JP2023515773A - 抗胸腺細胞グロブリン - Google Patents
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Abstract
ヒト抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）製品、並びにその製造方法及び使用方法が提供される。特に、本開示は、完全ヒトまたは実質的にヒトの免疫グロブリンの集団を有する、有蹄動物由来のポリクローナル免疫グロブリンを提供する。完全ヒトまたは実質的にヒトの免疫グロブリンの集団は、ヒト胸腺細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、および／または単球と特異的に結合する。このような組成物は、ヒトＩｇ遺伝子座を有するトランスジェニック動物にヒト胸腺細胞で免疫化することにより作製することができる。この方法は、医療用途でのこの製品の使用を可能にする収量、純度、および抗原特異性を備えたポリクローナル免疫グロブリンを生成する。【選択図】図１Ａ
Description
関連出願との相互参照
本出願は、２０２０年２月１２日に出願された米国出願第６２／９７５，６４９号の優先権を主張し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２０年２月１２日に出願された米国出願第６２／９７５，６４９号の優先権を主張し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
配列表の参照による組込み
本出願は、電子形式の配列表とともに提出される。配列表は、２０２１年９月８日に作成されたＡ２ＢＩ＿００１＿０１ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ．ｔｘｔと題するファイルとして提供され、サイズは７０キロバイトである。配列表の電子形式の情報は、その全体が参照により組み込まれる。
本出願は、電子形式の配列表とともに提出される。配列表は、２０２１年９月８日に作成されたＡ２ＢＩ＿００１＿０１ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ．ｔｘｔと題するファイルとして提供され、サイズは７０キロバイトである。配列表の電子形式の情報は、その全体が参照により組み込まれる。
本発明は、一般に、生物医学的用途のための抗胸腺細胞グロブリンの製造方法に関するものである。
ＡＴＧ（抗胸腺細胞グロブリン）は、ポリクローナル免疫グロブリンであり、ＦＤＡより臓器移植に使用することが承認されている。ＡＴＧは、移植片対宿主病および１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）の治療にも使用され、または、臨床試験でも使用されている。Ｔ１Ｄにおいて、ＡＴＧは、β細胞機能を維持するための単剤療法、および骨髄非破壊的造血幹細胞移植における免疫抑制剤として使用されている。
現在のＡＴＧ製剤は、ウサギまたはウマに免疫化してポリクローナルな異種免疫グロブリンを生成することにより製造されている。ＡＴＧ療法は、レシピエントの免疫系がＡＴＧ内の異種免疫グロブリンに反応するため、患者が血清病のリスクにさらされる。また、ＡＴＧに対する免疫反応により、再投与が問題となる。さらに、グルココルチコイドは患者のβ細胞の機能を損なうため、Ｔ１Ｄにおける血清病はグルココルチコイドで管理することができない。
したがって、ＡＴＧを製造する改良された方法、それに関連する組成物および使用方法に対する必要性が当技術分野において残っている。
本開示は、一般に、完全ヒト（または少なくとも部分的にヒト）免疫グロブリン遺伝子座を有するトランスジェニック動物において産生される抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）に関する。得られた組成物は、完全ヒト（または実質的にヒト）免疫グロブリンを有する。驚くべきことに、ヒト胸腺細胞によるトランスジェニック動物の免疫化は、参照ＡＴＧ製品と同程度かそれ以上の効力を有するＡＴＧを生成する。したがって、本明細書に開示された方法は、異種免疫グロブリンに起因する血清病の問題を解決するヒトＡＴＧ製品の製造を可能にするのに十分な収量および効力においてＡＴＧを産生する。
一態様において、本開示は、完全ヒト又は実質的にヒトの免疫グロブリンの集団を有する、有蹄動物ポリクローナル免疫グロブリン組成物を提供する。完全ヒト又は実質的にヒトの免疫グロブリンの集団は、ヒト胸腺細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、及び／又は単球と特異的に結合する。
別の態様において、本開示は、トランスジェニック有蹄動物をヒト胸腺細胞で免疫化することによって製造される組成物を提供する。この組成物は、完全ヒトまたは実質的にヒトの免疫グロブリンの集団を含んでいる。完全ヒトまたは実質的にヒトの免疫グロブリンの集団は、ヒト胸腺細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、および／または単球と特異的に結合する。
さらに別の態様において、本開示は、抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）を製造する方法であって、ヒト胸腺細胞をトランスジェニック有蹄動物に投与する工程を有する、方法を提供する。トランスジェニック有蹄動物のゲノムは、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を有する。トランスジェニック有蹄動物が、抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）を有するポリクローナル免疫グロブリンを産生する。
さらなる態様において、本開示は、抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）治療を、それを必要とする対象に提供する方法であって、対象に：ｉ）本開示によるポリクローナル免疫グロブリン組成物；ｉｉ）本開示による組成物；またはｉｉｉ）本開示に従って製造されたポリクローナル免疫グロブリン組成物を投与する工程を有する、前記方法を提供する。本方法は、前記対象に対して有効量の抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）を提供する。
さらに別の態様では、本開示は、完全ヒトまたは実質的にヒトの免疫グロブリンの集団、および１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤を有する、医薬組成物を提供する。完全ヒトまたは実質的にヒトの免疫グロブリンの集団は、ヒト胸腺細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、および／または単球を特異的に結合させる。
本発明の追加の実施形態、特徴、および利点は、以下の詳細な説明から、および本発明の実施を通じて明らかになるであろう。
本発明者らは、動物ＡＴＧの限界を克服したヒトＡＴＧ製品を開発した。内因性Ｉｇ遺伝子座を、ヒトＩｇ遺伝子座をコードするヒト人工染色体に置き換えたトランスジェニック動物は、完全ヒトポリクローナル抗体を発現する。このようなトランスジェニック動物をヒト胸腺細胞で免疫化すると、医療用途での使用を可能にする収率、純度、および抗原特異性を有するポリクローナル免疫グロブリンが生成される。本発明の様々な実施形態は、以下の説明で提供される。
定義
引用された全ての文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。本願内では、特に断らない限り、利用される技術は、以下のような周知の文献：Molecular Cloning:A Laboratory Manual（Sambrook, et al., 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press）、Gene Expression Technology（Methods in Enzymology, Vol.185, edited by D. Goeddel, 1991.Academic Press, San Diego, Calif.）、"Guide to Protein Purification" in Methods in Enzymology（M. P. Deutshcer, ed., (1990) Academic Press, Inc.）、PCR Protocols:A Guide to Methods and Applications (Innis, et al. 1990. Academic Press, San Diego, Calif.), Culture of Animal Cells:A Manual of Basic Technique, 2nd Ed. (R. I. Freshney. 1987. Liss, Inc. New York, N.Y.), Gene Transfer and Expression Protocols, pp.109-128, ed.E. J. Murray, The Humana Press Inc., Clifton, N.J.), Ambion 1998 Catalog (Ambion, Austin, Tex.) のいずれかに見出すことができる。
引用された全ての文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。本願内では、特に断らない限り、利用される技術は、以下のような周知の文献：Molecular Cloning:A Laboratory Manual（Sambrook, et al., 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press）、Gene Expression Technology（Methods in Enzymology, Vol.185, edited by D. Goeddel, 1991.Academic Press, San Diego, Calif.）、"Guide to Protein Purification" in Methods in Enzymology（M. P. Deutshcer, ed., (1990) Academic Press, Inc.）、PCR Protocols:A Guide to Methods and Applications (Innis, et al. 1990. Academic Press, San Diego, Calif.), Culture of Animal Cells:A Manual of Basic Technique, 2nd Ed. (R. I. Freshney. 1987. Liss, Inc. New York, N.Y.), Gene Transfer and Expression Protocols, pp.109-128, ed.E. J. Murray, The Humana Press Inc., Clifton, N.J.), Ambion 1998 Catalog (Ambion, Austin, Tex.) のいずれかに見出すことができる。
本書で使用される単数形の「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上明らかに異なることが指示されない限り、複数の参照語を含む。本書で使用される「および」は、明示的に別段の定めがない限り、「または」と互換的に使用される。
本発明の任意の態様のすべての実施形態は、文脈が明らかにそうでないことを指示しない限り、組み合わせて使用することができる。
文脈上明らかに他に要求されない限り、本明細書及び特許請求の範囲を通じて、「有する（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「有する（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」等の語は、排他的又は網羅的な意味とは対照的に、包括的な意味で解釈されるものとし、すなわち、「含むがこれに限らない」意味において解釈される。また、単数または複数を用いる語は、それぞれ、複数および単数を含む。さらに、「本明細書」、「上記」、「下記」、および類似の語は、本願で使用される場合、本願を全体として参照し、本願の特定の部分を参照しないものとする。
