JP2023508844A - 左旋性二環式モルホリン及びその塩、その調製方法、医薬組成物、並びに使用 - Google Patents
左旋性二環式モルホリン及びその塩、その調製方法、医薬組成物、並びに使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2023508844A JP2023508844A JP2022532069A JP2022532069A JP2023508844A JP 2023508844 A JP2023508844 A JP 2023508844A JP 2022532069 A JP2022532069 A JP 2022532069A JP 2022532069 A JP2022532069 A JP 2022532069A JP 2023508844 A JP2023508844 A JP 2023508844A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- acid
- imm
- levorotatory
- pharmaceutically acceptable
- liver
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D407/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00
- C07D407/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00 containing two hetero rings
- C07D407/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D317/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms
- C07D317/08—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3
- C07D317/44—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D317/46—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with one six-membered ring
- C07D317/48—Methylenedioxybenzenes or hydrogenated methylenedioxybenzenes, unsubstituted on the hetero ring
- C07D317/62—Methylenedioxybenzenes or hydrogenated methylenedioxybenzenes, unsubstituted on the hetero ring with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to atoms of the carbocyclic ring
- C07D317/64—Oxygen atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D317/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms
- C07D317/08—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3
- C07D317/44—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D317/46—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with one six-membered ring
- C07D317/48—Methylenedioxybenzenes or hydrogenated methylenedioxybenzenes, unsubstituted on the hetero ring
- C07D317/62—Methylenedioxybenzenes or hydrogenated methylenedioxybenzenes, unsubstituted on the hetero ring with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to atoms of the carbocyclic ring
- C07D317/68—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
- A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
- A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
- C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
- C07B2200/07—Optical isomers
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Virology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
Abstract
本発明は、医薬化学の分野に関し、そしてそれは特に、左旋性二環式モルホリン及びその医薬的に許容される塩、その調製方法、医薬組成物、並びに肝疾患などを予防及び/又は治療するための薬剤の調製におけるその使用に関する。TIFF2023508844000019.tif63142
Description
本発明は、医薬化学の分野に関し、そしてそれは特に、左旋性二環式モルホリン及びその医薬的に許容される塩、その調製方法、医薬組成物、並びに肝疾患などを予防及び/又は治療するための薬剤の調製におけるその使用に関する。
肝疾患は世界的な疾患の一種であり、そして中国は肝疾患大国である。現在、我が国には、主にウイルス性肝炎に起因する、様々な原因によって引き起こされた肝障害や炎に罹患している多くの患者が存在する。統計的に、我が国では慢性肝炎(遅発性慢性肝炎によって引き起こされた肝硬変及び肝癌を含む)によって一年間に生じる直接的な経済的損失は、9000億人民元に達する。近年、薬物性肝疾患、アルコール性及び非アルコール性脂肪肝疾患、及び自己免疫性肝疾患の発生もまた年を追うごとに増加傾向を示している。肝疾患を予防及び治療するために安全かつ有効な薬物を捜し求めることは、世界中の様々な研究所や薬品会社にとって常に研究のホットスポットである。
ビシクロールは、中国医学科学院薬物研究所(MMA)によって最初に開発された、中国の独自知的財産権を有する中国で肝炎を治療するためのカテゴリー1化学薬品の一種であり、外来診療所では、それらは肝臓保護と酵素分解における良好な効果、肝炎ウイルスに対する特定の活性、あらゆる顕著な有害反応を伴わない簡便な投与、及び幅広い薬理活性の利点を有する。ビシクロールに関連する研究業績は、9th Five-year National Science and Technology Key Task Achievement Award (2002), Top Ten News in Chinese Pharmaceuticals Industry in 2002, First Prize of Beijing Scientific and Technological Progress (2005), Second Prize of National Scientific and Technological Progress (2007)などを含めた複数の賞を見事に受賞し、そして、ビシクロールは、16の国/地域、例えば、米国、欧州連合、日本、韓国など、及び台湾地域における化合物発明特許権により保護されており、ウクライナといった国々に販売されている。2001年11月に人民大会堂でおこなわれた記者会見でビシクロールが市販されると発表された日以来、それは我が国の大きな社会的及び経済的利益を達成した。
しかしながら、ビシクロールは、生物学的利用能が高くないので生体での水溶解性が低い。中国医学科学院薬物研究所の研究者らは、ビシクロールの構造を最適化し、二環式モルホリンとその塩が良好な薬理活性及び薬物動態学的特性を有することを見出した(Wu Song, Sun Hua, et al., Bicyclol Derivative and Preparations and Applications Thereof, 201610922563.5)。これまでの知見に基づいて、研究者らは、二環式モルホリンのラセミ体を分割(resolute)し、左旋性二環式モルホリンとその塩がラセミ体、並びにデキストロモルホリン及びその塩に比べて、抗炎症及び肝臓保護の態様においてより良好な薬理活性及び薬物動態学的特性を有することを見出した。
本発明で解決された技術的問題は、左旋性二環式モルホリン及びその医薬的に許容される塩、その調製方法、並びに肝疾患がなどを予防及び/又は治療するための薬剤の調製におけるその使用を提供することである。
本発明の技術的問題を解決するために、本発明は、次の技術的解決方法を提供する：
本発明による技術的解決法の第一の態様は、化合物5：
によって示される構造を有する左旋性二環式モルホリン、及び式(I)によって表される構造を有するその医薬的に許容される塩を提供することである。
本発明による技術的解決法の第一の態様は、化合物5：
そこで、医薬的に許容される酸付加塩は、無機酸や有機酸から調製され得る。そこで、Xは無機酸や有機酸から選択され；該無機酸は、フッ化水素酸、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、酢酸、硫酸、及びリン酸から選択され；該有機酸は、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸、サリチル酸、キナ酸、ショウノウ酸、カンファースルホン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、ピログルタミン酸、L-酒石酸、L-ジベンゾイル酒石酸、L-ジ-p-メチルベンゾイル酒石酸、L-酒石酸ジエチル、L-リンゴ酸、L-ショウノウ酸、L-10-カンファースルホン酸、R-(－)-マンデル酸、L-キナ酸、L-アスパラギン酸、L-グルタミン酸、L-ピログルタミン酸、D-酒石酸、D-ジベンゾイル酒石酸、D-ジ-p-メチルベンゾイル酒石酸、D-酒石酸ジエチル、D-リンゴ酸、D-ショウノウ酸、D-10-カンファースルホン酸、S-(－)-マンデル酸、D-キナ酸、D-アスパラギン酸、D-グルタミン酸、及びD-ピログルタミン酸から選択され、ここで、遊離塩基対酸の比は、任意選択で1：1、2：1又は3：1である。そこで、好ましい構造は、以下の：
に示される。
本発明による技術的解決法の第二の態様は、第一の態様による左旋性二環式モルホリン及びその医薬的に許容される塩を調製する方法を提供することであって、そしてそれは、以下の：
