JP2023515398A - Ｌｉｌｒｂ３抗体分子およびその使用 - Google Patents

Abstract

ヒト骨髄細胞の再プログラミングを介した移植片拒絶または自己免疫の治療において使用するためのアゴニスト抗ＬＩＬＲＢ３抗体分子などの抗ＬＩＬＲＢ３抗体分子が記載されている。特定の抗ＬＩＬＲＢ３抗体分子、および医薬におけるそのような抗体分子の使用、例えば、移植片拒絶、自己免疫障害または炎症性障害の治療における使用についても記載されている。【選択図】図１－１

Description

本発明は、ＬＩＬＲＢ３（ＩＬＴ５）に特異的に結合する新規の抗体分子に関する。本発明はまた、移植片拒絶、自己免疫障害および／または炎症性障害の治療におけるＬＩＬＲＢ３（ＩＬＴ５）に特異的に結合するそのような新規の抗体分子または他の抗体分子の使用に関する。

ヒト免疫グロブリン様転写物（ＩＴＬ）とも呼ばれるヒト白血球免疫グロブリン（Ｉｇ）様受容体（ＬＩＬＲ）のファミリーは、免疫応答を調節する６つの活性化（ＬＩＬＲＡ１～６）および５つの阻害性（ＬＩＬＲＢ１～５）ＬＩＬＲを含む（１、２）。両方の受容体サブタイプは、２つまたは４つの相同Ｃ－２型免疫グロブリン（Ｉｇ）様細胞外ドメインを示すが、その膜貫通領域および細胞質領域が異なる（３、４）。ＬＩＬＲＡは、その膜貫通ドメインに荷電アルギニン残基を有する短い短縮型細胞質ドメインを有し、ＩＴＡＭを有するＦｃεＲのγ鎖と結合して活性化シグナル伝達カスケードを伝播することができる（５）。逆に、ＬＩＬＲＢは複数のＩＴＩＭドメインを含む長い細胞質ドメインを有し、これは抑制性シグナル伝達を誘発するＳＨＰ－１およびＳＨＩＰ－１などのホスファターゼを動員する（３、４）。ヒト染色体１９ｑ１３．４に位置するこれらのポリジーン受容体は、有意な対立遺伝子変異を示し、ＬＩＬＲＢ３（ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ）およびＬＩＬＲＢ４（ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ）は少なくとも１５の異なる変異体を示す（３、６）。

阻害性ＬＩＬＲＢは、明白な免疫応答を制御および制限するのに役立つ免疫チェックポイントとして機能することが提案されている（１、２）。これと一致して、ＬＩＬＲＢの発現は抑制性（代替活性化またはＭ２とも呼ばれる）マクロファージおよび寛容原性樹状細胞（ＤＣ）で増加する（７～１０）。単球では、ＬＩＬＲＢ１（ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ）およびＬＩＬＲＢ２（ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ）とＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）との同時ライゲーションによりＳＨＰ－１が活性化され、下流のリン酸化イベントおよび細胞内カルシウム動員が減少する（１１）。ＨＬＡクラスＩ（ＨＬＡ－Ｉ）リガンドとライゲーションすると、ＬＩＬＲＢ１およびＬＩＬＲＢ２はＤＣの移動を防ぎ、抗炎症性サイトカインの放出を促進する（１、１２）。同様に、悪性細胞上の一般的なＨＬＡ－Ｉサブユニットβ２－ミクログロブリンによるマクロファージ上のＬＩＬＲＢ１の関与は、それらの食作用能力を制限する（１３）。ＬＩＬＲＢはまた、ＤＣをインビトロおよびインビボの両方で寛容原性にし、その後Ｔ細胞応答を阻害することも示されている（７、８、１２、１４、１５）。そのため、ＨＬＡ－ＧとＬＩＬＲＢ１およびＬＩＬＲＢ２との関与は、妊娠中の胎児と母体との境界面での重要な免疫抑制経路である（１６～１８）。ＬＩＬＲＢ１はＮＫ細胞にも発現し、ＮＫ細胞の細胞毒性を阻害することが報告されている（１９）。

マウスはＬＩＬＲＢを発現しないが、オーソロガスペアＩｇ様受容体（ＰＩＲ）－Ｂは免疫系の様々なアームを調節する。ＰＩＲ－Ｂは、ＣＤ８細胞で発現するＭＨＣクラスＩとの相互作用を介して、ＤＣによる細胞傷害性Ｔリンパ球のプライミングを調節し（２０）、好中球およびマクロファージのインテグリンシグナル伝達に悪影響を及ぼす（２１）。さらに、ＰＩＲ－Ｂは、腫瘍の進行を助ける骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の分化を調節する（２２）。ＰＩＲ－Ｂと同様に、ＨＬＡ－ＧとＬＩＬＲＢ１との間の相互作用は、強力なＭＤＳＣの拡大を通じて同種移植片の生着を補助する（２３、２４）。

阻害性ＬＩＬＲＢのうち、４つの細胞内ＩＴＩＭモチーフを含むＬＩＬＲＢ３（ＩＬＴ５／ＬＩＲ３／ＣＤ８５ａ）は、骨髄細胞に対する相対的な制限および高発現により、魅力的な免疫調節標的を示す（２）。１９９０年代後半に発見されたにもかかわらず、特定の試薬およびモデルシステムが不足しているため、その正確な機能および免疫調節能力は完全には究明されていない。

ＬＩＬＲＢ３の潜在的な免疫調節能力を調査するために、ＢｉｏＩｎｖｅｎｔ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＡＢ独自のｎ－ＣｏＤｅＲ（登録商標）およびＦ．Ｉ．Ｒ．Ｓ．Ｔ（商標）プラットフォームテクノロジーを使用して、ＬＩＬＲＢ３特異的モノクローナル抗体（ｍＡｂ）のパネルを作成した。抗体は、Ｉｇ様ドメイン２および４の２つの主要であるが別個のエピトープに結合した。初代ヒト単球およびマクロファージへのＬＩＬＲＢ３ライゲーションは、表現型および機能の変化、ならびにオプソニン化がん細胞の食作用およびＴ細胞増殖の有意な減少を含むインビトロでの免疫応答の強力な阻害をもたらした。重要なことに、ヒト化マウスにおけるＬＩＬＲＢ３の標的化は、寛容原性の状態を誘発し、同種異系のヒトリンパ腫細胞の生着の増強を可能にした。我々の調査結果は、ヒトＬＩＬＲＢ３の免疫調節機能を明らかにし、移植、感染、自己免疫における潜在的な役割を有する重要な骨髄免疫チェックポイントとしてのその可能性を特定する。

本発明に至るまでの研究は、以下を含む。
●ヒトモノクローナル抗ＬＩＬＲＢ３抗体のアゴニスト活性のパネルの作成および特性評価、
●ヒト骨髄細胞へのＬＩＬＲＢ３のライゲーションが抗炎症表現型を誘発し、その後のＴ細胞増殖の阻害をもたらすことの実証、
●ヒトマクロファージへのＬＩＬＲＢ３ライゲーションがオプソニン化標的細胞の食作用を阻害することの実証、
●アゴニスト抗ＬＩＬＲＢ３抗体がヒト化マウスに耐性を誘発し、同種異系細胞の生着を成功させることの実証。

したがって、本発明は、移植片拒絶、自己免疫障害および／または炎症性障害の治療において使用するための、ＬＩＬＲＢ３（ＩＬＴ５）に特異的に結合する抗体分子に関する。

本発明はまた、ＣＤＲであるＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ３、ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２およびＶＬ－ＣＤＲ３のうちの１～６個を含む抗体分子からなる群から選択される、ＬＩＬＲＢ３（ＩＬＴ５）に特異的に結合する抗体分子に関し、
存在する場合、ＶＨ－ＣＤＲ１は、配列番号１、９、１７および２５からなる群から選択され、
存在する場合、ＶＨ－ＣＤＲ２は、配列番号２、１０、１８および２６からなる群から選択され、
存在する場合、ＶＨ－ＣＤＲ３は、配列番号３、１１、１９および２７からなる群から選択され、
存在する場合、ＶＬ－ＣＤＲ１は、配列番号４、１２、２０および２８からなる群から選択され、
存在する場合、ＶＬ－ＣＤＲ２は、配列番号５、１３、２１および２９からなる群から選択され、
存在する場合、ＶＬ－ＣＤＲ３は、配列番号６、１４、２２および３０からなる群から選択される。

本発明はまた、上記抗体分子のうちの少なくとも１つをコードする単離されたヌクレオチド配列に関する。

本発明はまた、上記ヌクレオチド配列のうちの少なくとも１つを含むプラスミドに関する。

本発明はまた、上記ヌクレオチド配列のうちの少なくとも１つ、または上記プラスミドのうちの少なくとも１つを含む細胞に関する。

本発明はまた、医薬において使用するための上記抗体分子、ヌクレオチド配列、プラスミドおよび／または細胞に関する。

本発明はまた、移植片拒絶の治療において使用するための上記抗体分子、ヌクレオチド配列、プラスミドおよび／または細胞に関する。

本発明はまた、自己免疫障害（自己免疫とも言われる）の治療において使用するための上記抗体分子、ヌクレオチド配列、プラスミドおよび／または細胞に関する。

本発明はまた、炎症性障害の治療において使用するための上記抗体分子、ヌクレオチド配列、プラスミドおよび／または細胞に関する。

本発明はまた、移植片拒絶の治療において使用するための上記抗体分子、ヌクレオチド配列、プラスミドおよび／または細胞の使用に関する。

本発明はまた、自己免疫障害の治療において使用するための上記抗体分子、ヌクレオチド配列、プラスミドおよび／または細胞の使用に関する。

本発明はまた、炎症性障害の治療において使用するための上記抗体分子、ヌクレオチド配列、プラスミドおよび／または細胞の使用に関する。

本発明はまた、上記抗体分子、ヌクレオチド配列、プラスミドおよび／または細胞のうちの少なくとも１つ、ならびに、任意選択的に、薬学的に許容される希釈剤、担体、ビヒクルおよび／または賦形剤を含む、またはそれらからなる医薬組成物に関する。そのような医薬組成物は、移植片拒絶の治療において使用され得る。そのような医薬組成物はまた、または代替的に、自己免疫障害の治療において使用され得る。そのような医薬組成物はまた、または代替的に、炎症性障害の治療において使用され得る。

本発明はまた、患者における移植片拒絶を治療するための方法であって、治療有効量の上記抗体分子、ヌクレオチド配列、プラスミドおよび／または細胞のうちの少なくとも１つを患者に投与することを含む方法に関する。

本発明はまた、患者における自己免疫障害を治療するための方法であって、治療有効量の上記抗体分子、ヌクレオチド配列、プラスミドおよび／または細胞のうちの少なくとも１つを患者に投与することを含む方法に関する。

本発明はまた、患者における炎症性障害を治療するための方法であって、治療有効量の上記抗体分子、ヌクレオチド配列、プラスミドおよび／または細胞のうちの少なくとも１つを患者に投与することを含む方法に関する。

本発明はまた、添付の説明、実施例および／または図を参照して本明細書に記載される、抗体分子、使用のための抗体分子、単離されたヌクレオチド配列、使用のための単離されたヌクレオチド配列、プラスミド、使用のためのプラスミド、細胞、使用のための細胞、使用、医薬組成物および治療方法に関する。

発明の詳細な説明
したがって、本発明は、ＬＩＬＲＢ３（ＩＬＴ５）に特異的に結合する抗体分子に関する。この文脈において、「ＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する抗体分子」という用語は、「抗ＬＩＬＲＢ３抗体分子」（またはそれぞれ「ＩＬＴ５に特異的に結合する抗体分子」および「抗ＩＬＴ５抗体分子」）という用語と交換可能に使用することができ、ＬＩＬＲＢ３（ＩＬＴ５）の細胞外ドメインの少なくとも１つのエピトープに特異的に結合する抗体分子を指す。細胞表面抗原およびエピトープは、免疫学または細胞生物学の当業者によって容易に理解される用語である。

タンパク質の結合を評価する方法は、生化学および免疫学の当業者には既知である。当業者であれば、それらの方法を使用して、抗体の標的への結合、ならびにそれらの相互作用の相対的な強度、または特異性、または阻害、または防止、または低減を評価することができることを理解するであろう。タンパク質結合を評価するために使用できる方法の例は、例えば、イムノアッセイ、Ｂｉａｃｏｒｅ、ウエスタンブロット、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）および酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）およびフローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）である。抗体の特異性に関する議論については、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ａｔ ｐａｇｅｓ ３３２－３３６（１９８９）を参照のこと。

本発明に従って抗体分子が結合するＬＩＬＲＢ３を発現する標的細胞は、単球およびマクロファージを含むヒト骨髄細胞などの任意のＬＩＬＲＢ３発現細胞であり得る。

任意の特定のメカニズムに束縛されないが、１つの仮説は、本発明による抗体分子のＬＩＬＲＢ３への結合の効果が、それがＩＴＩＭドメインのリン酸化をもたらす可能性があるということである。ＬＩＬＲＢ３は、４つの細胞内ＩＴＩＭを含む。これは、一方で、細胞活性化を阻害し、骨髄細胞による免疫抑制遺伝子の産生を誘発する。これは、ヒト単球のＲＮＡｓｅｑ分析を示す以下の例から明らかである。

いくつかの実施形態において、アゴニスト活性は、ＬＩＬＲＢ３への結合に加えて、Ｆｃγ受容体に結合する抗体分子によって改善され得る。いくつかのそのような実施形態において、アゴニスト非遮断ＬＩＬＲＢ３抗体分子は、活性化Ｆｃγ受容体よりも抑制性Ｆｃγ受容体に対してより高い親和性で結合する。活性化Ｆｃγ受容体よりも抑制性Ｆｃγ受容体への親和性が高いため、個々の活性化Ｆｃγ受容体と比較して、例えばＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩＡおよびＦｃγＲＩのいずれかと比較して、抑制性Ｆｃγ受容体に高い親和性で結合する変異体という意味を含む。

マウスＦｃγＲシステムとヒトＦｃγＲシステムとの間の比較的高い相同性は、種間の保存されたＦｃγＲ介在性メカニズムの一般的な側面の多くを説明している。しかしながら、マウスおよびヒトのＩｇＧサブクラスは、それらの同種のＦｃγＲに対する親和性が異なるため、マウスシステムでのＦｃγＲを介した観察をヒトＩｇＧベースの治療法に変換する際には、抗体、抗体サブクラスおよび／または改変されたサブクラスの変異体を選択することが重要であり、これは、ヒト活性化ＦｃγＲ対抑制性ＦｃγＲへの適切な結合を示している。個々のヒトＦｃγＲに対するヒト抗体分子の親和性および／または結合力は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して決定することができる。

いくつかの実施形態において、Ｆｃ受容体への結合は、アゴニスト抗体分子のＦｃ領域とＦｃ受容体との間の通常の相互作用を介して起こる。いくつかのそのような実施形態において、抗体分子は、Ｆｃγ受容体に結合するＦｃ領域を有するＩｇＧである。いくつかのそのような実施形態において、抗ＬＩＬＲＢ３抗体は、ヒトＩｇＧ２アイソタイプのものであり、これは、ヒト阻害性ＦｃγＲＩＩＢならびにヒト活性化ＦｃγＲＩＩＡおよびＦｃγＲＩＩＩＡに対して同様の中間親和性を有するが、ヒト活性化ＦｃγＲＩとは生産的に結合しない。いくつかの実施形態において、抗ＬＩＬＲＢ３抗体は、ＩｇＧ２と比較してより高い親和性でＦｃγＲＩＩＢに結合するが、より高い親和性で活性化ヒト活性化ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩＡにも結合し、さらに、高い親和性で活性化ＦｃγＲＩに結合するヒトＩｇＧ１アイソタイプのものである。他の実施形態において、抗ＬＩＬＲＢ３抗体は、ＦｃγＲＩＩＢへの結合を増強するように改変された（例えば、「ＳＥＬＦ」変異）（Ｃｈｕ ｅｔ ａｌ．“Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｂ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｉｍａｒｙ ｈｕｍａｎ Ｂ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｃｏｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ＣＤ１９ ａｎｄ ＦｃｇａｍｍａＲＩＩｂ ｗｉｔｈ Ｆｃ－ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．”Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００８ Ｓｅｐ；４５（１５）：３９２６－３３）、および／または活性化ＦｃγＲと比較してＦｃγＲＩＩＢへの結合が比較的増強されるように改変された（例えば、Ｖ９またはＶ１１変異）（Ｍｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．“Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｆｃ ｖａｒｉａｎｔ ｗｉｔｈ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ ｅｎｈａｎｃｅｄ ＦｃγＲＩＩｂ ｂｉｎｄｉｎｇ ｏｖｅｒ ｂｏｔｈ ＦｃγＲＩＩａ^R131 ａｎｄ ＦｃγＲＩＩａ^H131”．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ．２０１３ Ｏｃｔ；２６（１０）：５８９－５９８．）、ヒトＩｇＧである。阻害性ＦｃγＲＩＩＢへの結合を増強するため、または活性化ＦｃγＲＩＩＡではなく阻害性ＦｃγＲＩＩＢへの特異的な結合親和性を特異的に増強するために改変されたそのようなＩｇＧ変異体は、活性化ＦｃγＲおよび阻害性ＦｃγＲがヒト化された動物におけるＣＤ４０アゴニスト抗体ＣＰ－８７０，８９３のインビボアゴニスト活性および治療活性を増大させることが示されている（Ｄａｈａｎ ｅｔ ａｌ．２０１６．‘Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ａｇｏｎｉｓｔｉｃ，Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉ－ＣＤ４０ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｒｅｑｕｉｒｅｓ Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ＦｃｇａｍｍａＲ Ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ’，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ，２９：８２０－３１）。

