JP2023515875A - 抗ｃｄ１２３抗体またはキメラ抗原受容体（ｃａｒ）に結合する抗イディオタイプ抗体、およびそれを使用する方法 - Google Patents
抗ｃｄ１２３抗体またはキメラ抗原受容体（ｃａｒ）に結合する抗イディオタイプ抗体、およびそれを使用する方法 Download PDFInfo
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Abstract
本開示は、一般的に、抗ＣＤ１２３抗体、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または抗体結合性断片に結合する抗体およびその結合性断片に関する。特に、開示される抗イディオタイプ抗体および断片は、抗ＣＤ１２３抗体、ＣＡＲまたはそれらの断片に結合し、新規相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。最後に、本開示は、ＣＤ１２３－ＣＡＲ発現免疫細胞を拡大および／または活性化するために開示される抗体およびその断片を使用する方法、ＣＤ１２３－ＣＡＲを検出または定量する方法、ならびにＣＤ１２３－ＣＡＲ発現免疫細胞を単離する方法に関する。【選択図】図１
Description
本出願は、２０２０年３月６日出願の米国仮特許出願第６２／９８６，４０５号の優先権を主張する。当該出願の内容は、その全体を参照により本明細書に組み込む。
本開示は、一般的に、抗ＣＤ１２３抗体、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または抗体結合性断片に結合する抗体およびその結合性断片に関する。特に、開示される抗イディオタイプ抗体および断片は、抗ＣＤ１２３抗体、ＣＡＲまたはそれらの断片に結合し、新規相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。最後に、本開示は、ＣＤ１２３－ＣＡＲ発現免疫細胞を拡大および／または活性化するために開示される抗体およびその断片を使用する方法、ＣＤ１２３－ＣＡＲを検出または定量する方法、ならびにＣＤ１２３－ＣＡＲ発現免疫細胞を単離する方法に関する。
以下の説明は、単に本開示の理解において読み手を補助するために提供され、それに対する先行技術を説明または構成するとは認められない。
ＣＤ１２３（すなわち、インターロイキン３受容体アルファ鎖；ＩＬ－３Ｒα）は、Ｉ型サイトカイン受容体ファミリーに属し、共通ベータ（ベータｃまたはＣＤ１３１）サブユニットと対形成した独特なアルファ鎖を有するヘテロ二量体である。ＣＤ１２３は、急性および慢性骨髄性白血病、有毛細胞白血病、Ｂ細胞系統急性リンパ芽球性白血病ならびに芽球形質細胞様樹状細胞腫瘍を含む、様々な悪性腫瘍において発現される。加えて、ＣＤ１２３は、典型的に正常な造血幹細胞において発現されず、したがって、このことからＣＤ１２３は理想的な免疫療法標的となっている。
抗体およびキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）発現免疫細胞（例えばＴ細胞またはナチュラルキラー細胞）のような免疫療法は、標的特異的機構を使用して、様々な種類のがんを処置することについて大きな潜在性を有する。しかしながら、そのような抗体またはＣＡＲ発現細胞を単離および定量することは、難儀かつ困難である場合があり、ＣＡＲ発現細胞の拡大および活性化は、挑戦を要するものであり得る。
本開示は、抗ＣＤ１２３抗体、ＣＡＲ、またはそれらの断片に結合し、様々な異なる製造、品質管理および治療適用に有用である抗イディオタイプ抗体および断片を提供する。
抗ＣＤ１２３抗体に結合する新規抗イディオタイプ抗体またはその断片、およびそれを使用する方法が、本明細書で説明される。
一態様において、本開示は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む抗体または抗原結合性断片であって、ＶＨおよびＶＬ領域が、ＧＦＮＩＫＤＳＦ（配列番号１）を含む重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）、ＩＤＰＥＤＤＥＴ（配列番号２）を含むＣＤＲＨ２、およびＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹ（配列番号３）を含むＣＤＲＨ３、ならびにＥＤＩＹＸ１Ｘ２（配列番号１０）を含む軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）、Ｘ３ＡＸ４（配列番号１１）を含むＣＤＲＬ２、およびＱＱＸ５Ｘ６Ｘ７ＹＰＸ８Ｔ（配列番号１２）を含むＣＤＲＬ３を含み、Ｘ１が、極性アミノ酸であり；Ｘ２が、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、システイン（Ｃ）、グリシン（Ｇ）およびプロリン（Ｐ）からなる群から選択され；Ｘ３が、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、アスパラギン（Ｎ）およびグルタミン（Ｑ）からなる群から選択され；Ｘ４が、極性アミノ酸であり；Ｘ５およびＸ６が、アルギニン（Ｒ）、ヒスチジン（Ｈ）、リジン（Ｋ）、アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）およびトリプトファン（Ｗ）からなる群から選択され；Ｘ７が、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、アスパラギン（Ｎ）およびグルタミン（Ｑ）からなる群から選択され；Ｘ８が、アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）およびトリプトファン（Ｗ）からなる群から選択される、抗体または抗原結合性断片に関する。
一部の実施形態において、Ｘ１は、セリン（Ｓ）またはアスパラギン（Ｎ）である。一部の実施形態において、Ｘ２は、アスパラギン（Ｎ）またはグリシン（Ｇ）である。一部の実施形態において、Ｘ３は、アスパラギン酸（Ｄ）またはアスパラギン（Ｎ）である。一部の実施形態において、Ｘ４は、セリン（Ｓ）またはアスパラギン（Ｎ）である。一部の実施形態において、Ｘ５およびＸ６は、ヒスチジン（Ｈ）またはチロシン（Ｙ）である。一部の実施形態において、Ｘ７は、アスパラギン酸（Ｄ）またはアスパラギン（Ｎ）である。一部の実施形態において、Ｘ８は、ロイシン（Ｌ）またはチロシン（Ｙ）である。一部の実施形態において、Ｘ１は、セリン（Ｓ）またはアスパラギン（Ｎ）であり；Ｘ２は、アスパラギン（Ｎ）またはグリシン（Ｇ）であり；Ｘ３は、アスパラギン酸（Ｄ）またはアスパラギン（Ｎ）であり；Ｘ４は、セリン（Ｓ）またはアスパラギン（Ｎ）であり；Ｘ５およびＸ６は、ヒスチジン（Ｈ）またはチロシン（Ｙ）であり；Ｘ７は、アスパラギン酸（Ｄ）またはアスパラギン（Ｎ）であり；Ｘ８は、ロイシン（Ｌ）またはチロシン（Ｙ）である。
一部の実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、ＧＦＮＩＫＤＳＦ（配列番号１）を含むＣＤＲＨ１、ＩＤＰＥＤＤＥＴ（配列番号２）を含むＣＤＲＨ２、およびＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹ（配列番号３）を含むＣＤＲＨ３、ならびにＥＤＩＹＳＮ（配列番号４）を含むＣＤＲＬ１、ＤＡＳ（配列番号５）を含むＣＤＲＬ２、およびＱＱＨＨＤＹＰＬＴ（配列番号６）を含むＣＤＲＬ３；またはＧＦＮＩＫＤＳＦ（配列番号１）を含むＣＤＲＨ１、ＩＤＰＥＤＤＥＴ（配列番号２）を含むＣＤＲＨ２、およびＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹ（配列番号３）を含むＣＤＲＨ３、ならびにＥＤＩＹＮＧ（配列番号７）を含むＣＤＲＬ１、ＮＡＮ（配列番号８）を含むＣＤＲＬ２、およびＱＱＹＹＮＹＰＹＴ（配列番号９）を含むＣＤＲＬ３を含み得る。
一部の実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＲＬＳＣＴＴＳＧＦＮＩＫＤＳＦＩＨＷＶＫＱＲＴＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＥＤＤＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号１３）を含むＶＨ領域およびＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＬＧＥＴＶＴＩＥＣＬＡＳＥＤＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＳＰＱＬＬＩＹＤＡＳＳＬＱＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＥＳＧＴＱＹＳＬＥＩＮＳＬＱＳＥＤＡＡＴＹＦＣＱＱＨＨＤＹＰＬＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１４）を含むＶＬ領域；またはＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＲＬＳＣＴＴＳＧＦＮＩＫＤＳＦＩＨＷＶＫＱＲＴＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＥＤＤＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号１３）を含むＶＨ領域およびＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＬＧＥＴＶＴＩＥＣＲＡＳＥＤＩＹＮＧＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＳＰＱＬＬＩＹＮＡＮＳＬＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＹＳＬＫＩＮＳＬＱＳＥＤＶＡＳＹＦＣＱＱＹＹＮＹＰＹＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号１５）を含むＶＬ領域を含み得る。
一部の実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、抗ＣＤ１２３抗体または抗ＣＤ１２３抗原結合性断片のイディオタイプに特異的に結合する。一部の実施形態において、抗ＣＤ１２３抗体または抗ＣＤ１２３抗原結合性断片は、ＤＶＱＩＴＱＳＰＳＹＬＡＡＳＰＧＥＴＩＴＩＮＣＲＡＳＫＳＩＳＫＤＬＡＷＹＱＥＫＰＧＫＴＮＫＬＬＩＹＳＧＳＴＬＱＳＧＩＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＭＹＹＣＱＱＨＮＫＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号２０）のＶＬドメインおよび／またはＱＶＱＬＱＱＰＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＮＷＶＫＱＲＰＤＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＹＤＳＥＴＨＹＮＱＫＦＫＤＫＡＩＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＮＷＤＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号２１）のＶＨドメインを含む。一部の実施形態において、抗ＣＤ１２３抗原結合性断片は、ｓｃＦｖである。一部の実施形態において、抗ＣＤ１２３抗原結合性断片は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）へ組み込まれている。
抗イディオタイプ抗体または断片がＣＡＲに結合する実施形態において、ＣＡＲは、ＩｇＧヒンジまたは改変ＩｇＧヒンジ、膜貫通ドメイン、共刺激性シグナル伝達ドメインおよびＴ細胞受容体ゼータ鎖シグナル伝達ドメインを含み得る。一部の実施形態において、共刺激性シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７共刺激性シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８共刺激性シグナル伝達ドメイン、４－１ＢＢ共刺激性シグナル伝達ドメインおよびＯＸ４０共刺激性シグナル伝達ドメインからなる群から選択される。一部の実施形態において、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ４、ＣＤ８、４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０、ＨＶＥＭまたはＣＤ３０の膜貫通部分を含む。一部の実施形態において、ＣＤ１２３－ＣＡＲは、配列番号２０を含むＶＬドメインおよび配列番号２１を含むＶＨドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号２４または配列番号２５を含む共刺激性ドメイン、ならびに配列番号４８を含むＣＤ３ζドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ１２３－ＣＡＲは、配列番号４９を含む。一部の実施形態において、ＣＤ１２３－ＣＡＲは、配列番号２２を含むＶＬドメインおよび配列番号２３を含むＶＨドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号２４または配列番号２５を含む共刺激性ドメイン、ならびに配列番号４８を含むＣＤ３ζドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ１２３－ＣＡＲは、配列番号５０を含む。
別の態様において、本開示は、
GAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCAGAGCTTGTGAGGCCAGGGGCCTCAGTCAGGTTGTCCTGCACAACTTCTGGCTTCAACATTAAAGACTCCTTTATTCACTGGGTGAAGCAGAGGACTGAACAGGGCCTGGAGTGGATTGGAAGGATTGATCCTGAGGATGATGAAACTAAATATGCCCCGAAATTCCAGGGCAAGGCCACTATAACAGCAGACACATCCTCCAACACAGCCTACCTGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACACTGCCGTCTATTACTGTGCTAGCCCCATCTACGGTAGTAGAGAGGCCTGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA（配列番号１６）およびGACATCCAGATGACACAGTCTCCAGCTTCCCTGTCTGCATCTCTGGGAGAAACTGTCACCATCGAATGTCTAGCAAGTGAAGACATTTACAGTAATTTAGCGTGGTATCAGCAGAAGCCAGGGAAATCTCCTCAGCTCCTGATCTATGATGCAAGTAGCTTGCAAGATGGGGTCCCATCACGGTTCAGTGGCAGTGAATCTGGCACACAGTATTCTCTCGAGATCAACAGCCTGCAATCTGAAGATGCCGCGACTTATTTCTGTCAACAGCATCATGATTATCCTCTCACGTTCGGTTCTGGGACCAAGCTGGAGATCAAA（配列番号１７）；または
GAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCAGAGCTTGTGAGGCCAGGGGCCTCAGTCAGGTTGTCCTGCACAACTTCTGGCTTCAACATTAAAGACTCCTTTATTCACTGGGTGAAGCAGAGGACTGAACAGGGCCTGGAGTGGATTGGAAGGATTGATCCTGAGGATGATGAAACTAAATATGCCCCGAAATTCCAGGGCAAGGCCACTATAACAGCAGACACATCCTCCAACACAGCCTACCTGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACACTGCCGTCTATTACTGTGCTAGCCCCATCTACGGTAGTAGAGAGGCCTGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA（配列番号１８）およびGACATCCAGATGACACAGTCTCCAGCTTCCCTGTCTGCATCTCTGGGAGAAACTGTCACCATCGAATGTCGAGCAAGTGAGGACATTTACAATGGTTTAGCATGGTATCAGCAGAAGCCAGGGAAATCTCCTCAGCTCCTGATCTATAATGCAAATAGCTTGCATACTGGGGTCCCATCACGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGTACACAGTATTCTCTCAAGATAAACAGCCTGCAGTCTGAAGATGTCGCAAGTTATTTCTGTCAACAGTATTACAATTATCCGTACACGTTTGGAGCTGGGACCAAGCTGGAACTGAAA（配列番号１９）を含む抗体または抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を提供する。一部の実施形態において、上記ヌクレオチド配列は、発現ベクター内に含まれ得る。
GAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCAGAGCTTGTGAGGCCAGGGGCCTCAGTCAGGTTGTCCTGCACAACTTCTGGCTTCAACATTAAAGACTCCTTTATTCACTGGGTGAAGCAGAGGACTGAACAGGGCCTGGAGTGGATTGGAAGGATTGATCCTGAGGATGATGAAACTAAATATGCCCCGAAATTCCAGGGCAAGGCCACTATAACAGCAGACACATCCTCCAACACAGCCTACCTGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACACTGCCGTCTATTACTGTGCTAGCCCCATCTACGGTAGTAGAGAGGCCTGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA（配列番号１６）およびGACATCCAGATGACACAGTCTCCAGCTTCCCTGTCTGCATCTCTGGGAGAAACTGTCACCATCGAATGTCTAGCAAGTGAAGACATTTACAGTAATTTAGCGTGGTATCAGCAGAAGCCAGGGAAATCTCCTCAGCTCCTGATCTATGATGCAAGTAGCTTGCAAGATGGGGTCCCATCACGGTTCAGTGGCAGTGAATCTGGCACACAGTATTCTCTCGAGATCAACAGCCTGCAATCTGAAGATGCCGCGACTTATTTCTGTCAACAGCATCATGATTATCCTCTCACGTTCGGTTCTGGGACCAAGCTGGAGATCAAA（配列番号１７）；または
GAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCAGAGCTTGTGAGGCCAGGGGCCTCAGTCAGGTTGTCCTGCACAACTTCTGGCTTCAACATTAAAGACTCCTTTATTCACTGGGTGAAGCAGAGGACTGAACAGGGCCTGGAGTGGATTGGAAGGATTGATCCTGAGGATGATGAAACTAAATATGCCCCGAAATTCCAGGGCAAGGCCACTATAACAGCAGACACATCCTCCAACACAGCCTACCTGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACACTGCCGTCTATTACTGTGCTAGCCCCATCTACGGTAGTAGAGAGGCCTGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA（配列番号１８）およびGACATCCAGATGACACAGTCTCCAGCTTCCCTGTCTGCATCTCTGGGAGAAACTGTCACCATCGAATGTCGAGCAAGTGAGGACATTTACAATGGTTTAGCATGGTATCAGCAGAAGCCAGGGAAATCTCCTCAGCTCCTGATCTATAATGCAAATAGCTTGCATACTGGGGTCCCATCACGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGTACACAGTATTCTCTCAAGATAAACAGCCTGCAGTCTGAAGATGTCGCAAGTTATTTCTGTCAACAGTATTACAATTATCCGTACACGTTTGGAGCTGGGACCAAGCTGGAACTGAAA（配列番号１９）を含む抗体または抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を提供する。一部の実施形態において、上記ヌクレオチド配列は、発現ベクター内に含まれ得る。
別の態様において、本開示は、抗ＣＤ１２３キメラ抗原受容体（ＣＤ１２３－ＣＡＲ）を発現する免疫細胞を拡大または活性化する方法であって、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する免疫細胞集団を、ＣＤ１２３－ＣＡＲのイディオタイプに特異的に結合する抗イディオタイプ抗体または抗原結合性断片と接触させる工程を含み、ＣＤ１２３－ＣＡＲが、ＣＤ１２３に結合するｓｃＦｖ、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激性ドメインおよびＴ細胞受容体ゼータ鎖シグナル伝達ドメインを含む、方法を提供する。
別の態様において、本開示は、試料中のＣＤ１２３－ＣＡＲの存在を検出する方法であって、ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現することが疑われる免疫細胞を含む試料を、ＣＤ１２３－ＣＡＲのイディオタイプに特異的に結合する抗イディオタイプ抗体または抗原結合性断片と接触させる工程と、ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する細胞数を定量する工程とを含み、ＣＤ１２３－ＣＡＲが、ＣＤ１２３に結合するｓｃＦｖ、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、少なくとも１つの共刺激性ドメインおよびＴ細胞受容体ゼータ鎖シグナル伝達ドメインを含む、方法を提供する。一部の実施形態において、試料は、細胞培養培地である。一部の実施形態において、試料は、ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する免疫細胞により処置された対象からの血液試料である。一部の実施形態において、ＣＤ１２３－ＣＡＲの存在を検出する本方法は、ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する免疫細胞の量が事前設定閾値未満であると決定された場合、ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現するさらなる免疫細胞の投与を推奨する工程をさらに含み得る。一部の実施形態において、ＣＤ１２３－ＣＡＲの存在を検出する本方法は、ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する免疫細胞の量が事前設定閾値未満であると決定された場合、ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現するさらなる免疫細胞を投与する工程をさらに含み得る。一部の実施形態において、ＣＤ１２３－ＣＡＲの存在を検出する本方法は、ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する免疫細胞の量が事前設定閾値を超えていると決定された場合、ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現するさらなる免疫細胞の投与を控えることを推奨する工程をさらに含み得る。一部の実施形態において、ＣＤ１２３－ＣＡＲの存在を検出する本方法は、ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する免疫細胞の量が事前設定閾値を超えていると決定された場合、ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現するさらなる免疫細胞の投与を控える工程をさらに含み得る。一部の実施形態において、ＣＤ１２３－ＣＡＲの存在を検出する本方法は、血液を、例えば、ＧＦＮＩＫＤＳＦ（配列番号１）を含むＣＤＲＨ１、ＩＤＰＥＤＤＥＴ（配列番号２）を含むＣＤＲＨ２、およびＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹ（配列番号３）を含むＣＤＲＨ３、ならびにＥＤＩＹＳＮ（配列番号４）を含むＣＤＲＬ１、ＤＡＳ（配列番号５）を含むＣＤＲＬ２、およびＱＱＨＨＤＹＰＬＴ（配列番号６）を含むＣＤＲＬ３；またはＧＦＮＩＫＤＳＦ（配列番号１）を含むＣＤＲＨ１、ＩＤＰＥＤＤＥＴ（配列番号２）を含むＣＤＲＨ２、およびＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹ（配列番号３）を含むＣＤＲＨ３、ならびにＥＤＩＹＮＧ（配列番号７）を含むＣＤＲＬ１、ＮＡＮ（配列番号８）を含むＣＤＲＬ２、およびＱＱＹＹＮＹＰＹＴ（配列番号９）を含むＣＤＲＬ３を含む抗イディオタイプ抗体または抗原結合性断片を含む固体支持体と接触させ、これによって、対象の血液からＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する免疫細胞を隔離し、次に、ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する免疫細胞を除去した血液を、対象へ投与して戻すことによって、対象の血液から免疫細胞を除去する工程をさらに含み得る。一部の実施形態において、対象は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、芽球形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＢＰＤＣＮ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）または有毛細胞白血病を有する。
別の態様において、本開示は、試料からＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する免疫細胞を単離する方法であって、ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現することが疑われる免疫細胞を含む試料を、抗イディオタイプ抗体または抗原結合性断片を含む固体支持体と接触させ、これによって、試料からＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する免疫細胞を単離する工程を含み、ＣＤ１２３－ＣＡＲが、ＣＤ１２３に結合するｓｃＦｖ、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激性ドメインおよびＴ細胞受容体ゼータ鎖シグナル伝達ドメインを含む、方法を提供する。一部の実施形態において、試料は、細胞培養培地である。一部の実施形態において、試料は、ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する免疫細胞により処置された対象からの血液試料である。一部の実施形態において、固体支持体は、抗イディオタイプ抗体または抗原結合性断片が連結されているカラムまたはビーズを含み得る。
上記方法の一部の実施形態において、抗イディオタイプ抗体または抗原結合性断片は、ＧＦＮＩＫＤＳＦ（配列番号１）を含むＣＤＲＨ１、ＩＤＰＥＤＤＥＴ（配列番号２）を含むＣＤＲＨ２、およびＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹ（配列番号３）を含むＣＤＲＨ３、ならびにＥＤＩＹＳＮ（配列番号４）を含むＣＤＲＬ１、ＤＡＳ（配列番号５）を含むＣＤＲＬ２、およびＱＱＨＨＤＹＰＬＴ（配列番号６）を含むＣＤＲＬ３；またはＧＦＮＩＫＤＳＦ（配列番号１）を含むＣＤＲＨ１、ＩＤＰＥＤＤＥＴ（配列番号２）を含むＣＤＲＨ２、およびＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹ（配列番号３）を含むＣＤＲＨ３、ならびにＥＤＩＹＮＧ（配列番号７）を含むＣＤＲＬ１、ＮＡＮ（配列番号８）を含むＣＤＲＬ２、およびＱＱＹＹＮＹＰＹＴ（配列番号９）を含むＣＤＲＬ３を含む。
上記方法の一部の実施形態において、抗イディオタイプ抗体または抗原結合性断片は、ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＲＬＳＣＴＴＳＧＦＮＩＫＤＳＦＩＨＷＶＫＱＲＴＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＥＤＤＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号１３）を含むＶＨ領域およびＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＬＧＥＴＶＴＩＥＣＬＡＳＥＤＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＳＰＱＬＬＩＹＤＡＳＳＬＱＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＥＳＧＴＱＹＳＬＥＩＮＳＬＱＳＥＤＡＡＴＹＦＣＱＱＨＨＤＹＰＬＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１４）を含むＶＬ；またはＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＲＬＳＣＴＴＳＧＦＮＩＫＤＳＦＩＨＷＶＫＱＲＴＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＥＤＤＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号１３）を含むＶＨ領域およびＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＬＧＥＴＶＴＩＥＣＲＡＳＥＤＩＹＮＧＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＳＰＱＬＬＩＹＮＡＮＳＬＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＹＳＬＫＩＮＳＬＱＳＥＤＶＡＳＹＦＣＱＱＹＹＮＹＰＹＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号１５）を含むＶＬを含む。