a)ビシクロールのヒドロキシル基を塩素化して、化合物2を得；
b)化合物2をモルホリンと反応させて、化合物3を得；
c)化合物3をキラル酸Yと反応させることによって塩を形成し、そして、塩可溶性の差を利用することによって有機溶媒中で分割を実施して、そのレボ鏡像異性体が95.0%超の鏡像異性体過剰率(%e. e.)を有するレボ鏡像異性体として塩4を得；ここで、該キラル酸Yは、L-酒石酸、L-ジベンゾイル酒石酸、L-ジ-p-メチルベンゾイル酒石酸、L-酒石酸ジエチル、L-リンゴ酸、L-ショウノウ酸、L-10-カンファースルホン酸、R-(－)-マンデル酸、L-キナ酸、L-アスパラギン酸、L-ピログルタミン酸、D-酒石酸、D-ジベンゾイル酒石酸、D-ジ-p-メチルベンゾイル酒石酸、D-酒石酸ジエチル、D-リンゴ酸、D-ショウノウ酸、D-10-カンファースルホン酸、S-(－)-マンデル酸、D-キナ酸、D-アスパラギン酸、D-グルタミン酸、D-ピログルタミン酸及び上記酸の誘導体から選択され、ここで、該遊離塩基対酸の比は、任意選択で1：1、2：1又は3：1であり；該有機溶媒は、酢酸エチル、アセトン、メタノール、エタノール、イソプロパノール及び混合溶媒から選択され；
d)塩基の作用下で塩4を遊離アミンさせ；
e)遊離アミン5を酸Xと反応させることによって塩を形成して、式(I)の化合物を得る、
に示されている。
そこで、Xの定義は、本発明による技術的解決法の第一の態様における定義と同じである。
b)化合物2をモルホリンと反応させて、化合物3を得；
c)化合物3をキラル酸Yと反応させることによって塩を形成し、そして、塩可溶性の差を利用することによって有機溶媒中で分割を実施して、そのレボ鏡像異性体が95.0%超の鏡像異性体過剰率(%e. e.)を有するレボ鏡像異性体として塩4を得；ここで、該キラル酸Yは、L-酒石酸、L-ジベンゾイル酒石酸、L-ジ-p-メチルベンゾイル酒石酸、L-酒石酸ジエチル、L-リンゴ酸、L-ショウノウ酸、L-10-カンファースルホン酸、R-(－)-マンデル酸、L-キナ酸、L-アスパラギン酸、L-ピログルタミン酸、D-酒石酸、D-ジベンゾイル酒石酸、D-ジ-p-メチルベンゾイル酒石酸、D-酒石酸ジエチル、D-リンゴ酸、D-ショウノウ酸、D-10-カンファースルホン酸、S-(－)-マンデル酸、D-キナ酸、D-アスパラギン酸、D-グルタミン酸、D-ピログルタミン酸及び上記酸の誘導体から選択され、ここで、該遊離塩基対酸の比は、任意選択で1：1、2：1又は3：1であり；該有機溶媒は、酢酸エチル、アセトン、メタノール、エタノール、イソプロパノール及び混合溶媒から選択され；
d)塩基の作用下で塩4を遊離アミンさせ；
e)遊離アミン5を酸Xと反応させることによって塩を形成して、式(I)の化合物を得る、
に示されている。
そこで、Xの定義は、本発明による技術的解決法の第一の態様における定義と同じである。
本発明による技術的解決法の第三の態様は、治療的及び予防的有効量の、本発明の第一の態様による左旋性二環式モルホリン及びその医薬的に許容される塩、並びに任意選択で1若しくは複数の医薬的に許容される担体又は賦形剤を含む医薬組成物を提供することである。
医薬組成物は、当該技術分野で周知の方法によって調製され得る。本発明の化合物は、1若しくは複数の医薬的に許容される固体又は液体の賦形剤及び/又はアジュバントと組み合わせられて、ヒト又は動物用途に好適な任意の剤形に調製され得る。本発明の化合物は、0.1～95重量%の量でその医薬組成物の状態で典型的には提供される。
本発明の化合物又はそれを含む医薬組成物は、単位剤形で投与され得、その投与経路は、例えば、経口投与、静脈内注射、筋肉内注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、目、肺及び気道、皮膚、膣、直腸などの経腸又は非経口であってもよい。
投与剤形は、液体剤形であっても、固体剤形であっても又は半固体剤形であってもよい。液体剤形は、溶液(真溶液やコロイド溶液を含む)、乳濁液(o/w型、w/o型、及び複合乳濁液を含む)、懸濁液、注射液(水注射液、粉末注射液、及び輸液を含む)、点眼剤、点鼻剤、ローション、及び塗布剤であってもよく；固体剤形は、錠剤(一般的な錠剤、腸溶錠、バッカル錠、分散錠、チュアブル錠、発泡錠、及び経口崩壊錠を含む)、カプセル剤(硬カプセル、軟カプセル、及び腸溶性コーティングカプセル剤を含む)、粒剤、散剤、ペレット剤、丸薬、坐剤、薄膜剤、パッチ、エアゾール(粉末)、スプレーなどであってもよく；半固体剤形は、軟膏剤、ゲル剤、ペースト剤などであってもよい。
本発明の化合物は、一般的な製剤にも処方され得、徐放製剤、制御放出製剤、標的化製剤及び様々な微粒子投与システムにも処方され得る。
本発明の化合物は、一般的な製剤にも処方され得、徐放製剤、制御放出製剤、標的化製剤及び様々な微粒子投与システムにも処方され得る。
本発明の化合物を錠剤に調製するために、希釈剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、滑沢剤及び共溶媒を含めた、当該技術分野で知られている様々な賦形剤が、使用されてもよい。希釈剤は、デンプン、デキストリン、スクロース、グルコース、ラクトース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、微結晶性セルロース、硫酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、炭酸カルシウムなどであってもよく；湿潤剤は、水、エタノール、イソプロパノールなどであってもよく；結合剤は、デンプンスラリー、デキストリン、シロップ、ハチミツ、グルコース溶液、微結晶性セルロース、アカシアスラリー、ゼラチンスラリー、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセルロース、アクリル樹脂、カルボマー、ポリビニールピロリドン、ポリエチレングリコールなどであってもよく；崩壊剤は、乾燥デンプン、微結晶性セルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、架橋ポリビニールピロリドン、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルデンプンナトリウム、重炭酸ナトリウム及びクエン酸、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステル、ドデシル硫酸ナトリウムなどであってもよく；滑沢剤及び共溶媒は、タルク粉末、シリカ、ステアラート、酒石酸、流動パラフィン、及びポリエチレングリコールであってもよい。
錠剤はさらに、糖衣錠、フィルムコーティング錠、腸溶コーティング錠、又は二層及び多層錠剤などの被覆錠剤に調製されてもよい。
カプセル剤に投与単位を調製するために、有効成分である本発明の化合物は、希釈剤や共溶媒と混合され、そして、得られた混合物は硬カプセル又は軟カプセルにそのまま詰められる。また、有効成分である本発明の化合物は、希釈剤、結合剤及び崩壊剤と混合されて、顆粒剤又はペレットが調製され、その後、硬カプセル又は軟カプセルに詰められる。本発明の化合物の錠剤を調製するための様々な種の希釈剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤及び共溶媒もまた、本発明の化合物のカプセル剤を調製するのに使用できる。
カプセル剤に投与単位を調製するために、有効成分である本発明の化合物は、希釈剤や共溶媒と混合され、そして、得られた混合物は硬カプセル又は軟カプセルにそのまま詰められる。また、有効成分である本発明の化合物は、希釈剤、結合剤及び崩壊剤と混合されて、顆粒剤又はペレットが調製され、その後、硬カプセル又は軟カプセルに詰められる。本発明の化合物の錠剤を調製するための様々な種の希釈剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤及び共溶媒もまた、本発明の化合物のカプセル剤を調製するのに使用できる。
本発明の化合物を注射剤に調製するために、水、エタノール、イソプロパノール、プロピレングリコール又はそれらの混合物が溶媒として使用でき、そして、当該技術分野で一般的に使用される適切な量の可溶化剤、共溶媒、pH調節剤及び浸透圧調節剤が加えられてもよく；該可溶化剤又は共溶媒は、ポロキサマー、レシチン、ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンなどであってもよく；該pH調整剤はホスファート、アセタート、塩酸、水酸化ナトリウムなどであってもよく；該浸透圧調整剤は塩化ナトリウム、マンニトール、グルコース、ホスファート、アセタートなどであってもよい。注射剤のため凍結乾燥粉末が調製される場合、マンニトールやグルコースもまた、プロパントとして加えられてもよい。
加えて、所望であれば、着色料、保存料、香味料、又は他の添加剤もまた、医薬製剤に加えてもよい。
投与目的を達成し、かつ、治療効果を高めるために、本発明の薬物又は医薬組成物は、任意の既知の投与方法で投与され得る。
本発明の化合物を含む医薬組成物の投与用量は、予防又は治療される疾患の性質及び重症度、患者又は動物の個々の状態、投与経路、並びに剤形によって、幅広い範囲で変動し得る。一般的に、本発明の化合物の日用量の好適な範囲は、0.001～5mg/kg体重である。上記用量は、医師の臨床経験や他の治療手段の使用を含めた投与レジメンによって、1用量単位で投与しても、又はそれを数個の用量単位に分割して投与してもよい。
投与目的を達成し、かつ、治療効果を高めるために、本発明の薬物又は医薬組成物は、任意の既知の投与方法で投与され得る。
本発明の化合物を含む医薬組成物の投与用量は、予防又は治療される疾患の性質及び重症度、患者又は動物の個々の状態、投与経路、並びに剤形によって、幅広い範囲で変動し得る。一般的に、本発明の化合物の日用量の好適な範囲は、0.001～5mg/kg体重である。上記用量は、医師の臨床経験や他の治療手段の使用を含めた投与レジメンによって、1用量単位で投与しても、又はそれを数個の用量単位に分割して投与してもよい。
本発明の化合物又は組成物は、単独で又は他の治療薬若しくは対症薬物と組み合わせて投与してもよい。本発明の化合物が他の治療薬との効果を相乗的に有するとき、その用量は、実際の状況に応じて調整されなければならない。
本発明による技術的解決法の第四の態様は、第一の態様による左旋性二環式モルホリンとその医薬的に許容される塩、及び肝臓関連疾患を予防及び/又は治療するための薬剤の調製における第三の態様による医薬組成物の使用を提供することである。そこで、肝臓関連疾患とは、肝臓障害関連疾患、並びに特に、A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎、薬物誘発性肝疾患、アルコール性肝疾患、非アルコール性肝疾患、自己免疫性肝疾患、肝疾患進行によって引き起こされた肝線維症、肝硬変、及び肝不全を含めた肝炎関連疾患から選択される。