ＬＩＬＲＢ３に加えてアゴニスト抗体分子が結合する可能性のあるＦｃ受容体は、マクロファージ、単球、ＭＤＣＳ、好中球、肥満細胞、好塩基球もしくは樹状細胞などの骨髄由来細胞の表面、またはＮＫ細胞、Ｂ細胞もしくは特定のＴ細胞などのリンパ球の表面に見られる受容体である。

他の実施形態において、抗体分子は、ＩｇＧ１抗体分子の脱グリコシル化または非グリコシル化変異体などの、Ｆｃγ受容体への結合が低下した改変Ｆｃ領域を含み得る。そのような非グリコシル化は、例えば、抗体鎖の２９７位（Ｎ２９７Ｘ）におけるアスパラギンのアミノ酸置換によって達成され得る。置換は、グルタミン（Ｎ２９７Ｑ）、もしくはアラニン（Ｎ２９７Ａ）、もしくはグリシン（Ｎ２９７Ｇ）、もしくはアスパラギン（Ｎ２９７Ｄ）で、またはセリン（Ｎ２９７Ｓ）によって行われてもよい。他の置換は、例えば、Ｊａｃｏｂｓｅｎ ＦＷ ｅｔ ａｌ．，ＪＢＣ ２０１７，２９２，１８６５－１８７５によって記載されている（例えば、表１を参照）。このような追加の置換としては、Ｌ２４２Ｃ、Ｖ２５９Ｃ、Ａ２８７Ｃ、Ｒ２９２Ｃ、Ｖ３０２Ｃ、Ｌ３０６Ｃ、Ｖ３２３Ｃ、Ｉ３３２Ｃおよび／またはＫ３３４Ｃが含まれる。

抗体は、免疫学および分子生物学分野の当業者には公知である。通常は、抗体は、２つの重鎖（Ｈ）と、２つの軽鎖（Ｌ）と、を含む。本明細書では、時には、この完全な抗体分子をフルサイズ抗体または完全長抗体と称する。抗体の重鎖は、１つの可変領域（ＶＨ）および３つの定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３）を含み、抗体分子の軽鎖は、１つの可変領域（ＶＬ）および１つの定常領域（ＣＬ）を含む。可変領域（時にＦ_V領域と総称される）は、抗体の標的、または抗原に結合する。各可変領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される３つのループを含み、これらのループが標的の結合に関与する。定常領域は、抗体の抗原への結合には直接関与しないが、種々のエフェクター機能を呈する。それらの重鎖の定常領域のアミノ酸配列に応じて、抗体または免疫グロブリンを異なるクラスに割り当てることができる。免疫グロブリンには、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭの５つの主要なクラスがあり、ヒトでは、これらのうちのいくつかは、さらにサブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４；ＩｇＡ１およびＩｇＡ２に分割される。

抗体の別の部分は、Ｆｃ領域（あるいは断片結晶化可能ドメインとしても既知である）であり、抗体の重鎖の各々に２つの定常ドメインを含む。上で言及されるように、Ｆｃ領域は抗体とＦｃ受容体との間の相互作用に関与する。

本明細書で用いる場合、抗体分子という用語は、完全長抗体またはフルサイズ抗体、ならびに完全長抗体の機能的断片およびこのような抗体分子の誘導体を包含する。

フルサイズ抗体の機能的断片は、対応するフルサイズ抗体と同じ抗原結合特徴を有し、対応するフルサイズ抗体と同じ可変ドメイン（すなわち、ＶＨ配列およびＶＬ配列）および／または同じＣＤＲ配列のいずれかを含む。機能的断片は、対応するフルサイズ抗体の６個のＣＤＲのすべてを常に含有するわけではない。３つ以下のＣＤＲ領域（場合によっては、単一のＣＤＲだけまたはその一部）を含有する分子は、そのＣＤＲに由来する抗体の抗原結合活性を保持することが可能であることが理解される。例えば、全ＶＬ鎖（３個のＣＤＲをすべて含む）がその基質に対して高い親和性を有することが、Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６９：３２３８９～９３に記載されている。

２つのＣＤＲ領域を含有する分子については、例えば、Ｖａｕｇｈａｎ＆Ｓｏｌｌａｚｚｏ ２００１，Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＆Ｈｉｇｈ Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ，４：４１７～４３０に記載されている。４１８頁（右欄－３（Ｏｕｒ Ｓｔｒａｔｅｇｙ ｆｏｒ Ｄｅｓｉｇｎ））に、フレームワーク領域内に散在するＨ１およびＨ２ ＣＤＲ超可変領域のみを含むミニボディについて記載されている。ミニボディは、標的に結合することが可能であると記載されている。Ｐｅｓｓｉ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：３６７～９、およびＢｉａｎｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２３６：６４９～５９は、Ｖａｕｇｈａｎ＆Ｓｏｌｌａｚｚｏによって参照され、Ｈ１およびＨ２ミニボディ、ならびにその特性についてより詳細に記載している。Ｑｉｕ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２５：９２１～９では、２つの結合されたＣＤＲからなる分子が抗原に結合することが可能であることが示されている。Ｑｕｉｏｃｈｏ １９９３，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２９３～４は、「ミニボディ」技術の概要を提供している。Ｌａｄｎｅｒ ２００７，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２５：８７５－７は、２個のＣＤＲを含有する分子が抗原結合活性を保持することが可能であると見解を述べている。

単一のＣＤＲ領域を含有する抗体分子については、例えば、Ｌａｕｎｅ ｅｔ ａｌ．，１９９７，ＪＢＣ，２７２：３０９３７～４４に記載されており、ここでは、ＣＤＲに由来する様々なヘキサペプチドが抗原結合活性を表すことが示され、完全な単一のＣＤＲの合成ペプチドが強力な結合活性を示すことに言及している。Ｍｏｎｎｅｔ ｅｔ ａｌ．，１９９９，ＪＢＣ，２７４：３７８９～９６では、様々な１２量体ペプチドおよび関連するフレームワーク領域が、抗原結合活性を有することが示されており、ＣＤＲ３様ペプチド単独で抗原に結合することが可能であると見解を述べている。Ｈｅａｐ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．，８６：１７９１～１８００では、「マイクロ抗体」（単一のＣＤＲを含有する分子）は抗原に結合することが可能であることが報告されており、抗ＨＩＶ抗体からの環状ペプチドが、抗原結合活性および機能を有することが示されている。Ｎｉｃａｉｓｅ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１３：１８８２－９１では、単一のＣＤＲが、そのリゾチーム抗原に対する抗原結合活性および親和性を付与し得ることが示されている。

したがって、５個、４個、３個またはそれ以下のＣＤＲを有する抗体分子は、それらが由来する完全長抗体の抗原結合特性を保持することが可能である。

抗体分子は、完全長抗体の誘導体またはそのような抗体の断片であってもよい。誘導体が、対応するフルサイズ抗体と同じ抗原結合特徴を有するということは、フルサイズ抗体と同じ標的上のエピトープに結合することを意味する。

したがって、本明細書で用いる場合、「抗体分子」という用語は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、合成抗体、組換えで産生された抗体、多重特異性抗体、二重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト由来抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）₂断片、Ｆ（ａｂ’）断片、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、抗体重鎖、抗体軽鎖、抗体重鎖のホモ二量体、抗体軽鎖のホモ二量体、抗体重鎖のヘテロ二量体、抗体軽鎖のヘテロ二量体、そのようなホモ二量体およびヘテロ二量体の抗原結合機能的断片を含む、すべてのタイプの抗体分子、ならびにそれらの機能的断片およびそれらの誘導体を含む。

さらに、本明細書で用いる場合、「抗体分子」という用語は、特に明記しない限り、ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＥを含む、すべてのクラスの抗体分子および機能的断片を含む。

いくつかの実施形態において、抗体分子は、ヒト抗体分子、ヒト化抗体分子またはヒト由来の抗体分子である。この文脈において、ヒト化抗体分子は、ヒト抗体との類似性を高めるために改変された、元々は非ヒト抗体を意味する。ヒト化抗体分子は、例えば、元々はマウス抗体またはラマ抗体であり得る。この文脈において、ヒト起源の抗体分子は、改変された元々はヒト抗体の分子を意味する。

いくつかの実施形態において、抗体分子は、ＩｇＧ抗体である。

いくつかの実施形態において、抗体分子は、野生型ＩｇＧ抗体である。

いくつかの実施形態において、抗体分子は、例えばＮ２９７ＱまたはＮ２９７Ａ置換などの、位置２９７におけるアスパラギンの置換を含むものなどの、非グリコシル化または脱グリコシル化されたＩｇＧ抗体分子を含む、上記のものなどのＦｃ改変されたＩｇＧ抗体である。

いくつかの実施形態において、抗体分子は、ヒトＩｇＧ１抗体である。ヒトＩｇＧ１抗体はマウスＩｇＧ２ａ抗体に対応するため、例えばインビボ研究などでヒトＩｇＧ１のマウス代理が使用される場合、マウスＩｇＧ２ａフォーマットが使用される。

いくつかの実施形態において、抗体分子は、ヒトＩｇＧ２抗体である。ヒトＩｇＧ２抗体はマウスＩｇＧ３抗体に対応するため、例えばインビボ研究などでヒトＩｇＧ２のマウス代理が使用される場合、マウスＩｇＧ３フォーマットが使用される。

いくつかの実施形態において、抗体分子は、ヒトＩｇＧ４抗体である。ヒトＩｇＧ４抗体はマウスＩｇＧ１抗体に対応するため、例えばインビボ研究などでヒトＩｇＧ４のマウス代理が使用される場合、マウスＩｇＧ１フォーマットが使用される。

Ｆｃ改変は、ヒトとマウスの抗体分子間で異なり得る。例えば、マウスＮ２９７Ａ ＩｇＧ２ａ抗体分子は、ヒトＮ２９７Ｑ ＩｇＧ１抗体分子の代理として使用することができる。

いくつかの実施形態において、抗ＬＩＬＲＢ３抗体は、モノクローナル抗体である。

いくつかの実施形態において、抗ＬＩＬＲＢ３抗体は、ポリクローナル抗体である。

上記の概略のように、抗体分子の異なる種類および形態は本発明に包含され、免疫学分野の当業者には既知であろう。治療目的で使用される抗体は、多くの場合、抗体分子の特性を修正する追加の構成成分を用いて改変されることが公知である。

したがって、本明細書に記載される抗体分子または本明細書に記載されるように使用される抗体分子（例えば、モノクローナル抗体分子、および／またはポリクローナル抗体分子、および／または二重特異性抗体分子）は、検出可能な部分および／または細胞傷害性部分を備える場合を含む。

「検出可能な部分」とは、酵素、放射性原子、蛍光部分、化学発光部分、生物発光部分で構成される群からの１つ以上を含む。検出可能な部分により、抗体分子をインビトロ、および／またはインビボ、および／またはエクスビボで視覚化することが可能になる。

「細胞傷害性部分」とは、放射性部分および／または酵素が挙げられ、例えば、酵素はカスパーゼおよび／または毒素であり、例えば毒素は細菌毒素または毒液であり、細胞傷害性部分は細胞溶解を誘導することが可能である。

さらに、抗体分子は、単離された形態および／または精製された形態であってよく、かつ／またはＰＥＧ化されてもよいことを含む。ＰＥＧ化は、その挙動を改変する、例えば、その流体力学的サイズを増加させ、腎クリアランスを予防することでその半減期を延ばすように、ポリエチレングリコールポリマーを抗体分子または誘導体等の分子に付加する方法である。

上で考察したように、抗体のＣＤＲは、抗体標的に結合する。本明細書に記載の各ＣＤＲへのアミノ酸の割り当ては、Ｋａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．１９９１，”Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２，ｐｐ ｘｖ－ｘｖｉｉによる定義に従う。

当業者が認識するように、アミノ酸を各ＣＤＲに割り当てるための他の方法も存在する。例えば、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（ＩＭＧＴ（登録商標））（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／およびＡｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，２００１により出版のＬｅｆｒａｎｃ ａｎｄ Ｌｅｆｒａｎｃ“Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ＦａｃｔｓＢｏｏｋ”）。

いくつかの実施形態において、ＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する抗体分子は、以下の表１に列挙されたＶＨ－ＣＤＲ１配列のうちの１つを含む。

いくつかの実施形態において、ＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する抗体分子は、以下の表１に列挙されたＶＨ－ＣＤＲ２配列のうちの１つを含む。

いくつかの実施形態において、ＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する抗体分子は、以下の表１に列挙されたＶＨ－ＣＤＲ３配列のうちの１つを含む。

いくつかの実施形態において、ＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する抗体分子は、以下の表１に列挙されたＶＬ－ＣＤＲ１配列のうちの１つを含む。

いくつかの実施形態において、ＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する抗体分子は、以下の表１に列挙されたＶＬ－ＣＤＲ２配列のうちの１つを含む。

いくつかの実施形態において、ＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する抗体分子は、以下の表１に列挙されたＶＬ－ＣＤＲ３配列のうちの１つを含む。

いくつかの実施形態において、抗ＬＩＬＲＢ３抗体分子は、可変重鎖（ＶＨ）中の３つのＣＤＲが以下からなる群から選択される抗体分子からなる群から選択される抗体分子である：
配列番号１、配列番号２および配列番号３、
配列番号９、配列番号１０および配列番号１１、
配列番号１７、配列番号１８および配列番号１９、ならびに
配列番号２５、配列番号２６および配列番号２７。

いくつかの実施形態において、抗ＬＩＬＲＢ３抗体分子は、可変軽鎖（ＶＬ）中の３つのＣＤＲが以下からなる群から選択される抗体分子からなる群から選択される抗体分子である：
配列番号４、配列番号５および配列番号６、
配列番号１２、配列番号１３および配列番号１４、
配列番号２０、配列番号２１および配列番号２２、
配列番号２８、配列番号２９および配列番号３０。

いくつかの実施形態において、抗ＬＩＬＲＢ３抗体分子は、配列番号７、１５、２３および３１からなる群から選択されるＶＨを含む抗体分子からなる群から選択される抗体分子である。

いくつかの実施形態において、抗ＬＩＬＲＢ３抗体分子は、配列番号８、１６、２４および３２からなる群から選択されるＶＬを含む抗体分子からなる群から選択される抗体分子である。

いくつかの実施形態において、抗ＬＩＬＲＢ３抗体分子は、配列番号４１を有するＣＨを含む。

いくつかの実施形態において、抗ＬＩＬＲＢ３抗体分子は、配列番号４２を有するＣＬを含む。

上記表１の配列はすべてヒト起源のものであり、実施例１で詳細に説明されているように、ｎ－ＣｏＤｅＲ（登録商標）ライブラリに由来する。

いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する抗体分子はまた、以下の表２に示される定常領域（ＣＨおよび／またはＣＬ）の一方または両方を含み得る。

上記の表２のＣＨ（配列番号３３）および（配列番号３４）配列は、ヒト起源のものである。

上述のように、いくつかの実施形態において、抗体分子は、ヒトＬＩＬＲＢ３に結合する。いくつかの実施形態において、抗体分子は、ヒトＬＩＬＲＢ３に強く結合すること、すなわち、それらが低いＥＣ５０値を有することが好ましい。

いくつかの実施形態において、抗体分子は、ヒトＬＩＬＲＢ３およびカニクイザルＬＩＬＲＢ３（ｃｍＬＩＬＲＢ３またはｃｙｎｏ ＬＩＬＲＢ３）の両方に結合することが有利である。カニクイザル（ｃｒａｂ－ｅａｔｉｎｇ ｍａｃａｑｕｅまたはＭａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）とも呼ばれるカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｍｏｎｋｅｙ）の細胞に発現するＬＩＬＲＢ３との交差反応性は、特に忍容性に焦点を当てた代理抗体を使用する必要なく抗体分子の動物試験を可能にするため、有利である可能性がある。

