JP2023139253A - 難培養性嫌気性微生物の高収率培養のための培地サプリメント及びそれを含む培地組成物 - Google Patents
難培養性嫌気性微生物の高収率培養のための培地サプリメント及びそれを含む培地組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2023139253A JP2023139253A JP2023122972A JP2023122972A JP2023139253A JP 2023139253 A JP2023139253 A JP 2023139253A JP 2023122972 A JP2023122972 A JP 2023122972A JP 2023122972 A JP2023122972 A JP 2023122972A JP 2023139253 A JP2023139253 A JP 2023139253A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- medium
- culture
- peptone
- anaerobic
- medium composition
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 title claims abstract description 23
- 239000012913 medium supplement Substances 0.000 title abstract description 12
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 91
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract description 27
- FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L cobalt(3+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+3].N#[C-].N([C@@H]([C@]1(C)[N-]\C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C(\C)/C1=N/C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C\C1=N\C([C@H](C1(C)C)CCC(N)=O)=C/1C)[C@@H]2CC(N)=O)=C\1[C@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP([O-])(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](N2C3=CC(C)=C(C)C=C3N=C2)O[C@@H]1CO FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L 0.000 claims abstract description 27
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 claims abstract description 25
- OVRNDRQMDRJTHS-BKJPEWSUSA-N N-acetyl-D-hexosamine Chemical compound CC(=O)NC1C(O)O[C@H](CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-BKJPEWSUSA-N 0.000 claims abstract description 15
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N L-Aspartic acid Natural products OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 238000012136 culture method Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 37
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 37
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 37
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 33
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 claims description 21
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 claims description 21
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 claims description 20
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 18
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 17
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 claims description 17
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 17
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 16
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 15
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 15
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 15
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 14
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 14
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 14
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 claims description 13
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical group CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 claims description 13
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 13
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 claims description 13
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 claims description 12
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 12
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 12
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 12
- 229960002433 cysteine Drugs 0.000 claims description 11
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 10
- 239000013589 supplement Substances 0.000 claims description 9
- 241001505572 Anaerostipes caccae Species 0.000 claims description 8
- 241000605980 Faecalibacterium prausnitzii Species 0.000 claims description 8
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 claims description 8
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical class CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 claims description 7
- 241001608472 Bifidobacterium longum Species 0.000 claims description 6
- 239000004201 L-cysteine Substances 0.000 claims description 6
- 235000013878 L-cysteine Nutrition 0.000 claims description 6
- 229940009291 bifidobacterium longum Drugs 0.000 claims description 6
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229940066779 peptones Drugs 0.000 claims description 5
- OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N N-acetyl-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N 0.000 claims description 4
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 claims description 4
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 claims description 4
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 claims description 3
- 241000219745 Lupinus Species 0.000 claims description 3
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 claims description 3
- 241000209140 Triticum Species 0.000 claims description 3
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 claims description 3
- 240000006677 Vicia faba Species 0.000 claims description 3
- 235000010749 Vicia faba Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000002098 Vicia faba var. major Nutrition 0.000 claims description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 claims description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 3
- OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N N-acetyl-D-galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N 0.000 claims description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 abstract description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 11
- PWKSKIMOESPYIA-UHFFFAOYSA-N 2-acetamido-3-sulfanylpropanoic acid Chemical compound CC(=O)NC(CS)C(O)=O PWKSKIMOESPYIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 43
- 241000702462 Akkermansia muciniphila Species 0.000 description 36
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 18
- 239000000306 component Substances 0.000 description 17
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 14
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 14
- 229960001375 lactose Drugs 0.000 description 12
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 10
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 9
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 9
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 8
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 8
- 230000008859 change Effects 0.000 description 8
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 8
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 235000008521 threonine Nutrition 0.000 description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 6
- -1 pentose phosphates Chemical class 0.000 description 6
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 6
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 6
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 6
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 6
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 6
- 241000702460 Akkermansia Species 0.000 description 5
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 5
- 108010063954 Mucins Proteins 0.000 description 5
- 102000015728 Mucins Human genes 0.000 description 5
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 5
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 5
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 5
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 239000001974 tryptic soy broth Substances 0.000 description 5
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 4
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 4
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 4
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 4
- RMRCNWBMXRMIRW-BYFNXCQMSA-M cyanocobalamin Chemical compound N#C[Co+]N([C@]1([H])[C@H](CC(N)=O)[C@]\2(CCC(=O)NC[C@H](C)OP(O)(=O)OC3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)C)C/2=C(C)\C([C@H](C/2(C)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O RMRCNWBMXRMIRW-BYFNXCQMSA-M 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000301580 Butyricicoccus pullicaecorum Species 0.000 description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- 241000872832 Roseburia hominis Species 0.000 description 3
- 241001394655 Roseburia inulinivorans Species 0.000 description 3
- 229930003779 Vitamin B12 Natural products 0.000 description 3
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 3
- 229910001873 dinitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 3
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 3
- 229960003646 lysine Drugs 0.000 description 3
- 239000012577 media supplement Substances 0.000 description 3
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 3
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 3
- 235000006109 methionine Nutrition 0.000 description 3
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 3
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 3
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 description 3
- 235000019156 vitamin B Nutrition 0.000 description 3
- 239000011720 vitamin B Substances 0.000 description 3
- 235000019163 vitamin B12 Nutrition 0.000 description 3
- 239000011715 vitamin B12 Substances 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 102000009338 Gastric Mucins Human genes 0.000 description 2
- 108010009066 Gastric Mucins Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 102100024295 Maltase-glucoamylase Human genes 0.000 description 2
- PQMWYJDJHJQZDE-UHFFFAOYSA-M Methantheline bromide Chemical compound [Br-].C1=CC=C2C(C(=O)OCC[N+](C)(CC)CC)C3=CC=CC=C3OC2=C1 PQMWYJDJHJQZDE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930003270 Vitamin B Natural products 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 2
- 108010028144 alpha-Glucosidases Proteins 0.000 description 2
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 2
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 2
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 230000006860 carbon metabolism Effects 0.000 description 2
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 2
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 229960002104 cyanocobalamin Drugs 0.000 description 2
- 235000000639 cyanocobalamin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011666 cyanocobalamin Substances 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940051875 mucins Drugs 0.000 description 2
- 238000007481 next generation sequencing Methods 0.000 description 2
- GHOKWGTUZJEAQD-UHFFFAOYSA-N pantothenic acid Chemical compound OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(O)=O GHOKWGTUZJEAQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 239000013630 prepared media Substances 0.000 description 2