本発明による技術的解決法の第四の態様は、第一の態様による左旋性二環式モルホリンとその医薬的に許容される塩、及び肝臓関連疾患を予防及び/又は治療するための薬剤の調製における第三の態様による医薬組成物の使用を提供することである。そこで、肝臓関連疾患とは、肝臓障害関連疾患、並びに特に、A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎、薬物誘発性肝疾患、アルコール性肝疾患、非アルコール性肝疾患、自己免疫性肝疾患、肝疾患進行によって引き起こされた肝線維症、肝硬変、及び肝不全を含めた肝炎関連疾患から選択される。
本発明の有益な技術的効果
本発明の左旋性二環式モルホリンとその医薬的に許容される塩は、様々な肝障害動物モデルにおいてデキストロ鏡像異性体やラセミ体より良好な薬理活性を示し、統計的な有意差(P<0.05)がある。そのうえ、左旋性二環式モルホリンとその医薬的に許容される塩は、デキストロ鏡像異性体やラセミ体より良好な薬物動態学的特性を有する。
本発明の左旋性二環式モルホリンとその医薬的に許容される塩は、様々な肝障害動物モデルにおいてデキストロ鏡像異性体やラセミ体より良好な薬理活性を示し、統計的な有意差(P<0.05)がある。そのうえ、左旋性二環式モルホリンとその医薬的に許容される塩は、デキストロ鏡像異性体やラセミ体より良好な薬物動態学的特性を有する。
本発明を実施するための最良の態様
本発明は、肝疾患を治療するための左旋性二環式モルホリンとその医薬的に許容される塩、その調製方法、医薬組成物及びその使用を提供する。以下の実施例は、本発明をさらに例示するために列挙されるのであって、どのような形であっても本発明を制限するものではない。その要旨及び範囲から逸脱することなく、様々な変更及び修飾が本発明に対して成されることは、当業者によって理解され得る。
本発明によって提供される左旋性二環式モルホリンとその塩の核磁気共鳴スペクトルは、内部標準としてのTMSと共にVarain Mercury-500核磁気共鳴計量器を使用することによって計測され、そして、質量スペクトルはZAB-2F質量分析計を使用することによって計測される。
本発明は、肝疾患を治療するための左旋性二環式モルホリンとその医薬的に許容される塩、その調製方法、医薬組成物及びその使用を提供する。以下の実施例は、本発明をさらに例示するために列挙されるのであって、どのような形であっても本発明を制限するものではない。その要旨及び範囲から逸脱することなく、様々な変更及び修飾が本発明に対して成されることは、当業者によって理解され得る。
本発明によって提供される左旋性二環式モルホリンとその塩の核磁気共鳴スペクトルは、内部標準としてのTMSと共にVarain Mercury-500核磁気共鳴計量器を使用することによって計測され、そして、質量スペクトルはZAB-2F質量分析計を使用することによって計測される。
実施例1 レボ(－)IMM-H014の調製
a. SOCl2/DMF；b. TEA/CH2Cl2又はCH3COCH3；c. L-DBTA/EA；d. NaHCO3/H2O/EA；e. CH3SO3H/EA。
化合物1(すなわち、ビシクロール、5.1g、13.1mmol)を、50mlの乾燥DMFを加えた、マグネティックスターラと温度計を備えた100ml容の三つ口フラスコに入れ、そして、固形物を完全に溶解した。反応系を氷浴中で0℃に冷やした後に、SOCl2(4.5ml、61.8mmol)をゆっくり滴下して加え、それと同時に、系の温度を、5℃を超えないように制御した。滴下添加後に、TLC下で原料が完全に反応したことが示されるまで、30分間にわたり氷浴中で反応を続けた。反応系を、約100gの砕いた氷に注ぎ入れ、そして、十分に撹拌して多量の白色の固体を沈殿させ、それを濾過し、そして、その濾過ケーキを、少量の蒸留水とエーテルで洗浄し、水気を切って乾燥させた。生成物を、空気で自然に乾燥させて、そして、計量して、全部で4.9gの白色の固体(化合物2)を製造した、収率：91.7%。
モルホリン(1.28g、14.7mmol)を、25mlのアセトンと2.2mlのトリエチルアミンを加えた50ml容の丸底フラスコに入れ、そして、室温にて撹拌しながら、化合物2(2.76g、6.8mmol)をそれに加えた。混合物を、室温にて5時間にわたり反応させ、そして、それを一晩静置した。TLCでは、原料が完全に反応したことを示し、そして、ピンク色の不溶性固体が系中に生じた。濾過により、濾液を減圧下で蒸留して、その中の溶媒を取り除いた。得られた黄色のオイルを真空カラム(石油エーテル：酢酸エチル=2：1)によって分離し、そして、生成物成分を回収して、3.1gの無色のオイル(化合物3)を製造した、収率：92.3%。MS-FAB[M+H]+=460.1。
化合物3(3.0g、6.54mmol)を計量し、45mlの酢酸エチル中に溶解し、そして、L-ジベンゾイル酒石酸(L-DBTA、1.2g、3.27mmol)をそれに加えた。室温にて、混合物を、撹拌して、白色の固体を沈殿させ、そして、30分後に、それを濾過して、固形物を回収し、そしてそれを、1時間60℃にてさらに乾燥させ、次に、計量して、1.25gの白色の固体(左旋性二環式モルホリン：L-ジベンゾイル酒石酸=2：1)を得た、収率：56.8%。キラルHPLC分析により、中間体4の鏡像異性体過剰率(%e.e.)は98.0%であった、[α]25=-130.4(CH2Cl2)。
中間体4(1.25g)を25mLの酢酸エチルによって分散させ、25mLの飽和重炭酸ナトリウム液で二度洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、そして、濃縮して、無色のオイルを製造した。そのオイルを、10mlの酢酸エチル中に溶解し、そして、120μLのメタンスルホン酸をそれに加えた。結晶化を室温にて撹拌しながら実施し、濾過により、得られた固形物を10mlのメタノールを用いて再結晶化して、白色の固体である0.7gの(－)IMM-H014を製造した、HPLC純度>98.0%、[α]25=-65.6(CH2Cl2)。1H NMR (500 MHz, クロロホルム-d) δ 7.45 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 6.14 (s, 1H), 6.02 (s, 1H), 5.96 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 4.37 (dd, J = 13.3, 4.0 Hz, 1H), 4.16 (t, J = 12.0 Hz, 1H), 4.05 (d, J = 19.7 Hz, 8H), 3.96-3.81 (m, 3H), 3.76 (s, 3H), 3.57 (d, J = 11.8 Hz, 1H), 3.41 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 2.91 (s, 3H), 2.79-2.68 (m, 1H), 2.50 (d, J = 11.3 Hz, 1H)。
比較実施例1 デキストロ鏡像異性体(＋)IMM-H014の調製
化合物3(3.0g、6.54mmol)を、さらに取得し、45mlの酢酸エチル中に溶解し、そして、D-ジベンゾイル酒石酸(1.2g、3.27mmol)をそれに加えた。混合物を、室温にて撹拌して、白色の固体を沈殿させ、そして、30分後に、固形物を回収し、60℃にて1時間乾燥させ、計量して、1.2gの白色の固体(デキストロ二環式モルヒネ：D-ジベンゾイル酒石酸=2：1)を製造した、収率：54.5%。キラルHPLC分析により、中間体4の鏡像異性体過剰率(%e. e.)は97.3%であった、[α]25=+133.2(CH2Cl2)。
中間体(1.2g)を25mLの酢酸エチルによって分散させ、25mLの飽和重炭酸ナトリウム液で二度洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、そして、濃縮して、無色のオイルを得た。そのオイルを、10mlの酢酸エチル中に溶解し、そして、120μLのメタンスルホン酸をそれに加えた。結晶化を室温にて撹拌しながら実施し、濾過により、得られた固形物を10mLのメタノールを用いて再結晶化して、白色の固体である0.6gの(＋)IMM-H014を得た、HPLC純度>98.0%、[α]25=-78.2(CH2Cl2)。1H NMR (500 MHz, クロロホルム-d) δ 7.45 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 6.14 (s, 1H), 6.02 (s, 1H), 5.96 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 4.37 (dd, J = 13.3, 4.0 Hz, 1H), 4.16 (t, J = 12.0 Hz, 1H), 4.05 (d, J = 19.7 Hz, 8H), 3.96-3.81 (m, 3H), 3.76 (s, 3H), 3.57 (d, J = 11.8 Hz, 1H), 3.41 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 2.91 (s, 3H), 2.79-2.68 (m, 1H), 2.50 (d, J = 11.3 Hz, 1H)。
薬理試験
実施例1 フィトヘムアグルチニン(ConA)誘発性急性免疫肝障害に対するIMM-H014光学鏡像異性体の効果
実施例1 フィトヘムアグルチニン(ConA)誘発性急性免疫肝障害に対するIMM-H014光学鏡像異性体の効果
1. ConA誘発性マウス急性免疫肝疾患モデルの確立のための方法及び投与方法
順化後に、SPFグレードの雄ICRマウス(20～22g)を無作為に5つの群に割り当てた：ブランク対照群、ConA誘発モデル群、200mg/kgの(＋)IMM-H014群、200mg/kgの(－)IMM-H014群、及び200mg/kgの(±)IMM-H014群、各群に10匹のマウス。それぞれの投与群では、1日に一度胃内に投与し、そして、それを合計で3回投与した。ブランク対照群及びモデル群では、同じ用量の生理的食塩水を用いて胃内に投与した。最後の投与の2時間後に、ブランク対照群以外の各群のマウスには、尾静脈に20mg/kgのConAを注射し、各投与用量は10ml/kgであった。そのマウスは、16時間にわたり絶食したが、水制限状態ではなく、次に、その動物は更なる処理を待った。
順化後に、SPFグレードの雄ICRマウス(20～22g)を無作為に5つの群に割り当てた：ブランク対照群、ConA誘発モデル群、200mg/kgの(＋)IMM-H014群、200mg/kgの(－)IMM-H014群、及び200mg/kgの(±)IMM-H014群、各群に10匹のマウス。それぞれの投与群では、1日に一度胃内に投与し、そして、それを合計で3回投与した。ブランク対照群及びモデル群では、同じ用量の生理的食塩水を用いて胃内に投与した。最後の投与の2時間後に、ブランク対照群以外の各群のマウスには、尾静脈に20mg/kgのConAを注射し、各投与用量は10ml/kgであった。そのマウスは、16時間にわたり絶食したが、水制限状態ではなく、次に、その動物は更なる処理を待った。
2. 生化学的指標の測定