用語「有蹄動物」は、ウシ、ブタ、ウマ、ロバ、シマウマ、シカ、雄牛、ヤギ、ヒツジ、およびカモシカを含むがこれらに限定されない、任意の適切な有蹄動物を指す。
用語「トランスジェニック」は、有蹄動物の細胞が、外来遺伝子（例えば、免疫グロブリン遺伝子座）をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを有することを意味する。このようなポリヌクレオチドは、人工染色体の一部であってもよい。代替的に、または人工染色体に加えて、外来遺伝子（複数可）をコードする１つまたは複数のポリヌクレオチドが、有蹄動物の細胞のゲノムに統合されてもよい。
用語「ポリクローナル」または「ポリクローナル血清」または「ポリクローナル血漿」または「ポリクローナル免疫グロブリン」は、共通の定数領域を有するが多様な可変領域を有する免疫グロブリンの集団を指す。ただし、ポリクローナルという用語は、優性免疫応答が生じる場合のように、単一のＢ細胞前駆体または単一の組換え事象に由来する免疫グロブリンを除外するものではない。ポリクローナル血清または血漿は、免疫グロブリン集団の可溶性形態（例えば、ＩｇＧ）を含む。精製ポリクローナル免疫グロブリン」という用語は、血清または血漿によって精製されたポリクローナル免疫グロブリンを指す。ポリクローナル免疫グロブリンを精製する方法には、カプリル酸分画及び赤血球（ＲＢＣ）による吸着が含まれるが、これに限定されない。
免疫グロブリンの「集団」は、単一の免疫グロブリンの複数のコピーを有する試料とは対照的に、多様な配列を有する免疫グロブリンを指す。同様に、集団という用語は、培養中の単一のＢ細胞、形質細胞、またはハイブリドーマから分泌される免疫グロブリン、または重鎖および軽鎖免疫グロブリン配列の単一対をコードする組換えポリヌクレオチド（複数可）で形質転換またはトランスフォームされた宿主細胞からの免疫グロブリンを排除するものである。
用語「免疫グロブリン」は、少なくとも２本の重鎖と少なくとも２本の軽鎖が１：１の比率で存在するタンパク質複合体を指し、５つのクラスの免疫グロブリン－ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥのいずれかが含まれる。変形例では、免疫グロブリンは、グリコシル化パターンを変更するための変異、及び／又は補体依存性細胞傷害を増加又は減少させるための変異を含むがこれらに限定されない、当該分野で知られている又は将来的に発見される様々な方法のいずれかにおいて操作される。
免疫グロブリンは、免疫グロブリンのタンパク質配列がネイティブヒト免疫グロブリンの配列と十分に類似しており、対象に投与した場合、免疫グロブリンがネイティブヒト免疫グロブリンに対する免疫反応と同様の、または著しく悪化しない抗免疫グロブリン免疫反応を生成するとき、「完全ヒトまたは実質的にヒト」である。完全ヒト免疫グロブリンは、免疫グロブリン配列の組換え、選択、及び親和性成熟と一致する、可変領域における１つ又は複数の置換、挿入、及び欠失を含むであろう。変形例では、完全ヒトまたは実質的にヒト免疫グロブリンは、グリコシル化パターンを変更するための変異、および／または補体依存性細胞傷害を増加または減少させるための変異を含むがこれに限定されない、当該分野で既知のまたは将来的に発見される種々の方法のいずれかにおいて操作される。
用語「胸腺細胞」、「Ｔ細胞」、「Ｂ細胞」及び「単球」は、当該技術分野における通常の意味を有するものである。胸腺細胞は、胸腺に存在する造血前駆細胞である。本開示の方法において、（ヒト）胸腺細胞を投与する工程は、いくつかの実施形態において、胸腺細胞がトランスジェニック有蹄動物において抗胸腺細胞免疫応答を生成するのに十分な量及び純度で存在する場合、胸腺細胞を含む細胞の混合集団を投与する工程を指す場合がある。本開示の方法の変形例では、例えば非ヒト霊長類の胸腺細胞など、非ヒト胸腺細胞が使用される。
「全免疫グロブリンの質量による」免疫グロブリン（例えば、ヒト胸腺細胞に特異的に結合する免疫グロブリン）の割合は、標的免疫グロブリン集団の濃度をサンプル中の全免疫グロブリン濃度で割り、１００を乗じたものを指す。標的免疫グロブリンの濃度は、例えば、標的免疫グロブリンを（例えば、胸腺細胞または胸腺細胞の細胞膜からなるアフィニティーカラムで）アフィニティー精製した後、濃度測定することにより決定することができる。
用語「約（ａｂｏｕｔ）」又は「約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」は、当業者によって決定される特定の値に対する許容誤差範囲内を意味し、これは、値が測定又は決定される方法、例えば、測定システムの限界に部分的に依存することになる。例えば、「約」は、１標準偏差以内または以上を意味することができる。あるいは、「約」は、最大２０％、最大１０％、または最大５％の範囲のプラスまたはマイナスを意味することができる。
用語「免疫化」および「免疫化する」は、１回以上の投与工程の後に、所望の免疫応答（例えば、胸腺細胞に特異的なポリクローナル免疫グロブリン応答）を誘発するのに十分な量の組成物を対象（例えば、トランスジェニック有蹄動物）に投与することを意味する。投与は、筋肉内注射、静脈内注射、腹腔内注射、または他の任意の適切な経路によって行うことができる。免疫化は、１回から１０回、またはそれ以上の組成物の投与（例えば注射）、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０回、またはそれ以上の投与を有し得る。最初の投与は、一般に、その後の各投与が、前の投与によって生成された免疫応答を高めるので、検出可能な免疫応答を誘発しない可能性がある。
用語「標的抗原」は、所望の免疫反応を誘発するために使用されるあらゆる抗原を指す。ＡＴＧ製品を生成するために使用される標的抗原は、胸腺細胞、胸腺細胞と１つ以上の内因性タンパク質マーカーを共有する細胞、１つ以上の胸腺細胞タンパク質を組み換え発現する細胞、組み換え胸腺細胞タンパク質、または胸腺細胞タンパク質をコードする核酸（例えばＲＮＡ、線形ＤＮＡ、またはプラスミドＤＮＡ）であってもよい。
用語「精製する」は、標的細胞または分子（例えば、免疫グロブリンの集団、胸腺細胞）を、組成物中に存在する他の物質から分離することを指す。免疫グロブリンは、血漿の分画によって、親和性によって（例えば、プロテインＡ又はプロテインＧ結合、又は他の捕捉分子）、電荷によって（例えば、イオン交換クロマトグラフィー、サイズによって（例えば、サイズ排除クロマトグラフィー）、又はその他によって精製することができる。免疫グロブリンの集団を精製することは、免疫グロブリンの集団を有する組成物を、酸、塩基、塩、酵素、熱、冷、凝固因子、又は他の適切な薬剤のうちの１つ又は複数で処理する工程を有し得る。精製は、標的細胞又は分子及び不純物を有する組成物を非標的細胞又は分子（例えば、赤血球）に吸着させ、不純物を部分的又は完全に除去することをさらに含み得る。精製は、血清または血漿の前処理、例えば、カプリル酸分画をさらに含んでもよい。
用語「治療する」及び「治療」は、対象の状態の少なくとも１つの症状を緩和、軽減、遅延、低減、反転、改善、又は管理することの１つ以上を意味する。また、用語「治療する」は、症状の発症（すなわち、症状の臨床的発現前の期間）を阻止する、遅延させる、または症状を発症もしくは悪化させるリスクを低減させることの１つまたは複数を意味する場合もある。
用語「薬学的に許容される」は、動物またはヒトにおける生体内での使用に生物学的または薬学的に適合することを意味し、連邦政府または州政府の規制機関によって承認されているか、動物、特にヒトでの使用について米国薬局方または他の一般に認められた薬局方に記載されていることを意味し得る。
用語「過免疫化」は、対象によって産生された免疫グロブリンの希釈後に所望の力価（例えば、結合力価）を産生するのに必要とされるよりも高い免疫応答を対象に生成する免疫化レジメンを指す。例えば、所望の力価が１：１００である場合、対象において１：１，０００またはそれ以上の力価を生じさせるために、１、２、３またはそれ以上のブースト免疫によって動物を過免疫化し、対象によって産生された免疫グロブリンをバイオ治療薬の生産において希釈して、バイオ治療薬に所望の力価を付与できるようにすることができる。
免疫グロブリンは標的（例えば、胸腺細胞または胸腺細胞抗原）に「特異的」または「特異的に結合する」（本明細書では互換的に使用）ことは、当技術分野でよく理解されている用語であり、そのような特異的または優先的結合を決定する方法も当技術分野でよく知られたものである。分子は、特定の細胞または物質と、他の細胞または物質と反応するよりも、より頻繁に、より迅速に、より持続的に、および／またはより高い親和性で反応または会合する場合、「特異的結合」または「優先的結合」を示すと言われる。免疫グロブリンが特定の細胞や物質と「特異的に結合する」とは、他の特定の細胞や物質と結合するよりも高い親和性、高い結合活性、より容易に、および／または高い持続時間で結合することをいう。例えば、胸腺細胞に特異的または優先的に結合する免疫グロブリンは、他の細胞に結合するよりも高い親和性、高い結合活性、より容易、および／またはより長い時間で胸腺細胞に結合する免疫グロブリンである。第一の細胞または物質に特異的に結合する免疫グロブリンは、第二の細胞または物質に特異的または優先的に結合する場合もあるし、しない場合もある。このように、「特異的結合」は、必ずしも排他的結合を（含むことはできるが）必要としない。一般に、結合への言及は、特異的結合を意味するが、必ずしもそうではない。
用語「ＨＡＣベクター」は、少なくともヒト染色体由来のセントロメア配列、テロメア配列、および複製起点を有するベクターを意味し、所定の用途に応じて他の配列を含んでもよい。宿主細胞内に存在する場合、ＨＡＣベクターは宿主細胞の染色体、核から独立して存在する。ＨＡＣベクターを調製し、目的の核酸をＨＡＣに挿入するために、任意の適切な方法を用いることができ、これには、以下の実施例に記載されるものが含まれるが、これらに限定されない。ＨＡＣベクターは、当業者に知られているように、二本鎖ＤＮＡベクターである。
実施形態
ヒト胸腺細胞をトランスジェニック有蹄動物に投与する工程を有する、抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）を製造する方法が提供される。胸腺細胞は、胸腺に存在する造血前駆細胞である。胸腺組織は患者から摘出されなければならず、通常は廃棄される小児および若年成人の心臓手術など、様々な供給源から入手可能である。生きたヒト胸腺細胞は、表面抗原のコンフォメーションをよりよく保存するため、胸腺細胞は、生きたヒト胸腺細胞であり得る。いくつかの実施形態において、本方法は、有効量のヒト胸腺細胞を投与する工程を有する。実施形態では、有効量は、少なくとも約１×１０８、少なくとも約５×１０８、少なくとも約１×１０９、少なくとも約５×１０９、少なくとも約１×１０１０、または少なくとも約５×１０１１の胸腺細胞である。
ヒト胸腺細胞をトランスジェニック有蹄動物に投与する工程を有する、抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）を製造する方法が提供される。胸腺細胞は、胸腺に存在する造血前駆細胞である。胸腺組織は患者から摘出されなければならず、通常は廃棄される小児および若年成人の心臓手術など、様々な供給源から入手可能である。生きたヒト胸腺細胞は、表面抗原のコンフォメーションをよりよく保存するため、胸腺細胞は、生きたヒト胸腺細胞であり得る。いくつかの実施形態において、本方法は、有効量のヒト胸腺細胞を投与する工程を有する。実施形態では、有効量は、少なくとも約１×１０８、少なくとも約５×１０８、少なくとも約１×１０９、少なくとも約５×１０９、少なくとも約１×１０１０、または少なくとも約５×１０１１の胸腺細胞である。
変形例では、非ヒト胸腺細胞（例えば、イヌ、ネコ、ヒツジなどの家畜の胸腺細胞）が使用される。このような場合、トランスジェニック有蹄動物は、非ヒト種のＩｇ遺伝子座をコードする人工染色体を有してもよく、その種の抗体が生成されるようにすることができる。