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 2
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N -2-Amino-4-hydroxybutanoic acid Natural products OC(=O)C(N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QDGAVODICPCDMU-UHFFFAOYSA-N 2-amino-3-[3-[bis(2-chloroethyl)amino]phenyl]propanoic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=CC(N(CCCl)CCCl)=C1 QDGAVODICPCDMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001763 2-hydroxyethyl(trimethyl)azanium Substances 0.000 description 1
- 230000002407 ATP formation Effects 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000040338 Bacillus caccae Species 0.000 description 1
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 1
- 241000185999 Bifidobacterium longum subsp. longum Species 0.000 description 1
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 1
- 235000019743 Choline chloride Nutrition 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N D-Cellobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 108010020056 Hydrogenase Proteins 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N L-Methionine Natural products CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N L-homoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 description 1
- 239000004395 L-leucine Substances 0.000 description 1
- 235000019454 L-leucine Nutrition 0.000 description 1
- 229930195722 L-methionine Natural products 0.000 description 1
- 229930182821 L-proline Natural products 0.000 description 1
- MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N Muraminsaeure Natural products OC(=O)C(C)OC1C(N)C(O)OC(CO)C1O MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ACFIXJIJDZMPPO-NNYOXOHSSA-N NADPH Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 ACFIXJIJDZMPPO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N Nicotinamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010222 PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 108010013639 Peptidoglycan Proteins 0.000 description 1
- 108010064851 Plant Proteins Proteins 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- DFPAKSUCGFBDDF-ZQBYOMGUSA-N [14c]-nicotinamide Chemical compound N[14C](=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- 230000006518 acidic stress Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 1
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000004099 anaerobic respiration Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-L aspartate group Chemical group N[C@@H](CC(=O)[O-])C(=O)[O-] CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-L 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- SGMZJAMFUVOLNK-UHFFFAOYSA-M choline chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)CCO SGMZJAMFUVOLNK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960003178 choline chloride Drugs 0.000 description 1
- 235000006279 cobamamide Nutrition 0.000 description 1
- 239000011789 cobamamide Substances 0.000 description 1
- ZIHHMGTYZOSFRC-UWWAPWIJSA-M cobamamide Chemical compound C1(/[C@](C)(CCC(=O)NC[C@H](C)OP(O)(=O)OC2[C@H]([C@H](O[C@@H]2CO)N2C3=CC(C)=C(C)C=C3N=C2)O)[C@@H](CC(N)=O)[C@]2(N1[Co+]C[C@@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O1)N1C3=NC=NC(N)=C3N=C1)O)[H])=C(C)\C([C@H](C/1(C)C)CCC(N)=O)=N\C\1=C/C([C@H]([C@@]\1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N/C/1=C(C)\C1=N[C@]2(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]1CCC(N)=O ZIHHMGTYZOSFRC-UWWAPWIJSA-M 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 239000003989 dielectric material Substances 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- VDQVEACBQKUUSU-UHFFFAOYSA-M disodium;sulfanide Chemical compound [Na+].[Na+].[SH-] VDQVEACBQKUUSU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000037149 energy metabolism Effects 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- BJHIKXHVCXFQLS-UYFOZJQFSA-N fructose group Chemical group OCC(=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO BJHIKXHVCXFQLS-UYFOZJQFSA-N 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 description 1
- 230000034659 glycolysis Effects 0.000 description 1
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 1
- 244000005702 human microbiome Species 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000014705 isoleucine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 1
- 125000003071 maltose group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012533 medium component Substances 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007102 metabolic function Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 235000007672 methylcobalamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011585 methylcobalamin Substances 0.000 description 1
- JEWJRMKHSMTXPP-BYFNXCQMSA-M methylcobalamin Chemical compound C[Co+]N([C@]1([H])[C@H](CC(N)=O)[C@]\2(CCC(=O)NC[C@H](C)OP(O)(=O)OC3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)C)C/2=C(C)\C([C@H](C/2(C)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O JEWJRMKHSMTXPP-BYFNXCQMSA-M 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 1
- 229960003966 nicotinamide Drugs 0.000 description 1
- 235000005152 nicotinamide Nutrition 0.000 description 1
- 239000011570 nicotinamide Substances 0.000 description 1
