobase modifications have been evaluated for destabilization of the central region of dsRNA duplexes, as described in WO2010/0011895, which is hereby incorporated by reference in its entirety. Exemplary nucleobase modifications include:

Figure 2023521604000014
がある。
Figure 2023521604000014
 There is

一部の実施形態において、アンチセンス鎖のシード領域における二重鎖の熱的不安定化修飾には、標的ｍＲＮＡ上の塩基と相補的である１つまたは複数のα－ヌクレオチド、例えば、以下： In some embodiments, the thermally destabilizing duplex modification in the seed region of the antisense strand includes one or more α-nucleotides that are complementary to bases on the target mRNA, such as:

Figure 2023521604000015
［式中、Ｒは、Ｈ、ＯＨ、ＯＣＨ３、Ｆ、ＮＨ２、ＮＨＭｅ、ＮＭｅ２またはＯ－アルキルである］
が含まれる。
Figure 2023521604000015
 [wherein R is H, OH, OCH 3 , F, NH 2 , NHMe, NMe 2 or O-alkyl]
is included.

天然のホスホジエステル結合と比較して、ｄｓＲＮＡ二重鎖の熱的安定性を低下させると知られている例示的リン酸修飾として： Exemplary phosphate modifications known to reduce the thermal stability of dsRNA duplexes compared to native phosphodiester linkages include:

Figure 2023521604000016
Ｒ＝アルキル
がある。
Figure 2023521604000016
 There is R=alkyl.

Ｒ基のアルキルは、Ｃ１～Ｃ６アルキルであり得る。Ｒ基の具体的なアルキルとして、それだけには限らないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ペンチルおよびヘキシルが挙げられる。 Alkyl in the R group can be C 1 -C 6 alkyl. Specific alkyl for R groups include, but are not limited to, methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, pentyl and hexyl.

当業者は認識するであろうが、核酸塩基の機能的役割が本開示のＲＮＡｉ剤の特異性を定義していることを考慮して、核酸塩基修飾は、例えば、オフターゲット効果に対してオンターゲット効果を増強する目的のために、例えば、本開示のＲＮＡｉ剤中に不安定化修飾を導入するために、本明細書に記載されるような種々の方法で実施できるが、利用可能な、一般に、本開示のＲＮＡｉ剤上に存在する修飾の範囲は、非核酸塩基修飾、例えば、ポリリボヌクレオチドの糖基またはリン酸骨格への修飾についてより大きいものとなる傾向がある。このような修飾は、本開示の他の節においてより詳細に記載されており、上記または本明細書において他の場所で記載されるような、天然の核酸塩基または修飾された核酸塩基のいずれかを有する本開示のＲＮＡｉ剤のために明確に企図される。 As one of skill in the art will appreciate, given that the functional role of nucleobases defines the specificity of the RNAi agents of the present disclosure, nucleobase modifications may be used, e.g., on to off-target effects. For the purpose of enhancing the targeting effect, e.g., to introduce destabilizing modifications into the RNAi agents of the present disclosure, which can be performed in a variety of ways as described herein, available In general, the range of modifications present on the RNAi agents of the present disclosure tends to be greater for non-nucleobase modifications, such as modifications to the sugar groups or phosphate backbone of polyribonucleotides. Such modifications are described in more detail in other sections of this disclosure, either naturally occurring nucleobases or modified nucleobases, as described above or elsewhere herein. is expressly contemplated for RNAi agents of the present disclosure having

熱的不安定化修飾を含むアンチセンス鎖に加えて、ｄｓＲＮＡはまた、１または複数の安定化修飾を含み得る。例えば、ｄｓＲＮＡは、少なくとも２つの（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより多い）安定化修飾を含み得る。制限するものではないが、安定化修飾は全て、一方の鎖中に存在する場合がある。一部の実施形態において、センスおよびアンチセンス鎖両方が、少なくとも２つの安定化修飾を含む。安定化修飾は、センス鎖またはアンチセンス鎖の任意のヌクレオチドで生じ得る。例えば、安定化修飾は、センス鎖もしくはアンチセンス鎖上のどのヌクレオチドでも生じる場合があり、各安定化修飾は、センス鎖もしくはアンチセンス鎖上で交互パターンで生じる場合があり、またはセンス鎖もしくはアンチセンス鎖は、両方とも交互パターンで安定化修飾を含む。センス鎖上の安定化修飾の交互パターンは、アンチセンス鎖と同一である場合も異なっている場合もあり、センス鎖上の安定化修飾の交互パターンは、アンチセンス鎖上の安定化修飾の交互パターンと比較してシフトを有する場合がある。 In addition to the antisense strand containing thermally destabilizing modifications, the dsRNA may also contain one or more stabilizing modifications. For example, a dsRNA can include at least two (eg, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 or more) stabilizing modifications. Without limitation, all stabilizing modifications may be present in one strand. In some embodiments, both the sense and antisense strands contain at least two stabilizing modifications. Stabilizing modifications can occur at any nucleotide of the sense or antisense strand. For example, a stabilizing modification can occur at any nucleotide on the sense or antisense strand; each stabilizing modification can occur in an alternating pattern on the sense or antisense strand; Both sense strands contain stabilizing modifications in an alternating pattern. The alternating pattern of stabilizing modifications on the sense strand can be the same as or different from the antisense strand, and the alternating pattern of stabilizing modifications on the sense strand is equal to the alternating pattern of stabilizing modifications on the antisense strand. It may have a shift compared to the pattern.

一部の実施形態において、アンチセンス鎖は、少なくとも２つ（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより多い）の安定化修飾を含む。制限するものではないが、アンチセンス鎖中の安定化修飾は、任意の位置に存在し得る。一部の実施形態において、アンチセンスは、５’端から位置２、６、８、９、１４および１６に安定化修飾を含む。一部の他の実施形態において、アンチセンスは、５’端から位置２、６、１４および１６に安定化修飾を含む。さらに一部の他の実施形態において、アンチセンスは、５’端から位置２、１４および１６に安定化修飾を含む。 In some embodiments, the antisense strand comprises at least two (eg, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 or more) stabilizing modifications. Without limitation, stabilizing modifications in the antisense strand can be at any position. In some embodiments, the antisense comprises stabilizing modifications at positions 2, 6, 8, 9, 14 and 16 from the 5' end. In some other embodiments, the antisense comprises stabilizing modifications at positions 2, 6, 14 and 16 from the 5' end. In still some other embodiments, the antisense comprises stabilizing modifications at positions 2, 14 and 16 from the 5'end.

一部の実施形態において、アンチセンス鎖は、不安定化修飾に隣接する少なくとも１つの安定化修飾を含む。例えば、安定化修飾は、不安定化修飾の５’端または３’端の、すなわち、不安定化修飾の位置から位置－１または＋１のヌクレオチドであり得る。一部の実施形態において、アンチセンス鎖は、不安定化修飾の５’端および３’端の各々、すなわち、不安定化修飾の位置から位置－１および＋１に安定化修飾を含む。 In some embodiments, the antisense strand comprises at least one stabilizing modification flanked by destabilizing modifications. For example, the stabilizing modification can be a nucleotide at the 5' or 3' end of the destabilizing modification, ie, position -1 or +1 from the position of the destabilizing modification. In some embodiments, the antisense strand comprises a stabilizing modification at each of the 5' and 3' ends of the destabilizing modification, i.e., at positions -1 and +1 from the position of the destabilizing modification.

一部の実施形態において、アンチセンス鎖は、不安定化修飾の３’端に、すなわち、不安定化修飾の位置から位置＋１および＋２に少なくとも２つの安定化修飾を含む。 In some embodiments, the antisense strand comprises at least two stabilizing modifications at the 3' end of the destabilizing modification, i.e., positions +1 and +2 from the position of the destabilizing modification.

一部の実施形態において、センス鎖は、少なくとも２つ（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより多い）の安定化修飾を含む。制限するものではないが、センス鎖中の安定化修飾は、任意の位置に存在し得る。一部の実施形態において、センス鎖は、５’端から位置７、１０および１１に安定化修飾を含む。一部の他の実施形態において、センス鎖は、５’端から位置７、９、１０および１１に安定化修飾を含む。一部の実施形態において、センス鎖は、アンチセンス鎖の５’端から数えてアンチセンス鎖の位置１１、１２および１５に対して対向するまたは相補的な位置に安定化修飾を含む。一部の他の実施形態において、センス鎖は、アンチセンス鎖の５’端から数えてアンチセンス鎖の位置１１、１２、１３および１５に対して対向するまたは相補的な位置に安定化修飾を含む。一部の実施形態において、センス鎖は、２、３または４つの安定化修飾のブロックを含む。 In some embodiments, the sense strand comprises at least two (eg, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 or more) stabilizing modifications. Without limitation, stabilizing modifications in the sense strand can be at any position. In some embodiments, the sense strand contains stabilizing modifications at positions 7, 10 and 11 from the 5' end. In some other embodiments, the sense strand contains stabilizing modifications at positions 7, 9, 10 and 11 from the 5' end. In some embodiments, the sense strand contains stabilizing modifications at positions opposite or complementary to positions 11, 12 and 15 of the antisense strand, counting from the 5' end of the antisense strand. In some other embodiments, the sense strand has stabilizing modifications at positions opposite or complementary to positions 11, 12, 13 and 15 of the antisense strand, counting from the 5' end of the antisense strand. include. In some embodiments, the sense strand comprises blocks of 2, 3 or 4 stabilizing modifications.

一部の実施形態において、センス鎖は、アンチセンス鎖中の二重鎖の熱的不安定化修飾に対抗するまたは相補的な位置に安定化修飾を含まない。 In some embodiments, the sense strand does not contain stabilizing modifications at positions opposite or complementary to thermally destabilizing modifications of the duplex in the antisense strand.

例示的な熱的安定化修飾として、それだけには限らないが、２’－フルオロ修飾が挙げられる。他の熱的安定化修飾として、それだけには限らないが、ＬＮＡが挙げられる。 Exemplary thermal stabilizing modifications include, but are not limited to, 2'-fluoro modifications. Other thermal stabilizing modifications include, but are not limited to, LNA.

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡは、少なくとも４つの（例えば、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより多い）２’－フルオロヌクレオチドを含む。制限するものではないが、２’－フルオロヌクレオチドは全て、一方の鎖中に存在する場合がある。一部の実施形態において、センスおよびアンチセンス鎖両方が、少なくとも２つの２’－フルオロヌクレオチドを含む。２’－フルオロ修飾は、センス鎖またはアンチセンス鎖の任意のヌクレオチドで生じ得る。例えば、２’－フルオロ修飾は、センス鎖もしくはアンチセンス鎖上のどのヌクレオチドでも生じる場合があり、各２’－フルオロ修飾は、センス鎖もしくはアンチセンス鎖上で交互パターンで生じる場合があり、またはセンス鎖もしくはアンチセンス鎖は、両方とも交互パターンで２’－フルオロ修飾を含む。センス鎖上の２’－フルオロ修飾の交互パターンは、アンチセンス鎖と同一である場合も異なっている場合もあり、センス鎖上の２’－フルオロ修飾の交互パターンは、アンチセンス鎖上の２’－フルオロ修飾の交互パターンと比較してシフトを有する場合がある。 In some embodiments, a dsRNA of the present disclosure comprises at least four (eg, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 or more) 2'-fluoronucleotides. Without limitation, all 2'-fluoronucleotides may be present in one strand. In some embodiments both the sense and antisense strands comprise at least two 2'-fluoronucleotides. A 2'-fluoro modification can occur at any nucleotide of the sense or antisense strand. For example, a 2'-fluoro modification can occur at any nucleotide on the sense or antisense strand, each 2'-fluoro modification can occur in an alternating pattern on the sense or antisense strand, or Both the sense or antisense strands contain 2'-fluoro modifications in alternating patterns. The alternating pattern of 2'-fluoro modifications on the sense strand can be the same or different than the antisense strand, and the alternating pattern of 2'-fluoro modifications on the sense strand can be two-fold on the antisense strand. It may have a shift compared to the alternating pattern of '-fluoro modifications.

一部の実施形態において、アンチセンス鎖は、少なくとも２つ（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより多い）の２’－フルオロヌクレオチドを含む。制限するものではないが、アンチセンス鎖中の２’－フルオロ修飾は、任意の位置に存在し得る。一部の実施形態において、アンチセンスは、５’端から位置２、６、８、９、１４および１６に２’－フルオロヌクレオチドを含む。一部の他の実施形態において、アンチセンスは、５’端から位置２、６、１４および１６に２’－フルオロヌクレオチドを含む。さらに一部の他の実施形態において、アンチセンスは、５’端から位置２、１４および１６に２’－フルオロヌクレオチドを含む。 In some embodiments, the antisense strand comprises at least two (eg, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 or more) 2'-fluoronucleotides. Without limitation, the 2'-fluoro modification in the antisense strand can be at any position. In some embodiments, the antisense comprises 2'-fluoronucleotides at positions 2, 6, 8, 9, 14 and 16 from the 5' end. In some other embodiments, the antisense comprises 2'-fluoronucleotides at positions 2, 6, 14 and 16 from the 5' end. In still some other embodiments, the antisense comprises 2'-fluoronucleotides at positions 2, 14 and 16 from the 5' end.

一部の実施形態において、アンチセンス鎖は、不安定化修飾に隣接する少なくとも１つの２’－フルオロヌクレオチドを含む。例えば、２’－フルオロヌクレオチドは、不安定化修飾の５’端または３’端の、すなわち、不安定化修飾の位置から位置－１または＋１のヌクレオチドであり得る。一部の実施形態において、アンチセンス鎖は、不安定化修飾の５’端および３’端の各々、すなわち、不安定化修飾の位置から位置－１および＋１に２’－フルオロヌクレオチドを含む。 In some embodiments, the antisense strand comprises at least one 2'-fluoronucleotide flanked by destabilizing modifications. For example, a 2'-fluoro nucleotide can be the nucleotide at the 5' or 3' end of the destabilizing modification, ie, at position -1 or +1 from the position of the destabilizing modification. In some embodiments, the antisense strand comprises a 2'-fluoronucleotide at each of the 5' and 3' ends of the destabilizing modification, i.e., positions -1 and +1 from the position of the destabilizing modification.

一部の実施形態において、アンチセンス鎖は、不安定化修飾の３’端に、すなわち、不安定化修飾の位置から位置＋１および＋２に少なくとも２つの２’－フルオロヌクレオチドを含む。 In some embodiments, the antisense strand comprises at least two 2'-fluoronucleotides at the 3' end of the destabilizing modification, ie, positions +1 and +2 from the position of the destabilizing modification.

一部の実施形態において、センス鎖は、少なくとも２つ（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより多い）の２’－フルオロヌクレオチドを含む。制限するものではないが、センス中の２’－フルオロ修飾は、任意の位置に存在し得る。一部の実施形態において、アンチセンスは、５’端から位置７、１０および１１に２’－フルオロヌクレオチドを含む。一部の他の実施形態において、センス鎖は、５’端から位置７、９、１０および１１に２’－フルオロヌクレオチドを含む。一部の実施形態において、センス鎖は、アンチセンス鎖の５’端から数えてアンチセンス鎖の位置１１、１２および１５に対して対向するまたは相補的な位置に２’－フルオロヌクレオチドを含む。一部の他の実施形態において、センス鎖は、アンチセンス鎖の５’端から数えてアンチセンス鎖の位置１１、１２、１３および１５に対して対向するまたは相補的な位置に２’－フルオロヌクレオチドを含む。一部の実施形態において、センス鎖は、２、３または４つの２’－フルオロヌクレオチドのブロックを含む。 In some embodiments, the sense strand comprises at least two (eg, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 or more) 2'-fluoronucleotides. Without limitation, the 2'-fluoro modification in sense can be at any position. In some embodiments, the antisense comprises 2'-fluoronucleotides at positions 7, 10 and 11 from the 5' end. In some other embodiments, the sense strand comprises 2'-fluoronucleotides at positions 7, 9, 10 and 11 from the 5' end. In some embodiments, the sense strand comprises 2'-fluoronucleotides at positions opposite or complementary to positions 11, 12 and 15 of the antisense strand counting from the 5' end of the antisense strand. In some other embodiments, the sense strand has 2'-fluoro at positions opposite or complementary to positions 11, 12, 13 and 15 of the antisense strand, counting from the 5' end of the antisense strand. Contains nucleotides. In some embodiments, the sense strand comprises blocks of 2, 3 or 4 2'-fluoronucleotides.

一部の実施形態において、センス鎖は、アンチセンス鎖中の二重鎖の熱的不安定化修飾に対抗するまたは相補的な位置に２’－フルオロヌクレオチドを含まない。 In some embodiments, the sense strand does not contain 2'-fluoronucleotides at positions opposite or complementary to the thermally destabilizing modifications of the duplex in the antisense strand.

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、２１ヌクレオチド（ｎｔ）のセンス鎖および２３ヌクレオチド（ｎｔ）のアンチセンスを含み、アンチセンス鎖は、少なくとも１つの熱的不安定化ヌクレオチドを含有し、少なくとも１つの熱的不安定化ヌクレオチドは、アンチセンス鎖のシード領域中に（すなわち、アンチセンス鎖の５’端の位置２～９に）生じ、ｄｓＲＮＡの一方の末端は平滑であり、もう一方の末端は２ｎｔのオーバーハングを含み、ｄｓＲＮＡは、以下の特徴のうち少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、６または７つ全て）をさらに有してもよい：（ｉ）アンチセンスは、２、３、４、５または６つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｉｉ）アンチセンスは、１、２、３、４または５つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含む、（ｉｉｉ）センス鎖は、リガンドとコンジュゲートされる、（ｉｖ）センス鎖は、２、３、４または５つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｖ）センス鎖は、１、２、３、４または５つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含む、（ｖｉ）ｄｓＲＮＡは、少なくとも４つの２’－フルオロ修飾を含む、および（ｖｉｉ）ｄｓＲＮＡは、アンチセンス鎖の５’端に平滑末端を含む。好ましくは、２ｎｔのオーバーハングは、アンチセンスの３’端にある。 In some embodiments, a dsRNA molecule of the disclosure comprises a 21 nucleotide (nt) sense strand and a 23 nucleotide (nt) antisense strand, wherein the antisense strand contains at least one thermally labile nucleotide. at least one thermally destabilizing nucleotide occurs in the seed region of the antisense strand (i.e., at positions 2-9 of the 5' end of the antisense strand) and one end of the dsRNA is blunt; The other end comprises a 2-nt overhang, and the dsRNA may further have at least one (e.g., 1, 2, 3, 4, 5, 6 or all 7) of the following characteristics: (i) the antisense comprises 2, 3, 4, 5 or 6 2'-fluoro modifications, (ii) the antisense comprises 1, 2, 3, 4 or 5 phosphorothioate internucleotide linkages, ( iii) the sense strand is conjugated to the ligand, (iv) the sense strand contains 2, 3, 4 or 5 2'-fluoro modifications, (v) the sense strand has 1, 2, 3, 4 or five phosphorothioate internucleotide linkages, (vi) the dsRNA contains at least four 2'-fluoro modifications, and (vii) the dsRNA contains a blunt end at the 5' end of the antisense strand. Preferably, a 2nt overhang is at the 3' end of the antisense.

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センスおよびアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、２５～３０ヌクレオチド残基の長さであり、５’末端ヌクレオチド（位置１）から開始して、前記センス鎖の位置１～２３は、少なくとも８のリボヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖は、３６～６６ヌクレオチド残基の長さであり、３’末端ヌクレオチドから開始して、センス鎖の位置１～２３と対形成される位置中の少なくとも８のリボヌクレオチドは、二本鎖を形成し、アンチセンス鎖の少なくとも３’末端ヌクレオチドは、センス鎖と対形成せず、最大６つの連続３’末端ヌクレオチドは、センス鎖と対形成せず、それによって、１～６ヌクレオチドの３’一本鎖オーバーハングを形成し、アンチセンス鎖の５’末端は、センス鎖と対形成しない１０～３０の連続ヌクレオチドを含み、それによって、１０～３０ヌクレオチドの一本鎖５’オーバーハングを形成し、少なくともセンス鎖５’末端および３’末端ヌクレオチドは、センスおよびアンチセンス鎖が最大相補性のためにアラインされる場合に、アンチセンス鎖のヌクレオチドと対形成される塩基であり、それによって、センスおよびアンチセンス鎖の間に実質的に二本鎖の領域を形成し、アンチセンス鎖は、アンチセンス鎖の長さの少なくとも１９リボヌクレオチドに沿って標的ＲＮＡと十分に相補的であり、二本鎖核酸が哺乳動物細胞中に導入される場合に標的遺伝子発現を低減させ、アンチセンス鎖は、少なくとも１つの熱的不安定化ヌクレオチドを含有し、少なくとも１つの熱的不安定化ヌクレオチドは、アンチセンス鎖のシード領域中（すなわち、アンチセンス鎖の５’端の位置２～９に）にある。例えば、熱的不安定化ヌクレオチドは、センス鎖の５’端の位置１４～１７に対抗するまたは相補的な位置の間に生じ、ｄｓＲＮＡは、以下の特徴のうち少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、６または７つ全て）をさらに有してもよい：（ｉ）アンチセンスは、２、３、４、５または６つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｉｉ）アンチセンスは、１、２、３、４または５つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含む、（ｉｉｉ）センス鎖は、リガンドとコンジュゲートされる、（ｉｖ）センス鎖は、２、３、４または５つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｖ）センス鎖は、１、２、３、４または５つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含む、（ｖｉ）ｄｓＲＮＡは、少なくとも４つの２’－フルオロ修飾を含む、および（ｖｉｉ）ｄｓＲＮＡは、１２～３０ヌクレオチド対の長さの二重鎖領域を含む。 In some embodiments, the dsRNA molecules of this disclosure comprise a sense and an antisense strand, the sense strand being 25-30 nucleotide residues in length and starting at the 5′ terminal nucleotide (position 1). , positions 1-23 of the sense strand comprise at least 8 ribonucleotides, the antisense strand is 36-66 nucleotide residues in length, and starting from the 3′ terminal nucleotide, positions 1-23 of the sense strand at least 8 ribonucleotides in positions paired with ∼23 form a duplex, at least the 3' terminal nucleotides of the antisense strand are not paired with the sense strand, and up to 6 consecutive 3' ends The nucleotides are unpaired with the sense strand, thereby forming a 3′ single-stranded overhang of 1-6 nucleotides, and the 5′ end of the antisense strand is a stretch of 10-30 unpaired with the sense strand. nucleotides thereby forming a single-stranded 5' overhang of 10-30 nucleotides, at least the 5' and 3' terminal nucleotides of the sense strand are aligned for maximum complementarity of the sense and antisense strands. bases paired with nucleotides of the antisense strand, thereby forming a substantially double-stranded region between the sense and antisense strands, the antisense strand being the base of the antisense strand. sufficiently complementary to the target RNA along at least 19 ribonucleotides in length to reduce target gene expression when the double-stranded nucleic acid is introduced into mammalian cells; It contains thermally labile nucleotides, wherein at least one thermally labile nucleotide is in the seed region of the antisense strand (ie, at positions 2-9 of the 5' end of the antisense strand). For example, the thermally labile nucleotide occurs between positions opposite or complementary to positions 14-17 on the 5' end of the sense strand, and the dsRNA has at least one of the following characteristics (e.g., 1, 2, 3, 4, 5, 6 or all 7): (i) the antisense comprises 2, 3, 4, 5 or 6 2'-fluoro modifications, (ii) The antisense comprises 1, 2, 3, 4 or 5 phosphorothioate internucleotide linkages, (iii) the sense strand is conjugated to the ligand, (iv) the sense strand comprises 2, 3, 4 or 5 (v) the sense strand contains 1, 2, 3, 4 or 5 phosphorothioate internucleotide linkages, (vi) the dsRNA contains at least 4 2'-fluoro modifications, and (vii) the dsRNA contains a double-stranded region 12-30 nucleotide pairs in length;

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センスおよびアンチセンス鎖を含み、前記ｄｓＲＮＡ分子は、少なくとも２５かつ多くとも２９ヌクレオチドである長さを有するセンス鎖と、多くとも３０ヌクレオチドである長さを有するアンチセンス鎖を含み、センス鎖は５’端から位置１１に酵素分解に対して感受性である修飾されたヌクレオチドを含み、前記センス鎖の３’端と前記アンチセンス鎖の５’端は平滑末端を形成し、前記アンチセンス鎖は、センス鎖よりもその３’端で１～４ヌクレオチド長く、二重鎖領域は少なくとも２５ヌクレオチド長であり、前記アンチセンス鎖は、少なくとも１９ヌクレオチドの前記アンチセンス鎖の長さに沿って標的ｍＲＮＡと十分に相補的であり、前記ｄｓＲＮＡ分子が哺乳動物細胞中に導入される場合に標的遺伝子発現を低減させ、前記ｄｓＲＮＡのダイサー切断は、前記アンチセンス鎖の３’端を含むｓｉＲＮＡを優先的にもたらし、それによって、哺乳動物において標的遺伝子の発現を低減し、アンチセンス鎖は、少なくとも１つの熱的不安定化ヌクレオチドを含有し、少なくとも１つの熱的不安定化ヌクレオチドは、アンチセンス鎖のシード領域中（すなわち、アンチセンス鎖の５’端の位置２～９）にあり、ｄｓＲＮＡは、以下の特徴のうち少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、６または７つ全て）をさらに有してもよい：（ｉ）アンチセンスは、２、３、４、５または６つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｉｉ）アンチセンスは、アンチセンスは、２、３、４、５または６つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｉｉ）アンチセンスは、１、２、３、４または５つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含む、（ｉｉｉ）センス鎖は、リガンドとコンジュゲートされる、（ｉｖ）センス鎖は、２、３、４または５つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｖ）センス鎖は、１、２、３、４または５つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含む、（ｖｉ）ｄｓＲＮＡは、少なくとも４つの２’－フルオロ修飾を含む、および（ｖｉｉ）ｄｓＲＮＡは、１２～２９ヌクレオチド対の長さの二重鎖領域を有する。 In some embodiments, a dsRNA molecule of the disclosure comprises a sense and an antisense strand, wherein said dsRNA molecule is a sense strand having a length that is at least 25 and at most 29 nucleotides and at most 30 nucleotides. and the sense strand comprises a modified nucleotide susceptible to enzymatic degradation from the 5' end to position 11, the 3' end of said sense strand and the 5' end of said antisense strand. The ends form blunt ends, the antisense strand is 1-4 nucleotides longer at its 3' end than the sense strand, the duplex region is at least 25 nucleotides in length, and the antisense strand is at least 19 nucleotides in length. is sufficiently complementary to a target mRNA along the length of said antisense strand of to reduce target gene expression when said dsRNA molecule is introduced into a mammalian cell, and Dicer cleavage of said dsRNA results in said Preferentially resulting in an siRNA comprising the 3' end of the antisense strand, thereby reducing expression of a target gene in a mammal, the antisense strand containing at least one thermally labile nucleotide and at least one The two thermally destabilizing nucleotides are in the seed region of the antisense strand (i.e., positions 2-9 at the 5' end of the antisense strand), and the dsRNA has at least one of the following characteristics (e.g., 1 , 2, 3, 4, 5, 6 or all 7): (i) the antisense comprises 2, 3, 4, 5 or 6 2'-fluoro modifications, (ii ) the antisense contains 2, 3, 4, 5 or 6 2'-fluoro modifications; (ii) the antisense contains 1, 2, 3, 4 or 5 phosphorothioate internucleotide linkages; (iii) the sense strand is conjugated to the ligand; (iv) the sense strand contains 2, 3, 4 or 5 2'-fluoro modifications; (v) the sense strand contains 1, 2, 3 , 4 or 5 phosphorothioate internucleotide linkages, (vi) the dsRNA contains at least 4 2′-fluoro modifications, and (vii) the dsRNA comprises a duplex region 12-29 nucleotide pairs in length. have.

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ分子のセンス鎖およびアンチセンス鎖中のどのヌクレオチドも修飾され得る。各ヌクレオチドは、非連結性リン酸酸素の、または連結性リン酸酸素の１つもしくは複数の一方または両方の１つまたは複数の変更、リボース糖の構成成分の、例えば、リボース糖上の２’ヒドロキシルの変更、リン酸部分の「デホスホ」リンカーとの大規模な置き換え、天然に存在する塩基の修飾または置き換え、およびリボース－リン酸骨格の置き換えまたは修飾を含み得る同一または異なる修飾で修飾され得る。 In some embodiments, any nucleotide in the sense and antisense strands of the dsRNA molecule can be modified. Each nucleotide has one or more alterations of one or more of the non-linking phosphate oxygens or of one or more of the linking phosphate oxygens or both, a component of the ribose sugar, e.g. Can be modified with the same or different modifications, which can include hydroxyl changes, massive replacement of the phosphate moiety with a "dephospho" linker, modification or replacement of naturally occurring bases, and replacement or modification of the ribose-phosphate backbone. .

核酸はサブユニットのポリマーであるので、修飾の多くは、核酸内で反復される位置で生じる、例えば、塩基またはリン酸部分またはリン酸部分の非連結性Ｏの修飾。一部の場合には、修飾は、核酸中の対象位置の全てで生じるが、多くの場合、生じない。例として、修飾は、３’または５’末端位置でのみ生じる場合があり、末端領域においてのみ、例えば、鎖の末端ヌクレオチド上の位置で、または最後の２、３、４、５もしくは１０ヌクレオチドにおいて生じる場合がある。修飾は、二本鎖領域、一本鎖領域または両方において生じる場合がある。修飾は、ＲＮＡの二本鎖領域においてのみ生じる場合があり、またはＲＮＡの一本鎖領域においてのみ生じる場合がある。例えば、非連結性Ｏ位置でのホスホロチオエート修飾は、一方または両方の末端でのみ生じる場合があり、末端領域においてのみ、例えば、鎖の末端ヌクレオチド上の位置で、または最後の２、３、４、５もしくは１０ヌクレオチドにおいて生じる場合があり、または二本鎖および一本鎖領域において、特に、末端で生じる場合がある。５’端または両端がリン酸化され得る。 Since nucleic acids are polymers of subunits, many of the modifications occur at repeated positions within the nucleic acid, eg, modifications of bases or phosphate moieties or non-linking Os of phosphate moieties. In some cases, modifications occur at all positions of interest in the nucleic acid, but in many cases, they do not. By way of example, modifications may occur only at the 3' or 5' terminal positions, only in the terminal regions, e.g. may occur. Modifications may occur in double-stranded regions, single-stranded regions or both. Modifications may occur only in double-stranded regions of RNA, or may occur only in single-stranded regions of RNA. For example, phosphorothioate modifications at non-linking O-positions may occur only at one or both termini, only in the terminal regions, e.g. It may occur at 5 or 10 nucleotides, or in double-stranded and single-stranded regions, especially at the ends. The 5' end or both ends can be phosphorylated.

例えば、安定性を増強すること、オーバーハング中に特定の塩基を含めること、または一本鎖オーバーハング中、例えば、５’もしくは３’オーバーハング中、または両方中に修飾されたヌクレオチドもしくはヌクレオチド代替物を含めることが可能であり得る。例えば、オーバーハング中にプリンヌクレオチドを含めることが望ましいものであり得る。一部の実施形態において、３’または５’オーバーハング中の塩基の全てまたは一部が、例えば、本明細書に記載される修飾で修飾され得る。修飾は、例えば、当技術分野で公知である修飾でのリボース糖の２’位置での修飾の使用、例えば、核酸塩基のリボ糖の代わりに、２’－デオキシ－２’－フルオロ（２’－Ｆ）または２’－Ｏ－メチル修飾された、デオキシリボヌクレオチドの使用、およびリン酸基における修飾、例えば、ホスホロチオエート修飾を含み得る。オーバーハングは、標的配列と相同である必要はない。 For example, to enhance stability, inclusion of specific bases in overhangs, or modified nucleotides or nucleotide substitutions in single-stranded overhangs, such as in 5′ or 3′ overhangs, or both. It may be possible to include objects. For example, it may be desirable to include purine nucleotides in overhangs. In some embodiments, all or some of the bases in the 3' or 5' overhangs can be modified, e.g., with modifications described herein. Modifications include, for example, the use of modifications at the 2' position of the ribose sugar in modifications known in the art, e.g., 2'-deoxy-2'-fluoro (2' -F) or the use of 2'-O-methyl modified deoxyribonucleotides and modifications in the phosphate group, eg phosphorothioate modifications. Overhangs need not be homologous to the target sequence.

一部の実施形態において、センス鎖およびアンチセンス鎖の各残基は、ロックド核酸（ＬＮＡ）、非ロックド核酸（ＵＮＡ）、シクロヘキセン核酸（ＣｅＮＡ）、２’－メトキシエチル、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－アリル、２’－Ｃ－アリル、２’－デオキシ、または２’－フルオロで独立に修飾される。鎖は、２以上の修飾を含有し得る。一部の実施形態において、センス鎖およびアンチセンス鎖の各残基は、２’－Ｏ－メチルまたは２’－フルオロで独立に修飾される。これらの修飾は、アンチセンス鎖中に存在する二重鎖の少なくとも１つの熱的不安定化修飾に追加されるということは理解されるべきである。 In some embodiments, each residue of the sense and antisense strands is locked nucleic acid (LNA), unlocked nucleic acid (UNA), cyclohexene nucleic acid (CeNA), 2′-methoxyethyl, 2′-O-methyl , 2′-O-allyl, 2′-C-allyl, 2′-deoxy, or 2′-fluoro. A strand may contain more than one modification. In some embodiments, each residue of the sense and antisense strands is independently modified with 2'-O-methyl or 2'-fluoro. It should be understood that these modifications are in addition to at least one thermally destabilizing modification of the duplex present in the antisense strand.

少なくとも２つの異なる修飾は通常、センス鎖およびアンチセンス鎖上に存在する。それらの２つの修飾は、２’－デオキシ、２’－Ｏ－メチルまたは２’－フルオロ修飾、非環式ヌクレオチドなどであり得る。一部の実施形態において、センス鎖およびアンチセンス鎖は各々、２’－Ｏ－メチルまたは２’－デオキシから選択される２つの異なって修飾されたヌクレオチドを含む。一部の実施形態において、センス鎖およびアンチセンス鎖の各残基は、２’－Ｏ－メチルヌクレオチド、２’－デオキシヌクレオチド、２’－デオキシ－２’－フルオロヌクレオチド、２’－Ｏ－Ｎ－メチルアセトアミド（２’－Ｏ－ＮＭＡ）ヌクレオチド、２’－Ｏ－ジメチルアミノエトキシエチル（２’－Ｏ－ＤＭＡＥＯＥ）ヌクレオチド、２’－Ｏ－アミノプロピル（２’－Ｏ－ＡＰ）ヌクレオチドまたは２’－アラ－Ｆヌクレオチドで独立に修飾される。やはり、これらの修飾は、アンチセンス鎖中に存在する二重鎖の少なくとも１つの熱的不安定化修飾に追加されるということは理解されるべきである。 At least two different modifications are usually present on the sense and antisense strands. Those two modifications can be 2'-deoxy, 2'-O-methyl or 2'-fluoro modifications, acyclic nucleotides, and the like. In some embodiments, the sense strand and antisense strand each comprise two differently modified nucleotides selected from 2'-O-methyl or 2'-deoxy. In some embodiments, each residue of the sense and antisense strands is a 2'-O-methyl nucleotide, a 2'-deoxy nucleotide, a 2'-deoxy-2'-fluoro nucleotide, a 2'-ON -methylacetamide (2'-O-NMA) nucleotides, 2'-O-dimethylaminoethoxyethyl (2'-O-DMAEOE) nucleotides, 2'-O-aminopropyl (2'-O-AP) nucleotides or 2 '-Ar-F nucleotides independently modified. Again, it should be understood that these modifications are in addition to at least one thermally destabilizing modification of the duplex present in the antisense strand.

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、特に、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ１’、Ｂ２’、Ｂ３’、Ｂ４’領域における交互パターンの修飾を含む。「交互モチーフ」または「交互パターン」という用語は、本明細書において使用される場合、１つまたは複数の修飾を有するモチーフを指し、各修飾は、１つの鎖の交互ヌクレオチドで生じる。交互ヌクレオチドとは、１つおきのヌクレオチド毎に１つまたは３ヌクレオチド毎に１つまたは同様のパターンを指す場合がある。例えば、Ａ、ＢおよびＣが各々、ヌクレオチドへの修飾の１つのタイプを表す場合には、交互モチーフは、「ＡＢＡＢＡＢＡＢＡＢＡＢ…」、「ＡＡＢＢＡＡＢＢＡＡＢＢ…」、「ＡＡＢＡＡＢＡＡＢＡＡＢ…」、「ＡＡＡＢＡＡＡＢＡＡＡＢ…」、「ＡＡＢＢＢＡＡＡＢＢＢ…」または「ＡＢＣＡＢＣＡＢＣＡＢＣ…」などであり得る。 In some embodiments, the dsRNA molecules of the present disclosure comprise alternating patterns of modifications, particularly in the B1, B2, B3, B1', B2', B3', B4' regions. The terms "alternating motif" or "alternating pattern" as used herein refer to a motif having one or more modifications, each modification occurring at alternating nucleotides of one strand. Alternating nucleotides may refer to one every other nucleotide or one every third nucleotide or similar patterns. For example, where A, B and C each represent one type of modification to a nucleotide, the alternating motifs are "ABABABABABABAB...", "AABBAABBAABB...", "AABAABAABAAB...", "AAABAAABAAAB...", "AABBBAABBBB …” or “ABCABCABCABC …” and so on.

交互モチーフ中に含有される修飾のタイプは、同一である場合も、異なっている場合もある。例えば、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄが各々、ヌクレオチド上の修飾の１つのタイプを表す場合には、交互ターン、すなわち、１つおきのヌクレオチド上の修飾は、同一である場合があるが、センス鎖またはアンチセンス鎖の各々は、「ＡＢＡＢＡＢ…」、「ＡＣＡＣＡＣ…」、「ＢＤＢＤＢＤ…」または「ＣＤＣＤＣＤ…」などといった交互モチーフ内の修飾のいくつかの可能性から選択され得る。 The types of modifications contained in alternating motifs may be the same or different. For example, if A, B, C, D each represent one type of modification on a nucleotide, alternate turns, ie, modifications on every other nucleotide, may be identical, but the sense Each of the strands or antisense strands can be selected from several possibilities of modifications within the alternating motifs such as "ABABAB...", "ACACAC...", "BDDBBD..." or "CDCDCD...".

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、アンチセンス鎖上の交互モチーフの修飾パターンに対してシフトされているセンス鎖上の交互モチーフの修飾パターンを含む。シフトは、センス鎖のヌクレオチドの修飾された基が、アンチセンス鎖のヌクレオチドの異なって修飾された基に対応するようなものであり得る、逆もまた同様。例えば、センス鎖は、ｄｓＲＮＡ二本鎖中のアンチセンス鎖と対形成される場合には、センス鎖中の交互モチーフは、鎖の５’－３’から「ＡＢＡＢＡＢ」で開始する場合があり、アンチセンス鎖中の交互モチーフは、二重鎖領域内の鎖の３’－５’から「ＢＡＢＡＢＡ」で開始する場合がある。別の例として、センス鎖中の交互モチーフは、鎖の５’－３’から「ＡＡＢＢＡＡＢＢ」で開始する場合があり、アンチセンス鎖中の交互モチーフは、二重鎖領域内の鎖の３’－５’に「ＢＢＡＡＢＢＡＡ」で開始する場合があり、その結果、センス鎖とアンチセンス鎖の間で修飾パターンの完全なまたは部分的なシフトがある。 In some embodiments, the dsRNA molecules of this disclosure comprise a modification pattern of alternating motifs on the sense strand that is shifted relative to the modification pattern of alternating motifs on the antisense strand. The shift can be such that a modified group of nucleotides in the sense strand corresponds to a differently modified group of nucleotides in the antisense strand, or vice versa. For example, when the sense strand is paired with the antisense strand in the dsRNA duplex, the alternating motif in the sense strand may start with "ABABAB" from 5'-3' of the strand, Alternating motifs in the antisense strand may begin 'BABABA' from the 3'-5' of the strands within the duplex region. As another example, the alternating motif in the sense strand may start from 5'-3' to 'AABBAABB' of the strand and the alternating motif in the antisense strand may start at 3' of the strand within the duplex region. -5' may begin with "BBAABBAA", resulting in a complete or partial shift in modification pattern between the sense and antisense strands.

本開示のｄｓＲＮＡ分子は、少なくとも１つのホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結をさらに含み得る。ホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結修飾は、鎖の任意の位置においてセンス鎖またはアンチセンス鎖または両方の任意のヌクレオチドで生じ得る。例えば、ヌクレオチド間連結修飾は、センス鎖もしくはアンチセンス鎖上のどのヌクレオチドでも生じる可能性があり、各ヌクレオチド間連結修飾は、センス鎖もしくはアンチセンス鎖上で交互パターンで生じ得る、またはセンス鎖もしくはアンチセンス鎖は、交互パターンで両方のヌクレオチド間連結修飾を含む。センス鎖上のヌクレオチド間連結修飾の交互パターンは、アンチセンス鎖と同一である場合も、異なっている場合もあり、センス鎖上のヌクレオチド間連結修飾の交互パターンは、アンチセンス鎖上のヌクレオチド間連結修飾の交互パターンに対してシフトを有する場合がある。 The dsRNA molecules of this disclosure can further comprise at least one phosphorothioate or methylphosphonate internucleotide linkage. A phosphorothioate or methylphosphonate internucleotide linkage modification can occur at any nucleotide in the sense or antisense strand or both at any position on the strand. For example, an internucleotide linkage modification can occur at any nucleotide on the sense or antisense strand, each internucleotide linkage modification can occur in an alternating pattern on the sense or antisense strand, or The antisense strand contains both internucleotide linkage modifications in an alternating pattern. The alternating pattern of internucleotide linkage modifications on the sense strand may be the same as or different from the antisense strand, and the alternating pattern of internucleotide linkage modifications on the sense strand may be the same as the internucleotide linkage modifications on the antisense strand. It may have a shift to the alternating pattern of linking modifications.

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ分子は、オーバーハング領域中にホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結修飾を含む。例えば、オーバーハング領域は、２つのヌクレオチドの間にホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結を有する２つのヌクレオチドを含む。ヌクレオチド間連結修飾はまた、オーバーハングヌクレオチドを二重鎖領域内の末端の対形成されるヌクレオチドと連結するように行われ得る。例えば、少なくとも２、３、４または全てのオーバーハングヌクレオチドを、ホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結によって連結でき、オーバーハングヌクレオチドを、オーバーハングヌクレオチドと隣接する対形成されるヌクレオチドと連結するさらなるホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結があってもよい。例えば、３ヌクレオチドのうち２つがオーバーハングヌクレオチドであり、３番目は、オーバーハングヌクレオチドに隣接する対形成されるヌクレオチドである、末端の３ヌクレオチドの間に少なくとも２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結があり得る。好ましくは、これらの末端の３ヌクレオチドは、アンチセンス鎖の３’端であり得る。 In some embodiments, the dsRNA molecules include phosphorothioate or methylphosphonate internucleotide linkage modifications in the overhang regions. For example, the overhang region comprises two nucleotides with a phosphorothioate or methylphosphonate internucleotide linkage between the two nucleotides. Internucleotide linkage modifications can also be made to link overhanging nucleotides with terminal paired nucleotides within the duplex region. For example, at least 2, 3, 4 or all overhanging nucleotides can be linked by phosphorothioate or methylphosphonate internucleotide linkages, and additional phosphorothioate or methyl phosphonate linkages linking the overhanging nucleotides to the paired nucleotides adjacent to the overhanging nucleotides. There may be phosphonate internucleotide linkages. For example, there can be at least two phosphorothioate internucleotide linkages between the terminal three nucleotides, two of which are overhanging nucleotides and the third is the paired nucleotide adjacent to the overhanging nucleotide. Preferably, these terminal three nucleotides can be the 3' end of the antisense strand.

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ分子のセンス鎖は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６のリン酸ヌクレオチド間連結によってわけられる、２～１０のホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結の１～１０のブロックを含み、ホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結の１つは、オリゴヌクレオチド配列中の任意の位置に配置され、前記センス鎖は、ホスホロチオエート、メチルホスホネートおよびリン酸ヌクレオチド間連結の任意の組合せを含むアンチセンス鎖と、またはホスホロチオエートもしくはメチルホスホネートもしくはリン酸連結のいずれかを含むアンチセンス鎖と対形成される。 In some embodiments, the sense strand of the dsRNA molecule has 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 or 16 phosphate internucleotide comprising 1-10 blocks of 2-10 phosphorothioate or methylphosphonate internucleotide linkages separated by linkages, one of the phosphorothioate or methylphosphonate internucleotide linkages being placed at any position in the oligonucleotide sequence, said The sense strand is paired with an antisense strand containing any combination of phosphorothioate, methylphosphonate and phosphate internucleotide linkages, or with an antisense strand containing either phosphorothioate or methylphosphonate or phosphate linkages.

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ分子のアンチセンス鎖は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７または１８のリン酸ヌクレオチド間連結によってわけられる、２つのホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結の２つのブロックを含み、ホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結のうち１つは、オリゴヌクレオチド配列中の任意の位置に配置され、前記アンチセンス鎖は、ホスホロチオエート、メチルホスホネートおよびリン酸ヌクレオチド間連結の任意の組合せを含むセンス鎖と、ホスホロチオエートもしくはメチルホスホネートもしくはリン酸連結のいずれかを含むアンチセンス鎖と対形成される。 In some embodiments, the antisense strand of the dsRNA molecule is 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 or 18 two blocks of two phosphorothioate or methylphosphonate internucleotide linkages separated by phosphate internucleotide linkages, one of the phosphorothioate or methylphosphonate internucleotide linkages being placed at any position in the oligonucleotide sequence , the antisense strand is paired with a sense strand containing any combination of phosphorothioate, methylphosphonate and phosphate internucleotide linkages, and an antisense strand containing either phosphorothioate or methylphosphonate or phosphate linkages.

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ分子のアンチセンス鎖は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６のリン酸ヌクレオチド間連結によってわけられる、３つのホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結の２つのブロックを含み、ホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結のうち１つは、オリゴヌクレオチド配列中の任意の位置に配置され、前記アンチセンス鎖は、ホスホロチオエート、メチルホスホネートおよびリン酸ヌクレオチド間連結の任意の組合せを含むセンス鎖と、またはホスホロチオエートもしくはメチルホスホネートもしくはリン酸連結のいずれかを含むアンチセンス鎖と対形成される。 In some embodiments, the antisense strand of the dsRNA molecule comprises 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 or 16 phosphate nucleotides comprising two blocks of three phosphorothioate or methylphosphonate internucleotide linkages separated by interlinkages, one of the phosphorothioate or methylphosphonate internucleotide linkages being placed at any position in the oligonucleotide sequence; The strands are paired with a sense strand containing any combination of phosphorothioate, methylphosphonate and phosphate internucleotide linkages, or with an antisense strand containing either phosphorothioate or methylphosphonate or phosphate linkages.

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ分子のアンチセンス鎖は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３または１４のリン酸ヌクレオチド間連結によってわけられる、４つのホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結の２つのブロックを含み、ホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結のうち１つは、オリゴヌクレオチド配列中の任意の位置に配置され、前記アンチセンス鎖は、ホスホロチオエート、メチルホスホネートおよびリン酸ヌクレオチド間連結の任意の組合せを含むセンス鎖と、またはホスホロチオエートもしくはメチルホスホネートもしくはリン酸連結のいずれかを含むアンチセンス鎖と対形成される。 In some embodiments, the antisense strand of the dsRNA molecule is separated by 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, or 14 phosphate internucleotide linkages. two blocks of four phosphorothioate or methylphosphonate internucleotide linkages, one of the phosphorothioate or methylphosphonate internucleotide linkages being placed at any position in the oligonucleotide sequence, the antisense strand comprising phosphorothioate , with a sense strand containing any combination of methylphosphonate and phosphate internucleotide linkages, or with an antisense strand containing either phosphorothioate or methylphosphonate or phosphate linkages.

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ分子のアンチセンス鎖は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２のリン酸ヌクレオチド間連結によってわけられる、５つのホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結の２つのブロックを含み、ホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結のうち１つは、オリゴヌクレオチド配列中の任意の位置に配置され、前記アンチセンス鎖は、ホスホロチオエート、メチルホスホネートおよびリン酸ヌクレオチド間連結の任意の組合せを含むセンス鎖と、またはホスホロチオエートもしくはメチルホスホネートもしくはリン酸連結のいずれかを含むアンチセンス鎖と対形成される。 In some embodiments, the antisense strand of the dsRNA molecule has five comprising two blocks of phosphorothioate or methylphosphonate internucleotide linkages, one of the phosphorothioate or methylphosphonate internucleotide linkages being placed at any position in the oligonucleotide sequence; Paired with a sense strand containing any combination of phosphate internucleotide linkages, or with an antisense strand containing either phosphorothioate or methylphosphonate or phosphate linkages.

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ分子のアンチセンス鎖は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０のリン酸ヌクレオチド間連結によってわけられる、６つのホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結の２つのブロックを含み、ホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結のうち１つは、オリゴヌクレオチド配列中の任意の位置に配置され、前記アンチセンス鎖は、ホスホロチオエート、メチルホスホネートおよびリン酸ヌクレオチド間連結の任意の組合せを含むセンス鎖と、またはホスホロチオエートもしくはメチルホスホネートもしくはリン酸連結のいずれかを含むアンチセンス鎖と対形成される。 In some embodiments, the antisense strand of the dsRNA molecule comprises six phosphorothioate or methylphosphonates separated by 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 phosphate internucleotide linkages. comprising two blocks of internucleotide linkages, one of phosphorothioate or methylphosphonate internucleotide linkages located anywhere in the oligonucleotide sequence; Paired with a sense strand containing any combination of linkages, or with an antisense strand containing either phosphorothioate or methylphosphonate or phosphate linkages.

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ分子のアンチセンス鎖は、１、２、３、４、５、６、７または８つのリン酸ヌクレオチド間連結によってわけられる、７つのホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結の２つのブロックを含み、ホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結のうち１つは、オリゴヌクレオチド配列中の任意の位置に配置され、前記アンチセンス鎖は、ホスホロチオエート、メチルホスホネートおよびリン酸ヌクレオチド間連結の任意の組合せを含むセンス鎖と、またはホスホロチオエートもしくはメチルホスホネートもしくはリン酸連結のいずれかを含むアンチセンス鎖と対形成される。 In some embodiments, the antisense strand of the dsRNA molecule is composed of 7 phosphorothioate or methylphosphonate internucleotide linkages separated by 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8 phosphate internucleotide linkages. comprising two blocks, one of phosphorothioate or methylphosphonate internucleotide linkages positioned anywhere in the oligonucleotide sequence, the antisense strand comprising any of phosphorothioate, methylphosphonate and phosphate internucleotide linkages; Paired with a sense strand containing the combination, or with an antisense strand containing either phosphorothioate or methylphosphonate or phosphate linkages.

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ分子のアンチセンス鎖は、１、２、３、４、５または６つのリン酸ヌクレオチド間連結によってわけられる、８つのホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結の２つのブロックを含み、ホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結のうち１つは、オリゴヌクレオチド配列中の任意の位置に配置され、前記アンチセンス鎖は、ホスホロチオエート、メチルホスホネートおよびリン酸ヌクレオチド間連結の任意の組合せを含むセンス鎖と、またはホスホロチオエートもしくはメチルホスホネートもしくはリン酸連結のいずれかを含むアンチセンス鎖と対形成される。 In some embodiments, the antisense strand of the dsRNA molecule comprises two blocks of eight phosphorothioate or methylphosphonate internucleotide linkages separated by 1, 2, 3, 4, 5, or 6 phosphate internucleotide linkages. wherein one of the phosphorothioate or methylphosphonate internucleotide linkages is placed at any position in the oligonucleotide sequence, and the antisense strand comprises any combination of phosphorothioate, methylphosphonate and phosphate internucleotide linkages in a sense strands, or antisense strands containing either phosphorothioate or methylphosphonate or phosphate linkages.

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ分子のアンチセンス鎖は、１、２、３または４つのリン酸ヌクレオチド間連結によってわけられる、９つのホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結の２つのブロックを含み、ホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結のうち１つは、オリゴヌクレオチド配列中の任意の位置に配置され、前記アンチセンス鎖は、ホスホロチオエート、メチルホスホネートおよびリン酸ヌクレオチド間連結の任意の組合せを含むセンス鎖と、またはホスホロチオエートもしくはメチルホスホネートもしくはリン酸連結のいずれかを含むアンチセンス鎖と対形成される。 In some embodiments, the antisense strand of the dsRNA molecule comprises two blocks of nine phosphorothioate or methylphosphonate internucleotide linkages separated by 1, 2, 3 or 4 phosphate internucleotide linkages, phosphorothioate or one of the methylphosphonate internucleotide linkages is positioned anywhere in the oligonucleotide sequence, the antisense strand with a sense strand comprising any combination of phosphorothioate, methylphosphonate and phosphate internucleotide linkages; or It is paired with an antisense strand containing either phosphorothioate or methylphosphonate or phosphate linkages.

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センスまたはアンチセンス鎖の１～１０の末端位置内に１つまたは複数のホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結修飾をさらに含む。例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９または１０ヌクレオチドが、センスまたはアンチセンス鎖の一方の末端または両端でホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結によって連結され得る。 In some embodiments, the dsRNA molecules of this disclosure further comprise one or more phosphorothioate or methylphosphonate internucleotide linkage modifications within one to ten terminal positions of the sense or antisense strand. For example, at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 nucleotides can be linked by phosphorothioate or methylphosphonate internucleotide linkages at either or both ends of the sense or antisense strand.

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センスまたはアンチセンス鎖の各々の二重鎖の内部領域の１～１０内に１つまたは複数のホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結修飾をさらに含む。例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９または１０ヌクレオチドが、センス鎖の５’端から数えて二重鎖領域の位置８～１６でホスホロチオエートメチルホスホネートヌクレオチド間連結によって連結され得る。ｄｓＲＮＡ分子は、１～１０の末端位置内に１つまたは複数のホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結修飾をさらに含んでもよい。 In some embodiments, the dsRNA molecules of this disclosure further comprise one or more phosphorothioate or methylphosphonate internucleotide linkage modifications within 1-10 of the internal region of the duplex of each of the sense or antisense strands. . For example, at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 nucleotides linked by phosphorothioate methylphosphonate internucleotide linkages at positions 8-16 of the duplex region counting from the 5' end of the sense strand can be The dsRNA molecule may further comprise one or more phosphorothioate or methylphosphonate internucleotide linkage modifications within one to ten terminal positions.

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１～５内に１～５つのホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に１～５つのホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１および２に１～５つのホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に１～５つ（５’端から数えて）をさらに含む。 In some embodiments, the dsRNA molecules of the present disclosure comprise 1-5 phosphorothioate or methylphosphonate internucleotide linkage modifications within positions 1-5 of the sense strand and 1-5 phosphorothioate or methylphosphonate within positions 18-23 of the sense strand. Internucleotide linkage modifications (counting from the 5' end) and 1-5 phosphorothioate or methylphosphonate internucleotide linkage modifications in positions 1 and 2 of the antisense strand and 1-5 in positions 18-23 (counting from the 5' end). counting).

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１～５内に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に１つのホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１または２に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に２つのホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）をさらに含む。 In some embodiments, the dsRNA molecules of this disclosure have one phosphorothioate internucleotide linkage modification within positions 1-5 of the sense strand and one phosphorothioate or methylphosphonate internucleotide linkage modification within positions 18-23 (5' counting from the end) and one phosphorothioate internucleotide linkage modification at position 1 or 2 of the antisense strand and two phosphorothioate or methylphosphonate internucleotide linkage modifications within positions 18-23 (counting from the 5' end) of the antisense strand. .

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１～５内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１または２に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）をさらに含む。 In some embodiments, the dsRNA molecules of this disclosure have two phosphorothioate internucleotide linkage modifications within positions 1-5 of the sense strand and one phosphorothioate internucleotide linkage modification within positions 18-23 (counting from the 5′ end) of the sense strand. ) and one phosphorothioate internucleotide linkage modification at positions 1 or 2 and two phosphorothioate internucleotide linkage modifications within positions 18-23 (counting from the 5' end) of the antisense strand.

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１～５内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１または２に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）をさらに含む。 In some embodiments, the dsRNA molecules of this disclosure have two phosphorothioate internucleotide linkage modifications within positions 1-5 and two phosphorothioate internucleotide linkage modifications within positions 18-23 of the sense strand (counting from the 5′ end). ) and one phosphorothioate internucleotide linkage modification at positions 1 or 2 and two phosphorothioate internucleotide linkage modifications within positions 18-23 (counting from the 5' end) of the antisense strand.

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１～５内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１または２に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）をさらに含む。 In some embodiments, the dsRNA molecules of this disclosure have two phosphorothioate internucleotide linkage modifications within positions 1-5 and two phosphorothioate internucleotide linkage modifications within positions 18-23 of the sense strand (counting from the 5′ end). ) and one phosphorothioate internucleotide linkage modification at positions 1 or 2 and one phosphorothioate internucleotide linkage modification within positions 18-23 (counting from the 5' end) of the antisense strand.

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１～５内に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１および２に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）をさらに含む。 In some embodiments, the dsRNA molecules of this disclosure have one phosphorothioate internucleotide linkage modification within positions 1-5 of the sense strand and one phosphorothioate internucleotide linkage modification within positions 18-23 (counting from the 5′ end) of the sense strand. ) and two phosphorothioate internucleotide linkage modifications at positions 1 and 2 and two phosphorothioate internucleotide linkage modifications within positions 18-23 (counting from the 5' end) of the antisense strand.

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１～５内に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に１つ（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１および２に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）をさらに含む。 In some embodiments, the dsRNA molecules of the present disclosure have one phosphorothioate internucleotide linkage modification within positions 1-5 of the sense strand and one within positions 18-23 (counting from the 5' end) and the antisense strand. It further contains two phosphorothioate internucleotide linkage modifications at positions 1 and 2 of the strand and one phosphorothioate internucleotide linkage modification within positions 18-23 (counting from the 5' end) of the strand.

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１～５内に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１および２に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）をさらに含む。 In some embodiments, the dsRNA molecules of this disclosure have one phosphorothioate internucleotide linkage modification within positions 1-5 of the sense strand (counting from the 5' end) and two modifications at positions 1 and 2 of the antisense strand. Further includes a phosphorothioate internucleotide linkage modification and one phosphorothioate internucleotide linkage modification within positions 18-23 (counting from the 5' end).

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１～５内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１または２に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）をさらに含む。 In some embodiments, the dsRNA molecules of this disclosure have two phosphorothioate internucleotide linkage modifications within positions 1-5 of the sense strand (counting from the 5' end) and one at positions 1 or 2 of the antisense strand. Further includes a phosphorothioate internucleotide linkage modification and two phosphorothioate internucleotide linkage modifications within positions 18-23 (counting from the 5' end).

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１～５内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に１つ（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１および２に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）をさらに含む。 In some embodiments, the dsRNA molecules of this disclosure have two phosphorothioate internucleotide linkage modifications within positions 1-5 of the sense strand and one within positions 18-23 (counting from the 5' end) and an antisense strand. It further contains two phosphorothioate internucleotide linkage modifications at positions 1 and 2 of the strand and one phosphorothioate internucleotide linkage modification within positions 18-23 (counting from the 5' end) of the strand.

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１～５内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１および２に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）をさらに含む。 In some embodiments, the dsRNA molecules of this disclosure have two phosphorothioate internucleotide linkage modifications within positions 1-5 of the sense strand and one phosphorothioate internucleotide linkage modification within positions 18-23 (counting from the 5′ end) of the sense strand. ) and two phosphorothioate internucleotide linkage modifications at positions 1 and 2 and two phosphorothioate internucleotide linkage modifications within positions 18-23 (counting from the 5' end) of the antisense strand.

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１～５内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１または２に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置１８～２３内に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）をさらに含む。 In some embodiments, the dsRNA molecules of this disclosure have two phosphorothioate internucleotide linkage modifications within positions 1-5 of the sense strand and one phosphorothioate internucleotide linkage modification within positions 18-23 (counting from the 5′ end) of the sense strand. ) and one phosphorothioate internucleotide linkage modification at positions 1 or 2 and two phosphorothioate internucleotide linkage modifications within positions 18-23 (counting from the 5' end) of the antisense strand.

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１および２に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置２０および２１に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置２１に１つ（５’端から数えて）をさらに含む。 In some embodiments, the dsRNA molecules of this disclosure have two phosphorothioate internucleotide linkage modifications at positions 1 and 2 and two phosphorothioate internucleotide linkage modifications at positions 20 and 21 (counting from the 5' end) of the sense strand. and further comprising one phosphorothioate internucleotide linkage modification at position 1 and one at position 21 (counting from the 5' end) of the antisense strand.

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置２１に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１および２に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置２０および２１に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）をさらに含む。 In some embodiments, the dsRNA molecules of this disclosure comprise one phosphorothioate internucleotide linkage modification at position 1 and one phosphorothioate internucleotide linkage modification at position 21 (counting from the 5' end) of the sense strand and the antisense strand further includes two phosphorothioate internucleotide linkage modifications at positions 1 and 2 and two phosphorothioate internucleotide linkage modifications at positions 20 and 21 (counting from the 5' end).

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１および２に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置２１および２２に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置２１に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）をさらに含む。 In some embodiments, the dsRNA molecules of this disclosure have two phosphorothioate internucleotide linkage modifications at positions 1 and 2 and two phosphorothioate internucleotide linkage modifications at positions 21 and 22 (counting from the 5' end) of the sense strand. and one phosphorothioate internucleotide linkage modification at position 1 and one phosphorothioate internucleotide linkage modification at position 21 (counting from the 5' end) of the antisense strand.

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置２１に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１および２に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置２１および２２に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）をさらに含む。 In some embodiments, the dsRNA molecules of this disclosure comprise one phosphorothioate internucleotide linkage modification at position 1 and one phosphorothioate internucleotide linkage modification at position 21 (counting from the 5' end) of the sense strand and the antisense strand further includes two phosphorothioate internucleotide linkage modifications at positions 1 and 2 and two phosphorothioate internucleotide linkage modifications at positions 21 and 22 (counting from the 5' end).

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１および２に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置２２および２３に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置２１に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）をさらに含む。 In some embodiments, the dsRNA molecules of this disclosure have two phosphorothioate internucleotide linkage modifications at positions 1 and 2 and two phosphorothioate internucleotide linkage modifications at positions 22 and 23 (counting from the 5' end) of the sense strand. and one phosphorothioate internucleotide linkage modification at position 1 and one phosphorothioate internucleotide linkage modification at position 21 (counting from the 5' end) of the antisense strand.

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖の位置１に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置２１に１つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）ならびにアンチセンス鎖の位置１および２に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾および位置２３および２３に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結修飾（５’端から数えて）をさらに含む。 In some embodiments, the dsRNA molecules of this disclosure comprise one phosphorothioate internucleotide linkage modification at position 1 and one phosphorothioate internucleotide linkage modification at position 21 (counting from the 5' end) of the sense strand and the antisense strand further includes two phosphorothioate internucleotide linkage modifications at positions 1 and 2 and two phosphorothioate internucleotide linkage modifications at positions 23 and 23 (counting from the 5' end).

一部の実施形態において、本開示の化合物は、骨格キラル中心のパターンを含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも５つのヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも６つのヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも７つのヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも８つのヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも９つのヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも１０のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも１１のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも１２のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも１３のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも１４のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも１５のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも１６のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも１７のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも１８のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも１９のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｒｐ立体配置において８つ以下のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｒｐ立体配置において７つ以下のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｒｐ立体配置において６つ以下のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｒｐ立体配置において５つ以下のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｒｐ立体配置において４つ以下のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｒｐ立体配置において３つ以下のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｒｐ立体配置において２つ以下のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｒｐ立体配置において１つ以下のヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、８つ以下のキラルではないヌクレオチド間連結を含む（限定されるわけではない例として、ホスホジエステル）。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、７つ以下のキラルではないヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、６つ以下のキラルではないヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、５つ以下のキラルではないヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、４つ以下のキラルではないヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、３つ以下のキラルではないヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、２つ以下のキラルではないヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、１つ以下のキラルではないヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも１０のヌクレオチド間連結および８つ以下のキラルではないヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも１１のヌクレオチド間連結および７つ以下のキラルではないヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも１２のヌクレオチド間連結および６つ以下のキラルではないヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも１３のヌクレオチド間連結および６つ以下のキラルではないヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも１４のヌクレオチド間連結および５つ以下のキラルではないヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、骨格キラル中心の一般的なパターンは、Ｓｐ立体配置において少なくとも１５のヌクレオチド間連結および４つ以下のキラルではないヌクレオチド間連結を含む。一部の実施形態において、Ｓｐ立体配置におけるヌクレオチド間連結は、連続であってもよく、連続でなくてもよい。一部の実施形態において、Ｒｐ立体配置におけるヌクレオチド間連結は、連続であってもよく、連続でなくてもよい。一部の実施形態において、キラルではないヌクレオチド間連結は、連続であってもよく、連続でなくてもよい。 In some embodiments, the compounds of this disclosure contain a pattern of backbone chiral centers. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes at least 5 internucleotide linkages in the Sp configuration. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes at least 6 internucleotide linkages in the Sp configuration. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes at least 7 internucleotide linkages in the Sp configuration. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers comprises at least 8 internucleotide linkages in the Sp configuration. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes at least 9 internucleotide linkages in the Sp configuration. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes at least 10 internucleotide linkages in the Sp configuration. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers comprises at least 11 internucleotide linkages in the Sp configuration. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes at least 12 internucleotide linkages in the Sp configuration. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes at least 13 internucleotide linkages in the Sp configuration. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes at least 14 internucleotide linkages in the Sp configuration. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes at least 15 internucleotide linkages in the Sp configuration. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers comprises at least 16 internucleotide linkages in the Sp configuration. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes at least 17 internucleotide linkages in the Sp configuration. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers comprises at least 18 internucleotide linkages in the Sp configuration. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes at least 19 internucleotide linkages in the Sp configuration. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes no more than 8 internucleotide linkages in the Rp configuration. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes no more than 7 internucleotide linkages in the Rp configuration. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes no more than 6 internucleotide linkages in the Rp configuration. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes no more than 5 internucleotide linkages in the Rp configuration. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes no more than 4 internucleotide linkages in the Rp configuration. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes no more than three internucleotide linkages in the Rp configuration. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes no more than two internucleotide linkages in the Rp configuration. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes no more than one internucleotide linkage in the Rp configuration. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes no more than 8 non-chiral internucleotide linkages (phosphodiesters as a non-limiting example). In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes no more than 7 non-chiral internucleotide linkages. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes no more than 6 non-chiral internucleotide linkages. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes no more than 5 non-chiral internucleotide linkages. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes no more than 4 non-chiral internucleotide linkages. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes no more than three non-chiral internucleotide linkages. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes no more than two non-chiral internucleotide linkages. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes no more than one non-chiral internucleotide linkage. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes at least 10 internucleotide linkages and no more than 8 non-chiral internucleotide linkages in the Sp configuration. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes at least 11 internucleotide linkages and no more than 7 non-chiral internucleotide linkages in the Sp configuration. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes at least 12 internucleotide linkages and no more than 6 non-chiral internucleotide linkages in the Sp configuration. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes at least 13 internucleotide linkages and no more than 6 non-chiral internucleotide linkages in the Sp configuration. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes at least 14 internucleotide linkages and no more than 5 non-chiral internucleotide linkages in the Sp configuration. In some embodiments, the general pattern of backbone chiral centers includes at least 15 internucleotide linkages and no more than 4 non-chiral internucleotide linkages in the Sp configuration. In some embodiments, the internucleotide linkages in the Sp configuration may or may not be continuous. In some embodiments, the internucleotide linkages in the Rp configuration may or may not be continuous. In some embodiments, non-chiral internucleotide linkages may or may not be continuous.

一部の実施形態において、本開示の化合物は、立体化学ブロックであるブロックを含む。一部の実施形態において、ブロックは、ブロックの各ヌクレオチド間連結がＲｐである点でＲｐブロックである。一部の実施形態において、５’－ブロックは、Ｒｐブロックである。一部の実施形態において、３’－ブロックは、Ｒｐブロックである。一部の実施形態において、ブロックは、ブロックの各ヌクレオチド間連結がＳｐである点でＳｐブロックである。一部の実施形態において、５’－ブロックは、Ｓｐブロックである。一部の実施形態において、３’－ブロックは、Ｓｐブロックである。一部の実施形態において、提供されるオリゴヌクレオチドは、ＲｐおよびＳｐブロックの両方を含む。一部の実施形態において、提供されたオリゴヌクレオチドは、１つまたは複数のＲｐを含むが、Ｓｐブロックを含まない。一部の実施形態において、提供されるオリゴヌクレオチドは、１つまたは複数のＳｐを含むが、Ｒｐブロックを含まない。一部の実施形態において、提供されるオリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の、各ヌクレオチド間連結が天然リン酸連結であるＰＯブロックを含む。 In some embodiments, the compounds of the present disclosure contain blocks that are stereochemical blocks. In some embodiments, the block is an Rp block in that each internucleotide linkage of the block is an Rp. In some embodiments, the 5'-block is the Rp block. In some embodiments, the 3'-block is the Rp block. In some embodiments, the block is an Sp block in that each internucleotide linkage of the block is Sp. In some embodiments, the 5'-block is an Sp block. In some embodiments, the 3'-block is an Sp block. In some embodiments, provided oligonucleotides contain both Rp and Sp blocks. In some embodiments, provided oligonucleotides comprise one or more Rp but no Sp blocks. In some embodiments, provided oligonucleotides comprise one or more Sp but no Rp blocks. In some embodiments, provided oligonucleotides comprise one or more PO blocks in which each internucleotide linkage is a native phosphate linkage.

一部の実施形態において、本開示の化合物は、各糖部分が２’－Ｆ修飾を含むＳｐブロックである５’－ブロックを含む。一部の実施形態において、５’－ブロックは、ヌクレオチド間連結の各々が、修飾されたヌクレオチド間連結であり、各糖部分が、２’－Ｆ修飾を含むＳｐブロックである。一部の実施形態において、５’－ブロックは、ヌクレオチド間連結の各々が、ホスホロチオエート連結であり、各糖部分が、２’－Ｆ修飾を含むＳｐブロックである。一部の実施形態において、５’－ブロックは、４以上のヌクレオシド単位を含む。一部の実施形態において、５’－ブロックは、５以上のヌクレオシド単位を含む。一部の実施形態において、５’－ブロックは、６以上のヌクレオシド単位を含む。一部の実施形態において、５’－ブロックは、７以上のヌクレオシド単位を含む。一部の実施形態において、３’－ブロックは、各糖部分が、２’－Ｆ修飾を含むＳｐブロックである。一部の実施形態において、３’－ブロックは、ヌクレオチド間連結の各々が、修飾されたヌクレオチド間連結であり、各糖部分が、２’－Ｆ修飾を含むＳｐブロックである。一部の実施形態において、３’－ブロックは、ヌクレオチド間連結の各々が、ホスホロチオエート連結であり、各糖部分が２’－Ｆ修飾を含むＳｐブロックである。一部の実施形態において、３’－ブロックは、４以上のヌクレオシド単位を含む。一部の実施形態において、３’－ブロックは、５以上のヌクレオシド単位を含む。一部の実施形態において、３’－ブロックは、６以上のヌクレオシド単位を含む。一部の実施形態において、３’－ブロックは、７以上のヌクレオシド単位を含む。 In some embodiments, the compounds of the present disclosure contain a 5'-block where each sugar moiety is an Sp block containing a 2'-F modification. In some embodiments, the 5'-block is an Sp block in which each internucleotide linkage is a modified internucleotide linkage and each sugar moiety contains a 2'-F modification. In some embodiments, the 5'-block is an Sp block in which each internucleotide linkage is a phosphorothioate linkage and each sugar moiety contains a 2'-F modification. In some embodiments, the 5'-block comprises 4 or more nucleoside units. In some embodiments, the 5'-block comprises 5 or more nucleoside units. In some embodiments, the 5'-block comprises 6 or more nucleoside units. In some embodiments, the 5'-block comprises 7 or more nucleoside units. In some embodiments, the 3'-block is an Sp block with each sugar moiety containing a 2'-F modification. In some embodiments, the 3'-block is an Sp block in which each internucleotide linkage is a modified internucleotide linkage and each sugar moiety contains a 2'-F modification. In some embodiments, the 3'-block is an Sp block in which each internucleotide linkage is a phosphorothioate linkage and each sugar moiety contains a 2'-F modification. In some embodiments, the 3'-block comprises 4 or more nucleoside units. In some embodiments, the 3'-block comprises 5 or more nucleoside units. In some embodiments, the 3'-block comprises 6 or more nucleoside units. In some embodiments, the 3'-block comprises 7 or more nucleoside units.

一部の実施形態において、本開示の化合物は、領域中にあるタイプのヌクレオシドを含み、またはオリゴヌクレオチドに、特定のタイプのヌクレオチド間連結、例えば、天然のリン酸連結、修飾されたヌクレオチド間連結、Ｒｐキラルヌクレオチド間連結、Ｓｐキラルヌクレオチド間連結などが続く。一部の実施形態において、Ａに、Ｓｐが続く。一部の実施形態において、Ａに、Ｒｐが続く。一部の実施形態において、Ａに、天然のリン酸連結（ＰＯ）が続く。一部の実施形態において、Ｕに、Ｓｐが続く。一部の実施形態において、Ｕに、Ｒｐが続く。一部の実施形態において、Ｕに、天然のリン酸連結（ＰＯ）が続く。一部の実施形態において、Ｃに、Ｓｐが続く。一部の実施形態において、Ｃに、Ｒｐが続く。一部の実施形態において、Ｃに、天然のリン酸連結（ＰＯ）が続く。一部の実施形態において、Ｇに、Ｓｐが続く。一部の実施形態において、Ｇに、Ｒｐが続く。一部の実施形態において、Ｇに、天然のリン酸連結（ＰＯ）が続く。一部の実施形態において、ＣおよびＵに、Ｓｐが続く。一部の実施形態において、ＣおよびＵに、Ｒｐが続く。一部の実施形態において、ＣおよびＵに、天然のリン酸連結（ＰＯ）が続く。一部の実施形態において、ＡおよびＧに、Ｓｐが続く。一部の実施形態において、ＡおよびＧに、Ｒｐが続く。 In some embodiments, the compounds of the present disclosure contain certain types of nucleosides in the region or have specific types of internucleotide linkages in the oligonucleotide, e.g., natural phosphate linkages, modified internucleotide linkages. , Rp chiral internucleotide linkages, Sp chiral internucleotide linkages, and so on. In some embodiments, A is followed by Sp. In some embodiments, A is followed by Rp. In some embodiments, A is followed by a natural phosphate linkage (PO). In some embodiments, U is followed by Sp. In some embodiments, U is followed by Rp. In some embodiments, U is followed by a natural phosphate linkage (PO). In some embodiments, C is followed by Sp. In some embodiments, C is followed by Rp. In some embodiments, C is followed by a natural phosphate linkage (PO). In some embodiments, G is followed by Sp. In some embodiments, G is followed by Rp. In some embodiments, G is followed by a natural phosphate linkage (PO). In some embodiments, C and U are followed by Sp. In some embodiments, C and U are followed by Rp. In some embodiments, C and U are followed by a natural phosphate linkage (PO). In some embodiments, A and G are followed by Sp. In some embodiments, A and G are followed by Rp.

一部の実施形態において、アンチセンス鎖は、ヌクレオチド位置２１と２２の間およびヌクレオチド位置２２と２３の間にホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含み、アンチセンス鎖は、アンチセンス鎖のシード領域に（すなわち、アンチセンス鎖の５’端の位置２～９に）位置する二重鎖の少なくとも１つの熱的不安定化修飾を含有し、ｄｓＲＮＡは、以下の特徴のうち少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、６、７または８つ全て）をさらに有してもよい：（ｉ）アンチセンスは、２、３、４、５または６つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｉｉ）アンチセンスは、３、４または５つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含む、（ｉｉｉ）センス鎖は、リガンドとコンジュゲートされる、（ｉｖ）センス鎖は、２、３、４または５つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｖ）センス鎖は、１、２、３、４または５つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含む、（ｖｉ）ｄｓＲＮＡは、少なくとも４つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｖｉｉ）ｄｓＲＮＡは、１２～４０ヌクレオチド対の長さの二重鎖領域を含む、および（ｖｉｉｉ）ｄｓＲＮＡは、アンチセンス鎖の５’端に平滑末端を有する。 In some embodiments, the antisense strand comprises phosphorothioate internucleotide linkages between nucleotide positions 21 and 22 and between nucleotide positions 22 and 23, and the antisense strand is attached to the seed region of the antisense strand (i.e., containing at least one thermally destabilizing modification of the duplex located at positions 2-9 of the 5' end of the antisense strand, the dsRNA has at least one of the following characteristics (e.g., 1, 2 , 3, 4, 5, 6, 7 or all 8): (i) the antisense comprises 2, 3, 4, 5 or 6 2'-fluoro modifications, (ii ) the antisense contains 3, 4 or 5 phosphorothioate internucleotide linkages, (iii) the sense strand is conjugated to the ligand, (iv) the sense strand has 2, 3, 4 or 5 2'- (v) the sense strand contains 1, 2, 3, 4 or 5 phosphorothioate internucleotide linkages, (vi) the dsRNA contains at least 4 2'-fluoro modifications, (vii) the dsRNA contains a double-stranded region 12-40 nucleotide pairs in length, and (viii) the dsRNA has a blunt end at the 5' end of the antisense strand.

一部の実施形態において、アンチセンス鎖は、ヌクレオチド位置１と２の間、ヌクレオチド位置２と３の間、ヌクレオチド位置２１と２２の間およびヌクレオチド位置２２と２３の間にホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含み、アンチセンス鎖は、アンチセンス鎖のシード領域に（すなわち、アンチセンス鎖の５’端の位置２～９に）位置する二重鎖の少なくとも１つの熱的不安定化修飾を含有し、ｄｓＲＮＡは、以下の特徴のうち少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、６、７または８つ全て）をさらに有してもよい：（ｉ）アンチセンスは、２、３、４、５または６つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｉｉ）センス鎖は、リガンドとコンジュゲートされる、（ｉｉｉ）センス鎖は、２、３、４または５つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｉｖ）センス鎖は、１、２、３、４または５つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含む、（ｖ）ｄｓＲＮＡは、少なくとも４つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｖｉ）ｄｓＲＮＡは、１２～４０ヌクレオチド対の長さの二重鎖領域を含む、（ｖｉｉ）ｄｓＲＮＡは、１２～４０ヌクレオチド対の長さの二重鎖領域を含む、および（ｖｉｉｉ）ｄｓＲＮＡは、アンチセンス鎖の５’端に平滑末端を有する。 In some embodiments, the antisense strand comprises phosphorothioate internucleotide linkages between nucleotide positions 1 and 2, between nucleotide positions 2 and 3, between nucleotide positions 21 and 22, and between nucleotide positions 22 and 23. , the antisense strand contains at least one thermally destabilizing modification of the duplex located in the seed region of the antisense strand (i.e., at positions 2-9 of the 5' end of the antisense strand), and the dsRNA may further have at least one of the following characteristics (e.g. 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or all 8): (i) the antisense is 2, 3, contains 4, 5 or 6 2'-fluoro modifications, (ii) the sense strand is conjugated to the ligand, (iii) the sense strand contains 2, 3, 4 or 5 2'-fluoro modifications , (iv) the sense strand contains 1, 2, 3, 4 or 5 phosphorothioate internucleotide linkages, (v) the dsRNA contains at least 4 2'-fluoro modifications, (vi) the dsRNA contains 12- (vii) the dsRNA comprises a double-stranded region 12-40 nucleotide pairs long; and (viii) the dsRNA comprises a double-stranded region 40 nucleotide pairs long, and have blunt ends.

一部の実施形態において、センス鎖は、ヌクレオチド位置１と２の間、ヌクレオチド位置２と３の間にホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含み、アンチセンス鎖は、アンチセンス鎖のシード領域に（すなわち、アンチセンス鎖の５’端の位置２～９に）位置する二重鎖の少なくとも１つの熱的不安定化修飾を含有し、ｄｓＲＮＡは、以下の特徴のうち少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、６、７または８つ全て）をさらに有してもよい：（ｉ）アンチセンスは、２、３、４、５または６つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｉｉ）アンチセンスは、１、２、３、４または５つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含む、（ｉｉｉ）センス鎖は、リガンドとコンジュゲートされる、（ｉｖ）センス鎖は、２、３、４または５つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｖ）センス鎖は、３、４または５つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含む、（ｖｉ）ｄｓＲＮＡは、少なくとも４つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｖｉｉ）ｄｓＲＮＡは、１２～４０ヌクレオチド対の長さの二重鎖領域を含む、および（ｖｉｉｉ）ｄｓＲＮＡは、アンチセンス鎖の５’端に平滑末端を有する。 In some embodiments, the sense strand comprises a phosphorothioate internucleotide linkage between nucleotide positions 1 and 2, between nucleotide positions 2 and 3, and the antisense strand is in the seed region of the antisense strand (i.e., anti containing at least one thermally destabilizing modification of the duplex located at positions 2-9 of the 5' end of the sense strand, the dsRNA has at least one of the following characteristics (e.g., 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or all 8): (i) the antisense comprises 2, 3, 4, 5 or 6 2'-fluoro modifications, (ii) The antisense comprises 1, 2, 3, 4 or 5 phosphorothioate internucleotide linkages, (iii) the sense strand is conjugated to the ligand, (iv) the sense strand comprises 2, 3, 4 or 5 (v) the sense strand contains 3, 4 or 5 phosphorothioate internucleotide linkages, (vi) the dsRNA contains at least 4 2′-fluoro modifications, (vii) the dsRNA contains , contains a double-stranded region 12-40 nucleotide pairs in length, and (viii) the dsRNA has a blunt end at the 5' end of the antisense strand.

一部の実施形態において、センス鎖は、ヌクレオチド位置１と２の間およびヌクレオチド位置２と３の間にホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含み、アンチセンス鎖は、ヌクレオチド位置１と２の間、ヌクレオチド位置２と３の間、ヌクレオチド位置２１と２２の間およびヌクレオチド位置２２と２３の間にホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含み、アンチセンス鎖は、アンチセンス鎖のシード領域に（すなわち、アンチセンス鎖の５’端の位置２～９に）位置する二重鎖の少なくとも１つの熱的不安定化修飾を含有し、ｄｓＲＮＡは、以下の特徴のうち少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、６または７つ全て）をさらに有してもよい：（ｉ）アンチセンスは、２、３、４、５または６つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｉｉ）センス鎖は、リガンドとコンジュゲートされる、（ｉｉｉ）センス鎖は、２、３、４または５つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｉｖ）センス鎖は、３、４または５つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含む、（ｖ）ｄｓＲＮＡは、少なくとも４つの２’－フルオロ修飾を含む、（ｖｉ）ｄｓＲＮＡは、１２～４０ヌクレオチド対の長さの二重鎖領域を含む、および（ｖｉｉ）ｄｓＲＮＡは、アンチセンス鎖の５’端に平滑末端を有する。 In some embodiments, the sense strand comprises a phosphorothioate internucleotide linkage between nucleotide positions 1 and 2 and between nucleotide positions 2 and 3, and the antisense strand comprises between nucleotide positions 1 and 2 and between nucleotide positions 2 and 2. and 3, between nucleotide positions 21 and 22 and between nucleotide positions 22 and 23, the antisense strand is attached to the seed region of the antisense strand (i.e., the 5' end of the antisense strand containing at least one thermally destabilizing modification of the duplex located at positions 2-9 of the dsRNA, wherein the dsRNA has at least one of the following characteristics (e.g., 1, 2, 3, 4, 5, 6 or all 7): (i) the antisense contains 2, 3, 4, 5 or 6 2'-fluoro modifications, (ii) the sense strand is conjugated to the ligand (iii) the sense strand contains 2, 3, 4 or 5 2'-fluoro modifications, (iv) the sense strand contains 3, 4 or 5 phosphorothioate internucleotide linkages, (v) the dsRNA contains at least four 2′-fluoro modifications, (vi) the dsRNA contains a double-stranded region 12-40 nucleotide pairs in length, and (vii) the dsRNA contains at the 5′ end of the antisense strand It has blunt ends.

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、標的との、二本鎖内のミスマッチ（複数可）またはそれらの組合せを含む。ミスマッチは、オーバーハング領域または二重鎖領域中に生じ得る。塩基対は、解離または融解を促進するその傾向に基づいてランク付けできる（例えば、特定の対形成の会合または解離の自由エネルギーで、最も簡単なアプローチは、個々の対に基づいて対を調べることであるが、次の隣接分析または同様の分析も使用できる）。解離の促進の点では：Ａ：ＵはＧ：Ｃを上回って好ましく、Ｇ：ＵはＧ：Ｃを上回って好ましく、Ｉ：ＣはＧ：Ｃを上回って好ましい（Ｉ＝イノシン）。ミスマッチ、例えば、非正準対形成または正準対形成以外のもの（本明細書において別の場所で記載されるような）は、正準（Ａ：Ｔ、Ａ：Ｕ、Ｇ：Ｃ）対形成を上回って好ましく、ユニバーサル塩基を含む対形成は正準対形成を上回って好ましい。 In some embodiments, the dsRNA molecules of this disclosure contain mismatch(es) or a combination thereof within the duplex with the target. Mismatches can occur in overhang regions or duplex regions. Base pairs can be ranked based on their propensity to promote dissociation or melting (e.g., the free energy of association or dissociation for a particular pairing; the simplest approach is to examine pairs on the basis of individual pairing but the next neighbor analysis or similar analysis can also be used). In terms of promoting dissociation: A:U is preferred over G:C, G:U is preferred over G:C, I:C is preferred over G:C (I=inosine). Mismatches, e.g., non-canonical pairing or anything other than canonical pairing (as described elsewhere herein) may be Preferred over formation, pairing involving universal bases is preferred over canonical pairing.

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、二本鎖の５’端でのアンチセンス鎖の解離を促進するために、Ａ：Ｕ、Ｇ：Ｕ、Ｉ：Ｃおよびミスマッチ対、例えば、非正準対形成または正準対形成以外のものまたはユニバーサル塩基を含む対形成の群から独立に選択され得る、アンチセンス鎖の５’端から二重鎖領域内の最初の１、２、３、４または５つの塩基対のうち少なくとも１つを含む。 In some embodiments, the dsRNA molecules of the present disclosure comprise A:U, G:U, I:C and mismatched pairs, such as A:U, G:U, I:C, to facilitate dissociation of the antisense strand at the 5′ end of the duplex. , the first 1, 2 in the duplex region from the 5' end of the antisense strand, which can be independently selected from the group of pairings including non-canonical pairing or non-canonical pairing or universal bases; Contains at least one of 3, 4 or 5 base pairs.

一部の実施形態において、アンチセンス鎖中の５’端から二重鎖領域内の１位置のヌクレオチドは、Ａ、ｄＡ、ｄＵ、ＵおよびｄＴからなる群から選択される。あるいは、アンチセンス鎖の５’端から二重鎖領域内の最初の１、２または３つの塩基対のうち少なくとも１つは、ＡＵ塩基対である。例えば、アンチセンス鎖の５’端から二重鎖領域内の最初の塩基対は、ＡＵ塩基対である。 In some embodiments, the nucleotide at position 1 within the duplex region from the 5' end in the antisense strand is selected from the group consisting of A, dA, dU, U and dT. Alternatively, at least one of the first 1, 2 or 3 base pairs in the duplex region from the 5' end of the antisense strand is an AU base pair. For example, the first base pair in the duplex region from the 5' end of the antisense strand is an AU base pair.

一本鎖または二本鎖オリゴヌクレオチドの任意の位置で、ジヌクレオチドのホスホジエステル（ＰＯ）、ホスホロチオエート（ＰＳ）またはホスホロジチオエート（ＰＳ２）連結の３’端に、４’－修飾されたまたは５’－修飾されたヌクレオチドを導入することは、ヌクレオチド間連結に対して立体的効果を発揮し、ひいては、それをヌクレアーゼから保護し、安定化できるということが見出された。一部の実施形態において、４’－修飾されたまたは５’－修飾されたヌクレオチドをジヌクレオチドのＰＯ、ＰＳ、またはＰＳ２連結の３’端に導入することは、ジヌクレオチド対における第２のヌクレオチドを修飾する。他の実施形態において、４’－修飾されたまたは５’－修飾されたヌクレオチドをジヌクレオチドのＰＯ、ＰＳ、またはＰＳ２連結の３’端に導入することは、ジヌクレオチド対の３’端でヌクレオチドを修飾する。 4'-modified or It has been found that introducing 5'-modified nucleotides can exert steric effects on the internucleotide linkage, thus protecting it from nucleases and stabilizing it. In some embodiments, introducing a 4'-modified or 5'-modified nucleotide to the 3' end of a dinucleotide PO, PS, or PS2 linkage is the second nucleotide in the dinucleotide pair. modify the In other embodiments, introducing a 4'-modified or 5'-modified nucleotide at the 3' end of a PO, PS, or PS2 linkage of a dinucleotide is a nucleotide at the 3' end of the dinucleotide pair. modify the

一部の実施形態において、５’－修飾されたヌクレオシドが、一本鎖または二本鎖ｓｉＲＮＡの任意の位置でジヌクレオチドの３’端に導入される。例えば、５’－アルキル化ヌクレオシドを、一本鎖または二本鎖ｓｉＲＮＡの任意の位置でジヌクレオチドの３’端に導入できる。リボース糖の５’位置のアルキル基は、ラセミ体またはキラル的に純粋なＲもしくはＳ異性体であり得る。例示的な５’－アルキル化ヌクレオシドとして、５’－メチルヌクレオシドがある。５’－メチルは、ラセミ体またはキラル的に純粋なＲもしくはＳ異性体のいずれかであり得る。 In some embodiments, a 5'-modified nucleoside is introduced at the 3' end of the dinucleotide at any position in the single- or double-stranded siRNA. For example, a 5'-alkylated nucleoside can be introduced at the 3' end of a dinucleotide at any position in a single- or double-stranded siRNA. The alkyl group at the 5' position of the ribose sugar can be racemic or chirally pure R or S isomer. An exemplary 5'-alkylated nucleoside is a 5'-methyl nucleoside. The 5'-methyl can be either racemic or chirally pure R or S isomer.

一部の実施形態において、４’－修飾されたヌクレオシドが、一本鎖または二本鎖ｓｉＲＮＡの任意の位置でジヌクレオチドの３’端に導入される。例えば、４’－アルキル化ヌクレオシドを、一本鎖または二本鎖ｓｉＲＮＡの任意の位置でジヌクレオチドの３’端に導入できる。リボース糖の５’位置のアルキル基は、ラセミ体またはキラル的に純粋なＲもしくはＳ異性体であり得る。例示的な４’－アルキル化ヌクレオシドとして、４’－メチルヌクレオシドがある。４’－メチルは、ラセミ体またはキラル的に純粋なＲもしくはＳ異性体のいずれかであり得る。あるいは、４’－Ｏ－アルキル化ヌクレオシドを、一本鎖または二本鎖ｓｉＲＮＡの任意の位置でジヌクレオチドの３’端に導入できる。リボース糖の４’－Ｏ－アルキルは、ラセミ体またはキラル的に純粋なＲもしくはＳ異性体であり得る。例示的４’－Ｏ－アルキル化ヌクレオシドとして、４’－Ｏ－メチルヌクレオシドがある。４’－Ｏ－メチルは、ラセミ体またはキラル的に純粋なＲもしくはＳ異性体のいずれかであり得る。 In some embodiments, a 4'-modified nucleoside is introduced at the 3' end of the dinucleotide at any position in the single- or double-stranded siRNA. For example, a 4'-alkylated nucleoside can be introduced at the 3' end of a dinucleotide at any position in a single- or double-stranded siRNA. The alkyl group at the 5' position of the ribose sugar can be racemic or chirally pure R or S isomer. An exemplary 4'-alkylated nucleoside is a 4'-methyl nucleoside. The 4'-methyl can be either racemic or chirally pure R or S isomer. Alternatively, a 4'-O-alkylated nucleoside can be introduced at the 3' end of the dinucleotide at any position in the single- or double-stranded siRNA. The 4'-O-alkyl of the ribose sugar can be racemic or chirally pure R or S isomer. An exemplary 4'-O-alkylated nucleoside is 4'-O-methyl nucleoside. 4'-O-methyl can be either racemic or chirally pure R or S isomer.

一部の実施形態において、５’－アルキル化ヌクレオシドが、ｄｓＲＮＡのセンス鎖またはアンチセンス鎖の任意の位置で導入され、このような修飾は、ｄｓＲＮＡの効力を維持または改良する。５’－アルキルは、ラセミ体またはキラル的に純粋なＲもしくはＳ異性体のいずれかであり得る。例示的５’－アルキル化ヌクレオシドとして、５’－メチルヌクレオシドがある。５’－メチルは、ラセミ体またはキラル的に純粋なＲもしくはＳ異性体のいずれかであり得る。 In some embodiments, 5'-alkylated nucleosides are introduced at any position of the sense or antisense strand of the dsRNA, and such modifications maintain or improve the potency of the dsRNA. The 5'-alkyl can be either racemic or chirally pure R or S isomer. An exemplary 5'-alkylated nucleoside is a 5'-methyl nucleoside. The 5'-methyl can be either racemic or chirally pure R or S isomer.

一部の実施形態において、４’－アルキル化ヌクレオシドが、ｄｓＲＮＡのセンス鎖またはアンチセンス鎖の任意の位置で導入され、このような修飾は、ｄｓＲＮＡの効力を維持または改良する。４’－アルキルは、ラセミ体またはキラル的に純粋なＲもしくはＳ異性体のいずれかであり得る。例示的４’－アルキル化ヌクレオシドとして、４’－メチルヌクレオシドがある。４’－メチルは、ラセミ体またはキラル的に純粋なＲもしくはＳ異性体のいずれかであり得る。 In some embodiments, 4'-alkylated nucleosides are introduced at any position of the sense or antisense strand of the dsRNA, and such modifications maintain or improve the potency of the dsRNA. The 4'-alkyl can be either racemic or chirally pure R or S isomer. An exemplary 4'-alkylated nucleoside is a 4'-methyl nucleoside. The 4'-methyl can be either racemic or chirally pure R or S isomer.

一部の実施形態において、４’－Ｏ－アルキル化ヌクレオシドは、ｄｓＲＮＡのセンス鎖またはアンチセンス鎖の任意の位置で導入され、このような修飾は、ｄｓＲＮＡの効力を維持または改良する。５’－アルキルは、ラセミ体またはキラル的に純粋なＲもしくはＳ異性体のいずれかであり得る。例示的４’－Ｏ－アルキル化ヌクレオシドとして、４’－Ｏ－メチルヌクレオシドがある。４’－Ｏ－メチルは、ラセミ体またはキラル的に純粋なＲもしくはＳ異性体のいずれかであり得る。 In some embodiments, 4'-O-alkylated nucleosides are introduced at any position of the sense or antisense strand of the dsRNA, and such modifications maintain or improve potency of the dsRNA. The 5'-alkyl can be either racemic or chirally pure R or S isomer. An exemplary 4'-O-alkylated nucleoside is 4'-O-methyl nucleoside. 4'-O-methyl can be either racemic or chirally pure R or S isomer.

一部の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、２’－５’連結（２’－Ｈ、２’－ＯＨおよび２’－ＯＭｅを有し、Ｐ＝ＯまたはＰ＝Ｓである）を含み得る。例えば、２’－５’連結修飾を、ヌクレアーゼ耐性を促進するために、もしくはセンスのアンチセンス鎖への結合を阻害するために使用できる、またはＲＩＳＣによるセンス鎖活性化を避けるためにセンス鎖の５’端で使用できる。 In some embodiments, the dsRNA molecules of this disclosure have 2′-5′ linkages (having 2′-H, 2′-OH and 2′-OMe with P=O or P=S). can contain. For example, 2′-5′ linkage modifications can be used to promote nuclease resistance, or to inhibit sense binding to the antisense strand, or to avoid sense strand activation by RISC. Can be used at the 5' end.

別の実施形態において、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、Ｌ糖（例えば、２’－Ｈ、２’－ＯＨおよび２’－ＯＭｅを有するＬリボース、Ｌ－アラビノース）を含み得る。例えば、これらのＬ糖修飾を、ヌクレアーゼ耐性を促進するために、もしくはセンスのアンチセンス鎖への結合を阻害するために使用できる、またはＲＩＳＣによるセンス鎖活性化を避けるためにセンス鎖の５’端で使用できる。 In another embodiment, the dsRNA molecules of this disclosure can include L sugars (eg, L ribose, L-arabinose with 2'-H, 2'-OH and 2'-OMe). For example, these L-sugar modifications can be used to promote nuclease resistance, or to inhibit binding of sense to the antisense strand, or 5' of the sense strand to avoid sense strand activation by RISC. available on the edge.

種々の刊行物に多量体ｓｉＲＮＡが記載されており、これらは全て、本開示のｄｓＲＮＡとともに使用できる。このような刊行物には、その全体が本明細書に組み込まれるＷＯ２００７／０９１２６９、ＵＳ７８５８７６９、ＷＯ２０１０／１４１５１１、ＷＯ２００７／１１７６８６、ＷＯ２００９／０１４８８７およびＷＯ２０１１／０３１５２０が含まれる。 Various publications describe multimeric siRNAs, all of which can be used with the dsRNAs of the present disclosure. Such publications include WO2007/091269, US7858769, WO2010/141511, WO2007/117686, WO2009/014887 and WO2011/031520, which are incorporated herein in their entirety.

以下により詳細に記載されるように、ＲＮＡｉ剤への１つまたは複数の炭水化物部分のコンジュゲーションを含有するＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡｉ剤の１つまたは複数の特性を最適化できる。多くの場合、炭水化物部分を、ＲＮＡｉ剤の修飾されたサブユニットに付着させる。例えば、ｄｓＲＮＡ剤の１つまたは複数のリボヌクレオチドサブユニットのリボース糖を別の部分、例えば、炭水化物リガンドが付着される非炭水化物（好ましくは、環式）担体と置き換えることができる。サブユニットのリボース糖がそのように置き換えられているリボヌクレオチドサブユニットは、本明細書において、リボース置き換え修飾サブユニット（ＲＲＭＳ）と呼ばれる。環式担体は、炭素環系であり得る、すなわち、全ての環原子は、炭素原子であるか、または複素環式環構造、すなわち、１つまたは複数の環原子は、ヘテロ原子、例えば、窒素、酸素、硫黄であり得る。環式担体は、単環式環構造であり得る、または２つ以上の環、例えば、縮合環を含有し得る。環式担体は、完全飽和環構造であり得る、または１つもしくは複数の二重結合を含有し得る。 As described in more detail below, RNAi agents containing conjugation of one or more carbohydrate moieties to the RNAi agent can optimize one or more properties of the RNAi agent. Carbohydrate moieties are often attached to the modified subunits of the RNAi agent. For example, the ribose sugar of one or more ribonucleotide subunits of the dsRNA agent can be replaced with another moiety, eg, a non-carbohydrate (preferably cyclic) carrier to which the carbohydrate ligand is attached. A ribonucleotide subunit in which the ribose sugar of the subunit is so replaced is referred to herein as a ribose replacement modified subunit (RRMS). The cyclic carrier can be a carbocyclic ring system, i.e. all ring atoms are carbon atoms, or a heterocyclic ring structure, i.e. one or more ring atoms are heteroatoms such as nitrogen , oxygen, sulfur. Cyclic carriers can be monocyclic ring systems or can contain more than one ring, eg, fused rings. Cyclic carriers can be fully saturated ring structures or can contain one or more double bonds.

リガンドは、担体を介してポリヌクレオチドに付着させることができる。担体は、（ｉ）少なくとも１つの「骨格付着点」、好ましくは、２つの「骨格付着点」ならびに（ｉｉ）少なくとも１つの「繋留付着点」を含む。「骨格付着点」とは、本明細書において使用される場合、官能基、例えば、ヒドロキシル基、または、一般的に、骨格、例えば、リボ核酸のリン酸または修飾されたリン酸、例えば、硫黄含有骨格への担体の組み込みのために利用可能な、およびそれに適している結合を指す。「繋留付着点」（ＴＡＰ）とは、一部の実施形態において、選択された部分を接続する環式担体の構成物環原子、例えば、炭素原子またはヘテロ原子（骨格付着点を提供する原子とは別個）を指す。部分は、例えば、炭水化物、例えば、単糖、二糖、三糖、四糖、オリゴ糖および多糖であり得る。選択された部分は、介在するテザーによって環式担体に接続されてもよい。したがって、環式担体は、官能基、例えば、アミノ基を含む、または一般的に、構成物環への、別の化学実体、例えば、リガンドの組み込みもしくは繋留に適している結合を提供することが多いであろう。 A ligand can be attached to a polynucleotide via a carrier. The carrier comprises (i) at least one "backbone attachment point", preferably two "backbone attachment points" and (ii) at least one "tethering point". A "backbone attachment point", as used herein, is a functional group, such as a hydroxyl group, or, in general, a backbone, such as a phosphate or a modified phosphate, such as sulfur, of a ribonucleic acid. Refers to linkages available and suitable for incorporation of the carrier into the containing scaffold. A "tethered point of attachment" (TAP) is, in some embodiments, a constituent ring atom of a cyclic carrier that connects selected moieties, e.g. separate). Moieties can be, for example, carbohydrates such as monosaccharides, disaccharides, trisaccharides, tetrasaccharides, oligosaccharides and polysaccharides. The selected moieties may be connected to the cyclic carrier by intervening tethers. Thus, the cyclic carrier may contain a functional group, such as an amino group, or generally provide a bond suitable for incorporation or tethering of another chemical entity, such as a ligand, to the constituent ring. There will be many.

ＲＮＡｉ剤は、担体を介してリガンドにコンジュゲートされる場合があり、担体は、環式基または非環式基であり得る、好ましくは、環式基は、ピロリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、［１，３］ジオキソラン、オキサゾリジニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、キノキサリニル、ピリダジノニル、テトラヒドロフリルおよびデカリンから選択され、好ましくは、非環式群は、セリノール骨格またはジエタノールアミン骨格から選択される。 RNAi agents may be conjugated to ligands via carriers, which may be cyclic or acyclic groups, preferably cyclic groups are pyrrolidinyl, pyrazolinyl, pyrazolidinyl, imidazolinyl, imidazolidinyl , piperidinyl, piperazinyl, [1,3]dioxolane, oxazolidinyl, isoxazolidinyl, morpholinyl, thiazolidinyl, isothiazolidinyl, quinoxalinyl, pyridazinonyl, tetrahydrofuryl and decalin, preferably the acyclic group is It is selected from a serinol skeleton or a diethanolamine skeleton.

ある特定の具体的実施形態において、本開示の方法において使用するためのＲＮＡｉ剤は、表２～５、９もしくは１０のいずれか１つにおいて列挙される薬剤の群から選択される薬剤である。 In certain specific embodiments, an RNAi agent for use in the methods of the disclosure is an agent selected from the group of agents listed in any one of Tables 2-5, 9 or 10.