いくつかの実施形態では、胸腺細胞は、１つ以上のアジュバントの投与前、投与中、又は投与後に投与される。いくつかの実施形態では、胸腺細胞及び１つ以上のアジュバントは、任意に１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を有する単一の組成物中に一緒に投与される。
例示的なアジュバントには、アルミニウム塩アジュバント、水中油型エマルジョン（例えば、ＭＦ５９またはＡＳ０３などのスクアレンを有する水中油型エマルジョン）、ＴＬＲ７アゴニスト（イミダゾキノリンまたはイミキモドなど）、またはそれらの組み合わせが含まれる。好適なアルミニウム塩としては、水酸化物（例えば、オキシ水酸化物）、リン酸塩（例えば、ヒドロキシリン酸塩、オルトリン酸塩）、（例えば、Vaccine Design(1995) eds. Powell & Newman. ISBN: 030644867X. Plenumの第８章及び第９章を参照）、またはそれらの混合物が含まれる。さらなる例示的なアジュバントとしては、これらに限定されないが、Ａｄｊｕ－Ｐｈｏｓ、Ａｄｊｕｍｅｒｌｍ、アルブミン－ヘパリン微粒子、藻類グルカン、アルガムリン、ミョウバン、抗原製剤、ＡＳ－２アジュバント、自己樹状細胞、自己ＰＢＭＣ、Ａｖｒｉｄｉｎｅ（商標）、Ｂ７－２、ＢＡＫ、ＢＡＹ Ｒ１００５、ブピバカイン、ブピバカイン－ＨＣｌ、ＢＷＺＬ、カルシトリオール、リン酸カルシウムゲル、ＣＣＲ５ペプチド、ＣＦＡ、コレラホロトキシン（ＣＴ）およびコレラ毒素Ｂサブユニット（ＣＴＢ）、コレラ毒素Ａ１－サブユニット-タンパク質Ａ Ｄ－フラグメント融合タンパク質、ＣｐＧ、ＣＲＬ１００５、サイトカイン含有リポソーム、Ｄ－ムラパルミチン、ＤＤＡ、ＤＨＥＡ、ジフテリアトキソイド、ＤＬ－ＰＧＬ、ＤＭＰＣ、ＤＭＰＧ、ＤＯＣ／ミョウバン複合体、鶏痘、フロイント完全アジュバント、ガンマイヌリン、Ｇｅｒｂｕアジュバント、ＧＭ－ＣＳＦ、ＧＭＤＰ、ｈＧＭ－ＣＳＦ、ｈＩＬ－１２ （Ｎ２２２Ｌ）、ｈＴＮＦ－アルファ、ＩＦＡ、ｐｃＤＮＡ３のＩＦＮガンマ、ＩＬ－１２ ＤＮＡ、ＩＬ－１２プラスミド、ＩＬ－１２／ＧＭＣＳＦプラスミド（Ｓｙｋｅｓ）、ｐｃＤＮＡ３のＩＬ－２、ＩＬ－２／Ｉｇプラスミド、ＩＬ－２／Ｉｇタンパク質、ＩＬ－４、ｐｃＤＮＡ３のＩＬ－４、イミキモド、ＩｍｍＴｈｅｒ（商標）、共刺激分子に対する抗体を含む免疫リポソーム、インターフェロン－ガンマ、インターロイキン－１ベータ、インターロイキン－１２、インターロイキン－２、インターロイキン－７、ＩＳＣＯＭ（ｓ）（商標）、Ｉｓｃｏｐｒｅｐ ７．０．３（商標）、ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（商標）ＩＳＡ－２５、キーホールリンペットヘモシアニン、脂質ベースアジュバント、リポソーム、ロキソリビン、ＬＴ（Ｒ１９２Ｇ）、ＬＴ－ＯＡまたはＬＴ経口アジュバント、ＬＴ－Ｒ１９２Ｇ、ＬＴＫ６３、ＬＴＫ７２、ＭＦ５９、ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ ＩＳＡ５１、ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ ＩＳＡ ７２０、ＭＰＬ．ＴＭ．、ＭＰＬ－ＳＥ、ＭＴＰ－ＰＥ、ＭＴＰ－ＰＥリポソーム、ムラメチド、ムラパルミチン、ＮＡＧＯ、ｎＣＴ天然コレラ毒素、非イオン性界面活性剤ベシクル、コレラ毒素ｍＣＴ－Ｅ１１２Ｋの非毒性変異体Ｅ１ １２Ｋ、ｐ－ヒドロキシ安息香酸メチルエステル、ｐＣＩＬ－１０、ｐＣＩＬ１２、ｐＣＭＶｍＣＡＴ１、ｐＣＭＶＮ、ペプトマー－ＮＰ、Ｐｌｅｕｒａｎ、ＰＬＧ、ＰＬＧＡ、ＰＧＡ、およびＰＬＡ、プルロニックＬ１２１、ＰＭＭＡ、ＰＯＤＤＳ（商標）、Ｐｏｌｙ ｒＡ：Ｐｏｌｙ ｒＵ、ポリソルベート８０、タンパク質コクリエート、ＱＳ－２１、クアドリＡサポニン、Ｑｕｉｌ－Ａ、ＩＳＡ－２５／Ｑｕｉｌ－Ａ、リヒドラゲルＨＰＡ、リヒドラゲルＬＶ、ＲＩＢＩ、Ｒｉｂｉｌｉｋｅアジュバント系（ＭＰＬ、ＴＭＤ、ＣＷＳ） 、Ｓ－２８４６３、ＳＡＢ－ａｄｊ－１、ＳＡＢ－ａｄｊ－２、ＳＡＦ－１、Ｓｃｌａｖｏペプチド、Ｓｅｎｄａｉプロテオリポソーム、Ｓｅｎｄａｉ含有脂質マトリックス、Ｓｐａｎ８５、スペコール、スクアラン１、スクアレン２、ステアリルチロシン、テタヌストキソイド（ＴＴ）、セラミド（商標）、スレオニルムラミルジペプチド（ＴＭＤＰ）、Ｔｙ粒子、およびＷａｌｔｅｒ Ｒｅｅｄリポソームを含む。
免疫化は、例えば、完全フロイントアジュバント又は水酸化アルミニウムゲルのような適切なアジュバント、及び百日咳菌ワクチンを有するヒト胸腺細胞を、トランスジェニック有蹄動物に皮下、静脈内又は腹腔内に投与することにより実施することができる。一実施形態では、免疫化は、過免疫化を有する。様々な実施形態において、ヒト胸腺細胞は、最初の投与の後、１～４週間ごとに１～１０回投与される。各投与から１～１４日後、前記動物から血液を採取し、血清の抗体価を測定する。
いくつかの実施形態では、ヒト胸腺細胞は、３、４、５、６、またはそれ以上の回数で投与される。ヒト胸腺細胞の投与は、例えば、１～２週間、２～３週間、３～４週間、４～５週間、５～６週間、又は６～７週間ごと、又はより長い間隔、例えば、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間又は６週間ごとに実施されてもよい。各免疫化の後、血清及び／又は血漿をトランスジェニック有蹄動物から１回又は複数回採取してもよい。例えば、本方法は、約７～１４日の間隔で２～３回対照採血を行うことを含むものであってもよい。
いくつかの実施形態では、ＡＴＧ製品を生成するために使用される抗原は、胸腺細胞ではなく、胸腺細胞と１つ以上の内因性タンパク質マーカーを共有する細胞、１つ以上の胸腺細胞タンパク質、組換え胸腺細胞タンパク質、または胸腺細胞タンパク質をコードする核酸（例えばＲＮＡ、線形ＤＮＡ、またはプラスミドＤＮＡ）であってもよい。
本開示の方法の実施形態において、トランスジェニック有蹄動物のゲノムは、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を有する。例示的な方法は、米国特許第９，９０２，９７０号、米国特許第９，３１５，８２４号、米国特許第７，６５２，１９２号、および米国特許第７，４２９，６７２号、および米国特許第７，２５３，３３４号に提供され、これらの開示は、全ての目的のために参照により本明細書に組み込まれる。さらなる例示的な方法は、Kuroiwa, Y., et al. (2009) Nat Biotechnol.27（2）：173-81、およびMatsushita et al. (2015) PLoS ONE 10(6):e0130699に提供されている。
本開示は、
（ａ）１つ以上のヒト抗体重鎖であって、抗体重鎖をコードする各遺伝子がクラススイッチ制御要素に作動的に連結されている、抗体重鎖と、
（ｂ）１つ以上のヒト抗体軽鎖と、および、
（ｃ）１つ以上のヒト抗体代替軽鎖、および／または有蹄動物由来のＩｇＭ重鎖定常領域と
をコードする遺伝子を含むヒト人工染色体（ＨＡＣ）ベクターを提供し、
ここで、１つ以上のヒト抗体重鎖をコードする遺伝子の少なくとも１つのクラススイッチ制御要素は、有蹄動物由来のクラススイッチ制御要素で置換されている。
（ａ）１つ以上のヒト抗体重鎖であって、抗体重鎖をコードする各遺伝子がクラススイッチ制御要素に作動的に連結されている、抗体重鎖と、
（ｂ）１つ以上のヒト抗体軽鎖と、および、
（ｃ）１つ以上のヒト抗体代替軽鎖、および／または有蹄動物由来のＩｇＭ重鎖定常領域と
をコードする遺伝子を含むヒト人工染色体（ＨＡＣ）ベクターを提供し、
ここで、１つ以上のヒト抗体重鎖をコードする遺伝子の少なくとも１つのクラススイッチ制御要素は、有蹄動物由来のクラススイッチ制御要素で置換されている。
本開示のＨＡＣベクターは、例えば、本発明の方法について説明したように、トランスジェニック動物による完全ヒト抗体の大量生産に使用することができる。本開示のＨＡＣベクターは、ヒト抗体重鎖をコードする１つ以上の遺伝子を有する。任意のヒト抗体重鎖又はヒト抗体重鎖の組み合わせが、ＨＡＣ上の１つ以上の核酸によってコードされてもよい。様々な実施形態において、ヒト抗体重鎖ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＥ及びＩｇＤの１、２、３、４、５、６、７、８、又は９つ全てが、１以上のコピーでＨＡＣ上にコードされてもよい。一実施形態では、ＨＡＣは、単独で又は１、２、３、４、５、６、７、又は他の８つのヒト抗体鎖コード化遺伝子と組み合わせて、ヒトＩｇＭ抗体重鎖コード遺伝子を有する。好ましい一実施形態では、ＨＡＣは、少なくともヒトＩｇＧ１抗体重鎖をコードする遺伝子を有する；この実施形態では、ＨＡＣが、ヒトＩｇＭ抗体重鎖をコードする遺伝子、または、有蹄動物由来のＩｇＭ重鎖定常領域（例えばウシ重鎖定常領域）をコードするようにキメラ化されているヒトＩｇＭ抗体重鎖をコードする遺伝子を有することが、さらに好ましい。別の実施形態では、ＨＡＣは、少なくともヒトＩｇＡ抗体重鎖をコードする遺伝子を有し；この実施形態では、ＨＡＣは、ヒトＩｇＭ抗体重鎖をコードする遺伝子、または、キメラ化して有蹄動物由来のＩｇＭ重鎖定数領域（例えばウシ重鎖定数領域）をコードするヒトＩｇＭ抗体重鎖の遺伝子を有することが、さらに好ましい。別の好ましい実施形態では、ＨＡＣは、９つ全ての抗体重鎖をコードする遺伝子を有し、より好ましくは、ヒトＩｇＭ抗体重鎖をコードする遺伝子がキメラ化されて、有蹄動物由来のＩｇＭ重鎖定数領域をコードしている場合である。別の実施形態では、ＨＡＣは、ヒト抗体重鎖をコードするヒト１４番染色体の一部を有し得る。ヒト抗体重鎖の可変領域遺伝子及び定常領域遺伝子はクラスターを形成し、ヒト重鎖遺伝子座はヒト１４番染色体の１４ｑ３２に配置される。一実施形態では、ＨＡＣに挿入されるヒト１４番染色体の領域は、ヒト１４番染色体の１４ｑ３２領域からヒト抗体重鎖の可変領域と定常領域とを有する。
本開示のＨＡＣベクターのいくつかの実施形態では、ヒト抗体重鎖コード核酸の少なくとも１つのクラススイッチ制御要素は、有蹄動物由来のクラススイッチ制御要素で置換されている。クラススイッチ制御要素は、抗体重鎖定数領域の５’側にある核酸を指す。各重鎖定数領域遺伝子は、それ自身のＩ－エキソンと関連する、それ自身のスイッチ領域と作動的に連結している（すなわち、その制御下にある）。クラススイッチ制御要素は、クラススイッチの組換えを制御し、Ｉｇ重鎖のアイソタイプを決定する。各重鎖アイソタイプの生殖細胞系転写は、Ｉ－エキソンのちょうど５’に位置するプロモーター／エンハンサー要素によって駆動され、これらの要素はサイトカインまたは他の活性化因子応答性である。クラススイッチの単純なモデルでは、特定の活性化因子および／またはサイトカインが、そのクラススイッチ制御要素（すなわち、活性化因子／サイトカイン応答性プロモーターおよび／またはエンハンサー）から各重鎖アイソタイプの生殖細胞系列転写を誘導する。クラススイッチの前に、各Ｉｇ重（ＩＧＨ）遺伝子座に関連したスイッチ領域からＩ－エキソンの転写が行われる。各重鎖定常領域遺伝子は、それぞれのスイッチ領域と連結している。
任意の適切な有蹄動物由来のクラススイッチ制御要素を使用することができる。例えば、以下に示すヒト重鎖遺伝子のアイソタイプは、以下のクラススイッチ制御要素：
ＩｇＭ：Ｉμ－Ｓμ、
ＩｇＧ１：Ｉγ１－Ｓγ１、
ＩｇＧ２：Ｉγ２－Ｓγ２、
ＩｇＧ３：Ｉγ３－Ｓγ３、
ＩｇＧ４：Ｉγ４－Ｓγ４、
ＩｇＡ１：Ｉα１－Ｓα１、
ＩｇＡ２：Ｉα２－Ｓα２、および
ＩｇＥ：Ｉε－Ｓε
を有する。
ＩｇＭ：Ｉμ－Ｓμ、
ＩｇＧ１：Ｉγ１－Ｓγ１、
ＩｇＧ２：Ｉγ２－Ｓγ２、
ＩｇＧ３：Ｉγ３－Ｓγ３、
ＩｇＧ４：Ｉγ４－Ｓγ４、
ＩｇＡ１：Ｉα１－Ｓα１、
ＩｇＡ２：Ｉα２－Ｓα２、および
ＩｇＥ：Ｉε－Ｓε
を有する。
