JP2023084479A

JP2023084479A - 複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤の評価及び／又は選択方法

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Publication number: JP2023084479A
Application number: JP2021198675A
Authority: JP
Inventors: 敬一吉川; Keiichi Yoshikawa
Original assignee: Kao Corp
Current assignee: Kao Corp
Priority date: 2021-12-07
Filing date: 2021-12-07
Publication date: 2023-06-19

Abstract

【課題】複素環式芳香族化合物を原因とするにおいを選択的に抑制することができる物質の探索。【解決手段】試験物質添加後のＯＲ１２Ｄ３、ＯＲ１２Ｄ２、ＯＲ１１Ｈ７、ＯＲ１１Ｌ１、ＯＲ１１Ｈ１２、ＯＲ１１Ｈ２、ＯＲ２Ｂ１１、ＯＲ２Ｌ２、ＯＲ１Ｑ１、ＯＲ１０Ｐ１、ＯＲ４Ｌ１及びこれらと同等の機能を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種の嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定することを含む、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤の評価及び／又は選択方法。【選択図】なし

Description

本発明は複素環式芳香族化合物を原因とするにおいを抑制する香料素材を探索する方法に関する。

我々の生活環境には、極性や分子量が異なる多数の悪臭分子が存在し、複素環式芳香族化合物もその１種である。複素環式芳香族化合物には、インドール、スカトール等の糞便臭や口臭の原因物質として知られる化合物が含まれる（例えば、特許文献１、２）。複素環式芳香族化合物を原因とするにおいを抑制できる技術はこれら悪臭課題の解決につながる。

複素環式芳香族化合物を原因とするにおいに対する対策として、原因のにおい物質を吸着・分解してその存在量を減少させる消臭技術が提案されているが、におい物質減少までに時間を要するために即効性に欠ける。また、複素環式芳香族化合物よりも強いにおいの香料によりマスキングする技術が提案されているが、このような技術は、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいを消臭するものではなく、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいを根本的になくすことはできない。また、芳香剤のにおいによる不快感が生じることもある。

ヒト等の哺乳動物においては、匂いは、鼻腔上部の嗅上皮に存在する嗅神経細胞上の嗅覚受容体に匂い分子が結合し、それに対する受容体の応答が中枢神経系へと伝達されることにより認識されている。ヒトの場合、嗅覚受容体は約４００種存在することが報告されており、これらをコードする遺伝子はヒトの全遺伝子の約２％にあたる。一般的に、嗅覚受容体と匂い分子は複数対複数の組み合わせで対応付けられている。すなわち、個々の嗅覚受容体は構造の類似した複数の匂い分子を異なる親和性で受容し、一方で、個々の匂い分子は複数種の嗅覚受容体によって受容される。さらに、ある嗅覚受容体を活性化する匂い分子が、別の嗅覚受容体の活性化を阻害するアンタゴニストとして働くことも報告されている。これら複数種の嗅覚受容体の応答の組み合わせが、個々の匂いの認識をもたらしている。

従来、香料物質の開発においては、候補物質の匂いの評価は専門家による官能試験によって行われてきた。しかし、官能試験には、匂いを評価できる専門家の育成が必要なことや、スループット性が低いなどの問題があった。そこで近年では、候補物質に対する嗅覚受容体の応答を指標にした香料物質の探索方法が開発されている（特許文献３）。嗅覚受容体の応答は匂い物質に選択的であるため、最初に標的とする匂いに選択性を有する嗅覚受容体を見つけ出すことが肝要である。そうした嗅覚受容体を特定すれば、例えば悪臭の消臭を目的とする場合、アンタゴニストによる嗅覚受容体抑制又はアゴニストによる交差順応に基づくアプローチが可能となる。すなわち、悪臭である複素環式芳香族化合物を原因とするにおいをより効果的に抑制することが可能となる。実際これまでに、複素環式芳香族化合物に応答する嗅覚受容体が複数特定されている。例えば、インドール又はスカトールに応答する嗅覚受容体としてＯＲ５Ｐ３、ＯＲ２Ｗ１、ＯＲ５Ｋ１及びＯＲ８Ｈ１（特許文献１）が、インドールに応答する嗅覚受容体としてＯＲ４Ｓ２及びＯＲ１Ａ１（特許文献２）が、インドール又はスカトールに応答する嗅覚受容体としてＯＲ５２Ｎ２、ＯＲ１１Ｇ２、ＯＲ５ＡＣ２、ＯＲ４Ｃ１５、ＯＲ８Ｓ１、ＯＲ１１Ｈ６及びＯＲ１１Ｈ４（特許文献４）が特定されている。しかし、既存の受容体解析方法では、全ヒト受容体の１２％程度しか機能解析に成功していない（非特許文献１）。このように、嗅覚システムは未だに解明されておらず、よって、分子生物学的アプローチにより特定の匂いに感受性がある嗅覚受容体を全て見出すことも容易でないという問題があった。

殆どの嗅覚受容体が解析に成功していない原因は、目的の嗅覚受容体ポリペプチドを培養細胞に作らせても、細胞の表面に移行（膜発現）せず、小胞体内に留まってしまうことにある。そのため、細胞外から投与するにおい物質に対する結合性を評価することができない。嗅覚受容体が膜発現しない原因については永らく未知であったが、近年、培養細胞で膜発現するマウス嗅覚受容体と膜発現しないマウス嗅覚受容体が比較解析された（非特許文献２）。その結果、膜発現しない嗅覚受容体は立体構造の安定性が低い可能性が見出された。そして重要なことに、膜発現可能な嗅覚受容体と不可能な嗅覚受容体との間にはタンパク質の一次アミノ酸配列において統計学上有意にＧｒａｎｔｈａｍｄｉｓｔａｎｃｅが異なるアミノ酸箇所が存在し、そのアミノ酸箇所とは、約一千種の全マウス嗅覚受容体において共通性の高いアミノ酸であることが示された。すなわち、膜発現しない嗅覚受容体とは、本来共通するアミノ酸が使われるべきポリペプチドの位置に、異なるアミノ酸への変異が起きたために、立体構造の安定性を欠き、培養細胞内で、細胞膜に移行させない判断が下されている可能性が示唆された。このことを踏まえると、嗅覚受容体間で共通性の高いアミノ酸を導入する「コンセンサス化法」によって、目的の嗅覚受容体を安定的なタンパク質として獲得することや、効率よく細胞膜上に発現させることが可能になると考えられる。

こうした考えのもと、非特許文献１では特定の嗅覚受容体を解析可能とするためにコンセンサス化法が用いられた。具体的には、ヒト嗅覚受容体ＯＲ６Ｙ１、ＯＲ６Ｂ２、ＯＲ５６Ａ４の３種類について、それぞれ１０種類の哺乳類（ゴリラ、ボノボ、チンパンジー、スマトラオランウータン、アカゲザル、ドリル、コモンマーモセット、ハイイロネズミキツネザル、ラット、マウス）の相同遺伝子間での共通性の高いアミノ酸を、それぞれのヒト嗅覚受容体に導入したコンセンサス嗅覚受容体ＯＲ６Ｙ１、ＯＲ６Ｂ２、ＯＲ５６Ａ４を作製した。その結果、３種の嗅覚受容体のうちＯＲ６Ｙ１は培養細胞を用いて匂い物質に対する応答測定を行うことが可能になったことが開示されている。したがって、コンセンサス化により応答解析が可能になる受容体は存在するものの、その割合は１／３程度であることが示唆されている。

コンセンサス化法は産業上有用な酵素を安定的なものにデザインするために古くから実施されてきた。しかし、本法に関する総説である非特許文献３によれば、ある一箇所のアミノ酸配列にコンセンサス化を導入して改善効果が得られる確率は５０％程度であり、残る４０％は逆にタンパク質を改悪してしまうリスクがあることが、コンセンサス化法の利用を難しくしていると指摘する。また、嗅覚受容体の本来の機能を推定することを目的とした研究においては、コンセンサス化方法の適用は適切ではないとする考え方がある。すなわち、アミノ酸置換を導入するアプローチには、オリジナル嗅覚受容体のリガンド結合部位を変化させ、その結果、本来のにおい応答性を観察させなくなる懸念がある。以上より、コンセンサス化には成功率の低さと、目的の嗅覚受容体本来の機能を変容させてしまうリスクの二つが予測されることから、幅広い嗅覚受容体に対する有効性が検証された例はない。

特許第５５９３２７１号公報特開２０２１－６９３３０号公報特開２０１８－７４９４４号公報特表２０１６－５２３５４６号公報

Trimmer C et al. PNAS 116:9475-9480 (2019) Ikegami K et al. PNAS 117:2957-2967 (2020) Porebski TB et al. Protein Engineering, Design & Selection 29:245-251 (2016)

本発明は、嗅覚受容体の応答を指標として複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤を効率よく評価及び／又は選択する方法を提供する。

本発明者は、前記非特許文献１よりも多くの生物種の嗅覚受容体のアミノ酸配列に基づいて目的の嗅覚受容体のコンセンサス化を行うなど、これまで検討されていなかった様々なパターンでのコンセンサス化法を検討し、その結果として、嗅覚受容体について細胞膜発現量と応答測定効率を向上できる方法を見出し、先に特許出願した（特願２０２１－１０３６７５）。

本発明者は、斯かるコンセンサス化法を用いることで、複素環式芳香族化合物に選択的に応答する嗅覚受容体を新たに同定することに成功した。また本発明者は、該嗅覚受容体又はそれと同様の機能を有するポリペプチドの応答を指標とすることにより、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいを抑制する物質を効率よく探索することが可能であることを見出した。

したがって、本発明は、試験物質添加後のＯＲ１２Ｄ３、ＯＲ１２Ｄ２、ＯＲ１１Ｈ７、ＯＲ１１Ｌ１、ＯＲ１１Ｈ１２、ＯＲ１１Ｈ２、ＯＲ２Ｂ１１、ＯＲ２Ｌ２、ＯＲ１Ｑ１、ＯＲ１０Ｐ１、ＯＲ４Ｌ１及びこれらと同等の機能を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種の嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定することを含む、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤の評価及び／又は選択方法を提供する。

本発明によれば、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいを選択的に抑制することができる物質を効率よく評価又は選択することができる。