上記方法の一部の実施形態において、ＣＤ１２３－ＣＡＲのヒンジは、ＩｇＧヒンジまたは改変ＩｇＧヒンジである。上記方法の一部の実施形態において、ＣＤ１２３－ＣＡＲの共刺激性シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７共刺激性シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８共刺激性シグナル伝達ドメイン、４－１ＢＢ共刺激性シグナル伝達ドメインおよびＯＸ４０共刺激性シグナル伝達ドメインからなる群から選択される。上記方法の一部の実施形態において、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ４、ＣＤ８、４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０、ＨＶＥＭまたはＣＤ３０の膜貫通部分を含む。上記方法の一部の実施形態において、ＣＤ１２３－ＣＡＲのｓｃＦｖは、配列番号２０および２１、または配列番号２２および２３を含む。上記方法の一部の実施形態において、ＣＤ１２３－ＣＡＲは、配列番号４９または配列番号５０を含む。上記方法の一部の実施形態において、ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する免疫細胞は、Ｔ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞であり得る。
上記の一般的説明および以下の詳細な説明は、例示的および説明的なものであり、特許請求の範囲の本開示のさらなる説明を提供することが意図される。他の目的、利点および新規特色は、以下の図面の簡単な説明および本開示の詳細な説明から当業者に容易に明らかであろう。
本開示は、抗ＣＤ１２３抗体もしくはその断片またはＣＤ１２３－ＣＡＲの可変ドメインに結合する抗イディオタイプ抗体を提供する。したがって、本開示の抗イディオタイプ抗体は、抗ＣＤ１２３抗体または断片およびＣＤ１２３－ＣＡＲ Ｔ細胞を検出し、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞を区別し、ＣＤ１２３－ＣＡＲ Ｔ細胞を拡大および／または活性化するために使用され得る。開示される抗イディオタイプ抗体の検出および分析能は、ＣＡＲ Ｔ細胞製造プロセスおよびＣＤ１２３－ＣＡＲ Ｔ細胞の臨床適用の両方へ利益を与えることとなる。
Ｉ．定義
方法は、説明される特定の実施形態に限定されず、そのため、変動し得ることを理解すべきである。また、本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明する目的のためのみであり、限定であるとは意図されないことを理解すべきである。本技術の範囲は、附属の特許請求の範囲によってのみ限定されることとなる。
方法は、説明される特定の実施形態に限定されず、そのため、変動し得ることを理解すべきである。また、本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明する目的のためのみであり、限定であるとは意図されないことを理解すべきである。本技術の範囲は、附属の特許請求の範囲によってのみ限定されることとなる。
本明細書で使用される場合、ある特定の用語は、以下の定義された意味を有し得る。明細書および特許請求の範囲において使用される場合、「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」という単数形は、文脈が明らかに別のように指示しない限り、単数および複数の指示物を含む。例えば、「細胞（ａ ｃｅｌｌ）」という用語は、単一の細胞、およびその混合物を含む複数の細胞を含む。
本明細書で使用される場合、「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、組成物および方法が、列挙される要素を含むが、その他を除外しないことを意味すると意図される。「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」は、組成物および方法を定義するために使用される場合、組成物または方法にとっての任意の本質的な重要性の他の要素を除外することを意味する。「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」は、特許請求の範囲の組成物および実質的な方法ステップについての他の成分の微量元素を超えるものを除外することを意味する。これらの移行用語の各々によって定義される実施形態は、本開示の範囲内である。したがって、方法および組成物は、追加のステップおよび構成成分を含むか（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）、またはあるいは重要性のないステップおよび組成物を含むか（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）、またはあるいは言及される方法ステップまたは組成物のみを意図する（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）ことが意図される。
本明細書で使用される場合、「約」とは、特定される数字のみならずプラスまたはマイナス１０％を意味する。例えば、「約１０」は、「１０」および「９～１１」の両方として理解すべきである。
本明細書で使用される場合、「場合による」または「場合により」とは、続いて説明される事象または状況が発生しても、しなくてもよく、かつ説明が、前記事象または状況が発生する場合、およびそれが発生しない場合を含むことを意味する。
本明細書で使用される場合、「個体」、「患者」または「対象」という用語は、個々の生物、脊椎動物、哺乳動物（例えば、ウシ、イヌ、ネコもしくはウマ）またはヒトであり得る。好ましい実施形態において、個体、患者または対象は、ヒトである。
本明細書で使用される場合、「単離された抗体」という用語は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含有しない抗体を指すと意図される（例えば、単離された抗イディオタイプ抗体は、抗ＣＤ１２３抗体またはＣＤ１２３－ＣＡＲのイディオタイプに結合しない抗体を実質的に含有しない）。しかしながら、抗ＣＤ１２３抗体またはＣＤ１２３－ＣＡＲのイディオタイプに特異的に結合する単離された抗体は、他のタンパク質への交差反応性を有する場合がある。しかしながら、抗体は、好ましくは、抗ＣＤ１２３抗体またはＣＤ１２３－ＣＡＲのイディオタイプに常に結合する。加えて、単離された抗体は、典型的に、他の細胞物質および／または化学物質を実質的に含有しない。
本明細書で使用される場合、「ヒト化抗体」という用語は、ヒト以外の哺乳動物に由来する抗体のＣＤＲと、ヒト抗体のフレームワーク（ＦＲ）領域および定常領域とを含む抗体を指す。ヒト体内におけるヒト化抗体の抗原性は低いので、ヒト化抗体は、本開示による治療剤において有効な構成成分として有用である。
本明細書で使用される場合、「組換えヒト抗体」という用語は、組換え手段によって調製、発現、作出または単離されたすべてのヒト抗体を含み、（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックもしくはトランスクロモソーマルである動物（例えばマウス）またはそれから調製されたハイブリドーマから単離された抗体、（ｂ）抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から（例えばトランスフェクトーマから）単離された抗体、（ｃ）組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、および（ｄ）ヒト免疫グロブリン遺伝子配列の、他のＤＮＡ配列へのスプライシングに関与する任意の他の手段によって調製、発現、作出または単離された抗体を含むが、これらに限定されない。そのような組換えヒト抗体は、ヒト生殖細胞系および／または非生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変および定常領域を有する。しかしながら、ある特定の実施形態において、そのような組換えヒト抗体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ変異誘発（またはヒトＩｇ配列についてトランスジェニックである動物が使用される場合、ｉｎ ｖｉｖｏ体細胞変異誘発）に供してもよく、したがって、組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系ＶＨおよびＶＬ配列に由来し、これに関連するが、ｉｎ ｖｉｖｏでヒト抗体生殖細胞系レパートリー内に天然に存在しない場合がある配列である。
本明細書で使用される場合、「グリコシル化パターン」という用語は、タンパク質に、特に免疫グロブリンタンパク質に共有結合している炭水化物単位のパターンとして定義される。
本明細書で使用される場合、「治療有効量」および「治療的レベル」という句は、それぞれ、処置を必要とする対象において、薬物が投与される理由である特定の薬理学的効果を提供する、すなわち、がん、悪性疾患またはがん細胞増殖の症状または効果を低減、改善または除去するための、対象における薬物投与量または血漿濃度を意味する。治療有効量または治療的レベルの薬物は、当業者によって治療有効量であるとみなされるが、そのような投与量が、本明細書で説明される状態／疾患の処置において常に有効であるというわけではないであろうことが強調される。治療有効量は、他の因子の中でも、投与経路および剤形、対象の年齢および体重、ならびに／またはがん、悪性疾患もしくはがん細胞増殖の種類および段階を含む対象の状態に基づいて変動し得る。
「処置」または「処置すること」という用語は、がん、悪性疾患またはがん細胞増殖に関して本明細書で使用される場合、がん、悪性疾患またはがん細胞増殖の１つまたは複数の症状または効果を低減、改善または除去することを指す。
ＩＩ．抗イディオタイプ抗体
ＣＤ１２３結合タンパク質またはペプチドの可変ドメインに結合する抗イディオタイプ抗体が、本明細書で提供される。開示される抗イディオタイプ抗体およびその機能的断片は、抗ＣＤ１２３抗体またはＣＤ１２３－ＣＡＲなどの、ＣＤ１２３結合タンパク質またはペプチドを検出および評価するための様々な機能特性を有することとなる。
ＣＤ１２３結合タンパク質またはペプチドの可変ドメインに結合する抗イディオタイプ抗体が、本明細書で提供される。開示される抗イディオタイプ抗体およびその機能的断片は、抗ＣＤ１２３抗体またはＣＤ１２３－ＣＡＲなどの、ＣＤ１２３結合タンパク質またはペプチドを検出および評価するための様々な機能特性を有することとなる。
開示される抗イディオタイプ抗体は、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、ヒト、部分的ヒト化もしくは完全ヒト化、および／または組換え抗体であり得る。
ポリクローナル抗体は、選択された動物を、抗ＣＤ１２３抗体またはＣＤ１２３－ＣＡＲの可変ドメインの部分のすべてを含む抗原により免疫化し、動物から血清を収集し、血清から抗体を単離および／または精製することによるなどの、当該技術分野において公知の方法によって得ることができる。モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、当該技術分野において公知の方法によって、例えば、抗体産生細胞を不死化細胞と融合してハイブリドーマを得ることによって、ならびに／またはコンビナトリアル抗体ライブラリー技術を使用して免疫化した動物の骨髄および脾臓細胞から抽出したｍＲＮＡからｍＡｂを生成することによって、得ることができる。組換え抗体は、当該技術分野において公知の方法によって、例えば、ファージもしくは酵母ディスプレイ技術を使用して、および／または抗体ポリペプチドを発現もしくは共発現して、得ることができる。抗体を製造するための他の技法は、当該技術分野において公知であり、本明細書で説明される方法において使用される抗体を得るために使用することができる。開示される抗体は、非限定的に、ラット、マウス、ブタ、ヤギ、ウシ、ウマまたはヒトを含む、好適な動物に由来し得る。
典型的に、抗体は、４つのポリペプチド：重（Ｈ）鎖ポリペプチドの２つの同一のコピーおよび軽（Ｌ）鎖ポリペプチドの２つのコピーからなる。典型的に、各重鎖は、１つのＮ末端可変（ＶＨ）領域および３つのＣ末端定常（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）領域を含有し、各軽鎖は、１つのＮ末端可変（ＶＬ）領域および１つのＣ末端定常（ＣＬ）領域を含有する。軽鎖および重鎖の各対の可変領域は、抗体の抗原結合部位を形成する。
「結合性断片」または「機能的断片」という用語は、本明細書で使用される場合、抗ＣＤ１２３抗体またはＣＤ１２３－ＣＡＲの可変ドメインに結合する能力を保持する、抗イディオタイプ抗体の１つまたは複数の断片を指す。結合性断片の例には、（ｉ）Ｆａｂ断片（ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価の断片）；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片（ヒンジ領域におけるジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価の断片）；（ｉｉｉ）Ｆｄ断片（ＶＨおよびＣＨ１ドメインを含む）；（ｉｖ）Ｆｖ断片（抗体の単一のアームのＶＬおよびＶＨドメインを含む）；（ｖ）ｄＡｂ断片（ＶＨドメインを含む）；ならびに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、例えばＶＨ ＣＤＲ３が含まれる。他の例には、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）構築物が含まれる。例えば、Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４２：４２３～２６（１９８８）；Ｈｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ、８５：５８７９～８３（１９８８）を参照されたい。
一部の実施形態において、抗イディオタイプ抗体またはその断片は、以下の表１および２で開示される例示的なＣＤＲ配列を含み得る。
表１および２で開示されるＣＤＲ配列への置換または他の変更は、許容され得るが、それでも、抗イディオタイプ抗体が、例えば抗ＣＤ１２３抗体またはその断片の、可変ドメインに結合することを可能にすることを理解すべきである。したがって、ＣＤＲ配列内のアミノ酸の一部は、可変であり、変化してもよい。
例えば、一部の実施形態において、開示される抗イディオタイプ抗体のＣＤＲＬ１は、ＥＤＩＹＸ１Ｘ２（配列番号１０）を含む場合があり、ここで、Ｘ１は、極性アミノ酸であり；Ｘ２は、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、システイン（Ｃ）、グリシン（Ｇ）およびプロリン（Ｐ）からなる群から選択される。一部の実施形態において、Ｘ１は、セリン（Ｓ）またはアスパラギン（Ｎ）である。一部の実施形態において、Ｘ２は、アスパラギン（Ｎ）またはグリシン（Ｇ）である。
一部の実施形態において、開示される抗イディオタイプ抗体のＣＤＲＬ２は、Ｘ３ＡＸ４（配列番号１１）を含む場合があり、ここで、Ｘ３は、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、アスパラギン（Ｎ）およびグルタミン（Ｑ）からなる群から選択され；Ｘ４は、極性アミノ酸である。一部の実施形態において、Ｘ３は、アスパラギン酸（Ｄ）またはアスパラギン（Ｎ）である。一部の実施形態において、Ｘ４は、セリン（Ｓ）またはアスパラギン（Ｎ）である。
一部の実施形態において、開示される抗イディオタイプ抗体のＣＤＲＬ３は、ＱＱＸ５Ｘ６Ｘ７ＹＰＸ８Ｔ（配列番号１２）を含む場合があり、ここで、Ｘ５およびＸ６は、独立に、アルギニン（Ｒ）、ヒスチジン（Ｈ）、リジン（Ｋ）、アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）およびトリプトファン（Ｗ）からなる群から選択され；Ｘ７は、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、アスパラギン（Ｎ）およびグルタミン（Ｑ）からなる群から選択され；Ｘ８は、アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）およびトリプトファン（Ｗ）からなる群から選択される。一部の実施形態において、Ｘ５は、ヒスチジン（Ｈ）またはチロシン（Ｙ）である。一部の実施形態において、Ｘ６は、ヒスチジン（Ｈ）またはチロシン（Ｙ）である。一部の実施形態において、Ｘ７は、アスパラギン酸（Ｄ）またはアスパラギン（Ｎ）である。一部の実施形態において、Ｘ８は、ロイシン（Ｌ）またはチロシン（Ｙ）である。
