JP2023143904A - ヒト化抗ｍｕｃ１＊抗体及び開裂酵素の使用 - Google Patents
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Abstract
【課題】ヒト化及び非ヒト化抗MUCl*抗体及びそれらを作り使用する方法を提供する。【解決手段】縦列反復ドメインを欠いているMUC1アイソフォームの細胞外ドメイン若しくは開裂産物の領域に結合する、ヒト若しくはヒト化抗MUCl*抗体、抗体断片又は抗体様蛋白質を提供する。【選択図】なし
Description
本発明は、ヒト化及び非ヒト化抗MUCl*抗体及びそれらを作り使用する方法に関係する。
本発明は、また、癌の処置のための開裂酵素で形質転換若しくは形質導入された免疫細胞を使用することに関係する。本発明は、また、癌の処置のためのCAR及び他のタンパク質で形質転換若しくは形質導入された免疫細胞を使用することに関係する。
本発明者等は、先に、MUC 1 (SEQ ID NO: l)膜貫通タンパク質の開裂型は、ヒト癌の75%以上の成長を導く成長因子リセプターであることを見出した。
我々が、MUCl*（ムックワンスターと発音する）と呼ぶMUC1の開裂型は、強力な成長因子リセプターである。MUC 1の細胞外領域（以下領域の文言はドメインということもある）の大部分の開裂及び遊離は、活性化リガンド2量体NME1, NME6, NME7, NME7AB, NME7-X1 若しくは NME8の結合サイトをマスクしない。これは、全ての癌の７５％以上で異常発現し、転移性癌の高率でさえ過剰発現するので、抗ガン医薬の理想的な標的である(Mahanta et al. (2008) A Minimal Fragment of MUC 1 Mediates Growth of Cancer Cells. PLoS ONE 3(4): e2054. doi: 10.1371/ journal. pone.0002054;Fessler et al. (2009), "MUC 1 * is a determinant of trastuzumab(Herceptin) resistance in breast cancer cells," Breast Cancer Res Treat.118(1): 113-124)。MUC1開裂後、その細胞外領域の大部分は、細胞表面から隠されている。残った部分は、PSMGFR (SEQ ID NO:2)と呼ばれる主要成長因子リセプター配列の殆ど若しくは全てを含む欠失細胞外領域である。
抗体は、ヒトの疾患の治療のために増加的に利用されている。歴史的には、非ヒト種で生成された抗体、例えば馬抗体、がヒトで治療に使われてきた。より、最近では、異種抗体の拒否反応を避けるために、できるだけ、ヒト配列含むように、加工され若しくは選択されている。ヒト抗体への非ヒト抗体の認識断片を加工する工程は、一般的に、「ヒト化する：humanizing」と呼ばれる。ヒト抗体配列を置き換えるに使われる非ヒト配列の量は、それらが、キメラ化、ヒト化、完全ヒトと呼ばれるかどうかを決定する。
ヒト化若しくは完全ヒト抗体の生成を可能にする互換的な技術手段が存在する。これらの手段には、動物に抗原で免疫するよりむしろ、ヒト抗体若しくは抗体断片のライブラリーをスクリーニングするあるいは標的抗原に結合するようなものを同定することを含む。別のアプローチは、抗体様分子中へ抗体の可変領域を加工処理することである。別のアプローチは、ヒト化動物を免疫化することを含む。本発明は、また、MUCl*の細胞外領域に結合する、本発明者が決定した、抗体認識断片を使ってのこれらのアプローチを包含する。
抗体で患者を処置することに加えて、癌免疫療法は、最近、血液癌の治療に有効であることを示した。一つの癌免疫療法は、CART（キメラ抗原リセプターT細胞）と呼ばれ、T細胞を加工し、その結果、T細胞の癌抗原を認識する細胞外領域を持つ細胞外領域、膜貫通及び細胞質尾部を持つキメラリセプターを発現する (Dai H, Wang Y, Lu X, Han W.(2016) Chimeric Antigen Receptors Modified T-Cells for Cancer Therapy. J NatlCancer Inst. 108(7): djv439)。このようなリセプターは、癌抗原を認識し、T細胞膜貫通及びシグナリング領域にリンクする、単鎖抗体断片(scFv)から構成される。癌関連抗原へのリセプターの結合において、シグナルは、伝わり、T細胞活性化、伝播、癌細胞の標的化された殺滅をもたらす。実際、患者T細胞は、単離され、CARで形質導入され、増殖され、その後、患者へ注入によって戻された。患者のCAR T細胞が癌細胞上の抗原に結合するとき、該CAR T細胞は、増殖し、該癌細胞を攻撃する。この方法の欠点は、多くの癌抗原がある健康組織で発現し、しかし、癌組織で過剰発現するとき、標的抗原を担持する細胞を破滅させるように、患者免疫系を活性化することのリスクである。腫瘍オフ／標的オン効果（off-tumor/on-target effects）のリスクを最小にするためには、癌抗原は、健康組織で発現が最小であることである。
別の癌免疫療法は、BiTEs（２重特異的T細胞関与物：Bi-specific T cell Engagers）。BiTEアプローチは、腫瘍オフ／標的オン効果（off-tumor/on-target effects）のCAR T関連リスクを排除する試みである。CAR Tとは違って、BiTEsは、一般的な抗体ベース治療より、なんら大きなリスクを課さない２重特異的抗体である。しかしながら、癌抗原に結合しそしてブロックする典型的な抗癌抗体と異なり、癌細胞上の抗原へ結合し、同時に、T細胞のような、免疫細胞にある抗原に結合するｋとを指向する。この方法で、BiTEsは、T細胞を癌細胞へリクルートする。BiTEsは、癌関連抗原へ結合すると同時にCD3-イプシロンのようなT細胞表面タンパク質に結合する加工タンパク質である。BiTEsは、癌抗原に結合する治療用モノクローナル抗体のscFvへの抗CD3-イプシロンのように、T細胞抗原に結合する抗体のscFv'sに遺伝子工学的にリンキングさせることにより作られた抗体である(Patrick A. Baeuerle, andCarsten Reinhardt (2009) Bispecific T-cell engaging antibodies for cancertherapy. Cancer Res. 69(12):4941-4944)。
1つの態様では、本願発明は、縦列反復領域が欠けているMUClアイソフォーム若しくは開裂産物の細胞外領域の部位へ結合する非ヒト、ヒト、ヒト化抗MUCl*抗体若しくは抗体断片、若しくは、抗体様タンパク質を志向する。非ヒト、ヒト、ヒト化抗MUCl*抗体若しくは抗体断片、若しくは、抗体様タンパク質は、特異的に以下に結合できる。
(i)PSMGFR領域
(ii)PSMGFRペプチド
(iii)SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQID NO: 620)のアミノ酸配列であるペプチド
(iv)SVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQID NO: 621)のアミノ酸配列であるペプチド
(v)VQLTLAFREGTINVHDVETQFNQY(SEQ ID NO: 622)のアミノ酸配列であるペプチド、若しくは
(vi)SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTIN(SEQ ID NO:623)のアミノ酸配列であるペプチド。
非ヒト、ヒト若しくはヒト化抗体は、IgGl、IgG2、IgG3、IgG4若しくはIgMでありうる。ヒト若しくはヒト化抗体断片、若しくは、抗体様タンパク質は、scFv若しくはscFv-Fcでありうる。
上記における、ヒト若しくはヒト化抗体、抗体断片若しくは抗体様タンパク質は、マウスモノクローナルMN-E6抗体に由来する重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含んでもよい。また、マウスモノクローナルMN-E6抗体に、少なくとも80%、90%、95%若しくは98%の配列同一性を持ちうる。重鎖可変領域は、SEQ ID NO:13に、少なくとも90%、95%若しくは98%の配列同一性を持ちうる。そして、軽鎖可変領域は、SEQ ID NO:66に、少なくとも90%、95%若しくは98%の配列同一性を持ちうる。
上記における、ヒト若しくはヒト化抗体、抗体断片若しくは抗体様タンパク質は、次のような配列をもつ、CDR1、CDR2若しくはCDR3領域へ、少なくとも90%、95%若しくは98％の配列同一性がある、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域に相補性決定領域(CDRs)を含みうる。
CDR1重鎖SEQ ID NO:17
CDR1軽鎖SEQ ID NO:70
CDR2重鎖SEQ ID NO:21
CDR2軽鎖SEQ ID NO:74
CDR3重鎖SEQ ID NO:25
CDR3軽鎖SEQ ID NO:78
上記、ヒト若しくはヒト化抗体、抗体断片若しくは抗体様タンパク質は、マウスモノクローナルMN-C2抗体に由来する重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含みうる。そして、それは、マウスモノクローナルMN-C2抗体への少なくとも80%、90%、95%若しくは98%の配列同一性をもちうる。重鎖可変領域は、SEQ ID NO:119へ、少なくとも90%、95%若しくは98%の、配列同一性をもちうる。そして、軽鎖可変領域は、SEQ ID NO:169へ、少なくとも90%、95%若しくは98%の配列同一性をもちうる。重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の相補性決定領域(CDR)は、少なくとも90%、95%若しくは98%の、以下のような、CDR1、CDR2若しくはCDR3領域への配列同一性をもちうる。
CDR1重鎖SEQ ID NO:123
CDR1軽鎖SEQ ID NO:173
CDR2重鎖SEQ ID NO:127
CDR2軽鎖SEQ ID NO:177
CDR3重鎖SEQ ID NO:131
CDR3軽鎖SEQ ID NO:181
ヒト若しくはヒト化抗体、抗体断片若しくは抗体様タンパク質は、マウスモノクローナルMN-C3抗体に由来する重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含みうる。また、それは、マウスモノクローナルMN-C3抗体へ、少なくとも80%、90%、95%若しくは98%の配列同一性をもちうる。重鎖可変領域は、SEQ ID NO:414へ、少なくとも90%、95%若しくは98%の配列同一性を持ちうる。及び、軽鎖可変領域は、SEQ ID NO:459へ、少なくとも90%、95%若しくは98%の配列同一性を持ちうる。重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の相補性決定領域(CDR)は、以下のような配列のCDR1、CDR2若しくはCDR3領域へ、少なくとも90%、95%若しくは98%の配列同一性をもちうる。
CDR1重鎖SEQ ID NO:418
CDR1軽鎖SEQ ID NO:463
CDR2重鎖SEQ ID NO:422
CDR2軽鎖SEQ ID NO:467
CDR3重鎖SEQ ID NO:426
CDR3軽鎖SEQ ID NO:471
上記、ヒト若しくはヒト化抗体、抗体断片若しくは抗体様タンパク質は、マウスモノクローナルMN-C8抗体に由来する重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含みうる。また、マウスモノクローナルMN-C8抗体に、少なくとも80%、90%、95%若しくは98%の配列同一性を持ちうる。重鎖可変領域は、SEQ ID NO:506へ、少なくとも90%、95%若しくは98%の配列同一性を持ちうる。及び、軽鎖可変領域は、SEQ ID NO:544へ、少なくとも90%、95%若しくは98%の配列同一性を持ちえる。重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の相補性決定領域(CDR)は、少なくとも90%、95%若しくは98%の、以下のような配列のCDRl、CDR2若しくはCDR3領域への配列同一性をもちうる。
CDRl重鎖SEQ ID NO:508
CDRl軽鎖SEQ ID NO:546
CDR2重鎖SEQ ID NO:510
CDR2軽鎖SEQ ID NO:548
CDR3重鎖SEQ ID NO:512
CDR3軽鎖SEQ ID NO:550
別の態様では、本願発明は、ヒト化ラムダ軽鎖若しくはヒト化カッパ軽鎖とペアになって、ヒト化IgG2重鎖若しくはヒト化IgGl重鎖によって表わされる、ヒト化MN-E6の配列で構成された抗MUCl*細胞外領域抗体を志向する。ヒト化IgG2重鎖は、SEQ ID NOS:53でありえ、ヒト化IgGl重鎖は、SEQ ID NO:57でありえ、ヒト化カッパ軽鎖は、SEQ ID NO:108でありえ、また、ヒト化ラムダ軽鎖は、SEQ ID NO:112でありえ、若しくはその90%、95%若しくは98%配列同一性をもちうるものでありえる。
別の態様では、本願発明は、ヒト化カッパ軽鎖若しくはヒト化ラムダ軽鎖とペアになって、ヒト化IgGl重鎖若しくはヒト化IgG2重鎖によって表わされる、ヒト化MN-C2の配列で構成された抗MUCl*細胞外領域抗体を志向する。ヒト化IgGl重鎖MN-C2はSEQ ID NOS:159でありえ、そして、IgG2重鎖はSEQ ID NOS:164でありえ、ラムダ軽鎖はSEQ ID NO:219、カッパ軽鎖はSEQ ID NO:213でありえ、若しくはそれの90%、95%若しくは98%の配列同一性をもちうるものである。
別の態様では、本願発明は、ヒト化ラムダ軽鎖若しくはヒト化カッパ軽鎖とペアになって、ヒト化IgGl重鎖若しくはヒト化IgG2重鎖によって表わされる、ヒト化MN-C3の配列で構成された抗MUCl*細胞外領域抗体を志向する。ヒト化MN-C3 IgGl重鎖はSEQ ID NOS:454でありえ、IgG2重鎖はSEQ ID NOS:456でありえ、ラムダ軽鎖はSEQ ID NO:501でありえ、カッパ軽鎖はSEQ ID NO:503でありえ、若しくはそれの90%、95%若しくは98%の配列同一性を持ちうるものである。
別の態様では、本願発明は、ヒト化ラムダ軽鎖若しくはヒト化カッパ軽鎖とペアになって、ヒト化IgGl重鎖若しくはヒト化IgG2重鎖によって表わされる、ヒト化MN-C8の配列で構成された抗MUCl*細胞外領域抗体を志向する。ヒト化MN-C8 IgGl重鎖はSEQ ID NOS:540でありえ、IgG2重鎖はSEQ ID NOS:542でありえ、ラムダ軽鎖はSEQ ID NO:580でありえ、カッパ軽鎖はSEQ ID NO:582でありえ、若しくはそれの90%、95%若しくは98%の配列同一性を持ちうるものである。
別の態様では、本願発明は、MUC1*へのNMEタンパク質の結合を阻害する、ヒト若しくはヒト化抗MUCl*抗体、抗体断片若しくは抗体様タンパク質を志向する。NMEは、NME1、NME6、NME7AB、NME7-X1、NME7若しくはNME8でありうる。
まだ別の態様では、本願発明は、MUCl*細胞外領域に結合する抗体のCDRsをさらに含んで、リンカーを経て接続している重及び軽鎖可変領域を含む、単一鎖可変断片(scFv)を志向する。CDRは、MN-E6、MN-C2、MN-C3若しくはMN-C8抗体若しくはそれのヒト化抗体に由来しうる。scFvは、SEQ ID NOS:233、235及び237(E6)； SEQ ID NOS:239、241及び243(C2);SEQ ID NOS:245、247及び249(C3);若しくはSEQ ID NOS:251、253及び255(C8)を保持するものでありうる。
まだ別の態様では、本願発明は、縦列反復、リンカー分子、膜貫通領域及び細胞質領域が
欠けているMUC1の細胞外領域へ結合するscFv若しくはヒト化可変領域を含む、キメラ抗原リセプター(CAR)を志向する。単一鎖抗体断片は、以下に結合できる。
欠けているMUC1の細胞外領域へ結合するscFv若しくはヒト化可変領域を含む、キメラ抗原リセプター(CAR)を志向する。単一鎖抗体断片は、以下に結合できる。
(i) MUC1のPSMGFR領域、
(ii)PSMGFRペプチド
(iii)SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQID NO:620) のアミノ酸配列であるペプチド
(iv)SVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQID NO:621)のアミノ酸配列であるペプチド
(v)VQLTLAFREGTINVHDVETQFNQY(SEQ ID NO:622)のアミノ酸配列であるペプチド、若しくは
(vi)SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTIN(SEQ ID NO:623)のアミノ酸配列であるペプチド
上記CARにおいて、上記及び定義された可変領域のうちのいずれかの部分、又はそれのコンビネーションは、CARの細胞外領域で使用されてもよい。CARは、さらに、膜貫通領域、及び免疫系活性化をシグナルする配列モチーフを含む細胞質尾部を含む。細胞外領域は、MN-E6 scFv、MN-C2 scFv、MN-C3 scFv若しくはMN-C8 scFvの、非ヒト若しくはヒト化単一鎖抗体断片で構成されうる。
上記CARでは、細胞外領域が、SEQ ID NOS :233、235若しくは237、MN-C2 scFv(SEQ IDNOS: 239、241若しくは243)、MN-C3 scFv(SEQ ID NOS:245、247若しくは249)又はMN-C8 scFv(SEQ ID NOS:251、253若しくは255) として定義された、MN-E6scFvの非ヒト若しくはヒト化単一鎖抗体断片を含みうる。
上記CARでは、細胞質尾部は、シグナル配列モチーフCD3-zeta、CD27、CD28、4-IBB、OX40、CD30、CD40、ICAm-1、LFA-1、ICOS、CD2、CD5若しくはCD7の1つ以上で構成されうる。
上記CARでは、配列は、CAR MN-E6 CD3z(SEQ ID NOS:295)、CAR MN-E6 CD28/CD3z(SEQ ID NOS:298)); CAR MN-E64-lBB/CD3z(SEQ ID NOS:301); CAR MN-E6 OX40/CD3z(SEQ ID NOS:617); CAR MN-E6CD28/4-lBB/CD3z(SEQ ID NOS:304); CAR MN-E6 CD28/OX40/CD3z(SEQ ID NOS:619); CARMN-C2 CD3z(SEQ ID NOS:607); CAR MN-C2 CD28/CD3z(SEQ ID NOS:609); CAR MN-C24-lBB/CD3z(SEQ ID NOS:611及びSEQ ID NOS:719); CAR MN-C2 OX40/CD3z(SEQ ID NOS:613); CAR MN-C2CD28/4-lBB/CD3z(SEQ ID NOS:307); CAR MN-C2 CD28/OX40/CD3z(SEQ ID NOS:615)若しくはCAR MN-C3 4-lBB/CD3z(SEQ ID NOS:601)でありうる。
別の態様では、CARは、ペプチドを認識する細胞外領域ユニットを持ちうる。ペプチドは、PSMGFR(SEQ IDNO:2)でありうる。ペプチドは、NME7に由来したペプチドでありうる。ペプチドは以下でありうる。
NME7Aペプチド1(A領域):
MLSRKE ALDFH VDHQS;(SEQ ID NO:7);
MLSRKE ALDFH VDHQS;(SEQ ID NO:7);
NME7Aペプチド2(A領域):
SGVARTDASES;(SEQ ID NO:8);
SGVARTDASES;(SEQ ID NO:8);
NME7Bペプチド1(B領域):
DAGFEISAMQMFNMDRVNVE;(SEQ ID NO:9);
DAGFEISAMQMFNMDRVNVE;(SEQ ID NO:9);
NME7Bペプチド2(B領域):
EVYKGVVTEYHDMVTE;(SEQ ID NO:10);及び
EVYKGVVTEYHDMVTE;(SEQ ID NO:10);及び
NME7Bペプチド3(B領域):
AIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFF(SEQ ID NO:11)。
AIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFF(SEQ ID NO:11)。
別の態様では、本願発明は、同じ細胞へ形質転換された異なる細胞外領域ユニットを備えた少なくとも2つのCARを含んでいる構成を志向する。
少なくとも2つのCARは、腫瘍抗原標的認識ユニットがない1つのCARを持ち、別のCARは腫瘍抗原標的認識ユニットがある。本願発明の別の態様では、細胞外領域認識ユニットのうちの1つは、MUCl*細胞外領域に結合しうる。本願発明の別の態様では、細胞外領域認識ユニットのうちの1つは、抗体断片でありえ、そして、他はペプチドであり、それは膜貫通及び シグナルリングモチーフが欠けうる;該ペプチドは単一鎖抗体断片でありえる。本願発明の別の態様では、認識ユニットのうちの1つは、PD-1若しくはPDL-1を結合できる。本願発明の別の態様では、1つの細胞外領域認識ユニットは、MN-E6抗体のscFv、MN-C2抗体のscFv、MN-C3抗体のscFv若しくはMN-C8抗体のscFvからなるグループから選ばる抗MUCl* scFvであり、そして、他は、NME7に由来したペプチド若しくは以下のグループから選ばれたペプチドである。
NME7Aペプチド1(A領域):
MLSRKEALDFHVDHQS;(SEQ ID NO:7)；
MLSRKEALDFHVDHQS;(SEQ ID NO:7)；
NME7Aペプチド2(A領域):
SGVARTDASES;(SEQ ID NO:8)；
SGVARTDASES;(SEQ ID NO:8)；
NME7Bペプチド1(B領域):
DAGFEISAMQMFNMDRVNVE;(SEQ ID NO:9)；
DAGFEISAMQMFNMDRVNVE;(SEQ ID NO:9)；
NME7Bペプチド2(B領域):
EVYKGVVTEYHDMVTE;(SEQ ID NO:10)、及び
EVYKGVVTEYHDMVTE;(SEQ ID NO:10)、及び
NME7Bペプチド3(B領域):
AIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFF(SEQ ID NO:11)。
AIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFF(SEQ ID NO:11)。
別の態様では、本願発明は、縦列反復が欠けているMUCl分子の細胞外領域へ結合する細胞外領域を備えたCARを含む細胞を志向する。別の態様では、本願発明は、MUCl*形質転換若しくは形質導入細胞に結合する、細胞外領域を備えたCARを含む細胞を志向する。CARを含んでいる細胞は、免疫系細胞、好適には、T細胞、ナチュラルキラー細胞(NK)、樹状細胞若しくはマスト細胞とイありうる。
別の態様では、本願発明は、加工された抗体様タンパク質を志向する。
別の態様では、本願発明は、次のものに結合できる、ヒトである抗体若しくは抗体断片のライブラリーをスクリーニングする方法を志向する。
(i)PSMGFRペプチド;
(ii)SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQID NO:620)のアミノ酸配列であるペプチド
(iii)SVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQID NO:621)のアミノ酸配列であるペプチド
(iv)VQLTLAFREGTINVHDVETQFNQY(SEQ ID NO:622)のアミノ酸配列であるペプチド
(v)SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTIN(SEQ ID NO:623)のアミノ酸配列であるペプチド
(vi)NME7タンパク質;若しくは
(vii)NME7タンパク質のペプチド断片。
別の態様では、本願発明は、その病気に苦しむ人に、任意の上記の記述によって抗体を処理することを含む対象患者の病気を治療する方法を志向する。そこでは対象患者は、MUClを異常に発現する。当該病気は、乳癌、卵巣癌、肺癌、結腸癌、胃癌若しくは食道癌のような癌でありうる。
別の態様では、本願発明は、その病気に苦しむ人に、NMEペプチドを投与することを含む対象患者の病気を治療する方法を志向する。そこでは対象患者は、MUClを異常に発現する。
別の態様では、本願発明は、細胞を上記任意の方法若しくは構成による抗体と接触させることを含む幹細胞数を増殖若しくは拡張する方法を志向する。
別の態様では、本願発明は、ヒト化MN-C3若しくはMN-C8抗体、それらの抗体断片若しくは単一鎖抗体で表面を被覆し、そして、該表面への幹細胞を接触させることを含む、表面への幹細胞付着を促進する方法を志向する。
別の態様では、本願発明は、ヒト化MN-C3若しくはMN-C8抗体、それらの抗体断片若しくは単一鎖抗体で、表面を被覆し、該表面へ幹細胞を接触させ、そして、特定の位置に幹細胞を輸送するステップを含む、生体内若しくは生体外で、幹細胞を移送する方法を志向する。
別の態様では、本願発明は、ヒト化MN-C3若しくはMN-C8抗体、それらの抗体断片若しくは単一鎖抗体で、表面を被覆し、該表面へ細胞の混合物と接触させ、そして、幹細胞を単離するステップを含む、幹細胞を単離する方法を志向する。
別の態様では、本願発明は、縦列反復領域が欠けているMUClアイソフォーム若しくは開裂産物の細胞外領域へ結合する抗体に由来した可変領域断片を含むscFvを志向する。可変領域断片は、マウスモノクローナル抗体MN-E6(SEQ ID NO:13と66)若しくはヒト化MN-E6(SEQID NO:39と94)、若しくはMN-E6 scFv(SEQ ID NO:233、235及び237)に由来しうる。若しくは、可変領域断片は、マウスモノクローナル抗体MN-C2(SEQ ID NO:119と169)、若しくはヒト化MN-C2(SEQID NO: 145と195)、若しくはMN-C2 scFv(SEQ ID NO:239、241及び243)に由来しうる。若しくは、可変領域断片は、マウスモノクローナル抗体MN-C3(SEQ ID NO:414と459)、ヒト化MN-C3(SEQ IDNO:440と487)、若しくはMN-C3 scFv(SEQ ID NO:245、247及び249)に由来しうる。若しくは、可変領域断片は、マウスモノクローナル抗体MN-C8(SEQ ID NO:505と544)、ヒト化MN-C8(SEQ IDNO:526と566)、若しくはMN-C8 scFv(SEQ ID NO:251、253、255)に由来しうる。
別の態様では、本願発明は、ヒトに、有効な量の上記scFvを投与することを含む、MUC1若しくはMUCl*陽性癌を持つと診断された、それが疑われた、進展のリスクがある対象の処置法を志向する。
別の態様では、本願発明は、上記scFvを含むscFv-Fc構築物を志向する。scFv-Fcは、二量化しうる。scFv-Fcがモノマーであるように、Fcコンポーネントが変異されうる。該変異は、Fcのヒンジ領域を変異させるか削除し、SEQ ID NO:281、279、285及び287によって表わされるFcでの、F405Q、Y407R、T366W/L368W若しくはT364R/L368R変異若しくはそれらの組合せをつくりだす。
別の態様では、本願発明は少なくとも2つの異なるscFv配列を含むポリペプチドを志向し、そこでは、scFv配列のうちの1つは、縦列反復領域が欠けているMUC1アイソフォーム若しくは開裂産物の細胞外領域へ結合する配列である。該ポリペプチドは以下に結合する。
(i)MUC1のPSMGFR領域;
(ii)PSMGFRペプチド
(iii)SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQID NO:620)のアミノ酸配列であるペプチド
(iv)VQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQ IDNO:621)のアミノ酸配列であるペプチド
(v)VQLTLAFREGTINVHDVETQFNQY(SEQ ID NO:622)のアミノ酸配列であるペプチド、又は
(vi)SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTIN(SEQ ID NO:623)のアミノ酸配列であるペプチド
該ポリペプチドは、T細胞のような免疫細胞、特に、T細胞上のCD3にあるリセプターに結合できる。
別の態様では、本願発明は、上記scFv-Fcと細胞のサンプルを接触させ、該細胞へのscFv-Fcの結合の存在を検知することを含む、MUCl*を異常に発現する細胞の存在を検出する方法を志向する。該細胞は癌細胞でありうる。
別の態様では、本願発明は、対応するMN-E6 scFv-Fc、MN-C2 scFv-Fc、MN-C3 scFv-Fc若しくはMN-C8 scFv-Fcとの、患者からの体標本を接触させるステップを含む、MN-E6、MN-C2、MN-C3若しくはMN-C8の可変領域の部分を含む組成物での処置の適応性に関して対象患者の癌をテストする方法を志向する。
別の態様では、本願発明は、成熟の様々な段階によって、T細胞がMUCl*特異的リセプターを展開する、MUCl*ペプチドに対象からのT細胞を露出し、適したT細胞（アドプテイッドT細胞）を作り出し、拡張し、そして、MUCl*陽性癌を持つと診断された、それが疑われた、進展のリスクがあるドナー患者へ、該アドプテイッドT細胞を投与することを含む、疾病に苦しむ対象患者を治療する方法を志向する。
1つの態様では、本願発明は、癌治療のために、開裂酵素で形質転換若しくは形質導入された免疫細胞に志向する。該癌はMUC1陽性癌でありうる。該免疫細胞はT細胞でありうる。該免疫細胞は、治療される患者に由来しうる。該開裂酵素は、MMP若しくはADAM ファミリーのメンバーでありうる。該開裂酵素は、MMP2、MMP9、MMP3、MMP14、ADAM 17、ADAM 28若しくはADAM TS 16でありうる。
別の態様では、本願発明は、その細胞外領域が、縦列反復が欠けているMUC1分子の細胞外領域へ結合する抗体scFvを含む、CARで形質転換若しくは形質導入された免疫細胞を志向する。
別の態様では、本願発明は、癌治療のために、開裂酵素で形質転換若しくは形質導入された免疫細胞を志向する。該癌はMUC1陽性癌でありうる。該免疫細胞はT細胞でありうる。
該免疫細胞はNK細胞でありうる。該開裂酵素は、縦列反復領域が膜貫通領域から分離されるようにMUC1を開裂する酵素でありうる。そのような開裂酵素は、MMP1、MMP2、MMP3、MMP7、MMP8、MMP9、MMP11、MMP12、MMP13、MMP14、MMP16、ADAM 9、ADAM 10、ADAM 17、ADAM 19、ADAM TS 16、ADAM 28若しくはそれの触媒活性断片が例示されるが、これらに限定されるものでない。該免疫細胞は、開裂酵素の活性化剤でさらに形質転換若しくは形質導入されうる。該開裂酵素は、制限なく、MMP2若しくはMMP9若しくはADAM 17でありえ、及び開裂酵素MMP2及びMMP9の活性化剤は、それぞれMMP14とMMP3でありうる。該開裂酵素をコードする核酸は、誘導可能なプロモーターにリンクされうる。該開裂酵素の発現は、免疫細胞が標的腫瘍細胞への免疫反応をマウントする場合、特異的に生じる事象によって誘導されうる。本発明の1つの態様では、該開裂酵素は、開裂産物が、癌組織において、特異的に、開裂したMUC1を認識する抗体によって、認識されるように、MUC1を開裂する。1つの態様では、開裂したMUC1を特異的に認識する抗体は、T細胞が正常に機能する健康組織に結合するより、癌組織において、少なくとも２倍、癌組織に結合するだろう。
該免疫細胞はNK細胞でありうる。該開裂酵素は、縦列反復領域が膜貫通領域から分離されるようにMUC1を開裂する酵素でありうる。そのような開裂酵素は、MMP1、MMP2、MMP3、MMP7、MMP8、MMP9、MMP11、MMP12、MMP13、MMP14、MMP16、ADAM 9、ADAM 10、ADAM 17、ADAM 19、ADAM TS 16、ADAM 28若しくはそれの触媒活性断片が例示されるが、これらに限定されるものでない。該免疫細胞は、開裂酵素の活性化剤でさらに形質転換若しくは形質導入されうる。該開裂酵素は、制限なく、MMP2若しくはMMP9若しくはADAM 17でありえ、及び開裂酵素MMP2及びMMP9の活性化剤は、それぞれMMP14とMMP3でありうる。該開裂酵素をコードする核酸は、誘導可能なプロモーターにリンクされうる。該開裂酵素の発現は、免疫細胞が標的腫瘍細胞への免疫反応をマウントする場合、特異的に生じる事象によって誘導されうる。本発明の1つの態様では、該開裂酵素は、開裂産物が、癌組織において、特異的に、開裂したMUC1を認識する抗体によって、認識されるように、MUC1を開裂する。1つの態様では、開裂したMUC1を特異的に認識する抗体は、T細胞が正常に機能する健康組織に結合するより、癌組織において、少なくとも２倍、癌組織に結合するだろう。
別の態様では、本願発明は、抗体断片を含むCARで形質転換若しくは形質導入された免疫細胞、及び癌治療のための開裂酵素を志向する。該癌は、MUC1陽性癌でありうる。
該免疫細胞は、T細胞でありうる。T細胞におけるCARの抗体断片は、細胞を、MUCl*陽性腫瘍に仕向けうる。T細胞にけるCARの抗体断片は、その特異的開裂酵素によって開裂された後、MUC1型を認識しうる。該CARの抗体断片は、MN-C2またはMN-E6に由来しうるし、また、該開裂酵素はMMP9、MMP2若しくはADAM 17、又はMMP9、MMP2若しくはADAM 17の活性化型でありうる。該免疫細胞は、開裂酵素の活性化剤でさらに形質転換若しくは形質導入されうる。該開裂酵素、恐らく、MMP2若しくはMMP9若しくはADAM 17、及び、開裂酵素MMP2及びMMP9の活性化剤は、それぞれMMP14とMMP3でありうる。該開裂酵素をコードする核酸は、誘導可能なプロモーターにリンクされうる。該開裂酵素の発現は、免疫細胞が標的腫瘍細胞への免疫反応をマウントする場合、特異的に生じる事象によって誘導されうる。該抗体断片は、開裂酵素がMUC1若しくはMUCl*を開裂する場合に、つくられるMUC1若しくはMUCl*の型を認識しうる。誘導可能なプロモーターによる開裂酵素の発現は、CARの抗体断片が、腫瘍で、MUC1若しくはMUCl*に関与するか結合する場合に、誘導されうる。
該免疫細胞は、T細胞でありうる。T細胞におけるCARの抗体断片は、細胞を、MUCl*陽性腫瘍に仕向けうる。T細胞にけるCARの抗体断片は、その特異的開裂酵素によって開裂された後、MUC1型を認識しうる。該CARの抗体断片は、MN-C2またはMN-E6に由来しうるし、また、該開裂酵素はMMP9、MMP2若しくはADAM 17、又はMMP9、MMP2若しくはADAM 17の活性化型でありうる。該免疫細胞は、開裂酵素の活性化剤でさらに形質転換若しくは形質導入されうる。該開裂酵素、恐らく、MMP2若しくはMMP9若しくはADAM 17、及び、開裂酵素MMP2及びMMP9の活性化剤は、それぞれMMP14とMMP3でありうる。該開裂酵素をコードする核酸は、誘導可能なプロモーターにリンクされうる。該開裂酵素の発現は、免疫細胞が標的腫瘍細胞への免疫反応をマウントする場合、特異的に生じる事象によって誘導されうる。該抗体断片は、開裂酵素がMUC1若しくはMUCl*を開裂する場合に、つくられるMUC1若しくはMUCl*の型を認識しうる。誘導可能なプロモーターによる開裂酵素の発現は、CARの抗体断片が、腫瘍で、MUC1若しくはMUCl*に関与するか結合する場合に、誘導されうる。
別の態様では、本願発明は、チェックポイント阻害剤との組合せで、患者に上記のもののうちのいずれかの免疫細胞を投与することを含む患者の癌を処置する方法を志向する。
これら及び本願発明の他の目的は、以下の詳細な説明、付記された参考文献、図面、及びクレーム、実施例の記述からより完全に理解されうる。
本願発明は、以下の詳細な説明の記述、及び実施例、図面で与えられ、より完全に理解されるうるが、それらは本願発明を限定するものではない。
表1は、生成されテストされた抗MUCl* CARの多くの詳細を示す。各々の示された構築物について、そのCARに割り当てられた数、使用されるプロモーター、シグナル・ペプチド、抗体種、scFvの配列、ヒンジ領域、膜貫通領域、及び各CARで使用されるシグナルするモチーフ、塩基対の数での挿入物の長さ、その分子量及び構築物の長さが表示される。
表2は、ヒトT細胞へ形質導入の後にCARのうちのいくつかのためのサイトカイン・リリース・データを示し、また様々な癌細胞と共培養された。
本願明細書で、「a」「an」は、単一及び複数の対象物の両方を参照するために使用される。
ここに使用されるように、時々、要するに、ポリペプチドは、細胞へ「形質導入されるか形質転換される」こととして示される。
これらのケースでは、細胞へポリペプチドは形質導入するか形質転換することが不可能であるので、ポリペプチド配列をコードする核酸が、細胞に、形質導入されるか形質転換されるということは理解されうる。
これらのケースでは、細胞へポリペプチドは形質導入するか形質転換することが不可能であるので、ポリペプチド配列をコードする核酸が、細胞に、形質導入されるか形質転換されるということは理解されうる。
ここに使用されるように、動物に注入された細胞の数を若しくはそうでなければ文脈的に細胞の数を参照する時、「M」は何百万を指し、また、「K」は何千を指す。
ここに使用されるように、様々なモノクローナル抗体のための交換可能な明示は、「MN-C2」、それは「C2」、「MinC2」又は「MN-C2」と交換可能である;「MN-E6」、それは「E6」、「minE6」又は「MN-E6」で交換可能である;「MN-C3」、それは「C3」、「minC3」又は「MNC3」で交換可能である;そして「MN-C8」、それは「C8」、「minC8」また「MNC8」で交換可能である。
ここに使用されるように、抗体の前に記載された「h」若しくは「hu」は、ヒト化の略語である。
ここに使用されるように、「抗体様」の用語は、それが抗体の部分を含んでいるが、自然界に自然には生じる抗体でないような加工された分子を意味する。例示は包含するが、例えば、CAR(キメラ抗原リセプター)Τ細胞工学及びYlanthiテクノロジーaに制限されるものではない。CAR技術は、身体の免疫系が特定の標的タンパク質若しくは細胞を攻撃するのを指示されるように、T細胞の一部に結合された抗体エピトープを使用する。Ylanthia技術は、標的タンパク質からペプチド・エピトープに結合するためにスクリーニングされる合成ヒトFabsのコレクションである、「抗体様」ライブラリーから成る。その後、それらが抗体に似ているように、選択されたFab領域が、足場かフレームワークへ加工処理がなされうる。
ここに使用されるように、「PSMGFR」は、SEQ ID NO:2によって同定されるMUC1成長因子リセプターの一次配列のための略語である。6つのアミノ酸配列と混同するべきではない。「PSMGFRペプチド」若しくは「PSMGFR領域」は、MUC1成長因子リセプター(SEQ ID NO: 2)の一次配列を具体化するペプチドか領域を指す。
ここに使用されるように、“MUCl*”細胞外領域は、主としてPSMGFR配列(GTINVHDVETQFNQ YKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGA(SEQID NO:2))によって定義される。MUC1開裂の正確なサイトは、それを切り取る酵素に依存し、開裂酵素が細胞タイプ、組織タイプ若しくは細胞の分化時間に依存して変化し、MUCl*細胞外領域の正確な配列は、N-端末で変わりうる。
他の略したアミノ酸配列は、SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQID NO:620)若しくはSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQ YKTEAASRY(SEQ IDNO:621) を含みうる。
ここに使用されるように、用語「PSMGFR」は、GTINVHDVETQFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGA(SEQ ID NO:2)として述べられるようなMUC1成長因子リセプターの一次配列の頭文字である。この点では、「N-10PSMGFR」、「N-15 PSMGFR」若しくは「N-20 PSMGFR」でのような「N-数」は、PSMGFRのN-端末で削除されたアミノ酸残基の数を指す。同様に「C-10 PSMGFR」、「C-15 PSMGFR」若しくは「C-20 PSMGFR」でのような「C-数」は、PSMGFRのC-端末で削除されたアミ酸残基の数を指す。
ここに使用されように、MUCl*細胞外領域は、縦列反復領域が欠けているMUC1タンパク質の細胞外の部分を指す。ほとんどの場合、MUCl*は、MUCl*部分が、縦列反復、膜貫通領域及び細胞質尾部を欠く、短い細胞外領域から成る、開裂産物である。恐らく1つを超える酵素によってそれを開裂されうるように見えるので、MUC1の開裂の正確な位置は知られていない。MUCl*細胞外領域は、ほとんどのPSMGFR配列を含むが、さらに10-20のN-末端アミノ酸があってもよい。
ここに使用されるように、「配列同一性」は、同族のペプチドの機能が参照ペプチド若しくは核酸と同じであるような、核酸若しくはアミノ酸の参照配列が特定のポリペプチド若しくは核酸の配列において相同を意味する。そのような相同は、2つの配列が90%、95%、若しくは98％同一であるときに、なお、結合若しくは他の生物学的活性において同じ機能を保持するほど、参照ペプチドと非常に密接でありうる。
ここに使用されるように、「MUC1陽性」細胞は、MUC1、MUC1-Y若しくはMUC1-Z若しくは他のMUC1バリアントのための遺伝子を発現させる細胞を指す。
ここに使用されるように、「MUC1陰性」細胞は、MUC1のための遺伝子を発現させない細胞を指す。
ここに使用されるように、「MUCl*陽性」細胞は、MUC1のための遺伝子を発現させる細胞を指す。そこでは、その遺伝子の発現されたタンパク質は、縦列反復が欠けている膜貫通型タンパク質であって、それらは翻訳後修飾、開裂、選択的スプライシング若しくは縦列反復が欠けているMUC1タンパク質で細胞を形質転換するか形質導入することの結果でありうる。
ここに使用されるように、「MUCl*陰性」細胞は、MUClのための遺伝子を発現する若しくは発現しないかもしれないが、縦列反復が欠けているMUCl膜貫通型タンパク質を発現しない細胞を指す。
ここに使用されるように、「MUCl陽性」癌細胞は、MUClの遺伝子を過剰発現する、異常なパターンでMUClを発現する癌細胞を指し、そこではその発現は、頂点の限界には制限されず、及び/又は縦列反復が欠けているMUClを発現する。
ここに使用されるように、「MUCl陰性」癌細胞は、MUClのための遺伝子を発現する若しくは発現しないかもしれないが、MUClを過剰発現しない、若しくは縦列反復が欠けているMUCl膜貫通型タンパク質を過剰発現しない癌細胞を指す。
ここに使用されるように、「MUCl*陽性」癌細胞は、縦列反復が欠けているMUCl膜貫通型タンパク質を過剰発現する癌細胞を指す。
ここに使用されるように、「MUCl*陰性」癌細胞はMUClのための遺伝子を発現する若しくは発現しないかもしれないが、縦列反復が欠けているMUCl膜貫通型タンパク質を過剰発現しない癌細胞を指す。
癌の治療若しくは予防用のMUCl*抗体(抗PSMGFR)
本願発明者等は、MUCl(SEQID NO: l)膜貫通型タンパク質の開裂型がすべてのヒト癌の75%以上の成長を誘導する成長因子リセプターであることを発見した。MUClの開裂型(本願発明者等はそれをMUCl*(ムックワンスターと発音)と呼んだ)は、強力な成長因子リセプターである。酵素開裂は、MUClの細胞外領域の大部分をリリースする。それは、MUCl*と呼ばれる、欠失細胞外領域、膜貫通領域及び細胞質尾部を含む、残る部分である。MUClの細胞外領域の大部分の開裂及びリリースは、活性化リガンド 二量体NME1、NME6、NME8、NME7-AB、NME7-X1若しくはNME7の結合部位を露出する。細胞増殖分析は、成長を促進する、MUCl*細胞外領域のリガンド誘導二量化であることを示す (図1A-1D)。MUCl*陽性細胞が、二価の「bv」抗MUCl*抗体、一価の「mv」若しくはFab、NM23-H1二量体若しくはNME7-ABで処置された。二価の抗MUCl*抗体は、癌細胞の成長を促進する、しかし、一価Fabは、成長を阻害する。古典的正規曲線は、リガンド誘導二量化が成長を促進することを示す。二量体NM23-H1(aka NME1)は、MUCl*陽性癌細胞の成長を促進し、MUCl発現を抑えるsiRNAはその効果なくす(図1C)。NME7-ABは、さらにMUCl*陽性細胞の成長を促進する(図1D)。
MUCl*は、すべての癌の75%以上で異常に発現され、恐らく転移癌のさらに高い割合で過剰発現されるようであり、MUCl*は、制癌剤の優れた標的である。MUCl開裂の後、ほとんどのその細胞外領域は細胞表面から流される。残りの部分は、一次成長要因リセプター配列、PSMGFR(SEQ ID NO: 2)を少なくとも含む欠失細胞外領域をもつ。PSMGFR配列に結合する抗体、NMEl、NME6、NME8、NME7AB、NME7-X1及びNME7を含むNMEタンパク質のような活性化リガンドの結合は、理想的な治療薬で、MUC1陽性の若しくはMUCl*陽性の癌を処置するか若しくは予防するために使用することができ、スタンド・アロンの抗体として、スタンド・アロンの抗体として、二重特異性抗体、又はCARと呼ぶキメラ抗原リセプター、その後それは免疫細胞へ形質転換若しくは形質導入される、に組み込まれた抗体断片若しくはその可変領域断片として、次に、患者に投与される。
治療用の抗MUCl*抗体は、モノクローナル、ポリクローナル、抗体模倣物、加工抗体様分子、完全抗体若しくは抗体断片でありえる。抗体断片の例は、Fabs、scFv及びscFv-Fcを含むが、これに制限されない。ヒト若しくはヒト化抗体は、癌の治療若しくは予防において使用するために好適である。これらの抗体様分子では、変異は、二量体形成を防ぐ若しくは最小化するように導入されうる。MUCl*機能は、リガンド誘導二量化によって活性化されるので、一価若しくは、2重特異的抗MUCl*抗体が好適である。典型的な結合性分析は、MUCl*のPSMGFRペプチド部分に、NMEl及びNME7-ABが結合することを示す(図2A、2D)。さらに、それらは、10C末端アミノ酸を欠く場合、それらはPSMGFRペプチドに結合しないので、これらの活性化成長因子がMUCl*の膜近位に結合することを示す。同様に、抗MUCl*抗体MN-C2及びMN-E6は、10C末端アミノ酸が存在する場合にのみ、PSMGFRペプチドに結合する(図2B、2C)。抗体、MN-C3及びMN-C8は、それらがPSMGFRペプチドの10C末端アミノ酸の存在に依存しないので、MN-C2及びMN-E6とは異なるエピトープに結合する(図2E、2F)。抗体MN-C2、MN-E6、MN-C3若しくはMN-C8、又はそれらに由来した断片は、スタンド・アロンの抗体として、あるいは二重特異性抗体、BiTEs若しくは免疫細胞へ形質導入されたCARと呼ばれるキメラ抗原リセプターに組み入れて、癌の治療若しくは予防のための患者に投与されうる。NMEl及びNME7-ABの結合を競合的に阻害するMN-C2及びMN-E6、及び他の抗MUCl*抗体は、スタンド・アロンの抗体療法での使用のために好適である。
スタンド・アロンの抗体療法での、又はBiTEまたはCARへの統合のために、使用される、治療用抗MUCl*抗体は、特定の基準に基づいて選択されうる。親抗体は、動物のモノクローナル抗体を生成する典型的な方法を使用して生成されうる。あるいは、それらは、MUC1*ペプチド、PSMGFRペプチド(SEQ ID NO: 2)、SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQID NO: 620);若しくはSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQ IDNO: 621)への結合性に基づき、抗体と抗体断片ライブラリーをスクリーニングすることにより選択されうる。
その後、このように生成され若しくは選択されて得られた抗体若しくは抗体断片は、追加のスクリーンをへてよりさらに選択されうる。例えば、抗体若しくは抗体断片は、MUCl陰性癌細胞若しくは正常組織にではなく、MUCl*陽性癌細胞若しくは組織に結合するそれらの能力に基づいて、もっと好適となる。さらに、抗MUCl*抗体若しくは抗体断片は、それらが幹若しくは先祖細胞へ結合する場合、癌治療治療薬として脱選択されうる。抗MUCl*抗体若しくは抗体断片は、それらがMUCl*への活性化リガンド結合を競合的に阻害する能力を持っている場合に、もっと好適となる。図3A-3Cは、MN-E6及びMN-C2が、MUCl*への活性化リガンドNME1及びNME7の結合を競合的に阻害することを示す。
MUCl陽性癌と診断された、MUCl陽性癌になるリスクを診断された、若しくはMUCl陽性癌を持っていることが疑われる患者の治療で使用される抗MUCl*抗体の選択プロセスは、抗体若しくは抗体断片を選択する次のステップの1つ以上を含む；1) PSMGFRペプチドに結合する;2) N-10 PSMGFRペプチドに結合する;3) 癌細胞に結合する;4) 幹若しくは先祖細胞へ結合しない;そして、5) 競合的に、PSMGFRペプチドへの、二量体NME1若しくはNME7-ABの結合を阻害する。例えば、図3A-3Cは、モノクローナルMN-E6及びMN-C2が、5つの基準すべてを満たし、一方、モノクローナルMN-C3及びMN-C8が、活性化リガンドNME1及びNME7の結合を競合的に阻害しないことを示す(図3C)。しかしながら、MN-C3及びMN-C8に由来した抗体若しくは抗体断片は、これらの方法では、BiTEまたはCARへ組み込まれた時、抗癌剤として等しいく有力であり、免疫細胞の殺滅効果は、活性化リガンドの結合を阻害する能力より重要である。さらに、MN-E6、MN-C2、MN-C3若しくはMN-C8に結合した毒性物質は、有力な癌治療薬である。MUCl*成長因子リセプターがその細胞外領域のリガンド誘導二量化によって活性化されることを確認されたい。したがって、理想的な抗体治療は、MUCl*細胞外領域を二量化するものではない。むしろ、この点に関して、適切な抗体は、Fc部分が、ホモ二量化しないように構築される限り、ラマとラクダで生成されるような一価抗体、Fabs、scFv‘s、単一領域抗体(sdAb)、scFv-Fc、を含む。
FACSスキャンは、抗MUCl*抗体MN-C2及びMN-E6が、MUCl*陰性若しくはMUCl陰性細胞ではおこらないが、MUCl*陽性固形腫瘍癌細胞及びMUCl*形質転換細胞に特異的に結合することを示す。これらの疾病が、血液先祖細胞の最終的に分化することの不可能性によって特徴づけられるので、MNC3とMNC8は、血液癌細胞へも血液先祖細胞へも結合する。したがって、MNC3とMNC8は、スタンド・アロン治療薬、BiTEs若しくはCAR T治療薬として、血液癌の処置に好適である。1例において、ヒト化MN-C2 scFvは、ZR-75-1、aka 1500 、MUC1*陽性乳癌細胞に結合することが示される(図4A-4C)。MN-E6は、MUC1*で形質転換された場合にのみ、MUC1陰性HCT-116結腸癌細胞へ結合することが示された。MN-E6は、さらに、ZR-75-1、aka 1500、MUCl*陽性乳癌細胞のようなMUC1*陽性癌細胞に結合する(図4D-4F)。ELISA、免疫蛍光検査法などのような結合分析はすべて、MN-C2及びMN-E6が、PSMGFRペプチドに結合し、またMUC1陽性癌細胞を生かすことを確認するヒト化抗MUCl*抗体は、さらに、PSMGFRペプチドへ若しくはMUC1陽性癌細胞へ結合するそれらの能力に基づいて選択される。図5は、ヒト化MN-C2 scFvは、約333nM のEC-50で、MUC1*ペプチドPSMGFRへの高い親和性をもって結合することを示す。図6A、6Bの１実施例で示されるように、Fabsのような、ヒト化MN-C2 scFvは、強力にMUC1*陽性癌細胞の成長を阻害する。
MN-E6、MN-C2のFabs若しくはそれらに由来する比較可能な単一鎖変項領域は、生体外若しくは生体内において、MUCl*陽性癌の成長を阻害する。いくつかの例において、抗MUCl*抗体のFabsは、ヒトMUCl*陽性癌の成長を、生体内で、阻害した。1つのケースでは、免疫不全マウスに、ヒト乳腫瘍が注入され、腫瘍移植成功の後に、MN-E6 Fabで処置された。図7Aは、強力に、FabMN-E6が、MUCl*陽性乳癌の成長を阻害したことを示す。90日間、エストロゲンペレットが注入された雌のニュー/ニュー・マウスに、Matrigelと50/50で調合された600万のT47Dヒト乳癌細胞が注入された。少なくとも150 mmA3であり、腫瘍ボリュームの3連続の増加があった腫瘍担持マウスが、処置に選ばれた。動物は、80mg/kgのMN-E6 Fabを皮下に1週当たり2度注入され、また、同じ選択基準に適合する等しい数のマウスは、ビークルを単独で注入された(図7A)。
別の態様では、MN-E6は前立腺癌の成長を停止させることを示された。図7Bは、強力に、FabMN-E6が、MUCl*陽性前立腺癌の成長を阻害したことを示す。オスのNOD/SCIDマウスに、Matrigelと50/50で調合された600万のDU-145ヒト前立腺癌細胞が注入された。少なくとも150 mm3で、腫瘍ボリュームの3連続の増加があった腫瘍担持マウスが、処置に選ばれた。動物は、48時間ごとに160mg/kgのMN-E6 Fabを皮下投与され、また、同じ選択基準に適合する等しい数のマウスは、ビークルを単独で注入された(図7B)。腫瘍は、2人の研究者によって独立して1週当たり2度測定され記録した。統計は、各々に対する0.0001のP値を与える独立した統計家によって盲目的に計算された。抗MUCl*Fabは、乳癌成長及び前立腺癌成長を阻害した。処置はウェイト、骨髄細胞タイプ若しくは数に影響がなかった。有効に、FabMN-E6は、腫瘍の成長を阻害した。一方、対照群の腫瘍は殺処理まで成長し続けた。処置の副作用は観察されなかったし検知されなかった。
FabようにモノマーのMN-E6及びMINER VA-C2の組み換え体が構築された。この場合、MN-E6はヒト化され、また、MINERVA-C2がヒト化された。抗体のヒト化について当業者に知られる多くの方法がある。ヒト化に加えて、ヒト抗体のライブラリーは、PSMGFRに結合する他の完全ヒト抗体を同定するためにスクリーニングされた。図8は、軽鎖がカッパまたはラムダか、可変部分がヒトIgGlかIgG2に融合したかどうかに依存して、ヒト化MN-E6抗MUCl*抗体の発現の異なるレベルを示すELISA分析のグラフである。図9は、MUCl*細胞外領域に由来したPSMGFRペプチドを提示する表面へのMN-E6抗体のヒト化バージョンに対する、親マウスMN-E6抗体の結合を比較するELISA分析のグラフである。図10は、軽鎖がカッパまたはラムダか、可変部分がヒトIgGlかIgG2に融合したかどうかに依存して、ヒト化MN-C2抗MUCl*抗体の発現の異なるレベルを示すELISA分析のグラフである。図11は、MUCl*細胞外領域に由来したPSMGFRペプチドを提示する表面へのMN-C2抗体のヒト化バージョンに対する、親マウスMN-C2抗体の結合を比較するELISA分析のグラフである。図12は、MUCl*細胞外領域に由来したPSMGFRペプチドを提示する表面への、ヒト化単一鎖(scFv)MN-C2 及び/又はMN-E6抗体の結合のELISA分析のグラフである。
scFvと呼ばれる、ヒト化MN-E6可変領域の単一鎖が、遺伝子工学的に加工がなされ、それ
は、抗体(SEQ ID NO: 256と257)のFc部分に接続された。Fc領域は、治療薬として使用の
ための抗体断片に、ある利点を与える。抗体のFc部分は、補体を引き込み、一般的な意味で、それは、免疫系の他の態様を引き出し、標的を単に阻害することを超えて抗腫瘍反応
を増幅されうる。Fc部分の付加は、又、抗体断片の半減期を増加させる(Czajkowsky DM, Hu J, Shao Z andPleass RJ. (2012) Fc-fusion proteins: new developments and future perspectives.EMBO Mol Med. 4(10): 1015-1028).。
は、抗体(SEQ ID NO: 256と257)のFc部分に接続された。Fc領域は、治療薬として使用の
ための抗体断片に、ある利点を与える。抗体のFc部分は、補体を引き込み、一般的な意味で、それは、免疫系の他の態様を引き出し、標的を単に阻害することを超えて抗腫瘍反応
を増幅されうる。Fc部分の付加は、又、抗体断片の半減期を増加させる(Czajkowsky DM, Hu J, Shao Z andPleass RJ. (2012) Fc-fusion proteins: new developments and future perspectives.EMBO Mol Med. 4(10): 1015-1028).。
しかしながら、抗体のFc部分は、ホモ二量化し、それは抗MUCl*抗体ベースの治療薬の場合には、MUCl*リセプターのリガンド誘導二量化が成長を促進するので、最適でない。図13 Bで見ることができるように、ヒト化MN-E6scFv-Fcは、一部分、ジィスルフィド結合により、二量体である。したがって、二量体形成に抵抗するFc領域の変異は、抗MUCl*抗癌治療薬のために好適である。Fc変異体を2量体への抵抗性にするFc領域における変異及びヒンジ領域の欠失〔いくつかの図ではhingeless（ヒンジがない）はdelta hinge(デルタヒンジ)若しくはDhinge(ディヒンジ)と呼ばれSEQ ID NO:288と289が例示される〕がなされた。モノマーのscFv-Fc融合タンパク質を作るために、次の変異がCH3領域でなされた:Y407R(SEQ ID NO: 278と279)、F405Q(SEQ ID NO: 280と281)、T394D(SEQ ID NO:282と283)、T366W/L368W(SEQ ID NO: 284と285)、T364R/L368R(SE ID NO: 286と287)。図14は、非還元ゲルでの精製MN-E6 scFv-Fc融合タンパク質のSDS-PAGE特性の写真を示す、そこではMN-E6に融合されたFc部分は、野生型(wt)か、以下のように変異させた):A) F405Q、Y407R、T394D;B) T366W/L368W、T364R/L368R、T366W/L368W若しくはT364R/L368R。Fc変異体F405Q、Y407R、T366W/L368W、T364R/L368R、T366W/L368W及びT364R/L368Rはすべて、二量体形成よりモノマーを指向した。図15は、プロテインAアフイニティカラムでの、低IgG FBSにおいて成長したMN-E6scFv-Fc Y407Q融合タンパク質の精製にFPLCトレースを示す。A)は、通過物のトレースである。B)は、溶出物のトレースである。タンパク質は、S200カラムでのサイズ排除によってさらに精製した(C)。(D)は、どの分画がモノマーの優位を持っていたか示すSDS-PAGEゲルの写真である。図16は、非還元ゲル上の精製MN-E6 scFv-Fc変異体融合タンパク質のSDS-PAGE特性の写真を示し、MN-E6 scFvに接合したFc部分は、野生型(wt)又はFcのヒンジ領域の除去、「DHinge」、による若しくはFcのヒンジ領域の除去とY407R変異を担持した変異をなされた。Fc変異体は、すべて、二量体形成よりモノマーを指向した。示された変異のための参照構築物アミノ酸配列はSEQ ID NO:273である。他の関連配列は、SEQ ID NOS:289と279である。図17A及び図17Bは、それがモノマーであることを示している、MN-E6 scFv-Fcヒンジレス変異体の大規模発現と精製の非還元SDS-PAGE特性の写真を示す。MN-E6 scFv-Fcヒンジレス変異体の、FPLC特性及び精製は示される(図17C)。図18A-18Cは、非還元ゲル(図18A)若しくは還元ゲル(図18B)上での、精製MN-C3scFv-Fc融合タンパク質のSDS-PAGE特性の写真を示す。タンパク質はサイズ排除によって精製した。FPLCトレースが示される(図18C)。図19A-19Bは、Fc部分が、野生型又は排他的にモノマーである若しくは好む変異体である、scFv-Fc、scFv、MN-C3若しくはMN-E6 Fabsの天然ゲルの写真を示す。天然ゲルは、Y407R Fc変異体(図19A)及びダブル変異体Y407R、欠失ヒンジ(図19B)が、最上に、二量体を越えてモノマーを指向した。タンパク質が、典型的な使用濃度よりはるかに高い濃度でゲルに載せられることに注意がいる。他のFc変異体の二量体形成は、単に充填濃度が非常に高いという事実を反映するものである。
ある変異若しくは欠失は、高濃度でゲルに充填された時でさえ、二量体形成に抵抗するとうほど非常に有効だった(図14A、14B)。Y407R変異は、二量体scFv-Fcのほとんど純粋な集合をもたらした(図10)。同様に、Fcのヒンジ領域の欠失は、二量体よりむしろモノマーである融合タンパク質をもたらした。変異のコンビネーションは、二量体形成のより有効な抵抗をもたらしうる(図16及び17)。これら及びそれの他の変異及びそれらのコンビネーションは、scFvのようなCH2-CH3(SEQ ID NO: 274と275)及びCH3(SEQ ID NO: 276と277)融合タンパク質へ、若しくはscFvのようなヒンジレスFc融合タンパク質で導入され、二量化を排除する若しくは最小化することが示された。
親マウスモノクローナル抗体のように、単鎖構築物、scFv’s、scFv-Fc融合体若しくはscFv-Fc変異体と、同様に、ヒト若しくはヒト化抗体は、特異的に合成MUCl*ペプチドに結合する(図20-22)。図23は、ヒト化MN-E6scFv-Fcデルタヒンジ、akA-Dhinge若しくはhingeless、及びMN-E6 scFvの、MUCl*ペプチドPSMGFRへの結合を定量するELISA分析のグラフを示す。
ここで記述されたヒト若しくはヒト化抗MUCl*抗体断片は、MUCl及びMUCl*陽性癌細胞に結合する。図24は、ヒト化MN-C2 scFv若しくはMN-E6 scFvが、特異的に、同一の濃度依存のやり方で、MUCl*陽性乳癌細胞に結合する、免疫蛍光検査法実験の写真を示す。A～G：示された濃度でT47D乳癌細胞へ結合するhuMN-C2scFv。H～N：蛍光ラベル化scFv及びDAPIを示す。O～U：示された濃度でT47D乳癌細胞へ結合するhuMN-E6 scFv。V～B'：蛍光ラベル化scFv及びDAPIを示す。C‘は、第2抗体コントロールである。
抗MUCl*抗体可変領域断片、scFv’s、scFv-Fc及びscFv-Fc変異体は、MUCl *陽性癌細胞への結合に加えて、MUCl陽性癌細胞の成長を阻害した。図25A-25Lは、通常培地若しくはヒト化MN-E6 scFvの存在下で、培養された、MUCl*陽性乳癌細胞の写真を示す。写真は、500 μg/mLでさらに大きな結果をもたらし、5μg/mLのMN-E6 scFv によるMUCl*陽性細胞の殺滅及び／又は増殖阻害を示す。図6A-26Lは、通常培地中で若しくはヒト化MN-E6scFv-Fc Dhinge、それはhingeless若しくはデルタヒンジ変異体である、の存在において培養された、MUCl*陽性乳癌細胞の写真を示す。写真は、100 μg/mLのさらに大きな結果50 μg/mLで大きな結果をもたらし、5μg/mLのhMN-E6 scFv-Fc DhingeによるMUCl*陽性細胞の殺滅及び／又は増殖阻害を示す。殺滅及び(または)MUCl*の増殖阻害を示す。図27は、図25と26の蛍光イメージの画像分析のグラフを示す。イメージJは、ヒト化MN-E6scFv若しくはMN-E6 scFv-Fcデルタヒンジ(akA-Dhinge)での、96時間処置の後に残存する細胞数の量を計るために使用された。分析ソフトウェアは、各写真の細胞の数の量を計るために、ピクセル蛍光強度及びピクセルカウンテイングを使用する。分析は、全イメージ512X512ピクセル、8ビットイメージで行なわれた。比較のために、マウスモノクローナルMN-E6 Fabの阻害も分析された。
これらのデータは、ヒト若しくはヒト化MN-E6抗体若しくは抗体断片、Fab、MN-E6 scFv若しくはhuMN-E6 scFv-Fcmutは、MUCl若しくはMUCl*陽性癌と診断された、MUCl若しくはMUCl*陽性癌になるリスクを診断された、若しくはMUCl若しくはMUCl*陽性癌を持っていることが疑われる患者に投与されうる、効果的な抗癌剤であることを示す。
これらの特定の実施例において、抗体断片若しくはscFvに融合された二量化抵抗性Fcは、huMN-E7 scFvである。しかしながら、二量化を除去するか最小化する、Fc領域変異若しくはそれのコンビネーションのうちのどれでも、MN-E6、MN-C2、MN-C3、MN-C8若しくは他の抗体であってそれが癌細胞または組織に存在するので、MUCl*に選択的に結合することが同定された抗体の、可変領域断片若しくは単一鎖構築物に融合されうる。さらに、これらの抗体のFabsは、癌治療剤として使用されうる。1つの態様で、MUCl若しくはMUCl*陽性癌と診断された、MUCl若しくはMUCl*陽性癌になるリスクを診断された、若しくはMUCl若しくはMUCl*陽性癌を持っていることが疑われる患者は、有効な量のヒト若しくはヒト化MN-E6 scFv、MN-C2 scFv、MN-C3 scFv若しくはMN-C8 scFvで処置可能である。別の態様で、MUCl若しくはMUCl*陽性癌と診断された、MUCl若しくはMUCl*陽性癌になるリスクを診断された、若しくはMUCl若しくはMUCl*陽性癌を持っていることが疑われる患者は、有効な量のヒト若しくはヒト化MN-E6 SCFV-FCY407R及びMN-C2 SCFV-FCY407R及びMN-C3 SCFV-FCY407Rで処置可能である。さらに別の態様で、MUCl若しくはMUCl*陽性癌と診断された、MUCl若しくはMUCl*陽性癌になるリスクを診断された、若しくはMUCl若しくはMUCl*陽性癌を持っていることが疑われる患者は、有効な量のヒト若しくはヒト化MN-E6scFv-Fc mutantDhinge、MN-C2 scFv-Fc mutantDhinge、MN-C3 scFv-Fc mutantDhinge若しくはMN-C8 scFv-Fc mutantDhingeで処置可能である。もっと別の態様で、MUCl若しくはMUCl*陽性癌と診断された、MUCl若しくはMUCl*陽性癌になるリスクを診断された、若しくはMUCl若しくはMUCl*陽性癌を持っていることが疑われる患者は、有効な量のヒト若しくはヒト化MN-E6scFv-Fc mutantY407R-Dhinge、MN-C2 scFv-Fc mutantY407R-Dhinge、MN-C3 scFv-Fc mutantY407R-Dhinge若しくはMN-C8 scFv-Fc mutantY407R-Dhingeで処置可能である。発明の1つの態様は、MUCl若しくはMUCl*陽性癌と診断された、MUCl若しくはMUCl*陽性癌になるリスクを診断された、若しくはMUCl若しくはMUCl*陽性癌を持っていることが疑われる患者を処置する方法に関し、ここで該患者は、有効な量のモノマーのMN-E6 scFv、MN-C2 scFv、MN-C3 scFv、MN-C8 scFv、若しくはMN-E6scFv-Fc及びMN-C2 scFv-Fc及びMN-C3 scFv-Fc及びMN-C8 scFv-Fcを投与され、ここで抗体様タンパク質のFc部分は、二量体形成抵抗性に変異された。
ヒト化
MUCl*細胞外領域へ結合する、ヒト化抗体若しくは抗体断片若しくは完全ヒト抗体は、治療の使用のために好適である。抗体のヒト化のためにここに記述された技術は、当業者に知られていた様々な方法のうちほんの少数にすぎない。本発明は、抗体をヒト化するために使用されるそのような技術によって制限されることが目的ではない。
ヒト化とは、その結合特異性及び親和性を変更せずに、治療用抗体(通常マウスモノクローナル抗体)の非ヒトの領域をヒトものに取り替える過程をいう。ヒト化の主なゴールは、ヒトに投与された時、治療用モノクローナル抗体の抗原性を減少させることである。別個の3つのタイプのヒト化が可能である。第１は、キメラ抗体が、抗体の非ヒトの定常領域をヒト定常領域に取り替えることにより作られる。そのような抗体は、マウスFab領域を含み、またヒト配列の約80-90%を含む。第２は、ヒト化抗体は、ヒトCDRを交換して、ヒト抗体の可変領域にマウスCDR領域(結合特異性に関与する領域)を接合することにより作られる（CDR接合法）。そのような抗体は、ヒト配列の約90-95%を含む。第３に、そて最後であるが、完全ヒト抗体(100%のヒト配列)が、ファージディスプレイによって、そこでは、ヒト抗体のライブラリーが、抗原特異的ヒト抗体をスクリーニングする、又はヒト抗体を発現している遺伝子組み換えのマウスに免疫することによって作成されうる。
抗体をヒト化するための一般的な技術は、ほぼ以下のように実行される。モノクローナル抗体が、ホスト動物、典型的にはマウス、で生成される。その後、モノクローナル抗体は、標的に結合する親和性と特異性のためにスクリーニングされる。一旦、所望の効果があり、所望の特性をもつモノクローナル抗体が同定されれば、それの配列が決定される。その後、動物に生成された抗体の配列は、その動物抗体に最も相同性をもつ配列のヒト抗を見出すために、多くのヒト抗体の配列とアラインされる。生化学技術は、ヒト化抗体配列及び動物抗体配列をともに貼り付けるために使用される。典型的には、非ヒトCDRは、非ヒト抗体に対して最も高い相同性を持っているヒト抗体へ接合される。このプロセスは、抗体または複数抗体のどれが、所望の親和性と特異性を持っているかを同定するためにテストされる必要のある多くの候補ヒト化抗体を生成可能である。
一旦、ヒト抗体若しくはヒト化抗体が生成されたならば、scFv若しくはscFv-Fcのような可変領域を含む単一鎖分子のような抗体様化合物、完全抗体、又はFab断片として使用のために修飾される。ある場合には、抗体のFc部分を持っていることが望ましイ。若しくは
、抗体様分子は、それが二量化しないように変異された抗体様分子若しくは抗体Fc部分をもつことが好適である。
、抗体様分子は、それが二量化しないように変異された抗体様分子若しくは抗体Fc部分をもつことが好適である。
非ヒトの種で生成された抗体へヒト配列を導入する方法に加えて、完全ヒト抗体は、抗原のペプチド断片で、ヒト化抗体ライブラリーをスクリーニングすることにより得ることができる。MN-E6若しくはMN-C2のように機能する完全ヒト抗体は、PSMGFR N-10ペプチドの配列をもつペプチドでヒト抗体ライブラリーをスクリーニングすることにより生成される。MN-C3若しくはMN-C8のように機能する完全ヒト抗体は、PSMGFR C-10ペプチドの配列があるペプチドでヒト化抗体ライブラリーをスクリーニングすることにより生成される。
ヒト化抗MUCl*抗体は、マウスモノクローナル抗体MN-E6、MN-C2、MN-C3及びMN-C8の配列に基づいて生成された。本発明の1つの態様では、MUCl*陽性癌をもつと診断された患者が、有効な量のヒト化MN-E6、MN-C2、MN-C3若しくはMN-C8で処置された。好ましい態様では、MUCl*陽性癌をもつと診断された患者が、有効な量のヒト化MN-E6若しくはMN-C2で処置された。本発明の別の態様では、MUCl*陽性癌をもつと診断された患者が、有効な量のヒト化一価MN-E6、MN-C2、MN-C3若しくはMN-C8で処置され、そこでは一価とは、相当するFab断片、相当するscFv若しくは相当するscFv-Fc融合物を意味する。好ましい態様では、MUCl*陽性癌をもつと診断された患者が、有効な量のヒト化scFv又はMN-E6若しくはMN-C2のモノマーヒト化scFv-Fcで処置された。MUCl*成長因子リセプターは、その細胞外領域のリガンド誘導二量化によって活性化されるので、、また、抗体のFc部分はホモ二量化するので、Fc部分を含む構築物は、二量化を防ぐ若しくは最小化するように変異させられたFc領域を使用することが望ましい。
MUCl*リセプターの細胞外領域のPSMGFR(SEQ ID NO: 2)ペプチドに結合する抗体は、MUCl*陽性癌の治療若しくは予防に有効である、ので、有力な癌治療薬である。それらは、MUCl*細胞外領域への活性化リガンド二量体NME1(SEQ ID NOS: 3と4)及びNME7(SEQ IDNOS: 5と6)の結合を阻害することが示された。特異的に、それらがリガンド誘導リセプター二量化を阻害する場合、PSMGFR配列に結合する抗MUCl*抗体は、MUCl*陽性癌細胞の成長を阻害する。抗MUCl*抗体のFabsは、動物で、腫瘍増殖を阻害することが実証された。したがって、MUCl*の細胞外領域へ結合する抗体若しくは抗体断片は、癌組織がMUCl*を発現する癌の治療には有益である。
MUC1*のPSMGFR領域へ結合するか、合成PSMGFRペプチドに結合する抗体は好適である。本願発明者等は、MUCl*の細胞外領域へ結合するいくつかのモノクローナル抗体を同定した。このグループの中には、マウスモノクローナル抗体MN-E6、MN-C2、MN-C3及びMN-C8がある。それらの可変領域は配列が決定された；MN-E6 のためにSEQ ID NOS: 12-13及び65-66、MN-C2 のためにSEQ ID NOS: 118-119及び168-169、Mn-C3のために SEQ ID NOS:413-414及び458-459、そしてMn-C8のために SEQ ID NOS:505-506及び543-554。これらの抗体のCDRは、抗体の認識ユニットを構築し、ヒト抗体へ接合する場合、保持されるべきマウス抗体の最も重要な部分である。各マウスモノクローナルCDRの配列は以下のとおりである、軽鎖が後続する重鎖配列:MN-E6 CDR1 (SEQ ID NO: 16-17及び69-70) CDR2(SEQ ID NO: 20-21及び73-74) CDR3(SEQ ID NO: 24-25及び77-78)、MN-C2 CDR1(SEQ ID NO: 122- 123及び172-173) CDR2(SEQ ID NO: 126-127と176-177)CDR3(SEQ ID NO: 130-131と180-181)、MN-C3 CDR1(SEQ IDNO: 417-418と462-463)CDR2(SEQID NO: 421-422と466-467)CDR3(SEQID NO: 425-426と470-471)、MN-C8 CDR1(SEQ ID NO: 507-508と545-546)CDR2(SEQ ID NO: 509-510と547-548)CDR3(SEQ ID NO: 511-512と549-550)。ある場合には、モデリングによって、CDRの3-次元の構造にとって重要であると思われる、フレームワーク領域の部分も、マウス配列から導入される。
モノクローナル抗体MN-E6及びMN-C2は、癌細胞に現われる、MUCl*へのより大きな親和性がある。モノクローナル抗体MN-C3及びMN-C8は、幹細胞に現われる、MUCl*へのより大きな親和性がある。配列アラインメントによって、次のヒト化抗体が、マウスCDRの置換が標的を認識する能力を保持した抗体をもたらすマウス抗体に十分相同あるので選ばれた。マウスMN-E6重鎖可変領域は、ヒトIGHV3-21*03重鎖可変領域(SEQ ID NO: 26-27)に相同、また、軽鎖可変領域は、ヒトIGKV3-11*02軽鎖可変領域(SEQ ID NO:79-80)に相同である。マウスMN-C2重鎖可変領域は、ヒトIGHV3-21*04重鎖可変領域(SEQ ID NO:132-133)に相同、また、軽鎖可変領域は、ヒトIGKV7-3*01軽鎖可変領域(SEQ ID NO:182-183)に相同である。マウスMN-C3重鎖可変領域は、ヒトIGHV1-18*04重鎖可変領域(SEQ ID NO: 427-428)に相同、また、軽鎖可変領域は、ヒトIGKV2-29*03軽鎖可変領域(SEQ ID NO: 472-473)に相同である。マウスMN-C8重鎖可変領域は、ヒトIGHV3-21*04重鎖可変領域(SEQ ID NO:513-514)に相同、また、軽鎖可変領域は、ヒトZ00023軽鎖可変領域(SEQ ID NO:551-552)に相同である。
4つの抗体はすべてヒト化された。そのプロセスは、各抗体のいくつかのヒト化型もたらした。マウス抗体の可変領域に由来したCDRは、相同なヒト抗体可変領域配列へ生化学的に接合された。MN-E6(SEQ ID NOS: 38-39と93-94)、MN-C2(SEQ ID NOS:144-145と194-195)、MN-C3(SEQ ID NOS: 439-440と486-487)及びMN-C8(SEQ ID NOS: 525-526と543-544)のヒト化可変領域は、相同なヒト抗体の可変領域へマウスCDRを接合することにより生成された。ヒト化重鎖可変構築物は、その後、ヒトIgGl重鎖定常領域(SEQ ID NOS:58-59)若しくはヒトIgG2重鎖定常領域(SEQ ID NO: 54-55)のいずれかの定常領域へ接合され、その後、それは、ヒトカッパ鎖(SEQ ID NO:109-110)に接合されたヒト化軽鎖可変構築物、又はヒトラムダ鎖(SEQ ID NO: 113-114)定常領域と、ペアに調製された。他のIgGアイソタイプは、IgG3またはIgG4を含む定常領域として使用されうる。
IgG2重鎖(SEQ ID NOS: 52-53)へ及びIgGl重鎖(SEQ ID NOS:56-57)へのヒト化MN-E6可変領域、ラムダ軽鎖(SEQ ID NO: 111-112と216-219)若しくはカッパ鎖(SEQ ID NO: 107-108と210-213)のいずれかとペアになった、IgGl重鎖(SEQ ID NOS: 158-159)へ若しくはIgG2重鎖(SEQ ID NOS: 163-164)へのヒト化MN-C2可変領域、そして、ヒト化MN-C3(SEQID NOS: 455-456、453-454及び500-501、502-503)及びMN-C8(SEQ ID NOS:541-542、539-540及び579-580、581-582)抗体が、生成された。各アイソタイプは、それ自身の特徴的活性があるので、どのIgG定常領域がヒト化可変領域へ融合されるかは、所望の効果に依存する。ヒト定常領域のアイソタイプは、抗体依存性細胞傷害(ADCC)若しくは補体依存性細胞毒性(CDC)が望まれるか、さらに細胞に基-zetaンパク質発現システムで生成される抗体の産出量にも依存するような物事を基礎に選択される。好ましい態様では、ヒト化抗MUCl*抗体若しくは抗体断片は、MUCl陽性癌になるリスクをもつ若しくはそのように診断された人に投与れる。
MUCl陽性癌になるリスクをもつ若しくはそのように診断された人に最も有用なヒト化抗MUCl*抗体をテストし及び選択する1つの方法は、MUCl*細胞外領域への活性化リガンドの結合を阻害するそれらの能力に関して、それらをテストすることである。二量体NME1は、MUCl*細胞外領域に結合し二量化させることができ、そして、そうすることで、癌細胞増直を刺激する。したがって、MUCl*細胞外領域への結合を、NME1と競合する抗体及び抗体断片は、抗癌剤である。NME7は、MUCl*の別の活性化リガンドである。ある場合には、MUCl*細胞外領域への、NME7、若しくはNME7欠失、開裂産物の結合を阻止する抗体を同定することは望ましい。MUCl*細胞外領域への結合について、NME7及びNME7変異体と競合する抗体及び抗体断片は、癌治療薬として有効である。これらの抗体は、これら抗体のscFvのような単鎖型及びそのヒト化型と同様に、MN-E6、MN-C2、MN-C3、MN-C8を含み、制限されない。他のNMEタンパク質は、また、NME6とNME8を含むMUC1若しくはMUCl*に結合する。MUCl*への結合についてこれらのタンパク質と競合する抗体は、さらに治療薬として有用でありうる。好ましい態様では、ヒト化抗MUCl*抗体若しくは抗体断片は、MUCl陽性癌になるリスクをもつ若しくはそのように診断された人に投与される。もっと好ましい態様では、MN-E6及びMN-C2のヒト化配列に由来した、単一鎖抗体断片、モノマーのscFv-Fc融合体は、MUCl陽性癌になるリスクをもつ若しくはそのように診断された人に投与される。
さらに、一価抗体若しくは抗体様タンパク質になる単一鎖可変断片、scFv若しくは他の型は有用である。ある場合には、それがMUCl*細胞外領域の二量化を防ぐことが所望される。単一鎖可変断片、Fabs及び他の一価抗体様タンパク質は、MUCl*細胞外領域へ結合及びMUCl*二量化の阻止に有効なことを示された。このような単一鎖可変断片、Fabs及び他の一価抗体様分子は、ヒトMUCl陽性癌細胞を異種移植された動物で、及び生体外で癌増殖を阻止した。したがって、ヒト化単一鎖可変断片若しくは一価抗MUCl*抗体若しくは抗体様分子は、抗癌治療で非常に有効である。MUCl*細胞外領域に結合するか若しくはPSMGFRペプチドに結合する、このようなヒト化単一鎖抗体、Fabs及び他の一価抗体様分子は、癌治療薬として有用である。抗MUCl*単一鎖可変断片は、同族の可変領域ヒト化抗体のフレームワークへ、抗体（それらはMUCl*の細胞外領域へ結合するか、PSMGFRペプチドに結合する）の非ヒトCDR接合して、生成される。得られた、ヒト化重鎖及び軽鎖可変領域は、その後、適切なリンカーを経て互いに接続され、ここで、リンカーは、軽鎖に重鎖を結合させるが別の軽鎖と結合するのを1分子の重鎖で阻止する、柔軟性と長さを持つ必要がある。例えば、約10-15残基のリンカーが例示される。好適には、リンカーは、(Glycine)4 (Serin)1]3(SEQ ID NOS: 401-402)を持つが、特に制限されず、他の配列も可能である。
1つの態様では、MN-E6(SEQ ID NOS: 38-39と93-94)、MN-C2(SEQ ID NOS:144-145と194-195)、MN-C3(SEQ ID NOS: 439-440と486-487)及びMN-C8(SEQ ID NOS: 525-526と565-566)のヒト化可変領域は、リンカーを経て重鎖及び軽鎖に接続する構築物に生化学的に接合される。MN-E6、MN-C2、MN-C3及びMN-C8の可変領域からのヒト化配列を含む、ヒト化単一鎖抗MUCl*抗体の例が、生成された。
いくつかのヒト化MN-E6単一鎖タンパク質が生成された(SEQ ID NOS: 232-237)。
いくつかのヒト化MN-C2単一鎖タンパク質が生成された(SEQ ID NOS: 238-243)。
いくつかのヒト化MN-C3単一鎖タンパク質が生成された(SEQ ID NOS: 244-249)。
いくつかのヒト化MN-C8単一鎖タンパク質が生成された(SEQ ID NOS: 250-255)。
好ましい態様で、可変断片、scFv抗体断片MN-E6 scFv、MN-C2 scFv、MN-C3 scFv若しくはMN-C8 scFv、を含む、ヒト化抗MUCl*抗体断片は、MUCl陽性癌になる危険がある、若しくはもつと診断された人に投与される。もっと好ましい態様では、MN-E6及びMN-C2のヒト化配列に由来した可変断片のような単一鎖抗体断片は、MUCl陽性癌になる危険がある、若しくはもつと診断された人に投与される。
いくつかのヒト化MN-E6単一鎖タンパク質が生成された(SEQ ID NOS: 232-237)。
いくつかのヒト化MN-C2単一鎖タンパク質が生成された(SEQ ID NOS: 238-243)。
いくつかのヒト化MN-C3単一鎖タンパク質が生成された(SEQ ID NOS: 244-249)。
いくつかのヒト化MN-C8単一鎖タンパク質が生成された(SEQ ID NOS: 250-255)。
好ましい態様で、可変断片、scFv抗体断片MN-E6 scFv、MN-C2 scFv、MN-C3 scFv若しくはMN-C8 scFv、を含む、ヒト化抗MUCl*抗体断片は、MUCl陽性癌になる危険がある、若しくはもつと診断された人に投与される。もっと好ましい態様では、MN-E6及びMN-C2のヒト化配列に由来した可変断片のような単一鎖抗体断片は、MUCl陽性癌になる危険がある、若しくはもつと診断された人に投与される。
別の態様では、MN-E6(SEQID NOS: 38-39と93-94)、MN-C2(SEQ ID NOS: 144-145と194-195)、MN-C3(SEQ ID NOS: 439-440と486-487)及びMN-C8(SEQ ID NOS:525-526と565-566)のヒト化可変領域は、抗体のFc部分をさらに含んでいる、単一鎖可変断片(scFv)へ生化学的に接合される。抗体のFc領域へ接合されたMN-E6、MN-C2、MN-C3及びMN-C8のヒト化単一連鎖可変断片の例が生成された(SEQ ID NOS: 256-257、260-261、264-265及び268-269)。Fc領域の包含はいくつかの目的に役立ちます。それは、抗体断片の分子量を増加させ、それは分解を遅くし、半減期を増加させる。Fc領域は、さらに腫瘍部位への免疫系補体を補充する。さらに、第2抗体がFc部分を検知しラベルを付けると、抗体Fc領域の添加は、scFvを便利な診断のツールにする。しかしながら、Fc部分は、ホモ二量化する。したがって、scFv-Fcは、二価で、MUCl*成長因子リセプターを二量化させ、活性化することができた。MUCl*二量化を引き起こす欠点なしで、抗MUCl* scFvにFcを接合する利点を得るために、Fc領域は、Fcホモ二量化を最小化する若しくは除去するように変異させられた。モノマーのscFv-Fc融合タンパク質を作成するために、次の変異がCH3領域でなさられた:Y407R(SEQ ID NOS: 278と279)、F405Q(SEQ ID NOS: 280と281)、T394D(SEQ ID NOS:282と283)、T366W/L368W(SEQ ID NOD: 284と285)、T364R/L368R(SEQ ID NOS: 286と285)。それらの変化のどんなコンビネーションもテストすることができ、Fc(SEQ ID NOS: 272-273)、CH2-CH3(SEQ ID NOS: 274-275)若しくはCH3(SEQ ID NOS: 276-277)融合タンパク質へ、若しくはヒンジがないFc融合タンパク質(SEQ ID NOS:288-289)に導入することができた。
発明の1つの態様は、MUCl若しくはMUCl*陽性癌と診断された、MUCl若しくはMUCl*陽性癌になるリスクを診断された、若しくはMUCl若しくはMUCl*陽性癌を持っていることが疑われる患者を処置する方法に関し、有効な量のモノマーのMN-E6scFv、MN-C2 scFv、MN-C3 scFv、MN-C8 scFv、若しくはMN-E6scFv-Fc及びMN-C2 scFv-Fc及びMN-C3 scFv-Fc及びMN-C8 scFv-Fcが投与され、そこでは、抗体可変断片部分は、ヒト若しくはヒト化され、そして、抗体様タンパク質のFc部分は二量体形成に抵抗するように変異されている。
CAR T及び癌免疫療法技術
発明の別の態様では、抗MUCl*抗体断片の単一鎖部分のうちのいくつか若しくはすべては、いくつかの異なるキメラ的な抗原リセプターを使用し、免疫系分子に生化学的に接合される、「CAR」戦略。このアイデアは、膜貫通領域、及び免疫系を活性化するシグナルを送信されうる細胞質尾部をもつ、免疫系分子に、典型的には、単一鎖可変断片として抗体の認識部分を接合させることである。認識ユニットは、抗体断片、単一鎖可変断片、scFv若しくはペプチドでありえる。1つの態様では、CARの細胞外領域の認識部分は、MN-E6(SEQ ID NOS: 38-39と93-94)、MN-C2(SEQ ID NOS:144-145と194-195)、MN-C3(SEQ ID NOS: 439-440と486-487)及びMN-C8(SEQ ID NOS: 525-526と565-566)のヒト化可変領域からなる配列で構成される。別の態様では、それは単一鎖可変断片からの配列で構成される。単一鎖構築物の例は以下である。いくつかのヒト化MN-E6単一鎖タンパク質、scFv、が生成された(SEQ ID NOS:232-237)。いくつかのヒト化MN-C2単一鎖タンパク質、scFv、が生成された(SEQ ID NOS: 238-243)。いくつかのヒト化MN-C3単一鎖タンパク質、scFv、が生成された(SEQ ID NOS: 244-249)。いくつかのヒト化MN-C8単一鎖タンパク質、scFv、が生成された(SEQ ID NOS: 250-255)。CARの膜貫通領域は、CD28、4-IBB若しくは他のもののような近位細胞質の共刺激的な領域の膜貫通領域を含むCD8、CD4、抗体領域若しくは他の膜貫通領域に由来しうるCARの細胞質尾部は、免疫系活性化をシグナルする1つ以上のモチーフで構成されうる。細胞質のシグナルするモチーフのこのグループ、時々、共刺激的な細胞質領域を参照される、は、CD3-zeta、CD27、CD28、4-IBB、OX40、CD30、CD40、ICAm-1、LFA-1、ICOS、CD2、CD5、CD7及びFc受容体ガンマ領域を含むが、これに制限されない。そのとき、最小のCARには、CD3-zeta若しくはFc受容体ガンマ領域を持ち得、細胞質尾部の縦列の上記の領域のうちの1つ若しくは2をもつ。1つの態様では、細胞質尾部は、CD3-zeta、CD28、4-IBB及び/又はOX40を含みえる。
表1は、私たちが生成しテストした抗MUCl* CARの多くをリストする。
MN-E6 CARのいくつかの例が生成された:CAR MN-E6 CD3z(SEQ ID NOS: 294-295);CAR MN-E
6 CD28/CD3z(SEQ ID NOS:297-298);CAR MN-E6 4-lBB/CD3z(SEQ ID NOS: 300-301);CAR MN-E6 OX40/CD3z(SEQ ID NOS:616-617);CAR MN-E6 CD28/OX40/CD3z(SEQ ID NOS: 618-619);CAR MN-E6CD28/4-lBB/CD3z(SEQ ID NOS: 303-304)。ヒト化MN-C2 CARのいくつかの例が生成された:CAR MN-C2 CD3z(SEQ ID NOS: 606-607);CAR MN-C2 CD28/CD3z(SEQ ID NOS:608-609);CAR MN-C2 4-lBB/CD3z(SEQ ID NOS: 610-611);CAR MN-C2 OX40/CD3z(SEQ ID NOS:612-613);CAR MN-C2 CD28/4-lBB/CD3z(SEQ ID NOS: 306-307);CAR MN-C2CD28/OX40/CD3z(SEQ ID NOS: 614-615)。ヒト化MN-C3 CARが生成された:CAR MN-C34-lBB/CD3z(SEQ ID NOS: 600-601)。
MN-E6 CARのいくつかの例が生成された:CAR MN-E6 CD3z(SEQ ID NOS: 294-295);CAR MN-E
6 CD28/CD3z(SEQ ID NOS:297-298);CAR MN-E6 4-lBB/CD3z(SEQ ID NOS: 300-301);CAR MN-E6 OX40/CD3z(SEQ ID NOS:616-617);CAR MN-E6 CD28/OX40/CD3z(SEQ ID NOS: 618-619);CAR MN-E6CD28/4-lBB/CD3z(SEQ ID NOS: 303-304)。ヒト化MN-C2 CARのいくつかの例が生成された:CAR MN-C2 CD3z(SEQ ID NOS: 606-607);CAR MN-C2 CD28/CD3z(SEQ ID NOS:608-609);CAR MN-C2 4-lBB/CD3z(SEQ ID NOS: 610-611);CAR MN-C2 OX40/CD3z(SEQ ID NOS:612-613);CAR MN-C2 CD28/4-lBB/CD3z(SEQ ID NOS: 306-307);CAR MN-C2CD28/OX40/CD3z(SEQ ID NOS: 614-615)。ヒト化MN-C3 CARが生成された:CAR MN-C34-lBB/CD3z(SEQ ID NOS: 600-601)。
異なるヒンジ領域(SEQ IDNOS: 345-360)をもつヒト化MN-E6 CARのいくつかの例が生成された:CAR MN-E6-Fc/8/4-IBB/CD3z(SEQ ID NOS: 310-311);CAR MN-E6 FcH/8/4-IBB/CD3z(SEQID NOS: 315-316);CAR MN-E6 Fc/4/4-IBB/CD3z(SEQ ID NOS: 318-319);CAR MN-E6FcH/4/4-IBB/CD3z(SEQ ID NOS: 321-322);;CAR MN-E6 IgD/8/4-IBB/CD3z(SEQ ID NOS:323-324);CAR MN-E6 IgD/44-IBB/CD3z(SEQ ID NOS: 327-328);CAR MN-E6 X4/84-IBB/CD3z(SEQID NOS: 330-331);CAR MN-E6 X4/44-IBB/CD3z(SEQ ID NOS: 333-334);CAR MN-E6 8+4/4/4lBB/CD3z(SEQ ID NOS: 336-337)。さらに、いくつかのヒト化MN-C3単一鎖可変断片及びヒト化MN-C8単一鎖可変断片も生成された。
CARの標的ヘッドが、抗MUCl*抗体MN-C2に由来したいくつかのCARも生成されテストした。CAR MN-C2-Fc4-IBB/CD3z(SEQID NOS: 732-733);CAR MN-C2 IgD/Fc/4-lBB/CD3z(SEQ ID NOS: 734-735);CAR MN-C2FcH/4-IBB/CD3z(SEQ ID NOS: 736-737);CAR MN-C2 IgD/FcH/4-lBB/CD3z(SEQ ID NOS:738-739);CAR MN-C2 IgD/4-IBB/CD3z(SEQ ID NOS: 740-741);CAR MN-C2 X44-IBB/CD3z(SEQID NOS: 742-743)。
MUCl*標的化CARの細胞外領域認識ユニットは、PSMGFRペプチド(SEQ ID NO: 2)の少なくとも12の連続するアミノ酸に結合されうる非ヒト、ヒト、若しくはヒト化抗体の可変領域を含むことができる。1つの態様では、CARのMUC1*標的化部分は、非ヒト、ヒト化か、ヒトMN-E6、MN-C2、MN-C3若しくはMN-C8からの可変領域を含む。1つの態様では、CARの細胞外領域認識ユニットは、ヒト化MN-E6、MN-C2、MN-C3若しくはMN-C8単一鎖可変断片scFvで本質的に構成される。CARの膜貫通領域は、CD8(SEQ ID NOS: 363-364)に由来する場合があり、若しくはCD3-zeta、CD284-IBB、OX40若しくは他の膜貫通領域(SEQ ID NOS: 361-372)の膜貫通領域でありえ、及びMUCl*細胞外領域を標的にする抗体断片を備えたCARの細胞質領域は、免疫系共刺激細胞質領域を含むグループから選ばれた１若しくは２から構成されうる。免疫系共刺激領域のグループは、CD3-zeta、CD27、CD28、4-IBB、OX40、CD30、CD40、ICAm-1、LFA-1、ICOS、CD2、CD5、CD7及びFc受容体ガンマ領域(SEQ ID NOS: 373-382) を含むが、これに制限されない。若しくは、CARの認識ユニット部分は、ペプチドが標的に結合するペプチドを含むことができる。NME7は、MUCl*に結合し活性化する。発明の1つの態様では、CARの認識ユニットは、NME7(SEQID NOS: 5-6)に由来したペプチド又はNME7ペプチドA１(SEQ ID NO: 7)、NME7ペプチドA2(SEQ ID NO:8)、NME7ペプチドB l(SEQ ID NO: 9)、NME7ペプチドB2(SEQ ID NO: 10)及びNME7ペプチドB3(SEQ ID NO:11)を含むNME7ペプチドに由来するペプチドであるが、これらに限定されない。
CARを生成するためのいくつかの戦略は、それ自体で二量化する分子の一部を含んでいる。ある場合には、標的の二量化は望ましくない。したがって、CARは、それらがヘテロ二量体化するそのように構築されうる。1つのケースでは、第一のCARの認識ユニットは、最初の標的に結合する。その一方で第2のCARの認識ユニットは別の標的に結合する。両方の認識ユニットは抗体断片でありえ、両方がペプチドでありえ、又は、一つは抗体断片及び他方はペプチドでありえる。CARの第一の標的は、MUCl*細胞外領域でありえる。CARの認識ユニットは、MUCl*細胞外領域に結合する若しくはPSMGFRペプチドにに結合する抗体断片でありえる。又は、CARの認識ユニットは、MUCl*細胞外領域に結合するペプチドで構成されえ、そのようなペプチドは、NME1またはNME7のようなNMEタンパク質に由来したペプチドを含み、より特異的にはSEQ ID NOS: 7-11としてリストされたNME7由来ペプチドである。異種ダイマー性CARの第2の標的は、NME7に結合するペプチドまたは抗体断片でありうる。又は、異種ダイマー性CARの第２の標的は、PDl若しくはその同系統のリガンドPDL-1若しくは標的癌細胞の他の標的リガンドに結合するペプチドまたは抗体の断片でありうる。第2の標的は、NME1若しくはNME7-ABに結合するペプチドまたは抗体の断片でありうる。CARによって引き起こされたMUC1の二量化を防ぐことが望ましいので、異種ダイマー性のCARは、1つの分子の細胞外領域だけが、標的に結合する細胞外認識ユニットを持つように、構築されうる(SEQ ID NOS: 584-587)。他の分子は、標的認識ユニット若しくは抗体断片が欠けている欠失細胞外領域がありえる(SEQ ID NOS: 588-599)。
記述されたCARsは、免疫系の細胞へ形質転換するか形質導入されうる。好ましい態様では、MUCl*標的化CARは、T細胞へ形質転換されるか形質導入される。1つの態様では、T細胞はCD3+/CD28+T細胞である。別の場合では、それは樹状細胞である。別の場合では、それはB細胞である。別の場合では、それはマスト細胞である。受容細胞は、患者、若しくはドナーからでありえる。ドナーから場合、それは拒絶反応を引き起こす分子を除去するために加工されうる。本願発明のCARで形質転換若しくは形質導入されたセルは、エクソビボ若しくはインビボで拡張され、その後患者に投与される。投与ルートは、骨髄移植、静脈注射、原位置注入若しくは移植のグループから選ばれるこれに制限されていない。好ましい態様では、MUCl*標的化CARは、MUC1陽性癌と診断された若しくは危険が診断された人に投与される。
MUCl*陽性癌の治療若しくは予防用のT細胞若しくは他の免疫細胞へ形質導入されうる多くの可能な抗MUCl* CAR構築物がある。CARはモジュールから構成され、また、モジュールのうちのいくつかのアイデンテティは比較的重要でない。他方、他のモジュールのアイデンテティは、厳格に重要である。
私たちの実験は、それが腫瘍部位へCARを運ぶ免疫細胞を標的にするので、CARの最も外側の部分の抗体認識断片が厳格に重要であることを実証した。さらに、細胞内シグナル伝達モチーフは、非常に重要であるが互換性がある。図28は、CARのコンポーネント及びCARに含まれうる様々な配列の模型を示す。図28参照。
図28の式において、Rlは、次のとおりである:無;又は、
リガンド若しくは癌関連抗原のリガンドの断片;又は
リガンド又はMUC1若しくはMUC1*のリガンドの断片;又は
抗体または抗体の断片が、MUC1若しくはMUCl*に結合する、抗体または抗体の断片；又は、抗体か抗体断片が、PSMGFR*に結合する、そして該抗体がヒト若しくはヒト化である、抗体または抗体の断片; 又は、MN-E6、MN-C2、MN-C3若しくはMN-C8、又はヒト化MN-E6、MN-C2、MN-C3若しくはMN-C8の抗体若しくは抗体の断片; 又は、開裂MUC1若しくはMUCl*に結合する抗体(scFv)の単一鎖可変断片; 又は、ヒト化でありうるMN-E6、MN-C2、MN-C3若しくはMN-C8のscFv; 又は、MUCl*若しくはPSMGFRペプチドに結合するペプチド; 又は、MUCl*のPSMGFR部分を結合する抗体断片、scFv若しくはペプチド;又は、MN-E6(SEQ ID NOS: 38-39と93-94)、MN-C2(SEQ ID NOS: 144-145と194-195)、MN-C3(SEQ ID NOS:439-440と486-487)及びMN-C8(SEQ ID NOS: 525-526と565-566)のヒト化可変領域からの配列で構成される。
1つの態様中で、Rlは、scFvであって、それは、次の配列を含むMUCl*のPSMGFR部分を結合する；ヒト化MN-E6 scFv(SEQ ID NOS: 232-237)、ヒト化MN-C2 scFv(SEQ ID NOS: 238-243)、ヒト化MN-C3 scFv(SEQ ID NOS: 244-249)若しくはヒト化MN-C8 scFv(SEQ ID NOS: 250-255)。別の態様では、Rlは、ヒト化MN-E6 scFv(SEQ ID NOS: 232-237)若しくはヒト化MN-C2 scFv(SEQ ID NOS: 238-243)からの配列で構成されたMUCl*のPSMGFR部分を結合するscFvである。1例において、Rlは、ヒト化MN-E6scFv(SEQ ID NOS: 232-237)からの配列で構成されたMUC1*のPSMGFR部分を結合するscFvである。
1つの態様中で、Rlは、scFvであって、それは、次の配列を含むMUCl*のPSMGFR部分を結合する；ヒト化MN-E6 scFv(SEQ ID NOS: 232-237)、ヒト化MN-C2 scFv(SEQ ID NOS: 238-243)、ヒト化MN-C3 scFv(SEQ ID NOS: 244-249)若しくはヒト化MN-C8 scFv(SEQ ID NOS: 250-255)。別の態様では、Rlは、ヒト化MN-E6 scFv(SEQ ID NOS: 232-237)若しくはヒト化MN-C2 scFv(SEQ ID NOS: 238-243)からの配列で構成されたMUCl*のPSMGFR部分を結合するscFvである。1例において、Rlは、ヒト化MN-E6scFv(SEQ ID NOS: 232-237)からの配列で構成されたMUC1*のPSMGFR部分を結合するscFvである。
図28の式において、R2は、CARの膜貫通領域に認識部分を接続する、ポリペプチドのフレキシブルリンカーである。1つの態様では、R2は5から250のアミノ酸の異なる長さのポリペプチドリンカーになりえる。別の態様では、R2はヒト起源のポリペプチドリンカーである。1つの態様では、R2は、ヒト免疫グロブリン(IgG、IgA、IgE、IgM若しくはIgD)のヒンジ領域若しくはヒンジ領域の修飾物である。1つの態様では、R2は、T細胞レセプター(CD8a、CD28若しくはCD4)のヒンジ領域若しくはヒンジ領域の修飾物になりえる。1例において、R2は、CD8aのヒンジ領域、ヒトIgDのヒンジ領域若しくはヒトIgGlのFc領域である。
図28の式において、R3は、膜貫通領域である。1つの態様では、R3は、膜貫通領域若しくは任意の膜貫通ヒトタンパク質の膜貫通領域の修飾物でありうる。別の態様では、R3は、膜貫通領域若しくはヒト細胞リセプターからの膜貫通領域の修飾物でありうる。1つの態様では、R3は、膜貫通領域若しくはT細胞レセプター(CD8a、CD4、CD28、CD3z、OX40若しくは4-IBB)の膜貫通領域の修飾物でありうる。別の態様では、R3は、CARの最初の細胞質の共刺激領域からの膜貫通領域である。1つの態様では、R3は、膜貫通領域又は膜貫通領域へ関連した細胞質領域の1、2、3、4若しくは5アミノ酸で拡張されたT細胞レセプターの膜貫通領域の修飾物でありうる。別の態様では、R3は、膜貫通領域又はジスルフイド結合のためのシステインが後続する膜貫通領域へ関連した細胞質領域の1、2、3、4若しくは5アミノ酸で拡張されたT細胞レセプターの膜貫通領域の修飾物でありうる。1例において、R3は、CD8aまたはCD4の膜貫通領域である。
図28の式において、R4は、T細胞レセプターからのシグナリング領域である。1つの態様では、R4は、CD3-zeta、CD27、CD28、4-IBB、OX40、CD30、CD40、ICAm-1、LFA-1、ICOS、CD2、CD5、CD7及びFc受容体ガンマ領域の細胞質のシグナリング領域になりえる。1例において、R4は、CD3-zetaの細胞質領域である。単一のシグナリング領域(CAR I)を備えたヒト化CARのいくつかの例が再生成された: CAR MN-E6 CD3z(SEQ ID NOS: 294-295);CAR MN-C2 CD3z(SEQ ID NOS:606-607)
図28の式において、R5は、T細胞レセプターからの共刺激領域である。1つの態様では、R5は、CD27、CD28、4-IBB、OX40、CD30、CD40、ICAm-1、LFA-1、ICOS、CD2、CD5、CD7及びFc受容体ガンマ領域の細胞質のシグナリング領域になりえる。R5は、R4及びR6とは異なっている。1例で、R5はCD28、4-IBB若しくはOX40の細胞質領域である。2つのシグナリング領域(CAR II)を備えたヒト化CARのいくつかの例が再生成された:CAR MN-E6 CD28/CD3z(SEQ ID NOS: 297-298);CARMN-E6 4-lBB/CD3z(SEQ ID NOS: 300-301);CAR MN-E6 OX40/CD3z(SEQ ID NOS: 616-617);CARMN-C2 CD28/CD3z(SEQ ID NOS: 608-609);CAR MN-C2 4-lBB/CD3z(SEQ ID NOS: 610-611);CARMN-C2 OX40/CD3z(SEQ ID NOS: 612-613);MN-C3 4-IBB/CD3z(SEQ ID NOS: 600-601);CAR MN-E6-Fc/8/4-IBB/CD3z(SEQID NOS: 310-311);CAR MN-E6 FcH/8/4-IBB/CD3z(SEQ ID NOS: 315-316);CAR MN-E6Fc/4/4-IBB/CD3z(SEQ ID NOS: 318-319);CAR MN-E6 FcH/4/4-IBB/CD3z(SEQ ID NOS:321-322);;CARMN-E6 IgD/8/4-IBB/CD3z(SEQ ID NOS: 323-324);CAR MN-E6 IgD/4/4-IBB/CD3z(SEQID NOS: 327-328);CAR MN-E6 X4/8/4-IBB/CD3z(SEQ ID NOS: 330-331);CAR MN-E6 X4/4/4-IBB/CD3z(SEQ ID NOS: 333-334);CAR MN-E6 8+4/4/4 IBB/CD3z(SEQ ID NOS: 336-337)。
図28の式において、R6は、T細胞レセプターからの共刺激領域である。1つの態様では、R6は、CD27、CD28、4-IBB、OX40、CD30、CD40、ICAm-1、LFA-1、ICOS、CD2、CD5、CD7及びFc受容体ガンマ領域の細胞質のシグナリング領域でありえる。R6は、R4及びR5とは異なっている。1例において、R5は、CD28の細胞質領域である。2つのシグナリング領域(CAR III)を備えたヒト化CARのいくつかの例が再生成された:CAR MN-E6 CD28/OX40/CD3z(SEQ ID NOS:618-619);CAR MN-E6 CD28/4-lBB/CD3z(SEQ ID NOS: 303-304);CAR MN-C2CD28/4-lBB/CD3z(SEQ ID NOS: 306-307);CAR MN-C2 CD28/OX40/CD3z(SEQ ID NOS:614-615)
私たち及び他は、CD3-zeta(SEQ ID NOS: 373-376、CD28(SEQ ID NOS: 377-378)及び4-IBB(SEQ ID NOS: 379-380)のような、細胞内シグナル伝達モジュールが、単独若しくは組み合わせで、免疫細胞拡張、サイトカイン分泌及び免疫細胞仲介標的腫瘍細胞殺滅を刺激することを示した（(Pμle MA, Straathof KC, Dotti G,Heslop HE, Rooney CM and Brenner MK (2005) A chimeric T cell antigen receptorthat augments cytokine release and supports clonal expansion of primary human Tcells. Mol Ther. 12(5):933-941; Hombach AA, Heiders J, Foppe M, Chmielewski Mand Abken H. (2012) OX40 costimμlation by a chimeric antigen receptor abrogatesCD28 and IL-2 induced IL-10 secretion by redirected CD4(+) T cells.Oncoimmunology. 1(4):458-466; Kowolik CM, Topp MS, Gonzalez S, Pfeiffer T,Olivares S, Gonzalez N, Smith DD, Forman SJ, Jensen MC and Cooper LJ. (2006)CD28 costimμlation provided through a CD19-specific chimeric antigen receptorenhances in vivo persistence and antitumor efficacy of adoptively transferred Tcells. Cancer Res. 66(22): 10995- 11004; Loskog A, Giandomenico V, Rossig C, PμleM, Dotti G and Brenner MK. (2006) Addition of the CD28 signaling domain tochimeric T-cell receptors enhances chimeric T-cell resistance to T regμlatorycells. Leukemia. 20(10): 1819- 1828; Milone MC, Fish JD, Carpenito C, CarrollRG, Binder GK, Teachey D, Samanta M, Lakhal M, Gloss B, Danet-Desnoyers G,Campana D, Riley JL, Grupp SA and June CH. (2009) Chimeric receptors containing CD 137 signal transduction domains mediate enhanced survival of T cells andincreased antileukemic efficacy in vivo. Mol Ther. 17(8): 1453-1464; Song DG,Ye Q, Carpenito C, Poussin M, Wang LP, Ji C, Figini M, June CH, Coukos G,Powell DJ Jr. (2011) In vivo persistence, tumor localization, and antitumoractivity of CAR-engineered T cells is enhanced by costimμlatory signalingthrough CD137 (4-lBB). Cancer Res. 71(13):4617-4627).）それほど重要でないのは、抗体断片、膜貫通領域、及び細胞内シグナル伝達モチーフの前に来る短い細胞質尾部を提示する短い細胞外ピースの同一性である。
腫瘍へのCARを標的とする認識抗体断片の同一性は、厳格に重要である。MUCl陽性若しくはMUCl*陽性癌の治療のために、その抗体認識断片は、縦列反復領域を含む、細胞外領域の大部分の開裂及び解放後に残るMUCl部分の細胞外領域へ結合するに違いない。本発明の1つの態様では、残る部分は、PSMGFR配列を含みむ。発明の別の態様では、開裂及び開放後に残るMUClの部分は、より多くのアミノ酸がN-端末で拡張した9までプラスのPSMGFR配列を含んでいる。発明の別の態様では、開裂及び開放後に残るMUClの部分は、より多くのアミノ酸がN-端末で拡張した21までプラスのPSMGFR配列を含んでいる。1つの態様では、抗体認識断片は、PSMGFRペプチドの少なくとも12の連続するアミノ酸に結合する。発明の別の態様では、抗体認識断片は、配列SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQID NO: 620);若しくは、SVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQ IDNO: 621) を含むペプチドに結合する。
デモンストレーションとして、MN-E6若しくはMN-C2と呼ばれるモノクローナル抗MUCl*抗体の可変領域を含む単一鎖抗体断片が、CARのパネルに、加工された(表1)。その後、MUCl*標的化CARは、免疫細胞へ、別々に若しくはコンビネーションで形質導入された。MUCl*ペプチドを提示する表面でチャレンジされたとき、MUCl*で形質転換された抗原提示細胞若しくはMUCl*陽性癌細胞、MUCl*標的化CARで形質導入された免疫細胞は、免疫細胞の拡張、標的細胞の殺滅、サイトカイン・リリースを含む免疫反応を誘発した(表2)。
1つのケースでは、ヒトJurkhat細胞は、MUCl*標的化CARで形質導入され、そして、PSMGFRペプチドを提示する表面、MUCl*若しくはMUCl*陽性癌細胞で形質転換されたK562抗原提示細胞、に露出され、Jurkhat細胞はIL-2を分泌した。別の場合では、精製ヒトT細胞は、MUCl*標的化CARsで形質導入され、そして、PSMGFRペプチドを提示する表面、MUCl*若しくはMUCl*陽性癌細胞で形質転換されたK562抗原提示細胞、に露出され、T細胞はIL-2、インターフェロンγを分泌し、T細胞が拡大した一方、ターゲットとされた抗原提示細胞及び癌細胞を殺滅した。実証されるように、抗体断片を含むCAR、そこで抗体断片は共刺激領域を担持する細胞質尾部、PSMGFRペプチド、膜貫通領域に結合される、は、CARが免疫細胞へ形質導入され、それはT細胞を含んでいるとき、免疫系、抗腫瘍細胞反応を誘発する。したがって、PSMGFRペプチドに結合されうる、他の抗体、抗体断片若しくは抗体模倣は、同様に履行し、癌を処置するか若しくは予防するために使用されうる。当業者は、CARで細胞を形質転換若しくは形質導入する利用可能な多くの技術があること、そして、本発明は、免疫細胞に、MUCl*標的化CARを発現させるために使用された方法によって制限されないことを理解可能である。
例えば、ここに記述された、CARをコードする遺伝子及び活性化T細胞誘導遺伝子は、ウイルスを使用して、免疫細胞へウイルス形質導入されうる。それは、受容細胞のゲノムへ統合されたCAR遺伝子に帰着するかもしれないし、帰着しないかもしれない。ガンマ・レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ関連性ウイルス、バキュロウイルス、ポックスウイルス、単純性疱疹ウイルス、オンコリテイックウイルス、HF10、T-Vecなどを含むレトロウイルスを含む、これらに限定されない、ウイルス運搬システム及びウイルスベクターは使用されうる。ウイルス形質導入に加えて、ここに記述されたCAR及び活性化T細胞誘導遺伝子は、CRISPR技術、CRISPR-Cas9及びCPF1、TALEN、スリーピングビュウティートランスポゾン・システム及びSB 100X、のような方法を使い、受容細胞のゲノムへ直接結合されうる。
同様に、細胞外領域、膜貫通領域及び細胞質領域の膜近位部分のようなCARのターゲットとしない部分を構築する分子の同一性は、MUCl*標的化CARの機能に本質的でない。例えば、細胞外領域、膜貫通領域及び細胞質領域の膜近位部分は、CD8、CD4、CD28又はFc、CH2CH3若しくはCH3のようなジェネリックな抗体領域、の部分から構成されうる。さらに、CARのターゲットとしない部分は、これらの分子若しくは他のファミリーメンバーの1つ以上の部分のコンポサイトになりえる。
本発明の1つの態様は、MUCl若しくはMUCl*陽性癌と診断された、MUCl若しくはMUCl*陽性癌になるリスクを診断された、若しくはMUCl若しくはMUCl*陽性癌を持っていることが疑われる患者を処置する方法であり、そこでは患者はMUCl*標的化CARで形質導入された有効な量の免疫細胞を投与される。本発明の別の態様では、免疫細胞は、患者から単離され、その後、それはCARの標的ヘッドがMUCl*に結合するCARで形質導入され、そして、形質導入されたT細胞の拡張の後、CAR T細胞は患者へ有効量が投与される。まだ本発明の別の態様では、免疫細胞は、患者から単離され、その後、それはCARの標的ヘッドがhuMN-E6、huMN-C2、huMN-C3若しくはhuMN-C8の部分を含むCARで形質導入され、そして、形質導入されたT細胞の拡張の後、CAR T細胞は患者へ有効量が投与される。まだ本発明の別の態様では、免疫細胞へ形質導入され、MUCl若しくはMUCl*陽性癌と診断された患者に投与されるCARは、表1若しくは表2のCARのリストから選ばれ。
CARのスペシフィックを作りテストした。
CARの遠位端での標的抗体断片が、MN-E6、MN-C2、MN-C3若しくはMN-C8である、多くのMUCl*標的化CARが生成された。各CARのDNAは、クローニングが正確に行われたことを保証するためにシークエンス化された。その後、構築物は、発現プラスミドへ混ぜられ、細胞へ形質転換され、次に、構築物が成功裡に挿入されたことをウェスタンブロットで確認した。表面の発現は、FACSによって確認された。その後、MUCl*標的化CARは、免疫細胞へウイルスで形質導入された。1つの態様では、それらはJurkat細胞へ形質導入された。別の態様では、それらは、血液が精製された一次ヒトT細胞へ形質導入された。一連の機能分析が行なわれ、CARが機能を保持していることを確認した。機能分析は次のことを示した、MUCl*標的化CARで形質導入されたJurkat細胞及び一次T細胞は、MUCl*提示細胞または表面でチャンレンジされた時、サイトカインIL-2及びインターフェロンγ(IFN-g)を分泌した。表1は、作られテストされたCARをリストする。表2は、CARのうちのいくつかについて、ヒトT細胞へ形質導入されそして様々な癌細胞と共培養後における、サイトカイン・リリース・データをリストする。図29は、MN-E6 CD8/CD3z、MN-E6 CD8/CD28/CD3z、MN-E6 CD8/4-IBB/CD3z、MN-E6 CD4/CD28/CD3z及びMN-E6 CD4/CD28/4-IBB/CD3zを含むCARのパネルで形質導入されたJurkat細胞による、IL-2サイトカイン分泌を測定する実験のグラフである。CAR Jurkat細胞は、MUCl*で形質転換されたK562細胞若しくはK562-wt細胞に露出された時だけ、IL-2が分泌された。親K562-wt細胞は、MUCl*のまさに低レベルを発現することは注目されるべきである。Jurkat細胞へ形質転換されたCARの別のグループは、サイトカイン分泌に関して同様にテストされた。図30は、CAR T細胞が、MUCl*で形質転換されたK562細胞若しくはK562-wt細胞に露出された時、MN-E6 CD8/CD28/CD3z、MN-E6 CD8/4-IBB/CD3z、MN-E6 CD4/CD28/CD3z若しくはMN-E6 CD4/4-IBB/CD3zで形質導入されたJurkat T細胞によってIL-2分泌することを示す。同様に、図31は、MN-E6 CD8/CD28/CD3z、MN-E6 CD8/4-IBB/CD3z若しくはMN-E6 CD4/4-IBB/CD3zで形質導入された一次ヒトT細胞によるIL-2サイトカイン分泌を示す。MUC1*標的CAR T細胞が、MUCl*で形質転換されたK562細胞若しくはK562-wt細胞に露出された時のみ、サイトカイン分泌が生じた。標的細胞を見る場合、活性化T細胞によって分泌される別のサイトカインは、インターフェロンγ(IFNg)である。図32は、CAR T細胞が、MUCl*で形質転換されたK562細胞若しくはK562-wt細胞に露出された時、MN-E6 CD8/CD28/CD3z及びMN-E6 CD4/4-IBB/CD3zを含むCARのパネルで形質導入された一次ヒトT細胞によって、インターフェロンγが、分泌されたことを示す。インターフェロンγは、MUC1*標的CAR T細胞が、MUCl*、前立腺癌MUCl*陽性癌細胞(DU145)、乳癌(1500)若しくは膵臓癌(Capan)で形質導入されたK562細胞若しくはK562-wt細胞に露出された時、MN-E6CD8/CD28/CD3z、MN-E6 CD8/4-IBB/CD3z及びMN-E6 CD8/CD28/4-IBB/CD3zを含むCARのパネルで形質導入された、一次ヒトT細胞で同様に分泌された(図33)。
CAR T細胞の機能の別の測定は、それらが標的細胞の殺滅を引き起こすかどうかである。MUCl*のPSMGFR配列に結合する抗体断片を含む様々なCARで形質転換されたT細胞は、共培養分析で、MUCl*発現細胞を殺滅した。1つの分析では、標的MUCl*発現細胞は、カルセイン（calcein）と培養された。CARがMN-E6、MN-C2、MN-C3若しくはMN-C8のような抗体断片を含む、CAR T細胞と混じり合った場合、CART細胞は、MUCl*提示細胞を殺滅し、それは標的細胞を溶解させ、上澄みへcalceinをリリースする。図34は、一次ヒトT細胞、それは血液サンプルから単離され、MN-E6 CD8/CD28/CD3z、MN-E6 CD8/4-IBB/CD3z及びMN-E6 CD4/4-IBB/CD3z を含むCARのパネルで形質導入され、該CART細胞が、MUCl*で形質転換されたK562細胞若しくはK562-wt細胞に露出された時の、標的細胞死を測定する実験グラフである。T細胞対標的細胞の比率は、1:１で、細胞は24時間共培養された。図35A-35Bは、1日目から3日目までの、標的細胞生存の時間的経過を測定するFACSのグラフである。血液サンプルから単離された一次ヒトT細胞は、ヒト化MN-E6-CD8-3z、MN-E6-CD8-CD28-3z、MN-E6-CD84-IBB-3z及びMN-E6-CD8-CD28-4-IBB-3zを含むCARのパネルで形質導入された。その後、CAR T細胞は、MUCl*を自然に低レベルで発現するK562-wt細胞若しくはMUCl*highで形質転換されたK562細胞に露出された。標的細胞に対するMUCl*標的化CAR T細胞の比率は、1:1、10:1、又は20:1でした。生存細胞は、1日目若しくは3日目で検出され測定された。
図36は、共培養実験の3日目の標的細胞生存のFACS測定のグラフである。一次ヒトT細胞は、ヒト化MN-E6-CD8-3z、MN-E6-CD8-CD28-3z、MN-E6-CD84-IBB-3z及びMN-E6-CD8-CD28-4-IBB-3zを含むCARのパネルで形質導入された。その後、CAR T細胞は、MUCl*陽性T47D乳癌細胞若しくはMUCl*陽性1500 akaZR-75-1乳癌細胞に露出された。標的細胞に対するMUCl*標的化CAR T細胞の比率は、1:1又は10:1であった。グラフから見ることができるように、MUCl*標的化CARで形質導入されたT細胞は、MUCl*癌細胞に、非形質導入コントロールT細胞よりはるかに、大きな殺滅効果をもつ。さらに、殺滅効果は、T細胞:標的細胞の比率が増加するとさらに大きくなる。図37は、共培養実験の一日目の標的細胞生存のFACS測定のグラフである。一次ヒトT細胞は、ヒト化MN-E6-CD84-IBB-3z、MN-E6-CD44-IBB-3z及びMN-E6-CD8-CD28-4-IBB-3zを含むCARのパネルで形質導入された。その後、CAR T細胞は次のMUCl*陽性癌細胞に露出された: T47D乳癌; capan2膵臓癌;若しくはDU-145前立腺癌。標的細胞に対するMUCl*標的化CAR T細胞の比率は、5: 1であった。グラフから見ることができるように、MUCl*標的化CARで形質導入されたT細胞は、MUCl*癌細胞に、非形質導入コントロールT細胞より、はるかに大きな殺滅効果がある。測定は、標的細胞に対するT細胞比率は5:1だけで24時間の後に得られたことに注意がいる。さらにCD8構築物と同様に、CD4細胞外領域-膜貫通-細胞質尾部をもつMUCl*標的化CARが機能することに注意がいる。
図38は、一次ヒトT細胞が、ヒト化MN-E6-CD84-IBB-3z、MN-E6-CD44-IBB-3z及びMN-E6-CD8-CD28-4-IBB-3zを含むCARのパネルで形質導入された、共培養実験の3日目の標的細胞生存のFACS測定のグラフである。その後、CAR T細胞は、次のMUCl*陽性癌細胞に露出された: MUCl*で形質転換されたK562血液癌細胞; T47D乳癌; 1500のaka ZR-75-1乳癌細胞;若しくはCAPAN-2膵臓癌細胞。分析は、非形質導入T細胞コントロールに加えて、PC3 MUCl*陰性前立腺癌細胞で行なわれた。標的細胞に対するMUCl*標的化CAR T細胞の比率は、1:1である。グラフから見ることができるように、MUCl*標的化CARで形質導入されたT細胞は、MUCl*癌細胞に、非形質導入コントロールT細胞よりはるかに大きな殺滅効果がある。さらに、殺滅結果は、MUCl*陽性細胞に特異的である。CD8構築物と同様に、CD4細胞外領域-膜貫通-細胞質尾部をもつMUCl*標的化CARが機能することに注意がいる。図39は、標的細胞へのCAR T細胞の比率5:1での、標的細胞との共培養で、24時間の間のCAR T細胞拡張のFACS測定のグラフである。一次ヒトT細胞は、ヒト化MN-E6-CD84-IBB-3z、MN-E6-CD44-IBB-3z及びMN-E6-CD8-CD28-4-IBB-3zを含むCARのパネルで形質導入された。CAR T細胞は、MUC1*陽性T47D乳癌細胞、MUCl*陽性Capan膵臓癌細胞及びMUCl陰性細胞HCT-116結腸癌細胞及びHEK-293ヒト胚腎臓細胞と共培養された。グラフから見ることができるように、CAR T数はMUCl*陽性細胞の存在状態で増加する。図40は、MUCl*標的化CARsのウェスタンブロットの写真を示す。1～9は、次のものである: 1. MN-E6scFv-Fc-8-4-IBB-CD3z(CD8 TMを持つヒンジ領域としてのヒトFc); 2: MN-E6scFv-FcH-8-4-IBB-CD3z(CD8TMを持つヒンジ領域としてのヒトFc hingeless);3: MN-E6scFv-Fc-4-4-IBB-CD3z(CD4 TMを持つヒンジ領域としてのヒトFc); 4: MN-E6scFv-FcH-4-4-IBB-CD3z(CD4 TMを持つヒンジレスヒンジ領域としてのヒトFc); 5: MN-E6scFv-IgD-8-4-IBB-CD3z(CD8TMを持つヒトIgDからのヒンジ領域); 6: MN-E6scFv-IgD-4-4-IBB-CD3z(CD4TMを持つヒトIgDからのヒンジ領域); 7: MN-E6scFv-X4-8-4-IBB-CD3z(CD8 TMを持つヒンジ領域としての長い柔軟なリンカー); 8: MN-E6scFv-X4-4-4-IBB-CD3z(CD4TMを持つヒンジ領域としての長い柔軟なリンカー); 9:MN-E6scFv-8-4-4-IBB-CD3z。(CD4 TM をもつCD8とCD4からのヒンジ領域)。
図41は、MN-E6scFv-Fc-84-IBB-CD3z、MN-E6scFv-FcH-8-4-IBB-CD3z(hingeless)、MN-E6scFv-Fc-4-4-IBB-CD3z、MN-E6scFv-IgD-8-4-IBB-CD3z、MN-E6scFv-X4-8-4-IBB-CD3z及びMN-E6scFv-X4-4-4-IBB-CD3zで、形質導入されたヒトT細胞と共培養されたT47D乳癌細胞の、FACSスキャンのグラフを示す。T細胞と癌細胞は1:1の比率で、48時間共培養された。T細胞計算はすべての非形質導入T細胞の平均に標準化された。また、非形質導入T細胞と共培養された時、標的細胞は個々の特定の細胞タイプに標準化された。CAR T細胞がMUCl*陽性癌細胞と共培養される場合、T細胞数は拡大し、標的癌細胞数は減少することをグラフはしめす。
図42は、T47D乳癌細胞、Capan-2膵臓癌細胞、K562-MUC1*形質転換細胞、及びK562-wt細胞のFACSスキャンのグラフを示し、それはMN-E6scFv-Fc-8-4-IBB-CD3z、MN-E6scFv-FcH-8-4-IBB-CD3z、MN-E6scFv-Fc-4-4-IBB-CD3z、MN-E6scFv-IgD-8-4-IBB-CD3z、MN-E6scFv-X4-8-4-IBB-CD3z及びMN-E6scFv-X4-4-4-IBB-CD3zで形質導入されたヒトT細胞と共培養された。T細胞と癌細胞は、1:1の比率で48時間共培養された。T細胞計算はすべての非形質導入T細胞の平均に標準化された。また、非形質導入T細胞と共培養された時、標的細胞は個々の特定の細胞タイプに標準化された。CAR T細胞がMUCl*陽性癌細胞と共培養される場合、T細胞数は拡大し、標的癌細胞数は減少することをグラフはしめす。
抗MUCl*標的化抗体の特異性
これらの実験が実証するように、CARの重要な部分は、腫瘍細胞に対して免疫細胞を仕向ける抗体断片である。次のセクションで示すように、MN-E6及びMN-C2は、腫瘍細胞上で発現されるMUCl*の型に特異的である。CARの次の最も重要な部分は、免疫系共刺激領域を担持する細胞質尾部である。これらの領域の同一性は、免疫反応の程度を調整するが、特異性に影響はしない。示されるように、CARの膜貫通の部分の同一性は最も重要ではない。膜貫通の部分がある柔軟性を持ち、十分に長いので、抗体断片が腫瘍細胞上のその同系統のリセプターに達することを可能にする限り、それは十分である。これは、図40-42に実証される。MN-E6標的抗体断片及び細胞内の共同刺激領域4 IBB及びCD3-zetaを含むCARで、様々な異なる細胞外、膜貫通、短い細胞質尾部を持っているすべては、ホストT細胞の拡張を刺激する間、それらが特異的に標的細胞を殺す機能を示す。
抗体特異性を実証する最も正確な方法は、癌組織標本と比較して、正常なヒト組織標本上で抗体をテストしている。MN-C2及びMN-E6は、特異的に、MUC1若しくはMUCl*陽性癌細胞に結合すると示された。いくつかの乳癌アレイは、いくつかの抗MUCl若しくはMUCl*抗体を使用して分析された。本質的に、1,200人の異なる乳癌患者からの乳癌組織標本の連続切片に関する研究は、ほとんど、全長MUC1は乳癌組織に残存しないことを示した。発現されたMUC1の大部分は、MUCl*であり、MN-C2によって染色された。その分析は、Clarient診断法によって行なわれ、また、組織染色はアルフレッド法を使用して得点化された。例えば、図43は、VU4H5（縦列反復に結合する市販の抗MUCl抗体）若しくはMUCl*に結合するMN-C2で染色された乳癌組織アレイの連続切片を示す。図43と44は、MUC1-FL(全長) を認識するVU4H5 若しくは癌のMUCl*を認識するMN-C2で、染色された乳癌組織アレイの写真である。組織染色は、強度スコア及び分配スコアを組み合わせる、アルフレッドを得点する方法を使用して得点化された。組織アレイの写真下に、結果を表示す、色分けされたグラフがある。見ることができるように、VU4H5で染色されたアレイは非常に明るく、また、多くの組織が、核酸ベースの診断法によって証拠づけられるようなすべての乳癌の96%以上にMUClが異常に発現されると公表された報告書にもかかわらず全く染色されない。対照的に、MN-C2で染色されたアレイは、非常に暗い(グラフにおいて黄色若しくは白に対して赤)。さらに、多くの組織が、抗全長MUClで全く染色されず、しかし、MN-C2で大変暗く染色された(グラフでブリーンボックスを参照)、同様に、本願発明者等は、ヒト化MN-E6scFv-Fcで、正常若しくは癌の乳組織を染色した。第2streptavidin基によってそれを視覚化することができるように、抗体断片がビオチンを付加された。図45で見ることができるように、hMN-E6 scFv-Fcは、正常な乳組織を染色しないが、癌の乳組織を染色する。さらに、染色の程度と均質性は、患者の腫瘍等級及び転移性等級で増加する(図45-46)。同様に、hMN-E6 scFv-Fcは、正常な肺組織を染色しないが、肺癌組織を染色し(図47-51)、腫瘍等級若しくは転移等級の増加ように染色強度及び分配を増加させた。図52は、ヒト化MN-E6-scFv-Fcビオチン化抗MUCl*抗体5 μg/mLで染色された、正常な小腸及び癌の小腸組織の写真であり、その後、第2streptavidinHRP抗体で染色された。A)は、正常な小腸組織である。B)は、図の中で表示されるような患者からの小腸癌である。C）とD）は、第2抗体単独で染色された、対応する連続切片の写真である。図53は、ヒト化MN-E6-scFv-Fc抗MUCl*抗体50 μg/mLで染色され、その後、第2ヤギ抗ヒトHRP抗体で染色された正常小腸組織の写真を示す。A-Dは、正常な小腸組織である。E-Hは、第2抗体単独で染色された、対応する連続切片の写真である。図54は、ヒト化MN-E6-scFv-Fc抗MUCl*抗体50 μg/mLで染色され、その後、第2ヤギ抗ヒトHRP抗体で染色された、癌の小腸組織の写真を示す。A-Dは、図の中で表示されるような患者からの癌の小腸組織である。E-Hは、第2抗体単独で染色された、対応する連続切片の写真である。図55は、ヒト化MN-E6-scFv-Fc抗MUCl*抗体50 μg/mLで染色され、その後、第2ヤギ抗ヒトHRP抗体で染色された、癌の小腸組織の写真を示す。A-Dは、図の中で表示されるような患者からの癌の小腸組織である。E-Hは、第2抗体単独で染色された、対応する連続切片の写真である。図56は、ヒト化MN-E6-scFv-Fc抗MUCl*抗体50 μg/mLで染色され、その後、第2ヤギ抗ヒトHRP抗体で染色された、正常な結腸組織の写真を示し、A-Dは、正常な結腸である。E-Hは、第2抗体単独で染色された、対応する連続切片の写真である。図57は、ヒト化MN-E6-scFv-Fc抗MUCl*抗体50 μg/mLで染色され、その後、第2ヤギ抗ヒトHRP抗体で染色された、結腸癌組織の写真を示す。A-Dは、図の中で表示されるような転移の患者からの結腸癌組織である。E-Hは、第2抗体単独で染色された、対応する連続切片の写真である。図58は、ヒト化MN-E6-scFv-Fc抗MUCl*抗体50 μg/mLで染色され、その後、第2ヤギ抗ヒトHRP抗体で染色された、結腸癌組織の写真を示す。A-Dは、図の中で表示されるような等級2の患者からの結腸癌組織である。E-Hは、第2抗体単独で染色された、対応する連続切片の写真である。図59は、ヒト化MN-E6-scFv-Fc抗MUCl*抗体50 μg/mLで染色され、その後、第2ヤギ抗ヒトHRP抗体で染色された、結腸癌組織の写真を示す。A-Dは、図の中で表示されるような転移の患者からの結腸癌組織である。E-Hは、第2抗体単独で染色された、対応する連続切片の写真である。図60は、ヒト化MN-E6-scFv-Fc抗MUCl*抗体50 μg/mLで染色され、その後、第2ヤギ抗ヒトHRP抗体で染色された、前立腺癌組織の写真を示す。A-Dは、図の中で表示されるような患者からの前立腺癌組織である。E-Hは、第2抗体単独で染色された、対応する連続切片の写真である。図61は、ヒト化MN-E6-scFv-Fc抗MUCl*抗体50 μg/mLで染色され、その後、第2ヤギ抗ヒトHRP抗体で染色された前立腺癌組織の写真を示す。A-Dは、図の中で表示されるような患者からの前立腺癌組織である。E-Hは、第2抗体単独で染色された、対応する連続切片の写真である。図62は、ヒト化MN-E6-scFv-Fc抗MUCl*抗体50 μg/mLで染色され、その後、第2ヤギ抗ヒトHRP抗体で染色された、前立腺癌組織の写真を示す。A-Dは、図の中で表示されるような患者からの前立腺癌組織である。E-Hは、第2抗体単独で染色された、対応する連続切片の写真である。
本発明の1つの態様は、MUCl若しくはMUCl*陽性癌と診断された、MUCl若しくはMUCl*陽性癌になるリスクを診断された、若しくはMUCl若しくはMUCl*陽性癌を持っていることが疑われる患者を処置する方法であり、そこでは、標本は患者の癌から得られ、PSMGFR SEQ ID NO:2、 SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQID NO: 620)若しくはSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQ IDNO: 621)に結合する抗体との反応性に関してテストされる。その後、患者は、それら患者の癌標本で反応した抗体からの抗体可変断片を含むscFv、scFv-Fc若しくはCAR Tで処置される。本発明の別の態様は、MUCl若しくはMUCl*陽性癌と診断された、MUCl若しくはMUCl*陽性癌になるリスクを診断された、若しくはMUCl若しくはMUCl*陽性癌を持っていることが疑われる患者を処置する方法であり、そこでは、標本は患者の癌から得られ、MN-E6-scFv、MN-C2-scFv、MN-C3-scFv若しくはMN-C8-scFvを持つ反動に関してテストされ、その後、患者は、それらの癌標本と反応した抗体の部分を含むscFv、scFv-Fc-mut若しくはCAR Tで処置される。
本願発明者等は、MUC1は、1つを超える開裂酵素によってMUCl*に開裂することができ、その開裂のサイトが3次元畳み込みに影響し、その結果として、そのモノクローナル抗体がMUCl*のその型を認識されうるように影響することを発見した。異なる癌細胞若しくは癌組織は、異なる開裂酵素を発現する。本願発明者等は、異なる癌細胞株上の様々な開裂酵素阻害剤をテストし、一つの癌細胞株で、MUC1の開裂を阻害する阻害剤は、別の癌細胞株でその開裂を阻害しないことをみいだした。同様に、PCR実験は、異なる細胞若しくは細胞株において、異なるレベルで開裂酵素が発現されることを示した。例えば、骨髄の造血幹細胞は、モノクローナル抗体、MN-E6若しくはMN-C2ではなく、MNC3によって認識されるMUCl*を発現する(図63)。DU145前立腺癌細胞及びT47D乳癌細胞の成長は、MN-C2とMN-E6のFabsによって阻害されるが、MNC3またはMNC8のFabsによってはされない。これは、癌細胞株が、MNC3若しくはMNC8ではなく、MN-E6とMN-C2によって認識されるMUCl*を発現することを示している（図64）。PCR実験は、骨髄のCD34陽性細胞は、T47D乳癌細胞より、約2,500倍多くのMMP2及び約350倍多くのADAM28を発現し、一方、DU145前立腺癌細胞は、T47D乳癌細胞より、約2,000倍多くのADAM TS 16、約400倍多くのMMP14及び約100多くのMMP1 を発現する(図65及び図66)。反対に、T47D乳癌細胞は、骨髄細胞より約80倍多くのMMP9を発現し及びDU145前立腺癌細胞の同じ約2倍発現する。様々な開裂酵素阻害剤は、異なる種類の癌細胞中の開裂を阻害するそれらの能力に関してテストされた。MMP2、MMP9及びADAM 17を阻害するTAPI-1、及びMMP2、MMP9、MMP14を阻害するMMP2/9 V阻害剤は、T47D乳癌細胞のMUC1の開裂を阻害した、しかし、テストされた開裂酵素阻害剤のどれも、DU145前立腺癌細胞で効果がなかった(図68A、68B)。これらの実験は、これらの乳癌細胞のMUC1は、MMP2、MMP9、MMP14若しくはADAM 17又は、これら酵素のコンビネーションによって、開裂されることを示した。
BiTEs
ディバレント(若しくはビバレント)単一鎖可変断片(di-scFvs、bi-scFvs)は、2つの scFvsのリンキングにより加工することができる。これは２つの縦並びのscFvsを産出して、2つのVH及び2つのVL領域を持つ単一のペプチド鎖の生産により行うことができる。別の可能性は、scFvsに二量化させるのに、ともに折り重ねることが2つの可変領域にとってあまりにも短いのリンカーペプチド(約アミノ酸)での、scFvsの生成である。このタイプはダイアボデイー（diabodies）として知られている。Diabodiesは、それらの標的へのはるかに高い親和性を持っていることを意味している、対応するscFvsより40倍までの低い解離定数を持つ。従って、diabody薬は、他の治療用抗体よりはるかに低く投薬量が可能であるし、生体内で癌への極めて高い特異性のある標的化が可能である。さらに、短いリンカー(1つ若しくは2つのアミノ酸)は、三量体、いわゆるtriabodies若しくはtribodiesと呼ばれる、の形成を可能とする。Tetrabodiesも、また、生産された。それらは、diabodiesより、標的へのさらに高い親和性をもつ。
これらのフォーマットの全ては、2つの異なる抗原への特異性を持つ種々の可変断片から構成されうる。その場合、それらは二重特異性抗体のタイプである。その、最も早く開発された、2重特異的T細胞エンゲガー(BiTE抗体構築物)として知られる、2重特異性縦列di-scFvsである。BiTEsは、約55キロダルトンの単一のペプチド鎖上に、異なる抗体の2 つのscFvsから成る融合タンパク質である。scFvsのうちの1つは、CDSのリセプター経由のような、T細胞に結合でき、他は、異常に発現されたMUC1*のような、腫瘍特異的分子経由癌細胞に結合できる。
本発明の別の態様は、MUCl若しくはMUCl*陽性癌と診断された、MUCl若しくはMUCl*陽性癌になるリスクを診断された、若しくはMUCl若しくはMUCl*陽性癌を持っていることが疑われる患者を処置する方法であり、そこでは患者は処理される、有効な量のBiTEが投与され、BiTEの1個の抗体可変断片は、T細胞表面抗原に結合し、及びBiTEの別の抗体可変断片は、PSMGFR （SEQ ID NO:2）、SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQID NO: 620)若しくはSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQ ID NO: 621)に結合する。1つのケースでは、MUCl*に結合するBiTEの抗体可変断片は、huMN-E6、huMN-C2、huMN-C3若しくはhuMN-C8の部分を含む。
本発明の別の態様中で、PSMGFR （SEQ ID NO:2）、
SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQ ID NO: 620)、若しくは、SVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQ IDNO: 621)のすべて若しくは大部分を含むMUC1*ペプチドが、養子関係の(adoptive)T細胞アプローチで使用される。この場合、患者のT細胞は、MUCl*ペプチドに露出され、そして、成熟の様々な段階を経て、T細胞は、MUCl*特異的リセプターを展開する。その後、適合された(adapted)T細胞は、拡張され、MUCl若しくはMUCl*陽性癌と診断された、MUCl若しくはMUCl*陽性癌になるリスクを診断された、若しくはMUCl若しくはMUCl*陽性癌を持っていることが疑われる患者に投与される。
SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQ ID NO: 620)、若しくは、SVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQ IDNO: 621)のすべて若しくは大部分を含むMUC1*ペプチドが、養子関係の(adoptive)T細胞アプローチで使用される。この場合、患者のT細胞は、MUCl*ペプチドに露出され、そして、成熟の様々な段階を経て、T細胞は、MUCl*特異的リセプターを展開する。その後、適合された(adapted)T細胞は、拡張され、MUCl若しくはMUCl*陽性癌と診断された、MUCl若しくはMUCl*陽性癌になるリスクを診断された、若しくはMUCl若しくはMUCl*陽性癌を持っていることが疑われる患者に投与される。
CARの細胞外標的ヘッドとして、MN-C2及びヒト化MN-C2を持つ、CARsのシリーズも作られた。これらのCARのための構築物は、その後にLentiウイルスベクターに挿入されるプラスミドに挿入された。その後、ヒトT細胞は、MN-C2 CAR及びhuMN-C2 CARを担持するlentiウイルスベクターで形質導入された。マウス配列若しくはヒト化MN-C2-scFv-CARが生成された。MN-C2-scFv及び様々な膜貫通・細胞内共刺激領域を含むCARが、表1にリストされた構築物を含めて生成された。本発明の1つの態様では、CARは、CD8短細胞内部分-4-lBB-3zetaに由来したhuMN-C2-scFv-短ヒンジ領域膜貫通領域を含む。別の態様では、膜貫通領域は、CD4膜貫通配列に由来した。別の態様では、細胞内共刺激領域は、CD28-3zetaである。また別の態様では、細胞内共刺激領域は、CD28-4-lBB-3zetaである。
T細胞が標的細胞を認識し、免疫反応をマウントする過程にあるかどうかを評価する様々な方法がある。T細胞は、標的若しくは異細胞を認識する場合、クラスターする。これは、容易に肉眼で、若しくは低倍率で見ることができる。標的癌細胞と共培養された時CAR T細胞クラスタリングの外観は、次のものの1つの物指しである: a)それらは、その細胞を、標的細胞と認めるのかどうか;そして、b) それらは、標的細胞、それらはこの場合癌細胞である、を攻撃するために活性化されるかどうか。図80A-80Fは、CARのないヒトT細胞又はhuMN-C2-scFv-CAR44、huMN-C2-scFv-CAR49、huMN-C2-scFv-CAR50、huMN-C2-scFv-CAR18若しくはhuMN-C2-scFv-CAR19で形質導入されたヒトT細胞と共培養された、mCherryで安定して形質転換された、したがって赤である、MUCl*陽性T47D乳癌細胞の写真を示す。この場合、CAR構築物は、GFPマーカーを担持し、したがって、CAR形質導入T細胞は緑である。T細胞が、CARを担持しない場合、見ることができるように、癌細胞のT細胞誘導クラスタリングはない。しかしながら、T細胞が、MUCl*標的化CARを担持するとき、MUCl*陽性癌細胞の劇的なクラスタリングがある。
T細胞が、標的細胞を認識しクラスターの後、それらは、perforin及びgranzyme Bを過剰発現する。ともに、これらの2つの分子は、標的細胞の細胞死パスウェイを活性化する。Perforinが、標的細胞に穴を作り、そこへ、アポトーシス性プロテアーゼを活性化する、granzyme BをT細胞が注入し、標的細胞を溶解させるということが推定される。図81A-81Dは、標的MUCl*陽性前立腺癌細胞へ結合し、そしてgranzyme Bを注入しているhuMN-C2-scFV-CAR44 T細胞を示す。
T細胞が、標的細胞を認識し、その細胞を殺すために活性化されるかどうかの別の測定の手段は、サイトカイン、特にインターフェロンγ(IFNg)のアップレギュレーションである。表2は、様々な異なる癌細胞との共培養の後に、多様なMUCl*標的化CAR T細胞によって分泌されたインターフェロンγの量を測定するELISA実験の結果をリストする。MUCl*発現とCAR T活性の間のリンクを確立するために、本願発明者等は、CAR T殺滅の量が、癌細胞によって発現されたMUCl*の量に比例したかどうか判断するための実験を行なった。T47Dは、1つの、高い、MUCl*陽性乳癌細胞である。これらの細胞はさらにある全長MUC1をも発現する。T47D細胞は、様々の変わる量の付加的なMUCl*で形質転換され、その後、CAR T細胞と共培養された。結果は、1:1のような標的(癌細胞)に対する低エフェクター(CART)で、特異的CAR T殺滅は、増加するMUCl*発現で増加され、分泌されたインターフェロンγの量もまた、増加するMUCl*につれて増加した(図82B)。CAR T反応を測定する別の方法は、蛍光活性化細胞ソーテイング(FACS)による。図X7Aは、付加的なMUCl*で形質転換されたT47D癌細胞のFACS分析のグラフを示す。E:T比率、1: 1で、CAR T媒介癌細胞殺滅は、癌細胞上で発現されたMUCl*の量の増加とように増加した。本発明者は、以前に、癌細胞が、化学療法剤への抵抗性を獲得するとき、それらが発現するMUCl*の量を増加させることを見出していたので、このことは重要である(Fesslerら、2009)。したがって、抗MUCl* CAR Tは、後期段階の癌患者の治療法として、若しくは化学療法剤に対して獲得耐性を持っているものに対して、特に有益である。いくつかのMN-C2-scFv-CARは、ヒトT細胞へ形質導入され、標的化MUCl*陽性癌細胞を殺すそれらの能力を決定するためにFACSによって分析された。図83A-83Dは、MUCl*陽性癌細胞との24時間の共培養の後に、huMN-C2-CAR44T細胞のFACS分析の結果を示す。図83Aは、非形質導入T細胞(赤棒)と比較して、huMN-C2-CAR44 T細胞(青棒)によって殺されたT47D癌細胞のパーセンテージを示すFACSデータのグラフである。X軸は、癌細胞に対するT細胞の比率を示す。図83Bは、非形質導入T細胞(赤棒)と比較して、huMN-C2-CAR44T細胞(青棒)によって殺されたK562-MUC1*癌細胞のパーセンテージを示すFACSデータのグラフである。図83Cは、T47D乳癌細胞の染料CMTMRで染色された FACSスキャンである。Sytox青は、死細胞染色である。死んだ癌細胞は、四分円2及び3中のものである。図83Dは、K562-MUC1*癌細胞が、染料CMTMRで染色された、FACSスキャンである。Sytox青は、死細胞染色である。死んだ癌細胞は、四分円2及び3中のものである。
FACS分析に加えて、多くの研究者が、癌細胞のCAR T殺滅を測定するために、今や、xCELLigence装置を使用する。T細胞が標的細胞を溶解するので、FACSはT細胞誘導細胞殺滅をトレースする最良の方法ではない。FACSによると、それらが細胞残屑として除外されるので、死滅細胞を測定することは困難である。したがって、人が、細胞殺滅の量を推論しなければならず、行方不明の細胞が、T細胞若しくは癌細胞かどうかを様々な方法によって判断する
xCELLigence装置は、そこに癌細胞が置かれる、電極アレイを使用する。付着している癌細胞は、電極を絶縁し、それらが成長するように、したがって、インピーダンスの増加を引き起こす。反対に、T細胞は付着せず、懸濁中に残り、その結果、インピーダンスを増加させる電極の絶縁に寄与しない。しかしながら、T細胞若しくはCAR T細胞が、電極プレート上の癌細胞を殺す場合、それが死んでいるとして癌細胞は、ボールアップ（Ball up）し、離れて浮かぶ。それは、インピーダンスを減少させる。xCELLigence装置は、時間の関数としてインピーダンスを測定する。それは癌細胞殺滅に関連づけられる。さらに、電極プレートには観察ウインドウがある。CAR T細胞が、吸着された標的癌細胞を有効に殺す場合、インピーダンスに減少があり、人は、癌細胞がプレート表面の上に残されていないことが分かりる。
図84A-84Hは、様々な分析によって測定される、MUC1*陽性DU145前立腺癌細胞上のhuMN-C2-CAR44 T細胞の細胞毒性を示す。図84Aは、前立腺癌細胞と共培養された、非形質導入T細胞の蛍光写真である。そこではgranzymeBは赤い蛍光団で染色される。図X4Bは、DAPIである。また、granzyme Bはマージされる。図84Cは、前立腺癌細胞と共培養されたhuMN-C2-CAR44 T細胞の蛍光写真であり、そこではgranzyme Bは赤い蛍光団で染色される。図84Dは、DAPIであり、また、granzyme Bはマージされる。図84Eは、癌細胞とインキュベートされた、非形質導入T細胞のための蛍光ラベル化granzyme BのためのFACSスキャンである。図84Fは、癌細胞とインキュベートされた、huMN-C2-CAR44 T細胞のための蛍光ラベル化granzyme Bの肯定的な増加を示すFACSスキャンである。図84Gは、中間の蛍光強度のグラフである。図84Hは、非形質導入T細胞(緑)ではおこらなかったが、huMN-C2-CAR44T細胞(青トレース)によるDU145癌細胞のリアルタイム殺滅をトレースするxCELLigenceスキャンである。図85A-85Hは、様々な分析によって測定される、MUC1*陽性CAPAN-2膵臓癌細胞における、huMN-C2-CAR44 T細胞の細胞毒性効果を示す。図85Aは、膵臓癌細胞と共培養された、非形質導入T細胞の蛍光写真であり、そこではgranzymeBは赤い蛍光団で染色される。図85Bは、DAPIであり、granzyme Bはマージされる。図85Cは、膵臓癌細胞と共培養されたhuMN-C2-CAR44 T細胞の蛍光写真であり、そこではgranzyme Bは赤い蛍光団で染色される。図85Dは、DAPIであり、granzyme Bはマージされる。図85Eは、癌細胞とインキュベートされた、非形質導入T細胞のための蛍光ラベル化granzyme BのためにFACSスキャンである。図85Fは、癌細胞とインキュベートされた、huMN-C2-CAR44 T細胞のための蛍光ラベル化granzyme Bの肯定的な増加を示してFACSスキャンである。図85Gは、中間の蛍光強度のグラフである。図85Hは、非形質導入T細胞(緑)ではおこらなかったが、huMN-C2-CAR44T細胞(青いトレース)によるCAPAN-2癌細胞のリアルタイム殺滅をトレースするxCELLigenceスキャンである。図86A-86Cは、MUC1*陰性細胞ではなかったが、huMN-C2-CAR44 T細胞による、MUCl*陽性癌細胞のリアルタイム殺滅をトレースするxCELLigenceスキャンである。図86Aは、huMN-C2-CAR44 T細胞が、MUC1*で安定して形質転換されたHCT結腸癌細胞を有効に殺すことを示す。図86Bは、huMN-C2-CAR44T細胞が、HCT-MUC1-41TRにほとんど効果がないことを示し、それは、全長MUC1で安定して形質転換されたMUC1陰性の癌細胞である。この細胞株では、細胞のわずか約10%が、MUCl*へMUC1を開裂させる。図86Cは、MUCl陰性結腸癌細胞株であるHCT-116細胞に、huMN-C2-CAR44T細胞が効果がないことを示す。
これらのデータは、抗体断片標的ヘッドがMN-C2である、CARで形質導入されたT細胞が、有効にMUCl*陽性癌細胞を殺すことを実証する。これらのデータは、ヒトT細胞へ有効に形質導入されたhuMN-C2-scFV-CAR44が、MUCl*陽性癌細胞を殺すことを特に示す。CAR Tの機能の最も重要な態様は、標的抗体断片であることを、私たち他が、今実証したので、抗体断片MN-C2-scFV若しくはhuMN-C2-scFVをもつ任意のCARで形質導入された免疫細胞若しくはT細胞が、MUCl若しくはMUCl*陽性癌細胞に対する同様の効能を持つであろうことが推定される。例えば、膜貫通の部分にscFvを接続するヒンジ領域は、任意のフレキシブルなリンカーでありえる。細胞内の共刺激領域は、CD28-3zeta、CD28-4-lBB-3zeta若しくは免疫細胞共刺激領域の任意のコンビネーションでありえる。
実験は、また、より有効に標的癌細胞を殺すために、あらかじめCAR T細胞を活性化する方法の開発を行なわれた。本願発明者等は、最初に抗CD3及び抗CD28抗体を提示するビーズを使用して、CAR T細胞の予備刺激（予備活性化ともいう）をテストした。この予備刺激は、細胞殺滅の量を増加させた。しかし、増加はCARの標的には特異的ではなかった。むしろ、CD3-CD28刺激CAR T細胞は、非特異的に、MUCl*陽性及び陰性の細胞を殺滅した。次に本発明者たちは、CARの抗体部分の標的を発現するビーズ若しくは癌細胞で、CAR T細胞を予備刺激することを試験した。合成MUCl*細胞外領域ペプチドは、１μｍ若しくは4.5μｍビーズに付着された。抗MUCl* CAR T細胞は、12～24時間、ペプチド提示ビーズでインキュベートされた。図87A-87Lは、MUCl*ペプチド提示ビーズで24時間のインキュベーション後の、非形質導入T細胞若しくはCAR T細胞を示す。見ることができるように、CAR形質導入T細胞だけが、活性化誘導クラスタリングを示す。CAR T細胞は、遠心分離によってビーズから分けられ、次に、T細胞活性化マーカーCD25、CD69及びgranzyme Bの発現を測定するためにFACSによって分析された。図88A-88Dで見ることができるように、T細胞活性化マーカーは、T細胞がその細胞外領域が抗MUCl*抗体断片を含んだCARで形質導入された場合に及び場合にのみに、MUCl*提示ビーズでインキュベーションの後に増加する。CD3-CD28ビーズでの予備活性化に対する際立った対照では、MUCl*ペプチドビーズでの刺激が、唯一、特異的殺滅を増加させた。MUCl*陰性細胞の殺滅に増加はなかった。図89A-89Cは、MUCl*で安定して形質転換されたヒト卵巣癌細胞、3倍陰性乳癌細胞及びMUCl陰性結腸癌細胞株での、ビーズ刺激抗MUCl* CAR T細胞の増強した殺滅を示す、xCELLigenceスキャンを示す。MUCl*ペプチドビーズ刺激CAR T細胞の増強された殺滅能力は、CART細胞が、より長い期間、及び癌細胞比率へのはるかに低いT細胞で、標的癌細胞を有効に殺滅することを可能にした。本発明の1つの態様では、CAR T細胞は、MUCl若しくはMUCl*陽性癌と診断された、MUCl若しくはMUCl*陽性癌になるリスクを診断された、若しくはMUCl若しくはMUCl*陽性癌を持っていることが疑われる患者に投与される前に、MUCl細胞外領域に由来するペプチドを提示するビーズ若しくは表面とのインキュベーションによって、予備刺激がなされる。
さらに、本願発明者等は標的抗原を提示する癌細胞とインキュベーションすることにより、予備活性化CAR T細胞をテストした。本願発明者等は、12-24時間、HCT-MUC1*細胞とhuMN-C2-CAR44 T細胞をインキュベーションした。この予備刺激は、１回、2回、3若しくは4回行われた。標的細胞予備刺激は、CART細胞の特異的殺滅を非常に増強した。図90A-90Dで見ることができるように、癌細胞刺激CAR T細胞による特異的殺滅は、癌細胞比率にたいする低いCAR Tでさえ、そして、より長い期間、それらの殺滅能力を増加させたことを示す。図90A-90Dは、癌細胞刺激huMN-C2-scFv-CAR44形質導入ヒトT細胞は、有効にT47D乳癌細胞を殺す、BT-203倍陰性乳癌細胞、SKOV-3卵巣癌細胞及びHCT-MUCl*癌細胞を殺滅することを示す。本発明の1つの態様では、MUCl若しくはMUCl*陽性癌と診断された、MUCl若しくはMUCl*陽性癌になるリスクを診断された、若しくはMUCl若しくはMUCl*陽性癌を持っていることが疑われる患者に投与される前に、癌細胞でありうる、MUCl*発現細胞とのインキュベーションによって、予備刺激される。好ましい態様では、MUCl*刺激細胞は、UV若しくは化学的に、CAR T細胞との共培養の前に、不活性化される。
ビーズ刺激(プロトコル１)若しくは癌細胞刺激 (プロトコル２)をされたhuMN-C2-scFv-CAR44形質導入ヒトT細胞が、動物での腫瘍成長阻害のそれらの能力に関してテストされた。ルシフェラーゼで安定して形質転換されたヒト癌細胞が、11及び15週間の年齢間で、雌のNOD/SCID/GAMMA(NSG)マウスに注入された。1つの実験では、500,000のHCT-MUCl*癌細胞が、後部側面に皮下投与された。腫瘍移植は、ルシフェリンを動物に注入し、次に、IVIS装置を使用して、蛍光癌細胞をイメージ化することにより確認された。注入後５日目に得られたIVISイメージは、腫瘍細胞の存在を示した。６日目、及び１２日目において、10M huMN-C2-scFv-CAR44 T細胞が動物に投与された。CAR T細胞の5Mが、腫瘍内注入で投与されそして別の5Mが、尾静脈注入によって投与された。対照群は、同じ投与経路によって、非形質導入T細胞の同じ数若しくはPBSの同じボリュームのいずれかを注入した。全身腫瘍組織量のIVIS測定は、7、11、13及び21日目で得られた。図91A-91Yで見ることができるように、コントロール・マウスの両方のグループは、連続的に成長した腫瘍を持っていた。しかし、ビーズ刺激されたhuMN-C2-scFv-CAR44 T細胞で処置されたマウスは、21日目で検知できる癌細胞を持たなかった。癌細胞刺激されたhuMN-C2-scFv-CAR44 T細胞で処置された、5匹のマウスの3匹で、21日目で検知できる癌細胞を持っていない。他の2匹のマウスには、21日目で残りの癌細胞がかろうじて検知できる数がある。
ビーズ刺激(プロトコル１)若しくは癌細胞刺激 (プロトコル２)をされたhuMN-C2-scFv-CAR44形質導入ヒトT細胞が、動物での腫瘍成長阻害のそれらの能力に関してテストされた。ルシフェラーゼで安定して形質転換されたヒト癌細胞が、11及び15週間の年齢間で、雌のNOD/SCID/GAMMA(NSG)マウスに注入された。1つの実験では、500,000のBT-20 MUCl*癌細胞が、後部側面に皮下投与された。腫瘍移植は、ルシフェリンを動物に注入し、次に、IVIS装置を使用して、蛍光癌細胞をイメージ化することにより確認された。注入後6日目に得られたIVISイメージは、腫瘍細胞の存在を示した。6日目において、IVISイメージ化後、10M huMN-C2-scFv-CAR44 T細胞が動物に投与された。CAR T細胞の5Mが、腫瘍内注入で投与されそして別の5Mが、尾静脈注入によって投与された。対照群は、同じ投与経路によって、非形質導入T細胞の同じ数若しくはPBSの同じボリュームのいずれかを注入した。全身腫瘍組織量のIVIS測定は、6、8及び12日目で得られた。図92A-92Jで見ることができるように、huMN-C2-CAR44 T細胞で処置されたマウスの両方のグループは、対照群と比較して、全身腫瘍組織量の減少を示した。
ビーズ刺激(プロトコル１)をされたhuMN-C2-scFv-CAR44形質導入ヒトT細胞が、動物での腫瘍成長阻害のそれらの能力に関してテストされた。ルシフェラーゼで安定して形質転換されたヒトSKOV-3 MUCl*陽性卵巣癌細胞が、11及び15週間の年齢間で、雌のNOD/SCID/GAMMA(NSG)マウスに注入された。1つの実験では、500,000のSKOV-3癌細胞が、後部側面に皮下投与された。腫瘍移植は、ルシフェリンを動物に注入し、次に、IVIS装置を使用して、蛍光癌細胞をイメージ化することにより確認された。注入後3日目に得られたIVISイメージは、腫瘍細胞の存在を示した。癌移植後、4及び11日目において、10M huMN-C2-scFv-CAR44 T細胞が動物に投与された。4日目にCAR T細胞が、IP注入で投与された。11日目において、CAR T細胞の半分が腹腔内のスペースに注入された。また、他方の半分は尾静脈に注入された。対照群は、同じ投与経路によって非形質導入T細胞の同じ数若しくはPBSの同じボリュームのいずれかを注入された。全身腫瘍組織量の後のIVIS測定は７日目、１０日目及び１5日目で得られた。図93A-93Lで見ることができるように、コントロール・マウスは、huMN-C2-CAR44 T細胞処理マウスよりはるかに速い速さで成長している腫瘍がある。
図93Mは、色をつけるべき光子/秒に、関連づけるIVIS色スケールである。
図93Mは、色をつけるべき光子/秒に、関連づけるIVIS色スケールである。
本発明の1つの態様は、MUCl若しくはMUCl*陽性癌と診断された、MUCl若しくはMUCl*陽性癌になるリスクを診断された、若しくはMUCl若しくはMUCl*陽性癌を持っていることが疑われる患者を処置する方法である。それはMUCl*標的化CARで形質導入された免疫細胞の有効量を投与することである。そこではCARは、以下からなるグループの中から選ばれる;
MN-E6-CD8-3z(SEQ ID NOS: 294-295);
MN-E6-CD4-3z(SEQ ID NOS: 746-747);
MN-E6-CD8-CD28-3z(SEQ ID NOS: 297-298);
MN-E6-CD4-CD28-3z(SEQ ID NOS: 748-749);
MN-E6-CD8-4-IBB-3z(SEQ ID NOS: 300-301);
MN-E6-CD4-4-IBB-3z(SEQ ID NOS: 750-751);
MN-E6-CD8-CD28-4-IBB-3z(SEQ ID NOS: 303-304);
MN-E6-CD4-CD28-4-IBB-3z(SEQ ID NOS:754-755);
MN-E6scFv-Fc-8-4-IBB-CD3z(SEQ ID NOS:310-311);
MN-E6scFv-IgD-Fc-8-4-IBB-CD3z(SEQ ID NOS:770-771);
MN-E6scFv-FcH-8-4-IBB-CD3z(SEQ ID NOS:315-316);
MN-E6scFv-IgD-FcH-8-4-IBB-CD3z(SEQ ID NOS:772-773);
MN-E6scFv-Fc-4-4-IBB-CD3z(SEQ ID NOS:318-319);
MN-E6scFv-FcH-4-4-IBB-CD3z(SEQ ID NOS:321-322);
MN-E6scFv-IgD-8-4-IBB-CD3z(SEQ ID NOS:323-324);
MN-E6scFv-IgD-4-4-IBB-CD3z(SEQ ID NOS:327-328);
MN-E6scFv-X4-8-4-IBB-CD3z(SEQ ID NOS:330-331);
MN-E6scFv-X4-4-4-IBB-CD3z(SEQ ID NOS:333-334);
MN-E6scFv-8-4-4-IBB-CD3z(SEQ ID NOS:336-337)、若しくはMN-E6が、MN-C2、MN-C3若しくはMN-C8と取り替えられる上述のCARのいずれか;
MN-C2-CD8-3z(SEQ ID NOS: 606-607);
MN-C2-CD4-3z(SEQ ID NOS: 758-759);
MN-C2-CD8-CD28-3z(SEQ ID NOS: 608-609);
MN-C2-CD4-CD28-3z(SEQ ID NOS: 760-761);
MN-C2-CD8-4-IBB-3z(SEQ ID NOS: 610-611及びSEQ ID NOS: 718-719);
MN-C2-CD4-4-IBB-3z(SEQ ID NOS: 762-763);
MN-C2-CD8-CD28-4-IBB-3z(SEQ ID NOS:306-307);
MN-C2-CD4-CD28-4-IBB-3z(SEQ ID NOS:766-767);
MN-C2-Fc-84-IBB-CD3z(SEQ ID NOS: 732-733);
MN-C2IgD-Fc-8-4-IBB-CD3z(SEQ ID NOS:734-735);
MN-C2-FcH-8-4-IBB-CD3z(SEQ ID NOS:736-737);
MN-C2IgD-FcH-8-4-IBB-CD3z(SEQ ID NOS:738-739);
MN-C2IgD-8-4-IBB-CD3z(SEQ ID NOS: 740-741);
MN-C2-X4-84-IBB-CD3z(SEQ ID NOS: 742-743)。
MUCl若しくはMUCl*陽性癌と診断された、MUCl若しくはMUCl*陽性癌になるリスクを診断された、若しくはMUCl若しくはMUCl*陽性癌を持っていることが疑われる患者を処置する方法である。そこでは、有効な量の免疫細胞が投与され、それは前述のCARのうちの1つで形質導入されており、そこではMN-E6は、癌抗原に特異的である抗体可変領域断片を含むペプチドと取り替えられている。上記の方法では、免疫細胞はT細胞でありえ、さらに、治療される患者から、単離されえる。
MN-E6-CD8-3z(SEQ ID NOS: 294-295);
MN-E6-CD4-3z(SEQ ID NOS: 746-747);
MN-E6-CD8-CD28-3z(SEQ ID NOS: 297-298);
MN-E6-CD4-CD28-3z(SEQ ID NOS: 748-749);
MN-E6-CD8-4-IBB-3z(SEQ ID NOS: 300-301);
MN-E6-CD4-4-IBB-3z(SEQ ID NOS: 750-751);
MN-E6-CD8-CD28-4-IBB-3z(SEQ ID NOS: 303-304);
MN-E6-CD4-CD28-4-IBB-3z(SEQ ID NOS:754-755);
MN-E6scFv-Fc-8-4-IBB-CD3z(SEQ ID NOS:310-311);
MN-E6scFv-IgD-Fc-8-4-IBB-CD3z(SEQ ID NOS:770-771);
MN-E6scFv-FcH-8-4-IBB-CD3z(SEQ ID NOS:315-316);
MN-E6scFv-IgD-FcH-8-4-IBB-CD3z(SEQ ID NOS:772-773);
MN-E6scFv-Fc-4-4-IBB-CD3z(SEQ ID NOS:318-319);
MN-E6scFv-FcH-4-4-IBB-CD3z(SEQ ID NOS:321-322);
MN-E6scFv-IgD-8-4-IBB-CD3z(SEQ ID NOS:323-324);
MN-E6scFv-IgD-4-4-IBB-CD3z(SEQ ID NOS:327-328);
MN-E6scFv-X4-8-4-IBB-CD3z(SEQ ID NOS:330-331);
MN-E6scFv-X4-4-4-IBB-CD3z(SEQ ID NOS:333-334);
MN-E6scFv-8-4-4-IBB-CD3z(SEQ ID NOS:336-337)、若しくはMN-E6が、MN-C2、MN-C3若しくはMN-C8と取り替えられる上述のCARのいずれか;
MN-C2-CD8-3z(SEQ ID NOS: 606-607);
MN-C2-CD4-3z(SEQ ID NOS: 758-759);
MN-C2-CD8-CD28-3z(SEQ ID NOS: 608-609);
MN-C2-CD4-CD28-3z(SEQ ID NOS: 760-761);
MN-C2-CD8-4-IBB-3z(SEQ ID NOS: 610-611及びSEQ ID NOS: 718-719);
MN-C2-CD4-4-IBB-3z(SEQ ID NOS: 762-763);
MN-C2-CD8-CD28-4-IBB-3z(SEQ ID NOS:306-307);
MN-C2-CD4-CD28-4-IBB-3z(SEQ ID NOS:766-767);
MN-C2-Fc-84-IBB-CD3z(SEQ ID NOS: 732-733);
MN-C2IgD-Fc-8-4-IBB-CD3z(SEQ ID NOS:734-735);
MN-C2-FcH-8-4-IBB-CD3z(SEQ ID NOS:736-737);
MN-C2IgD-FcH-8-4-IBB-CD3z(SEQ ID NOS:738-739);
MN-C2IgD-8-4-IBB-CD3z(SEQ ID NOS: 740-741);
MN-C2-X4-84-IBB-CD3z(SEQ ID NOS: 742-743)。
MUCl若しくはMUCl*陽性癌と診断された、MUCl若しくはMUCl*陽性癌になるリスクを診断された、若しくはMUCl若しくはMUCl*陽性癌を持っていることが疑われる患者を処置する方法である。そこでは、有効な量の免疫細胞が投与され、それは前述のCARのうちの1つで形質導入されており、そこではMN-E6は、癌抗原に特異的である抗体可変領域断片を含むペプチドと取り替えられている。上記の方法では、免疫細胞はT細胞でありえ、さらに、治療される患者から、単離されえる。
他のMUC1開裂サイト
癌細胞に加えてのいくつかの正常細胞上で、成長因子リセプター形式、MUCl*に、MUC1が開裂されることは知られている。例えば、MUC1は、健康な幹及び先祖細胞でMUCl*に開裂される。骨髄細胞の大きな割合は、MUCl*陽性癌細胞である。腸の部分はMUCl*陽性である。
本発明者は、互いに比較的接近している異なる位置でMUC1は開裂されうることを見出した。しかし、開裂の位置は、細胞外領域の残りの部分のフォールデイング（折り目）を変更する。その結果、最初の位置で開裂MUCl*に結合するが、別の位置で開裂MUCl*に結合しないモノクローナル抗体が同定されうる。この発見は、2013年8月14日にファイルされた、WO2014/028668に示される。それらの内容は、参照によってその全体がここに組込まれる。本願発明者等は、それが癌細胞に現われるように、MUCl*に結合するが、それが幹と先祖細胞に現われるように、MUCl*に結合しない1セットの抗MUCl*モノクローナル抗体を同定した。反対に、本願発明者等は、幹と先祖細胞に結合するが、癌細胞に結合しないモノクローナル抗体の第２のセットを同定した。幹特異的抗体を同定するために使用される1つの方法は以下のとおりである:モノクローナルハイブリドーマからの上澄みは、2マルチウェルプレートに別々に吸着された。幹細胞、それらは非付着細胞である、は1つのプレートにのせられた。また、付着している癌細胞は、同一のプレートにのせられた。インキュベーションの後、プレートはすすがれ逆さまにされた。非付着幹細胞が、プレートにくっついた場合、その特別なウェルにあるモノクローナル抗体は、幹細胞を認識し、癌細胞を認識しない。癌細胞を捕らえた抗体若しくは幹細胞を捕らえなかった抗体は、癌特異抗体であると確認された。FACS分析は、この方法の有効性を確認した。
抗体MN-E6及びMN-C2は、癌特異抗体の例である。抗体MN-C3及びMN-C8は、幹特異抗体の例である。抗体の両方のセットは、PSMGFR配列があるペプチドに結合されうるが、FACS分析は、抗MUCl*ポリクローナル抗体及びMN-C3がMUCl*陽性骨髄細胞に結合するが、MN-E6はしないことを示す。MUCl*ポリクローナル抗体はPSMGFRペプチドでウサギを免疫することにより生成された。同様に、MN-C3は腸クリプトの幹細胞に結合するが、MN-E6は結合しない。反対に、MN-E6抗体は癌組織に結合するが、幹特異MN-C3は結合しない。競合ELISA実験は、MN-C3及びMN-C8ではなく、MN-E6及びMN-C2結合に、PSMGFRペプチドのC-ターミナル10アミノ酸が必要であることを示す。したがって、癌特異的である抗体を識別する別の方法は、10N末端アミノ酸マイナスPSMGFRペプチドの配列があるペプチドで免疫すること、または癌特異的である抗体若しくは抗体断片をスクリーンするためのこのペプチドを使うことである。N-ターミナル10アミノ酸マイナスPSMGFRペプチドの配列をもつペプチドに結合するが、C-ターミナル10アミノ酸マイナスPSMGFRペプチドの配列をもつペプチドに結合しない抗体は、癌の治療若しくは予防において使用されうる癌特異抗体である。
MUC1細胞外領域は、また、幹細胞及びいくつかの先祖細胞上で開裂する。ここで2量体のリガンドNME１若しくはNME７によって開裂されたMUC1の活性化は、成長と（多能化）pluripotencyを促進し、分化を阻害する。開裂後に残るMUC1の膜貫通の部分がMUCl*と呼ばれ、そして細胞外領域は、MUC1成長因子リセプターPSMGFR)配列の一次配列で本質的に構成される。しかしながら、開裂の正確なサイトは、細胞タイプ、組織タイプ若しくはある人が発現する若しくは過剰発現するどれか開裂酵素に依存して変わりうる。加えて、私たちが以前に同定した開裂サイト、それは、PSMGFR SEQ ID NO:2の大部分若しくはすべてを含み、MUCl*膜貫通部分を除去した。他の開裂サイトは、配列
SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQID NO: 620)若しくは
SVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQ IDNO: 621)の大部分で構成された拡張MUCl*に帰着する;MUC1開裂のサイトは、残る細胞外領域がどのように折り重るかに影響する。本願発明者等は、癌細胞で開裂MUCl*に結合するが、健康な幹及び先祖細胞に存在するように、開裂MUCl*に結合しないモノクローナル抗体を同定した。
SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQID NO: 620)若しくは
SVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQ IDNO: 621)の大部分で構成された拡張MUCl*に帰着する;MUC1開裂のサイトは、残る細胞外領域がどのように折り重るかに影響する。本願発明者等は、癌細胞で開裂MUCl*に結合するが、健康な幹及び先祖細胞に存在するように、開裂MUCl*に結合しないモノクローナル抗体を同定した。
それがNMEl、NME6、NME8、NME7、若しくはNME7-ABのMUC1*への結合を競合的に阻害する場合、例えば、PSMGFR配列に結合する抗体、特に、該抗体がPSMGFRペプチドに結合することができない場合、10 C末端アミノ酸を欠く場合、抗MUCl*抗体若しくは抗体様分子はとても有効でありうるが、ペイロードを担持する抗体若しくは抗体様分子は、抗癌剤として有効であるために、MUCl*リガンドの結合を競合的に阻害する必要はない。例えば、毒素に接合する抗体若しくは抗体様分子は、活性化リガンドの結合を阻害する必要なしに、標的癌細胞の殺滅において有効になりえる。例えば、抗体断片が、NME6、NME8、NME7-AB若しくはNME7の結合を競合的に阻害しないような、MUCl*の部分を標的とするとしても、患者の腫瘍への免疫系を補充する、CAR T若しくはBiTEsに組み入れられた抗体若しくは抗体様分子は、抗癌剤として有効になりえる。好ましい態様では、CAR、適応性のある(adaptive)T細胞レセプター若しくはBiTEに組み入れられた抗体断片は、MUCl*への、NMEl、NME6、NME8、NME7-AB若しくはNME7の結合を競合的に阻害する。
残存する膜貫通の部分の細胞外領域へ結合されうる抗体は、MUCl*細胞外領域及び活性化するリガンドの間の相互作用をブロックする、そしてこの方法で、治療薬として、例えば、癌の治療に使用されうる。さらに、抗MUCl*抗体は、生体外・生体内での幹細胞の成長、運送、同定若しくは単離に役立つ。
MUC1*の細胞外領域を標的とする抗体、抗体断片及びCARを使用するための一般的な戦略
モノクローナル抗体MN-C3及びMN-C8は、固形腫瘍癌細胞より血液細胞へ大きな結合親和性がある。MN-C3及びMN-C8の可変領域に由来した配列を含むヒト化抗体及び抗体断片は、スタンド・アロン治療と使用されえ、又は血液癌の治療用には、CAR Ts、BiTEs、ADCへ統合される。
代替的に、MN-C3及びMN-C8の可変領域に由来した配列を含むヒト化抗体及び抗体断片は、イン・サイツ(in situ)ヒト治療薬のためのような、特定の位置に、幹細胞を運送するために使用されうる。1つのケースでは、ヒト化MN-C3若しくはMN-C8由来抗体若しくは抗体断片で覆われた基質が、幹細胞に載せられ、そして患者に挿入される。別の場合では、ヒト化MN-C3若しくはMN-C8由来抗体若しくは抗体断片で覆われた基質が、治療のために、特定のエリアへ、患者自身の幹細胞を補充するために患者に挿入される。ヒト幹細胞に結合する抗体が治療に役に立つヒト治療は、脊髄修復を含んでいる。ヒト化MN-C3若しくはMN-C8由来抗体若しくは抗体断片で覆われた基質は、抗体を同定・単離するために使われる。ヒト化MN-C3若しくはMN-C8由来抗体は、幹細胞の成長を促進するために使用されうる。
CARs及び開裂酵素
CAR T治療の多くの適用が、T細胞細胞膜と所望の位置にT細胞を向ける抗体断片の間の細胞外領域の長さ若しくは柔軟性によって制限される。例えば、固形腫瘍癌細胞の表面には、無数の細胞表面蛋白及び成長因子リセプターが存在する。これらの細胞表面蛋白の多くは、腫瘍細胞表面への、T細胞若しくはCAR T細胞のような免疫細胞のアクセスを制限するバルキーな細胞外領域がある。1例において、MUC1及び開裂された成長因子リセプター型MUCl*は、固形腫瘍癌の75%以上、及びいくつかの血液癌、で過剰発現される。全長MUC1細胞外領域は、約1,500アミノ酸と2,500アミノ酸の間を含んでいる。その一方で、MUCl*の細胞外領域は、約45アミノ酸～65アミノ酸だけを含んでいる。全長MUC1の長さの変わりやすさは、発現される縦列反復ユニットの数の変わりやすさによる。MUC1が異なる開裂酵素によって開裂される場合、MUCl*の長さの変わりやすさは、異なる開裂サイトによる。癌細胞の表面に近いT細胞を得ることはとても望ましいが、アクセスは、大きくてかさばった細胞外領域を持っている、全長MUC1を含む、近隣のタンパク質によって、立体的に妨害されうる。これは、初期（段階）癌には特に真実である。組織研究は、初期（段階）癌が、任意の全長MUC1が欠けているかもしれない後期（段階）癌より、より全長MUC1を持っていることを示す。この問題は、ある場合には、厳しく、CAR T、適応性のあるT細胞治療、BiTEs及び他のT細胞エンゲガー(engager)を含む癌免疫療法の効能を制限する。
この問題の1つの解決策は、腫瘍へのT細胞のアクセスを制限する、かさばったンパク質を開裂するためにターゲットとされた腫瘍細胞のエリアの開裂酵素を発現するか活性化することである。図94A-94Bは、腫瘍の近くに、MUC1*へMUC1を開裂する開裂酵素を発現する、CAR T細胞の漫画を示す。
本発明の1つの態様では、開裂酵素及びCARは、同じT細胞へ形質導入される。本発明の別の態様では、開裂酵素が、CARが標的癌細胞に交戦するとき、その発現が活性化される誘導可能なプロモーター上にある。ある場合には、開裂酵素の発現が、誘導可能なプロモーターによってコントロールされる。本発明の1つの態様では、その標的を認識するか交戦する場合に、免疫細胞が例えば活性化される場合、開裂酵素の発現が引き起こされる。1例において、T細胞は、T細胞が標的癌細胞を認識する場合、その発現が引き起こされる開裂酵素が形質転換されるか形質導入される。これをする１つの方法は、NFATタンパク質が核に発現されるか移動させられる、時若しくはとすぐに、開裂酵素の発現を引き起こすことである。例えば、NFATプロモーター領域に由来した配列は、開裂酵素用の遺伝子の上流に置かれる。このように、NFATタンパク質のプロモーターに結合する転写調節因子が、NFATタンパク質の転写に結合し誘導するべき十分な濃度にある場合、それらは、さらに開裂酵素の転写のための配列の前に加工される同じそのプロモーターに結合する。NFATタンパク質は、NFATc2として知られるNFAT、NFATc若しくはNFATc 1として知られるNFAT2、NFATc4として知られるNFAT3、NFATc3として知られるNFAT4、又はNFAT5でありうる。本発明の1つの態様では、NFATはNFATc 1、NFATc3若しくはNFATc2である。本発明の1つの態様では、NFATはNFATc 1として知られるNFAT2である。SEQ ID NO: 646は、NFAT2のための上流転写調節領域の核酸配列である。NFAT遺伝子のためのプロモーター配列は、例えば、SEQ ID NO:781-783若しくはSEQ ID NO: 815の核酸配列を含みうる。しかし、開裂酵素の発現のための最適な配列若しくは最小の配列が、プロモーターの断片、拡張若しくは変異を作り、開裂酵素の発現に関してプロモーターの強さのテストすることにより、得られうることは理解可能である。本発明の1つの態様では、NFAT2のための転写調節領域は、開裂酵素MMP9(SEQ ID NO: 647)若しくはMMP9の触媒サブユニット(SEQ ID NO: 648)をコードする遺伝子の上流に加工がなされる。本発明の1つの態様では、NFATはNFATc3であり、また、NFATc3のプロモーター配列は、SEQ IDNO:816からの核酸配列を含んでいる。本発明の1つの態様では、NFATc3のための転写調節領域は、開裂酵素MMP9(SEQ ID NO: 647)若しくはMMP9の触媒サブユニット(SEQ IDNO: 648)をコードする遺伝子の上流に加工がなされる。本発明の別の態様では、NFATはNFATc2である。SEQ ID NO:817-818は、NFATc2のための上流転写調節領域の核酸配列を示す。本発明の1つの態様では、NFATc2のための転写調節領域は、開裂酵素MMP9(SEQ ID NO: 647)若しくはMMP9の触媒サブユニット(SEQ ID NO: 648)をコードする遺伝子の上流に加工がなされる。
T細胞若しくはCAR T細胞が活性化される時、開裂酵素の発現を引き起こす別の方法は、NFATタンパク質がそれ自身開裂酵素の転写に結合し引き起こすところで、誘導可能なプロモーター上に開裂酵素用の遺伝子を持つことである。この場合、NFAT反応要素(NFAT RE)は、開裂酵素若しくは開裂酵素断片の遺伝子の上流に位置しうる。NFATは、開裂酵素の上流にその反応する要素に単独で若しくは複合体の一部として結合できる。NFATタンパク質は、NFATcl、NFATc2、NFATc3、NFATc4若しくはNFAT5でありうる。好ましい態様では、NFATタンパク質は、NFAT2 aka NFATcl、aka NFATcである。開裂酵素若しくはその断片の遺伝子は、NFAT-反応要素(SEQ ID NO:649)に下流にクローンされ、NFATタンパク質による開裂酵素の発現を引き起こすために、反応要素(SEQ ID NO: 650)及びCMV最小プロモーター(mCMV)(SEQ ID NO: 651)の反復でありえる。NFAT反応要素は、NFATコンセンサス配列(SEQ ID NO: 804)の核酸配列を含みうる。NFAT反応要素は、例えば、SEQ ID NOS: 805-814の核酸配列を含みうる、しかし、しかし、開裂酵素の発現のための最適な配列若しくは最小の配列が、反応要素核酸の断片、拡張若しくは変異を作り、開裂酵素の発現に関して反応要素の強さのテストすることにより、得られうることは理解可能である。Foxp3のエンハンサー領域は、さらに2079から2098(SEQ ID NO: 821)までの120-bpの内のNFAT反応要素を含んでいる。NFAT反応要素は、核酸NFATコンセンサス配列(5'-cattttttccat-3')(SEQ ID NO: 819)若しくは(5'-tttttcca-3’)(SEQ ID NO: 820)を含みえ、そのNFATclは、特異的にそれに結合し(Xu et al., Closely relatedT-memory stem cells correlate with in vivo expansion of CAR. CD19-T cells andare preserved by IL-7 and IL-15, Blood 2014 123:3750-3759)る)結合し若しくはそれの繰り返しである。NFAT反応要素は、また、核酸スペーサー・配列によって単離されうる。他のNFAT反応要素は存在するかもしれないしさらに発見されるかもしれない、そして当業者は、NFAT反応要素を決定しようとする時、単なる実例にもかかわらず、少なくともSEQ ID NOS: NO804-814として述べられるような反応要素のガイダンスを与えられて、それを得るために分子の生物検定を実行することにより目的達成可能である。本発明の1つの態様では、NFAT反応要素及びCMV最小プロモーターの下流の開裂酵素は、MMP9(SEQ ID NO: 652)である。本発明の別の態様では、開裂酵素はMMP9の触媒サブユニット(SEQ IDNO: 653)である。
NFAT 1-4は、calcineurinパスウェイによって制御されるので、患者で発生するかもしれない潜在的な毒性は、Calcineurin活性をブロックし、核へのNFAT転送を阻害するFK506、シクロスポリン、サイクロスポリンA、若しくはTacrolimusのような免疫抑制剤での治療によって止めることができる。誘導可能なプロモーター上に開裂酵素で形質導入されたか形質転換されたT細胞も、癌細胞上のタンパク質若しくは分子を認識するCARで形質転換若しくは形質導入されうる。特定の実施例において、開裂酵素は、MUC1全長を開裂することができるものであり、また、CARは、癌細胞の表面でMUCl*にそれを向ける抗体断片を担持する。
どの開裂酵素が、癌細胞上のMUC1を開裂するかを決めるために、本願発明者等は、一連のMMPとADAMの酵素阻害剤をテストした。これらの実験は、癌細胞中の重要な開裂酵素であるとしてMMP9を指摘した。MMP9が癌細胞上のMUC1を開裂することを確認するために、本願発明者等は、41縦列反復領域、HCT-MUC1-41TR、がある全長MUC1に模倣物で、HCT-116 MUC1陰性結腸癌細胞を形質転換した。単細胞クローニングによって、本願発明者等は、MUC1のみがMUCl*に最小に開裂されるこの細胞株を確立することができた。図95A-95Dは、HCT-MUC1-41 TRは、全長MUC1に95％陽性であり、開裂型MUC1*にはほんの5-10%陽性であることを示す、ウェスタンブロット及びFACS分析である。HCT-MUC1-41TR細胞は、濃度を変えて、MMP9で培養され、次に、得られたの細胞へのMN-C2モノクローナル抗体の結合を測定するために免疫蛍光検査法によって分析された。細胞へ添加されたMMP9の濃度の増加ように、図96A-96Eで見ることができるように、MN-C2の結合は増加した。これらの実験は、MMP9が、MN-C2によって認識される型へ、MUC1を開裂することを示す。私たちが行なったヒト癌組織アレイ研究(図69A-69D、図70A-70F、図71A-71F、図72A-72F、図73A-73F)は、MN-C2が、正常細胞若しくは組織でではなく癌組織に存在する、開裂MUC1の型を認識することを示す(図74A-74I)。重要なことには、MN-C2は、骨髄の健康な造血幹細胞上で発現される、開裂MUC1の型を認識しない。
本発明の1つの態様では、免疫細胞は、腫瘍へ免疫細胞を標的化するCAR及び開裂酵素の両方で、形質導入される。CAR及び開裂酵素は、同じプラスミド、若しくは2つの異なるプラスミド上でコード化されうる。1つの態様では、開裂酵素が、誘導可能なプロモーター上にある。別の態様では、開裂酵素の発現は、免疫細胞が活性化される場合、発現されるタンパク質によって引き起こされる。1つのケースでは、開裂酵素の発現は、NFATタンパク質によって引き起こされる。別の態様では、開裂酵素の発現は、NFATclによって引き起こされる。別の態様では、NFATタンパク質のうちの1つが、開裂酵素若しくはそれの触媒活性断片の遺伝子の上流に挿入されるNFAT反応要素に結合する場合、開裂酵素の発現は引き起こされる。1つの態様では、開裂酵素は、MMP9若しくは触媒活性のあるMMP9の断片である。
本発明の1つの態様では、開裂酵素はMMP9(SEQ ID NO: 643)である。いくつかの開裂酵素は、活性化される必要のある前駆体酵素として自然には発現される。これは生化学の手段によって、開裂酵素を活性化する補酵素の発現によって、若しくは活性型に酵素を加工することにより遂行されうる。本発明者は、その活性化剤と開裂酵素を共発現することによりこの問題を克服することを予想する。本発明の1つの態様では、開裂酵素はMMP9である。また、共活性化剤はMMP3である。本発明の別の態様では、開裂酵素は、例えば、なお触媒活性がある開裂酵素の断片の発現によるように、活性な型で発現される。1つのケースでは、開裂酵素は、触媒活性のあるMMP9断片である。MMP9触媒断片の1つの例は、SEQ ID NO:645として挙げられる。
MMP9、それはMMP3によって活性化されなければならない、は、固形腫瘍で大きな割合中で過剰発現される。さらに、MMP9によって開裂された後、MN-C2抗MUCl*モノクローナル抗体は、MUC1を認識することは知られている。図69-73で示された、乳、卵巣、膵臓及び肺臓の癌アレイは、MN-C2-scFvでプローブされ、さらに、これらの癌のMUC1が、MMP9によって開裂されていることを示した。MMP9による腫瘍の開裂が、腫瘍へのT細胞アクセスを増加させるかどうか確かめるために、本願発明者等は、全長MUC1を発現する細胞株、HCT-MUC1-41TR、全長MUC1及びMUC1*の両方の高い発現をする乳癌細胞株及びMUC1*45で形質転換されたMUC1陰性細胞株を発現する細胞株を使用して、一連の実験を行った。本願発明者等は、MMP9とMMP3で細胞を形質転換した。それはMMP9を活性化する。本願発明者等は、それらの細胞、それらは活性化されたMMP9を含んでいた、の上澄みをとり、様々な細胞へそれを加えた。その後、それは抗MUCl* CAR、huMN-C2-CAR44、で形質導入されたT細胞と共培養された。結果は、MUC1開裂酵素と培養されなかったコントロール細胞にくらべ、標的MUC1/MUC1*陽性癌細胞がCAR T細胞殺滅を大きく増加させた。
APMAは、MMPを活性化する生化学物質である。本願発明者等は、これらの開裂酵素が、全長MUC1を発現するHCT-MUC1-41TR細胞株上のMUC1を開裂するかどうかみるために、MMP9若しくはADAM17で形質転換した細胞の調整培地と共にAPMAを使用した。コントロールとして、本願発明者等は、さらにHCT-MUC1*細胞上の酵素をテストした。MUC1及びMUC1*発現細胞は、赤色色素、CMTMRで染色された。抗MUCl* CAR、CAR44若しくはCAR50で形質導入されたヒトT細胞は、癌細胞と共培養された。非形質導入T細胞は、コントロールとして使用された。図75B、75C及び75Dで見ることができるように、抗MUCl*CAR T細胞は、HCT-MUC1*癌細胞を認識し、クラスターした。それはT細胞活性化及び殺滅のサインである。しかしながら、CAR T細胞誘導クラスタリングは、HCT-MUC1-41 TR、全長MUC1発現細胞を含むウェルでは目視できない(図75F、75G及び75H)。しかしながら、の劇的な増加が引き起こした活性化MMP9と培養された細胞は、CAR T細胞クラスタリングのドラマティクな増加があった(図75J、75K及び751)、そして、これは、MMP9は、MN-C2モノクローナル抗体、より特異的にはhuMN-C2-scFvによって認識されるMUCl*型への全長MUC1を開裂した、ということを意味する。ADAM 17は、明白な効果がなかった。ADAM 17は、MUC1を開裂しなかった若しくはMN-C2によって認識されない位置でそれを開裂した。それはよりありそうである。
本願発明者等は、おそらく、それらがMUC1*と同様にハイ・レベルに全長MUC1も発現するので、抗MUCl* CAR T細胞を使用して殺滅するのが難しかった、T47D乳癌細胞を使用して、今回同じ実験を行なった。図76B、76C、若しくは6Dで見ることができるように、抗MUCl* CAR44及びCAR50は、T47D癌細胞に効果がほとんどない。図76D、それはT細胞でCAR発現の最高水準のCAR44である、でのみ、本願発明者等は、少量のCAR T細胞誘導クラスタリングを確認できる。しかしながら、活性化MMP2(図76J、76K、76L)若しくは活性化MMP9(図76R、76S、76T)の存在は、CAR T細胞認識、クラスタリング、及び殺滅の劇的な増加を示し、そして、全長MUC1の開裂は、癌細胞へのT細胞アクセスを増加させる、ことを示す。
別の例において、T47D MUC1陽性腫瘍細胞が、l00ng/mL若しくは500ng/mLのMMP9の組変え触媒領域(Enzo Life Sciences, Inc., Farmingdale, NY)と インキュベートされた。ウェスタンブロット分析は、MUC1/MUC1*陽性癌細胞がMUCl*へのMUC1の広範囲な開裂をおこしたことを示した。別の例において、T47D乳癌細胞は、ヒト組み換えMMP9触媒領域タンパク質と前接触され、その後、抗MUCl* CAR44 T細胞と共培養した。CAR44 T細胞によるT47D細胞の特異的殺滅薬は、時間の関数として、インピーダンスを測定するxCelligence装置上でリアル・タイムにおいてモニターされた。この分析は、癌細胞が載せられた電極アレイを使用する。付着している癌細胞は電極を絶縁し、それらが成長するように、インピーダンスの増加を引き起こす。反対に、T細胞は付着せず、懸濁中に残存するので、インピーダンスを増加させたり、減少させたりしない。しかしながら、T細胞若しくはCAR T細胞が、電極プレート上の癌細胞を殺す場合、癌細胞は、球形化し、死滅体として浮かび、それはインピーダンスを減少させる。MMP9触媒領域の添加は、T47D癌細胞の殺滅を劇的に増加させた。図78は、コントロールとしての非形質導入T細胞又はhuMN-C2-CAR44 T細胞との、45時間にわたる、共培養のT47D乳癌細胞のxCelligenceグラフを示す。18時間の癌細胞生育の後、触媒サブユニットMMP9が、細胞のうちのいくつかへ添加された。25時間で、T細胞が添加された。見ることができるように、T47D細胞が開裂酵素MMP9と前培養される場合、huMN-C2-CAR44 T細胞殺滅は非常に改善される。xCelligenceシステムでは、標的癌細胞、それらは付着している、は電極アレイプレート上に載せられる。付着細胞は、電極を絶縁し、インピーダンスを増加させる。付着癌細胞の数は、インピーダンスに正比例する。T細胞は付着せず、インピーダンスに寄与しない。したがって、インピーダンスを増加させることは、癌細胞の成長を反映する。また、インピーダンスを減少させることは、癌細胞の殺滅を反映する。前立腺癌細胞株DU145は、MUC1及びMUCl*の両方を発現する、しかしT47D細胞よりはるかに低いレベルの発現である。DU145細胞は、開裂酵素がある状態若しくはない状態で、抗MUCl* CAR T細胞によって効率的に殺滅される。
図79は、コントロールとしての非形質導入T細胞又はhuMN-C2-CAR44 T細胞との、45時間にわたる、共培養のDU145前立腺癌細胞のxCelligenceグラフを示す。18時間の癌細胞生育の後、触媒サブユニットMMP9は細胞のうちのいくつかへ添加された。25時間で、T細胞が添加された。見ることができるように、低密度MUC1/MUC1*陽性癌細胞のhuMN-C2-CAR44 T細胞殺滅は、開裂酵素MMP9との前インキューベションによって影響されない。DU145癌細胞は、MUCl*と同様に全長型も含んでいる著しくより低い量のMUC1を発現する。全長MUC1のより低い密度は、立体的に膜近位MUCl*へのT細胞アクセスを妨害しない。DU145細胞は、全長と開裂型MUC1の両方を発現する、しかしより低いレベルである、初期癌を表し、T細胞アクセスを、立体的に妨害しない。T47D細胞は、MUC1及びMUCl*の両方をハイレベルに発現する、中期癌を表わし、そこでは、全長MUC1の密度は、腫瘍へのT細胞アクセスを立体的に妨害する。HCT-MUCl*細胞は、MUC1*45で安定して形質転換されたMUC1陰性細胞株で、それは後期癌細胞を表わす。MMP9によってMUCl*に開裂されたMUC1が、抗MUCl*抗体MN-C2、それはCARの標的ヘッドである、によって認識されることは重要である。癌細胞表面上の腫瘍抗原への免疫細胞アクセスは、かさばった細胞外領域タンパク質若しくは腫瘍微小環境として知られている他の妨害要素の存在によって立体的に妨害されうる。上述の記載は、他の腫瘍抗原を標的とするCAR T治療の効能を改善するために拡張されうる実施例として役立つ。本発明の1つの態様では、免疫細胞は、腫瘍抗原を標的とする抗体断片を含むCAR及び開裂酵素の両方で形質転換されるか形質導入される。本発明の別の態様では、免疫細胞は、腫瘍抗原を標的とする抗体断片を含むCAR及びCARの抗体断片によって認識される型へ腫瘍抗原を開裂する開裂酵素の両方で形質転換されるか形質導入される。1つの態様では、免疫細胞は、腫瘍抗原を標的とする抗体断片を含むCAR及びCARの抗体断片によって認識される型へ腫瘍抗原を開裂する開裂酵素の両方で形質転換されるか形質導入され、ここで、CARの抗体断片は、MUCl*細胞外領域を認識し、そして、開裂酵素がMUC1をMUCl*に開裂する。1つの態様で、免疫細胞、それはT細胞若しくはNK細胞でありうる、は、MN-C2、MN-E6、MNC3若しくはMNC8に由来する抗体断片を含むCARで、及び、MMP1、MMP2、MMP3、MMP7、MMP8、MMP9、MMP11、MMP12、MMP13、MMP14、MMP16、ADAM9、ADAM 10、ADAM 17、ADAM 19、ADAMTS 16、ADAM28若しくはそれらの触媒活性断片のグループから選ばれた開裂酵素で、形質転換される若しくは形質導入される。
MMP9の存在をテストする便利な方法は、例えば、OMNIMMPペプチド分析キットを使用して、蛍光性分析をおこなう。該キットはマスクされた蛍光団で誘導化されたMMP9基質であるペプチドをもつ。MMP9が、ペプチドを含んでいる溶液に添加される場合、MMP9は蛍光団を露出する位置でペプチドを開裂させ、蛍光はプレート・リーダで読むことができる。MMP-9活性は、相対的な蛍光ユニット(RFU)で読まれ、それは、328nmでサンプルを含んでいる各ウェルを賦活化するためにプレートリーダーセットに検出させる光の量と関係する任意の値であり、そして、393nmで蛍光を測定する。RFUの増加は、Gly-Leu結合の開裂、蛍光団の露出を示し、それゆえ、MMP-9の存在を示す。OMNIMMPペプチドの配列は、Mca-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH2である。AcOH[Mca=(7-methoxycoumarin-4-yl)acetyl;Dpa=N-3-(2,4-dinitrophenyl)-L-a,P-diaminopropionyl]。図97は、MMP9触媒領域によって開裂され、蛍光を発する、MMP9のOMNIMMP蛍光性ペプチド基質のグラフを示す。MMP9触媒領域は、PBS、固体トレース、若しくは細胞培養培地、ダッシュトレース、での2つの濃度で添加された。この実験は、OMNIMMPペプチド分析が、それらが細胞増殖培地にあとしても、細胞によって分泌されたMMP9の活性を測定するであろうことを示す。
NFATパスウェイの活性化を研究する方法は、IonomycinをもつPMAを使用して、該パスウェイを化学的に活性化することによりおこなわれる(Lyakh et al., Expression ofNFAT-Family proteins in normal human T cells, MOLECΜLAR AND CELLΜLAR BIOLOGY,Vol. 17, No. 5, May 1997, p. 2475-2484; Rao et al., Transcription factors ofthe NFAT family - Regμlation and function, Annu. Rev. Immunol. 1997. 15:707-47;Macian, NFAT proteins - Key regμlators of T-cell development and function,Nature Reviews Immunology, Vol. 5, pp 472-484 June (2005))。PMAとIonomycinが、NFATタンパク質の発現を引き起こすことが実証された。上記の引用された参照は、NFAT活性化の制御のスキームを示す。Ionomycinは、Calcineurin/カルモジュリン複合体を活性化するカルシウムを増加させる。Calcineurin/カルモジュリンは、それが標的遺伝子の転写を刺激するためにDNAに結合するところである、核に移動させられるためにNFAT(特にNFATcl)を脱燐する。NFATclは、T細胞活性化で核に移動させられる最初のNFATタンパク質のうちの1つである。また、それは、核を出る前に、単にそこに一時的にある。したがって、私たちがNFAT誘導可能開裂酵素で形質転換した若しくは形質導入した、細胞のPMAプラスIonomycin活性化は、生理学上適切で、ここに記述されたNFAT誘導可能開裂酵素の発現を点火する生体内T細胞活性化を模倣する。
293tsA1609neoとしてもとは参照される、HEK293T細胞株(ヒト胚の腎臓細胞)は、ヒト胚腎臓293細胞の非常にトランスフェクト可能な誘導体で、SV40 T抗原を含んでいる。この細胞株は、複製のSV40領域を担持するベクターを複製するる能力がある。レトロウイルスを生産するために使用された時、それは高いタイター与える。それは、レトロウイルスの生産、遺伝子発現及びタンパク質生産に広く使用された。プラスミドがレンチウイルスベクターに挿入され、そしてヒトT細胞へ形質導入される前に、HEK293T細胞は、初期の実験のうちのいくつかで使用された。
プラスミドは、構築され、そしてHEK293T細胞へ形質転換された。そこではMMP9触媒領域遺伝子は、3つ若しくは4つのNFAT反応要素の下流に挿入された。NFATパスウェイは、lμMか2μMのいずれかのIonomycin及びl0ng/mLのPMAの添加によって活性化された。NFAT反応要素3若しくは４反復を含んでいるプラスミドで形質転換された細胞からの溶解物、又は、細胞からの調整培地が、ウェスタンブロット法で、MMP9の存在について分析された。図98A-98Eで見ることができるように、MMP9の上流にNFAT反応要素を含み、NFATパスウェイはPMA/Ionomycinによって活性化されたか、細胞のみが、溶解物及び調整培地がMMP9検知可能であった。さらに、発現された若しくは分泌されたMMP9の量は、NFATパスウェイ活性化剤の濃度に比例した。本願発明者等は、次に溶解物からのMMP9、及びさらにそれがMMP9基質を開裂するのに活性であったか及び有能だったかを確かめるために調整培地へ分泌されたMMP9をテストした。図99A-99Bは、NFAT反応要素の４反復から下流MMP9遺伝子を含むプラスミドで形質転換されたHEK293T細胞の細胞溶解物若しくは調整培地によって、開裂されているMMP9の蛍光性ペプチド基質のグラフを示す。MMP9ペプチド基質分析は、PMA/ionomycinによるNFATパスウェイの活性化が、MMP9を発現し分泌されることを導き、そしてペプチド基質を開裂するその能力によって証拠づけられるようにそれが活性だったことを示す。
さらに、本願発明者等は、MMP9遺伝子の前にある天然リーダー配列が不可欠かどうか、又は細胞からのその発現若しくは分泌を増加させるかもしれない他のリーダー配列とそれを取り替えることができるかどうかのテストをした。これらの次の実験は、他のリーダー配列と天然MMP9リーダー配列を取り替えることができることを示した。図100A-100Dは、MMP9の天然リーダー配列がIgKリーダー配列と取り替えられ、MMP9触媒領域はNFAT反応要素４反復の下流にある、HEK293T細胞で発現された、NFAT誘導MMP9触媒領域を示す。図100Aは、NFATパスウェイの活性化の後、細胞溶解物中にMMP9の発現を検知するウェスタンブロットの写真である。図100Bは、NFATパスウェイの活性化の後、調整培地中にMMP9の発現を検知するウェスタンブロットの写真である。図l00Cは、MMP9の天然リーダー配列がIgKリーダー配列と取り替えられており、MMP9触媒領域がNFAT反応要素4反復の下流にある、HEK293T細胞の調整培地中で発現され分泌されたMMP9触媒領域によるMMP9蛍光性ペプチド基質開裂のグラフを示す。図100Dは、MMP9の天然リーダー配列がIgKリーダー配列と取り替えられており、MMP9触媒領域がNFAT反応要素４反復の下流にある、HEK293T細胞の調整培地中で発現され分泌されたMMP9触媒領域によるMMP9蛍光性ペプチド基質開裂のグラフを示す。図101A-101Cは、MMP9は異なるリーダー配列で発現し、さらに、各々の後の活性を呈すことができる。図101Aは、MMP9遺伝子の上流のリーダー配列が、その天然配列若しくはIgK配列である、細胞溶解物でのMMP9タンパク質を検知するウェスタンブロットを示す。図101Bは、MMP9遺伝子の上流のリーダー配列が、その天然配列若しくはIgK配列である、調整培地でのMMP9を検知するウェスタンブロットを示す。図101Cは、発現されたMMP9によって開裂された、MMP9ペプチド基質のグラフを示す。
発現されるか、T細胞活性化の後にだけ核に移動させられるタンパク質によって開裂酵素
発現を引き起こす構築物を設計するために、反応要素の下流に、若しくはその開裂酵素の
プロモーターに下流に、酵素遺伝子を持っていることは可能である。MMP9触媒領域用の遺伝子がNFATclのプロモーターの一部から下流に挿入された別のプラスミドが作られた。図102A-102Bは、で示される実験は、NFATclプロモーターなし若しくはNFAT反応要素4反復なしでの、MMP9発現レベルを比較する。それらは、両方のアプローチがうまく働くことを示す。図102A-102Bは、NFATclプロモーター配列がMMP9遺伝子、それはこの場合触媒領域を含む欠失MMP9である、の上流にあるNFATの誘導可能なMMP9を生産するプラスミドで形質転換された細胞3クローン4、6及び7をしめした。さらに比較のために、NFAT反応要素配列4反復がMMP9遺伝子の上流にある、NFAT誘導可能MMP9を生産するプラスミドで形質転換された細胞が示された。図102Aは、細胞溶解物にMMP9タンパク質を検出するウェスタンブロットを示す。図102Bは、調整培地にMMP9を検出するウェスタンブロット示す。図103A-103Bは、さらに、それらがペプチド蛍光分析のMMP9基質を開裂するように、透明溶解液中のMMP9及び調整培地中のMMP9が活性であることを示す。
発現を引き起こす構築物を設計するために、反応要素の下流に、若しくはその開裂酵素の
プロモーターに下流に、酵素遺伝子を持っていることは可能である。MMP9触媒領域用の遺伝子がNFATclのプロモーターの一部から下流に挿入された別のプラスミドが作られた。図102A-102Bは、で示される実験は、NFATclプロモーターなし若しくはNFAT反応要素4反復なしでの、MMP9発現レベルを比較する。それらは、両方のアプローチがうまく働くことを示す。図102A-102Bは、NFATclプロモーター配列がMMP9遺伝子、それはこの場合触媒領域を含む欠失MMP9である、の上流にあるNFATの誘導可能なMMP9を生産するプラスミドで形質転換された細胞3クローン4、6及び7をしめした。さらに比較のために、NFAT反応要素配列4反復がMMP9遺伝子の上流にある、NFAT誘導可能MMP9を生産するプラスミドで形質転換された細胞が示された。図102Aは、細胞溶解物にMMP9タンパク質を検出するウェスタンブロットを示す。図102Bは、調整培地にMMP9を検出するウェスタンブロット示す。図103A-103Bは、さらに、それらがペプチド蛍光分析のMMP9基質を開裂するように、透明溶解液中のMMP9及び調整培地中のMMP9が活性であることを示す。
本願発明者等は、次にNFAT誘導可能なMMP9が、ヒトT細胞で機能するか、そして、それがT細胞活性化の後に特異的に発現され分泌されるかどうかのテストをした。これをテストするために、NFAT反応要素４反復をもつ構築物が、レンチウイルスベクターに組み入まれた。ヒトT細胞は、NFAT誘導可能なMMP9単独で、CAR44単独で、若しくはCAR44及びNFAT誘導可能なMMP9の両方で、形質導入された。ある場合には、形質導入されたT細胞が、抗CD3及び抗CD28で覆われたビーズでそれらをインキュベーションすることにより活性化された。それはT細胞を活性化すると知られている。他の場合では、形質導入されたT細胞は、合成MUCl*ペプチドを示すビーズと共培養することにより、又はHCT-MUC1*細胞のようなMUCl*陽性癌細胞と共培養することにより、活性化された。