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- KHPXUQMNIQBQEV-UHFFFAOYSA-N oxaloacetic acid Chemical compound OC(=O)CC(=O)C(O)=O KHPXUQMNIQBQEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000033116 oxidation-reduction process Effects 0.000 description 1
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 1
- 230000036417 physical growth Effects 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 235000021118 plant-derived protein Nutrition 0.000 description 1
- 230000004260 plant-type cell wall biogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000007739 pm medium Substances 0.000 description 1
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N pyridoxine Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019171 pyridoxine hydrochloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011764 pyridoxine hydrochloride Substances 0.000 description 1
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 description 1
- 235000019192 riboflavin Nutrition 0.000 description 1
- 239000002151 riboflavin Substances 0.000 description 1
- 230000002000 scavenging effect Effects 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- IFGCUJZIWBUILZ-UHFFFAOYSA-N sodium 2-[[2-[[hydroxy-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyphosphoryl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound [Na+].C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NP(O)(=O)OC1OC(C)C(O)C(O)C1O IFGCUJZIWBUILZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GNBVPFITFYNRCN-UHFFFAOYSA-M sodium thioglycolate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)CS GNBVPFITFYNRCN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940046307 sodium thioglycolate Drugs 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 235000019157 thiamine Nutrition 0.000 description 1
- 239000011721 thiamine Substances 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010050327 trypticase-soy broth Proteins 0.000 description 1
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 1
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 229940011671 vitamin b6 Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/38—Chemical stimulation of growth or activity by addition of chemical compounds which are not essential growth factors; Stimulation of growth by removal of a chemical compound
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/02—Atmosphere, e.g. low oxygen conditions
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/05—Inorganic components
- C12N2500/10—Metals; Metal chelators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/32—Amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/34—Sugars
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/38—Vitamins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/70—Undefined extracts
- C12N2500/74—Undefined extracts from fungi, e.g. yeasts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
【課題】マイクロバイオーム治療剤またはパーマバイオティクスとして使用される嫌気性微生物を長期間にわたって安定的に高収率で製造できる培地サプリメント及び培地組成物を提供する。また、難培養性嫌気性微生物を高い最終光学密度に経済的に培養できる培養方法を提供する。
【解決手段】N-アセチルヘキソサミン、L-アスパラギン酸、L-システイン及びコバラミンを含む嫌気性微生物の高収率培養用培地サプリメント、これを含む難培養性嫌気性微生物の高収率培養用培地組成物及び培養方法を提供する。
【選択図】図3
【解決手段】N-アセチルヘキソサミン、L-アスパラギン酸、L-システイン及びコバラミンを含む嫌気性微生物の高収率培養用培地サプリメント、これを含む難培養性嫌気性微生物の高収率培養用培地組成物及び培養方法を提供する。
【選択図】図3
Description
本発明は、難培養性嫌気性微生物を高濃度に培養するための新規な培地サプリメント、それを含む培地組成物及びそれを用いた難培養性嫌気性微生物の高収率培養方法に関し、より詳細にはアッカーマンシア・ムシニフィラを含む難培養性嫌気性微生物の大量生産が可能であり、薬品や食品用途に適した培地サプリメント、培地組成物及び培養方法に関する。
ヒトマイクロバイオーム(human microbiome)とは、ヒトの体に共生する微生物群集とこのような微生物群集の誘電体を意味する用語で、マイクロバイオームがヒトの健康と密接な相関関係があることが明らかになり、多くの関心を集めている。
無菌動物モデル(germ-free animal model)、次世代塩基配列解析(Next-Generation Sequencing、NGS)、マルチオミクス解析(multi-omics analysis)などの生命工学分野の研究技法の飛躍的発展により、腸内微生物の組成と構造を分析するだけでなく、マイクロバイオームの機能と疾病との関連性を研究できるようになり、これによって、より多くの研究結果が発表されている。マイクロバイオーム治療剤またはパーマバイオティクス治療剤(医療用プロバイオティクス)が効果的な治療剤のない感染疾患、免疫疾患、代謝疾患などの代替治療剤になり得るという点で最近注目されている。マイクロバイオーム治療剤またはパーマバイオティクス治療剤は、大量生産により実用化が可能となれば、様々な難治性疾患に有利に適用可能であるものと予想される。
ヒトの腸内は嫌気状態なので、マイクロバイオームを構成する微生物は、ほとんど嫌気性微生物であるが、これらのほとんどは、利用可能な炭素源と窒素源が非常に制限的であり、さらに酸素に極度に敏感な絶対嫌気性という生理的特性のために産業化のための高濃度及び大量培養が難しいのが実情である。絶対嫌気性微生物の培養は極めて難しく、高いバイオマスの収率を得ることはさらに難しい。
例えば、大腸の粘膜層に生息し、パーマバイオティクスの候補として有望なアッカーマンシア・ムシニフィラは、一般的に培地に炭素源と窒素源として豚の胃から抽出されたムチン(hog gastric mucin)を添加して培養してもよい(Derrien et al.,2004)。また、アッカーマンシア ミューシピラー菌株は、コロンビアブロス(CB)及び脳心臓浸出液(BHI)ブロス上で培養されることもあるが、このような培地には、すべて動物由来成分が含まれ、さらにほとんどのムチン基盤の培地より培養性が劣り、ムチン添加培地により獲得できる最終光学密度の半分程度の最終光学密度に増殖させることができるだけである。
動物-由来成分は、ウイルスや細菌起源の汚染物質を含有するか、またはアレルゲン、抗原ペプチドまたは他の望ましくない生成物を含んでもよいため、ヒトにおいて食品や薬剤の用途のために嫌気性微生物を培養するのに適していないものと認識されている。最近までのかなりの努力にもかかわらず、既存の嫌気性微生物の培養のための培地は、組成が難しく、価格が高価で、さらに高収率で嫌気性微生物を培養できないため、特殊な研究目的以外の産業用途として利用できないという限界を持っている。
本発明は、上述した従来技術の限界ないし問題を克服するためのもので、本発明の一つの目的は、マイクロバイオーム治療剤またはパーマバイオティクスとして使用される嫌気性微生物を産業的に大量に培養するとき、医薬品、食品、または飼料として使用するのに適した長期間にわたって安定的に高収率で製造できる培地サプリメント及び培地組成物を提供することである。
本発明の他の目的は、難培養性嫌気性微生物を高い最終光学密度に経済的に培養できる培養方法を提供することである。
上述した課題を解決するための本発明の一態様は、N-アセチルヘキソサミン、L-アスパラギン酸、L-システイン及びコバラミンを含む嫌気性微生物の高収率培養用培地サプリメントに関する。
本発明の培地サプリメントは、N-アセチルヘキソサミン5g/L、L-アスパラギン酸8g/L、L-システイン0.5g/L及びコバラミン0.0001~0.005g/Lを含んでもよい。
前記嫌気性微生物は、ヒトの腸内絶対-嫌気性微生物であって、フィーカリバクテリウム・プラウスニッツイ(Faecalibacterium prausnitzii)、アナエロスティペス・カカエ(Anaerostipes caccae)、アッカーマンシア・ムシニフィラ(Akkermansia muciniphila)、ブチリシコッカス・プリセコルム(Butyricicoccus pullicaecorum)、ロゼブリア・イヌリニボランス(Roseburia inulinivorans)、ロゼブリア・ホミニス(Roseburia hominis)、またはビフィドバクテリウム・ロンガム(Bifidobacterium longum)であってもよいが、必ずしもこれらに制限されるものではない。
上述した課題を解決するための本発明の他の態様は、
植物ペプトン、酵母エキス、リン酸水素二カリウムを含む培地組成物であって、炭素源としてフルクトース及びラクトースを含み、サプリメントとしてN-アセチルヘキソサミン、L-アスパラギン酸及びL-システインのアミノ酸混合物及びコバラミンを含むことを特徴とする嫌気性微生物高収率培養用培地組成物に関する。