一部の実施形態において、開示される抗イディオタイプ抗体の、Ｘ１は、セリン（Ｓ）またはアスパラギン（Ｎ）であり；Ｘ２は、アスパラギン（Ｎ）またはグリシン（Ｇ）であり；Ｘ３は、アスパラギン酸（Ｄ）またはアスパラギン（Ｎ）であり；Ｘ４は、セリン（Ｓ）またはアスパラギン（Ｎ）であり；Ｘ５およびＸ６は、ヒスチジン（Ｈ）またはチロシン（Ｙ）であり；Ｘ７は、アスパラギン酸（Ｄ）またはアスパラギン（Ｎ）であり；Ｘ８は、ロイシン（Ｌ）またはチロシン（Ｙ）である。
開示される抗イディオタイプ抗体の一部の実施形態は、ＧＦＮＩＫＤＳＦ（配列番号１）を含むＣＤＲＨ１、ＩＤＰＥＤＤＥＴ（配列番号２）を含むＣＤＲＨ２、およびＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹ（配列番号３）を含むＣＤＲＨ３、ならびにＥＤＩＹＳＮ（配列番号４）を含むＣＤＲＬ１、ＤＡＳ（配列番号５）を含むＣＤＲＬ２、およびＱＱＨＨＤＹＰＬＴ（配列番号６）を含むＣＤＲＬ３；またはＧＦＮＩＫＤＳＦ（配列番号１）を含むＣＤＲＨ１、ＩＤＰＥＤＤＥＴ（配列番号２）を含むＣＤＲＨ２、およびＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹ（配列番号３）を含むＣＤＲＨ３、ならびにＥＤＩＹＮＧ（配列番号７）を含むＣＤＲＬ１、ＮＡＮ（配列番号８）を含むＣＤＲＬ２、およびＱＱＹＹＮＹＰＹＴ（配列番号９）を含むＣＤＲＬ３を含み得る。
また、開示される抗イディオタイプ抗体または結合性断片は、可変重鎖ドメイン（ＶＨ）および可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）を含み得る。例えば、抗イディオタイプ抗体またはその断片のＶＨ領域は、ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＲＬＳＣＴＴＳＧＦＮＩＫＤＳＦＩＨＷＶＫＱＲＴＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＥＤＤＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号１３）を含む場合があり；抗イディオタイプ抗体またはその断片のＶＬ領域は、ＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＬＧＥＴＶＴＩＥＣＬＡＳＥＤＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＳＰＱＬＬＩＹＤＡＳＳＬＱＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＥＳＧＴＱＹＳＬＥＩＮＳＬＱＳＥＤＡＡＴＹＦＣＱＱＨＨＤＹＰＬＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１４）；またはＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＬＧＥＴＶＴＩＥＣＲＡＳＥＤＩＹＮＧＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＳＰＱＬＬＩＹＮＡＮＳＬＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＹＳＬＫＩＮＳＬＱＳＥＤＶＡＳＹＦＣＱＱＹＹＮＹＰＹＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号１５）を含む場合がある。加えて、一部の実施形態において、開示される抗体および断片は、それらのフレームワーク領域への様々な改変（すなわち、置換、付加または欠失）を含み得る。実際に、開示されるＣＤＲおよび可変領域は、例えばヒト、マウスまたはラットＩｇＧ、例えばＩｇＧ２ａを含む様々なＦｃ形式に容易に適合され得る。一部の実施形態において、抗イディオタイプ抗体は、ビオチニル化しても、ビオチニル化しなくてもよい。
開示される抗体または抗原結合性断片は、以下の表３に示される核酸配列のうちの１つまたは複数によってコードされ得る。開示される抗体および断片をコードする核酸配列を、例えば発現ベクターへ組み込んで、開示される抗体または断片の組換え発現を可能にすることができる。
開示される抗体または抗原結合性断片は、抗ＣＤ１２３抗体または抗ＣＤ１２３抗原結合性断片のイディオタイプに特異的に結合する。例えば、開示される抗体または抗原結合性断片は、ＤＶＱＩＴＱＳＰＳＹＬＡＡＳＰＧＥＴＩＴＩＮＣＲＡＳＫＳＩＳＫＤＬＡＷＹＱＥＫＰＧＫＴＮＫＬＬＩＹＳＧＳＴＬＱＳＧＩＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＭＹＹＣＱＱＨＮＫＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号２０）のＶＬドメインおよび／またはＱＶＱＬＱＱＰＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＮＷＶＫＱＲＰＤＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＹＤＳＥＴＨＹＮＱＫＦＫＤＫＡＩＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＮＷＤＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号２１）のＶＨドメインを含む抗ＣＤ１２３抗体または抗ＣＤ１２３抗原結合性断片（例えばｓｃＦｖ）に特異的に結合し得る。あるいは、開示される抗体または抗原結合性断片は、ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＮＴＦＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＡＳＮＬＥＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＲＴＤＦＴＬＴＩＮＰＶＥＡＤＤＶＡＴＹＹＣＱＱＳＮＥＤＰＰＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号２２）のＶＬドメインおよび／またはＱＩＱＬＶＱＳＧＰＥＬＫＫＰＧＥＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＩＦＴＮＹＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＫＳＦＫＷＭＧＷＩＮＴＹＴＧＥＳＴＹＳＡＤＦＫＧＲＦＡＦＳＬＥＴＳＡＳＴＡＹＬＨＩＮＤＬＫＮＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＳＧＧＹＤＰＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号２３）のＶＨドメインを含む抗ＣＤ１２３抗体または抗ＣＤ１２３抗原結合性断片（例えばｓｃＦｖ）に特異的に結合し得る。抗ＣＤ１２３抗原結合性断片は、単離された断片であってもよく、またはそれは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）などのより大きな構築物へ組み込まれていてもよい。
一般的に、開示される抗イディオタイプ抗体および断片によって結合され得るＣＤ１２３－ＣＡＲは、（ａ）ヒンジおよび／またはリンカー、例えばＩｇＧヒンジまたは改変ＩｇＧヒンジ、（ｂ）膜貫通ドメイン、（ｃ）１つまたは複数の共刺激性シグナル伝達ドメイン（単数または複数）ならびに（ｄ）Ｔ細胞受容体ゼータ鎖シグナル伝達ドメイン（例えばＣＤ３ζドメイン）を含み得る。
共刺激性シグナル伝達ドメイン（単数または複数）は、例えば、ＣＤ２７共刺激性シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８共刺激性シグナル伝達ドメイン（もしくは改変ＣＤ２８ドメイン）、４－１ＢＢ共刺激性シグナル伝達ドメインおよびＯＸ４０共刺激性シグナル伝達ドメインまたはこれらの組合せからなる群から選択され得ることを当業者は理解するであろう。１つの共刺激性ドメインを含み得るＣＡＲもあれば、２つまたは３つの共刺激性ドメインを含有し得るＣＡＲもある。例示的な共刺激性ドメインを、以下の表に示す。
膜貫通ドメインは、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ４、ＣＤ８、４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０、ＨＶＥＭまたはＣＤ３０の膜貫通部分から選択され得ることを当業者は理解するであろう。例示的な膜貫通ドメインを、以下の表に示す。
ヒンジまたはリンカーは、例えば、ＩｇＧ４ヒンジもしくはその誘導体、ＩｇＧ２ヒンジもしくはその誘導体、ＣＤ２８ヒンジ、またはＣＤ８ヒンジ、または別の好適なペプチドリンカー、例えばＧもしくはＳ反復から選択され得ることを当業者は理解するであろう。例示的なヒンジ／リンカードメインを、以下の表に示す。
一部の実施形態において、ＣＤ１２３－ＣＡＲは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン（ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ；配列番号４８）を含み得る。
請求項２１に記載の抗体または抗原結合性断片において、ＣＤ１２３ ＣＡＲは、アミノ酸配列：
QVQLQQPGAELVRPGASVKLSCKASGYTFTSYWMNWVKQRPDQGLEWIGRIDPYDSETHYNQKFKDKAILTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARGNWDDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDVQITQSPSYLAASPGETITINCRASKSISKDLAWYQEKPGKTNKLLIYSGSTLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAMYYCQQHNKYPYTFGGGTKLEIKESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRGGHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSGGGRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR（配列番号４９）；または
QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYIFTNYGMNWVKQAPGKSFKWMGWINTYTGESTYSADFKGRFAFSLETSASTAYLHINDLKNEDTATYFCARSGGYDPMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDNYGNTFMHWYQQKPGQPPKLLIYRASNLESGIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEADDVATYYCQQSNEDPPTFGAGTKLELKESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRGGHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSGGGRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR（配列番号５０）
を含む。
QVQLQQPGAELVRPGASVKLSCKASGYTFTSYWMNWVKQRPDQGLEWIGRIDPYDSETHYNQKFKDKAILTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARGNWDDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDVQITQSPSYLAASPGETITINCRASKSISKDLAWYQEKPGKTNKLLIYSGSTLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAMYYCQQHNKYPYTFGGGTKLEIKESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRGGHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSGGGRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR（配列番号４９）；または
QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYIFTNYGMNWVKQAPGKSFKWMGWINTYTGESTYSADFKGRFAFSLETSASTAYLHINDLKNEDTATYFCARSGGYDPMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDNYGNTFMHWYQQKPGQPPKLLIYRASNLESGIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEADDVATYYCQQSNEDPPTFGAGTKLELKESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRGGHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSGGGRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR（配列番号５０）
を含む。
ＣＤ１２３－ＣＡＲは、リーダー配列または代理タグなどの追加の構成成分を場合により含み得る。例示的なリーダー配列は、ＭＬＬＬＶＴＳＬＬＬＣＥＬＰＨＰＡＦＬＬＩＰ（配列番号５１）である。代理タグには、ＣＡＲ（例えばＣＤ１２３－ＣＡＲ）を発現するために核酸により形質転換された細胞を特定するために使用され得る、ＣＤ１９、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＣＤ３４およびＮＧＦＲなどの短縮型タンパク質が含まれるが、これらに限定されない。例示的な代理タグ配列には、短縮型ＥＧＦＲ（「ＥＧＦＲｔ」）：
MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPRKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNCTSISGDLHILPVAFRGDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHAFENLEIIRGRTKQHGQFSLAVVSLNITSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWKKLFGTSGQKTKIISNRGENSCKATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCNLLEGEPREFVENSECIQCHPECLPQAMNITCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVMGENNTLVWKYADAGHVCHLCHPNCTYGCTGPGLEGCPTNGPKIPSIATGMVGALLLLLVVALGIGLFMGMCSFRAシグナルペプチド（配列番号５２）、および短縮型ＣＤ１９（「ＣＤ１９ｔ」）：