図104A-104Bは、MMP9の活性を測定するOMNIMMP9の蛍光性基質分析の結果を示す。NFAT誘導可能なMMP9で単独で若しくはCAR44との組み合わせで、形質導入されたヒトT細胞からの調整培地が、分析に添加され、そして、MMP9基質開裂が時間の関数として測定された。図104Aは、細胞がHCT-MUCl*癌細胞と共培養することにより活性化された後、ヒトT細胞にCAR44及びNFAT誘導可能なMMP9の両方で形質導入された時の、MMP9活性を示す。時間の関数として増加した基質開裂を示さないトレースは、活性化されなかった細胞からの調整培地である。図104Bは、細胞が、T細胞を活性化すると知られている抗CD3及び抗CD28で覆われたビーズと共培養することにより活性化された後、ヒトT細胞が、単に、NFAT誘導可能なMMP9で形質導入された時の、MMP9活性を示す。時間の関数として増加した基質開裂を示さないトレースは、活性化されなかった細胞からの調整培地である。図105A-105Eは、CAR44で単独で形質導入された、NFAT誘導可能なMMP9単独で、又はCAR44及びNFAT誘導可能なMMP9両方で、形質導入されたヒトT細胞のウェスタンブロットの写真を示し、ここで、得られたT細胞は、活性化されない、化学的にPMA/Ionomycinによって活性化された、合成MUCl*ペプチドを提示するビーズとの共培養することにより若しくはMUCl*陽性癌細胞と共培養することにより活性化された。ウェスタンブロットは、DYKタグ抗体として知られている抗フラグ・タグでプローブされた。MMP9触媒領域は、40kDaの明白な分子量で展開される。図105A-105Dは、明澄化細胞溶解物のウェスタンブロットの写真である。図105Aは、次の溶解物がレーン1～7に載せられた:レーン1: CAR44で形質導入されたT細胞、、活性化されなかった;レーン2: CAR44で形質導入され、合成MUCl*細胞外領域ペプチドを提示するビーズで活性化されたT細胞;レーン3: CAR44で形質導入され、HCT-MUCl*癌細胞との共培養によって活性化されたT細胞;レーン4: CAR44及びNFAT誘導可能なMMP9で形質導入されたT細胞、しかし活性化されなかった;レーン5: CAR44及びNFAT誘導可能なMMP9で形質導入され、合成MUCl*細胞外領域ペプチドを提示するビーズで活性化されたT細胞;レーン6: CAR44及びNFAT誘導可能なMMP9で形質導入され、HCT-MUCl*癌細胞との共培養によって活性化されたT細胞;レーン7: フラグDYKタグを担持する無関係のタンパク質。結果は、NFAT誘導可能なMMP9のみで形質導入されたT細胞は、それらがPMA/Ionomycin、MUCl*ビーズ若しくはMUCl*陽性癌細胞によって活性化される場合、MMP9を発現する。CAR44及びNFAT誘導可能なMMP9の両方のみで形質導入されたT細胞は、T細胞が、MUCl*ビーズ若しくはMUCl*陽性癌細胞での刺激によって活性化される場合、MMP9を発現する。図105Bは、次の溶解物がレーン1～7に載せられた:レーン1: CAR44で形質導入されたT細胞、しかし活性化されなかった;レーン2: CAR44で形質導入され、T細胞を活性化すると知られている抗CD3及び抗CD28抗体を示すビーズで活性化されたT細胞;レーン3: CAR44で形質導入され、PMA/Ionomycinとの共培養によって活性化されたT細胞;レーン4: NFAT誘導可能なMMP9で形質導入されたT細胞、しかし活性化されなかった;レーン5: NFAT誘導可能なMMP9で形質導入され、抗CD3及び抗CD28抗体を示すビーズで活性化されたT細胞;レーン6: NFAT誘導可能なMMP9で形質導入され、PMA/Ionomycinによって活性化されたT細胞;レーン7: フラグDYKタグを担持する無関係のタンパク質。図105C及び105Dは、それぞれ105A及び105Bと同じウェスタンブロットのより暗い露出である。図105Eは、以下のように形質導入された細胞の細胞上澄みのウェスタンブロットの写真である:レーン1: CAR44で形質導入されたT細胞、しかし活性化されなかった;レーン2: CAR44で形質導入され、T細胞を活性化すると知られている抗CD3及び抗CD28抗体を示すビーズで活性化されたT細胞;レーン3: CAR44で形質導入され、PMA/Ionomycinとの共培養によって活性化されたT細胞;レーン4: NFAT誘導可能なMMP9で形質導入されたT細胞、しかし活性化されなかった;レーン5: NFAT誘導可能なMMP9で形質導入され、抗CD3及び抗CD28抗体を示すビーズで活性化されたT細胞;レーン6: NFAT誘導可能なMMP9で形質導入され、PMA/Ionomycinによって活性化されたT細胞;レーン7: フラグDYKタグを担持する無関係のタンパク質。結果は、NFAT誘導可能なMMP9で形質導入された、T細胞が、それらが活性化される時、MMP9を発現したことを示す。CAR44及びNFAT誘導可能なMMP9の両方で形質導入されたT細胞は、MUCl*を示すか発現するビーズまたはセルで共培養される場合、特異的に、活性化される(図105Aレーン5及びレーン6)。
本発明の1つの態様では、癌である若しくは癌になる危険を診断された人は、CAR及び開裂酵素の両方で形質導入された十分な量の免疫細胞を投与される。本発明の別の態様では、癌である若しくは癌になる危険を診断された人は、CAR及び開裂酵素の両方で形質導入された十分な量の免疫細胞を投与される。ここで、該開裂酵素は、免疫細胞が活性化されるようになる場合に発現されるタンパク質によって活性化される誘導可能なプロモーター上にある。発明の別の態様では、癌若しくは癌になる危険でと診断された人は、CAR及び開裂酵素の両方が形質導入された十分な量の免疫細胞を投与される。ここで、開裂酵素は、1つ以上のNFATによって活性化される誘導可能なプロモーター上にある。1つのケースでは、NFATはNFATclである。別の態様では、NFATはNFATc3である。別の態様では、NFATはNFATc2である。上記の実例では、CARの細胞外領域は、抗MUCl*抗体の断片を含む。1つの態様では、抗MUCl*抗体は、MN-C2scFv若しくはMN-C2scFvのヒト化型である。別の態様では、抗MUCl*抗体は、MN-E6scFv若しくはMN-E6scFvのヒト化型である。上記の実例では、免疫細胞は、T細胞、NK細胞、マスト細胞若しくは樹状細胞でありえる。
本願発明は、活性化T細胞によって誘導された開裂酵素の発現を引き起こす、1つ若しくは2つの特定の方法に制限されることは意図されていない。本願発明者等は、NFATプロモーター配列の下流若しくはNFAT反応要素の一以上反復の下流に、開裂酵素遺伝子をもつプラ
スミドを構築することにより、T細胞活性化でのみ、開裂酵素の特異的発現を実証した。本発明の別の態様では、開裂酵素の発現は、開裂酵素遺伝子が、IL-2プロモーター配列の下流若しくはIL-2反応要素の下流に挿入され、次に、免疫細胞にプラスミドを挿入することで、おこなわれる。本発明の別の態様では、開裂酵素の発現は、開裂酵素遺伝子が、Calcineurinプロモーター配列の下流若しくはCalcineurin反応要素の下流に挿入され、プラスミドを構築し、次に、免疫細胞にプラスミドを挿入し、次に、それを癌の治療若しくは予防のための患者に投与することにより引き起こされる。開裂酵素の発現を引き起こすために使用されうる若しくは活性化T細胞の要素によって引き起こされた発現を止めるために使用されうる、さらに薬誘導可能なプラスミドがある。これらの薬誘導可能なシステムは、テトラサイクリン誘導可能なシステム、Tet-on、Tet-off、テトラサイクリン反応要素、ドキシサイクリン、タモキシフェン誘導可能なシステム、エクジソン誘導可能なシステム及びその他同種のものを含んでいる。
スミドを構築することにより、T細胞活性化でのみ、開裂酵素の特異的発現を実証した。本発明の別の態様では、開裂酵素の発現は、開裂酵素遺伝子が、IL-2プロモーター配列の下流若しくはIL-2反応要素の下流に挿入され、次に、免疫細胞にプラスミドを挿入することで、おこなわれる。本発明の別の態様では、開裂酵素の発現は、開裂酵素遺伝子が、Calcineurinプロモーター配列の下流若しくはCalcineurin反応要素の下流に挿入され、プラスミドを構築し、次に、免疫細胞にプラスミドを挿入し、次に、それを癌の治療若しくは予防のための患者に投与することにより引き起こされる。開裂酵素の発現を引き起こすために使用されうる若しくは活性化T細胞の要素によって引き起こされた発現を止めるために使用されうる、さらに薬誘導可能なプラスミドがある。これらの薬誘導可能なシステムは、テトラサイクリン誘導可能なシステム、Tet-on、Tet-off、テトラサイクリン反応要素、ドキシサイクリン、タモキシフェン誘導可能なシステム、エクジソン誘導可能なシステム及びその他同種のものを含んでいる。
CAR若しくは誘導可能な開裂酵素をコードするプラスミドで使用される、1若しくは2の特異的プロモーターに本願発明が制限されることは意図されていない。当業者に知られているように、SV40、PGK1、Ubc、CAG、TRE、UAS、Ac5、Polyhedron、CaMKIIa、GAL1、GAL 10、TEF1、GDS、ADH1、CaMV35S、Ubi、HI、及びU6のような多くのプロモーターが、互換性がある。MUC1-FLのようなかさばった細胞表面蛋白によって引き起こされる、CAR T細胞アクセスの立体障害の問題の別の解決策は、T細胞によって発現されるCARのリンカー領域の長さを増加させることである。標準設計CARでは、膜貫通の部分と抗体断片の間の細胞外のリンカー領域の長さは、約45-50のアミノ酸である。本願発明者等は細胞外のリンカーの長さが約50から217～290のアミノ酸まで延長されるような、長い腕CARを作った。共培養分析は、より長い細胞外のリンカーを備えたCARが、標的癌細胞上の腫瘍関連抗原へのアクセスを改善したことを示す。この戦略の漫画は、図106A-106Eで示される。
CARの公表された報告書は、一般に、膜貫通領域と抗体断片(scFv)の間のリンカーは、長さ45-50のアミノ酸であり、多くの場合CD8の細胞外領域の配列であるものを使用する。CAR 44は、抗MUCl* CARであり、そのリンカーはCD8の細胞外領域に由来し、長さ45のアミノ酸である。長い腕のCARが、T細胞を、細胞表面の近くの腫瘍関連抗原により多きくアクセス可能にすることを実証するために、一連のCARを作成した。そこで、抗MUCl*抗体断片は、MN-C2 scFv(SEQ ID NO:655)で、それは可変長及び柔軟性のリンカーのパネルによって膜貫通領域に接続された。そこで、膜貫通領域は、CD8(SEQ ID NO: 657)であり、共刺激領域4-IBB(SEQ ID NO: 659)がつづき、そしてCD3-zeta(SEQ ID NO: 661)がつづく。リンカーのパネルは、このモデルCARに組み入れられた。長さ232のアミノ酸であるIgGl Fc領域(SEQ ID NO:663)が、MN-C2 CAR(SEQ ID NO:665)のためのリンカーとして使用された。長さ290のアミノ酸であるIgD Fc領域(SEQ ID NO: 667)が、MN-C2 CAR(SEQ ID NO: 669)のためのリンカーとして使用された。長さ217のアミノ酸であるIgGlのヒンジがないFc領域リンカー(SEQ IDNO: 671)が、MN-C2 CAR(SEQ IDNO: 673)のためのリンカーとして使用された。長さで275のアミノ酸であるIgDヒンジがないFc領域リンカー(SEQ IDNO: 675)が、MN-C2 CAR(SEQ IDNO: 677)のためのリンカーとして使用された。長さ58のアミノ酸であるIgDリンカー(SEQ ID NO: 679)が、MN-C2 CAR(SEQ ID NO: 681)のためのリンカーとして使用された。長さ43のアミノ酸であるX4リンカー(SEQ ID NO: 683)が、MN-C2 CAR(SEQ ID NO: 685)のためのリンカーとして使用された。
scFvと膜貫通領域の間の可変長リンカーを備えたこれらのCARは次のとおりである:
CAR15: huE6-IgDCD8-4-IBB-3z(SEQ ID NO:324);
CAR16: muE6-IgDCD8-4-IBB-3z(SEQ ID NO:823);
CAR17: muC2IgD-CD84-IBB-3z(SEQ ID NO: 825);
CAR18: huE6-Fc-CD84-IBB-3z(SEQ ID NO: 311);
CAR19: huE6-FcH-CD8-4-IBB-3z(SEQ ID NO:316);
CAR20: huE6-X4-CD84-IBB-3z(SEQ ID NO: 330);
CAR33: huE6-IgDCD44-IBB-3z(SEQ ID NO: 327);
CAR34: huE6-Fc-CD44-IBB-3z(SEQ ID NO: 319);
CAR35: huE6-FcH-CD44-IBB-3z(SEQ ID NO:321);
CAR36: huE6-X4-CD44-IBB-3z(SEQ ID NO: 334);
CAR39: muE6-CD28-CD28-CD28-3z(SEQ ID NO:827);
CAR40: muC2-CD28-CD28-CD28-3z(SEQ ID NO:829);
CAR53: huC2-Fc-CD84-IBB-3z(SEQ ID NO: 665と733);
CAR54: huC2-IgD+Fc-CD84-IBB-3z(SEQ ID NO:669と735);
CAR55: huC2-FcH-CD84-IBB-3z(SEQ ID NO: 673と737);
CAR56: huC2-IgD+FcH-CD8-4-IBB-3z(SEQ ID NO:677と739);
CAR57: huC2-IgDCD8-4-IBB-3z(SEQ ID NO: 681と741);
CAR58: huC2-X4-CD84-IBB-3z(SEQ ID NO: 685と743);
CAR63: huE6-IgD+Fc-CD8-4-IBB-3z(SEQ ID NO:771);
CAR64: huE6-IgD+FcH-CD8-4-IBB-3z(SEQ ID NO:773);
CAR42: hu CD19IgDCD8-4-IBB-3z(SEQ ID NO:831)。
これらの長いリンカーCARに関する追加の詳細は表1に示される。ヒトT細胞へ形質導入され、癌細胞と共培養された時について、表2は、CARのうちのいくつかの実験活性を示す。
CAR15: huE6-IgDCD8-4-IBB-3z(SEQ ID NO:324);
CAR16: muE6-IgDCD8-4-IBB-3z(SEQ ID NO:823);
CAR17: muC2IgD-CD84-IBB-3z(SEQ ID NO: 825);
CAR18: huE6-Fc-CD84-IBB-3z(SEQ ID NO: 311);
CAR19: huE6-FcH-CD8-4-IBB-3z(SEQ ID NO:316);
CAR20: huE6-X4-CD84-IBB-3z(SEQ ID NO: 330);
CAR33: huE6-IgDCD44-IBB-3z(SEQ ID NO: 327);
CAR34: huE6-Fc-CD44-IBB-3z(SEQ ID NO: 319);
CAR35: huE6-FcH-CD44-IBB-3z(SEQ ID NO:321);
CAR36: huE6-X4-CD44-IBB-3z(SEQ ID NO: 334);
CAR39: muE6-CD28-CD28-CD28-3z(SEQ ID NO:827);
CAR40: muC2-CD28-CD28-CD28-3z(SEQ ID NO:829);
CAR53: huC2-Fc-CD84-IBB-3z(SEQ ID NO: 665と733);
CAR54: huC2-IgD+Fc-CD84-IBB-3z(SEQ ID NO:669と735);
CAR55: huC2-FcH-CD84-IBB-3z(SEQ ID NO: 673と737);
CAR56: huC2-IgD+FcH-CD8-4-IBB-3z(SEQ ID NO:677と739);
CAR57: huC2-IgDCD8-4-IBB-3z(SEQ ID NO: 681と741);
CAR58: huC2-X4-CD84-IBB-3z(SEQ ID NO: 685と743);
CAR63: huE6-IgD+Fc-CD8-4-IBB-3z(SEQ ID NO:771);
CAR64: huE6-IgD+FcH-CD8-4-IBB-3z(SEQ ID NO:773);
CAR42: hu CD19IgDCD8-4-IBB-3z(SEQ ID NO:831)。
これらの長いリンカーCARに関する追加の詳細は表1に示される。ヒトT細胞へ形質導入され、癌細胞と共培養された時について、表2は、CARのうちのいくつかの実験活性を示す。
共培養実験では、長さを変える細胞外領域リンカーを備えた抗MUCl* CARsが、特異的に標的MUC1/MUC1*陽性癌細胞を殺すそれらの能力に関してテストされた。図107A-107Bで示されるxCELLigenceスキャンは、1つの実験の結果を示す。この実験で、長いリンカーCARがヒトT細胞に形質導入され、その後、T47D乳癌細胞と共培養させた。しかしながら、有効に標的癌細胞を殺さないように見えるCARのうちのいくつかは、単に効率的に発現されていなかったのかもしれない。別の実験が、CAR効能評価からCAR発現を分けるために行なわれた。HEK293付着細胞は、各々異なる長さのリンカーをもつCARのパネルで形質導入された。緑の細胞の量によって各CARの発現を測定することができるように、CARプラスミドはGFPマーカーを担持した。これらの細胞へ、MUCl*で安定して形質転換されたK562懸濁細胞を追加した。K562-MUC1*細胞は、赤色色素、CMTMRで染色された。洗浄ステップの後、黄色(緑プラス赤)であった細胞の量は、癌細胞上の標的腫瘍抗原を認識するCARの各々の能力を示すものである。図108A-108Hで見ることができるように、CARの発現レベルは非常に変わりうる。しかしながら、発現レベルというのは、容易に最適化され、問題とはならない。図108I-108Pを見る際に、黄色に見える細胞の数は、緑のままであるものに対して、どのCARリンカーが標的癌細胞上の他の表面分子の立体障害を克服するのに最良かに関してより多くの情報を与える。かなりの量の標的癌細胞は、CD8、IgGl FcH(hingeless)、IgD及びIgDFcH(hingeless)に由来したリンカーをもつCARのためのCAR発現細胞へ結合した。長さに加えて、これらのCARの中でテストされたリンカーは、それらの剛性において異なると予想される。
表2は、長いリンカーCARのうちのいくつかで形質転換された、ヒトT細胞のためのサイトカイン・リリース・データを示す。
本願発明者等は、固形腫瘍癌に対する効能を増加させた、「長い腕」のCARsが、MN-E6 scFv、MN-C2-scFv及び他の抗MUCl*抗体断片を含む腫瘍関連抗原を認識するあらゆる抗体断片によってガイドされうることに注目する。同様に、長い腕CARsの膜貫通部分は、CD8、CD4若しくは他の膜貫通領域に由来しうる。CARの細胞内尾部は、CD3-zeta及び他の共刺激領域を含むことができ、あるいは、CD28、4-IBB及びOX40を含むそれらの組み合わせを含むことができる。
別の態様では、本願発明は、同じ免疫細胞へ形質転換された少なくとも2つの異なるプラスミドを含んでいる構成を志向する。そこでは1つ目は、腫瘍抗原に結合するペプチドもしくは抗体断片scFvを含むCARをコードする。また、他方は、CARでない遺伝子をコードする。ここで、CARでない遺伝子は、活性化された免疫細胞の要素によって活性化される誘導可能なプロモーターから発現する。1つの態様では、免疫細胞は、T細胞若しくはNK細胞である。1つの態様では、CARは、MUCl*の細胞外領域へ結合するペプチド、抗体断片、若しくはscFvを含む。1つの態様では、CARは、MN-C2、MN-E6、MNC3若しくはMNC8に由来したscFvを含む。1つの態様では、非CAR種は開裂酵素である。1つの態様では、開裂酵素は、MMP2、MMP3、MMP9、MMP13、MMP14、MMP16、ADAM 10、ADAM 17、ADAM 28若しくはそれらの触媒活発断片である。別の態様では、非CAR種はサイトカインである。1つの態様では、サイトカインはIL-7である。1つの態様では、サイトカインはIL-15である。別の態様では、サイトカインはIL-7及びIL-15である。あるケースでは、非CAR種の発現は、活性化された免疫細胞の要素によって引き起こされる。1つの態様では、活性化された免疫細胞の要素はNFATである。1つの態様では、NFATはNFATcl、NFATc3若しくはNFATc2である。サイトカインIL-7及びIL-15は、T細胞持続性を促進する。発明の1つの態様では、上記免疫細胞は、癌の治療若しくは予防のためにの患者に投与される。発明の1つの態様では、癌はMUC1陽性癌若しくはMUCl*陽性癌である。
別の態様では、本願発明は、同じ免疫細胞へ形質転換された少なくとも2つの異なるプラスミドを含んでいる構成を志向する。そこでは1つ目は、B細胞の表面上の抗原の細胞外領域へ結合するペプチド、抗体断片、若しくはscFvを含むCARをコードし、他方は、CARでない遺伝子をコードする。そこではCARでない遺伝子は、活性化された免疫細胞の要素によって活性化される誘導可能なプロモーターから発現する。1つの態様では、免疫細胞はT細胞若しくはNK細胞である。1つの態様では、CARは、CD 19に結合するペプチド、抗体断片、若しくはscFvを含む。1つの態様では、CARは、SEQ ID NO: 830-831に由来した配列を含む。別の態様では、抗体断片、scFv若しくはペプチドは、B細胞若しくはB細胞前駆体の表面抗原に結合する、若しくはCD 19、CD20、CD22、BCMA、CD30、CD138、CD123、CD33若しくはLeY抗原に結合する。1つの態様では、非CAR種は開裂酵素である。別の態様では、非CAR種はサイトカインである。1つの態様では、サイトカインはIL-7である。1つの態様では
、サイトカインはIL-15である。別の態様では、サイトカインはIL-7及びIL-15である。あるケースで、非CAR種の発現では、活性化された免疫細胞の要素によって引き起こされる。1つの態様では、活性化された免疫細胞の要素はNFATである。1つの態様では、NFATはNFATcl、NFATc3若しくはNFATc2である。CARでない遺伝子は、その発現が活性化免疫細胞の要素によって引き起こされる誘導可能なプロモーターから発現する。1つの態様では、その構成で形質転換若しくは形質導入された免疫細胞は、癌の治療若しくは予防のために患者に投与される。1つのケースでは、癌は血液癌、リンパ腫若しくは血液癌である。
、サイトカインはIL-15である。別の態様では、サイトカインはIL-7及びIL-15である。あるケースで、非CAR種の発現では、活性化された免疫細胞の要素によって引き起こされる。1つの態様では、活性化された免疫細胞の要素はNFATである。1つの態様では、NFATはNFATcl、NFATc3若しくはNFATc2である。CARでない遺伝子は、その発現が活性化免疫細胞の要素によって引き起こされる誘導可能なプロモーターから発現する。1つの態様では、その構成で形質転換若しくは形質導入された免疫細胞は、癌の治療若しくは予防のために患者に投与される。1つのケースでは、癌は血液癌、リンパ腫若しくは血液癌である。
本願発明は、コード化されたペプチド、活性化T細胞誘導可能なタンパク質、若しくはCARをコードする配列を含む遺伝子若しくはプラスミドを挿入する、特定の方法若しくは技術によって発明が制限される意図はない。例えば、ここに記述されたCARをコードする遺伝子及び活性化T細胞誘導遺伝子は、ウイルスを使用して、免疫細胞へウイルスで形質導入されうる。それは、受容細胞のゲノムへ統合されるCAR遺伝子になるかもしれないし、ならない場合もうる。ウイルス運搬システム及びウイルスベクターは、ガンマ・レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ関連性ウイルス、バキュロウイルス、ポックスウイルス、単純性疱疹ウイルス、腫瘍崩壊のウイルス、HF10、T-Vec及びその他同種のものを含むレトロウイルスを含んでいるがこれに制限されない。ウイルスの形質導入に加えて、ここに記述されたCAR及び活性化T細胞誘導遺伝子は、CRISPR技術、CRISPR-Cas9及び-CPF1、TALEN、Sleeping Beauty Transposn System及びSB 100Xのような方法を使い、受容細胞のゲノムへ直接結合されうる。
MUC1-FLのようなかさばった細胞表面蛋白は、さらにBiTEsのために立体障害問題を引き起こす場合がある。BiTEは、1つの頭がT細胞に結合し、別の頭が腫瘍関連抗原に結合する、2-ヘッド2重特異的抗体である。このように、BiTEは、T細胞と腫瘍細胞ともにリンクする。T細胞に結合する抗体は、T細胞を活性化する、OKT3 scFv(SEQ ID NO: 687)若しくはCD28のようなCD3に対する抗体のような、抗体であるべきである。立体障害問題の解決には、T細胞特異的抗体と腫瘍特異的抗体間のリンカーが延長される。拡張リンカー抗-CD3リンカー抗MUCl*をもつBiTEsの例は、SEQ ID NOS:689、691、693、695、697及び699として示される。
本発明の別の態様では、抗MUCl*単一鎖分子は、開裂酵素若しくは開裂酵素の触媒活性断片に結合される。本発明の1つの態様では、開裂酵素はMMP9(SEQ ID NO: 701)である。本発明の別の態様では、酵素はMMP9(SEQ ID NO: 703)の触媒活性断片である。ある場合には、CARの抗体断片は、その特定の開裂酵素によって開裂された時に、MUCl*を認識するその能力のよって選定される。1つの具体化では、開裂酵素は、MMP9、MMP3、MMP14、MMP2、ADAM 17、ADAM TS 16及び/又はADAM 28である。
1つの態様では、抗体若しくは抗体断片は、以下の配列をもつペプチドに結合する；
SEQ ID NO:2(PSMGFR)、
GTINVHDVETQFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGA、
PSMGFR N-10、
QFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGA、若しくは
PSMGFR N+18
SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGA。「PSMGFR N+18」は、SEQ ID NO: 1のMUC1リセプター内のPSMGFRセグメントのN-端末に18アミノ酸残基が加えられたMUC1リセプターの断片を指す。別の具体化では、開裂酵素MMP9及びMMP3は、MN-C2の断片である抗体断片をもつCARで形質導入されたT細胞へ形質導入される。
1つの態様では、抗体若しくは抗体断片は、以下の配列をもつペプチドに結合する；
SEQ ID NO:2(PSMGFR)、
GTINVHDVETQFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGA、
PSMGFR N-10、
QFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGA、若しくは
PSMGFR N+18
SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGA。「PSMGFR N+18」は、SEQ ID NO: 1のMUC1リセプター内のPSMGFRセグメントのN-端末に18アミノ酸残基が加えられたMUC1リセプターの断片を指す。別の具体化では、開裂酵素MMP9及びMMP3は、MN-C2の断片である抗体断片をもつCARで形質導入されたT細胞へ形質導入される。
本願発明に関しての実験を実行するのに使用される方法
1．レンチウイルス生産及び免疫細胞のウイルス形質導入
HEK293またはHEK293Tの細胞(ATCC)が、レンチウイルスを生産するために使用された。形質転換の前の日、プレート（６ウェルプレート）が、ポリDリジンでコートされ、細胞密度が5%CO2大気中で、形質転換及び培養の時に、細胞密度が90-95%に達するように、細胞が植え付けられた。翌日、細胞は、Lipofectamine 3000(Lifetechnologies)及びOpti-MEMTM還元血清培地で、製造マニュアルに従い形質転換された (lentiviral発現ベクターの0.75μg及びpPACKHlパッケージング・ミックスの2.25μgが使用された)。6hのインキュベーションの後に、培地は変更された。また、レンチウイルスを含んでいる培地は、24及び48
時間の後に回収された。レンチウイルスは、Lenti-Xコンセントレータ(Clontech)で濃度された。また、タイターは、Lenti-X p@4、迅速タイターキット(Clontech)を使い計算された。レンチウイルスは、単一使用アリクオットに、-80℃で保存した。
時間の後に回収された。レンチウイルスは、Lenti-Xコンセントレータ(Clontech)で濃度された。また、タイターは、Lenti-X p@4、迅速タイターキット(Clontech)を使い計算された。レンチウイルスは、単一使用アリクオットに、-80℃で保存した。
2. CARを含む構築物をもつ免疫細胞の形質導入
ヒトT細胞が、冷凍、100-200ユニットのIL-2及びTexMACS培地、20ml、で溶かされ、あらかじめ暖められ、遠心分離によってペレットにした。細胞は10mlの培地で再懸濁され、37℃、5%CO2において、1x106細胞s/mlで、抗CD 3 /anti-CD28ビーズ(TransActキット)を含む完全培地で培養された。
培養4日後に、細胞が数えられた。また、細胞懸濁液の450μlが、ほぼ1x106cells/mlの密度で、24ウェルプレートの単一ウェルに置かれた。細胞は、定着された。150μlが、各ウェルのトップから注意深く取り除かれた。各ウェルに、1ウェルあたり最終全容積が450μになるように、150μl において、10μg/mlの終濃度で硫酸プロタミンを含む、プレインTexMACS培地で希釈されたレンチウイルスベクターの適切な稀釈液が、添加された。その後、24時間インキュベーションされた。形質導入された細胞は除去され、遠心分離によってペレットにし、そして、新鮮培地に、細胞密度が1.0x106cells/mlを超過しないように細胞密度を調節して、再懸濁した。形質導入されたT細胞は拡張し凍結する、若しくは直接使用されうる。典型的に形質導入されたT細胞が、使用される若しくはIL-2とTransAct培地での活性化後７日目と20日目の間冷凍した。
3．いくつかの抗MUCl* CARでのCAR T細胞活性の比較
ヒトT細胞(ALLCELLS)が、抗MUCl* CAR18、CAR 19、CAR44、CAR49、CAR44とCAR49、若しくはCAR50で形質導入された。構築されたCARはすべてGFPマーカーをもち、そのためCAR T細胞は緑で、非形質導入T細胞(図80A)はクリアである。CAR 18は、huMN-E6scFv-FcCD84-IBB-3zである。CAR19は、scFv及び膜貫通領域の間のリンカー用のFc領域の一部の代わり以外は同じで、CAR 19はヒンジ部分が変異されたFc領域をもつ。CAR44は、huMN-C2-scFv-CD8-CD8(transmemnbrane4-IBB-3z)である。CAR49は、CAR44がCD8リーダー配列をもち、CAR49はIgKリーダー配列を持つ以外、CAR44と同じである。CAR50は、CAR50がネズミMN-C2-scFv及びCD4膜貫通領域をもつ以外は、CAR44と同じである。表1は、各CAR構築物の詳細を示す。その後、CAR T細胞は、mCherry(赤)で安定して形質転換されたHCT-MUCl*癌細胞と18時間インキュベートされた。T細胞が標的細胞を認識する場合、それらは標的細胞をクラスター化し、それらを殺し始める。図80A-80Fで見ることができるように、緑のCART細胞が、標的MUCl*陽性癌細胞を、効果的にクラスター化し、殺滅した。
4． MUC1*陽性癌細胞に「破滅のもと：Kissof Death」を与えるCAR T細胞の共焦点画像解析。
CAR44で形質導入されたヒトT細胞は、GFP(緑)で安定して形質転換されたMUCl*陽性癌細胞と、24時間共培養された。細胞は、すべてDAPI(青)で染色された。Granzyme Bは、蛍光団で染色された。T細胞活性化の後、標的癌細胞中で穴を作っていると思われるパーフォリン（perforin）を発現する。その後、T細胞は、granzyme B(黄色)をもつ癌細胞に注入した。それは、その後、癌細胞溶解に帰着するアポトーシス経路を引き起こす。図81A-81Dは、MUCl*陽性及びGFP陽性(緑)DU145前立腺癌細胞へ、granzyme B(黄色)を注入する、ヒトhuMN-C2-CAR44 T細胞の写真である。図81Aは、4Xに拡大された写真である。図81Bは、20Xに拡大された写真である。図81Cは、20Xに拡大された写真である。図81Dは、40Xに拡大された写真である。
5． FACS分析による、MUC1*陽性癌細胞のCAR T細胞誘導殺滅の分析
図82A-82Bは、T47D MUC1*陽性乳癌細胞に対するhuMN-C2-CAR44 T細胞の殺滅効果を示し、そこでは、乳癌細胞は、付加的なMUCl*の量を増加し形質転換された。見ることができるように、細胞上で発現された標的MUCl*の量が増加すると、huMN-C2-CAR44T細胞の殺滅効果は増加する。図82Aは、FACSによって測定される、標的細胞殺滅のグラフである。図82Bは、ELISA分析のグラフで、それにおいて、 T47D細胞との共培養での、huMN-C2-CAR44 T細胞からの上澄みについて、T細胞活性化の表れである、分泌されたインターフェロンγの存在を追跡した。
FACSによる細胞毒性を分析する多くの方法がある。この実施例において、ヒトT細胞が、標準プロトコルによって、全血から単離された。その後、T細胞は、GFPタグをもつCAR構築物を担持するレンチウイルスで別々に2度形質導入された。RPMI10%FBS及びIL-2での培養2-3日間に続いて、細胞は、MN-E6、MN-C2、MN-C3及びMN-C8の表面発現にラベルを付けるために、F(ab’)2で染色された。その後、細胞は、Fab陽性及びGFP陽性の細胞のための、フローサイトメトリーによってソートされた。それは、2倍の陽性数が挿入されたCARをもち、CARが正確な抗体断片を露出したことを意味する。そして、CAR T細胞は、MUCl*陰性のコントロール細胞若しくは標的MUCl*陽性癌細胞と、混合する準備ができた。
標的細胞は以下のように準備された:標的細胞を回収し、そして、1～1.5xl06細胞/mLで、CMTMr染料(CellTracker Orange, 5-and-6-4-chloromethyl benzoyl amino tetramethylrhodamine,Thermo Fisher)の15μMを含んでいる無血清培地で細胞を再懸濁した。特定の細胞タイプに適切な成長条件下、30分間インキュベーション。培養培地で洗って、新しいチューブに染色された細胞を移し、培地中で細胞を60min培養。超過染料をすべて取り除くために、培養培地でさらに2度洗浄。0.5mlの培地全容積で、24ウェルプレートでの分析をセットアップ。ウェルあたり常に20,000個の細胞（20,000細胞/250μl)であるように、標的細胞及びコントロール標的細胞を再懸濁。各ウェルに、250μlに置く。T細胞の250μlを添加し、結果、T細胞：標的細胞の比率は、=20: 1と10: 1と5: 1または1: 1．である。24h 及び72hの後に細胞を分析する。懸濁標的細胞について、ウェルから0.5mlの培地を取り、チューブに置き、0.5mlの培地若しくはPBSでウェルを洗浄する。接着標的細胞については、ウェルから0.5mlの培地を取り、チューブに置き、0.5mlのPBSでウェルを洗浄する。同じチューブにPBSを加え、ウェルに120μlトリプシンを加える。そして、4分間インキュベーションし、その後、トリプシンを中和するために0.5mlの培地を加え、同様にチューブにそれを置く。細胞をスピンさせ、l00μl FACSバッファーにペレットを再懸濁する。再び細胞をスピンさせる。T細胞染色のために、細胞を、氷中30分間、l00μlバッファー+5μl抗CD3抗体に再懸濁する。30分後、FACSバッファーで2度染色された細胞を洗い、250μlバッファーに再懸濁する。FACSチューブのフイルタ・キャップを通して細胞をランスルーさせる。分析10分前、各チューブに10μl 7AA-D染料を加え、細胞毒性テンプレート下のFortessaで分析する。図83A-83Dは、MUCl*陽性癌細胞と24時間の共培養の後における、huMN-C2-CAR44T細胞のFACS分析の結果を示す。図83Aは、非形質導入T細胞(赤棒)に比較しての、huMN-C2-CAR44 T細胞(青棒)によって殺されたT47D癌細胞のパーセンテージを示すFACSデータのグラフである。X軸は、癌細胞に対するT細胞の比率を示す。図83Bは、FACSデータのグラフで、それは非形質導入T細胞(赤棒)に比較しての、huMN-C2-CAR44T細胞(青棒)によって殺された、K562-MUC1*癌細胞のパーセンテージを示す。図83Cは、T47D乳癌細胞が、染料CMTMRで染色されたFACSスキャンを示す。Sytox Blueは、死細胞の染色である。死んでいる癌細胞は、四分円2及び3のものである。図83Dは、K562-MUC1*癌細胞が、染料CMTMRで染色されたFACSスキャンを示す。Sytox Blueは、死細胞の染色である。死んでいる癌細胞は四分円2及び3のものである。
培地へのIFN-γの分泌は、ヒトIFN-γELISAキット(Biolegend) を使用して、測定された。プレートは抗IFN-γ抗体で、コートされた(捕捉抗体、コーテイングバッファーに１X)。4℃で、一夜インキュベーションの後、プレートは、PBS-Tで４回洗われた。また、ブロッキング溶液が、ウェル上の残りの結合部位をブロックするために添加された。RT(500rpmでシェーキング)1時間後、プレートは、PBS-Tで4度洗浄され、コンデイション化培地(CM)及びIFN-γ標準が添加された。シェーキングでのRTの2h後、プレートは、PBS-Tでの４度洗浄後、検出用抗体(lx)が、添加された。シェーキングでのRTの1時間後、プレートは、PBS-Tで４回洗われ、そして、アビデイン-HRP(lx)が添加された。シェーキングでのRTの30分後、プレートは、PBS-Tで5回洗浄(各洗浄は1分間浸された)し、そして、TMB基質溶液が添加された。反応は、停止溶液加えて、20分後に停止させ、停止後15分以内に、450nm(570nmでのマイナスの吸光度)の吸光度をよんだ。
6．xCELLigenceによる、MUC1*陽性癌細胞のCAR T細胞誘導殺滅の分析
FACS分析に加えて、いまや、多くの研究者が、癌細胞のCAR T殺滅を測定するために、xCELLigence装置を使用する。xCELLigence装置は、その上に癌細胞が置かれた、電極アレイを使用する。付着癌細胞は、電極を絶縁し、それらが成長するにしたがって、インピーダンスの増加を引き起こす。反対に、T細胞は付着せず、懸濁中に残り、その結果、インピーダンスを増加させる電極の絶縁に寄与しない。しかしながら、T細胞若しくはCAR T細胞が、電極プレート上の癌細胞を殺す場合、癌細胞はボールアップし、それらの死に伴い、遊離し、インピーダンスを減少させる。xCELLigence装置は、時間の関数としてインピーダンスを測定する。それは癌細胞殺滅に関連づけられる。さらに、電極プレートには、観察ウインドウがある。CAR T細胞が吸着された標的癌細胞を有効に殺す場合、インピーダンスに減少があり、また、人は、癌細胞がプレート表面上に残されていないことが確認できる。
ほとんどのXCELLigence実験では、5,000癌細胞が、96ウェル電極アレイプレートにウェルごとに植えつけられた。細胞は、24時間付着し成長させた。その後、CART細胞は以下のターゲット比率(E: T)でエフェクターに添加された；0.5:1、1: 1、2: 1、5:1、10: 1、そしてまれに、20: 1。E: T比率は、実際の形質導入効率が40%である場合に、T細胞へのCARの100%形質導入を仮定するものである。
xCELLigence装置は、時間の関数としてインピーダンスを記録する。また、実験は7日まで続くことができる。
図78、図79、図84H、図85H、図86A-86C、図89A-89C、図90A-90D及び図107A-107Bは、すべて、xCELLigence装置上で行なわれたCAR T及び癌細胞実験の結果を示す。
7．ヒト腫瘍担持マウスでの、抗MUCl* CAR T細胞治療
8-12週齢の雌のNOD/SCID/GAMMA(NSG)マウスに、500,000のヒト癌細胞が注入された。そこでは癌細胞は、ルシフェラーゼで安定して形質転換された。ルシフェラーゼ陽性細胞を担持するマウスは、画像化直前に酵素基質ルシフェリンを注入され、それは癌細胞に蛍光を発させる。癌細胞は、IVIS装置上で、ルシフェリン注入の後10-15分以内に、生存マウスで画像化される。読み出しは、毎秒当たりの流出若しくは光子である。腫瘍は、IVISによって明瞭に可視できるまで、植え付けられた。
図91A-91Yは、IVIS装置上で得られた、マウスの蛍光写真を表わす。免疫不全マウスNSG(NOD/SCID/GAMMA)に、０日目で腹側面皮下に、ルシフェラーゼで安定して形質転換された、500,000のヒトMUCl*陽性癌細胞が移植された。腫瘍は、植え付けに成功した。IVIS測定の後5日目及び１２日目において、動物は、huMN-C2-scFv-CAR44で形質導入されたヒトT細胞若しくは非形質導入T細胞若しくはPBSの1000万を注入された。500万のT細胞は、腫瘍内に注入され。また、500万のT細胞が尾静脈に注入された。IVIS写真の10分前に、マウスは、ルシフェリンを腹腔内に(IP)注入され、それはルシフェラーゼによって開裂の後に蛍光を発し、腫瘍細胞に蛍光を発させる。
図92A-92Jは、IVIS装置上で得られたマウスの蛍光写真を表わす。免疫不全マウスNSG(NOD/SCID/GAMMA)に、０日目で腹側面皮下に、ルシフェラーゼで安定して形質転換された、MUCl*陽性3倍陰性癌細胞株である、500KのヒトBT-20細胞が移植された。腫瘍は、植え付けに成功した。IVIS測定の後6日目に、動物は、huMN-C2-scFv-CAR44で形質導入されたヒトT細胞若しくは非形質導入T細胞の1000万を一回注入された。500万のT細胞は腫瘍内に注入され。また、500万は尾静脈に注入された。IVIS写真の10分前に、マウスはルシフェリンをIP注入された。
図93A-93Hは、IVIS装置上で得られたマウスの蛍光写真を表わす。免疫不全マウスNSG(NOD/SCID/GAMMA)に、０日目で腹側面皮下に、ルシフェラーゼで安定して形質転換された、MUCl*陽性卵巣癌細胞株である、500KのヒトSKOV-3細胞が移植された。腫瘍は、植え付けに成功した。IVIS測定の後3日目に、動物は、huMN-C2-scFv-CAR44で形質導入されたヒトT細胞若しくは非形質導入T細胞若しくはPBSの10Mを注入された。動物は、7日目で、再度IVISイメージ化された。IVIS写真の10分前に、マウスはルシフェリンをIP注入された。
8． MMP9処置細胞の共焦点分析
安定して全長MUC1を発現するHCT-MUCl-18細胞として知られているHCT-MUC1-41が、DMEM+10%FCSで、6チャンネルu-スライドVI0.4(Ibidi(WI))に植え付けられた。48h後に、細胞は、PBS pH 7.4の120μLで洗浄され、そして、無血清培地(DMEM)で希釈された、MMP9触媒領域(EnzoLife Science,NY)が、異なる濃度(0、12.5、25、50及び100ng/mLの40 μl)で、添加された。CO2インキュベータで37℃lhの後、細胞は、冷PBS pH7.4の120 μlで2度洗われ、8分間４%PFA(30 μl)に固定された。細胞は、冷PBSpH 7.4で3回洗われ、シェーキングにより、4℃30分間、PBS pH 7.4(40μl)に5%BSA溶液でブロックされた。冷PBS pH 7.4(lx)と細胞を洗った後に、細胞は、PBS pH 7.4(100 μl)で希釈されたMN-C2の125 μg/mLと４℃(シェーキングによる)で夜通し培養された。次の日、細胞は、120μlのPBS pH 7.4で３X洗浄され、PBS pH 7.4 (100μl、1:200)で希釈された、ヤギ抗マウスIgG PE(Biolegend(CA))と４℃2時間インキュベート(シェーキングによる)された。インキュベーションの後、細胞は、PBS pH 7.4の120 μlでlx洗浄し、そして、PBS pH7.4+2.5μMヘキスト33342の120μlで2x洗浄した。最後に、細胞は、IbidiMountingMedia (Ibidi(WI))でマウントされた。結果は、MMP9添加が、抗MUCl*モノクローナル抗体MN-C2によって認識された、MUCl*型へ、全長MUC1の開裂を引き起こしたことを示す(図96A-96E)。これは、MMP9が、MN-C2によって認識されるサイトでMUC1を開裂することを示す。
9． NFAT誘導MMP9触媒領域発現
MMP9触媒領域が後続するNFATclプロモーター若しくはNFAT反応要素の４反復を含むベクターが、トランシエントリーに、メーカー・マニュアルに従い、Lipofectamine3000(ThermoFisherScientific、MA)でHEK293TN細胞(SystemBioscience,CA)へ形質転換された。24-30hの後、培地は、DMEM+1%FBS+l0ng/mL PMA(CaymanChemical(MI))及びIonomycin(1-6μM（CaymanChemical(MI)）に変更された。培地と細胞は、分析のために18hインキュベーション後に集められた。
MMP9の発現及び分泌は、次のプロトコルによって、細胞溶解物と調整培地のウェスタンブロット分析によって確認された。細胞は、溶解バッファー(50mMトリス、150mM NaCl及び1%のトリトンXI 00)で、氷上20分間で溶解された。ウェスタンブロットのために、タンパク質のl00μgがゲル電気泳動(4-15% Mini-PROTEAN® TGX™Precast Protein Gels, BioRad, CA)によって単離され、次いで、PVDF膜(BioRAD (CA))に移された。膜は、PBS-Tで簡単にすすがれ、次に、3%の無脂肪牛乳(BioRAD(CA))の溶液で室温にてlhブロックされた。フラグタグ化タンパク質のために、膜は、素早く洗浄され、そして、室温で2時間、1%無脂肪牛乳(1:2000)で希釈されたウサギ抗DYKDDDDKエピトープ・タグ抗体(Biolegend(CA))が、インキュベートされた。Hisタグ化タンパク質については、膜は素早く洗浄され、1%の無脂肪牛乳(1: 10000)で希釈されたウサギ抗6X Hisタグ抗体HRP(Abcam,MA)と室温で1hrインキュベートされた。フラグタグ化タンパク質のために、膜は、PBS-Tで10分間3回洗浄され、室温でlh、1%脱脂乳(1:2500)で希釈されたヤギ抗ウサギHRP抗体でインキュベートされた。Hisタグ化タンパク質ために及びフラグタグ化タンパク質ために第2抗体インキュベーション後、膜は、Clarity™ Western ECL Substrate (BioRad, CA)を使ったPBS-Tと、10分間3度洗浄後、プロセスされた。
ある場合には、タンパク質は、分析の前に、最初に免疫沈殿させられた。フラグタグ化MMP9触媒領域が、メーカー・マニュアルに従い、抗DYKDDDDKタグ(L5)親和ゲル(Biolegend(CA))を使用する調整培地(～2mL)から、免疫沈殿させられた。プルダウンされたタンパク質が、ウェスタンブロット分析若しくは開裂分析に使用された。
図98A-98Fは、、形質転換されたMMP9構築物を認識する抗体でプローブされた細胞溶解物のウェスタンブロットの写真である。プラスミドは構築され、次いで、HEK293T細胞へ形は、3つ若しくは4つのNFAT反応要素の下流に挿入された。NFATパスウェイは、コントロール(ctl)細胞以外において、lμM若しくは2μMのIonomycin及びl0ng/mLのPMAの添加によって活性化された。プルダウンは、MMP9構築物のC末端に組込まれたフラグ・タグを認識する抗体を結合されたビーズを使い行われた。レーン1は、分子量コントロールを示す。レーン2、3、4及び5は、抗フラグ・タグビーズから溶出されたMMP9を示す。レーン2及び3は、第1の溶出物であり、また、レーン4及び5に示される細胞は、第2の溶出物である。レーン2と4へ、細胞からの調整培地が乗せられ、そこにおいて、NFATパスウェイは、PMA 10ng/ml及びlμMのIonomycinで活性化された。レーン3と5へ、細胞からの調整培地が乗せられ、そこにおいて、NFATパスウェイは、PMA 10ng/ml及び2μMのIonomycinで活性化された。
図100A-100Eは、HEK293T細胞の中で発現されたNFAT誘導MMP9触媒領域を示し、そこでは、MMP9の天然リーダー配列が、IgKリーダー配列と取り替えられており、MMP9触媒領域がNFAT反応要素4反復の下流にある。図100Aは、NFATパスウェイの活性化の後の、細胞溶解物における、MMP9の発現を検出するウェスタンブロットの写真を示す。図100Bは、NFATパスウェイの活性化の後の、調整培地における、MMP9の発現を検出するウェスタンブロットの写真を示す。
図101A-101Eは、MMP9は、異なるリーダー配列で発現し、そして、各々の活性を呈することを示す。図101Aは、MMP9遺伝子の上流のリーダー配列が、その天然配列若しくはIgK配列である細胞溶解物におけるMMP9タンパク質を検出するウェスタンブロットを示す。図101Bは、MMP9遺伝子の上流のリーダー配列が、その天然配列若しくはIgKである調整培地におけるMMP9を検出するウェスタンブロットを示す。
図102A-102Dは、NFAT誘導可能MMP9を生産するプラスミドで形質転換された細胞の３クローン、（4、6及び7）を示し、そこで、NFATclプロモーター配列がMMP9遺伝子の上流にあり、このケースで、それは、その触媒領域を含む欠失MMP9である。さらに比較のために示されたは、NFAT誘導可能なMMP9を生産するプラスミドで形質転換された細胞であり、そこで、NFAT反応要素配列４反復は、MMP9遺伝子の上流にある。図102Aは、細胞溶解物におけるMMP9タンパク質を発現するウウェスタンブロットを示す。図102Bは、調整培地におけるMMP9を発現するウェスタンブロットを示す。
図105A-105Eは、CAR44単独で若しくはNFAT誘導可能なMMP9単独で形質導入された、又はCAR44及びNFAT誘導可能なMMP9で形質導入されたヒトT細胞のウェスタンブロットの写真を示し、ここで、得られたT細胞は、活性化されない、化学的にPMA/Ionomycinによって活性化された、又は合成MUCl*ペプチドを提示するビーズとの共培養により若しくはMUCl*陽性癌細胞との共培養により活性化された。ウェスタンブロットは、DYKタグ抗体として知られている抗フラグ・タグでプローブされた。MMP9触媒領域は、約40kDaの明白な分子量で展開する。図105A-105Dは、明澄化細胞溶解物のウェスタンブロットの写真を示す。結果は、NFAT誘導可能なMMP9のみで形質導入されたT細胞が、それらがPMA/Ionomycin、MUCl*ビーズ若しくはMUCl*陽性癌細胞によって活性化される場合に、MMP9を発現する。CAR44及びNFAT誘導可能なMMP9の両方で形質導入されたT細胞のみが、T細胞がMUCl*ビーズ若しくはMUCl*陽性癌細胞での刺激によって活性化される場合に、MMP9を発現する。
結果は、NFAT誘導可能なMMP9で形質導入されたT細胞は、それらが活性化される時、MMP9を発現することを示す。CAR44及びNFAT誘導可能なMMP9の両方で形質導入されたT細胞は、MUCl*を提示する若しくは発現するビーズ若しくは細胞との共培養されるときに、特異的に活性化される(図105Aレーン5及びレーン6)。
10．蛍光性MMPペプチド基質開裂分析
OMNIMMP蛍光基質(EnzoLifeScience,NY)は、分析バッファー(50mMトリスpH 7.5、300mM NaCl、1mM CaCl2、5μM ZnCl2、0.1%Brj-35及び15%グリセリン)で、20μMに希釈され、氷上に維持し、使用されるまで光から保護した。ペプチドは、PBS pH 7.4若しくは培養培地で希釈できる。0.4mg/mLまで希釈された細胞溶解物は、分析バッファーであり、若しくはPBS pH 7.4若しくは培養培地である。分析のために、組み換えのMMP9の触媒領域の50μl、(分析バッファー、PBS pH 7.4若しくは培地中の1-2μg/mL)、希釈された細胞溶解物の50μl、調整培地の50μl若しくはプルダウンタンパク質の50 μlが、蛍光測定器をもつ96ウェルプレートコンパーチブルのウェルに添加された。まさに分析を始める前に、希釈されたペプチドの50 μlが各ウェルに添加され、速やかに混合された。終ペプチド濃度は、10 μMである。蛍光は、37℃で約6時間、10分毎に、記録された（Ex.: 328nm、Em.:393nm）。
図97は、PBS、ソリッドトレース、若しくは細胞培養培地、ダッシュトレース、の2つの濃度で、MMP9触媒領域によって開裂される、MMP9の蛍光性ペプチド基質、OMNIMMPペプチド、のグラフを示す。
図99A-99Cは、NFAT反応要素４反復から下流にMMP9遺伝子を含むプラスミドで形質転換されたHEK293T細胞の細胞溶解物若しくは調整培地によって開裂される、MMP9の基質、OMNIMMPペプチド、蛍光ペプチドのグラフを示す。MMP9ペプチド基質分析は、PMA/ionomycinによるNFATパスウェイの活性化が、MMP9の発現及び分泌がおこるということ、そして、それはペプチド基質を開裂するその能力によって証拠づけられるようにそれが活性だったことを示す。
図l00Cは、HEK293T細胞の調整培地で発現され分泌された、MMP9触媒領域による開裂についての、MMP9蛍光ペプチド基質、OMNIMMPペプチドのグラフを示し、そこでは、MMP9の天然リーダー配列がIgKリーダー配列で置き換わり及びMMP9触媒領域はNFAT反応要素4反復の下流にある。図100Dは、HEK293T細胞の調整培地で発現され分泌された、MMP9触媒領域によるMMP9蛍光性ペプチド基質開裂のグラフを示し、そこでは、MMP9の天然リーダー配列がIgKリーダー配列と取り替えられており、MMP9触媒領域が、NFAT反応要素4反復の下流にある。
図101Cは、発現されたMMP9によって開裂されたMMP9ペプチド基質のグラフを示す。
図103A-103Dは、MMP9ペプチド基質開裂分析のグラフを表わす。図103Aは、NFATclプロモーター若しくはNFAT反応要素4反復から駆動されるMMP9発現をもつプラスミドで形質転換された細胞の溶解物からのMMP9の開裂活性を示す。図103Bは、NFATclプロモーター若しくはNFAT反応要素4反復から駆動されるMMP9発現もつプラスミドで形質転換された細胞の調整培地からのMMP9の開裂活性を示す。
図104A-104Bは、MMP9の活性を測定するOMNIMMP9蛍光性基質分析の結果を示す。NFAT誘導可能なMMP9単独で若しくはCAR44との組み合わせで、形質導入されたヒトT細胞からの調整培地が、該分析に添加され、また、MMP9基質開裂は時間の関数として測定された。図104Aは、ヒトT細胞が、HCT-MUCl*癌細胞と共培養することにより活性化された後、CAR44及びNFAT誘導可能なMMP9の両方で形質導入された時の、ヒトT細胞のMMP9活性を示す。時間の関数として増加した基質開裂を示さないトレースは、活性化されなかった細胞からの調整培地である。図104Bは、ヒトT細胞が、T細胞を活性化すると知られている抗CD3及び抗CD28でコートされたビーズと共培養することにより活性化された後、NFAT誘導可能なMMP9で形質導入された時の、MMP9活性を示す。時間の関数として増加した基質開裂を示さないトレースは、活性化されなかった細胞からの調整培地である。
11．クローニング
NFAT反応要素の下流のlentivectorにおけるMMP9触媒領域クローニング
2つの配列が合成された；
(pNFAT-MMP9cat -1及びpNFAT-MMP9cat-2(SEQ ID NO: 784及びSEQ ID NO:785)。lentivector pGreenFirel-4x NFAT(SystemBioscience,CA)は、SpelとKpnlの制限酵素(ニューイングランドバイオ研究所)で消化切断された。精製断片及び2つの合成された配列が、ギブソンアッセンブリークローニング・キット(ニューイングランドバイオ研究所)を使用して組み立てられた。得られた構築物(pGreenFirel-4xNFAT-MMP9cat)は、その天然リーダー配列を持った、最小プロモーター(mCMV)及びMMP9触媒領域が後続するNFAT反応要素4反復を含む。
(pNFAT-MMP9cat -1及びpNFAT-MMP9cat-2(SEQ ID NO: 784及びSEQ ID NO:785)。lentivector pGreenFirel-4x NFAT(SystemBioscience,CA)は、SpelとKpnlの制限酵素(ニューイングランドバイオ研究所)で消化切断された。精製断片及び2つの合成された配列が、ギブソンアッセンブリークローニング・キット(ニューイングランドバイオ研究所)を使用して組み立てられた。得られた構築物(pGreenFirel-4xNFAT-MMP9cat)は、その天然リーダー配列を持った、最小プロモーター(mCMV)及びMMP9触媒領域が後続するNFAT反応要素4反復を含む。
pGL4-14[luc2/Hygro]でのNFAT反応要素のクローニング:
4X NFAT領域は次のプライマーを使用して、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)によってlentive
ctorpGreenFirel-4x NFATから増幅された:
5'-tagatggtaccaagaggaaaatttgtttcatacag-3'(SEQ ID NO: 786) 及び
5'-tagataagcttgctggatcggtcccggtgtc-3'(SEQ IDNO: 787)。KpnlとHindlllの制限酵素(ニューイングランドBiolabs)で消化切断の後、精製断片が、構築物pGL4-14-4xNFATを作成するために同じ制限酵素で消化切断されたプロモーター無しベクターpGL4-14[luc2/Hygro](Promega)へクローン化された。
ctorpGreenFirel-4x NFATから増幅された:
5'-tagatggtaccaagaggaaaatttgtttcatacag-3'(SEQ ID NO: 786) 及び
5'-tagataagcttgctggatcggtcccggtgtc-3'(SEQ IDNO: 787)。KpnlとHindlllの制限酵素(ニューイングランドBiolabs)で消化切断の後、精製断片が、構築物pGL4-14-4xNFATを作成するために同じ制限酵素で消化切断されたプロモーター無しベクターpGL4-14[luc2/Hygro](Promega)へクローン化された。
pGL4-14-4xNFATへのMMP9触媒領域のクローニング:
MMP9の天然リーダー配列及びMMP9触媒領域が後続する最小のプロモーター(mCMV)を含む断片が、次のプライマーを使用して、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)によって、lentivectorpGreenFirel-4x NFAT-MMP9catから増幅された:
5'-tcatacagaaggcgttactagttaggcgtgtacggtgg-3'(SEQ ID NO: 788) 及び
5'-acagtaccggattgccaagcttttatcacttatcgtcgtcatccttg-3'(SEQ ID NO: 789)。
pGL4-14-4xNFATは、SpelとHindlllの制限酵素(ニューイングランドバイオ研究所)で消化切断された。精製PCR断片及び消化切断されたpGL4-14-4xNFATは、構築物pGL4-14-4xNFAT-MMP9catを作成するためにギブソンアッセンブリークローニング・キット(ニューイングランドBiolab)を使用して組み立てられた。
5'-tcatacagaaggcgttactagttaggcgtgtacggtgg-3'(SEQ ID NO: 788) 及び
5'-acagtaccggattgccaagcttttatcacttatcgtcgtcatccttg-3'(SEQ ID NO: 789)。
pGL4-14-4xNFATは、SpelとHindlllの制限酵素(ニューイングランドバイオ研究所)で消化切断された。精製PCR断片及び消化切断されたpGL4-14-4xNFATは、構築物pGL4-14-4xNFAT-MMP9catを作成するためにギブソンアッセンブリークローニング・キット(ニューイングランドBiolab)を使用して組み立てられた。
pSECTag2へのMMP9触媒領域のクローニング:
その天然リーダー配列のないMMP9触媒領域が、次のプライマーを使用して、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)によってlentivectorpGreenFirel-4x NFAT-MMP9catから増幅された:
5'-aagttggtaccgttccaaacctttgagggcgacc-3'(SEQ ID NO: 790)及び
5'-aagttctcgagcaggttcagggcgaggaccatag-3'(SEQ ID NO: 791)。
KpnlとXholの制限酵素(ニューイングランドBiolabs)で消化切断の後、精製断片は、構築物pSECTag2 MMP9 cat Hisを作成するために、同じ制限酵素で消化切断されたベクターpSECTag2A(ThermoFisherScientific)へクローン化された。この構築物において、MMP9触媒領域は、あるなら、IgKリーダー配列の下流だろう。
5'-aagttggtaccgttccaaacctttgagggcgacc-3'(SEQ ID NO: 790)及び
5'-aagttctcgagcaggttcagggcgaggaccatag-3'(SEQ ID NO: 791)。
KpnlとXholの制限酵素(ニューイングランドBiolabs)で消化切断の後、精製断片は、構築物pSECTag2 MMP9 cat Hisを作成するために、同じ制限酵素で消化切断されたベクターpSECTag2A(ThermoFisherScientific)へクローン化された。この構築物において、MMP9触媒領域は、あるなら、IgKリーダー配列の下流だろう。
pGL4-14-4xNFATへのIgKリーダー配列を備えたMMP9触媒領域のクローニング:
その天然リーダー配列を備えたMMP9触媒領域は、次のプライマーを使用して、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)によってpGL4-14-4xNFAT-MMP9catから増幅された:
5'-attgactcgagctctcgacattcgtttctagagc-3'(SEQ ID NO: 792) 及び
5'-attgaaagcttttatcacttatcgtcgtcatccttg-3'(SEQ ID NO: 793)。
XholとHindlllの制限酵素(ニューイングランドBiolabs)で消化切断の後、精製断片は、構築物pGL4-14 MMP9cat XHを作成するために、同じ制限酵素で消化切断されたベクターpGL4-14[luc2/Hygro](Promega)へクローン化された。
5'-attgactcgagctctcgacattcgtttctagagc-3'(SEQ ID NO: 792) 及び
5'-attgaaagcttttatcacttatcgtcgtcatccttg-3'(SEQ ID NO: 793)。
XholとHindlllの制限酵素(ニューイングランドBiolabs)で消化切断の後、精製断片は、構築物pGL4-14 MMP9cat XHを作成するために、同じ制限酵素で消化切断されたベクターpGL4-14[luc2/Hygro](Promega)へクローン化された。
最小のプロモーター(mCMV)が後続する4x NFAT反応要素を含んでいる断片が、次のプライマーを使用して、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)によってpGL4-14-4xNFAT-MMP9catから増幅された:
5'-tagcaaaataggctgtccc -3'(SEQ ID NO: 794) 及び
5'-attgactcgaggctggatcggtcccggtgtc -3'(SEQ IDNO: 795)。
KpnlとXholの制限酵素(ニューイングランドBiolabs)で消化切断の後、精製断片は、構築物pGL4-14 4xNFAT-MMP9cat KXHを作成するために同じ制限酵素で消化切断されたベクターpGL4-14 MMP9cat XHへクローン化された。
5'-tagcaaaataggctgtccc -3'(SEQ ID NO: 794) 及び
5'-attgactcgaggctggatcggtcccggtgtc -3'(SEQ IDNO: 795)。
KpnlとXholの制限酵素(ニューイングランドBiolabs)で消化切断の後、精製断片は、構築物pGL4-14 4xNFAT-MMP9cat KXHを作成するために同じ制限酵素で消化切断されたベクターpGL4-14 MMP9cat XHへクローン化された。
MMP9触媒領域が後続するIgKリーダー配列を含んでいる断片が、次のプライマーを使用して、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)によってpSECTag2MMP9 catから増幅された:
5'-aagacaccgggaccgatccagcctcgagagacccaagctggctagccacc-3' (SEQ ID NO: 796) 及び
5'-ttaccaacagtaccggattgccaagcttttatcacttatcgtcgtcatcc-3'(SEQ ID NO: 797)。
pGL4-14 4xNFAT-MMP9cat KXHが、XholとHindlllの制限酵素(ニューイングランドバイオ研究所)で消化切断された。精製PCR断片及び消化切断されたpGL4-14 4xNFAT-MMP9cat KXHは、構築物pGL4-14-4xNFAT-IgK MMP9catを作成するためにギブソンアッセンブルクローニング・キット(ニューイングランドBiolab)を使用して組み立てられた。
5'-aagacaccgggaccgatccagcctcgagagacccaagctggctagccacc-3' (SEQ ID NO: 796) 及び
5'-ttaccaacagtaccggattgccaagcttttatcacttatcgtcgtcatcc-3'(SEQ ID NO: 797)。
pGL4-14 4xNFAT-MMP9cat KXHが、XholとHindlllの制限酵素(ニューイングランドバイオ研究所)で消化切断された。精製PCR断片及び消化切断されたpGL4-14 4xNFAT-MMP9cat KXHは、構築物pGL4-14-4xNFAT-IgK MMP9catを作成するためにギブソンアッセンブルクローニング・キット(ニューイングランドBiolab)を使用して組み立てられた。
NFATclプロモーター下流のpEZX-PG02.1へのMMP9触媒領域のクローニング:
その天然リーダー配列を備えたMMP9触媒領域は、次のプライマーを使用して、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)によってlentivector pGreenFirel-4x NFAT-MMP9catから増幅された:
5'-attgaaagcttctctcgacattcgtttctagagc-3'(SEQ ID NO: 798) 及び
5'-attgagagctcttatcacttatcgtcgtcatc -3'(SEQID NO: 799)。
HindlllとSaclの制限酵素(ニューイングランドBiolabs)で消化切断の後、精製断片は、構築物pEZX-NFATc1-MMP9catを作成するために、NFACTclプロモーター(GeneCopoeia、MD)の下流ベクターpEZX-PG02.1にクローン化された。
5'-attgaaagcttctctcgacattcgtttctagagc-3'(SEQ ID NO: 798) 及び
5'-attgagagctcttatcacttatcgtcgtcatc -3'(SEQID NO: 799)。
HindlllとSaclの制限酵素(ニューイングランドBiolabs)で消化切断の後、精製断片は、構築物pEZX-NFATc1-MMP9catを作成するために、NFACTclプロモーター(GeneCopoeia、MD)の下流ベクターpEZX-PG02.1にクローン化された。
pEZX-NFATcl-MMP9catの修飾:
pEZX-NFATcl-MMP9catが、NFATclプロモーターのSpelとKpnlの制限部位5’及びMMP9触媒領域のNhelとEcoRVの制限部位'3を導入するために修飾された。2つの gBLOCKsが、IDT,IA.によって、本願発明者等のリクエストによって合成された (NFAT modif 1及びNFAT modif 2、SEQ ID NO: 800及びSEQ ID NO: 801)。pEZX-NFATcl-MMP9catベクターは、Nhel、EcoRI、Sacl及びXhol制限酵素(ニューイングランドバイオ研究所)で消化切断された。2個の断片が精製され、ギブソンアセンブリクローニング・キット(ニューイングランドバイオ研究所)を使用して、2つの合成されたgBLOCKSで組み立てられた。
lentivector pCDH-CMV-MCS-EFla-HygroへのNFATclのプロモーター/MMP9触媒領域のクローニング:
修飾pEZX-NFATcl-MMP9catベクターは、SpelとNhelの制限酵素(ニューイングランドBiolabs)で消化切断された。また、MMP9触媒領域が後続するNFATclプロモーターを含む断片は、精製され、同じ制限酵素で消化切断されたlentivector pCDH-CMV-MCS-EFla-Hygro(システム・バイオササイエンス)へクローン化された。
lentivector pCDH-CMV-MCS-EFla-HygroへのNFAT反応要素/MMP9触媒領域のクローニング:
その天然リーダー配列を備えたMMP9触媒領域が後続するNFAT反応要素4反復を含む断片が、次のプライマーを使用するポリメラーゼ連鎖反応(PCR)によってベクターpGL4-14-4xNFAT-MMP9catから増幅された:
5'-acaaaattcaaaattttatcgatactagttggcctaactggccggtaccaag-3'(SEQ ID NO: 802) 及び
5'-atccgatttaaattcgaattcgctagcttatcacttatcgtcgtcatcc-3'(SEQ ID NO: 803)。
精製PCR断片及び消化切断されたpCDH-CMV-MCS-EFla-Hygro(Spel及びNhel)は、ギブソンアセンブリクローニング・キット(ニューイングランドバイオ研究所)を使用して組み立てられた。
5'-acaaaattcaaaattttatcgatactagttggcctaactggccggtaccaag-3'(SEQ ID NO: 802) 及び
5'-atccgatttaaattcgaattcgctagcttatcacttatcgtcgtcatcc-3'(SEQ ID NO: 803)。
精製PCR断片及び消化切断されたpCDH-CMV-MCS-EFla-Hygro(Spel及びNhel)は、ギブソンアセンブリクローニング・キット(ニューイングランドバイオ研究所)を使用して組み立てられた。
ここに引用された参照のすべては、その全体が、参照によって本願明細書に挿入される。
配列表フリーテキスト
a、g、c、t以外のヌクレオチド・シンボルの使用については、それらは、WIPO標準ST.25,付録2、表1で述べられた規定に従う。そこではkは、t若しくはgを表わす); nは、a、c、
t若しくはgを表わす; mは、a若しくはcを表す; rは、a若しくはgを表す; sは、c若しくは
gを表わす; wは、a若しくはtを表す、そしれ、yはc若しくはtを表わす。
MUC1 Receptor
(Mucin 1 precursor, GenbankAccession number: P15941)
MTPGTQSPFFLLLLLTVLTVVTGSGHASSTPGGEKETSATQRSSVPSSTEKNAVSMTSSVLSSHSPGSGSSTTQGQDVTL
APATEPASGSAATWGQDVTSVPVTRPALGSTTPPAHDVTSAPDNKPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTS
APDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTS
APDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTS
APDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTS
APDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTS
APDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTS
APDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTS
APDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTS
APDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTS
APDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTS
APDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDNRPALGSTAPPVHNVTS
ASGSASGSASTLVHNGTSARATTTPASKSTPFS IPSHHSDTPTTLASHSTKTDASSTHHSSVPPLTSSNHSTSPQLSTG
VSFFFLSFHISNLQ FNSSLEDPSTDYYQELQRDISEMFLQIYKQGGFLGLSNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVE
TQFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGAGVPGWGIALLVLVCVLVALAIVYLIALAVCQCRRKNYGQLDIFP
ARDTYHPMSEYPTYHTHGRYVPPSSTDRSPYEKVSAGNGGSSLSYTNPAVAAASANL (SEQ ID NO : 1 )
PSMGFR
GTINVHDVETQFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGA (SEQ ID NO: 2)
Human NME1
(DNA)
atggccaactgtgagcgtaccttcattgcgatcaaaccagatggggtccagcggggtcttgtgggagagattatcaagcg
ttttgagcagaaaggattccgccttgttggtctgaaattcatgcaagcttccgaagatcttctcaaggaacactacgttg
acctgaaggaccgtccattctttgccggcctggtgaaatacatgcactcagggccggtagttgccatggtctgggagggg
ctgaatgtggtgaagacgggccgagtcatgctcggggagaccaaccctgcagactccaagcctgggaccatccgtggaga
cttctgcatacaagttggcaggaacattatacatggcagtgattctgtggagagtgcagagaaggagatcggcttgtggt
ttcaccctgaggaactggtagattacacgagctgtgctcagaactggatctatgaatga (SEQ ID NO: 3)
(amino acids)
MANCERTFIAIKPDGVQRGLVGEIIKRFEQKGFRLVGLKFMQASEDLLKEHYVDLKDRPFFAGLVKYMHSGPVVAMVWEG
LNVVKTGRVMLGETNPADSKPGTIRGDFCIQVGRNIIHGSDSVESAEKEIGLWFHPEELVDYTSCAQNWIYE- (SEQID
NO: 4)
Human NME7
(DNA)
atgaatcatagtgaaagattcgttttcattgcagagtggtatgatccaaatgcttcacttcttcgacgttatgagctttt
attttacccaggggatggatctgttgaaatgcatgatgtaaagaatcatcgcacctttttaaagcggaccaaatatgata
acctgcacttggaagatttatttataggcaacaaagtgaatgtcttttctcgacaactggtattaattgactatggggat
caatatacagctcgccagctgggcagtaggaaagaaaaaacgctagccctaattaaaccagatgcaatatcaaaggctgg
agaaataattgaaataataaacaaagctggatttactataaccaaactcaaaatgatgatgctttcaaggaaagaagcat
tggattttcatgtagatcaccagtcaagaccctttttcaatgagctgatccagtttattacaactggtcctattattgcc
atggagattttaagagatgatgctatatgtgaatggaaaagactgctgggacctgcaaactctggagtggcacgcacaga
tgcttctgaaagcattagagccctctttggaacagatggcataagaaatgcagcgcatggccctgattcttttgcttctg
cggccagagaaatggagttgttttttccttcaagtggaggttgtgggccggcaaacactgctaaatttactaattgtacc
tgttgcattgttaaaccccatgctgtcagtgaaggactgttgggaaagatcctgatggctatccgagatgcaggttttga
aatctcagctatgcagatgttcaatatggatcgggttaatgttgaggaattctatgaagtttataaaggagtagtgaccg
aatatcatgacatggtgacagaaatgtattctggcccttgtgtagcaatggagattcaacagaataatgctacaaagaca
tttcgagaattttgtggacctgctgatcctgaaattgcccggcatttacgccctggaactctcagagcaatctttggtaa
aactaagatccagaatgctgttcactgtactgatctgccagaggatggcctattagaggttcaatacttcttcaagatct
tggataattag (SEQ ID NO: 5)
(amino acids)
MNHSERFVFIAEWYDPNASLLRRYELLFYPGDGSVEMHDVKNHRTFLKRTKYDNLHLEDLFIGNKVNVFSRQLVLIDYGD
QYTARQLGSRKEKTLALIKPDAI SKAGEI IEIINKAGFTITKLKMMMLSRKEALDFHVDHQSRPFFNELIQFITTGP
IIAMEILRDDAICEWKRLLGPANSGVARTDASESIRALFGTDGIRNAAHGPDSFASAAREMELFFPSSGGCGPANTAKFT
NCTCCIVKPHAVSEGLLGKILMAIRDAGFEISAMQMFNMDRVNVEEFYEVYKGVVTEYHDMVTEMYSGPCVAMEIQQNNA
TKTFREFCGPADPEIARHLRPGTLRAIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFFKILDN- (SEQ ID NO : 6 )
NME7 peptides
NME7A peptide 1 (A domain)MLSRKEALDFHVDHQS (SEQ ID NO : 7 )
NME7A peptide 2 (A domain)SGVARTDASES (SEQ ID NO : 8 )
NME7B peptide 1 (B domain)DAGFEI SAMQMFNMDRVNVE (SEQ ID NO : 9 )
NME7B peptide 2 (B domain)EVYKGVVTEYHDMVTE (SEQ ID NO : 10 )
NME7B peptide 3 (B domain)AIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFF (SEQ ID NO : 11 )
Mouse E6 Heavy chain variableregion sequence:
(DNA)
gaggtgaaggtggtggagtctgggggagacttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgtagtctctggatt
cactttcagtagatatggcatgtcttgggttcgccagactccaggcaagaggctggagtgggtcgcaaccattagtggtg
gcggtacttacatctactatccagacagtgtgaaggggcgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaccctgtac
ctgcaaatgagcagtctgaagtctgaggacacagccatgtatcactgtacaagggataactacggtaggaactacgacta
cggtatggactactggggtcaaggaacctcagtcaccgtctcctca (SEQ ID NO: 12)
(amino acids)
EVKVVESGGDLVKPGGSLKLSCVVSGFTFSRYGMSWVRQTPGKRLEWVATISGGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNTL
YL QMSSLKSEDTAMYHCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTSVTVSS (SEQID NO: 13)
Mouse E6 heavy chain variableframework region 1 (FWR1) sequence:
(DNA)
gaggtgaaggtggtggagtctgggggagacttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgtagtctct(SEQ
ID NO: 14)
(amino acids)
EVKVVESGGDLVKPGGSLKLSCVVSGFTFS(SEQ ID NO: 15)
Mouse E6 heavy chain variablecomplementarity determining regions 1 (CDR1) sequen
ce :
(DNA)
ggattcactttcagtagatatggcatgtct(SEQ ID NO: 16)
(amino acids)
RYGMS (SEQ ID NO: 17)
Mouse E6 heavy chain variableframework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
tgggttcgccagactccaggcaagaggctggagtgggtcgca(SEQ ID NO: 18)
(amino acids)
WVRQTPGKRLEWVA (SEQ ID NO : 19 )
Mouse E6 heavy chain variablecomplementarity determining regions 2 (CDR2) sequen
ce :
(DNA)
accattagtggtggcggtacttacatctactatccagacagtgtgaagggg(SEQ ID NO: 20)
(amino acids)
TISGGGTYIYYPDSVKG (SEQ ID NO :21 )
Mouse E6 heavy chain variableframework region 3 (FWR3) acid sequence:
(DNA)
cgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaccctgtacctgcaaatgagcagtctgaagtctgaggacacagccat
gtatcactgtacaagg (SEQ ID NO: 22)
(amino acids)
RFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMYHCTR (SEQ ID NO: 23)
Mouse E6 heavy chain variablecomplementarity determining regions 3 (CDR3) sequen
ce :
(DNA)
gataactacggtaggaactacgactacggtatggactac(SEQ ID NO: 24)
(amino acids)
DNYGRNYDYGMDY (SEQ ID NO: 25)
IGHV3-21*03 heavy chain variableregion sequence:
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtagctatagcatgaactgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcatccattagtagta
gtagtagttacatatactacgcagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtgcgaga (SEQ ID NO: 26)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSSSSYIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLY
LQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 27)
IGHV3-21*01 heavy chain variableframework region 1 (FWR1) sequence:
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagt(SEQ ID NO:28)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO : 29 )
IGHV3-21*01 heavy chain variablecomplementarity determining regions 1 (CDR1) seq
uence :
(DNA)
agctatagcatgaac (SEQ ID NO: 30)
(amino acids)
SYSMN (SEQ ID NO: 31)
IGHV3-21*01 heavy chain variableframework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
tgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctca(SEQ ID NO: 32)
(amino acids)
WVRQAPGKGLEWVS (SEQ ID NO: 33)
IGHV3-21*01 heavy chain variablecomplementarity determining regions 2 (CDR2) seq
uence :
(DNA)
tccattagtagtagtagtagttacatatactacgcagactcagtgaagggc(SEQ ID NO: 34)
(amino acids)
SISSSSSYIYYADSVKG (SEQ ID NO:35)
IGHV3-21*01 heavy chain variableframework region 3 (FWR3) sequence:
(DNA)
cgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgt
gtattactgtgcgaga (SEQ ID NO: 36)
(amino acids)
RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 37)
Humanized E6 heavy chainvariable region sequence:
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtaggtatggcatgagctgggtccgccaggctccagggaagaggctggagtgggtctcaaccattagtggcg
gaggcacctacatatactacccagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacaccctgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtaccagagataactatggccgcaactatgatta
tggcatggattattggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagc (SEQ ID NO: 38)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNTL
Y LQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSS (SEQID NO : 39 )
Humanized E6 heavy chainvariable framework region 1 (FWR1) acid sequence:
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagt (SEQ ID NO: 40)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO : 41 )
Humanized E6 heavy chainvariable complementarity determining regions 1 (CDR1) se
quence :
(DNA)
aggtatggcatgagc (SEQ ID NO: 42)
(amino acids)
RYGMS (SEQ ID NO: 43)
Humanized E6 heavy chainvariable framework region 2 (FWR2) acid sequence:
(DNA)
tgggtccgccaggctccagggaagaggctggagtgggtctca(SEQ ID NO: 44)
(amino acids)
WVRQAPGKRLEWVS (SEQ ID NO: 45)
Humanized E6 heavy chainvariable complementarity determining regions 2 (CDR2) se
quence :
(DNA)
accattagtggcggaggcacctacatatactacccagactcagtgaagggc(SEQ ID NO: 46)
(amino acids)
TI SGGGTYIYYPDSVKG (SEQ ID NO:47)
Humanized E6 heavy chainvariable framework region 3 (FWR3) acid sequence:
(DNA)
cgattcaccatctccagagacaacgccaagaacaccctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgt
gtattactgtaccaga (SEQ ID NO: 48)
(amino acids)
RFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR (SEQ ID NO : 49 )
Humanized E6 heavy chainvariable complementarity determining regions 3 (CDR3) se
quence :
(DNA)
gataactatggccgcaactatgattatggcatggattat(SEQ ID NO: 50)
(amino acids)
DNYGRNYDYGMDY (SEQ ID NO: 51)
Humanized E6 IgG2 heavy chainsynthesized by Genescript :
(DNA)
gaattctaagcttgggccaccatggaactggggctccgctgggttttccttgttgctattttagaaggtgtccagtgtga
ggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattca
ccttcagtaggtatggcatgagctgggtccgccaggctccagggaagaggctggagtgggtctcaaccattagtggcgga
ggcacctacatatactacccagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacaccctgtatct
gcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtaccagagataactatggccgcaactatgattatg
gcatggattattggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagcgcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcg
ccctgctccaggagcacctccgagagcacagccgccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggt
gtcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctcaggactctactccctca
gcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacacc
aaggtggacaagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagt
cttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtga
gccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggag
gagcagttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgttgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaa
gtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccac
aggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctac
cccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactc
cgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccg
tgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatagtaagtttaaactcta
ga (SEQ ID NO:52)
(amino acids)
EF*AWATMELGLRWVFLVAILEGVQCEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGG
G TYIYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPL
APCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSN
TKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR
EEQFN STFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTI SKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK
GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* *
V*TLX(SEQ ID NO:53)
Human IgG2 heavy chain constantregion sequence :
(DNA)
gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagccgccctgggctg
cctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcc
cagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggcacccagacc
tacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgccc
accgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctccc
ggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggc
gtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgt
tgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaa
ccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaac
caggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccgga
gaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaaga
gcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctc
tccctgtctccgggtaaatag (SEQ ID NO: 54)
(amino acids)
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQT
YTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDG
VE VHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTI SKTKGQPREPQVYTLPPSREEMT
KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQK
SLSLSPGK (SEQ ID NO:55)
Humanized E6 IgGl heavy chainsequence:
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtaggtatggcatgagctgggtccgccaggctccagggaagaggctggagtgggtctcaaccattagtggcg
gaggcacctacatatactacccagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacccactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtcccagagataactatggccgcaactatgatta
tggcatggattattggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagcgctagcaccaagggcccatcggtcttccccctgg
caccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacg
gtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccct
cagcagcgtggtgacagtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaaca
ccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctg
gggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgt
ggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaaga
caaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaat
ggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggca
gccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctgg
tcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcct
cccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgt
cttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatgat
aa (SEQ ID NO:56)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNPL
YLQMNSLRAEDTAVYYCPRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPV
TVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEL
LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWL
NGKEY KCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYK
TTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* * (SEQ ID NO: 57)
Human IgGl heavy chain constantregion sequence :
(DNA)
gctagcaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctg
cctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcc
cggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgacagtgccctccagcagcttgggcacccagacc
tacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactca
cacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccc
tcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactgg
tacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcag
cgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagccc
ccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggag
atgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaa
tgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctca
ccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacg
cagaagagcctctccctgtctccgggtaaatgataa (SEQ ID NO: 58)
(amino acids)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQT
YICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFN
WYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAP IEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR
EEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH
YTQKSLSLSPGK** (SEQ ID NO:59)
Human IgGl heavy chain constantregion gBLOCK#l sequence:
(DNA)
atggcatggattattggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagcgctagcaccaagggcccatcggtcttccccctg
gcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgac
ggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccc
tcagcagcgtggtgacagtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaac
accaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcct
ggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcg
tggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaag
(SEQ ID NO: 60)
Human IgGl heavy chain constantregion gBLOCK#2 sequence :
(DNA)
tacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcag
cgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagccc
ccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggag
atgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaa
tgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctca
ccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacg
cagaagagcctctccctgtctccgggtaaatgataagtttaaacccgctgatcagcctcgactgtgccttctagttg (S
EQ IDNO: 61)
E6 heavy chain variable regionoverlapping sequence:
(DNA)
atggcatggattattggggccagggcaccct(SEQ ID NO: 62)
IgGl heavy chain constant regionoverlapping region sequence:
(DNA)
tacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaag(SEQ ID NO: 63)
pCDNA3.1 V5 and pSECTag2overlapping sequence :
(DNA)
ccgctgatcagcctcgactgtgccttctagttg(SEQ ID NO: 64)
Mouse E6 Light Chain variableregion sequence:
(DNA)
caaattgttctcacccagtctccagcaatcatgtctgcatctccaggggaggaggtcaccctaacctgcagtgccacctc
aagtgtaagttacatacactggttccagcagaggccaggcacttctcccaaactctggatttatagcacatccaacctgg
cttctggagtccctgttcgcttcagtggcagtggatatgggacctcttactctctcacaatcagccgaatggaggctgaa
gatgctgccacttattactgccagcaaaggagtagttccccattcacgttcggctcggggacaaagttggaaataaaa (
SEQ ID NO: 65)
(amino acids)
QIVLTQSPAIMSASPGEEVTLTCSATSSVSYIHWFQQRPGTSPKLWIYSTSNLASGVPVRFSGSGYGTSYSLTISRMEAE
D AATYYCQQRSSSPFTFGSGTKLEIK (SEQ ID NO : 66 )
Mouse E6 light chain variableframework region 1 (FWR1) sequence:
(DNA)
caaattgttctcacccagtctccagcaatcatgtctgcatctccaggggaggaggtcaccctaacctgc(SEQ ID NO:
67)
(amino acids)
QIVLTQSPAIMSASPGEEVTLTC (SEQ IDNO: 68)
Mouse E6 light chain variablecomplementarity determining regions 1 (CDR1) sequen
ce :
(DNA)
AGTGCCACCTCAAGTGTAAGTTACATACAC(SEQ ID NO : 69 )
(amino acids)
SATSSVSYIH (SEQ ID NO : 70 )
Mouse E6 light chain variableframework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
tggttccagcagaggccaggcacttctcccaaactctggatttat(SEQ ID NO: 71)
(amino acids)
WFQQRPGTSPKLWIY (SEQ ID NO: 72)
Mouse E6 light chain variablecomplementarity determining regions 2 (CDR2) sequen
ce :
(DNA)
agcacatccaacctggcttct (SEQ IDNO: 73)
(amino acids)
STSNLAS (SEQ ID NO: 74)
Mouse E6 light chain variableframework region 3 (FWR3) sequence:
(DNA)
ggagtccctgttcgcttcagtggcagtggatatgggacctcttactctctcacaatcagccgaatggaggctgaagatgc
tgccacttattactgc (SEQ ID NO: 75)
(amino acids)
GVPVRFSGSGYGTSYSLTISRMEAEDAATYYC (SEQ ID NO : 76 )
Mouse E6 light chain variablecomplementarity determining regions 3 (CDR3) sequen
ce :
(DNA)
cagcaaaggagtagttccccattcacg (SEQID NO: 77)
(amino acids)
QQRSSSPFT (SEQ ID NO: 78)
IGKV3-11*02 light chain variableregion sequence:
(DNA)
gaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctctcctgcagggccagtca
gagtgttagcagctacttagcctggtaccaacagaaacctggccaggctcccaggctcctcatctatgatgcatccaaca
gggccactggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggagagacttcactctcaccatcagcagcctagagcct
gaagattttgcagtttattactgtcagcagcgtagcaactggcctcc (SEQ ID NO: 79)
(amino acids)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGRDFTLTI SSLE
PEDFAVYYCQQRSNWPP (SEQ ID NO : 80 )
IGKV3-11*02 light chain variableframework region 1 (FWR1) acid sequence:
(DNA)
gaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctctcctgc(SEQ ID NO:
81)
(amino acids)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC (SEQ IDNO: 82)
IGKV3-11*02 light chain variablecomplementarity determining regions 1 (CDR1) seq
uence :
(DNA)
agggccagtcagagtgttagcagctacttagcc(SEQ ID NO: 83)
(amino acids)
RASQSVSSYLA (SEQ ID NO: 84)
IGKV3-11*02 light chain variableframework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
tggtaccaacagaaacctggccaggctcccaggctcctcatctat(SEQ ID NO: 85)
(amino acids)
WYQQKPGQAPRLLIY (SEQ ID N086)
IGKV3-11*02 light chain variablecomplementarity determining regions 2 (CDR2) seq
uence :
(DNA)
gatgcatccaacagggccact (SEQ IDNO: 87)
(amino acids)
DASNRAT (SEQ ID NO : 88 )
IGKV3-11*02 light chain variableframework region 3 (FWR3) sequence:
(DNA)
ggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggagagacttcactctcaccatcagcagcctagagcctgaagattt
tgcagtttattactgt (SEQ ID NO: 89)
(amino acids)
GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC (SEQ ID NO: 90)
IGKV3-11*02 light chain variablecomplementarity determining regions3 (CDR3) sequ
ence :
(DNA)
cagcagcgtagcaactggcctcc (SEQ IDNO: 91)
(amino acids)
QQRSNWPP (SEQ ID NO: 92)
Humanized E6 light chainvariable region sequence:
(DNA)
gaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctcacctgcagcgccaccag
cagtgttagctacatccactggtaccaacagaggcctggccagagccccaggctcctcatctatagcacctccaacctgg
ccagcggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggagcgactacactctcaccatcagcagcctagagcctgaa
gattttgcagtttattactgtcagcagcgtagcagctcccctttcacctttggcagcggcaccaaagtggaaattaaa (
SEQ ID NO: 93)
(amino acids)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPE
DFAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIK (SEQ ID NO: 94)
Humanized E6 light chainvariable framework region 1 (FWR1) acid sequence:
(DNA)
gaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctcacctgc(SEQ ID NO:
95)
(amino acids)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLTC (SEQ IDNO : 96 )
Humanized E6 light chainvariable complementarity determining regions 1 (CDR1) se
quence :
(DNA)
agcgccaccagcagtgttagctacatccac(SEQ ID NO: 97)
(amino acids)
SATSSVSYIH (SEQ ID NO: 98)
Humanized E6 heavy lightvariable framework region 2 (FWR2) acid sequence:
(DNA)
tggtaccaacagaggcctggccagagccccaggctcctcatctat(SEQ ID NO: 99)
(amino acids)
WYQQRPGQSPRLLIY (SEQ ID NO : 100)
Humanized E6 light chainvariable complementarity determining regions 2 (CDR2) se
quence :
(DNA)
agcacctccaacctggccagc (SEQ IDNO: 101)
(amino acids)
STSNLAS (SEQ ID NO: 102)
Humanized E6 light chainvariable framework region 3 (FWR3) acid sequence:
(DNA)
ggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggagcgactacactctcaccatcagcagcctagagcctgaagattt
tgcagtttattactgt (SEQ ID NO: 103)
(amino acids)
GIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPEDFAVYYC (SEQ ID NO: 104)
Humanized E6 light chainvariable complementarity determining regions 3 (CDR3) se
quence :
(DNA)
cagcagcgtagcagctcccctttcacc (SEQID NO: 105)
(amino acids)
QQRSSSPFT (SEQ ID NO: 106)
Humanized E6 Kappa light chainsynthesized by Genescript :
(DNA)
gaattctaagcttgggccaccatggaagccccagcgcagcttctcttcctcctgctactctggctcccagataccactgg
agaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctcacctgcagcgccacca
gcagtgttagctacatccactggtaccaacagaggcctggccagagccccaggctcctcatctatagcacctccaacctg
gccagcggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggagcgactacactctcaccatcagcagcctagagcctga
agattttgcagtttattactgtcagcagcgtagcagctcccctttcacctttggcagcggcaccaaagtggaaattaaaa
ggacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgc
ctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccagga
gagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgaga
aacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt
tagtaagtttaaactctaga (SEQ ID NO: 107)
(amino acids)
EF*AWATMEAPAQLLFLLLLWLPDTTGEIVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNL
ASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVC
LLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
**V *TLX (SEQ ID NO: 108)
Human Kappa light chain constantregion sequence:
(DNA)
aggacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtg
cctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccagg
agagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgag
aaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtg
ttag(SEQ ID NO: 109)
(amino acids)
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYE
KHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO : 110 )
Humanized E6 lambda light chainsequence:
(DNA)
gaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctcacctgcagcgccaccag
cagtgttagctacatccactggtaccaacagaggcctggccagagccccaggctcctcatctatagcacctccaacctgg
ccagcggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggagcgactacactctcaccatcagcagcctagagcctgaa
gattttgcagtttattactgtcagcagcgtagcagctcccctttcacctttggcagcggcaccaaagtggaaattaaagg
tcagcccaaggctgccccctcggtcactctgttcccgccctcctctgaggagcttcaagccaacaaggccacactggtgt
gtctcataagtgacttctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagcagccccgtcaaggcgggagtggag
accaccacaccctccaaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctatctgagcctgacgcctgagcagtggaagtc
ccacagaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctacagaatgttcatagt
aa (SEQ ID NO: 111)
(amino acids)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPE
DFAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVE
TTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS * * (SEQ ID NO: 112)
Humanized lambda light chainconstant region sequence:
(DNA)
ggtcagcccaaggctgccccctcggtcactctgttcccgccctcctctgaggagcttcaagccaacaaggccacactggt
gtgtctcataagtgacttctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagcagccccgtcaaggcgggagtgg
agaccaccacaccctccaaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctatctgagcctgacgcctgagcagtggaag
tcccacagaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctacagaatgttcata
gtaa(SEQ ID NO: 113)
(amino acids)
GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWK
SHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS * * (SEQ ID NO: 114)
Human lambda light chainconstant region gBLOCK#3 sequence:
(DNA)
agcgccaccagcagtgttagctacatccactggtaccaacagaggcctggccagagccccaggctcctcatctatagcac
ctccaacctggccagcggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggagcgactacactctcaccatcagcagcc
tagagcctgaagattttgcagtttattactgtcagcagcgtagcagctcccctttcacctttggcagcggcaccaaagtg
gaaattaaaggtcagcccaaggctgccccctcggtcactctgttcccgccctcctctgaggagcttcaagccaacaaggc
cacactggtgtgtctcataagtgacttctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagcagccccgtcaagg
cgggagtggagaccaccacaccctccaaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctatctgagcctgacgcctgag
cagtggaagtcccacagaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctacaga
atgttcatagtaagtttaaacccgctgatcagcctcgactgtgccttctagttg (SEQ ID NO: 115)
E6 light chain variable regionoverlapping sequence:
(DNA)
agcgccaccagcagtgttagctacatccact(SEQ ID NO: 116)
pCDNA3.1 V5 and pSECTag2overlapping sequence :
(DNA)
ccgctgatcagcctcgactgtgccttctagttg(SEQ ID NO: 117)
Mouse C2 heavy chain variableregion sequence :
(DNA)
gaggtccagctggaggagtcagggggaggcttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgcagcctctggatt
cactttcagtggctatgccatgtcttgggttcgccagactccggagaagaggctggagtgggtcgcaaccattagtagtg
gtggtacttatatctactatccagacagtgtgaaggggcgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaccctgtac
ctgcaaatgagcagtctgaggtctgaggacacggccatgtattactgtgcaagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcgcagggaccacggtcaccgtctcctccgccaaaacgacacccccatctgtctat (SEQ IDNO
: 118)
(amino acids)
EVQLEESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSGYAMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNTL
Y LQMSSLRSEDTAMYYCARLGGDNYYEYFDVWGAGTTVTVSSAKTTPPSVY(SEQ ID NO : 119 )
Mouse C2 heavy chain variableframework region 1 (FWR1) sequence:
(DNA)
gaggtccagctggaggagtcagggggaggcttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgcagcctctggatt
cactttcagt (SEQ ID NO: 120)
(amino acids)
EVQLEESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFS(SEQ ID NO: 121)
Mouse C2 heavy chain variablecomplementarity determining regions 1 (CDR1) sequence :
(DNA)
ggctatgccatgtct (SEQ ID NO: 122)
(amino acids)
GYAMS (SEQ ID NO: 123)
Mouse C2 heavy chain variableframework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
tgggttcgccagactccggagaagaggctggagtgggtcgca(SEQ ID NO: 124)
(amino acids)
WVRQTPEKRLEWVA (SEQ ID NO: 125)
Mouse C2 heavy chain variablecomplementarity determining regions 2 (CDR2) sequen
ce :
(DNA)
accattagtagtggtggtacttatatctactatccagacagtgtgaagggg(SEQ ID NO: 126)
(amino acids)
TISSGGTYIYYPDSVKG (SEQ ID NO:127)
Mouse C2 heavy chain variableframework region 3 (FWR3) sequence:
(DNA)
cgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaccctgtacctgcaaatgagcagtctgaggtctgaggacacggccat
gtattactgtgcaaga (SEQ ID NO: 128)
(amino acids)
RFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTAMYYCAR (SEQ ID NO: 129)
Mouse C2 heavy chain variablecomplementarity determining regions 3 (CDR3) sequence :
(DNA)
cttgggggggataattactacgaatacttcgatgtc(SEQ ID NO: 130)
(amino acids)
LGGDNYYEYFDV (SEQ ID NO: 131)
IGHV3-21*04 heavy chain variableregion sequence:
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtagctatagcatgaactgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcatccattagtagta
gtagtagttacatatactacgcagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgaga (SEQ ID NO: 132)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSSSSYIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLY
LQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 133)
IGHV3-21*04 heavy chain variableframework region 1 (FWR1) sequence:
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagt (SEQ ID NO: 134)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO: 135)
IGHV3-21*04 heavy chain variablecomplementarity determining regions 1 (CDR1) seq
uence :
(DNA)
agctatagcatgaac (SEQ ID NO: 136)
(amino acids)
SYSMN (SEQ ID NO: 137)
IGHV3-21*04 heavy chain variableframework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
gggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctca(SEQ ID NO: 138)
(amino acids)
WVRQAPGKGLEWVS (SEQ ID NO: 139)
IGHV3-21*04 heavy chain variablecomplementarity determining regions 2 (CDR2) seq
uence :
(DNA)
tccattagtagtagtagtagttacatatactacgcagactcagtgaagggc(SEQ ID NO: 140)
(amino acids)
SISSSSSYIYYADSVKG (SEQ ID NO:141)
IGHV3-21*04 heavy chain variableframework region 3 (FWR3) sequence:
(DNA)
cgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgt
gtattactgtgcgaga (SEQ ID NO: 142)
(amino acids)
RFTI SRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO: 143)
Humanized C2 heavy chainvariable region sequence:
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctcc (SEQ ID NO: 144)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YL QMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSS (SEQID NO: 145)
Humanized C2 heavy chainvariable framework region 1 (FWR1) sequence:
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagt (SEQ ID NO: 146)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO: 147)
Humanized C2 heavy chainvariable complementarity determining regions 1 (CDR1) se
quence :
(DNA)
ggctatgccatgagc (SEQ ID NO: 148)
(amino acids)
GYAMS (SEQ ID NO: 149)
Humanized C2 heavy chainvariable framework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
tgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaa(SEQ ID NO: 150)
(amino acids)
WVRQAPGKGLEWVS (SEQ ID NO: 151)
Humanized C2 heavy chainvariable complementarity determining regions 2 (CDR2) se
quence :
(DNA)
accattagtagtggcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggc(SEQ ID NO: 152)
(amino acids)
TI SSGGTYIYYPDSVKG (SEQ ID NO:153)
Humanized C2 heavy chainvariable framework region 3 (FWR3) sequence:
(DNA)
cgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgt
gtattactgtgcgaga (SEQ ID NO: 154)
(amino acids)
RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 155)
Humanized C2 heavy chainvariable complementarity determining regions 3 (CDR3) se
quence :
(DNA)
cttgggggggataattactacgaatacttcgatgtc(SEQ ID NO: 156)
(amino acids)
LGGDNYYEYFDV (SEQ ID NO: 157)
Humanized C2 IgGl heavy chainsequence
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccgctagcaccaagggcccatcggtcttccccctggcac
cctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtg
tcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcag
cagcgtggtgacagtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacacca
aggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctgggg
ggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggt
ggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaa
agccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggc
aaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagcc
ccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtca
aaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctccc
gtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtctt
ctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatgataa
(SEQ ID NO: 157)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVT
VSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELL
GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLN
GKEYK CKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKT
TPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* * (SEQ ID NO: 158)
Humanized C2 gBLOCK#4 sequence:
(DNA)
actcactatagggagacccaagctggctagttaagcttgggccaccatggagacagacacactcctgctatgggtactgc
tgctctgggttccaggttccactggtgacgaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtcc
ctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggg
gctggagtgggtctcaaccattagtagtggcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatct
ccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcg
agacttgggggggataattactacgaatacttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccgctagcac
caagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtca
aggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagc (SEQ ID NO: 160)
pCDNA3.1 V5 overlapping sequence:
(DNA)
actcactatagggagacccaagctggctagtt(SEQ ID NO: 161)
Human IgGl constant regionoverlapping sequence:
(DNA)
gacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagc(SEQ ID NO: 162)
Humanized C2 IgG2 heavy chainsequence
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccgcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgc
cctgctccaggagcacctccgagagcacagccgccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtg
tcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcag
cagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacacca
aggtggacaagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtc
ttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgag
ccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggagg
agcagttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgttgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaag
tgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccaca
ggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctacc
ccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactcc
gacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgt
gatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatagtaa (SEQ ID NO:
163)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVT
VSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPS
VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEY
KCKVS NKGLPAPIEKTI SKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPM
LDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* * (SEQ ID NO: 164)
Humanized C2 gBLOCK#5 sequence:
(DNA)
tgctctgggttccaggttccactggtgacgcggcccagccggccgaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtc
aagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtggctatgccatgagctgggtccgcca
ggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtggcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagg
gccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggcc
gtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaatacttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgt
ctcctccgcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagccgccc
tgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgacca (SEQ ID NO
:165) pSEC Tag2 overlapping sequence:
(DNA)
tgctctgggttccaggttccactggtgacgc(SEQ ID NO: 166)
Human IgG2 constant regionoverlapping sequence:
(DNA)
gacggtgtcgtggaactcaggcgctctgacca(SEQ ID NO: 167)
Mouse C2 light chain variableregion sequence:
(DNA)
gacattgtgatcacacagtctacagcttccttaggtgtatctctggggcagagggccaccatctcatgcagggccagcaa
aagtgtcagtacatctggctatagttatatgcactggtaccaacagagaccaggacagccacccaaactcctcatctatc
ttgcatccaacctagaatctggggtccctgccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcaccctcaacatccat
cctgtggaggaggaggatgctgcaacctattactgtcagcacagtagggagcttccgttcacgttcggaggggggaccaa
gctggagataaaacgggctgatgctgcaccaactgtatcc (SEQ ID NO: 168)
(amino acids)
DIVITQSTASLGVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYMHWYQQRPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIH
PVEEEDAATYYCQHSRELPFTFGGGTKLEIKRADAAPTVS (SEQ ID NO : 169 )
Mouse C2 light chain variableframework region 1 (FWR1) sequence:
(DNA)
gacattgtgatcacacagtctacagcttccttaggtgtatctctggggcagagggccaccatctcatgc(SEQ ID NO:
170)
(amino acids)
DIVITQSTASLGVSLGQRATISC (SEQ IDNO: 171)
Mouse C2 light chain variablecomplementarity determining regions 1 (CDR1) sequen
ce :
(DNA)
agggccagcaaaagtgtcagtacatctggctatagttatatgcac(SEQ ID NO: 172)
(amino acids)
RASKSVSTSGYSYMH (SEQ ID NO: 173)
Mouse C2 light chain variableframework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
tggtaccaacagagaccaggacagccacccaaactcctcatctat(SEQ ID NO: 174)
(amino acids)
WYQQRPGQPPKLLIY (SEQ ID NO: 175)
Mouse C2 light chain variablecomplementarity determining regions 2 (CDR2) sequen
ce :
(DNA)
cttgcatccaacctagaatc (SEQ ID NO:176)
(amino acids)
LASNLES (SEQ ID NO: 177)
Mouse C2 light chain variableframework region 3 (FWR3) sequence:
(DNA)
tggggtccctgccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcaccctcaacatccatcctgtggaggaggaggatg
ctgcaacctattactgt (SEQ ID NO: 178)
(amino acids)
GVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYC(SEQ ID NO: 179)
Mouse C2 light chain variablecomplementarity determining regions 3 (CDR3) sequen
ce :
(DNA)
cagcacagtagggagcttccgttcacg (SEQID NO: 180)
(amino acids)
QHSRELPFT (SEQ ID NO : 181 )
IGKV7-3*01 light chain variableregion sequence:
(DNA)
gacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcagagccagtga
gagtgtcagtttcttgggaataaacttaattcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcctgatttacc
aagcatccaataaagacactggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctcacaattaat
cctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtctgcagagtaagaattttcctcccaca (SEQ ID NO: 182)
(amino acid)
DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASESVSFLGINLIHWYQQKPGQPPKLLIYQASNKDTGVPARFSGSGSGTDFTLTIN
PVEANDTANYYCLQSKNFPPT (SEQ ID NO: 183)
IGKV7-3*01 light chain variableframework region 1 (FWR1) sequence:
(DNA)
gacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgc(SEQ ID NO:
184)
(amino acids)
DIVLTQSPASLAVSPGQRATITC (SEQ IDNO: 185)
IGKV7-3*01 light chain variablecomplementarity determining regions 1 (CDR1) sequ
ence :
(DNA)
agagccagtgagagtgtcagtttcttgggaataaacttaattcac(SEQ ID NO: 186)
(amino acids)
RASESVSFLGINLIH (SEQ ID NO: 187)
IGKV7-3*01 light chain variableframework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
tggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcctgatttac(SEQ ID NO: 188)
(amino acids)
WYQQKPGQPPKLLIY (SEQ ID NO : 189)
IGKV7-3*01 light chain variablecomplementarity determining regions 2 (CDR2) sequ
ence :
(DNA)
caagcatccaataaagacact (SEQ IDNO: 190)
(amino acids)
QASNKDT (SEQ ID NO: 191)
IGKV7-3*01 light chain variableframework region 3 (FWR3) sequence:
(DNA)
ggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctcacaattaatcctgtggaagctaatgatac
tgcaaattattactgt (SEQ ID NO: 192)
(amino acids)
GVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYC(SEQ ID NO: 193)
Humanized C2 light chainvariable region sequence:
(DNA)
gacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcagagccagtaa
gagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcctgatttacc
tggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctcacaattaat
cctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcggagggaccaa
ggtggagatcaaacgaact (SEQ ID NO: 194)
(amino acids)
DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTIN
PVEANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRT (SEQ ID NO: 195)
Humanized C2 light chainvariable framework region 1 (FWR1) acid sequence:
(DNA)
gacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgc(SEQ ID NO:
196)
(amino acids)
DIVLTQSPASLAVSPGQRATITC (SEQ IDNO: 197)
Humanized C2 light chainvariable complementarity determining regions 1 (CDR1) se
quence :
(DNA)
agagccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcac(SEQ ID NO: 198)
(amino acids)
RASKSVSTSGYSYMH (SEQ ID NO : 199)
Humanized C2 heavy light variableframework region 2 (FWR2) acid sequence:
(DNA)
tggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcctgatttac(SEQ ID NO: 200)
(amino acids)
WYQQKPGQPPKLLIY (SEQ ID NO : 201)
Humanized C2 light chainvariable complementarity determining regions 2 (CDR2) se
quence :
(DNA)
ctggcatccaatctggagagc (SEQ IDNO: 202)
(amino acids)
LASNLES (SEQ ID NO:203)
Humanized C2 light chainvariable framework region 3 (FWR3) acid sequence:
(DNA)
ggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctcacaattaatcctgtggaagctaatgatac
tgcaaattattactgt (SEQ ID NO:204)
(amino acids)
GVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYC(SEQ ID NO: 205)
Humanized C2 light chainvariable complementarity determining regions 3 (CDR3) se
quence :
(DNA)
cagcacagtagggagctgcctttcaca (SEQID NO: 206)
(amino acids)
QHSRELPFT (SEQ ID NO:207)
Humanized C2 light chainvariable complementarity determining regions 3 (CDR3) se
quence :
(DNA)
ctgcagagtaagaattttcctcccaca (SEQID NO: 208)
(amino acids)
LQSKNFPPT (SEQ ID NO : 209 )
Humanized C2 gBLOCK#6 sequence(Kappa light chain in pCDNA3.1 V5) :
(DNA)
actcactatagggagacccaagctggctagttaagcttgggccaccatggagacagacacactcctgctatgggtactgc
tgctctgggttccaggttccactggtgacgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacag
agggccaccatcacctgcagagccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaacc
aggacaacctcctaaactcctgatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggt
ctgggaccgatttcaccctcacaattaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggag
ctgcctttcacattcggcggagggaccaaggtggagatcaaacgaactacggtggctgcaccatctgtcttcatcttccc
gccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaag
tacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacc
tacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatca
gggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgttagtaagtttaaacccgctgatcagcctcgactg
tgccttctagttg (SEQ ID NO:210)
pCDNA3.1 V5 5' overlappingsequence:
(DNA)
actcactatagggagacccaagctggctagtt(SEQ ID NO: 211)
pCDNA3.1 V5 3' overlappingsequence:
(DNA)
ccgctgatcagcctcgactgtgccttctagttg(SEQ ID NO: 212)
Humanized C2 gBLOCK#7 sequence(Kappa light chain in pSEC Tag2) :
(DNA)
tgctctgggttccaggttccactggtgacgcggcccagccggccgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggcc
gtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcagagccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactg
gtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcctgatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggt
tcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctcacaattaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgt
cagcacagtagggagctgcctttcacattcggcggagggaccaaggtggagatcaaacgaactacggtggctgcaccatc
tgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatc
ccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggac
agcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctg
cgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgttagtaagtttaaacccgct
gatcagcctcgactgtgccttctagttg (SEQ ID NO:213)
pSEC Tag2 5' overlappingsequence:
(DNA)
tgctctgggttccaggttccactggtgacgc(SEQ ID NO: 214)
pSEC Tag2 3' overlappingsequence:
(DNA)
ccgctgatcagcctcgactgtgccttctagttg(SEQ ID NO: 215)
Humanized C2 gBLOCK#8 sequence(lambda light chain in pCDNA3.1 V5) :
(DNA)
actcactatagggagacccaagctggctagttaagcttgggccaccatggagacagacacactcctgctatgggtactgc
tgctctgggttccaggttccactggtgacgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacag
agggccaccatcacctgcagagccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaacc
aggacaacctcctaaactcctgatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggt
ctgggaccgatttcaccctcacaattaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggag
ctgcctttcacattcggcggagggaccaaggtggagatcaaacgaactggtcagcccaaggctgccccctcggtcactct
gttcccgccctcctctgaggagcttcaagccaacaaggccacactggtgtgtctcataagtgacttctacccgggagccg
tgacagtggcctggaaggcagatagcagccccgtcaaggcgggagtggagaccaccacaccctccaaacaaagcaacaac
aagtacgcggccagcagctatctgagcctgacgcctgagcagtggaagtcccacagaagctacagctgccaggtcacgca
tgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctacagaatgttcatagtaagtttaaacccgctgatcagcctcgactg
tgccttctagttg (SEQ ID NO:216)
pCDNA3.1 V5 5' overlappingsequence:
(DNA)
actcactatagggagacccaagctggctagtt(SEQ ID NO: 217)
pCDNA3.1 V5 3' overlappingsequence:
(DNA)
ccgctgatcagcctcgactgtgccttctagttg(SEQ ID NO: 218)
Humanized C2 gBLOCK#9 sequence(lambda light chain in pSEC Tag2) :
(DNA)
tgctctgggttccaggttccactggtgacgcggcccagccggccgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggcc
gtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcagagccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactg
gtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcctgatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggt
tcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctcacaattaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgt
cagcacagtagggagctgcctttcacattcggcggagggaccaaggtggagatcaaacgaactggtcagcccaaggctgc
cccctcggtcactctgttcccgccctcctctgaggagcttcaagccaacaaggccacactggtgtgtctcataagtgact
tctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagcagccccgtcaaggcgggagtggagaccaccacaccctcc
aaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctatctgagcctgacgcctgagcagtggaagtcccacagaagctacag
ctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctacagaatgttcatagtaagtttaaacccgct
gatcagcctcgactgtgccttctagttg (SEQ ID NO:219)
pSEC Tag2 5' overlappingsequence:
(DNA)
tgctctgggttccaggttccactggtgacgc(SEQ ID NO: 220)
pSEC Tag2 3' overlappingsequence:
(DNA)
ccgctgatcagcctcgactgtgccttctagttg(SEQ ID NO: 221)
Murine Ig kappa chain leadersequence
(DNA)
atggagacagacacactcctgctatgggtactgctgctctgggttccaggttccactggtgac(SEQ ID NO: 222)
(amino acids)
METDTLLLWVLLLWVPGSTGD (SEQ IDNO: 223)
Interleukin-2 (IL-2) leadersequence
(DNA)
atgtacaggatgcaactcctgtcttgcattgcactaagtcttgcacttgtcacaaacagt(SEQ ID NO: 224) (am
ino acids)
MYRMQLLSCIALSLALVTNS (SEQ ID NO:225)
CD33 leader sequence
(DNA)
atgcctcttctgcttctgcttcctctgctttgggctggagctcttgct(SEQ ID NO: 226)
(amino acids)
MPLLLLLPLLWAGALA (SEQ ID NO:227)
IGHV3-21*03 leader sequence
(DNA)
atggaactggggctccgctgggttttccttgttgctattttagaaggtgtccagtgt(SEQ ID NO: 228)
(amino acids)
MELGLRWVFLVAILEGVQC (SEQ ID NO:229)
IGHV3-11*02 leader sequence
(DNA)
atggaagccccagcgcagcttctcttcctcctgctactctggctcccagataccactgga(SEQ ID NO: 230) (am
ino acids)
MEAPAQLLFLLLLWLPDTTG (SEQ ID NO:231)
Humanized E6 single chain GS3
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtaggtatggcatgagctgggtccgccaggctccagggaagaggctggagtgggtctcaaccattagtggcg
gaggcacctacatatactacccagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacaccctgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtaccagagataactatggccgcaactatgatta
tggcatggattattggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagcggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcg
gtggcggatccgaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctcacctgc
agcgccaccagcagtgttagctacatccactggtaccaacagaggcctggccagagccccaggctcctcatctatagcac
ctccaacctggccagcggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggagcgactacactctcaccatcagcagcc
tagagcctgaagattttgcagtttattactgtcagcagcgtagcagctcccctttcacctttggcagcggcaccaaagtg
gaaattaaa
(SEQ ID NO:232)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNTL
YLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLT
CSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSSPFTFGSGTK
VEIK (SEQ ID NO:233)
Humanized E6 single chainIgGlnoC
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtaggtatggcatgagctgggtccgccaggctccagggaagaggctggagtgggtctcaaccattagtggcg
gaggcacctacatatactacccagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacaccctgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtaccagagataactatggccgcaactatgatta
tggcatggattattggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagcgataaaacccatactaaaccgccaaaaccggcgc
cggaactgctgggtggtcctggtaccggtgaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaa
agagccaccctcacctgcagcgccaccagcagtgttagctacatccactggtaccaacagaggcctggccagagccccag
gctcctcatctatagcacctccaacctggccagcggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggagcgactaca
ctctcaccatcagcagcctagagcctgaagattttgcagtttattactgtcagcagcgtagcagctcccctttcaccttt
ggcagcggcaccaaagtggaaattaaa (SEQ ID NO:234)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNTL
YLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSDKTHTKPPKPAPELLGGPGTGEIVLTQSPATLSLSPG
ERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSSPFT
FGSGTKVEIK (SEQ ID NO:235)
Humanized E6 single chain X4(linker is IgGl and IgG2 modified hinge region)
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtaggtatggcatgagctgggtccgccaggctccagggaagaggctggagtgggtctcaaccattagtggcg
gaggcacctacatatactacccagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacaccctgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtaccagagataactatggccgcaactatgatta
tggcatggattattggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagcgataaaacccatactaaaccgccaaaaccggcgc
cggaactgctgggtggtcctggtaccggtactggtggtccgactattaaacctccgaaacctccgaaacctgctccgaac
ctgctgggtggtccggaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctcac
ctgcagcgccaccagcagtgttagctacatccactggtaccaacagaggcctggccagagccccaggctcctcatctata
gcacctccaacctggccagcggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggagcgactacactctcaccatcagc
agcctagagcctgaagattttgcagtttattactgtcagcagcgtagcagctcccctttcacctttggcagcggcaccaa
agtggaaattaaa (SEQ ID NO:236)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNTL
Y LQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSDKTHTKPPKPAPELLGGPGTGTGGPTIKPPKPPKPA
PNLLGGPEIVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLT
IS SLEPEDFAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIK (SEQ ID NO: 237)
Humanized C2 single chain GS3
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtg
gcggatccgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcaga
gccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcct
gatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctca
caattaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcgga
gggaccaaggtggagatcaaacgaact (SEQ ID NO: 238)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATITC
RASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPFTFG
GGTKVEIKRT (SEQ ID NO: 239)
Humanized C2 single chain IgG(no Cysteine)
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccgataaaacccatactaaaccgccaaaaccggcgccgg
aactgctgggtggtcctggtaccggtgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagg
gccaccatcacctgcagagccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccagg
acaacctcctaaactcctgatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctg
ggaccgatttcaccctcacaattaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctg
cctttcacattcggcggagggaccaaggtggagatcaaacgaact (SEQ ID NO: 240)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSDKTHTKPPKPAPELLGGPGTGDIVLTQSPASLAVSPGQ
RATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRE
LPFTFGGGTKVEIKRT (SEQ ID NO: 241)
Humanized C2 single chain X4(linker is IgGl and IgG2 modified hinge region)
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccgataaaacccatactaaaccgccaaaaccggcgccgg
aactgctgggtggtcctggtaccggtactggtggtccgactattaaacctccgaaacctccgaaacctgctccgaacctg
ctgggtggtccggacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctg
cagagccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaac
tcctgatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcacc
ctcacaattaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcgg
cggagggaccaaggtggagatcaaacgaact (SEQ ID NO: 242)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSDKTHTKPPKPAPELLGGPGTGTGGPTIKPPKPPKPAPN
LLGGPDIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDF
TLTINPVEANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRT (SEQ ID NO: 243)
Humanized C3 single chain GS3
(DNA)
caggttcagctggtgcagtctggagctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggtta
cacctttaccgactacgccatgaactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggagtgatcagcacct
tcagcggtaacacaaacttcaaccagaagttcaagggcagagtcaccatgaccacagacacatccacgagcacagcctac
atggagctgaggagcctgagatctgacgacacggccgtgtattactgtgcgagaagcgactactacggcccatacttcga
ctactggggccagggcaccaccctgaccgtgtccagcggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggat
ccgatattgtgatgacccagactccactctctctgtccgtcacccctggacagccggcctccatctcctgcaggtctagt
cagaccattgtccatagtaatggaaacacctatttggagtggtacctgcagaagccaggccagtctccacagctcctgat
ctataaggtttccaaccggttctctggagtgccagataggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcacactgaaaa
tcagccgggtggaggctgaggatgttggggtttattactgettccaaggtagccacgtgcctttcaccttcggcggaggg
accaaggtggagatcaaacgaact (SEQ ID NO:244)
(amino acids)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYAMNWVRQAPGQGLEWMGVISTFSGNTNFNQKFKGRVTMTTDTSTSTAY
M ELRSLRSDDTAVYYCARSDYYGPYFDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRS
SQTIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPFTFGG
GTKVEIKRT (SEQ ID NO: 245)
Humanized C3 single chain IgGl(no Cysteine)
(DNA)
caggttcagctggtgcagtctggagctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggtta
cacctttaccgactacgccatgaactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggagtgatcagcacct
tcagcggtaacacaaacttcaaccagaagttcaagggcagagtcaccatgaccacagacacatccacgagcacagcctac
atggagctgaggagcctgagatctgacgacacggccgtgtattactgtgcgagaagcgactactacggcccatacttcga
ctactggggccagggcaccaccctgaccgtgtccagcgataaaacccatactaaaccgccaaaaccggcgccggaactgc
tgggtggtcctggtaccggtgatattgtgatgacccagactccactctctctgtccgtcacccctggacagccggcctcc
atctcctgcaggtctagtcagaccattgtccatagtaatggaaacacctatttggagtggtacctgcagaagccaggcca
gtctccacagctcctgatctataaggtttccaaccggttctctggagtgccagataggttcagtggcagcgggtcaggga
cagatttcacactgaaaatcagccgggtggaggctgaggatgttggggtttattactgettccaaggtagccacgtgcct
ttcaccttcggcggagggaccaaggtggagatcaaacgaact (SEQ ID NO: 246)
(amino acids)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYAMNWVRQAPGQGLEWMGVISTFSGNTNFNQKFKGRVTMTTDTSTSTAY
MELRSLRSDDTAVYYCARSDYYGPYFDYWGQGTTLTVSSDKTHTKPPKPAPELLGGPGTGDIVMTQTPLSLSVTPGQPAS
ISCRSSQTIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVP
FTFGGGTKVEIKRT (SEQ ID NO: 247)
Humanized C3 single chain X4(linker is IgGl and IgG2 modified hinge region)
(DNA)
caggttcagctggtgcagtctggagctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggtta
cacctttaccgactacgccatgaactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggagtgatcagcacct
tcagcggtaacacaaacttcaaccagaagttcaagggcagagtcaccatgaccacagacacatccacgagcacagcctac
atggagctgaggagcctgagatctgacgacacggccgtgtattactgtgcgagaagcgactactacggcccatacttcga
ctactggggccagggcaccaccctgaccgtgtccagcgataaaacccatactaaaccgccaaaaccggcgccggaactgc
tgggtggtcctggtaccggtactggtggtccgactattaaacctccgaaacctccgaaacctgctccgaacctgctgggt
ggtccggatattgtgatgacccagactccactctctctgtccgtcacccctggacagccggcctccatctcctgcaggtc
tagtcagaccattgtccatagtaatggaaacacctatttggagtggtacctgcagaagccaggccagtctccacagctcc
tgatctataaggtttccaaccggttctctggagtgccagataggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcacactg
aaaatcagccgggtggaggctgaggatgttggggtttattactgettccaaggtagccacgtgcctttcaccttcggcgg
agggaccaaggtggagatcaaacgaact (SEQ ID NO: 248)
(amino acids)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYAMNWVRQAPGQGLEWMGVISTFSGNTNFNQKFKGRVTMTTDTSTSTAY
MELRSLRSDDTAVYYCARSDYYGPYFDYWGQGTTLTVSSDKTHTKPPKPAPELLGGPGTGTGGPTIKPPKPPKPAPNLLG
GPDIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQTIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTL
KI SRVEAEDVGVYYCFQGSHVPFTFGGGTKVEIKRT (SEQ ID NO: 249)
Humanized C8 single chain GS3(linker is [Gly4Seri] 3)
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccctgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagactgggcggcgataactattatgaata
ttggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccg
acatcgtgatgacccagtctccagactccctggctgtgtctctgggcgagagggccaccatcaactgcagggccagcaag
agtgttagcaccagcggctacagctacatgcactggtaccagcagaaaccaggacagcctcctaagctgctcatttacct
ggtgtctaacctggaatccggggtccctgaccgattcagtggcagcgggtctgggacagatttcactctcaccatcagca
gcctgcaggctgaagatgtggcagtttattactgtcaacacattcgggaactgaccaggagtgaattcggcggagggacc
aaggtggagatcaaacgaact (SEQ ID NO:250)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRAS
KSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLVSNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHIRELTRSEFGGG
T KVEIKRT (SEQ ID NO:251)
Humanized C8 single chain IgGl(no Cysteine)
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccctgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagactgggcggcgataactattatgaata
ttggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccgataaaacccatactaaaccgccaaaaccggcgccggaactgctgg
gtggtcctggtaccggtgacatcgtgatgacccagtctccagactccctggctgtgtctctgggcgagagggccaccatc
aactgcagggccagcaagagtgttagcaccagcggctacagctacatgcactggtaccagcagaaaccaggacagcctcc
taagctgctcatttacctggtgtctaacctggaatccggggtccctgaccgattcagtggcagcgggtctgggacagatt
tcactctcaccatcagcagcctgcaggctgaagatgtggcagtttattactgtcaacacattcgggaactgaccaggagt
gaattcggcggagggaccaaggtggagatcaaacgaact (SEQ ID NO: 252)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
Y LQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYWGKGTTVTVSSDKTHTKPPKPAPELLGGPGTGDIVMTQSPDSLAVSLGERA
TINCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLVSNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHIRELT
RS EFGGGTKVEIKRT (SEQ ID NO: 253)
Humanized C8 single chain X4(linker is IgGl and IgG2 modified hinge region)
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactacccagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagactgggcggcgacaattactatgagta
ttggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccgataaaacccatactaaaccgccaaaaccggcgccggaactgctgg
gtggtcctggtaccggtactggtggtccgactattaaacctccgaaacctccgaaacctgctccgaacctgctgggtggt
ccggacatcgtgatgacccagtctccagactccctggctgtgtctctgggcgagagggccaccatcaactgcagggccag
caagagtgttagcaccagcggctacagctacatgcactggtaccagcagaaaccaggacagcctcctaagctgctcattt
acctggtgtctaacctggaatccggggtccctgaccgattcagtggcagcgggtctgggacagatttcactctcaccatc
agcagcctgcaggctgaagatgtggcagtttattactgtcaacacattcgggaactgaccaggagtgaattcggcggagg
gaccaaggtggagatcaaacgaact (SEQ ID NO:254)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYWGKGTTVTVSSDKTHTKPPKPAPELLGGPGTGTGGPTIKPPKPPKPAPNLLG
GPDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLVSNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLT
ISSLQAEDVAVYYCQHIRELTRSEFGGGTKVEIKRT (SEQ ID NO: 255)
pSECTag2 E6 scFV-FC
(DNA)
atggagacagacacactcctgctatgggtactgctgctctgggttccaggttccactggtgacgcggcccagccggccga
ggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattca
ccttcagtaggtatggcatgagctgggtccgccaggctccagggaagaggctggagtgggtctcaaccattagtggcgga
ggcacctacatatactacccagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacaccctgtatct
gcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtaccagagataactatggccgcaactatgattatg
gcatggattattggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagcggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggt
ggcggatccgaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctcacctgcag
cgccaccagcagtgttagctacatccactggtaccaacagaggcctggccagagccccaggctcctcatctatagcacct
ccaacctggccagcggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggagcgactacactctcaccatcagcagccta
gagcctgaagattttgcagtttattactgtcagcagcgtagcagctcccctttcacctttggcagcggcaccaaagtgga
aattaaagagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcag
tcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtg
agccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcggga
ggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtaca
agtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaacca
caggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttcta
tcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggact
ccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctcc
gtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatgataa (SEQ ID NO
: 256)
(amino acids)
METDTLLLWVLLLWVPGSTGDAAQPAEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGG
GTYIYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSG
GGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISS
LEPEDFAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVD
V SHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQP
REPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF
SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* * (SEQ ID NO: 257)
E6 scFC-FC 1 gBLOCk sequence:
tgctctgggttccaggttccactggtgacgcggcccagccggccgaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtc
aagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtaggtatggcatgagctgggtccgcca
ggctccagggaagaggctggagtgggtctcaaccattagtggcggaggcacctacatatactacccagactcagtgaagg
gccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacaccctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggct
gtgtattactgtaccagagataactatggccgcaactatgattatggcatggattattggggccagggcaccctggtgac
cgtgagcagcggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgaaattgtgttgacacagtctccag
ccaccctgtctttgtc (SEQ ID NO:258)
E6 scFC-FC 2 gBLOCk sequence:
aattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctcacctgcagcgccaccagca
gtgttagctacatccactggtaccaacagaggcctggccagagccccaggctcctcatctatagcacctccaacctggcc
agcggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggagcgactacactctcaccatcagcagcctagagcctgaaga
ttttgcagtttattactgtcagcagcgtagcagctcccctttcacctttggcagcggcaccaaagtggaaattaaagagc
ccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttc
cccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaaga
ccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtaca
acagcacgtaccgtgtggtcagc (SEQ ID NO: 259)
pSECTag2 C2 scFV-FC
(DNA)
atggagacagacacactcctgctatgggtactgctgctctgggttccaggttccactggtgacgcggcccagccggccga
ggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattca
ccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtggc
ggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatct
gcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaatact
tcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggc
ggatccgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcagagc
cagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcctga
tttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctcaca
attaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcggagg
gaccaaggtggagatcaaacgaactgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaac
tcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcaca
tgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgc
caagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggc
tgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaa
gggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctg
cctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagacca
cgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcagggg
aacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaa
atgataa (SEQ ID
NO: 260)
(amino acids)