ＩＶ．リガンドにコンジュゲートされたｉＲＮＡ
本発明のｉＲＮＡのＲＮＡの別の修飾は、ｉＲＮＡを１つまたは複数のリガンド、ｉＲＮＡの活性、細胞分布または例えば、細胞への細胞取り込みを増強する部分またはコンジュゲートと化学的に連結することを含む。このような部分として、それだけには限らないが、コレステロール部分などの脂質部分（Letsinger et al., Proc. Natl. Acid. Sci. USA, 1989, 86: 6553-6556)、コール酸（Manoharan et al., Biorg. Med. Chem. Let., 1994, 4:1053-1060）、チオエーテル、例えば、ベリル－Ｓ－トリチルチオール（Manoharan et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 1992, 660:306-309; Manoharan et al., Biorg. Med. Chem. Let., 1993, 3:2765-2770）、チオコレステロール（Oberhauser et al., Nucl. Acids Res., 1992, 20:533-538）、脂肪鎖、例えば、ドデカンジオールまたはウンデシル残基（Saison-Behmoaras et al., EMBO J, 1991, 10:1111-1118、Kabanov et al., FEBS Lett., 1990, 259:327-330、Svinarchuk et al., Biochimie, 1993, 75:49-54）、リン脂質、例えば、ジ－ヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロールまたはトリエチル－アンモニウム１，２－ジ－Ｏ－ヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロ－３－ホスホネート（Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651-3654、Shea et al., Nucl. Acids Res., 1990, 18:3777-3783）、ポリアミンまたはポリエチレングリコール鎖（Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14:969-973）またはアダマンタン酢酸（Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651-3654）、パルミチル部分（Mishra et al., Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264:229-237）またはオクタデシルアミンまたはヘキシルアミノ－カルボニルオキシコレステロール部分（Crooke et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277:923-937）が挙げられる。 IV. iRNA Conjugated to Ligand
Another modification of the RNA of the iRNA of the present invention is to chemically link the iRNA to one or more ligands, moieties or conjugates that enhance the iRNA's activity, cellular distribution or, for example, cellular uptake into cells. include. Such moieties include, but are not limited to, lipid moieties such as cholesterol moieties (Letsinger et al., Proc. Natl. Acid. Sci. USA, 1989, 86: 6553-6556), cholic acid (Manoharan et al. Chem. Let., 1994, 4:1053-1060), thioethers such as beryl-S-tritylthiol (Manoharan et al., Ann. NY Acad. Sci., 1992, 660:306-309). Manoharan et al., Biorg. Med. Chem. Let., 1993, 3:2765-2770), thiocholesterol (Oberhauser et al., Nucl. Acids Res., 1992, 20:533-538), fatty chains, For example, dodecanediol or undecyl residues (Saison-Behmoaras et al., EMBO J, 1991, 10:1111-1118; Kabanov et al., FEBS Lett., 1990, 259:327-330; Svinarchuk et al., Biochimie 1993, 75:49-54), phospholipids such as di-hexadecyl-rac-glycerol or triethyl-ammonium 1,2-di-O-hexadecyl-rac-glycero-3-phosphonate (Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651-3654; Shea et al., Nucl. Acids Res., 1990, 18:3777-3783); 969-973) or adamantane acetic acid (Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651-3654), a palmityl moiety (Mishra et al., Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264:229-237) or octadecyl amine or hexylamino-carbonyloxycholesterol moieties (Crooke et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277:923-937).

ある特定の実施形態において、リガンドは、それが組み込まれるｉＲＮＡ剤の分布、標的化または寿命を変更する。一部の実施形態において、リガンドは、例えば、このようなリガンドが存在しない種と比較されるように、選択された標的、例えば、分子、細胞または細胞種、コンパートメント、例えば、細胞のまたは臓器のコンパートメント、組織、器官または身体の領域に対する親和性の増強を提供する。通常のリガンドは、二本鎖核酸において二重鎖対形成に関与しない。 In certain embodiments, a ligand alters the distribution, targeting or longevity of an iRNA agent into which it is incorporated. In some embodiments, the ligand is a selected target, e.g., a molecule, cell or cell type, compartment, e.g., of a cell or of an organ, e.g., compared to a species in which such ligand does not exist. Provides enhanced affinity for a compartment, tissue, organ or region of the body. Ordinary ligands do not participate in duplex pairing in double-stranded nucleic acids.

リガンドとして、天然に存在する物質、例えば、タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）またはグロブリン）、炭水化物（例えば、デキストラン、プルラン、キチン、キトサン、イヌリン、シクロデキストリンまたはヒアルロン酸）または脂質を挙げることができる。リガンドはまた、組換えまたは合成分子、例えば、合成ポリマー、例えば、合成ポリアミノ酸であり得る。ポリアミノ酸の例として、ポリリジン（ＰＬＬ）、ポリＬ－アスパラギン酸、ポリＬ－グルタミン酸であるポリアミノ酸、スチレン－無水マレイン酸共重合体、ポリ（Ｌ－ラクチド－ｃｏ－グリコリド（ｇｌｙｃｏｌｉｅｄ））共重合体、ジビニルエーテル－無水マレイン酸共重合体、Ｎ－（２－ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド共重合体（ＨＭＰＡ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリウレタン、ポリ（２－エチルアクリル酸（ｅｔｈｙｌａｃｒｙｌｌｉｃ ａｃｉｄ））、Ｎ－イソプロピルアクリルアミドポリマーまたはポリホスファジンが挙げられる。ポリアミンの例として、ポリエチレンイミン、ポリリジン（ＰＬＬ）、スペルミン、スペルミジン、ポリアミン、シュードペプチド－ポリアミン、ペプチドミメティックポリアミン、デンドリマーポリアミン、アルギニン、アミジン、プロタミン、カチオン性脂質、カチオン性ポルフィリン、ポリアミンの第四級塩またはαヘリックスペプチドが挙げられる。 As ligands, naturally occurring substances such as proteins (e.g. human serum albumin (HSA), low density lipoprotein (LDL) or globulin), carbohydrates (e.g. dextran, pullulan, chitin, chitosan, inulin, cyclodextrin or hyaluronic acid) or lipids. Ligands can also be recombinant or synthetic molecules, such as synthetic polymers, such as synthetic polyamino acids. Examples of polyamino acids include polylysine (PLL), poly-L-aspartic acid, poly-amino acids such as poly-L-glutamic acid, styrene-maleic anhydride copolymer, poly(L-lactide-co-glycolied) copolymer. coalescing, divinyl ether-maleic anhydride copolymer, N-(2-hydroxypropyl) methacrylamide copolymer (HMPA), polyethylene glycol (PEG), polyvinyl alcohol (PVA), polyurethane, poly(2-ethylacrylic acid) (ethylacryllic acid)), N-isopropylacrylamide polymer or polyphosphazine. Examples of polyamines include polyethylenimine, polylysine (PLL), spermine, spermidine, polyamines, pseudopeptide-polyamines, peptidomimetic polyamines, dendrimer polyamines, arginine, amidine, protamine, cationic lipids, cationic porphyrins, quaternary polyamines. grade salts or alpha-helical peptides.

リガンドにはまた、標的化基、例えば、細胞または組織標的化剤、例えば、レクチン、糖タンパク質、脂質またはタンパク質、例えば、特定の細胞種、例えば、腎臓細胞に結合する抗体が含まれ得る。標的化基は、甲状腺刺激ホルモン、メラニン細胞刺激ホルモン、レクチン、糖タンパク質、界面活性剤プロテインＡ、ムチン炭水化物、多価ラクトース、多価ガラクトース、Ｎ－アセチル－ガラクトサミン、Ｎ－アセチル－グルコサミン多価マンノース、多価フコース、グリコシル化ポリアミノ酸、多価ガラクトース、トランスフェリン、ビスホスホネート、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、脂質、コレステロールステロイド、胆汁酸、葉酸、ビタミンＢ１２、ビオチンまたはＲＧＤペプチドもしくはＲＧＤペプチドミメティックであり得る。ある特定の実施形態において、リガンドは、多価ガラクトース、例えば、Ｎ－アセチル－ガラクトサミンである。 Ligands can also include targeting groups, such as cell or tissue targeting agents such as lectins, glycoproteins, lipids or proteins, such as antibodies that bind to specific cell types, such as kidney cells. Targeting groups include thyroid stimulating hormone, melanocyte stimulating hormone, lectins, glycoproteins, surfactant protein A, mucin carbohydrates, polyvalent lactose, polyvalent galactose, N-acetyl-galactosamine, N-acetyl-glucosamine polyvalent mannose , polyfucose, glycosylated polyamino acids, polygalactose, transferrin, bisphosphonates, polyglutamic acid, polyaspartic acid, lipids, cholesterol steroids, bile acids, folic acid, vitamin B12, biotin or RGD peptides or RGD peptide mimetics. . In certain embodiments, the ligand is a polyvalent galactose, such as N-acetyl-galactosamine.

リガンドの他の例として、色素、インターカレート剤（例えば、アクリジン）、架橋剤（例えば、プソラレン、マイトマイシンＣ）、ポルフィリン（ＴＰＰＣ４、テキサフィリン、サッフィリン（Ｓａｐｐｈｙｒｉｎ））、多環式芳香族炭化水素（例えば、フェナジン、ジヒドロフェナジン）、人工エンドヌクレアーゼ（例えば、ＥＤＴＡ）、親油性分子、例えば、コレステロール、コール酸、アダマンタン酢酸、１－ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、１，３－ビス－Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メントール、１，３－プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ミリスチン酸、Ｏ３－（オレオイル）リトコール酸、Ｏ３－（オレオイル）コレン酸、ジメトキシトリチルまたはフェノキサジン）およびペプチドコンジュゲート（例えば、アンテナペディアペプチド、Ｔａｔペプチド）、アルキル化剤、リン酸、アミノ、メルカプト、ＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ－４０Ｋ）、ＭＰＥＧ、［ＭＰＥＧ］２、ポリアミノ、アルキル、置換アルキル、放射標識マーカー、酵素、ハプテン（例えば、ビオチン）、輸送／吸収促進物質（例えば、アスピリン、ビタミンＥ、葉酸）、合成リボヌクレアーゼ（例えば、イミダゾール、ビスイミダゾール、ヒスタミン、イミダゾールクラスター、アクリジン－イミダゾールコンジュゲート、テトラアザ大環状分子のＥｕ３＋複合体）、ジニトロフェニル、ＨＲＰまたはＡＰが挙げられる。 Other examples of ligands include dyes, intercalating agents (e.g. acridine), cross-linking agents (e.g. psoralen, mitomycin C), porphyrins (TPPC4, texaphyrin, Sapphyrin), polycyclic aromatic hydrocarbons ( phenazine, dihydrophenazine), artificial endonucleases (eg EDTA), lipophilic molecules such as cholesterol, cholic acid, adamantaneacetic acid, 1-pyrenebutyric acid, dihydrotestosterone, 1,3-bis-O (hexadecyl)glycerol , geranyloxyhexyl group, hexadecylglycerol, borneol, menthol, 1,3-propanediol, heptadecyl group, palmitic acid, myristic acid, O3-(oleoyl)lithocholic acid, O3-(oleoyl)cholenic acid, dimethoxytrityl or phenoxazine) and peptide conjugates (e.g. antennapedia peptide, Tat peptide), alkylating agents, phosphate, amino, mercapto, PEG (e.g. PEG-40K), MPEG, [MPEG] 2 , polyamino, alkyl, Substituted alkyls, radiolabeled markers, enzymes, haptens (e.g. biotin), transport/absorption enhancers (e.g. aspirin, vitamin E, folic acid), synthetic ribonucleases (e.g. imidazole, bisimidazole, histamine, imidazole cluster, acridine-imidazole conjugates, Eu3+ complexes of tetraazamacrocycles), dinitrophenyl, HRP or AP.

リガンドは、タンパク質、例えば、糖タンパク質またはペプチド、例えば、共リガンドに対して特異的親和性を有する分子または抗体、例えば、がん細胞、内皮細胞または骨細胞などの特定の細胞種に結合する抗体であり得る。リガンドにはまた、ホルモンおよびホルモン受容体が含まれ得る。それらにはまた、非ペプチド種、例えば、脂質、レクチン、炭水化物、ビタミン、補助因子、多価ラクトース、多価ガラクトース、Ｎ－アセチル－ガラクトサミン、Ｎ－アセチル－グルコサミン多価マンノースまたは多価フコースが含まれ得る。リガンドは、例えば、リポ多糖、ｐ３８ ＭＡＰキナーゼのアクチベーターまたはＮＦ－κＢのアクチベーターであり得る。 A ligand is a protein, e.g., a glycoprotein or peptide, e.g., a molecule or antibody that has a specific affinity for a co-ligand, e.g., an antibody that binds to a particular cell type such as cancer cells, endothelial cells or bone cells. can be Ligands can also include hormones and hormone receptors. They also include non-peptide species such as lipids, lectins, carbohydrates, vitamins, cofactors, polyvalent lactose, polyvalent galactose, N-acetyl-galactosamine, N-acetyl-glucosamine polymannose or polyvalent fucose. can be The ligand can be, for example, a lipopolysaccharide, an activator of p38 MAP kinase or an activator of NF-κB.

リガンドは、例えば、細胞の細胞骨格を破壊することによって、例えば、細胞の微小管、微小線維または中間径線維を破壊することによってｉＲＮＡ剤の細胞への取り込みを増大し得る物質、例えば、薬物であり得る。薬物は、例えば、タキソン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、サイトカラシン、ノコダゾール、ジャスプラキノリド、ラトルンクリンＡ、ファロイジン、スウィンホリドＡ、インダノシンまたはミオセルビンであり得る。 The ligand is a substance, e.g., a drug, that can increase cellular uptake of an iRNA agent, e.g., by disrupting the cytoskeleton of the cell, e.g., by disrupting the microtubules, microfilaments or intermediate fibers of the cell. could be. The drug can be, for example, taxone, vincristine, vinblastine, cytochalasin, nocodazole, jasplakinolide, latrunculin A, phalloidin, swinholide A, indanosine or myocerbin.

一部の実施形態において、本明細書に記載されるようなｉＲＮＡに付着されるリガンドは、薬物動態モジュレーター（ＰＫモジュレーター）として作用する。ＰＫモジュレーターには、親油性物質、胆汁酸、ステロイド、リン脂質類似体、ペプチド、タンパク質結合剤、ＰＥＧ、ビタミンなどが含まれる。例示的ＰＫモジュレーターとして、それだけには限らないが、コレステロール、脂肪酸、コール酸、リトコール酸、ジアルキルグリセリド、ジアシルグリセリド、リン脂質、スフィンゴ脂質、ナプロキセン、イブプロフェン、ビタミンＥ、ビオチンなどが挙げられる。いくつかのホスホロチオエート連結を含むオリゴヌクレオチドはまた、血清タンパク質に結合すると知られており、従って、短いオリゴヌクレオチド、例えば、骨格中に複数のホスホロチオエート連結を含む、約５塩基、１０塩基、１５塩基または２０塩基のオリゴヌクレオチドはまた、リガンドとして（例えば、ＰＫモジュレーティングリガンドとして）本発明に適している。さらに、血清構成成分（例えば、血清タンパク質）に結合するアプタマーも、本明細書に記載される実施形態においてＰＫモジュレーティングリガンドとして使用するのに適している。 In some embodiments, ligands attached to iRNAs as described herein act as pharmacokinetic modulators (PK modulators). PK modulators include lipophilic substances, bile acids, steroids, phospholipid analogs, peptides, protein binders, PEG, vitamins, and the like. Exemplary PK modulators include, but are not limited to, cholesterol, fatty acids, cholic acid, lithocholic acid, dialkylglycerides, diacylglycerides, phospholipids, sphingolipids, naproxen, ibuprofen, vitamin E, biotin, and the like. Oligonucleotides containing several phosphorothioate linkages are also known to bind to serum proteins and thus short oligonucleotides, e.g. Oligonucleotides of 20 bases are also suitable for the present invention as ligands (eg, as PK modulating ligands). Additionally, aptamers that bind serum components (eg, serum proteins) are also suitable for use as PK modulating ligands in the embodiments described herein.

本発明のリガンドがコンジュゲートされたｉＲＮＡは、ペンダント反応性官能性を有する、例えば、オリゴヌクレオチド上への連結分子の付着に由来する（以下に記載される）オリゴヌクレオチドの使用によって合成できる。この反応性オリゴヌクレオチドを、市販のリガンド、種々の保護基のいずれかを有する合成されているリガンドまたはそれに付着された連結部分を有するリガンドと直接反応させることができる。 Ligand-conjugated iRNAs of the invention can be synthesized through the use of oligonucleotides (described below) that have pendant reactive functionalities, eg, derived from the attachment of linking molecules onto the oligonucleotides. This reactive oligonucleotide can be reacted directly with commercially available ligands, synthesized ligands with any of a variety of protecting groups, or ligands with linking moieties attached thereto.

本発明のコンジュゲートにおいて使用されるオリゴヌクレオチドは、固相合成の公知の技術によって好都合に、日常的に作製できる。このような合成のための機器は、例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（登録商標）（カリフォルニア州、フォスターシティ）を含むいくつかのベンダーによって販売されている。当技術分野で公知のこのような合成のための任意の他の手段をさらに、または代わりに使用してもよい。他のオリゴヌクレオチド、例えば、ホスホロチオエートおよびアルキル化誘導体を調製するために同様の技術を使用することも公知である。 Oligonucleotides used in the conjugates of the invention can be conveniently and routinely made by the well-known technique of solid-phase synthesis. Equipment for such synthesis is sold by several vendors including, for example, Applied Biosystems® (Foster City, Calif.). Any other means for such synthesis known in the art may additionally or alternatively be used. It is also known to use similar techniques to prepare other oligonucleotides, such as phosphorothioate and alkylated derivatives.

本発明のリガンドがコンジュゲートされたオリゴヌクレオチドおよびリガンド－配列特異的な連結されたヌクレオシドを有する分子では、オリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオシドを、標準ヌクレオチドもしくはヌクレオシド前駆体または連結部分をすでに有するヌクレオチドもしくはヌクレオシドコンジュゲート前駆体、リガンド分子をすでに有するリガンド－ヌクレオチドもしくはヌクレオシドコンジュゲート前駆体またはビルディングブロックを有する非ヌクレオシドリガンドを利用して適したＤＮＡシンセサイザーで組み立てることができる。 For ligand-conjugated oligonucleotides and molecules with ligand-sequence-specific linked nucleosides of the invention, oligonucleotides and oligonucleosides can be either standard nucleotide or nucleoside precursors or nucleotide or nucleoside conjugates already having a linking moiety. Gate precursors, ligand-nucleotide or nucleoside conjugate precursors already bearing the ligand molecule, or non-nucleoside ligands bearing building blocks can be utilized and assembled in a suitable DNA synthesizer.

連結部分をすでに有するヌクレオチド－コンジュゲート前駆体を使用する場合には、配列特異的な連結されたヌクレオシドの合成が通常完了され、次いで、リガンド分子が連結部分と反応されて、リガンドがコンジュゲートされたオリゴヌクレオチドが形成される。一部の実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドまたは連結されたヌクレオシドは、市販されており、オリゴヌクレオチド合成において日常的に使用される標準ホスホラミダイトおよび非標準ホスホラミダイトに加えて、リガンド－ヌクレオシドコンジュゲートに由来するホスホラミダイトを使用して自動化シンセサイザーによって合成される。 When using a nucleotide-conjugate precursor that already has a linking moiety, the synthesis of the sequence-specific linked nucleosides is usually completed, then the ligand molecule is reacted with the linking moiety to conjugate the ligand. An oligonucleotide is formed. In some embodiments, the oligonucleotides or linked nucleosides of the present invention are commercially available and can be used in ligand-nucleoside conjugates in addition to standard and non-standard phosphoramidites routinely used in oligonucleotide synthesis. Synthesized by an automated synthesizer using the phosphoramidites from which it was derived.

Ａ．脂質コンジュゲート
ある特定の実施形態において、リガンドまたはコンジュゲートは、脂質または脂質ベースの分子である。このような脂質または脂質ベースの分子は、通常、血清タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）に結合できる。ＨＳＡ結合性リガンドは、身体の標的組織、例えば、非腎臓標的組織へのコンジュゲートの分布を可能にする。例えば、標的組織は、肝臓の実質細胞を含む肝臓であり得る。ＨＳＡに結合できる他の分子も、リガンドとして使用できる。例えば、ナプロキセンまたはアスピリンを使用できる。脂質または脂質ベースのリガンドは、（ａ）コンジュゲートの分解に対する耐性を増大できる、（ｂ）標的細胞もしくは細胞膜中への標的化もしくは輸送を増大できる、または（ｃ）血清タンパク質、例えば、ＨＳＡへの結合を調整できる。 A. Lipid Conjugates In certain embodiments, the ligand or conjugate is a lipid or lipid-based molecule. Such lipids or lipid-based molecules are typically capable of binding serum proteins, such as human serum albumin (HSA). HSA-binding ligands allow distribution of the conjugate to target tissues of the body, eg, non-kidney target tissues. For example, the target tissue can be the liver, which contains liver parenchymal cells. Other molecules that can bind to HSA can also be used as ligands. For example, naproxen or aspirin can be used. Lipids or lipid-based ligands can (a) increase resistance to degradation of the conjugate, (b) increase targeting or transport into target cells or cell membranes, or (c) to serum proteins such as HSA. can adjust the binding of

脂質ベースのリガンドを使用して、コンジュゲートの標的組織への結合をモジュレート、例えば、管理（例えば、阻害）できる。例えば、より強力にＨＳＡに結合する脂質または脂質ベースのリガンドは、腎臓へ標的化される可能性が低く、したがって、身体から排除される可能性が低くなる。あまり強力にＨＳＡに結合しない脂質または脂質ベースのリガンドは、コンジュゲートを腎臓に標的化するために使用できる。 Lipid-based ligands can be used to modulate, eg, control (eg, inhibit) binding of the conjugate to the target tissue. For example, a lipid or lipid-based ligand that binds HSA more strongly is less likely to be targeted to the kidney and thus less likely to be cleared from the body. A lipid or lipid-based ligand that binds HSA less strongly can be used to target the conjugate to the kidney.

ある特定の実施形態において、脂質ベースのリガンドは、ＨＳＡに結合する。例えば、リガンドは、十分な親和性でＨＳＡに結合でき、その結果、非腎臓組織へのコンジュゲートの分布が増強される。しかし、親和性は、通常、ＨＳＡ－リガンド結合を元に戻すことができないほど強力ではない。 In certain embodiments, the lipid-based ligand binds HSA. For example, the ligand can bind to HSA with sufficient affinity, resulting in enhanced distribution of the conjugate to non-kidney tissues. However, the affinity is usually not so strong that HSA-ligand binding cannot be reversed.

ある特定の実施形態において、脂質ベースのリガンドは、ＨＳＡに弱く結合するか、全く結合せず、その結果、腎臓へのコンジュゲートの分布が増強される。脂質ベースのリガンドの代わりに、またはそれに加えて、腎臓細胞を標的化する他の部分も使用できる。 In certain embodiments, the lipid-based ligand binds HSA weakly or not at all, resulting in enhanced distribution of the conjugate to the kidney. Other moieties that target kidney cells can also be used in place of, or in addition to, lipid-based ligands.

別の態様では、リガンドは、標的細胞、例えば、増殖している細胞によって取り込まれる部分、例えば、ビタミンである。これらは、例えば、悪性または非悪性種、例えば、がん細胞の望まれない細胞増殖を特徴とする障害の処置にとって特に有用である。例示的ビタミンとして、ビタミンＡ、ＥおよびＫが挙げられる。他の例示的ビタミンとして、Ｂビタミン、例えば、葉酸、Ｂ１２、リボフラビン、ビオチン、ピリドキサールまたはがん細胞によって取り込まれる他のビタミンもしくは栄養素が挙げられる。また、ＨＳＡおよび低比重リポタンパク質（ＬＤＬ）も含まれる。 In another aspect, the ligand is a moiety, eg, a vitamin, that is taken up by target cells, eg, proliferating cells. They are particularly useful, for example, for the treatment of disorders characterized by unwanted cell proliferation of malignant or non-malignant species, such as cancer cells. Exemplary vitamins include vitamins A, E and K. Other exemplary vitamins include B vitamins such as folic acid, B12, riboflavin, biotin, pyridoxal, or other vitamins or nutrients that are taken up by cancer cells. Also included are HSA and low density lipoprotein (LDL).

Ｂ．細胞透過剤
別の態様では、リガンドは、細胞透過剤、例えば、ヘリックス細胞透過剤である。ある特定の実施形態において、これらの細胞透過剤は、両親媒性である。例示的細胞透過剤として、ペプチド、例えば、ｔａｔまたはアンテナペディア（ａｎｔｅｎｎｏｐｅｄｉａ）がある。薬剤がペプチドである場合は、修飾される場合があり、ぺプチジルミメティック、逆転異性体、非ペプチドまたはシュードペプチド連結およびＤ－アミノ酸の使用を含む。ヘリックス剤は、通常、α－ヘリックス剤であり、親油性および疎油性相を有し得る。 B. Cell Penetrating Agents In another aspect, the ligand is a cell penetrating agent, eg, a helix cell penetrating agent. In certain embodiments, these cell-penetrating agents are amphipathic. Exemplary cell penetrating agents include peptides such as tat or antennapedia. If the agent is a peptide, it may be modified, including the use of peptidyl mimetics, reverse isomers, non-peptide or pseudopeptide linkages and D-amino acids. A helical agent is usually an α-helical agent and can have a lipophilic and a lipophobic phase.

リガンドは、ペプチドまたはペプチドミメティックであり得る。ペプチドミメティック（本明細書においてオリゴペプチドミメティックとも呼ばれる）は、天然ペプチドと類似する規定の三次元構造にフォールディング可能な分子である。ペプチドおよびペプチドミメティックのｉＲＮＡ剤への付着は、細胞認識および吸収を増強することなどによって、ｉＲＮＡの薬物動態分布に影響を及ぼし得る。ペプチドまたはペプチドミメティック部分は、約５～５０アミノ酸長、例えば、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５または５０アミノ酸長であり得る。 A ligand can be a peptide or peptidomimetic. Peptidomimetics (also referred to herein as oligopeptide mimetics) are molecules capable of folding into defined three-dimensional structures similar to natural peptides. Attachment of peptides and peptidomimetics to iRNA agents can affect the pharmacokinetic distribution of the iRNA, such as by enhancing cellular recognition and uptake. A peptide or peptidomimetic portion can be about 5-50 amino acids long, eg, about 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 or 50 amino acids long.

ペプチドまたはペプチドミメティックは、例えば、細胞透過ペプチド、カチオン性ペプチド、両親媒性ペプチドまたは疎水性ペプチド（例えば、主にＴｙｒ、ＴｒｐまたはＰｈｅからなる）であり得る。ペプチド部分は、デンドリマーペプチド、拘束ペプチドまたは架橋ペプチドであり得る。別の代替法では、ペプチド部分は、疎水性膜移行配列（ＭＴＳ）を含み得る。例示的な疎水性ＭＴＳ含有ペプチドとして、アミノ酸配列ＡＡＶＡＬＬＰＡＶＬＬＡＬＬＡＰ（配列番号１５３４）を有するＲＦＧＦがある。疎水性ＭＴＳを含有するＲＦＧＦ類似体（例えば、アミノ酸配列ＡＡＬＬＰＶＬＬＡＡＰ（配列番号１５３５））も、標的化部分であり得る。ペプチド部分は、細胞膜を横切ってペプチド、オリゴヌクレオチドおよびタンパク質を含む大きな極性分子を運ぶことができる、「送達」ペプチドであり得る。例えば、ＨＩＶ Ｔａｔタンパク質に由来する配列（ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲＰＰＱ（配列番号１５３６））およびショウジョウバエアンテナペディアタンパク質に由来する配列（ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ（配列番号１５３７））は、送達ペプチドとして機能化能であると見出されている。ペプチドまたはペプチドミメティックは、ファージディスプレイライブラリーまたは１－ビーズ－１－化合物（ＯＢＯＣ）コンビナトリアルライブラリー（Lam et al., Nature, 354:82-84, 1991）から同定されるペプチドなどの、ＤＮＡのランダム配列によってコードされ得る。通常、組み込まれたモノマー単位を介してｄｓＲＮＡ剤に繋留されるペプチドまたはペプチドミメティックとして、細胞標的化ペプチド、例えば、アルギニン－グリシン－アスパラギン酸（ＲＧＤ）－ペプチドまたはＲＧＤミミックがある。ペプチド部分は、約５アミノ酸～約４０アミノ酸長の範囲であり得る。ペプチド部分は、例えば、安定性または直接的な立体配座特性を増大する構造修飾を有し得る。以下に記載される構造修飾のいずれも利用できる。 Peptides or peptidomimetics can be, for example, cell-penetrating peptides, cationic peptides, amphipathic peptides or hydrophobic peptides (eg consisting primarily of Tyr, Trp or Phe). Peptide moieties can be dendrimer peptides, constrained peptides or bridging peptides. In another alternative, the peptide portion may contain a hydrophobic membrane translocating sequence (MTS). An exemplary hydrophobic MTS-containing peptide is RFGF, which has the amino acid sequence AAVALLPAVLLALLAP (SEQ ID NO: 1534). RFGF analogs containing a hydrophobic MTS (eg, amino acid sequence AALLPVLLAAP (SEQ ID NO: 1535)) can also be targeting moieties. The peptide moiety can be a "delivery" peptide capable of carrying large polar molecules including peptides, oligonucleotides and proteins across cell membranes. For example, a sequence derived from the HIV Tat protein (GRKKRRQRRRPPQ (SEQ ID NO: 1536)) and a sequence derived from the Drosophila Antennapedia protein (RQIKIWFQNRRMKWKK (SEQ ID NO: 1537)) have been found to be functional as delivery peptides. . Peptides or peptidomimetics are DNA, such as peptides identified from phage display libraries or 1-bead-1-compound (OBOC) combinatorial libraries (Lam et al., Nature, 354:82-84, 1991). can be encoded by a random sequence of Peptides or peptidomimetics that are commonly tethered to dsRNA agents via incorporated monomeric units include cell-targeting peptides, eg, arginine-glycine-aspartic acid (RGD)-peptides or RGD mimics. Peptide portions can range from about 5 amino acids to about 40 amino acids in length. The peptide portion may have structural modifications that, for example, increase stability or direct conformational properties. Any of the structural modifications described below can be used.

本発明の組成物および方法において使用するためのＲＧＤペプチドは、線状である場合も、環状である場合もあり、特定の組織（複数可）への標的化を促進するように修飾される、例えば、グリコシル化またはメチル化される場合もある。ＲＧＤ含有ペプチドおよびペプチドミメティック（ｐｅｐｔｉｄｉｏｍｉｍｅｍｔｉｃｓ）は、Ｄ－アミノ酸ならびに合成ＲＧＤミミックを含み得る。ＲＧＤに加えて、インテグリンリガンドを標的化する他の部分を使用できる。このリガンドの好ましいコンジュゲートは、ＰＥＣＡＭ－１またはＶＥＧＦを標的化する。 RGD peptides for use in the compositions and methods of the invention may be linear or cyclic and modified to facilitate targeting to a particular tissue(s). For example, it may be glycosylated or methylated. RGD-containing peptides and peptidiomimetics can include D-amino acids as well as synthetic RGD mimics. In addition to RGD, other moieties that target integrin ligands can be used. Preferred conjugates of this ligand target PECAM-1 or VEGF.

ＲＧＤペプチド部分を、特定の細胞種、例えば、腫瘍細胞、例えば、内皮腫瘍細胞または乳がん腫瘍細胞を標的化するために使用できる（Zitzmann et al., Cancer Res., 62:5139-43, 2002）。ＲＧＤペプチドは、ｄｓＲＮＡ剤の肺、腎臓、脾臓または肝臓を含むさまざまな他の組織の腫瘍への標的化を促進できる（Aoki et al., Cancer Gene Therapy 8:783-787, 2001）。通常、ＲＧＤペプチドは、ｉＲＮＡ剤の腎臓への標的化を促進する。ＲＧＤペプチドは、線状である場合も、環状である場合もあり、特定の組織（複数可）への標的化を促進するように修飾される、例えば、グリコシル化またはメチル化される場合もある。例えば、グリコシル化ＲＧＤペプチドは、ｉＲＮＡ剤をαＶβ３を発現する腫瘍細胞に送達できる（Haubner et al., Jour. Nucl. Med., 42:326-336, 2001）。 RGD peptide moieties can be used to target specific cell types, such as tumor cells, such as endothelial or breast cancer tumor cells (Zitzmann et al., Cancer Res., 62:5139-43, 2002). . RGD peptides can facilitate targeting of dsRNA agents to tumors in a variety of other tissues, including lung, kidney, spleen or liver (Aoki et al., Cancer Gene Therapy 8:783-787, 2001). In general, RGD peptides facilitate targeting of iRNA agents to the kidney. RGD peptides may be linear or cyclic, and may be modified, e.g., glycosylated or methylated, to facilitate targeting to specific tissue(s). . For example, glycosylated RGD peptides can deliver iRNA agents to tumor cells expressing αvβ3 (Haubner et al., Jour . Nucl. Med., 42:326-336, 2001).

「細胞透過ペプチド」は、細胞、例えば、微生物細胞、例えば、細菌もしくは真菌細胞または哺乳動物細胞、例えば、ヒト細胞に透過可能である。微生物細胞透過性ペプチドは、例えば、α－ヘリックス線状ペプチド（例えば、ＬＬ－３７またはセロピンＰ１）、ジスルフィド結合含有ペプチド（例えば、α－デフェンシン、β－デフェンシンまたはバクテネシン）または１つもしくは２つの優性アミノ酸のみを含有するペプチド（例えば、ＰＲ－３９またはインドリシジン）であり得る。細胞透過ペプチドはまた、核局在性シグナル（ＮＬＳ）を含み得る。例えば、細胞透過ペプチドは、例えば、ＨＩＶ－１ ｇｐ４１とＳＶ４０ラージＴ抗原のＮＬＳの融合ペプチドドメインに由来するＭＰＧなどの二分両親媒性ペプチドであり得る（Simeoni et al., Nucl. Acids Res. 31:2717-2724, 2003）。 A "cell penetrating peptide" is capable of penetrating cells, eg, microbial cells, eg, bacterial or fungal cells, or mammalian cells, eg, human cells. Microbial cell-penetrating peptides are, for example, α-helical linear peptides (eg LL-37 or Seropin P1), disulfide bond-containing peptides (eg α-defensins, β-defensins or bactenesins) or one or two dominant It can be a peptide containing only amino acids, such as PR-39 or indolicidin. A cell penetrating peptide may also contain a nuclear localization signal (NLS). For example, the cell penetrating peptide can be a bisected amphipathic peptide such as MPG derived from the fusion peptide domain of the NLS of HIV-1 gp41 and SV40 large T antigen (Simeoni et al., Nucl. Acids Res. 31 : 2717-2724, 2003).

Ｃ．炭水化物コンジュゲート
本発明の組成物および方法の一部の実施形態において、ｉＲＮＡは、炭水化物をさらに含む。炭水化物がコンジュゲートされたｉＲＮＡは、本明細書に記載されるような、核酸ならびにインビボ治療的使用に適した組成物のインビボ送達にとって有利である。本明細書において使用される場合、「炭水化物」とは、各炭素原子に結合された酸素、窒素もしくは硫黄原子とともに少なくとも６個の炭素原子（線状、分岐または環状であり得る）を有する１つもしくは複数の単糖単位で構成されている炭水化物自体またはその一部として、各炭素原子に結合された酸素、窒素もしくは硫黄原子とともに各々少なくとも６個の炭素原子（線状、分岐または環状であり得る）を有する１または複数の単糖単位で構成されている炭水化物部分を有する化合物のいずれかである化合物を指す。代表的な炭水化物として、糖（単糖、二糖、三糖および約４、５、６、７、８または９つの単糖単位を含有するオリゴ糖）ならびに多糖、例えば、デンプン、グリコーゲン、セルロースおよび多糖ゴムが挙げられる。特定の単糖として、Ｃ５が挙げられ、上記の（例えば、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７またはＣ８）糖、二糖および三糖は、２つまたは３つの単糖単位有する糖（例えば、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７またはＣ８）を含む。 C. Carbohydrate Conjugates In some embodiments of the compositions and methods of the invention, the iRNA further comprises a carbohydrate. Carbohydrate-conjugated iRNAs are advantageous for in vivo delivery of nucleic acids as described herein as well as compositions suitable for in vivo therapeutic use. As used herein, a "carbohydrate" is one having at least 6 carbon atoms (which may be linear, branched or cyclic) with oxygen, nitrogen or sulfur atoms attached to each carbon atom. or as a carbohydrate itself or part thereof, which is composed of multiple monosaccharide units, each of at least 6 carbon atoms (which can be linear, branched or cyclic), with oxygen, nitrogen or sulfur atoms attached to each carbon atom. ), which is any compound having a carbohydrate moiety made up of one or more monosaccharide units. Representative carbohydrates include sugars (monosaccharides, disaccharides, trisaccharides and oligosaccharides containing about 4, 5, 6, 7, 8 or 9 monosaccharide units) and polysaccharides such as starch, glycogen, cellulose and polysaccharide gums. Particular monosaccharides include C5 and the above (e.g. C5, C6, C7 or C8) sugars, disaccharides and trisaccharides are sugars with two or three monosaccharide units (e.g. C5, C6, C7 or C8).

ある特定の実施形態において、炭水化物コンジュゲートは、単糖を含む。 In certain embodiments the carbohydrate conjugate comprises a monosaccharide.

ある特定の実施形態において、単糖は、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）である。１つまたは複数のＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）誘導体を含むＧａｌＮＡｃコンジュゲートは、例えば、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれるＵＳ８，１０６，０２２に記載されている。一部の実施形態において、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートは、ｉＲＮＡを特定の細胞に標的化するリガンドとして働く。一部の実施形態において、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートは、例えば、肝臓細胞（例えば、肝細胞）のアシアロ糖タンパク質受容体のリガンドとして働くことによってｉＲＮＡを肝臓細胞に標的化する。 In certain embodiments, the monosaccharide is N-acetylgalactosamine (GalNAc). GalNAc conjugates comprising one or more N-acetylgalactosamine (GalNAc) derivatives are described, for example, in US Pat. No. 8,106,022, the entire contents of which are incorporated herein by reference. In some embodiments, GalNAc conjugates act as ligands to target iRNAs to specific cells. In some embodiments, the GalNAc conjugate targets the iRNA to liver cells, eg, by acting as a ligand for the asialoglycoprotein receptor of liver cells (eg, hepatocytes).

一部の実施形態において、炭水化物コンジュゲートは、１つまたは複数のＧａｌＮＡｃ誘導体を含む。ＧａｌＮＡｃ誘導体は、リンカー、例えば、二価または三価分岐リンカーを介して付着させることができる。一部の実施形態において、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートは、センス鎖の３’端にコンジュゲートされる。一部の実施形態において、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートは、リンカー、例えば、本明細書に記載されるようなリンカーを介してｉＲＮＡ剤に（例えば、センス鎖の３’端に）コンジュゲートされる。一部の実施形態において、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートは、センス鎖の５’端にコンジュゲートされる。一部の実施形態において、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートは、リンカー、例えば、本明細書に記載されるようなリンカーを介してｉＲＮＡ剤に（例えば、センス鎖の５’端に）コンジュゲートされる。 In some embodiments, the carbohydrate conjugate comprises one or more GalNAc derivatives. A GalNAc derivative can be attached via a linker, eg, a bivalent or trivalent branched linker. In some embodiments, the GalNAc conjugate is conjugated to the 3' end of the sense strand. In some embodiments, the GalNAc conjugate is conjugated to the iRNA agent (eg, at the 3' end of the sense strand) via a linker, eg, a linker as described herein. In some embodiments, the GalNAc conjugate is conjugated to the 5' end of the sense strand. In some embodiments, the GalNAc conjugate is conjugated to the iRNA agent (eg, at the 5' end of the sense strand) via a linker, eg, a linker as described herein.

本発明のある特定の実施形態において、ＧａｌＮＡｃまたはＧａｌＮＡｃ誘導体を、一価リンカーを介して本発明のｉＲＮＡ剤に付着させる。一部の実施形態において、ＧａｌＮＡｃまたはＧａｌＮＡｃ誘導体を、二価リンカーを介して本発明のｉＲＮＡ剤に付着させる。本発明のさらに他の実施形態において、ＧａｌＮＡｃまたはＧａｌＮＡｃ誘導体を、三価リンカーを介して本発明のｉＲＮＡ剤に付着させる。本発明の他の実施形態において、ＧａｌＮＡｃまたはＧａｌＮＡｃ誘導体を、四価リンカーを介して本発明のｉＲＮＡ剤に付着させる。 In certain embodiments of the invention, a GalNAc or GalNAc derivative is attached to an iRNA agent of the invention via a monovalent linker. In some embodiments, a GalNAc or GalNAc derivative is attached to an iRNA agent of the invention via a bivalent linker. In still other embodiments of the invention, a GalNAc or GalNAc derivative is attached to an iRNA agent of the invention via a trivalent linker. In other embodiments of the invention, a GalNAc or GalNAc derivative is attached to an iRNA agent of the invention via a tetravalent linker.

ある特定の実施形態において、本発明の二本鎖ＲＮＡｉ剤は、ｉＲＮＡ剤に付着された１つのＧａｌＮＡｃまたはＧａｌＮＡｃ誘導体を含む。ある特定の実施形態において、本発明の二本鎖ＲＮＡｉ剤は、複数の一価リンカーを介して二本鎖ＲＮＡｉ剤の複数のヌクレオチドに各々独立に付着された、複数の（例えば、２、３、４、５または６つの）ＧａｌＮＡｃまたはＧａｌＮＡｃ誘導体を含む。 In certain embodiments, double-stranded RNAi agents of the invention comprise one GalNAc or GalNAc derivative attached to the iRNA agent. In certain embodiments, a double-stranded RNAi agent of the invention comprises a plurality (e.g., 2, 3) each independently attached to multiple nucleotides of the double-stranded RNAi agent via multiple monovalent linkers. , 4, 5 or 6) GalNAc or GalNAc derivatives.

一部の実施形態において、例えば、本発明のｉＲＮＡ剤の２つの鎖が、複数の対形成されないヌクレオチドを含むヘアピンループを形成する、一方の鎖の３’端と、それぞれのもう一方の鎖の５’端の間のヌクレオチドの中断されない鎖によって接続された１つの大きな分子の一部である場合には、ヘアピンループ内の対形成されないヌクレオチドは各々、一価リンカーを介して付着されたＧａｌＮＡｃまたはＧａｌＮＡｃ誘導体を独立に含み得る。ヘアピンループはまた、二本鎖のうち１つの鎖における延長されたオーバーハングによって形成される場合もある。 In some embodiments, for example, two strands of an iRNA agent of the invention form a hairpin loop comprising multiple unpaired nucleotides, the 3′ end of one strand and the The unpaired nucleotides in the hairpin loop are each attached via a monovalent linker, GalNAc or A GalNAc derivative may be included independently. A hairpin loop may also be formed by an extended overhang on one strand of the duplex.

一部の実施形態において、例えば、本発明のｉＲＮＡ剤の２つの鎖が、複数の対形成されないヌクレオチドを含むヘアピンループを形成する、一方の鎖の３’端と、それぞれのもう一方の鎖の５’端の間のヌクレオチドの中断されない鎖によって接続された１つの大きな分子の一部である場合には、ヘアピンループ内の対形成されないヌクレオチドは各々、一価リンカーを介して付着されたＧａｌＮＡｃまたはＧａｌＮＡｃ誘導体を独立に含み得る。ヘアピンループはまた、二本鎖のうち１つの鎖における延長されたオーバーハングによって形成される場合もある。 In some embodiments, for example, two strands of an iRNA agent of the invention form a hairpin loop comprising multiple unpaired nucleotides, the 3′ end of one strand and the The unpaired nucleotides in the hairpin loop are each attached via a monovalent linker, GalNAc or A GalNAc derivative may be included independently. A hairpin loop may also be formed by an extended overhang on one strand of the duplex.

一部の実施形態において、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートは、 In some embodiments, the GalNAc conjugate is

Figure 2023521604000017
式ＩＩ
である。
Figure 2023521604000017
 Formula II
is.

一部の実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、以下の模式図で示されるようにリンカーを介して炭水化物コンジュゲートに付着され、式中、Ｘは、ＯまたはＳである。 In some embodiments, the RNAi agent is attached to the carbohydrate conjugate via a linker as shown in the schematic below, where X is O or S.

Figure 2023521604000018
Figure 2023521604000018

一部の実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、表１において定義され、以下に示されるようにＬ９６にコンジュゲートされる： In some embodiments, the RNAi agent is defined in Table 1 and conjugated to L96 as shown below:

Figure 2023521604000019
Figure 2023521604000019

ある特定の実施形態において、本発明の組成物および方法において使用するための炭水化物コンジュゲートは、以下からなる群から選択される： In certain embodiments, carbohydrate conjugates for use in the compositions and methods of the invention are selected from the group consisting of:

Figure 2023521604000020
Figure 2023521604000021
Figure 2023521604000022
Figure 2023521604000023
Figure 2023521604000024
Figure 2023521604000025
 ［式中、Ｙは、ＯまたはＳであり、ｎは、３～６である］（式ＸＸＩＶ）、
Figure 2023521604000020
Figure 2023521604000021
Figure 2023521604000022
Figure 2023521604000023
Figure 2023521604000024
Figure 2023521604000025
 [wherein Y is O or S and n is 3-6] (Formula XXIV),

Figure 2023521604000026
［式中、Ｙは、ＯまたはＳであり、ｎは、３～６である］（式ＸＸＶ）、
Figure 2023521604000026
 [wherein Y is O or S and n is 3-6] (Formula XXV),

Figure 2023521604000027
［式中、Ｘは、ＯまたはＳである］（式ＸＸＶＩＩ）、
Figure 2023521604000027
 [wherein X is O or S] (Formula XXVII),

Figure 2023521604000028
Figure 2023521604000029
Figure 2023521604000030
 （式ＸＸＸＩＶ）
Figure 2023521604000028
Figure 2023521604000029
Figure 2023521604000030
 (Formula XXXIV)

ある特定の実施形態において、本発明の組成物および方法において使用するための炭水化物コンジュゲートは、単糖である。ある特定の実施形態において、単糖は、Ｎ－アセチルガラクトサミン、 In certain embodiments, carbohydrate conjugates for use in the compositions and methods of the invention are monosaccharides. In certain embodiments, the monosaccharide is N-acetylgalactosamine,

Figure 2023521604000031
式ＩＩ
である。
Figure 2023521604000031
 Formula II
is.

本明細書に記載される実施形態において使用するための別の代表的な炭水化物コンジュゲートとして、それだけには限らないが、 Other exemplary carbohydrate conjugates for use in the embodiments described herein include, but are not limited to:

Figure 2023521604000032
（式ＸＸＸＶＩ）
［式中、ＸまたはＹのうち一方は、オリゴヌクレオチドであり、もう一方は、水素である］
が挙げられる。
Figure 2023521604000032
 (Formula XXXVI)
[wherein one of X or Y is an oligonucleotide and the other is hydrogen]
are mentioned.

一部の実施形態において、適したリガンドは、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１９／０５５６３３において開示されるリガンドである。一実施形態において、リガンドは、以下の構造： In some embodiments, suitable ligands are those disclosed in WO2019/055633, the entire contents of which are incorporated herein by reference. In one embodiment, the ligand has the following structure:

Figure 2023521604000033
を含む。
Figure 2023521604000033
 including.

ある特定の実施形態において、本開示のＲＮＡｉ剤は、ＧａｌＮＡｃリガンドを、このようなＧａｌＮＡｃリガンドが現在、本開示の好ましい髄腔内／ＣＮＳ送達経路（複数可）にとって限定された価値のものであると予測されている場合であっても含み得る。 In certain embodiments, the RNAi agents of the disclosure are GalNAc ligands such GalNAc ligands are of limited value for the presently preferred intrathecal/CNS delivery route(s) of the disclosure. It can be included even if it is predicted that

本発明のある特定の実施形態において、ＧａｌＮＡｃまたはＧａｌＮＡｃ誘導体を、一価リンカーを介して本発明のｉＲＮＡ剤に付着させる。一部の実施形態において、ＧａｌＮＡｃまたはＧａｌＮＡｃ誘導体を、二価リンカーを介して本発明のｉＲＮＡ剤に付着させる。本発明のさらに他の実施形態において、ＧａｌＮＡｃまたはＧａｌＮＡｃ誘導体を、三価リンカーを介して本発明のｉＲＮＡ剤に付着させる。 In certain embodiments of the invention, a GalNAc or GalNAc derivative is attached to an iRNA agent of the invention via a monovalent linker. In some embodiments, a GalNAc or GalNAc derivative is attached to an iRNA agent of the invention via a bivalent linker. In still other embodiments of the invention, a GalNAc or GalNAc derivative is attached to an iRNA agent of the invention via a trivalent linker.

一実施形態において、本発明の二本鎖ＲＮＡｉ剤は、ｉＲＮＡ剤に付着された１つまたは複数のＧａｌＮＡｃまたはＧａｌＮＡｃ誘導体を含む。ＧａｌＮＡｃは、センス鎖またはアンチセンス（ａｎｔｓｉｓｅｎｓｅ）鎖上のリンカーを介して任意のヌクレオチドに付着させることができる。ＧａｌＮａｃは、センス鎖の５’端、センス鎖の３’端、アンチセンス鎖の５’端またはアンチセンス鎖の３’端に付着させることができる。一実施形態において、ＧａｌＮＡｃを、例えば、三価リンカーを介してセンス鎖の３’端に付着させる。 In one embodiment, a double-stranded RNAi agent of the invention comprises one or more GalNAc or GalNAc derivatives attached to an iRNA agent. GalNAc can be attached to any nucleotide via a linker on the sense or antisense strand. GalNac can be attached to the 5' end of the sense strand, the 3' end of the sense strand, the 5' end of the antisense strand or the 3' end of the antisense strand. In one embodiment, GalNAc is attached to the 3' end of the sense strand, eg, via a trivalent linker.

他の実施形態において、本発明の二本鎖ＲＮＡｉ剤は、複数のリンカー、例えば、一価リンカーを介して二本鎖ＲＮＡｉ剤の複数のヌクレオチド各々独立に付着された、複数の（例えば、２、３、４、５または６つの）ＧａｌＮＡｃまたはＧａｌＮＡｃ誘導体を含む。 In other embodiments, a double-stranded RNAi agent of the invention comprises a plurality of (e.g., 2 , 3, 4, 5 or 6) GalNAc or GalNAc derivatives.

一部の実施形態において、例えば、本発明のｉＲＮＡ剤の２つの鎖が、複数の対形成されないヌクレオチドを含むヘアピンループを形成する、一方の鎖の３’端と、それぞれのもう一方の鎖の５’端の間のヌクレオチドの中断されない鎖によって接続された１つの大きな分子の一部である場合には、ヘアピンループ内の対形成されないヌクレオチドは各々、一価リンカーを介して付着されたＧａｌＮＡｃまたはＧａｌＮＡｃ誘導体を独立に含み得る。 In some embodiments, for example, two strands of an iRNA agent of the invention form a hairpin loop comprising multiple unpaired nucleotides, the 3′ end of one strand and the The unpaired nucleotides in the hairpin loop are each attached via a monovalent linker, GalNAc or A GalNAc derivative may be included independently.

一部の実施形態において、炭水化物コンジュゲートは、それだけには限らないが、ＰＫモジュレーターまたは細胞透過ペプチドなどの、上記のような１または複数のさらなるリガンドをさらに含む。 In some embodiments, the carbohydrate conjugate further comprises one or more additional ligands as described above, such as, but not limited to, PK modulators or cell penetrating peptides.

本発明において使用するのに適したさらなる炭水化物コンジュゲートおよびリンカーとして、各々の内容全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１４／１７９６２０およびＷＯ２０１４／１７９６２７に記載されるものが挙げられる。 Additional carbohydrate conjugates and linkers suitable for use in the present invention include those described in WO2014/179620 and WO2014/179627, the entire contents of each of which are incorporated herein by reference.

Ｄ．リンカー
一部の実施形態において、本明細書に記載されるコンジュゲートまたはリガンドを、切断可能である場合も、切断可能でない場合もある種々のリンカーを用いてｉＲＮＡオリゴヌクレオチドに付着させることができる。 D. Linkers In some embodiments, the conjugates or ligands described herein can be attached to iRNA oligonucleotides using a variety of linkers that may or may not be cleavable.

「リンカー」または「連結基」という用語は、化合物の２つの部分を接続する、例えば、化合物の２つの部分を共有結合によって付着させる有機部分を意味する。リンカーは、通常、直接結合または酸素もしくは硫黄などの原子、ＮＲ８、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、ＳＯ、ＳＯ２、ＳＯ２ＮＨなどの単位またはそれだけには限らないが、１つもしくは複数のメチレンがＯ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、ＳＯ２、Ｎ（Ｒ８）、Ｃ（Ｏ）によって中断または終結され得る、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換アルキニル、アリールアルキル、アリールアルケニル、アリールアルキニル、ヘテロアリールアルキル、へテロアリールアルケニル、へテロアリールアルキニル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロシクリルアルケニル、ヘテロシクリルアルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アルキルアリールアルキル、アルキルアリールアルケニル、アルキルアリールアルキニル、アルケニルアリールアルキル、アルケニルアリールアルケニル、アルケニルアリールアルキニル、アルキニルアリールアルキル、アルキニルアリールアルケニル、アルキニルアリールアルキニル、アルキルヘテロアリールアルキル、アルキルヘテロアリールアルケニル、アルキルヘテロアリールアルキニル、アルケニルヘテロアリールアルキル、アルケニルヘテロアリールアルケニル、アルケニルヘテロアリールアルキニル、アルキニルヘテロアリールアルキル、アルキニルヘテロアリールアルケニル、アルキニルヘテロアリールアルキニル、アルキルヘテロシクリルアルキル、アルキルヘテロシクリルアルケニル、アルキルヘテロシクリルアルキニル（ａｌｋｙｌｈｅｒｅｒｏｃｙｃｌｙｌａｌｋｙｎｙｌ）、アルケニルヘテロシクリルアルキル、アルケニルヘテロシクリルアルケニル、アルケニルヘテロシクリルアルキニル、アルキニルヘテロシクリルアルキル、アルキニルヘテロシクリルアルケニル、アルキニルヘテロシクリルアルキニル、アルキルアリール、アルケニルアリール、アルキニルアリール、アルキルヘテロアリール、アルケニルヘテロアリール、アルキニルヘテロアリール（ａｌｋｙｎｙｌｈｅｒｅｒｏａｒｙｌ）、Ｒ８が、水素、アシル、脂肪族もしくは置換脂肪族である、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ヘテロアリール、置換もしくは非置換複素環式などの原子の鎖を含む。ある特定の実施形態において、リンカーは、約１～２４個原子、２～２４、３～２４、４～２４、５～２４、６～２４、６～１８、７～１８、８～１８個の原子、７～１７、８～１７、６～１６、７～１６または８～１６個の原子である。 The term "linker" or "linking group" means an organic moiety that connects two parts of a compound, eg, covalently attaches two parts of a compound. A linker is typically a direct bond or an atom such as oxygen or sulfur, a unit such as NR8, C(O), C(O)NH, SO, SO2 , SO2NH or one or more methylene may be interrupted or terminated by O, S, S(O), SO2 , N(R8), C(O), substituted or unsubstituted alkyl, substituted or unsubstituted alkenyl, substituted or unsubstituted alkynyl, aryl Alkyl, arylalkenyl, arylalkynyl, heteroarylalkyl, heteroarylalkenyl, heteroarylalkynyl, heterocyclylalkyl, heterocyclylalkenyl, heterocyclylalkynyl, aryl, heteroaryl, heterocyclyl, cycloalkyl, cycloalkenyl, alkylarylalkyl, alkylaryl alkenyl, alkylarylalkynyl, alkenylarylalkyl, alkenylarylalkenyl, alkenylarylalkynyl, alkynylarylalkyl, alkynylarylalkenyl, alkynylarylalkynyl, alkylheteroarylalkyl, alkylheteroarylalkenyl, alkylheteroarylalkynyl, alkenylheteroarylalkyl, alkenylheteroarylalkenyl, alkenylheteroarylalkynyl, alkynylheteroarylalkyl, alkynylheteroarylalkenyl, alkynylheteroarylalkynyl, alkylheterocyclylalkyl, alkylheterocyclylalkenyl, alkylheterocyclylalkynyl, alkenylheterocyclylalkyl, alkenylheterocyclylalkenyl, alkenylheterocyclyl alkynyl, alkynylheterocyclylalkyl, alkynylheterocyclylalkenyl, alkynylheterocyclylalkynyl, alkylaryl, alkenylaryl, alkynylaryl, alkylheteroaryl, alkenylheteroaryl, alkynylhereroaryl, R8 is hydrogen, acyl, aliphatic or substituted aliphatic groups of atoms, such as substituted or unsubstituted aryl, substituted or unsubstituted heteroaryl, substituted or unsubstituted heterocyclic. In certain embodiments, the linker is about 1-24 atoms, 2-24, 3-24, 4-24, 5-24, 6-24, 6-18, 7-18, 8-18 atoms, 7-17, 8-17, 6-16, 7-16 or 8-16 atoms.

切断可能な連結基とは、細胞の外側で十分に安定であるが、標的細胞中に入ると、切断されて、リンカーが一緒に保持している２つの部分を放出するものである。好ましい実施形態において、切断可能な連結基は、対象の血液において、または第２の参照条件下（血液または血清において見出される条件を模倣または表すように選択され得る）よりも、標的細胞において、または第１の参照条件下（例えば、細胞内条件を模倣または表すように選択され得る）で、少なくとも約１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍またはそれより多く、または少なくとも約１００倍速く切断される。 A cleavable linking group is one that is sufficiently stable outside the cell, but once inside the target cell it is cleaved to release the two moieties held together by the linker. In a preferred embodiment, the cleavable linking group is in the subject's blood or in target cells rather than under a second reference condition (which may be selected to mimic or represent conditions found in blood or serum), or at least about 10-fold, 20-fold, 30-fold, 40-fold, 50-fold, 60-fold, 70-fold, 80-fold, under a first reference condition (e.g., can be selected to mimic or represent intracellular conditions); 90 times or more, or at least about 100 times faster.

切断可能な連結基は、切断剤、例えば、ｐＨ、酸化還元電位または分解性分子の存在の影響を受けやすい。一般に、切断剤は、血清または血液においてよりも細胞の内側で、より一般的であるか、またはより高いレベルもしくは活性で見出される。このような分解剤の例として、特定の基質のために選択される、または基質特異性を有さない酸化還元剤が挙げられ、例えば、酸化酵素もしくは還元酵素または還元によって酸化還元切断可能な連結基を分解できる、細胞中に存在する、メルカプタンなどの還元剤、エステラーゼ、エンドソームまたは酸性環境を作出できる薬剤、例えば、５以下のｐＨをもたらすもの、一般酸、ペプチダーゼ（基質特異的であり得る）およびホスファターゼとして作用することによって酸切断可能な連結基を加水分解もしくは分解できる酵素を含む。 Cleavable linking groups are susceptible to the presence of cleaving agents such as pH, redox potential or degradable molecules. In general, cleaving agents are more prevalent or found at higher levels or activity inside cells than in serum or blood. Examples of such degrading agents include redox agents that are selected for a particular substrate or have no substrate specificity, e.g. Reducing agents such as mercaptans, esterases, endosomes, or agents that can create an acidic environment, such as those that result in a pH of 5 or less, common acids, peptidases (which can be substrate-specific), present in cells that can degrade groups, and enzymes that can hydrolyze or degrade acid-cleavable linking groups by acting as phosphatases.

切断可能な連結基、例えば、ジスルフィド結合は、ｐＨの影響を受けやすい場合がある。ヒト血清のｐＨは７．４であるが、平均細胞内ｐＨはわずかに低く、約７．１～７．３の範囲である。エンドソームは、５．５～６．０の範囲のより酸性のｐＨを有し、リソソームは、およそ５．０のさらにより酸性のｐＨを有する。いくつかのリンカーは、好ましいｐＨで切断され、それによって、細胞の内側でリガンドからカチオン性脂質を細胞の所望のコンパートメント中に放出する切断可能な連結基を有するであろう。 Cleavable linking groups, such as disulfide bonds, can be pH sensitive. Human serum has a pH of 7.4, but the average intracellular pH is slightly lower, ranging from about 7.1 to 7.3. Endosomes have a more acidic pH in the range of 5.5-6.0, and lysosomes have an even more acidic pH of approximately 5.0. Some linkers will have a cleavable linking group that is cleaved at a preferred pH, thereby releasing the cationic lipid from the ligand inside the cell into the desired compartment of the cell.

リンカーは、特定の酵素によって切断可能である切断可能な連結基を含み得る。リンカー中に組み込まれる切断可能な連結基の種類は、標的化されるべき細胞に応じて変わり得る。例えば、肝臓標的化リガンドを、エステル基を含むリンカーを介してカチオン性脂質に連結できる。肝臓細胞は、エステラーゼが豊富であり、したがって、リンカーは、肝臓細胞において、エステラーゼが豊富ではない細胞種よりも効率的に切断される。エステラーゼが豊富な他の細胞種として、肺、腎皮質および精巣の細胞が挙げられる。 A linker may comprise a cleavable linking group that is cleavable by a particular enzyme. The type of cleavable linking group incorporated into the linker can vary depending on the cell to be targeted. For example, a liver-targeting ligand can be linked to a cationic lipid via a linker containing an ester group. Liver cells are rich in esterases, therefore linkers are cleaved more efficiently in liver cells than in cell types that are not rich in esterases. Other cell types rich in esterases include lung, renal cortical and testicular cells.

肝臓細胞および滑膜細胞などのペプチダーゼが豊富な細胞種を標的化する場合には、ペプチド結合を含有するリンカーを使用できる。 Linkers containing peptide bonds can be used when targeting peptidase-rich cell types such as liver cells and synoviocytes.

一般に、候補の切断可能な連結基の適合性は、分解剤（または条件）の、候補連結基を切断する能力を試験することによって評価できる。また、血液中で、または他の非標的組織と接触する場合に、切断に抵抗する能力について候補の切断可能な連結基を試験することも望ましいであろう。したがって、第１および第２の条件の間の切断に対する相対的感受性を決定でき、第１のものは、標的細胞において切断を示すように選択され、第２のものは、他の組織または生物学的流体、例えば、血液もしくは血清において切断を示すように選択される。評価は、無細胞系において、細胞において、細胞培養物において、臓器においてまたは組織培養物において、または動物全体において実施できる。細胞不含または培養条件において最初の評価を行うことおよび動物全体におけるさらなる評価によって確認することは、有用であり得る。好ましい実施形態において、有用な候補化合物は、血液もしくは血清（または細胞外条件を模倣するように選択されたインビトロ条件下で）と比較して、細胞において（または細胞内条件を模倣するように選択されたインビトロ条件下で）少なくとも約２、４、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または約１００倍速く切断される。 In general, the suitability of a candidate cleavable linking group can be assessed by testing the ability of a degrading agent (or condition) to cleave the candidate linking group. It may also be desirable to test candidate cleavable linking groups for their ability to resist cleavage in blood or when in contact with other non-target tissues. Thus, relative susceptibility to cleavage can be determined between first and second conditions, the first selected to exhibit cleavage in the target cell and the second selected for other tissues or biology. are selected to exhibit cleavage in biological fluids such as blood or serum. Assessment can be performed in cell-free systems, in cells, in cell culture, in organs or in tissue culture, or in whole animals. It may be helpful to perform an initial evaluation in cell-free or culture conditions and confirm by further evaluation in whole animals. In preferred embodiments, useful candidate compounds are administered in cells (or selected to mimic intracellular conditions) as compared to blood or serum (or under in vitro conditions selected to mimic extracellular conditions). cleaved at least about 2, 4, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, or about 100 times faster under controlled in vitro conditions.

ｉ．酸化還元切断可能な連結基
ある特定の実施形態において、切断可能な連結基は、還元または酸化の際に切断される酸化還元切断可能な連結基である。還元的に切断可能な連結基の例として、ジスルフィド連結基（－Ｓ－Ｓ－）がある。候補の切断可能な連結基が適した「還元的に切断可能な連結基」であるか、または、例えば、特定のｉＲＮＡ部分および特定の標的化剤とともに使用するのに適しているか否かを決定するために、本明細書に記載される方法に目を向けることができる。例えば、細胞、例えば、標的細胞において観察されるであろう切断の速度を模倣する、当技術分野で公知の試薬を使用してジチオトレイトール（ＤＴＴ）または他の還元剤とともにインキュベートすることによって、候補を評価できる。候補はまた、血液または血清条件を模倣するように選択された条件下で評価できる。あるものでは、候補化合物は、血液において最大で約１０％切断される。他の実施形態において、有用な候補化合物は、血液（または細胞外条件を模倣するように選択されたインビトロ条件下）と比較して、細胞において（または細胞内条件を模倣するように選択されたインビトロ条件下で）少なくとも約２、４、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または約１００倍速く分解される。候補化合物の切断の速度は、細胞外媒体を模倣するように選択された条件と比較して、細胞内媒体を模倣するように選択された条件下で標準酵素動態学アッセイを使用して決定できる。 i. Redox Cleavable Linking Groups In certain embodiments, the cleavable linking group is a redox cleavable linking group that is cleaved upon reduction or oxidation. An example of a reductively cleavable linking group is a disulfide linking group (-SS-). Determine if a candidate cleavable linking group is a suitable "reductively cleavable linking group" or is suitable for use with, for example, a particular iRNA moiety and a particular targeting agent To do so, one can turn to the methods described herein. For example, by incubating with dithiothreitol (DTT) or other reducing agents using reagents known in the art that mimic the rate of cleavage that would be observed in cells, e.g., target cells. Can evaluate candidates. Candidates can also be evaluated under conditions selected to mimic blood or serum conditions. In some, candidate compounds are cleaved up to about 10% in blood. In other embodiments, useful candidate compounds are in cells (or selected to mimic intracellular conditions) compared to blood (or in vitro conditions selected to mimic extracellular conditions). under in vitro conditions) at least about 2, 4, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, or about 100 times faster. The rate of cleavage of a candidate compound can be determined using standard enzyme kinetic assays under conditions selected to mimic the intracellular medium compared to conditions selected to mimic the extracellular medium. .

ｉｉ．リン酸ベースの切断可能な連結基
ある特定の実施形態において、切断可能なリンカーは、リン酸ベースの切断可能な連結基を含む。リン酸ベースの切断可能な連結基は、リン酸基を分解または加水分解する薬剤によって切断される。細胞中のリン酸基を切断する薬剤の例として、細胞中のホスファターゼなどの酵素がある。リン酸ベースの連結基の例として、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲｋ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＯＲｋ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＳＲｋ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲｋ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲｋ）－Ｓ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲｋ）－Ｓ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＯＲｋ）－Ｓ－、－Ｓ－Ｐ（Ｓ）（ＯＲｋ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（Ｒｋ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（Ｒｋ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（Ｒｋ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｓ）（Ｒｋ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（Ｒｋ）－Ｓ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（Ｒｋ）－Ｓ－がある。好ましい実施形態として、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＯＨ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＳＨ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－Ｓ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－Ｓ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＯＨ）－Ｓ－、－Ｓ－Ｐ（Ｓ）（ＯＨ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（Ｈ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（Ｈ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（Ｈ）－Ｏ、－Ｓ－Ｐ（Ｓ）（Ｈ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（Ｈ）－Ｓ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（Ｈ）－Ｓ－がある。好ましい実施形態として、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－Ｏ－がある。これらの候補は、上記のものと類似の方法を使用して評価できる。 ii. Phosphate-Based Cleavable Linking Groups In certain embodiments, the cleavable linker comprises a phosphate-based cleavable linking group. Phosphate-based cleavable linking groups are cleaved by agents that degrade or hydrolyze the phosphate group. Examples of agents that cleave phosphate groups in cells are enzymes such as phosphatases in cells. Examples of phosphate-based linking groups include -OP(O)(ORk)-O-, -OP(S)(ORk)-O-, -OP(S)(SRk)-O -, -SP (O) (ORk) -O-, -OP (O) (ORk) -S-, -SP (O) (ORk) -S-, -OP (S ) (ORk) -S-, -SP (S) (ORk) -O-, -OP (O) (Rk) -O-, -OP (S) (Rk) -O-, -SP (O) (Rk) -O-, -SP (S) (Rk) -O-, -SP (O) (Rk) -S-, -OP (S) ( Rk)-S-. As preferred embodiments, -O-P(O)(OH)-O-, -O-P(S)(OH)-O-, -O-P(S)(SH)-O-, -S- P(O)(OH)-O-, -OP(O)(OH)-S-, -S-P(O)(OH)-S-, -OP(S)(OH)- S-, -SP (S) (OH) -O-, -OP (O) (H) -O-, -OP (S) (H) -O-, -SP ( O)(H)-O, -SP(S)(H)-O-, -SP(O)(H)-S-, -OP(S)(H)-S- be. A preferred embodiment is -OP(O)(OH)-O-. These candidates can be evaluated using methods similar to those described above.

ｉｉｉ．酸切断可能な連結基
ある特定の実施形態において、切断可能なリンカーは、酸切断可能な連結基を含む。酸切断可能な連結基は、酸性条件下で切断される連結基である。好ましい実施形態において、酸切断可能な連結基は、約６．５以下の（例えば、約６．０、５．７５、５．５、５．２５、５．０またはそれより低い）ｐＨを有する酸性環境において、または一般酸として作用できる酵素などの薬剤によって切断される。細胞では、特定の低ｐＨオルガネラ、例えば、エンドソームおよびリソソームは、酸切断可能な連結基のための切断環境を提供できる。酸切断可能な連結基の例として、それだけには限らないが、ヒドラゾン、エステルおよびアミノ酸のエステルが挙げられる。酸切断可能な基は、一般式－Ｃ＝ＮＮ－、Ｃ（Ｏ）Ｏまたは－ＯＣ（Ｏ）を有し得る。好ましい実施形態は、エステルの酸素と結合している炭素（アルコキシ基）が、アリール基、置換アルキル基または第三級アルキル基、例えば、ジメチルペンチルもしくはｔ－ブチルである場合である。これらの候補は、上記のものと類似の方法を使用して評価できる。 iii. Acid Cleavable Linking Groups In certain embodiments, the cleavable linker comprises an acid cleavable linking group. An acid-cleavable linking group is a linking group that is cleaved under acidic conditions. In preferred embodiments, the acid-cleavable linking group has a pH of about 6.5 or less (eg, about 6.0, 5.75, 5.5, 5.25, 5.0 or lower) Cleaved in acidic environments or by agents such as enzymes that can act as general acids. In cells, certain low pH organelles, such as endosomes and lysosomes, can provide the cleavage environment for acid-cleavable linking groups. Examples of acid-cleavable linking groups include, but are not limited to, hydrazones, esters and esters of amino acids. Acid-cleavable groups may have the general formula -C=NN-, C(O)O or -OC(O). A preferred embodiment is when the carbon (alkoxy group) attached to the oxygen of the ester is an aryl group, substituted alkyl group or tertiary alkyl group such as dimethylpentyl or t-butyl. These candidates can be evaluated using methods similar to those described above.

ｉｖ．エステルベースの切断可能な連結基
ある特定の実施形態において、切断可能なリンカーは、エステルベースの切断可能な連結基を含む。エステルベースの切断可能な連結基は、細胞中のエステラーゼおよびアミダーゼなどの酵素によって切断される。エステルベースの切断可能な連結基の例として、それだけには限らないが、アルキレン、アルケニレンおよびアルキニレン基のエステルが挙げられる。エステル切断可能な連結基は、一般式－Ｃ（Ｏ）Ｏ－または－ＯＣ（Ｏ）－を有する。これらの候補は、上記のものと類似の方法を使用して評価できる。 iv. Ester-Based Cleavable Linking Groups In certain embodiments, the cleavable linker comprises an ester-based cleavable linking group. Ester-based cleavable linking groups are cleaved by enzymes such as esterases and amidases in cells. Examples of ester-based cleavable linking groups include, but are not limited to, esters of alkylene, alkenylene and alkynylene groups. Ester cleavable linking groups have the general formula -C(O)O- or -OC(O)-. These candidates can be evaluated using methods similar to those described above.

ｖ．ペプチドベースの切断可能な連結基
さらに別の実施形態において、切断可能なリンカーは、ペプチドベースの切断可能な連結基を含む。ペプチドベースの切断可能な連結基は、細胞中のペプチダーゼおよびプロテアーゼなどの酵素によって切断される。ペプチドベースの切断可能な連結基は、アミノ酸の間で形成され、オリゴペプチド（例えば、ジペプチド、トリペプチドなど）およびポリペプチドをもたらすペプチド結合である。ペプチドベースの切断可能な基は、アミド基（－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－）を含まない。アミド基は、任意のアルキレン、アルケニレンまたはアルキネレンの間で形成され得る。ペプチド結合は、アミノ酸の間で形成され、ペプチドおよびタンパク質をもたらすアミド結合の特別なタイプである。ペプチドベースの切断基は、一般に、アミノ酸の間で形成され、ペプチドおよびタンパク質をもたらす、ペプチド結合（すなわち、アミド結合）に限定され、アミド官能基全体を含まない。ペプチドベースの切断可能な連結基は、一般式－ＮＨＣＨＲＡＣ（Ｏ）ＮＨＣＨＲＢＣ（Ｏ）－、（式中、ＲＡおよびＲＢは、２つの隣接するアミノ酸のＲ基である）を有する。これらの候補は、上記のものと類似の方法を使用して評価できる。 v. Peptide-Based Cleavable Linking Groups In yet another embodiment, the cleavable linker comprises a peptide-based cleavable linking group. Peptide-based cleavable linkers are cleaved by enzymes such as peptidases and proteases in cells. Peptide-based cleavable linking groups are peptide bonds formed between amino acids resulting in oligopeptides (eg, dipeptides, tripeptides, etc.) and polypeptides. Peptide-based cleavable groups do not include amide groups (--C(O)NH--). Amido groups can be formed between any alkylene, alkenylene or alkynylene. A peptide bond is a special type of amide bond that is formed between amino acids and gives rise to peptides and proteins. Peptide-based cleaving groups are generally limited to peptide bonds (ie, amide bonds), which are formed between amino acids, resulting in peptides and proteins, and do not include the entire amide functionality. Peptide-based cleavable linking groups have the general formula -NHCHRAC(O)NHCHRBC(O)-, where RA and RB are the R groups of two adjacent amino acids. These candidates can be evaluated using methods similar to those described above.

一部の実施形態において、本発明のｉＲＮＡは、リンカーを介して炭水化物にコンジュゲートされる。本発明の組成物および方法のリンカーを有するｉＲＮＡ炭水化物コンジュゲートの限定されるわけではない例として、それだけには限らないが、 In some embodiments, an iRNA of the invention is conjugated to a carbohydrate via a linker. Non-limiting examples of iRNA carbohydrate conjugates with linkers of the compositions and methods of the invention include, but are not limited to:

Figure 2023521604000034
Figure 2023521604000035
Figure 2023521604000036
 ［ＸまたはＹのうち一方が、オリゴヌクレオチドである場合は、もう一方は、水素である］
が挙げられる。
Figure 2023521604000034
Figure 2023521604000035
Figure 2023521604000036
 [If one of X or Y is an oligonucleotide, the other is hydrogen]
are mentioned.

本発明の組成物および方法のある特定の実施形態において、リガンドは、二価または三価分岐リンカーを介して付着された１つまたは複数の「ＧａｌＮＡｃ」（Ｎ－アセチルガラクトサミン）誘導体である。 In certain embodiments of the compositions and methods of the present invention, the ligand is one or more "GalNAc" (N-acetylgalactosamine) derivatives attached via bivalent or trivalent branched linkers.

ある特定の実施形態において、本発明のｄｓＲＮＡは、式（ＸＬＶ）～（ＸＬＶＩ）のいずれかで示される構造の群から選択される二価または三価分岐リンカーにコンジュゲートされる： In certain embodiments, the dsRNA of the invention is conjugated to a bivalent or trivalent branched linker selected from the group of structures represented by any of formulas (XLV)-(XLVI):

Figure 2023521604000037
［式中、
ｑ２Ａ、ｑ２Ｂ、ｑ３Ａ、ｑ３Ｂ、ｑ４Ａ、ｑ４Ｂ、ｑ５Ａ、ｑ５Ｂおよびｑ５Ｃは、各出現について独立に、０～２０を表し、反復単位は、同一である場合も、異なる場合もあり、
Ｐ２Ａ、Ｐ２Ｂ、Ｐ３Ａ、Ｐ３Ｂ、Ｐ４Ａ、Ｐ４Ｂ、Ｐ５Ａ、Ｐ５Ｂ、Ｐ５Ｃ、Ｔ２Ａ、Ｔ２Ｂ、Ｔ３Ａ、Ｔ３Ｂ、Ｔ４Ａ、Ｔ４Ｂ、Ｔ４Ａ、Ｔ５Ｂ、Ｔ５Ｃは、各出現について各々独立に、存在しない、ＣＯ、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、ＯＣ（Ｏ）、ＮＨＣ（Ｏ）、ＣＨ２、ＣＨ２ＮＨまたはＣＨ２Ｏであり、
Ｑ２Ａ、Ｑ２Ｂ、Ｑ３Ａ、Ｑ３Ｂ、Ｑ４Ａ、Ｑ４Ｂ、Ｑ５Ａ、Ｑ５Ｂ、Ｑ５Ｃは、各出現について独立に、存在しない、アルキレン、置換アルキレンであり、１つまたは複数のメチレンは、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、ＳＯ２、Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｒ’）＝Ｃ（Ｒ’’）、Ｃ≡ＣまたはＣ（Ｏ）のうち１つまたは複数によって中断または終結され得る、
Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ａ、Ｒ３Ｂ、Ｒ４Ａ、Ｒ４Ｂ、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂ、Ｒ５Ｃは、各出現について各々独立に、存在しない、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２、Ｃ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、ＮＨＣＨ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒａ）－ＮＨ－、ＣＯ、ＣＨ＝Ｎ－Ｏ、
Figure 2023521604000037
 [In the formula,
q2A, q2B, q3A, q3B, q4A, q4B, q5A, q5B and q5C independently for each occurrence represents 0-20 and the repeating units may be the same or different;
P2A , P2B , P3A , P3B , P4A, P4B , P5A , P5B , P5C , T2A, T2B, T3A , T3B , T4A , T4B , T4A , T5B , T 5C is independently for each occurrence absent CO, NH, O, S, OC(O), NHC(O), CH2 , CH2NH or CH2O ;
Q 2A , Q 2B , Q 3A , Q 3B , Q 4A , Q 4B , Q 5A , Q 5B , Q 5C is independently for each occurrence absent, alkylene, substituted alkylene, one or more methylene is interrupted by one or more of O, S, S(O), SO 2 , N(R N ), C(R′)=C(R″), C≡C or C(O) or can be terminated
R 2A , R 2B , R 3A , R 3B , R 4A , R 4B , R 5A , R 5B , R 5C are each independently absent, NH, O, S, CH 2 , C(O ) O, C(O)NH, NHCH(R a )C(O), —C(O)—CH(R a )—NH—, CO, CH═N—O,

Figure 2023521604000038
またはヘテロシクリルであり、
Ｌ２Ａ、Ｌ２Ｂ、Ｌ３Ａ、Ｌ３Ｂ、Ｌ４Ａ、Ｌ４Ｂ、Ｌ５Ａ、Ｌ５ＢおよびＬ５Ｃは、リガンド、すなわち、各出現について各々独立に、単糖（ＧａｌＮＡｃなど）、二糖、三糖、四糖、オリゴ糖または多糖を表し、Ｒａは、Ｈまたはアミノ酸側鎖である]。三価コンジュゲート性ＧａｌＮＡｃ誘導体は、標的遺伝子、例えば、式（ＸＬＩＸ）のもの：
Figure 2023521604000038
 or heterocyclyl,
L 2A , L 2B , L 3A , L 3B , L 4A , L 4B , L 5A , L 5B and L 5C are ligands, i. represents a sugar, tetrasaccharide, oligosaccharide or polysaccharide, and R a is H or an amino acid side chain]. A trivalent conjugated GalNAc derivative is a target gene, e.g., of formula (XLIX):

Figure 2023521604000039
［式中、Ｌ５Ａ、Ｌ５ＢおよびＬ５Ｃは、単糖、例えば、ＧａｌＮＡｃ誘導体を表す］
の発現を阻害するために、ＲＮＡｉ剤とともに使用するために特に有用である。
Figure 2023521604000039
 [wherein L 5A , L 5B and L 5C represent monosaccharides such as GalNAc derivatives]
is particularly useful for use with RNAi agents to inhibit the expression of

ＧａｌＮＡｃ誘導体をコンジュゲートする適した二価および三価分岐リンカー基の例として、それだけには限らないが、式ＩＩ、ＶＩＩ、ＸＩ、ＸおよびＸＩＩＩのような上記で列挙された構造が挙げられる。 Examples of suitable divalent and trivalent branched linker groups to conjugate GalNAc derivatives include, but are not limited to, the structures listed above such as Formulas II, VII, XI, X and XIII.

ＲＮＡコンジュゲートの調製を教示する代表的な米国特許として、それだけには限らないが、米国特許第４，８２８，９７９号、同４，９４８，８８２号、同５，２１８，１０５号、同５，５２５，４６５号、同５，５４１，３１３号、同５，５４５，７３０号、同５，５５２，５３８号、同５，５７８，７１７号、同５，５８０，７３１号、同５，５９１，５８４号、同５，１０９，１２４号、同５，１１８，８０２号、同５，１３８，０４５号、同５，４１４，０７７号、同５，４８６，６０３号、同５，５１２，４３９号、同５，５７８，７１８号、同５，６０８，０４６号、同４，５８７，０４４号、同４，６０５，７３５号、同４，６６７，０２５号、同４，７６２，７７９号、同４，７８９，７３７号、同４，８２４，９４１号、同４，８３５，２６３号、同４，８７６，３３５号、同４，９０４，５８２号、同４，９５８，０１３号、同５，０８２，８３０号、同５，１１２，９６３号、同５，２１４，１３６号、同５，０８２，８３０号、同５，１１２，９６３号、同５，２１４，１３６号、同５，２４５，０２２号、同５，２５４，４６９号、同５，２５８，５０６号、同５，２６２，５３６号、同５，２７２，２５０号、同５，２９２，８７３号、同５，３１７，０９８号、同５，３７１，２４１号、同５，３９１，７２３号、同５，４１６，２０３号、同５，４５１，４６３号、同５，５１０，４７５号、同５，５１２，６６７号、同５，５１４，７８５号、同５，５６５，５５２号、同５，５６７，８１０号、同５，５７４，１４２号、同５，５８５，４８１号、同５，５８７，３７１号、同５，５９５，７２６号、同５，５９７，６９６号、同５，５９９，９２３号、同５，５９９，９２８号、同５，６８８，９４１号、同６，２９４，６６４号、同６，３２０，０１７号、同６，５７６，７５２号、同６，７８３，９３１号、同６，９００，２９７号、同７，０３７，６４６号および同８，１０６，０２２号が挙げられ、それらの各々の内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。 Representative U.S. patents teaching the preparation of RNA conjugates include, but are not limited to, U.S. Pat. 525,465, 5,541,313, 5,545,730, 5,552,538, 5,578,717, 5,580,731, 5,591, 584, 5,109,124, 5,118,802, 5,138,045, 5,414,077, 5,486,603, 5,512,439 , 5,578,718, 5,608,046, 4,587,044, 4,605,735, 4,667,025, 4,762,779, 4,789,737, 4,824,941, 4,835,263, 4,876,335, 4,904,582, 4,958,013, 5, 082,830, 5,112,963, 5,214,136, 5,082,830, 5,112,963, 5,214,136, 5,245, 022, 5,254,469, 5,258,506, 5,262,536, 5,272,250, 5,292,873, 5,317,098 , 5,371,241, 5,391,723, 5,416,203, 5,451,463, 5,510,475, 5,512,667, 5,514,785, 5,565,552, 5,567,810, 5,574,142, 5,585,481, 5,587,371, 5, 595,726, 5,597,696, 5,599,923, 5,599,928, 5,688,941, 6,294,664, 6,320, 017, 6,576,752, 6,783,931, 6,900,297, 7,037,646 and 8,106,022, each of which The entire contents are incorporated herein by reference.

所与の化合物において全ての位置について均一に修飾される必要はなく、実際、前記修飾のうち２つ以上を単一化合物中に、またはさらにｉＲＮＡ内の単一ヌクレオシドに組み込むことができる。本発明はまた、キメラ化合物であるｉＲＮＡ化合物を含む。 All positions need not be uniformly modified in a given compound, indeed two or more of said modifications can be incorporated into a single compound or even into a single nucleoside within the iRNA. The present invention also includes iRNA compounds that are chimeric compounds.

本発明との関連で「キメラ」ｉＲＮＡ化合物または「キメラ」とは、各々、少なくとも１つのモノマー単位、すなわち、ｄｓＲＮＡ化合物の場合にはヌクレオチドで構成されている、２つ以上の化学的に別個の領域を含有する、ｉＲＮＡ化合物、好ましくは、ｄｓＲＮＡ剤である。これらのｉＲＮＡは通常、ｉＲＮＡに、ヌクレアーゼ分解に対する耐性の増大、細胞取り込みの増大または標的核酸に対する結合親和性の増大を付与するようにＲＮＡが修飾される少なくとも１つの領域を含有する。ｉＲＮＡのさらなる領域は、ＲＮＡ：ＤＮＡまたはＲＮＡ：ＲＮＡハイブリッドを切断可能な酵素の基質として働くことができる。例として、ＲＮアーゼＨは、ＲＮＡ：ＤＮＡ二本鎖のＲＮＡ鎖を切断する細胞性エンドヌクレアーゼである。したがって、ＲＮアーゼＨの活性化は、ＲＮＡ標的の切断をもたらし、それによって、遺伝子発現のｉＲＮＡ阻害の効率を大きく増強する。結果的に、同一標的領域にハイブリダイズするホスホロチオエートデオキシｄｓＲＮＡと比較して、キメラｄｓＲＮＡが使用される場合により短いｉＲＮＡで比較できる結果を得ることができることが多い。ＲＮＡ標的の切断は、ゲル電気泳動、必要に応じて、当技術分野で公知の関連する核酸ハイブリダイゼーション技術によって日常的に検出できる。 A "chimeric" iRNA compound or "chimera" in the context of the present invention refers to two or more chemically distinct An iRNA compound, preferably a dsRNA agent, containing the region. These iRNAs usually contain at least one region in which the RNA is modified to confer increased resistance to nuclease degradation, increased cellular uptake, or increased binding affinity for the target nucleic acid. Additional regions of the iRNA can serve as substrates for enzymes capable of cleaving RNA:DNA or RNA:RNA hybrids. As an example, RNase H is a cellular endonuclease that cleaves the RNA strand of an RNA:DNA duplex. Activation of RNase H therefore results in cleavage of the RNA target, thereby greatly enhancing the efficiency of iRNA inhibition of gene expression. As a result, comparable results can often be obtained with shorter iRNAs when chimeric dsRNAs are used compared to phosphorothioate deoxy dsRNAs hybridizing to the same target region. Cleavage of an RNA target can be routinely detected by gel electrophoresis and, optionally, related nucleic acid hybridization techniques known in the art.

ある特定の例では、ｉＲＮＡのＲＮＡは、非リガンド基によって修飾できる。ｉＲＮＡの活性、細胞分布または細胞取り込みを増強するために、いくつかの非リガンド分子がｉＲＮＡにコンジュゲートされており、このようなコンジュゲーションを実施するための手順は、科学文献において利用可能である。このような非リガンド部分には、コレステロールなどの脂質部分［Kubo, T. et al., Biochem. Biophys. Res. Comm., 2007, 365(1):54-61、Letsinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86:6553］、コール酸（Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1994, 4:1053）、チオエーテル、例えば、ヘキシル－Ｓ－トリチルチオール（Manoharan et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 1992, 660:306、Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Let., 1993, 3:2765）、チオコレステロール（Oberhauser et al., Nucl. Acids Res., 1992, 20:533）、脂肪鎖、例えば、ドデカンジオールもしくはウンデシル残基（Saison-Behmoaras et al., EMBO J., 1991, 10:111、Kabanov et al., FEBS Lett., 1990, 259:327; Svinarchuk et al., Biochimie, 1993, 75:49）、リン脂質、例えば、ジ－ヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロールもしくはトリエチルアンモニウム１，２－ジ－Ｏ－ヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロ－３－Ｈ－ホスホネート（Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651、Shea et al., Nucl. Acids Res., 1990, 18:3777）、ポリアミンもしくはポリエチレングリコール鎖（Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14:969）またはアダマンタン酢酸（Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651）、パルミチル部分（Mishra et al., Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264:229）またはオクタデシルアミンもしくはヘキシルアミノ－カルボニル－オキシコレステロール部分（Crooke et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277:923）が含まれていた。このようなＲＮＡコンジュゲートの調製を教示する代表的な米国特許は、上記で列挙されている。通常のコンジュゲーションプロトコールは、配列の１つまたは複数の位置にアミノリンカーを有するＲＮＡの合成を含む。次いで、適切なカップリングまたは活性化試薬を使用して、アミノ基が、コンジュゲートされている分子と反応する。コンジュゲーション反応は、ＲＮＡがまだ固体支持体に結合している状態で、または溶液相でＲＮＡが切断された後に実施できる。ＨＰＬＣによるＲＮＡコンジュゲートの精製によって、通常、純粋なコンジュゲートが得られる。 In certain examples, the RNA of an iRNA can be modified with non-ligand groups. Several non-ligand molecules have been conjugated to iRNAs to enhance iRNA activity, cellular distribution or cellular uptake, and procedures for performing such conjugations are available in the scientific literature. . Such non-ligand moieties include lipid moieties such as cholesterol [Kubo, T. et al., Biochem. Biophys. Res. Comm., 2007, 365(1):54-61, Letsinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86:6553], cholic acid (Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1994, 4:1053), thioethers such as hexyl-S-tritylthiol ( Acad. Sci., 1992, 660:306, Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Let., 1993, 3:2765), thiocholesterol (Oberhauser et al., Nucl. Acids Res., 1992, 20:533), fatty chains such as dodecanediol or undecyl residues (Saison-Behmoaras et al., EMBO J., 1991, 10:111, Kabanov et al., FEBS Lett., 1990 Svinarchuk et al., Biochimie, 1993, 75:49), phospholipids such as di-hexadecyl-rac-glycerol or triethylammonium 1,2-di-O-hexadecyl-rac-glycero-3- H-phosphonates (Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651; Shea et al., Nucl. Acids Res., 1990, 18:3777), polyamine or polyethylene glycol chains (Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14:969) or adamantane acetic acid (Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651), a palmityl moiety (Mishra et al., Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264:229) or octadecyl An amine or hexylamino-carbonyl-oxycholesterol moiety (Crooke et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277:923) was included. Representative US patents teaching the preparation of such RNA conjugates are listed above. A typical conjugation protocol involves synthesizing RNA with an amino linker at one or more positions of the sequence. The amino group is then reacted with the molecule being conjugated using a suitable coupling or activating reagent. The conjugation reaction can be performed while the RNA is still attached to the solid support or after the RNA has been cleaved in the solution phase. Purification of RNA conjugates by HPLC usually yields pure conjugates.

Ｖ．本開示のＲＮＡｉ剤のデリバリー V. Delivery of RNAi Agents of the Disclosure

細胞、例えば、対象内の細胞、例えば、ヒト対象（例えば、それを必要とする対象、例えば、ＭＡＰＴ関連障害、例えば、アルツハイマー病、ＦＴＤ、ＰＳＰ、または別のタウオパチーを有する対象）内の細胞への本開示のＲＮＡｉ剤のデリバリーは、いくつかの異なる方法において達成することができる。例えば、デリバリーは、細胞をインビトロまたはインビボのどちらかにおいて本開示のＲＮＡｉ剤と接触させることによって実施され得る。インビボデリバリーは、ＲＮＡｉ剤、例えば、ｄｓＲＮＡを含む組成物を対象に投与することによって直接的に実施してもよい。あるいは、インビボデリバリーは、ＲＮＡｉ剤をコードしその発現を誘導する１つまたは複数のベクターを投与することによって間接的に実施してもよい。これらの代替策は、下記においてさらに説明される。 To a cell, e.g., a cell within a subject, e.g., a cell within a human subject (e.g., a subject in need thereof, e.g., a subject with a MAPT-related disorder, e.g., Alzheimer's disease, FTD, PSP, or another tauopathy) Delivery of the RNAi agents of this disclosure can be accomplished in a number of different ways. For example, delivery can be performed by contacting a cell either in vitro or in vivo with an RNAi agent of this disclosure. In vivo delivery may be performed directly by administering a composition comprising the RNAi agent, eg, dsRNA, to the subject. Alternatively, in vivo delivery may be performed indirectly by administering one or more vectors encoding the RNAi agent and directing its expression. These alternatives are described further below.

概して、核酸分子をデリバリーする任意の方法（インビトロまたはインビボ）は、本開示のＲＮＡｉ剤の使用に適合させることができる［例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Akhtar S. and Julian RL., (1992) Trends Cell. Biol. 2(5):139-144およびＷＯ９４／０２５９５を参照されたい］。インビボデリバリーの場合、ＲＮＡｉ剤をデリバリーするために考慮する要因としては、例えば、デリバリーされた薬剤の生物学的安定性、非特異的効果の防止、および標的組織におけるデリバリーされた薬剤の蓄積が挙げられる。ＲＮＡｉ剤の非特異的効果は、局所投与、例えば、組織への直接注入もしくは移植または調製物の局所投与によって最小限に抑えることができる。処置部位への局所投与は、薬剤の局所濃度を最大化し、薬剤によって害され得るかまたは薬剤を分解することができる全身組織への薬剤の曝露を制限し、投与されるＲＮＡｉ剤のより少ない合計用量を可能にする。いくつかの研究は、ＲＮＡｉ剤が局所的に投与された場合での遺伝子産物のノックダウンの成功を示している。例えば、カニクイザルでの硝子体注入によるＶＥＧＦ ｄｓＲＮＡの眼内デリバリー［Tolentino, MJ. et al., (2004) Retina 24:132-138］およびマウスでの網膜下注入［Reich, SJ. et al. (2003) Mol. Vis. 9:210-216］は、両方とも、加齢黄斑変性症の実験モデルにおいて、新生血管形成を予防することが示された。加えて、マウスへのｄｓＲＮＡの直接的腫瘍内注入は、腫瘍体積を減少させ［Pille, J. et al. (2005) Mol. Ther. 11:267-274］、ならびに腫瘍を有するマウスの生存を長引かせることができる［Kim, WJ. et al., (2006) Mol. Ther. 14:343-350; Li, S. et al., (2007) Mol. Ther. 15:515-523］。ＲＮＡ干渉は、直接注入によるＣＮＳへの［Dorn, G. et al., (2004) Nucleic Acids 32:e49; Tan, PH. et al. (2005) Gene Ther. 12:59-66; Makimura, H. et al. (2002) BMC Neurosci. 3:18; Shishkina, GT., et al. (2004) Neuroscience 129:521-528; Thakker, ER., et al. (2004) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101:17270-17275; Akaneya,Y., et al. (2005) J. Neurophysiol. 93 :594-602］、および鼻腔内投与による肺への［Howard, KA. et al., (2006) Mol. Ther. 14:476-484; Zhang, X. et al., (2004) J. Biol. Chem. 279:10677-10684; Bitko, V. et al., (2005) Nat. Med. 11:50-55］、局所デリバリーによる成功も示している。疾患の処置のためにＲＮＡｉ剤を全身投与する場合、ＲＮＡを修飾することができ、またはその代わりに、薬物デリバリーシステムを使用してデリバリーすることができ；両方の方法は、インビボでのエンドヌクレアーゼおよびエクソヌクレアーゼによるｄｓＲＮＡの急速な分解を防ぐように機能する。ＲＮＡまたは医薬担体の修飾も、標的組織へのＲＮＡｉ剤の標的化を可能にすることができ、望ましくないオフターゲット効果を避けることができる（例えば、理論に束縛されることを望むわけではないが、本明細書において説明されるＧＮＡの使用は、ｄｓＲＮＡのシード領域を不安定化することが特定されており、そのようなオフターゲット効果は、そのようなシード領域の不安定化によって著しく弱められるため、結果として、オフターゲット効果と比較したときのオンターゲットの有効性に対する、そのようなｄｓＲＮＡの優先性を高める）。ＲＮＡｉ剤は、細胞取り込みを増強し、分解を防ぐように、コレステロールなどの親油性基への化学的コンジュゲーションによって修飾することができる。例えば、親油性コレステロール部分にコンジュゲートさせたＡｐｏＢへと誘導されたＲＮＡｉ剤を、マウスに全身的に注入したところ、結果として、肝臓および空腸の両方においてａｐｏＢ ｍＲＮＡのノックダウンを生じた［Soutschek, J. et al., (2004) Nature 432:173-178］。アプタマーへのＲＮＡｉ剤のコンジュゲーションは、前立腺がんのマウスモデルにおいて腫瘍の成長を阻害し、腫瘍縮小を媒介することが分かっている［McNamara, JO. et al., (2006) Nat. Biotechnol. 24:1005-1015］。代替の実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、薬物デリバリーシステム、例えば、ナノ粒子、デンドリマー、ポリマー、リポソーム、またはカチオン性デリバリーシステムなどを使用してデリバリーすることができる。正に帯電したカチオン性デリバリーシステムは、分子ＲＮＡｉ剤（負に帯電した）の結合を促進し、負に帯電した細胞膜での相互作用も高め、それにより、細胞によるＲＮＡｉ剤の効率的な取り込みを可能にする。カチオン性脂質、デンドリマー、またはポリマーは、ＲＮＡｉ剤に結合することができるか、またはＲＮＡｉ剤を封入するベシクルまたはミセルを形成するように誘導することができる［例えば、Kim SH. et al., (2008) Journal of Controlled Release 129(2):107-116を参照されたい］。ベシクルまたはミセルの形成はさらに、全身投与したときのＲＮＡｉ剤の分解を防ぐ。カチオン性ＲＮＡｉ剤複合体を作製および投与する方法は、十分に当業者の能力の範囲内である［例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Sorensen, DR., et al. (2003) J. Mol. Biol 327:761-766; Verma, UN. et al., (2003) Clin. Cancer Res. 9:1291-1300; Arnold, AS et al. (2007) J. Hypertens. 25:197-205を参照されたい］。ＲＮＡｉ剤の全身デリバリーにとって有用な薬物デリバリーシステムのいくつかの非限定的な例としては、ＤＯＴＡＰ［Sorensen, DR., et al (2003), supra; Verma, UN. et al., (2003), supra］、オリゴフェクタミン（Ｏｌｉｇｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ）、「固体核酸脂質粒子」［Zimmermann, TS. et al., (2006) Nature 441:111-114］、カルジオリピン［Chien, PY. et al., (2005) Cancer Gene Ther. 12:321-328; Pal, A. et al., (2005) Int J. Oncol. 26:1087-1091］、ポリエチレンミン［Bonnet ME. et al., (2008) Pharm. Res. Aug 16 Epub ahead of print; Aigner, A. (2006) J. Biomed. Biotechnol. 71659］、Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ（ＲＧＤ）ペプチド［Liu, S. (2006) Mol. Pharm. 3:472-487］、およびポリアミドアミン［Tomalia, DA. et al., (2007) Biochem. Soc. Trans. 35:61-67; Yoo, H. et al., (1999) Pharm. Res. 16:1799-1804］が挙げられる。一部の実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、全身投与のためにシクロデキストリンと複合体を形成する。投与の方法およびＲＮＡｉ剤とシクロデキストリンとによる医薬組成物は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第７，４２７，６０５号に見出すことができる。 Generally, any method (in vitro or in vivo) of delivering nucleic acid molecules can be adapted for use with the RNAi agents of the present disclosure [e.g., Akhtar S. and Julian, which is incorporated herein by reference in its entirety] RL., (1992) Trends Cell. Biol. 2(5):139-144 and WO 94/02595]. For in vivo delivery, factors to consider for delivering an RNAi agent include, for example, biostability of the delivered agent, prevention of non-specific effects, and accumulation of the delivered agent in target tissues. be done. Non-specific effects of RNAi agents can be minimized by local administration, eg, direct injection or implantation into tissue or local administration of preparations. Local administration to the treatment site maximizes local concentration of the drug, limits exposure of the drug to systemic tissues that can be harmed by the drug or can degrade the drug, and results in a lower total RNAi agent administered. Allow dose. Several studies have shown successful knockdown of gene products when RNAi agents are administered locally. For example, intraocular delivery of VEGF dsRNA by vitreous injection in cynomolgus monkeys [Tolentino, MJ. et al., (2004) Retina 24:132-138] and subretinal injection in mice [Reich, SJ. 2003) Mol. Vis. 9:210-216] were both shown to prevent neovascularization in an experimental model of age-related macular degeneration. In addition, direct intratumoral injection of dsRNA into mice reduced tumor volume [Pille, J. et al. (2005) Mol. Ther. 11:267-274] and improved survival of tumor-bearing mice. et al., (2006) Mol. Ther. 14:343-350; Li, S. et al., (2007) Mol. Ther. 15:515-523]. RNA interference can be directly injected into the CNS [Dorn, G. et al., (2004) Nucleic Acids 32:e49; Tan, PH. et al. (2005) Gene Ther. 12:59-66; (2002) BMC Neurosci. 3:18; Shishkina, GT., et al. (2004) Neuroscience 129:521-528; Thakker, ER., et al. (2004) Proc. U.S.A. 101:17270-17275; Akaneya, Y., et al. (2005) J. Neurophysiol. 93:594-602], and intranasal administration to the lung [Howard, KA. et al., (2006). Mol. Ther. 14:476-484; Zhang, X. et al., (2004) J. Biol. Chem. 279:10677-10684; Bitko, V. et al., (2005) Nat. 50–55], and has also shown success with local delivery. When an RNAi agent is administered systemically for the treatment of disease, the RNA can be modified or, alternatively, can be delivered using a drug delivery system; and functions to prevent rapid degradation of dsRNA by exonucleases. Modification of the RNA or pharmaceutical carrier can also enable targeting of the RNAi agent to the target tissue and avoid unwanted off-target effects (e.g., without wishing to be bound by theory , the use of GNAs described herein has been identified to destabilize the seed region of dsRNA, and such off-target effects are significantly attenuated by destabilization of such seed region thus increasing the preference of such dsRNAs for on-target efficacy when compared to off-target effects). RNAi agents can be modified by chemical conjugation to lipophilic groups such as cholesterol to enhance cellular uptake and prevent degradation. For example, systemic injection of an ApoB-directed RNAi agent conjugated to a lipophilic cholesterol moiety into mice resulted in knockdown of apoB mRNA in both the liver and jejunum [Soutschek, et al. J. et al., (2004) Nature 432:173-178]. Conjugation of RNAi agents to aptamers has been shown to inhibit tumor growth and mediate tumor regression in mouse models of prostate cancer [McNamara, JO. et al., (2006) Nat. Biotechnol. 24:1005-1015]. In alternative embodiments, RNAi agents can be delivered using drug delivery systems such as nanoparticles, dendrimers, polymers, liposomes, or cationic delivery systems. Positively charged cationic delivery systems facilitate binding of molecular RNAi agents (negatively charged) and also enhance interactions with negatively charged cell membranes, thereby facilitating efficient uptake of RNAi agents by cells. enable. Cationic lipids, dendrimers, or polymers can bind RNAi agents or can be induced to form vesicles or micelles that encapsulate RNAi agents [see, for example, Kim SH. et al. 2008) Journal of Controlled Release 129(2):107-116]. Formation of vesicles or micelles also prevents degradation of the RNAi agent upon systemic administration. Methods of making and administering cationic RNAi agent conjugates are well within the capabilities of those skilled in the art [e.g., Sorensen, DR., et al. (2003), which is incorporated herein by reference in its entirety. ) J. Mol. Biol 327:761-766; Verma, UN. et al., (2003) Clin. Cancer Res. 9:1291-1300; Arnold, AS et al. -205]. Some non-limiting examples of drug delivery systems useful for systemic delivery of RNAi agents include DOTAP [Sorensen, DR., et al (2003), supra; Verma, UN. et al., (2003), supra], Oligofectamine, "solid nucleic acid lipid particles" [Zimmermann, TS. et al., (2006) Nature 441:111-114], cardiolipin [Chien, PY. et al., (2005) Cancer Gene Ther. 12:321-328; Pal, A. et al., (2005) Int J. Oncol. 26:1087-1091], polyethylenemine [Bonnet ME. et al., (2008) Pharm. Res. Aug 16 Epub ahead of print; Aigner, A. (2006) J. Biomed. Biotechnol. 71659], Arg-Gly-Asp (RGD) peptide [Liu, S. (2006) Mol. Pharm. 3:472-487] , and polyamidoamine [Tomalia, DA. et al., (2007) Biochem. Soc. Trans. 35:61-67; Yoo, H. et al., (1999) Pharm. Res. 16:1799-1804] mentioned. In some embodiments, RNAi agents are complexed with cyclodextrins for systemic administration. Methods of administration and pharmaceutical compositions with RNAi agents and cyclodextrins can be found in US Pat. No. 7,427,605, which is hereby incorporated by reference in its entirety.