いくつかの実施形態では、マウスの関連するインビボモデルにおいて抗体分子の機能的活性を試験するには、代理抗体を使用する必要がある。ヒトにおける抗体分子の効果とマウスにおける代理抗体のインビボ結果との間の比較可能性を確実にするために、ヒト抗体分子と同じインビトロ特性を有する機能的に同等の代理抗体を選択することが不可欠である。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体分子または本発明に従って使用される抗体分子は、ＬＩＬＲＢ３への結合について、本明細書で提供される特定の抗体と競合することができる、例えば、配列番号７、１５、２３および３１からなる群から選択されるＶＨ、ならびに／または配列番号８、１６、２４および３２からなる群から選択されるＶＬを含む抗体分子と競合することができる抗体分子である。

「競合することができる」とは、競合する抗体が、本明細書で定義される抗体分子の特定の標的ＬＩＬＲＢ３への結合を少なくとも部分的に抑制またはその他の方法で妨害する能力があることを意味する。

例えば、そのような競合する抗体分子は、本明細書に記載される抗体分子のＬＩＬＲＢ３への結合を少なくとも約１０％、例えば、少なくとも約２０％、または少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％抑制することができる場合がある。

競合結合は、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）等の当業者に公知の方法によって判定することができる。

ＥＬＩＳＡアッセイを使用して、エピトープ改変抗体または遮断抗体を評価することができる。競合抗体を特定するために好適な追加の方法は、参照により本明細書に組み込まれるＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｈａｒｌｏｗ＆Ｌａｎｅに開示されている（例えば、５６７～５６９頁、５７４～５７６頁、５８３頁、および５９０～６１２頁、１９８８，ＣＳＨＬ，ＮＹ，ＩＳＢＮ０－８７９６９－３１４－２を参照されたい）。

いくつかの実施形態において、抗ＬＩＬＲＢ３抗体分子自体ではなく、そのような抗体分子をコードするヌクレオチド配列を使用することが興味深い。したがって、本発明は、上記抗ＬＩＬＲＢ３抗体分子をコードするヌクレオチド配列を包含する。

上記抗体分子およびヌクレオチド配列、または他の抗ＬＩＬＲＢ３抗体分子もしくはそのような抗体分子をコードするヌクレオチド配列は、医薬において使用することができ、またそのような抗体分子および／またはヌクレオチド配列は、以下でさらに論じられるように、医薬組成物に含まれ得る。

抗ＬＩＬＲＢ３抗体分子、ヌクレオチド配列および／または医薬組成物は、以下でさらに論じられるように、移植片拒絶の治療において使用され得る。

抗ＬＩＬＲＢ３抗体分子、ヌクレオチド配列および／または医薬組成物は、以下でさらに論じられるように、自己免疫障害の治療において使用され得る。

抗ＬＩＬＲＢ３抗体分子、ヌクレオチド配列および／または医薬組成物は、以下でさらに論じられるように、炎症性障害の治療において使用され得る。

抗ＬＩＬＲＢ３抗体分子、ヌクレオチド配列および／または医薬組成物は、移植片拒絶の治療において使用するための医薬組成物の製造に使用され得る。

抗ＬＩＬＲＢ３抗体分子、ヌクレオチド配列および／または医薬組成物は、自己免疫障害の治療において使用するための医薬組成物の製造に使用され得る。

抗ＬＩＬＲＢ３抗体分子、ヌクレオチド配列および／または医薬組成物は、炎症性障害の治療において使用するための医薬組成物の製造に使用され得る。

抗ＬＩＬＲＢ３抗体分子、ヌクレオチド配列および／または医薬組成物は、患者における移植片拒絶、自己免疫障害および／または炎症性障害の治療において使用され得、治療有効量の抗ＬＩＬＲＢ３抗体分子、ヌクレオチド配列および／または医薬組成物が患者に投与される。

本明細書に開示されるように治療され得る移植片拒絶の例には、臓器移植または臓器移植手術、例えばドナーからレシピエントへの腎臓、肝臓、心臓、肺、膵臓および腸の移植手術に関連する拒絶が含まれ、レシピエントは、移植手術で置き換えられる臓器に影響を与える病気または傷害に罹患している。本明細書に開示されるように治療され得る移植片拒絶の別の例には、造血幹細胞（ＨＳＣ）などの幹細胞が一致するドナーから収集され、疾患を抑制し、患者の免疫系を回復するために患者に移植される同種異系移植の拒絶を含む。

少なくともいくつかの実施形態において、移植片のレシピエントは、移植手術前にアゴニストＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂを投与することによって事前処置を受けるべきである。いくつかの実施形態において、移植片のレシピエントはまた、移植手術後にアゴニストＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂによる治療を受けるべきである。

本明細書に記載の抗体分子、医薬組成物および治療は、レシピエントによる新しい臓器または他の移植の拒絶を予防、治療、または最小化するために使用され得る。

本明細書に開示されるように治療され得る自己免疫障害または自己免疫の例には、セリアック病、１型真性糖尿病、サルコイドーシス、全身性紅斑性ループス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、橋本甲状腺炎、グレーブス病、特発性血小板減少性紫斑病、アディソン病、関節リウマチ（ＲＡ）、強直性脊椎炎、多発性筋炎（ＰＭ）、皮膚筋炎（ＤＭ）および多発性硬化症（ＭＳ）が含まれる。

本明細書に開示されるように治療され得る炎症性障害の例には、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性紅斑性ループス（ＳＬＥ）および多発性硬化症（ＭＳ）などの慢性炎症性障害、ならびに敗血症などの急性炎症性障害の両方が含まれる。

例えば、薬剤が身体に吸収される速度を変更するように、薬剤は、異なる添加物で改変することができ、例えば身体への特定の投与経路を可能にするように異なる形態で改変することができることは、医薬当業者には既知であろう。

したがって、本明細書に記載の抗体分子、ヌクレオチド配列、プラスミドおよび／または細胞を、薬学的に許容される賦形剤、担体、希釈剤、ビヒクルおよび／またはアジュバントと組み合わせて医薬組成物にすることができることが含まれる。この文脈において、医薬組成物という用語は、医薬調製物、薬医薬製剤、治療組成物、治療調製物、治療製剤、および治療実体（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｅｎｔｉｔｙ）という用語と交換可能に使用することができる。

本明細書に記載の医薬組成物は、抗体分子、ヌクレオチド配列、プラスミドまたは細胞を含み得るか、またはいくつかの実施形態ではそれらからなり得る。

本明細書に記載の医薬組成物は、いくつかの実施形態において、上記の抗体分子をコードするヌクレオチド配列を含む、または上記のヌクレオチド配列を含むプラスミドからなるか、またはそれを含み得る。

本発明はまた、抗体薬物コンジュゲート、融合タンパク質などの他の治療様式または薬物の「形状」、およびそのような治療様式を含む医薬組成物を含む。

本明細書に記載の抗体分子、ヌクレオチド配列、プラスミド、細胞および／または医薬組成物は、抗酸化剤、および／もしくはバッファー、および／もしくは静菌剤、および／もしくは、意図するレシピエントの血液と製剤を等張にする溶質を含有し得る水性および／もしくは非水性滅菌注射溶液；ならびに／または懸濁剤および／もしくは増粘剤を含み得る水性および／もしくは非水性滅菌懸濁液を含み、非経口投与に好適であり得る。本明細書に記載される抗体分子、ヌクレオチド配列、プラスミド、細胞および／または医薬組成物は、単位用量または複数用量容器、例えば、密封されたアンプルおよびバイアル内に存在させてもよく、使用直前に滅菌液体担体、例えば注射用水の添加のみを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保存されてもよい。

即時注射液および懸濁液剤は、前述の種類の滅菌散剤、および／または顆粒剤、および／または錠剤から調製され得る。

ヒト患者への非経口投与では、抗ＬＩＬＲＢ３抗体分子の１日投与量レベルは通常、患者の体重で１ｍｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇであり、あるいは場合によっては、最大１００ｍｇ／ｋｇが単回または分割用量で投与されるであろう。特別な状況下、例えば長期投与と組み合わせて、より低い用量を使用してもよい。いずれにしても、医師は個々の患者に最も好適であろう実際の投与量を判定し、それは特定の患者の年齢、体重、および反応によって変動するであろう。上述の投与量は平均的な場合の例示である。当然ながら、より高いかまたはより低い投与量範囲が妥当である個々の症例があり得、それらも本発明の範囲内に含まれる。

典型的には、抗体分子を含む本明細書に記載の医薬組成物（または医薬品）は、約２ｍｇ／ｍｌ～１５０ｍｇ／ｍｌまたは約２ｍｇ／ｍｌ～２００ｍｇ／ｍｌの濃度で抗ＬＩＬＲＢ３抗体分子を含有するであろう。

一般に、ヒトでは、本明細書に記載の抗体分子、ヌクレオチド配列、プラスミド、細胞および／または医薬組成物の経口または非経口投与が好ましい経路であり、最も便利である。獣医学的使用には、本明細書に記載の抗体分子、ヌクレオチド配列、プラスミド、細胞および／または医薬組成物は、通常の獣医学的診療に従って適宜許容される製剤として投与され、獣医師は、ある特定の動物にとって最も適切であろう投薬計画および投与経路を決定するであろう。したがって、本発明は、（上述および以下でさらに説明する）様々な状態を治療するのに有効な、本発明の抗体分子、ヌクレオチド配列、プラスミドおよび／または細胞の量を含む医薬製剤を提供する。好ましくは、本明細書に記載の抗体分子、ヌクレオチド配列、プラスミド、細胞および／または医薬組成物は、静脈内（ＩＶもしくはｉ．ｖ．）、筋肉内（ＩＭもしくはｉ．ｍ．）または皮下（ＳＣもしくはｓ．ｃ．）を含む群から選択される経路による送達に適合される。

本発明はまた、本発明の標的結合分子または部分の薬学的に許容される酸または塩基付加塩を含む、本明細書に記載の抗体分子、ヌクレオチド配列、プラスミド、細胞および／または医薬組成物を含む。本発明において有用な上述の塩基化合物の薬学的に許容される酸付加塩を調製するために使用される酸は、非毒性の酸付加塩、すなわち、薬理学的に許容されるアニオンを含有する塩、例えば、とりわけ、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、重酒石酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、糖酸塩、安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、およびパモ酸塩［すなわち、１，１’－メチレン－ビス－（２－ヒドロキシ－３ナフトエート）］塩を形成するものである。また、薬学的に許容可能な塩基付加塩を使用して、本発明に従った薬剤の、薬学的に許容可能な塩の形態を生成してもよい。本質的に酸性である本薬剤の薬学的に許容される塩基塩を調製するための試薬として使用され得る化学塩基は、そのような化合物と非毒性塩基塩を形成するものである。そのような非毒性塩基塩には、これらに限定されないが、とりわけ、アルカリ金属カチオン（例えばカリウムおよびナトリウム）およびアルカリ土類金属カチオン（例えばカルシウムおよびマグネシウム）、アンモニウムまたは水溶性アミン付加塩、例えばＮ－メチルグルカミン－（メグルミン）、および低級アルカノールアンモニウム、ならびに他の薬学的に許容される有機アミンの塩基塩等のそのような薬理学的に許容されるカチオンに由来するものが挙げられる。本明細書に記載の抗体分子、ヌクレオチド配列、プラスミドおよび／または細胞は、保存のために凍結乾燥され、使用前に適切な担体中で再構成することができる。任意の好適な凍結乾燥法（例えば、噴霧乾燥、ケーキ乾燥）、および／または再構成技法を用いてもよい。凍結乾燥および再構成によって、抗体活性低下の程度の変動に至る場合があり（例えば、従来の免疫グロブリンでは、ＩｇＭ抗体はＩｇＧ抗体よりも活性が大きく低下する傾向を有する）、使用レベルを上方調整して補う必要があり得ることを当業者は理解するであろう。一実施形態において、凍結乾燥（フリーズドライ）ポリペプチド結合部分は、再水和されるとき、（凍結乾燥前の）その活性のうちの約２０％未満、または約２５％未満、または約３０％未満、または約３５％未満、または約４０％未満、または約４５％未満、または約５０％未満を損失する。

本明細書に記載の抗ＬＩＬＲＢ３抗体分子、ヌクレオチド配列および医薬組成物は、対象または患者における移植片拒絶または自己免疫の治療における使用において使用され得る。本明細書では、対象および患者という用語は交換可能に使用される。

「患者」（または対象）という用語は、本明細書で使用される場合、移植片拒絶もしくは自己免疫に罹患していると診断された、または移植片拒絶もしくは自己免疫の罹患症状を呈する、ヒトを含む動物を指す。

いくつかの実施形態において、患者（または対象）は、移植片拒絶または自己免疫に罹患していると診断された、ヒトを含む動物である。いくつかの実施形態において、患者（または対象）は、移植手術を受ける、したがって移植片拒絶のリスクを有する、ヒトを含む動物であり、本明細書で論じられる治療は、予防的治療として、または予防目的で行われる。

いくつかの実施形態において、患者（または対象）は、移植片拒絶または自己免疫を有すると診断された、および／または移植片拒絶または自己免疫の症状を示す、ヒトを含む哺乳動物または非哺乳動物である。

治療は、一連の治療として投与され得、すなわち治療剤は、ある期間にわたって投与される。一連の治療の時間の長さは、他の理由のなかでもとりわけ、投与されている治療剤の種類、治療されている疾患または状態の種類、治療されている疾患または状態の重症度、ならびに患者の年齢および健康状態を含むいくつかの要因に依存する。