METDTLLLWVLLLWVPGSTGDAAQPAEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSG
GTYIYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGG
GSDIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLT
INPVEANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRTEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT
CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SK
AKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ
QGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* * (SEQ ID NO: 261)
C2 scFV-FC 1 gBLOCk sequence:
(DNA)
tgctctgggttccaggttccactggtgacgcggcccagccggccgaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtc
aagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtggctatgccatgagctgggtccgcca
ggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtggcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagg
gccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggcc
gtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaatacttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgt
ctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgacattgtgctgacccagtctccagcct
ccttggc (SEQ ID NO:262)
C2 scFV-FC 2 gBLOCk sequence:
(DNA)
cattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcagagccagtaaga
gtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcctgatttacctg
gcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctcacaattaatcc
tgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcggagggaccaagg
tggagatcaaacgaactgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctgggg
ggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggt
ggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaa
agccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagc (SEQ ID NO: 263)
pSECTag2 C3 scFV-FC
(DNA)
atggagacagacacactcctgctatgggtactgctgctctgggttccaggttccactggtgacgcggcccagccggccca
ggttcagctggtgcagtctggagctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggttaca
cctttaccgactacgccatgaactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggagtgatcagcaccttc
ageggtaacacaaacttcaaccagaagttcaagggcagagtcaccatgaccacagacacatccacgagcacagcctacat
ggagctgaggagcctgagatctgacgacacggccgtgtattactgtgcgagaagcgactactacggcccatacttcgact
actggggccagggcaccaccctgaccgtgtccagcggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatcc
gatattgtgatgacccagactccactctctctgtccgtcacccctggacagccggcctccatctcctgcaggtctagtca
gaccattgtccatagtaatggaaacacctatttggagtggtacctgcagaagccaggccagtctccacagctcctgatct
ataaggtttccaaccggttctctggagtgccagataggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcacactgaaaatc
agccgggtggaggctgaggatgttggggtttattactgettccaaggtagccacgtgcctttcaccttcggcggagggac
caaggtggagatcaaacgaactgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcc
tggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgc
gtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaa
gacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctga
atggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaaggg
cagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcct
ggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgc
ctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaac
gtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatg
ataa (SEQ ID NO:264)
(amino acids)
METDTLLLWVLLLWVPGSTGDAAQPAQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYAMNWVRQAPGQGLEWMGVISTF
SGNTNFNQKFKGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARSDYYGPYFDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGS
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQTIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKI
SRVEAEDVGVYYCFQGSHVPFTFGGGTKVEIKRTEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC
VVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKA
KGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ
GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* * (SEQ ID NO: 265)
C3 GS scFV FC 1 gBLOCk sequence:
(DNA)
tgctctgggttccaggttccactggtgacgcggcccagccggcccaggttcagctggtgcagtctggagctgaggtgaag
aagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggttacacctttaccgactacgccatgaactgggtgcgaca
ggcccctggacaagggcttgagtggatgggagtgatcagcaccttcagcggtaacacaaacttcaaccagaagttcaagg
gcagagtcaccatgaccacagacacatccacgagcacagcctacatggagctgaggagcctgagatctgacgacacggcc
gtgtattactgtgcgagaagcgactactacggcccatacttcgactactggggccagggcaccaccctgaccgtgtccag
cggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgatattgtgatgacccagactccactctctctgt
(SEQ
ID NO:266)
C3 scFV FC2 gBLOCk sequence:
(DNA)
tattgtgatgacccagactccactctctctgtccgtcacccctggacagccggcctccatctcctgcaggtctagtcaga
ccattgtccatagtaatggaaacacctatttggagtggtacctgcagaagccaggccagtctccacagctcctgatctat
aaggtttccaaccggttctctggagtgccagataggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcacactgaaaatcag
ccgggtggaggctgaggatgttggggtttattactgettccaaggtagccacgtgcctttcaccttcggcggagggacca
aggtggagatcaaacgaactgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctg
gggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgt
ggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaaga
caaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagc (SEQ ID NO: 267)
pSECTag2 C8 scFV-FC
(DNA)
atggagacagacacactcctgctatgggtactgctgctctgggttccaggttccactggtgacgcggcccagccggccga
ggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattca
ccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtggc
ggaacctacatatactaccctgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatct
gcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagactgggcggcgataactattatgaatatt
ggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgac
atcgtgatgacccagtctccagactccctggctgtgtctctgggcgagagggccaccatcaactgcagggccagcaagag
tgttagcaccagcggctacagctacatgcactggtaccagcagaaaccaggacagcctcctaagctgctcatttacctgg
tgtctaacctggaatccggggtccctgaccgattcagtggcagcgggtctgggacagatttcactctcaccatcagcagc
ctgcaggctgaagatgtggcagtttattactgtcaacacattcgggaactgaccaggagtgaattcggcggagggaccaa
ggtggagatcaaacgaactgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctgg
ggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtg
gtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagac
aaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatg
gcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcag
ccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggt
caaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctc
ccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtc
ttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatgata
a (SEQ ID NO:268)
(amino acids)
METDTLLLWVLLLWVPGSTGDAAQPAEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSG
GTYIYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSD
IVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLVSNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISS
LQAEDVAVYYCQHIRELTRSEFGGGTKVEIKRTEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC
V VVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKA
KGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ
GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* * (SEQ ID NO : 269 )
C8 scFV FC 1 gBLOCk sequence:
(DNA)
tgctctgggttccaggttccactggtgacgcggcccagccggccgaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtc
aagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtggctatgccatgagctgggtccgcca
ggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtggcggaacctacatatactaccctgactcagtgaagg
gccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggcc
gtgtattactgtgcgagactgggcggcgataactattatgaatattggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccgg
cggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgacatcgtgatgacccagtctccagactccctgg (S
EQID
NO: 270)
C8 scFV FC2 gBLOCk sequence:
(DNA)
catcgtgatgacccagtctccagactccctggctgtgtctctgggcgagagggccaccatcaactgcagggccagcaaga
gtgttagcaccagcggctacagctacatgcactggtaccagcagaaaccaggacagcctcctaagctgctcatttacctg
gtgtctaacctggaatccggggtccctgaccgattcagtggcagcgggtctgggacagatttcactctcaccatcagcag
cctgcaggctgaagatgtggcagtttattactgtcaacacattcgggaactgaccaggagtgaattcggcggagggacca
aggtggagatcaaacgaactgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctg
gggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgt
ggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaaga
caaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagc (SEQ ID NO: 271)
Human IgGl Fc sequence:
(DNA)
gagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcct
cttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacg
aagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcag
tacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaa
ggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgt
acaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagc
gacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacgg
ctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgc
atgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatgataa (SEQ ID NO: 272)
(amino acids)
EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ
YNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY
PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* *(SE
Q ID NO:273)
Human IgGl CH2-CH3 domainsequence:
(DNA)
ccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctc
ccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacg
gcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcacc
gtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaa
aaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaaga
accaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccg
gagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaa
gagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcc
tctccctgtctccgggtaaatgataa (SEQ ID NO:274)
(amino acids)
PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLT
VLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNG
QPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* * (SEQ ID NO:275
)
Human IgGl CH3 domain sequence :
(DNA)
gggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctg
cctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagacca
cgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcagggg
aacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaa
atgataa (SEQ ID NO:276)
(amino acids)
GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG
NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* * (SEQ ID NO: 277)
Human IgGl Fc Y407R sequence:
(DNA)
gagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcct
cttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacg
aagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcag
tacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaa
ggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgt
acaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagc
gacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacgg
ctccttcttcctcaggagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgc
atgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatgataa (SEQ ID NO: 278)
(amino acids)
EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ
YNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY
PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLRSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* *(SE
Q ID NO:279)
Human IgGl Fc F405Q sequence:
(DNA)
gagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcct
cttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacg
aagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcag
tacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaa
ggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgt
acaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagc
gacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacgg
ctccttccagctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgc
atgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatgataa (SEQ ID NO: 280)
(amino acids)
EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ
YNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY
PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFQLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* *(SE
Q ID NO:281)
Human IgGl Fc T394D sequence:
(DNA)
gagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcct
cttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacg
aagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcag
tacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaa
ggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgt
acaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagc
gacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccgaccctcccgtgctggactccgacgg
ctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgc
atgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatgataa (SEQ ID NO: 282)
(amino acids)
EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ
YNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY
PSDIAVEWESNGQPENNYKTDPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* *(SE
Q ID NO:283)
Human IgGl Fc T366W/L368Wsequence:
(DNA)
gagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcct
cttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacg
aagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcag
tacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaa
ggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgt
acaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgtggtgctgggtcaaaggcttctatcccagc
gacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacgg
ctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgc
atgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatgataa (SEQ ID NO: 284)
(amino acids)
EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ
YNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCWVKGFY
PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* *(SE
Q ID NO:285)
Human IgGl Fc T364R/L368Rsequence:
(DNA)
gagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcct
cttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacg
aagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcag
tacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaa
ggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgt
acaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcaggctgacctgcagggtcaaaggcttctatcccagc
gacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacgg
ctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgc
atgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatgataa (SEQ ID NO: 286)
(amino acids)
EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ
YNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVRLTCRVKGFY
PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* *(SEQ ID NO:287)
Human IgGl Fc hingelesssequence:
(DNA)
gcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccc
tgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggagg
tgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcac
caggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctc
caaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtca
gcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaac
tacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtg
gcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgt
ctccgggtaaatgataa (SEQ ID NO:288)
(amino acids)
APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLH
QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPE
NNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* * (SEQ ID NO : 289 )
Human IgGl G237A FC sequence:
(DNA)
gagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctgggggccccgtcagtcttcct
cttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacg
aagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcag
tacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaa
ggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgt
acaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagc
gacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacgg
ctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgc
atgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (SEQ ID NO: 290)
(amino acids)
EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ
Y NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY
PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK ( SEQIDNO: 291)
Human IgGl L234A/L235A FCsequence:
(DNA)
gagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaagccgccgggggaccgtcagtcttcct
cttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacg
aagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcag
tacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaa
ggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgt
acaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagc
gacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacgg
ctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgc
atgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (SEQ ID NO: 292)
(amino acids)
EPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ
Y NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY
PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK ( SEQ IDNO:293)
CAR-T E6 CD8/CD8/CD3z sequence:
N-CD81s-huMNE6scFv-CD8ecdfragment- CD8 transmembrane- CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggggggggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaaacgacaac
cccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctgtaggcctg
ccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgt
ggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgccgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaa
gcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggcc
gcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatg
gcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtc
cacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 294)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
IVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPED
FAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGT
CGVLLLSLVITLYCRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDK
MAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* *
** (SEQ ID NO:295)
CAR-T E6 CD3z gBLOCK sequence:
(DNA)
tggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgtggagtgc
tcctcctctccctggtgattaccctgtactgccgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggc
cagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgaccc
agaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaag
cttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagca
acaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataagtttaaacccgctgatcagcctcgac
tgtgc(SEQ ID NO:296)
CAR-T E6 CD8/CD8/CD28/CD3zsequence:
N-CD81s-huMNE6scFv-CD8ecdfragment- CD8 transmembrane- CD28- CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggggggggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaaacgacaac
cccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctgtaggcctg
ccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgt
ggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcagaagcaagcggtctcggctcctgcattctgattacatgaa
catgaccccaagaagaccaggccccaccaggaaacattaccagccctacgctccgccacgcgacttcgctgcctaccggt
cccgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctc
ggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaa
cccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaa
ggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatg
caggcacttccaccacggtgataa
(SEQ ID NO:297)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
IVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPED
F AVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAG
TCGVLLLSLVITLYCRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNEL
NLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDAL
HMQALPPR* * (SEQ ID NO:298)
CAR-T E6 CD28/CD3z g BLOCKsequence:
(DNA)
tggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgtggagtgc
tcctcctctccctggtgattaccctgtactgcagaagcaagcggtctcggctcctgcattctgattacatgaacatgacc
ccaagaagaccaggccccaccaggaaacattaccagccctacgctccgccacgcgacttcgctgcctaccggtcccgcgt
taagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagac
gggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccag
gagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacg
agggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcac
ttccaccacggtgataagtttaaacccgctgatcagcctcgactgtgc (SEQ ID NO: 299)
CAR-T E6 CD8/CD8/4-lBB/CD3zsequence:
N-CD81s-huMNE6scFv-CD8ecdfragment- CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggggggggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaaacgacaac
cccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctgtaggcctg
ccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgt
ggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagcc
ttttatgaggccagtacagacgactcaagaggaagacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcg
aactgcgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaat
ctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaa
aaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaaggggg
aaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccat
atgcaggcacttccaccacggtgataa
(SEQ ID NO:300)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
IVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPED
FAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGT
CGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNEL
NLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDAL
HMQALPPR* *
(SEQ ID NO:301)
CAR-T E6 4-lBB/CD3z gBLOCKsequence:
(DNA)
tggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgtggagtgc
tcctcctctccctggtgattaccctgtactgcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatg
aggccagtacagacgactcaagaggaagacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactgcg
cgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggta
gacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccc
caggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggag
acgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcagg
cacttccaccacggtgataagtttaaacccgctgatcagcctcgactgtgc (SEQ ID NO: 302)
CAR-T E6 CD8/CD8/CD28/4-lBB/CD3zsequence:
N-CD81s-huMNE6scFv-CD8ecd fragment-CD8 transmembrane- CD28- 4-1BB- CD3zeta-C (DN
A)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggggggggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaaacgacaac
cccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctgtaggcctg
ccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgt
ggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcagaagcaagcggtctcggctcctgcattctgattacatgaa
catgaccccaagaagaccaggccccaccaggaaacattaccagccctacgctccgccacgcgacttcgctgcctaccggt
ccaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaagaggaagac
gggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcc
tgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaac
ggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaa
gataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatca
gggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa
(SEQ ID NO:303)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTI SRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGS
EIVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPE
DFAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAG
TCGVLLLSLVITLYCRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQE
EDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNEL
QKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 304)
CAR-T E6 CD28/4-lBB/CD3z gBLOCKsequence:
(DNA)
atagggagacccaagctggctagttaagcttggtaccgagggccaccatggccctgcccgtgaccgctttgctgctcccc
ctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttgagagtggcggtgggctggttaagcctggcggctc
cctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatgggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaaga
ggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctattaccccgactcagtcaaggggagatttaccatt
tcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctctgagagcagaggacacagctgtttactattgtac
ccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggggacaagggacattggttacagtgagcagtggcg
gcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggggggggcagcgagatagtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctc
tcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagtgtcatatattcactggtatcagcaacggcccgg
gcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcaggtatccctgcacgattttctggatctggttcag
gttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagactttgccgtttattactgccagcagaggtctagctcc
ccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaaacgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccac
catcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctgtaggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactgg
atttcgcctgtgatatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctg
tactgcagaagcaagcggtctcggctcctgcattctgattacatgaacatgaccccaagaagaccaggccccaccaggaa
acattaccagccctacgctccgccacgcgacttcgctgcctaccggtccaaaaggggccgcaaaaaactcctttacattt
ttaagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaagaggaagacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaa
ggagggtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaa
cgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagc
ctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcgga
atgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatga
cgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataagtttaaacccgctgatcagcctcgactgtgc (SEQ ID NO:
305)
CAR-T C2 CD8/CD8/CD28/4-lBB/CD3zsequence:
N-CD81s-huMNC2scFv-CD8ecdfragment- CD8 transmembrane- CD28- 4-1BB- CD3zeta-C (DN
A)
atggccttgccagtgacggccctgctgctgccattggctcttctgttgcacgctgccaggcctgaagtgcagctcgtaga
gagtggcgggggactggtgaagcccggtggaagcctcagactcagttgcgccgcctcaggtttcactttttcaggttacg
ccatgtcctgggtaagacaggcaccggggaaaggactcgagtgggtgtctactatcagctcaggaggcacttatatatat
tatcctgactctgtaaaaggccgatttacgatttctcgcgacaatgcaaagaactccctctacctccaaatgaacagtct
tagggcagaagacactgctgtatactattgtgcacgcctcggcggcgacaactactacgagtactttgacgtgtggggga
aagggactaccgtgacagtttcaagcggaggaggtggctcaggtggaggcgggtcaggggggggaggaagtgatattgtg
ctcacacaatccccagcctccctggctgtgtctcccggccaacgcgctacaattacatgtcgggcctccaaaagcgtgag
caccagcggctacagctacatgcactggtatcaacagaaaccaggacaaccccccaaactgttgatttatctcgcttcaa
acttggagtccggcgtgcctgcgcgcttttcagggagtgggagcggcacagattttacgctgactatcaaccccgtagaa
gcaaacgatacagcgaattattattgtcaacattcccgggaactcccctttacgttcggcgggggcacaaaggtcgaaat
taagagaaccacgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagac
cagaagcctgtaggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggcc
ccgctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcagaagcaagcggtctcggctcct
gcattctgattacatgaacatgaccccaagaagaccaggccccaccaggaaacattaccagccctacgctccgccacgcg
acttcgctgcctaccggtccaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatgaggccagtacag
acgactcaagaggaagacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactgcgcgttaagttctc
ccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagt
acgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactg
tacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaagg
acacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccac
ggtgataa (SEQ ID
NO: 306)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YL QMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATIT
CRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPFTF
GGGTKVEIKRTTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC
RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGG
CELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMK
GERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 307)
CAR-T C2-1 gBLOCK sequence:
(DNA)
atagggagacccaagctggctagttaagcttggtaccgagggccaccatggccttgccagtgacggccctgctgctgcca
ttggctcttctgttgcacgctgccaggcctgaagtgcagctcgtagagagtggcgggggactggtgaagcccggtggaag
cctcagactcagttgcgccgcctcaggtttcactttttcaggttacgccatgtcctgggtaagacaggcaccggggaaag
gactcgagtgggtgtctactatcagctcaggaggcacttatatatattatcctgactctgtaaaaggccgatttacgatt
tctcgcgacaatgcaaagaactccctctacctccaaatgaacagtcttagggcagaagacactgctgtatactattgtgc
acgcctcggcggcgacaactactacgagtactttgacgtgtgggggaaagggactaccgtgacagtttcaagcggaggag
gtggctcaggtggaggcgggtcaggggggggaggaagtgatattgtgctcacacaatccccagcctccctggc (SEQ I
D
NO: 308)
CAR-T C2-2 gBLOCK sequence:
(DNA)
aagtgatattgtgctcacacaatccccagcctccctggctgtgtctcccggccaacgcgctacaattacatgtcgggcct
ccaaaagcgtgagcaccagcggctacagctacatgcactggtatcaacagaaaccaggacaaccccccaaactgttgatt
tatctcgcttcaaacttggagtccggcgtgcctgcgcgcttttcagggagtgggagcggcacagattttacgctgactat
caaccccgtagaagcaaacgatacagcgaattattattgtcaacattcccgggaactcccctttacgttcggcgggggca
caaaggtcgaaattaagagaaccacgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaaccc
ctgtctctgagaccagaagcctgtaggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatat
ctacatttgggccccgctcgcaggcacatgtggagtgc (SEQ ID NO: 309)
CAR E6 Fc/8/4-lBB/CD3z sequence:
N-CD81s-huMNE6scFv-Human IgGlFc- CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggcggaggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaagagcccaa
atcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccc
caaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccct
gaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacag
cacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctcca
acaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctg
cccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgc
cgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttct
tcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggct
ctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaaatctacatttgggccccgctcgcaggcacatg
tggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagc
cttttatgaggccagtacagacgactcaagaggaagacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgc
gaactgcgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaa
tctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcagga
aaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggg
gaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctcca
tatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 310)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
IVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPED
F AVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHE
DP EVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQ
VYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV
MHEALHNHYTQKSLSLSPGKIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEE
EGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEI
GMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * ( SEQ ID NO:311)
E6 CAR pCDH gBLOCK sequence:
(DNA)
acgctgttttgacctccatagaagattctagagctagctgtagagcttggtaccgagggccaccatggccctgcccgtga
ccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttgagagtggcggtgggctg
gttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatgggatgagttgggtgcg
gcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctattaccccgactcagtca
aggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctctgagagcagaggacaca
gctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggggacaagggacattggt
tacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggcggaggcagcgagatagtgctcacgcagtcac
ccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagtgtcatatattcactgg
tatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcaggtatccctgc (SEQ
ID NO:312)
E6 CAR Fc pCDH gBLOCK sequence:
(DNA)
agtacctctaatctggcctcaggtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctc
tagcctggagcctgaagactttgccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggacca
aggttgaaattaaagagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctgggggga
ccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggt
ggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagc
cgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaag
gagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccg
agaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaag
gcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtg
ctg (SEQ
ID NO:313)
E6 CAR 8BB3 pCDH gBLOCKsequence:
(DNA)
agaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaag
agcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcct
ctccctgtctccgggtaaaatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgatta
ccctgtactgcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaa
gaggaagacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagc
cgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgt
tggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgag
ttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacgg
cctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataag
tttaaacccgctgatcaggcggccgcgaaggatctgcgatcgctccggtgcccgtcag (SEQ ID NO: 314)
CAR E6 FcH/8/4-lBB/CD3zsequence:
N-CD81s-huMNE6scFv-Human IgGlhingeless Fc Y407R- CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3ze
ta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggcggaggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaagcacctga
actcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtca
catgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataat
gccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactg
gctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagcca
aagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacc
tgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagac
cacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcagg
ggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggt
aaaatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcaaaag
gggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaagaggaagacgggtgct
catgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttac
aagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagagg
ccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataaga
tggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctg
tccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 315)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTI SRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGS
EIVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPE
DF AVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVE
VHN AKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKN
QVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSL
SLSPGKIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSA
DAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDG
LYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 316)
E6 CAR FcH pCDH gBLOCK sequence:
(DNA)
agtacctctaatctggcctcaggtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctc
tagcctggagcctgaagactttgccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggacca
aggttgaaattaaagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatg
atetcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgt
ggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcc
tcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatc
gagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgac
caagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggc
agccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctg (SEQ ID NO: 317)
CAR E6 Fc/4/4-lBB/CD3z sequence:
N-CD81s-huMNE6scFv-Human IgGlFc- CD4 transmembrane- CD28- 4-1BB- CD3zeta-C (DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggcggaggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaagagcccaa
atcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccc
caaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccct
gaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacag
cacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctcca
acaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctg
cccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgc
cgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttct
tcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggct
ctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaaatggccctgattgtgctggggggcgtcgccgg
cctcctgcttttcattgggctaggcatcttcttcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagcctttta
tgaggccagtacagacgactcaagaggaagacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactg
cgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcgg
tagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacc
cccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaagg
agacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgca
ggcacttccaccacggtgataa(SEQ ID NO:318)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
IVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPED
F AVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHE
DP EVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQ
VYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV
MHEALHNHYTQKSLSLSPGKMALIVLGGVAGLLLFIGLGIFFKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEG
GCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGM
KGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 319)
E6 CAR 44BB3 pCDH gBLOCKsequence:
(DNA)
agaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaag
agcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcct
ctccctgtctccgggtaaaatggccctgattgtgctggggggcgtcgccggcctcctgcttttcattgggctaggcatct
tcttcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaagaggaa
gacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagccgacgc
gcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggaca
aacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcag
aaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggccttta
tcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataagtttaaa
cccgctgatcaggcggccgcgaaggatctgcgatcgctccggtgcccgtcag (SEQ ID NO: 320)
CAR E6 FcH/4/4-lBB/CD3zsequence:
N-CD81s-huMNE6scFv-Human IgGlhingeless Fc Y407R- CD4 transmembrane- CD28- 4-1BB-
CD3zeta-C
(DNA)
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ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggcggaggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaagcacctga
actcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtca
catgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataat
gccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactg
gctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagcca
aagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacc
tgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagac
cacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcagg
ggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggt
aaaatggccctgattgtgctggggggcgtcgccggcctcctgcttttcattgggctaggcatcttcttcaaaaggggccg
caaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaagaggaagacgggtgctcatgcc
gctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcag
ggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcga
cccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcag
aagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccaca
gcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 321)
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CAR E6 IgD/8/4-lBB/CD3zsequence:
N-CD81s-huMNE6scFv-IgD hingeregion- CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggcggaggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaagagtctcc
aaaggcacaggcctcctcagtgcccactgcacaaccccaagcagagggcagcctcgccaaggcaaccacagccccagcca
ccacccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggagaaggagaaagaggaacaagaagagagagagacaaag
acaccaatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcaa
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gctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgct
tacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggag
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agatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggc
ctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 3
23)
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(DNA)
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aggttgaaattaaagagtctccaaaggcacaggcctcctcagtgcccactgcacaaccccaagcagagggcagcctcgcc
aaggcaaccacagccccagccaccacccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggagaaggagaaagagga
acaagaagagagagagacaaagacaccaatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccc
tggtgattaccctgtactgcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatgaggccag (SEQ
ID
NO: 325)
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(DNA)
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gtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcg
gcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgag
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gtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataagtttaaacccgctgatcaggcggccgcgaaggatctg
cgatcgctccggtgcccgtcag (SEQ ID NO: 326)
CAR E6 IgD/4/4-lBB/CD3zsequence:
N-CD81s-huMNE6scFv-IgD hingeregion- CD4 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggcggaggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
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aaaggcacaggcctcctcagtgcccactgcacaaccccaagcagagggcagcctcgccaaggcaaccacagccccagcca
ccacccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggagaaggagaaagaggaacaagaagagagagagacaaag
acaccaatggccctgattgtgctggggggcgtcgccggcctcctgcttttcattgggctaggcatcttcttcaaaagggg
ccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaagaggaagacgggtgctcat
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(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
I VLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPE
DFAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERE
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YKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQG
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(DNA)
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aaggcaaccacagccccagccaccacccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggagaaggagaaagagga
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taggcatcttcttcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatgaggccag (SEQ ID
NO: 329)
CAR E6 X4/8/4-lBB/CD3z sequence:
N-CD81s-huMNE6scFv- X4 linker-CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
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ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggcggaggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
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gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaagacaagac
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ctaagccacctaagcctgctcctaacctgctcggaggacctatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgtggagtg
ctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttat
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(amino acids)
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YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
IVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPED
F AVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKDKTHTKPPKPAPELLGGPGTGTGGPTIKPPKPPKPAPNLLGGPIYIWAPLAGTC
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(DNA)
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gctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcaaaaggggccgcaaaaaactccttt
acatttttaagcagccttttatgaggccag (SEQ ID NO: 332)
CAR E6 X4/4/4-lBB/CD3z sequence:
N-CD81s-huMNE6scFv-X4 linker-CD4 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
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taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggcggaggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
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gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaagacaagac
gcacaccaagccacctaaaccagctccagaactgctcggaggtcctggcaccggaaccggaggacctaccatcaaaccac
ctaagccacctaagcctgctcctaacctgctcggaggacctatggccctgattgtgctggggggcgtcgccggcctcctg
cttttcattgggctaggcatcttcttcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatgaggcc
agtacagacgactcaagaggaagacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactgcgcgtta
agttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgg
gaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccagga
gggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgag
ggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcactt
ccaccacggtgataa(SEQ ID NO:333)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTI SRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGS
EIVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPE
DFAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKDKTHTKPPKPAPELLGGPGTGTGGPTIKPPKPPKPAPNLLGGPMALIVLGGVAG
LLLFIGLGIFFKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLG
RREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQ
ALPPR** (SEQ ID NO:334)
E6 CAR X44 pCDH gBLOCK sequence:
(DNA)
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ggaggacctaccatcaaaccacctaagccacctaagcctgctcctaacctgctcggaggacctatggccctgattgtgct
ggggggcgtcgccggcctcctgcttttcattgggctaggcatcttcttcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacattt
ttaagcagccttttatgaggccag (SEQ ID NO: 335)
CAR E6 8+4/4/4-lBB/CD3zsequence:
N-CD81s-huMNE6scFv- CD8ecd +CD4ecd fragment - CD4 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-
C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
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gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggcggaggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
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gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaaacgacaac
cccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctgtaggcctg
ccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatggccctgattgtgctggggggcgtcgccggc
ctcctgcttttcattgggctaggcatcttcttcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttat
gaggccagtacagacgactcaagaggaagacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactgc
gcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggt
agacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaaccc
ccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaagga
gacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcag
gcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO:336)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
IVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPED
F AVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDMALIVLGGV
AGLLLFIGLGIFFKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELN
LGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALH
MQALPPR* * (SEQ ID NO:337)
E6 CAR CD844 pCDH gBLOCK sequence:
(DNA)
agtacctctaatctggcctcaggtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctc
tagcctggagcctgaagactttgccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggacca
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agaccagaagcctgtaggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatggccctgat
tgtgctggggggcgtcgccggcctcctgcttttcattgggctaggcatcttcttcaaaaggggccgcaaaaaactccttt
acatttttaagcagccttttatgaggccag (SEQ ID NO: 338)
Humanized C2 scFV sequence inCAR:
(DNA)
gagggccaccatggccttgccagtgacggccctgctgctgccattggctcttctgttgcacgctgccaggcctgaagtgc
agctcgtagagagtggcgggggactggtgaagcccggtggaagcctcagactcagttgcgccgcctcaggtttcactttt
tcaggttacgccatgtcctgggtaagacaggcaccggggaaaggactcgagtgggtgtctactatcagctcaggaggcac
ttatatatattatcctgactctgtaaaaggccgatttacgatttctcgcgacaatgcaaagaactccctctacctccaaa
tgaacagtcttagggcagaagacactgctgtatactattgtgcacgcctcggcggcgacaactactacgagtactttgac
gtgtgggggaaagggactaccgtgacagtttcaagcggaggaggtggctcaggtggaggcgggtcaggggggggaggaag
tgatattgtgctcacacaatccccagcctccctggctgtgtctcccggccaacgcgctacaattacatgtcgggcctcca
aaagcgtgagcaccagcggctacagctacatgcactggtatcaacagaaaccaggacaaccccccaaactgttgatttat
ctcgcttcaaacttggagtccggcgtgcctgcgcgcttttcagggagtgggagcggcacagattttacgctgactatcaa
ccccgtagaagcaaacgatacagcgaattattattgtcaacattcccgggaactcccctttacgttcggcgggggcacaa
aggtcgaaattaagagaacc (SEQ ID NO: 339)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATITC
RASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPFTFG
GGTKVEIKRT (SEQ ID NO: 340)
Humanized E6 scFV sequence inCAR:
(DNA)
gaggtccagctggttgagagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatt
tactttcagccgatatgggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccgggg
ggggcacttacatctattaccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtat
ttgcagatgaattctctgagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgacta
cggtatggactattggggacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtg
gggggggcagcgagatagtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgc
tctgctacctcctcagtgtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtac
ctctaatctggcctcaggtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcc
tggagcctgaagactttgccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggtt
gaaattaaa(SEQ ID NO:341)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNTL
Y LQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATL
TCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSSPFTFGSGT
KVEIK (SEQ ID NO:342)
CD8 leader sequence:
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggcca(SEQ ID NO: 343)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARP (SEQ IDNO: 344)
CD8 hinge domain sequence :
(DNA)
acgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctg
taggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgat (SEQ ID NO: 345)
(amino acids)
TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD(SEQ ID NO: 346)
CD4 hinge domain sequence :
(DNA)
tcgggacaggtcctgctggaatccaacatcaaggttctgcccacatggtccaccccggtgcagcca(SEQ ID NO: 34
7) (amino acids)
SGQVLLESNIKVLPTWSTPVQP (SEQ IDNO: 348)
CD28 hinge domain sequence:
(DNA)
aaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagccc(SEQ ID NO: 349)
(amino acids)
KHLCPSPLFPGPSKP (SEQ ID NO: 350)
CD8+CD4 hinge domain sequence:
(DNA)
acgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctg
taggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgattcgggacaggtcctgctggaatcca
acatcaaggttctgcccacatggtccaccccggtgcagcca (SEQ ID NO: 351)
(amino acids)
TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDSGQVLLESNIKVLPTWSTPVQP(SEQ ID NO: 3
52)
CD8+CD28 hinge domain sequence:
(DNA)
acgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctg
taggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgataaacacctttgtccaagtcccctat
ttcccggaccttctaagccc (SEQ ID NO: 353)
(amino acids)
TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDKHLCPSPLFPGPSKP(SEQ ID NO: 354)
CD28+CD4 hinge domain sequence:
(DNA)
aaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagccctcgggacaggtcctgctggaatccaacatcaaggt
tctgcccacatggtccaccccggtgcagcca (SEQ ID NO: 355)
(amino acids)
KHLCPSPLFPGPSKPSGQVLLESNIKVLPTWSTPVQP(SEQ ID NO: 356)
Human IgD hinge domain sequence:
(DNA)
gagtctccaaaggcacaggcctcctcagtgcccactgcacaaccccaagcagagggcagcctcgccaaggcaaccacagc
cccagccaccacccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggagaaggagaaagaggaacaagaagagagag
agacaaagacacca (SEQ ID NO: 357)
(amino acids)
ESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTP(SEQ ID NO: 358)
X4 linker (IgGl and IgG2modified hinge region) sequence:
(DNA)
gacaagacgcacaccaagccacctaaaccagctccagaactgctcggaggtcctggcaccggaaccggaggacctaccat
caaaccacctaagccacctaagcctgctcctaacctgctcggaggacct (SEQ ID NO: 359)
(amino acids)
DKTHTKPPKPAPELLGGPGTGTGGPTIKPPKPPKPAPNLLGGP(SEQ ID NO: 360)
CD3 zeta transmembrane domainsequence :
(DNA)
ctctgctacctgctggatggaatcctcttcatctatggtgtcattctcactgccttgttcctg(SEQ ID NO: 361)
(amino acids)
LCYLLDGILFIYGVILTALFL (SEQ IDNO: 362)
CD8 transmembrane domainsequence :
(DNA)
atctacatttgggccccgctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgc(SEQ ID
NO: 363)
(amino acids)
IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC (SEQ IDNO: 364)
CD4 transmembrane domainsequence :
(DNA)
atggccctgattgtgctggggggcgtcgccggcctcctgcttttcattgggctaggcatcttcttc(SEQ ID NO: 36
5) (amino acids)
MALIVLGGVAGLLLFIGLGIFF (SEQ IDNO : 366 )
CD28 transmembrane domainsequence:
(DNA)
ttttgggtgctggtggtggttggtggagtcctggcttgctatagcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggt
g (SEQ ID NO:367)
(amino acids)
FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV (SEQID NO: 368)
4-1BB transmembrane domainsequence:
(DNA)
atcatctccttctttcttgcgctgacgtcgactgcgttgctcttcctgctgttcttcctcacgctccgtttctctgttgt
t (SEQ ID NO:369)
(amino acids)
IISFFLALTSTALLFLLFFLTLRFSVV(SEQ ID NO: 370)
OX40 transmembrane domainsequence:
(DNA)
gttgccgccatcctgggcctgggcctggtgctggggctgctgggccccctggccatcctgctggccctgtacctgctc(S
EQ ID NO:371)
(amino acids)
VAAILGLGLVLGLLGPLAILLALYLL (SEQID NO: 372)
CD3 zeta domain sequence:
(DNA)
cgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcgg
tagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacc
cccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaagg
agacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgca
ggcacttccaccacgg (SEQ ID NO: 373)
(amino acids)
RVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGER
RRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 374)
CD3 zeta domain variantsequence:
(DNA)
agagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctagg
acgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaacc
ctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgc
cggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgca
ggccctgccccctcgc (SEQ ID NO: 375)
(amino acids)
RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGER
RRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 376)
CD28 domain sequence:
(DNA)
agaagcaagcggtctcggctcctgcattctgattacatgaacatgaccccaagaagaccaggccccaccaggaaacatta
ccagccctacgctccgccacgcgacttcgctgcctaccggtcc (SEQ ID NO: 377)
(amino acids)
RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS(SEQ ID NO: 378)
4-1BB domain sequence:
(DNA)
aaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaagaggaagacgg
gtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactg (SEQ ID NO: 379)
(amino acids)
KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL(SEQ ID NO: 380)
0X40 domain sequence:
(DNA)
cggagggaccagaggctgccccccgatgcccacaagccccctgggggaggcagtttccggacccccatccaagaggagca
ggccgacgcccactccaccctggccaagatc (SEQ ID NO: 381)
(amino acids)
RRDQRLPPDAHKPPGGGSFRTPIQEEQADAHSTLAKI (SEQ ID NO: 382)
Humanized anti CD3 scFV clone12F6 (VH-VL) sequence:
(DNA)
caggtgcagctggtgcagagcggaggtggagtggtccaacctggaagatctctgagactgagctgtaaggctagcgggta
cacgttcacatcttacacgatgcactgggtgaggcaagcccccggtaagggcctggaatggatcggatatataaacccca
gctcagggtataccaaatataatcagaagttcaaagatcggttcacgatttctgctgataaaagtaagtccaccgctttc
ctgcagatggactcactcaggccagaagatactggtgtttatttctgtgcaaggtggcaggactacgacgtgtactttga
ctattgggggcaggggacgcctgtaacagtatcaagcggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggat
ccgatattcagatgacccagagcccgagcagcctgagcgcgagcgtgggcgatcgcgtgaccatgacctgccgcgcgagc
agcagcgtgagctatatgcattggtatcagcagaccccgggcaaagcgccgaaaccgtggatttatgcgaccagcaacct
ggcgagcggcgtgccgagccgctttagcggcagcggcagcggcaccgattataccctgaccattagcagcctgcagccgg
aagatattgcgacctattattgccagcagtggagcagcaacccgccgacctttggccagggcaccaaactgcagattacc
cgc (SEQ ID NO:383)
(amino acids)
QVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCKASGYTFTSYTMHWVRQAPGKGLEWIGYINPSSGYTKYNQKFKDRFTISADKSKSTAF
LQMDSLRPEDTGVYFCARWQDYDVYFDYWGQGTPVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTMTCRAS
SSVSYMHWYQQTPGKAPKPWIYATSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDIATYYCQQWSSNPPTFGQGTKLQIT
R (SEQ ID NO:384)
Humanized anti CD3 scFV clone12F6 (VL-VH) sequence:
(DNA)
gatattcagatgacccagagcccgagcagcctgagcgcgagcgtgggcgatcgcgtgaccatgacctgccgcgcgagcag
cagcgtgagctatatgcattggtatcagcagaccccgggcaaagcgccgaaaccgtggatttatgcgaccagcaacctgg
cgagcggcgtgccgagccgctttagcggcagcggcagcggcaccgattataccctgaccattagcagcctgcagccggaa
gatattgcgacctattattgccagcagtggagcagcaacccgccgacctttggccagggcaccaaactgcagattacccg
cggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatcccaggtgcagctggtgcagagcggaggtggagtgg
tccaacctggaagatctctgagactgagctgtaaggctagcgggtacacgttcacatcttacacgatgcactgggtgagg
caagcccccggtaagggcctggaatggatcggatatataaaccccagctcagggtataccaaatataatcagaagttcaa
agatcggttcacgatttctgctgataaaagtaagtccaccgctttcctgcagatggactcactcaggccagaagatactg
gtgtttatttctgtgcaaggtggcaggactacgacgtgtactttgactattgggggcaggggacgcctgtaacagtatca
age (SEQ ID NO:385)
(amino acids)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTMTCRASSSVSYMHWYQQTPGKAPKPWIYATSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPE
DIATYYCQQWSSNPPTFGQGTKLQITRGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCKASGYTFTSYTMHWVR
QAPGKGLEWIGYINPSSGYTKYNQKFKDRFTISADKSKSTAFLQMDSLRPEDTGVYFCARWQDYDVYFDYWGQGTPVTVS
S (SEQ ID NO:386)
Humanized anti CD3 scFV cloneOKT3 (VH-VL) sequence:
(DNA)
caggtgcagctggtgcagagcggaggcggagtggtgcagcctggaagaagcctgcgcctgagctgcaaagcgagcggcta
tacctttacccgctataccatgcattgggtgcgccaggcgccgggcaaaggcctggaatggattggctatattaacccga
gccgcggctataccaactataaccagaaagtgaaagatcgctttaccattagcaccgataaaagcaaaagcaccgcgttt
ctgcagatggatagcctgcgcccggaagataccgcggtgtattattgcgcgcgctattatgatgatcattattgcctgga
ttattggggccagggcaccaccctgaccgtgagcagcggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggat
ccgatattcagatgacccagagcccgagcagcctgagcgcgagcgtgggcgatcgcgtgaccattacctgcagcgcgagc
agcagcgtgagctatatgaactggtatcagcagaccccgggcaaagcgccgaaacgctggatttatgataccagcaaact
ggcgagcggcgtgccgagccgctttagcggcagcggcagcggcaccgattatacctttaccattagcagcctgcagccgg
aagatattgcgacctattattgccagcagtggagcagcaacccgtttacctttggccagggcaccaaactgcagattacc
cgc (SEQ ID NO:387)
(amino acids)
QVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCKASGYTFTRYTMHWVRQAPGKGLEWIGYINPSRGYTNYNQKVKDRFTISTDKSKSTAF
LQMDSLRPEDTAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSAS
SSVSYMNWYQQTPGKAPKRWIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQWSSNPFTFGQGTKLQIT
R (SEQ ID NO:388)
Humanized anti CD3 scFV cloneOKT3 (VH-VL) sequence:
(DNA)
gatattcagatgacccagagcccgagcagcctgagcgcgagcgtgggcgatcgcgtgaccattacctgcagcgcgagcag
cagcgtgagctatatgaactggtatcagcagaccccgggcaaagcgccgaaacgctggatttatgataccagcaaactgg
cgagcggcgtgccgagccgctttagcggcagcggcagcggcaccgattatacctttaccattagcagcctgcagccggaa
gatattgcgacctattattgccagcagtggagcagcaacccgtttacctttggccagggcaccaaactgcagattacccg
cggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatcccaggtgcagctggtgcagagcggaggcggagtgg
tgcagcctggaagaagcctgcgcctgagctgcaaagcgagcggctatacctttacccgctataccatgcattgggtgcgc
caggcgccgggcaaaggcctggaatggattggctatattaacccgagccgcggctataccaactataaccagaaagtgaa
agatcgctttaccattagcaccgataaaagcaaaagcaccgcgtttctgcagatggatagcctgcgcccggaagataccg
cggtgtattattgcgcgcgctattatgatgatcattattgcctggattattggggccagggcaccaccctgaccgtgagc
age (SEQ ID NO:389)
(amino acids)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYMNWYQQTPGKAPKRWIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPE
DIATYYCQQWSSNPFTFGQGTKLQITRGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCKASGYTFTRYTMHWVR
QAPGKGLEWIGYINPSRGYTNYNQKVKDRFTISTDKSKSTAFLQMDSLRPEDTAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVS
S (SEQ ID NO:390)
HumanizeE6 scFV (VH-VL)sequence:
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtaggtatggcatgagctgggtccgccaggctccagggaagaggctggagtgggtctcaaccattagtggcg
gaggcacctacatatactacccagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacaccctgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtaccagagataactatggccgcaactatgatta
tggcatggattattggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagcggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcg
gtggcggatccgaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctcacctgc
agcgccaccagcagtgttagctacatccactggtaccaacagaggcctggccagagccccaggctcctcatctatagcac
ctccaacctggccagcggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggagcgactacactctcaccatcagcagcc
tagagcctgaagattttgcagtttattactgtcagcagcgtagcagctcccctttcacctttggcagcggcaccaaagtg
gaaattaaa(SEQ ID NO:391)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNTL
YLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLT
CSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSSPFTFGSGTK
VEIK (SEQ ID NO:392)
HumanizeE6 scFV (VL-VH)sequence:
(DNA)
gaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctcacctgcagcgccaccag
cagtgttagctacatccactggtaccaacagaggcctggccagagccccaggctcctcatctatagcacctccaacctgg
ccagcggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggagcgactacactctcaccatcagcagcctagagcctgaa
gattttgcagtttattactgtcagcagcgtagcagctcccctttcacctttggcagcggcaccaaagtggaaattaaagg
cggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtca
agcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtaggtatggcatgagctgggtccgccag
gctccagggaagaggctggagtgggtctcaaccattagtggcggaggcacctacatatactacccagactcagtgaaggg
ccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacaccctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctg
tgtattactgtaccagagataactatggccgcaactatgattatggcatggattattggggccagggcaccctggtgacc
gtgagcagc(SEQ ID NO:393)
(amino acids)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPE
DFAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQ
APGKRLEWVSTI SGGGTYIYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLV
T VSS (SEQ ID NO: 394)
HumanizeC2 scFV (VH-VL)sequence:
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtg
gcggatccgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcaga
gccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcct
gatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctca
caattaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcgga
gggaccaaggtggagatcaaacgaact (SEQ ID NO: 395)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
Y LQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATIT
CRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPFTF
GGGTKVEIKRT (SEQ ID NO : 396 )
HumanizeE6 scFV (VL-VH)sequence:
(DNA)
gacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcagagccagtaa
gagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcctgatttacc
tggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctcacaattaat
cctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcggagggaccaa
ggtggagatcaaacgaactggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgaggtgcagctggtgg
agtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtggctat
gccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtggcggaacctacatata
ctaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcc
tgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaatacttcgatgtctggggc
aaagggaccacggtcaccgtctcctcc (SEQ ID NO: 397)
(amino acids)
DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTIN
PVEANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRTGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGY
AMSWVRQAPGKGLEWVSTI SSGGTYIYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVW
G KGTTVTVSS (SEQ ID NO: 398)
G4S1 linker sequence:
(DNA)
ggcggtggcggatcc (SEQ ID NO: 399)
(amino acids)
GGGGS (SEQ ID NO:400)
[G4Si]x3 linker sequence:
(DNA)
ggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatcc(SEQ ID NO: 401)
(amino acids)
GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 402)
8 aa GS linker sequence:
(DNA)
ggcggttccggcggtggatccgga (SEQ IDNO: 403)
(amino acids)
GGSGGGSG (SEQ ID NO:404)
12 aa GS linker sequence:
(DNA)
ggcggttccggcggtggatccggcggtggcggatccgga(SEQ ID NO: 405)
(amino acids)
GGSGGGSGGGSG (SEQ ID NO: 406)
13 aa GS linker sequence
ggcggtggatccggcggtggcggatccggcggtggatcc(SEQ ID NO: 407)
(amino acids)
GGGSGGGGSGGGS (SEQ ID NO: 408)
22 aa GS linker sequence:
(DNA)
ggcggtggaagcggcggtggcggatccggcagcggcggaagcggcggtggcggatccggcggtgga(SEQ ID NO: 40
9)
(amino acids)
GGGSGGGGSGSGGSGGGGSGGG (SEQ IDNO: 4110)
24 aa GS linker sequence:
(DNA)
ggcggttccggcggtggatccggcggtggcggatccggaggcggttccggcggtggatccggcggtggcggatccgga(S
EQ ID NO:411)
(amino acids)
GGSGGGSGGGSGGGSGGGSGGGSG (SEQ IDNO: 412)
Mouse C3 Heavy chain variableregion sequence:
(DNA)
caggtccagctgcagcagtctgggcctgagctggtgaggcctggggtctcagtgaagatttcctgcaagggttccggcta
cagattcactgattatgctatgaactgggtgaagcagagtcatgcaaagagtctagagtggattggagttattagtactt
tctctggtaatacaaacttcaaccagaagtttaagggcaaggccacaatgactgtagacaaatcctccagcacagcctat
atggaacttgccagattgacatctgaggattctgccatgtattactgtgcaagatcggattactacggcccatactttga
ctactggggccaaggcaccactctcacagtctcctca (SEQ ID NO: 413)
(amino acids)
QVQLQQSGPELVRPGVSVKISCKGSGYRFTDYAMNWVKQSHAKSLEWIGVI STFSGNTNFNQKFKGKATMTVDKSSSTA
YMELARLTSEDSAMYYCARSDYYGPYFDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO: 414)
Mouse C3 heavy chain variableframework region 1 (FWR1) sequence:
(DNA)
caggtccagctgcagcagtctgggcctgagctggtgaggcctggggtctcagtgaagatttcctgcaagggttccggcta
cagattcact (SEQ ID NO: 415)
(amino acids)
QVQLQQSGPELVRPGVSVKI SCKGSGYRFT(SEQ ID NO: 416)
Mouse C3 heavy chain variablecomplementarity determining regions 1 (CDR1) sequen
ce :
(DNA)
gattatgctatgaac (SEQ ID NO: 417)
(amino acids)
DYAMN (SEQ ID NO : 418 )
Mouse C3 heavy chain variableframework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
tgggtgaagcagagtcatgcaaagagtctagagtggattgga(SEQ ID NO: 419)
(amino acids)
WVKQSHAKSLEWIG (SEQ ID NO: 420)
Mouse C3 heavy chain variablecomplementarity determining regions 2 (CDR2) sequen
ce :
(DNA)
gttattagtactttctctggtaatacaaacttcaaccagaagtttaagggc(SEQ ID NO: 421)
(amino acids)
VI STFSGNTNFNQKFKG (SEQ ID NO:422)
Mouse C3 heavy chain variableframework region 3 (FWR3) acid sequence:
(DNA)
aaggccacaatgactgtagacaaatcctccagcacagcctatatggaacttgccagattgacatctgaggattctgccat
gtattactgtgcaaga (SEQ ID NO: 423)
(amino acids)
KATMTVDKSSSTAYMELARLTSEDSAMYYCAR(SEQ ID NO: 424)
Mouse C3 heavy chain variablecomplementarity determining regions 3 (CDR3) sequen
ce :
(DNA)
tcggattactacggcccatactttgactac(SEQ ID NO: 425)
(amino acids)
SDYYGPYFDY (SEQ ID NO: 426)
IGHV1-18*04 heavy chain variableregion sequence:
(DNA)
caggttcagctggtgcagtctggagctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggtta
cacctttaccagctacggtatcagctgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggatggatcagcgctt
acaatggtaacacaaactatgcacagaagctccagggcagagtcaccatgaccacagacacatccacgagcacagcctac
atggagctgaggagcctgagatctgacgacacggccgtgtattactgtgcgagaga (SEQ ID NO: 427)
(amino acids)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAY
MELRSLRSDDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 428)
IGHV1-18*04 heavy chain variableframework region 1 (FWR1) sequence:
(DNA)
caggttcagctggtgcagtctggagctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggtta
cacctttacc (SEQ ID NO: 429)
(amino acids)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT(SEQ ID NO: 430)
IGHV1-18*04 heavy chain variablecomplementarity determining regions 1 (CDR1) seq
uence :
(DNA)
agctacggtatcagc (SEQ ID NO: 431)
(amino acids)
SYGIS (SEQ ID NO:432)
IGHV1-18*04 heavy chain variableframework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
tgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatggga(SEQ ID NO: 433)
(amino acids)
WVRQAPGQGLEWMG (SEQ ID NO: 434)
IGHV1-18*04 heavy chain variablecomplementarity determining regions 2 (CDR2) seq
uence :
(DNA)
tggatcagcgcttacaatggtaacacaaactatgcacagaagctccagggc(SEQ ID NO: 435)
(amino acids)
WISAYNGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:436)
IGHV1-18*04 heavy chain variableframework region 3 (FWR3) sequence:
(DNA)
agagtcaccatgaccacagacacatccacgagcacagcctacatggagctgaggagcctgagatctgacgacacggccgt
gtattactgtgcgaga (SEQ ID NO: 437)
(amino acids)
RVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAR(SEQ ID NO: 438)
Humanized C3 heavy chainvariable region sequence:
(DNA)
caggttcagctggtgcagtctggagctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggtta
cacctttaccgactacgccatgaactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggagtgatcagcacct
tcagcggtaacacaaacttcaaccagaagttcaagggcagagtcaccatgaccacagacacatccacgagcacagcctac
atggagctgaggagcctgagatctgacgacacggccgtgtattactgtgcgagaagcgactactacggcccatacttcga
ctactggggccagggcaccaccctgaccgtgtccagc (SEQ ID NO: 439)
(amino acids)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYAMNWVRQAPGQGLEWMGVISTFSGNTNFNQKFKGRVTMTTDTSTSTAY
MELRSLRSDDTAVYYCARSDYYGPYFDYWGQGTTLTVSS (SEQ IDNO: 440)
Humanized C3 heavy chainvariable framework region 1 (FWR1) acid sequence:
(DNA)
caggttcagctggtgcagtctggagctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggtta
cacctttacc (SEQ ID NO:441)
(amino acids)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT(SEQ ID NO: 442)
Humanized C3 heavy chainvariable complementarity determining regions 1 (CDR1) se
quence :
(DNA)
gactacgccatgaac (SEQ ID NO: 443)
(amino acids)
DYAMN (SEQ ID NO: 444)
Humanized C3 heavy chainvariable framework region 2 (FWR2) acid sequence:
(DNA)
tgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatggga(SEQ ID NO: 445)
(amino acids)
WVRQAPGQGLEWMG (SEQ ID NO: 446)
Humanized C3 heavy chainvariable complementarity determining regions 2 (CDR2) se
quence :
(DNA)
gtgatcagcaccttcagcggtaacacaaacttcaaccagaagttcaagggc(SEQ ID NO: 447)
(amino acids)
VI STFSGNTNFNQKFKG (SEQ ID NO:448)
Humanized C3 heavy chainvariable framework region 3 (FWR3) acid sequence:
(DNA)
agagtcaccatgaccacagacacatccacgagcacagcctacatggagctgaggagcctgagatctgacgacacggccgt
gtattactgtgcgaga (SEQ ID NO: 449)
(amino acids)
RVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAR(SEQ ID NO: 450)
Humanized C3 heavy chainvariable complementarity determining regions 3 (CDR3) se
quence :
(DNA)
agcgactactacggcccatacttcgactac(SEQ ID NO: 451)
(amino acids)
SDYYGPYFDY (SEQ ID NO: 452)
Humanized C3 IgGl heavy chainsequence
(DNA)
caggttcagctggtgcagtctggagctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggtta
cacctttaccgactacgccatgaactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggagtgatcagcacct
tcagcggtaacacaaacttcaaccagaagttcaagggcagagtcaccatgaccacagacacatccacgagcacagcctac
atggagctgaggagcctgagatctgacgacacggccgtgtattactgtgcgagaagcgactactacggcccatacttcga
ctactggggccagggcaccaccctgaccgtgtccagcgctagcaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcct
ccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtgg
aactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgt
ggtgacagtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtgg
acaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccg
tcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtgga
cgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgc
gggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggag
tacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgaga
accacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggct
tctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctg
gactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatg
ctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatgataa (SEQ I
D NO: 453)
(amino acids)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYAMNWVRQAPGQGLEWMGVISTFSGNTNFNQKFKGRVTMTTDTSTSTAY
MELRSLRSDDTAVYYCARSDYYGPYFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW
NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGP
SVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGK
EYKCKVSNKALPAP IEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPP
VLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* * (SEQ ID NO: 454)
Humanized C3 IgG2 heavy chainsequence
(DNA)
caggttcagctggtgcagtctggagctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggtta
cacctttaccgactacgccatgaactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggagtgatcagcacct
tcagcggtaacacaaacttcaaccagaagttcaagggcagagtcaccatgaccacagacacatccacgagcacagcctac
atggagctgaggagcctgagatctgacgacacggccgtgtattactgtgcgagaagcgactactacggcccatacttcga
ctactggggccagggcaccaccctgaccgtgtccagcgcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgct
ccaggagcacctccgagagcacagccgccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtgg
aactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgt
ggtgaccgtgccctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtgg
acaagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctc
ttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacga
agaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagcagt
tcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgttgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaag
gtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgta
caccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcg
acatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggc
tccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgca
tgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatagtaa (SEQ ID NO: 455)
(amino acids)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYAMNWVRQAPGQGLEWMGVISTFSGNTNFNQKFKGRVTMTTDTSTSTAY
MELRSLRSDDTAVYYCARSDYYGPYFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSW
NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFL
FPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCK
VSNKGLPAPIEKTI SKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDS
DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* * ( SEQ ID NO:456)
Humanized C3 heavy chain IgGlgBLOCK sequence:
(DNA)
tgctctgggttccaggttccactggtgacgcggcccagccggcccaggttcagctggtgcagtctggagctgaggtgaag
aagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggttacacctttaccgactacgccatgaactgggtgcgaca
ggcccctggacaagggcttgagtggatgggagtgatcagcaccttcagcggtaacacaaacttcaaccagaagttcaagg
gcagagtcaccatgaccacagacacatccacgagcacagcctacatggagctgaggagcctgagatctgacgacacggcc
gtgtattactgtgcgagaagcgactactacggcccatacttcgactactggggccagggcaccaccctgaccgtgtccag
cgctagcaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggct
gcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagc (SEQ ID NO: 45
7)
Mouse C3 Light Chain variableregion sequence:
(DNA)
gatgttttgatgacccaaactccactctccctgcctgtcagtcttggagatcaagcctccatctcttgcagatctagtca
gaccattgtacatagtaatggaaacacctatttagaatggtacctgcagaaaccaggccagtctccaaagctcctgatct
acaaagtttccaaccgattttctggggtcccagacaggttcagtggcagtggatcagggacagatttcacactcaagatc
aacagagtggaggctgaggatctgggagtttattactgetttcaaggttcacatgttccattcacgttcggctcggggac
aaagttggaaataaaa (SEQ ID NO: 458)
(amino acids)
DVLMTQTPLSLPVSLGDQAS ISCRSSQTIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLK
INRVEAEDLGVYYCFQGSHVPFTFGSGTKLEIK (SEQ ID NO: 459)
Mouse C3 light chain variableframework region 1 (FWR1) sequence :
(DNA)
gatgttttgatgacccaaactccactctccctgcctgtcagtcttggagatcaagcctccatctcttgc(SEQ ID NO:
460)
(amino acids)
DVLMTQTPLSLPVSLGDQAS ISC (SEQ IDNO: 461)
Mouse C3 light chain variablecomplementarity determining regions 1 (CDR1) sequen
ce :
(DNA)
agatctagtcagaccattgtacatagtaatggaaacacctatttagaa(SEQ ID NO: 462)
(amino acids)
RSSQTIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO:463)
Mouse C3 light chain variableframework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
tggtacctgcagaaaccaggccagtctccaaagctcctgatctac(SEQ ID NO: 464)
(amino acids)
WYLQKPGQSPKLLIY (SEQ ID NO: 465)
Mouse C3 light chain variablecomplementarity determining regions 2 (CDR2) sequen
ce :
(DNA)
aaagtttccaaccgattttct (SEQ IDNO: 466)
(amino acids)
KVSNRFS (SEQ ID NO: 467)
Mouse C3 light chain variableframework region 3 (FWR3) sequence:
(DNA)
ggggtcccagacaggttcagtggcagtggatcagggacagatttcacactcaagatcaacagagtggaggctgaggatct
gggagtttattactgc (SEQ ID NO: 468)
(amino acids)
GVPDRFSGSGSGTDFTLKINRVEAEDLGVYYC(SEQ ID NO : 469 )
Mouse C3 light chain variablecomplementarity determining regions 3 (CDR3) sequen
ce :
(DNA)
tttcaaggttcacatgttccattcacg (SEQID NO: 470)
(amino acids)
FQGSHVPFT (SEQ ID NO: 471)
IGKV2-29*03 light chain variableregion sequence:
(DNA)
gatattgtgatgacccagactccactctctctgtccgtcacccctggacagccggcctccatctcctgcaagtctagtca
gagcctcctgcatagtgatggaaagacctatttgtattggtacctgcagaagccaggccagtctccacagctcctgatct
atgaagtttccagccggttctctggagtgccagataggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcacactgaaaatc
agccgggtggaggctgaggatgttggggtttattactgcatgcaaggtatacaccttcct (SEQ ID NO: 472)
(amino acids)
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLLHSDGKTYLYWYLQKPGQSPQLLIYEVSSRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKI
SRVEAEDVGVYYCMQGIHLP (SEQ ID NO: 473)
IGKV2-29*03 light chain variableframework region 1 (FWR1) acid sequence:
(DNA)
gatattgtgatgacccagactccactctctctgtccgtcacccctggacagccggcctccatctcctgc(SEQ ID NO:
474)
(amino acids)
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISC (SEQ IDNO: 475)
IGKV2-29*03 light chain variablecomplementarity determining regions 1 (CDR1) seq
uence:
(DNA)
aagtctagtcagagcctcctgcatagtgatggaaagacctatttgtat(SEQ ID NO: 476)
(amino acids)
KSSQSLLHSDGKTYLY (SEQ ID NO:477)
IGKV2-29*03 light chain variableframework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
tggtacctgcagaagccaggccagtctccacagctcctgatctat(SEQ ID NO: 478)
(amino acids)
WYLQKPGQSPQLLIY (SEQ ID NO: 479)
IGKV2-29*03 light chain variablecomplementarity determining regions 2 (CDR2) seq
uence :
(DNA)
gaagtttccagccggttc (SEQ ID NO:480)
(amino acids)
EVSSRFS (SEQ ID NO : 481 )
IGKV2-29*03 light chain variableframework region 3 (FWR3) sequence:
(DNA)
ggagtgccagataggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcacactgaaaatcagccgggtggaggctgaggatgt
tggggtttattactgc (SEQ ID NO: 482)
(amino acids)
GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC (SEQ ID NO: 483)
IGKV2-29*03 light chain variablecomplementarity determining regions3 (CDR3) sequ
ence :
(DNA)
atgcaaggtatacaccttcct (SEQ ID NO:484)
(amino acids)
MQGIHLP (SEQ ID NO: 485)
Humanized C3 light chainvariable region sequence:
(DNA)
gatattgtgatgacccagactccactctctctgtccgtcacccctggacagccggcctccatctcctgcaggtctagtca
gaccattgtccatagtaatggaaacacctatttggagtggtacctgcagaagccaggccagtctccacagctcctgatct
ataaggtttccaaccggttctctggagtgccagataggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcacactgaaaatc
agccgggtggaggctgaggatgttggggtttattactgettccaaggtagccacgtgcctttcaccttcggcggagggac
caaggtggagatcaaacgaact (SEQ ID NO: 486)
(amino acids)
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQTIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKI
SRVEAEDVGVYYCFQGSHVPFTFGGGTKVEIKRT (SEQ ID NO: 487)
Humanized C3 light chainvariable framework region 1 (FWR1) acid sequence:
(DNA)
gatattgtgatgacccagactccactctctctgtccgtcacccctggacagccggcctccatctcctgc(SEQ ID NO:
488)
(amino acids)
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISC (SEQ IDNO : 489 )
Humanized C3 light chainvariable complementarity determining regions 1 (CDR1) se
quence :
(DNA)
ggtctagtcagaccattgtccatagtaatggaaacacctatttggag(SEQ ID NO: 490)
(amino acids)
RSSQTIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO:491)
Humanized C3 light chainvariable framework region 2 (FWR2) acid sequence:
(DNA)
tggtacctgcagaagccaggccagtctccacagctcctgatctat(SEQ ID NO: 492)
(amino acids)
WYLQKPGQSPQLLIY (SEQ ID NO: 493)
Humanized C3 light chainvariable complementarity determining regions 2 (CDR2) se
quence :
(DNA)
aaggtttccaaccggttctct (SEQ IDNO: 494)
(amino acids)
KVSNRFS (SEQ ID NO: 495)
Humanized C3 light chainvariable framework region 3 (FWR3) acid sequence:
(DNA)
ggagtgccagataggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcacactgaaaatcagccgggtggaggctgaggatgt
tggggtttattactgc (SEQ ID NO: 496)
(amino acids)
GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC (SEQ ID NO: 497)
Humanized C3 light chainvariable complementarity determining regions 3 (CDR3) se
quence :
(DNA)
ttccaaggtagccacgtgcctttcacc (SEQID NO: 498)
(amino acids)
FQGSHVPFT (SEQ ID NO : 499 )
Humanized C3 lambda light chainsequence
(DNA)
gatattgtgatgacccagactccactctctctgtccgtcacccctggacagccggcctccatctcctgcaggtctagtca
gaccattgtccatagtaatggaaacacctatttggagtggtacctgcagaagccaggccagtctccacagctcctgatct
ataaggtttccaaccggttctctggagtgccagataggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcacactgaaaatc
agccgggtggaggctgaggatgttggggtttattactgettccaaggtagccacgtgcctttcaccttcggcggagggac
caaggtggagatcaaacgaactggtcagcccaaggctgccccctcggtcactctgttcccgccctcctctgaggagcttc
aagccaacaaggccacactggtgtgtctcataagtgacttctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagc
agccccgtcaaggcgggagtggagaccaccacaccctccaaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctatctgag
cctgacgcctgagcagtggaagtcccacagaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacag
tggcccctacagaatgttcatagtaa (SEQ ID NO: 500)
(amino acids)
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQTIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKI
SRVEAEDVGVYYCFQGSHVPFTFGGGTKVEIKRTGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADS
SPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS * * (SEQ ID NO:501)
Humanized C3 Kappa light chain
(DNA)
gatattgtgatgacccagactccactctctctgtccgtcacccctggacagccggcctccatctcctgcaggtctagtca
gaccattgtccatagtaatggaaacacctatttggagtggtacctgcagaagccaggccagtctccacagctcctgatct
ataaggtttccaaccggttctctggagtgccagataggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcacactgaaaatc
agccgggtggaggctgaggatgttggggtttattactgettccaaggtagccacgtgcctttcaccttcggcggagggac
caaggtggagatcaaacgaactacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctg
gaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctc
caatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgct
gagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaaga
gcttcaacaggggagagtgttagtaa (SEQ ID NO: 502)
(amino acids)
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQTIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKI
SRVEAEDVGVYYCFQGSHVPFTFGGGTKVEIKRTTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNAL
QSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC* * (SEQ ID NO: 503)
Humanized C3 Kappa light gBLOCK sequence:
(DNA)
agctggctaggtaagcttggtaccgagctcggatccacgccaccatggagacagacacactcctgctatgggtactgctg
ctctgggttccaggttccactggtgacgatattgtgatgacccagactccactctctctgtccgtcacccctggacagcc
ggcctccatctcctgcaggtctagtcagaccattgtccatagtaatggaaacacctatttggagtggtacctgcagaagc
caggccagtctccacagctcctgatctataaggtttccaaccggttctctggagtgccagataggttcagtggcagcggg
tcagggacagatttcacactgaaaatcagccgggtggaggctgaggatgttggggtttattactgettccaaggtagcca
cgtgcctttcaccttcggcggagggaccaaggtggagatcaaacgaactacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcc
cgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaa
gtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcac
ctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatc
agggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgttagtaagtttaaacccgctgatcagcctcgact
gtgccttctagttgc (SEQ ID NO:504)
Mouse C8 heavy chain variableregion sequence
(DNA)
gaagtgatggtcgtggaaagcggcggtggtctggtaaagccggggggatcccttaagctttcttgcgccgcatccgggtt
cacgttctccggctatgccatgtcctgggtccgacagactcccgaaaagcgcttggaatgggtggccactatctcctccg
gggggacgtacatctactaccccgacagtgtgaaaggaagatttacaatatctcgcgacaacgcaaaaaataccttgtat
cttcaaatgagctccctgcggtcagaggacactgccatgtactattgcgcccgcctgggcggcgacaattactatgagta
t(SEQ ID NO:505)
(amino acids)
EVMVVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSGYAMSWVRQTPEKRLEWVATI SSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNT
LYL QMSSLRSEDTAMYYCARLGGDNYYEY (SEQ ID NO: 506)
Mouse C8 heavy chain variablecomplementarity determining region 1 (CDR1) sequence :
(DNA)
ggctatgccatgtcc (SEQ ID NO: 507)
(amino acids)
GYAMS (SEQ ID NO: 508)
Mouse C8 heavy chain variablecomplementarity determining region 2 (CDR2) sequence :
(DNA)
actatctcctccggggggacgtacatctactaccccgacagtgtgaaagga(SEQ ID NO: 509)
(amino acids)
T I SSGGTYIYYPDSVKG (SEQ ID NO:510)
Mouse C8 heavy chain variablecomplementarity determining region 3 (CDR3) sequenc
e :
(DNA)
ctgggcggcgacaattactatgagtat (SEQID NO: 511)
(amino acids)
LGGDNYYEY (SEQ ID NO: 512)
IGHV3-21*04 heavy chain variableregion sequence:
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtagctatagcatgaactgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcatccattagtagta
gtagtagttacatatactacgcagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcga (SEQ ID NO: 513)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSSSSYIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLY
LQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 514)
IGHV3-21*04 heavy chain variableframework region 1 (FWR1) sequence:
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagt (SEQ ID NO: 515)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO: 516)
IGHV3-21*04 heavy chain variablecomplementarity determining regions 1 (COR1) seq
uence :
(DNA)
agctatagcatgaac (SEQ ID NO: 517)
(amino acids)
SYSMN (SEQ ID NO: 518)
IGHV3-21*04 heavy chain variableframework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
tgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtc(SEQ ID NO: 519)
(amino acids)
WVRQAPGKGLEWV (SEQ ID NO: 520)
IGHV3-21*04 heavy chain variablecomplementarity determining regions 2 (COR2) seq
uence :
(DNA)
tcatccattagtagtagtagtagttacatatactacgcagactcagtgaagggc(SEQ ID NO: 521)
(amino acids)
SSISSSSSYIYYADSVKG (SEQ ID NO:522)
IGHV3-21*04 heavy chain variableframework region 3 (FWR3) sequence:
(DNA)
cgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgt
gtattactgtgcga (SEQ ID NO: 523)
(amino acids)
RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 524)
Humanized C8 heavy chainvariable region sequence:
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccctgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagactgggcggcgataactattatgaata
ttggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctcc (SEQ ID NO: 525)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
Y LQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYWGKGTTVTVSS (SEQ IDNO: 526)
Humanized C8 heavy chainvariable framework region 1 (FWR1) sequence:
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagt (SEQ ID NO: 527)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS (SEQID NO: 528)
Humanized C8 heavy chainvariable complementarity determining region 1 (CDR1) seq
uence :
(DNA)
ggctatgccatgagc (SEQ ID NO: 529)
(amino acids)
GYAMS (SEQ ID NO: 530)
Humanized C8 heavy chainvariable framework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
tgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctca(SEQ ID NO: 531)
(amino acids)
WVRQAPGKGLEWVS (SEQ ID NO: 532)
Humanized C8 heavy chainvariable complementarity determining region 2 (CDR2) seq
uence :
(DNA)
accattagtagtggcggaacctacatatactaccctgactcagtgaagggc(SEQ ID NO: 533)
(amino acids)
TI SSGGTYIYYPDSVKG (SEQ ID NO:534)
Humanized C8 heavy chainvariable framework region 3 (FWR3) sequence:
(DNA)
cgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgt
gtattactgtgcgaga (SEQ ID NO: 535)
(amino acids)
RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 536)
Humanized C8 heavy chainvariable complementarity determining region 3 (CDR3) seq
uence :
(DNA)
ctgggcggcgataactattatgaatat (SEQID NO: 537)
(amino acids)
LGGDNYYEY (SEQ ID NO: 538)
Humanized C8 IgGl heavy chainsequence
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccctgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagactgggcggcgataactattatgaata
ttggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccgctagcaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctcca
agagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaac
tcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggt
gacagtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggaca
agaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtca
gtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgt
gagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcggg
aggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtac
aagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaacc
acaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttct
atcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggac
tccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctc
cgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatgataa (SEQ ID N
O: 539)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YL QMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYWGKGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS
WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG
PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGK
EYKCKV SNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTP
PVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* * (SEQ ID NO: 540)
Humanized C8 IgG2 heavy chainsequence
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccctgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagactgggcggcgataactattatgaata
ttggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccgcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctcca
ggagcacctccgagagcacagccgccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaac
tcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggt
gaccgtgccctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggaca
agacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttc
cccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaaga
ccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagcagttca
acagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgttgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtc
tccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacac
cctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgaca
tcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctcc
ttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatga
ggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatagtaa (SEQ ID NO: 541)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYWGKGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSW
NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFL
FPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCK
VSNKG LPAPIEKTI SKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDS
DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* * (SEQ ID NO: 542)
Mouse C8 light chain variableregion sequence
(DNA)
gacatcgtcattacgcagacccctgccagtcttgccgtttctctgggccagagggccactatcagttacagggcgagtaa
gtctgtgagtaccagcggctatagttacatgcattggaaccagcagaaaccgggacagccaccacgcctgcttatttatc
tggtgtctaatcttgagtccggggtgcccgccaggttcagcggcagcggctctgggaccgacttcacactcaacattcat
ccagtggaagaagaggacgctgctacatactactgtcaacacattcgggaactgaccaggagtgaa (SEQ ID NO:54
3) (amino acids)
DIVITQTPASLAVSLGQRATISYRASKSVSTSGYSYMHWNQQKPGQPPRLLIYLVSNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIH
PVEEEDAATYYCQHIRELTRSE (SEQ ID NO: 544)
Mouse C8 light chain variablecomplementarity determining region 1 (CDR1) sequenc
e :
(DNA)
agggcgagtaagtctgtgagtaccagcggctatagttacatgcat(SEQ ID NO: 545)
(amino acids)
RASKSVSTSGYSYMH (SEQ ID NO: 546)
Mouse C8 light chain variablecomplementarity determining region 2 (CDR2) sequenc
e :
(DNA)
ctggtgtctaatcttgagtcc (SEQ IDNO: 547)
(amino acids)
LVSNLES (SEQ ID NO: 548)
Mouse C8 light chain variablecomplementarity determining region 3 (CDR3) sequenc
e :
(DNA)
caacacattcgggaactgaccaggagtgaa(SEQ ID NO: 549)
(amino acids)
QHIRELTRSE (SEQ ID NO: 550)
NCBI germline z00023 light chainvariable region sequence:
(DNA)
gacatcgtgatgacccagtctccagactccctggctgtgtctctgggcgagagggccaccatcaactgcaagtccagcca
gagtgttttatacagctccaacaataagaactacttagcttggtaccagcagaaaccaggacagcctcctaagctgctca
tttactgggcatctacccgggaatccggggtccctgaccgattcagtggcagcgggtctgggacagatttcactctcacc
atcagcagcctgcaggctgaagatgtggcagtttattactgtcagcaatattatagtactcct (SEQ ID NO: 551)
(amino acids)
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLT
ISSLQAEDVAVYYCQQYYSTP (SEQ ID NO: 552)
NCBI germline z00023 light chainvariable framework region 1 (FWR1) acid sequence
:
(DNA)
gacatcgtgatgacccagtctccagactccctggctgtgtctctgggcgagagggccaccatcaactgc(SEQ ID NO:
553)
(amino acids)
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC (SEQ IDNO: 554)
NCBI germline z00023 light chainvariable complementarity determining regions 1 (
CDR1 ) sequence :
(DNA)
aagtccagccagagtgttttatacagctccaacaataagaactacttagct(SEQ ID NO: 555)
(amino acids)
KSSQSVLYSSNNKNYLA (SEQ ID NO:556)
NCBI germline z00023 light chainvariable framework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
tggtaccagcagaaaccaggacagcctcctaagctgctcatttac(SEQ ID NO: 557)
(amino acids)
WYQQKPGQPPKLLIY (SEQ ID NO: 558)
NCBI germline z00023 light chainvariable complementarity determining regions 2 (
CDR2 ) sequence :
(DNA)
tgggcatctacccgggaatcc (SEQ IDNO: 559)
(amino acids)
WASTRES (SEQ ID NO: 560)
NCBI germline z00023 light chainvariable framework region 3 (FWR3) sequence:
(DNA)
ggggtccctgaccgattcagtggcagcgggtctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcaggctgaagatgt
ggcagtttattactgt (SEQ ID NO: 561)
(amino acids)
GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC (SEQ ID NO: 562)
NCBI germline z00023 light chainvariable complementarity determining regions3 (C
DR3) sequence :
(DNA)
cagcaatattatagtactcct (SEQ IDNO: 563)
(amino acids)
QQYYSTP (SEQ ID NO: 564)
Humanized C8 light chainvariable region sequence
(DNA)
gacatcgtgatgacccagtctccagactccctggctgtgtctctgggcgagagggccaccatcaactgcagggccagcaa
gagtgttagcaccagcggctacagctacatgcactggtaccagcagaaaccaggacagcctcctaagctgctcatttacc
tggtgtctaacctggaatccggggtccctgaccgattcagtggcagcgggtctgggacagatttcactctcaccatcagc
agcctgcaggctgaagatgtggcagtttattactgtcaacacattcgggaactgaccaggagtgaattcggcggagggac
caaggtggagatcaaacgaact (SEQ ID NO: 565)
(amino acids)
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLVSNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIS
SLQAEDVAVYYCQHIRELTRSEFGGGTKVEIKRT (SEQ ID NO : 566 )
Humanized C8 light chainvariable framework region 1 (FWR1) sequence:
(DNA)
gacatcgtgatgacccagtctccagactccctggctgtgtctctgggcgagagggccaccatcaactgc(SEQ ID NO:
567)
(amino acids)
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC (SEQ IDNO: 568)
Humanized C8 light chainvariable complementarity determining region 1 (CDR1) seq
uence :
(DNA)
agggccagcaagagtgttagcaccagcggctacagctacatg(SEQ ID NO: 569)
(amino acids)
RASKSVSTSGYSYM (SEQ ID NO: 570)
Humanized C8 light chainvariable framework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
cactggtaccagcagaaaccaggacagcctcctaagctgctcatttac(SEQ ID NO: 571)
(amino acids)
HWYQQKPGQPPKLLIY (SEQ ID NO:572)
Humanized C8 light chainvariable complementarity determining region 2 (CDR2) seq
uence :
(DNA)
ctggtgtctaacctggaatcc (SEQ IDNO: 573)
(amino acids)
LVSNLES (SEQ ID NO: 574)
Humanized C8 light chainvariable framework region 3 (FWR3) sequence:
(DNA)
ggggtccctgaccgattcagtggcagcgggtctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcaggctgaagatgt
ggcagtttattactgt (SEQ ID NO: 575)
(amino acids)
GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC (SEQ ID NO: 576)
Humanized C8 light chainvariable complementarity determining region 3 (CDR3) seq
uence :
(DNA)
caacacattcgggaactgaccaggagtgaa(SEQ ID NO: 577)
(amino acids)
QHIRELTRSE (SEQ ID NO: 578)
Humanized C8 Lambda light chainsequence
(DNA)
gacatcgtgatgacccagtctccagactccctggctgtgtctctgggcgagagggccaccatcaactgcagggccagcaa
gagtgttagcaccagcggctacagctacatgcactggtaccagcagaaaccaggacagcctcctaagctgctcatttacc
tggtgtctaacctggaatccggggtccctgaccgattcagtggcagcgggtctgggacagatttcactctcaccatcagc
agcctgcaggctgaagatgtggcagtttattactgtcaacacattcgggaactgaccaggagtgaattcggcggagggac
caaggtggagatcaaacgaactggtcagcccaaggctgccccctcggtcactctgttcccgccctcctctgaggagcttc
aagccaacaaggccacactggtgtgtctcataagtgacttctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagc
agccccgtcaaggcgggagtggagaccaccacaccctccaaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctatctgag
cctgacgcctgagcagtggaagtcccacagaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacag
tggcccctacagaatgttcatagtaa (SEQ ID NO: 579)
(amino acids)
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLVSNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIS
SLQAEDVAVYYCQHIRELTRSEFGGGTKVEIKRTGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADS
SPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS * * (SEQ ID NO: 580
)
Humanized C8 Kappa light chainsequence
(DNA)
gacatcgtgatgacccagtctccagactccctggctgtgtctctgggcgagagggccaccatcaactgcagggccagcaa
gagtgttagcaccagcggctacagctacatgcactggtaccagcagaaaccaggacagcctcctaagctgctcatttacc
tggtgtctaacctggaatccggggtccctgaccgattcagtggcagcgggtctgggacagatttcactctcaccatcagc
agcctgcaggctgaagatgtggcagtttattactgtcaacacattcgggaactgaccaggagtgaattcggcggagggac
caaggtggagatcaaacgaactacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctg
gaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctc
caatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgct
gagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaaga
gcttcaacaggggagagtgttagtaa (SEQ ID NO: 581)
(amino acids)