本開示のある特定の態様は、細胞においてＭＡＰＴ標的遺伝子の発現を減少させる方法であって、細胞を本開示の二本鎖ＲＮＡｉ剤と接触させることを含む方法に関する。一実施形態において、細胞は、肝外細胞、適宜、ＣＮＳ細胞である。他の実施形態において、細胞は肝細胞（ｈｅｐｔｉｃ ｃｅｌｌ）である。 Certain aspects of the present disclosure relate to methods of reducing MAPT target gene expression in a cell comprising contacting the cell with a double-stranded RNAi agent of the present disclosure. In one embodiment, the cells are extrahepatic cells, optionally CNS cells. In other embodiments, the cells are heptic cells.

本開示の別の態様は、対象においてＭＡＰＴ標的遺伝子の発現を減少させる方法であって、対象に本開示の二本鎖ＲＮＡｉ剤を投与することを含む方法に関する。 Another aspect of the present disclosure relates to a method of decreasing MAPT target gene expression in a subject comprising administering to the subject a double-stranded RNAi agent of the present disclosure.

本開示の別の態様は、ＣＮＳ障害（神経変性障害）を有する対象を処置する方法であって、治療有効量の本開示の二本鎖ＭＡＰＴ標的化ＲＮＡｉ剤を対象に投与すること、それによって対象を処置することを含む方法に関する。対象の神経変性障害は、ＭＡＰＴ遺伝子にコードされるタンパク質タウの異常に関連している。ＭＡＰＴ遺伝子にコードされるタンパク質タウの異常は、対象の脳内でのタウの凝集を引き起こすおそれがある。 Another aspect of the disclosure is a method of treating a subject having a CNS disorder (neurodegenerative disorder), comprising administering to the subject a therapeutically effective amount of a double-stranded MAPT-targeting RNAi agent of the disclosure, thereby It relates to a method comprising treating a subject. The neurodegenerative disorder of interest is associated with abnormalities in the protein tau encoded by the MAPT gene. Abnormalities in the MAPT gene-encoded protein tau can lead to tau aggregation in the brain of a subject.

本開示の方法によって処置することができる例示的なＣＮＳ障害としては、ＭＡＰＴ関連疾患ＣＮＳ障害、例えば、タウオパチー、アルツハイマー病、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、行動障害型前頭側頭型認知症（ｂｖＦＴＤ）、非流暢性亜型原発性進行性失語（ｎｆｖＰＰＡ）、意味型原発性進行性失語（ＰＰＡ－Ｓ）、ロゴペニック型原発性進行性失語（ＰＰＡ－Ｌ）、１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、ピック病（ＰｉＤ）、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、初老期認知症を伴う多系統タウオパチー（ＭＳＴＤ）、球状グリア封入体を伴う白質タウオパチー（ＧＧＩを伴うＦＴＬＤ）、ＭＡＰＴ突然変異を伴うＦＴＬＤ、神経原線維変化（ＮＦＴ）認知症、運動ニューロン疾患を伴うＦＴＤ、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、皮質基底核症候群（ＣＢＳ）、皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、パーキンソン病、脳炎後パーキンソニズム、ニーマン・ピック病、ハンチントン病、筋強直性ジストロフィー１型、およびダウン症候群（ＤＳ）が挙げられる。 Exemplary CNS disorders that can be treated by the methods of the present disclosure include MAPT-related disease CNS disorders such as tauopathy, Alzheimer's disease, frontotemporal dementia (FTD), behavioral frontotemporal dementia. (bvFTD), non-fluent subtype primary progressive aphasia (nfvPPA), semantic primary progressive aphasia (PPA-S), logopenic primary progressive aphasia (PPA-L), linked to chromosome 17 Frontotemporal dementia with parkinsonism (FTDP-17), Pick's disease (PiD), argyrophilia granulopathy (AGD), multisystem tauopathy with presenile dementia (MSTD), white matter with globular glial inclusions Tauopathy (FTLD with GGI), FTLD with MAPT mutations, neurofibrillary tangle (NFT) dementia, FTD with motor neuron disease, amyotrophic lateral sclerosis (ALS), corticobasal ganglia syndrome (CBS) , corticobasal degeneration (CBD), progressive supranuclear palsy (PSP), Parkinson's disease, postencephalitic parkinsonism, Niemann-Pick disease, Huntington's disease, myotonic dystrophy type 1, and Down's syndrome (DS). mentioned.

一実施形態において、二本鎖ＲＮＡｉ剤は、髄腔内投与される。二本鎖ＲＮＡｉ剤の髄腔内投与によって、方法は、脳（例えば、線条体）または脊柱組織、例えば、皮質、小脳、頚椎、腰椎、および胸椎、免疫細胞、例えば、単球およびＴ細胞でのＭＡＰＴ標的遺伝子の発現を低減させることができる。 In one embodiment, the double-stranded RNAi agent is administered intrathecally. By intrathecal administration of a double-stranded RNAi agent, the method can be administered to brain (e.g., striatum) or spinal column tissue, such as cortex, cerebellum, cervical, lumbar, and thoracic spine, immune cells, such as monocytes and T cells. can reduce the expression of MAPT target genes at

解説の容易さのために、このセクションにおける製剤、組成物、および方法は、主に、修飾されたｓｉＲＮＡ化合物に関して説明される。しかしながら、これらの製剤、組成物、および方法は、他のｓｉＲＮＡ化合物、例えば、未修飾ｓｉＲＮＡ化合物によって実践することができ、そのような実践は、本開示内であることは理解され得る。ＲＮＡｉ剤を含む組成物は、様々な経路によって対象にデリバリーすることができる。例示的経路としては、髄腔内、静脈内、局所、経直腸、経肛門、経膣、経鼻、経肺、および経眼が挙げられる。 For ease of explanation, the formulations, compositions, and methods in this section are described primarily with respect to modified siRNA compounds. However, it is understood that these formulations, compositions and methods can be practiced with other siRNA compounds, such as unmodified siRNA compounds, and such practice is within the present disclosure. Compositions containing RNAi agents can be delivered to a subject by a variety of routes. Exemplary routes include intrathecal, intravenous, topical, rectal, anal, vaginal, nasal, pulmonary, and ocular.

本開示のＲＮＡｉ剤は、投与にとって好適な医薬組成物に組み込むことができる。そのような組成物は、通常、１種または複数種のＲＮＡｉ剤と薬学的に許容される担体とを含む。本明細書において使用される場合、語句「薬学的に許容される担体」は、医薬投与に適合性の、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング剤、抗真菌剤および防かび剤、等張剤および吸収遅延剤、ならびに同様のものを含むことが意図される。薬学的に活性な物質のためのそのような媒質および薬剤の使用は、当技術分野において周知である。任意の従来的な媒質または薬剤が活性成分と不適合性である場合を除き、組成物におけるそれらの使用は想到される。補足の有効成分もまた組成物に組み込まれ得る。 The RNAi agents of this disclosure can be incorporated into pharmaceutical compositions suitable for administration. Such compositions typically comprise one or more RNAi agents and a pharmaceutically acceptable carrier. As used herein, the phrase "pharmaceutically acceptable carrier" includes any and all solvents, dispersion media, coatings, antifungal and antifungal agents, isotonic and absorbent agents compatible with pharmaceutical administration. It is intended to include retardants, as well as the like. The use of such media and agents for pharmaceutically active substances is well known in the art. Except insofar as any conventional media or agent is incompatible with the active ingredient, use thereof in the compositions is contemplated. Supplementary active ingredients can also be incorporated into the compositions.

本開示の医薬組成物は、局所処置または全身処置のどちらが所望されるか、ならびに処置されるエリアに応じて、いくつかの方法において投与され得る。投与は、局所（例えば、点眼、経膣、経直腸、鼻腔内、経皮など）、髄腔内、経口、または非経口投与であり得る。非経口投与は、点滴、皮下、腹腔内、もしくは筋肉注射、または髄腔内または脳室内投与を含む。 The pharmaceutical compositions of this disclosure can be administered in a number of ways depending on whether local or systemic treatment is desired and the area to be treated. Administration can be topical (eg, eye drops, vaginal, rectal, intranasal, transdermal, etc.), intrathecal, oral, or parenteral. Parenteral administration includes infusion, subcutaneous, intraperitoneal or intramuscular injection, or intrathecal or intracerebroventricular administration.

投与の経路および部位は、標的化を増強するように選択され得る。例えば、神経または脊柱組織を標的化するためには、髄腔内注射が論理的な選択であろう。肺細胞は、エアゾール形態でのＲＮＡｉ剤の投与によって標的化され得る。血管内皮細胞は、ＲＮＡｉ剤によるバルーンカテーテルのコーティングおよびＲＮＡの機械的導入によって標的化され得る。 The route and site of administration can be chosen to enhance targeting. For example, to target nerve or spinal tissue, intrathecal injection would be a logical choice. Lung cells can be targeted by administration of RNAi agents in aerosol form. Vascular endothelial cells can be targeted by coating a balloon catheter with an RNAi agent and mechanically introducing RNA.

局所投与用製剤は、経皮パッチ、軟膏剤、ローション剤、クリーム剤、ゲル剤、滴剤、坐剤、噴霧剤、溶液剤、および散剤を含み得る。従来の医薬用担体、水性、粉末、または油状基剤、増粘剤なども必要であり得、または望ましくあり得る。被覆したコンドーム、手袋なども有用であり得る。 Formulations for topical administration may include transdermal patches, ointments, lotions, creams, gels, drops, suppositories, sprays, solutions, and powders. Conventional pharmaceutical carriers, aqueous, powder or oil bases, thickening agents and the like may also be necessary or desirable. Coated condoms, gloves, etc. may also be useful.

経口投与用組成物は、散剤または顆粒剤、水中における懸濁剤または溶液剤、シロップ剤、エキシル剤または非水性媒体、タブレット剤、カプセル剤、ドロップ剤、またはトローチ剤を含む。錠剤の場合、使用できる担体としては、ラクトース、クエン酸ナトリウム、およびリン酸の塩が挙げられる。様々な崩壊剤、例えば、デンプンなど、および潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、およびタルクなどが、錠剤において一般的に使用される。カプセル形態での経口投与の場合、有用な希釈剤は、ラクトースおよび高分子量ポリエチレングリコールである。経口投与に水性懸濁液が必要な場合、核酸組成物は、乳化剤および懸濁剤と組み合わせることができる。所望の場合、ある特定の甘味剤または風味剤を加えることができる。 Compositions for oral administration include powders or granules, suspensions or solutions in water, syrups, exyls or non-aqueous media, tablets, capsules, drops, or troches. In the case of tablets, carriers that can be used include lactose, sodium citrate and salts of phosphoric acid. Various disintegrants, such as starch, and lubricants, such as magnesium stearate, sodium lauryl sulfate, and talc, are commonly used in tablets. For oral administration in a capsule form, useful diluents are lactose and high molecular weight polyethylene glycols. When oral administration requires aqueous suspensions, the nucleic acid compositions can be combined with emulsifying and suspending agents. If desired, certain sweetening or flavoring agents can be added.

髄腔内または脳室内投与用の組成物は、緩衝液、希釈剤、および他の好適な添加剤も含有し得る無菌水溶液を含み得る。 Compositions for intrathecal or intracerebroventricular administration may include sterile aqueous solutions which may also contain buffers, diluents and other suitable additives.

非経口投与用の製剤は、緩衝液、希釈剤、および他の好適な添加剤も含有し得る無菌水溶液を含み得る。脳室内注射は、例えばリザーバーに取り付けられた、脳室内カテーテルによって促進され得る。静脈内使用の場合、溶質の総濃度は、調製物を等張にするように制御され得る。 Formulations for parenteral administration may include sterile aqueous solutions which may also contain buffers, diluents and other suitable additives. Intraventricular injection may be facilitated by an intraventricular catheter, eg, attached to a reservoir. For intravenous use, the total concentration of solutes can be controlled to render the preparation isotonic.

一実施形態において、ｓｉＲＮＡ化合物、例えば、二本鎖ｓｉＲＮＡ化合物、またはｓｓｉＲＮＡ化合物、組成物の投与は、非経口、例えば、静脈内（例えば、ボーラスとして、または拡散性注入として）、皮内、腹腔内、筋肉内、髄腔内、心室内、脳内、皮下、経粘膜、頬側、舌下、内視鏡下、経直腸、経口、経膣、局所、経肺、鼻腔内、経尿道、または経眼である。投与は、本人によって、または他の人、例えば、医療提供者などによって提供され得る。医薬品は、測定された用量において、または秤量された用量をデリバリーするディスペンサーにおいて提供することができる。選択されたデリバリーのモードは、下記においてより詳細に説明される。 In one embodiment, administration of the siRNA compound, e.g., double-stranded siRNA compound, or ssiRNA compound, composition is parenteral, e.g., intravenous (e.g., as a bolus or as a diffuse infusion), intradermal, intraperitoneal. intramuscular, intrathecal, intraventricular, intracerebral, subcutaneous, transmucosal, buccal, sublingual, endoscopic, rectal, oral, vaginal, topical, pulmonary, intranasal, transurethral, or transocular. Administration may be provided by the individual or by another person, such as a health care provider. Medicaments can be provided in metered doses or in dispensers that deliver metered doses. Selected modes of delivery are described in more detail below.

Ａ．髄腔内投与
一実施形態において、二本鎖ＲＮＡｉ剤は、髄腔内注入（すなわち、脳および脊髄組織を浸す髄液への注入）によってデリバリーされる。髄液へのＲＮＡｉ剤の髄腔内注入は、ボーラス注入として、または、皮下に注入することができるミニポンプによって、実施することができ、それにより、髄液中へのｓｉＲＮＡの規則正しい一定のデリバリーを提供することができる。髄液が産生される脈絡叢からの髄液の循環は、脊髄および後根神経節の周りを下り、その後、小脳を通過して、クモ膜顆粒へと皮質を越え、そこで、体液はＣＮＳを出ることができ、注入された化合物のサイズ、安定性、および溶解性に応じて、髄腔内によりデリバリーされる分子は、ＣＮＳ全体を通して標的を攻撃することができる。 A. Intrathecal Administration In one embodiment, the double-stranded RNAi agent is delivered by intrathecal injection (ie, injection into the spinal fluid that bathes the brain and spinal cord tissue). Intrathecal injection of the RNAi agent into the cerebrospinal fluid can be performed as a bolus injection or by a minipump that can be injected subcutaneously, thereby providing regular and constant delivery of the siRNA into the cerebrospinal fluid. can provide. Circulation of cerebrospinal fluid from the choroid plexus, where it is produced, descends around the spinal cord and dorsal root ganglia, then through the cerebellum and across the cortex to the arachnoid granules, where the fluid enters the CNS. Molecules delivered intrathecally can attack targets throughout the CNS, depending on the size, stability, and solubility of the injected compound.

一部の実施形態において、髄腔内投与は、ポンプを介して行われる。ポンプは、外科手術によって移植された浸透圧ポンプであり得る。一実施形態において、浸透圧ポンプは、髄腔内投与を容易にするために、脊柱管の髄腔内に移植される。 In some embodiments, intrathecal administration is via a pump. The pump can be an osmotic pump that is surgically implanted. In one embodiment, the osmotic pump is implanted intrathecally in the spinal canal to facilitate intrathecal administration.

一部の実施形態において、髄腔内投与は、ある量の医薬品を収容するリザーバーおよびリザーバーに収容された医薬品の一部をデリバリーするように構成されたポンプを含む、製薬品の髄腔内デリバリーシステムを介して行われる。この髄腔内デリバリーシステムについてのさらなる詳細は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１５／１１６６５８に見出され得る。 In some embodiments, the intrathecal administration includes intrathecal delivery of a pharmaceutical product comprising a reservoir containing an amount of the pharmaceutical product and a pump configured to deliver a portion of the pharmaceutical product contained in the reservoir. done through the system. Further details about this intrathecal delivery system can be found in WO2015/116658, which is incorporated herein by reference in its entirety.

髄腔内注入されたＲＮＡｉ剤の量は、一方の標的遺伝子から別の標的遺伝子へと変わり得、ならびに適用されるべき適切な量は、各標的遺伝子に対して個別に決定しなければならない場合がある。典型的には、この量は、１０μｇから２ｍｇ、好ましくは５０μｇから１５００μｇ、より好ましくは１００μｇから１０００μｇの範囲である。 The amount of RNAi agent injected intrathecally can vary from one target gene to another, and the appropriate amount to be applied must be determined individually for each target gene. There is Typically, this amount ranges from 10 μg to 2 mg, preferably from 50 μg to 1500 μg, more preferably from 100 μg to 1000 μg.

Ｂ．本開示のベクターコードＲＮＡｉ剤
ＭＡＰＴ遺伝子を標的化するＲＮＡｉ剤は、ＤＮＡまたはＲＮＡベクターに挿入された転写物ユニットから発現され得る［例えば、Couture, A, et al., TIG. (1996), 12:5-10; WO 00/22113、WO 00/22114、およびUS 6,054,299を参照されたい］。発現は、好ましくは、使用される特定のコンストラクトならびに標的組織または細胞タイプに応じて継続される（数か月またはそれ以上）。これらの導入遺伝子は、直鎖状コンストラクト、環状プラスミド、またはウイルスベクターとして導入することができ、それらは、統合ベクターまたは非統合ベクターであり得る。導入遺伝子は、染色体外プラスミドとして継代されることを可能にするように構築することもできる［Gassmann, et al., (1995) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:1292］。 B. Vector-Encoded RNAi Agents of the Disclosure RNAi agents that target the MAPT gene can be expressed from transcript units inserted into DNA or RNA vectors [e.g., Couture, A, et al., TIG. (1996), 12]. :5-10; see WO 00/22113, WO 00/22114, and US 6,054,299]. Expression is preferably continued (months or longer) depending on the particular construct used and the target tissue or cell type. These transgenes can be introduced as linear constructs, circular plasmids, or viral vectors, which can be integrative or non-integrative vectors. The transgene can also be constructed to allow it to be passaged as an extrachromosomal plasmid [Gassmann, et al., (1995) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:1292].

ＲＮＡｉ剤の個々の鎖は、発現ベクター上のプロモーターから転写させることができる。２つの別々の鎖が、例えば、ｄｓＲＮＡを産生するように発現される場合、２つの別々の発現ベクターを、標的細胞中に共導入することができる（例えば、トランスフェクションまたは感染によって）。あるいは、ｄｓＲＮＡのそれぞれ個別の鎖を、両方が同じ発現プラスミド上に位置されたプロモーターによって転写させることができる。一実施形態において、ｄｓＲＮＡは、ｄｓＲＮＡがステム－アンド－ループ構造を有するようにリンカーポリヌクレオチド配列によって連結された逆方向反復ポリヌクレオチドとして発現される。 The individual strands of the RNAi agent can be transcribed from promoters on expression vectors. If two separate strands are expressed to produce, for example, dsRNA, two separate expression vectors can be co-introduced into the target cell (eg, by transfection or infection). Alternatively, each separate strand of dsRNA can be transcribed by promoters both located on the same expression plasmid. In one embodiment, the dsRNA is expressed as inverted repeat polynucleotides linked by linker polynucleotide sequences such that the dsRNA has a stem-and-loop structure.

ＲＮＡｉ剤発現ベクターは、一般的に、ＤＮＡプラスミドまたはウイルスベクターである。真核細胞に対して適合性の発現ベクター、好ましくは脊椎動物細胞に対して適合性の発現ベクターを使用することにより、本明細書において説明されるＲＮＡｉ剤の発現のための組換えコンストラクトを生成することができる。ＲＮＡｉ剤発現ベクターのデリバリーは、例えば、静脈内または筋肉内投与によって、患者から外植された標的細胞への投与とその後の患者への再導入によって、または所望の標的細胞への導入を可能にする任意の他の手段によって、全身性であり得る。 RNAi agent expression vectors are generally DNA plasmids or viral vectors. Generating recombinant constructs for expression of the RNAi agents described herein by using expression vectors compatible with eukaryotic cells, preferably expression vectors compatible with vertebrate cells can do. Delivery of the RNAi agent expression vector can be accomplished, for example, by intravenous or intramuscular administration, by administration to target cells explanted from the patient and then reintroduction into the patient, or allowing introduction into the desired target cells. It can be systemic by any other means of doing.

本明細書において説明される方法および組成物と共に用いることができるウイルスベクターシステムとしては、これらに限定されるわけではないが、（ａ）アデノウィルスベクター；（ｂ）レトロウイルスベクター、例えば、これらに限定されるわけではないが、レンチウイルスベクター、モロニーマウス白血病ウイルスなど；（ｃ）アデノ随伴ウイルスベクター；（ｄ）単純ヘルペスウイルスベクター；（ｅ）ＳＶ４０ベクター；（ｆ）ポリオームウイルスベクター；（ｇ）パピローマウイルスベクター；（ｈ）ピコルナウイルスベクター；（ｉ）水泡ウイルスベクター、例えば、オルソポックス、例えば、種痘疹ウイルスベクターなど、または鳥ポックス（ａｖｉｐｏｘ）、例えば、カナリア痘または家禽ジフテリアなど；ならびに（ｊ）ヘルパー依存性またはガットレス（ｇｕｔｌｅｓｓ）アデノウィルスが挙げられる。複製欠損ウイルスも有利であり得る。異なるベクターは、細胞のゲノムの中に組み込まれるかまたは組み込まれないであろう。コンストラクトは、所望の場合、トランスフェクションのためのウイルス配列を含ませることができる。あるいは、コンストラクトは、エピソーム複製が可能なベクター、例えば、ＥＰＶおよびＥＢＶベクターなどに組み込むことができる。ＲＮＡｉ剤の組換え発現のためのコンストラクトは、概して、標的細胞におけるＲＮＡｉ剤の発現を確実にするために、調節要素、例えば、プロモーター、エンハンサー、などを必要とするであろう。ベクターおよびコンストラクトを考慮する他の態様は、当技術分野で公知である。 Viral vector systems that can be used with the methods and compositions described herein include, but are not limited to: (a) adenoviral vectors; (b) retroviral vectors such as, but not limited to, (c) adeno-associated virus vectors; (d) herpes simplex virus vectors; (e) SV40 vectors; (f) polyome virus vectors; (h) picornavirus vectors; (i) vesicular virus vectors, such as orthopox, such as vaccinia virus vectors, or avipox, such as canarypox or poultry diphtheria; and ( j) Helper dependent or gutless adenoviruses. Replication-defective viruses may also be advantageous. Different vectors may or may not integrate into the cell's genome. The construct can include viral sequences for transfection, if desired. Alternatively, the constructs can be incorporated into vectors capable of episomal replication, such as EPV and EBV vectors. Constructs for recombinant expression of RNAi agents will generally require regulatory elements, such as promoters, enhancers, etc., to ensure expression of the RNAi agent in target cells. Other aspects of considering vectors and constructs are known in the art.

ＶＩ．本発明の医薬組成物
本開示は、本開示のＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物および製剤も含む。一実施形態において、本明細書において説明されるＲＮＡｉ剤と、薬学的に許容される担体と
を含む医薬組成物が本明細書において提供される。ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物は、ＭＡＰＴの発現または活性に関連する疾患または障害、例えば、ＭＡＰＴ関連疾患の処置にとって有用である。 VI. Pharmaceutical Compositions of the Invention This disclosure also includes pharmaceutical compositions and formulations comprising the RNAi agents of this disclosure. In one embodiment, provided herein is a pharmaceutical composition comprising an RNAi agent described herein and a pharmaceutically acceptable carrier. Pharmaceutical compositions comprising RNAi agents are useful for treating diseases or disorders associated with MAPT expression or activity, eg, MAPT-related diseases.

一部の実施形態において、本発明の医薬組成物は、エクソン１０含有ＭＡＰＴ転写物を選択的に阻害するためのｄｓＲＮＡ剤である。 In some embodiments, the pharmaceutical compositions of the invention are dsRNA agents for selectively inhibiting exon 10-containing MAPT transcripts.

一部の実施形態において、本発明の医薬組成物は、無菌である。別の実施形態において、本発明の医薬組成物は、パイロジェンフリーである。 In some embodiments, pharmaceutical compositions of the invention are sterile. In another embodiment, the pharmaceutical composition of the invention is pyrogen-free.

そのような医薬組成物は、デリバリーのモードに基づいて製剤化される。一例は、非経口デリバリー、例えば、静脈内（ＩＶ）、筋肉内（ＩＭ）、または皮下（ｓｕｂＱ）デリバリーによる全身投与のために製剤化される組成物である。別の例は、例えば、注入の髄腔内または硝子体内経路、適宜、脳（例えば、線状体）内への注入、例えば、連続ポンプ注入などによる、ＣＮＳ内への直接デリバリーのために製剤化された組成物である。 Such pharmaceutical compositions are formulated based on the mode of delivery. One example is a composition formulated for systemic administration by parenteral delivery, eg, intravenous (IV), intramuscular (IM), or subcutaneous (subQ) delivery. Another example is formulation for direct delivery into the CNS, such as by intrathecal or intravitreal routes of injection, optionally into the brain (e.g., striatum), such as by continuous pump infusion. It is a modified composition.

本開示の医薬組成物は、ＭＡＰＴ遺伝子の発現を阻害するのに十分な投薬量において投与され得る。概して、本開示のＲＮＡｉ剤の好適な用量は、１日あたりレシピエントの体重１キログラムあたり約０．００１ミリグラムから約２００．０ミリグラムの範囲、概して、１日あたり体重１キログラムあたり約１ｍｇから５０ｍｇの範囲であろう。 The pharmaceutical compositions of this disclosure can be administered in dosages sufficient to inhibit expression of the MAPT gene. In general, suitable dosages of RNAi agents of the present disclosure range from about 0.001 milligrams to about 200.0 milligrams per kilogram of recipient body weight per day, generally from about 1 mg to 50 mg per kilogram of body weight per day. would be in the range of

反復投薬計画は、定期的な、例えば、月１回から６か月毎に１回などのＲＮＡｉ剤の治療量の投与を含み得る。ある特定の実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、四半期に約１回（すなわち、３か月毎に約１回）から１年に約２回、投与される。 Repeated dosing regimens may involve administration of therapeutic doses of the RNAi agent on a regular basis, such as once a month to once every six months. In certain embodiments, the RNAi agent is administered about once quarterly (ie, about once every three months) to about twice a year.

初期処置計画（例えば、初回負荷量）の後、処置は、低頻度において投与することができる。 After the initial treatment regimen (eg, initial loading dose), treatment can be administered infrequently.

他の実施形態において、医薬組成物の単回投与は、継続することができ、それにより、その後の用量は、１か月以下、２か月以下、３か月以下、もしくは４か月以下、またはそれ以上の間隔において投与される。本開示の一部の実施形態において、本開示の医薬組成物の単回投与は、月１回投与される。本開示の他の実施形態において、本開示の医薬組成物の単回投与は、四半期に１回から年に２回において投与される。 In other embodiments, a single administration of the pharmaceutical composition can be continued such that subsequent doses are no longer than 1 month, no longer than 2 months, no longer than 3 months, or no longer than 4 months, or at longer intervals. In some embodiments of the disclosure, a single dose of a pharmaceutical composition of the disclosure is administered once a month. In other embodiments of the present disclosure, a single dose of the pharmaceutical composition of the present disclosure is administered quarterly to twice yearly.

当業者は、ある特定の要因、例えば、これらに限定されるわけではないが、疾患または障害の重症度、以前の処置、対象の健康全般または年齢、および他の存在する疾患など、は、対象を効果的に処置するために必要な投薬量および投薬のタイミングに影響を及ぼし得ることを理解するだろう。その上、治療有効量の組成物による対象の処置は、単一の処置または一連の処置を含み得る。 One of skill in the art will appreciate that certain factors, such as, but not limited to, the severity of the disease or disorder, previous treatments, the subject's general health or age, and other pre-existing conditions, may It will be understood that this can affect the dosage and timing of dosage required to effectively treat . Moreover, treatment of a subject with a therapeutically effective amount of the composition can comprise a single treatment or a series of treatments.

マウス遺伝学における進歩は、様々なヒト疾患、例えば、ＭＡＰＴの発現の減少が有益であろうＡＬＳおよびＦＴＤなどの研究のための多くのマウスモデルを生み出した。そのようなモデルは、ＲＮＡｉ剤のインビボ試験のため、ならびに治療有効用量を決定するために使用することができる。好適な齧歯類モデルは、当技術分野で公知であり、例えば、Cepeda, et al. (ASN Neuro (2010) 2(2):e00033)およびPouladi, et al. (Nat Reviews (2013) 14:708)に記載されるものなどが挙げられる。 Advances in mouse genetics have produced a number of mouse models for the study of various human diseases, such as ALS and FTD, where reduced expression of MAPT would be beneficial. Such models can be used for in vivo testing of RNAi agents, as well as for determining therapeutically effective doses. Suitable rodent models are known in the art, for example Cepeda, et al. (ASN Neuro (2010) 2(2):e00033) and Pouladi, et al. (Nat Reviews (2013) 14: 708).

本開示の医薬組成物は、局所処置または全身処置のどちらが所望されるか、および処置されるエリアに応じて、いくつかの方法において投与することができる。投与は、局所（例えば、経皮貼布による）、経肺、（例えば、ネブライザーなどによる散剤またはエアゾール剤の吸入または吹送による）；気管内、鼻腔内、表皮および経皮、経口または非経口であり得る。非経口投与は、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内、もしくは筋肉内注射もしくは注入；皮下（例えば、移植されたデバイスによる）、または脳内（例えば、実質内、髄腔内、または心室内投与による）を含む。 The pharmaceutical compositions of this disclosure can be administered in a number of ways depending on whether local or systemic treatment is desired and the area to be treated. Administration may be topical (e.g., by transdermal patch), pulmonary, (e.g., by inhalation or insufflation of powders or aerosols, such as by a nebulizer); intratracheal, intranasal, epidermal and transdermal, oral or parenteral. could be. Parenteral administration includes intravenous, intraarterial, subcutaneous, intraperitoneal, or intramuscular injection or infusion; administration).

ＲＮＡｉ剤は、特定の組織、例えば、ＣＮＳ（例えば、脳のニューロン、膠細胞、または維管束組織）などを標的化する方式においてデリバリーすることができる。 RNAi agents can be delivered in a manner that targets specific tissues, such as the CNS (eg, neurons, glial cells, or vascular tissue of the brain).

局所投与用の医薬組成物および製剤は、経皮パッチ、軟膏剤、ローション剤、クリーム剤、ゲル剤、滴剤、坐剤、噴霧剤、液剤、および散剤を含み得る。従来の、医薬担体、水性、粉末状、または油性基剤、増粘剤などは、必要であり得るか、または望ましくあり得る。被覆されたコンドーム、手袋なども有用であり得る。好適な局所用製剤としては、本開示において特徴とされるＲＮＡｉ剤が、局所デリバリー剤、例えば、脂質、リポソーム、脂肪酸、脂肪酸エステル、ステロイド、キレート化剤、および界面活性物質との混合物であるような製剤が挙げられる。好適な脂質およびリポソームとしては、中性（例えば、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミンＤＯＰＥ、ジミリストイルホスファチジルコリンＤＭＰＣ、ジステアロイルホスファチジルコリン）、陰性（例えば、ジミリストイルホスファチジルグリセロールＤＭＰＧ）、およびカチオン性（例えば、ジオレオイルテトラメチルアミノプロピルＤＯＴＡＰおよびジオレオイルホスファチジルエタノールアミンＤＯＴＭＡ）が挙げられる。本開示において特徴とされるＲＮＡｉ剤は、リポソーム内においてカプセル化することができ、またはリポソーム、特にカチオン性リポソームに対して複合体を形成することができる。あるいは、ＲＮＡｉ剤は、脂質、特にカチオン性脂質に対して複合体化することができる。好適な脂肪酸およびエステルとしては、これらに限定されるわけではないが、アラキドン酸、オレイン酸、エイコサン酸、ラウリン酸、カプリル酸、カプリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、リノレン酸、ジカプロエート、トリカプロエート、モノオレイン、ジラウリン、グリセリル１－モノカプロエート、１－ドデシルアザシクロヘプタナ－２－オン、アシルカルニチン、アシルコリン、またはＣ１～２０アルキルエステル（例えば、イソプロピルミリステートＩＰＭ）、モノグリセライド、ディグリセライド、またはそれらの薬学的に許容される塩が挙げられる。局所用製剤は、参照により本明細書に組み込まれる、ＵＳ６，７４７，０１４において詳細に説明されている。 Pharmaceutical compositions and formulations for topical administration can include transdermal patches, ointments, lotions, creams, gels, drops, suppositories, sprays, solutions, and powders. Conventional pharmaceutical carriers, aqueous, powdered or oily bases, thickening agents and the like may be necessary or desirable. Coated condoms, gloves, etc. may also be useful. Suitable topical formulations include mixtures of RNAi agents featured in this disclosure with topical delivery agents such as lipids, liposomes, fatty acids, fatty acid esters, steroids, chelating agents, and surfactants. formulations. Suitable lipids and liposomes include neutral (eg, dioleoylphosphatidylethanolamine DOPE, dimyristoylphosphatidylcholine DMPC, distearoylphosphatidylcholine), negative (eg, dimyristoylphosphatidylglycerol DMPG), and cationic (eg, dioleoylphosphatidylglycerol DMPG). oil tetramethylaminopropyl DOTAP and dioleoylphosphatidylethanolamine DOTMA). The RNAi agents featured in this disclosure can be encapsulated within liposomes or can be complexed to liposomes, particularly cationic liposomes. Alternatively, RNAi agents can be conjugated to lipids, particularly cationic lipids. Suitable fatty acids and esters include, but are not limited to, arachidonic acid, oleic acid, eicosanoic acid, lauric acid, caprylic acid, capric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, linoleic acid, linolenic acid. , dicaproate, tricaproate, monoolein, dilaurin, glyceryl 1-monocaproate, 1-dodecylazacycloheptan-2-one, acylcarnitine, acylcholine, or C 1-20 alkyl ester (e.g. isopropyl myristate IPM), monoglycerides, diglycerides, or pharmaceutically acceptable salts thereof. Topical formulations are described in detail in US 6,747,014, which is incorporated herein by reference.

Ａ．膜分子アセンブリを含むＲＮＡｉ剤製剤
本開示の組成物および方法における使用のためのＲＮＡｉ剤は、膜分子アセンブリ、例えば、リポソームまたはミセルでのデリバリー用に製剤化することができる。本明細書において使用される場合、用語「リポソーム」は、少なくとも１つの二層、例えば、１つの二層または複数の二層において整列された両親媒性脂質で構成されたベシクルを意味する。リポソームは、親油性材料から形成された膜と水性内部とを有する単層および多層ラメラベシクルを含む。水性部分は、ＲＮＡｉ剤組成物を含有する。親油性材料は、水性内部を、典型的にはＲＮＡｉ剤組成物を含まない（いくつかの例では、含む場合もある）水性外部から隔離する。リポソームは、作用部位への活性成分の移送およびデリバリーにとって有用である。リポソーム膜は、生体膜と構造的に似ているため、リポソームが組織に適用される場合、リポソーム二層は、細胞膜の二層と融合する。リポソームと細胞の併合が進行するため、ＲＮＡｉ剤を含む内部水性内容物は、細胞内へとデリバリーされ、そこで、ＲＮＡｉ剤は、標的ＲＮＡに特異的に結合することができ、ＲＮＡｉを媒介することができる。場合によって、リポソームはまた、例えば、ＲＮＡｉ剤を特定の細胞タイプに誘導するために、特異的に標的化される。 A. RNAi Agent Formulations Comprising Membrane Molecular Assemblies RNAi agents for use in the compositions and methods of the present disclosure can be formulated for delivery in membrane molecular assemblies, eg, liposomes or micelles. As used herein, the term "liposome" means a vesicle composed of amphipathic lipids arranged in at least one bilayer, such as a bilayer or bilayers. Liposomes include unilamellar and multilamellar vesicles having a membrane formed from lipophilic material and an aqueous interior. The aqueous portion contains the RNAi agent composition. The lipophilic material separates the aqueous interior from the aqueous exterior, which typically does not contain (and in some instances may contain) the RNAi agent composition. Liposomes are useful for the transfer and delivery of active ingredients to the site of action. Since liposome membranes are structurally similar to biological membranes, the liposome bilayer fuses with the cell membrane bilayer when the liposomes are applied to a tissue. As liposome-cell coalescence proceeds, the internal aqueous contents containing the RNAi agent are delivered into the cell, where the RNAi agent can specifically bind to target RNA and mediate RNAi. can be done. In some cases, the liposomes are also specifically targeted, eg, to direct the RNAi agent to particular cell types.

ＲＮＡｉ剤を含有するリポソームは、様々な方法によって調製することができる。一例において、リポソームの脂質成分が界面活性剤に溶解され、それにより、脂質成分によってミセルが形成される。例えば、脂質成分は、両親媒性カチオン性脂質または脂質コンジュゲートであり得る。界面活性剤は、高い臨界ミセル濃度を有することができ、非イオン性であり得る。例示的界面活性剤としては、コレート、ＣＨＡＰＳ、オクチルグルコシド、デオキシコレート、およびラウロイルサルコシンが挙げられる。次いで、ＲＮＡｉ剤が、脂質成分を含むミセルに加えられる。脂質上のカチオン性基は、ＲＮＡｉ剤と相互作用し、ＲＮＡｉ剤の周りに凝縮してリポソームを形成する。凝縮後、界面活性剤は、ＲＮＡｉ剤のリポソーム調製物を得るために、例えば、透析などによって除去される。 Liposomes containing RNAi agents can be prepared by a variety of methods. In one example, the lipid components of the liposomes are dissolved in a detergent, thereby forming micelles with the lipid components. For example, the lipid component can be an amphipathic cationic lipid or lipid conjugate. Surfactants can have a high critical micelle concentration and can be non-ionic. Exemplary surfactants include cholate, CHAPS, octylglucoside, deoxycholate, and lauroylsarcosine. An RNAi agent is then added to the micelle containing the lipid component. Cationic groups on the lipid interact with the RNAi agent and condense around the RNAi agent to form liposomes. After condensation, the detergent is removed, such as by dialysis, to obtain a liposomal preparation of the RNAi agent.

必要であれば、凝集反応の際に、例えば、制御された添加によって、凝集を補助する担体化合物を加えることもできる。例えば、担体化合物は、核酸以外のポリマーであり得る（例えば、スペルミン、またはスペルミジン）。凝縮を支持するために、ｐＨも調整することができる。 If desired, carrier compounds can be added during the agglutination reaction to aid in agglutination, for example by controlled addition. For example, carrier compounds can be polymers other than nucleic acids (eg, spermine or spermidine). The pH can also be adjusted to support condensation.

デリバリービヒクルの構造要素としてポリヌクレオチド／カチオン性脂質複合体を組み込む、安定なポリヌクレオチドデリバリービヒクルを生成する方法は、例えば、ＷＯ９６／３７１９４においてより詳細に説明されており、その内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。リポソームの形成は、Felgner, P. L. et al., (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 8:7413-7417；米国特許第４，８９７，３５５号；国特許第５，１７１，６７８号；Bangham et al., (1965) M. Mol. Biol. 23:238; Olson et al., (1979) Biochim. Biophys. Acta 557:9; Szoka et al., (1978) Proc. Natl. Acad. Sci. 75: 4194; Mayhew et al., (1984) Biochim. Biophys. Acta 775:169; Kim et al., (1983) Biochim. Biophys. Acta 728:339; and Fukunaga et al., (1984) Endocrinol. 115:757において説明される例示的方法の１つまたは複数の態様も含むことができる。デリバリービヒクルとしての使用のために適切なサイズの脂質集合体を調製するために一般的に使用される方法としては、超音波処理ならびに凍結融解および押出加工が挙げられる［例えば、Mayer et al., (1986) Biochim. Biophys. Acta 858:161を参照されたい］。一貫して小さくて（５０ｎｍから２００ｎｍ）比較的均一な集合体が所望される場合、顕微溶液化を使用することができる［Mayhew et al., (1984) Biochim. Biophys. Acta 775:169］。これらの方法は、ＲＮＡｉ剤調製物をリポソーム内にパッキングすることに容易に適合される。 Methods for generating stable polynucleotide delivery vehicles that incorporate polynucleotide/cationic lipid complexes as structural elements of the delivery vehicle are described in greater detail, for example, in WO 96/37194, the entire contents of which are incorporated herein by reference. incorporated herein. Formation of liposomes has been described by Felgner, P. L. et al., (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 8:7413-7417; Bangham et al., (1965) M. Mol. Biol. 23:238; Olson et al., (1979) Biochim. Biophys. 75: 4194; Mayhew et al., (1984) Biochim. Biophys. Acta 775:169; Kim et al., (1983) Biochim. 115:757 may also include one or more aspects of the exemplary methods described. Commonly used methods for preparing lipid aggregates of appropriate size for use as delivery vehicles include sonication and freeze-thaw and extrusion [see, eg, Mayer et al., (1986) Biochim. Biophys. Acta 858:161]. Microfluidization can be used when consistently small (50 nm to 200 nm) and relatively uniform aggregates are desired [Mayhew et al., (1984) Biochim. Biophys. Acta 775:169]. These methods are readily adapted for packaging RNAi agent preparations within liposomes.

リポソームは、２つの広いクラスに分類される。カチオン性リポソームは、正に帯電したリポソームであり、負に帯電した核酸分子と相互作用して、安定な複合体を形成する。正に帯電した核酸／リポソーム複合体は、負に帯電した細胞表面に結合し、エンドソームに内在化される。エンドソーム内の酸性ｐＨにより、リポソームは破裂して、その内容物を細胞質中へと放出する［Wang et al. (1987) Biochem. Biophys. Res. Commun., 147:980-985］。 Liposomes fall into two broad classes. Cationic liposomes are positively charged liposomes that interact with negatively charged nucleic acid molecules to form stable complexes. Positively charged nucleic acid/liposome complexes bind to negatively charged cell surfaces and are internalized into endosomes. The acidic pH within the endosome causes the liposome to rupture and release its contents into the cytoplasm [Wang et al. (1987) Biochem. Biophys. Res. Commun., 147:980-985].

リポソームは、ｐＨ感応性（ｐＨ－ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ）であるかまたは負に帯電しており、それらとの複合体ではなく核酸を捕捉する。核酸および脂質の両方が、同じように荷電されるため、複合体形成ではなく反発が生じる。それにもかかわらず、いくらかの核酸は、これらのリポソームの水性内部へと捕捉される。チミジンキナーゼ遺伝子をコードする核酸を培養中の細胞単層にデリバリーするために、ｐＨ感応性リポソームが使用されている。外因性遺伝子の発現が、標的遺伝子において検出された［Zhou et al. (1992) Journal of Controlled Release, 19:269-274］。 Liposomes are pH-sensitive or negatively charged and entrap nucleic acids rather than complex with them. Since both nucleic acids and lipids are similarly charged, repulsion rather than complexation occurs. Nonetheless, some nucleic acids are entrapped within the aqueous interior of these liposomes. pH-sensitive liposomes have been used to deliver nucleic acids encoding the thymidine kinase gene to cell monolayers in culture. Exogenous gene expression was detected in target genes [Zhou et al. (1992) Journal of Controlled Release, 19:269-274].

リポソーム組成物の主要なタイプの１つは、天然由来のホスファチジルコリン以外のリン脂質を含む。中性リポソーム組成物は、例えば、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）またはジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）から形成することができる。アニオン性リポソーム組成物は、概して、ジミリストイルホスファチジルグリセロールから形成され、その一方で、アニオン性融合リポソームは、主に、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）から形成される。別のタイプのリポソーム組成物は、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、例えば、大豆ＰＣおよび卵ＰＣなど、から形成される。別のタイプは、リン脂質またはホスファチジルコリンまたはコレステロールの混合物から形成される。 One major type of liposomal composition contains phospholipids other than naturally occurring phosphatidylcholine. Neutral liposome compositions, for example, can be formed from dimyristoyl phosphatidylcholine (DMPC) or dipalmitoyl phosphatidylcholine (DPPC). Anionic liposome compositions are generally formed from dimyristoyl phosphatidylglycerol, while anionic fusogenic liposomes are formed primarily from dioleoyl phosphatidylethanolamine (DOPE). Another type of liposomal composition is formed from phosphatidylcholines (PC), such as soybean PC and egg PC. Another type is formed from mixtures of phospholipids or phosphatidylcholines or cholesterol.

インビトロおよびインビボにおいてリポソームを細胞に導入する他の方法の例としては、米国特許第５，２８３，１８５号；米国特許第５，１７１，６７８号；ＷＯ９４／００５６９；ＷＯ９３／２４６４０；ＷＯ９１／１６０２４；Felgner, (1994) J. Biol. Chem. 269:2550; Nabel, (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. 90:11307; Nabel, (1992) Human Gene Ther. 3:649; Gershon, (1993) Biochem. 32:7143; and Strauss, (1992) EMBO J. 11:417が挙げられる。 Examples of other methods of introducing liposomes into cells in vitro and in vivo include US Pat. No. 5,283,185; US Pat. No. 5,171,678; WO94/00569; WO93/24640; Felgner, (1994) J. Biol. Chem. 269:2550; Nabel, (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. Biochem. 32:7143; and Strauss, (1992) EMBO J. 11:417.

非イオン性リポソーム系、特に、非イオン性界面活性剤とコレステロールとを含む系も、皮膚への薬物のデリバリーにおけるそれらの有用性を判定するために調べられている。ノバソーム（Ｎｏｖａｓｏｍｅ）（商標） Ｉ（ジラウリン酸グリセリル／コレステロール／ポリオキシエチレン－１０－ステアリルエーテル）およびノバソーム（商標） ＩＩ（ジステアリン酸グリセリル／コレステロール／ポリオキシエチレン－１０－ステアリルエーテル）を含む非イオン性リポソーム製剤が、マウスの皮膚の真皮中にシクロスポリン－Ａをデリバリーするために使用された。結果は、そのような非イオン性リポソーム系が、皮膚の異なる層中へのシクロスポリン－Ａの蓄積を促進することにおいて有効であることを示した［Hu et al., (1994) S.T.P.Pharma. Sci., 4(6):466］。 Nonionic liposomal systems, particularly systems comprising nonionic surfactants and cholesterol, have also been investigated to determine their usefulness in delivering drugs to the skin. Non-ionics including Novasome™ I (glyceryl dilaurate/cholesterol/polyoxyethylene-10-stearyl ether) and Novasome™ II (glyceryl distearate/cholesterol/polyoxyethylene-10-stearyl ether) A liposomal formulation was used to deliver cyclosporin-A into the dermis of mouse skin. Results have shown that such nonionic liposome systems are effective in promoting the accumulation of cyclosporin-A into different layers of the skin [Hu et al., (1994) S.T.P.Pharma. ., 4(6):466].

リポソームは、「立体的に安定化された」リポソームも含み、当該用語は、本明細書において使用される場合、リポソームに組み込まれた場合に、結果としてそのような特化された脂質を欠くリポソームと比較して増強された循環寿命を生じるような１つまたは複数の特化された脂質を含むリポソームを意味する。立体的に安定化されたリポソームの例は、リポソームのベシクル形成脂質部分の一部が、（Ａ）１つまたは複数の糖脂質、例えば、モノシアロガングリオシドＧＭ１を含むもの、または（Ｂ）：１つまたは複数の親水性ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分などによって誘導体化されるものである。いかなる特定の理論にも束縛されることを望まないが、少なくとも、ガングリオシド、スフィンゴミエリン、またはＰＥＧ誘導体化脂質を含む立体的に安定化されたリポソームの場合、これらの立体的に安定化されたリポソームの増強された循環半減期は、細網内皮系（ＲＥＳ）の細胞内への減少した取り込みに由来すると、当技術分野において考えられる［Allen et al., (1987) FEBS Letters, 223:42; Wu et al., (1993) Cancer Research, 53:3765］。 Liposomes also include "sterically stabilized" liposomes, a term as used herein that, when incorporated into a liposome, result in liposomes that lack such specialized lipids. Liposomes containing one or more specialized lipids that result in enhanced circulation longevity compared to liposomes. Examples of sterically stabilized liposomes are those in which a portion of the vesicle-forming lipid portion of the liposome comprises (A) one or more glycolipids, such as monosialoganglioside G M1 , or (B): Those that are derivatized with one or more hydrophilic polymers, such as polyethylene glycol (PEG) moieties. Without wishing to be bound by any particular theory, at least for sterically stabilized liposomes comprising gangliosides, sphingomyelin, or PEG-derivatized lipids, these sterically stabilized liposomes is believed in the art to result from decreased uptake into cells of the reticuloendothelial system (RES) [Allen et al., (1987) FEBS Letters, 223:42; Wu et al., (1993) Cancer Research, 53:3765].

１つまたは複数の糖脂質を含む様々なリポソームが、当技術分野で公知である。Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓら［Ann. N.Y. Acad. Sci., (1987), 507:64］は、リポソームの血液半減期を改善する、モノシアロガングリオシドＧＭ１、硫酸ガラクトセレブロシドサルフェート、およびホスファチジルイノシトールの能力について報告している。これらの知見は、Ｇａｂｉｚｏｎら［Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., (1988), 85,:6949］によって解説されている。米国特許第４，８３７，０２８号およびＷＯ８８／０４９２４（両方ともＡｌｌｅｎらによる）では、（１）スフィンゴミエリン、および（２）ガングリオシドＧＭ１またはガラクトセレブロシド硫酸エステルを含むリポソームが開示されている。米国特許第５，５４３，１５２号（Ｗｅｂｂら）では、スフィンゴミエリンを含むリポソームについて開示されている。１，２－ｓｎ－ジミリストイルホスファチジルコリンを含むリポソームが、ＷＯ９７／１３４９９（Ｌｉｍら）において開示されている。 Various liposomes containing one or more glycolipids are known in the art. Papahadjopoulos et al [Ann. N.Y. Acad. Sci., (1987), 507:64] report the ability of monosialoganglioside GM1, galactocerebroside sulfate, and phosphatidylinositol to improve the blood half-life of liposomes. . These findings are reviewed by Gabizon et al. [Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., (1988), 85,:6949]. US Pat. No. 4,837,028 and WO 88/04924 (both to Allen et al.) disclose liposomes containing (1) sphingomyelin and (2) ganglioside GM1 or galactocerebroside sulfate. US Pat. No. 5,543,152 (Webb et al.) discloses liposomes containing sphingomyelin. Liposomes containing 1,2-sn-dimyristoyl phosphatidylcholine are disclosed in WO97/13499 (Lim et al.).

一実施形態において、カチオン性リポソームが使用される。カチオン性リポソームは、細胞膜に融合することができるという利点を有する。非カチオン性リポソームは、原形質膜と効率的には融合することができないが、インビボにおいてマクロファージによって取り込まれるため、ＲＮＡｉ剤をマクロファージにデリバリーするために使用することができる。 In one embodiment, cationic liposomes are used. Cationic liposomes have the advantage of being able to fuse to cell membranes. Non-cationic liposomes cannot fuse efficiently with the plasma membrane, but are taken up by macrophages in vivo and can be used to deliver RNAi agents to macrophages.

リポソームのさらなる利点としては、天然のリン脂質から得られるリポソームが生体適合性および生分解性であること；リポソームは、様々な水および脂質溶解性薬物を組み込むことができること；リポソームは、それらの内部コンパートメント内のカプセル化されたＲＮＡｉ剤を、代謝および劣化から保護することができることが挙げられる［Rosoff, in "Pharmaceutical Dosage Forms," Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, volume 1, p. 245］。リポソーム製剤の調製における重要な考慮すべき事柄は、脂質表面の電荷、ベシクルのサイズ、およびリポソームの水の量である。 Additional advantages of liposomes include that liposomes derived from natural phospholipids are biocompatible and biodegradable; liposomes can incorporate a variety of water- and lipid-soluble drugs; Encapsulated RNAi agents within the compartment can be protected from metabolism and degradation [Rosoff, in "Pharmaceutical Dosage Forms," Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, volume 1, p. 245]. Important considerations in the preparation of liposomal formulations are the lipid surface charge, the size of the vesicles, and the amount of water in the liposomes.

正に帯電した合成カチオン性脂質であるＮ－［１－（２，３－ジオレイルオキシ）プロピル］－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチル塩化アンモニウム（ＤＯＴＭＡ）は、小さいリポソームを形成するために使用することができ、リポソームは、自然に核酸と相互作用して、組織培養細胞の細胞膜の負に帯電した脂質と融合することができる脂質－核酸複合体を形成し、それにより、結果としてＲＮＡｉ剤のデリバリーをもたらす（例えば、ＤＯＴＭＡおよびＤＮＡによるその使用の説明は、Felgner, P. L. et al., (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 8:7413-7417、および米国特許第４，８９７，３５５号を参照されたい）。 N-[1-(2,3-dioleyloxy)propyl]-N,N,N-trimethylammonium chloride (DOTMA), a positively charged synthetic cationic lipid, is used to form small liposomes. liposomes can naturally interact with nucleic acids to form lipid-nucleic acid complexes that can fuse with the negatively charged lipids of the cell membrane of tissue culture cells, thereby resulting in an RNAi agent. (for example, a description of DOTMA and its use with DNA, see Felgner, P. L. et al., (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 8:7413-7417, and U.S. Pat. No. 4,897,355). No.).

ＤＯＴＭＡアナログである１，２－ビス（オレオイルオキシ）－３－（トリメチルアンモニア）プロパン（ＤＯＴＡＰ）は、リン脂質と組み合わせて使用することにより、ＤＮＡ複合体化ベシクルを形成することができる。リポフェクチン（商標）（Ｂｅｔｈｅｓｄａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ゲイザースバーグ、メリーランド州）は、負に帯電したポリヌクレオチドと自然に相互作用して複合体を形成する正に帯電したＤＯＴＭＡリポソームを含む、生きた組織培養細胞内への高いアニオン性の核酸のデリバリーのための有効な薬剤である。十分に正に帯電したリポソームが使用される場合、結果として得られる複合体上の正味電荷も正である。この方法において調製された正に帯電した複合体は、負に帯電した細胞表面に自然に付着し、原形質膜と融合して、機能的核酸を、例えば、組織培養細胞内へと効率的にデリバリーする。別の市販のカチオン性脂質である１，２－ビス（オレオイルオキシ）－３，３－（トリメチルアンモニア）プロパン（「ＤＯＴＡＰ」）（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ、インディアナポリス、インディアナ）は、オレオイル部分が、エーテル連結ではなくエステルによって連結されている点においてＤＯＴＭＡとは異なっている。 The DOTMA analog 1,2-bis(oleoyloxy)-3-(trimethylammonia)propane (DOTAP) can be used in combination with phospholipids to form DNA complexing vesicles. Lipofectin™ (Bethesda Research Laboratories, Gaithersburg, Md.) is a living tissue culture assay containing positively charged DOTMA liposomes that naturally interact and form complexes with negatively charged polynucleotides. It is an effective agent for delivery of highly anionic nucleic acids into cells. If sufficiently positively charged liposomes are used, the net charge on the resulting complex is also positive. Positively charged complexes prepared in this manner naturally attach to the negatively charged cell surface and fuse with the plasma membrane to efficiently transfer functional nucleic acids into, for example, tissue culture cells. deliver. Another commercially available cationic lipid, 1,2-bis(oleoyloxy)-3,3-(trimethylammonia)propane (“DOTAP”) (Boehringer Mannheim, Indianapolis, Indiana), has It differs from DOTMA in that it is linked by an ester rather than an ether linkage.

他の報告されたカチオン性脂質化合物としては、様々な部分にコンジュゲートしているもの、例えば、２つのタイプの脂質の一方にコンジュゲートしているカルボキシスペルミンなど、ならびに５－カルボキシスペルミルグリシンジオクタオレオイルアミド（「ＤＯＧＳ」）（トランスフェクタム（商標）、Ｐｒｏｍｅｇａ、マディソン、ウィスコンシン州）およびジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン５－カルボキシスペルミル－アミド（「ＤＰＰＥＳ」）などの化合物が挙げられる（例えば、米国特許第５，１７１，６７８号を参照されたい）。 Other reported cationic lipid compounds include those conjugated to various moieties, such as carboxyspermine conjugated to one of the two types of lipids, as well as 5-carboxyspermylglycine. compounds such as octaoleoylamide (“DOGS”) (Transfectam™, Promega, Madison, Wis.) and dipalmitoylphosphatidylethanolamine 5-carboxyspermyl-amide (“DPPES”) (e.g. , see U.S. Pat. No. 5,171,678).

別のカチオン性脂質コンジュゲートは、ＤＯＰＥと組み合わせてリポソーム中へと製剤化されているコレステロールによる脂質の誘導体化（「ＤＣ－Ｃｈｏｌ」）を含む［Gao, X. and Huang, L., (1991) Biochim. Biophys. Res. Commun. 179:280を参照されたい］。ポリリジンをＤＯＰＥにコンジュゲートさせることによって作製されたリポポリリジンは、血清の存在下でのトランスフェクションにとって効果的であることが報告されている［Zhou, X. et al., (1991) Biochim. Biophys. Acta 1065:8］。ある特定の細胞系にとって、コンジュゲートしたカチオン性脂質を含むこれらのリポソームは、低い毒性を示すと言われており、ＤＯＴＭＡ含有組成物よりもより効率的なトランスフェクションを提供する。他の市販のカチオン性脂質製品としては、ＤＭＲＩＥおよびＤＭＲＩＥ－ＨＰ（Ｖｉｃａｌ、ラ・ホーヤ、カリフォルニア）およびリポフェクタミン（ＤＯＳＰＡ）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｉｎｃ．、ゲイザースバーグ、メリーランド州）が挙げられる。オリゴヌクレオチドのデリバリーにとって好適な他のカチオン性脂質は、ＷＯ９８／３９３５９およびＷＯ９６／３７１９４に記載されている。 Another cationic lipid conjugate involves the derivatization of lipids with cholesterol (“DC-Chol”) formulated into liposomes in combination with DOPE [Gao, X. and Huang, L., (1991 ) Biochim. Biophys. Res. Commun. 179:280]. Lipopolylysine, made by conjugating polylysine to DOPE, has been reported to be effective for transfection in the presence of serum [Zhou, X. et al., (1991) Biochim. Acta 1065:8]. For certain cell lines, these liposomes containing conjugated cationic lipids are said to exhibit low toxicity and provide more efficient transfection than DOTMA-containing compositions. Other commercially available cationic lipid products include DMRIE and DMRIE-HP (Vical, La Jolla, Calif.) and Lipofectamine (DOSPA) (Life Technology, Inc., Gaithersburg, Md.). Other cationic lipids suitable for delivery of oligonucleotides are described in WO98/39359 and WO96/37194.

リポソーム製剤は、局所性投与に対して特に適しており、リポソームは、他の製剤に勝るいくつかの利点を提示する。そのような利点としては、投与された薬物の高い体内吸収に関連する副作用の減少、所望の標的での投与された薬物の累積の増加、およびＲＮＡｉ剤を皮膚に投与する能力が挙げられる。いくつかの実践形態において、リポソームは、ＲＮＡｉ剤を上皮細胞にデリバリーするため、および皮膚組織内、例えば、皮膚内へのＲＮＡｉ剤の浸透を増強するためにも、使用される。例えば、リポソームは、局所的に適用することができる。リポソームとして製剤化された薬物の皮膚への局所デリバリーは、文献に報告されている［例えば、Weiner et al., (1992) Journal of Drug Targeting, vol. 2,405-410 and du Plessis et al., (1992) Antiviral Research, 18:259-265; Mannino, R. J. and Fould-Fogerite, S., (1998) Biotechniques 6:682-690; Itani, T. et al., (1987) Gene 56:267-276; Nicolau, C. et al. (1987) Meth. Enzymol. 149:157-176; Straubinger, R. M. and Papahadjopoulos, D. (1983) Meth. Enzymol. 101:512-527; Wang, C. Y. and Huang, L., (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:7851-7855を参照されたい］。 Liposomal formulations are particularly suitable for topical administration, and liposomes offer several advantages over other formulations. Such advantages include reduced side effects associated with high systemic absorption of the administered drug, increased accumulation of the administered drug at the desired target, and the ability to deliver RNAi agents to the skin. In some implementations, liposomes are used to deliver RNAi agents to epithelial cells and also to enhance penetration of RNAi agents into skin tissue, eg, skin. For example, liposomes can be applied topically. Topical delivery of drugs formulated as liposomes to the skin has been reported in the literature [e.g., Weiner et al., (1992) Journal of Drug Targeting, vol. 1992) Antiviral Research, 18:259-265; Mannino, R. J. and Fould-Fogerite, S., (1998) Biotechniques 6:682-690; Itani, T. et al., (1987) Gene 56:267-276; Nicolau, C. et al. (1987) Meth. Enzymol. 149:157-176; Straubinger, R. M. and Papahadjopoulos, D. (1983) Meth. Enzymol. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:7851-7855].

非イオン性リポソーム系、特に、非イオン性界面活性剤とコレステロールを含む系、も、皮膚への薬物のデリバリーにおけるそれらの有用性を判定するためにも調べられている。マウスの皮膚の真皮内に薬物をデリバリーするために、ノバソームＩ（ジラウリン酸グリセリル／コレステロール／ポリオキシエチレン－１０－ステアリルエーテル）およびノバソームＩＩ（ジステアリン酸グリセリル／コレステロール／ポリオキシエチレン－１０－ステアリルエーテル）を含む非イオン性リポソーム製剤が使用された。ＲＮＡｉ剤を伴うそのような製剤は、皮膚科障害を処置するために有用である。 Non-ionic liposome systems, particularly systems containing non-ionic surfactants and cholesterol, have also been investigated to determine their usefulness in delivering drugs to the skin. Novasome I (glyceryl dilaurate/cholesterol/polyoxyethylene-10-stearyl ether) and Novasome II (glyceryl distearate/cholesterol/polyoxyethylene-10-stearyl ether) were used to deliver drugs into the dermis of mouse skin. ) was used. Such formulations with RNAi agents are useful for treating dermatological disorders.

ＲＮＡｉ剤を含むリポソームは、非常に変形可能に作製することができる。そのような変形能は、リポソームがリポソームの平均半径より小さい孔を通って浸透することを可能にする。例えば、トランスファーソーム（ｔｒａｎｓｆｅｒｓｏｍｅ）は、変形可能なタイプのリポソームである。トランスファーソームは、表面エッジ活性化剤（ｓｕｒｆａｃｅ ｅｄｇｅ ａｃｔｉｖａｔｏｒ）、通常は界面活性剤を標準的リポソーム組成物に加えることによって作製することができる。ＲＮＡｉ剤を含むトランスファーソームは、ＲＮＡｉ剤を皮膚のケラチン生成細胞にデリバリーするために、感染によって、例えば皮下に、デリバリーすることができる。無傷の哺乳動物の皮膚を横断するために、脂質ベシクルは、好適な経皮勾配の影響下において、それぞれが５０ｎｍ未満の直径を有する一連の微細な孔を通過しなければならない。加えて、脂質特性に起因して、これらのトランスファーソームは、自己最適性（例えば皮膚などにおける孔の形状に適応性のある）、自己修復性であり得、ならびに断片化することなく頻繁にそれらの標的に達することができ、多くの場合、自己装填することができる。 Liposomes containing RNAi agents can be made highly deformable. Such deformability allows liposomes to penetrate through pores smaller than the average radius of the liposomes. For example, transfersomes are a deformable type of liposome. Transfersomes can be made by adding a surface edge activator, usually a surfactant, to a standard liposomal composition. Transfersomes containing the RNAi agent can be delivered by infection, eg, subcutaneously, to deliver the RNAi agent to the keratinocytes of the skin. To traverse intact mammalian skin, lipid vesicles must pass through a series of fine pores, each with a diameter of less than 50 nm, under the influence of a suitable transdermal gradient. In addition, due to their lipid properties, these transfersomes can be self-optimizing (e.g. adaptable to the shape of pores such as in the skin), self-repairing, and frequently can be used without fragmentation. targets and can often be self-loading.

本開示に適した他の製剤は、２００８年１月２日に出願された米国特許仮出願第６１／０１８，６１６号；２００８年１月２日に出願された米国特許仮出願第６１／０１８，６１１号；２００８年３月２６日に出願された米国特許仮出願第６１／０３９，７４８号；２００８年４月２２日に出願された米国特許仮出願第６１／０４７，０８７号；および２００８年５月８日に出願された米国特許仮出願第６１／０５１，５２８号に記載される。２００７年１０月３日に出願されたＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０８０３３１号にも、本開示に適した製剤について記載されている。 Other formulations suitable for the present disclosure are US Provisional Application No. 61/018,616 filed January 2, 2008; , 611; U.S. Provisional Application No. 61/039,748 filed March 26, 2008; U.S. Provisional Application No. 61/047,087 filed April 22, 2008; No. 61/051,528, filed May 8, 2005. PCT Application No. PCT/US2007/080331, filed Oct. 3, 2007, also describes suitable formulations for the present disclosure.

トランスファーソームは、別のタイプのリポソームであり、薬物デリバリーシステムの魅力的な候補である、非常に変形可能な脂質集合体である。トランスファーソームは、非常に変形可能であるため、脂質滴より小さい孔を通って容易に浸透することができる、脂質滴として説明することができる。トランスファーソームは、それらが使用される環境に適応し、例えば、それらは、自己最適性（皮膚における孔の形状に適応性のある）であり、自己修復性であり、断片化することなく頻繁にそれらの標的に達し、多くの場合、自動装填性である。トランスファーソームを作製するために、表面エッジ活性化剤、通常は界面活性剤を標準的リポソーム組成物に加えることができる。トランスファーソームは、皮膚に血清アルブミンをデリバリーするために使用されてきた。血清アルブミンのトランスファーソーム媒介デリバリーは、血清アルブミンを含有する溶液の皮下注入と同じくらい有効であることが分かっている。 Transfersomes, another type of liposome, are highly deformable lipid assemblies that are attractive candidates for drug delivery systems. Transfersomes can be described as lipid droplets that are so deformable that they can easily penetrate through pores that are smaller than the lipid droplet. Transfersomes adapt to the environment in which they are used, for example, they are self-optimizing (adapted to the shape of pores in the skin), self-repairing, and often They reach their targets and are often self-loading. To make transfersomes, surface edge activators, usually surfactants, can be added to standard liposomal compositions. Transfersomes have been used to deliver serum albumin to the skin. Transfersome-mediated delivery of serum albumin has been found to be as effective as subcutaneous injection of a solution containing serum albumin.

界面活性剤は、本明細書において説明されるような製剤において、特にエマルション（マイクロエマルションを含む）において、広い応用を見い出す。天然および合成の、多くの異なるタイプの界面活性剤の特性を分類および格付けする最も一般的な方法は、親水性／親油性バランス（ＨＬＢ）の使用による方法である。親水性基（「ヘッド」としても知られる）の性質は、製剤に使用される様々な界面活性剤をカテゴライズするための最も有用な手段を提供する（Rieger, in Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., 1988, p. 285）。 Surfactants find wide application in formulations such as those described herein, particularly in emulsions (including microemulsions). The most common method of classifying and rating the properties of many different types of surfactants, both natural and synthetic, is through the use of the hydrophilic/lipophilic balance (HLB). The nature of the hydrophilic group (also known as the "head") provides the most useful means for categorizing the various surfactants used in formulations (Rieger, in Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Dekker, Inc. ., New York, N.Y., 1988, p. 285).

界面活性剤分子がイオン化されない場合、それらは、非イオン性界面活性剤として分類される。非イオン性界面活性剤は、医薬品および化粧製品において広い応用を見い出し、広い範囲のｐＨ値において使用可能である。概して、それらのＨＬＢ値は、それらの構造に応じて２から約１８の範囲である。非イオン性界面活性剤としては、非イオン性エステル、例えば、エチレングリコールエステル、プロピレングリコールエステル、グリセリルエステル、ポリグリセリルエステル、ソルビタンエステル、スクロースエステル、およびエトキシル化エステルなどが挙げられる。非イオン性アルカノールアミドおよびエーテル、例えば、脂肪族アルコールエトキシレート、プロポキシル化アルコール、およびエトキシル化／プロポキシル化ブロックポリマーなど、も、このクラスに含まれる。ポリオキシエチレン界面活性剤は、非イオン性界面活性剤のクラスの最も一般的なメンバーである。 If the surfactant molecules are not ionized, they are classified as nonionic surfactants. Nonionic surfactants find wide application in pharmaceutical and cosmetic products and are usable in a wide range of pH values. In general, their HLB values range from 2 to about 18 depending on their structure. Nonionic surfactants include nonionic esters such as ethylene glycol esters, propylene glycol esters, glyceryl esters, polyglyceryl esters, sorbitan esters, sucrose esters, and ethoxylated esters. Nonionic alkanolamides and ethers such as fatty alcohol ethoxylates, propoxylated alcohols, and ethoxylated/propoxylated block polymers are also included in this class. Polyoxyethylene surfactants are the most common members of the class of nonionic surfactants.

水に溶解または分散されたときに、界面活性剤分子が負電荷を保持する場合、界面活性剤は、アニオン性として分類される。アニオン性界面活性剤としては、カルボキシレート、例えば、石鹸など、アシルラクチレ－ト、アミノ酸のアシルアミド、硫酸のエステル、例えば、アルキル硫酸エステルおよびエトキシ化アルキル硫酸エステルなど、スルホネート、例えば、アキルベンゼンスルホネート、など、アシルイセチオネート、アシルタウレート、ならびにスルホスクシネートおよびホスフェートが挙げられる。アニオン性界面活性剤のクラスの最も一般的なメンバーは、アルキル硫酸エステルおよび石鹸である。 A surfactant is classified as anionic if the surfactant molecule retains a negative charge when dissolved or dispersed in water. Anionic surfactants include carboxylates such as soaps, acyl lactylates, acylamides of amino acids, esters of sulfuric acid such as alkyl sulfates and ethoxylated alkyl sulfates, sulfonates such as alkylbenzene sulfonates, and the like. , acyl isethionates, acyl taurates, and sulfosuccinates and phosphates. The most common members of the anionic surfactant class are alkyl sulfates and soaps.

水に溶解または分散されたときに、界面活性剤分子が正電荷を保持する場合、界面活性剤は、カチオン性として分類される。カチオン性界面活性剤としては、第四級アンモニウム塩およびエトキシ化アミンが挙げられる。第四級アンモニウム塩は、このクラスの最も使用されるメンバーである。 A surfactant is classified as cationic if the surfactant molecule retains a positive charge when dissolved or dispersed in water. Cationic surfactants include quaternary ammonium salts and ethoxylated amines. Quaternary ammonium salts are the most used members of this class.

界面活性剤分子が、正電荷または負電荷のどちらかを保持する能力を有する場合、界面活性剤は、両性として分類される。両性界面活性剤としては、アクリル酸誘導体、置換アルキルアミド、Ｎ－アルキルベタインおよびホスファチドが挙げられる。薬品、製剤、およびエマルションにおける界面活性剤の使用は、概説されている（Rieger, in Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., 1988, p. 285）。 A surfactant is classified as amphoteric if the surfactant molecule has the ability to carry either a positive or a negative charge. Amphoteric surfactants include acrylic acid derivatives, substituted alkylamides, N-alkylbetaines and phosphatides. The use of surfactants in drugs, formulations, and emulsions has been reviewed (Rieger, in Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., 1988, p. 285).

本開示の方法での使用のためのＲＮＡｉ剤は、ミセル製剤としても提供することができる。「ミセル」は、本明細書において、分子の全ての疎水性基が内側を向くように両親媒性分子が球状構造において整列され、それにより、親水性部分を周囲の水相に接触させたままにする、特定のタイプの分子アセンブリとして定義される。環境が疎水性の場合、逆の配置も存在する。 RNAi agents for use in the disclosed methods can also be provided as micellar formulations. A "micelle", as used herein, is an amphiphilic molecule arranged in a spherical structure such that all the hydrophobic groups of the molecule face inward, thereby leaving the hydrophilic portion in contact with the surrounding aqueous phase. defined as a specific type of molecular assembly that The opposite arrangement also exists when the environment is hydrophobic.

経皮的な膜によるデリバリーにとって好適な混合ミセル製剤は、ｓｉＲＮＡ組成物の水溶液と、アルカリ金属のＣ８からＣ２２アルキル硫酸塩と、ミセル形成化合物とを混合することによって調製され得る。例示的ミセル形成化合物としては、レシチン、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸の薬学的に許容される塩、グリコール酸、乳酸、カモミール抽出物、キュウリ抽出物、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、モノオレイン、モノオレエート、モノラウレート、ルリチシャ油、月見草油、メンソール、トリヒドロキシオキソコラニルグリシンおよびその薬学的に許容される塩、グリセリン、ポリグリセリン、リシン、ポリリジン、トリオレイン、ポリオキシエチレンエーテルおよびそのアナログ、ポリドカノールアルキルエーテルおよびそのアナログ、ケノデオキシコレート（ｃｈｅｎｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ）、デオキシコレート、ならびにそれらの混合物が挙げられる。ミセル形成化合物は、アルカリ金属のアルキル硫酸塩と同時に加えてもよく、またはそれらを加えた後に加えてもよい。混合ミセルは、原材料の、実質的に任意の種類の混合によって形成されるであろうが、より小さいサイズのミセルを提供するために、激しい混合によって形成されるであろう。 Mixed micelle formulations suitable for transdermal membrane delivery can be prepared by mixing an aqueous solution of the siRNA composition, a C8 to C22 alkyl sulfate salt of an alkali metal, and a micelle-forming compound. Exemplary micelle-forming compounds include lecithin, hyaluronic acid, pharmaceutically acceptable salts of hyaluronic acid, glycolic acid, lactic acid, chamomile extract, cucumber extract, oleic acid, linoleic acid, linolenic acid, monoolein, monooleate. , monolaurate, borage oil, evening primrose oil, menthol, trihydroxyoxocolanylglycine and its pharmaceutically acceptable salts, glycerin, polyglycerin, lysine, polylysine, triolein, polyoxyethylene ether and its analogs, poly Dokanol alkyl ethers and analogues thereof, chenodeoxycholate, deoxycholate, and mixtures thereof. The micelle-forming compound may be added at the same time as the alkali metal alkyl sulfate, or may be added after their addition. Mixed micelles may be formed by virtually any type of mixing of the raw materials, but by vigorous mixing to provide micelles of smaller size.

一方法において、第１のミセル組成物は、ｓｉＲＮＡ組成物と少なくともアルカリ金属アルキル塩酸塩とを含むように調製される。第１のミセル組成物は、次いで、少なくとも３つのミセル形成化合物と混合され、混合ミセル組成物を形成する。別の方法において、ミセル組成物は、ｓｉＲＮＡ組成物とアルカリ金属アルキル硫酸塩と、ミセル形成化合物のうちの少なくとも１つとを混合し、その後に、激しく混合しながら、残りのミセル形成化合物を加えることによって調製される。 In one method, a first micellar composition is prepared to include the siRNA composition and at least the alkali metal alkyl hydrochloride. The first micelle composition is then mixed with at least three micelle-forming compounds to form a mixed micelle composition. In another method, the micelle composition is prepared by mixing the siRNA composition, the alkali metal alkyl sulfate, and at least one of the micelle-forming compounds, followed by adding the remaining micelle-forming compound while mixing vigorously. Prepared by

製剤を安定化させるため、および細菌増殖から保護するために、フェノールまたはｍ－クレゾールを混合ミセル組成物に加えてもよい。あるいは、フェノールまたはｍ－クレゾールを、ミセル形成原材料と共に加えてもよい。グリセリンなどの等張剤を、混合ミセル組成物の形成後に加えてもよい。 Phenol or m-cresol may be added to the mixed micelle composition to stabilize the formulation and protect against bacterial growth. Alternatively, phenol or m-cresol may be added along with the micelle-forming raw materials. An isotonicity agent, such as glycerin, may be added after formation of the mixed micelle composition.

噴霧剤としてのミセル製剤のデリバリーのために、製剤を、エアゾールディスペンサーに入れることができ、ディスペンサーは、発射薬を装填される。加圧下の発射薬は、ディスペンサー内において液体状態である。原材料の比率は、水相および発射薬相が１つになるように、すなわち、１つの相が存在するように調整される。２つの相が存在する場合、例えば、計量式バルブなどによって、内容物の一部を分配する前に、ディスペンサーを振盪する必要がある。医薬品の分配用量が、微細な噴霧において計量式バルブから射出される。 For delivery of micellar formulations as a propellant, the formulation can be placed in an aerosol dispenser, which is loaded with a propellant. The propellant under pressure is in a liquid state within the dispenser. The ratio of raw materials is adjusted so that there is one aqueous phase and one propellant phase, ie one phase is present. If two phases are present, the dispenser should be shaken before dispensing a portion of the contents, such as by means of a metering valve. A dispensed dose of medicament is ejected from a metered valve in a fine spray.

発射薬は、含水素クロロフルオロカーボン、含水素フルオロカーボン、ジメチルエーテル、およびジエチルエーテルを含み得る。ある特定の実施形態において、ＨＦＡ１３４ａ（１，１，１，２テトラフルオロエタン）が使用され得る。 Propellants may include hydrogen-containing chlorofluorocarbons, hydrogen-containing fluorocarbons, dimethyl ether, and diethyl ether. In certain embodiments, HFA134a (1,1,1,2 tetrafluoroethane) can be used.

必須の原材料の特定の濃度は、比較的簡単な実験によって決定することができる。口腔による吸収のために、射出のためまたは胃腸管を通る投与のために、投薬量を、例えば、少なくとも二倍または三倍に増加させることは、多くの場合、望ましい。 Specific concentrations of essential raw materials can be determined by relatively simple experimentation. It is often desirable to increase the dosage, for example by at least a factor of two or three, for absorption by the oral cavity, for injection or for administration through the gastrointestinal tract.

Ｂ．脂質粒子
ＲＮＡｉ剤、例えば、本開示のｄｓＲＮＡは、脂質製剤、例えば、ＬＮＰなど、または他の核酸－脂質粒子において、完全にカプセル化され得る。 B. Lipid Particles RNAi agents, eg, dsRNA, of the present disclosure can be fully encapsulated in lipid formulations, such as LNPs, or other nucleic acid-lipid particles.

本明細書において使用される場合、用語「ＬＮＰ」は、安定な核酸－脂質粒子を意味する。ＬＮＰは、典型的には、カチオン性脂質、非カチオン性脂質、および粒子の凝集を防ぐ脂質（例えば、ＰＥＧ－脂質コンジュゲート）を含む。ＬＮＰは、静脈内注射（ｉ．ｖ．）後に、延長された循環寿命を示し、遠位部位（例えば、投与部位から物理的に分離された部位）において蓄積するため、全身投与にとって非常に有用である。ＬＮＰは、「ｐＳＰＬＰ」を含み、それは、ＷＯ００／０３６８３において詳しく説明されるようなカプセル化された縮合剤－核酸複合体を含む。本開示の粒子は、典型的には、約５０ｎｍから約１５０ｎｍ、より典型的には約６０ｎｍから約１３０ｎｍ、より典型的には約７０ｎｍから約１１０ｎｍ、最も典型的には約７０ｎｍから約９０ｎｍの平均直径を有し、実質的に非毒性である。加えて、核酸は、本開示の核酸－脂質粒子中に存在する場合、水溶液中において、ヌクレアーゼによる分解に対して抵抗性を有する。核酸－脂質粒子およびその調製方法は、例えば、米国特許第５，９７６，５６７号；同第５，９８１，５０１号；同第６，５３４，４８４号；同第６，５８６，４１０号；同第６，８１５，４３２号；米国特許出願公開第２０１０／０３２４１２０号、およびＷＯ９６／４０９６４において開示されている。 As used herein, the term "LNP" means a stable nucleic acid-lipid particle. LNPs typically include cationic lipids, non-cationic lipids, and lipids that prevent particle aggregation (eg, PEG-lipid conjugates). LNPs are very useful for systemic administration because they exhibit an extended circulatory lifetime after intravenous injection (i.v.) and accumulate at distal sites (e.g., sites physically separated from the site of administration). is. LNPs include "pSPLPs", which include encapsulated condensing agent-nucleic acid complexes as detailed in WO00/03683. Particles of the present disclosure are typically about 50 nm to about 150 nm, more typically about 60 nm to about 130 nm, more typically about 70 nm to about 110 nm, most typically about 70 nm to about 90 nm. It has an average diameter and is substantially non-toxic. Additionally, the nucleic acids, when present in the nucleic acid-lipid particles of the present disclosure, are resistant to degradation by nucleases in aqueous solutions. Nucleic acid-lipid particles and methods for their preparation are described, for example, in US Pat. Nos. 5,976,567; 5,981,501; No. 6,815,432; U.S. Patent Application Publication No. 2010/0324120, and WO96/40964.

一実施形態において、脂質と薬物の比率（質量／質量比）（例えば、脂質とｄｓＲＮＡの比率）は、約１：１から約５０：１、約１：１から約２５：１、約３：１から約１５：１、約４：１から約１０：１、約５：１から約９：１、または約６：１から約９：１の範囲であるだろう。上記に列記した範囲の中間的な範囲も、本開示の一部であることが想到される。 In one embodiment, the lipid to drug ratio (mass/mass ratio) (e.g., the lipid to dsRNA ratio) is about 1:1 to about 50:1, about 1:1 to about 25:1, about 3: It will range from 1 to about 15:1, from about 4:1 to about 10:1, from about 5:1 to about 9:1, or from about 6:1 to about 9:1. Ranges intermediate to the above recited ranges are also contemplated to be part of this disclosure.

ＲＮＡｉ剤のデリバリーのためのある特定のＬＮＰ製剤は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２００８／０４２９７３などにおいて説明されるような「ＬＮＰ０１」製剤など、当技術分野において説明されている。 Certain LNP formulations for delivery of RNAi agents are described in the art, such as the "LNP01" formulations, such as those described in WO2008/042973, which is incorporated herein by reference.

追加の例示的脂質－ｄｓＲＮＡ製剤は、下記の表２において特定される。 Additional exemplary lipid-dsRNA formulations are identified in Table 2 below.

表1

Figure 2023521604000040



Figure 2023521604000041


Figure 2023521604000042


ＤＳＰＣ：ジステアロイルホスファチジルコリン；ＤＰＰＣ：ジパルミトイルホスファチジルコリン；ＰＥＧ－ＤＭＧ：ＰＥＧ－ジジミリストイルグリセロール（Ｃ１４－ＰＥＧ、またはＰＥＧ－Ｃ１４）（ＰＥＧは２０００の平均分子量を有する）；ＰＥＧ－ＤＳＧ：ＰＥＧ－ジスチリルグリセロール（Ｃ１８－ＰＥＧ、またはＰＥＧ－Ｃ１８）（ＰＥＧは２０００の平均分子量を有する）；ＰＥＧ－ｃＤＭＡ：ＰＥＧ－カルバモイル－１，２－ジミリスチルオキシプロピルアミン（ＰＥＧは２０００の平均分子量を有する）およびＳＮＡＬＰ（１，２－ジリノレニルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＭＡ））を含む製剤は、参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２００９／１２７０６０に記載されている。 table 1
Figure 2023521604000040


Figure 2023521604000041


Figure 2023521604000042


DSPC: distearoylphosphatidylcholine; DPPC: dipalmitoylphosphatidylcholine; PEG-DMG: PEG-didymyristoylglycerol (C14-PEG, or PEG-C14) (PEG has an average molecular weight of 2000); PEG-DSG: PEG-distyryl glycerol (C18-PEG, or PEG-C18) (PEG has an average molecular weight of 2000); PEG-cDMA: PEG-carbamoyl-1,2-dimyristyloxypropylamine (PEG has an average molecular weight of 2000) and Formulations containing SNALP (1,2-dilinolenyloxy-N,N-dimethylaminopropane (DLinDMA)) are described in WO2009/127060, which is incorporated herein by reference.

ＸＴＣを含む製剤は、ＷＯ２０１０／０８８５３７に記載されており、その内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。ＭＣ３を含む製剤は、例えば、米国特許出願公開第２０１０／０３２４１２０号に記載されており、その内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。 Formulations containing XTC are described in WO2010/088537, the entire contents of which are incorporated herein by reference. Formulations comprising MC3 are described, for example, in US Patent Application Publication No. 2010/0324120, the entire contents of which are incorporated herein by reference.

ＡＬＮＹ－１００を含む製剤は、ＷＯ２０１０／０５４４０６に記載されており、その内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。 Formulations containing ALNY-100 are described in WO2010/054406, the entire contents of which are incorporated herein by reference.

Ｃ１２－２００を含む製剤は、ＷＯ２０１０／１２９７０９に記載されており、その内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。 Formulations containing C12-200 are described in WO2010/129709, the entire contents of which are incorporated herein by reference.

経口投与用の組成物および製剤としては、粉末剤または粒剤、マイクロ粒子、ナノ粒子、水または非水性媒体における懸濁剤または溶液剤、カプセル剤、ゲルカプセル剤、サッシェ、錠剤またはミニ錠剤が挙げられる。増粘剤、矯臭剤、希釈剤、乳化剤、分散助剤、または結合剤は、望ましくあり得る。一部の実施形態において、経口製剤は、本開示において特徴とされるｄｓＲＮＡが、１つまたは複数の浸透促進剤、界面活性剤、およびキレート化剤と併せて投与される、製剤である。好適な界面活性剤としては、脂肪酸またはエステルまたはそれらの塩、胆汁酸またはそれらの塩が挙げられる。好適な胆汁酸／塩としては、ケノデオキシコール酸（ＣＤＣＡ）およびウルソデオキシケノデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）、コール酸、デヒドロコール酸、デオキシコール酸、グルコール酸（ｇｌｕｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ）、グリコール酸（ｇｌｙｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ）、グリコデオキシコール酸、タウロコール酸、タウロデオキシコール酸、タウロ－２４，２５－ジヒドロ－フシジン酸ナトリウムおよびグリコジヒドロフシジン酸ナトリウムが挙げられる。好適な脂肪酸としては、アラキドン酸、ウンデカン酸、オレイン酸、ラウリン酸、カプリル酸、カプリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸リノール酸、リノレン酸、ジカプロエート、トリカプロエート、モノオレイン、ジラウリン、グリセリル１－モノカプロエート、１－ドデシルアザシクロヘプタナ－２－オン、アシルカルニチン、アシルコリン、またはモノグリセライド、ジグリセリド、またはその薬学的に許容される塩（例えば、ナトリウム）が挙げられる。一部の実施形態において、浸透促進剤の組合せ、例えば、胆汁酸／塩と組み合わされた脂肪酸／塩などが使用される。例示的組合せの１つは、ラウリン酸、カプリン酸、およびＵＤＣＡのナトリウム塩である。さらに、浸透促進剤としては、ポリオキシエチレン－９－ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン－２０－セチルエーテルが挙げられる。本開示において特徴とされるｄｓＲＮＡは、噴霧された乾燥粒子などの粒状において、経口によりデリバリーすることができ、またはマイクロ粒子またはナノ粒子を形成するために複合体化することができる。ｄｓＲＮＡ複合剤としては、ポリ－アミノ酸；ポリイミン；ポリアクリレート；ポリアルキルアクリレート、ポリアルキルアクリレート、ポリアルキルシアノアクリレート；カチオン化されたゼラチン、アルブミン、デンプン、アクリレート、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、およびデンプン；ポリアルキルシアノアクリレート；ＤＥＡＥ誘導体化ポリイミン、プルラン（ｐｏｌｌｕｌａｎ）、セルロース、およびデンプンが挙げられる。好適な複合剤としては、キトサン、Ｎ－トリメチルキトサン、ポリーＬリジン、ポリヒスチジン、ポリオルニチン、ポリスペルミン、プロタミン、ポリビニルピリジン、ポリチオジエチルアミノメチルエチレンＰ（ＴＤＡＥ）、ポリアミノスチレン（例えば、ｐ－アミノ）、ポリ（メチルシアノアクリレート）、ポリ（エチルシアノアクリレート）、ポリ（ブチルシアノアクリレート）、ポリ（イソブチルシアノアクリレート）、ポリ（イソヘキシルシアノアクリレート）、ＤＥＡＥ－メタクリレート、ＤＥＡＥ－ヘキシルアクリレート、ＤＥＡＥ－アクリルアミド、ＤＥＡＥ－アルブミン、およびＤＥＡＥデキストラン、ポリメチルアクリレート、ポリヘキシルアクリレート、ポリ（Ｄ，Ｌ－乳酸）、ポリ（ＤＬ－乳酸－コ－グリコール酸（ＰＬＧＡ）、アルギネート、およびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられる。ｄｓＲＮＡのための経口製剤およびその調製は、米国特許第６，８８７，９０６号、米国特許出願公開第２００３／００２７７８０号、および米国特許第６，７４７，０１４号において詳細に説明されており、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる。 Compositions and formulations for oral administration include powders or granules, microparticles, nanoparticles, suspensions or solutions in water or non-aqueous media, capsules, gel capsules, sachets, tablets or mini-tablets. mentioned. Thickeners, flavoring agents, diluents, emulsifiers, dispersing aids or binders may be desirable. In some embodiments, oral formulations are formulations in which the dsRNA featured in this disclosure are administered in conjunction with one or more penetration enhancers, surfactants, and chelators. Suitable surfactants include fatty acids or esters or salts thereof, bile acids or salts thereof. Suitable bile acids/salts include chenodeoxycholic acid (CDCA) and ursodeoxychenodeoxycholic acid (UDCA), cholic acid, dehydrocholic acid, deoxycholic acid, glucolic acid, glycolic acid, glycodeoxycholic acid cholic acid, taurocholic acid, taurodeoxycholic acid, sodium tauro-24,25-dihydro-fusidate and sodium glycodihydrofusidate. Suitable fatty acids include arachidonic acid, undecanoic acid, oleic acid, lauric acid, caprylic acid, capric acid, myristic acid, palmitic acid, linoleic stearate, linolenic acid, dicaproate, tricaproate, monoolein, dilaurin, glyceryl. 1-monocaproate, 1-dodecylazacycloheptan-2-one, acylcarnitines, acylcholines, or monoglycerides, diglycerides, or pharmaceutically acceptable salts thereof (eg, sodium). In some embodiments, combinations of penetration enhancers are used, such as fatty acids/salts combined with bile acids/salts. One exemplary combination is the sodium salts of lauric acid, capric acid, and UDCA. Furthermore, penetration enhancers include polyoxyethylene-9-lauryl ether and polyoxyethylene-20-cetyl ether. The dsRNA featured in this disclosure can be delivered orally, in particulate form, such as nebulized dry particles, or complexed to form microparticles or nanoparticles. Poly-amino acids; polyimines; polyacrylates; polyalkylacrylates, polyalkylacrylates, polyalkylcyanoacrylates; cationized gelatin, albumin, starch, acrylates, polyethylene glycol (PEG), and starch; Alkyl cyanoacrylates; DEAE-derivatized polyimines, pollulan, cellulose, and starch. Suitable complexing agents include chitosan, N-trimethylchitosan, poly-L-lysine, polyhistidine, polyornithine, polyspermine, protamine, polyvinylpyridine, polythiodiethylaminomethylethylene P (TDAE), polyaminostyrene (e.g., p-amino ), poly(methylcyanoacrylate), poly(ethylcyanoacrylate), poly(butylcyanoacrylate), poly(isobutylcyanoacrylate), poly(isohexylcyanoacrylate), DEAE-methacrylate, DEAE-hexylacrylate, DEAE-acrylamide , DEAE-albumin, and DEAE-dextran, polymethyl acrylate, polyhexyl acrylate, poly(D,L-lactic acid), poly(DL-lactic-co-glycolic acid (PLGA), alginate, and polyethylene glycol (PEG). Oral formulations for dsRNA and their preparation are described in detail in US Pat. , each incorporated herein by reference.

非経口、実質内（脳内へ）、髄腔内、脳室内、または肝内投与のための組成物および製剤は、緩衝剤、希釈剤、および他の好適な添加剤、例えば、これらに限定されるわけではないが、浸透促進剤、担体化合物、他の薬学的に許容される担体または賦形剤などを含むことができる滅菌水溶液を含むことができる。 Compositions and formulations for parenteral, intraparenchymal (into the brain), intrathecal, intracerebroventricular, or intrahepatic administration may contain buffers, diluents, and other suitable additives, including, but not limited to, Although not required, sterile aqueous solutions can include penetration enhancers, carrier compounds, other pharmaceutically acceptable carriers or excipients, and the like.

本開示の医薬組成物は、溶液、エマルション、およびリポソームを含有する製剤を含む。これらの組成物は、これらに限定されるわけではないが、予め形成された液体、自己乳化性固体、および自己乳化性半固体を含む様々な成分から生成することができる。特に好ましいのは、ＭＡＰＴ関連疾患または障害を処置する場合において脳を標的化する製剤である。 Pharmaceutical compositions of this disclosure include solutions, emulsions, and formulations containing liposomes. These compositions can be formed from a variety of ingredients including, but not limited to, preformed liquids, self-emulsifying solids, and self-emulsifying semi-solids. Particularly preferred are formulations that target the brain in treating MAPT-related diseases or disorders.

本開示の医薬製剤は、単位剤形において簡便に提示することができ、製薬産業において周知の従来技術に従って調製することができる。そのような技術は、活性成分を医薬担体または賦形剤と混合する工程を含む。概して、製剤は、活性成分を液体担体または微粉化された固体担体またはその両方と均一にかつ密接に混合し、次いで、必要であれば、生成物を成形することによって調製される。 The pharmaceutical formulations of the present disclosure may conveniently be presented in unit dosage form and may be prepared according to conventional techniques well known in the pharmaceutical industry. Such techniques include the step of bringing into association the active ingredient with a pharmaceutical carrier or excipient. In general, the formulations are prepared by uniformly and intimately bringing into association the active ingredient with liquid carriers or finely divided solid carriers or both, and then, if necessary, shaping the product.

本開示の組成物は、例えば、これらに限定されるわけではないが、錠剤、カプセル剤、ゲルカプセル剤、液体シロップ、軟質ゲル、坐剤、および浣腸剤などの多くの可能な剤形のいずれかへと製剤化することができる。本開示の組成物は、水性媒質、非水性媒質、または混合媒質における懸濁液としても製剤化することができる。水懸濁液は、懸濁液の粘度を増加させる物質、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストランなどをさらに含有することができる。懸濁液は、安定化剤も含有することができる。 Compositions of the present disclosure can be in any of a number of possible dosage forms such as, but not limited to, tablets, capsules, gel capsules, liquid syrups, soft gels, suppositories, and enemas. Can be formulated into Compositions of the disclosure can also be formulated as suspensions in aqueous, non-aqueous, or mixed media. Aqueous suspensions may further contain substances which increase the viscosity of the suspension, such as sodium carboxymethyl cellulose, sorbitol, or dextran. The suspension may also contain stabilizers.

Ｃ．さらなる製剤
ｉ．エマルション
本開示の組成物は、エマルションとして調製および製剤化することができる。エマルションは、典型的には、一方の液体が通常は直径０．１μｍを超える液滴の形態において別の液体に分散された不均質系である［例えば、Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199; Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Volume 1, p. 245; Block in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 2, p. 335; Higuchi et al., in Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1985, p. 301を参照されたい］。エマルションは、多くの場合、お互いに十分に混合され分散された２つの不混和性液相を含む二相系である。一般的に、エマルションは、油中水（ｗ／ｏ）種または水中油（ｏ／ｗ）種のどちらかであり得る。水相が、微細化されて微細な液滴として大量の油相中に分散されている場合、結果として得られる組成物は、油中水（ｗ／ｏ）エマルションと呼ばれる。あるいは、油相が、微細化されて微細な液滴として大量の水相中に分散されている場合、結果として得られる組成物は、水中油（ｏ／ｗ）エマルションと呼ばれる。エマルションは、分散相および、水相中また油相中のどちらかの溶液としてまたはそれ自体別々の相として存在し得る活性薬物に加えて、追加の成分を含有することができる。乳化剤、安定化剤、染料、および抗酸化剤などの医薬品賦形剤も、必要であれば、エマルション中に存在していてもよい。医薬エマルションは、例えば、油中水中油（ｏ／ｗ／ｏ）および水中油中水（ｗ／ｏ／ｗ）エマルションの場合など、３相以上で構成される多相エマルションでもあってもよい。そのような複合製剤は、多くの場合、単純な二相エマルションでは提供することができないある特定の利点を提供する。ｏ／ｗエマルションの個々の油滴が小さい水滴を封入する多相エマルションは、ｗ／ｏ／ｗエマルションを構成する。同様に、連続油相中において安定化された水の小滴中に封入された油滴の系は、ｏ／ｗ／ｏエマルションを提供する。 C. Further Formulations i. Emulsions Compositions of the present disclosure can be prepared and formulated as emulsions. Emulsions are typically heterogeneous systems in which one liquid is dispersed in another liquid in the form of droplets usually exceeding 0.1 μm in diameter [see, for example, Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen , LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, NY, volume 1, p. 199; Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, NY, Volume 1, 245; Block in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, NY, volume 2, p. 335; Higuchi et al., in Remington's Pharmaceutical Sciences, See Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1985, p. 301]. Emulsions are often two-phase systems containing two immiscible liquid phases that are intimately mixed and dispersed with each other. In general, emulsions can be either of the water-in-oil (w/o) variety or the oil-in-water (o/w) variety. When an aqueous phase is micronized and dispersed as fine droplets in a bulk oil phase, the resulting composition is called a water-in-oil (w/o) emulsion. Alternatively, when an oil phase is micronized and dispersed as fine droplets in a bulk aqueous phase, the resulting composition is called an oil-in-water (o/w) emulsion. Emulsions can contain additional ingredients in addition to the dispersed phase and the active drug, which can be present as a solution either in the aqueous phase, in the oil phase, or itself as a separate phase. Pharmaceutical excipients such as emulsifiers, stabilizers, dyes and antioxidants, if desired, can also be present in the emulsion. Pharmaceutical emulsions may also be multiphase emulsions composed of three or more phases, for example in the case of oil-in-water (o/w/o) and water-in-oil-in-water (w/o/w) emulsions. Such complex formulations often provide certain advantages that simple binary emulsions cannot provide. Multiphase emulsions in which individual oil droplets of an o/w emulsion enclose small water droplets constitute w/o/w emulsions. Similarly, a system of oil droplets encapsulated in droplets of water stabilized in a continuous oil phase provides an o/w/o emulsion.

エマルションは、熱力学的安定性がほとんどないかまたは全くないことによって特徴付けられる。多くの場合、エマルションの分散相または不連続相は、外部相または連続相中によく分散されており、乳化剤または製剤の粘度によってこの形態に維持される。エマルション様式の軟膏基剤およびクリーム剤の場合と同様に、エマルションの相のいずれかは、半固体または固体であってもよい。エマルションを安定化するその他の手段は、乳化剤の使用を伴い、それらは、エマルションのいずれかの相に組み込まれ得る。乳化剤は、以下の４つのカテゴリ：合成界面活性剤、天然乳化剤、吸収基剤、および微細分散固体に大きく分類することができる［例えば、Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199を参照されたい］。 Emulsions are characterized by little or no thermodynamic stability. In many cases, the dispersed or discontinuous phase of the emulsion is well dispersed in the external or continuous phase and maintained in this form by emulsifiers or the viscosity of the formulation. As with emulsion-type ointment bases and creams, either phase of the emulsion may be semi-solid or solid. Other means of stabilizing emulsions involve the use of emulsifiers, which can be incorporated into either phase of the emulsion. Emulsifiers can be broadly divided into four categories: synthetic surfactants, natural emulsifiers, absorption bases, and finely dispersed solids [see, for example, Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., See New York, N.Y., volume 1, p. 199].

表面活性剤としても知られる合成界面活性剤は、エマルションの製剤化において広い適用可能性を見出しており、文献において概説されている［例えば、Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Rieger, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 285; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., 1988, volume 1, p. 199を参照されたい］。界面活性剤は、典型的には両親媒性であり、親水性部分および疎水性部分を含む。界面活性剤の疎水性性質に対する親水性性質の比は、親水性／親油性バランス（ＨＬＢ）と命名されており、製剤の調製において界面活性剤を分類および選択する際の有益なツールである。界面活性剤は、親水性基の性質に基づいて以下の異なるクラス：非イオン性、アニオン性、カチオン性、および両性に分類することができる［例えば、Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY Rieger, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 285を参照されたい］。 Synthetic surfactants, also known as surfactants, have found wide applicability in the formulation of emulsions and have been reviewed in the literature [e.g., Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Rieger, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc. , New York, N.Y., volume 1, p. 285; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., 1988, volume 1, p. see]. Surfactants are typically amphiphilic and contain a hydrophilic portion and a hydrophobic portion. The ratio of hydrophilic to hydrophobic properties of a surfactant is termed the hydrophilic/lipophilic balance (HLB) and is a valuable tool in classifying and selecting surfactants in the preparation of formulations. Surfactants can be divided into different classes based on the nature of the hydrophilic group: nonionic, anionic, cationic, and amphoteric [see, for example, Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY Rieger, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 285].

エマルション製剤において使用される天然の乳化剤としては、ラノリン、蜜蝋、ホスファチド、レシチン、およびアカシアが挙げられる。脱水ラノリンおよび親水性ワセリンなどの吸収基剤は、親水特性を有し、そのため、それらは、水を吸い上げてｗ／ｏエマルションを形成し、それでもなお、それらの半固体の稠度を維持することができる。微粒子固体も、とりわけ界面活性剤との組合せにおいて、および粘性調製物において、良好な乳化剤として使用されている。これらは、極性無機固体、例えば、重金属水酸化物など、膨潤クレー、例えば、ベントナイト、アタパルジャイト、ヘクトライト、カオリン、モンモリロナイト、コロイド状ケイ酸アルミニウムおよびコロイド状ケイ酸アルミニウムマグネシウムなど、顔料、および非極性固体、例えば、炭素またはトリステアリン酸グリセリンなどを含む。 Natural emulsifiers used in emulsion formulations include lanolin, beeswax, phosphatides, lecithin and acacia. Absorption bases such as dehydrated lanolin and hydrophilic petrolatum have hydrophilic properties such that they can take up water to form w/o emulsions and still maintain their semi-solid consistency. can. Finely divided solids have also been used as good emulsifiers, especially in combination with surfactants and in viscous preparations. These include polar inorganic solids such as heavy metal hydroxides, swelling clays such as bentonite, attapulgite, hectorite, kaolin, montmorillonite, colloidal aluminum silicate and colloidal magnesium aluminum silicate, pigments, and non-polar solids. Includes solids such as carbon or glyceryl tristearate.

