JP2023516301A

JP2023516301A - ヒトアルファ－ガラクトシダーゼ変異体

Info

Publication number: JP2023516301A
Application number: JP2022551638A
Authority: JP
Inventors: ウィリアムケイシーハロウズ，; ニッキデラス，; ユーズー，; ジュディヴィクトリアアントニオヴィドゥヤ，; チンピンチェン，; アントワネットセロ，; レイチェルキャスリーンボサム，; デイビッドウィリアムホーマン，; イスマイリ，ムーレイヒシャムアラウイ; ジョナサンブルーム，; アダムピー．シルバーマン，; クリステンジーンヴァリュウ，; チャルシュクラレディ，; ケリンマクラスキー，
Original assignee: コデクシス，インコーポレイテッド
Priority date: 2020-02-28
Filing date: 2021-02-26
Publication date: 2023-04-19
Also published as: TW202146648A; BR112022016990A2; KR20220146601A; PE20230487A1; EP4110926A2; CA3173294A1; CO2022012809A2; IL295818A; WO2021173928A3; AR121457A1; CN116096898A; AU2021228689A1; US20210269787A1; ECSP22075305A; CL2022002330A1; MX2022010663A; WO2021173928A2

Abstract

本発明は、操作されたヒトアルファ－ガラクトシダーゼポリペプチドおよびその組成物を提供する。操作されたヒトアルファ－ガラクトシダーゼポリペプチドは、改善された熱安定性、血清安定性、改善された細胞取り込み、酸性（ｐＨ＜４）と塩基性（ｐＨ＞７）の両方の条件での安定性、免疫原性の低下、ならびに細胞からの改善されたグロボトリアオシルセラミドの除去を提供するように最適化されている。本発明はまた、治療目的のための操作されたヒトアルファ－ガラクトシダーゼポリペプチドを含む組成物の使用に関する。

Description

本出願は、参照によりその全体があらゆる目的のために本明細書に組み込まれる、２０２０年２月２８日に出願された米国特許仮出願第６２／９８２，９４９号の優先権を主張する。
発明の分野

本発明は、操作されたヒトアルファ－ガラクトシダーゼポリペプチドおよびその組成物を提供する。操作されたヒトアルファ－ガラクトシダーゼポリペプチドは、改善された熱安定性、血清安定性、免疫原性の低下、改善された細胞取り込み、および酸性（ｐＨ＜４）と塩基性（ｐＨ＞７）の両方の条件での安定性、ならびに細胞からの改善されたグロボトリアオシルセラミドのクリアランスを提供するように最適化されている。本発明はまた、治療目的のための操作されたヒトアルファ－ガラクトシダーゼポリペプチドを含む組成物の使用に関する。
配列表、表またはコンピュータプログラムの参照

配列表の公式の写しは、ファイル名が「ＣＸ７－２０３ＷＯ２＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」、作成日が２０２１年２月２２日、サイズが４．４３メガバイトのＡＳＣＩＩ形式のテキストファイルとしてＥＦＳ－Ｗｅｂを介して本明細書と同時に提出される。ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して提出された配列表は、本明細書の一部であり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

発明の背景
ヒトアルファガラクトシダーゼ（「ＧＬＡ」；ＥＣ３．２．１．２２）は、糖脂質および糖タンパク質からの末端アルファガラクトシル部分の加水分解に関与するリソソーム糖タンパク質である。これは、様々なヒト組織に存在する多くの基質に作用する。ファブリー病（びまん性体部被角血管腫、アンダーソン・ファブリー病、遺伝性異所性脂質症、アルファ－ガラクトシダーゼＡ欠損症、ＧＬＡ欠損症、およびセラミドトリヘキソシダーゼ欠損症とも呼ばれる）は、アルファ－ガラクトシダーゼＡの活性の欠損または欠如に起因するスフィンゴ糖脂質異化作用のＸ連鎖先天性エラーである。ファブリー病に罹患した患者は、血管、組織および器官の血漿および細胞リソソーム中に、グロボトリアオシルセラミド（本明細書では「Ｇｂ_３」および「Ｇｂ３」と呼ばれる）および関連するスフィンゴ糖脂質を蓄積する（例えば、Ｎａｎｃｅら、Ａｒｃｈ．Ｎｅｕｒｏｌ．，６３：４５３－４５７［２００６］を参照されたい）。患者が加齢するにつれて、これらの脂質の蓄積により血管が徐々に狭くなり、特に皮膚、腎臓、心臓、脳、および神経系の組織への血流および栄養の減少をもたらす。このように、ファブリー病は、腎不全、心疾患、脳血管疾患、小線維末梢神経障害、および皮膚病変、ならびに他の障害として現れる全身性障害である（例えば、Ｓｃｈｉｆｆｍａｎｎ，Ｐｈａｒｍ．Ｔｈｅｒ．，１２２：６５－７７［２００９］を参照されたい）。罹患患者は、手足の痛み、皮膚上の小さな暗い赤色の斑点の塊、発汗能力の低下、角膜混濁、胃腸の問題、耳鳴り、および難聴などの症状を示す。生命を脅かす可能性のある合併症には、進行性腎障害、心臓発作、および脳卒中が含まれる。この疾患は、男性の４０，０００～６０，０００人に１人が罹患すると推定されるが、女性にも発生する。実際、ファブリー病を有するヘテロ接合女性は、神経系異常、慢性疼痛、疲労、高血圧、心疾患、腎不全、および脳卒中を含む生命を脅かす深刻な状態を経験し、それゆえに医学的処置を必要とする（例えば、Ｗａｎｔら、Ｇｅｎｅｔ．Ｍｅｄ．，１３：４５７－４８４［２０１１］を参照されたい）。ファブリー病の徴候は乳児期からいつでも始まる可能性があり、徴候は通常４～８歳の間に現れ始めるが、一部の患者はより軽度の遅発性疾患を示す。処置は一般に支持的であり、ファブリー病の治療法はないため、安全で効果的な処置が依然として必要である。

Ｎａｎｃｅら、Ａｒｃｈ．Ｎｅｕｒｏｌ．，６３：４５３－４５７［２００６］Ｓｃｈｉｆｆｍａｎｎ，Ｐｈａｒｍ．Ｔｈｅｒ．，１２２：６５－７７［２００９］Ｗａｎｔら、Ｇｅｎｅｔ．Ｍｅｄ．，１３：４５７－４８４［２０１１］

発明の概要
本発明は、操作されたヒトアルファ－ガラクトシダーゼポリペプチドおよびその組成物を提供する。操作されたヒトアルファ－ガラクトシダーゼポリペプチドは、改善された熱安定性、血清安定性、免疫原性の低下、改善された細胞取り込み、および酸性（ｐＨ＜４）と塩基性（ｐＨ＞７）の両方の条件での安定性、ならびに細胞からの改善されたグロボトリアオシルセラミドのクリアランスを提供するように最適化されている。本発明はまた、治療目的のための操作されたヒトアルファ－ガラクトシダーゼポリペプチドを含む組成物の使用に関する。

本発明は、配列番号８と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、組換えアルファガラクトシダーゼＡおよび／または生物学的に活性な組換えアルファガラクトシダーゼＡ断片を提供する。本発明は、配列番号８と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む組換えアルファガラクトシダーゼＡおよび／または生物学的に活性な組換えアルファガラクトシダーゼＡ断片を提供する。

本発明はまた、配列番号８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含む組換えアルファガラクトシダーゼＡを提供し、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、４４、４４／２１７、４４／２１７／３１６、４４／２１７／３２２、４４／２１７／３２２／３３７、４４／２４７、４４／２４７／３０２、４４／２４７／３０２／３２２、４４／２４７／３２２、４４／２４７／３３７、４４／２４７／３６２、４４／３０２、４４／３３７、４４／３７３、２１７／３２２、２１７／３７３、２４７／３２２、２４７／３６２、３０２／３２２／３６２／３７３、３０２／３３７、３１６、３１６／３３７、３２２、３２２／３３７、３６２／３７３、および３７３から選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号８を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、４４Ｌ、４４Ｌ／２１７Ｆ、４４Ｌ／２１７Ｆ／３１６Ｌ、４４Ｌ／２１７Ｆ／３２２Ｍ、４４Ｌ／２１７Ｆ／３２２Ｍ／３３７Ａ、４４Ｌ／２４７Ｎ、４４Ｌ／２４７Ｎ／３０２Ｑ、４４Ｌ／２４７Ｎ／３０２Ｑ／３２２Ｍ、４４Ｌ／２４７Ｎ／３２２Ｍ、４４Ｌ／２４７Ｎ／３３７Ａ、４４Ｌ／２４７Ｎ／３６２Ｋ、４４Ｌ／３０２Ｑ、４４Ｌ／３３７Ａ、４４Ｌ／３７３Ｒ、２１７Ｆ／３２２Ｍ、２１７Ｆ／３７３Ｒ、２４７Ｎ／３２２Ｍ、２４７Ｎ／３６２Ｋ、３０２Ｑ／３２２Ｍ／３６２Ｋ／３７３Ｒ、３０２Ｑ／３３７Ａ、３１６Ｌ、３１６Ｌ／３３７Ａ、３２２Ｍ、３２２Ｍ／３３７Ａ、３６２Ｋ／３７３Ｒ、および３７３Ｒから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号８を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、Ｒ４４Ｌ、Ｒ４４Ｌ／Ｒ２１７Ｆ、Ｒ４４Ｌ／Ｒ２１７Ｆ／Ｄ３１６Ｌ、Ｒ４４Ｌ／Ｒ２１７Ｆ／Ｉ３２２Ｍ、Ｒ４４Ｌ／Ｒ２１７Ｆ／Ｉ３２２Ｍ／Ｐ３３７Ａ、Ｒ４４Ｌ／Ｄ２４７Ｎ、Ｒ４４Ｌ／Ｄ２４７Ｎ／Ｋ３０２Ｑ、Ｒ４４Ｌ／Ｄ２４７Ｎ／Ｋ３０２Ｑ／Ｉ３２２Ｍ、Ｒ４４Ｌ／Ｄ２４７Ｎ／Ｉ３２２Ｍ、Ｒ４４Ｌ／Ｄ２４７Ｎ／Ｐ３３７Ａ、Ｒ４４Ｌ／Ｄ２４７Ｎ／Ｑ３６２Ｋ、Ｒ４４Ｌ／Ｋ３０２Ｑ、Ｒ４４Ｌ／Ｐ３３７Ａ、Ｒ４４Ｌ／Ｋ３７３Ｒ、Ｒ２１７Ｆ／Ｉ３２２Ｍ、Ｒ２１７Ｆ／Ｋ３７３Ｒ、Ｄ２４７Ｎ／Ｉ３２２Ｍ、Ｄ２４７Ｎ／Ｑ３６２Ｋ、Ｋ３０２Ｑ／Ｉ３２２Ｍ／Ｑ３６２Ｋ／Ｋ３７３Ｒ、Ｋ３０２Ｑ／Ｐ３３７Ａ、Ｄ３１６Ｌ、Ｄ３１６Ｌ／Ｐ３３７Ａ、Ｉ３２２Ｍ、Ｉ３２２Ｍ／Ｐ３３７Ａ、Ｑ３６２Ｋ／Ｋ３７３Ｒ、およびＫ３７３Ｒから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号８を参照してナンバリングされる。

本発明はまた、配列番号８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含む組換えアルファガラクトシダーゼＡを提供し、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、１０／３９／４４／４７／９２／１６６／２０６／２１７／２４７／２６１／２７１／３０２／３１６／３２２／３３７／３６２／３６８／３７３／３９２、４４／２１７／３１６、４４／２１７／３２２／３３７、１６６／３６２、２１７／３７３、および３６２／３７３から選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号８を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、１０Ｔ／３９Ｍ／４４Ｌ／４７Ｓ／９２Ｙ／１６６Ｓ／２０６Ｋ／２１７Ｆ／２４７Ｎ／２６１Ａ／２７１Ｈ／３０２Ｑ／３１６Ｌ／３２２Ｍ／３３７Ａ／３６２Ｋ／３６８Ｗ／３７３Ｒ／３９２Ｍ、４４Ｌ／２１７Ｆ／３１６Ｌ、４４Ｌ／２１７Ｆ／３２２Ｍ／３３７Ａ、１６６Ａ／３６２Ｋ、２１７Ｆ／３７３Ｒ、および３６２Ｋ／３７３Ｒから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号８を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、Ｐ１０Ｔ／Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ａ２０６Ｋ／Ｒ２１７Ｆ／Ｄ２４７Ｎ／Ｇ２６１Ａ／Ａ２７１Ｈ／Ｋ３０２Ｑ／Ｄ３１６Ｌ／Ｉ３２２Ｍ／Ｐ３３７Ａ／Ｑ３６２Ｋ／Ａ３６８Ｗ／Ｋ３７３Ｒ／Ｔ３９２Ｍ、Ｒ４４Ｌ／Ｒ２１７Ｆ／Ｄ３１６Ｌ、Ｒ４４Ｌ／Ｒ２１７Ｆ／Ｉ３２２Ｍ／Ｐ３３７Ａ、Ｐ１６６Ａ／Ｑ３６２Ｋ、Ｒ２１７Ｆ／Ｋ３７３Ｒ、およびＱ３６２Ｋ／Ｋ３７３Ｒから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号８を参照してナンバリングされる。

本発明はまた、配列番号５８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含む組換えアルファガラクトシダーゼＡを提供し、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、７、７／４８／６８、７／４８／６８／１２０／２８２／２９９、７／４８／１３０／２８２、７／４８／１８０、７／６８／１３０／２８２／３６５、７／６８／１８０、７／８８／１２０／３０５／３６５、７／１２０、７／１３０、７／２８２、７／３０５、７／３０５／３６５、７／３６５、３９、４７、４７／８７／９５／９６／１５８／１６２、４７／９５、４７／２７３、４７／３４３、４８、４８／６８、４８／１８０／２８２、４８／２８２、４８／２８２／３０５、６７／１８０、６８、６８／２９９／３００、７１、８７／９１／９５／９６／１５８／１６２、８７／９１／９５／９６／２０６／３４３、８７／９６／１５５／２７３／３４３、８８、９１／９５、９１／９５／９６、９２、９３、９６、９６／２７３、９６／３１２／３４３、１２０、１２０／２９９／３０５、１５１、１５８、１５８／１６２／２７３、１６２、１６２／２７３、１６２／３４３、１６６、１７８、１８０、１８１、２０６、２１７、２７１、２７３、２７３／３４３、２８２、２８２／３６５、２９３／３９１、２９９／３００、２９９／３００／３０５／３６５、３００、３０１、３０５、３０５／３６５、３１４、３３３、３３６、３３７、３４３、３４５、３６３、３６５、３７０、３８９、３９３、３９４、３９６／３９８、３９７、および３９８から選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号５８を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号５８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、７Ｌ、７Ｌ／４８Ｄ／６８Ｅ、７Ｌ／４８Ｄ／６８Ｅ／１２０Ｈ／２８２Ｎ／２９９Ｒ、７Ｌ／４８Ｄ／１３０Ｅ／２８２Ｎ、７Ｌ／４８Ｄ／１８０Ｇ、７Ｌ／６８Ｅ／１３０Ｅ／２８２Ｎ／３６５Ｖ、７Ｌ／６８Ｅ／１８０Ｇ、７Ｌ／８８Ａ／１２０Ｈ／３０５Ｇ／３６５Ｖ、７Ｌ／１２０Ｈ、７Ｌ／１３０Ｅ、７Ｌ／２８２Ｎ、７Ｌ／３０５Ｇ、７Ｌ／３０５Ｇ／３６５Ｖ、７Ｌ／３６５Ｖ、３９Ｖ、４７Ｄ、４７Ｄ／８７Ｋ／９５Ｅ／９６Ｌ／１５８Ｒ／１６２Ｈ、４７Ｄ／９５Ｅ、４７Ｄ／２７３Ｐ、４７Ｄ／３４３Ｇ、４７Ｖ、４８Ｄ、４８Ｄ／６８Ｅ、４８Ｄ／１８０Ｇ／２８２Ｎ、４８Ｄ／２８２Ｎ、４８Ｄ／２８２Ｎ／３０５Ｇ、６７Ｔ／１８０Ｇ、６８Ｅ、６８Ｅ／２９９Ｒ／３００Ｉ、７１Ｐ、８７Ｋ／９１Ｑ／９５Ｅ／９６Ｌ／１５８Ａ／１６２Ｋ、８７Ｋ／９１Ｑ／９５Ｅ／９６Ｌ／２０６Ｓ／３４３Ｇ、８７Ｋ／９６Ｉ／１５５Ｎ／２７３Ｐ／３４３Ｇ、８８Ａ、９１Ｑ／９５Ｅ、９１Ｑ／９５Ｅ／９６Ｌ、９２Ｆ、９２Ｔ、９３Ｉ、９６Ｌ、９６Ｌ／２７３Ｐ、９６Ｌ／３１２Ｑ／３４３Ｇ、１２０Ｈ、１２０Ｈ／２９９Ｒ／３０５Ｇ、１５１Ｌ、１５８Ａ、１５８Ａ／１６２Ｋ／２７３Ｇ、１５８Ｒ、１６２Ｈ／３４３Ｄ、１６２Ｋ、１６２Ｋ／２７３Ｐ、１６２Ｓ、１６６Ｋ、１７８Ｇ、１７８Ｓ、１８０Ｇ、１８０Ｌ、１８０Ｔ、１８０Ｖ、１８１Ａ、２０６Ｋ、２０６Ｓ、２１７Ｋ、２７１Ｒ、２７３Ｐ、２７３Ｐ／３４３Ｇ、２８２Ｎ、２８２Ｎ／３６５Ｖ、２９３Ｐ／３９１Ａ、２９９Ｒ／３００Ｉ、２９９Ｒ／３００Ｉ／３０５Ｇ／３６５Ｖ、３００Ｉ、３０１Ｍ、３０５Ｇ、３０５Ｇ／３６５Ｖ、３１４Ａ、３３３Ｆ、３３３Ｇ、３３６Ｖ、３３７Ｒ、３４３Ｄ、３４３Ｇ、３４５Ａ、３４５Ｑ、３６３Ｑ、３６５Ａ、３６５Ｑ、３６５Ｖ、３７０Ｇ、３８９Ｋ、３９３Ｖ、３９４Ｋ、３９６Ｇ／３９８Ｔ、３９７Ａ、３９８Ａ、３９８Ｐ、３９８Ｓ、および３９８Ｖから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号５８を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号５８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、Ｒ７Ｌ、Ｒ７Ｌ／Ｅ４８Ｄ／Ｑ６８Ｅ、Ｒ７Ｌ／Ｅ４８Ｄ／Ｑ６８Ｅ／Ｙ１２０Ｈ／Ｄ２８２Ｎ／Ｑ２９９Ｒ、Ｒ７Ｌ／Ｅ４８Ｄ／Ｄ１３０Ｅ／Ｄ２８２Ｎ、Ｒ７Ｌ／Ｅ４８Ｄ／Ｆ１８０Ｇ、Ｒ７Ｌ／Ｑ６８Ｅ／Ｄ１３０Ｅ／Ｄ２８２Ｎ／Ｆ３６５Ｖ、Ｒ７Ｌ／Ｑ６８Ｅ／Ｆ１８０Ｇ、Ｒ７Ｌ／Ｑ８８Ａ／Ｙ１２０Ｈ／Ｎ３０５Ｇ／Ｆ３６５Ｖ、Ｒ７Ｌ／Ｙ１２０Ｈ、Ｒ７Ｌ／Ｄ１３０Ｅ、Ｒ７Ｌ／Ｄ２８２Ｎ、Ｒ７Ｌ／Ｎ３０５Ｇ、Ｒ７Ｌ／Ｎ３０５Ｇ／Ｆ３６５Ｖ、Ｒ７Ｌ／Ｆ３６５Ｖ、Ｅ３９Ｖ、Ｔ４７Ｄ、Ｔ４７Ｄ／Ｒ８７Ｋ／Ｓ９５Ｅ／Ｋ９６Ｌ／Ｌ１５８Ｒ／Ｒ１６２Ｈ、Ｔ４７Ｄ／Ｓ９５Ｅ、Ｔ４７Ｄ／Ｓ２７３Ｐ、Ｔ４７Ｄ／Ｋ３４３Ｇ、Ｔ４７Ｖ、Ｅ４８Ｄ、Ｅ４８Ｄ／Ｑ６８Ｅ、Ｅ４８Ｄ／Ｆ１８０Ｇ／Ｄ２８２Ｎ、Ｅ４８Ｄ／Ｄ２８２Ｎ、Ｅ４８Ｄ／Ｄ２８２Ｎ／Ｎ３０５Ｇ、Ｐ６７Ｔ／Ｆ１８０Ｇ、Ｑ６８Ｅ、Ｑ６８Ｅ／Ｑ２９９Ｒ／Ｌ３００Ｉ、Ｓ７１Ｐ、Ｒ８７Ｋ／Ｎ９１Ｑ／Ｓ９５Ｅ／Ｋ９６Ｌ／Ｌ１５８Ａ／Ｒ１６２Ｋ、Ｒ８７Ｋ／Ｎ９１Ｑ／Ｓ９５Ｅ／Ｋ９６Ｌ／Ａ２０６Ｓ／Ｋ３４３Ｇ、Ｒ８７Ｋ／Ｋ９６Ｉ／Ｈ１５５Ｎ／Ｓ２７３Ｐ／Ｋ３４３Ｇ、Ｑ８８Ａ、Ｎ９１Ｑ／Ｓ９５Ｅ、Ｎ９１Ｑ／Ｓ９５Ｅ／Ｋ９６Ｌ、Ｈ９２Ｆ、Ｈ９２Ｔ、Ｖ９３Ｉ、Ｋ９６Ｌ、Ｋ９６Ｌ／Ｓ２７３Ｐ、Ｋ９６Ｌ／Ｐ３１２Ｑ／Ｋ３４３Ｇ、Ｙ１２０Ｈ、Ｙ１２０Ｈ／Ｑ２９９Ｒ／Ｎ３０５Ｇ、Ｄ１５１Ｌ、Ｌ１５８Ａ、Ｌ１５８Ａ／Ｒ１６２Ｋ／Ｓ２７３Ｇ、Ｌ１５８Ｒ、Ｒ１６２Ｈ／Ｋ３４３Ｄ、Ｒ１６２Ｋ、Ｒ１６２Ｋ／Ｓ２７３Ｐ、Ｒ１６２Ｓ、Ｐ１６６Ｋ、Ｗ１７８Ｇ、Ｗ１７８Ｓ、Ｆ１８０Ｇ、Ｆ１８０Ｌ、Ｆ１８０Ｔ、Ｆ１８０Ｖ、Ｑ１８１Ａ、Ａ２０６Ｋ、Ａ２０６Ｓ、Ｒ２１７Ｋ、Ａ２７１Ｒ、Ｓ２７３Ｐ、Ｓ２７３Ｐ／Ｋ３４３Ｇ、Ｄ２８２Ｎ、Ｄ２８２Ｎ／Ｆ３６５Ｖ、Ｌ２９３Ｐ／Ｑ３９１Ａ、Ｑ２９９Ｒ／Ｌ３００Ｉ、Ｑ２９９Ｒ／Ｌ３００Ｉ／Ｎ３０５Ｇ／Ｆ３６５Ｖ、Ｌ３００Ｉ、Ｒ３０１Ｍ、Ｎ３０５Ｇ、Ｎ３０５Ｇ／Ｆ３６５Ｖ、Ｓ３１４Ａ、Ｓ３３３Ｆ、Ｓ３３３Ｇ、Ｉ３３６Ｖ、Ｐ３３７Ｒ、Ｋ３４３Ｄ、Ｋ３４３Ｇ、Ｖ３４５Ａ、Ｖ３４５Ｑ、Ｌ３６３Ｑ、Ｆ３６５Ａ、Ｆ３６５Ｑ、Ｆ３６５Ｖ、Ｓ３７０Ｇ、Ｔ３８９Ｋ、Ｓ３９３Ｖ、Ｌ３９４Ｋ、Ｄ３９６Ｇ／Ｌ３９８Ｔ、Ｌ３９７Ａ、Ｌ３９８Ａ、Ｌ３９８Ｐ、Ｌ３９８Ｓ、およびＬ３９８Ｖから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号５８を参照してナンバリングされる。

本発明はまた、配列番号１５８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含む組換えアルファガラクトシダーゼＡを提供し、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、２４／２０２、３９／４７、３９／４７／２１７、３９／１５１、３９／２８２／３３７／３９８、３９／３３７／３４３／３９８、３９／３９３／３９８、４７／１３０、４７／１５１、４７／３４３／３４５／３９３、４８、４８／６８、４８／６８／２１７／３３３／３９１／３９３、４８／６８／３３３、４８／２１７、４８／３３３、４８／３４５／３９３、４８／３９３、５９／１４３、６８、６８／３４５、１３０、１３０／１５８、１３０／１５８／３９３、１３０／３４５／３９３、１４３／２７１、１４３／３３３、１４３／３８７、１５１、１５１／１５８／２１７／３４３／３４５／３９３、１５１／２０６／２８２／３３７／３４３／３４５／３９８、１５１／２８２／３９３、１５１／３４５／３９３／３９８、１５１／３９３、１５８、１５８／３９３、２０２、２０６、２０６／２１７、２１７、２１７／３３３、２１７／３３７／３４５／３９８、２７１、２８２／３９３、３３３、３３３／３４５、３３７／３４３／３４５／３９８、３４３、３４３／３４５／３９３／３９８、３９３、および３９３／３９８から選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号１５８を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号１５８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、２４Ｓ／２０２Ｎ、３９Ｖ／４７Ｄ、３９Ｖ／４７Ｖ／２１７Ｋ、３９Ｖ／１５１Ｌ、３９Ｖ／２８２Ｎ／３３７Ｒ／３９８Ａ、３９Ｖ／３３７Ｒ／３４３Ｇ／３９８Ａ、３９Ｖ／３９３Ｖ／３９８Ａ、４７Ｖ／１３０Ｅ、４７Ｖ／１５１Ｌ、４７Ｖ／３４３Ｄ／３４５Ｑ／３９３Ｖ、４８Ｄ、４８Ｄ／６８Ｅ、４８Ｄ／６８Ｅ／２１７Ｋ／３３３Ｆ／３９１Ａ／３９３Ｖ、４８Ｄ／６８Ｅ／３３３Ｆ、４８Ｄ／２１７Ｋ、４８Ｄ／３３３Ｆ、４８Ｄ／３３３Ｇ、４８Ｄ／３４５Ｑ／３９３Ｖ、４８Ｄ／３９３Ｖ、５９Ａ／１４３Ｓ、６８Ｅ、６８Ｅ／３４５Ｑ、１３０Ｅ、１３０Ｅ／１５８Ｒ、１３０Ｅ／１５８Ｒ／３９３Ｖ、１３０Ｅ／３４５Ｑ／３９３Ｖ、１４３Ｓ／２７１Ｎ、１４３Ｓ／３３３Ｎ、１４３Ｓ／３８７Ｎ、１５１Ｌ、１５１Ｌ／１５８Ｒ／２１７Ｋ／３４３Ｇ／３４５Ｑ／３９３Ｖ、１５１Ｌ／２０６Ｓ／２８２Ｎ／３３７Ｒ／３４３Ｄ／３４５Ｑ／３９８Ａ、１５１Ｌ／２８２Ｎ／３９３Ｖ、１５１Ｌ／３４５Ｑ／３９３Ｖ／３９８Ａ、１５１Ｌ／３９３Ｖ、１５８Ｒ、１５８Ｒ／３９３Ｖ、２０２Ｎ、２０６Ｓ、２０６Ｓ／２１７Ｋ、２１７Ｋ、２１７Ｋ／３３３Ｆ、２１７Ｋ／３３３Ｇ、２１７Ｋ／３３７Ｒ／３４５Ｑ／３９８Ａ、２７１Ｎ、２８２Ｎ／３９３Ｖ、３３３Ｆ／３４５Ｑ、３３３Ｇ、３３３Ｎ、３３７Ｒ／３４３Ｇ／３４５Ｑ／３９８Ａ、３４３Ｄ、３４３Ｄ／３４５Ｑ／３９３Ｖ／３９８Ａ、３９３Ｖ、および３９３Ｖ／３９８Ａから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号１５８を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、Ｄ２４Ｓ／Ｄ２０２Ｎ、Ｅ３９Ｖ／Ｔ４７Ｄ、Ｅ３９Ｖ／Ｔ４７Ｖ／Ｒ２１７Ｋ、Ｅ３９Ｖ／Ｄ１５１Ｌ、Ｅ３９Ｖ／Ｄ２８２Ｎ／Ｐ３３７Ｒ／Ｌ３９８Ａ、Ｅ３９Ｖ／Ｐ３３７Ｒ／Ｋ３４３Ｇ／Ｌ３９８Ａ、Ｅ３９Ｖ／Ｓ３９３Ｖ／Ｌ３９８Ａ、Ｔ４７Ｖ／Ｄ１３０Ｅ、Ｔ４７Ｖ／Ｄ１５１Ｌ、Ｔ４７Ｖ／Ｋ３４３Ｄ／Ｖ３４５Ｑ／Ｓ３９３Ｖ、Ｅ４８Ｄ、Ｅ４８Ｄ／Ｑ６８Ｅ、Ｅ４８Ｄ／Ｑ６８Ｅ／Ｒ２１７Ｋ／Ｓ３３３Ｆ／Ｑ３９１Ａ／Ｓ３９３Ｖ、Ｅ４８Ｄ／Ｑ６８Ｅ／Ｓ３３３Ｆ、Ｅ４８Ｄ／Ｒ２１７Ｋ、Ｅ４８Ｄ／Ｓ３３３Ｆ、Ｅ４８Ｄ／Ｓ３３３Ｇ、Ｅ４８Ｄ／Ｖ３４５Ｑ／Ｓ３９３Ｖ、Ｅ４８Ｄ／Ｓ３９３Ｖ、Ｃ５９Ａ／Ｃ１４３Ｓ、Ｑ６８Ｅ、Ｑ６８Ｅ／Ｖ３４５Ｑ、Ｄ１３０Ｅ、Ｄ１３０Ｅ／Ｌ１５８Ｒ、Ｄ１３０Ｅ／Ｌ１５８Ｒ／Ｓ３９３Ｖ、Ｄ１３０Ｅ／Ｖ３４５Ｑ／Ｓ３９３Ｖ、Ｃ１４３Ｓ／Ａ２７１Ｎ、Ｃ１４３Ｓ／Ｓ３３３Ｎ、Ｃ１４３Ｓ／Ｅ３８７Ｎ、Ｄ１５１Ｌ、Ｄ１５１Ｌ／Ｌ１５８Ｒ／Ｒ２１７Ｋ／Ｋ３４３Ｇ／Ｖ３４５Ｑ／Ｓ３９３Ｖ、Ｄ１５１Ｌ／Ａ２０６Ｓ／Ｄ２８２Ｎ／Ｐ３３７Ｒ／Ｋ３４３Ｄ／Ｖ３４５Ｑ／Ｌ３９８Ａ、Ｄ１５１Ｌ／Ｄ２８２Ｎ／Ｓ３９３Ｖ、Ｄ１５１Ｌ／Ｖ３４５Ｑ／Ｓ３９３Ｖ／Ｌ３９８Ａ、Ｄ１５１Ｌ／Ｓ３９３Ｖ、Ｌ１５８Ｒ、Ｌ１５８Ｒ／Ｓ３９３Ｖ、Ｄ２０２Ｎ、Ａ２０６Ｓ、Ａ２０６Ｓ／Ｒ２１７Ｋ、Ｒ２１７Ｋ、Ｒ２１７Ｋ／Ｓ３３３Ｆ、Ｒ２１７Ｋ／Ｓ３３３Ｇ、Ｒ２１７Ｋ／Ｐ３３７Ｒ／Ｖ３４５Ｑ／Ｌ３９８Ａ、Ａ２７１Ｎ、Ｄ２８２Ｎ／Ｓ３９３Ｖ、Ｓ３３３Ｆ／Ｖ３４５Ｑ、Ｓ３３３Ｇ、Ｓ３３３Ｎ、Ｐ３３７Ｒ／Ｋ３４３Ｇ／Ｖ３４５Ｑ／Ｌ３９８Ａ、Ｋ３４３Ｄ、Ｋ３４３Ｄ／Ｖ３４５Ｑ／Ｓ３９３Ｖ／Ｌ３９８Ａ、Ｓ３９３Ｖ、およびＳ３９３Ｖ／Ｌ３９８Ａから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号１５８を参照してナンバリングされる。

本発明はまた、配列番号３７２と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含む組換えアルファガラクトシダーゼＡを提供し、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、１０、１０／３９／４４／３２２、１０／３９／９２／２０６／２１７／２７１、１０／３９／９２／２４７、１０／３９／９２／２４７／２７１／３１６、１０／４４、１０／４４／４７／９２／２４７、１０／４４／４７／２６１／３０２／３２２／３６８、１０／４４／９２／３１６／３２２、１０／４４／２６１／３０２／３１６、１０／４４／３０２／３３７／３６８、１０／４７／２１７／２４７／３１６／３９２、１０／４７／２１７／３２２、１０／４７／２７１、１０／９２、１０／９２／２０６／２１７／２４７、１０／９２／２０６／２４７／３１６／３２２／３９２、１０／９２／２０６／２４７／３２２／３６８、１０／９２／２１７／２６１／３０２／３３７、１０／２０６／２１７／２７１、１０／２０６／２４７、１０／２０６／２６１／２７１／３１６、１０／２６１、１０／２７１／３０２、１０／３０２、１０／３０２／３１６、１０／３０２／３２２／３３７、１０／３１６／３２２、１０／３３７／３９２、１０／３６８、３９／４４／９２／１６２／２４７／３０２／３１６／３２２、３９／４４／９２／２１７／３２２、３９／４４／９２／２４７／２７１／３０２、３９／４７／９２／２４７／３０２／３１６／３２２、３９／４７／２１７／２４７／３６８、３９／４７／２４７、３９／９２／２４７／３０２／３１６／３３７／３６８、３９／９２／３１６／３２２、３９／２４７／２７１、３９／２４７／２７１／３１６、３９／３２２、４４／４７／９２／２０６／２１７／３１６／３２２、４４／４７／９２／２４７／２６１／２７１／３１６／３３７／３６８、４４／４７／２０６／２１７／２４７／２７１／３２２、４４／４７／２４７／３２２／３６８、４４／４７／３０２／３１６／３２２、４４／９２／２０６／２４７／３６８、４４／２０６／３３７、４４／２４７／２６１／３０２／３１６、４４／２４７／２６１／３０２／３１６／３２２、４７／９２／２４７／２７１、４７／２１７／３０２、４７／２４７、４７／２４７／２７１、８９／２１７／２４７／２６１／３０２／３１６、９２／２１７／２７１、９２／２４７、９２／２４７／２７１／３２２、９２／２４７／３０２／３２２／３３７、９２／２７１／３３７、９２／３０２、９２／３１６、２０６／２１７／２７１／３９２、２１７／２４７／３１６／３２２／３３７／３６８、２４７、２４７／２７１、２４７／３０２、２７１、２７１／３０２／３２２、２７１／３１６／３２２、３０２／３２２／３６８、および３６８から選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号３７２を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号３７２と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、１０Ｐ、１０Ｐ／３９Ｅ／４４Ｒ／３２２Ｉ、１０Ｐ／３９Ｅ／９２Ｈ／２０６Ａ／２１７Ｒ／２７１Ａ、１０Ｐ／３９Ｅ／９２Ｈ／２４７Ｄ、１０Ｐ／３９Ｅ／９２Ｈ／２４７Ｄ／２７１Ａ／３１６Ｄ、１０Ｐ／４４Ｒ、１０Ｐ／４４Ｒ／４７Ｔ／９２Ｈ／２４７Ｄ、１０Ｐ／４４Ｒ／４７Ｔ／２６１Ｇ／３０２Ｋ／３２２Ｉ／３６８Ａ、１０Ｐ／４４Ｒ／９２Ｈ／３１６Ｄ／３２２Ｉ、１０Ｐ／４４Ｒ／２６１Ｇ／３０２Ｋ／３１６Ｄ、１０Ｐ／４４Ｒ／３０２Ｋ／３３７Ｐ／３６８Ａ、１０Ｐ／４７Ｔ／２１７Ｒ／２４７Ｄ／３１６Ｄ／３９２Ｔ、１０Ｐ／４７Ｔ／２１７Ｒ／３２２Ｉ、１０Ｐ／４７Ｔ／２７１Ａ、１０Ｐ／９２Ｈ、１０Ｐ／９２Ｈ／２０６Ａ／２１７Ｒ／２４７Ｄ、１０Ｐ／９２Ｈ／２０６Ａ／２４７Ｄ／３１６Ｄ／３２２Ｉ／３９２Ｔ、１０Ｐ／９２Ｈ／２０６Ａ／２４７Ｄ／３２２Ｉ／３６８Ａ、１０Ｐ／９２Ｈ／２１７Ｒ／２６１Ｇ／３０２Ｋ／３３７Ｐ、１０Ｐ／２０６Ａ／２１７Ｒ／２７１Ａ、１０Ｐ／２０６Ａ／２４７Ｄ、１０Ｐ／２０６Ａ／２６１Ｇ／２７１Ａ／３１６Ｄ、１０Ｐ／２６１Ｇ、１０Ｐ／２７１Ａ／３０２Ｋ、１０Ｐ／３０２Ｋ、１０Ｐ／３０２Ｋ／３１６Ｄ、１０Ｐ／３０２Ｋ／３２２Ｉ／３３７Ｐ、１０Ｐ／３１６Ｄ／３２２Ｉ、１０Ｐ／３３７Ｐ／３９２Ｔ、１０Ｐ／３６８Ａ、３９Ｅ／４４Ｒ／９２Ｈ／１６２Ｍ／２４７Ｄ／３０２Ｋ／３１６Ｄ／３２２Ｉ、３９Ｅ／４４Ｒ／９２Ｈ／２１７Ｒ／３２２Ｉ、３９Ｅ／４４Ｒ／９２Ｈ／２４７Ｄ／２７１Ａ／３０２Ｋ、３９Ｅ／４７Ｔ／９２Ｈ／２４７Ｄ／３０２Ｋ／３１６Ｄ／３２２Ｉ、３９Ｅ／４７Ｔ／２１７Ｒ／２４７Ｄ／３６８Ａ、３９Ｅ／４７Ｔ／２４７Ｄ、３９Ｅ／９２Ｈ／２４７Ｄ／３０２Ｋ／３１６Ｄ／３３７Ｐ／３６８Ａ、３９Ｅ／９２Ｈ／３１６Ｄ／３２２Ｉ、３９Ｅ／２４７Ｄ／２７１Ａ、３９Ｅ／２４７Ｄ／２７１Ａ／３１６Ｄ、３９Ｅ／３２２Ｉ、４４Ｒ／４７Ｔ／９２Ｈ／２０６Ａ／２１７Ｒ／３１６Ｄ／３２２Ｉ、４４Ｒ／４７Ｔ／９２Ｈ／２４７Ｄ／２６１Ｇ／２７１Ａ／３１６Ｄ／３３７Ｐ／３６８Ａ、４４Ｒ／４７Ｔ／２０６Ａ／２１７Ｒ／２４７Ｄ／２７１Ａ／３２２Ｉ、４４Ｒ／４７Ｔ／２４７Ｄ／３２２Ｉ／３６８Ａ、４４Ｒ／４７Ｔ／３０２Ｋ／３１６Ｄ／３２２Ｉ、４４Ｒ／９２Ｈ／２０６Ａ／２４７Ｄ／３６８Ａ、４４Ｒ／２０６Ａ／３３７Ｐ、４４Ｒ／２４７Ｄ／２６１Ｇ／３０２Ｋ／３１６Ｄ、４４Ｒ／２４７Ｄ／２６１Ｇ／３０２Ｋ／３１６Ｄ／３２２Ｉ、４７Ｔ／９２Ｈ／２４７Ｄ／２７１Ａ、４７Ｔ／２１７Ｒ／３０２Ｋ、４７Ｔ／２４７Ｄ、４７Ｔ／２４７Ｄ／２７１Ａ、８９Ｉ／２１７Ｒ／２４７Ｄ／２６１Ｇ／３０２Ｋ／３１６Ｄ、９２Ｈ／２１７Ｒ／２７１Ａ、９２Ｈ／２４７Ｄ、９２Ｈ／２４７Ｄ／２７１Ａ／３２２Ｉ、９２Ｈ／２４７Ｄ／３０２Ｋ／３２２Ｉ／３３７Ｐ、９２Ｈ／２７１Ａ／３３７Ｐ、９２Ｈ／３０２Ｋ、９２Ｈ／３１６Ｄ、２０６Ａ／２１７Ｒ／２７１Ａ／３９２Ｔ、２１７Ｒ／２４７Ｄ／３１６Ｄ／３２２Ｉ／３３７Ｐ／３６８Ａ、２４７Ｄ、２４７Ｄ／２７１Ａ、２４７Ｄ／３０２Ｋ、２７１Ａ、２７１Ａ／３０２Ｋ／３２２Ｉ、２７１Ａ／３１６Ｄ／３２２Ｉ、３０２Ｋ／３２２Ｉ／３６８Ａ、および３６８Ａから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号３７２を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号３７２と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、Ｔ１０Ｐ、Ｔ１０Ｐ／Ｍ３９Ｅ／Ｌ４４Ｒ／Ｍ３２２Ｉ、Ｔ１０Ｐ／Ｍ３９Ｅ／Ｙ９２Ｈ／Ｋ２０６Ａ／Ｆ２１７Ｒ／Ｈ２７１Ａ、Ｔ１０Ｐ／Ｍ３９Ｅ／Ｙ９２Ｈ／Ｎ２４７Ｄ、Ｔ１０Ｐ／Ｍ３９Ｅ／Ｙ９２Ｈ／Ｎ２４７Ｄ／Ｈ２７１Ａ／Ｌ３１６Ｄ、Ｔ１０Ｐ／Ｌ４４Ｒ、Ｔ１０Ｐ／Ｌ４４Ｒ／Ｓ４７Ｔ／Ｙ９２Ｈ／Ｎ２４７Ｄ、Ｔ１０Ｐ／Ｌ４４Ｒ／Ｓ４７Ｔ／Ａ２６１Ｇ／Ｑ３０２Ｋ／Ｍ３２２Ｉ／Ｗ３６８Ａ、Ｔ１０Ｐ／Ｌ４４Ｒ／Ｙ９２Ｈ／Ｌ３１６Ｄ／Ｍ３２２Ｉ、Ｔ１０Ｐ／Ｌ４４Ｒ／Ａ２６１Ｇ／Ｑ３０２Ｋ／Ｌ３１６Ｄ、Ｔ１０Ｐ／Ｌ４４Ｒ／Ｑ３０２Ｋ／Ａ３３７Ｐ／Ｗ３６８Ａ、Ｔ１０Ｐ／Ｓ４７Ｔ／Ｆ２１７Ｒ／Ｎ２４７Ｄ／Ｌ３１６Ｄ／Ｍ３９２Ｔ、Ｔ１０Ｐ／Ｓ４７Ｔ／Ｆ２１７Ｒ／Ｍ３２２Ｉ、Ｔ１０Ｐ／Ｓ４７Ｔ／Ｈ２７１Ａ、Ｔ１０Ｐ／Ｙ９２Ｈ、Ｔ１０Ｐ／Ｙ９２Ｈ／Ｋ２０６Ａ／Ｆ２１７Ｒ／Ｎ２４７Ｄ、Ｔ１０Ｐ／Ｙ９２Ｈ／Ｋ２０６Ａ／Ｎ２４７Ｄ／Ｌ３１６Ｄ／Ｍ３２２Ｉ／Ｍ３９２Ｔ、Ｔ１０Ｐ／Ｙ９２Ｈ／Ｋ２０６Ａ／Ｎ２４７Ｄ／Ｍ３２２Ｉ／Ｗ３６８Ａ、Ｔ１０Ｐ／Ｙ９２Ｈ／Ｆ２１７Ｒ／Ａ２６１Ｇ／Ｑ３０２Ｋ／Ａ３３７Ｐ、Ｔ１０Ｐ／Ｋ２０６Ａ／Ｆ２１７Ｒ／Ｈ２７１Ａ、Ｔ１０Ｐ／Ｋ２０６Ａ／Ｎ２４７Ｄ、Ｔ１０Ｐ／Ｋ２０６Ａ／Ａ２６１Ｇ／Ｈ２７１Ａ／Ｌ３１６Ｄ、Ｔ１０Ｐ／Ａ２６１Ｇ、Ｔ１０Ｐ／Ｈ２７１Ａ／Ｑ３０２Ｋ、Ｔ１０Ｐ／Ｑ３０２Ｋ、Ｔ１０Ｐ／Ｑ３０２Ｋ／Ｌ３１６Ｄ、Ｔ１０Ｐ／Ｑ３０２Ｋ／Ｍ３２２Ｉ／Ａ３３７Ｐ、Ｔ１０Ｐ／Ｌ３１６Ｄ／Ｍ３２２Ｉ、Ｔ１０Ｐ／Ａ３３７Ｐ／Ｍ３９２Ｔ、Ｔ１０Ｐ／Ｗ３６８Ａ、Ｍ３９Ｅ／Ｌ４４Ｒ／Ｙ９２Ｈ／Ｒ１６２Ｍ／Ｎ２４７Ｄ／Ｑ３０２Ｋ／Ｌ３１６Ｄ／Ｍ３２２Ｉ、Ｍ３９Ｅ／Ｌ４４Ｒ／Ｙ９２Ｈ／Ｆ２１７Ｒ／Ｍ３２２Ｉ、Ｍ３９Ｅ／Ｌ４４Ｒ／Ｙ９２Ｈ／Ｎ２４７Ｄ／Ｈ２７１Ａ／Ｑ３０２Ｋ、Ｍ３９Ｅ／Ｓ４７Ｔ／Ｙ９２Ｈ／Ｎ２４７Ｄ／Ｑ３０２Ｋ／Ｌ３１６Ｄ／Ｍ３２２Ｉ、Ｍ３９Ｅ／Ｓ４７Ｔ／Ｆ２１７Ｒ／Ｎ２４７Ｄ／Ｗ３６８Ａ、Ｍ３９Ｅ／Ｓ４７Ｔ／Ｎ２４７Ｄ、Ｍ３９Ｅ／Ｙ９２Ｈ／Ｎ２４７Ｄ／Ｑ３０２Ｋ／Ｌ３１６Ｄ／Ａ３３７Ｐ／Ｗ３６８Ａ、Ｍ３９Ｅ／Ｙ９２Ｈ／Ｌ３１６Ｄ／Ｍ３２２Ｉ、Ｍ３９Ｅ／Ｎ２４７Ｄ／Ｈ２７１Ａ、Ｍ３９Ｅ／Ｎ２４７Ｄ／Ｈ２７１Ａ／Ｌ３１６Ｄ、Ｍ３９Ｅ／Ｍ３２２Ｉ、Ｌ４４Ｒ／Ｓ４７Ｔ／Ｙ９２Ｈ／Ｋ２０６Ａ／Ｆ２１７Ｒ／Ｌ３１６Ｄ／Ｍ３２２Ｉ、Ｌ４４Ｒ／Ｓ４７Ｔ／Ｙ９２Ｈ／Ｎ２４７Ｄ／Ａ２６１Ｇ／Ｈ２７１Ａ／Ｌ３１６Ｄ／Ａ３３７Ｐ／Ｗ３６８Ａ、Ｌ４４Ｒ／Ｓ４７Ｔ／Ｋ２０６Ａ／Ｆ２１７Ｒ／Ｎ２４７Ｄ／Ｈ２７１Ａ／Ｍ３２２Ｉ、Ｌ４４Ｒ／Ｓ４７Ｔ／Ｎ２４７Ｄ／Ｍ３２２Ｉ／Ｗ３６８Ａ、Ｌ４４Ｒ／Ｓ４７Ｔ／Ｑ３０２Ｋ／Ｌ３１６Ｄ／Ｍ３２２Ｉ、Ｌ４４Ｒ／Ｙ９２Ｈ／Ｋ２０６Ａ／Ｎ２４７Ｄ／Ｗ３６８Ａ、Ｌ４４Ｒ／Ｋ２０６Ａ／Ａ３３７Ｐ、Ｌ４４Ｒ／Ｎ２４７Ｄ／Ａ２６１Ｇ／Ｑ３０２Ｋ／Ｌ３１６Ｄ、Ｌ４４Ｒ／Ｎ２４７Ｄ／Ａ２６１Ｇ／Ｑ３０２Ｋ／Ｌ３１６Ｄ／Ｍ３２２Ｉ、Ｓ４７Ｔ／Ｙ９２Ｈ／Ｎ２４７Ｄ／Ｈ２７１Ａ、Ｓ４７Ｔ／Ｆ２１７Ｒ／Ｑ３０２Ｋ、Ｓ４７Ｔ／Ｎ２４７Ｄ、Ｓ４７Ｔ／Ｎ２４７Ｄ／Ｈ２７１Ａ、Ｌ８９Ｉ／Ｆ２１７Ｒ／Ｎ２４７Ｄ／Ａ２６１Ｇ／Ｑ３０２Ｋ／Ｌ３１６Ｄ、Ｙ９２Ｈ／Ｆ２１７Ｒ／Ｈ２７１Ａ、Ｙ９２Ｈ／Ｎ２４７Ｄ、Ｙ９２Ｈ／Ｎ２４７Ｄ／Ｈ２７１Ａ／Ｍ３２２Ｉ、Ｙ９２Ｈ／Ｎ２４７Ｄ／Ｑ３０２Ｋ／Ｍ３２２Ｉ／Ａ３３７Ｐ、Ｙ９２Ｈ／Ｈ２７１Ａ／Ａ３３７Ｐ、Ｙ９２Ｈ／Ｑ３０２Ｋ、Ｙ９２Ｈ／Ｌ３１６Ｄ、Ｋ２０６Ａ／Ｆ２１７Ｒ／Ｈ２７１Ａ／Ｍ３９２Ｔ、Ｆ２１７Ｒ／Ｎ２４７Ｄ／Ｌ３１６Ｄ／Ｍ３２２Ｉ／Ａ３３７Ｐ／Ｗ３６８Ａ、Ｎ２４７Ｄ、Ｎ２４７Ｄ／Ｈ２７１Ａ、Ｎ２４７Ｄ／Ｑ３０２Ｋ、Ｈ２７１Ａ、Ｈ２７１Ａ／Ｑ３０２Ｋ／Ｍ３２２Ｉ、Ｈ２７１Ａ／Ｌ３１６Ｄ／Ｍ３２２Ｉ、Ｑ３０２Ｋ／Ｍ３２２Ｉ／Ｗ３６８Ａ、およびＷ３６８Ａから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号３７２を参照してナンバリングされる。

本発明はまた、配列番号３７４と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含む組換えアルファガラクトシダーゼＡを提供し、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、１０／３６／９２／１６６／２４７／２６１／３１６／３９２、１０／３９、１０／３９／４４／４７／９２／２０６／２１７、１０／３９／４４／４７／３１６、１０／３９／４４／４７／３３７、１０／３９／４４／９２／１６６／２６１／３１６／３２２、１０／３９／４４／９２／１６６／３０２／３２２、１０／３９／４４／９２／１６６／３９２、１０／３９／４４／９２／２１７／３０２／３２２、１０／３９／４４／９２／３０２／３２２、１０／３９／４４／１６６／２６１／２７１／３１６／３２２、１０／３９／４４／３９２、１０／３９／４７／９２／３３７、１０／３９／９２／１３１／１６６／２７１／３１６／３２２、１０／３９／９２／１６６／２１７／２４７／２７１、１０／３９／９２／２１７／３１６、１０／４４／４７／１６６／２６１／２７１、１０／４４／４７／１６６／２７１／３２２／３６８、１０／４４／４７／２１７／２７１／３１６／３２２、１０／４４／９２、１０／４４／９２／２１７／２４７／２７１／３０２／３１６／３９２、１０／４４／１６６／３０２、１０／４４／２０６／３１６／３２２、１０／４７／９２／１６６／２７１／３１６／３３７、１０／４７／９２／２７１／３０２、１０／４７／９２／３１６／３２２／３９２、１０／４７／１６６／２７１、１０／４７／１６６／３１６、１０／９２／１６６、１０／９２／１６６／２１７／２４７／２６１／２７１、１０／９２／１６６／２６１／２７１／３９２、１０／９２／１６６／２６１／３１６／３２２／３３７、１０／９２／１６６／３３７／３６８、１０／９２／３０２／３３７、１０／９２／３１６／３２２、１０／２０６、１０／２０６／２４７／２６１、１０／２１７／３２２、１０／２６１、１０／２６１／３３７／３９２、１０／３１６／３９２、１０／３６８、３９／４４／４７／９２／１６６／２０６／３９２、３９／４４／４７／９２／２０６／２４７／２６１、３９／４４／４７／９２／２０６／３９２、３９／４４／４７／２０６／３３７／３６８／３９２、３９／４４／９２／１６６／２４７／２６１／３０２／３３７、３９／４４／１６６／２７１、３９／４４／１６６／２７１／３３７／３６８／３９２、３９／４７／９２／３１６／３２２、３９／４７／９２／３９２、３９／４７／１６６／２１７／２６１／３９２、３９／４７／２１７／２４７／３６８、３９／４７／２４７、３９／９２／１６６／２１７／３９２、３９／９２／２６１／３０２、３９／１６６／２１７／２６１／３１６／３６８、３９／３２２、３９／３９２、４４／４７、４４／４７／９２／２１７／２７１、４４／４７／９２／２１７／３１６／３２２／３９２、４４／４７／９２／３９２、４４／４７／１６６、４４／４７／１６６／２７１、４４／４７／２４７／２７１／３９２、４４／３１６／３２２／３９２、４４／３３７、４７／１６６／２０６／２１７／２４７／３３７、４７／１６６／２１７／２７１／３３７、４７／２０６、４７／２１７／２４７／２６１、４７／２７１、５２／２１７／３０２／３１６、９２／１６６／２０６／２７１／３１６、９２／１６６／２１７／２６１／２７１／３９２、９２／１６６／２１７／３１６／３３７／３９２、９２／１６６／２４７、９２／１６６／３１６、９２／２０６／３２２、９２／２１７、９２／２１７／２７１／３３７、９２／２６１／２７１、９２／２７１、１６６／２１７／３１６／３２２／３３７、１６６／２４７／２７１／３１６、１６６／３１６／３２２／３３７、２０６／２１７、２１７／３９２、２４７／３１６、３１６／３２２／３６８、および３１６／３３７／３９２から選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号３７４を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号３７４と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、１０Ｔ／３６Ｍ／９２Ｙ／１６６Ｓ／２４７Ｎ／２６１Ａ／３１６Ｌ／３９２Ｍ、１０Ｔ／３９Ｍ、１０Ｔ／３９Ｍ／４４Ｌ／４７Ｓ／９２Ｙ／２０６Ｋ／２１７Ｆ、１０Ｔ／３９Ｍ／４４Ｌ／４７Ｓ／３１６Ｌ、１０Ｔ／３９Ｍ／４４Ｌ／４７Ｓ／３３７Ａ、１０Ｔ／３９Ｍ／４４Ｌ／９２Ｙ／１６６Ｓ／２６１Ａ／３１６Ｌ／３２２Ｍ、１０Ｔ／３９Ｍ／４４Ｌ／９２Ｙ／１６６Ｓ／３０２Ｑ／３２２Ｍ、１０Ｔ／３９Ｍ／４４Ｌ／９２Ｙ／１６６Ｓ／３９２Ｍ、１０Ｔ／３９Ｍ／４４Ｌ／９２Ｙ／２１７Ｆ／３０２Ｑ／３２２Ｍ、１０Ｔ／３９Ｍ／４４Ｌ／９２Ｙ／３０２Ｑ／３２２Ｍ、１０Ｔ／３９Ｍ／４４Ｌ／１６６Ｓ／２６１Ａ／２７１Ｈ／３１６Ｌ／３２２Ｍ、１０Ｔ／３９Ｍ／４４Ｌ／３９２Ｍ、１０Ｔ／３９Ｍ／４７Ｓ／９２Ｙ／３３７Ａ、１０Ｔ／３９Ｍ／９２Ｙ／１３１Ｇ／１６６Ｓ／２７１Ｈ／３１６Ｌ／３２２Ｍ、１０Ｔ／３９Ｍ／９２Ｙ／１６６Ｓ／２１７Ｆ／２４７Ｎ／２７１Ｈ、１０Ｔ／３９Ｍ／９２Ｙ／２１７Ｆ／３１６Ｌ、１０Ｔ／４４Ｌ／４７Ｓ／１６６Ｓ／２６１Ａ／２７１Ｈ、１０Ｔ／４４Ｌ／４７Ｓ／１６６Ｓ／２７１Ｈ／３２２Ｍ／３６８Ｗ、１０Ｔ／４４Ｌ／４７Ｓ／２１７Ｆ／２７１Ｈ／３１６Ｌ／３２２Ｍ、１０Ｔ／４４Ｌ／９２Ｙ、１０Ｔ／４４Ｌ／９２Ｙ／２１７Ｆ／２４７Ｎ／２７１Ｈ／３０２Ｑ／３１６Ｌ／３９２Ｍ、１０Ｔ／４４Ｌ／１６６Ｓ／３０２Ｑ、１０Ｔ／４４Ｌ／２０６Ｋ／３１６Ｌ／３２２Ｍ、１０Ｔ／４７Ｓ／９２Ｙ／１６６Ｓ／２７１Ｈ／３１６Ｌ／３３７Ａ、１０Ｔ／４７Ｓ／９２Ｙ／２７１Ｈ／３０２Ｑ、１０Ｔ／４７Ｓ／９２Ｙ／３１６Ｌ／３２２Ｍ／３９２Ｍ、１０Ｔ／４７Ｓ／１６６Ｓ／２７１Ｈ、１０Ｔ／４７Ｓ／１６６Ｓ／３１６Ｌ、１０Ｔ／９２Ｙ／１６６Ｓ、１０Ｔ／９２Ｙ／１６６Ｓ／２１７Ｆ／２４７Ｎ／２６１Ａ／２７１Ｈ、１０Ｔ／９２Ｙ／１６６Ｓ／２６１Ａ／２７１Ｈ／３９２Ｍ、１０Ｔ／９２Ｙ／１６６Ｓ／２６１Ａ／３１６Ｌ／３２２Ｍ／３３７Ａ、１０Ｔ／９２Ｙ／１６６Ｓ／３３７Ａ／３６８Ｗ、１０Ｔ／９２Ｙ／３０２Ｑ／３３７Ａ、１０Ｔ／９２Ｙ／３１６Ｌ／３２２Ｍ、１０Ｔ／２０６Ｋ、１０Ｔ／２０６Ｋ／２４７Ｎ／２６１Ａ、１０Ｔ／２１７Ｆ／３２２Ｍ、１０Ｔ／２６１Ａ、１０Ｔ／２６１Ａ／３３７Ａ／３９２Ｍ、１０Ｔ／３１６Ｌ／３９２Ｍ、１０Ｔ／３６８Ｗ、３９Ｍ／４４Ｌ／４７Ｓ／９２Ｙ／１６６Ｓ／２０６Ｋ／３９２Ｍ、３９Ｍ／４４Ｌ／４７Ｓ／９２Ｙ／２０６Ｋ／２４７Ｎ／２６１Ａ、３９Ｍ／４４Ｌ／４７Ｓ／９２Ｙ／２０６Ｋ／３９２Ｍ、３９Ｍ／４４Ｌ／４７Ｓ／２０６Ｋ／３３７Ａ／３６８Ｗ／３９２Ｍ、３９Ｍ／４４Ｌ／９２Ｙ／１６６Ｓ／２４７Ｎ／２６１Ａ／３０２Ｑ／３３７Ａ、３９Ｍ／４４Ｌ／１６６Ｓ／２７１Ｈ、３９Ｍ／４４Ｌ／１６６Ｓ／２７１Ｈ／３３７Ａ／３６８Ｗ／３９２Ｍ、３９Ｍ／４７Ｓ／９２Ｙ／３１６Ｌ／３２２Ｍ、３９Ｍ／４７Ｓ／９２Ｙ／３９２Ｍ、３９Ｍ／４７Ｓ／１６６Ｓ／２１７Ｆ／２６１Ａ／３９２Ｍ、３９Ｍ／４７Ｓ／２１７Ｆ／２４７Ｎ／３６８Ｗ、３９Ｍ／４７Ｓ／２４７Ｎ、３９Ｍ／９２Ｙ／１６６Ｓ／２１７Ｆ／３９２Ｍ、３９Ｍ／９２Ｙ／２６１Ａ／３０２Ｑ、３９Ｍ／１６６Ｓ／２１７Ｆ／２６１Ａ／３１６Ｌ／３６８Ｗ、３９Ｍ／３２２Ｍ、３９Ｍ／３９２Ｍ、４４Ｌ／４７Ｓ、４４Ｌ／４７Ｓ／９２Ｙ／２１７Ｆ／２７１Ｈ、４４Ｌ／４７Ｓ／９２Ｙ／２１７Ｆ／３１６Ｌ／３２２Ｍ／３９２Ｍ、４４Ｌ／４７Ｓ／９２Ｙ／３９２Ｍ、４４Ｌ／４７Ｓ／１６６Ｓ、４４Ｌ／４７Ｓ／１６６Ｓ／２７１Ｈ、４４Ｌ／４７Ｓ／２４７Ｎ／２７１Ｈ／３９２Ｍ、４４Ｌ／３１６Ｌ／３２２Ｍ／３９２Ｍ、４４Ｌ／３３７Ａ、４７Ｓ／１６６Ｓ／２０６Ｋ／２１７Ｆ／２４７Ｎ／３３７Ａ、４７Ｓ／１６６Ｓ／２１７Ｆ／２７１Ｈ／３３７Ａ、４７Ｓ／２０６Ｋ、４７Ｓ／２１７Ｆ／２４７Ｎ／２６１Ａ、４７Ｓ／２７１Ｈ、５２Ｎ／２１７Ｆ／３０２Ｑ／３１６Ｌ、９２Ｙ／１６６Ｓ／２０６Ｋ／２７１Ｈ／３１６Ｌ、９２Ｙ／１６６Ｓ／２１７Ｆ／２６１Ａ／２７１Ｈ／３９２Ｍ、９２Ｙ／１６６Ｓ／２１７Ｆ／３１６Ｌ／３３７Ａ／３９２Ｍ、９２Ｙ／１６６Ｓ／２４７Ｎ、９２Ｙ／１６６Ｓ／３１６Ｌ、９２Ｙ／２０６Ｋ／３２２Ｍ、９２Ｙ／２１７Ｆ、９２Ｙ／２１７Ｆ／２７１Ｈ／３３７Ａ、９２Ｙ／２６１Ａ／２７１Ｈ、９２Ｙ／２７１Ｈ、１６６Ｓ／２１７Ｆ／３１６Ｌ／３２２Ｍ／３３７Ａ、１６６Ｓ／２４７Ｎ／２７１Ｈ／３１６Ｌ、１６６Ｓ／３１６Ｌ／３２２Ｍ／３３７Ａ、２０６Ｋ／２１７Ｆ、２１７Ｆ／３９２Ｍ、２４７Ｎ／３１６Ｌ、３１６Ｌ／３２２Ｍ／３６８Ｗ、および３１６Ｌ／３３７Ａ／３９２Ｍから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号３７４を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号３７４と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、Ｐ１０Ｔ／Ｋ３６Ｍ／Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ｄ２４７Ｎ／Ｇ２６１Ａ／Ｄ３１６Ｌ／Ｔ３９２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｅ３９Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ｈ９２Ｙ／Ａ２０６Ｋ／Ｒ２１７Ｆ、Ｐ１０Ｔ／Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ｄ３１６Ｌ、Ｐ１０Ｔ／Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ｐ３３７Ａ、Ｐ１０Ｔ／Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ｇ２６１Ａ／Ｄ３１６Ｌ／Ｉ３２２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ｋ３０２Ｑ／Ｉ３２２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ｔ３９２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｈ９２Ｙ／Ｒ２１７Ｆ／Ｋ３０２Ｑ／Ｉ３２２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｈ９２Ｙ／Ｋ３０２Ｑ／Ｉ３２２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｐ１６６Ｓ／Ｇ２６１Ａ／Ａ２７１Ｈ／Ｄ３１６Ｌ／Ｉ３２２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｔ３９２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｅ３９Ｍ／Ｔ４７Ｓ／Ｈ９２Ｙ／Ｐ３３７Ａ、Ｐ１０Ｔ／Ｅ３９Ｍ／Ｈ９２Ｙ／Ｗ１３１Ｇ／Ｐ１６６Ｓ／Ａ２７１Ｈ／Ｄ３１６Ｌ／Ｉ３２２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｅ３９Ｍ／Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ｒ２１７Ｆ／Ｄ２４７Ｎ／Ａ２７１Ｈ、Ｐ１０Ｔ／Ｅ３９Ｍ／Ｈ９２Ｙ／Ｒ２１７Ｆ／Ｄ３１６Ｌ、Ｐ１０Ｔ／Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ｐ１６６Ｓ／Ｇ２６１Ａ／Ａ２７１Ｈ、Ｐ１０Ｔ／Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ｐ１６６Ｓ／Ａ２７１Ｈ／Ｉ３２２Ｍ／Ａ３６８Ｗ、Ｐ１０Ｔ／Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ｒ２１７Ｆ／Ａ２７１Ｈ／Ｄ３１６Ｌ／Ｉ３２２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｒ４４Ｌ／Ｈ９２Ｙ、Ｐ１０Ｔ／Ｒ４４Ｌ／Ｈ９２Ｙ／Ｒ２１７Ｆ／Ｄ２４７Ｎ／Ａ２７１Ｈ／Ｋ３０２Ｑ／Ｄ３１６Ｌ／Ｔ３９２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｒ４４Ｌ／Ｐ１６６Ｓ／Ｋ３０２Ｑ、Ｐ１０Ｔ／Ｒ４４Ｌ／Ａ２０６Ｋ／Ｄ３１６Ｌ／Ｉ３２２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｔ４７Ｓ／Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ａ２７１Ｈ／Ｄ３１６Ｌ／Ｐ３３７Ａ、Ｐ１０Ｔ／Ｔ４７Ｓ／Ｈ９２Ｙ／Ａ２７１Ｈ／Ｋ３０２Ｑ、Ｐ１０Ｔ／Ｔ４７Ｓ／Ｈ９２Ｙ／Ｄ３１６Ｌ／Ｉ３２２Ｍ／Ｔ３９２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｔ４７Ｓ／Ｐ１６６Ｓ／Ａ２７１Ｈ、Ｐ１０Ｔ／Ｔ４７Ｓ／Ｐ１６６Ｓ／Ｄ３１６Ｌ、Ｐ１０Ｔ／Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ、Ｐ１０Ｔ／Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ｒ２１７Ｆ／Ｄ２４７Ｎ／Ｇ２６１Ａ／Ａ２７１Ｈ、Ｐ１０Ｔ

／Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ｇ２６１Ａ／Ａ２７１Ｈ／Ｔ３９２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ｇ２６１Ａ／Ｄ３１６Ｌ／Ｉ３２２Ｍ／Ｐ３３７Ａ、Ｐ１０Ｔ／Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ｐ３３７Ａ／Ａ３６８Ｗ、Ｐ１０Ｔ／Ｈ９２Ｙ／Ｋ３０２Ｑ／Ｐ３３７Ａ、Ｐ１０Ｔ／Ｈ９２Ｙ／Ｄ３１６Ｌ／Ｉ３２２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ａ２０６Ｋ、Ｐ１０Ｔ／Ａ２０６Ｋ／Ｄ２４７Ｎ／Ｇ２６１Ａ、Ｐ１０Ｔ／Ｒ２１７Ｆ／Ｉ３２２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｇ２６１Ａ、Ｐ１０Ｔ／Ｇ２６１Ａ／Ｐ３３７Ａ／Ｔ３９２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｄ３１６Ｌ／Ｔ３９２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ａ３６８Ｗ、Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ａ２０６Ｋ／Ｔ３９２Ｍ、Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ｈ９２Ｙ／Ａ２０６Ｋ／Ｄ２４７Ｎ／Ｇ２６１Ａ、Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ｈ９２Ｙ／Ａ２０６Ｋ／Ｔ３９２Ｍ、Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ａ２０６Ｋ／Ｐ３３７Ａ／Ａ３６８Ｗ／Ｔ３９２Ｍ、Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ｄ２４７Ｎ／Ｇ２６１Ａ／Ｋ３０２Ｑ／Ｐ３３７Ａ、Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｐ１６６Ｓ／Ａ２７１Ｈ、Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｐ１６６Ｓ／Ａ２７１Ｈ／Ｐ３３７Ａ／Ａ３６８Ｗ／Ｔ３９２Ｍ、Ｅ３９Ｍ／Ｔ４７Ｓ／Ｈ９２Ｙ／Ｄ３１６Ｌ／Ｉ３２２Ｍ、Ｅ３９Ｍ／Ｔ４７Ｓ／Ｈ９２Ｙ／Ｔ３９２Ｍ、Ｅ３９Ｍ／Ｔ４７Ｓ／Ｐ１６６Ｓ／Ｒ２１７Ｆ／Ｇ２６１Ａ／Ｔ３９２Ｍ、Ｅ３９Ｍ／Ｔ４７Ｓ／Ｒ２１７Ｆ／Ｄ２４７Ｎ／Ａ３６８Ｗ、Ｅ３９Ｍ／Ｔ４７Ｓ／Ｄ２４７Ｎ、Ｅ３９Ｍ／Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ｒ２１７Ｆ／Ｔ３９２Ｍ、Ｅ３９Ｍ／Ｈ９２Ｙ／Ｇ２６１Ａ／Ｋ３０２Ｑ、Ｅ３９Ｍ／Ｐ１６６Ｓ／Ｒ２１７Ｆ／Ｇ２６１Ａ／Ｄ３１６Ｌ／Ａ３６８Ｗ、Ｅ３９Ｍ／Ｉ３２２Ｍ、Ｅ３９Ｍ／Ｔ３９２Ｍ、Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ、Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ｈ９２Ｙ／Ｒ２１７Ｆ／Ａ２７１Ｈ、Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ｈ９２Ｙ／Ｒ２１７Ｆ／Ｄ３１６Ｌ／Ｉ３２２Ｍ／Ｔ３９２Ｍ、Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ｈ９２Ｙ／Ｔ３９２Ｍ、Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ｐ１６６Ｓ、Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ｐ１６６Ｓ／Ａ２７１Ｈ、Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ｄ２４７Ｎ／Ａ２７１Ｈ／Ｔ３９２Ｍ、Ｒ４４Ｌ／Ｄ３１６Ｌ／Ｉ３２２Ｍ／Ｔ３９２Ｍ、Ｒ４４Ｌ／Ｐ３３７Ａ、Ｔ４７Ｓ／Ｐ１６６Ｓ／Ａ２０６Ｋ／Ｒ２１７Ｆ／Ｄ２４７Ｎ／Ｐ３３７Ａ、Ｔ４７Ｓ／Ｐ１６６Ｓ／Ｒ２１７Ｆ／Ａ２７１Ｈ／Ｐ３３７Ａ、Ｔ４７Ｓ／Ａ２０６Ｋ、Ｔ４７Ｓ／Ｒ２１７Ｆ／Ｄ２４７Ｎ／Ｇ２６１Ａ、Ｔ４７Ｓ／Ａ２７１Ｈ、Ｄ５２Ｎ／Ｒ２１７Ｆ／Ｋ３０２Ｑ／Ｄ３１６Ｌ、Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ａ２０６Ｋ／Ａ２７１Ｈ／Ｄ３１６Ｌ、Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ｒ２１７Ｆ／Ｇ２６１Ａ／Ａ２７１Ｈ／Ｔ３９２Ｍ、Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ｒ２１７Ｆ／Ｄ３１６Ｌ／Ｐ３３７Ａ／Ｔ３９２Ｍ、Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ｄ２４７Ｎ、Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ｄ３１６Ｌ、Ｈ９２Ｙ／Ａ２０６Ｋ／Ｉ３２２Ｍ、Ｈ９２Ｙ／Ｒ２１７Ｆ、Ｈ９２Ｙ／Ｒ２１７Ｆ／Ａ２７１Ｈ／Ｐ３３７Ａ、Ｈ９２Ｙ／Ｇ２６１Ａ／Ａ２７１Ｈ、Ｈ９２Ｙ／Ａ２７１Ｈ、Ｐ１６６Ｓ／Ｒ２１７Ｆ／Ｄ３１６Ｌ／Ｉ３２２Ｍ／Ｐ３３７Ａ、Ｐ１６６Ｓ／Ｄ２４７Ｎ／Ａ２７１Ｈ／Ｄ３１６Ｌ、Ｐ１６６Ｓ／Ｄ３１６Ｌ／Ｉ３２２Ｍ／Ｐ３３７Ａ、Ａ２０６Ｋ／Ｒ２１７Ｆ、Ｒ２１７Ｆ／Ｔ３９２Ｍ、Ｄ２４７Ｎ／Ｄ３１６Ｌ、Ｄ３１６Ｌ／Ｉ３２２Ｍ／Ａ３６８Ｗ、およびＤ３１６Ｌ／Ｐ３３７Ａ／Ｔ３９２Ｍから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号３７４を参照してナンバリングされる。

本発明はまた、配列番号７０４と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含む組換えアルファガラクトシダーゼＡを提供し、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、２、４、５、２４／５９、２４／１４３／１４４、２４／１４３／２０２／３３３、２４／１４３／２０２／３５２／３９０／３９１、２４／１４３／３３３／３５２／３８７／３９０／３９１、２４／１４３／３９０／３９１、２４／２０２、２４／２０２／２７１、２４／２０２／３３３／３５２、２４／２７１／３５２、２４／３５２／３８７／３９０／３９１、２４／３８７／３９１、３１、４０、５９、５９／１４３、５９／１４３／２０２、５９／１４３／２０２／２７１／３３３、５９／１４３／２７１、５９／１４３／３３３、５９／２０２、５９／２０２／３３３、５９／２７１／３８７／３９０、７３、７６、８０、８３、８４、９１／２１５／３６１、１２２、１２３、１４３、１４３／２０２、１４３／２７１、１４３／２７１／３５２／３９０、１４３／３３３、１４３／３３３／３８７／３９０、１４３／３８７／３９１、１４７、１５５、１６４、１６５、１７９、１８６、２０２、２０２／３３３、２１０、２１５／２１８、２１８、２１８／３６１、２１８／３６１／３９８、２１８／３９８、２４６、２５４／３９８、２７１、２７１／３３３、２７１／３３３／３９０／３９１、２７１／３３３／３９１、２７１／３５２／３９１、２７３、２７５、２７７、２７８、２８０、２８１、２８３、２８４、２８７、３００、３０３、３０４、３２５、３３１、３３２、３３３／３５２、３３３／３９０／３９１、３３３／３９１、３３４、３３５、３３６、３３８、３３９、３４０、３４１、３４３、３５９、３６０、３６１、３６２、３６７、３６９、３７１、３７３、３７５、３７７、３８２、３８２／３９８、３８５、３８７／３９１、３９０、および３９８から選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号７０４を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号７０４と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、２Ｓ、４Ｌ、５Ｍ、５Ｖ、２４Ｓ／５９Ａ、２４Ｓ／１４３Ｓ／１４４Ｎ、２４Ｓ／１４３Ｓ／２０２Ｎ／３３３Ｎ、２４Ｓ／１４３Ｓ／２０２Ｎ／３５２Ｎ／３９０Ｎ／３９１Ｎ、２４Ｓ／１４３Ｓ／３３３Ｎ／３５２Ｎ／３８７Ｎ／３９０Ｔ／３９１Ｎ、２４Ｓ／１４３Ｓ／３９０Ｔ／３９１Ｎ、２４Ｓ／２０２Ｎ、２４Ｓ／２０２Ｎ／２７１Ｎ、２４Ｓ／２０２Ｎ／３３３Ｎ／３５２Ｎ、２４Ｓ／２７１Ｎ／３５２Ｎ、２４Ｓ／３５２Ｎ／３８７Ｎ／３９０Ｎ／３９１Ｎ、２４Ｓ／３８７Ｎ／３９１Ｎ、３１Ｆ、３１Ｈ、３１Ｌ、３１Ｔ、３１Ｗ、４０Ｑ、５９Ａ、５９Ａ／１４３Ｓ、５９Ａ／１４３Ｓ／２７１Ｎ、５９Ａ／２０２Ｎ、５９Ｔ、５９Ｔ／１４３Ｓ／２０２Ｎ、５９Ｔ／１４３Ｓ／３３３Ｎ、５９Ｔ／２０２Ｎ／３３３Ｎ、５９Ｖ／１４３Ｓ／２０２Ｎ／２７１Ｎ／３３３Ｎ、５９Ｖ／２７１Ｎ／３８７Ｎ／３９０Ｔ、７３Ａ、７６Ａ、７６Ｆ、７６Ｍ、７６Ｓ、８０Ｔ、８３Ｒ、８３Ｓ、８４Ｇ、８４Ｋ、８４Ｒ、９１Ｓ／２１５Ｓ／３６１Ｔ、１２２Ｅ、１２２Ｎ、１２２Ｓ、１２３Ｑ、１２３Ｒ、１２３Ｓ、１２３Ｔ、１４３Ｓ、１４３Ｓ／２０２Ｎ、１４３Ｓ／２７１Ｎ、１４３Ｓ／２７１Ｎ／３５２Ｎ／３９０Ｎ、１４３Ｓ／３３３Ｎ、１４３Ｓ／３３３Ｎ／３８７Ｎ／３９０Ｔ、１４３Ｓ／３８７Ｎ／３９１Ｎ、１４７Ｌ、１４７Ｓ、１５５Ａ、１５５Ｄ、１５５Ｆ、１５５Ｌ、１５５Ｒ、１５５Ｔ、１６４Ｅ、１６５Ｉ、１７９Ｈ、１７９Ｌ、１７９Ｒ、１７９Ｗ、１８６Ｅ、１８６Ｆ、１８６Ｍ、１８６Ｐ、１８６Ｒ、１８６Ｓ、１８６Ｙ、２０２Ｎ、２０２Ｎ／３３３Ｎ、２１０Ｉ、２１５Ｓ／２１８Ｙ、２１８Ｙ、２１８Ｙ／３６１Ｔ、２１８Ｙ／３６１Ｔ／３９８Ｆ、２１８Ｙ／３９８Ｆ、２４６Ｙ、２５４Ｔ／３９８Ｆ、２７１Ｎ、２７１Ｎ／３３３Ｎ、２７１Ｎ／３３３Ｎ／３９０Ｎ／３９１Ｎ、２７１Ｎ／３３３Ｎ／３９１Ｎ、２７１Ｎ／３５２Ｎ／３９１Ｎ、２７３Ｌ、２７５Ａ、２７５Ｇ、２７７Ｑ、２７７Ｖ、２７８Ｎ、２７８Ｒ、２７８Ｓ、２８０Ｇ、２８１Ｉ、２８１Ｍ、２８３Ｌ、２８３Ｐ、２８３Ｔ、２８３Ｖ、２８４Ａ、２８４Ｅ、２８４Ｇ、２８４Ｌ、２８４Ｍ、２８４Ｒ、２８４Ｓ、２８７Ｒ、３００Ｆ、３０３Ａ、３０３Ｃ、３０３Ｗ、３０４Ｔ、３０４Ｖ、３０４Ｗ、３２５Ａ、３３１Ｍ、３３２Ｇ、３３２Ｈ、３３３Ｎ／３５２Ｎ、３３３Ｎ／３９０Ｎ／３９１Ｎ、３３３Ｎ／３９０Ｓ／３９１Ｎ、３３３Ｎ／３９１Ｎ、３３４Ｃ、３３４Ｖ、３３５Ａ、３３５Ｌ、３３６Ｆ、３３６Ｇ、３３６Ｓ、３３６Ｔ、３３８Ｌ、３３９Ｇ、３３９Ｎ、３３９Ｑ、３３９Ｖ、３４０Ｈ、３４０Ｉ、３４０Ｋ、３４０Ｍ、３４０Ｐ、３４０Ｗ、３４１Ｆ、３４１Ｍ、３４３Ｌ、３４３Ｒ、３４３Ｓ、３４３Ｗ、３５９Ｆ、３５９Ｌ、３５９Ｒ、３６０Ｈ、３６０Ｖ、３６１Ｔ、３６１Ｖ、３６２Ｈ、３６７Ａ、３６７Ｄ、３６７Ｌ、３６７Ｍ、３６９Ｄ、３７１Ｇ、３７３Ｌ、３７３Ｓ、３７５Ｌ、３７５Ｑ、３７７Ｑ、３８２Ｉ、３８２Ｉ／３９８Ｆ、３８５Ｒ、３８７Ｎ／３９１Ｎ、３９０Ｓ、および３９８Ｆから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号７０４を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号７０４と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、Ｄ２Ｓ、Ｇ４Ｌ、Ｌ５Ｍ、Ｌ５Ｖ、Ｄ２４Ｓ／Ｃ５９Ａ、Ｄ２４Ｓ／Ｃ１４３Ｓ／Ｄ１４４Ｎ、Ｄ２４Ｓ／Ｃ１４３Ｓ／Ｄ２０２Ｎ／Ｇ３３３Ｎ、Ｄ２４Ｓ／Ｃ１４３Ｓ／Ｄ２０２Ｎ／Ｆ３５２Ｎ／Ｍ３９０Ｎ／Ｑ３９１Ｎ、Ｄ２４Ｓ／Ｃ１４３Ｓ／Ｇ３３３Ｎ／Ｆ３５２Ｎ／Ｅ３８７Ｎ／Ｍ３９０Ｔ／Ｑ３９１Ｎ、Ｄ２４Ｓ／Ｃ１４３Ｓ／Ｍ３９０Ｔ／Ｑ３９１Ｎ、Ｄ２４Ｓ／Ｄ２０２Ｎ、Ｄ２４Ｓ／Ｄ２０２Ｎ／Ａ２７１Ｎ、Ｄ２４Ｓ／Ｄ２０２Ｎ／Ｇ３３３Ｎ／Ｆ３５２Ｎ、Ｄ２４Ｓ／Ａ２７１Ｎ／Ｆ３５２Ｎ、Ｄ２４Ｓ／Ｆ３５２Ｎ／Ｅ３８７Ｎ／Ｍ３９０Ｎ／Ｑ３９１Ｎ、Ｄ２４Ｓ／Ｅ３８７Ｎ／Ｑ３９１Ｎ、Ｓ３１Ｆ、Ｓ３１Ｈ、Ｓ３１Ｌ、Ｓ３１Ｔ、Ｓ３１Ｗ、Ｅ４０Ｑ、Ｃ５９Ａ、Ｃ５９Ａ／Ｃ１４３Ｓ、Ｃ５９Ａ／Ｃ１４３Ｓ／Ａ２７１Ｎ、Ｃ５９Ａ／Ｄ２０２Ｎ、Ｃ５９Ｔ、Ｃ５９Ｔ／Ｃ１４３Ｓ／Ｄ２０２Ｎ、Ｃ５９Ｔ／Ｃ１４３Ｓ／Ｇ３３３Ｎ、Ｃ５９Ｔ／Ｄ２０２Ｎ／Ｇ３３３Ｎ、Ｃ５９Ｖ／Ｃ１４３Ｓ／Ｄ２０２Ｎ／Ａ２７１Ｎ／Ｇ３３３Ｎ、Ｃ５９Ｖ／Ａ２７１Ｎ／Ｅ３８７Ｎ／Ｍ３９０Ｔ、Ｇ７３Ａ、Ｑ７６Ａ、Ｑ７６Ｆ、Ｑ７６Ｍ、Ｑ７６Ｓ、Ｑ８０Ｔ、Ｐ８３Ｒ、Ｐ８３Ｓ、Ｈ８４Ｇ、Ｈ８４Ｋ、Ｈ８４Ｒ、Ｎ９１Ｓ／Ｔ２１５Ｓ／Ｒ３６１Ｔ、Ｄ１２２Ｅ、Ｄ１２２Ｎ、Ｄ１２２Ｓ、Ｉ１２３Ｑ、Ｉ１２３Ｒ、Ｉ１２３Ｓ、Ｉ１２３Ｔ、Ｃ１４３Ｓ、Ｃ１４３Ｓ／Ｄ２０２Ｎ、Ｃ１４３Ｓ／Ａ２７１Ｎ、Ｃ１４３Ｓ／Ａ２７１Ｎ／Ｆ３５２Ｎ／Ｍ３９０Ｎ、Ｃ１４３Ｓ／Ｇ３３３Ｎ、Ｃ１４３Ｓ／Ｇ３３３Ｎ／Ｅ３８７Ｎ／Ｍ３９０Ｔ、Ｃ１４３Ｓ／Ｅ３８７Ｎ／Ｑ３９１Ｎ、Ｅ１４７Ｌ、Ｅ１４７Ｓ、Ｈ１５５Ａ、Ｈ１５５Ｄ、Ｈ１５５Ｆ、Ｈ１５５Ｌ、Ｈ１５５Ｒ、Ｈ１５５Ｔ、Ｇ１６４Ｅ、Ｒ１６５Ｉ、Ｐ１７９Ｈ、Ｐ１７９Ｌ、Ｐ１７９Ｒ、Ｐ１７９Ｗ、Ｔ１８６Ｅ、Ｔ１８６Ｆ、Ｔ１８６Ｍ、Ｔ１８６Ｐ、Ｔ１８６Ｒ、Ｔ１８６Ｓ、Ｔ１８６Ｙ、Ｄ２０２Ｎ、Ｄ２０２Ｎ／Ｇ３３３Ｎ、Ｓ２１０Ｉ、Ｔ２１５Ｓ／Ｎ２１８Ｙ、Ｎ２１８Ｙ、Ｎ２１８Ｙ／Ｒ３６１Ｔ、Ｎ２１８Ｙ／Ｒ３６１Ｔ／Ｌ３９８Ｆ、Ｎ２１８Ｙ／Ｌ３９８Ｆ、Ｗ２４６Ｙ、Ａ２５４Ｔ／Ｌ３９８Ｆ、Ａ２７１Ｎ、Ａ２７１Ｎ／Ｇ３３３Ｎ、Ａ２７１Ｎ／Ｇ３３３Ｎ／Ｍ３９０Ｎ／Ｑ３９１Ｎ、Ａ２７１Ｎ／Ｇ３３３Ｎ／Ｑ３９１Ｎ、Ａ２７１Ｎ／Ｆ３５２Ｎ／Ｑ３９１Ｎ、Ｓ２７３Ｌ、Ｑ２７５Ａ、Ｑ２７５Ｇ、Ｋ２７７Ｑ、Ｋ２７７Ｖ、Ａ２７８Ｎ、Ａ２７８Ｒ、Ａ２７８Ｓ、Ｌ２８０Ｇ、Ｑ２８１Ｉ、Ｑ２８１Ｍ、Ｋ２８３Ｌ、Ｋ２８３Ｐ、Ｋ２８３Ｔ、Ｋ２８３Ｖ、Ｄ２８４Ａ、Ｄ２８４Ｅ、Ｄ２８４Ｇ、Ｄ２８４Ｌ、Ｄ２８４Ｍ、Ｄ２８４Ｒ、Ｄ２８４Ｓ、Ａ２８７Ｒ、Ｌ３００Ｆ、Ｇ３０３Ａ、Ｇ３０３Ｃ、Ｇ３０３Ｗ、Ｄ３０４Ｔ、Ｄ３０４Ｖ、Ｄ３０４Ｗ、Ｒ３２５Ａ、Ｐ３３１Ｍ、Ｒ３３２Ｇ、Ｒ３３２Ｈ、Ｇ３３３Ｎ／Ｆ３５２Ｎ、Ｇ３３３Ｎ／Ｍ３９０Ｎ／Ｑ３９１Ｎ、Ｇ３３３Ｎ／Ｍ３９０Ｓ／Ｑ３９１Ｎ、Ｇ３３３Ｎ／Ｑ３９１Ｎ、Ｙ３３４Ｃ、Ｙ３３４Ｖ、Ｔ３３５Ａ、Ｔ３３５Ｌ、Ｉ３３６Ｆ、Ｉ３３６Ｇ、Ｉ３３６Ｓ、Ｉ３３６Ｔ、Ｖ３３８Ｌ、Ａ３３９Ｇ、Ａ３３９Ｎ、Ａ３３９Ｑ、Ａ３３９Ｖ、Ｓ３４０Ｈ、Ｓ３４０Ｉ、Ｓ３４０Ｋ、Ｓ３４０Ｍ、Ｓ３４０Ｐ、Ｓ３４０Ｗ、Ｌ３４１Ｆ、Ｌ３４１Ｍ、Ｋ３４３Ｌ、Ｋ３４３Ｒ、Ｋ３４３Ｓ、Ｋ３４３Ｗ、Ｖ３５９Ｆ、Ｖ３５９Ｌ、Ｖ３５９Ｒ、Ｋ３６０Ｈ、Ｋ３６０Ｖ、Ｒ３６１Ｔ、Ｒ３６１Ｖ、Ｋ３６２Ｈ、Ｅ３６７Ａ、Ｅ３６７Ｄ、Ｅ３６７Ｌ、Ｅ３６７Ｍ、Ｔ３６９Ｄ、Ｒ３７１Ｇ、Ｒ３７３Ｌ、Ｒ３７３Ｓ、Ｈ３７５Ｌ、Ｈ３７５Ｑ、Ｎ３７７Ｑ、Ｖ３８２Ｉ、Ｖ３８２Ｉ／Ｌ３９８Ｆ、Ｑ３８５Ｒ、Ｅ３８７Ｎ／Ｑ３９１Ｎ、Ｍ３９０Ｓ、およびＬ３９８Ｆから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号７０４を参照してナンバリングされる。

本発明はまた、配列番号３７４と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含む組換えアルファガラクトシダーゼＡを提供し、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、１０、３９、４４、４７、９２、１６６、２０６、２１７、２４７、２６１、２７１、３０２、３１６、３２２、３３７、３６８、および３９２から選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号３７４を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号３７４と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、１０Ａ、１０Ｃ、１０Ｄ、１０Ｅ、１０Ｆ、１０Ｇ、１０Ｈ、１０Ｉ、１０Ｋ、１０Ｌ、１０Ｍ、１０Ｎ、１０Ｑ、１０Ｒ、１０Ｓ、１０Ｔ、１０Ｖ、１０Ｗ、１０Ｙ、３９Ａ、３９Ｃ、３９Ｄ、３９Ｆ、３９Ｇ、３９Ｈ、３９Ｉ、３９Ｋ、３９Ｌ、３９Ｍ、３９Ｎ、３９Ｐ、３９Ｑ、３９Ｒ、３９Ｓ、３９Ｔ、３９Ｖ、３９Ｗ、３９Ｙ、４４Ａ、４４Ｃ、４４Ｄ、４４Ｅ、４４Ｆ、４４Ｇ、４４Ｈ、４４Ｉ、４４Ｋ、４４Ｌ、４４Ｎ、４４Ｐ、４４Ｑ、４４Ｓ、４４Ｔ、４４Ｖ、４４Ｗ、４４Ｙ、４７Ａ、４７Ｃ、４７Ｄ、４７Ｅ、４７Ｆ、４７Ｇ、４７Ｈ、４７Ｉ、４７Ｋ、４７Ｌ、４７Ｍ、４７Ｎ、４７Ｐ、４７Ｑ、４７Ｒ、４７Ｓ、４７Ｖ、４７Ｗ、４７Ｙ、９２Ａ、９２Ｃ、９２Ｄ、９２Ｅ、９２Ｆ、９２Ｇ、９２Ｉ、９２Ｋ、９２Ｌ、９２Ｍ、９２Ｎ、９２Ｐ、９２Ｑ、９２Ｒ、９２Ｓ、９２Ｔ、９２Ｖ、９２Ｗ、９２Ｙ、１６６Ａ、１６６Ｃ、１６６Ｄ、１６６Ｅ、１６６Ｆ、１６６Ｇ、１６６Ｈ、１６６Ｉ、１６６Ｋ、１６６Ｌ、１６６Ｍ、１６６Ｎ、１６６Ｑ、１６６Ｒ、１６６Ｓ、１６６Ｔ、１６６Ｖ、１６６Ｗ、１６６Ｙ、２０６Ｃ、２０６Ｄ、２０６Ｅ、２０６Ｆ、２０６Ｇ、２０６Ｈ、２０６Ｉ、２０６Ｋ、２０６Ｌ、２０６Ｍ、２０６Ｎ、２０６Ｐ、２０６Ｑ、２０６Ｒ、２０６Ｓ、２０６Ｔ、２０６Ｖ、２０６Ｗ、２０６Ｙ、２１７Ａ、２１７Ｃ、２１７Ｄ、２１７Ｅ、２１７Ｆ、２１７Ｇ、２１７Ｈ、２１７Ｉ、２１７Ｋ、２１７Ｌ、２１７Ｍ、２１７Ｎ、２１７Ｐ、２１７Ｑ、２１７Ｓ、２１７Ｔ、２１７Ｖ、２１７Ｗ、２１７Ｙ、２４７Ａ、２４７Ｃ、２４７Ｅ、２４７Ｆ、２４７Ｇ、２４７Ｈ、２４７Ｉ、２４７Ｋ、２４７Ｌ、２４７Ｍ、２４７Ｎ、２４７Ｐ、２４７Ｑ、２４７Ｒ、２４７Ｓ、２４７Ｔ、２４７Ｖ、２４７Ｗ、２４７Ｙ、２６１Ａ、２６１Ｃ、２６１Ｄ、２６１Ｅ、２６１Ｆ、２６１Ｈ、２６１Ｉ、２６１Ｋ、２６１Ｌ、２６１Ｍ、２６１Ｎ、２６１Ｐ、２６１Ｑ、２６１Ｒ、２６１Ｓ、２６１Ｔ、２６１Ｖ、２６１Ｗ、２６１Ｙ、２７１Ｃ、２７１Ｄ、２７１Ｅ、２７１Ｆ、２７１Ｇ、２７１Ｈ、２７１Ｉ、２７１Ｋ、２７１Ｌ、２７１Ｍ、２７１Ｎ、２７１Ｐ、２７１Ｑ、２７１Ｒ、２７１Ｓ、２７１Ｔ、２７１Ｖ、２７１Ｗ、２７１Ｙ、３０２Ａ、３０２Ｃ、３０２Ｄ、３０２Ｅ、３０２Ｆ、３０２Ｇ、３０２Ｈ、３０２Ｉ、３０２Ｌ、３０２Ｍ、３０２Ｎ、３０２Ｐ、３０２Ｑ、３０２Ｒ、３０２Ｓ、３０２Ｔ、３０２Ｖ、３０２Ｗ、３０２Ｙ、３１６Ａ、３１６Ｃ、３１６Ｅ、３１６Ｆ、３１６Ｇ、３１６Ｈ、３１６Ｉ、３１６Ｋ、３１６Ｌ、３１６Ｍ、３１６Ｎ、３１６Ｐ、３１６Ｑ、３１６Ｒ、３１６Ｓ、３１６Ｔ、３１６Ｖ、３１６Ｗ、３１６Ｙ、３２２Ａ、３２２Ｃ、３２２Ｄ、３２２Ｅ、３２２Ｆ、３２２Ｇ、３２２Ｈ、３２２Ｋ、３２２Ｌ、３２２Ｍ、３２２Ｎ、３２２Ｐ、３２２Ｑ、３２２Ｒ、３２２Ｓ、３２２Ｔ、３２２Ｖ、３２２Ｗ、３２２Ｙ、３３７Ａ、３３７Ｃ、３３７Ｄ、３３７Ｅ、３３７Ｆ、３３７Ｇ、３３７Ｈ、３３７Ｉ、３３７Ｋ、３３７Ｌ、３３７Ｍ、３３７Ｎ、３３７Ｑ、３３７Ｒ、３３７Ｓ、３３７Ｔ、３３７Ｖ、３３７Ｗ、３３７Ｙ、３６８Ｃ、３６８Ｄ、３６８Ｅ、３６８Ｆ、３６８Ｇ、３６８Ｈ、３６８Ｉ、３６８Ｋ、３６８Ｌ、３６８Ｍ、３６８Ｎ、３６８Ｐ、３６８Ｑ、３６８Ｒ、３６８Ｓ、３６８Ｔ、３６８Ｖ、３６８Ｗ、３６８Ｙ、３９２Ａ、３９２Ｃ、３９２Ｄ、３９２Ｅ、３９２Ｆ、３９２Ｇ、３９２Ｈ、３９２Ｉ、３９２Ｋ、３９２Ｌ、３９２Ｍ、３９２Ｎ、３９２Ｐ、３９２Ｑ、３９２Ｒ、３９２Ｓ、３９２Ｖ、３９２Ｗ、および３９２Ｙから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号３７４を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号３７４と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的フラグメントを含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、Ｐ１０Ａ、Ｐ１０Ｃ、Ｐ１０Ｄ、Ｐ１０Ｅ、Ｐ１０Ｆ、Ｐ１０Ｇ、Ｐ１０Ｈ、Ｐ１０Ｉ、Ｐ１０Ｋ、Ｐ１０Ｌ、Ｐ１０Ｍ、Ｐ１０Ｎ、Ｐ１０Ｑ、Ｐ１０Ｒ、Ｐ１０Ｓ、Ｐ１０Ｔ、Ｐ１０Ｖ、Ｐ１０Ｗ、Ｐ１０Ｙ、Ｅ３９Ａ、Ｅ３９Ｃ、Ｅ３９Ｄ、Ｅ３９Ｆ、Ｅ３９Ｇ、Ｅ３９Ｈ、Ｅ３９Ｉ、Ｅ３９Ｋ、Ｅ３９Ｌ、Ｅ３９Ｍ、Ｅ３９Ｎ、Ｅ３９Ｐ、Ｅ３９Ｑ、Ｅ３９Ｒ、Ｅ３９Ｓ、Ｅ３９Ｔ、Ｅ３９Ｖ、Ｅ３９Ｗ、Ｅ３９Ｙ、Ｒ４４Ａ、Ｒ４４Ｃ、Ｒ４４Ｄ、Ｒ４４Ｅ、Ｒ４４Ｆ、Ｒ４４Ｇ、Ｒ４４Ｈ、Ｒ４４Ｉ、Ｒ４４Ｋ、Ｒ４４Ｌ、Ｒ４４Ｎ、Ｒ４４Ｐ、Ｒ４４Ｑ、Ｒ４４Ｓ、Ｒ４４Ｔ、Ｒ４４Ｖ、Ｒ４４Ｗ、Ｒ４４Ｙ、Ｔ４７Ａ、Ｔ４７Ｃ、Ｔ４７Ｄ、Ｔ４７Ｅ、Ｔ４７Ｆ、Ｔ４７Ｇ、Ｔ４７Ｈ、Ｔ４７Ｉ、Ｔ４７Ｋ、Ｔ４７Ｌ、Ｔ４７Ｍ、Ｔ４７Ｎ、Ｔ４７Ｐ、Ｔ４７Ｑ、Ｔ４７Ｒ、Ｔ４７Ｓ、Ｔ４７Ｖ、Ｔ４７Ｗ、Ｔ４７Ｙ、Ｈ９２Ａ、Ｈ９２Ｃ、Ｈ９２Ｄ、Ｈ９２Ｅ、Ｈ９２Ｆ、Ｈ９２Ｇ、Ｈ９２Ｉ、Ｈ９２Ｋ、Ｈ９２Ｌ、Ｈ９２Ｍ、Ｈ９２Ｎ、Ｈ９２Ｐ、Ｈ９２Ｑ、Ｈ９２Ｒ、Ｈ９２Ｓ、Ｈ９２Ｔ、Ｈ９２Ｖ、Ｈ９２Ｗ、Ｈ９２Ｙ、Ｐ１６６Ａ、Ｐ１６６Ｃ、Ｐ１６６Ｄ、Ｐ１６６Ｅ、Ｐ１６６Ｆ、Ｐ１６６Ｇ、Ｐ１６６Ｈ、Ｐ１６６Ｉ、Ｐ１６６Ｋ、Ｐ１６６Ｌ、Ｐ１６６Ｍ、Ｐ１６６Ｎ、Ｐ１６６Ｑ、Ｐ１６６Ｒ、Ｐ１６６Ｓ、Ｐ１６６Ｔ、Ｐ１６６Ｖ、Ｐ１６６Ｗ、Ｐ１６６Ｙ、Ａ２０６Ｃ、Ａ２０６Ｄ、Ａ２０６Ｅ、Ａ２０６Ｆ、Ａ２０６Ｇ、Ａ２０６Ｈ、Ａ２０６Ｉ、Ａ２０６Ｋ、Ａ２０６Ｌ、Ａ２０６Ｍ、Ａ２０６Ｎ、Ａ２０６Ｐ、Ａ２０６Ｑ、Ａ２０６Ｒ、Ａ２０６Ｓ、Ａ２０６Ｔ、Ａ２０６Ｖ、Ａ２０６Ｗ、Ａ２０６Ｙ、Ｒ２１７Ａ、Ｒ２１７Ｃ、Ｒ２１７Ｄ、Ｒ２１７Ｅ、Ｒ２１７Ｆ、Ｒ２１７Ｇ、Ｒ２１７Ｈ、Ｒ２１７Ｉ、Ｒ２１７Ｋ、Ｒ２１７Ｌ、Ｒ２１７Ｍ、Ｒ２１７Ｎ、Ｒ２１７Ｐ、Ｒ２１７Ｑ、Ｒ２１７Ｓ、Ｒ２１７Ｔ、Ｒ２１７Ｖ、Ｒ２１７Ｗ、Ｒ２１７Ｙ、Ｄ２４７Ａ、Ｄ２４７Ｃ、Ｄ２４７Ｅ、Ｄ２４７Ｆ、Ｄ２４７Ｇ、Ｄ２４７Ｈ、Ｄ２４７Ｉ、Ｄ２４７Ｋ、Ｄ２４７Ｌ、Ｄ２４７Ｍ、Ｄ２４７Ｎ、Ｄ２４７Ｐ、Ｄ２４７Ｑ、Ｄ２４７Ｒ、Ｄ２４７Ｓ、Ｄ２４７Ｔ、Ｄ２４７Ｖ、Ｄ２４７Ｗ、Ｄ２４７Ｙ、Ｇ２６１Ａ、Ｇ２６１Ｃ、Ｇ２６１Ｄ、Ｇ２６１Ｅ、Ｇ２６１Ｆ、Ｇ２６１Ｈ、Ｇ２６１Ｉ、Ｇ２６１Ｋ、Ｇ２６１Ｌ、Ｇ２６１Ｍ、Ｇ２６１Ｎ、Ｇ２６１Ｐ、Ｇ２６１Ｑ、Ｇ２６１Ｒ、Ｇ２６１Ｓ、Ｇ２６１Ｔ、Ｇ２６１Ｖ、Ｇ２６１Ｗ、Ｇ２６１Ｙ、Ａ２７１Ｃ、Ａ２７１Ｄ、Ａ２７１Ｅ、Ａ２７１Ｆ、Ａ２７１Ｇ、Ａ２７１Ｈ、Ａ２７１Ｉ、Ａ２７１Ｋ、Ａ２７１Ｌ、Ａ２７１Ｍ、Ａ２７１Ｎ、Ａ２７１Ｐ、Ａ２７１Ｑ、Ａ２７１Ｒ、Ａ２７１Ｓ、Ａ２７１Ｔ、Ａ２７１Ｖ、Ａ２７１Ｗ、Ａ２７１Ｙ、Ｋ３０２Ａ、Ｋ３０２Ｃ、Ｋ３０２Ｄ、Ｋ３０２Ｅ、Ｋ３０２Ｆ、Ｋ３０２Ｇ、Ｋ３０２Ｈ、Ｋ３０２Ｉ、Ｋ３０２Ｌ、Ｋ３０２Ｍ、Ｋ３０２Ｎ、Ｋ３０２Ｐ、Ｋ３０２Ｑ、Ｋ３０２Ｒ、Ｋ３０２Ｓ、Ｋ３０２Ｔ、Ｋ３０２Ｖ、Ｋ３０２Ｗ、Ｋ３０２Ｙ、Ｄ３１６Ａ、Ｄ３１６Ｃ、Ｄ３１６Ｅ、Ｄ３１６Ｆ、Ｄ３１６Ｇ、Ｄ３１６Ｈ、Ｄ３１６Ｉ、Ｄ３１６Ｋ、Ｄ３１６Ｌ、Ｄ３１６Ｍ、Ｄ３１６Ｎ、Ｄ３１６Ｐ、Ｄ３１６Ｑ、Ｄ３１６Ｒ、Ｄ３１６Ｓ、Ｄ３１６Ｔ、Ｄ３１６Ｖ、Ｄ３１６Ｗ、Ｄ３１６Ｙ、Ｉ３２２Ａ、Ｉ３２２Ｃ、Ｉ３２２Ｄ、Ｉ３２２Ｅ、Ｉ３２２Ｆ、Ｉ３２２Ｇ、Ｉ３２２Ｈ、Ｉ３２２Ｋ、Ｉ３２２Ｌ、Ｉ３２２Ｍ、Ｉ３２２Ｎ、Ｉ３２２Ｐ、Ｉ３２２Ｑ、Ｉ３２２Ｒ、Ｉ３２２Ｓ、Ｉ３２２Ｔ、Ｉ３２２Ｖ、Ｉ３２２Ｗ、Ｉ３２２Ｙ、Ｐ３３７Ａ、Ｐ３３７Ｃ、Ｐ３３７Ｄ、Ｐ３３７Ｅ、Ｐ３３７Ｆ、Ｐ３３７Ｇ、Ｐ３３７Ｈ、Ｐ３３７Ｉ、Ｐ３３７Ｋ、Ｐ３３７Ｌ、Ｐ３３７Ｍ、Ｐ３３７Ｎ、Ｐ３３７Ｑ、Ｐ３３７Ｒ、Ｐ３３７Ｓ、Ｐ３３７Ｔ、Ｐ３３７Ｖ、Ｐ３３７Ｗ、Ｐ３３７Ｙ、Ａ３６８Ｃ、Ａ３６８Ｄ、Ａ３６８Ｅ、Ａ３６８Ｆ、Ａ３６８Ｇ、Ａ３６８Ｈ、Ａ３６８Ｉ、Ａ３６８Ｋ、Ａ３６８Ｌ、Ａ３６８Ｍ、Ａ３６８Ｎ、Ａ３６８Ｐ、Ａ３６８Ｑ、Ａ３６８Ｒ、Ａ３６８Ｓ、Ａ３６８Ｔ、Ａ３６８Ｖ、Ａ３６８Ｗ、Ａ３６８Ｙ、Ｔ３９２Ａ、Ｔ３９２Ｃ、Ｔ３９２Ｄ、Ｔ３９２Ｅ、Ｔ３９２Ｆ、Ｔ３９２Ｇ、Ｔ３９２Ｈ、Ｔ３９２Ｉ、Ｔ３９２Ｋ、Ｔ３９２Ｌ、Ｔ３９２Ｍ、Ｔ３９２Ｎ、Ｔ３９２Ｐ、Ｔ３９２Ｑ、Ｔ３９２Ｒ、Ｔ３９２Ｓ、Ｔ３９２Ｖ、Ｔ３９２Ｗ、およびＴ３９２Ｙから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号３７４を参照してナンバリングされる。

本発明はまた、配列番号１０２２と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含む組換えアルファガラクトシダーゼＡを提供し、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、１０、１０／３９２、３１、３１／３９／４４／１６６／３０２、３１／４７、３１／２８３／２８４、３９、３９／４４、３９／４４／４７、３９／４４／４７／２６１／２８３／２８４、３９／４４／２８３、３９／４４／３３９、３９／４７／２６１、３９／９２、３９／２０６、３９／２８４、４４、４４／２８４／３０２、８４、８４／９２、８４／２８４／３０２／３９２、８４／３１６、８４／３６８／３９２、９２、９２／２０６／２１７、９２／２０６／２７５、９２／２０６／２８４、９２／２０６／３０２／３６８、９２／２７１、９２／２７１／２７７、９２／２７５／２８４、９２／２８３、９２／２８３／３９２、９２／２８４、９２／３０２、９２／３１６、９２／３６８、１５５、１５５／２１７、１５５／３６８、１６６、１６６／２８３／２８４、１６６／３０２、２０６、２０６／２１７、２０６／３３４、２６１、２６１／２８３、２７１、２７１／３６８、２７５、２８３、２８３／２８４、２８３／３９２、２８４、３０２、３１６、３３４、３３９、３６８、３６８／３９２、および３９２から選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号１０２２を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号１０２２と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、Ｐ１０Ｇ、Ｐ１０Ｇ／Ｔ３９２Ｄ、Ｓ３１Ｔ、Ｓ３１Ｔ／Ｅ３９Ｖ／Ｒ４４Ｖ／Ｐ１６６Ｄ／Ｋ３０２Ｙ、Ｓ３１Ｔ／Ｔ４７Ｒ、Ｓ３１Ｔ／Ｋ２８３Ｌ／Ｄ２８４Ａ、Ｅ３９Ｌ、Ｅ３９Ｌ／Ｈ９２Ｖ、Ｅ３９Ｌ／Ａ２０６Ｅ、Ｅ３９Ｌ／Ｄ２８４Ｓ、Ｅ３９Ｖ／Ｒ４４Ｖ、Ｅ３９Ｖ／Ｒ４４Ｖ／Ｔ４７Ｒ、Ｅ３９Ｖ／Ｒ４４Ｖ／Ｔ４７Ｒ／Ｇ２６１Ｓ／Ｋ２８３Ｌ／Ｄ２８４Ａ、Ｅ３９Ｖ／Ｒ４４Ｖ／Ｋ２８３Ｔ、Ｅ３９Ｖ／Ｒ４４Ｖ／Ａ３３９Ｎ、Ｅ３９Ｖ／Ｔ４７Ｒ／Ｇ２６１Ｓ、Ｒ４４Ｖ、Ｒ４４Ｖ／Ｄ２８４Ｅ／Ｋ３０２Ｙ、Ｈ８４Ｋ、Ｈ８４Ｋ／Ｈ９２Ｖ、Ｈ８４Ｋ／Ｄ２８４Ｓ／Ｋ３０２Ｌ／Ｔ３９２Ａ、Ｈ８４Ｋ／Ｄ３１６Ｈ、Ｈ８４Ｋ／Ａ３６８Ｅ／Ｔ３９２Ａ、Ｈ９２Ｑ、Ｈ９２Ｔ、Ｈ９２Ｔ／Ａ２０６Ｅ／Ｒ２１７Ｎ、Ｈ９２Ｔ／Ａ２０６Ｅ／Ｋ３０２Ｔ／Ａ３６８Ｅ、Ｈ９２Ｔ／Ａ２７１Ｋ、Ｈ９２Ｔ／Ａ２７１Ｋ／Ｋ２７７Ｒ、Ｈ９２Ｔ／Ｋ２８３Ｐ、Ｈ９２Ｔ／Ｋ２８３Ｖ／Ｔ３９２Ｗ、Ｈ９２Ｔ／Ｄ２８４Ｍ、Ｈ９２Ｔ／Ｋ３０２Ｌ、Ｈ９２Ｔ／Ａ３６８Ｅ、Ｈ９２Ｖ、Ｈ９２Ｖ／Ａ２０６Ｅ／Ｄ２８４Ｓ、Ｈ９２Ｖ／Ａ２０６Ｙ／Ｑ２７５Ａ、Ｈ９２Ｖ／Ｑ２７５Ａ／Ｄ２８４Ｓ、Ｈ９２Ｖ／Ｄ２８４Ｓ、Ｈ９２Ｖ／Ｋ３０２Ｌ、Ｈ９２Ｖ／Ｄ３１６Ｈ、Ｈ１５５Ｆ、Ｈ１５５Ｆ／Ｒ２１７Ｉ、Ｈ１５５Ｆ／Ａ３６８Ｅ、Ｐ１６６Ｄ、Ｐ１６６Ｄ／Ｋ２８３Ｌ／Ｄ２８４Ａ、Ｐ１６６Ｄ／Ｋ３０２Ｙ、Ａ２０６Ｅ、Ａ２０６Ｅ／Ｒ２１７Ｎ、Ａ２０６Ｉ、Ａ２０６Ｑ、Ａ２０６Ｔ／Ｙ３３４Ｃ、Ａ２０６Ｙ、Ｇ２６１Ｓ、Ｇ２６１Ｓ／Ｋ２８３Ｌ、Ａ２７１Ｋ、Ａ２７１Ｋ／Ａ３６８Ｅ、Ｑ２７５Ａ、Ｋ２８３Ｌ、Ｋ２８３Ｐ／Ｔ３９２Ｗ、Ｋ２８３Ｔ、Ｋ２８３Ｔ／Ｄ２８４Ｅ、Ｄ２８４Ｅ、Ｄ２８４Ｍ、Ｄ２８４Ｓ、Ｋ３０２Ｌ、Ｋ３０２Ｙ、Ｄ３１６Ｈ、Ｙ３３４Ｃ、Ａ３３９Ｎ、Ａ３６８Ｅ、Ａ３６８Ｅ／Ｔ３９２Ｗ、Ｔ３９２Ａ、Ｔ３９２Ｄ、およびＴ３９２Ｗから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号１０２２を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号１０２２と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、１０Ｇ、１０Ｇ／３９２Ｄ、３１Ｔ、３１Ｔ／３９Ｖ／４４Ｖ／１６６Ｄ／３０２Ｙ、３１Ｔ／４７Ｒ、３１Ｔ／２８３Ｌ／２８４Ａ、３９Ｌ、３９Ｌ／９２Ｖ、３９Ｌ／２０６Ｅ、３９Ｌ／２８４Ｓ、３９Ｖ／４４Ｖ、３９Ｖ／４４Ｖ／４７Ｒ、３９Ｖ／４４Ｖ／４７Ｒ／２６１Ｓ／２８３Ｌ／２８４Ａ、３９Ｖ／４４Ｖ／２８３Ｔ、３９Ｖ／４４Ｖ／３３９Ｎ、３９Ｖ／４７Ｒ／２６１Ｓ、４４Ｖ、４４Ｖ／２８４Ｅ／３０２Ｙ、８４Ｋ、８４Ｋ／９２Ｖ、８４Ｋ／２８４Ｓ／３０２Ｌ／３９２Ａ、８４Ｋ／３１６Ｈ、８４Ｋ／３６８Ｅ／３９２Ａ、９２Ｑ、９２Ｔ、９２Ｔ／２０６Ｅ／２１７Ｎ、９２Ｔ／２０６Ｅ／３０２Ｔ／３６８Ｅ、９２Ｔ／２７１Ｋ、９２Ｔ／２７１Ｋ／２７７Ｒ、９２Ｔ／２８３Ｐ、９２Ｔ／２８３Ｖ／３９２Ｗ、９２Ｔ／２８４Ｍ、９２Ｔ／３０２Ｌ、９２Ｔ／３６８Ｅ、９２Ｖ、９２Ｖ／２０６Ｅ／２８４Ｓ、９２Ｖ／２０６Ｙ／２７５Ａ、９２Ｖ／２７５Ａ／２８４Ｓ、９２Ｖ／２８４Ｓ、９２Ｖ／３０２Ｌ、９２Ｖ／３１６Ｈ、１５５Ｆ、１５５Ｆ／２１７Ｉ、１５５Ｆ／３６８Ｅ、１６６Ｄ、１６６Ｄ／２８３Ｌ／２８４Ａ、１６６Ｄ／３０２Ｙ、２０６Ｅ、２０６Ｅ／２１７Ｎ、２０６Ｉ、２０６Ｑ、２０６Ｔ／３３４Ｃ、２０６Ｙ、２６１Ｓ、２６１Ｓ／２８３Ｌ、２７１Ｋ、２７１Ｋ／３６８Ｅ、２７５Ａ、２８３Ｌ、２８３Ｐ／３９２Ｗ、２８３Ｔ、２８３Ｔ／２８４Ｅ、２８４Ｅ、２８４Ｍ、２８４Ｓ、３０２Ｌ、３０２Ｙ、３１６Ｈ、３３４Ｃ、３３９Ｎ、３６８Ｅ、３６８Ｅ／３９２Ｗ、３９２Ａ、３９２Ｄ、および３９２Ｗから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号１０２２を参照してナンバリングされる。

いくつかの実施形態では、本発明のアルファガラクトシダーゼＡは、表２－１、５－１、６－１、７－１、８－１、９－１、１１－１、１２－１および／または１３－１に示される少なくとも１つの位置に少なくとも１つの変異を含み、これらの位置は、表に示されるように、配列番号２または別の参照配列を参照してナンバリングされる。いくつかのさらなる実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、ヒトアルファガラクトシダーゼＡに由来する。いくつかのさらなる実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは配列番号８、５８、１５８、３７２、３７４、７０４および／または１０２２のポリペプチド配列を含む。

いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号２、８、５８、１５８、３７２、３７４、７０４および／または１０２２のアルファガラクトシダーゼＡよりも熱安定性が高い。いくつかのさらなる実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、ｐＨ７において、配列番号２、８、５８、１５８、３７２、３７４、７０４および／または１０２２のアルファガラクトシダーゼＡよりも安定である。さらにいくつかのさらなる実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、ｐＨ４において、配列番号２、８、５８、１５８、３７２、３７４、７０４および／または１０２２のアルファガラクトシダーゼＡよりも安定である。さらにいくつかのさらなる実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号２、８、５８、１５８、３７２、３７４、７０４および／または１０２２のアルファガラクトシダーゼＡよりもｐＨ７において安定であり、ｐＨ４において安定である。さらにさらなる実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、血清への曝露に対して、配列番号２、８、５８、１５８、３７２、３７４、７０４および／または１０２２のアルファガラクトシダーゼＡよりも安定である。いくつかのさらなる実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、リソソームに対して、配列番号２、８、５８、１５８、３７２、３７４、７０４および／または１０２２のアルファガラクトシダーゼＡよりも安定である。さらにいくつかのさらなる実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号２、８、５８、１５８、３７２、３７４、７０４および／または１０２２のアルファガラクトシダーゼＡよりも細胞に取り込まれやすい。いくつかのさらなる実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号２、８、５８、１５８、３７２、３７４、７０４および／または１０２２のアルファガラクトシダーゼＡよりも多くのグロボトリアオシルセラミドを細胞から枯渇させる。またいくつかのさらなる実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号２、８、５８、１５８、３７２、３７４、７０４および／または１０２２と比較して、細胞への取り込みの改善を示す。いくつかのさらなる実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号２、８、５８、１５８、３７２、３７４、７０４および／または１０２２のアルファガラクトシダーゼＡよりも免疫原性が低い。いくつかのさらなる実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、参照配列と比較して、ｉ）増強された触媒活性、ｉｉ）ｐＨ７に対する耐性の増加、ｉｉｉ）ｐＨ４に対する耐性の増加、ｉｖ）血清耐性の増加、ｖ）細胞への取り込みの改善、ｖｉ）免疫原性の低下、またはｖｉｉ）細胞からのグロボトリアオシルセラミドの枯渇の増加、またはｉ）、ｉｉ）、ｉｉｉ）、ｉｖ）、ｖ）、ｖｉ）もしくはｖｉｉ）のいずれかの組み合わせ、から選択される少なくとも１つの改善された特性を示す。いくつかの実施形態では、上記参照配列は、配列番号２、８、５８、１５８、３７２、３７４、７０４および／または１０２２である。いくつかのさらなる実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは精製される。

本発明はまた、本明細書で提供される少なくとも１つの組換えアルファガラクトシダーゼＡをコードする組換えポリヌクレオチド配列を（例えば、表２－１、５－１、６－１、７－１、８－１、９－１、１１－１、１２－１および／または１３－１において）提供する。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、ＤＮＡ、ＲＮＡおよびｍＲＮＡから選択される。いくつかの実施形態では、組換えポリヌクレオチド配列は、コドン最適化されている。

本発明はまた、本明細書において提供する少なくとも１つの組換えアルファガラクトシダーゼＡをコードする組換えポリヌクレオチド配列（例えば、表２－１、５－１、６－１、７－１、８－１、９－１、１１－１、１２－１、および／または１３－１）を含む発現ベクターを提供する。いくつかの実施形態では、組換えポリヌクレオチド配列は、制御配列に作動可能に連結される。いくつかのさらなる実施形態では、制御配列はプロモーターである。いくつかのさらなる実施形態では、プロモーターは異種プロモーターである。いくつかの実施形態では、発現ベクターは、本明細書で提供されるシグナル配列をさらに含む。

本発明はまた、本明細書で提供される少なくとも１つの発現ベクターを含む宿主細胞を提供する。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、本明細書において提供する少なくとも１つの組換えアルファガラクトシダーゼＡをコードする組換えポリヌクレオチド配列（例えば、表２－１、５－１、６－１、７－１、８－１、９－１、１１－１、１２－１、および／または１３－１）を含む発現ベクターを含む。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、真核生物および原核生物から選択される。いくつかの実施形態では、宿主細胞は真核生物である。いくつかのさらなる実施形態では、宿主細胞は哺乳動物細胞である。

本発明はまた、組換えポリヌクレオチドによってコードされるアルファガラクトシダーゼＡが産生される条件下で、本明細書で提供される宿主細胞を培養することを含む、アルファガラクトシダーゼＡ変異体を産生する方法を提供する。いくつかの実施形態では、本方法は、アルファガラクトシダーゼＡを回収する工程をさらに含む。いくつかのさらなる実施形態では、本方法は、アルファガラクトシダーゼＡを精製する工程をさらに含む。本発明はまた、本明細書で提供される少なくとも１つの組換えアルファガラクトシダーゼＡ（例えば、表２－１、５－１、６－１、７－１、８－１、９－１、１１－１、１２－１、および／または１３－１）を含む組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書で提供される少なくとも１つの組換えポリヌクレオチドを含む医薬組成物を提供する。いくつかのさらなる実施形態では、本発明は、本明細書で提供される酵素組成物を含む、ファブリー病を処置するための医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本医薬組成物は、薬学的に許容され得る担体および／または賦形剤をさらに含む。いくつかのさらなる実施形態では、本医薬組成物は、ヒトへの非経口注射または注入に適している。

本発明はまた、対象のファブリー病の症状を処置および／または予防する方法であって、ファブリー病を有する対象を提供すること、本明細書で提供される少なくとも１つの組換えアルファガラクトシダーゼＡ（例えば、表２－１、５－１、６－１、７－１、８－１、９－１、１１－１、１２－１、および／または１３－１）を含む少なくとも１つの医薬組成物を提供すること、および医薬組成物を対象に投与すること、を含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、ファブリー病の症状は対象において改善される。いくつかのさらなる実施形態では、本発明の医薬組成物が投与された対象は、ファブリー病の症状を示す対象が必要とする食事よりもその脂肪含有量が制限されていない食事を食べることができる。いくつかの実施形態では、対象は乳児または小児であるが、いくつかの代替実施形態では、対象は成人または若年成人である。

本発明はまた、本明細書で提供される組成物の使用を提供する。

図１は、３０～５０℃の温度で１時間インキュベートした後のＧＬＡ変異体の相対活性を示すグラフを提供する。

図２は、ヒト血清を用いて３７℃で０～２４時間チャレンジした後のＧＬＡ変異体の相対活性を示すグラフを提供する。

図３は、ヒトリソソーム抽出物を用いた３７℃で０～２４時間のチャレンジ後のＧＬＡ変異体の相対活性を示すグラフを提供する。

図４は、培養ファブリー患者線維芽細胞と３７℃で４時間インキュベートした後の野生型と比較した相対活性として表される、異なる精製ＧＬＡ変異体の細胞取り込みを示すグラフを提供する。

図５は、投与後１週間、２週間および４週間における、配列番号２と比較した、ファブリーマウスの心臓におけるＧＬＡ変異体の活性を示すグラフを提供する。

図６は、投与後１週間および２週間における、ＧＬＡ変異体で処置したファブリーマウスの心臓における残留Ｇｂ_３を示すグラフを提供する。

図７は、ヒト血清を用いて０～２４時間チャレンジした後のＧＬＡ変異体の残存活性を示すグラフを提供する。

図８は、３７℃で４時間のインキュベーションおよび３日間のウォッシュアウト後の培養ファブリー患者線維芽細胞における精製ＧＬＡ変異体の細胞取り込みを示すグラフを提供する。

図９は、最後の処置の７日後のファブリーマウスモデルの心臓におけるインビボ酵素活性を示すグラフを提供する。

図１０は、最後の処置の７日後のファブリーマウスモデルの腎臓におけるインビボ酵素活性を示すグラフを提供する。

図１１は、心臓組織におけるＧｂ３の分解を示すグラフを提供する。

図１２は、腎臓組織におけるＧｂ３の分解を示すグラフを提供する。

図１３は、心臓組織におけるリゾ－Ｇｂ３の分解を示すグラフを提供する。

図１４は、腎臓組織におけるリゾ－Ｇｂ３の分解を示すグラフを提供する。

発明の説明
本発明は、操作されたヒトアルファ－ガラクトシダーゼポリペプチドおよびその組成物を提供する。操作されたヒトアルファ－ガラクトシダーゼポリペプチドは、改善された熱安定性、血清安定性、改善された細胞取り込み、および酸性（ｐＨ＜４）と塩基性（ｐＨ＞７）の両方の条件での安定性、免疫原性の低下、ならびに細胞からの改善されたグロボトリアオシルセラミドのクリアランスを提供するように最適化されている。本発明はまた、治療目的のための操作されたヒトアルファ－ガラクトシダーゼポリペプチドを含む組成物の使用に関する。
いくつかの実施形態では、操作されたヒトアルファ－ガラクトシダーゼポリペプチドは、安定性を維持しながら細胞の取り込みが改善されるように最適化されている。本発明はまた、治療目的のための操作されたヒトアルファ－ガラクトシダーゼポリペプチドを含む組成物の使用に関する。

場合によっては、適格個体について、ファブリー病の処置のために酵素補充療法（例えば、ＦＡＢＲＡＺＹＭＥ（登録商標）アガルシダーゼベータ、ゲンザイム）が考慮される。現在使用されている酵素補充療法は、野生型ヒトＧＬＡの組換え発現形態である。静脈内投与されたＧＬＡは循環し、受容体媒介エンドサイトーシス、主にマンノース６－リン酸受容体（Ｍ６ＰＲ）を介して細胞内に取り込まれ、標的器官のエンドソーム／リソソームに移動し、そこでＧｂ３の蓄積を除去することが知られている。これらの薬物は、患者の症状を完全には軽減せず、神経障害性疼痛および一過性虚血発作が低い割合で起こり続ける。さらに、ほとんどの標的器官によるＧＬＡの取り込みは、高度に血管新生したＭ６ＰＲに富む肝臓と比較して不十分であり、酵素は血液およびリソソームのｐＨで不安定である。したがって、利用可能な処置には問題が残っている。さらに、患者は、免疫応答（投与された薬物を標的とするＩｇＧ抗体およびＩｇＥ抗体）を発症し、重度のアレルギー（アナフィラキシー）反応や重度の注入反応に苦しみ、さらには死亡する可能性がある。本発明は、現在利用可能な処置と比較して、ファブリー病の処置に適していながら、副作用が低減され、転帰が改善された、より安定で有効な酵素を提供することを意図する。実際、本発明は、血流への導入時に酵素が受ける、血中での安定性が増加した（ｐＨ７．４）組換えＧＬＡ酵素を提供することを意図する。さらに、酵素は、治療中に酵素が活性である場所であるリソソームのｐＨ（ｐＨ４．３）で安定性が増加している。したがって、多様な酵素変異体ライブラリーのハイスループットスクリーニングを使用する、ヒトＨＥＫ２９３Ｔ細胞における組換え発現ヒトＧＬＡの指向進化を使用することによって、安定性が維持され、グロボトリアオシルセラミドクリアランスが改善され、細胞取り込みが改善された新規ＧＬＡ変異体を得た。いくつかの実施形態では、ＧＬＡ変異体は、免疫原性の低下を示す。
略語および定義