MPPPRLLFFLLFLTPMEVRPEEPLVVKVEEGDNAVLQCLKGTSDGPTQQLTWSRESPLKPFLKLSLGLPGLGIHMRPLAIWLFIFNVSQQMGGFYLCQPGPPSEKAWQPGWTVNVEGSGELFRWNVSDLGGLGCGLKNRSSEGPSSPSGKLMSPKLYVWAKDRPEIWEGEPPCVPPRDSLNQSLSQDLTMAPGSTLWLSCGVPPDSVSRGPLSWTHVHPKGPKSLLSLELKDDRPARDMWVMETGLLLPRATAQDAGKYYCHRGNLTMSFHLEITARPVLWHWLLRTGGWKVSAVTLAYLIFCLCSLVGILHLQRALVLRRKR（配列番号５３）が含まれる。代理タグは、一般に、切断Ｔ２Ａリンカー：LEGGGEGRGSLLTCGDVEENPGPR（配列番号５４）
を介してＣＡＲに連結されている。
MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPRKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNCTSISGDLHILPVAFRGDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHAFENLEIIRGRTKQHGQFSLAVVSLNITSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWKKLFGTSGQKTKIISNRGENSCKATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCNLLEGEPREFVENSECIQCHPECLPQAMNITCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVMGENNTLVWKYADAGHVCHLCHPNCTYGCTGPGLEGCPTNGPKIPSIATGMVGALLLLLVVALGIGLFMGMCSFRAシグナルペプチド（配列番号５２）、および短縮型ＣＤ１９（「ＣＤ１９ｔ」）：
MPPPRLLFFLLFLTPMEVRPEEPLVVKVEEGDNAVLQCLKGTSDGPTQQLTWSRESPLKPFLKLSLGLPGLGIHMRPLAIWLFIFNVSQQMGGFYLCQPGPPSEKAWQPGWTVNVEGSGELFRWNVSDLGGLGCGLKNRSSEGPSSPSGKLMSPKLYVWAKDRPEIWEGEPPCVPPRDSLNQSLSQDLTMAPGSTLWLSCGVPPDSVSRGPLSWTHVHPKGPKSLLSLELKDDRPARDMWVMETGLLLPRATAQDAGKYYCHRGNLTMSFHLEITARPVLWHWLLRTGGWKVSAVTLAYLIFCLCSLVGILHLQRALVLRRKR（配列番号５３）が含まれる。代理タグは、一般に、切断Ｔ２Ａリンカー：LEGGGEGRGSLLTCGDVEENPGPR（配列番号５４）
を介してＣＡＲに連結されている。
代理タグは、一般に、品質管理目的のために使用されるが、それらは、いくつかの欠点を提示する。例えば、代理タグは、ＣＡＲおよび代理タグを発現する細胞を特定し得るが、それらは、ＣＡＲを識別することができない。したがって、これは、多種類のＣＡＲ発現細胞を産生し、これらを区別しなければならない施設においては問題を提示し得る。開示される抗イディオタイプ抗体および断片は、細胞特異的ではなく、ＣＡＲ特異的であり、同じ代理タグを有するＣＡＲが細胞において発現される場合でさえも、当業者が多数のＣＡＲを区別することを可能にする。
開示される抗イディオタイプ抗体および機能的断片の結合親和性または機能を損なうことなく、開示される配列に、ある特定の変化を与えることができることを、当業者は理解するであろう。したがって、一部の実施形態において、抗イディオタイプ抗体または断片は、開示される配列（例えば配列番号１～９および１３～１５）との約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％または約９９％の配列同一性を共有することとなる。
一部の実施形態において、本開示は、抗イディオタイプ抗体またはその断片、例えば配列番号１～９および１３～１５をコードする単離された核酸配列を提供する。
開示される抗イディオタイプ抗体およびその断片は、標的対象への投与のために好適な医薬組成物において製剤化されるか；様々な診断、品質保証もしくは臨床適用のための固体支持体に固定化されるか；または形質導入された細胞の検出におけるもしくは形質導入された細胞のアクチベーターとしての、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの使用のために製剤化され得る。
ＩＩＩ．本開示の抗イディオタイプ抗体または断片を使用する方法
開示される抗イディオタイプ抗体および断片は、様々な製造、品質管理、診断および臨床適用に有用である。
開示される抗イディオタイプ抗体および断片は、様々な製造、品質管理、診断および臨床適用に有用である。
一態様において、開示される抗イディオタイプ抗体および断片は、試料を、ＣＤ１２３－ＣＡＲまたは抗ＣＤ１２３抗体のイディオタイプに特異的に結合する抗イディオタイプ抗体または抗原結合性断片と接触させ、結合した抗イディオタイプ抗体の量を定量することによって、試料中のＣＤ１２３－ＣＡＲまたは抗ＣＤ１２３抗体の存在を検出するために使用され得る。そのような方法は、ＣＤ１２３－ＣＡＲまたは抗ＣＤ１２３抗体を発現する細胞数の定量を可能にする。検出法および定量法の目的のために、開示される抗イディオタイプ抗体は、ＥＬＩＳＡ形式においてまたはフローサイトメトリーアッセイにおいて使用されて、ＣＤ１２３－ＣＡＲまたは抗ＣＤ１２３抗体を検出および／または定量することができる。開示される検出法および定量法の一部の実施形態において、開示される抗イディオタイプ抗体は、免疫組織化学に使用してもよい。
試料は、細胞培養培地であってもよく（例えば、ＣＤ１２３－ＣＡＲ発現細胞の製造もしくは拡大中の定量の場合）、または試料は、ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する免疫細胞により処置された対象からの血液試料であってもよい（例えば、患者の循環中の細胞の残留性を決定するため、もしくは患者が十分な用量を受容したかどうかを決定するため）。
開示される抗イディオタイプ抗体または断片が患者からの血液試料中のＣＤ１２３－ＣＡＲ細胞の残留性または相対的用量を決定するために使用される臨床適用の目的のために、方法は、ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する免疫細胞の量が事前設定閾値未満であると決定された場合、ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現するさらなる免疫細胞の投与を推奨する工程をさらに含み得る。対照的に、そのような方法は、ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する免疫細胞の量が事前設定閾値を超えていると決定された場合、ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現するさらなる免疫細胞の投与を控えることを推奨する工程をさらに含み得る。あるいは、方法は、血液を、例えば、ＧＦＮＩＫＤＳＦ（配列番号１）を含むＣＤＲＨ１、ＩＤＰＥＤＤＥＴ（配列番号２）を含むＣＤＲＨ２、およびＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹ（配列番号３）を含むＣＤＲＨ３、ならびにＥＤＩＹＳＮ（配列番号４）を含むＣＤＲＬ１、ＤＡＳ（配列番号５）を含むＣＤＲＬ２、およびＱＱＨＨＤＹＰＬＴ（配列番号６）を含むＣＤＲＬ３；またはＧＦＮＩＫＤＳＦ（配列番号１）を含むＣＤＲＨ１、ＩＤＰＥＤＤＥＴ（配列番号２）を含むＣＤＲＨ２、およびＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹ（配列番号３）を含むＣＤＲＨ３、ならびにＥＤＩＹＮＧ（配列番号７）を含むＣＤＲＬ１、ＮＡＮ（配列番号８）を含むＣＤＲＬ２、およびＱＱＹＹＮＹＰＹＴ（配列番号９）を含むＣＤＲＬ３を含む抗イディオタイプ抗体またはその断片を含む固体支持体と接触させ、これによって、対象の血液からＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する免疫細胞を隔離し、次に、ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する免疫細胞を除去した血液を、対象へ投与して戻すことによって、対象の血液からＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する免疫細胞を除去する工程をさらに含み得る。ＣＤ１２３は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の処置において利用されている標的であり、それゆえ、そのような臨床適用の一部の実施形態において、患者は、ＡＭＬを有するか、またはＡＭＬを有することが疑われ得る。しかしながら、また、ＣＤ１２３は、芽球形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＢＰＤＣＮ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）または有毛細胞白血病などの他の血液がんまたは状態において有用な標的であり得る。
加えて、開示される抗イディオタイプ抗体および断片は、ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現することが疑われる免疫細胞を含む試料を、抗イディオタイプ抗体または抗原結合性断片を含む固体支持体と接触させ、これによって、試料からＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する免疫細胞を単離することによって、試料からＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する免疫細胞を単離するために使用され得る。一部の実施形態において、試料は、細胞培養培地であってもよく、一方で一部の実施形態において、試料は、ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する免疫細胞により処置された対象からの血液試料であってもよい。一部の実施形態において、固体支持体は、抗イディオタイプ抗体または断片が連結されているカラムまたはビーズを含み得る。
Ｔ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などのＣＡＲ発現細胞の製造中、産生ステップのうちの１つは、形質導入された細胞集団を拡大するために、細胞が発現するＣＡＲを活性化することである。活性化および拡大のプロセスは、ＣＡＲ発現細胞をＣＡＲのリガンドと接触させることを含み得る。開示される抗イディオタイプ抗体または断片は、ＣＤ１２３－ＣＡＲの可変ドメインに結合し、それゆえ、受容体を刺激し、したがってＴ細胞を活性化し、ＣＤ１２３－ＣＡＲ発現集団を拡大し得る。したがって、本開示は、ＣＤ１２３－ＣＡＲ発現細胞（例えばＴ細胞またはＮＫ細胞）集団を活性化および／または拡大する方法であって、ＣＤ１２３－ＣＡＲ発現細胞集団をｉｎ ｖｉｔｒｏで開示される抗体またはその断片と接触させることを含む方法を提供する。
上記方法の一部の実施形態において、抗イディオタイプ抗体または抗原結合性断片は、ＧＦＮＩＫＤＳＦ（配列番号１）を含むＣＤＲＨ１、ＩＤＰＥＤＤＥＴ（配列番号２）を含むＣＤＲＨ２、およびＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹ（配列番号３）を含むＣＤＲＨ３、ならびにＥＤＩＹＳＮ（配列番号４）を含むＣＤＲＬ１、ＤＡＳ（配列番号５）を含むＣＤＲＬ２、およびＱＱＨＨＤＹＰＬＴ（配列番号６）を含むＣＤＲＬ３；またはＧＦＮＩＫＤＳＦ（配列番号１）を含むＣＤＲＨ１、ＩＤＰＥＤＤＥＴ（配列番号２）を含むＣＤＲＨ２、およびＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹ（配列番号３）を含むＣＤＲＨ３、ならびにＥＤＩＹＮＧ（配列番号７）を含むＣＤＲＬ１、ＮＡＮ（配列番号８）を含むＣＤＲＬ２、およびＱＱＹＹＮＹＰＹＴ（配列番号９）を含むＣＤＲＬ３を含む。
上記方法の一部の実施形態において、抗イディオタイプ抗体または抗原結合性断片は、ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＲＬＳＣＴＴＳＧＦＮＩＫＤＳＦＩＨＷＶＫＱＲＴＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＥＤＤＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号１３）を含むＶＨ領域およびＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＬＧＥＴＶＴＩＥＣＬＡＳＥＤＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＳＰＱＬＬＩＹＤＡＳＳＬＱＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＥＳＧＴＱＹＳＬＥＩＮＳＬＱＳＥＤＡＡＴＹＦＣＱＱＨＨＤＹＰＬＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１４）を含むＶＬ；またはＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＲＬＳＣＴＴＳＧＦＮＩＫＤＳＦＩＨＷＶＫＱＲＴＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＥＤＤＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号１３）を含むＶＨ領域およびＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＬＧＥＴＶＴＩＥＣＲＡＳＥＤＩＹＮＧＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＳＰＱＬＬＩＹＮＡＮＳＬＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＹＳＬＫＩＮＳＬＱＳＥＤＶＡＳＹＦＣＱＱＹＹＮＹＰＹＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号１５）を含むＶＬを含む。
上記方法の一部の実施形態において、ＣＤ１２３－ＣＡＲのヒンジは、ＩｇＧヒンジまたは改変ＩｇＧヒンジである。上記方法の一部の実施形態において、ＣＤ１２３－ＣＡＲの共刺激性シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７共刺激性シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８共刺激性シグナル伝達ドメイン、４－１ＢＢ共刺激性シグナル伝達ドメインおよびＯＸ４０共刺激性シグナル伝達ドメインからなる群から選択される。上記方法の一部の実施形態において、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ４、ＣＤ８、４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０、ＨＶＥＭまたはＣＤ３０の膜貫通部分を含む。上記方法の一部の実施形態において、ＣＤ１２３－ＣＡＲのｓｃＦｖは、配列番号２０および２１、または配列番号２２および２３を含む。上記方法の一部の実施形態において、ＣＤ１２３－ＣＡＲは、配列番号４９または配列番号５０を含む。上記方法の一部の実施形態において、ＣＤ１２３－ＣＡＲが発現する免疫細胞は、Ｔ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞であり得る。
以下の実施例は、本発明を例示するために示される。しかしながら、本発明は、これらの実施例において説明される特定の状態または詳細に限定されるものではないことを理解すべきである。
ｉｎ ｖｉｔｒｏでＣＤ１２３－ＣＡＲ Ｔ細胞を識別するための方法
序論
本プロトコールは、抗イディオタイプ抗体およびフローサイトメトリーを使用して、ＣＤ１２３－ＣＡＲ発現細胞製品の放出についての照合方法を認定することを意図した。このアッセイは、ＣＤ１２３ ＣＡＲのイディオタイプに対して特異的に方向付けられている抗イディオタイプ抗体を使用した。
序論
本プロトコールは、抗イディオタイプ抗体およびフローサイトメトリーを使用して、ＣＤ１２３－ＣＡＲ発現細胞製品の放出についての照合方法を認定することを意図した。このアッセイは、ＣＤ１２３ ＣＡＲのイディオタイプに対して特異的に方向付けられている抗イディオタイプ抗体を使用した。
目的
この認定は、ＣＤ１２３－ＣＡＲ発現細胞での使用のためのフローサイトメトリーベースの照合アッセイを査定した。
この認定は、ＣＤ１２３－ＣＡＲ発現細胞での使用のためのフローサイトメトリーベースの照合アッセイを査定した。
本プロトコールは、以下の基準を査定した：システム適合性、特異性、検出限界、再現性および中間精度。
試験材料は、３ロットのＣＤ１２３－ＣＡＲ発現細胞、１ロットのＣＳ１－ＣＡＲ発現細胞、形質導入していない初代Ｔ細胞およびＣＤ－ＣＨＥＸ－ＰＬＵＳ（正常なヒト末梢血白血球および赤血球から製造された安定化血液）を含んだ。
材料および設備
すべての設備は、使用前に認定または較正されることとなる。
すべての設備は、使用前に認定または較正されることとなる。
試薬
手技
Ｔ細胞および細胞製品の調製
各細胞種の必要な数のバイアルを、－１５０℃の冷凍庫から得た。バイアルを、氷の裂片のみが残るまで３７℃の水浴中において融解し、融解中はバイアルを振盪または撹拌しなかった。
Ｔ細胞および細胞製品の調製
各細胞種の必要な数のバイアルを、－１５０℃の冷凍庫から得た。バイアルを、氷の裂片のみが残るまで３７℃の水浴中において融解し、融解中はバイアルを振盪または撹拌しなかった。
１０００μＬのピペットを使用して、融解した細胞を、各々の１５ｍＬの遠心分離管に入れた。１０ｍＬのＣＴＳ ＯｐＴｍｉｚｅｒ媒体を、各１５ｍＬ管に添加した。管を、２００ｘＧにおいて６分間遠心分離し、上清を捨てた。
細胞ペレットを、５ｍＬのＣＴＳ ＯｐＴｍｉｚｅｒ媒体中に再懸濁し、各々のＴ２５フラスコに、および３７℃のインキュベーターに少なくとも１時間入れた。このインキュベーション後、細胞懸濁液を、各々の１５ｍＬの遠心分離管に移し、８００ｘＧにおいて３分間遠心分離した。上清を捨て、細胞ペレットをフローサイトメトリー染色緩衝液中に再懸濁して、１００μＬ当たり細胞５ｅ５個の密度を得た。
ＣＤ ＣＨＥＸ ＰＬＵＳの調製
ＣＤ ＣＨＥＸ ＰＬＵＳのバイアルを、使用前に冷蔵庫から取り出し、室温（１８～３０℃）まで１５分間温めた。その後、バイアルを手掌の間で水平に保持し、バイアルを前後に２０～３０秒間回転させた。穏やかに反転（少なくとも８～１０回）させることにより、すべての細胞が完全に懸濁されるまで製品を混合した。バイアルをベンチで３０分間静置する場合は、試料採取直前にバイアルを５回穏やかに反転する。
ＣＤ ＣＨＥＸ ＰＬＵＳのバイアルを、使用前に冷蔵庫から取り出し、室温（１８～３０℃）まで１５分間温めた。その後、バイアルを手掌の間で水平に保持し、バイアルを前後に２０～３０秒間回転させた。穏やかに反転（少なくとも８～１０回）させることにより、すべての細胞が完全に懸濁されるまで製品を混合した。バイアルをベンチで３０分間静置する場合は、試料採取直前にバイアルを５回穏やかに反転する。
２００μＬのＣＤ Ｃｈｅｘ Ｐｌｕｓ試薬を、１５ｍＬ管へ１ウェル当たり一定分量取り、元のバイアルを、最大の開封バイアル安定性を確実にするために冷蔵へ戻した。３ｍＬのＡＣＫ溶解物を添加し、上下に３回ピペッティングを行うことによって混合した。その後、バイアルを室温において１０±１分間インキュベートした。
細胞を、８００ｘＧにおいて室温にて３分間遠心分離し、上清を除去し、その後、細胞を２００μＬの染色緩衝液中に再懸濁した。
抗体カクテル調製物
１ウェルについてのカクテル計算を示す。
１ウェルについてのカクテル計算を示す。
抗イディオタイプ一次抗体カクテル（すべてのアッセイは、配列番号１３のＶＨおよび配列番号１５のＶＬを含む抗体を利用した）。
抗ＥＧＦＲ一次抗体カクテル
抗ラットＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７二次カクテル
ストレプトアビジンＡＰＣ二次カクテル
システム適合性
システム適合性を試験するために、ＣＤ Ｃｈｅｘ Ｐｌｕｓ試料におけるリンパ球中のＣＤ３＋細胞の％を決定し、製造業者によって提供される予測範囲と比較した。
システム適合性を試験するために、ＣＤ Ｃｈｅｘ Ｐｌｕｓ試料におけるリンパ球中のＣＤ３＋細胞の％を決定し、製造業者によって提供される予測範囲と比較した。
具体的には、１００μＬのＣＤ ＣＨＥＸ ＰＬＵＳを９６ウェルプレートの１ウェルに添加した。プレートを８００ｘＧにおいて３分間遠心分離し、上清を捨てた。細胞ペレットを２５μＬの対応する一次抗体カクテルにより再懸濁し、室温において暗条件にて２５±５分間インキュベートした。
次に、１５０μＬの染色緩衝液を各ウェルに添加し、プレートを再び８００ｘＧにおいて３分間遠心分離し、上清を捨てた。得られる細胞ペレットを１００μＬの二次抗体カクテル中に再懸濁し、室温において２０±５分間インキュベートした。
次に、１００μＬの染色緩衝液を各ウェルに添加し、プレートを再び８００ｘＧにおいて３分間遠心分離し、上清を捨てた。得られる細胞ペレットを１５０μＬの染色緩衝液中に再懸濁し、その後、再び８００ｘＧにおいて３分間遠心分離し（上清は捨てた）、１２５μＬの染色緩衝液中に再懸濁した。適合性試験については、ＤＡＰＵは添加しなかった。
その後、ＭＡＣＳＱｕａｎｔ １０を使用して、細胞を解析した。細胞のゲーティングは、図１のゲーティング法に従って行った。％ＣＤ３＋／リンパ球を報告し、使用した特定のロットについての製造業者推奨範囲に対して比較した。
特異性解析
抗イディオタイプ試薬による、ＣＤ１２３ ＣＡＲ製品を明解に検出するが、ＣＳ１－ＣＡＲ製品は明解に検出しない能力を評価した。特に、特異性を評価するために、抗イディオタイプ試薬を、ＣＡＲ製品および形質導入していないＴ細胞の両方に適用した。ＣＡＲ細胞集団および形質導入していないＴ細胞中の染色された細胞の百分率を評価した。あるいは、すべての３つの細胞製品を抗ＥＧＦＲ抗体により染色して、両方のＣＡＲ製品に存在するＥＧＦＲタグを検出してもよい。
抗イディオタイプ試薬による、ＣＤ１２３ ＣＡＲ製品を明解に検出するが、ＣＳ１－ＣＡＲ製品は明解に検出しない能力を評価した。特に、特異性を評価するために、抗イディオタイプ試薬を、ＣＡＲ製品および形質導入していないＴ細胞の両方に適用した。ＣＡＲ細胞集団および形質導入していないＴ細胞中の染色された細胞の百分率を評価した。あるいは、すべての３つの細胞製品を抗ＥＧＦＲ抗体により染色して、両方のＣＡＲ製品に存在するＥＧＦＲタグを検出してもよい。
各種類の細胞３ｘ１０５個を９６ウェルプレートの対応するウェルに添加し、プレートを８００ｘＧにおいて３分間遠心分離した。その後、上清を捨て、細胞ペレットを２５μＬの一次抗体カクテルにより再懸濁した。再懸濁した細胞を室温において暗条件にて２５±５分間インキュベートし、その後、１５０μＬの染色緩衝液を各ウェルに添加した。プレートを８００ｘＧにおいて３分間遠心分離し、上清を捨て、細胞ペレットを１００μＬの二次抗体カクテル中に再懸濁し、室温において２０±５分間インキュベートした。１００μＬの染色緩衝液を各ウェルに添加した。プレートを再び８００ｘＧにおいて３分間遠心分離し、上清を捨て、細胞ペレットを１５０μＬの染色緩衝液中に再懸濁し、プレートを８００ｘＧにおいて３分間遠心分離し、上清を捨て、細胞を１２５μＬの染色緩衝液に入れ、その後、ＭＡＣＳＱｕａｎｔ １０を使用して取得した。自動試薬添加機能を使用して取得直前にＤＡＰＩを添加した。
評価および報告
図２で規定されるゲーティング法を使用して、各ウェル中の細胞についてゲーティングを行った。抗イディオタイプ染色および抗ＥＧＦＲ染色の両方を使用して、ＣＤ１２３ ＣＡＲまたはＣＳ１ ＣＡＲを発現するＣＡＲ＋細胞、および形質導入していないＴ細胞の百分率を得た。
図２で規定されるゲーティング法を使用して、各ウェル中の細胞についてゲーティングを行った。抗イディオタイプ染色および抗ＥＧＦＲ染色の両方を使用して、ＣＤ１２３ ＣＡＲまたはＣＳ１ ＣＡＲを発現するＣＡＲ＋細胞、および形質導入していないＴ細胞の百分率を得た。
図３で示される通り、開示される抗イディオタイプ抗体は、ＣＤ１２３－ＣＡＲ Ｔ細胞を特異的に検出することができるが、ＣＳ１－ＣＡＲ Ｔ細胞を特異的に検出することができない。
検出限界（ＬｏＤ）
ＬｏＤは、所与の試料中において確実に特定することができ、かつ陰性対照（形質導入していないＴ細胞）から区別することができる分析物（例えばＣＤ１２３－ＣＡＲ Ｔ細胞）の最低濃度である。ＬｏＤを決定するために、ＣＤ１２３－ＣＡＲ Ｔ細胞を、形質導入していない初代Ｔ細胞中に１：２の様式で連続希釈した。その後、抗イディオタイプカクテルを使用して各希釈物をアッセイした。形質導入していないＴ細胞を希釈液として使用するＣＡＲ Ｔ細胞の１：２連続希釈を、１：１２８希釈が達成されるまで行った。
ＬｏＤは、所与の試料中において確実に特定することができ、かつ陰性対照（形質導入していないＴ細胞）から区別することができる分析物（例えばＣＤ１２３－ＣＡＲ Ｔ細胞）の最低濃度である。ＬｏＤを決定するために、ＣＤ１２３－ＣＡＲ Ｔ細胞を、形質導入していない初代Ｔ細胞中に１：２の様式で連続希釈した。その後、抗イディオタイプカクテルを使用して各希釈物をアッセイした。形質導入していないＴ細胞を希釈液として使用するＣＡＲ Ｔ細胞の１：２連続希釈を、１：１２８希釈が達成されるまで行った。
細胞３ｘ１０５個の各希釈物を９６ウェルプレートの対応するウェルに入れ、上記に説明される通りに染色を行った。図２で規定されるゲーティング法を使用して、各ウェル中の細胞についてゲーティングを行って、ＣＡＲ＋細胞の％を得た。「ブランク限界（ＬｏＢ）」を、以下の通りに定義した：
ＬｏＢ＝形質導入していないＴ細胞（ウェルＥ９、Ｆ９、Ｇ９）中のＣＡＲ＋細胞の％の平均値＋２＊標準偏差
ＬｏＢ＝形質導入していないＴ細胞（ウェルＥ９、Ｆ９、Ｇ９）中のＣＡＲ＋細胞の％の平均値＋２＊標準偏差
その後、反復ウェルの平均値がＬｏＢよりも大きい場合に試験によってアッセイされ得る最低ＣＡＲ＋細胞％を有するウェルを決定し、ＬｏＤを以下の通りに定義した：
ＬｏＢ＋２＊（８．５．３．３からの最低ＣＡＲ％を有するウェルの標準偏差）
ＬｏＢ＋２＊（８．５．３．３からの最低ＣＡＲ％を有するウェルの標準偏差）
抗体は、高感度応答を呈した。図４は、形質導入していないＴ細胞中の３３．５％～０．１％のＣＡＲ＋Ｔ細胞の範囲にわたる希釈評価の結果を示し、結果は強い直線性を示す。試験したアッセイ範囲にわたり、アッセイは直線的にふるまい、Ｒ２値は０．９９７１である。検出感度は、１％ＣＡＲ＋細胞であった。
再現性（アッセイ内精度）
まったく同じ試薬で同じ分析物により反復した場合のアッセイの精度を評価した。再現性を決定するために、アッセイを同じ分析物により３回反復し、三重のウェルのＣＶ％を計算した。３種の生物試料を使用して、再現性を評価した。
まったく同じ試薬で同じ分析物により反復した場合のアッセイの精度を評価した。再現性を決定するために、アッセイを同じ分析物により３回反復し、三重のウェルのＣＶ％を計算した。３種の生物試料を使用して、再現性を評価した。
３種のＣＤ１２３－ＣＡＲ Ｔ細胞試料の各々の３つの反復を、９６ウェルプレートの対応するウェルに添加し、上記に説明される通りに染色を行った。ＣＡＲ％についてのＣＶ％を、各試料について計算した。
中間精度（アッセイ間精度）
また、異なる分析物により反復した場合のアッセイの変動を評価した。システム適合性および再現性の節において概略される通りに、第２の分析物によりアッセイを反復した。細胞染色およびゲーティングを上記に説明される通りに行った。
また、異なる分析物により反復した場合のアッセイの変動を評価した。システム適合性および再現性の節において概略される通りに、第２の分析物によりアッセイを反復した。細胞染色およびゲーティングを上記に説明される通りに行った。
多ロット間の評価
５ロットの、ＣＤ１９ｔ代理タグを有するＣＤ１２３－ＣＡＲ Ｔ細胞、および４ロットの、ＣＤ１９ｔ代理タグを有するＣＳ１－ＣＡＲ Ｔ細胞を製造し、配列番号１３の可変重鎖ドメイン（ＶＨ）および配列番号１５の可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）を含む開示される抗イディオタイプ抗体を使用して評価した。
５ロットの、ＣＤ１９ｔ代理タグを有するＣＤ１２３－ＣＡＲ Ｔ細胞、および４ロットの、ＣＤ１９ｔ代理タグを有するＣＳ１－ＣＡＲ Ｔ細胞を製造し、配列番号１３の可変重鎖ドメイン（ＶＨ）および配列番号１５の可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）を含む開示される抗イディオタイプ抗体を使用して評価した。
以下の表に示される通り、抗体は、代理タグ染色と同等のレベルにおいてＣＤ１２３－ＣＡＲ Ｔ細胞を検出することができたが、ＣＳ１－ＣＡＲ Ｔ細胞ロットのいずれも検出しなかった。
血液試料中における評価
開示される抗イディオタイプ抗体を使用してＣＤ１２３を評価および検出する能力は、製造の観点からのみでなく、臨床的観点からも重要である。例えば、開示される抗体は、臨床試験においてまたは処置レジメン中にＣＡＲ Ｔ細胞残留性を定期的に評価するために使用され得る。したがって、開示される抗体の、血液中で機能する能力は、臨床的かつ商業的に価値がある。
開示される抗イディオタイプ抗体を使用してＣＤ１２３を評価および検出する能力は、製造の観点からのみでなく、臨床的観点からも重要である。例えば、開示される抗体は、臨床試験においてまたは処置レジメン中にＣＡＲ Ｔ細胞残留性を定期的に評価するために使用され得る。したがって、開示される抗体の、血液中で機能する能力は、臨床的かつ商業的に価値がある。
臨床適用についての開示される抗体の感度を評価するために、ＣＤ１２３－ＣＡＲ Ｔ細胞を、全血由来ＰＢＭＣに添加して、３０％～０．１％の範囲にわたり変動するＣＡＲ＋の割合を有する試料を生成した。図５で示される通り、開示される抗体（配列番号１３のＶＨおよび配列番号１５のＶＬを含む）は、試験した範囲にわたり直線的にふるまい、Ｒ２値は、０．９９２５であり、これは、抗体が血液試料中でさえも強い感度を維持することを示し、抗体が臨床適用に十分に堅牢であることを示唆する。
本明細書で挙げられるすべての特許および出版物は、本開示が属する技術分野の当業者のレベルを示す。すべての特許および出版物は、各個々の出版物が参照により組み込まれることが具体的にかつ個々に示されるのと同様に、参照により本明細書に組み込まれる。
さらに、当業者は、本開示が目標を実行し、言及される目的および利益ならびにそれらに固有のものを得るために十分に適合されることを容易に理解する。その中の改変および他の使用は、当業者に想起されるであろう。これらの改変は、本開示の趣旨に包含され、本開示の非限定的な実施形態を明らかにする特許請求の範囲によって規定される。
Claims (54)
- 重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む抗体または抗原結合性断片であって、前記ＶＨおよびＶＬ領域が、ＧＦＮＩＫＤＳＦ（配列番号１）を含む重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）、ＩＤＰＥＤＤＥＴ（配列番号２）を含むＣＤＲＨ２、およびＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹ（配列番号３）を含むＣＤＲＨ３、ならびにＥＤＩＹＸ１Ｘ２（配列番号１０）を含む軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）、Ｘ３ＡＸ４（配列番号１１）を含むＣＤＲＬ２、およびＱＱＸ５Ｘ６Ｘ７ＹＰＸ８Ｔ（配列番号１２）を含むＣＤＲＬ３を含み、