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLVSNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIS
SLQAEDVAVYYCQHIRELTRSEFGGGTKVEIKRTTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNAL
QSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC* * (SEQ ID NO: 582)
Humanized C8 Kappa light chaingBLOCk sequence:
(DNA)
agctggctaggtaagcttggtaccgagctcggatccacgccaccatggagacagacacactcctgctatgggtactgctg
ctctgggttccaggttccactggtgacgacatcgtgatgacccagtctccagactccctggctgtgtctctgggcgagag
ggccaccatcaactgcagggccagcaagagtgttagcaccagcggctacagctacatgcactggtaccagcagaaaccag
gacagcctcctaagctgctcatttacctggtgtctaacctggaatccggggtccctgaccgattcagtggcagcgggtct
gggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcaggctgaagatgtggcagtttattactgtcaacacattcgggaact
gaccaggagtgaattcggcggagggaccaaggtggagatcaaacgaactacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcc
cgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaa
gtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcac
ctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatc
agggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgttagtaagtttaaacccgctgatcagcctcgact
gtgccttctagttgc (SEQ ID NO:583)
CAR-T E6 CD8 sequence:
(DNA)
gaggtccagctggttgagagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatt
tactttcagccgatatgggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccgggg
ggggcacttacatctattaccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtat
ttgcagatgaattctctgagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgacta
cggtatggactattggggacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtg
gggggggcagcgagatagtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgc
tctgctacctcctcagtgtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtac
ctctaatctggcctcaggtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcc
tggagcctgaagactttgccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggtt
gaaattaaaacgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagacc
agaagcctgtaggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccc
cgctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgctgataa (SEQ ID NO: 584)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNTL
YLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLT
CSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSSPFTFGSGTK
VEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC* *(SEQ
ID NO:585)
CAR-T C2 CD8 CD8 sequence:
N-CD81s-huMNC2scFv-CD8ecdfragment- CD8 transmembrane-C
(DNA)
gaagtgcagctcgtagagagtggcgggggactggtgaagcccggtggaagcctcagactcagttgcgccgcctcaggttt
cactttttcaggttacgccatgtcctgggtaagacaggcaccggggaaaggactcgagtgggtgtctactatcagctcag
gaggcacttatatatattatcctgactctgtaaaaggccgatttacgatttctcgcgacaatgcaaagaactccctctac
ctccaaatgaacagtcttagggcagaagacactgctgtatactattgtgcacgcctcggcggcgacaactactacgagta
ctttgacgtgtgggggaaagggactaccgtgacagtttcaagcggaggaggtggctcaggtggaggcgggtcaggggggg
gaggaagtgatattgtgctcacacaatccccagcctccctggctgtgtctcccggccaacgcgctacaattacatgtcgg
gcctccaaaagcgtgagcaccagcggctacagctacatgcactggtatcaacagaaaccaggacaaccccccaaactgtt
gatttatctcgcttcaaacttggagtccggcgtgcctgcgcgcttttcagggagtgggagcggcacagattttacgctga
ctatcaaccccgtagaagcaaacgatacagcgaattattattgtcaacattcccgggaactcccctttacgttcggcggg
ggcacaaaggtcgaaattaagagaaccacgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagcca
acccctgtctctgagaccagaagcctgtaggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtg
atatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgctgataa
(SEQ ID
NO: 586)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATITC
RASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPFTFG
GGTKVEIKRTTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC*
* (SEQ ID NO:587)
CD8/4-1BB sequence
N- CD8 transmembrane- 4-lBB-C
(DNA)
acgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctg
taggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccccgctcgcag
gcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacattttt
aagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaagaggaagacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaagg
agggtgcgaactgtgataa (SEQ ID NO: 588)
(amino acids)
TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIF
KQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL* * (SEQ ID NO: 589)
CD8/CD28 sequence
N- CD8 transmembrane- CD28-C
(DNA)
acgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctg
taggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccccgctcgcag
gcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcagaagcaagcggtctcggctcctgcattctgat
tacatgaacatgaccccaagaagaccaggccccaccaggaaacattaccagccctacgctccgccacgcgacttcgctgc
ctaccggtcctgataa (SEQ ID NO: 590)
(amino acids)
TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCRSKRSRLLHSD
YMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS * * (SEQ ID NO: 591)
CD8/CD3z sequence:
N- CD8 transmembrane- CD3zeta-C
(DNA)
acgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctg
taggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccccgctcgcag
gcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgccgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcct
gcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacg
gagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaag
ataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcag
ggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO
:592)
(amino acids)
TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCRVKFSRSADAP
AYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQ
GLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 593)
CD8/CD28/CD3z sequence:
N- CD8 transmembrane- CD28-CD3zeta-C
(DNA)
acgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctg
taggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccccgctcgcag
gcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcagaagcaagcggtctcggctcctgcattctgat
tacatgaacatgaccccaagaagaccaggccccaccaggaaacattaccagccctacgctccgccacgcgacttcgctgc
ctaccggtcccgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagc
tgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgc
aggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaa
gggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccc
tccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 594)
(amino acids)
TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCRSKRSRLLHSD
YMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPR
RKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO:595
)
CD8/4-lBB/CD3z sequence:
N- CD8 transmembrane- 4-1BB-CD3zeta-C
(DNA)
acgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctg
taggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccccgctcgcag
gcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacattttt
aagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaagaggaagacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaagg
agggtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacg
agctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcct
cgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaat
gaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacg
ccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 596)
(amino acids)
TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIF
KQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKP
RRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO:59
7)
CD8/CD28/4-lBB/CD3z sequence:
N- CD8 transmembrane- CD28-4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
acgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctg
taggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccccgctcgcag
gcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcagaagcaagcggtctcggctcctgcattctgat
tacatgaacatgaccccaagaagaccaggccccaccaggaaacattaccagccctacgctccgccacgcgacttcgctgc
ctaccggtccaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaag
aggaagacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagcc
gacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgtt
ggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagt
tgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggc
ctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (
SEQ ID
NO: 598)
(amino acids)
TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCRSKRSRLLHSD
YMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSA
DAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDG
LYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 599)
CAR-T C3 CD8/CD8/4-lBB/CD3zsequence:
N-CD81s-huMNC3scFv-CD8ecdfragment- CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccacaggttcagctggtgca
gtctggagctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggttacacctttaccgactacg
ccatgaactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggagtgatcagcaccttcagcggtaacacaaac
ttcaaccagaagttcaagggcagagtcaccatgaccacagacacatccacgagcacagcctacatggagctgaggagcct
gagatctgacgacacggccgtgtattactgtgcgagaagcgactactacggcccatacttcgactactggggccagggca
ccaccctgaccgtgtccagcggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgatattgtgatgacc
cagactccactctctctgtccgtcacccctggacagccggcctccatctcctgcaggtctagtcagaccattgtccatag
taatggaaacacctatttggagtggtacctgcagaagccaggccagtctccacagctcctgatctataaggtttccaacc
ggttctctggagtgccagataggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcacactgaaaatcagccgggtggaggct
gaggatgttggggtttattactgettccaaggtagccacgtgcctttcaccttcggcggagggaccaaggtggagatcaa
acgaactacgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccag
aagcctgtaggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccccg
ctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcaaaaggggccgcaaaaaactccttta
catttttaagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaagaggaagacgggtgctcatgccgctttcctgaggagg
aggaaggagggtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactg
tacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcgg
caagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgaga
tcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacg
tatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 600)
(amino acids)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYAMNWVRQAPGQGLEWMGVISTFSGNTNFNQKFKGRVTMTTDTSTSTAY
MELRSLRSDDTAVYYCARSDYYGPYFDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPLSLSVTPGQPAS ISCRS
S QTIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPFTFG
GGTKVEIKRTTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCK
RGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRR
GRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SE
QID NO: 601)
C3 CAR gBLOCK 1 sequence:
(DNA)
atccacgctgttttgacctccatagaagattctagagctagctgtagagcttggtaccgagggccaccatggccctgccc
gtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccacaggttcagctggtgcagtctggagctga
ggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggttacacctttaccgactacgccatgaactggg
tgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggagtgatcagcaccttcagcggtaacacaaacttcaaccagaag
ttcaagggcagagtcaccatgaccacagacacatccacgagcacagcctacatggagctgaggagcctgagatctgacga
cacggccgtgtattactgtgcgagaagcgactactacggcccatacttcgactactggggccagggcaccaccctgaccg
tgtccagcggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgatattgtgatgacccagactccactc
tctctgt(SEQ ID NO: 602)
C3 CAR gBLOCK 2 sequence:
(DNA)
tattgtgatgacccagactccactctctctgtccgtcacccctggacagccggcctccatctcctgcaggtctagtcaga
ccattgtccatagtaatggaaacacctatttggagtggtacctgcagaagccaggccagtctccacagctcctgatctat
aaggtttccaaccggttctctggagtgccagataggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcacactgaaaatcag
ccgggtggaggctgaggatgttggggtttattactgettccaaggtagccacgtgcctttcaccttcggcggagggacca
aggtggagatcaaacgaactacgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctg
tctctgagaccagaagcctgtaggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatcta
catttgggccccgctcgcaggcacatgtg (SEQ ID NO: 603)
E6 scFV gBLOCK 1 sequence:
(DNA)
tgctctgggttccaggttccactggtgacgcggcccagccggccgaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtc
aagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtaggtatggcatgagctgggtccgcca
ggctccagggaagaggctggagtgggtctcaaccattagtggcggaggcacctacatatactacccagactcagtgaagg
gccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacaccctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggct
gtgtattactgtaccagagataactatggccgcaactatgattatggcatggattattggggccagggcaccctggtgac
cgtgagcagcggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatcc (SEQ ID NO: 604)
E6 scFV gBLOCK 2 sequence:
(DNA)
ggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtc
tttgtctccaggggaaagagccaccctcacctgcagcgccaccagcagtgttagctacatccactggtaccaacagaggc
ctggccagagccccaggctcctcatctatagcacctccaacctggccagcggcatcccagccaggttcagtggcagtggg
tctgggagcgactacactctcaccatcagcagcctagagcctgaagattttgcagtttattactgtcagcagcgtagcag
ctcccctttcacctttggcagcggcaccaaagtggaaattaaaaccggtcatcatcaccatcaccactgataagtttaaa
cccgctgatcagcctcgactgtgccttctagt (SEQ ID NO: 605)
CAR-T C2 CD8/CD8/CD3z sequence:
N-CD81s-huMNC2scFv-CD8ecdfragment- CD8 transmembrane- CD3zeta-C
(DNA)
atggccttgccagtgacggccctgctgctgccattggctcttctgttgcacgctgccaggcctgaagtgcagctcgtaga
gagtggcgggggactggtgaagcccggtggaagcctcagactcagttgcgccgcctcaggtttcactttttcaggttacg
ccatgtcctgggtaagacaggcaccggggaaaggactcgagtgggtgtctactatcagctcaggaggcacttatatatat
tatcctgactctgtaaaaggccgatttacgatttctcgcgacaatgcaaagaactccctctacctccaaatgaacagtct
tagggcagaagacactgctgtatactattgtgcacgcctcggcggcgacaactactacgagtactttgacgtgtggggga
aagggactaccgtgacagtttcaagcggaggaggtggctcaggtggaggcgggtcaggggggggaggaagtgatattgtg
ctcacacaatccccagcctccctggctgtgtctcccggccaacgcgctacaattacatgtcgggcctccaaaagcgtgag
caccagcggctacagctacatgcactggtatcaacagaaaccaggacaaccccccaaactgttgatttatctcgcttcaa
acttggagtccggcgtgcctgcgcgcttttcagggagtgggagcggcacagattttacgctgactatcaaccccgtagaa
gcaaacgatacagcgaattattattgtcaacattcccgggaactcccctttacgttcggcgggggcacaaaggtcgaaat
taagagaaccacgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagac
cagaagcctgtaggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggcc
ccgctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgccgcgttaagttctcccgatcagc
cgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgt
tggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgag
ttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacgg
cctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa
(SEQ ID NO:606)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIY
YPDSVKGRFTI SRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSD
IVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINP
VEANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRTTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYI
WAPLAGTCGVLLLSLVITLYCRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLY
NELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 607)
CAR-T C2 CD8/CD8/CD28/CD3zsequence:
N-CD81s-huMNC2scFv-CD8ecdfragment- CD8 transmembrane- CD28- CD3zeta-C
(DNA)
atggccttgccagtgacggccctgctgctgccattggctcttctgttgcacgctgccaggcctgaagtgcagctcgtaga
gagtggcgggggactggtgaagcccggtggaagcctcagactcagttgcgccgcctcaggtttcactttttcaggttacg
ccatgtcctgggtaagacaggcaccggggaaaggactcgagtgggtgtctactatcagctcaggaggcacttatatatat
tatcctgactctgtaaaaggccgatttacgatttctcgcgacaatgcaaagaactccctctacctccaaatgaacagtct
tagggcagaagacactgctgtatactattgtgcacgcctcggcggcgacaactactacgagtactttgacgtgtggggga
aagggactaccgtgacagtttcaagcggaggaggtggctcaggtggaggcgggtcaggggggggaggaagtgatattgtg
ctcacacaatccccagcctccctggctgtgtctcccggccaacgcgctacaattacatgtcgggcctccaaaagcgtgag
caccagcggctacagctacatgcactggtatcaacagaaaccaggacaaccccccaaactgttgatttatctcgcttcaa
acttggagtccggcgtgcctgcgcgcttttcagggagtgggagcggcacagattttacgctgactatcaaccccgtagaa
gcaaacgatacagcgaattattattgtcaacattcccgggaactcccctttacgttcggcgggggcacaaaggtcgaaat
taagagaaccacgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagac
cagaagcctgtaggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggcc
ccgctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcagaagcaagcggtctcggctcct
gcattctgattacatgaacatgaccccaagaagaccaggccccaccaggaaacattaccagccctacgctccgccacgcg
acttcgctgcctaccggtcccgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactg
tacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcgg
caagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgaga
tcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacg
tatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 608)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI
VLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPV
EANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRTTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIW
APLAGTCGVLLLSLVITLYCRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYKQGQNQ
LYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKD
TYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 609)
CAR-T C2 CD8/CD8/4-lBB/CD3z sequence#13:
N-CD81s-huMNC2scFv-CD8ecdfragment- CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C (DNA)
atggccttgccagtgacggccctgctgctgccattggctcttctgttgcacgctgccaggcctgaagtgcagctcgtaga
gagtggcgggggactggtgaagcccggtggaagcctcagactcagttgcgccgcctcaggtttcactttttcaggttacg
ccatgtcctgggtaagacaggcaccggggaaaggactcgagtgggtgtctactatcagctcaggaggcacttatatatat
tatcctgactctgtaaaaggccgatttacgatttctcgcgacaatgcaaagaactccctctacctccaaatgaacagtct
tagggcagaagacactgctgtatactattgtgcacgcctcggcggcgacaactactacgagtactttgacgtgtggggga
aagggactaccgtgacagtttcaagcggaggaggtggctcaggtggaggcgggtcaggggggggaggaagtgatattgtg
ctcacacaatccccagcctccctggctgtgtctcccggccaacgcgctacaattacatgtcgggcctccaaaagcgtgag
caccagcggctacagctacatgcactggtatcaacagaaaccaggacaaccccccaaactgttgatttatctcgcttcaa
acttggagtccggcgtgcctgcgcgcttttcagggagtgggagcggcacagattttacgctgactatcaaccccgtagaa
gcaaacgatacagcgaattattattgtcaacattcccgggaactcccctttacgttcggcgggggcacaaaggtcgaaat
taagagaaccacgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagac
cagaagcctgtaggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggcc
ccgctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcaaaaggggccgcaaaaaactcct
ttacatttttaagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaagaggaagacgggtgctcatgccgctttcctgagg
aggaggaaggagggtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaa
ctgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatggg
cggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcg
agatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagat
acgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 610)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI
V LTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINP
VEANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRTTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYI
WAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQ
NQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTAT
KDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 611)
CAR-T C2 CD8/CD8/OX40/CD3zsequence:
N-CD81s-huMNC2scFv-CD8ecdfragment- CD8 transmembrane- OX40- CD3zeta-C
(DNA)
atggccttgccagtgacggccctgctgctgccattggctcttctgttgcacgctgccaggcctgaagtgcagctcgtaga
gagtggcgggggactggtgaagcccggtggaagcctcagactcagttgcgccgcctcaggtttcactttttcaggttacg
ccatgtcctgggtaagacaggcaccggggaaaggactcgagtgggtgtctactatcagctcaggaggcacttatatatat
tatcctgactctgtaaaaggccgatttacgatttctcgcgacaatgcaaagaactccctctacctccaaatgaacagtct
tagggcagaagacactgctgtatactattgtgcacgcctcggcggcgacaactactacgagtactttgacgtgtggggga
aagggactaccgtgacagtttcaagcggaggaggtggctcaggtggaggcgggtcaggggggggaggaagtgatattgtg
ctcacacaatccccagcctccctggctgtgtctcccggccaacgcgctacaattacatgtcgggcctccaaaagcgtgag
caccagcggctacagctacatgcactggtatcaacagaaaccaggacaaccccccaaactgttgatttatctcgcttcaa
acttggagtccggcgtgcctgcgcgcttttcagggagtgggagcggcacagattttacgctgactatcaaccccgtagaa
gcaaacgatacagcgaattattattgtcaacattcccgggaactcccctttacgttcggcgggggcacaaaggtcgaaat
taagagaaccacgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagac
cagaagcctgtaggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggcc
ccgctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgccggagggaccagaggctgccccc
cgatgcccacaagccccctgggggaggcagtttccggacccccatccaagaggagcaggccgacgcccactccaccctgg
ccaagatccgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctg
aatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcag
gaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagg
gggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctc
catatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 612)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI
VLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPV
EANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRTTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIW
APLAGTCGVLLLSLVITLYCRRDQRLPPDAHKPPGGGSFRTPIQEEQADAHSTLAKIRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNE
LNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDA
LHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 613)
CAR-T C2 CD8/CD8/CD28/OX40/CD3zsequence:
N-CD81s-huMNC2scFv-CD8ecdfragment- CD8 transmembrane- CD28- OX40- CD3zeta-C (DNA
)
atggccttgccagtgacggccctgctgctgccattggctcttctgttgcacgctgccaggcctgaagtgcagctcgtaga
gagtggcgggggactggtgaagcccggtggaagcctcagactcagttgcgccgcctcaggtttcactttttcaggttacg
ccatgtcctgggtaagacaggcaccggggaaaggactcgagtgggtgtctactatcagctcaggaggcacttatatatat
tatcctgactctgtaaaaggccgatttacgatttctcgcgacaatgcaaagaactccctctacctccaaatgaacagtct
tagggcagaagacactgctgtatactattgtgcacgcctcggcggcgacaactactacgagtactttgacgtgtggggga
aagggactaccgtgacagtttcaagcggaggaggtggctcaggtggaggcgggtcaggggggggaggaagtgatattgtg
ctcacacaatccccagcctccctggctgtgtctcccggccaacgcgctacaattacatgtcgggcctccaaaagcgtgag
caccagcggctacagctacatgcactggtatcaacagaaaccaggacaaccccccaaactgttgatttatctcgcttcaa
acttggagtccggcgtgcctgcgcgcttttcagggagtgggagcggcacagattttacgctgactatcaaccccgtagaa
gcaaacgatacagcgaattattattgtcaacattcccgggaactcccctttacgttcggcgggggcacaaaggtcgaaat
taagagaaccacgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagac
cagaagcctgtaggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggcc
ccgctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcagaagcaagcggtctcggctcct
gcattctgattacatgaacatgaccccaagaagaccaggccccaccaggaaacattaccagccctacgctccgccacgcg
acttcgctgcctaccggtcccggagggaccagaggctgccccccgatgcccacaagccccctgggggaggcagtttccgg
acccccatccaagaggagcaggccgacgcccactccaccctggccaagatccgcgttaagttctcccgatcagccgacgc
gcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggaca
aacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcag
aaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggccttta
tcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ I
D NO: 614)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI
VLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPV
EANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRTTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIW
APLAGTCGVLLLSLVITLYCRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRRDQRLPPDAHKPPGGGSF
RTPIQEEQADAHSTLAKIRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNEL
QKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 615)
CAR-T E6 CD8/CD8/OX40/CD3z sequence:
N-CD81s-huMNE6scFv-CD8ecdfragment- CD8 transmembrane- OX40- CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggggggggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaaacgacaac
cccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctgtaggcctg
ccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgt
ggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgccggagggaccagaggctgccccccgatgcccacaagccccc
tgggggaggcagtttccggacccccatccaagaggagcaggccgacgcccactccaccctggccaagatccgcgttaagt
tctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaa
gagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggaggg
actgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgaggga
aaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttcca
ccacggtgataa (SEQ
ID NO: 616)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
IVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPED
FAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGT
CGVLLLSLVITLYCRRDQRLPPDAHKPPGGGSFRTPIQEEQADAHSTLAKIRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRR
EEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQAL
PPR** (SEQ ID NO: 617)
CAR-T E6 CD8/CD8/CD28/OX40/CD3zsequence:
N-CD81s-huMNC2scFv-CD8ecdfragment- CD8 transmembrane- CD28- OX40- CD3zeta-C (DNA
)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggggggggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaaacgacaac
cccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctgtaggcctg
ccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgt
ggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcagaagcaagcggtctcggctcctgcattctgattacatgaa
catgaccccaagaagaccaggccccaccaggaaacattaccagccctacgctccgccacgcgacttcgctgcctaccggt
cccggagggaccagaggctgccccccgatgcccacaagccccctgggggaggcagtttccggacccccatccaagaggag
caggccgacgcccactccaccctggccaagatccgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcaggg
ccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacc
cagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaa
gcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagc
aacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 618)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
IVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPED
FAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGT
CGVLLLSLVITLYCRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRRDQRLPPDAHKPPGGGSFRTPIQE
EQADAHSTLAKIRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMA
EAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 619)
MUC1 truncated cytoplasmicsequence
(amino acids)
SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQ ID NO: 620)
MUC1 truncated cytoplasmicsequence
(amino acids)
SVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQ ID NO: 621)
MUC1 truncated cytoplasmicsequence
(amino acids)
VQLTLAFREGTINVHDVETQFNQY (SEQ IDNO: 622)
MUC1 truncated cytoplasmicsequence
(amino acids)
SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTIN (SEQ IDNO: 623)
Primers
attctaagcttgggccaccatggaactg(SEQ ID NO: 624)
tctagagtttaaacttactatttacccggagacagggagag(SEQ ID NO: 625)
agtatggcccagccggccgaggtgcagctggtggagtctgg(SEQ ID NO: 626)
tagaaggcacagtcgaggctgatcag (SEQID NO: 627)
attctaagcttgggccaccatggaagc (SEQID NO: 628)
tctagagtttaaacttactaacactctcccctgttgaagc(SEQ ID NO: 629)
agtatggcccagccggccgaaattgtgttgacacagtctccag(SEQ ID NO: 630)
tagaaggcacagtcgaggctgatcag (SEQID NO: 631)
actgtcatatggaggtgcagctggtggagtctg(SEQ ID NO: 632)
actgtctcgagtttaatttccactttggtgccgctgc(SEQ ID NO: 633)
actgtcatatggaggtgcagctggtggagtctg(SEQ ID NO: 634)
actgtaccggttttaatttccactttggtgccgctgc(SEQ ID NO: 635)
cttcttcctcaggagcaagctcaccgtgg(SEQ ID NO: 636)
gagccgtcggagtccagc (SEQ ID NO:637)
gcacctgaactcctgggg (SEQ ID NO:638)
tttaatttccactttggtgccg (SEQ IDNO: 639)
cgcggctagcttaagcttggtaccgagggcca(SEQ ID NO: 640)
cgcggcggccgcctgatcagcgggtttaaacttatc(SEQ ID NO: 641)
MMP9
(DNA)
atgagcctctggcagcccctggtcctggtgctcctggtgctgggctgctgctttgctgcccccagacagcgccagtccac
ccttgtgctcttccctggagacctgagaaccaatctcaccgacaggcagctggcagaggaatacctgtaccgctatggtt
acactcgggtggcagagatgcgtggagagtcgaaatctctggggcctgcgctgctgcttctccagaagcaactgtccctg
cccgagaccggtgagctggatagcgccacgctgaaggccatgcgaaccccacggtgcggggtcccagacctgggcagatt
ccaaacctttgagggcgacctcaagtggcaccaccacaacatcacctattggatccaaaactactcggaagacttgccgc
gggcggtgattgacgacgcctttgcccgcgccttcgcactgtggagcgcggtgacgccgctcaccttcactcgcgtgtac
agccgggacgcagacatcgtcatccagtttggtgtcgcggagcacggagacgggtatcccttcgacgggaaggacgggct
cctggcacacgcctttcctcctggccccggcattcagggagacgcccatttcgacgatgacgagttgtggtccctgggca
agggcgtcgtggttccaactcggtttggaaacgcagatggcgcggcctgccacttccccttcatcttcgagggccgctcc
tactctgcctgcaccaccgacggtcgctccgacggcttgccctggtgcagtaccacggccaactacgacaccgacgaccg
gtttggcttctgccccagcgagagactctacacccaggacggcaatgctgatgggaaaccctgccagtttccattcatct
tccaaggccaatcctactccgcctgcaccacggacggtcgctccgacggctaccgctggtgcgccaccaccgccaactac
gaccgggacaagctcttcggcttctgcccgacccgagctgactcgacggtgatggggggcaactcggcgggggagctgtg
cgtcttccccttcactttcctgggtaaggagtactcgacctgtaccagcgagggccgcggagatgggcgcctctggtgcg
ctaccacctcgaactttgacagcgacaagaagtggggcttctgcccggaccaaggatacagtttgttcctcgtggcggcg
catgagttcggccacgcgctgggcttagatcattcctcagtgccggaggcgctcatgtaccctatgtaccgcttcactga
ggggccccccttgcataaggacgacgtgaatggcatccggcacctctatggtcctcgccctgaacctgagccacggcctc
caaccaccaccacaccgcagcccacggctcccccgacggtctgccccaccggaccccccactgtccacccctcagagcgc
cccacagctggccccacaggtcccccctcagctggccccacaggtccccccactgctggcccttctacggccactactgt
gcctttgagtccggtggacgatgcctgcaacgtgaacatcttcgacgccatcgcggagattgggaaccagctgtatttgt
tcaaggatgggaagtactggcgattctctgagggcagggggagccggccgcagggccccttccttatcgccgacaagtgg
cccgcgctgccccgcaagctggactcggtctttgaggagcggctctccaagaagcttttcttcttctctgggcgccaggt
gtgggtgtacacaggcgcgtcggtgctgggcccgaggcgtctggacaagctgggcctgggagccgacgtggcccaggtga
ccggggccctccggagtggcagggggaagatgctgctgttcagcgggcggcgcctctggaggttcgacgtgaaggcgcag
atggtggatccccggagcgccagcgaggtggaccggatgttccccggggtgcctttggacacgcacgacgtcttccagta
ccgagagaaagcctatttctgccaggaccgcttctactggcgcgtgagttcccggagtgagttgaaccaggtggaccaag
tgggctacgtgacctatgacatcctgcagtgccctgaggacgattacaaggatgacgacgataagtgataa (SEQ ID
NO: 642)
(amino acids)
MSLWQPLVLVLLVLGCCFAAPRQRQSTLVLFPGDLRTNLTDRQLAEEYLYRYGYTRVAEMRGESKSLGPALLLLQKQLSL
PETGELDSATLKAMRTPRCGVPDLGRFQTFEGDLKWHHHNITYWIQNYSEDLPRAVIDDAFARAFALWSAVTPLTFTRVY
SRDADIVIQFGVAEHGDGYPFDGKDGLLAHAFPPGPGIQGDAHFDDDELWSLGKGVVVPTRFGNADGAACHFPFIFEGRS
YSACTTDGRSDGLPWCSTTANYDTDDRFGFCPSERLYTQDGNADGKPCQFPFIFQGQSYSACTTDGRSDGYRWCATTANY
DRDKLFGFCPTRADSTVMGGNSAGELCVFPFTFLGKEYSTCTSEGRGDGRLWCATTSNFDSDKKWGFCPDQGYSLFLVAA
HEFGHALGLDHSSVPEALMYPMYRFTEGPPLHKDDVNGIRHLYGPRPEPEPRPPTTTTPQPTAPPTVCPTGPPTVHPSER
PTAGPTGPPSAGPTGPPTAGPSTATTVPLSPVDDACNVNIFDAIAEIGNQLYLFKDGKYWRFSEGRGSRPQGPFLIADKW
PALPRKLDSVFEERLSKKLFFFSGRQVWVYTGASVLGPRRLDKLGLGADVAQVTGALRSGRGKMLLFSGRRLWRFDVKAQ
MVDPRSASEVDRMFPGVPLDTHDVFQYREKAYFCQDRFYWRVSSRSELNQVDQVGYVTYDILQCPEDDYKDDDDK* *(S
EQ ID NO: 643)
MMP9 catalytic domain
(DNA)
atgttccaaacctttgagggcgacctcaagtggcaccaccacaacatcacctattggatccaaaactactcggaagactt
gccgcgggcggtgattgacgacgcctttgcccgcgccttcgcactgtggagcgcggtgacgccgctcaccttcactcgcg
tgtacagccgggacgcagacatcgtcatccagtttggtgtcgcggagcacggagacgggtatcccttcgacgggaaggac
gggctcctggcacacgcctttcctcctggccccggcattcagggagacgcccatttcgacgatgacgagttgtggtccct
gggcaagggcgtcgtggttccaactcggtttggaaacgcagatggcgcggcctgccacttccccttcatcttcgagggcc
gctcctactctgcctgcaccaccgacggtcgctccgacggcttgccctggtgcagtaccacggccaactacgacaccgac
gaccggtttggcttctgccccagcgagagactctacacccaggacggcaatgctgatgggaaaccctgccagtttccatt
catcttccaaggccaatcctactccgcctgcaccacggacggtcgctccgacggctaccgctggtgcgccaccaccgcca
actacgaccgggacaagctcttcggcttctgcccgacccgagctgactcgacggtgatggggggcaactcggcgggggag
ctgtgcgtcttccccttcactttcctgggtaaggagtactcgacctgtaccagcgagggccgcggagatgggcgcctctg
gtgcgctaccacctcgaactttgacagcgacaagaagtggggcttctgcccggaccaaggatacagtttgttcctcgtgg
cggcgcatgagttcggccacgcgctgggcttagatcattcctcagtgccggaggcgctcatgtaccctatgtaccgcttc
actgaggggccccccttgcataaggacgacgtgaatggcatccggcacctctatggtcctcgccctgaacctgattacaa
ggatgacgacgataagtgataa (SEQ ID NO: 644)
(amino acids)
MFQTFEGDLKWHHHNITYWIQNYSEDLPRAVIDDAFARAFALWSAVTPLTFTRVYSRDADIVIQFGVAEHGDGYPFDGKD
GLLAHAFPPGPGIQGDAHFDDDELWSLGKGVVVPTRFGNADGAACHFPFIFEGRSYSACTTDGRSDGLPWCSTTANYDTD
DRFGFCPSERLYTQDGNADGKPCQFPFIFQGQSYSACTTDGRSDGYRWCATTANYDRDKLFGFCPTRADSTVMGGNSAGE
LCVFPFTFLGKEYSTCTSEGRGDGRLWCATTSNFDSDKKWGFCPDQGYSLFLVAAHEFGHALGLDHSSVPEALMYPMYRF
TEGPPLHKDDVNGIRHLYGPRPEPDYKDDDDK* * (SEQ ID NO: 645)
NFATcl Promoter (NFATclP)
(DNA)
aggcaggaggaagaggaaaggggcgcagggcgctcggggagcagagccgggggcccgcggtggccgcagaggccgggccg
gggcgcagaggccgggcgagctggccgcgctctgggccgccgcctccggaactccctgcgcctggcgcgcggccaccgtg
gtcccggcaacggcattaaacagagggaaacagacccgggattccgtcacccgggcggggggataaggacggctttgaga
gcagacaggaaaagggagcttttctgcatggggtgaaaaaattatttattgaaggaggaggaggcggcagcggaggaagg
ggaggggcgggaggaggaggaagagccggccgcccccgccccggccccggctcctcaggagccaagggcagcctcgccag
gtcggtcccgggctcgaggaccgcggctggggtcgaggggctcagtctcccacgtgaccggctgggcgcgccccgccaga
cccggcctcgggattccctcctcccggcgagtctccgcccgccccgtcctggaggtggggagaaggagggcggggcgggg
gggacggaaactctccccgccaaatcctggccccaggcctggggacactcgcggcgggaagatttggaggggaggggagg
gggaggggcgtgggggcgcggcctcgctggagtccccctgaccccccgacccccgcccaccggcctgggcgtcctcccgc
ggcccctcctcccctcccggcgcccggtgctctggggcgcgtgccacgcctggctcggcgccgtaggggcccccgcaggt
agagacccctggaaatggcctcgacgccgcaggagcgaggcggccaccaccccgctaatccgggcacgtctctccaggcc
gaggcctgcggtggaaaagccggggttccatttgtgctgagtcggggcggccgaatggagccaggcctcgggacgcggga
cggacgggctctggccgcgcaccttcgcgggctctgcagcgcccgaccgcctcccccggcagggaggaggcgcttgtggg
gggcacccacggggcacagtgatccctgggggtctgcggacctcctgggccccgcagcagacacgagtttagcctttggg
tttagtttaaatcacataagggtgtcgtgcaatcgatttatggtttctacacaccagacactttaacctccaaccccccc
catccaagccaacaagaaaatgcggtgccgtgttggcagctgagctgcgcccgaagagacgcagggagacgtaagagagg
aaagtgtgagtggccggggggcctccccccgtcagaagtcgcgcagtcgcgcccataaaacgccccctccgggcggctag
ggcaggtgagcgcgtccccgggcctccccacgccggcccctgccacagagccgtctaggtcgagcagatatttacagaat
aaaaatgacaataactcgacgtcccgggacggccacgcaatctgttagtaatttagcgggatgggaatttcctttctagg
gcctgccagtgaagcgcttttccaaatttccacagcgggggaagcctgcgattttacataatgacttcagcatgccgggc
tttctcgacacccctccccggcccccggcccccgccccccgccccttttccagcagggccgggctccctccggacacccg
cgtggactcaggcgtcccgtctggcccgttcgcccccgtttcccccgccagccccagcgcccccctgcccggcccccgga
ttccccgttcccgcccctacgcccccatcccctccccgtgcgcccctccccgtgcgcccccctccccgtgcgccccccct
ccccgtgcgcccccctccccgtgcgccccccctccccgggcgcccccctccccgggcgccccccctccccgtgcgccccc
ccctccccgtgcgccccccctccccgtgcgcgccccgcctcttgcgcccctgcccccaggcgagcggctgccgcggcgcg
gggaggggcgggcgctcggcgactcgtccccggggccccgcgcgggcccgggcagcaggggcgtgatgtcacggcaggga
gggggcgcgggagccgccgggccggcggggaggcgggggaggtgttttccagctttaaaaaggcaggaggcagagcgcgg
ccctgcgtcagagcgagactcagagg (SEQ ID NO: 646)
NFATclP—MMP9
(DNA)
aggcaggaggaagaggaaaggggcgcagggcgctcggggagcagagccgggggcccgcggtggccgcagaggccgggccg
gggcgcagaggccgggcgagctggccgcgctctgggccgccgcctccggaactccctgcgcctggcgcgcggccaccgtg
gtcccggcaacggcattaaacagagggaaacagacccgggattccgtcacccgggcggggggataaggacggctttgaga
gcagacaggaaaagggagcttttctgcatggggtgaaaaaattatttattgaaggaggaggaggcggcagcggaggaagg
ggaggggcgggaggaggaggaagagccggccgcccccgccccggccccggctcctcaggagccaagggcagcctcgccag
gtcggtcccgggctcgaggaccgcggctggggtcgaggggctcagtctcccacgtgaccggctgggcgcgccccgccaga
cccggcctcgggattccctcctcccggcgagtctccgcccgccccgtcctggaggtggggagaaggagggcggggcgggg
gggacggaaactctccccgccaaatcctggccccaggcctggggacactcgcggcgggaagatttggaggggaggggagg
gggaggggcgtgggggcgcggcctcgctggagtccccctgaccccccgacccccgcccaccggcctgggcgtcctcccgc
ggcccctcctcccctcccggcgcccggtgctctggggcgcgtgccacgcctggctcggcgccgtaggggcccccgcaggt
agagacccctggaaatggcctcgacgccgcaggagcgaggcggccaccaccccgctaatccgggcacgtctctccaggcc
gaggcctgcggtggaaaagccggggttccatttgtgctgagtcggggcggccgaatggagccaggcctcgggacgcggga
cggacgggctctggccgcgcaccttcgcgggctctgcagcgcccgaccgcctcccccggcagggaggaggcgcttgtggg
gggcacccacggggcacagtgatccctgggggtctgcggacctcctgggccccgcagcagacacgagtttagcctttggg
tttagtttaaatcacataagggtgtcgtgcaatcgatttatggtttctacacaccagacactttaacctccaaccccccc
catccaagccaacaagaaaatgcggtgccgtgttggcagctgagctgcgcccgaagagacgcagggagacgtaagagagg
aaagtgtgagtggccggggggcctccccccgtcagaagtcgcgcagtcgcgcccataaaacgccccctccgggcggctag
ggcaggtgagcgcgtccccgggcctccccacgccggcccctgccacagagccgtctaggtcgagcagatatttacagaat
aaaaatgacaataactcgacgtcccgggacggccacgcaatctgttagtaatttagcgggatgggaatttcctttctagg
gcctgccagtgaagcgcttttccaaatttccacagcgggggaagcctgcgattttacataatgacttcagcatgccgggc
tttctcgacacccctccccggcccccggcccccgccccccgccccttttccagcagggccgggctccctccggacacccg
cgtggactcaggcgtcccgtctggcccgttcgcccccgtttcccccgccagccccagcgcccccctgcccggcccccgga
ttccccgttcccgcccctacgcccccatcccctccccgtgcgcccctccccgtgcgcccccctccccgtgcgccccccct
ccccgtgcgcccccctccccgtgcgccccccctccccgggcgcccccctccccgggcgccccccctccccgtgcgccccc
ccctccccgtgcgccccccctccccgtgcgcgccccgcctcttgcgcccctgcccccaggcgagcggctgccgcggcgcg
gggaggggcgggcgctcggcgactcgtccccggggccccgcgcgggcccgggcagcaggggcgtgatgtcacggcaggga
gggggcgcgggagccgccgggccggcggggaggcgggggaggtgttttccagctttaaaaaggcaggaggcagagcgcgg
ccctgcgtcagagcgagactcagaggtctagagccaccatgagcctctggcagcccctggtcctggtgctcctggtgctg
ggctgctgctttgctgcccccagacagcgccagtccacccttgtgctcttccctggagacctgagaaccaatctcaccga
caggcagctggcagaggaatacctgtaccgctatggttacactcgggtggcagagatgcgtggagagtcgaaatctctgg
ggcctgcgctgctgcttctccagaagcaactgtccctgcccgagaccggtgagctggatagcgccacgctgaaggccatg
cgaaccccacggtgcggggtcccagacctgggcagattccaaacctttgagggcgacctcaagtggcaccaccacaacat
cacctattggatccaaaactactcggaagacttgccgcgggcggtgattgacgacgcctttgcccgcgccttcgcactgt
ggagcgcggtgacgccgctcaccttcactcgcgtgtacagccgggacgcagacatcgtcatccagtttggtgtcgcggag
cacggagacgggtatcccttcgacgggaaggacgggctcctggcacacgcctttcctcctggccccggcattcagggaga
cgcccatttcgacgatgacgagttgtggtccctgggcaagggcgtcgtggttccaactcggtttggaaacgcagatggcg
cggcctgccacttccccttcatcttcgagggccgctcctactctgcctgcaccaccgacggtcgctccgacggcttgccc
tggtgcagtaccacggccaactacgacaccgacgaccggtttggcttctgccccagcgagagactctacacccaggacgg
caatgctgatgggaaaccctgccagtttccattcatcttccaaggccaatcctactccgcctgcaccacggacggtcgct
ccgacggctaccgctggtgcgccaccaccgccaactacgaccgggacaagctcttcggcttctgcccgacccgagctgac
tcgacggtgatggggggcaactcggcgggggagctgtgcgtcttccccttcactttcctgggtaaggagtactcgacctg
taccagcgagggccgcggagatgggcgcctctggtgcgctaccacctcgaactttgacagcgacaagaagtggggcttct
gcccggaccaaggatacagtttgttcctcgtggcggcgcatgagttcggccacgcgctgggcttagatcattcctcagtg
ccggaggcgctcatgtaccctatgtaccgcttcactgaggggccccccttgcataaggacgacgtgaatggcatccggca
cctctatggtcctcgccctgaacctgagccacggcctccaaccaccaccacaccgcagcccacggctcccccgacggtct
gccccaccggaccccccactgtccacccctcagagcgccccacagctggccccacaggtcccccctcagctggccccaca
ggtccccccactgctggcccttctacggccactactgtgcctttgagtccggtggacgatgcctgcaacgtgaacatctt
cgacgccatcgcggagattgggaaccagctgtatttgttcaaggatgggaagtactggcgattctctgagggcaggggga
gccggccgcagggccccttccttatcgccgacaagtggcccgcgctgccccgcaagctggactcggtctttgaggagcgg
ctctccaagaagcttttcttcttctctgggcgccaggtgtgggtgtacacaggcgcgtcggtgctgggcccgaggcgtct
ggacaagctgggcctgggagccgacgtggcccaggtgaccggggccctccggagtggcagggggaagatgctgctgttca
gcgggcggcgcctctggaggttcgacgtgaaggcgcagatggtggatccccggagcgccagcgaggtggaccggatgttc
cccggggtgcctttggacacgcacgacgtcttccagtaccgagagaaagcctatttctgccaggaccgcttctactggcg
cgtgagttcccggagtgagttgaaccaggtggaccaagtgggctacgtgacctatgacatcctgcagtgccctgaggacg
attacaaggatgacgacgataagtgataa (SEQ ID NO: 647)
NFATclP-MMP9cat
(DNA)
aggcaggaggaagaggaaaggggcgcagggcgctcggggagcagagccgggggcccgcggtggccgcagaggccgggccg
gggcgcagaggccgggcgagctggccgcgctctgggccgccgcctccggaactccctgcgcctggcgcgcggccaccgtg
gtcccggcaacggcattaaacagagggaaacagacccgggattccgtcacccgggcggggggataaggacggctttgaga
gcagacaggaaaagggagcttttctgcatggggtgaaaaaattatttattgaaggaggaggaggcggcagcggaggaagg
ggaggggcgggaggaggaggaagagccggccgcccccgccccggccccggctcctcaggagccaagggcagcctcgccag
gtcggtcccgggctcgaggaccgcggctggggtcgaggggctcagtctcccacgtgaccggctgggcgcgccccgccaga
cccggcctcgggattccctcctcccggcgagtctccgcccgccccgtcctggaggtggggagaaggagggcggggcgggg
gggacggaaactctccccgccaaatcctggccccaggcctggggacactcgcggcgggaagatttggaggggaggggagg
gggaggggcgtgggggcgcggcctcgctggagtccccctgaccccccgacccccgcccaccggcctgggcgtcctcccgc
ggcccctcctcccctcccggcgcccggtgctctggggcgcgtgccacgcctggctcggcgccgtaggggcccccgcaggt
agagacccctggaaatggcctcgacgccgcaggagcgaggcggccaccaccccgctaatccgggcacgtctctccaggcc
gaggcctgcggtggaaaagccggggttccatttgtgctgagtcggggcggccgaatggagccaggcctcgggacgcggga
cggacgggctctggccgcgcaccttcgcgggctctgcagcgcccgaccgcctcccccggcagggaggaggcgcttgtggg
gggcacccacggggcacagtgatccctgggggtctgcggacctcctgggccccgcagcagacacgagtttagcctttggg
tttagtttaaatcacataagggtgtcgtgcaatcgatttatggtttctacacaccagacactttaacctccaaccccccc
catccaagccaacaagaaaatgcggtgccgtgttggcagctgagctgcgcccgaagagacgcagggagacgtaagagagg
aaagtgtgagtggccggggggcctccccccgtcagaagtcgcgcagtcgcgcccataaaacgccccctccgggcggctag
ggcaggtgagcgcgtccccgggcctccccacgccggcccctgccacagagccgtctaggtcgagcagatatttacagaat
aaaaatgacaataactcgacgtcccgggacggccacgcaatctgttagtaatttagcgggatgggaatttcctttctagg
gcctgccagtgaagcgcttttccaaatttccacagcgggggaagcctgcgattttacataatgacttcagcatgccgggc
tttctcgacacccctccccggcccccggcccccgccccccgccccttttccagcagggccgggctccctccggacacccg
cgtggactcaggcgtcccgtctggcccgttcgcccccgtttcccccgccagccccagcgcccccctgcccggcccccgga
ttccccgttcccgcccctacgcccccatcccctccccgtgcgcccctccccgtgcgcccccctccccgtgcgccccccct
ccccgtgcgcccccctccccgtgcgccccccctccccgggcgcccccctccccgggcgccccccctccccgtgcgccccc
ccctccccgtgcgccccccctccccgtgcgcgccccgcctcttgcgcccctgcccccaggcgagcggctgccgcggcgcg
gggaggggcgggcgctcggcgactcgtccccggggccccgcgcgggcccgggcagcaggggcgtgatgtcacggcaggga
gggggcgcgggagccgccgggccggcggggaggcgggggaggtgttttccagctttaaaaaggcaggaggcagagcgcgg
ccctgcgtcagagcgagactcagaggtctagagccaccatgttccaaacctttgagggcgacctcaagtggcaccaccac
aacatcacctattggatccaaaactactcggaagacttgccgcgggcggtgattgacgacgcctttgcccgcgccttcgc
actgtggagcgcggtgacgccgctcaccttcactcgcgtgtacagccgggacgcagacatcgtcatccagtttggtgtcg
cggagcacggagacgggtatcccttcgacgggaaggacgggctcctggcacacgcctttcctcctggccccggcattcag
ggagacgcccatttcgacgatgacgagttgtggtccctgggcaagggcgtcgtggttccaactcggtttggaaacgcaga
tggcgcggcctgccacttccccttcatcttcgagggccgctcctactctgcctgcaccaccgacggtcgctccgacggct
tgccctggtgcagtaccacggccaactacgacaccgacgaccggtttggcttctgccccagcgagagactctacacccag
gacggcaatgctgatgggaaaccctgccagtttccattcatcttccaaggccaatcctactccgcctgcaccacggacgg
tcgctccgacggctaccgctggtgcgccaccaccgccaactacgaccgggacaagctcttcggcttctgcccgacccgag
ctgactcgacggtgatggggggcaactcggcgggggagctgtgcgtcttccccttcactttcctgggtaaggagtactcg
acctgtaccagcgagggccgcggagatgggcgcctctggtgcgctaccacctcgaactttgacagcgacaagaagtgggg
cttctgcccggaccaaggatacagtttgttcctcgtggcggcgcatgagttcggccacgcgctgggcttagatcattcct
cagtgccggaggcgctcatgtaccctatgtaccgcttcactgaggggccccccttgcataaggacgacgtgaatggcatc
cggcacctctatggtcctcgccctgaacctgattacaaggatgacgacgataagtgataa (SEQ ID NO: 648)
NFAT response element
(DNA)
ggaggaaaaactgtttcatacagaaggcgt(SEQ ID NO: 649)
NFAT response element repeats
(DNA)
ggaggaaaaactgtttcatacagaaggcgtggaggaaaaactgtttcatacagaaggcgtggaggaaaaactgtttcata
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CMV minimal promoter
(DNA)
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NFATREmCMV-MMP9
(DNA)
ggaggaaaaactgtttcatacagaaggcgtggaggaaaaactgtttcatacagaaggcgtggaggaaaaactgtttcata
cagaaggcgtagatctagactcaggtaggcgtgtacggtgggaggtctatataagcagagctggtttagtgaaccgtcag
atctctagagccaccatgagcctctggcagcccctggtcctggtgctcctggtgctgggctgctgctttgctgcccccag
acagcgccagtccacccttgtgctcttccctggagacctgagaaccaatctcaccgacaggcagctggcagaggaatacc
tgtaccgctatggttacactcgggtggcagagatgcgtggagagtcgaaatctctggggcctgcgctgctgcttctccag
aagcaactgtccctgcccgagaccggtgagctggatagcgccacgctgaaggccatgcgaaccccacggtgcggggtccc
agacctgggcagattccaaacctttgagggcgacctcaagtggcaccaccacaacatcacctattggatccaaaactact
cggaagacttgccgcgggcggtgattgacgacgcctttgcccgcgccttcgcactgtggagcgcggtgacgccgctcacc
ttcactcgcgtgtacagccgggacgcagacatcgtcatccagtttggtgtcgcggagcacggagacgggtatcccttcga
cgggaaggacgggctcctggcacacgcctttcctcctggccccggcattcagggagacgcccatttcgacgatgacgagt
tgtggtccctgggcaagggcgtcgtggttccaactcggtttggaaacgcagatggcgcggcctgccacttccccttcatc
ttcgagggccgctcctactctgcctgcaccaccgacggtcgctccgacggcttgccctggtgcagtaccacggccaacta
cgacaccgacgaccggtttggcttctgccccagcgagagactctacacccaggacggcaatgetgatgggaaaccctgcc
agtttccatteatcttccaaggccaatcctactccgcctgcaccacggacggtcgctccgacggctaccgctggtgcgcc
accaccgccaactacgaccgggacaagctcttcggcttctgcccgacccgagctgactcgacggtgatggggggcaactc
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cacccctcagagcgccccacagctggccccacaggtcccccctcagctggccccacaggtccccccactgctggcccttc
tacggccactactgtgcctttgagtccggtggacgatgcctgcaacgtgaacatcttcgacgccatcgcggagattggga
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atcgccgacaagtggcccgcgctgccccgcaagctggactcggtctttgaggagcggctctccaagaagcttttcttctt
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cgacgtcttccagtaccgagagaaagcctatttctgccaggaccgcttctactggcgcgtgagttcccggagtgagttga
accaggtggaccaagtgggctacgtgacctatgacatcctgcagtgccctgaggacgattacaaggatgacgacgataag
tgataa (SEQ ID NO: 652)
NFATREmCMV-MMP9cat
(DNA)
ggaggaaaaactgtttcatacagaaggcgtggaggaaaaactgtttcatacagaaggcgtggaggaaaaactgtttcata
cagaaggcgtagatctagactcaggtaggcgtgtacggtgggaggtctatataagcagagctggtttagtgaaccgtcag
atctctagagccaccatgttccaaacctttgagggcgacctcaagtggcaccaccacaacatcacctattggatccaaaa
ctactcggaagacttgccgcgggcggtgattgacgacgcctttgcccgcgccttcgcactgtggagcgcggtgacgccgc
tcaccttcactcgcgtgtacagccgggacgcagacatcgtcatccagtttggtgtcgcggagcacggagacgggtatccc
ttcgacgggaaggacgggctcctggcacacgcctttcctcctggccccggcattcagggagacgcccatttcgacgatga
cgagttgtggtccctgggcaagggcgtcgtggttccaactcggtttggaaacgcagatggcgcggcctgccacttcccct
tcatcttcgagggccgctcctactctgcctgcaccaccgacggtcgctccgacggcttgccctggtgcagtaccacggcc
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ctgccagtttccattcatcttccaaggccaatcctactccgcctgcaccacggacggtcgctccgacggctaccgctggt
gcgccaccaccgccaactacgaccgggacaagctcttcggcttctgcccgacccgagctgactcgacggtgatggggggc
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cctatgtaccgcttcactgaggggccccccttgcataaggacgacgtgaatggcatccggcacctctatggtcctcgccc
tgaacctgattacaaggatgacgacgataagtgataa (SEQ ID NO: 653)
C2 scFv
(DNA)
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caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtg
gcggatccgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcaga
gccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcct
gatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctca
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(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATITC
RASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPFTFG
GGTKVEIKRT (SEQ ID NO: 655)
CD8 transmembrane domain
(DNA)
atctacatctgggcgcccttggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttatcaccctttactgc( SEQ ID
NO: 656)
(amino acids)
IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC (SEQ IDNO: 657)
4-1BB domain
(DNA)
aaacggggcagaaagaaactcctgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatgg
ctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaactg (SEQ ID NO: 658)
(amino acids)
KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL(SEQ ID NO: 659)
CD3zeta domain
(DNA)
agagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtacaagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctagg
acgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaacc
ctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgc
cggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgca
ggccctgccccctcgc (SEQ ID NO: 660)
(amino acids)
RVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGER
RRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 661)
Human IgGl Fc linker
(DNA)
gagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcct
cttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacg
aagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcag
tacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaa
ggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgt
acaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagc
gacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacgg
ctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgc
atgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (SEQ ID NO: 662)
(amino acids)
EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ
YNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY
PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQI
D NO: 663)
C2 CAR FC linker
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtg
gcggatccgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcaga
gccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcct
gatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctca
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gggaccaaggtggagatcaaacgaactgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctga
actcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtca
catgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataat
gccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactg
gctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagcca
aagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacc
tgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagac
cacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcagg
ggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggt
aaaatctacatctgggcgcccttggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaaacg
gggcagaaagaaactcctgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgta
gctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtac
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ccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataaga
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agtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctgataa (SEQ ID NO: 664)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATITC
RASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPFTFG
GGTKVEIKRTEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVH
N AKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQV
SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSL
SPGKIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADA
PAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLY
QGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 665)
IgD/Fc linker
(DNA)
gagtctccaaaggcacaggcctcctcagtgcccactgcacaaccccaagcagagggcagcctcgccaaggcaaccacagc
cccagccaccacccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggagaaggagaaagaggaacaagaagagagag
agacaaagacaccagagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctgggggga
ccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggt
ggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagc
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ctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctc
atgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (SEQ ID N
O: 666)
(amino acids)
ESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTPEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG
PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGK
EYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTP
PVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 667)
C2 CAR IgD/FC linker
(DNA)
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caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtg
gcggatccgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcaga
gccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcct
gatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctca
caattaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcgga
gggaccaaggtggagatcaaacgaactgagtctccaaaggcacaggcctcctcagtgcccactgcacaaccccaagcaga
gggcagcctcgccaaggcaaccacagccccagccaccacccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggaga
aggagaaagaggaacaagaagagagagagacaaagacaccagagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccg
tgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccg
gacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcg
tggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtc
ctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaac
catctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaacc
aggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggag
aacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagag
caggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctct
ccctgtctccgggtaaaatctacatctgggcgcccttggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttatcacc
ctttactgcaaacggggcagaaagaaactcctgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaaga
ggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcaggagcgcag
acgcccccgcgtacaagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttg
gacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaact
gcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcc
tttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctgataa (S
EQ ID NO: 668)
(amino acids)
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PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLT
V LHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNG
QPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKIYIWAPLAGTCGVLLLSL
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DVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
** (SEQ ID NO: 669)
Fc hingeless Y407R linker
(DNA)
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tgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggagg
tgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcac
caggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctc
caaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtca
gcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaac
tacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctcaggagcaagctcaccgtggacaagagcaggtg
gcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgt
ctccgggtaaa (SEQ ID NO: 670)
(amino acids)
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QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPE
NNYKTTPPVLDSDGSFFLRSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 671)
C2 CAR FCHingeless/Y407R linker
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtg
gcggatccgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcaga
gccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcct
gatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctca
caattaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcgga
gggaccaaggtggagatcaaacgaactgcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaa
ggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagt
tcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgt
gtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccct
cccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatccc
gggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgg
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caagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaacc
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ggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggcc
ctgccccctcgctgataa (SEQID NO: 672)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATITC
RASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPFTFG
GGTKVEIKRTAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNST
YRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAP IEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIA
VEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLRSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKIYIWAPLAGTC
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LGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALH
MQALPPR** (SEQ ID NO: 673)
IgD/FCHingeless/Y407R linker
(DNA)
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cccagccaccacccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggagaaggagaaagaggaacaagaagagagag
agacaaagacaccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatg
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ggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcc
tcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatc
gagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgac
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(amino acids)
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ISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPI
EKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLRSKL
TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 675)
C2 CAR IgD/FCHingeless/Y407Rlinker
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtg
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gccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcct
gatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctca
caattaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcgga
gggaccaaggtggagatcaaacgaactgagtctccaaaggcacaggcctcctcagtgcccactgcacaaccccaagcaga
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cccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaaga
ccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtaca
acagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtc
tccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacac
cctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgaca
tcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctcc
ttcttcctcaggagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatga
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caaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggagg
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ttcacatgcaggccctgccccctcgctgataa (SEQ ID NO: 676)
(amino acids)
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YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATITC
RASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPFTFG
GGTKVEIKRTESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTPAPELLGGPSVFL
FPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCK
V SNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS
DGSFFLRSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLY
IFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGG
KPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO:
677)
IgD linker
(DNA)
gagtctccaaaggcacaggcctcctcagtgcccactgcacaaccccaagcagagggcagcctcgccaaggcaaccacagc
cccagccaccacccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggagaaggagaaagaggaacaagaagagagag
agacaaagacacca (SEQ ID NO: 678)
(amino acids)
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C2 CAR IgD linker
(DNA)
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caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtg
gcggatccgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcaga
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caattaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcgga
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gggcagcctcgccaaggcaaccacagccccagccaccacccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggaga
aggagaaagaggaacaagaagagagagagacaaagacaccaatctacatctgggcgcccttggccgggacttgtggggtc
cttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaaacggggcagaaagaaactcctgtatatattcaaacaaccatttat
gagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaactga
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ggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcag
gccctgccccctcgctgataa (SEQ ID NO: 680)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATITC
RASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPFTFG
GGTKVEIKRTESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTPIYIWAPLAGTCG
VLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNL
GRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHM
QALPPR* * (SEQ ID NO: 681)
X4 linker
(DNA)
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(amino acids)
DKTHTKPPKPAPELLGGPGTGTGGPTIKPPKPPKPAPNLLGGP(SEQ ID NO: 683)
C2 CAR X4 linker
(DNA)
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ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtg
gcggatccgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcaga
gccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcct
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caattaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcgga
gggaccaaggtggagatcaaacgaactgacaagacgcacaccaagccacctaaaccagctccagaactgctcggaggtcc
tggcaccggaaccggaggacctaccatcaaaccacctaagccacctaagcctgctcctaacctgctcggaggacctatct
acatctgggcgcccttggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaaacggggcaga
aagaaactcctgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccg
atttccagaagaagaagaaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtacaagcagg
gccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggac
cctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcgga
ggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacag
ccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctgataa (SEQ ID NO: 684)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATITC
RASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPFTFG
GGTKVEIKRTDKTHTKPPKPAPELLGGPGTGTGGPTIKPPKPPKPAPNLLGGPIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRG
R KKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRG
RDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ
ID NO: 685)
OKT3 scFv
(DNA)
caggtgcagctggtgcagagcggaggcggagtggtgcagcctggaagaagcctgcgcctgagctgcaaagcgagcggcta
tacctttacccgctataccatgcattgggtgcgccaggcgccgggcaaaggcctggaatggattggctatattaacccga
gccgcggctataccaactataaccagaaagtgaaagatcgctttaccattagcaccgataaaagcaaaagcaccgcgttt
ctgcagatggatagcctgcgcccggaagataccgcggtgtattattgcgcgcgctattatgatgatcattattgcctgga
ttattggggccagggcaccaccctgaccgtgagcagcggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggat
ccgatattcagatgacccagagcccgagcagcctgagcgcgagcgtgggcgatcgcgtgaccattacctgcagcgcgagc
agcagcgtgagctatatgaactggtatcagcagaccccgggcaaagcgccgaaacgctggatttatgataccagcaaact
ggcgagcggcgtgccgagccgctttagcggcagcggcagcggcaccgattatacctttaccattagcagcctgcagccgg
aagatattgcgacctattattgccagcagtggagcagcaacccgtttacctttggccagggcaccaaactgcagattacc
cgctgataa(SEQ ID NO: 686)
(amino acids)
QVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCKASGYTFTRYTMHWVRQAPGKGLEWIGYINPSRGYTNYNQKVKDRFTISTDKSKSTAF
LQMDSLRPEDTAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSAS
SSVSYMNWYQQTPGKAPKRWIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQWSSNPFTFGQGTKLQIT
R** (SEQ ID NO: 687)
C2-FC-OKT3
(DNA)
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caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
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ttagcagcctgcagccggaagatattgcgacctattattgccagcagtggagcagcaacccgtttacctttggccagggc
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(amino acids)
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Y LQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATIT
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HN AKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQ
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DRVTITCSASSSVSYMNWYQQTPGKAPKRWIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQWSSNPFT
FGQGTKLQITR* * (SEQ ID NO: 689)
C2-IgD/FC-OKT3
(DNA)
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caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
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ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtg
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(amino acids)
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V LHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNG
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GKAPKRWIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQWSSNPFTFGQGTKLQITR* * (SEQ IDN
O: 691)
C2-FCHingeless/Y407R-OKT3
(DNA)
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agtggagcagcaacccgtttacctttggccagggcaccaaactgcagattacccgctgataa (SEQ ID NO: 692)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATITC
RASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPFTFG
GGTKVEIKRTAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY
R VVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIA
VEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLRSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSQVQLVQ
SGGGVVQPGRSLRLSCKASGYTFTRYTMHWVRQAPGKGLEWIGYINPSRGYTNYNQKVKDRFTISTDKSKSTAFLQMDSL
RPEDTAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYM
NWYQQTPGKAPKRWIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQWSSNPFTFGQGTKLQITR* *(S
EQ ID NO: 693)
C2-IgD/FCHingeless/Y407R-OKT3
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
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ctattattgccagcagtggagcagcaacccgtttacctttggccagggcaccaaactgcagattacccgctgataa (SE
Q ID NO: 694)
(amino acids)
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YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATITC
RASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPFTFG
GGTKVEIKRTESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTPAPELLGGPSVFL
FPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCK
VSNKAL PAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS
DGSFFLRSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSQVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCKASGYT
FTRYTMHWVRQAPGKGLEWIGYINPSRGYTNYNQKVKDRFTISTDKSKSTAFLQMDSLRPEDTAVYYCARYYDDHYCLDY
WGQGTTLTVSS GGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYMNWYQQTPGKAPKRWIYDTSKL
ASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQWSSNPFTFGQGTKLQITR* * (SEQ ID NO: 695)
C2-IgD-OKT3
(DNA)
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caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
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6)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATITC
RASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPFTFG
GGTKVEIKRTESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTPGGGGSQVQLVQS
GGGVVQPGRSLRLSCKASGYTFTRYTMHWVRQAPGKGLEWIGYINPSRGYTNYNQKVKDRFTISTDKSKSTAFLQMDSLR
P EDTAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYM
NWYQQTPGKAPKRWIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQWSSNPFTFGQGTKLQITR* *(S
EQ ID NO: 697)
C2-X4-OKT3
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
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gcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtg
gcggatccgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcaga
gccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcct
gatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctca
caattaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcgga
gggaccaaggtggagatcaaacgaactgacaagacgcacaccaagccacctaaaccagctccagaactgctcggaggtcc
tggcaccggaaccggaggacctaccatcaaaccacctaagccacctaagcctgctcctaacctgctcggaggacctggcg
gtggcggatcccaggtgcagctggtgcagagcggaggcggagtggtgcagcctggaagaagcctgcgcctgagctgcaaa
gcgagcggctatacctttacccgctataccatgcattgggtgcgccaggcgccgggcaaaggcctggaatggattggcta
tattaacccgagccgcggctataccaactataaccagaaagtgaaagatcgctttaccattagcaccgataaaagcaaaa
gcaccgcgtttctgcagatggatagcctgcgcccggaagataccgcggtgtattattgcgcgcgctattatgatgatcat
tattgcctggattattggggccagggcaccaccctgaccgtgagcagcggcggtggcggatccggcggtggcggatccgg
cggtggcggatccgatattcagatgacccagagcccgagcagcctgagcgcgagcgtgggcgatcgcgtgaccattacct
gcagcgcgagcagcagcgtgagctatatgaactggtatcagcagaccccgggcaaagcgccgaaacgctggatttatgat
accagcaaactggcgagcggcgtgccgagccgctttagcggcagcggcagcggcaccgattatacctttaccattagcag
cctgcagccggaagatattgcgacctattattgccagcagtggagcagcaacccgtttacctttggccagggcaccaaac
tgcagattacccgctgataa(SEQ ID NO: 698)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTI SSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNS
LYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATIT
CRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPFTF
GGGTKVEIKRTDKTHTKPPKPAPELLGGPGTGTGGPTIKPPKPPKPAPNLLGGPGGGGSQVQLVQSGGGVVQPGRSLRLS
CKASGYTFTRYTMHWVRQAPGKGLEWIGYINPSRGYTNYNQKVKDRFTISTDKSKSTAFLQMDSLRPEDTAVYYCARYYD
DHYCLDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYMNWYQQTPGKAPKRWI
YDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQWSSNPFTFGQGTKLQITR* * (SEQ ID NO : 699
)
C2-MMP9
(DNA)
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caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtg
gcggatccgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcaga
gccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcct
gatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctca
caattaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcgga
gggaccaaggtggagatcaaacgaactggcggtggcggatccagcctctggcagcccctggtcctggtgctcctggtgct
gggctgctgctttgctgcccccagacagcgccagtccacccttgtgctcttccctggagacctgagaaccaatctcaccg
acaggcagctggcagaggaatacctgtaccgctatggttacactcgggtggcagagatgcgtggagagtcgaaatctctg
gggcctgcgctgctgcttctccagaagcaactgtccctgcccgagaccggtgagctggatagcgccacgctgaaggccat
gcgaaccccacggtgcggggtcccagacctgggcagattccaaacctttgagggcgacctcaagtggcaccaccacaaca
tcacctattggatccaaaactactcggaagacttgccgcgggcggtgattgacgacgcctttgcccgcgccttcgcactg
tggagcgcggtgacgccgctcaccttcactcgcgtgtacagccgggacgcagacatcgtcatccagtttggtgtcgcgga
gcacggagacgggtatcccttcgacgggaaggacgggctcctggcacacgcctttcctcctggccccggcattcagggag
acgcccatttcgacgatgacgagttgtggtccctgggcaagggcgtcgtggttccaactcggtttggaaacgcagatggc
gcggcctgccacttccccttcatcttcgagggccgctcctactctgcctgcaccaccgacggtcgctccgacggcttgcc
ctggtgcagtaccacggccaactacgacaccgacgaccggtttggcttctgccccagcgagagactctacacccaggacg
gcaatgctgatgggaaaccctgccagtttccattcatcttccaaggccaatcctactccgcctgcaccacggacggtcgc
tccgacggctaccgctggtgcgccaccaccgccaactacgaccgggacaagctcttcggcttctgcccgacccgagctga
ctcgacggtgatggggggcaactcggcgggggagctgtgcgtcttccccttcactttcctgggtaaggagtactcgacct
gtaccagcgagggccgcggagatgggcgcctctggtgcgctaccacctcgaactttgacagcgacaagaagtggggcttc
tgcccggaccaaggatacagtttgttcctcgtggcggcgcatgagttcggccacgcgctgggcttagatcattcctcagt
gccggaggcgctcatgtaccctatgtaccgcttcactgaggggccccccttgcataaggacgacgtgaatggcatccggc
acctctatggtcctcgccctgaacctgagccacggcctccaaccaccaccacaccgcagcccacggctcccccgacggtc
tgccccaccggaccccccactgtccacccctcagagcgccccacagctggccccacaggtcccccctcagctggccccac
aggtccccccactgctggcccttctacggccactactgtgcctttgagtccggtggacgatgcctgcaacgtgaacatct
tcgacgccatcgcggagattgggaaccagctgtatttgttcaaggatgggaagtactggcgattctctgagggcaggggg
agccggccgcagggccccttccttatcgccgacaagtggcccgcgctgccccgcaagctggactcggtctttgaggagcg
gctctccaagaagcttttcttcttctctgggcgccaggtgtgggtgtacacaggcgcgtcggtgctgggcccgaggcgtc
tggacaagctgggcctgggagccgacgtggcccaggtgaccggggccctccggagtggcagggggaagatgctgctgttc
agcgggcggcgcctctggaggttcgacgtgaaggcgcagatggtggatccccggagcgccagcgaggtggaccggatgtt
ccccggggtgcctttggacacgcacgacgtcttccagtaccgagagaaagcctatttctgccaggaccgcttctactggc
gcgtgagttcccggagtgagttgaaccaggtggaccaagtgggctacgtgacctatgacatcctgcagtgccctgaggac
gattacaaggatgacgacgataagtgataa (SEQ
ID NO:700)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATITC
RASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPFTFG
GGTKVEIKRTGGGGSSLWQPLVLVLLVLGCCFAAPRQRQSTLVLFPGDLRTNLTDRQLAEEYLYRYGYTRVAEMRGESKS
LGPALLLLQKQLSLPETGELDSATLKAMRTPRCGVPDLGRFQTFEGDLKWHHHNITYWIQNYSEDLPRAVIDDAFARAFA
LWSAVTPLTFTRVYSRDADIVIQFGVAEHGDGYPFDGKDGLLAHAFPPGPGIQGDAHFDDDELWSLGKGVVVPTRFGNAD
GAACHFPFIFEGRSYSACTTDGRSDGLPWCSTTANYDTDDRFGFCPSERLYTQDGNADGKPCQFPFIFQGQSYSACTTDG
RSDGYRWCATTANYDRDKLFGFCPTRADSTVMGGNSAGELCVFPFTFLGKEYSTCTSEGRGDGRLWCATTSNFDSDKKWG
FCPDQGYSLFLVAAHEFGHALGLDHSSVPEALMYPMYRFTEGPPLHKDDVNGIRHLYGPRPEPEPRPPTTTTPQPTAPPT
VCPTGPPTVHPSERPTAGPTGPPSAGPTGPPTAGPSTATTVPLSPVDDACNVNIFDAIAEIGNQLYLFKDGKYWRFSEGR
GSRPQGPFLIADKWPALPRKLDSVFEERLSKKLFFFSGRQVWVYTGASVLGPRRLDKLGLGADVAQVTGALRSGRGKMLL
FSGRRLWRFDVKAQMVDPRSASEVDRMFPGVPLDTHDVFQYREKAYFCQDRFYWRVSSRSELNQVDQVGYVTYDILQCPE
DDYKDDDDK* * (SEQ ID NO : 701 )
C2-MMP9cat
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtg
gcggatccgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcaga
gccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcct
gatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctca
caattaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcgga
gggaccaaggtggagatcaaacgaactggcggtggcggatccttccaaacctttgagggcgacctcaagtggcaccacca
caacatcacctattggatccaaaactactcggaagacttgccgcgggcggtgattgacgacgcctttgcccgcgccttcg
cactgtggagcgcggtgacgccgctcaccttcactcgcgtgtacagccgggacgcagacatcgtcatccagtttggtgtc
gcggagcacggagacgggtatcccttcgacgggaaggacgggctcctggcacacgcctttcctcctggccccggcattca
gggagacgcccatttcgacgatgacgagttgtggtccctgggcaagggcgtcgtggttccaactcggtttggaaacgcag
atggcgcggcctgccacttccccttcatcttcgagggccgctcctactctgcctgcaccaccgacggtcgctccgacggc
ttgccctggtgcagtaccacggccaactacgacaccgacgaccggtttggcttctgccccagcgagagactctacaccca
ggacggcaatgctgatgggaaaccctgccagtttccattcatcttccaaggccaatcctactccgcctgcaccacggacg
gtcgctccgacggctaccgctggtgcgccaccaccgccaactacgaccgggacaagctcttcggcttctgcccgacccga
gctgactcgacggtgatggggggcaactcggcgggggagctgtgcgtcttccccttcactttcctgggtaaggagtactc
gacctgtaccagcgagggccgcggagatgggcgcctctggtgcgctaccacctcgaactttgacagcgacaagaagtggg
gcttctgcccggaccaaggatacagtttgttcctcgtggcggcgcatgagttcggccacgcgctgggcttagatcattcc
tcagtgccggaggcgctcatgtaccctatgtaccgcttcactgaggggccccccttgcataaggacgacgtgaatggcat
ccggcacctctatggtcctcgccctgaacctgattacaaggatgacgacgataagtgataa (SEQ ID NO: 702)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATITC
RASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPFTFG
GGTKVEIKRTGGGGSFQTFEGDLKWHHHNITYWIQNYSEDLPRAVIDDAFARAFALWSAVTPLTFTRVYSRDADIVIQFG
VAEHGDGYPFDGKDGLLAHAFPPGPGIQGDAHFDDDELWSLGKGVVVPTRFGNADGAACHFPFIFEGRSYSACTTDGRSD
GLPWCSTTANYDTDDRFGFCPSERLYTQDGNADGKPCQFPFIFQGQSYSACTTDGRSDGYRWCATTANYDRDKLFGFCPT
RADSTVMGGNSAGELCVFPFTFLGKEYSTCTSEGRGDGRLWCATTSNFDSDKKWGFCPDQGYSLFLVAAHEFGHALGLDH
SSVPEALMYPMYRFTEGPPLHKDDVNGIRHLYGPRPEPDYKDDDDK* * (SEQ ID NO:703)
Other linkers for BiTES betweentwo scFvs and between C2 and MMP9 include but are
not limited to those shown asSEQ ID NOS:705, 707, 709, 711, 713, 715 and 717.
[G4Si]x2 linkersequence:
(DNA)
ggcggtggcggatccggcggtggcggatcc(SEQ ID NO: 704)
(amino acids)
GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 705)
[G4Si]x3 linker sequence:
(DNA)
ggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatcc(SEQ ID NO: 706)
(amino acids)
GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 707)
Long GS linker sequence:
(DNA)
ggcggtggaagcggcggtggcggatccggcagcggcggaagcggcggtggcggatccggcggtgga(SEQ ID NO: 70
8)
(amino acids)
GGGSGGGGSGSGGSGGGGSGGG (SEQ IDNO: 709)
13 aa GS linker sequence:
(DNA)
ggcggtggatccggcggtggcggatccggcggtggatcc(SEQ ID NO: 710)
(amino acids)
GGGSGGGGSGGGS (SEQ ID NO: 711)
8 aa GS linker sequence:
(DNA)
ggcggttccggcggtggatccgga (SEQ IDNO: 712)
(amino acids)
GGSGGGSG (SEQ ID NO:713)
12 aa GS linker sequence:
(DNA)
ggcggttccggcggtggatccggcggtggcggatccgga(SEQ ID NO: 714)
(amino acids)
GGSGGGSGGGSG (SEQ ID NO: 715)
24 aa GS linker sequence:
(DNA)
ggcggttccggcggtggatccggcggtggcggatccggaggcggttccggcggtggatccggcggtggcggatccgga(S
EQ ID NO:716)
(amino acids)
GGSGGGSGGGSGGGSGGGSGGGSG (SEQ IDNO: 717)
CAR-T C2 CD8/CD8/4-lBB/CD3z #44
N-CD81s-huMNC2scFv-CD8ecdfragment- CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccttaccagtgaccgccttgctcctgccgctggccttgctgctccacgccgccaggccggaggtgcagctggtgga
gtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtggctatg
ccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtggcggaacctacatatac
taccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcct
gagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaatacttcgatgtctggggca
aagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgacattgtg
ctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcagagccagtaagagtgtcag
taccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcctgatttacctggcatcca
atctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctcacaattaatcctgtggaa
gctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcggagggaccaaggtggagat
caaacgaactacaacaacccctgcccccagacctcctaccccagcccctacaattgccagccagcctctgagcctgaggc
ccgaggcttgtagacctgctgctggcggagccgtgcacaccagaggactggatttcgcctgcgacatctacatctgggcg
cccttggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaaacggggcagaaagaaactcct
gtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaag
aagaagaaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtacaagcagggccagaaccag
ctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggg
gggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtg
agattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggac
acctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctgataa (SEQ ID NO: 718)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI
VLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPV
EANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRTTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIW
APLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQN
QLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATK
DTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO : 719 )
CAR-T IgK C2 CD8/CD8/4-lBB/CD3z#45
N-IgKls-huMNC2scFv-CD8ecdfragment- CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggagacagacacactcctgctatgggtactgctgctctgggttccaggttccactggtgaggtgcagctggtggagtc
tgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtggctatgcca
tgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtggcggaacctacatatactac
cccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgag
agccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaatacttcgatgtctggggcaaag
ggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgacattgtgctg
acccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcagagccagtaagagtgtcagtac
cagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcctgatttacctggcatccaatc
tggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctcacaattaatcctgtggaagct
aatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcggagggaccaaggtggagatcaa
acgaactacaacaacccctgcccccagacctcctaccccagcccctacaattgccagccagcctctgagcctgaggcccg
aggcttgtagacctgctgctggcggagccgtgcacaccagaggactggatttcgcctgcgacatctacatctgggcgccc
ttggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaaacggggcagaaagaaactcctgta
tatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaag
aagaaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtacaagcagggccagaaccagctc
tataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatgggggg
aaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgaga
ttgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacc
tacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctgataa (SEQ ID NO: 720)
(amino acids)
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYY
PDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIV
LTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVE
ANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRTTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWA
PLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQ
LYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKD
TYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 721)
CAR-T C2 op CD8/CD8/4-lBB/CD3z#46
N-CD81s-huMNC2scFv codonoptimized-CD8ecd fragment- CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3
zeta-C
(DNA)
atggccttaccagtgaccgccttgctcctgccgctggccttgctgctccacgccgccaggccggaagtgcagctggtgga
atctggcggcggactcgtgaagcctggcggctctctgagactgagctgtgccgccagcggcttcacctttagcggctacg
ccatgagctgggtgcgccaggctcctggcaaaggcctggaatgggtgtccaccatctctagcggcggcacctacatctac
taccccgacagcgtgaagggccggttcaccatcagccgggacaacgccaagaacagcctgtacctgcagatgaactccct
gcgggccgaggacaccgccgtgtactattgtgctagactgggcggcgacaactactacgagtacttcgacgtgtggggca
agggcaccaccgtgacagtgtctagcggaggcggaggatcaggcggcggaggaagtggcggagggggatctgatatcgtg
ctgacccagagccctgccagcctggctgtgtctcctggacagagggccaccatcacctgtcgggccagcaagagcgtgtc
cacctccggctacagctacatgcactggtatcagcagaagcccggccagccccccaagctgctgatctacctggccagca
acctggaaagcggcgtgcccgctagattttccggctctggcagcggcaccgacttcaccctgaccatcaaccccgtggaa
gccaacgacaccgccaattactactgccagcacagcagagagctgcccttcaccttcggcggaggcaccaaggtggaaat
caagcggaccacaacaacccctgcccccagacctcctaccccagcccctacaattgccagccagcctctgagcctgaggc
ccgaggcttgtagacctgctgctggcggagccgtgcacaccagaggactggatttcgcctgcgacatctacatctgggcg
cccttggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaaacggggcagaaagaaactcct
gtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaag
aagaagaaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtacaagcagggccagaaccag
ctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggg
gggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtg
agattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggac
acctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctgataa (SEQ ID NO: 722)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI
VLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPV
EANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRTTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIW
APLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQN
QLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATK
DTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 723)
CAR-T IgK C2 opCD8/CD8/4-lBB/CD3z #47
N-IgKls-huMNC2scFv codonoptimized-CD8ecd fragment- CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3
zeta-C
(DNA)
atggagacagacacactcctgctatgggtactgctgctctgggttccaggttccactggtgaagtgcagctggtggaatc
tggcggcggactcgtgaagcctggcggctctctgagactgagctgtgccgccagcggcttcacctttagcggctacgcca
tgagctgggtgcgccaggctcctggcaaaggcctggaatgggtgtccaccatctctagcggcggcacctacatctactac
cccgacagcgtgaagggccggttcaccatcagccgggacaacgccaagaacagcctgtacctgcagatgaactccctgcg
ggccgaggacaccgccgtgtactattgtgctagactgggcggcgacaactactacgagtacttcgacgtgtggggcaagg
gcaccaccgtgacagtgtctagcggaggcggaggatcaggcggcggaggaagtggcggagggggatctgatatcgtgctg
acccagagccctgccagcctggctgtgtctcctggacagagggccaccatcacctgtcgggccagcaagagcgtgtccac
ctccggctacagctacatgcactggtatcagcagaagcccggccagccccccaagctgctgatctacctggccagcaacc
tggaaagcggcgtgcccgctagattttccggctctggcagcggcaccgacttcaccctgaccatcaaccccgtggaagcc
aacgacaccgccaattactactgccagcacagcagagagctgcccttcaccttcggcggaggcaccaaggtggaaatcaa
gcggaccacaacaacccctgcccccagacctcctaccccagcccctacaattgccagccagcctctgagcctgaggcccg
aggcttgtagacctgctgctggcggagccgtgcacaccagaggactggatttcgcctgcgacatctacatctgggcgccc
ttggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaaacggggcagaaagaaactcctgta
tatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaag
aagaaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtacaagcagggccagaaccagctc
tataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatgggggg
aaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgaga
ttgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacc
tacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctgataa (SEQ ID NO: 724)
(amino acids)
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYY
PDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIV
L TQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPV
EANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRTTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIW
APLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQN
QLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATK
DTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 725)
CAR-T C2 CD8/CD8/4-lBB/CD3z op#48
N-CD81s-huMNC2scFv -CD8ecdfragment- CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta (all domai
ns codon optimized) -C
(DNA)
atggccttaccagtgaccgccttgctcctgccgctggccttgctgctccacgccgccaggccggaagtgcagctggtgga
atctggcggcggactcgtgaagcctggcggctctctgagactgagctgtgccgccagcggcttcacctttagcggctacg
ccatgagctgggtgcgccaggctcctggcaaaggcctggaatgggtgtccaccatctctagcggcggcacctacatctac
taccccgacagcgtgaagggccggttcaccatcagccgggacaacgccaagaacagcctgtacctgcagatgaactccct
gcgggccgaggacaccgccgtgtactattgtgctagactgggcggcgacaactactacgagtacttcgacgtgtggggca
agggcaccaccgtgacagtgtctagcggaggcggaggatcaggcggcggaggaagtggcggagggggatctgatatcgtg
ctgacccagagccctgccagcctggctgtgtctcctggacagagggccaccatcacctgtcgggccagcaagagcgtgtc
cacctccggctacagctacatgcactggtatcagcagaagcccggccagccccccaagctgctgatctacctggccagca
acctggaaagcggcgtgcccgctagattttccggctctggcagcggcaccgacttcaccctgaccatcaaccccgtggaa
gccaacgacaccgccaattactactgccagcacagcagagagctgcccttcaccttcggcggaggcaccaaggtggaaat
caagcggaccacaacaacccctgcccccagacctcctaccccagcccctacaattgccagccagcctctgagcctgaggc
ccgaggcttgtagacctgctgctggcggagccgtgcacaccagaggactggatttcgcctgcgacatctacatctgggcc
cctctggccggcacatgtggcgtgctgctgctgagcctcgtgatcaccctgtactgcaagcggggcagaaagaagctgct
gtacatcttcaagcagcccttcatgcggcccgtgcagaccacccaggaagaggacggctgctcctgcagattccccgagg
aagaagaaggcggctgcgagctgagagtgaagttcagcagatccgccgacgcccctgcctacaagcagggccagaaccag
ctgtacaacgagctgaacctgggcagacgggaagagtacgacgtgctggacaagcggagaggcagggaccctgagatggg
cggcaagcccagaagaaagaacccccaggaaggcctgtataacgaactgcagaaagacaagatggccgaggcctacagcg
agatcggaatgaagggcgagcggagaagaggcaagggccacgatggcctgtaccagggcctgagcaccgccaccaaggac
acctatgacgccctgcacatgcaggccctgcctcccagatgataa (SEQ ID NO: 726)
(amino acids)
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QLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATK
DTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 727)
CAR-T IgK C2 CD8/CD8/4-lBB/CD3zop #49
N-IgKls-huMNC2scFv -CD8ecdfragment- CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta (all domai
ns codon optimized) -C
(DNA)
atggagacagacacactcctgctatgggtactgctgctctgggttccaggttccactggtgaagtgcagctggtggaatc
tggcggcggactcgtgaagcctggcggctctctgagactgagctgtgccgccagcggcttcacctttagcggctacgcca
tgagctgggtgcgccaggctcctggcaaaggcctggaatgggtgtccaccatctctagcggcggcacctacatctactac
cccgacagcgtgaagggccggttcaccatcagccgggacaacgccaagaacagcctgtacctgcagatgaactccctgcg
ggccgaggacaccgccgtgtactattgtgctagactgggcggcgacaactactacgagtacttcgacgtgtggggcaagg
gcaccaccgtgacagtgtctagcggaggcggaggatcaggcggcggaggaagtggcggagggggatctgatatcgtgctg
acccagagccctgccagcctggctgtgtctcctggacagagggccaccatcacctgtcgggccagcaagagcgtgtccac
ctccggctacagctacatgcactggtatcagcagaagcccggccagccccccaagctgctgatctacctggccagcaacc
tggaaagcggcgtgcccgctagattttccggctctggcagcggcaccgacttcaccctgaccatcaaccccgtggaagcc
aacgacaccgccaattactactgccagcacagcagagagctgcccttcaccttcggcggaggcaccaaggtggaaatcaa
gcggaccacaacaacccctgcccccagacctcctaccccagcccctacaattgccagccagcctctgagcctgaggcccg
aggcttgtagacctgctgctggcggagccgtgcacaccagaggactggatttcgcctgcgacatctacatctgggcccct
ctggccggcacatgtggcgtgctgctgctgagcctcgtgatcaccctgtactgcaagcggggcagaaagaagctgctgta
catcttcaagcagcccttcatgcggcccgtgcagaccacccaggaagaggacggctgctcctgcagattccccgaggaag
aagaaggcggctgcgagctgagagtgaagttcagcagatccgccgacgcccctgcctacaagcagggccagaaccagctg
tacaacgagctgaacctgggcagacgggaagagtacgacgtgctggacaagcggagaggcagggaccctgagatgggcgg
caagcccagaagaaagaacccccaggaaggcctgtataacgaactgcagaaagacaagatggccgaggcctacagcgaga
tcggaatgaagggcgagcggagaagaggcaagggccacgatggcctgtaccagggcctgagcaccgccaccaaggacacc
tatgacgccctgcacatgcaggccctgcctcccagatgataa (SEQ ID NO: 728)
(amino acids)
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYY
PDSVKGRFTI SRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI
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QLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATK
DTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 729)
CAR-T C2 CD4/CD4/4-lBB/CD3z #50
N-CD81s-huMNC2scFv-CD4ecdfragment- CD4 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccttaccagtgaccgccttgctcctgccgctggccttgctgctccacgccgccaggccggaggtgcagctggtgga
gtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtggctatg
ccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtggcggaacctacatatac
taccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcct
gagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaatacttcgatgtctggggca
aagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgacattgtg
ctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcagagccagtaagagtgtcag
taccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcctgatttacctggcatcca
atctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctcacaattaatcctgtggaa
gctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcggagggaccaaggtggagat
caaacgaacttcgggacaggtcctgctggaatccaacatcaaggttctgcccacatggtccaccccggtgcagccaatgg
ccctgattgtgctggggggcgtcgccggcctcctgcttttcattgggctaggcatcttcttcaaacggggcagaaagaaa
ctcctgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttcc
agaagaagaagaaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtacaagcagggccaga
accagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgag
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cagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccacca
aggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctgataa (SEQ ID NO: 730)
(amino acids)
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YPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI
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KLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDP
EMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID
NO: 731)
CAR-T C2 FC/CD8/ 4-lBB/CD3z"Fc" CAR53
N-CD81s-huMNC2scFv-Human IgGlFc- CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccttaccagtgaccgccttgctcctgccgctggccttgctgctccacgccgccaggccggaggtgcagctggtgga
gtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtggctatg
ccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtggcggaacctacatatac
taccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcct
gagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaatacttcgatgtctggggca
aagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgacattgtg
ctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcagagccagtaagagtgtcag
taccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcctgatttacctggcatcca
atctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctcacaattaatcctgtggaa
gctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcggagggaccaaggtggagat
caaacgaactgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgt
cagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggac
gtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcg
ggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagt
acaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaa
ccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggctt
ctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctgg
actccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgc
tccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaaatctacatctgggc
gcccttggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaaacggggcagaaagaaactcc
tgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaa
gaagaagaaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtacaagcagggccagaacca
gctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatgg
ggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagt
gagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaagga
cacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctgataa (SEQ ID NO: 732)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI
V LTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINP
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VD VSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKG
QPRE PQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG
NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCS
CRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKM
AEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 733)
CAR-T C2 IgD/FC/CD8/4-lBB/CD3z"IgD-Fc" CAR54
N-CD81s-huMNC2scFv- IgD hinge-Human IgGl Fc- CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccttaccagtgaccgccttgctcctgccgctggccttgctgctccacgccgccaggccggaggtgcagctggtgga
gtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtggctatg
ccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtggcggaacctacatatac
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gagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaatacttcgatgtctggggca
aagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgacattgtg
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caaacgaactgagtctccaaaggcacaggcctcctcagtgcccactgcacaaccccaagcagagggcagcctcgccaagg
caaccacagccccagccaccacccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggagaaggagaaagaggaacaa
gaagagagagagacaaagacaccagagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaact
cctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacat
gcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgcc
aagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggct
gaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaag
ggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgc
ctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccac
gcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcagggga
acgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa
atctacatctgggcgcccttggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaaacgggg
cagaaagaaactcctgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagct
gccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtacaag
cagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccg
ggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatgg
cggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagt
acagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctgataa (SEQ ID NO: 734)
(amino acids)
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YPDSVKGRFTI SRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSD
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SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSL
SPGKIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADA
PAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLY
QGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 735)
CAR-T C2 FCHingelessY407R/CD8/4-lBB/CD3z "FcH" CAR55
N-CD81s-huMNC2scFv-Human IgGlhingeless Fc Y407R- CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3ze
ta-C
(DNA)
atggccttaccagtgaccgccttgctcctgccgctggccttgctgctccacgccgccaggccggaggtgcagctggtgga
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cgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgaga
aaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaag
aaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagcc
ggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctcaggagcaagctcaccgtggaca
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ctctccctgtctccgggtaaaatctacatctgggcgcccttggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttat
caccctttactgcaaacggggcagaaagaaactcctgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactc
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ggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctgata
a (SEQ ID NO:736)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI
VLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPV
EANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRTAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYV
D GVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREE
MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLRSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPGKIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKF
SRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGK
GHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 737)
CAR-T C2 IgD/FCHingeless Y407R/CD8/4-lBB/CD3z"IgD FcH" CAR56
N-CD81S- huMNC2scFv- IgD hinge-Human IgGl hingeless Fc Y407R- CD8
transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccttaccagtgaccgccttgctcctgccgctggccttgctgctccacgccgccaggccggaggtgcagctggtgga
gtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtggctatg
ccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtggcggaacctacatatac
taccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcct
gagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaatacttcgatgtctggggca
aagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgacattgtg
ctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcagagccagtaagagtgtcag
taccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcctgatttacctggcatcca
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caaacgaactgagtctccaaaggcacaggcctcctcagtgcccactgcacaaccccaagcagagggcagcctcgccaagg
caaccacagccccagccaccacccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggagaaggagaaagaggaacaa
gaagagagagagacaaagacaccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaagga
caccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttca
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gtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctccc
agcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccggg
aggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggag
agcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctcaggagcaa
gctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccact
acacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaaatctacatctgggcgcccttggccgggacttgtggggtccttctc
ctgtcactggttatcaccctttactgcaaacggggcagaaagaaactcctgtatatattcaaacaaccatttatgagacc
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ccccctcgctgataa (SEQ ID NO: 738)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI
VLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPV
EANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRTESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEE
QEERETKTPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYR
V VSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV
EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLRSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKIYIWAPLAGTCG
VLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNL
GRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHM
QALPPR** (SEQ ID NO:739)
CAR-T C2 IgD/CD8/4-lBB/CD3z"IgD" CAR57
N-CD81s-huMNC2scFv- IgD hinge-CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccttaccagtgaccgccttgctcctgccgctggccttgctgctccacgccgccaggccggaggtgcagctggtgga
gtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtggctatg
ccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtggcggaacctacatatac
taccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcct
gagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaatacttcgatgtctggggca
aagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgacattgtg
ctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcagagccagtaagagtgtcag
taccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcctgatttacctggcatcca
atctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctcacaattaatcctgtggaa
gctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcggagggaccaaggtggagat
caaacgaactgagtctccaaaggcacaggcctcctcagtgcccactgcacaaccccaagcagagggcagcctcgccaagg
caaccacagccccagccaccacccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggagaaggagaaagaggaacaa
gaagagagagagacaaagacaccaatctacatctgggcgcccttggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggt
tatcaccctttactgcaaacggggcagaaagaaactcctgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaacta
ctcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcagg
agcgcagacgcccccgcgtacaagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacga
tgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtaca
atgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcac
gatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctg
ataa (SEQ ID NO:740)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI
VLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPV
EANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRTESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEE
QEERETKTPIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFS
RSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKG
HDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 741)
CAR-T C2 X4/CD8/4-lBB/CD3z"X4" CAR58
N-CD81s-huMNC2scFv- X4 linker-CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccttaccagtgaccgccttgctcctgccgctggccttgctgctccacgccgccaggccggaggtgcagctggtgga
gtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtggctatg
ccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtggcggaacctacatatac
taccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcct
gagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaatacttcgatgtctggggca
aagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgacattgtg
ctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcagagccagtaagagtgtcag
taccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcctgatttacctggcatcca
atctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctcacaattaatcctgtggaa
gctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcggagggaccaaggtggagat
caaacgaactgacaagacgcacaccaagccacctaaaccagctccagaactgctcggaggtcctggcaccggaaccggag
gacctaccatcaaaccacctaagccacctaagcctgctcctaacctgctcggaggacctatctacatctgggcgcccttg
gccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaaacggggcagaaagaaactcctgtatat
attcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaag
aaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtacaagcagggccagaaccagctctat
aacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaa
gccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattg
ggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctac
gacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctgataa (SEQ ID NO: 742)
(amino acids)
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YPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI
VLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPV
EANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRTDKTHTKPPKPAPELLGGPGTGTGGPTIKPPKPPKPAPNLLGGPIYIWAP
LAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQL
YNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDT
YDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 743)
CAR-T E6 CD8/CD4/41BB/CD3z CAR37
N-CD81s-huMNE6scFv- CD8ecd- CD4transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggcggaggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaaacgacaac
cccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctgtaggcctg
ccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatggccctgattgtgctggggggcgtcgccggc
ctcctgcttttcattgggctaggcatcttcttcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttat
gaggccagtacagacgactcaagaggaagacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactgc
gcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggt
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gacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcag
gcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO:744)
(amino acids)
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YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
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GLLLFIGLGIFFKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNL
GRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHM
QALPPR* * (SEQ ID NO:745)
CAR-T E6 CD4/CD4/CD3z sequenceCAR23:
N-CD81s-huMNE6scFv- CD4ecd- CD4transmembrane- CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
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ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggggggggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaatcgggaca
ggtcctgctggaatccaacatcaaggttctgcccacatggtccaccccggtgcagccaatggccctgattgtgctggggg
gcgtcgccggcctcctgcttttcattgggctaggcatcttcttccgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgct
tacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggag
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ctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 7
46)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
IVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPED
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AYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQ
GLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 747)
CAR-T E6 CD4/CD4/CD28/CD3zsequence CAR25:
N-CD81s-huMNE6scFv- CD4ecd- CD4transmembrane- CD28- CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggggggggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaatcgggaca
ggtcctgctggaatccaacatcaaggttctgcccacatggtccaccccggtgcagccaatggccctgattgtgctggggg
gcgtcgccggcctcctgcttttcattgggctaggcatcttcttcagaagcaagcggtctcggctcctgcattctgattac
atgaacatgaccccaagaagaccaggccccaccaggaaacattaccagccctacgctccgccacgcgacttcgctgccta
ccggtcccgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctga
atctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcagg
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ggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctcc
atatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 748)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
IVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPED
F AVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKSGQVLLESNIKVLPTWSTPVQPMALIVLGGVAGLLLFIGLGIFFRSKRSRLLHS
DYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKP
RRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO:74
9)
CAR-T E6 CD4/CD4/4-lBB/CD3z sequence CAR31:
N-CD81s-huMNE6scFv- CD4ecd- CD4transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggggggggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaatcgggaca
ggtcctgctggaatccaacatcaaggttctgcccacatggtccaccccggtgcagccaatggccctgattgtgctggggg
gcgtcgccggcctcctgcttttcattgggctaggcatcttcttcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaag
cagccttttatgaggccagtacagacgactcaagaggaagacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagg
gtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagc
tgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgc
aggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaa
gggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccc
tccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 750)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
IVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPED
F AVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKSGQVLLESNIKVLPTWSTPVQPMALIVLGGVAGLLLFIGLGIFFKRGRKKLLYI
FKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGK
PRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO:7
51)
CAR-T E6 CD4/CD4/OX40/CD3zsequence:
N-CD81s-huMNE6scFv- CD4ecd- CD4transmembrane- OX40- CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggggggggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaatcgggaca
ggtcctgctggaatccaacatcaaggttctgcccacatggtccaccccggtgcagccaatggccctgattgtgctggggg
gcgtcgccggcctcctgcttttcattgggctaggcatcttcttccggagggaccagaggctgccccccgatgcccacaag
ccccctgggggaggcagtttccggacccccatccaagaggagcaggccgacgcccactccaccctggccaagatccgcgt
taagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagac
gggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccag
gagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacg
agggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcac
ttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 752)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
IVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPED
F AVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKSGQVLLESNIKVLPTWSTPVQPMALIVLGGVAGLLLFIGLGIFFRRDQRLPPDA
HKPPGGGSFRTPIQEEQADAHSTLAKIRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKN
PQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 753)
CAR-T E6 CD4/CD4/CD28/4-lBB/CD3z sequence CAR38 :
N-CD81s-huMNE6scFv- CD4ecd- CD4transmembrane- CD28- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggggggggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaatcgggaca
ggtcctgctggaatccaacatcaaggttctgcccacatggtccaccccggtgcagccaatggccctgattgtgctggggg
gcgtcgccggcctcctgcttttcattgggctaggcatcttcttcagaagcaagcggtctcggctcctgcattctgattac
atgaacatgaccccaagaagaccaggccccaccaggaaacattaccagccctacgctccgccacgcgacttcgctgccta
ccggtccaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaagagg
aagacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagccgac
gcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttgga
caaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgc
agaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctt
tatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ
ID NO: 754)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
IVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPED
FAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKSGQVLLESNIKVLPTWSTPVQPMALIVLGGVAGLLLFIGLGIFFRSKRSRLLHSD
YMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSA
DAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDG
LYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 755)
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gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
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ccggtcccggagggaccagaggctgccccccgatgcccacaagccccctgggggaggcagtttccggacccccatccaag
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cgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatgg
cagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtcc
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F AVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKSGQVLLESNIKVLPTWSTPVQPMALIVLGGVAGLLLFIGLGIFFRSKRSRLLHS
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KKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRD
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EANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRTSGQVLLESNIKVLPTWSTPVQPMALIVLGGVAGLLLFIGLGIFFRSKRS
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ADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHD
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(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
IVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPED
FAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERET
KTPEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR
E EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK
GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKIYI
WAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQ
NQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTAT
KDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 771)
CAR-T E6 IgD/FCHingelessY407R/CD8/4-lBB/CD3z
N-CD81S- huMNE6scFv- IgD hinge-Human IgGl hingeless Fc Y407R- CD8
transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggcggaggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaagagtctcc
aaaggcacaggcctcctcagtgcccactgcacaaccccaagcagagggcagcctcgccaaggcaaccacagccccagcca
ccacccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggagaaggagaaagaggaacaagaagagagagagacaaag
acaccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccg
gacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcg
tggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtc
ctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaac
catctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaacc
aggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggag
aacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctcaggagcaagctcaccgtggacaagag
caggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctct
ccctgtctccgggtaaaatctacatctgggcgcccttggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttatcacc
ctttactgcaaacggggcagaaagaaactcctgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaaga
ggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcaggagcgcag
acgcccccgcgtacaagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttg
gacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaact
gcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcc
tttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctgataa (S
EQ ID NO: 772)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTI SRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGS
EIVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPE
DFAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERE
TKTPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAP IEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESN
GQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLRSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKIYIWAPLAGTCGVLLLS
LVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREE
YDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPP
R** (SEQ ID NO:773)
NFATclP2—MMP9
(DNA)
caggcctggggacactcgcggcgggaagatttggaggggaggggagggggaggggcgtgggggcgcggcctcgctggagt
ccccctgaccccccgacccccgcccaccggcctgggcgtcctcccgcggcccctcctcccctcccggcgcccggtgctct
ggggcgcgtgccacgcctggctcggcgccgtaggggcccccgcaggtagagacccctggaaatggcctcgacgccgcagg
agcgaggcggccaccaccccgctaatccgggcacgtctctccaggccgaggcctgcggtggaaaagccggggttccattt
gtgctgagtcggggcggccgaatggagccaggcctcgggacgcgggacggacgggctctggccgcgcaccttcgcgggct
ctgcagcgcccgaccgcctcccccggcagggaggaggcgcttgtggggggcacccacggggcacagtgatccctgggggt
ctgcggacctcctgggccccgcagcagacacgagtttagcctttgggtttagtttaaatcacataagggtgtcgtgcaat
cgatttatggtttctacacaccagacactttaacctccaaccccccccatccaaagccaacaagaaaatgcggtgccgtg
ttggcagctgagctgcgcccgaagagacgcagggagacgtaagagaggaaagtgtgagtggccggggggcctccccccgt
cagaagtcgcgcagtcgcgcccataaaacgccccctccgggcggctagggcaggtgagcgcgtccccgggcctccccacg
ccggcccctgccacaggccgtctaggtcgagcagatatttacagaataaaaatgacaataactcgacgtcccgggacggc
cacgcaatctgttagtaatttagcgggatgggaatttcctttctagggcctgccagtgaagcgcttttccaaatttccac
agcgggggaagcctgcgattttacataatgacttcagcatgccgggctttctcgacacccctccccggcccccggccccc
gccccccgccccttttccagcagggccgggctccctccggacacccgcgtggactcaggcgtcccgtctggcccgttcgc
ccccgtttcccccgccagccccagcgcccccctgcccggcccccggattccccgttcccgcccctacgcccccatcccct
ccccgtgcgcccctccccgtgcgcccccctccccgtgcgccccccctccccgtgcgcccccctccccgtgcgccccccct
ccccgggcgcccccctccccgggcgccccccctccccgtgcgcccccccctccccgtgcgccccccctccccgtgcgcgc
cccgcctcttgcgcccctgcccccaggcgagcggctgccgcggcgcggggaggggcgggcgctcggcgactcgtccccgg
ggccccgcgcgggcccgggcagcaggggcgtgatgtcacggcagggagggggcgcgggagccgccgggccggcggggagg
cgggggaggtgttttccagctttaaaaaggcaggaggcagagcgcggccctgcgtcagagcgagactcagaggctccgaa
ctcgccggcggagtcgccgcgccagatcccagcagcagggcgcggaagcttctctcgacattcgtttctagagccaccat
gagcctctggcagcccctggtcctggtgctcctggtgctgggctgctgctttgctgcccccagacagcgccagtccaccc
ttgtgctcttccctggagacctgagaaccaatctcaccgacaggcagctggcagaggaatacctgtaccgctatggttac
actcgggtggcagagatgcgtggagagtcgaaatctctggggcctgcgctgctgcttctccagaagcaactgtccctgcc
cgagaccggtgagctggatagcgccacgctgaaggccatgcgaaccccacggtgcggggtcccagacctgggcagattcc
aaacctttgagggcgacctcaagtggcaccaccacaacatcacctattggatccaaaactactcggaagacttgccgcgg
gcggtgattgacgacgcctttgcccgcgccttcgcactgtggagcgcggtgacgccgctcaccttcactcgcgtgtacag
ccgggacgcagacatcgtcatccagtttggtgtcgcggagcacggagacgggtatcccttcgacgggaaggacgggctcc
tggcacacgcctttcctcctggccccggcattcagggagacgcccatttcgacgatgacgagttgtggtccctgggcaag
ggcgtcgtggttccaactcggtttggaaacgcagatggcgcggcctgccacttccccttcatcttcgagggccgctccta
ctctgcctgcaccaccgacggtcgctccgacggcttgccctggtgcagtaccacggccaactacgacaccgacgaccggt
ttggcttctgccccagcgagagactctacacccaggacggcaatgctgatgggaaaccctgccagtttccattcatcttc
caaggccaatcctactccgcctgcaccacggacggtcgctccgacggctaccgctggtgcgccaccaccgccaactacga
ccgggacaagctcttcggcttctgcccgacccgagctgactcgacggtgatggggggcaactcggcgggggagctgtgcg
tcttccccttcactttcctgggtaaggagtactcgacctgtaccagcgagggccgcggagatgggcgcctctggtgcgct
accacctcgaactttgacagcgacaagaagtggggcttctgcccggaccaaggatacagtttgttcctcgtggcggcgca
tgagttcggccacgcgctgggcttagatcattcctcagtgccggaggcgctcatgtaccctatgtaccgcttcactgagg
ggccccccttgcataaggacgacgtgaatggcatccggcacctctatggtcctcgccctgaacctgagccacggcctcca
accaccaccacaccgcagcccacggctcccccgacggtctgccccaccggaccccccactgtccacccctcagagcgccc
cacagctggccccacaggtcccccctcagctggccccacaggtccccccactgctggcccttctacggccactactgtgc
ctttgagtccggtggacgatgcctgcaacgtgaacatcttcgacgccatcgcggagattgggaaccagctgtatttgttc
aaggatgggaagtactggcgattctctgagggcagggggagccggccgcagggccccttccttatcgccgacaagtggcc
cgcgctgccccgcaagctggactcggtctttgaggagcggctctccaagaagcttttcttcttctctgggcgccaggtgt
gggtgtacacaggcgcgtcggtgctgggcccgaggcgtctggacaagctgggcctgggagccgacgtggcccaggtgacc
ggggccctccggagtggcagggggaagatgctgctgttcagcgggcggcgcctctggaggttcgacgtgaaggcgcagat
ggtggatccccggagcgccagcgaggtggaccggatgttccccggggtgcctttggacacgcacgacgtcttccagtacc
gagagaaagcctatttctgccaggaccgcttctactggcgcgtgagttcccggagtgagttgaaccaggtggaccaagtg
ggctacgtgacctatgacatcctgcagtgccctgaggacgattacaaggatgacgacgataagtgataa (SEQ ID NO
: 774)
NFATclP2-MMP9cat
(DNA)
caggcctggggacactcgcggcgggaagatttggaggggaggggagggggaggggcgtgggggcgcggcctcgctggagt
ccccctgaccccccgacccccgcccaccggcctgggcgtcctcccgcggcccctcctcccctcccggcgcccggtgctct
ggggcgcgtgccacgcctggctcggcgccgtaggggcccccgcaggtagagacccctggaaatggcctcgacgccgcagg
agcgaggcggccaccaccccgctaatccgggcacgtctctccaggccgaggcctgcggtggaaaagccggggttccattt
gtgctgagtcggggcggccgaatggagccaggcctcgggacgcgggacggacgggctctggccgcgcaccttcgcgggct
ctgcagcgcccgaccgcctcccccggcagggaggaggcgcttgtggggggcacccacggggcacagtgatccctgggggt
ctgcggacctcctgggccccgcagcagacacgagtttagcctttgggtttagtttaaatcacataagggtgtcgtgcaat
cgatttatggtttctacacaccagacactttaacctccaaccccccccatccaaagccaacaagaaaatgcggtgccgtg
ttggcagctgagctgcgcccgaagagacgcagggagacgtaagagaggaaagtgtgagtggccggggggcctccccccgt
cagaagtcgcgcagtcgcgcccataaaacgccccctccgggcggctagggcaggtgagcgcgtccccgggcctccccacg
ccggcccctgccacaggccgtctaggtcgagcagatatttacagaataaaaatgacaataactcgacgtcccgggacggc
cacgcaatctgttagtaatttagcgggatgggaatttcctttctagggcctgccagtgaagcgcttttccaaatttccac
agcgggggaagcctgcgattttacataatgacttcagcatgccgggctttctcgacacccctccccggcccccggccccc
gccccccgccccttttccagcagggccgggctccctccggacacccgcgtggactcaggcgtcccgtctggcccgttcgc
ccccgtttcccccgccagccccagcgcccccctgcccggcccccggattccccgttcccgcccctacgcccccatcccct
ccccgtgcgcccctccccgtgcgcccccctccccgtgcgccccccctccccgtgcgcccccctccccgtgcgccccccct
ccccgggcgcccccctccccgggcgccccccctccccgtgcgcccccccctccccgtgcgccccccctccccgtgcgcgc
cccgcctcttgcgcccctgcccccaggcgagcggctgccgcggcgcggggaggggcgggcgctcggcgactcgtccccgg
ggccccgcgcgggcccgggcagcaggggcgtgatgtcacggcagggagggggcgcgggagccgccgggccggcggggagg
cgggggaggtgttttccagctttaaaaaggcaggaggcagagcgcggccctgcgtcagagcgagactcagaggctccgaa
ctcgccggcggagtcgccgcgccagatcccagcagcagggcgcggaagcttctctcgacattcgtttctagagccaccat
gagcctctggcagcccctggtcctggtgctcctggtgctgggctgctgctttgctttccaaacctttgagggcgacctca
agtggcaccaccacaacatcacctattggatccaaaactactcggaagacttgccgcgggcggtgattgacgacgccttt
gcccgcgccttcgcactgtggagcgcggtgacgccgctcaccttcactcgcgtgtacagccgggacgcagacatcgtcat
ccagtttggtgtcgcggagcacggagacgggtatcccttcgacgggaaggacgggctcctggcacacgcctttcctcctg
gccccggcattcagggagacgcccatttcgacgatgacgagttgtggtccctgggcaagggcgtcgtggttccaactcgg
tttggaaacgcagatggcgcggcctgccacttccccttcatcttcgagggccgctcctactctgcctgcaccaccgacgg
tcgctccgacggcttgccctggtgcagtaccacggccaactacgacaccgacgaccggtttggcttctgccccagcgaga
gactctacacccaggacggcaatgctgatgggaaaccctgccagtttccattcatcttccaaggccaatcctactccgcc
tgcaccacggacggtcgctccgacggctaccgctggtgcgccaccaccgccaactacgaccgggacaagctcttcggctt
ctgcccgacccgagctgactcgacggtgatggggggcaactcggcgggggagctgtgcgtcttccccttcactttcctgg
gtaaggagtactcgacctgtaccagcgagggccgcggagatgggcgcctctggtgcgctaccacctcgaactttgacagc
gacaagaagtggggcttctgcccggaccaaggatacagtttgttcctcgtggcggcgcatgagttcggccacgcgctggg
cttagatcattcctcagtgccggaggcgctcatgtaccctatgtaccgcttcactgaggggccccccttgcataaggacg
acgtgaatggcatccggcacctctatggtcctcgccctgaacctgattacaaggatgacgacgataagtgataa (SEQ
ID NO: 775)
NFAT response element 2
(DNA)
aagaggaaaatttgtttcatacagaaggcgtt(SEQ ID NO: 776)
NFAT response element 2 repeats
(DNA)
aagaggaaaatttgtttcatacagaaggcgttaagaggaaaatttgtttcatacagaaggcgttaagaggaaaatttgtt
tcatacagaaggcgttaagaggaaaatttgtttcatacagaaggcgtt (SEQ ID NO: 777)
CMV minimal promoter 2
(DNA)
taggcgtgtacggtgggaggcctatataagcagagctcgtttagtgaaccgtcagatcgcctggagacgccatccacgct
gttttgacctccatagaagacaccgggaccgatccagc (SEQ ID NO: 778)
NFATRE2mCMV2-MMP9
(DNA)
aagaggaaaatttgtttcatacagaaggcgttaagaggaaaatttgtttcatacagaaggcgttaagaggaaaatttgtt
tcatacagaaggcgttaagaggaaaatttgtttcatacagaaggcgttactagttaggcgtgtacggtgggaggcctata
taagcagagctcgtttagtgaaccgtcagatcgcctggagacgccatccacgctgttttgacctccatagaagacaccgg
gaccgatccagcctctcgacattcgtttctagagccaccatgagcctctggcagcccctggtcctggtgctcctggtgct
gggctgctgctttgctgcccccagacagcgccagtccacccttgtgctcttccctggagacctgagaaccaatctcaccg
acaggcagctggcagaggaatacctgtaccgctatggttacactcgggtggcagagatgcgtggagagtcgaaatctctg
gggcctgcgctgctgcttctccagaagcaactgtccctgcccgagaccggtgagctggatagcgccacgctgaaggccat
gcgaaccccacggtgcggggtcccagacctgggcagattccaaacctttgagggcgacctcaagtggcaccaccacaaca
tcacctattggatccaaaactactcggaagacttgccgcgggcggtgattgacgacgcctttgcccgcgccttcgcactg
tggagcgcggtgacgccgctcaccttcactcgcgtgtacagccgggacgcagacatcgtcatccagtttggtgtcgcgga
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acgcccatttcgacgatgacgagttgtggtccctgggcaagggcgtcgtggttccaactcggtttggaaacgcagatggc
gcggcctgccacttccccttcatcttcgagggccgctcctactctgcctgcaccaccgacggtcgctccgacggcttgcc
ctggtgcagtaccacggccaactacgacaccgacgaccggtttggcttctgccccagcgagagactctacacccaggacg
gcaatgctgatgggaaaccctgccagtttccattcatcttccaaggccaatcctactccgcctgcaccacggacggtcgc
tccgacggctaccgctggtgcgccaccaccgccaactacgaccgggacaagctcttcggcttctgcccgacccgagctga
ctcgacggtgatggggggcaactcggcgggggagctgtgcgtcttccccttcactttcctgggtaaggagtactcgacct
gtaccagcgagggccgcggagatgggcgcctctggtgcgctaccacctcgaactttgacagcgacaagaagtggggcttc
tgcccggaccaaggatacagtttgttcctcgtggcggcgcatgagttcggccacgcgctgggcttagatcattcctcagt
gccggaggcgctcatgtaccctatgtaccgcttcactgaggggccccccttgcataaggacgacgtgaatggcatccggc
acctctatggtcctcgccctgaacctgagccacggcctccaaccaccaccacaccgcagcccacggctcccccgacggtc
tgccccaccggaccccccactgtccacccctcagagcgccccacagctggccccacaggtcccccctcagctggccccac
aggtccccccactgctggcccttctacggccactactgtgcctttgagtccggtggacgatgcctgcaacgtgaacatct
tcgacgccatcgcggagattgggaaccagctgtatttgttcaaggatgggaagtactggcgattctctgagggcaggggg
agccggccgcagggccccttccttatcgccgacaagtggcccgcgctgccccgcaagctggactcggtctttgaggagcg
gctctccaagaagcttttcttcttctctgggcgccaggtgtgggtgtacacaggcgcgtcggtgctgggcccgaggcgtc
tggacaagctgggcctgggagccgacgtggcccaggtgaccggggccctccggagtggcagggggaagatgctgctgttc
agcgggcggcgcctctggaggttcgacgtgaaggcgcagatggtggatccccggagcgccagcgaggtggaccggatgtt
ccccggggtgcctttggacacgcacgacgtcttccagtaccgagagaaagcctatttctgccaggaccgcttctactggc
gcgtgagttcccggagtgagttgaaccaggtggaccaagtgggctacgtgacctatgacatcctgcagtgccctgaggac
gattacaaggatgacgacgataagtgataa(SEQ ID NO:779)
NFATRE2mCMV2-MMP9cat
(DNA)
aagaggaaaatttgtttcatacagaaggcgttaagaggaaaatttgtttcatacagaaggcgttaagaggaaaatttgtt
tcatacagaaggcgttaagaggaaaatttgtttcatacagaaggcgttactagttaggcgtgtacggtgggaggcctata
taagcagagctcgtttagtgaaccgtcagatcgcctggagacgccatccacgctgttttgacctccatagaagacaccgg
gaccgatccagcctcgagctctcgacattcgtttctagagccaccatgagcctctggcagcccctggtcctggtgctcct
ggtgctgggctgctgctttgctttccaaacctttgagggcgacctcaagtggcaccaccacaacatcacctattggatcc
aaaactactcggaagacttgccgcgggcggtgattgacgacgcctttgcccgcgccttcgcactgtggagcgcggtgacg
ccgctcaccttcactcgcgtgtacagccgggacgcagacatcgtcatccagtttggtgtcgcggagcacggagacgggta
tcccttcgacgggaaggacgggctcctggcacacgcctttcctcctggccccggcattcagggagacgcccatttcgacg
atgacgagttgtggtccctgggcaagggcgtcgtggttccaactcggtttggaaacgcagatggcgcggcctgccacttc
cccttcatcttcgagggccgctcctactctgcctgcaccaccgacggtcgctccgacggcttgccctggtgcagtaccac
ggccaactacgacaccgacgaccggtttggcttctgccccagcgagagactctacacccaggacggcaatgctgatggga
aaccctgccagtttccattcatcttccaaggccaatcctactccgcctgcaccacggacggtcgctccgacggctaccgc
tggtgcgccaccaccgccaactacgaccgggacaagctcttcggcttctgcccgacccgagctgactcgacggtgatggg
gggcaactcggcgggggagctgtgcgtcttccccttcactttcctgggtaaggagtactcgacctgtaccagcgagggcc
gcggagatgggcgcctctggtgcgctaccacctcgaactttgacagcgacaagaagtggggcttctgcccggaccaagga
tacagtttgttcctcgtggcggcgcatgagttcggccacgcgctgggcttagatcattcctcagtgccggaggcgctcat
gtaccctatgtaccgcttcactgaggggccccccttgcataaggacgacgtgaatggcatccggcacctctatggtcctc
gccctgaacctgattacaaggatgacgacgataagtgataa (SEQ ID NO :780)
NFATcl Promoter fragment (PI)
(DNA)
aggcaggaggaagaggaaaggggcgcagggcgctcggggagcagagccgggggcccgcggtggccgcagaggccgggccg
gggcgcagaggccgggcgagctggccgcgctctgggccgccgcctccggaactccctgcgcctggcgcgcggccaccgtg
gtcccggcaacggcattaaacagagggaaacagacccgggattccgtcacccgggcggggggataaggacggctttgaga
gcagacaggaaaagggagcttttctgcatggggtgaaaaaattatttattgaaggaggaggaggcggcagcggaggaagg
ggaggggcgggaggaggaggaagagccggccgcccccgccccggccccggctcctcaggagccaagggcagcctcgccag
gtcggtcccgggctcgaggaccgcggctggggtcgaggggctcagtctcccacgtgaccggctgggcgcgccccgccaga
cccggcctcgggattccctcctcccggcgagtctccgcccgccccgtcctggaggtggggagaaggagggcggggcgggg
gggacggaaactctccccgccaaatcctggccccaggcctggggacactcgcggcgggaagatttggaggggaggggagg
gggaggggcgtgggggcgcggcctcgctggagtccccctgaccccccgacccccgcccaccggcctgggcgtcctcccgc
ggcccctcctcccctcccggcgcccggtgctctggggcgcgtgccacgcctggctcggcgccgtaggggcccccgcaggt
agagacccctggaaatggcctcgacgccgcaggagcgaggcggccaccaccccgctaatccgggcacgtctctccaggcc
gaggcctgcggtggaaaagccggggttccatttgtgctgagtcggggcggccgaatggagccaggcctcgggacgcggga
cggacgggctctggccgcgcaccttcgcgggctctgcagcgcccgaccgcctcccccggcagggaggaggcgcttgtggg
gggcacccacggggcacagtgatccctgggggtctgcggacctcctgggccccgcagcagacacgagtttagcctttggg
tttagtttaaatcacataagggtgtcgtgcaatcgatttatggtttctacacaccagacactttaacctccaaccccccc
catccaagccaacaagaaaatgcggtgccgtgttggcagctgagctgcgcccgaagagacgcagggagacgtaagagagg
aaagtgtgagtggccggggggcctccccccgtcagaagtcgcgcagtcgcgcccataaaacgccccctccgggcggctag
ggcaggtgagcgcgtccccgggcctccccacgccggcccctgccacagagccgtctaggtcgagcagatatttacagaat
aaaaatgacaataactcgacgtcccgggacggccacgcaatctgttagtaatttagcgggatgggaatttcctttctagg
gcctgccagtgaagcgcttttccaaatttccacagcgggggaagcctgcgattttacataatgacttcagcatgccgggc
tttctcgacacccctccccggcccccggcccccgccccccgccccttttccagcagggccgggctccctccggacacccg
cgtggactcaggcgtcccgtctggcccgttcgcccccgtttcccccgccagccccagcgcccccctgcccggcccccgga
ttccccgttcccgcccctacgcccccatcccctccccgtgcgcccctccccgtgcgcccccctccccgtgcgccccccct
ccccgtgcgcccccctccccgtgcgccccccctccccgggcgcccccctccccgggcgccccccctccccgtgcgccccc
ccctccccgtgcgccccccctccccgtgcgcgccccgcctcttgcgcccctgcccccaggcgagcggctgccgcggcgcg
gggaggggcgggcgctcggcgactcgtccccggggccccgcgcgggcccgggcagcaggggcgtgatgtcacggcaggga
gggggcgcgggagccgccgggccggcggggaggcgggggaggtgttttccagctttaaaaaggcaggaggcagagcgcgg
ccctgcgtcagagcgagactcagaggctccgaactcgccggcggagtcgccgcgccagatcccagcagcagggcgcgg(S
EQ ID NO:781)
NFATcl Promoter fragment
(DNA)
aggcaggaggaagaggaaaggggcgcagggcgctcggggagcagagccgggggcccgcggtggccgcagaggccgggccg
gggcgcagaggccgggcgagctggccgcgctctgggccgccgcctccggaactccctgcgcctggcgcgcggccaccgtg
gtcccggcaacggcattaaacagagggaaacagacccgggattccgtcacccgggcggggggataaggacggctttgaga
gcagacaggaaaagggagcttttctgcatggggtgaaaaaattatttattgaaggaggaggaggcggcagcggaggaagg
ggaggggcgggaggaggaggaagagccggccgcccccgccccggccccggctcctcaggagccaagggcagcctcgccag
gtcggtcccgggctcgaggaccgcggctggggtcgaggggctcagtctcccacgtgaccggctgggcgcgccccgccaga
cccggcctcgggattccctcctcccggcgagtctccgcccgccccgtcctggaggtggggagaaggagggcggggcgggg
gggacggaaactctccccgccaaatcctggccccaggcctggggacactcgcggcgggaagatttggaggggaggggagg
gggaggggcgtgggggcgcggcctcgctggagtccccctgaccccccgacccccgcccaccggcctgggcgtcctcccgc
ggcccctcctcccctcccggcgcccggtgctctggggcgcgtgccacgcctggctcggcgccgtaggggcccccgcaggt
agagacccctggaaatggcctcgacgccgcaggagcgaggcggccaccaccccgctaatccgggcacgtctctccaggcc
gaggcctgcggtggaaaagccggggttccatttgtgctgagtcggggcggccgaatggagccaggcctcgggacgcggga
cggacgggctctggccgcgcaccttcgcgggctctgcagcgcccgaccgcctcccccggcagggaggaggcgcttgtggg
gggcacccacggggcacagtgatccctgggggtctgcggacctcctgggccccgcagcagacacgagtttagcctttggg
tttagtttaaatcacataagggtgtcgtgcaatcgatttatggtttctacacaccagacactttaacctccaaccccccc
catccaagccaacaagaaaatgcggtgccgtgttggcagctgagctgcgcccgaagagacgcagggagacgtaagagagg
aaagtgtgagtggccggggggcctccccccgtcagaagtcgcgcagtcgcgcccataaaacgccccctccgggcggctag
ggcaggtgagcgcgtccccgggcctccccacgccggcccctgccacagagccgtctaggtcgagcagatatttacagaat
aaaaatgacaataactcgacgtcccgggacggccacgcaatctgttagtaatttagcgggatgggaatttcctttctagg
gcctgccagtgaagcgcttttccaaatttccacagcgggggaagcctgcgattttacataatgacttcagcatgccgggc
tttctcgacacccctccccggcccccggcccccgccccccgccccttttccagcagggccgggctccctccggacacccg
cgtggactcaggcgtcccgtctggcccgttcgcccccgtttcccccgccagccccagcgcccccctgcccggcccccgga
ttccccgttcccgcccctacgcccccatcccctccccgtgcgcccctccccgtgcgcccccctccccgtgcgccccccct
ccccgtgcgcccccctccccgtgcgccccccctccccgggcgcccccctccccgggcgccccccctccccgtgcgccccc
ccctccccgtgcgccccccctccccgtgcgcgccccgcctcttgcgcccctgcccccaggcgagcggctgccgcggcgcg
gggaggggcgggcgctcggcgactcgtccccggggccccgcgcgggcccgggcagcaggggcgtgatgtcacggcaggga
gggggcgcgggagccgccgggccggcggggaggcgggggaggtgttttccagctttaaaaaggcaggaggcagagcgcgg
ccctgcgtcagagcgagactcagagg (SEQ ID NO: 782)
NFATcl Promoter fragment (P3)
(DNA)
caggcctggggacactcgcggcgggaagatttggaggggaggggagggggaggggcgtgggggcgcggcctcgctggagt
ccccctgaccccccgacccccgcccaccggcctgggcgtcctcccgcggcccctcctcccctcccggcgcccggtgctct
ggggcgcgtgccacgcctggctcggcgccgtaggggcccccgcaggtagagacccctggaaatggcctcgacgccgcagg
agcgaggcggccaccaccccgctaatccgggcacgtctctccaggccgaggcctgcggtggaaaagccggggttccattt
gtgctgagtcggggcggccgaatggagccaggcctcgggacgcgggacggacgggctctggccgcgcaccttcgcgggct
ctgcagcgcccgaccgcctcccccggcagggaggaggcgcttgtggggggcacccacggggcacagtgatccctgggggt
ctgcggacctcctgggccccgcagcagacacgagtttagcctttgggtttagtttaaatcacataagggtgtcgtgcaat
cgatttatggtttctacacaccagacactttaacctccaaccccccccatccaaagccaacaagaaaatgcggtgccgtg
ttggcagctgagctgcgcccgaagagacgcagggagacgtaagagaggaaagtgtgagtggccggggggcctccccccgt
cagaagtcgcgcagtcgcgcccataaaacgccccctccgggcggctagggcaggtgagcgcgtccccgggcctccccacg
ccggcccctgccacaggccgtctaggtcgagcagatatttacagaataaaaatgacaataactcgacgtcccgggacggc
cacgcaatctgttagtaatttagcgggatgggaatttcctttctagggcctgccagtgaagcgcttttccaaatttccac
agcgggggaagcctgcgattttacataatgacttcagcatgccgggctttctcgacacccctccccggcccccggccccc
gccccccgccccttttccagcagggccgggctccctccggacacccgcgtggactcaggcgtcccgtctggcccgttcgc
ccccgtttcccccgccagccccagcgcccccctgcccggcccccggattccccgttcccgcccctacgcccccatcccct
ccccgtgcgcccctccccgtgcgcccccctccccgtgcgccccccctccccgtgcgcccccctccccgtgcgccccccct
ccccgggcgcccccctccccgggcgccccccctccccgtgcgcccccccctccccgtgcgccccccctccccgtgcgcgc
cccgcctcttgcgcccctgcccccaggcgagcggctgccgcggcgcggggaggggcgggcgctcggcgactcgtccccgg
ggccccgcgcgggcccgggcagcaggggcgtgatgtcacggcagggagggggcgcgggagccgccgggccggcggggagg
cgggggaggtgttttccagctttaaaaaggcaggaggcagagcgcggccctgcgtcagagcgagactcagaggctccgaa
ctcgccggcggagtcgccgcgccagatcccagcagcagggcgcgg (SEQ ID NO: 783)
pNFAT-MMP9cat-1 gBLOCK sequence
(DNA)
aagaggaaaatttgtttcatacagaaggcgttactagttaggcgtgtacggtgggaggcctatataagcagagctcgttt
agtgaaccgtcagatcgcctggagacgccatccacgctgttttgacctccatagaagacaccgggaccgatccagcctct
cgacattcgtttctagagccaccatgagcctctggcagcccctggtcctggtgctcctggtgctgggctgctgctttgct
ttccaaacctttgagggcgacctcaagtggcaccaccacaacatcacctattggatccaaaactactcggaagacttgcc
gcgggcggtgattgacgacgcctttgcccgcgccttcgcactgtggagcgcggtgacgccgctcaccttcactcgcgtgt
acagccgggacgcagacatcgtcatccagtttggtgtcgcggagcacggagacgggtatcccttcgacgggaaggacggg
ctcctggcacacgcctttcctcctggccccggcattcagggagacgcccatttcgacgatgacgagttgtggtccctggg
caagggcgtcgtggttccaactcggtttggaaacgcagatggcgcggcctgccacttccccttcatcttcgagggccgct
cctactctgcctgcaccaccgacggtcgctccgacggcttgccctggtgcagtaccacggccaactacgacaccgacgac
cggtttggcttctgccccagcgagagactctacacccaggacggcaatgctgatgggaaaccctgccagtttccattcat
cttccaaggccaatcctactccgcctgcaccacggacggtcgctccgacggctaccgctggtgcgccaccaccgccaact
acgaccgggacaagctcttcggcttctgcccgacccgagctgactcg (SEQ ID NO: 784)
pNFAT-MMP9ca -2 gBLOCK sequence:
(DNA)
ttcggcttctgcccgacccgagctgactcgacggtgatggggggcaactcggcgggggagctgtgcgtcttccccttcac
tttcctgggtaaggagtactcgacctgtaccagcgagggccgcggagatgggcgcctctggtgcgctaccacctcgaact
ttgacagcgacaagaagtggggcttctgcccggaccaaggatacagtttgttcctcgtggcggcgcatgagttcggccac
gcgctgggcttagatcattcctcagtgccggaggcgctcatgtaccctatgtaccgcttcactgaggggccccccttgca
taaggacgacgtgaatggcatccggcacctctatggtcctcgccctgaacctgattacaaggatgacgacgataagtgat
aagctagctcgactcgacaatcaacctctggattacaaaatttgtgaaagattgactggtattcttaactatgttgctcc
ttttacgctatgtggatacgctgctttaatgcctttgtatcatgctattgcttcccgtatggctttcattttctcctcct
tgtataaatcctggttgctgtctctttatgaggagttgtggcccgttgtcaggcaacgtggcgtggtgtgcactgtgttt
gctgacgcaacccccactggttggggcattgccaccacctgtcagctcctttccgggactttcgctttccccctccctat
tgccacggcggaactcatcgccgcctgccttgcccgctgctggacaggggctcggctgttgggcactgacaattccgtgg
tgttgtcggggaaatcatcgtcctttccttggctgctcgcctgtgttgccacctggattctgcgcgggacgtccttctgc
tacgtcccttcggccctcaatccagcggaccttccttcccgcggcctgctgccggctctgcggcctcttccgcatcttcg
ccttcgccctcagacgagtcggatctccctttgggccgcctccccgcctggaattaattcgagctcggtacctttaagac
caatgacttacaaggcagctgtag (SEQ ID NO: 785)
Primer
(DNA)
tagatggtaccaagaggaaaatttgtttcatacag(SEQ ID NO: 786)
Primer
(DNA)
tagataagcttgctggatcggtcccggtgtc(SEQ ID NO: 787)
Primer
(DNA)
tcatacagaaggcgttactagttaggcgtgtacggtgg(SEQ ID NO: 788)
Primer
(DNA)
acagtaccggattgccaagcttttatcacttatcgtcgtcatccttg(SEQ ID NO: 789)
Primer
(DNA)
aagttggtaccgttccaaacctttgagggcgacc(SEQ ID NO: 790)
Primer
(DNA)
aagttctcgagcaggttcagggcgaggaccatag(SEQ ID NO: 791)
Primer
(DNA)
attgactcgagctctcgacattcgtttctagagc(SEQ ID NO: 792)
Primer
(DNA)
attgaaagcttttatcacttatcgtcgtcatccttg(SEQ ID NO: 793)
Primer
(DNA)
tagcaaaataggctgtccc (SEQ ID NO:794)
Primer
(DNA)
attgactcgaggctggatcggtcccggtgtc(SEQ ID NO: 795)
Primer
(DNA)
aagacaccgggaccgatccagcctcgagagacccaagctggctagccacc(SEQ ID NO: 796)
Primer
(DNA)
ttaccaacagtaccggattgccaagcttttatcacttatcgtcgtcatcc(SEQ ID NO: 797)
Primer
(DNA)
attgaaagcttctctcgacattcgtttctagagc(SEQ ID NO: 798)
Primer
(DNA)
attgagagctcttatcacttatcgtcgtcatc(SEQ ID NO: 799)
NFAT modif 1 gBLOCK sequence:
(DNA)
attctgtggataaccgtattaccgctagcatggatctcggggacgtctaactactaagcgagagtagggaactgccaggc
atcaaataaaacgaaaggctcagtcggaagactgggcctttcgttttatctgttgtttgtcggtgaacgctctcctgagt
aggacaaatccgccgggagcggatttgaacgttgtgaagcaacggcccggagggtggcgggcaggacgcccgccataaac
tgccaggcatcaaactaagcagaaggccatcctgacggatggcctttttgcgtttctacaaactcttcctgttagttagt
tacttaagctcgggccccaaattatgattttgttctgactgatagtgacctgttcgttgcaacaaattgataagcaatgc
ttttttataatgccaactttgtacaaaaaagcaggcttcgctgtgccttctagttgccagccatctgttgtttgcccctc
ccccgtgccttccttgaccctggaaggtgccactcccactgtcctttcctaataaaatgaggaaattgcatcgcattgtc
tgagtaggtgtcattctattctggggggtggggtggggcaggacagcaagggggaggattgggaagacaatagcaggcat
gctggggatgcggtgggctctatggttcgaaggagatagaaccagatcttgactagtggtaccgaattccaggcctgggg
acactcgcggcgggaa (SEQ ID NO: 800)
NFAT modif 2 gBLOCK sequences :
(DNA)
acaaggatgacgacgataagtgataagagctcgctagcgatatcgccaccatgggggtaaaagttcttttcgcgcttatc
tgtatcgcggttgcagaagctaaaccaacagaaaataatgaagactttaacattgttgccgtggcatcgaacttcgccac
aaccgatttggacgctgatcgcgggaaactgcccggcagccaccacggctcgcaaagctcggtttgcccggacttgcacc
gttgtgggcgcgggcaagcgcatcgtgagcagcgtcgcttgcagcaccgtgggcgcggccagcaattacgcgaccacgga
agccgttgttaaccacgcgaagtagcacgtcaagaagctgccgctggaggtgctcaaagagctggaagccaatgcccgga
aagctggctgcaccaggggctgtctgatctgcctgtcccacatcaagtgcacgcccaagatgaagaagttcatcccagga
cgctgccacacctacgaaggcgacaaagagtccgcacagggcggcataggcgaggcgatcgtcgacattcctgagattcc
tgggttcaaggacttggagcccctggagcagttcatcgcacaggtcgatctgtgtgtggactgcacaactggctgcctca
aagggcttgccaacgtgcagtgttctgacctgctcaagaagtggctgccgcaacgctgtgcgacctttgccagcaagatc
cagggccaggtggacaagatcaagggggccggtggtgactaagcggccgctcgagcatgcatctagaaataattcttact
gt (SEQID NO: 801)
Primer
(DNA)
acaaaattcaaaattttatcgatactagttggcctaactggccggtaccaag(SEQ ID NO: 802)
Primer
(DNA)
atccgatttaaattcgaattcgctagcttatcacttatcgtcgtcatcc(SEQ ID NO: 803)
NFAT consensus sequence :
(A/T) GGAAA (A/N) (A/T/C) N (SEQID NO:804)
Current NFAT RE (Form SystemBiosciences . The sequence is from the mouse IL2 pro
moter
(DNA)
aagaggaaaatttgtttcatacagaaggcgtt(SEQ ID NO: 805)
Mouse IL2 Promoter (highlightedin green the NFAT RE used, highlighted in yellow
is the start codon)
(DNA)
aactagagacatataaaataacaccaacatccttagatacaacccttcctgagaatttattggacatcatactcttttta
aaaagcataataaacatcaagacacttacacaaaatatgttaaattaaatttaaaacaacaacgacaaaatagtacctca
agctcaacaagcattttaggtgtccttagcttactatttctctggctaactgtatgaagccatctatcaccctgtgtgca
attagctcattgtgtagataagaaggtaaaaccatcttgaaacaggaaaccaatatccttcctgtctaatcaacaaatct
aaaagatttattcttttcatctatctcctcttgcgtttgtccaccacaacaggctgcttacaggttcaggatggttttga
caaagagaacattttcatgagttacttttgtgtctccaccccaaagaggaaaatttgtttcatacagaaggcgttcattg
tatgaattaaaactgccacctaagtgtgggctaacccgaccaagagggatttcacctaaatccattcagtcagtgtatgg
gggtttaaagaaattccagagagtcatcagaagaggaaaaacaaaaggtaatgctttctgccacacaggtagactctttg
aaaatatgtgtaatatgtaaaacatcgtgacacccccatattatttttccagcattaacagtataaattgcctcccatgc
tgaagagctgcctatcacccttgctaatcactcctcacagtgacctcaagtcctgcaggcatgtacagcatgcagctcgc
atcctgtgtcac (SEQ ID NO: 806)
NFAT RE (Form PRomega. Thesequence is from the humane IL2 promoter
(DNA)
ggaggaaaaactgtttcatacagaaggcgt(SEQ ID NO: 807)
Possible NFAT RE from ET-1promoter
(DNA)
tccagggaaaatcggagtagaacaagagggatg(SEQ ID NO: 808)
Possible NFAT RE from ET-1promoter
(DNA)
actgttggaaaacgtaaacacgttattaaacggt(SEQ ID NO: 809)
Possible NFAT RE from human CD3Y
(DNA)
tccttaacggaaaaacaaaa (SEQ ID NO:810)
Possible NFAT RE from human CD3Y
(DNA)
aaaggaaaaagtatatgttc (SEQ ID NO:811)
Possible NFAT RE from human IL3promoter
(DNA)
atgccatggaaagggtg (SEQ ID NO:812)
Possible NFAT RE from human GPC6
(DNA)
aaggggaaatgttgagtctaga (SEQ IDNO: 813)
Possible NFAT RE from humangrowth hormone-releasing hormone
NFATcl promoter large
(DNA)
ttatgccgtctagaggagacatactttctactcaaagctacacacatagactacaacgatgggaaaagacgacacaccaa
cagcgacttcaggaaagctggagtggctgctaatgttagacaaaataggctttttaaaaaaggttttattaaagaggaat
gtttcgtaatgataaaagcactaatctgtgagaaagatacaacaatgataaacatacgtgcagctaataagagagctcca
aaatctatgaagcaaaaactcacagaatgaggggagaagcagttctacaacagagaatggggacttcgatactccacttt
caataatggatacaacaaccaggcagataacaaggcaacagaaggcctgaacaacagtataaaccaattagacctaccag
atatctatagctagcacactccacccaacgacagcagaatacacattcttctcaagcgcacaagtaacatcctccaggat
gggccatgttctaggccatcaaacaaactcaggtggtttgaggccagaggcctctcttttaaccaccacactagggcctt
cggaggaggcaagcagagagttgtcaaagaggccctcaggactgggtgcagtggctcatgactgtaatcccagcacttta
gaaggctgaggcacaaggatcttttgagctcaggagttcaagaaatgagcacttatccactgggcgcggtggctcacgcc
agtaatccagcactttgggaggcttaggcgggcggatcaagaggtcagaagctcaagaccagcctgaccaacatggtgaa
accccgtctctactaaaagtacaaaaattagccgggcgtggtggcgcacacctgtaatcccagctacttgggaggctgag
gcaggagaatcacttgaacccgggaggtggaggttgcagtgagtggagatcacaccattgcaccccagcctgggcaacag
agcgagactccgtctcaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaagaaagaaagaaaaagaaaaaaaaagtgagcatgtattttgcca
gagtctggagattagaattaaattagcaaaccagaattatagaaaaagctatttacttttaagtaaacagctgagatttt
tttttttaagtcagtgtgaatgaagctcacagccatggttggagctgagaaagaaggatttccctttagttatgcacctg
tgtcagcaccttctgactttccttctaaagtctggggtgttcctgaggatccgtaagtttggggttcagggtttctacag
catgctgttacttgtgaaacatctctttaaccatgtcccagagttgcccaggagtttaagaccagcctgagcaacatagc
aagacctcatctcaacaacaacaaaaattagaaataaattagccaggtgtggtgacatgtgcctgtagtcccagctactc
agaaggctgaggcatgaggatcacttgggcccaggaagttggggctgcagggagccctgttcatgccgctgcactccagc
ctgcaagacagagcagaaaaaaagaatcaggatcctgggcagagggaggagaggggaccggggtccagcaagcacttggg
gattgactgaatggcgttggggagagatgactccaaagtcctggagtgggtgagaatgactgcgagtggcttttaggtgg
ggaggttcctgcctggccactccgggaggggacgtggggctgaagggtatcaggtgccgtgctgagcagtttggccttga
tcctaatgccctggacacacgtctagggtaggaaagttgactgatccattggtgatctgagtttttagacatggtggtag
tccatgaggtgggtgttcatgctaagagtttagacagggaaacctatgaagcccttagcaaccctccagggaaggggcgt
ggttaaagagatgtttcataagtaacagcatggtatagaaactctgaaccccaaatgtatgggtcctcaggaacacccca
gactttagaaggaaagtcagaaggtgctgacacgggtgtataactaaagggaaatccttctttctcagctccaaccatgg
ctgtgaggttcattcacactgacttaaaaaaaaaaatctcagtttacttaaaagtaaatagctttttctataattctggt
ttgctaatttaatcctagtctccagaccctggctaaataaatgcccatttctccagatggtctcaagagtctctggacat
cgtgggggcccttccctgttggttggaaggtgcctcaggaagaagggggtggattctgagttgagtcaaaacctcaaaga
cccctgatgggaaaagctctcaagtgaccaccgctgtgggccagaatgcaaaactgcaggaacagaacattcgcaggaac
agaacacagtcgtattaagtgattttcccgagcaggaagtggcatctggcctgcggttcagtagggggaggaaagggtgg
gcgcacctgcccctggctggcgcacctgccaggtagccccacgcggcaccgcgtgtgccgagcgcccctgaggatggaaa
gccccacgcggggcaggtggcacccaccctccgaagacgggacgggatggagcgttgagcttcggggcagctccggcccg
gcccgcgctggagacgcccgcatctgccaggatggcgtctcatagccctggtgctcacacatgacgccaggaagccccag
caacagtgaccgcccaggctctagaaaatattggacggggtggatgaacacccaagtgcgctccaggagaagggatttgg
caccccaaggggcttttaaaacggtaagcttctaggggtgtctttgcccccaataatccatagaaacaacagtcatctaa
aaatagtcttgttttctgtcctaagctccttttaactttgttagtcatcaccaatcctaaaataaaacccgtgtaacgtc
tcccctagtagcggctataaacaaacctacgaggaggcaggaggaagaggaaaggggcgcagggcgctcggggagcagag
ccgggggcccgcggtggccgcagaggccgggccggggcgcagaggccgggcgagctggccgcgctctgggccgccgcctc
cggaactccctgcgcctggcgcgcggccaccgtggtcccggcaacggcattaaacagagggaaacagacccgggattccg
tcacccgggcggggggataaggacggctttgagagcagacaggaaaagggagcttttctgcatggggtgaaaaaattatt
tattgaaggaggaggaggcggcagcggaggaaggggaggggcgggaggaggaggaagagccggccgcccccgccccggcc
ccggctcctcaggagccaagggcagcctcgccaggtcggtcccgggctcgaggaccgcggctggggtcgaggggctcagt
ctcccacgtgaccggctgggcgcgccccgccagacccggcctcgggattccctcctcccggcgagtctccgcccgccccg
tcctggaggtggggagaaggagggcggggcgggggggacggaaactctccccgccaaatcctggccccaggcctggggac
actcgcggcgggaagatttggaggggaggggagggggaggggcgtgggggcgcggcctcgctggagtccccctgaccccc
cgacccccgcccaccggcctgggcgtcctcccgcggcccctcctcccctcccggcgcccggtgctctggggcgcgtgcca
cgcctggctcggcgccgtaggggcccccgcaggtagagacccctggaaatggcctcgacgccgcaggagcgaggcggcca
ccaccccgctaatccgggcacgtctctccaggccgaggcctgcggtggaaaagccggggttccatttgtgctgagtcggg
gcggccgaatggagccaggcctcgggacgcgggacggacgggctctggccgcgcaccttcgcgggctctgcagcgcccga
ccgcctcccccggcagggaggaggcgcttgtggggggcacccacggggcacagtgatccctgggggtctgcggacctcct
gggccccgcagcagacacgagtttagcctttgggtttagtttaaatcacataagggtgtcgtgcaatcgatttatggttt
ctacacaccagacactttaacctccaaccccccccatccaaagccaacaagaaaatgcggtgccgtgttggcagctgagc
tgcgcccgaagagacgcagggagacgtaagagaggaaagtgtgagtggccggggggcctccccccgtcagaagtcgcgca
gtcgcgcccataaaacgccccctccgggcggctagggcaggtgagcgcgtccccgggcctccccacgccggcccctgcca
caggccgtctaggtcgagcagatatttacagaataaaaatgacaataactcgacgtcccgggacggccacgcaatctgtt
agtaatttagcgggatgggaatttcctttctagggcctgccagtgaagcgcttttccaaatttccacagcgggggaagcc
tgcgattttacataatgacttcagcatgccgggctttctcgacacccctccccggcccccggcccccgccccccgcccct
tttccagcagggccgggctccctccggacacccgcgtggactcaggcgtcccgtctggcccgttcgcccccgtttccccc
gccagccccagcgcccccctgcccggcccccggattccccgttcccgcccctacgcccccatcccctccccgtgcgcccc
tccccgtgcgcccccctccccgtgcgccccccctccccgtgcgcccccctccccgtgcgccccccctccccgggcgcccc
cctccccgggcgccccccctccccgtgcgcccccccctccccgtgcgccccccctccccgtgcgcgccccgcctcttgcg
cccctgcccccaggcgagcggctgccgcggcgcggggaggggcgggcgctcggcgactcgtccccggggccccgcgcggg
cccgggcagcaggggcgtgatgtcacggcagggagggggcgcgggagccgccgggccggcggggaggcgggggaggtgtt
ttccagctttaaaaaggcaggaggcagagcgcggccctgcgtcagagcgagactcagaggctccgaactcgccggcggag
tcgccgcgccagatcccagcagcagggcgcgggcaccggggcgcgggcagggctcggagccaccgcgcaggtcctagggc
cgcggccgggccccgccacgcgcgcacacgcccctcgatg (SEQ ID NO: 815)
NFATc3 promoter sequence
(DNA)
gcagccaggcagggtgggcgcgcgtagggggcggggccgggcgcgcggcagggcgcgagagcgcacccgcggcggcggtg
gcggcgactgtgggggggcggcggggaacattggctaagccgacagtggaggcttaggcaccggtggcgggcggctgcgg
ttcctggtgctgctcggcgcgcggccagctttcggaacggaacgctcggcgtcgcgggccccgcccggaaagtttgccgt
ggagtcgcgacctcttggcccgcgcggcccggcatgaagcggcgttgaggagctgctgccgccgcttgccgctgccgccg
ccgccgcctgaggaggagctgcagcaccctgggccacgccg (SEQ ID NO: 816)
NFATc2 promoter sequence 1
(DNA)
cagagagaggctgcgttcagactggggcactgccatcccctccgcatca
tggggtctgtggaccaaggtaactgactctcgatcccttccagccttttccgctcgctcctcccggccctttcctgctgc
tcccgtcccgggcagcactttcagctcccggcagaggtcggtgcgggaggcctggggaccccgctcgccctcggcgcaca
ggtagcggggcccgcggaggggcgcccgcgccccggccagggaagggacacttgggaaggcgactttggacaactttacg
cgggggcagggaagtgtcccaggccgggattccctaggccagtctgtcgggaggattttcctctccacgggacaccggga
gggattctcgctactaaccgctggctgtttaaccgtttcagcactcggcttttgacagcaa (SEQ ID NO: 817)
NFATc2 promoter sequence 2
(DNA)
catcatggggtctgtggaccaaggtaactgactctcgatcccttccagccttttccgctcgctc(SEQ ID NO: 818)
NFATcl response elementconsensus
(DNA)
cattttttccat (SEQ ID NO: 819)
NFATcl response elementconsensus
(DNA)
tttttcca (SEQ ID NO: 820)
NFAT response elements containedwithin the Foxp3 enhancer region
(DNA)
acttgaaaatgagataaatgttcacctatgttggcttctagtctcttttatggcttcatt
ttttccatttactatagaggttaagagtgtgggtactggagccagactgtctgggacaa(SEQ ID NO: 821)
muE6 IgD/CD8/41BB/CD3z
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtgaaggtggtgga
gtctgggggagacttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgtagtctctggattcactttcagtagatatg
gcatgtcttgggttcgccagactccaggcaagaggctggagtgggtcgcaaccattagtggtggcggtacttacatctac
tatccagacagtgtgaaggggcgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaccctgtacctgcaaatgagcagtct
gaagtctgaggacacagccatgtatcactgtacaagggataactacggtaggaactacgactacggtatggactactggg
gtcaaggaacctcagtcaccgtctcctcaggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatcccaaatt
gttctcacccagtctccagcaatcatgtctgcatctccaggggaggaggtcaccctaacctgcagtgccacctcaagtgt
aagttacatacactggttccagcagaggccaggcacttctcccaaactctggatttatagcacatccaacctggcttctg
gagtccctgttcgcttcagtggcagtggatatgggacctcttactctctcacaatcagccgaatggaggctgaagatgct
gccacttattactgccagcaaaggagtagttccccattcacgttcggctcggggacaaagttggaaataaaagagtctcc
aaaggcacaggcctcctcagtgcccactgcacaaccccaagcagagggcagcctcgccaaggcaaccacagccccagcca
ccacccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggagaaggagaaagaggaacaagaagagagagagacaaag
acaccaatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcaa
aaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaagaggaagacgggt
gctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgct
tacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggag
aggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagata
agatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggc
ctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 8
22)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVKVVESGGDLVKPGGSLKLSCVVSGFTFSRYGMSWVRQTPGKRLEWVATISGGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMYHCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQ
IVLTQSPAIMSASPGEEVTLTCSATSSVSYIHWFQQRPGTSPKLWIYSTSNLASGVPVRFSGSGYGTSYSLTISRMEAED
AATYYCQQRSSSPFTFGSGTKLEIKESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERET
KTP IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADA
PAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLY
QGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 823)
muC2 IgD/CD8/41BB/CD3z
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggagga
gtcagggggaggcttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgcagcctctggattcactttcagtggctatg
ccatgtcttgggttcgccagactccggagaagaggctggagtgggtcgcaaccattagtagtggtggtacttatatctac
tatccagacagtgtgaaggggcgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaccctgtacctgcaaatgagcagtct
gaggtctgaggacacggccatgtattactgtgcaagacttgggggggataattactacgaatacttcgatgtctggggcg
cagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgacattgtg
atcacacagtctacagcttccttaggtgtatctctggggcagagggccaccatctcatgcagggccagcaaaagtgtcag
tacatctggctatagttatatgcactggtaccaacagagaccaggacagccacccaaactcctcatctatcttgcatcca
acctagaatctggggtccctgccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcaccctcaacatccatcctgtggag
gaggaggatgctgcaacctattactgtcagcacagtagggagcttccgttcacgttcggaggggggaccaagctggagat
aaaagagtctccaaaggcacaggcctcctcagtgcccactgcacaaccccaagcagagggcagcctcgccaaggcaacca
cagccccagccaccacccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggagaaggagaaagaggaacaagaagag
agagagacaaagacaccaatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattac
cctgtactgcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaag
aggaagacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagcc
gacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgtt
ggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagt
tgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggc
ctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (
SEQ ID NO:824)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLEESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSGYAMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTAMYYCARLGGDNYYEYFDVWGAGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI
VITQSTASLGVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYMHWYQQRPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPV
E EEDAATYYCQHSRELPFTFGGGTKLEIKESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQ
EERETKTPIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSR
SADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGH
DGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 825)
muE6 CD28/CD28/CD28/CD3z
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtgaaggtggtgga
gtctgggggagacttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgtagtctctggattcactttcagtagatatg
gcatgtcttgggttcgccagactccaggcaagaggctggagtgggtcgcaaccattagtggtggcggtacttacatctac
tatccagacagtgtgaaggggcgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaccctgtacctgcaaatgagcagtct
gaagtctgaggacacagccatgtatcactgtacaagggataactacggtaggaactacgactacggtatggactactggg
gtcaaggaacctcagtcaccgtctcctcaggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatcccaaatt
gttctcacccagtctccagcaatcatgtctgcatctccaggggaggaggtcaccctaacctgcagtgccacctcaagtgt
aagttacatacactggttccagcagaggccaggcacttctcccaaactctggatttatagcacatccaacctggcttctg
gagtccctgttcgcttcagtggcagtggatatgggacctcttactctctcacaatcagccgaatggaggctgaagatgct
gccacttattactgccagcaaaggagtagttccccattcacgttcggctcggggacaaagttggaaataaaaaaacacct
ttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagcccttttgggtgctggtggtggttggtggagtcctggcttgctata
gcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggtgagaagcaagcggtctcggctcctgcattctgattacatgaac
atgaccccaagaagaccaggccccaccaggaaacattaccagccctacgctccgccacgcgacttcgctgcctaccggtc
ccgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcg
gtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaac
ccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaag
gagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgc
aggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 826)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVKVVESGGDLVKPGGSLKLSCVVSGFTFSRYGMSWVRQTPGKRLEWVATISGGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMYHCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQ
IVLTQSPAIMSASPGEEVTLTCSATSSVSYIHWFQQRPGTSPKLWIYSTSNLASGVPVRFSGSGYGTSYSLTISRMEAED
A ATYYCQQRSSSPFTFGSGTKLEIKKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDY
MNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRR
KNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 827
)
muC2 CD28/CD28/CD28/CD3z
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggagga
gtcagggggaggcttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgcagcctctggattcactttcagtggctatg
ccatgtcttgggttcgccagactccggagaagaggctggagtgggtcgcaaccattagtagtggtggtacttatatctac
tatccagacagtgtgaaggggcgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaccctgtacctgcaaatgagcagtct
gaggtctgaggacacggccatgtattactgtgcaagacttgggggggataattactacgaatacttcgatgtctggggcg
cagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgacattgtg
atcacacagtctacagcttccttaggtgtatctctggggcagagggccaccatctcatgcagggccagcaaaagtgtcag
tacatctggctatagttatatgcactggtaccaacagagaccaggacagccacccaaactcctcatctatcttgcatcca
acctagaatctggggtccctgccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcaccctcaacatccatcctgtggag
gaggaggatgctgcaacctattactgtcagcacagtagggagcttccgttcacgttcggaggggggaccaagctggagat
aaaaaaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagcccttttgggtgctggtggtggttggtggagtcc
tggcttgctatagcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggtgagaagcaagcggtctcggctcctgcattct
gattacatgaacatgaccccaagaagaccaggccccaccaggaaacattaccagccctacgctccgccacgcgacttcgc
tgcctaccggtcccgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacg
agctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcct
cgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaat
gaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacg
ccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 828)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLEESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSGYAMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGTYIY
YPDSVKGRFTI SRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTAMYYCARLGGDNYYEYFDVWGAGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSD
IVITQSTASLGVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYMHWYQQRPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHP
VEEEDAATYYCQHSRELPFTFGGGTKLEIKKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLL
HS DYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMG
GKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO
:829)
CD19 IgD/CD8/41BB/CD3z
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagacatacagatgacgca
gacgaccagcagcctttccgcttccctgggcgaccgagtaaccattagttgtagagcatctcaggatatttctaagtatc
tgaattggtaccaacagaaacctgatggcactgtcaagctcttgatatatcacaccagtcgactccattcaggcgtccct
tccagattcagtgggagtggcagcgggactgattactccctcactatctctaacctggaacaggaagacatcgctacata
cttctgtcagcagggaaacactctcccctatacctttgggggaggaaccaagttggaaataacaggcggtggcggatccg
gcggtggcggatccggcggtggcggatccgaggtgaaactgcaggagtcaggacctggcctggtggcgccctcacagagc
ctgtccgtcacatgcactgtctcaggggtctcattacccgactatggtgtaagctggattcgccagcctccacgaaaggg
tctggagtggctgggagtaatatggggtagtgaaaccacatactataattcagctctcaaatccagactgaccatcatca
aggacaactccaagagccaagttttcttaaaaatgaacagtctgcaaactgatgacacagccatttactactgtgccaaa
cattattactacggtggtagctatgctatggactactggggccaaggaacctcagtcaccgtctcctcagagtctccaaa
ggcacaggcctcctcagtgcccactgcacaaccccaagcagagggcagcctcgccaaggcaaccacagccccagccacca
cccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggagaaggagaaagaggaacaagaagagagagagacaaagaca
ccaatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcaaaag
gggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaagaggaagacgggtgct
catgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttac
aagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagagg
ccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataaga
tggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctg
tccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 830)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVP
SRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGGGGSGGGGSGGGGSEVKLQESGPGLVAPSQS
LSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAK
HYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSSESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKT
P IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPA
YKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQG
LSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 831)
t若しくはgを表わす; mは、a若しくはcを表す; rは、a若しくはgを表す; sは、c若しくは
gを表わす; wは、a若しくはtを表す、そしれ、yはc若しくはtを表わす。
MUC1 Receptor
(Mucin 1 precursor, GenbankAccession number: P15941)
MTPGTQSPFFLLLLLTVLTVVTGSGHASSTPGGEKETSATQRSSVPSSTEKNAVSMTSSVLSSHSPGSGSSTTQGQDVTL
APATEPASGSAATWGQDVTSVPVTRPALGSTTPPAHDVTSAPDNKPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTS
APDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTS
APDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTS
APDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTS
APDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTS
APDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTS
APDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTS
APDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTS
APDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTS
APDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTS
APDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDNRPALGSTAPPVHNVTS
ASGSASGSASTLVHNGTSARATTTPASKSTPFS IPSHHSDTPTTLASHSTKTDASSTHHSSVPPLTSSNHSTSPQLSTG
VSFFFLSFHISNLQ FNSSLEDPSTDYYQELQRDISEMFLQIYKQGGFLGLSNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVE
TQFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGAGVPGWGIALLVLVCVLVALAIVYLIALAVCQCRRKNYGQLDIFP
ARDTYHPMSEYPTYHTHGRYVPPSSTDRSPYEKVSAGNGGSSLSYTNPAVAAASANL (SEQ ID NO : 1 )
PSMGFR
GTINVHDVETQFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGA (SEQ ID NO: 2)
Human NME1
(DNA)
atggccaactgtgagcgtaccttcattgcgatcaaaccagatggggtccagcggggtcttgtgggagagattatcaagcg
ttttgagcagaaaggattccgccttgttggtctgaaattcatgcaagcttccgaagatcttctcaaggaacactacgttg
acctgaaggaccgtccattctttgccggcctggtgaaatacatgcactcagggccggtagttgccatggtctgggagggg
ctgaatgtggtgaagacgggccgagtcatgctcggggagaccaaccctgcagactccaagcctgggaccatccgtggaga
cttctgcatacaagttggcaggaacattatacatggcagtgattctgtggagagtgcagagaaggagatcggcttgtggt
ttcaccctgaggaactggtagattacacgagctgtgctcagaactggatctatgaatga (SEQ ID NO: 3)
(amino acids)
MANCERTFIAIKPDGVQRGLVGEIIKRFEQKGFRLVGLKFMQASEDLLKEHYVDLKDRPFFAGLVKYMHSGPVVAMVWEG
LNVVKTGRVMLGETNPADSKPGTIRGDFCIQVGRNIIHGSDSVESAEKEIGLWFHPEELVDYTSCAQNWIYE- (SEQID
NO: 4)
Human NME7
(DNA)
atgaatcatagtgaaagattcgttttcattgcagagtggtatgatccaaatgcttcacttcttcgacgttatgagctttt
attttacccaggggatggatctgttgaaatgcatgatgtaaagaatcatcgcacctttttaaagcggaccaaatatgata
acctgcacttggaagatttatttataggcaacaaagtgaatgtcttttctcgacaactggtattaattgactatggggat
caatatacagctcgccagctgggcagtaggaaagaaaaaacgctagccctaattaaaccagatgcaatatcaaaggctgg
agaaataattgaaataataaacaaagctggatttactataaccaaactcaaaatgatgatgctttcaaggaaagaagcat
tggattttcatgtagatcaccagtcaagaccctttttcaatgagctgatccagtttattacaactggtcctattattgcc
atggagattttaagagatgatgctatatgtgaatggaaaagactgctgggacctgcaaactctggagtggcacgcacaga
tgcttctgaaagcattagagccctctttggaacagatggcataagaaatgcagcgcatggccctgattcttttgcttctg
cggccagagaaatggagttgttttttccttcaagtggaggttgtgggccggcaaacactgctaaatttactaattgtacc
tgttgcattgttaaaccccatgctgtcagtgaaggactgttgggaaagatcctgatggctatccgagatgcaggttttga
aatctcagctatgcagatgttcaatatggatcgggttaatgttgaggaattctatgaagtttataaaggagtagtgaccg
aatatcatgacatggtgacagaaatgtattctggcccttgtgtagcaatggagattcaacagaataatgctacaaagaca
tttcgagaattttgtggacctgctgatcctgaaattgcccggcatttacgccctggaactctcagagcaatctttggtaa
aactaagatccagaatgctgttcactgtactgatctgccagaggatggcctattagaggttcaatacttcttcaagatct
tggataattag (SEQ ID NO: 5)
(amino acids)
MNHSERFVFIAEWYDPNASLLRRYELLFYPGDGSVEMHDVKNHRTFLKRTKYDNLHLEDLFIGNKVNVFSRQLVLIDYGD
QYTARQLGSRKEKTLALIKPDAI SKAGEI IEIINKAGFTITKLKMMMLSRKEALDFHVDHQSRPFFNELIQFITTGP
IIAMEILRDDAICEWKRLLGPANSGVARTDASESIRALFGTDGIRNAAHGPDSFASAAREMELFFPSSGGCGPANTAKFT
NCTCCIVKPHAVSEGLLGKILMAIRDAGFEISAMQMFNMDRVNVEEFYEVYKGVVTEYHDMVTEMYSGPCVAMEIQQNNA
TKTFREFCGPADPEIARHLRPGTLRAIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFFKILDN- (SEQ ID NO : 6 )
NME7 peptides
NME7A peptide 1 (A domain)MLSRKEALDFHVDHQS (SEQ ID NO : 7 )
NME7A peptide 2 (A domain)SGVARTDASES (SEQ ID NO : 8 )
NME7B peptide 1 (B domain)DAGFEI SAMQMFNMDRVNVE (SEQ ID NO : 9 )
NME7B peptide 2 (B domain)EVYKGVVTEYHDMVTE (SEQ ID NO : 10 )
NME7B peptide 3 (B domain)AIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFF (SEQ ID NO : 11 )
Mouse E6 Heavy chain variableregion sequence:
(DNA)
gaggtgaaggtggtggagtctgggggagacttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgtagtctctggatt
cactttcagtagatatggcatgtcttgggttcgccagactccaggcaagaggctggagtgggtcgcaaccattagtggtg
gcggtacttacatctactatccagacagtgtgaaggggcgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaccctgtac
ctgcaaatgagcagtctgaagtctgaggacacagccatgtatcactgtacaagggataactacggtaggaactacgacta
cggtatggactactggggtcaaggaacctcagtcaccgtctcctca (SEQ ID NO: 12)
(amino acids)
EVKVVESGGDLVKPGGSLKLSCVVSGFTFSRYGMSWVRQTPGKRLEWVATISGGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNTL
YL QMSSLKSEDTAMYHCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTSVTVSS (SEQID NO: 13)
Mouse E6 heavy chain variableframework region 1 (FWR1) sequence:
(DNA)
gaggtgaaggtggtggagtctgggggagacttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgtagtctct(SEQ
ID NO: 14)
(amino acids)
EVKVVESGGDLVKPGGSLKLSCVVSGFTFS(SEQ ID NO: 15)
Mouse E6 heavy chain variablecomplementarity determining regions 1 (CDR1) sequen
ce :
(DNA)
ggattcactttcagtagatatggcatgtct(SEQ ID NO: 16)
(amino acids)
RYGMS (SEQ ID NO: 17)
Mouse E6 heavy chain variableframework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
tgggttcgccagactccaggcaagaggctggagtgggtcgca(SEQ ID NO: 18)
(amino acids)
WVRQTPGKRLEWVA (SEQ ID NO : 19 )
Mouse E6 heavy chain variablecomplementarity determining regions 2 (CDR2) sequen
ce :
(DNA)
accattagtggtggcggtacttacatctactatccagacagtgtgaagggg(SEQ ID NO: 20)
(amino acids)
TISGGGTYIYYPDSVKG (SEQ ID NO :21 )
Mouse E6 heavy chain variableframework region 3 (FWR3) acid sequence:
(DNA)
cgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaccctgtacctgcaaatgagcagtctgaagtctgaggacacagccat
gtatcactgtacaagg (SEQ ID NO: 22)
(amino acids)
RFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMYHCTR (SEQ ID NO: 23)
Mouse E6 heavy chain variablecomplementarity determining regions 3 (CDR3) sequen
ce :
(DNA)
gataactacggtaggaactacgactacggtatggactac(SEQ ID NO: 24)
(amino acids)
DNYGRNYDYGMDY (SEQ ID NO: 25)
IGHV3-21*03 heavy chain variableregion sequence:
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtagctatagcatgaactgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcatccattagtagta
gtagtagttacatatactacgcagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtgcgaga (SEQ ID NO: 26)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSSSSYIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLY
LQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 27)
IGHV3-21*01 heavy chain variableframework region 1 (FWR1) sequence:
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagt(SEQ ID NO:28)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO : 29 )
IGHV3-21*01 heavy chain variablecomplementarity determining regions 1 (CDR1) seq
uence :
(DNA)
agctatagcatgaac (SEQ ID NO: 30)
(amino acids)
SYSMN (SEQ ID NO: 31)
IGHV3-21*01 heavy chain variableframework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
tgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctca(SEQ ID NO: 32)
(amino acids)
WVRQAPGKGLEWVS (SEQ ID NO: 33)
IGHV3-21*01 heavy chain variablecomplementarity determining regions 2 (CDR2) seq
uence :
(DNA)
tccattagtagtagtagtagttacatatactacgcagactcagtgaagggc(SEQ ID NO: 34)
(amino acids)
SISSSSSYIYYADSVKG (SEQ ID NO:35)
IGHV3-21*01 heavy chain variableframework region 3 (FWR3) sequence:
(DNA)
cgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgt
gtattactgtgcgaga (SEQ ID NO: 36)
(amino acids)
RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 37)
Humanized E6 heavy chainvariable region sequence:
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtaggtatggcatgagctgggtccgccaggctccagggaagaggctggagtgggtctcaaccattagtggcg
gaggcacctacatatactacccagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacaccctgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtaccagagataactatggccgcaactatgatta
tggcatggattattggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagc (SEQ ID NO: 38)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNTL
Y LQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSS (SEQID NO : 39 )
Humanized E6 heavy chainvariable framework region 1 (FWR1) acid sequence:
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagt (SEQ ID NO: 40)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO : 41 )
Humanized E6 heavy chainvariable complementarity determining regions 1 (CDR1) se
quence :
(DNA)
aggtatggcatgagc (SEQ ID NO: 42)
(amino acids)
RYGMS (SEQ ID NO: 43)
Humanized E6 heavy chainvariable framework region 2 (FWR2) acid sequence:
(DNA)
tgggtccgccaggctccagggaagaggctggagtgggtctca(SEQ ID NO: 44)
(amino acids)
WVRQAPGKRLEWVS (SEQ ID NO: 45)
Humanized E6 heavy chainvariable complementarity determining regions 2 (CDR2) se
quence :
(DNA)
accattagtggcggaggcacctacatatactacccagactcagtgaagggc(SEQ ID NO: 46)
(amino acids)
TI SGGGTYIYYPDSVKG (SEQ ID NO:47)
Humanized E6 heavy chainvariable framework region 3 (FWR3) acid sequence:
(DNA)
cgattcaccatctccagagacaacgccaagaacaccctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgt
gtattactgtaccaga (SEQ ID NO: 48)
(amino acids)
RFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR (SEQ ID NO : 49 )
Humanized E6 heavy chainvariable complementarity determining regions 3 (CDR3) se
quence :
(DNA)
gataactatggccgcaactatgattatggcatggattat(SEQ ID NO: 50)
(amino acids)
DNYGRNYDYGMDY (SEQ ID NO: 51)
Humanized E6 IgG2 heavy chainsynthesized by Genescript :
(DNA)
gaattctaagcttgggccaccatggaactggggctccgctgggttttccttgttgctattttagaaggtgtccagtgtga
ggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattca
ccttcagtaggtatggcatgagctgggtccgccaggctccagggaagaggctggagtgggtctcaaccattagtggcgga
ggcacctacatatactacccagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacaccctgtatct
gcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtaccagagataactatggccgcaactatgattatg
gcatggattattggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagcgcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcg
ccctgctccaggagcacctccgagagcacagccgccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggt
gtcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctcaggactctactccctca
gcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacacc
aaggtggacaagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagt
cttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtga
gccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggag
gagcagttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgttgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaa
gtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccac
aggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctac
cccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactc
cgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccg
tgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatagtaagtttaaactcta
ga (SEQ ID NO:52)
(amino acids)
EF*AWATMELGLRWVFLVAILEGVQCEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGG
G TYIYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPL
APCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSN
TKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR
EEQFN STFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTI SKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK
GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* *
V*TLX(SEQ ID NO:53)
Human IgG2 heavy chain constantregion sequence :
(DNA)
gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagccgccctgggctg
cctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcc
cagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggcacccagacc
tacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgccc
accgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctccc
ggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggc
gtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgt
tgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaa
ccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaac
caggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccgga
gaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaaga
gcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctc
tccctgtctccgggtaaatag (SEQ ID NO: 54)
(amino acids)
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQT
YTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDG
VE VHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTI SKTKGQPREPQVYTLPPSREEMT
KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQK
SLSLSPGK (SEQ ID NO:55)
Humanized E6 IgGl heavy chainsequence:
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtaggtatggcatgagctgggtccgccaggctccagggaagaggctggagtgggtctcaaccattagtggcg
gaggcacctacatatactacccagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacccactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtcccagagataactatggccgcaactatgatta
tggcatggattattggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagcgctagcaccaagggcccatcggtcttccccctgg
caccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacg
gtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccct
cagcagcgtggtgacagtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaaca
ccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctg
gggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgt
ggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaaga
caaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaat
ggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggca
gccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctgg
tcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcct
cccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgt
cttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatgat
aa (SEQ ID NO:56)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNPL
YLQMNSLRAEDTAVYYCPRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPV
TVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEL
LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWL
NGKEY KCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYK
TTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* * (SEQ ID NO: 57)
Human IgGl heavy chain constantregion sequence :
(DNA)
gctagcaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctg
cctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcc
cggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgacagtgccctccagcagcttgggcacccagacc
tacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactca
cacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccc
tcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactgg
tacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcag
cgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagccc
ccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggag
atgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaa
tgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctca
ccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacg
cagaagagcctctccctgtctccgggtaaatgataa (SEQ ID NO: 58)
(amino acids)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQT
YICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFN
WYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAP IEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR
EEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH
YTQKSLSLSPGK** (SEQ ID NO:59)
Human IgGl heavy chain constantregion gBLOCK#l sequence:
(DNA)
atggcatggattattggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagcgctagcaccaagggcccatcggtcttccccctg
gcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgac
ggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccc
tcagcagcgtggtgacagtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaac
accaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcct
ggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcg
tggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaag
(SEQ ID NO: 60)
Human IgGl heavy chain constantregion gBLOCK#2 sequence :
(DNA)
tacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcag
cgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagccc
ccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggag
atgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaa
tgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctca
ccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacg
cagaagagcctctccctgtctccgggtaaatgataagtttaaacccgctgatcagcctcgactgtgccttctagttg (S
EQ IDNO: 61)
E6 heavy chain variable regionoverlapping sequence:
(DNA)
atggcatggattattggggccagggcaccct(SEQ ID NO: 62)
IgGl heavy chain constant regionoverlapping region sequence:
(DNA)
tacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaag(SEQ ID NO: 63)
pCDNA3.1 V5 and pSECTag2overlapping sequence :
(DNA)
ccgctgatcagcctcgactgtgccttctagttg(SEQ ID NO: 64)
Mouse E6 Light Chain variableregion sequence:
(DNA)
caaattgttctcacccagtctccagcaatcatgtctgcatctccaggggaggaggtcaccctaacctgcagtgccacctc
aagtgtaagttacatacactggttccagcagaggccaggcacttctcccaaactctggatttatagcacatccaacctgg
cttctggagtccctgttcgcttcagtggcagtggatatgggacctcttactctctcacaatcagccgaatggaggctgaa
gatgctgccacttattactgccagcaaaggagtagttccccattcacgttcggctcggggacaaagttggaaataaaa (
SEQ ID NO: 65)
(amino acids)
QIVLTQSPAIMSASPGEEVTLTCSATSSVSYIHWFQQRPGTSPKLWIYSTSNLASGVPVRFSGSGYGTSYSLTISRMEAE
D AATYYCQQRSSSPFTFGSGTKLEIK (SEQ ID NO : 66 )
Mouse E6 light chain variableframework region 1 (FWR1) sequence:
(DNA)
caaattgttctcacccagtctccagcaatcatgtctgcatctccaggggaggaggtcaccctaacctgc(SEQ ID NO:
67)
(amino acids)
QIVLTQSPAIMSASPGEEVTLTC (SEQ IDNO: 68)
Mouse E6 light chain variablecomplementarity determining regions 1 (CDR1) sequen
ce :
(DNA)
AGTGCCACCTCAAGTGTAAGTTACATACAC(SEQ ID NO : 69 )
(amino acids)
SATSSVSYIH (SEQ ID NO : 70 )
Mouse E6 light chain variableframework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
tggttccagcagaggccaggcacttctcccaaactctggatttat(SEQ ID NO: 71)
(amino acids)
WFQQRPGTSPKLWIY (SEQ ID NO: 72)
Mouse E6 light chain variablecomplementarity determining regions 2 (CDR2) sequen
ce :
(DNA)
agcacatccaacctggcttct (SEQ IDNO: 73)
(amino acids)
STSNLAS (SEQ ID NO: 74)
Mouse E6 light chain variableframework region 3 (FWR3) sequence:
(DNA)
ggagtccctgttcgcttcagtggcagtggatatgggacctcttactctctcacaatcagccgaatggaggctgaagatgc
tgccacttattactgc (SEQ ID NO: 75)
(amino acids)
GVPVRFSGSGYGTSYSLTISRMEAEDAATYYC (SEQ ID NO : 76 )
Mouse E6 light chain variablecomplementarity determining regions 3 (CDR3) sequen
ce :
(DNA)
cagcaaaggagtagttccccattcacg (SEQID NO: 77)
(amino acids)
QQRSSSPFT (SEQ ID NO: 78)
IGKV3-11*02 light chain variableregion sequence:
(DNA)
gaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctctcctgcagggccagtca
gagtgttagcagctacttagcctggtaccaacagaaacctggccaggctcccaggctcctcatctatgatgcatccaaca
gggccactggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggagagacttcactctcaccatcagcagcctagagcct
gaagattttgcagtttattactgtcagcagcgtagcaactggcctcc (SEQ ID NO: 79)
(amino acids)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGRDFTLTI SSLE
PEDFAVYYCQQRSNWPP (SEQ ID NO : 80 )
IGKV3-11*02 light chain variableframework region 1 (FWR1) acid sequence:
(DNA)
gaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctctcctgc(SEQ ID NO:
81)
(amino acids)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC (SEQ IDNO: 82)
IGKV3-11*02 light chain variablecomplementarity determining regions 1 (CDR1) seq
uence :
(DNA)
agggccagtcagagtgttagcagctacttagcc(SEQ ID NO: 83)
(amino acids)
RASQSVSSYLA (SEQ ID NO: 84)
IGKV3-11*02 light chain variableframework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
tggtaccaacagaaacctggccaggctcccaggctcctcatctat(SEQ ID NO: 85)
(amino acids)
WYQQKPGQAPRLLIY (SEQ ID N086)
IGKV3-11*02 light chain variablecomplementarity determining regions 2 (CDR2) seq
uence :
(DNA)
gatgcatccaacagggccact (SEQ IDNO: 87)
(amino acids)
DASNRAT (SEQ ID NO : 88 )
IGKV3-11*02 light chain variableframework region 3 (FWR3) sequence:
(DNA)
ggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggagagacttcactctcaccatcagcagcctagagcctgaagattt
tgcagtttattactgt (SEQ ID NO: 89)
(amino acids)
GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC (SEQ ID NO: 90)
IGKV3-11*02 light chain variablecomplementarity determining regions3 (CDR3) sequ
ence :
(DNA)
cagcagcgtagcaactggcctcc (SEQ IDNO: 91)
(amino acids)
QQRSNWPP (SEQ ID NO: 92)
Humanized E6 light chainvariable region sequence:
(DNA)
gaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctcacctgcagcgccaccag
cagtgttagctacatccactggtaccaacagaggcctggccagagccccaggctcctcatctatagcacctccaacctgg
ccagcggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggagcgactacactctcaccatcagcagcctagagcctgaa
gattttgcagtttattactgtcagcagcgtagcagctcccctttcacctttggcagcggcaccaaagtggaaattaaa (
SEQ ID NO: 93)
(amino acids)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPE
DFAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIK (SEQ ID NO: 94)
Humanized E6 light chainvariable framework region 1 (FWR1) acid sequence:
(DNA)
gaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctcacctgc(SEQ ID NO:
95)
(amino acids)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLTC (SEQ IDNO : 96 )
Humanized E6 light chainvariable complementarity determining regions 1 (CDR1) se
quence :
(DNA)
agcgccaccagcagtgttagctacatccac(SEQ ID NO: 97)
(amino acids)
SATSSVSYIH (SEQ ID NO: 98)
Humanized E6 heavy lightvariable framework region 2 (FWR2) acid sequence:
(DNA)
tggtaccaacagaggcctggccagagccccaggctcctcatctat(SEQ ID NO: 99)
(amino acids)
WYQQRPGQSPRLLIY (SEQ ID NO : 100)
Humanized E6 light chainvariable complementarity determining regions 2 (CDR2) se
quence :
(DNA)
agcacctccaacctggccagc (SEQ IDNO: 101)
(amino acids)
STSNLAS (SEQ ID NO: 102)
Humanized E6 light chainvariable framework region 3 (FWR3) acid sequence:
(DNA)
ggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggagcgactacactctcaccatcagcagcctagagcctgaagattt
tgcagtttattactgt (SEQ ID NO: 103)
(amino acids)
GIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPEDFAVYYC (SEQ ID NO: 104)
Humanized E6 light chainvariable complementarity determining regions 3 (CDR3) se
quence :
(DNA)
cagcagcgtagcagctcccctttcacc (SEQID NO: 105)
(amino acids)
QQRSSSPFT (SEQ ID NO: 106)
Humanized E6 Kappa light chainsynthesized by Genescript :
(DNA)
gaattctaagcttgggccaccatggaagccccagcgcagcttctcttcctcctgctactctggctcccagataccactgg
agaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctcacctgcagcgccacca
gcagtgttagctacatccactggtaccaacagaggcctggccagagccccaggctcctcatctatagcacctccaacctg
gccagcggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggagcgactacactctcaccatcagcagcctagagcctga
agattttgcagtttattactgtcagcagcgtagcagctcccctttcacctttggcagcggcaccaaagtggaaattaaaa
ggacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgc
ctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccagga
gagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgaga
aacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt
tagtaagtttaaactctaga (SEQ ID NO: 107)
(amino acids)
EF*AWATMEAPAQLLFLLLLWLPDTTGEIVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNL
ASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVC
LLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
**V *TLX (SEQ ID NO: 108)
Human Kappa light chain constantregion sequence:
(DNA)
aggacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtg
cctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccagg
agagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgag
aaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtg
ttag(SEQ ID NO: 109)
(amino acids)
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYE
KHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO : 110 )
Humanized E6 lambda light chainsequence:
(DNA)
gaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctcacctgcagcgccaccag
cagtgttagctacatccactggtaccaacagaggcctggccagagccccaggctcctcatctatagcacctccaacctgg
ccagcggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggagcgactacactctcaccatcagcagcctagagcctgaa
gattttgcagtttattactgtcagcagcgtagcagctcccctttcacctttggcagcggcaccaaagtggaaattaaagg
tcagcccaaggctgccccctcggtcactctgttcccgccctcctctgaggagcttcaagccaacaaggccacactggtgt
gtctcataagtgacttctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagcagccccgtcaaggcgggagtggag
accaccacaccctccaaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctatctgagcctgacgcctgagcagtggaagtc
ccacagaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctacagaatgttcatagt
aa (SEQ ID NO: 111)
(amino acids)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPE
DFAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVE
TTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS * * (SEQ ID NO: 112)
Humanized lambda light chainconstant region sequence:
(DNA)
ggtcagcccaaggctgccccctcggtcactctgttcccgccctcctctgaggagcttcaagccaacaaggccacactggt
gtgtctcataagtgacttctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagcagccccgtcaaggcgggagtgg
agaccaccacaccctccaaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctatctgagcctgacgcctgagcagtggaag
tcccacagaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctacagaatgttcata
gtaa(SEQ ID NO: 113)
(amino acids)
GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWK
SHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS * * (SEQ ID NO: 114)
Human lambda light chainconstant region gBLOCK#3 sequence:
(DNA)
agcgccaccagcagtgttagctacatccactggtaccaacagaggcctggccagagccccaggctcctcatctatagcac
ctccaacctggccagcggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggagcgactacactctcaccatcagcagcc
tagagcctgaagattttgcagtttattactgtcagcagcgtagcagctcccctttcacctttggcagcggcaccaaagtg
gaaattaaaggtcagcccaaggctgccccctcggtcactctgttcccgccctcctctgaggagcttcaagccaacaaggc
cacactggtgtgtctcataagtgacttctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagcagccccgtcaagg
cgggagtggagaccaccacaccctccaaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctatctgagcctgacgcctgag
cagtggaagtcccacagaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctacaga
atgttcatagtaagtttaaacccgctgatcagcctcgactgtgccttctagttg (SEQ ID NO: 115)
E6 light chain variable regionoverlapping sequence:
(DNA)
agcgccaccagcagtgttagctacatccact(SEQ ID NO: 116)
pCDNA3.1 V5 and pSECTag2overlapping sequence :
(DNA)
ccgctgatcagcctcgactgtgccttctagttg(SEQ ID NO: 117)
Mouse C2 heavy chain variableregion sequence :
(DNA)
gaggtccagctggaggagtcagggggaggcttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgcagcctctggatt
cactttcagtggctatgccatgtcttgggttcgccagactccggagaagaggctggagtgggtcgcaaccattagtagtg
gtggtacttatatctactatccagacagtgtgaaggggcgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaccctgtac
ctgcaaatgagcagtctgaggtctgaggacacggccatgtattactgtgcaagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcgcagggaccacggtcaccgtctcctccgccaaaacgacacccccatctgtctat (SEQ IDNO
: 118)
(amino acids)
EVQLEESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSGYAMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNTL
Y LQMSSLRSEDTAMYYCARLGGDNYYEYFDVWGAGTTVTVSSAKTTPPSVY(SEQ ID NO : 119 )
Mouse C2 heavy chain variableframework region 1 (FWR1) sequence:
(DNA)
gaggtccagctggaggagtcagggggaggcttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgcagcctctggatt
cactttcagt (SEQ ID NO: 120)
(amino acids)
EVQLEESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFS(SEQ ID NO: 121)
Mouse C2 heavy chain variablecomplementarity determining regions 1 (CDR1) sequence :
(DNA)
ggctatgccatgtct (SEQ ID NO: 122)
(amino acids)
GYAMS (SEQ ID NO: 123)
Mouse C2 heavy chain variableframework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
tgggttcgccagactccggagaagaggctggagtgggtcgca(SEQ ID NO: 124)
(amino acids)
WVRQTPEKRLEWVA (SEQ ID NO: 125)
Mouse C2 heavy chain variablecomplementarity determining regions 2 (CDR2) sequen
ce :
(DNA)
accattagtagtggtggtacttatatctactatccagacagtgtgaagggg(SEQ ID NO: 126)
(amino acids)
TISSGGTYIYYPDSVKG (SEQ ID NO:127)
Mouse C2 heavy chain variableframework region 3 (FWR3) sequence:
(DNA)
cgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaccctgtacctgcaaatgagcagtctgaggtctgaggacacggccat
gtattactgtgcaaga (SEQ ID NO: 128)
(amino acids)
RFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTAMYYCAR (SEQ ID NO: 129)
Mouse C2 heavy chain variablecomplementarity determining regions 3 (CDR3) sequence :
(DNA)
cttgggggggataattactacgaatacttcgatgtc(SEQ ID NO: 130)
(amino acids)
LGGDNYYEYFDV (SEQ ID NO: 131)
IGHV3-21*04 heavy chain variableregion sequence:
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtagctatagcatgaactgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcatccattagtagta
gtagtagttacatatactacgcagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgaga (SEQ ID NO: 132)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSSSSYIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLY
LQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 133)
IGHV3-21*04 heavy chain variableframework region 1 (FWR1) sequence:
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagt (SEQ ID NO: 134)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO: 135)
IGHV3-21*04 heavy chain variablecomplementarity determining regions 1 (CDR1) seq
uence :
(DNA)
agctatagcatgaac (SEQ ID NO: 136)
(amino acids)
SYSMN (SEQ ID NO: 137)
IGHV3-21*04 heavy chain variableframework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
gggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctca(SEQ ID NO: 138)
(amino acids)
WVRQAPGKGLEWVS (SEQ ID NO: 139)
IGHV3-21*04 heavy chain variablecomplementarity determining regions 2 (CDR2) seq
uence :
(DNA)
tccattagtagtagtagtagttacatatactacgcagactcagtgaagggc(SEQ ID NO: 140)
(amino acids)
SISSSSSYIYYADSVKG (SEQ ID NO:141)
IGHV3-21*04 heavy chain variableframework region 3 (FWR3) sequence:
(DNA)
cgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgt
gtattactgtgcgaga (SEQ ID NO: 142)
(amino acids)
RFTI SRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO: 143)
Humanized C2 heavy chainvariable region sequence:
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctcc (SEQ ID NO: 144)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YL QMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSS (SEQID NO: 145)
Humanized C2 heavy chainvariable framework region 1 (FWR1) sequence:
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagt (SEQ ID NO: 146)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO: 147)
Humanized C2 heavy chainvariable complementarity determining regions 1 (CDR1) se
quence :
(DNA)
ggctatgccatgagc (SEQ ID NO: 148)
(amino acids)
GYAMS (SEQ ID NO: 149)
Humanized C2 heavy chainvariable framework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
tgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaa(SEQ ID NO: 150)
(amino acids)
WVRQAPGKGLEWVS (SEQ ID NO: 151)
Humanized C2 heavy chainvariable complementarity determining regions 2 (CDR2) se
quence :
(DNA)
accattagtagtggcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggc(SEQ ID NO: 152)
(amino acids)
TI SSGGTYIYYPDSVKG (SEQ ID NO:153)
Humanized C2 heavy chainvariable framework region 3 (FWR3) sequence:
(DNA)
cgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgt
gtattactgtgcgaga (SEQ ID NO: 154)
(amino acids)
RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 155)
Humanized C2 heavy chainvariable complementarity determining regions 3 (CDR3) se
quence :
(DNA)
cttgggggggataattactacgaatacttcgatgtc(SEQ ID NO: 156)
(amino acids)
LGGDNYYEYFDV (SEQ ID NO: 157)
Humanized C2 IgGl heavy chainsequence
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccgctagcaccaagggcccatcggtcttccccctggcac
cctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtg
tcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcag
cagcgtggtgacagtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacacca
aggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctgggg
ggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggt
ggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaa
agccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggc
aaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagcc
ccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtca
aaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctccc
gtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtctt
ctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatgataa
(SEQ ID NO: 157)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVT
VSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELL
GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLN
GKEYK CKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKT
TPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* * (SEQ ID NO: 158)
Humanized C2 gBLOCK#4 sequence:
(DNA)
actcactatagggagacccaagctggctagttaagcttgggccaccatggagacagacacactcctgctatgggtactgc
tgctctgggttccaggttccactggtgacgaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtcc
ctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggg
gctggagtgggtctcaaccattagtagtggcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatct
ccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcg
agacttgggggggataattactacgaatacttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccgctagcac
caagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtca
aggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagc (SEQ ID NO: 160)
pCDNA3.1 V5 overlapping sequence:
(DNA)
actcactatagggagacccaagctggctagtt(SEQ ID NO: 161)
Human IgGl constant regionoverlapping sequence:
(DNA)
gacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagc(SEQ ID NO: 162)
Humanized C2 IgG2 heavy chainsequence
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccgcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgc
cctgctccaggagcacctccgagagcacagccgccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtg
tcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcag
cagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacacca
aggtggacaagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtc
ttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgag
ccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggagg
agcagttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgttgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaag
tgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccaca
ggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctacc
ccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactcc
gacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgt
gatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatagtaa (SEQ ID NO:
163)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVT
VSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPS
VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEY
KCKVS NKGLPAPIEKTI SKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPM
LDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* * (SEQ ID NO: 164)
Humanized C2 gBLOCK#5 sequence:
(DNA)
tgctctgggttccaggttccactggtgacgcggcccagccggccgaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtc
aagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtggctatgccatgagctgggtccgcca
ggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtggcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagg
gccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggcc
gtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaatacttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgt
ctcctccgcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagccgccc
tgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgacca (SEQ ID NO
:165) pSEC Tag2 overlapping sequence:
(DNA)
tgctctgggttccaggttccactggtgacgc(SEQ ID NO: 166)
Human IgG2 constant regionoverlapping sequence:
(DNA)
gacggtgtcgtggaactcaggcgctctgacca(SEQ ID NO: 167)
Mouse C2 light chain variableregion sequence:
(DNA)
gacattgtgatcacacagtctacagcttccttaggtgtatctctggggcagagggccaccatctcatgcagggccagcaa
aagtgtcagtacatctggctatagttatatgcactggtaccaacagagaccaggacagccacccaaactcctcatctatc
ttgcatccaacctagaatctggggtccctgccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcaccctcaacatccat
cctgtggaggaggaggatgctgcaacctattactgtcagcacagtagggagcttccgttcacgttcggaggggggaccaa
gctggagataaaacgggctgatgctgcaccaactgtatcc (SEQ ID NO: 168)
(amino acids)
DIVITQSTASLGVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYMHWYQQRPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIH
PVEEEDAATYYCQHSRELPFTFGGGTKLEIKRADAAPTVS (SEQ ID NO : 169 )
Mouse C2 light chain variableframework region 1 (FWR1) sequence:
(DNA)
gacattgtgatcacacagtctacagcttccttaggtgtatctctggggcagagggccaccatctcatgc(SEQ ID NO:
170)
(amino acids)
DIVITQSTASLGVSLGQRATISC (SEQ IDNO: 171)
Mouse C2 light chain variablecomplementarity determining regions 1 (CDR1) sequen
ce :
(DNA)
agggccagcaaaagtgtcagtacatctggctatagttatatgcac(SEQ ID NO: 172)
(amino acids)
RASKSVSTSGYSYMH (SEQ ID NO: 173)
Mouse C2 light chain variableframework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
tggtaccaacagagaccaggacagccacccaaactcctcatctat(SEQ ID NO: 174)
(amino acids)
WYQQRPGQPPKLLIY (SEQ ID NO: 175)
Mouse C2 light chain variablecomplementarity determining regions 2 (CDR2) sequen
ce :
(DNA)
cttgcatccaacctagaatc (SEQ ID NO:176)
(amino acids)
LASNLES (SEQ ID NO: 177)
Mouse C2 light chain variableframework region 3 (FWR3) sequence:
(DNA)
tggggtccctgccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcaccctcaacatccatcctgtggaggaggaggatg
ctgcaacctattactgt (SEQ ID NO: 178)
(amino acids)
GVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYC(SEQ ID NO: 179)
Mouse C2 light chain variablecomplementarity determining regions 3 (CDR3) sequen
ce :
(DNA)
cagcacagtagggagcttccgttcacg (SEQID NO: 180)
(amino acids)
QHSRELPFT (SEQ ID NO : 181 )
IGKV7-3*01 light chain variableregion sequence:
(DNA)
gacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcagagccagtga
gagtgtcagtttcttgggaataaacttaattcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcctgatttacc
aagcatccaataaagacactggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctcacaattaat
cctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtctgcagagtaagaattttcctcccaca (SEQ ID NO: 182)
(amino acid)
DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASESVSFLGINLIHWYQQKPGQPPKLLIYQASNKDTGVPARFSGSGSGTDFTLTIN
PVEANDTANYYCLQSKNFPPT (SEQ ID NO: 183)
IGKV7-3*01 light chain variableframework region 1 (FWR1) sequence:
(DNA)
gacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgc(SEQ ID NO:
184)
(amino acids)
DIVLTQSPASLAVSPGQRATITC (SEQ IDNO: 185)
IGKV7-3*01 light chain variablecomplementarity determining regions 1 (CDR1) sequ
ence :
(DNA)
agagccagtgagagtgtcagtttcttgggaataaacttaattcac(SEQ ID NO: 186)
(amino acids)
RASESVSFLGINLIH (SEQ ID NO: 187)
IGKV7-3*01 light chain variableframework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
tggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcctgatttac(SEQ ID NO: 188)
(amino acids)
WYQQKPGQPPKLLIY (SEQ ID NO : 189)
IGKV7-3*01 light chain variablecomplementarity determining regions 2 (CDR2) sequ
ence :
(DNA)
caagcatccaataaagacact (SEQ IDNO: 190)
(amino acids)
QASNKDT (SEQ ID NO: 191)
IGKV7-3*01 light chain variableframework region 3 (FWR3) sequence:
(DNA)
ggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctcacaattaatcctgtggaagctaatgatac
tgcaaattattactgt (SEQ ID NO: 192)
(amino acids)
GVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYC(SEQ ID NO: 193)
Humanized C2 light chainvariable region sequence:
(DNA)
gacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcagagccagtaa
gagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcctgatttacc
tggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctcacaattaat
cctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcggagggaccaa
ggtggagatcaaacgaact (SEQ ID NO: 194)
(amino acids)
DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTIN
PVEANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRT (SEQ ID NO: 195)
Humanized C2 light chainvariable framework region 1 (FWR1) acid sequence:
(DNA)
gacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgc(SEQ ID NO:
196)
(amino acids)
DIVLTQSPASLAVSPGQRATITC (SEQ IDNO: 197)
Humanized C2 light chainvariable complementarity determining regions 1 (CDR1) se
quence :
(DNA)
agagccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcac(SEQ ID NO: 198)
(amino acids)
RASKSVSTSGYSYMH (SEQ ID NO : 199)
Humanized C2 heavy light variableframework region 2 (FWR2) acid sequence:
(DNA)
tggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcctgatttac(SEQ ID NO: 200)
(amino acids)
WYQQKPGQPPKLLIY (SEQ ID NO : 201)
Humanized C2 light chainvariable complementarity determining regions 2 (CDR2) se
quence :
(DNA)
ctggcatccaatctggagagc (SEQ IDNO: 202)
(amino acids)
LASNLES (SEQ ID NO:203)
Humanized C2 light chainvariable framework region 3 (FWR3) acid sequence:
(DNA)
ggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctcacaattaatcctgtggaagctaatgatac
tgcaaattattactgt (SEQ ID NO:204)
(amino acids)
GVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYC(SEQ ID NO: 205)
Humanized C2 light chainvariable complementarity determining regions 3 (CDR3) se
quence :
(DNA)
cagcacagtagggagctgcctttcaca (SEQID NO: 206)
(amino acids)
QHSRELPFT (SEQ ID NO:207)
Humanized C2 light chainvariable complementarity determining regions 3 (CDR3) se
quence :
(DNA)
ctgcagagtaagaattttcctcccaca (SEQID NO: 208)
(amino acids)
LQSKNFPPT (SEQ ID NO : 209 )
Humanized C2 gBLOCK#6 sequence(Kappa light chain in pCDNA3.1 V5) :
(DNA)
actcactatagggagacccaagctggctagttaagcttgggccaccatggagacagacacactcctgctatgggtactgc
tgctctgggttccaggttccactggtgacgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacag
agggccaccatcacctgcagagccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaacc
aggacaacctcctaaactcctgatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggt
ctgggaccgatttcaccctcacaattaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggag
ctgcctttcacattcggcggagggaccaaggtggagatcaaacgaactacggtggctgcaccatctgtcttcatcttccc
gccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaag
tacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacc
tacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatca
gggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgttagtaagtttaaacccgctgatcagcctcgactg
tgccttctagttg (SEQ ID NO:210)
pCDNA3.1 V5 5' overlappingsequence:
(DNA)
actcactatagggagacccaagctggctagtt(SEQ ID NO: 211)
pCDNA3.1 V5 3' overlappingsequence:
(DNA)
ccgctgatcagcctcgactgtgccttctagttg(SEQ ID NO: 212)
Humanized C2 gBLOCK#7 sequence(Kappa light chain in pSEC Tag2) :
(DNA)
tgctctgggttccaggttccactggtgacgcggcccagccggccgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggcc
gtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcagagccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactg
gtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcctgatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggt
tcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctcacaattaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgt
cagcacagtagggagctgcctttcacattcggcggagggaccaaggtggagatcaaacgaactacggtggctgcaccatc
tgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatc
ccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggac
agcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctg
cgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgttagtaagtttaaacccgct
gatcagcctcgactgtgccttctagttg (SEQ ID NO:213)
pSEC Tag2 5' overlappingsequence:
(DNA)
tgctctgggttccaggttccactggtgacgc(SEQ ID NO: 214)
pSEC Tag2 3' overlappingsequence:
(DNA)
ccgctgatcagcctcgactgtgccttctagttg(SEQ ID NO: 215)
Humanized C2 gBLOCK#8 sequence(lambda light chain in pCDNA3.1 V5) :
(DNA)
actcactatagggagacccaagctggctagttaagcttgggccaccatggagacagacacactcctgctatgggtactgc
tgctctgggttccaggttccactggtgacgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacag
agggccaccatcacctgcagagccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaacc
aggacaacctcctaaactcctgatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggt
ctgggaccgatttcaccctcacaattaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggag
ctgcctttcacattcggcggagggaccaaggtggagatcaaacgaactggtcagcccaaggctgccccctcggtcactct
gttcccgccctcctctgaggagcttcaagccaacaaggccacactggtgtgtctcataagtgacttctacccgggagccg
tgacagtggcctggaaggcagatagcagccccgtcaaggcgggagtggagaccaccacaccctccaaacaaagcaacaac
aagtacgcggccagcagctatctgagcctgacgcctgagcagtggaagtcccacagaagctacagctgccaggtcacgca
tgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctacagaatgttcatagtaagtttaaacccgctgatcagcctcgactg
tgccttctagttg (SEQ ID NO:216)
pCDNA3.1 V5 5' overlappingsequence:
(DNA)
actcactatagggagacccaagctggctagtt(SEQ ID NO: 217)
pCDNA3.1 V5 3' overlappingsequence:
(DNA)
ccgctgatcagcctcgactgtgccttctagttg(SEQ ID NO: 218)
Humanized C2 gBLOCK#9 sequence(lambda light chain in pSEC Tag2) :
(DNA)
tgctctgggttccaggttccactggtgacgcggcccagccggccgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggcc
gtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcagagccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactg
gtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcctgatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggt
tcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctcacaattaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgt
cagcacagtagggagctgcctttcacattcggcggagggaccaaggtggagatcaaacgaactggtcagcccaaggctgc
cccctcggtcactctgttcccgccctcctctgaggagcttcaagccaacaaggccacactggtgtgtctcataagtgact
tctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagcagccccgtcaaggcgggagtggagaccaccacaccctcc
aaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctatctgagcctgacgcctgagcagtggaagtcccacagaagctacag
ctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctacagaatgttcatagtaagtttaaacccgct
gatcagcctcgactgtgccttctagttg (SEQ ID NO:219)
pSEC Tag2 5' overlappingsequence:
(DNA)
tgctctgggttccaggttccactggtgacgc(SEQ ID NO: 220)
pSEC Tag2 3' overlappingsequence:
(DNA)
ccgctgatcagcctcgactgtgccttctagttg(SEQ ID NO: 221)
Murine Ig kappa chain leadersequence
(DNA)
atggagacagacacactcctgctatgggtactgctgctctgggttccaggttccactggtgac(SEQ ID NO: 222)
(amino acids)
METDTLLLWVLLLWVPGSTGD (SEQ IDNO: 223)
Interleukin-2 (IL-2) leadersequence
(DNA)
atgtacaggatgcaactcctgtcttgcattgcactaagtcttgcacttgtcacaaacagt(SEQ ID NO: 224) (am
ino acids)
MYRMQLLSCIALSLALVTNS (SEQ ID NO:225)
CD33 leader sequence
(DNA)
atgcctcttctgcttctgcttcctctgctttgggctggagctcttgct(SEQ ID NO: 226)
(amino acids)
MPLLLLLPLLWAGALA (SEQ ID NO:227)
IGHV3-21*03 leader sequence
(DNA)
atggaactggggctccgctgggttttccttgttgctattttagaaggtgtccagtgt(SEQ ID NO: 228)
(amino acids)
MELGLRWVFLVAILEGVQC (SEQ ID NO:229)
IGHV3-11*02 leader sequence
(DNA)
atggaagccccagcgcagcttctcttcctcctgctactctggctcccagataccactgga(SEQ ID NO: 230) (am
ino acids)
MEAPAQLLFLLLLWLPDTTG (SEQ ID NO:231)
Humanized E6 single chain GS3
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtaggtatggcatgagctgggtccgccaggctccagggaagaggctggagtgggtctcaaccattagtggcg
gaggcacctacatatactacccagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacaccctgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtaccagagataactatggccgcaactatgatta
tggcatggattattggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagcggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcg
gtggcggatccgaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctcacctgc
agcgccaccagcagtgttagctacatccactggtaccaacagaggcctggccagagccccaggctcctcatctatagcac
ctccaacctggccagcggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggagcgactacactctcaccatcagcagcc
tagagcctgaagattttgcagtttattactgtcagcagcgtagcagctcccctttcacctttggcagcggcaccaaagtg
gaaattaaa
(SEQ ID NO:232)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNTL
YLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLT
CSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSSPFTFGSGTK
VEIK (SEQ ID NO:233)
Humanized E6 single chainIgGlnoC
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtaggtatggcatgagctgggtccgccaggctccagggaagaggctggagtgggtctcaaccattagtggcg
gaggcacctacatatactacccagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacaccctgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtaccagagataactatggccgcaactatgatta
tggcatggattattggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagcgataaaacccatactaaaccgccaaaaccggcgc
cggaactgctgggtggtcctggtaccggtgaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaa
agagccaccctcacctgcagcgccaccagcagtgttagctacatccactggtaccaacagaggcctggccagagccccag
gctcctcatctatagcacctccaacctggccagcggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggagcgactaca
ctctcaccatcagcagcctagagcctgaagattttgcagtttattactgtcagcagcgtagcagctcccctttcaccttt
ggcagcggcaccaaagtggaaattaaa (SEQ ID NO:234)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNTL
YLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSDKTHTKPPKPAPELLGGPGTGEIVLTQSPATLSLSPG
ERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSSPFT
FGSGTKVEIK (SEQ ID NO:235)
Humanized E6 single chain X4(linker is IgGl and IgG2 modified hinge region)
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtaggtatggcatgagctgggtccgccaggctccagggaagaggctggagtgggtctcaaccattagtggcg
gaggcacctacatatactacccagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacaccctgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtaccagagataactatggccgcaactatgatta
tggcatggattattggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagcgataaaacccatactaaaccgccaaaaccggcgc
cggaactgctgggtggtcctggtaccggtactggtggtccgactattaaacctccgaaacctccgaaacctgctccgaac
ctgctgggtggtccggaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctcac
ctgcagcgccaccagcagtgttagctacatccactggtaccaacagaggcctggccagagccccaggctcctcatctata
gcacctccaacctggccagcggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggagcgactacactctcaccatcagc
agcctagagcctgaagattttgcagtttattactgtcagcagcgtagcagctcccctttcacctttggcagcggcaccaa
agtggaaattaaa (SEQ ID NO:236)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNTL
Y LQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSDKTHTKPPKPAPELLGGPGTGTGGPTIKPPKPPKPA
PNLLGGPEIVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLT
IS SLEPEDFAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIK (SEQ ID NO: 237)
Humanized C2 single chain GS3
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtg
gcggatccgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcaga
gccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcct
gatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctca
caattaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcgga
gggaccaaggtggagatcaaacgaact (SEQ ID NO: 238)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATITC
RASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPFTFG
GGTKVEIKRT (SEQ ID NO: 239)
Humanized C2 single chain IgG(no Cysteine)
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccgataaaacccatactaaaccgccaaaaccggcgccgg
aactgctgggtggtcctggtaccggtgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagg
gccaccatcacctgcagagccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccagg
acaacctcctaaactcctgatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctg
ggaccgatttcaccctcacaattaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctg
cctttcacattcggcggagggaccaaggtggagatcaaacgaact (SEQ ID NO: 240)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSDKTHTKPPKPAPELLGGPGTGDIVLTQSPASLAVSPGQ
RATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRE
LPFTFGGGTKVEIKRT (SEQ ID NO: 241)
Humanized C2 single chain X4(linker is IgGl and IgG2 modified hinge region)
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccgataaaacccatactaaaccgccaaaaccggcgccgg
aactgctgggtggtcctggtaccggtactggtggtccgactattaaacctccgaaacctccgaaacctgctccgaacctg
ctgggtggtccggacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctg
cagagccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaac
tcctgatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcacc
ctcacaattaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcgg
cggagggaccaaggtggagatcaaacgaact (SEQ ID NO: 242)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSDKTHTKPPKPAPELLGGPGTGTGGPTIKPPKPPKPAPN
LLGGPDIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDF
TLTINPVEANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRT (SEQ ID NO: 243)
Humanized C3 single chain GS3
(DNA)
caggttcagctggtgcagtctggagctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggtta
cacctttaccgactacgccatgaactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggagtgatcagcacct
tcagcggtaacacaaacttcaaccagaagttcaagggcagagtcaccatgaccacagacacatccacgagcacagcctac
atggagctgaggagcctgagatctgacgacacggccgtgtattactgtgcgagaagcgactactacggcccatacttcga
ctactggggccagggcaccaccctgaccgtgtccagcggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggat
ccgatattgtgatgacccagactccactctctctgtccgtcacccctggacagccggcctccatctcctgcaggtctagt
cagaccattgtccatagtaatggaaacacctatttggagtggtacctgcagaagccaggccagtctccacagctcctgat
ctataaggtttccaaccggttctctggagtgccagataggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcacactgaaaa
tcagccgggtggaggctgaggatgttggggtttattactgettccaaggtagccacgtgcctttcaccttcggcggaggg
accaaggtggagatcaaacgaact (SEQ ID NO:244)
(amino acids)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYAMNWVRQAPGQGLEWMGVISTFSGNTNFNQKFKGRVTMTTDTSTSTAY
M ELRSLRSDDTAVYYCARSDYYGPYFDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRS
SQTIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPFTFGG
GTKVEIKRT (SEQ ID NO: 245)
Humanized C3 single chain IgGl(no Cysteine)
(DNA)
caggttcagctggtgcagtctggagctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggtta
cacctttaccgactacgccatgaactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggagtgatcagcacct
tcagcggtaacacaaacttcaaccagaagttcaagggcagagtcaccatgaccacagacacatccacgagcacagcctac
atggagctgaggagcctgagatctgacgacacggccgtgtattactgtgcgagaagcgactactacggcccatacttcga
ctactggggccagggcaccaccctgaccgtgtccagcgataaaacccatactaaaccgccaaaaccggcgccggaactgc
tgggtggtcctggtaccggtgatattgtgatgacccagactccactctctctgtccgtcacccctggacagccggcctcc
atctcctgcaggtctagtcagaccattgtccatagtaatggaaacacctatttggagtggtacctgcagaagccaggcca
gtctccacagctcctgatctataaggtttccaaccggttctctggagtgccagataggttcagtggcagcgggtcaggga
cagatttcacactgaaaatcagccgggtggaggctgaggatgttggggtttattactgettccaaggtagccacgtgcct
ttcaccttcggcggagggaccaaggtggagatcaaacgaact (SEQ ID NO: 246)
(amino acids)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYAMNWVRQAPGQGLEWMGVISTFSGNTNFNQKFKGRVTMTTDTSTSTAY
MELRSLRSDDTAVYYCARSDYYGPYFDYWGQGTTLTVSSDKTHTKPPKPAPELLGGPGTGDIVMTQTPLSLSVTPGQPAS
ISCRSSQTIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVP
FTFGGGTKVEIKRT (SEQ ID NO: 247)
Humanized C3 single chain X4(linker is IgGl and IgG2 modified hinge region)
(DNA)
caggttcagctggtgcagtctggagctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggtta
cacctttaccgactacgccatgaactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggagtgatcagcacct
tcagcggtaacacaaacttcaaccagaagttcaagggcagagtcaccatgaccacagacacatccacgagcacagcctac
atggagctgaggagcctgagatctgacgacacggccgtgtattactgtgcgagaagcgactactacggcccatacttcga
ctactggggccagggcaccaccctgaccgtgtccagcgataaaacccatactaaaccgccaaaaccggcgccggaactgc
tgggtggtcctggtaccggtactggtggtccgactattaaacctccgaaacctccgaaacctgctccgaacctgctgggt
ggtccggatattgtgatgacccagactccactctctctgtccgtcacccctggacagccggcctccatctcctgcaggtc
tagtcagaccattgtccatagtaatggaaacacctatttggagtggtacctgcagaagccaggccagtctccacagctcc
tgatctataaggtttccaaccggttctctggagtgccagataggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcacactg
aaaatcagccgggtggaggctgaggatgttggggtttattactgettccaaggtagccacgtgcctttcaccttcggcgg
agggaccaaggtggagatcaaacgaact (SEQ ID NO: 248)
(amino acids)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYAMNWVRQAPGQGLEWMGVISTFSGNTNFNQKFKGRVTMTTDTSTSTAY
MELRSLRSDDTAVYYCARSDYYGPYFDYWGQGTTLTVSSDKTHTKPPKPAPELLGGPGTGTGGPTIKPPKPPKPAPNLLG
GPDIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQTIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTL
KI SRVEAEDVGVYYCFQGSHVPFTFGGGTKVEIKRT (SEQ ID NO: 249)
Humanized C8 single chain GS3(linker is [Gly4Seri] 3)
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccctgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagactgggcggcgataactattatgaata
ttggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccg
acatcgtgatgacccagtctccagactccctggctgtgtctctgggcgagagggccaccatcaactgcagggccagcaag
agtgttagcaccagcggctacagctacatgcactggtaccagcagaaaccaggacagcctcctaagctgctcatttacct
ggtgtctaacctggaatccggggtccctgaccgattcagtggcagcgggtctgggacagatttcactctcaccatcagca
gcctgcaggctgaagatgtggcagtttattactgtcaacacattcgggaactgaccaggagtgaattcggcggagggacc
aaggtggagatcaaacgaact (SEQ ID NO:250)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRAS
KSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLVSNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHIRELTRSEFGGG
T KVEIKRT (SEQ ID NO:251)
Humanized C8 single chain IgGl(no Cysteine)
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccctgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagactgggcggcgataactattatgaata
ttggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccgataaaacccatactaaaccgccaaaaccggcgccggaactgctgg
gtggtcctggtaccggtgacatcgtgatgacccagtctccagactccctggctgtgtctctgggcgagagggccaccatc
aactgcagggccagcaagagtgttagcaccagcggctacagctacatgcactggtaccagcagaaaccaggacagcctcc
taagctgctcatttacctggtgtctaacctggaatccggggtccctgaccgattcagtggcagcgggtctgggacagatt
tcactctcaccatcagcagcctgcaggctgaagatgtggcagtttattactgtcaacacattcgggaactgaccaggagt
gaattcggcggagggaccaaggtggagatcaaacgaact (SEQ ID NO: 252)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
Y LQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYWGKGTTVTVSSDKTHTKPPKPAPELLGGPGTGDIVMTQSPDSLAVSLGERA
TINCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLVSNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHIRELT
RS EFGGGTKVEIKRT (SEQ ID NO: 253)
Humanized C8 single chain X4(linker is IgGl and IgG2 modified hinge region)
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactacccagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagactgggcggcgacaattactatgagta
ttggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccgataaaacccatactaaaccgccaaaaccggcgccggaactgctgg
gtggtcctggtaccggtactggtggtccgactattaaacctccgaaacctccgaaacctgctccgaacctgctgggtggt
ccggacatcgtgatgacccagtctccagactccctggctgtgtctctgggcgagagggccaccatcaactgcagggccag
caagagtgttagcaccagcggctacagctacatgcactggtaccagcagaaaccaggacagcctcctaagctgctcattt
acctggtgtctaacctggaatccggggtccctgaccgattcagtggcagcgggtctgggacagatttcactctcaccatc
agcagcctgcaggctgaagatgtggcagtttattactgtcaacacattcgggaactgaccaggagtgaattcggcggagg
gaccaaggtggagatcaaacgaact (SEQ ID NO:254)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYWGKGTTVTVSSDKTHTKPPKPAPELLGGPGTGTGGPTIKPPKPPKPAPNLLG
GPDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLVSNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLT
ISSLQAEDVAVYYCQHIRELTRSEFGGGTKVEIKRT (SEQ ID NO: 255)
pSECTag2 E6 scFV-FC
(DNA)
atggagacagacacactcctgctatgggtactgctgctctgggttccaggttccactggtgacgcggcccagccggccga
ggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattca
ccttcagtaggtatggcatgagctgggtccgccaggctccagggaagaggctggagtgggtctcaaccattagtggcgga
ggcacctacatatactacccagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacaccctgtatct
gcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtaccagagataactatggccgcaactatgattatg
gcatggattattggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagcggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggt
ggcggatccgaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctcacctgcag
cgccaccagcagtgttagctacatccactggtaccaacagaggcctggccagagccccaggctcctcatctatagcacct
ccaacctggccagcggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggagcgactacactctcaccatcagcagccta
gagcctgaagattttgcagtttattactgtcagcagcgtagcagctcccctttcacctttggcagcggcaccaaagtgga
aattaaagagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcag
tcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtg
agccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcggga
ggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtaca
agtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaacca
caggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttcta
tcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggact
ccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctcc
gtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatgataa (SEQ ID NO
: 256)
(amino acids)
METDTLLLWVLLLWVPGSTGDAAQPAEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGG
GTYIYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSG
GGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISS
LEPEDFAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVD
V SHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQP
REPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF
SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* * (SEQ ID NO: 257)
E6 scFC-FC 1 gBLOCk sequence:
tgctctgggttccaggttccactggtgacgcggcccagccggccgaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtc
aagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtaggtatggcatgagctgggtccgcca
ggctccagggaagaggctggagtgggtctcaaccattagtggcggaggcacctacatatactacccagactcagtgaagg
gccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacaccctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggct
gtgtattactgtaccagagataactatggccgcaactatgattatggcatggattattggggccagggcaccctggtgac
cgtgagcagcggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgaaattgtgttgacacagtctccag
ccaccctgtctttgtc (SEQ ID NO:258)
E6 scFC-FC 2 gBLOCk sequence:
aattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctcacctgcagcgccaccagca
gtgttagctacatccactggtaccaacagaggcctggccagagccccaggctcctcatctatagcacctccaacctggcc
agcggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggagcgactacactctcaccatcagcagcctagagcctgaaga
ttttgcagtttattactgtcagcagcgtagcagctcccctttcacctttggcagcggcaccaaagtggaaattaaagagc
ccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttc
cccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaaga
ccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtaca
acagcacgtaccgtgtggtcagc (SEQ ID NO: 259)
pSECTag2 C2 scFV-FC
(DNA)
atggagacagacacactcctgctatgggtactgctgctctgggttccaggttccactggtgacgcggcccagccggccga
ggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattca
ccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtggc
ggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatct
gcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaatact
tcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggc
ggatccgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcagagc
cagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcctga
tttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctcaca
attaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcggagg
gaccaaggtggagatcaaacgaactgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaac
tcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcaca
tgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgc
caagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggc
tgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaa
gggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctg
cctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagacca
cgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcagggg
aacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaa
atgataa (SEQ ID
NO: 260)
(amino acids)
METDTLLLWVLLLWVPGSTGDAAQPAEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSG
GTYIYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGG
GSDIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLT
INPVEANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRTEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT
CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SK
AKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ
QGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* * (SEQ ID NO: 261)
C2 scFV-FC 1 gBLOCk sequence:
(DNA)
tgctctgggttccaggttccactggtgacgcggcccagccggccgaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtc
aagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtggctatgccatgagctgggtccgcca
ggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtggcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagg
gccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggcc
gtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaatacttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgt
ctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgacattgtgctgacccagtctccagcct
ccttggc (SEQ ID NO:262)
C2 scFV-FC 2 gBLOCk sequence:
(DNA)
cattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcagagccagtaaga
gtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcctgatttacctg
gcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctcacaattaatcc
tgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcggagggaccaagg
tggagatcaaacgaactgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctgggg
ggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggt
ggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaa
agccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagc (SEQ ID NO: 263)
pSECTag2 C3 scFV-FC
(DNA)
atggagacagacacactcctgctatgggtactgctgctctgggttccaggttccactggtgacgcggcccagccggccca
ggttcagctggtgcagtctggagctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggttaca
cctttaccgactacgccatgaactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggagtgatcagcaccttc
ageggtaacacaaacttcaaccagaagttcaagggcagagtcaccatgaccacagacacatccacgagcacagcctacat
ggagctgaggagcctgagatctgacgacacggccgtgtattactgtgcgagaagcgactactacggcccatacttcgact
actggggccagggcaccaccctgaccgtgtccagcggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatcc
gatattgtgatgacccagactccactctctctgtccgtcacccctggacagccggcctccatctcctgcaggtctagtca
gaccattgtccatagtaatggaaacacctatttggagtggtacctgcagaagccaggccagtctccacagctcctgatct
ataaggtttccaaccggttctctggagtgccagataggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcacactgaaaatc
agccgggtggaggctgaggatgttggggtttattactgettccaaggtagccacgtgcctttcaccttcggcggagggac
caaggtggagatcaaacgaactgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcc
tggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgc
gtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaa
gacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctga
atggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaaggg
cagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcct
ggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgc
ctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaac
gtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatg
ataa (SEQ ID NO:264)
(amino acids)
METDTLLLWVLLLWVPGSTGDAAQPAQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYAMNWVRQAPGQGLEWMGVISTF
SGNTNFNQKFKGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARSDYYGPYFDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGS
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQTIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKI
SRVEAEDVGVYYCFQGSHVPFTFGGGTKVEIKRTEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC
VVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKA
KGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ
GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* * (SEQ ID NO: 265)
C3 GS scFV FC 1 gBLOCk sequence:
(DNA)
tgctctgggttccaggttccactggtgacgcggcccagccggcccaggttcagctggtgcagtctggagctgaggtgaag
aagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggttacacctttaccgactacgccatgaactgggtgcgaca
ggcccctggacaagggcttgagtggatgggagtgatcagcaccttcagcggtaacacaaacttcaaccagaagttcaagg
gcagagtcaccatgaccacagacacatccacgagcacagcctacatggagctgaggagcctgagatctgacgacacggcc
gtgtattactgtgcgagaagcgactactacggcccatacttcgactactggggccagggcaccaccctgaccgtgtccag
cggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgatattgtgatgacccagactccactctctctgt
(SEQ
ID NO:266)
C3 scFV FC2 gBLOCk sequence:
(DNA)
tattgtgatgacccagactccactctctctgtccgtcacccctggacagccggcctccatctcctgcaggtctagtcaga
ccattgtccatagtaatggaaacacctatttggagtggtacctgcagaagccaggccagtctccacagctcctgatctat
aaggtttccaaccggttctctggagtgccagataggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcacactgaaaatcag
ccgggtggaggctgaggatgttggggtttattactgettccaaggtagccacgtgcctttcaccttcggcggagggacca
aggtggagatcaaacgaactgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctg
gggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgt
ggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaaga
caaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagc (SEQ ID NO: 267)
pSECTag2 C8 scFV-FC
(DNA)
atggagacagacacactcctgctatgggtactgctgctctgggttccaggttccactggtgacgcggcccagccggccga
ggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattca
ccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtggc
ggaacctacatatactaccctgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatct
gcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagactgggcggcgataactattatgaatatt
ggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgac
atcgtgatgacccagtctccagactccctggctgtgtctctgggcgagagggccaccatcaactgcagggccagcaagag
tgttagcaccagcggctacagctacatgcactggtaccagcagaaaccaggacagcctcctaagctgctcatttacctgg
tgtctaacctggaatccggggtccctgaccgattcagtggcagcgggtctgggacagatttcactctcaccatcagcagc
ctgcaggctgaagatgtggcagtttattactgtcaacacattcgggaactgaccaggagtgaattcggcggagggaccaa
ggtggagatcaaacgaactgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctgg
ggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtg
gtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagac
aaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatg
gcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcag
ccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggt
caaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctc
ccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtc
ttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatgata
a (SEQ ID NO:268)
(amino acids)
METDTLLLWVLLLWVPGSTGDAAQPAEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSG
GTYIYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSD
IVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLVSNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISS
LQAEDVAVYYCQHIRELTRSEFGGGTKVEIKRTEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC
V VVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKA
KGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ
GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* * (SEQ ID NO : 269 )
C8 scFV FC 1 gBLOCk sequence:
(DNA)
tgctctgggttccaggttccactggtgacgcggcccagccggccgaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtc
aagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtggctatgccatgagctgggtccgcca
ggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtggcggaacctacatatactaccctgactcagtgaagg
gccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggcc
gtgtattactgtgcgagactgggcggcgataactattatgaatattggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccgg
cggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgacatcgtgatgacccagtctccagactccctgg (S
EQID
NO: 270)
C8 scFV FC2 gBLOCk sequence:
(DNA)
catcgtgatgacccagtctccagactccctggctgtgtctctgggcgagagggccaccatcaactgcagggccagcaaga
gtgttagcaccagcggctacagctacatgcactggtaccagcagaaaccaggacagcctcctaagctgctcatttacctg
gtgtctaacctggaatccggggtccctgaccgattcagtggcagcgggtctgggacagatttcactctcaccatcagcag
cctgcaggctgaagatgtggcagtttattactgtcaacacattcgggaactgaccaggagtgaattcggcggagggacca
aggtggagatcaaacgaactgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctg
gggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgt
ggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaaga
caaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagc (SEQ ID NO: 271)
Human IgGl Fc sequence:
(DNA)
gagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcct
cttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacg
aagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcag
tacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaa
ggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgt
acaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagc
gacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacgg
ctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgc
atgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatgataa (SEQ ID NO: 272)
(amino acids)
EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ
YNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY
PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* *(SE
Q ID NO:273)
Human IgGl CH2-CH3 domainsequence:
(DNA)
ccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctc
ccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacg
gcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcacc
gtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaa
aaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaaga
accaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccg
gagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaa
gagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcc
tctccctgtctccgggtaaatgataa (SEQ ID NO:274)
(amino acids)
PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLT
VLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNG
QPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* * (SEQ ID NO:275
)
Human IgGl CH3 domain sequence :
(DNA)
gggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctg
cctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagacca
cgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcagggg
aacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaa
atgataa (SEQ ID NO:276)
(amino acids)
GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG
NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* * (SEQ ID NO: 277)
Human IgGl Fc Y407R sequence:
(DNA)
gagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcct
cttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacg
aagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcag
tacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaa
ggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgt
acaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagc
gacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacgg
ctccttcttcctcaggagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgc
atgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatgataa (SEQ ID NO: 278)
(amino acids)
EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ
YNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY
PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLRSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* *(SE
Q ID NO:279)
Human IgGl Fc F405Q sequence:
(DNA)
gagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcct
cttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacg
aagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcag
tacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaa
ggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgt
acaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagc
gacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacgg
ctccttccagctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgc
atgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatgataa (SEQ ID NO: 280)
(amino acids)
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YNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY
PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFQLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* *(SE
Q ID NO:281)
Human IgGl Fc T394D sequence:
(DNA)
gagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcct
cttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacg
aagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcag
tacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaa
ggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgt
acaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagc
gacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccgaccctcccgtgctggactccgacgg
ctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgc
atgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatgataa (SEQ ID NO: 282)
(amino acids)
EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ
YNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY
PSDIAVEWESNGQPENNYKTDPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* *(SE
Q ID NO:283)
Human IgGl Fc T366W/L368Wsequence:
(DNA)
gagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcct
cttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacg
aagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcag
tacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaa
ggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgt
acaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgtggtgctgggtcaaaggcttctatcccagc
gacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacgg
ctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgc
atgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatgataa (SEQ ID NO: 284)
(amino acids)
EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ
YNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCWVKGFY
PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* *(SE
Q ID NO:285)
Human IgGl Fc T364R/L368Rsequence:
(DNA)
gagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcct
cttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacg
aagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcag
tacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaa
ggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgt
acaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcaggctgacctgcagggtcaaaggcttctatcccagc
gacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacgg
ctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgc
atgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatgataa (SEQ ID NO: 286)
(amino acids)
EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ
YNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVRLTCRVKGFY
PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* *(SEQ ID NO:287)
Human IgGl Fc hingelesssequence:
(DNA)
gcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccc
tgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggagg
tgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcac
caggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctc
caaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtca
gcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaac
tacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtg
gcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgt
ctccgggtaaatgataa (SEQ ID NO:288)
(amino acids)
APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLH
QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPE
NNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* * (SEQ ID NO : 289 )
Human IgGl G237A FC sequence:
(DNA)
gagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctgggggccccgtcagtcttcct
cttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacg
aagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcag
tacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaa
ggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgt
acaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagc
gacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacgg
ctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgc
atgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (SEQ ID NO: 290)
(amino acids)
EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ
Y NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY
PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK ( SEQIDNO: 291)
Human IgGl L234A/L235A FCsequence:
(DNA)
gagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaagccgccgggggaccgtcagtcttcct
cttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacg
aagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcag
tacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaa
ggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgt
acaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagc
gacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacgg
ctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgc
atgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (SEQ ID NO: 292)
(amino acids)
EPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ
Y NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY
PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK ( SEQ IDNO:293)
CAR-T E6 CD8/CD8/CD3z sequence:
N-CD81s-huMNE6scFv-CD8ecdfragment- CD8 transmembrane- CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggggggggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaaacgacaac
cccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctgtaggcctg
ccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgt
ggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgccgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaa
gcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggcc
gcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatg
gcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtc
cacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 294)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
IVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPED
FAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGT
CGVLLLSLVITLYCRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDK
MAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* *
** (SEQ ID NO:295)
CAR-T E6 CD3z gBLOCK sequence:
(DNA)
tggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgtggagtgc
tcctcctctccctggtgattaccctgtactgccgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggc
cagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgaccc
agaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaag
cttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagca
acaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataagtttaaacccgctgatcagcctcgac
tgtgc(SEQ ID NO:296)
CAR-T E6 CD8/CD8/CD28/CD3zsequence:
N-CD81s-huMNE6scFv-CD8ecdfragment- CD8 transmembrane- CD28- CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggggggggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaaacgacaac
cccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctgtaggcctg
ccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgt
ggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcagaagcaagcggtctcggctcctgcattctgattacatgaa
catgaccccaagaagaccaggccccaccaggaaacattaccagccctacgctccgccacgcgacttcgctgcctaccggt
cccgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctc
ggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaa
cccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaa
ggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatg
caggcacttccaccacggtgataa
(SEQ ID NO:297)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
IVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPED
F AVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAG
TCGVLLLSLVITLYCRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNEL
NLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDAL
HMQALPPR* * (SEQ ID NO:298)
CAR-T E6 CD28/CD3z g BLOCKsequence:
(DNA)
tggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgtggagtgc
tcctcctctccctggtgattaccctgtactgcagaagcaagcggtctcggctcctgcattctgattacatgaacatgacc
ccaagaagaccaggccccaccaggaaacattaccagccctacgctccgccacgcgacttcgctgcctaccggtcccgcgt
taagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagac
gggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccag
gagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacg
agggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcac
ttccaccacggtgataagtttaaacccgctgatcagcctcgactgtgc (SEQ ID NO: 299)
CAR-T E6 CD8/CD8/4-lBB/CD3zsequence:
N-CD81s-huMNE6scFv-CD8ecdfragment- CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggggggggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaaacgacaac
cccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctgtaggcctg
ccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgt
ggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagcc
ttttatgaggccagtacagacgactcaagaggaagacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcg
aactgcgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaat
ctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaa
aaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaaggggg
aaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccat
atgcaggcacttccaccacggtgataa
(SEQ ID NO:300)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
IVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPED
FAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGT
CGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNEL
NLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDAL
HMQALPPR* *
(SEQ ID NO:301)
CAR-T E6 4-lBB/CD3z gBLOCKsequence:
(DNA)
tggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgtggagtgc
tcctcctctccctggtgattaccctgtactgcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatg
aggccagtacagacgactcaagaggaagacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactgcg
cgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggta
gacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccc
caggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggag
acgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcagg
cacttccaccacggtgataagtttaaacccgctgatcagcctcgactgtgc (SEQ ID NO: 302)
CAR-T E6 CD8/CD8/CD28/4-lBB/CD3zsequence:
N-CD81s-huMNE6scFv-CD8ecd fragment-CD8 transmembrane- CD28- 4-1BB- CD3zeta-C (DN
A)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggggggggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaaacgacaac
cccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctgtaggcctg
ccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgt
ggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcagaagcaagcggtctcggctcctgcattctgattacatgaa
catgaccccaagaagaccaggccccaccaggaaacattaccagccctacgctccgccacgcgacttcgctgcctaccggt
ccaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaagaggaagac
gggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcc
tgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaac
ggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaa
gataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatca
gggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa
(SEQ ID NO:303)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTI SRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGS
EIVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPE
DFAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAG
TCGVLLLSLVITLYCRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQE
EDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNEL
QKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 304)
CAR-T E6 CD28/4-lBB/CD3z gBLOCKsequence:
(DNA)
atagggagacccaagctggctagttaagcttggtaccgagggccaccatggccctgcccgtgaccgctttgctgctcccc
ctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttgagagtggcggtgggctggttaagcctggcggctc
cctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatgggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaaga
ggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctattaccccgactcagtcaaggggagatttaccatt
tcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctctgagagcagaggacacagctgtttactattgtac
ccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggggacaagggacattggttacagtgagcagtggcg
gcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggggggggcagcgagatagtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctc
tcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagtgtcatatattcactggtatcagcaacggcccgg
gcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcaggtatccctgcacgattttctggatctggttcag
gttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagactttgccgtttattactgccagcagaggtctagctcc
ccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaaacgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccac
catcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctgtaggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactgg
atttcgcctgtgatatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctg
tactgcagaagcaagcggtctcggctcctgcattctgattacatgaacatgaccccaagaagaccaggccccaccaggaa
acattaccagccctacgctccgccacgcgacttcgctgcctaccggtccaaaaggggccgcaaaaaactcctttacattt
ttaagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaagaggaagacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaa
ggagggtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaa
cgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagc
ctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcgga
atgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatga
cgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataagtttaaacccgctgatcagcctcgactgtgc (SEQ ID NO:
305)
CAR-T C2 CD8/CD8/CD28/4-lBB/CD3zsequence:
N-CD81s-huMNC2scFv-CD8ecdfragment- CD8 transmembrane- CD28- 4-1BB- CD3zeta-C (DN
A)
atggccttgccagtgacggccctgctgctgccattggctcttctgttgcacgctgccaggcctgaagtgcagctcgtaga
gagtggcgggggactggtgaagcccggtggaagcctcagactcagttgcgccgcctcaggtttcactttttcaggttacg
ccatgtcctgggtaagacaggcaccggggaaaggactcgagtgggtgtctactatcagctcaggaggcacttatatatat
tatcctgactctgtaaaaggccgatttacgatttctcgcgacaatgcaaagaactccctctacctccaaatgaacagtct
tagggcagaagacactgctgtatactattgtgcacgcctcggcggcgacaactactacgagtactttgacgtgtggggga
aagggactaccgtgacagtttcaagcggaggaggtggctcaggtggaggcgggtcaggggggggaggaagtgatattgtg
ctcacacaatccccagcctccctggctgtgtctcccggccaacgcgctacaattacatgtcgggcctccaaaagcgtgag
caccagcggctacagctacatgcactggtatcaacagaaaccaggacaaccccccaaactgttgatttatctcgcttcaa
acttggagtccggcgtgcctgcgcgcttttcagggagtgggagcggcacagattttacgctgactatcaaccccgtagaa
gcaaacgatacagcgaattattattgtcaacattcccgggaactcccctttacgttcggcgggggcacaaaggtcgaaat
taagagaaccacgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagac
cagaagcctgtaggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggcc
ccgctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcagaagcaagcggtctcggctcct
gcattctgattacatgaacatgaccccaagaagaccaggccccaccaggaaacattaccagccctacgctccgccacgcg
acttcgctgcctaccggtccaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatgaggccagtacag
acgactcaagaggaagacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactgcgcgttaagttctc
ccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagt
acgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactg
tacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaagg
acacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccac
ggtgataa (SEQ ID
NO: 306)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YL QMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATIT
CRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPFTF
GGGTKVEIKRTTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC
RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGG
CELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMK
GERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 307)
CAR-T C2-1 gBLOCK sequence:
(DNA)
atagggagacccaagctggctagttaagcttggtaccgagggccaccatggccttgccagtgacggccctgctgctgcca
ttggctcttctgttgcacgctgccaggcctgaagtgcagctcgtagagagtggcgggggactggtgaagcccggtggaag
cctcagactcagttgcgccgcctcaggtttcactttttcaggttacgccatgtcctgggtaagacaggcaccggggaaag
gactcgagtgggtgtctactatcagctcaggaggcacttatatatattatcctgactctgtaaaaggccgatttacgatt
tctcgcgacaatgcaaagaactccctctacctccaaatgaacagtcttagggcagaagacactgctgtatactattgtgc
acgcctcggcggcgacaactactacgagtactttgacgtgtgggggaaagggactaccgtgacagtttcaagcggaggag
gtggctcaggtggaggcgggtcaggggggggaggaagtgatattgtgctcacacaatccccagcctccctggc (SEQ I
D
NO: 308)
CAR-T C2-2 gBLOCK sequence:
(DNA)
aagtgatattgtgctcacacaatccccagcctccctggctgtgtctcccggccaacgcgctacaattacatgtcgggcct
ccaaaagcgtgagcaccagcggctacagctacatgcactggtatcaacagaaaccaggacaaccccccaaactgttgatt
tatctcgcttcaaacttggagtccggcgtgcctgcgcgcttttcagggagtgggagcggcacagattttacgctgactat
caaccccgtagaagcaaacgatacagcgaattattattgtcaacattcccgggaactcccctttacgttcggcgggggca
caaaggtcgaaattaagagaaccacgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaaccc
ctgtctctgagaccagaagcctgtaggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatat
ctacatttgggccccgctcgcaggcacatgtggagtgc (SEQ ID NO: 309)
CAR E6 Fc/8/4-lBB/CD3z sequence:
N-CD81s-huMNE6scFv-Human IgGlFc- CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggcggaggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaagagcccaa
atcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccc
caaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccct
gaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacag
cacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctcca
acaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctg
cccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgc
cgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttct
tcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggct
ctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaaatctacatttgggccccgctcgcaggcacatg
tggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagc
cttttatgaggccagtacagacgactcaagaggaagacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgc
gaactgcgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaa
tctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcagga
aaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggg
gaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctcca
tatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 310)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
IVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPED
F AVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHE
DP EVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQ
VYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV
MHEALHNHYTQKSLSLSPGKIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEE
EGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEI
GMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * ( SEQ ID NO:311)
E6 CAR pCDH gBLOCK sequence:
(DNA)
acgctgttttgacctccatagaagattctagagctagctgtagagcttggtaccgagggccaccatggccctgcccgtga
ccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttgagagtggcggtgggctg
gttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatgggatgagttgggtgcg
gcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctattaccccgactcagtca
aggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctctgagagcagaggacaca
gctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggggacaagggacattggt
tacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggcggaggcagcgagatagtgctcacgcagtcac
ccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagtgtcatatattcactgg
tatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcaggtatccctgc (SEQ
ID NO:312)
E6 CAR Fc pCDH gBLOCK sequence:
(DNA)
agtacctctaatctggcctcaggtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctc
tagcctggagcctgaagactttgccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggacca
aggttgaaattaaagagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctgggggga
ccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggt
ggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagc
cgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaag
gagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccg
agaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaag
gcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtg
ctg (SEQ
ID NO:313)
E6 CAR 8BB3 pCDH gBLOCKsequence:
(DNA)
agaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaag
agcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcct
ctccctgtctccgggtaaaatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgatta
ccctgtactgcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaa
gaggaagacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagc
cgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgt
tggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgag
ttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacgg
cctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataag
tttaaacccgctgatcaggcggccgcgaaggatctgcgatcgctccggtgcccgtcag (SEQ ID NO: 314)
CAR E6 FcH/8/4-lBB/CD3zsequence:
N-CD81s-huMNE6scFv-Human IgGlhingeless Fc Y407R- CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3ze
ta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggcggaggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaagcacctga
actcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtca
catgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataat
gccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactg
gctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagcca
aagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacc
tgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagac
cacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcagg
ggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggt
aaaatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcaaaag
gggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaagaggaagacgggtgct
catgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttac
aagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagagg
ccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataaga
tggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctg
tccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 315)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTI SRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGS
EIVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPE
DF AVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVE
VHN AKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKN
QVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSL
SLSPGKIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSA
DAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDG
LYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 316)
E6 CAR FcH pCDH gBLOCK sequence:
(DNA)
agtacctctaatctggcctcaggtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctc
tagcctggagcctgaagactttgccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggacca
aggttgaaattaaagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatg
atetcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgt
ggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcc
tcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatc
gagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgac
caagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggc
agccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctg (SEQ ID NO: 317)
CAR E6 Fc/4/4-lBB/CD3z sequence:
N-CD81s-huMNE6scFv-Human IgGlFc- CD4 transmembrane- CD28- 4-1BB- CD3zeta-C (DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggcggaggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaagagcccaa
atcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccc
caaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccct
gaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacag
cacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctcca
acaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctg
cccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgc
cgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttct
tcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggct
ctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaaatggccctgattgtgctggggggcgtcgccgg
cctcctgcttttcattgggctaggcatcttcttcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagcctttta
tgaggccagtacagacgactcaagaggaagacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactg
cgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcgg
tagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacc
cccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaagg
agacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgca
ggcacttccaccacggtgataa(SEQ ID NO:318)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
IVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPED
F AVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHE
DP EVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQ
VYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV
MHEALHNHYTQKSLSLSPGKMALIVLGGVAGLLLFIGLGIFFKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEG
GCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGM
KGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 319)
E6 CAR 44BB3 pCDH gBLOCKsequence:
(DNA)
agaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaag
agcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcct
ctccctgtctccgggtaaaatggccctgattgtgctggggggcgtcgccggcctcctgcttttcattgggctaggcatct
tcttcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaagaggaa
gacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagccgacgc
gcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggaca
aacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcag
aaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggccttta
tcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataagtttaaa
cccgctgatcaggcggccgcgaaggatctgcgatcgctccggtgcccgtcag (SEQ ID NO: 320)
CAR E6 FcH/4/4-lBB/CD3zsequence:
N-CD81s-huMNE6scFv-Human IgGlhingeless Fc Y407R- CD4 transmembrane- CD28- 4-1BB-
CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggcggaggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaagcacctga
actcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtca
catgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataat
gccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactg
gctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagcca
aagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacc
tgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagac
cacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcagg
ggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggt
aaaatggccctgattgtgctggggggcgtcgccggcctcctgcttttcattgggctaggcatcttcttcaaaaggggccg
caaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaagaggaagacgggtgctcatgcc
gctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcag
ggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcga
cccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcag
aagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccaca
gcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 321)
(amino acids)
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YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
IVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPED
F AVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEV
HN AKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQ
VSLT CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSL
SLSPGKMALIVLGGVAGLLLFIGLGIFFKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADA
PAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLY
QGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 322)
CAR E6 IgD/8/4-lBB/CD3zsequence:
N-CD81s-huMNE6scFv-IgD hingeregion- CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggcggaggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaagagtctcc
aaaggcacaggcctcctcagtgcccactgcacaaccccaagcagagggcagcctcgccaaggcaaccacagccccagcca
ccacccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggagaaggagaaagaggaacaagaagagagagagacaaag
acaccaatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcaa
aaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaagaggaagacgggt
gctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgct
tacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggag
aggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagata
agatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggc
ctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 3
23)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTI SRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGS
EIVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPE
DFAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERE
TKTP IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSAD
APAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGL
YQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 324)
E6 CAR IgD8 pcDH gBLOCKsequence:
(DNA)
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tagcctggagcctgaagactttgccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggacca
aggttgaaattaaagagtctccaaaggcacaggcctcctcagtgcccactgcacaaccccaagcagagggcagcctcgcc
aaggcaaccacagccccagccaccacccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggagaaggagaaagagga
acaagaagagagagagacaaagacaccaatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccc
tggtgattaccctgtactgcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatgaggccag (SEQ
ID
NO: 325)
E6 CAR BB 3 pCDH gBLOCKsequence:
(DNA)
acatttttaagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaagaggaagacgggtgctcatgccgctttcctgaggag
gaggaaggagggtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaact
gtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcg
gcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgag
atcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatac
gtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataagtttaaacccgctgatcaggcggccgcgaaggatctg
cgatcgctccggtgcccgtcag (SEQ ID NO: 326)
CAR E6 IgD/4/4-lBB/CD3zsequence:
N-CD81s-huMNE6scFv-IgD hingeregion- CD4 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggcggaggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaagagtctcc
aaaggcacaggcctcctcagtgcccactgcacaaccccaagcagagggcagcctcgccaaggcaaccacagccccagcca
ccacccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggagaaggagaaagaggaacaagaagagagagagacaaag
acaccaatggccctgattgtgctggggggcgtcgccggcctcctgcttttcattgggctaggcatcttcttcaaaagggg
ccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaagaggaagacgggtgctcat
gccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaag
cagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccg
cgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatgg
cagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtcc
acagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 327)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
I VLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPE
DFAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERE
TKTPMALIVLGGVAGLLLFIGLGIFFKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPA
YKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQG
LSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 328)
E6 CAR IgD4 pcDH gBLOCKsequence:
(DNA)
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tagcctggagcctgaagactttgccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggacca
aggttgaaattaaagagtctccaaaggcacaggcctcctcagtgcccactgcacaaccccaagcagagggcagcctcgcc
aaggcaaccacagccccagccaccacccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggagaaggagaaagagga
acaagaagagagagagacaaagacaccaatggccctgattgtgctggggggcgtcgccggcctcctgcttttcattgggc
taggcatcttcttcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatgaggccag (SEQ ID
NO: 329)
CAR E6 X4/8/4-lBB/CD3z sequence:
N-CD81s-huMNE6scFv- X4 linker-CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggcggaggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaagacaagac
gcacaccaagccacctaaaccagctccagaactgctcggaggtcctggcaccggaaccggaggacctaccatcaaaccac
ctaagccacctaagcctgctcctaacctgctcggaggacctatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgtggagtg
ctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttat
gaggccagtacagacgactcaagaggaagacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactgc
gcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggt
agacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaaccc
ccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaagga
gacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcag
gcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO:330)
(amino acids)
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YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
IVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPED
F AVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKDKTHTKPPKPAPELLGGPGTGTGGPTIKPPKPPKPAPNLLGGPIYIWAPLAGTC
GVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELN
LGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALH
MQALPPR* * (SEQ ID NO:331)
E6 CAR X48 pCDH gBLOCK sequence:
(DNA)
agtacctctaatctggcctcaggtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctc
tagcctggagcctgaagactttgccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggacca
aggttgaaattaaagacaagacgcacaccaagccacctaaaccagctccagaactgctcggaggtcctggcaccggaacc
ggaggacctaccatcaaaccacctaagccacctaagcctgctcctaacctgctcggaggacctatctacatttgggcccc
gctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcaaaaggggccgcaaaaaactccttt
acatttttaagcagccttttatgaggccag (SEQ ID NO: 332)
CAR E6 X4/4/4-lBB/CD3z sequence:
N-CD81s-huMNE6scFv-X4 linker-CD4 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggcggaggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaagacaagac
gcacaccaagccacctaaaccagctccagaactgctcggaggtcctggcaccggaaccggaggacctaccatcaaaccac
ctaagccacctaagcctgctcctaacctgctcggaggacctatggccctgattgtgctggggggcgtcgccggcctcctg
cttttcattgggctaggcatcttcttcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatgaggcc
agtacagacgactcaagaggaagacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactgcgcgtta
agttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgg
gaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccagga
gggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgag
ggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcactt
ccaccacggtgataa(SEQ ID NO:333)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTI SRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGS
EIVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPE
DFAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKDKTHTKPPKPAPELLGGPGTGTGGPTIKPPKPPKPAPNLLGGPMALIVLGGVAG
LLLFIGLGIFFKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLG
RREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQ
ALPPR** (SEQ ID NO:334)
E6 CAR X44 pCDH gBLOCK sequence:
(DNA)
agtacctctaatctggcctcaggtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctc
tagcctggagcctgaagactttgccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggacca
aggttgaaattaaagacaagacgcacaccaagccacctaaaccagctccagaactgctcggaggtcctggcaccggaacc
ggaggacctaccatcaaaccacctaagccacctaagcctgctcctaacctgctcggaggacctatggccctgattgtgct
ggggggcgtcgccggcctcctgcttttcattgggctaggcatcttcttcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacattt
ttaagcagccttttatgaggccag (SEQ ID NO: 335)
CAR E6 8+4/4/4-lBB/CD3zsequence:
N-CD81s-huMNE6scFv- CD8ecd +CD4ecd fragment - CD4 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-
C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
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taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggcggaggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
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gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaaacgacaac
cccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctgtaggcctg
ccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatggccctgattgtgctggggggcgtcgccggc
ctcctgcttttcattgggctaggcatcttcttcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttat
gaggccagtacagacgactcaagaggaagacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactgc
gcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggt
agacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaaccc
ccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaagga
gacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcag
gcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO:336)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
IVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPED
F AVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDMALIVLGGV
AGLLLFIGLGIFFKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELN
LGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALH
MQALPPR* * (SEQ ID NO:337)
E6 CAR CD844 pCDH gBLOCK sequence:
(DNA)
agtacctctaatctggcctcaggtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctc
tagcctggagcctgaagactttgccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggacca
aggttgaaattaaaacgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctg
agaccagaagcctgtaggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatggccctgat
tgtgctggggggcgtcgccggcctcctgcttttcattgggctaggcatcttcttcaaaaggggccgcaaaaaactccttt
acatttttaagcagccttttatgaggccag (SEQ ID NO: 338)
Humanized C2 scFV sequence inCAR:
(DNA)
gagggccaccatggccttgccagtgacggccctgctgctgccattggctcttctgttgcacgctgccaggcctgaagtgc
agctcgtagagagtggcgggggactggtgaagcccggtggaagcctcagactcagttgcgccgcctcaggtttcactttt
tcaggttacgccatgtcctgggtaagacaggcaccggggaaaggactcgagtgggtgtctactatcagctcaggaggcac
ttatatatattatcctgactctgtaaaaggccgatttacgatttctcgcgacaatgcaaagaactccctctacctccaaa
tgaacagtcttagggcagaagacactgctgtatactattgtgcacgcctcggcggcgacaactactacgagtactttgac
gtgtgggggaaagggactaccgtgacagtttcaagcggaggaggtggctcaggtggaggcgggtcaggggggggaggaag
tgatattgtgctcacacaatccccagcctccctggctgtgtctcccggccaacgcgctacaattacatgtcgggcctcca
aaagcgtgagcaccagcggctacagctacatgcactggtatcaacagaaaccaggacaaccccccaaactgttgatttat
ctcgcttcaaacttggagtccggcgtgcctgcgcgcttttcagggagtgggagcggcacagattttacgctgactatcaa
ccccgtagaagcaaacgatacagcgaattattattgtcaacattcccgggaactcccctttacgttcggcgggggcacaa
aggtcgaaattaagagaacc (SEQ ID NO: 339)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATITC
RASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPFTFG
GGTKVEIKRT (SEQ ID NO: 340)
Humanized E6 scFV sequence inCAR:
(DNA)
gaggtccagctggttgagagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatt
tactttcagccgatatgggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccgggg
ggggcacttacatctattaccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtat
ttgcagatgaattctctgagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgacta
cggtatggactattggggacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtg
gggggggcagcgagatagtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgc
tctgctacctcctcagtgtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtac
ctctaatctggcctcaggtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcc
tggagcctgaagactttgccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggtt
gaaattaaa(SEQ ID NO:341)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNTL
Y LQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATL
TCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSSPFTFGSGT
KVEIK (SEQ ID NO:342)
CD8 leader sequence:
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggcca(SEQ ID NO: 343)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARP (SEQ IDNO: 344)
CD8 hinge domain sequence :
(DNA)
acgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctg
taggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgat (SEQ ID NO: 345)
(amino acids)
TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD(SEQ ID NO: 346)
CD4 hinge domain sequence :
(DNA)
tcgggacaggtcctgctggaatccaacatcaaggttctgcccacatggtccaccccggtgcagcca(SEQ ID NO: 34
7) (amino acids)
SGQVLLESNIKVLPTWSTPVQP (SEQ IDNO: 348)
CD28 hinge domain sequence:
(DNA)
aaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagccc(SEQ ID NO: 349)
(amino acids)
KHLCPSPLFPGPSKP (SEQ ID NO: 350)
CD8+CD4 hinge domain sequence:
(DNA)
acgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctg
taggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgattcgggacaggtcctgctggaatcca
acatcaaggttctgcccacatggtccaccccggtgcagcca (SEQ ID NO: 351)
(amino acids)
TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDSGQVLLESNIKVLPTWSTPVQP(SEQ ID NO: 3
52)
CD8+CD28 hinge domain sequence:
(DNA)
acgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctg
taggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgataaacacctttgtccaagtcccctat
ttcccggaccttctaagccc (SEQ ID NO: 353)
(amino acids)
TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDKHLCPSPLFPGPSKP(SEQ ID NO: 354)
CD28+CD4 hinge domain sequence:
(DNA)
aaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagccctcgggacaggtcctgctggaatccaacatcaaggt
tctgcccacatggtccaccccggtgcagcca (SEQ ID NO: 355)
(amino acids)
KHLCPSPLFPGPSKPSGQVLLESNIKVLPTWSTPVQP(SEQ ID NO: 356)
Human IgD hinge domain sequence:
(DNA)
gagtctccaaaggcacaggcctcctcagtgcccactgcacaaccccaagcagagggcagcctcgccaaggcaaccacagc
cccagccaccacccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggagaaggagaaagaggaacaagaagagagag
agacaaagacacca (SEQ ID NO: 357)
(amino acids)
ESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTP(SEQ ID NO: 358)
X4 linker (IgGl and IgG2modified hinge region) sequence:
(DNA)
gacaagacgcacaccaagccacctaaaccagctccagaactgctcggaggtcctggcaccggaaccggaggacctaccat
caaaccacctaagccacctaagcctgctcctaacctgctcggaggacct (SEQ ID NO: 359)
(amino acids)
DKTHTKPPKPAPELLGGPGTGTGGPTIKPPKPPKPAPNLLGGP(SEQ ID NO: 360)
CD3 zeta transmembrane domainsequence :
(DNA)
ctctgctacctgctggatggaatcctcttcatctatggtgtcattctcactgccttgttcctg(SEQ ID NO: 361)
(amino acids)
LCYLLDGILFIYGVILTALFL (SEQ IDNO: 362)
CD8 transmembrane domainsequence :
(DNA)
atctacatttgggccccgctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgc(SEQ ID
NO: 363)
(amino acids)
IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC (SEQ IDNO: 364)
CD4 transmembrane domainsequence :
(DNA)
atggccctgattgtgctggggggcgtcgccggcctcctgcttttcattgggctaggcatcttcttc(SEQ ID NO: 36
5) (amino acids)
MALIVLGGVAGLLLFIGLGIFF (SEQ IDNO : 366 )
CD28 transmembrane domainsequence:
(DNA)
ttttgggtgctggtggtggttggtggagtcctggcttgctatagcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggt
g (SEQ ID NO:367)
(amino acids)
FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV (SEQID NO: 368)
4-1BB transmembrane domainsequence:
(DNA)
atcatctccttctttcttgcgctgacgtcgactgcgttgctcttcctgctgttcttcctcacgctccgtttctctgttgt
t (SEQ ID NO:369)
(amino acids)
IISFFLALTSTALLFLLFFLTLRFSVV(SEQ ID NO: 370)
OX40 transmembrane domainsequence:
(DNA)
gttgccgccatcctgggcctgggcctggtgctggggctgctgggccccctggccatcctgctggccctgtacctgctc(S
EQ ID NO:371)
(amino acids)
VAAILGLGLVLGLLGPLAILLALYLL (SEQID NO: 372)
CD3 zeta domain sequence:
(DNA)
cgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcgg
tagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacc
cccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaagg
agacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgca
ggcacttccaccacgg (SEQ ID NO: 373)
(amino acids)
RVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGER
RRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 374)
CD3 zeta domain variantsequence:
(DNA)
agagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctagg
acgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaacc
ctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgc
cggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgca
ggccctgccccctcgc (SEQ ID NO: 375)
(amino acids)
RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGER
RRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 376)
CD28 domain sequence:
(DNA)
agaagcaagcggtctcggctcctgcattctgattacatgaacatgaccccaagaagaccaggccccaccaggaaacatta
ccagccctacgctccgccacgcgacttcgctgcctaccggtcc (SEQ ID NO: 377)
(amino acids)
RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS(SEQ ID NO: 378)
4-1BB domain sequence:
(DNA)
aaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaagaggaagacgg
gtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactg (SEQ ID NO: 379)
(amino acids)
KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL(SEQ ID NO: 380)
0X40 domain sequence:
(DNA)
cggagggaccagaggctgccccccgatgcccacaagccccctgggggaggcagtttccggacccccatccaagaggagca
ggccgacgcccactccaccctggccaagatc (SEQ ID NO: 381)
(amino acids)
RRDQRLPPDAHKPPGGGSFRTPIQEEQADAHSTLAKI (SEQ ID NO: 382)
Humanized anti CD3 scFV clone12F6 (VH-VL) sequence:
(DNA)
caggtgcagctggtgcagagcggaggtggagtggtccaacctggaagatctctgagactgagctgtaaggctagcgggta
cacgttcacatcttacacgatgcactgggtgaggcaagcccccggtaagggcctggaatggatcggatatataaacccca
gctcagggtataccaaatataatcagaagttcaaagatcggttcacgatttctgctgataaaagtaagtccaccgctttc
ctgcagatggactcactcaggccagaagatactggtgtttatttctgtgcaaggtggcaggactacgacgtgtactttga
ctattgggggcaggggacgcctgtaacagtatcaagcggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggat
ccgatattcagatgacccagagcccgagcagcctgagcgcgagcgtgggcgatcgcgtgaccatgacctgccgcgcgagc
agcagcgtgagctatatgcattggtatcagcagaccccgggcaaagcgccgaaaccgtggatttatgcgaccagcaacct
ggcgagcggcgtgccgagccgctttagcggcagcggcagcggcaccgattataccctgaccattagcagcctgcagccgg
aagatattgcgacctattattgccagcagtggagcagcaacccgccgacctttggccagggcaccaaactgcagattacc
cgc (SEQ ID NO:383)
(amino acids)
QVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCKASGYTFTSYTMHWVRQAPGKGLEWIGYINPSSGYTKYNQKFKDRFTISADKSKSTAF
LQMDSLRPEDTGVYFCARWQDYDVYFDYWGQGTPVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTMTCRAS
SSVSYMHWYQQTPGKAPKPWIYATSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDIATYYCQQWSSNPPTFGQGTKLQIT
R (SEQ ID NO:384)
Humanized anti CD3 scFV clone12F6 (VL-VH) sequence:
(DNA)
gatattcagatgacccagagcccgagcagcctgagcgcgagcgtgggcgatcgcgtgaccatgacctgccgcgcgagcag
cagcgtgagctatatgcattggtatcagcagaccccgggcaaagcgccgaaaccgtggatttatgcgaccagcaacctgg
cgagcggcgtgccgagccgctttagcggcagcggcagcggcaccgattataccctgaccattagcagcctgcagccggaa
gatattgcgacctattattgccagcagtggagcagcaacccgccgacctttggccagggcaccaaactgcagattacccg
cggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatcccaggtgcagctggtgcagagcggaggtggagtgg
tccaacctggaagatctctgagactgagctgtaaggctagcgggtacacgttcacatcttacacgatgcactgggtgagg
caagcccccggtaagggcctggaatggatcggatatataaaccccagctcagggtataccaaatataatcagaagttcaa
agatcggttcacgatttctgctgataaaagtaagtccaccgctttcctgcagatggactcactcaggccagaagatactg
gtgtttatttctgtgcaaggtggcaggactacgacgtgtactttgactattgggggcaggggacgcctgtaacagtatca
age (SEQ ID NO:385)
(amino acids)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTMTCRASSSVSYMHWYQQTPGKAPKPWIYATSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPE
DIATYYCQQWSSNPPTFGQGTKLQITRGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCKASGYTFTSYTMHWVR
QAPGKGLEWIGYINPSSGYTKYNQKFKDRFTISADKSKSTAFLQMDSLRPEDTGVYFCARWQDYDVYFDYWGQGTPVTVS
S (SEQ ID NO:386)
Humanized anti CD3 scFV cloneOKT3 (VH-VL) sequence:
(DNA)
caggtgcagctggtgcagagcggaggcggagtggtgcagcctggaagaagcctgcgcctgagctgcaaagcgagcggcta
tacctttacccgctataccatgcattgggtgcgccaggcgccgggcaaaggcctggaatggattggctatattaacccga
gccgcggctataccaactataaccagaaagtgaaagatcgctttaccattagcaccgataaaagcaaaagcaccgcgttt
ctgcagatggatagcctgcgcccggaagataccgcggtgtattattgcgcgcgctattatgatgatcattattgcctgga
ttattggggccagggcaccaccctgaccgtgagcagcggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggat
ccgatattcagatgacccagagcccgagcagcctgagcgcgagcgtgggcgatcgcgtgaccattacctgcagcgcgagc
agcagcgtgagctatatgaactggtatcagcagaccccgggcaaagcgccgaaacgctggatttatgataccagcaaact
ggcgagcggcgtgccgagccgctttagcggcagcggcagcggcaccgattatacctttaccattagcagcctgcagccgg
aagatattgcgacctattattgccagcagtggagcagcaacccgtttacctttggccagggcaccaaactgcagattacc
cgc (SEQ ID NO:387)
(amino acids)
QVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCKASGYTFTRYTMHWVRQAPGKGLEWIGYINPSRGYTNYNQKVKDRFTISTDKSKSTAF
LQMDSLRPEDTAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSAS
SSVSYMNWYQQTPGKAPKRWIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQWSSNPFTFGQGTKLQIT
R (SEQ ID NO:388)
Humanized anti CD3 scFV cloneOKT3 (VH-VL) sequence:
(DNA)
gatattcagatgacccagagcccgagcagcctgagcgcgagcgtgggcgatcgcgtgaccattacctgcagcgcgagcag
cagcgtgagctatatgaactggtatcagcagaccccgggcaaagcgccgaaacgctggatttatgataccagcaaactgg
cgagcggcgtgccgagccgctttagcggcagcggcagcggcaccgattatacctttaccattagcagcctgcagccggaa
gatattgcgacctattattgccagcagtggagcagcaacccgtttacctttggccagggcaccaaactgcagattacccg
cggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatcccaggtgcagctggtgcagagcggaggcggagtgg
tgcagcctggaagaagcctgcgcctgagctgcaaagcgagcggctatacctttacccgctataccatgcattgggtgcgc
caggcgccgggcaaaggcctggaatggattggctatattaacccgagccgcggctataccaactataaccagaaagtgaa
agatcgctttaccattagcaccgataaaagcaaaagcaccgcgtttctgcagatggatagcctgcgcccggaagataccg
cggtgtattattgcgcgcgctattatgatgatcattattgcctggattattggggccagggcaccaccctgaccgtgagc
age (SEQ ID NO:389)
(amino acids)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYMNWYQQTPGKAPKRWIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPE
DIATYYCQQWSSNPFTFGQGTKLQITRGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCKASGYTFTRYTMHWVR
QAPGKGLEWIGYINPSRGYTNYNQKVKDRFTISTDKSKSTAFLQMDSLRPEDTAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVS
S (SEQ ID NO:390)
HumanizeE6 scFV (VH-VL)sequence:
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtaggtatggcatgagctgggtccgccaggctccagggaagaggctggagtgggtctcaaccattagtggcg
gaggcacctacatatactacccagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacaccctgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtaccagagataactatggccgcaactatgatta
tggcatggattattggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagcggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcg
gtggcggatccgaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctcacctgc
agcgccaccagcagtgttagctacatccactggtaccaacagaggcctggccagagccccaggctcctcatctatagcac
ctccaacctggccagcggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggagcgactacactctcaccatcagcagcc
tagagcctgaagattttgcagtttattactgtcagcagcgtagcagctcccctttcacctttggcagcggcaccaaagtg
gaaattaaa(SEQ ID NO:391)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNTL
YLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLT
CSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSSPFTFGSGTK
VEIK (SEQ ID NO:392)
HumanizeE6 scFV (VL-VH)sequence:
(DNA)
gaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctcacctgcagcgccaccag
cagtgttagctacatccactggtaccaacagaggcctggccagagccccaggctcctcatctatagcacctccaacctgg
ccagcggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggagcgactacactctcaccatcagcagcctagagcctgaa
gattttgcagtttattactgtcagcagcgtagcagctcccctttcacctttggcagcggcaccaaagtggaaattaaagg
cggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtca
agcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtaggtatggcatgagctgggtccgccag
gctccagggaagaggctggagtgggtctcaaccattagtggcggaggcacctacatatactacccagactcagtgaaggg
ccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacaccctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctg
tgtattactgtaccagagataactatggccgcaactatgattatggcatggattattggggccagggcaccctggtgacc
gtgagcagc(SEQ ID NO:393)
(amino acids)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPE
DFAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQ
APGKRLEWVSTI SGGGTYIYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLV
T VSS (SEQ ID NO: 394)
HumanizeC2 scFV (VH-VL)sequence:
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtg
gcggatccgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcaga
gccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcct
gatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctca
caattaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcgga
gggaccaaggtggagatcaaacgaact (SEQ ID NO: 395)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
Y LQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATIT
CRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPFTF
GGGTKVEIKRT (SEQ ID NO : 396 )
HumanizeE6 scFV (VL-VH)sequence:
(DNA)
gacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcagagccagtaa
gagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcctgatttacc
tggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctcacaattaat
cctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcggagggaccaa
ggtggagatcaaacgaactggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgaggtgcagctggtgg
agtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtggctat
gccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtggcggaacctacatata
ctaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcc
tgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaatacttcgatgtctggggc
aaagggaccacggtcaccgtctcctcc (SEQ ID NO: 397)
(amino acids)
DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTIN
PVEANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRTGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGY
AMSWVRQAPGKGLEWVSTI SSGGTYIYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVW
G KGTTVTVSS (SEQ ID NO: 398)
G4S1 linker sequence:
(DNA)
ggcggtggcggatcc (SEQ ID NO: 399)
(amino acids)
GGGGS (SEQ ID NO:400)
[G4Si]x3 linker sequence:
(DNA)
ggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatcc(SEQ ID NO: 401)
(amino acids)
GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 402)
8 aa GS linker sequence:
(DNA)
ggcggttccggcggtggatccgga (SEQ IDNO: 403)
(amino acids)
GGSGGGSG (SEQ ID NO:404)
12 aa GS linker sequence:
(DNA)
ggcggttccggcggtggatccggcggtggcggatccgga(SEQ ID NO: 405)
(amino acids)
GGSGGGSGGGSG (SEQ ID NO: 406)
13 aa GS linker sequence
ggcggtggatccggcggtggcggatccggcggtggatcc(SEQ ID NO: 407)
(amino acids)
GGGSGGGGSGGGS (SEQ ID NO: 408)
22 aa GS linker sequence:
(DNA)
ggcggtggaagcggcggtggcggatccggcagcggcggaagcggcggtggcggatccggcggtgga(SEQ ID NO: 40
9)
(amino acids)
GGGSGGGGSGSGGSGGGGSGGG (SEQ IDNO: 4110)
24 aa GS linker sequence:
(DNA)
ggcggttccggcggtggatccggcggtggcggatccggaggcggttccggcggtggatccggcggtggcggatccgga(S
EQ ID NO:411)
(amino acids)
GGSGGGSGGGSGGGSGGGSGGGSG (SEQ IDNO: 412)
Mouse C3 Heavy chain variableregion sequence:
(DNA)
caggtccagctgcagcagtctgggcctgagctggtgaggcctggggtctcagtgaagatttcctgcaagggttccggcta
cagattcactgattatgctatgaactgggtgaagcagagtcatgcaaagagtctagagtggattggagttattagtactt
tctctggtaatacaaacttcaaccagaagtttaagggcaaggccacaatgactgtagacaaatcctccagcacagcctat
atggaacttgccagattgacatctgaggattctgccatgtattactgtgcaagatcggattactacggcccatactttga
ctactggggccaaggcaccactctcacagtctcctca (SEQ ID NO: 413)
(amino acids)
QVQLQQSGPELVRPGVSVKISCKGSGYRFTDYAMNWVKQSHAKSLEWIGVI STFSGNTNFNQKFKGKATMTVDKSSSTA
YMELARLTSEDSAMYYCARSDYYGPYFDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO: 414)
Mouse C3 heavy chain variableframework region 1 (FWR1) sequence:
(DNA)
caggtccagctgcagcagtctgggcctgagctggtgaggcctggggtctcagtgaagatttcctgcaagggttccggcta
cagattcact (SEQ ID NO: 415)
(amino acids)
QVQLQQSGPELVRPGVSVKI SCKGSGYRFT(SEQ ID NO: 416)
Mouse C3 heavy chain variablecomplementarity determining regions 1 (CDR1) sequen
ce :
(DNA)
gattatgctatgaac (SEQ ID NO: 417)
(amino acids)
DYAMN (SEQ ID NO : 418 )
Mouse C3 heavy chain variableframework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
tgggtgaagcagagtcatgcaaagagtctagagtggattgga(SEQ ID NO: 419)
(amino acids)
WVKQSHAKSLEWIG (SEQ ID NO: 420)
Mouse C3 heavy chain variablecomplementarity determining regions 2 (CDR2) sequen
ce :
(DNA)
gttattagtactttctctggtaatacaaacttcaaccagaagtttaagggc(SEQ ID NO: 421)
(amino acids)
VI STFSGNTNFNQKFKG (SEQ ID NO:422)
Mouse C3 heavy chain variableframework region 3 (FWR3) acid sequence:
(DNA)
aaggccacaatgactgtagacaaatcctccagcacagcctatatggaacttgccagattgacatctgaggattctgccat
gtattactgtgcaaga (SEQ ID NO: 423)
(amino acids)
KATMTVDKSSSTAYMELARLTSEDSAMYYCAR(SEQ ID NO: 424)
Mouse C3 heavy chain variablecomplementarity determining regions 3 (CDR3) sequen
ce :
(DNA)
tcggattactacggcccatactttgactac(SEQ ID NO: 425)
(amino acids)
SDYYGPYFDY (SEQ ID NO: 426)
IGHV1-18*04 heavy chain variableregion sequence:
(DNA)
caggttcagctggtgcagtctggagctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggtta
cacctttaccagctacggtatcagctgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggatggatcagcgctt
acaatggtaacacaaactatgcacagaagctccagggcagagtcaccatgaccacagacacatccacgagcacagcctac
atggagctgaggagcctgagatctgacgacacggccgtgtattactgtgcgagaga (SEQ ID NO: 427)
(amino acids)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAY
MELRSLRSDDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 428)
IGHV1-18*04 heavy chain variableframework region 1 (FWR1) sequence:
(DNA)
caggttcagctggtgcagtctggagctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggtta
cacctttacc (SEQ ID NO: 429)
(amino acids)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT(SEQ ID NO: 430)
IGHV1-18*04 heavy chain variablecomplementarity determining regions 1 (CDR1) seq
uence :
(DNA)
agctacggtatcagc (SEQ ID NO: 431)
(amino acids)
SYGIS (SEQ ID NO:432)
IGHV1-18*04 heavy chain variableframework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
tgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatggga(SEQ ID NO: 433)
(amino acids)
WVRQAPGQGLEWMG (SEQ ID NO: 434)
IGHV1-18*04 heavy chain variablecomplementarity determining regions 2 (CDR2) seq
uence :
(DNA)
tggatcagcgcttacaatggtaacacaaactatgcacagaagctccagggc(SEQ ID NO: 435)
(amino acids)
WISAYNGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:436)
IGHV1-18*04 heavy chain variableframework region 3 (FWR3) sequence:
(DNA)
agagtcaccatgaccacagacacatccacgagcacagcctacatggagctgaggagcctgagatctgacgacacggccgt
gtattactgtgcgaga (SEQ ID NO: 437)
(amino acids)
RVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAR(SEQ ID NO: 438)
Humanized C3 heavy chainvariable region sequence:
(DNA)
caggttcagctggtgcagtctggagctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggtta
cacctttaccgactacgccatgaactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggagtgatcagcacct
tcagcggtaacacaaacttcaaccagaagttcaagggcagagtcaccatgaccacagacacatccacgagcacagcctac
atggagctgaggagcctgagatctgacgacacggccgtgtattactgtgcgagaagcgactactacggcccatacttcga
ctactggggccagggcaccaccctgaccgtgtccagc (SEQ ID NO: 439)
(amino acids)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYAMNWVRQAPGQGLEWMGVISTFSGNTNFNQKFKGRVTMTTDTSTSTAY
MELRSLRSDDTAVYYCARSDYYGPYFDYWGQGTTLTVSS (SEQ IDNO: 440)
Humanized C3 heavy chainvariable framework region 1 (FWR1) acid sequence:
(DNA)
caggttcagctggtgcagtctggagctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggtta
cacctttacc (SEQ ID NO:441)
(amino acids)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT(SEQ ID NO: 442)
Humanized C3 heavy chainvariable complementarity determining regions 1 (CDR1) se
quence :
(DNA)
gactacgccatgaac (SEQ ID NO: 443)
(amino acids)
DYAMN (SEQ ID NO: 444)
Humanized C3 heavy chainvariable framework region 2 (FWR2) acid sequence:
(DNA)
tgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatggga(SEQ ID NO: 445)
(amino acids)
WVRQAPGQGLEWMG (SEQ ID NO: 446)
Humanized C3 heavy chainvariable complementarity determining regions 2 (CDR2) se
quence :
(DNA)
gtgatcagcaccttcagcggtaacacaaacttcaaccagaagttcaagggc(SEQ ID NO: 447)
(amino acids)
VI STFSGNTNFNQKFKG (SEQ ID NO:448)
Humanized C3 heavy chainvariable framework region 3 (FWR3) acid sequence:
(DNA)
agagtcaccatgaccacagacacatccacgagcacagcctacatggagctgaggagcctgagatctgacgacacggccgt
gtattactgtgcgaga (SEQ ID NO: 449)
(amino acids)
RVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAR(SEQ ID NO: 450)
Humanized C3 heavy chainvariable complementarity determining regions 3 (CDR3) se
quence :
(DNA)
agcgactactacggcccatacttcgactac(SEQ ID NO: 451)
(amino acids)
SDYYGPYFDY (SEQ ID NO: 452)
Humanized C3 IgGl heavy chainsequence
(DNA)
caggttcagctggtgcagtctggagctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggtta
cacctttaccgactacgccatgaactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggagtgatcagcacct
tcagcggtaacacaaacttcaaccagaagttcaagggcagagtcaccatgaccacagacacatccacgagcacagcctac
atggagctgaggagcctgagatctgacgacacggccgtgtattactgtgcgagaagcgactactacggcccatacttcga
ctactggggccagggcaccaccctgaccgtgtccagcgctagcaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcct
ccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtgg
aactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgt
ggtgacagtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtgg
acaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccg
tcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtgga
cgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgc
gggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggag
tacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgaga
accacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggct
tctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctg
gactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatg
ctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatgataa (SEQ I
D NO: 453)
(amino acids)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYAMNWVRQAPGQGLEWMGVISTFSGNTNFNQKFKGRVTMTTDTSTSTAY
MELRSLRSDDTAVYYCARSDYYGPYFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW
NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGP
SVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGK
EYKCKVSNKALPAP IEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPP
VLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* * (SEQ ID NO: 454)
Humanized C3 IgG2 heavy chainsequence
(DNA)
caggttcagctggtgcagtctggagctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggtta
cacctttaccgactacgccatgaactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggagtgatcagcacct
tcagcggtaacacaaacttcaaccagaagttcaagggcagagtcaccatgaccacagacacatccacgagcacagcctac
atggagctgaggagcctgagatctgacgacacggccgtgtattactgtgcgagaagcgactactacggcccatacttcga
ctactggggccagggcaccaccctgaccgtgtccagcgcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgct
ccaggagcacctccgagagcacagccgccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtgg
aactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgt
ggtgaccgtgccctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtgg
acaagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctc
ttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacga
agaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagcagt
tcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgttgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaag
gtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgta
caccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcg
acatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggc
tccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgca
tgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatagtaa (SEQ ID NO: 455)
(amino acids)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYAMNWVRQAPGQGLEWMGVISTFSGNTNFNQKFKGRVTMTTDTSTSTAY
MELRSLRSDDTAVYYCARSDYYGPYFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSW
NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFL
FPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCK
VSNKGLPAPIEKTI SKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDS
DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* * ( SEQ ID NO:456)
Humanized C3 heavy chain IgGlgBLOCK sequence:
(DNA)
tgctctgggttccaggttccactggtgacgcggcccagccggcccaggttcagctggtgcagtctggagctgaggtgaag
aagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggttacacctttaccgactacgccatgaactgggtgcgaca
ggcccctggacaagggcttgagtggatgggagtgatcagcaccttcagcggtaacacaaacttcaaccagaagttcaagg
gcagagtcaccatgaccacagacacatccacgagcacagcctacatggagctgaggagcctgagatctgacgacacggcc
gtgtattactgtgcgagaagcgactactacggcccatacttcgactactggggccagggcaccaccctgaccgtgtccag
cgctagcaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggct
gcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagc (SEQ ID NO: 45
7)
Mouse C3 Light Chain variableregion sequence:
(DNA)
gatgttttgatgacccaaactccactctccctgcctgtcagtcttggagatcaagcctccatctcttgcagatctagtca
gaccattgtacatagtaatggaaacacctatttagaatggtacctgcagaaaccaggccagtctccaaagctcctgatct
acaaagtttccaaccgattttctggggtcccagacaggttcagtggcagtggatcagggacagatttcacactcaagatc
aacagagtggaggctgaggatctgggagtttattactgetttcaaggttcacatgttccattcacgttcggctcggggac
aaagttggaaataaaa (SEQ ID NO: 458)
(amino acids)
DVLMTQTPLSLPVSLGDQAS ISCRSSQTIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLK
INRVEAEDLGVYYCFQGSHVPFTFGSGTKLEIK (SEQ ID NO: 459)
Mouse C3 light chain variableframework region 1 (FWR1) sequence :
(DNA)
gatgttttgatgacccaaactccactctccctgcctgtcagtcttggagatcaagcctccatctcttgc(SEQ ID NO:
460)
(amino acids)
DVLMTQTPLSLPVSLGDQAS ISC (SEQ IDNO: 461)
Mouse C3 light chain variablecomplementarity determining regions 1 (CDR1) sequen
ce :
(DNA)
agatctagtcagaccattgtacatagtaatggaaacacctatttagaa(SEQ ID NO: 462)
(amino acids)
RSSQTIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO:463)
Mouse C3 light chain variableframework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
tggtacctgcagaaaccaggccagtctccaaagctcctgatctac(SEQ ID NO: 464)
(amino acids)
WYLQKPGQSPKLLIY (SEQ ID NO: 465)
Mouse C3 light chain variablecomplementarity determining regions 2 (CDR2) sequen
ce :
(DNA)
aaagtttccaaccgattttct (SEQ IDNO: 466)
(amino acids)
KVSNRFS (SEQ ID NO: 467)
Mouse C3 light chain variableframework region 3 (FWR3) sequence:
(DNA)
ggggtcccagacaggttcagtggcagtggatcagggacagatttcacactcaagatcaacagagtggaggctgaggatct
gggagtttattactgc (SEQ ID NO: 468)
(amino acids)
GVPDRFSGSGSGTDFTLKINRVEAEDLGVYYC(SEQ ID NO : 469 )
Mouse C3 light chain variablecomplementarity determining regions 3 (CDR3) sequen
ce :
(DNA)
tttcaaggttcacatgttccattcacg (SEQID NO: 470)
(amino acids)
FQGSHVPFT (SEQ ID NO: 471)
IGKV2-29*03 light chain variableregion sequence:
(DNA)
gatattgtgatgacccagactccactctctctgtccgtcacccctggacagccggcctccatctcctgcaagtctagtca
gagcctcctgcatagtgatggaaagacctatttgtattggtacctgcagaagccaggccagtctccacagctcctgatct
atgaagtttccagccggttctctggagtgccagataggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcacactgaaaatc
agccgggtggaggctgaggatgttggggtttattactgcatgcaaggtatacaccttcct (SEQ ID NO: 472)
(amino acids)
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLLHSDGKTYLYWYLQKPGQSPQLLIYEVSSRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKI
SRVEAEDVGVYYCMQGIHLP (SEQ ID NO: 473)
IGKV2-29*03 light chain variableframework region 1 (FWR1) acid sequence:
(DNA)
gatattgtgatgacccagactccactctctctgtccgtcacccctggacagccggcctccatctcctgc(SEQ ID NO:
474)
(amino acids)
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISC (SEQ IDNO: 475)
IGKV2-29*03 light chain variablecomplementarity determining regions 1 (CDR1) seq
uence:
(DNA)
aagtctagtcagagcctcctgcatagtgatggaaagacctatttgtat(SEQ ID NO: 476)
(amino acids)
KSSQSLLHSDGKTYLY (SEQ ID NO:477)
IGKV2-29*03 light chain variableframework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
tggtacctgcagaagccaggccagtctccacagctcctgatctat(SEQ ID NO: 478)
(amino acids)
WYLQKPGQSPQLLIY (SEQ ID NO: 479)
IGKV2-29*03 light chain variablecomplementarity determining regions 2 (CDR2) seq
uence :
(DNA)
gaagtttccagccggttc (SEQ ID NO:480)
(amino acids)
EVSSRFS (SEQ ID NO : 481 )
IGKV2-29*03 light chain variableframework region 3 (FWR3) sequence:
(DNA)
ggagtgccagataggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcacactgaaaatcagccgggtggaggctgaggatgt
tggggtttattactgc (SEQ ID NO: 482)
(amino acids)
GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC (SEQ ID NO: 483)
IGKV2-29*03 light chain variablecomplementarity determining regions3 (CDR3) sequ
ence :
(DNA)
atgcaaggtatacaccttcct (SEQ ID NO:484)
(amino acids)
MQGIHLP (SEQ ID NO: 485)
Humanized C3 light chainvariable region sequence:
(DNA)
gatattgtgatgacccagactccactctctctgtccgtcacccctggacagccggcctccatctcctgcaggtctagtca
gaccattgtccatagtaatggaaacacctatttggagtggtacctgcagaagccaggccagtctccacagctcctgatct
ataaggtttccaaccggttctctggagtgccagataggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcacactgaaaatc
agccgggtggaggctgaggatgttggggtttattactgettccaaggtagccacgtgcctttcaccttcggcggagggac
caaggtggagatcaaacgaact (SEQ ID NO: 486)
(amino acids)
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQTIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKI
SRVEAEDVGVYYCFQGSHVPFTFGGGTKVEIKRT (SEQ ID NO: 487)
Humanized C3 light chainvariable framework region 1 (FWR1) acid sequence:
(DNA)
gatattgtgatgacccagactccactctctctgtccgtcacccctggacagccggcctccatctcctgc(SEQ ID NO:
488)
(amino acids)
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISC (SEQ IDNO : 489 )
Humanized C3 light chainvariable complementarity determining regions 1 (CDR1) se
quence :
(DNA)
ggtctagtcagaccattgtccatagtaatggaaacacctatttggag(SEQ ID NO: 490)
(amino acids)
RSSQTIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO:491)
Humanized C3 light chainvariable framework region 2 (FWR2) acid sequence:
(DNA)
tggtacctgcagaagccaggccagtctccacagctcctgatctat(SEQ ID NO: 492)
(amino acids)
WYLQKPGQSPQLLIY (SEQ ID NO: 493)
Humanized C3 light chainvariable complementarity determining regions 2 (CDR2) se
quence :
(DNA)
aaggtttccaaccggttctct (SEQ IDNO: 494)
(amino acids)
KVSNRFS (SEQ ID NO: 495)
Humanized C3 light chainvariable framework region 3 (FWR3) acid sequence:
(DNA)
ggagtgccagataggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcacactgaaaatcagccgggtggaggctgaggatgt
tggggtttattactgc (SEQ ID NO: 496)
(amino acids)
GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC (SEQ ID NO: 497)
Humanized C3 light chainvariable complementarity determining regions 3 (CDR3) se
quence :
(DNA)
ttccaaggtagccacgtgcctttcacc (SEQID NO: 498)
(amino acids)
FQGSHVPFT (SEQ ID NO : 499 )
Humanized C3 lambda light chainsequence
(DNA)
gatattgtgatgacccagactccactctctctgtccgtcacccctggacagccggcctccatctcctgcaggtctagtca
gaccattgtccatagtaatggaaacacctatttggagtggtacctgcagaagccaggccagtctccacagctcctgatct
ataaggtttccaaccggttctctggagtgccagataggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcacactgaaaatc
agccgggtggaggctgaggatgttggggtttattactgettccaaggtagccacgtgcctttcaccttcggcggagggac
caaggtggagatcaaacgaactggtcagcccaaggctgccccctcggtcactctgttcccgccctcctctgaggagcttc
aagccaacaaggccacactggtgtgtctcataagtgacttctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagc
agccccgtcaaggcgggagtggagaccaccacaccctccaaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctatctgag
cctgacgcctgagcagtggaagtcccacagaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacag
tggcccctacagaatgttcatagtaa (SEQ ID NO: 500)
(amino acids)
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQTIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKI
SRVEAEDVGVYYCFQGSHVPFTFGGGTKVEIKRTGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADS
SPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS * * (SEQ ID NO:501)
Humanized C3 Kappa light chain
(DNA)
gatattgtgatgacccagactccactctctctgtccgtcacccctggacagccggcctccatctcctgcaggtctagtca
gaccattgtccatagtaatggaaacacctatttggagtggtacctgcagaagccaggccagtctccacagctcctgatct
ataaggtttccaaccggttctctggagtgccagataggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcacactgaaaatc
agccgggtggaggctgaggatgttggggtttattactgettccaaggtagccacgtgcctttcaccttcggcggagggac
caaggtggagatcaaacgaactacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctg
gaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctc
caatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgct
gagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaaga
gcttcaacaggggagagtgttagtaa (SEQ ID NO: 502)
(amino acids)
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQTIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKI
SRVEAEDVGVYYCFQGSHVPFTFGGGTKVEIKRTTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNAL
QSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC* * (SEQ ID NO: 503)
Humanized C3 Kappa light gBLOCK sequence:
(DNA)
agctggctaggtaagcttggtaccgagctcggatccacgccaccatggagacagacacactcctgctatgggtactgctg
ctctgggttccaggttccactggtgacgatattgtgatgacccagactccactctctctgtccgtcacccctggacagcc
ggcctccatctcctgcaggtctagtcagaccattgtccatagtaatggaaacacctatttggagtggtacctgcagaagc
caggccagtctccacagctcctgatctataaggtttccaaccggttctctggagtgccagataggttcagtggcagcggg
tcagggacagatttcacactgaaaatcagccgggtggaggctgaggatgttggggtttattactgettccaaggtagcca
cgtgcctttcaccttcggcggagggaccaaggtggagatcaaacgaactacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcc
cgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaa
gtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcac
ctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatc
agggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgttagtaagtttaaacccgctgatcagcctcgact
gtgccttctagttgc (SEQ ID NO:504)
Mouse C8 heavy chain variableregion sequence
(DNA)
gaagtgatggtcgtggaaagcggcggtggtctggtaaagccggggggatcccttaagctttcttgcgccgcatccgggtt
cacgttctccggctatgccatgtcctgggtccgacagactcccgaaaagcgcttggaatgggtggccactatctcctccg
gggggacgtacatctactaccccgacagtgtgaaaggaagatttacaatatctcgcgacaacgcaaaaaataccttgtat
cttcaaatgagctccctgcggtcagaggacactgccatgtactattgcgcccgcctgggcggcgacaattactatgagta
t(SEQ ID NO:505)
(amino acids)
EVMVVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSGYAMSWVRQTPEKRLEWVATI SSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNT
LYL QMSSLRSEDTAMYYCARLGGDNYYEY (SEQ ID NO: 506)
Mouse C8 heavy chain variablecomplementarity determining region 1 (CDR1) sequence :
(DNA)
ggctatgccatgtcc (SEQ ID NO: 507)
(amino acids)
GYAMS (SEQ ID NO: 508)
Mouse C8 heavy chain variablecomplementarity determining region 2 (CDR2) sequence :
(DNA)
actatctcctccggggggacgtacatctactaccccgacagtgtgaaagga(SEQ ID NO: 509)
(amino acids)
T I SSGGTYIYYPDSVKG (SEQ ID NO:510)
Mouse C8 heavy chain variablecomplementarity determining region 3 (CDR3) sequenc
e :
(DNA)
ctgggcggcgacaattactatgagtat (SEQID NO: 511)
(amino acids)
LGGDNYYEY (SEQ ID NO: 512)
IGHV3-21*04 heavy chain variableregion sequence:
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtagctatagcatgaactgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcatccattagtagta
gtagtagttacatatactacgcagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcga (SEQ ID NO: 513)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSSSSYIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLY
LQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 514)
IGHV3-21*04 heavy chain variableframework region 1 (FWR1) sequence:
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagt (SEQ ID NO: 515)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO: 516)
IGHV3-21*04 heavy chain variablecomplementarity determining regions 1 (COR1) seq
uence :
(DNA)
agctatagcatgaac (SEQ ID NO: 517)
(amino acids)
SYSMN (SEQ ID NO: 518)
IGHV3-21*04 heavy chain variableframework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
tgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtc(SEQ ID NO: 519)
(amino acids)
WVRQAPGKGLEWV (SEQ ID NO: 520)
IGHV3-21*04 heavy chain variablecomplementarity determining regions 2 (COR2) seq
uence :
(DNA)
tcatccattagtagtagtagtagttacatatactacgcagactcagtgaagggc(SEQ ID NO: 521)
(amino acids)
SSISSSSSYIYYADSVKG (SEQ ID NO:522)
IGHV3-21*04 heavy chain variableframework region 3 (FWR3) sequence:
(DNA)
cgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgt
gtattactgtgcga (SEQ ID NO: 523)
(amino acids)
RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 524)
Humanized C8 heavy chainvariable region sequence:
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccctgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagactgggcggcgataactattatgaata
ttggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctcc (SEQ ID NO: 525)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
Y LQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYWGKGTTVTVSS (SEQ IDNO: 526)
Humanized C8 heavy chainvariable framework region 1 (FWR1) sequence:
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagt (SEQ ID NO: 527)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS (SEQID NO: 528)
Humanized C8 heavy chainvariable complementarity determining region 1 (CDR1) seq
uence :
(DNA)
ggctatgccatgagc (SEQ ID NO: 529)
(amino acids)
GYAMS (SEQ ID NO: 530)
Humanized C8 heavy chainvariable framework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
tgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctca(SEQ ID NO: 531)
(amino acids)
WVRQAPGKGLEWVS (SEQ ID NO: 532)
Humanized C8 heavy chainvariable complementarity determining region 2 (CDR2) seq
uence :
(DNA)
accattagtagtggcggaacctacatatactaccctgactcagtgaagggc(SEQ ID NO: 533)
(amino acids)
TI SSGGTYIYYPDSVKG (SEQ ID NO:534)
Humanized C8 heavy chainvariable framework region 3 (FWR3) sequence:
(DNA)
cgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgt
gtattactgtgcgaga (SEQ ID NO: 535)
(amino acids)
RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 536)
Humanized C8 heavy chainvariable complementarity determining region 3 (CDR3) seq
uence :
(DNA)
ctgggcggcgataactattatgaatat (SEQID NO: 537)
(amino acids)
LGGDNYYEY (SEQ ID NO: 538)
Humanized C8 IgGl heavy chainsequence
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccctgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagactgggcggcgataactattatgaata
ttggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccgctagcaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctcca
agagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaac
tcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggt
gacagtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggaca
agaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtca
gtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgt
gagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcggg
aggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtac
aagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaacc
acaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttct
atcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggac
tccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctc
cgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatgataa (SEQ ID N
O: 539)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YL QMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYWGKGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS
WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG
PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGK
EYKCKV SNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTP
PVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* * (SEQ ID NO: 540)
Humanized C8 IgG2 heavy chainsequence
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccctgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagactgggcggcgataactattatgaata
ttggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccgcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctcca
ggagcacctccgagagcacagccgccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaac
tcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggt
gaccgtgccctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggaca
agacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttc
cccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaaga
ccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagcagttca
acagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgttgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtc
tccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacac
cctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgaca
tcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctcc
ttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatga
ggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatagtaa (SEQ ID NO: 541)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYWGKGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSW
NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFL
FPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCK
VSNKG LPAPIEKTI SKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDS
DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK* * (SEQ ID NO: 542)
Mouse C8 light chain variableregion sequence
(DNA)
gacatcgtcattacgcagacccctgccagtcttgccgtttctctgggccagagggccactatcagttacagggcgagtaa
gtctgtgagtaccagcggctatagttacatgcattggaaccagcagaaaccgggacagccaccacgcctgcttatttatc
tggtgtctaatcttgagtccggggtgcccgccaggttcagcggcagcggctctgggaccgacttcacactcaacattcat
ccagtggaagaagaggacgctgctacatactactgtcaacacattcgggaactgaccaggagtgaa (SEQ ID NO:54
3) (amino acids)
DIVITQTPASLAVSLGQRATISYRASKSVSTSGYSYMHWNQQKPGQPPRLLIYLVSNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIH
PVEEEDAATYYCQHIRELTRSE (SEQ ID NO: 544)
Mouse C8 light chain variablecomplementarity determining region 1 (CDR1) sequenc
e :
(DNA)
agggcgagtaagtctgtgagtaccagcggctatagttacatgcat(SEQ ID NO: 545)
(amino acids)
RASKSVSTSGYSYMH (SEQ ID NO: 546)
Mouse C8 light chain variablecomplementarity determining region 2 (CDR2) sequenc
e :
(DNA)
ctggtgtctaatcttgagtcc (SEQ IDNO: 547)
(amino acids)
LVSNLES (SEQ ID NO: 548)
Mouse C8 light chain variablecomplementarity determining region 3 (CDR3) sequenc
e :
(DNA)
caacacattcgggaactgaccaggagtgaa(SEQ ID NO: 549)
(amino acids)
QHIRELTRSE (SEQ ID NO: 550)
NCBI germline z00023 light chainvariable region sequence:
(DNA)
gacatcgtgatgacccagtctccagactccctggctgtgtctctgggcgagagggccaccatcaactgcaagtccagcca
gagtgttttatacagctccaacaataagaactacttagcttggtaccagcagaaaccaggacagcctcctaagctgctca
tttactgggcatctacccgggaatccggggtccctgaccgattcagtggcagcgggtctgggacagatttcactctcacc
atcagcagcctgcaggctgaagatgtggcagtttattactgtcagcaatattatagtactcct (SEQ ID NO: 551)
(amino acids)
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLT
ISSLQAEDVAVYYCQQYYSTP (SEQ ID NO: 552)
NCBI germline z00023 light chainvariable framework region 1 (FWR1) acid sequence
:
(DNA)
gacatcgtgatgacccagtctccagactccctggctgtgtctctgggcgagagggccaccatcaactgc(SEQ ID NO:
553)
(amino acids)
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC (SEQ IDNO: 554)
NCBI germline z00023 light chainvariable complementarity determining regions 1 (
CDR1 ) sequence :
(DNA)
aagtccagccagagtgttttatacagctccaacaataagaactacttagct(SEQ ID NO: 555)
(amino acids)
KSSQSVLYSSNNKNYLA (SEQ ID NO:556)
NCBI germline z00023 light chainvariable framework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
tggtaccagcagaaaccaggacagcctcctaagctgctcatttac(SEQ ID NO: 557)
(amino acids)
WYQQKPGQPPKLLIY (SEQ ID NO: 558)
NCBI germline z00023 light chainvariable complementarity determining regions 2 (
CDR2 ) sequence :
(DNA)
tgggcatctacccgggaatcc (SEQ IDNO: 559)
(amino acids)
WASTRES (SEQ ID NO: 560)
NCBI germline z00023 light chainvariable framework region 3 (FWR3) sequence:
(DNA)
ggggtccctgaccgattcagtggcagcgggtctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcaggctgaagatgt
ggcagtttattactgt (SEQ ID NO: 561)
(amino acids)
GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC (SEQ ID NO: 562)
NCBI germline z00023 light chainvariable complementarity determining regions3 (C
DR3) sequence :
(DNA)
cagcaatattatagtactcct (SEQ IDNO: 563)
(amino acids)
QQYYSTP (SEQ ID NO: 564)
Humanized C8 light chainvariable region sequence
(DNA)
gacatcgtgatgacccagtctccagactccctggctgtgtctctgggcgagagggccaccatcaactgcagggccagcaa
gagtgttagcaccagcggctacagctacatgcactggtaccagcagaaaccaggacagcctcctaagctgctcatttacc
tggtgtctaacctggaatccggggtccctgaccgattcagtggcagcgggtctgggacagatttcactctcaccatcagc
agcctgcaggctgaagatgtggcagtttattactgtcaacacattcgggaactgaccaggagtgaattcggcggagggac
caaggtggagatcaaacgaact (SEQ ID NO: 565)
(amino acids)
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLVSNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIS
SLQAEDVAVYYCQHIRELTRSEFGGGTKVEIKRT (SEQ ID NO : 566 )
Humanized C8 light chainvariable framework region 1 (FWR1) sequence:
(DNA)
gacatcgtgatgacccagtctccagactccctggctgtgtctctgggcgagagggccaccatcaactgc(SEQ ID NO:
567)
(amino acids)
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC (SEQ IDNO: 568)
Humanized C8 light chainvariable complementarity determining region 1 (CDR1) seq
uence :
(DNA)
agggccagcaagagtgttagcaccagcggctacagctacatg(SEQ ID NO: 569)
(amino acids)
RASKSVSTSGYSYM (SEQ ID NO: 570)
Humanized C8 light chainvariable framework region 2 (FWR2) sequence:
(DNA)
cactggtaccagcagaaaccaggacagcctcctaagctgctcatttac(SEQ ID NO: 571)
(amino acids)
HWYQQKPGQPPKLLIY (SEQ ID NO:572)
Humanized C8 light chainvariable complementarity determining region 2 (CDR2) seq
uence :
(DNA)
ctggtgtctaacctggaatcc (SEQ IDNO: 573)
(amino acids)
LVSNLES (SEQ ID NO: 574)
Humanized C8 light chainvariable framework region 3 (FWR3) sequence:
(DNA)
ggggtccctgaccgattcagtggcagcgggtctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcaggctgaagatgt
ggcagtttattactgt (SEQ ID NO: 575)
(amino acids)
GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC (SEQ ID NO: 576)
Humanized C8 light chainvariable complementarity determining region 3 (CDR3) seq
uence :
(DNA)
caacacattcgggaactgaccaggagtgaa(SEQ ID NO: 577)
(amino acids)
QHIRELTRSE (SEQ ID NO: 578)
Humanized C8 Lambda light chainsequence
(DNA)
gacatcgtgatgacccagtctccagactccctggctgtgtctctgggcgagagggccaccatcaactgcagggccagcaa
gagtgttagcaccagcggctacagctacatgcactggtaccagcagaaaccaggacagcctcctaagctgctcatttacc
tggtgtctaacctggaatccggggtccctgaccgattcagtggcagcgggtctgggacagatttcactctcaccatcagc
agcctgcaggctgaagatgtggcagtttattactgtcaacacattcgggaactgaccaggagtgaattcggcggagggac
caaggtggagatcaaacgaactggtcagcccaaggctgccccctcggtcactctgttcccgccctcctctgaggagcttc
aagccaacaaggccacactggtgtgtctcataagtgacttctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagc
agccccgtcaaggcgggagtggagaccaccacaccctccaaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctatctgag
cctgacgcctgagcagtggaagtcccacagaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacag
tggcccctacagaatgttcatagtaa (SEQ ID NO: 579)
(amino acids)
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLVSNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIS
SLQAEDVAVYYCQHIRELTRSEFGGGTKVEIKRTGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADS
SPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS * * (SEQ ID NO: 580
)
Humanized C8 Kappa light chainsequence
(DNA)
gacatcgtgatgacccagtctccagactccctggctgtgtctctgggcgagagggccaccatcaactgcagggccagcaa
gagtgttagcaccagcggctacagctacatgcactggtaccagcagaaaccaggacagcctcctaagctgctcatttacc
tggtgtctaacctggaatccggggtccctgaccgattcagtggcagcgggtctgggacagatttcactctcaccatcagc
agcctgcaggctgaagatgtggcagtttattactgtcaacacattcgggaactgaccaggagtgaattcggcggagggac
caaggtggagatcaaacgaactacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctg
gaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctc
caatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgct
gagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaaga
gcttcaacaggggagagtgttagtaa (SEQ ID NO: 581)
(amino acids)
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLVSNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIS
SLQAEDVAVYYCQHIRELTRSEFGGGTKVEIKRTTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNAL
QSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC* * (SEQ ID NO: 582)
Humanized C8 Kappa light chaingBLOCk sequence:
(DNA)
agctggctaggtaagcttggtaccgagctcggatccacgccaccatggagacagacacactcctgctatgggtactgctg
ctctgggttccaggttccactggtgacgacatcgtgatgacccagtctccagactccctggctgtgtctctgggcgagag
ggccaccatcaactgcagggccagcaagagtgttagcaccagcggctacagctacatgcactggtaccagcagaaaccag
gacagcctcctaagctgctcatttacctggtgtctaacctggaatccggggtccctgaccgattcagtggcagcgggtct
gggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcaggctgaagatgtggcagtttattactgtcaacacattcgggaact
gaccaggagtgaattcggcggagggaccaaggtggagatcaaacgaactacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcc
cgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaa
gtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcac
ctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatc
agggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgttagtaagtttaaacccgctgatcagcctcgact
gtgccttctagttgc (SEQ ID NO:583)
CAR-T E6 CD8 sequence:
(DNA)
gaggtccagctggttgagagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatt
tactttcagccgatatgggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccgggg
ggggcacttacatctattaccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtat
ttgcagatgaattctctgagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgacta
cggtatggactattggggacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtg
gggggggcagcgagatagtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgc
tctgctacctcctcagtgtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtac
ctctaatctggcctcaggtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcc
tggagcctgaagactttgccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggtt
gaaattaaaacgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagacc
agaagcctgtaggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccc
cgctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgctgataa (SEQ ID NO: 584)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNTL
YLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLT
CSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSSPFTFGSGTK
VEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC* *(SEQ
ID NO:585)
CAR-T C2 CD8 CD8 sequence:
N-CD81s-huMNC2scFv-CD8ecdfragment- CD8 transmembrane-C
(DNA)
gaagtgcagctcgtagagagtggcgggggactggtgaagcccggtggaagcctcagactcagttgcgccgcctcaggttt
cactttttcaggttacgccatgtcctgggtaagacaggcaccggggaaaggactcgagtgggtgtctactatcagctcag
gaggcacttatatatattatcctgactctgtaaaaggccgatttacgatttctcgcgacaatgcaaagaactccctctac
ctccaaatgaacagtcttagggcagaagacactgctgtatactattgtgcacgcctcggcggcgacaactactacgagta
ctttgacgtgtgggggaaagggactaccgtgacagtttcaagcggaggaggtggctcaggtggaggcgggtcaggggggg
gaggaagtgatattgtgctcacacaatccccagcctccctggctgtgtctcccggccaacgcgctacaattacatgtcgg
gcctccaaaagcgtgagcaccagcggctacagctacatgcactggtatcaacagaaaccaggacaaccccccaaactgtt
gatttatctcgcttcaaacttggagtccggcgtgcctgcgcgcttttcagggagtgggagcggcacagattttacgctga
ctatcaaccccgtagaagcaaacgatacagcgaattattattgtcaacattcccgggaactcccctttacgttcggcggg
ggcacaaaggtcgaaattaagagaaccacgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagcca
acccctgtctctgagaccagaagcctgtaggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtg
atatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgctgataa
(SEQ ID
NO: 586)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATITC
RASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPFTFG
GGTKVEIKRTTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC*
* (SEQ ID NO:587)
CD8/4-1BB sequence
N- CD8 transmembrane- 4-lBB-C
(DNA)
acgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctg
taggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccccgctcgcag
gcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacattttt
aagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaagaggaagacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaagg
agggtgcgaactgtgataa (SEQ ID NO: 588)
(amino acids)
TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIF
KQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL* * (SEQ ID NO: 589)
CD8/CD28 sequence
N- CD8 transmembrane- CD28-C
(DNA)
acgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctg
taggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccccgctcgcag
gcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcagaagcaagcggtctcggctcctgcattctgat
tacatgaacatgaccccaagaagaccaggccccaccaggaaacattaccagccctacgctccgccacgcgacttcgctgc
ctaccggtcctgataa (SEQ ID NO: 590)
(amino acids)
TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCRSKRSRLLHSD
YMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS * * (SEQ ID NO: 591)
CD8/CD3z sequence:
N- CD8 transmembrane- CD3zeta-C
(DNA)
acgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctg
taggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccccgctcgcag
gcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgccgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcct
gcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacg
gagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaag
ataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcag
ggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO
:592)
(amino acids)
TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCRVKFSRSADAP
AYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQ
GLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 593)
CD8/CD28/CD3z sequence:
N- CD8 transmembrane- CD28-CD3zeta-C
(DNA)
acgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctg
taggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccccgctcgcag
gcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcagaagcaagcggtctcggctcctgcattctgat
tacatgaacatgaccccaagaagaccaggccccaccaggaaacattaccagccctacgctccgccacgcgacttcgctgc
ctaccggtcccgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagc
tgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgc
aggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaa
gggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccc
tccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 594)
(amino acids)
TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCRSKRSRLLHSD
YMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPR
RKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO:595
)
CD8/4-lBB/CD3z sequence:
N- CD8 transmembrane- 4-1BB-CD3zeta-C
(DNA)
acgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctg
taggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccccgctcgcag
gcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacattttt
aagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaagaggaagacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaagg
agggtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacg
agctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcct
cgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaat
gaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacg
ccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 596)
(amino acids)
TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIF
KQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKP
RRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO:59
7)
CD8/CD28/4-lBB/CD3z sequence:
N- CD8 transmembrane- CD28-4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
acgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctg
taggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccccgctcgcag
gcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcagaagcaagcggtctcggctcctgcattctgat
tacatgaacatgaccccaagaagaccaggccccaccaggaaacattaccagccctacgctccgccacgcgacttcgctgc
ctaccggtccaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaag
aggaagacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagcc
gacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgtt
ggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagt
tgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggc
ctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (
SEQ ID
NO: 598)
(amino acids)
TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCRSKRSRLLHSD
YMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSA
DAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDG
LYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 599)
CAR-T C3 CD8/CD8/4-lBB/CD3zsequence:
N-CD81s-huMNC3scFv-CD8ecdfragment- CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccacaggttcagctggtgca
gtctggagctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggttacacctttaccgactacg
ccatgaactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggagtgatcagcaccttcagcggtaacacaaac
ttcaaccagaagttcaagggcagagtcaccatgaccacagacacatccacgagcacagcctacatggagctgaggagcct
gagatctgacgacacggccgtgtattactgtgcgagaagcgactactacggcccatacttcgactactggggccagggca
ccaccctgaccgtgtccagcggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgatattgtgatgacc
cagactccactctctctgtccgtcacccctggacagccggcctccatctcctgcaggtctagtcagaccattgtccatag
taatggaaacacctatttggagtggtacctgcagaagccaggccagtctccacagctcctgatctataaggtttccaacc
ggttctctggagtgccagataggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcacactgaaaatcagccgggtggaggct
gaggatgttggggtttattactgettccaaggtagccacgtgcctttcaccttcggcggagggaccaaggtggagatcaa
acgaactacgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccag
aagcctgtaggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccccg
ctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcaaaaggggccgcaaaaaactccttta
catttttaagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaagaggaagacgggtgctcatgccgctttcctgaggagg
aggaaggagggtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactg
tacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcgg
caagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgaga
tcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacg
tatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 600)
(amino acids)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYAMNWVRQAPGQGLEWMGVISTFSGNTNFNQKFKGRVTMTTDTSTSTAY
MELRSLRSDDTAVYYCARSDYYGPYFDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPLSLSVTPGQPAS ISCRS
S QTIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPFTFG
GGTKVEIKRTTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCK
RGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRR
GRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SE
QID NO: 601)
C3 CAR gBLOCK 1 sequence:
(DNA)
atccacgctgttttgacctccatagaagattctagagctagctgtagagcttggtaccgagggccaccatggccctgccc
gtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccacaggttcagctggtgcagtctggagctga
ggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggttacacctttaccgactacgccatgaactggg
tgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggagtgatcagcaccttcagcggtaacacaaacttcaaccagaag
ttcaagggcagagtcaccatgaccacagacacatccacgagcacagcctacatggagctgaggagcctgagatctgacga
cacggccgtgtattactgtgcgagaagcgactactacggcccatacttcgactactggggccagggcaccaccctgaccg
tgtccagcggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgatattgtgatgacccagactccactc
tctctgt(SEQ ID NO: 602)
C3 CAR gBLOCK 2 sequence:
(DNA)
tattgtgatgacccagactccactctctctgtccgtcacccctggacagccggcctccatctcctgcaggtctagtcaga
ccattgtccatagtaatggaaacacctatttggagtggtacctgcagaagccaggccagtctccacagctcctgatctat
aaggtttccaaccggttctctggagtgccagataggttcagtggcagcgggtcagggacagatttcacactgaaaatcag
ccgggtggaggctgaggatgttggggtttattactgettccaaggtagccacgtgcctttcaccttcggcggagggacca
aggtggagatcaaacgaactacgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctg
tctctgagaccagaagcctgtaggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatcta
catttgggccccgctcgcaggcacatgtg (SEQ ID NO: 603)
E6 scFV gBLOCK 1 sequence:
(DNA)
tgctctgggttccaggttccactggtgacgcggcccagccggccgaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtc
aagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtaggtatggcatgagctgggtccgcca
ggctccagggaagaggctggagtgggtctcaaccattagtggcggaggcacctacatatactacccagactcagtgaagg
gccgattcaccatctccagagacaacgccaagaacaccctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggct
gtgtattactgtaccagagataactatggccgcaactatgattatggcatggattattggggccagggcaccctggtgac
cgtgagcagcggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatcc (SEQ ID NO: 604)
E6 scFV gBLOCK 2 sequence:
(DNA)
ggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtc
tttgtctccaggggaaagagccaccctcacctgcagcgccaccagcagtgttagctacatccactggtaccaacagaggc
ctggccagagccccaggctcctcatctatagcacctccaacctggccagcggcatcccagccaggttcagtggcagtggg
tctgggagcgactacactctcaccatcagcagcctagagcctgaagattttgcagtttattactgtcagcagcgtagcag
ctcccctttcacctttggcagcggcaccaaagtggaaattaaaaccggtcatcatcaccatcaccactgataagtttaaa
cccgctgatcagcctcgactgtgccttctagt (SEQ ID NO: 605)
CAR-T C2 CD8/CD8/CD3z sequence:
N-CD81s-huMNC2scFv-CD8ecdfragment- CD8 transmembrane- CD3zeta-C
(DNA)
atggccttgccagtgacggccctgctgctgccattggctcttctgttgcacgctgccaggcctgaagtgcagctcgtaga
gagtggcgggggactggtgaagcccggtggaagcctcagactcagttgcgccgcctcaggtttcactttttcaggttacg
ccatgtcctgggtaagacaggcaccggggaaaggactcgagtgggtgtctactatcagctcaggaggcacttatatatat
tatcctgactctgtaaaaggccgatttacgatttctcgcgacaatgcaaagaactccctctacctccaaatgaacagtct
tagggcagaagacactgctgtatactattgtgcacgcctcggcggcgacaactactacgagtactttgacgtgtggggga
aagggactaccgtgacagtttcaagcggaggaggtggctcaggtggaggcgggtcaggggggggaggaagtgatattgtg
ctcacacaatccccagcctccctggctgtgtctcccggccaacgcgctacaattacatgtcgggcctccaaaagcgtgag
caccagcggctacagctacatgcactggtatcaacagaaaccaggacaaccccccaaactgttgatttatctcgcttcaa
acttggagtccggcgtgcctgcgcgcttttcagggagtgggagcggcacagattttacgctgactatcaaccccgtagaa
gcaaacgatacagcgaattattattgtcaacattcccgggaactcccctttacgttcggcgggggcacaaaggtcgaaat
taagagaaccacgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagac
cagaagcctgtaggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggcc
ccgctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgccgcgttaagttctcccgatcagc
cgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgt
tggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgag
ttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacgg
cctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa
(SEQ ID NO:606)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIY
YPDSVKGRFTI SRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSD
IVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINP
VEANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRTTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYI
WAPLAGTCGVLLLSLVITLYCRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLY
NELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 607)
CAR-T C2 CD8/CD8/CD28/CD3zsequence:
N-CD81s-huMNC2scFv-CD8ecdfragment- CD8 transmembrane- CD28- CD3zeta-C
(DNA)
atggccttgccagtgacggccctgctgctgccattggctcttctgttgcacgctgccaggcctgaagtgcagctcgtaga
gagtggcgggggactggtgaagcccggtggaagcctcagactcagttgcgccgcctcaggtttcactttttcaggttacg
ccatgtcctgggtaagacaggcaccggggaaaggactcgagtgggtgtctactatcagctcaggaggcacttatatatat
tatcctgactctgtaaaaggccgatttacgatttctcgcgacaatgcaaagaactccctctacctccaaatgaacagtct
tagggcagaagacactgctgtatactattgtgcacgcctcggcggcgacaactactacgagtactttgacgtgtggggga
aagggactaccgtgacagtttcaagcggaggaggtggctcaggtggaggcgggtcaggggggggaggaagtgatattgtg
ctcacacaatccccagcctccctggctgtgtctcccggccaacgcgctacaattacatgtcgggcctccaaaagcgtgag
caccagcggctacagctacatgcactggtatcaacagaaaccaggacaaccccccaaactgttgatttatctcgcttcaa
acttggagtccggcgtgcctgcgcgcttttcagggagtgggagcggcacagattttacgctgactatcaaccccgtagaa
gcaaacgatacagcgaattattattgtcaacattcccgggaactcccctttacgttcggcgggggcacaaaggtcgaaat
taagagaaccacgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagac
cagaagcctgtaggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggcc
ccgctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcagaagcaagcggtctcggctcct
gcattctgattacatgaacatgaccccaagaagaccaggccccaccaggaaacattaccagccctacgctccgccacgcg
acttcgctgcctaccggtcccgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactg
tacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcgg
caagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgaga
tcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacg
tatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 608)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI
VLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPV
EANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRTTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIW
APLAGTCGVLLLSLVITLYCRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYKQGQNQ
LYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKD
TYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 609)
CAR-T C2 CD8/CD8/4-lBB/CD3z sequence#13:
N-CD81s-huMNC2scFv-CD8ecdfragment- CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C (DNA)
atggccttgccagtgacggccctgctgctgccattggctcttctgttgcacgctgccaggcctgaagtgcagctcgtaga
gagtggcgggggactggtgaagcccggtggaagcctcagactcagttgcgccgcctcaggtttcactttttcaggttacg
ccatgtcctgggtaagacaggcaccggggaaaggactcgagtgggtgtctactatcagctcaggaggcacttatatatat
tatcctgactctgtaaaaggccgatttacgatttctcgcgacaatgcaaagaactccctctacctccaaatgaacagtct
tagggcagaagacactgctgtatactattgtgcacgcctcggcggcgacaactactacgagtactttgacgtgtggggga
aagggactaccgtgacagtttcaagcggaggaggtggctcaggtggaggcgggtcaggggggggaggaagtgatattgtg
ctcacacaatccccagcctccctggctgtgtctcccggccaacgcgctacaattacatgtcgggcctccaaaagcgtgag
caccagcggctacagctacatgcactggtatcaacagaaaccaggacaaccccccaaactgttgatttatctcgcttcaa
acttggagtccggcgtgcctgcgcgcttttcagggagtgggagcggcacagattttacgctgactatcaaccccgtagaa
gcaaacgatacagcgaattattattgtcaacattcccgggaactcccctttacgttcggcgggggcacaaaggtcgaaat
taagagaaccacgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagac
cagaagcctgtaggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggcc
ccgctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcaaaaggggccgcaaaaaactcct
ttacatttttaagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaagaggaagacgggtgctcatgccgctttcctgagg
aggaggaaggagggtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaa
ctgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatggg
cggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcg
agatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagat
acgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 610)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI
V LTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINP
VEANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRTTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYI
WAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQ
NQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTAT
KDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 611)
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N-CD81s-huMNC2scFv-CD8ecdfragment- CD8 transmembrane- OX40- CD3zeta-C
(DNA)
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gagtggcgggggactggtgaagcccggtggaagcctcagactcagttgcgccgcctcaggtttcactttttcaggttacg
ccatgtcctgggtaagacaggcaccggggaaaggactcgagtgggtgtctactatcagctcaggaggcacttatatatat
tatcctgactctgtaaaaggccgatttacgatttctcgcgacaatgcaaagaactccctctacctccaaatgaacagtct
tagggcagaagacactgctgtatactattgtgcacgcctcggcggcgacaactactacgagtactttgacgtgtggggga
aagggactaccgtgacagtttcaagcggaggaggtggctcaggtggaggcgggtcaggggggggaggaagtgatattgtg
ctcacacaatccccagcctccctggctgtgtctcccggccaacgcgctacaattacatgtcgggcctccaaaagcgtgag
caccagcggctacagctacatgcactggtatcaacagaaaccaggacaaccccccaaactgttgatttatctcgcttcaa
acttggagtccggcgtgcctgcgcgcttttcagggagtgggagcggcacagattttacgctgactatcaaccccgtagaa
gcaaacgatacagcgaattattattgtcaacattcccgggaactcccctttacgttcggcgggggcacaaaggtcgaaat
taagagaaccacgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagac
cagaagcctgtaggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggcc
ccgctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgccggagggaccagaggctgccccc
cgatgcccacaagccccctgggggaggcagtttccggacccccatccaagaggagcaggccgacgcccactccaccctgg
ccaagatccgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctg
aatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcag
gaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagg
gggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctc
catatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 612)
(amino acids)
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LHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 613)
CAR-T C2 CD8/CD8/CD28/OX40/CD3zsequence:
N-CD81s-huMNC2scFv-CD8ecdfragment- CD8 transmembrane- CD28- OX40- CD3zeta-C (DNA
)
atggccttgccagtgacggccctgctgctgccattggctcttctgttgcacgctgccaggcctgaagtgcagctcgtaga
gagtggcgggggactggtgaagcccggtggaagcctcagactcagttgcgccgcctcaggtttcactttttcaggttacg
ccatgtcctgggtaagacaggcaccggggaaaggactcgagtgggtgtctactatcagctcaggaggcacttatatatat
tatcctgactctgtaaaaggccgatttacgatttctcgcgacaatgcaaagaactccctctacctccaaatgaacagtct
tagggcagaagacactgctgtatactattgtgcacgcctcggcggcgacaactactacgagtactttgacgtgtggggga
aagggactaccgtgacagtttcaagcggaggaggtggctcaggtggaggcgggtcaggggggggaggaagtgatattgtg
ctcacacaatccccagcctccctggctgtgtctcccggccaacgcgctacaattacatgtcgggcctccaaaagcgtgag
caccagcggctacagctacatgcactggtatcaacagaaaccaggacaaccccccaaactgttgatttatctcgcttcaa
acttggagtccggcgtgcctgcgcgcttttcagggagtgggagcggcacagattttacgctgactatcaaccccgtagaa
gcaaacgatacagcgaattattattgtcaacattcccgggaactcccctttacgttcggcgggggcacaaaggtcgaaat
taagagaaccacgacaaccccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagac
cagaagcctgtaggcctgccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggcc
ccgctcgcaggcacatgtggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcagaagcaagcggtctcggctcct
gcattctgattacatgaacatgaccccaagaagaccaggccccaccaggaaacattaccagccctacgctccgccacgcg
acttcgctgcctaccggtcccggagggaccagaggctgccccccgatgcccacaagccccctgggggaggcagtttccgg
acccccatccaagaggagcaggccgacgcccactccaccctggccaagatccgcgttaagttctcccgatcagccgacgc
gcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggaca
aacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcag
aaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggccttta
tcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ I
D NO: 614)
(amino acids)
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YPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI
VLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPV
EANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRTTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIW
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RTPIQEEQADAHSTLAKIRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNEL
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(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggggggggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaaacgacaac
cccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctgtaggcctg
ccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgt
ggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgccggagggaccagaggctgccccccgatgcccacaagccccc
tgggggaggcagtttccggacccccatccaagaggagcaggccgacgcccactccaccctggccaagatccgcgttaagt
tctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaa
gagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggaggg
actgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgaggga
aaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttcca
ccacggtgataa (SEQ
ID NO: 616)
(amino acids)
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IVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPED
FAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGT
CGVLLLSLVITLYCRRDQRLPPDAHKPPGGGSFRTPIQEEQADAHSTLAKIRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRR
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taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggggggggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
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gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaaacgacaac
cccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctgtaggcctg
ccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatctacatttgggccccgctcgcaggcacatgt
ggagtgctcctcctctccctggtgattaccctgtactgcagaagcaagcggtctcggctcctgcattctgattacatgaa
catgaccccaagaagaccaggccccaccaggaaacattaccagccctacgctccgccacgcgacttcgctgcctaccggt
cccggagggaccagaggctgccccccgatgcccacaagccccctgggggaggcagtttccggacccccatccaagaggag
caggccgacgcccactccaccctggccaagatccgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcaggg
ccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacc
cagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaa
gcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagc
aacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 618)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
IVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPED
FAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGT
CGVLLLSLVITLYCRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRRDQRLPPDAHKPPGGGSFRTPIQE
EQADAHSTLAKIRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMA
EAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 619)
MUC1 truncated cytoplasmicsequence
(amino acids)
SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQ ID NO: 620)
MUC1 truncated cytoplasmicsequence
(amino acids)
SVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY(SEQ ID NO: 621)
MUC1 truncated cytoplasmicsequence
(amino acids)
VQLTLAFREGTINVHDVETQFNQY (SEQ IDNO: 622)
MUC1 truncated cytoplasmicsequence
(amino acids)
SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTIN (SEQ IDNO: 623)
Primers
attctaagcttgggccaccatggaactg(SEQ ID NO: 624)
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tagaaggcacagtcgaggctgatcag (SEQID NO: 631)
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actgtcatatggaggtgcagctggtggagtctg(SEQ ID NO: 634)
actgtaccggttttaatttccactttggtgccgctgc(SEQ ID NO: 635)
cttcttcctcaggagcaagctcaccgtgg(SEQ ID NO: 636)
gagccgtcggagtccagc (SEQ ID NO:637)
gcacctgaactcctgggg (SEQ ID NO:638)
tttaatttccactttggtgccg (SEQ IDNO: 639)
cgcggctagcttaagcttggtaccgagggcca(SEQ ID NO: 640)
cgcggcggccgcctgatcagcgggtttaaacttatc(SEQ ID NO: 641)
MMP9
(DNA)
atgagcctctggcagcccctggtcctggtgctcctggtgctgggctgctgctttgctgcccccagacagcgccagtccac
ccttgtgctcttccctggagacctgagaaccaatctcaccgacaggcagctggcagaggaatacctgtaccgctatggtt
acactcgggtggcagagatgcgtggagagtcgaaatctctggggcctgcgctgctgcttctccagaagcaactgtccctg
cccgagaccggtgagctggatagcgccacgctgaaggccatgcgaaccccacggtgcggggtcccagacctgggcagatt
ccaaacctttgagggcgacctcaagtggcaccaccacaacatcacctattggatccaaaactactcggaagacttgccgc
gggcggtgattgacgacgcctttgcccgcgccttcgcactgtggagcgcggtgacgccgctcaccttcactcgcgtgtac
agccgggacgcagacatcgtcatccagtttggtgtcgcggagcacggagacgggtatcccttcgacgggaaggacgggct
cctggcacacgcctttcctcctggccccggcattcagggagacgcccatttcgacgatgacgagttgtggtccctgggca
agggcgtcgtggttccaactcggtttggaaacgcagatggcgcggcctgccacttccccttcatcttcgagggccgctcc
tactctgcctgcaccaccgacggtcgctccgacggcttgccctggtgcagtaccacggccaactacgacaccgacgaccg
gtttggcttctgccccagcgagagactctacacccaggacggcaatgctgatgggaaaccctgccagtttccattcatct
tccaaggccaatcctactccgcctgcaccacggacggtcgctccgacggctaccgctggtgcgccaccaccgccaactac
gaccgggacaagctcttcggcttctgcccgacccgagctgactcgacggtgatggggggcaactcggcgggggagctgtg
cgtcttccccttcactttcctgggtaaggagtactcgacctgtaccagcgagggccgcggagatgggcgcctctggtgcg
ctaccacctcgaactttgacagcgacaagaagtggggcttctgcccggaccaaggatacagtttgttcctcgtggcggcg
catgagttcggccacgcgctgggcttagatcattcctcagtgccggaggcgctcatgtaccctatgtaccgcttcactga
ggggccccccttgcataaggacgacgtgaatggcatccggcacctctatggtcctcgccctgaacctgagccacggcctc
caaccaccaccacaccgcagcccacggctcccccgacggtctgccccaccggaccccccactgtccacccctcagagcgc
cccacagctggccccacaggtcccccctcagctggccccacaggtccccccactgctggcccttctacggccactactgt
gcctttgagtccggtggacgatgcctgcaacgtgaacatcttcgacgccatcgcggagattgggaaccagctgtatttgt
tcaaggatgggaagtactggcgattctctgagggcagggggagccggccgcagggccccttccttatcgccgacaagtgg
cccgcgctgccccgcaagctggactcggtctttgaggagcggctctccaagaagcttttcttcttctctgggcgccaggt
gtgggtgtacacaggcgcgtcggtgctgggcccgaggcgtctggacaagctgggcctgggagccgacgtggcccaggtga
ccggggccctccggagtggcagggggaagatgctgctgttcagcgggcggcgcctctggaggttcgacgtgaaggcgcag
atggtggatccccggagcgccagcgaggtggaccggatgttccccggggtgcctttggacacgcacgacgtcttccagta
ccgagagaaagcctatttctgccaggaccgcttctactggcgcgtgagttcccggagtgagttgaaccaggtggaccaag
tgggctacgtgacctatgacatcctgcagtgccctgaggacgattacaaggatgacgacgataagtgataa (SEQ ID
NO: 642)
(amino acids)
MSLWQPLVLVLLVLGCCFAAPRQRQSTLVLFPGDLRTNLTDRQLAEEYLYRYGYTRVAEMRGESKSLGPALLLLQKQLSL
PETGELDSATLKAMRTPRCGVPDLGRFQTFEGDLKWHHHNITYWIQNYSEDLPRAVIDDAFARAFALWSAVTPLTFTRVY
SRDADIVIQFGVAEHGDGYPFDGKDGLLAHAFPPGPGIQGDAHFDDDELWSLGKGVVVPTRFGNADGAACHFPFIFEGRS
YSACTTDGRSDGLPWCSTTANYDTDDRFGFCPSERLYTQDGNADGKPCQFPFIFQGQSYSACTTDGRSDGYRWCATTANY
DRDKLFGFCPTRADSTVMGGNSAGELCVFPFTFLGKEYSTCTSEGRGDGRLWCATTSNFDSDKKWGFCPDQGYSLFLVAA
HEFGHALGLDHSSVPEALMYPMYRFTEGPPLHKDDVNGIRHLYGPRPEPEPRPPTTTTPQPTAPPTVCPTGPPTVHPSER
PTAGPTGPPSAGPTGPPTAGPSTATTVPLSPVDDACNVNIFDAIAEIGNQLYLFKDGKYWRFSEGRGSRPQGPFLIADKW
PALPRKLDSVFEERLSKKLFFFSGRQVWVYTGASVLGPRRLDKLGLGADVAQVTGALRSGRGKMLLFSGRRLWRFDVKAQ
MVDPRSASEVDRMFPGVPLDTHDVFQYREKAYFCQDRFYWRVSSRSELNQVDQVGYVTYDILQCPEDDYKDDDDK* *(S
EQ ID NO: 643)
MMP9 catalytic domain
(DNA)
atgttccaaacctttgagggcgacctcaagtggcaccaccacaacatcacctattggatccaaaactactcggaagactt
gccgcgggcggtgattgacgacgcctttgcccgcgccttcgcactgtggagcgcggtgacgccgctcaccttcactcgcg
tgtacagccgggacgcagacatcgtcatccagtttggtgtcgcggagcacggagacgggtatcccttcgacgggaaggac
gggctcctggcacacgcctttcctcctggccccggcattcagggagacgcccatttcgacgatgacgagttgtggtccct
gggcaagggcgtcgtggttccaactcggtttggaaacgcagatggcgcggcctgccacttccccttcatcttcgagggcc
gctcctactctgcctgcaccaccgacggtcgctccgacggcttgccctggtgcagtaccacggccaactacgacaccgac
gaccggtttggcttctgccccagcgagagactctacacccaggacggcaatgctgatgggaaaccctgccagtttccatt
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actacgaccgggacaagctcttcggcttctgcccgacccgagctgactcgacggtgatggggggcaactcggcgggggag
ctgtgcgtcttccccttcactttcctgggtaaggagtactcgacctgtaccagcgagggccgcggagatgggcgcctctg
gtgcgctaccacctcgaactttgacagcgacaagaagtggggcttctgcccggaccaaggatacagtttgttcctcgtgg
cggcgcatgagttcggccacgcgctgggcttagatcattcctcagtgccggaggcgctcatgtaccctatgtaccgcttc
actgaggggccccccttgcataaggacgacgtgaatggcatccggcacctctatggtcctcgccctgaacctgattacaa
ggatgacgacgataagtgataa (SEQ ID NO: 644)
(amino acids)
MFQTFEGDLKWHHHNITYWIQNYSEDLPRAVIDDAFARAFALWSAVTPLTFTRVYSRDADIVIQFGVAEHGDGYPFDGKD
GLLAHAFPPGPGIQGDAHFDDDELWSLGKGVVVPTRFGNADGAACHFPFIFEGRSYSACTTDGRSDGLPWCSTTANYDTD
DRFGFCPSERLYTQDGNADGKPCQFPFIFQGQSYSACTTDGRSDGYRWCATTANYDRDKLFGFCPTRADSTVMGGNSAGE
LCVFPFTFLGKEYSTCTSEGRGDGRLWCATTSNFDSDKKWGFCPDQGYSLFLVAAHEFGHALGLDHSSVPEALMYPMYRF
TEGPPLHKDDVNGIRHLYGPRPEPDYKDDDDK* * (SEQ ID NO: 645)
NFATcl Promoter (NFATclP)
(DNA)
aggcaggaggaagaggaaaggggcgcagggcgctcggggagcagagccgggggcccgcggtggccgcagaggccgggccg
gggcgcagaggccgggcgagctggccgcgctctgggccgccgcctccggaactccctgcgcctggcgcgcggccaccgtg
gtcccggcaacggcattaaacagagggaaacagacccgggattccgtcacccgggcggggggataaggacggctttgaga
gcagacaggaaaagggagcttttctgcatggggtgaaaaaattatttattgaaggaggaggaggcggcagcggaggaagg
ggaggggcgggaggaggaggaagagccggccgcccccgccccggccccggctcctcaggagccaagggcagcctcgccag
gtcggtcccgggctcgaggaccgcggctggggtcgaggggctcagtctcccacgtgaccggctgggcgcgccccgccaga
cccggcctcgggattccctcctcccggcgagtctccgcccgccccgtcctggaggtggggagaaggagggcggggcgggg
gggacggaaactctccccgccaaatcctggccccaggcctggggacactcgcggcgggaagatttggaggggaggggagg
gggaggggcgtgggggcgcggcctcgctggagtccccctgaccccccgacccccgcccaccggcctgggcgtcctcccgc
ggcccctcctcccctcccggcgcccggtgctctggggcgcgtgccacgcctggctcggcgccgtaggggcccccgcaggt
agagacccctggaaatggcctcgacgccgcaggagcgaggcggccaccaccccgctaatccgggcacgtctctccaggcc
gaggcctgcggtggaaaagccggggttccatttgtgctgagtcggggcggccgaatggagccaggcctcgggacgcggga
cggacgggctctggccgcgcaccttcgcgggctctgcagcgcccgaccgcctcccccggcagggaggaggcgcttgtggg
gggcacccacggggcacagtgatccctgggggtctgcggacctcctgggccccgcagcagacacgagtttagcctttggg
tttagtttaaatcacataagggtgtcgtgcaatcgatttatggtttctacacaccagacactttaacctccaaccccccc
catccaagccaacaagaaaatgcggtgccgtgttggcagctgagctgcgcccgaagagacgcagggagacgtaagagagg
aaagtgtgagtggccggggggcctccccccgtcagaagtcgcgcagtcgcgcccataaaacgccccctccgggcggctag
ggcaggtgagcgcgtccccgggcctccccacgccggcccctgccacagagccgtctaggtcgagcagatatttacagaat
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gcctgccagtgaagcgcttttccaaatttccacagcgggggaagcctgcgattttacataatgacttcagcatgccgggc
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gggggcgcgggagccgccgggccggcggggaggcgggggaggtgttttccagctttaaaaaggcaggaggcagagcgcgg
ccctgcgtcagagcgagactcagagg (SEQ ID NO: 646)
NFATclP—MMP9
(DNA)
aggcaggaggaagaggaaaggggcgcagggcgctcggggagcagagccgggggcccgcggtggccgcagaggccgggccg
gggcgcagaggccgggcgagctggccgcgctctgggccgccgcctccggaactccctgcgcctggcgcgcggccaccgtg
gtcccggcaacggcattaaacagagggaaacagacccgggattccgtcacccgggcggggggataaggacggctttgaga
gcagacaggaaaagggagcttttctgcatggggtgaaaaaattatttattgaaggaggaggaggcggcagcggaggaagg
ggaggggcgggaggaggaggaagagccggccgcccccgccccggccccggctcctcaggagccaagggcagcctcgccag
gtcggtcccgggctcgaggaccgcggctggggtcgaggggctcagtctcccacgtgaccggctgggcgcgccccgccaga
cccggcctcgggattccctcctcccggcgagtctccgcccgccccgtcctggaggtggggagaaggagggcggggcgggg
gggacggaaactctccccgccaaatcctggccccaggcctggggacactcgcggcgggaagatttggaggggaggggagg
gggaggggcgtgggggcgcggcctcgctggagtccccctgaccccccgacccccgcccaccggcctgggcgtcctcccgc
ggcccctcctcccctcccggcgcccggtgctctggggcgcgtgccacgcctggctcggcgccgtaggggcccccgcaggt
agagacccctggaaatggcctcgacgccgcaggagcgaggcggccaccaccccgctaatccgggcacgtctctccaggcc
gaggcctgcggtggaaaagccggggttccatttgtgctgagtcggggcggccgaatggagccaggcctcgggacgcggga
cggacgggctctggccgcgcaccttcgcgggctctgcagcgcccgaccgcctcccccggcagggaggaggcgcttgtggg
gggcacccacggggcacagtgatccctgggggtctgcggacctcctgggccccgcagcagacacgagtttagcctttggg
tttagtttaaatcacataagggtgtcgtgcaatcgatttatggtttctacacaccagacactttaacctccaaccccccc
catccaagccaacaagaaaatgcggtgccgtgttggcagctgagctgcgcccgaagagacgcagggagacgtaagagagg
aaagtgtgagtggccggggggcctccccccgtcagaagtcgcgcagtcgcgcccataaaacgccccctccgggcggctag
ggcaggtgagcgcgtccccgggcctccccacgccggcccctgccacagagccgtctaggtcgagcagatatttacagaat
aaaaatgacaataactcgacgtcccgggacggccacgcaatctgttagtaatttagcgggatgggaatttcctttctagg
gcctgccagtgaagcgcttttccaaatttccacagcgggggaagcctgcgattttacataatgacttcagcatgccgggc
tttctcgacacccctccccggcccccggcccccgccccccgccccttttccagcagggccgggctccctccggacacccg
cgtggactcaggcgtcccgtctggcccgttcgcccccgtttcccccgccagccccagcgcccccctgcccggcccccgga
ttccccgttcccgcccctacgcccccatcccctccccgtgcgcccctccccgtgcgcccccctccccgtgcgccccccct
ccccgtgcgcccccctccccgtgcgccccccctccccgggcgcccccctccccgggcgccccccctccccgtgcgccccc
ccctccccgtgcgccccccctccccgtgcgcgccccgcctcttgcgcccctgcccccaggcgagcggctgccgcggcgcg
gggaggggcgggcgctcggcgactcgtccccggggccccgcgcgggcccgggcagcaggggcgtgatgtcacggcaggga
gggggcgcgggagccgccgggccggcggggaggcgggggaggtgttttccagctttaaaaaggcaggaggcagagcgcgg
ccctgcgtcagagcgagactcagaggtctagagccaccatgagcctctggcagcccctggtcctggtgctcctggtgctg
ggctgctgctttgctgcccccagacagcgccagtccacccttgtgctcttccctggagacctgagaaccaatctcaccga
caggcagctggcagaggaatacctgtaccgctatggttacactcgggtggcagagatgcgtggagagtcgaaatctctgg
ggcctgcgctgctgcttctccagaagcaactgtccctgcccgagaccggtgagctggatagcgccacgctgaaggccatg
cgaaccccacggtgcggggtcccagacctgggcagattccaaacctttgagggcgacctcaagtggcaccaccacaacat
cacctattggatccaaaactactcggaagacttgccgcgggcggtgattgacgacgcctttgcccgcgccttcgcactgt
ggagcgcggtgacgccgctcaccttcactcgcgtgtacagccgggacgcagacatcgtcatccagtttggtgtcgcggag
cacggagacgggtatcccttcgacgggaaggacgggctcctggcacacgcctttcctcctggccccggcattcagggaga
cgcccatttcgacgatgacgagttgtggtccctgggcaagggcgtcgtggttccaactcggtttggaaacgcagatggcg
cggcctgccacttccccttcatcttcgagggccgctcctactctgcctgcaccaccgacggtcgctccgacggcttgccc
tggtgcagtaccacggccaactacgacaccgacgaccggtttggcttctgccccagcgagagactctacacccaggacgg
caatgctgatgggaaaccctgccagtttccattcatcttccaaggccaatcctactccgcctgcaccacggacggtcgct
ccgacggctaccgctggtgcgccaccaccgccaactacgaccgggacaagctcttcggcttctgcccgacccgagctgac
tcgacggtgatggggggcaactcggcgggggagctgtgcgtcttccccttcactttcctgggtaaggagtactcgacctg
taccagcgagggccgcggagatgggcgcctctggtgcgctaccacctcgaactttgacagcgacaagaagtggggcttct
gcccggaccaaggatacagtttgttcctcgtggcggcgcatgagttcggccacgcgctgggcttagatcattcctcagtg
ccggaggcgctcatgtaccctatgtaccgcttcactgaggggccccccttgcataaggacgacgtgaatggcatccggca
cctctatggtcctcgccctgaacctgagccacggcctccaaccaccaccacaccgcagcccacggctcccccgacggtct
gccccaccggaccccccactgtccacccctcagagcgccccacagctggccccacaggtcccccctcagctggccccaca
ggtccccccactgctggcccttctacggccactactgtgcctttgagtccggtggacgatgcctgcaacgtgaacatctt
cgacgccatcgcggagattgggaaccagctgtatttgttcaaggatgggaagtactggcgattctctgagggcaggggga
gccggccgcagggccccttccttatcgccgacaagtggcccgcgctgccccgcaagctggactcggtctttgaggagcgg
ctctccaagaagcttttcttcttctctgggcgccaggtgtgggtgtacacaggcgcgtcggtgctgggcccgaggcgtct
ggacaagctgggcctgggagccgacgtggcccaggtgaccggggccctccggagtggcagggggaagatgctgctgttca
gcgggcggcgcctctggaggttcgacgtgaaggcgcagatggtggatccccggagcgccagcgaggtggaccggatgttc
cccggggtgcctttggacacgcacgacgtcttccagtaccgagagaaagcctatttctgccaggaccgcttctactggcg
cgtgagttcccggagtgagttgaaccaggtggaccaagtgggctacgtgacctatgacatcctgcagtgccctgaggacg
attacaaggatgacgacgataagtgataa (SEQ ID NO: 647)
NFATclP-MMP9cat
(DNA)
aggcaggaggaagaggaaaggggcgcagggcgctcggggagcagagccgggggcccgcggtggccgcagaggccgggccg
gggcgcagaggccgggcgagctggccgcgctctgggccgccgcctccggaactccctgcgcctggcgcgcggccaccgtg
gtcccggcaacggcattaaacagagggaaacagacccgggattccgtcacccgggcggggggataaggacggctttgaga
gcagacaggaaaagggagcttttctgcatggggtgaaaaaattatttattgaaggaggaggaggcggcagcggaggaagg
ggaggggcgggaggaggaggaagagccggccgcccccgccccggccccggctcctcaggagccaagggcagcctcgccag
gtcggtcccgggctcgaggaccgcggctggggtcgaggggctcagtctcccacgtgaccggctgggcgcgccccgccaga
cccggcctcgggattccctcctcccggcgagtctccgcccgccccgtcctggaggtggggagaaggagggcggggcgggg
gggacggaaactctccccgccaaatcctggccccaggcctggggacactcgcggcgggaagatttggaggggaggggagg
gggaggggcgtgggggcgcggcctcgctggagtccccctgaccccccgacccccgcccaccggcctgggcgtcctcccgc
ggcccctcctcccctcccggcgcccggtgctctggggcgcgtgccacgcctggctcggcgccgtaggggcccccgcaggt
agagacccctggaaatggcctcgacgccgcaggagcgaggcggccaccaccccgctaatccgggcacgtctctccaggcc
gaggcctgcggtggaaaagccggggttccatttgtgctgagtcggggcggccgaatggagccaggcctcgggacgcggga
cggacgggctctggccgcgcaccttcgcgggctctgcagcgcccgaccgcctcccccggcagggaggaggcgcttgtggg
gggcacccacggggcacagtgatccctgggggtctgcggacctcctgggccccgcagcagacacgagtttagcctttggg
tttagtttaaatcacataagggtgtcgtgcaatcgatttatggtttctacacaccagacactttaacctccaaccccccc
catccaagccaacaagaaaatgcggtgccgtgttggcagctgagctgcgcccgaagagacgcagggagacgtaagagagg
aaagtgtgagtggccggggggcctccccccgtcagaagtcgcgcagtcgcgcccataaaacgccccctccgggcggctag
ggcaggtgagcgcgtccccgggcctccccacgccggcccctgccacagagccgtctaggtcgagcagatatttacagaat
aaaaatgacaataactcgacgtcccgggacggccacgcaatctgttagtaatttagcgggatgggaatttcctttctagg
gcctgccagtgaagcgcttttccaaatttccacagcgggggaagcctgcgattttacataatgacttcagcatgccgggc
tttctcgacacccctccccggcccccggcccccgccccccgccccttttccagcagggccgggctccctccggacacccg
cgtggactcaggcgtcccgtctggcccgttcgcccccgtttcccccgccagccccagcgcccccctgcccggcccccgga
ttccccgttcccgcccctacgcccccatcccctccccgtgcgcccctccccgtgcgcccccctccccgtgcgccccccct
ccccgtgcgcccccctccccgtgcgccccccctccccgggcgcccccctccccgggcgccccccctccccgtgcgccccc
ccctccccgtgcgccccccctccccgtgcgcgccccgcctcttgcgcccctgcccccaggcgagcggctgccgcggcgcg
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ccctgcgtcagagcgagactcagaggtctagagccaccatgttccaaacctttgagggcgacctcaagtggcaccaccac
aacatcacctattggatccaaaactactcggaagacttgccgcgggcggtgattgacgacgcctttgcccgcgccttcgc
actgtggagcgcggtgacgccgctcaccttcactcgcgtgtacagccgggacgcagacatcgtcatccagtttggtgtcg
cggagcacggagacgggtatcccttcgacgggaaggacgggctcctggcacacgcctttcctcctggccccggcattcag
ggagacgcccatttcgacgatgacgagttgtggtccctgggcaagggcgtcgtggttccaactcggtttggaaacgcaga
tggcgcggcctgccacttccccttcatcttcgagggccgctcctactctgcctgcaccaccgacggtcgctccgacggct
tgccctggtgcagtaccacggccaactacgacaccgacgaccggtttggcttctgccccagcgagagactctacacccag
gacggcaatgctgatgggaaaccctgccagtttccattcatcttccaaggccaatcctactccgcctgcaccacggacgg
tcgctccgacggctaccgctggtgcgccaccaccgccaactacgaccgggacaagctcttcggcttctgcccgacccgag
ctgactcgacggtgatggggggcaactcggcgggggagctgtgcgtcttccccttcactttcctgggtaaggagtactcg
acctgtaccagcgagggccgcggagatgggcgcctctggtgcgctaccacctcgaactttgacagcgacaagaagtgggg
cttctgcccggaccaaggatacagtttgttcctcgtggcggcgcatgagttcggccacgcgctgggcttagatcattcct
cagtgccggaggcgctcatgtaccctatgtaccgcttcactgaggggccccccttgcataaggacgacgtgaatggcatc
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NFAT response element
(DNA)
ggaggaaaaactgtttcatacagaaggcgt(SEQ ID NO: 649)
NFAT response element repeats
(DNA)
ggaggaaaaactgtttcatacagaaggcgtggaggaaaaactgtttcatacagaaggcgtggaggaaaaactgtttcata
cagaaggcgt (SEQ ID NO: 650)
CMV minimal promoter
(DNA)
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NFATREmCMV-MMP9
(DNA)
ggaggaaaaactgtttcatacagaaggcgtggaggaaaaactgtttcatacagaaggcgtggaggaaaaactgtttcata
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atctctagagccaccatgagcctctggcagcccctggtcctggtgctcctggtgctgggctgctgctttgctgcccccag
acagcgccagtccacccttgtgctcttccctggagacctgagaaccaatctcaccgacaggcagctggcagaggaatacc
tgtaccgctatggttacactcgggtggcagagatgcgtggagagtcgaaatctctggggcctgcgctgctgcttctccag
aagcaactgtccctgcccgagaccggtgagctggatagcgccacgctgaaggccatgcgaaccccacggtgcggggtccc
agacctgggcagattccaaacctttgagggcgacctcaagtggcaccaccacaacatcacctattggatccaaaactact
cggaagacttgccgcgggcggtgattgacgacgcctttgcccgcgccttcgcactgtggagcgcggtgacgccgctcacc
ttcactcgcgtgtacagccgggacgcagacatcgtcatccagtttggtgtcgcggagcacggagacgggtatcccttcga
cgggaaggacgggctcctggcacacgcctttcctcctggccccggcattcagggagacgcccatttcgacgatgacgagt
tgtggtccctgggcaagggcgtcgtggttccaactcggtttggaaacgcagatggcgcggcctgccacttccccttcatc
ttcgagggccgctcctactctgcctgcaccaccgacggtcgctccgacggcttgccctggtgcagtaccacggccaacta
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agtttccatteatcttccaaggccaatcctactccgcctgcaccacggacggtcgctccgacggctaccgctggtgcgcc
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accaggtggaccaagtgggctacgtgacctatgacatcctgcagtgccctgaggacgattacaaggatgacgacgataag
tgataa (SEQ ID NO: 652)
NFATREmCMV-MMP9cat
(DNA)
ggaggaaaaactgtttcatacagaaggcgtggaggaaaaactgtttcatacagaaggcgtggaggaaaaactgtttcata
cagaaggcgtagatctagactcaggtaggcgtgtacggtgggaggtctatataagcagagctggtttagtgaaccgtcag
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tcaccttcactcgcgtgtacagccgggacgcagacatcgtcatccagtttggtgtcgcggagcacggagacgggtatccc
ttcgacgggaaggacgggctcctggcacacgcctttcctcctggccccggcattcagggagacgcccatttcgacgatga
cgagttgtggtccctgggcaagggcgtcgtggttccaactcggtttggaaacgcagatggcgcggcctgccacttcccct
tcatcttcgagggccgctcctactctgcctgcaccaccgacggtcgctccgacggcttgccctggtgcagtaccacggcc
aactacgacaccgacgaccggtttggcttctgccccagcgagagactctacacccaggacggcaatgctgatgggaaacc
ctgccagtttccattcatcttccaaggccaatcctactccgcctgcaccacggacggtcgctccgacggctaccgctggt
gcgccaccaccgccaactacgaccgggacaagctcttcggcttctgcccgacccgagctgactcgacggtgatggggggc
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cctatgtaccgcttcactgaggggccccccttgcataaggacgacgtgaatggcatccggcacctctatggtcctcgccc
tgaacctgattacaaggatgacgacgataagtgataa (SEQ ID NO: 653)
C2 scFv
(DNA)
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caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtg
gcggatccgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcaga
gccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcct
gatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctca
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gggaccaaggtggagatcaaacgaact (SEQ ID NO: 654)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATITC
RASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPFTFG
GGTKVEIKRT (SEQ ID NO: 655)
CD8 transmembrane domain
(DNA)
atctacatctgggcgcccttggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttatcaccctttactgc( SEQ ID
NO: 656)
(amino acids)
IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC (SEQ IDNO: 657)
4-1BB domain
(DNA)
aaacggggcagaaagaaactcctgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatgg
ctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaactg (SEQ ID NO: 658)
(amino acids)
KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL(SEQ ID NO: 659)
CD3zeta domain
(DNA)
agagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtacaagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctagg
acgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaacc
ctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgc
cggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgca
ggccctgccccctcgc (SEQ ID NO: 660)
(amino acids)
RVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGER
RRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 661)
Human IgGl Fc linker
(DNA)
gagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcct
cttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacg
aagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcag
tacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaa
ggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgt
acaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagc
gacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacgg
ctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgc
atgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (SEQ ID NO: 662)
(amino acids)
EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ
YNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY
PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQI
D NO: 663)
C2 CAR FC linker
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtg
gcggatccgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcaga
gccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcct
gatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctca
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gggaccaaggtggagatcaaacgaactgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctga
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tgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagac
cacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcagg
ggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggt
aaaatctacatctgggcgcccttggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaaacg
gggcagaaagaaactcctgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgta
gctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtac
aagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtgg
ccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataaga
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agtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctgataa (SEQ ID NO: 664)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATITC
RASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPFTFG
GGTKVEIKRTEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVH
N AKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQV
SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSL
SPGKIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADA
PAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLY
QGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 665)
IgD/Fc linker
(DNA)
gagtctccaaaggcacaggcctcctcagtgcccactgcacaaccccaagcagagggcagcctcgccaaggcaaccacagc
cccagccaccacccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggagaaggagaaagaggaacaagaagagagag
agacaaagacaccagagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctgggggga
ccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggt
ggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagc
cgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaag
gagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccg
agaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaag
gcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtg
ctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctc
atgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa (SEQ ID N
O: 666)
(amino acids)
ESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTPEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG
PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGK
EYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTP
PVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 667)
C2 CAR IgD/FC linker
(DNA)
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caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtg
gcggatccgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcaga
gccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcct
gatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctca
caattaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcgga
gggaccaaggtggagatcaaacgaactgagtctccaaaggcacaggcctcctcagtgcccactgcacaaccccaagcaga
gggcagcctcgccaaggcaaccacagccccagccaccacccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggaga
aggagaaagaggaacaagaagagagagagacaaagacaccagagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccg
tgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccg
gacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcg
tggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtc
ctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaac
catctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaacc
aggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggag
aacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagag
caggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctct
ccctgtctccgggtaaaatctacatctgggcgcccttggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttatcacc
ctttactgcaaacggggcagaaagaaactcctgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaaga
ggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcaggagcgcag
acgcccccgcgtacaagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttg
gacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaact
gcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcc
tttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctgataa (S
EQ ID NO: 668)
(amino acids)
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YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATITC
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PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLT
V LHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNG
QPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKIYIWAPLAGTCGVLLLSL
VITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEY
DVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
** (SEQ ID NO: 669)
Fc hingeless Y407R linker
(DNA)
gcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccc
tgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggagg
tgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcac
caggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctc
caaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtca
gcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaac
tacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctcaggagcaagctcaccgtggacaagagcaggtg
gcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgt
ctccgggtaaa (SEQ ID NO: 670)
(amino acids)
APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLH
QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPE
NNYKTTPPVLDSDGSFFLRSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 671)
C2 CAR FCHingeless/Y407R linker
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtg
gcggatccgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcaga
gccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcct
gatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctca
caattaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcgga
gggaccaaggtggagatcaaacgaactgcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaa
ggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagt
tcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgt
gtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccct
cccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatccc
gggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgg
gagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctcaggag
caagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaacc
actacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaaatctacatctgggcgcccttggccgggacttgtggggtcctt
ctcctgtcactggttatcaccctttactgcaaacggggcagaaagaaactcctgtatatattcaaacaaccatttatgag
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tgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtacaagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacga
agagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctca
ggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccgga
ggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggcc
ctgccccctcgctgataa (SEQID NO: 672)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATITC
RASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPFTFG
GGTKVEIKRTAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNST
YRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAP IEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIA
VEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLRSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKIYIWAPLAGTC
GVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELN
LGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALH
MQALPPR** (SEQ ID NO: 673)
IgD/FCHingeless/Y407R linker
(DNA)
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cccagccaccacccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggagaaggagaaagaggaacaagaagagagag
agacaaagacaccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatg
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ggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcc
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gagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgac
caagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggc
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gacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaa
gagcctctccctgtctccgggtaaa (SEQ ID NO: 674)
(amino acids)
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ISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPI
EKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLRSKL
TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 675)
C2 CAR IgD/FCHingeless/Y407Rlinker
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtg
gcggatccgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcaga
gccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcct
gatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctca
caattaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcgga
gggaccaaggtggagatcaaacgaactgagtctccaaaggcacaggcctcctcagtgcccactgcacaaccccaagcaga
gggcagcctcgccaaggcaaccacagccccagccaccacccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggaga
aggagaaagaggaacaagaagagagagagacaaagacaccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttc
cccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaaga
ccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtaca
acagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtc
tccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacac
cctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgaca
tcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctcc
ttcttcctcaggagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatga
ggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaaatctacatctgggcgcccttggccggga
cttgtggggtccttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaaacggggcagaaagaaactcctgtatatattcaaa
caaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggagg
atgtgaactgagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtacaagcagggccagaaccagctctataacgagc
tcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgaga
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aggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgccc
ttcacatgcaggccctgccccctcgctgataa (SEQ ID NO: 676)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATITC
RASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPFTFG
GGTKVEIKRTESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTPAPELLGGPSVFL
FPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCK
V SNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS
DGSFFLRSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLY
IFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGG
KPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO:
677)
IgD linker
(DNA)
gagtctccaaaggcacaggcctcctcagtgcccactgcacaaccccaagcagagggcagcctcgccaaggcaaccacagc
cccagccaccacccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggagaaggagaaagaggaacaagaagagagag
agacaaagacacca (SEQ ID NO: 678)
(amino acids)
ESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTP(SEQ ID NO: 679)
C2 CAR IgD linker
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtg
gcggatccgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcaga
gccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcct
gatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctca
caattaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcgga
gggaccaaggtggagatcaaacgaactgagtctccaaaggcacaggcctcctcagtgcccactgcacaaccccaagcaga
gggcagcctcgccaaggcaaccacagccccagccaccacccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggaga
aggagaaagaggaacaagaagagagagagacaaagacaccaatctacatctgggcgcccttggccgggacttgtggggtc
cttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaaacggggcagaaagaaactcctgtatatattcaaacaaccatttat
gagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaactga
gagtgaagttcageaggagcgcagacgcccccgcgtacaagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctagga
cgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccc
tcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgcc
ggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcag
gccctgccccctcgctgataa (SEQ ID NO: 680)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATITC
RASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPFTFG
GGTKVEIKRTESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTPIYIWAPLAGTCG
VLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNL
GRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHM
QALPPR* * (SEQ ID NO: 681)
X4 linker
(DNA)
gacaagacgcacaccaagccacctaaaccagctccagaactgctcggaggtcctggcaccggaaccggaggacctaccat
caaaccacctaagccacctaagcctgctcctaacctgctcggaggacct (SEQ ID NO: 682)
(amino acids)
DKTHTKPPKPAPELLGGPGTGTGGPTIKPPKPPKPAPNLLGGP(SEQ ID NO: 683)
C2 CAR X4 linker
(DNA)
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caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
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cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtg
gcggatccgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcaga
gccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcct
gatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctca
caattaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcgga
gggaccaaggtggagatcaaacgaactgacaagacgcacaccaagccacctaaaccagctccagaactgctcggaggtcc
tggcaccggaaccggaggacctaccatcaaaccacctaagccacctaagcctgctcctaacctgctcggaggacctatct
acatctgggcgcccttggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaaacggggcaga
aagaaactcctgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccg
atttccagaagaagaagaaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtacaagcagg
gccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggac
cctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcgga
ggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacag
ccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctgataa (SEQ ID NO: 684)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATITC
RASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPFTFG
GGTKVEIKRTDKTHTKPPKPAPELLGGPGTGTGGPTIKPPKPPKPAPNLLGGPIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRG
R KKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRG
RDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ
ID NO: 685)
OKT3 scFv
(DNA)
caggtgcagctggtgcagagcggaggcggagtggtgcagcctggaagaagcctgcgcctgagctgcaaagcgagcggcta
tacctttacccgctataccatgcattgggtgcgccaggcgccgggcaaaggcctggaatggattggctatattaacccga
gccgcggctataccaactataaccagaaagtgaaagatcgctttaccattagcaccgataaaagcaaaagcaccgcgttt
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ccgatattcagatgacccagagcccgagcagcctgagcgcgagcgtgggcgatcgcgtgaccattacctgcagcgcgagc
agcagcgtgagctatatgaactggtatcagcagaccccgggcaaagcgccgaaacgctggatttatgataccagcaaact
ggcgagcggcgtgccgagccgctttagcggcagcggcagcggcaccgattatacctttaccattagcagcctgcagccgg
aagatattgcgacctattattgccagcagtggagcagcaacccgtttacctttggccagggcaccaaactgcagattacc
cgctgataa(SEQ ID NO: 686)
(amino acids)
QVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCKASGYTFTRYTMHWVRQAPGKGLEWIGYINPSRGYTNYNQKVKDRFTISTDKSKSTAF
LQMDSLRPEDTAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSAS
SSVSYMNWYQQTPGKAPKRWIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQWSSNPFTFGQGTKLQIT
R** (SEQ ID NO: 687)
C2-FC-OKT3
(DNA)
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ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtg
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gccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcct
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(amino acids)
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(DNA)
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(amino acids)
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YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATITC
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V LHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNG
QPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSQVQLVQSGGGVVQ
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YYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYMNWYQQTP
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O: 691)
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YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATITC
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GGTKVEIKRTAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY
R VVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIA
VEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLRSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSQVQLVQ
SGGGVVQPGRSLRLSCKASGYTFTRYTMHWVRQAPGKGLEWIGYINPSRGYTNYNQKVKDRFTISTDKSKSTAFLQMDSL
RPEDTAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYM
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EQ ID NO: 693)
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Q ID NO: 694)
(amino acids)
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YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATITC
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FPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCK
VSNKAL PAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS
DGSFFLRSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSQVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCKASGYT
FTRYTMHWVRQAPGKGLEWIGYINPSRGYTNYNQKVKDRFTISTDKSKSTAFLQMDSLRPEDTAVYYCARYYDDHYCLDY
WGQGTTLTVSS GGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYMNWYQQTPGKAPKRWIYDTSKL
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6)
(amino acids)
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YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATITC
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GGGVVQPGRSLRLSCKASGYTFTRYTMHWVRQAPGKGLEWIGYINPSRGYTNYNQKVKDRFTISTDKSKSTAFLQMDSLR
P EDTAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYM
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C2-X4-OKT3
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ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtg
gcggatccgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcaga
gccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcct
gatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctca
caattaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcgga
gggaccaaggtggagatcaaacgaactgacaagacgcacaccaagccacctaaaccagctccagaactgctcggaggtcc
tggcaccggaaccggaggacctaccatcaaaccacctaagccacctaagcctgctcctaacctgctcggaggacctggcg
gtggcggatcccaggtgcagctggtgcagagcggaggcggagtggtgcagcctggaagaagcctgcgcctgagctgcaaa
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tattaacccgagccgcggctataccaactataaccagaaagtgaaagatcgctttaccattagcaccgataaaagcaaaa
gcaccgcgtttctgcagatggatagcctgcgcccggaagataccgcggtgtattattgcgcgcgctattatgatgatcat
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cggtggcggatccgatattcagatgacccagagcccgagcagcctgagcgcgagcgtgggcgatcgcgtgaccattacct
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tgcagattacccgctgataa(SEQ ID NO: 698)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTI SSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNS
LYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATIT
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GGGTKVEIKRTDKTHTKPPKPAPELLGGPGTGTGGPTIKPPKPPKPAPNLLGGPGGGGSQVQLVQSGGGVVQPGRSLRLS
CKASGYTFTRYTMHWVRQAPGKGLEWIGYINPSRGYTNYNQKVKDRFTISTDKSKSTAFLQMDSLRPEDTAVYYCARYYD
DHYCLDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYMNWYQQTPGKAPKRWI
YDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQWSSNPFTFGQGTKLQITR* * (SEQ ID NO : 699
)
C2-MMP9
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtg
gcggatccgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcaga
gccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcct
gatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctca
caattaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcgga
gggaccaaggtggagatcaaacgaactggcggtggcggatccagcctctggcagcccctggtcctggtgctcctggtgct
gggctgctgctttgctgcccccagacagcgccagtccacccttgtgctcttccctggagacctgagaaccaatctcaccg
acaggcagctggcagaggaatacctgtaccgctatggttacactcgggtggcagagatgcgtggagagtcgaaatctctg
gggcctgcgctgctgcttctccagaagcaactgtccctgcccgagaccggtgagctggatagcgccacgctgaaggccat
gcgaaccccacggtgcggggtcccagacctgggcagattccaaacctttgagggcgacctcaagtggcaccaccacaaca
tcacctattggatccaaaactactcggaagacttgccgcgggcggtgattgacgacgcctttgcccgcgccttcgcactg
tggagcgcggtgacgccgctcaccttcactcgcgtgtacagccgggacgcagacatcgtcatccagtttggtgtcgcgga
gcacggagacgggtatcccttcgacgggaaggacgggctcctggcacacgcctttcctcctggccccggcattcagggag
acgcccatttcgacgatgacgagttgtggtccctgggcaagggcgtcgtggttccaactcggtttggaaacgcagatggc
gcggcctgccacttccccttcatcttcgagggccgctcctactctgcctgcaccaccgacggtcgctccgacggcttgcc
ctggtgcagtaccacggccaactacgacaccgacgaccggtttggcttctgccccagcgagagactctacacccaggacg
gcaatgctgatgggaaaccctgccagtttccattcatcttccaaggccaatcctactccgcctgcaccacggacggtcgc
tccgacggctaccgctggtgcgccaccaccgccaactacgaccgggacaagctcttcggcttctgcccgacccgagctga
ctcgacggtgatggggggcaactcggcgggggagctgtgcgtcttccccttcactttcctgggtaaggagtactcgacct
gtaccagcgagggccgcggagatgggcgcctctggtgcgctaccacctcgaactttgacagcgacaagaagtggggcttc
tgcccggaccaaggatacagtttgttcctcgtggcggcgcatgagttcggccacgcgctgggcttagatcattcctcagt
gccggaggcgctcatgtaccctatgtaccgcttcactgaggggccccccttgcataaggacgacgtgaatggcatccggc
acctctatggtcctcgccctgaacctgagccacggcctccaaccaccaccacaccgcagcccacggctcccccgacggtc
tgccccaccggaccccccactgtccacccctcagagcgccccacagctggccccacaggtcccccctcagctggccccac
aggtccccccactgctggcccttctacggccactactgtgcctttgagtccggtggacgatgcctgcaacgtgaacatct
tcgacgccatcgcggagattgggaaccagctgtatttgttcaaggatgggaagtactggcgattctctgagggcaggggg
agccggccgcagggccccttccttatcgccgacaagtggcccgcgctgccccgcaagctggactcggtctttgaggagcg
gctctccaagaagcttttcttcttctctgggcgccaggtgtgggtgtacacaggcgcgtcggtgctgggcccgaggcgtc
tggacaagctgggcctgggagccgacgtggcccaggtgaccggggccctccggagtggcagggggaagatgctgctgttc
agcgggcggcgcctctggaggttcgacgtgaaggcgcagatggtggatccccggagcgccagcgaggtggaccggatgtt
ccccggggtgcctttggacacgcacgacgtcttccagtaccgagagaaagcctatttctgccaggaccgcttctactggc
gcgtgagttcccggagtgagttgaaccaggtggaccaagtgggctacgtgacctatgacatcctgcagtgccctgaggac
gattacaaggatgacgacgataagtgataa (SEQ
ID NO:700)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATITC
RASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPFTFG
GGTKVEIKRTGGGGSSLWQPLVLVLLVLGCCFAAPRQRQSTLVLFPGDLRTNLTDRQLAEEYLYRYGYTRVAEMRGESKS
LGPALLLLQKQLSLPETGELDSATLKAMRTPRCGVPDLGRFQTFEGDLKWHHHNITYWIQNYSEDLPRAVIDDAFARAFA
LWSAVTPLTFTRVYSRDADIVIQFGVAEHGDGYPFDGKDGLLAHAFPPGPGIQGDAHFDDDELWSLGKGVVVPTRFGNAD
GAACHFPFIFEGRSYSACTTDGRSDGLPWCSTTANYDTDDRFGFCPSERLYTQDGNADGKPCQFPFIFQGQSYSACTTDG
RSDGYRWCATTANYDRDKLFGFCPTRADSTVMGGNSAGELCVFPFTFLGKEYSTCTSEGRGDGRLWCATTSNFDSDKKWG
FCPDQGYSLFLVAAHEFGHALGLDHSSVPEALMYPMYRFTEGPPLHKDDVNGIRHLYGPRPEPEPRPPTTTTPQPTAPPT
VCPTGPPTVHPSERPTAGPTGPPSAGPTGPPTAGPSTATTVPLSPVDDACNVNIFDAIAEIGNQLYLFKDGKYWRFSEGR
GSRPQGPFLIADKWPALPRKLDSVFEERLSKKLFFFSGRQVWVYTGASVLGPRRLDKLGLGADVAQVTGALRSGRGKMLL
FSGRRLWRFDVKAQMVDPRSASEVDRMFPGVPLDTHDVFQYREKAYFCQDRFYWRVSSRSELNQVDQVGYVTYDILQCPE
DDYKDDDDK* * (SEQ ID NO : 701 )
C2-MMP9cat
(DNA)
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatt
caccttcagtggctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtg
gcggaacctacatatactaccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtat
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaata
cttcgatgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtg
gcggatccgacattgtgctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcaga
gccagtaagagtgtcagtaccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcct
gatttacctggcatccaatctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctca
caattaatcctgtggaagctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcgga
gggaccaaggtggagatcaaacgaactggcggtggcggatccttccaaacctttgagggcgacctcaagtggcaccacca
caacatcacctattggatccaaaactactcggaagacttgccgcgggcggtgattgacgacgcctttgcccgcgccttcg
cactgtggagcgcggtgacgccgctcaccttcactcgcgtgtacagccgggacgcagacatcgtcatccagtttggtgtc
gcggagcacggagacgggtatcccttcgacgggaaggacgggctcctggcacacgcctttcctcctggccccggcattca
gggagacgcccatttcgacgatgacgagttgtggtccctgggcaagggcgtcgtggttccaactcggtttggaaacgcag
atggcgcggcctgccacttccccttcatcttcgagggccgctcctactctgcctgcaccaccgacggtcgctccgacggc
ttgccctggtgcagtaccacggccaactacgacaccgacgaccggtttggcttctgccccagcgagagactctacaccca
ggacggcaatgctgatgggaaaccctgccagtttccattcatcttccaaggccaatcctactccgcctgcaccacggacg
gtcgctccgacggctaccgctggtgcgccaccaccgccaactacgaccgggacaagctcttcggcttctgcccgacccga
gctgactcgacggtgatggggggcaactcggcgggggagctgtgcgtcttccccttcactttcctgggtaaggagtactc
gacctgtaccagcgagggccgcggagatgggcgcctctggtgcgctaccacctcgaactttgacagcgacaagaagtggg
gcttctgcccggaccaaggatacagtttgttcctcgtggcggcgcatgagttcggccacgcgctgggcttagatcattcc
tcagtgccggaggcgctcatgtaccctatgtaccgcttcactgaggggccccccttgcataaggacgacgtgaatggcat
ccggcacctctatggtcctcgccctgaacctgattacaaggatgacgacgataagtgataa (SEQ ID NO: 702)
(amino acids)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYYPDSVKGRFTI SRDNAKNSL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAVSPGQRATITC
RASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPFTFG
GGTKVEIKRTGGGGSFQTFEGDLKWHHHNITYWIQNYSEDLPRAVIDDAFARAFALWSAVTPLTFTRVYSRDADIVIQFG
VAEHGDGYPFDGKDGLLAHAFPPGPGIQGDAHFDDDELWSLGKGVVVPTRFGNADGAACHFPFIFEGRSYSACTTDGRSD
GLPWCSTTANYDTDDRFGFCPSERLYTQDGNADGKPCQFPFIFQGQSYSACTTDGRSDGYRWCATTANYDRDKLFGFCPT
RADSTVMGGNSAGELCVFPFTFLGKEYSTCTSEGRGDGRLWCATTSNFDSDKKWGFCPDQGYSLFLVAAHEFGHALGLDH
SSVPEALMYPMYRFTEGPPLHKDDVNGIRHLYGPRPEPDYKDDDDK* * (SEQ ID NO:703)
Other linkers for BiTES betweentwo scFvs and between C2 and MMP9 include but are
not limited to those shown asSEQ ID NOS:705, 707, 709, 711, 713, 715 and 717.