他に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、一般に、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。一般に、本明細書で使用される命名法ならびに以下に記載される細胞培養、分子遺伝学、微生物学、生化学、有機化学、分析化学および核酸化学の実験室手順は、当技術分野で周知であり、一般的に使用されるものである。そのような技術は周知であり、当業者に周知の多数のテキストおよび参考文献に記載されている。標準的な技術またはその変形は、化学合成および化学分析に使用される。上記および下記の両方の本明細書で言及されるすべての特許、特許出願、論文および刊行物は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。

本発明の実施においては、本明細書に記載されるものと類似または同等の任意の適切な方法および材料が使用されるが、本明細書では、一部の方法および材料が記載される。本発明は、記載される特定の方法論、プロトコル、および試薬に限定されず、これらは当業者がそれらを使用する文脈に応じて変化し得ることを理解されたい。したがって、すぐ下に定義される用語は、全体として本出願を参照することによってより完全に説明される。上記および下記の両方の本明細書で言及されるすべての特許、特許出願、論文および刊行物は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。

また、本明細書で使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかにそうでないことを示さない限り、複数の言及を含む。

数値範囲は、範囲を定義する数を含む。したがって、本明細書に開示されるすべての数値範囲は、そのようなより広い数値範囲内に入るすべてのより狭い数値範囲を、かかるより狭い数値範囲がすべて本明細書に明示的に記載されているかのように包含することを意図している。また、本明細書に開示されるすべての最大（または最小）の数値限定は、すべてのより低い（またはより高い）数値限定を、かかるより低い（またはより高い）数値限定が本明細書に明示的に記載されているかのように含むことも意図される。

「約」という用語は、特定の値について許容され得る誤差を意味する。場合によっては、「約」は、所与の値の範囲の０．０５％、０．５％、１．０％、または２．０％以内を意味する。場合によっては、「約」は、所与の値の標準偏差１以内、２以内、３以内、または４以内を意味する。

さらに、本明細書で提供される見出しは、本出願を全体として参照することによって有することができる本発明の様々な態様または実施形態を限定するものではない。したがって、すぐ下に定義される用語は、全体として本出願を参照することによってより完全に定義される。とはいえ、本発明の理解を容易にするために、いくつかの用語を以下に定義する。

別段示されない限り、核酸は、５’から３’方向に左から右に書かれ、アミノ酸配列は、それぞれアミノからカルボキシの方向で左から右に書かれる。

本明細書で使用される場合、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語およびその同語源語は、包括的な意味で使用される（すなわち、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語およびその対応する同語源語と同等）。

本明細書で使用される場合、「ＥＣ」番号は、国際生化学・分子生物学連合の命名法委員会（ＮＣ－ＩＵＢＭＢ）の酵素命名法を指す。ＩＵＢＭＢ生化学的分類は、酵素が触媒する化学反応に基づく酵素の数値分類システムである。

本明細書で使用される場合、「ＡＴＣＣ」は、ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎを指し、そのバイオレポジトリーコレクションは、遺伝子および株を含む。

本明細書で使用されるとき、「ＮＣＢＩ」とは、ＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎおよびその中に提供される配列データベースのことを指す。

「タンパク質」、「ポリペプチド」および「ペプチド」は、本明細書では、長さまたは翻訳後修飾（例えば、グリコシル化またはリン酸化）にかかわらず、アミド結合によって共有結合した少なくとも２つのアミノ酸のポリマーを示すために互換的に使用される。

「アミノ酸」は、本明細書では、一般に知られている３文字の記号またはＩＵＰＡＣ－ＩＵＢＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＮｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅＣｏｍｍｉｓｓｉｏｎによって推奨される１文字の記号のいずれかによって参照される。同様に、ヌクレオチドは、それらの一般に受け入れられている一文字コードによって参照され得る。遺伝的にコードされたアミノ酸に使用される略語は従来のものであり、以下の通りである：アラニン（ＡｌａまたはＡ）、アルギニン（ＡｒｇまたはＲ）、アスパラギン（ＡｓｎまたはＮ）、アスパラギン酸（ＡｓｐまたはＤ）、システイン（ＣｙｓまたはＣ）、グルタミン酸（ＧｌｕまたはＥ）、グルタミン（ＧｌｎまたはＱ）、ヒスチジン（ＨｉｓまたはＨ）、イソロイシン（ＩｌｅまたはＩ）、ロイシン（ＬｅｕまたはＬ）、リジン（ＬｙｓまたはＫ）、メチオニン（ＭｅｔまたはＭ）、フェニルアラニン（ＰｈｅまたはＦ）、プロリン（ＰｒｏまたはＰ）、セリン（ＳｅｒまたはＳ）、トレオニン（ＴｈｒまたはＴ）、トリプトファン（ＴｒｐまたはＷ）、チロシン（ＴｙｒまたはＹ）およびバリン（ＶａｌまたはＶ）。３文字略語が使用される場合、「Ｌ」または「Ｄ」が特に前に来ない限り、または略語が使用される文脈から明らかでない限り、アミノ酸はα－炭素（Ｃ_α）についてＬ－体またはＤ－体のいずれかであり得る。例えば、「Ａｌａ」は、α－炭素に関する立体配置を特定せずにアラニンを示すのに対して、「Ｄ－Ａｌａ」および「Ｌ－Ａｌａ」は、それぞれＤ－アラニンおよびＬ－アラニンを示す。ポリペプチド配列を一連の一文字または三文字略語（またはそれらの組み合わせ）として示す場合、その配列は、一般的な慣例に従ってアミノ（Ｎ）からカルボキシ（Ｃ）方向に示す。

遺伝的にコードするヌクレオシドに使用される略語は従来のものであり、以下の通りである：アデノシン（Ａ）、グアノシン（Ｇ）、シチジン（Ｃ）、チミジン（Ｔ）、およびウリジン（Ｕ）。具体的に示されていない限り、省略されたヌクレオシドは、リボヌクレオシドまたは２’－デオキシリボヌクレオシドのいずれかであり得る。ヌクレオシドは、リボヌクレオシドまたは２’－デオキシリボヌクレオシドのいずれかであることを、個別単位で、または集合体の単位で特定することができる。核酸配列が一連の一文字略語として示す場合、配列は一般的な慣例に従って５’から３’方向に示し、リン酸塩は示さない。

「操作された」、「組換え」、「天然に存在しない」および「変異体」という用語は、細胞、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドに関して使用される場合、本来は天然に存在しない形に修飾されているか、または、それと同一であるが、合成材料からおよび／または組換え技術を使用した操作によって産生または誘導される、材料またはその材料の天然若しくは天然形態に対応する材料を指す。

本明細書で使用される場合、「ＵＴＲ」は、ｍＲＮＡポリヌクレオチドの非翻訳領域を指す。いくつかの実施形態では、「５’非翻訳領域」または「５’ＵＴＲ」は、「リーダー配列」または「リーダーＲＮＡ」と呼ばれる。このｍＲＮＡ領域は、開始コドンのすぐ上流にある。いくつかの実施形態では、「３’非翻訳領域」または「３’ＵＴＲ」は、終止コドンのすぐ下流のｍＲＮＡ領域である。様々な生物（例えば、原核生物、真核生物およびウイルス）において、これらの領域は両方とも翻訳調節および細胞内輸送に重要である。

本明細書で使用される場合、「野生型」、「ＷＴ」および「天然に存在する」は、自然界に見られる形態を指す。例えば、野生型ポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列は、天然の供給源から単離され得る生物に存在し、ヒトの操作によって意図的に改変されていない配列である。

本明細書で使用される場合、「コード配列」は、タンパク質のアミノ酸配列をコードする核酸（例えば、遺伝子）の部分を指す。

「配列同一性パーセント（％）」という用語は、本明細書では、ポリヌクレオチドとポリペプチドとの間の比較を指すために使用され、比較ウィンドウによって２つの最適にアラインメントされた配列を比較することによって決定され、比較ウィンドウ内のポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の部分は、２つの配列の最適なアラインメントにおいて、参照配列と比較して、付加または欠失（すなわち、隙間）を含み得る。パーセンテージは、同一の核酸塩基またはアミノ酸残基が両方の配列に存在する位置の数を調べてマッチした位置の数を得、マッチした位置の数を比較ウィンドウ内の位置の総数で除算し、その結果に１００を掛けて配列同一性のパーセンテージを得ることによって算出することができる。あるいは、同一の核酸塩基もしくはアミノ酸残基が両方の配列に存在するか、または核酸塩基もしくはアミノ酸残基がギャップと整列してマッチした位置の数を得る位置の数を決定し、マッチした位置の数を比較ウィンドウ内の位置の総数で除算し、結果に１００を掛けて配列同一性のパーセンテージを得ることによってパーセンテージを計算することができる。当業者は、２つの配列をアライメントするために利用可能な多くの確立されたアルゴリズムがあることを理解している。比較のための配列の最適なアラインメントは、例えば、ＳｍｉｔｈａｎｄＷａｔｅｒｍａｎの局所相同性アルゴリズム（ＳｍｉｔｈａｎｄＷａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．，２：４８２［１９８１］）によって、ＮｅｅｄｌｅｍａｎａｎｄＷｕｎｓｃｈの相同性アラインメントアルゴリズム（ＮｅｅｄｌｅｍａｎａｎｄＷｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４８：４４３［１９７０）によって、ＰｅａｒｓｏｎａｎｄＬｉｐｍａｎの類似性検索方法（ＰｅａｒｓｏｎａｎｄＬｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：２４４４［１９８８］）によって、これらのアルゴリズムのコンピュータ化された実装（例えば、ＧＣＧＷｉｓｃｏｎｓｉｎＳｏｆｔｗａｒｅＰａｃｋａｇｅのＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ）によって、または当該技術分野で知られている目視検査によって行うことができる。配列同一性パーセントおよび配列類似性の決定に適したアルゴリズムの例としては、Ａｌｔｓｃｈｕｌらによって説明されているＢＬＡＳＴおよびＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズムが挙げられるが、これらに限定されない（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５：４０３－４１０［１９９０］、およびＡｌｔｓｃｈｕｌら、１９７７，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．，３３８９－３４０２［１９７７］をそれぞれ参照されたい）。ＢＬＡＳＴ分析を行うためのソフトウェアは、ＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎのウェブサイトを通じて公開されている。このアルゴリズムは、最初に、クエリ配列中の長さＷの短いワードを識別することによって高スコア配列対（ＨＳＰ）を識別することを含み、これは、データベース配列中の同じ長さのワードとアラインメントされたときに、いくつかの正の値の閾値スコアＴと一致するかまたはそれを満たす。Ｔは、近傍ワードスコア閾値と呼ばれる（上記のＡｌｔｓｃｈｕｌらを参照されたい）。これらの初期近傍ワードヒットは、それらを含むより長いＨＳＰを見つけるための検索を開始するためのシードとして作用する。次いで、このワードヒットは、累積アラインメントスコアが増加し得る限り、各配列に沿って両方向に拡張される。累積スコアは、ヌクレオチド配列について、パラメータＭ（一対のマッチング残差に対する報酬スコア、常に０超）およびＮ（ミスマッチ残差に対するペナルティスコア、常に０未満）を使用して計算される。アミノ酸配列の場合、スコア行列を使用して累積スコアを計算する。ワードヒットの各方向への伸長は、累積アラインメントスコアがその最大達成値から量Ｘだけ低下したとき、累積スコアは、１またはそれを超える負のスコアリング残基アラインメントの蓄積のために０以下になったとき、または、いずれかの配列の末端に達したとき、に停止される。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメータＷ、Ｔ、およびＸは、アライメントの感度および速度を決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列用）は、デフォルトとしてワード長（Ｗ）１１、期待値（Ｅ）１０、Ｍ＝５、Ｎ＝－４、および両鎖の比較を使用する。アミノ酸配列の場合、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、ワード長（Ｗ）３、期待値（Ｅ）１０およびＢＬＯＳＵＭ６２スコア行列をデフォルトとして使用する（ＨｅｎｉｋｏｆｆａｎｄＨｅｎｉｋｏｆｆ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９：１０９１５［１９８９］を参照されたい）。配列アラインメントおよび配列同一性％の例示的な決定では、提供されるデフォルトパラメータを使用して、ＧＣＧＷｉｓｃｏｎｓｉｎＳｏｆｔｗａｒｅパッケージ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ、ＭａｄｉｓｏｎＷＩ）のＢＥＳＴＦＩＴまたはＧＡＰプログラムを使用することができる。

本明細書で使用される場合、「参照配列」は、配列比較の基礎として使用される定義された配列を指す。参照配列は、より大きな配列のサブセット、例えば、全長遺伝子またはポリペプチド配列のセグメントであり得る。一般に、参照配列は、少なくとも２０ヌクレオチドまたはアミノ酸残基の長さ、少なくとも２５残基の長さ、少なくとも５０残基の長さ、少なくとも１００残基の長さまたは全長の核酸またはポリペプチドである。２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチドはそれぞれ、（１）２つの配列間で類似する配列（すなわち、完全な配列の一部）を含み得、また、（２）２つの配列間で異なる配列をさらに含み得るので、２つの（またはそれを超える）ポリヌクレオチドまたはポリペプチド間の配列比較は、典型的には、「比較ウィンドウ」を通して２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチドの配列を比較して、配列類似性の局所領域を同定および比較することによって行われる。いくつかの実施形態では、「参照配列」は、一次アミノ酸配列に基づくことができ、その参照配列は、一次配列に１またはそれを超える変更を有し得る配列である。「比較ウィンドウ」は、少なくとも約２０個の連続したヌクレオチド位置またはアミノ酸残基からなる概念的セグメントを指し、ここで、配列は、少なくとも２０個の連続したヌクレオチドまたはアミノ酸の参照配列と比較することができ、比較ウィンドウ内の配列の部分は、２つの配列の最適なアラインメントにおいて、参照配列（付加または欠失を含まない）と比較して２０％またはそれ未満の付加または欠失（すなわち、隙間）を含み得る。比較ウィンドウは、２０個の連続残基よりも長くてもよく、必要に応じて、３０個、４０個、５０個、１００個、またはそれよりも長いウィンドウを含む。

「対応する」、「～への参照」および「～に対する」は、所与のアミノ酸またはポリヌクレオチド配列のナンバリングの文脈で使用される場合、所与のアミノ酸またはポリヌクレオチド配列を参照配列と比較した場合の特定の参照配列の残基のナンバリングを指す。換言すれば、所与のポリマーの残基番号または残基位置は、所与のアミノ酸またはポリヌクレオチド配列内の残基の実際の数値位置によってではなく、参照配列に関して指定される。例えば、操作されたＧＬＡのアミノ酸配列などの所与のアミノ酸配列は、ギャップを導入して２つの配列間の残基マッチを最適化することによって参照配列に整列させることができる。これらの場合、ギャップは存在するが、所与のアミノ酸またはポリヌクレオチド配列中の残基のナンバリングは、それがアラインメントされた参照配列に関して行われる。

本明細書で使用される場合、「アミノ酸差異」および「残基差異」は、ポリペプチド配列のある位置のアミノ酸残基における、参照配列の対応する位置のアミノ酸残基に対する差異を指す。アミノ酸差異の位置は、本明細書では、一般に「Ｘｎ」と称され、ここで、ｎは、残基差異が基づく参照配列の対応する位置を指す。例えば、「配列番号８と比較したＸ４４位の残基差異」は、配列番号８の４４位に対応するポリペプチド位置のアミノ酸残基の差異を指す。したがって、配列番号８の参照ポリペプチドが位置４４にアルギニンを有する場合、「配列番号８と比較したＸ４４位の残基差異」は、配列番号８の位置４４に対応するポリペプチドの位置に、アルギニン以外の任意の残基からなるアミノ酸置換を有する。本明細書のほとんどの場合、ある位置における特定のアミノ酸残基の差異は「ＸｎＹ」として示され、「Ｘｎ」は上記の対応する位置を指定し、「Ｙ」は操作されたポリペプチド中に見出されるアミノ酸（すなわち、参照ポリペプチドとは異なる残基）の一文字識別子である。場合によっては（例えば、表２－１、５－１、６－１、７－１、８－１、９－１、１１－１、１２－１および１３－１に示すように）、本開示はまた、従来の表記「ＡｎＢ」によって示される特定のアミノ酸差異を提示し、式中、Ａは参照配列中の残基の一文字識別子であり、「ｎ」は参照配列中の残基位置の番号であり、Ｂは操作されたポリペプチドの配列中の残基置換の一文字識別子である。いくつかの場合において、本開示のポリペプチドは、参照配列に対する１またはそれを超えるアミノ酸残基差異を含み得、それは残基差異が参照配列に対して存在する特定の位置のリストによって示される。いくつかの実施形態では、ポリペプチドの特定の残基位置に２つ以上のアミノ酸を使用することができる場合、使用することができる様々なアミノ酸残基は、「／」によって分離される（例えば、Ｘ２４７Ｄ／Ｘ２４７ＮまたはＸ２４７Ｄ／Ｎ）。いくつかの実施形態では、酵素変異体は２つ以上の置換を含む。これらの置換は、読みやすいようにスラッシュで区切られる（例えば、Ｄ２４Ｓ／Ｄ２０２Ｎ）。本出願は、保存的アミノ酸置換および非保存的アミノ酸置換のいずれか／または両方を含む１またはそれを超えるアミノ酸差異を含む操作されたポリペプチド配列を含む。

本明細書で使用される場合、「変異」は、ポリペプチドおよびポリヌクレオチド配列の置換、挿入、欠失、および他の修飾を指す。本発明は、任意の特定のタイプの突然変異に限定されることを意図しない。

「保存的アミノ酸置換」とは、類似の側鎖を有する異なる残基による残基の置換を指し、したがって、典型的には、ポリペプチド中のアミノ酸を、定義されたアミノ酸クラス内の同じまたは類似のアミノ酸で置換することを含む。限定ではなく例として、脂肪族側鎖を有するアミノ酸は、別の脂肪族アミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン）で置換されていてもよく、ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸がヒドロキシル側鎖を有する別のアミノ酸（例えば、セリンおよびトレオニン）で置換され、芳香族側鎖を有するアミノ酸が、芳香族側鎖を有する別のアミノ酸（例えば、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファンおよびヒスチジン）で置換され、塩基性側鎖を有するアミノ酸が、塩基性側鎖を有する別のアミノ酸（例えば、リジンおよびアルギニン）で置換され、酸性側鎖を有するアミノ酸が、酸性側鎖を有する別のアミノ酸（例えば、アスパラギン酸またはグルタミン酸）で置換され、かつ／または疎水性もしくは親水性アミノ酸がそれぞれ別の疎水性もしくは親水性アミノ酸で置換される。

「非保存的置換」とは、ポリペプチド中のアミノ酸を、有意に異なる側鎖特性を有するアミノ酸で置換することを指す。非保存的置換では、定義された群内のアミノ酸ではなく、定義された群相互間のアミノ酸を使用し得、（ａ）置換の領域のペプチド骨格の構造（例えば、グリシンのプロリン）、（ｂ）電荷もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖の大部分に影響を及ぼす。限定ではなく例として、例示的な非保存的置換は、塩基性または脂肪族アミノ酸で置換された酸性アミノ酸、小アミノ酸で置換された芳香族アミノ酸、および疎水性アミノ酸で置換された親水性アミノ酸であり得る。

本明細書中で使用される場合、「欠失」とは、参照ポリペプチドから１またはそれを超えるアミノ酸を除去することによるポリペプチドの改変のことを指す。欠失は、操作された酵素の酵素活性を保持し、かつ／または改善された特性を保持しながら、参照酵素を構成する１個またはそれを超えるアミノ酸、２個またはそれを超えるアミノ酸、５個またはそれを超えるアミノ酸、１０個またはそれを超えるアミノ酸、１５個またはそれを超えるアミノ酸、または２０個またはそれを超えるアミノ酸、アミノ酸の総数の最大１０％、またはアミノ酸の総数の最大２０％の除去を含み得る。欠失は、ポリペプチドの内部部分および／または末端部分を対象とし得る。様々な実施形態では、欠失は連続セグメントを含み得、または不連続であり得る。

本明細書中で使用されるとき、「挿入」とは、参照ポリペプチドから１またはそれを超えるアミノ酸を付加することによるポリペプチドの改変のことを指す。挿入は、ポリペプチドの内部、またはカルボキシ末端もしくはアミノ末端へのものであり得る。本明細書で使用される挿入には、当技術分野で公知の融合タンパク質が含まれる。挿入は、アミノ酸の連続セグメントであり得、または天然に存在する１またはそれを超えるポリペプチドのアミノ酸によって分離され得る。

「機能的断片」および「生物学的に活性な断片」は、本明細書では、アミノ末端および／またはカルボキシ末端の欠失および／または内部欠失を有するが、残りのアミノ酸配列が、それが比較される配列（例えば、本発明の完全長の操作されたＧＬＡ）中の対応する位置と同一であって、全長ポリペプチドの活性の実質的にすべてを保持するポリペプチドを指すために互換的に使用される。

本明細書で使用される場合、「単離されたポリペプチド」は、天然に付随する他の夾雑物（例えば、タンパク質、脂質、およびポリヌクレオチド）から実質的に分離されているポリペプチドを指す。この用語は、天然に存在する環境または発現系（例えば、宿主細胞またはインビトロ合成）から除去または精製されたポリペプチドを包含する。組換えＧＬＡポリペプチドは、細胞内に存在してもよく、細胞培地中に存在してもよく、またはライセートもしくは単離された調製物などの様々な形態で調製されてもよい。したがって、いくつかの実施形態では、組換えＧＬＡポリペプチドは単離されたポリペプチドであり得る。

本明細書で使用される場合、「実質的に純粋なポリペプチド」は、ポリペプチド種が存在する優勢種である（すなわち、モルベースまたは重量ベースで、組成物中の任意の他の個々の高分子種よりも豊富である）組成物を指し、一般に、対象種が、モルまたは重量％単位で、存在する高分子種の少なくとも約５０％を構成する場合に、実質的に精製された組成物である。一般に、実質的に純粋なＧＬＡ組成物は、モルまたは重量％単位で、組成物中に存在するすべての高分子種の、約６０またはそれを超える％、約７０またはそれを超える％、約８０またはそれを超える％、約９０またはそれを超える％、約９５またはそれを超える％、および約９８またはそれを超える％を構成する。いくつかの実施形態では、対象種は、組成物が単一の高分子種から本質的になる本質的な均一性に至るまで（すなわち、汚染種は、従来の検出方法によって組成物中で検出することができない）精製される。溶媒種、小分子（５００ダルトン未満）、および元素イオン種は、高分子種と見なされない。いくつかの実施形態では、単離された組換えＧＬＡポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチド組成物である。

本明細書で使用される場合、「改善された酵素特性」は、参照ＧＬＡポリペプチドと比較して、かつ／または、野生型ＧＬＡポリペプチドもしくは別の操作されたＧＬＡポリペプチドと比較して、任意の酵素特性の改善を示す操作されたＧＬＡポリペプチドを指す。改善された特性として、遺伝子発現の増加、タンパク質産生の増加、熱活性の増加、熱安定性の増加、様々なｐＨレベルでの活性の増加、安定性の増加、酵素活性の増加、基質特異性または親和性の増加、比活性の増加、基質に対する耐性および／または産生物の阻害の増加、化学的安定性の増加、化学選択性の改善、溶媒安定性の改善、酸性、中性または塩基性のｐＨに対する耐性の増加、タンパク質分解活性に対する耐性の増加（すなわち、タンパク質分解に対する感受性の低下）、凝集の減少、溶解性の増加、免疫原性の減少、翻訳後修飾（例えば、グリコシル化）の改善、温度プロファイルの変更、細胞取り込みの増加、リソソーム安定性の増加、Ｇｂ３細胞を枯渇させる能力の増加、ＧＬＡ産生細胞からの分泌の増加などの特性が挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書で使用される場合、「増加した酵素活性」および「増強された触媒活性」は、操作されたＧＬＡポリペプチドの改善された特性を指し、これは、参照ＧＬＡ酵素と比較した比活性（例えば、産生された産生物／時間／重量タンパク質）の増加、または基質から産生物への変換率（例えば、指定された量のＧＬＡを使用した、指定された期間における基質の出発量から産生物への変換率）の増加によって表すことができる。

酵素活性を決定するための例示的な方法は、実施例に提示されている。Ｋ_ｍ、Ｖ_ｍａｘまたはｋ_ｃａｔの古典的な酵素特性を含む、酵素活性に関連する任意の特性が影響を受ける可能性があり、その変化は酵素活性の増加をもたらし得る。酵素活性の改善は、対応する野生型酵素の約１．１倍から、２倍、５倍、１０倍、２０倍、２５倍、５０倍、７５倍、１００倍、１５０倍、２００倍またはそれを超える程度の酵素活性、または、天然に存在するＧＬＡまたはＧＬＡポリペプチドが由来する別の操作されたＧＬＡを超える酵素活性であり得る。

いくつかの実施形態では、操作されたＧＬＡポリペプチドは、少なくとも０．１／秒、少なくとも０．５／秒、少なくとも１．０／秒、少なくとも５．０／秒、少なくとも１０．０／秒のｋ_ｃａｔを有し、いくつかの好ましい実施形態では、１０．０／秒を超えるｋ_ｃａｔを有する。いくつかの実施形態では、Ｋ_ｍは、約１μＭから約５ｍＭの範囲、約５μＭから約２ｍＭの範囲、約１０μＭから約２ｍＭの範囲、または約１０μＭから約１ｍＭの範囲である。いくつかの特定の実施形態では、操作されたＧＬＡ酵素は、特定の条件に曝露した後に、参照ＧＬＡ酵素（例えば、野生型ＧＬＡまたは任意の他の参照ＧＬＡ、例えば配列番号８）の１．５から１０倍、１．５から２５倍、１．５から５０倍、１．５から１００倍、またはそれを超える範囲の改善された酵素活性を示す。ＧＬＡ活性は、当技術分野で公知の任意の適切な方法（例えば、反応物または産生物の分光光度特性の変化のモニタリングなどの標準的なアッセイ）によって測定することができる。いくつかの実施形態では、産生された産生物の量は、そのまま、またはｏ－フタルジアルデヒド（ＯＰＡ）誘導体化の後に、ＵＶ吸光度または蛍光検出と組み合わせた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分離によって測定することができる。いくつかの実施形態では、産生された産生物の量は、４－メチルウンベリフェリル－アルファ－Ｄ－ガラクトピラノシド（４－ＭＵＧａｌ）分子の加水分解後の蛍光（励起波長３５５ｎｍ、蛍光波長４６０ｎｍ）をモニタリングすることによって測定することができる。酵素活性の比較は、本明細書でさらに詳細に説明するように、酵素の定義された調製物、設定条件下での定義されたアッセイ、および１またはそれを超える定義された基質を使用して行われる。一般に、ライセートを比較する場合、細胞の数およびアッセイされるタンパク質の量を測定するとともに、同一の発現系および同一の宿主細胞を使用して、宿主細胞によって産生されてライセート中に存在する酵素の量の変動を最小限に抑える。

本明細書で使用される場合、「酸性ｐＨに対する改善された耐性」という用語は、本発明による組換えＧＬＡが、参照ＧＬＡまたは別の酵素と比較して安定性が増加する（酸性ｐＨに曝露した後に、特定の期間（１時間、最大２４時間）にわたって約ｐＨ４．８でより高い活性が保持される）ことを意味する。

本明細書で使用される場合、「改善された細胞取り込み」という用語は、本明細書で提供される組換えＧＬＡが、参照ＧＬＡ（野生型ＧＬＡを含む）または別の酵素と比較して、細胞内へのエンドサイトーシスの増加を示すことを意味する。いくつかの実施形態では、細胞は、培養されたファブリー患者の線維芽細胞である（参照ＧＬＡまたは別の酵素と比較して、培養細胞とインキュベートした後、特定の期間にわたってより高い細胞内活性が保持される）。いくつかのさらなる実施形態では、本明細書で提供される組換えＧＬＡは、参照ＧＬＡ（野生型ＧＬＡを含む）または別の酵素と比較して、特定の期間にわたって培養細胞でより大きな細胞内活性が保持されることを示す。いくつかのさらなる実施形態では、その期間は約４時間であるが、いくつかの他の実施形態では、その期間は４時間未満（例えば、１、２、または３時間）であり、いくつかの代替の実施形態では、その期間は４時間超（例えば、５、６、７、８時間またはそれを超える時間）である。

本明細書で使用される「生理学的ｐＨ」は、対象（例えば、ヒト）の血液に一般的に見られるｐＨ範囲を意味する。

（例えば、塩基性ｐＨ条件に対する改善された安定性または塩基性ｐＨに対する増大した耐性に関して使用される）「塩基性ｐＨ」という用語は、約７から１１のｐＨ範囲を意味する。

（例えば、酸性ｐＨ条件に対する改善された安定性または酸性ｐＨに対する増大した耐性に関して使用される）「酸性ｐＨ」という用語は、約１．５から４．５のｐＨ範囲を意味する。

本明細書で使用される場合、「変換」は、基質から対応する産生物への酵素的変換（または生体内変換）を指す。「変換率」は、特定の条件下で一定期間内に産生物に変換される基質の割合を指す。したがって、ＧＬＡポリペプチドの「酵素活性」または「活性」は、特定の期間における基質から生成物への「変換率」として表すことができる。

本明細書で使用される場合、「ハイブリダイゼーションストリンジェンシー」は、核酸のハイブリダイゼーションにおける洗浄条件などのハイブリダイゼーション条件に関する。一般に、ハイブリダイゼーション反応は、より低いストリンジェンシーの条件下で行われ、続いて様々な、ただしより高いストリンジェンシーの洗浄が行われる。「中程度のストリンジェントなハイブリダイゼーション」という用語は、標的ＤＮＡが、標的ＤＮＡに対して約６０％の同一性、好ましくは約７５％の同一性、約８５％の同一性を有し、標的ポリヌクレオチドに対して約９０％を超える同一性を有する相補的核酸に結合することを可能にする条件を指す。例示的な中程度のストリンジェントな条件は、４２℃での、５０％ホルムアミド、５倍デンハルト溶液、５倍ＳＳＰＥ、０．２％ＳＤＳ中でのハイブリダイゼーションと、これに続く４２℃での、０．２倍ＳＳＰＥ、０．２％ＳＤＳ中での洗浄に相当する条件である。「高ストリンジェンシーハイブリダイゼーション」は、一般に、定義されたポリヌクレオチド配列についての溶液条件下で測定される熱融解温度Ｔ_ｍから約１０℃またはそれ未満の条件を指す。いくつかの実施形態では、高ストリンジェンシー条件は、６５℃の０．０１８ＭＮａＣｌ中で安定なハイブリッドを形成する核酸配列のみのハイブリダイゼーションを可能にする条件を指す（換言すれば、ハイブリッドが６５℃の０．０１８ＭＮａＣｌ中で安定でない場合、本明細書で企図されるように、高ストリンジェンシー条件下で安定ではない）。高ストリンジェンシー条件は、例えば、４２℃での、５０％ホルムアミド、５倍デンハルト溶液、５倍ＳＳＰＥ、０．２％ＳＤＳに相当する条件でのハイブリダイゼーションと、これに続く６５℃での、０．１倍ＳＳＰＥおよび０．１％ＳＤＳ中での洗浄によって提供され得る。別の高ストリンジェンシー条件は、６５℃での、０．１％（ｗ：ｖ）ＳＤＳを含有する５倍ＳＳＣ中でのハイブリダイズおよび６５℃の０．１％ＳＤＳを含有する０．１倍ＳＳＣ中での洗浄に相当する条件でのハイブリダイズである。他の高ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件ならびに中程度のストリンジェントな条件は、先に引用した参考文献に記載されている。

本明細書で使用される場合、「コドン最適化された」とは、コードされたタンパク質が目的の生物および／または細胞においてより効率的に発現されるような、タンパク質をコードするポリヌクレオチドのコドンの変化を指す。遺伝暗号は、ほとんどのアミノ酸が「同義」または「同義語」コドンと呼ばれるいくつかのコドンによって表されるという点で縮重しているが、特定の生物によるコドン使用頻度は非ランダムであり、特定のコドントリプレットに偏っていることがよく知られている。このコドン使用頻度の偏りは、所与の遺伝子、共通の機能または祖先起源の遺伝子、低コピー数タンパク質に対する高発現タンパク質、および生物のゲノムの凝集タンパク質コード領域に関してより高くなり得る。いくつかの実施形態では、ＧＬＡ酵素をコードするポリヌクレオチドは、ＧＣ含有量、３’スプライス部位、転写終結シグナル、ＲＮＡ安定性に影響を及ぼし得るモチーフ、および核酸二次構造、ならびに任意の他の目的の因子を考慮して発現のために選択された宿主生物および／または細胞型からの最適な産生のためにコドン最適化され得る。

本明細書で使用される場合、「制御配列」は、本出願のポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチドの発現に必要または有利なすべての成分を含むことを指す。各制御配列は、ポリペプチドをコードする核酸配列に対して天然であっても外来であってもよい。そのような制御配列としては、リーダー、ポリアデニル化配列、プロペプチド配列、プロモーター配列、シグナルペプチド配列、開始配列および転写ターミネーターが挙げられるが、これらに限定されない。少なくとも、制御配列は、プロモーター、ならびに転写および翻訳停止シグナルを含む。制御配列には、ポリペプチドをコードする核酸配列のコード領域との制御配列のライゲーションを容易にする特定の制限部位を導入する目的でリンカーが提供され得る。

本明細書で使用される場合、「作動可能に連結された」とは、制御配列が目的のポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチドの発現を指示または調節するように、制御配列が目的のポリヌクレオチドに対して適切な位置に配置される（すなわち、機能的関係にある）構成を指す。

本明細書で使用される場合、「プロモーター配列」は、コード配列などの目的のポリヌクレオチドの発現のために宿主細胞によって認識される核酸配列を指す。プロモーター配列は、目的のポリヌクレオチドの発現を媒介する転写制御配列を含む。プロモーターは、選択された宿主細胞において転写活性を示す、変異プロモーター、切断プロモーターおよびハイブリッドプロモーターなどの、任意の核酸配列であり得、宿主細胞と相同または異種のいずれかである細胞外または細胞内ポリペプチドをコードする遺伝子から得ることができる。

本明細書で使用される場合、「適切な反応条件」は、本出願のＧＬＡポリペプチドが基質を所望の産生物化合物に変換することができる酵素変換反応溶液の条件（例えば、酵素負荷、温度、ｐＨ、緩衝剤、共溶媒などの範囲）を指し、例示的な「適切な反応条件」は本出願に提示され、実施例によって例示される。「酵素負荷」は、反応開始時の反応混合物中の成分の濃度または量を指す。酵素変換反応プロセスの文脈における「基質」は、ＧＬＡポリペプチドが作用する化合物または分子を指す。酵素変換プロセスの文脈における「産生物」は、基質に対するＧＬＡポリペプチドの作用から生じる化合物または分子を指す。

本明細書で使用される場合、「培養する」という用語は、（例えば、液体、ゲルまたは固体媒体を使用する）任意の適切な条件下で微生物、哺乳動物、または他の適切な細胞の集団を増殖させることを指す。

組換えポリペプチドは、当技術分野で公知の任意の適切な方法を用いて産生することができる。目的の野生型ポリペプチドをコードする遺伝子は、プラスミドなどのベクターにクローニングされ、大腸菌、出芽酵母または哺乳動物細胞株（例えば、ＨＥＫまたはＣＨＯ細胞）などの所望の宿主で発現され得る。組換えポリペプチドの変異体は、当技術分野で公知の様々な方法によって生成することができる。実際、当業者に周知の多種多様な異なる突然変異誘発技術が存在する。さらに、突然変異誘発キットは、多くの商業的分子生物学供給業者からも入手可能である。定義されたアミノ酸での特異的置換（部位特異的）、遺伝子の局所領域での特異的もしくはランダム突然変異（部位特異的）、または遺伝子全体にわたるランダム突然変異誘発（例えば、飽和突然変異誘発）を行うための方法が利用可能である。限定するものではないが、ＰＣＲ、カセット突然変異誘発、遺伝子合成、エラープローンＰＣＲ、シャッフリング、および化学的飽和突然変異誘発を使用する一本鎖ＤＮＡまたは二本鎖ＤＮＡの部位特異的突然変異誘発、または当技術分野で公知の任意の他の適切な方法などの、酵素変異体を生成するための多くの適切な方法が当業者に公知である。ＤＮＡおよびタンパク質の操作に使用される方法の非限定的な例は、以下の特許、すなわち、米国特許第６，１１７，６７９号、米国特許第６，４２０，１７５号、米国特許第６，３７６，２４６号、米国特許第６，５８６，１８２号、米国特許第７，７４７，３９１号、米国特許第７，７４７，３９３号、米国特許第７，７８３，４２８号、および米国特許第８，３８３，３４６号に示されている。変異体を生成した後、それらを任意の所望の特性（例えば、高い活性もしくは活性の増加、または低い活性もしくは活性の低下、熱活性の増加、熱安定性の増加、および／または酸性ｐＨ安定性など）についてスクリーニングすることができる。いくつかの実施形態では、「組換えＧＬＡポリペプチド」（本明細書では「操作されたＧＬＡポリペプチド」、「変異体ＧＬＡ酵素」、および「ＧＬＡ変異体」とも呼ばれる）が使用される。

本明細書で使用される場合、「ベクター」は、ＤＮＡ配列を細胞に導入するためのＤＮＡ構築物である。いくつかの実施形態では、ベクターは、ＤＮＡ配列にコードされるポリペプチドの、適切な宿主において発現を行うことができる適切な制御配列に作動可能に連結された発現ベクターである。いくつかの実施形態では、「発現ベクター」は、宿主細胞における発現を駆動するためにＤＮＡ配列（例えば導入遺伝子）に作動可能に連結されたプロモーター配列を有し、いくつかの実施形態では、転写ターミネーター配列も含む。

本明細書で使用される場合、「遺伝子治療ベクター」という用語は、ポリヌクレオチド配列を細胞へ送達するのに適したビヒクルまたは担体を指す。いくつかの実施形態では、ベクターは、限定するものではないが、アデノウイルス（ＡＶ）、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、レンチウイルス（ＬＶ）、およびリポソームなどの非ウイルスベクターなどの、細胞または組織に送達するための遺伝子（例えば、治療遺伝子）またはポリヌクレオチド配列を含む。本発明が任意の特定の遺伝子治療ベクターに限定されることは意図されておらず、所与の設定に適した任意のビヒクルが用いられる。遺伝子治療ベクターは、特定の種または宿主に遺伝子を送達するように設計されている場合もあれば、より一般的な適用性が見出される場合もある。

本明細書で使用される場合、「発現」という用語は、限定するものではないが、転写、転写後修飾、翻訳、および翻訳後修飾などの、ポリペプチドの産生に関与する任意の工程を含む。いくつかの実施形態では、この用語はまた、細胞からのポリペプチドの分泌も包含する。

本明細書で使用される場合、「産生する」という用語は、細胞によるタンパク質および／または他の化合物の産生を指す。この用語は、限定するものではないが、転写、転写後修飾、翻訳および翻訳後修飾などのポリペプチドの産生に関与する任意の工程を包含することが意図される。いくつかの実施形態では、この用語はまた、細胞からのポリペプチドの分泌も包含する。

本明細書で使用される場合、アミノ酸またはヌクレオチド配列（例えば、プロモーター配列、シグナルペプチド、ターミネーター配列など）は、それが作動可能に連結されている別の配列に対して、２つの配列が自然界で結合していない場合、「組換え体」または「異種」である。

本明細書で使用される場合、「宿主細胞」および「宿主株」という用語は、本明細書で提供されるＤＮＡ（例えば、ＧＬＡ変異体をコードするポリヌクレオチド）を含む発現ベクターに適した宿主を指す。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、当技術分野で公知の組換えＤＮＡ技術を使用して構築されたベクターで形質転換またはトランスフェクトされた原核細胞または真核細胞である。

「類似体」という用語は、参照ポリペプチドと７０％を超える配列同一性を有し、ただし１００％未満の配列同一性を有する（例えば、７５％、７８％、８０％、８３％、８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％を超える配列同一性を有する）ポリペプチドを意味する。いくつかの実施形態では、「類似体」は、限定するものではないが、ホモアルギニン、オルニチンおよびノルバリン、ならびに天然アミノ酸などの、１またはそれを超える非天然アミノ酸残基を含むポリペプチドを意味する。いくつかの実施形態では、類似体はまた、１またはそれを超えるＤ－アミノ酸残基および２またはそれを超えるアミノ酸残基間の非ペプチド結合を含む。

本明細書で使用される場合、「治療的」という用語は、病理の徴候または症状を示す対象に投与される有益なまたは望ましい医学的効果を有する化合物を指す。

本明細書で使用される場合、「医薬組成物」という用語は、本発明に包含される操作されたＧＬＡポリペプチドの薬学的有効量および許容され得る担体を含む、哺乳動物対象（例えば、ヒト）での医薬使用に適した組成物を指す。

本明細書で使用される場合、「遺伝子療法」という用語は、疾患の予防の処置のために細胞または組織を改変するための遺伝子、ポリデオキシリボヌクレオチド、またはポリヌクレオチド配列を遺伝子療法ベクターを用いてその細胞または組織へ送達することを指す。遺伝子治療は、疾患を引き起こす変異遺伝子をその遺伝子の健康なコピーで置き換えること、または不適切に機能している変異遺伝子を不活性化または「ノックアウト」することを含み得る。いくつかの実施形態では、遺伝子療法は、患者の疾患の処置に使用される。

本明細書で使用される場合、「ｍＲＮＡ療法」という用語は、疾患を処置または予防するために、細胞または組織を改変するためのｍＲＮＡポリリボヌクレオチド配列をその細胞または組織へ送達することを指す。いくつかの実施形態では、細胞または組織に送達するためのｍＲＮＡポリヌクレオチド配列は、例えば、限定するものではないが、リポソームに製剤化される。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡ療法は、患者における疾患の処置に使用される。

本明細書で使用される場合、「細胞療法」という用語は、疾患を処置または予防するために、欠損遺伝子を提供するための外因的に改変された生細胞を患者に送達することを指す。このとき、改変された細胞は体内に再導入される。

本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、所望の結果をもたらすのに十分な量を意味する。当業者は、日常的な実験を用いて有効量を決定することができる。

「単離された」および「精製された」という用語は、本明細書では、自然界で結合している少なくとも１つの他の成分から取り出された分子（例えば、単離された核酸、ポリペプチドなど）または他の成分を指すために使用される。「精製された」という用語は、絶対的な純度を必要とするものではなく、むしろ相対的な定義として意図されている。

本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、ヒト、非ヒト霊長類、家畜、コンパニオンアニマル、および実験動物（例えば、げっ歯類およびウサギ類）などの哺乳動物を包含する。この用語は、雄だけでなく雌も包含することが意図される。

本明細書で使用される場合、「患者」という用語は、疾患について評価されている、疾患について処置されている、または疾患を経験している任意の対象を意味する。

「乳児」という用語は、生後１ヶ月から約１歳までの期間の子供を指す。本明細書で使用される場合、「新生児」という用語は、生後２８日までの期間の子供を指す。「未熟児」という用語は、妊娠の第２０週が完了した後であるが満期前に生まれた乳児を指し、一般に出生時の体重は約５００から約２４９９グラムである。「超低出生体重児」は、出生時に１５００ｇ未満の体重の乳児である。

本明細書で使用される場合、「小児」という用語は、処置または研究手順に対する同意のための法定年齢に達していない者を指す。いくつかの実施形態では、この用語は、出生時と青年期の間の者を指す。

本明細書で使用される場合、「成人」という用語は、関連する管轄権の法定年齢に達した者（例えば、米国では１８歳）を指す。いくつかの実施形態では、この用語は、任意の完全に成長した成熟生物を指す。いくつかの実施形態では、「若年成人」という用語は、１８歳未満であるが性的成熟に達した者を指す。

本明細書で使用される場合、「組成物」および「製剤」は、任意の適切な使用（例えば、医薬組成物、食餌／栄養補助食品、飼料など）を意図した、少なくとも１つの本発明の操作されたＧＬＡを含む製品を包含する。

本明細書で使用される場合、組成物を「投与」および「投与する」という用語は、本発明の組成物を対象に（例えば、ファブリー病の影響を受けている人に）与えることを意味する。

本明細書で使用される場合、医薬組成物に関して使用される場合の「担体」という用語は、標準的な医薬担体、緩衝剤、および賦形剤、例えば、安定剤、保存剤、およびアジュバントのいずれかを意味する。

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容され得る」という用語は、望ましくない生物学的効果を引き起こすことなく、またはそれが含まれる成分のいずれとも有害な形で相互作用することなく対象に投与することができ、所望の生物学的活性を有する材料を意味する。

本明細書で使用される場合、「賦形剤」という用語は、活性医薬成分（ＡＰＩ、例えば、本発明の操作されたＧＬＡポリペプチド）以外の任意の薬学的に許容され得る添加剤、担体、希釈剤、アジュバント、または他の成分を指す。賦形剤は、典型的には、製剤および／または投与目的のために含まれる。

本明細書で使用される場合、疾患／症状の症候に関して使用される場合の「治療有効量」という用語は、疾患／症状の１またはそれを超える症候を改善、減弱、もしくは排除するか、または症候の発症を予防もしくは遅延する化合物（例えば、操作されたＧＬＡポリペプチド）の量および／または濃度を指す。

本明細書で使用される場合、疾患／状態に関して使用される場合の「治療有効量」という用語は、疾患／状態を改善、減弱、または排除する組成物（例えば、操作されたＧＬＡポリペプチド）の量および／または濃度を指す。いくつかの実施形態では、この用語は、研究者、医師、獣医、または他の臨床医によって求められる組織、系、または動物の対象による生物学的（例えば、医学的）応答を誘発する組成物の量に関して使用される。

「処置すること」、「処置する」および「処置」という用語は、予防的（例えば、予防的）処置ならびに緩和的処置を包含することが意図される。
操作されたＧＬＡの発現および活性

合成マウスＩＧシグナルペプチドを使用して、酵母コドン最適化成熟ヒトＧＬＡの分泌発現を達成した。クローンを、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞においてｐＣＤＮＡ３．１（＋）ベクターから発現させた。このアプローチによって、蛍光発生基質４－メチルウンベリフェリルα－Ｄ－ガラクトピラノシド（４－ＭｕＧａｌ）に対して測定可能な活性を有する上清を得た。

いくつかの実施形態では、配列番号８と比較して同様の安定性および改善された細胞取り込みを有する変異多様性を同定するために、配列番号８に由来するＧＬＡ変異体を生成するコンビナトリアルライブラリーを構築した。同量の上清を、未チャレンジの条件（インキュベーションなし、ｐＨ４．６）で、または低ｐＨ（３．９～４．２）、中性ｐＨ（７．０～７．６）もしくはヒト血清（生理学的ｐＨ７．１～８．２）環境で１時間インキュベートした後にスクリーニングした。ＧＬＡ発現またはＧＬＡ比活性の増加による活性を有するＧＬＡ変異体を、親ＧＬＡに対するそれらの改善倍率に基づいて同定した。チャレンジした条件下で観察された改善倍率を未チャレンジの条件下で観察された改善倍率で割ることによって、安定性が増加したＧＬＡ変異体を同定した。このアプローチは、発現の増加に基づいて変異体を選択するバイアスを低減するが、極端なｐＨでの比活性の変化はない。複合活性スコア（３つすべての条件に対する改善倍率の積）および安定性（安定性スコアの積）を使用して、後にＧＬＡライブラリーに含めるために、改善された変異体における変異をランク付けした。さらなる実施形態では、実施例に記載のさらなる方法および配列を使用した。
操作されたＧＬＡ

いくつかの実施形態では、改善された特性を示す操作されたＧＬＡは、配列番号２、８、４８、１５８、３７２、３７４、７０４および／または１０２２と、少なくとも約８５％、少なくとも約８８％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％のアミノ酸配列同一性を有し、配列番号２、８、４８、１５８、３７２、３７４、７０４および／または１０２２と比較した場合に、少なくとも１またはそれを超えるアミノ酸の位置においてアミノ酸残基の差異を有する。（例えば、配列番号２、８、４８、１５８、３７２、３７４、７０４および／または１０２２と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１４、１５、２０個もしくはそれを超えるアミノ酸の位置において、または配列番号２、８、４８、１５８、３７２、３７４、７０４および／もしくは１０２２と少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくはそれを超えるアミノ酸配列同一性を有する配列）。いくつかの実施形態では、配列番号５と比較した残基差異は、１またはそれを超える位置において、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれを超える保存的アミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、操作されたＧＬＡポリペプチドは、表２－１、５－１、６－１、７－１、８－１、９－１、１１－１、１２－１および／または１３－１に記載されるポリペプチドである。いくつかの実施形態では、操作されたＧＬＡポリペプチドは、配列番号２、８、４８、１５８、３７２、３７４、７０４および／または１０２２を含む。

本発明はまた、配列番号５８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含む組換えアルファガラクトシダーゼＡを提供し、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、７、７／４８／６８、７／４８／６８／１２０／２８２／２９９、７／４８／１３０／２８２、７／４８／１８０、７／６８／１３０／２８２／３６５、７／６８／１８０、７／８８／１２０／３０５／３６５、７／１２０、７／１３０、７／２８２、７／３０５、７／３０５／３６５、７／３６５、３９、４７、４７／８７／９５／９６／１５８／１６２、４７／９５、４７／２７３、４７／３４３、４８、４８／６８、４８／１８０／２８２、４８／２８２、４８／２８２／３０５、６７／１８０、６８、６８／２９９／３００、７１、８７／９１／９５／９６／１５８／１６２、８７／９１／９５／９６／２０６／３４３、８７／９６／１５５／２７３／３４３、８８、９１／９５、９１／９５／９６、９２、９３、９６、９６／２７３、９６／３１２／３４３、１２０、１２０／２９９／３０５、１５１、１５８、１５８／１６２／２７３、１６２、１６２／２７３、１６２／３４３、１６６、１７８、１８０、１８１、２０６、２１７、２７１、２７３、２７３／３４３、２８２、２８２／３６５、２９３／３９１、２９９／３００、２９９／３００／３０５／３６５、３００、３０１、３０５、３０５／３６５、３１４、３３３、３３６、３３７、３４３、３４５、３６３、３６５、３７０、３８９、３９３、３９４、３９６／３９８、３９７、および３９８から選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号５８を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号５８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、７Ｌ、７Ｌ／４８Ｄ／６８Ｅ、７Ｌ／４８Ｄ／６８Ｅ／１２０Ｈ／２８２Ｎ／２９９Ｒ、７Ｌ／４８Ｄ／１３０Ｅ／２８２Ｎ、７Ｌ／４８Ｄ／１８０Ｇ、７Ｌ／６８Ｅ／１３０Ｅ／２８２Ｎ／３６５Ｖ、７Ｌ／６８Ｅ／１８０Ｇ、７Ｌ／８８Ａ／１２０Ｈ／３０５Ｇ／３６５Ｖ、７Ｌ／１２０Ｈ、７Ｌ／１３０Ｅ、７Ｌ／２８２Ｎ、７Ｌ／３０５Ｇ、７Ｌ／３０５Ｇ／３６５Ｖ、７Ｌ／３６５Ｖ、３９Ｖ、４７Ｄ、４７Ｄ／８７Ｋ／９５Ｅ／９６Ｌ／１５８Ｒ／１６２Ｈ、４７Ｄ／９５Ｅ、４７Ｄ／２７３Ｐ、４７Ｄ／３４３Ｇ、４７Ｖ、４８Ｄ、４８Ｄ／６８Ｅ、４８Ｄ／１８０Ｇ／２８２Ｎ、４８Ｄ／２８２Ｎ、４８Ｄ／２８２Ｎ／３０５Ｇ、６７Ｔ／１８０Ｇ、６８Ｅ、６８Ｅ／２９９Ｒ／３００Ｉ、７１Ｐ、８７Ｋ／９１Ｑ／９５Ｅ／９６Ｌ／１５８Ａ／１６２Ｋ、８７Ｋ／９１Ｑ／９５Ｅ／９６Ｌ／２０６Ｓ／３４３Ｇ、８７Ｋ／９６Ｉ／１５５Ｎ／２７３Ｐ／３４３Ｇ、８８Ａ、９１Ｑ／９５Ｅ、９１Ｑ／９５Ｅ／９６Ｌ、９２Ｆ、９２Ｔ、９３Ｉ、９６Ｌ、９６Ｌ／２７３Ｐ、９６Ｌ／３１２Ｑ／３４３Ｇ、１２０Ｈ、１２０Ｈ／２９９Ｒ／３０５Ｇ、１５１Ｌ、１５８Ａ、１５８Ａ／１６２Ｋ／２７３Ｇ、１５８Ｒ、１６２Ｈ／３４３Ｄ、１６２Ｋ、１６２Ｋ／２７３Ｐ、１６２Ｓ、１６６Ｋ、１７８Ｇ、１７８Ｓ、１８０Ｇ、１８０Ｌ、１８０Ｔ、１８０Ｖ、１８１Ａ、２０６Ｋ、２０６Ｓ、２１７Ｋ、２７１Ｒ、２７３Ｐ、２７３Ｐ／３４３Ｇ、２８２Ｎ、２８２Ｎ／３６５Ｖ、２９３Ｐ／３９１Ａ、２９９Ｒ／３００Ｉ、２９９Ｒ／３００Ｉ／３０５Ｇ／３６５Ｖ、３００Ｉ、３０１Ｍ、３０５Ｇ、３０５Ｇ／３６５Ｖ、３１４Ａ、３３３Ｆ、３３３Ｇ、３３６Ｖ、３３７Ｒ、３４３Ｄ、３４３Ｇ、３４５Ａ、３４５Ｑ、３６３Ｑ、３６５Ａ、３６５Ｑ、３６５Ｖ、３７０Ｇ、３８９Ｋ、３９３Ｖ、３９４Ｋ、３９６Ｇ／３９８Ｔ、３９７Ａ、３９８Ａ、３９８Ｐ、３９８Ｓ、および３９８Ｖから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号５８を参照してナンバリングされる。

いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号５８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、Ｒ７Ｌ、Ｒ７Ｌ／Ｅ４８Ｄ／Ｑ６８Ｅ、Ｒ７Ｌ／Ｅ４８Ｄ／Ｑ６８Ｅ／Ｙ１２０Ｈ／Ｄ２８２Ｎ／Ｑ２９９Ｒ、Ｒ７Ｌ／Ｅ４８Ｄ／Ｄ１３０Ｅ／Ｄ２８２Ｎ、Ｒ７Ｌ／Ｅ４８Ｄ／Ｆ１８０Ｇ、Ｒ７Ｌ／Ｑ６８Ｅ／Ｄ１３０Ｅ／Ｄ２８２Ｎ／Ｆ３６５Ｖ、Ｒ７Ｌ／Ｑ６８Ｅ／Ｆ１８０Ｇ、Ｒ７Ｌ／Ｑ８８Ａ／Ｙ１２０Ｈ／Ｎ３０５Ｇ／Ｆ３６５Ｖ、Ｒ７Ｌ／Ｙ１２０Ｈ、Ｒ７Ｌ／Ｄ１３０Ｅ、Ｒ７Ｌ／Ｄ２８２Ｎ、Ｒ７Ｌ／Ｎ３０５Ｇ、Ｒ７Ｌ／Ｎ３０５Ｇ／Ｆ３６５Ｖ、Ｒ７Ｌ／Ｆ３６５Ｖ、Ｅ３９Ｖ、Ｔ４７Ｄ、Ｔ４７Ｄ／Ｒ８７Ｋ／Ｓ９５Ｅ／Ｋ９６Ｌ／Ｌ１５８Ｒ／Ｒ１６２Ｈ、Ｔ４７Ｄ／Ｓ９５Ｅ、Ｔ４７Ｄ／Ｓ２７３Ｐ、Ｔ４７Ｄ／Ｋ３４３Ｇ、Ｔ４７Ｖ、Ｅ４８Ｄ、Ｅ４８Ｄ／Ｑ６８Ｅ、Ｅ４８Ｄ／Ｆ１８０Ｇ／Ｄ２８２Ｎ、Ｅ４８Ｄ／Ｄ２８２Ｎ、Ｅ４８Ｄ／Ｄ２８２Ｎ／Ｎ３０５Ｇ、Ｐ６７Ｔ／Ｆ１８０Ｇ、Ｑ６８Ｅ、Ｑ６８Ｅ／Ｑ２９９Ｒ／Ｌ３００Ｉ、Ｓ７１Ｐ、Ｒ８７Ｋ／Ｎ９１Ｑ／Ｓ９５Ｅ／Ｋ９６Ｌ／Ｌ１５８Ａ／Ｒ１６２Ｋ、Ｒ８７Ｋ／Ｎ９１Ｑ／Ｓ９５Ｅ／Ｋ９６Ｌ／Ａ２０６Ｓ／Ｋ３４３Ｇ、Ｒ８７Ｋ／Ｋ９６Ｉ／Ｈ１５５Ｎ／Ｓ２７３Ｐ／Ｋ３４３Ｇ、Ｑ８８Ａ、Ｎ９１Ｑ／Ｓ９５Ｅ、Ｎ９１Ｑ／Ｓ９５Ｅ／Ｋ９６Ｌ、Ｈ９２Ｆ、Ｈ９２Ｔ、Ｖ９３Ｉ、Ｋ９６Ｌ、Ｋ９６Ｌ／Ｓ２７３Ｐ、Ｋ９６Ｌ／Ｐ３１２Ｑ／Ｋ３４３Ｇ、Ｙ１２０Ｈ、Ｙ１２０Ｈ／Ｑ２９９Ｒ／Ｎ３０５Ｇ、Ｄ１５１Ｌ、Ｌ１５８Ａ、Ｌ１５８Ａ／Ｒ１６２Ｋ／Ｓ２７３Ｇ、Ｌ１５８Ｒ、Ｒ１６２Ｈ／Ｋ３４３Ｄ、Ｒ１６２Ｋ、Ｒ１６２Ｋ／Ｓ２７３Ｐ、Ｒ１６２Ｓ、Ｐ１６６Ｋ、Ｗ１７８Ｇ、Ｗ１７８Ｓ、Ｆ１８０Ｇ、Ｆ１８０Ｌ、Ｆ１８０Ｔ、Ｆ１８０Ｖ、Ｑ１８１Ａ、Ａ２０６Ｋ、Ａ２０６Ｓ、Ｒ２１７Ｋ、Ａ２７１Ｒ、Ｓ２７３Ｐ、Ｓ２７３Ｐ／Ｋ３４３Ｇ、Ｄ２８２Ｎ、Ｄ２８２Ｎ／Ｆ３６５Ｖ、Ｌ２９３Ｐ／Ｑ３９１Ａ、Ｑ２９９Ｒ／Ｌ３００Ｉ、Ｑ２９９Ｒ／Ｌ３００Ｉ／Ｎ３０５Ｇ／Ｆ３６５Ｖ、Ｌ３００Ｉ、Ｒ３０１Ｍ、Ｎ３０５Ｇ、Ｎ３０５Ｇ／Ｆ３６５Ｖ、Ｓ３１４Ａ、Ｓ３３３Ｆ、Ｓ３３３Ｇ、Ｉ３３６Ｖ、Ｐ３３７Ｒ、Ｋ３４３Ｄ、Ｋ３４３Ｇ、Ｖ３４５Ａ、Ｖ３４５Ｑ、Ｌ３６３Ｑ、Ｆ３６５Ａ、Ｆ３６５Ｑ、Ｆ３６５Ｖ、Ｓ３７０Ｇ、Ｔ３８９Ｋ、Ｓ３９３Ｖ、Ｌ３９４Ｋ、Ｄ３９６Ｇ／Ｌ３９８Ｔ、Ｌ３９７Ａ、Ｌ３９８Ａ、Ｌ３９８Ｐ、Ｌ３９８Ｓ、およびＬ３９８Ｖから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号５８を参照してナンバリングされる。