ヒト嗅覚受容体及び該嗅覚受容体についてデザインしたコンセンサス嗅覚受容体の細胞膜発現量とにおい応答性。左から２つのヒストグラムと１つのバーグラフは、Ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ法により求められたＨＥＫ２９３細胞膜上の受容体タンパク質量を表す。Ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ法では、嗅覚受容体のＮ末端に付加したＦＬＡＧタグを認識する抗ＦＬＡＧマウスＩｇＧ抗体を一次抗体として、ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ（ＰＥ）－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅＩｇＧ抗体を二次抗体として用い、ＰＥシグナルを測定した。対照として受容体を発現させない細胞（Ｍｏｃｋ）と効率よく膜発現する受容体であるＭ２アセチルコリン受容体（Ｍ２ＡｃＲ）を発現させた細胞を解析した。ＭｏｃｋのＰＥシグナルを０％、Ｍ２ＡｃＲのＰＥシグナルを１００％として基準化を行い、各嗅覚受容体のＰＥシグナルを算出した。右には受容体のリガンド応答性をルシフェラーゼアッセイにより測定した結果を表す。エラーバーはＳＥＭを表す（ｎ＝３）。ヒト嗅覚受容体及び該嗅覚受容体についてデザインしたコンセンサス嗅覚受容体の２種類のリガンドに対するリガンド選択性。ルシフェラーゼアッセイの結果を示す。エラーバーはＳＥＭを表す（ｎ＝３）。ヒト嗅覚受容体及び該嗅覚受容体についてデザインしたコンセンサス嗅覚受容体のリガンド選択性。ルシフェラーゼアッセイの結果を示す。エラーバーはＳＥＭを表す（ｎ＝３）。下段に示す番号は、それぞれ図４に示すにおい物質の番号に対応する。図３で用いたにおい物質。嗅覚受容体のルシフェラーゼアッセイ。３種類のヒト嗅覚受容体及び該嗅覚受容体についてデザインしたコンセンサス嗅覚受容体について、におい物質を濃度を変えて投与し、応答を測定した。エラーバーはＳＥＭを表す（ｎ＝３）。嗅覚受容体のルシフェラーゼアッセイ。４種類のコンセンサス嗅覚受容体それぞれについて、におい応答性に個人差が報告されるアミノ酸置換を導入したものをＨＥＫ２９３細胞に発現させ、におい物質を濃度を変えて投与し応答を測定した。エラーバーはＳＥＭを表す（ｎ＝３）。嗅覚受容体のルシフェラーゼアッセイ。各コンセンサス嗅覚受容体についてスカトールもしくはインドールを濃度を変えて投与した際の応答強度をバーグラフで示す。図中にはデータをシグモイドにカーブフィットした際に得られたＥＣ₅₀を示す。エラーバーはＳＥＭを表す（１回の実験における３つの複製から）。

本明細書中で引用された全ての特許文献、非特許文献、及びその他の刊行物は、その全体が本明細書中において参考として援用される。

本明細書において「アゴニスト」とは、受容体に結合し、活性化させる物質をいう。一方、本明細書において「アンタゴニスト」とは、受容体に結合するが、受容体を活性化しないか、又はアゴニストに対する受容体の応答を抑制する物質をいう。

本明細書において、「嗅覚受容体アゴニズム」とは、受容体に結合して、その受容体を活性化することをいう。

本明細書において、標的においに関する「においの交差順応（又は嗅覚の交差順応）」とは、該標的においの原因物質とは別の物質のにおいを予め受容し、そのにおいに慣れることによって、該標的においの原因物質に対する嗅覚感受性が低下又は変化する現象を指す。本発明者らは、以前、「においの交差順応」が、嗅覚受容体アゴニズムに基づく現象であることを明らかにした（国際公開公報第２０１６／１９４７８８号）。すなわち、「においの交差順応」においては、標的においの原因物質に対する嗅覚受容体が、該標的においの原因物質への応答に先だって異なるにおいの原因物質に応答し、次いで脱感作することにより、後から該標的においの原因物質に曝されても低い応答しかできず、その結果、個体に認識される標的においの強度の低下又は変質が生じる。こうした嗅覚受容体の挙動により引き起こされるにおいの交差順応の仕組みを、本明細書において「嗅覚受容体アゴニズムによるにおいの交差順応」とも呼ぶ。

本明細書において、標的においの「嗅覚受容体アンタゴニズムによる抑制」とは、標的においを有する物質に対する嗅覚受容体の応答を、アンタゴニストにより抑制し、結果的に個体に認識される標的においを抑制することをいう。

本明細書において、「嗅覚受容体ポリペプチド」とは、嗅覚受容体又はそれと同等の機能を有するポリペプチドをいい、「嗅覚受容体と同等の機能を有するポリペプチド」とは、嗅覚受容体と同様に、細胞膜上に発現することができ、におい分子の結合によって活性化し、かつ活性化されると、細胞内のＧαｓと共役してアデニル酸シクラーゼを活性化することで細胞内ｃＡＭＰ量を増加させる機能を有するポリペプチドをいう（Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，２００４，５：２６３－２７８）。

本明細書において、ヌクレオチド配列及びアミノ酸配列の同一性は、リップマン－パーソン法（Ｌｉｐｍａｎ－Ｐｅａｒｓｏｎ法；Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８５，２２７：１４３５－４１）によって計算される。具体的には、遺伝情報処理ソフトウェアＧｅｎｅｔｙｘ－Ｗｉｎ（Ｖｅｒ．５．１．１；ソフトウェア開発）のホモロジー解析（Ｓｅａｒｃｈｈｏｍｏｌｏｇｙ）プログラムを用いて、Ｕｎｉｔｓｉｚｅｔｏｃｏｍｐａｒｅ（ｋｔｕｐ）を２として解析を行うことにより算出される。

本明細書において、ヌクレオチド配列及びアミノ酸配列に関する「少なくとも８０％の同一性」とは、８０％以上、好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、さらにより好ましくは９８％以上、なお好ましくは９９％以上の同一性をいう。また、ヌクレオチド配列及びアミノ酸配列に関する「少なくとも９０％の同一性」とは、９０％以上、好ましくは９５％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９％以上の同一性をいう。

本明細書において、「アミノ酸残基」とは、タンパク質を構成する２０種のアミノ酸残基、アラニン（Ａｌａ又はＡ）、アルギニン（Ａｒｇ又はＲ）、アスパラギン（Ａｓｎ又はＮ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ又はＤ）、システイン（Ｃｙｓ又はＣ）、グルタミン（Ｇｌｎ又はＱ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ又はＥ）、グリシン（Ｇｌｙ又はＧ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ又はＨ）、イソロイシン（Ｉｌｅ又はＩ）、ロイシン（Ｌｅｕ又はＬ）、リシン（Ｌｙｓ又はＫ）、メチオニン（Ｍｅｔ又はＭ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ又はＦ）、プロリン（Ｐｒｏ又はＰ）、セリン（Ｓｅｒ又はＳ）、スレオニン（Ｔｈｒ又はＴ）、トリプトファン（Ｔｒｐ又はＷ）、チロシン（Ｔｙｒ又はＹ）及びバリン（Ｖａｌ又はＶ）を意味する。

本明細書において、アミノ酸の改変は、公認されているＩＵＰＡＣの１文字のアミノ酸略記により、［元のアミノ酸、位置、改変されたアミノ酸］で表記されることがある。

本明細書において、アミノ酸配列上の「相当する位置」は、目的配列と基準配列（本発明においては配列番号１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１又は３４で示されるアミノ酸配列）とを、最大の相同性を与えるように整列（アラインメント）させることにより決定することができる。アミノ酸配列のアラインメントは、公知のアルゴリズムを用いて実行することができ、その手順は当業者に公知である。例えば、アラインメントは、ＣｌｕｓｔａｌＷマルチプルアラインメントプログラム（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｊ．Ｄ．ｅｔａｌ，１９９４，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．２２：４６７３－４６８０）をデフォルト設定で用いることにより、行うことができる。あるいは、ＣｌｕｓｔａｌＷの改訂版であるＣｌｕｓｔａｌＷ２やＣｌｕｓｔａｌｏｍｅｇａを使用することもできる。ＣｌｕｓｔａｌＷ、ＣｌｕｓｔａｌＷ２及びＣｌｕｓｔａｌｏｍｅｇａは、例えば、欧州バイオインフォマティクス研究所（ＥｕｒｏｐｅａｎＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓＩｎｓｔｉｔｕｔｅ：ＥＢＩ［ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ］）や、国立遺伝学研究所が運営する日本ＤＮＡデータバンク（ＤＤＢＪ［ｗｗｗ．ｄｄｂｊ．ｎｉｇ．ａｃ．ｊｐ／ｓｅａｒｃｈｅｓ－ｊ．ｈｔｍｌ］）のウェブサイト上で利用することができる。上述のアラインメントにより基準配列の任意の位置にアラインされた目的配列の位置は、当該任意の位置に「相当する位置」とみなされる。

本明細書において、「複素環式芳香族化合物」とは、環構造に少なくとも１種類のヘテロ原子を含む芳香族化合物をいう。好ましくは、複素環式芳香族化合物は、環構造に窒素原子を含む含窒素芳香族化合物である。より好ましい複素環式芳香族化合物の例としては、インドール又はスカトールが挙げられる。

本発明により抑制される「複素環式芳香族化合物を原因とするにおい」とは、上述した複素環式芳香族化合物により生じるにおいであり、好ましくは、含窒素芳香族化合物により生じるにおいであり、より好ましくは、インドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種により生じるにおいである。インドール及びスカトールは、ともに糞便臭、口臭等の原因物質として知られている。したがって、代表的には、本発明により抑制される「複素環式芳香族化合物を原因とするにおい」とは、糞便臭、口臭であり得る。

本発明者は、これまでに、目的の嗅覚受容体のアミノ酸配列を、該目的の嗅覚受容体のアミノ酸配列と該目的の嗅覚受容体の特定のオルソログ又は特定のオルソログ及びパラログにコードされる嗅覚受容体のアミノ酸配列のアラインメントから導き出されるコンセンサスアミノ酸配列に基づいて改変することにより、嗅覚受容体の培養細胞での膜発現を向上できること、嗅覚受容体のにおい応答性を向上できること、また、改変された嗅覚受容体が改変前の嗅覚受容体のリガンド選択性をよく維持できること、改変された嗅覚受容体によりもたらされる解析結果はヒトの嗅覚をよく反映するものであることを見出し、先に特許出願した（特願２０２１－１０３６７５）。本明細書において、改変前の嗅覚受容体を「オリジナルの嗅覚受容体」と称し、嗅覚受容体のアミノ酸配列をコンセンサスアミノ酸配列に基づいて改変することを「コンセンサス化する」と称し、コンセンサス化された嗅覚受容体を「コンセンサス嗅覚受容体」と称することがある。