様々な実施形態において、ＨＡＣ上のヒト抗体重鎖遺伝子の１、１以上、または全てが、そのクラススイッチ制御要素を、有蹄動物Ｉμ－Ｓμ、Ｉγ－Ｓγ、Ｉα－Ｓα、またはＩε－Ｓε、クラススイッチ制御要素を含むがこれらに限定されない有蹄動物由来クラススイッチ制御要素に置換される。一実施形態では、ＨＡＣ上の核酸をコードするヒトＩｇＧ１重鎖のＩγ１－Ｓγ１ヒトクラススイッチ制御要素（配列ＩＤ番号：１のものなど）は、有蹄動物Ｉγ１－Ｓγ１クラススイッチ制御要素に置換される。例示的な有蹄動物Ｉγ１－Ｓγ１クラス調節スイッチ要素には、ウシＩｇＧ１ Ｉγ１－Ｓγ１クラススイッチ制御要素（配列ＩＤ番号：２）、ウマＩγ１－Ｓγ１クラススイッチ制御要素（配列ＩＤ番号：３）、およびブタＩγ１－Ｓγ１クラススイッチ制御要素（配列ＩＤ番号：４）が含まれる。しかしながら、ヒトクラススイッチ制御要素を、対応する重鎖アイソタイプからの有蹄動物クラススイッチ制御要素で置換する必要はない。したがって、例えば、ＨＡＣ上の核酸をコードするヒトＩｇＧ３重鎖のＩγ３－Ｓγ３ヒトクラススイッチ制御要素は、有蹄動物Ｉγ１－Ｓγ１クラススイッチ制御要素に置換することができる。本明細書の教示に基づく当業者には明らかなように、任意のそのような組み合わせを本開示のＨＡＣにおいて使用することができる。
別の実施形態では、ＨＡＣは、ＨＡＣ上の１つ以上の核酸をコードする１つ以上のヒト抗体重鎖定常領域関連するエンハンサー要素を置き換えるために、少なくとも１つの有蹄動物エンハンサー要素を有する。ヒト抗体重鎖遺伝子に関連する２つの３’エンハンサー領域（アルファ１及びアルファ２）がある。エンハンサー要素は重鎖定数領域の３’にあり、またクラススイッチの調節にも役立つ。３’Ｅαエンハンサーを含むがこれに限定されない、任意の適切な有蹄動物エンハンサーを使用することができる。使用できる３’Ｅαエンハンサーの非限定的な例には、３’Ｅα、３’Ｅα１、及び３’Ｅα２が含まれる。ＨＡＣにおいて使用され、ヒトエンハンサーを置換することができる例示的なウシ由来の３’Ｅαエンハンサー要素は、ウシＨＳ３エンハンサー（配列ＩＤ番号：５）、ウシＨＳ１２エンハンサー（配列ＩＤ番号：６）、およびウシエンハンサーＨＳ４があるが、それだけに限られるわけではない。この実施形態は、ＨＡＣが、ヒト１４番染色体の１４ｑ３２領域からのヒト抗体重鎖の可変領域及び定常領域からなる実施形態において、特に好ましい。
本開示のＨＡＣベクターは、ヒト抗体軽鎖をコードする１つまたは複数の遺伝子を有し得る。任意の適切なヒト抗体軽鎖をコードする遺伝子を、本発明のＨＡＣベクターに使用することができる。ヒト抗体軽鎖は、２種類の遺伝子、すなわち、カッパ／Ｋ鎖遺伝子及びラムダ／Ｌ鎖遺伝子を含む。一実施形態では、ＨＡＣは、カッパおよびラムダの両方をコードする遺伝子を１つまたは複数のコピーで含む。κ鎖の可変領域及び定常領域は、ヒト２番染色体の２ｐ１１．２～２ｐ１２に位置し、λ鎖は、ヒト２２番染色体の２２ｑ１１．２に位置するクラスターを形成している。したがって、一実施形態では、本発明のＨＡＣベクターは、２ｐ１１．２－２ｐ１２領域のκ鎖遺伝子クラスターを含むヒト第２染色体フラグメントを含んでいる。別の実施形態では、本発明のＨＡＣベクターは、２２ｑ１１．２領域のラムダ鎖遺伝子クラスターを含むヒト２２番染色体フラグメントを有する。
別の実施形態では、ＨＡＣベクターは、ヒト抗体代替軽鎖をコードする少なくとも１つの遺伝子を有する。ヒト抗体代替軽鎖をコードする遺伝子は、ヒトプロＢ細胞における遺伝子再構成によって産生される抗体重鎖と結合してプレＢ細胞受容体（ｐｒｅＢＣＲ）を構成する一過性の抗体軽鎖をコードする遺伝子を意味する。ＶｐｒｅＢ１（配列ＩＤ番号：７）、ＶｐｒｅＢ３（配列ＩＤ番号：８）及びλ５（ＩｇＬＬ１としても知られている、配列ＩＤ番号：９）ヒト抗体代替軽鎖、及びそれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない任意の適切なヒト抗体代替軽鎖コード化遺伝子が使用可能である。ＶｐｒｅＢ遺伝子及びλ５遺伝子は、ヒト２２番染色体の２２ｑ１１．２のヒト抗体λ鎖遺伝子座の中に位置する。したがって、一実施形態では、ＨＡＣは、ＶｐｒｅＢ遺伝子及びλ５遺伝子を含むヒト２２番染色体の２２ｑ１１．２領域から構成され得る。本発明のヒトＶｐｒｅＢ遺伝子は、ＶｐｒｅＢ１遺伝子（配列ＩＤ番号：７）及びＶｐｒｅＢ３遺伝子（配列ＩＤ番号：８）のいずれか又は両方を提供し、一実施形態では、ＶｐｒｅＢ１遺伝子及びＶｐｒｅＢ３遺伝子の両方を提供する。
さらに別の実施形態では、ＨＡＣベクターは、有蹄動物由来のＩｇＭ重鎖定数領域をコードする遺伝子を有する。この実施形態では、ＩｇＭ重鎖定数領域は、ヒトＩｇＭ抗体重鎖可変領域とのキメラとして発現される。ウシＩｇＭ、（配列ＩＤ番号：１０）、ウマＩｇＭ、（配列ＩＤ番号：１１）、ヒツジＩｇＭ、（配列ＩＤ番号：１２）、及びブタＩｇＭ、（配列ＩＤ番号：１３）を含むがこれらに限定されない任意の適切な有蹄動物ＩｇＭ重鎖抗体定常領域コード核酸が使用可能である。一実施形態では、キメラＩｇＭは、配列ＩＤ番号：１４の配列からなる。ＩｇＭ重鎖分子を介したＰｒｅ－ＢＣＲ／ＢＣＲシグナルは、Ｂ細胞膜分子Ｉｇ－アルファ／Ｉｇ－ベータと相互作用して細胞内のシグナル伝達を引き起こすことにより、Ｂ細胞の増殖及び発生を促進する。ＩｇＭの膜貫通領域やその他の定常領域は、Ｉｇ－α／Ｉｇ－βと相互作用してシグナル伝達を行う上で重要な役割を担っていると考えられている。ＩｇＭ重鎖の定常領域の例としては、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４などの定常領域ドメインや、ＴＭ１、ＴＭ２などのＢ細胞膜貫通ドメインや細胞質ドメインをコードする核酸が挙げられる。本発明のヒト人工染色体ベクターに含まれる、有蹄動物由来のＩｇＭ重鎖定数領域をコードする核酸は、上記ＩｇＭ重鎖定数領域において、Ｂ細胞受容体のシグナルまたはＢ細胞の増殖および発生を十分に誘導し得る範囲であれば、特に限定されるものではない。一実施形態では、有蹄動物由来のＩｇＭ重鎖定数領域をコードする核酸は、有蹄動物由来の膜貫通ドメイン及び細胞質ＴＭ１ドメイン及びＴＭ２ドメインを提供し、他の実施形態では、有蹄動物由来のＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ＣＨ４ドメイン、ＴＭ１ドメイン及びＴＭ２ドメイン又は有蹄動物由来のＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ＣＨ４ドメイン、ＴＭ１ドメイン及びＴＭ２ドメインがコードされる。
一実施形態において、ウシのＩｇＭ重鎖定数領域をコードする遺伝子は、ウシ内在性ＩｇＭ重鎖遺伝子が配置されているＩＧＨＭ領域に含まれる（ＩＧＨＭ由来）ウシＩｇＭ重鎖定数領域をコードする遺伝子、またはＩＧＨＭＬ１領域（ＩＧＨＭＬ１由来）に含まれるウシＩｇＭ重鎖定数領域をコードする遺伝子である。別の実施形態では、ウシＩｇＭ重鎖定常領域をコードする遺伝子は、ＩＧＨＭ領域内に含まれる。
さらなる実施形態において、ＨＡＣは、ヒト抗体重鎖をコードする遺伝子が、ヒト重鎖（例えば、ＩｇＧ１重鎖などのヒトＩｇＧ重鎖）をコードする遺伝子を有し、ヒト重鎖遺伝子の一定領域の膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインが、有蹄動物由来の重鎖（例えば、ＩｇＧ１重鎖などの有蹄動物ＩｇＧ重鎖）、一定領域遺伝子の膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインで置換されてなるものである。一実施形態では、ヒトＩｇＧ重鎖遺伝子の対応する領域を置き換えるために、有蹄動物由来（ウシなど）ＩｇＧ（ＩｇＧ１など）重鎖定常領域の膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインをコードする遺伝子が使用される。別の実施形態では、ヒトＩｇＧ重鎖遺伝子の対応する領域を置き換えるために、有蹄動物由来（ウシなど）のＩｇＧ（ＩｇＧ１など）重鎖定常領域のＴＭ１ドメインおよびＴＭ２ドメインをコードする遺伝子が使用される。別の実施形態では、ヒトＩｇＧ重鎖遺伝子の対応する領域を置き換えるために、有蹄動物由来（ウシなど）ＩｇＧ（ＩｇＧ１など）重鎖定常領域のＣＨ１－ＣＨ４ドメイン及び／又はＴＭ１及びＴＭ２ドメインのうちの１以上をコードする遺伝子が使用される。
本開示は、さらに、本開示の任意の実施形態または実施形態の組み合わせによるＨＡＣベクターを有するトランスジェニック有蹄動物を提供する。本発明のＨＡＣベクターを有するトランスジェニック有蹄動物とは、本発明のヒト人工染色体ベクターが導入された動物を指す。本発明のＨＡＣを有するトランスジェニック有蹄動物は、その細胞にヒト人工染色体フラグメントが導入され得る動物である限り特に限定されず、ヒト以外の動物、例えば、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ブタなどの有蹄動物などが使用され得る。一態様において、トランスジェニック有蹄動物はウシである。本発明のＨＡＣベクターを有するトランスジェニック有蹄動物は、例えば、本明細書に記載のものなど、任意の適切な技術を用いて本開示のＨＡＣベクターを宿主動物の卵子に導入することにより構築することができる。本発明のＨＡＣベクターは、例えば、マイクロセル融合法により、宿主有蹄動物由来の体細胞に導入されてもよい。その後、該細胞の核又はクロマチン凝集体を卵母細胞に移植し、該卵母細胞又は該卵母細胞から形成される胚を宿主動物の子宮に移植して出産させることにより、ＨＡＣベクターを有する動物を構築することができる。上記方法により構築された動物がヒト人工染色体ベクターを有するかどうかは、黒岩らの方法（Kuroiwa et al., Nature Biotechnology, 18, 1086-1090, 2000 and Kuroiwa et al., Nature Biotechnology, 20, 889-894）により確認することができる。
本開示は、
（ａ）１つ以上のヒト抗体重鎖であって、抗体重鎖をコードする各遺伝子がクラススイッチ制御要素に作動的に連結されている、抗体重鎖と、
（ｂ）１つ以上のヒト抗体軽鎖と、および、
（ｃ）１つ以上のヒト抗体代替軽鎖、および／または有蹄動物由来のＩｇＭ重鎖定常領域と
をコードするゲノムに組み込まれた遺伝子を有するトランスジェニック有蹄動物をさらに提供し、
ここで、１つ以上のヒト抗体重鎖をコードする遺伝子の少なくとも１つのクラススイッチ制御要素は、有蹄動物由来のクラススイッチ制御要素で置換されている。
（ａ）１つ以上のヒト抗体重鎖であって、抗体重鎖をコードする各遺伝子がクラススイッチ制御要素に作動的に連結されている、抗体重鎖と、
（ｂ）１つ以上のヒト抗体軽鎖と、および、
（ｃ）１つ以上のヒト抗体代替軽鎖、および／または有蹄動物由来のＩｇＭ重鎖定常領域と
をコードするゲノムに組み込まれた遺伝子を有するトランスジェニック有蹄動物をさらに提供し、
ここで、１つ以上のヒト抗体重鎖をコードする遺伝子の少なくとも１つのクラススイッチ制御要素は、有蹄動物由来のクラススイッチ制御要素で置換されている。
そのような実施形態では、トランスジェニック有蹄動物は、ＨＡＣについて本明細書に記載されるような核酸の任意の実施形態または実施形態の組み合わせを有し得るが、ＨＡＣに存在するのではなく、有蹄動物の染色体に統合されている。
本開示は、ヒト抗体を産生する方法であって、前記方法は（ａ）ヒト胸腺細胞、または本開示の他の標的抗原を、本開示の任意の実施形態または実施形態の組み合わせのトランスジェニック有蹄動物に投与して、前記有蹄動物の血清または血漿中のヒト胸腺細胞（またはＴ細胞、Ｂ細胞、および／または単球）に特異的なヒト免疫グロブリン集団を生成し蓄積させる工程と、および任意選択で（ｂ）前記有蹄動物の前記血清または血漿から、前記ヒト胸腺細胞に特異的な（またはＴ細胞、Ｂ細胞、および／または単球に特異的な）ヒト免疫グロブリンの集団を単離、回収、および／または精製する工程とを有する。
ポリクローナル血清もしくは血漿、またはポリクローナル血清もしくは血漿から精製されたヒト免疫グロブリンは、ＡＴＧ製剤として使用することができる。
変形例において、本開示は、ヒト抗体のタンパク質配列を回収する方法を提供し、前記方法は（ｉ）トランスジェニック有蹄動物からリンパ球を単離する工程と、（ｉｉ）前記リンパ球からヒトモノクローナル抗体産生ハイブリドーマを生成する工程と、および（ｉｉｉ）ハイブリドーマからヒト胸腺細胞に対して特異的なヒトモノクローナル抗体を回収する工程と、を有する。別の実施形態では、トランスジェニック有蹄動物からのリンパ球は、トランスジェニック有蹄動物のリンパ節から単離される。さらなる実施形態では、トランスジェニック有蹄動物は、ヒト胸腺細胞または本開示の他の標的抗原で過免疫化される。