本発明はまた、配列番号１５８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含む組換えアルファガラクトシダーゼＡを提供し、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、２４／２０２、３９／４７、３９／４７／２１７、３９／１５１、３９／２８２／３３７／３９８、３９／３３７／３４３／３９８、３９／３９３／３９８、４７／１３０、４７／１５１、４７／３４３／３４５／３９３、４８、４８／６８、４８／６８／２１７／３３３／３９１／３９３、４８／６８／３３３、４８／２１７、４８／３３３、４８／３４５／３９３、４８／３９３、５９／１４３、６８、６８／３４５、１３０、１３０／１５８、１３０／１５８／３９３、１３０／３４５／３９３、１４３／２７１、１４３／３３３、１４３／３８７、１５１、１５１／１５８／２１７／３４３／３４５／３９３、１５１／２０６／２８２／３３７／３４３／３４５／３９８、１５１／２８２／３９３、１５１／３４５／３９３／３９８、１５１／３９３、１５８、１５８／３９３、２０２、２０６、２０６／２１７、２１７、２１７／３３３、２１７／３３７／３４５／３９８、２７１、２８２／３９３、３３３、３３３／３４５、３３７／３４３／３４５／３９８、３４３、３４３／３４５／３９３／３９８、３９３、および３９３／３９８から選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号１５８を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号１５８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、２４Ｓ／２０２Ｎ、３９Ｖ／４７Ｄ、３９Ｖ／４７Ｖ／２１７Ｋ、３９Ｖ／１５１Ｌ、３９Ｖ／２８２Ｎ／３３７Ｒ／３９８Ａ、３９Ｖ／３３７Ｒ／３４３Ｇ／３９８Ａ、３９Ｖ／３９３Ｖ／３９８Ａ、４７Ｖ／１３０Ｅ、４７Ｖ／１５１Ｌ、４７Ｖ／３４３Ｄ／３４５Ｑ／３９３Ｖ、４８Ｄ、４８Ｄ／６８Ｅ、４８Ｄ／６８Ｅ／２１７Ｋ／３３３Ｆ／３９１Ａ／３９３Ｖ、４８Ｄ／６８Ｅ／３３３Ｆ、４８Ｄ／２１７Ｋ、４８Ｄ／３３３Ｆ、４８Ｄ／３３３Ｇ、４８Ｄ／３４５Ｑ／３９３Ｖ、４８Ｄ／３９３Ｖ、５９Ａ／１４３Ｓ、６８Ｅ、６８Ｅ／３４５Ｑ、１３０Ｅ、１３０Ｅ／１５８Ｒ、１３０Ｅ／１５８Ｒ／３９３Ｖ、１３０Ｅ／３４５Ｑ／３９３Ｖ、１４３Ｓ／２７１Ｎ、１４３Ｓ／３３３Ｎ、１４３Ｓ／３８７Ｎ、１５１Ｌ、１５１Ｌ／１５８Ｒ／２１７Ｋ／３４３Ｇ／３４５Ｑ／３９３Ｖ、１５１Ｌ／２０６Ｓ／２８２Ｎ／３３７Ｒ／３４３Ｄ／３４５Ｑ／３９８Ａ、１５１Ｌ／２８２Ｎ／３９３Ｖ、１５１Ｌ／３４５Ｑ／３９３Ｖ／３９８Ａ、１５１Ｌ／３９３Ｖ、１５８Ｒ、１５８Ｒ／３９３Ｖ、２０２Ｎ、２０６Ｓ、２０６Ｓ／２１７Ｋ、２１７Ｋ、２１７Ｋ／３３３Ｆ、２１７Ｋ／３３３Ｇ、２１７Ｋ／３３７Ｒ／３４５Ｑ／３９８Ａ、２７１Ｎ、２８２Ｎ／３９３Ｖ、３３３Ｆ／３４５Ｑ、３３３Ｇ、３３３Ｎ、３３７Ｒ／３４３Ｇ／３４５Ｑ／３９８Ａ、３４３Ｄ、３４３Ｄ／３４５Ｑ／３９３Ｖ／３９８Ａ、３９３Ｖ、および３９３Ｖ／３９８Ａから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号１５８を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号１５８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、Ｄ２４Ｓ／Ｄ２０２Ｎ、Ｅ３９Ｖ／Ｔ４７Ｄ、Ｅ３９Ｖ／Ｔ４７Ｖ／Ｒ２１７Ｋ、Ｅ３９Ｖ／Ｄ１５１Ｌ、Ｅ３９Ｖ／Ｄ２８２Ｎ／Ｐ３３７Ｒ／Ｌ３９８Ａ、Ｅ３９Ｖ／Ｐ３３７Ｒ／Ｋ３４３Ｇ／Ｌ３９８Ａ、Ｅ３９Ｖ／Ｓ３９３Ｖ／Ｌ３９８Ａ、Ｔ４７Ｖ／Ｄ１３０Ｅ、Ｔ４７Ｖ／Ｄ１５１Ｌ、Ｔ４７Ｖ／Ｋ３４３Ｄ／Ｖ３４５Ｑ／Ｓ３９３Ｖ、Ｅ４８Ｄ、Ｅ４８Ｄ／Ｑ６８Ｅ、Ｅ４８Ｄ／Ｑ６８Ｅ／Ｒ２１７Ｋ／Ｓ３３３Ｆ／Ｑ３９１Ａ／Ｓ３９３Ｖ、Ｅ４８Ｄ／Ｑ６８Ｅ／Ｓ３３３Ｆ、Ｅ４８Ｄ／Ｒ２１７Ｋ、Ｅ４８Ｄ／Ｓ３３３Ｆ、Ｅ４８Ｄ／Ｓ３３３Ｇ、Ｅ４８Ｄ／Ｖ３４５Ｑ／Ｓ３９３Ｖ、Ｅ４８Ｄ／Ｓ３９３Ｖ、Ｃ５９Ａ／Ｃ１４３Ｓ、Ｑ６８Ｅ、Ｑ６８Ｅ／Ｖ３４５Ｑ、Ｄ１３０Ｅ、Ｄ１３０Ｅ／Ｌ１５８Ｒ、Ｄ１３０Ｅ／Ｌ１５８Ｒ／Ｓ３９３Ｖ、Ｄ１３０Ｅ／Ｖ３４５Ｑ／Ｓ３９３Ｖ、Ｃ１４３Ｓ／Ａ２７１Ｎ、Ｃ１４３Ｓ／Ｓ３３３Ｎ、Ｃ１４３Ｓ／Ｅ３８７Ｎ、Ｄ１５１Ｌ、Ｄ１５１Ｌ／Ｌ１５８Ｒ／Ｒ２１７Ｋ／Ｋ３４３Ｇ／Ｖ３４５Ｑ／Ｓ３９３Ｖ、Ｄ１５１Ｌ／Ａ２０６Ｓ／Ｄ２８２Ｎ／Ｐ３３７Ｒ／Ｋ３４３Ｄ／Ｖ３４５Ｑ／Ｌ３９８Ａ、Ｄ１５１Ｌ／Ｄ２８２Ｎ／Ｓ３９３Ｖ、Ｄ１５１Ｌ／Ｖ３４５Ｑ／Ｓ３９３Ｖ／Ｌ３９８Ａ、Ｄ１５１Ｌ／Ｓ３９３Ｖ、Ｌ１５８Ｒ、Ｌ１５８Ｒ／Ｓ３９３Ｖ、Ｄ２０２Ｎ、Ａ２０６Ｓ、Ａ２０６Ｓ／Ｒ２１７Ｋ、Ｒ２１７Ｋ、Ｒ２１７Ｋ／Ｓ３３３Ｆ、Ｒ２１７Ｋ／Ｓ３３３Ｇ、Ｒ２１７Ｋ／Ｐ３３７Ｒ／Ｖ３４５Ｑ／Ｌ３９８Ａ、Ａ２７１Ｎ、Ｄ２８２Ｎ／Ｓ３９３Ｖ、Ｓ３３３Ｆ／Ｖ３４５Ｑ、Ｓ３３３Ｇ、Ｓ３３３Ｎ、Ｐ３３７Ｒ／Ｋ３４３Ｇ／Ｖ３４５Ｑ／Ｌ３９８Ａ、Ｋ３４３Ｄ、Ｋ３４３Ｄ／Ｖ３４５Ｑ／Ｓ３９３Ｖ／Ｌ３９８Ａ、Ｓ３９３Ｖ、およびＳ３９３Ｖ／Ｌ３９８Ａから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号１５８を参照してナンバリングされる。

いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡポリペプチド配列は、配列番号４～１８６４の偶数番号の配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超える配列同一性を有する。

いくつかの実施形態では、操作されたＧＬＡポリペプチドは、本発明に包含される操作されたＧＬＡポリペプチドの機能的断片を含む。機能的断片は、由来する操作されたＧＬＡポリペプチド（すなわち、親の操作されたＧＬＡ）の活性の少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％を有する。機能的断片は、操作されたＧＬＡの親配列の少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％およびさらには９９％を含む。いくつかの実施形態では、機能的断片は、５個未満、１０個未満、１５個未満、１０個未満、２５個未満、３０個未満、３５個未満、４０個未満、４５個未満および５０個未満のアミノ酸がトランケートされている。
操作されたポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、発現ベクターおよび宿主細胞

本発明は、本明細書に記載の操作されたＧＬＡポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ポリペプチドを発現することができる組換えポリヌクレオチドを作製するために遺伝子発現を制御する１またはそれを超える異種または相同な調節配列に作動可能に連結される。操作されたＧＬＡポリペプチドをコードする異種ポリヌクレオチドを含む発現構築物を適切な宿主細胞に導入して、対応するＧＬＡポリペプチドを発現させることができる。

当業者に明らかなように、タンパク質配列の利用可能性および様々なアミノ酸に対応するコドンの知識は、主題のポリペプチドをコードすることができるすべてのポリヌクレオチドの説明を提供する。同じアミノ酸が代替的または同義的コドンによってコードされる遺伝暗号の縮重は、非常に多数の核酸を作製することを可能にし、それらのすべてが操作されたＧＬＡポリペプチドをコードする。したがって、特定のアミノ酸配列の知識を有する当業者は、タンパク質のアミノ酸配列を変化させない方法で１またはそれを超えるコドンの配列を単純に改変することによって任意の数の異なる核酸を作製することができる。これに関して、本発明は、可能なコドン選択に基づいて組み合わせを選択することによって、本明細書に記載のポリペプチドをコードして作製することができるポリヌクレオチドのありとあらゆる可能なバリエーションを特に企図しており、そのようなすべてのバリエーションは、本明細書に記載の、表２－１、５－１、６－１、７－１、８－１、９－１、１１－１、１２－１および／または１３－１に提供される変異体などの、任意のポリペプチドについて具体的に開示されていると見なされるべきである。

様々な実施形態では、コドンは、好ましくは、タンパク質が産生されている宿主細胞に適合するように選択される。例えば、細菌において使用される好ましいコドンは、細菌における発現のために使用される。その結果、操作されたＧＬＡポリペプチドをコードするコドン最適化ポリヌクレオチドは、全長コード領域のコドン位置の約４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％超に好ましいコドンを含む。いくつかの実施形態では、本発明は、コドンがヒト細胞または組織における発現のために最適化されている組換えポリヌクレオチド配列を提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、配列番号１と少なくとも約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％またはそれを超える配列同一性を有する組換えポリヌクレオチド配列を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、配列番号１と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超える配列同一性を有する組換えポリヌクレオチド配列を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、配列番号７と少なくとも約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％またはそれを超える配列同一性を有する組換えポリヌクレオチド配列を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、配列番号７と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超える配列同一性を有する組換えポリヌクレオチド配列を提供する。いくつかの実施形態では、組換えポリヌクレオチド配列は、配列番号３～１８６３の奇数番号の配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超える配列同一性を有する。

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列またはその機能的断片を含む組換えアルファガラクトシダーゼＡをコードし、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、４４、４４／２１７、４４／２１７／３１６、４４／２１７／３２２、４４／２１７／３２２／３３７、４４／２４７、４４／２４７／３０２、４４／２４７／３０２／３２２、４４／２４７／３２２、４４／２４７／３３７、４４／２４７／３６２、４４／３０２、４４／３３７、４４／３７３、２１７／３２２、２１７／３７３、２４７／３２２、２４７／３６２、３０２／３２２／３６２／３７３、３０２／３３７、３１６、３１６／３３７、３２２、３２２／３３７、３６２／３７３、および３７３から選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号８を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含む組換えアルファガラクトシダーゼＡをコードし、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、４４Ｌ、４４Ｌ／２１７Ｆ、４４Ｌ／２１７Ｆ／３１６Ｌ、４４Ｌ／２１７Ｆ／３２２Ｍ、４４Ｌ／２１７Ｆ／３２２Ｍ／３３７Ａ、４４Ｌ／２４７Ｎ、４４Ｌ／２４７Ｎ／３０２Ｑ、４４Ｌ／２４７Ｎ／３０２Ｑ／３２２Ｍ、４４Ｌ／２４７Ｎ／３２２Ｍ、４４Ｌ／２４７Ｎ／３３７Ａ、４４Ｌ／２４７Ｎ／３６２Ｋ、４４Ｌ／３０２Ｑ、４４Ｌ／３３７Ａ、４４Ｌ／３７３Ｒ、２１７Ｆ／３２２Ｍ、２１７Ｆ／３７３Ｒ、２４７Ｎ／３２２Ｍ、２４７Ｎ／３６２Ｋ、３０２Ｑ／３２２Ｍ／３６２Ｋ／３７３Ｒ、３０２Ｑ／３３７Ａ、３１６Ｌ、３１６Ｌ／３３７Ａ、３２２Ｍ、３２２Ｍ／３３７Ａ、３６２Ｋ／３７３Ｒ、および３７３Ｒから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号８を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含む組換えアルファガラクトシダーゼＡをコードし、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、Ｒ４４Ｌ、Ｒ４４Ｌ／Ｒ２１７Ｆ、Ｒ４４Ｌ／Ｒ２１７Ｆ／Ｄ３１６Ｌ、Ｒ４４Ｌ／Ｒ２１７Ｆ／Ｉ３２２Ｍ、Ｒ４４Ｌ／Ｒ２１７Ｆ／Ｉ３２２Ｍ／Ｐ３３７Ａ、Ｒ４４Ｌ／Ｄ２４７Ｎ、Ｒ４４Ｌ／Ｄ２４７Ｎ／Ｋ３０２Ｑ、Ｒ４４Ｌ／Ｄ２４７Ｎ／Ｋ３０２Ｑ／Ｉ３２２Ｍ、Ｒ４４Ｌ／Ｄ２４７Ｎ／Ｉ３２２Ｍ、Ｒ４４Ｌ／Ｄ２４７Ｎ／Ｐ３３７Ａ、Ｒ４４Ｌ／Ｄ２４７Ｎ／Ｑ３６２Ｋ、Ｒ４４Ｌ／Ｋ３０２Ｑ、Ｒ４４Ｌ／Ｐ３３７Ａ、Ｒ４４Ｌ／Ｋ３７３Ｒ、Ｒ２１７Ｆ／Ｉ３２２Ｍ、Ｒ２１７Ｆ／Ｋ３７３Ｒ、Ｄ２４７Ｎ／Ｉ３２２Ｍ、Ｄ２４７Ｎ／Ｑ３６２Ｋ、Ｋ３０２Ｑ／Ｉ３２２Ｍ／Ｑ３６２Ｋ／Ｋ３７３Ｒ、Ｋ３０２Ｑ／Ｐ３３７Ａ、Ｄ３１６Ｌ、Ｄ３１６Ｌ／Ｐ３３７Ａ、Ｉ３２２Ｍ、Ｉ３２２Ｍ／Ｐ３３７Ａ、Ｑ３６２Ｋ／Ｋ３７３Ｒ、およびＫ３７３Ｒから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号８を参照してナンバリングされる。

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列またはその機能的断片を含む組換えアルファガラクトシダーゼＡをコードし、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、１０／３９／４４／４７／９２／１６６／２０６／２１７／２４７／２６１／２７１／３０２／３１６／３２２／３３７／３６２／３６８／３７３／３９２、４４／２１７／３１６、４４／２１７／３２２／３３７、１６６／３６２、２１７／３７３、および３６２／３７３から選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号８を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含む組換えアルファガラクトシダーゼＡをコードし、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、１０Ｔ／３９Ｍ／４４Ｌ／４７Ｓ／９２Ｙ／１６６Ｓ／２０６Ｋ／２１７Ｆ／２４７Ｎ／２６１Ａ／２７１Ｈ／３０２Ｑ／３１６Ｌ／３２２Ｍ／３３７Ａ／３６２Ｋ／３６８Ｗ／３７３Ｒ／３９２Ｍ、４４Ｌ／２１７Ｆ／３１６Ｌ、４４Ｌ／２１７Ｆ／３２２Ｍ／３３７Ａ、１６６Ａ／３６２Ｋ、２１７Ｆ／３７３Ｒ、および３６２Ｋ／３７３Ｒから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号８を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含む組換えアルファガラクトシダーゼＡをコードし、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、Ｐ１０Ｔ／Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ａ２０６Ｋ／Ｒ２１７Ｆ／Ｄ２４７Ｎ／Ｇ２６１Ａ／Ａ２７１Ｈ／Ｋ３０２Ｑ／Ｄ３１６Ｌ／Ｉ３２２Ｍ／Ｐ３３７Ａ／Ｑ３６２Ｋ／Ａ３６８Ｗ／Ｋ３７３Ｒ／Ｔ３９２Ｍ、Ｒ４４Ｌ／Ｒ２１７Ｆ／Ｄ３１６Ｌ、Ｒ４４Ｌ／Ｒ２１７Ｆ／Ｉ３２２Ｍ／Ｐ３３７Ａ、Ｐ１６６Ａ／Ｑ３６２Ｋ、Ｒ２１７Ｆ／Ｋ３７３Ｒ、およびＱ３６２Ｋ／Ｋ３７３Ｒから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号８を参照してナンバリングされる。

いくつかの実施形態では、本発明は、配列番号５７と少なくとも約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％またはそれを超える配列同一性を有する組換えポリヌクレオチド配列を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、配列番号５７と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超える配列同一性を有する組換えポリヌクレオチド配列を提供する。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは組換えアルファガラクトシダーゼＡをコードし、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号５８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、７、７／４８／６８、７／４８／６８／１２０／２８２／２９９、７／４８／１３０／２８２、７／４８／１８０、７／６８／１３０／２８２／３６５、７／６８／１８０、７／８８／１２０／３０５／３６５、７／１２０、７／１３０、７／２８２、７／３０５、７／３０５／３６５、７／３６５、３９、４７、４７／８７／９５／９６／１５８／１６２、４７／９５、４７／２７３、４７／３４３、４８、４８／６８、４８／１８０／２８２、４８／２８２、４８／２８２／３０５、６７／１８０、６８、６８／２９９／３００、７１、８７／９１／９５／９６／１５８／１６２、８７／９１／９５／９６／２０６／３４３、８７／９６／１５５／２７３／３４３、８８、９１／９５、９１／９５／９６、９２、９３、９６、９６／２７３、９６／３１２／３４３、１２０、１２０／２９９／３０５、１５１、１５８、１５８／１６２／２７３、１６２、１６２／２７３、１６２／３４３、１６６、１７８、１８０、１８１、２０６、２１７、２７１、２７３、２７３／３４３、２８２、２８２／３６５、２９３／３９１、２９９／３００、２９９／３００／３０５／３６５、３００、３０１、３０５、３０５／３６５、３１４、３３３、３３６、３３７、３４３、３４５、３６３、３６５、３７０、３８９、３９３、３９４、３９６／３９８、３９７、および３９８から選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号５８を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号５８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、７Ｌ、７Ｌ／４８Ｄ／６８Ｅ、７Ｌ／４８Ｄ／６８Ｅ／１２０Ｈ／２８２Ｎ／２９９Ｒ、７Ｌ／４８Ｄ／１３０Ｅ／２８２Ｎ、７Ｌ／４８Ｄ／１８０Ｇ、７Ｌ／６８Ｅ／１３０Ｅ／２８２Ｎ／３６５Ｖ、７Ｌ／６８Ｅ／１８０Ｇ、７Ｌ／８８Ａ／１２０Ｈ／３０５Ｇ／３６５Ｖ、７Ｌ／１２０Ｈ、７Ｌ／１３０Ｅ、７Ｌ／２８２Ｎ、７Ｌ／３０５Ｇ、７Ｌ／３０５Ｇ／３６５Ｖ、７Ｌ／３６５Ｖ、３９Ｖ、４７Ｄ、４７Ｄ／８７Ｋ／９５Ｅ／９６Ｌ／１５８Ｒ／１６２Ｈ、４７Ｄ／９５Ｅ、４７Ｄ／２７３Ｐ、４７Ｄ／３４３Ｇ、４７Ｖ、４８Ｄ、４８Ｄ／６８Ｅ、４８Ｄ／１８０Ｇ／２８２Ｎ、４８Ｄ／２８２Ｎ、４８Ｄ／２８２Ｎ／３０５Ｇ、６７Ｔ／１８０Ｇ、６８Ｅ、６８Ｅ／２９９Ｒ／３００Ｉ、７１Ｐ、８７Ｋ／９１Ｑ／９５Ｅ／９６Ｌ／１５８Ａ／１６２Ｋ、８７Ｋ／９１Ｑ／９５Ｅ／９６Ｌ／２０６Ｓ／３４３Ｇ、８７Ｋ／９６Ｉ／１５５Ｎ／２７３Ｐ／３４３Ｇ、８８Ａ、９１Ｑ／９５Ｅ、９１Ｑ／９５Ｅ／９６Ｌ、９２Ｆ、９２Ｔ、９３Ｉ、９６Ｌ、９６Ｌ／２７３Ｐ、９６Ｌ／３１２Ｑ／３４３Ｇ、１２０Ｈ、１２０Ｈ／２９９Ｒ／３０５Ｇ、１５１Ｌ、１５８Ａ、１５８Ａ／１６２Ｋ／２７３Ｇ、１５８Ｒ、１６２Ｈ／３４３Ｄ、１６２Ｋ、１６２Ｋ／２７３Ｐ、１６２Ｓ、１６６Ｋ、１７８Ｇ、１７８Ｓ、１８０Ｇ、１８０Ｌ、１８０Ｔ、１８０Ｖ、１８１Ａ、２０６Ｋ、２０６Ｓ、２１７Ｋ、２７１Ｒ、２７３Ｐ、２７３Ｐ／３４３Ｇ、２８２Ｎ、２８２Ｎ／３６５Ｖ、２９３Ｐ／３９１Ａ、２９９Ｒ／３００Ｉ、２９９Ｒ／３００Ｉ／３０５Ｇ／３６５Ｖ、３００Ｉ、３０１Ｍ、３０５Ｇ、３０５Ｇ／３６５Ｖ、３１４Ａ、３３３Ｆ、３３３Ｇ、３３６Ｖ、３３７Ｒ、３４３Ｄ、３４３Ｇ、３４５Ａ、３４５Ｑ、３６３Ｑ、３６５Ａ、３６５Ｑ、３６５Ｖ、３７０Ｇ、３８９Ｋ、３９３Ｖ、３９４Ｋ、３９６Ｇ／３９８Ｔ、３９７Ａ、３９８Ａ、３９８Ｐ、３９８Ｓ、および３９８Ｖから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号５８を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号５８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、Ｒ７Ｌ、Ｒ７Ｌ／Ｅ４８Ｄ／Ｑ６８Ｅ、Ｒ７Ｌ／Ｅ４８Ｄ／Ｑ６８Ｅ／Ｙ１２０Ｈ／Ｄ２８２Ｎ／Ｑ２９９Ｒ、Ｒ７Ｌ／Ｅ４８Ｄ／Ｄ１３０Ｅ／Ｄ２８２Ｎ、Ｒ７Ｌ／Ｅ４８Ｄ／Ｆ１８０Ｇ、Ｒ７Ｌ／Ｑ６８Ｅ／Ｄ１３０Ｅ／Ｄ２８２Ｎ／Ｆ３６５Ｖ、Ｒ７Ｌ／Ｑ６８Ｅ／Ｆ１８０Ｇ、Ｒ７Ｌ／Ｑ８８Ａ／Ｙ１２０Ｈ／Ｎ３０５Ｇ／Ｆ３６５Ｖ、Ｒ７Ｌ／Ｙ１２０Ｈ、Ｒ７Ｌ／Ｄ１３０Ｅ、Ｒ７Ｌ／Ｄ２８２Ｎ、Ｒ７Ｌ／Ｎ３０５Ｇ、Ｒ７Ｌ／Ｎ３０５Ｇ／Ｆ３６５Ｖ、Ｒ７Ｌ／Ｆ３６５Ｖ、Ｅ３９Ｖ、Ｔ４７Ｄ、Ｔ４７Ｄ／Ｒ８７Ｋ／Ｓ９５Ｅ／Ｋ９６Ｌ／Ｌ１５８Ｒ／Ｒ１６２Ｈ、Ｔ４７Ｄ／Ｓ９５Ｅ、Ｔ４７Ｄ／Ｓ２７３Ｐ、Ｔ４７Ｄ／Ｋ３４３Ｇ、Ｔ４７Ｖ、Ｅ４８Ｄ、Ｅ４８Ｄ／Ｑ６８Ｅ、Ｅ４８Ｄ／Ｆ１８０Ｇ／Ｄ２８２Ｎ、Ｅ４８Ｄ／Ｄ２８２Ｎ、Ｅ４８Ｄ／Ｄ２８２Ｎ／Ｎ３０５Ｇ、Ｐ６７Ｔ／Ｆ１８０Ｇ、Ｑ６８Ｅ、Ｑ６８Ｅ／Ｑ２９９Ｒ／Ｌ３００Ｉ、Ｓ７１Ｐ、Ｒ８７Ｋ／Ｎ９１Ｑ／Ｓ９５Ｅ／Ｋ９６Ｌ／Ｌ１５８Ａ／Ｒ１６２Ｋ、Ｒ８７Ｋ／Ｎ９１Ｑ／Ｓ９５Ｅ／Ｋ９６Ｌ／Ａ２０６Ｓ／Ｋ３４３Ｇ、Ｒ８７Ｋ／Ｋ９６Ｉ／Ｈ１５５Ｎ／Ｓ２７３Ｐ／Ｋ３４３Ｇ、Ｑ８８Ａ、Ｎ９１Ｑ／Ｓ９５Ｅ、Ｎ９１Ｑ／Ｓ９５Ｅ／Ｋ９６Ｌ、Ｈ９２Ｆ、Ｈ９２Ｔ、Ｖ９３Ｉ、Ｋ９６Ｌ、Ｋ９６Ｌ／Ｓ２７３Ｐ、Ｋ９６Ｌ／Ｐ３１２Ｑ／Ｋ３４３Ｇ、Ｙ１２０Ｈ、Ｙ１２０Ｈ／Ｑ２９９Ｒ／Ｎ３０５Ｇ、Ｄ１５１Ｌ、Ｌ１５８Ａ、Ｌ１５８Ａ／Ｒ１６２Ｋ／Ｓ２７３Ｇ、Ｌ１５８Ｒ、Ｒ１６２Ｈ／Ｋ３４３Ｄ、Ｒ１６２Ｋ、Ｒ１６２Ｋ／Ｓ２７３Ｐ、Ｒ１６２Ｓ、Ｐ１６６Ｋ、Ｗ１７８Ｇ、Ｗ１７８Ｓ、Ｆ１８０Ｇ、Ｆ１８０Ｌ、Ｆ１８０Ｔ、Ｆ１８０Ｖ、Ｑ１８１Ａ、Ａ２０６Ｋ、Ａ２０６Ｓ、Ｒ２１７Ｋ、Ａ２７１Ｒ、Ｓ２７３Ｐ、Ｓ２７３Ｐ／Ｋ３４３Ｇ、Ｄ２８２Ｎ、Ｄ２８２Ｎ／Ｆ３６５Ｖ、Ｌ２９３Ｐ／Ｑ３９１Ａ、Ｑ２９９Ｒ／Ｌ３００Ｉ、Ｑ２９９Ｒ／Ｌ３００Ｉ／Ｎ３０５Ｇ／Ｆ３６５Ｖ、Ｌ３００Ｉ、Ｒ３０１Ｍ、Ｎ３０５Ｇ、Ｎ３０５Ｇ／Ｆ３６５Ｖ、Ｓ３１４Ａ、Ｓ３３３Ｆ、Ｓ３３３Ｇ、Ｉ３３６Ｖ、Ｐ３３７Ｒ、Ｋ３４３Ｄ、Ｋ３４３Ｇ、Ｖ３４５Ａ、Ｖ３４５Ｑ、Ｌ３６３Ｑ、Ｆ３６５Ａ、Ｆ３６５Ｑ、Ｆ３６５Ｖ、Ｓ３７０Ｇ、Ｔ３８９Ｋ、Ｓ３９３Ｖ、Ｌ３９４Ｋ、Ｄ３９６Ｇ／Ｌ３９８Ｔ、Ｌ３９７Ａ、Ｌ３９８Ａ、Ｌ３９８Ｐ、Ｌ３９８Ｓ、およびＬ３９８Ｖから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号５８を参照してナンバリングされる。

いくつかの実施形態では、本発明は、配列番号１５７と少なくとも約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％またはそれを超える配列同一性を有する組換えポリヌクレオチド配列を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、配列番号１５７と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超える配列同一性を有する組換えポリヌクレオチド配列を提供する。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは組換えアルファガラクトシダーゼＡをコードし、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号１５８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、２４／２０２、３９／４７、３９／４７／２１７、３９／１５１、３９／２８２／３３７／３９８、３９／３３７／３４３／３９８、３９／３９３／３９８、４７／１３０、４７／１５１、４７／３４３／３４５／３９３、４８、４８／６８、４８／６８／２１７／３３３／３９１／３９３、４８／６８／３３３、４８／２１７、４８／３３３、４８／３４５／３９３、４８／３９３、５９／１４３、６８、６８／３４５、１３０、１３０／１５８、１３０／１５８／３９３、１３０／３４５／３９３、１４３／２７１、１４３／３３３、１４３／３８７、１５１、１５１／１５８／２１７／３４３／３４５／３９３、１５１／２０６／２８２／３３７／３４３／３４５／３９８、１５１／２８２／３９３、１５１／３４５／３９３／３９８、１５１／３９３、１５８、１５８／３９３、２０２、２０６、２０６／２１７、２１７、２１７／３３３、２１７／３３７／３４５／３９８、２７１、２８２／３９３、３３３、３３３／３４５、３３７／３４３／３４５／３９８、３４３、３４３／３４５／３９３／３９８、３９３、および３９３／３９８から選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号１５８を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号１５８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、２４Ｓ／２０２Ｎ、３９Ｖ／４７Ｄ、３９Ｖ／４７Ｖ／２１７Ｋ、３９Ｖ／１５１Ｌ、３９Ｖ／２８２Ｎ／３３７Ｒ／３９８Ａ、３９Ｖ／３３７Ｒ／３４３Ｇ／３９８Ａ、３９Ｖ／３９３Ｖ／３９８Ａ、４７Ｖ／１３０Ｅ、４７Ｖ／１５１Ｌ、４７Ｖ／３４３Ｄ／３４５Ｑ／３９３Ｖ、４８Ｄ、４８Ｄ／６８Ｅ、４８Ｄ／６８Ｅ／２１７Ｋ／３３３Ｆ／３９１Ａ／３９３Ｖ、４８Ｄ／６８Ｅ／３３３Ｆ、４８Ｄ／２１７Ｋ、４８Ｄ／３３３Ｆ、４８Ｄ／３３３Ｇ、４８Ｄ／３４５Ｑ／３９３Ｖ、４８Ｄ／３９３Ｖ、５９Ａ／１４３Ｓ、６８Ｅ、６８Ｅ／３４５Ｑ、１３０Ｅ、１３０Ｅ／１５８Ｒ、１３０Ｅ／１５８Ｒ／３９３Ｖ、１３０Ｅ／３４５Ｑ／３９３Ｖ、１４３Ｓ／２７１Ｎ、１４３Ｓ／３３３Ｎ、１４３Ｓ／３８７Ｎ、１５１Ｌ、１５１Ｌ／１５８Ｒ／２１７Ｋ／３４３Ｇ／３４５Ｑ／３９３Ｖ、１５１Ｌ／２０６Ｓ／２８２Ｎ／３３７Ｒ／３４３Ｄ／３４５Ｑ／３９８Ａ、１５１Ｌ／２８２Ｎ／３９３Ｖ、１５１Ｌ／３４５Ｑ／３９３Ｖ／３９８Ａ、１５１Ｌ／３９３Ｖ、１５８Ｒ、１５８Ｒ／３９３Ｖ、２０２Ｎ、２０６Ｓ、２０６Ｓ／２１７Ｋ、２１７Ｋ、２１７Ｋ／３３３Ｆ、２１７Ｋ／３３３Ｇ、２１７Ｋ／３３７Ｒ／３４５Ｑ／３９８Ａ、２７１Ｎ、２８２Ｎ／３９３Ｖ、３３３Ｆ／３４５Ｑ、３３３Ｇ、３３３Ｎ、３３７Ｒ／３４３Ｇ／３４５Ｑ／３９８Ａ、３４３Ｄ、３４３Ｄ／３４５Ｑ／３９３Ｖ／３９８Ａ、３９３Ｖ、および３９３Ｖ／３９８Ａから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号１５８を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、Ｄ２４Ｓ／Ｄ２０２Ｎ、Ｅ３９Ｖ／Ｔ４７Ｄ、Ｅ３９Ｖ／Ｔ４７Ｖ／Ｒ２１７Ｋ、Ｅ３９Ｖ／Ｄ１５１Ｌ、Ｅ３９Ｖ／Ｄ２８２Ｎ／Ｐ３３７Ｒ／Ｌ３９８Ａ、Ｅ３９Ｖ／Ｐ３３７Ｒ／Ｋ３４３Ｇ／Ｌ３９８Ａ、Ｅ３９Ｖ／Ｓ３９３Ｖ／Ｌ３９８Ａ、Ｔ４７Ｖ／Ｄ１３０Ｅ、Ｔ４７Ｖ／Ｄ１５１Ｌ、Ｔ４７Ｖ／Ｋ３４３Ｄ／Ｖ３４５Ｑ／Ｓ３９３Ｖ、Ｅ４８Ｄ、Ｅ４８Ｄ／Ｑ６８Ｅ、Ｅ４８Ｄ／Ｑ６８Ｅ／Ｒ２１７Ｋ／Ｓ３３３Ｆ／Ｑ３９１Ａ／Ｓ３９３Ｖ、Ｅ４８Ｄ／Ｑ６８Ｅ／Ｓ３３３Ｆ、Ｅ４８Ｄ／Ｒ２１７Ｋ、Ｅ４８Ｄ／Ｓ３３３Ｆ、Ｅ４８Ｄ／Ｓ３３３Ｇ、Ｅ４８Ｄ／Ｖ３４５Ｑ／Ｓ３９３Ｖ、Ｅ４８Ｄ／Ｓ３９３Ｖ、Ｃ５９Ａ／Ｃ１４３Ｓ、Ｑ６８Ｅ、Ｑ６８Ｅ／Ｖ３４５Ｑ、Ｄ１３０Ｅ、Ｄ１３０Ｅ／Ｌ１５８Ｒ、Ｄ１３０Ｅ／Ｌ１５８Ｒ／Ｓ３９３Ｖ、Ｄ１３０Ｅ／Ｖ３４５Ｑ／Ｓ３９３Ｖ、Ｃ１４３Ｓ／Ａ２７１Ｎ、Ｃ１４３Ｓ／Ｓ３３３Ｎ、Ｃ１４３Ｓ／Ｅ３８７Ｎ、Ｄ１５１Ｌ、Ｄ１５１Ｌ／Ｌ１５８Ｒ／Ｒ２１７Ｋ／Ｋ３４３Ｇ／Ｖ３４５Ｑ／Ｓ３９３Ｖ、Ｄ１５１Ｌ／Ａ２０６Ｓ／Ｄ２８２Ｎ／Ｐ３３７Ｒ／Ｋ３４３Ｄ／Ｖ３４５Ｑ／Ｌ３９８Ａ、Ｄ１５１Ｌ／Ｄ２８２Ｎ／Ｓ３９３Ｖ、Ｄ１５１Ｌ／Ｖ３４５Ｑ／Ｓ３９３Ｖ／Ｌ３９８Ａ、Ｄ１５１Ｌ／Ｓ３９３Ｖ、Ｌ１５８Ｒ、Ｌ１５８Ｒ／Ｓ３９３Ｖ、Ｄ２０２Ｎ、Ａ２０６Ｓ、Ａ２０６Ｓ／Ｒ２１７Ｋ、Ｒ２１７Ｋ、Ｒ２１７Ｋ／Ｓ３３３Ｆ、Ｒ２１７Ｋ／Ｓ３３３Ｇ、Ｒ２１７Ｋ／Ｐ３３７Ｒ／Ｖ３４５Ｑ／Ｌ３９８Ａ、Ａ２７１Ｎ、Ｄ２８２Ｎ／Ｓ３９３Ｖ、Ｓ３３３Ｆ／Ｖ３４５Ｑ、Ｓ３３３Ｇ、Ｓ３３３Ｎ、Ｐ３３７Ｒ／Ｋ３４３Ｇ／Ｖ３４５Ｑ／Ｌ３９８Ａ、Ｋ３４３Ｄ、Ｋ３４３Ｄ／Ｖ３４５Ｑ／Ｓ３９３Ｖ／Ｌ３９８Ａ、Ｓ３９３Ｖ、およびＳ３９３Ｖ／Ｌ３９８Ａから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号１５８を参照してナンバリングされる。

いくつかの実施形態では、本発明は、配列番号３７１と少なくとも約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％またはそれを超える配列同一性を有する組換えポリヌクレオチド配列を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、配列番号３７１と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超える配列同一性を有する組換えポリヌクレオチド配列を提供する。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは組換えアルファガラクトシダーゼＡをコードし、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号３７２と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、１０、１０／３９／４４／３２２、１０／３９／９２／２０６／２１７／２７１、１０／３９／９２／２４７、１０／３９／９２／２４７／２７１／３１６、１０／４４、１０／４４／４７／９２／２４７、１０／４４／４７／２６１／３０２／３２２／３６８、１０／４４／９２／３１６／３２２、１０／４４／２６１／３０２／３１６、１０／４４／３０２／３３７／３６８、１０／４７／２１７／２４７／３１６／３９２、１０／４７／２１７／３２２、１０／４７／２７１、１０／９２、１０／９２／２０６／２１７／２４７、１０／９２／２０６／２４７／３１６／３２２／３９２、１０／９２／２０６／２４７／３２２／３６８、１０／９２／２１７／２６１／３０２／３３７、１０／２０６／２１７／２７１、１０／２０６／２４７、１０／２０６／２６１／２７１／３１６、１０／２６１、１０／２７１／３０２、１０／３０２、１０／３０２／３１６、１０／３０２／３２２／３３７、１０／３１６／３２２、１０／３３７／３９２、１０／３６８、３９／４４／９２／１６２／２４７／３０２／３１６／３２２、３９／４４／９２／２１７／３２２、３９／４４／９２／２４７／２７１／３０２、３９／４７／９２／２４７／３０２／３１６／３２２、３９／４７／２１７／２４７／３６８、３９／４７／２４７、３９／９２／２４７／３０２／３１６／３３７／３６８、３９／９２／３１６／３２２、３９／２４７／２７１、３９／２４７／２７１／３１６、３９／３２２、４４／４７／９２／２０６／２１７／３１６／３２２、４４／４７／９２／２４７／２６１／２７１／３１６／３３７／３６８、４４／４７／２０６／２１７／２４７／２７１／３２２、４４／４７／２４７／３２２／３６８、４４／４７／３０２／３１６／３２２、４４／９２／２０６／２４７／３６８、４４／２０６／３３７、４４／２４７／２６１／３０２／３１６、４４／２４７／２６１／３０２／３１６／３２２、４７／９２／２４７／２７１、４７／２１７／３０２、４７／２４７、４７／２４７／２７１、８９／２１７／２４７／２６１／３０２／３１６、９２／２１７／２７１、９２／２４７、９２／２４７／２７１／３２２、９２／２４７／３０２／３２２／３３７、９２／２７１／３３７、９２／３０２、９２／３１６、２０６／２１７／２７１／３９２、２１７／２４７／３１６／３２２／３３７／３６８、２４７、２４７／２７１、２４７／３０２、２７１、２７１／３０２／３２２、２７１／３１６／３２２、３０２／３２２／３６８、および３６８から選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号３７２を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号３７２と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、１０Ｐ、１０Ｐ／３９Ｅ／４４Ｒ／３２２Ｉ、１０Ｐ／３９Ｅ／９２Ｈ／２０６Ａ／２１７Ｒ／２７１Ａ、１０Ｐ／３９Ｅ／９２Ｈ／２４７Ｄ、１０Ｐ／３９Ｅ／９２Ｈ／２４７Ｄ／２７１Ａ／３１６Ｄ、１０Ｐ／４４Ｒ、１０Ｐ／４４Ｒ／４７Ｔ／９２Ｈ／２４７Ｄ、１０Ｐ／４４Ｒ／４７Ｔ／２６１Ｇ／３０２Ｋ／３２２Ｉ／３６８Ａ、１０Ｐ／４４Ｒ／９２Ｈ／３１６Ｄ／３２２Ｉ、１０Ｐ／４４Ｒ／２６１Ｇ／３０２Ｋ／３１６Ｄ、１０Ｐ／４４Ｒ／３０２Ｋ／３３７Ｐ／３６８Ａ、１０Ｐ／４７Ｔ／２１７Ｒ／２４７Ｄ／３１６Ｄ／３９２Ｔ、１０Ｐ／４７Ｔ／２１７Ｒ／３２２Ｉ、１０Ｐ／４７Ｔ／２７１Ａ、１０Ｐ／９２Ｈ、１０Ｐ／９２Ｈ／２０６Ａ／２１７Ｒ／２４７Ｄ、１０Ｐ／９２Ｈ／２０６Ａ／２４７Ｄ／３１６Ｄ／３２２Ｉ／３９２Ｔ、１０Ｐ／９２Ｈ／２０６Ａ／２４７Ｄ／３２２Ｉ／３６８Ａ、１０Ｐ／９２Ｈ／２１７Ｒ／２６１Ｇ／３０２Ｋ／３３７Ｐ、１０Ｐ／２０６Ａ／２１７Ｒ／２７１Ａ、１０Ｐ／２０６Ａ／２４７Ｄ、１０Ｐ／２０６Ａ／２６１Ｇ／２７１Ａ／３１６Ｄ、１０Ｐ／２６１Ｇ、１０Ｐ／２７１Ａ／３０２Ｋ、１０Ｐ／３０２Ｋ、１０Ｐ／３０２Ｋ／３１６Ｄ、１０Ｐ／３０２Ｋ／３２２Ｉ／３３７Ｐ、１０Ｐ／３１６Ｄ／３２２Ｉ、１０Ｐ／３３７Ｐ／３９２Ｔ、１０Ｐ／３６８Ａ、３９Ｅ／４４Ｒ／９２Ｈ／１６２Ｍ／２４７Ｄ／３０２Ｋ／３１６Ｄ／３２２Ｉ、３９Ｅ／４４Ｒ／９２Ｈ／２１７Ｒ／３２２Ｉ、３９Ｅ／４４Ｒ／９２Ｈ／２４７Ｄ／２７１Ａ／３０２Ｋ、３９Ｅ／４７Ｔ／９２Ｈ／２４７Ｄ／３０２Ｋ／３１６Ｄ／３２２Ｉ、３９Ｅ／４７Ｔ／２１７Ｒ／２４７Ｄ／３６８Ａ、３９Ｅ／４７Ｔ／２４７Ｄ、３９Ｅ／９２Ｈ／２４７Ｄ／３０２Ｋ／３１６Ｄ／３３７Ｐ／３６８Ａ、３９Ｅ／９２Ｈ／３１６Ｄ／３２２Ｉ、３９Ｅ／２４７Ｄ／２７１Ａ、３９Ｅ／２４７Ｄ／２７１Ａ／３１６Ｄ、３９Ｅ／３２２Ｉ、４４Ｒ／４７Ｔ／９２Ｈ／２０６Ａ／２１７Ｒ／３１６Ｄ／３２２Ｉ、４４Ｒ／４７Ｔ／９２Ｈ／２４７Ｄ／２６１Ｇ／２７１Ａ／３１６Ｄ／３３７Ｐ／３６８Ａ、４４Ｒ／４７Ｔ／２０６Ａ／２１７Ｒ／２４７Ｄ／２７１Ａ／３２２Ｉ、４４Ｒ／４７Ｔ／２４７Ｄ／３２２Ｉ／３６８Ａ、４４Ｒ／４７Ｔ／３０２Ｋ／３１６Ｄ／３２２Ｉ、４４Ｒ／９２Ｈ／２０６Ａ／２４７Ｄ／３６８Ａ、４４Ｒ／２０６Ａ／３３７Ｐ、４４Ｒ／２４７Ｄ／２６１Ｇ／３０２Ｋ／３１６Ｄ、４４Ｒ／２４７Ｄ／２６１Ｇ／３０２Ｋ／３１６Ｄ／３２２Ｉ、４７Ｔ／９２Ｈ／２４７Ｄ／２７１Ａ、４７Ｔ／２１７Ｒ／３０２Ｋ、４７Ｔ／２４７Ｄ、４７Ｔ／２４７Ｄ／２７１Ａ、８９Ｉ／２１７Ｒ／２４７Ｄ／２６１Ｇ／３０２Ｋ／３１６Ｄ、９２Ｈ／２１７Ｒ／２７１Ａ、９２Ｈ／２４７Ｄ、９２Ｈ／２４７Ｄ／２７１Ａ／３２２Ｉ、９２Ｈ／２４７Ｄ／３０２Ｋ／３２２Ｉ／３３７Ｐ、９２Ｈ／２７１Ａ／３３７Ｐ、９２Ｈ／３０２Ｋ、９２Ｈ／３１６Ｄ、２０６Ａ／２１７Ｒ／２７１Ａ／３９２Ｔ、２１７Ｒ／２４７Ｄ／３１６Ｄ／３２２Ｉ／３３７Ｐ／３６８Ａ、２４７Ｄ、２４７Ｄ／２７１Ａ、２４７Ｄ／３０２Ｋ、２７１Ａ、２７１Ａ／３０２Ｋ／３２２Ｉ、２７１Ａ／３１６Ｄ／３２２Ｉ、３０２Ｋ／３２２Ｉ／３６８Ａ、および３６８Ａから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号３７２を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号３７２と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、Ｔ１０Ｐ、Ｔ１０Ｐ／Ｍ３９Ｅ／Ｌ４４Ｒ／Ｍ３２２Ｉ、Ｔ１０Ｐ／Ｍ３９Ｅ／Ｙ９２Ｈ／Ｋ２０６Ａ／Ｆ２１７Ｒ／Ｈ２７１Ａ、Ｔ１０Ｐ／Ｍ３９Ｅ／Ｙ９２Ｈ／Ｎ２４７Ｄ、Ｔ１０Ｐ／Ｍ３９Ｅ／Ｙ９２Ｈ／Ｎ２４７Ｄ／Ｈ２７１Ａ／Ｌ３１６Ｄ、Ｔ１０Ｐ／Ｌ４４Ｒ、Ｔ１０Ｐ／Ｌ４４Ｒ／Ｓ４７Ｔ／Ｙ９２Ｈ／Ｎ２４７Ｄ、Ｔ１０Ｐ／Ｌ４４Ｒ／Ｓ４７Ｔ／Ａ２６１Ｇ／Ｑ３０２Ｋ／Ｍ３２２Ｉ／Ｗ３６８Ａ、Ｔ１０Ｐ／Ｌ４４Ｒ／Ｙ９２Ｈ／Ｌ３１６Ｄ／Ｍ３２２Ｉ、Ｔ１０Ｐ／Ｌ４４Ｒ／Ａ２６１Ｇ／Ｑ３０２Ｋ／Ｌ３１６Ｄ、Ｔ１０Ｐ／Ｌ４４Ｒ／Ｑ３０２Ｋ／Ａ３３７Ｐ／Ｗ３６８Ａ、Ｔ１０Ｐ／Ｓ４７Ｔ／Ｆ２１７Ｒ／Ｎ２４７Ｄ／Ｌ３１６Ｄ／Ｍ３９２Ｔ、Ｔ１０Ｐ／Ｓ４７Ｔ／Ｆ２１７Ｒ／Ｍ３２２Ｉ、Ｔ１０Ｐ／Ｓ４７Ｔ／Ｈ２７１Ａ、Ｔ１０Ｐ／Ｙ９２Ｈ、Ｔ１０Ｐ／Ｙ９２Ｈ／Ｋ２０６Ａ／Ｆ２１７Ｒ／Ｎ２４７Ｄ、Ｔ１０Ｐ／Ｙ９２Ｈ／Ｋ２０６Ａ／Ｎ２４７Ｄ／Ｌ３１６Ｄ／Ｍ３２２Ｉ／Ｍ３９２Ｔ、Ｔ１０Ｐ／Ｙ９２Ｈ／Ｋ２０６Ａ／Ｎ２４７Ｄ／Ｍ３２２Ｉ／Ｗ３６８Ａ、Ｔ１０Ｐ／Ｙ９２Ｈ／Ｆ２１７Ｒ／Ａ２６１Ｇ／Ｑ３０２Ｋ／Ａ３３７Ｐ、Ｔ１０Ｐ／Ｋ２０６Ａ／Ｆ２１７Ｒ／Ｈ２７１Ａ、Ｔ１０Ｐ／Ｋ２０６Ａ／Ｎ２４７Ｄ、Ｔ１０Ｐ／Ｋ２０６Ａ／Ａ２６１Ｇ／Ｈ２７１Ａ／Ｌ３１６Ｄ、Ｔ１０Ｐ／Ａ２６１Ｇ、Ｔ１０Ｐ／Ｈ２７１Ａ／Ｑ３０２Ｋ、Ｔ１０Ｐ／Ｑ３０２Ｋ、Ｔ１０Ｐ／Ｑ３０２Ｋ／Ｌ３１６Ｄ、Ｔ１０Ｐ／Ｑ３０２Ｋ／Ｍ３２２Ｉ／Ａ３３７Ｐ、Ｔ１０Ｐ／Ｌ３１６Ｄ／Ｍ３２２Ｉ、Ｔ１０Ｐ／Ａ３３７Ｐ／Ｍ３９２Ｔ、Ｔ１０Ｐ／Ｗ３６８Ａ、Ｍ３９Ｅ／Ｌ４４Ｒ／Ｙ９２Ｈ／Ｒ１６２Ｍ／Ｎ２４７Ｄ／Ｑ３０２Ｋ／Ｌ３１６Ｄ／Ｍ３２２Ｉ、Ｍ３９Ｅ／Ｌ４４Ｒ／Ｙ９２Ｈ／Ｆ２１７Ｒ／Ｍ３２２Ｉ、Ｍ３９Ｅ／Ｌ４４Ｒ／Ｙ９２Ｈ／Ｎ２４７Ｄ／Ｈ２７１Ａ／Ｑ３０２Ｋ、Ｍ３９Ｅ／Ｓ４７Ｔ／Ｙ９２Ｈ／Ｎ２４７Ｄ／Ｑ３０２Ｋ／Ｌ３１６Ｄ／Ｍ３２２Ｉ、Ｍ３９Ｅ／Ｓ４７Ｔ／Ｆ２１７Ｒ／Ｎ２４７Ｄ／Ｗ３６８Ａ、Ｍ３９Ｅ／Ｓ４７Ｔ／Ｎ２４７Ｄ、Ｍ３９Ｅ／Ｙ９２Ｈ／Ｎ２４７Ｄ／Ｑ３０２Ｋ／Ｌ３１６Ｄ／Ａ３３７Ｐ／Ｗ３６８Ａ、Ｍ３９Ｅ／Ｙ９２Ｈ／Ｌ３１６Ｄ／Ｍ３２２Ｉ、Ｍ３９Ｅ／Ｎ２４７Ｄ／Ｈ２７１Ａ、Ｍ３９Ｅ／Ｎ２４７Ｄ／Ｈ２７１Ａ／Ｌ３１６Ｄ、Ｍ３９Ｅ／Ｍ３２２Ｉ、Ｌ４４Ｒ／Ｓ４７Ｔ／Ｙ９２Ｈ／Ｋ２０６Ａ／Ｆ２１７Ｒ／Ｌ３１６Ｄ／Ｍ３２２Ｉ、Ｌ４４Ｒ／Ｓ４７Ｔ／Ｙ９２Ｈ／Ｎ２４７Ｄ／Ａ２６１Ｇ／Ｈ２７１Ａ／Ｌ３１６Ｄ／Ａ３３７Ｐ／Ｗ３６８Ａ、Ｌ４４Ｒ／Ｓ４７Ｔ／Ｋ２０６Ａ／Ｆ２１７Ｒ／Ｎ２４７Ｄ／Ｈ２７１Ａ／Ｍ３２２Ｉ、Ｌ４４Ｒ／Ｓ４７Ｔ／Ｎ２４７Ｄ／Ｍ３２２Ｉ／Ｗ３６８Ａ、Ｌ４４Ｒ／Ｓ４７Ｔ／Ｑ３０２Ｋ／Ｌ３１６Ｄ／Ｍ３２２Ｉ、Ｌ４４Ｒ／Ｙ９２Ｈ／Ｋ２０６Ａ／Ｎ２４７Ｄ／Ｗ３６８Ａ、Ｌ４４Ｒ／Ｋ２０６Ａ／Ａ３３７Ｐ、Ｌ４４Ｒ／Ｎ２４７Ｄ／Ａ２６１Ｇ／Ｑ３０２Ｋ／Ｌ３１６Ｄ、Ｌ４４Ｒ／Ｎ２４７Ｄ／Ａ２６１Ｇ／Ｑ３０２Ｋ／Ｌ３１６Ｄ／Ｍ３２２Ｉ、Ｓ４７Ｔ／Ｙ９２Ｈ／Ｎ２４７Ｄ／Ｈ２７１Ａ、Ｓ４７Ｔ／Ｆ２１７Ｒ／Ｑ３０２Ｋ、Ｓ４７Ｔ／Ｎ２４７Ｄ、Ｓ４７Ｔ／Ｎ２４７Ｄ／Ｈ２７１Ａ、Ｌ８９Ｉ／Ｆ２１７Ｒ／Ｎ２４７Ｄ／Ａ２６１Ｇ／Ｑ３０２Ｋ／Ｌ３１６Ｄ、Ｙ９２Ｈ／Ｆ２１７Ｒ／Ｈ２７１Ａ、Ｙ９２Ｈ／Ｎ２４７Ｄ、Ｙ９２Ｈ／Ｎ２４７Ｄ／Ｈ２７１Ａ／Ｍ３２２Ｉ、Ｙ９２Ｈ／Ｎ２４７Ｄ／Ｑ３０２Ｋ／Ｍ３２２Ｉ／Ａ３３７Ｐ、Ｙ９２Ｈ／Ｈ２７１Ａ／Ａ３３７Ｐ、Ｙ９２Ｈ／Ｑ３０２Ｋ、Ｙ９２Ｈ／Ｌ３１６Ｄ、Ｋ２０６Ａ／Ｆ２１７Ｒ／Ｈ２７１Ａ／Ｍ３９２Ｔ、Ｆ２１７Ｒ／Ｎ２４７Ｄ／Ｌ３１６Ｄ／Ｍ３２２Ｉ／Ａ３３７Ｐ／Ｗ３６８Ａ、Ｎ２４７Ｄ、Ｎ２４７Ｄ／Ｈ２７１Ａ、Ｎ２４７Ｄ／Ｑ３０２Ｋ、Ｈ２７１Ａ、Ｈ２７１Ａ／Ｑ３０２Ｋ／Ｍ３２２Ｉ、Ｈ２７１Ａ／Ｌ３１６Ｄ／Ｍ３２２Ｉ、Ｑ３０２Ｋ／Ｍ３２２Ｉ／Ｗ３６８Ａ、およびＷ３６８Ａから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号３７２を参

照してナンバリングされる。

いくつかの実施形態では、本発明は、配列番号３７３と少なくとも約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％またはそれを超える配列同一性を有する組換えポリヌクレオチド配列を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、配列番号３７３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超える配列同一性を有する組換えポリヌクレオチド配列を提供する。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは組換えアルファガラクトシダーゼＡをコードし、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号３７４と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、１０／３６／９２／１６６／２４７／２６１／３１６／３９２、１０／３９、１０／３９／４４／４７／９２／２０６／２１７、１０／３９／４４／４７／３１６、１０／３９／４４／４７／３３７、１０／３９／４４／９２／１６６／２６１／３１６／３２２、１０／３９／４４／９２／１６６／３０２／３２２、１０／３９／４４／９２／１６６／３９２、１０／３９／４４／９２／２１７／３０２／３２２、１０／３９／４４／９２／３０２／３２２、１０／３９／４４／１６６／２６１／２７１／３１６／３２２、１０／３９／４４／３９２、１０／３９／４７／９２／３３７、１０／３９／９２／１３１／１６６／２７１／３１６／３２２、１０／３９／９２／１６６／２１７／２４７／２７１、１０／３９／９２／２１７／３１６、１０／４４／４７／１６６／２６１／２７１、１０／４４／４７／１６６／２７１／３２２／３６８、１０／４４／４７／２１７／２７１／３１６／３２２、１０／４４／９２、１０／４４／９２／２１７／２４７／２７１／３０２／３１６／３９２、１０／４４／１６６／３０２、１０／４４／２０６／３１６／３２２、１０／４７／９２／１６６／２７１／３１６／３３７、１０／４７／９２／２７１／３０２、１０／４７／９２／３１６／３２２／３９２、１０／４７／１６６／２７１、１０／４７／１６６／３１６、１０／９２／１６６、１０／９２／１６６／２１７／２４７／２６１／２７１、１０／９２／１６６／２６１／２７１／３９２、１０／９２／１６６／２６１／３１６／３２２／３３７、１０／９２／１６６／３３７／３６８、１０／９２／３０２／３３７、１０／９２／３１６／３２２、１０／２０６、１０／２０６／２４７／２６１、１０／２１７／３２２、１０／２６１、１０／２６１／３３７／３９２、１０／３１６／３９２、１０／３６８、３９／４４／４７／９２／１６６／２０６／３９２、３９／４４／４７／９２／２０６／２４７／２６１、３９／４４／４７／９２／２０６／３９２、３９／４４／４７／２０６／３３７／３６８／３９２、３９／４４／９２／１６６／２４７／２６１／３０２／３３７、３９／４４／１６６／２７１、３９／４４／１６６／２７１／３３７／３６８／３９２、３９／４７／９２／３１６／３２２、３９／４７／９２／３９２、３９／４７／１６６／２１７／２６１／３９２、３９／４７／２１７／２４７／３６８、３９／４７／２４７、３９／９２／１６６／２１７／３９２、３９／９２／２６１／３０２、３９／１６６／２１７／２６１／３１６／３６８、３９／３２２、３９／３９２、４４／４７、４４／４７／９２／２１７／２７１、４４／４７／９２／２１７／３１６／３２２／３９２、４４／４７／９２／３９２、４４／４７／１６６、４４／４７／１６６／２７１、４４／４７／２４７／２７１／３９２、４４／３１６／３２２／３９２、４４／３３７、４７／１６６／２０６／２１７／２４７／３３７、４７／１６６／２１７／２７１／３３７、４７／２０６、４７／２１７／２４７／２６１、４７／２７１、５２／２１７／３０２／３１６、９２／１６６／２０６／２７１／３１６、９２／１６６／２１７／２６１／２７１／３９２、９２／１６６／２１７／３１６／３３７／３９２、９２／１６６／２４７、９２／１６６／３１６、９２／２０６／３２２、９２／２１７、９２／２１７／２７１／３３７、９２／２６１／２７１、９２／２７１、１６６／２１７／３１６／３２２／３３７、１６６／２４７／２７１／３１６、１６６／３１６／３２２／３３７、２０６／２１７、２１７／３９２、２４７／３１６、３１６／３２２／３６８、および３１６／３３７／３９２から選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号３７４を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号３７４と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、１０Ｔ／３６Ｍ／９２Ｙ／１６６Ｓ／２４７Ｎ／２６１Ａ／３１６Ｌ／３９２Ｍ、１０Ｔ／３９Ｍ、１０Ｔ／３９Ｍ／４４Ｌ／４７Ｓ／９２Ｙ／２０６Ｋ／２１７Ｆ、１０Ｔ／３９Ｍ／４４Ｌ／４７Ｓ／３１６Ｌ、１０Ｔ／３９Ｍ／４４Ｌ／４７Ｓ／３３７Ａ、１０Ｔ／３９Ｍ／４４Ｌ／９２Ｙ／１６６Ｓ／２６１Ａ／３１６Ｌ／３２２Ｍ、１０Ｔ／３９Ｍ／４４Ｌ／９２Ｙ／１６６Ｓ／３０２Ｑ／３２２Ｍ、１０Ｔ／３９Ｍ／４４Ｌ／９２Ｙ／１６６Ｓ／３９２Ｍ、１０Ｔ／３９Ｍ／４４Ｌ／９２Ｙ／２１７Ｆ／３０２Ｑ／３２２Ｍ、１０Ｔ／３９Ｍ／４４Ｌ／９２Ｙ／３０２Ｑ／３２２Ｍ、１０Ｔ／３９Ｍ／４４Ｌ／１６６Ｓ／２６１Ａ／２７１Ｈ／３１６Ｌ／３２２Ｍ、１０Ｔ／３９Ｍ／４４Ｌ／３９２Ｍ、１０Ｔ／３９Ｍ／４７Ｓ／９２Ｙ／３３７Ａ、１０Ｔ／３９Ｍ／９２Ｙ／１３１Ｇ／１６６Ｓ／２７１Ｈ／３１６Ｌ／３２２Ｍ、１０Ｔ／３９Ｍ／９２Ｙ／１６６Ｓ／２１７Ｆ／２４７Ｎ／２７１Ｈ、１０Ｔ／３９Ｍ／９２Ｙ／２１７Ｆ／３１６Ｌ、１０Ｔ／４４Ｌ／４７Ｓ／１６６Ｓ／２６１Ａ／２７１Ｈ、１０Ｔ／４４Ｌ／４７Ｓ／１６６Ｓ／２７１Ｈ／３２２Ｍ／３６８Ｗ、１０Ｔ／４４Ｌ／４７Ｓ／２１７Ｆ／２７１Ｈ／３１６Ｌ／３２２Ｍ、１０Ｔ／４４Ｌ／９２Ｙ、１０Ｔ／４４Ｌ／９２Ｙ／２１７Ｆ／２４７Ｎ／２７１Ｈ／３０２Ｑ／３１６Ｌ／３９２Ｍ、１０Ｔ／４４Ｌ／１６６Ｓ／３０２Ｑ、１０Ｔ／４４Ｌ／２０６Ｋ／３１６Ｌ／３２２Ｍ、１０Ｔ／４７Ｓ／９２Ｙ／１６６Ｓ／２７１Ｈ／３１６Ｌ／３３７Ａ、１０Ｔ／４７Ｓ／９２Ｙ／２７１Ｈ／３０２Ｑ、１０Ｔ／４７Ｓ／９２Ｙ／３１６Ｌ／３２２Ｍ／３９２Ｍ、１０Ｔ／４７Ｓ／１６６Ｓ／２７１Ｈ、１０Ｔ／４７Ｓ／１６６Ｓ／３１６Ｌ、１０Ｔ／９２Ｙ／１６６Ｓ、１０Ｔ／９２Ｙ／１６６Ｓ／２１７Ｆ／２４７Ｎ／２６１Ａ／２７１Ｈ、１０Ｔ／９２Ｙ／１６６Ｓ／２６１Ａ／２７１Ｈ／３９２Ｍ、１０Ｔ／９２Ｙ／１６６Ｓ／２６１Ａ／３１６Ｌ／３２２Ｍ／３３７Ａ、１０Ｔ／９２Ｙ／１６６Ｓ／３３７Ａ／３６８Ｗ、１０Ｔ／９２Ｙ／３０２Ｑ／３３７Ａ、１０Ｔ／９２Ｙ／３１６Ｌ／３２２Ｍ、１０Ｔ／２０６Ｋ、１０Ｔ／２０６Ｋ／２４７Ｎ／２６１Ａ、１０Ｔ／２１７Ｆ／３２２Ｍ、１０Ｔ／２６１Ａ、１０Ｔ／２６１Ａ／３３７Ａ／３９２Ｍ、１０Ｔ／３１６Ｌ／３９２Ｍ、１０Ｔ／３６８Ｗ、３９Ｍ／４４Ｌ／４７Ｓ／９２Ｙ／１６６Ｓ／２０６Ｋ／３９２Ｍ、３９Ｍ／４４Ｌ／４７Ｓ／９２Ｙ／２０６Ｋ／２４７Ｎ／２６１Ａ、３９Ｍ／４４Ｌ／４７Ｓ／９２Ｙ／２０６Ｋ／３９２Ｍ、３９Ｍ／４４Ｌ／４７Ｓ／２０６Ｋ／３３７Ａ／３６８Ｗ／３９２Ｍ、３９Ｍ／４４Ｌ／９２Ｙ／１６６Ｓ／２４７Ｎ／２６１Ａ／３０２Ｑ／３３７Ａ、３９Ｍ／４４Ｌ／１６６Ｓ／２７１Ｈ、３９Ｍ／４４Ｌ／１６６Ｓ／２７１Ｈ／３３７Ａ／３６８Ｗ／３９２Ｍ、３９Ｍ／４７Ｓ／９２Ｙ／３１６Ｌ／３２２Ｍ、３９Ｍ／４７Ｓ／９２Ｙ／３９２Ｍ、３９Ｍ／４７Ｓ／１６６Ｓ／２１７Ｆ／２６１Ａ／３９２Ｍ、３９Ｍ／４７Ｓ／２１７Ｆ／２４７Ｎ／３６８Ｗ、３９Ｍ／４７Ｓ／２４７Ｎ、３９Ｍ／９２Ｙ／１６６Ｓ／２１７Ｆ／３９２Ｍ、３９Ｍ／９２Ｙ／２６１Ａ／３０２Ｑ、３９Ｍ／１６６Ｓ／２１７Ｆ／２６１Ａ／３１６Ｌ／３６８Ｗ、３９Ｍ／３２２Ｍ、３９Ｍ／３９２Ｍ、４４Ｌ／４７Ｓ、４４Ｌ／４７Ｓ／９２Ｙ／２１７Ｆ／２７１Ｈ、４４Ｌ／４７Ｓ／９２Ｙ／２１７Ｆ／３１６Ｌ／３２２Ｍ／３９２Ｍ、４４Ｌ／４７Ｓ／９２Ｙ／３９２Ｍ、４４Ｌ／４７Ｓ／１６６Ｓ、４４Ｌ／４７Ｓ／１６６Ｓ／２７１Ｈ、４４Ｌ／４７Ｓ／２４７Ｎ／２７１Ｈ／３９２Ｍ、４４Ｌ／３１６Ｌ／３２２Ｍ／３９２Ｍ、４４Ｌ／３３７Ａ、４７Ｓ／１６６Ｓ／２０６Ｋ／２１７Ｆ／２４７Ｎ／３３７Ａ、４７Ｓ／１６６Ｓ／２１７Ｆ／２７１Ｈ／３３７Ａ、４７Ｓ／２０６Ｋ、４７Ｓ／２１７Ｆ／２４７Ｎ／２６１Ａ、４７Ｓ／２７１Ｈ、５２Ｎ／２１７Ｆ／３０２Ｑ／３１６Ｌ、９２Ｙ／１６６Ｓ／２０６Ｋ／２７１Ｈ／３１６Ｌ、９２Ｙ／１６６Ｓ／２１７Ｆ／２６１Ａ／２７１Ｈ／３９２Ｍ、９２Ｙ／１６６Ｓ／２１７Ｆ／３１６Ｌ／３３７Ａ／３９２Ｍ、９２Ｙ／１６６Ｓ／２４７Ｎ、９２Ｙ／１６６Ｓ／３１６Ｌ、９２Ｙ／２０６Ｋ／３２２Ｍ、９２Ｙ／２１７Ｆ、９２Ｙ／２１７Ｆ／２７１Ｈ／３３７Ａ、９２Ｙ／２６１Ａ／２７１Ｈ、９２Ｙ／２７１Ｈ、１６６Ｓ／２１７Ｆ／３１６Ｌ／３２２Ｍ／３３７Ａ、１６６Ｓ／２４７Ｎ／２７１Ｈ／３１６Ｌ、１６６Ｓ／３１６Ｌ／３２２Ｍ／３３７Ａ、２０６Ｋ／２１７Ｆ、２１７Ｆ／３９２Ｍ、２４７Ｎ／３１６Ｌ、３１６Ｌ／３２２Ｍ／３６８Ｗ、および３１６Ｌ／３３７Ａ／３９２Ｍから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号３７４を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号３７４と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、Ｐ１０Ｔ／Ｋ３６Ｍ／Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ｄ２４７Ｎ／Ｇ２６１Ａ／Ｄ３１６Ｌ／Ｔ３９２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｅ３９Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ｈ９２Ｙ／Ａ２０６Ｋ／Ｒ２１７Ｆ、Ｐ１０Ｔ／Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ｄ３１６Ｌ、Ｐ１０Ｔ／Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ｐ３３７Ａ、Ｐ１０Ｔ／Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ｇ２６１Ａ／Ｄ３１６Ｌ／Ｉ３２２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ｋ３０２Ｑ／Ｉ３２２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ｔ３９２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｈ９２Ｙ／Ｒ２１７Ｆ／Ｋ３０２Ｑ／Ｉ３２２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｈ９２Ｙ／Ｋ３０２Ｑ／Ｉ３２２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｐ１６６Ｓ／Ｇ２６１Ａ／Ａ２７１Ｈ／Ｄ３１６Ｌ／Ｉ３２２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｔ３９２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｅ３９Ｍ／Ｔ４７Ｓ／Ｈ９２Ｙ／Ｐ３３７Ａ、Ｐ１０Ｔ／Ｅ３９Ｍ／Ｈ９２Ｙ／Ｗ１３１Ｇ／Ｐ１６６Ｓ／Ａ２７１Ｈ／Ｄ３１６Ｌ／Ｉ３２２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｅ３９Ｍ／Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ｒ２１７Ｆ／Ｄ２４７Ｎ／Ａ２７１Ｈ、Ｐ１０Ｔ／Ｅ３９Ｍ／Ｈ９２Ｙ／Ｒ２１７Ｆ／Ｄ３１６Ｌ、Ｐ１０Ｔ／Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ｐ１６６Ｓ／Ｇ２６１Ａ／Ａ２７１Ｈ、Ｐ１０Ｔ／Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ｐ１６６Ｓ／Ａ２７１Ｈ／Ｉ３２２Ｍ／Ａ３６８Ｗ、Ｐ１０Ｔ／Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ｒ２１７Ｆ／Ａ２７１Ｈ／Ｄ３１６Ｌ／Ｉ３２２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｒ４４Ｌ／Ｈ９２Ｙ、Ｐ