非常に多様な非乳化材料も、エマルション製剤に含まれ、エマルションの特性に貢献する。そのようなものとしては、脂肪、油、ワックス、脂肪酸、脂肪アルコール、脂肪エステル、湿潤剤、親水性コロイド、保存料、および抗酸化剤が挙げられる［Block, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 335; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199］。 A wide variety of non-emulsifying materials are also included in emulsion formulations and contribute to emulsion properties. Such include fats, oils, waxes, fatty acids, fatty alcohols, fatty esters, humectants, hydrophilic colloids, preservatives, and antioxidants [Block, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 335; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc. , New York, N.Y., volume 1, p. 199].

親水性コロイドまたはハイドロコロイドとしては、天然ゴムおよび合成ポリマー、例えば、多糖（例えば、アカシア、寒天、アルギン酸、カラゲナン、グアーゴム、カラヤゴム、およびトラガカント）、セルロース誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースおよびカルボキシプロピルセルロース）、および合成ポリマー（例えば、カルボマー、セルロースエーテル、およびカルボキシビニルポリマー）などが挙げられる。これらは、水に分散または膨潤して、コロイド状溶液を形成し、それは、分散相液滴の周囲に強力な界面フィルムを形成すること、および外部相の粘度を増加することによって、エマルションを安定化する。 Hydrophilic colloids or hydrocolloids include natural gums and synthetic polymers such as polysaccharides (e.g. acacia, agar, alginic acid, carrageenan, guar gum, karaya gum, and tragacanth), cellulose derivatives (e.g. carboxymethylcellulose and carboxypropylcellulose), and Synthetic polymers such as carbomers, cellulose ethers, and carboxyvinyl polymers, and the like. They disperse or swell in water to form a colloidal solution, which stabilizes the emulsion by forming a strong interfacial film around the dispersed phase droplets and increasing the viscosity of the external phase. become

エマルションは、多くの場合、微生物の増殖を容易に支援することができる多くの成分、例えば、炭水化物、タンパク質、ステロール、およびホスファチドなどを含有するため、これらの製剤は、多くの場合、保存料が組み込まれている。エマルション製剤に含まれる一般的に使用される保存料としては、メチルパラベン、プロピルパラベン、４級アンモニウム塩、塩化ベンザルコニウム、ｐ－ヒドロキシ安息香酸のエステル、およびホウ酸が挙げられる。製剤の劣化を防ぐために、抗酸化剤も、一般的に、エマルション製剤に加えられる。使用される抗酸化剤は、フリーラジカル捕捉剤、例えば、トコフェロール、没食子酸アルキル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエンなど、または還元剤、例えば、アスコルビン酸およびメタ重亜硫酸ナトリウムなど、ならびに酸化防止相乗剤、例えば、クエン酸、酒石酸、およびレシチンなどであり得る。 Because emulsions often contain many ingredients that can readily support microbial growth, such as carbohydrates, proteins, sterols, and phosphatides, these formulations are often free of preservatives. It has been incorporated. Commonly used preservatives included in emulsion formulations include methylparaben, propylparaben, quaternary ammonium salts, benzalkonium chloride, esters of p-hydroxybenzoic acid, and boric acid. Antioxidants are also commonly added to emulsion formulations to prevent deterioration of the formulation. The antioxidants used are free radical scavengers such as tocopherols, alkyl gallates, butylated hydroxyanisole, butylated hydroxytoluene, or reducing agents such as ascorbic acid and sodium metabisulfite, and antioxidants. Synergists such as citric acid, tartaric acid, and lecithin can be used.

皮膚、経口、および非経口経路によるエマルション製剤の適用ならびにそれらの製造方法は、文献において概説されている［例えば、Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199を参照されたい］。経口デリバリー用のエマルション製剤は、製剤の容易さ、ならびに吸収およびバイオアベイラビリティの見地からの有効性により、非常に広く使用されている［例えば、Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 245; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199を参照されたい］。鉱油系緩下剤、脂溶性ビタミン、および高脂肪栄養製剤は、ｏ／ｗエマルションとして一般的に経口投与されている材料の１つである。 The application of emulsion formulations by dermal, oral, and parenteral routes and methods for their manufacture have been reviewed in the literature [e.g., Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC. ., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199]. Emulsion formulations for oral delivery are very widely used because of their ease of formulation and efficacy in terms of absorption and bioavailability [see, eg, Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc. , New York, N.Y., volume 1, p. 245; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. see]. Mineral oil-based laxatives, fat-soluble vitamins, and high-fat nutritional formulations are among the materials commonly administered orally as o/w emulsions.

ｉｉ．マイクロエマルション
本開示の一実施形態において、ＲＮＡｉ剤および核酸の組成物は、マイクロエマルションとして製剤化される。マイクロエマルションは、単一の光学的に等方性で熱力学的に安定な液体溶液である、水、油、および両親媒性物質の系として定義することができる［例えば、Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 245を参照されたい］。典型的には、マイクロエマルションは、油を界面活性剤水溶液に分散させ、次いで、十分な量の第４の成分、概して中鎖長のアルコールを加えて透明な系を形成することによって調製される系である。したがって、マイクロエマルションは、表面活性分子の界面フィルムによって安定化される、２つの不混和性液体の熱力学的に安定で等方的に澄明な分散液として説明されている（Leung and Shah, in: Controlled Release of Drugs: Polymers and Aggregate Systems, Rosoff, M., Ed., 1989, VCH Publishers, New York, pages 185-215）。マイクロエマルションは、一般的に、油、水、界面活性剤、補助界面活性剤、および電解質を含む３つから５つの成分を組み合わせることによって調製される。マイクロエマルションが油中水（ｗ／ｏ）タイプまたは水中油（ｏ／ｗ）タイプのどちらであるかは、使用される油および界面活性剤の特性、ならびに界面活性剤分子の極性ヘッドおよび炭化水素テールの構造および幾何学的パッキングに依存する（Schott, in Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1985, p. 271）。 ii. Microemulsions In one embodiment of the present disclosure, the RNAi agent and nucleic acid compositions are formulated as microemulsions. Microemulsions can be defined as systems of water, oil, and amphiphiles that are single optically isotropic and thermodynamically stable liquid solutions [e.g., Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds. ), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, NY, volume 1, p. 245]. Typically, microemulsions are prepared by dispersing the oil in an aqueous surfactant solution and then adding a sufficient amount of a fourth component, generally a medium chain alcohol, to form a clear system. It is a system. Microemulsions are thus described as thermodynamically stable, isotropically clear dispersions of two immiscible liquids stabilized by an interfacial film of surface-active molecules (Leung and Shah, in : Controlled Release of Drugs: Polymers and Aggregate Systems, Rosoff, M., Ed., 1989, VCH Publishers, New York, pages 185-215). Microemulsions are generally prepared by combining three to five ingredients including oil, water, surfactants, co-surfactants, and electrolytes. Whether a microemulsion is of the water-in-oil (w/o) or oil-in-water (o/w) type depends on the properties of the oils and surfactants used, as well as the polar heads and hydrocarbons of the surfactant molecules. Depends on tail structure and geometric packing (Schott, in Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1985, p. 271).

状態図を利用する現象論的アプローチが、広く研究されており、それは、マイクロエマルションをどのようにして製剤化するかの包括的な知識を当業者にもたらした［例えば、Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 245; Block, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 335を参照されたい］。従来のエマルションと比較して、マイクロエマルションは、水不溶性薬物を、自然発生的に形成された熱力学的に安定な液滴の製剤に可溶化するという利点を提供する。 A phenomenological approach utilizing state diagrams has been extensively studied and has provided those skilled in the art with a comprehensive knowledge of how to formulate microemulsions [e.g. Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Allen, LV., Popovich NG., and Ansel HC., 2004, Lippincott Williams & Wilkins (8th ed.), New York, NY; Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.) , 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 245; Block, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y. , volume 1, p. 335]. Compared to conventional emulsions, microemulsions offer the advantage of solubilizing water-insoluble drugs into a formulation of spontaneously formed, thermodynamically stable droplets.

マイクロエマルションの調製において使用される界面活性剤としては、これらに限定されるわけではないが、単独での、または補助界面活性剤と組み合わせた、イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、Ｂｒｉｊ９６、ポリオキシエチレンオレイルエーテル、ポリグリセロール脂肪酸エステル、テトラグリセロールモノラウレート（ＭＬ３１０）、テトラグリセロールモノオレエート（ＭＯ３１０）、ヘキサグリセロールモノオレエート（ＰＯ３１０）、ヘキサグリセロールペンタオレエート（ＰＯ５００）、デカグリセロールモノカプロエート（ＭＣＡ７５０）、デカグリセロールモノオレエート（ＭＯ７５０）、デカグリセロールセスキオレエート（ＳＯ７５０）、デカグリセロールデカオレエート（ＤＡＯ７５０）が挙げられる。補助界面活性剤は、通常はエタノール、１－プロパノール、および１－ブタノールなどの短鎖アルコールであり、界面活性剤フィルムに浸透し、その結果、界面活性剤分子の間に生じるボイドスペースにより、乱れたフィルムを作り出すことによって、界面の流動性を増加させる役割を果たす。しかしながら、マイクロエマルションは、補助界面活性剤を用いずに調製することもでき、アルコール不含自己乳化性マイクロエマルション系は、当技術分野で公知である。水相は、典型的には、これらに限定されるわけではないが、水、薬物の水溶液、グリセロール、ＰＥＧ３００、ＰＥＧ４００、ポリグリセロール、プロピレングリコール、およびエチレングリコールの誘導体であり得る。油相は、これらに限定されるわけではないが、Ｃａｐｔｅｘ ３００、Ｃａｐｔｅｘ ３５５、Ｃａｐｍｕｌ ＭＣＭ、脂肪酸エステル、中鎖（Ｃ８～Ｃ１２）モノ、ジ、およびトリグリセリド、ポリオキシエチル化グリセリル脂肪酸エステル、脂肪アルコール、ポリグリコール化グリセリド、飽和ポリグリコール化Ｃ８～Ｃ１０グリセリド、植物油、およびシリコーン油などの材料を含むことができる。 Surfactants used in the preparation of microemulsions include, but are not limited to, ionic surfactants, nonionic surfactants, alone or in combination with co-surfactants, Brij96, polyoxyethylene oleyl ether, polyglycerol fatty acid ester, tetraglycerol monolaurate (ML310), tetraglycerol monooleate (MO310), hexaglycerol monooleate (PO310), hexaglycerol pentaoleate (PO500), deca glycerol monocaproate (MCA750), decaglycerol monooleate (MO750), decaglycerol sesquioleate (SO750), decaglycerol decaoleate (DAO750). Cosurfactants, usually short chain alcohols such as ethanol, 1-propanol, and 1-butanol, penetrate the surfactant film, resulting in turbulence due to void spaces between surfactant molecules. It serves to increase interfacial fluidity by creating a thick film. However, microemulsions can also be prepared without cosurfactants and alcohol-free self-emulsifying microemulsion systems are known in the art. The aqueous phase can typically be, but is not limited to, water, aqueous solutions of drugs, derivatives of glycerol, PEG300, PEG400, polyglycerol, propylene glycol, and ethylene glycol. The oil phase includes, but is not limited to, Captex 300, Captex 355, Capmul MCM, fatty acid esters, medium chain (C8-C12) mono-, di- and triglycerides, polyoxyethylated glyceryl fatty acid esters, fatty alcohols. , polyglycolized glycerides, saturated polyglycolized C8-C10 glycerides, vegetable oils, and silicone oils.

マイクロエマルションは、薬物可溶化および薬物の吸収増強の見地から、特に興味深い。脂質系マイクロエマルション（ｏ／ｗおよびｗ／ｏの両方）は、ペプチドなどの薬物の経口バイオアベイラビリティを増強すると提唱されている（例えば、米国特許第６，１９１，１０５号；同第７，０６３，８６０号；同第７，０７０，８０２号；同第７，１５７，０９９号；Constantinides et al., Pharmaceutical Research, 1994, 11, 1385-1390; Ritschel, Meth. Find. Exp. Clin. Pharmacol., 1993, 13, 205を参照されたい）。マイクロエマルションは、薬物の可溶化の向上、酵素加水分解からの薬物の保護、界面活性剤によって誘導される膜流動性および浸透性の変化に起因する、薬物吸収における可能な増強、調製の容易さ、固体剤形よりも経口投与の容易さ、臨床効力の向上、および毒性の減少の利点を提供する（例えば、米国特許第６，１９１，１０５号；同第７，０６３，８６０号；同第７，０７０，８０２号；同第７，１５７，０９９号；Constantinides et al., Pharmaceutical Research, 1994, 11, 1385; Ho et al., J. Pharm. Sci., 1996, 85, 138-143を参照されたい）。多くの場合、マイクロエマルションは、それらの成分が周囲温度において一緒にされたとき、自然発生的に形成され得る。これは、昜熱分解性の薬物であるペプチドまたはＲＮＡｉ剤を製剤化する場合に、特に有利であり得る。さらに、マイクロエマルションは、美容および医薬的適用の両方における、活性成分の経皮デリバリーにとっても効果的であった。本開示のマイクロエマルション組成物および製剤は、胃腸管からのＲＮＡｉ剤および核酸の全身吸収の増加、ならびにＲＮＡｉ剤および核酸の局所細胞取り込みの向上を促進するであろうことが予想される。 Microemulsions are of particular interest from the standpoint of drug solubilization and drug absorption enhancement. Lipid-based microemulsions (both o/w and w/o) have been proposed to enhance the oral bioavailability of drugs such as peptides (e.g., U.S. Pat. Nos. 6,191,105; 7,063). 7,070,802; 7,157,099; Constantinides et al., Pharmaceutical Research, 1994, 11, 1385-1390; Ritschel, Meth. Find. Exp. Clin. , 1993, 13, 205). Microemulsions offer enhanced drug solubilization, protection of drugs from enzymatic hydrolysis, possible enhancement in drug absorption due to surfactant-induced changes in membrane fluidity and permeability, ease of preparation. , offer advantages of ease of oral administration, improved clinical efficacy, and reduced toxicity over solid dosage forms (e.g., U.S. Pat. Nos. 6,191,105; 7,063,860; 7,070,802; 7,157,099; Constantinides et al., Pharmaceutical Research, 1994, 11, 1385; Ho et al., J. Pharm. Sci., 1996, 85, 138-143. see). In many cases, microemulsions can form spontaneously when their ingredients are brought together at ambient temperature. This can be particularly advantageous when formulating peptides or RNAi agents that are thermolytic drugs. Furthermore, microemulsions were also effective for transdermal delivery of active ingredients in both cosmetic and pharmaceutical applications. It is expected that the microemulsion compositions and formulations of the present disclosure will facilitate increased systemic absorption of RNAi agents and nucleic acids from the gastrointestinal tract and improved local cellular uptake of RNAi agents and nucleic acids.

本開示のマイクロエマルションは、製剤の性質を向上させるため、および本開示のＲＮＡｉ剤および核酸の吸収を高めるために、追加の成分および添加剤、例えば、ソルビタンモノステアレート（Ｇｒｉｌｌ ３）、ラブラソール（Ｌａｂｒａｓｏｌ）、および浸透促進剤など、も含有することができる。本開示のマイクロエマルションにおいて使用される浸透促進剤は、５つのカテゴリ：界面活性剤、脂肪酸、胆汁酸塩、キレート化剤、および非キレート化非界面活性剤のうちの１つに属するとして分類することができる（Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p. 92）。これらのクラスのそれぞれは、上記において説明されている。 The microemulsions of the present disclosure may contain additional ingredients and additives, such as sorbitan monostearate (Grill 3), labrasol ( Labrasol), and penetration enhancers and the like may also be included. Penetration enhancers used in the microemulsions of the present disclosure are classified as belonging to one of five categories: surfactants, fatty acids, bile salts, chelating agents, and non-chelating non-surfactants. (Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p. 92). Each of these classes is described above.

ｉｉｉ．マイクロ粒子
本開示のＲＮＡｉ剤は、粒子、例えば、マイクロ粒子などに組み込まれ得る。マイクロ粒子は、噴霧乾燥によって生成することができるが、凍結乾燥、蒸発、流動層乾燥、真空乾燥、またはこれらの技術の組合せなどの他の方法によっても生成され得る。 iii. Microparticles The RNAi agents of the present disclosure can be incorporated into particles, such as microparticles. Microparticles can be produced by spray drying, but can also be produced by other methods such as freeze drying, evaporation, fluid bed drying, vacuum drying, or combinations of these techniques.

ｉｖ．浸透促進剤
一実施形態において、本開示は、動物の皮膚への、核酸、特にＲＮＡｉ剤の効率的なデリバリーを実施するために、様々な浸透促進剤を採用する。ほとんどの薬物は、イオン化状態および非イオン化状態の両方において存在する。しかしながら、通常、脂溶性または親油性薬物のみが、細胞膜を容易に横断する。横断される膜が、浸透促進剤で処置されている場合、非親油性薬物も、細胞膜を横断することができることが分かっている。非親油性薬物が細胞膜を横断して拡散するのを支援することに加えて、浸透促進剤も、親油性薬物の透過性を高める。 iv. Penetration Enhancers In one embodiment, the present disclosure employs various penetration enhancers to effect efficient delivery of nucleic acids, particularly RNAi agents, to animal skin. Most drugs exist in both ionized and non-ionized states. However, usually only lipid-soluble or lipophilic drugs readily cross cell membranes. It has been found that non-lipophilic drugs can also cross cell membranes if the membrane to be crossed is treated with a penetration enhancer. In addition to helping non-lipophilic drugs diffuse across cell membranes, penetration enhancers also increase the permeability of lipophilic drugs.

浸透促進剤は、５つの広いカテゴリ、すなわち、界面活性剤、脂肪酸、胆汁酸塩、キレート化剤、および非キレート化非界面活性剤のうちの１つに属するとして分類することができる（例えば、Malmsten, M. Surfactants and polymers in drug delivery, Informa Health Care, New York, NY, 2002; Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p.92を参照されたい）。浸透促進剤の上記において言及されたクラスのそれぞれについては、以下においてより詳細に説明される。 Penetration enhancers can be classified as belonging to one of five broad categories: surfactants, fatty acids, bile salts, chelating agents, and non-chelating non-surfactants (e.g. Malmsten, M. Surfactants and polymers in drug delivery, Informa Health Care, New York, NY, 2002; Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p.92). Each of the above-mentioned classes of penetration enhancers is described in more detail below.

界面活性剤（または「表面活性剤」」は、水溶液中に溶解されたとき、溶液の表面張力または水溶液と別の液体との間の界面張力を減少させ、結果として、粘膜を通過するＲＮＡｉ剤の吸収を高める化学物質である。胆汁塩および脂肪酸に加えて、これらの浸透促進剤としては、例えば、ラウリル硫酸ナトリウム、ポリオキシエチレン－９－ラウリルエーテル、およびポリオキシエチレン－２０－セチルエーテルが挙げられる（例えば、Malmsten, M. Surfactants and polymers in drug delivery, Informa Health Care, New York, NY, 2002; Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p.92); and perfluorochemical emulsions, such as FC-43. Takahashi et al., J. Pharm. Pharmacol., 1988, 40, 252を参照されたい）。 Surfactants (or "surfactants"), when dissolved in an aqueous solution, reduce the surface tension of a solution or the interfacial tension between an aqueous solution and another liquid, resulting in RNAi agents crossing mucous membranes. In addition to bile salts and fatty acids, these penetration enhancers include, for example, sodium lauryl sulfate, polyoxyethylene-9-lauryl ether, and polyoxyethylene-20-cetyl ether. (e.g., Malmsten, M. Surfactants and polymers in drug delivery, Informa Health Care, New York, NY, 2002; Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p.92); and perfluorochemical emulsions Takahashi et al., J. Pharm. Pharmacol., 1988, 40, 252).

浸透促進剤としての役割を果たす様々な脂肪酸およびその誘導体としては、例えば、オレイン酸、ラウリン酸、カプリン酸（ｎ－デカン酸）、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、リノレン酸、ジカプロエート、トリカプロエート、モノオレイン（１－モノオレオイル－ｒａｃ－グリセロール）、ジラウリン、カプリル酸、アラキドン酸、グリセロール１－モノカプロエート、１－ドデシルアザシクロヘプタナ－２－オン、アシルカルニチン、アシルコリン、それらのＣ１～２０アルキルエステル（例えば、メチル、イソプロピル、およびｔ－ブチル）、ならびにそれらのモノ－およびジ－グリセリド（すなわち、オレエート、ラウレート、カプロエート、ミリステート、パルミテート、ステアレート、リノレエートなど）が挙げられる（例えば、Touitou, E., et al. Enhancement in Drug Delivery, CRC Press, Danvers, MA, 2006; Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p.92; Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33; El Hariri et al., J. Pharm. Pharmacol., 1992, 44, 651-654を参照されたい）。 Various fatty acids and their derivatives that serve as penetration enhancers include, for example, oleic acid, lauric acid, capric acid (n-decanoic acid), myristic acid, palmitic acid, stearic acid, linoleic acid, linolenic acid, dicaproate. , tricaproate, monoolein (1-monooleoyl-rac-glycerol), dilaurin, caprylic acid, arachidonic acid, glycerol 1-monocaproate, 1-dodecylazacycloheptan-2-one, acylcarnitine, acylcholine, and their mono- and di-glycerides (i.e. oleate, laurate, caproate, myristate , palmitate, stearate, linoleate, etc.) of (For example, Touitou, E., et al. Enhancement in Drug Delivery, CRC Press, Danvers, MA, 2006; Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p.92; Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33; El Hariri et al., J. Pharm. Pharmacol., 1992, 44, 651-654).

胆汁の生理的役割としては、脂質および脂溶性ビタミンの分散および吸収の促進が挙げられる（例えば、Malmsten, M. Surfactants and polymers in drug delivery, Informa Health Care, New York, NY, 2002; Brunton, Chapter 38 in: Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9th Ed., Hardman et al. Eds., McGraw-Hill, New York, 1996, pp. 934-935を参照されたい）。様々な天然の胆汁塩、およびそれらの合成誘導体が、浸透促進剤としての役割を果たす。したがって、用語「胆汁塩」は、胆汁の天然に存在する成分の全て、ならびにそれらの合成誘導体の全てを包含する。好適な胆汁塩としては、例えば、コール酸（またはその薬学的に許容されるナトリウム塩、コール酸ナトリウム）、デヒドロコール酸（デヒドロコール酸ナトリウム）、デオキシコール酸（デオキシコール酸ナトリウム）、グルコール酸（グルコール酸ナトリウム）、グリコール酸（グリココール酸ナトリウム）、グリコデオキシコール酸（グリコデオキシコール酸ナトリウム）、タウロコール酸（タウロコール酸ナトリウム）、タウロデオキシコール酸（タウロデオキシコール酸ナトリウム）、ケノデオキシコール酸（ケノデオキシコール酸ナトリウム）、ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）、タウロ－２４，２５－ジヒドロ－フシジン酸ナトリウム（ＳＴＤＨＦ）、グリコジヒドロフシジン酸ナトリウム、およびポリオキシエチレン－９－ラウリルエーテル（ＰＯＥ）が挙げられる（例えば、Malmsten, M. Surfactants and polymers in drug delivery, Informa Health Care, New York, NY, 2002; Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, page 92; Swinyard, Chapter 39 In: Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1990, pages 782-783; Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33; Yamamoto et al., J. Pharm. Exp. Ther., 1992, 263, 25; Yamashita et al., J. Pharm. Sci., 1990, 79, 579-583を参照されたい）。 Physiological roles of bile include facilitating the distribution and absorption of lipids and fat-soluble vitamins (see, eg, Malmsten, M. Surfactants and polymers in drug delivery, Informa Health Care, New York, NY, 2002; Brunton, Chapter 38 in: Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9th Ed., Hardman et al. Eds., McGraw-Hill, New York, 1996, pp. 934-935). Various natural bile salts, and their synthetic derivatives, serve as penetration enhancers. Thus, the term "bile salts" includes all naturally occurring components of bile, as well as all synthetic derivatives thereof. Suitable bile salts include, for example, cholic acid (or its pharmaceutically acceptable sodium salt, sodium cholate), dehydrocholic acid (sodium dehydrocholate), deoxycholic acid (sodium deoxycholate), glycolic acid (sodium glycocholate), glycolic acid (sodium glycocholate), glycodeoxycholic acid (sodium glycodeoxycholate), taurocholic acid (sodium taurocholate), taurodeoxycholic acid (sodium taurodeoxycholate), chenodeoxycholic acid ( sodium chenodeoxycholate), ursodeoxycholic acid (UDCA), sodium tauro-24,25-dihydro-fusidate (STDHF), sodium glycodihydrofusidate, and polyoxyethylene-9-lauryl ether (POE) ( For example, Malmsten, M. Surfactants and polymers in drug delivery, Informa Health Care, New York, NY, 2002; Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, page 92; Swinyard, Chapter 39 In: Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1990, pages 782-783; Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33; Yamamoto et al. Ther., 1992, 263, 25; Yamashita et al., J. Pharm. Sci., 1990, 79, 579-583).

キレート化剤は、本開示に関連して使用される場合、金属イオンとの複合体を形成することによって溶液から金属イオンを除去し、結果として、粘膜を通るＲＮＡｉ剤の吸収を高める化合物として定義することができる。本開示における浸透促進剤としての使用に関して、ほとんどの特徴的なＤＮＡヌクレアーゼは、触媒作用のために二価金属イオンを必要とし、結果として、キレート化剤によって阻害されるため、キレート化剤は、ＤＮａｓｅ阻害剤としても機能するさらなる利点を有する（Jarrett, J. Chromatogr., 1993, 618, 315-339Jarrett, J. Chromatogr., 1993, 618, 315-339）。好適なキレート化剤としては、これらに限定されるわけではないが、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム（ＥＤＴＡ）、クエン酸、サリチレート（例えば、サリチル酸ナトリウム、５－メトキシサリチレート、およびホモバニレート（ｈｏｍｏｖａｎｉｌａｔｅ））、コラーゲンのＮ－アシル誘導体、ラウレス－９、およびβ－ジケトンのＮ－アミノアシル誘導体（エナミン）が挙げられる（例えば、Katdare, A. et al., Excipient development for pharmaceutical, biotechnology, and drug delivery, CRC Press, Danvers, MA, 2006; Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, page 92; Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33; Buur et al., J. Control Rel., 1990, 14, 43-51を参照されたい）。 A chelating agent, as used in the context of this disclosure, is defined as a compound that removes metal ions from solution by forming a complex with the metal ion, resulting in enhanced absorption of an RNAi agent across mucosal membranes. can do. For use as penetration enhancers in the present disclosure, chelating agents are: It has the added advantage of also functioning as a DNase inhibitor (Jarrett, J. Chromatogr., 1993, 618, 315-339 Jarrett, J. Chromatogr., 1993, 618, 315-339). Suitable chelating agents include, but are not limited to, disodium ethylenediaminetetraacetate (EDTA), citric acid, salicylates (eg, sodium salicylate, 5-methoxysalicylate, and homovanilate) , N-acyl derivatives of collagen, laureth-9, and N-aminoacyl derivatives (enamines) of β-diketones (e.g., Katdare, A. et al., Excipient development for pharmaceutical, biotechnology, and drug delivery, CRC Press, Danvers, MA, 2006; Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, page 92; Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33; See Control Rel., 1990, 14, 43-51).

本明細書において使用される場合、非キレート化非界面活性剤である浸透促進化合物は、キレート化剤または界面活性剤としてはわずかな活性しか示さないが、それにもかかわらず消化器粘膜を通してのＲＮＡｉ剤の吸収を高める化合物として定義することができる（例えば、Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33を参照されたい）。このクラスの浸透促進剤としては、例えば、不飽和環状尿素、１－アルキル－および１－アルケニルアザシクロ－アルカノン誘導体（Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, page 92）；ならびに非ステロイド性抗炎症剤、例えば、ジクロフェナクナトリウム、インドメタシン、およびフェニルブタゾンなどが挙げられる（Yamashita et al., J. Pharm. Pharmacol., 1987, 39, 621-626）。 As used herein, penetration enhancing compounds that are non-chelating non-surfactants show little activity as chelating agents or surfactants, but nevertheless demonstrate RNAi across the gastrointestinal mucosa. A compound can be defined as a compound that enhances the absorption of a drug (see, eg, Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33). This class of penetration enhancers includes, for example, unsaturated cyclic ureas, 1-alkyl- and 1-alkenyl azacyclo-alkanone derivatives (Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, page 92); Nonsteroidal anti-inflammatory agents such as diclofenac sodium, indomethacin, and phenylbutazone (Yamashita et al., J. Pharm. Pharmacol., 1987, 39, 621-626).

細胞レベルでのＲＮＡｉ剤の取り込みを増強する薬剤も、本開示の医薬組成物および他の組成物に加えることができる。例えば、カチオン性脂質、例えば、リポフェクチンなど（Junichi et al, U.S. Pat. No. 5,705,188）、カチオン性グリセロール誘導体、およびポリカチオン性分子、例えば、ポリリジンなど（ＷＯ９７／３０７３１）も、ｄｓＲＮＡの細胞取り込みを増強することが知られている。 Agents that enhance uptake of RNAi agents at the cellular level can also be added to the pharmaceutical and other compositions of this disclosure. For example, cationic lipids such as Lipofectin (Junichi et al, U.S. Pat. No. 5,705,188), cationic glycerol derivatives, and polycationic molecules such as polylysine (WO 97/30731) also enhance cellular uptake of dsRNA. known to enhance.

投与された核酸の浸透を高めるために、他の薬剤、例えば、グリコール、例えば、エチレングリコールおよびプロピレングリコールなど、ピロール、例えば、２－ピロールなど、アゾン、ならびにテルペン、例えば、リモネンおよびメントンなどを用いることができる。 Other agents, such as glycols, such as ethylene glycol and propylene glycol, pyrroles, such as 2-pyrrole, azones, and terpenes, such as limonene and menthone, are used to enhance the penetration of the administered nucleic acids. be able to.

ｖ．賦形剤
担体化合物とは対照的に、「医薬担体」または「賦形剤」は、１つまたは複数の核酸を動物にデリバリーするための、薬学的に許容される溶媒、懸濁剤、または任意の他の薬理学的に不活性なビヒクルである。賦形剤は、液体または固体であり得、ならびに、核酸および所定の医薬組成物お他の成分を組み合わせたときに、所望の体積、稠度などを提供するように計画された投与の様式を念頭において選択される。典型的な医薬担体としては、これらに限定されるわけではないが、結着剤（例えば、予めゼラチン化されたウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン、またはヒドロキシプロピルメチルセルロースなど）；充填剤（例えば、ラクトースおよび他の糖、微結晶性セルロース、ペクチン、ゼラチン、硫酸カルシウム、エチルセルロース、ポリアクリレート、またはリン酸水素カルシウムなど）；潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、シリカ、コロイド状二酸化ケイ素、ステアリン酸、金属ステアリン酸塩、硬化植物油、コーンスターチ、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウムなど）；崩壊剤（例えば、デンプン、デンプングリコール酸ナトリウムなど）；および湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウムなど）が挙げられる。 v. Excipients A "pharmaceutical carrier" or "excipient," as opposed to a carrier compound, is a pharmaceutically acceptable solvent, suspension, or agent for delivering one or more nucleic acids to an animal. Any other pharmacologically inert vehicle. Excipients can be liquid or solid, and have in mind the mode of administration designed to provide the desired volume, consistency, etc., when combined with the nucleic acid and other ingredients of a given pharmaceutical composition. is selected in Typical pharmaceutical carriers include, but are not limited to, binders such as pregelatinized corn starch, polyvinylpyrrolidone, or hydroxypropylmethylcellulose; fillers such as lactose and other sugar, microcrystalline cellulose, pectin, gelatin, calcium sulfate, ethyl cellulose, polyacrylates, or calcium hydrogen phosphate); lubricants (e.g. magnesium stearate, talc, silica, colloidal silicon dioxide, stearic acid, metal stearates, hydrogenated vegetable oils, corn starch, polyethylene glycol, sodium benzoate, sodium acetate, etc.); disintegrating agents (eg, starch, sodium starch glycolate, etc.); and wetting agents (eg, sodium lauryl sulfate, etc.).

核酸と有害に反応しない、非経静脈投与にとって好適な薬学的に許容される有機または無機賦形剤も、本開示の組成物を製剤化するために使用することができる。好適な薬学的に許容される担体としては、これらに限定されるわけではないが、水、塩溶液、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドンなどが挙げられる。 Pharmaceutically acceptable organic or inorganic excipients suitable for parenteral administration that do not deleteriously react with nucleic acids can also be used to formulate the compositions of this disclosure. Suitable pharmaceutically acceptable carriers include, but are not limited to, water, salt solutions, alcohols, polyethylene glycol, gelatin, lactose, amylose, magnesium stearate, talc, silicic acid, viscous paraffin, Hydroxymethylcellulose, polyvinylpyrrolidone, and the like.

核酸の局所投与用の製剤は、滅菌および非滅菌水溶液、アルコールなどの一般的な溶媒における非水溶液、または液体もしくは固体油基剤における核酸の溶液を含むことができる。溶液は、緩衝剤、希釈剤、および他の好適な添加剤も含有することができる。核酸と有害に反応しない、非経静脈投与にとって好適な薬学的に許容される有機または無機賦形剤を、使用することができる。 Formulations for topical administration of nucleic acids can include sterile and non-sterile aqueous solutions, non-aqueous solutions in common solvents such as alcohols, or solutions of the nucleic acids in liquid or solid oil bases. The solutions can also contain buffers, diluents and other suitable additives. Pharmaceutically acceptable organic or inorganic excipients suitable for parenteral administration that do not deleteriously react with nucleic acids can be used.

好適な薬学的に許容される賦形剤としては、これらに限定されるわけではないが、水、塩溶液、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドンなどが挙げられる。 Suitable pharmaceutically acceptable excipients include, but are not limited to, water, saline, alcohol, polyethylene glycol, gelatin, lactose, amylose, magnesium stearate, talc, silicic acid, viscous paraffin, hydroxymethylcellulose, polyvinylpyrrolidone, and the like.

ｖｉ．他の成分
本開示の組成物は、さらに、医薬組成物中に従来的に見出される他の補助成分を、確立されたそれらの使用レベルにおいて含有することができる。したがって、例えば、組成物は、追加の適合性の、薬学的に活性な材料、例えば、止痒剤、収斂剤、局部麻酔薬、もしくは抗炎症剤などを含有することができ、または、本開示の組成物の様々な剤形を物理的に製剤化する際に有用な追加の材料、例えば、染料、矯臭剤、防腐剤、酸化防止剤、乳白剤、増粘剤、および安定化剤などを含有することができる。ただし、そのような材料は、添加したときに、本開示の組成物の成分の生物活性を過度に妨害すべきではない。製剤は、滅菌することができ、所望の場合は、製剤の核酸と有害に相互作用しない助剤、例えば、潤滑剤、防腐剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を及ぼすための塩、緩衝剤、着色剤、風味剤、または芳香族物質などと混合することができる。 vi. Other Ingredients The compositions of the present disclosure can additionally contain other adjunct ingredients conventionally found in pharmaceutical compositions, at their established usage levels. Thus, for example, a composition can contain additional compatible, pharmaceutically active ingredients, such as antipruritics, astringents, local anesthetics, or anti-inflammatory agents, or the present disclosure. Additional ingredients useful in physically formulating various dosage forms of the compositions of can contain. However, such materials should not unduly interfere with the biological activity of the components of the disclosed compositions when added. The formulation can be sterilized and, if desired, contains auxiliaries that do not adversely interact with the nucleic acids of the formulation, such as lubricants, preservatives, stabilizers, wetting agents, emulsifiers, to affect osmotic pressure. salts, buffering agents, coloring agents, flavoring agents, or aromatic substances.

水性懸濁液は、懸濁液の粘度を増加する物質、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストランなどを含有することができる。懸濁液は、安定化剤も含有することができる。 Aqueous suspensions may contain substances which increase the viscosity of the suspension, such as sodium carboxymethyl cellulose, sorbitol, or dextran. The suspension may also contain stabilizers.

一部の実施形態において、本開示において特徴とされる医薬組成物は、（ａ）１つまたは複数のＲＮＡｉ剤、および（ｂ）非ＲＮＡｉメカニズムによって機能し、ＭＡＰＴ関連障害を使用する際に有用である、１つまたは複数の薬剤を含む。そのような薬剤の例としては、コリンエステラーゼ阻害剤、メマンチン、モノアミン阻害剤、レセルピン、抗痙攣薬、抗精神病薬、および抗鬱薬が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。 In some embodiments, the pharmaceutical compositions featured in this disclosure function by (a) one or more RNAi agents and (b) non-RNAi mechanisms and are useful in using MAPT-related disorders. comprising one or more agents that are Examples of such agents include, but are not limited to, cholinesterase inhibitors, memantine, monoamine inhibitors, reserpine, anticonvulsants, antipsychotics, and antidepressants.

そのような化合物の毒性および治療有効性は、例えば、５０％致死量（集団の５０％に致死的である用量）およびＥＤ５０（集団の５０％において治療的有効な用量）を判定するために、細胞培養物または実験動物における標準的な薬学的手法によって判定することができる。毒性と治療有効性との間の用量比は、治療指数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０の比として示すことができる。高い治療指数を示す化合物が好ましい。 Toxicity and therapeutic efficacy of such compounds are determined, for example, to determine the 50% lethal dose (the dose that is lethal to 50% of the population) and the ED50 (the dose that is therapeutically effective in 50% of the population). It can be determined by standard pharmaceutical techniques in cell cultures or experimental animals. The dose ratio between toxic and therapeutic efficacy is the therapeutic index and it can be expressed as the ratio LD50/ED50. Compounds that exhibit high therapeutic indices are preferred.

細胞培養アッセイおよび動物研究から得たデータは、ヒトにおける使用のために様々な投薬量を製剤化する際に使用することができる。本開示における本明細書において特徴とされる組成物の投薬量は、概して、わずかな毒性かまたは毒性が全くないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内である。投薬量は、用いられる剤形および利用される投与経路に応じて、この範囲内で変更することができる。本開示において特徴とされる方法で使用される任意の化合物に対して、最初に、細胞培養アッセイから治療有効用量を見積もることができる。細胞培養において決定されたＩＣ５０（すなわち、症状の１／２最大阻害を達成する試験化合物の濃度）を含む、化合物、または、適切な場合には、標的配列のポリペプチド産物の循環血漿濃度範囲を達成する（例えば、ポリペプチドの濃度減少を達成する）ように、用量を動物モデルにおいて製剤化することができる。そのような情報は、ヒトにおける有用な用量をより正確に判定するために使用することができる。血漿中のレベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィーによって、測定することができる。 The data obtained from cell culture assays and animal studies can be used in formulating a range of dosages for use in humans. The dosage of the compositions featured herein in this disclosure lies generally within a range of circulating concentrations that include the ED50 with little or no toxicity. The dosage can vary within this range depending on the dosage form employed and the route of administration utilized. For any compound used in the methods featured in this disclosure, the therapeutically effective dose can be estimated initially from cell culture assays. The circulating plasma concentration range of the compound, or, where appropriate, the polypeptide product of the target sequence, that includes the IC50 (i.e., the concentration of the test compound that achieves a half-maximal inhibition of symptoms) as determined in cell culture. A dose can be formulated in animal models to achieve (eg, achieve a decreased concentration of the polypeptide). Such information can be used to more accurately determine useful doses in humans. Levels in plasma may be measured, for example, by high performance liquid chromatography.

本開示において特徴とされるＲＮＡｉ剤は、上記において説明されるようなそれらの投与以外に、ヌクレオチドリピートの発現によって媒介される病理学的プロセスの処置において有効な他の既知の薬物と併用して投与することもできる。いずれにしても、投与する医師は、当技術分野で公知であるかまたは本明細書において説明された、有効性の標準的尺度を使用して観察された結果に基づいて、ＲＮＡｉ剤投与の量およびタイミングを調整することができる。 RNAi agents featured in this disclosure may be used in combination with other known drugs effective in treating pathological processes mediated by expression of nucleotide repeats, other than their administration as described above. It can also be administered. In any event, the administering physician will determine the amount of RNAi agent administered based on observed results using standard measures of efficacy known in the art or described herein. and timing can be adjusted.

ＶＩＩ．キット
ある特定の態様では、本開示は、ｓｉＲＮＡ化合物、例えば、二本鎖ｓｉＲＮＡ化合物、またはｓｓｉＲＮＡ化合物（例えば、前駆体、例えば、ｓｓｉＲＮＡ化合物へとプロセシングすることができるより大きなｓｉＲＮＡ化合物、またはｓｉＲＮＡ化合物、例えば、二本鎖ｓｉＲＮＡ化合物、もしくはｓｓｉＲＮＡ化合物をコードするＤＮＡ、またはその前駆体）の医薬製剤を収容する好適な容器を含むキットを提供する。 VII. Kits In certain aspects, the present disclosure provides siRNA compounds, e.g., double-stranded siRNA compounds, or ssiRNA compounds (e.g., larger siRNA compounds or siRNA compounds that can be processed into precursors, e.g., ssiRNA compounds). (eg, a double-stranded siRNA compound, or DNA encoding an ssiRNA compound, or a precursor thereof), comprising a suitable container containing the pharmaceutical formulation.

そのようなキットは、１つまたは複数のｄｓＲＮＡ剤と、使用のための使用説明書、例えば、予防有効量または治療有効量のｄｓＲＮＡ剤を投与するための使用説明書とを含む。ｄｓＲＮＡ剤は、バイアル瓶または予め充填された注射器にあり得る。適宜、キットは、ｄｓＲＮＡ剤を投与するための手段（例えば、予め充填された注射器または髄腔内ポンプなどの注入デバイス）またはＭＡＰＴの阻害を測定するための手段（例えば、ＭＡＰＴ ｍＲＮＡ、タウ、および／またはＭＡＰＴ活性の阻害を測定するための手段）をさらに含んでもよい。ＭＡＰＴの阻害を測定するためのそのような手段は、対象から試料、例えば、ＣＳＦおよび／または血漿試料を得るための手段を含み得る。適宜、本発明のキットは、治療有効量または予防有効量を判定するための手段をさらに含んでもよい。 Such kits include one or more dsRNA agents and instructions for use, eg, instructions for administering a prophylactically or therapeutically effective amount of the dsRNA agents. The dsRNA agent can be in a vial or pre-filled syringe. Optionally, the kit includes a means for administering a dsRNA agent (e.g., a pre-filled syringe or an infusion device such as an intrathecal pump) or a means for measuring inhibition of MAPT (e.g., MAPT mRNA, tau, and /or means for measuring inhibition of MAPT activity). Such means for measuring inhibition of MAPT can include means for obtaining samples, eg, CSF and/or plasma samples, from the subject. Optionally, kits of the invention may further comprise means for determining a therapeutically effective amount or a prophylactically effective amount.

ある特定の実施形態において、医薬製剤の個々の成分は、１つの容器において提供され得る。あるいは、医薬製剤の成分を別々に２つ以上の容器において、例えば、ｓｉＲＮＡ化合物調製物のための１つの容器と、担体化合物のための少なくとも別の容器において提供することは、望ましくあり得る。キットは、単一の箱における１つまたは複数の容器など、多数の異なる構成においてパッケージしてもよい。異なる成分は、例えば、キットと共に提供される使用説明書に従って、組み合わせることができる。成分は、医薬組成物を調製および投与するために、本明細書において説明される方法に従って組み合わせることができる。キットは、デリバリーデバイスも含むことができる。 In certain embodiments, the individual components of the pharmaceutical formulation may be provided in one container. Alternatively, it may be desirable to provide the components of the pharmaceutical formulation separately in two or more containers, for example, one container for the siRNA compound preparation and at least another container for the carrier compound. Kits may be packaged in a number of different configurations, such as one or more containers in a single box. Different components can be combined, for example, according to instructions provided with the kit. The ingredients can be combined according to the methods described herein to prepare and administer the pharmaceutical composition. A kit can also include a delivery device.

ＶＩＩＩ．ＭＡＰＴ発現を阻害する方法
本開示はまた、細胞においてＭＡＰＴ遺伝子の発現を阻害する方法を提供する。本方法は、細胞を、細胞におけるＭＡＰＴの発現および／または活性を阻害するのに有効な量のＲＮＡｉ剤、例えば、二本鎖ＲＮＡｉ剤と接触させること、それによって、細胞におけるＭＡＰＴの発現および／または活性を阻害することを含む。本開示はまた、細胞におけるエクソン１０含有ＭＡＰＴ転写物を選択的に阻害する方法も提供する。本方法は、細胞を、本開示のｄｓＲＮＡ剤、または本開示の医薬組成物と接触させること、それによって細胞におけるエクソン１０含有ＭＡＰＴ転写物を選択的に分解することを含む。ある特定の実施形態において、細胞は対象内である。ある特定の実施形態において、対象はヒトである。ある特定の実施形態において、対象は、ＭＡＰＴ関連障害を有する。ある特定の実施形態において、ＭＡＰＴ関連障害は、神経変性障害である。ある特定の実施形態において、神経変性障害は、ＭＡＰＴ遺伝子にコードされるタンパク質タウの異常に関連する。ある特定の実施形態において、ＭＡＰＴ遺伝子にコードされるタンパク質タウの異常は、対象の脳内でのタウの凝集を引き起こす。 VIII. Methods of Inhibiting MAPT Expression The present disclosure also provides methods of inhibiting MAPT gene expression in cells. The method comprises contacting the cell with an effective amount of an RNAi agent, e.g., a double-stranded RNAi agent, to inhibit MAPT expression and/or activity in the cell, thereby inhibiting MAPT expression and/or activity in the cell. or inhibiting activity. The present disclosure also provides methods of selectively inhibiting exon 10-containing MAPT transcripts in cells. The method comprises contacting a cell with a dsRNA agent of the disclosure, or a pharmaceutical composition of the disclosure, thereby selectively degrading exon 10-containing MAPT transcripts in the cell. In certain embodiments, the cell is within a subject. In certain embodiments, the subject is human. In certain embodiments, the subject has a MAPT-related disorder. In certain embodiments, the MAPT-related disorder is a neurodegenerative disorder. In certain embodiments, the neurodegenerative disorder is associated with abnormalities of the protein tau encoded by the MAPT gene. In certain embodiments, aberrant MAPT gene-encoded protein tau causes aggregation of tau in the brain of the subject.

本開示のある特定の実施形態において、ＭＡＰＴの発現および／または活性は、ＣＮＳ（例えば、脳）細胞において優先的に少なくとも３０％阻害される。特定の実施形態において、ＭＡＰＴの発現および／または活性は、少なくとも３０％阻害される。ある特定の実施形態において、対象の血清中のタウタンパク質レベルは、少なくとも３０％阻害される。本開示のある特定の他の実施形態において、ＭＡＰＴの発現および／または活性は、肝細胞において優先的に少なくとも３０％阻害される。 In certain embodiments of the present disclosure, MAPT expression and/or activity is preferentially inhibited by at least 30% in CNS (eg, brain) cells. In certain embodiments, MAPT expression and/or activity is inhibited by at least 30%. In certain embodiments, tau protein levels in the serum of the subject are inhibited by at least 30%. In certain other embodiments of the present disclosure, MAPT expression and/or activity is preferentially inhibited by at least 30% in hepatocytes.

細胞の、ＲＮＡｉ剤、例えば、二本鎖ＲＮＡｉ剤との接触は、インビトロまたはインビボで行うことができる。インビボで細胞を、ＲＮＡｉ剤と接触させることは、対象、例えば、ヒト対象内の細胞または細胞の群を、ＲＮＡｉ剤と接触させることを含む。細胞を接触させるインビトロおよびインビボ法の組合せも可能である。A108868_1030US_P2_Specification Contacting a cell with an RNAi agent, eg, a double-stranded RNAi agent, can occur in vitro or in vivo. Contacting a cell in vivo with an RNAi agent includes contacting a cell or group of cells within a subject, eg, a human subject, with the RNAi agent. A combination of in vitro and in vivo methods of contacting cells is also possible. A108868_1030US_P2_Specification

細胞を接触させることは、上記で論じたように直接的である場合も間接的である場合もある。さらに、細胞を接触させることは、本明細書に記載される、または当技術分野で公知の任意のリガンドを含む標的化リガンドを介して達成できる。一部の実施形態において、標的化リガンドは、炭水化物部分、例えば、ＧａｌＮＡｃリガンドまたはＲＮＡｉ剤を目的の部位に向ける任意の他のリガンドである。 Contacting the cells may be direct or indirect as discussed above. Additionally, contacting the cells can be accomplished via a targeting ligand, including any ligand described herein or known in the art. In some embodiments, the targeting ligand is a carbohydrate moiety, such as a GalNAc ligand or any other ligand that directs the RNAi agent to the site of interest.

「阻害すること」という用語は、本明細書において使用される場合、「低減すること」、「サイレンシングすること」、「下方制御すること」、「抑制すること」および他の同様の用語と同義的に使用され、阻害の任意のレベルを含む。ある特定の実施形態において、例えば、本開示のＲＮＡｉ剤の阻害のレベルは、例えば、細胞培養物中の細胞が、リポフェクタミン（商標）媒介性トランスフェクションによってトランスフェクトされる細胞培養条件において、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下などの細胞の近傍における濃度で評価できる。所与のＲＮＡｉ剤のノックダウンは、細胞培養物において前処置されたレベル対細胞培養物において後処置されたレベルの比較によって決定でき、また、スクランブルされたまたは他の形態の対照ＲＮＡｉ剤を用いて並行して処置された細胞に対して比較してもよい。例えば、少なくとも約３０％の細胞培養物におけるノックダウンは、それによって、「阻害すること」または「低減すること」、「下方制御すること」または「抑制すること」などが生じたことを示すと同定され得る。標的化されたｍＲＮＡまたはコードされるタンパク質レベル（および従って、本開示のＲＮＡｉ剤によって引き起こされる「阻害すること」などの程度）の評価も、当技術分野において記載されるような適切に制御された条件下で本開示のＲＮＡｉ剤のインビボ系において評価できるということは明確に企図される。 The term "inhibiting," as used herein, is synonymous with "reducing," "silencing," "downregulating," "suppressing," and other similar terms. Used synonymously, includes any level of inhibition. In certain embodiments, for example, the level of inhibition of an RNAi agent of the present disclosure is 10 nM or less, e.g., in cell culture conditions in which cells in the cell culture are transfected by Lipofectamine™-mediated transfection. , 1 nM or less in the vicinity of the cell. Knockdown of a given RNAi agent can be determined by comparing pre-treated levels in cell culture versus post-treated levels in cell culture, and using scrambled or other forms of control RNAi agents. may be compared against cells treated in parallel. For example, knockdown in at least about 30% of the cell culture indicates that "inhibiting" or "reducing", "down-regulating" or "suppressing", etc. has occurred thereby. can be identified. Assessment of targeted mRNA or encoded protein levels (and thus the degree of "inhibiting," etc., caused by the RNAi agents of the present disclosure) can also be appropriately controlled, as described in the art. It is expressly contemplated that the RNAi agents of the present disclosure can be evaluated in an in vivo system under certain conditions.

語句「ＭＡＰＴを阻害すること」、「ＭＡＰＴ遺伝子の発現を阻害すること」、または「ＭＡＰＴの発現を阻害すること」は、本明細書において使用される場合、任意のＭＡＰＴ遺伝子（例えば、マウスＭＡＰＴ遺伝子、ラットＭＡＰＴ遺伝子、サルＭＡＰＴ遺伝子、またはヒトＭＡＰＴ遺伝子など）、ならびにタウをコードするＭＡＰＴ遺伝子の変異体または突然変異体の発現の阻害を含む。したがって、ＭＡＰＴ遺伝子は、遺伝子操作された細胞、細胞の群または生物との関連で、野生型ＭＡＰＴ遺伝子、突然変異体ＭＡＰＴ遺伝子またはトランスジェニックＭＡＰＴ遺伝子であり得る。 The phrases "inhibiting MAPT," "inhibiting expression of a MAPT gene," or "inhibiting expression of MAPT," as used herein, refer to any MAPT gene (e.g., mouse MAPT gene, rat MAPT gene, monkey MAPT gene, or human MAPT gene), as well as variants or mutations of the MAPT gene encoding tau. Thus, the MAPT gene can be a wild-type MAPT gene, a mutant MAPT gene or a transgenic MAPT gene in the context of a genetically engineered cell, group of cells or organism.

「ＭＡＰＴ遺伝子の発現を阻害すること」は、任意のレベルのＭＡＰＴ遺伝子の阻害、例えば、ＭＡＰＴ遺伝子の発現の少なくとも部分的抑制、例えば、少なくとも約２５％までの阻害を含む。ある特定の実施形態において、阻害は、対照レベルに対して少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％である。ＭＡＰＴの阻害は、例えば、本明細書における実施例に提供されるようなＡ５４９細胞および１０ｎＭの濃度のＲＮＡ剤を用いたインビトロアッセイならびにＰＣＲアッセイを使用して測定することができ、本開示の範囲内であることが企図される。一部の実施形態において、ＭＡＰＴの阻害は、ＢＥ（２）－Ｃ細胞を用いたインビトロアッセイを使用して測定することができる。一部の実施形態において、ＭＡＰＴの阻害は、Ｎｅｕｒｏ－２ａ細胞を用いたインビトロアッセイを使用して測定することができる。別の実施形態において、ＭＡＰＴの阻害は、Ｃｏｓ－７（Ｄｕａｌ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ｐｓｉＣＨＥＣＫ２ベクター）を用いたインビトロアッセイを使用して測定することができる。さらに別の実施形態において、ＭＡＰＴの阻害は、一次マウス肝細胞を用いたインビトロアッセイを使用して測定することができる。 "Inhibiting expression of the MAPT gene" includes any level of inhibition of the MAPT gene, such as at least partial inhibition of expression of the MAPT gene, such as inhibition by at least about 25%. In certain embodiments, the inhibition is at least about 25%, at least about 30%, at least about 40%, at least about 50%, at least about 60%, at least about 70%, at least about 80%, At least about 90%, or at least about 95%, or at least about 99%. Inhibition of MAPT can be measured using, for example, an in vitro assay using A549 cells and an RNA agent at a concentration of 10 nM and a PCR assay as provided in the Examples herein, and is within the scope of the present disclosure. is intended to be within In some embodiments, inhibition of MAPT can be measured using an in vitro assay using BE(2)-C cells. In some embodiments, inhibition of MAPT can be measured using an in vitro assay using Neuro-2a cells. In another embodiment, inhibition of MAPT can be measured using an in vitro assay with Cos-7 (Dual-Luciferase psiCHECK2 vector). In yet another embodiment, inhibition of MAPT can be measured using an in vitro assay using primary mouse hepatocytes.

ＭＡＰＴ遺伝子の発現は、ＭＡＰＴ遺伝子の発現に付随する任意の変数のレベル、例えばＭＡＰＴ ｍＲＮＡのレベル（例えばセンスｍＲＮＡ、アンチセンスｍＲＮＡ、総ＭＡＰＴ ｍＲＮＡ、センスＭＡＰＴリピート含有ｍＲＮＡ、および／またはアンチセンスＭＡＰＴリピート含有ｍＲＮＡ）、またはタウのレベル（例えば総タウ、野生型タウタンパク質、または伸張されたリピートを含有するタンパク質）、または例えばセンスもしくはアンチセンス含有凝集体のレベルおよび／または異常なジペプチドリピートタンパク質のレベルに基づいて評価してよい。 Expression of the MAPT gene can be measured at levels of any variable associated with expression of the MAPT gene, such as levels of MAPT mRNA (e.g., sense mRNA, antisense mRNA, total MAPT mRNA, sense MAPT repeat-containing mRNA, and/or antisense MAPT repeats). mRNA), or levels of tau (e.g., total tau, wild-type tau protein, or proteins containing expanded repeats), or levels of e.g., sense- or antisense-containing aggregates and/or levels of aberrant dipeptide repeat proteins. can be evaluated based on

阻害は、対照レベルと比較した、これらの変数のうち１つまたは複数の絶対または相対レベルの低下によって評価できる。対照レベルは、当技術分野で利用される任意の種類の対照レベル、例えば、投与前ベースラインレベルまたは未処置であるか、もしくは対照（例えば、バッファーのみの対照または不活性の薬剤対照など）を用いて処置された同様の対象、細胞もしくは試料から決定されるレベルであり得る。 Inhibition can be assessed by a reduction in absolute or relative levels of one or more of these variables compared to control levels. The control level can be any type of control level utilized in the art, e.g., pre-dose baseline level or untreated, or a control (e.g., buffer only control or inactive drug control, etc.). It can be the level determined from a similar subject, cell or sample treated with.

例えば、本開示の方法の一部の実施形態において、ＭＡＰＴ遺伝子の発現（例えば、センスもしくはアンチセンス含有凝集体および／または異常なジペプチドリピートタンパク質レベルによって評価される）は、対照レベルに対して少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、もしくは９５％阻害されるか、またはアッセイの検出レベル未満まで阻害される。本開示の方法の他の実施形態において、ＭＡＰＴ遺伝子の発現（例えば、ｍＲＮＡまたはタンパク質発現レベルによって評価される）は、対照レベルに対して少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％阻害される。ある特定の実施形態において、方法は、例えば、ＭＡＰＴの発現を低減する薬剤を用いる対象の処置後の臨床的に関連するアウトカムによって実証されるような、ＭＡＰＴの発現の臨床的に関連する阻害を含む。 For example, in some embodiments of the methods of the present disclosure, MAPT gene expression (e.g., as assessed by sense- or antisense-containing aggregates and/or abnormal dipeptide repeat protein levels) is at least 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, or 95% inhibition, or inhibition below the level of detection of the assay. In other embodiments of the disclosed methods, MAPT gene expression (e.g., as assessed by mRNA or protein expression levels) is at least about 25%, at least about 30%, at least about 40%, It is inhibited by at least about 50%, at least about 60%, at least about 70%, at least about 80%, at least about 90%, or at least about 95%. In certain embodiments, the methods achieve clinically relevant inhibition of MAPT expression, e.g., as demonstrated by a clinically relevant outcome following treatment of a subject with an agent that reduces MAPT expression. include.

ＭＡＰＴ遺伝子の発現の阻害は、第１の細胞または細胞の群と実質的に同一であるが、そのように処置されていない第２の細胞または細胞の群（ＲＮＡｉ剤で処置されていない、または目的の遺伝子に標的化されるＲＮＡｉ剤を用いて処置されていない対照細胞（複数可））と比較して、ＭＡＰＴ遺伝子の発現が阻害されるように、ＭＡＰＴ遺伝子が転写され、処置（例えば、細胞（単数または複数）を本開示のＲＮＡｉ剤と接触させることによって、または本開示のＲＮＡｉ剤を、細胞が存在しているもしくは存在していた対象に投与することによって）されている第１の細胞または細胞の群（このような細胞は、例えば、対象に由来する試料中に存在し得る）によって発現されるｍＲＮＡの量の低減によって示される場合もある。阻害の程度は、以下の点で表すことができる： Inhibition of expression of the MAPT gene is substantially identical to the first cell or group of cells, but is not so treated in a second cell or group of cells (not treated with an RNAi agent, or The MAPT gene is transcribed and the treatment (e.g., by contacting the cell(s) with an RNAi agent of this disclosure or administering an RNAi agent of this disclosure to a subject in which the cell is or has been present It may also be indicated by a reduction in the amount of mRNA expressed by a cell or group of cells (such cells may be present, for example, in a sample derived from a subject). The degree of inhibition can be expressed in terms of:

Figure 2023521604000043
Figure 2023521604000043

他の実施形態において、ＭＡＰＴ遺伝子の発現の阻害は、ＭＡＰＴ遺伝子の発現に機能的に関連するパラメータ、例えばタウの発現、センスもしくはアンチセンス含有凝集体および／または異常なジペプチドリピートタンパク質のレベルの低減の観点で評価してよい。ＭＡＰＴ遺伝子のサイレンシングは、発現コンストラクトから内因性または異種性のＭＡＰＴを発現する任意の細胞において、当技術で既知の任意のアッセイによって決定してよい。 In other embodiments, inhibition of MAPT gene expression reduces levels of parameters functionally associated with MAPT gene expression, such as expression of tau, sense- or antisense-containing aggregates and/or abnormal dipeptide repeat proteins. can be evaluated from the viewpoint of MAPT gene silencing may be determined by any assay known in the art in any cell that expresses endogenous or heterologous MAPT from an expression construct.

ＭＡＰＴ遺伝子の発現の阻害は、細胞または細胞の群によって発現されるタウタンパク質のレベル（例えば、対象に由来する試料中に発現されるタンパク質のレベル）の低減（または機能性パラメータ、例えば、微小管アセンブリーの低減）によって明らかにすることができる。上記で説明されたように、ｍＲＮＡ抑制の評価のために、処置された細胞または細胞の群におけるタンパク質発現レベルの阻害を、対照細胞または細胞の群におけるタンパク質のレベルのパーセンテージとして同様に表すことができる。一部の実施形態において、語句「ＭＡＰＴを阻害すること」はまた、タウタンパク質発現の阻害、例えば、タウ発現の少なくとも部分的抑制、例えば少なくとも約２５％の阻害も含むことができる。ある特定の実施形態において、ＭＡＰＴの活性の阻害は、対照レベルに対して少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％である。タウタンパク質レベルは、例えば、（Rubenstein et al.(2015) J. Neurotrauma 2015 Mar1: 32 (5):342-352; Lim et al. (2014) Comput Struct Biotechnol J. 2014;12(20-21):7-13）に記載されるアッセイを用いたインビトロアッセイを使用して測定することができる。ＭＡＰＴの発現は、例えば、（Caillet-Boudin et al. (2015) Mol Neurodegener. 2015; 10:28; Hefti et al. (2018) PLoS ONE 13(4): e0195771）に記載されるアッセイを用いたインビトロアッセイを使用して測定することができる。 Inhibition of MAPT gene expression results in a reduction in the level of tau protein expressed by a cell or group of cells (e.g., the level of protein expressed in a sample derived from a subject) (or a functional parameter, e.g., microtubules). reduced assembly). As explained above, for assessment of mRNA suppression, inhibition of protein expression levels in treated cells or groups of cells can similarly be expressed as a percentage of levels of protein in control cells or groups of cells. can. In some embodiments, the phrase "inhibiting MAPT" can also include inhibition of tau protein expression, eg, at least partial suppression of tau expression, eg, inhibition of at least about 25%. In certain embodiments, the inhibition of MAPT activity is at least about 25%, at least about 30%, at least about 40%, at least about 50%, at least about 60%, at least about 70%, at least About 80%, at least about 90%, or at least about 95%, or at least about 99%. Tau protein levels, for example (Rubenstein et al. (2015) J. Neurotrauma 2015 Mar1: 32 (5):342-352; Lim et al. (2014) Comput Struct Biotechnol J. 2014;12(20-21) :7-13) using an in vitro assay. MAPT expression, for example, using the assay described in (Caillet-Boudin et al. (2015) Mol Neurodegener. 2015; 10:28; Hefti et al. (2018) PLoS ONE 13(4): e0195771) It can be measured using an in vitro assay.

ＭＡＰＴ遺伝子の発現の阻害を評価するために使用できる対照細胞または細胞の群には、本開示のＲＮＡｉ剤とまだ接触していない細胞または細胞の群が含まれる。例えば、対照細胞または細胞の群は、ＲＮＡｉ剤を用いる対照の処置の前の個々の対象（例えば、ヒトまたは動物対象）に由来し得る。 Control cells or groups of cells that can be used to assess inhibition of MAPT gene expression include cells or groups of cells that have not yet been contacted with an RNAi agent of the present disclosure. For example, a control cell or group of cells can be derived from an individual subject (eg, a human or animal subject) prior to control treatment with an RNAi agent.

細胞または細胞の群によって発現されたＭＡＰＴ ｍＲＮＡのレベルは、ｍＲＮＡ発現を評価するための当技術分野で公知の任意の方法を使用して決定できる。一実施形態において、試料中のＭＡＰＴの発現のレベルは、転写されたポリヌクレオチドまたはその一部、例えば、ＭＡＰＴ遺伝子のｍＲＮＡを検出することによって決定される。ＲＮＡは、例えば、酸フェノール／グアニジンイソチオシアネート抽出（ＲＮＡｚｏｌ Ｂ； Ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ）、ＲＮｅａｓｙ（商標）ＲＮＡ調製キット（Ｑｉａｇｅｎ（登録商標））またはＰＡＸｇｅｎｅ（ＰｒｅＡｎａｌｙｔｉｘ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を使用することを含む、ＲＮＡ抽出技術を使用して細胞から抽出できる。リボ核酸ハイブリダイゼーションを利用する通常のアッセイ形式には、核ランオンアッセイ、ＲＴ－ＰＣＲ、ＲＮアーゼ保護アッセイ、ノーザンブロッティング、インサイツハイブリダイゼーションおよびマイクロアレイ分析が含まれる。鎖特異的なＭＡＰＴ ｍＲＮＡは、例えば上記Jiang, et al.、上記Lagier-Tourenne, et al.、および上記Jiang, et al.に記載されている定量的ＲＴ－ＰＣＲおよび／または液滴デジタルＰＣＲ法を使用して検出してよい。循環するＭＡＰＴ ｍＲＮＡは、ＷＯ２０１２／１７７９０６に記載されている方法を使用して検出してよく、その全内容はこれにより参照により本明細書に組み込まれる。 The level of MAPT mRNA expressed by a cell or group of cells can be determined using any method known in the art for assessing mRNA expression. In one embodiment, the level of expression of MAPT in a sample is determined by detecting transcribed polynucleotides or portions thereof, eg, mRNA of the MAPT gene. RNA may be extracted using RNA extraction techniques, including, for example, using acid phenol/guanidine isothiocyanate extraction (RNAzol B; Biogenesis), RNeasy™ RNA preparation kit (Qiagen®) or PAXgene (PreAnalytix, Switzerland). can be extracted from the cells using Common assay formats utilizing ribonucleic acid hybridization include nuclear run-on assays, RT-PCR, RNase protection assays, northern blotting, in situ hybridization and microarray analysis. Strand-specific MAPT mRNA can be obtained by quantitative RT-PCR and/or droplet digital PCR methods described, for example, in Jiang, et al., supra, Lagier-Tourenne, et al., supra, and Jiang, et al., supra. may be detected using Circulating MAPT mRNA may be detected using the methods described in WO2012/177906, the entire contents of which are hereby incorporated herein by reference.

一部の実施形態において、ＭＡＰＴの発現のレベルは、核酸プローブを使用して決定される。「プローブ」という用語は、本明細書において使用される場合、特定のＭＡＰＴ核酸またはタンパク質もしくはその断片に選択的に結合可能である任意の分子を指す。プローブは、当業者によって合成できる、または適切な生物学的調製物から誘導できる。プローブは、標識されるように具体的に設計できる。プローブとして利用できる分子の例として、それだけには限らないが、ＲＮＡ、ＤＮＡ、タンパク質、抗体および有機分子が挙げられる。 In some embodiments, the level of MAPT expression is determined using a nucleic acid probe. The term "probe" as used herein refers to any molecule capable of selectively binding to a specific MAPT nucleic acid or protein or fragment thereof. Probes can be synthesized by one skilled in the art or derived from appropriate biological preparations. Probes can be specifically designed to be labeled. Examples of molecules that can be used as probes include, but are not limited to, RNA, DNA, proteins, antibodies and organic molecules.

単離されたｍＲＮＡは、それだけには限らないが、サザンまたはノーザン分析、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）分析およびプローブアレイを含む、ハイブリダイゼーションまたは増幅アッセイにおいて使用できる。ｍＲＮＡレベルを決定する１つの方法は、単離されたｍＲＮＡを、ＭＡＰＴ ｍＲＮＡとハイブリダイズできる核酸分子（プローブ）と接触させることを含む。一実施形態において、例えば、単離されたｍＲＮＡをアガロースゲル上に流すことおよびｍＲＮＡをゲルからメンブレン、例えば、ニトロセルロースにトランスファーすることによって、ｍＲＮＡを固体表面上に固定化し、プローブと接触させる。代替実施形態において、プローブ（複数可）を固体表面上に固定化し、例えば、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ（登録商標）遺伝子チップアレイにおいてｍＲＮＡをプローブ（複数可）と接触させる。当業者ならば、公知のｍＲＮＡ検出方法を、ＭＡＰＴ ｍＲＮＡのレベルの決定において使用するために容易に適応させることができる。 Isolated mRNA can be used in hybridization or amplification assays, including, but not limited to, Southern or Northern analysis, polymerase chain reaction (PCR) analysis and probe arrays. One method of determining mRNA levels involves contacting the isolated mRNA with a nucleic acid molecule (probe) capable of hybridizing to the MAPT mRNA. In one embodiment, the mRNA is immobilized on a solid surface and contacted with the probe, eg, by running the isolated mRNA on an agarose gel and transferring the mRNA from the gel to a membrane, eg, nitrocellulose. In an alternative embodiment, the probe(s) are immobilized on a solid surface and the mRNA is contacted with the probe(s) in, for example, Affymetrix® gene chip arrays. A skilled artisan can readily adapt known mRNA detection methods for use in determining levels of MAPT mRNA.

試料中のＭＡＰＴの発現のレベルを決定するための代替方法は、例えば、ＲＴ－ＰＣＲ（Ｍｕｌｌｉｓ、１９８７年、米国特許第４，６８３，２０２号に示された実験の実施形態）、リガーゼ連鎖反応［Barany (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:189-193］、自家持続配列複製法［Guatelli et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:1874-1878］、転写増幅システム［Kwoh et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:1173-1177］、Ｑ－ベータレプリカーゼ［Lizardi et al. (1988) Bio/Technology 6:1197］、ローリングサークル複製（Lizardi et al.、米国特許第５，８５４，０３３号）または任意のその他の核酸増幅法による、例えば、試料中のｍＲＮＡの核酸増幅または逆転写酵素（ｃＤＮＡを調製するための）のプロセスと、それに続く、当業者に公知の技術を使用する増幅された分子の検出を含む。これらの検出スキームは、このような分子が、極めて少数で存在する場合には、核酸分子の検出のために特に有用である。本開示の特定の態様では、ＭＡＰＴの発現のレベルは、定量的蛍光発生的ＲＴ－ＰＣＲ（すなわち、ＴａｑＭａｎ（商標）システム）によって、Ｄｕａｌ－Ｇｌｏ（登録商標）ルシフェラーゼアッセイによって、またはＭＡＰＴ発現もしくはｍＲＮＡレベルの測定のための他の技術分野によって認識された方法によって決定される。 Alternative methods for determining the level of expression of MAPT in a sample include, for example, RT-PCR (embodiment of experiments shown in Mullis, 1987, US Pat. No. 4,683,202), ligase chain reaction. [Barany (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:189-193], the self-sustained sequence replication method [Guatelli et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:1874-1878], Transcriptional amplification system [Kwoh et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:1173-1177], Q-beta replicase [Lizardi et al. (1988) Bio/Technology 6:1197], rolling circle replication (Lizardi et al., US Pat. No. 5,854,033) or any other nucleic acid amplification method, e.g., the process of nucleic acid amplification of mRNA in a sample or reverse transcriptase (to prepare cDNA); , followed by detection of the amplified molecules using techniques known to those of skill in the art. These detection schemes are particularly useful for the detection of nucleic acid molecules when such molecules are present in very low numbers. In certain aspects of the present disclosure, the level of expression of MAPT is determined by quantitative fluorogenic RT-PCR (i.e., TaqMan™ system), by Dual-Glo® luciferase assay, or by MAPT expression or mRNA Determined by other art-recognized methods for measuring levels.

ＭＡＰＴ ｍＲＮＡの発現レベルは、メンブレンブロット（例えば、ノーザン、サザン、ドットなどといったハイブリダイゼーション分析において使用される）またはマイクロウェル、試料チューブ、ゲル、ビーズまたはファイバー（または結合している核酸を含む任意の固相支持体）を使用してモニタリングできる。参照によって本明細書に組み込まれる、米国特許第５，７７０，７２２号、同５，８７４，２１９号、同５，７４４，３０５号、同５，６７７，１９５号および同５，４４５，９３４号を参照されたい。ＭＡＰＴ発現レベルの決定はまた、溶液中で核酸プローブを使用することを含み得る。 Expression levels of MAPT mRNA can be measured using membrane blots (e.g., used in hybridization assays such as Northern, Southern, Dot, etc.) or microwells, sample tubes, gels, beads or fibers (or any sample containing bound nucleic acid). solid phase support). U.S. Patent Nos. 5,770,722, 5,874,219, 5,744,305, 5,677,195 and 5,445,934, which are incorporated herein by reference See Determining MAPT expression levels can also involve using nucleic acid probes in solution.

一部の実施形態において、ｍＲＮＡ発現のレベルは、分岐ＤＮＡ（ｂＤＮＡ）アッセイまたはリアルタイムＰＣＲ（ｑＰＣＲ）を使用して評価される。このＰＣＲ方法の使用は、本明細書において示される実施例において記載され、例示されている。このような方法はまた、ＭＡＰＴ核酸の検出のために使用できる。 In some embodiments, the level of mRNA expression is assessed using branched DNA (bDNA) assays or real-time PCR (qPCR). The use of this PCR method is described and exemplified in the examples presented herein. Such methods can also be used for detection of MAPT nucleic acids.

タウ発現のレベルは、タンパク質レベルの測定のための当技術分野で公知の任意の方法を使用して決定できる。このような方法には、例えば、電気泳動、キャピラリー電気泳動、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、超拡散クロマトグラフィー、流体またはゲル沈降素反応、吸収分光法、比色アッセイ、分光光度的アッセイ、フローサイトメトリー、免疫拡散法（一元または二元）、免疫電気泳動、ウエスタンブロッティング、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、免疫蛍光アッセイ、電気化学発光アッセイなどが含まれる。このようなアッセイはまた、タウの存在または複製を示すタンパク質の検出のために使用できる。タウタンパク質レベルは、例えば、（Rubenstein et al.(2015) J. Neurotrauma 2015 Mar1: 32 (5):342-352; Lim et al. (2014) Comput Struct Biotechnol J. 2014;12(20-21):7-13）に記載されるアッセイを用いたインビトロアッセイを使用して測定することができる。 The level of tau expression can be determined using any method known in the art for measuring protein levels. Such methods include, for example, electrophoresis, capillary electrophoresis, high performance liquid chromatography (HPLC), thin layer chromatography (TLC), hyperdiffusion chromatography, fluid or gel precipitin reactions, absorption spectroscopy, ratio color assay, spectrophotometric assay, flow cytometry, immunodiffusion (one-way or two-way), immunoelectrophoresis, western blotting, radioimmunoassay (RIA), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), immunofluorescence assay, electrical Chemiluminescence assays and the like are included. Such assays can also be used to detect proteins indicative of the presence or replication of tau. Tau protein levels, for example (Rubenstein et al. (2015) J. Neurotrauma 2015 Mar1: 32 (5):342-352; Lim et al. (2014) Comput Struct Biotechnol J. 2014;12(20-21) :7-13) using an in vitro assay.

センスまたはアンチセンス含有凝集体のレベルおよび異常なジペプチドリピートタンパク質のレベルは、例えば蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）、免疫組織化学および免疫アッセイを含む当業者には周知の方法を使用して評価してよい（例えば上記Jiang, et al.を参照）。一部の実施形態において、ＭＡＰＴ関連疾患の処置における本開示の方法の有効性は、ＭＡＰＴ ｍＲＮＡレベルの低下によって（例えば、ＭＡＰＴレベルについてのＣＳＦ試料および／または血漿試料の評価によって、脳生検または別の方法によって）評価される。 Levels of sense- or antisense-containing aggregates and levels of aberrant dipeptide repeat proteins are assessed using methods well known to those skilled in the art, including, for example, fluorescence in situ hybridization (FISH), immunohistochemistry and immunoassays. Good (see, eg, Jiang, et al., supra). In some embodiments, efficacy of the methods of the present disclosure in treating MAPT-related disease is determined by reduction of MAPT mRNA levels (e.g., by evaluation of CSF and/or plasma samples for MAPT levels, brain biopsy or by another method).

本開示の方法の一部の実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡｉ剤が、対象内の特定の部位に送達されるように対象に投与される。ＭＡＰＴの発現の阻害は、ＭＡＰＴ ｍＲＮＡ（例えばセンスｍＲＮＡ、アンチセンスｍＲＮＡ、総ＭＡＰＴ ｍＲＮＡ）、タウタンパク質（例えば総タウタンパク質、野生型タウタンパク質）、センス含有凝集体、アンチセンス含有凝集体、対象の中の特定の部位、例えばＣＮＳ細胞から誘導された試料中の異常なジペプチドリピートタンパク質のレベルまたはレベルの変化の測定を使用して評価してよい。ある特定の実施形態において、方法は、例えば、ＭＡＰＴの発現を低減する薬剤を用いる対象の処置後の臨床的に関連するアウトカム、例えば、尾状核萎縮（例えば、容積測定ＭＲＩ（ｖＭＲＩ）によって評価されるような）の安定化または阻害、対象から得たＣＳＦ試料中の神経細線維軽鎖（Ｎｆｌ）レベルの安定化または低減、突然変異体ＭＡＰＴ ｍＲＮＡまたは切断された突然変異体タウ、例えば、全長突然変異体ＭＡＰＴ ｍＲＮＡもしくはタンパク質および切断された突然変異体ＭＡＰＴ ｍＲＮＡもしくはタンパク質の一方もしくは両方の低減などによって実証されるような、ＭＡＰＴの発現の臨床的に関連する阻害を含む。 In some embodiments of the disclosed methods, the RNAi agent is administered to the subject such that the RNAi agent is delivered to specific sites within the subject. Inhibition of expression of MAPT may result in MAPT mRNA (e.g., sense mRNA, antisense mRNA, total MAPT mRNA), tau protein (e.g., total tau protein, wild-type tau protein), sense-containing aggregates, antisense-containing aggregates, subject measurement of the level or changes in the level of aberrant dipeptide repeat proteins in samples derived from specific sites in, eg, CNS cells. In certain embodiments, the method assesses a clinically relevant outcome, e.g., caudate atrophy, e.g., by volumetric MRI (vMRI), e.g., following treatment of a subject with an agent that reduces expression of MAPT. stabilization or inhibition of neurofibrillary light chain (Nfl) levels in a CSF sample obtained from a subject, mutant MAPT mRNA or truncated mutant tau, e.g. Includes clinically relevant inhibition of expression of MAPT, such as as demonstrated by reduction of one or both of full-length mutant MAPT mRNA or protein and truncated mutant MAPT mRNA or protein.

本明細書において使用される場合、分析物のレベルを検出することまたは決定することという用語は、材料、例えば、タンパク質、ＲＮＡが存在するか否かを決定する工程を実施することを意味すると理解される。本明細書において使用される場合、検出するまたは決定する方法は、使用される方法の検出のレベルを下回る分析物レベルの検出または決定を含む。 As used herein, the term detecting or determining the level of an analyte is understood to mean performing a step of determining whether a material, e.g., protein, RNA is present. be done. As used herein, methods of detecting or determining include detection or determination of analyte levels below the level of detection of the method used.

ＩＸ．ＭＡＰＴ関連疾患を処置または予防する方法
本開示はまた、細胞においてＭＡＰＴ発現を低減または阻害するために本開示のＲＮＡｉ剤または本開示のＲＮＡｉ剤を含有する組成物を使用する方法を提供する。方法は、細胞を本開示のｄｓＲＮＡと接触させることおよび細胞をＭＡＰＴ遺伝子のｍＲＮＡ転写物の分解を得るのに十分な時間の間維持し、それによって、細胞においてＭＡＰＴ遺伝子の発現を阻害することを含む。 IX. Methods of Treating or Preventing MAPT-Related Diseases The disclosure also provides methods of using the RNAi agents of the disclosure or compositions containing the RNAi agents of the disclosure to reduce or inhibit MAPT expression in cells. The method comprises contacting the cell with a dsRNA of the present disclosure and maintaining the cell for a period of time sufficient to obtain degradation of the MAPT gene mRNA transcript, thereby inhibiting expression of the MAPT gene in the cell. include.

さらに、本開示はまた、細胞におけるセンスおよびアンチセンス含有凝集体のレベルを低減させるおよび／またはその形成を阻害するために、本開示のＲＮＡｉ剤または本開示のＲＮＡｉ剤を含有する組成物を使用する方法も提供する。本方法は、細胞を本開示のｄｓＲＮＡと接触させること、それによって細胞におけるＭＡＰＴセンスおよびアンチセンス含有凝集体のレベルを低減させることを含む。 In addition, the disclosure also uses the RNAi agents of the disclosure or compositions containing the RNAi agents of the disclosure to reduce the levels and/or inhibit the formation of sense- and antisense-containing aggregates in cells. It also provides a method to The method comprises contacting a cell with a dsRNA of the present disclosure, thereby reducing levels of MAPT sense- and antisense-containing aggregates in the cell.

本開示はまた、細胞における異常なジペプチドリピートタンパク質を低減させるおよび／またはその形成を阻害するために、本開示のＲＮＡｉ剤または本開示のＲＮＡｉ剤を含有する組成物を使用する方法も提供する。本方法は、細胞を本開示のｄｓＲＮＡと接触させること、それによって細胞における異常なジペプチドリピートタンパク質のレベルを低減させることを含む。 The disclosure also provides methods of using the RNAi agents of the disclosure or compositions containing the RNAi agents of the disclosure to reduce and/or inhibit the formation of aberrant dipeptide repeat proteins in cells. The method comprises contacting a cell with a dsRNA of the present disclosure, thereby reducing levels of abnormal dipeptide repeat proteins in the cell.

ＭＡＰＴセンスおよびアンチセンス含有凝集体および／または異常なジペプチドリピートタンパク質の遺伝子発現、レベルの低減は、当技術分野で公知の任意の方法によって評価することができる。例えば、ＭＡＰＴの発現の低減は、当業者に常用される方法、例えば、ノーザンブロッティング、ｑＲＴ－ＰＣＲを使用してＭＡＰＴのｍＲＮＡ発現レベルを決定することによって；当業者に常用される方法、例えば、ウェスタンブロッティング、免疫学的技術を使用してＭＡＰＴのタンパク質レベルを決定することによって、決定してもよい。 Reduction in gene expression, levels of MAPT sense- and antisense-containing aggregates and/or aberrant dipeptide repeat proteins can be assessed by any method known in the art. For example, reduction of expression of MAPT can be achieved by methods routinely used by those skilled in the art, such as northern blotting, qRT-PCR to determine MAPT mRNA expression levels; It may be determined by determining protein levels of MAPT using Western blotting, immunological techniques.

本開示の方法では、細胞をインビトロまたはインビボで接触させることができる、すなわち、細胞は、対象内であり得る。対象は、ヒトであり得る。対象は、ＭＡＰＴ関連障害を有し得る。ＭＡＰＴ関連障害は、神経変性障害であり得る。対象の神経変性障害は、ＭＡＰＴ遺伝子にコードされるタンパク質タウの異常に関連し得る。ＭＡＰＴ遺伝子にコードされるタンパク質タウの異常は、対象の脳内でのタウの凝集を引き起こすおそれがある。 In the methods of the present disclosure, the cells can be contacted in vitro or in vivo, ie, the cells can be within a subject. A subject can be a human. A subject can have a MAPT-related disorder. A MAPT-related disorder can be a neurodegenerative disorder. A subject's neurodegenerative disorder can be associated with an abnormality of the protein tau encoded by the MAPT gene. Abnormalities in the protein tau encoded by the MAPT gene can lead to aggregation of tau in the brain of a subject.

本開示の方法を使用する処置のために好適な細胞は、ＭＡＰＴ遺伝子を発現する任意の細胞であってよい。本開示の方法における使用にとって適した細胞は、哺乳動物細胞、例えば、霊長類細胞（ヒト細胞または非ヒト霊長類細胞、例えば、サル細胞またはチンパンジー細胞など）、非霊長類細胞（ラット細胞またはマウス細胞など）であり得る。一実施形態において、細胞は、ヒト細胞、例えば、ヒトＣＮＳ細胞である。 A cell suitable for treatment using the methods of the present disclosure may be any cell that expresses the MAPT gene. Cells suitable for use in the methods of the present disclosure include mammalian cells, such as primate cells (human cells or non-human primate cells such as monkey cells or chimpanzee cells), non-primate cells (rat cells or mouse cells). cells, etc.). In one embodiment, the cells are human cells, eg, human CNS cells.

ＭＡＰＴの発現（例えば、センスｍＲＮＡ、アンチセンスｍＲＮＡ、総ＭＡＰＴ ｍＲＮＡ、総タウタンパク質によって評価される）は、対照細胞における発現に対して、細胞において約２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、または５０％阻害される。ある特定の実施形態において、ＭＡＰＴの発現は、対照レベルに対して少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％阻害される。 Expression of MAPT (e.g., as assessed by sense mRNA, antisense mRNA, total MAPT mRNA, total tau protein) was about 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, or 50% inhibition. In certain embodiments, expression of MAPT is inhibited by at least about 50%, at least about 60%, at least about 70%, at least about 80%, at least about 90%, or at least about 95% relative to control levels. .

好ましい実施形態において、ＭＡＰＴの発現は、細胞において少なくとも３０％阻害される。特定の実施形態において、ＭＡＰＴの発現の阻害は、対象の血清中のタウタンパク質レベルを少なくとも３０％減少させることができる。 In preferred embodiments, MAPT expression is inhibited by at least 30% in the cells. In certain embodiments, inhibition of expression of MAPT can reduce tau protein levels in the serum of the subject by at least 30%.

センスもしくはアンチセンス含有凝集体および／または異常なジペプチドリピートタンパク質レベルによって評価される阻害は、細胞内において少なくとも２０％、３０％、４０％、好ましくは少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、またはアッセイの検出レベル未満にまで阻害される。 Inhibition as assessed by sense or antisense containing aggregates and/or aberrant dipeptide repeat protein levels is at least 20%, 30%, 40%, preferably at least 50%, 60%, 70%, 80% in cells , 85%, 90%, or 95%, or below the detection level of the assay.

本開示のインビボ法は、対象に、ＲＮＡｉ剤を含有する組成物を投与することを含むことができ、ＲＮＡｉ剤は、処置されるべき哺乳動物のＭＡＰＴ遺伝子のＲＮＡ転写物の少なくとも一部と相補的であるヌクレオチド配列を含む。処置されるべき生物が哺乳動物、例えば、ヒトである場合には、組成物は、それだけには限らないが、経口、腹腔内または頭蓋内（例えば、脳室内、実質内および髄腔内）、静脈内の、筋肉内の、硝子体内、皮下、経皮、気道（エアロゾル）、鼻腔、直腸および局所（頬側および舌下を含む）投与を含む非経口経路を含む、当技術分野で公知の任意の手段によって投与され得る。ある特定の実施形態において、組成物は、静脈内注入または注射によって投与される。ある特定の実施形態において、組成物は、皮下注射によって投与される。ある特定の実施形態において、組成物は、髄腔内注射によって投与される。 The in vivo methods of the present disclosure can include administering to a subject a composition containing an RNAi agent, wherein the RNAi agent is complementary to at least a portion of the RNA transcript of the MAPT gene of the mammal to be treated. contains a nucleotide sequence that is a target. When the organism to be treated is a mammal, e.g., a human, the composition may be administered, including but not limited to, oral, intraperitoneal or intracranial (e.g., intracerebroventricular, intraparenchymal and intrathecal), intravenous Any known in the art, including parenteral routes including intravitreal, intramuscular, intravitreal, subcutaneous, transdermal, respiratory tract (aerosol), nasal, rectal and topical (including buccal and sublingual) administration. can be administered by means of In certain embodiments, compositions are administered by intravenous infusion or injection. In certain embodiments, the composition is administered by subcutaneous injection. In certain embodiments, the composition is administered by intrathecal injection.

一部の実施形態において、投与は、デポー注射によってである。デポー注射は、長時間にわたって一貫した方法でＲＮＡｉ剤を放出し得る。したがって、デポー注射は、所望の効果、例えば、所望のＭＡＰＴの阻害または治療的もしくは予防的効果を得るために必要とされる投薬の頻度を低減し得る。デポー注射はまた、より一貫した血清濃度を提供し得る。デポー注射は、皮下注射または筋肉内注射を含み得る。好ましい実施形態において、デポー注射は、皮下注射である。 In some embodiments, administration is by depot injection. Depot injections can release RNAi agents in a consistent manner over time. Thus, depot injections may reduce the frequency of dosing required to obtain a desired effect, eg, inhibition of MAPT or a desired therapeutic or prophylactic effect. Depot injections may also provide more consistent serum concentrations. Depot injections may involve subcutaneous or intramuscular injections. In preferred embodiments, the depot injection is a subcutaneous injection.

一部の実施形態において、投与は、ポンプによってである。ポンプは、外部ポンプまたは外科的に埋め込まれたポンプであり得る。ある特定の実施形態において、ポンプは、皮下に埋め込まれた浸透圧ポンプである。他の実施形態において、ポンプは、注入ポンプである。注入ポンプは、頭蓋内、静脈内、皮下、動脈性または硬膜外注入のために使用され得る。好ましい実施形態において、注入ポンプは、皮下注入ポンプである。他の実施形態において、ポンプは、ＲＮＡｉ剤をＣＮＳに送達する外科的に埋め込まれたポンプである。 In some embodiments, administration is by pump. The pump can be an external pump or a surgically implanted pump. In certain embodiments, the pump is an osmotic pump implanted subcutaneously. In other embodiments, the pump is an infusion pump. Infusion pumps can be used for intracranial, intravenous, subcutaneous, arterial or epidural infusion. In preferred embodiments, the infusion pump is a subcutaneous infusion pump. In other embodiments, the pump is a surgically implanted pump that delivers the RNAi agent to the CNS.

投与様式は、局所処置が望まれるか、または全身処置が望まれるかに基づいて、また処置されるべき領域に基づいて選択できる。投与の経路および部位は、標的化を増強するように選択できる。 The mode of administration can be selected based on whether local or systemic treatment is desired and based on the area to be treated. The route and site of administration can be chosen to enhance targeting.

一態様では、本開示はまた、哺乳動物においてＭＡＰＴ遺伝子の発現を阻害する方法を提供する。方法は、哺乳動物に、哺乳動物の細胞においてＭＡＰＴ遺伝子を標的化するｄｓＲＮＡを含む組成物を投与し、それによって、細胞においてＭＡＰＴ遺伝子の発現を阻害することを含む。遺伝子発現の低減は、当技術分野で公知の任意の方法によって、また本明細書に記載される方法、例えば、ｑＲＴ－ＰＣＲによって評価できる。タンパク質産生の低減は、当技術分野で公知の任意の方法によって、また本明細書に記載される方法、例えば、ＥＬＩＳＡによって評価できる。一実施形態において、ＣＮＳ生検試料または脳脊髄液（ＣＳＦ）試料は、ＭＡＰＴ遺伝子またはタンパク質発現の（またはしたがって、プロキシの）低減をモニタリングするための組織材料として働く。 In one aspect, the disclosure also provides a method of inhibiting MAPT gene expression in a mammal. The method includes administering to the mammal a composition comprising a dsRNA that targets the MAPT gene in cells of the mammal, thereby inhibiting expression of the MAPT gene in the cell. Reduction of gene expression can be assessed by any method known in the art and by methods described herein, eg, qRT-PCR. Reduction in protein production can be assessed by any method known in the art and by methods described herein, eg, ELISA. In one embodiment, a CNS biopsy or cerebrospinal fluid (CSF) sample serves as tissue material for monitoring the reduction (or, therefore, proxy) of MAPT gene or protein expression.

本開示は、それを必要とする対象の処置の方法をさらに提供する。本開示の処置方法は、対象、例えば、ＭＡＰＴの発現の阻害が有益であろう対象、例えば、ＭＡＰＴ遺伝子にミスセンスおよび／または欠失突然変異を有する対象に、ＭＡＰＴ遺伝子を標的化するＲＮＡｉ剤またはＭＡＰＴ遺伝子を標的化するＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物の治療有効量で、本開示のＲＮＡｉ剤を投与することを含む。 The disclosure further provides methods of treatment of a subject in need thereof. Methods of treatment of the present disclosure include the use of RNAi agents targeting the MAPT gene or administering an RNAi agent of the present disclosure in a therapeutically effective amount of a pharmaceutical composition comprising an RNAi agent that targets the MAPT gene.

さらに、本開示は、対象におけるＭＡＰＴ関連疾患または障害（例えば、アルツハイマー病、ＦＴＤ、ＰＳＰ、または別のタウオパチー）を防止する、処置する、またはその進行を阻害する方法を提供する。本方法は、対象に、治療有効量の本明細書に提供されるＲＮＡｉ剤のいずれか、例えば、ｄｓＲＮＡ剤、または医薬組成物を投与すること、それによって対象におけるＭＡＰＴ関連疾患または障害を防止する、処置する、またはその進行を阻害することを含む。本開示の方法によって防止することができるＭＡＰＴ関連疾患または障害は、ＭＡＰＴ遺伝子にコードされるタンパク質タウの異常に関連し得る。ＭＡＰＴ遺伝子にコードされるタンパク質タウの異常は、対象の脳内でのタウの凝集を引き起こす。対象はヒトであり得る。本開示のｄｓＲＮＡ剤または本開示の医薬組成物の投与は、対象の脳内でのタウの凝集の減少をもたらすことができる。 Additionally, the present disclosure provides methods of preventing, treating, or inhibiting progression of a MAPT-related disease or disorder (eg, Alzheimer's disease, FTD, PSP, or another tauopathy) in a subject. The method comprises administering to a subject a therapeutically effective amount of any of the RNAi agents provided herein, e.g., a dsRNA agent, or a pharmaceutical composition, thereby preventing a MAPT-related disease or disorder in the subject , treating or inhibiting its progression. A MAPT-related disease or disorder that can be prevented by the methods of the present disclosure can be associated with abnormalities in the protein tau encoded by the MAPT gene. Abnormalities in the MAPT gene-encoded protein tau cause tau aggregation in the brain of a subject. A subject can be a human. Administration of a dsRNA agent of the disclosure or a pharmaceutical composition of the disclosure can result in decreased tau aggregation in the brain of a subject.

本開示のＲＮＡｉ剤は、「遊離ＲＮＡｉ剤」として投与される場合がある。遊離ＲＮＡｉ剤は、医薬組成物の不在下で投与される。裸のＲＮＡｉ剤は、適したバッファー溶液中にある場合がある。バッファー溶液は、酢酸塩、クエン酸塩、プロラミン、炭酸塩またはリン鎖塩またはそれらの任意の組合せを含み得る。一実施形態において、バッファー溶液は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）である。ＲＮＡｉ剤を含有するバッファー溶液のｐＨおよび浸透圧は、対象へ投与することに適しているように調整できる。 The RNAi agents of this disclosure may be administered as "free RNAi agents." A free RNAi agent is administered in the absence of a pharmaceutical composition. A naked RNAi agent may be in a suitable buffer solution. The buffer solution may contain acetates, citrates, prolamines, carbonates or phosphate salts or any combination thereof. In one embodiment, the buffer solution is phosphate buffered saline (PBS). The pH and osmotic pressure of the buffer solution containing the RNAi agent can be adjusted to suit administration to the subject.

あるいは、本開示のＲＮＡｉ剤は、医薬組成物、例えば、ｄｓＲＮＡリポソーム製剤として投与され得る。 Alternatively, the RNAi agents of this disclosure can be administered as pharmaceutical compositions, eg, dsRNA liposomal formulations.

ＭＡＰＴ遺伝子の発現の低減または阻害が有益であろう対象は、ＭＡＰＴ関連疾患を有する対象である。例示的なＭＡＰＴ関連疾患としては、タウオパチー、アルツハイマー病、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、行動障害型前頭側頭型認知症（ｂｖＦＴＤ）、非流暢性亜型原発性進行性失語（ｎｆｖＰＰＡ）、意味型原発性進行性失語（ＰＰＡ－Ｓ）、ロゴペニック型原発性進行性失語（ＰＰＡ－Ｌ）、１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、ピック病（ＰｉＤ）、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、初老期認知症を伴う多系統タウオパチー（ＭＳＴＤ）、球状グリア封入体を伴う白質タウオパチー（ＧＧＩを伴うＦＴＬＤ）、ＭＡＰＴ突然変異を伴うＦＴＬＤ、神経原線維変化（ＮＦＴ）認知症、運動ニューロン疾患を伴うＦＴＤ、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、皮質基底核症候群（ＣＢＳ）、皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、パーキンソン病、脳炎後パーキンソニズム、ニーマン・ピック病、ハンチントン病、筋強直性ジストロフィー１型、およびダウン症候群（ＤＳ）が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。 Subjects who would benefit from a reduction or inhibition of MAPT gene expression are those with a MAPT-related disease. Exemplary MAPT-related diseases include tauopathy, Alzheimer's disease, frontotemporal dementia (FTD), behavioral frontotemporal dementia (bvFTD), non-fluent subtype primary progressive aphasia (nfvPPA) , Semantic Primary Progressive Aphasia (PPA-S), Logopenic Primary Progressive Aphasia (PPA-L), Frontotemporal Dementia with Chromosome 17 Linked Parkinsonism (FTDP-17), Pick disease (PiD), argyria granulopathy (AGD), multisystem tauopathy with presenile dementia (MSTD), white matter tauopathy with globular glial inclusions (FTLD with GGI), FTLD with MAPT mutation, neurogenic fibrotic tangle (NFT) dementia, FTD with motor neuron disease, amyotrophic lateral sclerosis (ALS), corticobasal ganglia syndrome (CBS), corticobasal degeneration (CBD), progressive supranuclear palsy ( PSP), Parkinson's disease, post-encephalitis parkinsonism, Niemann-Pick disease, Huntington's disease, myotonic dystrophy type 1, and Down's syndrome (DS).

本開示は、例えば、ＭＡＰＴ発現の低減もしくは阻害が有益であろう対象、例えば、ＭＡＰＴ関連障害を有する対象を処置するための、他の医薬または他の治療方法と、例えば、公知の医薬または公知の治療方法、例えば、これらの障害を処置するために現在使用されているものなどと組み合わせた、ＲＮＡｉ剤またはその医薬組成物の使用のための方法をさらに提供する。例えば、ある特定の実施形態において、ＭＡＰＴを標的化するＲＮＡｉ剤は、例えば、本明細書において別の場所に記載されるような、またはそうではなく当技術分野で公知のような、ＭＡＰＴ関連障害の処置において有用な薬剤と組み合わせて投与される。例えば、ＭＡＰＴ発現の低減が有益であろう対象、例えば、ＭＡＰＴ関連障害を有する対象を処置するのに適した追加の薬剤は、ＭＡＰＴ関連疾患の症状を処置するために現在使用されている薬剤を含み得る。ＲＮＡｉ剤および追加の治療薬は、同時にまたは同一組合せで、例えば、髄腔内に投与してもよく、または追加の治療薬は、別個の組成物の一部として、または別個の時間で、または当技術分野で公知のもしくは本明細書に記載される別の方法によって投与できる。 The present disclosure provides other medicaments or other therapeutic methods, e.g., known medicaments or methods, for treating subjects, e.g., subjects with MAPT-related disorders, for which reduction or inhibition of MAPT expression would be beneficial. Further provided are methods for the use of RNAi agents, or pharmaceutical compositions thereof, in combination with therapeutic methods, such as those currently used to treat these disorders. For example, in certain embodiments, an RNAi agent that targets MAPT is a MAPT-associated disorder, e.g., as described elsewhere herein or otherwise known in the art. are administered in combination with agents useful in the treatment of For example, additional agents suitable for treating subjects who would benefit from reduced MAPT expression, e.g. can contain. The RNAi agent and the additional therapeutic agent may be administered simultaneously or in the same combination, e.g., intrathecally, or the additional therapeutic agent as part of separate compositions or at separate times, or Administration can be by other methods known in the art or described herein.

例示的な追加の治療薬として、例えば、モノアミン阻害剤、例えば、テトラベナジン（Ｘｅｎａｚｉｎｅ）、デュテトラベナジン（Ａｕｓｔｅｄｏ）およびレセルピン、抗痙攣剤、例えば、バルプロ酸（Ｄｅｐａｋｏｔｅ、Ｄｅｐａｋｅｎｅ、Ｄｅｐａｃｏｎ）およびクロナゼパム（Ｋｌｏｎｏｐｉｎ）、抗精神病剤、例えば、リスペリドン（Ｒｉｓｐｅｒｄａｌ）およびハロペリドール（Ｈａｌｄｏｌ）および抗うつ剤、例えば、パロキセチン（Ｐａｘｉｌ）が挙げられる。 Exemplary additional therapeutic agents include, for example, monoamine inhibitors such as tetrabenazine (Xenazine), detetrabenazine (Austedo) and reserpine, anticonvulsants such as valproic acid (Depakote, Depakene, Depacon) and clonazepam ( Klonopin), antipsychotics such as risperidone (Risperdal) and haloperidol (Haldol) and antidepressants such as paroxetine (Paxil).

一実施形態において、方法は、標的ＭＡＰＴ遺伝子の発現が少なくとも１か月間低下されるように本明細書において特徴とされる組成物を投与することを含む。好ましい実施形態において、発現は、少なくとも２か月、３か月または６か月間低下される。 In one embodiment, the method comprises administering the composition featured herein such that expression of the target MAPT gene is reduced for at least one month. In preferred embodiments, expression is reduced for at least 2 months, 3 months or 6 months.

好ましくは、本明細書において特徴とされる方法および組成物にとって有用なＲＮＡｉ剤は、標的ＭＡＰＴ遺伝子のＲＮＡ（一次またはプロセシングされた）を特異的に標的化する。ＲＮＡｉ剤を使用してこれらの遺伝子の発現を阻害する組成物および方法は、本明細書に記載されるように調製および実施できる。 Preferably, RNAi agents useful for the methods and compositions featured herein specifically target RNA (primary or processed) of the target MAPT gene. Compositions and methods for inhibiting expression of these genes using RNAi agents can be prepared and practiced as described herein.