植物ペプトン、酵母エキス、リン酸水素二カリウムを含む培地組成物であって、炭素源としてフルクトース及びラクトースを含み、サプリメントとしてN-アセチルヘキソサミン、L-アスパラギン酸及びL-システインのアミノ酸混合物及びコバラミンを含むことを特徴とする嫌気性微生物高収率培養用培地組成物に関する。
本発明の嫌気性微生物高収率培養用培地組成物は、フルクトース2.5g/L、ラクトース2.5g/L、植物ペプトン20g/L、酵母エキス10g/L、リン酸水素二カリウム2.5g/L、N-アセチルヘキソサミン5g/L、L-アスパラギン酸8g/L、L-システイン0.5g/L、及びコバラミン0.0001~0.005g/Lを含んでもよい。
前記植物ペプトンは、大豆ペプトン(soy peptone)、小麦ペプトン(wheat peptone)、綿ペプトン(cotton peptone)、エンドウペプトン(pea peptone)、ソラマメペプトン(broadbean peptone)、ルピンペプトン(lupin peptone)、及びジャガイモペプトン(potato peptone)から構成されたグループから選ばれてもよいが、必ずしもこれらに制限されるものではない。
上述した課題を解決するための本発明のさらに他の態様は、上述した培地組成物に嫌気性微生物を接種して嫌気性条件下で増殖させることを特徴とする嫌気性微生物の高収率培養方法に関する。
前記培養段階は、pH6.6~7.0、培養温度35~39℃、攪拌速度40~50rpm、窒素飽和度80~90%、水素飽和度0~5%、二酸化炭素飽和度5~20%の条件で行ってもよい。
本発明の嫌気性微生物の高収率培養方法では、培養された嫌気性微生物が平板計数法により測定される生菌数が1010CFU/mL以上の細胞密度に到達することを特徴とする。
本発明の様々な実施例によれば、マイクロバイオーム治療剤またはパーマバイオティクスとして用いられる嫌気性微生物を産業的に大量に培養するとき、医薬品、食品または飼料として使用するのに適するように安定的に高収率で製造しうる。
本発明の培地サプリメント及び培地組成物によれば、パーマバイオティクス候補として有力であるが、酸素に非常に敏感で、微量の酸素にも死滅して大量生産が不可能であった難培養性菌種であるアッカーマンシア・ムシニフィラを薬品または食品用途に適合するように高濃度で培養しうる。
本発明の培地サプリメントまたは培養培地において高収率で培養された嫌気性微生物は、パーマバイオティクス医薬品、乳酸菌製剤、乳加工品及び生菌剤などに広範囲に用いることができるだろう。
以下、添付図面を参照し、本発明について詳細に説明する。
本発明において、用語の「培地(media)」または「培養培地(culture media)」とは、微生物の成長または増殖に必要なすべての栄養素及び必須物理的成長パラメータを含有する固体、半固体または液体培地を意味する。
本明細書に使用される場合、微生物の「培養」または「成長」という用語は、微生物有機体をその成長に役立つ条件下で所定の培養培地中で繁殖させることにより、これを増大させることを意味する。
本発明において培地の「サプリメント」とは、望む嫌気性微生物の成長、増殖または他の特徴を促進するために選ばれた構成成分から構成される添加物を意味する。
本明細書に使用される場合、用語の「嫌気性微生物」とは、酸素に敏感で、酸素の存在下で成長しない微生物を意味する。嫌気性微生物は、絶対(strict or obligate)嫌気性微生物及び通性(facultative)嫌気性微生物を含んでもよい。
本願で使用される場合、用語の「含む」及びその変形は、これらの用語が説明及び請求範囲に示される場合、制限的な意味を持たない。また、本明細書において、終点(endpoint)による数値範囲の言及は、その範囲内に含まれるすべての数を含む(例えば、1~5は、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5などを含む)。
本発明の一態様は、N-アセチルヘキソサミン、L-アスパラギン酸、L-システイン及びコバラミンを含む嫌気性微生物の高収率培養用培地サプリメントに関する。前記培地サプリメントは、N-アセチルヘキソサミン5g/L、L-アスパラギン酸8g/L、L-システイン0.5g/L及びコバラミン0.0001g~0.005g/Lを含んでもよい。
本発明の培地サプリメントは、主に嫌気性微生物の培養に使用されるが、このような嫌気性微生物は、ヒトの腸内絶対-嫌気性微生物(gastrointestinal strict-anaerobic microorganism)である。
これらの嫌気性微生物の例としては、フィーカリバクテリウム・プラウスニッツイ(Faecalibacterium prausnitzii)、アナエロスティペス・カカエ(Anaerostipes caccae)、アッカーマンシア・ムシニフィラ(Akkermansia muciniphila)、ブチリシコッカス・プリセコルム(Butyricicoccus pullicaecorum)、ロゼブリア・イヌリニボランス(Roseburia inulinivorans)、ロゼブリア・ホミニス(Roseburia hominis)、またはビフィドバクテリウム・ロンガム(Bifidobacterium longum)が挙げられるが、必ずしもこれらに制限されるものではない。
本発明の嫌気性微生物の高収率培養用培地サプリメントは、N-アセチルヘキソサミン(N-acetylhexosamines)を含む。N-アセチルヘキソサミン(N-acetylhexosamines)としては、N-アセチルグルコサミン(GlcNAc)またはN-アセチルガラクトサミン(GalNAc)を含んでもよいが、好ましくは、N-アセチルグルコサミン(GlcNAc)を含む。図1は、アッカーマンシア・ムシニフィラの炭素代謝過程を示す模式図である。図1を参照すると、アッカーマンシア・ムシニフィラは、ラクトースをガラクトースとグルコースに変換する酵素であるベータ-ガラクトシダーゼ(β-galactosidase)と、マルトースをグルコースに変換する酵素であるアルファ-グルコシダーゼ(α-glucosidase)を有しているため、ラクトース、マルトース、フルクトースのような炭素原は、すべて該当過程(glycolysis)を経て、高エネルギー分子であるATPを形成するのに使用される。外部から供給されるN-アセチルグルコサミン(Glc-NAc)は、細胞壁合成(peptidoglycan biosynthesis)及びエネルギー代謝に使用され、N-アセチルグルコサミンは、代謝されてアンモニアを生成するが、アンモニアは、細胞質を中和し、窒素源として供給する機能も可能である。N-アセチルグルコサミン(Glc-NAc)の他にN-アセチルガラクトサミン(GaL-NAc)がさらに追加されてもよい。
前記N-アセチルヘキソサミンは、約2.5~5g/Lの範囲の量で含まれてもよい。
アミノ酸は、細胞培養培地の中で培養された細胞の代謝機能を維持させるのに重要である。嫌気性微生物の高濃度培養時に良好な増殖を持続させるためには、外部タンパク質供給源が必須的である。本発明者らは、様々なアミノ酸のうち、アスパラギン酸とシステインの組み合わせが嫌気性微生物に対するタンパク質供給源ないし窒素源として非常に効果的であることを確認した。アミノ酸としては、L-アラニン、L-アルギニン、L-アスパラギン、L-アスパラギン酸、L-システイン、L-グルタミン酸、L-グルタミン、グリシン、L-ヒスチジン、L-イソロイシン、L-ロイシン、L-リジン、L-メチオニン、L-フェニルアラニン、L-プロリン、L-ヒドロキシプロリン、L-セリン、L-トレオニン、L-トリプトファン、L-チロシン、及びL-バリンなどがあり、アッカーマンシア・ムシニフィラが分解できるムチンは、セリン、トレオニン、プロリン及びシステインが豊富なアミノ酸配列の繰り返し構造の特徴を有している。しかし、本発明では、このアミノ酸のうち、アスパラギン酸とシステインの追加でアッカーマンシア・ムシニフィラを高収率で増殖させることができる。アスパラギン酸とシステインは、D-形態及びL-形態で存在してもよい。
図2は、アスパラギン酸から様々なアミノ酸の生合成過程を示す模式図である。図2を参照すると、アスパラギン酸は、トレオニン及びメチオニン生合成の中間体であるホモセリン(homoserine)に変換されてもよく、セリン、プロリンを含む様々なアミノ酸がアスパラギン酸から生合成されてもよい。さらに、アスパラギン酸は、核酸(nucleic acid)、脂肪酸(fatty acid)とグルタチオン(glutathione、一部の細菌において非常に重要な抗酸化剤)の合成に必要なペントースリン酸塩(pentose phosphates)とニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸(NADPH)の生成を増加させて酸性ストレスに対する抵抗性を改善させることができる。また、アスパラギン酸からリシン(Lysine)とトレオニン(Threoine)の生合成は、いくつかの菌種の増殖に役立ち、アスパラギン酸の摂取により腸内ミクロビオータの多様性が増加することもある。
本発明の培地サプリメントの組成物は、アスパラギン酸とシステインをそれぞれ例えば、約4~8g/Lと約0.5~1g/Lの範囲の量で含んでもよい。
本発明の培地サプリメントは、コバラミン(cobalamin)、すなわちビタミンB12を含む。コバラミンは、補助因子として細胞によって使用される。培養培地にムチンが含まれない場合、嫌気性微生物が高密度に成長するためには、相当量のコバラミンを必要とする。コバラミンはコバラミンと同等の化合物を含んでもよい。例えば、コバラミンとしては、シアノコバラミン、メチルコバラミン、アデノシルコバラミン(adenosyl cobalamin)、ヒドロキシルコバラミン(hydroxyl cobalamin)及び他の機能的に同等の化合物を含んでもよい。本発明の培養培地サプリメントは、コバラミンを約0.0001~0.005g/Lの範囲の量で含んでもよい。
ビタミンとしては、ビオチン、コリンクロリド、葉酸、ミオイノシトール、ニアシンアミド、ピリドキシンHCl、D-パントテン酸(hemiCa)、リボフラビン、チアミンHClなどもあるが、コバラミンを培地に添加する場合に嫌気性微生物の相対的な豊富度を増加させ、他のビタミンを追加してもコバラミンを単独で添加した場合と効果上大きな差がない。アッカーマンシア・ムシニフィラの誘電体分析において、ATCC BAA-835菌株とEB-AMDK19菌株を含むほとんどの菌株は、ビタミンB群(B1、B2、B3、B5、B6、B7、B9)の生合成(biosynthesis)に関連した遺伝子は、確認されたが、ビタミンB12の生合成関連遺伝子は有していないことが分かった。また、アッカーマンシア・ムシニフィラにおけるコバラミンは、スクシネートからプロピオネートの合成に重要な助酵素として作用しうる。
本発明の他の態様は、本発明の培地サプリメントを含む嫌気性微生物の高収率培養のための培地組成物に関する。
本発明の嫌気性微生物の高収率培養のための培地組成物を準備するための基礎培地としては、大量培養による産業的生産を目的とする場合には、液体培地が好ましいが、植物ペプトン、酵母エキス、リン酸水素二カリウムを含む培地であってもよい。
本発明の嫌気性微生物高収率培養用培地組成物は、植物ペプトン、酵母エキス、リン酸水素二カリウムを含む培地を基礎にし、炭素源としてフルクトース及びラクトースを含み、サプリメントとしてN-アセチルヘキソサミン、L-アスパラギン酸とL-システインのアミノ酸混合物及びコバラミンを含む。
本発明の培地組成物は、嫌気性微生物、具体的には絶対-嫌気性微生物の培養に適する。絶対-嫌気性微生物の非限定的な例としては、フィーカリバクテリウム・プラウスニッツイ(Faecalibacterium prausnitzii)、アナエロスティペス・カカエ(Anaerostipes caccae)、アッカーマンシア・ムシニフィラ(Akkermansia muciniphila)、ブチリシコッカス・プリセコルム(Butyricicoccus pullicaecorum)、ロゼブリア・イヌリニボランス(Roseburia inulinivorans)、ロゼブリア・ホミニス(Roseburia hominis)、またはビフィドバクテリウム・ロンガム(Bifidobacterium longum)が含まれてもよいが、必ずしもこれらに制限されるものではない。本発明の培地組成物は、特にアッカーマンシア属、具体的にアッカーマンシア・ムシニフィラを産業的規模で高収率で培養するのに適する。