ここで、「コンセンサスアミノ酸配列」とは、目的の嗅覚受容体のアミノ酸配列及び該目的の嗅覚受容体の特定のオルソログ又は特定のオルソログ及びパラログにコードされる嗅覚受容体（例えば、哺乳類における該目的の嗅覚受容体のオルソログにコードされる嗅覚受容体からなる群より選択される少なくとも１１種の嗅覚受容体）のアミノ酸配列のアラインメントから以下の（ｉ）～（ｉｉｉ）の基準に従い同定したコンセンサス残基からなるアミノ酸配列である。
（ｉ）該アラインメントの各アミノ酸位置において、
（ｉ－ｉ）該目的の嗅覚受容体のアミノ酸残基と異なり且つ出現頻度５０％以上のアミノ酸残基が１種存在する場合、該アミノ酸残基をコンセンサス残基と同定する、
（ｉ－ｉｉ）出現頻度５０％のアミノ酸残基が２種存在する場合、該目的の嗅覚受容体のアミノ酸残基をコンセンサス残基と同定する、
（ｉ－ｉｉｉ）該目的の嗅覚受容体にアミノ酸残基が存在し且つ出現頻度４０％以上でアミノ酸残基が存在しない場合、コンセンサス残基なしと同定する、
（ｉ－ｉｖ）該目的の嗅覚受容体にアミノ酸残基が存在せず且つ出現頻度６０％以上でアミノ酸残基が存在する場合、最も出現頻度が高いアミノ酸残基をコンセンサス残基と同定し、最も出現頻度が高いアミノ酸残基が２種以上存在する場合は、該アミノ酸残基のうち最も分子量が小さいアミノ酸残基をコンセンサス残基と同定する、
（ｉ－ｖ）上記（ｉ－ｉ）～（ｉ－ｉｖ）のいずれにも該当しない場合、該目的の嗅覚受容体のアミノ酸残基をコンセンサス残基と同定する、
（ｉｉ）上記（ｉ）の基準に従いコンセンサス残基を同定したときに、最もＮ末端側のコンセンサス残基が該目的の嗅覚受容体のＮ末端又はそれよりもＣ末端側に相当する位置のコンセンサス残基であり且つメチオニン残基でない場合、最もＮ末端に近い位置のメチオニン残基からなるコンセンサス残基よりＮ末端側のコンセンサス残基をコンセンサス残基なしに変更する、
（ｉｉｉ）上記（ｉ）の基準に従いコンセンサス残基を同定したときに、最もＮ末端側のコンセンサス残基が該目的の嗅覚受容体のＮ末端よりもＮ末端側に相当する位置のコンセンサス残基であり且つメチオニン残基でない場合、該アラインメントの該コンセンサス残基の位置よりＮ末端側にアミノ酸位置を１つずつ遡り、メチオニン残基が出現するまで、最も出現頻度が高いアミノ酸残基をコンセンサス残基と同定し、最も出現頻度が高いアミノ酸残基が２種以上存在する場合は、該アミノ酸残基のうち最も分子量が小さいアミノ酸残基をコンセンサス残基と同定する。
またここで、「嗅覚受容体のアミノ酸配列をコンセンサスアミノ酸配列に基づいて改変する」、すなわち「コンセンサス化する」とは、目的の嗅覚受容体のアミノ酸配列においてコンセンサスアミノ酸配列と異なるアミノ酸残基の少なくとも１個をこれに相当する位置の該コンセンサスアミノ酸配列のアミノ酸残基に改変することをいう。

上記の嗅覚受容体のコンセンサス化は、嗅覚受容体にアミノ酸変異を導入することから、一見、オリジナルの嗅覚受容体が有する本来の機能と人の嗅覚感覚を正しく反映しない測定結果を与える可能性を懸念させる。しかしながら、後述するように、コンセンサス嗅覚受容体は、オリジナルの嗅覚受容体のリガンド応答選択性を高度に維持しており、なおかつ、人の嗅覚感覚を最もよく説明する測定結果を与えるものである。

先の特許出願に示すように、リガンドが既知のヒト嗅覚受容体について、該嗅覚受容体のアミノ酸配列を、例えば、該嗅覚受容体のアミノ酸配列と哺乳類における該嗅覚受容体のオルソログにコードされる嗅覚受容体からなる群より選択される少なくとも１１種の嗅覚受容体のアミノ酸配列のアラインメントから導き出されるコンセンサスアミノ酸配列に基づいて改変することでコンセンサス嗅覚受容体を作製し、オリジナルの嗅覚受容体とコンセンサス嗅覚受容体を培養細胞に発現させ、膜発現量とリガンドに対する応答性を測定したところ、コンセンサス化により膜発現量が増加し、応答性が向上した（図１）。

また、先の特許出願に示すように、リガンドが既知のヒト嗅覚受容体及び該嗅覚受容体について上記同様に作製したコンセンサス嗅覚受容体を用い、リガンドに対する応答選択性を検討したところ、応答選択性にコンセンサス化による顕著な変化は認められなかった（図２）。さらに、先の特許出願に示すように、リガンドが既知のヒト嗅覚受容体及び該嗅覚受容体について上記同様に作製したコンセンサス嗅覚受容体を用い、リガンド及びその構造類似物質（図４）に対する応答選択性を検討したところ、応答選択性にコンセンサス化による顕著な変化は認められなかった（図３）。尚、コンセンサス化による全体的な測定感度の上昇により、応答が検出可能になる物質が認められたが、オリジナルの嗅覚受容体で明確に応答を示す物質のうちコンセンサス嗅覚受容体で応答が認められなくなる物質はなかった。斯様に、コンセンサス嗅覚受容体は、オリジナルの嗅覚受容体のリガンド応答選択性を高度に維持している。

非特許文献１において、個々のにおいの感じ方の異なる集団について、比較ゲノム解析を実施することにより、当該においの感受性を担う嗅覚受容体の候補が報告されている。例えば、イソブチルアルデヒドの感受性と関連する嗅覚受容体としてＯＲ６Ｂ２が、シトラールの感受性と関連する嗅覚受容体としてＯＲ５Ｃ１が、イソオイゲノールの感受性と関連する嗅覚受容体としてＯＲ１０Ｄ３が報告されている。しかしながら、これらのオリジナルの嗅覚受容体を培養細胞に発現させ、対応するにおい物質に対する応答性を実証することには成功していなかった。そこで、先の特許出願に示すように、これらの嗅覚受容体に上記同様のコンセンサス化を適用し、応答解析を実施したところ、対応するにおい物質に対する応答が測定可能となった（図５）。
また、パクチーを由来とするにおいに対する感じ方の個人差を説明する遺伝子座が報告されている（Eriksson N et al. Flavour 1:22 (2012)）。該遺伝子座には８つの嗅覚受容体が存在するが、実際にどの受容体がパクチーを由来とするにおい物質の受容体なのか機能解析に成功していなかった。そこで、先の特許出願に示すように、該８受容体に上記同様のコンセンサス化を適用し、パクチーの主要香気成分（（Ｅ）－２－ｄｅｃｅｎａｌ、（Ｅ）－２－ｄｏｄｅｃｅｎａｌ）に対する応答解析を実施したところ、ＯＲ１０Ａ２及びＯＲ１０Ａ４がそれらにおい物質を認識できることが明らかとなった。
さらに、先の特許出願に示すように、上記ＯＲ１０Ａ２、ＯＲ１０Ａ４、ＯＲ６Ｂ２及びＯＲ５Ｃ１のそれぞれについて、上記同様のコンセンサス化を適用した上で、個人差が報告されるアミノ酸配列を導入し、官能評価でのにおいの感じ方の個人差に符号する応答性が得られるかを検証した。例えば、ＯＲ１０Ａ２については、ＮＰ＿００１００４４６０．１で登録されるアミノ酸配列の出現頻度が集団の６８％であるのに対して、Ｈ４３Ｒ、Ｈ２０７Ｒ、Ｋ２５８Ｔの３変異を有するアミノ酸配列の出現頻度が３２％であることが報告されている（出現頻度は１０００ｇｅｎｏｍｅｓｐｒｏｊｅｃｔｐｈａｓｅ３ａｌｌｅｌｅｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓより）。なお、３箇所の変異のうち、Ｈ２０７Ｒはコンセンサス残基でもある。集団に認められるこれら二種類のアミノ酸配列型は、それぞれパクチーの主要香気成分（（Ｅ）－２－ｄｅｃｅｎａｌ、（Ｅ）－２－ｄｏｄｅｃｅｎａｌ）に対する応答性に変化をもたらし、その結果としてヒトがパクチーの香りを不快な石鹸様として感じるか否かの違いをもたらしていると予想された。そこで、ＯＲ１０Ａ２にコンセンサス化を適用した上で、該二種類のアミノ酸配列型を導入したところ、予想通り、Ｈ４３Ｒ、Ｈ２０７Ｒ、Ｋ２５８Ｔの変異型では、上記香気成分に対する応答性が顕著に低いことが判明した（図６の１０Ａ２）。上記香気成分に対する応答性が１０Ａ２よりも低かった嗅覚受容体１０Ａ４にも集団の３１％に出現するＲ２６２Ｑ変異型が報告されているが、この変異型は上記香気成分に応答性の変化をもたらさなかった（図６の１０Ａ４）。したがって、嗅覚受容体のコンセンサス化により初めて、パクチーの香りの感じ方の個人差を説明する受容体としてＯＲ１０Ａ２を特定することが可能になった。
ＯＲ６Ｂ２に関しては、Ｒ１２２Ｃ、Ｃ１７９Ｒの変異型が集団（非特許文献１での試験参加者）の１％に認められ、この集団は非特許文献１によれば、低濃度のイソブチルアルデヒドのにおいを強く感じることができない。先の特許出願に示すように、この官能評価での個人差に符合して、コンセンサスＯＲ６Ｂ２にＲ１２２Ｃ及びＣ１７９Ｒの変異を導入すると、イソブチルアルデヒドへの応答性が顕著に低下することが確認された（図６の６Ｂ２）。
ＯＲ５Ｃ１に関しては、Ｎ５Ｋの変異型が集団の１％に認められ（出現頻度は１０００ｇｅｎｏｍｅｓｐｒｏｊｅｃｔｐｈａｓｅ３ａｌｌｅｌｅｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓより）、この集団は非特許文献１によれば、低濃度のシトラールのにおいを強く感じることができない。先の出願に示すように、この官能評価での個人差に符合して、コンセンサスＯＲ５Ｃ１にＮ５Ｋの変異を導入すると、シトラールへの応答性が顕著に低下することが確認された（図６の５Ｃ１）。
斯様に、コンセンサス嗅覚受容体を用いた応答解析は、官能評価によって測定された嗅覚現象、すなわち人の嗅覚感覚を最もよく説明する測定結果を与える。

したがって、コンセンサス嗅覚受容体は、膜発現向上のためアミノ酸配列が改変されているものの、その応答性はオリジナルの嗅覚受容体の嗅細胞における応答性を反映しており、嗅覚受容体としての機能はオリジナルの嗅覚受容体と同等である。

本発明者は、上記同様のコンセンサス化を適用した嗅覚受容体の中から、コンセンサスＯＲ１２Ｄ３、コンセンサスＯＲ１２Ｄ２、コンセンサスＯＲ１１Ｈ７、コンセンサスＯＲ１１Ｌ１、コンセンサスＯＲ１１Ｈ１２、コンセンサスＯＲ１１Ｈ２、コンセンサスＯＲ２Ｂ１１、コンセンサスＯＲ２Ｌ２、コンセンサスＯＲ１Ｑ１、コンセンサスＯＲ１０Ｐ１、コンセンサスＯＲ４Ｌ１及びコンセンサスＯＲ１１Ｇ２が複素環式芳香族化合物に対して応答することを見出した。上述したように、コンセンサス嗅覚受容体は、オリジナルの嗅覚受容体のリガンド選択性を高度に維持している。すなわち、コンセンサス嗅覚受容体のあるにおい物質に対する応答は、オリジナルの嗅覚受容体の嗅細胞における該におい物質に対する応答を反映している。したがって、ＯＲ１２Ｄ３、ＯＲ１２Ｄ２、ＯＲ１１Ｈ７、ＯＲ１１Ｌ１、ＯＲ１１Ｈ１２、ＯＲ１１Ｈ２、ＯＲ２Ｂ１１、ＯＲ２Ｌ２、ＯＲ１Ｑ１、ＯＲ１０Ｐ１、ＯＲ４Ｌ１及びＯＲ１１Ｇ２を複素環式芳香族化合物に対して応答する嗅覚受容体として同定することができる。

ＯＲ１２Ｄ３、ＯＲ１２Ｄ２、ＯＲ１１Ｈ７、ＯＲ１１Ｌ１、ＯＲ１１Ｈ１２、ＯＲ１１Ｈ２、ＯＲ２Ｂ１１、ＯＲ２Ｌ２、ＯＲ１Ｑ１、ＯＲ１０Ｐ１及びＯＲ４Ｌ１が複素環式芳香族化合物に応答すること又はその可能性があることはこれまで認識されていなかった。