[G4Si]x2 linkersequence:
(DNA)
ggcggtggcggatccggcggtggcggatcc(SEQ ID NO: 704)
(amino acids)
GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 705)
[G4Si]x3 linker sequence:
(DNA)
ggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatcc(SEQ ID NO: 706)
(amino acids)
GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 707)
Long GS linker sequence:
(DNA)
ggcggtggaagcggcggtggcggatccggcagcggcggaagcggcggtggcggatccggcggtgga(SEQ ID NO: 70
8)
(amino acids)
GGGSGGGGSGSGGSGGGGSGGG (SEQ IDNO: 709)
13 aa GS linker sequence:
(DNA)
ggcggtggatccggcggtggcggatccggcggtggatcc(SEQ ID NO: 710)
(amino acids)
GGGSGGGGSGGGS (SEQ ID NO: 711)
8 aa GS linker sequence:
(DNA)
ggcggttccggcggtggatccgga (SEQ IDNO: 712)
(amino acids)
GGSGGGSG (SEQ ID NO:713)
12 aa GS linker sequence:
(DNA)
ggcggttccggcggtggatccggcggtggcggatccgga(SEQ ID NO: 714)
(amino acids)
GGSGGGSGGGSG (SEQ ID NO: 715)
24 aa GS linker sequence:
(DNA)
ggcggttccggcggtggatccggcggtggcggatccggaggcggttccggcggtggatccggcggtggcggatccgga(S
EQ ID NO:716)
(amino acids)
GGSGGGSGGGSGGGSGGGSGGGSG (SEQ IDNO: 717)
CAR-T C2 CD8/CD8/4-lBB/CD3z #44
N-CD81s-huMNC2scFv-CD8ecdfragment- CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccttaccagtgaccgccttgctcctgccgctggccttgctgctccacgccgccaggccggaggtgcagctggtgga
gtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtggctatg
ccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtggcggaacctacatatac
taccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcct
gagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaatacttcgatgtctggggca
aagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgacattgtg
ctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcagagccagtaagagtgtcag
taccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcctgatttacctggcatcca
atctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctcacaattaatcctgtggaa
gctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcggagggaccaaggtggagat
caaacgaactacaacaacccctgcccccagacctcctaccccagcccctacaattgccagccagcctctgagcctgaggc
ccgaggcttgtagacctgctgctggcggagccgtgcacaccagaggactggatttcgcctgcgacatctacatctgggcg
cccttggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaaacggggcagaaagaaactcct
gtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaag
aagaagaaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtacaagcagggccagaaccag
ctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggg
gggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtg
agattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggac
acctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctgataa (SEQ ID NO: 718)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI
VLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPV
EANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRTTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIW
APLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQN
QLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATK
DTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO : 719 )
CAR-T IgK C2 CD8/CD8/4-lBB/CD3z#45
N-IgKls-huMNC2scFv-CD8ecdfragment- CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggagacagacacactcctgctatgggtactgctgctctgggttccaggttccactggtgaggtgcagctggtggagtc
tgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtggctatgcca
tgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtggcggaacctacatatactac
cccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgag
agccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaatacttcgatgtctggggcaaag
ggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgacattgtgctg
acccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcagagccagtaagagtgtcagtac
cagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcctgatttacctggcatccaatc
tggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctcacaattaatcctgtggaagct
aatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcggagggaccaaggtggagatcaa
acgaactacaacaacccctgcccccagacctcctaccccagcccctacaattgccagccagcctctgagcctgaggcccg
aggcttgtagacctgctgctggcggagccgtgcacaccagaggactggatttcgcctgcgacatctacatctgggcgccc
ttggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaaacggggcagaaagaaactcctgta
tatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaag
aagaaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtacaagcagggccagaaccagctc
tataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatgggggg
aaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgaga
ttgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacc
tacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctgataa (SEQ ID NO: 720)
(amino acids)
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYY
PDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIV
LTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVE
ANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRTTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWA
PLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQ
LYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKD
TYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 721)
CAR-T C2 op CD8/CD8/4-lBB/CD3z#46
N-CD81s-huMNC2scFv codonoptimized-CD8ecd fragment- CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3
zeta-C
(DNA)
atggccttaccagtgaccgccttgctcctgccgctggccttgctgctccacgccgccaggccggaagtgcagctggtgga
atctggcggcggactcgtgaagcctggcggctctctgagactgagctgtgccgccagcggcttcacctttagcggctacg
ccatgagctgggtgcgccaggctcctggcaaaggcctggaatgggtgtccaccatctctagcggcggcacctacatctac
taccccgacagcgtgaagggccggttcaccatcagccgggacaacgccaagaacagcctgtacctgcagatgaactccct
gcgggccgaggacaccgccgtgtactattgtgctagactgggcggcgacaactactacgagtacttcgacgtgtggggca
agggcaccaccgtgacagtgtctagcggaggcggaggatcaggcggcggaggaagtggcggagggggatctgatatcgtg
ctgacccagagccctgccagcctggctgtgtctcctggacagagggccaccatcacctgtcgggccagcaagagcgtgtc
cacctccggctacagctacatgcactggtatcagcagaagcccggccagccccccaagctgctgatctacctggccagca
acctggaaagcggcgtgcccgctagattttccggctctggcagcggcaccgacttcaccctgaccatcaaccccgtggaa
gccaacgacaccgccaattactactgccagcacagcagagagctgcccttcaccttcggcggaggcaccaaggtggaaat
caagcggaccacaacaacccctgcccccagacctcctaccccagcccctacaattgccagccagcctctgagcctgaggc
ccgaggcttgtagacctgctgctggcggagccgtgcacaccagaggactggatttcgcctgcgacatctacatctgggcg
cccttggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaaacggggcagaaagaaactcct
gtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaag
aagaagaaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtacaagcagggccagaaccag
ctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggg
gggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtg
agattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggac
acctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctgataa (SEQ ID NO: 722)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI
VLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPV
EANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRTTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIW
APLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQN
QLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATK
DTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 723)
CAR-T IgK C2 opCD8/CD8/4-lBB/CD3z #47
N-IgKls-huMNC2scFv codonoptimized-CD8ecd fragment- CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3
zeta-C
(DNA)
atggagacagacacactcctgctatgggtactgctgctctgggttccaggttccactggtgaagtgcagctggtggaatc
tggcggcggactcgtgaagcctggcggctctctgagactgagctgtgccgccagcggcttcacctttagcggctacgcca
tgagctgggtgcgccaggctcctggcaaaggcctggaatgggtgtccaccatctctagcggcggcacctacatctactac
cccgacagcgtgaagggccggttcaccatcagccgggacaacgccaagaacagcctgtacctgcagatgaactccctgcg
ggccgaggacaccgccgtgtactattgtgctagactgggcggcgacaactactacgagtacttcgacgtgtggggcaagg
gcaccaccgtgacagtgtctagcggaggcggaggatcaggcggcggaggaagtggcggagggggatctgatatcgtgctg
acccagagccctgccagcctggctgtgtctcctggacagagggccaccatcacctgtcgggccagcaagagcgtgtccac
ctccggctacagctacatgcactggtatcagcagaagcccggccagccccccaagctgctgatctacctggccagcaacc
tggaaagcggcgtgcccgctagattttccggctctggcagcggcaccgacttcaccctgaccatcaaccccgtggaagcc
aacgacaccgccaattactactgccagcacagcagagagctgcccttcaccttcggcggaggcaccaaggtggaaatcaa
gcggaccacaacaacccctgcccccagacctcctaccccagcccctacaattgccagccagcctctgagcctgaggcccg
aggcttgtagacctgctgctggcggagccgtgcacaccagaggactggatttcgcctgcgacatctacatctgggcgccc
ttggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaaacggggcagaaagaaactcctgta
tatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaag
aagaaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtacaagcagggccagaaccagctc
tataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatgggggg
aaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgaga
ttgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacc
tacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctgataa (SEQ ID NO: 724)
(amino acids)
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYY
PDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIV
L TQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPV
EANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRTTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIW
APLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQN
QLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATK
DTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 725)
CAR-T C2 CD8/CD8/4-lBB/CD3z op#48
N-CD81s-huMNC2scFv -CD8ecdfragment- CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta (all domai
ns codon optimized) -C
(DNA)
atggccttaccagtgaccgccttgctcctgccgctggccttgctgctccacgccgccaggccggaagtgcagctggtgga
atctggcggcggactcgtgaagcctggcggctctctgagactgagctgtgccgccagcggcttcacctttagcggctacg
ccatgagctgggtgcgccaggctcctggcaaaggcctggaatgggtgtccaccatctctagcggcggcacctacatctac
taccccgacagcgtgaagggccggttcaccatcagccgggacaacgccaagaacagcctgtacctgcagatgaactccct
gcgggccgaggacaccgccgtgtactattgtgctagactgggcggcgacaactactacgagtacttcgacgtgtggggca
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ctgacccagagccctgccagcctggctgtgtctcctggacagagggccaccatcacctgtcgggccagcaagagcgtgtc
cacctccggctacagctacatgcactggtatcagcagaagcccggccagccccccaagctgctgatctacctggccagca
acctggaaagcggcgtgcccgctagattttccggctctggcagcggcaccgacttcaccctgaccatcaaccccgtggaa
gccaacgacaccgccaattactactgccagcacagcagagagctgcccttcaccttcggcggaggcaccaaggtggaaat
caagcggaccacaacaacccctgcccccagacctcctaccccagcccctacaattgccagccagcctctgagcctgaggc
ccgaggcttgtagacctgctgctggcggagccgtgcacaccagaggactggatttcgcctgcgacatctacatctgggcc
cctctggccggcacatgtggcgtgctgctgctgagcctcgtgatcaccctgtactgcaagcggggcagaaagaagctgct
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aagaagaaggcggctgcgagctgagagtgaagttcagcagatccgccgacgcccctgcctacaagcagggccagaaccag
ctgtacaacgagctgaacctgggcagacgggaagagtacgacgtgctggacaagcggagaggcagggaccctgagatggg
cggcaagcccagaagaaagaacccccaggaaggcctgtataacgaactgcagaaagacaagatggccgaggcctacagcg
agatcggaatgaagggcgagcggagaagaggcaagggccacgatggcctgtaccagggcctgagcaccgccaccaaggac
acctatgacgccctgcacatgcaggccctgcctcccagatgataa (SEQ ID NO: 726)
(amino acids)
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QLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATK
DTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 727)
CAR-T IgK C2 CD8/CD8/4-lBB/CD3zop #49
N-IgKls-huMNC2scFv -CD8ecdfragment- CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta (all domai
ns codon optimized) -C
(DNA)
atggagacagacacactcctgctatgggtactgctgctctgggttccaggttccactggtgaagtgcagctggtggaatc
tggcggcggactcgtgaagcctggcggctctctgagactgagctgtgccgccagcggcttcacctttagcggctacgcca
tgagctgggtgcgccaggctcctggcaaaggcctggaatgggtgtccaccatctctagcggcggcacctacatctactac
cccgacagcgtgaagggccggttcaccatcagccgggacaacgccaagaacagcctgtacctgcagatgaactccctgcg
ggccgaggacaccgccgtgtactattgtgctagactgggcggcgacaactactacgagtacttcgacgtgtggggcaagg
gcaccaccgtgacagtgtctagcggaggcggaggatcaggcggcggaggaagtggcggagggggatctgatatcgtgctg
acccagagccctgccagcctggctgtgtctcctggacagagggccaccatcacctgtcgggccagcaagagcgtgtccac
ctccggctacagctacatgcactggtatcagcagaagcccggccagccccccaagctgctgatctacctggccagcaacc
tggaaagcggcgtgcccgctagattttccggctctggcagcggcaccgacttcaccctgaccatcaaccccgtggaagcc
aacgacaccgccaattactactgccagcacagcagagagctgcccttcaccttcggcggaggcaccaaggtggaaatcaa
gcggaccacaacaacccctgcccccagacctcctaccccagcccctacaattgccagccagcctctgagcctgaggcccg
aggcttgtagacctgctgctggcggagccgtgcacaccagaggactggatttcgcctgcgacatctacatctgggcccct
ctggccggcacatgtggcgtgctgctgctgagcctcgtgatcaccctgtactgcaagcggggcagaaagaagctgctgta
catcttcaagcagcccttcatgcggcccgtgcagaccacccaggaagaggacggctgctcctgcagattccccgaggaag
aagaaggcggctgcgagctgagagtgaagttcagcagatccgccgacgcccctgcctacaagcagggccagaaccagctg
tacaacgagctgaacctgggcagacgggaagagtacgacgtgctggacaagcggagaggcagggaccctgagatgggcgg
caagcccagaagaaagaacccccaggaaggcctgtataacgaactgcagaaagacaagatggccgaggcctacagcgaga
tcggaatgaagggcgagcggagaagaggcaagggccacgatggcctgtaccagggcctgagcaccgccaccaaggacacc
tatgacgccctgcacatgcaggccctgcctcccagatgataa (SEQ ID NO: 728)
(amino acids)
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIYY
PDSVKGRFTI SRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI
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APLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQN
QLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATK
DTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 729)
CAR-T C2 CD4/CD4/4-lBB/CD3z #50
N-CD81s-huMNC2scFv-CD4ecdfragment- CD4 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccttaccagtgaccgccttgctcctgccgctggccttgctgctccacgccgccaggccggaggtgcagctggtgga
gtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtggctatg
ccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtggcggaacctacatatac
taccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcct
gagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaatacttcgatgtctggggca
aagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgacattgtg
ctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcagagccagtaagagtgtcag
taccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcctgatttacctggcatcca
atctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctcacaattaatcctgtggaa
gctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcggagggaccaaggtggagat
caaacgaacttcgggacaggtcctgctggaatccaacatcaaggttctgcccacatggtccaccccggtgcagccaatgg
ccctgattgtgctggggggcgtcgccggcctcctgcttttcattgggctaggcatcttcttcaaacggggcagaaagaaa
ctcctgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttcc
agaagaagaagaaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtacaagcagggccaga
accagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgag
atggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggccta
cagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccacca
aggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctgataa (SEQ ID NO: 730)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI
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KLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDP
EMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID
NO: 731)
CAR-T C2 FC/CD8/ 4-lBB/CD3z"Fc" CAR53
N-CD81s-huMNC2scFv-Human IgGlFc- CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccttaccagtgaccgccttgctcctgccgctggccttgctgctccacgccgccaggccggaggtgcagctggtgga
gtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtggctatg
ccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtggcggaacctacatatac
taccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcct
gagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaatacttcgatgtctggggca
aagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgacattgtg
ctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcagagccagtaagagtgtcag
taccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcctgatttacctggcatcca
atctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctcacaattaatcctgtggaa
gctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcggagggaccaaggtggagat
caaacgaactgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgt
cagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggac
gtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcg
ggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagt
acaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaa
ccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggctt
ctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctgg
actccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgc
tccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaaatctacatctgggc
gcccttggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaaacggggcagaaagaaactcc
tgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaa
gaagaagaaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtacaagcagggccagaacca
gctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatgg
ggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagt
gagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaagga
cacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctgataa (SEQ ID NO: 732)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI
V LTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINP
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VD VSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKG
QPRE PQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG
NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCS
CRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKM
AEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 733)
CAR-T C2 IgD/FC/CD8/4-lBB/CD3z"IgD-Fc" CAR54
N-CD81s-huMNC2scFv- IgD hinge-Human IgGl Fc- CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccttaccagtgaccgccttgctcctgccgctggccttgctgctccacgccgccaggccggaggtgcagctggtgga
gtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtggctatg
ccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtggcggaacctacatatac
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gagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaatacttcgatgtctggggca
aagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgacattgtg
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atctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctcacaattaatcctgtggaa
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caaacgaactgagtctccaaaggcacaggcctcctcagtgcccactgcacaaccccaagcagagggcagcctcgccaagg
caaccacagccccagccaccacccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggagaaggagaaagaggaacaa
gaagagagagagacaaagacaccagagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaact
cctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacat
gcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgcc
aagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggct
gaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaag
ggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgc
ctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccac
gcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcagggga
acgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa
atctacatctgggcgcccttggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaaacgggg
cagaaagaaactcctgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagct
gccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtacaag
cagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccg
ggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatgg
cggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagt
acagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctgataa (SEQ ID NO: 734)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIY
YPDSVKGRFTI SRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSD
IVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINP
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HNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAP IEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQV
SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSL
SPGKIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADA
PAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLY
QGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 735)
CAR-T C2 FCHingelessY407R/CD8/4-lBB/CD3z "FcH" CAR55
N-CD81s-huMNC2scFv-Human IgGlhingeless Fc Y407R- CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3ze
ta-C
(DNA)
atggccttaccagtgaccgccttgctcctgccgctggccttgctgctccacgccgccaggccggaggtgcagctggtgga
gtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtggctatg
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aagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgacattgtg
ctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcagagccagtaagagtgtcag
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ggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcac
cgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgaga
aaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaag
aaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagcc
ggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctcaggagcaagctcaccgtggaca
agagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagc
ctctccctgtctccgggtaaaatctacatctgggcgcccttggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttat
caccctttactgcaaacggggcagaaagaaactcctgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactc
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tttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatg
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ggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctgata
a (SEQ ID NO:736)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI
VLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPV
EANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRTAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYV
D GVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREE
MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLRSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPGKIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKF
SRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGK
GHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 737)
CAR-T C2 IgD/FCHingeless Y407R/CD8/4-lBB/CD3z"IgD FcH" CAR56
N-CD81S- huMNC2scFv- IgD hinge-Human IgGl hingeless Fc Y407R- CD8
transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccttaccagtgaccgccttgctcctgccgctggccttgctgctccacgccgccaggccggaggtgcagctggtgga
gtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtggctatg
ccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtggcggaacctacatatac
taccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcct
gagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaatacttcgatgtctggggca
aagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgacattgtg
ctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcagagccagtaagagtgtcag
taccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcctgatttacctggcatcca
atctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctcacaattaatcctgtggaa
gctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcggagggaccaaggtggagat
caaacgaactgagtctccaaaggcacaggcctcctcagtgcccactgcacaaccccaagcagagggcagcctcgccaagg
caaccacagccccagccaccacccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggagaaggagaaagaggaacaa
gaagagagagagacaaagacaccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaagga
caccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttca
actggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtg
gtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctccc
agcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccggg
aggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggag
agcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctcaggagcaa
gctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccact
acacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaaatctacatctgggcgcccttggccgggacttgtggggtccttctc
ctgtcactggttatcaccctttactgcaaacggggcagaaagaaactcctgtatatattcaaacaaccatttatgagacc
agtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaactgagagtga
agttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtacaagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaaga
gaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcagga
aggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggg
gcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctg
ccccctcgctgataa (SEQ ID NO: 738)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI
VLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPV
EANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRTESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEE
QEERETKTPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYR
V VSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV
EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLRSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKIYIWAPLAGTCG
VLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNL
GRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHM
QALPPR** (SEQ ID NO:739)
CAR-T C2 IgD/CD8/4-lBB/CD3z"IgD" CAR57
N-CD81s-huMNC2scFv- IgD hinge-CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccttaccagtgaccgccttgctcctgccgctggccttgctgctccacgccgccaggccggaggtgcagctggtgga
gtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtggctatg
ccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtggcggaacctacatatac
taccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcct
gagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaatacttcgatgtctggggca
aagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgacattgtg
ctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcagagccagtaagagtgtcag
taccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcctgatttacctggcatcca
atctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctcacaattaatcctgtggaa
gctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcggagggaccaaggtggagat
caaacgaactgagtctccaaaggcacaggcctcctcagtgcccactgcacaaccccaagcagagggcagcctcgccaagg
caaccacagccccagccaccacccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggagaaggagaaagaggaacaa
gaagagagagagacaaagacaccaatctacatctgggcgcccttggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggt
tatcaccctttactgcaaacggggcagaaagaaactcctgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaacta
ctcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcagg
agcgcagacgcccccgcgtacaagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacga
tgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtaca
atgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcac
gatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctg
ataa (SEQ ID NO:740)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI
VLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPV
EANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRTESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEE
QEERETKTPIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFS
RSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKG
HDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 741)
CAR-T C2 X4/CD8/4-lBB/CD3z"X4" CAR58
N-CD81s-huMNC2scFv- X4 linker-CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccttaccagtgaccgccttgctcctgccgctggccttgctgctccacgccgccaggccggaggtgcagctggtgga
gtctgggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtggctatg
ccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtggcggaacctacatatac
taccccgactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcct
gagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgagacttgggggggataattactacgaatacttcgatgtctggggca
aagggaccacggtcaccgtctcctccggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatccgacattgtg
ctgacccagtctccagcctccttggccgtgtctccaggacagagggccaccatcacctgcagagccagtaagagtgtcag
taccagcggatactcctacatgcactggtatcagcagaaaccaggacaacctcctaaactcctgatttacctggcatcca
atctggagagcggggtcccagccaggttcagcggcagtgggtctgggaccgatttcaccctcacaattaatcctgtggaa
gctaatgatactgcaaattattactgtcagcacagtagggagctgcctttcacattcggcggagggaccaaggtggagat
caaacgaactgacaagacgcacaccaagccacctaaaccagctccagaactgctcggaggtcctggcaccggaaccggag
gacctaccatcaaaccacctaagccacctaagcctgctcctaacctgctcggaggacctatctacatctgggcgcccttg
gccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaaacggggcagaaagaaactcctgtatat
attcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaag
aaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtacaagcagggccagaaccagctctat
aacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaa
gccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattg
ggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctac
gacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctgataa (SEQ ID NO: 742)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISSGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI
VLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPV
EANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRTDKTHTKPPKPAPELLGGPGTGTGGPTIKPPKPPKPAPNLLGGPIYIWAP
LAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQL
YNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDT
YDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 743)
CAR-T E6 CD8/CD4/41BB/CD3z CAR37
N-CD81s-huMNE6scFv- CD8ecd- CD4transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggcggaggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaaacgacaac
cccggcccccagaccaccaacgccagcccccaccatcgccagccaacccctgtctctgagaccagaagcctgtaggcctg
ccgccggtggagctgtgcacacaagaggactggatttcgcctgtgatatggccctgattgtgctggggggcgtcgccggc
ctcctgcttttcattgggctaggcatcttcttcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttat
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gacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcag
gcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO:744)
(amino acids)
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YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
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GLLLFIGLGIFFKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNL
GRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHM
QALPPR* * (SEQ ID NO:745)
CAR-T E6 CD4/CD4/CD3z sequenceCAR23:
N-CD81s-huMNE6scFv- CD4ecd- CD4transmembrane- CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggggggggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaatcgggaca
ggtcctgctggaatccaacatcaaggttctgcccacatggtccaccccggtgcagccaatggccctgattgtgctggggg
gcgtcgccggcctcctgcttttcattgggctaggcatcttcttccgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgct
tacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggag
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agatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggc
ctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 7
46)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
IVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPED
FAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKSGQVLLESNIKVLPTWSTPVQPMALIVLGGVAGLLLFIGLGIFFRVKFSRSADAP
AYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQ
GLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 747)
CAR-T E6 CD4/CD4/CD28/CD3zsequence CAR25:
N-CD81s-huMNE6scFv- CD4ecd- CD4transmembrane- CD28- CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggggggggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaatcgggaca
ggtcctgctggaatccaacatcaaggttctgcccacatggtccaccccggtgcagccaatggccctgattgtgctggggg
gcgtcgccggcctcctgcttttcattgggctaggcatcttcttcagaagcaagcggtctcggctcctgcattctgattac
atgaacatgaccccaagaagaccaggccccaccaggaaacattaccagccctacgctccgccacgcgacttcgctgccta
ccggtcccgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctga
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ggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctcc
atatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 748)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
IVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPED
F AVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKSGQVLLESNIKVLPTWSTPVQPMALIVLGGVAGLLLFIGLGIFFRSKRSRLLHS
DYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKP
RRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO:74
9)
CAR-T E6 CD4/CD4/4-lBB/CD3z sequence CAR31:
N-CD81s-huMNE6scFv- CD4ecd- CD4transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggggggggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaatcgggaca
ggtcctgctggaatccaacatcaaggttctgcccacatggtccaccccggtgcagccaatggccctgattgtgctggggg
gcgtcgccggcctcctgcttttcattgggctaggcatcttcttcaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaag
cagccttttatgaggccagtacagacgactcaagaggaagacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagg
gtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagc
tgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgc
aggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaa
gggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccc
tccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 750)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
IVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPED
F AVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKSGQVLLESNIKVLPTWSTPVQPMALIVLGGVAGLLLFIGLGIFFKRGRKKLLYI
FKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGK
PRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO:7
51)
CAR-T E6 CD4/CD4/OX40/CD3zsequence:
N-CD81s-huMNE6scFv- CD4ecd- CD4transmembrane- OX40- CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggggggggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaatcgggaca
ggtcctgctggaatccaacatcaaggttctgcccacatggtccaccccggtgcagccaatggccctgattgtgctggggg
gcgtcgccggcctcctgcttttcattgggctaggcatcttcttccggagggaccagaggctgccccccgatgcccacaag
ccccctgggggaggcagtttccggacccccatccaagaggagcaggccgacgcccactccaccctggccaagatccgcgt
taagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagac
gggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccag
gagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacg
agggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcac
ttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 752)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
IVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPED
F AVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKSGQVLLESNIKVLPTWSTPVQPMALIVLGGVAGLLLFIGLGIFFRRDQRLPPDA
HKPPGGGSFRTPIQEEQADAHSTLAKIRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKN
PQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 753)
CAR-T E6 CD4/CD4/CD28/4-lBB/CD3z sequence CAR38 :
N-CD81s-huMNE6scFv- CD4ecd- CD4transmembrane- CD28- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggggggggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaatcgggaca
ggtcctgctggaatccaacatcaaggttctgcccacatggtccaccccggtgcagccaatggccctgattgtgctggggg
gcgtcgccggcctcctgcttttcattgggctaggcatcttcttcagaagcaagcggtctcggctcctgcattctgattac
atgaacatgaccccaagaagaccaggccccaccaggaaacattaccagccctacgctccgccacgcgacttcgctgccta
ccggtccaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatgaggccagtacagacgactcaagagg
aagacgggtgctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagccgac
gcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttgga
caaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgc
agaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctt
tatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ
ID NO: 754)
(amino acids)
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FAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKSGQVLLESNIKVLPTWSTPVQPMALIVLGGVAGLLLFIGLGIFFRSKRSRLLHSD
YMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSA
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(DNA)
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ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggggggggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaatcgggaca
ggtcctgctggaatccaacatcaaggttctgcccacatggtccaccccggtgcagccaatggccctgattgtgctggggg
gcgtcgccggcctcctgcttttcattgggctaggcatcttcttcagaagcaagcggtctcggctcctgcattctgattac
atgaacatgaccccaagaagaccaggccccaccaggaaacattaccagccctacgctccgccacgcgacttcgctgccta
ccggtcccggagggaccagaggctgccccccgatgcccacaagccccctgggggaggcagtttccggacccccatccaag
aggagcaggccgacgcccactccaccctggccaagatccgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaag
cagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgttggacaaacggagaggccg
cgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatgg
cagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtcc
acagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 756)
(amino acids)
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F AVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKSGQVLLESNIKVLPTWSTPVQPMALIVLGGVAGLLLFIGLGIFFRSKRSRLLHS
DYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRRDQRLPPDAHKPPGGGSFRTPIQEEQADAHSTLAKIRVKFSRSADAPA
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N-CD81s-huMNC2scFv- CD4ecd- CD4transmembrane- CD3zeta-C
(DNA)
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tatcctgactctgtaaaaggccgatttacgatttctcgcgacaatgcaaagaactccctctacctccaaatgaacagtct
tagggcagaagacactgctgtatactattgtgcacgcctcggcggcgacaactactacgagtactttgacgtgtggggga
aagggactaccgtgacagtttcaagcggaggaggtggctcaggtggaggcgggtcaggggggggaggaagtgatattgtg
ctcacacaatccccagcctccctggctgtgtctcccggccaacgcgctacaattacatgtcgggcctccaaaagcgtgag
caccagcggctacagctacatgcactggtatcaacagaaaccaggacaaccccccaaactgttgatttatctcgcttcaa
acttggagtccggcgtgcctgcgcgcttttcagggagtgggagcggcacagattttacgctgactatcaaccccgtagaa
gcaaacgatacagcgaattattattgtcaacattcccgggaactcccctttacgttcggcgggggcacaaaggtcgaaat
taagagaacctcgggacaggtcctgctggaatccaacatcaaggttctgcccacatggtccaccccggtgcagccaatgg
ccctgattgtgctggggggcgtcgccggcctcctgcttttcattgggctaggcatcttcttccgcgttaagttctcccga
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gacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtg
ataa (SEQ ID
NO: 758)
(amino acids)
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SRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGK
GHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 759)
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(amino acids) (SEQ ID NO:760)
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IVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINP
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SRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDP
EMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID
NO: 761)
CAR-T C2 CD4/CD4/4-lBB/CD3zsequence:
N-CD81s-huMNC2scFv- CD4ecd- CD4transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
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tgaggaggaggaaggagggtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgcttacaagcagggccaga
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atgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagctta
tagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaa
aagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 762)
(amino acids)
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YPDSVKGRFTI SRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSD
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KKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRD
PEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ I
DNO: 763)
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N-CD81s-huMNC2scFv- CD4ecd- CD4transmembrane- OX40- CD3zeta-C
(DNA)
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ccccccgatgcccacaagccccctgggggaggcagtttccggacccccatccaagaggagcaggccgacgcccactccac
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cgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaat
gaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacg
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(amino acids)
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YPDSVKGRFTI SRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSD
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RLPPDAHKPPGGGSFRTP IQEEQADAHSTLAKIRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMG
GKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO
:765)
CAR-T C2 CD4/CD4/CD28/4-lBB/CD3zsequence:
N-CD81s-huMNC2scFv- CD4ecd- CD4transmembrane- CD28- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
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aagggactaccgtgacagtttcaagcggaggaggtggctcaggtggaggcgggtcaggggggggaggaagtgatattgtg
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ctcctgcattctgattacatgaacatgaccccaagaagaccaggccccaccaggaaacattaccagccctacgctccgcc
acgcgacttcgctgcctaccggtccaaaaggggccgcaaaaaactcctttacatttttaagcagccttttatgaggccag
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agagtacgacgtgttggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagg
gactgtacaatgagttgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgaggg
aaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttcc
accacggtgataa (SEQ ID NO: 766)
(amino acids)
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YPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI
VLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPV
EANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRTSGQVLLESNIKVLPTWSTPVQPMALIVLGGVAGLLLFIGLGIFFRSKRS
RLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRV
KFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRR
GKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 767)
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tagggcagaagacactgctgtatactattgtgcacgcctcggcggcgacaactactacgagtactttgacgtgtggggga
aagggactaccgtgacagtttcaagcggaggaggtggctcaggtggaggcgggtcaggggggggaggaagtgatattgtg
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gacgcgcctgcttacaagcagggccagaaccaactgtacaacgagctgaatctcggtagacgggaagagtacgacgtgtt
ggacaaacggagaggccgcgacccagaaatgggcggcaagcctcgcaggaaaaacccccaggagggactgtacaatgagt
tgcagaaagataagatggcagaagcttatagcgagatcggaatgaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggc
ctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa(S
EQ ID NO:768)
(amino acids)
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YPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGGDNYYEYFDVWGKGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI
VLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPV
EANDTANYYCQHSRELPFTFGGGTKVEIKRTSGQVLLESNIKVLPTWSTPVQPMALIVLGGVAGLLLFIGLGIFFRSKRS
RLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRRDQRLPPDAHKPPGGGSFRTPIQEEQADAHSTLAKIRVKFSRS
ADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHD
GLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO : 769 )
CAR-T E6 IgD/FC/CD8/4-lBB/CD3z
N-CD81s-huMNE6scFv- IgD hinge-Human IgGl Fc- CD8 transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
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gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaagagtctcc
aaaggcacaggcctcctcagtgcccactgcacaaccccaagcagagggcagcctcgccaaggcaaccacagccccagcca
ccacccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggagaaggagaaagaggaacaagaagagagagagacaaag
acaccagagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagt
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gccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggag
gagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaa
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aggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctat
cccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactc
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tgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaaatctacatctgggcgccc
ttggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaaacggggcagaaagaaactcctgta
tatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaag
aagaaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtacaagcagggccagaaccagctc
tataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatgggggg
aaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgaga
ttgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacc
tacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctgataa (SEQ ID NO: 770)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSE
IVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPED
FAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERET
KTPEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR
E EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK
GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKIYI
WAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQ
NQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTAT
KDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 771)
CAR-T E6 IgD/FCHingelessY407R/CD8/4-lBB/CD3z
N-CD81S- huMNE6scFv- IgD hinge-Human IgGl hingeless Fc Y407R- CD8
transmembrane- 4-1BB- CD3zeta-C
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggttga
gagtggcggtgggctggttaagcctggcggctccctgcggctgagctgcgccgcgagtggatttactttcagccgatatg
ggatgagttgggtgcggcaagctcccgggaagaggctggaatgggtctcaacaatctccggggggggcacttacatctat
taccccgactcagtcaaggggagatttaccatttcacgagacaacgctaagaataccctgtatttgcagatgaattctct
gagagcagaggacacagctgtttactattgtacccgcgacaactatggcaggaactacgactacggtatggactattggg
gacaagggacattggttacagtgagcagtggcggcgggggcagcggaggaggaggcagcggtggcggaggcagcgagata
gtgctcacgcagtcacccgcgactctcagtctctcacctggggaacgagctaccctgacgtgctctgctacctcctcagt
gtcatatattcactggtatcagcaacggcccgggcagtcccctagattgctcatttatagtacctctaatctggcctcag
gtatccctgcacgattttctggatctggttcaggttctgattacaccctcactatctctagcctggagcctgaagacttt
gccgtttattactgccagcagaggtctagctccccattcacctttgggagtgggaccaaggttgaaattaaagagtctcc
aaaggcacaggcctcctcagtgcccactgcacaaccccaagcagagggcagcctcgccaaggcaaccacagccccagcca
ccacccgtaacacaggaagaggcggcgaagagaagaaaaaggagaaggagaaagaggaacaagaagagagagagacaaag
acaccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccg
gacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcg
tggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtc
ctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaac
catctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaacc
aggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggag
aacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctcaggagcaagctcaccgtggacaagag
caggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctct
ccctgtctccgggtaaaatctacatctgggcgcccttggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttatcacc
ctttactgcaaacggggcagaaagaaactcctgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaaga
ggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaactgagagtgaagttcagcaggagcgcag
acgcccccgcgtacaagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttg
gacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaact
gcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcc
tttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctgataa (S
EQ ID NO: 772)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKRLEWVSTISGGGTYIY
YPDSVKGRFTI SRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGS
EIVLTQSPATLSLSPGERATLTCSATSSVSYIHWYQQRPGQSPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGSDYTLTISSLEPE
DFAVYYCQQRSSSPFTFGSGTKVEIKESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERE
TKTPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAP IEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESN
GQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLRSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKIYIWAPLAGTCGVLLLS
LVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREE
YDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPP
R** (SEQ ID NO:773)
NFATclP2—MMP9
(DNA)
caggcctggggacactcgcggcgggaagatttggaggggaggggagggggaggggcgtgggggcgcggcctcgctggagt
ccccctgaccccccgacccccgcccaccggcctgggcgtcctcccgcggcccctcctcccctcccggcgcccggtgctct
ggggcgcgtgccacgcctggctcggcgccgtaggggcccccgcaggtagagacccctggaaatggcctcgacgccgcagg
agcgaggcggccaccaccccgctaatccgggcacgtctctccaggccgaggcctgcggtggaaaagccggggttccattt
gtgctgagtcggggcggccgaatggagccaggcctcgggacgcgggacggacgggctctggccgcgcaccttcgcgggct
ctgcagcgcccgaccgcctcccccggcagggaggaggcgcttgtggggggcacccacggggcacagtgatccctgggggt
ctgcggacctcctgggccccgcagcagacacgagtttagcctttgggtttagtttaaatcacataagggtgtcgtgcaat
cgatttatggtttctacacaccagacactttaacctccaaccccccccatccaaagccaacaagaaaatgcggtgccgtg
ttggcagctgagctgcgcccgaagagacgcagggagacgtaagagaggaaagtgtgagtggccggggggcctccccccgt
cagaagtcgcgcagtcgcgcccataaaacgccccctccgggcggctagggcaggtgagcgcgtccccgggcctccccacg
ccggcccctgccacaggccgtctaggtcgagcagatatttacagaataaaaatgacaataactcgacgtcccgggacggc
cacgcaatctgttagtaatttagcgggatgggaatttcctttctagggcctgccagtgaagcgcttttccaaatttccac
agcgggggaagcctgcgattttacataatgacttcagcatgccgggctttctcgacacccctccccggcccccggccccc
gccccccgccccttttccagcagggccgggctccctccggacacccgcgtggactcaggcgtcccgtctggcccgttcgc
ccccgtttcccccgccagccccagcgcccccctgcccggcccccggattccccgttcccgcccctacgcccccatcccct
ccccgtgcgcccctccccgtgcgcccccctccccgtgcgccccccctccccgtgcgcccccctccccgtgcgccccccct
ccccgggcgcccccctccccgggcgccccccctccccgtgcgcccccccctccccgtgcgccccccctccccgtgcgcgc
cccgcctcttgcgcccctgcccccaggcgagcggctgccgcggcgcggggaggggcgggcgctcggcgactcgtccccgg
ggccccgcgcgggcccgggcagcaggggcgtgatgtcacggcagggagggggcgcgggagccgccgggccggcggggagg
cgggggaggtgttttccagctttaaaaaggcaggaggcagagcgcggccctgcgtcagagcgagactcagaggctccgaa
ctcgccggcggagtcgccgcgccagatcccagcagcagggcgcggaagcttctctcgacattcgtttctagagccaccat
gagcctctggcagcccctggtcctggtgctcctggtgctgggctgctgctttgctgcccccagacagcgccagtccaccc
ttgtgctcttccctggagacctgagaaccaatctcaccgacaggcagctggcagaggaatacctgtaccgctatggttac
actcgggtggcagagatgcgtggagagtcgaaatctctggggcctgcgctgctgcttctccagaagcaactgtccctgcc
cgagaccggtgagctggatagcgccacgctgaaggccatgcgaaccccacggtgcggggtcccagacctgggcagattcc
aaacctttgagggcgacctcaagtggcaccaccacaacatcacctattggatccaaaactactcggaagacttgccgcgg
gcggtgattgacgacgcctttgcccgcgccttcgcactgtggagcgcggtgacgccgctcaccttcactcgcgtgtacag
ccgggacgcagacatcgtcatccagtttggtgtcgcggagcacggagacgggtatcccttcgacgggaaggacgggctcc
tggcacacgcctttcctcctggccccggcattcagggagacgcccatttcgacgatgacgagttgtggtccctgggcaag
ggcgtcgtggttccaactcggtttggaaacgcagatggcgcggcctgccacttccccttcatcttcgagggccgctccta
ctctgcctgcaccaccgacggtcgctccgacggcttgccctggtgcagtaccacggccaactacgacaccgacgaccggt
ttggcttctgccccagcgagagactctacacccaggacggcaatgctgatgggaaaccctgccagtttccattcatcttc
caaggccaatcctactccgcctgcaccacggacggtcgctccgacggctaccgctggtgcgccaccaccgccaactacga
ccgggacaagctcttcggcttctgcccgacccgagctgactcgacggtgatggggggcaactcggcgggggagctgtgcg
tcttccccttcactttcctgggtaaggagtactcgacctgtaccagcgagggccgcggagatgggcgcctctggtgcgct
accacctcgaactttgacagcgacaagaagtggggcttctgcccggaccaaggatacagtttgttcctcgtggcggcgca
tgagttcggccacgcgctgggcttagatcattcctcagtgccggaggcgctcatgtaccctatgtaccgcttcactgagg
ggccccccttgcataaggacgacgtgaatggcatccggcacctctatggtcctcgccctgaacctgagccacggcctcca
accaccaccacaccgcagcccacggctcccccgacggtctgccccaccggaccccccactgtccacccctcagagcgccc
cacagctggccccacaggtcccccctcagctggccccacaggtccccccactgctggcccttctacggccactactgtgc
ctttgagtccggtggacgatgcctgcaacgtgaacatcttcgacgccatcgcggagattgggaaccagctgtatttgttc
aaggatgggaagtactggcgattctctgagggcagggggagccggccgcagggccccttccttatcgccgacaagtggcc
cgcgctgccccgcaagctggactcggtctttgaggagcggctctccaagaagcttttcttcttctctgggcgccaggtgt
gggtgtacacaggcgcgtcggtgctgggcccgaggcgtctggacaagctgggcctgggagccgacgtggcccaggtgacc
ggggccctccggagtggcagggggaagatgctgctgttcagcgggcggcgcctctggaggttcgacgtgaaggcgcagat
ggtggatccccggagcgccagcgaggtggaccggatgttccccggggtgcctttggacacgcacgacgtcttccagtacc
gagagaaagcctatttctgccaggaccgcttctactggcgcgtgagttcccggagtgagttgaaccaggtggaccaagtg
ggctacgtgacctatgacatcctgcagtgccctgaggacgattacaaggatgacgacgataagtgataa (SEQ ID NO
: 774)
NFATclP2-MMP9cat
(DNA)
caggcctggggacactcgcggcgggaagatttggaggggaggggagggggaggggcgtgggggcgcggcctcgctggagt
ccccctgaccccccgacccccgcccaccggcctgggcgtcctcccgcggcccctcctcccctcccggcgcccggtgctct
ggggcgcgtgccacgcctggctcggcgccgtaggggcccccgcaggtagagacccctggaaatggcctcgacgccgcagg
agcgaggcggccaccaccccgctaatccgggcacgtctctccaggccgaggcctgcggtggaaaagccggggttccattt
gtgctgagtcggggcggccgaatggagccaggcctcgggacgcgggacggacgggctctggccgcgcaccttcgcgggct
ctgcagcgcccgaccgcctcccccggcagggaggaggcgcttgtggggggcacccacggggcacagtgatccctgggggt
ctgcggacctcctgggccccgcagcagacacgagtttagcctttgggtttagtttaaatcacataagggtgtcgtgcaat
cgatttatggtttctacacaccagacactttaacctccaaccccccccatccaaagccaacaagaaaatgcggtgccgtg
ttggcagctgagctgcgcccgaagagacgcagggagacgtaagagaggaaagtgtgagtggccggggggcctccccccgt
cagaagtcgcgcagtcgcgcccataaaacgccccctccgggcggctagggcaggtgagcgcgtccccgggcctccccacg
ccggcccctgccacaggccgtctaggtcgagcagatatttacagaataaaaatgacaataactcgacgtcccgggacggc
cacgcaatctgttagtaatttagcgggatgggaatttcctttctagggcctgccagtgaagcgcttttccaaatttccac
agcgggggaagcctgcgattttacataatgacttcagcatgccgggctttctcgacacccctccccggcccccggccccc
gccccccgccccttttccagcagggccgggctccctccggacacccgcgtggactcaggcgtcccgtctggcccgttcgc
ccccgtttcccccgccagccccagcgcccccctgcccggcccccggattccccgttcccgcccctacgcccccatcccct
ccccgtgcgcccctccccgtgcgcccccctccccgtgcgccccccctccccgtgcgcccccctccccgtgcgccccccct
ccccgggcgcccccctccccgggcgccccccctccccgtgcgcccccccctccccgtgcgccccccctccccgtgcgcgc
cccgcctcttgcgcccctgcccccaggcgagcggctgccgcggcgcggggaggggcgggcgctcggcgactcgtccccgg
ggccccgcgcgggcccgggcagcaggggcgtgatgtcacggcagggagggggcgcgggagccgccgggccggcggggagg
cgggggaggtgttttccagctttaaaaaggcaggaggcagagcgcggccctgcgtcagagcgagactcagaggctccgaa
ctcgccggcggagtcgccgcgccagatcccagcagcagggcgcggaagcttctctcgacattcgtttctagagccaccat
gagcctctggcagcccctggtcctggtgctcctggtgctgggctgctgctttgctttccaaacctttgagggcgacctca
agtggcaccaccacaacatcacctattggatccaaaactactcggaagacttgccgcgggcggtgattgacgacgccttt
gcccgcgccttcgcactgtggagcgcggtgacgccgctcaccttcactcgcgtgtacagccgggacgcagacatcgtcat
ccagtttggtgtcgcggagcacggagacgggtatcccttcgacgggaaggacgggctcctggcacacgcctttcctcctg
gccccggcattcagggagacgcccatttcgacgatgacgagttgtggtccctgggcaagggcgtcgtggttccaactcgg
tttggaaacgcagatggcgcggcctgccacttccccttcatcttcgagggccgctcctactctgcctgcaccaccgacgg
tcgctccgacggcttgccctggtgcagtaccacggccaactacgacaccgacgaccggtttggcttctgccccagcgaga
gactctacacccaggacggcaatgctgatgggaaaccctgccagtttccattcatcttccaaggccaatcctactccgcc
tgcaccacggacggtcgctccgacggctaccgctggtgcgccaccaccgccaactacgaccgggacaagctcttcggctt
ctgcccgacccgagctgactcgacggtgatggggggcaactcggcgggggagctgtgcgtcttccccttcactttcctgg
gtaaggagtactcgacctgtaccagcgagggccgcggagatgggcgcctctggtgcgctaccacctcgaactttgacagc
gacaagaagtggggcttctgcccggaccaaggatacagtttgttcctcgtggcggcgcatgagttcggccacgcgctggg
cttagatcattcctcagtgccggaggcgctcatgtaccctatgtaccgcttcactgaggggccccccttgcataaggacg
acgtgaatggcatccggcacctctatggtcctcgccctgaacctgattacaaggatgacgacgataagtgataa (SEQ
ID NO: 775)
NFAT response element 2
(DNA)
aagaggaaaatttgtttcatacagaaggcgtt(SEQ ID NO: 776)
NFAT response element 2 repeats
(DNA)
aagaggaaaatttgtttcatacagaaggcgttaagaggaaaatttgtttcatacagaaggcgttaagaggaaaatttgtt
tcatacagaaggcgttaagaggaaaatttgtttcatacagaaggcgtt (SEQ ID NO: 777)
CMV minimal promoter 2
(DNA)
taggcgtgtacggtgggaggcctatataagcagagctcgtttagtgaaccgtcagatcgcctggagacgccatccacgct
gttttgacctccatagaagacaccgggaccgatccagc (SEQ ID NO: 778)
NFATRE2mCMV2-MMP9
(DNA)
aagaggaaaatttgtttcatacagaaggcgttaagaggaaaatttgtttcatacagaaggcgttaagaggaaaatttgtt
tcatacagaaggcgttaagaggaaaatttgtttcatacagaaggcgttactagttaggcgtgtacggtgggaggcctata
taagcagagctcgtttagtgaaccgtcagatcgcctggagacgccatccacgctgttttgacctccatagaagacaccgg
gaccgatccagcctctcgacattcgtttctagagccaccatgagcctctggcagcccctggtcctggtgctcctggtgct
gggctgctgctttgctgcccccagacagcgccagtccacccttgtgctcttccctggagacctgagaaccaatctcaccg
acaggcagctggcagaggaatacctgtaccgctatggttacactcgggtggcagagatgcgtggagagtcgaaatctctg
gggcctgcgctgctgcttctccagaagcaactgtccctgcccgagaccggtgagctggatagcgccacgctgaaggccat
gcgaaccccacggtgcggggtcccagacctgggcagattccaaacctttgagggcgacctcaagtggcaccaccacaaca
tcacctattggatccaaaactactcggaagacttgccgcgggcggtgattgacgacgcctttgcccgcgccttcgcactg
tggagcgcggtgacgccgctcaccttcactcgcgtgtacagccgggacgcagacatcgtcatccagtttggtgtcgcgga
gcacggagacgggtatcccttcgacgggaaggacgggctcctggcacacgcctttcctcctggccccggcattcagggag
acgcccatttcgacgatgacgagttgtggtccctgggcaagggcgtcgtggttccaactcggtttggaaacgcagatggc
gcggcctgccacttccccttcatcttcgagggccgctcctactctgcctgcaccaccgacggtcgctccgacggcttgcc
ctggtgcagtaccacggccaactacgacaccgacgaccggtttggcttctgccccagcgagagactctacacccaggacg
gcaatgctgatgggaaaccctgccagtttccattcatcttccaaggccaatcctactccgcctgcaccacggacggtcgc
tccgacggctaccgctggtgcgccaccaccgccaactacgaccgggacaagctcttcggcttctgcccgacccgagctga
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gtaccagcgagggccgcggagatgggcgcctctggtgcgctaccacctcgaactttgacagcgacaagaagtggggcttc
tgcccggaccaaggatacagtttgttcctcgtggcggcgcatgagttcggccacgcgctgggcttagatcattcctcagt
gccggaggcgctcatgtaccctatgtaccgcttcactgaggggccccccttgcataaggacgacgtgaatggcatccggc
acctctatggtcctcgccctgaacctgagccacggcctccaaccaccaccacaccgcagcccacggctcccccgacggtc
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gcgtgagttcccggagtgagttgaaccaggtggaccaagtgggctacgtgacctatgacatcctgcagtgccctgaggac
gattacaaggatgacgacgataagtgataa(SEQ ID NO:779)
NFATRE2mCMV2-MMP9cat
(DNA)
aagaggaaaatttgtttcatacagaaggcgttaagaggaaaatttgtttcatacagaaggcgttaagaggaaaatttgtt
tcatacagaaggcgttaagaggaaaatttgtttcatacagaaggcgttactagttaggcgtgtacggtgggaggcctata
taagcagagctcgtttagtgaaccgtcagatcgcctggagacgccatccacgctgttttgacctccatagaagacaccgg
gaccgatccagcctcgagctctcgacattcgtttctagagccaccatgagcctctggcagcccctggtcctggtgctcct
ggtgctgggctgctgctttgctttccaaacctttgagggcgacctcaagtggcaccaccacaacatcacctattggatcc
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gccctgaacctgattacaaggatgacgacgataagtgataa (SEQ ID NO :780)
NFATcl Promoter fragment (PI)
(DNA)
aggcaggaggaagaggaaaggggcgcagggcgctcggggagcagagccgggggcccgcggtggccgcagaggccgggccg
gggcgcagaggccgggcgagctggccgcgctctgggccgccgcctccggaactccctgcgcctggcgcgcggccaccgtg
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gcagacaggaaaagggagcttttctgcatggggtgaaaaaattatttattgaaggaggaggaggcggcagcggaggaagg
ggaggggcgggaggaggaggaagagccggccgcccccgccccggccccggctcctcaggagccaagggcagcctcgccag
gtcggtcccgggctcgaggaccgcggctggggtcgaggggctcagtctcccacgtgaccggctgggcgcgccccgccaga
cccggcctcgggattccctcctcccggcgagtctccgcccgccccgtcctggaggtggggagaaggagggcggggcgggg
gggacggaaactctccccgccaaatcctggccccaggcctggggacactcgcggcgggaagatttggaggggaggggagg
gggaggggcgtgggggcgcggcctcgctggagtccccctgaccccccgacccccgcccaccggcctgggcgtcctcccgc
ggcccctcctcccctcccggcgcccggtgctctggggcgcgtgccacgcctggctcggcgccgtaggggcccccgcaggt
agagacccctggaaatggcctcgacgccgcaggagcgaggcggccaccaccccgctaatccgggcacgtctctccaggcc
gaggcctgcggtggaaaagccggggttccatttgtgctgagtcggggcggccgaatggagccaggcctcgggacgcggga
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tttagtttaaatcacataagggtgtcgtgcaatcgatttatggtttctacacaccagacactttaacctccaaccccccc
catccaagccaacaagaaaatgcggtgccgtgttggcagctgagctgcgcccgaagagacgcagggagacgtaagagagg
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ggcaggtgagcgcgtccccgggcctccccacgccggcccctgccacagagccgtctaggtcgagcagatatttacagaat
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ccctccccgtgcgccccccctccccgtgcgcgccccgcctcttgcgcccctgcccccaggcgagcggctgccgcggcgcg
gggaggggcgggcgctcggcgactcgtccccggggccccgcgcgggcccgggcagcaggggcgtgatgtcacggcaggga
gggggcgcgggagccgccgggccggcggggaggcgggggaggtgttttccagctttaaaaaggcaggaggcagagcgcgg
ccctgcgtcagagcgagactcagaggctccgaactcgccggcggagtcgccgcgccagatcccagcagcagggcgcgg(S
EQ ID NO:781)
NFATcl Promoter fragment
(DNA)
aggcaggaggaagaggaaaggggcgcagggcgctcggggagcagagccgggggcccgcggtggccgcagaggccgggccg
gggcgcagaggccgggcgagctggccgcgctctgggccgccgcctccggaactccctgcgcctggcgcgcggccaccgtg
gtcccggcaacggcattaaacagagggaaacagacccgggattccgtcacccgggcggggggataaggacggctttgaga
gcagacaggaaaagggagcttttctgcatggggtgaaaaaattatttattgaaggaggaggaggcggcagcggaggaagg
ggaggggcgggaggaggaggaagagccggccgcccccgccccggccccggctcctcaggagccaagggcagcctcgccag
gtcggtcccgggctcgaggaccgcggctggggtcgaggggctcagtctcccacgtgaccggctgggcgcgccccgccaga
cccggcctcgggattccctcctcccggcgagtctccgcccgccccgtcctggaggtggggagaaggagggcggggcgggg
gggacggaaactctccccgccaaatcctggccccaggcctggggacactcgcggcgggaagatttggaggggaggggagg
gggaggggcgtgggggcgcggcctcgctggagtccccctgaccccccgacccccgcccaccggcctgggcgtcctcccgc
ggcccctcctcccctcccggcgcccggtgctctggggcgcgtgccacgcctggctcggcgccgtaggggcccccgcaggt
agagacccctggaaatggcctcgacgccgcaggagcgaggcggccaccaccccgctaatccgggcacgtctctccaggcc
gaggcctgcggtggaaaagccggggttccatttgtgctgagtcggggcggccgaatggagccaggcctcgggacgcggga
cggacgggctctggccgcgcaccttcgcgggctctgcagcgcccgaccgcctcccccggcagggaggaggcgcttgtggg
gggcacccacggggcacagtgatccctgggggtctgcggacctcctgggccccgcagcagacacgagtttagcctttggg
tttagtttaaatcacataagggtgtcgtgcaatcgatttatggtttctacacaccagacactttaacctccaaccccccc
catccaagccaacaagaaaatgcggtgccgtgttggcagctgagctgcgcccgaagagacgcagggagacgtaagagagg
aaagtgtgagtggccggggggcctccccccgtcagaagtcgcgcagtcgcgcccataaaacgccccctccgggcggctag
ggcaggtgagcgcgtccccgggcctccccacgccggcccctgccacagagccgtctaggtcgagcagatatttacagaat
aaaaatgacaataactcgacgtcccgggacggccacgcaatctgttagtaatttagcgggatgggaatttcctttctagg
gcctgccagtgaagcgcttttccaaatttccacagcgggggaagcctgcgattttacataatgacttcagcatgccgggc
tttctcgacacccctccccggcccccggcccccgccccccgccccttttccagcagggccgggctccctccggacacccg
cgtggactcaggcgtcccgtctggcccgttcgcccccgtttcccccgccagccccagcgcccccctgcccggcccccgga
ttccccgttcccgcccctacgcccccatcccctccccgtgcgcccctccccgtgcgcccccctccccgtgcgccccccct
ccccgtgcgcccccctccccgtgcgccccccctccccgggcgcccccctccccgggcgccccccctccccgtgcgccccc
ccctccccgtgcgccccccctccccgtgcgcgccccgcctcttgcgcccctgcccccaggcgagcggctgccgcggcgcg
gggaggggcgggcgctcggcgactcgtccccggggccccgcgcgggcccgggcagcaggggcgtgatgtcacggcaggga
gggggcgcgggagccgccgggccggcggggaggcgggggaggtgttttccagctttaaaaaggcaggaggcagagcgcgg
ccctgcgtcagagcgagactcagagg (SEQ ID NO: 782)
NFATcl Promoter fragment (P3)
(DNA)
caggcctggggacactcgcggcgggaagatttggaggggaggggagggggaggggcgtgggggcgcggcctcgctggagt
ccccctgaccccccgacccccgcccaccggcctgggcgtcctcccgcggcccctcctcccctcccggcgcccggtgctct
ggggcgcgtgccacgcctggctcggcgccgtaggggcccccgcaggtagagacccctggaaatggcctcgacgccgcagg
agcgaggcggccaccaccccgctaatccgggcacgtctctccaggccgaggcctgcggtggaaaagccggggttccattt
gtgctgagtcggggcggccgaatggagccaggcctcgggacgcgggacggacgggctctggccgcgcaccttcgcgggct
ctgcagcgcccgaccgcctcccccggcagggaggaggcgcttgtggggggcacccacggggcacagtgatccctgggggt
ctgcggacctcctgggccccgcagcagacacgagtttagcctttgggtttagtttaaatcacataagggtgtcgtgcaat
cgatttatggtttctacacaccagacactttaacctccaaccccccccatccaaagccaacaagaaaatgcggtgccgtg
ttggcagctgagctgcgcccgaagagacgcagggagacgtaagagaggaaagtgtgagtggccggggggcctccccccgt
cagaagtcgcgcagtcgcgcccataaaacgccccctccgggcggctagggcaggtgagcgcgtccccgggcctccccacg
ccggcccctgccacaggccgtctaggtcgagcagatatttacagaataaaaatgacaataactcgacgtcccgggacggc
cacgcaatctgttagtaatttagcgggatgggaatttcctttctagggcctgccagtgaagcgcttttccaaatttccac
agcgggggaagcctgcgattttacataatgacttcagcatgccgggctttctcgacacccctccccggcccccggccccc
gccccccgccccttttccagcagggccgggctccctccggacacccgcgtggactcaggcgtcccgtctggcccgttcgc
ccccgtttcccccgccagccccagcgcccccctgcccggcccccggattccccgttcccgcccctacgcccccatcccct
ccccgtgcgcccctccccgtgcgcccccctccccgtgcgccccccctccccgtgcgcccccctccccgtgcgccccccct
ccccgggcgcccccctccccgggcgccccccctccccgtgcgcccccccctccccgtgcgccccccctccccgtgcgcgc
cccgcctcttgcgcccctgcccccaggcgagcggctgccgcggcgcggggaggggcgggcgctcggcgactcgtccccgg
ggccccgcgcgggcccgggcagcaggggcgtgatgtcacggcagggagggggcgcgggagccgccgggccggcggggagg
cgggggaggtgttttccagctttaaaaaggcaggaggcagagcgcggccctgcgtcagagcgagactcagaggctccgaa
ctcgccggcggagtcgccgcgccagatcccagcagcagggcgcgg (SEQ ID NO: 783)
pNFAT-MMP9cat-1 gBLOCK sequence
(DNA)
aagaggaaaatttgtttcatacagaaggcgttactagttaggcgtgtacggtgggaggcctatataagcagagctcgttt
agtgaaccgtcagatcgcctggagacgccatccacgctgttttgacctccatagaagacaccgggaccgatccagcctct
cgacattcgtttctagagccaccatgagcctctggcagcccctggtcctggtgctcctggtgctgggctgctgctttgct
ttccaaacctttgagggcgacctcaagtggcaccaccacaacatcacctattggatccaaaactactcggaagacttgcc
gcgggcggtgattgacgacgcctttgcccgcgccttcgcactgtggagcgcggtgacgccgctcaccttcactcgcgtgt
acagccgggacgcagacatcgtcatccagtttggtgtcgcggagcacggagacgggtatcccttcgacgggaaggacggg
ctcctggcacacgcctttcctcctggccccggcattcagggagacgcccatttcgacgatgacgagttgtggtccctggg
caagggcgtcgtggttccaactcggtttggaaacgcagatggcgcggcctgccacttccccttcatcttcgagggccgct
cctactctgcctgcaccaccgacggtcgctccgacggcttgccctggtgcagtaccacggccaactacgacaccgacgac
cggtttggcttctgccccagcgagagactctacacccaggacggcaatgctgatgggaaaccctgccagtttccattcat
cttccaaggccaatcctactccgcctgcaccacggacggtcgctccgacggctaccgctggtgcgccaccaccgccaact
acgaccgggacaagctcttcggcttctgcccgacccgagctgactcg (SEQ ID NO: 784)
pNFAT-MMP9ca -2 gBLOCK sequence:
(DNA)
ttcggcttctgcccgacccgagctgactcgacggtgatggggggcaactcggcgggggagctgtgcgtcttccccttcac
tttcctgggtaaggagtactcgacctgtaccagcgagggccgcggagatgggcgcctctggtgcgctaccacctcgaact
ttgacagcgacaagaagtggggcttctgcccggaccaaggatacagtttgttcctcgtggcggcgcatgagttcggccac
gcgctgggcttagatcattcctcagtgccggaggcgctcatgtaccctatgtaccgcttcactgaggggccccccttgca
taaggacgacgtgaatggcatccggcacctctatggtcctcgccctgaacctgattacaaggatgacgacgataagtgat
aagctagctcgactcgacaatcaacctctggattacaaaatttgtgaaagattgactggtattcttaactatgttgctcc
ttttacgctatgtggatacgctgctttaatgcctttgtatcatgctattgcttcccgtatggctttcattttctcctcct
tgtataaatcctggttgctgtctctttatgaggagttgtggcccgttgtcaggcaacgtggcgtggtgtgcactgtgttt
gctgacgcaacccccactggttggggcattgccaccacctgtcagctcctttccgggactttcgctttccccctccctat
tgccacggcggaactcatcgccgcctgccttgcccgctgctggacaggggctcggctgttgggcactgacaattccgtgg
tgttgtcggggaaatcatcgtcctttccttggctgctcgcctgtgttgccacctggattctgcgcgggacgtccttctgc
tacgtcccttcggccctcaatccagcggaccttccttcccgcggcctgctgccggctctgcggcctcttccgcatcttcg
ccttcgccctcagacgagtcggatctccctttgggccgcctccccgcctggaattaattcgagctcggtacctttaagac
caatgacttacaaggcagctgtag (SEQ ID NO: 785)
Primer
(DNA)
tagatggtaccaagaggaaaatttgtttcatacag(SEQ ID NO: 786)
Primer
(DNA)
tagataagcttgctggatcggtcccggtgtc(SEQ ID NO: 787)
Primer
(DNA)
tcatacagaaggcgttactagttaggcgtgtacggtgg(SEQ ID NO: 788)
Primer
(DNA)
acagtaccggattgccaagcttttatcacttatcgtcgtcatccttg(SEQ ID NO: 789)
Primer
(DNA)
aagttggtaccgttccaaacctttgagggcgacc(SEQ ID NO: 790)
Primer
(DNA)
aagttctcgagcaggttcagggcgaggaccatag(SEQ ID NO: 791)
Primer
(DNA)
attgactcgagctctcgacattcgtttctagagc(SEQ ID NO: 792)
Primer
(DNA)
attgaaagcttttatcacttatcgtcgtcatccttg(SEQ ID NO: 793)
Primer
(DNA)
tagcaaaataggctgtccc (SEQ ID NO:794)
Primer
(DNA)
attgactcgaggctggatcggtcccggtgtc(SEQ ID NO: 795)
Primer
(DNA)
aagacaccgggaccgatccagcctcgagagacccaagctggctagccacc(SEQ ID NO: 796)
Primer
(DNA)
ttaccaacagtaccggattgccaagcttttatcacttatcgtcgtcatcc(SEQ ID NO: 797)
Primer
(DNA)
attgaaagcttctctcgacattcgtttctagagc(SEQ ID NO: 798)
Primer
(DNA)
attgagagctcttatcacttatcgtcgtcatc(SEQ ID NO: 799)
NFAT modif 1 gBLOCK sequence:
(DNA)
attctgtggataaccgtattaccgctagcatggatctcggggacgtctaactactaagcgagagtagggaactgccaggc
atcaaataaaacgaaaggctcagtcggaagactgggcctttcgttttatctgttgtttgtcggtgaacgctctcctgagt
aggacaaatccgccgggagcggatttgaacgttgtgaagcaacggcccggagggtggcgggcaggacgcccgccataaac
tgccaggcatcaaactaagcagaaggccatcctgacggatggcctttttgcgtttctacaaactcttcctgttagttagt
tacttaagctcgggccccaaattatgattttgttctgactgatagtgacctgttcgttgcaacaaattgataagcaatgc
ttttttataatgccaactttgtacaaaaaagcaggcttcgctgtgccttctagttgccagccatctgttgtttgcccctc
ccccgtgccttccttgaccctggaaggtgccactcccactgtcctttcctaataaaatgaggaaattgcatcgcattgtc
tgagtaggtgtcattctattctggggggtggggtggggcaggacagcaagggggaggattgggaagacaatagcaggcat
gctggggatgcggtgggctctatggttcgaaggagatagaaccagatcttgactagtggtaccgaattccaggcctgggg
acactcgcggcgggaa (SEQ ID NO: 800)
NFAT modif 2 gBLOCK sequences :
(DNA)
acaaggatgacgacgataagtgataagagctcgctagcgatatcgccaccatgggggtaaaagttcttttcgcgcttatc
tgtatcgcggttgcagaagctaaaccaacagaaaataatgaagactttaacattgttgccgtggcatcgaacttcgccac
aaccgatttggacgctgatcgcgggaaactgcccggcagccaccacggctcgcaaagctcggtttgcccggacttgcacc
gttgtgggcgcgggcaagcgcatcgtgagcagcgtcgcttgcagcaccgtgggcgcggccagcaattacgcgaccacgga
agccgttgttaaccacgcgaagtagcacgtcaagaagctgccgctggaggtgctcaaagagctggaagccaatgcccgga
aagctggctgcaccaggggctgtctgatctgcctgtcccacatcaagtgcacgcccaagatgaagaagttcatcccagga
cgctgccacacctacgaaggcgacaaagagtccgcacagggcggcataggcgaggcgatcgtcgacattcctgagattcc
tgggttcaaggacttggagcccctggagcagttcatcgcacaggtcgatctgtgtgtggactgcacaactggctgcctca
aagggcttgccaacgtgcagtgttctgacctgctcaagaagtggctgccgcaacgctgtgcgacctttgccagcaagatc
cagggccaggtggacaagatcaagggggccggtggtgactaagcggccgctcgagcatgcatctagaaataattcttact
gt (SEQID NO: 801)
Primer
(DNA)
acaaaattcaaaattttatcgatactagttggcctaactggccggtaccaag(SEQ ID NO: 802)
Primer
(DNA)
atccgatttaaattcgaattcgctagcttatcacttatcgtcgtcatcc(SEQ ID NO: 803)
NFAT consensus sequence :
(A/T) GGAAA (A/N) (A/T/C) N (SEQID NO:804)
Current NFAT RE (Form SystemBiosciences . The sequence is from the mouse IL2 pro
moter
(DNA)
aagaggaaaatttgtttcatacagaaggcgtt(SEQ ID NO: 805)
Mouse IL2 Promoter (highlightedin green the NFAT RE used, highlighted in yellow
is the start codon)
(DNA)
aactagagacatataaaataacaccaacatccttagatacaacccttcctgagaatttattggacatcatactcttttta
aaaagcataataaacatcaagacacttacacaaaatatgttaaattaaatttaaaacaacaacgacaaaatagtacctca
agctcaacaagcattttaggtgtccttagcttactatttctctggctaactgtatgaagccatctatcaccctgtgtgca
attagctcattgtgtagataagaaggtaaaaccatcttgaaacaggaaaccaatatccttcctgtctaatcaacaaatct
aaaagatttattcttttcatctatctcctcttgcgtttgtccaccacaacaggctgcttacaggttcaggatggttttga
caaagagaacattttcatgagttacttttgtgtctccaccccaaagaggaaaatttgtttcatacagaaggcgttcattg
tatgaattaaaactgccacctaagtgtgggctaacccgaccaagagggatttcacctaaatccattcagtcagtgtatgg
gggtttaaagaaattccagagagtcatcagaagaggaaaaacaaaaggtaatgctttctgccacacaggtagactctttg
aaaatatgtgtaatatgtaaaacatcgtgacacccccatattatttttccagcattaacagtataaattgcctcccatgc
tgaagagctgcctatcacccttgctaatcactcctcacagtgacctcaagtcctgcaggcatgtacagcatgcagctcgc
atcctgtgtcac (SEQ ID NO: 806)
NFAT RE (Form PRomega. Thesequence is from the humane IL2 promoter
(DNA)
ggaggaaaaactgtttcatacagaaggcgt(SEQ ID NO: 807)
Possible NFAT RE from ET-1promoter
(DNA)
tccagggaaaatcggagtagaacaagagggatg(SEQ ID NO: 808)
Possible NFAT RE from ET-1promoter
(DNA)
actgttggaaaacgtaaacacgttattaaacggt(SEQ ID NO: 809)
Possible NFAT RE from human CD3Y
(DNA)
tccttaacggaaaaacaaaa (SEQ ID NO:810)
Possible NFAT RE from human CD3Y
(DNA)
aaaggaaaaagtatatgttc (SEQ ID NO:811)
Possible NFAT RE from human IL3promoter
(DNA)
atgccatggaaagggtg (SEQ ID NO:812)
Possible NFAT RE from human GPC6
(DNA)
aaggggaaatgttgagtctaga (SEQ IDNO: 813)
Possible NFAT RE from humangrowth hormone-releasing hormone
NFATcl promoter large
(DNA)
ttatgccgtctagaggagacatactttctactcaaagctacacacatagactacaacgatgggaaaagacgacacaccaa
cagcgacttcaggaaagctggagtggctgctaatgttagacaaaataggctttttaaaaaaggttttattaaagaggaat
gtttcgtaatgataaaagcactaatctgtgagaaagatacaacaatgataaacatacgtgcagctaataagagagctcca
aaatctatgaagcaaaaactcacagaatgaggggagaagcagttctacaacagagaatggggacttcgatactccacttt
caataatggatacaacaaccaggcagataacaaggcaacagaaggcctgaacaacagtataaaccaattagacctaccag
atatctatagctagcacactccacccaacgacagcagaatacacattcttctcaagcgcacaagtaacatcctccaggat
gggccatgttctaggccatcaaacaaactcaggtggtttgaggccagaggcctctcttttaaccaccacactagggcctt
cggaggaggcaagcagagagttgtcaaagaggccctcaggactgggtgcagtggctcatgactgtaatcccagcacttta
gaaggctgaggcacaaggatcttttgagctcaggagttcaagaaatgagcacttatccactgggcgcggtggctcacgcc
agtaatccagcactttgggaggcttaggcgggcggatcaagaggtcagaagctcaagaccagcctgaccaacatggtgaa
accccgtctctactaaaagtacaaaaattagccgggcgtggtggcgcacacctgtaatcccagctacttgggaggctgag
gcaggagaatcacttgaacccgggaggtggaggttgcagtgagtggagatcacaccattgcaccccagcctgggcaacag
agcgagactccgtctcaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaagaaagaaagaaaaagaaaaaaaaagtgagcatgtattttgcca
gagtctggagattagaattaaattagcaaaccagaattatagaaaaagctatttacttttaagtaaacagctgagatttt
tttttttaagtcagtgtgaatgaagctcacagccatggttggagctgagaaagaaggatttccctttagttatgcacctg
tgtcagcaccttctgactttccttctaaagtctggggtgttcctgaggatccgtaagtttggggttcagggtttctacag
catgctgttacttgtgaaacatctctttaaccatgtcccagagttgcccaggagtttaagaccagcctgagcaacatagc
aagacctcatctcaacaacaacaaaaattagaaataaattagccaggtgtggtgacatgtgcctgtagtcccagctactc
agaaggctgaggcatgaggatcacttgggcccaggaagttggggctgcagggagccctgttcatgccgctgcactccagc
ctgcaagacagagcagaaaaaaagaatcaggatcctgggcagagggaggagaggggaccggggtccagcaagcacttggg
gattgactgaatggcgttggggagagatgactccaaagtcctggagtgggtgagaatgactgcgagtggcttttaggtgg
ggaggttcctgcctggccactccgggaggggacgtggggctgaagggtatcaggtgccgtgctgagcagtttggccttga
tcctaatgccctggacacacgtctagggtaggaaagttgactgatccattggtgatctgagtttttagacatggtggtag
tccatgaggtgggtgttcatgctaagagtttagacagggaaacctatgaagcccttagcaaccctccagggaaggggcgt
ggttaaagagatgtttcataagtaacagcatggtatagaaactctgaaccccaaatgtatgggtcctcaggaacacccca
gactttagaaggaaagtcagaaggtgctgacacgggtgtataactaaagggaaatccttctttctcagctccaaccatgg
ctgtgaggttcattcacactgacttaaaaaaaaaaatctcagtttacttaaaagtaaatagctttttctataattctggt
ttgctaatttaatcctagtctccagaccctggctaaataaatgcccatttctccagatggtctcaagagtctctggacat
cgtgggggcccttccctgttggttggaaggtgcctcaggaagaagggggtggattctgagttgagtcaaaacctcaaaga
cccctgatgggaaaagctctcaagtgaccaccgctgtgggccagaatgcaaaactgcaggaacagaacattcgcaggaac
agaacacagtcgtattaagtgattttcccgagcaggaagtggcatctggcctgcggttcagtagggggaggaaagggtgg
gcgcacctgcccctggctggcgcacctgccaggtagccccacgcggcaccgcgtgtgccgagcgcccctgaggatggaaa
gccccacgcggggcaggtggcacccaccctccgaagacgggacgggatggagcgttgagcttcggggcagctccggcccg
gcccgcgctggagacgcccgcatctgccaggatggcgtctcatagccctggtgctcacacatgacgccaggaagccccag
caacagtgaccgcccaggctctagaaaatattggacggggtggatgaacacccaagtgcgctccaggagaagggatttgg
caccccaaggggcttttaaaacggtaagcttctaggggtgtctttgcccccaataatccatagaaacaacagtcatctaa
aaatagtcttgttttctgtcctaagctccttttaactttgttagtcatcaccaatcctaaaataaaacccgtgtaacgtc
tcccctagtagcggctataaacaaacctacgaggaggcaggaggaagaggaaaggggcgcagggcgctcggggagcagag
ccgggggcccgcggtggccgcagaggccgggccggggcgcagaggccgggcgagctggccgcgctctgggccgccgcctc
cggaactccctgcgcctggcgcgcggccaccgtggtcccggcaacggcattaaacagagggaaacagacccgggattccg
tcacccgggcggggggataaggacggctttgagagcagacaggaaaagggagcttttctgcatggggtgaaaaaattatt
tattgaaggaggaggaggcggcagcggaggaaggggaggggcgggaggaggaggaagagccggccgcccccgccccggcc
ccggctcctcaggagccaagggcagcctcgccaggtcggtcccgggctcgaggaccgcggctggggtcgaggggctcagt
ctcccacgtgaccggctgggcgcgccccgccagacccggcctcgggattccctcctcccggcgagtctccgcccgccccg
tcctggaggtggggagaaggagggcggggcgggggggacggaaactctccccgccaaatcctggccccaggcctggggac
actcgcggcgggaagatttggaggggaggggagggggaggggcgtgggggcgcggcctcgctggagtccccctgaccccc
cgacccccgcccaccggcctgggcgtcctcccgcggcccctcctcccctcccggcgcccggtgctctggggcgcgtgcca
cgcctggctcggcgccgtaggggcccccgcaggtagagacccctggaaatggcctcgacgccgcaggagcgaggcggcca
ccaccccgctaatccgggcacgtctctccaggccgaggcctgcggtggaaaagccggggttccatttgtgctgagtcggg
gcggccgaatggagccaggcctcgggacgcgggacggacgggctctggccgcgcaccttcgcgggctctgcagcgcccga
ccgcctcccccggcagggaggaggcgcttgtggggggcacccacggggcacagtgatccctgggggtctgcggacctcct
gggccccgcagcagacacgagtttagcctttgggtttagtttaaatcacataagggtgtcgtgcaatcgatttatggttt
ctacacaccagacactttaacctccaaccccccccatccaaagccaacaagaaaatgcggtgccgtgttggcagctgagc
tgcgcccgaagagacgcagggagacgtaagagaggaaagtgtgagtggccggggggcctccccccgtcagaagtcgcgca
gtcgcgcccataaaacgccccctccgggcggctagggcaggtgagcgcgtccccgggcctccccacgccggcccctgcca
caggccgtctaggtcgagcagatatttacagaataaaaatgacaataactcgacgtcccgggacggccacgcaatctgtt
agtaatttagcgggatgggaatttcctttctagggcctgccagtgaagcgcttttccaaatttccacagcgggggaagcc
tgcgattttacataatgacttcagcatgccgggctttctcgacacccctccccggcccccggcccccgccccccgcccct
tttccagcagggccgggctccctccggacacccgcgtggactcaggcgtcccgtctggcccgttcgcccccgtttccccc
gccagccccagcgcccccctgcccggcccccggattccccgttcccgcccctacgcccccatcccctccccgtgcgcccc
tccccgtgcgcccccctccccgtgcgccccccctccccgtgcgcccccctccccgtgcgccccccctccccgggcgcccc
cctccccgggcgccccccctccccgtgcgcccccccctccccgtgcgccccccctccccgtgcgcgccccgcctcttgcg
cccctgcccccaggcgagcggctgccgcggcgcggggaggggcgggcgctcggcgactcgtccccggggccccgcgcggg
cccgggcagcaggggcgtgatgtcacggcagggagggggcgcgggagccgccgggccggcggggaggcgggggaggtgtt
ttccagctttaaaaaggcaggaggcagagcgcggccctgcgtcagagcgagactcagaggctccgaactcgccggcggag
tcgccgcgccagatcccagcagcagggcgcgggcaccggggcgcgggcagggctcggagccaccgcgcaggtcctagggc
cgcggccgggccccgccacgcgcgcacacgcccctcgatg (SEQ ID NO: 815)
NFATc3 promoter sequence
(DNA)
gcagccaggcagggtgggcgcgcgtagggggcggggccgggcgcgcggcagggcgcgagagcgcacccgcggcggcggtg
gcggcgactgtgggggggcggcggggaacattggctaagccgacagtggaggcttaggcaccggtggcgggcggctgcgg
ttcctggtgctgctcggcgcgcggccagctttcggaacggaacgctcggcgtcgcgggccccgcccggaaagtttgccgt
ggagtcgcgacctcttggcccgcgcggcccggcatgaagcggcgttgaggagctgctgccgccgcttgccgctgccgccg
ccgccgcctgaggaggagctgcagcaccctgggccacgccg (SEQ ID NO: 816)
NFATc2 promoter sequence 1
(DNA)
cagagagaggctgcgttcagactggggcactgccatcccctccgcatca
tggggtctgtggaccaaggtaactgactctcgatcccttccagccttttccgctcgctcctcccggccctttcctgctgc
tcccgtcccgggcagcactttcagctcccggcagaggtcggtgcgggaggcctggggaccccgctcgccctcggcgcaca
ggtagcggggcccgcggaggggcgcccgcgccccggccagggaagggacacttgggaaggcgactttggacaactttacg
cgggggcagggaagtgtcccaggccgggattccctaggccagtctgtcgggaggattttcctctccacgggacaccggga
gggattctcgctactaaccgctggctgtttaaccgtttcagcactcggcttttgacagcaa (SEQ ID NO: 817)
NFATc2 promoter sequence 2
(DNA)
catcatggggtctgtggaccaaggtaactgactctcgatcccttccagccttttccgctcgctc(SEQ ID NO: 818)
NFATcl response elementconsensus
(DNA)
cattttttccat (SEQ ID NO: 819)
NFATcl response elementconsensus
(DNA)
tttttcca (SEQ ID NO: 820)
NFAT response elements containedwithin the Foxp3 enhancer region
(DNA)
acttgaaaatgagataaatgttcacctatgttggcttctagtctcttttatggcttcatt
ttttccatttactatagaggttaagagtgtgggtactggagccagactgtctgggacaa(SEQ ID NO: 821)
muE6 IgD/CD8/41BB/CD3z
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtgaaggtggtgga
gtctgggggagacttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgtagtctctggattcactttcagtagatatg
gcatgtcttgggttcgccagactccaggcaagaggctggagtgggtcgcaaccattagtggtggcggtacttacatctac
tatccagacagtgtgaaggggcgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaccctgtacctgcaaatgagcagtct
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gagtccctgttcgcttcagtggcagtggatatgggacctcttactctctcacaatcagccgaatggaggctgaagatgct
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gctcatgccgctttcctgaggaggaggaaggagggtgcgaactgcgcgttaagttctcccgatcagccgacgcgcctgct
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ctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 8
22)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVKVVESGGDLVKPGGSLKLSCVVSGFTFSRYGMSWVRQTPGKRLEWVATISGGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMYHCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQ
IVLTQSPAIMSASPGEEVTLTCSATSSVSYIHWFQQRPGTSPKLWIYSTSNLASGVPVRFSGSGYGTSYSLTISRMEAED
AATYYCQQRSSSPFTFGSGTKLEIKESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERET
KTP IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADA
PAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLY
QGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 823)
muC2 IgD/CD8/41BB/CD3z
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggagga
gtcagggggaggcttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgcagcctctggattcactttcagtggctatg
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tatccagacagtgtgaaggggcgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaccctgtacctgcaaatgagcagtct
gaggtctgaggacacggccatgtattactgtgcaagacttgggggggataattactacgaatacttcgatgtctggggcg
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ctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (
SEQ ID NO:824)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLEESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSGYAMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTAMYYCARLGGDNYYEYFDVWGAGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI
VITQSTASLGVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYMHWYQQRPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPV
E EEDAATYYCQHSRELPFTFGGGTKLEIKESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQ
EERETKTPIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSR
SADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGH
DGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 825)
muE6 CD28/CD28/CD28/CD3z
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtgaaggtggtgga
gtctgggggagacttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgtagtctctggattcactttcagtagatatg
gcatgtcttgggttcgccagactccaggcaagaggctggagtgggtcgcaaccattagtggtggcggtacttacatctac
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gtcaaggaacctcagtcaccgtctcctcaggcggtggcggatccggcggtggcggatccggcggtggcggatcccaaatt
gttctcacccagtctccagcaatcatgtctgcatctccaggggaggaggtcaccctaacctgcagtgccacctcaagtgt
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gagtccctgttcgcttcagtggcagtggatatgggacctcttactctctcacaatcagccgaatggaggctgaagatgct
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ttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagcccttttgggtgctggtggtggttggtggagtcctggcttgctata
gcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggtgagaagcaagcggtctcggctcctgcattctgattacatgaac
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aggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 826)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVKVVESGGDLVKPGGSLKLSCVVSGFTFSRYGMSWVRQTPGKRLEWVATISGGGTYIY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMYHCTRDNYGRNYDYGMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQ
IVLTQSPAIMSASPGEEVTLTCSATSSVSYIHWFQQRPGTSPKLWIYSTSNLASGVPVRFSGSGYGTSYSLTISRMEAED
A ATYYCQQRSSSPFTFGSGTKLEIKKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDY
MNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRR
KNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 827
)
muC2 CD28/CD28/CD28/CD3z
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagaggtccagctggagga
gtcagggggaggcttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgcagcctctggattcactttcagtggctatg
ccatgtcttgggttcgccagactccggagaagaggctggagtgggtcgcaaccattagtagtggtggtacttatatctac
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gaagggggaaaggagacgagggaaaggacacgacggcctttatcagggcctgtccacagcaacaaaagatacgtatgacg
ccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 828)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLEESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSGYAMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGTYIY
YPDSVKGRFTI SRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTAMYYCARLGGDNYYEYFDVWGAGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSD
IVITQSTASLGVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYMHWYQQRPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHP
VEEEDAATYYCQHSRELPFTFGGGTKLEIKKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLL
HS DYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMG
GKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO
:829)
CD19 IgD/CD8/41BB/CD3z
(DNA)
atggccctgcccgtgaccgctttgctgctccccctggcgctgctgctgcacgccgccaggccagacatacagatgacgca
gacgaccagcagcctttccgcttccctgggcgaccgagtaaccattagttgtagagcatctcaggatatttctaagtatc
tgaattggtaccaacagaaacctgatggcactgtcaagctcttgatatatcacaccagtcgactccattcaggcgtccct
tccagattcagtgggagtggcagcgggactgattactccctcactatctctaacctggaacaggaagacatcgctacata
cttctgtcagcagggaaacactctcccctatacctttgggggaggaaccaagttggaaataacaggcggtggcggatccg
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ctgtccgtcacatgcactgtctcaggggtctcattacccgactatggtgtaagctggattcgccagcctccacgaaaggg
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tccacagcaacaaaagatacgtatgacgccctccatatgcaggcacttccaccacggtgataa (SEQ ID NO: 830)
(amino acids)
MALPVTALLLPLALLLHAARPDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVP
SRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGGGGSGGGGSGGGGSEVKLQESGPGLVAPSQS
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P IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPA
YKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQG
LSTATKDTYDALHMQALPPR* * (SEQ ID NO: 831)
当業者は、ここに記述の本願発明の特異的態様に均等の多くの、慣用的実験を使い確認で
き、若しくは認識できる発明も本願発明の範囲に包含されることを理解可能である。
き、若しくは認識できる発明も本願発明の範囲に包含されることを理解可能である。
Claims (158)
- 縦列反復ドメインを欠いているMUC1アイソフォームの細胞外ドメイン若しくは開裂産物の領域に結合する、ヒト若しくはヒト化抗MUCl*抗体、抗体断片又は抗体様蛋白質。
- 以下に特異的に結合する、請求項1に記載のヒト若しくはヒト化抗MUCl*抗体、抗体断片又は抗体様蛋白質、
(i) MUC 1のPSMGFR領域、
(ii) PSMGFRペプチド、
(iii) 次のアミノ酸配列をもつペプチド
SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY (SEQ ID NO:620)、
(iv) 次のアミノ酸配列をもつペプチド
SVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY (SEQ ID NO:621)、
(v) 次のアミノ酸配列をもつペプチド
VQLTLAFREGTINVHDVETQFNQY (SEQ ID NO:622)、又は
(vi) 次のアミノ酸配列をもつペプチド
SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTIN (SEQ ID NO:623)。 - ヒト若しくはヒト化抗MUC1*抗体が、IgGl, IgG2, IgG3, IgG4 若しくは IgMである、請求項１に記載のヒト若しくはヒト化抗MUCl*抗体、抗体断片又は抗体様蛋白質。
- ヒト若しくはヒト化抗体断片若しくは抗体様蛋白質が、scFv 若しくは scFv-Fcである、請求項１に記載のヒト若しくはヒト化抗MUCl*抗体、抗体断片又は抗体様蛋白質。
- マウスモノクローナルMN-E6抗体から由来する重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、及びマウスモノクローナルMN-E6抗体の配列に対して、少なくとも80%, 90% 、 95%若しくは98%配列同一性をもつ、請求項１に記載のヒト若しくはヒト化抗MUCl*抗体、抗体断片又は抗体様蛋白質。
- 該重鎖可変領域が、SEQ ID NO: 13に、少なくとも、90%、95%若しくは98%の配列同一性を持ち、及び、該軽鎖可変領域が、SEQ ID NO: 66に、少なくとも、90%、95%若しくは98%の配列同一性を持つ、請求項５に記載のヒト若しくはヒト化抗MUCl*抗体、抗体断片又は抗体様蛋白質。
- 以下の配列をもつCDR1, CDR2 若しくは CDR3領域に、少なくとも、90%、95%若しくは98%の配列同一性を持つ、該重鎖可変領域及び該軽鎖可変領域における相補性決定領域（CDRs）を含む、請求項５に記載のヒト若しくはヒト化抗MUCl*抗体、抗体断片又は抗体様蛋白質。
CDR1重鎖SEQ ID NO: 17
CDR1軽鎖SEQ ID NO:70
CDR2重鎖SEQ ID NO:21
CDR2軽鎖SEQ ID NO:74
CDR3重鎖SEQ ID NO:25
CDR3軽鎖SEQ ID NO:78 - ヒト若しくはヒト化抗体が、IgGl, IgG2, IgG3, IgG4 若しくは IgMである、請求項５に記載のヒト若しくはヒト化抗MUCl*抗体、抗体断片又は抗体様蛋白質。
- ヒト若しくはヒト化抗体断片又は抗体様蛋白質が、scFv 若しくは scFv-Fcである、請求項５に記載のヒト若しくはヒト化抗MUCl*抗体、抗体断片又は抗体様蛋白質。
- マウスモノクローナルMN-C2抗体から由来する重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、及びマウスモノクローナルMN-C2抗体の配列に対して、少なくとも80%, 90%、 95%若しくは98%配列同一性をもつ、請求項１に記載のヒト若しくはヒト化抗MUCl*抗体、抗体断片又は抗体様蛋白質。
- 該重鎖可変領域が、SEQ ID NO:119に、少なくとも、90%、95%若しくは98%の配列同一性を持ち、及び、該軽鎖可変領域が、SEQ ID NO:169に、少なくとも、90%、95%若しくは98%の配列同一性を持つ、請求項１０に記載のヒト若しくはヒト化抗MUCl*抗体、抗体断片又は抗体様蛋白質。
- 以下の配列をもつCDR1, CDR2 若しくは CDR3領域に、少なくとも、90%、95%若しくは98%の配列同一性を持つ、該重鎖可変領域及び該軽鎖可変領域における相補性決定領域（CDRs）を含む、請求項１０に記載のヒト若しくはヒト化抗MUCl*抗体、抗体断片又は抗体様蛋白質。
CDR1重鎖SEQ ID NO: 123
CDR1軽鎖SEQ ID NO: 173
CDR2重鎖SEQ ID NO: 127
CDR2軽鎖SEQ ID NO: 177
CDR3重鎖SEQ ID NO: 131
CDR3軽鎖SEQ ID NO: 181 - ヒト若しくはヒト化抗体が、IgGl, IgG2, IgG3, IgG4 若しくは IgMである、請求項１０に記載のヒト若しくはヒト化抗MUCl*抗体、抗体断片又は抗体様蛋白質。
- ヒト若しくはヒト化抗体断片又は抗体様蛋白質が、scFv若しくはscFv-Fcである、請求項１０に記載のヒト若しくはヒト化抗MUCl*抗体、抗体断片又は抗体様蛋白質。
- マウスモノクローナルMN-C3抗体から由来する重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、及びマウスモノクローナルMN-C3抗体の配列に対して、少なくとも80%, 90%、95%若しくは98%配列同一性をもつ、請求項１に記載のヒト若しくはヒト化抗MUCl*抗体、抗体断片又は抗体様蛋白質。
- 該重鎖可変領域が、SEQ ID NO:414に、少なくとも、90%、95%若しくは98%の配列同一性を持ち、及び、該軽鎖可変領域が、SEQ ID NO:459に、少なくとも、90%、95%若しくは98%の配列同一性を持つ、請求項１5に記載のヒト若しくはヒト化抗MUCl*抗体、抗体断片又は抗体様蛋白質。
- 以下の配列をもつCDR1, CDR2 若しくは CDR3領域に、少なくとも、90%、95%若しくは98%の配列同一性を持つ、該重鎖可変領域及び該軽鎖可変領域における相補性決定領域（CDRs）を含む、請求項１5に記載のヒト若しくはヒト化抗MUCl*抗体、抗体断片又は抗体様蛋白質。
CDR1重鎖SEQ ID NO:418
CDR1軽鎖SEQ ID NO:463
CDR2重鎖SEQ ID NO:422
CDR2軽鎖SEQ ID NO:467
CDR3重鎖SEQ ID NO:426
CDR3軽鎖SEQ ID NO:471 - ヒト若しくはヒト化抗体が、IgGl, IgG2, IgG3, IgG4 若しくは IgMである、請求項１５に記載のヒト若しくはヒト化抗MUCl*抗体、抗体断片又は抗体様蛋白質。
- ヒト若しくはヒト化抗体断片又は抗体様蛋白質が、scFv 若しくは scFv-Fcである、請求項１５に記載のヒト若しくはヒト化抗MUCl*抗体、抗体断片又は抗体様蛋白質。
- マウスモノクローナルMN-C8抗体から由来する重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、及びマウスモノクローナルMN-C8抗体の配列に対して、少なくとも80%, 90%、95%若しくは98%配列同一性をもつ、請求項１に記載のヒト若しくはヒト化抗MUCl*抗体、抗体断片又は抗体様蛋白質。
- 該重鎖可変領域が、SEQ ID NO:506に、少なくとも、90%、95%若しくは98%の配列同一性を持ち、及び、該軽鎖可変領域が、SEQ ID NO:544に、少なくとも、90%、95%若しくは98%の配列同一性を持つ、請求項２０に記載のヒト若しくはヒト化抗MUCl*抗体、抗体断片又は抗体様蛋白質。
- 以下の配列をもつCDR1, CDR2 若しくは CDR3領域に、少なくとも、90%、95%若しくは98%の配列同一性を持つ、該重鎖可変領域及び該軽鎖可変領域における相補性決定領域（CDRs）を含む、請求項２０に記載のヒト若しくはヒト化抗MUCl*抗体、抗体断片又は抗体様蛋白質。
CDR1重鎖SEQ ID NO:508
CDR1軽鎖SEQ ID NO:546
CDR2重鎖SEQ ID NO:510
CDR2軽鎖SEQ ID NO:548
CDR3重鎖SEQ ID NO:512
CDR3軽鎖SEQ ID NO:550 - ヒト若しくはヒト化抗体が、IgGl, IgG2, IgG3, IgG4 若しくは IgMである、請求項２０に記載のヒト若しくはヒト化抗MUCl*抗体、抗体断片又は抗体様蛋白質。
- ヒト若しくはヒト化抗体断片又は抗体様蛋白質が、scFv 若しくは scFv-Fcである、請求項２０に記載のヒト若しくはヒト化抗MUCl*抗体、抗体断片又は抗体様蛋白質。
- ヒト化カッパ軽鎖若しくはヒト化ラムダ軽鎖と一対で、ヒト化IgG2重鎖若しくはヒト化IgG1重鎖によって表されるヒト化MN-E6の配列を含む、抗MUC1*細胞外ドメイン抗体。
- ヒト化IgG2重鎖がSEQ ID NOS:53、ヒト化IgG1重鎖がSEQ ID NOS:57、ヒト化カッパ軽鎖がSEQ ID NO:108、そしてヒト化ラムダ軽鎖がSEQ ID NO:112である、又は、各々と90%,95%若しくは98%の配列同一性をもつ各配列である、請求項２５に記載の抗体。
- ヒト化ラムダ軽鎖及びヒト化カッパ軽鎖と一対で、ヒト化IgG1重鎖とヒト化IｇG2重鎖によって表されるヒト化MN-C2の配列を含む、抗MUC1*細胞外ドメイン抗体。
- ラムダ軽鎖(SEQ ID NO:219)若しくはヒト化カッパ軽鎖(SEQ ID NO:213)と一対で、ヒト化IgG1重鎖(SEQ ID NOS:159)若しくはヒト化IｇG2重鎖(SEQ ID NOS:164)である、又は、それらと90%,95% 若しくは 98%の配列同一性をもつ配列である、請求項２７に記載の抗体。
- ヒト化ラムダ軽鎖若しくはヒト化カッパ軽鎖と一対で、ヒト化IgG1重鎖若しくはヒト化IｇG2重鎖によって表されるヒト化MN-C3の配列を含む、抗MUC1*細胞外ドメイン抗体。
- ヒト化MN-C3 IgG1重鎖がSEQ ID NOS:454、IgG2重鎖がSEQ ID NOS:456、ラムダ軽鎖がSEQ ID NO:501、及びカッパ軽鎖がSEQ ID NO:503、又は、それらと90%,95% 若しくは 98%の配列同一性をもつ配列である、請求項２９に記載の抗体。
- ヒト化ラムダ軽鎖若しくはヒト化カッパ軽鎖と一対で、ヒト化IgG1重鎖若しくはヒト化IｇG2重鎖によって表されるヒト化MN-C8の配列を含む、抗MUC1*細胞外ドメイン抗体。
- ヒト化MN-C8 IgG1重鎖がSEQ ID NOS:540、IgG2重鎖がSEQ ID NOS:542、ラムダ軽鎖がSEQ ID NO:580、及びカッパ軽鎖がSEQ ID NO:582、又は、それらと90%, 95% 若しくは 98%の配列同一性をもつ配列である、請求項31に記載の抗体。
- MUC1*へのNME蛋白質の結合を阻害する、請求項１に記載のヒト若しくはヒト化抗MUCl*抗体、抗体断片又は抗体様蛋白質。
- NMEが、NME7若しくはNME1である、請求項３３に記載のヒト若しくはヒト化抗MUCl*抗体、抗体断片又は抗体様蛋白質。
- NMEが、NME6若しくはNME8である、請求項３３に記載のヒト若しくはヒト化抗MUCl*抗体、抗体断片又は抗体様蛋白質。
- ヒト若しくはヒト化抗体が、IgGl, IgG2, IgG3, IgG4 若しくは IgMである、請求項３３に記載のヒト若しくはヒト化抗MUCl*抗体、抗体断片又は抗体様蛋白質。
- ヒト若しくはヒト化抗体断片又は抗体様蛋白質が、scFv 若しくは scFv-Fcである、請求項３３に記載のヒト若しくはヒト化抗MUCl*抗体、抗体断片又は抗体様蛋白質。
- リンカーを経て結合された、重鎖と軽鎖の可変領域を含む、単鎖可変断片(scFv)であって、さらに、MUCl*細胞外ドメインへ結合する抗体のCDRｓを含む、ｓcFv。
- 抗MUC1*抗体のCDRsが、MN-E6, MN-C2, MN-C3 若しくはMN-C8 抗体由来である、請求項３８に記載のscFv。
- 抗MUC1*抗体のCDRsが、ヒト化MN-E6, MN-C2, MN-C3 若しくはMN-C8 抗体由来である、請求項３９に記載のscFv。
- SEQ ID NOS:233, 235 及び 237 (E6)のグループから選ばれた、請求項３８に記載のscFv。
- SEQ ID NOS:239, 241及び 243 (C2)のグループから選ばれた、請求項３８に記載のscFv。
- SEQ ID NOS:245, 247及び 249 (C3)のグループから選ばれた、請求項３８に記載のscFv。
- SEQ ID NOS:251, 253及び 255 (C8)のグループから選ばれた、請求項３８に記載のscFv。
- 縦列反復、リンカー分子、膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインを欠くMUC1の細胞外ドメインに結合するヒト化可変領域抗体断片若しくはscFvを含むキメラ抗原リセプター（CAR）
。 - 請求項４５に記載のCARであって、該単鎖抗体断片が以下から選ばれる少なくとも１２の連続したアミノ酸を含むペプチドに結合する、CAR。
(i) MUC1のPSMGFR領域,
(ii) PSMGFR ペプチド,
(iii) 次のアミノ酸配列もつペプチド
SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY (SEQ ID NO:620)
(iv) 次のアミノ酸配列もつペプチド
SVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY (SEQ ID NO:621)
(v) 次のアミノ酸配列もつペプチド
VQLTLAFREGTINVHDVETQFNQY (SEQ ID NO:622)、又は
(vi) 次のアミノ酸配列もつペプチド
SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTIN (SEQ ID NO:623) - 請求項４６に記載のCARであって、それは、請求項２５～３２のいづれか一に記載の可変領域のいずれかの部分を含む、又は、それらのいずれかの部分の組み合わせであって、細胞外ドメイン、膜貫通領域、及び免疫系活性化シグナルを送る配列モチーフを含む細胞質尾部における該組み合わせを含む、CAR。
- 請求項４５に記載のCARであって、そこにおいて、細胞外ドメインは、MN-E6 scFv, MN-C2 scFv, MN-C3 scFv 若しくは MN-C8 scFvのヒト化単鎖抗体断片を含む、CAR。
- 請求項４８に記載のCARであって、そこにおいて、細胞外ドメインは、(SEQ ID NOS:233, 235, 若しくは 237)として記述のMN-E6 scFv, (SEQ ID NOS:239, 241, 若しくは 243)として記述のMN-C2 scFv, (SEQ ID NOS:245, 247, 若しくは 249)として記述のMN-C3 scFv 又は (SEQ ID NOS:251, 253, 若しくは 255)として記述のMN-C8 scFvのヒト化単鎖抗体断片を含む、CAR。
- 請求項４５に記載のCARであって、そこにおいて、細胞質尾部は、シグナル伝達配列モチーフである、CD3-zeta, CD27, CD28, 4-lBB, OX40, CD30, CD40, ICAm-1, LFA-l, ICOS, CD2, CD5, 若しくは CD7 の1以上を含む、CAR。
- 請求項４５に記載のCARであって、そこにおいて、その配列は、以下から選択される、CAR。
CAR-MN-E6 CD3z (SEQ ID NOS:295)
CAR-MN-E6 CD28/CD3z (SEQ ID NOS:298)
CAR-MN-E6 4-lBB/CD3z (SEQ ID NOS:301)
CAR-MN-E6 OX40/CD3z (SEQ ID NOS:617)
CAR-MN-E6 CD28/4-lBB/CD3z (SEQ ID NOS:304)
CAR-MN-E6 CD28/OX40/CD3z (SEQ ID NOS:619)
CAR-MN-E6 Fc/4-lBB/CD3z (SEQ ID NOS:311)
CAR-MN-E6 IgD/Fc/4-lBB/CD3z (SEQ ID NOS:771)
CAR-MN-E6 FcH/4-lBB/CD3z (SEQ ID NOS:316)
CAR-MN-E6 IgD/FcH/4-lBB/CD3z (SEQ ID NOS:773)
CAR-MN-E6 IgD/4-lBB/CD3z (SEQ ID NOS:324)
CAR-MN-E6 X4/4-lBB/CD3z (SEQ ID NOS:331)
CAR-MN-C2 CD3z (SEQ ID NOS:607)
CAR-MN-C2 CD28/CD3z (SEQ ID NOS:609)
CAR-MN-C2 4-lBB/CD3z (SEQ ID NOS:611)
CAR-MN-C2 OX40/CD3z (SEQ ID NOS:613)
CAR-MN-C2 CD28/4-lBB/CD3z (SEQ ID NOS:307)
CAR-MN-C2-CD28/OX40/CD3z (SEQ ID NOS:615),
CAR44 huMNC2-CD8-4-lBB-CD3z (SEQ ID NOS:719)
CAR-MN-C2 Fc/4-lBB/CD3z (SEQ ID NOS:733)
CAR-MN-C2 IgD/Fc/4-lBB/CD3z (SEQ ID NOS:735)
CAR-MN-C2 FcH/4-lBB/CD3z (SEQ ID NOS:737)
CAR-MN-C2 IgD/FcH/4-lBB/CD3z (SEQ ID NOS:739)
CAR-MN-C2 IgD/4-lBB/CD3z (SEQ ID NOS:741)
CAR-MN-C2 X4/4-lBB/CD3z (SEQ ID NOS:743) - MUC1*形質転換若しくは形質導入細胞に結合する細胞外ドメインをもつCARを含む細胞。
- CARを含む細胞が、免疫系細胞である、請求項５２に記載の細胞。
- CARを含む免疫系細胞が、T細胞若しくはNK細胞である、請求項５３に記載の細胞。
- CARを含む免疫系細胞が、樹状細胞である、請求項５３に記載の細胞。
- CARを含む免疫系細胞が、マスト細胞である、請求項５３に記載の細胞。
- 細胞外ドメインユニットが、あるペプチドを認識するCAR分子。
- 当該ペプチドが、PSMGFR (SEQ ID NO:2)である、請求項５７に記載のCAR分子。
- 当該ペプチドが、NME7由来のペプチドである、請求項５７に記載のCAR分子。
- 以下のペプチドから選ばれる、請求項５９に記載のCAR
NME7A ペプチド 1 (A domain): MLSRKEALDFHVDHQS (SEQ ID NO:7)
NME7A ペプチド 2 (A domain): SGVARTDASES (SEQ ID NO:8)
NME7B ペプチド 1 (B domain): DAGFEISAMQMFNMDRVNVE (SEQ ID NO:9)
NME7B ペプチド 2 (B domain): EVYKGVVTEYHDMVTE (SEQ ID NO: 10)、又は
NME7B ペプチド 3 (B domain): AIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFF (SEQ ID NO: 11). - 同じ細胞へ形質転換された異なる細胞外ドメインユニットをもつ、少なくとも２つのCARを含む組成物。
- 同じ細胞へ形質転換された異なる細胞外ドメインユニットをもつ、少なくとも２つのCARを含む組成物であって、ここで、ひとつのCARは、標的認識ユニットを持たず、そして、他のCARが、標的認識ユニットを持つ、組成物。
- 細胞外ドメイン認識ユニットのひとつが、MUC1*細胞外ドメインに結合する、請求項６１に記載の少なくとも２つのCARを含む組成物。
- 細胞外ドメイン認識ユニットのひとつが、PD-1に結合する、請求項６１に記載の少なくとも２つのCARを含む組成物。
- 細胞外ドメイン認識ユニットのひとつが、抗体断片であり、他が、あるペプチドである、請求項６１に記載の少なくとも２つのCARを含む組成物。
- 請求項６１に記載の少なくとも２つのCARを含む組成物であって、ひとつが、MN-E6 抗体のscFv, MN-C2 抗体のscFv, MN-C3 抗体のscFv 若しくは MN-C8 抗体のscFvから選ばれる抗-MUCl* scFv であり、そして、他がNME7から由来するペプチド又は以下からなるグループからえらばれる、組成物。
NME7A ペプチド 1 (A domain): MLS RKE ALDFH VDHQS (SEQ ID NO:7)
NME7A ペプチド 2 (A domain): SGVARTDASES (SEQ ID NO:8)
NME7B ペプチド 1 (B domain): DAGFEISAMQMFNMDRVNVE (SEQ ID NO:9)
NME7B ペプチド 2 (B domain): EVYKGVVTEYHDMVTE (SEQ ID NO:10)、及び
NME7B ペプチド 3 (B domain): AIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFF (SEQ ID NO:11) - 加工抗体様蛋白質である、請求項1に記載の抗体。
- 以下に結合する物質について、ヒトである抗体若しくは抗体断片のライブラリーをスクリーニングする方法。
(i) PSMGFR ペプチド
(ii) 次のアミノ酸配列を持つペプチド
SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY (SEQ ID NO:620)
(iii) 次のアミノ酸配列を持つペプチド
SVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY (SEQ ID NO:621)
(iv) 次のアミノ酸配列を持つペプチド
VQLTLAFREGTINVHDVETQFNQY (SEQ ID NO:622)
(v) 次のアミノ酸配列を持つペプチド
SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTIN (SEQ ID NO:623)
(vi) NME7 蛋白質、又は
(vii) NME7 蛋白質のペプチド断片 - 対象が、MUC1を異常に発現する、疾患を患ったヒトに、上記請求項１～６７のいずれか一つに記載の抗体を投与することを含む、対象における疾患を処置する方法。
- 疾患が、癌である、請求項６９に記載の方法。
- 対象が、MUC1を異常に発現する、疾患を患ったヒトに、NMEペプチドを投与することを含む、対象における疾患を処置する方法。
- 請求項１～６７のいづれか一に記載の抗体と幹細胞を接触させることを含む、幹細胞個体群の増殖若しくは拡張の方法。
- ヒト化MN-C3 若しくは MN-C8 抗体、又はそれらの抗体断片若しくは単鎖抗体で表面を被覆すること、及び 該表面へ幹細胞を接触させること、を含む表面への幹細胞接着の促進方法。
- ヒト化MN-C3 若しくは MN-C8 抗体、又はそれらの抗体断片若しくは単鎖抗体で表面を被覆すること、及び 該表面へ幹細胞を接触させること、及び特定の局所に幹細胞移送することの工程を含む、生体内若しくは生体外幹細胞移送方法。
- ヒト化MN-C3 若しくは MN-C8 抗体、又はそれらの抗体断片若しくは単鎖抗体で表面を被覆すること、及び 該表面へ細胞の混合個体群を接触させること、及び幹細胞を単離することの工程を含む、幹細胞単離の方法。
- MUC1アイソフォームの細胞外ドメイン若しくは縦列反復ドメインを欠く開裂産物に結合する抗体由来の可変ドメイン断片を含むscFv。
- 可変ドメイン断片が、マウスモノクローナル抗体MN-E6 (SEQ ID NO:13 及び 66)由来、若しくはヒト化MN-E6 (SEQ ID NO:39 及び 94)由来、若しくはMN-E6 scFv (SEQ ID NO:233, 235 及び 237)由来である、請求項７６に記載のscFv。
- 可変ドメイン断片が、マウスモノクローナル抗体MN- C2 (SEQ ID NO:119 及び 169) 由来、若しくは ヒト化MN-C2 (SEQ ID NO:145 及び 195)由来, 若しくは MN-C2 scFv (SEQ ID NO:239, 241 及び 243)由来である、請求項７６に記載のscFv。
- 可変ドメイン断片が、マウスモノクローナル抗体MN-C3 (SEQ ID NO:414 及び 459)由来、若しくは from the humanized MN-C3 (SEQ ID NO:440 及び 487)由来、若しくは MN-C3 scFv (SEQ ID NO:245, 247 及び 249) 由来である、請求項７６に記載のscFv。
- 可変ドメイン断片が、マウスモノクローナル抗体MN-C8 (SEQ ID NO:505 及び 544)由来、若しくは ヒト化 MN-C8 (SEQ ID NO:526 及び 566) 由来、 若しくは MN-C8 scFv (SEQ ID NO:251, 253, 255) 由来である、請求項７６に記載のscFv。
- 請求項７６～８０のいづれか一に記載のscFvの有効量をヒトに投与することを含む、MUC1若しくはMUC1*陽性癌を持つと診断された、それが疑われた、若しくは進展のリスクがあるヒトを処置する方法。
- 請求項７６～８０のいづれか一に記載のscFvを含むscFv-Fc構築物。
- 二量体化している、請求項８２に記載のscFv-Fc構築物。
- Fc要素が、scFv-Fcが単量体であるように、変異されている、請求項８２に記載のscFv-Fc構築物。
- 当該変異が、Fcのヒンジ領域の変異若しくは欠失することを含み、SEQ ID NO:281, 279, 285 及び 287によって表されるFCにおけるF405Q, Y407R, T366W/L368W, 及び T364R/L368R変異又はその組み合わせをおこなうことを含む、請求項８４に記載のscFv-Fc構築物。
- 少なくとも２つの異なるscFv 配列を含むポリペプチドであって、scFv 配列のひとつは、
縦列反復ドメインを欠くMUC1アイソフォーム若しくは開裂産物の細胞外ドメインに結合する配列である、ポリペプチド。 - 当該ポリペプチドが、以下に結合する、請求項８６に記載のポリペプチド。
(i) MUC 1のPSMGFR領域;
(ii) PSMGFR ペプチド
(iii) 次のアミノ酸配列をもつペプチド
SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY (SEQ ID NO:620)
(iv) 次のアミノ酸配列をもつペプチド
VQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRY (SEQ ID NO:621)
(v) 次のアミノ酸配列をもつペプチド
VQLTLAFREGTINVHDVETQFNQY (SEQ ID NO:622)、若しくは
(vi) 次のアミノ酸配列をもつペプチド
SNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTIN (SEQ ID NO:623) - 当該ポリペプチドは、免疫細胞のリセプターに結合する、請求項８６に記載のポリペプチド。
- 当該ポリペプチドは、T細胞のリセプターに結合する、請求項８８に記載のポリペプチド。
- 当該ポリペプチドは、T細胞のCD3に結合する、請求項８９に記載のポリペプチド。
- 異常にMUC1*を発現する細胞の存在を検出する方法であって、請求項８２に記載のscFv-Fcと細胞のサンプルを接触させ、該細胞へのscFv-Fcの結合の存在を検出することを含む、方法。
- 当該細胞が、癌細胞である、請求項９１に記載の方法。
- MN-E6, MN-C2, MN-C3 若しくは MN-C8の可変領域の部分を含む組成物での処置の適合性について、対象者の癌をテストする方法であって、相当するMN-E6 scFv-Fc, MN-C3 scFv-Fc, MN-C3 scFv-Fc 若しくは MN-C8 scFv-Fcと、患者からの生体標品を接触するステップを含む、方法。
- 対象からのT細胞をMUC1*ペプチドに露出し、そこにおいて、成熟の種々のラウンドを通じて、T細胞がMUC1*特異的リセプターを展開し、アダプテイッド(adapted)T細胞を創生させる、
MUC1*陽性癌を持つと診断された、それが疑われた、若しくは進展のリスクがあるドナー患者に、該アダプテイッド(adapted)T細胞を拡張させ、投与すること、を含む、疾患のある対象を処置する方法。 - MUCl*標的化CARで形質導入された免疫細胞の有効量を投与することを含む、MUC1陽性若しくはMUC1*陽性癌を持つと診断された、それが疑われた、若しくは進展のリスクがある患者を処置する方法。
- 当該免疫細胞が、患者から単離されたT細胞であり、次いで、それは、CARの標的化ヘッドがMUC1*に結合するCARで形質導入され、形質導入されたT細胞の拡張後、該CAR T細胞は該患者に有効量で投与される、請求項９５に記載の方法。
- 当該免疫細胞が、患者から単離されたT細胞であり、次いで、それは、CARの標的化ヘッドがhuMN-E6, huMN-C2, huMN-C3 若しくは huMN-C8の部分を含むCARで形質導入され、形質導入されたT細胞の拡張後、該CAR T細胞は該患者に有効量で投与される、請求項９５に記載の方法。
- 癌治療用である、開裂酵素で形質転換若しくは形質導入された免疫細胞。
- 癌細胞が、MUCl陽性癌である、請求項９８に記載の免疫細胞。
- 免疫細胞が、T細胞若しくはNK細胞である、請求項９８に記載の免疫細胞。
- 当該細胞が、処置される患者由来である、請求項１００に記載の免疫細胞。
- 該開裂酵素が、MMP若しくはADAMファミリーメンバー若しくはそれらの触媒活性断片である、請求項９８に記載の免疫細胞。
- 該開裂酵素が、MMP2, MMP9, MMP3, MMP14, ADAM 17, ADAM28, 若しくは ADAM TS 16である、請求項１０２に記載の免疫細胞。
- 癌治療用である、抗体断片を含むCAR 及び 開裂酵素若しくはその触媒活性断片、の両方で、形質転換された若しくは形質導入された免疫細胞。
- 癌が、MUCl陽性癌である、請求項１０４に記載の免疫細胞。
- 免疫細胞が、T細胞若しくはNK細胞である、請求項１０４に記載の免疫細胞。
- T細胞におけるCARの抗体断片が該細胞をMUC1*陽性癌に導く、請求項１０４に記載の免疫細胞。
- 免疫細胞に形質導入されたCARの抗体断片が、免疫細胞に形質導入されている開裂酵素によって開裂された後のMUC1の型を認識する、請求項１０４に記載の免疫細胞。
- CARの抗体断片は、MNC2 若しくは MNE6に由来し、及び、開裂酵素は、MMP9若しくはMMP9の断片若しくはMMP9の活性型である、請求項１０８に記載の免疫細胞。
- 開裂酵素の活性化剤を、形質転換若しくは形質導入された、請求項１０４に記載の免疫細胞。
- 開裂酵素がMMP9であり、開裂酵素の活性化剤がMMP3である、請求項１１０に記載の免疫細胞。
- 開裂酵素をコードする核酸は、誘導可能なプロモーターにリンクする、請求項１０４に記載の免疫細胞。
- 開裂酵素の発現が、免疫細胞が標的腫瘍細胞への免疫応答を開始するときに特異的におこる事象によって、誘導される、請求項１１２に記載の免疫細胞。
- 誘導可能なプロモーターが、開裂酵素を発現するために、NFATファミリー蛋白質の存在によって誘導される、又は、誘導可能なプロモーターが、NFAT蛋白質の発現のためのプロモーターである、請求項１１２に記載の免疫細胞。
- NFAT蛋白質は、NFAT2として知られるNFATclである、請求項１１４の免疫細胞。
- 免疫細胞は、T細胞若しくはNK細胞である、請求項１１２に記載の免疫細胞。
- 当該抗体断片が、開裂酵素が、MUC1 若しくは MUCl*を開裂するとき、創生されるMUC1 若しくは MUCl*の型を認識する、請求項１０４に記載の免疫細胞。
- 当該抗体断片が、CARの部分である、請求項１１２に記載の免疫細胞。
- 誘導可能プロモーターにおける開裂酵素の発現は、CARの抗体断片が、腫瘍における、MUC1 若しくは MUC1*に結合する若しくは応答するときに、誘導される、請求項１１２に記載の免疫細胞。
- 省略
- NFATプロモーターの下流に局在する、開裂酵素若しくはその触媒活性断片をコードする核酸を含む核酸構築物。
- NFATがNFATclである、請求項１２１に記載の核酸構築物。
- プロモーターの配列が、SEQ ID NOS:781-783で表されるプロモーター配列、又はそれらの断片若しくは変異体であり、それは、開裂酵素若しくはその触媒活性断片の発現を誘導する活性を保持する、請求項１２１に記載の核酸構築物。
- 開裂酵素が、MMP9である、請求項１２１に記載の核酸構築物。
- プラスミドである、請求項１２１に記載の核酸構築物。
- 請求項１２１に記載の核酸構築物で、形質転換若しくは形質導入された免疫細胞。
- T細胞若しくはNK細胞である、請求項１２６に記載の免疫細胞。
- 請求項１２６に記載の免疫細胞を患者に投与することを含む、癌の処置若しくは予防の方法。
- 少なくとも一つのNFAT反応要素の下流に局在する、開裂酵素若しくはその触媒活性断片をコードする核酸を含む、核酸構築物。
- NFAT反応要素が、少なくとも２、３、若しくは４反応要素を含む、請求項１２９に記載の核酸構築物。
- 該反応要素の配列が、SEQ ID NOS:804-816で表される配列、又はその断片若しくは変異体の配列のいずれかであり、開裂酵素若しくはその触媒活性断片の発現を誘導する活性を保持する、請求項１２９に記載の核酸構築物。
- 開裂酵素が、MMP9である、請求項１２９に記載の核酸構築物。
- プラスミドである、請求項１２９に記載の核酸構築物。
- 請求項１２９に記載の核酸構築物で、形質転換若しくは形質導入された免疫細胞。
- T細胞若しくはNK細胞である、請求項１３４に記載の免疫細胞。
- 請求項１３４に記載の細胞を患者に投与することを含む、癌の処置若しくは予防の方法。
- MUCl* 及び/又は MUC1特異的開裂酵素に特異的であるCARをコードする核酸で形質転換若しくは形質導入された免疫細胞を、MUC1の欠失細胞外ドメイン配列をもつペプチドを提示する表面で、生体外で、該免疫細胞と共培養することで、予備活性化し、予備活性化（予備刺激ともいう）された免疫細胞（予備活性化免疫細胞ともいう）をえる、免疫細胞の予備活性化方法。
- 免疫細胞は、T細胞である、請求項１３７に記載の方法。
- さらに、予備活性化免疫細胞を含む組成物を患者に投与することを含む、請求項１３７に記載の方法。
- 該表面が、ビーズ、細胞培養プレート、若しくは細胞である、請求項１３７に記載の方法。
- 該細胞が、MUC1*発現細胞である、請求項１４０に記載の方法。
- 該細胞が、MUC1*発現癌細胞である、請求項１４１に記載の方法。
- 該細胞が、患者由来である、請求項１４２に記載の方法。
- 患者への該組成物投与前に、当該表面を除去することを含む、請求項１３７に記載の方法。
- 該表面が細胞であるとき、該細胞は、該細胞が数回複製するように、UV光で処理若しくは化学的に不活性化して、その後、患者に投与される、請求項１４４に記載の方法。
- CARをコードするプラスミド及び誘導可能プロモーターから発現される非CARの種類をコードするプラスミドで、形質転換若しくは形質導入された免疫細胞。
- CARが、抗体断片、scFv、又は腫瘍抗原に結合するペプチドを含む、請求項１４６に記載の免疫細胞。
- 腫瘍抗原が、MUCl*である、請求項１４７に記載の免疫細胞。
- 抗体断片が、非ヒト、ヒト、若しくはヒト化MNC2, MNE6, MNC3 若しくは MNC8由来である、請求項１４７に記載の免疫細胞。
- 抗体断片、scFv、又は該ペプチドが、B細胞又はB細胞前駆体、CD19, CD20, CD22, BCMA, CD30, CD138, CD123, CD33 若しくは LeY の、表面抗原に結合する、請求項１４７に記載の免疫細胞。
- 非CARの種類が、活性化免疫細胞の要素によって、活性化される、誘導可能なプロモーターから発現される、請求項１４６に記載の免疫細胞。
- 非CARの種類が、NFAT誘導可能プロモーターから発現される、請求項１４６に記載の免疫細胞。
- NFATが、NFATc 1 , NFATc3 若しくは NFATc2153である、請求項１５２に記載の免疫細胞。
- 非CARの種類が、開裂酵素である、請求項１４６に記載の免疫細胞。
- 開裂酵素が、MMP2, MMP3, MMP9, MMP13, MMP14, MMP16, ADAMIO, ADAM 17, 若しくは ADAM28、又はこれらの触媒活性断片である、請求項１４６に記載の免疫細胞。
- 非CARの種類が、サイトカインである、請求項１４６に記載の免疫細胞。
- サイトカインが、IL-7若しくは IL-15 又は IL-7 及び IL-15である、請求項１５６に記載の免疫細胞。
- 請求項１４６に記載の免疫細胞を、癌患者へ投与することを含む、癌の処置若しくは予防方法。
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