「治療中」とは、患者が現在、一連の治療を受けていること、および／または治療薬を受けていること、および／または一連の治療薬を受けている場合を含む。

以下の実施例では、以下の図を参照している。

ヒトＬＩＬＲＢ３に対する完全ヒトｍＡｂの生成。図１Ａ：生成されたＬＩＬＲＢ３クローンのスクリーニング。ＦＭＡＴを実行し、ｓｃＦｖクローンをＬＩＬＲＢ３標的およびＬＩＬＲＢ１非標的トランスフェクト細胞に対してスクリーニングした。ＭＦＩが計算され、標的固有のｓｃＦｖは明るい色で、非標的ｓｃＦｖは暗い色で示されている。 図１Ｂ：フローサイトメトリーによるＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂのスクリーニング。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）またはＬＩＬＲでトランスフェクトされたＣＨＯ－Ｓ細胞を、Ｈｉｓタグ付きｓｃＦｖ上清とインキュベートし、続いて抗Ｈｉｓ－ＡＦ６４７染色を行った。トランスフェクトされたＣＨＯ－Ｓ細胞が使用された場合、ＬＩＬＲＢ１およびＬＩＬＲＢ２でトランスフェクトされたＣＨＯ－Ｓ細胞が、ＬＩＬＲＢ３の非標的として使用された。ＴＩＢＣＯ Ｓｐｏｔｆｉｒｅソフトウェアを使用して、ゲートされた単球および標的トランスフェクトされたＣＨＯ－Ｓ細胞の両方に対して抗体クローンを比較した。ＬＩＬＲＢ３特異的クローンは薄い灰色で強調表示され、非特異的クローンは濃い灰色で強調表示され、無関係なアイソタイプ対照は灰色で強調表示されている。図１Ｃ：ヒトＬＩＬＲでトランスフェクトされた２Ｂ４細胞に対するＬＩＬＲＢ３クローンの特異性。フローサイトメトリーによって、示されたＬＩＬＲファミリーメンバーでトランスフェクトされた細胞に対してＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂをテストした。代表的なクローン（Ａ１６）が表示されている。 図１ＤおよびＥ：フローサイトメトリーによる一次細胞に対するＬＩＬＲＢクローンの特異性のテスト。示されているように、ＰＢＭＣ（図１Ｄ）または全血（図１Ｅ）は、ＡＰＣ標識ＬＩＬＲＢ３（クローンＡ１６）またはｈＩｇＧ１アイソタイプ、および様々な白血球表面マーカーのいずれかで染色された。ヒストグラムは、単球およびＢ細胞（ｎ＝１２）、Ｔ細胞およびＮＫ細胞（ｎ＝１２）、ならびに好中球（ｎ＝６）の複数のドナーの代表的なプロットである。 ＬＩＬＲＢ３抗体の特性。図２Ａ：ＳＰＲによって評価されたＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂ親和性。ＬＩＬＲＢ３－ｈＦｃ組換えタンパク質を固定化し、様々なＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂをチップ全体に流した。ＫＤ値は、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）Ｔ１００評価ソフトウェアを使用して計算された。代表的なＬＩＬＲＢ３クローンが示されている。図２Ｂ：ＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂ（市販のＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂ；（クローン２２２８２１、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＵＫ））の結合をクロスブロックする生成されたｍＡｂの能力。ＰＢＭＣを非コンジュゲートＬＩＬＲＢ３抗体クローンで染色し、その後、直接コンジュゲートした市販のＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂで染色し、フローサイトメトリーにより分析した。示されているように、代表的なクローンが表示されている。アイソタイプ対照（ｉｓｏ ｃｔｒｌ）は灰色で網掛けされており、クローン２２２８２１のみが黒色で、示されているＬＩＬＲＢ３クローンの組み合わせが灰色の線で示されている。 図２Ｃ：ＬＩＬＲＢ３ドメインエピトープマッピング。ＷＴ ＬＩＬＲＢ３（完全長細胞外部分）、ＬＩＬＲＢ３－Ｄ１－３、ＬＩＬＲＢ３－Ｄ１－２、またはＬＩＬＲＢ３－Ｄ１のいずれかでトランスフェクトされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞を、ＬＩＬＲＢ３クローンで染色し、続いて抗ｈＩｇＧ－ＰＥ二次抗体染色を行った。生成されたドメインコンストラクトの概略図、および各コンストラクトの制限消化が示されている。示されているように、ヒストグラムは、ＷＴ（Ｄ４）、Ｄ３、Ｄ２、およびＤ１発現細胞に差示的に結合する２つの代表的なクローンの染色を示す（ｎ＝３の独立した実験）。図２Ｄ：ＬＩＬＲＢ３ ２Ｂ４レポーター細胞を１０μｇ／ｍｌのＬＩＬＲＢ３抗体で一晩処理して、アゴニズムまたはアンタゴニズムを評価した。次いで、ＧＦＰ発現をフローサイトメトリーで測定した。代表的なクローンが示されている。 ＬＩＬＲＢ３ライゲーションはＴ細胞の活性化および増殖を調節する。ＣＦＳＥ標識ＰＢＭＣを、アイソタイプ対照（ｉｓｏ ｃｔｒｌ）またはＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂ（１０μｇ／ｍｌ）の存在下または非存在下でヒトＣＤ３およびＣＤ２８に対する抗体で刺激し、３～５日後にＣＦＳＥ希釈によって増殖を測定した。図３Ａ：治療後のＴ細胞の活性化および増殖の評価。培養中のＰＢＭＣ刺激後の光学顕微鏡画像。ＣＤ８＋ Ｔ細胞増殖を、ＣＦＳＥ希釈によって評価した。代表的なヒストグラムが示されている。 図３Ｂ：ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって確認されるように、ＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂを、ＰＮＧａｓｅ処理によって脱グリコシル化した（Ｄｅｇｌｙ）。代表的なクローンが示されている。図３Ｃ：Ｔ細胞増殖に対する脱グリコシル化ＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂの効果の評価。様々なＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂで処理されたＣＤ８＋ Ｔ細胞のＣＦＳＥ希釈を、フローサイトメトリーによって評価した。データは抗ＣＤ３／ＣＤ２８処理試料に対して正規化され、平均は実線で表されている。代表的なクローンが示されている。両側の対応のあるＴ検定を実行したが、星はｉｓｏ ｃｔｒｌと比較した有意差のレベルを表す（＊＊＊ｐ＜０．００５）。ｎ＝１３～２０の独立したドナー（各ドットは個々のドナーを表す）。 ＬＩＬＲＢ３ライゲーションはマクロファージの食作用を調節する。図４Ａ：ヒトＭＤＭを抗ＣＤ１４および抗ＬＩＬＲＢ３（Ａ１６）で染色し、フローサイトメトリーで分析した。図４Ｂ：ＣＦＳＥ⁺リツキシマブオプソニン化標的細胞との共培養の前に、ＭＤＭを脱グリコシル化アイソタイプ対照（ｉｓｏ ｃｔｒｌ）またはＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂ（１０μｇ／ｍｌ）で処理した。食作用は、次の式を使用して、二重陽性であったゲート生細胞（ＣＤ１６⁺ ＣＦＳＥ⁺細胞）の数として、総ＭＤＭ（ＣＤ１６⁺細胞）のパーセンテージとして定義された： （二重陽性ＭＤＭ／総ＭＤＭ）×１００＝％陽性ＭＤＭ 図４Ｃ：食作用に対する脱グリコシル化ＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂの効果。各ドナーに３回実行し、平均を実線で表す（ｎ＝４～６人の健康なドナー）。代表的なクローンが示されている。両側の対応のあるＴ検定を実行したが、星はアイソタイプ対照と比較した有意差のレベルを表す（＊ｐ＜０．０５、＊＊＊ｐ＜０．０００５）。図４Ｄ：共焦点顕微鏡法によって評価された食作用に対する脱グリコシル化ＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂの効果。ＬＩＬＲＢ３で処理されたＭＤＭ（灰色）をＣＦＳＥ標識Ｂ細胞（薄い灰色）と共培養し、４％ＰＦＡで固定し、膜糖タンパク質をビオチン化ＷＧＡで染色した。次いで、細胞を二次ストレプトアビジンコンジュゲートＡＦ６３５とインキュベートし、共焦点顕微鏡で分析した。 ＬＩＬＲＢ３ライゲーションはインビボで耐性を誘発する。完全に再構成されたヒト化マウス（５０％以上の循環ｈＣＤ４５＋白血球）が生成され、ＣＤ１４＋骨髄細胞でヒトＬＩＬＲＢ３の発現が確認された。図５Ａ：ｈＣＤ４５＋骨髄ｈＣＤ１４⁺骨髄細胞でのＬＩＬＲＢ３発現を示す代表的なフローサイトメトリーヒストグラム。濃い灰色はアイソタイプ対照、薄い灰色はＬＩＬＲＢ３である。図５Ｂ：ヒト化マウスに、それぞれ、０日目および４日目に、２００μｇのＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂ（クローンＡ１）またはアイソタイプがマッチした（ｈＩｇＧ１）対照ｍＡｂをｉｖおよび腹腔内（ｉ．ｐ．）注射した。７日目に、マウスに１×１０⁷個の非自己ルシフェラーゼ⁺ヒトリンパ腫細胞をｉ．ｐ．注射した。ＩＶＩＳイメージャを使用してリンパ腫細胞の増殖を経時的にモニタリングしたが、３つの独立した実験からの代表的な画像が示されている（ｎ＝３マウス／群）。 ヒトＬＩＬＲＢ３ライゲーションはヒト初代骨髄細胞を再プログラムする。新しく単離されたヒト末梢ＣＤ１４⁺単球を、アイソタイプ対照（ｉｓｏ ｃｔｒｌ）またはヒトＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂ（クローンＡ１）で処理した。図６Ａ：処理後の単球の形態。培養中の示されたｍＡｂで新たに単離されたＣＤ１４⁺単球を一晩処理した後の光学顕微鏡画像。図６Ｂ：ＬＩＬＲＢ３で処理された単球のトランスクリプトミクス分析。ｍＡｂ処理（約１８時間）後に細胞からＲＮＡを抽出し、ＲＮＡ配列決定に供した。左のパネルは、有意にアップレギュレーションされた遺伝子のリストを示し、右のパネルは、ｉｓｏ ｃｔｒｌ処理細胞と比較して有意にダウンレギュレーションされた遺伝子を示す（ｎ＝４；各行は個々のドナーを表す）。 図６Ｃ：初代ヒトＣＤ１４⁺単球上のＬＩＬＲＢ３のライゲーションは、Ｍ２分極遺伝子を誘発する。ＬＩＬＲＢ３で処理された単球対アイソタイプ対照のそれぞれにおけるＭ２分極遺伝子の有意な濃縮を示すＧＳＥＡグラフ。ＵＰ；アップレギュレーション、ＮＥＳ；正規化された濃縮スコア＝－１．６８、ＦＷＥＲ；ファミリーワイズエラー率ｐ＜０．００１。図６Ｄ：単球上のＬＩＬＲＢ３ライゲーション後の選択された遺伝子のｑＰＣＲ分析。データは、ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡレベルに正規化し、アイソタイプ対照で処理された単球のレベルに標準化した。倍率差データはｌｏｇ１０変換した。ボンフェローニの多重比較検定を使用した一元配置ＡＮＯＶＡを実行した。ｎ＝３の独立したドナーであった（＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＜０．０００５）。 図６Ｅ：「ＩＦＮ－γ」（ＮＥＳ＝－２．１７；ＦＷＥＲ ｐ＜０．００１）、「ＩＦＮ－α」（ＮＥＳ＝－２．３；ＦＷＥＲ ｐ＜０．００１）および 「同種移植片拒絶」（ＮＥＳ＝－１．５８；ＦＷＥＲ ｐ＝０．１４）シグナル伝達要素との負の相関および「酸化的リン酸化」との正の相関（ＮＥＳ＝２；ＦＷＥＲ ｐ＜０．００１）を示すＧＳＥＡ分析。 図６Ｆ：ＡＰＣでのライゲーション後のＬＩＬＲＢ３の免疫抑制機能を示す概略図。

ここで、本発明のある特定の態様を具体的に示す、特定の非限定的な実施例を説明する。

材料および方法
倫理に関する声明
ヒトの試料およびマウスを用いたすべての研究は、施設のガイドライン、ヘルシンキ宣言、およびＵＳ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓの実験動物の管理と使用に関するガイドに準拠して実施された。Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＭＩＴ）の動物管理委員会は、ここで説明されている研究を審査および承認した。すべてのヒト試料（成人の末梢血および胎児の肝臓）は、第三者のインフォームドコンセントを得て匿名で収集され、研究のために購入された。ヒト末梢血については、臨床試料の使用に関する倫理的承認がＳｏｕｔｈａｍｐｔｏｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｈｏｓｐｉｔａｌｓ ＮＨＳトラストにより、インフォームドコンセントの提供後、Ｓｏｕｔｈａｍｐｔｏｎ ａｎｄ Ｓｏｕｔｈ Ｗｅｓｔ Ｈａｍｐｓｈｉｒｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｅｔｈｉｃｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅから取得された。原発性慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）試料は、ＬＰＤ研究ＬＲＥＣ番号２２８／０２／Ｔの一部として、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｏｕｔｈａｍｐｔｏｎのがん科学ユニット組織バンクに認可された人体組織管理機構からリリースされた。

造血幹／前駆細胞（ＨＳＰＣ）の分離およびヒト化マウスの生成
ヒト胎児肝臓は、施設の倫理ガイドライン（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ、Ｉｎｃ．、ＣＡ，ＵＳＡ）に従って、妊娠１５～２３週で中絶された胎児から得られた。すべての女性から、研究のために胎児組織を寄付することについて書面によるインフォームドコンセントが得られた。胎児は妊娠中絶から２時間以内に採取された。胎児の肝臓組織を最初に小片に切断し、コラゲナーゼＶＩ（ダルベッコの改良イーグル培地［ＤＭＥＭ］中２ｍｇ／ｍｌ）で、定期的に混合しながら３７℃で３０分間消化した。消化された組織を１００μｍの細胞ストレーナー（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＮＪ，ＵＳＡ）に通すことにより、単細胞懸濁液を調製した。ＣＤ３４⁺細胞を、ＣＤ３４⁺選択キット（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，ＢＣ，Ｃａｎａｄａ）を使用して精製した。ＣＤ３４⁺細胞の純度は９０％～９９％であった。死細胞をトリパンブルーで排除することにより、生細胞をカウントした。すべての細胞は無菌条件下で単離された。

ＮＳＧマウスは、ジャクソン研究所（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ、Ｍａｉｎｅ、ＵＳＡ）から購入し、ＭＩＴの動物施設で特定病原体除去条件下で飼育した。以前に報告されたように（２５）、マウスを再構成するために、新生児（２日未満）にＣＤ３４＋ＣＤ１３３＋細胞（約２×１０⁵細胞／レシピエント）を心臓内に注入したガンマ線源を使用して１００ｃＧｙを照射した。約１２週齢で、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）のフローサイトメトリーによってヒト白血球の再構成が断定された。キメラ現象、またはヒト白血球再構成のレベルは、以下のように計算された：％ＣＤ４５＋ヒト細胞／（％ＣＤ４５＋ヒト細胞＋％ＣＤ４５＋マウス細胞）。この研究では、４０％以上のヒトＣＤ４５＋白血球を有するマウスを使用した。

細胞培養
細胞株を、１０％ウシ胎児血（ＦＣＳ）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、ＵＫ）、１００Ｕ／ｍｌペニシリン－ストレプトマイシン、２ｍＭグルタミンおよび１ｍＭピルビン酸（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＫ）を添加したＲＰＭＩ１６４０培地で、５％ＣＯ₂を含む加湿インキュベータ、Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ ２９３Ｆ培地、８％ＣＯ₂、１３０ｒｐｍで振とう、またはＦｒｅｅｓｔｙｌｅ ＣＨＯ培地（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＫ）、８ｍＭグルタミン、８％ＣＯ₂、１４０ｒｐｍで振とうして３７°Ｃで増殖させた。

抗体生成および産生
ＬＩＬＲＢ３抗体の生成。
様々なＬＩＬＲＢ３特異的ｍＡｂの選択が、ｎ－ＣｏＤｅＲ（登録商標）ファージディスプレイライブラリを使用して実行された（２６）。３回の連続したパニングラウンド、および事前パニングステップが実行された。パニングでは、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ２、またはＬＩＬＲＢ３の細胞外ドメインを含むＦｃ融合タンパク質（ＬＩＬＲＢ－Ｆｃ）をそれぞれ非標的または標的として使用された。これらのタンパク質は、以前に説明されているように（２７）、一過性にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞で産生され、続いてプロテインＡで精製された。様々なＬＩＬＲＢタンパク質を発現するために一過性にトランスフェクトされたＣＨＯ－Ｓ細胞も、パニングの標的／非標的として使用された。

パニング１では、ＢｉｏＩｎｖｅｎｔ ｎ－ＣｏＤｅＲ（登録商標）ｓｃＦｖが、競合あり、またはなしでビオチン化された社内生産の組換えＬＩＬＲＢ－ヒト（ｈ）Ｆｃ組換え融合タンパク質（ストレプトアビジンでコーティングされたＤｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）で捕捉）を使用して、またはエッチングされたポリスチレンボール（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＵＳ）／プラスチックイムノチューブにコーティングされたＬＩＬＲＢ－ｈＦｃを使用して選択された。結合ファージはトリプシン消化によって溶出され、標準的な手順を使用してプレート上で増幅された（２８）。パニング１からの増幅されたファージはパニング２に使用され、プロセスが繰り返され、パニング２からの増幅されたファージはパニング３に使用された。ただし、３回目のパニングラウンドでは、３つの戦略すべてから増幅されたファージが組み合わされ、ＬＩＬＲＢの一過性にトランスフェクトされたＣＨＯ－Ｓ細胞に対して選択された。

次に、パニング３からの濃縮ファージレパートリーからのＬＩＬＲＢ３陽性ｓｃＦｖカセットを再クローニングして、Ｅ． ｃｏｌｉでの可溶性ｓｃＦｖ発現を可能にした。個々のクローンによって発現された可溶性ｓｃＦｖ断片を、Ｆｌｏｕｒｏｍｅｔｒｉｃ Ｍｉｃｒｏｖｏｌｕｍｅ Ａｓｓａｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＦＭＡＴ）を使用して、ＬＩＬＲＢでトランスフェクトされたＣＨＯ－Ｓ細胞に対する結合についてテストし、組換えＬＩＬＲＢタンパク質は酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によってテストした。これにより、ＬＩＬＲＢ３に特異的に結合するクローンの特定が可能になった。次いで、クローンは、ＬＩＬＲＢ１－３を発現するＣＨＯ－Ｓ細胞および一次細胞（ＰＢＭＣ）に対する三次スクリーニングでさらに減少した。単一のＬＩＬＲＢへの結合の特定のパターンを示すクローンを配列決定し、ＬＩＬＲＢ１－３特異的ｍＡｂを得た。

全長ＩｇＧの産生。
上で特定された固有のｓｃＦｖを、ＨＥＫ２９３－ＥＢＮＡ細胞での完全長ＩｇＧの一過性発現を可能にする真核生物発現システムにクローニングした。次いで、以前に説明された（２９）ようにプロテインＡベースのアフィニティークロマトグラフィーを使用して、培養上清から抗体を精製した。

脱グリコシル化されたＩｇＧの産生。
ＦｃおよびＦａｂ依存性エフェクター機能の分析を可能にするために、ＩｇＧを０．０５ＵのＰＮＧａｓｅ／μｇのＩｇＧを含むＰＮＧａｓｅＦ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、３７℃で少なくとも１５時間脱グリコシル化した。脱グリコシル化は、ＳＤＳ－ＰＡＧＥでの重鎖のサイズの減少によって確認された。