図７に示すとおり、コンセンサスＯＲ１２Ｄ３、コンセンサスＯＲ１２Ｄ２、コンセンサスＯＲ１１Ｈ７、コンセンサスＯＲ１１Ｌ１、コンセンサスＯＲ１１Ｈ１２、コンセンサスＯＲ１１Ｈ２、コンセンサスＯＲ２Ｂ１１、コンセンサスＯＲ２Ｌ２、コンセンサスＯＲ１Ｑ１、コンセンサスＯＲ１０Ｐ１、コンセンサスＯＲ４Ｌ１及びコンセンサスＯＲ１１Ｇ２は、インドールに応答し、なかでも、コンセンサスＯＲ１２Ｄ３、コンセンサスＯＲ１２Ｄ２、コンセンサスＯＲ１１Ｈ７、コンセンサスＯＲ１１Ｌ１、コンセンサスＯＲ１１Ｈ１２及びコンセンサスＯＲ１１Ｇ２は、インドールに対して濃度依存的に応答する。また、コンセンサスＯＲ１２Ｄ３、コンセンサスＯＲ１２Ｄ２、コンセンサスＯＲ１１Ｈ７、コンセンサスＯＲ１１Ｌ１、コンセンサスＯＲ１１Ｈ１２、コンセンサスＯＲ１１Ｈ２、コンセンサスＯＲ２Ｂ１１、コンセンサスＯＲ２Ｌ２、コンセンサスＯＲ１Ｑ１、コンセンサスＯＲ１０Ｐ１、コンセンサスＯＲ４Ｌ１及びコンセンサスＯＲ１１Ｇ２は、スカトールに応答し、なかでも、コンセンサスＯＲ１２Ｄ３、コンセンサスＯＲ１２Ｄ２、コンセンサスＯＲ１１Ｈ７、コンセンサスＯＲ１１Ｌ１、コンセンサスＯＲ１１Ｈ１２、コンセンサスＯＲ１１Ｈ２及びコンセンサスＯＲ１１Ｇ２は、スカトールに対して濃度依存的に応答する。したがって、ＯＲ１２Ｄ３、ＯＲ１２Ｄ２、ＯＲ１１Ｈ７、ＯＲ１１Ｌ１、ＯＲ１１Ｈ１２、ＯＲ１１Ｈ２、ＯＲ２Ｂ１１、ＯＲ２Ｌ２、ＯＲ１Ｑ１、ＯＲ１０Ｐ１及びＯＲ４Ｌ１は、新たに見出された複素環式芳香族化合物受容体である。ＯＲ１２Ｄ３、ＯＲ１２Ｄ２、ＯＲ１１Ｈ７、ＯＲ１１Ｌ１、ＯＲ１１Ｈ１２、ＯＲ１１Ｈ２、ＯＲ２Ｂ１１、ＯＲ２Ｌ２、ＯＲ１Ｑ１、ＯＲ１０Ｐ１、ＯＲ４Ｌ１、ＯＲ１１Ｇ２又はこれらと同等の機能を有するポリペプチドの応答を抑制する物質は、嗅覚受容体アンタゴニズムによるにおい抑制に基づいて、中枢における複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの認識に変化を生じさせ、結果として、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいを選択的に抑制することができる。一方、ＯＲ１２Ｄ３、ＯＲ１２Ｄ２、ＯＲ１１Ｈ７、ＯＲ１１Ｌ１、ＯＲ１１Ｈ１２、ＯＲ１１Ｈ２、ＯＲ２Ｂ１１、ＯＲ２Ｌ２、ＯＲ１Ｑ１、ＯＲ１０Ｐ１、ＯＲ４Ｌ１、ＯＲ１１Ｇ２又はこれらと同様の機能を有するポリペプチドの応答を増強する物質は、嗅覚受容体アゴニズムによるにおいの交差順応に基づいて、中枢における複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの認識に変化を生じさせ、結果として、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいを選択的に抑制することができる。したがって、これらのポリペプチドの応答を抑制又は増強する物質によれば、従来の消臭剤又は芳香剤を用いる消臭方法において生じていた芳香剤の強いにおいに基づく不快感等や、他のにおいをも抑えてしまうという問題を生じることがなく、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいを消臭することができる。

したがって、本発明は、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤の評価及び／又は選択方法を提供する。当該方法は、試験物質添加後のＯＲ１２Ｄ３、ＯＲ１２Ｄ２、ＯＲ１１Ｈ７、ＯＲ１１Ｌ１、ＯＲ１１Ｈ１２、ＯＲ１１Ｈ２、ＯＲ２Ｂ１１、ＯＲ２Ｌ２、ＯＲ１Ｑ１、ＯＲ１０Ｐ１、ＯＲ４Ｌ１及びこれらと同等の機能を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種の嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定することを含む。当該方法は、試験物質添加後のＯＲ１１Ｇ２及びこれと同等の機能を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種の嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定することをさらに含んでいてもよい。測定された応答に基づいて、該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を増強又は抑制する試験物質が検出される。検出された試験物質は、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤として選択される。すなわち、該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を増強する試験物質は、嗅覚受容体アゴニズムによるにおいの交差順応に基づく複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤として選択され、該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する試験物質は、嗅覚受容体アンタゴニズムに基づく複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤として選択される。

上記本発明の方法は、ｉｎｖｉｔｒｏ又はｅｘｖｉｖｏで行われ得る。

本発明の方法に使用される試験物質は、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤として使用することを所望する物質であれば、特に制限されない。該試験物質は、天然に存在する物質であっても、化学的若しくは生物学的方法等で人工的に合成した物質であってもよく、又は化合物であっても、組成物若しくは混合物であってもよい。

本発明の方法に使用される嗅覚受容体ポリペプチドは、ＯＲ１２Ｄ３、ＯＲ１２Ｄ２、ＯＲ１１Ｈ７、ＯＲ１１Ｌ１、ＯＲ１１Ｈ１２、ＯＲ１１Ｈ２、ＯＲ２Ｂ１１、ＯＲ２Ｌ２、ＯＲ１Ｑ１、ＯＲ１０Ｐ１、ＯＲ４Ｌ１、ＯＲ１１Ｇ２及びこれらと同等の機能を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種の嗅覚受容体ポリペプチドである。ＯＲ１２Ｄ３、ＯＲ１２Ｄ２、ＯＲ１１Ｈ７、ＯＲ１１Ｌ１、ＯＲ１１Ｈ１２、ＯＲ１１Ｈ２、ＯＲ２Ｂ１１、ＯＲ２Ｌ２、ＯＲ１Ｑ１、ＯＲ１０Ｐ１、ＯＲ４Ｌ１及びＯＲ１１Ｇ２は、ヒト嗅細胞で発現している嗅覚受容体である。各嗅覚受容体のＮＣＢＩデータベースにおけるＡｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏ．及びアミノ酸配列を表１に示す。

ＯＲ１２Ｄ３と同等の機能を有するポリペプチドの例としては、配列番号１で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。
ＯＲ１２Ｄ３と同等の機能を有するポリペプチドの別の例としては、配列番号１で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号１で示されるアミノ酸配列の下記表２の（１）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所、好ましくは少なくとも３箇所、より好ましくは少なくとも５箇所、さらに好ましくは少なくとも１０箇所、さらにより好ましくは全ての箇所に（２）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。尚、配列番号１で示されるアミノ酸配列において、下記表２の（１）の各アミノ酸位置の全ての箇所に（２）のアミノ酸残基を有するポリペプチドは、配列番号３で示されるアミノ酸配列からなるコンセンサスＯＲ１２Ｄ３である。換言すれば、下記表２は、ＯＲ１２Ｄ３とコンセンサスＯＲ１２Ｄ３の間で異なるアミノ酸残基を示している。

ＯＲ１２Ｄ３と同等の機能を有するポリペプチドのさらに別の例としては、配列番号３で示されるアミノ酸配列からなるコンセンサスＯＲ１２Ｄ３又はこれと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。
コンセンサスＯＲ１２Ｄ３は、配列番号１で示されるＯＲ１２Ｄ３のアミノ酸配列と哺乳類におけるＯＲ１２Ｄ３のオルソログにコードされる嗅覚受容体１３５種のアミノ酸配列のアラインメントから上記の手法により導き出される配列番号３で示されるコンセンサスアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールに対する応答性を有する。該オルソログは、哺乳類に属する生物種が有する嗅覚受容体遺伝子のうち、ＯＲ１２Ｄ３と相同性の高い遺伝子であって、ＯＲ１２Ｄ３と同じ名称を含む遺伝子である。コンセンサスＯＲ１２Ｄ３とＯＲ１２Ｄ３のアミノ酸配列同一性は９３％である。

ＯＲ１２Ｄ２と同等の機能を有するポリペプチドの例としては、配列番号４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。
ＯＲ１２Ｄ２と同等の機能を有するポリペプチドの別の例としては、配列番号４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号４で示されるアミノ酸配列の下記表２の（３）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所、好ましくは少なくとも３箇所、より好ましくは少なくとも５箇所、さらに好ましくは少なくとも１０箇所、さらにより好ましくは全ての箇所に（４）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。ここで、下記表２の（３）の３０７位に相当するアミノ酸位置に（４）のＬＬを有するとは、あるアミノ酸配列において、配列番号４で示されるアミノ酸配列の３０７位のＬに相当する位置のアミノ酸残基の直後にＬが付加されていることを意味する。尚、配列番号４で示されるアミノ酸配列において、下記表２の（３）の各アミノ酸位置の全ての箇所に（４）のアミノ酸残基を有するポリペプチドは、配列番号６で示されるアミノ酸配列からなるコンセンサスＯＲ１２Ｄ２である。換言すれば、下記表２は、ＯＲ１２Ｄ２とコンセンサスＯＲ１２Ｄ２の間で異なるアミノ酸残基を示している。

ＯＲ１２Ｄ２と同等の機能を有するポリペプチドのさらに別の例としては、配列番号６で示されるアミノ酸配列からなるコンセンサスＯＲ１２Ｄ２又はこれと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。
コンセンサスＯＲ１２Ｄ２は、配列番号４で示されるＯＲ１２Ｄ２のアミノ酸配列と哺乳類におけるＯＲ１２Ｄ２のオルソログにコードされる嗅覚受容体２３１種のアミノ酸配列のアラインメントから上記の手法により導き出される配列番号６で示されるコンセンサスアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールに対する応答性を有する。該オルソログは、哺乳類に属する生物種が有する嗅覚受容体遺伝子のうち、ＯＲ１２Ｄ２と相同性の高い遺伝子であって、ＯＲ１２Ｄ２と同じ名称を含む遺伝子である。コンセンサスＯＲ１２Ｄ２とＯＲ１２Ｄ２のアミノ酸配列同一性は９１％である。