マウスを断頭し、血液を採取し、その血液サンプルを室温にて2時間静置し、そして、4000rmpにて10分間遠心分離して、血清を分離した。血清中のALT、AST及びLDH含有量を全自動生化学分析装置で検出した。
マウスを断頭し、血液を採取し、その血液サンプルを室温にて2時間静置し、そして、4000rmpにて10分間遠心分離して、血清を分離した。血清中のALT、AST及びLDH含有量を全自動生化学分析装置で検出した。
3. 統計解析
それぞれのデータを、数値平均±標準偏差(x±SD)として示した。群間比較をt-検定によって実施し、P<0.05は有意差があることを示した。
それぞれのデータを、数値平均±標準偏差(x±SD)として示した。群間比較をt-検定によって実施し、P<0.05は有意差があることを示した。
4. 実験結果
4.1 血清肝障害のバイオマーカーであるALTのConA誘発性増加に対するIMM-H014鏡像異性体の効果
血清ALTレベルは、肝障害の程度と直接的な、かつ、正の相関関係を示すので、それは一般に認められた肝障害の血清バイオマーカーである。表1の結果は、20mg/kgのConAがマウスにおいて有意な肝障害をもたらすであろうことを示し、そして、ブランク対照群と比較して、血清ALTレベルを有意に増強した(P<0.001)。(＋)IMM-H014と(－)IMM-H014は両方とも、血清ALTのConA誘発性増加を有意に低減し得る(P<0.001)。IMM-H014鏡像異性体によるALTの低減百分率は、それぞれ95.3%と97.3%であり、そして、ALT含有量をブランク対照群のレベルまで低減した。(＋)IMM-H014と(－)IMM-H014は両方ともConA誘発免疫肝障害に対する有意な保護効果を示し、(－)IMM-H014の活性は(＋)IMM-H014のものよりわずかに優れていた。同じ用量にて(±)IMM-H014と比較した場合、マウス血清ALTレベルのConA誘発性増加に対する(＋)IMM-H014及び(－)IMM-H014の低減効果は、(±)IMM-H014のものと比較して優れており(そしてそれはまた有意な有効性も示し、ALTの低減百分率は88.6%であった)、ここで、ALTに対する(－)IMM-H014の低減効果は、(±)IMM-H014のものと比較した場合、統計的差異(P<0.05)を有した。
4.1 血清肝障害のバイオマーカーであるALTのConA誘発性増加に対するIMM-H014鏡像異性体の効果
血清ALTレベルは、肝障害の程度と直接的な、かつ、正の相関関係を示すので、それは一般に認められた肝障害の血清バイオマーカーである。表1の結果は、20mg/kgのConAがマウスにおいて有意な肝障害をもたらすであろうことを示し、そして、ブランク対照群と比較して、血清ALTレベルを有意に増強した(P<0.001)。(＋)IMM-H014と(－)IMM-H014は両方とも、血清ALTのConA誘発性増加を有意に低減し得る(P<0.001)。IMM-H014鏡像異性体によるALTの低減百分率は、それぞれ95.3%と97.3%であり、そして、ALT含有量をブランク対照群のレベルまで低減した。(＋)IMM-H014と(－)IMM-H014は両方ともConA誘発免疫肝障害に対する有意な保護効果を示し、(－)IMM-H014の活性は(＋)IMM-H014のものよりわずかに優れていた。同じ用量にて(±)IMM-H014と比較した場合、マウス血清ALTレベルのConA誘発性増加に対する(＋)IMM-H014及び(－)IMM-H014の低減効果は、(±)IMM-H014のものと比較して優れており(そしてそれはまた有意な有効性も示し、ALTの低減百分率は88.6%であった)、ここで、ALTに対する(－)IMM-H014の低減効果は、(±)IMM-H014のものと比較した場合、統計的差異(P<0.05)を有した。
表1 マウス血清ALTのConA誘発性増加に対するIMM-H014鏡像異性体の低減効果(n=10)
4.2 肝障害のバイオマーカーである血清ASTのConA誘発性増加に対するIMM-H014鏡像異性体の効果
血清ASTレベルの増大はまた、肝細胞障害、特に肝細胞ミトコンドリア障害の重要なマーカーの一つでもあり、ミトコンドリアが障害されているとき、血清ASTレベルが著しく増大して、肝細胞の重症度を反映する。結果を表2に示し、20mg/kgのConAが、マウス肝細胞ミトコンドリアの著しい損傷を引き起こし、そして、ブランク対照群と比較して、血清ASTレベルを有意に増大させた(P<0.001)。(＋)IMM-H014、(－)IMM-H014及び(±)IMM-H014はすべて、血清ASTのConA誘発性増加のレベルを低減できた。モデル群との比較では、(＋)IMM-H014、(－)IMM-H014及び(±)IMM-H014によるAST低減百分率は、それぞれ44.8%、72.9%及び22.2%であり、ここで、該(－)IMM-H014群は、モデル群と比較して、統計的差異異があった(P<0.01)。ASTを低減するための(＋)IMM-H014及び(－)IMM-H014の活性は、(±)IMM-H014のものより優れており、該(－)IMM-H014の活性は最適であり、同じ用量にて(±)IMM-H014群と比較して、統計的差異があった(P<0.05)。
血清ASTレベルの増大はまた、肝細胞障害、特に肝細胞ミトコンドリア障害の重要なマーカーの一つでもあり、ミトコンドリアが障害されているとき、血清ASTレベルが著しく増大して、肝細胞の重症度を反映する。結果を表2に示し、20mg/kgのConAが、マウス肝細胞ミトコンドリアの著しい損傷を引き起こし、そして、ブランク対照群と比較して、血清ASTレベルを有意に増大させた(P<0.001)。(＋)IMM-H014、(－)IMM-H014及び(±)IMM-H014はすべて、血清ASTのConA誘発性増加のレベルを低減できた。モデル群との比較では、(＋)IMM-H014、(－)IMM-H014及び(±)IMM-H014によるAST低減百分率は、それぞれ44.8%、72.9%及び22.2%であり、ここで、該(－)IMM-H014群は、モデル群と比較して、統計的差異異があった(P<0.01)。ASTを低減するための(＋)IMM-H014及び(－)IMM-H014の活性は、(±)IMM-H014のものより優れており、該(－)IMM-H014の活性は最適であり、同じ用量にて(±)IMM-H014群と比較して、統計的差異があった(P<0.05)。
表2 マウス血清ASTのConA誘発性増加に対するIMM-H014鏡像異性体の低減効果(n=10)
4.3 血清LDHのConA誘発性増加に対するIMM-H014鏡像異性体の効果
肝臓が障害されているとき、血清LDHレベルもまた、肝細胞障害の状況と程度を反映し得る。結果を表3に示した。尾静脈注射による20mg/kgのConAの投与は、重度の肝細胞障害を引き起こし、そして、ブランク対照群と比較して、血清LDHレベルを有意に増大させた(P<0.001)。(－)IMM-H014はConA誘発血清LDH増大のレベルを有意に低減でき、そして、そのLDHの低減百分率は最大54.4%であり、そしてそれは、モデル群と比較して、統計的差異があった(P<0.01)。(＋)IMM-H014もまた、血清LDHの増大に対して低減効果を有し、そして、その低減百分率は27.6%であったが、それはモデル群と比較して、統計的差異はなかった。 (±)IMM-H014は、当該用量にて、LDH増大に対して弱い低減効果を有するだけであり、そして、その低減百分率は6.4%であった。LDHレベルを低減する態様において、(－)IMM-H014の活性は、(＋)IMM-H014及び(±)IMM-H014のものよりまだ優れており、そして、同じ用量にて、(－)IMM-H014と(±)IMM-H014との間には、統計的差異があった(P<0.05)。
肝臓が障害されているとき、血清LDHレベルもまた、肝細胞障害の状況と程度を反映し得る。結果を表3に示した。尾静脈注射による20mg/kgのConAの投与は、重度の肝細胞障害を引き起こし、そして、ブランク対照群と比較して、血清LDHレベルを有意に増大させた(P<0.001)。(－)IMM-H014はConA誘発血清LDH増大のレベルを有意に低減でき、そして、そのLDHの低減百分率は最大54.4%であり、そしてそれは、モデル群と比較して、統計的差異があった(P<0.01)。(＋)IMM-H014もまた、血清LDHの増大に対して低減効果を有し、そして、その低減百分率は27.6%であったが、それはモデル群と比較して、統計的差異はなかった。 (±)IMM-H014は、当該用量にて、LDH増大に対して弱い低減効果を有するだけであり、そして、その低減百分率は6.4%であった。LDHレベルを低減する態様において、(－)IMM-H014の活性は、(＋)IMM-H014及び(±)IMM-H014のものよりまだ優れており、そして、同じ用量にて、(－)IMM-H014と(±)IMM-H014との間には、統計的差異があった(P<0.05)。
表3 マウス血清LDHのConA誘発性増加に対するIMM-H014鏡像異性体の低減効果(n=10)
実施例2 エチオニン誘発性非アルコール性脂肪肝疾患に対するIMM-H014光学鏡像異性体の効果
1. エチオニン誘発性マウス非アルコール性脂肪肝モデル確立のための方法及び投与方法
順化後に、SPFグレードの雄ICRマウス(20～22 g)を無作為に5つの群に割り当てた：ブランク対照群、エチオニン誘発モデル群、200mg/kgの(＋)IMM-H014群、200mg/kgの(－)IMM-H014群、及び200mg/kgの(±)IMM-H014群、各群に5匹のマウス。モデル確立の3日前に、それぞれの投与群では1日に一度胃内に投与し、そして、それを合計で3回投与した。ブランク対照群及びモデル群の動物では、同じ用量の生理的食塩水を用いて胃内に投与した。各投与用量は10mL/kgであった。最後の投与の1時間後に、各群のマウスに250mg/kgのエチオニンを一度胃内に投与した。投与用量は20ml/kgであった。そのマウスは、24時間にわたり絶食したが、水制限状態ではなく、次に、その動物は更なる処理を待った。
1. エチオニン誘発性マウス非アルコール性脂肪肝モデル確立のための方法及び投与方法
順化後に、SPFグレードの雄ICRマウス(20～22 g)を無作為に5つの群に割り当てた：ブランク対照群、エチオニン誘発モデル群、200mg/kgの(＋)IMM-H014群、200mg/kgの(－)IMM-H014群、及び200mg/kgの(±)IMM-H014群、各群に5匹のマウス。モデル確立の3日前に、それぞれの投与群では1日に一度胃内に投与し、そして、それを合計で3回投与した。ブランク対照群及びモデル群の動物では、同じ用量の生理的食塩水を用いて胃内に投与した。各投与用量は10mL/kgであった。最後の投与の1時間後に、各群のマウスに250mg/kgのエチオニンを一度胃内に投与した。投与用量は20ml/kgであった。そのマウスは、24時間にわたり絶食したが、水制限状態ではなく、次に、その動物は更なる処理を待った。
2. 肝臓組織内の中性脂肪及びコレステロールの含有量の測定