本開示の方法によるｄｓＲＮＡの投与は、ＭＡＰＴ関連障害を有する患者においてこのような疾患または障害の重症度、徴候、症状またはマーカーの低減をもたらし得る。これに関連して「低減」とは、このようなレベルの統計的に有意なまたは臨床的に有意な低下を意味する。低減は、例えば、対照レベルに対して少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％または約１００％であり得る。疾患の処置または予防の有効性は、例えば、疾患進行、疾患緩解、症状の重症度、疼痛の低減、生活の質、処置効果を持続するために必要とされる投薬の用量、疾患マーカーまたは処置されているまたは予防のために標的化される所与の疾患にとって適切な任意の他の測定可能なパラメータのレベルを測定することによって評価できる。このようなパラメータのうち任意の１つまたはパラメータの任意の組合せを測定することによって、処置または予防の有効性をモニタリングすることは、十分に当業者の能力の範囲内である。例えば、ＭＡＰＴ関連障害の処置の有効性は、例えば、対象のものの定期的なモニタリングによって評価できる。後の読み取り値を、最初の読み取り値と比較することによって、処置が有効であるか否かの指標が医師に提供される。このようなパラメータのうち任意の１つまたはパラメータの任意の組合せを測定することによって、処置または予防の有効性をモニタリングすることは、十分に当業者の能力の範囲内である。ＭＡＰＴを標的化するＲＮＡｉ剤またはその医薬組成物の投与に関連して、ＭＡＰＴ関連障害「に対して有効な」は、臨床的に適切な方法での投与が、少なくとも統計的に有意な割合の患者にとって有益な効果、例えば、症状の改善、治癒、疾患の低減、寿命の延長、生活の質の改善またはＭＡＰＴ関連障害および関連原因の処置に精通している医師によって肯定的であると一般的に認識される他の効果をもたらすことを示す。 Administration of dsRNA according to the disclosed methods can result in a reduction in the severity, signs, symptoms or markers of such diseases or disorders in patients with MAPT-related disorders. "Reduction" in this context means a statistically significant or clinically significant reduction in such levels. The reduction is, for example, at least about 5%, at least about 10%, at least about 15%, at least about 20%, at least about 25%, at least about 30%, at least about 35%, at least about 40%, at least about 45%, at least about 50%, at least about 55%, at least about 60%, at least about 65%, at least about 70%, at least about 75%, at least about 80%, at least about 85%, at least about 90%, It can be at least about 95% or about 100%. Efficacy of treating or preventing disease is measured, for example, by disease progression, disease regression, severity of symptoms, reduction in pain, quality of life, dose of medication required to sustain treatment effect, disease markers or treatment by measuring the level of any other measurable parameter appropriate for a given disease being treated or targeted for prevention. It is well within the capabilities of one skilled in the art to monitor the efficacy of treatment or prevention by measuring any one of such parameters or any combination of parameters. For example, efficacy of treatment for a MAPT-related disorder can be assessed, eg, by periodic monitoring of the subject's. Comparing the subsequent readings to the initial readings provides the physician with an indication of whether the treatment is effective. It is well within the capabilities of one skilled in the art to monitor the efficacy of treatment or prevention by measuring any one of such parameters or any combination of parameters. In the context of administration of an RNAi agent that targets MAPT or a pharmaceutical composition thereof, "effective against" a MAPT-related disorder means that administration in a clinically relevant manner results in at least a statistically significant proportion of generally positive by physicians familiar with beneficial effects for patients, e.g., ameliorating symptoms, curing, reducing disease, prolonging life, improving quality of life, or treating MAPT-related disorders and related causes indicates that it produces other effects that are recognized in

処置または予防的効果は、疾患状態の１つまたは複数のパラメータにおいて統計的に有意な改善がある場合に、または悪化しなかったこともしくはそうでなければ予測される症状を発症しなかったことによって明らかである。例として、疾患の測定可能なパラメータにおける少なくとも１０％の好都合な変化、好ましくは、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％またはそれより多くが、有効な処置を示し得る。所与のＲＮＡｉ剤薬物またはその薬物の製剤の有効性はまた、当技術分野で公知のように、所与の疾患の実験動物モデルを使用して判断できる。実験動物モデルを使用する場合には、処置の有効性は、マーカーまたは症状の統計的に有意な低減が観察される場合に証明される。 A treatment or prophylactic effect occurs when there is a statistically significant improvement in one or more parameters of the disease state or by failure to worsen or otherwise develop the expected symptoms. it is obvious. By way of example, at least a 10% favorable change in a measurable parameter of the disease, preferably at least 20%, 30%, 40%, 50% or more, may indicate effective treatment. The efficacy of a given RNAi agent drug or formulation of that drug can also be determined using experimental animal models of a given disease, as is known in the art. When using experimental animal models, efficacy of treatment is demonstrated when a statistically significant reduction in a marker or symptom is observed.

あるいは、有効性は、臨床的に許容された疾患重症度類別スケールに基づいて、診断の当業者によって決定されるような疾患の重症度の低減によって測定できる。例えば、適切なスケールを使用して測定される疾患の重症度の減少をもたらす任意の肯定的な変化は、本明細書に記載されるようなＲＮＡｉ剤またはＲＮＡｉ剤製剤を使用する妥当な処置を表す。 Alternatively, efficacy can be measured by a reduction in disease severity as determined by those skilled in the art of diagnosis, based on clinically accepted disease severity grading scales. For example, any positive change that results in a reduction in disease severity, as measured using an appropriate scale, will indicate reasonable treatment using an RNAi agent or RNAi agent formulation as described herein. show.

ある特定の実施形態において、対象には、ｄｓＲＮＡの治療量、例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約２００ｍｇ／ｋｇを投与することができる。他の実施形態において、対象には、ｄｓＲＮＡの治療量、例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約５００ｍｇ／ｋｇを投与することができる。さらに他の実施形態において、対象には、約５００ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上のｄｓＲＮＡの治療量を投与することができる。 In certain embodiments, a subject can be administered a therapeutic amount of dsRNA, eg, from about 0.01 mg/kg to about 200 mg/kg. In other embodiments, a subject can be administered a therapeutic amount of dsRNA, eg, from about 0.01 mg/kg to about 500 mg/kg. In still other embodiments, the subject can be administered a therapeutic amount of dsRNA of about 500 mg/kg or more.

ＲＮＡｉ剤は、一定期間にわたって定期的に、髄腔内に、硝子体内注射を介して、または静脈内注入によって投与できる。ある特定の実施形態において、最初の処置レジメン後に、より少ない頻度で処置を投与できる。ＲＮＡｉ剤の投与は、例えば、患者の細胞、組織、血液、ＣＳＦ試料または他のコンパートメントにおいてＭＡＰＴレベルを低減できる。一実施形態において、ＲＮＡｉ剤の投与は、例えば、患者の細胞、組織、血液、ＣＳＦ試料または他のコンパートメントにおいてＭＡＰＴレベルを対照レベルに対して少なくとも約２５％、例えば約２５％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％低減できる。 The RNAi agent can be administered intrathecally, via intravitreal injection, or by intravenous infusion periodically over a period of time. In certain embodiments, treatment can be administered less frequently after the initial treatment regimen. Administration of an RNAi agent can, for example, reduce MAPT levels in a patient's cells, tissues, blood, CSF samples or other compartments. In one embodiment, administration of the RNAi agent reduces MAPT levels in, e.g., a patient's cells, tissues, blood, CSF samples, or other compartments by at least about 25%, e.g., about 25%, about 30%, relative to control levels, It can be reduced by about 40%, about 50%, about 60%, about 70%, about 80%, about 90%, or about 95%.

ＲＮＡｉ剤の全用量の投与の前に、患者により少ない用量、例えば、５％の注入反応を投与し、有害作用、例えば、アレルギー反応についてモニタリングできる。別の例では、患者を、望まれない免疫賦活性効果、例えば、サイトカイン（例えば、ＴＮＦ－アルファまたはＩＮＦ－アルファ）レベルの増大についてモニタリングできる。 Prior to administration of the full dose of RNAi agent, the patient can be administered a lower dose, eg, a 5% infusion reaction, and monitored for adverse effects, eg, allergic reactions. In another example, patients can be monitored for unwanted immunostimulatory effects, such as increased cytokine (eg, TNF-alpha or INF-alpha) levels.

あるいは、ＲＮＡｉ剤を、皮下に、すなわち、皮下注射によって投与できる。ＲＮＡｉ剤の所望の、例えば、毎月の用量を対象に送達するために、１回または複数回の注射を使用できる。一定期間にわたって、注射を反復できる。投与を定期的に反復できる。ある特定の実施形態において、最初の処置レジメン後に、より少ない頻度で処置を投与できる。反復用量レジメンは、定期的な、例えば、毎月の、または四半期に１回、年に２回、年に１回に延長する、ＲＮＡｉ剤の治療量の投与を含み得る。ある特定の実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、月に約１回～四半期に約１回（すなわち、３か月毎に約１回）投与される。 Alternatively, the RNAi agent can be administered subcutaneously, ie, by subcutaneous injection. Single or multiple injections can be used to deliver the desired, eg, monthly, dose of the RNAi agent to the subject. Injections can be repeated over a period of time. Dosing can be repeated periodically. In certain embodiments, treatment can be administered less frequently after the initial treatment regimen. Repeat dose regimens may involve administration of therapeutic doses of the RNAi agent on a regular basis, eg, monthly or quarterly, twice yearly, extending to once yearly. In certain embodiments, the RNAi agent is administered about once a month to about once a quarter (ie, about once every three months).

別段の定義がない限り、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載されているものと類似または同等の方法および材料を、本発明において特徴とされるＲＮＡｉ剤および方法の実施または試験に使用できるが、適した方法および材料を以下に記載する。本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許および他の参考文献は、それらの全体が参照により組み込まれる。矛盾する場合には、定義を含む本明細書が支配する。さらに、材料、方法および例は、単に例示的なものであり、制限であるように意図されない。 Unless defined otherwise, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which this invention belongs. Although methods and materials similar or equivalent to those described herein can be used in practicing or testing the RNAi agents and methods featured in the invention, suitable methods and materials are described below. All publications, patent applications, patents and other references mentioned herein are incorporated by reference in their entirety. In case of conflict, the present specification, including definitions, will control. In addition, the materials, methods, and examples are illustrative only and not intended to be limiting.

非公式な配列表が本明細書と共に提出され、出願される明細書の一部を形成する。 An Unofficial Sequence Listing is submitted herewith and forms a part of the application.

［実施例１］
ＲＮＡｉ剤設計、合成、選択およびインビトロ評価
この実施例は、ＭＡＰＴ ＲＮＡｉ剤の設計、合成、選択およびインビトロ評価のための方法を記載する。 [Example 1]
RNAi Agent Design, Synthesis, Selection and In Vitro Evaluation This example describes methods for design, synthesis, selection and in vitro evaluation of MAPT RNAi agents.

試薬の供給源
試薬の供給源が本明細書に具体的に与えられない場合には、このような試薬は、分子生物学において適用するための品質／純度基準で分子生物学のための試薬の任意の供給者から得ることができる。 Sources of Reagents Where the source of reagents is not specifically given herein, such reagents are deemed to be reagents for molecular biology with quality/purity standards for application in molecular biology. It can be obtained from any supplier.

生物情報科学
ヒトＭＡＰＴ転写物[ヒト（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）微小管関連タンパク質タウ（ＭＡＰＴ）、転写物変異体４、ｍＲＮＡ、ＮＣＢＩ ｒｅｆｓｅｑＩＤ ＮＭ＿０１６８４１．４；ＮＣＢＩ ＧｅｎｅＩＤ：４１３７およびヒト微小管関連タンパク質タウ（ＭＡＰＴ）、転写物変異体２、ｍＲＮＡ、ＮＣＢＩ ｒｅｆｓｅｑＩＤ ＮＭ＿００５９１０．６；ＮＣＢＩ ＧｅｎｅＩＤ：４１３７]を標的化するｓｉＲＮＡを、カスタムＲおよびＰｙｔｈｏｎスクリプトを使用して設計した。ヒトＮＭ＿０１６８４１．４ ｍＲＮＡは、５５４４塩基の長さを有する。ヒトＮＭ＿００５９１０．６ ｍＲＮＡは、５６３９塩基の長さを有する。 Bioinformatics Human MAPT Transcript [Homo sapiens Microtubule Associated Protein Tau (MAPT), Transcript Variant 4, mRNA, NCBI refseqID NM_016841.4; NCBI GeneID: 4137 and Human Microtubule Associated Protein Tau (MAPT) , transcript variant 2, mRNA, NCBI refseqID NM_005910.6; NCBI GeneID: 4137] were designed using custom R and Python scripts. Human NM_016841.4 mRNA has a length of 5544 bases. Human NM_005910.6 mRNA has a length of 5639 bases.

ヒトＭＡＰＴ転写物を標的化する未修飾のＭＡＰＴセンスおよびアンチセンス鎖ヌクレオチド配列の詳細なリストは、表３～５、１６、１８、２０、２２、２５、および２７に示されている。ヒトＭＡＰＴ転写物を標的化する修飾されたＭＡＰＴセンスおよびアンチセンス鎖ヌクレオチド配列の詳細なリストは、表６～８、１７、１９、２１、２３、２６、および２８に示されている。 Detailed lists of unmodified MAPT sense and antisense strand nucleotide sequences targeting human MAPT transcripts are shown in Tables 3-5, 16, 18, 20, 22, 25, and 27. Detailed lists of modified MAPT sense and antisense strand nucleotide sequences targeting human MAPT transcripts are shown in Tables 6-8, 17, 19, 21, 23, 26, and 28.

マウスＭＡＰＴ転写物[ハツカネズミ（Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ）微小管関連タンパク質タウ（Ｍａｐｔ）、ｍＲＮＡ、ＮＣＢＩ ｒｅｆｓｅｑＩＤ ＮＭ＿００１０３８６０９；ＮＣＢＩ ＧｅｎｅＩＤ：１７７６２]を標的化するｓｉＲＮＡを、カスタムＲおよびＰｙｔｈｏｎスクリプトを使用して設計した。マウスＮＭ＿００１０３８６０９．２ ｍＲＮＡは、５３９６塩基の長さを有する。 siRNAs targeting the mouse MAPT transcript [Mus musculus microtubule-associated protein tau (Mapt), mRNA, NCBI refseqID NM — 001038609; NCBI GeneID: 17762] were designed using custom R and Python scripts. Mouse NM_001038609.2 mRNA has a length of 5396 bases.

マカクＭＡＰＴ転写物[カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）微小管関連タンパク質タウ（ＭＡＰＴ）、転写物変異体Ｘ１３、ＮＣＢＩ ｒｅｆｓｅｑＩＤ ＸＭ＿００５５８４５４０．１；ＮＣＢＩ ＧｅｎｅＩＤ：１０２１１９４１４]を標的化するｓｉＲＮＡを、カスタムＲおよびＰｙｔｈｏｎスクリプトを使用して設計した。マウスＸＭ＿００５５８４５４０．１ ｍＲＮＡは、５７９０塩基の長さを有する。 siRNA targeting the macaque MAPT transcript [Macaca fascicularis microtubule-associated protein tau (MAPT), transcript variant X13, NCBI refseqID XM_005584540.1; NCBI GeneID: 102119414] using custom R and Python scripts and designed. Mouse XM_005584540.1 mRNA has a length of 5790 bases.

マウスＭＡＰＴ転写物を標的化する未修飾のＭＡＰＴセンスおよびアンチセンス鎖ヌクレオチド配列の詳細なリストは、表１２に示されている。マウスＭＡＰＴ転写物を標的化する修飾されたＭＡＰＴセンスおよびアンチセンス鎖ヌクレオチド配列の詳細なリストは、表１３に示されている。 A detailed list of unmodified MAPT sense and antisense strand nucleotide sequences targeting the mouse MAPT transcript is shown in Table 12. A detailed list of modified MAPT sense and antisense strand nucleotide sequences targeting the mouse MAPT transcript is shown in Table 13.

本出願を通じて、小数点のない二重鎖名は、単に二本鎖のバッチ番号を言及する小数点を有する二重鎖名と同等であるということは理解されるべきである。例えば、ＡＤ－５２３５６１は、ＡＤ－５２３５６１．１と同等である。 It should be understood that throughout this application, duplex names without decimal points are equivalent to duplex names with decimal points that simply refer to the batch number of the duplex. For example, AD-523561 is equivalent to AD-523561.1.

ＢＥ（２）－ＣおよびＮｅｕｒｏ－２ａ細胞におけるインビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）スクリーニング
ｉ． 細胞培養およびトランスフェクション：
３８４ウェルプレートで、各ｓｉＲＮＡ二重鎖につき４ウェルごと、ウェルあたり５μｌのｓｉＲＮＡ二重鎖にウェルあたり５μｌのＯｐｔｉ－ＭＥＭおよび０．１μｌのリポフェクタミンＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州、カールスバッド カタログ番号１３７７８－１５０）を添加することによって、ＢＥ（２）－Ｃ（ＡＴＣＣ）をトランスフェクトし、室温で１５分間インキュベートした。次いで、ｓｉＲＮＡ混合物に約５×１０３個の細胞を含有する４０μｌの最小必須培地およびＦ１２培地の１：１混合物（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を添加した。細胞を２４時間インキュベートした後にＲＮＡ精製を行った。ＢＥ（２）－Ｃ細胞における表３～８および１２～１３に列記されるｄｓＲＮＡ剤のスクリーニングの結果は、それぞれ表９～１１および表１４に示されている。表９に示されるスクリーン１では、４つの用量の実験を５０ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、および０．１ｎＭにおいて行った。表１０～１１に示されるスクリーン２～３では、３つの用量の実験を１０ｎＭ、１ｎＭ、および０．１ｎＭにおいて行った。表１４に示されるスクリーン４では、２つの用量の実験を１０ｎＭおよび０．１ｎＭにおいて行った。ＢＥ（２）－Ｃ細胞における表１６～２３に列記されるスクリーン５～８でのｄｓＲＮＡ剤のスクリーニングの結果は表２４に示されている。スクリーン５～８では、３つの用量の実験を１０ｎＭ、１ｎＭ、および０．１ｎＭにおいて行った。 In vitro screening in BE(2)-C and Neuro-2a cells i. Cell culture and transfection:
In a 384-well plate, for each siRNA duplex, 5 μl per well of siRNA duplex was added with 5 μl of Opti-MEM and 0.1 μl of Lipofectamine RNAiMAX (Invitrogen, Carlsbad, CA Cat. 150) and incubated for 15 minutes at room temperature. The siRNA mixture was then added with 40 μl of a 1:1 mixture of minimum essential medium and F12 medium (ThermoFisher) containing approximately 5×10 3 cells. RNA purification was performed after incubating the cells for 24 hours. The results of screening dsRNA agents listed in Tables 3-8 and 12-13 in BE(2)-C cells are shown in Tables 9-11 and Table 14, respectively. For Screen 1, shown in Table 9, four dose experiments were performed at 50 nM, 10 nM, 1 nM, and 0.1 nM. For screens 2-3 shown in Tables 10-11, three dose experiments were performed at 10 nM, 1 nM, and 0.1 nM. In Screen 4, shown in Table 14, two dose experiments were performed at 10 nM and 0.1 nM. Results of screening dsRNA agents in screens 5-8 listed in Tables 16-23 in BE(2)-C cells are shown in Table 24. For screens 5-8, three dose experiments were performed at 10 nM, 1 nM and 0.1 nM.

３８４ウェルプレートで、各ｓｉＲＮＡ二重鎖につき４ウェルごと、ウェルあたり５μｌのｓｉＲＮＡ二重鎖にウェルあたり５μｌのＯｐｔｉ－ＭＥＭおよび０．１μｌのリポフェクタミンＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州、カールスバッド カタログ番号１３７７８－１５０）を添加することによって、Ｎｅｕｒｏ－２ａ（ＡＴＣＣ）をトランスフェクトし、室温で１５分間インキュベートした。次いで、ｓｉＲＮＡ混合物に約５×１０３個の細胞を含有する４０μｌの最小必須培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を添加した。細胞を２４時間インキュベートした後にＲＮＡ精製を行った。Ｎｅｕｒｏ－２ａ（マウス）細胞における表１２～１３に列記されるｄｓＲＮＡ剤のスクリーニングの結果は表１５に示されている。表１５に示されるスクリーン４では、２つの用量の実験を１０ｎＭおよび０．１ｎＭにおいて行った。 In a 384-well plate, for each siRNA duplex, 5 μl per well of siRNA duplex was added with 5 μl of Opti-MEM and 0.1 μl of Lipofectamine RNAiMAX (Invitrogen, Carlsbad, CA Cat. 150) were transfected with Neuro-2a (ATCC) and incubated for 15 minutes at room temperature. 40 μl of minimal essential medium (ThermoFisher) containing approximately 5×10 3 cells was then added to the siRNA mixture. RNA purification was performed after incubating the cells for 24 hours. Results of screening of the dsRNA agents listed in Tables 12-13 in Neuro-2a (mouse) cells are shown in Table 15. In Screen 4, shown in Table 15, two dose experiments were performed at 10 nM and 0.1 nM.

ｉｉ． ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ ｍＲＮＡ単離キットを使用する総ＲＮＡ単離
ＤＹＮＡＢＥＡＤ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号６１０１２）を使用するＢｉｏＴｅｋ－ＥＬ４０６プラットフォームで自動化プロトコールを使用してＲＮＡを単離した。手短には、細胞を有するプレートに、７０μＬの溶解／結合バッファーおよび３μＬの磁性ビーズを含有する１０μＬの溶解バッファーを添加した。プレートを、電磁シェーカー上で室温で１０分間インキュベートし、次いで、磁性ビーズを捕捉し、上清を除去した。次いで、ビーズが結合しているＲＮＡを、１５０μＬの洗浄バッファーＡを用いて２回および洗浄バッファーＢを用いて１回洗浄した。次いで、１５０μＬの溶出バッファーを用いてビーズを洗浄し、再捕捉し、上清を除去した。 ii. Total RNA Isolation Using DYNABEADS mRNA Isolation Kit RNA was isolated using an automated protocol on a BioTek-EL406 platform using DYNABEAD (Invitrogen, Catalog No. 61012). Briefly, 10 μL of lysis buffer containing 70 μL of lysis/binding buffer and 3 μL of magnetic beads was added to the plate with cells. Plates were incubated for 10 minutes at room temperature on a magnetic shaker, then magnetic beads were captured and the supernatant was removed. The bead-bound RNA was then washed twice with 150 μL of wash buffer A and once with wash buffer B. The beads were then washed with 150 μL of elution buffer, recaptured and the supernatant removed.

ｉｉｉ ＡＢＩ大容量ｃＤＮＡ逆転写キット（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カリフォルニア州、フォスターシティ、カタログ番号４３６８８１３）を使用するｃＤＮＡ合成
上記で単離されたＲＮＡに、反応あたり１μＬの１０×バッファー、０．４μＬの２５× ｄＮＴＰ、１μＬの１０×ランダムプライマー、０．５μＬの逆転写酵素、０．５μＬのＲＮアーゼ阻害剤および６．６μＬのＨ２Ｏを含有する１０μＬのマスターミックスを添加した。プレートを密閉し、混合し、電磁シェーカー上で室温で１０分間インキュベートし、続いて、３７℃で２時間インキュベートした。 iii cDNA Synthesis Using ABI High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit (Applied Biosystems, Foster City, Calif. Catalog No. 4368813) To the RNA isolated above, add 1 μL of 10× buffer, 0.4 μL of 25× 10 μL of master mix containing dNTPs, 1 μL of 10× random primers, 0.5 μL of reverse transcriptase, 0.5 μL of RNase inhibitor and 6.6 μL of H 2 O was added. Plates were sealed, mixed and incubated on a magnetic shaker at room temperature for 10 minutes followed by incubation at 37° C. for 2 hours.

ｉｖ． リアルタイムＰＣＲ
３８４ウェルプレート（Ｒｏｃｈｅ カタログ番号０４８８７３０１００１）中のウェルあたり、２μｌのｃＤＮＡおよび５μｌのＬｉｇｈｔｃｙｃｌｅｒ ４８０ ｐｒｏｂｅ ｍａｓｔｅｒ ｍｉｘ（Ｒｏｃｈｅ カタログ番号０４８８７３０１００１）を、０．５μｌのＨｕｍａｎ ＧＡＰＤＨ ＴａｑＭａｎ Ｐｒｏｂｅ（４３２６３１７Ｅ）および０．５μｌのｈｕｍａｎ ＭＡＰＴ ｐｒｏｂｅ（ｈｓ００９０２１９４＿ｍ１、Ｔｈｅｒｍｏ）または０．５μｌのＭｏｕｓｅ ＧＡＰＤＨ ＴａｑＭａｎ Ｐｒｏｂｅ（４３５２３３９Ｅ）および０．５μｌのｍｏｕｓｅ ＭＡＰＴ ｐｒｏｂｅ（Ｍｍ００５２１９８８＿ｍ１、Ｔｈｅｒｍｏ）のいずれかに添加した。リアルタイムＰＣＲをＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ４８０ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｓｙｓｔｅｍ（Ｒｏｃｈｅ）において行った。各二重鎖を少なくとも２回試験し、非標的化対照ｓｉＲＮＡをトランスフェクトされた細胞に対してデータを正規化した。相対変化倍数を算出するために、ΔΔＣｔ法を使用してリアルタイムデータを分析し、非標的化対照ｓｉＲＮＡでトランスフェクトされた細胞を用いて実施されたアッセイに対して正規化した。 iv. Real-time PCR
Per well in a 384-well plate (Roche Catalog No. 04887301001), add 2 μl of cDNA and 5 μl of Lightcycler 480 probe master mix (Roche Catalog No. 04887301001) to 0.5 μl of Human GAPDH TaqMan Probe (432631 7E) and 0.5 μl of human Added to either MAPT probe (hs00902194_ml, Thermo) or 0.5 μl Mouse GAPDH TaqMan Probe (4352339E) and 0.5 μl mouse MAPT probe (Mm00521988_ml, Thermo). Real-time PCR was performed on a LightCycler480 Real Time PCR system (Roche). Each duplex was tested at least twice and data normalized to cells transfected with non-targeting control siRNA. To calculate relative fold changes, real-time data were analyzed using the ΔΔCt method and normalized to assays performed with cells transfected with non-targeting control siRNA.

表2. 核酸配列表現において使用されるヌクレオチドモノマーの略称。これらのモノマーは、オリゴヌクレオチド中に存在する場合、5'-3'-ホスホジエステル結合により互いに連結されることが理解されるであろう。また、ヌクレオチドが2'-フルオロ修飾を含む場合、次いでフルオロが、親ヌクレオチドの当該位置におけるヒドロキシに取って換わっていることが理解される(すなわち、ヌクレオチドは、2'-デオキシ-2'-フルオロヌクレオチドである)。

Figure 2023521604000044



Figure 2023521604000045


Figure 2023521604000046

Table 2. Nucleotide monomer abbreviations used in nucleic acid sequence representations. It will be appreciated that these monomers, when present in an oligonucleotide, are linked together by 5'-3'-phosphodiester bonds. It is also understood that if a nucleotide contains a 2'-fluoro modification, then the fluoro replaces the hydroxy at that position in the parent nucleotide (i.e., the nucleotide is 2'-deoxy-2'-fluoro is a nucleotide).
Figure 2023521604000044


Figure 2023521604000045


Figure 2023521604000046

表3. MAPT dsRNA剤の未修飾センスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン1

Figure 2023521604000047


Figure 2023521604000048

Figure 2023521604000049


Figure 2023521604000050

Figure 2023521604000051

Figure 2023521604000052

Table 3. Unmodified Sense and Antisense Strand Sequences of MAPT dsRNA Agents - Screen 1
Figure 2023521604000047

Figure 2023521604000048

Figure 2023521604000049


Figure 2023521604000050

Figure 2023521604000051

Figure 2023521604000052

表4. MAPT dsRNA剤の未修飾センスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン2

Figure 2023521604000053


Figure 2023521604000054

Figure 2023521604000055

Figure 2023521604000056

Figure 2023521604000057


Figure 2023521604000058

Figure 2023521604000059

Figure 2023521604000060

Figure 2023521604000061

Table 4. Unmodified Sense and Antisense Strand Sequences of MAPT dsRNA Agents - Screen 2
Figure 2023521604000053

Figure 2023521604000054

Figure 2023521604000055

Figure 2023521604000056

Figure 2023521604000057


Figure 2023521604000058

Figure 2023521604000059

Figure 2023521604000060

Figure 2023521604000061

表5. MAPT dsRNA剤の未修飾センスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン3

Figure 2023521604000062


Figure 2023521604000063
Figure 2023521604000064


Figure 2023521604000065


Figure 2023521604000066
Figure 2023521604000067


Figure 2023521604000068
Figure 2023521604000069
Figure 2023521604000070

Figure 2023521604000071
Figure 2023521604000072
Table 5. Unmodified Sense and Antisense Strand Sequences of MAPT dsRNA Agents - Screen 3
Figure 2023521604000062

Figure 2023521604000063
Figure 2023521604000064


Figure 2023521604000065


Figure 2023521604000066
Figure 2023521604000067


Figure 2023521604000068
Figure 2023521604000069
Figure 2023521604000070

Figure 2023521604000071
Figure 2023521604000072

表6. MAPT dsRNA剤の修飾されたセンスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン1

Figure 2023521604000073

Figure 2023521604000074

Figure 2023521604000075
Figure 2023521604000076

Figure 2023521604000077

Figure 2023521604000078
Figure 2023521604000079

Figure 2023521604000080


Table 6. Modified Sense and Antisense Strand Sequences of MAPT dsRNA Agents - Screen 1
Figure 2023521604000073
Figure 2023521604000074

Figure 2023521604000075
Figure 2023521604000076

Figure 2023521604000077

Figure 2023521604000078
Figure 2023521604000079

Figure 2023521604000080


表7. MAPT dsRNA剤の修飾されたセンスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン2

Figure 2023521604000081

Figure 2023521604000082
Figure 2023521604000083
Figure 2023521604000084

Figure 2023521604000085
Figure 2023521604000086
Figure 2023521604000087
Figure 2023521604000088
Figure 2023521604000089

Figure 2023521604000090
 Table 7. Modified Sense and Antisense Strand Sequences of MAPT dsRNA Agents - Screen 2
Figure 2023521604000081
Figure 2023521604000082
Figure 2023521604000083
Figure 2023521604000084

Figure 2023521604000085
Figure 2023521604000086
Figure 2023521604000087
Figure 2023521604000088
Figure 2023521604000089

Figure 2023521604000090

表8. MAPT dsRNAの修飾されたセンスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン3

Figure 2023521604000091


Figure 2023521604000092
Figure 2023521604000093
Figure 2023521604000094
Figure 2023521604000095
Figure 2023521604000096
Figure 2023521604000097
Table 8. MAPT dsRNA Modified Sense and Antisense Strand Sequences - Screen 3
Figure 2023521604000091

Figure 2023521604000092
Figure 2023521604000093
Figure 2023521604000094
Figure 2023521604000095
Figure 2023521604000096
Figure 2023521604000097

表9. BE(2)C細胞におけるMAPT単回用量スクリーン-スクリーン1

Figure 2023521604000098



Figure 2023521604000099
Figure 2023521604000100
 Table 9. MAPT Single Dose Screen in BE(2)C Cells - Screen 1
Figure 2023521604000098


Figure 2023521604000099
Figure 2023521604000100

表10. BE(2)C細胞におけるMAPT単回用量スクリーン-スクリーン2

Figure 2023521604000101


Figure 2023521604000102
Figure 2023521604000103
Figure 2023521604000104
Table 10. MAPT Single Dose Screen in BE(2)C Cells-Screen 2
Figure 2023521604000101

Figure 2023521604000102
Figure 2023521604000103
Figure 2023521604000104

表11. BE(2)C細胞におけるMAPT単回用量スクリーン-スクリーン3

Figure 2023521604000105

Figure 2023521604000106

Figure 2023521604000107
Figure 2023521604000108

Table 11. MAPT Single Dose Screen in BE(2)C Cells-Screen 3
Figure 2023521604000105
Figure 2023521604000106

Figure 2023521604000107
Figure 2023521604000108

表12. MAPT dsRNA剤の未修飾センスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン4

Figure 2023521604000109

Figure 2023521604000110
Figure 2023521604000111

Figure 2023521604000112
Figure 2023521604000113
Table 12. Unmodified Sense and Antisense Strand Sequences of MAPT dsRNA Agents - Screen 4
Figure 2023521604000109
Figure 2023521604000110
Figure 2023521604000111

Figure 2023521604000112
Figure 2023521604000113

表13. MAPT dsRNA剤の修飾されたセンスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン4

Figure 2023521604000114

Figure 2023521604000115
Figure 2023521604000116

Figure 2023521604000117
 Table 13. Modified Sense and Antisense Strand Sequences of MAPT dsRNA Agents - Screen 4
Figure 2023521604000114
Figure 2023521604000115
Figure 2023521604000116

Figure 2023521604000117

表14. BE(2)C (ヒト)細胞におけるMAPT単回用量スクリーン-スクリーン4

Figure 2023521604000118

Figure 2023521604000119

Table 14. MAPT Single Dose Screen in BE(2)C (Human) Cells-Screen 4
Figure 2023521604000118
Figure 2023521604000119

表15. NEuro2a (マウス)細胞におけるMAPT単回用量スクリーン-スクリーン4

Figure 2023521604000120


Figure 2023521604000121

Table 15. MAPT single dose screen in NEuro2a (mouse) cells - Screen 4
Figure 2023521604000120

Figure 2023521604000121

表16. MAPT dsRNA剤の未修飾センスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン5

Figure 2023521604000122


Figure 2023521604000123
Figure 2023521604000124
Figure 2023521604000125
Figure 2023521604000126

Figure 2023521604000127
Figure 2023521604000128

Table 16. Unmodified Sense and Antisense Strand Sequences of MAPT dsRNA Agents - Screen 5
Figure 2023521604000122

Figure 2023521604000123
Figure 2023521604000124
Figure 2023521604000125
Figure 2023521604000126

Figure 2023521604000127
Figure 2023521604000128

表17. MAPT dsRNA剤の修飾されたセンスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン5

Figure 2023521604000129


Figure 2023521604000130

Figure 2023521604000131

Figure 2023521604000132

Figure 2023521604000133

Figure 2023521604000134
 Table 17. Modified Sense and Antisense Strand Sequences of MAPT dsRNA Agents - Screen 5
Figure 2023521604000129

Figure 2023521604000130

Figure 2023521604000131

Figure 2023521604000132

Figure 2023521604000133

Figure 2023521604000134

表18. MAPT dsRNA剤の未修飾センスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン6

Figure 2023521604000135


Figure 2023521604000136

Figure 2023521604000137

Figure 2023521604000138
Figure 2023521604000139

Figure 2023521604000140
Figure 2023521604000141
 Table 18. Unmodified Sense and Antisense Strand Sequences of MAPT dsRNA Agents - Screen 6
Figure 2023521604000135

Figure 2023521604000136

Figure 2023521604000137

Figure 2023521604000138
Figure 2023521604000139

Figure 2023521604000140
Figure 2023521604000141

表19. MAPT dsRNA剤の修飾されたセンスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン6

Figure 2023521604000142

Figure 2023521604000143
Figure 2023521604000144

Figure 2023521604000145
Figure 2023521604000146
Figure 2023521604000147
Figure 2023521604000148

Table 19. Modified Sense and Antisense Strand Sequences of MAPT dsRNA Agents - Screen 6
Figure 2023521604000142
Figure 2023521604000143
Figure 2023521604000144

Figure 2023521604000145
Figure 2023521604000146
Figure 2023521604000147
Figure 2023521604000148

表20. MAPT dsRNA剤の未修飾センスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン7

Figure 2023521604000149

Figure 2023521604000150
Figure 2023521604000151
Figure 2023521604000152
Figure 2023521604000153

Figure 2023521604000154
Figure 2023521604000155

Table 20. Unmodified Sense and Antisense Strand Sequences of MAPT dsRNA Agents - Screen 7
Figure 2023521604000149
Figure 2023521604000150
Figure 2023521604000151
Figure 2023521604000152
Figure 2023521604000153

Figure 2023521604000154
Figure 2023521604000155

表21. MAPT dsRNA剤の修飾されたセンスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン7

Figure 2023521604000156


Figure 2023521604000157

Figure 2023521604000158

Figure 2023521604000159
Figure 2023521604000160

Table 21. Modified Sense and Antisense Strand Sequences of MAPT dsRNA Agents - Screen 7
Figure 2023521604000156

Figure 2023521604000157

Figure 2023521604000158

Figure 2023521604000159
Figure 2023521604000160

表22. MAPT dsRNA剤の未修飾センスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン8

Figure 2023521604000161

Figure 2023521604000162
Figure 2023521604000163

Figure 2023521604000164

Figure 2023521604000165

Table 22. Unmodified Sense and Antisense Strand Sequences of MAPT dsRNA Agents - Screen 8
Figure 2023521604000161
Figure 2023521604000162
Figure 2023521604000163

Figure 2023521604000164

Figure 2023521604000165

表23. MAPT dsRNA剤の修飾されたセンスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン8

Figure 2023521604000166


Figure 2023521604000167
Figure 2023521604000168
Figure 2023521604000169

Figure 2023521604000170

Table 23. Modified Sense and Antisense Strand Sequences of MAPT dsRNA Agents - Screen 8
Figure 2023521604000166

Figure 2023521604000167
Figure 2023521604000168
Figure 2023521604000169

Figure 2023521604000170

表24. BE(2)C細胞におけるMAPT単回用量スクリーン-スクリーン5～8

Figure 2023521604000171

Figure 2023521604000172
Figure 2023521604000173
Figure 2023521604000174

Figure 2023521604000175
Figure 2023521604000176
Figure 2023521604000177
Figure 2023521604000178

Figure 2023521604000179

Figure 2023521604000180
Figure 2023521604000181

Figure 2023521604000182

Figure 2023521604000183

Table 24. MAPT Single Dose Screen in BE(2)C Cells-Screens 5-8
Figure 2023521604000171
Figure 2023521604000172
Figure 2023521604000173
Figure 2023521604000174

Figure 2023521604000175
Figure 2023521604000176
Figure 2023521604000177
Figure 2023521604000178

Figure 2023521604000179

Figure 2023521604000180
Figure 2023521604000181

Figure 2023521604000182

Figure 2023521604000183

表25. MAPT dsRNA剤の未修飾センスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン9

Figure 2023521604000184


Figure 2023521604000185

Figure 2023521604000186

Figure 2023521604000187

Figure 2023521604000188
Table 25. Unmodified Sense and Antisense Strand Sequences of MAPT dsRNA Agents - Screen 9
Figure 2023521604000184

Figure 2023521604000185

Figure 2023521604000186

Figure 2023521604000187

Figure 2023521604000188

表26. MAPT dsRNA剤の修飾されたセンスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン9

Figure 2023521604000189

Figure 2023521604000190

Figure 2023521604000191

Table 26. Modified Sense and Antisense Strand Sequences of MAPT dsRNA Agents - Screen 9
Figure 2023521604000189
Figure 2023521604000190

Figure 2023521604000191

表27. MAPT dsRNA剤の未修飾センスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン10

Figure 2023521604000192


Figure 2023521604000193
Figure 2023521604000194
Figure 2023521604000195
Figure 2023521604000196

Figure 2023521604000197

Table 27. Unmodified Sense and Antisense Strand Sequences of MAPT dsRNA Agents - Screen 10
Figure 2023521604000192

Figure 2023521604000193
Figure 2023521604000194
Figure 2023521604000195
Figure 2023521604000196

Figure 2023521604000197

表28. MAPT dsRNA剤の修飾されたセンスおよびアンチセンス鎖配列- スクリーン10

Figure 2023521604000198


Figure 2023521604000199

Figure 2023521604000200

Figure 2023521604000201

Figure 2023521604000202
Figure 2023521604000203

［実施例２］ Table 28. Modified Sense and Antisense Strand Sequences of MAPT dsRNA Agents - Screen 10
Figure 2023521604000198

Figure 2023521604000199

Figure 2023521604000200

Figure 2023521604000201

Figure 2023521604000202
Figure 2023521604000203

[Example 2]

トランスジェニックマウスにおけるインビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）評価
この実施例は、ヒトＭＡＰＴ ＲＮＡを発現するトランスジェニックマウスにおけるＭＡＰＴ ＲＮＡｉ剤のインビボ評価の方法を記載する。 In Vivo Evaluation in Transgenic Mice This example describes methods for in vivo evaluation of MAPT RNAi agents in transgenic mice expressing human MAPT RNA.

実施例１において設計およびアッセイされた選択されたｄｓＲＮＡ剤の能力を、ヒトＭＡＰＴ ＲＮＡを発現するマウスにおいてセンス含有凝集体またはアンチセンス含有凝集体の両方のレベルを低減させる能力について評価する。 The ability of selected dsRNA agents designed and assayed in Example 1 is evaluated for their ability to reduce levels of both sense- or antisense-containing aggregates in mice expressing human MAPT RNA.

簡潔に述べれば、上記のインビトロ研究から特定され、表２～７および１１～１２に示される目的の二重鎖を、インビボにおいて評価した。詳細には、投与１４日前に、野生型の８週齢雌マウス（Ｃ５７ＢＬ／６）に、ヒトＭＡＰＴ遺伝子の一部を発現するＡＡＶの２×１０１０ゲノムコピーを後眼窩に投与することによって形質導入した。詳細には、ＮＭ＿０１６８４１．４のヒトＭＡＰＴ遺伝子コード配列の一部（３２３～１６４８）および３’ＵＴＲ（４４７３～５８１１）の部分をコードするＡＡＶをマウスに投与し、そこでクローニングした。 Briefly, the duplexes of interest identified from the in vitro studies described above and shown in Tables 2-7 and 11-12 were evaluated in vivo. Specifically, 14 days prior to dosing, wild-type 8-week-old female mice (C57BL/6) were trans-orbitally injected with 2× 10 genome copies of AAV expressing a portion of the human MAPT gene. introduced. Specifically, AAV encoding a portion of the human MAPT gene coding sequence (323-1648) and a portion of the 3'UTR (4473-5811) of NM_016841.4 was administered to mice and cloned therein.

２週後および０日目に、マウスに、３ｍｇ／Ｋｇの目的のｄｓＲＮＡ剤のうちの１つまたはＰＢＳ対照の単回用量を皮下投与する。投与する二重鎖は、ＡＤ－３９３７５２、ＡＤ－３９６４２０、ＡＤ－３９６４２５、ＡＤ－３９３２３９、ＡＤ－３９７１６７、ＡＤ－５２３５６１、ＡＤ－５２３５６５、ＡＤ－５２３５６２、およびＡＤ－５３５０９４から選択する。二重鎖投与の２週後および１４日目に、動物を屠殺し、肝臓試料を収集し、液体窒素中で瞬間凍結した。組織ｍＲＮＡを抽出し、ヒトＭＡＰＴ発現についてＲＴ－ＱＰＣＲ法により分析した。 Two weeks later and on day 0, mice are administered a single dose of 3 mg/Kg of one of the dsRNA agents of interest or PBS control subcutaneously. The duplexes administered are selected from AD-393752, AD-396420, AD-396425, AD-393239, AD-397167, AD-523561, AD-523565, AD-523562, and AD-535094. Two weeks and 14 days after double-stranded administration, animals were sacrificed and liver samples were collected and snap frozen in liquid nitrogen. Tissue mRNA was extracted and analyzed by RT-QPCR for human MAPT expression.

ヒトＭＡＰＴ ｍＲＮＡレベルを、ハウスキーピング遺伝子ＧＡＰＤＨと比較した。次いで、ＰＢＳ媒体対照群の平均に対して値を正規化した。データを、ベースライン値のパーセントとして表し、平均値および標準偏差として示した。表２９に列記し、図１に示した結果は、試験された例示的な二重鎖薬剤が、インビボにおいてヒトＭＡＰＴ ｍＲＮＡのレベルを効果的に低減させることを実証している。 Human MAPT mRNA levels were compared to the housekeeping gene GAPDH. Values were then normalized to the mean of the PBS vehicle control group. Data were expressed as percent of baseline values and shown as mean and standard deviation. The results, listed in Table 29 and shown in Figure 1, demonstrate that the exemplary duplex agents tested effectively reduce levels of human MAPT mRNA in vivo.

表29.

Figure 2023521604000204



［実施例３］ Table 29.
Figure 2023521604000204


[Example 3]

マウスにおけるＭＡＰＴ ｍＲＮＡ抑制のインビボ評価
この実施例は、ヒトＭＡＰＴ ＲＮＡを発現するトランスジェニックマウスにおけるＭＡＰＴ ＲＮＡｉ剤のインビボ評価の方法を記載する。 In Vivo Evaluation of MAPT mRNA Suppression in Mice This example describes methods for in vivo evaluation of MAPT RNAi agents in transgenic mice expressing human MAPT RNA.

実施例１の表２５～２６において設計およびアッセイされた選択されたｄｓＲＮＡ剤の能力を、ヒトＭＡＰＴ ＲＮＡを発現するマウスにおけるセンス含有凝集体またはアンチセンス含有凝集体の両方のレベルを低減させる能力について評価する。 The ability of selected dsRNA agents designed and assayed in Tables 25-26 of Example 1 to reduce levels of both sense- or antisense-containing aggregates in mice expressing human MAPT RNA. evaluate.

簡潔に述べれば、上記のインビトロ研究から特定され、表２５～２６に示された目的の二重鎖を、インビボにおいて評価した。詳細には、第１の研究には、投与前日にヒトＭＡＰＴ遺伝子の一部を発現するＡＡＶの２×１０１０ゲノムコピーを後眼窩に投与することによって形質導入された野生型６～８週齢雌マウス（Ｃ５７ＢＬ／６）７２匹が含まれた。第２の研究には、投与前日にヒトＭＡＰＴ遺伝子の一部を発現するＡＡＶの２×１０１０ゲノムコピーを後眼窩に投与することによって形質導入された野生型６～８週齢雌マウス（Ｃ５７ＢＬ／６）６０匹が含まれた。第１および第２の研究の両方において、ＮＭ＿００５９１０のヒトＭＡＰＴ遺伝子コード配列の一部をコードするＡＡＶをマウスに投与し、そこでクローニングした。 Briefly, the duplexes of interest identified from the in vitro studies described above and shown in Tables 25-26 were evaluated in vivo. Specifically, the first study included wild-type 6- to 8-week-old mice transduced by retro-orbital administration of 2 x 1010 genome copies of AAV expressing a portion of the human MAPT gene the day before dosing. 72 female mice (C57BL/6) were included. In a second study, wild-type 6- to 8-week-old female mice (C57BL) were transduced by retro-orbital administration of 2 x 1010 genome copies of AAV expressing a portion of the human MAPT gene the day before dosing. /6) 60 were included. In both the first and second studies, AAV encoding a portion of the human MAPT gene coding sequence of NM_005910 was administered to mice and cloned therein.

２週後および０日目に、１群当たり３匹の１６群に分けた第１の研究の４８匹のマウスに、３ｍｇ／Ｋｇの目的のｄｓＲＮＡ剤のうちの１つまたはＰＢＳ対照の単回用量を皮下投与した。投与する二重鎖は、ＡＤ－３９７１６７．１、ＡＤ－５２３５６５．１、ＡＤ－１３９７０７２．３、ＡＤ－１３９７０７３．３、ＡＤ－１３９７０７６．３、ＡＤ－１３９７０７７．３、ＡＤ－１３９７０７８．３、ＡＤ－１３９７２５２．２、ＡＤ－１３９７２５７．２、ＡＤ－１３９７２５８．２、ＡＤ－１３９７２５９．２、ＡＤ－１３９７２６３．２、ＡＤ－１３９７２６４．２、ＡＤ－１３９７３０９．２、およびＡＤ－６４９５８．１１４から選択する。同様に、０日目に、１群当たり３匹の１８群に分けた第２の研究の５４匹のマウスに、３ｍｇ／Ｋｇの目的のｄｓＲＮＡ剤のうちの１つまたはＰＢＳ対照の単回用量を皮下投与した。投与する二重鎖は、ＡＤ－３９７１６７．１、ＡＤ－３９３７５８．４、ＡＤ－１３９７０８０．３、ＡＤ－１３９７２９３．２、ＡＤ－１３９７２９４．２、ＡＤ－１３９７０８１．３、ＡＤ－１３９７０８３．３、ＡＤ－１３９７２９８．２、ＡＤ－１３９７２９９．２、ＡＤ－１３９７０８４．２、ＡＤ－１３９７０８５．２、ＡＤ－１３９７０８７．３、ＡＤ－１３９７３０６．２、ＡＤ－１３９７３０７．２、ＡＤ－１３９７３０８．２、およびＡＤ－１３９７０８８．２から選択する。二重鎖投与の２週後および１４日目に、両方の研究の動物を屠殺し、肝臓試料を収集し、液体窒素中で瞬間凍結した。組織ｍＲＮＡを抽出し、ヒトＭＡＰＴ発現についてＲＴ－ＱＰＣＲ法により分析した。 After 2 weeks and on day 0, 48 mice from the first study, divided into 16 groups of 3 mice per group, received a single dose of 3 mg/Kg of one of the dsRNA agents of interest or PBS control. Doses were administered subcutaneously. The duplexes administered are AD-397167.1, AD-523565.1, AD-1397072.3, AD-1397073.3, AD-1397076.3, AD-1397077.3, AD-1397078.3, AD - select from AD-1397252.2, AD-1397257.2, AD-1397258.2, AD-1397259.2, AD-1397263.2, AD-1397264.2, AD-1397309.2, and AD-64958.114 . Similarly, on day 0, a second study of 54 mice, divided into 18 groups of 3 mice per group, received a single dose of 3 mg/Kg of one of the dsRNA agents of interest or PBS control. was administered subcutaneously. The duplexes administered are AD-397167.1, AD-393758.4, AD-1397080.3, AD-1397293.2, AD-1397294.2, AD-1397081.3, AD-1397083.3, AD -1397298.2, AD-1397299.2, AD-1397084.2, AD-1397085.2, AD-1397087.3, AD-1397306.2, AD-1397307.2, AD-1397308.2, and AD- Select from 1397088.2. Two weeks and 14 days after double-stranded administration, animals in both studies were sacrificed and liver samples were collected and snap frozen in liquid nitrogen. Tissue mRNA was extracted and analyzed by RT-QPCR for human MAPT expression.

ヒトＭＡＰＴ ｍＲＮＡレベルを、ハウスキーピング遺伝子ＧＡＰＤＨと比較し、対応するＰＢＳ媒体対照群におけるレベルの平均に対して正規化した。データは、ベースライン値のパーセントとして表し、平均値および標準偏差として示した。結果は、それぞれ表２９および３０に列記し、それぞれ図２および３に示した。結果は、選択された試験された例示的な二重鎖薬剤がインビボにおいてヒトＭＡＰＴ ｍＲＮＡのレベルを効果的に低減させることを実証している。 Human MAPT mRNA levels were compared to the housekeeping gene GAPDH and normalized to the mean levels in the corresponding PBS vehicle control group. Data are expressed as percent of baseline values and shown as mean and standard deviation. The results are listed in Tables 29 and 30, respectively, and shown in Figures 2 and 3, respectively. The results demonstrate that selected exemplary duplex agents tested effectively reduce levels of human MAPT mRNA in vivo.

表29.

Figure 2023521604000205

Table 29.
Figure 2023521604000205

表30.

Figure 2023521604000206


Table 30.
Figure 2023521604000206

均等物
当業者であれば、本明細書において説明される特定の実施形態および方法に対する多くの均等物を認識し、または日常的な実験法だけを使用して確かめることができるであろう。そのような均等物は、以下の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。 Equivalents Those skilled in the art will recognize, or be able to ascertain using no more than routine experimentation, many equivalents to the specific embodiments and methods described herein. Such equivalents are intended to be covered by the following claims.