ＯＲ１１Ｈ７と同等の機能を有するポリペプチドの例としては、配列番号７で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。
ＯＲ１１Ｈ７と同等の機能を有するポリペプチドの別の例としては、配列番号７で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号７で示されるアミノ酸配列の下記表２の（５）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所、好ましくは少なくとも３箇所、より好ましくは少なくとも５箇所、さらに好ましくは少なくとも１０箇所、さらにより好ましくは全ての箇所に（６）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。尚、配列番号７で示されるアミノ酸配列において、下記表２の（５）の各アミノ酸位置の全ての箇所に（６）のアミノ酸残基を有するポリペプチドは、配列番号９で示されるアミノ酸配列からなるコンセンサスＯＲ１１Ｈ７である。換言すれば、下記表２は、ＯＲ１１Ｈ７とコンセンサスＯＲ１１Ｈ７の間で異なるアミノ酸残基を示している。

ＯＲ１１Ｈ７と同等の機能を有するポリペプチドのさらに別の例としては、配列番号９で示されるアミノ酸配列からなるコンセンサスＯＲ１１Ｈ７又はこれと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。
コンセンサスＯＲ１１Ｈ７は、配列番号７で示されるＯＲ１１Ｈ７のアミノ酸配列と哺乳類におけるＯＲ１１Ｈ７のオルソログにコードされる嗅覚受容体１２９種のアミノ酸配列のアラインメントから上記の手法により導き出される配列番号９で示されるコンセンサスアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールに対する応答性を有する。該オルソログは、哺乳類に属する生物種が有する嗅覚受容体遺伝子のうち、ＯＲ１１Ｈ７と相同性の高い遺伝子であって、ＯＲ１１Ｈ７と同じ名称を含む遺伝子である。尚、異なる嗅覚受容体名称体系が用いられているＭｕｓｍｕｓｃｕｌｕｓ（ハツカネズミ）の嗅覚受容体遺伝子及びＲａｔｔｕｓｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ（ドブネズミ）の嗅覚受容体遺伝子に関しては、最も相同性の高い１種をオルソログとして選択している。コンセンサスＯＲ１１Ｈ７とＯＲ１１Ｈ７のアミノ酸配列同一性は９３％である。

ＯＲ１１Ｌ１と同等の機能を有するポリペプチドの例としては、配列番号１０で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。
ＯＲ１１Ｌ１と同等の機能を有するポリペプチドの別の例としては、配列番号１０で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号１０で示されるアミノ酸配列の下記表２の（７）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所、好ましくは少なくとも３箇所、より好ましくは少なくとも５箇所、さらに好ましくは少なくとも１０箇所、さらにより好ましくは全ての箇所に（８）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。尚、配列番号１０で示されるアミノ酸配列において、下記表２の（７）の各アミノ酸位置の全ての箇所に（８）のアミノ酸残基を有するポリペプチドは、配列番号１２で示されるアミノ酸配列からなるコンセンサスＯＲ１１Ｌ１である。換言すれば、下記表２は、ＯＲ１１Ｌ１とコンセンサスＯＲ１１Ｌ１の間で異なるアミノ酸残基を示している。

ＯＲ１１Ｌ１と同等の機能を有するポリペプチドのさらに別の例としては、配列番号１２で示されるアミノ酸配列からなるコンセンサスＯＲ１１Ｌ１又はこれと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。
コンセンサスＯＲ１１Ｌ１は、配列番号１０で示されるＯＲ１１Ｌ１のアミノ酸配列と哺乳類におけるＯＲ１１Ｌ１のオルソログにコードされる嗅覚受容体２０９種のアミノ酸配列のアラインメントから上記の手法により導き出される配列番号１２で示されるコンセンサスアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールに対する応答性を有する。該オルソログは、哺乳類に属する生物種が有する嗅覚受容体遺伝子のうち、ＯＲ１１Ｌ１と相同性の高い遺伝子であって、ＯＲ１１Ｌ１と同じ名称を含む遺伝子である。尚、Ｍｕｓｍｕｓｃｕｌｕｓの嗅覚受容体遺伝子及びＲａｔｔｕｓｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓの嗅覚受容体遺伝子に関しては、最も相同性の高い１種をオルソログとして選択している。コンセンサスＯＲ１１Ｌ１とＯＲ１１Ｌ１のアミノ酸配列同一性は８７％である。

ＯＲ１１Ｈ１２と同等の機能を有するポリペプチドの例としては、配列番号１３で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。
ＯＲ１１Ｈ１２と同等の機能を有するポリペプチドの別の例としては、配列番号１３で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号１３で示されるアミノ酸配列の下記表２の（９）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所、好ましくは少なくとも３箇所、より好ましくは少なくとも５箇所、さらに好ましくは少なくとも１０箇所、さらにより好ましくは全ての箇所に（１０）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。尚、配列番号１３で示されるアミノ酸配列において、下記表２の（９）の各アミノ酸位置の全ての箇所に（１０）のアミノ酸残基を有するポリペプチドは、配列番号１５で示されるアミノ酸配列からなるコンセンサスＯＲ１１Ｈ１２である。換言すれば、下記表２は、ＯＲ１１Ｈ１２とコンセンサスＯＲ１１Ｈ１２の間で異なるアミノ酸残基を示している。

ＯＲ１１Ｈ１２と同等の機能を有するポリペプチドのさらに別の例としては、配列番号１５で示されるアミノ酸配列からなるコンセンサスＯＲ１１Ｈ１２又はこれと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。
コンセンサスＯＲ１１Ｈ１２は、配列番号１３で示されるＯＲ１１Ｈ１２のアミノ酸配列と哺乳類におけるＯＲ１１Ｈ１２のオルソログにコードされる嗅覚受容体９６種のアミノ酸配列のアラインメントから上記の手法により導き出される配列番号１５で示されるコンセンサスアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールに対する応答性を有する。該オルソログは、哺乳類に属する生物種が有する嗅覚受容体遺伝子のうち、ＯＲ１１Ｈ１２と相同性の高い遺伝子であって、ＯＲ１１Ｈ１２と同じ名称を含む遺伝子である。コンセンサスＯＲ１１Ｈ１２とＯＲ１１Ｈ１２のアミノ酸配列同一性は８７％である。

ＯＲ１１Ｈ２と同等の機能を有するポリペプチドの例としては、配列番号１６で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。
ＯＲ１１Ｈ２と同等の機能を有するポリペプチドの別の例としては、配列番号１６で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号１６で示されるアミノ酸配列の下記表３の（１）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所、好ましくは少なくとも３箇所、より好ましくは少なくとも５箇所、さらに好ましくは少なくとも１０箇所、さらにより好ましくは全ての箇所に（２）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。尚、配列番号１６で示されるアミノ酸配列において、下記表３の（１）の各アミノ酸位置の全ての箇所に（２）のアミノ酸残基を有するポリペプチドは、配列番号１８で示されるアミノ酸配列からなるコンセンサスＯＲ１１Ｈ２である。換言すれば、下記表３は、ＯＲ１１Ｈ２とコンセンサスＯＲ１１Ｈ２の間で異なるアミノ酸残基を示している。

ＯＲ１１Ｈ２と同等の機能を有するポリペプチドのさらに別の例としては、配列番号１８で示されるアミノ酸配列からなるコンセンサスＯＲ１１Ｈ２又はこれと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。
コンセンサスＯＲ１１Ｈ２は、配列番号１６で示されるＯＲ１１Ｈ２のアミノ酸配列、哺乳類におけるＯＲ１１Ｈ２のオルソログにコードされる嗅覚受容体１種のアミノ酸配列、ＯＲ１１Ｈ２と相同性が高いパラログである配列番号１３で示されるＯＲ１１Ｈ１２のアミノ酸配列、及び哺乳類におけるＯＲ１１Ｈ１２のオルソログにコードされる嗅覚受容体９５種のアミノ酸配列のアラインメントから上記の手法により導き出される配列番号１８で示されるコンセンサスアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールに対する応答性を有する。該ＯＲ１１Ｈ２のオルソログは、哺乳類に属する生物種が有する嗅覚受容体遺伝子のうち、ＯＲ１１Ｈ２と相同性の高い遺伝子であって、ＯＲ１１Ｈ２と同じ名称を含む遺伝子である。また、該ＯＲ１１Ｈ１２のオルソログは、哺乳類に属する生物種が有する嗅覚受容体遺伝子のうち、ＯＲ１１Ｈ２と相同性の高い遺伝子であって、ＯＲ１１Ｈ１２と同じ名称を含む遺伝子である。コンセンサスＯＲ１１Ｈ２とＯＲ１１Ｈ２のアミノ酸配列同一性は９０％である。

ＯＲ２Ｂ１１と同等の機能を有するポリペプチドの例としては、配列番号１９で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。
ＯＲ２Ｂ１１と同等の機能を有するポリペプチドの別の例としては、配列番号１９で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号１９で示されるアミノ酸配列の下記表３の（３）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所、好ましくは少なくとも３箇所、より好ましくは少なくとも５箇所、さらに好ましくは少なくとも１０箇所、さらにより好ましくは全ての箇所に（４）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。ここで、下記表３の（３）の３１７位に相当するアミノ酸位置に（４）のＲＲを有するとは、あるアミノ酸配列において、配列番号１９で示されるアミノ酸配列の３１７位のＧに相当する位置のアミノ酸残基がＲに置換され、その直後にＲが付加されていることを意味する。尚、配列番号１９で示されるアミノ酸配列において、下記表３の（３）の各アミノ酸位置の全ての箇所に（４）のアミノ酸残基を有するポリペプチドは、配列番号２１で示されるアミノ酸配列からなるコンセンサスＯＲ２Ｂ１１である。換言すれば、下記表３は、ＯＲ２Ｂ１１とコンセンサスＯＲ２Ｂ１１の間で異なるアミノ酸残基を示している。

ＯＲ２Ｂ１１と同等の機能を有するポリペプチドのさらに別の例としては、配列番号２１で示されるアミノ酸配列からなるコンセンサスＯＲ２Ｂ１１又はこれと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。
コンセンサスＯＲ２Ｂ１１は、配列番号１９で示されるＯＲ２Ｂ１１のアミノ酸配列と哺乳類におけるＯＲ２Ｂ１１のオルソログにコードされる嗅覚受容体２００種のアミノ酸配列のアラインメントから上記の手法により導き出される配列番号２１で示されるコンセンサスアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールに対する応答性を有する。該オルソログは、哺乳類に属する生物種が有する嗅覚受容体遺伝子のうち、ＯＲ２Ｂ１１と相同性の高い遺伝子であって、ＯＲ２Ｂ１１と同じ名称を含む遺伝子である。コンセンサスＯＲ２Ｂ１１とＯＲ２Ｂ１１のアミノ酸配列同一性は９３％である。

ＯＲ２Ｌ２と同等の機能を有するポリペプチドの例としては、配列番号２２で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。
ＯＲ２Ｌ２と同等の機能を有するポリペプチドの別の例としては、配列番号２２で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号２２で示されるアミノ酸配列の下記表３の（５）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所、好ましくは少なくとも３箇所、より好ましくは少なくとも５箇所、さらに好ましくは少なくとも１０箇所、さらにより好ましくは全ての箇所に（６）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。尚、配列番号２２で示されるアミノ酸配列において、下記表３の（５）の各アミノ酸位置の全ての箇所に（６）のアミノ酸残基を有するポリペプチドは、配列番号２４で示されるアミノ酸配列からなるコンセンサスＯＲ２Ｌ２である。換言すれば、下記表３は、ＯＲ２Ｌ２とコンセンサスＯＲ２Ｌ２の間で異なるアミノ酸残基を示している。