本発明の嫌気性微生物高収率培養用培地組成物は、植物ペプトン20g/L、酵母エキス10g/L、リン酸水素二カリウム2.5g/L、フルクトース2.5g/L、ラクトース2.5g/L、N-アセチルヘキソサミン5g/L、L-アスパラギン酸8g/L、L-システイン0.5g/L、及びコバラミン0.0001~0.005g/Lを含んでもよい。
本発明の嫌気性微生物高収率培養用培地は、植物ペプトンを含んでもよい。植物ペプトンは、植物タンパク質加水分解物(hydrolysate)である。これは、任意の植物から由来したものであってもよい。前記植物ペプトンは、例えば、大豆ペプトン(soy peptone)、小麦ペプトン(wheat peptone)、綿ペプトン(cotton peptone)、エンドウペプトン(pea peptone)、ソラマメペプトン(broadbean peptone)、ルピンペプトン(lupin peptone)、及びジャガイモペプトン(potato peptone)から構成されたグループから選ばれてもよい。前記植物ペプトンは、例えば、約15~20g/Lの量で含んでもよい。
本発明の嫌気性微生物高収率培養用培地は、酵母エキスを含む。酵母エキスを添加する場合、タンパク質供給源の増加が非-動物由来の培地上で嫌気性微生物の増殖をさらに増加させることができる。酵母エキスは、酵母自己溶解物(autolysate)、限外ろ過された酵母エキスまたは合成酵母エキスであってもよい。酵母エキスの濃度は、5g/L~10g/L、例えば、約10g/Lであってもよい。
本発明の培地は、フォスフェイト-含有成分、例えば、Na2HPO4、K2HPO4またはKH2PO4をさらに含む。これらの成分は、等張性条件を維持させ、浸透圧の不均衡を防ぐために細胞培養培地に添加される。本発明の培地組成物は、pHを6.5~8.0、好ましくは、6.0~7.0、より好ましくは、約pH6.8±1の範囲に維持させることが好ましい。
本発明の嫌気性微生物の高収率培養のための培地組成物は、炭素源及びエネルギー源としてフルクトースとラクトースを含み、選択的にマルトースをさらに含んでもよい。フルクトースまたはマルトースの濃度は、2.5g/L~5.0g/L、例えば、約2.5g/Lであってもよい。
炭素源としてグルコースを含んでもよいが、グルコースの添加時に微生物の指数的成長を誘導するが、長く持続されておらず、グルコースがガラクトースとβ(1→4)-グリコシドで結合されているラクトースを分解してグルコースが供給されることができ、代謝経路においてN-アセチルグルコサミンとグルコースは、相互変換が可能なため、グルコースよりはフルクトースとラクトースの組み合わせがより好ましい。
本発明において、培養培地は、多数の構成成分を含む、「粉末培地(powdered medium)」、または「濃縮培地(concentrated medium)」であって、一般的に言及された粉末または濃縮物の形態で提供されるか、または液体培地に望む濃度の特定の構成成分を提供するための所定の体積の水と結合されてもよい。このような粉末培地または濃縮培地は、使用前に適切な水、普通の滅菌水に溶解されてもよい。
本発明において、培地や培地組成物は、嫌気性微生物を培養するのに適した濃度で構成要素を含む最終培地及び希釈のために適切な粉末または濃縮培地をすべて含む。
本発明の培養培地は、嫌気性微生物の培養のために選択的に還元剤を含んでもよい。適切な還元試薬は、培養培地の酸化-還元電位を下げて溶存酸素を除去(oxygen scavanger)することにより、嫌気性微生物の成長を促進させることができる。適切な還元剤としては、例えば、チオグリコール酸ナトリウム、L-システイン、ジチオトレイトール、ルジチオエリトリトール、硫化ナトリウム(Na2S)及びこれらの組み合わせを含むが、必ずしもこれらに制限されるものではない。
本発明の一実施例によれば、本発明の培地の嫌気性は、窒素(N2)、水素(H2)、及び二酸化炭素(CO2)が100:0:0~90:5:5の体積比で混合された混合ガスによる培地内の酸素の置換によって組成されてもよい。本発明の一実施例によれば、培地内の気圧は、0.1~0.3気圧であってもよく、好ましくは、0.2気圧(0.02MPa)であってもよい。
本発明のさらに他の態様は、以上で説明した本発明の培地組成物に嫌気性微生物を接種して嫌気性条件下で増殖させることを特徴とする嫌気性微生物の高収率培養方法に関する。
微生物の培養条件は、通常の技術者によってよく知られているように、微生物の成長速度に影響を及ぼすことができる。本発明において、培養段階は、pH6.6~7.0、培養温度35~39℃、攪拌速度40~50rpm、窒素飽和度80~90%、水素飽和度0~5%、二酸化炭素飽和度5~20%で行ってもよい。
本発明において嫌気性微生物の培養は、マイクロプレートリーダーを用いて600nmの波長で測定された光学密度(OD600)によって結晶時、0.6以上の細胞密度を持つまで行われ、このときの平板計数法により測定される生菌数1010CFU/mL以上の細胞密度に到達するように高濃度で培養しうる。
嫌気性微生物の高濃度培養のための培養温度は、35~39℃、特に36~38℃が好ましい。培養時、微生物群集懸濁液が接種された組成物を攪拌しうる。例えば、培養器の毎分回転速度(rpm)は、40rpm~50rpmであってもよいが、これに限定されるものではない。培養期間は、嫌気性微生物の生育状態に応じて適宜調整してもよいが、一般的に20~100時間、特に24~48時間程度が適当である。
本発明の一実施例によれば、本発明の培地の嫌気性は、窒素(N2)、水素(H2)、及び二酸化炭素(CO2)が90:5:5~80:0:20の体積比で混合された混合ガスによる培地内の酸素の置換によって組成されてもよい。混合ガスによる培地内の酸素の置換は、培地体積1mLを基準に30秒以上行われることが好ましく、最も好ましくは、2分であってもよい。
アッカーマンシア・ムシニフィラは、代謝経路でATP合成に水素イオンが使用され、嫌気性条件で水素(H2)がNi-dependent hydrogenaseによる嫌気性呼吸に重要である。したがって、本発明の培地でアッカーマンシア・ムシニフィラEB-AMDK19菌株の高濃度培養のためには、水素が含まれた混合ガスや水に溶けて炭酸と水素イオンを発生できる二酸化炭素が含まれたガスを注入することが必要である。
以下、実施例によって本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。特に明示されない限り、本実施例に言及されたすべての部及び百分率は、重量基準であり、すべての温度は、摂氏温度で表現される。
また、以下の実施例において、嫌気性微生物の濃度(バイオマスの生成量)は、培養期間中に分光光度計を用いて600nmで培養液の光学密度を測定して求めた。ΔODは、初期と48時間(または72時間)培養後の吸光度の差により算出した。
実施例
実施例1:培養培地でムチン代替成分組成の最適化
大豆カゼイン消化液体培地(Tryptic Soy Broth、TSB)をベースにムチンに代わる基質及び成分の最適な組み合わせを探索し、このために表1のようにそれぞれの準備された培地に0.1%v/vの割合でアッカーマンシア・ムシニフィラEB-AMDK19(KCTC 13761BP)菌株を接種した後、37℃、嫌気条件(90%N2、5%CO2、5%H2)で24~48時間培養し、光学密度(OD600)の変化を測定し、その結果を下記表1に示した。
実施例1:培養培地でムチン代替成分組成の最適化
大豆カゼイン消化液体培地(Tryptic Soy Broth、TSB)をベースにムチンに代わる基質及び成分の最適な組み合わせを探索し、このために表1のようにそれぞれの準備された培地に0.1%v/vの割合でアッカーマンシア・ムシニフィラEB-AMDK19(KCTC 13761BP)菌株を接種した後、37℃、嫌気条件(90%N2、5%CO2、5%H2)で24~48時間培養し、光学密度(OD600)の変化を測定し、その結果を下記表1に示した。
アッカーマンシア・ムシニフィラ菌株は、TSB培地ではほとんど増殖されなかったが、ムチンに代わる成分としてN-アセチルグルコサミン(GlcNAc)とトレオニンを追加すると、培養が可能であることが分かった。しかし、トレオニンをアスパラギン酸(Aspartate)に代わる場合に、同じ濃度(4g/L)で培養性が改善されることが分かり、最大8g/Lの濃度のアスパラギン酸を添加するまで倍養性が増加した。
前記表1から分かるように、TSBに基づいてN-アセチルグルコサミン、ラクトース、アスパラギン酸とビタミンが添加された培地で吸光度の変化量は、0.4水準であり、このときの生菌数は、109CFU/mLと測定され、これと比較してPM培地で吸光度の変化量は、0.1水準であり、このときの生菌数は、108CFU/mLと測定され、10倍以上の差があることが分かった。
これはオキサロアセテート/アスパラギン酸アミノ酸系がリシン、アスパラギン、メチオニン、トレオニン及びイソロイシンから構成され、代謝過程においてアスパラギン酸はリシン、アスパラギン、メチオニン及びトレオニンに変換できるためであると考えられる。
実施例2:互いに異なる炭素源を有する培地の倍養性の比較
動物由来成分または動物由来酵素が使用されて製造された成分を排除するため、植物ペプトンと酵母エキスに基づいて、本発明の培地サプリメントの嫌気性微生物培養性を試験した。
動物由来成分または動物由来酵素が使用されて製造された成分を排除するため、植物ペプトンと酵母エキスに基づいて、本発明の培地サプリメントの嫌気性微生物培養性を試験した。
植物ペプトンとして大豆ペプトンと酵母エキスは、それぞれ5、10、15、20g/Lの濃度を互いに組み合わせてテストした結果、20g/Lの濃度の大豆ペプトンと10g/Lの濃度の酵母エキスの組み合わせにおいて培養性が最も優れており、pH調節のためにリン酸水素二カリウムを2.5g/Lの濃度で添加して基礎培地を製造した。
嫌気性微生物であるアッカーマンシア・ムシニフィラの培養性に影響を及ぼす炭素源を調査するために窒素源基礎培地に表2に示すように、様々な炭素源を添加し、0.1%v/vの割合でアッカーマンシア・ムシニフィラEB-AMDK19(KCTC 13761BP)菌株を接種した後、37℃、嫌気条件(90%N2、5%CO2、5%H2)で24~48時間培養した後、光学密度(OD600)の変化を測定し、その結果を下記表3に示した。
前記表3の結果から分かるように、炭素源としてラクトースを基本とし、これにN-アセチルグルコサミンを添加するか、またはN-アセチルグルコサミンとグルコースをともに添加した場合に比べて、フルクトースを添加する場合にアッカーマンシア・ムシニフィラ菌株の倍養性がはるかに優れていることが分かった。吸光度の変化量(△OD)は、平均0.5~0.6水準であり、生菌数は、約1010CFU/mLと測定され、本発明の場合に生菌数を基準に10~100倍増加されて培養性が著しく向上したことを確認した。また、グルコース2分子がβ(1→4)-グリコシドで結合されているマルトース(Maltose)を添加したときにも、培養性はグルコースを添加したときよりも改善された。
実施例3:倍養性の改善に重要なビタミンB群の選別
本実施例では、アッカーマンシア・ムシニフィラ菌株の培養培地にビタミンB群の添加による倍養性の改善の有無を確認した。嫌気性微生物の増殖に影響を及ぼす特定のビタミンを選別するためにビタミンB群に属するすべてのビタミンをそれぞれ個別に、またはB群複合体(B1、B2、B3、B5、B6、B7、B9、B10、B12)に対してテストを行った。
本実施例では、アッカーマンシア・ムシニフィラ菌株の培養培地にビタミンB群の添加による倍養性の改善の有無を確認した。嫌気性微生物の増殖に影響を及ぼす特定のビタミンを選別するためにビタミンB群に属するすべてのビタミンをそれぞれ個別に、またはB群複合体(B1、B2、B3、B5、B6、B7、B9、B10、B12)に対してテストを行った。