マウスを開胸に供して、肝臓を摘出し、そしてそれを4℃にて生理的食塩水で洗浄した。肝臓組織の一部を、ライセートと電動ホモジナイザを用いて10%の肝臓組織ホモジネートに調製した；ここで、その一部を、中性脂肪キット及びコレステロールキットの計測方法に従って計測して、その中のトリグリセリド及びコレステロールを測定し、そして、その他の部分を、BCAタンパク質定量キットを用いて計測して、その中のタンパク質の含有量を測定した。肝臓組織内のトリグリセリド及びコレステロールをタンパク質補正に供した。
マウスを開胸に供して、肝臓を摘出し、そしてそれを4℃にて生理的食塩水で洗浄した。肝臓組織の一部を、ライセートと電動ホモジナイザを用いて10%の肝臓組織ホモジネートに調製した；ここで、その一部を、中性脂肪キット及びコレステロールキットの計測方法に従って計測して、その中のトリグリセリド及びコレステロールを測定し、そして、その他の部分を、BCAタンパク質定量キットを用いて計測して、その中のタンパク質の含有量を測定した。肝臓組織内のトリグリセリド及びコレステロールをタンパク質補正に供した。
3. 統計解析
SPSSソフトウェアを採用することによって、それぞれのデータを数値平均±標準偏差(x±SD)として示した。群間比較をt-検定によって実施し、P<0.05は有意差があることを示した。
SPSSソフトウェアを採用することによって、それぞれのデータを数値平均±標準偏差(x±SD)として示した。群間比較をt-検定によって実施し、P<0.05は有意差があることを示した。
4. 実験結果
4.1 マウス肝臓組織コレステロール(TC)含有量のエチオニン誘発性増加に対するIMM-H014鏡像異性体の効果
アポリポタンパク質の合成にさらに影響を及ぼすようにメチオニンの代謝に干渉することによって、エチオニンは、肝細胞で合成されたコレステロールやトリグリセリドなどが血中に輸送されないようにする結果となり、そしてそれが、肝細胞脂質の蓄積を引き起こし、これにより薬物誘発性非アルコール性脂肪肝モデルが形成される。結果を表4に示し、250mg/kgのエチオニンは、ブランク対照群と比較して、肝臓組織内のコレステロール含量の有意な増大を引き起こし得る(P<0.05)。(＋)IMM-H014と(－)IMM-H014は両方とも、肝臓組織TCのエチオニン誘発性蓄積を低減することができ、IMM-H014鏡像異性体(すなわち、(＋)IMM-H014と(－)IMM-H014)によるTC低減百分率は、それぞれ27.2%と32.4%であり、ここで、該(－)IMM-H014群は、モデル群と比較して、統計的差異があった(P<0.05)。 (±)IMM-H014もまた、エチオニン誘発性肝臓組織TC増大に対して有意な阻害作用を有し、そしてそれは、モデル群と比較して、統計的差異があった(P<0.05)。(－)IMM-H014の活性は、(±)IMM-H014のものよりわずかに優れていた。
4.1 マウス肝臓組織コレステロール(TC)含有量のエチオニン誘発性増加に対するIMM-H014鏡像異性体の効果
アポリポタンパク質の合成にさらに影響を及ぼすようにメチオニンの代謝に干渉することによって、エチオニンは、肝細胞で合成されたコレステロールやトリグリセリドなどが血中に輸送されないようにする結果となり、そしてそれが、肝細胞脂質の蓄積を引き起こし、これにより薬物誘発性非アルコール性脂肪肝モデルが形成される。結果を表4に示し、250mg/kgのエチオニンは、ブランク対照群と比較して、肝臓組織内のコレステロール含量の有意な増大を引き起こし得る(P<0.05)。(＋)IMM-H014と(－)IMM-H014は両方とも、肝臓組織TCのエチオニン誘発性蓄積を低減することができ、IMM-H014鏡像異性体(すなわち、(＋)IMM-H014と(－)IMM-H014)によるTC低減百分率は、それぞれ27.2%と32.4%であり、ここで、該(－)IMM-H014群は、モデル群と比較して、統計的差異があった(P<0.05)。 (±)IMM-H014もまた、エチオニン誘発性肝臓組織TC増大に対して有意な阻害作用を有し、そしてそれは、モデル群と比較して、統計的差異があった(P<0.05)。(－)IMM-H014の活性は、(±)IMM-H014のものよりわずかに優れていた。
表4 エチオニン誘発性マウス肝臓組織TC蓄積に対するIMM-H014鏡像異性体の低減効果(n=10)
4.2 マウス肝臓組織トリグリセリド(TG)含有量のエチオニン誘発性増加に対するIMM-H014鏡像異性体の効果
結果を表5に示した。250mg/kgのエチオニンは、ブランク対照群のものと比較して、肝臓組織におけるTG含有量の有意な増大を引き起こして(P<0.05)、非アルコール性脂肪肝の症状を示した。(－)IMM-H014は、エチオニン誘発性肝臓組織TG蓄積を有意に低減することができ、そのTG低減百分率は39.0%であり、そしてそれは、モデル群と比較して、統計的差異があった(P<0.05)。(＋)IMM-H014は、7.1%のパーセント低減率を有するだけの、エチオニン誘発性肝臓組織トリグリセライド増加に対する弱い低減効果を示した。
結果を表5に示した。250mg/kgのエチオニンは、ブランク対照群のものと比較して、肝臓組織におけるTG含有量の有意な増大を引き起こして(P<0.05)、非アルコール性脂肪肝の症状を示した。(－)IMM-H014は、エチオニン誘発性肝臓組織TG蓄積を有意に低減することができ、そのTG低減百分率は39.0%であり、そしてそれは、モデル群と比較して、統計的差異があった(P<0.05)。(＋)IMM-H014は、7.1%のパーセント低減率を有するだけの、エチオニン誘発性肝臓組織トリグリセライド増加に対する弱い低減効果を示した。
表5 エチオニン誘発性肝臓組織TG蓄積に対するIMM-H014鏡像異性体の低減効果(n=10)
実施例3 4-アセトアミドフェノール誘発性肝細胞障害に対するIMM-H014の光学鏡像異性体の効果
1. 細胞培養
ヒト肝臓癌HepG2細胞は、正常ヒト肝細胞の特徴をよく保持し、そして、それらを培養条件：37℃、5%のCO2、及び飽和湿度、にて10%のウシ胎仔セリウム(100U/mLのペニシリン及び100μg/mLのストレプトマイシンを含有)を含有するDMEM培地で培養した。0.25%のトリプシン及び0.02%のEDTAを含有する溶液を、消化及び継代に使用した。
1. 細胞培養
ヒト肝臓癌HepG2細胞は、正常ヒト肝細胞の特徴をよく保持し、そして、それらを培養条件：37℃、5%のCO2、及び飽和湿度、にて10%のウシ胎仔セリウム(100U/mLのペニシリン及び100μg/mLのストレプトマイシンを含有)を含有するDMEM培地で培養した。0.25%のトリプシン及び0.02%のEDTAを含有する溶液を、消化及び継代に使用した。
2. 4-アセトアミドフェノール誘発性インビトロ肝細胞障害に対するIMM-H014鏡像異性体の保護効果
MTT法を採用した。HepG2細胞を96ウェル細胞培養プレートに植菌し、24時間培養した後に、(＋)IMM-H014、(－)IMM-H014及び(±)IMM-H014を無毒濃度で加え、さらに、4-アセトアミドフェノール(APAP、8mMの終濃度)をそれに加えた。ビシクロール陽性対照群、溶媒対照群及びモデル群を実験に設定した。培養を24時間にわたり継続した。100μLの培養液を採取し、遠心分離し、そして、LDH検出キットによる全自動生化学分析装置を利用して、そこでLDHレベルを検出した。残った培養液を捨て、そして、4時間にわたり培養を続けるために、各ウェルに、100μLのMTT(0.5mg/mL)溶液を加えた。MTT溶液を捨て、そして、各ウェルに、150μLのDMSOを加えた。混合物を、混合振盪器によって振盪し、吸収値をマイクロプレートリーダーにより570nmの波長にて計測した。細胞生存率(%)=(投与群のOD平均/溶媒対照群の平均OD)×100 %。
MTT法を採用した。HepG2細胞を96ウェル細胞培養プレートに植菌し、24時間培養した後に、(＋)IMM-H014、(－)IMM-H014及び(±)IMM-H014を無毒濃度で加え、さらに、4-アセトアミドフェノール(APAP、8mMの終濃度)をそれに加えた。ビシクロール陽性対照群、溶媒対照群及びモデル群を実験に設定した。培養を24時間にわたり継続した。100μLの培養液を採取し、遠心分離し、そして、LDH検出キットによる全自動生化学分析装置を利用して、そこでLDHレベルを検出した。残った培養液を捨て、そして、4時間にわたり培養を続けるために、各ウェルに、100μLのMTT(0.5mg/mL)溶液を加えた。MTT溶液を捨て、そして、各ウェルに、150μLのDMSOを加えた。混合物を、混合振盪器によって振盪し、吸収値をマイクロプレートリーダーにより570nmの波長にて計測した。細胞生存率(%)=(投与群のOD平均/溶媒対照群の平均OD)×100 %。
3. 統計解析
データを、数値平均±標準偏差(x±SD)として示した。群間比較をt-検定によって実施し、P<0.05は有意差があることを示した。
データを、数値平均±標準偏差(x±SD)として示した。群間比較をt-検定によって実施し、P<0.05は有意差があることを示した。
4. 実験結果
10μMの(＋)IMM-H014、10μMの(－)IMM-H014及び10μMの(±)IMM-H014は、48時間にわたりHepG2細胞に影響し、そして、それらはそれぞれ90%の細胞生存率で、細胞に対して有意な毒性ではなかった。その濃度を、APAP障害肝細胞に対する保護効果を調査するのに利用した。結果を表6に示し、8mMのAPAPはHepG2細胞を有意に障害することができ、そして、その細胞生存率は、ブランク対照群と比較して、38.33%にすぎなかった(P<0.001)。それぞれ10μMの用量での(＋)IMM-H014、(－)IMM-H014及び(±)IMM-H014は、APAP誘発インビトロヒト肝細胞損傷に対して有意な保護効果を有し(P<0.05、P<0.001、P<0.01)、そして、細胞生存の割合の増大は、それぞれ41.4%、74.8%及び32.1%であった。(－)IMM-H014の活性は比較的最適であり、そして、それは同じ用量にて(±)IMM-H014群と比較して、統計的差異があった(P<0.05)。ビシクロールもまた、APAP誘発性肝細胞障害を有意に改善し得る(P<0.05)。
10μMの(＋)IMM-H014、10μMの(－)IMM-H014及び10μMの(±)IMM-H014は、48時間にわたりHepG2細胞に影響し、そして、それらはそれぞれ90%の細胞生存率で、細胞に対して有意な毒性ではなかった。その濃度を、APAP障害肝細胞に対する保護効果を調査するのに利用した。結果を表6に示し、8mMのAPAPはHepG2細胞を有意に障害することができ、そして、その細胞生存率は、ブランク対照群と比較して、38.33%にすぎなかった(P<0.001)。それぞれ10μMの用量での(＋)IMM-H014、(－)IMM-H014及び(±)IMM-H014は、APAP誘発インビトロヒト肝細胞損傷に対して有意な保護効果を有し(P<0.05、P<0.001、P<0.01)、そして、細胞生存の割合の増大は、それぞれ41.4%、74.8%及び32.1%であった。(－)IMM-H014の活性は比較的最適であり、そして、それは同じ用量にて(±)IMM-H014群と比較して、統計的差異があった(P<0.05)。ビシクロールもまた、APAP誘発性肝細胞障害を有意に改善し得る(P<0.05)。