ドメイン変異コンストラクトの産生
健康なドナーＰＢＭＣから単離された野生型ＬＩＬＲＢ３ｃＤＮＡを使用して、オーバーラップＰＣＲによって一連のドメイン変異ＤＮＡコンストラクトを生成し、１つ、２つ、または３つのＬＩＬＲＢ３ Ｉｇ様ドメイン（Ｕｎｉｐｒｏｔの注釈に基づいてドメインを特定）を発現させた。次いで、遺伝子コンストラクトをｐｃＤＮＡ３にクローニングした。

細胞トランスフェクション
Ｏｐｔｉｍｅｍ １ Ｍｅｄｉａ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＫ）で２３３フェクチンを使用したリポフェクションにより、１０×１０⁶ ＨＥＫ２９３Ｆ細胞に１０μｇのプラスミドＤＮＡを一過性にトランスフェクトした。

ヒト白血球の調製および単球由来マクロファージ（ＭＤＭ）の生成
全血は、健康なボランティアからのインフォームドコンセントを得て取得した。ＰＢＭＣは、白血球の血液コーン（輸血サービス、サウサンプトン総合病院）から分離した。分離は、ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（Ａｘｉｓ Ｓｈｉｅｌｄ、ＵＫ）を使用した勾配密度遠心分離によって行った。ＭＤＭは、以前と同様に（３０）健康な末梢血のヒト単球から生成した。簡単に説明すると、ＰＢＭＣを１％ヒトＡＢ血清（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、ＵＫ）を含む６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＵＫ）に２×１０⁷細胞／ウェルで播種し、３７℃で２時間インキュベートした。非接着細胞を洗い流し、接着単球（＞９０％ ＣＤ１４⁺）を５％ＣＯ₂で３７℃で一晩インキュベートした。翌日、１００ｎｇ／ｍｌのヒト組換えＭ－ＣＳＦ（社内）を各ウェルに添加した。培養中に培地およびサイトカインを２回補充し、７～８日目に細胞を回収した。

マクロファージ食作用アッセイ
上述のように生成されたヒトＭＤＭを、９６ウェル平底プレートに１×１０⁵細胞／ウェルでプレーティングした。ＭＤＭを１０μｇ／ｍｌのＬＩＬＲＢ３抗体で２時間処理し、洗浄した。５μＭのＣＦＳＥ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、ＵＫ）で標識された原発性慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞を、４℃で２５分間リツキシマブ（またはアイソタイプ対照としてのハーセプチン）でオプソニン化した。次いで、ＭＤＭと標的ＣＬＬ細胞をそれぞれ３７℃で１時間、１：５の比率で共培養した後、１０μｇ／ｍｌのＣＤ１６－ＡＰＣ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、ＵＫ）で暗所中室温で１５分間染色した。細胞を洗浄し、回収し、フローサイトメトリーで分析し、％食作用を次のように計算した：（％二重陽性ＭＤＭ）／（％総ＭＤＭ）×１００。

フローサイトメトリー
ＰＢＭＣまたは全血の細胞表面染色では、細胞を２％ヒトＡＢ血清（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、ＵＫ）で氷上で１０分間ブロックし、次いで関連するＡＰＣ標識ｍＡｂまたはｈＩｇＧ１アイソタイプ（ＢｉｏＩｎｖｅｎｔ、Ｓｗｅｄｅｎ）で、次の細胞表面マーカーと一緒に染色した：ＣＤ１４－ＰＥ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、ＵＫ）、ＣＤ２０－Ａ４８８（蛍光標識リツキシマブ、社内）、ＣＤ３－ＰＥ－Ｃｙ７、ＣＤ５６－ＡＰＣ－Ｃｙ７またはＣＤ１５－Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ、およびＣＤ６６Ｂ－ＦＩＴＣ ｍＡｂ（すべてＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、ＵＫ）。細胞を４℃で３０分間染色し、次いで、最初は１０％赤血球（ＲＢＣ）溶解バッファー（Ｓｅｒｏｔｅｃ、ＵＫ）で、次にＦＡＣＳ洗浄（ＰＢＳ、１％ＢＳＡ、１０ｍＭ ＮａＮ３）で２回洗浄してから、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒまたはＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＵＳＡ）で取得し、ＦＣＳ Ｅｘｐｒｅｓｓ Ｖ３（Ｄｅ Ｎｏｖｏ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）で分析した。

ｍＡｂが同様のクロスブロッキングエピトープに結合したかどうかを決定するアッセイでは、１×１０⁶ ＰＢＭＣを２％ヒトＡＢ血清で１０分間ブロックし、１０μｇ／ｍｌの非コンジュゲートＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂで４℃で３０分間染色した。次いで、直接コンジュゲートした市販のＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂ（クローン２２２８２１；Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＵＫ）で細胞を４℃で２０分間染色してから洗浄し、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒを使用して取得した。

ＬＩＬＲＢ３エピトープマッピング研究では、ＬＩＬＲＢ３ドメイン変異でトランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｆ細胞を関連するＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂで４℃で２５分間染色し、２回洗浄し、抗ヒトＰＥ二次（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、ＵＳＡ）で４℃で２０分間染色してから洗浄し、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒを使用して取得した。

ＬＩＬＲ－Ａ１、－Ａ２、－Ａ５、－Ｂ１、－Ｂ２、－Ｂ３、－Ｂ４、または－Ｂ５（またはトランスフェクトされていない対照）を発現する２Ｂ４レポーター細胞の染色では、細胞を１０μｇ／ｍｌのＬＩＬＲＢ ｍＡｂで染色し、５％ＣＯ₂で３７℃で一晩インキュベートした。翌日、細胞を洗浄し、二次抗ｈＩｇＧ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、ＵＳＡ）で４℃で４５分間染色した。細胞を洗浄し、ＦＡＣＳｃａｎ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＵＳＡ）を使用して取得を行い、Ｃｅｌｌ Ｑｕｅｓｔ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＵＳＡ）を使用して分析を行った。

ＦＣＳ Ｅｘｐｒｅｓｓ Ｖ３（Ｄｅ Ｎｏｖｏ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）およびＦｌｏｗＪｏを使用して、フローサイトメトリーデータを分析した。

表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）
ＳＰＲは、製造元の指示に従いＢｉａｃｏｒｅ Ｔ１００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＵＫ）を用いて行った。ＬＩＬＲＢ３－ｈＦｃ組換えタンパク質（ヒトＦｃタグを有する細胞外ＬＩＬＲＢ３ドメイン）をリガンドとして使用し、アミンカップリングによってシリーズＳセンサーチップ（ＣＭ５）に固定化した。様々なＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂを「分析物」として使用し、チップ全体に流し、ＳＰＲを測定した。ＫＤ値は、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）Ｔ１００評価ソフトウェア（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＵＫ）を使用して、Ｋｄ［１／ｓ］／Ｋａ［１／Ｍｓ］による１：１結合の「一価」モデルから計算した。

Ｔ細胞増殖アッセイ
ＰＢＭＣ（１～２×１０⁷）を、室温で１０分間２μＭのＣＳＦＥで標識した。その後、細胞を無血清ＣＴＬ培地（Ｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）に再懸濁し、９６ウェル丸底プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＵＫ）に１×１０⁵細胞／ウェルで播種した。次いで、細胞を０．０２μｇ／ｍｌのＣＤ３（クローンＯＫＴ３、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｏｕｔｈａｍｐｔｏｎ）、５μｇ／ｍｌのＣＤ２８（クローンＣＤ２８．２；ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、ＵＫ）および１０μｇ／ｍｌのＬＩＬＲＢ３抗体または関連するアイソタイプで刺激した。次いで、プレートを３７℃で４日間インキュベートし、その後細胞を５μｇ／ｍｌのＣＤ８－ＡＰＣ（クローンＳＫ１；ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、ＵＫ）で染色し、回収し、Ｔ細胞増殖の読み出しとしてフローサイトメトリーでＣＳＦＥ希釈物を測定した。

インビボ同種移植アッセイ
完全に再構成されたヒト化マウス（４０％以上の循環ｈＣＤ４５＋白血球）に、２００μｇのＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂ（クローンＡ１）またはアイソタイプマッチ（ｈＩｇＧ１）対照を、それぞれ０日目および４日目にｉ．ｖ．およびｉ．ｐ．注射した。７日目に、マウスのコホートに、無関係の非マッチドナーに由来する１×１０⁷ルシフェラーゼ陽性ヒト「ダブルヒット」Ｂ細胞リンパ腫（２５、３１）をｉ．ｐ．注射した。リンパ腫細胞の増殖を、以前と同様に（２５）、ＩＶＩＳスペクトル生物発光イメージングシステムを使用して経時的に監視した。

トランスクリプトーム分析
単球でのＬＩＬＲＢ３媒介転写変化を評価するために、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒト単球濃縮キット（陰性選択細胞；ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＵＳＡ）を使用して、健康なドナーから採取した新しく調製したＰＢＭＣからヒト末梢血単球を分離した。細胞を、１００Ｕ／ｍｌペニシリン－ストレプトマイシン、２ｍＭグルタミン、およびＨＥＰＥＳバッファーを添加したＣＴＬ培地でインキュベートし、１０μｇ／ｍｌのアイソタイプ対照またはアゴニストＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂ（クローンＡ１；ｈＩｇＧ１）で処理した。１８時間後、β－メルカプトエタノールを含むＲＬＴ溶解バッファーで細胞を溶解し、ＲＮｅａｓｙマイクロキット（Ｑｉａｇｅｎ、ＵＳＡ）を使用して全ＲＮＡを抽出した。全ＲＮＡの品質を評価し、２１００ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｉｎｃ．、ＵＳＡ）で全ＲＮＡ ６０００ Ｎａｎｏ ＬａｂＣｈｉｐを使用して定量し、ＳＭＡＲＴｅｒ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｌｏｗ Ｉｎｐｕｔ ＲＮＡ Ｋｉｔ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、ＵＳＡ）およびＨｉＳｅｑ ２０００システム（Ｉｌｌｕｍｉｎａ、ＵＳＡ）のＩｌｌｕｍｉｎａ ＴｒｕＳｅｑＲＮＡ試料調製ガイドに従ってｃＤＮＡライブラリを調製および配列決定した。ＲＮＡｓｅｑの出力は、Ｂｏｗｔｉｅ２ ｖ２．２．３（３２）を使用してｈｇ１９にアラインメントした。マッピングされた読み取りの数は、ＲＳＥＭ ｖ１．２．１５（３３）によって定量した。処理前後のペア試料間の差次的発現分析は、ｐ＜０．０５および２倍超の変化カットオフのｅｄｇｅＲ（３４）を使用して行った。差次的に発現する遺伝子には、オンライン機能強化分析ツールＤＡＶＩＤ（ｈｔｔｐ：／／ｄａｖｉｄ．ｎｃｉｆｃｒｆ．ｇｏｖ／）を使用して注釈を付けた（３５）。遺伝子セット濃縮分析（ＧＳＥＡ）は、Ｂｒｏａｄ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（３６）を使用して行い、遺伝子リストは、ｅｄｇｅＲ出力からのｌｏｇＦＣ値に従って事前にランク付けした。遺伝子セット発現を比較するために、Ｍ１およびＭ２マクロファージ遺伝子セット（３７）をＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｉｇｎａｔｕｒｅ Ｄａｔａｂａｓｅ（ｈｔｔｐ：／／ｓｏｆｔｗａｒｅ．ｂｒｏａｄｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．ｏｒｇ／ｇｓｅａ／ｍｓｉｇｄｂ／）から入手した。ヒートマップはＭｅＶで視覚化した（３８）。

定量ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）
プローブベースのｑＰＣＲを使用して、９６ウェルＰＣＲプレート（Ｂｉｏ－Ｒａｄ、ＵＫ）で各試料条件に対して３回実行した２０μｌの反応でｃＤＮＡを増幅した。各反応は、製造元のプロトコルに従って、４８ｎｇのｃＤＮＡ、１０μｌの白金ｑＰＣＲミックス（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＵＫ）、８μｌのＤＥＰＣ水、および１μｌの遺伝子特異的２０ｘ ＰｒｉｍｅＴｉｍｅプローブ／プライマーミックスで構成された。ＰＣＲ試薬を含む９６ウェルプレートを、Ｃ１０００サーマルサイクラーＣＦＸ９６リアルタイムシステムＰＣＲ機器（Ｂｉｏ－Ｒａｄ、Ｋｉｄｌｉｎｇｔｏｎ、ＵＫ）で処理した。最初にサイクル閾値（Ｃｔ）として記録された遺伝子発現のデータ取得および分析には、ＣＦＸマネージャーソフトウェア（Ｂｉｏ－Ｒａｄ、Ｋｉｄｌｉｎｇｔｏｎ、ＵＫ）を使用した。Ｃｔ値は、ハウスキーピング遺伝子のグリセルアルデヒド３－リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）に対して正規化し、アイソタイプ対照で処理された細胞における遺伝子発現レベルに対して標準化した。

統計
食作用およびＴ細胞増殖の両方のデータに対して、対応のある両側Ｔ検定を行った。直線のバーは中央値を示す。少なくとも３回の実験を行った棒グラフでは、エラーバーは標準偏差を表す。ｑＰＣＲデータ分析のために、ボンフェローニの多重比較検定を使用した一元配置ＡＮＯＶＡを実行した。ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ（５版または６版）を使用して統計分析を行った。

結果
特定のＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂのパネルの生成
ヒトＬＩＬＲＢ３のタンパク質発現および機能を研究するために、ヒトファージディスプレイライブラリを使用してＬＩＬＲＢ３に対する抗体を特定した。選択は、標的ＬＩＬＲＢ３タンパク質（溶液中、プラスチック表面にコーティングされているか、細胞上に発現されている）を使用し、相同な非標的ＬＩＬＲＢ１およびＬＩＬＲＢ２タンパク質に対して選択することによって行った。３ラウンドのファージパニングおよび濃縮の後、ＬＩＬＲＢ３に特異的なクローンの選択が成功したことをフローサイトメトリーおよびＥＬＩＳＡで確認した（データは示さず）。その後、標的特異的ファージ結合ｓｃＦｖクローンを可溶性ｓｃＦｖに変換し、ＦＭＡＴおよびＥＬＩＳＡによってスクリーニングした。各クローンの蛍光強度をプロットし、標的対非標的の特異性を表示した（図１Ａ）。成功したクローンは、ＬＩＬＲＢ３の結合、ならびにＬＩＬＲＢ１およびＬＩＬＲＢ２への交差反応性の欠如に基づいて選択された。次いで、選択されたクローンを配列決定し、一次細胞およびトランスフェクタントに対する結合についてテストした（図１Ｂ）。標的特異的クローンを選択してＩｇＧに変換したら、ＬＩＬＲを発現する２Ｂ４レポーター細胞株のパネルに対してスクリーニングすることで特異性を再確認した（図１Ｃ）。合計１６のＬＩＬＲＢ３特異的抗体を、さらなる研究のために特定した。これらのＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂによるＰＢＭＣまたは全血の染色は、以前の報告（３９）と一致して、単球（図１Ｄ）および好中球（図１Ｅ）の優勢な染色を示した。ＬＩＬＲＢ３特異的クローンをさらにテストし、マウスオルソログであるＰＩＲ－Ｂとの交差反応性がないことを確認した（データは示さず）。

ＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂは高い親和性で結合し、様々なエピトープにマッピングされる。
次いで、ＬＩＬＲＢ３特異的ｍＡｂを結合特性についてテストした。ＳＰＲ分析は、すべてのＬＩＬＲＢ３クローンが組換えＬＩＬＲＢ３－ｈＦｃタンパク質に用量依存的に結合し（図２Ａ）、Ａ１６（８．１６×１０^-10）で表される一連の親和性を示すことを示した。興味深いことに、ｍＡｂのすべてが同様の結合率を有していた（約１０５）が、解離速度は３桁異なっていた（約１０^-3－１０^-6）。

次いで、エピトープマッピング研究を行った。一部のｍＡｂは、市販のＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂ（例えばＡ３５）の結合をブロックすることができ、共有または近位に関連するエピトープを示唆していたが、一方他のｍＡｂはブロックできず（例えばＡ１）、他の場所での結合を示していた（図２Ｂ）。結合特異性は、ＨＥＫ２９３Ｆ細胞に一過性にトランスフェクトされた４つの細胞外ドメイン（ＷＴ）、３つ、２つ、または１つのドメインすべてを表示する一連のＬＩＬＲＢ３ドメイン（図２Ｄ）変異でさらに確認された。これらの細胞への結合は、ｍＡｂの２つの群、すなわちＷＴ、Ｄ３およびＤ２発現細胞に結合したもの、ならびにＷＴでトランスフェクトされた細胞のみに結合したものを示し（図２Ｂ）、これは、それぞれＤ４内での結合を示している（Ａ１で例示）（図２Ｃ）。これらのデータは、非常に特異的な完全ヒトＩｇＧ１ ｍＡｂがＬＩＬＲＢ３に対して産生されたことを実証している。保存された残基は４つのドメインすべてに存在するように見えるが、ＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂは、それぞれＤ２およびＤ４内に位置する２つの異なる細胞外優勢エピトープのいずれかに結合することが、エピトープマッピングにより明らかになった。