表4のようにそれぞれの準備された培地に0.1%v/vの割合でアッカーマンシア・ムシニフィラ菌株を接種した後、37℃、嫌気条件(90%N2、5%CO2、5%H2)において24~48時間培養し、光学密度(OD600)の変化を測定し、その結果を下記表4に示した。
表4から確認できるように、培地にシアノコバラミン(ビタミンB12)が含まれる場合(B12、B2+B6+B9+B12、B1+B2+B3+B5+B6+B7+B9+B12またはB1+B2+B3+B5+B6+B7+B9+B10+B12)にのみ培養性が増加することが分かり、ビタミンB12を単独で添加したものは、ビタミンB群複合体で添加したときに比べて有意な差はなかった。
また、コバラミンの最適濃度を見つけるため、コバラミンの濃度を変更するとともに培養した後、光学密度(OD600)の変化を測定し、その結果を下記表5に示した。
前記表5結果から分かるように、培地に添加されるビタミンB12の最適濃度を確認した結果、0.1mg/L未満の濃度では、培養性が次第に減少することが分かり、0.1mg/Lから5mg/L濃度では、培養性において有意な差がないため、0.1mg/Lでの濃度が最も適すると考えられる。
実施例4:培地成分の最適化
嫌気性微生物の高濃度培養に必要な必須構成成分及び最適の組み合わせを探索するため、アッカーマンシア・ムシニフィラ菌株を様々な成分の組み合わせを有する培地に同一条件で培養した後、その結果を下記表6に示した。
嫌気性微生物の高濃度培養に必要な必須構成成分及び最適の組み合わせを探索するため、アッカーマンシア・ムシニフィラ菌株を様々な成分の組み合わせを有する培地に同一条件で培養した後、その結果を下記表6に示した。
本発明の培地において各成分別培養に及ぼす影響を確認した結果、前記組み合わせにおいて単糖類の窒素含有誘導体であるN-アセチルグルコサミンは、アッカーマンシア・ムシニフィラ培養に最も必須的な成分であると確認されており、N-アセチルグルコサミンと代謝経路の一部を互いに共有している炭素源であるフルクトースとラクトースは、高濃度培養のために必要な成分であることが分かった。主なアミノ酸供給源である大豆ペプトンと、アスパラギン酸、及びシアノコバラミンの組み合わせは、培養性の改善に重要な成分であることが確認された。
マルトースは、グルコースやフルクトースを代替可能であり、培養初期の増殖速度は、フルクトースやグルコースに比べて早い方であり、培養性においても大きな差を示さなかった。しかし、現在マルトースは、フルクトースやグルコースに比べて多少高価であるため、産業用培地としてはフルクトースが最も適すると考えられる。結論的に、表6から分かるように、本発明の培地のすべての構成成分は、アッカーマンシア・ムシニフィラ菌株の高濃度培養のために必要であり、すべての成分が組み合わせたときに培養性が最も優れていることが確認された。
実施例5:本発明の培地において様々なアッカーマンシア・ムシニフィラ菌株の培養性確認
前記表2に記載された培地を用いて、培養菌株の種類を下記表7に記載されたように、異にしたことを除いては、実施例1と同様に行って0.1%v/vの割合でアッカーマンシア・ムシニフィラ菌株を接種した後、37℃、嫌気条件(90%N2、5%CO2、5%H2)で24~48時間培養し、光学密度(OD600)の変化を測定し、その結果を下記表7に示した。
前記表2に記載された培地を用いて、培養菌株の種類を下記表7に記載されたように、異にしたことを除いては、実施例1と同様に行って0.1%v/vの割合でアッカーマンシア・ムシニフィラ菌株を接種した後、37℃、嫌気条件(90%N2、5%CO2、5%H2)で24~48時間培養し、光学密度(OD600)の変化を測定し、その結果を下記表7に示した。
前記表7の結果から確認されるように、本発明の培地を用いて、アッカーマンシア・ムシニフィラ標準菌株(ATCC BAA-835T)及び互いに異なるアッカーマンシア・ムシニフィラ菌株の培養性を確認した結果、すべてのアッカーマンシア・ムシニフィラ菌株において類似した培養水準を示し、したがって、すべてのアッカーマンシア・ムシニフィラ菌株の高濃度培養培地に活用可能であることが確認できる。
実施例6:様々な難培養性絶対嫌気性微生物の倍養性比較
培養菌株の種類を下記表8に記載されたように、異にしたことを除いては、前記表2に記載された培地を用いて、実施例1と同様に行って0.1%v/vの割合でフィーカリバクテリウム・プラウスニッツイ(Faecalibacterium prausnitzii)、アナエロスティペス・カカエ(Anaerostipes caccae)またはビフィドバクテリウム・ロンガム(Bifidobacterium longum)菌株を接種した後、37℃、嫌気条件(90%N2、5%CO2、5%H2)で24~48時間培養し、光学密度(OD600)の変化を測定し、その結果を下記表8に示した。対照のために培養性が優れていることが知られている対照培地でも培養し、本発明の培地における培養性と比較した。対照培地としてF.Prausnitziiは、脳心臓浸出培地(Brain Heart Infusion、BHI)に5g/L酵母エキス、1g/Lセロビオース及び1g/Lマルトースを補充した培地で同じ条件で培養した。A.caccaeは、TSB培地に5g/L酵母エキスを補充した培地で培養し、B.longumは、BLブロス培地で培養した。
培養菌株の種類を下記表8に記載されたように、異にしたことを除いては、前記表2に記載された培地を用いて、実施例1と同様に行って0.1%v/vの割合でフィーカリバクテリウム・プラウスニッツイ(Faecalibacterium prausnitzii)、アナエロスティペス・カカエ(Anaerostipes caccae)またはビフィドバクテリウム・ロンガム(Bifidobacterium longum)菌株を接種した後、37℃、嫌気条件(90%N2、5%CO2、5%H2)で24~48時間培養し、光学密度(OD600)の変化を測定し、その結果を下記表8に示した。対照のために培養性が優れていることが知られている対照培地でも培養し、本発明の培地における培養性と比較した。対照培地としてF.Prausnitziiは、脳心臓浸出培地(Brain Heart Infusion、BHI)に5g/L酵母エキス、1g/Lセロビオース及び1g/Lマルトースを補充した培地で同じ条件で培養した。A.caccaeは、TSB培地に5g/L酵母エキスを補充した培地で培養し、B.longumは、BLブロス培地で培養した。
前記表8の結果から確認されるように、フィーカリバクテリウム・プラウスニッツイ(Faecalibacterium prausnitzii)、アナエロスティペス・カカエ(Anaerostipes caccae)のような難培養性絶対嫌気性微生物及びビフィドバクテリウム・ロンガム(Bifidobacterium longum)の培養の可能性を行った結果、培養性が優れていることが知られている対照培地と比較し、本発明の培地が培養性がさらに優れていることを確認した。
実施例7:大量培養のための工程条件最適化-培養条件別倍養性比較分析
図4に示すような嫌気性発酵システムを用いて、3L-スケールにおいて表2の培地で炭素源の種類を変更した培地を使用して下記表9の条件で培養を行っており、アッカーマンシア・ムシニフィラ菌株の成長曲線(growth curve)及びpHの変化を確認した。また、顕微鏡観察による菌数の変化と形態学的変化を確認して図5に示し、平板計数法(plate count method)を用いて生菌数を測定し、表10に示した。
図4に示すような嫌気性発酵システムを用いて、3L-スケールにおいて表2の培地で炭素源の種類を変更した培地を使用して下記表9の条件で培養を行っており、アッカーマンシア・ムシニフィラ菌株の成長曲線(growth curve)及びpHの変化を確認した。また、顕微鏡観察による菌数の変化と形態学的変化を確認して図5に示し、平板計数法(plate count method)を用いて生菌数を測定し、表10に示した。
本発明の培地を用いて嫌気性発酵システムにおいて、アッカーマンシア・ムシニフィラEB-AMDK19菌株を培養した結果、指数増殖期は、接種後5~25時間であることが分かり、pHの変化も9~18.5時間に急激に発生したことが確認された。24時間培養を基準に光学密度(OD600)は、0.798水準であることが分かり、このときの生菌数は、5.5x1010CFU/mLと測定された(図6及び表10参照)。
本発明の培地においてフルクトースをマルトースに置き換えたとき、指数増殖期は、接種後3.5~21時間であることが分かり、pHの変化も7~14時間に急激に発生していることが確認された。フルクトースを用いて培養した結果と比較すると、マルトースが含まれた本発明の培地では、誘導期が1.5時間短くなる特徴を示し、24時間培養を基準に吸光度は0.632水準となり、多少低くなったが、このときの生菌数は、5.1x1010CFU/mLと大きな差はなかった(図7及び表9参照)。
フルクトースが含まれた本発明の培地で混合ガス(90%N2、5%CO2、5%H2)の代わりに、より経済的で工業化に適した水素を含まないガス{高純度窒素ガス(100%N2)または80%N2と20%CO2から構成された混合ガス}を用いて培養した結果、高純度窒素ガスの場合、既存の培養結果と比較して培養性が著しく劣ることが分かるが、80%N2と20%CO2から構成されたガスでは、培養性において大きな差はなかった(図8及び表10参照)。
また、前記表10から分かるように、本発明の培地においてすべての構成成分は、アッカーマンシア・ムシニフィラ菌株の高濃度培養のために必要であり、さらに水素や二酸化炭素を含む混合ガスの注入が必要であることが確認された。
Claims (8)
- 植物ペプトン、酵母エキス、リン酸水素二カリウムを含む嫌気性微生物の培養用培地組成物であって、炭素源としてラクトースと少なくとも1種のフルクトースとマルトースを含み、サプリメントとしてN-アセチルヘキソサミン、L-アスパラギン酸とL-システインのアミノ酸混合物及びコバラミンを含み、
前記N-アセチルヘキソサミンは、N-アセチルグルコサミン(GlcNAc)またはN-アセチルガラクトサミン(GalNAc)であり、
前記嫌気性微生物は、フィーカリバクテリウム・プラウスニッツイ(Faecalibacterium prausnitzii)、アナエロスティペス・カカエ(Anaerostipes caccae)、またはビフィドバクテリウム・ロンガム(Bifidobacterium longum)からなる群より選択されることを特徴とする嫌気性微生物の培養用培地組成物。 - 前記培地組成物は、植物ペプトン20g/L、酵母エキス10g/L、リン酸水素二カリウム2.5g/L、フルクトース2.5g/L、ラクトース2.5g/L、N-アセチルヘキソサミン5g/L、L-アスパラギン酸8g/L、L-システイン0.5g/L、及びコバラミン0.0001~0.005g/Lを含有することを特徴とする、請求項1に記載の難培養性嫌気性微生物の培養用培地組成物。
- 前記植物ペプトンは、大豆ペプトン(soy peptone)、小麦ペプトン(wheat peptone)、綿ペプトン(cotton peptone)、エンドウペプトン(pea peptone)、ソラマメペプトン(broadbean peptone)、ルピンペプトン(lupin peptone)、及びジャガイモペプトン(potato peptone)から構成されたグループから選ばれることを特徴とする、請求項1に記載の難培養性嫌気性微生物の培養用培地組成物。
- 前記嫌気性微生物は、フィーカリバクテリウム・プラウスニッツイ(Faecalibacterium prausnitzii)、または、アナエロスティペス・カカエ(Anaerostipes caccae)であることを特徴とする請求項1に記載の難培養性嫌気性微生物の培養用培地組成物。
- 請求項1に記載の培地組成物に嫌気性微生物を接種し、嫌気性条件下で増殖させることを特徴とする、難培養性嫌気性微生物の培養方法。
- 前記培養段階は、pH 6.6~7.0、培養温度35~39℃、攪拌速度40~50rpm、窒素飽和度80~90%、二酸化炭素飽和度5~20%及び水素飽和度0~5%で行うことを特徴とする、請求項5に記載の難培養性嫌気性微生物の培養方法。