表6 肝細胞生存率の4-アセトアミドフェノール誘発性低下に対するIMM-H014鏡像異性体の効果(n=3～4)
LDH(乳酸デヒドロゲナーゼ)は、細胞のエネルギー代謝のための重要な酵素の一つである。細胞が死滅したとき、細胞内膜が破れ、そして、LDHが細胞質から放出されるので、LDHレベルが細胞損傷の程度に比例する。結果を図1に示し、8mMのAPAPは24時間にわたりHepG2細胞に影響し、細胞培養上清のLDHレベルは、ブランク対照群のものと比較して、有意に上昇して(P<0.01)、有意な肝細胞障害をさらに示した。それぞれ10μMの用量での(＋)IMM-H014、(－)IMM-H014及び(±)IMM-H014は、LDHレベルを低減することができ、ここで、(－)IMM-H014及び(±)IMM-H014のLDHレベルは、モデル群のものと比較して、統計的差異があり(P<0.05、P<0.05)、そして、(－)IMM-H014群の低減効果は、同じ用量にて(±)IMM-H014群のものよりわずかに優れていた。
実施例4 四塩化炭素誘発性肝細胞障害に対するIMM-H014の光学鏡像異性体の効果
1. 細胞培養
ヒト肝臓癌HepG2細胞は、正常ヒト肝細胞の特徴をよく保持し、そして、それらを培養条件：37℃、5%のCO2、及び飽和湿度、にて10%のウシ胎仔セリウム(100U/mLのペニシリン及び100μg/mLのストレプトマイシンを含有)を含有するDMEM培地で培養した。0.25%のトリプシン及び0.02%のEDTAを含有する溶液を、消化及び継代に使用した。
1. 細胞培養
ヒト肝臓癌HepG2細胞は、正常ヒト肝細胞の特徴をよく保持し、そして、それらを培養条件：37℃、5%のCO2、及び飽和湿度、にて10%のウシ胎仔セリウム(100U/mLのペニシリン及び100μg/mLのストレプトマイシンを含有)を含有するDMEM培地で培養した。0.25%のトリプシン及び0.02%のEDTAを含有する溶液を、消化及び継代に使用した。
2. 四塩化炭素誘発性インビトロ肝細胞障害に対するIMM-H014鏡像異性体の保護効果
MTT法を採用した。HepG2細胞を96ウェル細胞培養プレートに植菌し、24時間培養した後に、(＋)IMM-H014、(－)IMM-H014及び(±)IMM-H014を無毒濃度で加え、さらに、四塩化炭素(CCl4、0.6%の終濃度)をそれに加えた。ビシクロール陽性対照群、溶媒対照群及びモデル群を実験に設定した。それらは、細胞に対して24時間にわたり継続的に影響した。培養液を捨て、そして、各ウェルに、100μLのMTT(0.5mg/mL)溶液を加えて、4時間培養した。MTT溶液を捨て、そして、各ウェルに、150μLのDMSOを加えた。混合物を、混合振盪器によって振盪し、吸収値をマイクロプレートリーダーにより570nmの波長にて計測した。細胞生存率(%)=(投与群のOD平均/溶媒対照群の平均OD)×100 %。
MTT法を採用した。HepG2細胞を96ウェル細胞培養プレートに植菌し、24時間培養した後に、(＋)IMM-H014、(－)IMM-H014及び(±)IMM-H014を無毒濃度で加え、さらに、四塩化炭素(CCl4、0.6%の終濃度)をそれに加えた。ビシクロール陽性対照群、溶媒対照群及びモデル群を実験に設定した。それらは、細胞に対して24時間にわたり継続的に影響した。培養液を捨て、そして、各ウェルに、100μLのMTT(0.5mg/mL)溶液を加えて、4時間培養した。MTT溶液を捨て、そして、各ウェルに、150μLのDMSOを加えた。混合物を、混合振盪器によって振盪し、吸収値をマイクロプレートリーダーにより570nmの波長にて計測した。細胞生存率(%)=(投与群のOD平均/溶媒対照群の平均OD)×100 %。
3. 統計解析
データを、数値平均±標準偏差(x±SD)として示した。群間比較をt-検定によって実施し、P<0.05は有意差があることを示した。
データを、数値平均±標準偏差(x±SD)として示した。群間比較をt-検定によって実施し、P<0.05は有意差があることを示した。
4. 実験結果
10μMの(＋)IMM-H014、10μMの(－)IMM-H014及び10μMの(±)IMM-H014は、48時間にわたりHepG2細胞に影響し、そして、それらはそれぞれ90%の細胞生存率で、細胞に対して有意な毒性ではなかった。その濃度を、CCl4障害肝細胞に対する保護効果を調査するのに利用した。結果を表7に示し、0.6%のCCl4はHepG2細胞を有意に障害することができ、そして、その細胞生存率は、ブランク対照群と比較して、77.50%であった(P<0.001)。それぞれ10μMの用量での(＋)IMM-H014、(－)IMM-H014及び(±)IMM-H014は、CCl4誘発インビトロヒト肝細胞損傷に対して有意な改善効果を有し(P<0.05、P<0.01、P<0.01)、そして、細胞生存の割合の増大は、それぞれ12.59%、34.66%及び18.74%であった。同じ用量にて(±)IMM-H014と比較して、(－)IMM-H014は、CCl4誘発性肝細胞損傷に対してより良好な保護活性を有した。ビシクロールもまた、APAP誘発性肝細胞障害を有意に改善し得る。
10μMの(＋)IMM-H014、10μMの(－)IMM-H014及び10μMの(±)IMM-H014は、48時間にわたりHepG2細胞に影響し、そして、それらはそれぞれ90%の細胞生存率で、細胞に対して有意な毒性ではなかった。その濃度を、CCl4障害肝細胞に対する保護効果を調査するのに利用した。結果を表7に示し、0.6%のCCl4はHepG2細胞を有意に障害することができ、そして、その細胞生存率は、ブランク対照群と比較して、77.50%であった(P<0.001)。それぞれ10μMの用量での(＋)IMM-H014、(－)IMM-H014及び(±)IMM-H014は、CCl4誘発インビトロヒト肝細胞損傷に対して有意な改善効果を有し(P<0.05、P<0.01、P<0.01)、そして、細胞生存の割合の増大は、それぞれ12.59%、34.66%及び18.74%であった。同じ用量にて(±)IMM-H014と比較して、(－)IMM-H014は、CCl4誘発性肝細胞損傷に対してより良好な保護活性を有した。ビシクロールもまた、APAP誘発性肝細胞障害を有意に改善し得る。
表7 4-アセトアミドフェノールに起因する肝細胞生存率の低下に対するIMM-H014鏡像異性体の効果(n=3～4)
薬物動力学的試験
実施例5
1. 実験目的
雄SDラットに、IMM-H014の単一エナンチオマとラセミ体を胃内投与して、ラットの体内におけるそれらの薬物動力学特性を比較した。
実施例5
1. 実験目的
雄SDラットに、IMM-H014の単一エナンチオマとラセミ体を胃内投与して、ラットの体内におけるそれらの薬物動力学特性を比較した。
2. 実験装置と材料
2.1 実験装置
Agilent 6470トリプルタンデム四重極LC-MS(Agilent Technologies Inc.)、Mettler AG135-モデル電子式分析天秤、ピペットガン、TDL-5-A遠心分離機、Sigmaミニ遠心分離機、窒素ブロワー、及び動物秤量スケール。
2.1 実験装置
Agilent 6470トリプルタンデム四重極LC-MS(Agilent Technologies Inc.)、Mettler AG135-モデル電子式分析天秤、ピペットガン、TDL-5-A遠心分離機、Sigmaミニ遠心分離機、窒素ブロワー、及び動物秤量スケール。
2.2 実験材料
(＋)IMM-H014、(－)IMM-H014、(±)IMM-H014；メタノール(MS Grade、Fisher Scientific Inc.の製品、カタログ番号179097)；アセトニトリル(MS Grade、Fisher Scientific Inc.の製品、カタログ番号177802)；脱イオン水(Hangzhou Wahaha Co.)；ギ酸(HPLC Grade、ROE SCIENTIFIC INC、カタログ番号6F2941)；酢酸エチル(MS Grade、Fisher Scientific Inc.の製品、カタログ番号166828)；1.5mlのEPチューブ。
(＋)IMM-H014、(－)IMM-H014、(±)IMM-H014；メタノール(MS Grade、Fisher Scientific Inc.の製品、カタログ番号179097)；アセトニトリル(MS Grade、Fisher Scientific Inc.の製品、カタログ番号177802)；脱イオン水(Hangzhou Wahaha Co.)；ギ酸(HPLC Grade、ROE SCIENTIFIC INC、カタログ番号6F2941)；酢酸エチル(MS Grade、Fisher Scientific Inc.の製品、カタログ番号166828)；1.5mlのEPチューブ。
2.3 実験動物
36匹の雄SDラット(200±10g)をBeijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.から購入した。ラットを、23±2℃の温度にて、かつ、55±5%の相対湿度で、毎日12時間にわたり光照射がある、中国医学科学院薬物研究所内の動物舎のクリーンルームで飼育した。実験動物は、自由に水を飲み、かつ、食餌ができ、そして、2週間の順化後に、実験を開始した。研究は、中国医学科学院薬物研究所の動物実験倫理委員会によって作成された規則に従う。
36匹の雄SDラット(200±10g)をBeijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.から購入した。ラットを、23±2℃の温度にて、かつ、55±5%の相対湿度で、毎日12時間にわたり光照射がある、中国医学科学院薬物研究所内の動物舎のクリーンルームで飼育した。実験動物は、自由に水を飲み、かつ、食餌ができ、そして、2週間の順化後に、実験を開始した。研究は、中国医学科学院薬物研究所の動物実験倫理委員会によって作成された規則に従う。
3. 動物実験
3.1 動物の割り付けと投与
36匹の雄SDラットを無作為に、各群6匹の、(＋)IMM-H014胃内投与群、(－)IMM-H014胃内投与群、及び(±)IMM-H014胃内投与群を含めた6つの群に分け、含むのに分けた。投与投薬量は50mg/kgであった。ラットは、投与前12時間にわたり断食状態にしたが、自由に水を飲むことはできた。
3.1 動物の割り付けと投与
36匹の雄SDラットを無作為に、各群6匹の、(＋)IMM-H014胃内投与群、(－)IMM-H014胃内投与群、及び(±)IMM-H014胃内投与群を含めた6つの群に分け、含むのに分けた。投与投薬量は50mg/kgであった。ラットは、投与前12時間にわたり断食状態にしたが、自由に水を飲むことはできた。
3.2 投与溶液の調製
100mgのIMM-H014原料薬物を秤量し、そして、20mlの精製水で溶解して、5mg/mlの投与溶液を調製し、そしてそれを、体重に従って単回投与で投与した(1ml/100g)。
100mgのIMM-H014原料薬物を秤量し、そして、20mlの精製水で溶解して、5mg/mlの投与溶液を調製し、そしてそれを、体重に従って単回投与で投与した(1ml/100g)。
3.3 血漿サンプルの採取