ＭＡＰＴ配列
配列番号１
＞ＮＭ＿０１６８４１．４ ヒト微小管関連タンパク質タウ（ＭＡＰＴ）、転写物変異体４、ｍＲＮＡ
GGACGGCCGAGCGGCAGGGCGCTCGCGCGCGCCCACTAGTGGCCGGAGGAGAAGGCTCCCGCGGAGGCCG
CGCTGCCCGCCCCCTCCCCTGGGGAGGCTCGCGTTCCCGCTGCTCGCGCCTGCGCCGCCCGCCGGCCTCA
GGAACGCGCCCTCTTCGCCGGCGCGCGCCCTCGCAGTCACCGCCACCCACCAGCTCCGGCACCAACAGCA
GCGCCGCTGCCACCGCCCACCTTCTGCCGCCGCCACCACAGCCACCTTCTCCTCCTCCGCTGTCCTCTCC
CGTCCTCGCCTCTGTCGACTATCAGGTGAACTTTGAACCAGGATGGCTGAGCCCCGCCAGGAGTTCGAAG
TGATGGAAGATCACGCTGGGACGTACGGGTTGGGGGACAGGAAAGATCAGGGGGGCTACACCATGCACCA
AGACCAAGAGGGTGACACGGACGCTGGCCTGAAAGCTGAAGAAGCAGGCATTGGAGACACCCCCAGCCTG
GAAGACGAAGCTGCTGGTCACGTGACCCAAGCTCGCATGGTCAGTAAAAGCAAAGACGGGACTGGAAGCG
ATGACAAAAAAGCCAAGGGGGCTGATGGTAAAACGAAGATCGCCACACCGCGGGGAGCAGCCCCTCCAGG
CCAGAAGGGCCAGGCCAACGCCACCAGGATTCCAGCAAAAACCCCGCCCGCTCCAAAGACACCACCCAGC
TCTGGTGAACCTCCAAAATCAGGGGATCGCAGCGGCTACAGCAGCCCCGGCTCCCCAGGCACTCCCGGCA
GCCGCTCCCGCACCCCGTCCCTTCCAACCCCACCCACCCGGGAGCCCAAGAAGGTGGCAGTGGTCCGTAC
TCCACCCAAGTCGCCGTCTTCCGCCAAGAGCCGCCTGCAGACAGCCCCCGTGCCCATGCCAGACCTGAAG
AATGTCAAGTCCAAGATCGGCTCCACTGAGAACCTGAAGCACCAGCCGGGAGGCGGGAAGGTGCAAATAG
TCTACAAACCAGTTGACCTGAGCAAGGTGACCTCCAAGTGTGGCTCATTAGGCAACATCCATCATAAACC
AGGAGGTGGCCAGGTGGAAGTAAAATCTGAGAAGCTTGACTTCAAGGACAGAGTCCAGTCGAAGATTGGG
TCCCTGGACAATATCACCCACGTCCCTGGCGGAGGAAATAAAAAGATTGAAACCCACAAGCTGACCTTCC
GCGAGAACGCCAAAGCCAAGACAGACCACGGGGCGGAGATCGTGTACAAGTCGCCAGTGGTGTCTGGGGA
CACGTCTCCACGGCATCTCAGCAATGTCTCCTCCACCGGCAGCATCGACATGGTAGACTCGCCCCAGCTC
GCCACGCTAGCTGACGAGGTGTCTGCCTCCCTGGCCAAGCAGGGTTTGTGATCAGGCCCCTGGGGCGGTC
AATAATTGTGGAGAGGAGAGAATGAGAGAGTGTGGAAAAAAAAAGAATAATGACCCGGCCCCCGCCCTCT
GCCCCCAGCTGCTCCTCGCAGTTCGGTTAATTGGTTAATCACTTAACCTGCTTTTGTCACTCGGCTTTGG
CTCGGGACTTCAAAATCAGTGATGGGAGTAAGAGCAAATTTCATCTTTCCAAATTGATGGGTGGGCTAGT
AATAAAATATTTAAAAAAAAACATTCAAAAACATGGCCACATCCAACATTTCCTCAGGCAATTCCTTTTG
ATTCTTTTTTCTTCCCCCTCCATGTAGAAGAGGGAGAAGGAGAGGCTCTGAAAGCTGCTTCTGGGGGATT
TCAAGGGACTGGGGGTGCCAACCACCTCTGGCCCTGTTGTGGGGGTGTCACAGAGGCAGTGGCAGCAACA
AAGGATTTGAAACTTGGTGTGTTCGTGGAGCCACAGGCAGACGATGTCAACCTTGTGTGAGTGTGACGGG
GGTTGGGGTGGGGCGGGAGGCCACGGGGGAGGCCGAGGCAGGGGCTGGGCAGAGGGGAGAGGAAGCACAA
GAAGTGGGAGTGGGAGAGGAAGCCACGTGCTGGAGAGTAGACATCCCCCTCCTTGCCGCTGGGAGAGCCA
AGGCCTATGCCACCTGCAGCGTCTGAGCGGCCGCCTGTCCTTGGTGGCCGGGGGTGGGGGCCTGCTGTGG
GTCAGTGTGCCACCCTCTGCAGGGCAGCCTGTGGGAGAAGGGACAGCGGGTAAAAAGAGAAGGCAAGCTG
GCAGGAGGGTGGCACTTCGTGGATGACCTCCTTAGAAAAGACTGACCTTGATGTCTTGAGAGCGCTGGCC
TCTTCCTCCCTCCCTGCAGGGTAGGGGGCCTGAGTTGAGGGGCTTCCCTCTGCTCCACAGAAACCCTGTT
TTATTGAGTTCTGAAGGTTGGAACTGCTGCCATGATTTTGGCCACTTTGCAGACCTGGGACTTTAGGGCT
AACCAGTTCTCTTTGTAAGGACTTGTGCCTCTTGGGAGACGTCCACCCGTTTCCAAGCCTGGGCCACTGG
CATCTCTGGAGTGTGTGGGGGTCTGGGAGGCAGGTCCCGAGCCCCCTGTCCTTCCCACGGCCACTGCAGT
CACCCCGTCTGCGCCGCTGTGCTGTTGTCTGCCGTGAGAGCCCAATCACTGCCTATACCCCTCATCACAC
GTCACAATGTCCCGAATTCCCAGCCTCACCACCCCTTCTCAGTAATGACCCTGGTTGGTTGCAGGAGGTA
CCTACTCCATACTGAGGGTGAAATTAAGGGAAGGCAAAGTCCAGGCACAAGAGTGGGACCCCAGCCTCTC
ACTCTCAGTTCCACTCATCCAACTGGGACCCTCACCACGAATCTCATGATCTGATTCGGTTCCCTGTCTC
CTCCTCCCGTCACAGATGTGAGCCAGGGCACTGCTCAGCTGTGACCCTAGGTGTTTCTGCCTTGTTGACA
TGGAGAGAGCCCTTTCCCCTGAGAAGGCCTGGCCCCTTCCTGTGCTGAGCCCACAGCAGCAGGCTGGGTG
TCTTGGTTGTCAGTGGTGGCACCAGGATGGAAGGGCAAGGCACCCAGGGCAGGCCCACAGTCCCGCTGTC
CCCCACTTGCACCCTAGCTTGTAGCTGCCAACCTCCCAGACAGCCCAGCCCGCTGCTCAGCTCCACATGC
ATAGTATCAGCCCTCCACACCCGACAAAGGGGAACACACCCCCTTGGAAATGGTTCTTTTCCCCCAGTCC
CAGCTGGAAGCCATGCTGTCTGTTCTGCTGGAGCAGCTGAACATATACATAGATGTTGCCCTGCCCTCCC
CATCTGCACCCTGTTGAGTTGTAGTTGGATTTGTCTGTTTATGCTTGGATTCACCAGAGTGACTATGATA
GTGAAAAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAGGACGCATGTATCTTGAAATGCTTGTAAAGAGGTTTCTAACCCA
CCCTCACGAGGTGTCTCTCACCCCCACACTGGGACTCGTGTGGCCTGTGTGGTGCCACCCTGCTGGGGCC
TCCCAAGTTTTGAAAGGCTTTCCTCAGCACCTGGGACCCAACAGAGACCAGCTTCTAGCAGCTAAGGAGG
CCGTTCAGCTGTGACGAAGGCCTGAAGCACAGGATTAGGACTGAAGCGATGATGTCCCCTTCCCTACTTC
CCCTTGGGGCTCCCTGTGTCAGGGCACAGACTAGGTCTTGTGGCTGGTCTGGCTTGCGGCGCGAGGATGG
TTCTCTCTGGTCATAGCCCGAAGTCTCATGGCAGTCCCAAAGGAGGCTTACAACTCCTGCATCACAAGAA
AAAGGAAGCCACTGCCAGCTGGGGGGATCTGCAGCTCCCAGAAGCTCCGTGAGCCTCAGCCACCCCTCAG
ACTGGGTTCCTCTCCAAGCTCGCCCTCTGGAGGGGCAGCGCAGCCTCCCACCAAGGGCCCTGCGACCACA
GCAGGGATTGGGATGAATTGCCTGTCCTGGATCTGCTCTAGAGGCCCAAGCTGCCTGCCTGAGGAAGGAT
GACTTGACAAGTCAGGAGACACTGTTCCCAAAGCCTTGACCAGAGCACCTCAGCCCGCTGACCTTGCACA
AACTCCATCTGCTGCCATGAGAAAAGGGAAGCCGCCTTTGCAAAACATTGCTGCCTAAAGAAACTCAGCA
GCCTCAGGCCCAATTCTGCCACTTCTGGTTTGGGTACAGTTAAAGGCAACCCTGAGGGACTTGGCAGTAG
AAATCCAGGGCCTCCCCTGGGGCTGGCAGCTTCGTGTGCAGCTAGAGCTTTACCTGAAAGGAAGTCTCTG
GGCCCAGAACTCTCCACCAAGAGCCTCCCTGCCGTTCGCTGAGTCCCAGCAATTCTCCTAAGTTGAAGGG
ATCTGAGAAGGAGAAGGAAATGTGGGGTAGATTTGGTGGTGGTTAGAGATATGCCCCCCTCATTACTGCC
AACAGTTTCGGCTGCATTTCTTCACGCACCTCGGTTCCTCTTCCTGAAGTTCTTGTGCCCTGCTCTTCAG
CACCATGGGCCTTCTTATACGGAAGGCTCTGGGATCTCCCCCTTGTGGGGCAGGCTCTTGGGGCCAGCCT
AAGATCATGGTTTAGGGTGATCAGTGCTGGCAGATAAATTGAAAAGGCACGCTGGCTTGTGATCTTAAAT
GAGGACAATCCCCCCAGGGCTGGGCACTCCTCCCCTCCCCTCACTTCTCCCACCTGCAGAGCCAGTGTCC
TTGGGTGGGCTAGATAGGATATACTGTATGCCGGCTCCTTCAAGCTGCTGACTCACTTTATCAATAGTTC
CATTTAAATTGACTTCAGTGGTGAGACTGTATCCTGTTTGCTATTGCTTGTTGTGCTATGGGGGGAGGGG
GGAGGAATGTGTAAGATAGTTAACATGGGCAAAGGGAGATCTTGGGGTGCAGCACTTAAACTGCCTCGTA
ACCCTTTTCATGATTTCAACCACATTTGCTAGAGGGAGGGAGCAGCCACGGAGTTAGAGGCCCTTGGGGT
TTCTCTTTTCCACTGACAGGCTTTCCCAGGCAGCTGGCTAGTTCATTCCCTCCCCAGCCAGGTGCAGGCG
TAGGAATATGGACATCTGGTTGCTTTGGCCTGCTGCCCTCTTTCAGGGGTCCTAAGCCCACAATCATGCC
TCCCTAAGACCTTGGCATCCTTCCCTCTAAGCCGTTGGCACCTCTGTGCCACCTCTCACACTGGCTCCAG
ACACACAGCCTGTGCTTTTGGAGCTGAGATCACTCGCTTCACCCTCCTCATCTTTGTTCTCCAAGTAAAG
CCACGAGGTCGGGGCGAGGGCAGAGGTGATCACCTGCGTGTCCCATCTACAGACCTGCAGCTTCATAAAA
CTTCTGATTTCTCTTCAGCTTTGAAAAGGGTTACCCTGGGCACTGGCCTAGAGCCTCACCTCCTAATAGA
CTTAGCCCCATGAGTTTGCCATGTTGAGCAGGACTATTTCTGGCACTTGCAAGTCCCATGATTTCTTCGG
TAATTCTGAGGGTGGGGGGAGGGACATGAAATCATCTTAGCTTAGCTTTCTGTCTGTGAATGTCTATATA
GTGTATTGTGTGTTTTAACAAATGATTTACACTGACTGTTGCTGTAAAAGTGAATTTGGAAATAAAGTTA
TTACTCTGATTAAA
配列番号２
＞配列番号１の逆相補物
TTTAATCAGAGTAATAACTTTATTTCCAAATTCACTTTTACAGCAACAGTCAGTGTAAATCATTTGTTAAAACACACAATACACTATATAGACATTCACAGACAGAAAGCTAAGCTAAGATGATTTCATGTCCCTCCCCCCACCCTCAGAATTACCGAAGAAATCATGGGACTTGCAAGTGCCAGAAATAGTCCTGCTCAACATGGCAAACTCATGGGGCTAAG
TCTATTAGGAGGTGAGGCTCTAGGCCAGTGCCCAGGGTAACCCTTTTCAAAGCTGAAGAGAAATCAGAAG
TTTTATGAAGCTGCAGGTCTGTAGATGGGACACGCAGGTGATCACCTCTGCCCTCGCCCCGACCTCGTGG
CTTTACTTGGAGAACAAAGATGAGGAGGGTGAAGCGAGTGATCTCAGCTCCAAAAGCACAGGCTGTGTGT
CTGGAGCCAGTGTGAGAGGTGGCACAGAGGTGCCAACGGCTTAGAGGGAAGGATGCCAAGGTCTTAGGGA
GGCATGATTGTGGGCTTAGGACCCCTGAAAGAGGGCAGCAGGCCAAAGCAACCAGATGTCCATATTCCTA
CGCCTGCACCTGGCTGGGGAGGGAATGAACTAGCCAGCTGCCTGGGAAAGCCTGTCAGTGGAAAAGAGAA
ACCCCAAGGGCCTCTAACTCCGTGGCTGCTCCCTCCCTCTAGCAAATGTGGTTGAAATCATGAAAAGGGT
TACGAGGCAGTTTAAGTGCTGCACCCCAAGATCTCCCTTTGCCCATGTTAACTATCTTACACATTCCTCC
CCCCTCCCCCCATAGCACAACAAGCAATAGCAAACAGGATACAGTCTCACCACTGAAGTCAATTTAAATG
GAACTATTGATAAAGTGAGTCAGCAGCTTGAAGGAGCCGGCATACAGTATATCCTATCTAGCCCACCCAA
GGACACTGGCTCTGCAGGTGGGAGAAGTGAGGGGAGGGGAGGAGTGCCCAGCCCTGGGGGGATTGTCCTC
ATTTAAGATCACAAGCCAGCGTGCCTTTTCAATTTATCTGCCAGCACTGATCACCCTAAACCATGATCTT
AGGCTGGCCCCAAGAGCCTGCCCCACAAGGGGGAGATCCCAGAGCCTTCCGTATAAGAAGGCCCATGGTG
CTGAAGAGCAGGGCACAAGAACTTCAGGAAGAGGAACCGAGGTGCGTGAAGAAATGCAGCCGAAACTGTT
GGCAGTAATGAGGGGGGCATATCTCTAACCACCACCAAATCTACCCCACATTTCCTTCTCCTTCTCAGAT
CCCTTCAACTTAGGAGAATTGCTGGGACTCAGCGAACGGCAGGGAGGCTCTTGGTGGAGAGTTCTGGGCC
CAGAGACTTCCTTTCAGGTAAAGCTCTAGCTGCACACGAAGCTGCCAGCCCCAGGGGAGGCCCTGGATTT
CTACTGCCAAGTCCCTCAGGGTTGCCTTTAACTGTACCCAAACCAGAAGTGGCAGAATTGGGCCTGAGGC
TGCTGAGTTTCTTTAGGCAGCAATGTTTTGCAAAGGCGGCTTCCCTTTTCTCATGGCAGCAGATGGAGTT
TGTGCAAGGTCAGCGGGCTGAGGTGCTCTGGTCAAGGCTTTGGGAACAGTGTCTCCTGACTTGTCAAGTC
ATCCTTCCTCAGGCAGGCAGCTTGGGCCTCTAGAGCAGATCCAGGACAGGCAATTCATCCCAATCCCTGC
TGTGGTCGCAGGGCCCTTGGTGGGAGGCTGCGCTGCCCCTCCAGAGGGCGAGCTTGGAGAGGAACCCAGT
CTGAGGGGTGGCTGAGGCTCACGGAGCTTCTGGGAGCTGCAGATCCCCCCAGCTGGCAGTGGCTTCCTTT
TTCTTGTGATGCAGGAGTTGTAAGCCTCCTTTGGGACTGCCATGAGACTTCGGGCTATGACCAGAGAGAA
CCATCCTCGCGCCGCAAGCCAGACCAGCCACAAGACCTAGTCTGTGCCCTGACACAGGGAGCCCCAAGGG
GAAGTAGGGAAGGGGACATCATCGCTTCAGTCCTAATCCTGTGCTTCAGGCCTTCGTCACAGCTGAACGG
CCTCCTTAGCTGCTAGAAGCTGGTCTCTGTTGGGTCCCAGGTGCTGAGGAAAGCCTTTCAAAACTTGGGA
GGCCCCAGCAGGGTGGCACCACACAGGCCACACGAGTCCCAGTGTGGGGGTGAGAGACACCTCGTGAGGG
TGGGTTAGAAACCTCTTTACAAGCATTTCAAGATACATGCGTCCTTTTTTTTTTTTTTTTTTCTTTTCAC
TATCATAGTCACTCTGGTGAATCCAAGCATAAACAGACAAATCCAACTACAACTCAACAGGGTGCAGATG
GGGAGGGCAGGGCAACATCTATGTATATGTTCAGCTGCTCCAGCAGAACAGACAGCATGGCTTCCAGCTG
GGACTGGGGGAAAAGAACCATTTCCAAGGGGGTGTGTTCCCCTTTGTCGGGTGTGGAGGGCTGATACTAT
GCATGTGGAGCTGAGCAGCGGGCTGGGCTGTCTGGGAGGTTGGCAGCTACAAGCTAGGGTGCAAGTGGGG
GACAGCGGGACTGTGGGCCTGCCCTGGGTGCCTTGCCCTTCCATCCTGGTGCCACCACTGACAACCAAGA
CACCCAGCCTGCTGCTGTGGGCTCAGCACAGGAAGGGGCCAGGCCTTCTCAGGGGAAAGGGCTCTCTCCA
TGTCAACAAGGCAGAAACACCTAGGGTCACAGCTGAGCAGTGCCCTGGCTCACATCTGTGACGGGAGGAG
GAGACAGGGAACCGAATCAGATCATGAGATTCGTGGTGAGGGTCCCAGTTGGATGAGTGGAACTGAGAGT
GAGAGGCTGGGGTCCCACTCTTGTGCCTGGACTTTGCCTTCCCTTAATTTCACCCTCAGTATGGAGTAGG
TACCTCCTGCAACCAACCAGGGTCATTACTGAGAAGGGGTGGTGAGGCTGGGAATTCGGGACATTGTGAC
GTGTGATGAGGGGTATAGGCAGTGATTGGGCTCTCACGGCAGACAACAGCACAGCGGCGCAGACGGGGTG
ACTGCAGTGGCCGTGGGAAGGACAGGGGGCTCGGGACCTGCCTCCCAGACCCCCACACACTCCAGAGATG
CCAGTGGCCCAGGCTTGGAAACGGGTGGACGTCTCCCAAGAGGCACAAGTCCTTACAAAGAGAACTGGTT
AGCCCTAAAGTCCCAGGTCTGCAAAGTGGCCAAAATCATGGCAGCAGTTCCAACCTTCAGAACTCAATAA
AACAGGGTTTCTGTGGAGCAGAGGGAAGCCCCTCAACTCAGGCCCCCTACCCTGCAGGGAGGGAGGAAGA
GGCCAGCGCTCTCAAGACATCAAGGTCAGTCTTTTCTAAGGAGGTCATCCACGAAGTGCCACCCTCCTGC
CAGCTTGCCTTCTCTTTTTACCCGCTGTCCCTTCTCCCACAGGCTGCCCTGCAGAGGGTGGCACACTGAC
CCACAGCAGGCCCCCACCCCCGGCCACCAAGGACAGGCGGCCGCTCAGACGCTGCAGGTGGCATAGGCCT
TGGCTCTCCCAGCGGCAAGGAGGGGGATGTCTACTCTCCAGCACGTGGCTTCCTCTCCCACTCCCACTTC
TTGTGCTTCCTCTCCCCTCTGCCCAGCCCCTGCCTCGGCCTCCCCCGTGGCCTCCCGCCCCACCCCAACC
CCCGTCACACTCACACAAGGTTGACATCGTCTGCCTGTGGCTCCACGAACACACCAAGTTTCAAATCCTT
TGTTGCTGCCACTGCCTCTGTGACACCCCCACAACAGGGCCAGAGGTGGTTGGCACCCCCAGTCCCTTGA
AATCCCCCAGAAGCAGCTTTCAGAGCCTCTCCTTCTCCCTCTTCTACATGGAGGGGGAAGAAAAAAGAAT
CAAAAGGAATTGCCTGAGGAAATGTTGGATGTGGCCATGTTTTTGAATGTTTTTTTTTAAATATTTTATT
ACTAGCCCACCCATCAATTTGGAAAGATGAAATTTGCTCTTACTCCCATCACTGATTTTGAAGTCCCGAG
CCAAAGCCGAGTGACAAAAGCAGGTTAAGTGATTAACCAATTAACCGAACTGCGAGGAGCAGCTGGGGGC
AGAGGGCGGGGGCCGGGTCATTATTCTTTTTTTTTCCACACTCTCTCATTCTCTCCTCTCCACAATTATT
GACCGCCCCAGGGGCCTGATCACAAACCCTGCTTGGCCAGGGAGGCAGACACCTCGTCAGCTAGCGTGGC
GAGCTGGGGCGAGTCTACCATGTCGATGCTGCCGGTGGAGGAGACATTGCTGAGATGCCGTGGAGACGTG
TCCCCAGACACCACTGGCGACTTGTACACGATCTCCGCCCCGTGGTCTGTCTTGGCTTTGGCGTTCTCGC
GGAAGGTCAGCTTGTGGGTTTCAATCTTTTTATTTCCTCCGCCAGGGACGTGGGTGATATTGTCCAGGGA
CCCAATCTTCGACTGGACTCTGTCCTTGAAGTCAAGCTTCTCAGATTTTACTTCCACCTGGCCACCTCCT
GGTTTATGATGGATGTTGCCTAATGAGCCACACTTGGAGGTCACCTTGCTCAGGTCAACTGGTTTGTAGA
CTATTTGCACCTTCCCGCCTCCCGGCTGGTGCTTCAGGTTCTCAGTGGAGCCGATCTTGGACTTGACATT
CTTCAGGTCTGGCATGGGCACGGGGGCTGTCTGCAGGCGGCTCTTGGCGGAAGACGGCGACTTGGGTGGA
GTACGGACCACTGCCACCTTCTTGGGCTCCCGGGTGGGTGGGGTTGGAAGGGACGGGGTGCGGGAGCGGC
TGCCGGGAGTGCCTGGGGAGCCGGGGCTGCTGTAGCCGCTGCGATCCCCTGATTTTGGAGGTTCACCAGA
GCTGGGTGGTGTCTTTGGAGCGGGCGGGGTTTTTGCTGGAATCCTGGTGGCGTTGGCCTGGCCCTTCTGG
CCTGGAGGGGCTGCTCCCCGCGGTGTGGCGATCTTCGTTTTACCATCAGCCCCCTTGGCTTTTTTGTCAT
CGCTTCCAGTCCCGTCTTTGCTTTTACTGACCATGCGAGCTTGGGTCACGTGACCAGCAGCTTCGTCTTC
CAGGCTGGGGGTGTCTCCAATGCCTGCTTCTTCAGCTTTCAGGCCAGCGTCCGTGTCACCCTCTTGGTCT
TGGTGCATGGTGTAGCCCCCCTGATCTTTCCTGTCCCCCAACCCGTACGTCCCAGCGTGATCTTCCATCA
CTTCGAACTCCTGGCGGGGCTCAGCCATCCTGGTTCAAAGTTCACCTGATAGTCGACAGAGGCGAGGACG
GGAGAGGACAGCGGAGGAGGAGAAGGTGGCTGTGGTGGCGGCGGCAGAAGGTGGGCGGTGGCAGCGGCGC
TGCTGTTGGTGCCGGAGCTGGTGGGTGGCGGTGACTGCGAGGGCGCGCGCCGGCGAAGAGGGCGCGTTCC
TGAGGCCGGCGGGCGGCGCAGGCGCGAGCAGCGGGAACGCGAGCCTCCCCAGGGGAGGGGGCGGGCAGCG
CGGCCTCCGCGGGAGCCTTCTCCTCCGGCCACTAGTGGGCGCGCGCGAGCGCCCTGCCGCTCGGCCGTCC
配列番号３
＞ＮＭ＿００５９１０．６ ヒト微小管関連タンパク質タウ（ＭＡＰＴ）、転写物変異体２、ｍＲＮＡ
GGACGGCCGAGCGGCAGGGCGCTCGCGCGCGCCCACTAGTGGCCGGAGGAGAAGGCTCCCGCGGAGGCCG
CGCTGCCCGCCCCCTCCCCTGGGGAGGCTCGCGTTCCCGCTGCTCGCGCCTGCGCCGCCCGCCGGCCTCA
GGAACGCGCCCTCTTCGCCGGCGCGCGCCCTCGCAGTCACCGCCACCCACCAGCTCCGGCACCAACAGCA
GCGCCGCTGCCACCGCCCACCTTCTGCCGCCGCCACCACAGCCACCTTCTCCTCCTCCGCTGTCCTCTCC
CGTCCTCGCCTCTGTCGACTATCAGGTGAACTTTGAACCAGGATGGCTGAGCCCCGCCAGGAGTTCGAAG
TGATGGAAGATCACGCTGGGACGTACGGGTTGGGGGACAGGAAAGATCAGGGGGGCTACACCATGCACCA
AGACCAAGAGGGTGACACGGACGCTGGCCTGAAAGAATCTCCCCTGCAGACCCCCACTGAGGACGGATCT
GAGGAACCGGGCTCTGAAACCTCTGATGCTAAGAGCACTCCAACAGCGGAAGATGTGACAGCACCCTTAG
TGGATGAGGGAGCTCCCGGCAAGCAGGCTGCCGCGCAGCCCCACACGGAGATCCCAGAAGGAACCACAGC
TGAAGAAGCAGGCATTGGAGACACCCCCAGCCTGGAAGACGAAGCTGCTGGTCACGTGACCCAAGCTCGC
ATGGTCAGTAAAAGCAAAGACGGGACTGGAAGCGATGACAAAAAAGCCAAGGGGGCTGATGGTAAAACGA
AGATCGCCACACCGCGGGGAGCAGCCCCTCCAGGCCAGAAGGGCCAGGCCAACGCCACCAGGATTCCAGC
AAAAACCCCGCCCGCTCCAAAGACACCACCCAGCTCTGGTGAACCTCCAAAATCAGGGGATCGCAGCGGC
TACAGCAGCCCCGGCTCCCCAGGCACTCCCGGCAGCCGCTCCCGCACCCCGTCCCTTCCAACCCCACCCA
CCCGGGAGCCCAAGAAGGTGGCAGTGGTCCGTACTCCACCCAAGTCGCCGTCTTCCGCCAAGAGCCGCCT
GCAGACAGCCCCCGTGCCCATGCCAGACCTGAAGAATGTCAAGTCCAAGATCGGCTCCACTGAGAACCTG
AAGCACCAGCCGGGAGGCGGGAAGGTGCAGATAATTAATAAGAAGCTGGATCTTAGCAACGTCCAGTCCA
AGTGTGGCTCAAAGGATAATATCAAACACGTCCCGGGAGGCGGCAGTGTGCAAATAGTCTACAAACCAGT
TGACCTGAGCAAGGTGACCTCCAAGTGTGGCTCATTAGGCAACATCCATCATAAACCAGGAGGTGGCCAG
GTGGAAGTAAAATCTGAGAAGCTTGACTTCAAGGACAGAGTCCAGTCGAAGATTGGGTCCCTGGACAATA
TCACCCACGTCCCTGGCGGAGGAAATAAAAAGATTGAAACCCACAAGCTGACCTTCCGCGAGAACGCCAA
AGCCAAGACAGACCACGGGGCGGAGATCGTGTACAAGTCGCCAGTGGTGTCTGGGGACACGTCTCCACGG
CATCTCAGCAATGTCTCCTCCACCGGCAGCATCGACATGGTAGACTCGCCCCAGCTCGCCACGCTAGCTG
ACGAGGTGTCTGCCTCCCTGGCCAAGCAGGGTTTGTGATCAGGCCCCTGGGGCGGTCAATAATTGTGGAG
AGGAGAGAATGAGAGAGTGTGGAAAAAAAAAGAATAATGACCCGGCCCCCGCCCTCTGCCCCCAGCTGCT
CCTCGCAGTTCGGTTAATTGGTTAATCACTTAACCTGCTTTTGTCACTCGGCTTTGGCTCGGGACTTCAA
AATCAGTGATGGGAGTAAGAGCAAATTTCATCTTTCCAAATTGATGGGTGGGCTAGTAATAAAATATTTA
AAAAAAAACATTCAAAAACATGGCCACATCCAACATTTCCTCAGGCAATTCCTTTTGATTCTTTTTTCTT
CCCCCTCCATGTAGAAGAGGGAGAAGGAGAGGCTCTGAAAGCTGCTTCTGGGGGATTTCAAGGGACTGGG
GGTGCCAACCACCTCTGGCCCTGTTGTGGGGGTGTCACAGAGGCAGTGGCAGCAACAAAGGATTTGAAAC
TTGGTGTGTTCGTGGAGCCACAGGCAGACGATGTCAACCTTGTGTGAGTGTGACGGGGGTTGGGGTGGGG
CGGGAGGCCACGGGGGAGGCCGAGGCAGGGGCTGGGCAGAGGGGAGAGGAAGCACAAGAAGTGGGAGTGG
GAGAGGAAGCCACGTGCTGGAGAGTAGACATCCCCCTCCTTGCCGCTGGGAGAGCCAAGGCCTATGCCAC
CTGCAGCGTCTGAGCGGCCGCCTGTCCTTGGTGGCCGGGGGTGGGGGCCTGCTGTGGGTCAGTGTGCCAC
CCTCTGCAGGGCAGCCTGTGGGAGAAGGGACAGCGGGTAAAAAGAGAAGGCAAGCTGGCAGGAGGGTGGC
ACTTCGTGGATGACCTCCTTAGAAAAGACTGACCTTGATGTCTTGAGAGCGCTGGCCTCTTCCTCCCTCC
CTGCAGGGTAGGGGGCCTGAGTTGAGGGGCTTCCCTCTGCTCCACAGAAACCCTGTTTTATTGAGTTCTG
AAGGTTGGAACTGCTGCCATGATTTTGGCCACTTTGCAGACCTGGGACTTTAGGGCTAACCAGTTCTCTT
TGTAAGGACTTGTGCCTCTTGGGAGACGTCCACCCGTTTCCAAGCCTGGGCCACTGGCATCTCTGGAGTG
TGTGGGGGTCTGGGAGGCAGGTCCCGAGCCCCCTGTCCTTCCCACGGCCACTGCAGTCACCCCGTCTGCG
CCGCTGTGCTGTTGTCTGCCGTGAGAGCCCAATCACTGCCTATACCCCTCATCACACGTCACAATGTCCC
GAATTCCCAGCCTCACCACCCCTTCTCAGTAATGACCCTGGTTGGTTGCAGGAGGTACCTACTCCATACT
GAGGGTGAAATTAAGGGAAGGCAAAGTCCAGGCACAAGAGTGGGACCCCAGCCTCTCACTCTCAGTTCCA
CTCATCCAACTGGGACCCTCACCACGAATCTCATGATCTGATTCGGTTCCCTGTCTCCTCCTCCCGTCAC
AGATGTGAGCCAGGGCACTGCTCAGCTGTGACCCTAGGTGTTTCTGCCTTGTTGACATGGAGAGAGCCCT
TTCCCCTGAGAAGGCCTGGCCCCTTCCTGTGCTGAGCCCACAGCAGCAGGCTGGGTGTCTTGGTTGTCAG
TGGTGGCACCAGGATGGAAGGGCAAGGCACCCAGGGCAGGCCCACAGTCCCGCTGTCCCCCACTTGCACC
CTAGCTTGTAGCTGCCAACCTCCCAGACAGCCCAGCCCGCTGCTCAGCTCCACATGCATAGTATCAGCCC
TCCACACCCGACAAAGGGGAACACACCCCCTTGGAAATGGTTCTTTTCCCCCAGTCCCAGCTGGAAGCCA
TGCTGTCTGTTCTGCTGGAGCAGCTGAACATATACATAGATGTTGCCCTGCCCTCCCCATCTGCACCCTG
TTGAGTTGTAGTTGGATTTGTCTGTTTATGCTTGGATTCACCAGAGTGACTATGATAGTGAAAAGAAAAA
AAAAAAAAAAAAAGGACGCATGTATCTTGAAATGCTTGTAAAGAGGTTTCTAACCCACCCTCACGAGGTG
TCTCTCACCCCCACACTGGGACTCGTGTGGCCTGTGTGGTGCCACCCTGCTGGGGCCTCCCAAGTTTTGA
AAGGCTTTCCTCAGCACCTGGGACCCAACAGAGACCAGCTTCTAGCAGCTAAGGAGGCCGTTCAGCTGTG
ACGAAGGCCTGAAGCACAGGATTAGGACTGAAGCGATGATGTCCCCTTCCCTACTTCCCCTTGGGGCTCC
CTGTGTCAGGGCACAGACTAGGTCTTGTGGCTGGTCTGGCTTGCGGCGCGAGGATGGTTCTCTCTGGTCA
TAGCCCGAAGTCTCATGGCAGTCCCAAAGGAGGCTTACAACTCCTGCATCACAAGAAAAAGGAAGCCACT
GCCAGCTGGGGGGATCTGCAGCTCCCAGAAGCTCCGTGAGCCTCAGCCACCCCTCAGACTGGGTTCCTCT
CCAAGCTCGCCCTCTGGAGGGGCAGCGCAGCCTCCCACCAAGGGCCCTGCGACCACAGCAGGGATTGGGA
TGAATTGCCTGTCCTGGATCTGCTCTAGAGGCCCAAGCTGCCTGCCTGAGGAAGGATGACTTGACAAGTC
AGGAGACACTGTTCCCAAAGCCTTGACCAGAGCACCTCAGCCCGCTGACCTTGCACAAACTCCATCTGCT
GCCATGAGAAAAGGGAAGCCGCCTTTGCAAAACATTGCTGCCTAAAGAAACTCAGCAGCCTCAGGCCCAA
TTCTGCCACTTCTGGTTTGGGTACAGTTAAAGGCAACCCTGAGGGACTTGGCAGTAGAAATCCAGGGCCT
CCCCTGGGGCTGGCAGCTTCGTGTGCAGCTAGAGCTTTACCTGAAAGGAAGTCTCTGGGCCCAGAACTCT
CCACCAAGAGCCTCCCTGCCGTTCGCTGAGTCCCAGCAATTCTCCTAAGTTGAAGGGATCTGAGAAGGAG
AAGGAAATGTGGGGTAGATTTGGTGGTGGTTAGAGATATGCCCCCCTCATTACTGCCAACAGTTTCGGCT
GCATTTCTTCACGCACCTCGGTTCCTCTTCCTGAAGTTCTTGTGCCCTGCTCTTCAGCACCATGGGCCTT
CTTATACGGAAGGCTCTGGGATCTCCCCCTTGTGGGGCAGGCTCTTGGGGCCAGCCTAAGATCATGGTTT
AGGGTGATCAGTGCTGGCAGATAAATTGAAAAGGCACGCTGGCTTGTGATCTTAAATGAGGACAATCCCC
CCAGGGCTGGGCACTCCTCCCCTCCCCTCACTTCTCCCACCTGCAGAGCCAGTGTCCTTGGGTGGGCTAG
ATAGGATATACTGTATGCCGGCTCCTTCAAGCTGCTGACTCACTTTATCAATAGTTCCATTTAAATTGAC
TTCAGTGGTGAGACTGTATCCTGTTTGCTATTGCTTGTTGTGCTATGGGGGGAGGGGGGAGGAATGTGTA
AGATAGTTAACATGGGCAAAGGGAGATCTTGGGGTGCAGCACTTAAACTGCCTCGTAACCCTTTTCATGA
TTTCAACCACATTTGCTAGAGGGAGGGAGCAGCCACGGAGTTAGAGGCCCTTGGGGTTTCTCTTTTCCAC
TGACAGGCTTTCCCAGGCAGCTGGCTAGTTCATTCCCTCCCCAGCCAGGTGCAGGCGTAGGAATATGGAC
ATCTGGTTGCTTTGGCCTGCTGCCCTCTTTCAGGGGTCCTAAGCCCACAATCATGCCTCCCTAAGACCTT
GGCATCCTTCCCTCTAAGCCGTTGGCACCTCTGTGCCACCTCTCACACTGGCTCCAGACACACAGCCTGT
GCTTTTGGAGCTGAGATCACTCGCTTCACCCTCCTCATCTTTGTTCTCCAAGTAAAGCCACGAGGTCGGG
GCGAGGGCAGAGGTGATCACCTGCGTGTCCCATCTACAGACCTGCAGCTTCATAAAACTTCTGATTTCTC
TTCAGCTTTGAAAAGGGTTACCCTGGGCACTGGCCTAGAGCCTCACCTCCTAATAGACTTAGCCCCATGA
GTTTGCCATGTTGAGCAGGACTATTTCTGGCACTTGCAAGTCCCATGATTTCTTCGGTAATTCTGAGGGT
GGGGGGAGGGACATGAAATCATCTTAGCTTAGCTTTCTGTCTGTGAATGTCTATATAGTGTATTGTGTGT
TTTAACAAATGATTTACACTGACTGTTGCTGTAAAAGTGAATTTGGAAATAAAGTTATTACTCTGATTAA
A
配列番号４
＞配列番号３の逆相補物
TTTAATCAGAGTAATAACTTTATTTCCAAATTCACTTTTACAGCACAGTCAGTGTAAATCATTTGTTAAA
ACACACAATACACTATATAGACATTCACAGACAGAAAGCTAAGCTAAGATGATTTCATGTCCCTCCCCCC
ACCCTCAGAATTACCGAAGAAATCATGGGACTTGCAAGTGCCAGAAATAGTCCTGCTCAACATGGCAAAC
TCATGGGGCTAAGTCTATTAGGAGGTGAGGCTCTAGGCCAGTGCCCAGGGTAACCCTTTTCAAAGCTGAA
GAGAAATCAGAAGTTTTATGAAGCTGCAGGTCTGTAGATGGGACACGCAGGTGATCACCTCTGCCCTCGC
CCCGACCTCGTGGCTTTACTTGGAGAACAAAGATGAGGAGGGTGAAGCGAGTGATCTCAGCTCCAAAAGC
ACAGGCTGTGTGTCTGGAGCCAGTGTGAGAGGTGGCACAGAGGTGCCAACGGCTTAGAGGGAAGGATGCC
AAGGTCTTAGGGAGGCATGATTGTGGGCTTAGGACCCCTGAAAGAGGGCAGCAGGCCAAAGCAACCAGAT
GTCCATATTCCTACGCCTGCACCTGGCTGGGGAGGGAATGAACTAGCCAGCTGCCTGGGAAAGCCTGTCA
GTGGAAAAGAGAAACCCCAAGGGCCTCTAACTCCGTGGCTGCTCCCTCCCTCTAGCAAATGTGGTTGAAA
TCATGAAAAGGGTTACGAGGCAGTTTAAGTGCTGCACCCCAAGATCTCCCTTTGCCCATGTTAACTATCT
TACACATTCCTCCCCCCTCCCCCCATAGCACAACAAGCAATAGCAAACAGGATACAGTCTCACCACTGAA
GTCAATTTAAATGGAACTATTGATAAAGTGAGTCAGCAGCTTGAAGGAGCCGGCATACAGTATATCCTAT
CTAGCCCACCCAAGGACACTGGCTCTGCAGGTGGGAGAAGTGAGGGGAGGGGAGGAGTGCCCAGCCCTGG
GGGGATTGTCCTCATTTAAGATCACAAGCCAGCGTGCCTTTTCAATTTATCTGCCAGCACTGATCACCCT
AAACCATGATCTTAGGCTGGCCCCAAGAGCCTGCCCCACAAGGGGGAGATCCCAGAGCCTTCCGTATAAG
AAGGCCCATGGTGCTGAAGAGCAGGGCACAAGAACTTCAGGAAGAGGAACCGAGGTGCGTGAAGAAATGC
AGCCGAAACTGTTGGCAGTAATGAGGGGGGCATATCTCTAACCACCACCAAATCTACCCCACATTTCCTT
CTCCTTCTCAGATCCCTTCAACTTAGGAGAATTGCTGGGACTCAGCGAACGGCAGGGAGGCTCTTGGTGG
AGAGTTCTGGGCCCAGAGACTTCCTTTCAGGTAAAGCTCTAGCTGCACACGAAGCTGCCAGCCCCAGGGG
AGGCCCTGGATTTCTACTGCCAAGTCCCTCAGGGTTGCCTTTAACTGTACCCAAACCAGAAGTGGCAGAA
TTGGGCCTGAGGCTGCTGAGTTTCTTTAGGCAGCAATGTTTTGCAAAGGCGGCTTCCCTTTTCTCATGGC
AGCAGATGGAGTTTGTGCAAGGTCAGCGGGCTGAGGTGCTCTGGTCAAGGCTTTGGGAACAGTGTCTCCT
GACTTGTCAAGTCATCCTTCCTCAGGCAGGCAGCTTGGGCCTCTAGAGCAGATCCAGGACAGGCAATTCA
TCCCAATCCCTGCTGTGGTCGCAGGGCCCTTGGTGGGAGGCTGCGCTGCCCCTCCAGAGGGCGAGCTTGG
AGAGGAACCCAGTCTGAGGGGTGGCTGAGGCTCACGGAGCTTCTGGGAGCTGCAGATCCCCCCAGCTGGC
AGTGGCTTCCTTTTTCTTGTGATGCAGGAGTTGTAAGCCTCCTTTGGGACTGCCATGAGACTTCGGGCTA
TGACCAGAGAGAACCATCCTCGCGCCGCAAGCCAGACCAGCCACAAGACCTAGTCTGTGCCCTGACACAG
GGAGCCCCAAGGGGAAGTAGGGAAGGGGACATCATCGCTTCAGTCCTAATCCTGTGCTTCAGGCCTTCGT
CACAGCTGAACGGCCTCCTTAGCTGCTAGAAGCTGGTCTCTGTTGGGTCCCAGGTGCTGAGGAAAGCCTT
TCAAAACTTGGGAGGCCCCAGCAGGGTGGCACCACACAGGCCACACGAGTCCCAGTGTGGGGGTGAGAGA
CACCTCGTGAGGGTGGGTTAGAAACCTCTTTACAAGCATTTCAAGATACATGCGTCCTTTTTTTTTTTTT
TTTTTCTTTTCACTATCATAGTCACTCTGGTGAATCCAAGCATAAACAGACAAATCCAACTACAACTCAA
CAGGGTGCAGATGGGGAGGGCAGGGCAACATCTATGTATATGTTCAGCTGCTCCAGCAGAACAGACAGCA
TGGCTTCCAGCTGGGACTGGGGGAAAAGAACCATTTCCAAGGGGGTGTGTTCCCCTTTGTCGGGTGTGGA
GGGCTGATACTATGCATGTGGAGCTGAGCAGCGGGCTGGGCTGTCTGGGAGGTTGGCAGCTACAAGCTAG
GGTGCAAGTGGGGGACAGCGGGACTGTGGGCCTGCCCTGGGTGCCTTGCCCTTCCATCCTGGTGCCACCA
CTGACAACCAAGACACCCAGCCTGCTGCTGTGGGCTCAGCACAGGAAGGGGCCAGGCCTTCTCAGGGGAA
AGGGCTCTCTCCATGTCAACAAGGCAGAAACACCTAGGGTCACAGCTGAGCAGTGCCCTGGCTCACATCT
GTGACGGGAGGAGGAGACAGGGAACCGAATCAGATCATGAGATTCGTGGTGAGGGTCCCAGTTGGATGAG
TGGAACTGAGAGTGAGAGGCTGGGGTCCCACTCTTGTGCCTGGACTTTGCCTTCCCTTAATTTCACCCTC
AGTATGGAGTAGGTACCTCCTGCAACCAACCAGGGTCATTACTGAGAAGGGGTGGTGAGGCTGGGAATTC
GGGACATTGTGACGTGTGATGAGGGGTATAGGCAGTGATTGGGCTCTCACGGCAGACAACAGCACAGCGG
CGCAGACGGGGTGACTGCAGTGGCCGTGGGAAGGACAGGGGGCTCGGGACCTGCCTCCCAGACCCCCACA
CACTCCAGAGATGCCAGTGGCCCAGGCTTGGAAACGGGTGGACGTCTCCCAAGAGGCACAAGTCCTTACA
AAGAGAACTGGTTAGCCCTAAAGTCCCAGGTCTGCAAAGTGGCCAAAATCATGGCAGCAGTTCCAACCTT
CAGAACTCAATAAAACAGGGTTTCTGTGGAGCAGAGGGAAGCCCCTCAACTCAGGCCCCCTACCCTGCAG
GGAGGGAGGAAGAGGCCAGCGCTCTCAAGACATCAAGGTCAGTCTTTTCTAAGGAGGTCATCCACGAAGT
GCCACCCTCCTGCCAGCTTGCCTTCTCTTTTTACCCGCTGTCCCTTCTCCCACAGGCTGCCCTGCAGAGG
GTGGCACACTGACCCACAGCAGGCCCCCACCCCCGGCCACCAAGGACAGGCGGCCGCTCAGACGCTGCAG
GTGGCATAGGCCTTGGCTCTCCCAGCGGCAAGGAGGGGGATGTCTACTCTCCAGCACGTGGCTTCCTCTC
CCACTCCCACTTCTTGTGCTTCCTCTCCCCTCTGCCCAGCCCCTGCCTCGGCCTCCCCCGTGGCCTCCCG
CCCCACCCCAACCCCCGTCACACTCACACAAGGTTGACATCGTCTGCCTGTGGCTCCACGAACACACCAA
GTTTCAAATCCTTTGTTGCTGCCACTGCCTCTGTGACACCCCCACAACAGGGCCAGAGGTGGTTGGCACC
CCCAGTCCCTTGAAATCCCCCAGAAGCAGCTTTCAGAGCCTCTCCTTCTCCCTCTTCTACATGGAGGGGG
AAGAAAAAAGAATCAAAAGGAATTGCCTGAGGAAATGTTGGATGTGGCCATGTTTTTGAATGTTTTTTTT
TAAATATTTTATTACTAGCCCACCCATCAATTTGGAAAGATGAAATTTGCTCTTACTCCCATCACTGATT
TTGAAGTCCCGAGCCAAAGCCGAGTGACAAAAGCAGGTTAAGTGATTAACCAATTAACCGAACTGCGAGG
AGCAGCTGGGGGCAGAGGGCGGGGGCCGGGTCATTATTCTTTTTTTTTCCACACTCTCTCATTCTCTCCT
CTCCACAATTATTGACCGCCCCAGGGGCCTGATCACAAACCCTGCTTGGCCAGGGAGGCAGACACCTCGT
CAGCTAGCGTGGCGAGCTGGGGCGAGTCTACCATGTCGATGCTGCCGGTGGAGGAGACATTGCTGAGATG
CCGTGGAGACGTGTCCCCAGACACCACTGGCGACTTGTACACGATCTCCGCCCCGTGGTCTGTCTTGGCT
TTGGCGTTCTCGCGGAAGGTCAGCTTGTGGGTTTCAATCTTTTTATTTCCTCCGCCAGGGACGTGGGTGA
TATTGTCCAGGGACCCAATCTTCGACTGGACTCTGTCCTTGAAGTCAAGCTTCTCAGATTTTACTTCCAC
CTGGCCACCTCCTGGTTTATGATGGATGTTGCCTAATGAGCCACACTTGGAGGTCACCTTGCTCAGGTCA
ACTGGTTTGTAGACTATTTGCACACTGCCGCCTCCCGGGACGTGTTTGATATTATCCTTTGAGCCACACT
TGGACTGGACGTTGCTAAGATCCAGCTTCTTATTAATTATCTGCACCTTCCCGCCTCCCGGCTGGTGCTT
CAGGTTCTCAGTGGAGCCGATCTTGGACTTGACATTCTTCAGGTCTGGCATGGGCACGGGGGCTGTCTGC
AGGCGGCTCTTGGCGGAAGACGGCGACTTGGGTGGAGTACGGACCACTGCCACCTTCTTGGGCTCCCGGG
TGGGTGGGGTTGGAAGGGACGGGGTGCGGGAGCGGCTGCCGGGAGTGCCTGGGGAGCCGGGGCTGCTGTA
GCCGCTGCGATCCCCTGATTTTGGAGGTTCACCAGAGCTGGGTGGTGTCTTTGGAGCGGGCGGGGTTTTT
GCTGGAATCCTGGTGGCGTTGGCCTGGCCCTTCTGGCCTGGAGGGGCTGCTCCCCGCGGTGTGGCGATCT
TCGTTTTACCATCAGCCCCCTTGGCTTTTTTGTCATCGCTTCCAGTCCCGTCTTTGCTTTTACTGACCAT
GCGAGCTTGGGTCACGTGACCAGCAGCTTCGTCTTCCAGGCTGGGGGTGTCTCCAATGCCTGCTTCTTCA
GCTGTGGTTCCTTCTGGGATCTCCGTGTGGGGCTGCGCGGCAGCCTGCTTGCCGGGAGCTCCCTCATCCA
CTAAGGGTGCTGTCACATCTTCCGCTGTTGGAGTGCTCTTAGCATCAGAGGTTTCAGAGCCCGGTTCCTC
AGATCCGTCCTCAGTGGGGGTCTGCAGGGGAGATTCTTTCAGGCCAGCGTCCGTGTCACCCTCTTGGTCT
TGGTGCATGGTGTAGCCCCCCTGATCTTTCCTGTCCCCCAACCCGTACGTCCCAGCGTGATCTTCCATCA
CTTCGAACTCCTGGCGGGGCTCAGCCATCCTGGTTCAAAGTTCACCTGATAGTCGACAGAGGCGAGGACG
GGAGAGGACAGCGGAGGAGGAGAAGGTGGCTGTGGTGGCGGCGGCAGAAGGTGGGCGGTGGCAGCGGCGC
TGCTGTTGGTGCCGGAGCTGGTGGGTGGCGGTGACTGCGAGGGCGCGCGCCGGCGAAGAGGGCGCGTTCC
TGAGGCCGGCGGGCGGCGCAGGCGCGAGCAGCGGGAACGCGAGCCTCCCCAGGGGAGGGGGCGGGCAGCG
CGGCCTCCGCGGGAGCCTTCTCCTCCGGCCACTAGTGGGCGCGCGCGAGCGCCCTGCCGCTCGGCCGTCC
配列番号５
＞ＮＭ＿００１０３８６０９．２ ハツカネズミ微小管関連タンパク質タウ（Ｍａｐｔ）、転写物変異体１、ｍＲＮＡ
CCGCCGGCCTCCAGAACGCGCTTTCTCGGCCGCGCGCGCTCTCAGTCTCCGCCACCCACCAGCTCCAGCA
CCAGCAGCAGCGCCGCCGCCACCGCCCACCTTCTGCCGCCGCCGCCACAACCACCTTCTCCTCCGCTGTC
CTCTTCTGTCCTCGCCTTCTGTCGATTATCAGGCTTTGAACCAGTATGGCTGACCCTCGCCAGGAGTTTG
ACACAATGGAAGACCATGCTGGAGATTACACTCTGCTCCAAGACCAAGAAGGAGACATGGACCATGGCTT
AAAAGAGTCTCCCCCACAGCCCCCCGCCGATGATGGAGCGGAGGAACCAGGGTCGGAGACCTCCGATGCT
AAGAGCACTCCAACTGCTGAAGACGTGACTGCGCCCCTAGTGGATGAGAGAGCTCCCGACAAGCAGGCCG
CTGCCCAGCCCCACACGGAGATCCCAGAAGGAATTACAGCCGAAGAAGCAGGCATCGGAGACACCCCGAA
CCAGGAGGACCAAGCCGCTGGGCATGTGACTCAAGCTCGTGTGGCCAGCAAAGACAGGACAGGAAATGAC
GAGAAGAAAGCCAAGGGCGCTGATGGCAAAACCGGGGCGAAGATCGCCACACCTCGGGGAGCAGCCTCTC
CGGCCCAGAAGGGCACGTCCAACGCCACCAGGATCCCGGCCAAGACCACGCCCAGCCCTAAGACTCCTCC
AGGGTCAGGTGAACCACCAAAATCCGGAGAACGAAGCGGCTACAGCAGCCCCGGCTCTCCCGGAACGCCT
GGCAGTCGCTCGCGCACCCCATCCCTACCAACACCGCCCACCCGGGAGCCCAAGAAGGTGGCAGTGGTCC
GCACTCCCCCTAAGTCACCATCAGCTAGTAAGAGCCGCCTGCAGACTGCCCCTGTGCCCATGCCAGACCT
AAAGAATGTCAGGTCGAAGATTGGCTCTACTGAGAACCTGAAGCACCAGCCAGGAGGTGGCAAGGTGCAG
ATAATTAATAAGAAGCTGGATCTTAGCAACGTCCAGTCCAAGTGTGGCTCGAAGGATAATATCAAACACG
TCCCGGGTGGAGGCAGTGTGCAAATAGTCTACAAGCCGGTGGACCTGAGCAAAGTGACCTCCAAGTGTGG
CTCGTTAGGGAACATCCATCACAAGCCAGGAGGTGGCCAGGTGGAAGTAAAATCAGAGAAGCTGGACTTC
AAGGACAGAGTCCAGTCGAAGATTGGCTCCTTGGATAATATCACCCACGTCCCTGGAGGAGGGAATAAGA
AGATTGAAACCCACAAGCTGACCTTCAGGGAGAATGCCAAAGCCAAGACAGACCATGGAGCAGAAATTGT
GTATAAGTCACCCGTGGTGTCTGGGGACACATCTCCACGGCACCTCAGCAATGTGTCTTCCACGGGCAGC
ATCGACATGGTGGACTCACCACAGCTTGCCACACTAGCCGATGAAGTGTCTGCTTCCTTGGCCAAGCAGG
GTTTGTGATCAGGCTCCCAGGGCAGTCAATAATCATGGAGAGAAGAGAGAGTGAGAGTGTGGAAAAAAAA
AAAAAAAAAGAATGATCTGGCCCCTTGCCCTCTGCCCTCCCCGCTGCTCCTCATAGACAGGCTGACCTGC
TTGTCACCTAACCTGCTTTTGTGGCTCGGATTTGGCTCGGGACTTCAAAATCAGTGATGGGAAAAGTACA
TTTCATCTTTCCAAATTGATTTGTGGGCTAAAAATAAAACATATTTAAGGGAAAAAAAAACATGTAAAAA
CATGGCCAAAAAATTTCCTTGGGCAATTGCTAATTGATTTCCCCCCCCTGACCCCGCCCTCCCTCTCTGA
GTATTAGAGGGTGAAGAAGGCTCTGGAGGCTGCTTCTGGGGAGTGGCTGAGGGACTAGGGCAGCTAATTG
CCCATAGCCCCATCCTAGGGGCTTCAGGGACAGTGGCAGCAATGAGAGATTTGAGACTTGGTGTGTTCGT
GGGGCCGTAGGCAGGTGCTGTTAACTTGTGTGGGTGTGAGTGGGGACTGAAACAGCGACAGCGAAGGCTG
AGAGATGGATGGGTGGACTGAGTTAGAGGACAGAGGTGAGGAAGGCAGGTTGGGAGAGGGGACACTGGCT
CCTTGCCAAGTAGCTTGGGGAGGACAGGGTGCTGCAGCTGCCTGCAGCAGTCCTAGCTAGCTCAGATGCC
TGCTTGATAAAGCACTGTGGGGGTAACGTGGGTGTGTGTGCCCCTTCTGCAGGGCAGCCTGTGGGAGAAG
GGGTATTGGGCAGAAGGAAGGTAAGCCAGCAGGTGGTACCTTGTAGATTGGTTCTCTTGAAGGCTGCTCT
TGACATCCCAGGGCACTGGCTTCTTCCTCCCTCCCCGCAAGGTGGGAGGTCCTGAGCGAGGTGTTTCCCT
TCGCTCCCACAGGAAAAGCTGCTTTACTGAGTTCTCAAGTTTGGAACTACAGCCATGATTTGGCCACCAT
TACAGACCTGGGACTTTAGGGCTAACCAGATCTTTGTAAGGACTTGTGCCTCTTGGGGGACCTCTGCCTG
TTCTCATGCTTGGCCCTCTGGCACTTCTGTAGTGGGAGGGATGGGGGGTGGTATTCTGGGATGTGGGTCC
CAGGCCTCCCATCCCTCACACAGCCACTGTATCCCCTCTCTCTGTCCTATCATGCCCACGTCTGCCACGA
GAGCTAGTCACTGCCGTCCGTACATCACGTCTCACTGTCCTGAGTGCCATGCCTCTCCCAGCCCCCATCC
CTGGCCCCTGGGTAGATATGGGCAATATCTGCTCTACACTAGGGGTTGGAGTCCAGGGAAGGCAAAGATT
TGGGCCTCAGTCTCTAGTCCTACGTTCCACGAATCCAACCAGTGTGCCTCCCACAAGGAACCTTACGACC
TTGTTTGGTTCACTCCATTACTTCCTATCCTGGATGGGAACTGGTGTGTGCCTGCCTGGGGATGACCTTG
GACCTCTGCCTTTTCTTTTATCTAAGTGGATGCCTCCTAGGCCTGACTCCTTGTGTTGAGCTGGAGGCAG
CCAAGTCAGGTGCCAATGTCTTGGCATCAGTAAGAACAGTCAAGAGTCCCAGGGCAGGGCCACACTTCTC
CCATCTTTCGCTTCCACCCCAGCTTGTGATCGCTAGCCTCCCAGAGCTCAGCTGCCATTAAGTCCCCATG
CACGTAATCAGTCTCCACACCCCAGTTTGGGGAACATACCCCCTTGATTGAAGTGTTTTTTTCCTCCGGT
CCCATGGAAACCATGCTGCCTGCCCTGCTGGAGCAGACGGCCACCTCCATAGATGCAGCCCTTTCTTTCC
CGTCTTCGCCCTGTTACGTTGTAGTTGGATTTGTCTGTTTGTCTGGGTTCACCAGAGTGACTATGATAGT
GAAAAGAAAAGAAAGAAAAAGAAAAAAAAAAAAAAAAAGAAAAAGAAAAAGGAAAAAAAAAAGGACGCAT
GTATCTTGAAATATTTGTCAAAAGGTTCTAGCCCACCACGTGATGGAGAGTCTGGATATCTCCTTCCTGA
CGTGGCTCCAGGCCAGTGCAGTGCTAACCTGCTGGGACATCCCATGTTTTGAAGGGTTTCTTCTGCATCT
GGGACCTCACAGACACTGGATTGTGACATTGGAGGTCTGTGACATTGGAGGTCAATGGCATTGGCCAAGG
CCTGAAGCACAGGACCAGCTAGAGGCAGCAGGCTCCGAGTGCCAGGGAGAGCTTGTGGCTGGCCTGTTTT
GTATGAAGATGGTCCTTTCTGATCACGACTTCAAATCCCACAGTAGCCCTGAAAGACATCTAAGAACTCC
TGCATCACAAGAGAAAAGGACACCAGTACCAGCAGGGAGAGCTGTGACCCTAGAAATTCCATGACGACCC
AGTAGATATCCTTGGGCCCTCTCCAAGCCTGGGCCTTTTCACCATAGAGTTTGGGATGGACTGTCCCACT
GATGAAGGGGACATCTTAGGAGACTCCCTTGGTTTCCAAGCTGTCAGCCCCCTGAACTTGCACGACCTCC
TACAGCTTCAGGGACTAGGCCTTTGAAGATTAGGAACCTCAGGCCCACATCAGCCACTTCTGATGTACAG
TTAAGGACAATGTGGAGACTAGGAGGAAGCAGCCAGCCTTTCCCATTAAAGAACTCTTGAGTGCCCAGGG
CTACCTATTGTGAGCTTCCCCACTGATAAGACTTTAGCTGTCCATAGAAGTGAGTCCGAGGGAGGAAAAG
TGTGGTTTCTTCATCATGGTTACCTGTCGTGGTTCTCTCTCTTACACCCATTTACCCATCCCGCAGTTCC
TGTCCTTGAATGGGGGGTGGGGTGCTCTGCCTATCTCTTGTGGGGTGATCAGCCCAAAAATCATGATTTG
GAGTGATCTGATCAGTGCTGATAGGCAGTTTACAAAGGGATTCTGGCTTGTGACTTCAGTGAGGACAATC
CCCCAGGGCCCTTTCTTTCCATGCCTCTCCAACTCAGAGCCAATGTCTTTGGGTGGGCTAGATAGATAGG
GCATACAATTGGCCTGGTTCCTCCAAGCTCTTAATTCACTTTATCAATAGTTCCATTTAAATTGACTTCA
ATGATAAGAGTGTATCCCATTTGAGATTGCTTGCGTTGTGGGGGAGGGGGAGGAGGAACACATTAAGATA
ATTCACATGGGCAAAGGGAGGTCTTGGAGTGTAGCCGTTAAGCCATCTTGTAACCCCATTCATGATTTTG
ACCACCTGCTAGAGAGAAGAGGTGCCAAGAGACTAGAACTTGGAGGCTTGGCTGTCCCACTAATAGGCTT
TCGCAAGGCAGAGGTAGCCAGCTAGGTCCCTGCCTTCCCAGCCAGGTACAGCTCTCAGGTTTGTGGAGGT
AATCTGTGAACTTCTCTTCCTGCTGCCTTCTTGTGATGTCCAGAGCCCACAGTCAAATACCTCCTAAGAA
CCCTGGCTTCCTTCCCTCTAATCCACTGGCACATGACTATCACCTCTGGATTGACCTCAGATCCATAGCC
TACACACTGCTAGCAGTGGCCAAGATCACTTCCTTTATCTCCATCTGTTCTGTTCTCCAGGAAAGTAAGT
GGGGATGAGGGTGGAGGTGGTAATCAACTGTAGATCTGTGGCTTTATGAGCCTTCAGACTTCTCTCTGGC
TTCTTCTGGAAGGGTTACTATTGGCAGTATTGCAATCTCACCCTCCTGATGAACTGTAGCCTGTGCCGTT
ACTGTGCTGGGCATGATCTCCAGTGCTTGCAAGTCCCATGATTTCTTTGGTGATTTTGAGGGTGGGGGGA
GGGACACAAATCAGCTTAGCTTAGCTTCCTGTCTGTGAATGTCCATATAGTGTATTGTGTTTTAACAAAT
GATCTACACTGACTGTTGCTGTAAAAGTGAATTTGGAAATAAAGTTATTACTCTGAATAAAAAAAAAAAA
AAAAAA
配列番号６
＞配列番号５の逆相補物
TTTTTTTTTTTTTTTTTTATTCAGAGTAATAACTTTATTTCCAAATTCACTTTTACAGCAACAGTCAGTGTAGATC
ATTTGTTAAAACACAATACACTATATGGACATTCACAGACAGGAAGCTAAGCTAAGCTGATTTGTGTCCC
TCCCCCCACCCTCAAAATCACCAAAGAAATCATGGGACTTGCAAGCACTGGAGATCATGCCCAGCACAGT
AACGGCACAGGCTACAGTTCATCAGGAGGGTGAGATTGCAATACTGCCAATAGTAACCCTTCCAGAAGAA
GCCAGAGAGAAGTCTGAAGGCTCATAAAGCCACAGATCTACAGTTGATTACCACCTCCACCCTCATCCCC
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GGCTATGGATCTGAGGTCAATCCAGAGGTGATAGTCATGTGCCAGTGGATTAGAGGGAAGGAAGCCAGGG
TTCTTAGGAGGTATTTGACTGTGGGCTCTGGACATCACAAGAAGGCAGCAGGAAGAGAAGTTCACAGATT
ACCTCCACAAACCTGAGAGCTGTACCTGGCTGGGAAGGCAGGGACCTAGCTGGCTACCTCTGCCTTGCGA
AAGCCTATTAGTGGGACAGCCAAGCCTCCAAGTTCTAGTCTCTTGGCACCTCTTCTCTCTAGCAGGTGGT
CAAAATCATGAATGGGGTTACAAGATGGCTTAACGGCTACACTCCAAGACCTCCCTTTGCCCATGTGAAT
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CCTATCTATCTAGCCCACCCAAAGACATTGGCTCTGAGTTGGAGAGGCATGGAAAGAAAGGGCCCTGGGG
GATTGTCCTCACTGAAGTCACAAGCCAGAATCCCTTTGTAAACTGCCTATCAGCACTGATCAGATCACTC
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GGAACTGCGGGATGGGTAAATGGGTGTAAGAGAGAGAACCACGACAGGTAACCATGATGAAGAAACCACA
CTTTTCCTCCCTCGGACTCACTTCTATGGACAGCTAAAGTCTTATCAGTGGGGAAGCTCACAATAGGTAG
CCCTGGGCACTCAAGAGTTCTTTAATGGGAAAGGCTGGCTGCTTCCTCCTAGTCTCCACATTGTCCTTAA
CTGTACATCAGAAGTGGCTGATGTGGGCCTGAGGTTCCTAATCTTCAAAGGCCTAGTCCCTGAAGCTGTA
GGAGGTCGTGCAAGTTCAGGGGGCTGACAGCTTGGAAACCAAGGGAGTCTCCTAAGATGTCCCCTTCATC
AGTGGGACAGTCCATCCCAAACTCTATGGTGAAAAGGCCCAGGCTTGGAGAGGGCCCAAGGATATCTACT
GGGTCGTCATGGAATTTCTAGGGTCACAGCTCTCCCTGCTGGTACTGGTGTCCTTTTCTCTTGTGATGCA
GGAGTTCTTAGATGTCTTTCAGGGCTACTGTGGGATTTGAAGTCGTGATCAGAAAGGACCATCTTCATAC
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CCTTGGCCAATGCCATTGACCTCCAATGTCACAGACCTCCAATGTCACAATCCAGTGTCTGTGAGGTCCC
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TCAGGAAGGAGATATCCAGACTCTCCATCACGTGGTGGGCTAGAACCTTTTGACAAATATTTCAAGATAC
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GGAAAGAAAGGGCTGCATCTATGGAGGTGGCCGTCTGCTCCAGCAGGGCAGGCAGCATGGTTTCCATGGG
ACCGGAGGAAAAAAACACTTCAATCAAGGGGGTATGTTCCCCAAACTGGGGTGTGGAGACTGATTACGTG
CATGGGGACTTAATGGCAGCTGAGCTCTGGGAGGCTAGCGATCACAAGCTGGGGTGGAAGCGAAAGATGG
GAGAAGTGTGGCCCTGCCCTGGGACTCTTGACTGTTCTTACTGATGCCAAGACATTGGCACCTGACTTGG
CTGCCTCCAGCTCAACACAAGGAGTCAGGCCTAGGAGGCATCCACTTAGATAAAAGAAAAGGCAGAGGTC
CAAGGTCATCCCCAGGCAGGCACACACCAGTTCCCATCCAGGATAGGAAGTAATGGAGTGAACCAAACAA
GGTCGTAAGGTTCCTTGTGGGAGGCACACTGGTTGGATTCGTGGAACGTAGGACTAGAGACTGAGGCCCA
AATCTTTGCCTTCCCTGGACTCCAACCCCTAGTGTAGAGCAGATATTGCCCATATCTACCCAGGGGCCAG
GGATGGGGGCTGGGAGAGGCATGGCACTCAGGACAGTGAGACGTGATGTACGGACGGCAGTGACTAGCTC
TCGTGGCAGACGTGGGCATGATAGGACAGAGAGAGGGGATACAGTGGCTGTGTGAGGGATGGGAGGCCTG
GGACCCACATCCCAGAATACCACCCCCCATCCCTCCCACTACAGAAGTGCCAGAGGGCCAAGCATGAGAA
CAGGCAGAGGTCCCCCAAGAGGCACAAGTCCTTACAAAGATCTGGTTAGCCCTAAAGTCCCAGGTCTGTA
ATGGTGGCCAAATCATGGCTGTAGTTCCAAACTTGAGAACTCAGTAAAGCAGCTTTTCCTGTGGGAGCGA
AGGGAAACACCTCGCTCAGGACCTCCCACCTTGCGGGGAGGGAGGAAGAAGCCAGTGCCCTGGGATGTCA
AGAGCAGCCTTCAAGAGAACCAATCTACAAGGTACCACCTGCTGGCTTACCTTCCTTCTGCCCAATACCC
CTTCTCCCACAGGCTGCCCTGCAGAAGGGGCACACACACCCACGTTACCCCCACAGTGCTTTATCAAGCA
GGCATCTGAGCTAGCTAGGACTGCTGCAGGCAGCTGCAGCACCCTGTCCTCCCCAAGCTACTTGGCAAGG
AGCCAGTGTCCCCTCTCCCAACCTGCCTTCCTCACCTCTGTCCTCTAACTCAGTCCACCCATCCATCTCT
CAGCCTTCGCTGTCGCTGTTTCAGTCCCCACTCACACCCACACAAGTTAACAGCACCTGCCTACGGCCCC
ACGAACACACCAAGTCTCAAATCTCTCATTGCTGCCACTGTCCCTGAAGCCCCTAGGATGGGGCTATGGG
CAATTAGCTGCCCTAGTCCCTCAGCCACTCCCCAGAAGCAGCCTCCAGAGCCTTCTTCACCCTCTAATAC
TCAGAGAGGGAGGGCGGGGTCAGGGGGGGGAAATCAATTAGCAATTGCCCAAGGAAATTTTTTGGCCATG
TTTTTACATGTTTTTTTTTCCCTTAAATATGTTTTATTTTTAGCCCACAAATCAATTTGGAAAGATGAAA
TGTACTTTTCCCATCACTGATTTTGAAGTCCCGAGCCAAATCCGAGCCACAAAAGCAGGTTAGGTGACAA
GCAGGTCAGCCTGTCTATGAGGAGCAGCGGGGAGGGCAGAGGGCAAGGGGCCAGATCATTCTTTTTTTTT
TTTTTTTTCCACACTCTCACTCTCTCTTCTCTCCATGATTATTGACTGCCCTGGGAGCCTGATCACAAAC
CCTGCTTGGCCAAGGAAGCAGACACTTCATCGGCTAGTGTGGCAAGCTGTGGTGAGTCCACCATGTCGAT
GCTGCCCGTGGAAGACACATTGCTGAGGTGCCGTGGAGATGTGTCCCCAGACACCACGGGTGACTTATAC
ACAATTTCTGCTCCATGGTCTGTCTTGGCTTTGGCATTCTCCCTGAAGGTCAGCTTGTGGGTTTCAATCT
TCTTATTCCCTCCTCCAGGGACGTGGGTGATATTATCCAAGGAGCCAATCTTCGACTGGACTCTGTCCTT
GAAGTCCAGCTTCTCTGATTTTACTTCCACCTGGCCACCTCCTGGCTTGTGATGGATGTTCCCTAACGAG
CCACACTTGGAGGTCACTTTGCTCAGGTCCACCGGCTTGTAGACTATTTGCACACTGCCTCCACCCGGGA
CGTGTTTGATATTATCCTTCGAGCCACACTTGGACTGGACGTTGCTAAGATCCAGCTTCTTATTAATTAT
CTGCACCTTGCCACCTCCTGGCTGGTGCTTCAGGTTCTCAGTAGAGCCAATCTTCGACCTGACATTCTTT
AGGTCTGGCATGGGCACAGGGGCAGTCTGCAGGCGGCTCTTACTAGCTGATGGTGACTTAGGGGGAGTGC
GGACCACTGCCACCTTCTTGGGCTCCCGGGTGGGCGGTGTTGGTAGGGATGGGGTGCGCGAGCGACTGCC
AGGCGTTCCGGGAGAGCCGGGGCTGCTGTAGCCGCTTCGTTCTCCGGATTTTGGTGGTTCACCTGACCCT
GGAGGAGTCTTAGGGCTGGGCGTGGTCTTGGCCGGGATCCTGGTGGCGTTGGACGTGCCCTTCTGGGCCG
GAGAGGCTGCTCCCCGAGGTGTGGCGATCTTCGCCCCGGTTTTGCCATCAGCGCCCTTGGCTTTCTTCTC
GTCATTTCCTGTCCTGTCTTTGCTGGCCACACGAGCTTGAGTCACATGCCCAGCGGCTTGGTCCTCCTGG
TTCGGGGTGTCTCCGATGCCTGCTTCTTCGGCTGTAATTCCTTCTGGGATCTCCGTGTGGGGCTGGGCAG
CGGCCTGCTTGTCGGGAGCTCTCTCATCCACTAGGGGCGCAGTCACGTCTTCAGCAGTTGGAGTGCTCTT
AGCATCGGAGGTCTCCGACCCTGGTTCCTCCGCTCCATCATCGGCGGGGGGCTGTGGGGGAGACTCTTTT
AAGCCATGGTCCATGTCTCCTTCTTGGTCTTGGAGCAGAGTGTAATCTCCAGCATGGTCTTCCATTGTGT
CAAACTCCTGGCGAGGGTCAGCCATACTGGTTCAAAGCCTGATAATCGACAGAAGGCGAGGACAGAAGAG
GACAGCGGAGGAGAAGGTGGTTGTGGCGGCGGCGGCAGAAGGTGGGCGGTGGCGGCGGCGCTGCTGCTGG
TGCTGGAGCTGGTGGGTGGCGGAGACTGAGAGCGCGCGCGGCCGAGAAAGCGCGTTCTGGAGGCCGGCGG
配列番号７
＞予想されるＸＭ＿００５５８４５４０．１：カニクイザル微小管関連タンパク質タウ（ＭＡＰＴ）、転写物変異体Ｘ１３、ｍＲＮＡ
GCCGAGCGGCAGGGCGCTCGCGCGCGCCCACTGGTGGCCGGAGGAGAAGGCTCCCGCGGAGGCCGGGCTG
CCCGCCCCCTCCCCTGGGGAGGCTCGCGCTCCCGCTGCTCGCGCCTGCGCCGCCTGCCGGCCTCGGGAAC
GCGCCCTCTTCCCCGGCGCGCGCCCTCGCAGTCACCGCCACCCACCAGCTCCGGCACCAACAGCAGCGCC
GCTGCCACCGCCCACCTTCTGCCGCCGCCACCACAGCCACCTTCTCCTCCTCCGCTGTCCTCTCCCGTCC
TCGCCTCTGTCGACTATCAGGCGAGCCTTGAACCAGGATGGCTGAGCCCCGCCAGGAGTTCGATGTGATG
GAAGATCACGCTGGGACGTACGGGTTGGGGGACAGGAAAGATCAAGAGGGCTACACCATGCTCCAAGACC
AAGAGGGTGACACGGACGCTGGCCTGAAAGAATCTCCCCTGCAGACCCCCGCTGAGGATGGATCTGAGGA
ACTGGGCTCTGAAACCTCTGATGCTAAGAGCACTCCAACGGCGGAAGATGTGACAGCGCCCTTAGTGGAT
GAGAGAGCTCCCGGCGAGCAGGCTGCCGCCCAGCCCCACATGGAGATCCCAGAAGGAACCACAGCTGAGG
AAGCAGGCATCGGAGACACCCCCAGCCTGGAAGACGAAGCTGCTGGTCACGTGACCCAAGCTCGCATGGT
CAGTAAAAGCAAAGACGGGACTGGAAGCGATGACAAAAAAGCCAAGGGGGCTGATGGGAAAACGAAGATC
GCCACACCCCGGGGAGCGGCCCCTCCAGGCCAGAAGGGCCAAGCCAACGCCACCAGGATTCCAGCAAAAA
CCCCGCCCGCCCCAAAGACACCACCCAGCTCTGGTGAACCTCCAAAATCAGGGGATCGCAGTGGCTACAG
CAGCCCCGGCTCCCCGGGCACTCCCGGCAGCCGCTCCCGCACCCCGTCCCTTCCAACCCCTCCAGCCCGG
GAGCCCAAGAAGGTGGCGGTGGTCCGTACTCCACCTAAGTCGCCGTCTTCCGCCAAGAGCCGCCTGCAGA
CAGCCCCCGTGCCCATGCCAGACCTGAAGAACGTCAAGTCCAAGATCGGCTCCACCGAGAACCTGAAGCA
CCAGCCGGGAGGCGGGAAGGTGCAGATAATTAATAAGAAGCTGGATCTTAGCAACGTCCAGTCCAAGTGT
GGCTCAAAGGATAATATCAAACACGTCCCGGGAGGCGGCAGTGTGCAAATAGTCTACAAACCAGTTGACC
TGAGCAAGGTGACCTCCAAGTGTGGCTCATTAGGCAACATCCATCATAAACCAGGAGGTGGCCAGGTGGA
AGTAAAATCTGAGAAGCTGGACTTCAAGGACAGAGTGCAGTCGAAGATCGGGTCCCTGGACAATATCACC
CATGTCCCTGGCGGAGGAAATAAAAAGATTGAAACCCACAAGCTGACCTTCCGCGAGAACGCCAAAGCCA
AGACAGACCACGGGGCGGAAATCGTGTACAAGTCGCCGGTGGTGTCTGGGGACACGTCTCCACGGCACCT
CAGCAATGTCTCCTCCACCGGCAGCATCGACATGGTAGACTCGCCCCAGCTCGCCACGCTAGCCGACGAG
GTGTCTGCCTCCCTGGCCAAGCAGGGTTTGTGATCAGGCCCCCGGGGCGGTCAATAATCGTGGAGAGAAG
AGAGAGTGAGAGTGTGGAAAAAAAAAGAATAATGACCCGGCCCCGCCCTCTGCCCCCAGCTGCTCCTCGC
AGTTCGGTTAATCGGTTCATCACTTAACCGGCTTTTATCGCTCGGCTTTGGCTCGGGACTTCAAAATCAG
TGATGGGAATAAGAGCAAATTGCATCTTTCCAAATTGATCGGTGGGCTAATAATAAAATATTTTTTAAAA
AACATTCAAAAACATGGCCACACCCAACATTTCCTCGGGCAATTCCTTTTGATTCTTTTTTTTTCCCCCT
CCATGTAGAAGAGGGAGAAGGAGAGGCTGTGAAAGCTGCTTCGGGGGGATTTCAAGAGACTGGGGGTGCC
CACCGCCTCTGGCCCTGTCGTGGGGGTGTCACAGAGGCAGCGGCAGCAACAAAGGATTTGAAACTTGGTG
TGTTCGTGGAGCCACAGGCAGACGATGTCAACCTTGTGTGAGTGTGACGGGTGGGGGTGGGGCGGGAGGC
CATGGGGGAGGCCAAGGCAGGGGCTGGGCAGAGGGGAGAGGAAGGACGAGAAGGGGGAGTGGGAGAGGAA
GCCACATGCTGGAGAGGAGATGCCCTCCTCCGCGCCACTGGGAGGGCCAAGGCCTCCGCCACCTGCAGTG
TCTCAGACTGAGCGGCTGCCTGTCCTTGGTGGCCAGGGTCTGCTGCGAGTTGATGTGCCACCCTCTGCAG
GGCAGCCTGTGGGAGAAGGGGCGGCGGGTAAGAAGAGAAGGCAAGCTGGCGGGAGGGTGGCACCCCGTGG
ATGACCTCCTTGGAAAAGACTGACCTTGATGTCGGAGGGCGCTGGCCTCTTCCTCCCTCCCTGCAGGGTA
GGGGGCCTGAGCCGAGGGGCTTCCCTCTGCTCCACAGAAACCCTGTTTTATTGAGTTCTGAAGGTTGGAA
CTGCAGCCATGATTTTGGCCACTTTGCAGACCTGGGACTTTAGGGCTAACCAGTTCTCTTTGTAAGGACT
TGTGCCTCTTGGGAGACGTCCACCCGTTTCCAAGCCTGGGCCACCGGCATCTCTGGAGTGTGCAGGGGTC
TGGGAGGCGGGTCCCGAGCCCCCTGTCCTTCCCACGGCCACTGCAGTCACCCCTGTCTGCCCCACTGTGC
TGTCGTCTGCCATGAGAACCCAGTCACTGCCTATACCCCTCATCACGTCACAATGTCCAAATTCCCAGCC
TCACCACCCCCCTTCTCAGTAAGGACCCTGGTTGGCTGTGGGAGGCACCTACTCCATACTGAGGGTGAAA
TTAAGGGAAGGTAAAGTCCAGGCACAAGAGTGGGACCCCAGCCTCTCACTCTCAGTTCCACTCATCCAAC
TGGGTCCCTCACCACGAATCTCACGACCTGATTCGGTTCCCTGCCTCCTCCTCCCATCACAGATGTGAGC
CAGGGCACTGCTCAGCTGTGACCCTCGGTGTTTCTGCCTTGTTGACATAGAGAGAGCCCTTTCCCCCCGA
GAAGGCCTGGCCCCTTCCTGTGCTGAGCCCGCAGCAGGAGGCTGGGTGTCCTGGTTGTCGGTGACGGCAC
CAGGATGGGCGGGCAAGGCACCCAGGGCAGGCCCACAGTCCCGCTGTCCCCCACTTGCACCCCAGCTTGT
GGCTGCCAGCCTCCCAGACAGCCCAGCCCGCTGCTCAGCTCCACATGCATAGAATCAGCCCTCCACATCC
CAAAAAGGGGAACACACCCCCTTCGAAATGGTTTTCTCCCCGGTCCCAGCTGGAAGCCATGCTGTCTGTT
CTGCTGGAGCAGCTGAACATATACATAGATGTTGCCCTGCCCTCCCCATCTGCACCCTGTTGCGTTGTAG
TTGGATTTGTCTGTTTATGCTTGGATTCACCAGAGTGACTATGATAGTGAAAAGAAAAAAAAAAAAAAAA
AAAGGACGCATGTATCTTGAAATGCTTGTAAAGAGGTTTCTAACCCACCCTCACAAGGTGTCTCTCACCC
CCACGCTGGGACGCGTGTGGCCTGTGTGGCGCCGCCCTGCTGGGGCCTCCCAAGGTTTGAAAGGCTTTCC
TCAGCATCCGGGACCCAACAGAGACCAGATTCTAGCATCTAAGGAGGCCGTTCAGCTGTGAAGAAGGCCT
GAAGCACAGGATTAGGACTGAAGCGATGACATCTCCTTCCCTACTTCCCCTTGGGGCTCTCTGTGTCAGG
GCAGAGAGTAGGTCTTGTGGCTGGTCTGGCTTGCGGCACGAGGATGGTTCTCTCTGGTCACAGCCCGAAG
TCCCACAGCAGTCCTAAAGGAGGCTTACAACTCCTGCATCACAAGAAGAAGGAAGCCAGTGCCAGCTGGG
GGGATCTGCAGCTCCCAGAAGCTCCATGAGCCTCAGCCACCCCGCAGACTGGGTTCCTCGCCAAGCTCGC
CCTCTGGAGGGGCAGCCAGCCTCCCACCAAGGGCCCTGCGACCACAGCAGGGATTGGGATGAATGGCCTA
TCCTGGATCTGCTCCAGAGGCCCGAGCCACCTGCCTGAGGAAGGATAAGTCAGGAGACACCGTTCCCAAA
GCCTTGACCAGAGCACCTCAGCCCACTGACCTTGCACAAACTCCATCTGCTGCCATGAGAAAAGGGAAGC
CGCCTTTGCAAAAAATTGCTGCCTAAAGAAACTCAGCAGCCTCAGGCTCAATTCTGCCGCTTCTGGTTTG
GGTACAGTTAAAGGCAACCCTGAGGGACTTGGCAGTAGAAATCCAGGGCATCCCCTAGGGCTGGCAACTT
CGTGTGCAGCTAGAGCTTTCCCTGCAAGAAGTTTCTGGGCCCAGAACTCTCCACCAGGAAGCTCCCTGCT
GTTCGCTAAGTCCCAGCAATTCTCTAAGTGAAGGGATCTGAGAATGAGGAGGAAATGTGGGGTAGAGATT
TGGTGGTGGTTAGAGACATGCCCCCCTCATTACTGCCAACAGTTTCGGCTGCATTTTTCACGTACCTCGG
TTCCTCTTCCTGAAGTTCTTGTGCCCTGCTCTTCAGCACCGTGGGCCTTATCCGGTAGGCTCTGGGATCT
CCCCCTTGTGGGGCAGGCTCTTGGGGCCAGCCTAAGATCATGGTTTAGGGTGATCAGTGCTGGCAGATAA
ATTGCAAAGGCACGCTGGCTTGTGACCTCAAATGACAATCCCCCCAGGGCTGGGCACTCCTCCCCTCCCC
TCACTTCTCCCACCTGCAGAGCCAGTGTCCGTGGGTGGGCTAGATAGGATATACTGTATGCCGGCTCCTT
CAAGCTGTTGACTCACTTTATCAATAGTTCCATTTAAATTGACTTCAATGGTGAGACTGTATCCTGTTTG
CTATTGCTTATTGTGCTATGGGGGGAGGGGGGAGGAATGTGTAACATAGTTAACATGGGTAAAGGGAGAT
CTTGGGGTGCAGCACTTCAATTGCCTCGTAACCCTTTTCATCATTTCAACCACATTTGCTAAAGGGAGGG
AGCAGCCACGCGGTTAGAGGCCCTTGGGGTTTCTCTTTTCCACTGACAGCCTTTCCCAGGCAGCTGGCCA
GTTCCCCATTCCCTCCCCAGCCAGGTGCAGGCGTAGCAATATGGACATCTGGTTGCTTTGGCCTGCTGCC
CTCTTTCAGGGGTCCTAAGCCCACAATCATGCCTCCCTAAGACCCTGGCATCCTTCCTTTTAAGCCGTTG
GCACCTCTGTGCCACCTCTCACACTGGCTCCAGACACAGCCTGTGCTTCTGGCAGCTGAGATCACTCACT
TCCCCCTCCTCATCTTTGTTGGAGCTCCAAGTCAAGCCACGAGGTCAGGGCGAGGGCAGAGGTGGTCACC
AGCGTGTCCCATCTACAGACCTGTGGCTTCGTAAGACTTCTGATTTCTCTTCAGCTTTGAAAAGGGTTAC
CCTGGGCACTGGCCTAGAGTCTCACCTCCTAATAGACTTACCCCCATGAGTTTGCCATGTTGAGCAGGAC
AATTTCTGGCACTTGCAAGTCCCATGATTTCTTCGGTAATTGTGAGGGTGGGGGGAGGGACATGAAATCA
TCTTAGCTTAGCTTCCTGTCTGTGAATGTCTATATAGTGTATTGTGTGTTTTAACAAATGATTTACACTG
ACTGTTGCCGTAAAAGTGAATTTGGAAATAAAGTTATTACTCTGATTAAA
配列番号８
＞配列番号７の逆相補物
TTTAATCAGAGTAATAACTTTATTTCCAAATTCACTTTTACGGCAACAGT
CAGTGTAAATCATTTGTTAAAACACACAATACACTATATAGACATTCACAGACAGGAAGCTAAGCTAAGA
TGATTTCATGTCCCTCCCCCCACCCTCACAATTACCGAAGAAATCATGGGACTTGCAAGTGCCAGAAATT
GTCCTGCTCAACATGGCAAACTCATGGGGGTAAGTCTATTAGGAGGTGAGACTCTAGGCCAGTGCCCAGG
GTAACCCTTTTCAAAGCTGAAGAGAAATCAGAAGTCTTACGAAGCCACAGGTCTGTAGATGGGACACGCT
GGTGACCACCTCTGCCCTCGCCCTGACCTCGTGGCTTGACTTGGAGCTCCAACAAAGATGAGGAGGGGGA
AGTGAGTGATCTCAGCTGCCAGAAGCACAGGCTGTGTCTGGAGCCAGTGTGAGAGGTGGCACAGAGGTGC
CAACGGCTTAAAAGGAAGGATGCCAGGGTCTTAGGGAGGCATGATTGTGGGCTTAGGACCCCTGAAAGAG
GGCAGCAGGCCAAAGCAACCAGATGTCCATATTGCTACGCCTGCACCTGGCTGGGGAGGGAATGGGGAAC
TGGCCAGCTGCCTGGGAAAGGCTGTCAGTGGAAAAGAGAAACCCCAAGGGCCTCTAACCGCGTGGCTGCT
CCCTCCCTTTAGCAAATGTGGTTGAAATGATGAAAAGGGTTACGAGGCAATTGAAGTGCTGCACCCCAAG
ATCTCCCTTTACCCATGTTAACTATGTTACACATTCCTCCCCCCTCCCCCCATAGCACAATAAGCAATAG
CAAACAGGATACAGTCTCACCATTGAAGTCAATTTAAATGGAACTATTGATAAAGTGAGTCAACAGCTTG
AAGGAGCCGGCATACAGTATATCCTATCTAGCCCACCCACGGACACTGGCTCTGCAGGTGGGAGAAGTGA
GGGGAGGGGAGGAGTGCCCAGCCCTGGGGGGATTGTCATTTGAGGTCACAAGCCAGCGTGCCTTTGCAAT
TTATCTGCCAGCACTGATCACCCTAAACCATGATCTTAGGCTGGCCCCAAGAGCCTGCCCCACAAGGGGG
AGATCCCAGAGCCTACCGGATAAGGCCCACGGTGCTGAAGAGCAGGGCACAAGAACTTCAGGAAGAGGAA
CCGAGGTACGTGAAAAATGCAGCCGAAACTGTTGGCAGTAATGAGGGGGGCATGTCTCTAACCACCACCA
AATCTCTACCCCACATTTCCTCCTCATTCTCAGATCCCTTCACTTAGAGAATTGCTGGGACTTAGCGAAC
AGCAGGGAGCTTCCTGGTGGAGAGTTCTGGGCCCAGAAACTTCTTGCAGGGAAAGCTCTAGCTGCACACG
AAGTTGCCAGCCCTAGGGGATGCCCTGGATTTCTACTGCCAAGTCCCTCAGGGTTGCCTTTAACTGTACC
CAAACCAGAAGCGGCAGAATTGAGCCTGAGGCTGCTGAGTTTCTTTAGGCAGCAATTTTTTGCAAAGGCG
GCTTCCCTTTTCTCATGGCAGCAGATGGAGTTTGTGCAAGGTCAGTGGGCTGAGGTGCTCTGGTCAAGGC
TTTGGGAACGGTGTCTCCTGACTTATCCTTCCTCAGGCAGGTGGCTCGGGCCTCTGGAGCAGATCCAGGA
TAGGCCATTCATCCCAATCCCTGCTGTGGTCGCAGGGCCCTTGGTGGGAGGCTGGCTGCCCCTCCAGAGG
GCGAGCTTGGCGAGGAACCCAGTCTGCGGGGTGGCTGAGGCTCATGGAGCTTCTGGGAGCTGCAGATCCC
CCCAGCTGGCACTGGCTTCCTTCTTCTTGTGATGCAGGAGTTGTAAGCCTCCTTTAGGACTGCTGTGGGA
CTTCGGGCTGTGACCAGAGAGAACCATCCTCGTGCCGCAAGCCAGACCAGCCACAAGACCTACTCTCTGC
CCTGACACAGAGAGCCCCAAGGGGAAGTAGGGAAGGAGATGTCATCGCTTCAGTCCTAATCCTGTGCTTC
AGGCCTTCTTCACAGCTGAACGGCCTCCTTAGATGCTAGAATCTGGTCTCTGTTGGGTCCCGGATGCTGA
GGAAAGCCTTTCAAACCTTGGGAGGCCCCAGCAGGGCGGCGCCACACAGGCCACACGCGTCCCAGCGTGG
GGGTGAGAGACACCTTGTGAGGGTGGGTTAGAAACCTCTTTACAAGCATTTCAAGATACATGCGTCCTTT
TTTTTTTTTTTTTTTTCTTTTCACTATCATAGTCACTCTGGTGAATCCAAGCATAAACAGACAAATCCAA
CTACAACGCAACAGGGTGCAGATGGGGAGGGCAGGGCAACATCTATGTATATGTTCAGCTGCTCCAGCAG
AACAGACAGCATGGCTTCCAGCTGGGACCGGGGAGAAAACCATTTCGAAGGGGGTGTGTTCCCCTTTTTG
GGATGTGGAGGGCTGATTCTATGCATGTGGAGCTGAGCAGCGGGCTGGGCTGTCTGGGAGGCTGGCAGCC
ACAAGCTGGGGTGCAAGTGGGGGACAGCGGGACTGTGGGCCTGCCCTGGGTGCCTTGCCCGCCCATCCTG
GTGCCGTCACCGACAACCAGGACACCCAGCCTCCTGCTGCGGGCTCAGCACAGGAAGGGGCCAGGCCTTC
TCGGGGGGAAAGGGCTCTCTCTATGTCAACAAGGCAGAAACACCGAGGGTCACAGCTGAGCAGTGCCCTG
GCTCACATCTGTGATGGGAGGAGGAGGCAGGGAACCGAATCAGGTCGTGAGATTCGTGGTGAGGGACCCA
GTTGGATGAGTGGAACTGAGAGTGAGAGGCTGGGGTCCCACTCTTGTGCCTGGACTTTACCTTCCCTTAA
TTTCACCCTCAGTATGGAGTAGGTGCCTCCCACAGCCAACCAGGGTCCTTACTGAGAAGGGGGGTGGTGA
GGCTGGGAATTTGGACATTGTGACGTGATGAGGGGTATAGGCAGTGACTGGGTTCTCATGGCAGACGACA
GCACAGTGGGGCAGACAGGGGTGACTGCAGTGGCCGTGGGAAGGACAGGGGGCTCGGGACCCGCCTCCCA
GACCCCTGCACACTCCAGAGATGCCGGTGGCCCAGGCTTGGAAACGGGTGGACGTCTCCCAAGAGGCACA
AGTCCTTACAAAGAGAACTGGTTAGCCCTAAAGTCCCAGGTCTGCAAAGTGGCCAAAATCATGGCTGCAG
TTCCAACCTTCAGAACTCAATAAAACAGGGTTTCTGTGGAGCAGAGGGAAGCCCCTCGGCTCAGGCCCCC
TACCCTGCAGGGAGGGAGGAAGAGGCCAGCGCCCTCCGACATCAAGGTCAGTCTTTTCCAAGGAGGTCAT
CCACGGGGTGCCACCCTCCCGCCAGCTTGCCTTCTCTTCTTACCCGCCGCCCCTTCTCCCACAGGCTGCC
CTGCAGAGGGTGGCACATCAACTCGCAGCAGACCCTGGCCACCAAGGACAGGCAGCCGCTCAGTCTGAGA
CACTGCAGGTGGCGGAGGCCTTGGCCCTCCCAGTGGCGCGGAGGAGGGCATCTCCTCTCCAGCATGTGGC
TTCCTCTCCCACTCCCCCTTCTCGTCCTTCCTCTCCCCTCTGCCCAGCCCCTGCCTTGGCCTCCCCCATG
GCCTCCCGCCCCACCCCCACCCGTCACACTCACACAAGGTTGACATCGTCTGCCTGTGGCTCCACGAACA
CACCAAGTTTCAAATCCTTTGTTGCTGCCGCTGCCTCTGTGACACCCCCACGACAGGGCCAGAGGCGGTG
GGCACCCCCAGTCTCTTGAAATCCCCCCGAAGCAGCTTTCACAGCCTCTCCTTCTCCCTCTTCTACATGG
AGGGGGAAAAAAAAAGAATCAAAAGGAATTGCCCGAGGAAATGTTGGGTGTGGCCATGTTTTTGAATGTT
TTTTAAAAAATATTTTATTATTAGCCCACCGATCAATTTGGAAAGATGCAATTTGCTCTTATTCCCATCA
CTGATTTTGAAGTCCCGAGCCAAAGCCGAGCGATAAAAGCCGGTTAAGTGATGAACCGATTAACCGAACT
GCGAGGAGCAGCTGGGGGCAGAGGGCGGGGCCGGGTCATTATTCTTTTTTTTTCCACACTCTCACTCTCT
CTTCTCTCCACGATTATTGACCGCCCCGGGGGCCTGATCACAAACCCTGCTTGGCCAGGGAGGCAGACAC
CTCGTCGGCTAGCGTGGCGAGCTGGGGCGAGTCTACCATGTCGATGCTGCCGGTGGAGGAGACATTGCTG
AGGTGCCGTGGAGACGTGTCCCCAGACACCACCGGCGACTTGTACACGATTTCCGCCCCGTGGTCTGTCT
TGGCTTTGGCGTTCTCGCGGAAGGTCAGCTTGTGGGTTTCAATCTTTTTATTTCCTCCGCCAGGGACATG
GGTGATATTGTCCAGGGACCCGATCTTCGACTGCACTCTGTCCTTGAAGTCCAGCTTCTCAGATTTTACT
TCCACCTGGCCACCTCCTGGTTTATGATGGATGTTGCCTAATGAGCCACACTTGGAGGTCACCTTGCTCA
GGTCAACTGGTTTGTAGACTATTTGCACACTGCCGCCTCCCGGGACGTGTTTGATATTATCCTTTGAGCC
ACACTTGGACTGGACGTTGCTAAGATCCAGCTTCTTATTAATTATCTGCACCTTCCCGCCTCCCGGCTGG
TGCTTCAGGTTCTCGGTGGAGCCGATCTTGGACTTGACGTTCTTCAGGTCTGGCATGGGCACGGGGGCTG
TCTGCAGGCGGCTCTTGGCGGAAGACGGCGACTTAGGTGGAGTACGGACCACCGCCACCTTCTTGGGCTC
CCGGGCTGGAGGGGTTGGAAGGGACGGGGTGCGGGAGCGGCTGCCGGGAGTGCCCGGGGAGCCGGGGCTG
CTGTAGCCACTGCGATCCCCTGATTTTGGAGGTTCACCAGAGCTGGGTGGTGTCTTTGGGGCGGGCGGGG
TTTTTGCTGGAATCCTGGTGGCGTTGGCTTGGCCCTTCTGGCCTGGAGGGGCCGCTCCCCGGGGTGTGGC
GATCTTCGTTTTCCCATCAGCCCCCTTGGCTTTTTTGTCATCGCTTCCAGTCCCGTCTTTGCTTTTACTG
ACCATGCGAGCTTGGGTCACGTGACCAGCAGCTTCGTCTTCCAGGCTGGGGGTGTCTCCGATGCCTGCTT
CCTCAGCTGTGGTTCCTTCTGGGATCTCCATGTGGGGCTGGGCGGCAGCCTGCTCGCCGGGAGCTCTCTC
ATCCACTAAGGGCGCTGTCACATCTTCCGCCGTTGGAGTGCTCTTAGCATCAGAGGTTTCAGAGCCCAGT
TCCTCAGATCCATCCTCAGCGGGGGTCTGCAGGGGAGATTCTTTCAGGCCAGCGTCCGTGTCACCCTCTT
GGTCTTGGAGCATGGTGTAGCCCTCTTGATCTTTCCTGTCCCCCAACCCGTACGTCCCAGCGTGATCTTC
CATCACATCGAACTCCTGGCGGGGCTCAGCCATCCTGGTTCAAGGCTCGCCTGATAGTCGACAGAGGCGA
GGACGGGAGAGGACAGCGGAGGAGGAGAAGGTGGCTGTGGTGGCGGCGGCAGAAGGTGGGCGGTGGCAGC
GGCGCTGCTGTTGGTGCCGGAGCTGGTGGGTGGCGGTGACTGCGAGGGCGCGCGCCGGGGAAGAGGGCGC
GTTCCCGAGGCCGGCAGGCGGCGCAGGCGCGAGCAGCGGGAGCGCGAGCCTCCCCAGGGGAGGGGGCGGG
CAGCCCGGCCTCCGCGGGAGCCTTCTCCTCCGGCCACCAGTGGGCGCGCGCGAGCGCCCTGCCGCTCGGC
配列番号９
＞予想されるＸＭ＿００８７６８２７７．２：ドブネズミ（Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）微小管関連タンパク質タウ（Ｍａｐｔ）、転写物変異体Ｘ７、ｍＲＮＡ
ACCGCCCACCTTCTGCTGTCGCCGCCGCCACAACCACCTTCCCCTCCGCTGTCCTCTTCTGTCCTCGCCT
CCTGTCGATTATCAGGCTTTGAAGCAGCATGGCTGAACCCCGCCAGGAGTTTGACACAATGGAAGACCAG
GCCGGAGATTACACTATGCTCCAAGACCAAGAAGGAGACATGGACCATGGCTTAAAAGAGTCTCCCCCAC
AGCCCCCAGCCGATGATGGATCAGAAGAACCAGGGTCGGAGACCTCTGATGCTAAGAGCACTCCAACTGC
TGAAGACGTGACTGCGCCCCTAGTGGAAGAGAGAGCTCCCGACAAGCAGGCGACTGCCCAGTCCCACACG
GAGATCCCAGAAGGCACCACAGCTGAAGAAGCAGGCATCGGAGACACCCCGAACATGGAGGACCAAGCTG
CTGGGCATGTGACTCAAGCTCGAGTGGCCGGCGTAAGCAAAGACAGGACAGGAAATGACGAGAAGAAAGC
CAAGGGCGCCGATGGCAAAACGGGGGCGAAGATCGCCACACCTCGGGGAGCAGCCACTCCGGGCCAGAAA
GGCACATCCAATGCCACCAGGATCCCAGCCAAGACCACACCCAGCCCAAAGACTCCTCCAGGATCAGGTG
AACCACCAAAATCCGGAGAACGAAGCGGCTACAGCAGCCCCGGCTCGCCCGGAACCCCTGGCAGTCGCTC
CCGTACCCCATCCCTACCAACGCCGCCCACCCGAGAGCCCAAAAAGGTGGCAGTGGTTCGCACTCCCCCT
AAGTCACCGTCTGCCAGTAAGAGCCGCCTACAGACTGCCCCTGTGCCCATGCCAGACCTAAAGAACGTCA
GGTCCAAGATTGGCTCCACTGAGAACCTGAAGCACCAGCCGGGAGGCGGCAAGGTGCAGATAATTAATAA
GAAGCTGGATCTTAGCAACGTCCAGTCCAAGTGTGGCTCAAAGGACAATATCAAACACGTCCCGGGCGGA
GGCAGTGTGCAAATAGTCTACAAGCCAGTGGACCTGAGCAAGGTGACCTCCAAGTGTGGTTCCTTAGGGA
ACATCCATCACAAGCCAGGAGGTGGCCAGGTAGAAGTAAAATCAGAGAAGCTGGACTTCAAGGATAGAGT
CCAGTCGAAGATTGGCTCCTTGGATAACATCACCCATGTCCCTGGAGGAGGGAATAAGAAGATTGAAACC
CACAAGCTGACCTTCAGGGAGAATGCCAAAGCCAAGACAGACCATGGAGCAGAAATCGTGTACAAGTCAC
CTGTGGTGTCTGGGGACACATCTCCACGGCACCTCAGCAACGTCTCCTCCACGGGCAGCATCGACATGGT
GGACTCTCCACAGCTTGCCACGTTAGCCGATGAAGTGTCCGCCTCTTTGGCCAAGCAGGGTTTGTGATCA
GGCCCCTGGGGCCGTCACTGATCATGGAGAGAAGAGAGAGTGAGAGTGTGGAAAAAAAAAAAAAAAAAAG
AATGACCTGGCCCCTCACCCTCTGCCCTCCCCGCTGCTCCTCATAGACAGGCTGACCAGCTTGTCACCTA
ACCTGCTTTTGTGGCTCGGGTTTGGCTCGGGACTTCAAAATCAGTGATGGGAAAAAGTAAATTTCATCTT
TCCAAATTGATTTGTGGGCTAGTAATAAAATATTTTTAAGGAAGGAAAAAAAAAAAAACACGTAAAACCA
TGGCCAAACAAAACCCAACATTTCCTTGGCAATTGTTATTGACCCCGCCCCCCCCCTCTGAGTTTTAGAG
GGTGAAGGAGGCTTTGGATGGAGGCTGCTTCTGGGGATTGGCTGAGGGACTAGGGCAACTAATTGCCCAC
AGCCCCATCTTAGGGGCATCAGGGACAGCGGCAGCAATGAAAGACTTGGGACTTGGTGTGTTTGTGGAGC
CGTAGGCAGGTGATGTTAACTTTGTGTGGGTTTGAGGGAGGACTGTGATAGTGAAGGCTGAGAGATGGGT
GGGCTGGGAGTCAGAGGAGAGAGGTGAGGAAGACAGGTTGGGAGAGGGGACATTGGCTCCTTGCCAAGGA
GCTTGGGAAGCACAGGTAGCCCTGGCTGCCTGCAGCAGTCTTAGCTAGCACAGATGCCTGCCTGAGAAAG
CACAGTGGGGTACAGTGGGTGTGTGTGCCCCTTCTGAAGGGCAGCCCATGGGAGAAGGGGTATTGGGCAG
AAGGAAGGTAGGCCAGAAGGTGGCACCTTGTAGATTGGTTCTCTGAAGGCTGACCTTGCCATCCCAGGGC
ACTGGCTCCCACCCTCCAGGGAGGGAGGTCCTGAGCTGAGGAGCTTCCCTTTGCTCTCACAGGAAAACCT
GTGTTACTGAGTTCTGAAGTTTGGAACTACAGCCATGATTTTGGCCACCATACAGACCTGGGACTTTAGG
GCTAACCAGTTCTTTGTAAGGACTTGTGCCTCTTGCGGGAACATCTGCCTGTTCTCAAGCCTGGTCCTCT
GGCACTTCTGCAGTGTGAGGGATGGGGGTGGTAATTCTGGGATGTGGGTCCCAGGCCTCCCATCCTCGCA
CAGCCACTGTATCCCCTCTACCTGTCCTATCATGCCCACGTCTGCCATGAGAGCCAGTCACTGCCGTCCG
TACATCACGTCTCACCGTCCTGAGTGCCCAGCCTCCCCAAGCCCCATCCCTGGCCCCTGGGTAGTTATGG
CCAATATCTGCTCTACACTAGGGGTTGGAGTCCAGGGAAGGCAAAGATTTGGGCCTTGGTCTCTAGTCCT
ACGTTGCACGAATCCAACCAGTGTGCCTCCCACAAGGAACCTTACAACCTTGTTTGGTTTGCTCCATCAT
TTCCCATCGTGGATGGGAGTCCGTGTGTGCCTGGAGATTACCCTGGACACCTCTGCTTTTTTTTTTTTAC
TTTAGCGGTTGCCTCCTAGGCCTGACTCCTTCCCATGTTGAACTGGAGGCAGCCACGTTAGGTGTCAATG
TCCTGGCATCAGTATGAACAGTCAGTAGTCCCAGGGCAGGGCCACACTTCTCCCATCTTCTGCTTCCACC
CCAGCTTGTGATTGCTAGCCTCCCAGAGCTCAGCCGCCATTAAGTCCCCATGCACGTAATCAGCCCTTCA
TACCCCAATTTGGGGAACATACCCCTTGATTGAAATGTTTTCCCTCCAGTCCTATGGAAGCGGTGCTGCC
TGCCCTGCTGGAGCAGCCAGCCATCTCCAGAGACGCAGCCCTTTCTCTCCTGTCCGCACCCTGTTGCGCT
GTAGTCGGATTCGTCTGTTTGTCTGGGTTCACCAGAGTGACTATGATAGTGAAAAGAAAAAGAAAAAGAA
AAAAGAAAAAAGAAAAAAAAAAAAGGACGCATGTTATCTTGAAATATTTGTCAAAAGGTTGTAGCCCACC
GCAGGGATTGGAGGGCCTGGATATTCCTTGTCTTCTTCGTGACTTAGGTCCAGGCCGGTGCAGTGCTACC
CTGCTGGGACATCCCATGTTTTGAAGGGTTTCTTCTTCATCTGGGACCCTGCAGACACTGGATTGTGACA
TTGGAGGTCTATGACATTGGCCAAGGCCTGAAGCACAGGACCCGTTAGAGGCAGCAGGCTCCGACTGTCA
GGGAGAGCTTGTGGCTGGCCTGTTTCTCTGAGTGAAGATGGTCCTCTCTAATCACAACTTCAAGTCCCAC
AGCAGCCCTGGCAGACATCTAAGAACTCCTGCATCACAAGAGAAAAGGACACTAGTACCAGCAGGGAGAG
CTGTGGCCCTAGAAATTCCATGACTCTCCACTACATATCCGTGGGTCCTTTCCAAGCCTTGGCCTCGTCA
CCAAGGGCTTGGGATGGACTGCCCCACTGATGAAAGGGACATCTTTGGAGACCCCCTTGGTTTCCAAGGC
GTCAGCCCCCTGACCTTGCATGACCTCCTACAGCTGTAAGGATGAGGCCTTTAAAGATTAGGAACCTCAG
GCCCAGGTCGGCCACTTTGGGCTTGGGTACAGTTAGGGACGATGCGGTAGAAGGAGGTGGCCAACCTTTC
CCATATAAGAGTTCTGTGTGCCCAGAGCTACCCTATTGTGAGCTCCCCACTGCTGATGGACTTTAGCTGT
CCTTAGAAGTGAAGAGTCCAACGGAGGAAAAGGAAGTGTGGTTTGATGGTCTGTGGTCCCTTCATCATGG
TTACCTGTTGTGGTTTTCTCTCGTATACCCATTTACCCATCCTGCAGTTCCTGTCCTTGAATAGGGGTGG
GGGTACTCTGCCATATCTCTTGTAGGGCAGTCAGCCCCCAAGTCATAGTTTGGAGTGATCTGGTCAGTGC
TAATAGGCAGTTTACAAAGGAATTCTGGCTTGTTACTTCAGTGAGGACAATCCCCCAAGGGCCCTGGCAC
CTGTCCTGTCTTTCCATGGCTCTCCACTGCAGAGCCAATGTCTTTGGGTGGGCTAGATAGGGTGTACAAT
TTGCCTGGTTCCTCCAAGCTCTTAATCCACTTTATCAATAGTTCCATTTAAATTGACTTCAATGATAAGA
GTGTATCCCATTTGAGATTGCTTGTGTTGTGGGGTAAAGGGGGGAGGAGGAACATGTTAAGATAATTGAC
ATGGGCAAGGGGAAGTCTTGAAGTGTAGCAGTTAAACCATCTTGTAGCCCCATTCATGATGTTGACCACT
TGCTAGAGAGAAGAGGTGCCATAAGGCTAGAACCTAGAGGCTTGGCTGTCCCACCAACAGGCAGGCTTTT
GCAAGGCAGAGGCAGCCAGCTAGGTCCCTGACTTCCCAGCCAGGTGCAGCTCTAAGAACTGCTCTTGCCT
GCTGCCTTCTTGTGGTGTCCAGAGCCCACAGCCAATGCCTCCTCAAAACCCTGGCTTCCTTCCTTCTAAT
CCACTGGCACATCAGCATCACCTCCGGATTGACTTCAGATCCACAGCCTACACTACTAGCAGTGGGTAAG
ACCACTTCCTTTGTCCTTGTCTGTTCTCCAGAAAAGTGGGCATGGAGGCGGTGTTAATAACTATAGGTCT
GTGGCTTTATGAGCCTTCAAACTTCTCTCTAGCTTCTGAAAGGGTTACTTTTGGGCAGTATTGCAGTCTC
ACCCTCCCGATGGGCTGTAGCCTGTGCAGTTGCTGTACTGGGCATGATCTCCAGTGCTTGCAAGTCCCAT
GATTTCTTTGGTGATTTTGAGGGTGGGGGGAGGGACATGAATCATCTTAGCTTAGCTTCCTGTCTGTGAA
TGTCCATATAGTGTACTGTGTTTTAACAAACGATTTACACTGACTGTTGCTGTACAAGTGAATTTGGAAA
TAAAGTTATTACTCTGATTAAA
配列番号１０
＞配列番号９の逆相補物
TTTAATCAGAGTAATAACTTTA
TTTCCAAATTCACTTGTACAGCAACAGTCAGTGTAAATCGTTTGTTAAAACACAGTACACTATATGGACA
TTCACAGACAGGAAGCTAAGCTAAGATGATTCATGTCCCTCCCCCCACCCTCAAAATCACCAAAGAAATC
ATGGGACTTGCAAGCACTGGAGATCATGCCCAGTACAGCAACTGCACAGGCTACAGCCCATCGGGAGGGT
GAGACTGCAATACTGCCCAAAAGTAACCCTTTCAGAAGCTAGAGAGAAGTTTGAAGGCTCATAAAGCCAC
AGACCTATAGTTATTAACACCGCCTCCATGCCCACTTTTCTGGAGAACAGACAAGGACAAAGGAAGTGGT
CTTACCCACTGCTAGTAGTGTAGGCTGTGGATCTGAAGTCAATCCGGAGGTGATGCTGATGTGCCAGTGG
ATTAGAAGGAAGGAAGCCAGGGTTTTGAGGAGGCATTGGCTGTGGGCTCTGGACACCACAAGAAGGCAGC
AGGCAAGAGCAGTTCTTAGAGCTGCACCTGGCTGGGAAGTCAGGGACCTAGCTGGCTGCCTCTGCCTTGC
AAAAGCCTGCCTGTTGGTGGGACAGCCAAGCCTCTAGGTTCTAGCCTTATGGCACCTCTTCTCTCTAGCA
AGTGGTCAACATCATGAATGGGGCTACAAGATGGTTTAACTGCTACACTTCAAGACTTCCCCTTGCCCAT
GTCAATTATCTTAACATGTTCCTCCTCCCCCCTTTACCCCACAACACAAGCAATCTCAAATGGGATACAC
TCTTATCATTGAAGTCAATTTAAATGGAACTATTGATAAAGTGGATTAAGAGCTTGGAGGAACCAGGCAA
ATTGTACACCCTATCTAGCCCACCCAAAGACATTGGCTCTGCAGTGGAGAGCCATGGAAAGACAGGACAG
GTGCCAGGGCCCTTGGGGGATTGTCCTCACTGAAGTAACAAGCCAGAATTCCTTTGTAAACTGCCTATTA
GCACTGACCAGATCACTCCAAACTATGACTTGGGGGCTGACTGCCCTACAAGAGATATGGCAGAGTACCC
CCACCCCTATTCAAGGACAGGAACTGCAGGATGGGTAAATGGGTATACGAGAGAAAACCACAACAGGTAA
CCATGATGAAGGGACCACAGACCATCAAACCACACTTCCTTTTCCTCCGTTGGACTCTTCACTTCTAAGG
ACAGCTAAAGTCCATCAGCAGTGGGGAGCTCACAATAGGGTAGCTCTGGGCACACAGAACTCTTATATGG
GAAAGGTTGGCCACCTCCTTCTACCGCATCGTCCCTAACTGTACCCAAGCCCAAAGTGGCCGACCTGGGC
CTGAGGTTCCTAATCTTTAAAGGCCTCATCCTTACAGCTGTAGGAGGTCATGCAAGGTCAGGGGGCTGAC
GCCTTGGAAACCAAGGGGGTCTCCAAAGATGTCCCTTTCATCAGTGGGGCAGTCCATCCCAAGCCCTTGG
TGACGAGGCCAAGGCTTGGAAAGGACCCACGGATATGTAGTGGAGAGTCATGGAATTTCTAGGGCCACAG
CTCTCCCTGCTGGTACTAGTGTCCTTTTCTCTTGTGATGCAGGAGTTCTTAGATGTCTGCCAGGGCTGCT
GTGGGACTTGAAGTTGTGATTAGAGAGGACCATCTTCACTCAGAGAAACAGGCCAGCCACAAGCTCTCCC
TGACAGTCGGAGCCTGCTGCCTCTAACGGGTCCTGTGCTTCAGGCCTTGGCCAATGTCATAGACCTCCAA
TGTCACAATCCAGTGTCTGCAGGGTCCCAGATGAAGAAGAAACCCTTCAAAACATGGGATGTCCCAGCAG
GGTAGCACTGCACCGGCCTGGACCTAAGTCACGAAGAAGACAAGGAATATCCAGGCCCTCCAATCCCTGC
GGTGGGCTACAACCTTTTGACAAATATTTCAAGATAACATGCGTCCTTTTTTTTTTTTCTTTTTTCTTTT
TTCTTTTTCTTTTTCTTTTCACTATCATAGTCACTCTGGTGAACCCAGACAAACAGACGAATCCGACTAC
AGCGCAACAGGGTGCGGACAGGAGAGAAAGGGCTGCGTCTCTGGAGATGGCTGGCTGCTCCAGCAGGGCA
GGCAGCACCGCTTCCATAGGACTGGAGGGAAAACATTTCAATCAAGGGGTATGTTCCCCAAATTGGGGTA
TGAAGGGCTGATTACGTGCATGGGGACTTAATGGCGGCTGAGCTCTGGGAGGCTAGCAATCACAAGCTGG
GGTGGAAGCAGAAGATGGGAGAAGTGTGGCCCTGCCCTGGGACTACTGACTGTTCATACTGATGCCAGGA
CATTGACACCTAACGTGGCTGCCTCCAGTTCAACATGGGAAGGAGTCAGGCCTAGGAGGCAACCGCTAAA
GTAAAAAAAAAAAAGCAGAGGTGTCCAGGGTAATCTCCAGGCACACACGGACTCCCATCCACGATGGGAA
ATGATGGAGCAAACCAAACAAGGTTGTAAGGTTCCTTGTGGGAGGCACACTGGTTGGATTCGTGCAACGT
AGGACTAGAGACCAAGGCCCAAATCTTTGCCTTCCCTGGACTCCAACCCCTAGTGTAGAGCAGATATTGG
CCATAACTACCCAGGGGCCAGGGATGGGGCTTGGGGAGGCTGGGCACTCAGGACGGTGAGACGTGATGTA
CGGACGGCAGTGACTGGCTCTCATGGCAGACGTGGGCATGATAGGACAGGTAGAGGGGATACAGTGGCTG
TGCGAGGATGGGAGGCCTGGGACCCACATCCCAGAATTACCACCCCCATCCCTCACACTGCAGAAGTGCC
AGAGGACCAGGCTTGAGAACAGGCAGATGTTCCCGCAAGAGGCACAAGTCCTTACAAAGAACTGGTTAGC
CCTAAAGTCCCAGGTCTGTATGGTGGCCAAAATCATGGCTGTAGTTCCAAACTTCAGAACTCAGTAACAC
AGGTTTTCCTGTGAGAGCAAAGGGAAGCTCCTCAGCTCAGGACCTCCCTCCCTGGAGGGTGGGAGCCAGT
GCCCTGGGATGGCAAGGTCAGCCTTCAGAGAACCAATCTACAAGGTGCCACCTTCTGGCCTACCTTCCTT
CTGCCCAATACCCCTTCTCCCATGGGCTGCCCTTCAGAAGGGGCACACACACCCACTGTACCCCACTGTG
CTTTCTCAGGCAGGCATCTGTGCTAGCTAAGACTGCTGCAGGCAGCCAGGGCTACCTGTGCTTCCCAAGC
TCCTTGGCAAGGAGCCAATGTCCCCTCTCCCAACCTGTCTTCCTCACCTCTCTCCTCTGACTCCCAGCCC
ACCCATCTCTCAGCCTTCACTATCACAGTCCTCCCTCAAACCCACACAAAGTTAACATCACCTGCCTACG
GCTCCACAAACACACCAAGTCCCAAGTCTTTCATTGCTGCCGCTGTCCCTGATGCCCCTAAGATGGGGCT
GTGGGCAATTAGTTGCCCTAGTCCCTCAGCCAATCCCCAGAAGCAGCCTCCATCCAAAGCCTCCTTCACC
CTCTAAAACTCAGAGGGGGGGGGCGGGGTCAATAACAATTGCCAAGGAAATGTTGGGTTTTGTTTGGCCA
TGGTTTTACGTGTTTTTTTTTTTTTCCTTCCTTAAAAATATTTTATTACTAGCCCACAAATCAATTTGGA
AAGATGAAATTTACTTTTTCCCATCACTGATTTTGAAGTCCCGAGCCAAACCCGAGCCACAAAAGCAGGT
TAGGTGACAAGCTGGTCAGCCTGTCTATGAGGAGCAGCGGGGAGGGCAGAGGGTGAGGGGCCAGGTCATT
CTTTTTTTTTTTTTTTTTTCCACACTCTCACTCTCTCTTCTCTCCATGATCAGTGACGGCCCCAGGGGCC
TGATCACAAACCCTGCTTGGCCAAAGAGGCGGACACTTCATCGGCTAACGTGGCAAGCTGTGGAGAGTCC
ACCATGTCGATGCTGCCCGTGGAGGAGACGTTGCTGAGGTGCCGTGGAGATGTGTCCCCAGACACCACAG
GTGACTTGTACACGATTTCTGCTCCATGGTCTGTCTTGGCTTTGGCATTCTCCCTGAAGGTCAGCTTGTG
GGTTTCAATCTTCTTATTCCCTCCTCCAGGGACATGGGTGATGTTATCCAAGGAGCCAATCTTCGACTGG
ACTCTATCCTTGAAGTCCAGCTTCTCTGATTTTACTTCTACCTGGCCACCTCCTGGCTTGTGATGGATGT
TCCCTAAGGAACCACACTTGGAGGTCACCTTGCTCAGGTCCACTGGCTTGTAGACTATTTGCACACTGCC
TCCGCCCGGGACGTGTTTGATATTGTCCTTTGAGCCACACTTGGACTGGACGTTGCTAAGATCCAGCTTC
TTATTAATTATCTGCACCTTGCCGCCTCCCGGCTGGTGCTTCAGGTTCTCAGTGGAGCCAATCTTGGACC
TGACGTTCTTTAGGTCTGGCATGGGCACAGGGGCAGTCTGTAGGCGGCTCTTACTGGCAGACGGTGACTT
AGGGGGAGTGCGAACCACTGCCACCTTTTTGGGCTCTCGGGTGGGCGGCGTTGGTAGGGATGGGGTACGG
GAGCGACTGCCAGGGGTTCCGGGCGAGCCGGGGCTGCTGTAGCCGCTTCGTTCTCCGGATTTTGGTGGTT
CACCTGATCCTGGAGGAGTCTTTGGGCTGGGTGTGGTCTTGGCTGGGATCCTGGTGGCATTGGATGTGCC
TTTCTGGCCCGGAGTGGCTGCTCCCCGAGGTGTGGCGATCTTCGCCCCCGTTTTGCCATCGGCGCCCTTG
GCTTTCTTCTCGTCATTTCCTGTCCTGTCTTTGCTTACGCCGGCCACTCGAGCTTGAGTCACATGCCCAG
CAGCTTGGTCCTCCATGTTCGGGGTGTCTCCGATGCCTGCTTCTTCAGCTGTGGTGCCTTCTGGGATCTC
CGTGTGGGACTGGGCAGTCGCCTGCTTGTCGGGAGCTCTCTCTTCCACTAGGGGCGCAGTCACGTCTTCA
GCAGTTGGAGTGCTCTTAGCATCAGAGGTCTCCGACCCTGGTTCTTCTGATCCATCATCGGCTGGGGGCT
GTGGGGGAGACTCTTTTAAGCCATGGTCCATGTCTCCTTCTTGGTCTTGGAGCATAGTGTAATCTCCGGC
CTGGTCTTCCATTGTGTCAAACTCCTGGCGGGGTTCAGCCATGCTGCTTCAAAGCCTGATAATCGACAGG
AGGCGAGGACAGAAGAGGACAGCGGAGGGGAAGGTGGTTGTGGCGGCGGCGACAGCAGAAGGTGGGCGGT
配列番号１１
＞予想されるＸＭ＿００５６２４１８３．３：イヌ（Ｃａｎｉｓ ｌｕｐｕｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ）微小管関連タンパク質タウ（ＭＡＰＴ）、転写物変異体Ｘ２３、ｍＲＮＡ
CGCGCTCGCGCTCTCAGCCACCCACCAGCTCCCGCACCAGCAGCAGCAGCGCCGCCGCCGCCGCCGCCGC
CGCCGCCGCCCACCTTCTGCTGCCGCCACCACAGCCACTTTCTCCTCTTTCCTCTCCTGTCCTCGCCCTC
TGTCGACTATCAGGTGGGCCTTGACCTAGGATGGCTGAGCCCCGCCAGGAGTTCACTGTGATGGAAGATC
ATGCTGGGACATACGGGAAAGATCTCCCCTCTCAGGGGGGCTACACCCTGCTGCAAGACCATGAGGGGGA
CGTGGATCACGGCCTGAAAGCTGAAGAAGCAGGCATTGGAGACACCCCCAACCTGGAAGACCAAGCTGCT
GGACATGTGACTCAAGCTCGCATGGTCAGTAAAGGCAAAGATGGGACTGGAACCGATGACAAAAAAGCCA
AGGGGGCTGATGGTAAAACTGGAACGAAGATCGCCACACCCCGGGGAGCGACCCCTTCAGGCCAGAAAGG
CCAGGCCAATGCCACCAGGATTCCAGCGAAAACCACGCCCTCCCCCAAGACCCCACCGGGCGGTGAATCT
GGAAAATCTGGGGATCGCAGTGGCTACAGCAGCCCCGGCTCCCCAGGCACTCCTGGCAGCCGCTCCCGCA
CCCCGTCCCTGCCAACCCCACCCACCCGGGAGCCCAAGAAGGTGGCGGTGGTCCGCACCCCACCCAAGTC
GCCGTCTGCAGCCAAGAGTCGCCTGCAGACCGCCCCTGTGCCCATGCCAGACCTAAAGAACGTCAGATCC
AAGATCGGCTCCACTGAAAACCTGAAGCACCAGCCAGGAGGTGGGAAGGTGCAAATAGTGTACAAACCAG
TGGATCTGAGCAAGGTGACCTCCAAGTGCGGCTCATTAGGCAACATCCATCATAAGCCAGGAGGCGGTCA
GGTGGAAGTCAAATCTGAGAAGCTGGACTTCAAGGACAGAGTCCAGTCGAAGATCGGGTCCCTGGACAAC
ATCACCCACGTCCCTGGCGGAGGGAATAAAAAGATCGAAACCCACAAGCTGACCTTCCGTGAGAACGCCA
AAGCCAAGACCGACCACGGGGCGGAGATCGTGTACAAGTCGCCCGTGGTGTCCGGGGACACGTCTCCGCG
GCACCTGAGCAACGTGTCCTCCACGGGCAGCATCGACATGGTCGACTCGCCCCAGCTCGCCACGCTAGCC
GACGAAGTGTCCGCCTCCCTGGCCAAGCAGGGTTTGTGATCAGGCCCCCGGGGCGGTCAATGATCGTGGA
GAGAAGAGAGTGTGGAAAAAAAAAGAATAATGATCTGGCCCTTCTCGCCCTCTGCCCTCCCCCAGCTGCT
CCTCACAGACCGGTTAATCGGTTAATCACTTAACCTGCTTTTGTCGCTCGGCTCTGGCTCGGGACTTCAA
AATCAGTGACGGGAAAAAGCAAATTTCATCTTTCCAAATTGATGGGTGGGCTAATAATAATAAAATATTT
TTAAAACCATTTAAAAA
配列番号１２
＞配列番号１１の逆相補物
TTTTTAAATGGTTTTAA
AAATATTTTATTATTATTAGCCCACCCATCAATTTGGAAAGATGAAATTTGCTTTTTCCCGTCACTGATT
TTGAAGTCCCGAGCCAGAGCCGAGCGACAAAAGCAGGTTAAGTGATTAACCGATTAACCGGTCTGTGAGG
AGCAGCTGGGGGAGGGCAGAGGGCGAGAAGGGCCAGATCATTATTCTTTTTTTTTCCACACTCTCTTCTC
TCCACGATCATTGACCGCCCCGGGGGCCTGATCACAAACCCTGCTTGGCCAGGGAGGCGGACACTTCGTC
GGCTAGCGTGGCGAGCTGGGGCGAGTCGACCATGTCGATGCTGCCCGTGGAGGACACGTTGCTCAGGTGC
CGCGGAGACGTGTCCCCGGACACCACGGGCGACTTGTACACGATCTCCGCCCCGTGGTCGGTCTTGGCTT
TGGCGTTCTCACGGAAGGTCAGCTTGTGGGTTTCGATCTTTTTATTCCCTCCGCCAGGGACGTGGGTGAT
GTTGTCCAGGGACCCGATCTTCGACTGGACTCTGTCCTTGAAGTCCAGCTTCTCAGATTTGACTTCCACC
TGACCGCCTCCTGGCTTATGATGGATGTTGCCTAATGAGCCGCACTTGGAGGTCACCTTGCTCAGATCCA
CTGGTTTGTACACTATTTGCACCTTCCCACCTCCTGGCTGGTGCTTCAGGTTTTCAGTGGAGCCGATCTT
GGATCTGACGTTCTTTAGGTCTGGCATGGGCACAGGGGCGGTCTGCAGGCGACTCTTGGCTGCAGACGGC
GACTTGGGTGGGGTGCGGACCACCGCCACCTTCTTGGGCTCCCGGGTGGGTGGGGTTGGCAGGGACGGGG
TGCGGGAGCGGCTGCCAGGAGTGCCTGGGGAGCCGGGGCTGCTGTAGCCACTGCGATCCCCAGATTTTCC
AGATTCACCGCCCGGTGGGGTCTTGGGGGAGGGCGTGGTTTTCGCTGGAATCCTGGTGGCATTGGCCTGG
CCTTTCTGGCCTGAAGGGGTCGCTCCCCGGGGTGTGGCGATCTTCGTTCCAGTTTTACCATCAGCCCCCT
TGGCTTTTTTGTCATCGGTTCCAGTCCCATCTTTGCCTTTACTGACCATGCGAGCTTGAGTCACATGTCC
AGCAGCTTGGTCTTCCAGGTTGGGGGTGTCTCCAATGCCTGCTTCTTCAGCTTTCAGGCCGTGATCCACG
TCCCCCTCATGGTCTTGCAGCAGGGTGTAGCCCCCCTGAGAGGGGAGATCTTTCCCGTATGTCCCAGCAT
GATCTTCCATCACAGTGAACTCCTGGCGGGGCTCAGCCATCCTAGGTCAAGGCCCACCTGATAGTCGACA
GAGGGCGAGGACAGGAGAGGAAAGAGGAGAAAGTGGCTGTGGTGGCGGCAGCAGAAGGTGGGCGGCGGCG
GCGGCGGCGGCGGCGGCGGCGCTGCTGCTGCTGGTGCGGGAGCTGGTGGGTGGCTGAGAGCGCGAGCGCG
配列番号１５３３
＞ＭＡＰＴ（ＮＭ＿００５９１０）エクソン１０
GTGCAAATAGTCTACAAACCAGTTGACCTGAGCAAGGTGACCTCCAAGTGTGGCTCATTA
GGCAACATCCATCATAAACCAG MAPT sequence SEQ ID NO: 1
>NM_016841.4 Human microtubule-associated protein tau (MAPT), transcript variant 4, mRNA
GGACGGCCGAGCGGCAGGGCGCTCGCGCGCGCCCACTAGTGGCCGGAGGAGAAGGCTCCCGCGGAGGCCG
CGCTGCCCGCCCCCTCCCCTGGGGAGGCTCGCGTTCCCGCTGCTCGCGCCTGCGCCGCCCGCCGGCCTCA
GGAACGCGCCCTCTTCGCCGGCGGCGCGCCCTCGCAGTCACCGCCACCCACCAGCTCCGGCACCAACAGCA
GCGCCGCTGCCACCGCCCACCTTTCTGCCGCCGCCACCACAGCCACCTTCTCCTCCTCCGCTGTCCTCTCC
CGTCCTCGCCTCTGTCGACTATCAGGTGAACTTTGAACCAGGATGGCTGAGCCCCGCCAGGAGTTCGAAG