胸腺細胞特異的ヒト免疫グロブリンは、ＨＡＣベクターを有するトランスジェニック有蹄動物をヒト胸腺細胞、または本開示の他の標的抗原で免疫化して、トランスジェニック有蹄動物の血清または血漿中に胸腺細胞特異的ヒト免疫グロブリンを産生し、トランスジェニック有蹄動物の血清または血漿から胸腺細胞特異的ヒト免疫グロブリンを回収して、製造することも可能である。
組成物中の胸腺細胞特異的ヒト免疫グロブリンを検出および測定する方法の例としては、酵素結合免疫吸着測定法（ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ）などによる結合測定が挙げられる。ヒト免疫グロブリンの結合量は、ヒト免疫グロブリンを有する組成物を細胞（例えば、胸腺細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞及び／又は単球、又は組換えタンパク質抗原）とインキュベートし、ヒト免疫グロブリンを特異的に認識する抗体を用いることにより測定することができる。
変形例では、本開示の方法は、モノクローナル抗体を生成するために使用される。様々な種類の抗体を調製し利用する方法は、当業者に周知であり、本発明の実施において好適であろう（例えば、Harlow, et al: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988; Kohler and Milstein, Nature 256:495 (1975)を参照）。ハイブリドーマの調製方法の一例は、（１）トランスジェニック有蹄動物を胸腺細胞で免疫化する工程と、（２）前記トランスジェニック有蹄動物から（すなわち、リンパ節から）抗体産生細胞を採取する工程と；（３）前記抗体産生細胞をミエローマ細胞と融合する工程と；（４）上記工程で得られた融合細胞から胸腺細胞に特異的なモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを選択する工程と；および任意で（５）前記選択したハイブリドーマから胸腺細胞に特異的なモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを選択する工程と、を有する。
本開示の抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）を産生する方法の実施形態では、トランスジェニック有蹄動物は、ヒト抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）を産生する。本方法は、トランスジェニック有蹄動物からポリクローナル血清及び／又はポリクローナル血漿を採取する工程を有し得る。いくつかの実施形態では、有蹄動物はウシである。いくつかの実施形態では、ポリクローナル免疫グロブリン組成物は、完全ヒト免疫グロブリンの集団、又は実質的にヒト免疫グロブリンの集団を有する。
本開示の方法、及び関連する組成物のいくつかの実施形態は、胸腺細胞特異的免疫グロブリンが、高収率で、高純度で、及び／又はトランスジェニック有蹄動物の血清又は血漿中に存在する全免疫グロブリンの高い割合として産生されるという驚くべき利点を有する。いくつかの実施形態では、有蹄動物はウシである。
本開示の方法及び組成物のいくつかの実施形態では、ポリクローナル血清又はポリクローナル血漿は、ポリクローナル血清またはポリクローナル血漿中の全免疫グロブリンの質量で、少なくとも０．１％、少なくとも０．２％、少なくとも０．３％、少なくとも０．４％、少なくとも０．５％、少なくとも０．６％、少なくとも０．７％、少なくとも０．８％、少なくとも０．９％、少なくとも１％、少なくとも１．１％、少なくとも１．２％、少なくとも１．３％、少なくとも１．４％、少なくとも１．５％、少なくとも１．６％、少なくとも１．７％、少なくとも１．８％、少なくとも１．９％、少なくとも２％、少なくとも２．１％、少なくとも２．２％、少なくとも２．３％、少なくとも２．４％、少なくとも２．５％、少なくとも２．６％、少なくとも２．７％、少なくとも２．８％、少なくとも２．９％、少なくとも３％、少なくとも３．１％、少なくとも３．２％、少なくとも３．３％、少なくとも３．４％、少なくとも３．５％、少なくとも３．６％、少なくとも３．７％、少なくとも３．８％、少なくとも３．９％、少なくとも４％、少なくとも４．１％、少なくとも４．２％、少なくとも４．３％、少なくとも４．４％、少なくとも４．５％、少なくとも４．６％、少なくとも４．７％、少なくとも４．８％、少なくとも４．９％、少なくとも５％、少なくとも５．１％、少なくとも５．２％、少なくとも５．３％、少なくとも５．４％、少なくとも５．５％、少なくとも５．６％、少なくとも５．７％、少なくとも５．８％、少なくとも５．９％、少なくとも６．０％、少なくとも６．１％、少なくとも６．２％、少なくとも６．３％、少なくとも６．４％、少なくとも６．５％、少なくとも６．６％、少なくとも６．７％、少なくとも６．８％、少なくとも６．９％、少なくとも７．０％、少なくとも７．１％、少なくとも７．２％、少なくとも７．３％、少なくとも７．４％、少なくとも７．５％、少なくとも７．６％、少なくとも７．７％、少なくとも７．８％、少なくとも７．９％、少なくとも８．０％、少なくとも８．１％、少なくとも８．２％、少なくとも８．３％、少なくとも８．４％、少なくとも８．５％、少なくとも８．６％、少なくとも８．７％、少なくとも８．８％、少なくとも８．８％、少なくとも９．０％、少なくとも９．１％、少なくとも９．２％、少なくとも９．３％、少なくとも９．４％、少なくとも９．５％、少なくとも９．６％、少なくとも９．７％、少なくとも９．８％、少なくとも９．８％、少なくとも９．９％、または少なくとも１０％の完全ヒト（または実質的にヒト）免疫グロブリンを有する。
本開示の方法及び組成物のいくつかの実施形態では、ポリクローナル血清又はポリクローナル血漿は、ポリクローナル血清またはポリクローナル血漿中の全免疫グロブリンの質量で、０．１～０．６％、０．２～０．７％、０．３～０．８％、０．４～０．９％、０．５～１％、０．６～１．１％、０．７～１．２％、０．８～１．３％、０．９～１．４％、１～１．５％、１．１～１．６％、１．２～１．７％、１．３～１．８％、１．４～１．９％、１．５～２％、１．６～２．１％、１．７～２．２％、１．８～２．３％、１．９～２．４％、２～２．５％、２．１～２．６％、２．２～２．７％、２．３～２．８％、２．４～２．９％、２．５～３％、２．６～３．１％、２．７～３．２％、２．８～３．３％、２．９～３．４％、３～３．５％、３．１～３．６％、３．２～３．７％、３．３～３．８％、３．４～３．９％、３．５～４％、３．６～４．１％、３．７～４．２％、３．８～４．３％、３．９～４．４％、４～４．５％、４．１～４．６％、４．２～４．７％、４．３～４．８％、４．４～４．９％、４．５～５％、４．６～５．１％、４．７～５．２％、４．８～５．３％、４．９～５．４％、５～５．５％、５．１～５．６％、５．２～５．７％、５．３～５．８％、５．４～５．９％、５．５～６％、５．６～６．１％、５．７～６．２％、５．８～６．３％、または５．９～６．４％の完全ヒト（または実質的にヒト）免疫グロブリンを有する。
本開示の方法及び組成物のいくつかの実施形態では、ポリクローナル血清又はポリクローナル血漿は、ポリクローナル血清またはポリクローナル血漿中の全免疫グロブリンの質量で、０～０．５％、０．５～１％、１～１．５％、１．５～２％、２～２．５％、２．５～３％、３～３．５％、３．５～４％、４～４．５％、４．５～５％、５～５．５％、５．５～６％、６～６．５％、６．５～７％、７～７．５％、７．５～８％、８～８．５％、８．５～９％、９～９．５％、９．５～１０％またはそれ以上の完全ヒト（または実質的にヒト）免疫グロブリンを有する。
本開示の方法及び組成物のいくつかの実施形態では、ポリクローナル血清又はポリクローナル血漿は、ポリクローナル血清又はポリクローナル血漿中の全免疫グロブリンの質量で、０～１％、１～２％、２～３％、３～４％、４～５％、５～６％、６～７％、７～８％、８～９％、９～１０％又はそれ以上の完全ヒト（又は実質的にヒト）免疫グロブリンを有する。
本開示の方法及び組成物のいくつかの実施形態では、ポリクローナル血清又はポリクローナル血漿は、ポリクローナル血清又はポリクローナル血漿中の全免疫グロブリンの質量で０～５％、５～１０％、１０～１５％、１５～２０％、２０～２５％、２５～３０％、３０～３５％、３５～４０％又はそれ以上の完全ヒト（又は実質的にヒト）免疫グロブリンを有する。
本開示の方法及び組成物のいくつかの実施形態では、ポリクローナル血清又はポリクローナル血漿は、ポリクローナル血清又はポリクローナル血漿中の全免疫グロブリンの質量で０～５％、５～１０％、１０～１５％、１５～２０％、２０～２５％、２５～３０％、３０～３５％、３５～４０％又はそれ以上の完全ヒト（又は実質的にヒト）免疫グロブリンを有する。
本開示の方法及び組成物のいくつかの実施形態では、ポリクローナル血清又はポリクローナル血漿は、ポリクローナル血清又はポリクローナル血漿中の全免疫グロブリンの質量で少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、又は少なくとも１０％の完全ヒト（又は実質的にヒト）免疫グロブリンを有する。
本開示の方法及び組成物のいくつかの実施形態では、ポリクローナル血清又はポリクローナル血漿は、ポリクローナル血清又はポリクローナル血漿中の全免疫グロブリンの質量で１～４％、２～５％、３～６％、４～７％、５～８％、６～９％又は７～１０％の完全ヒト（又は実質的にヒト）免疫グロブリンを有する。
本開示の方法及び組成物のいくつかの実施形態では、ポリクローナル免疫グロブリンは、ポリクローナル免疫グロブリン中の全免疫グロブリンの質量で、少なくとも０．１％、少なくとも０．２％、少なくとも０．３％、少なくとも０．４％、少なくとも０．５％、少なくとも０．６％、少なくとも０．７％、少なくとも０．８％、少なくとも０．９％、少なくとも１％、少なくとも１．１％、少なくとも１．２％、少なくとも１．３％、少なくとも１．４％、少なくとも１．５％、少なくとも１．６％、少なくとも１．７％、少なくとも１．８％、少なくとも１．９％、少なくとも２％、少なくとも２．１％、少なくとも２．２％、少なくとも２．３％、少なくとも２．４％、少なくとも２．５％、少なくとも２．６％、少なくとも２．７％、少なくとも２．８％、少なくとも２．９％、少なくとも３％、少なくとも３．１％、少なくとも３．２％、少なくとも３．３％、少なくとも３．４％、少なくとも３．５％、少なくとも３．６％、少なくとも３．７％、少なくとも３．８％、少なくとも３．９％、少なくとも４％、少なくとも４．１％、少なくとも４．２％、少なくとも４．３％、少なくとも４．４％、少なくとも４．５％、少なくとも４．６％、少なくとも４．７％、少なくとも４．８％、少なくとも４．９％、少なくとも５％、少なくとも５．１％、少なくとも５．２％、少なくとも５．３％、少なくとも５．４％、少なくとも５．５％、少なくとも５．６％、少なくとも５．７％、少なくとも５．８％、少なくとも５．９％、少なくとも６．０％、少なくとも６．１％、少なくとも６．２％、少なくとも６．３％、少なくとも６．４％、少なくとも６．５％、少なくとも６．６％、少なくとも６．７％、少なくとも６．８％、少なくとも６．９％、少なくとも７．０％、少なくとも７．１％、少なくとも７．２％、少なくとも７．３％、少なくとも７．４％、少なくとも７．５％、少なくとも７．６％、少なくとも７．７％、少なくとも７．８％、少なくとも７．９％、少なくとも８．０％、少なくとも８．１％、少なくとも８．２％、少なくとも８．３％、少なくとも８．４％、少なくとも８．５％、少なくとも８．６％、少なくとも８．７％、少なくとも８．８％、少なくとも８．８％、少なくとも９．０％、少なくとも９．１％、少なくとも９．２％、少なくとも９．３％、少なくとも９．４％、少なくとも９．５％、少なくとも９．６％、少なくとも９．７％、少なくとも９．８％、少なくとも９．８％、少なくとも９．９％、または少なくとも１０％の完全ヒト（または実質的にヒト）免疫グロブリンを有する。