１０Ｔ／Ｒ４４Ｌ／Ｈ９２Ｙ／Ｒ２１７Ｆ／Ｄ２４７Ｎ／Ａ２７１Ｈ／Ｋ３０２Ｑ／Ｄ３１６Ｌ／Ｔ３９２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｒ４４Ｌ／Ｐ１６６Ｓ／Ｋ３０２Ｑ、Ｐ１０Ｔ／Ｒ４４Ｌ／Ａ２０６Ｋ／Ｄ３１６Ｌ／Ｉ３２２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｔ４７Ｓ／Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ａ２７１Ｈ／Ｄ３１６Ｌ／Ｐ３３７Ａ、Ｐ１０Ｔ／Ｔ４７Ｓ／Ｈ９２Ｙ／Ａ２７１Ｈ／Ｋ３０２Ｑ、Ｐ１０Ｔ／Ｔ４７Ｓ／Ｈ９２Ｙ／Ｄ３１６Ｌ／Ｉ３２２Ｍ／Ｔ３９２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｔ４７Ｓ／Ｐ１６６Ｓ／Ａ２７１Ｈ、Ｐ１０Ｔ／Ｔ４７Ｓ／Ｐ１６６Ｓ／Ｄ３１６Ｌ、Ｐ１０Ｔ／Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ、Ｐ１０Ｔ／Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ｒ２１７Ｆ／Ｄ２４７Ｎ／Ｇ２６１Ａ／Ａ２７１Ｈ、Ｐ１０Ｔ／Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ｇ２６１Ａ／Ａ２７１Ｈ／Ｔ３９２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ｇ２６１Ａ／Ｄ３１６Ｌ／Ｉ３２２Ｍ／Ｐ３３７Ａ、Ｐ１０Ｔ／Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ｐ３３７Ａ／Ａ３６８Ｗ、Ｐ１０Ｔ／Ｈ９２Ｙ／Ｋ３０２Ｑ／Ｐ３３７Ａ、Ｐ１０Ｔ／Ｈ９２Ｙ／Ｄ３１６Ｌ／Ｉ３２２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ａ２０６Ｋ、Ｐ１０Ｔ／Ａ２０６Ｋ／Ｄ２４７Ｎ／Ｇ２６１Ａ、Ｐ１０Ｔ／Ｒ２１７Ｆ／Ｉ３２２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｇ２６１Ａ、Ｐ１０Ｔ／Ｇ２６１Ａ／Ｐ３３７Ａ／Ｔ３９２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ｄ３１６Ｌ／Ｔ３９２Ｍ、Ｐ１０Ｔ／Ａ３６８Ｗ、Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ａ２０６Ｋ／Ｔ３９２Ｍ、Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ｈ９２Ｙ／Ａ２０６Ｋ／Ｄ２４７Ｎ／Ｇ２６１Ａ、Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ｈ９２Ｙ／Ａ２０６Ｋ／Ｔ３９２Ｍ、Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ａ２０６Ｋ／Ｐ３３７Ａ／Ａ３６８Ｗ／Ｔ３９２Ｍ、Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ｄ２４７Ｎ／Ｇ２６１Ａ／Ｋ３０２Ｑ／Ｐ３３７Ａ、Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｐ１６６Ｓ／Ａ２７１Ｈ、Ｅ３９Ｍ／Ｒ４４Ｌ／Ｐ１６６Ｓ／Ａ２７１Ｈ／Ｐ３３７Ａ／Ａ３６８Ｗ／Ｔ３９２Ｍ、Ｅ３９Ｍ／Ｔ４７Ｓ／Ｈ９２Ｙ／Ｄ３１６Ｌ／Ｉ３２２Ｍ、Ｅ３９Ｍ／Ｔ４７Ｓ／Ｈ９２Ｙ／Ｔ３９２Ｍ、Ｅ３９Ｍ／Ｔ４７Ｓ／Ｐ１６６Ｓ／Ｒ２１７Ｆ／Ｇ２６１Ａ／Ｔ３９２Ｍ、Ｅ３９Ｍ／Ｔ４７Ｓ／Ｒ２１７Ｆ／Ｄ２４７Ｎ／Ａ３６８Ｗ、Ｅ３９Ｍ／Ｔ４７Ｓ／Ｄ２４７Ｎ、Ｅ３９Ｍ／Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ｒ２１７Ｆ／Ｔ３９２Ｍ、Ｅ３９Ｍ／Ｈ９２Ｙ／Ｇ２６１Ａ／Ｋ３０２Ｑ、Ｅ３９Ｍ／Ｐ１６６Ｓ／Ｒ２１７Ｆ／Ｇ２６１Ａ／Ｄ３１６Ｌ／Ａ３６８Ｗ、Ｅ３９Ｍ／Ｉ３２２Ｍ、Ｅ３９Ｍ／Ｔ３９２Ｍ、Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ、Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ｈ９２Ｙ／Ｒ２１７Ｆ／Ａ２７１Ｈ、Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ｈ９２Ｙ／Ｒ２１７Ｆ／Ｄ３１６Ｌ／Ｉ３２２Ｍ／Ｔ３９２Ｍ、Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ｈ９２Ｙ／Ｔ３９２Ｍ、Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ｐ１６６Ｓ、Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ｐ１６６Ｓ／Ａ２７１Ｈ、Ｒ４４Ｌ／Ｔ４７Ｓ／Ｄ２４７Ｎ／Ａ２７１Ｈ／Ｔ３９２Ｍ、Ｒ４４Ｌ／Ｄ３１６Ｌ／Ｉ３２２Ｍ／Ｔ３９２Ｍ、Ｒ４４Ｌ／Ｐ３３７Ａ、Ｔ４７Ｓ／Ｐ１６６Ｓ／Ａ２０６Ｋ／Ｒ２１７Ｆ／Ｄ２４７Ｎ／Ｐ３３７Ａ、Ｔ４７Ｓ／Ｐ１６６Ｓ／Ｒ２１７Ｆ／Ａ２７１Ｈ／Ｐ３３７Ａ、Ｔ４７Ｓ／Ａ２０６Ｋ、Ｔ４７Ｓ／Ｒ２１７Ｆ／Ｄ２４７Ｎ／Ｇ２６１Ａ、Ｔ４７Ｓ／Ａ２７１Ｈ、Ｄ５２Ｎ／Ｒ２１７Ｆ／Ｋ３０２Ｑ／Ｄ３１６Ｌ、Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ａ２０６Ｋ／Ａ２７１Ｈ／Ｄ３１６Ｌ、Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ｒ２１７Ｆ／Ｇ２６１Ａ／Ａ２７１Ｈ／Ｔ３９２Ｍ、Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ｒ２１７Ｆ／Ｄ３１６Ｌ／Ｐ３３７Ａ／Ｔ３９２Ｍ、Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ｄ２４７Ｎ、Ｈ９２Ｙ／Ｐ１６６Ｓ／Ｄ３１６Ｌ、Ｈ９２Ｙ／Ａ２０６Ｋ／Ｉ３２２Ｍ、Ｈ９２Ｙ／Ｒ２１７Ｆ、Ｈ９２Ｙ／Ｒ２１７Ｆ／Ａ２７１Ｈ／Ｐ３３７Ａ、Ｈ９２Ｙ／Ｇ２６１Ａ／Ａ２７１Ｈ、Ｈ９２Ｙ／Ａ２７１Ｈ、Ｐ１６６Ｓ／Ｒ２１７Ｆ／Ｄ３１６Ｌ／Ｉ３２２Ｍ／Ｐ３３７Ａ、Ｐ１６６Ｓ／Ｄ２４７Ｎ／Ａ２７１Ｈ／Ｄ３１６Ｌ、Ｐ１６６Ｓ／Ｄ３１６Ｌ／Ｉ３２２Ｍ／Ｐ３３７Ａ、Ａ２０６Ｋ／Ｒ２１７Ｆ、Ｒ２１７Ｆ／Ｔ３９２Ｍ、Ｄ２４７Ｎ／Ｄ３１６Ｌ、Ｄ３１６Ｌ／Ｉ３２２Ｍ／Ａ３６８Ｗ、およびＤ３１６Ｌ／Ｐ３３７Ａ／Ｔ３９２Ｍから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号３７４を参照してナンバリングされる。

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号７０４と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列またはその機能的断片を含む組換えアルファガラクトシダーゼＡをコードし、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、２、４、５、２４／５９、２４／１４３／１４４、２４／１４３／２０２／３３３、２４／１４３／２０２／３５２／３９０／３９１、２４／１４３／３３３／３５２／３８７／３９０／３９１、２４／１４３／３９０／３９１、２４／２０２、２４／２０２／２７１、２４／２０２／３３３／３５２、２４／２７１／３５２、２４／３５２／３８７／３９０／３９１、２４／３８７／３９１、３１、４０、５９、５９／１４３、５９／１４３／２０２、５９／１４３／２０２／２７１／３３３、５９／１４３／２７１、５９／１４３／３３３、５９／２０２、５９／２０２／３３３、５９／２７１／３８７／３９０、７３、７６、８０、８３、８４、９１／２１５／３６１、１２２、１２３、１４３、１４３／２０２、１４３／２７１、１４３／２７１／３５２／３９０、１４３／３３３、１４３／３３３／３８７／３９０、１４３／３８７／３９１、１４７、１５５、１６４、１６５、１７９、１８６、２０２、２０２／３３３、２１０、２１５／２１８、２１８、２１８／３６１、２１８／３６１／３９８、２１８／３９８、２４６、２５４／３９８、２７１、２７１／３３３、２７１／３３３／３９０／３９１、２７１／３３３／３９１、２７１／３５２／３９１、２７３、２７５、２７７、２７８、２８０、２８１、２８３、２８４、２８７、３００、３０３、３０４、３２５、３３１、３３２、３３３／３５２、３３３／３９０／３９１、３３３／３９１、３３４、３３５、３３６、３３８、３３９、３４０、３４１、３４３、３５９、３６０、３６１、３６２、３６７、３６９、３７１、３７３、３７５、３７７、３８２、３８２／３９８、３８５、３８７／３９１、３９０、および３９８から選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号７０４を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号７０４と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、２Ｓ、４Ｌ、５Ｍ、５Ｖ、２４Ｓ／５９Ａ、２４Ｓ／１４３Ｓ／１４４Ｎ、２４Ｓ／１４３Ｓ／２０２Ｎ／３３３Ｎ、２４Ｓ／１４３Ｓ／２０２Ｎ／３５２Ｎ／３９０Ｎ／３９１Ｎ、２４Ｓ／１４３Ｓ／３３３Ｎ／３５２Ｎ／３８７Ｎ／３９０Ｔ／３９１Ｎ、２４Ｓ／１４３Ｓ／３９０Ｔ／３９１Ｎ、２４Ｓ／２０２Ｎ、２４Ｓ／２０２Ｎ／２７１Ｎ、２４Ｓ／２０２Ｎ／３３３Ｎ／３５２Ｎ、２４Ｓ／２７１Ｎ／３５２Ｎ、２４Ｓ／３５２Ｎ／３８７Ｎ／３９０Ｎ／３９１Ｎ、２４Ｓ／３８７Ｎ／３９１Ｎ、３１Ｆ、３１Ｈ、３１Ｌ、３１Ｔ、３１Ｗ、４０Ｑ、５９Ａ、５９Ａ／１４３Ｓ、５９Ａ／１４３Ｓ／２７１Ｎ、５９Ａ／２０２Ｎ、５９Ｔ、５９Ｔ／１４３Ｓ／２０２Ｎ、５９Ｔ／１４３Ｓ／３３３Ｎ、５９Ｔ／２０２Ｎ／３３３Ｎ、５９Ｖ／１４３Ｓ／２０２Ｎ／２７１Ｎ／３３３Ｎ、５９Ｖ／２７１Ｎ／３８７Ｎ／３９０Ｔ、７３Ａ、７６Ａ、７６Ｆ、７６Ｍ、７６Ｓ、８０Ｔ、８３Ｒ、８３Ｓ、８４Ｇ、８４Ｋ、８４Ｒ、９１Ｓ／２１５Ｓ／３６１Ｔ、１２２Ｅ、１２２Ｎ、１２２Ｓ、１２３Ｑ、１２３Ｒ、１２３Ｓ、１２３Ｔ、１４３Ｓ、１４３Ｓ／２０２Ｎ、１４３Ｓ／２７１Ｎ、１４３Ｓ／２７１Ｎ／３５２Ｎ／３９０Ｎ、１４３Ｓ／３３３Ｎ、１４３Ｓ／３３３Ｎ／３８７Ｎ／３９０Ｔ、１４３Ｓ／３８７Ｎ／３９１Ｎ、１４７Ｌ、１４７Ｓ、１５５Ａ、１５５Ｄ、１５５Ｆ、１５５Ｌ、１５５Ｒ、１５５Ｔ、１６４Ｅ、１６５Ｉ、１７９Ｈ、１７９Ｌ、１７９Ｒ、１７９Ｗ、１８６Ｅ、１８６Ｆ、１８６Ｍ、１８６Ｐ、１８６Ｒ、１８６Ｓ、１８６Ｙ、２０２Ｎ、２０２Ｎ／３３３Ｎ、２１０Ｉ、２１５Ｓ／２１８Ｙ、２１８Ｙ、２１８Ｙ／３６１Ｔ、２１８Ｙ／３６１Ｔ／３９８Ｆ、２１８Ｙ／３９８Ｆ、２４６Ｙ、２５４Ｔ／３９８Ｆ、２７１Ｎ、２７１Ｎ／３３３Ｎ、２７１Ｎ／３３３Ｎ／３９０Ｎ／３９１Ｎ、２７１Ｎ／３３３Ｎ／３９１Ｎ、２７１Ｎ／３５２Ｎ／３９１Ｎ、２７３Ｌ、２７５Ａ、２７５Ｇ、２７７Ｑ、２７７Ｖ、２７８Ｎ、２７８Ｒ、２７８Ｓ、２８０Ｇ、２８１Ｉ、２８１Ｍ、２８３Ｌ、２８３Ｐ、２８３Ｔ、２８３Ｖ、２８４Ａ、２８４Ｅ、２８４Ｇ、２８４Ｌ、２８４Ｍ、２８４Ｒ、２８４Ｓ、２８７Ｒ、３００Ｆ、３０３Ａ、３０３Ｃ、３０３Ｗ、３０４Ｔ、３０４Ｖ、３０４Ｗ、３２５Ａ、３３１Ｍ、３３２Ｇ、３３２Ｈ、３３３Ｎ／３５２Ｎ、３３３Ｎ／３９０Ｎ／３９１Ｎ、３３３Ｎ／３９０Ｓ／３９１Ｎ、３３３Ｎ／３９１Ｎ、３３４Ｃ、３３４Ｖ、３３５Ａ、３３５Ｌ、３３６Ｆ、３３６Ｇ、３３６Ｓ、３３６Ｔ、３３８Ｌ、３３９Ｇ、３３９Ｎ、３３９Ｑ、３３９Ｖ、３４０Ｈ、３４０Ｉ、３４０Ｋ、３４０Ｍ、３４０Ｐ、３４０Ｗ、３４１Ｆ、３４１Ｍ、３４３Ｌ、３４３Ｒ、３４３Ｓ、３４３Ｗ、３５９Ｆ、３５９Ｌ、３５９Ｒ、３６０Ｈ、３６０Ｖ、３６１Ｔ、３６１Ｖ、３６２Ｈ、３６７Ａ、３６７Ｄ、３６７Ｌ、３６７Ｍ、３６９Ｄ、３７１Ｇ、３７３Ｌ、３７３Ｓ、３７５Ｌ、３７５Ｑ、３７７Ｑ、３８２Ｉ、３８２Ｉ／３９８Ｆ、３８５Ｒ、３８７Ｎ／３９１Ｎ、３９０Ｓ、および３９８Ｆから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号７０４を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号７０４と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、Ｄ２Ｓ、Ｇ４Ｌ、Ｌ５Ｍ、Ｌ５Ｖ、Ｄ２４Ｓ／Ｃ５９Ａ、Ｄ２４Ｓ／Ｃ１４３Ｓ／Ｄ１４４Ｎ、Ｄ２４Ｓ／Ｃ１４３Ｓ／Ｄ２０２Ｎ／Ｇ３３３Ｎ、Ｄ２４Ｓ／Ｃ１４３Ｓ／Ｄ２０２Ｎ／Ｆ３５２Ｎ／Ｍ３９０Ｎ／Ｑ３９１Ｎ、Ｄ２４Ｓ／Ｃ１４３Ｓ／Ｇ３３３Ｎ／Ｆ３５２Ｎ／Ｅ３８７Ｎ／Ｍ３９０Ｔ／Ｑ３９１Ｎ、Ｄ２４Ｓ／Ｃ１４３Ｓ／Ｍ３９０Ｔ／Ｑ３９１Ｎ、Ｄ２４Ｓ／Ｄ２０２Ｎ、Ｄ２４Ｓ／Ｄ２０２Ｎ／Ａ２７１Ｎ、Ｄ２４Ｓ／Ｄ２０２Ｎ／Ｇ３３３Ｎ／Ｆ３５２Ｎ、Ｄ２４Ｓ／Ａ２７１Ｎ／Ｆ３５２Ｎ、Ｄ２４Ｓ／Ｆ３５２Ｎ／Ｅ３８７Ｎ／Ｍ３９０Ｎ／Ｑ３９１Ｎ、Ｄ２４Ｓ／Ｅ３８７Ｎ／Ｑ３９１Ｎ、Ｓ３１Ｆ、Ｓ３１Ｈ、Ｓ３１Ｌ、Ｓ３１Ｔ、Ｓ３１Ｗ、Ｅ４０Ｑ、Ｃ５９Ａ、Ｃ５９Ａ／Ｃ１４３Ｓ、Ｃ５９Ａ／Ｃ１４３Ｓ／Ａ２７１Ｎ、Ｃ５９Ａ／Ｄ２０２Ｎ、Ｃ５９Ｔ、Ｃ５９Ｔ／Ｃ１４３Ｓ／Ｄ２０２Ｎ、Ｃ５９Ｔ／Ｃ１４３Ｓ／Ｇ３３３Ｎ、Ｃ５９Ｔ／Ｄ２０２Ｎ／Ｇ３３３Ｎ、Ｃ５９Ｖ／Ｃ１４３Ｓ／Ｄ２０２Ｎ／Ａ２７１Ｎ／Ｇ３３３Ｎ、Ｃ５９Ｖ／Ａ２７１Ｎ／Ｅ３８７Ｎ／Ｍ３９０Ｔ、Ｇ７３Ａ、Ｑ７６Ａ、Ｑ７６Ｆ、Ｑ７６Ｍ、Ｑ７６Ｓ、Ｑ８０Ｔ、Ｐ８３Ｒ、Ｐ８３Ｓ、Ｈ８４Ｇ、Ｈ８４Ｋ、Ｈ８４Ｒ、Ｎ９１Ｓ／Ｔ２１５Ｓ／Ｒ３６１Ｔ、Ｄ１２２Ｅ、Ｄ１２２Ｎ、Ｄ１２２Ｓ、Ｉ１２３Ｑ、Ｉ１２３Ｒ、Ｉ１２３Ｓ、Ｉ１２３Ｔ、Ｃ１４３Ｓ、Ｃ１４３Ｓ／Ｄ２０２Ｎ、Ｃ１４３Ｓ／Ａ２７１Ｎ、Ｃ１４３Ｓ／Ａ２７１Ｎ／Ｆ３５２Ｎ／Ｍ３９０Ｎ、Ｃ１４３Ｓ／Ｇ３３３Ｎ、Ｃ１４３Ｓ／Ｇ３３３Ｎ／Ｅ３８７Ｎ／Ｍ３９０Ｔ、Ｃ１４３Ｓ／Ｅ３８７Ｎ／Ｑ３９１Ｎ、Ｅ１４７Ｌ、Ｅ１４７Ｓ、Ｈ１５５Ａ、Ｈ１５５Ｄ、Ｈ１５５Ｆ、Ｈ１５５Ｌ、Ｈ１５５Ｒ、Ｈ１５５Ｔ、Ｇ１６４Ｅ、Ｒ１６５Ｉ、Ｐ１７９Ｈ、Ｐ１７９Ｌ、Ｐ１７９Ｒ、Ｐ１７９Ｗ、Ｔ１８６Ｅ、Ｔ１８６Ｆ、Ｔ１８６Ｍ、Ｔ１８６Ｐ、Ｔ１８６Ｒ、Ｔ１８６Ｓ、Ｔ１８６Ｙ、Ｄ２０２Ｎ、Ｄ２０２Ｎ／Ｇ３３３Ｎ、Ｓ２１０Ｉ、Ｔ２１５Ｓ／Ｎ２１８Ｙ、Ｎ２１８Ｙ、Ｎ２１８Ｙ／Ｒ３６１Ｔ、Ｎ２１８Ｙ／Ｒ３６１Ｔ／Ｌ３９８Ｆ、Ｎ２１８Ｙ／Ｌ３９８Ｆ、Ｗ２４６Ｙ、Ａ２５４Ｔ／Ｌ３９８Ｆ、Ａ２７１Ｎ、Ａ２７１Ｎ／Ｇ３３３Ｎ、Ａ２７１Ｎ／Ｇ３３３Ｎ／Ｍ３９０Ｎ／Ｑ３９１Ｎ、Ａ２７１Ｎ／Ｇ３３３Ｎ／Ｑ３９１Ｎ、Ａ２７１Ｎ／Ｆ３５２Ｎ／Ｑ３９１Ｎ、Ｓ２７３Ｌ、Ｑ２７５Ａ、Ｑ２７５Ｇ、Ｋ２７７Ｑ、Ｋ２７７Ｖ、Ａ２７８Ｎ、Ａ２７８Ｒ、Ａ２７８Ｓ、Ｌ２８０Ｇ、Ｑ２８１Ｉ、Ｑ２８１Ｍ、Ｋ２８３Ｌ、Ｋ２８３Ｐ、Ｋ２８３Ｔ、Ｋ２８３Ｖ、Ｄ２８４Ａ、Ｄ２８４Ｅ、Ｄ２８４Ｇ、Ｄ２８４Ｌ、Ｄ２８４Ｍ、Ｄ２８４Ｒ、Ｄ２８４Ｓ、Ａ２８７Ｒ、Ｌ３００Ｆ、Ｇ３０３Ａ、Ｇ３０３Ｃ、Ｇ３０３Ｗ、Ｄ３０４Ｔ、Ｄ３０４Ｖ、Ｄ３０４Ｗ、Ｒ３２５Ａ、Ｐ３３１Ｍ、Ｒ３３２Ｇ、Ｒ３３２Ｈ、Ｇ３３３Ｎ／Ｆ３５２Ｎ、Ｇ３３３Ｎ／Ｍ３９０Ｎ／Ｑ３９１Ｎ、Ｇ３３３Ｎ／Ｍ３９０Ｓ／Ｑ３９１Ｎ、Ｇ３３３Ｎ／Ｑ３９１Ｎ、Ｙ３３４Ｃ、Ｙ３３４Ｖ、Ｔ３３５Ａ、Ｔ３３５Ｌ、Ｉ３３６Ｆ、Ｉ３３６Ｇ、Ｉ３３６Ｓ、Ｉ３３６Ｔ、Ｖ３３８Ｌ、Ａ３３９Ｇ、Ａ３３９Ｎ、Ａ３３９Ｑ、Ａ３３９Ｖ、Ｓ３４０Ｈ、Ｓ３４０Ｉ、Ｓ３４０Ｋ、Ｓ３４０Ｍ、Ｓ３４０Ｐ、Ｓ３４０Ｗ、Ｌ３４１Ｆ、Ｌ３４１Ｍ、Ｋ３４３Ｌ、Ｋ３４３Ｒ、Ｋ３４３Ｓ、Ｋ３４３Ｗ、Ｖ３５９Ｆ、Ｖ３５９Ｌ、Ｖ３５９Ｒ、Ｋ３６０Ｈ、Ｋ３６０Ｖ、Ｒ３６１Ｔ、Ｒ３６１Ｖ、Ｋ３６２Ｈ、Ｅ３６７Ａ、Ｅ３６７Ｄ、Ｅ３６７Ｌ、Ｅ３６７Ｍ、Ｔ３６９Ｄ、Ｒ３７１Ｇ、Ｒ３７３Ｌ、Ｒ３７３Ｓ、Ｈ３７５Ｌ、Ｈ３７５Ｑ、Ｎ３７７Ｑ、Ｖ３８２Ｉ、Ｖ３８２Ｉ／Ｌ３９８Ｆ、Ｑ３８５Ｒ、Ｅ３８７Ｎ／Ｑ３９１Ｎ、Ｍ３９０Ｓ、およびＬ３９８Ｆから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号７０４を参照してナンバリングされる。

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号３７４と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列またはその機能的断片を含む組換えアルファガラクトシダーゼＡをコードし、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、１０、３９、４４、４７、９２、１６６、２０６、２１７、２４７、２６１、２７１、３０２、３１６、３２２、３３７、３６８、および３９２から選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号３７４を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号３７４と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、１０Ａ、１０Ｃ、１０Ｄ、１０Ｅ、１０Ｆ、１０Ｇ、１０Ｈ、１０Ｉ、１０Ｋ、１０Ｌ、１０Ｍ、１０Ｎ、１０Ｑ、１０Ｒ、１０Ｓ、１０Ｔ、１０Ｖ、１０Ｗ、１０Ｙ、３９Ａ、３９Ｃ、３９Ｄ、３９Ｆ、３９Ｇ、３９Ｈ、３９Ｉ、３９Ｋ、３９Ｌ、３９Ｍ、３９Ｎ、３９Ｐ、３９Ｑ、３９Ｒ、３９Ｓ、３９Ｔ、３９Ｖ、３９Ｗ、３９Ｙ、４４Ａ、４４Ｃ、４４Ｄ、４４Ｅ、４４Ｆ、４４Ｇ、４４Ｈ、４４Ｉ、４４Ｋ、４４Ｌ、４４Ｎ、４４Ｐ、４４Ｑ、４４Ｓ、４４Ｔ、４４Ｖ、４４Ｗ、４４Ｙ、４７Ａ、４７Ｃ、４７Ｄ、４７Ｅ、４７Ｆ、４７Ｇ、４７Ｈ、４７Ｉ、４７Ｋ、４７Ｌ、４７Ｍ、４７Ｎ、４７Ｐ、４７Ｑ、４７Ｒ、４７Ｓ、４７Ｖ、４７Ｗ、４７Ｙ、９２Ａ、９２Ｃ、９２Ｄ、９２Ｅ、９２Ｆ、９２Ｇ、９２Ｉ、９２Ｋ、９２Ｌ、９２Ｍ、９２Ｎ、９２Ｐ、９２Ｑ、９２Ｒ、９２Ｓ、９２Ｔ、９２Ｖ、９２Ｗ、９２Ｙ、１６６Ａ、１６６Ｃ、１６６Ｄ、１６６Ｅ、１６６Ｆ、１６６Ｇ、１６６Ｈ、１６６Ｉ、１６６Ｋ、１６６Ｌ、１６６Ｍ、１６６Ｎ、１６６Ｑ、１６６Ｒ、１６６Ｓ、１６６Ｔ、１６６Ｖ、１６６Ｗ、１６６Ｙ、２０６Ｃ、２０６Ｄ、２０６Ｅ、２０６Ｆ、２０６Ｇ、２０６Ｈ、２０６Ｉ、２０６Ｋ、２０６Ｌ、２０６Ｍ、２０６Ｎ、２０６Ｐ、２０６Ｑ、２０６Ｒ、２０６Ｓ、２０６Ｔ、２０６Ｖ、２０６Ｗ、２０６Ｙ、２１７Ａ、２１７Ｃ、２１７Ｄ、２１７Ｅ、２１７Ｆ、２１７Ｇ、２１７Ｈ、２１７Ｉ、２１７Ｋ、２１７Ｌ、２１７Ｍ、２１７Ｎ、２１７Ｐ、２１７Ｑ、２１７Ｓ、２１７Ｔ、２１７Ｖ、２１７Ｗ、２１７Ｙ、２４７Ａ、２４７Ｃ、２４７Ｅ、２４７Ｆ、２４７Ｇ、２４７Ｈ、２４７Ｉ、２４７Ｋ、２４７Ｌ、２４７Ｍ、２４７Ｎ、２４７Ｐ、２４７Ｑ、２４７Ｒ、２４７Ｓ、２４７Ｔ、２４７Ｖ、２４７Ｗ、２４７Ｙ、２６１Ａ、２６１Ｃ、２６１Ｄ、２６１Ｅ、２６１Ｆ、２６１Ｈ、２６１Ｉ、２６１Ｋ、２６１Ｌ、２６１Ｍ、２６１Ｎ、２６１Ｐ、２６１Ｑ、２６１Ｒ、２６１Ｓ、２６１Ｔ、２６１Ｖ、２６１Ｗ、２６１Ｙ、２７１Ｃ、２７１Ｄ、２７１Ｅ、２７１Ｆ、２７１Ｇ、２７１Ｈ、２７１Ｉ、２７１Ｋ、２７１Ｌ、２７１Ｍ、２７１Ｎ、２７１Ｐ、２７１Ｑ、２７１Ｒ、２７１Ｓ、２７１Ｔ、２７１Ｖ、２７１Ｗ、２７１Ｙ、３０２Ａ、３０２Ｃ、３０２Ｄ、３０２Ｅ、３０２Ｆ、３０２Ｇ、３０２Ｈ、３０２Ｉ、３０２Ｌ、３０２Ｍ、３０２Ｎ、３０２Ｐ、３０２Ｑ、３０２Ｒ、３０２Ｓ、３０２Ｔ、３０２Ｖ、３０２Ｗ、３０２Ｙ、３１６Ａ、３１６Ｃ、３１６Ｅ、３１６Ｆ、３１６Ｇ、３１６Ｈ、３１６Ｉ、３１６Ｋ、３１６Ｌ、３１６Ｍ、３１６Ｎ、３１６Ｐ、３１６Ｑ、３１６Ｒ、３１６Ｓ、３１６Ｔ、３１６Ｖ、３１６Ｗ、３１６Ｙ、３２２Ａ、３２２Ｃ、３２２Ｄ、３２２Ｅ、３２２Ｆ、３２２Ｇ、３２２Ｈ、３２２Ｋ、３２２Ｌ、３２２Ｍ、３２２Ｎ、３２２Ｐ、３２２Ｑ、３２２Ｒ、３２２Ｓ、３２２Ｔ、３２２Ｖ、３２２Ｗ、３２２Ｙ、３３７Ａ、３３７Ｃ、３３７Ｄ、３３７Ｅ、３３７Ｆ、３３７Ｇ、３３７Ｈ、３３７Ｉ、３３７Ｋ、３３７Ｌ、３３７Ｍ、３３７Ｎ、３３７Ｑ、３３７Ｒ、３３７Ｓ、３３７Ｔ、３３７Ｖ、３３７Ｗ、３３７Ｙ、３６８Ｃ、３６８Ｄ、３６８Ｅ、３６８Ｆ、３６８Ｇ、３６８Ｈ、３６８Ｉ、３６８Ｋ、３６８Ｌ、３６８Ｍ、３６８Ｎ、３６８Ｐ、３６８Ｑ、３６８Ｒ、３６８Ｓ、３６８Ｔ、３６８Ｖ、３６８Ｗ、３６８Ｙ、３９２Ａ、３９２Ｃ、３９２Ｄ、３９２Ｅ、３９２Ｆ、３９２Ｇ、３９２Ｈ、３９２Ｉ、３９２Ｋ、３９２Ｌ、３９２Ｍ、３９２Ｎ、３９２Ｐ、３９２Ｑ、３９２Ｒ、３９２Ｓ、３９２Ｖ、３９２Ｗ、および３９２Ｙから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号３７４を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号３７４と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的フラグメントを含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、Ｐ１０Ａ、Ｐ１０Ｃ、Ｐ１０Ｄ、Ｐ１０Ｅ、Ｐ１０Ｆ、Ｐ１０Ｇ、Ｐ１０Ｈ、Ｐ１０Ｉ、Ｐ１０Ｋ、Ｐ１０Ｌ、Ｐ１０Ｍ、Ｐ１０Ｎ、Ｐ１０Ｑ、Ｐ１０Ｒ、Ｐ１０Ｓ、Ｐ１０Ｔ、Ｐ１０Ｖ、Ｐ１０Ｗ、Ｐ１０Ｙ、Ｅ３９Ａ、Ｅ３９Ｃ、Ｅ３９Ｄ、Ｅ３９Ｆ、Ｅ３９Ｇ、Ｅ３９Ｈ、Ｅ３９Ｉ、Ｅ３９Ｋ、Ｅ３９Ｌ、Ｅ３９Ｍ、Ｅ３９Ｎ、Ｅ３９Ｐ、Ｅ３９Ｑ、Ｅ３９Ｒ、Ｅ３９Ｓ、Ｅ３９Ｔ、Ｅ３９Ｖ、Ｅ３９Ｗ、Ｅ３９Ｙ、Ｒ４４Ａ、Ｒ４４Ｃ、Ｒ４４Ｄ、Ｒ４４Ｅ、Ｒ４４Ｆ、Ｒ４４Ｇ、Ｒ４４Ｈ、Ｒ４４Ｉ、Ｒ４４Ｋ、Ｒ４４Ｌ、Ｒ４４Ｎ、Ｒ４４Ｐ、Ｒ４４Ｑ、Ｒ４４Ｓ、Ｒ４４Ｔ、Ｒ４４Ｖ、Ｒ４４Ｗ、Ｒ４４Ｙ、Ｔ４７Ａ、Ｔ４７Ｃ、Ｔ４７Ｄ、Ｔ４７Ｅ、Ｔ４７Ｆ、Ｔ４７Ｇ、Ｔ４７Ｈ、Ｔ４７Ｉ、Ｔ４７Ｋ、Ｔ４７Ｌ、Ｔ４７Ｍ、Ｔ４７Ｎ、Ｔ４７Ｐ、Ｔ４７Ｑ、Ｔ４７Ｒ、Ｔ４７Ｓ、Ｔ４７Ｖ、Ｔ４７Ｗ、Ｔ４７Ｙ、Ｈ９２Ａ、Ｈ９２Ｃ、Ｈ９２Ｄ、Ｈ９２Ｅ、Ｈ９２Ｆ、Ｈ９２Ｇ、Ｈ９２Ｉ、Ｈ９２Ｋ、Ｈ９２Ｌ、Ｈ９２Ｍ、Ｈ９２Ｎ、Ｈ９２Ｐ、Ｈ９２Ｑ、Ｈ９２Ｒ、Ｈ９２Ｓ、Ｈ９２Ｔ、Ｈ９２Ｖ、Ｈ９２Ｗ、Ｈ９２Ｙ、Ｐ１６６Ａ、Ｐ１６６Ｃ、Ｐ１６６Ｄ、Ｐ１６６Ｅ、Ｐ１６６Ｆ、Ｐ１６６Ｇ、Ｐ１６６Ｈ、Ｐ１６６Ｉ、Ｐ１６６Ｋ、Ｐ１６６Ｌ、Ｐ１６６Ｍ、Ｐ１６６Ｎ、Ｐ１６６Ｑ、Ｐ１６６Ｒ、Ｐ１６６Ｓ、Ｐ１６６Ｔ、Ｐ１６６Ｖ、Ｐ１６６Ｗ、Ｐ１６６Ｙ、Ａ２０６Ｃ、Ａ２０６Ｄ、Ａ２０６Ｅ、Ａ２０６Ｆ、Ａ２０６Ｇ、Ａ２０６Ｈ、Ａ２０６Ｉ、Ａ２０６Ｋ、Ａ２０６Ｌ、Ａ２０６Ｍ、Ａ２０６Ｎ、Ａ２０６Ｐ、Ａ２０６Ｑ、Ａ２０６Ｒ、Ａ２０６Ｓ、Ａ２０６Ｔ、Ａ２０６Ｖ、Ａ２０６Ｗ、Ａ２０６Ｙ、Ｒ２１７Ａ、Ｒ２１７Ｃ、Ｒ２１７Ｄ、Ｒ２１７Ｅ、Ｒ２１７Ｆ、Ｒ２１７Ｇ、Ｒ２１７Ｈ、Ｒ２１７Ｉ、Ｒ２１７Ｋ、Ｒ２１７Ｌ、Ｒ２１７Ｍ、Ｒ２１７Ｎ、Ｒ２１７Ｐ、Ｒ２１７Ｑ、Ｒ２１７Ｓ、Ｒ２１７Ｔ、Ｒ２１７Ｖ、Ｒ２１７Ｗ、Ｒ２１７Ｙ、Ｄ２４７Ａ、Ｄ２４７Ｃ、Ｄ２４７Ｅ、Ｄ２４７Ｆ、Ｄ２４７Ｇ、Ｄ２４７Ｈ、Ｄ２４７Ｉ、Ｄ２４７Ｋ、Ｄ２４７Ｌ、Ｄ２４７Ｍ、Ｄ２４７Ｎ、Ｄ２４７Ｐ、Ｄ２４７Ｑ、Ｄ２４７Ｒ、Ｄ２４７Ｓ、Ｄ２４７Ｔ、Ｄ２４７Ｖ、Ｄ２４７Ｗ、Ｄ２４７Ｙ、Ｇ２６１Ａ、Ｇ２６１Ｃ、Ｇ２６１Ｄ、Ｇ２６１Ｅ、Ｇ２６１Ｆ、Ｇ２６１Ｈ、Ｇ２６１Ｉ、Ｇ２６１Ｋ、Ｇ２６１Ｌ、Ｇ２６１Ｍ、Ｇ２６１Ｎ、Ｇ２６１Ｐ、Ｇ２６１Ｑ、Ｇ２６１Ｒ、Ｇ２６１Ｓ、Ｇ２６１Ｔ、Ｇ２６１Ｖ、Ｇ２６１Ｗ、Ｇ２６１Ｙ、Ａ２７１Ｃ、Ａ２７１Ｄ、Ａ２７１Ｅ、Ａ２７１Ｆ、Ａ２７１Ｇ、Ａ２７１Ｈ、Ａ２７１Ｉ、Ａ２７１Ｋ、Ａ２７１Ｌ、Ａ２７１Ｍ、Ａ２７１Ｎ、Ａ２７１Ｐ、Ａ２７１Ｑ、Ａ２７１Ｒ、Ａ２７１Ｓ、Ａ２７１Ｔ、Ａ２７１Ｖ、Ａ２７１Ｗ、Ａ２７１Ｙ、Ｋ３０２Ａ、Ｋ３０２Ｃ、Ｋ３０２Ｄ、Ｋ３０２Ｅ、Ｋ３０２Ｆ、Ｋ３０２Ｇ、Ｋ３０２Ｈ、Ｋ３０２Ｉ、Ｋ３０２Ｌ、Ｋ３０２Ｍ、Ｋ３０２Ｎ、Ｋ３０２Ｐ、Ｋ３０２Ｑ、Ｋ３０２Ｒ、Ｋ３０２Ｓ、Ｋ３０２Ｔ、Ｋ３０２Ｖ、Ｋ３０２Ｗ、Ｋ３０２Ｙ、Ｄ３１６Ａ、Ｄ３１６Ｃ、Ｄ３１６Ｅ、Ｄ３１６Ｆ、Ｄ３１６Ｇ、Ｄ３１６Ｈ、Ｄ３１６Ｉ、Ｄ３１６Ｋ、Ｄ３１６Ｌ、Ｄ３１６Ｍ、Ｄ３１６Ｎ、Ｄ３１６Ｐ、Ｄ３１６Ｑ、Ｄ３１６Ｒ、Ｄ３１６Ｓ、Ｄ３１６Ｔ、Ｄ３１６Ｖ、Ｄ３１６Ｗ、Ｄ３１６Ｙ、Ｉ３２２Ａ、Ｉ３２２Ｃ、Ｉ３２２Ｄ、Ｉ３２２Ｅ、Ｉ３２２Ｆ、Ｉ３２２Ｇ、Ｉ３２２Ｈ、Ｉ３２２Ｋ、Ｉ３２２Ｌ、Ｉ３２２Ｍ、Ｉ３２２Ｎ、Ｉ３２２Ｐ、Ｉ３２２Ｑ、Ｉ３２２Ｒ、Ｉ３２２Ｓ、Ｉ３２２Ｔ、Ｉ３２２Ｖ、Ｉ３２２Ｗ、Ｉ３２２Ｙ、Ｐ３３７Ａ、Ｐ３３７Ｃ、Ｐ３３７Ｄ、Ｐ３３７Ｅ、Ｐ３３７Ｆ、Ｐ３３７Ｇ、Ｐ３３７Ｈ、Ｐ３３７Ｉ、Ｐ３３７Ｋ、Ｐ３３７Ｌ、Ｐ３３７Ｍ、Ｐ３３７Ｎ、Ｐ３３７Ｑ、Ｐ３３７Ｒ、Ｐ３３７Ｓ、Ｐ３３７Ｔ、Ｐ３３７Ｖ、Ｐ３３７Ｗ、Ｐ３３７Ｙ、Ａ３６８Ｃ、Ａ３６８Ｄ、Ａ３６８Ｅ、Ａ３６８Ｆ、Ａ３６８Ｇ、Ａ３６８Ｈ、Ａ３６８Ｉ、Ａ３６８Ｋ、Ａ３６８Ｌ、Ａ３６８Ｍ、Ａ３６８Ｎ、Ａ３６８Ｐ、Ａ３６８Ｑ、Ａ３６８Ｒ、Ａ３６８Ｓ、Ａ３６８Ｔ、Ａ３６８Ｖ、Ａ３６８Ｗ、Ａ３６８Ｙ、Ｔ３９２Ａ、Ｔ３９２Ｃ、Ｔ３９２Ｄ、Ｔ３９２Ｅ、Ｔ３９２Ｆ、Ｔ３９２Ｇ、Ｔ３９２Ｈ、Ｔ３９２Ｉ、Ｔ３９２Ｋ、Ｔ３９２Ｌ、Ｔ３９２Ｍ、Ｔ３９２Ｎ、Ｔ３９２Ｐ、Ｔ３９２Ｑ、Ｔ３９２Ｒ、Ｔ３９２Ｓ、Ｔ３９２Ｖ、Ｔ３９２Ｗ、およびＴ３９２Ｙから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号３７４を参照してナンバリングされる。

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号１０２２と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列またはその機能的断片を含む組換えアルファガラクトシダーゼＡをコードし、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、１０、１０／３９２、３１、３１／３９／４４／１６６／３０２、３１／４７、３１／２８３／２８４、３９、３９／４４、３９／４４／４７、３９／４４／４７／２６１／２８３／２８４、３９／４４／２８３、３９／４４／３３９、３９／４７／２６１、３９／９２、３９／２０６、３９／２８４、４４、４４／２８４／３０２、８４、８４／９２、８４／２８４／３０２／３９２、８４／３１６、８４／３６８／３９２、９２、９２／２０６／２１７、９２／２０６／２７５、９２／２０６／２８４、９２／２０６／３０２／３６８、９２／２７１、９２／２７１／２７７、９２／２７５／２８４、９２／２８３、９２／２８３／３９２、９２／２８４、９２／３０２、９２／３１６、９２／３６８、１５５、１５５／２１７、１５５／３６８、１６６、１６６／２８３／２８４、１６６／３０２、２０６、２０６／２１７、２０６／３３４、２６１、２６１／２８３、２７１、２７１／３６８、２７５、２８３、２８３／２８４、２８３／３９２、２８４、３０２、３１６、３３４、３３９、３６８、３６８／３９２、および３９２から選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号１０２２を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号１０２２と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、Ｐ１０Ｇ、Ｐ１０Ｇ／Ｔ３９２Ｄ、Ｓ３１Ｔ、Ｓ３１Ｔ／Ｅ３９Ｖ／Ｒ４４Ｖ／Ｐ１６６Ｄ／Ｋ３０２Ｙ、Ｓ３１Ｔ／Ｔ４７Ｒ、Ｓ３１Ｔ／Ｋ２８３Ｌ／Ｄ２８４Ａ、Ｅ３９Ｌ、Ｅ３９Ｌ／Ｈ９２Ｖ、Ｅ３９Ｌ／Ａ２０６Ｅ、Ｅ３９Ｌ／Ｄ２８４Ｓ、Ｅ３９Ｖ／Ｒ４４Ｖ、Ｅ３９Ｖ／Ｒ４４Ｖ／Ｔ４７Ｒ、Ｅ３９Ｖ／Ｒ４４Ｖ／Ｔ４７Ｒ／Ｇ２６１Ｓ／Ｋ２８３Ｌ／Ｄ２８４Ａ、Ｅ３９Ｖ／Ｒ４４Ｖ／Ｋ２８３Ｔ、Ｅ３９Ｖ／Ｒ４４Ｖ／Ａ３３９Ｎ、Ｅ３９Ｖ／Ｔ４７Ｒ／Ｇ２６１Ｓ、Ｒ４４Ｖ、Ｒ４４Ｖ／Ｄ２８４Ｅ／Ｋ３０２Ｙ、Ｈ８４Ｋ、Ｈ８４Ｋ／Ｈ９２Ｖ、Ｈ８４Ｋ／Ｄ２８４Ｓ／Ｋ３０２Ｌ／Ｔ３９２Ａ、Ｈ８４Ｋ／Ｄ３１６Ｈ、Ｈ８４Ｋ／Ａ３６８Ｅ／Ｔ３９２Ａ、Ｈ９２Ｑ、Ｈ９２Ｔ、Ｈ９２Ｔ／Ａ２０６Ｅ／Ｒ２１７Ｎ、Ｈ９２Ｔ／Ａ２０６Ｅ／Ｋ３０２Ｔ／Ａ３６８Ｅ、Ｈ９２Ｔ／Ａ２７１Ｋ、Ｈ９２Ｔ／Ａ２７１Ｋ／Ｋ２７７Ｒ、Ｈ９２Ｔ／Ｋ２８３Ｐ、Ｈ９２Ｔ／Ｋ２８３Ｖ／Ｔ３９２Ｗ、Ｈ９２Ｔ／Ｄ２８４Ｍ、Ｈ９２Ｔ／Ｋ３０２Ｌ、Ｈ９２Ｔ／Ａ３６８Ｅ、Ｈ９２Ｖ、Ｈ９２Ｖ／Ａ２０６Ｅ／Ｄ２８４Ｓ、Ｈ９２Ｖ／Ａ２０６Ｙ／Ｑ２７５Ａ、Ｈ９２Ｖ／Ｑ２７５Ａ／Ｄ２８４Ｓ、Ｈ９２Ｖ／Ｄ２８４Ｓ、Ｈ９２Ｖ／Ｋ３０２Ｌ、Ｈ９２Ｖ／Ｄ３１６Ｈ、Ｈ１５５Ｆ、Ｈ１５５Ｆ／Ｒ２１７Ｉ、Ｈ１５５Ｆ／Ａ３６８Ｅ、Ｐ１６６Ｄ、Ｐ１６６Ｄ／Ｋ２８３Ｌ／Ｄ２８４Ａ、Ｐ１６６Ｄ／Ｋ３０２Ｙ、Ａ２０６Ｅ、Ａ２０６Ｅ／Ｒ２１７Ｎ、Ａ２０６Ｉ、Ａ２０６Ｑ、Ａ２０６Ｔ／Ｙ３３４Ｃ、Ａ２０６Ｙ、Ｇ２６１Ｓ、Ｇ２６１Ｓ／Ｋ２８３Ｌ、Ａ２７１Ｋ、Ａ２７１Ｋ／Ａ３６８Ｅ、Ｑ２７５Ａ、Ｋ２８３Ｌ、Ｋ２８３Ｐ／Ｔ３９２Ｗ、Ｋ２８３Ｔ、Ｋ２８３Ｔ／Ｄ２８４Ｅ、Ｄ２８４Ｅ、Ｄ２８４Ｍ、Ｄ２８４Ｓ、Ｋ３０２Ｌ、Ｋ３０２Ｙ、Ｄ３１６Ｈ、Ｙ３３４Ｃ、Ａ３３９Ｎ、Ａ３６８Ｅ、Ａ３６８Ｅ／Ｔ３９２Ｗ、Ｔ３９２Ａ、Ｔ３９２Ｄ、およびＴ３９２Ｗから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号１０２２を参照してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、組換えアルファガラクトシダーゼＡは、配列番号１０２２と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡは、１０Ｇ、１０Ｇ／３９２Ｄ、３１Ｔ、３１Ｔ／３９Ｖ／４４Ｖ／１６６Ｄ／３０２Ｙ、３１Ｔ／４７Ｒ、３１Ｔ／２８３Ｌ／２８４Ａ、３９Ｌ、３９Ｌ／９２Ｖ、３９Ｌ／２０６Ｅ、３９Ｌ／２８４Ｓ、３９Ｖ／４４Ｖ、３９Ｖ／４４Ｖ／４７Ｒ、３９Ｖ／４４Ｖ／４７Ｒ／２６１Ｓ／２８３Ｌ／２８４Ａ、３９Ｖ／４４Ｖ／２８３Ｔ、３９Ｖ／４４Ｖ／３３９Ｎ、３９Ｖ／４７Ｒ／２６１Ｓ、４４Ｖ、４４Ｖ／２８４Ｅ／３０２Ｙ、８４Ｋ、８４Ｋ／９２Ｖ、８４Ｋ／２８４Ｓ／３０２Ｌ／３９２Ａ、８４Ｋ／３１６Ｈ、８４Ｋ／３６８Ｅ／３９２Ａ、９２Ｑ、９２Ｔ、９２Ｔ／２０６Ｅ／２１７Ｎ、９２Ｔ／２０６Ｅ／３０２Ｔ／３６８Ｅ、９２Ｔ／２７１Ｋ、９２Ｔ／２７１Ｋ／２７７Ｒ、９２Ｔ／２８３Ｐ、９２Ｔ／２８３Ｖ／３９２Ｗ、９２Ｔ／２８４Ｍ、９２Ｔ／３０２Ｌ、９２Ｔ／３６８Ｅ、９２Ｖ、９２Ｖ／２０６Ｅ／２８４Ｓ、９２Ｖ／２０６Ｙ／２７５Ａ、９２Ｖ／２７５Ａ／２８４Ｓ、９２Ｖ／２８４Ｓ、９２Ｖ／３０２Ｌ、９２Ｖ／３１６Ｈ、１５５Ｆ、１５５Ｆ／２１７Ｉ、１５５Ｆ／３６８Ｅ、１６６Ｄ、１６６Ｄ／２８３Ｌ／２８４Ａ、１６６Ｄ／３０２Ｙ、２０６Ｅ、２０６Ｅ／２１７Ｎ、２０６Ｉ、２０６Ｑ、２０６Ｔ／３３４Ｃ、２０６Ｙ、２６１Ｓ、２６１Ｓ／２８３Ｌ、２７１Ｋ、２７１Ｋ／３６８Ｅ、２７５Ａ、２８３Ｌ、２８３Ｐ／３９２Ｗ、２８３Ｔ、２８３Ｔ／２８４Ｅ、２８４Ｅ、２８４Ｍ、２８４Ｓ、３０２Ｌ、３０２Ｙ、３１６Ｈ、３３４Ｃ、３３９Ｎ、３６８Ｅ、３６８Ｅ／３９２Ｗ、３９２Ａ、３９２Ｄ、および３９２Ｗから選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置は、配列番号１０２２を参照してナンバリングされる。

いくつかの実施形態では、上記のように、ポリヌクレオチドは、本明細書に開示される特性を有するＧＬＡ活性を有する操作されたポリペプチドをコードし、ここでポリペプチドは、参照配列（例えば、配列番号２、８、５８、１５８、３７２、３７４、７０４および１０２２）、または本明細書の表のいずれかに開示される任意の変異体のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超える同一性を有し、配列番号８の参照ポリペプチド、または表２－１、５－１、６－１、７－１、８－１、９－１、１１－１、１２－１、および／または１３－１に開示される任意の変異体のアミノ酸配列と比較した場合に、１またはそれを超える残基差異（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれを超えるアミノ酸残基位置）を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、本明細書に開示される特性を有するＧＬＡ活性を有する操作されたポリペプチドをコードし、ここでポリペプチドは、配列番号２、８、５８、１５８、３７２、３７４、７０４および／または１０２２の参照配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超える配列同一性を有し、必要に応じて配列番号８、５８、１５８、３７２、３７４、７０４、および／または１０２２とアライメントした場合に、表２－１、５－１、６－１、７－１、８－１、９－１、１１－１、１２－１および／または１３－１に提示されるものから選択される残基位置に、配列番号２、８、５８、１５８、３７２、３７４、７０４、および／または１０２２と比較して、１またはそれを超える残基差異を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、操作されたＧＬＡポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、配列番号８、５８、１５８、３７２、３７４、７０４、および／または１０２２のポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、高ストリンジェントな条件下で参照ポリヌクレオチド配列にハイブリダイズすることができる。いくつかの実施形態では、参照配列は、配列番号１、７、５７、１５７、２７５、３７１、３７３および／もしくは１０１９、またはその相補体、または本明細書で提供される変異体ＧＬＡポリペプチドのいずれかをコードするポリヌクレオチド配列から選択される。いくつかの実施形態では、高ストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドは、配列番号２、８、５８、１５８、３７２、３７４、７０４および／または１０２２と比較した場合に、表２－１、５－１、６－１、７－１、８－１、９－１、１１－１、１２－１および／または１３－１に示される任意の位置から選択される残基位置に、１またはそれを超える残基差異を有するアミノ酸配列を含むＧＬＡポリペプチドをコードする。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される操作されたＧＬＡポリペプチドのいずれかをコードする単離されたポリヌクレオチドは、ポリペプチドの発現を提供するために様々な方法で操作される。いくつかの実施形態では、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチドの発現を調節するための１またはそれを超える制御配列が存在する発現ベクターとして提供される。単離されたポリヌクレオチドをベクターへ挿入する前に操作することは、発現ベクターに応じて望ましいかまたは必要であり得る。組換えＤＮＡ法を利用してポリヌクレオチドおよび核酸配列を改変するための技術は、当技術分野で周知である。

いくつかの実施形態では、制御配列は、数ある配列の中でもとりわけ、プロモーター、コザック配列、リーダー配列、ポリアデニル化配列、プロペプチド配列、シグナルペプチド配列、遺伝子治療保持のためのＤＮＡベースの調節エレメントおよび転写ターミネーターを含む。当技術分野で公知のように、適切なプロモーターは、使用される宿主細胞に基づいて選択することができる。糸状菌宿主細胞の例示的なプロモーターとしては、ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｏｒｙｚａｅＴＡＫＡアミラーゼ、Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒｍｉｅｈｅｉアスパラギン酸プロテイナーゼ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ中性アルファ－アミラーゼ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ酸安定性アルファ－アミラーゼ、ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒまたはＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓａｗａｍｏｒｉグルコアミラーゼ（ｇｌａＡ）、Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒｍｉｅｈｅｉリパーゼ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｏｒｙｚａｅアルカリプロテアーゼ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｏｒｙｚａｅトリオースリン酸イソメラーゼ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｄｕｌａｎｓアセトアミダーゼ、およびＦｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍトリプシン様プロテアーゼ（例えば、国際公開第９６／００７８７号を参照されたい）の遺伝子から得られるプロモーター、ならびにＮＡ２－ｔｐｉプロモーター（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ中性アルファ－アミラーゼおよびＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｏｒｙｚａｅトリオースリン酸イソメラーゼの遺伝子からのプロモーターのハイブリッド）、ならびにその変異型、切断型およびハイブリッド型プロモーターが挙げられる。例示的な酵母細胞プロモーターは、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅエノラーゼ（ＥＮＯ－１）、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅガラクトキナーゼ（ＧＡＬ１）、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅアルコールデヒドロゲナーゼ／グリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ（ＡＤＨ２／ＧＡＰ）およびＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ３－ホスホグリセリン酸キナーゼの遺伝子に由来し得る。酵母宿主細胞のための他の有用なプロモーターは、当技術分野で公知である（例えば、Ｒｏｍａｎｏｓら、Ｙｅａｓｔ８：４２３－４８８［１９９２］を参照のこと）。哺乳動物細胞において使用するための例示的なプロモーターとしては、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）由来、ＣＭＶエンハンサーと融合したニワトリβ－アクチンプロモーター、サル空胞化ウイルス４０（ＳＶ４０）由来、ホモサピエンスホスホグリセリン酸キナーゼ由来、ベータアクチン、伸長因子－１ａもしくはグリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ由来、またはニワトリβ－アクチン由来のものが挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、制御配列は、適切な転写ターミネーター配列、すなわち、転写を終結させるために宿主細胞によって認識される配列である。ターミネーター配列は、ポリペプチドをコードする核酸配列の３’末端に作動可能に連結されている。選択された宿主細胞において機能的である任意のターミネーターが本発明において用いられる。例えば、糸状菌宿主細胞の例示的な転写ターミネーターは、ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｏｒｙｚａｅＴＡＫＡアミラーゼ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒグルコアミラーゼ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｄｕｌａｎｓアントラニル酸シンターゼ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒアルファ－グルコシダーゼ、およびＦｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍトリプシン様プロテアーゼの遺伝子から得ることができる。酵母宿主細胞のための例示的なターミネーターは、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅエノラーゼ、ＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅチトクロムＣ（ＣＹＣ１）およびＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅグリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼの遺伝子から得ることができる。酵母宿主細胞のための他の有用なターミネーターは、当技術分野で公知である（例えば、Ｒｏｍａｎｏｓら、前出を参照のこと）。哺乳動物細胞のための例示的なターミネーターとしては、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、サル空胞化ウイルス４０（ＳＶ４０）由来、ホモサピエンス成長ホルモンｈＧＨ由来、ウシ成長ホルモンＢＧＨ由来、およびヒトまたはウサギベータグロブリン由来のものが挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、制御配列は、適切なリーダー配列、５’キャップ修飾、５’ＵＴＲなどである。いくつかの実施形態では、これらの調節配列エレメントは、ｍＲＮＡ輸送および翻訳に関与する分子への結合を媒介し、５’－エキソヌクレアーゼ分解を阻害し、デキャッピングに対する耐性を付与する。リーダー配列は、ポリペプチドをコードする核酸配列の５’末端に作動可能に連結されている。選択された宿主細胞において機能的である任意のリーダー配列が使用され得る。糸状菌宿主細胞の例示的なリーダーは、ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｏｒｙｚａｅＴＡＫＡアミラーゼおよびＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｄｕｌａｎｓトリオースリン酸イソメラーゼの遺伝子から得られる。酵母宿主細胞に適したリーダーとしては、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅエノラーゼ（ＥＮＯ－１）、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ３－ホスホグリセリン酸キナーゼ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅアルファ－因子、およびＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅアルコールデヒドロゲナーゼ／グリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ（ＡＤＨ２／ＧＡＰ）の遺伝子から得られるものが挙げられるが、これらに限定されない。哺乳動物宿主細胞に適したリーダーとしては、オルソポックスウイルスｍＲＮＡに存在する５’－ＵＴＲエレメントが挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、制御配列は、３’非翻訳核酸領域およびポリアデニル化尾部核酸配列、ｍＲＮＡ輸送および翻訳ならびにｍＲＮＡ半減期に関与するタンパク質への結合を媒介するタンパク質コード核酸配列の３’末端に作動可能に連結された配列を含む。任意のポリアデニル化配列および選択された宿主細胞において機能的である３’ＵＴＲが本発明において使用され得る。糸状菌宿主細胞のための例示的なポリアデニル化配列としては、ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｏｒｙｚａｅＴＡＫＡアミラーゼ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒグルコアミラーゼ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｄｕｌａｎｓアントラニル酸シンターゼ、Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍトリプシン様プロテアーゼ、およびＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒアルファ－グルコシダーゼの遺伝子由来のものが挙げられるが、これらに限定されない。酵母宿主細胞に有用なポリアデニル化配列も当技術分野で公知である（例えば、ＧｕｏおよびＳｈｅｒｍａｎ、Ｍｏｌ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．，１５：５９８３－５９９０［１９９５］を参照のこと）。哺乳動物宿主細胞に有用なポリアデニル化および３’ＵＴＲ配列としては、ｍＲＮＡの安定性および翻訳を増加させるいくつかの配列エレメントを有するαグロビンｍＲＮＡおよびβグロビンｍＲＮＡの３’ＵＴＲが挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、制御配列は、ポリペプチドのアミノ末端に連結されたアミノ酸配列をコードし、コードされたポリペプチドを細胞の分泌経路に導くシグナルペプチドコード領域である。核酸配列のコード配列の５’末端は、分泌されたポリペプチドをコードするコード領域のセグメントと翻訳リーディングフレームで天然に連結されたシグナルペプチドコード領域を本質的に含み得る。あるいは、コード配列の５’末端は、コード配列に対して外来のシグナルペプチドコード領域を含み得る。発現されたポリペプチドを最適な宿主細胞の分泌経路に導く任意のシグナルペプチドコード領域が、本明細書で提供される操作されたＧＬＡポリペプチドの発現のために使用される。糸状菌宿主細胞のための効果的なシグナルペプチドコード領域としては、ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｏｒｙｚａｅＴＡＫＡアミラーゼ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ中性アミラーゼ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒグルコアミラーゼ、Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒｍｉｅｈｅｉアスパラギン酸プロテイナーゼ、ＨｕｍｉｃｏｌａｉｎｓｏｌｅｎｓセルラーゼおよびＨｕｍｉｃｏｌａｌａｎｕｇｉｎｏｓａリパーゼの遺伝子から得られるシグナルペプチドコード領域が挙げられるが、これらに限定されない。酵母宿主細胞に有用なシグナルペプチドとしては、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）アルファ－因子およびサッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）インベルターゼの遺伝子由来のものが挙げられるが、これらに限定されない。哺乳動物宿主細胞に有用なシグナルペプチドとしては、免疫グロブリンガンマ（ＩｇＧ）の遺伝子由来のものが挙げられるが、これに限定されない。