TGATGGAAGATCACGCTGGGACGTACGGGTTGGGGGACAGGAAAGATCAGGGGGGCTACACCATGCACCA
AGACCAAGAGGGTGACACGGACGCTGGCCTGAAAGCTGAAGAAGCAGGCATTGGAGACACCCCCAGCCTG
GAAGACGAAGCTGCTGGTCACGTGACCCAAGCTCGCATGGTCAGTAAAAGCAAAGACGGGACTGGAAGCG
ATGACAAAAAAGCCAAGGGGGCTGATGGTAAAACGAAGATCGCCACACCGCGGGGAGCAGCCCCTCCAGG
CCAGAAGGGCCAGGCCAACGCCACCAGGATTCCAGCAAAAACCCCGCCCGCTCCAAAGACACCACCCAGC
TCTGGTGAACCTCCAAAATCAGGGGATCGCAGCGGCTACAGCAGCCCCCGGCTCCCCAGGCACTCCCGGCA
GCCGCTCCCGCACCCCGTCCCTTCCAACCCCACCCACCCGGGAGCCCAAGAAGGTGGCAGTGGTCCGTAC
TCCACCCAAGTCGCCGTCTTCCGCCAAGAGCCGCCTGCAGACAGCCCCCGTGCCCATGCCAGACCTGAAG
AATGTCAAGTCCAAGATCGGCTCCACTGAGAACCTGAAGCACCAGCCGGGAGGCGGGAAGGTGCAAATAG
TCTACAAACCAGTTGACCTGAGCAAGGTGACCTCCAAGGTGTGGCTCATTAGGCAACATCCATCATAAACC
AGGAGGTGGCCAGGTGGAAGTAAAATCTGAGAAGCTTGACTTCAAGGACAGAGTCCAGTCGAAGATTGGG
TCCCTGGACAATATCACCCACGTCCCTGGCGGAGGAAATAAAAAGATTGAAACCCACAAGCTGACCTTCC
GCGAGAACGCCAAAGCCAAGACAGACCACGGGGCGGAGATCGTGTACAAGTCGCCAGTGGTGTCTGGGGA
CACGTCTCCACGCATCTCAGCAATGTCTCCTCCACCGGCAGCATCGACATGGTAGACTCGCCCCAGCTC
GCCACGCTAGCTGACGAGGTGTCTGCCTCCCTGGCCAAGCAGGGTTTGTGATCAGGCCCCTGGGGCGGTC
AATAATTGTGGAGAGGAGAGAATGAGAGAGTGTGGAAAAAAAAAGAATAATGACCCGGCCCCCGCCCTCT
GCCCCCAGCTGCTCCTCGCAGTTCGGTTAATTGGTTAATCACTTAACCTGCTTTTGTCACTCGGCTTTGG
CTCGGGACTTCAAAATCAGTGATGGGAGTAAGAGCAAATTTCATCTTTCCAAATTGATGGGGTGGGCTAGT
AATAAAATATTTAAAAAAAAACATTCAAAAAACATGGCCACATCCAACATTTCCTCAGCAATTCCTTTTG
ATTCTTTTTCTTCCCCCTCCATGTAGAAGAGGGAGAAGGAGAGGCTCTGAAAGCTGCTTCTGGGGGATT
TCAAGGGACTGGGGGTGCCAACCACCTCTGGCCCTGTTGTGGGGGTGTCACAGAGGCAGTGGCAGCAACA
AAGGATTTGAAACTTGGTGTGTTCGTGGAGCCACAGGCAGACGATGTCAACCTTGTGTGAGTGTGACGGG
GGTTGGGGTGGGGCGGGAGGCCACGGGGGAGGCCGAGGCAGGGGCTGGGCAGAGGGGAGAGGAAGCACAA
GAAGTGGGAGTGGGAGAGGAAGCCACGTGCTGGAGAGTAGACATCCCCCTCCTTGCCGCTGGGAGAGCCA
AGGCCTATGCCACCTGCAGCGTCTGAGCGGCCGCCTGTCCTTGGTGGCCGGGGGTGGGGGCCTGCTGTGG
GTCAGTGTGCCACCCTCTGCAGGGCAGCCTGTGGGAGAAGGGACAGCGGGTAAAAAGAGAAGGCAAGCTG
GCAGGAGGGTGGCACTTCGTGGATGACCTCCTTAGAAAAGACTGACCTTGATGTCTTGAGAGCGCTGGCCC
TCTTCCTCCCTCCCTGCAGGGTAGGGGGCCTGAGTTGAGGGGCTTCCCTCTGCTCCACAGAAACCCTGTT
TTATTGAGTTCTGAAGGTTGGAACTGCTGCCATGATTTTGGCCACTTTGCAGACCTGGGACTTTAGGGCT
AACCAGTTCTCTTTGTAAGGACTTGTGCCTCTTGGGAGACGTCCACCCGTTTCCAAGCCTGGGCCACTGG
CATCTCTGGAGTGTGTGGGGGTCTGGGAGGCAGGTCCCGAGCCCCCTGTCCTTCCCACGGCCACTGCAGT
CACCCCGTTCTGCGCCGCTGTGCTGTTGTCTGCCGTGAGAGCCCAATCACTGCCTATACCCCTCATCACAC
GTCACAATGTCCCGAATTCCCAGCCTCACCACCCCTTCTCAGTAATGACCCTGGTTGGTTGCAGGAGGTA
CCTACTCCATACTGAGGGTGAAATTAAGGGAAGGCAAAGTCCAGGCACAAGAGTGGGACCCCAGCCTCTC
ACTCTCAGTTCCACTCATCCAACTGGGACCCTCACCACGAATCTCATGATCTGATTCGGTTCCCTGTCTC
CTCCTCCCCGTCACAGATGTGAGCCAGGGCACTGCTCAGCTGTGACCCTAGGTGTTTCTGCCTTGTTGACA
TGGAGAGAGCCCTTTCCCCTGAGAAGGCCTGGCCCCTTCCTGTGCTGAGCCCACAGCAGCAGGCTGGGTG
TCTTGGTTGTCAGTGGTGGCACCAGGATGGAAGGGCAAGGCACCCAGGGCAGGCCCACAGTCCCGCTGTC
CCCCACTTGCACCCTAGCTTGTAGCTGCCAACCTCCCAGACAGCCCAGCCCGCTGCTCAGTCTCCACATGC
ATAGTATCAGCCCTCCACACCCGACAAAGGGGAACACACCCCCTTGGAAATGGTTCTTTTCCCCCAGTCC
CAGCTGGAAGCCATGCTGTCTGTTCTGCTGGAGCAGCTGAACATATACATAGATGTTGCCCTGCCCTCCC
CATCTGCACCCTGTTGAGTTGTAGTTGGATTTGTCTGTTTATGCTTGGATTCACCAGAGTGACTATGATA
GTGAAAAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAGGACGCATGTATCTTGAAATGCTTGTAAAGAGGTTTCTAACCCA
CCCTCACGAGGTGTCTCTCACCCCCACACTGGGACTCGTGTGGCCTGTGTGGTGCCACCCTGCTGGGGCC
TCCCAAGTTTTGAAAGGCTTTCCTCAGCACCTGGGACCCAACAGAGACCAGCTTCTAGCAGCTAAGGAGG
CCGTTCAGCTGTGACGAAGGCCTGAAGCACAGGATTAGGACTGAAGCGATGATGTCCCCTTCCCTACTTC
CCCTTGGGGCTCCCTGTGTCAGGGCACAGACTAGGTCTTGTGGCTGGTCTGGCTTGCGGCGCGAGGATGG
TTCTCTCTGGTCATAGCCCGAAGTCTCATGGCAGTCCCAAAGGAGGCTTACAACTCCTGCATCACAAGAA
AAAGGAAGCCACTGCCAGCTGGGGGGATCTGCAGCTCCCAGAAGCTCCGTGAGCCTCAGCCACCCCTCAG
ACTGGGTTCCTTCTCAAGCTCGCCCTCTGGAGGGGCAGCGCAGCCTCCCACCAAGGGCCCTGCGACCACA
GCAGGGATTGGGATGAATTGCCTGTCCTGGATCTGCTCTAGAGGCCCAAGCTGCCTGCCTGAGGAAGGAT
GACTTGACAAGTCAGGAGACACTGTTCCCAAAGCCTTGACCAGAGCACCTCAGCCCGCTGACCTTGCACA
AACTCCATCTGCTGCCATGAGAAAAGGGAAGCCGCCTTTGCAAAACATTGCTGCCTAAAGAAAATCAGCA
GCCTCAGGGCCCAATTCTGCCACTTCTGGTTTGGGTACAGTTAAAGGCAACCCTGAGGGACTTGGCAGTAG
AAATCCAGGGCCTCCCCTGGGGCTGGCAGCTTCGTGTGCAGCTAGAGCTTTACCTGAAAGGAAGTCTCTG
GGCCCAGAACTCTCCACCAAGAGCCTCCCTGCCGTTCGCTGAGTCCCAGCAATTCTCCTAAGTTGAAGGG
ATCTGAGAAGGAGAAGGAAATGTGGGGTAGATTTGGTGGTGGTTAGAGATATGCCCCCCTCATTACTGCC
AACAGTTTCGGCTGCATTTCTTCACGCACCTCGGTTCCTCTTCCTGAAGTTCTTGTGCCCTGCTCTTCAG
CACCATGGGCCTTCTTATACGGAAGGCTCTGGGATCTCCCCCTTGTGGGGCAGGCTCTTGGGGCCAGCCT
AAGATCATGGTTTAGGGTGATCAGTGCTGGCAGATAAATTGAAAAGGCACGCTGGCTGTGATCTTAAAT
GAGGACAATCCCCCCAGGGCTGGGCACTCCTCCCCTCCCCTCACTTCTCCCACCTGCAGAGCCAGTGTCC
TTGGGTGGGCTAGATAGGATATACTGTATGCCGGCTCCTTCAAGCTGCTGACTCACTTTATCAATAGTTC
CATTTAAATTGACTTCAGTGGTGAGACTGTATCCTGTTTGCTATTGCTTGTTGTGCTATGGGGGGAGGGG
GGAGGAATGTGTAAGATAGTTAACATGGGCAAAGGGAGATCTTGGGGTGCAGCACTTAAACTGCCTCGTA
ACCCTTTTCATGATTTCAACCACATTTGCTAGAGGGAGGGAGCAGCCACGGAGTTAGAGGCCCTTGGGGT
TTCTCTTTTCCACTGACAGGCTTTCCCAGGCAGCTGGCTAGTTCATTCCCTCCCCAGCCAGGTGCAGGCG
TAGGAATATGGACATCTGGTTGCTTTGGCCTGCTGCCCTCTTTCAGGGGTCCTAAGCCCACAATCATGCC
TCCCTAAGACCTTGGCATCCTTCCCTCTAAGCCGTTGGCACCTCTGTGCCACCTCTCACACTGGCTCCAG
ACACACAGCCTGTGCTTTTTGAGCTGAGATCACTCGCTTCACCCTCCTCATCTTTGTTCTCCAAGTAAAG
CCACGAGGTCGGGGCGAGGGCAGAGGTGATCACCTGCGTGTCCCATCTACAGACCTGCAGCTTCATAAAA
CTTCTGATTTCTCTTCAGCTTTGAAAAGGGTTACCCTGGGCACTGGCCTAGAGCCTCACCTCCTAATAGA
CTTAGCCCCATGAGTTTGCCATGTTGAGCAGGACTATTTCTGGCACTTGCAAGTCCCATGATTTCTTCGG
TAATTCTGAGGGTGGGGGGGAGGGACATGAAATCATCTTAGCTTAGCTTTCTGTCTGTGAATGTCTATATA
GTGTATTGTGTGTTTTAACAAATGATTTACACTGACTGTTGCTGTAAAAGTGAATTTGGAAATAAAGTTA
TTACTCTGATTAAA
SEQ ID NO:2
>reverse complement of SEQ ID NO:1
TTTAATCAGAGTAATAACTTTATTTCCAAATTCACTTTTACAGCAACAGTCAGGTGTAAATCATTTGTTAAAACACACAATACACTATATAGACATTCACAGACAGAAAGCTAAGCTAAGATGATTTCATGTCCCTCCCCCCACCCTCAGAATTACCGAAGAAATCATGGGACTTGCAAGTGCCAGAAATAGTCCTGCTCAACATGGCAAACTCATGGGGCTAAG
TCTATTAGGAGGTGAGGCTCTAGGCCAGTGCCCAGGGTAACCCTTTTCAAAGCTGAAGAGAAATCAGAAG
TTTTATGAAGCTGCAGGTCTGTAGATGGGACACGCAGGTGATCACCTCTGCCCTCGCCCCGACCTCGTGG
CTTTACTTGGAGAACAAAGATGAGGAGGGTGAAGCGAGTGATCTCAGCTCCAAAAGCACAGGCTGTGTGT
CTGGAGCCAGTGTGAGAGGTGGCACAGAGGTGCCAACGGCTTAGAGGGAAGGATGCCAAGGTCTTAGGGA
GGCATGATTGTGGGCTTAGGACCCCTGAAAGAGGGCAGCAGGCCAAAGCAACCAGATGTCCATATTCCTA
CGCCTGCACCTGGCTGGGGAGGGAATGAACTAGCCAGCTGCCTGGGAAAGCCTGTCAGTGGAAAAGAGAA
ACCCCAAGGGCCTCTAACTCCGTGGCTGCTCCCTCCCTCTAGCAAATGTGGTTGAAATCATGAAAAGGGT
TACGAGGCAGTTTAATGCTGCACCCCAAGATCTCCCTTTGCCCATGTTAACTATCTTACACATTCCTCC
CCCCTCCCCCCATAGCACAACAAGCAATAGCAAACAGGATACAGTCTCACCACTGAAGTCAATTTAAATG
GAACTATTGATAAAGTGAGTCAGCAGCTTGAAGGAGCCGGCATACAGTATATCCTATCTAGCCCCACCCAA
GGACACTGGCTCTGCAGGTGGGAGAAGTGAGGGGAGGGGAGGAGTGCCCAGCCCTGGGGGGATTGTCCTC
ATTTAAGATCACAAGCCAGCGTGCCTTTTCAATTTATCTGCCAGCACTGATCACCCTAAACCATGATCTT
AGGCTGGCCCCAAGAGCCTGCCCCACAAGGGGGAGATCCCAGAGCCTTCCGTATAAGAAGGCCCATGGTG
CTGAAGAGCAGGGCACAAGAACTTCAGGAAGAGGAACCGAGGTGCGTGAAGAAATGCAGCCGAAAACTGTT
GGCAGTAATGAGGGGGGCATATCTCTAACCACCACCAAATCTACCCCCACATTTCCTTCTCCTTCTCAGAT
CCCTTCAACTTAGGAGAATTGCTGGGACTCAGCGAACGGCAGGGAGGCTCTTGGTGGAGAGTTCTGGGCC
CAGAGACTTCCTTTCAGGTAAAGCTCTAGCTGCACACGAAGCTGCCAGCCCCAGGGGAGGCCCTGGATTT
CTACTGCCAAGTCCCTCAGGGTTGCCTTTAACTGTACCCAAACCAGAAGTGGCAGAATTGGGCCTGAGGC
TGCTGAGTTTCTTTAGGCAGCAATGTTTTGCAAAGGCGGCTTCCCTTTTCTCATGGCAGCAGATGGAGTT
TGTGCAAGGTCAGCGGGCTGAGGTGCTCTGGTCAAGGCTTTGGGAACAGTGTCTCCTGACTTGTCAAGTC
ATCCTTCCTCAGGCAGGCAGCTTGGGCCTCTAGAGCAGATCCAGGACAGGCAATTCATCCCAATCCCTGC
TGTGGTCGCAGGGCCCTTGGTGGGAGGCTGCGCTGCCCCTCCAGAGGGCGAGCTTGGAGAGGAACCCAGT
CTGAGGGGTGGCTGAGGCTCACGGAGCTTCTGGGAGCTGCAGATCCCCCCAGCTGGCAGTGGCTTCCTTT
TTCTTGTGATGCAGGAGTTGTTAAGCTCCTTTGGGACTGCCATGAGACTTCGGGCTATGACCAGAGAGAA
CCATCCTCGCGCCGCAAGCCAGACCAGCCACAAGACCTAGTCTGTGCCCTGACACAGGGAGCCCCAAGGG
GAAGTAGGGAAGGGGACATCATCGCTTCAGTCCTAATCCTGTGCTTCAGGCCTTCGTCACAGCTGAACGG
CCTCCTTAGCTGCTAGAAGCTGGTCTCTGTTGGGTCCCAGGTGCTGAGGAAAGCCTTTCAAAACTTGGGA
GGCCCCAGCAGGGTGGCACCACACAGGCCACACGAGTCCCAGTGTGGGGGTGAGAGACACCTCGTGAGGG
TGGGTTAGAAACCTCTTTACAAGCATTTCAAGATACATGCGTCCTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCTTTTCAC
TATCATAGTCACTCTGGTGAATCCAAGCATAAACAGACAAATCCAACTACAACTCAACAGGGTGCAGATG
GGGAGGGCAGGGCAACATCTATGTATATGTTCAGCTGCTCCAGCAGAACAGACAGCATGGCTTCCAGCTG
GGACTGGGGGAAAAGAACCATTTCCAAGGGGGTGTGTTCCCCTTTGTCGGGTGTGGAGGGGCTGATACTAT
GCATGTGGAGCTGAGCAGCGGGCTGGGCTGTCTGGGGAGGTTGGCAGCTACAAGCTAGGGTGCAAGTGGGGG
GACAGCGGGACTGTGGGCCTGCCCTGGGTGCCTTGCCCTTTCCATCCTGGTGCCACCACTGACAACCAAGA
CACCCAGCCTGCTGCTGTGGGCTCAGCACAGGAAGGGGCCAGGCCTTCTCAGGGGAAAGGGCTCTCTCCA
TGTCAACAAGGCAGAAACACCTAGGGTCACAGCTGAGCAGTGCCCTGGCTCACATCTGTGACGGGAGGAG
GAGACAGGGAACCGAATCAGATCATGAGATTCGTGGTGAGGGTCCCAGTTGGATGAGTGGAACTGAGAGT
GAGAGGCTGGGGTCCCACTCTTGTGCCTGGACTTTGCCTTCCCCTTAATTTCACCCTCAGTATGGAGTAGG
TACCTCCTGCAACCAACCAGGGTCATTACTGAGAAGGGGTGGGTGAGGCTGGGAATTCGGGACATTGTGAC
GTGTGATGAGGGGTATAGGCAGTGATTGGGCTCTCACGGCAGACAACAGCACAGCGGCGCAGACGGGGTG
ACTGCAGTGGCCGTGGGAAGGACAGGGGGCTCGGGACCTGCCTCCCAGACCCCCACACACTCCAGAGATG
CCAGTGGCCCAGGCTTGGAAACGGGTGGACGTCTCCCAAGAGGCACAAGTCCTTACAAAGAGAACTGGTT
AGCCCTAAAGTCCCAGGTCTGCAAAGTGGCCAAAATCATGGCAGCAGTTCCAACCTTCAGAACTCAATAA
AACAGGGTTTCTGTGGAGCAGGGAAGCCCCTCAACTCAGGCCCCCTACCCTGCAGGGAGGGAGGAAGA
GGCCAGGCTCTCTCAAGACATCAAGGTCAGTCTTTTCTAAGGAGGTCATCCACGAAGTGCCACCCTCCTGC
CAGCTTGCCTTCTCTTTTTACCCGCTGTCCCTTTCTCCCACAGGCTGCCCTGCAGAGGGTGGCACACTGAC
CCACAGCAGGCCCCCCACCCCCGGCCACCAAGGACAGGCGGCGCGCTCAGACGCTGCAGGGTGGCATAGGCCT
TGGCTCTCCCAGCGGCAAGGAGGGGGATGTCTACTCTCCAGCACGTGGCTTCCTCTCCCACTCCCACTTC
TTGTGCTTCCTCTCCCCTCTGCCCAGCCCCTGCCTCGGCCTCCCCCGTGGCCTCCCGCCCCCACCCCAACC
CCCGTCACACTCACACAAGGTTGACATCGTCTGCCTGTGGCTCCACGAACACACCAAGTTTCAAATCCTT
TGTTGCTGCCACTGCCTCTGTGACACCCCCACAACAGGGCCAGAGGTGGTTGGCACCCCCAGTCCCTTGA
AATCCCCCAGAAGCAGCTTTCAGAGCCTCTCCTTCTCCCTCTTCTACATGGAGGGGGAAGAAAAAAGAAT
CAAAAGGAATTGCCTGAGGAAATGTTGGATGTGGCCATGTTTTTGAATGTTTTTTTTTAAATATTTTATT
ACTAGCCCACCCATCAATTTGGAAAGATGAAATTTGCTCTTACTCCCATCACTGATTTTGAAGTCCCGAG
CCAAAGCCGAGTGACAAAAGCAGGTTAAGTGATTAACCAATTAACCGAACTGCGAGGAGCAGCTGGGGGC
AGAGGGCGGGGGCCGGGTCATTATTCTTTTTTTTTCCACACTCTCTCATTCTCTCCTCTCCACAATTATT
GACCGCCCCAGGGGCCTGATCACAAACCCTGCTTGGCCAGGGAGGCAGACACCTCGTCAGCTAGCGTGGC
GAGCTGGGGCGAGTCTACCATGTCGATGCTGCCGGTGGAGGAGACATTGCTGAGATGCCGTGGAGACGTG
TCCCCAGACACCACTGGCGACTTGTACACGATCTCCGCCCCGTGGTCTGTCTTGGCTTTTGGCGTTCTCGC
GGAAGGTCAGCTTGTGGGTTTCAATCTTTTTATTTCCTCCGCCAGGGACGTGGGTGATATTGTCCAGGGA
CCCAATCTTCGACTGGACTCTGTCCTTGAAGTCAAGCTTCTCAGATTTTACTTCCACCTGGCCACCTCCT
GGTTTATGATGGATGTTGCCTAATGAGCCACACTTGGAGGTCACCTTGCTCAGGTCAACTGGTTTGTAGA
CTATTTGCACCTTCCCGCCTCCCGGCTGGTGCTTCAGGTTCTCAGTGGAGCCGATCTTGGACTTGACATT
CTTCAGGTCTGGCATGGGCACGGGGGCTGTCTGCAGGCGGCTCTTGGCGGAAGACGGCGACTTGGGTGGA
GTACGGACCACTGCCACCTTCTTGGGCTCCCGGGTGGGTGGGGTTGGAAGGGACGGGGTGCGGGAGCGGC
TGCCGGGAGTGCCTGGGGAGCCGGGGCTGCTGTAGCCGCTGCGATCCCCTGATTTTGGAGGTTCACCAGA
GCTGGGTGGTGTCTTTGGAGCGGGCGGGGTTTTTGCTGGAATCCTGGTGGCGTTGGCCTGGCCCTTCTGG
CCTGGAGGGGCTGCTCCCCGCGGTGTGGCGATCTTCGTTTTACCATCAGCCCCCTTGGCTTTTTTGTCAT
CGCTTCCAGTCCCGTCTTTGCTTTTACTGACCATGCGAGCTTGGGTCACGTGACCAGCAGCTTCGTCTTC
CAGGCTGGGGGTGTCTCCAATGCCTGCTTCTTCAGCTTTCAGGCCAGCGTCCGTGTCACCCTCTTGGTCT
TGGTGCATGGTGTAGCCCCCCTGATTCTTTCCTGTCCCCCAACCCGTACGTCCCAGCGTGATCTTCCATCA
CTTCGAACTCCTGGCGGGGCTCAGCCATCCTGGTTCAAAGTTCACCTGATAGTCGACAGAGGCGAGGACG
GGAGAGGACAGCGGAGGAGGAGAAGGTGGCTGTGGTGGCGGCGGCAGAAGGTGGGCGGTGGCAGCGGCGC
TGCTGTTGGTGCCGGAGCTGGTGGGTGGCGGTGACTGCGAGGGCGCGCGCCGGCGAAGAGGGCGCGTTCC
TGAGGCCGGCGGGCGGCGCAGGCGCGAGCAGCGGGAACGCGAGCCTCCCCAGGGGAGGGGGCGGGCAGCG
CGGCCTCCGCGGGAGCCTTCTCCTCCGGCCACTAGTGGGCGCGCGCGAGCGCCCTGCCGCTCGGCCGTCC
SEQ ID NO:3
>NM_005910.6 Human microtubule-associated protein tau (MAPT), transcript variant 2, mRNA
GGACGGCCGAGCGGCAGGGCGCTCGCGCGCGCCCACTAGTGGCCGGAGGAGAAGGCTCCCGCGGAGGCCG
CGCTGCCCGCCCCCTCCCCTGGGGAGGCTCGCGTTCCCGCTGCTCGCGCCTGCGCCGCCCGCCGGCCTCA
GGAACGCGCCCTCTTCGCCGGCGGCGCGCCCTCGCAGTCACCGCCACCCACCAGCTCCGGCACCAACAGCA
GCGCCGCTGCCACCGCCCACCTTTCTGCCGCCGCCACCACAGCCACCTTCTCCTCCTCCGCTGTCCTCTCC
CGTCCTCGCCTCTGTCGACTATCAGGTGAACTTTGAACCAGGATGGCTGAGCCCCGCCAGGAGTTCGAAG
TGATGGAAGATCACGCTGGGACGTACGGGTTGGGGGACAGGAAAGATCAGGGGGGCTACACCATGCACCA
AGACCAAGAGGGTGACACGGACGCTGGCCTGAAAGAATCTCCCCTGCAGACCCCCACTGAGGACGGATCT
GAGGAACCGGGCTCTGAAACCTCTGATGCTAAGAGCACTCCAACAGCGGAAGATGTGACAGCACCCTTAG
TGGATGAGGGAGCTCCCGGCAAGCAGGGCTGCCGCGCAGCCCCACACGGAGATCCCAGAAGGAACCACAGC
TGAAGAAGCAGGCATTGGAGACACCCCCAGCCTGGAAGACGAAGCTGCTGGTCACGTGACCCAAGCTCGC
ATGGTCAGTAAAAGCAAAGACGGGACTGGAAGCGATGACAAAAAAGCCAAGGGGGCTGATGGTAAAACGA
AGATCGCCACACCGCGGGGAGCAGCCCCTCCAGGCCAGAAGGGCCAGGCCAACGCCACCAGGATTCCAGC
AAAAACCCCGCCCGCTCCAAAGACACCACCCAGCTCTGGTGAACCTCCAAAATCAGGGGATCGCAGCGGC
TACAGCAGCCCCGGCTCCCCAGGCACTCCCGGCAGCCGCTCCCGCACCCCGTCCCTTCCAACCCCACCCA
CCCGGGAGCCCAAGAAGGTGGCAGTGGTCCGTACTCCACCCAAGTCGCCGTCTTCCGCCAAGAGCCGCCT
GCAGACAGCCCCCGTGCCCATGCCAGACCTGAAGAATGTCAAGTCCAAGATCGGCTCCACTGAGAACCTG
AAGCACCAGCCGGGAGGCGGGAAGGTGCAGATAATTAATAAGAAGCTGGATCTTAGCAACGTCCAGTCCA
AGTGTGGCTCAAAGGATAATATCAAACACGTCCCGGGAGGCGGCAGTGTGCAAATAGTCTACAAACCAGT
TGACCTGAGCAAGGTGACCTCCAAGTGTGCTCATTAGGCAACATCCATCATAAACCAGGAGGTGGCCAG
GTGGAAGTAAAATCTGAGAAGCTTGACTTCAAGGACAGAGTCCAGTCGAAGATTGGGTCCCTGGACAATA
TCACCCACGTCCCTGGCGGAGAAATAAAAAGATTGAAACCCACAAGCTGACCTTCCGCGAGAACGCCAA
AGCCAAGACAGACCACGGGGCGGAGATCGTGTACAAGTCGCCAGTGGTGTCTGGGGACACGTCTCCACGG
CATCTCAGCAATGTCTCCTCCACCGGCAGCATCGACATGGTAGACTCGCCCCAGCTCGCCACGCTAGCTG
ACGAGGTGTCTGCCTCCCTGGCCAAGCAGGGTTTGTGATCAGGCCCCTGGGGCGGTCAATAATTGTGGAG
AGGAGAGAATGAGAGAGTGTGGAAAAAAAAAGAATAATGACCCGGCCCCCGCCCTCTGCCCCCAGCTGCT
CCTCGCAGTTCGGTTAATTGGTTAATCACTTAACCTGCTTTTGTCACTCGGCTTTGGCTCGGGACTTCAA
AATCAGTGATGGGAGTAAGAGCAAATTTCATCTTTCCAAATTGATGGGTGGGCTAGTAATAAAATATTTA
AAAAAAAACATTCAAAAACATGGCCACATCCAACATTTCCTCAGGCAATTCCTTTTGATTCTTTTTTCTT
CCCCCTCCATGTAGAAGAGGGAGAAGGAGAGGCTCTGAAAGCTGCTTCTGGGGGATTTCAAGGGACTGGG
GGTGCCAACCACCTCTGGCCCTGTTGTGGGGGTGTCACAGAGGCAGTGGCAGCAACAAAGGATTTGAAAC
TTGGTGTGTTCGTGGAGCCACAGGCAGACGATGTCAACCTTGTGTGAGTGTGACGGGGGTTGGGGTGGGG
CGGGAGGCCACGGGGGAGGCCGAGGCAGGGGCTGGGCAGAGGGGAGAGGAAGCACAAGAAGTGGGAGTGG
GAGAGGAAGCCACGTGCTGGAGAGTAGACATCCCCCTCCTTGCCGCTGGGAGAGCCAAGGCCTATTGCCAC
CTGCAGCGTCTGAGCGGCCGCCTGTCCTTGGTGGCCGGGGGTGGGGGCCTGCTGTGGGTCAGTGTGCCAC
CCTCTGCAGGGCAGCCTGGTGGGAGAAGGGACAGCGGGTAAAAAGAGAAGGCAAGCTGGCAGGAGGGTGGC
ACTTCGTGGATGACCTCCTTAGAAAAGACTGACCTTGATGTCTTGAGAGCGCTGGCCTCTTCCTCCCTCC
CTGCAGGGTAGGGGGCCTGAGTTGAGGGGCTTCCCTCTGCTCCACAGAAACCCTGTTTTATTGAGTTCTG
AAGGTTGGAACTGCTGCCATGATTTTGGCCACTTTGCAGACCTGGGACTTTAGGGCTAACCAGTTCTCTT
TGTAAGGACTTGTGCCTCTTGGGAGACGTCCCACCCGTTTCCAAGCCTGGGCCACTGGCATCTCTGGAGTG
TGTGGGGGTCTGGGAGGCAGGTCCCGAGCCCCCTGTCCTTCCCACGGCCACTGCAGTCACCCCGTCTGCG
CCGCTGTGCTGTTGTCTGCCGTGAGAGCCCAATCACTGCCTATACCCCTCATCACACGTCACAATGTCCC
GAATTCCCAGCCTCACCACCCCTTCTCAGTAATGACCCTGGTTGGTTGCAGGAGGTACCTACTCCATACT
GAGGGTGAAATTAAGGGAAGGCAAAGTCCAGGCACAAGAGTGGGACCCCAGCCTCTCACTCTCAGTTCCA
CTCATCCAACTGGGACCCTCACCACGAATCTCATGATCTGATTCGGTTCCCTGTCTCCTCCTCCCGTCAC
AGATGTGAGCCAGGGCACTGCTCAGCTGTGACCCTAGGTGTTTCTGCCTTGTTGACATGGAGAGAGCCCT
TTCCCCTGAGAAGGCCTGGCCCCTTCCTGTGCTGAGCCCACAGCAGCAGGCTGGGTGTCTTGGTTGTTCAG
TGGTGGCACCAGGATGGAAGGGCAAGGCACCCAGGGCAGGCCCACAGTCCCGCTGTCCCCCACTTGCACC
CTAGCTTGTAGCTGCCAACCTCCCAGACAGCCCAGCCCGCTGCTCAGCTCCACATGCATAGTATCAGCCC
TCCACACCCGACAAAGGGGAACACACCCCCTTGGAAATGGTTCTTTTCCCCCAGTCCCAGCTGGAAGCCA
TGCTGTCTGTTCTGCTGGAGCAGCTGAACATATACATAGATGTTGCCCTGCCCTCCCCATCTGCACCCTG
TTGAGTTGTAGTTGGATTTGTCTGTTTATGCTTGGATTCACCAGAGTGACTATGATAGTGAAAAGAAAAA
AAAAAAAAAAAAAGGACGCATGTATCTTGAAATGCTTGTAAAGAGGTTTCTAACCCCACCCTCACGAGGTG
TCTCTCACCCCCACACTGGGACTCGTGTGGCCTGTGTGGTGCCACCCTGCTGGGGCCTCCCAAGTTTTGA
AAGGCTTTCCTCAGCACCTGGGACCCAACAGAGACCAGCTTCTAGCAGCTAAGGAGGCCGTTCAGCTGTG
ACGAAGGCCTGAAGCACAGGATTAGGACTGAAGCGATGATGTCCCCTTCCCTACTTCCCCTTGGGGCTCC
CTGTGTCAGGGCACAGACTAGGTCTTGTGGCTGGTCTGGCTTGCGGCGCGAGGATGGTTCTCTCTGGTCA
TAGCCCGAAGTCTCATGGCAGTCCCAAAGGAGGCTTACAACTCCTGCATCACAAGAAAAAGGAAGCCACT
GCCAGCTGGGGGGATCTGCAGCTCCCAGAAGCTCCGTGAGCCTCAGCCACCCCTCAGACTGGGTTCCTCT
CCAAGCTCGCCCTCTGGAGGGGCAGCGCAGCCTCCCACCAAGGGCCCTGCGACCACAGCAGGGATTGGGA
TGAATTGCCTGTCCTGGATCTGCTCTAGAGGCCCAAGCTGCCTGCCTGAGGAAGGATGACTTGACAAGTC
AGGAGACACTGTTCCCAAAGCCTTGACCAGAGCACCTCAGCCCGCTGACCTTGCACAAACTCCATCTGCT
GCCATGAGAAAAGGGAAGCCGCCTTTGCAAAACATTGCTGCCTAAAGAAACTCAGCAGCCTCAGGCCCAA
TTCTGCCACTTCTGGTTTGGGTACAGTTAAAGGCAACCCTGAGGGACTTGGCAGTAGAAATCCAGGGCCT
CCCCTGGGGCTGGCAGCTTCGTGTGCAGCTAGAGCTTTACCTGAAAGGAAGTCTCTGGGCCCAGAACTCT
CCACCAAGAGCCTCCCTGCCGTTCGCTGAGTCCCAGCAATTCTCCTAAGTTGAAGGGATCTGAGAAGGAG
AAGGAAATGTGGGGTAGATTTGGTGGTGGTTAGAGATATGCCCCCCTCATTACTGCCAACAGTTTCGGCT
GCATTTCTTCACGCACCTCGGTTCCTCTTCCTGAAGTTCTTGTGCCCTGCTCTTCAGCACCATGGGCCTT
CTTATACGGAAGGCTCTGGGATCTCCCCCTTGTGGGGCAGGCTCTTGGGGCCAGCCTAAGATCATGGTTT
AGGGTGATCAGTGCTGGCAGATAAATTGAAAAGGCACGCTGGCTTGTGATCTTAAATGAGGACAATCCCC
CCAGGGCTGGGCACTCCTCCCCTCCCCTCACTTCTCCCACCTGCAGAGCCAGTGTCCTTGGGTGGGCTAG
ATAGGATATACTGTATGCCGGCTCCTTCAAGCTGCTGACTCACTTTATCAATAGTTCCATTTAAATTGAC
TTCAGTGGTGAGACTGTATCCTGTTTGCTATTGCTTGTTGTGCTATGGGGGGAGGGGGGAGGAATGTGTA
AGATAGTTAACATGGGCAAAGGGAGATCTTGGGGTGCAGCACTTAAACTGCCTCGTAACCCTTTTCATGA
TTTCAACCACATTTGCTAGAGGGAGGGAGCAGCCACGGAGTTAGAGGCCCTTGGGGTTTCTCTTTTCCAC
TGACAGGCTTTCCCAGGCAGCTGGCTAGTTCATTCCCTCCCCAGCCAGGTGCAGGCGTAGGAATATGGAC
ATCTGGTTGCTTTGGCCTGCTGCCCTCTTTCAGGGGTCCTAAGCCCACAATCATGCCTCCCTAAGACCTT
GGCATCCTTCCCTCTAAGCCGTTGGCACCTCTGTGCCACCTCTCACACTGGCTCCAGACACACAGCCTGT
GCTTTTGGAGCTGAGATCACTCGCTTCACCCTCCTCATCTTTGTTCTCCAAGTAAAGCCACGAGGTCGGG
GCGAGGGCAGAGGTGATCACCTGCGTGTCCCATCTACAGACCTGCAGCTTCATAAAACTTCTGATTTCTC
TTCAGCTTTGAAAAGGGTTACCCTGGGCACTGGCCTAGAGCCTCACCTCCTAATAGACTTAGCCCCATGA
GTTTGCCATGTTGAGCAGGACTATTTCTGGCACTTGCAAGTCCCATGATTTCTTCGGTAATTCTGAGGGT
GGGGGGAGGGACATGAAATCATCTTAGCTTAGCTTTCTGTCTGTGAATGTCTATATAGTGTATTGTGTGT
TTTAACAAATGATTTACACTGACTGTTGCTGTAAAAGTGAATTTGGAAATAAAGTTATTACTCTGATTAA
A.
SEQ ID NO: 4
>reverse complement of SEQ ID NO:3
TTTAATCAGAGTAATAACTTTATTTCCAAATTCACTTTTACAGCACAGTCAGTGTAAATCATTTGTTAAA
ACACACAATACACTATATAGACATTCACAGACAGAAAGCTAAGCTAAGATGATTTCATGTCCCTCCCCCC
ACCCTCAGAATTACCGAAGAAATCATGGGACTTGCAAGTGCCAGAAATAGTCCTGCTCAACATGGCAAAC
TCATGGGGCTAAGTCTATTAGGAGGTGAGGCTCTAGGCCAGTGCCCAGGGTAACCCTTTTCAAAGCTGAA
GAGAAATCAGAAGTTTTATGAAGCTGCAGGTCTGTAGATGGGACACGCAGGTGATCACCTCTGCCCTCGC
CCCGACCTCGTGGCTTTACTTGGAGAACAAAGATGAGGAGGGTGAAGCGAGTGATCTCAGCTCCAAAAGC
ACAGGCTGTGTGTCTGGAGCCAGTGTGAGAGGTGGCACAGAGGTGCCAACGGCTTAGAGGGAAGGATGCC
AAGGTCTTAGGGAGGCATGATTGTGGGCTTAGGACCCCTGAAAGAGGGCAGCAGGCCAAAGCAACCAGAT
GTCCATATTCCTACGCCTGCACCTGGCTGGGGAGGGAATGAACTAGCCAGCTGCCTGGGAAAGCCTGTCA
GTGGAAAAGAGAAACCCCAAGGGCCTCTAACTCCGTGGCTGCTCCCTCCCTCTAGCAAATGTGGTTGAAA
TCATGAAAAGGGTTACGAGGCAGTTTTAAGTGCTGCACCCCAAGATCTCCCTTTGCCCATGTTAACTATCT
TACACATTCCTCCCCCCTCCCCCCATAGCACAACAAGCAATAGCAAACAGGATACAGTCTCACCACTGAA
GTCAATTTAAATGGAACTATTGATAAAGTGAGTCAGCAGCTTGAAGGAGCCGGCATACAGTATATCCTAT
CTAGCCCACCCAAGGACACTGGCTCTGCAGGTGGGAGAAGTGAGGGGAGGGGAGGAGTGCCCAGCCCTGG
GGGGATTGTCCTCATTTAAGATCACAAGCCAGCGTGCCTTTTCAATTTATCTGCCAGCACTGATCACCCT
AAACCATGATCTTAGGCTGGCCCCAAGAGCCTGCCCCACAAGGGGGAGATCCCAGAGCCTTCCGTATAAG
AAGGCCCATGGTGCTGAAGAGCAGGGCACAAGAACTTCAGGAAGAGGAACCGAGGTGCGTGAAGAAATGC
AGCCGAAACTGTTGGCAGTAATGAGGGGGGCATATCTCTAACCACCACCAAATCTACCCCACATTTCCTT
CTCCTTCTCAGATCCCTTCAACTTAGGAGAATTGCTGGGACTCAGCGAACGGCAGGGAGGCTCTTGGTGG
AGAGTTCTGGGCCCAGAGACTTCCTTTCAGGTAAAGCTCTAGCTGCACACGAAGCTGCCAGCCCCAGGGG
AGGCCCTGGATTTCTACTGCCAAGTCCCTCAGGGTTGCCTTTAACTGTACCCAAACCAGAAGTGGCAGAA
TTGGGCCTGAGGCTGCTGAGTTTCTTTAGGCAGCAATGTTTTGCAAAGGCGGCTTCCCTTTTCTCATGGC
AGCAGATGGAGTTTGTGCAAGGTCAGCGGGCTGAGGTGCTCTGGTCAAGGCTTTGGGAACAGTGTCTCCT
GACTTGTCAAGTCATCCTTCCTCAGGCAGGCAGCTTGGGCCTCTAGAGCAGATCCAGGACAGGCAATTCA
TCCCAATCCCTGCTGTGGTCGCAGGGCCCTTGGTGGGAGGCTGCGCTGCCCCTCCAGAGGGCGAGCTTGG
AGAGGAACCCAGTCTGAGGGGTGGCTGAGGCTCACGGGAGCTTCTGGGAGCTGCAGATCCCCCCAGCTGGC
AGTGGCTTCCTTTTTCTTGTGATGCAGGAGTTGTAAGCCTCCTTTTGGGACTGCCATGAGACTTCGGGCTA
TGACCAGAGAGAACCATCCTCGCGCCGCAAGCCAGACCAGCCACAAGACCTAGTCTGTGCCCTGACACAG
GGAGCCCCAAGGGGAAGTAGGGAAGGGGACATCATCGCTTCAGTCCTAATCCTGTGCTTCAGGCCTTCGT
CACAGCTGAACGGCCTCCTTAGCTGCTAGAAGCTGGTCTCTGTTGGGTCCCAGGTGCTGAGGAAAGCCTT
TCAAAACTTGGGAGGCCCCAGCAGGGTGGCACCACACAGGCCACACGAGTCCCAGTGTGGGGGTGAGAGA
CACCTCGTGAGGGTGGGTTAGAAACCTCTTTACAAGCATTTCAAGATACATGCGTCCTTTTTTTTTTTTT
TTTTCTTTTCACTATCATAGTCACTCTGGTGAATCCAAGCATAAACAGACAAATCCAACTACAACTCAA
CAGGGTGCAGATGGGGAGGGCAGGGCAACATCTATGTATATGTTCAGCTGCTCCAGCAGAACAGACAGCA
TGGCTTCCAGCTGGGACTGGGGGAAAAGAACCATTTCCAAGGGGGTGTGTTCCCCTTTGTCGGGTGTGGA
GGGCTGATACTATGCATGTGGAGCTGAGCAGCGGGCTGGGCTGTCTGGAGGTTGGCAGCTACAAGCTAG
GGTGCAAGTGGGGGACAGCGGGACTGTGGGCCTGCCCTGGGTGCCTTGCCCTTCCATCCTGGTGCCCACCA
CTGACAACCAAGACACCCAGCCTGCTGCTGTGGGCTCAGCACAGGAAGGGGCCAGGCCTTCTCAGGGGAA
AGGGCTCTCTCCATGTCAACAAGGCAGAAACACCTAGGGTCACAGCTGAGCAGTGCCCTGGCTCACATCT
GTGACGGGAGGAGGAGACAGGGAACCGAATCAGATCATGAGATTCGTGGTGAGGGTCCCAGTTGGATGAG
TGGAACTGAGAGTGAGAGGCTGGGGTCCCACTCTTGTGCCTGGACTTTGCCCTTCCCTTAATTTCACCCTC
AGTATGGAGTAGGTACCTCCTGCAACCAACCAGGGTCATTACTGAGAAGGGGTGGGTGAGGCTGGGAATTC
GGGACATTGTGACGTGTGATGAGGGGTATAGGCAGTGATTGGGCTCTCACGGCAGACAACAGCACAGCGG
CGCAGACGGGGTGACTGCAGTGGCCGTGGGAAGGACAGGGGGCTCGGGACCTGCCTCCCAGACCCCCACA
CACTCCAGAGATGCCAGTGGCCCAGGCTTGGAAACGGGTGGACGTCTCCCAAGAGGCACAAGTCCTTACA
AAGAGAACTGGTTAGCCCTAAAGTCCCAGGTCTGCAAAGTGGCCAAAATCATGGCAGCAGTTCCAACCTT
CAGAACTCAATAAAACAGGGTTTCTGTGGAGCAGAGGGAAGCCCCTCAACTCAGGCCCCCTACCCTGCAG
GGAGGGAGGAAGAGGCCAGCGCTCTCAAGACATCAAGGTCAGTCTTTTCTAAGGAGGTCATCCACGAAGT
GCCACCCTCCTGCCAGCTTGCCTTTCTCTTTTTACCCGCTGTCCCTTCTCCCACAGGCTGCCCTGCAGAGG
GTGGCACACTGACCCACAGCAGGCCCCCACCCCCGGCCACCAAGGACAGGCGGCCGCTCAGACGCTGCAG
GTGGCATAGGCCTTGGCTCTCCCAGCGGCAAGGAGGGGGATGTCTACTCTCCAGCACGTGGCTTCCTCTC
CCACTCCCACTTCTTGTGCTTCCTCTCCCCTCTGCCCAGCCCCTGCCTCGGCCTCCCCCGTGGCCTCCCG
CCCCACCCCAACCCCCGTCACACTCACACAAGGTTGACATCGTCTGCCTGTGGCTCCCACGAACACACCAA
GTTTCAAATCCTTTTGTTGCTGCCACTGCCTCTGTGACACCCCCACAACAGGGCCAGAGGTGGTTGGCACC
CCCAGTCCCCTTGAAATCCCCCAGAAGCAGCTTTCAGAGCCTCTCCTTCTCCCTCTTCTACATGGAGGGGG
AAGAAAAAAGAATCAAAAGGAATTGCCTGAGGAAATGTTGGATGTGGCCATGTTTTTGAATGTTTTTTTTT
TAAATATTTTATTACTAGCCCACCCATCAATTTGGAAAGATGAAATTTGCTCTTACTCCCATCACTGATT
TTGAAGTCCCGAGCCAAAGCCGAGTGACAAAAGCAGGTTAAGTGATTAACCAATTAACCGAACTGCGAGG
AGCAGCTGGGGGCAGAGGGCGGGGGCCGGGTCATTATTCTTTTTTTTTCCACACTCTCTCATTCTCTCCT
CTCCACAATTATTGACCGCCCCAGGGGCCTGATCACAAACCCTGCTTGGCCAGGGAGGCAGACACCTCGT
CAGCTAGCGTGGCGAGCTGGGGCGAGTCTACCATGTCGATGCTGCCGGTGGAGGAGACATTGCTGAGATG
CCGTGGAGACGTGTCCCCAGACACCACTGGCGACTTGTACACGATCTCCGCCCCGTGGTCTGTCTTGGCT
TTGGCGTTCTCGCGGAAGGTCAGCTTGTGGGTTTCAATCTTTTTATTTCCTCCGCCAGGGACGTGGGTGA
TATTGTCCAGGGACCCAATCTTCGACTGGACTCTGTCCTTGAAGTCAAGCTTCTCAGATTTTACTTCCAC
CTGGCCACCTCCTGGTTTATGATGGATGTTGCCTAATGAGCCACACTTGGAGGTCACCTTGCTCAGGTCA
ACTGGTTTGTAGACTATTTGCACACTGCCGCCTCCCGGGACGTGTTTGATATTATCCTTTGAGCCACACT
TGGACTGGACGTTGCTAAGATCCAGCTTCTTATTAATTATCTGCACCTTCCCGCCTCCCGGCTGGTGCTT
CAGGTTCTCAGTGGAGCCGATCTTGGACTTGACATTCTTCAGGTCTGGCATGGGCACGGGGGCTGTCTGC
AGGCGGCTCTTGGCGGAAGACGGCGACTTGGGTGGAGTACGGACCACTGCCACCTTCTTGGGCTCCCGGG
TGGGTGGGGTTGGAAGGGACGGGGTGCGGGAGCGGCTGCCGGGAGTGCCTGGGGAGCCGGGGCTGCTGTA
GCCGCTGCGATCCCCTGATTTTGGAGGTTCACCAGAGCTGGGTGGTGTCTTTGGAGCGGGCGGGGGTTTTT
GCTGGAATCCTGGTGGCGTTGGCCTGGCCCTTCTGGCCTGGAGGGGCTGCTCCCCGCGGTGTGGCGATCT
TCGTTTTACCATCAGCCCCCTTGGCTTTTTTGTCATCGCTTCCAGTCCCGTCTTTGCTTTTACTGACCAT
GCGAGCTTGGGTCACGTGACCAGCAGCTTCGTCTTCCAGGCTGGGGGTGTCTCCAATGCCTGCTTTCTTCA
GCTGTGTTCCTTCTGGGATCTCCGTGTGGGGCTGCGCGGCAGCCTGCTTGCCGGGAGCTCCCTCATCCA
CTAAGGGTGCTGTCACATCTTCCGCTGTTGGAGTGCTCTTAGCATCAGAGGTTTCAGAGCCCGGTTCCTC
AGATCCGTCCTCAGTGGGGGTCTGCAGGGGAGATTCTTTCAGGCCAGCGTCCGTGTCACCCTCTTGGTCT
TGGTGCATGGTGTAGCCCCCCTGATTCTTTCCTGTCCCCCAACCCGTACGTCCCAGCGTGATCTTCCATCA
CTTCGAACTCCTGGCGGGGCTCAGCCATCCTGGTTCAAAGTTCACCTGATAGTCGACAGAGGCGAGGACG
GGAGAGGACAGCGGAGGAGGAGAAGGTGGCTGTGGTGGCGGCGGCAGAAGGTGGGCGGTGGCAGCGGCGC
TGCTGTTGGTGCCGGAGCTGGTGGGTGGCGGTGACTGCGAGGGCGCGCGCCGGCGAAGAGGGCGCGTTCC
TGAGGCCGGCGGGCGGCGCAGGCGCGAGCAGCGGGAACGCGAGCCTCCCCAGGGGAGGGGGCGGGCAGCG
CGGCCTCCGCGGGAGCCTTCTCCTCCGGCCACTAGTGGGCGCGCGCGAGCGCCCTGCCGCTCGGCCGTCC
SEQ ID NO:5
>NM_001038609.2 Mus musculus microtubule-associated protein tau (Mapt), transcript variant 1, mRNA
CCGCCGGCCTCCAGAACGCGCTTTCTCGGCCGCGCGCGCTCTCAGTCTCCGCCACCCACCAGCTCCAGCA
CCAGCAGCAGCGCCGCCGCCACCGCCCACCTTTCTGCCGCCGCCGCCACAACCACCTTTCTCCTCCGCTGTC
CTCTTCTGTCCTCGCCTTCTGTCGATTATCAGGCTTTGAACCAGTATGGCTGACCCTCGCCAGGAGTTTG
ACACAATGGAAGACCATGCTGGAGATTACACTCTGCTCCAAGACCAAGAAGGAGACATGGACCATGGCTT
AAAAGAGTCTCCCCCACAGCCCCCCGCCGATGATGGAGCGGAGGAACCAGGGTCGGAGACCTCCGATGCT
AAGAGCACTCCAACTGCTGAAGACGTGACTGCGCCCCTAGTGGATGAGAGAGGCTCCCGACAAGCAGGCCG
CTGCCCAGCCCCACACGGAGATCCCAGAAGGAATTACAGCCGAAGAAGCAGGCATCGGAGACACCCCGAA
CCAGGAGGACCAAGCCGCTGGGCATGTGACTCAAGCTCGTGTGGCCAGCAAAGACAGGACAGGAAATGAC
GAGAAGAAAGCCAAGGGCGCTGATGGCAAAACCGGGGCGAAGATCGCCACACCTCGGGGGAGCAGCCTCTC
CGGCCCAGAAGGGCACGTCCAACGCCCACCAGGATCCCGGCCAAGACCACGCCCAGCCCTAAGACTCCTCC
AGGGTCAGGTGAACCACCAAAATCCGGAGAACGAAGCGGCTACAGCAGCCCCGGCTCTCCCGGAACGCCT
GGCAGTCGCTCGCGCACCCCATCCCTACCAACACCGCCCACCCGGGAGCCCAAGAAGGTGGCAGTGGTCC
GCACTCCCCCTAAGTCACCATCAGCTAGTAAGAGCCGCCTGCAGACTGCCCCTTGTGCCCATGCCAGACCT
AAAGAATGTCAGGTCGAAGATTGGCTCTACTGAGAACCTGAAGCACCAGCCAGGAGGTGGCAAGGTGCAG
ATAATTAATAAGAAGCTGGATCTTAGCAACGTCCAGTCCAAGTGTGGCTCGAAGGATAATATCAAACACG
TCCCGGGTGGAGGCAGTGTGCAAATAGTCTACAAGCCGGTGGACCTGAGCAAAGTGACCTCCAAGTGTGG
CTCGTTAGGGAACATCCATCACAAGCCAGGAGGTGGCCAGGTGGAAGTAAAATCAGAGAAGCTGGACTTC
AAGGACAGAGTCCAGTCGAAGATTGGCTCCTTGGATAATATCACCCACGTCCCTGGAGGAGGGAATAAGA
AGATTGAAACCCACAAGCTGACCTTCAGGGAGAATGCCAAAGCCAAGACAGACCATGGAGCAGAAATTGT
GTATAAGTCACCCGGTGGTGTCTGGGGACACATCTCCACGGCACCTCAGCAATGTGTCTTCCACGGGCAGC
ATCGACATGGTGGACTCACCACAGCTTGCCACACTAGCCGATGAAGTGTCTGCTTCCTTGGCCAAGCAGG
GTTTGTGATCAGGCTCCCAGGGCAGTCAATAATCATGGAGAGAAGAGAGAGTGAGAGTGTGGAAAAAAAAA
AAAAAAAAAGAATGATCTGGCCCCTTGCCCTCTGCCCTCCCCGCTGCTCCTCATAGACAGGCTGACCTGC
TTGTCACCTAACCTGCTTTTTGTGGCTCGGATTTGGCTCGGGACTTCAAAATCAGTGATGGGAAAAGTACA
TTTCATCTTTCCAAATTGATTTGTGGGCTAAAAATAAAACATATTTAAGGGAAAAAAAAACATGTAAAAA
CATGGCCAAAAAATTTCCTTGGGCAATTGCTAATTGATTTCCCCCCCCTGACCCCGCCCTCCCTCTCTGA
GTATTAGAGGGTGAAGAAGGCTCTGGAGGCTGCTTCTGGGGAGTGGCTGAGGGACTAGGGCAGCTAATTG
CCCATAGCCCCATCCTAGGGGCTTCAGGGACAGTGGCAGCAATGAGAGATTTGAGACTTGGTGTGTTCGT
GGGGCCGTAGGCAGGTGCTGTTAACTTGGTGGGTGTGAGTGGGGACTGAAACAGCGACAGCGAAGGCTG
AGAGATGGATGGGGTGGACTGAGTTAGAGGACAGAGGTGAGGAAGGCAGGTTGGGAGAGGGGACACTGGCT
CCTTGCCAAGTAGCTTGGGGAGGACAGGGTGCTGCAGCTGCCTGCAGCAGTCCTAGCTAGCTCAGATGCC
TGCTTGATAAAGCACTGTGGGGGTAACGTGGGTGTGTGTGCCCCTTCTGCAGGGCAGCCTGTGGGAGAAG
GGGTATTGGGCAGAAGGAAGGTAAGCCAGCAGGTGGTACCTTGTAGATTGGTTCTCTTGAAGGCTGCTCT
TGACATCCCAGGGCACTGGCTTCTTCCTCCCTCCCCGCAAGGTGGGAGGTCCTGAGCGAGGTGTTTCCCT
TCGCTCCCACAGGAAAAGCTGCTTTACTGAGTTCTCAAGTTTGGAACTACAGCCATGATTTGGCCACCAT
TACAGACCTGGGACTTTAGGGCTAACCAGATCTTTGTAAGGACTTGTGCCTCTTGGGGGACCTCTGCCTG
TTCTCATGCTTGGCCCTCTGGCACTTCTGTAGTGGGAGGGATGGGGGGTGGTATTCTGGGATGTGGGTCC
CAGGCCTCCCATCCCTCACACAGCCACTGTATCCCCTCTCTCTGTCCTATCATGCCCACGTCTGCCACGA
GAGCTAGTCACTGCCGTCCGTACATCACGTCTCACTGTCCTGAGTGCCATGCCTCTCCCAGCCCCCATCC
CTGGCCCCTGGGTAGATATGGGCAATATCTGCTCTACACTAGGGGTTGGAGTCCAGGGAAGGCAAAGATT
TGGGCCTCAGTCTCTAGTCCTACGTTCCACGAATCCAACCAGTGTGCCTCCCACAAGGAACCTTACGACC
TTGTTTTGGTTCACTCCATTACTTCCTATCCTGGATGGGAACTGGTGTGTGCCTGCCTGGGGATGACCTTG
GACCTCTGCCTTTTCTTTTATCTAAGTGGATGCCTCCTAGGCCTGACTCCTTGTGTTGAGCTGGAGGCAG
CCAAGTCAGGTGCCAATGTCTTGGCATCAGTAAGAACAGTCAAGAGTCCCAGGGCAGGGCCACACTTCTC
CCATCTTTCGCTTCCACCCCAGCTTGTGATCGCTAGCCTCCCAGAGGCTCAGCTGCCATTAAGTCCCCATG
CACGTAATCAGTCTCCACACCCCAGTTTGGGGAACATACCCCCTTGATTGAAGTGTTTTTTTCCTCCGGT
CCCATGGAAACCATGCTGCCTGCCCTGCTGGAGCAGACGGCCACCTCCATAGATGCAGCCCTTTCTTTCC
CGTCTTCGCCCTGTTACGTTGTAGTTGGATTTGTCTGTTTGTCTGGGTTCACCAGAGTGACTATGATAGT
GAAAAGAAAAGAAAGAAAAAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAGAAAAAGAAAAAGGAAAAAAAAAAGGACGCAT
GTATCTTGAAATATTTGTCAAAAGGTTCTAGCCCACCACGTGATGGAGAGTCTGGATATCTCCTTCCTGA
CGTGGCTCCAGGCCAGTGCAGTGCTAACCTGCTGGGACATCCCATGTTTTGAAGGGTTTCTTCTGCATCT
GGGACCTCACAGACACTGGATTGTGACATTGGAGGTCTGTGACATTGGAGGTCAATGGCATTGGCCAAGG
CCTGAAGCACAGGACCAGCTAGAGGCAGCAGGCTCCGAGTGCCAGGGAGAGCTTGTGGCTGGCCTGTTTT
GTATGAAGATGGTCCTTTCTGATCACGACTTCAAATCCCACAGTAGCCCTGAAAGACATCTAAGAACTCC
TGCATCACAAGAGAAAAGGACACCAGTACCAGCAGGGAGAGCTGTGACCCTAGAAATTCCATGACGACCC
AGTAGATATCCTTGGGCCCTCTCCAAGCCTGGGCCTTTTCACCATAGAGTTTGGGATGGACTGTCCCACT
GATGAAGGGGACATCTTAGGAGACTCCCTTGGTTTCCAAGCTGTCAGCCCCCTGAACTTGCACGACCTCC
TACAGCTTCAGGGACTAGGCCTTTGAAGATTAGGAACCTCAGGCCCACATCAGCCACTTCTGATGTACAG
TTAAGGACAATGTGGAGACTAGGAGGAAGCAGCCAGCCTTTCCCATTAAAGAACTCTTGAGTGCCCAGGG
CTACCTATTGTGAGCTTCCCCACTGATAAGACTTTAGCTGTCCATAGAAGTGAGTCCGAGGGAGGAAAAG
TGTGGTTTCTTCATCATGGTTACCTGTCGTGGTTCTCTCTCTTACACCCATTTACCCATCCCGCAGTTCC
TGTCCTTGAATGGGGGGTGGGGTGCTCTGCCTATCTCTTGTGGGGGTGATCAGCCCAAAAATCATGATTTG
GAGTGATCTGATCAGTGCTGATAGGCAGTTTACAAAGGGATTCTGGCTTGTGACTTCAGTGAGGACAATC
CCCCAGGGCCCTTTCTTTCCATGCCTCTCCAACTCAGAGCCAATGTCTTTGGGTGGGCTAGATAGATAGG
GCATACAATTGGCCTGGTTCCTCCAAGCTCTTAATTCACTTTATCAATAGTTCCATTTAAATTGACTTCA
ATGATAAGAGTGTATCCCATTTGAGATTGCTTGCGTTGTGGGGGAGGGGGAGGAGGAACACATTAAGATA
ATTCACATGGGCAAAGGGAGGTCTTGGAGTGTAGCCGTTAAGCCATCTTGTAACCCCATTCATGATTTTG
ACCACCTGCTAGAGAGAAGAGGTGCCAAGAGACTAGAACTTGGAGGCTTGGCTGTCCCACTAATAGGCTT
TCGCAAGGCAGAGGTAGCCAGCTAGGTCCCTGCCTTCCCAGCCAGGTACAGCTCTCAGGTTTGTGGAGGT
AATCTGTGAACTTCTCTTCCTGCTGCCTTCTTGTGATGTCCAGAGCCCACAGTCAAATACCTCCTAAGAA
CCCTGGCTTCCTTCCCTCTAATCCACTGGCACATGACTATTCACCTCTGGATTGACCTCAGATCCATAGCC
TACACACTGCTAGCAGTGGCCAAGATCACTTCCTTTTATCTCCATCTGTTCTGTTCTCCAGGAAAGTAAGT
GGGGATGAGGGTGGAGGTGGTAATCAACTGTAGATCTGTGGCTTTATGAGCCTTCAGACTTCTCTCTGGC
TTCTTCTGGAAGGGTTACTATTGGCAGTATTGCAATCTCACCCTCCTGATGAACTGTAGCCTGTGCCGTT
ACTGTGCTGGGCATGATCTCCAGTGCTTGCAAGTCCCATGATTTCTTTGGTGATTTTGAGGGTGGGGGGA
GGGACACAAATCAGCTTAGCTTAGCTTCCTGTCTGTGAATGTCCATATAGTGTATTGTGTTTTAACAAAT
GATCTACACTGACTGTTGCTGTAAAAGTGAATTTGGAAATAAAGTTATTACTCTGAATAAAAAAAAAAAA
AAAAAA
SEQ ID NO:6
>reverse complement of SEQ ID NO:5
TTTTTTTTTTTTTTTTTTATTCAGAGTAATAACTTTATTTCCAAATTCACTTTTACAGCAACAGTCAGTGTAGATC
ATTTGTTAAAACACAATACACTATATGGACATTCACAGACAGGAAGCTAAGCTAAGCTGATTTGTGTCCC
TCCCCCCACCCTCAAAATCACCAAAGAAATCATGGGACTTGCAAGCACTGGAGATCATGCCCAGCACAGT
AACGGCCACAGGCTACAGTTCATCAGGAGGGTGAGATTGCAATACTGCCAATAGTAACCCTTCCAGAAGAA
GCCAGAGAGAAGTCTGAAGGCTCATAAAGCCACAGATCTACAGTTGATTACCACCTCCACCCTCATCCCC
ACTTACTTTCCTGGAGAACAGAACAGATGGAGATAAAGGAAGTGATCTTGGCCACTGCTAGCAGTGTGTA
GGCTATGGATCTGAGGTCAATCCAGAGGTGATAGTCATGTGCCAGTGGATTAGAGGGAAGGAAGCCAGGG
TTCTTAGGAGGTATTTGACTGTGGGCTCTGGACATCACAAGAAGGCAGCAGGAAGAGAAGTTCACAGATT
ACCTCCACAAACCTGAGAGCTGTACCTGGCTGGGAAGGCAGGGACCTAGCTGGCTACCTCTGCCTTGCGA
AAGCCTATTAGTGGGACAGCCAAGCCTCCAAGTTCTAGTCTCTTGGCACCTCTTCTCTCTAGCAGGTGGT
CAAAATCATGAATGGGGTTACAAGATGGCTTAACGGCTACACTCCAAGACCTCCCTTTGCCCATGTGAAT
TATCTTAATGTGTTCCTCCTCCCCCTCCCCCACAACGCAAGCAATCTCAAATGGGATACACTCTTATCAT
TGAAGTCAATTTAAATGGAACTATTGATAAAGTGAATTAAGAGCTTGGAGGAACCAGGCCAATTGTATGC
CCTATCTATCTAGCCCACCCAAAGACATTGGCTCTGAGTTGGAGAGGCATGGAAAGAAAGGGCCCTGGGG
GATTGTCCTCACTGAAGTCACAAGCCAGAATCCCTTTGTAAACTGCCTATCAGCACTGATCAGATCACTC
CAAATCATGATTTTTGGGCTGATCACCCCACAAGAGATAGGCAGAGACCACCCCACCCCCCATTCAAGGACA
GGAACTGCGGGATGGGGTAAATGGGTGTAAGAGAGAGAACCACGACAGGTAACCATGATGAAGAAACCACA
CTTTTCTCCCTCGGACTCACTTCTATGGACAGCTAAAGTCTTATCAGTGGGGAAGCTCACAATAGGTAG
CCCTGGGCACTCAAGAGTTCTTTAATGGGAAAGGCTGGCTGCTTCCTCCTAGTCTCCACATTGTCCTTAA
CTGTACATCAGAAGTGGCTGATGTGGGCCTGAGGTTCCTAATCTTCAAAGGCCTAGTCCCTGAAGCTGTA
GGAGGTCGTGCAAGTTCAGGGGGCTGACAGCTGGAAACCAAGGGAGTCTCCTAAGATGTCCCCTTCATC
AGTGGGACAGTCCATCCCAAACTCTATGGTGAAAAGGCCCAGGCTTGGAGAGGGCCCAAGGATATCTACT
GGGTCGTCATGGAATTTCTAGGGTCACAGCTTCCCCTGCTGGTACTGGTGTCCTTTTCTCTTGTGATGCA
GGAGTTCTTAGATGTCTTTCAGGGCTACTGTGGGATTTGAAGTCGTGATCAGAAAGGACCATCTTCATAC
AAAACAGGCCAGCCACAAGCTCTCCCTGGCACTCGGAGCCTGCTGCCTCTAGCTGGTCCTGTGCTTCAGG
CCTTGGCCAATGCCATTGACCTCCAATGTCACAGACCTCCAATGTCACAATCCAGTGTCTGTGAGGTCCC
AGATGCAGAAGAAACCCTTCAAAACATGGGATGTCCCAGCAGGTTAGCACTGCACTGGCCTGGAGCCACG
TCAGGAAGGAGATATCAGACTCTCCATCACGTGGTGGGCTAGAACCTTTTGACAAATATTTCAAGATAC
ATGCGTCCTTTTTTTTTTCCTTTTTCTTTTTCTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCTTTTTCTTTCTTTTCTTTTC
ACTATCATAGTCACTCTGGTGAACCCAGACAAACAGACAAATCCAACTACAACGTAACAGGGCGAAGACG
GGAAAGAAAGGGCTGCATCTATGGAGGTGGCCGTCTGCTCCAGCAGGGCAGGCAGCATGGTTTCCATGGG
ACCGGAGGAAAAAAACACTTCAATCAAGGGGGTATGTTCCCCAAACTGGGGTGTGGAGACTGATTACGTG
CATGGGGACTTAATGGCAGCTGAGCTCTGGGAGGCTAGCGATCACAAGCTGGGGTGGAAGCGAAAGATGG
GAGAAGTGTGGCCCTGCCCTGGGACTCTTGACTGTTCTTACTGATGCCAAGACATTGGCACCTGACTTGG
CTGCCTCCAGCTCAACACAAGGAGTCAGGCCTAGGAGGCATCCACTTAGATAAAAGAAAAGGCAGAGGTC
CAAGGTCATCCCCAGGCAGGCACACACCAGTTCCCATCCAGGATAGGAAGTAATGGAGTGAACCAAACAA
GGTCGTAAGGTTCCTTGTGGGAGGCACACTGGTTGGATTCGTGGAACGTAGGACTAGAGACTGAGGCCCA
AATCTTTTGCCTTCCCTGGACTCCAACCCCTAGTGTAGAGCAGATATTGCCCATATCTACCCAGGGGCCAG
GGATGGGGGCTGGGAGAGGCATGGCACTCAGGACAGTGAGACGTGATGTACGGACGGCAGTGACTAGCTC
TCGTGGCAGACGTGGGCATGATAGGACAGAGAGAGGGGATACAGTGGCTGTGTGAGGGATGGGAGGCCTG
GGACCCACATCCCAGAATACCACCCCCCATCCCTCCCACTACAGAAGTGCCAGAGGGCCAAGCATGAGAA
CAGGCAGAGGTCCCCCAAGAGGCACAAGTCCTTACAAAGATCTGGTTAGCCCTAAAGTCCCAGGTCTGTA
ATGGTGGCCAAATCATGGCTGTAGTTCCAAACTTGAGAACTCAGTAAAGCAGCTTTTCCTGTGGGAGCGA
AGGGAAACACCTCGCTCAGGACCTCCCACCTTGCGGGGAGGGAGGAAGAAGCCAGTGCCCTGGGATGTCA
AGAGCAGCCTTCAAGAGAACCAATCTACAAGGTACCACCTGCTGGCTTACCTTCCTTCTGCCCAATACCC
CTTCTCCCACAGGCTGCCCTGCAGAAGGGGCACACACACCCACGTTACCCCCACAGTGCTTTATCAAGCA
GGCATCTGAGCTAGCTAGGACTGCTGCAGGCAGCTGCAGCACCCTGTCCTCCCCAAGCTACTTGGCAAGG
AGCCAGTGTCCCCTCTCCCAACCTGCCTTCCTCACCTCTGTCCTCTAACTCAGTCCACCCATCCATCTCT
CAGCCTTCGCTGTCGCTGTTTCAGTCCCCACTCACACCCACACAAGTTAACAGCACCTGCCTACGGCCCC
ACGAACACACCAAGTCTCAAATCTCTCATTGCTGCCACTGTCCCTGAAGCCCCTAGGATGGGGCTATGGG
CAATTAGCTGCCCTAGTCCCTCAGCCACTCCCCAGAAGCAGCCTCCAGAGCCTTCTTCACCCTCTAATAC
TCAGAGAGGGGAGGGCGGGGTCAGGGGGGGGGAAATCAATTAGCAATTGCCCAAGGAAATTTTTTGGCCATG
TTTTTACATGTTTTTTTTTTCCCTTAAATATGTTTTATTTTTAGCCCACAAATCAATTTGGAAAGATGAAA
TGTACTTTTCCCATCACTGATTTTGAAGTCCCGAGCCAAATCCGAGCCACAAAAGCAGGTTAGGTGACAA
GCAGGTCAGCCTGTCTATGAGGAGCAGCGGGGAGGGCAGAGGGCAAGGGGCCAGATCATTCTTTTTTTTT
TTTTTTTTCCACACTCTCACTCTCTCTTCTCTCCATGATTATTGACTGCCCTGGGAGGCCTGATCACAAAC
CCTGCTTGGCCAAGGAAGCAGACACTTCATCGGCTAGTGTGGCAAGCTGTGGTGAGTCCACCATGTCGAT
GCTGCCCGTGGAAGACACATTGCTGAGGTGCCGTGGAGATGTGTCCCCAGACACCACGGGTGACTTATAC
ACAATTTCTGCTCCATGGTCTGTCTTGGCTTTGGCATTCTCCCTGAAGGTCAGCTTGTGGGTTTCAATCT
TCTTATTCCCTCCTCCAGGGACGTGGGTGATATTATCCAAGGAGCCAATCTTCGACTGGACTCTGTCCTT
GAAGTCCAGCTTCTCTGATTTTACTTCCACCTGGCCACCTCCTGGCTTGTGATGGATGTTCCCTAACGAG
CCACACTTGGAGGTCACTTTGCTCAGGTCCACCGGCTTGTAGACTATTTGCACACTGCCTCCACCCGGGA
CGTGTTTGATATTATCCTTCGAGCCACACTTGGACTGGACTGTTGCTAAGATCCAGCTTCTTATTAATTAT
CTGCACCTTGCCCTCCTGGCTGGTGCTTCAGGTTCTCAGTAGAGCCAATCTTCGACCTGACATTCTTT
AGGTCTGGCATGGGCACAGGGGCAGTCTGCAGGGCGGCTCTTACTAGCTGATGGTGACTTAGGGGGGAGTGC
GGACCACTGCCACCTTTCTTGGGCTCCCGGGTGGGCGGTGTTGGTAGGGATGGGGTGCGCGAGCGACTGCC
AGGCGTTCCGGGAGAGCCGGGGCTGCTGTAGCCGCTTCGTTCTCCGGATTTTGGTGGTTCACCTGACCCT
GGAGGAGTCTTAGGGCTGGGCGTGGTCTTGGCCGGGATCCTGGTGGCGTTGGACGTGCCCTTCTGGGCCG
GAGAGGCTGCTCCCCGAGGTGTGGCGATCTTCGCCCCGGTTTTGCCATCAGCGCCCTTGGCTTTCTTCTC
GTCATTTCCTGTCCTGTCTTTGCTGGCCACACGAGCTTGAGTCACATGCCCAGCGGCTTGGTCCTCCTGG
TTCGGGGTGTCTCCGATGCCTGCTTCTTCGGCTGTAATTCCTTCTGGGATCTCCGGTGTGGGGCTGGGCAG
CGGCCTGCTTGTCGGGAGCTCTCTCATCCACTAGGGGCGCAGTCACGTCTTCAGCAGTTGGAGTGCTCTT
AGCATCGGAGGTCTCCGACCCTGGTTCCTCGCTCCATCATCGGCGGGGGGCTGTGGGGGAGACTCTTTT
AAGCCATGGTCCATGTCTCCTTCTTGGTCTTGGAGCAGAGTGTAATCTCCAGCATGGTCTTCCATTGTGT
CAAACTCCTGGCGAGGGTCAGCCATACTGGTTCAAAGCCTGATAATCGACAGAAGGCGAGGACAGAAGAG
GACAGCGGAGGAGAAGGTGGTTGTGGCGGCGGCGGCAGAAGGTGGGCGGTGGCGGCGGCGCTGCTGCTGG
TGCTGGAGCTGGTGGGTGGCGGAGACTGAGAGCGCGCGCGGCCGAGAAAGCGCGTTCTGGAGGCCGGCGG
SEQ ID NO:7
>Predicted XM_005584540.1: Cynomolgus monkey microtubule-associated protein tau (MAPT), transcript variant X13, mRNA
GCCGAGCGGCAGGGCGCTCGCGCGCGCCCACTGGTGGCCGGAGGAGAAGGCTCCCGCGGAGGCCGGGCTG
CCCGCCCCCTCCCCTGGGGAGGCTCGCGCTCCCGCTGCTCGCGCCTGCGCCGCCTGCCGGCCTCGGGAAC
GCGCCCTCTTCCCCGGCGCGCGCCCTCGCAGTCACCGCCACCCACCAGCTCCGGCACCAACAGCAGCGCC
GCTGCCACCGCCCACCTTTCTGCCGCCGCCACCACAGCCACCTTTCTCCTCCTCCGCTGTCCTCTCCCGTCC
TCGCCTCTGTCGACTATCAGGCGAGCCTTGAACCAGGATGGCTGAGCCCCGCCAGGAGTTCGATGTGATG
GAAGATCACGCTGGGACGTACGGGTTGGGGACAGGAAAGATCAAGAGGGCTACACCATGCTCCAAGACC
AAGAGGGTGACACGGACGCTGGCCTGAAAGAATCTCCCCTGCAGACCCCCGCTGAGGATGGATCTGAGGA
ACTGGGCTCTGAAACCTCTGATGCTAAGAGGCACTCCAACGGCGGAAGATGTGACAGCGCCCTTAGTGGAT
GAGAGAGCTCCCGGCGAGCAGGCTGCCGCCCAGCCCCACATGGAGATCCCAGAAGGAACCACAGCTGAGG
AAGCAGGCATCGGAGACACCCCCAAGCCTGGAAGACGAAGCTGCTGGTCACGTGACCCAAGCTCGCATGGT
CAGTAAAGCAAAGACGGGACTGGAAGCGATGACAAAAAAGCCAAGGGGGCTGATGGGAAAACGAAGATC
GCCACACCCCGGGGAGCGGCCCCTCCAGGCCAGAAGGGCCAAGCCAACGCCACCAGGATTCCAGCAAAAA
CCCCGCCCCGCCCCAAAGACACCACCCAGCTCTGGTGAACCTCCAAAATCAGGGGATCGCAGTGGCTACAG
CAGCCCCGGCTCCCCGGGCACTCCCGGCAGCCGCTCCCGCACCCCGTCCCTTCCAACCCCTCCAGCCCGG
GAGCCCAAGAAGGTGGCGGTGGTCCGTACTCCACCTAAGTCGCCGTCTTCCGCCAAGAGCCGCCTGCAGA
CAGCCCCCGTGCCCATGCCAGACCTGAAGAACGTCAAGTCCAAGATCGGCTCCACCGAGAACCTGAAGCA
CCAGCCGGGAGGCGGGAAGGTGCAGATAATTAATAAGAAGCTGGATCTTAGCAACGTCCAGTCCAAGTGT
GGCTCAAAGGATAATATCAAACACGTCCCGGGAGGCGGCAGTGTGCAAATAGTCTACAAACCAGTTGACC
TGAGCAAGGTGACCTCCAAGTGGTGGCTCATTAGGCAACATCCATCATAAACCAGGAGGTGGCCAGGTGGA
AGTAAAATCTGAGAAGCTGGACTTCAAGGACAGAGTGCAGTCGAAGATCGGGTCCCTGGACAATATCACC
CATGTCCCTGGCGGAGGAAATAAAAAGATTGAAAACCCACAAGCTGACCTTCCGCGAGAACGCCAAAGCCA
AGACAGACCACGGGGGCGGAAATCGTGTACAAGTCGCCGGTGGTGTCTGGGGACACGTCTCCACGGCACCT
CAGCAATGTCTCCTCCACCGGCAGCATCGACATGGTAGACTCGCCCCAGCTCGCCACGCTAGCCGACGAG
GTGTCTGCCTCCCTGGCCAAGCAGGGTTTGTGATCAGGCCCCCGGGGCGGTCAATAATCGTGGAGAGAAG
AGAGAGTGAGAGTGTGGAAAAAAAAAGAATAATGACCCGGCCCCGCCCTCTGCCCCCAGCTGCTCCTCGC
AGTTCGGTTAATCGGTTCATCACTTAACCGGCTTTTATCGCTCGGCTTTGGCTCGGGACTTCAAAATCAG
TGATGGGAATAAGAGCAAATTGCATCTTTCCAAATTGATCGGTGGGCTAATAATAAAATATTTTTTAAAA
AACATTCAAAAACATGGCCACACCCAACATTTCCTCGGGCAATTCCTTTTGATTCTTTTTTTTTCCCCCT
CCATGTAGAAGAGGGAGAAGGAGAGGCTGTGAAAGCTGCTTCGGGGGGATTTCAAGAGACTGGGGGTGCC
CACCGCCTCTGGCCCTGTCGTGGGGGTGTCACAGAGGCAGCGGCAGCAACAAAGGATTTGAAACTTGGGTG
TGTTCGTGGAGCCACAGGCAGACGATGTCAACCTTGTGTGAGTGTGACGGGTGGGGGTGGGGCGGGAGGC
CATGGGGGAGGCCAAGGCAGGGGCTGGGCAGAGGGGAGAGGAAGGACGAGAAGGGGGAGTGGGAGAGGAA
GCCACATGCTGGAGAGGATGCCCTCCTCCGCGCCACTGGGAGGGCCAAGGCCTCCGCCACCTGCAGTG
TCTCAGACTGAGCGGCTGCCTGTCCTTGGTGGCCAGGGTCTGCTGCGAGTTGATGTGCCACCCTCTGCAG
GGCAGCCTGTGGGAGAAGGGGCGGCGGGTAAGAAGAGAAGGCAAGCTGGCGGGAGGGTGGCACCCCGTGG
ATGACCTCCTTGGAAAAGACTGACCTTGATGTCGGAGGGCGCTGGCCTCTTCCTCCCTCCCTGCAGGGTA
GGGGGCCTGAGCCGAGGGGCTTCCCTCTGCTCCACAGAAACCCTGTTTTTATTGAGTTCTGAAGGTTGGAA
CTGCAGCCATGATTTTGGCCACTTTGCAGACCTGGGACTTTAGGGCTAACCAGTTCTCTTTGTAAGGACT
TGTGCTCTTGGGAGACGTCCACCCGTTTCCAAGCCTGGGCCACCGGCATCTCTGGAGTGTGCAGGGGTC
TGGGAGGCGGGTCCCGAGCCCCCTGTCCTTCCCACGGCCACTGCAGTCACCCCTGTCTGCCCCACTGTGC
TGTCGTCTGCCATGAGAACCCAGTCACTGCCTATACCCCTCATCACGTCACAATGTCCAAATTCCCAGCC
TCACCACCCCCCTTCTCAGTAAGGACCCTGGTTGGCTGTGGGAGGCACCTACTCCATACTGAGGGTGAAA
TTAAGGGAAGGTAAAGTCCAGGCACAAGAGTGGGACCCCAGCCTCTCACTCTCAGTTCCACTCATCCAAC
TGGGTCCCTCACCACGAATCTCACGACCTGATTCGGTTCCCTGCCTCCTCCTCCCATCACAGATGTGAGC
CAGGGCACTGCTCAGCTGTGACCCTCGGTGTTTCTGCCTTGTTGACATAGAGAGAGCCCTTTCCCCCCGA
GAAGGCCTGGCCCCTTCCTGTGCTGAGCCCGCAGCAGGAGGCTGGGTGTCCTGGTTGTCGGTGACGGCAC
CAGGATGGGCGGGCAAGGCACCCAGGGCAGGCCCACAGTCCCGCTGTCCCCCACTTGCACCCCAGCTTGT
GGCTGCCAGCCTCCCAGACAGCCCAGCCCGCTGCTCAGCTCCACATGCATAGAATCAGCCCTCCACATCC
CAAAAAGGGGAACACACCCCCTTCGAAATGGTTTTCTCCCCGGTCCCAGCTGGAAGCCATGCTGTCTGTT
CTGCTGGAGCAGCTGAACATATACATAGATGTTGCCCTGCCCTCCCCATCTGCACCCTGTTTGCGTTGTAG
TTGGATTTGTCTGTTTATGCTTGGATTCACCAGAGTGACTATGATAGTGAAAAGAAAAAAAAAAAAAAAA
AAAGGACGCATGTATCTTGAAATGCTTGTAAAGAGGTTTCTAACCCACCCTCACAAGGTGTTCTCTCACCC
CCACGCTGGGACGCGTGTGGCCTGTGTGGCGCCGCCCTGCTGGGGCCTCCCAAGGTTTGAAAGGCTTTCC
TCAGCATCCGGGACCCAACAGAGACCAGATTCTAGCATCTAAGGAGGCCGTTCAGCTGTGAAGAAGGCCT
GAAGCACAGGATTAGGACTGAAGCGATGACATCTCCTTCCCTACTTCCCCTTGGGGCTCTCTGTGTCAGG
GCAGAGAGTAGGTCTTGTGGCTGGTCTGGCTTGCGGCACGAGGATGGTTCTCTCTGGTCACAGCCCGAAG
TCCCACAGCAGCTCCTAAAGGAGGCTTACAACTCCTGCATCACAAGAAGAAGGAAGCCAGTGCCAGCTGGG
GGGATCTGCAGCTCCCAGAAGCTCCATGAGCCTCAGCCACCCCGCAGACTGGGTTCCTCGCCAAGCTCGC
CCTCTGGAGGGGCAGCCAGCCTCCCACCAAGGGCCCTGCGACCACAGCAGGGGATTGGGATGAATGGCCTA
TCCTGGATCTGCTCCAGAGGCCCGAGCCACCTGCCTGAGGAAGGATAAGTCAGGAGACACCGTTCCCAAA
GCCTTGACCAGAGGCACCTCAGCCCACTGACCTTGCACAAACTCCATCTGCTGCCATGAGAAAAGGGAAGC
CGCCTTTGCAAAAAATTGCTGCCTAAAAGAAACTCAGCAGCCTCAGGCTCAATTCTGCCCGCTTCTGGTTTG
GGTACAGTTAAAGGCAACCCTGAGGGACTTGGCAGTAGAAATCCAGGGCATCCCCTAGGGCTGGCAACTT
CGTGTGCAGCTAGAGCTTTCCCTGCAAGAAGTTTCTGGGCCCAGAACTCTCCACCAGGAAGCTCCCTGCT
GTTCGCTAAGTCCCAGCAATTCTCTAAGTGAAGGGATCTGAGAATGAGGAGGAAATGTGGGGTAGAGATT
TGGTGGTGGTTAGAGACATGCCCCCTCTCATTACTGCCAACAGTTTCGGCTGCATTTTTCACGTACCTCGG
TTCCTCTTCCTGAAGTTCTTGTGCCCTGCTCTTCAGCACCGTGGGGCCTTATCCGGTAGGCTCTGGGATCT
CCCCCTTGTGGGGCAGGCTCTTGGGGCCAGCCTAAGATCATGGTTTAGGGTGATCAGTGCTGGCAGATAA
ATTGCAAAGGCACGCTGGCTTGTGACCTCAAATGACAATCCCCCCAGGGCTGGGCACTCCTCCCCTCCCC
TCACTTCTCCCACCTGCAGAGCCAGTGTCCGTGGGTGGGCTAGATAGGATATACTGTATGCCGGCTCCTT
CAAGCTGTTGACTCACTTTATCAATAGTTCCATTTAAATTGACTTCAATGGTGAGACTGTATCCTGTTTG
CTATTGCTTATTGTGCTATGGGGGGAGGGGGGAGGAATGTGTAACATAGTTAACATGGGTAAAGGGAGAT
CTTGGGTGCAGCACTTCAATTGCCTCGTAACCCTTTTCATCATTTCAACCACATTTGCTAAAGGGAGGG
AGCAGCCACGCGGTTAGAGGCCCTTGGGGTTTCTCTTTTCCACTGACAGCCTTTCCCAGGCAGCTGGCCA
GTTCCCCATTCCCTCCCCAGCCAGGTGCAGGCGTAGCAATATGGACATCTGGTTGCTTTGGCCTGCTGCC
CTCTTTCAGGGGTCCTAAGCCCACAATCATGCCTCCCTAAGACCCTGGCATCCTTCCTTTTTAAGCCGTTG
GCACCTCTGTGCCACCTCTCACACTGGCTCCAGACACAGCCTGTGCTTCTGGCAGCTGAGATCACTCACT
TCCCCCTCCTCATCTTTGTTGGAGCTCCAAGTCAAGCCACGAGGTCAGGGCGAGGGCAGAGGTGGTCACC
AGCGTGTCCCATCTACAGACCTGTGGCTTCGTAAGACTTCTGATTTCTCTTCAGCTTTGAAAAGGGTTAC
CCTGGGCACTGGCCTAGAGTCTCACCTCCTAATAGACTTACCCCCATGAGTTTGCCATGTTGAGCAGGAC
AATTTCTGGCACTTGCAAGTCCCATGATTTCTTCGGTAATTGTGAGGGTGGGGGGGAGGGACATGAAATCA
TCTTAGCTTAGCTTCCTGTCTGTGAATGTCTATATAGTGTATTGTGTGTTTTAACAAATGATTTACACTG
ACTGTTGCCGTAAAAGTGAATTTGGAAATAAAGTTATTACTCTGATTAAA
SEQ ID NO:8
>reverse complement of SEQ ID NO:7
TTTAATCAGAGTAATAACTTTATTTCCAAATTCACTTTTACGGCAACAGT
CAGTGTAAATCATTTGTTAAAACACACAATACACTATATAGACATTCACAGACAGGAAGCTAAGCTAAGA
TGATTTCATGTCCCTCCCCCCACCCTCACAATTACCGAAGAAATCATGGGACTTGCAAGTGCCAGAAATT
GTCCTGCTCAACATGGCAAACTCATGGGGGTAAGTCTATTAGGAGGTGAGACTCTAGGCCAGTGCCCCAGG
GTAACCCTTTTCAAAGCTGAAGAGAAATCAGAAGTCTTACGAAGCCACAGGTCTGTAGATGGGACACGCT
GGTGACCACCTCTGCCCTCGCCCTGACCTCGTGGCTTGACTTGGAGCTCCAACAAAGATGAGGAGGGGGA
AGTGAGTGATCTCAGCTGCCAGAAGCACAGGCTGTGTCTGGAGCCAGTGTGAGAGGTGGCACAGAGGTGC
CAACGGCTTAAAAGGAAGGATGCCAGGGTCTTAGGGAGGCATGATTGTGGGCTTAGGACCCCTGAAAGAG
GGCAGCAGGCCAAAGCAACCAGATGTCCATATTGCTACGCCTGCACCTGGCTGGGGAGGGAATGGGGAAC
TGGCCAGCTGCCTGGGAAAGGCTGTCAGTGGAAAAGAGAAACCCCAAGGGCCTCTAACCGCGTGGCTGCT
CCCTCCCTTTAGCAAATGTGGTTGAAATGATGAAAAGGGTTACGAGGCAATTGAAGTGCTGCACCCCAAG
ATCTCCCTTTACCCATGTTAACTATGTTACACATTCCTCCCCCCCTCCCCCCATAGCACAATAAGCAATAG
CAAACAGGATACAGTCTCACCATTGAAGTCAATTTAAAATGGAACTATTGATAAAGTGAGTCAACAGCTTG
AAGGAGCCGGCATACAGTATATCCTATCTAGCCCACCCAGGACACTGGCTCTGCAGGTGGGAGAAGTGA
GGGGAGGGGAGGAGTGCCCAGCCCTGGGGGGATTGTCATTTGAGGTCACAAGCCAGCGTGCCTTTGCAAT
TTATCTGCCAGCACTGATCACCCTAAACCATGATCTTAGGCTGGCCCCAAGAGCCTGCCCCACAAGGGGG
AGATCCCAGAGCCTACCGGATAAGGCCCACGGTGCTGAAGAGCAGGGCACAAGAACTTCAGGAAGAGGAA
CCGAGGTACGTGAAAAATGCAGCCGAAACTGTTGGCAGTAATGAGGGGGGCATGTCTCTAACCACCACCA
AATCTCTACCCCACATTTCCTCCTCATTCTCAGATCCCTTCACTTAGAGAATTGCTGGGACTTAGCGAAC
AGCAGGGAGCTTCCTGGTGGAGAGTTCTGGGCCCAGAAACTTCTTGCAGGGAAAGCTCTAGCTGCACACG
AAGTTGCCAGCCCTAGGGGATGCCCTGGATTTCTACTGCCAAGTCCCTCAGGGTTGCCTTTAACTGTACC
CAAACCAGAAGCGGCAGAATTGAGCCTGAGGCTGCTGAGTTTCTTTAGGCAGCAATTTTTTGCAAAGGCG
GCTTCCCTTTTCTCATGGCAGCAGATGGAGTTTGTGCAAGGTCAGTGGGCTGAGGTGCTCTGGTCAAGGC
TTTGGGAACGGTGTCTCCTGACTTATCCTTCCTCAGGCAGGTGGCTCGGGCCTCTGGAGCAGATCCAGGA
TAGGCCATTCATCCCAATCCCTGCTGTGGTCGCAGGGCCCTTGGTGGGAGGCTGGCTGCCCCTCCAGAGG
GCGAGCTTGGCGAGGAACCCAGTCTGCGGGGTGGCTGAGGCTCATGGAGCTTCTGGGAGCTGCAGATCCC
CCCAGCTGGCACTGGCTTCCTTCTTCTTGTGATGCAGGAGTTGTAAGCCTCCTTTAGGACTGCTGTGGGA
CTTCGGGCTGTGACCAGAGAGAACCATCCTCGTGCCGCAAGCCAGACCAGCCACAAGACCTACTCTCTGC
CCTGACACAGAGGCCCCAAGGGGAAGTAGGGAAGGAGATGTCATCGCTTCAGTCCTAATCCTGTGCTTC
AGGCCTTCTTCACAGCTGAACGGCCTCCTTAGATGCTAGAATCTGGTCTCTGTTGGGTCCCGGATGCTGA
GGAAAGCCTTTCAAACCTTGGGAGGCCCCAGCAGGGCGGCGCCACACAGGCCACACGCGTCCCAGCGTGG
GGGTGAGAGACACCTTGTGAGGGTGGGTTAGAAACCTCTTTACAAGCATTTCAAGATACATGCGTCCTTT
TTTTTTTTTTTTTTTTCTTTTCACTATCATAGTCACTCTGGTGAATCCAAGCATAAACAGACAAATCCAA
CTACAACGCAACAGGGTGCAGATGGGGAGGGCAGGGCAACATCTATGTATATGTTCAGCTGCTCCAGCAG
AACAGACAGCATGGCTTCCAGCTGGGACCGGGGAGAAAACCATTTCGAAGGGGGTGTGTTCCCCTTTTTG
GGATGTGGAGGGCTGATTCTATGCATGTGGAGCTGAGCAGCGGGCTGGGCTGTCTGGGAGGCTGGCAGCC
ACAAGCTGGGGTGCAAGTGGGGGACAGCGGGACTGTGGGCCTGCCCTGGGTGCCTTGCCCGCCCATCCTG
GTGCCGTCACCGACAACCAGGACACCCAGCCTCCTGCTGCGGGCTCAGCACAGGAAGGGGCCAGGCCTTC
TCGGGGGGAAAGGGCTCTCTCTATGTCAACAAGGCAGAAACACCGAGGGTCACAGCTGAGCAGTGCCCTG
GCTCACATCTGTGATGGGAGGAGGAGGCAGGGAACCGAATCAGGTCGTGAGATTCGTGGTGAGGGACCCA
GTTGGATGAGTGGAACTGAGAGTGAGAGGCTGGGGTCCCACTCTTGTGCCTGGACTTTACCTTCCCTTAA
TTTCACCCTCAGTATGGAGTAGGTGCCTCCCACAGCCAACCAGGGTCCTTACTGAGAAGGGGGGTGGTGA
GGCTGGGAATTTGGACATTGTGACGTGATGAGGGGTATAGGCAGTGACTGGGTTCTCATGGCAGACGACA
GCACAGTGGGGCAGAGGGGTGACTGCAGTGGCCGTGGGAAGGACAGGGGGCTCGGGACCCGCCTCCCA
GACCCCTGCACACTCCAGATGCCGGTGGCCCAGGCTTGGAAACGGGTGGACGTCTCCCAAGAGGCACA
AGTCCTTACAAAGAGAACTGGTTAGCCCTAAAGTCCCAGGTCTGCAAAGTGGCCAAAATCATGGCTGCAG
TTCCAACCTTCAGAACTCAATAAAACAGGGTTTCTGTGGAGCAGAGGGAAGCCCCTCGGCTCAGGCCCCC
TACCCTGCAGGGAGGGAGGAAGAGGCCAGCGCCCTCCGACATCAAGGTCAGTCTTTTCCAAGGAGGTCAT
CCACGGGGTGCCACCCTCCCGCCAGCTTGCCTTCTCTTCTTACCCGCCGCCCCTTCTCCCACAGGCTGCC
CTGCAGAGGGTGGCACATCAACTCGCAGCAGACCCTGGCCACCAAGGACAGGCAGCCGCTCAGTCTGAGA
CACTGCAGGTGGCGGAGGCCTTGGCCCTCCCAGTGGCGCGGAGGAGGGCATCTCCTCTCCAGCATGTGGC
TTCCTCTCCCACTCCCCCTTCTCGTCCTTCCTCTCCCCTCTGCCCAGCCCCTGCCTTGGCCTCCCCCCATG
GCCTCCCGCCCCACCCCCACCCGTCACACTCACACAAGGTTGACATCGTCTGCCTGTGGCTCCACGAACA
CACCAAGTTTCAAATCCTTTTGTTGCTGCCGCTGCCTCTGTGACACCCCCACGACAGGGCCAGAGGCGGTG
GGCACCCCCAGTCTCTTGAAATCCCCCCGAAGCAGCTTTCACAGCCTCTCCTTCTCCCTCTTCTACATGG
AGGGGGAAAAAAAAAGAATCAAAAGGAATTGCCCGAGGAAATGTTGGGTGTGGCCATGTTTTTGAATGTT
TTTTAAAAAATATTTTATTATTAGCCCACCGATCAATTTGGAAAGATGCAATTTGCTCTTATTCCCATCA
CTGATTTTGAAGTCCCGAGCCAAAGCCGAGCGATAAAAGCCGGTTAAGTGATGAACCGATTAACCGAACT
GCGAGGAGCAGCTGGGGGCAGAGGGCGGGGCCGGGTCATTATTCTTTTTTTTTCCACACTCTCACTCTCT
CTTCTCTCCACGATTATTGACCGCCCCCGGGGGCCTGATCACAAACCCTGCTTGGCCAGGGAGGCAGACAC
CTCGTCGGCTAGCGTGGCGAGCTGGGGCGAGTCTACCATGTCGATGCTGCCGGTGGAGGAGACATTGCTG
AGGTGCCGTGGAGACGTGTCCCCAGACACCACCGGCGACTTGTACACGATTTCCGCCCCGTGGTCTGTCT
TGGCTTTGGCGTTCTCGCGGAAGGTCAGCTTGTGGGTTTCAATCTTTTTATTTCCTCCGCCAGGGACATG
GGTGATATTGTCCAGGGACCCGATTCTTCGACTGCACTCTGTCCTTGAAGTCCAGCTTCTCAGATTTTACT
TCCACCTGGCCACCTCCTGTTTATGATGGATGTTGCCTAATGAGCCACACTTGGAGGTCACCTTGCTCA
GGTCAACTGGTTTGTAGACTATTTGCACACTGCCGCCTCCCGGGACGTGTTTGATATTATCCTTTGAGCC
ACACTTGGACTGGACGTTGCTAAGATCCAGCTTCTTATTAATTATCTGCACCTTCCCGCCTCCCGGCTGG
TGCTTCAGTTCTCGGTGGAGCCGATCTTGGACTTGACGTTCTTCAGGTCTGGCATGGGCACGGGGGCTG
TCTGCAGGCGGCTCTTGGCGGAAGACGGCGACTTAGGTGGAGTACGGACCACCGCCACCTTTCTTGGGCTC
CCGGGCTGGAGGGGTTGGAAGGGACGGGGTGCGGGAGCGGCTGCCGGGAGTGCCCGGGGAGCCGGGGCTG
CTGTAGCCACTGCGATCCCCTGATTTTGGAGGTTCACCAGAGCTGGGTGGTGTCTTTGGGGCGGGCGGGG
TTTTTGCTGGAATCCTGGTGGCGTTGGCTTGGCCCTTCTGGCCTGGAGGGGCCGCTCCCCGGGGTGTGGGC
GATCTTCGTTTTCCCATCAGCCCCCTTGGCTTTTTTGTCATCGCTTCCAGTCCCGTCTTTGCTTTTACTG
ACCATGCGAGCTTGGGTCACGTGACCAGCAGCTTCGTCTTCCAGGCTGGGGGTGTCTCCGATGCCTGCTT
CCTCAGCTGTGGTTCCTTCTGGGATCTCCATGTGGGGCTGGGCGGCAGCCCTGCTCGCCGGGAGCTCTCTC
ATCCACTAAGGGCGCTGTCACATCTTCCGCCGTTGGAGTGCTCTTAGCATCAGAGGTTTCAGAGCCCAGT
TCCTCAGATCCATCCTCAGCGGGGGTCTGCAGGGGAGATTCTTTCAGGCCAGCGTCCGTGTCACCCTCTT
GGTCTTGGAGCATGGTGTAGCCCTCTTGATCTTTCCTGTCCCCCAACCCGTACGTCCCAGCGTGATCTTC
CATCACATCGAACTCCTGGCGGGGCTCAGCCATCCTGGTTCAAGGCTCGCCTGATAGTCGACAGAGGCGA
GGACGGGAGAGGACAGCGGAGGAGGAGAAGGTGGCTGTGGTGGCGGCGGCAGAAGGTGGGCGGTGGCAGC
GGCGCTGCTGTTGGTGCCGGAGCTGGTGGGTGGCGGTGACTGCGAGGGCGCGCGCCGGGGAAGAGGGCGC
GTTCCCGAGGCCGGCAGGCGGCGCAGGCGCGAGCAGCGGGAGCGCGAGCCTCCCCAGGGGAGGGGGCGGG
CAGCCCGGCCTCCGGCGGGAGCCTTCTCCTCCGGCCACCAGTGGGCGCGCGCGAGCGCCCTGCCGCTCGGC
SEQ ID NO:9
>Predicted XM_008768277.2: Rattus norvegicus microtubule-associated protein tau (Mapt), transcript variant X7, mRNA
ACCGCCCACCTTCTGCTGTCGCCGCCGCCACAACCACCTTCCCCTCCGCTGTCCTCTTCTGTCCTCGCCT
CCTGTCGATTATCAGGCTTTGAAGCAGCATGGCTGAACCCCGCCAGGAGTTTGACACAATGGAAGACCAG
GCCGGAGATTACACTATGCTCCAAGACCAAGAAGGAGACATGGACCATGGCTTAAAAGAGTCTCCCCCAC
AGCCCCCAGCCGATGATGGATCAGAAGAACCAGGGTCGGAGACCTCTGATGCTAAGAGGCACTCCAACTGC
TGAAGACGTGACTGCGCCCCTAGTGGAAGAGAGAGCTCCCGACAAGCAGGCGACTGCCCAGTCCCACACG
GAGATCCCAGAAGGCACCACAGCTGAAGAAGCAGGCATCGGAGACACCCCGAACATGGAGGACCAAGCTG
CTGGGCATGTGACTCAAGCTCGAGTGGCCGGCGTAAGCAAAGACAGGACAGGAAATGACGAGAAGAAAGC
CAAGGGCGCCGATGGCAAAACGGGGGCGAAGATCGCCACACCTCGGGGAGCAGCCACTCCGGGCCAGAAA
GGCACATCCAATGCCACCAGGATCCCAGCCAAGACCACACCCAGCCCAAAGACTCCTCCAGGATCAGGTG
AACCACCAAAATCCGGAGAACGAAGCGGCTACAGCAGCCCCCGGCTCGCCCGGAACCCCTGGCAGTCGCTC
CCGTACCCCATCCCTACCAACGCCGCCCACCCGAGAGCCCAAAAAGGTGGCAGTGGTTCGCACTCCCCCT
AAGTCACCGTCTGCCAGTAAGAGCCGCCTACAGACTGCCCTGTGCCCATGCCAGACCTAAAGAACGTCA
GGTCCAAGATTGGCTCCACTGAGAACCTGAAGCACCAGCCGGGAGGCGGCAAGGTGCAGATAATTAATAA
GAAGCTGGATCTTAGCAACGTCCAGTCCAAGTGTGGCTCAAAGGACAATATCAAACACGTCCCGGGCGGA
GGCAGTGTGCAAATAGTCTACAAGCCAGTGGACCTGAGCAAGGTGACCTCCAAGTGTGGTTCCTTAGGGA
ACATCCATCACAAGCCAGGAGGTGGCCAGGTAGAAGTAAAATCAGAGAAGCTGGACTTCAAGGATAGAGT
CCAGTCGAAGATTGGCTCCTTGGATAACATCACCCATGTCCCTGGAGGAGGGAATAAGAAGATTGAAACC
CACAAGCTGACCTTCAGGGAGAATGCCAAAGCCAAGACAGACCATGGAGCAGAAATCGTGTACAAGTCAC
CTGTGGTGTCTGGGGACACATCTCCACGGCACCTCAGCAACGTCTCCTCCACGGGCAGCATCGACATGGT
GGACTCTCCACAGCTTGCCACGTTAGCCGATGAAGTGTCCGCCTCTTTGGCCAAGCAGGGTTTGTGATCA
GGCCCCTGGGGCCGTCACTGATCATGGAGAGAAGAGAGAGTGAGAGTGTGGAAAAAAAAAAAAAAAAAAG
AATGACCTGGCCCCTCACCCTCTGCCCTCCCCGCTGCTCCTCATAGACAGGCTGACCAGCTTGTCACCTA
ACCTGCTTTTGTGGCTCGGGTTTGGCTCGGGACTTCAAAATCAGTGATGGGAAAAAGTAAATTTCATCTT
TCCAAATTGATTTGTGGGCTAGTAATAAAATATTTTTAAGGAAGGAAAAAAAAAAAAACACGTAAAACCA
TGGCCAAACAAAACCCAACATTTCCTTGGCAATTGTTATTGACCCCGCCCCCCCCCTCTGAGTTTTAGAG
GGTGAAGGAGGCTTTGGATGGAGGCTGCTTCTGGGGATTGGCTGAGGGACTAGGGCAACTAATTGCCCAC
AGCCCCATCTTAGGGGCATCAGGGACAGCGGCAGCAATGAAAGACTTGGGACTTGGTGTGTTTGTGGAGC
CGTAGGCAGGTGATGTTAACTTTGTGTGGGTTTGAGGGAGGACTGTGATAGTGAAGGCTGAGAGATGGGT
GGGCTGGGAGTCAGAGGAGAGAGGTGAGGAAGACAGGTTGGGAGAGGGGACATTGGCTCCTTGCCAAGGA
GCTTGGGAAGCACAGGTAGCCCTGGCTGCCTGCAGCAGTCTTAGCTAGCACAGATGCCTGCCTGAGAAAG
CACAGTGGGGTACAGTGGGTGTGTGTGCCCCTTCTGAAGGGCAGCCCATGGGAGAAGGGGTATTGGGCAG
AAGGAAGGTAGGCCAGAAGGTGGCACCTTGTAGATTGGTTCTCTGAAGGCTGACCTTGCCATCCCAGGGC
ACTGGCTCCCACCCTCCAGGGAGGGAGGTCCTGAGCTGAGGAGCTTCCCTTTGCTCTCACAGGGAAAACCT
GTGTTACTGAGTTCTGAAGTTTGGAACTACAGCCATGATTTTGGCCACCATACAGACCTGGGACTTTAGG
GCTAACCAGTTCTTTGTAAGGACTTGTGCCTCTTGCGGGAACATCTGCCTGTTCTCAAGCCTGGTCCTCT
GGCACTTCTGCAGTGTGAGGGATGGGGGGTGGTAATTCTGGGATGTGGGTCCCAGGCCTCCCATCCTCGCA
CAGCCACTGTATCCCCTCTACCTTGTCCTATCATGCCCACGTCTGCCATGAGAGCCAGTCACTGCCGTCCG
TACATCACGTCTCACCGTCCTGAGTGCCCAGCCTCCCCAAGCCCCATCCCTGGCCCCTGGGTAGTTATGG
CCAATATCTGCTCTACACTAGGGGTTGGAGTCCAGGGAAGGCAAAGATTTGGGCCTTGGTCTCTAGTCCT
ACGTTGCACGAATCCAACCAGTGTGCCTCCCACAAGGAACCTTACAACCTTGTTTGGTTTGCTCCATCAT
TTCCCATCGTGGATGGGGAGTCCGTGTGTGCCTGGAGATTACCCTGGACACCTCTGCTTTTTTTTTTTTAC
TTTAGCGGTTGCCTCCTAGGCCTGACTCCTTCCCATGTTGAACTGGAGGCAGCCACGTTAGGTGTCAATG
TCCTGGCATCAGTATGAACAGTCAGTAGTCCCAGGGCAGGCCACACTTCTCCCATCTTCTGCTTCCACC
CCAGCTTGTGATTGCTAGCCTCCCAGAGGCTCAGCCGCCATTAAGTCCCCATGCACGTAATCAGCCCTTCA
TACCCCAATTTGGGGAACATACCCCTTGATTGAAATGTTTTCCCTCCAGTCCTATGGAAGCGGTGCTGCC
TGCCCTGCTGGAGCAGCCAGCCATCTCCAGAGACGCAGCCCTTTCTCTCCTGTCCGCACCCTGTTGCGCT
GTAGTCGGATTCGTCTGTTTGTCTGGGTTCACCAGAGTGACTATGATAGTGAAAAGAAAAAAGAAAAAGAA
AAAAGAAAAAAGAAAAAAAAAAAAGGACGCATGTTATCTTGAAATATTTGTCAAAAGGTTGTAGCCCACC
GCAGGGATTGGAGGGCCTGGATATTCCTTGTCTTCTTCGTGACTTAGGTCCAGGCCGGTGCAGTGCTACC
CTGCTGGGACATCCCATGTTTTGAAGGGTTTCTTCTTCATCTGGGACCCTGCAGACACTGGATTGTGACA
TTGGAGGTCTATGACATTGGCCAAGGCCTGAAGCACAGGACCCGTTAGAGGCAGCAGGGCTCCGACTGTCA
GGGAGAGCTTGTGGCTGGCCTGTTTCTCTGAGTGAAGATGGTCCTCTCTAATCACAACTTCAAGTCCCAC
AGCAGCCCTGGCAGACATCTAAGAACTCCTGCATCACAAGAGAAAAGGACACTAGTACCAGCAGGGAGAG
CTGTGGCCCTAGAAATTCCATGACTCTCCACTACATATCCGTGGGTCCTTTCCAAGCCTTGGCCTCGTCA
CCAAGGGCTTGGGATGGACTGCCCCCACTGATGAAAGGGACATCTTTGGAGACCCCCCTTGGTTTCCAAGGC
GTCAGCCCCCTGACCTTGCATGACCTCCTACAGCTGTAAGGATGAGGCCTTTAAAGATTAGGAACCTCAG
GCCCAGGTCGGCCACTTTGGGCTTGGGTACAGTTAGGGACGATGGCGGTAGAAGGAGGTGGCCAACCTTTC
CCATATAAGAGTTCTGTGTGCCCAGAGCTACCCTATTGTGAGCTCCCCACTGCTGATGGACTTTAGCTGT
CCTTAGAAGTGAAGAGTCCAACGGAGGAAAAGGAAGTGTGGTTTGATGGTCTGTGGTCCCTTCATCATGG
TTACCTGTTGTGGTTTTCTCTCGTATACCCATTTACCCATCCTGCAGTTCCTGTCCTTGAATAGGGGTGG
GGGTACTCTGCCATATCTCTTGTAGGGCAGTCAGCCCCCAAGTCATAGTTTGGAGTGATCTGGTCAGTGC
TAATAGGCAGTTTACAAAGGAATTCTGGCTTGTTACTTCAGTGAGGACAATCCCCCAAGGGCCCCTGGCAC
CTGTCCTGTCTTTCCATGGCTCTCCACTGCAGAGCCCAATGTCTTTGGGTGGGCTAGATAGGGTGTACAAT
TTGCCTGGTTCCTCCAAGCTCTTAATCCACTTTATCAATAGTTCCATTTAAATTGACTTCAATGATAAGA
GTGTATCCCATTTGAGATTGCTTGTGTTGTGGGGTAAAGGGGGGAGGAGGAACATGTTAAGATAATTGAC
ATGGGCAAGGGGAAGTCTTGAAGTGTAGCAGTTAAAACCATCTTGTAGCCCCATTCATGATGTTGACCACT
TGCTAGAGAGAAGAGGTGCCATAAGGCTAGAACCTAGAGGCTTGGCTGTCCCACCAACAGGCAGGCTTTT
GCAAGGCAGAGGCAGCCAGCTAGGTCCCTGACTTCCCAGCCAGGTGCAGCTCTAAGAACTGCTCTTGCCT
GCTGCCTTCTTGTGGTGTCCAGAGCCCACAGCCAATGCCTCCTCAAAACCCTGGCTTCCTTCCTTCTAAT
CCACTGGCACATCAGCATCACCTCCGGATTGACTTCAGATCCACACAGCCTACACTACTAGCAGTGGGTAAG
ACCACTTCCTTTGTCCTTGTCTGTTCTCCAGAAAAGTGGGCATGGAGGCGGTGTTAATAACTATAGGTCT
GTGGCTTTATGAGCCTTCAAACTTCTCTCTAGCTTCTGAAAGGGTTACTTTTGGGCAGTATTGCAGTCTC
ACCCTCCCGATGGGCTGTAGCCTGTGCAGTTGCTGTACTGGGCATGATCTCCAGTGCTTGCAAGTCCCAT
GATTTCTTTGGTGATTTTGAGGGTGGGGGGGAGGGACATGAATCATCTTAGCTTAGCTTCCTGTCTGTGAA
TGTCCATATAGTGTACTGTGTTTTAACAAACGATTTACACTGACTGTTGCTGTACAAGTGAATTTGGAAA
TAAAGTTATTACTCTGATTAAA
SEQ ID NO: 10
>reverse complement of SEQ ID NO:9
TTTAATCAGAGTAATAACTTTA
TTTCCAAATTCACTTGTACAGCAACAGTCAGGTGTAAATCGTTTGTTAAAACACAGTACACTATATGGACA
TTCACAGACAGGAAGCTAAGCTAAGATGATTCATGTCCCTCCCCCCACCCTCAAAATCACCAAAGAAATC
ATGGGACTTGCAAGCACTGGAGATCATGCCCAGTACAGCAACTGCACAGGCTACAGCCCATCGGGAGGGT
GAGACTGCAATACTGCCCAAAAGTAACCCTTTCAGAAGCTAGAGAGAAGTTTGAAGGCTCATAAAGCCAC
AGACCTATAGTTATTAACACCGCCTCCATGCCCACTTTTCTGGAGAACAGACAAGGACAAAGGAAGTGGT
CTTACCCACTGCTAGTAGTGTAGGCTGTGGATCTGAAGTCAATCCGGAGGTGATGCTGATGTGCCAGTGG
ATTAGAAGGAAGGAAGCCAGGGTTTTGAGGAGGCATTGGCTGTGGGCTCTGGACACCACAAGAAGGCAGC
AGGCAAGAGCAGTTCTTAGAGCTGCACCTGGCTGGGAAGTCAGGGACCTAGCTGGCTGCCTCTGCCTTGC
AAAAGCCTGCCTGTTGGTGGGACAGCCAAGCCTCTAGGTTCTAGCCTTATGGCACCTCTTCTCTCTAGCA
AGTGGTCAACATCATGAATGGGGCTACAAGATGGTTTAACTGCTACACTTCAAGACTTCCCCTTGCCCAT
GTCAATTATCTTAACATGTTCCTCCTCCCCCCTTTACCCCACAACACAAGCAATCTCAAATGGGATACAC
TCTTATCATTGAAGTCAATTTAAATGGAACTATTGATAAAGTGGATTAAGAGCTTGGAGGAACCAGGCAA
ATTGTACACCCTATCTAGCCCACCCAAAGACATTGGCTCTGCAGTTGGAGAGCCATGGAAAGACAGGACAG
GTGCCAGGCCCTTGGGGGATTGTCCTCACTGAAGTAACAAGCCAGAATTCCTTTGTAAACTGCCTATTA
GCACTGACCAGATCACTCCAAAACTATGACTTGGGGGCTGACTGCCCTACAAGAGATATGGCAGAGTACCC
CCACCCCTATTCAAGGACAGGAACTGCAGGATGGGTAAATGGGTATACGAGAGAAAACCACAACAGGTAA
CCATGATGAAGGGACCACAGACCATCAAACCACACTTCCTTTTTCCTCCGTTGGACTCTTCACTTCTAAGG
ACAGCTAAAGTCCATCAGCAGTGGGGAGCTCACAATAGGGTAGCTCTGGGCACACAGAACTCTTATATGG
GAAAGGTTGGCCACCTCCTTCTACCGCATCGTCCCTAACTGTACCCAAGCCCAAAGTGGCCGACCTGGGC
CTGAGGTTCCTAATCTTTAAAGGCCTCATCCTTACAGCTGTAGGAGGTCATGCAAGGTCAGGGGGCTGAC
GCCTTGGAAACCAAGGGGGTCTCCAAAGATGTCCCTTTTCATCAGTGGGGGCAGTCCATCCCAAGCCCCTTGG
TGACGAGGCCAAGGCTTGGAAAGGACCCACGGATATGTAGTGGAGAGTCATGGAATTTCTAGGGCCACAG
CTCTCCCTGCTGGTACTAGTGTCCTTTTCTCTTGTGATGCAGGAGTTCTTAGATGTCTGCCAGGGCTGCT
GTGGGACTTGAAGTTGTGATTAGAGAGGACCATCTTCACTCAGAGAAACAGGCCAGCCACAAGCTCTCCC
TGACAGTCGGAGCCTGCTGCCTCTAACGGGTCCTGTGCTTCAGGCCTTGGCCAATGTCATAGACCTCCAA
TGTCACAATCCAGTGTCTGCAGGGTCCCAGATGAAGAAGAAACCCTTCAAAACATGGGATGTCCCAGCAG
GGTAGCACTGCACCGGCCTGGACCTAAGTCACGAAGAAGACAAGGAATATCCAGGGCCCTCCAATCCCTGC
GGTGGGCTACAACCTTTTGACAAATATTTCAAGATAACATGCGTCCTTTTTTTTTTTTCTTTTTTCTTTT
TTCTTTTTCTTTTTCTTTTCACTATCATAGTCACTCTGGTGAACCCAGACAAACAGACGAATCCGACTAC
AGCGCAACAGGGTGCGGACAGGAGAGAAAGGGCTGCGTCTCTGGAGATGGCTGGCTGCTCCAGCAGGGGCA
GGCAGCACCGCTTCCATAGGACTGGAGGGAAAACATTTCAATCAAGGGGTATGTTCCCCAAATTGGGGTA
TGAAGGGCTGATTACGTGCATGGGGACTTAATGGCGGCTGAGCTCTGGGAGGCTAGCAATCACAAGCTGG
GGTGGAAGCAGAAGATGGGAGAAGGTGTGGCCCTGCCCTGGGACTACTGACTGTTCATACTGATGCCAGGA
CATTGACACCTAACGTGGCTGCCTCCAGTTCAACATGGGAAGGAGTCAGGCCTAGGAGGCAACCGCTAAA
GTAAAAAAAAAAAAGCAGAGGTGTCCAGGGTAATCTCCAGGCACACACGGACTCCCATCCACGATGGGAA
ATGATGGAGCAAACCAAACAAGGTTGTAAGGTTCCTTGTGGGAGGCACACTGGTTGGATTCGTGCAACGT
AGGACTAGAGACCAAGGCCCAAATCTTTGCCTTCCCTGGACTCCAACCCCTAGTGTAGAGCAGATATTGG
CCATAACTACCCAGGGGCCAGGGATGGGGCTTGGGGAGGCTGGGCACTCAGGACGGTGAGACGTGATGTA
CGGACGGCAGTGACTGGCTCTCATGGCAGACGTGGGCATGATAGGACAGGTAGAGGGGATACAGTGGCTG
TGCGAGGATGGGAGGCCTGGGACCCACATCCCAGAATTACCACCCCCCCATCCCTCACACTGCAGAAGTGCC
AGAGGACCAGGCTTGAGAACAGGCAGATGTTCCCGCAAGAGGCACAAGTCCTTACAAAGAACTGGTTAGC
CCTAAAGTCCCAGGTCTGTATGGTGGCCAAAATCATGGCTGTAGTTCCAAACTTCAGAACTCAGTAACAC
AGGTTTTCCTGTGAGAGCAAAGGGAAGCTCCTCAGCTCAGGACCTCCCTCCCTGGAGGGTGGGAGCCAGT
GCCCTGGGATGGCAAGGTCAGCCTTCAGAGAACCAATCTACAAGGTGCCACCTTCTGGCCTACCCTTCCTT
CTGCCCAAATACCCCTTCTCCCATGGGCTGCCCTTCAGAAGGGGCACACACACCCCACTGTACCCCACTGTG
CTTTCTCAGGCAGGCATCTGTGCTAGCTAAGACTGCTGCAGGCAGCCAGGGCTACCTGTGCTTCCCAAGC
TCCTTGGCAAGGAGCCAATGTCCCCTCTCCCAACCTGTCTTCCTCACCTCTCTCCTCTGACTCCCAGCCC
ACCCATCTCTCAGCTTCACTATCACAGTCCTCCCTCAAACCCACACAAAGTTAACATCACCTGCCTACG
GCTCCACAAACACACCAAGTCCCAAGTCTTTCATTGCTGCCGCTGTCCCTGATGCCCCTAAGATGGGGCT
GTGGGCAATTAGTTGCCCTAGTCCCTCAGCCAATCCCCAGAAGCAGCCTCCATCCAAAGCCTCCTTCACC
CTCTAAAACTCAGAGGGGGGGGGCGGGGTCAATAACAATTGCCAAGGAAATGTTGGGTTTTGTTTGGCCA
TGGTTTTACGTGTTTTTTTTTTTTTCCTTCCTTAAAAATATTTTATTACTAGCCCACAAATCAATTTGGA
AAGATGAAATTTACTTTTTCCCATCACTGATTTTGAAGTCCCGAGCCAAACCCGAGCCACAAAAGCAGGT
TAGGTGACAAGCTGGTCAGCCTGTCTATGAGGAGCAGCGGGGAGGGCAGAGGGTGAGGGGCCAGGTCATT
CTTTTTTTTTTTTTTTTTCCACACTCTCACTCTCTCTTCTCTCCATGATCAGTGACCGGCCCCAGGGGCC
TGATCACAAACCCTGCTTGGCCAAAGAGGCGGACACTTCATCGGCTAACGTGGCAAGCTGTGGAGAGTCC
ACCATGTCGATGCTGCCCGTGGAGGAGACGTTGCTGAGGTGCCGTGGAGATGTGTCCCCAGACACCACAG
GTGACTTGTACACGATTTCTGCTCCATGGTCTGTCTTGGCTTTGGCATTCTCCCTGAAGGTCAGCTTGTG
GGTTTCAATCTTCTTATTCCCTCCTCCAGGGACATGGGTGATGTTATCCAAGGAGCCAATCTTCGACTGG
ACTCTATCCTTGAAGTCCAGCTTTCTCTGATTTTACTTCTACCTGGCCACCTCCTGGCTTGTGATGGATGT
TCCCTAAGGAACCACACTTGGAGGTCACCTTGCTCAGGTCCACTGGCTTGTAGACTATTTGCACACTGCC
TCCGCCCGGGACGTGTTTGATATTGTCCTTTGAGCCACACTTGGACTGGACGTTGCTAAGATCCAGCTTC
TTATTAATTATCTGCACCTTGCCGCCTCCCGGCTGGTGCTTCAGGTTCTCAGTGGAGCCAATCTTGGACC
TGACGTTCTTTAGGTCTGGCATGGGCACAGGGGCAGTCTGTAGGCGGCTCTTACTGGCAGACGGTGACTT
AGGGGGAGTGCGAACCACTGCCACCTTTTTGGGCTCTCGGGTGGGCGGCGTTGGTAGGGATGGGGTACGG
GAGCGACTGCCAGGGGTTCCGGGCGAGCCGGGGCTGCTGTAGCCGCTTCGTTCTCCGGATTTTGGTGGTT
CACCTGATCCTGGAGGAGTCTTTGGGCTGGGTGTGGTCTTGGCTGGGATCCTGGTGGCATTGGATGTGCC
TTTCTGGCCCGGAGTGGCTGCTCCCCGAGGTGTGGCGATCTTCGCCCCCGTTTTGCCATCGGCGCCCTTG
GCTTTCTTCTCGTCATTTCCTGTCCTGTCTTTGCTTACGCCGGCCACTCGAGCTTGAGTCACATGCCCAG
CAGCTTGGTCCTCCATGTTCGGGGTGTCTCCGATGCCTGCTTCTTCAGCTGTGGTGCCTTCTGGGATCTC
CGTGTGGGACTGGGCAGTCGCCTGCTTGTCGGGAGCTCTCTCTTCCACTAGGGGCGCAGTCACGTCTTCA
GCAGTTGGAGTGCTCTTAGCATCAGAGGTCTCCGACCCTGGTTCTTCTGATCCATCATCGGCTGGGGGCT
GTGGGGGAGACTCTTTTAAGCCATGGTCCATGTCTCCTTCTTGGTCTTGGAGCATAGTGTAATCTCCGGC
CTGGTCTTCCATTGTGTCAAACTCCTGGCGGGGTTCAGCCATGCTGCTTCAAAGCCTGATAATCGACAGG
AGGCGAGGACAGAAGAGGACAGCGGAGGGGAAGGTGGTTGTGGCGGCGGCGACAGCAGAAGGTGGGCGGT
SEQ ID NO: 11
>Predicted XM_005624183.3: Canine (Canis lupus familiaris) microtubule-associated protein tau (MAPT), transcript variant X23, mRNA
CGCGCTCGCGCTCTCAGCCACCCACCAGCTCCCGCACCAGCAGCAGCAGCGCCGCCGCCGCCGCCGCCGC
CGCCGCCGCCCACCTTCTGCTGCCGCCCACCACAGCCACTTTCTCCTCTTTCCTCTCCTGTCCTCGCCCTC
TGTCGACTATCAGGTGGGCCTTGACCTAGGATGGCTGAGCCCCCGCCAGGAGTTCACTGTGATGGAAGATC
ATGCTGGGACATACGGGAAAGATCTCCCCTCTCAGGGGGGCTACACCCTGCTGCAAGACCATGAGGGGGA
CGTGGATCACGGCCTGAAAGCTGAAGAAGCAGGCATTGGAGACACCCCCAACCTGGAAGACCAAGCTGCT
GGACATGTGACTCAAGCTCGCATGGTCAGTAAGGCAAAGATGGGACTGGAACCGATGACAAAAAAGCCA
AGGGGGCTGATGGTAAAACTGGAACGAAGATCGCCACACCCCGGGGAGCGACCCCTTCAGGCCAGAAAGG
CCAGGCCAATGCCCACCAGGATTCCAGCGAAAACCACGCCCTCCCCCAAGACCCCACCGGGCGGTGAATCT
GGAAAATCTGGGGATCGCAGTGGCTACAGCAGCCCCCGGCTCCCCAGGCACTCCTGGCAGCCGCTCCCGCCA
CCCCGTCCCTGCCAACCCCACCCCACCCGGGAGCCCAAGAAGGTGGCGGTGGTCCGCACCCCACCCAAGTC
GCCGTCTGCAGCCAAGAGTCGCCTGCAGACCGCCCTGTGCCCATGCCAGACCTAAAGAACGTCAGATCC
AAGATCGGCTCCACTGAAAACCTGAAGCACCAGCCAGGAGGTGGGAAGGTGCAAATAGTGTACAAACCAG
TGGATCTGAGCAAGGTGACCTCCAAGTGCGGCTCATTAGGCAACATCCATCATAAGCCAGGAGGCGGTCA
GGTGGAAGTCAAATCTGAGAAGCTGGACTTCAAGGACAGAGTCCAGTCGAAGATCGGGTCCCTGGACAAC
ATCACCCACGTCCCTGGCGGAGGGAATAAAAAGATCGAAACCCACAAGCTGACCTTCCGTGAGAACGCCA
AAGCCAAGACCGACCACGGGGCGGAGATCGTGTACAAGTCGCCCGTGGTGTCCGGGGACACGTCTCCGCG
GCACCTGAGCAACGTGTCCTCCCACGGGCAGCATCGACATGGTCGACTCGCCCCAGCTCGCCACGCTAGCC
GACGAAGTGTCCGCCTCCCTGGCCAAGCAGGGTTTGTGATCAGGCCCCCGGGGCGGTCAATGATCGTGGA
GAGAAGAGAGTGTGGAAAAAAAAAGAATAATGATCTGGCCCTTTCGCCCTCTGCCCCTCCCCCCAGCTGCT
CCTCACAGACCGGTTAATCGGTTAATCACTTAACCTGCTTTTGTCGCTCGGCTCTGGCTCGGGACTTCAA
AATCAGTGACGGGAAAAAGCAAATTTCATCTTTCCAAATTGATGGGGTGGGCTAATAATAATAAAATATTT
TTAAAACCATTTAAAAA
SEQ ID NO: 12
>reverse complement of SEQ ID NO: 11
TTTTTAAATGGTTTTAA
AAATATTTTATTATTATTAGCCCACCCATCAATTTGGAAAGATGAAATTTGCTTTTTCCCGTCACTGATT
TTGAAGTCCCGAGCCAGAGCCGAGCGACAAAAGCAGGTTAAGTGATTAACCGATTAACCGGTCTGTGAGG
AGCAGCTGGGGGAGGGCAGAGGGCGAGAAGGGCCAGATCATTATTCTTTTTTTTTCCACACTCTCTTCTC
TCCACGATCATTGACCGCCCCGGGGGCCTGATCACAAACCCTGCTTGGCCAGGGAGGCGGACACTTCGTC
GGCTAGCGTGGCGAGCTGGGGCGAGTCGACCATGTCGATGCTGCCCGTGGAGGACACGTTGCTCAGGTGC
CGCGGAGACGTGTCCCCGGACACCACGGGCGACTTGTACACGATCTCCGCCCCGTGGTCGGTCTTGGCTT
TGGCGTTCTCACGGAAGGTCAGCTTGTGGGTTTCGATCTTTTTATTCCCTCCGCCAGGGACGTGGGTGAT
GTTGTCCAGGGACCCGATCTTCGACTGGACTCTGTCCTTGAAGTCCAGCTTTCTCAGATTTGACTTCCACC
TGACCGCCTCCTGGCTTATGATGGATGTTGCCTAATGAGCCGCACTTGGAGGTCACCTTGCTCAGATCCA
CTGGTTTGTACACTATTTGCACCTTCCCACCTCCTGGCTGGTGCTTCAGGTTTTCAGTGGAGCCGATCTT
GGATCTGACGTTCTTTAGGTCTGGCATGGGCACAGGGGCGGTCTGCAGGCGACTCTTGGCTGCAGACGGC
GACTTGGGTGGGGTGCGGACCACCGCCCACCTTCTTGGGCTCCCGGGTGGGTGGGGTTGGCAGGGACGGGG
TGCGGGAGCGGCTGCCAGGAGTGCCTGGGGAGCCGGGGCTGCTGTAGCCACTGCGATCCCCAGATTTTCC
AGATTCACCGCCCGGTGGGGTCTTGGGGGAGGGCGTGGTTTTCGCTGGAATCCTGGTGGCATTGGCCTGG
CCTTTCTGGCCTGAAGGGGTCGCTCCCCGGGGTGTGGCGATCTTCGTTCCAGTTTTACCATCAGCCCCCT
TGGCTTTTTTGTCATCGGTTCCAGTCCCATCTTTGCCTTTACTGACCATGCGAGCTTGAGTCACATGTCC
AGCAGCTTGGTCTTCCAGGTTGGGGGTGTCTCCAATGCCTGCTTCTTCAGCTTTCAGGCCGTGATCCACG
TCCCCCTCATGGTCTTGCAGCAGGTGTAGCCCCCCTGAGAGGGGAGATCTTTCCCGTATGTCCCAGCAT
GATCTTCCATCACAGTGAACTCCTGGCGGGGCTCAGCCATCCTAGGTCAAGGCCCACCTGATAGTCGACA
GAGGGCGAGGACAGGAGAGGAAAGAGGAGAAAGTGGCTGTGGTGGCGGCAGCAGAAGGTGGGCGGCGGCG
GCGGCGGCGGCGGCGGCGGCGCTGCTGCTGCTGGTGCGGGAGCTGGTGGGTGGCTGAGAGCGCGAGCGCG
SEQ ID NO: 1533
>MAPT (NM_005910) exon 10
GTGCAAATAGTCTACAAACCAGTTGACCTGAGCAAGGTGACCTCCAAGGTGTGGCTCATTA
GGCAACATCCATCATAAACCAG