本開示の方法及び組成物のいくつかの実施形態では、ポリクローナル免疫グロブリンは、ポリクローナル免疫グロブリン中の全免疫グロブリンの質量で、０．１～０．６％、０．２～０．７％、０．３～０．８％、０．４～０．９％、０．５～１％、０．６～１．１％、０．７～１．２％、０．８～１．３％、０．９～１．４％、１～１．５％、１．１～１．６％、１．２～１．７％、１．３～１．８％、１．４～１．９％、１．５～２％、１．６～２．１％、１．７～２．２％、１．８～２．３％、１．９～２．４％、２～２．５％、２．１～２．６％、２．２～２．７％、２．３～２．８％、２．４～２．９％、２．５～３％、２．６～３．１％、２．７～３．２％、２．８～３．３％、２．９～３．４％、３～３．５％、３．１～３．６％、３．２～３．７％、３．３～３．８％、３．４～３．９％、３．５～４％、３．６～４．１％、３．７～４．２％、３．８～４．３％、３．９～４．４％、４～４．５％、４．１～４．６％、４．２～４．７％、４．３～４．８％、４．４～４．９％、４．５～５％、４．６～５．１％、４．７～５．２％、４．８～５．３％、４．９～５．４％、５～５．５％、５．１～５．６％、５．２～５．７％、５．３～５．８％、５．４～５．９％、５．５～６％、５．６～６．１％、５．７～６．２％、５．８～６．３％、または５．９～６．４％の完全ヒト（または実質的にヒト）免疫グロブリンを有する。
本開示の方法及び組成物のいくつかの実施形態では、ポリクローナル免疫グロブリンは、ポリクローナル免疫グロブリン中の全免疫グロブリンの質量で、０～０．５％、０．５～１％、１～１．５％、１．５～２％、２～２．５％、２．５～３％、３～３．５％、３．５～４％、４～４．５％、４．５～５％、５～５．５％、５．５～６％、６～６．５％、６．５～７％、７～７．５％、７．５～８％、８～８．５％、８．５～９％、９～９．５％、９．５～１０％またはそれ以上の完全ヒト（または実質的にヒト）免疫グロブリンを有する。
本開示の方法及び組成物のいくつかの実施形態では、ポリクローナル免疫グロブリンは、ポリクローナル免疫グロブリン中の全免疫グロブリンの質量で、０～１％、１～２％、２～３％、３～４％、４～５％、５～６％、６～７％、７～８％、８～９％、９～１０％又はそれ以上の完全ヒト（又は実質的にヒト）免疫グロブリンを有する。
本開示の方法及び組成物のいくつかの実施形態では、ポリクローナル免疫グロブリンは、ポリクローナル免疫グロブリン中の全免疫グロブリンの質量で、０～５％、５～１０％、１０～１５％、１５～２０％、２０～２５％、２５～３０％、３０～３５％、３５～４０％又はそれ以上の完全ヒト（又は実質的にヒト）免疫グロブリンを有する。
本開示の方法及び組成物のいくつかの実施形態では、ポリクローナル免疫グロブリンは、ポリクローナル免疫グロブリン中の全免疫グロブリンの質量で、０～５％、５～１０％、１０～１５％、１５～２０％、２０～２５％、２５～３０％、３０～３５％、３５～４０％又はそれ以上の完全ヒト（又は実質的にヒト）免疫グロブリンを有する。
本開示の方法及び組成物のいくつかの実施形態では、ポリクローナル免疫グロブリンは、ポリクローナル免疫グロブリン中の全免疫グロブリンの質量で、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、又は少なくとも１０％の完全ヒト（又は実質的にヒト）免疫グロブリンを有する。
本開示の方法及び組成物のいくつかの実施形態では、ポリクローナル免疫グロブリンは、ポリクローナル免疫グロブリン中の全免疫グロブリンの質量で、１～４％、２～５％、３～６％、４～７％、５～８％、６～９％又は７～１０％の完全ヒト（又は実質的にヒト）免疫グロブリンを有する。
本開示の方法及び組成物のいくつかの実施形態では、ポリクローナル免疫グロブリンは、ポリクローナル免疫グロブリン中の全免疫グロブリンの質量で、少なくとも５％の完全ヒト免疫グロブリンを有する。
本開示の方法及び組成物のいくつかの実施形態では、ポリクローナル免疫グロブリンは、ポリクローナル免疫グロブリン中の全免疫グロブリンの質量で２％～５％の完全ヒト免疫グロブリンを有する。
いくつかの実施形態では、有蹄動物由来ポリクローナル免疫グロブリンは、ヒト重鎖及び有蹄動物カッパ軽鎖を有する「キメラ」ヒト免疫グロブリン（「ｃＩｇＧ」と称される）を有する。いくつかの実施形態では、ポリクローナル免疫グロブリンは、全タンパク質濃度のパーセントで、約０．５％未満、約０．７５％未満、約１．０％未満、約１．２５％未満、約１．５％未満、約１．７５％未満、約２．０％、約２．２５％未満、約２．５％未満、約２．７５％未満、約３．０％未満、約３．２５％未満、約３．５％未満、約３．７５％未満、または約４．０％未満のｃＩｇＧを有する。いくつかの実施形態では、ポリクローナル免疫グロブリンは、全タンパク質濃度のパーセントとして、約０．５％～約１．０％、約１．０％～約１．５％、約１．５％～約２．０％、約２．０％～約２．５％、または約２．５％～約３．０％のｃＩｇＧを有する。いくつかの実施形態では、ポリクローナル免疫グロブリンは、全タンパク質濃度のパーセントで、約０．５％～約１．０％、約１．０％～約２．０％、又は約１．０～約３．０％のｃＩｇＧを有する。
いくつかの実施形態では、本開示のポリクローナル免疫グロブリンは、参照製品（例えば、サイモグロブリン又はＡＴＧＡＭ）よりも補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）アッセイにおいてより強力である。いくつかの実施形態では、本開示のポリクローナル免疫グロブリンは、参照製品（例えば、サイモグロブリン又はＡＴＧＡＭ）よりも補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）アッセイにおいて少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、又は少なくとも約２００％以上強力である。
いくつかの実施形態では、本開示のポリクローナル免疫グロブリンは、参照製品（例えば、サイモグロブリン又はＡＴＧＡＭ）よりもＣＤ８＋細胞に対して高い毒性を生成する。いくつかの実施形態では、本開示のポリクローナル免疫グロブリンは、ＣＤ８＋細胞殺傷アッセイにおいて、参照製品（例えば、サイモグロブリン又はＡＴＧＡＭ）よりも少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約１００％、又は少なくとも約２００％高い効力を発揮する。
いくつかの実施形態では、本開示のポリクローナル免疫グロブリンは、参照製品（例えば、サイモグロブリン又はＡＴＧＡＭ）よりも低いＣＤ４＋Ｔ細胞アポトーシスの割合を生成する。いくつかの実施形態では、本開示のポリクローナル免疫グロブリンは、参照製品（例えば、サイモグロブリン又はＡＴＧＡＭ）よりもＣＤ４＋細胞アポトーシスアッセイにおいて少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約１００％、又は少なくとも約２００％毒性が小さい。
いくつかの実施形態では、本開示のポリクローナル免疫グロブリンは、参照製品（例えば、サイモグロブリン又はＡＴＧＡＭ）よりも、従来のＴ細胞配給にＴｒｅｇをよりよく保存する。いくつかの実施形態では、本開示のポリクローナル免疫グロブリンは、参照製品（例えば、サイモグロブリン又はＡＴＧＡＭ）よりも、Ｔｒｅｇ細胞に対して少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、又は少なくとも約２００％少ない毒性である。
本開示の方法及び組成物のいくつかの実施形態では、完全ヒト免疫グロブリンの集団（又は実質的にヒト）は、ヒト胸腺細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、及び／又は単球を特異的に結合させる。いくつかの実施形態では、完全ヒト（又は実質的にヒト）免疫グロブリンの集団は、ヒト胸腺細胞を特異的に結合させる。
本開示は、ヒト胸腺細胞によりトランスジェニック有蹄動物を免疫化することによって製造される組成物であって、組成物が、完全ヒトまたは実質的にヒトの免疫グロブリンの集団を有し、完全ヒトまたは実質的にヒトの免疫グロブリンの集団が、ヒト胸腺細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、および／または単球を特異的に結合するものを、更に提供する。
いくつかの実施形態では、トランスジェニック有蹄動物のゲノムは、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を有する。
いくつかの実施形態では、トランスジェニック有蹄動物は、３回、４回、５回、またはそれ以上の回数、免疫化される。
いくつかの実施形態では、完全ヒトまたは実質的にヒトの免疫グロブリンの集団は、免疫化後にトランスジェニック有蹄動物の血清から精製される。
本開示は、それを必要とする対象に抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）治療を提供する方法であって、本開示によるポリクローナル免疫グロブリンを対象に投与する工程を有する、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本方法は、有効量の抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）を対象に提供する。いくつかの実施形態では、対象は、１型糖尿病に罹患している。いくつかの実施形態では、対象は、臓器移植レシピエントである。いくつかの実施形態では、対象は、移植片対宿主病に罹患しているか、またはその危険性がある。いくつかの実施形態では、対象は、幹細胞移植レシピエントである。
本開示は、それを必要とする対象に抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）治療を提供する方法であって、トランスジェニック有蹄動物をヒト胸腺細胞で免疫化することによって産生された組成物を対象に投与する工程を有する、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本方法は、有効量の抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）を対象に提供する。いくつかの実施形態では、対象は、１型糖尿病に罹患している。いくつかの実施形態では、対象は、臓器移植レシピエントである。いくつかの実施形態では、対象は、移植片対宿主病に罹患しているか、またはその危険性がある。いくつかの実施形態では、対象は、幹細胞移植レシピエントである。
本開示は、それを必要とする対象に抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）治療を提供する方法であって、本開示に従って産生されたポリクローナル免疫グロブリンを対象に投与する工程を有する、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本方法は、有効量の抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）を対象に提供する。いくつかの実施形態では、対象は、１型糖尿病に罹患している。いくつかの実施形態では、対象は、臓器移植レシピエントである。いくつかの実施形態では、対象は、移植片対宿主病に罹患しているか、またはその危険性がある。いくつかの実施形態では、対象は、幹細胞移植レシピエントである。
ＡＴＧによる治療の例示的な方法は、例えば、以下の文献に記載されている：
Voltarelli, J.C., et al. (2007) Autologous nonmyeloablative hematopoietic stem cell transplantation in newly diagnosed type 1 diabetes mellitus. JAMA. 297(14):1568-76.
Couri, C.E., et al. (2009) C-peptide levels and insulin independence following autologous nonmyeloablative hematopoietic stem cell transplantation in newly diagnosed type 1 diabetes mellitus. JAMA. 301(15):1573-9.