Ｘ１が、極性アミノ酸であり；Ｘ２が、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、システイン（Ｃ）、グリシン（Ｇ）およびプロリン（Ｐ）からなる群から選択され；Ｘ３が、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、アスパラギン（Ｎ）およびグルタミン（Ｑ）からなる群から選択され；Ｘ４が、極性アミノ酸であり；Ｘ５およびＸ６が、アルギニン（Ｒ）、ヒスチジン（Ｈ）、リジン（Ｋ）、アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）およびトリプトファン（Ｗ）からなる群から選択され；Ｘ７が、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、アスパラギン（Ｎ）およびグルタミン（Ｑ）からなる群から選択され；Ｘ８が、アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）およびトリプトファン（Ｗ）からなる群から選択される、抗体または抗原結合性断片。 - Ｘ１が、セリン（Ｓ）またはアスパラギン（Ｎ）である、請求項１に記載の抗体または抗原結合性断片。
- Ｘ２が、アスパラギン（Ｎ）またはグリシン（Ｇ）である、請求項１または２に記載の抗体または抗原結合性断片。
- Ｘ３が、アスパラギン酸（Ｄ）またはアスパラギン（Ｎ）である、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。
- Ｘ４が、セリン（Ｓ）またはアスパラギン（Ｎ）である、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。
- Ｘ５およびＸ６が、ヒスチジン（Ｈ）またはチロシン（Ｙ）である、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。
- Ｘ７が、アスパラギン酸（Ｄ）またはアスパラギン（Ｎ）である、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。
- Ｘ８が、ロイシン（Ｌ）またはチロシン（Ｙ）である、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。
- Ｘ１が、セリン（Ｓ）またはアスパラギン（Ｎ）であり；Ｘ２が、アスパラギン（Ｎ）またはグリシン（Ｇ）であり；Ｘ３が、アスパラギン酸（Ｄ）またはアスパラギン（Ｎ）であり；Ｘ４が、セリン（Ｓ）またはアスパラギン（Ｎ）であり；Ｘ５およびＸ６が、ヒスチジン（Ｈ）またはチロシン（Ｙ）であり；Ｘ７が、アスパラギン酸（Ｄ）またはアスパラギン（Ｎ）であり；Ｘ８が、ロイシン（Ｌ）またはチロシン（Ｙ）である、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。
- ａ）ＧＦＮＩＫＤＳＦ（配列番号１）を含むＣＤＲＨ１、ＩＤＰＥＤＤＥＴ（配列番号２）を含むＣＤＲＨ２、およびＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹ（配列番号３）を含むＣＤＲＨ３、ならびにＥＤＩＹＳＮ（配列番号４）を含むＣＤＲＬ１、ＤＡＳ（配列番号５）を含むＣＤＲＬ２、およびＱＱＨＨＤＹＰＬＴ（配列番号６）を含むＣＤＲＬ３；または
ｂ）ＧＦＮＩＫＤＳＦ（配列番号１）を含むＣＤＲＨ１、ＩＤＰＥＤＤＥＴ（配列番号２）を含むＣＤＲＨ２、およびＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹ（配列番号３）を含むＣＤＲＨ３、ならびにＥＤＩＹＮＧ（配列番号７）を含むＣＤＲＬ１、ＮＡＮ（配列番号８）を含むＣＤＲＬ２、およびＱＱＹＹＮＹＰＹＴ（配列番号９）を含むＣＤＲＬ３
を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。 - ａ）前記ＶＨ領域が、ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＲＬＳＣＴＴＳＧＦＮＩＫＤＳＦＩＨＷＶＫＱＲＴＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＥＤＤＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号１３）を含み、前記ＶＬが、ＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＬＧＥＴＶＴＩＥＣＬＡＳＥＤＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＳＰＱＬＬＩＹＤＡＳＳＬＱＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＥＳＧＴＱＹＳＬＥＩＮＳＬＱＳＥＤＡＡＴＹＦＣＱＱＨＨＤＹＰＬＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１４）を含むか；または
ｂ）前記ＶＨ領域が、ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＲＬＳＣＴＴＳＧＦＮＩＫＤＳＦＩＨＷＶＫＱＲＴＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＥＤＤＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号１３）を含み、前記ＶＬが、ＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＬＧＥＴＶＴＩＥＣＲＡＳＥＤＩＹＮＧＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＳＰＱＬＬＩＹＮＡＮＳＬＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＹＳＬＫＩＮＳＬＱＳＥＤＶＡＳＹＦＣＱＱＹＹＮＹＰＹＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号１５）を含む、
請求項１～１０のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。 - 抗ＣＤ１２３抗体または抗ＣＤ１２３抗原結合性断片のイディオタイプに特異的に結合する、請求項１～１１のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。
- 前記抗ＣＤ１２３抗体または抗ＣＤ１２３抗原結合性断片が、ＤＶＱＩＴＱＳＰＳＹＬＡＡＳＰＧＥＴＩＴＩＮＣＲＡＳＫＳＩＳＫＤＬＡＷＹＱＥＫＰＧＫＴＮＫＬＬＩＹＳＧＳＴＬＱＳＧＩＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＭＹＹＣＱＱＨＮＫＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号２０）のＶＬドメインおよび／またはＱＶＱＬＱＱＰＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＮＷＶＫＱＲＰＤＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＹＤＳＥＴＨＹＮＱＫＦＫＤＫＡＩＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＮＷＤＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号２１）のＶＨドメインを含む、請求項１２に記載の抗体または抗原結合性断片。
- 前記抗ＣＤ１２３抗原結合性断片が、ｓｃＦｖである、請求項１２または１３に記載の抗体または抗原結合性断片。
- 前記抗ＣＤ１２３抗原結合性断片が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）へ組み込まれている、請求項１２～１４のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。
- 前記ＣＡＲが、
ａ）ＩｇＧヒンジまたは改変ＩｇＧヒンジ、
ｂ）膜貫通ドメイン、
ｃ）共刺激性シグナル伝達ドメインおよび
ｄ）Ｔ細胞受容体ゼータ鎖シグナル伝達ドメイン
を含む、請求項１５に記載の抗体または抗原結合性断片。 - 前記共刺激性シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２７共刺激性シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８共刺激性シグナル伝達ドメイン、４－１ＢＢ共刺激性シグナル伝達ドメインおよびＯＸ４０共刺激性シグナル伝達ドメインからなる群から選択される、請求項１６に記載の抗体または抗原結合性断片。
- 前記膜貫通ドメインが、ＣＤ２８、ＣＤ４、ＣＤ８、４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０、ＨＶＥＭまたはＣＤ３０の膜貫通部分を含む、請求項１６または１７に記載の抗体または抗原結合性断片。
- ＣＤ１２３－ＣＡＲが、配列番号２０を含むＶＬドメインおよび配列番号２１を含むＶＨドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号２４または配列番号２５を含む共刺激性ドメイン、ならびに配列番号４８を含むＣＤ３ζドメインを含む、請求項１５～１８のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。
- 前記ＣＤ１２３－ＣＡＲが、配列番号４９を含む、請求項１９に記載の抗体または抗原結合性断片。
- ＣＤ１２３－ＣＡＲが、配列番号２２を含むＶＬドメインおよび配列番号２３を含むＶＨドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号２４または配列番号２５を含む共刺激性ドメイン、ならびに配列番号４８を含むＣＤ３ζドメインを含む、請求項１５～１８のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。
- 前記ＣＤ１２３－ＣＡＲが、配列番号５０を含む、請求項２１に記載の抗体または抗原結合性断片。
- ａ）GAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCAGAGCTTGTGAGGCCAGGGGCCTCAGTCAGGTTGTCCTGCACAACTTCTGGCTTCAACATTAAAGACTCCTTTATTCACTGGGTGAAGCAGAGGACTGAACAGGGCCTGGAGTGGATTGGAAGGATTGATCCTGAGGATGATGAAACTAAATATGCCCCGAAATTCCAGGGCAAGGCCACTATAACAGCAGACACATCCTCCAACACAGCCTACCTGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACACTGCCGTCTATTACTGTGCTAGCCCCATCTACGGTAGTAGAGAGGCCTGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA（配列番号１６）およびGACATCCAGATGACACAGTCTCCAGCTTCCCTGTCTGCATCTCTGGGAGAAACTGTCACCATCGAATGTCTAGCAAGTGAAGACATTTACAGTAATTTAGCGTGGTATCAGCAGAAGCCAGGGAAATCTCCTCAGCTCCTGATCTATGATGCAAGTAGCTTGCAAGATGGGGTCCCATCACGGTTCAGTGGCAGTGAATCTGGCACACAGTATTCTCTCGAGATCAACAGCCTGCAATCTGAAGATGCCGCGACTTATTTCTGTCAACAGCATCATGATTATCCTCTCACGTTCGGTTCTGGGACCAAGCTGGAGATCAAA（配列番号１７）；または
ｂ）GAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCAGAGCTTGTGAGGCCAGGGGCCTCAGTCAGGTTGTCCTGCACAACTTCTGGCTTCAACATTAAAGACTCCTTTATTCACTGGGTGAAGCAGAGGACTGAACAGGGCCTGGAGTGGATTGGAAGGATTGATCCTGAGGATGATGAAACTAAATATGCCCCGAAATTCCAGGGCAAGGCCACTATAACAGCAGACACATCCTCCAACACAGCCTACCTGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACACTGCCGTCTATTACTGTGCTAGCCCCATCTACGGTAGTAGAGAGGCCTGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA（配列番号１８）およびGACATCCAGATGACACAGTCTCCAGCTTCCCTGTCTGCATCTCTGGGAGAAACTGTCACCATCGAATGTCGAGCAAGTGAGGACATTTACAATGGTTTAGCATGGTATCAGCAGAAGCCAGGGAAATCTCCTCAGCTCCTGATCTATAATGCAAATAGCTTGCATACTGGGGTCCCATCACGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGTACACAGTATTCTCTCAAGATAAACAGCCTGCAGTCTGAAGATGTCGCAAGTTATTTCTGTCAACAGTATTACAATTATCCGTACACGTTTGGAGCTGGGACCAAGCTGGAACTGAAA（配列番号１９）
を含む抗体または抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列。 - 請求項２３に記載のヌクレオチド配列を含む発現ベクター。
- 抗ＣＤ１２３キメラ抗原受容体（ＣＤ１２３－ＣＡＲ）を発現する免疫細胞を拡大または活性化する方法であって、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する免疫細胞集団を、前記ＣＤ１２３－ＣＡＲのイディオタイプに特異的に結合する抗イディオタイプ抗体または抗原結合性断片と接触させる工程を含み、前記ＣＤ１２３－ＣＡＲが、ＣＤ１２３に結合するｓｃＦｖ、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激性ドメインおよびＴ細胞受容体ゼータ鎖シグナル伝達ドメインを含む、方法。
- 前記抗イディオタイプ抗体または抗原結合性断片が、
ａ）ＧＦＮＩＫＤＳＦ（配列番号１）を含むＣＤＲＨ１、ＩＤＰＥＤＤＥＴ（配列番号２）を含むＣＤＲＨ２、およびＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹ（配列番号３）を含むＣＤＲＨ３、ならびにＥＤＩＹＳＮ（配列番号４）を含むＣＤＲＬ１、ＤＡＳ（配列番号５）を含むＣＤＲＬ２、およびＱＱＨＨＤＹＰＬＴ（配列番号６）を含むＣＤＲＬ３；または
ｂ）ＧＦＮＩＫＤＳＦ（配列番号１）を含むＣＤＲＨ１、ＩＤＰＥＤＤＥＴ（配列番号２）を含むＣＤＲＨ２、およびＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹ（配列番号３）を含むＣＤＲＨ３、ならびにＥＤＩＹＮＧ（配列番号７）を含むＣＤＲＬ１、ＮＡＮ（配列番号８）を含むＣＤＲＬ２、およびＱＱＹＹＮＹＰＹＴ（配列番号９）を含むＣＤＲＬ３
を含む、請求項２５に記載の方法。 - 前記抗イディオタイプ抗体または抗原結合性断片が、