さらに、ＬＩＬＲＢ３の細胞外ドメインでトランスフェクトされ、ヒトＣＤ３ζ細胞質ドメインと融合したレポーター細胞を使用して、生成されたｍＡｂが受容体を架橋できるかどうかを調査した。これらのハイブリッド細胞を介したシグナル伝達により、ＮＦＡＴプロモーター下でＧＦＰが発現する（４０）。ＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂの２つの異なる群、すなわちシグナル伝達を誘発できるもの（例えばＡ１）、および受容体に結合すると不活性なもの（例えばＡ２８）を特定することができた（図２Ｄ）。

ＬＩＬＲＢ３ライゲーションはＴ細胞の活性化および増殖を調節する。
次に、これらのｍＡｂが細胞のエフェクター機能に及ぼす影響を調査した。ＬＩＬＲＢ１は、ＣＤ３シグナル伝達カスケードで脱リン酸化を引き起こすか、またはＨＬＡ－Ｉ結合についてＣＤ８と競合することにより、Ｔ細胞応答を阻害することが以前に示されている（４１、４２）。また、ＬＩＬＲＢは、ＣＤ８＋ Ｔサプレッサー細胞の誘発を通じて単球およびＤＣなどの抗原提示細胞（ＡＰＣ）を寛容原性にすることにより、間接的にＴ細胞応答を阻害することも示されている（１０、１２、４３）。ＬＩＬＲＢ３の免疫調節能および適応免疫応答を調節する能力を調査するために、ＰＢＭＣアッセイでＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂをテストし、抗ＣＤ３／ＣＤ２８刺激に応答するＴ細胞増殖を測定した。Ｔ細胞の活性化および増殖は、ＣＤ３およびＣＤ２８抗体によって成功裏に駆動され、細胞のクラスタ化およびＣＦＳＥ希釈によって実証された（図３Ａ）。

Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）はヒトＩｇＧの効果を媒介することが知られているため（２９、４４～４６）、Ｔ細胞増殖に対するＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂの直接的なＦ（ａｂ）：受容体媒介効果を研究するために、それらを最初に脱グリコシル化して、ＦｃγＲ－ＩｇＧ相互作用によって媒介される効果を排除した（４７）。ＳＤＳ－ＰＡＧＥにより、野生型（ＷＴ）対照と比較して脱グリコシル化ｍＡｂ（Ｄｅｇｌｙ）の分子量が減少していることが確認され、脱グリコシル化が成功したことが示された（図３Ｂ）。次いで、ｍＡｂを上で詳述したＴ細胞増殖アッセイに導入した。ＣＤ３およびＣＤ２８抗体によって駆動されるＴ細胞増殖の成功は、２０の異なるドナーで評価され、対照と比較してＣＤ８＋ Ｔ細胞増殖の有意な増加が示された（ｐ＜０．０００１）（図３Ｃ）。ＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂの大部分は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照と比較した場合、クローンＡ１で表されるＣＤ８＋ Ｔ細胞増殖を有意に阻害した（ｐ＝０．０００１、図３Ｃ）。Ａ２８もまた増殖阻害の傾向を示したが、Ａ１６には阻害効果がないようであった。これらのデータは、ＬＩＬＲＢ３を標的とすることにより、明確なｍＡｂ特異的様式でＴ細胞応答をいずれかの方向に調節することができ、いくつかはＡ１などのＬＩＬＲ３Ｂアゴニスト特性（増強された阻害）を提供することを示している。同じ様式で単離されたＴ細胞でアッセイを繰り返した場合、阻害は見られず、ＰＢＭＣ内のＡＰＣ、おそらくは単球が、観察された効果の原因であることを裏付けている（データは示さず）。Ｔ細胞でのＬＩＬＲ３Ｂの発現がないことを考えると、この結果は予想されるものであった。

ＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂはマクロファージエフェクター機能を調節する。
上記の所見は、ＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂがＬＩＬＲＢ３をアゴナイズまたはそれに拮抗して、おそらくＡＰＣ機能の調節を通じてＴ細胞増殖を調節できることを示している。したがって、マクロファージも高レベルのＬＩＬＲＢを発現し、それらによって調節されることが知られているため（１３）、マクロファージの食作用に対するＬＩＬＲＢ３ライゲーションの影響を研究した。代表的なＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂで染色すると、ヒトＭＤＭでのＬＩＬＲＢ３の高発現レベルが確認された（図４Ａ）。それらのエフェクター機能の調節を評価するために、ＣＦＳＥ標識初代ＣＬＬＢ細胞を抗ＣＤ２０ ｍＡｂ（リツキシマブ）でオプソニン化し、食作用アッセイでマクロファージの標的として使用した（図４Ｂ～Ｃ）。脱グリコシル化された抗ＬＩＬＲＢ３クローンは、食作用の程度を有意に減少させた（すべての場合でｐ＜０．０５）（図４Ｃ）。これらの所見は、共焦点顕微鏡によってさらに確認され、アイソタイプ対照と比較して、ＬＩＬＲＢ３で処理されたマクロファージのＣＦＳＥ＋標的細胞の数が少ないことが示された（図４Ｄ）。これらのデータは、ＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂの大部分がマクロファージエフェクター機能を低下させる阻害性シグナルを送達したことを実証している。重要なことに、ＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂは脱グリコシル化されており、Ｆｃ：ＦｃγＲ相互作用の結果として生じる合併症なしにＦａｂ依存性効果のみを媒介することができる（４８）。

ＬＩＬＲＢ３ライゲーションはヒト化マウスおいて免疫寛容を誘発する。
適応（Ｔ細胞）および先天性（骨髄）の両方の活性がＬＩＬＲＢ３ライゲーション後に抑制され得ることを示すこれらのデータを考慮して、我々は次に、ヒト化マウス（初代ヒトＨＳＣで再構成）を使用した同種異系生着モデルにおけるＬＩＬＲＢ３調節の考えられる影響をテストした。ヒト化マウスの特性評価は、ＬＩＬＲＢ３がヒト末梢血と同様の様式で骨髄細胞に発現することを示した（図５Ａ）。同種異系のヒトリンパ腫細胞は、ＨＬＡのミスマッチのためにヒト化マウスでは容易に拒絶される（データは示さず、４９）。ＬＩＬＲＢ３ライゲーションが同種異系免疫応答を抑制する可能性をテストするために、再構成した成体ヒト化マウスをアゴニストＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂ（Ａ１）で前処理し、無関係のドナーに由来する同種異系ヒト「ダブルヒット」Ｂ細胞リンパ腫細胞の生着を評価した（３１、５０）。ＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂ処理は、マウスにおいて寛容状態を誘発することができ、ヒトリンパ腫細胞の生着に成功した（図５Ｂ）。ＬＩＬＲＢ３で処理した担がんマウスは、腫瘍量が多いため人道的に殺処分する必要があったが、アイソタイプ対照で処理したマウスは、病的状態なしにリンパ腫細胞を容易に拒絶した。これらの観察結果は、インビトロ機能アッセイをさらに裏付け、免疫応答中の骨髄細胞の重要な調節因子であるＬＩＬＲＢ３を特定している。

ＬＩＬＲＢ３ライゲーションは、転写改変およびヒトＡＰＣのＭ２歪みをもたらす。
ＬＩＬＲＢ３媒介免疫抑制に関与する経路および要因を調査するために、ＬＩＬＲＢ３の関与に続く一次ＡＰＣのトランスクリプトミクスの変化を調査する。単離されたヒト末梢ＣＤ１４＋単球をアゴニストＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂ（Ａ１）で短期間（約１８時間）インビトロ処理すると、表現型が劇的にシフトし（図６Ａ）、細胞は免疫抑制されたＩＬ４／ＩＬ－１３処理マクロファージ「Ｍ２」に似た細長い形態を示した（５１）。ＲＮＡｓｅｑ分析では、単球へのＬＩＬＲＢ３のライゲーションによって「Ｍ２」が歪んだ免疫抑制マクロファージに似たシグネチャーが誘発されることが明らかになった（図６Ｂ）。同様に、「Ｍ１」が歪んだ免疫刺激マクロファージに関連する遺伝子の発現は、アイソタイプ対照で処理された単球と比較して、ＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂで処理された場合にダウンレギュレーションされた（図６Ｂ～Ｃ）。選択した数の差次的に調節された遺伝子について、さらに３人のドナーでｑＰＣＲを実行することにより、これらのデータを確認した（図６Ｄ）。より少ない／非アゴニストのＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂ（Ａ２８）による単球の処理は、単球の表現型および遺伝子発現に影響を与えなかった（データは示さず、図６Ｃ）。遺伝子セット濃縮分析（ＧＳＥＡ）は、酸化的リン酸化などの抑制性マクロファージについて報告された遺伝子シグネチャーと正の相関を示した（５２）。逆に、ＬＩＬＲＢ３に連結された単球遺伝子シグネチャーは、炎症性マクロファージ、例えばＩＦＮ－γおよびＩＦＮ－α応答エレメント、ならびに同種移植片拒絶について報告された遺伝子シグネチャーと負の相関があった（図６Ｅ）。まとめると、これらのデータは、ＬＩＬＲＢ３の活性化が、単球などのＡＰＣに有意な表現型および転写の変化をもたらし、下流の免疫応答を強力に阻害することを裏付けている（図６Ｆ）。

考察
ヒト単球へのＬＩＬＲＢ１のライゲーションは寛容原性の表現型を誘発し、その後Ｔ細胞応答を妨げることを以前に示した（１２、５３）。この研究では、好適な試薬と実験システムが不足しているため、機能がまだ決定されていない別のＬＩＬＲファミリーメンバーであるＬＩＬＲＢ３を調査した。したがって、ＬＩＬＲＢ３に対する特異性を有する完全ヒトｍＡｂの広範なパネルを生成し、特性評価した。特定のｍＡｂによる様々な白血球集団の染色により、ＬＩＬＲＢ３は主にヒト骨髄細胞に限定されていることが確認された（３）。これはいくつかの独立したドナーで確認され、これらの受容体は多形性であるが（ＬＩＬＲＢ３は少なくとも１０の変異体を有する（３、５４））、抗体はすべてではないにしても多くの変異体を認識することが示唆され、これは治療用途のこれらの試薬の開発に重要である。その後の分析では、ＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂが様々な親和性を示し、そのすべてがナノモル（ｎＭ）の範囲にあり、オンレートは類似しているが、オフレートは３桁以上異なる。ｎＭの範囲が低いＫＤ値は、一般的に実行可能な薬剤候補とみなされ、例えば、リツキシマブは、その標的であるＣＤ２０に対して８ｎＭの親和性を有する（５５）。これは、ここで生成されたＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂが治療剤としての可能性を有することを示唆している。選択されたＬＩＬＲＢ３クローンのいくつかは、他のヒトＬＩＬＲトランスフェクタントに対して予期しない交差反応性を示し、その後の分析から除外された。しかしながら、ＬＩＬＲ３Ｂは細胞外ドメインでＬＩＬＲＡ６と９５％超の配列相同性を共有しているため、共発現した場合、ＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂはＬＩＬＲＡ６と十分に相互作用する可能性があることに留意されたい（５６）。さらに、エピトープマッピング実験により、特定のＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂは、Ｉｇ様細胞外ドメイン２または４のいずれかに結合するため、２つの異なるエピトープに対して生成されることが明らかになった。生成されたＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂはいずれもドメイン１または３に結合せず、これらのドメインは保存された固有のエピトープを含まない可能性があることを示唆している。

Ｔ細胞応答に影響を与えるＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂの能力は、増殖の阻害または増強のいずれかを通して観察され、それぞれアゴニストまたはアンタゴニスト特性を示す。ＬＩＬＲＢ１（１２、１３、５７）と同様に、ＡＰＣは培養でＬＩＬＲＢ３を発現する唯一の細胞であるため、これはＡＰＣへの影響による可能性がある。ＬＩＬＲＢ１（４２、５３、５８３、５９）とは異なり、ＬＩＬＲＢ３はＴ細胞では発現せず、Ｔ細胞応答に間接的にのみ影響を及ぼす。ＬＩＬＲＢ３の発現パターンおよびＰＢＭＣ培養内の細胞の頻度に基づいて、単球は影響を受ける可能性が最も高い細胞型を表す。これを裏付けるように、アゴニストＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂは、単球の非存在下でＴ細胞の増殖を抑制しなかった。結合エピトープは、多くの系で受容体機能を調節するｍＡｂの能力に影響を与えるため（２９、６０）、反対の機能が可能なＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂが見られるのは当然のことであった。ＬＩＬＲＢ３の２番目のＩｇ様ドメインに結合したＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂの大部分は、Ｔ細胞増殖を阻害することができた。逆に、ドメイン４に結合したいくつかのクローンは増殖を増強した。しかしながら、Ｄ４結合ｍＡｂ（Ａ１）は増殖の最も強力な阻害剤の１つであり、別のＤ４結合（Ａ２８）はより低い阻害効果を誘発した。したがって、ドメイン特異的エピトープは、ＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂを媒介したエフェクター細胞の機能と直接相関してはいないと思われる。

ＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂは、Ｔ細胞増殖を阻害または増強する能力にばらつきを示したが、クローンの大部分はマクロファージによる食作用を阻害するか、または効果がなかった。これは、ｍＡｂの大部分がこの文脈においてアゴニストであり、Ｔ細胞応答の阻害と同様に、阻害性シグナル伝達を刺激し、エフェクター機能を抑制することを示唆している。

ＬＩＬＲ３Ｂの下流の免疫阻害活性を実証する我々の観察は、再構成されたヒト化マウスモデルでさらに確認された。ＬＩＬＲＢ３が単球細胞にのみ存在するこの系では、同種異系リンパ腫細胞の生着前のＬＩＬＲＢ３とアゴニストＬＩＬＲＢ３ ｍＡｂとのライゲーション（３１）は、インビボで耐性を誘発し、その後の腫瘍成長を可能にした。これは、免疫寛容の誘発が有益である自己免疫および移植手術などの治療環境で利用され得る重要な免疫抑制効果を発揮するＬＩＬＲＢ３の能力を示している。オーファン受容体とみなされているが、ＬＩＬＲＢ３はサイトケラチン（ＣＫ）関連タンパク質（壊死性がん細胞に曝露）、アンジオポエチン様タンパク質５、および黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）などの細菌と結合することが示唆されている（４０、６１、６２）。したがって、我々の機能データは、ある特定の病原体（６１）が、能動的応答中にＬＩＬＲＢ３を能動的に連結することによって免疫応答を破壊できる可能性があることを示唆している。

ＬＩＬＲＢ３媒介免疫抑制に関与する経路および要因を調査するために、ＬＩＬＲＢ３活性化後の単離された末梢骨髄細胞のトランスクリプトミクス変化を調査した。１００を超える遺伝子が、ＬＩＬＲＢ３ライゲーション後の初代ヒト単球で示差的に調節され、そのうちのいくつかはＭ２マクロファージおよびＴＡＭで調節されることが知られている。アンフィレグリンは、ＬＩＬＲＢ３に連結された単球で発現が有意にアップレギュレートされた遺伝子の１つであった。アンフィレグリンは上皮成長因子のような成長因子であり、Ｔｒｅｇ活性の増強を含む様々なメカニズムを介して、寛容および免疫抑制を誘発する役割を果たす（６３）。さらに、アンフィレグリンは腫瘍関連ＤＣ（６４）および抑制／Ｍ２マクロファージで過剰発現し（６５）、免疫抑制およびがんの進行において重要な役割を果たすことが示唆されている（６６）。そのようなＬＩＬＲＢ３誘発性因子は、Ｔ細胞アッセイで観察された抑制の原因である可能性がある。我々の継続的な取り組みは、これをテストし、ＬＩＬＲＢ３が媒介する骨髄細胞の抑制の原因となるメカニズムを完全に理解することを目的としている。自己免疫を改善する再発寛解型の多発性硬化症の患者を治療するために使用されるペプチドベースの薬物である酢酸グラチラマー（コパキソン）の作用機序を調査した最近の研究では、ＬＩＬＲＢ２およびＬＩＬＲＢ３が潜在的なリガンドとして特定された（６７）。ヒト骨髄細胞に対する拮抗性ｍＡｂによるヒトＬＩＬＲＢ２の標的化は、それらの炎症誘発性活性を促進し、インビボで抗腫瘍応答を増強することができる（１３）。さらに、Ｚｈａｎｇらによる最近のデータは、白血病細胞におけるＬＩＬＲＢ４シグナル伝達が、遠位臓器への腫瘍細胞の播種を補助するＴ細胞抑制を媒介することを示唆している（６８）。これらのデータは、ヒトＬＩＬＲＢの活性化が骨髄細胞の再プログラミング（すなわち、Ｍ１様成熟の低減およびＭＤＳＣ抑制機能の促進）を介して免疫抑制を誘発することを実証する、我々の所見をさらに支持している。