投与前0時間、並びに投与後5分、10分、30分、1時間、2時間、3時間、5時間、8時間、12時間及び24時間にて、250μLの血液を眼底静脈叢から採取し、10μLのヘパリンナトリウムを含有したEPチューブに入れ、4000rpmにて10分間遠心分離し、次に、血漿を得、－80℃にて冷蔵庫内に保存した。
投与前0時間、並びに投与後5分、10分、30分、1時間、2時間、3時間、5時間、8時間、12時間及び24時間にて、250μLの血液を眼底静脈叢から採取し、10μLのヘパリンナトリウムを含有したEPチューブに入れ、4000rpmにて10分間遠心分離し、次に、血漿を得、－80℃にて冷蔵庫内に保存した。
4. 解析法
4.1 溶液の調製
4.1.1 原液の調製
5mgのIMM-H014対照サンプルを正確に秤量し、5ml容のメスフラスコに入れ、そして、それをメタノールで溶解し、そして、段階基準(the degree scale)へと希釈し、1.0mg/mlの対照原液を調製した。
4.1 溶液の調製
4.1.1 原液の調製
5mgのIMM-H014対照サンプルを正確に秤量し、5ml容のメスフラスコに入れ、そして、それをメタノールで溶解し、そして、段階基準(the degree scale)へと希釈し、1.0mg/mlの対照原液を調製した。
4.1.2 内部標準希釈標準溶液の調製
5.0mgのカルバマゼピン対照サンプルを、正確に秤量し、5mL容のメスフラスコに入れ、そして、それを、メタノールを加えることによって溶解し、段階基準にて一定体積に管理して、1.0mg/mLの濃度を有する内部標準原液を調製した。50μLの原液を、正確にピペットで計り取り、10mL容のメスフラスコに入れ、そして、それを、メタノールを加えることによって希釈し、段階基準にて一定体積に管理して、5.0μg/mLの濃度を有する内部標準濃縮原液を調製した。5.0mLの内部標準濃縮原液を、正確にピペットで計り取り、50mL容のメスフラスコに入れ、そして、それを、メタノールを加えることによって段階基準にて一定体積に管理して、500ng/mLの濃度を有する内部標準希釈標準溶液を調製した。
5.0mgのカルバマゼピン対照サンプルを、正確に秤量し、5mL容のメスフラスコに入れ、そして、それを、メタノールを加えることによって溶解し、段階基準にて一定体積に管理して、1.0mg/mLの濃度を有する内部標準原液を調製した。50μLの原液を、正確にピペットで計り取り、10mL容のメスフラスコに入れ、そして、それを、メタノールを加えることによって希釈し、段階基準にて一定体積に管理して、5.0μg/mLの濃度を有する内部標準濃縮原液を調製した。5.0mLの内部標準濃縮原液を、正確にピペットで計り取り、50mL容のメスフラスコに入れ、そして、それを、メタノールを加えることによって段階基準にて一定体積に管理して、500ng/mLの濃度を有する内部標準希釈標準溶液を調製した。
4.1.3 一連の濃度を有する検量線希釈標準溶液及び品質管理標準溶液の調製
100μLの1.0mg/mL IMM-H014原液を、正確にピペットで計り取り、10mL容のメスフラスコに入れ、そして、それを、メタノールで希釈して、10μg/mLのIMM-H014の溶液を調製した。その溶液を、メタノールを用いて段階的に希釈して、2、5、10、50、100、500、1000、2000、4000及び5000ng/mlの濃度を有するIMM-H014シリーズの標準溶液を調製する。
1.0mg/mlのIMM-H014原液を、正確にピペットで計り取り、そして、メタノールで段階的に希釈して、5、100及び4000ng/mlの濃度を有する定量的対照標準溶液を調製した。
100μLの1.0mg/mL IMM-H014原液を、正確にピペットで計り取り、10mL容のメスフラスコに入れ、そして、それを、メタノールで希釈して、10μg/mLのIMM-H014の溶液を調製した。その溶液を、メタノールを用いて段階的に希釈して、2、5、10、50、100、500、1000、2000、4000及び5000ng/mlの濃度を有するIMM-H014シリーズの標準溶液を調製する。
1.0mg/mlのIMM-H014原液を、正確にピペットで計り取り、そして、メタノールで段階的に希釈して、5、100及び4000ng/mlの濃度を有する定量的対照標準溶液を調製した。
4.1.4 マトリックス検量線サンプルと品質管理サンプルの調製
それぞれ2、5、10、50、100、500、1000、2000、4000及び5000ng/mlにて50μlの標準溶液を正確にピペットで計り取り、30℃にて窒素ガスを吹きかけることによって乾燥させ、そして、それに50μlのラットブランク血漿を加えた。その混合物を3分間かき回した後に、マトリックス検量線サンプルを調製した。
それぞれ2、5、10、50、100、500、1000、2000、4000及び5000ng/mlにて50μlの標準溶液を正確にピペットで計り取り、30℃にて窒素ガスを吹きかけることによって乾燥させ、そして、それに50μlのラットブランク血漿を加えた。その混合物を3分間かき回した後に、マトリックス検量線サンプルを調製した。
それぞれ5、100及び4000ng/mlにて50μlの標準溶液を正確にピペットで計り取り、30℃にて窒素ガスを吹きかけることによって乾燥させ、そして、それに50μlのラットブランク血漿を加えた。その混合物を3分間かき回した後に、品質管理サンプルを調製した。
4.2 サンプルの前処理
50μLの血漿サンプルを正確にピペットで計り取り、そして、それに10μLの内部標準希釈標準溶液を加えた後に、それらを1.5ml容のEPに入れた。それらを30秒間かき回し、500μlの酢酸エチルを加えた。次に、それらを、5分間かき回し及び振盪し、そして、4℃にて10分間維持した後に、13000rにて5分間遠心分離した。上清を採取し、そして、30℃でのN2を吹き付けることによって乾燥させた。残渣を、100μLの最初の移動相を加えることによって再溶解し、13000rにて5分間遠心分離し、そして、上清を測定のためのサンプリングボトル内に移した。
50μLの血漿サンプルを正確にピペットで計り取り、そして、それに10μLの内部標準希釈標準溶液を加えた後に、それらを1.5ml容のEPに入れた。それらを30秒間かき回し、500μlの酢酸エチルを加えた。次に、それらを、5分間かき回し及び振盪し、そして、4℃にて10分間維持した後に、13000rにて5分間遠心分離した。上清を採取し、そして、30℃でのN2を吹き付けることによって乾燥させた。残渣を、100μLの最初の移動相を加えることによって再溶解し、13000rにて5分間遠心分離し、そして、上清を測定のためのサンプリングボトル内に移した。
4.3 クロマトグラフィーの条件
クロマトグラフ用カラム：Agilent ZORBAX SB C18(2.1×100mm、3.5μm)
移動相A：水(0.1%のギ酸、1mMの酢酸アンモニウム)；移動相B：アセトニトリル(0.1%のギ酸)
カラム温度：35℃；サンプリング量：3μL
溶出：0～2分： 40%から53%のBへ；2～3分： 53%から40%のBへ
クロマトグラフ用カラム：Agilent ZORBAX SB C18(2.1×100mm、3.5μm)
移動相A：水(0.1%のギ酸、1mMの酢酸アンモニウム)；移動相B：アセトニトリル(0.1%のギ酸)
カラム温度：35℃；サンプリング量：3μL
溶出：0～2分： 40%から53%のBへ；2～3分： 53%から40%のBへ
4.4 質量分析の条件
イオン源：ESI；検出モード：陽イオン；乾燥ガスの温度：300 ℃；乾燥ガスの流量：窒素ガス、11L/分；噴霧ガス：窒素、15psi；キャピラリ管電圧：4000V；走査モード：多重反応測定(MRM)；イオン対と関連電圧パラメーターを以下に示す：
イオン源：ESI；検出モード：陽イオン；乾燥ガスの温度：300 ℃；乾燥ガスの流量：窒素ガス、11L/分；噴霧ガス：窒素、15psi；キャピラリ管電圧：4000V；走査モード：多重反応測定(MRM)；イオン対と関連電圧パラメーターを以下に示す：
5. データ処理
サンプルを採取した後に得られた元データを、MassHunter QQQデータ処理ソフトウェアを採用することによって処理して、血中薬物濃度データを得；次に、薬物動力学パラメーターをDASソフトウェアによって計算し；最後に、SPSSソフトウェアを採用することによって、t-検定を実施して、同じ光学活性度を有するが、異なったバッチの薬物、及び異なった光学活性度を有する薬物の統計的差異があるかどうか比較し、ここで、P<0.05を有意差を有すると見なした。
サンプルを採取した後に得られた元データを、MassHunter QQQデータ処理ソフトウェアを採用することによって処理して、血中薬物濃度データを得；次に、薬物動力学パラメーターをDASソフトウェアによって計算し；最後に、SPSSソフトウェアを採用することによって、t-検定を実施して、同じ光学活性度を有するが、異なったバッチの薬物、及び異なった光学活性度を有する薬物の統計的差異があるかどうか比較し、ここで、P<0.05を有意差を有すると見なした。
試験では、3群のSDラットに、それぞれIMM-H014の単一エナンチオマやラセミ体を胃内投与することによって、ラット体内におけるそれらの薬物動力学特性を試験した。その試験の結果は、胃内投与(－)IMM-H014及び(±)IMM-H014のインビボ暴露レベルが(＋)IMM-H014のものより優れていることを示唆した。
表8 各ラット群の(異常値を除いた)平均薬物動力学パラメーター
Claims (9)
- 左旋性二環式モルホリン及びその医薬的に許容される塩であって、前記左旋性二環式モルホリンの構造が化合物5によって示され、及びその医薬的に許容される塩が構造式(I)を有すること：
- 前記無機酸が、フッ化水素酸、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、酢酸、硫酸、及びリン酸を含み；前記有機酸が、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸、サリチル酸、キナ酸、ショウノウ酸、カンファースルホン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、及びピログルタミン酸を含むことを特徴とする、請求項1に記載の左旋性二環式モルホリン及びその医薬的に許容される塩。
- 前記有機酸が、L-酒石酸、L-ジベンゾイル酒石酸、L-ジ-p-メチルベンゾイル酒石酸、L-酒石酸ジエチル、L-リンゴ酸、L-ショウノウ酸、L-10-カンファースルホン酸、R-(－)-マンデル酸、L-キナ酸、L-アスパラギン酸、L-グルタミン酸、L-ピログルタミン酸、D-酒石酸、D-ジベンゾイル酒石酸、D-ジ-p-メチルベンゾイル酒石酸、D-酒石酸ジエチル、D-リンゴ酸、D-ショウノウ酸、D-10-カンファースルホン酸、S-(－)-マンデル酸、D-キナ酸、D-アスパラギン酸、D-グルタミン酸、及びD-ピログルタミン酸から選択されることを特徴とする、請求項1に記載の左旋性二環式モルホリン及びその医薬的に許容される塩。
- 前記左旋性二環式モルホリン及びその医薬的に許容される塩が、以下の構造：