いくつかの実施形態では、制御配列は、ポリペプチドのアミノ末端に位置するアミノ酸配列をコードするプロペプチドコード領域である。得られたポリペプチドは、「プロ酵素」、「プロポリペプチド」または「チモーゲン」と呼ばれることもある）。プロポリペプチドは、プロポリペプチドからプロペプチドの触媒的または自己触媒的切断によって成熟活性ポリペプチドに変換され得る。

別の態様では、本発明はまた、操作されたＧＬＡポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと、それらが導入される宿主の種類に応じた、プロモーターおよびターミネーター、複製起点などの１またはそれを超える発現調節領域とを含む組換え発現ベクターを提供する。いくつかの実施形態では、上記の様々な核酸と制御配列とを一緒に連結して、１またはそれを超える好都合な制限部位であって、かかる部位で変異体ＧＬＡポリペプチドをコードする核酸配列の挿入または置換が可能になる部位を含む組換え発現ベクターを作製する。あるいは、本発明のポリヌクレオチド配列は、ポリヌクレオチド配列またはポリヌクレオチド配列を含む核酸構築物を発現のための適切なベクターに挿入することによって発現される。発現ベクターの作製において、コード配列は、コード配列が発現のための適切な制御配列と作動可能に連結されるようにベクター中に配置される。

組換え発現ベクターは、組換えＤＮＡ手順に都合よく供することができ、変異体ＧＬＡポリヌクレオチド配列の発現をもたらすことができる任意のベクター（例えば、限定するものではないが、アデノウイルス（ＡＶ）、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、レンチウイルス（ＬＶ）、およびリポソームなどの非ウイルスベクターを含むプラスミドまたはウイルス）であり得る。ベクターの選択は、典型的には、ベクターが導入される宿主細胞とのベクターの適合性に依存する。ベクターは、線状または閉鎖環状プラスミドであり得る。

いくつかの実施形態では、発現ベクターは自律複製ベクター（すなわち、その複製が染色体複製とは無関係である染色体外実体として存在するベクター、例えば、プラスミド、染色体外エレメント、ミニ染色体または人工染色体）である。ベクターは、自己複製を保証するための任意の手段を含み得る。いくつかの代替実施形態では、ベクターは、宿主細胞に導入されると、ゲノムに組み込まれ、組み込まれた染色体と共に複製されるものであり得る。さらに、宿主細胞のゲノムに導入される全ＤＮＡを一緒に含む単一のベクターもしくはプラスミド、または２つまたはそれを超えるベクターもしくはプラスミド、またはトランスポゾンを使用してもよい。

いくつかの実施形態では、発現ベクターは好ましくは、形質転換された細胞の容易な選択を可能にする１またはそれを超える選択マーカーを含有する。「選択マーカー」は、その産生物が殺生物剤耐性またはウイルス耐性、重金属に対する耐性、栄養要求体に対する原栄養性などを提供する遺伝子である。酵母宿主細胞に適したマーカーとしては、ＡＤＥ２、ＨＩＳ３、ＬＥＵ２、ＬＹＳ２、ＭＥＴ３、ＴＲＰ１およびＵＲＡ３が挙げられるが、これらに限定されない。糸状菌宿主細胞で使用するための選択マーカーとしては、ａｍｄＳ（アセトアミダーゼ）、ａｒｇＢ（オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼ）、ｂａｒ（ホスフィノトリシンアセチルトランスフェラーゼ）、ｈｐｈ（ハイグロマイシンホスホトランスフェラーゼ）、ｎｉａＤ（硝酸レダクターゼ）、ｐｙｒＧ（オロチジン－５’－リン酸デカルボキシラーゼ）、ｓＣ（硫酸アデニルトランスフェラーゼ）、およびｔｒｐＣ（アントラニル酸シンターゼ）、ならびにそれらの等価物が挙げられるが、これらに限定されない。別の態様では、本発明は、本出願の少なくとも１つの操作されたＧＬＡポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を提供し、ポリヌクレオチドは、宿主細胞における操作されたＧＬＡ酵素の発現のための１またはそれを超える制御配列に作動可能に連結されている。本発明の発現ベクターによってコードされるポリペプチドの発現に使用するための宿主細胞は当技術分野で周知であり、真菌細胞、例えば、酵母細胞（例えば、ＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅおよびＰｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ［例えば、ＡＴＣＣアクセッション番号２０１１７８］）、昆虫細胞（例えば、ショウジョウバエ（ＤｒｏｓｏｐｈｉｌａＳ２およびスポドプテラ（ＳｐｏｄｏｐｔｅｒａＳｆ９細胞）、植物細胞、動物細胞（例えば、ＣＨＯ、ＣＨＯ－Ｋ１、ＣＯＳ、およびＢＨＫ）およびヒト細胞（例えば、ＨＥＫ２９３Ｔ、ヒト線維芽細胞、ＴＨＰ－１、ＪｕｒｋａｔおよびＢｏｗｅｓ黒色腫細胞株）が挙げられるが、これらに限定されない。

したがって、別の態様では、本発明は、操作されたＧＬＡポリペプチドを産生する方法であって、操作されたＧＬＡポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを発現することができる宿主細胞を、ポリペプチドの発現に適した条件下で培養することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、本方法は、本明細書に記載のＧＬＡポリペプチドを単離および／または精製する工程をさらに含む。

上記の宿主細胞のための適切な培養培地および増殖条件は、当技術分野で周知である。ＧＬＡポリペプチドの発現のためのポリヌクレオチドは、当技術分野で公知の様々な方法によって細胞に導入され得る。技術としては、とりわけ、エレクトロポレーション、バイオリスティック粒子衝撃、リポソーム媒介トランスフェクション、塩化カルシウムトランスフェクションおよびプロトプラスト融合が挙げられる。

本明細書に開示される特性を有する操作されたＧＬＡは、天然に存在するまたは操作されたＧＬＡポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを当技術分野で公知の本明細書に記載される突然変異誘発および／または指向性進化法に供することによって得ることができる。例示的な指向性進化技術は、突然変異誘発および／またはＤＮＡシャッフリングである（例えば、Ｓｔｅｍｍｅｒ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１：１０７４７－１０７５１［１９９４］、国際公開第９５／２２６２５号、国際公開第９７／００７８号、国際公開第９７／３５９６６号、国際公開第９８／２７２３０号、国際公開第００／４２６５１号、国際公開第０１／７５７６７号および米国特許第６，５３７，７４６号を参照されたい）。使用され得る他の指向性進化手順としては、とりわけ、互い違い伸長プロセス（ＳｔＥＰ）、インビトロ組換え（例えば、Ｚｈａｏら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１６：２５８－２６１［１９９８］を参照されたい）、変異原性ＰＣＲ（例えば、Ｃａｌｄｗｅｌｌら、ＰＣＲＭｅｔｈｏｄｓＡｐｐｌ．，３：Ｓ１３６－Ｓ１４０［１９９４］を参照されたい）およびカセット変異誘発（例えば、Ｂｌａｃｋら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９３：３５２５－３５２９［１９９６］を参照されたい）が挙げられる。

例えば、変異誘発法および指向性進化法をポリヌクレオチドに容易に適用して、発現させ、スクリーニングし、アッセイすることができる変異体ライブラリーを作製することができる。突然変異誘発および指向性進化法は当技術分野で周知である（例えば、米国特許第５，６０５，７９３号、同第５，８１１，２３８号、同第５，８３０，７２１号、同第５，８３４，２５２号、同第５，８３７，４５８号、同第５，９２８，９０５号、同第６，０９６，５４８号、同第６，１１７，６７９号、同第６，１３２，９７０号、同第６，１６５，７９３号、同第６，１８０，４０６号、同第６，２５１，６７４号、同第６，２７７，６３８号、同第６，２８７，８６１号、同第６，２８７，８６２号、同第６，２９１，２４２号、同第６，２９７，０５３号、同第６，３０３，３４４号、同第６，３０９，８８３号、同第６，３１９，７１３号、同第６，３１９，７１４号、同第６，３２３，０３０号、同第６，３２６，２０４号、同第６，３３５，１６０号、同第６，３３５，１９８号、同第６，３４４，３５６号、同第６，３５２，８５９号、同第６，３５５，４８４号、同第６，３５８，７４０号、同第６，３５８，７４２号、同第６，３６５，３７７号、同第６，３６５，４０８号、同第６，３６８，８６１号、同第６，３７２，４９７号、同第６，３７６，２４６号、同第６，３７９，９６４号、同第６，３８７，７０２号、同第６，３９１，５５２号、同第６，３９１，６４０号、同第６，３９５，５４７号、同第６，４０６，８５５号、同第６，４０６，９１０号、同第６，４１３，７４５号、同第６，４１３，７７４号、同第６，４２０，１７５号、同第６，４２３，５４２号、同第６，４２６，２２４号、同第６，４３６，６７５号、同第６，４４４，４６８号、同第６，４５５，２５３号、同第６，４７９，６５２号、同第６，４８２，６４７号、同第６，４８９，１４６号、同第６，５０６，６０２号、同第６，５０６，６０３号、同第６，５１９，０６５号、同第６，５２１，４５３号、同第６，５２８，３１１号、同第６，５３７，７４６号、同第６，５７３，０９８号、同第６，５７６，４６７号、同第６，５７９，６７８号、同第６，５８６，１８２号、同第６，６０２，９８６号、同第６，６１３，５１４号、同第６，６５３，０７２号、同第６，７１６，６３１号、同第６，９４６，２９６号、同第６，９６１，６６４号、同第６，９９５，０１７号、同第７，０２４，３１２号、同第７，０５８，５１５号、同第７，１０５，２９７号、同第７，１４８，０５４号、同第７，２８８，３７５号、同第７，４２１，３４７号、同第７，４３０，４７７号、同第７，５３４，５６４号、同第７，６２０，５００号、同第７，６２０，５０２号、同第７，６２９，１７０号、同第７，７０２，４６４号、同第７，７４７，３９１号、同第７，７４７，３９３号、同第７，７５１，９８６号、同第７，７７６，５９８号、同第７，７８３，４２８号、同第７，７９５，０３０号、同第７，８５３，４１０号、同第７，８６８，１３８号、同第７，８７３，４９９号、同第７，９０４，２４９号、同第７，９５７，９１２号、同第８，３８３，３４６号、同第８，５０４，４９８号、同第８，８４９，５７５号、同第８，８７６，０６６号、同第８，７６８，８７１号、同第９，５９３，３２６号、および関連するすべての米国以外の対応特許、Ｌｉｎｇら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２５４（２）：１５７－７８［１９９７］、Ｄａｌｅら、Ｍｅｔｈ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，５７：３６９－７４［１９９６］、Ｓｍｉｔｈ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．，１９：４２３－４６２［１９８５］、Ｂｏｔｓｔｅｉｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２２９：１１９３－１２０１［１９８５］、Ｃａｒｔｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，２３７：１－７［１９８６］、Ｋｒａｍｅｒら、Ｃｅｌｌ，３８：８７９－８８７［１９８４］、Ｗｅｌｌｓら、Ｇｅｎｅ，３４：３１５－３２３［１９８５］、Ｍｉｎｓｈｕｌｌら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，３：２８４－２９０［１９９９］、Ｃｈｒｉｓｔｉａｎｓら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１７：２５９－２６４［１９９９］、Ｃｒａｍｅｒｉら、Ｎａｔｕｒｅ，３９１：２８８－２９１［１９９８］、Ｃｒａｍｅｒｉら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１５：４３６－４３８［１９９７］、Ｚｈａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，９４：４５０４－４５０９［１９９７］、Ｃｒａｍｅｒｉら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１４：３１５－３１９［１９９６］、Ｓｔｅｍｍｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ，３７０：３８９－３９１［１９９４］、Ｓｔｅｍｍｅｒ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９１：１０７４７－１０７５１［１９９４］、米国特許出願公開第２００８／０２２０９９０号、米国特許出願公開第２００９／０３１２１９６号、米国特許出願公開第２０１４／０００５０５７号、米国特許出願公開第２０１４／０２１４３９１号、米国特許出願公開第２０１４／０２２１２１６号、米国特許出願公開第２０１５／００５０６５８号、米国特許出願公開第２０１５／０１３３３０７号、米国特許出願公開第２０１５／０１３４３１５号、および関連するすべての米国以外の対応特許出願公開、国際公開第９５／２２６２５号、国際公開第９７／００７８号、国際公開第９７／３５９６６号、国際公開第９８／２７２３０号、国際公開第００／４２６５１号、国際公開第０１／７５７６７号、および国際公開第２００９／１５２３３６号を参照されたく、これらのすべては、参照により本明細書に組み込まれる）。

いくつかの実施形態では、変異誘発処理後に得られた酵素変異体を、その酵素変異体を規定の温度（または他のアッセイ条件）に供し、熱処理または他のアッセイ条件後に残存する酵素活性の量を測定することによってスクリーニングする。次いで、ＧＬＡポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するＤＮＡを宿主細胞から単離し、ヌクレオチド配列変化（もしあれば）を同定するために配列決定し、異なるまたは同じ宿主細胞で酵素を発現させるために使用する。発現ライブラリーからの酵素活性の測定は、当技術分野で公知の任意の適切な方法（例えば、ＨＰＬＣ分析などの標準的な生化学技術）を用いて行うことができる。

既知の配列の操作されたポリペプチドの場合、酵素をコードするポリヌクレオチドは、既知の合成方法に従って、標準的な固相法によって調製することができる。いくつかの実施形態では、最大約１００塩基のフラグメントを個々に合成し、次いで連結して（例えば、酵素的もしくは化学的ライゲーション法、またはポリメラーゼ媒介法によって）、任意の所望の連続配列を形成することができる。例えば、本明細書に開示されるポリヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチドは、典型的には自動合成法で実施される形で、古典的なホスホラミダイト法（例えば、Ｂｅａｕｃａｇｅら、Ｔｅｔｒａ．Ｌｅｔｔ．，２２：１８５９－６９［１９８１］、およびＭａｔｔｈｅｓら、ＥＭＢＯＪ．，３：８０１－０５［１９８４］を参照されたい）を用いた化学合成によって調製することができる。ホスホラミダイト法によって、オリゴヌクレオチドは（例えば、自動ＤＮＡ合成装置で）合成され、精製され、アニーリングされ、ライゲーションされ、適切なベクターにクローニングされる。

したがって、いくつかの実施形態では、操作されたＧＬＡポリペプチドを調製する方法は、（ａ）表２－１、５－１、６－１、７－１、８－１、９－１、１１－１、１２－１、および／または１３－１、ならびに配列番号８、５８、１５８、３７２、３７４、７０４、および／または１０２２に提示される任意の変異体のアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを合成すること、ならびに（ｂ）ポリヌクレオチドによってコードされるＧＬＡポリペプチドを発現させることを含み得る。本方法のいくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドによってコードされるアミノ酸配列は、必要に応じて、１個または数個（例えば、最大３個、４個、５個、または最大１０個）のアミノ酸残基変異（例えば、欠失、挿入および／または置換）を有していてもよい。いくつかの実施形態では、アミノ酸配列は、必要に応じて、１～２個、１～３個、１～４個、１～５個、１～６個、１～７個、１～８個、１～９個、１～１０個、１～１５個、１～２０個、１～２１個、１～２２個、１～２３個、１～２４個、１～２５個、１～３０個、１～３５個、１～４０個、１～４５個、または１～５０個のアミノ酸残基変異（例えば、欠失、挿入および／または置換）を有する。いくつかの実施形態では、アミノ酸配列は、必要に応じて、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３０、３５、４０、４５または５０個のアミノ酸残基変異（例えば、欠失、挿入および／または置換）を有する。いくつかの実施形態では、アミノ酸配列は、必要に応じて、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１８、２０、２１、２２、２３、２４、または２５個のアミノ酸残基変異（例えば、欠失、挿入および／または置換）を有する。いくつかの実施形態では、置換は、保存的置換または非保存的置換であり得る。

発現された操作されたＧＬＡポリペプチドは、限定するものではないが、本明細書に記載されるアッセイおよび条件など、当技術分野で公知の任意の適切なアッセイを使用して、任意の所望の改善された特性（例えば、活性、選択性、安定性、酸耐性、プロテアーゼ感受性など）について評価することができる。

いくつかの実施形態では、宿主細胞で発現される操作されたＧＬＡポリペプチドはいずれも、タンパク質精製のための周知の技術のうちの１またはそれを超えるいずれか、とりわけ、リゾチーム処理、超音波処理、濾過、塩析、超遠心分離、およびクロマトグラフィーなどを使用して、細胞および／または培地から回収される。

ＧＬＡポリペプチドを単離するためのクロマトグラフィー技術としては、とりわけ、逆相クロマトグラフィー高速液体クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、およびアフィニティークロマトグラフィーが挙げられる。特定の酵素を精製するための条件は、部分的には、正味電荷、疎水性、親水性、分子量、分子形状などの要因に依存し、当業者には明らかであろう。いくつかの実施形態では、親和性技術を使用して、改善された変異体ＧＬＡ酵素を単離することができる。アフィニティークロマトグラフィー精製を利用するいくつかの実施形態では、変異体ＧＬＡポリペプチドに特異的に結合する任意の抗体が使用される。アフィニティークロマトグラフィー精製を利用するいくつかの実施形態では、ＧＬＡに共有結合したグリカンに結合するタンパク質が使用される。アフィニティークロマトグラフィー精製を利用するさらに他の実施形態では、ＧＬＡ活性部位に結合する任意の小分子が使用される。抗体の産生のために、限定するものではないが、ウサギ、マウス、ラットなどの様々な宿主動物を、ＧＬＡポリペプチド（例えば、ＧＬＡ変異体）またはその断片の注射によって免疫化する。いくつかの実施形態では、ＧＬＡポリペプチドまたは断片は、側鎖官能基または側鎖官能基に結合したリンカーによって、ＢＳＡなどの適切な担体に結合している。

いくつかの実施形態では、操作されたＧＬＡポリペプチドは、操作されたＧＬＡポリペプチドの産生を促す条件下で、本明細書に記載の操作されたＧＬＡポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含む宿主細胞（例えば、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｄａｕｃｕｓｃａｒｏｔａ、Ｎｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍ、Ｈ．ｓａｐｉｅｎｓ（例えば、ＨＥＫ２９３Ｔ）、またはＣｒｉｃｅｔｕｌｕｓｇｒｉｓｅｕｓ（例えば、ＣＨＯ））を培養すること、ならびに、細胞および／または培養培地から操作されたＧＬＡポリペプチドを回収すること、を含む方法によって宿主細胞中で産生される。

いくつかの実施形態では、本発明は、操作されたＧＬＡポリペプチドの産生を可能にする適切な培養条件下で、参照配列（例えば、配列番号８、５８、１５８、３７２、３７４、７０４および／または１０２２）に対して少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有し、必要に応じて、配列番号８、５８、１５８、３７２、３７４、７０４および／または１０２２とアライメントした場合に、配列番号８、５８、１５８、３７２、３７４、７０４および／または１０２２と比較して、表２－１、５－１、６－１、７－１、８－１、９－１、１１－１、１２－１および１３－１に提示されるものから選択される１またはそれを超えるアミノ酸残基差異、ならびに／またはそれらの組み合わせを有する操作されたＧＬＡポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含む組換え真核細胞を培養すること、ならびに、必要に応じて、培養物および／または培養細胞から操作されたＧＬＡポリペプチドを回収することを含む、操作されたＧＬＡポリペプチドの製造方法を包含する。

いくつかの実施形態では、操作されたＧＬＡポリペプチドが組換え宿主細胞または細胞培養培地から回収されると、それらは当技術分野で公知の任意の適切な方法によってさらに精製される。いくつかのさらなる実施形態では、精製ＧＬＡポリペプチドを他の成分および化合物と組み合わせて、異なる用途および使用（例えば、医薬組成物）に適切な操作されたＧＬＡポリペプチドを含む組成物および製剤を提供する。いくつかのさらなる実施形態では、精製された操作されたＧＬＡポリペプチドまたは製剤化された操作されたＧＬＡポリペプチドを凍結乾燥する。いくつかの実施形態では、操作されたＧＬＡポリペプチドは、体内（すなわち、ヒトまたは別の動物などの体内の細胞）で直接産生され、精製されない。しかしながら、いくつかの代替的な実施形態では、操作されたＧＬＡポリペプチドは、体内（すなわち、ヒトまたは別の動物などの体内の細胞）で産生され、当技術分野で公知の方法を使用して体内から回収される。いくつかのさらなる実施形態では、これらの収集された操作されたＧＬＡポリペプチドを精製する。さらにいくつかのさらなる実施形態では、これらの収集および／または精製された操作されたポリペプチドを、別の動物（例えば、ヒトまたは別の動物）に導入するか、または収集および／または精製された操作されたＧＬＡポリペプチドを最初に産生した体内に再導入する。
組成物

本発明は、限定するものではないが、以下に記載されるものなど、様々な組成物およびフォーマットを提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、医薬および他の組成物、例えば、食事／栄養補助食品における使用に適した操作されたＧＬＡポリペプチドを提供する。

治療有効量の本発明による操作されたＧＬＡを含むこれらの組成物は、投与様式に応じて、固体、半固体または液体の形態である。いくつかの実施形態では、本組成物は、希釈剤、緩衝剤、賦形剤、塩、乳化剤、保存剤、安定剤、充填剤、および他の成分などの他の薬学的に許容され得る成分を含む。製剤化および投与のための技術に関する詳細は当技術分野で周知であり、文献に記載されている。いくつかの実施形態では、これらの組成物は、遺伝子治療として導入後にヒトの体内で直接産生される。

いくつかの実施形態では、操作されたＧＬＡポリペプチドは、医薬組成物に使用するために製剤化される。本発明では、操作されたＧＬＡポリペプチドの送達に使用するための任意の適切なフォーマットが使用され、それには、限定するものではないが、丸剤、錠剤、ゲルタブ、カプセル、ロゼンジ、糖衣錠、散剤、軟ゲル、ゾル－ゲル、ゲル、エマルジョン、インプラント、パッチ、スプレー、軟膏、リニメント、クリーム、ペースト、ゼリー、塗料、エアロゾル、ガム、咀嚼剤、スティック、溶液、懸濁液（限定するものではないが、油性懸濁液、水中油型エマルジョンなど）、スラリー、シロップ、制御放出製剤、坐剤などが含まれる。いくつかの実施形態では、操作されたＧＬＡポリペプチドは、注射または注入に適したフォーマットで（すなわち、注射用製剤で）提供される。いくつかの実施形態では、操作されたＧＬＡポリペプチドのポリヌクレオチド配列は、注射に適したフォーマットで提供される。いくつかの実施形態では、操作されたＧＬＡポリペプチドは、シリカベース（例えば、オキシシラン）のゾルゲルを含むゾルゲルなどの生体適合性マトリックスに入れて提供される。いくつかの実施形態では、操作されたＧＬＡポリペプチドをカプセル化する。いくつかの代替的な実施形態では、操作されたＧＬＡポリペプチドは、ナノ構造体（例えば、ナノチューブ、ナノ細管、ナノカプセル、またはマイクロカプセル、ミクロスフェア、リポソームなど）に封入される。実際、本発明が任意の特定の送達製剤および／または送達手段に限定されることは意図されていない。操作されたＧＬＡポリペプチドは、限定するものではないが、非経口、経口、局所、経皮、鼻腔内、眼内、髄腔内、インプラントなどの、当技術分野で公知の任意の適切な手段によって投与されることが意図される。

いくつかの実施形態では、操作されたＧＬＡポリペプチドは、グリコシル化、化学架橋試薬、ペグ化（すなわち、ポリエチレングリコール［ＰＥＧ］または活性化ＰＥＧなどを用いた修飾）または他の化合物によって化学的に修飾される（例えば、Ｉｋｅｄａ，ＡｍｉｎｏＡｃｉｄｓ２９：２８３－２８７［２００５］、米国特許第７，５３１，３４１号、同第７，５３４，５９５号、同第７，５６０，２６３号、同第７、５３，６５３号、米国特許出願公開第２０１３／００３９８９８号、同第２０１２／０１７７７２２号等を参照のこと）。実際、本発明がいかなる特定の送達方法および／または機構にも限定されることは意図されていない。

いくつかのさらなる実施形態では、限定するものではないが、アデノウイルス（ＡＶ）、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、レンチウイルス（ＬＶ）、または非ウイルスベクター（例えば、リポソーム）を含むウイルス送達ベクターなどの遺伝子治療を介した細胞または組織への送達のための操作されたＧＬＡポリペプチドが提供される。いくつかの実施形態では、操作されたＧＬＡポリペプチドは、封入送達ビヒクル（例えば、リポソーム）の中にポリリボヌクレオチド配列を製剤化した後、ｍＲＮＡ療法を介した細胞または組織への送達のために提供される。いくつかのさらなる実施形態では、操作されたＧＬＡポリペプチドは、細胞療法を介した細胞または組織への送達のために提供され、操作されたＧＬＡポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は外因性細胞に導入され、その細胞（または細胞群）はレシピエント（例えば、ファブリー病を示すか、ファブリー病を発症するリスクがある患者）に導入される。

いくつかのさらなる実施形態では、操作されたＧＬＡポリペプチドは、マトリックス安定化酵素結晶を含む製剤の形で提供される。いくつかの実施形態では、製剤は、架橋結晶の操作されたＧＬＡ酵素と、酵素結晶に付着する反応性部分を有するポリマーとを含む。本発明はまた、ポリマーに入った操作されたＧＬＡポリペプチドを提供する。

いくつかの実施形態では、本発明の操作されたＧＬＡポリペプチドを含む組成物は、限定するものではないが、糖（例えば、ラクトース、スクロース、マンニトール、および／またはソルビトール）、デンプン（例えば、トウモロコシ、コムギ、米、ジャガイモ、または他の植物デンプン）、セルロース（例えば、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース）、ガム（例えば、アラビア、トラガカント、グアーなど）、および／またはタンパク質（例えば、ゼラチン、コラーゲンなど）を含む１またはそれを超える一般的に使用される担体化合物を含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、血液、脳脊髄液などの流体中の糖脂質の濃度を低下させる際の使用に適した操作されたＧＬＡポリペプチドを提供する。投与される操作されたＧＬＡポリペプチドの投与量は、症状または疾患、対象の全身症状、および当業者に公知の他の因子に依存する。いくつかの実施形態では、本組成物は、単回または複数回投与を意図している。いくつかの実施形態では、ファブリー病を有するヒトに投与される組成物中の操作されたＧＬＡポリペプチドの濃度が、疾患（例えば、ファブリー病）を効果的に処置および／または改善するのに十分であることが企図される。いくつかの実施形態では、操作されたＧＬＡポリペプチドは、他の医薬組成物および／または食事性組成物と組み合わせて投与される。
実験

以下の実施例（実験および得られた結果を含む）は、例示のみを目的として提供されており、本発明を限定するものと解釈されるべきではない。
以下の実験的開示では、以下の略語が適用される。ｐｐｍ（百万分率）；Ｍ（モル）；ｍＭ（ミリモル）、ｕＭおよびμＭ（マイクロモル）；ｎＭ（ナノモル）；ｍｏｌ（モル）；ｇｍおよびｇ（グラム）；ｍｇ（ミリグラム）；ｕｇおよびμｇ（マイクログラム）；Ｌおよびｌ（リットル）；ｍｌおよびｍＬ（ミリリットル）；ｃｍ（センチメートル）；ｍｍ（ミリメートル）；ｕｍおよびμｍ（マイクロメートル）；ｓｅｃ．（秒）；ｍｉｎ（ｓ）（分）；ｈ（ｓ）およびｈｒ（ｓ）（時）；Ｕ（単位）；ＭＷ（分子量）；ｒｐｍ（毎分回転数）；℃（摂氏）；ＳＥＭ（標準誤差）；ＩＶ（静脈内）；ＣＤＳ（コード配列）；ＤＮＡ（デオキシリボ核酸）；ＲＮＡ（リボ核酸）；大腸菌Ｗ３１１０（ＣｏｌｉＧｅｎｅｔｉｃＳｔｏｃｋＣｅｎｔｅｒ［ＣＧＳＣ］、ニューヘブン、コネチカット州から入手可能な、一般的に使用される実験用大腸菌株）；ＮＨＰ（非ヒト霊長類）；ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）；ＭＷＣＯ（分子量カットオフ）；ＳＤＳ－ＰＡＧＥ（ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動）；）；ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）；ＤＰＢＳ（ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水）；ＰＥＳ（ポリエーテルスルホン）；ＣＦＳＥ（カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル）；ＩＰＴＧ（イソプロピルβ－Ｄ－１－チオガラクトピラノシド）；ＰＭＢＳ（硫酸ポリミキシンＢ）；ＮＡＤＰＨ（ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸）；ＧＩＤＨ（グルタミン酸デヒドロゲナーゼ）；ＦＩＯＰＣ（陽性対照に対する改善倍率）；ＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）；ＬＢ（ルリアブロス）；ＭｅＯＨ（メタノール）；Ｃ_ｍａｘ（投与間隔中の最大薬物濃度）；ＲＦＵ（相対蛍光単位）；ＡＵＣ_０－ｔ（最終測定可能濃度までの曲線下面積）；ＣＬ（クリアランス）；Ｖｚ（終末相の見かけの分布容積）；ＴＩ（試験項目）；ＡｔｈｅｎｓＲｅｓｅａｒｃｈ（ＡｔｈｅｎｓＲｅｓｅａｒｃｈＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、アテネ、ジョージア州）；ＰｒｏＳｐｅｃ（ＰｒｏＳｐｅｃＴａｎｙＴｅｃｈｎｏｇｅｎｅ、イーストブランズウィック、ニュージャージー州）；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、セントルイス、ミズーリ州）；ＲａｍＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（ＲａｍＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．、ヨンカーズ、ニューヨーク州）；ＰａｌｌＣｏｒｐ．（Ｐａｌｌ社、ポートワシントン、ニューヨーク州）；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社、ビレリカ、マサチューセッツ州）；Ｄｉｆｃｏ（ＤｉｆｃｏＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，ＢＤＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＳｙｓｔｅｍｓ、デトロイト、ミシガン州）；ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ウォルサム、マサチューセッツ州）；ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｅｖｉｃｅｓ（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｅｖｉｃｅｓ，ＬＬＣ、サニーベール、カリフォルニア州）；Ｋｕｈｎｅｒ（ＡｄｏｌｆＫｕｈｎｅｒ，ＡＧ、バーゼル、スイス）；Ａｘｙｇｅｎ（Ａｘｙｇｅｎ，Ｉｎｃ．、ユニオンシティ、カリフォルニア州）；ＴｏｒｏｎｔｏＲｅｓｅａｒｃｈＣｈｅｍｉｃａｌｓ（ＴｏｒｏｎｔｏＲｅｓｅａｒｃｈＣｈｅｍｉｃａｌｓＩｎｃ．、トロント、オンタリオ州、カナダ）；ＣａｍｂｒｉｄｇｅＩｓｏｔｏｐｅＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、（ＣａｍｂｒｉｄｇｅＩｓｏｔｏｐｅＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、テュークスベリー、マサチューセッツ州）；ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社の一部門、グランドアイランド、ニューヨーク州）、Ａｇｉｌｅｎｔ（ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．、サンタクララ、カリフォルニア州）；ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃの一部門、ウォルサム、マサチューセッツ州）；Ｇｉｂｃｏ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）；Ｐｉｅｒｃｅ（ＰｉｅｒｃｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃの今の一部門）、ロックフォード、イリノイ州）；ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ウォルサム、マサチューセッツ州）；Ｃｏｒｎｉｎｇ（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｉｎｃ．、パロアルト、カリフォルニア州）；ＸｅｎｏＴｅｃｈ（ＳｅｋｉｓｕｉＸｅｎｏＴｅｃｈ，ＬＬＣ、カンザスシティ、カンザス州）；コリエル医学研究所（コリエル医学研究所、カムデン、ニュージャージー州）；ＶＷＲ（ＶＷＲＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、ラドナー、ペンシルベニア州）；Ｊａｃｋｓｏｎ（ＴｈｅＪａｃｋｓｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｙ、バーハーバー、メイン州）；Ｍｅｇａｚｙｍｅ（ＭｅｇａｚｙｍｅＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、ウィックロー、アイルランド）；Ｅｎｚｏ（ＥｎｚｏＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．、ファーミングデール、ニューヨーク州）；ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＢｉｏ－Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、ピスカタウェイ、ニュージャージー州）；ＬＩ－ＣＯＲ（ＬＩ－ＣＯＲＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、リンカーン、ネブラスカ州）；Ａｍｉｃｕｓ（ＡｍｉｃｕｓＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、クランベリー、ニュージャージー州）；Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ，Ｉｎｃ．、トーランス、カリフォルニア州）；Ｏｐｔｉｍａｌ（ＯｐｔｉｍａｌＢｉｏｔｅｃｈＧｒｏｕｐ、ベルモント、カリフォルニア州）；および、Ｂｉｏ－Ｒａｄ（Ｂｉｏ－ＲａｄＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ヘラクレス、カリフォルニア州）。

以下のポリヌクレオチドおよびポリペプチド配列は、本発明において使用される。いくつかの場合において（下記に示されるように）、ポリヌクレオチド配列の後にコードされたポリペプチドが続く。
完全長ヒトＧＬＡｃＤＮＡのポリヌクレオチド配列（配列番号１）：
ATGCAGCTGAGGAACCCAGAACTACATCTGGGCTGCGCGCTTGCGCTTCGCTTCCTGGCCCTCGTTTCCTGGGACATCCCTGGGGCTAGAGCACTGGACAATGGATTGGCAAGGACGCCTACCATGGGCTGGCTGCACTGGGAGCGCTTCATGTGCAACCTTGACTGCCAGGAAGAGCCAGATTCCTGCATCAGTGAGAAGCTCTTCATGGAGATGGCAGAGCTCATGGTCTCAGAAGGCTGGAAGGATGCAGGTTATGAGTACCTCTGCATTGATGACTGTTGGATGGCTCCCCAAAGAGATTCAGAAGGCAGACTTCAGGCAGACCCTCAGCGCTTTCCTCATGGGATTCGCCAGCTAGCTAATTATGTTCACAGCAAAGGACTGAAGCTAGGGATTTATGCAGATGTTGGAAATAAAACCTGCGCAGGCTTCCCTGGGAGTTTTGGATACTACGACATTGATGCCCAGACCTTTGCTGACTGGGGAGTAGATCTGCTAAAATTTGATGGTTGTTACTGTGACAGTTTGGAAAATTTGGCAGATGGTTATAAGCACATGTCCTTGGCCCTGAATAGGACTGGCAGAAGCATTGTGTACTCCTGTGAGTGGCCTCTTTATATGTGGCCCTTTCAAAAGCCCAATTATACAGAAATCCGACAGTACTGCAATCACTGGCGAAATTTTGCTGACATTGATGATTCCTGGAAAAGTATAAAGAGTATCTTGGACTGGACATCTTTTAACCAGGAGAGAATTGTTGATGTTGCTGGACCAGGGGGTTGGAATGACCCAGATATGTTAGTGATTGGCAACTTTGGCCTCAGCTGGAATCAGCAAGTAACTCAGATGGCCCTCTGGGCTATCATGGCTGCTCCTTTATTCATGTCTAATGACCTCCGACACATCAGCCCTCAAGCCAAAGCTCTCCTTCAGGATAAGGACGTAATTGCCATCAATCAGGACCCCTTGGGCAAGCAAGGGTACCAGCTTAGACAGGGAGACAACTTTGAAGTGTGGGAACGACCTCTCTCAGGCTTAGCCTGGGCTGTAGCTATGATAAACCGGCAGGAGATTGGTGGACCTCGCTCTTATACCATCGCAGTTGCTTCCCTGGGTAAAGGAGTGGCCTGTAATCCTGCCTGCTTCATCACACAGCTCCTCCCTGTGAAAAGGAAGCTAGGGTTCTATGAATGGACTTCAAGGTTAAGAAGTCACATAAATCCCACAGGCACTGTTTTGCTTCAGCTAGAAAATACAATGCAGATGTCATTAAAAGACTTACTTTAG（配列番号１）
完全長ヒトＧＬＡのポリペプチド配列：
MQLRNPELHLGCALALRFLALVSWDIPGARALDNGLARTPTMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFMEMAELMVSEGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANYVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNRTGRSIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWKSIKSILDWTSFNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWNQQVTQMALWAIMAAPLFMSNDLRHISPQAKALLQDKDVIAINQDPLGKQGYQLRQGDNFEVWERPLSGLAWAVAMINRQEIGGPRSYTIAVASLGKGVACNPACFITQLLPVKRKLGFYEWTSRLRSHINPTGTVLLQLENTMQMSLKDLL（配列番号２）
成熟酵母コドン最適化（ｙＣＤＳ）ヒトＧＬＡのポリヌクレオチド配列：
TTGGATAACGGGTTAGCCCGTACACCTACTATGGGTTGGCTTCACTGGGAAAGATTCATGTGTAACTTAGATTGCCAAGAAGAGCCTGACAGCTGTATCTCAGAGAAACTATTCATGGAGATGGCTGAACTAATGGTAAGTGAAGGATGGAAGGATGCTGGTTATGAATACCTATGTATTGATGATTGCTGGATGGCTCCACAGCGTGATTCAGAAGGTAGGTTACAAGCTGACCCCCAGAGATTCCCACATGGCATACGTCAGCTTGCAAACTACGTACACAGCAAGGGTCTAAAGTTAGGCATCTACGCTGATGTCGGAAACAAGACATGTGCTGGTTTCCCAGGTTCATTCGGTTACTATGACATAGATGCGCAGACGTTTGCTGATTGGGGTGTTGATTTGTTGAAGTTTGATGGATGCTACTGCGATTCCCTGGAGAACCTAGCCGATGGGTACAAACACATGAGTTTGGCTCTAAACAGGACTGGTAGGAGCATCGTCTATAGTTGTGAATGGCCCTTGTACATGTGGCCGTTTCAGAAGCCAAACTACACTGAGATAAGACAATACTGTAACCATTGGCGTAACTTTGCTGACATAGATGATTCATGGAAGTCAATCAAATCTATCTTGGATTGGACTTCTTTCAACCAGGAAAGAATTGTTGATGTTGCAGGTCCAGGTGGATGGAATGACCCTGATATGCTTGTCATAGGGAACTTTGGGCTATCATGGAATCAACAAGTTACACAAATGGCTTTGTGGGCGATCATGGCCGCACCCCTATTCATGTCTAATGATCTACGTCACATATCACCCCAAGCAAAGGCTTTACTTCAAGATAAGGATGTCATAGCGATCAACCAAGATCCTCTTGGTAAACAAGGTTATCAATTGAGACAAGGTGACAACTTTGAAGTGTGGGAAAGACCATTGTCTGGACTTGCGTGGGCTGTTGCTATGATCAACCGTCAAGAGATCGGAGGGCCAAGATCTTACACTATCGCGGTAGCCTCTTTGGGTAAGGGTGTTGCGTGCAATCCTGCCTGCTTCATTACACAATTGCTTCCAGTTAAGAGAAAGTTGGGTTTCTATGAGTGGACATCTAGGCTAAGAAGTCACATCAATCCTACTGGTACGGTATTGTTGCAATTGGAGAACACAATGCAAATGTCTTTGAAAGATTTGTTA（配列番号３）
成熟ヒトＧＬＡ（天然ｈＣＤＳ）のポリヌクレオチド配列：
CTGGACAATGGATTGGCAAGGACGCCTACCATGGGCTGGCTGCACTGGGAGCGCTTCATGTGCAACCTTGACTGCCAGGAAGAGCCAGATTCCTGCATCAGTGAGAAGCTCTTCATGGAGATGGCAGAGCTCATGGTCTCAGAAGGCTGGAAGGATGCAGGTTATGAGTACCTCTGCATTGATGACTGTTGGATGGCTCCCCAAAGAGATTCAGAAGGCAGACTTCAGGCAGACCCTCAGCGCTTTCCTCATGGGATTCGCCAGCTAGCTAATTATGTTCACAGCAAAGGACTGAAGCTAGGGATTTATGCAGATGTTGGAAATAAAACCTGCGCAGGCTTCCCTGGGAGTTTTGGATACTACGACATTGATGCCCAGACCTTTGCTGACTGGGGAGTAGATCTGCTAAAATTTGATGGTTGTTACTGTGACAGTTTGGAAAATTTGGCAGATGGTTATAAGCACATGTCCTTGGCCCTGAATAGGACTGGCAGAAGCATTGTGTACTCCTGTGAGTGGCCTCTTTATATGTGGCCCTTTCAAAAGCCCAATTATACAGAAATCCGACAGTACTGCAATCACTGGCGAAATTTTGCTGACATTGATGATTCCTGGAAAAGTATAAAGAGTATCTTGGACTGGACATCTTTTAACCAGGAGAGAATTGTTGATGTTGCTGGACCAGGGGGTTGGAATGACCCAGATATGTTAGTGATTGGCAACTTTGGCCTCAGCTGGAATCAGCAAGTAACTCAGATGGCCCTCTGGGCTATCATGGCTGCTCCTTTATTCATGTCTAATGACCTCCGACACATCAGCCCTCAAGCCAAAGCTCTCCTTCAGGATAAGGACGTAATTGCCATCAATCAGGACCCCTTGGGCAAGCAAGGGTACCAGCTTAGACAGGGAGACAACTTTGAAGTGTGGGAACGACCTCTCTCAGGCTTAGCCTGGGCTGTAGCTATGATAAACCGGCAGGAGATTGGTGGACCTCGCTCTTATACCATCGCAGTTGCTTCCCTGGGTAAAGGAGTGGCCTGTAATCCTGCCTGCTTCATCACACAGCTCCTCCCTGTGAAAAGGAAGCTAGGGTTCTATGAATGGACTTCAAGGTTAAGAAGTCACATAAATCCCACAGGCACTGTTTTGCTTCAGCTAGAAAATACAATGCAGATGTCATTAAAAGACTTACTT（配列番号４）
成熟ヒトＧＬＡのポリペプチド配列：
LDNGLARTPTMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFMEMAELMVSEGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANYVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNRTGRSIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWKSIKSILDWTSFNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWNQQVTQMALWAIMAAPLFMSNDLRHISPQAKALLQDKDVIAINQDPLGKQGYQLRQGDNFEVWERPLSGLAWAVAMINRQEIGGPRSYTIAVASLGKGVACNPACFITQLLPVKRKLGFYEWTSRLRSHINPTGTVLLQLENTMQMSLKDLL（配列番号５）
ｐＣＫ１１０９００ｉ大腸菌発現ベクターのポリヌクレオチド配列：
TCGAGTTAATTAAGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACGGCTATGACCATGATTACGGATTCACTGGCCGTCGTTTTACAATCTAGAGGCCAGCCTGGCCATAAGGAGATATACATATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTCTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAGCGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTGTTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGTTTTTTTGCACACCATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTACAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGTAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGGGCCAAACTGGCCACCATCACCATCACCATTAGGGAAGAGCAGATGGGCAAGCTTGACCTGTGAAGTGAAAAATGGCGCACATTGTGCGACATTTTTTTTTGAATTCTACGTAAAAAGCCGCCGATACATCGGCTGCTTTTTTTTTGATAGAGGTTCAAACTTGTGGTATAATGAAATAAGATCACTCCGGGGCGTATTTTTTGAGTTATCGAGATTTTCAGGAGCTAAGGAAGCTAAAATGGAGAAAAAAATCACTGGATATACCACCGTTGATATATCCCAATGGCATCGTAAAGAACATTTTGAGGCATTTCAGTCAGTTGCTCAATGTACCTATAACCAGACCGTTCAGCTGGATATTACGGCCTTTTTAAAGACCGTAAAGAAAAATAAGCACAAGTTTTATCCGGCCTTTATTCACATTCTTGCCCGCCTGATGAATGCTCATCCGGAGTTCCGTATGGCAATGAAAGACGGTGAGCTGGTGATATGGGATAGTGTTCACCCTTGTTACACCGTTTTCCATGAGCAAACTGAAACGTTTTCATCGCTCTGGAGTGAATACCACGACGATTTCCGGCAGTTTCTACACATATATTCGCAAGATGTGGCGTGTTACGGTGAAAACCTGGCCTATTTCCCTAAAGGGTTTATTGAGAATATGTTTTTCGTCTCAGCCAATCCCTGGGTGAGTTTCACCAGTTTTGATTTAAACGTGGCCAATATGGACAACTTCTTCGCCCCCGTTTTCACCATGGGCAAATATTATACGCAAGGCGACAAGGTGCTGATGCCGCTGGCGATTCAGGTTCATCATGCCGTCTGTGATGGCTTCCATGTCGGCAGAATGCTTAATGAATTACAACAGTACTGCGATGAGTGGCAGGGCGGGGCGTAACTGCAGGAGCTCAAACAGCAGCCTGTATTCAGGCTGCTTTTTTCGTTTTGGTCTGCGCGTAATCTCTTGCTCTGAAAACGAAAAAACCGCCTTGCAGGGCGGTTTTTCGAAGGTTCTCTGAGCTACCAACTCTTTGAACCGAGGTAACTGGCTTGGAGGAGCGCAGTCACCAAAACTTGTCCTTTCAGTTTAGCCTTAACCGGCGCATGACTTCAAGACTAACTCCTCTAAATCAATTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGTGCTTTTGCATGTCTTTCCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGACTGAACGGGGGGTTCGTGCATACAGTCCAGCTTGGAGCGAACTGCCTACCCGGAACTGAGTGTCAGGCGTGGAATGAGACAAACGCGGCCATAACAGCGGAATGACACCGGTAAACCGAAAGGCAGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCCGCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCACTGATTTGAGCGTCAGATTTCGTGATGCTTGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGGCTTTGCCGCGGCCCTCTCACTTCCCTGTTAAGTATCTTCCTGGCATCTTCCAGGAAATCTCCGCCCCGTTCGTAAGCCATTTCCGCTCGCCGCAGTCGAACGACCGAGCGTAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAATATATCCTGTATCACATATTCTGCTGACGCACCGGTGCAGCCTTTTTTCTCCTGCCACATGAAGCACTTCACTGACACCCTCATCAGTGAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTAGGCCTATGGCCTTTTTTTTTTGTGGGAAACCTTTCGCGGTATGGTATTAAAGCGCCCGGAAGAGAGTCAATTCAGGGTGGTGAATGTGAAACCAGTAACGTTATACGATGTCGCAGAGTATGCCGGTGTCTCTTATCAGACCGTTTCCCGCGTGGTGAACCAGGCCAGCCACGTTTCTGCGAAAACGCGGGAAAAAGTGGAAGCGGCGATGGCGGAGCTGAATTACATTCCCAACCGCGTGGCACAACAACTGGCGGGCAAACAGTCGTTGCTGATTGGCGTTGCCACCTCCAGTCTGGCCCTGCACGCGCCGTCGCAAATTGTCGCGGCGATTAAATCTCGCGCCGATCAACTGGGTGCCAGCGTGGTGGTGTCGATGGTAGAACGAAGCGGCGTCGAAGCCTGTAAAGCGGCGGTGCACAATCTTCTCGCGCAACGCGTCAGTGGGCTGATCATTAACTATCCGCTGGATGACCAGGATGCCATTGCTGTGGAAGCTGCCTGCACTAATGTTCCGGCGTTATTTCTTGATGTCTCTGACCAGACACCCATCAACAGTATTATTTTCTCCCATGAAGACGGTACGCGACTGGGCGTGGAGCATCTGGTCGCATTGGGTCACCAGCAAATCGCGCTGTTAGCGGGCCCATTAAGTTCTGTCTCGGCGCGTCTGCGTCTGGCTGGCTGGCATAAATATCTCACTCGCAATCAAATTCAGCCGATAGCGGAACGGGAAGGCGACTGGAGTGCCATGTCCGGTTTTCAACAAACCATGCAAATGCTGAATGAGGGCATCGTTTCCACTGCGATGCTGGTTGCCAACGATCAGATGGCGCTGGGCGCAATGCGCGCCATTACCGAGTCCGGGCTGCGCGTTGGTGCGGACATCTCGGTAGTGGGATACGACGATACCGAAGACAGCTCATGTTATATCCCGCCGTTAACCACCATCAAACAGGATTTTCGCCTGCTGGGGCAAACCAGCGTGGACCGCTTGCTGCAACTCTCTCAGGGCCAGGCGGTTAAGGGCAATCAGCTGTTGCCCGTCTCACTGGTGAAAAGAAAAACCACCCTGGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGGTACCCGATAAAAGCGGCTTCCTGACAGGAGGCCGTTTTGTTTC（配列番号６）
ｐＹＴ－７２Ｂｇｌ分泌酵母発現ベクターのポリヌクレオチド配列：
TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGTACAAATATCATAAAAAAAGAGAATCTTTTTAAGCAAGGATTTTCTTAACTTCTTCGGCGACAGCATCACCGACTTCGGTGGTACTGTTGGAACCACCTAAATCACCAGTTCTGATACCTGCATCCAAAACCTTTTTAACTGCATCTTCAATGGCTTTACCTTCTTCAGGCAAGTTCAATGACAATTTCAACATCATTGCAGCAGACAAGATAGTGGCGATAGGGTTGACCTTATTCTTTGGCAAATCTGGAGCGGAACCATGGCATGGTTCGTACAAACCAAATGCGGTGTTCTTGTCTGGCAAAGAGGCCAAGGACGCAGATGGCAACAAACCCAAGGAGCCTGGGATAACGGAGGCTTCATCGGAGATGATATCACCAAACATGTTGCTGGTGATTATAATACCATTTAGGTGGGTTGGGTTCTTAACTAGGATCATGGCGGCAGAATCAATCAATTGATGTTGAACTTTCAATGTAGGGAATTCGTTCTTGATGGTTTCCTCCACAGTTTTTCTCCATAATCTTGAAGAGGCCAAAACATTAGCTTTATCCAAGGACCAAATAGGCAATGGTGGCTCATGTTGTAGGGCCATGAAAGCGGCCATTCTTGTGATTCTTTGCACTTCTGGAACGGTGTATTGTTCACTATCCCAAGCGACACCATCACCATCGTCTTCCTTTCTCTTACCAAAGTAAATACCTCCCACTAATTCTCTAACAACAACGAAGTCAGTACCTTTAGCAAATTGTGGCTTGATTGGAGATAAGTCTAAAAGAGAGTCGGATGCAAAGTTACATGGTCTTAAGTTGGCGTACAATTGAAGTTCTTTACGGATTTTTAGTAAACCTTGTTCAGGTCTAACACTACCGGTACCCCATTTAGGACCACCCACAGCACCTAACAAAACGGCATCAGCCTTTTTGGAGGCTTCCAGCGCCTCATTTGGAAGTGGAACACCTGTAGCATCGATAGCAGCCCCCCCAATTAAATGATTTTCGAAATCGAACTTGACATTGGAACGAACATCAGAAATAGCTTTAAGAACCTTAATGGCTTCGGCTGTGATTTCTTGACCAACGTGGTCACCTGGCAAAACGACGATTTTTTTAGGGGCAGACATTACAATGGTATATCCTTGAAATATATATAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAATGCAGCTTCTCAATGATATTCGAATACGCTTTGAGGAGATACAGCCTAATATCCGACAAACTGTTTTACAGATTTACGATCGTACTTGTTACCCATCATTGAATTTTGAACATCCGAACCTGGGAGTTTTCCCTGAAACAGATAGTATATTTGAACCTGTATAATAATATATAGTCTAGCGCTTTACGGAAGACAATGTATGTATTTCGGTTCCTGGAGAAACTATTGCATCTATTGCATAGGTAATCTTGCACGTCGCATCCCCGGTTCATTTTCTGCGTTTCCATCTTGCACTTCAATAGCATATCTTTGTTAACGAAGCATCTGTGCTTCATTTTGTAGAACAAAAATGCAACGCGAGAGCGCTAATTTTTCAAACAAAGAATCTGAGCTGCATTTTTACAGAACAGAAATGCAACGCGAAAGCGCTATTTTACCAACGAAGAATCTGTGCTTCATTTTTGTAAAACAAAAATGCAACGCGAGAGCGCTAATTTTTCAAACAAAGAATCTGAGCTGCATTTTTACAGAACAGAAATGCAACGCGAGAGCGCTATTTTACCAACAAAGAATCTATACTTCTTTTTTGTTCTACAAAAATGCATCCCGAGAGCGCTATTTTTCTAACAAAGCATCTTAGATTACTTTTTTTCTCCTTTGTGCGCTCTATAATGCAGTCTCTTGATAACTTTTTGCACTGTAGGTCCGTTAAGGTTAGAAGAAGGCTACTTTGGTGTCTATTTTCTCTTCCATAAAAAAAGCCTGACTCCACTTCCCGCGTTTACTGATTACTAGCGAAGCTGCGGGTGCATTTTTTCAAGATAAAGGCATCCCCGATTATATTCTATACCGATGTGGATTGCGCATACTTTGTGAACAGAAAGTGATAGCGTTGATGATTCTTCATTGGTCAGAAAATTATGAACGGTTTCTTCTATTTTGTCTCTATATACTACGTATAGGAAATGTTTACATTTTCGTATTGTTTTCGATTCACTCTATGAATAGTTCTTACTACAATTTTTTTGTCTAAAGAGTAATACTAGAGATAAACATAAAAAATGTAGAGGTCGAGTTTAGATGCAAGTTCAAGGAGCGAAAGGTGGATGGGTAGGTTATATAGGGATATAGCACAGAGATATATAGCAAAGAGATACTTTTGAGCAATGTTTGTGGAAGCGGTATTCGCAATATTTTAGTAGCTCGTTACAGTCCGGTGCGTTTTTGGTTTTTTGAAAGTGCGTCTTCAGAGCGCTTTTGGTTTTCAAAAGCGCTCTGAAGTTCCTATACTTTCTAGAGAATAGGAACTTCGGAATAGGAACTTCAAAGCGTTTCCGAAAACGAGCGCTTCCGAAAATGCAACGCGAGCTGCGCACATACAGCTCACTGTTCACGTCGCACCTATATCTGCGTGTTGCCTGTATATATATATACATGAGAAGAACGGCATAGTGCGTGTTTATGCTTAAATGCGTACTTATATGCGTCTATTTATGTAGGATGAAAGGTAGTCTAGTACCTCCTGTGATATTATCCCATTCCATGCGGGGTATCGTATGCTTCCTTCAGCACTACCCTTTAGCTGTTCTATATGCTGCCACTCCTCAATTGGATTAGTCTCATCCTTCAATGCTATCATTTCCTTTGATATTGGATCATATGCATAGTACCGAGAAACTAGTGCGAAGTAGTGATCAGGTATTGCTGTTATCTGATGAGTATACGTTGTCCTGGCCACGGCAGAAGCACGCTTATCGCTCCAATTTCCCACAACATTAGTCAACTCCGTTAGGCCCTTCATTGAAAGAAATGAGGTCATCAAATGTCTTCCAATGTGAGATTTTGGGCCATTTTTTATAGCAAAGATTGAATAAGGCGCATTTTTCTTCAAAGCTTTATTGTACGATCTGACTAAGTTATCTTTTAATAATTGGTATTCCTGTTTATTGCTTGAAGAATTGCCGGTCCTATTTACTCGTTTTAGGACTGGTTCAGAATTCCTCAAAAATTCATCCAAATATACAAGTGGATCGATGATAAGCTGTCAAACATGAGAATTCTTGAAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGATAATAATGGTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTGTTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGCAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGTATACACTCCGCTATCGCTACGTGACTGGGTCATGGCTGCGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGGCAGCTGCGGTAAAGCTCATCAGCGTGGTCGTGAAGCGATTCACAGATGTCTGCCTGTTCATCCGCGTCCAGCTCGTTGAGTTTCTCCAGAAGCGTTAATGTCTGGCTTCTGATAAAGCGGGCCATGTTAAGGGCGGTTTTTTCCTGTTTGGTCACTGATGCCTCCGTGTAAGGGGGATTTCTGTTCATGGGGGTAATGATACCGATGAAACGAGAGAGGATGCTCACGATACGGGTTACTGATGATGAACATGCCCGGTTACTGGAACGTTGTGAGGGTAAACAACTGGCGGTATGGATGCGGCGGGACCAGAGAAAAATCACTCAGGGTCAATGCCAGCGCTTCGTTAATACAGATGTAGGTGTTCCACAGGGTAGCCAGCAGCATCCTGCGATGCAGATCCGGAACATAATGGTGCAGGGCGCTGACTTCCGCGTTTCCAGACTTTACGAAACACGGAAACCGAAGACCATTCATGTTGTTGCTCAGGTCGCAGACGTTTTGCAGCAGCAGTCGCTTCACGTTCGCTCGCGTATCGGTGATTCATTCTGCTAACCAGTAAGGCAACCCCGCCAGCCTAGCCGGGTCCTCAACGACAGGAGCACGATCATGCGCACCCGTGGCCAGGACCCAACGCTGCCCGAGATGCGCCGCGTGCGGCTGCTGGAGATGGCGGACGCGATGGATATGTTCTGCCAAGGGTTGGTTTGCGCATTCACAGTTCTCCGCAAGAATTGATTGGCTCCAATTCTTGGAGTGGTGAATCCGTTAGCGAGGTGCCGCCGGCTTCCATTCAGGTCGAGGTGGCCCGGCTCCATGCACCGCGACGCAACGCGGGGAGGCAGACAAGGTATAGGGCGGCGCCTACAATCCATGCCAACCCGTTCCATGTGCTCGCCGAGGCGGCATAAATCGCCGTGACGATCAGCGGTCCAATGATCGAAGTTAGGCTGGTAAGAGCCGCGAGCGATCCTTGAAGCTGTCCCTGATGGTCGTCATCTACCTGCCTGGACAGCATGGCCTGCAACGCGGGCATCCCGATGCCGCCGGAAGCGAGAAGAATCATAATGGGGAAGGCCATCCAGCCTCGCGTCGCGAACGCCAGCAAGACGTAGCCCAGCGCGTCGGCCGCCATGCCGGCGATAATGGCCTGCTTCTCGCCGAAACGTTTGGTGGCGGGACCAGTGACGAAGGCTTGAGCGAGGGCGTGCAAGATTCCGAATACCGCAAGCGACAGGCCGATCATCGTCGCGCTCCAGCGAAAGCGGTCCTCGCCGAAAATGACCCAGAGCGCTGCCGGCACCTGTCCTACGAGTTGCATGATAAAGAAGACAGTCATAAGTGCGGCGACGATAGTCATGCCCCGCGCCCACCGGAAGGAGCTGACTGGGTTGAAGGCTCTCAAGGGCATCGGTCGAGGATCTGGGCAAAACGTAGGGGCAAACAAACGGAAAAATCGTTTCTCAAATTTTCTGATGCCAAGAACTCTAACCAGTCTTATCTAAAAATTGCCTTATGATCCGTCTCTCCGGTTACAGCCTGTGTAACTGATTAATCCTGCCTTTCTAATCACCATTCTAATGTTTTAATTAAGGGATTTTGTCTTCATTAACGGCTTTCGCTCATAAAAATGTTATGACGTTTTGCCCGCAGGCGGGAAACCATCCACTTCACGAGACTGATCTCCTCTGCCGGAACACCGGGCATCTCCAACTTATAAGTTGGAGAAATAAGAGAATTTCAGATTGAGAGAATGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAGGCAGAGGAGAGCATAGAAATGGGGTTCACTTTTTGGTAAAGCTATAGCATGCCTATCACATATAAATAGAGTGCCAGTAGCGACTTTTTTCACACTCGAAATACTCTTACTACTGCTCTCTTGTTGTTTTTATCACTTCTTGTTTCTTCTTGGTAAATAGAATATCAAGCTACAAAAAGCATACAATCAACTATCAACTATTAACTATATCGTAATACACAGGATCCACCATGAAGGCTGCTGCGCTTTCCTGCCTCTTCGGCAGTACCCTTGCCGTTGCAGGCGCCATTGAATCGAGAAAGGTTCACCAGAAGCCCCTCGCGAGATCTGAACCTTTTTACCCGTCGCCATGGATGAATCCCAACGCCATCGGCTGGGCGGAGGCCTATGCCCAGGCCAAGTCCTTTGTCTCCCAAATGACTCTGCTAGAGAAGGTCAACTTGACCACGGGAGTCGGCTGGGGGGAGGAGCAGTGCGTCGGCAACGTGGGCGCGATCCCTCGCCTTGGACTTCGCAGTCTGTGCATGCATGACTCCCCTCTCGGCGTGCGAGGAACCGACTACAACTCAGCGTTCCCCTCTGGCCAGACCGTTGCTGCTACCTGGGATCGCGGTCTGATGTACCGTCGCGGCTACGCAATGGGCCAGGAGGCCAAAGGCAAGGGCATCAATGTCCTTCTCGGACCAGTCGCCGGCCCCCTTGGCCGCATGCCCGAGGGCGGTCGTAACTGGGAAGGCTTCGCTCCGGATCCCGTCCTTACCGGCATCGGCATGTCCGAGACGATCAAGGGCATTCAGGATGCTGGCGTCATCGCTTGTGCGAAGCACTTTATTGGAAACGAGCAGGAGCACTTCAGACAGGTGCCAGAAGCCCAGGGATACGGTTACAACATCAGCGAAACCCTCTCCTCCAACATTGACGACAAGACCATGCACGAGCTCTACCTTTGGCCGTTTGCCGATGCCGTCCGGGCCGGCGTCGGCTCTGTCATGTGCTCGTACAACCAGGGCAACAACTCGTACGCCTGCCAGAACTCGAAGCTGCTGAACGACCTCCTCAAGAACGAGCTTGGGTTTCAGGGCTTCGTCATGAGCGACTGGTGGGCACAGCACACTGGCGCAGCAAGCGCCGTGGCTGGTCTCGATATGTCCATGCCGGGCGACACCATGGTCAACACTGGCGTCAGTTTCTGGGGCGCCAATCTCACCCTCGCCGTCCTCAACGGCACAGTCCCTGCCTACCGTCTCGACGACATGTGCATGCGCATCATGGCCGCCCTCTTCAAGGTCACCAAGACCACCGACCTGGAACCGATCAACTTCTCCTTCTGGACCCGCGACACTTATGGCCCGATCCACTGGGCCGCCAAGCAGGGCTACCAGGAGATTAATTCCCACGTTGACGTCCGCGCCGACCACGGCAACCTCATCCGGAACATTGCCGCCAAGGGTACGGTGCTGCTGAAGAATACCGGCTCTCTACCCCTGAACAAGCCAAAGTTCGTGGCCGTCATCGGCGAGGATGCTGGGCCGAGCCCCAACGGGCCCAACGGCTGCAGCGACCGCGGCTGTAACGAAGGCACGCTCGCCATGGGCTGGGGATCCGGCACAGCCAACTATCCGTACCTCGTTTCCCCCGACGCCGCGCTCCAGGCGCGGGCCATCCAGGACGGCACGAGGTACGAGAGCGTCCTGTCCAACTACGCCGAGGAAAATACAAAGGCTCTGGTCTCGCAGGCCAATGCAACCGCCATCGTCTTCGTCAATGCCGACTCAGGCGAGGGCTACATCAACGTGGACGGTAACGAGGGCGACCGTAAGAACCTGACTCTCTGGAACAACGGTGATACTCTGGTCAAGAACGTCTCGAGCTGGTGCAGCAACACCATCGTCGTCATCCACTCGGTCGGCCCGGTCCTCCTGACCGATTGGTACGACAACCCCAACATCACGGCCATTCTCTGGGCTGGTCTTCCGGGCCAGGAGTCGGGCAACTCCATCACCGACGTGCTTTACGGCAAGGTCAACCCCGCCGCCCGCTCGCCCTTCACTTGGGGCAAGACCCGCGAAAGCTATGGCGCGGACGTCCTGTACAAGCCGAATAATGGCAATTGGGCGCCCCAACAGGACTTCACCGAGGGCGTCTTCATCGACTACCGCTACTTCGACAAGGTTGACGATGACTCGGTCATCTACGAGTTCGGCCACGGCCTGAGCTACACCACCTTCGAGTACAGCAACATCCGCGTCGTCAAGTCCAACGTCAGCGAGTACCGGCCCACGACGGGCACCACGATTCAGGCCCCGACGTTTGGCAACTTCTCCACCGACCTCGAGGACTATCTCTTCCCCAAGGACGAGTTCCCCTACATCCCGCAGTACATCTACCCGTACCTCAACACGACCGACCCCCGGAGGGCCTCGGGCGATCCCCACTACGGCCAGACCGCCGAGGAGTTCCTCCCGCCCCACGCCACCGATGACGACCCCCAGCCGCTCCTCCGGTCCTCGGGCGGAAACTCCCCCGGCGGCAACCGCCAGCTGTACGACATTGTCTACACAATCACGGCCGACATCACGAATACGGGCTCCGTTGTAGGCGAGGAGGTACCGCAGCTCTACGTCTCGCTGGGCGGTCCCGAGGATCCCAAGGTGCAGCTGCGCGACTTTGACAGGATGCGGATCGAACCCGGCGAGACGAGGCAGTTCACCGGCCGCCTGACGCGCAGAGATCTGAGCAACTGGGACGTCACGGTGCAGGACTGGGTCATCAGCAGGTATCCCAAGACGGCATATGTTGGGAGGAGCAGCCGGAAGTTGGATCTCAAGATTGAGCTTCCTTGATAAGTCGACCTCGACTTTGTTCCCACTGTACTTTTA