ここに提示された所見は、初代ヒト骨髄細胞でのＬＩＬＲＢ３の活性化が強力な免疫阻害機能を発揮し、ＬＩＬＲＢ３特異的ｍＡｂが潜在的に強力な免疫調節剤であり、移植手術から自己免疫、炎症性傷害に至るまで幅広い用途を有することを示している。

参考文献
１．Ｋ．Ｊ．Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｒ．Ｌ．Ａｌｌｅｎ，Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔ－ｃｅｌｌ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｂｙ ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｆｏｒ ｓｅｌｆ ｏｎ ａｎｔｉｇｅｎ－ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ ｃｅｌｌｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １２７，８－１７（２００９）．
２．Ｗ．ｖａｎ ｄｅｒ Ｔｏｕｗ，Ｈ．Ｍ．Ｃｈｅｎ，Ｐ．Ｙ．Ｐａｎ，Ｓ．Ｈ．Ｃｈｅｎ，ＬＩＬＲＢ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｙｅｌｏｉｄ ｃｅｌｌ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ６６，１０７９－１０８７（２０１７）．
３．Ｍ．Ｃｏｌｏｎｎａ ｅｔ ａｌ．，Ａ ｃｏｍｍｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｏｒ ｍａｊｏｒ ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ ｃｏｍｐｌｅｘ ｃｌａｓｓ Ｉ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｏｎ ｈｕｍａｎ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ａｎｄ ｍｙｅｌｏｍｏｎｏｃｙｔｉｃ ｃｅｌｌｓ．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １８６，１８０９－１８１８（１９９７）．
４．Ｌ．Ｂｏｒｇｅｓ，Ｍ．Ｌ．Ｈｓｕ，Ｎ．Ｆａｎｇｅｒ，Ｍ．Ｋｕｂｉｎ，Ｄ．Ｃｏｓｍａｎ，Ａ ｆａｍｉｌｙ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ａｎｄ ｍｙｅｌｏｉｄ Ｉｇ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，ｓｏｍｅ ｏｆ ｗｈｉｃｈ ｂｉｎｄ ｔｏ ＭＨＣ ｃｌａｓｓ Ｉ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５９，５１９２－５１９６（１９９７）．
５．Ｈ．Ｎａｋａｊｉｍａ，Ｊ．Ｓａｍａｒｉｄｉｓ，Ｌ．Ａｎｇｍａｎ，Ｍ．Ｃｏｌｏｎｎａ，Ｈｕｍａｎ ｍｙｅｌｏｉｄ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｒｅｓｓ ａｎ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ＩＬＴ ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＩＬＴ１）ｔｈａｔ ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ｗｉｔｈ Ｆｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｇａｍｍａ－ｃｈａｉｎ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６２，５－８（１９９９）．
６．Ｃ．Ｃ．Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ａｎｄ ｌｉｎｋａｇｅ ｄｉｓｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ－ｌｉｋｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ ３ ｇｅｎｅ．Ｈｕｍ Ｉｍｍｕｎｏｌ ６９，２８４－２９０（２００８）．
７．Ｆ．Ｗ．Ｖｅｌｔｅｎ，Ｋ．Ｄｕｐｅｒｒｉｅｒ，Ｊ．Ｂｏｈｌｅｎｄｅｒ，Ｐ．Ｍｅｔｈａｒｏｍ，Ｓ．Ｇｏｅｒｄｔ，Ａ ｇｅｎｅ ｓｉｇｎａｔｕｒｅ ｏｆ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ＭＨＣ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ ａ ＢＤＣＡ３（＋）ｓｕｂｓｅｔ ｏｆ ＩＬ－１０－ｉｎｄｕｃｅｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｒｅｄｕｃｅｄ ａｌｌｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ｃａｐａｃｉｔｙ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３４，２８００－２８１１（２００４）．
８．Ｃ．Ｃ．Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｔｏｌｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｂｙ Ｔ（Ｓ）ｃｅｌｌｓ：ｔｈｅ ｃｒｕｃｉａｌ ｒｏｌｅ ｏｆ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ＩＬＴ３ ａｎｄ ＩＬＴ４．Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３，２３７－２４３（２００２）．
９．Ｍ．Ｂｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｈｉｇｈ－ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ７，ｅ４５４６６（２０１２）．
１０．Ｊ．Ｓ．Ｍａｎａｖａｌａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｈｉｇｈ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＩＬＴ３ ａｎｄ ＩＬＴ４ ｉｓ ａ ｇｅｎｅｒａｌ ｆｅａｔｕｒｅ ｏｆ ｔｏｌｅｒｏｇｅｎｉｃ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ．Ｔｒａｎｓｐｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ １１，２４５－２５８（２００３）．
１１．Ｎ．Ａ．Ｆａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ ＭＨＣ ｃｌａｓｓ Ｉ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ＬＩＲ－１ ａｎｄ ＬＩＲ－２ ｉｎｈｉｂｉｔ Ｆｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ．Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２８，３４２３－３４３４（１９９８）．
１２．Ｎ．Ｔ．Ｙｏｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ＬＩＬＲＢ１ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ．Ｂｌｏｏｄ １１１，３０９０－３０９６（２００８）．
１３．Ａ．Ａ．Ｂａｒｋａｌ ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ＭＨＣ ｃｌａｓｓ Ｉ ｂｙ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ＬＩＬＲＢ１ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ａｎｄ ｉｓ ａ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９，７６－８４（２０１８）．
１４．Ｍ．Ｋ．Ｒｏｃｈａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｍａｔｅｒｎａｌ ｖｉｔａｍｉｎ Ｄ ｉｎｔａｋｅ ｄｕｒｉｎｇ ｐｒｅｇｎａｎｃｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＩＬＴ３ ａｎｄ ＩＬＴ４ ｉｎ ｃｏｒｄ ｂｌｏｏｄ．Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ａｌｌｅｒｇｙ ４０，７８６－７９４（２０１０）．
１５．Ｍ．Ｂｒｅｎｋ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ ｄｅｐｒｉｖａｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｓ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ＩＬＴ３ ａｎｄ ＩＬＴ４ ｏｎ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｆａｖｏｒｉｎｇ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ Ｆｏｘｐ３＋ Ｔ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｃｅｌｌｓ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １８３，１４５－１５４（２００９）．
１６．Ｍ．Ｇ．Ｐｅｔｒｏｆｆ，Ｐ．Ｓｅｄｌｍａｙｒ，Ｄ．Ａｚｚｏｌａ，Ｊ．Ｓ．Ｈｕｎｔ，Ｄｅｃｉｄｕａｌ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ａｒｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌｌｙ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ ｔｏ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｂｙ ｃｌａｓｓ Ｉａ ａｎｄ ｃｌａｓｓ Ｉｂ ＨＬＡ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．Ｊ Ｒｅｐｒｏｄ Ｉｍｍｕｎｏｌ ５６，３－１７（２００２）．
１７．Ｒ．Ａｐｐｓ，Ｌ．Ｇａｒｄｎｅｒ，Ａ．Ｍ．Ｓｈａｒｋｅｙ，Ｎ．Ｈｏｌｍｅｓ，Ａ．Ｍｏｆｆｅｔｔ，Ａ ｈｏｍｏｄｉｍｅｒｉｃ ｃｏｍｐｌｅｘ ｏｆ ＨＬＡ－Ｇ ｏｎ ｎｏｒｍａｌ ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ ｃｅｌｌｓ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ａｎｔｉｇｅｎ－ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ ｃｅｌｌｓ ｖｉａ ＬＩＬＲＢ１．Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３７，１９２４－１９３７（２００７）．
１８．Ｌ．Ｌｏｍｂａｒｄｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，ＨＬＡ－Ｇ５ ｉｎｄｕｃｅｓ ＩＬ－４ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｆｏｒ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ ｐｒｅｇｎａｎｃｙ ｔｈｒｏｕｇｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＩＬＴ２ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｏｎ ｄｅｃｉｄｕａｌ ＣＤ４（＋）Ｔ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９１，３６５１－３６６２（２０１３）．
１９．Ｂ．Ｆａｖｉｅｒ，Ｊ．Ｌｅｍａｏｕｌｔ，Ｅ．Ｌｅｓｐｏｒｔ，Ｅ．Ｄ．Ｃａｒｏｓｅｌｌａ，ＩＬＴ２／ＨＬＡ－Ｇ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｉｍｐａｉｒｓ ＮＫ－ｃｅｌｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｌａｔｅ ｂｕｔ ｎｏｔ ｔｈｅ ｅａｒｌｙ ｅｖｅｎｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ＮＫ－ｃｅｌｌ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｓｙｎａｐｓｅ．ＦＡＳＥＢ Ｊ ２４，６８９－６９９（２０１０）．
２０．Ｓ．Ｅｎｄｏ，Ｙ．Ｓａｋａｍｏｔｏ，Ｅ．Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ａ．Ｎａｋａｍｕｒａ，Ｔ．Ｔａｋａｉ，Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇ ｂｙ ＰＩＲ－Ｂ ｏｎ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ １０５，１４５１５－１４５２０（２００８）．
２１．Ｓ．Ｐｅｒｅｉｒａ，Ｈ．Ｚｈａｎｇ，Ｔ．Ｔａｋａｉ，Ｃ．Ａ．Ｌｏｗｅｌｌ，Ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ＰＩＲ－Ｂ ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ａｎｄ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｉｎｔｅｇｒｉｎ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７３，５７５７－５７６５（２００４）．
２２．Ｎ．Ｓ．Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎ Ｆｃｇａｍｍａ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｄｒｉｖｅｓ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔａｒｇｅｔ－ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ １９，１０１－１１３（２０１１）．
２３．Ｗ．Ｚｈａｎｇ，Ｓ．Ｌｉａｎｇ，Ｊ．Ｗｕ，Ａ．Ｈｏｒｕｚｓｋｏ，Ｈｕｍａｎ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ＩＬＴ２ Ａｍｐｌｉｆｉｅｓ ＣＤ１１ｂ（＋）Ｇｒ１（＋）Ｍｙｅｌｏｉｄ－Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ Ｃｅｌｌｓ ｔｈａｔ Ｐｒｏｍｏｔｅ Ｌｏｎｇ－Ｔｅｒｍ Ｓｕｒｖｉｖａｌ ｏｆ Ａｌｌｏｇｒａｆｔｓ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ８６，１１２５－１１３４（２００８）．
２４．Ｊ．Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｉｓｏｆｏｒｍｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ａｎｔｉｇｅｎ－Ｇ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｋｉｄｎｅｙ ａｌｌｏｇｒａｆｔ ａｃｃｅｐｔａｎｃｅ†．Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ７０，９８８－９９４（２００９）．
２５．Ａ．Ｒｏｇｈａｎｉａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ Ｅｎｈａｎｃｅｓ Ｃａｎｃｅｒ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｔｈｅ Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｎｉｃｈｅ ｂｙ Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ＦｃｇａｍｍａＲ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ ７，１８７６－１８９０（２０１９）．
２６．Ｅ．Ｓｏｄｅｒｌｉｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｃｏｍｂｉｎｉｎｇ ｇｅｒｍｌｉｎｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ＣＤＲ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｆｏｒ ｃｒｅａｔｉｎｇ ｄｉｖｅｒｓｅ ｓｉｎｇｌｅ－ｆｒａｍｅｗｏｒｋ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｌｉｂｒａｒｉｅｓ．Ｎａｔｕｒｅ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １８，８５２－８５６（２０００）．
２７．Ａ．Ｒｏｇｈａｎｉａｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ｈｕｍａｎ ＦｃｇａｍｍａＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｈａｖｅ ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｏｖｅｒｃｏｍｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｖｉｖｏ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２７，４７３－４８８（２０１５）．
２８．Ｎ．Ｏｌｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃ Ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｕｓｉｎｇ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ａｎｄ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ．Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ １０，（２０１１）．
２９．Ｌ．Ｎ．Ｄａｈａｌ，Ａ．Ｒｏｇｈａｎｉａｎ，Ｓ．Ａ．Ｂｅｅｒｓ，Ｍ．Ｓ．Ｃｒａｇｇ，ＦｃｇａｍｍａＲ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｌｅａｄｉｎｇ ｔｏ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｅｖｉｅｗｓ ２６８，１０４－１２２（２０１５）．
３０．Ａ．Ｒｏｇｈａｎｉａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｆｉｌａｍｅｎｔ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ＴＳＧＡ１０ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｉｎｔｅｒａｃｔｓ ｗｉｔｈ ｖｉｍｅｎｔｉｎ．Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２６５，１２０－１２６（２０１０）．
３１．Ｉ．Ｌｅｓｋｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｒａｐｉｄ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ Ｂ－ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｍａｓ ｖｉａ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｍｙｃ ａｎｄ Ｂｃｌ２ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｕｓｅ ａｓ ａ ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ３２，１０６６－１０７２（２０１３）．
３２．Ｂ．Ｌａｎｇｍｅａｄ，Ｃ．Ｔｒａｐｎｅｌｌ，Ｍ．Ｐｏｐ，Ｓ．Ｌ．Ｓａｌｚｂｅｒｇ，Ｕｌｔｒａｆａｓｔ ａｎｄ ｍｅｍｏｒｙ－ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｏｆ ｓｈｏｒｔ ＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｔｏ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｇｅｎｏｍｅ．Ｇｅｎｏｍｅ Ｂｉｏｌ １０，Ｒ２５（２００９）．
３３．Ｂ．Ｌｉ，Ｃ．Ｎ．Ｄｅｗｅｙ，ＲＳＥＭ：ａｃｃｕｒａｔｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ＲＮＡ－Ｓｅｑ ｄａｔａ ｗｉｔｈ ｏｒ ｗｉｔｈｏｕｔ ａ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｇｅｎｏｍｅ．ＢＭＣ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ １２，３２３（２０１１）．
３４．Ｍ．Ｄ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｄ．Ｊ．ＭｃＣａｒｔｈｙ，Ｇ．Ｋ．Ｓｍｙｔｈ，ｅｄｇｅＲ：ａ Ｂｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒ ｐａｃｋａｇｅ ｆｏｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｄｉｇｉｔａｌ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｄａｔａ．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ２６，１３９－１４０（２０１０）．
３５．Ｄ．Ｗ．Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．，ＤＡＶＩＤ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ：ｅｘｐａｎｄｅｄ ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ ｄａｔａｂａｓｅ ａｎｄ ｎｏｖｅｌ ａｌｇｏｒｉｔｈｍｓ ｔｏ ｂｅｔｔｅｒ ｅｘｔｒａｃｔ ｂｉｏｌｏｇｙ ｆｒｏｍ ｌａｒｇｅ ｇｅｎｅ ｌｉｓｔｓ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ３５，Ｗ１６９－１７５（２００７）．
３６．Ａ．Ｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ ｓｅｔ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓ：ａ ｋｎｏｗｌｅｄｇｅ－ｂａｓｅｄ ａｐｐｒｏａｃｈ ｆｏｒ ｉｎｔｅｒｐｒｅｔｉｎｇ ｇｅｎｏｍｅ－ｗｉｄｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｆｉｌｅｓ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ １０２，１５５４５－１５５５０（２００５）．
３７．Ｆ．Ｏ．Ｍａｒｔｉｎｅｚ，Ｓ．Ｇｏｒｄｏｎ，Ｍ．Ｌｏｃａｔｉ，Ａ．Ｍａｎｔｏｖａｎｉ，Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｃｙｔｅ－ｔｏ－ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ：ｎｅｗ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ａｎｄ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｏｆ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７７，７３０３－７３１１（２００６）．
３８．Ａ．Ｉ．Ｓａｅｅｄ ｅｔ ａｌ．，ＴＭ４：ａ ｆｒｅｅ，ｏｐｅｎ－ｓｏｕｒｃｅ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ ｄａｔａ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ａｎｄ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ３４，３７４－３７８（２００３）．
３９．Ｎ．Ｔｅｄｌａ ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ７．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ １００，１１７４－１１７９（２００３）．
４０．Ｄ．Ｃ．Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｌｌｅｌｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｂｙ ＬＩＬＲＢ３ ａｎｄ ＬＩＬＲＡ６ ｏｆ ａ ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ ８－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｌｉｇａｎｄ ｏｎ ｎｅｃｒｏｔｉｃ ｇｌａｎｄｕｌａｒ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ ７，１５６１８－１５６３１（２０１６）．
４１．Ｄ．Ｓａｖｅｒｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ ＣＤ８５／ＬＩＲ－１／ＩＬＴ２ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｂｙ ａｌｌ ｈｕｍａｎ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ａｎｄ ｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｔｈｅｉｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６５，３７４２－３７５５（２０００）．
４２．Ｍ．Ｓｈｉｒｏｉｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ Ｉｇ－ｌｉｋｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ ２（ＩＬＴ２）ａｎｄ ＩＬＴ４ ｃｏｍｐｅｔｅ ｗｉｔｈ ＣＤ８ ｆｏｒ ＭＨＣ ｃｌａｓｓ Ｉ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｎｄ ｂｉｎｄ ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｔｏ ＨＬＡ－Ｇ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ １００，８８５６－８８６１（２００３）．
４３．Ｃ．Ｃ．Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，ＢＣＬ６ Ｉｓ Ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｇ－Ｌｉｋｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ ３－Ｆｃ－Ｉｎｄｕｃｅｄ ＣＤ８（＋）Ｔ Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ Ｃｅｌｌｓ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １８５，５７１４－５７２２（２０１０）．
４４．Ｒ．Ａ．Ｃｌｙｎｅｓ，Ｔ．Ｌ．Ｔｏｗｅｒｓ，Ｌ．Ｇ．Ｐｒｅｓｔａ，Ｊ．Ｖ． Ｒａｖｅｔｃｈ，Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｆｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｍｏｄｕｌａｔｅ ｉｎ ｖｉｖｏ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔ ｔｕｍｏｒ ｔａｒｇｅｔｓ．Ｎａｔｕｒｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ６，４４３－４４６（２０００）．
４５．Ｃ． Ｓ． Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｆｃ ｇａｍｍａ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ＩＩＢ（ＦＣＧＲ２Ｂ，ＣＤ３２Ｂ）ｏｎ ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ ｌｙｍｐｈｏｍａ ｃｅｌｌｓ ｌｏｗｅｒｓ ｔｈｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｒａｔｅ ｔｏ ｒｉｔｕｘｉｍａｂ ｍｏｎｏｔｈｅｒａｐｙ（ＳＡＫＫ ３５／９８）．Ｂｒｉｔｉｓｈ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ １６８，１４５－１４８（２０１５）．
４６．Ｃ．Ｅ．Ｈａｒｇｒｅａｖｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｆｃｇａｍｍａ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：ｇｅｎｅｔｉｃ ｖａｒｉａｔｉｏｎ，ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｅｖｉｅｗｓ ２６８，６－２４（２０１５）．
４７．Ｙ．Ｋａｎｅｋｏ，Ｆ．Ｎｉｍｍｅｒｊａｈｎ，Ｅ．Ｖ．Ｒａｖｅｔｃｈ，Ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｇ ｒｅｓｕｌｔｉｎｇ ｆｒｏｍ Ｆｃ ｓｉａｌｙｌａｔｉｏｎ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１３，６７０－６７３（２００６）．
４８．Ｐ．Ｍ．Ｈｏｇａｒｔｈ，Ｇ．Ａ．Ｐｉｅｔｅｒｓｚ，Ｆｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｔａｒｇｅｔｅｄ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｂｅｙｏｎｄ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ １１，３１１－３３１（２０１２）．
４９．Ａ．Ｒｏｇｈａｎｉａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ Ｅｎｈａｎｃｅｓ Ｃａｎｃｅｒ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｔｈｅ Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｎｉｃｈｅ ｂｙ Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ＦｃｇａｍｍａＲ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ，（２０１９）．
５０．Ｃ．Ｐ．Ｐａｌｌａｓｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｎｓｉｔｉｚｉｎｇ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｔｕｍｏｒ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓ ｔｏ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｃｅｌｌ １５６，５９０－６０２（２０１４）．
５１．Ｆ．Ｙ．ＭｃＷｈｏｒｔｅｒ，Ｔ．Ｗａｎｇ，Ｐ． Ｎｇｕｙｅｎ，Ｔ．Ｃｈｕｎｇ，Ｗ．Ｆ．Ｌｉｕ，Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｂｙ ｃｅｌｌ ｓｈａｐｅ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ １１０，１７２５３－１７２５８（２０１３）．
５２．Ｓ．Ｇａｌｖａｎ－Ｐｅｎａ，Ｌ．Ａ．Ｏ’Ｎｅｉｌｌ，Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｒｅｐｒｏｇｒａｍｉｎｇ ｉｎ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ．Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ５，４２０（２０１４）．
５３．Ｒ．Ｃ．Ｋｈａｎｏｌｋａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｉｇ－Ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｂ１ ｒｅｓｔｒａｉｎｓ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＮＦ－ｋａｐｐａＢ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ＡＢＩＮ１／ＴＮＩＰ１．Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ，（２０１６）．
５４．Ａ．Ａ．Ｂａｓｈｉｒｏｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ＬＩＬＲＢ３／Ａ６ ｌｏｃｕｓ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ａ ｍｙｅｌｏｉｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｐａｉｒ．Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ６６，１－８（２０１４）．
５５．Ｍ．Ｄ．Ｐｅｓｃｏｖｉｔｚ，Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ，ａｎ ａｎｔｉ－ｃｄ２０ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ：ｈｉｓｔｏｒｙ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ａｃｔｉｏｎ．Ａｍ Ｊ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ６，８５９－８６６（２００６）．
５６．Ｍ．Ｒ．Ｌｏｐｅｚ－Ａｌｖａｒｅｚ，Ｄ．Ｃ．Ｊｏｎｅｓ，Ｗ．Ｊｉａｎｇ，Ｊ．Ａ．Ｔｒａｈｅｒｎｅ，Ｊ．Ｔｒｏｗｓｄａｌｅ，Ｃｏｐｙ ｎｕｍｂｅｒ ａｎｄ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＬＩＬＲ ｆａｍｉｌｙ ｏｆ ｍｙｅｌｏｍｏｎｏｃｙｔｉｃ ｃｅｌｌ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ６６，７３－８３（２０１４）．
５７．Ｃ．Ｓ．Ｗａｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ＵＬ１８ ａｌｔｅｒｓ ｔｈｅ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍｏｎｏｃｙｔｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ．Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ ８３，５６－６３（２００８）．
５８．Ｊ．Ｄｉｅｔｒｉｃｈ，Ｍ．Ｃｅｌｌａ，Ｍ．Ｃｏｌｏｎｎａ，Ｉｇ－ｌｉｋｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ ２（ＩＬＴ２）／ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｉｇ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ １（ＬＩＲ１）ｉｎｈｉｂｉｔｓ ＴＣＲ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ａｎｄ ａｃｔｉｎ ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ ｒｅｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６６，２５１４－２５２１（２００１）．
５９．Ｆ．Ｋｅｔｒｏｕｓｓｉ ｅｔ ａｌ．，Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ Ｃｅｌｌ－Ｃｙｃｌｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｂｙ ＨＬＡ－Ｇ Ｉｓ Ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ＳＨＰ－２ ａｎｄ Ａｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ ｍＴＯＲ Ｐａｔｈｗａｙ．Ｐｌｏｓ Ｏｎｅ ６，（２０１１）．
６０．Ｘ．Ｙｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｉｎｔｅｒｐｌａｙ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ａｎｄ Ｉｓｏｔｙｐｅ Ｄｉｃｔａｔｅｓ ｔｈｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ａｎｔｉ－ｈｕｍａｎ ＣＤ４０ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ３３，６６４－６７５ ｅ６６４（２０１８）．
６１．Ｍ．Ｎａｋａｙａｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｐａｉｒｅｄ Ｉｇ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｂｉｎｄ ｔｏ ｂａｃｔｅｒｉａ ａｎｄ ｓｈａｐｅ ＴＬＲ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７８，４２５０－４２５９（２００７）．
６２．Ｊ．Ｚｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｂｉｎｄ ＡＮＧＰＴＬｓ ａｎｄ ｓｕｐｐｏｒｔ ｂｌｏｏｄ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｌｅｕｋａｅｍｉａ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｎａｔｕｒｅ ４８５，６５６－６６０（２０１２）．
６３．Ｄ．Ｍ．Ｗ．Ｚａｉｓｓ，Ｗ．Ｃ．Ｇａｕｓｅ，Ｌ．Ｃ．Ｏｓｂｏｒｎｅ，Ｄ．Ａｒｔｉｓ，Ｅｍｅｒｇｉｎｇ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ａｍｐｈｉｒｅｇｕｌｉｎ ｉｎ ｏｒｃｈｅｓｔｒａｔｉｎｇ ｉｍｍｕｎｉｔｙ，ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｔｉｓｓｕｅ ｒｅｐａｉｒ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ４２，２１６－２２６（２０１５）．
６４．Ｙ．Ｌ．Ｈｓｕ ｅｔ ａｌ．，Ｌｕｎｇ ｔｕｍｏｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ－ｄｅｒｉｖｅｄ ａｍｐｈｉｒｅｇｕｌｉｎ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｃａｎｃｅｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １８７，１７３３－１７４４（２０１１）．
６５．Ｐ．Ｖｌａｉｃｕ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ／ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ｓｕｐｐｏｒｔ ｍａｍｍａｒｙ ｔｕｍｏｒ ｉｎｖａｓｉｖｉｔｙ ｂｙ ｃｏ－ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ ｌｉｎｅａｇｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＥＧＦＲ ｌｉｇａｎｄｓ ａｎｄ ａ ＳＴＡＴ３ ａｃｔｉｖａｔｏｒ．ＢＭＣ Ｃａｎｃｅｒ １３，１９７（２０１３）．
６６．Ｂ．Ｂｕｓｓｅｒ，Ｌ．Ｓａｎｃｅｙ，Ｅ．Ｂｒａｍｂｉｌｌａ，Ｊ．Ｌ．Ｃｏｌｌ，Ａ．Ｈｕｒｂｉｎ，Ｔｈｅ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｒｏｌｅｓ ｏｆ ａｍｐｈｉｒｅｇｕｌｉｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃａｎｃｅｒ．Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ １８１６，１１９－１３１（２０１１）．
６７．Ｗ．ｖａｎ ｄｅｒ Ｔｏｕｗ ｅｔ ａｌ．，Ｇｌａｔｉｒａｍｅｒ Ａｃｅｔａｔｅ Ｅｎｈａｎｃｅｓ Ｍｙｅｌｏｉｄ－Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ Ｃｅｌｌ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｖｉａ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｐａｉｒｅｄ Ｉｇ－ｌｉｋｅ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｂ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１，１７２７－１７３４（２０１８）．
６８．Ｍ．Ｄｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，ＬＩＬＲＢ４ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ｉｎ ｌｅｕｋａｅｍｉａ ｃｅｌｌｓ ｍｅｄｉａｔｅｓ Ｔ ｃｅｌｌ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｔｕｍｏｕｒ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ ５６２，６０５－６０９（２０１８）．