- 請求項1～4のいずれか一項に記載の左旋性二環式モルホリン及びその医薬的に許容される塩を調製する方法であって、以下のステップ：
b)化合物2をモルホリンと反応させて、化合物3を得；
c)化合物3をキラル酸Yと反応させることによって塩を形成し、そして、塩可溶性の差を利用することによって有機溶媒中で分割を実施して、レボ塩4を得、ここで、前記キラル酸Yは、L-酒石酸、L-ジベンゾイル酒石酸、L-ジ-p-メチルベンゾイル酒石酸、L-酒石酸ジエチル、L-リンゴ酸、L-ショウノウ酸、L-10-カンファースルホン酸、R-(－)-マンデル酸、L-キナ酸、L-アスパラギン酸、L-グルタミン酸、L-ピログルタミン酸、D-酒石酸、D-ジベンゾイル酒石酸、D-ジ-p-メチルベンゾイル酒石酸、D-酒石酸ジエチル、D-リンゴ酸、D-ショウノウ酸、D-10-カンファースルホン酸、S-(－)-マンデル酸、D-キナ酸、D-アスパラギン酸、D-グルタミン酸、及びD-ピログルタミン酸から選択され；
前記有機溶媒は、酢酸エチル、アセトン、メタノール、エタノール及びイソプロパノール、並びに上記溶媒を異なる比で混合することによって得られる溶媒から選択され；レボ鏡像異性体とデキストロ鏡像異性体の%e.e.値は、それぞれ95%超であり；
d)塩基の作用下で塩4が遊離アミンになることを可能にし；
e)任意に、遊離アミン5を酸Xと反応させることによって塩を形成して、式(I)の化合物を得る；ことを含み、
ここで、前記Xの定義は、請求項1～4のいずれか一項に記載のものと同じである、
方法。 - 治療有効量及び/又は予防的有効量の、請求項1～4のいずれか一項に記載の左旋性二環式モルホリン及びその医薬的に許容される塩、並びに任意に、1若しくは複数の医薬的に許容される担体又は賦形剤を含むことを特徴とする医薬組成物。
- 肝臓関連疾患を予防及び/又は治療するための薬剤の調製における、請求項1～4のいずれか一項に記載の左旋性二環式モルホリン及びその医薬的に許容される塩又は請求項5に記載の医薬組成物の使用。
- 前記肝臓関連疾患が、肝臓障害関連疾患及び肝炎関連疾患を含むことを特徴とする、請求項7に記載の使用。
- 前記肝臓関連疾患が、A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎、薬物誘発性肝疾患、アルコール性肝疾患、非アルコール性肝疾患、自己免疫性肝疾患、肝疾患進行によって引き起こされた肝線維症、肝硬変、及び肝不全から選択されることを特徴とする、請求項7に記載の使用。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911190936.4 | 2019-11-28 | ||
| CN201911190936.4A CN112851626B (zh) | 2019-11-28 | 2019-11-28 | 一类左旋双环吗啉，其制备方法、药物组合物和应用 |
| PCT/CN2020/115410 WO2021103749A1 (zh) | 2019-11-28 | 2020-09-15 | 一类左旋双环吗啉及其盐，其制备方法、药物组合物和应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2023508844A true JP2023508844A (ja) | 2023-03-06 |
Family
ID=75995502
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2022532069A Pending JP2023508844A (ja) | 2019-11-28 | 2020-09-15 | 左旋性二環式モルホリン及びその塩、その調製方法、医薬組成物、並びに使用 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20230002343A1 (ja) |
| EP (1) | EP4050004A4 (ja) |
| JP (1) | JP2023508844A (ja) |
| KR (1) | KR20220107036A (ja) |
| CN (1) | CN112851626B (ja) |
| AU (1) | AU2020390812A1 (ja) |
| WO (1) | WO2021103749A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114652692B (zh) * | 2022-04-28 | 2023-09-01 | 长春钻智制药有限公司 | 一种治疗肝病的药物缓释片及其制备方法和用途 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1275961C (zh) * | 2002-12-12 | 2006-09-20 | 中国医学科学院药物研究所 | 光活双环醇及其制备方法和其药物组合物与用途 |
| CN100404527C (zh) * | 2006-03-07 | 2008-07-23 | 河南省科学院质量检验与分析测试研究中心 | 手性4,4＇-二甲氧基-5,6,5＇,6＇-二次甲二氧基联苯-2,2＇-二甲酸衍生物及其制备方法 |
| CN107488162B (zh) * | 2015-10-19 | 2020-09-18 | 中国医学科学院药物研究所 | 一类双环醇类衍生物及其制备和应用 |
-
2019
- 2019-11-28 CN CN201911190936.4A patent/CN112851626B/zh active Active
-
2020
- 2020-09-15 WO PCT/CN2020/115410 patent/WO2021103749A1/zh unknown
- 2020-09-15 AU AU2020390812A patent/AU2020390812A1/en active Pending
- 2020-09-15 KR KR1020227022153A patent/KR20220107036A/ko unknown
- 2020-09-15 US US17/775,402 patent/US20230002343A1/en active Pending
- 2020-09-15 JP JP2022532069A patent/JP2023508844A/ja active Pending
- 2020-09-15 EP EP20892802.8A patent/EP4050004A4/en active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN112851626B (zh) | 2022-09-16 |
| KR20220107036A (ko) | 2022-08-01 |
| EP4050004A1 (en) | 2022-08-31 |
| AU2020390812A1 (en) | 2022-06-30 |
| WO2021103749A1 (zh) | 2021-06-03 |
| CN112851626A (zh) | 2021-05-28 |
| EP4050004A4 (en) | 2023-12-06 |
| US20230002343A1 (en) | 2023-01-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR20180032578A (ko) | 염증 및 암 질환의 치료를 위한 클로로퀸 및 클레미졸 화합물의 용도 | |
| US20120053143A1 (en) | Triacetyl-3-hydroxyphenyladenosine and its use for regulating blood fat | |
| AU2016207118B2 (en) | Diphenyl derivative and uses thereof | |
| CN109432096B (zh) | 盐酸去亚甲基四氢小檗碱在制备预防或治疗酒精性肝病和非酒精性脂肪肝病药物中的应用 | |
| US6420429B1 (en) | Brain targeted low molecular weight hydrophobic antioxidant compounds | |
| CN107488162B (zh) | 一类双环醇类衍生物及其制备和应用 | |
| CN107438613A (zh) | 用于预防或治疗感觉毛细胞死亡的化合物和方法 | |
| CN107963987B (zh) | 一种水苏碱衍生物及其制备方法和在制备治疗心脑血管类疾病的药物中的应用 | |
| EP4215531A1 (en) | Compound for preventing and treating liver diseases and pharmaceutical use thereof | |
| JP2023508844A (ja) | 左旋性二環式モルホリン及びその塩、その調製方法、医薬組成物、並びに使用 | |
| US20160317513A1 (en) | Anti-inflammatory compounds | |
| CN105189446A (zh) | 间苯三酚类衍生物及其在治疗神经退行性疾病中的用途 | |
| JP2020510073A (ja) | デューテトラベナジンの類似体、その調製及び使用 | |
| WO2019134159A1 (zh) | 一种白头翁皂苷b4的直肠粘膜给药制剂及其制备方法 | |
| EP2965765A1 (en) | Use of adelmidrol in the treatment of epithelial dysfunctions | |
| CN114644642A (zh) | 一种噻吩并吡啶化合物的晶型a、制备方法及其药物组合物 | |
| RU2819002C1 (ru) | Левовращающий бициклический морфолин и его соль, способ его получения, его фармацевтическая композиция и применение | |
| JP5698741B2 (ja) | １３ａ−（Ｓ）脱酸チロホリニンの塩、医薬組成物と用途 | |
| CN112457291B (zh) | 苯并硫代吡喃酮类化合物的盐及其制备方法和用途 | |
| CN109384759B (zh) | 一种药物化合物及其制备与用途 | |
| EP3904335A1 (en) | Acetylsalicylic acid derivative and application thereof | |
| CN112294808B (zh) | 盐酸去亚甲基小檗碱乙酸酯在制备预防或治疗药物性肝损伤药物中的应用 | |
| CN114929682B (zh) | 苯并硫代吡喃酮类化合物的盐及其制备方法和用途 | |
| CN111704622B (zh) | 黄烷醇-薄荷烷杂合体及其药物组合物与其制备方法和应用 | |
| KR102566549B1 (ko) | 3성분 프로드럭, 이의 약학적 조성물 및 의약 용도 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20230621 |