ａ）ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＲＬＳＣＴＴＳＧＦＮＩＫＤＳＦＩＨＷＶＫＱＲＴＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＥＤＤＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号１３）を含むＶＨ領域およびＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＬＧＥＴＶＴＩＥＣＬＡＳＥＤＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＳＰＱＬＬＩＹＤＡＳＳＬＱＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＥＳＧＴＱＹＳＬＥＩＮＳＬＱＳＥＤＡＡＴＹＦＣＱＱＨＨＤＹＰＬＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１４）を含むＶＬ；または
ｂ）ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＲＬＳＣＴＴＳＧＦＮＩＫＤＳＦＩＨＷＶＫＱＲＴＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＥＤＤＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号１３）を含むＶＨ領域およびＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＬＧＥＴＶＴＩＥＣＲＡＳＥＤＩＹＮＧＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＳＰＱＬＬＩＹＮＡＮＳＬＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＹＳＬＫＩＮＳＬＱＳＥＤＶＡＳＹＦＣＱＱＹＹＮＹＰＹＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号１５）を含むＶＬ
を含む、請求項２５または２６に記載の方法。 - 前記ＣＤ１２３－ＣＡＲの前記ヒンジが、ＩｇＧヒンジまたは改変ＩｇＧヒンジである、請求項２５～２７のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ＣＤ１２３－ＣＡＲの共刺激性シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２７共刺激性シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８共刺激性シグナル伝達ドメイン、４－１ＢＢ共刺激性シグナル伝達ドメインおよびＯＸ４０共刺激性シグナル伝達ドメインからなる群から選択される、請求項２５～２８のいずれか一項に記載の方法。
- 前記膜貫通ドメインが、ＣＤ２８、ＣＤ４、ＣＤ８、４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０、ＨＶＥＭまたはＣＤ３０の膜貫通部分を含む、請求項２５～２９のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ＣＤ１２３－ＣＡＲの前記ｓｃＦｖが、配列番号２０および２１、または配列番号２２および２３を含む、請求項２５～３０のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ＣＤ１２３－ＣＡＲが、配列番号４９または配列番号５０を含む、請求項２５～３１のいずれか一項に記載の方法。
- 前記免疫細胞が、Ｔ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、請求項２５～３２のいずれか一項に記載の方法。
- 試料中のＣＤ１２３－ＣＡＲの存在を検出する方法であって、ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現することが疑われる免疫細胞を含む試料を、前記ＣＤ１２３－ＣＡＲのイディオタイプに特異的に結合する抗イディオタイプ抗体または抗原結合性断片と接触させる工程と、前記ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する細胞数を定量する工程とを含み、前記ＣＤ１２３－ＣＡＲが、ＣＤ１２３に結合するｓｃＦｖ、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、少なくとも１つの共刺激性ドメインおよびＴ細胞受容体ゼータ鎖シグナル伝達ドメインを含む、方法。
- 前記抗イディオタイプ抗体または抗原結合性断片が、
ａ）ＧＦＮＩＫＤＳＦ（配列番号１）を含むＣＤＲＨ１、ＩＤＰＥＤＤＥＴ（配列番号２）を含むＣＤＲＨ２、およびＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹ（配列番号３）を含むＣＤＲＨ３、ならびにＥＤＩＹＳＮ（配列番号４）を含むＣＤＲＬ１、ＤＡＳ（配列番号５）を含むＣＤＲＬ２、およびＱＱＨＨＤＹＰＬＴ（配列番号６）を含むＣＤＲＬ３；または
ｂ）ＧＦＮＩＫＤＳＦ（配列番号１）を含むＣＤＲＨ１、ＩＤＰＥＤＤＥＴ（配列番号２）を含むＣＤＲＨ２、およびＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹ（配列番号３）を含むＣＤＲＨ３、ならびにＥＤＩＹＮＧ（配列番号７）を含むＣＤＲＬ１、ＮＡＮ（配列番号８）を含むＣＤＲＬ２、およびＱＱＹＹＮＹＰＹＴ（配列番号９）を含むＣＤＲＬ３
を含む、請求項３４に記載の方法。 - 前記抗イディオタイプ抗体または抗原結合性断片が、
ａ）ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＲＬＳＣＴＴＳＧＦＮＩＫＤＳＦＩＨＷＶＫＱＲＴＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＥＤＤＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号１３）を含むＶＨ領域およびＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＬＧＥＴＶＴＩＥＣＬＡＳＥＤＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＳＰＱＬＬＩＹＤＡＳＳＬＱＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＥＳＧＴＱＹＳＬＥＩＮＳＬＱＳＥＤＡＡＴＹＦＣＱＱＨＨＤＹＰＬＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１４）を含むＶＬ；または
ｂ）ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＲＬＳＣＴＴＳＧＦＮＩＫＤＳＦＩＨＷＶＫＱＲＴＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＥＤＤＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号１３）を含むＶＨ領域およびＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＬＧＥＴＶＴＩＥＣＲＡＳＥＤＩＹＮＧＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＳＰＱＬＬＩＹＮＡＮＳＬＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＹＳＬＫＩＮＳＬＱＳＥＤＶＡＳＹＦＣＱＱＹＹＮＹＰＹＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号１５）を含むＶＬ
を含む、請求項３４または３５に記載の方法。 - 前記免疫細胞が、Ｔ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、請求項３４～３６のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ＣＤ１２３－ＣＡＲが、配列番号２０を含むＶＬドメインおよび配列番号２１を含むＶＨドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号２４または配列番号２５を含む共刺激性ドメイン、ならびに配列番号４８を含むＣＤ３ζドメインを含む、請求項３４～３７のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ＣＤ１２３－ＣＡＲが、配列番号２２を含むＶＬドメインおよび配列番号２３を含むＶＨドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号２４または配列番号２５を含む共刺激性ドメイン、ならびに配列番号４８を含むＣＤ３ζドメインを含む、請求項３４～３７のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ＣＤ１２３－ＣＡＲが、配列番号４９または配列番号５０を含む、請求項３４～３９のいずれか一項に記載の方法。
- 前記試料が、細胞培養培地である、請求項３４～４０のいずれか一項に記載の方法。
- 前記試料が、前記ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する前記免疫細胞により処置された対象からの血液試料である、請求項３４～４０のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する免疫細胞の量が事前設定閾値未満であると決定された場合、前記ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現するさらなる免疫細胞の投与を推奨する工程をさらに含む、請求項４２に記載の方法。
- 前記ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する免疫細胞の量が事前設定閾値未満であると決定された場合、前記ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現するさらなる免疫細胞を投与する工程をさらに含む、請求項４２に記載の方法。
- 前記ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する免疫細胞の量が事前設定閾値を超えていると決定された場合、前記ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現するさらなる免疫細胞の投与を控えることを推奨する工程をさらに含む、請求項４２に記載の方法。
- 前記血液を、
ａ）ＧＦＮＩＫＤＳＦ（配列番号１）を含むＣＤＲＨ１、ＩＤＰＥＤＤＥＴ（配列番号２）を含むＣＤＲＨ２、およびＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹ（配列番号３）を含むＣＤＲＨ３、ならびにＥＤＩＹＳＮ（配列番号４）を含むＣＤＲＬ１、ＤＡＳ（配列番号５）を含むＣＤＲＬ２、およびＱＱＨＨＤＹＰＬＴ（配列番号６）を含むＣＤＲＬ３；または
ｂ）ＧＦＮＩＫＤＳＦ（配列番号１）を含むＣＤＲＨ１、ＩＤＰＥＤＤＥＴ（配列番号２）を含むＣＤＲＨ２、およびＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹ（配列番号３）を含むＣＤＲＨ３、ならびにＥＤＩＹＮＧ（配列番号７）を含むＣＤＲＬ１、ＮＡＮ（配列番号８）を含むＣＤＲＬ２、およびＱＱＹＹＮＹＰＹＴ（配列番号９）を含むＣＤＲＬ３
を含む抗イディオタイプ抗体または抗原結合性断片を含む固体支持体と接触させ、これによって、前記対象の前記血液から前記ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する免疫細胞を隔離し、次に、前記ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する前記免疫細胞を除去した前記血液を、前記対象へ投与して戻すことによって、前記対象の前記血液から免疫細胞を除去する工程をさらに含む、請求項４５に記載の方法。 - 前記対象が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、芽球形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＢＰＤＣＮ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）または有毛細胞白血病を有する、請求項４２～４６のいずれか一項に記載の方法。
- 試料からＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する免疫細胞を単離する方法であって、ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現することが疑われる免疫細胞を含む試料を、
ａ）ＧＦＮＩＫＤＳＦ（配列番号１）を含むＣＤＲＨ１、ＩＤＰＥＤＤＥＴ（配列番号２）を含むＣＤＲＨ２、およびＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹ（配列番号３）を含むＣＤＲＨ３、ならびにＥＤＩＹＳＮ（配列番号４）を含むＣＤＲＬ１、ＤＡＳ（配列番号５）を含むＣＤＲＬ２、およびＱＱＨＨＤＹＰＬＴ（配列番号６）を含むＣＤＲＬ３；または
ｂ）ＧＦＮＩＫＤＳＦ（配列番号１）を含むＣＤＲＨ１、ＩＤＰＥＤＤＥＴ（配列番号２）を含むＣＤＲＨ２、およびＡＳＰＩＹＧＳＲＥＡＷＦＡＹ（配列番号３）を含むＣＤＲＨ３、ならびにＥＤＩＹＮＧ（配列番号７）を含むＣＤＲＬ１、ＮＡＮ（配列番号８）を含むＣＤＲＬ２、およびＱＱＹＹＮＹＰＹＴ（配列番号９）を含むＣＤＲＬ３
を含む抗イディオタイプ抗体または抗原結合性断片を含む固体支持体と接触させ、これによって、前記試料から前記ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する前記免疫細胞を単離する工程を含み、前記ＣＤ１２３－ＣＡＲが、ＣＤ１２３に結合するｓｃＦｖ、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激性ドメインおよびＴ細胞受容体ゼータ鎖シグナル伝達ドメインを含む、方法。 - 前記試料が、細胞培養培地である、請求項４８に記載の方法。
- 前記試料が、前記ＣＤ１２３－ＣＡＲを発現する前記免疫細胞により処置された対象からの血液試料である、請求項４８に記載の方法。
- 前記固体支持体が、前記抗イディオタイプ抗体または抗原結合性断片が連結されているカラムまたはビーズを含む、請求項４８～５０のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ＣＤ１２３－ＣＡＲが、配列番号２０を含むＶＬドメインおよび配列番号２１を含むＶＨドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号２４または配列番号２５を含む共刺激性ドメイン、ならびに配列番号４８を含むＣＤ３ζドメインを含む、請求項４８～５１のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ＣＤ１２３－ＣＡＲが、配列番号２２を含むＶＬドメインおよび配列番号２３を含むＶＨドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号２４または配列番号２５を含む共刺激性ドメイン、ならびに配列番号４８を含むＣＤ３ζドメインを含む、請求項４８～５１のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ＣＤ１２３－ＣＡＲが、配列番号４９または配列番号５０を含む、請求項４８～５３のいずれか一項に記載の方法。
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