Claims (22)

1. 移植片拒絶、自己免疫障害および／または炎症性障害の治療において使用するための、ＬＩＬＲＢ３（ＩＬＴ５）に特異的に結合する抗体分子。
2. アゴニスト抗体分子である、請求項１に記載の抗体分子。
3. ＬＩＬＲＢ３（ＩＬＴ５）に特異的に結合する抗体分子であって、前記抗体分子が、ＣＤＲであるＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ３、ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２およびＶＬ－ＣＤＲ３のうちの１～６個を含む抗体分子からなる群から選択され、
   存在する場合、ＶＨ－ＣＤＲ１は、配列番号１、９、１７および２５からなる群から選択され、
   存在する場合、ＶＨ－ＣＤＲ２は、配列番号２、１０、１８および２６からなる群から選択され、
   存在する場合、ＶＨ－ＣＤＲ３は、配列番号３、１１、１９および２７からなる群から選択され、
   存在する場合、ＶＬ－ＣＤＲ１は、配列番号４、１２、２０および２８からなる群から選択され、
   存在する場合、ＶＬ－ＣＤＲ２は、配列番号５、１３、２１および２９からなる群から選択され、
   存在する場合、ＶＬ－ＣＤＲ３は、配列番号６、１４、２２および３０からなる群から選択される、抗体分子。
4. 以下のＣＤＲ：
   （ｉ）配列番号１、配列番号２および配列番号３、もしくは
   （ｉｉ）配列番号９、配列番号１０および配列番号１１、もしくは
   （ｉｉｉ）配列番号１７、配列番号１８および配列番号１９、もしくは
   （ｉｖ）配列番号２５、配列番号２６および配列番号２７を含む可変重鎖（ＶＨ）を含み、
   かつ／または、以下のＣＤＲ：
   （ｖ）配列番号４、配列番号５および配列番号６、もしくは
   （ｖｉ）配列番号１２、配列番号１３および配列番号１４、もしくは
   （ｖｉｉ）配列番号２０、配列番号２１および配列番号２２、もしくは
   （ｖｉｉｉ）配列番号２８、配列番号２９および配列番号３０を含む可変軽鎖（ＶＬ）を含む、
   請求項３に記載の抗体分子。
5. 配列番号７、１５、２３および３１からなる群から選択される可変重鎖（ＶＨ）アミノ酸配列を含み、かつ／または、配列番号８、１６、２４および３２からなる群から選択される可変軽鎖（ＶＬ）アミノ酸配列を含む、請求項３または４に記載の抗体分子。
6. アゴニスト抗体分子である、請求項３～５のいずれか一項に記載の抗体分子。
7. 野生型またはＦｃ改変ヒトＩｇＧ抗体分子、ヒト化ＩｇＧ抗体分子およびヒト由来のＩｇＧ抗体分子からなる群から選択される、請求項１または２に記載の使用のための抗体分子、または請求項３～６のいずれか一項に記載の抗体分子。
8. ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４抗体である、請求項７に記載の使用のための抗体分子または請求項７に記載の抗体分子。
9. モノクローナル抗体である、請求項１または２に記載の使用のための抗体分子または請求項３～８のいずれか一項に記載の抗体分子。
10. 前記抗体が請求項３～９のいずれか一項に記載の抗体である、請求項１または２に記載の使用のための抗体分子。
11. 請求項３～９のいずれか一項に記載の抗体分子と、ＬＩＬＲＢ３（ＩＬＴ５）への結合について競合することができる抗体分子である、請求項１または２に記載の使用のための抗体分子。
12. 請求項３～９のいずれか一項に記載の抗体分子をコードする、単離されたヌクレオチド配列。
13. 請求項１２に記載のヌクレオチド配列を含むプラスミド。
14. 請求項１２に記載のヌクレオチド配列または請求項１３に記載のプラスミドを含む細胞。
15. 医薬において使用するための、請求項３～９のいずれか一項に記載の抗体分子、請求項１２に記載のヌクレオチド配列、請求項１３に記載のプラスミド、および／または請求項１４に記載の細胞。
16. 移植片拒絶、自己免疫障害および／または炎症性障害の治療において使用するための医薬組成物を製造するための、請求項３～９のいずれか一項に記載の抗体分子、請求項１２に記載のヌクレオチド配列、請求項１３に記載のプラスミド、および／または請求項１４に記載の細胞の使用。
17. 移植片拒絶、自己免疫障害および／または炎症性障害の治療において使用するための医薬組成物を製造するための、ＬＩＬＲＢ３（ＩＬＴ５）に特異的に結合する抗体分子の使用。
18. 請求項３～９のいずれか一項に記載の抗体分子、請求項１２に記載のヌクレオチド配列、請求項１３に記載のプラスミド、および／または請求項１４に記載の細胞、ならびに、任意選択的に、薬学的に許容される希釈剤、担体、ビヒクルおよび／または賦形剤を含むかまたはそれらからなる医薬組成物。
19. 移植片拒絶、自己免疫障害および／または炎症性障害の治療において使用するための、請求項１８に記載の医薬組成物。
20. 患者における移植片拒絶、自己免疫障害および／または炎症性障害を治療するための方法であって、ＬＩＬＲＢ３（ＩＬＴ５）に特異的に結合する治療有効量の抗体分子を前記患者に投与することを含む、方法。
21. 前記抗体分子が、ＬＩＬＲＢ３（ＩＬＴ５）に特異的に結合するアゴニスト抗体分子である、請求項２０に記載の方法。
22. 患者における移植片拒絶、自己免疫障害および／または炎症性障害を治療するための方法であって、治療有効量の請求項３～９のいずれか一項に記載の抗体分子、請求項１２に記載のヌクレオチド配列、請求項１３に記載のプラスミド、および／または請求項１４に記載の細胞を前記患者に投与することを含む、方法。

Images