Claims (122)

ＭＡＰＴの発現を阻害するための二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤であって、ｄｓＲＮＡ剤は、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、
センス鎖は、配列番号１および配列番号３からなる群から選択されるヌクレオチド配列と３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖は、配列番号２および配列番号４からなる群から選択されるヌクレオチド配列と３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、ｄｓＲＮＡ剤。 A double-stranded ribonucleic acid (dsRNA) agent for inhibiting expression of MAPT, the dsRNA agent comprising a sense strand and an antisense strand forming a double-stranded region,
The sense strand comprises at least 15 contiguous nucleotides that differ by no more than 3 nucleotides from a nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO:1 and SEQ ID NO:3, and the antisense strand comprises SEQ ID NO:2 and SEQ ID NO:4. A dsRNA agent comprising at least 15 contiguous nucleotides that differ by no more than 3 nucleotides from a nucleotide sequence selected from the group consisting of: ＭＡＰＴの発現を阻害するための二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤であって、ｄｓＲＮＡ剤は、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、
アンチセンス鎖は、タウをコードするｍＲＮＡに対して相補性の領域を含み、相補性の領域は、配列番号２および配列番号４からなる群から選択されるヌクレオチド配列と３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、ｄｓＲＮＡ剤。 A double-stranded ribonucleic acid (dsRNA) agent for inhibiting expression of MAPT, the dsRNA agent comprising a sense strand and an antisense strand forming a double-stranded region,
The antisense strand comprises a region of complementarity to a tau-encoding mRNA, wherein the region of complementarity differs by no more than 3 nucleotides from a nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO:2 and SEQ ID NO:4. A dsRNA agent comprising at least 15 contiguous nucleotides. ＭＡＰＴの発現を阻害するための二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤であって、ｄｓＲＮＡ剤は、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、
アンチセンス鎖は、タウをコードするｍＲＮＡに対して相補性の領域を含み、相補性の領域は、表３～８および１６～２８のいずれか１つに記載のアンチセンスヌクレオチド配列と３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、ｄｓＲＮＡ剤。 A double-stranded ribonucleic acid (dsRNA) agent for inhibiting expression of MAPT, the dsRNA agent comprising a sense strand and an antisense strand forming a double-stranded region,
The antisense strand comprises a region of complementarity to a tau-encoding mRNA, wherein the regions of complementarity are no more than three antisense nucleotide sequences set forth in any one of Tables 3-8 and 16-28 a dsRNA agent comprising at least 15 contiguous nucleotides that differ by nucleotides. センス鎖が、配列番号３のヌクレオチド５１２～５３２、５１３～５３３、５１４～５３４、５１５～５３５、５１６～５３６、５１７～５３７、５１８～５３８、５１９～５３９、５２０～５４０、１０６３～１０８３、１０６７～１０８７、１０７２～１０９２、１０７４～１０９４、１０７５～１０９５、１１２５～１１４５、１１２６～１１４６、１１２７～１１４７、１１２９～１１４９、１１７０～１１９０、１３９５～１４１５、１９０５～１９２５、１９０６～１９２６、１９０９～１９２９、１９１１～１９３１、１９１２～１９３２、１９１３～１９３３、１９１４～１９３４、１９１５～１９３５、１９１６～１９３６、１９１９～１９３９、１９５１～１９７１、１９５４～１９７４、１９５８～１９７８、２３８７～２４０７、２４０９～２４２９、２４１０～２４３０、２４６９～２４８９、２４７１～２４９１、２４７２～２４９２、２４７６～２４９６、２４７７～２４９７、２４７８～２４９８、２４８０～２５００、２４８１～２５０１、２４８２～２５０２、２４８４～２５０４、２７６２～２７８２、２７６４～２７８４、２７６６～２７８６、２７６７～２７８７、２７６８～２７８８、２７６９～２７８９、２８１９～２８３９、２８２１～２８４１、２８２８～２８４８、２９４３～２９６３、２９４４～２９６４、２９４６～２９６６、２９４７～２９６７、３２５２～３２７２、３２７７～３２９７、３２８０～３３００、３２８１～３３０１、３２８２～３３０２、３２８４～３３０４、３２８５～３３０５、３２８６～３３０６、３３３１～３３５１、３３３２～３３５２、３３３３～３３５３、３３３４～３３５４、３３３５～３３５５、３３３６～３３５６、３３３８～３３５８、３３４０～３３６０、３３４２～３３６２、３３４３～３３６３、３３４４～３３６４、３３４５～３３６５、３３４６～３３６６、３３４７～３３６７、３３４９～３３６９、３３５０～３３７０、３３５３～３３７３、３３６４～３３８４、３３６６～３３８６、３３６７～３３８７、３３６８～３３８８、３３６９～３３８９、３３７０～３３９０、３４１２～３４３２、３４１４～３４３４、３４１５～３４３５、３４１６～３４３６、３４１７～３４３７、３４１９～３４３９、３４２０～３４４０、３４２４～３４４４、３４２５～３４４５、３４２６～３４４６、３４２７～３４４７、３４２８～３４４８、３４２９～３４４９、３４３０～３４５０、３４３１～３４５１、３４３４～３４５４、４１３２～４１５２、４１３４～４１５４、４１７９～４１９９、４１８２～４２０２、４１８４～４２０４、４３９５～４４１５、４４２５～４４４５、４４２６～４４４６、４４２９～４４４９、４４６９～４４８９、４４７０～４４９０、４４７１～４４９１、４４７２～４４９２、４４７３～４４９３、４４７４～４４９４、４５６９～４５８９、４５７１～４５９１、４５７２～４５９２、４５９６～４６１６、４６２３～４６４３、４７２１～４７４１、４７２２～４７４２、４７２５～４７４５、４７２６～４７４６、４７６６～４７８６、４７６７～４７８７、４７６８～４７８８、４７６９～４７８９、４７７０～４７９０、４７７９～４７９９、４８０５～４８２５、４８０６～４８２６、４８０７～４８２７、４８０８～４８２８、４８０９～４８２９、４８１２～４８３２、４８１３～４８３３、４８１４～４８３４、４９３６～４９５６、５０７２～５０９２、５０７３～５０９３、５３４５～５３６５、５３４６～５３６６、５３４９～５３６９、５３５０～５３７０、５３５１～５３７１、５４６０～５４８０、５４６１～５４８１、５４６３～５４８３、５４６５～５４８５、５４６７～５４８７、５４６８～５４８８、５４６９～５４８９、５４７０～５４９０、５４７１～５４９１、５５０５～５５２５、５５０６～５５２６、５５０７～５５２７、５５０８～５５２８、５５０９～５５２９、５５１１～５５３１、５５１３～５５３３、５５１４～５５３４、５５４１～５５６１、５５４４～５５６４、５５４６～５５６６、５５４７～５５６７、５５４８～５５６８、５５５０～５５７０、５５５１～５５７１、５５７４～５５９４、５５７６～５５９６、５６１４～５６３４、５２１～５４１、５２２～５４２、５２３～５４３、５２４～５４４、５２５～５４５、５２６～５４６、５２７～５４７、５２８～５４８、５２９～５４９、５３０～５５０、５３１～５５１、５３２～５５２、５３３～５５３、５３４～５５４、５３５～５５５、５３６～５５６、１０３４～１０５４、１０３５～１０５５、１０３６～１０５６、１０３７～１０５７、１０３８～１０５８、１０３９～１０５９、１０４０～１０６０、１０４１～１０６１、１０４２～１０６２、１０４３～１０６３、１０４４～１０６４、１０４５～１０６５、１０４６～１０６６、１０４７～１０６７、１０４８～１０６８、１０４９～１０６９、１０５０～１０７０、１０５１～１０７１、１０５２～１０７２、１０５３～１０７３、１０５４～１０７４、１０６２～１０８２、１０６４～１０８４、１０６５～１０８５、１０６６～１０８６、１０６８～１０８８、１０６９～１０８９、１０７０～１０９０、１０７１～１０９１、１０７３～１０９３、１０７６～１０９６、１０７７～１０９７、１０７８～１０９８、１０７９～１０９９、１０８０～１１００、１０８１～１１０１、１０８２～１１０２、１１２８～１１４８、１１２９～１１４９、１１３０～１１５０、１１３１～１１５１、１１３２～１１５２、１１３３～１１５３、１１３４～１１５４、１１３５～１１５５、１１３６～１１５６、１１３７～１１５７、１１３８～１１５８、１１３９～１１５９、１１４０～１１６０、１１４１～１１６１、１１４２～１１６２、１１４３～１１６３、１１４４～１１６４、１１４５～１１６５、１１４６～１１６６、１１４７～１１６７、１１４８～１１６８、９７５～９９５、９７６～９９６、９７７～９９７、９７８～９９８、９７９～９９９、９８０～１０００、９８１～１００１、９８２～１００２、９８３～１００３、９８４～１００４、９８５～１００５、９８６～１００６、９８７～１００７、９８８～１００８、９８９～１００９、９９０～１０１０、９９１～１０１１、９９２～１０１２、９９３～１０１３、９９４～１０１４、９９５～１０１５、９９６～１０１６、９９７～１０１７、９９８～１０１８、９９９～１０１９、１０００～１０２０、１００１～１０２１、１００２～１０２２、１００３～１０２３、１００４～１０２４、１００５～１０２５、１００６～１０２６、１００７～１０２７、１００８～１０２８、１００９～１０２９、１０１０～１０３０、１０１１～１０３１、１０１２～１０３２、１０１３～１０３３、１０１４～１０３４、１０１５～１０３５、１０１６～１０３６、１０１７～１０３７、１０１８～１０３８、１０１９～１０３９、１０２０～１０４０、１０２１～１０４１、１０２２～１０４２、１０２３～１０４３、１０２４～１０４４、１０２５～１０４５、１０２６～１０４６、１０２７～１０４７、１０２８～１０４８、１０２９～１０４９、１０３０～１０５０、１０３１～１０５１、１０３２～１０５２、１０３３～１０５３、１０３４～１０５４、１０３５～１０５５、１０３６～１０５６、１０３７～１０５７、１０３８～１０５８、１０３９～１０５９、１０４０～１０６０、１０４１～１０６１、１０４２～１０６２、１０４３～１０６３、および１０４５～１０６５のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖が、配列番号４の対応するヌクレオチド配列からの少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 the sense strand is nucleotides 512-532, 513-533, 514-534, 515-535, 516-536, 517-537, 518-538, 519-539, 520-540, 1063-1083, 1067 of SEQ ID NO:3 ~1087, 1072-1092, 1074-1094, 1075-1095, 1125-1145, 1126-1146, 1127-1147, 1129-1149, 1170-1190, 1395-1415, 1905-1925, 1906-1926, 1909-1 929 and 2410 ~2430, 2469-2489, 2471-2491, 2472-2492, 2476-2496, 2477-2497, 2478-2498, 2480-2500, 2481-2501, 2482-2502, 2484-2504, 2762-2782, 2764-2 784 2766-2786, 2767-2787, 2768-2788, 2769-2789, 2819-2839, 2821-2841, 2828-2848, 2943-2963, 2944-2964, 2946-2966, 2947-2967, 3252-3272, 3277 ~3297, 3280~3300, 3281~3301, 3282~3302, 3284~3304, 3285~3305, 3286~3306, 3331~3351, 3332~3352, 3333~3353, 3334~3354, 3335~3355, 3336~3 356 ,3338-3358,3340-3360,3342-3362,3343-3363,3344-3364,3345-3365,3346-3366,3347-3367,3349-3369,3350-3370,3353-3373,3364-3384, 3366 ~3386, 3367-3387, 3368-3388, 3369-3389, 3370-3390, 3412-3432, 3414-3434, 3415-3435, 3416-3436, 3417-3437, 3419-3439, 3420-3440, 3424-3 444 ,3425-3445,3426-3446,3427-3447,3428-3448,3429-3449,3430-3450,3431-3451,3434-3454,4132-4152,4134-4154,4179-4199,4182-4202, 4184 ~4204, 4395~4415, 4425~4445, 4426~4446, 4429~4449, 4469~4489, 4470~4490, 4471~4491, 4472~4492, 4473~4493, 4474~4494, 4569~4589, 4571~4 591 ,4572-4592,4596-4616,4623-4643,4721-4741,4722-4742,4725-4745,4726-4746,4766-4786,4767-4787,4768-4788,4769-4789,4770-4790, 4779 ~4799, 4805~4825, 4806~4826, 4807~4827, 4808~4828, 4809~4829, 4812~4832, 4813~4833, 4814~4834, 4936~4956, 5072~5092, 5073~5093, 5345~5 365 . 5471 ~5491, 5505~5525, 5506~5526, 5507~5527, 5508~5528, 5509~5529, 5511~5531, 5513~5533, 5514~5534, 5541~5561, 5544~5564, 5546~5566, 5547~5 567 , 5548-5568, 5550-5570, 5551-5571, 5574-5594, 5576-5596, 5614-5634, 521-541, 522-542, 523-543, 524-544, 525-545, 526-546, 527 ~547, 528~548, 529~549, 530~550, 531~551, 532~552, 533~553, 534~554, 535~555, 536~556, 1034~1054, 1035~1055, 1036~1056 ,1037-1057,1038-1058,1039-1059,1040-1060,1041-1061,1042-1062,1043-1063,1044-1064,1045-1065,1046-1066,1047-1067,1048-1068, 1049 ~1069, 1050-1070, 1051-1071, 1052-1072, 1053-1073, 1054-1074, 1062-1082, 1064-1084, 1065-1085, 1066-1086, 1068-1088, 1069-1089, 1070-1 090 . 1131 ~1151, 1132-1152, 1133-1153, 1134-1154, 1135-1155, 1136-1156, 1137-1157, 1138-1158, 1139-1159, 1140-1160, 1141-1161, 1142-1162, 1143-1 163 , 1144-1164, 1145-1165, 1146-1166, 1147-1167, 1148-1168, 975-995, 976-996, 977-997, 978-998, 979-999, 980-1000, 981-1001, 982 ~1002, 983-1003, 984-1004, 985-1005, 986-1006, 987-1007, 988-1008, 989-1009, 990-1010, 991-1011, 992-1012, 993-1013, 994-1014 , 995-1015, 996-1016, 997-1017, 998-1018, 999-1019, 1000-1020, 1001-1021, 1002-1022, 1003-1023, 1004-1024, 1005-1025, 1006-1026, 1007 ~1027, 1008-1028, 1009-1029, 1010-1030, 1011-1031, 1012-1032, 1013-1033, 1014-1034, 1015-1035, 1016-1036, 1017-1037, 1018-1038, 1019-1 039 ,1020-1040,1021-1041,1022-1042,1023-1043,1024-1044,1025-1045,1026-1046,1027-1047,1028-1048,1029-1049,1030-1050,1031-1051, 1032 ~ 1052, 1033-1053, 1034-1054, 1035-1055, 1036-1056, 1037-1057, 1038-1057, 1039-1059, 1039-1059, 1040-1060, 1041-1061, 1045, and 1045 ~ at least 15 contiguous nucleotides differing by no more than 3 nucleotides from any one of the 1065 nucleotide sequences, and the antisense strand comprises at least 15 contiguous nucleotides from the corresponding nucleotide sequence of SEQ ID NO:4 , the dsRNA agent of any one of claims 1-3. センス鎖が、配列番号３のヌクレオチド５２０～５４１、５２０～５５６、５１０～５３４、５１２～５３６、５１６～５４１、５１６～５４０、５２０～５４４、５２４～５４７、５２６～５５１、５２９～５５６、５３２～５５６、１０６５～１０８９、１０６８～１０９５、１０６８～１０９４、１０７５～１１００、１０７６～１１００、１０７９～１１０３、１１２３～１１４７、１１２７～１１５１、１１３０～１１５５、１９０３～１９３４、１９０３～１９３０、１９１４～１９４０、１９４９～１９７５、２４７０～２４９７、２９４１～２９６５、３２７５～３３０２、３２７８～３３０２、３３２９～３３５３、３３３３～３３５７、３３３８～３３６７、３３３８～３３６６、３３４８～３３９０、３３４８～３３８８、３３５１～３３８５、５５０７～５５６２、および５５４９～５５９７のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖が、配列番号４の対応するヌクレオチド配列からの少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 the sense strand is nucleotides 520-541, 520-556, 510-534, 512-536, 516-541, 516-540, 520-544, 524-547, 526-551, 529-556, 532 of SEQ ID NO:3 ~556, 1065~1089, 1068~1095, 1068~1094, 1075~1100, 1076~1100, 1079~1103, 1123~1147, 1127~1151, 1130~1155, 1903~1934, 1903~1930, 1914~19 40 and 5507 -5562, and 5549-5597, and at least 15 contiguous nucleotides that differ by no more than 3 nucleotides from any one of the nucleotide sequences 5549-5597, wherein the antisense strand comprises at least 15 nucleotides from the corresponding nucleotide sequence of SEQ ID NO:4 4. The dsRNA agent of any one of claims 1-3, wherein the dsRNA agent comprises . センス鎖が、配列番号１のヌクレオチド９７７～９９７、９８０～１０００、９７３～９９３、９８８～１００８、９８７～１００７、９７２～９９２、９７９～９９９、１００１～１０２１、９７６～９９６、９９４～１０１４、１００２～１０２２、９７８～９９８、９７４～９９４、５２０～５４０、５２１～５４１、５４６４～５４８４、１８１３～１８３３、２３７８～２３９８、３２４２～３２６２、５４４２～５４６２、１６６５～１６８５、５２４～５４４、５２０７～５２２７、４６７０～４６９０、３４２０～３４４０、３３２８～３３４８、５４０９～５４２９、５４３９～５４５９、４５２７～４５４７、５４４１～５４６１、５４１０～５４３０、および５４４６～５４６６のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖が、配列番号２の対応するヌクレオチド配列からの少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 the sense strand is nucleotides 977-997, 980-1000, 973-993, 988-1008, 987-1007, 972-992, 979-999, 1001-1021, 976-996, 994-1014, 1002 of SEQ ID NO:1 ~1022, 978-998, 974-994, 520-540, 521-541, 5464-5484, 1813-1833, 2378-2398, 3242-3262, 5442-5462, 1665-1685, 524-544, 5207-5227 , 4670-4690, 3420-3440, 3328-3348, 5409-5429, 5439-5459, 4527-4547, 5441-5461, 5410-5430, and 5446-5466 and no more than 3 nucleotides comprises at least 15 contiguous nucleotides that differ, and wherein the antisense strand comprises at least 15 contiguous nucleotides from the corresponding nucleotide sequence of SEQ ID NO:2. dsRNA agent. アンチセンス鎖が、ＡＤ－５２３７９９．１、ＡＤ－５２３８０２．１、ＡＤ－５２３７９５．１、ＡＤ－５２３８１０．１、ＡＤ－５２３８０９．１、ＡＤ－１０１９３３１．１、ＡＤ－５２３８０１．１、ＡＤ－５２３８２３．１、ＡＤ－５２３７９８．１、ＡＤ－５２３８１６．１、ＡＤ－５２３８２４．１、ＡＤ－５２３８００．１、ＡＤ－５２３７９６．１、ＡＤ－５３５０９４．１、ＡＤ－５３５０９４．１、ＡＤ－５３５０９５．１、ＡＤ－５３８６４７．１、ＡＤ－５３５９２２．１、ＡＤ－５３６３１７．１、ＡＤ－５３６９１１．１、ＡＤ－５３８６２６．１、ＡＤ－５３５８６４．１、ＡＤ－５２３５６１．１、ＡＤ－５２３５６５．１、ＡＤ－５２３５６２．１、ＡＤ－５２６９１４．１、ＡＤ－５２６３９４．１、ＡＤ－３９５４５２．１、ＡＤ－５２５３４３．１、ＡＤ－５２４２７４．１、ＡＤ－５２６９５６．１、ＡＤ－５２６９８６．１、ＡＤ－５２６２９６．１、ＡＤ－５２６９８８．１、ＡＤ－５２６９５７．１、ＡＤ－５２６９９３．１、ＡＤ－１３９７０７０．１、ＡＤ－１３９７０７０．２、ＡＤ－１３９７０７１．１、ＡＤ－１３９７０７１．２、ＡＤ－１３９７０７２．１、ＡＤ－１３９７０７２．２、ＡＤ－１３９７０７３．１、ＡＤ－１３９７０７３．２、ＡＤ－１３９７０７４．１、ＡＤ－１３９７０７４．２、ＡＤ－１３９７０７５．１、ＡＤ－１３９７０７５．２、ＡＤ－１３９７０７６．１、ＡＤ－１３９７０７６．２、ＡＤ－１３９７０７７．１、ＡＤ－１３９７０７７．２、ＡＤ－１３９７０７８．１、ＡＤ－１３９７０７８．２、ＡＤ－１３９７２５０．１、ＡＤ－１３９７２５１．１、ＡＤ－１３９７２５２．１、ＡＤ－１３９７２５３．１、ＡＤ－１３９７２５４．１、ＡＤ－１３９７２５５．１、ＡＤ－１３９７２５６．１、ＡＤ－１３９７２５７．１、ＡＤ－１３９７２５８．１、ＡＤ－１３９７２５９．１、ＡＤ－１３９７２６０．１、ＡＤ－１３９７２６１．１、ＡＤ－１３９７２６２．１、ＡＤ－１３９７２６３．１、ＡＤ－１３９７２６４．１、ＡＤ－１３９７２６５．１、ＡＤ－１４２３２４２．１、ＡＤ－１４２３２４３．１、ＡＤ－１４２３２４４．１、ＡＤ－１４２３２４５．１、ＡＤ－１４２３２４６．１、ＡＤ－１４２３２４７．１、ＡＤ－１４２３２４８．１、ＡＤ－１４２３２４９．１、ＡＤ－１４２３２５０．１、ＡＤ－１４２３２５１．１、ＡＤ－１４２３２５２．１、ＡＤ－１４２３２５３．１、ＡＤ－１４２３２５４．１、ＡＤ－１４２３２５５．１、ＡＤ－１４２３２５６．１、ＡＤ－１４２３２５７．１、ＡＤ－１４２３２５８．１、ＡＤ－１４２３２５９．１、ＡＤ－１４２３２６０．１、ＡＤ－１４２３２６１．１、ＡＤ－１４２３２６２．１、ＡＤ－１４２３２６３．１、ＡＤ－１４２３２６４．１、ＡＤ－１４２３２６５．１、ＡＤ－１４２３２６６．１、ＡＤ－１４２３２６７．１、ＡＤ－１４２３２６８．１、ＡＤ－１４２３２６９．１、ＡＤ－１４２３２７０．１、ＡＤ－１４２３２７１．１、ＡＤ－１４２３２７２．１、ＡＤ－１４２３２７３．１、ＡＤ－１４２３２７４．１、ＡＤ－１４２３２７５．１、ＡＤ－１４２３２７６．１、ＡＤ－１４２３２７７．１、ＡＤ－１４２３２７８．１、ＡＤ－１４２３２７９．１、ＡＤ－１４２３２８０．１、ＡＤ－１４２３２８１．１、ＡＤ－１４２３２８２．１、ＡＤ－１４２３２８３．１、ＡＤ－１４２３２８４．１、ＡＤ－１４２３２８５．１、ＡＤ－１４２３２８６．１、ＡＤ－１４２３２８７．１、ＡＤ－１４２３２８８．１、ＡＤ－１４２３２８９．１、ＡＤ－１４２３２９０．１、ＡＤ－１４２３２９１．１、ＡＤ－１４２３２９２．１、ＡＤ－１４２３２９３．１、ＡＤ－１４２３２９４．１、ＡＤ－１４２３２９５．１、ＡＤ－１４２３２９６．１、ＡＤ－１４２３２９７．１、ＡＤ－１４２３２９８．１、ＡＤ－１４２３２９９．１、ＡＤ－１４２３３００．１、ＡＤ－１３９７２６６．１、ＡＤ－１３９７２６６．２、ＡＤ－１３９７２６７．１、ＡＤ－１４２３３０１．１、ＡＤ－１３９７２６８．１、ＡＤ－１３９７２６８．２、ＡＤ－１３９７２６９．１、ＡＤ－１４２３３０２．１、ＡＤ－１３９７２７０．１、ＡＤ－１３９７２７０．２、ＡＤ－１３９７２７１．１、ＡＤ－１３９７２７１．２、ＡＤ－１３９７２７２．１、ＡＤ－１４２３３０３．１、ＡＤ－１３９７２７３．１、ＡＤ－１４２３３０４．１、ＡＤ－１３９７２７４．１、ＡＤ－１４２３３０５．１、ＡＤ－１３９７２７５．１、ＡＤ－１４２３３０６．１、ＡＤ－１３９７２７６．１、ＡＤ－１３９７２７７．１、ＡＤ－１３９７２７７．２、ＡＤ－１３９７２７８．１、ＡＤ－１３９７２７９．１、ＡＤ－１３９７２８０．１、ＡＤ－１３９７２８１．１、ＡＤ－１３９７２８２．１、ＡＤ－１３９７２８３．１、ＡＤ－１３９７２８４．１、ＡＤ－１３９７２８５．１、ＡＤ－１３９７２８６．１、ＡＤ－１３９７２８７．１、ＡＤ－１３９７０７９．１、ＡＤ－１３９７０７９．２、ＡＤ－１３９７２８８．１、ＡＤ－１３９７２８９．１、ＡＤ－１３９７２９０．１、ＡＤ－１３９７０８０．１、ＡＤ－１３９７０８０．２、ＡＤ－１３９７２９１．１、ＡＤ－１３９７２９２．１、ＡＤ－１３９７２９３．１、ＡＤ－１３９７２９４．１、ＡＤ－１３９７０８１．１、ＡＤ－１３９７０８１．２、ＡＤ－１３９７２９５．１、ＡＤ－１３９７０８２．１、ＡＤ－１３９７０８２．２、ＡＤ－１３９７０８３．１、ＡＤ－１３９７０８３．２、ＡＤ－１３９７２９６．１、ＡＤ－１３９７２９７．１、ＡＤ－１３９７２９８．１、ＡＤ－１３９７２９９．１、ＡＤ－１３９７３００．１、ＡＤ－１３９７３０１．１、ＡＤ－１３９７３０２．１、ＡＤ－１３９７０８４．１、ＡＤ－１３９７０８５．１、ＡＤ－１３９７０８６．１、ＡＤ－１３９７３０３．１、ＡＤ－１３９７０８７．１、ＡＤ－１３９７０８７．２、ＡＤ－１３９７３０４．１、ＡＤ－１３９７３０５．１、ＡＤ－１３９７３０６．１、ＡＤ－１３９７３０７．１、ＡＤ－１３９７３０８．１、ＡＤ－１３９７３０９．１、ＡＤ－１３９７３１０．１、ＡＤ－１３９７３１１．１、ＡＤ－１３９７３１２．１、ＡＤ－１３９７３１３．１、ＡＤ－１３９７３１４．１、ＡＤ－１３９７３１５．１、ＡＤ－１３９７３１６．１、ＡＤ－１３９７３１７．１、ＡＤ－１３９７３１８．１、ＡＤ－１３９７３１９．１、ＡＤ－１３９７３２０．１、ＡＤ－１３９７３２１．１、ＡＤ－１３９７３２２．１、ＡＤ－１３９７０８８．１、ＡＤ－１３９７０８９．１、ＡＤ－１３９７０９０．１、ＡＤ－１３９７０９１．１、ＡＤ－１３９７０９２．１、ＡＤ－１３９７０９３．１、ＡＤ－１３９７０９４．１、ＡＤ－１３９７０９５．１、ＡＤ－１３９７０９６．１、ＡＤ－１３９７０９７．１、ＡＤ－１３９７０９８．１、ＡＤ－１３９７０９９．１、ＡＤ－１３９７１０１．１、ＡＤ－１３９７１０２．１、ＡＤ－１３９７１０３．１、ＡＤ－１３９７１０４．１、ＡＤ－１３９７１０５．１、ＡＤ－１３９７１０６．１、ＡＤ－１３９７１０７．１、ＡＤ－１３９７１０８．１、ＡＤ－１３９７１０９．１、ＡＤ－１３９７１１０．１、ＡＤ－１３９７１１１．１、ＡＤ－１３９７１１２．１、ＡＤ－１３９７１１３．１、ＡＤ－１３９７１１４．１、ＡＤ－１３９７１１５．１、ＡＤ－１３９７１１６．１、ＡＤ－１３９７１１７．１、ＡＤ－１３９７１１８．１、ＡＤ－１３９７１１９．１、ＡＤ－１３９７１２０．１、ＡＤ－１３９７１２１．１、ＡＤ－１３９７１２２．１、ＡＤ－１３９７１２３．１、ＡＤ－１３９７１２４．１、ＡＤ－１３９７１２５．１、ＡＤ－１３９７１２６．１、ＡＤ－１３９７１２７．１、ＡＤ－１３９７１２８．１、ＡＤ－１３９７１２９．１、ＡＤ－１３９７１３０．１、ＡＤ－１３９７１３１．１、ＡＤ－１３９７１３２．１、ＡＤ－１３９７１３３．１、ＡＤ－１３９７１３４．１、ＡＤ－１３９７１３５．１、ＡＤ－１３９７１３６．１、ＡＤ－１３９７１３７．１、ＡＤ－１３９７１３８．１、ＡＤ－１３９７１３９．１、ＡＤ－１３９７１４０．１、ＡＤ－１３９７１４１．１、ＡＤ－１３９７１４２．１、ＡＤ－１３９７１４３．１、ＡＤ－１３９７１４４．１、ＡＤ－１３９７１４５．１、ＡＤ－１３９７１４６．１、ＡＤ－１３９７１４７．１、ＡＤ－１３９７１４８．１、ＡＤ－１３９７１４９．１、ＡＤ－１３９７１５０．１、ＡＤ－１３９７１５１．１、ＡＤ－１３９７１５２．１、ＡＤ－１３９７１５３．１、ＡＤ－１３９７１５４．１、ＡＤ－１３９７１５５．１、ＡＤ－１３９７１５６．１、ＡＤ－１３９７１５７．１、ＡＤ－１３９７１５８．１、ＡＤ－１３９７１５９．１、ＡＤ－１３９７１６０．１、ＡＤ－１３９７１６１．１、ＡＤ－１３９７１６２．１、ＡＤ－１３９７１６３．１、ＡＤ－１３９７１６４．１、ＡＤ－１３９７１６５．１、ＡＤ－１３９７１６６．１、ＡＤ－１３９７１６７．１、ＡＤ－１３９７１６８．１、ＡＤ－１３９７１６９．１、ＡＤ－１３９７１７０．１、ＡＤ－１３９７１７１．１、ＡＤ－１３９７１７２．１、ＡＤ－１３９７１７３．１、ＡＤ－１３９７１７４．１、ＡＤ－１３９７１７５．１、ＡＤ－１３９７１７６．１、ＡＤ－１３９７１７７．１、ＡＤ－１３９７１７８．１、ＡＤ－１３９７１７９．１、ＡＤ－１３９７１８０．１、ＡＤ－１３９７１８１．１、ＡＤ－１３９７１８２．１、ＡＤ－１３９７１８３．１、ＡＤ－１３９７１８４．１、ＡＤ－１３９７１８５．１、ＡＤ－１３９７１８６．１、ＡＤ－１３９７１８７．１、ＡＤ－１３９７１８８．１、ＡＤ－１３９７１８９．１、ＡＤ－１３９７１９０．１、ＡＤ－１３９７１９１．１、ＡＤ－１３９７１９２．１、ＡＤ－１３９７１９３．１、ＡＤ－１３９７１９４．１、ＡＤ－１３９７１９５．１、ＡＤ－１３９７１９６．１、ＡＤ－１３９７１９７．１、ＡＤ－１３９７１９８．１、ＡＤ－１３９７１９９．１、ＡＤ－１３９７２００．１、ＡＤ－１３９７２０１．１、ＡＤ－１３９７２０２．１、ＡＤ－１３９７２０３．１、ＡＤ－１３９７２０４．１、ＡＤ－１３９７２０５．１、ＡＤ－１３９７２０６．１、ＡＤ－１３９７２０７．１、ＡＤ－１３９７２０８．１、ＡＤ－１３９７２０９．１、ＡＤ－１３９７２１０．１、ＡＤ－１３９７２１１．１、ＡＤ－１３９７２１２．１、ＡＤ－１３９７２１３．１、ＡＤ－１３９７２１４．１、ＡＤ－１３９７２１５．１、ＡＤ－１３９７２１６．１、ＡＤ－１３９７２１７．１、ＡＤ－１３９７２１８．１、ＡＤ－１３９７２１９．１、ＡＤ－１３９７２２０．１、ＡＤ－１３９７２２１．１、ＡＤ－１３９７２２２．１、ＡＤ－１３９７２２３．１、ＡＤ－１３９７２２４．１、ＡＤ－１３９７２２５．１、ＡＤ－１３９７２２６．１、ＡＤ－１３９７２２７．１、ＡＤ－１３９７２２８．１、ＡＤ－１３９７２２９．１、ＡＤ－１３９７２３０．１、ＡＤ－１３９７２３１．１、ＡＤ－１３９７２３２．１、ＡＤ－１３９７２３３．１、ＡＤ－１３９７２３４．１、ＡＤ－１３９７２３５．１、ＡＤ－１３９７２３６．１、ＡＤ－１３９７２３７．１、ＡＤ－１３９７２３８．１、ＡＤ－１３９７２３９．１、ＡＤ－１３９７２４０．１、ＡＤ－１３９７２４１．１、ＡＤ－１３９７２４２．１、ＡＤ－１３９７２４３．１、ＡＤ－１３９７２４４．１、ＡＤ－１３９７２４５．１、ＡＤ－１３９７２４６．１、ＡＤ－１３９７２４７．１、ＡＤ－１３９７２４８．１、ＡＤ－１３９７２４９．１、ＡＤ－５２３５６５．１、ＡＤ－１３９７０７２．３、ＡＤ－１３９７０７３．３、ＡＤ－１３９７０７６．３、ＡＤ－１３９７０７７．３、ＡＤ－１３９７０７８．３、ＡＤ－１３９７２５２．２、ＡＤ－１３９７２５７．２、ＡＤ－１３９７２５８．２、ＡＤ－１３９７２５９．２、ＡＤ－１３９７２６３．２、ＡＤ－１３９７２６４．２、ＡＤ－１３９７３０９．２、ＡＤ－６４９５８．１１４、ＡＤ－３９３７５８．４、ＡＤ－１３９７０８０．３、ＡＤ－１３９７２９３．２、ＡＤ－１３９７２９４．２、ＡＤ－１３９７０８１．３、ＡＤ－１３９７０８３．３、ＡＤ－１３９７２９８．２、ＡＤ－１３９７２９９．２、ＡＤ－１３９７０８４．２、
ＡＤ－１３９７０８５．２、ＡＤ－１３９７０８７．３、ＡＤ－１３９７３０６．２、ＡＤ－１３９７３０７．２、ＡＤ－１３９７３０８．２、ＡＤ－１３９７０８８．２、ＡＤ－１５６６２３８、ＡＤ－１５６６２３９、ＡＤ－１５６６２４０、ＡＤ－１５６６２４１、ＡＤ－１５６６２４２、ＡＤ－１５６６２４３、ＡＤ－１５６６２４４、ＡＤ－１５６６２４５、ＡＤ－１５６６２４６、ＡＤ－１０９１９６５、ＡＤ－１５６６２４８、ＡＤ－１５６６２４９、ＡＤ－１５６６２５０、ＡＤ－１０９１９６６、ＡＤ－１５６６２５１、ＡＤ－１５６６２５２、ＡＤ－１５６６２５３、ＡＤ－１５６６２５４、ＡＤ－１５６６２５５、ＡＤ－１５６６２５６、ＡＤ－１５６６２５７、ＡＤ－１５６６２５８、ＡＤ－１５６６２５９、ＡＤ－６９２９０６、ＡＤ－１５６６５７５、ＡＤ－１５６６５７６、ＡＤ－１５６６５７７、ＡＤ－１５６６５８０、ＡＤ－１５６６５８１、ＡＤ－１５６６５８２、ＡＤ－１５６６５８３、ＡＤ－１５６６５８４、ＡＤ－１５６６５８６、ＡＤ－１５６６５８７、ＡＤ－１５６６５８８、ＡＤ－１５６６５９０、ＡＤ－１５６６５９１、ＡＤ－１５６６６３４、ＡＤ－１５６６６３５、ＡＤ－１５６６６３８、ＡＤ－１５６６６３９、ＡＤ－１５６６６４１、ＡＤ－１５６６６４２、ＡＤ－１５６６６４３、ＡＤ－１５６６６７９、ＡＤ－１５６６８６１、ＡＤ－１５６７１５３、ＡＤ－１５６７１５４、ＡＤ－１５６７１５７、ＡＤ－１５６７１５９、ＡＤ－１５６７１６０、ＡＤ－１５６７１６１、ＡＤ－１５６７１６４、ＡＤ－１５６７１６７、ＡＤ－１５６７１９９、ＡＤ－１５６７２０２、ＡＤ－１５６７５５０、ＡＤ－１５６７５５４、ＡＤ－１５６７７８４、ＡＤ－１５６７８９６、ＡＤ－１５６７８９７、ＡＤ－１５６８１０５、ＡＤ－１５６８１０８、ＡＤ－１５６８１０９、ＡＤ－１５６８１３９、ＡＤ－１５６８１４０、ＡＤ－１５６８１４３、ＡＤ－１５６８１４４、ＡＤ－１５６８１４８、ＡＤ－１５６８１５０、ＡＤ－１５６８１５１、ＡＤ－１５６８１５２、ＡＤ－１５６８１５３、ＡＤ－１５６８１５４、ＡＤ－１５６８１５８、ＡＤ－１５６８１６１、ＡＤ－１５６８１７２、ＡＤ－１５６８１７４、ＡＤ－１５６８１７５、ＡＤ－６９２９０８、ＡＤ－１５６８１７６、ＡＤ－１５６９８３０、ＡＤ－１５６９８３２、ＡＤ－１５６９８３４、ＡＤ－１５６９８３５、ＡＤ－１５６９８６２、ＡＤ－１５６９８７２、ＡＤ－１５６９８９０およびＡＤ－１５６９８９２からなる群から選択される二重鎖のアンチセンス鎖ヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、請求項１～６のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 The antisense strand is AD-523799.1, AD-523802.1, AD-523795.1, AD-523810.1, AD-523809.1, AD-1019331.1, AD-523801.1, AD-523823 .1, AD-523798.1, AD-523816.1, AD-523824.1, AD-523800.1, AD-523796.1, AD-535094.1, AD-535094.1, AD-535095.1 , AD-538647.1, AD-535922.1, AD-536317.1, AD-536911.1, AD-538626.1, AD-535864.1, AD-523561.1, AD-523565.1, AD -523562.1, AD-526914.1, AD-526394.1, AD-395452.1, AD-525343.1, AD-524274.1, AD-526956.1, AD-526986.1, AD-526296 AD-526988.1, AD-526957.1, AD-526993.1, AD-1397070.1, AD-1397070.2, AD-1397071.1, AD-1397071.2, AD-1397072.1 , AD-1397072.2, AD-1397073.1, AD-1397073.2, AD-1397074.1, AD-1397074.2, AD-1397075.1, AD-1397075.2, AD-1397076.1, AD -1397076.2, AD-1397077.1, AD-1397077.2, AD-1397078.1, AD-1397078.2, AD-1397250.1, AD-1397251.1, AD-1397252.1, AD-1397253 AD-1397254.1, AD-1397255.1, AD-1397256.1, AD-1397257.1, AD-1397258.1, AD-1397259.1, AD-1397260.1, AD-1397261.1 , AD-1397262.1, AD-1397263.1, AD-1397264.1, AD-1397265.1, AD-1423242.1, AD-1423243.1, AD-1423244.1, AD-1423245.1, AD -1423246.1, AD-1423247.1, AD-1423248.1, AD-1423249.1, AD-1423250.1, AD-1423251.1, AD-1423252.1, AD-1423253.1, AD-1423254 AD-1423255.1, AD-1423256.1, AD-1423257.1, AD-1423258.1, AD-1423259.1, AD-1423260.1, AD-1423261.1, AD-1423262.1 , AD-1423263.1, AD-1423264.1, AD-1423265.1, AD-1423266.1, AD-1423267.1, AD-1423268.1, AD-1423269.1, AD-1423270.1, AD -1423271.1, AD-1423272.1, AD-1423273.1, AD-1423274.1, AD-1423275.1, AD-1423276.1, AD-1423277.1, AD-1423278.1, AD-1423279 AD-1423280.1, AD-1423281.1, AD-1423282.1, AD-1423283.1, AD-1423284.1, AD-1423285.1, AD-1423286.1, AD-1423287.1 , AD-1423288.1, AD-1423289.1, AD-1423290.1, AD-1423291.1, AD-1423292.1, AD-1423293.1, AD-1423294.1, AD-1423295.1, AD -1423296.1, AD-1423297.1, AD-1423298.1, AD-1423299.1, AD-1423300.1, AD-1397266.1, AD-1397266.2, AD-1397267.1, AD-1423301 AD-1397268.1, AD-1397268.2, AD-1397269.1, AD-1423302.1, AD-1397270.1, AD-1397270.2, AD-1397271.1, AD-1397271.2 , AD-1397272.1, AD-1423303.1, AD-1397273.1, AD-1423304.1, AD-1397274.1, AD-1423305.1, AD-1397275.1, AD-1423306.1, AD -1397276.1, AD-1397277.1, AD-1397277.2, AD-1397278.1, AD-1397279.1, AD-1397280.1, AD-1397281.1, AD-1397282.1, AD-1397283 AD-1397284.1, AD-1397285.1, AD-1397286.1, AD-1397287.1, AD-1397079.1, AD-1397079.2, AD-1397288.1, AD-1397289.1 , AD-1397290.1, AD-1397080.1, AD-1397080.2, AD-1397291.1, AD-1397292.1, AD-1397293.1, AD-1397294.1, AD-1397081.1, AD -1397081.2, AD-1397295.1, AD-1397082.1, AD-1397082.2, AD-1397083.1, AD-1397083.2, AD-1397296.1, AD-1397297.1, AD-1397298 .1, AD-1397299.1, AD-1397300.1, AD-1397301.1, AD-1397302.1, AD-1397084.1, AD-1397085.1, AD-1397086.1, AD-1397303.1 , AD-1397087.1, AD-1397087.2, AD-1397304.1, AD-1397305.1, AD-1397306.1, AD-1397307.1, AD-1397308.1, AD-1397309.1, AD -1397310.1, AD-1397311.1, AD-1397312.1, AD-1397313.1, AD-1397314.1, AD-1397315.1, AD-1397316.1, AD-1397317.1, AD-1397318 AD-1397322.1, AD-1397088.1, AD-1397089.1, AD-1397090.1, AD-1397091.1 , AD-1397092.1, AD-1397093.1, AD-1397094.1, AD-1397095.1, AD-1397096.1, AD-1397097.1, AD-1397098.1, AD-1397099.1, AD -1397101.1, AD-1397102.1, AD-1397103.1, AD-1397104.1, AD-1397105.1, AD-1397106.1, AD-1397107.1, AD-1397108.1, AD-1397109 AD-1397110.1, AD-1397111.1, AD-1397112.1, AD-1397113.1, AD-1397114.1, AD-1397115.1, AD-1397116.1, AD-1397117.1 , AD-1397118.1, AD-1397119.1, AD-1397120.1, AD-1397121.1, AD-1397122.1, AD-1397123.1, AD-1397124.1, AD-1397125.1, AD -1397126.1, AD-1397127.1, AD-1397128.1, AD-1397129.1, AD-1397130.1, AD-1397131.1, AD-1397132.1, AD-1397133.1, AD-1397134 AD-1397135.1, AD-1397136.1, AD-1397137.1, AD-1397138.1, AD-1397139.1, AD-1397140.1, AD-1397141.1, AD-1397142.1 , AD-1397143.1, AD-1397144.1, AD-1397145.1, AD-1397146.1, AD-1397147.1, AD-1397148.1, AD-1397149.1, AD-1397150.1, AD -1397151.1, AD-1397152.1, AD-1397153.1, AD-1397154.1, AD-1397155.1, AD-1397156.1, AD-1397157.1, AD-1397158.1, AD-1397159 AD-1397160.1, AD-1397161.1, AD-1397162.1, AD-1397163.1, AD-1397164.1, AD-1397165.1, AD-1397166.1, AD-1397167.1 , AD-1397168.1, AD-1397169.1, AD-1397170.1, AD-1397171.1, AD-1397172.1, AD-1397173.1, AD-1397174.1, AD-1397175.1, AD -1397176.1, AD-1397177.1, AD-1397178.1, AD-1397179.1, AD-1397180.1, AD-1397181.1, AD-1397182.1, AD-1397183.1, AD-1397184 AD-1397185.1, AD-1397186.1, AD-1397187.1, AD-1397188.1, AD-1397189.1, AD-1397190.1, AD-1397191.1, AD-1397192.1 , AD-1397193.1, AD-1397194.1, AD-1397195.1, AD-1397196.1, AD-1397197.1, AD-1397198.1, AD-1397199.1, AD-1397200.1, AD -1397201.1, AD-1397202.1, AD-1397203.1, AD-1397204.1, AD-1397205.1, AD-1397206.1, AD-1397207.1, AD-1397208.1, AD-1397209 AD-1397210.1, AD-1397211.1, AD-1397212.1, AD-1397213.1, AD-1397214.1, AD-1397215.1, AD-1397216.1, AD-1397217.1 , AD-1397218.1, AD-1397219.1, AD-1397220.1, AD-1397221.1, AD-1397222.1, AD-1397223.1, AD-1397224.1, AD-1397225.1, AD -1397226.1, AD-1397227.1, AD-1397228.1, AD-1397229.1, AD-1397230.1, AD-1397231.1, AD-1397232.1, AD-1397233.1, AD-1397234 AD-1397235.1, AD-1397236.1, AD-1397237.1, AD-1397238.1, AD-1397239.1, AD-1397240.1, AD-1397241.1, AD-1397242.1 , AD-1397243.1, AD-1397244.1, AD-1397245.1, AD-1397246.1, AD-1397247.1, AD-1397248.1, AD-1397249.1, AD-523565.1, AD -1397072.3, AD-1397073.3, AD-1397076.3, AD-1397077.3, AD-1397078.3, AD-1397252.2, AD-1397257.2, AD-1397258.2, AD-1397259 .2, AD-1397263.2, AD-1397264.2, AD-1397309.2, AD-64958.114, AD-393758.4, AD-1397080.3, AD-1397293.2, AD-1397294.2 , AD-1397081.3, AD-1397083.3, AD-1397298.2, AD-1397299.2, AD-1397084.2,
AD-1397085.2, AD-1397087.3, AD-1397306.2, AD-1397307.2, AD-1397308.2, AD-1397088.2, AD-1566238, AD-1566239, AD-1566240, AD- 1566241, AD-1566242, AD-1566243, AD-1566244, AD-1566245, AD-1566246, AD-1091965, AD-1566248, AD-1566249, AD-1566250, AD-1091966, AD-1566251, AD-1 566252, AD -1566253, AD -1566254, AD -1566255, AD -1566256, AD -1566257, AD -1566259, AD -1566259, AD -1566259, AD -692906, AD -156666575, AD -1566576, AD- 1566577, AD -1566580, AD- 1566581, AD-1566582, AD-1566583, AD-1566584, AD-1566586, AD-1566587, AD-1566588, AD-1566590, AD-1566591, AD-1566634, AD-1566635, AD-1566638, AD-1 566639, AD-1566641, AD-1566642, AD-1566643, AD-1566679, AD-1566861, AD-1567153, AD-1567154, AD-1567157, AD-1567159, AD-1567160, AD-1567161, AD-1567164, AD - 1567167, AD-1567199, AD-1567202, AD-1567550, AD-1567554, AD-1567784, AD-1567896, AD-1567897, AD-1568105, AD-1568108, AD-1568109, AD-1568139, AD-1 568140, AD-1568143, AD-1568144, AD-1568148, AD-1568150, AD-1568151, AD-1568152, AD-1568153, AD-1568154, AD-1568158, AD-1568161, AD-1568172, AD-1568174, AD - 1568175, AD-692908, AD-1568176, AD-1569830, AD-1569832, AD-1569834, AD-1569835, AD-1569862, AD-1569872, AD-1569890 and AD-1569892 7. The dsRNA agent of any one of claims 1-6, comprising at least 15 contiguous nucleotides that differ by no more than 3 nucleotides from any one of the antisense strand nucleotide sequences of the strands. センスおよびアンチセンス鎖のヌクレオチド配列が、表３～８および１６～２８のいずれか１つに記載のセンスおよびアンチセンス鎖ヌクレオチド配列のいずれか１つを含む、請求項１または２に記載のｄｓＲＮＡ剤。 3. The dsRNA of claim 1 or 2, wherein the nucleotide sequences of the sense and antisense strands comprise any one of the sense and antisense strand nucleotide sequences set forth in any one of Tables 3-8 and 16-28. agent. センス鎖のヌクレオチド配列が、配列番号１５３３において説明されるＭＡＰＴ遺伝子エクソン１０のセンス鎖配列に対応する少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖がそれに対して相補的な配列を含む、請求項１または２に記載のｄｓＲＮＡ剤。 The nucleotide sequence of the sense strand comprises at least 15 contiguous nucleotides corresponding to the sense strand sequence of MAPT gene exon 10 set forth in SEQ ID NO: 1533, and the antisense strand comprises a sequence complementary thereto. Item 3. The dsRNA agent of item 1 or 2. ＭＡＰＴの発現を阻害するための二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤であって、ｄｓＲＮＡ剤は、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、
センス鎖は、配列番号５のヌクレオチド配列と３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖は、配列番号６のヌクレオチド配列と３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、ｄｓＲＮＡ剤。 A double-stranded ribonucleic acid (dsRNA) agent for inhibiting expression of MAPT, the dsRNA agent comprising a sense strand and an antisense strand forming a double-stranded region,
The sense strand comprises at least 15 contiguous nucleotides that differ from the nucleotide sequence of SEQ ID NO:5 by no more than 3 nucleotides, and the antisense strand comprises at least 15 contiguous nucleotides that differ from the nucleotide sequence of SEQ ID NO:6 by no more than 3 nucleotides. consecutive nucleotides. ＭＡＰＴの発現を阻害するための二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤であって、ｄｓＲＮＡ剤は、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、
アンチセンス鎖は、タウをコードするｍＲＮＡに対して相補性の領域を含み、相補性の領域は、配列番号６のヌクレオチド配列と３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、ｄｓＲＮＡ剤。 A double-stranded ribonucleic acid (dsRNA) agent for inhibiting expression of MAPT, the dsRNA agent comprising a sense strand and an antisense strand forming a double-stranded region,
the antisense strand comprises a region of complementarity to the tau-encoding mRNA, the region of complementarity comprising at least 15 contiguous nucleotides differing by no more than 3 nucleotides from the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 6; dsRNA agent. ＭＡＰＴの発現を阻害するための二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤であって、ｄｓＲＮＡ剤は、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、
アンチセンス鎖は、タウをコードするｍＲＮＡに対して相補性の領域を含み、相補性の領域は、表１２～１３のいずれか１つに記載のアンチセンスヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、ｄｓＲＮＡ剤。 A double-stranded ribonucleic acid (dsRNA) agent for inhibiting expression of MAPT, the dsRNA agent comprising a sense strand and an antisense strand forming a double-stranded region,
The antisense strand comprises a region of complementarity to a tau-encoding mRNA, the region of complementarity being any one and no more than three of the antisense nucleotide sequences set forth in any one of Tables 12-13 a dsRNA agent comprising at least 15 contiguous nucleotides that differ by nucleotides. センス鎖が、配列番号５のヌクレオチド１０６５～１０８５、１１９５～１２１５、１０６６～１０８６、１０６８～１０８８、７０５～７２５、１０６７～１０８７、４５２０～４５４０、３３４１～３３６１、４５１５～４５３５、５２８４～５３０４、５２８５～５３０５、３４４～３６４、５２８３～５３０３、５３５４～５３７４、２４５９～２４７９、１０６１～１０８１、７０６～７２６、９７２～９９２、４５６４～４５８４、９９５～１０１５、４５４６～４５６６、９６８～９８８、１１２７～１１４７、４５３４～４５５４、１５８～１７８、４４９４～４５１４、１６９１～１７１１、３５４４～３５６４、１９８～２１８、９７９～９９９、４５４８～４５６８、４５５１～４５７１、５４３～５６３、７１５～７３５、５４２～５６２、３５２～３７２、３６２～３８２、４５５６～４５７６、４５４７～４５６７、４５４２～４５６２、４５５８～４５７８、４５４９～４５６９、５０７４～５０９４、４５５２～４５７２、５０７３～５０９３、５０７６～５０９６、４５５０～４５７０、および２７５３～２７７３のヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖が、配列番号６の対応するヌクレオチド配列からの少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、請求項１０～１２のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 the sense strand is nucleotides 1065-1085, 1195-1215, 1066-1086, 1068-1088, 705-725, 1067-1087, 4520-4540, 3341-3361, 4515-4535, 5284-5304, 5285 of SEQ ID NO:5 ~5305, 344-364, 5283-5303, 5354-5374, 2459-2479, 1061-1081, 706-726, 972-992, 4564-4584, 995-1015, 4546-4566, 968-988, 1127-1147 , 4534-4554, 158-178, 4494-4514, 1691-1711, 3544-3564, 198-218, 979-999, 4548-4568, 4551-4571, 543-563, 715-735, 542-562, 352 ~372, 362-382, 4556-4576, 4547-4567, 4542-4562, 4558-4578, 4549-4569, 5074-5094, 4552-4572, 5073-5093, 5076-5096, 4550-4570, and 2753~ at least 15 contiguous nucleotides differing by no more than 3 nucleotides from any one of the nucleotide sequences of SEQ ID NO: 6, and the antisense strand comprises at least 15 contiguous nucleotides from the corresponding nucleotide sequence of SEQ ID NO:6 , the dsRNA agent of any one of claims 10-12. アンチセンス鎖が、ＡＤ－３９３７５８．１、ＡＤ－３９３８８８．１、ＡＤ－３９３７５９．１、ＡＤ－３９３７６１．１、ＡＤ－３９３４９５．１、ＡＤ－３９３７６０．１、ＡＤ－３９６４２５．１、ＡＤ－３９５４４１．１、ＡＤ－３９６４２０．１、ＡＤ－３９７１０３．１、ＡＤ－３９７１０４．１、ＡＤ－３９３２３９．１、ＡＤ－３９７１０２．１、ＡＤ－３９７１６７．１、ＡＤ－３９４７９１．１、ＡＤ－３９３７５４．１、ＡＤ－３９３４９６．１、ＡＤ－３９３６６７．１、ＡＤ－３９６４６７．１、ＡＤ－３９３６９０．１、ＡＤ－３９６４４９．１、ＡＤ－３９３６６３．１、ＡＤ－３９３８２０．１、ＡＤ－３９６４３７．１、ＡＤ－３９３０８４．１、ＡＤ－３９６４０１．１、ＡＤ－３９４２９６．１、ＡＤ－３９５５７４．１、ＡＤ－３９３１２４．１、ＡＤ－３９３６７４．１、ＡＤ－３９６４５１．１、ＡＤ－３９６４５４．１、ＡＤ－３９３３７６．１、ＡＤ－３９３５０５．１、ＡＤ－３９３３７５．１、ＡＤ－３９３２４７．１、ＡＤ－３９３２５７．１、ＡＤ－３９６４５９．１、ＡＤ－３９６４５０．１、ＡＤ－３９６４４５．１、ＡＤ－３９６４６１．１、ＡＤ－３９６４５２．１、ＡＤ－３９６９１３．１、ＡＤ－３９６４５５．１、ＡＤ－３９６９１２．１、ＡＤ－３９６９１５．１、ＡＤ－３９６４５３．１およびＡＤ－３９４９９１．１からなる群から選択される二重鎖のアンチセンス鎖ヌクレオチド配列のいずれか１つと３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、請求項１０～１３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 The antisense strand is AD-393758.1, AD-393888.1, AD-393759.1, AD-393761.1, AD-393495.1, AD-393760.1, AD-396425.1, AD-395441 AD-396420.1, AD-397103.1, AD-397104.1, AD-393239.1, AD-397102.1, AD-397167.1, AD-394791.1, AD-393754.1 , AD-393496.1, AD-393667.1, AD-396467.1, AD-393690.1, AD-396449.1, AD-393663.1, AD-393820.1, AD-396437.1, AD -393084.1, AD-396401.1, AD-394296.1, AD-395574.1, AD-393124.1, AD-393674.1, AD-396451.1, AD-396454.1, AD-393376 .1, AD-393505.1, AD-393375.1, AD-393247.1, AD-393257.1, AD-396459.1, AD-396450.1, AD-396445.1, AD-396461.1 , AD-396452.1, AD-396913.1, AD-396455.1, AD-396912.1, AD-396915.1, AD-396453.1 and AD-394991.1. 14. The dsRNA agent of any one of claims 10-13, comprising at least 15 contiguous nucleotides that differ by no more than 3 nucleotides from any one of the heavy chain antisense strand nucleotide sequences. センス鎖、アンチセンス鎖、またはセンス鎖とアンチセンス鎖の両方が、１つまたは複数の親油性部分にコンジュゲートしている、請求項１～１４のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 15. The dsRNA agent of any one of claims 1-14, wherein the sense strand, the antisense strand, or both the sense and antisense strands are conjugated to one or more lipophilic moieties. 親油性部分が、ｄｓＲＮＡ剤の二本鎖領域中の１つまたは複数の内部位置にコンジュゲートしている、請求項１５に記載のｄｓＲＮＡ剤。 16. The dsRNA agent of claim 15, wherein the lipophilic moiety is conjugated to one or more internal positions in the double-stranded region of the dsRNA agent. 親油性部分が、リンカーまたは担体を介してコンジュゲートしている、請求項１５または１６に記載のｄｓＲＮＡ剤。 17. The dsRNA agent of claim 15 or 16, wherein the lipophilic moiety is conjugated via a linker or carrier. ｌｏｇＫｏｗによって測定された親油性部分の親油性が、０を超える、請求項１５～１７のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 18. The dsRNA agent of any one of claims 15-17, wherein the lipophilicity of the lipophilic moiety as measured by log Kow is greater than zero. 二本鎖ＲＮＡｉ剤の血漿タンパク質結合アッセイにおいて未結合画分によって測定される二本鎖ＲＮＡｉ剤の疎水性が、０．２を超える、請求項１～１８のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 19. The dsRNA agent of any one of claims 1-18, wherein the hydrophobicity of the double-stranded RNAi agent as measured by the unbound fraction in a plasma protein binding assay of the double-stranded RNAi agent is greater than 0.2. . 血漿タンパク質結合アッセイが、ヒト血清アルブミンタンパク質を使用する電気泳動移動度シフトアッセイである、請求項１９に記載のｄｓＲＮＡ剤。 20. The dsRNA agent of Claim 19, wherein the plasma protein binding assay is an electrophoretic mobility shift assay using human serum albumin protein. ｄｓＲＮＡ剤が、少なくとも１つの修飾されたヌクレオチドを含む、請求項１～２０のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 21. The dsRNA agent of any one of claims 1-20, wherein the dsRNA agent comprises at least one modified nucleotide. センス鎖ヌクレオチドの５個以下およびアンチセンス鎖のヌクレオチドの５個以下が、修飾されていないヌクレオチドである、請求項２１に記載のｄｓＲＮＡ剤。 22. The dsRNA agent of claim 21, wherein no more than 5 of the sense strand nucleotides and no more than 5 of the antisense strand nucleotides are unmodified nucleotides. センス鎖のヌクレオチドの全ておよびアンチセンス鎖のヌクレオチドの全てが、修飾されたヌクレオチドである、請求項２１に記載のｄｓＲＮＡ剤。 22. The dsRNA agent of claim 21, wherein all of the nucleotides of the sense strand and all of the nucleotides of the antisense strand are modified nucleotides. 修飾されたヌクレオチドの少なくとも１つが、デオキシヌクレオチド、３’末端デオキシチミジン（ｄＴ）ヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル修飾されたヌクレオチド、２’－フルオロ修飾されたヌクレオチド、２’－デオキシ修飾されたヌクレオチド、ロックドヌクレオチド、非ロックドヌクレオチド、立体配座的に制限されたヌクレオチド、拘束エチルヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、２’－アミノ変性ヌクレオチド、２’－Ｏ－アリル修飾されたヌクレオチド、２’－Ｃ－アルキル修飾されたヌクレオチド、２’－ヒドロキシル（ｈｙｄｒｏｘｌｙ）修飾されたヌクレオチド、２’－メトキシエチル修飾されたヌクレオチド、２’－Ｏ－アルキル修飾されたヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホルアミデート、非天然塩基を含むヌクレオチド、テトラヒドロピラン修飾されたヌクレオチド、１，５－アンヒドロヘキシトール修飾されたヌクレオチド、シクロヘキセニル修飾されたヌクレオチド、５’－ホスホロチオエート基を含むヌクレオチド、５’－メチルホスホネート基を含むヌクレオチド、５’リン酸または５’リン酸ミミックを含むヌクレオチド、ビニルホスホネートを含むヌクレオチド、アデノシン－グリコール核酸（ＧＮＡ）を含むヌクレオチド、チミジン－グリコール核酸（ＧＮＡ）Ｓ－異性体を含むヌクレオチド、２－ヒドロキシメチル－テトラヒドロフラン－５－ホスフェートを含むヌクレオチド、２’－デオキシチミジン－３’ホスフェートを含むヌクレオチド、２’－デオキシグアノシン－３’－ホスフェートを含むヌクレオチド、ならびにコレステリル誘導体およびドデカン酸ビスデシルアミド基に連結された末端ヌクレオチド；ならびにそれらの組合せからなる群から選択される、請求項２１～２３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 at least one of the modified nucleotides is a deoxynucleotide, a 3' terminal deoxythymidine (dT) nucleotide, a 2'-O-methyl modified nucleotide, a 2'-fluoro modified nucleotide, a 2'-deoxy modified nucleotide , locked nucleotides, non-locked nucleotides, conformationally restricted nucleotides, constrained ethyl nucleotides, abasic nucleotides, 2′-amino modified nucleotides, 2′-O-allyl modified nucleotides, 2′-C -alkyl modified nucleotides, 2'-hydroxyly modified nucleotides, 2'-methoxyethyl modified nucleotides, 2'-O-alkyl modified nucleotides, morpholino nucleotides, phosphoramidates, unnatural base-containing nucleotides, tetrahydropyran-modified nucleotides, 1,5-anhydrohexitol-modified nucleotides, cyclohexenyl-modified nucleotides, 5'-phosphorothioate-containing nucleotides, 5'-methylphosphonate-containing nucleotides nucleotides, nucleotides containing a 5′ phosphate or 5′ phosphate mimic, nucleotides containing a vinyl phosphonate, nucleotides containing adenosine-glycol nucleic acid (GNA), nucleotides containing a thymidine-glycol nucleic acid (GNA) S-isomer, 2- To nucleotides containing hydroxymethyl-tetrahydrofuran-5-phosphate, nucleotides containing 2′-deoxythymidine-3′phosphate, nucleotides containing 2′-deoxyguanosine-3′-phosphate, and cholesteryl derivatives and dodecanoic acid bisdecylamide groups ligated terminal nucleotides; and combinations thereof. 修飾されたヌクレオチドが、２’－デオキシ－２’－フルオロ修飾されたヌクレオチド、２’－デオキシ修飾されたヌクレオチド、３’末端デオキシチミジンヌクレオチド（ｄＴ）、ロックドヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、２’－アミノ変性ヌクレオチド、２’－アルキル修飾されたヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホルアミデート、および非天然塩基を含むヌクレオチドからなる群から選択される、請求項２４に記載のｄｓＲＮＡ剤。 Modified nucleotides include 2′-deoxy-2′-fluoro modified nucleotides, 2′-deoxy modified nucleotides, 3′ terminal deoxythymidine nucleotides (dT), locked nucleotides, abasic nucleotides, 2′- 25. The dsRNA agent of claim 24, selected from the group consisting of amino-modified nucleotides, 2'-alkyl modified nucleotides, morpholino nucleotides, phosphoramidates, and nucleotides containing non-natural bases. 修飾されたヌクレオチドが、３’末端デオキシチミジンヌクレオチド（ｄＴ）の短い配列を含む、請求項２４に記載のｄｓＲＮＡ剤。 25. The dsRNA agent of claim 24, wherein the modified nucleotides comprise a short sequence of 3' terminal deoxythymidine nucleotides (dT). ヌクレオチドへの修飾が、２’－Ｏ－メチル、ＧＮＡおよび２’フルオロ修飾である、請求項２４に記載のｄｓＲＮＡ剤。 25. The dsRNA agent of claim 24, wherein the modifications to nucleotides are 2'-O-methyl, GNA and 2'fluoro modifications. 少なくとも１つのホスホロチオエートインターヌクレオチド連結をさらに含む、請求項１～２７のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 28. The dsRNA agent of any one of claims 1-27, further comprising at least one phosphorothioate internucleotide linkage. ６～８個のホスホロチオエートインターヌクレオチド連結を含む、請求項２８に記載のｄｓＲＮＡ剤。 29. The dsRNA agent of claim 28, comprising 6-8 phosphorothioate internucleotide linkages. 各鎖が、３０個以下のヌクレオチドの長さである、請求項１～２９のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 30. The dsRNA agent of any one of claims 1-29, wherein each strand is 30 nucleotides or less in length. 少なくとも１つの鎖が、少なくとも１ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む、請求項１～３０のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 The dsRNA agent of any one of claims 1-30, wherein at least one strand comprises a 3' overhang of at least 1 nucleotide. 少なくとも１つの鎖が、少なくとも２ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む、請求項１～３１のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 32. The dsRNA agent of any one of claims 1-31, wherein at least one strand comprises a 3' overhang of at least 2 nucleotides. 二本鎖領域が、１５～３０ヌクレオチド対の長さである、請求項１～３２のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 The dsRNA agent of any one of claims 1-32, wherein the double-stranded region is 15-30 nucleotide pairs in length. 二本鎖領域が、１７～２３ヌクレオチド対の長さである、請求項３３に記載のｄｓＲＮＡ剤。 34. The dsRNA agent of claim 33, wherein the double-stranded region is 17-23 nucleotide pairs in length. 二本鎖領域が、１７～２５ヌクレオチド対の長さである、請求項３３に記載のｄｓＲＮＡ剤。 34. The dsRNA agent of claim 33, wherein the double-stranded region is 17-25 nucleotide pairs in length. 二本鎖領域が、２３～２７ヌクレオチド対の長さである、請求項３３に記載のｄｓＲＮＡ剤。 34. The dsRNA agent of claim 33, wherein the double-stranded region is 23-27 nucleotide pairs in length. 二本鎖領域が、１９～２１ヌクレオチド対の長さである、請求項３３に記載のｄｓＲＮＡ剤。 34. The dsRNA agent of claim 33, wherein the double-stranded region is 19-21 nucleotide pairs in length. 二本鎖領域が、２１～２３ヌクレオチド対の長さである、請求項３３に記載のｄｓＲＮＡ剤。 34. The dsRNA agent of claim 33, wherein the double-stranded region is 21-23 nucleotide pairs in length. 各鎖が、１９～３０ヌクレオチドを有する、請求項１～３８のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 The dsRNA agent of any one of claims 1-38, wherein each strand has 19-30 nucleotides. 各鎖が、１９～２３ヌクレオチドを有する、請求項１～３７のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 The dsRNA agent of any one of claims 1-37, wherein each strand has 19-23 nucleotides. 各鎖が、２１～２３ヌクレオチドを有する、請求項１～３８のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 The dsRNA agent of any one of claims 1-38, wherein each strand has 21-23 nucleotides. １つまたは複数の親油性部分が、少なくとも１つの鎖における１つまたは複数の内部位置にコンジュゲートしている、請求項１６～４１のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 42. The dsRNA agent of any one of claims 16-41, wherein one or more lipophilic moieties are conjugated to one or more internal positions in at least one strand. １つまたは複数の親油性部分が、リンカーまたは担体を介して少なくとも１つの鎖における１つまたは複数の内部位置にコンジュゲートされる、請求項４２に記載のｄｓＲＮＡ剤。 43. The dsRNA agent of claim 42, wherein the one or more lipophilic moieties are conjugated to one or more internal positions in at least one strand via a linker or carrier. 内部位置が、少なくとも１つの鎖の各端から末端の２つの位置を除く全ての位置を含む、請求項４３に記載のｄｓＲＮＡ剤。 44. The dsRNA agent of claim 43, wherein internal positions include all but two positions from each end to the end of at least one strand. 内部位置が、少なくとも１つの鎖の各端から末端の３つの位置を除く全ての位置を含む、請求項４３に記載のｄｓＲＮＡ剤。 44. The dsRNA agent of claim 43, wherein internal positions include all but three positions from each end to the end of at least one strand. 内部位置が、センス鎖の切断部位領域を除く、請求項４３～４５のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 46. The dsRNA agent of any one of claims 43-45, wherein the internal position excludes the cleavage site region of the sense strand. 内部位置が、センス鎖の５’端から数えて位置９～１２を除く全ての位置を含む、請求項４６に記載のｄｓＲＮＡ剤。 47. The dsRNA agent of claim 46, wherein internal positions include all positions counting from the 5' end of the sense strand except positions 9-12. 内部位置が、センス鎖の３’端から数えて位置１１～１３を除く全ての位置を含む、請求項４６に記載のｄｓＲＮＡ剤。 47. The dsRNA agent of claim 46, wherein internal positions include all positions counting from the 3' end of the sense strand except positions 11-13. 内部位置が、アンチセンス鎖の切断部位領域を除く、請求項４３～４５のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 46. The dsRNA agent of any one of claims 43-45, wherein the internal position excludes the cleavage site region of the antisense strand. 内部位置が、アンチセンス鎖の５’端から数えて位置１２～１４を除く全ての位置を含む、請求項４９に記載のｄｓＲＮＡ剤。 50. The dsRNA agent of claim 49, wherein internal positions include all positions counting from the 5' end of the antisense strand except positions 12-14. 内部位置が、３’端から数えて位置１１～１３および５’端から数えて位置１２～１４を除く全ての位置を含む、請求項４３～４５のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 46. The dsRNA agent of any one of claims 43-45, wherein internal positions include all positions except positions 11-13 counting from the 3' end and positions 12-14 counting from the 5' end. １つまたは複数の親油性部分が、各鎖の５’末端から数えて、センス鎖における４～８位および１３～１８位、ならびにアンチセンス鎖における６～１０位および１５～１８位からなる群から選択される内部位置の１つまたは複数にコンジュゲートしている、請求項１６～５１のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 A group in which one or more lipophilic moieties consist of positions 4-8 and 13-18 in the sense strand and positions 6-10 and 15-18 in the antisense strand, counting from the 5' end of each strand 52. The dsRNA agent of any one of claims 16-51, conjugated to one or more of the internal positions selected from: １つまたは複数の親油性部分が、各鎖の５’末端から数えて、センス鎖における５、６、７、１５、および１７位、ならびにアンチセンス鎖における１５および１７位からなる群から選択される内部位置の１つまたは複数にコンジュゲートしている、請求項５２に記載のｄｓＲＮＡ剤。 The one or more lipophilic moieties are selected from the group consisting of positions 5, 6, 7, 15, and 17 in the sense strand and positions 15 and 17 in the antisense strand, counting from the 5' end of each strand. 53. The dsRNA agent of claim 52, wherein the dsRNA agent is conjugated to one or more of the internal positions of 二本鎖領域中の内部位置が、センス鎖の切断部位領域を排除している、請求項１６に記載のｄｓＲＮＡ剤。 17. The dsRNA agent of claim 16, wherein the internal positions in the double-stranded region exclude the cleavage site region of the sense strand. センス鎖が、２１ヌクレオチド長であり、アンチセンス鎖が、２３ヌクレオチド長であり、親油性部分が、センス鎖の位置２１、位置２０、位置１５、位置１、位置７、位置６、もしくは位置２またはアンチセンス鎖の位置１６にコンジュゲートされる、請求項１５～５４のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 The sense strand is 21 nucleotides in length, the antisense strand is 23 nucleotides in length, and the lipophilic portion is at position 21, position 20, position 15, position 1, position 7, position 6, or position 2 of the sense strand. or the dsRNA agent of any one of claims 15-54, conjugated to position 16 of the antisense strand. 親油性部分が、センス鎖の２１位、２０位、１５位、１位、または７位にコンジュゲートしている、請求項５５に記載のｄｓＲＮＡ剤。 56. The dsRNA agent of claim 55, wherein the lipophilic moiety is conjugated to positions 21, 20, 15, 1, or 7 of the sense strand. 親油性部分が、センス鎖の２１位、２０位、または１５位にコンジュゲートしている、請求項５５に記載のｄｓＲＮＡ剤。 56. The dsRNA agent of claim 55, wherein the lipophilic moiety is conjugated to positions 21, 20, or 15 of the sense strand. 親油性部分が、センス鎖の２０位または１５位にコンジュゲートしている、請求項５５に記載のｄｓＲＮＡ剤。 56. The dsRNA agent of claim 55, wherein the lipophilic moiety is conjugated to position 20 or 15 of the sense strand. 親油性部分が、アンチセンス鎖の１６位にコンジュゲートしている、請求項５５に記載のｄｓＲＮＡ剤。 56. The dsRNA agent of claim 55, wherein the lipophilic moiety is conjugated to position 16 of the antisense strand. 親油性部分が、脂肪族化合物、脂環式化合物、または多脂環式化合物である、請求項１５～５９のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 60. The dsRNA agent of any one of claims 15-59, wherein the lipophilic moiety is an aliphatic, cycloaliphatic, or polycycloaliphatic compound. 親油性部分が、脂質、コレステロール、レチノイン酸、コール酸、アダマンタン酢酸、１－ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、１，３－ビス－Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシヘキサノール、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メンソール、１，３－プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ミリスチン酸、Ｏ３－（オレオイル）リトコール酸、Ｏ３－（オレオイル）コレン酸、ジメトキシトリチル、またはフェノキサジンからなる群から選択される、請求項６０に記載のｄｓＲＮＡ剤。 The lipophilic moiety contains lipids, cholesterol, retinoic acid, cholic acid, adamantaneacetic acid, 1-pyrenebutyric acid, dihydrotestosterone, 1,3-bis-O (hexadecyl)glycerol, geranyloxyhexanol, hexadecylglycerol, borneol, menthol, 1,3-propanediol, heptadecyl group, palmitic acid, myristic acid, O3-(oleoyl)lithocholic acid, O3-(oleoyl)cholenic acid, dimethoxytrityl, or phenoxazine. 60. The dsRNA agent according to 60. 親油性部分が、飽和または不飽和Ｃ４～Ｃ３０炭化水素鎖と、ヒドロキシル、アミン、カルボン酸、スルホネート、ホスフェート、チオール、アジド、およびアルキンからなる群から選択される適宜の官能基とを含有する、請求項６０に記載のｄｓＲＮＡ剤。 the lipophilic moiety contains a saturated or unsaturated C4-C30 hydrocarbon chain and a suitable functional group selected from the group consisting of hydroxyl, amine, carboxylic acid, sulfonate, phosphate, thiol, azide, and alkyne; 61. The dsRNA agent of claim 60. 親油性部分が、飽和または不飽和Ｃ６～Ｃ１８炭化水素鎖を含有する、請求項６２に記載のｄｓＲＮＡ剤。 63. The dsRNA agent of paragraph 62, wherein the lipophilic moiety contains a saturated or unsaturated C6-C18 hydrocarbon chain. 親油性部分が、飽和または不飽和Ｃ１６炭化水素鎖を含有する、請求項６２に記載のｄｓＲＮＡ剤。 63. The dsRNA agent of claim 62, wherein the lipophilic moiety contains a saturated or unsaturated C16 hydrocarbon chain. 飽和または不飽和Ｃ１６炭化水素鎖が、鎖の５’端から数えて位置６にコンジュゲートされる、請求項６４に記載のｄｓＲＮＡ剤。 65. The dsRNA agent of claim 64, wherein the saturated or unsaturated C16 hydrocarbon chain is conjugated to position 6 counting from the 5' end of the chain. 親油性部分が、内部位置または二本鎖領域における１つまたは複数のヌクレオチドに置き換わる担体を介してコンジュゲートされる、請求項１５～６５のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 66. The dsRNA agent of any one of claims 15-65, wherein the lipophilic moiety is conjugated via a carrier that replaces one or more nucleotides at internal positions or in the double-stranded region. 担体が、ピロリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、［１，３］ジオキソラニル、オキサゾリジニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、キノキサリニル、ピリダジノニル、テトラヒドロフラニル、およびデカリニルからなる群から選択される環状基であるか、あるいはセリノール骨格またはジエタノールアミン骨格に基づく非環状部分である、請求項６６に記載のｄｓＲＮＡ剤。 The carrier is pyrrolidinyl, pyrazolinyl, pyrazolidinyl, imidazolinyl, imidazolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, [1,3]dioxolanyl, oxazolidinyl, isoxazolidinyl, morpholinyl, thiazolidinyl, isothiazolidinyl, quinoxalinyl, pyridazinonyl, tetrahydrofuranyl, and decalinyl or an acyclic moiety based on a serinol backbone or a diethanolamine backbone. 親油性部分が、エーテル、チオエーテル、尿素、カーボネート、アミン、アミド、マレイミド－チオエーテル、ジスルフィド、ホスホジエステル、スルホアミド連結、クリック反応の生成物、またはカルバメートを含有するリンカーを介して二本鎖ｉＲＮＡ剤にコンジュゲートされる、請求項１５～６５のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 Lipophilic moieties are attached to double-stranded iRNA agents via linkers containing ethers, thioethers, ureas, carbonates, amines, amides, maleimide-thioethers, disulfides, phosphodiesters, sulfonamide linkages, products of click reactions, or carbamates. 66. The dsRNA agent of any one of claims 15-65, which is conjugated. 親油性部分が、核酸塩基、糖部分、またはヌクレオシド間連結にコンジュゲートされる、請求項１５～６８のいずれか一項に記載の二本鎖ｉＲＮＡ剤。 The double-stranded iRNA agent of any one of claims 15-68, wherein the lipophilic moiety is conjugated to a nucleobase, sugar moiety, or internucleoside linkage. 親油性部分または標的化リガンドが、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ジスルフィド、アミド、ガラクトサミン、グルコサミン、グルコース、ガラクトース、マンノースの官能化された単糖またはオリゴ糖、およびそれらの組合せからなる群から選択される生物切断性リンカーを介してコンジュゲートされる、請求項１５～６９のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 Biocleavage wherein the lipophilic moiety or targeting ligand is selected from the group consisting of functionalized mono- or oligosaccharides of DNA, RNA, disulfides, amides, galactosamines, glucosamines, glucose, galactose, mannose, and combinations thereof. 70. The dsRNA agent of any one of claims 15-69, conjugated via a sexual linker. センス鎖の３’端が、アミンを有する環状基であるエンドキャップを介して保護され、前記環状基が、ピロリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、［１，３］ジオキソラニル、オキサゾリジニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、キノキサリニル、ピリダジノニル、テトラヒドロフラニル、およびデカリニルからなる群から選択される、請求項１５～７０のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 The 3′ end of the sense strand is protected via an endcap which is a cyclic group with an amine, said cyclic group being pyrrolidinyl, pyrazolinyl, pyrazolidinyl, imidazolinyl, imidazolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, [1,3]dioxolanyl, oxazolidinyl. , isoxazolidinyl, morpholinyl, thiazolidinyl, isothiazolidinyl, quinoxalinyl, pyridazinonyl, tetrahydrofuranyl, and decalinyl. 神経細胞を標的化する標的化リガンドをさらに含む、請求項１５～６９のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 The dsRNA agent of any one of claims 15-69, further comprising a targeting ligand that targets neural cells. 肝臓細胞を標的化する標的化リガンドをさらに含む、請求項１５～６９のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 The dsRNA agent of any one of claims 15-69, further comprising a targeting ligand that targets liver cells. 標的化リガンドが、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートである、請求項７３に記載のｄｓＲＮＡ剤。 74. The dsRNA agent of Claim 73, wherein the targeting ligand is a GalNAc conjugate. Ｓｐ立体配置で連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の３’末端における第１のインターヌクレオチド連結に存在する末端のキラル修飾、Ｒｐ立体配置で連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の５’末端における第１のインターヌクレオチド連結に存在する末端のキラル修飾、およびＲｐ立体配置またはＳｐ立体配置のいずれかで連結リン原子を有する、センス鎖の５’末端における第１のインターヌクレオチド連結に存在する末端のキラル修飾をさらに含む、請求項１～７４のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 a chiral modification of the terminal present at the first internucleotide linkage at the 3' end of the antisense strand with the linking phosphorus atom in the Sp configuration, at the 5' end of the antisense strand with the linking phosphorus atom in the Rp configuration chiral modification of the terminus present in the first internucleotide linkage and the terminus present in the first internucleotide linkage at the 5′ end of the sense strand with the linking phosphorus atom in either the Rp or Sp configuration. 75. The dsRNA agent of any one of claims 1-74, further comprising a chiral modification. Ｓｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の３’端における第１および第２のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾
Ｒｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の５’端における第１のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾、および
ＲｐまたはＳｐ立体配置のどちらかにおいて連結リン原子を有する、センス鎖の５’端における第１のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾
をさらに含む、請求項１～７４のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 a terminal chiral modification that occurs at the first and second internucleotide linkages at the 3' end of the antisense strand, with the linking phosphorus atom in the Sp configuration, at the 5' end of the antisense strand, with the linking phosphorus atom in the Rp configuration; further comprising a terminal chiral modification occurring at the first internucleotide linkage and a terminal chiral modification occurring at the first internucleotide linkage at the 5' end of the sense strand with the linking phosphorus atom in either the Rp or Sp configuration; 75. The dsRNA agent of any one of claims 1-74. Ｓｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の３’端における第１、第２、および第３のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾
Ｒｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の５’端における第１のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾、および
ＲｐまたはＳｐ立体配置のどちらかにおいて連結リン原子を有する、センス鎖の５’端における第１のヌクレオチド間連結において生じる、末端キラル修飾
をさらに含む、請求項１～７４のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 Terminal chiral modifications occurring at the first, second, and third internucleotide linkages at the 3′ end of the antisense strand, with the linking phosphorus atom in the Sp configuration, with the linking phosphorus atom in the Rp configuration. A terminal chiral modification occurring at the first internucleotide linkage at the 5' end and a terminal chiral occurring at the first internucleotide linkage at the 5' end of the sense strand with the linking phosphorus atom in either the Rp or Sp configuration. 75. The dsRNA agent of any one of claims 1-74, further comprising a modification. Ｓｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の３’端における第１および第２のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾
Ｒｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の３’端における第３のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾
Ｒｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の５’端における第１のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾、および
ＲｐまたはＳｐ立体配置のどちらかにおいて連結リン原子を有する、センス鎖の５’端における第１のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾
をさらに含む、請求項１～７４のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 a terminal chiral modification that occurs at the first and second internucleotide linkages at the 3' end of the antisense strand with the linking phosphorus atom in the Sp configuration, at the 3' end of the antisense strand with the linking phosphorus atom in the Rp configuration Terminal chiral modification occurring at the third internucleotide linkage Rp configuration Terminal chiral modification occurring at the first internucleotide linkage at the 5' end of the antisense strand with the linking phosphorus atom in the Rp configuration and either the Rp or Sp configuration 75. The dsRNA agent of any one of claims 1-74, further comprising a terminal chiral modification occurring at the first internucleotide linkage at the 5' end of the sense strand having the linking phosphorus atom at . Ｓｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の３’端における第１および第２のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾
Ｒｐ立体配置において連結リン原子を有する、アンチセンス鎖の５’端における第１および第２のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾、および
ＲｐまたはＳｐ立体配置のどちらかにおいて連結リン原子を有する、センス鎖の５’端における第１のヌクレオチド間連結において生じる末端キラル修飾
をさらに含む、請求項１～７４のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 a terminal chiral modification that occurs at the first and second internucleotide linkages at the 3' end of the antisense strand, with the linking phosphorus atom in the Sp configuration; at the 5' end of the antisense strand, with the linking phosphorus atom in the Rp configuration; A terminal chiral modification that occurs at the first and second internucleotide linkages, and a terminal chiral modification that occurs at the first internucleotide linkage at the 5' end of the sense strand with the linking phosphorus atom in either the Rp or Sp configuration. 75. The dsRNA agent of any one of claims 1-74, further comprising. アンチセンス鎖の５’端におけるホスフェートまたはホスフェート模倣物をさらに含む、請求項１～７９のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 80. The dsRNA agent of any one of claims 1-79, further comprising a phosphate or phosphate mimetic at the 5' end of the antisense strand. ホスフェート模倣物が、５’－ビニルホスホネート（ＶＰ）である、請求項８０に記載のｄｓＲＮＡ剤。 81. The dsRNA agent of claim 80, wherein the phosphate mimetic is 5'-vinylphosphonate (VP). 二重鎖のアンチセンス鎖の５’端の１つの位置における塩基対が、ＡＵ塩基対である、請求項１～７９のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 80. The dsRNA agent of any one of claims 1-79, wherein the base pair at one position of the 5' end of the antisense strand of the duplex is an AU base pair. センス鎖が、合計２１ヌクレオチドを有し、アンチセンス鎖が、合計２３ヌクレオチドを有する、請求項１～７９のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤。 80. The dsRNA agent of any one of claims 1-79, wherein the sense strand has a total of 21 nucleotides and the antisense strand has a total of 23 nucleotides. 請求項１～８３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤を含有する細胞。 A cell containing the dsRNA agent of any one of claims 1-83. 請求項１～８３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤を含む、ＭＡＰＴをコードする遺伝子の発現を阻害するための医薬組成物。 A pharmaceutical composition for inhibiting expression of a gene encoding MAPT, comprising the dsRNA agent of any one of claims 1-83. 請求項１～８３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤と脂質製剤とを含む医薬組成物。 A pharmaceutical composition comprising the dsRNA agent of any one of claims 1-83 and a lipid formulation. 請求項１～８３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤を含む、エクソン１０含有ＭＡＰＴ転写物を選択的に阻害するための医薬組成物。 84. A pharmaceutical composition for selectively inhibiting exon 10 containing MAPT transcripts comprising the dsRNA agent of any one of claims 1-83. ｄｓＲＮＡ剤が、緩衝化されていない溶液中である、請求項８５～８７のいずれか一項に記載の医薬組成物。 88. The pharmaceutical composition of any one of claims 85-87, wherein the dsRNA agent is in an unbuffered solution. 緩衝化されていない溶液が、生理食塩水または水である、請求項８８に記載の医薬組成物。 89. The pharmaceutical composition of Claim 88, wherein the unbuffered solution is saline or water. 前記ｄｓＲＮＡ剤が、緩衝溶液中である、請求項８５～８７のいずれか一項に記載の医薬組成物。 88. The pharmaceutical composition of any one of claims 85-87, wherein the dsRNA agent is in a buffered solution. 緩衝溶液が、酢酸塩、クエン酸塩、プロラミン、炭酸塩、もしくはリン酸塩またはそれらのあらゆる組合せを含む、請求項９０に記載の医薬組成物。 91. The pharmaceutical composition of claim 90, wherein the buffer solution comprises acetate, citrate, prolamin, carbonate, or phosphate or any combination thereof. 緩衝溶液が、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）である、請求項９０に記載の医薬組成物。 91. The pharmaceutical composition of claim 90, wherein the buffer solution is phosphate buffered saline (PBS). 細胞におけるＭＡＰＴ遺伝子の発現を阻害する方法であって、細胞を、請求項１～８３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤または請求項８５～９２のいずれか一項に記載の医薬組成物と接触させること、それによって細胞におけるＭＡＰＴ遺伝子の発現を阻害することを含む、方法。 A method of inhibiting MAPT gene expression in a cell, wherein the cell is combined with the dsRNA agent of any one of claims 1-83 or the pharmaceutical composition of any one of claims 85-92. A method comprising contacting, thereby inhibiting expression of the MAPT gene in the cell. 細胞におけるエクソン１０含有ＭＡＰＴ転写物を選択的に阻害する方法であって、細胞を、請求項１～８３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤または請求項８５～９２のいずれか一項に記載の医薬組成物と接触させること、それによって細胞におけるエクソン１０含有ＭＡＰＴ転写物を選択的に分解することを含む、方法。 A method of selectively inhibiting exon 10-containing MAPT transcripts in a cell, wherein the cell is a dsRNA agent according to any one of claims 1-83 or a dsRNA agent according to any one of claims 85-92. thereby selectively degrading exon 10-containing MAPT transcripts in cells. 細胞が、対象内にある、請求項９４に記載の方法。 95. The method of claim 94, wherein the cell is within a subject. 対象がヒトである、請求項９５に記載の方法。 96. The method of claim 95, wherein the subject is human. 対象が、ＭＡＰＴ関連障害を有する、請求項９６に記載の方法。 97. The method of claim 96, wherein the subject has a MAPT-related disorder. ＭＡＰＴ関連障害が神経変性障害である、請求項９７に記載の方法。 98. The method of claim 97, wherein the MAPT-related disorder is a neurodegenerative disorder. 神経変性障害が、ＭＡＰＴ遺伝子にコードされるタンパク質タウの異常に関連する、請求項９８に記載の方法。 99. The method of claim 98, wherein the neurodegenerative disorder is associated with abnormalities in protein tau encoded by the MAPT gene. ＭＡＰＴ遺伝子にコードされるタンパク質タウの異常が、対象の脳内でのタウの凝集を引き起こす、請求項９９に記載の方法。 100. The method of claim 99, wherein the MAPT gene-encoded protein tau abnormality causes tau aggregation in the brain of the subject. 神経変性障害が家族性障害である、請求項９９に記載の方法。 100. The method of claim 99, wherein the neurodegenerative disorder is a familial disorder. 神経変性障害が孤発性障害である、請求項９９に記載の方法。 100. The method of claim 99, wherein the neurodegenerative disorder is a sporadic disorder. 障害が、タウオパチー、アルツハイマー病、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、行動障害型前頭側頭型認知症（ｂｖＦＴＤ）、非流暢性亜型原発性進行性失語（ｎｆｖＰＰＡ）、意味型原発性進行性失語（ＰＰＡ－Ｓ）、ロゴペニック型原発性進行性失語（ＰＰＡ－Ｌ）、１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、ピック病（ＰｉＤ）、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、初老期認知症を伴う多系統タウオパチー（ＭＳＴＤ）、球状グリア封入体を伴う白質タウオパチー（ＧＧＩを伴うＦＴＬＤ）、ＭＡＰＴ突然変異を伴うＦＴＬＤ、神経原線維変化（ＮＦＴ）認知症、運動ニューロン疾患を伴うＦＴＤ、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、皮質基底核症候群（ＣＢＳ）、皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、パーキンソン病、脳炎後パーキンソニズム、ニーマン・ピック病、ハンチントン病、筋強直性ジストロフィー１型、およびダウン症候群（ＤＳ）からなる群から選択される、請求項９７に記載の方法。 Disorders include tauopathy, Alzheimer's disease, frontotemporal dementia (FTD), behavioral frontotemporal dementia (bvFTD), non-fluent subtype primary progressive aphasia (nfvPPA), semantic primary progression sexual aphasia (PPA-S), logopenic primary progressive aphasia (PPA-L), chromosome 17-linked frontotemporal dementia with parkinsonism (FTDP-17), Pick's disease (PiD), Aggranular granulopathy (AGD), multisystem tauopathy with presenile dementia (MSTD), white matter tauopathy with globular glial inclusions (FTLD with GGI), FTLD with MAPT mutations, neurofibrillary tangle (NFT) cognition disease, FTD with motor neuron disease, amyotrophic lateral sclerosis (ALS), corticobasal ganglia syndrome (CBS), corticobasal degeneration (CBD), progressive supranuclear palsy (PSP), Parkinson's disease, 98. The method of claim 97, wherein the method is selected from the group consisting of postencephalitic parkinsonism, Niemann-Pick disease, Huntington's disease, myotonic dystrophy type 1, and Down's syndrome (DS). 細胞をｄｓＲＮＡ剤と接触させることが、ＭＡＰＴの発現を少なくとも２５％阻害する、請求項９３～１０３のいずれか一項に記載の方法。 104. The method of any one of claims 93-103, wherein contacting the cell with the dsRNA agent inhibits expression of MAPT by at least 25%. ＭＡＰＴの発現を阻害することが、対象の血清中のタウタンパク質レベルを少なくとも２５％減少させる、請求項９３～１０３のいずれか一項に記載の方法。 104. The method of any one of claims 93-103, wherein inhibiting MAPT expression reduces tau protein levels in the serum of the subject by at least 25%. ＭＡＰＴ遺伝子発現の低減が有益であろう障害を有する対象を処置する方法であって、治療有効量の請求項１～８３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤または請求項８５～９２のいずれか一項に記載の医薬組成物を対象に投与すること、それによってＭＡＰＴ発現の低減が有益であろう障害を有する対象を処置することを含む、方法。 A method of treating a subject having a disorder for which reduced MAPT gene expression would be beneficial, comprising a therapeutically effective amount of the dsRNA agent of any one of claims 1-83 or any of claims 85-92 A method comprising administering the pharmaceutical composition of claim 1 to a subject, thereby treating the subject with a disorder for which reduced MAPT expression would be beneficial. ＭＡＰＴ発現の低減が有益であろう障害を有する対象における少なくとも１つの症状を防止する方法であって、予防有効量の請求項１～８３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤または請求項８５～９２のいずれか一項に記載の医薬組成物を対象に投与すること、それによってＭＡＰＴ発現の低減が有益であろう障害を有する対象における少なくとも１つの症状を防止することを含む、方法。 A method of preventing at least one symptom in a subject having a disorder for which reduced MAPT expression would be beneficial, comprising a prophylactically effective amount of the dsRNA agent of any one of claims 1-83 or claims 85-85. 92. A method comprising administering to a subject the pharmaceutical composition of any one of 92, thereby preventing at least one symptom in a subject having a disorder for which reduced MAPT expression would be beneficial. 障害が、ＭＡＰＴ遺伝子にコードされるタンパク質タウの異常に関連する、請求項１０６または１０７に記載の方法。 108. The method of claim 106 or 107, wherein the disorder is associated with a defect in protein tau encoded by the MAPT gene. ＭＡＰＴ遺伝子にコードされるタンパク質タウの異常が、対象の脳内でのタウの凝集を引き起こす、請求項１０８に記載の方法。 109. The method of claim 108, wherein the MAPT gene-encoded protein tau abnormality causes tau aggregation in the brain of the subject. 障害が、タウオパチー、アルツハイマー病、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、行動障害型前頭側頭型認知症（ｂｖＦＴＤ）、非流暢性亜型原発性進行性失語（ｎｆｖＰＰＡ）、意味型原発性進行性失語（ＰＰＡ－Ｓ）、ロゴペニック型原発性進行性失語（ＰＰＡ－Ｌ）、１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、ピック病（ＰｉＤ）、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、初老期認知症を伴う多系統タウオパチー（ＭＳＴＤ）、球状グリア封入体を伴う白質タウオパチー（ＧＧＩを伴うＦＴＬＤ）、ＭＡＰＴ突然変異を伴うＦＴＬＤ、神経原線維変化（ＮＦＴ）認知症、運動ニューロン疾患を伴うＦＴＤ、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、皮質基底核症候群（ＣＢＳ）、皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、パーキンソン病、脳炎後パーキンソニズム、ニーマン・ピック病、ハンチントン病、筋強直性ジストロフィー１型、およびダウン症候群（ＤＳ）からなる群から選択される、請求項１０８に記載の方法。 Disorders include tauopathy, Alzheimer's disease, frontotemporal dementia (FTD), behavioral frontotemporal dementia (bvFTD), non-fluent subtype primary progressive aphasia (nfvPPA), semantic primary progression sexual aphasia (PPA-S), logopenic primary progressive aphasia (PPA-L), chromosome 17-linked frontotemporal dementia with parkinsonism (FTDP-17), Pick's disease (PiD), Aggranular granulopathy (AGD), multisystem tauopathy with presenile dementia (MSTD), white matter tauopathy with globular glial inclusions (FTLD with GGI), FTLD with MAPT mutations, neurofibrillary tangle (NFT) cognition disease, FTD with motor neuron disease, amyotrophic lateral sclerosis (ALS), corticobasal ganglia syndrome (CBS), corticobasal degeneration (CBD), progressive supranuclear palsy (PSP), Parkinson's disease, 109. The method of claim 108, selected from the group consisting of postencephalitic parkinsonism, Niemann-Pick disease, Huntington's disease, myotonic dystrophy type 1, and Down's syndrome (DS). 対象が、ヒトである、請求項１０７～１１０のいずれか一項に記載の方法。 111. The method of any one of claims 107-110, wherein the subject is a human. ｄｓＲＮＡ剤、または医薬組成物の投与が、対象の脳内でのタウの凝集の減少をもたらす、請求項１１１に記載の方法。 112. The method of claim 111, wherein administration of the dsRNA agent, or pharmaceutical composition, results in decreased tau aggregation in the subject's brain. ｄｓＲＮＡ剤が、約０．０１ｍｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇの用量において対象に投与される、請求項１０６～１１２のいずれか一項に記載の方法。 113. The method of any one of claims 106-112, wherein the dsRNA agent is administered to the subject at a dose of about 0.01 mg/kg to about 50 mg/kg. ｄｓＲＮＡ剤が、対象に髄腔内投与される、請求項１０６～１１３のいずれか一項に記載の方法。 114. The method of any one of claims 106-113, wherein the dsRNA agent is administered intrathecally to the subject. ｄｓＲＮＡ剤が、対象に大槽内投与される、請求項１０６～１１３のいずれか一項に記載の方法。 The method of any one of claims 106-113, wherein the dsRNA agent is administered to the subject intracisternally. 対象からの試料中のＭＡＰＴのレベルを決定することをさらに含む、請求項１０６～１１５のいずれか一項に記載の方法。 116. The method of any one of claims 106-115, further comprising determining the level of MAPT in a sample from the subject. 対象試料中のＭＡＰＴのレベルが、髄液試料中のタウタンパク質レベルである、請求項１１６に記載の方法。 117. The method of claim 116, wherein the level of MAPT in the subject sample is the tau protein level in the spinal fluid sample. 追加の治療剤を対象に投与することをさらに含む、請求項９８～１１７のいずれか一項に記載の方法。 118. The method of any one of claims 98-117, further comprising administering an additional therapeutic agent to the subject. 請求項１～８３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤または請求項８５～９２のいずれか一項に記載の医薬組成物を含むキット。 A kit comprising the dsRNA agent of any one of claims 1-83 or the pharmaceutical composition of any one of claims 85-92. 請求項１～８３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤または請求項８５～９２のいずれか一項に記載の医薬組成物を含むバイアル。 A vial comprising the dsRNA agent of any one of claims 1-83 or the pharmaceutical composition of any one of claims 85-92. 請求項１～８３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤または請求項８５～９２のいずれか一項に記載の医薬組成物を含むシリンジ。 A syringe comprising the dsRNA agent of any one of claims 1-83 or the pharmaceutical composition of any one of claims 85-92. 請求項１～８３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤、または請求項８５～９２のいずれか一項に記載の医薬組成物を含む、髄腔内ポンプ。 An intrathecal pump comprising the dsRNA agent of any one of claims 1-83 or the pharmaceutical composition of any one of claims 85-92.
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