Haller, M.J., et al., (2015) Anti-thymocyte globulin/G-CSF treatment preserves beta cell function in patients with established type 1 diabetes. J Clin Invest. 125(1):448-55.
Haller, M.J., et al., (2018) Low-Dose Anti-Thymocyte Globulin (ATG) Preserves beta-Cell Function and Improves HbA1c in New-Onset Type 1 Diabetes. Diabetes Care. 41(9):1917-1925
Voltarelli, J.C., et al. (2007) Autologous nonmyeloablative hematopoietic stem cell transplantation in newly diagnosed type 1 diabetes mellitus. JAMA. 297(14):1568-76.
Couri, C.E., et al. (2009) C-peptide levels and insulin independence following autologous nonmyeloablative hematopoietic stem cell transplantation in newly diagnosed type 1 diabetes mellitus. JAMA. 301(15):1573-9.
Haller, M.J., et al., (2015) Anti-thymocyte globulin/G-CSF treatment preserves beta cell function in patients with established type 1 diabetes. J Clin Invest. 125(1):448-55.
Haller, M.J., et al., (2018) Low-Dose Anti-Thymocyte Globulin (ATG) Preserves beta-Cell Function and Improves HbA1c in New-Onset Type 1 Diabetes. Diabetes Care. 41(9):1917-1925
本開示は、完全ヒト又は実質的にヒトの免疫グロブリンの集団、及び１つ又は複数の薬学的に許容される賦形剤を有する、医薬組成物をさらに提供する。いくつかの実施形態では、完全ヒトまたは実質的にヒトの免疫グロブリンの集団は、ヒト胸腺細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、及び／または単球を特異的に結合させる。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、少なくとも約１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約５０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１００ｍｇ／ｍＬ、又は少なくとも約１，０００ｍｇ／ｍＬの完全ヒト免疫グロブリン又は実質的にヒト免疫グロブリンを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、少なくとも約１００μｇ／ｍＬ、少なくとも約２５０μｇ／ｍＬ、少なくとも約５００μｇ／ｍＬ、少なくとも約７５０μｇ／ｍＬ、又は少なくとも約１，０００μｇ／ｍＬの完全ヒト免疫グロブリン又は実質的にヒト免疫グロブリンを有する。
いくつかの実施形態では、完全ヒトまたは実質的にヒトの免疫グロブリンは、有蹄動物において産生される。いくつかの実施形態では、有蹄動物はウシである。
くつかの実施形態では、医薬組成物は、医薬組成物中の全免疫グロブリンの質量で少なくとも５％の完全ヒト免疫グロブリンを有する。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、医薬組成物中の全免疫グロブリンの質量で２％～５％の完全ヒト免疫グロブリンを有する。
実施例
以下の具体的な実施例は、単に例示として解釈されるものであり、本開示の残りの部分を何ら限定するものではない。
以下の具体的な実施例は、単に例示として解釈されるものであり、本開示の残りの部分を何ら限定するものではない。
実施例１
トランスクロモソミック・ウシ（ＴｃＢ）系におけるヒトポリクローナルＡＴＧの生産
我々は、動物性ＡＴＧの既知の制限を克服した新しいヒトポリクローナルＡＴＧ製品（以下、「ＴｃＢ製品」）の開発について報告する。我々は、ｄｉｖｅｒｓｉｔＡｂ（商標）プラットフォーム技術、トランスクロモソミック・ウシ（ＴｃＢ）系を利用し、ウシのＩｇ遺伝子座をヒト人工染色体に置き換えた牛が完全ヒトポリクローナル抗体を発現するようにした。
トランスクロモソミック・ウシ（ＴｃＢ）系におけるヒトポリクローナルＡＴＧの生産
我々は、動物性ＡＴＧの既知の制限を克服した新しいヒトポリクローナルＡＴＧ製品（以下、「ＴｃＢ製品」）の開発について報告する。我々は、ｄｉｖｅｒｓｉｔＡｂ（商標）プラットフォーム技術、トランスクロモソミック・ウシ（ＴｃＢ）系を利用し、ウシのＩｇ遺伝子座をヒト人工染色体に置き換えた牛が完全ヒトポリクローナル抗体を発現するようにした。
ＴｃＢ対象にヒト胸腺細胞とアジュバントを３～５週間隔で免疫化した。高免疫血漿は３～５回目のワクチン接種後に採取した（Ｖ３～Ｖ５）。免疫試験のデザインは表１にまとめられている。第５回ワクチン接種後（Ｖ５）７日目、１１日目、１４日目に被験動物から採取した高免疫血漿の量は、動物の重量（ＢＷ）で血漿の２．１％であった。
補体依存性細胞傷害
補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）はＡＴＧＡＭおよびサイモグロブリンと同等で、ＳＡＢ－ＡＴＧの効力はＶ３／Ｖ４からＶ５へと増加した。各サンプル中の免疫グロブリン濃度は、波長２６０ｎｍで全タンパク質を測定するＮａｎｏＤｒｏｐ（商標）分光光度計で測定された。
補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）はＡＴＧＡＭおよびサイモグロブリンと同等で、ＳＡＢ－ＡＴＧの効力はＶ３／Ｖ４からＶ５へと増加した。各サンプル中の免疫グロブリン濃度は、波長２６０ｎｍで全タンパク質を測定するＮａｎｏＤｒｏｐ（商標）分光光度計で測定された。
ＣＤＣアッセイは、血清、血漿、インプロセスまたは精製抗体製品をヒトＰＢＭＣとインキュベートし、その後ウサギの補体とインキュベートする、サイトメトリーベースのアッセイである。ヒトリンパ球に特異的な抗体は細胞に結合し、補体は免疫グロブリンと細胞の両方に結合する。補体は、細胞に結合すると、最終的に細胞溶解に至るタンパク質のカスケードである。細胞死は、ＶｉａＣｏｕｎｔ試薬（登録商標）などの細胞生存率色素を使用して測定される。フローサイトメーターでサンプルを読み取ると、生存細胞の割合が算出される。細胞生存率パーセントを抗体濃度に対してプロットすることで、ＬＴ２５値を算出することができる。この値は、２５％の細胞を死滅させるために必要な抗体量を示している。この値が低いほど、ＡＴＧの効力または活性が高いことを意味する。この値は、必要に応じてＣＦ２５を使用して標準化することができる。
ウサギの補体を用いたＣＤＣアッセイの結果を表２に示した。ウサギの補体を用いた場合、ＴｃＢ製品はウサギ由来のサイモグロブリン（登録商標）と同等のＣＤＣ活性を有していた。
ＬＴ２５はウサギ補体の存在下でヒトＰＢＭＣの２５％が溶解するＩｇＧ濃度を意味する。
ＣＦ２５は、２５ｔｈパーセンタイル細胞毒性因子を意味する。ＬＴ２５をアッセイのばらつきを考慮して標準化したもので、（サンプルＬＴ２５／参照ＬＴ２５）×参照ＬＴ２５として算出される。
ＣＦ２５は、２５ｔｈパーセンタイル細胞毒性因子を意味する。ＬＴ２５をアッセイのばらつきを考慮して標準化したもので、（サンプルＬＴ２５／参照ＬＴ２５）×参照ＬＴ２５として算出される。
さらなるＣＤＣアッセイでは、ワクチン３（Ｖ３）またはワクチン５（Ｖ５）接種後の高免疫血漿をヒト赤血球（ＲＢＣ）に吸着させた。ＣＤＣの効力は、ウサギの補体を用いて決定された。ウサギの補体を用いたＣＤＣアッセイの結果を、表３に示す。数値が低いほど効力が強いことを示す。
ＬＴ５０は、ウサギ補体の存在下でヒトＰＢＭＣの５０％が溶解するＩｇＧ濃度を意味する。ＬＴ５０値は、２日間のアッセイから得られた平均値である。
ヒト補体では、ＴｃＢ製品はウサギ由来のサイモグロブリン（登録商標）と同様のＣＤＣ効力を有していた（データは示していない）。
生化学的特性評価
ヒト免疫グロブリンの濃度を測定し、血漿サンプルにウシ免疫グロブリンが存在しないことを確認するため、製品の一部をヒト赤血球（ＲＢＣ）に吸着させた。
生化学的特性評価
ヒト免疫グロブリンの濃度を測定し、血漿サンプルにウシ免疫グロブリンが存在しないことを確認するため、製品の一部をヒト赤血球（ＲＢＣ）に吸着させた。
サイズ排除クロマトグラフィーとＳＤＳ－ＰＡＧＥにより、この中には主によく折りたたまれ、凝集していない一対の重鎖および軽鎖ＩｇＧ分子が含まれていることが確認された。赤血球に吸着したのは全タンパク質の約５．６％（＝（６２．１－５８．６）／６２．１）であり、赤血球に吸着して精製しなくても、免疫グロブリンのごく一部が赤血球と交差反応することが示された。
ヒトＰＢＭＣへの結合
ヒトＰＢＭＣ：汎Ｔ細胞、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋従来型Ｔ細胞、Ｔｒｅｇ、ＮＫ Ｔ細胞、Ｂ細胞、および好中球への結合のフローサイトメトリー評価（図２）により、ＴｃＢ生成物がウマ由来（ＡＴＧＡＭ）およびウサギ由来（サイモグロブリン）ＡＴＧと同一のＴ細胞、Ｂ細胞、および／または単球に対して特異性を有することが明らかにされた。単一陽性細胞はなく、平均蛍光強度（ＭＦＩ）も極めて類似していた。ＴｃＢ製品で染色された稀な赤血球（～０．４％）は、ＡＴＧＡＭやサイモグロブリンでも染色されたことから、ＴｃＢ製品はヒトでの使用を禁忌とするような可能性のある固有のＲＢＣ特異性を持たないことが確認された。
ヒトＰＢＭＣ：汎Ｔ細胞、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋従来型Ｔ細胞、Ｔｒｅｇ、ＮＫ Ｔ細胞、Ｂ細胞、および好中球への結合のフローサイトメトリー評価（図２）により、ＴｃＢ生成物がウマ由来（ＡＴＧＡＭ）およびウサギ由来（サイモグロブリン）ＡＴＧと同一のＴ細胞、Ｂ細胞、および／または単球に対して特異性を有することが明らかにされた。単一陽性細胞はなく、平均蛍光強度（ＭＦＩ）も極めて類似していた。ＴｃＢ製品で染色された稀な赤血球（～０．４％）は、ＡＴＧＡＭやサイモグロブリンでも染色されたことから、ＴｃＢ製品はヒトでの使用を禁忌とするような可能性のある固有のＲＢＣ特異性を持たないことが確認された。
Ｔ細胞殺傷
ＡＴＧ製剤は、Ｔ細胞を死滅させることによって、その医療効果を発揮する。したがって、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＴ細胞の殺傷は、ＡＴＧ製剤のｉｎ ｖｉｖｏでの有効性の代用として一般的に使用されている。
ＡＴＧ製剤は、Ｔ細胞を死滅させることによって、その医療効果を発揮する。したがって、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＴ細胞の殺傷は、ＡＴＧ製剤のｉｎ ｖｉｖｏでの有効性の代用として一般的に使用されている。
非活性化条件下では、ＴｃＢ製品は、驚くべきことに、ＣＤ８＋細胞に対してサイモグロブリンと比較して有意に高い毒性を有し、一方ＡＴＧＡＭは最も効力が弱かった。ＴｃＢ製品処理は、再び驚くべきことに、ＣＤ４＋Ｔ細胞のアポトーシスをより低く誘導し、サイモグロブリンよりも多くのＣＤ４＋細胞を温存し、従来のＴ細胞と比較してＴｒｅｇの温存を増加させた。非活性化Ｔ細胞での結果を表４に示す（パーセントは細胞集団を示し、＋／－標準偏差）。
細胞活性化後、ＴｃＢ製品はＣＤ８＋細胞とＣＤ４＋細胞の両方に対して細胞毒性を示した（ＣＤ４＋細胞に対してはより顕著）。意外なことに、ＴｃＢ製品は他のＡＴＧよりも大きな効力を持っていた。予期せぬことに、アポトーシスＣＤ８＋およびＣＤ４＋細胞は、他のＡＴＧよりも高濃度のＴｃＢ製品では少なかった。これは、ＴｃＢ製品を介した細胞毒性がより迅速で、追加の生化学的経路が関与することを示唆するものである。ＰＨＡ活性化Ｔ細胞での結果を表５に示す（パーセントは細胞集団を示し、＋／－標準偏差）。