ＯＲ２Ｌ２と同等の機能を有するポリペプチドのさらに別の例としては、配列番号２４で示されるアミノ酸配列からなるコンセンサスＯＲ２Ｌ２又はこれと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。
コンセンサスＯＲ２Ｌ２は、配列番号２２で示されるＯＲ２Ｌ２のアミノ酸配列と哺乳類におけるＯＲ２Ｌ２のオルソログにコードされる嗅覚受容体４４種のアミノ酸配列のアラインメントから上記の手法により導き出される配列番号２４で示されるコンセンサスアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールに対する応答性を有する。該オルソログは、哺乳類に属する生物種が有する嗅覚受容体遺伝子のうち、ＯＲ２Ｌ２と相同性の高い遺伝子であって、ＯＲ２Ｌ２と同じ名称を含む遺伝子である。コンセンサスＯＲ２Ｌ２とＯＲ２Ｌ２のアミノ酸配列同一性は９３％である。

ＯＲ１Ｑ１と同等の機能を有するポリペプチドの例としては、配列番号２５で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。
ＯＲ１Ｑ１と同等の機能を有するポリペプチドの別の例としては、配列番号２５で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号２５で示されるアミノ酸配列の下記表３の（７）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所、好ましくは少なくとも３箇所、より好ましくは少なくとも５箇所、さらに好ましくは少なくとも１０箇所、さらにより好ましくは全ての箇所に（８）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。尚、配列番号２５で示されるアミノ酸配列において、下記表３の（７）の各アミノ酸位置の全ての箇所に（８）のアミノ酸残基を有するポリペプチドは、配列番号２７で示されるアミノ酸配列からなるコンセンサスＯＲ１Ｑ１である。換言すれば、下記表３は、ＯＲ１Ｑ１とコンセンサスＯＲ１Ｑ１の間で異なるアミノ酸残基を示している。

ＯＲ１Ｑ１と同等の機能を有するポリペプチドのさらに別の例としては、配列番号２７で示されるアミノ酸配列からなるコンセンサスＯＲ１Ｑ１又はこれと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。
コンセンサスＯＲ１Ｑ１は、配列番号２５で示されるＯＲ１Ｑ１のアミノ酸配列と哺乳類におけるＯＲ１Ｑ１のオルソログにコードされる嗅覚受容体１２３種のアミノ酸配列のアラインメントから上記の手法により導き出される配列番号２７で示されるコンセンサスアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールに対する応答性を有する。該オルソログは、哺乳類に属する生物種が有する嗅覚受容体遺伝子のうち、ＯＲ１Ｑ１と相同性の高い遺伝子であって、ＯＲ１Ｑ１と同じ名称を含む遺伝子である。コンセンサスＯＲ１Ｑ１とＯＲ１Ｑ１のアミノ酸配列同一性は８９％である。

ＯＲ１０Ｐ１と同等の機能を有するポリペプチドの例としては、配列番号２８で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。
ＯＲ１０Ｐ１と同等の機能を有するポリペプチドの別の例としては、配列番号２８で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号２８で示されるアミノ酸配列の下記表３の（９）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所、好ましくは少なくとも３箇所、より好ましくは少なくとも５箇所、さらに好ましくは少なくとも１０箇所、さらにより好ましくは全ての箇所に（１０）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。尚、配列番号２８で示されるアミノ酸配列において、下記表３の（９）の各アミノ酸位置の全ての箇所に（１０）のアミノ酸残基を有するポリペプチドは、配列番号３０で示されるアミノ酸配列からなるコンセンサスＯＲ１０Ｐ１である。換言すれば、下記表３は、ＯＲ１０Ｐ１とコンセンサスＯＲ１０Ｐ１の間で異なるアミノ酸残基を示している。

ＯＲ１０Ｐ１と同等の機能を有するポリペプチドのさらに別の例としては、配列番号３０で示されるアミノ酸配列からなるコンセンサスＯＲ１０Ｐ１又はこれと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。
コンセンサスＯＲ１０Ｐ１は、配列番号２８で示されるＯＲ１０Ｐ１のアミノ酸配列と哺乳類におけるＯＲ１０Ｐ１のオルソログにコードされる嗅覚受容体１２３種のアミノ酸配列のアラインメントから上記の手法により導き出される配列番号３０で示されるコンセンサスアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールに対する応答性を有する。該オルソログは、哺乳類に属する生物種が有する嗅覚受容体遺伝子のうち、ＯＲ１０Ｐ１と相同性の高い遺伝子であって、ＯＲ１０Ｐ１と同じ名称を含む遺伝子である。コンセンサスＯＲ１０Ｐ１とＯＲ１０Ｐ１のアミノ酸配列同一性は９２％である。

ＯＲ４Ｌ１と同等の機能を有するポリペプチドの例としては、配列番号３１で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。
ＯＲ４Ｌ１と同等の機能を有するポリペプチドの別の例としては、配列番号３１で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号３１で示されるアミノ酸配列の下記表４の（１）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所、好ましくは少なくとも３箇所、より好ましくは少なくとも５箇所、さらに好ましくは少なくとも１０箇所、さらにより好ましくは全ての箇所に（２）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。尚、配列番号３１で示されるアミノ酸配列において、下記表４の（１）の各アミノ酸位置の全ての箇所に（２）のアミノ酸残基を有するポリペプチドは、配列番号３３で示されるアミノ酸配列からなるコンセンサスＯＲ４Ｌ１である。換言すれば、下記表４は、ＯＲ４Ｌ１とコンセンサスＯＲ４Ｌ１の間で異なるアミノ酸残基を示している。

ＯＲ４Ｌ１と同等の機能を有するポリペプチドのさらに別の例としては、配列番号３３で示されるアミノ酸配列からなるコンセンサスＯＲ４Ｌ１又はこれと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。
コンセンサスＯＲ４Ｌ１は、配列番号３１で示されるＯＲ４Ｌ１のアミノ酸配列と哺乳類におけるＯＲ４Ｌ１のオルソログにコードされる嗅覚受容体２２５種のアミノ酸配列のアラインメントから上記の手法により導き出される配列番号３３で示されるコンセンサスアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールに対する応答性を有する。該オルソログは、哺乳類に属する生物種が有する嗅覚受容体遺伝子のうち、ＯＲ４Ｌ１と相同性の高い遺伝子であって、ＯＲ４Ｌ１と同じ名称を含む遺伝子である。尚、Ｍｕｓｍｕｓｃｕｌｕｓの嗅覚受容体遺伝子及びＲａｔｔｕｓｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓの嗅覚受容体遺伝子に関しては、最も相同性の高い１種をオルソログとして選択している。コンセンサスＯＲ４Ｌ１とＯＲ４Ｌ１のアミノ酸配列同一性は９１％である。

ＯＲ１１Ｇ２と同等の機能を有するポリペプチドの例としては、配列番号３４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。
ＯＲ１１Ｇ２と同等の機能を有するポリペプチドの別の例としては、配列番号３４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号３４で示されるアミノ酸配列の下記表５の（１）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所、好ましくは少なくとも３箇所、より好ましくは少なくとも５箇所、さらに好ましくは少なくとも１０箇所、さらにより好ましくは全ての箇所に（２）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。尚、配列番号３４で示されるアミノ酸配列において、下記表５の（１）の各アミノ酸位置の全ての箇所に（２）のアミノ酸残基を有するポリペプチドは、配列番号３６で示されるアミノ酸配列からなるコンセンサスＯＲ１１Ｇ２である。換言すれば、下記表５は、ＯＲ１１Ｇ２とコンセンサスＯＲ１１Ｇ２の間で異なるアミノ酸残基を示している。

ＯＲ１１Ｇ２と同等の機能を有するポリペプチドのさらに別の例としては、配列番号３６で示されるアミノ酸配列からなるコンセンサスＯＲ１１Ｇ２又はこれと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。
コンセンサスＯＲ１１Ｇ２は、配列番号３４で示されるＯＲ１１Ｇ２のアミノ酸配列と哺乳類におけるＯＲ１１Ｇ２のオルソログにコードされる嗅覚受容体２４８種のアミノ酸配列のアラインメントから上記の手法により導き出される配列番号３６で示されるコンセンサスアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールに対する応答性を有する。該オルソログは、哺乳類に属する生物種が有する嗅覚受容体遺伝子のうち、ＯＲ１１Ｇ２と相同性の高い遺伝子であって、ＯＲ１１Ｇ２と同じ名称を含む遺伝子である。尚、Ｍｕｓｍｕｓｃｕｌｕｓの嗅覚受容体遺伝子に関しては、最も相同性の高い１種をオルソログとして選択している。コンセンサスＯＲ１１Ｇ２とＯＲ１１Ｇ２のアミノ酸配列同一性は８９％である。

本発明の方法では、ＯＲ１２Ｄ３、ＯＲ１２Ｄ２、ＯＲ１１Ｈ７、ＯＲ１１Ｌ１、ＯＲ１１Ｈ１２、ＯＲ１１Ｈ２、ＯＲ２Ｂ１１、ＯＲ２Ｌ２、ＯＲ１Ｑ１、ＯＲ１０Ｐ１、ＯＲ４Ｌ１及びこれらと同等の機能を有するポリペプチドから選択される少なくとも１種を使用すればよいが、いずれか２種以上を組み合わせて使用してもよい。好ましくは、ＯＲ１２Ｄ３、ＯＲ１２Ｄ２、ＯＲ１１Ｈ７、ＯＲ１１Ｌ１、ＯＲ１１Ｈ１２、ＯＲ１１Ｈ２、ＯＲ２Ｂ１１、ＯＲ２Ｌ２、ＯＲ１Ｑ１、ＯＲ１０Ｐ１、ＯＲ４Ｌ１、コンセンサスＯＲ１２Ｄ３、コンセンサスＯＲ１２Ｄ２、コンセンサスＯＲ１１Ｈ７、コンセンサスＯＲ１１Ｌ１、コンセンサスＯＲ１１Ｈ１２、コンセンサスＯＲ１１Ｈ２、コンセンサスＯＲ２Ｂ１１、コンセンサスＯＲ２Ｌ２、コンセンサスＯＲ１Ｑ１、コンセンサスＯＲ１０Ｐ１及びコンセンサスＯＲ４Ｌ１からなる群より選択される少なくとも１種が使用され、より好ましくは、コンセンサスＯＲ１２Ｄ３、コンセンサスＯＲ１２Ｄ２、コンセンサスＯＲ１１Ｈ７、コンセンサスＯＲ１１Ｌ１、コンセンサスＯＲ１１Ｈ１２、コンセンサスＯＲ１１Ｈ２、コンセンサスＯＲ２Ｂ１１、コンセンサスＯＲ２Ｌ２、コンセンサスＯＲ１Ｑ１、コンセンサスＯＲ１０Ｐ１及びコンセンサスＯＲ４Ｌ１からなる群より選択される少なくとも１種が使用される。さらに、ＯＲ１１Ｇ２及びこれと同等の機能を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種、好ましくはＯＲ１１Ｇ２及びコンセンサスＯＲ１１Ｇ２からなる群より選択される少なくとも１種、より好ましくはコンセンサスＯＲ１１Ｇ２を組み合わせて使用してもよい。