- 培養された嫌気性微生物が平板計数法によって測定される生菌数1010CFU/mL以上の細胞密度に到達することを特徴とする、請求項5に記載の難培養性嫌気性微生物の培養方法。
- 前記嫌気性微生物は、フィーカリバクテリウム・プラウスニッツイ(Faecalibacterium prausnitzii)、または、アナエロスティペス・カカエ(Anaerostipes caccae)であることを特徴とする請求項5に記載の難培養性嫌気性微生物の培養方法。
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR10-2020-0150111 | 2020-11-11 | ||
KR1020200150111A KR102222953B1 (ko) | 2020-11-11 | 2020-11-11 | 난배양성 혐기성 미생물의 고수율 배양을 위한 배지 보충제 및 그를 포함하는 배지 조성물 |
JP2021552153A JP2022550494A (ja) | 2020-11-11 | 2020-12-28 | 難培養性嫌気性微生物の高収率培養のための培地サプリメント及びそれを含む培地組成物 |
PCT/KR2020/019214 WO2022102866A1 (en) | 2020-11-11 | 2020-12-28 | Medium supplement for high-yield industrial culture of fastidious anaerobes and medium composition containing the same |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021552153A Division JP2022550494A (ja) | 2020-11-11 | 2020-12-28 | 難培養性嫌気性微生物の高収率培養のための培地サプリメント及びそれを含む培地組成物 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2023139253A true JP2023139253A (ja) | 2023-10-03 |
Family
ID=81393280
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021552153A Pending JP2022550494A (ja) | 2020-11-11 | 2020-12-28 | 難培養性嫌気性微生物の高収率培養のための培地サプリメント及びそれを含む培地組成物 |
JP2023122972A Pending JP2023139253A (ja) | 2020-11-11 | 2023-07-28 | 難培養性嫌気性微生物の高収率培養のための培地サプリメント及びそれを含む培地組成物 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021552153A Pending JP2022550494A (ja) | 2020-11-11 | 2020-12-28 | 難培養性嫌気性微生物の高収率培養のための培地サプリメント及びそれを含む培地組成物 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US11377633B2 (ja) |
EP (1) | EP4025685B1 (ja) |
JP (2) | JP2022550494A (ja) |
CN (1) | CN114787335B (ja) |
AU (1) | AU2020429371B2 (ja) |
CA (1) | CA3132176C (ja) |
PL (1) | PL4025685T3 (ja) |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20130021920A (ko) | 2011-08-24 | 2013-03-06 | 포항공과대학교 산학협력단 | Akkermansia muciniphila 또는 Bacteroides acidifaciens 유래 세포밖 소포체를 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 치료 또는 예방용 조성물 |
KR101740893B1 (ko) | 2014-05-20 | 2017-06-13 | 주식회사 엠디헬스케어 | Akkermansia muciniphila 균에서 유래하는 세포밖 소포를 유효성분으로 함유하는 대사질환의 치료 또는 예방용 조성물 |
CA2984986C (en) * | 2015-05-06 | 2023-05-23 | Wageningen Universiteit | Method of culturing akkermansia |
KR101809172B1 (ko) | 2016-07-11 | 2017-12-14 | 한국생명공학연구원 | 뮤신이 없는 배지에서 배양한 아커만시아 뮤시니필라 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 |
CN110267669A (zh) * | 2016-12-06 | 2019-09-20 | 潘德勒姆治疗公司 | 与分离并纯化的微生物有关的方法和组合物 |
KR102197180B1 (ko) | 2018-10-11 | 2020-12-31 | 주식회사 고바이오랩 | 아커만시아 뮤시니필라 균주 및 이를 포함하는 식욕 억제 및 대사성 질환 예방, 개선, 완화 및 치료용 조성물 |
WO2020079026A1 (en) * | 2018-10-15 | 2020-04-23 | Pharmabiome Ag | A method of manufacturing a consortium of bacterial strains |
CN110079474B (zh) * | 2019-04-12 | 2022-11-25 | 沈阳药科大学 | 一种高密度培养艾克曼嗜黏蛋白菌的方法 |
-
2020
- 2020-12-28 CA CA3132176A patent/CA3132176C/en active Active
- 2020-12-28 JP JP2021552153A patent/JP2022550494A/ja active Pending
- 2020-12-28 AU AU2020429371A patent/AU2020429371B2/en active Active
- 2020-12-28 US US17/431,212 patent/US11377633B2/en active Active
- 2020-12-28 EP EP20922488.0A patent/EP4025685B1/en active Active
- 2020-12-28 CN CN202080026519.0A patent/CN114787335B/zh active Active
- 2020-12-28 PL PL20922488.0T patent/PL4025685T3/pl unknown
-
2022
- 2022-06-23 US US17/847,653 patent/US20220325233A1/en active Pending
-
2023
- 2023-07-28 JP JP2023122972A patent/JP2023139253A/ja active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20220145239A1 (en) | 2022-05-12 |
CA3132176A1 (en) | 2022-04-22 |
AU2020429371A1 (en) | 2022-05-26 |
EP4025685C0 (en) | 2024-02-28 |
EP4025685B1 (en) | 2024-02-28 |
EP4025685A4 (en) | 2022-08-17 |
CN114787335A (zh) | 2022-07-22 |
US11377633B2 (en) | 2022-07-05 |
CA3132176C (en) | 2023-03-14 |
PL4025685T3 (pl) | 2024-04-29 |
JP2022550494A (ja) | 2022-12-02 |
CN114787335B (zh) | 2023-09-19 |
EP4025685A1 (en) | 2022-07-13 |
US20220325233A1 (en) | 2022-10-13 |
AU2020429371B2 (en) | 2023-03-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
KR102222953B1 (ko) | 난배양성 혐기성 미생물의 고수율 배양을 위한 배지 보충제 및 그를 포함하는 배지 조성물 | |
JP6925280B2 (ja) | アッカーマンシアの培養方法 | |
US9249439B2 (en) | Process of cultivating bacteria for yield improvement of capsular polyoses | |
US7399615B2 (en) | Animal component free meningococcal polysaccharide fermentation and seedbank development | |
KR102051482B1 (ko) | 헤모필루스 인플루엔자에 비형 항원의 생산 방법 | |
JP5855939B2 (ja) | セレノヒドロキシ酸化合物を使用してセレンが濃縮された光合成微生物、並びに栄養食品、化粧品及び医薬におけるこれらの使用 | |
KR102245415B1 (ko) | 피칼리박테리움 프로스니치 균주 배양 배지 조성물 | |
JP2023139253A (ja) | 難培養性嫌気性微生物の高収率培養のための培地サプリメント及びそれを含む培地組成物 | |
NO331278B1 (no) | Anvendelse av en steril næringssammensetning avledet fra biomassen til en bakteriekultur som et vekstmedium for mikrooganismer, fremgangsmåte for dyrkning samt mikroorganismevekstsubstrat | |
TWI627278B (zh) | 生產l-組胺酸之麩胺酸棒狀桿菌變異株與使用其生產l-組胺酸之方法 | |
KR102359617B1 (ko) | 피칼리박테리움 프로스니치 균주 배양 배지 조성물 | |
JP2023553766A (ja) | フィーカリバクテリウムプラウスニッツィイ菌株培養培地組成物 | |
Kongo et al. | Development of a chemically defined medium for growth of Bifidobacterium animalis | |
CN106978363A (zh) | 一种巧克力琼脂培养基及其制备方法 | |
EP2275527A1 (en) | Animal component-free culture medium for bacterial fermentation | |
Salimova et al. | PECULIARITIES OF CULTIVATION OF HAEMOPHILUS INFLUENZAE TYPE B STRAINS-PRODUCERS OF POLYRIBOSYLRIBITOL PHOSPHATE-THE MAIN COMPONENT OF POLYSACCHARIDE VACCINES | |
CN115058354A (zh) | 一种化学成分明确的猪肺炎支原体培养基及其制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20230728 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20240604 |