GCTCGTACAAAATACAATATACTTTTCATTTCTCCGTAAACAACATGTTTTCCCATGTAATATCCTTTTCTATTTTTCGTTCCGTTACCAACTTTACACATACTTTATATAGCTATTCACTTCTATACACTAAAAAACTAAGACAATTTTAATTTTGCTGCCTGCCATATTTCAATTTGTTATAAATTCCTATAATTTATCCTATTAGTAGCTAAAAAAAGATGAATGTGAATCGAATCCTAAGAGAATTGGATCTGATCCACAGGACGGGTGTGGTCGCCATGATCGCGTAGTCGATAGTGGCTCCAAGTAGCGAAGCGAGCAGGACTGGGCGGCGGCCAAAGCGGTCGGACAGTGCTCCGAGAACGGGTGCGCATAGAAATTGCATCAACGCATATAGCGCTAGCAGCACGCCATAGTGACTGGCGATGCTGTCGGAATGGACGATATCCCGCAAGAGGCCCGGCAGTACCGGCATAACCAAGCCTATGCCTACAGCATCCAGGGTGACGGTGCCGAGGATGACGATGAGCGCATTGTTAGATTTCATACACGGTGCCTGACTGCGTTAGCAATTTAACTGTGATAAACTACCGCATTAAAGCTTTTTCTTTCCAATTTTTTTTTTTTCGTCATTATAAAAATCATTACGACCGAGATTCCCGGGTAATAACTGATATAATTAAATTGAAGCTCTAATTTGTGAGTTTAGTATACATGCATTTACTTATAATACAGTTTTTTAGTTTTGCTGGCCGCATCTTCTCAAATATGCTTCCCAGCCTGCTTTTCTGTAACGTTCACCCTCTACCTTAGCATCCCTTCCCTTTGCAAATAGTCCTCTTCCAACAATAATAATGTCAGATCCTGTAGAGACCACATCATCCACGGTTCTATACTGTTGACCCAATGCGTCTCCCTTGTCATCTAAACCCACACCGGGTGTCATAATCAACCAATCGTAACCTTCATCTCTTCCACCCATGTCTCTTTGAGCAATAAAGCCGATAACAAAATCTTTGTCGCTCTTCGCAATGTCAACAGTACCCTTAGTATATTCTCCAGTAGATAGGGAGCCCTTGCATGACAATTCTGCTAACATCAAAAGGCCTCTAGGTTCCTTTGTTACTTCTTCTGCCGCCTGCTTCAAACCGCTAACAATACCTGGGCCCACCACACCGTGTGCATTCGTAATGTCTGCCCATTCTGCTATTCTGTATACACCCGCAGAGTACTGCAATTTGACTGTATTACCAATGTCAGCAAATTTTCTGTCTTCGAAGAGTAAAAAATTGTACTTGGCGGATAATGCCTTTAGCGGCTTAACTGTGCCCTCCATGGAAAAATCAGTCAAGATATCCACATGTGTTTTTAGTAAACAAATTTTGGGACCTAATGCTTCAACTAACTCCAGTAATTCCTTGGTGGTACGAACATCCAATGAAGCACACAAGTTTGTTTGCTTTTCGTGCATGATATTAAATAGCTTGGCAGCAACAGGACTAGGATGAGTAGCAGCACGTTCCTTATATGTAGCTTTCGACATGATTTATCTTCGTTTCCTGCAGGTTTTTGTTCTGTGCAGTTGGGTTAAGAATACTGGGCAATTTCATGTTTCTTCAACACTACATATGCGTATATATACCAATCTAAGTCTGTGCTCCTTCCTTCGTTCTTCCTTCTGTTCGGAGATTACCGAATCAAAAAAATTTCAAGGAAACCGAAATCAAAAAAAAGAATAAAAAAAAAATGATGAATTGAAAAGCTTATCGATCCTACCCCTTGCGCTAAAGAAGTATATGTGCCTACTAACGCTTGTCTTTGTCTCTGTCACTAAACACTGGATTATTACTCCCAGATACTTATTTTGGACTAATTTAAATGATTTCGGATCAACGTTCTTAATATCGCTGAATCTTCCACAATTGATGAAAGTAGCTAGGAAGAGGAATTGGTATAAAGTTTTTGTTTTTGTAAATCTCGAAGTATACTCAAACGAATTTAGTATTTTCTCAGTGATCTCCCAGATGCTTTCACCCTCACTTAGAAGTGCTTTAAGCATTTTTTTACTGTGGCTATTTCCCTTATCTGCTTCTTCCGATGATTCGAACTGTAATTGCAAACTACTTACAATATCAGTGATATCAGATTGATGTTTTTGTCCATAGTAAGGAATAATTGTAAATTCCCAAGCAGGAATCAATTTCTTTAATGAGGCTTCCAGAATTGTTGCTTTTTGCGTCTTGTATTTAAACTGGAGTGATTTATTGACAATATCGAAACTCAGCGAATTGCTTATGATAGTATTATAGCTCATGAATGTGGCTCTCTTGATTGCTGTTCCGTTATGTGTAATCATCCAACATAAATAGGTTAGTTCAGCAGCACATAATGCTATTTTCTCACCTGAAGGTCTTTCAAACCTTTCCACAAACTGACGAACAAGCACCTTAGGTGGTGTTTTACATAATATATCAAATTGTGGCATGCTTAGCGCCGATCTTGTGTGCAATTGATATCTAGTTTCAACTACTCTATTTATCTTGTATCTTGCAGTATTCAAACACGCTAACTCGAAAAACTAACTTTAATTGTCCTGTTTGTCTCGCGTTCTTTCGAAAAATGCACCGGCCGCGCATTATTTGTACTGCGAAAATAATTGGTACTGCGGTATCTTCATTTCATATTTTAAAAATGCACCTTTGCTGCTTTTCCTTAATTTTTAGACGGCCCGCAGGTTCGTTTTGCGGTACTATCTTGTGATAAAAAGTTGTTTTGACATGTGATCTGCACAGATTTTATAATGTAATAAGCAAGAATACATTATCAAACGAACAATACTGGTAAAAGAAAACCAAAATGGACGACATTGAAACAGCCAAGAATCTGACGGTAAAAGCACGTACAGCTTATAGCGTCTGGGATGTATGTCGGCTGTTTATTGAAATGATTGCTCCTGATGTAGATATTGATATAGAGAGTAAACGTAAGTCTGATGAGCTACTCTTTCCAGGATATGTCATAAGGCCCATGGAATCTCTCACAACCGGTAGGCCGTATGGTCTTGATTCTAGCGCAGAAGATTCCAGCGTATCTTCTGACTCCAGTGCTGAGGTAATTTTGCCTGCTGCGAAGATGGTTAAGGAAAGGTTTGATTCGATTGGAAATGGTATGCTCTCTTCACAAGAAGCAAGTCAGGCTGCCATAGATTTGATGCTACAGAATAACAAGCTGTTAGACAATAGAAAGCAACTATACAAATCTATTGCTATAATAATAGGAAGATTGCCCGAGAAAGACAAGAAGAGAGCTACCGAAATGCTCATGAGAAAAATGGATTGTACACAGTTATTAGTCCCACCAGCTCCAACGGAAGAAGATGTTATGAAGCTCGTAAGCGTCGTTACCCAATTGCTTACTTTAGTTCCACCAGATCGTCAAGCTGCTTTAATAGGTGATTTATTCATCCCGGAATCTCTAAAGGATATATTCAATAGTTTCAATGAACTGGCGGCAGAGAATCGTTTACAGCAAAAAAAGAGTGAGTTGGAAGGAAGGACTGAAGTGAACCATGCTAATACAAATGAAGAAGTTCCCTCCAGGCGAACAAGAAGTAGAGACACAAATGCAAGAGGAGCATATAAATTACAAAACACCATCACTGAGGGCCCTAAAGCGGTTCCCACGAAAAAAAGGAGAGTAGCAACGAGGGTAAGGGGCAGAAAATCACGTAATACTTCTAGGGTATGATCCAATATCAAAGGAAATGATAGCATTGAAGGATGAGACTAATCCAATTGAGGAGTGGCAGCATATAGAACAGCTAAAGGGTAGTGCTGAAGGAAGCATACGATACCCCGCATGGAATGGGATAATATCACAGGAGGTACTAGACTACCTTTCATCCTACATAAATAGACGCATATAAGTACGCATTTAAGCATAAACACGCACTATGCCGTTCTTCTCATGTATATATATATACAGGCAACACGCAGATATAGGTGCGACGTGAACAGTGAGCTGTATGTGCGCAGCTCGCGTTGCATTTTCGGAAGCGCTCGTTTTCGGAAACGCTTTGAAGTTCCTATTCCGAAGTTCCTATTCTCTAGAAAGTATAGGAACTTCAGAGCGCTTTTGAAAACCAAAAGCGCTCTGAAGACGCACTTTCAAAAAACCAAAAACGCACCGGACTGTAACGAGCTACTAAAATATTGCGAATACCGCTTCCACAAACATTGCTCAAAAGTATCTCTTTGCTATATATCTCTGTGCTATATCCCTATATAACCTACCCATCCACCTTTCGCTCCTTGAACTTGCATCTAAACTCGACCTCTACATCAACAGGCTTCCAATGCTCTTCAAATTTTACTGTCAAGTAGACCCATACGGCTGTAATATGCTGCTCTTCATAATGTAAGCTTATCTTTATCGAATCGTGTGAAAAACTACTACCGCGATAAACCTTTACGGTTCCCTGAGATTGAATTAGTTCCTTTAGTATATGATACAAGACACTTTTGAACTTTGTACGACGAATTTTGAGGTTCGCCATCCTCTGGCTATTTCCAATTATCCTGTCGGCTATTATCTCCGCCTCAGTTTGATCTTCCGCTTCAGACTGCCATTTTTCACATAATGAATCTATTTCACCCCACAATCCTTCATCCGCCTCCGCATCTTGTTCCGTTAAACTATTGACTTCATGTTGTACATTGTTTAGTTCACGAGAAGGGTCCTCTTCAGGCGGTAGCTCCTGATCTCCTATATGACCTTTATCCTGTTCTCTTTCCACAAACTTAGAAATGTATTCATGAATTATGGAGCACCTAATAACATTCTTCAAGGCGGAGAAGTTTGGGCCAGATGCCCAATATGCTTGACATGAAAACGTGAGAATGAATTTAGTATTATTGTGATATTCTGAGGCAATTTTATTATAATCTCGAAGATAAGAGAAGAATGCAGTGACCTTTGTATTGACAAATGGAGATTCCATGTATCTAAAAAATACGCCTTTAGGCCTTCTGATACCCTTTCCCCTGCGGTTTAGCGTGCCTTTTACATTAATATCTAAACCCTCTCCGATGGTGGCCTTTAACTGACTAATAAATGCAACCGATATAAACTGTGATAATTCTGGGTGATTTATGATTCGATCGACAATTGTATTGTACACTAGTGCAGGATCAGGCCAATCCAGTTCTTTTTCAATTACCGGTGTGTCGTCTGTATTCAGTACATGTCCAACAAATGCAAATGCTAACGTTTTGTATTTCTTATAATTGTCAGGAACTGGAAAAGTCCCCCTTGTCGTCTCGATTACACACCTACTTTCATCGTACACCATAGGTTGGAAGTGCTGCATAATACATTGCTTAATACAAGCAAGCAGTCTCTCGCCATTCATATTTCAGTTATTTTCCATTACAGCTGATGTCATTGTATATCAGCGCTGTAAAAATCTATCTGTTACAGAAGGTTTTCGCGGTTTTTATAAACAAAACTTTCGTTACGAAATCGAGCAATCACCCCAGCTGCGTATTTGGAAATTCGGGAAAAAGTAGAGCAACGCGAGTTGCATTTTTTACACCATAATGCATGATTAACTTCGAGAAGGGATTAAGGCTAATTTCACTAGTATGTTTCAAAAACCTCAATCTGTCCATTGAATGCCTTATAAAACAGCTATAGATTGCATAGAAGAGTTAGCTACTCAATGCTTTTTGTCAAAGCTTACTGATGATGATGTGTCTACTTTCAGGCGGGTCTGTAGTAAGGAGAATGACATTATAAAGCTGGCACTTAGAATTCCACGGACTATAGACTATACTAGTATACTCCGTCTACTGTACGATACACTTCCGCTCAGGTCCTTGTCCTTTAACGAGGCCTTACCACTCTTTTGTTACTCTATTGATCCAGCTCAGCAAAGGCAGTGTGATCTAAGATTCTATCTTCGCGATGTAGTAAAACTAGCTAGACCGAGAAAGAGACTAGAAATGCAAAAGGCACTTCTACAATGGCTGCCATCATTATTATCCGATGTGACGCTGCA（配列番号７）
変異体番号７３ｙＣＤＳのポリヌクレオチド配列：
TTGGATAACGGGTTAGCCCGTACACCTACTATGGGTTGGCTTCACTGGGAAAGATTCATGTGTAACTTAGATTGCCAAGAAGAGCCTGACAGCTGTATCTCAGAGAAACTATTCATGGAGATGGCTGAACTAATGGTAAGTGAAGGATGGAAGGATGCTGGTTATGAATACCTATGTATTGATGATTGCTGGATGGCTCCACAGCGTGATTCAGAAGGTAGGTTACAAGCTGACCCCCAGAGATTCCCACATGGCATACGTCAGCTTGCAAACTACGTACACAGCAAGGGTCTAAAGTTAGGCATCTACGCTGATGTCGGAAACAAGACATGTGCTGGTTTCCCAGGTTCATTCGGTTACTATGACATAGATGCGCAGACGTTTGCTGATTGGGGTGTTGATTTGTTGAAGTTTGATGGATGCTACTGCGATTCCCTGGAGAACCTAGCCGATGGGTACAAACACATGAGTTTGGCTCTAAACAGGACTGGTAGGAGCATCGTCTATAGTTGTGAATGGCCCTTGTACATGTGGCCGTTTCAGAAGCCAAACTACACTGAGATAAGACAATACTGTAACCATTGGCGTAACTTTGCTGACATAGATGATTCATGGGCTTCAATCAAATCTATCTTGGATTGGACTTCTTTCAACCAGGAAAGAATTGTTGATGTTGCAGGTCCAGGTGGATGGAATGACCCTGATATGCTTGTCATAGGGAACTTTGGGCTATCATGGAATCAACAAGTTACACAAATGGCTTTGTGGGCGATCATGGCCGCACCCCTATTCATGTCTAATGATCTACGTCACATATCACCCCAAGCAAAGGCTTTACTTCAAGATAAGGATGTCATAGCGATCAACCAAGATCCTCTTGGTAAACAAGGTTATCAATTGAGACAAGGTGACAACTTTGAAGTGTGGGAAAGACCATTGTCTGGACTTGCGTGGGCTGTTGCTATGATCAACCGTCAAGAGATCGGAGGGCCAAGATCTTACACTATCGCGGTAGCCTCTTTGGGTAAGGGTGTTGCGTGCAATCCTGCCTGCTTCATTACACAATTGCTTCCAGTTAAGAGAAAGTTGGGTTTCTATGAGTGGACATCTAGGCTAAGAAGTCACATCAATCCTACTGGTACGGTATTGTTGCAATTGGAGAACACAATGCAAATGTCTTTGAAAGATTTGTTA（配列番号８）
変異体番号７３のポリヌクレオチド配列：
CTGGACAATGGATTGGCAAGGACGCCTACCATGGGCTGGCTGCACTGGGAGCGCTTCATGTGCAACCTTGACTGCCAGGAAGAGCCAGATTCCTGCATCAGTGAGAAGCTCTTCATGGAGATGGCAGAGCTCATGGTCTCAGAAGGCTGGAAGGATGCAGGTTATGAGTACCTCTGCATTGATGACTGTTGGATGGCTCCCCAAAGAGATTCAGAAGGCAGACTTCAGGCAGACCCTCAGCGCTTTCCTCATGGGATTCGCCAGCTAGCTAATTATGTTCACAGCAAAGGACTGAAGCTAGGGATTTATGCAGATGTTGGAAATAAAACCTGCGCAGGCTTCCCTGGGAGTTTTGGATACTACGACATTGATGCCCAGACCTTTGCTGACTGGGGAGTAGATCTGCTAAAATTTGATGGTTGTTACTGTGACAGTTTGGAAAATTTGGCAGATGGTTATAAGCACATGTCCTTGGCCCTGAATAGGACTGGCAGAAGCATTGTGTACTCCTGTGAGTGGCCTCTTTATATGTGGCCCTTTCAAAAGCCCAATTATACAGAAATCCGACAGTACTGCAATCACTGGCGAAATTTTGCTGACATTGATGATTCCTGGGCGAGTATAAAGAGTATCTTGGACTGGACATCTTTTAACCAGGAGAGAATTGTTGATGTTGCTGGACCAGGGGGTTGGAATGACCCAGATATGTTAGTGATTGGCAACTTTGGCCTCAGCTGGAATCAGCAAGTAACTCAGATGGCCCTCTGGGCTATCATGGCTGCTCCTTTATTCATGTCTAATGACCTCCGACACATCAGCCCTCAAGCCAAAGCTCTCCTTCAGGATAAGGACGTAATTGCCATCAATCAGGACCCCTTGGGCAAGCAAGGGTACCAGCTTAGACAGGGAGACAACTTTGAAGTGTGGGAACGACCTCTCTCAGGCTTAGCCTGGGCTGTAGCTATGATAAACCGGCAGGAGATTGGTGGACCTCGCTCTTATACCATCGCAGTTGCTTCCCTGGGTAAAGGAGTGGCCTGTAATCCTGCCTGCTTCATCACACAGCTCCTCCCTGTGAAAAGGAAGCTAGGGTTCTATGAATGGACTTCAAGGTTAAGAAGTCACATAAATCCCACAGGCACTGTTTTGCTTCAGCTAGAAAATACAATGCAGATGTCATTAAAAGACTTACTT（配列番号９）
変異体番号７３のポリペプチド配列：
LDNGLARTPTMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFMEMAELMVSEGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANYVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNRTGRSIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWASIKSILDWTSFNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWNQQVTQMALWAIMAAPLFMSNDLRHISPQAKALLQDKDVIAINQDPLGKQGYQLRQGDNFEVWERPLSGLAWAVAMINRQEIGGPRSYTIAVASLGKGVACNPACFITQLLPVKRKLGFYEWTSRLRSHINPTGTVLLQLENTMQMSLKDLL（配列番号１０）
変異体番号２１８ｙＣＤＳのポリヌクレオチド配列：
TTGGATAACGGGTTAGCCCGTACACCTACTATGGGTTGGCTTCACTGGGAAAGATTCATGTGTAACTTAGATTGCCAAGAAGAGCCTGACAGCTGTATCTCAGAGAAACTATTCATGGAGATGGCTGAACTAATGGTAAGTGAAGGATGGAAGGATGCTGGTTATGAATACCTATGTATTGATGATTGCTGGATGGCTCCACAGCGTGATTCAGAAGGTAGGTTACAAGCTGACCCCCAGAGATTCCCACATGGCATACGTCAGCTTGCAAACTACGTACACAGCAAGGGTCTAAAGTTAGGCATCTACGCTGATGTCGGAAACAAGACATGTGCTGGTTTCCCAGGTTCATTCGGTTACTATGACATAGATGCGCAGACGTTTGCTGATTGGGGTGTTGATTTGTTGAAGTTTGATGGATGCTACTGCGATTCCCTGGAGAACCTAGCCGATGGGTACAAACACATGAGTTTGGCTCTAAACAGGACTGGTAGGAGCATCGTCTATAGTTGTGAATGGCCCTTGTACATGTGGCCGTTTCAGAAGCCAAACTACACTGAGATAAGACAATACTGTAACCATTGGCGTAACTTTGCTGACATAGATGATTCATGGGCTTCAATCAAATCTATCTTGGATTGGACTTCTTTCAACCAGGAAAGAATTGTTGATGTTGCAGGTCCAGGTGGATGGAATGACCCTGATATGCTTGTCATAGGGAACTTTGGGCTATCATGGAATCAACAAGTTACACAAATGGCTTTGTGGGCGATCATGGCCGCACCCCTATTCATGTCTAATGATCTACGTCACATATCACCCCAAGCAAAGGCTTTACTTCAAGATAAGGATGTCATAGCGATCAACCAAGATCCTCTTGGTAAACAAGGTTATCAATTGAGACAAGGTGACAACTTTGAAGTGTGGGAAAGACCATTGTCTGGACTTGCGTGGGCTGTTGCTATTATCAACCGTCAAGAGATCGGAGGGCCAAGATCTTACACTATCGCGGTAGCCTCTTTGGGTAAGGGTGTTGCGTGCAATCCTGCCTGCTTCATTACACAATTGCTTCCAGTTAAGAGAAAGTTGGGTTTCTATAACTGGACATCTAGGCTAAAAAGTCACATTAATCCTACTGGTACGGTATTGTTGCAATTGGAGAACACAATGCAAATGTCTTTGAAAGATTTGTTA（配列番号１１）
変異体番号２１８ｈＣＤＳのポリヌクレオチド配列：
CTGGACAATGGATTGGCAAGGACGCCTACCATGGGCTGGCTGCACTGGGAGCGCTTCATGTGCAACCTTGACTGCCAGGAAGAGCCAGATTCCTGCATCAGTGAGAAGCTCTTCATGGAGATGGCAGAGCTCATGGTCTCAGAAGGCTGGAAGGATGCAGGTTATGAGTACCTCTGCATTGATGACTGTTGGATGGCTCCCCAAAGAGATTCAGAAGGCAGACTTCAGGCAGACCCTCAGCGCTTTCCTCATGGGATTCGCCAGCTAGCTAATTATGTTCACAGCAAAGGACTGAAGCTAGGGATTTATGCAGATGTTGGAAATAAAACCTGCGCAGGCTTCCCTGGGAGTTTTGGATACTACGACATTGATGCCCAGACCTTTGCTGACTGGGGAGTAGATCTGCTAAAATTTGATGGTTGTTACTGTGACAGTTTGGAAAATTTGGCAGATGGTTATAAGCACATGTCCTTGGCCCTGAATAGGACTGGCAGAAGCATTGTGTACTCCTGTGAGTGGCCTCTTTATATGTGGCCCTTTCAAAAGCCCAATTATACAGAAATCCGACAGTACTGCAATCACTGGCGAAATTTTGCTGACATTGATGATTCCTGGGCGAGTATAAAGAGTATCTTGGACTGGACATCTTTTAACCAGGAGAGAATTGTTGATGTTGCTGGACCAGGGGGTTGGAATGACCCAGATATGTTAGTGATTGGCAACTTTGGCCTCAGCTGGAATCAGCAAGTAACTCAGATGGCCCTCTGGGCTATCATGGCTGCTCCTTTATTCATGTCTAATGACCTCCGACACATCAGCCCTCAAGCCAAAGCTCTCCTTCAGGATAAGGACGTAATTGCCATCAATCAGGACCCCTTGGGCAAGCAAGGGTACCAGCTTAGACAGGGAGACAACTTTGAAGTGTGGGAACGACCTCTCTCAGGCTTAGCCTGGGCTGTAGCTATTATAAACCGGCAGGAGATTGGTGGACCTCGCTCTTATACCATCGCAGTTGCTTCCCTGGGTAAAGGAGTGGCCTGTAATCCTGCCTGCTTCATCACACAGCTCCTCCCTGTGAAAAGGAAGCTAGGGTTCTATAACTGGACTTCAAGGTTAAAAAGTCACATAAATCCCACAGGCACTGTTTTGCTTCAGCTAGAAAATACAATGCAGATGTCATTAAAAGACTTACTT（配列番号１２）
変異体番号２１８のポリペプチド配列：
LDNGLARTPTMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFMEMAELMVSEGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANYVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNRTGRSIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWASIKSILDWTSFNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWNQQVTQMALWAIMAAPLFMSNDLRHISPQAKALLQDKDVIAINQDPLGKQGYQLRQGDNFEVWERPLSGLAWAVAIINRQEIGGPRSYTIAVASLGKGVACNPACFITQLLPVKRKLGFYNWTSRLKSHINPTGTVLLQLENTMQMSLKDLL（配列番号１３）
変異体番号３２６ｙＣＤＳのポリヌクレオチド配列：
TTGGATAACGGGTTAGCCCGTACACCTACTATGGGTTGGCTTCACTGGGAAAGATTCATGTGTAACTTAGATTGCCAAGAAGAGCCTGACAGCTGTATCTCAGAGAAACTATTCATGGAGATGGCTGAACGGATGGTAAGTGAAGGATGGAAGGATGCTGGTTATGAATACCTATGTATTGATGATTGCTGGATGGCTCCACAGCGTGATTCAGAAGGTAGGTTACAAGCTGACCCCCAGAGATTCCCACATGGCATACGTCAGCTTGCAAACTACGTACACAGCAAAGGTCTAAAGTTAGGCATCTACGCTGATGTCGGAAACAAGACATGTGCTGGTTTCCCAGGTTCATTCGGTTACTATGACATAGATGCGCAGACGTTTGCTGATTGGGGTGTTGATTTGTTGAAGTTTGATGGATGCTACTGCGATTCCCTGGAGAACCTAGCCGATGGGTACAAACACATGAGTTTGGCTCTAAACAGGACTGGTAGGAGCATCGTCTATAGTTGTGAATGGCCCTTGTACATGTGGCCGTTTCAGAAGCCAAACTACACTGAGATAAGACAATACTGTAACCATTGGCGTAACTTTGCTGACATAGATGATTCATGGGCTTCAATCAAATCTATCTTGGATTGGACTTCTCGTAACCAGGAAAGAATTGTTGATGTTGCAGGTCCAGGTGGATGGAATGACCCTGATATGCTTGTCATAGGGAACTTTGGGCTATCATGGGACCAACAAGTTACACAAATGGCTTTGTGGGCGATCATGGCCGCACCCCTATTCATGTCTAATGATCTACGTCACATATCACCCCAAGCAAAGGCTTTACTTCAAGATAAGGATGTCATAGCGATCAACCAAGATCCTCTTGGTAAACAAGGTTATCAATTGAGAAAAGGTGACAACTTTGAAGTGTGGGAAAGACCATTGTCTGGAGATGCGTGGGCTGTTGCTATTATCAACCGTCAAGAGATCGGAGGGCCAAGATCTTACACTATCCCGGTAGCCTCTTTGGGTAAGGGTGTTGCGTGCAATCCTGCCTGCTTCATTACACAATTGCTTCCAGTTAAGAGACAATTGGGTTTCTATAACTGGACCTCTAGGCTAAAAAGTCACATTAATCCTACTGGTACGGTATTGTTGCAATTGGAGAACACAATGCAAATGTCTTTGAAAGATTTGTTA（配列番号１４）
変異体番号３２６のポリペプチド配列：
LDNGLARTPTMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFMEMAERMVSEGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANYVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNRTGRSIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWASIKSILDWTSRNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWDQQVTQMALWAIMAAPLFMSNDLRHISPQAKALLQDKDVIAINQDPLGKQGYQLRKGDNFEVWERPLSGDAWAVAIINRQEIGGPRSYTIPVASLGKGVACNPACFITQLLPVKRQLGFYNWTSRLKSHINPTGTVLLQLENTMQMSLKDLL（配列番号１５）
変異体番号２０６ｙＣＤＳのポリヌクレオチド配列：
TTGGATAACGGGTTAGCCCGTACACCTACTATGGGTTGGCTTCACTGGGAAAGATTCATGTGTAACTTAGATTGCCAAGAAGAGCCTGACAGCTGTATCTCAGAGAAACTATTCATGGAGATGGCTGAACTAATGGTAAGTGAAGGATGGAAGGATGCTGGTTATGAATACCTATGTATTGATGATTGCTGGATGGCTCCACAGCGTGATTCAGAAGGTAGGTTACAAGCTGACCCCCAGAGATTCCCACATGGCATACGTCAGCTTGCAAACTACGTACACAGCAAGGGTCTAAAGTTAGGCATCTACGCTGATGTCGGAAACAAGACATGTGCTGGTTTCCCAGGTTCATTCGGTTACTATGACATAGATGCGCAGACGTTTGCTGATTGGGGTGTTGATTTGTTGAAGTTTGATGGATGCTACTGCGATTCCCTGGAGAACCTAGCCGATGGGTACAAACACATGAGTTTGGCTCTAAACAGGACTGGTAGGAGCATCGTCTATAGTTGTGAATGGCCCTTGTACATGTGGCCGTTTCAGAAGCCAAACTACACTGAGATAAGACAATACTGTAACCATTGGCGTAACTTTGCTGACATAGATGATTCATGGGCTTCAATCAAATCTATCTTGGATTGGACTTCTTTCAACCAGGAAAGAATTGTTGATGTTGCAGGTCCAGGTGGATGGAATGACCCTGATATGCTTGTCATAGGGAACTTTGGGCTATCATGGAATCAACAAGTTACACAAATGGCTTTGTGGGCGATCATGGCCGCACCCCTATTCATGTCTAATGATCTACGTCACATATCACCCCAAGCAAAGGCTTTACTTCAAGATAAGGATGTCATAGCGATCAACCAAGATCCTCTTGGTAAACAAGGTTATCAATTGAGACAAGGTGACAACTTTGAAGTGTGGGAAAGACCATTGTCTGGACTTGCGTGGGCTGTTGCTATGATCAACCGTCAAGAGATCGGAGGGCCAAGATCTTACACTATCGCGGTAGCCTCTTTGGGTAAGGGTGTTGCGTGCAATCCTGCCTGCTTCATTACACAATTGCTTCCAGTTAAGAGAAAGTTGGGTTTCTATAATTGGACCTCTAGGCTAAGAAGTCACATCAATCCTACTGGTACGGTATTGTTGCAATTGGAGAACACAATGCAAATGTCTTTGAAAGATTTGTTA（配列番号１６）
変異体番号２０６ｈＣＤＳのポリヌクレオチド配列：
CTGGACAATGGATTGGCAAGGACGCCTACCATGGGCTGGCTGCACTGGGAGCGCTTCATGTGCAACCTTGACTGCCAGGAAGAGCCAGATTCCTGCATCAGTGAGAAGCTCTTCATGGAGATGGCAGAGCTCATGGTCTCAGAAGGCTGGAAGGATGCAGGTTATGAGTACCTCTGCATTGATGACTGTTGGATGGCTCCCCAAAGAGATTCAGAAGGCAGACTTCAGGCAGACCCTCAGCGCTTTCCTCATGGGATTCGCCAGCTAGCTAATTATGTTCACAGCAAAGGACTGAAGCTAGGGATTTATGCAGATGTTGGAAATAAAACCTGCGCAGGCTTCCCTGGGAGTTTTGGATACTACGACATTGATGCCCAGACCTTTGCTGACTGGGGAGTAGATCTGCTAAAATTTGATGGTTGTTACTGTGACAGTTTGGAAAATTTGGCAGATGGTTATAAGCACATGTCCTTGGCCCTGAATAGGACTGGCAGAAGCATTGTGTACTCCTGTGAGTGGCCTCTTTATATGTGGCCCTTTCAAAAGCCCAATTATACAGAAATCCGACAGTACTGCAATCACTGGCGAAATTTTGCTGACATTGATGATTCCTGGGCGAGTATAAAGAGTATCTTGGACTGGACATCTTTTAACCAGGAGAGAATTGTTGATGTTGCTGGACCAGGGGGTTGGAATGACCCAGATATGTTAGTGATTGGCAACTTTGGCCTCAGCTGGAATCAGCAAGTAACTCAGATGGCCCTCTGGGCTATCATGGCTGCTCCTTTATTCATGTCTAATGACCTCCGACACATCAGCCCTCAAGCCAAAGCTCTCCTTCAGGATAAGGACGTAATTGCCATCAATCAGGACCCCTTGGGCAAGCAAGGGTACCAGCTTAGACAGGGAGACAACTTTGAAGTGTGGGAACGACCTCTCTCAGGCTTAGCCTGGGCTGTAGCTATGATAAACCGGCAGGAGATTGGTGGACCTCGCTCTTATACCATCGCAGTTGCTTCCCTGGGTAAAGGAGTGGCCTGTAATCCTGCCTGCTTCATCACACAGCTCCTCCCTGTGAAAAGGAAGCTAGGGTTCTATAACTGGACTTCAAGGTTAAGAAGTCACATAAATCCCACAGGCACTGTTTTGCTTCAGCTAGAAAATACAATGCAGATGTCATTAAAAGACTTACTT（配列番号１７）
変異体番号２０６のポリペプチド配列：
LDNGLARTPTMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFMEMAELMVSEGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANYVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNRTGRSIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWASIKSILDWTSFNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWNQQVTQMALWAIMAAPLFMSNDLRHISPQAKALLQDKDVIAINQDPLGKQGYQLRQGDNFEVWERPLSGLAWAVAMINRQEIGGPRSYTIAVASLGKGVACNPACFITQLLPVKRKLGFYNWTSRLRSHINPTGTVLLQLENTMQMSLKDLL（配列番号１８）
変異体番号２０５ｙＣＤＳのポリヌクレオチド配列：
TTGGATAACGGGTTAGCCCGTACACCTACTATGGGTTGGCTTCACTGGGAAAGATTCATGTGTAACTTAGATTGCCAAGAAGAGCCTGACAGCTGTATCTCAGAGAAACTATTCATGGAGATGGCTGAACTAATGGTAAGTGAAGGATGGAAGGATGCTGGTTATGAATACCTATGTATTGATGATTGCTGGATGGCTCCACAGCGTGATTCAGAAGGTAGGTTACAAGCTGACCCCCAGAGATTCCCACATGGCATACGTCAGCTTGCAAACTACGTACACAGCAAGGGTCTAAAGTTAGGCATCTACGCTGATGTCGGAAACAAGACATGTGCTGGTTTCCCAGGTTCATTCGGTTACTATGACATAGATGCGCAGACGTTTGCTGATTGGGGTGTTGATTTGTTGAAGTTTGATGGATGCTACTGCGATTCCCTGGAGAACCTAGCCGATGGGTACAAACACATGAGTTTGGCTCTAAACAGGACTGGTAGGAGCATCGTCTATAGTTGTGAATGGCCCTTGTACATGTGGCCGTTTCAGAAGCCAAACTACACTGAGATAAGACAATACTGTAACCATTGGCGTAACTTTGCTGACATAGATGATTCATGGGCTTCAATCAAATCTATCTTGGATTGGACTTCTTTCAACCAGGAAAGAATTGTTGATGTTGCAGGTCCAGGTGGATGGAATGACCCTGATATGCTTGTCATAGGGAACTTTGGGCTATCATGGAATCAACAAGTTACACAAATGGCTTTGTGGGCGATCATGGCCGCACCCCTATTCATGTCTAATGATCTACGTCACATATCACCCCAAGCAAAGGCTTTACTTCAAGATAAGGATGTCATAGCGATCAACCAAGATCCTCTTGGTAAACAAGGTTATCAATTGAGACAAGGTGACAACTTTGAAGTGTGGGAAAGACCATTGTCTGGACTTGCGTGGGCTGTTGCTATGATCAACCGTCAAGAGATCGGAGGGCCAAGATCTTACACTATCGCGGTAGCCTCTTTGGGTAAGGGTGTTGCGTGCAATCCTGCCTGCTTCATTACACAATTGCTTCCAGTTAAGAGAAAGTTGGGTTTCTATGATTGGGACTCTAGGCTAAGAAGTCACATCAATCCTACTGGTACGGTATTGTTGCAATTGGAGAACACAATGCAAATGTCTTTGAAAGATTTGTTA（配列番号１９）
変異体番号２０５ｈＣＤＳのポリヌクレオチド配列：
CTGGACAATGGATTGGCAAGGACGCCTACCATGGGCTGGCTGCACTGGGAGCGCTTCATGTGCAACCTTGACTGCCAGGAAGAGCCAGATTCCTGCATCAGTGAGAAGCTCTTCATGGAGATGGCAGAGCTCATGGTCTCAGAAGGCTGGAAGGATGCAGGTTATGAGTACCTCTGCATTGATGACTGTTGGATGGCTCCCCAAAGAGATTCAGAAGGCAGACTTCAGGCAGACCCTCAGCGCTTTCCTCATGGGATTCGCCAGCTAGCTAATTATGTTCACAGCAAAGGACTGAAGCTAGGGATTTATGCAGATGTTGGAAATAAAACCTGCGCAGGCTTCCCTGGGAGTTTTGGATACTACGACATTGATGCCCAGACCTTTGCTGACTGGGGAGTAGATCTGCTAAAATTTGATGGTTGTTACTGTGACAGTTTGGAAAATTTGGCAGATGGTTATAAGCACATGTCCTTGGCCCTGAATAGGACTGGCAGAAGCATTGTGTACTCCTGTGAGTGGCCTCTTTATATGTGGCCCTTTCAAAAGCCCAATTATACAGAAATCCGACAGTACTGCAATCACTGGCGAAATTTTGCTGACATTGATGATTCCTGGGCGAGTATAAAGAGTATCTTGGACTGGACATCTTTTAACCAGGAGAGAATTGTTGATGTTGCTGGACCAGGGGGTTGGAATGACCCAGATATGTTAGTGATTGGCAACTTTGGCCTCAGCTGGAATCAGCAAGTAACTCAGATGGCCCTCTGGGCTATCATGGCTGCTCCTTTATTCATGTCTAATGACCTCCGACACATCAGCCCTCAAGCCAAAGCTCTCCTTCAGGATAAGGACGTAATTGCCATCAATCAGGACCCCTTGGGCAAGCAAGGGTACCAGCTTAGACAGGGAGACAACTTTGAAGTGTGGGAACGACCTCTCTCAGGCTTAGCCTGGGCTGTAGCTATGATAAACCGGCAGGAGATTGGTGGACCTCGCTCTTATACCATCGCAGTTGCTTCCCTGGGTAAAGGAGTGGCCTGTAATCCTGCCTGCTTCATCACACAGCTCCTCCCTGTGAAAAGGAAGCTAGGGTTCTATGATTGGGATTCAAGGTTAAGAAGTCACATAAATCCCACAGGCACTGTTTTGCTTCAGCTAGAAAATACAATGCAGATGTCATTAAAAGACTTACTT（配列番号２０）
変異体番号２０５のポリペプチド配列：
LDNGLARTPTMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFMEMAELMVSEGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANYVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNRTGRSIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWASIKSILDWTSFNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWNQQVTQMALWAIMAAPLFMSNDLRHISPQAKALLQDKDVIAINQDPLGKQGYQLRQGDNFEVWERPLSGLAWAVAMINRQEIGGPRSYTIAVASLGKGVACNPACFITQLLPVKRKLGFYDWDSRLRSHINPTGTVLLQLENTMQMSLKDLL（配列番号２１）
変異体番号７６ｙＣＤＳのポリヌクレオチド配列：
TTGGATAACGGGTTAGCCCGTACACCTACTATGGGTTGGCTTCACTGGGAAAGATTCATGTGTAACTTAGATTGCCAAGAAGAGCCTGACAGCTGTATCTCAGAGAAACTATTCATGGAGATGGCTGAACTAATGGTAAGTGAAGGATGGAAGGATGCTGGTTATGAATACCTATGTATTGATGATTGCTGGATGGCTCCACAGCGTGATTCAGAAGGTAGGTTACAAGCTGACCCCCAGAGATTCCCACATGGCATACGTCAGCTTGCAAACTACGTACACAGCAAGGGTCTAAAGTTAGGCATCTACGCTGATGTCGGAAACAAGACATGTGCTGGTTTCCCAGGTTCATTCGGTTACTATGACATAGATGCGCAGACGTTTGCTGATTGGGGTGTTGATTTGTTGAAGTTTGATGGATGCTACTGCGATTCCCTGGAGAACCTAGCCGATGGGTACAAACACATGAGTTTGGCTCTAAACAGGACTGGTAGGAGCATCGTCTATAGTTGTGAATGGCCCTTGTACATGTGGCCGTTTCAGAAGCCAAACTACACTGAGATAAGACAATACTGTAACCATTGGCGTAACTTTGCTGACATAGATGATTCATGGAGGTCAATCAAATCTATCTTGGATTGGACTTCTTTCAACCAGGAAAGAATTGTTGATGTTGCAGGTCCAGGTGGATGGAATGACCCTGATATGCTTGTCATAGGGAACTTTGGGCTATCATGGAATCAACAAGTTACACAAATGGCTTTGTGGGCGATCATGGCCGCACCCCTATTCATGTCTAATGATCTACGTCACATATCACCCCAAGCAAAGGCTTTACTTCAAGATAAGGATGTCATAGCGATCAACCAAGATCCTCTTGGTAAACAAGGTTATCAATTGAGACAAGGTGACAACTTTGAAGTGTGGGAAAGACCATTGTCTGGACTTGCGTGGGCTGTTGCTATGATCAACCGTCAAGAGATCGGAGGGCCAAGATCTTACACTATCGCGGTAGCCTCTTTGGGTAAGGGTGTTGCGTGCAATCCTGCCTGCTTCATTACACAATTGCTTCCAGTTAAGAGAAAGTTGGGTTTCTATGAGTGGACATCTAGGCTAAGAAGTCACATCAATCCTACTGGTACGGTATTGTTGCAATTGGAGAACACAATGCAAATGTCTTTGAAAGATTTGTTA（配列番号２２）
変異体番号７６ｈＣＤＳのポリヌクレオチド配列：
CTGGACAATGGATTGGCAAGGACGCCTACCATGGGCTGGCTGCACTGGGAGCGCTTCATGTGCAACCTTGACTGCCAGGAAGAGCCAGATTCCTGCATCAGTGAGAAGCTCTTCATGGAGATGGCAGAGCTCATGGTCTCAGAAGGCTGGAAGGATGCAGGTTATGAGTACCTCTGCATTGATGACTGTTGGATGGCTCCCCAAAGAGATTCAGAAGGCAGACTTCAGGCAGACCCTCAGCGCTTTCCTCATGGGATTCGCCAGCTAGCTAATTATGTTCACAGCAAAGGACTGAAGCTAGGGATTTATGCAGATGTTGGAAATAAAACCTGCGCAGGCTTCCCTGGGAGTTTTGGATACTACGACATTGATGCCCAGACCTTTGCTGACTGGGGAGTAGATCTGCTAAAATTTGATGGTTGTTACTGTGACAGTTTGGAAAATTTGGCAGATGGTTATAAGCACATGTCCTTGGCCCTGAATAGGACTGGCAGAAGCATTGTGTACTCCTGTGAGTGGCCTCTTTATATGTGGCCCTTTCAAAAGCCCAATTATACAGAAATCCGACAGTACTGCAATCACTGGCGAAATTTTGCTGACATTGATGATTCCTGGCGTAGTATAAAGAGTATCTTGGACTGGACATCTTTTAACCAGGAGAGAATTGTTGATGTTGCTGGACCAGGGGGTTGGAATGACCCAGATATGTTAGTGATTGGCAACTTTGGCCTCAGCTGGAATCAGCAAGTAACTCAGATGGCCCTCTGGGCTATCATGGCTGCTCCTTTATTCATGTCTAATGACCTCCGACACATCAGCCCTCAAGCCAAAGCTCTCCTTCAGGATAAGGACGTAATTGCCATCAATCAGGACCCCTTGGGCAAGCAAGGGTACCAGCTTAGACAGGGAGACAACTTTGAAGTGTGGGAACGACCTCTCTCAGGCTTAGCCTGGGCTGTAGCTATGATAAACCGGCAGGAGATTGGTGGACCTCGCTCTTATACCATCGCAGTTGCTTCCCTGGGTAAAGGAGTGGCCTGTAATCCTGCCTGCTTCATCACACAGCTCCTCCCTGTGAAAAGGAAGCTAGGGTTCTATGAATGGACTTCAAGGTTAAGAAGTCACATAAATCCCACAGGCACTGTTTTGCTTCAGCTAGAAAATACAATGCAGATGTCATTAAAAGACTTACTT（配列番号２３）
変異体番号７６のポリペプチド配列：
LDNGLARTPTMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFMEMAELMVSEGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANYVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNRTGRSIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWRSIKSILDWTSFNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWNQQVTQMALWAIMAAPLFMSNDLRHISPQAKALLQDKDVIAINQDPLGKQGYQLRQGDNFEVWERPLSGLAWAVAMINRQEIGGPRSYTIAVASLGKGVACNPACFITQLLPVKRKLGFYEWTSRLRSHINPTGTVLLQLENTMQMSLKDLL（配列番号２４）
Ｍｆアルファシグナルペプチドのポリヌクレオチド配列：
ATGAGATTTCCTTCAATTTTTACTGCAGTTTTATTCGCAGCATCCTCCGCATTAGCT（配列番号２５）
Ｍｆアルファシグナルペプチドのポリペプチド配列：
MRFPSIFTAVLFAASSALA（配列番号２６）
ＭＭＯ４３５のポリヌクレオチド配列：
ttaactatatcgtaatacacaggatccaccATGAGATTTCCTTCAATTTTTACTG（配列番号２７）
ＭＭＯ４３９のポリヌクレオチド配列：
AGTAGGTGTACGGGCTAACCCGTTATCCAAAGCTAATGCGGAGGATGC（配列番号２８）
ＭＭＯ５１４のポリヌクレオチド配列：
TTTTACTGCAGTTTTATTCGCAGCATCCTCCGCATTAGCTTTGGATAACGGGTTAGCCCG（配列番号２９）
ＭＭＯ４８１のポリヌクレオチド配列：
GAGCTAAAAGTACAGTGGGAACAAAGTCGAGGTCGACTTATAACAAATCTTTCAAAGACA（配列番号３０）
合成哺乳動物シグナルペプチドのポリヌクレオチド配列：
ATGGAATGGAGCTGGGTCTTTCTCTTCTTCCTGTCAGTAACGACTGGTGTCCACTCC（配列番号３１）
ＬＡＫＥＦｗのポリヌクレオチド配列：
CGATCGAAGCTTCGCCACCA（配列番号３２）
Ｂｒリバースのポリヌクレオチド配列：
CTTGCCAATCCATTGTCCAGGGAGTGGACACCAGTCGTTA（配列番号３３）
ＢｒＦｗのポリヌクレオチド配列：
TAACGACTGGTGTCCACTCCCTGGACAATGGATTGGCAAG（配列番号３４）
ｈＧＬＡＲｖのポリヌクレオチド配列：
CGATCGGCGGCCGCTCAAAGTAAGTCTTTTAATGACA（配列番号３５）
ＳＰ－ＧＬＡ（ｙＣＤＳ）のポリヌクレオチド配列：
ATGAGATTTCCTTCAATTTTTACTGCAGTTTTATTCGCAGCATCCTCCGCATTAGCTTTGGATAACGGGTTAGCCCGTACACCTACTATGGGTTGGCTTCACTGGGAAAGATTCATGTGTAACTTAGATTGCCAAGAAGAGCCTGACAGCTGTATCTCAGAGAAACTATTCATGGAGATGGCTGAACTAATGGTAAGTGAAGGATGGAAGGATGCTGGTTATGAATACCTATGTATTGATGATTGCTGGATGGCTCCACAGCGTGATTCAGAAGGTAGGTTACAAGCTGACCCCCAGAGATTCCCACATGGCATACGTCAGCTTGCAAACTACGTACACAGCAAGGGTCTAAAGTTAGGCATCTACGCTGATGTCGGAAACAAGACATGTGCTGGTTTCCCAGGTTCATTCGGTTACTATGACATAGATGCGCAGACGTTTGCTGATTGGGGTGTTGATTTGTTGAAGTTTGATGGATGCTACTGCGATTCCCTGGAGAACCTAGCCGATGGGTACAAACACATGAGTTTGGCTCTAAACAGGACTGGTAGGAGCATCGTCTATAGTTGTGAATGGCCCTTGTACATGTGGCCGTTTCAGAAGCCAAACTACACTGAGATAAGACAATACTGTAACCATTGGCGTAACTTTGCTGACATAGATGATTCATGGAAGTCAATCAAATCTATCTTGGATTGGACTTCTTTCAACCAGGAAAGAATTGTTGATGTTGCAGGTCCAGGTGGATGGAATGACCCTGATATGCTTGTCATAGGGAACTTTGGGCTATCATGGAATCAACAAGTTACACAAATGGCTTTGTGGGCGATCATGGCCGCACCCCTATTCATGTCTAATGATCTACGTCACATATCACCCCAAGCAAAGGCTTTACTTCAAGATAAGGATGTCATAGCGATCAACCAAGATCCTCTTGGTAAACAAGGTTATCAATTGAGACAAGGTGACAACTTTGAAGTGTGGGAAAGACCATTGTCTGGACTTGCGTGGGCTGTTGCTATGATCAACCGTCAAGAGATCGGAGGGCCAAGATCTTACACTATCGCGGTAGCCTCTTTGGGTAAGGGTGTTGCGTGCAATCCTGCCTGCTTCATTACACAATTGCTTCCAGTTAAGAGAAAGTTGGGTTTCTATGAGTGGACATCTAGGCTAAGAAGTCACATCAATCCTACTGGTACGGTATTGTTGCAATTGGAGAACACAATGCAAATGTCTTTGAAAGATTTGTTA（配列番号３６）
ＭＦｌｅａｄｅｒ－ＧＬＡ（ｙＣＤＳ）のポリヌクレオチド配列：
ATGAGATTTCCTTCAATTTTTACTGCAGTTTTATTCGCAGCATCCTCCGCATTAGCTGCTCCAGTCAACACTACAACAGAAGATGAAACGGCACAAATTCCGGCTGAAGCTGTCATCGGTTACTTAGATTTAGAAGGGGATTTCGATGTTGCTGTTTTGCCATTTTCCAACAGCACAAATAACGGGTTATTGTTTATAAATACTACTATTGCCAGCATTGCTGCTAAAGAAGAAGGGGTATCTTTGGATAAAAGATTGGATAACGGGTTAGCCCGTACACCTACTATGGGTTGGCTTCACTGGGAAAGATTCATGTGTAACTTAGATTGCCAAGAAGAGCCTGACAGCTGTATCTCAGAGAAACTATTCATGGAGATGGCTGAACTAATGGTAAGTGAAGGATGGAAGGATGCTGGTTATGAATACCTATGTATTGATGATTGCTGGATGGCTCCACAGCGTGATTCAGAAGGTAGGTTACAAGCTGACCCCCAGAGATTCCCACATGGCATACGTCAGCTTGCAAACTACGTACACAGCAAGGGTCTAAAGTTAGGCATCTACGCTGATGTCGGAAACAAGACATGTGCTGGTTTCCCAGGTTCATTCGGTTACTATGACATAGATGCGCAGACGTTTGCTGATTGGGGTGTTGATTTGTTGAAGTTTGATGGATGCTACTGCGATTCCCTGGAGAACCTAGCCGATGGGTACAAACACATGAGTTTGGCTCTAAACAGGACTGGTAGGAGCATCGTCTATAGTTGTGAATGGCCCTTGTACATGTGGCCGTTTCAGAAGCCAAACTACACTGAGATAAGACAATACTGTAACCATTGGCGTAACTTTGCTGACATAGATGATTCATGGAAGTCAATCAAATCTATCTTGGATTGGACTTCTTTCAACCAGGAAAGAATTGTTGATGTTGCAGGTCCAGGTGGATGGAATGACCCTGATATGCTTGTCATAGGGAACTTTGGGCTATCATGGAATCAACAAGTTACACAAATGGCTTTGTGGGCGATCATGGCCGCACCCCTATTCATGTCTAATGATCTACGTCACATATCACCCCAAGCAAAGGCTTTACTTCAAGATAAGGATGTCATAGCGATCAACCAAGATCCTCTTGGTAAACAAGGTTATCAATTGAGACAAGGTGACAACTTTGAAGTGTGGGAAAGACCATTGTCTGGACTTGCGTGGGCTGTTGCTATGATCAACCGTCAAGAGATCGGAGGGCCAAGATCTTACACTATCGCGGTAGCCTCTTTGGGTAAGGGTGTTGCGTGCAATCCTGCCTGCTTCATTACACAATTGCTTCCAGTTAAGAGAAAGTTGGGTTTCTATGAGTGGACATCTAGGCTAAGAAGTCACATCAATCCTACTGGTACGGTATTGTTGCAATTGGAGAACACAATGCAAATGTCTTTGAAAGATTTGTTA（配列番号３７）
ＭＦｌｅａｄｅｒのポリペプチド配列：
MRFPSIFTAVLFAASSALAAPVNTTTEDETAQIPAEAVIGYLDLEGDFDVAVLPFSNSTNNGLLFINTTIASIAAKEEGVSLDKR（配列番号３８）
変異体番号３９５ｙＣＤＳのポリヌクレオチド配列：
TTGGATAACGGGTTAGCCCGTACACCTACTATGGGTTGGCTTCACTGGGAAAGATTCATGTGTAACTTAGATTGCCAAGAAGAGCCTGACAGCTGTATCTCAGAGAAACTATTCATGGAGATGGCTGAACGGATGGTAAGTGAAGGATGGAAGGATGCTGGTTATGAATACCTATGTATTGATGATTGCTGGATGGCTCCACAGCGTGATTCAGAAGGTAGGTTACAAGCTGACCCCCAGAGATTCCCACATGGCATACGTCAGCTTGCAAACCATGTACACAGCAAAGGTCTAAAGTTAGGCATCTACGCTGATGTCGGAAACAAGACATGTGCTGGTTTCCCAGGTTCATTCGGTTACTATGACATAGATGCGCAGACGTTTGCTGATTGGGGTGTTGATTTGTTGAAGTTTGATGGATGCTACTGCGATTCCCTGGAGAACCTAGCCGATGGGTACAAACACATGAGTTTGGCTCTAAACAGGACTGGTAGGAGCATCGTCTATAGTTGTGAATGGCCCTTGTACATGTGGCCGTTTCAGAAGCCAAACTACACTGAGATAAGACAATACTGTAACCATTGGCGTAACTTTGCTGACATAGATGATTCATGGGCTTCAATCAAATCTATCTTGGATTGGACTTCTCGTAACCAGGAAAGAATTGTTGATGTTGCAGGTCCAGGTGGATGGAATGACCCTGATATGCTTGTCATAGGGAACTTTGGGCTATCATGGGACCAACAAGTTACACAAATGGCTTTGTGGGCGATCATGGCCGCACCCCTATTCATGTCTAATGATCTACGTCACATATCACCCCAAGCAAAGGCTTTACTTCAAGATAAGGATGTCATAGCGATCAACCAAGATCCTCTTGGTAAACAAGGTTATCAATTGAGAAAAGGTGACAACTTTGAAGTGTGGGAAAGACCATTGTCTGGAGATGCGTGGGCTGTTGCTATTATCAACCGTCAAGAGATCGGAGGGCCAAGATCTTACACTATCCCGGTAGCCTCTTTGGGTAAGGGTGTTGCGTGCAATCCTGCCTGCTTCATTACACAATTGCTTCCAGTTAAGAGACAATTGGGTTTCTATAACTGGACCTCTAGGCTAAAAAGTCACATTAATCCTACTGGTACGGTATTGTTGCAATTGGAGAACACAATGCAAATGTCTTTGAAAGATTTGTTA（配列番号３９）
変異体番号３９５のポリペプチド配列：
LDNGLARTPTMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFMEMAERMVSEGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANHVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNRTGRSIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWASIKSILDWTSRNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWDQQVTQMALWAIMAAPLFMSNDLRHISPQAKALLQDKDVIAINQDPLGKQGYQLRKGDNFEVWERPLSGDAWAVAIINRQEIGGPRSYTIPVASLGKGVACNPACFITQLLPVKRQLGFYNWTSRLKSHINPTGTVLLQLENTMQMSLKDLL（配列番号４０）
変異体番号４０２ｙＣＤＳのポリヌクレオチド配列：
TTGGATAACGGGTTAGCCCGTACACCTACTATGGGTTGGCTTCACTGGGAAAGATTCATGTGTAACTTAGATTGCCAAGAAGAGCCTGACAGCTGTATCTCAGAGAAACTATTCATGGAGATGGCTGAACGGATGGTAAGTGAAGGATGGAAGGATGCTGGTTATGAATACCTATGTATTGATGATTGCTGGATGGCTCCACAGCGTGATTCAGAAGGTAGGTTACAAGCTGACCCCCAGAGATTCCCACATGGCATACGTCAGCTTGCAAACTACGTACACAGCAAAGGTCTAAAGTTAGGCATCTACGCTGATGTCGGAAACAAGACATGTGCTGGTTTCCCAGGTTCATTCGGTTACTATGACATAGATGCGCAGACGTTTGCTGATTGGGGTGTTGATTTGTTGAAGTTTGATGGATGCTACTGCGATTCCCTGGAGAACCTAGCCGATGGGTACAAACACATGAGTTTGGCTCTAAACAGGACTGGTAGGCCGATCGTCTATAGTTGTGAATGGCCCTTGTACATGTGGCCGTTTCAGAAGCCAAACTACACTGAGATAAGACAATACTGTAACCATTGGCGTAACTTTGCTGACATAGATGATTCATGGGCTTCAATCAAATCTATCTTGGATTGGACTTCTCGTAACCAGGAAAGAATTGTTGATGTTGCAGGTCCAGGTGGATGGAATGACCCTGATATGCTTGTCATAGGGAACTTTGGGCTATCATGGGACCAACAAGTTACACAAATGGCTTTGTGGGCGATCATGGCCGCACCCCTATTCATGTCTAATGATCTACGTCACATATCACCCCAAGCAAAGGCTTTACTTCAAGATAAGGATGTCATAGCGATCAACCAAGATCCTCTTGGTAAACAAGGTTATCAATTGAGAAAAGGTGACAACTTTGAAGTGTGGGAAAGACCATTGTCTGGAGATGCGTGGGCTGTTGCTATTATCAACCGTCAAGAGATCGGAGGGCCAAGATCTTACACTATCCCGGTAGCCTCTTTGGGTAAGGGTGTTGCGTGCAATCCTGCCTGCTTCATTACACAATTGCTTCCAGTTAAGAGACAATTGGGTTTCTATAACTGGACCTCTAGGCTAAAAAGTCACATTAATCCTACTGGTACGGTATTGTTGCAATTGGAGAACACAATGCAAATGTCTTTGAAAGATTTGTTA（配列番号４１）
変異体番号４０２のポリペプチド配列：
LDNGLARTPTMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFMEMAERMVSEGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANYVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNRTGRPIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWASIKSILDWTSRNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWDQQVTQMALWAIMAAPLFMSNDLRHISPQAKALLQDKDVIAINQDPLGKQGYQLRKGDNFEVWERPLSGDAWAVAIINRQEIGGPRSYTIPVASLGKGVACNPACFITQLLPVKRQLGFYNWTSRLKSHINPTGTVLLQLENTMQMSLKDLL（配列番号４２）
変異体番号６２５ｙＣＤＳのポリヌクレオチド配列：
TTGGATAACGGGTTAGCCCGTACACCTACTATGGGTTGGCTTCACTGGGAAAGATTCATGTGTAACTTAGATTGCCAAGAAGAGCCTGACAGCTGTATCTCAGAGAAACTATTCATGGAGATGGCTGAACGGATGGTAACCGAAGGATGGAAGGATGCTGGTTATGAATACCTATGTATTGATGATTGCTGGATGGCTCCACAGCGTGATTCAGAAGGTAGGTTACAAGCTGACCCCCAGAGATTCCCACATGGCATACGTCAGCTTGCAAACCATGTACACAGCAAAGGTCTAAAGTTAGGCATCTACGCTGATGTCGGAAACAAGACATGTGCTGGTTTCCCAGGTTCATTCGGTTACTATGACATAGATGCGCAGACGTTTGCTGATTGGGGTGTTGATTTGTTGAAGTTTGATGGATGCTACTGCGATTCCCTGGAGAACCTAGCCGATGGGTACAAACACATGAGTTTGGCTCTAAACAGGACTGGTAGGCCGATCGTCTATAGTTGTGAATGGCCCTTGTACATGTGGCCGTTTCAGAAGCCAAACTACACTGAGATAAGACAATACTGTAACCATTGGCGTAACTTTGCTGACATAGATGATTCATGGGCTTCAATCAAATCTATCTTGGATTGGACTTCTCGTAACCAGGAAAGAATTGTTGATGTTGCAGGTCCAGGTGGATGGAATGACCCTGATATGCTTGTCATAGGGAACTTTGGGCTATCATGGGACCAACAAGTTACACAAATGGCTTTGTGGGCGATCATGGCCGCACCCCTATTCATGTCTAATGATCTACGTGCGATATCACCCCAAGCAAAGGCTTTACTTCAAGATAAGGATGTCATAGCGATCAACCAAGATCCTCTTGGTAAACAAGGTTATCAATTGAGAAAAGGTGACAACTTTGAAGTGTGGGAAAGACCATTGTCTGGAGATGCGTGGGCTGTTGCTATTATCAACCGTCAAGAGATCGGAGGGCCAAGATCTTACACTATCCCGGTAGCCTCTTTGGGTAAGGGTGTTGCGTGCAATCCTGCCTGCTTCATTACACAATTGCTTCCAGTTAAGAGACAATTGGGTTTCTATAACTGGACCTCTAGGCTAAAAAGTCACATTAATCCTACTGGTACGGTATTGTTGCAATTGGAGAACACAATGCAAACCTCTTTGAAAGATTTGTTA（配列番号４３）
変異体番号６２５のポリペプチド配列：
LDNGLARTPTMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFMEMAERMVTEGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANHVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNRTGRPIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWASIKSILDWTSRNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWDQQVTQMALWAIMAAPLFMSNDLRAISPQAKALLQDKDVIAINQDPLGKQGYQLRKGDNFEVWERPLSGDAWAVAIINRQEIGGPRSYTIPVASLGKGVACNPACFITQLLPVKRQLGFYNWTSRLKSHINPTGTVLLQLENTMQTSLKDLL（配列番号４４）
変異体番号６４８ｙＣＤＳのポリヌクレオチド配列：
TTGGATAACGGGTTAGCCCGTACACCTCCGATGGGTTGGCTTCACTGGGAAAGATTCATGTGTAACTTAGATTGCCAAGAAGAGCCTGACAGCTGTATCTCAGAGAAACTATTCGAAGAGATGGCTGAACGGATGGTAACCGAAGGATGGAAGGATGCTGGTTATGAATACCTATGTATTGATGATTGCTGGATGGCTCCACAGCGTGATTCAGAAGGTAGGTTACAAGCTGACCCCCAGAGATTCCCACATGGCATACGTCAGCTTGCAAACCATGTACACAGCAAAGGTCTAAAGTTAGGCATCTACGCTGATGTCGGAAACAAGACATGTGCTGGTTTCCCAGGTTCATTCGGTTACTATGACATAGATGCGCAGACGTTTGCTGATTGGGGTGTTGATTTGTTGAAGTTTGATGGATGCTACTGCGATTCCCTGGAGAACCTAGCCGATGGGTACAAACACATGAGTTTGGCTCTAAACAGGACTGGTAGGCCGATCGTCTATAGTTGTGAATGGCCCTTGTACATGTGGCCGTTTCAGAAGCCAAACTACACTGAGATAAGACAATACTGTAACCATTGGCGTAACTTTGCTGACATAGATGATTCATGGGCTTCAATCAAATCTATCTTGGATTGGACTTCTCGTAACCAGGAAAGAATTGTTGATGTTGCAGGTCCAGGTGGATGGAATGACCCTGATATGCTTGTCATAGGGAACTTTGGGCTATCATGGGACCAACAAGTTACACAAATGGCTTTGTGGGCGATCATGGCCGGCCCCCTATTCATGTCTAATGATCTACGTGCGATATCACCCCAAGCAAAGGCTTTACTTCAAGATAAGGATGTCATAGCGATCAACCAAGATCCTCTTGGTAAACAAGGTTATCAATTGAGAAAAGGTGACAACTTTGAAGTGTGGGAAAGACCATTGTCTGGAGATGCGTGGGCTGTTGCTATTATCAACCGTCAAGAGATCGGAGGGCCAAGATCTTACACTATCCCGGTAGCCTCTTTGGGTAAGGGTGTTGCGTGCAATCCTGCCTGCTTCATTACACAATTGCTTCCAGTTAAGAGACAATTGGGTTTCTATAACGCAACCTCTAGGCTAAAAAGTCACATTAATCCTACTGGTACGGTATTGTTGCAATTGGAGAACACAATGCAAACCTCTTTGAAAGATTTGTTA（配列番号４５）
変異体番号６４８のポリペプチド配列：
LDNGLARTPPMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFEEMAERMVTEGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANHVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNRTGRPIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWASIKSILDWTSRNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWDQQVTQMALWAIMAGPLFMSNDLRAISPQAKALLQDKDVIAINQDPLGKQGYQLRKGDNFEVWERPLSGDAWAVAIINRQEIGGPRSYTIPVASLGKGVACNPACFITQLLPVKRQLGFYNATSRLKSHINPTGTVLLQLENTMQTSLKDLL（配列番号４６）
実施例１
ＧＬＡ遺伝子の取得および発現ベクターの構築