一例において、複素環式芳香族化合物がインドールである場合、嗅覚受容体ポリペプチドとしては、好ましくは、ＯＲ１２Ｄ３、ＯＲ１２Ｄ２、ＯＲ１１Ｈ７、ＯＲ１１Ｌ１、ＯＲ１１Ｈ１２、ＯＲ１１Ｈ２、ＯＲ２Ｂ１１、ＯＲ２Ｌ２、ＯＲ１Ｑ１、ＯＲ１０Ｐ１、ＯＲ４Ｌ１及びこれらと同等の機能を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種が使用され、より好ましくは、ＯＲ１２Ｄ３、ＯＲ１２Ｄ２、ＯＲ１１Ｈ７、ＯＲ１１Ｌ１、ＯＲ１１Ｈ１２及びこれらと同等の機能を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種が使用され、さらに好ましくは、ＯＲ１２Ｄ３、ＯＲ１２Ｄ２、ＯＲ１１Ｈ７、ＯＲ１１Ｌ１、ＯＲ１１Ｈ１２、コンセンサスＯＲ１２Ｄ３、コンセンサスＯＲ１２Ｄ２、コンセンサスＯＲ１１Ｈ７、コンセンサスＯＲ１１Ｌ１及びコンセンサスＯＲ１１Ｈ１２からなる群より選択される少なくとも１種が使用され、さらにより好ましくは、コンセンサスＯＲ１２Ｄ３、コンセンサスＯＲ１２Ｄ２、コンセンサスＯＲ１１Ｈ７、コンセンサスＯＲ１１Ｌ１及びコンセンサスＯＲ１１Ｈ１２からなる群より選択される少なくとも１種が使用される。さらに、ＯＲ１１Ｇ２及びこれと同等の機能を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種、好ましくはＯＲ１１Ｇ２及びコンセンサスＯＲ１１Ｇ２からなる群より選択される少なくとも１種、より好ましくはコンセンサスＯＲ１１Ｇ２を組み合わせて使用してもよい。
別の一例において、複素環式芳香族化合物がスカトールである場合、嗅覚受容体ポリペプチドとしては、好ましくは、ＯＲ１２Ｄ３、ＯＲ１２Ｄ２、ＯＲ１１Ｈ７、ＯＲ１１Ｌ１、ＯＲ１１Ｈ１２、ＯＲ１１Ｈ２、ＯＲ２Ｂ１１、ＯＲ２Ｌ２、ＯＲ１Ｑ１、ＯＲ１０Ｐ１、ＯＲ４Ｌ１及びこれらと同等の機能を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種が使用され、より好ましくは、ＯＲ１２Ｄ３、ＯＲ１２Ｄ２、ＯＲ１１Ｈ７、ＯＲ１１Ｌ１、ＯＲ１１Ｈ１２、ＯＲ１１Ｈ２及びこれらと同等の機能を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種が使用され、さらに好ましくは、ＯＲ１２Ｄ３、ＯＲ１２Ｄ２、ＯＲ１１Ｈ７、ＯＲ１１Ｌ１、ＯＲ１１Ｈ１２、ＯＲ１１Ｈ２、コンセンサスＯＲ１２Ｄ３、コンセンサスＯＲ１２Ｄ２、コンセンサスＯＲ１１Ｈ７、コンセンサスＯＲ１１Ｌ１、コンセンサスＯＲ１１Ｈ１２及びンセンサスＯＲ１１Ｈ２からなる群より選択される少なくとも１種が使用され、さらにより好ましくは、コンセンサスＯＲ１２Ｄ３、コンセンサスＯＲ１２Ｄ２、コンセンサスＯＲ１１Ｈ７、コンセンサスＯＲ１１Ｌ１、コンセンサスＯＲ１１Ｈ１２及びコンセンサスＯＲ１１Ｈ２からなる群より選択される少なくとも１種が使用される。さらに、ＯＲ１１Ｇ２及びこれと同等の機能を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種、好ましくはＯＲ１１Ｇ２及びコンセンサスＯＲ１１Ｇ２からなる群より選択される少なくとも１種、より好ましくはコンセンサスＯＲ１１Ｇ２を組み合わせて使用してもよい。

本発明の方法において、該嗅覚受容体ポリペプチドは、複素環式芳香族化合物に対する応答性を失わない限り、任意の形態で使用され得る。例えば、該嗅覚受容体ポリペプチドは、生体から単離された嗅覚受容器若しくは嗅細胞等の、該嗅覚受容体ポリペプチドを天然に発現する組織や細胞、又はそれらの培養物；該嗅覚受容体ポリペプチドを担持した嗅細胞の膜；該嗅覚受容体ポリペプチドを発現するように遺伝的に操作された組換え細胞又はその培養物；該嗅覚受容体ポリペプチドを有する該組換え細胞の膜；該嗅覚受容体ポリペプチドを有する人工脂質二重膜、などの形態で使用され得る。これらの形態は全て、本発明で使用される嗅覚受容体ポリペプチドの範囲に含まれる。

好ましい態様においては、嗅覚受容体ポリペプチドとしては、嗅細胞等の該嗅覚受容体ポリペプチドを天然に発現する細胞、又は該嗅覚受容体ポリペプチドを発現するように遺伝的に操作された組換え細胞、あるいはそれらの培養物が使用される。該組換え細胞は、該嗅覚受容体ポリペプチドをコードする遺伝子を組み込んだベクターを用いて細胞を形質転換することで作製することができる。

好適には、該嗅覚受容体ポリペプチドの細胞膜発現を促進するために、該嗅覚受容体ポリペプチドをコードする遺伝子とともに、ＲＴＰ（ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ）をコードする遺伝子を細胞に導入する。好ましくは、ＲＴＰ１Ｓをコードする遺伝子を、該嗅覚受容体ポリペプチドをコードする遺伝子とともに細胞に導入する。ＲＴＰ１Ｓの例としては、ヒトＲＴＰ１Ｓが挙げられる。ヒトＲＴＰ１Ｓは、ＧｅｎＢａｎｋにＧＩ：５０２３４９１７として登録されており、配列番号３７のヌクレオチド配列を有する遺伝子にコードされる、配列番号３８のアミノ酸配列からなるポリペプチドである。

該嗅覚受容体ポリペプチドに試験物質を添加する方法としては、該嗅覚受容体ポリペプチドを発現する細胞を培養する培地に試験物質を添加する方法、該嗅覚受容体ポリペプチド又はそれを含む細胞や組織に試験物質を直接滴下、散布もしくは噴霧する方法などが挙げられるが、特に限定されない。

本発明の方法においては、該嗅覚受容体ポリペプチドへの試験物質の添加に続いて、該嗅覚受容体ポリペプチドの応答が測定される。測定は、嗅覚受容体の応答を測定する方法として当該分野で知られている任意の方法、例えば、細胞内ｃＡＭＰ量測定等によって行えばよい。例えば、嗅覚受容体は、におい分子によって活性化されると、細胞内のＧαｓファミリーに分類されるＧタンパク質αサブユニットと共役してアデニル酸シクラーゼを活性化することで、細胞内ｃＡＭＰ量を増加させることが知られている（Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，２００４，５：２６３－２７８）。一方で、嗅覚受容体はにおい分子により活性化されると、細胞内でＧα１５などＧｑファミリーに属するタンパク質とも共役し、細胞内でカルシウムイオン量を増加させることもできる。したがって、におい分子添加後の細胞内ｃＡＭＰ量もしくはカルシムイオン量、もしくはそれらを介して活性化する下流分子の挙動を指標にすることで、嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定することができる。ｃＡＭＰ量を測定する方法としては、ＥＬＩＳＡ法やレポータージーンアッセイ等が挙げられる。嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定する他の方法としてカルシウムイオン濃度を測定する方法は、カルシウムイメージング法やＴＧＦα ｓｈｅｄｄｉｎｇａｓｓａｙが挙げられる。また、ｃＡＭＰ量を介して活性化する下流分子の挙動を指標とした方法の例として、アフリカツメガエル卵母細胞において、ｃＡＭＰシグナルにより活性化する嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子ＣＦＴＲを介した細胞膜内外の電位変化を測定する二電極膜電位固定法も有効である。

本発明の第一の実施形態において、本発明による複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤の評価及び／又は選択方法は、上述した嗅覚受容体ポリペプチドに試験物質を添加すること；及び、該試験物質に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定すること、を含む。次いで、測定した応答に基づいて、該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を増強する試験物質を検出する。検出された試験物質は、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤として選択される。

該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を増強する試験物質は、先に嗅覚受容体の応答を増強させておくことで、後で複素環式芳香族化合物に曝露されたときの該嗅覚受容体の応答を弱めることができる。結果、におい交差順応に基づいて、個体による複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの認識を抑制することができる。したがって、該第一の実施形態では、嗅覚受容体アゴニズムによるにおいの交差順応に基づく複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤が選択される。

該嗅覚受容体ポリペプチドに対する試験物質の作用は、例えば、試験物質を添加した該嗅覚受容体ポリペプチド（試験群）の応答を、対照群における応答と比較することによって評価することができる。対照群の例としては、試験物質を添加していない該嗅覚受容体ポリペプチド、対照物質を添加した該嗅覚受容体ポリペプチド、より低濃度の試験物質を添加した該嗅覚受容体ポリペプチド、試験物質を添加する前の該嗅覚受容体ポリペプチド、該嗅覚受容体ポリペプチドが発現していない細胞、などを挙げることができる。好ましくは、該第一の実施形態における本発明の方法は、試験物質の存在下及び非存在下での該嗅覚受容体ポリペプチドの活性を測定することを含む。また好ましくは、該第一の実施形態における本発明の方法は、試験物質の存在下で、該嗅覚受容体ポリペプチドが発現した細胞及び未発現の細胞の該アゴニストに対する応答を測定することを含む。

例えば、該第一の実施形態においては、試験群における応答が対照群と比べて増強されていた場合、該試験物質を、複素環式芳香族化合物に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する物質として選択することができる。例えば、試験群における該嗅覚受容体ポリペプチドの応答が、対照群と比較して、好ましくは１２０％以上、より好ましくは１５０％以上、さらに好ましくは２００％に増強されていれば、該試験物質を、複素環式芳香族化合物に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する物質として選択することができる。あるいは、試験群における該嗅覚受容体ポリペプチドの応答が、対照群と比較して統計学的に有意に増強されていれば、該試験物質を、複素環式芳香族化合物に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する物質として選択することができる。

該第一の実施形態に従って選択された複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤によって抑制される複素環式芳香族化合物を原因とするにおいとしては、例えば、糞便臭、口臭、インドール臭、スカトール臭等が挙げられる。好ましくは、糞便臭又は口臭である。

該第一の実施形態に従って選択された複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤の使用についての一実施形態は、以下のとおりである：まず、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制を所望する対象者に、該対象者が該臭気に曝露される前に、該抑制剤のにおいを嗅がせておく。あるいは、該対象者に対し、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいよりも強いにおいとなるように該抑制剤を適用する。その結果、該対象者は、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいに曝露されても、該臭気に対する嗅覚感受性が低下しているため、該臭気を弱いと感じるか、又は感じなくなる。

本発明の第二の実施形態において、本発明による複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤の評価及び／又は選択方法は、上述した嗅覚受容体ポリペプチドに、試験物質及び該嗅覚受容体ポリペプチドのアゴニストを添加すること；及び、該アゴニストに対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定すること、を含む。該アゴニストとしては、限定されないが、好ましくは複素環式芳香族化合物、より好ましくは含窒素複素環式芳香族化合物、さらに好ましくはインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種が使用される。次いで、測定した応答に基づいて、該アゴニストに対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する試験物質を検出する。検出された試験物質は、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤として選択される。