以上のことから、ＳＡＢ－ＡＴＧは、市販のＡＴＧ製品と同等以上の結合力とｉｎ ｖｉｔｒｏでの細胞毒性を示すことがわかった。
Ｔ細胞の生存
制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞の生存に対するＴｃＢ製品の効果を、サイモグロブリン（登録商標）およびＡＴＧＡＭ（登録商標）と比較した。図３Ａ－３Ｂは、ウマ（Ｈｏ－ＡＴＧ）、ウサギ（Ｒｂ－ＡＴＧ）、またはＴｃＢ（ＳＡＢ－ＡＴＧ）製品で処理した制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞のレベルを示している。ＴｃＢ製品では、サイモグロブリン（登録商標）と同様のレベルでＴｒｅｇ細胞が維持されている。
制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞の生存に対するＴｃＢ製品の効果を、サイモグロブリン（登録商標）およびＡＴＧＡＭ（登録商標）と比較した。図３Ａ－３Ｂは、ウマ（Ｈｏ－ＡＴＧ）、ウサギ（Ｒｂ－ＡＴＧ）、またはＴｃＢ（ＳＡＢ－ＡＴＧ）製品で処理した制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞のレベルを示している。ＴｃＢ製品では、サイモグロブリン（登録商標）と同様のレベルでＴｒｅｇ細胞が維持されている。
同様のアッセイを従来のＴ（Ｔｃｏｎｖ）細胞で実施した。活性化Ｔｃｏｎｖ細胞およびナイーブＴｃｏｎｖ細胞の結果は、それぞれ図４Ａ～４Ｂおよび図５Ａ～５Ｂに示されている。ＴｃＢ製品は、サイモグロブリン（登録商標）と同レベルのＴ細胞の活性化を誘導した。ＴｃＢプロダクトは、サイモグロブリン（登録商標）と同レベルでナイーブＴ細胞を減少させた。
＊ ＊ ＊ ＊
本発明の実施形態が本明細書で示され、説明されてきたが、当業者は、そのような実施形態が例示としてのみ提供されることを理解するであろう。多数の変形、変更、および置換が、本発明から逸脱することなく、当業者には今や起こるであろう。本明細書に記載された本発明の実施形態に対する様々な代替案が、本発明を実施する際に採用され得ることを理解されたい。以下の請求項が本発明の範囲を規定し、これらの請求項の範囲内の方法および構造、ならびにそれらの等価物がそれによってカバーされることが意図される。
本発明の実施形態が本明細書で示され、説明されてきたが、当業者は、そのような実施形態が例示としてのみ提供されることを理解するであろう。多数の変形、変更、および置換が、本発明から逸脱することなく、当業者には今や起こるであろう。本明細書に記載された本発明の実施形態に対する様々な代替案が、本発明を実施する際に採用され得ることを理解されたい。以下の請求項が本発明の範囲を規定し、これらの請求項の範囲内の方法および構造、ならびにそれらの等価物がそれによってカバーされることが意図される。
Claims (47)
- 完全ヒトまたは実質的にヒトの免疫グロブリンの集団を有する、有蹄動物由来のポリクローナル免疫グロブリン組成物であって、
前記完全ヒトまたは実質的にヒトの免疫グロブリンの集団は、ヒト胸腺細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、および／または単球に特異的に結合するものである、組成物。 - 請求項１または２に記載の組成物であって、前記組成物は、ＣＤＣアッセイにおいて参照製品と少なくとも同程度の効力を有する、組成物。
- 請求項１または２に記載の組成物であって、前記組成物は、ＣＤＣアッセイにおいて参照製品よりも少なくとも約１０％強力である、組成物。
- 請求項１～３のいずれか１つに記載の組成物であって、前記組成物は、ＣＤ８＋細胞殺傷アッセイにおいて参照製品よりも少なくとも約１０％強力である、組成物。
- 請求項１～３のいずれか１つに記載の組成物であって、前記組成物は、ＣＤ４＋細胞アポトーシスアッセイにおいて参照製品よりも少なくとも約１０％少ない、組成物。
- 請求項２～５のいずれか１つに記載の組成物において、前記参照製品はウサギ由来のＡＴＧ、任意にサイモグロブリンである、組成物。
- 請求項２～５のいずれか１つに記載の組成物において、前記参照製品はウマ由来ＡＴＧ、任意にＡＴＧＡＭである、組成物。
- 請求項１～７のいずれか１つに記載の組成物であって、前記組成物は、前記組成物中の全免疫グロブリンの質量で少なくとも２％の完全ヒトまたは実質的にヒト免疫グロブリンを有する、組成物。
- 請求項１～８のいずれか１つに記載の組成物であって、前記有蹄動物がウシである、組成物。
- ヒト胸腺細胞によりトランスジェニック有蹄動物を免疫化することにより製造される組成物であって、前記組成物は完全ヒトまたは実質的にヒトの免疫グロブリンの集団を有し、および、
前記完全ヒトまたは実質的にヒトの免疫グロブリンの集団は、ヒト胸腺細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、および／または単球に特異的に結合するものである、組成物。 - 請求項１０記載の組成物であって、前記組成物は、ＣＤＣアッセイにおいて参照製品と少なくとも同程度の効力を有する、組成物。
- 請求項１０記載の組成物であって、前記組成物は、ＣＤＣアッセイにおいて参照製品よりも少なくとも約１０％強力である、組成物。
- 請求項１０～１２のいずれか１つに記載の組成物であって、前記組成物は、ＣＤ８＋細胞殺傷アッセイにおいて参照製品よりも少なくとも約１０％強力である、組成物。
- 請求項１０～１２のいずれか１つに記載の組成物であって、前記組成物は、ＣＤ４＋細胞アポトーシスアッセイにおいて参照製品よりも少なくとも約１０％少ない、組成物。
- 請求項１１～１４のいずれか１つに記載の組成物において、前記参照製品はウサギ由来のＡＴＧ、任意にサイモグロブリンである、組成物。
- 請求項１１～１４のいずれか１つに記載の組成物において、前記参照製品はウマ由来ＡＴＧ、任意にＡＴＧＡＭである、組成物。
- 請求項１０～１６のいずれか１つに記載の組成物であって、前記組成物は、前記組成物中の全免疫グロブリンの質量で少なくとも２％の完全ヒトまたは実質的にヒト免疫グロブリンを有する、組成物。
- 請求項１０～１７のいずれか１つに記載の組成物であって、前記有蹄動物がウシである、組成物。
- 請求項１０～１８のいずれか１つに記載の組成物において、前記トランスジェニック有蹄動物のゲノムは、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を有する、組成物。
- 請求項１０～１９のいずれか１つに記載の組成物において、前記トランスジェニック有蹄動物は、３、４、５、またはそれ以上の回数免疫化される、組成物。
- 請求項１０～２０のいずれか１つに記載の組成物において、前記完全ヒトまたは実質的にヒトの免疫グロブリンの集団は、免疫化後の前記トランスジェニック有蹄動物の血清から精製される、組成物。
- 抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）を製造する方法であって、ヒト胸腺細胞をトランスジェニック有蹄動物に投与する工程を有し、前記トランスジェニック有蹄動物は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を有するゲノムまたはヒト免疫グロブリン遺伝子座を有する人工染色体を有し、前記トランスジェニック有蹄動物がヒト抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）を製造する、方法。
- 請求項２２記載の方法であって、前記ヒト胸腺細胞を、３、４、５、またはそれ以上の回数投与する工程を有する、方法。
- 請求項２２または２３記載の方法であって、前記トランスジェニック有蹄動物から血清または血漿を採取する工程を有する、方法。
- 請求項２２～２４のいずれか１つに記載の方法において、前記血清または血漿は、完全ヒト免疫グロブリンの集団を有する、方法。
- 請求項２２～２５のいずれか１つに記載の方法において、前記完全ヒト免疫グロブリンの集団は、ＣＤＣアッセイにおいて参照製品よりも少なくとも約１０％強力である、方法。
- 請求項２２～２６のいずれか１つに記載の方法において、前記完全ヒト免疫グロブリンの集団は、ＣＤ８＋細胞殺傷アッセイにおいて参照製品よりも少なくとも約１０％強力である、方法。
- 請求項２２～２７のいずれか１つに記載の方法において、前記完全ヒト免疫グロブリンの集団は、ＣＤ４＋細胞アポトーシスアッセイにおいて参照製品よりも少なくとも約１０％少ない、方法。
- 請求項２５～２８のいずれか１つに記載の方法において、前記ヒトポリクローナル免疫グロブリンは、ヒト胸腺細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、および／または単球に特異的に結合する、方法。
- 請求項２６～２８のいずれか１つに記載の方法において、前記参照製品はウサギ由来のＡＴＧ、任意にサイモグロブリンである、方法。
- 請求項２６～２８のいずれか１つに記載の方法において、前記参照製品はウマ由来ＡＴＧ、任意にＡＴＧＡＭである、方法。
- 抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）治療を、それを必要とする対象に提供する方法であって、前記対象に
ｉ）請求項１～９のいずれか１つに記載の組成物、
ｉｉ）請求項１０～２１のいずれか１つに記載の組成物、または、
ｉｉｉ）請求項２２～３１のいずれか１つに記載の方法で製造された組成物
を投与する工程を有し、
前記方法は、有効量の抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）を前記対象に提供する、方法。 - 請求項３２記載の方法において、前記対象は１型糖尿病に罹患している、方法。
- 請求項３２記載の方法において、前記対象は臓器移植レシピエントである、方法。
- 請求項３２記載の方法において、前記対象は移植片対宿主病に罹患しているか、またはその危険性がある、方法。
- 請求項３２記載の方法において、前記対象は幹細胞移植レシピエントである、方法。
- 完全ヒトまたは実質的にヒトの免疫グロブリンの集団、および１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を有する医薬組成物であって、
前記完全ヒトまたは実質的にヒトの免疫グロブリンの集団は、ヒト胸腺細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、および／または単球に特異的に結合するものである、医薬組成物。 - 請求項３７記載の医薬組成物であって、前記医薬組成物は、ＣＤＣアッセイにおいて参照製品と少なくとも同程度の効力を有する、医薬組成物。
- 請求項３７記載の医薬組成物であって、前記医薬組成物は、ＣＤＣアッセイにおいて参照製品よりも少なくとも約１０％強力である、医薬組成物。
- 請求項３７～３９のいずれか１つに記載の医薬組成物であって、前記医薬組成物は、ＣＤ８＋細胞殺傷アッセイにおいて参照製品よりも少なくとも約１０％強力である、医薬組成物。
- 請求項３７～４０のいずれか１つに記載の医薬組成物であって、前記医薬組成物は、ＣＤ４＋細胞アポトーシスアッセイにおいて参照製品よりも少なくとも約１０％少ない、医薬組成物。
- 請求項３８～４１のいずれか１つに記載の医薬組成物において、前記参照製品はウサギ由来のＡＴＧ、任意にサイモグロブリンである、医薬組成物。
- 請求項３８～４１のいずれか１つに記載の医薬組成物において、前記参照製品はウマ由来ＡＴＧ、任意にＡＴＧＡＭである、医薬組成物。
- 請求項３７～４３のいずれか１つに記載の医薬組成物であって、前記医薬組成物は、前記医薬組成物中の全免疫グロブリンの質量で少なくとも２％の完全ヒトまたは実質的にヒト免疫グロブリンを有する、医薬組成物。
- 請求項３５～４４のいずれか１つに記載の医薬組成物であって、前記医薬組成物は、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約５０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１００ｍｇ／ｍＬ、または少なくとも約１０００ｍｇ／ｍＬの完全ヒトまたは実質的にヒト免疫グロブリンを有する、医薬組成物。
- 請求項３５～４５のいずれか１つに記載の医薬組成物において、前記完全ヒトまたは実質的にヒトの免疫グロブリンが、有蹄動物において産生される、医薬組成物。
- 請求項３５～４６のいずれか１つに記載の医薬組成物において、前記有蹄動物がウシである、医薬組成物。
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