ＷＴヒトＧＬＡ配列（配列番号２）をコードする合成遺伝子（配列番号１）および由来変異体（配列番号４、配列番号６）を、前述のように構築した（例えば、米国特許出願公開第２０１７／０３６０９００号を参照されたい）。哺乳動物細胞における分泌発現および一過性トランスフェクションのために、異なるＧＬＡ変異体をコードする合成遺伝子に融合した合成マウスＩＧシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むキメラＧＬＡ発現構築物を以下のように生成した。オリゴヌクレオチドＢａｍＨＩ－ｐｃＤＮＡ－ＧＬＡ－Ｆ（配列番号６３）およびＸｈｏＩ－ｐｃＤＮＡ－ＧＬＡ－Ｒ（配列番号６４）を使用して、シグナルペプチドをコードする断片およびＧＬＡ変異体の成熟形態のコード配列を増幅した。ＰＣＲ産物を、ＢａｍＨＩ／ＸｈｏＩ線状化哺乳動物発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、またはＣＭＶプロモーターおよびＢＧＨ－ｐＡ（ウシ成長ホルモンポリアデニル化）配列を含有するベクターに連結した。当業者に一般的に知られている指向性進化技術を使用して、このプラスミド構築物の中で配列番号８に由来する遺伝子変異体を生じさせた（例えば、米国特許第８，３８３，３４６号および国際公開第２０１０／１４４１０３号を参照されたい）。
実施例２
ハイスループット増殖およびアッセイ
ＧＬＡおよびＧＬＡ変異体のハイスループット（ＨＴＰ）増殖

ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（登録商標）３０００Ｒｅａｇｅｎｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いたリポフェクション法を用いて、野生型ＧＬＡまたはＧＬＡ変異体に融合した合成マウスＩＧシグナルペプチドをコードするｐｃＤＮＡ３．１（＋）またはＣＭＶプロモーターおよびＢＧＨ－ｐＡ含有ベクターをＨＥＫ２９３Ｔ細胞にトランスフェクトした。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を増殖培地（１０％ウシ胎児血清を含むＤＭＥＭ［両方ともＣｏｒｎｉｎｇ製］）中で培養した。トランスフェクションの２４時間前に、細胞をＮＵＮＣ（登録商標）Ｅｄｇｅ２．０９６ウェルプレート（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に増殖培地に１０^５細胞／ウェル／２５０μＬの密度で播種し、インキュベーター中３７℃、５％ＣＯ_２でインキュベートした。細胞を３７℃および５％ＣＯ_２で２４～７２時間インキュベートして、ＧＬＡ変異体の発現および分泌を可能にした。ＨＥＫ２９３Ｔトランスフェクションからの馴化培地（５０～１００μＬ）を、活性および／または安定性分析のためにＣｏｒｎｉｎｇ９６ウェル固体黒色プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に移した。
上清のＨＴＰ分析

４－メチルウンベリフェリルα－Ｄ－ガラクトピラノシド（ＭＵＧａｌ）の加水分解を測定することによって、ＧＬＡ変異体活性を調べた。未チャレンジアッセイのために、上記のように作製した５０μＬのＨＥＫ２９３Ｔ馴化培地を、９６ウェルの黒色不透明底部マイクロタイタープレート中で、５０μＬのＭｃＩｌｖａｉｎｅ緩衝液（ＭｃＩｌｖａｉｎｅ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，４９：１８３－１８６［１９２１］）中１ｍＭのＭＵＧａｌ（ｐＨ４．８）と混合した。反応物を短時間混合し、３７℃で３０～１８０分間インキュベートした後、１００μＬの０．５Ｍ炭酸ナトリウム（ｐＨ１０．２）でクエンチした。加水分解は、蛍光をモニタリングするＳＰＥＣＴＲＡＭＡＸ（登録商標）Ｍ２マイクロプレートリーダー（励起波長３５５ｎｍ、蛍光波長４６０ｎｍ）を使用して分析した。このアッセイの結果を表２－１に示す。
酸で前処理した上清のＨＴＰ分析

ＧＬＡ変異体を酸性緩衝液でチャレンジして、変異体がリソソーム内で遭遇し得る極端なｐＨをシミュレートした。最初に、５０μＬのＨＥＫ２９３Ｔ馴化培地および５０ｕＬのマッキルベイン緩衝液（ｐＨ３．３～４．３）を９６ウェル丸底マイクロタイタープレートのウェルに添加した。プレートをＰｌａｔｅＬｏｃ（登録商標）サーマルマイクロプレートシーラー（Ａｇｉｌｅｎｔ）で密封し、３７℃で１～２時間インキュベートした。ｐＨ４チャレンジアッセイのために、酸－ｐＨチャレンジ試料５０μＬを、マッキルベイン緩衝液（ｐＨ４．４）中１ｍＭのＭＵＧａｌ（５０ｕＬ）と混合した。反応物を短時間混合し、３７℃で３０～１８０分間インキュベートした後、１００μＬの０．５Ｍの炭酸ナトリウム（ｐＨ１０．２）でクエンチした。加水分解は、蛍光をモニタリングするＳＰＥＣＴＲＡＭＡＸ（登録商標）Ｍ２マイクロプレートリーダー（励起波長３５５ｎｍ、蛍光波長４６０ｎｍ）を使用して分析した。このアッセイの結果を表２－１に示す。
塩基で前処理した上清のＨＴＰ分析

患者への投与後に変異体が血液中で遭遇するｐＨをシミュレートするために、ＧＬＡ変異体を塩基性（中性）緩衝液でチャレンジした。最初に、５０μＬのＧＬＡ変異体ＨＥＫ２９３Ｔ馴化培地および５０μＬのマッキルベイン緩衝液（ｐＨ７．０～８．２）を９６ウェル丸底マイクロタイタープレートのウェルに添加した。プレートを密封し、３７℃で１～１８時間インキュベートした。ｐＨ７チャレンジアッセイのために、５０μＬの塩基性ｐＨチャレンジ試料をマッキルベイン緩衝液（ｐＨ４．４）中１ｍＭのＭＵＧａｌ（５０μＬ）と混合した。反応物を短時間混合し、３７℃で３０～１８０分間インキュベートした後、１００μＬの０．５Ｍ炭酸ナトリウム（ｐＨ１０．２）でクエンチした。加水分解は、蛍光をモニタリングするＳＰＥＣＴＲＡＭＡＸ（登録商標）Ｍ２マイクロプレートリーダー（励起波長３５５ｎｍ、蛍光波長４６０ｎｍ）を使用して分析した。このアッセイの結果を表２－１に示す。

実施例３
ＧＬＡ変異体の産生
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞におけるＧＬＡの産生

哺乳動物細胞におけるＧＬＡ変異体の分泌発現を、ＨＥＫ２９３細胞、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞またはＥｘｐｉ２９３細胞の一過性トランスフェクションによって行った。実施例１に記載したように、細胞を、Ｎ末端合成哺乳動物シグナルペプチドに融合したＧＬＡ変異体（配列番号３、４、９、１２、１７、２０、２３および４１）でトランスフェクトし、哺乳動物発現ベクターｐＬＥＶ１１３にサブクローニングした。ＨＥＫ２９３細胞をプラスミドＤＮＡでトランスフェクトし、当業者に公知の標準的な技術を使用して４日間懸濁状態で増殖させた。上清を回収し、分析するまで４℃で保存した。
実施例４
ＧＬＡ変異体の精製
哺乳動物細胞上清からのＧＬＡ変異体の精製

ＷＴＧＬＡ（配列番号２）を、文献（Ｙａｓｕｄａら、Ｐｒｏｔ．Ｅｘｐ．Ｐｕｒ，．３７：４９９－５０６［２００４］）に記載されるように哺乳動物培養上清から精製した。他のすべてのＧＬＡ変異体を以下のように精製した。本質的に当技術分野で公知のように（Ｙａｓｕｄａら、Ｐｒｏｔ．Ｅｘｐ．Ｐｕｒ，．３７：４９９－５０６［２００４］）、哺乳動物培養上清からＧＬＡ変異体を精製した。コンカナバリンＡ樹脂（ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ）を、０．１Ｍの酢酸ナトリウム、０．１ＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＭｇＣｌ_２、ＣａＣｌ_２、およびＭｎＣｌ_２（ｐＨ６．０）（コンカナバリンＡ結合緩衝液）で平衡化した。上清を０．２μｍボトルトップフィルターで滅菌濾過した後、カラムに充填した。充填後、カラムを１０カラム容量のコンカナバリンＡ結合緩衝液で洗浄し、結合タンパク質を、０．９Ｍのメチル－α－Ｄ－マンノピラノシドおよび０．９Ｍのメチル－α－Ｄ－グルコピラノシドを補充したコンカナバリンＡ結合緩衝液で溶出した。溶出したタンパク質を濃縮し、３０ｋＤａの分子量カットオフ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）膜を有するＡｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ１５ｍＬ濾過ユニットを使用して、緩衝液を保存緩衝液（２０ｍＭのリン酸ナトリウム、１５０ｍＭの塩化ナトリウム、１８５μＭのＴＷＥＥＮ（登録商標）－２０非イオン性界面活性剤、ｐＨ６．０）に交換した。保存緩衝液中のＧＬＡをＡＮＯＴＯＰ（登録商標）０．２μｍシリンジフィルター（Ｗｈａｔｍａｎ）で滅菌濾過し、－８０℃で保存した。精製により、ＢＣＡ定量に基づいて２．４～５０μｇの精製タンパク質／ｍｌの培養上清を得た。
ＢＣＡタンパク質アッセイによるタンパク質の定量

ビシンコニン酸（ＢＣＡ）タンパク質アッセイ（ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ）を使用して、精製ＧＬＡを定量した。マイクロタイタープレートにおいて、２５ｕＬのタンパク質標準および適切に希釈した精製ＧＬＡを、５０部のＢＣＡ試薬Ａおよび１部のＢＣＡ試薬Ｂを含有する２００ｕＬの作業試薬と混合した。プレートをプレートシェーカー上で３０秒間にわたって完全に混合し、３７℃で３０分間インキュベートした。プレートを室温に冷却した後、プレートリーダーを使用して試料の吸光度を５６２ｎｍで測定した。
実施例５
ＧＬＡ変異体のインビトロ特性評価
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞において発現されるＧＬＡ変異体の熱安定性

ＧＬＡ変異体を様々な温度チャレンジに曝露して、酵素の全体的な安定性を評価した。最初に、１倍ＰＢＳ（ｐＨ６．２）中の５０μＬの精製ＨＥＫ２９３Ｔ発現ＧＬＡおよびＧＬＡ変異体を９６ウェルＰＣＲプレート（Ｂｉｏｒａｄ、ＨＳＰ－９６０１）のウェルに添加した。プレートを密封し、サーモサイクラーの勾配プログラムを使用して３０～５０℃で１時間インキュベートした。アッセイのために、２５μＬのチャレンジした上清を２５μＬのマッキルベイン緩衝液（ｐＨ４．４）中１ｍＭのＭＵＧａｌと混合した。反応物を短時間混合し、３７℃で６０分間インキュベートした後、１００μＬの０．５Ｍの炭酸ナトリウム（ｐＨ１０．２）でクエンチした。加水分解は、蛍光をモニタリングするＳＰＥＣＴＲＡＭＡＸ（登録商標）Ｍ２マイクロプレートリーダー（励起波長３５５ｎｍ、蛍光波長４６０ｎｍ）を使用して分析した。３０℃から５０℃の範囲の温度での１時間のインキュベーションについての残留活性パーセントを、チャレンジした試料の活性を未チャレンジの試料の活性で割ることによって算出し、ここで、「未チャレンジ」は、時間０で測定した加水分解であり、「チャレンジした」は、各変異体について指定された温度で１時間で測定した加水分解である。このアッセイの結果を表５－１に示す。図１は、様々な温度での１時間のインキュベーション後のＧＬＡ変異体の残存活性を示すグラフを提供する。
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞において発現されたＧＬＡ変異体の血清安定性

血液の存在下での変異体の相対安定性を評価するために、試料を血清に曝露した。最初に、１倍ＰＢＳ（ｐＨ６．２）中の１００μＬの７．５ｕｇ／ｍＬの精製ＧＬＡ変異体および９０ｕＬのヒト血清を、ＣＯＳＴＡＲ（登録商標）９６ウェル丸底プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）のウェルに添加した。プレートを密封し、３７℃で０～２４時間インキュベートした。アッセイのために、５０μＬのチャレンジした上清を５０μＬのマッキルベイン緩衝液（ｐＨ４．４）中１ｍＭのＭＵＧａｌと混合した。反応物を短時間混合し、３７℃で９０分間インキュベートした後、１００μＬの０．５Ｍの炭酸ナトリウム（ｐＨ１０．２）でクエンチした。加水分解は、蛍光をモニタリングするＳＰＥＣＴＲＡＭＡＸ（登録商標）Ｍ２マイクロプレートリーダー（励起波長３５５ｎｍ、蛍光波長４６０ｎｍ）を使用して分析した。２４時間後の血清中の残存活性パーセントを、チャレンジした試料の活性を未チャレンジの試料の活性で割ることによって算出し、ここで、「未チャレンジ」は、時間０で測定した加水分解であり、「チャレンジした」は、各変異体について指定された時点で測定した加水分解である。結果を表５．１に示す。図２は、ヒト血清を用いて０～２４時間チャレンジした後のＧＬＡ変異体の残存活性を示すグラフを提供する。
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞において発現されるＧＬＡ変異体のリソソーム安定性

リソソームプロテアーゼおよび他のリソソーム成分の存在下での変異体の相対安定性を評価するために、ＧＬＡ変異体を、本明細書に記載されるように、いくつかの修正を加えた製造者の説明書に従ってヒトリソソームライセート（ＸｅｎｏＴｅｃｈ、Ｎｏ．Ｈ０６１０．Ｌ）に曝露した。端的に言うと、ＧＬＡ変異体を適切な濃度範囲（０．０６２５～０．００７８１２５ｍＭ）に希釈し、１０μＬの希釈液を、ＣＯＳＴＡＲ（登録商標）９６ウェル丸底プレート（Ｎｏ．３７９８、Ｃｏｒｎｉｎｇ）中の２倍異化緩衝液（ＸｅｎｏＴｅｃｈ、Ｎｏ．Ｋ５２００）中の１０μＬのヒトリソソームライセートの１：２０希釈液と合わせた。プレートを密封し、３７℃で０～２４時間インキュベートした。アッセイのために、５０μＬのチャレンジした上清を５０μＬのマッキルベイン緩衝液（ｐＨ４．４）中１ｍＭのＭＵＧａｌと混合した。反応物を短時間混合し、３７℃で９０分間インキュベートした後、１００μＬの０．５Ｍ炭酸ナトリウム（ｐＨ１０．２）でクエンチした。加水分解は、蛍光をモニタリングするＳＰＥＣＴＲＡＭＡＸ（登録商標）Ｍ２マイクロプレートリーダー（励起波長３５５ｎｍ、蛍光波長４６０ｎｍ）を使用して分析した。２４時間後のリソソーム抽出物中の残存活性パーセントを、チャレンジした試料の活性を未チャレンジの試料の活性で割ることによって算出し、ここで、「未チャレンジ」は、時間０で測定した加水分解であり、「チャレンジした」は、各変異体について指定された４時間および２４時間で測定した加水分解である。結果を表５．１に示す。図３は、ヒトリソソーム抽出物を用いた０～２４時間のチャレンジ後のＧＬＡ変異体の残存活性を示すグラフを提供する。
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞において発現された精製ＧＬＡ変異体のファブリー線維芽細胞における細胞取り込み

参照酵素（ＷＴＧＬＡ［配列番号２］）と比較したＧＬＡ変異体の細胞取り込みを調べて、培養細胞にエンドサイトーシスされる変異体の全体的な能力を評価した。ファブリー線維芽細胞（ＧＭＯ２７７５、ＣｏｒｉｅｌｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＭｅｄｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ）を、最小必須培地（ＭＥＭ；１％の非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ；ＧｉｂｃｏＮｏ．１１１４０－０５０）および１５％のウシ胎児血清（ＣｏｒｎｉｎｇＮｏ．３５－０１６－ＣＶ）を補充したＧｉｂｃｏＮｏ．１１０９５－０８０）を含有する１２ウェル培養ディッシュ（ＶＷＲ、Ｎｏ．１０８６１－６９８）に播種し、コンフルエントに達するまで増殖させた（３７℃、５％ＣＯ_２で２～３日）。コンフルエントに達した後、補充したＭＥＭを滅菌真空によって除去し、１ｍＬ／ウェル無血清ＭＥＭ＋１％ＮＥＡＡと交換した。実施例４に記載したように精製した酵素を１０ｕｇＧＬＡ／ｍＬで細胞に添加し、３７℃、５％ＣＯ_２で４時間インキュベートした。無血清培地を滅菌真空によって吸引し、細胞を１ｍＬの１倍ＰＢＳ／ウェルで簡単に洗浄し、ＰＢＳを滅菌真空によって吸引した。次いで、細胞を２００μＬ／ウェルの０．２５％トリプシン－ＥＤＴＡ（ＶＷＲＮｏ．０２－０１５４－０１００）でトリプシン処理し、室温で約５分間インキュベートして、接着細胞をプレートから除去し、残っている細胞外ＧＬＡを分解した。次いで、５００μＬの無血清ＭＥＭを各ウェルに添加し、試料を１．５ｍＬ微量遠心チューブに移した。試料を８０００ＲＰＭで５分間遠心分離して、細胞をペレット化した。培地を１０００μＬピペットでゆっくりと吸引した。細胞ペレットを５００μＬの１倍ＰＢＳに再懸濁し、８０００ＲＰＭで５分間再ペレット化し、ＰＢＳをゆっくりと除去した。次いで、１００μＬの溶解緩衝液（１倍ＰＢＳで希釈した０．２％ＴＲＩＴＯＮＸ－１００（商標）非イオン性界面活性剤（ＳｉｇｍａＮｏ．９３４４３））を各試料に添加し、続いて１～２分間超音波処理し、１２，０００～１４，０００ＲＰＭで１０分間、４℃で遠心分離した。タンパク質および活性アッセイのために、上清を滅菌ＰＣＲチューブに移した。活性アッセイのために、１０μＬの細胞溶解試料を５０μＬのマッキルベイン緩衝液（ｐＨ４．６）中２．５ｍＭのＭＵＧａｌと混合した。反応プレートを密封し、３７℃で６０分間インキュベートした後、ウェルあたり１４０μＬの０．５Ｍの炭酸ナトリウム（ｐＨ１０．２）で反応クエンチした。蛍光をモニタリングするＳＰＥＣＴＲＡＭＡＸ（登録商標）Ｍ２マイクロプレートリーダー（励起波長３５５ｎｍ、蛍光波長４６０ｎｍ）を使用して、ＭＵＧａｌ加水分解を調べた。タンパク質の定量のために、以下の修正を加えた製造業者の説明書（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｎｏ．２３２２５）に従ってＢＣＡアッセイを実施した。すなわち、１０μＬの細胞溶解試料を１９０μＬのＢＣＡワーキング試薬と混合し、プレートを密封し、３７℃で６０分間インキュベートした。試料を、吸光度（５６２ｎｍ）をモニタリングするＳＰＥＣＴＲＡＭＡＸ（登録商標）Ｍ２マイクロプレートリーダーを使用して分析した。ＢＳＡ標準曲線からタンパク質濃度を算出した。各ＧＬＡ変異体の細胞取り込みは、まず酵素処理試料から未処理細胞のバックグラウンド非酵素蛍光を差し引き、次いで各ウェルのタンパク質濃度に正規化することによって算出した。細胞取り込みＦＩＯＰＣを、正規化されたＧＬＡ変異体細胞内活性を対照（ＷＴ）の対応する活性で割ることによって算出した。図４は、３７℃で４時間インキュベートした後の、野生型（配列番号２）と比較した相対活性として表される、培養ファブリー患者線維芽細胞における精製ＧＬＡ変異体の細胞取り込みのグラフを提供する。

ファブリー線維芽細胞のライセートにおけるＧＬＡ活性のＨＴＰ分析

ＨＴＰにおいて産生されたＧＬＡ変異体を、細胞に取り込まれて、２４時間～９６時間にわたって活性を保持するようにチャレンジした。ファブリー線維芽細胞（ＧＭＯ２７７５、ＣｏｒｉｅｌｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＭｅｄｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ）を播種し、２４～７２時間にわたってコンフルエントに達するまで増殖させた。コンフルエントに達した後、自動ＢｉｏＭｅｋｉ５液体処理ロボットを用いて培地を除去した。上記のように一過性にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｔ細胞由来の馴化培地をファブリー線維芽細胞に添加し、細胞をＧＬＡ変異体と共に３７℃、５％ＣＯ_２で２～４時間インキュベートした。ＧＬＡ含有馴化培地を自動化ＢｉｏＭｅｋｉ５液体処理ロボットで除去した。次いで、細胞を１５０μＬの１倍ＤＰＢＳ／ウェルで短時間洗浄し、自動ＢｉｏＭｅｋｉ５液体処理ロボットでＤＰＢＳを除去した。次いで、２００μＬの完全増殖培地を各ウェルに添加し、プレートをインキュベーターに２４～７２時間戻した。インキュベーションの終了時に、自動ＢｉｏＭｅｋｉ５液体処理ロボットを用いて完全増殖培地を除去した。細胞を１５０μＬの１倍ＤＰＢＳ／ウェルで洗浄し、自動ＢｉｏＭｅｋｉ５液体処理ロボットでＤＰＢＳを除去した。細胞を、０．２％ＴＲＩＴＯＮＸ－１００（商標）非イオン性界面活性剤（ＳｉｇｍａＮｏ．９３４４３）を補充した５０μＬのマッキルベイン緩衝液（ｐＨ４．４）を添加し、室温で３０分間撹拌して溶解した。マッキルベイン緩衝液（ｐＨ４．４）中の５０μＬの１．５ｍＭのＭｕＧａｌの添加によって活性を評価した。プレートを密封し、４００ｒｐｍで撹拌しながら３７℃で３６０分間インキュベートした後、１００μＬの０．５Ｍの炭酸ナトリウム（ｐＨ１０．２）でクエンチした。加水分解は、蛍光をモニタリングするＳＰＥＣＴＲＡＭＡＸ（登録商標）Ｍ２マイクロプレートリーダー（励起波長３５５ｎｍ、蛍光波長４６０ｎｍ）を使用して分析した。細胞取り込みＦＩＯＰＣを、正規化されたＧＬＡ変異体細胞内活性を参照配列の対応する活性で割ることによって算出した。
ファブリー線維芽細胞におけるグロボトリアオシルセラミドのＧＬＡ誘導性枯渇のＨＴＰ分析

ＨＴＰにおいて産生されたＧＬＡ変異体を、細胞に取り込ませ、グロボトリアオシルセラミドの細胞負荷を低減するようにチャレンジした。ファブリー線維芽細胞（ＧＭＯ２７７５、ＣｏｒｉｅｌｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＭｅｄｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ）を播種し、２４～７２時間にわたってコンフルエントに達するまで増殖させた。コンフルエントに達した後、自動化されたＢｉｏＭｅｋｉ５液体処理ロボットによって培地を除去した。上記のように一過性にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｔ細胞によって産生された馴化培地を線維芽細胞に添加し、３７℃、５％ＣＯ_２で２～４時間インキュベートした。ＧＬＡ含有馴化培地を自動化ＢｉｏＭｅｋｉ５液体処理ロボットで除去した。次いで、細胞を１５０μＬの１倍ＤＰＢＳ／ウェルで短時間洗浄し、自動ＢｉｏＭｅｋｉ５液体処理ロボットでＤＰＢＳを除去した。次いで、２００μＬの完全増殖培地を各ウェルに添加し、プレートをインキュベーターに２４～７２時間戻した。インキュベーションの終了時に、自動ＢｉｏＭｅｋｉ５液体処理ロボットを用いて完全増殖培地を除去した。次いで、細胞を１５０μＬの１倍ＤＰＢＳ／ウェルで洗浄し、自動ＢｉｏＭｅｋｉ５液体処理ロボットでＤＰＢＳを除去した。グロボトリアオシルセラミドを、ゆっくりと撹拌しながら室温で３０分間、１０ｎｇ／ｍＬのＮ－ヘプタデカノイル－セラミドトリヘキソシドを補充した２００μＬのメタノールに抽出した。メタノール抽出物をＭｉｌｌｉｐｏｒｅ疎水性フィルタスタックを通して丸底９６ウェルプレートに濾過した。細胞のグロボトリアオシルセラミドを、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって本質的に当技術分野で知られている形で定量した（Ｐｒｏｖｅｎｃａｌら、Ｂｉｏａｎａｌ．，８：１７９３－１８０７［２０１６］を参照されたい）。各細胞試料のピーク積分の合計を求め、グロボトリアオシルセラミドＦＩＯＰＣを、正規化ＧＬＡ変異体のグロボトリアオシルセラミドレベルの変化を参照配列で割ることによって算出した。
実施例６
配列番号５８に由来するＧＬＡ変異体

この実施例では、ファブリー線維芽細胞におけるＧＬＡ変異体の活性およびＧＬＡ変異体によるＧｂ３クリアランスを評価するために行った実験を記載する。本実施例では、配列番号５８を参照配列として使用した（すなわち、変異体のアミノ酸の差異を配列番号５８と比較して示し、アッセイ結果を配列番号５８について得られた結果と比較して報告する）。これらの実験では、実施例５に記載されているように、プレインキュベーションなしでＧＬＡ変異体をＭＵ－Ｇａｌ活性について試験した。実施例５に記載されているように、ファブリー線維芽細胞におけるＧｂ３枯渇についても変異体を試験した。

実施例７
配列番号１５８に由来するＧＬＡ変異体

この実施例では、ＧＬＡ変異体のファブリー線維芽細胞における活性、ｐＨ７．４での安定性、および細胞内活性を評価するために行った実験を記載する。この実施例では、参照配列は配列番号１５８であった（すなわち、変異体のアミノ酸の差異を配列番号１５８と比較して示し、アッセイ結果を配列番号１５８の結果と比較して報告する）。実施例５に記載されているように、プレインキュベーションなし（未チャレンジ）で、またｐＨ７．４のプレインキュベーション後に、変異体をＧＬＡＭＵ－Ｇａｌ活性について試験した。実施例５に記載されているように、ＧＬＡ変異体と共にインキュベートしたファブリー線維芽細胞の溶解後にも、変異体をＭＵ－Ｇａｌ活性について試験した。

実施例８
配列番号３７２に由来するＧＬＡ変異体

この実施例では、ＧＬＡ変異体のファブリー線維芽細胞における活性、ｐＨ７．４での安定性、Ｇｂ３クリアランス、および細胞内活性を評価するために行った実験を記載する。この実施例では、参照配列は配列番号３７２であった（すなわち、変異体のアミノ酸の差異を配列番号３７２と比較して示し、アッセイ結果を配列番号３７２の結果と比較して報告する）。実施例５に記載されているように、プレインキュベーションなし（未チャレンジ）で、またｐＨ７．４のプレインキュベーション後に、これらの変異体をＭＵ－Ｇａｌ活性について試験した。変異体はまた、実施例５（「ライセートＦＩＯＰＣ」）に記載されているように、ＧＬＡ変異体とインキュベートしたファブリー線維芽細胞におけるＭＵ－Ｇａｌ活性についても試験した。変異体はまた、実施例５（「Ｇｂ３ＦＩＯＰＣ」）に記載されているように、ＧＬＡ変異体とのインキュベーション後のファブリー線維芽細胞におけるＧｂ３の枯渇についても試験した。

実施例９
配列番号３７４に由来するＧＬＡ変異体

この実施例では、一連のまたは独立したチャレンジ後に酵素活性をアッセイすることによって、ＧＬＡ変異体活性を調べるために行われた実験を記載する。実施例５に記載されているように、プレインキュベーションなしで、またｐＨ７．４のプレインキュベーション後に、これらの変異体をＧＬＡＭＵ－Ｇａｌ活性について試験した。実施例５に記載されているように、変異体と共にインキュベートしたファブリー線維芽細胞の溶解後にも、変異体をＭＵ－Ｇａｌ活性について試験した。実施例５に記載されているように、インキュベーション後のファブリー線維芽細胞におけるＧｂ３枯渇についても変異体を試験した。

実施例１０
ＧＬＡ変異体のインビボ特性評価

ＧＬＡ変異体を、蓄積したＧｂ３に対するそれらの活性についてインビボで特性評価した。同一の遺伝的背景を有するファブリーマウス（５月齢雌、Ｊａｃｋｓｏｎ、在庫Ｎｏ．３５３５）および年齢／性別が一致する野生型マウスを使用した。マウスに、Ｃｏｄｅｘｉｓ酵素変異体（１．０ｍｇ／ｋｇ）を尾静脈を介して単回ＩＶ注射した。予定した時点（注射後１および２週間）でＣＯ_２麻酔を用いて動物を屠殺し、疾患関連組織（例えば、心臓および腎臓）を２つの部分（一方は酵素活性アッセイのためのものであり、他方はＧｂ３定量のためのものである）に解剖し、ドライアイス上で凍結し、分析まで－８０℃で保存した。酵素アッセイのために、マウス組織を、ガラスホモジナイザーのモーター駆動ＴＥＦＬＯＮ（登録商標）コーティングペッスルを使用して、溶解緩衝液（１倍ＰＢＳに希釈した０．２％ＴＲＩＴＯＮＸ－１００（商標）非イオン性界面活性剤（ＳｉｇｍａＮｏ．９３４４３））中２０倍容量（ｗ／ｖ）でホモジナイズした。ライセートを超音波処理し、４℃、１４，０００ｒｐｍで１５分間遠心分離し、上清を酵素アッセイに使用した。α－ＧａｌＡ活性は、０．１ＭのＮ－アセチルガラクトサミン（すなわち、α－ガラクトシダーゼＢの特異的阻害剤）の存在下、ｐＨ４．４で５ｍＭの４－メチルウンベリフェリル－α－Ｄ－ガラクトピラノシドを用いた標準蛍光定量アッセイによって測定した。タンパク質濃度を、ＢＣＡタンパク質アッセイキット（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｎｏ．２３２２５）を使用して測定した。活性をタンパク質濃度に対して正規化し、ｎｍｏｌ／ｍｇタンパク質／時間として表した。Ｇｂ３濃度は、前述のように質量分析によって測定した（Ｄｕｒａｎｔら、Ｊ．ＬｉｐｉｄＲｅｓ．，５２：１７４２－６［２０１１］を参照されたい）。端的に言えば、マウス組織を、ガラスホモジナイザー中の２０倍容量の氷冷超純水中でホモジナイズし、総タンパク質２００μｇに相当するライセートをスフィンゴ糖脂質抽出、鹸化、およびその後の質量分析によるＧｂ_３の分析に供した。Ｇｂ_３濃度をｎｇ／ｍｇタンパク質として表した。図５は、処置後１、２および４週間のファブリーマウスモデルの心臓におけるインビボ酵素活性を示すグラフを提供する。図６は、未処置動物と比較した、処置後１週間および２週間のファブリーマウスモデルの心臓組織におけるＧｂ３分解のグラフを提供する。
実施例１１
配列番号７０４に由来するＧＬＡ変異体

この実施例では、ファブリー線維芽細胞における活性、血清安定性、細胞内活性およびファブリー線維芽細胞におけるＧＬＡ変異体によるＧｂ３クリアランスを評価するために行った実験を記載する。これらの実験では、実施例５に記載されているように、配列番号７０４（配列番号７０４は、配列番号７０３由来のアミノ酸配列であり、これは、酵母コドン最適化配列番号２７５の哺乳動物コドン最適化バージョンである）に関して、ファブリー線維芽細胞のライセート中で、プレインキュベーションなしで、血清インキュベーション後に、ＧＬＡ変異体をＭＵ－Ｇａｌ活性について試験した。実施例５に記載されているように、ファブリー線維芽細胞におけるＧｂ３枯渇についても変異体を試験した。

実施例１２
配列番号３７４に由来するＧＬＡ変異体

この実施例では、ファブリー線維芽細胞における活性、血清安定性、細胞内活性およびファブリー線維芽細胞におけるＧＬＡ変異体によるＧｂ３クリアランスを評価するために行った実験を記載する。これらの実験では、ＧＬＡ変異体を、実施例５に記載されているように、ファブリー線維芽細胞のライセート中で、プレインキュベーションなしで、血清インキュベーション後にＭＵ－Ｇａｌ活性について試験した。実施例５に記載されているように、ファブリー線維芽細胞におけるＧｂ３枯渇についても変異体を試験した。

実施例１３
配列番号１０２２に由来するＧＬＡ変異体

この実施例では、ファブリー線維芽細胞における活性、血清安定性および細胞内活性を評価するために行われた実験を記載する。これらの実験では、ＧＬＡ変異体を、実施例５に記載されているように、ファブリー線維芽細胞のライセート中で、プレインキュベーションなしで、血清インキュベーション後にＭＵ－Ｇａｌ活性について試験した。

懸濁培養で産生された精製ＧＬＡ変異体の血清安定性

血液の存在下での変異体の相対安定性を評価するために、試料を血清に曝露した。最初に、１倍ＰＢＳ（ｐＨ６．２）中の１００μＬの７．５ｕｇ／ｍＬの精製ＧＬＡ変異体および９０ｕＬのヒト血清を、ＣＯＳＴＡＲ（登録商標）９６ウェル丸底プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）のウェルに添加した。プレートを密封し、３７℃で０～２４時間インキュベートした。アッセイのために、５０μＬのチャレンジした上清を５０μＬのマッキルベイン緩衝液（ｐＨ４．４）中１ｍＭのＭＵＧａｌと混合した。反応物を短時間混合し、３７℃で９０分間インキュベートした後、１００μＬの０．５Ｍの炭酸ナトリウム（ｐＨ１０．２）でクエンチした。加水分解は、蛍光（励起波長３５５ｎｍ、蛍光波長４６０ｎｍ）をモニタリングするＥＮＶＩＳＩＯＮ（登録商標）マイクロプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して分析した。２４時間後の血清中の残存活性パーセントを、チャレンジした試料の活性を未チャレンジの試料の活性で割ることによって算出し、ここで、「未チャレンジ」は、時間０で測定した加水分解であり、「チャレンジした」は、各変異体について指定された時点で測定した加水分解である。図７は、ヒト血清を用いて０～２４時間チャレンジした後のＧＬＡ変異体の残存活性を示すグラフを提供する。
懸濁培養で産生された精製ＧＬＡ変異体のファブリー線維芽細胞における細胞取り込み

参照酵素（ＷＴＧＬＡ［配列番号２］）と比較したＧＬＡ変異体の細胞取り込みを調べて、培養細胞にエンドサイトーシスされる変異体の全体的な能力を評価した。ファブリー線維芽細胞（ＧＭＯ２７７５、ＣｏｒｉｅｌｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＭｅｄｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ）を、最小必須培地（ＭＥＭ；１％の非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ；ＧｉｂｃｏＮｏ．１１１４０－０５０）および１５％のウシ胎児血清（ＣｏｒｎｉｎｇＮｏ．３５－０１６－ＣＶ）を補充したＧｉｂｃｏＮｏ．１１０９５－０８０）を含有する９６ウェル培養ディッシュ（ＶＷＲ、Ｎｏ．１０８６１－６９８）に播種し、コンフルエントに達するまで増殖させた（３７℃、５％ＣＯ_２で１～３日）。コンフルエントに達した後、補充したＭＥＭを滅菌真空によって除去し、１ｍＬ／ウェル無血清ＭＥＭ＋１％ＮＥＡＡと交換した。実施例４に記載した精製した酵素を、２２０ｎＭ～２ｎＭの用量応答で細胞に添加し、３７℃、５％ＣＯ_２で４時間インキュベートした。細胞を１００μＬの滅菌１倍ＰＢＳ／ウェルで２回洗浄し、ＰＢＳを滅菌真空によって吸引した。次いで、細胞を最小必須培地（ＭＥＭ；１％の非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ；ＧｉｂｃｏＮｏ．１１１４０－０５０）および１５％のウシ胎児血清を補充したＧｉｂｃｏＮｏ．１１０９５－０８０［ＣｏｒｎｉｎｇＮｏ．３５－０１６－ＣＶ］）を含有する中でインキュベートし、３７℃、５％ＣＯ_２で３日間インキュベートした。３日後、細胞を１００μＬの滅菌１倍ＰＢＳ／ウェルで２回洗浄し、ＰＢＳを滅菌真空によって吸引した。次いで、２５μＬの溶解緩衝液（１倍ＰＢＳで希釈した０．２％ＴＲＩＴＯＮＸ－１００（商標）非イオン性界面活性剤［ＳｉｇｍａＮｏ．９３４４３］）を各試料に添加し、続いて１～２分間超音波処理し、１２，０００～１４，０００ＲＰＭで１０分間、４℃で遠心分離した。活性アッセイのために、２５μＬの細胞溶解試料を２５μＬのマッキルベイン緩衝液（ｐＨ４．６）中２．５ｍＭのＭＵＧａｌと混合した。反応プレートを密封し、３７℃で６０分間インキュベートした後、ウェルあたり１５０μＬの０．５Ｍの炭酸ナトリウム（ｐＨ１０．２）で反応クエンチした。蛍光（励起波長３５５ｎｍ、蛍光波長４６０ｎｍ）をモニタリングするＥＮＶＩＳＩＯＮ（登録商標）マイクロプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して、ＭＵＧａｌ加水分解を調べた。図８は、３７℃で４時間のインキュベーションおよび３日間のウォッシュアウト後の培養ファブリー患者線維芽細胞における精製ＧＬＡ変異体の細胞取り込みのグラフを提供する。
実施例１４
ＧＬＡ変異体のインビボ特性評価

この実施例では、いくつかのＧＬＡ変異体を特性評価するために動物モデルを使用して行われた実験を記載する。マウスの薬物動態学的プロファイルを評価するための実験デザインの概要を表１４－１に提供する。実験は単相で行い、３６匹の雄Ｃ５７Ｂｌ／６マウス（２０～２５ｇ）を含めた。動物を実験前に少なくとも３日間順応させた。すべての動物に、尾静脈を介して、ＷＴＧＬＡ（配列番号２）またはＧＬＡ変異体のいずれかを１ｍｇ／ｋｇ単回ＩＶ注射した。個々の用量は、投与日に量った体重に基づいて計算した。

所定の時点で、およそ１５０μＬの全血を、１つの試験項目あたり６匹のマウスから（表１４－１に従って各時点について６匹の２つの群を交互に）ヘパリン処理毛細チューブに採取し、直ちに血漿について処理して、アッセイまで－８０℃で保存した。血漿ＧＬＡ活性を、実施例５に記載されるように、標準的な蛍光定量的ＭｕＧａｌアッセイを使用して測定した。全体として、ＧＬＡ変異体は、配列番号２と比較して優れた血漿薬物動態プロファイルを示し、配列番号２は、約１０分の推定半減期（ｔ_１／２）で最も速いクリアランスを有していた。比較すると、ＧＬＡ変異体のｔ_１／２は約１０倍長かった。データを表１４－２に示す。

上記のマウス実験に加えて、健康なラットにおけるいくつかのＧＬＡ変異体の薬物動態を決定するために実験を行った。簡単な実験デザインを表１４－３に示す。第１の実験は３相で実施し、２１匹のラットを含めた。動物を実験前に少なくとも３日間順応させた。すべての動物に、頸静脈カニューレを介して、ＷＴＧＬＡ（配列番号２）またはＧＬＡ変異体のいずれかをＩＶ注射した。個々の用量は、投与日に量った体重に基づいて計算した。

各ラットから表１４－３に示す所定の時点で血液（約０．２５ｍＬ）をＥＤＴＡ分離チューブに採取し、直ちに血漿について処理して、アッセイまで－８０℃で保存した。血漿ＧＬＡ活性を、実施例５に記載されるように、標準的な蛍光定量的ＭｕＧａｌアッセイを使用して測定した。すべてのＧＬＡ変異体は、配列番号２と比較した場合に、改善されたＰＫ特性を示した。すべてのＰＫパラメータのデータを表１４－４に示す。

ラットＰＫ実験番号２の簡単な試験デザインを表１４～５に示す。実験は１相で行い、１８匹のラットを含めた。動物を実験前に少なくとも３日間順応させた。すべての動物に、頸静脈カニューレを介して、ＷＴＧＬＡ（配列番号２）またはＧＬＡ変異体のいずれかをＩＶ注射した。個々の用量は、投与日に量った体重に基づいて計算した。

表１４－５に示す所定の時点で血液（約０．２５ｍＬ）をＥＤＴＡ分離チューブに採取し、直ちに血漿について処理して、アッセイまで－８０℃で保存した。血漿ＧＬＡ活性を、実施例５に記載されるように、標準的な蛍光定量的ＭｕＧａｌアッセイを使用して測定した。すべての用量のＧＬＡ変異体は、配列番号２と比較した場合に、改善されたＰＫ特性をもたらした。すべてのＰＫパラメータのデータを表１４－６に示す。

上記のマウスおよびラットの実験に加えて、霊長類モデルで実験を行った。簡単な実験デザインを表１４～７に示す。この実験は１相で行い、１２匹の雄カニクイザル（２～３ｋｇ）を含めた。動物は試験施設のコロニーから供給され、タンパク質ナイーブとみなした。すべての動物に、ＷＴＧＬＡ（配列番号２）またはＧＬＡ変異体のいずれかをＩＶ注射した。個々の用量は、投与日に量った体重に基づいて計算した。

表１４－７に示す所定の時点で血液（約０．５ｍＬ）をＥＤＴＡ分離チューブに採取し、直ちに血漿について処理して、アッセイまで－８０℃で保存した。血漿ＧＬＡ活性を、実施例５に記載されるように、標準的な蛍光定量的ＭｕＧａｌアッセイを使用して測定した。すべての用量のＧＬＡ変異体は、配列番号２と比較した場合に、改善されたＰＫ特性をもたらした。すべてのＰＫパラメータのデータを表１４－８）に示す。

サルにおける第２のＰＫ試験の簡単な実験デザインを表１４～９に示す。この実験は１相で行われ、１２匹のカニクイザル（３匹の動物／群）を含めた。動物を試験施設のコロニーから供給し、ＧＬＡタンパク質ナイーブとみなした。すべての動物に、ＷＴＧＬＡ（配列番号２）またはＧＬＡ変異体のいずれかをＩＶ注射した。個々の用量は、投与日に量った体重に基づいて計算した。血液試料を以下の時点、すなわち、投与前（最大３時間）、投与後１分、５分、１５分、３０分、投与後１時間、２時間、４時間、８時間、１２時間および２４時間で採取した。

表１４－７に示す所定の時点で血液（約１ｍＬ）をＥＤＴＡ分離チューブに採取し、直ちに血漿について処理して、アッセイまで－８０℃で保存した。血漿ＧＬＡ活性を、実施例５に記載されるように、標準的な蛍光定量的ＭｕＧａｌアッセイを使用して測定した。すべての用量のＧＬＡ変異体は、配列番号２と比較した場合に、改善されたＰＫ特性をもたらした。すべてのＰＫパラメータのデータを表１４－１０に示す。

ファブリーノックアウトマウスにおけるｒｈＧＬＡと比較したＧＬＡ変異体の有効性

ファブリーマウス（５月齢雌、Ｊａｃｋｓｏｎ、在庫Ｎｏ．３５３５）および同一の遺伝的背景を有する年齢／性別が一致する野生型マウスを使用して、ＷＴＧＬＡ（配列番号２）と比較した６つのＧＬＡ変異体（配列番号４、５８、１５８、７０４、１０２２および１８６４）の有効性を評価した。マウスに酵素変異体（尾静脈注射による０．１、０．３、または１．０ｍｇ／ｋｇ）を週に１回、４週間投与した（ｎ＝５／群）。最後の注射の７日後に、動物を麻酔して心臓穿刺を実施してＫ３ＥＤＴＡチューブに採血し、次いで安楽死させた。心臓を通る全身灌流を冷生理食塩水で行い、組織から汚染血液を除去した。疾患関連組織（例えば、心臓および腎臓）を２つの部分（一方は酵素活性アッセイのためのものであり、他方はＧｂ３およびリゾ－Ｇｂ３定量のためのものである）に切断し、ドライアイス上で凍結し、分析まで－８０℃で保存した。血液を直ちに血漿について処理して、アッセイまで－８０℃で保存した。血漿および組織のＧＬＡ活性を、実施例５に記載されるように、標準的な蛍光定量的ＭｕＧａｌアッセイを使用して測定した。血漿ならびに組織のＧｂ３およびリゾＧｂ３レベルを、実施例１０において言及される方法を使用して評価し、組織を実施例１０で記載されるようにホモジナイズした。配列番号１８６４のいくつかの場合を除いて、すべてのＧＬＡ変異体は、ファブリーマウスモデルにおいて配列番号２よりも有効であった。

図９および図１０は、最後の処置の７日後のファブリーマウスモデルの心臓および腎臓それぞれにおけるインビボ酵素活性を示すグラフを提供する。図９では、データを平均±ＳＥＭとして表す。Ｄｕｎｎｅｔｔの事後検定を用いた二元配置ＡＮＯＶＡを使用して、結果を配列番号２の結果と比較した。「＾」、ｐ＜０．０００１、配列番号２に対する好ましくない有意な改善は、この図には示されていない。図１０では、データを平均±ＳＥＭとして表す。Ｄｕｎｎｅｔｔの事後検定を用いた二元配置ＡＮＯＶＡを使用して、結果を配列番号２の結果と比較した。「＊」ｐ＜０．０５、「＊＊」ｐ＜０．００５、および「＾」、ｐ＜０．０００１、配列番号２に対する好ましくない有意な改善は、この図には示されていない。図１１および図１２は、それぞれ心臓組織および腎臓組織におけるＧｂ３分解のグラフを提供する。図１１では、データを平均±ＳＥＭとして表す。Ｄｕｎｎｅｔｔの事後検定を用いた二元配置ＡＮＯＶＡを使用して、結果を配列番号２の結果と比較した。０．１ｍｇ／ｋｇ用量で、「＊」、配列番号１５８および１０２２についてｐ＜０．０５、０．３ｍｇ／ｋｇ用量では、配列番号１５８について「＾」、ｐ＜０．０００１、配列番号５８、７０４、１０２２および１８６４について「＊＊」、ｐ＜０．００５。図１２では、データを平均±ＳＥＭとして表す。Ｄｕｎｎｅｔｔの事後検定を用いた二元配置ＡＮＯＶＡを使用して、結果を配列番号２の結果と比較した。０．１ｍｇ／ｋｇ用量で、「＾」、配列番号４、５８、１５８、７０４および１０２２についてｐ＜０．０００１、０．３ｍｇ／ｋｇ用量では、配列番号１５８について「＾」、ｐ＜０．０００１、配列番号４、５８、７０４および１０２２について「＊＊」、ｐ＜０．００５。図１３および図１４は、それぞれ心臓組織および腎臓組織におけるリゾ－Ｇｂ３分解のグラフを提供する。図１３では、データを平均±ＳＥＭとして表す。Ｄｕｎｎｅｔｔの事後検定を用いた二元配置ＡＮＯＶＡを使用して、結果を配列番号２の結果と比較した。図１４では、データを平均±ＳＥＭとして表す。Ｄｕｎｎｅｔｔの事後検定を用いた二元配置ＡＮＯＶＡを使用して、結果を配列番号２の結果と比較した。０．１ｍｇ／ｋｇ用量で、「＊＊」、配列番号４についてはｐ＜０．００５、５８、１５８、配列番号７０４について「＊」、ｐ＜０．０５。

本発明を特定の実施形態を参照して説明してきたが、特定の状況、材料、物質の組成、プロセス、プロセスステップまたはステップに適合するように様々な変更を行うことができ、また、均等物を置き換えることができ、それにより、特許請求されるものの範囲から逸脱することなく本発明の利益を達成する。

米国においては、本開示において引用されたあらゆる刊行物および特許文献は、あたかもかかる各刊行物または文献が参照により本明細書に組み込まれることが具体的かつ個別に示されているかのように、参照により本明細書に組み込まれる。刊行物および特許文献の引用は、かかる文献が関連する先行技術であることを示すものではなく、その内容または日付に関する承認を構成するものでもない。

Claims

配列番号３７４、７０４、および／または１０２２と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む組換えアルファガラクトシダーゼＡおよび／または生物学的に活性な組換えアルファガラクトシダーゼＡ断片。
前記組換えアルファガラクトシダーゼが、配列番号８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡが、２、４、５、２４／５９、２４／１４３／１４４、２４／１４３／２０２／３３３、２４／１４３／２０２／３５２／３９０／３９１、２４／１４３／３３３／３５２／３８７／３９０／３９１、２４／１４３／３９０／３９１、２４／２０２、２４／２０２／２７１、２４／２０２／３３３／３５２、２４／２７１／３５２、２４／３５２／３８７／３９０／３９１、２４／３８７／３９１、３１、４０、５９、５９／１４３、５９／１４３／２０２、５９／１４３／２０２／２７１／３３３、５９／１４３／２７１、５９／１４３／３３３、５９／２０２、５９／２０２／３３３、５９／２７１／３８７／３９０、７３、７６、８０、８３、８４、９１／２１５／３６１、１２２、１２３、１４３、１４３／２０２、１４３／２７１、１４３／２７１／３５２／３９０、１４３／３３３、１４３／３３３／３８７／３９０、１４３／３８７／３９１、１４７、１５５、１６４、１６５、１７９、１８６、２０２、２０２／３３３、２１０、２１５／２１８、２１８、２１８／３６１、２１８／３６１／３９８、２１８／３９８、２４６、２５４／３９８、２７１、２７１／３３３、２７１／３３３／３９０／３９１、２７１／３３３／３９１、２７１／３５２／３９１、２７３、２７５、２７７、２７８、２８０、２８１、２８３、２８４、２８７、３００、３０３、３０４、３２５、３３１、３３２、３３３／３５２、３３３／３９０／３９１、３３３／３９１、３３４、３３５、３３６、３３８、３３９、３４０、３４１、３４３、３５９、３６０、３６１、３６２、３６７、３６９、３７１、３７３、３７５、３７７、３８２、３８２／３９８、３８５、３８７／３９１、３９０、および３９８から選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置が配列番号７０４を参照してナンバリングされる、請求項１に記載の組換えアルファガラクトシダーゼＡ。
前記組換えアルファガラクトシダーゼが、配列番号８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡが、１０、３９、４４、４７、９２、１６６、２０６、２１７、２４７、２６１、２７１、３０２、３１６、３２２、３３７、３６８、および３９２から選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置が配列番号３７４を参照してナンバリングされる、請求項１に記載の組換えアルファガラクトシダーゼＡ。
前記組換えアルファガラクトシダーゼが、配列番号５８と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える配列同一性を有するポリペプチド配列、またはその機能的断片を含み、前記組換えアルファガラクトシダーゼＡが、１０、１０／３９２、３１、３１／３９／４４／１６６／３０２、３１／４７、３１／２８３／２８４、３９、３９／４４、３９／４４／４７、３９／４４／４７／２６１／２８３／２８４、３９／４４／２８３、３９／４４／３３９、３９／４７／２６１、３９／９２、３９／２０６、３９／２８４、４４、４４／２８４／３０２、８４、８４／９２、８４／２８４／３０２／３９２、８４／３１６、８４／３６８／３９２、９２、９２／２０６／２１７、９２／２０６／２７５、９２／２０６／２８４、９２／２０６／３０２／３６８、９２／２７１、９２／２７１／２７７、９２／２７５／２８４、９２／２８３、９２／２８３／３９２、９２／２８４、９２／３０２、９２／３１６、９２／３６８、１５５、１５５／２１７、１５５／３６８、１６６、１６６／２８３／２８４、１６６／３０２、２０６、２０６／２１７、２０６／３３４、２６１、２６１／２８３、２７１、２７１／３６８、２７５、２８３、２８３／２８４、２８３／３９２、２８４、３０２、３１６、３３４、３３９、３６８、３６８／３９２、および３９２から選択される１またはそれを超える位置に、少なくとも１つの置換または置換の組を含み、前記ポリペプチド配列のアミノ酸の位置が配列番号１０２２を参照してナンバリングされる、請求項１に記載の組換えアルファガラクトシダーゼＡ。
前記アルファガラクトシダーゼＡが表１１．１、１２．１および／または１３．１に示される少なくとも１つの位置に少なくとも１つの変異を含む、請求項１に記載の組換えアルファガラクトシダーゼＡ。
ヒトアルファガラクトシダーゼＡに由来する、請求項１～５のいずれか一項に記載の組換えアルファガラクトシダーゼＡ。
配列番号３７４、７０４および／または１０２２のポリペプチド配列を含む組換えアルファガラクトシダーゼＡ。
配列番号２、３７４、７０４および／または１０２２のアルファガラクトシダーゼＡよりも熱安定性である、請求項１～７のいずれか一項に記載の組換えアルファガラクトシダーゼＡ。
配列番号２、３７４、７０４および／または１０２２のアルファガラクトシダーゼＡよりもｐＨ７で安定である、請求項１～８のいずれか一項に記載の組換えアルファガラクトシダーゼＡ。
配列番号２、３７４、７０４および／または１０２２のアルファガラクトシダーゼＡよりもｐＨ４で安定である、請求項１～９のいずれか一項に記載の組換えアルファガラクトシダーゼＡ。
配列番号２、３７４、７０４および／または１０２２のアルファガラクトシダーゼＡよりも血清への曝露に対して安定である、請求項１～１０のいずれか一項に記載の組換えアルファガラクトシダーゼＡ。
配列番号２、３７４、７０４および／または１０２２のアルファガラクトシダーゼＡよりもリソソームで安定である、請求項１～１１のいずれか一項に記載の組換えアルファガラクトシダーゼＡ。
配列番号２、３７４、７０４および／または１０２２のアルファガラクトシダーゼＡよりも細胞に取り込まれやすい、請求項１～１２のいずれか一項に記載の組換えアルファガラクトシダーゼＡ。
配列番号２、３７４、７０４および／または１０２２のアルファガラクトシダーゼＡよりも多くのグロボトリアオシルセラミドを細胞から枯渇させる、請求項１～１３のいずれか一項に記載の組換えアルファガラクトシダーゼＡ。
精製されている、請求項１～１４のいずれか一項に記載の組換えアルファガラクトシダーゼＡ。
参照配列と比較して、ｉ）触媒活性の増強、ｉｉ）ｐＨ７に対する耐性の増加、ｉｉｉ）ｐＨ４に対する耐性の増加、ｉｖ）血清耐性の増加、ｖ）細胞への取り込みの増加、ｖｉ）細胞からのグロボトリアオシルセラミドの枯渇の増加、ｖｉｉ）免疫原性の低下、または、ｉ）、ｉｉ）、ｉｉｉ）、ｉｖ）、ｖ）、ｖｉ）および／もしくはｖｉｉ）のうちのいずれかの組み合わせ、から選択される少なくとも１つの改善された特性を示す、請求項１～１５のいずれか一項に記載の組換えアルファガラクトシダーゼＡ。
前記参照配列が配列番号３７４、７０４および／または１０２２から選択される、請求項１６に記載の組換えアルファガラクトシダーゼＡ。
請求項１～１７のいずれか一項に記載の少なくとも１つの組換えアルファガラクトシダーゼＡを含む組成物。
請求項１～１８のいずれか一項に記載の少なくとも１つの組換えアルファガラクトシダーゼＡをコードする組換えポリヌクレオチド配列。
前記ポリヌクレオチド配列が、ＤＮＡ、ＲＮＡおよびｍＲＮＡから選択される、請求項１９に記載の組換えポリヌクレオチド配列。
前記ポリヌクレオチド配列がコドン最適化されている、請求項２０に記載の組換えポリヌクレオチド配列。
請求項１９、２０および／または２１に記載の組換えポリヌクレオチド配列を含む発現ベクター。
前記組換えポリヌクレオチド配列が、１またはそれを超える制御配列に作動可能に連結されている、請求項２２に記載の発現ベクター。
前記制御配列がプロモーターである、請求項２３に記載の発現ベクター。
前記プロモーターが異種プロモーターである、請求項２４に記載の発現ベクター。
請求項２２～２５のいずれか一項記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
真核生物および原核生物から選択される、請求項２６に記載の宿主細胞。
前記宿主細胞が哺乳動物細胞である、請求項２６および／または２７に記載の宿主細胞。
アルファガラクトシダーゼＡ変異体を産生する方法であって、請求項２６～２８のいずれか一項に記載の前記宿主細胞を、前記組換えポリヌクレオチドによってコードされる前記アルファガラクトシダーゼＡが産生される条件下で培養することを含む、方法。
前記アルファガラクトシダーゼＡを回収する工程をさらに含む、請求項２９に記載の方法。
前記アルファガラクトシダーゼＡを精製する工程をさらに含む、請求項３０に記載の方法。
請求項１８に記載の組成物を含む、ファブリー病を処置するための医薬組成物。
薬学的に許容され得る担体および／または賦形剤をさらに含む、請求項３２に記載の医薬組成物。
前記組成物がヒトへの非経口注射または注入に適している、請求項３２および／または３３に記載の医薬組成物。
請求項１９～２１のいずれか一項に記載の組換えポリヌクレオチドを含む医薬組成物。
対象のファブリー病の症候を処置および／または予防する方法であって、ファブリー病を有する対象を提供すること、および請求項３２～３５のいずれか一項に記載の医薬組成物を前記対象に与えることを含む方法。
ファブリー病の前記症候が改善される、請求項３６に記載の方法。
前記対象が、ファブリー病の前記症候を示す対象によって要求される食事よりもその脂肪含有量が制限されていない食事を食べることができる、請求項３６および／または３７に記載の方法。
前記対象が乳児または小児である、請求項３６～３８のいずれか一項に記載の方法。
前記対象が成人または若年成人である、請求項３６～３９のいずれか一項に記載の方法。
請求項１８および３２～３５のいずれか一項に記載の組成物の使用。