該第二の実施形態においては、該嗅覚受容体ポリペプチドのアゴニストに対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する試験物質は、嗅覚受容体アンタゴニズムに基づく複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤として選択される。該嗅覚受容体ポリペプチドの該アゴニストへの応答に対して該試験物質が及ぼす作用は、例えば、試験物質を添加した該嗅覚受容体ポリペプチド（試験群）の該アゴニストに対する応答を、対照群における該アゴニストに対する応答と比較することによって行うことができる。対照群の例としては、上述したものが挙げられる。好ましくは、該第二の実施形態における本発明の方法は、試験物質の存在下及び非存在下で、該アゴニストに対する該嗅覚受容体ポリペプチドの活性を測定することを含む。

例えば、試験群における応答が、対照群よりも抑制されていた場合、該試験物質を、複素環式芳香族化合物に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する物質として選択することができる。例えば、試験群における該嗅覚受容体ポリペプチドの応答が、対照群と比較して好ましくは６０％以下、より好ましくは５０％以下、さらに好ましくは２５％以下に抑制されていれば、該試験物質を、複素環式芳香族化合物に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する物質として選択することができる。あるいは、試験群における該嗅覚受容体ポリペプチドの応答が、対照群と比較して統計学的に有意に抑制されていれば、該試験物質を、複素環式芳香族化合物に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する物質として選択することができる。

該第二の実施形態に従って選択された複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤によって抑制される複素環式芳香族化合物を原因とするにおいとしては、例えば、糞便臭、口臭、インドール臭、スカトール臭等が挙げられる。好ましくは、糞便臭又は口臭である。

該第二の実施形態に従って選択された複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤の使用についての一実施形態は、以下のとおりである：まず、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制を所望する対象者に、該対象者が該臭気に曝露される前から又は同時に、該抑制剤のにおいを嗅がせておく。その結果、該対象者は、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいに曝露されても、該臭気に対する嗅覚感受性が低下しているため、該臭気を弱いと感じるか、又は感じなくなる。

以上の手順で、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいに応答性を有する嗅覚受容体ポリペプチドの応答活性に基づいて、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤を取得することができる。必要に応じて、上記で選択された試験物質の複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制能を、官能試験によりさらに評価してもよい。すなわち、本発明の方法の一実施形態においては、上記手順で選択された試験物質を、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤の候補物質として取得する。次いで、該候補物質の複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制作用を官能試験により評価する。官能試験でより良い評価が得られた候補物質は、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤として選択される。

該候補物質の官能試験は、当該分野で通常行われる消臭剤の評価手順に準じて行われ得る。該候補物質がにおいの交差順応の誘導物質である場合は、評価者に対する該候補物質と標的のにおいの原因物質の適用順序が調整され得る。例えば、上述した第一の実施形態で選択された試験物質を候補物質として官能試験する場合、評価者は、最初に該候補物質のにおいを嗅ぎ、そのにおいに順応しておく。次いで該評価者は、標的のにおい（好ましくは複素環式芳香族化合物を原因とするにおい）を嗅ぎ、その強度を評価する。得られた評価結果は、該候補物質に順応させなかった場合の標的のにおいの強度と比較される。また例えば、上述した第二の実施形態で選択された試験物質を候補物質として官能試験する場合、評価者は、該候補物質のにおいと同時に標的のにおい（好ましくは複素環式芳香族化合物を原因とするにおい）を嗅ぎ、該標的のにおいの強度を評価する。得られた評価結果は、標的のにおい単独でのにおいの強度と比較される。官能試験の結果、標的のにおいの強度を低下させたと評価された候補物質は、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤として選択される。

本発明で得られた複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤は、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制のための有効成分として使用され得る。例えば、該抑制剤は、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいを抑制するための組成物又は物品に、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいを抑制するための有効成分として含有され得る。あるいは、該抑制剤は、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいを抑制するための組成物又は物品の製造のために使用することができる。本発明で得られた複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤の適用例としては、該剤を含んだ生理用品、紙おむつ等の衛生用品；該剤を含んだ肌着、下着、リネン類等の服飾類、布製品、又は織物；該剤を含んだ洗濯用洗剤又は柔軟剤；該剤を含んだ香粧品、洗浄剤、デオドラント等の外用剤、医薬品、食品、等；トイレの前又は中への該剤の載置や噴霧；病棟又は介護施設などへの該剤の載置や噴霧；病棟又は介護施設などで排泄の処置に関わる者に、該剤を携行させたり、該処置の前に該剤に曝露したりする方法；複素環式芳香族化合物を原因とするにおいを発生する環境への適用、などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。

本発明の例示的実施形態として、さらに以下の物質、製造方法、用途、方法等を本明細書に開示する。ただし、本発明はこれらの実施形態に限定されない。

〔１〕試験物質添加後のＯＲ１２Ｄ３、ＯＲ１２Ｄ２、ＯＲ１１Ｈ７、ＯＲ１１Ｌ１、ＯＲ１１Ｈ１２、ＯＲ１１Ｈ２、ＯＲ２Ｂ１１、ＯＲ２Ｌ２、ＯＲ１Ｑ１、ＯＲ１０Ｐ１、ＯＲ４Ｌ１及びこれらと同等の機能を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種の嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定することを含む、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤の評価及び／又は選択方法。
〔２〕試験物質添加後のＯＲ１１Ｇ２及びこれと同等の機能を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種の嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定することをさらに含む、〔１〕記載の方法。
〔３〕好ましくは、前記複素環式芳香族化合物を原因とするにおいが糞便臭又は口臭である、〔１〕又は〔２〕記載の方法。
〔４〕好ましくは、前記複素環式芳香族化合物が含窒素複素環式芳香族化合物であり、より好ましくは、インドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種である、〔１〕～〔３〕のいずれか１項記載の方法。
〔５〕好ましくは、下記の嗅覚受容体ポリペプチドが下記の配列番号で示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドである、〔１〕～〔４〕のいずれか１項記載の方法。
ＯＲ１２Ｄ３；配列番号１
ＯＲ１２Ｄ２；配列番号４
ＯＲ１１Ｈ７；配列番号７
ＯＲ１１Ｌ１；配列番号１０
ＯＲ１１Ｈ１２；配列番号１３
ＯＲ１１Ｈ２；配列番号１６
ＯＲ２Ｂ１１；配列番号１９
ＯＲ２Ｌ２；配列番号２２
ＯＲ１Ｑ１；配列番号２５
ＯＲ１０Ｐ１；配列番号２８
ＯＲ４Ｌ１；配列番号３１
〔６〕好ましくは、前記ＯＲ１１Ｇ２が配列番号３４で示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドである、〔２〕～〔５〕のいずれか１項記載の方法。
〔７〕好ましくは、下記の嗅覚受容体ポリペプチドと同等の機能を有するポリペプチドが、下記の配列番号で示されるアミノ酸配列と、好ましくは８０％以上、より好ましくは８５％以上、さらに好ましくは９０％以上、さらにより好ましくは９５％以上、なお好ましくは９８％以上、なおより好ましくは９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドである、〔１〕～〔６〕のいずれか１項記載の方法。
ＯＲ１２Ｄ３；配列番号１
ＯＲ１２Ｄ２；配列番号４
ＯＲ１１Ｈ７；配列番号７
ＯＲ１１Ｌ１；配列番号１０
ＯＲ１１Ｈ１２；配列番号１３
ＯＲ１１Ｈ２；配列番号１６
ＯＲ２Ｂ１１；配列番号１９
ＯＲ２Ｌ２；配列番号２２
ＯＲ１Ｑ１；配列番号２５
ＯＲ１０Ｐ１；配列番号２８
ＯＲ４Ｌ１；配列番号３１
〔８〕好ましくは、前記ＯＲ１１Ｇ２と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号３４で示されるアミノ酸配列と、好ましくは８０％以上、より好ましくは８５％以上、さらに好ましくは９０％以上、さらにより好ましくは９５％以上、なお好ましくは９８％以上、なおより好ましくは９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドである、〔２〕～〔７〕のいずれか１項記載の方法。

〔９〕好ましくは、前記ＯＲ１２Ｄ３と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号１で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号１で示されるアミノ酸配列の上記表２の（１）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所に（２）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ１２Ｄ２と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号４で示されるアミノ酸配列の上記表２の（３）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所に（４）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ１１Ｈ７と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号７で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号７で示されるアミノ酸配列の上記表２の（５）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所に（６）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ１１Ｌ１と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号１０で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号１０で示されるアミノ酸配列の上記表２の（７）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所に（８）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ１１Ｈ１２と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号１３で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号１３で示されるアミノ酸配列の上記表２の（９）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所に（１０）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ１１Ｈ２と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号１６で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号１６で示されるアミノ酸配列の上記表３の（１）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所に（２）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ２Ｂ１１と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号１９で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号１９で示されるアミノ酸配列の上記表３の（３）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所に（４）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ２Ｌ２と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号２２で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号２２で示されるアミノ酸配列の上記表３の（５）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所に（６）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ１Ｑ１と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号２５で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号２５で示されるアミノ酸配列の上記表３の（７）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所に（８）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ１０Ｐ１と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号２８で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号２８で示されるアミノ酸配列の上記表３の（９）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所に（１０）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ４Ｌ１と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号３１で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号３１で示されるアミノ酸配列の上記表４の（１）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所に（２）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
少なくとも８０％以上の同一性とは、好ましくは８０％以上、より好ましくは８５％以上、さらに好ましくは９０％以上、さらにより好ましくは９５％以上、なお好ましくは９８％以上、なおより好ましくは９９％以上の同一性であり、少なくとも１箇所とは、好ましくは少なくとも１箇所、より好ましくは少なくとも３箇所、さらに好ましくは少なくとも５箇所、さらにより好ましくは少なくとも１０箇所、なお好ましくは全ての箇所である、
〔１〕～〔８〕のいずれか１項記載の方法。
〔１０〕好ましくは、前記ＯＲ１１Ｇ２と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号３４で示されるアミノ酸配列と、好ましくは８０％以上、より好ましくは８５％以上、さらに好ましくは９０％以上、さらにより好ましくは９５％以上、なお好ましくは９８％以上、なおより好ましくは９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号３４で示されるアミノ酸配列の上記表５の（１）の各アミノ酸位置に相当する位置の好ましくは少なくとも１箇所、より好ましくは少なくとも３箇所、さらに好ましくは少なくとも５箇所、さらにより好ましくは少なくとも１０箇所、なお好ましくは全ての箇所に（２）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドである、〔２〕～〔９〕のいずれか１項記載の方法。
〔１１〕好ましくは、下記の嗅覚受容体ポリペプチドと同等の機能を有するポリペプチドが、下記の配列番号で示されるアミノ酸配列と、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、さらに好ましくは９８％以上、さらにより好ましくは９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドである、〔１〕～〔６〕のいずれか１項記載の方法。
ＯＲ１２Ｄ３；配列番号３
ＯＲ１２Ｄ２；配列番号６
ＯＲ１１Ｈ７；配列番号９
ＯＲ１１Ｌ１；配列番号１２
ＯＲ１１Ｈ１２；配列番号１５
ＯＲ１１Ｈ２；配列番号１８
ＯＲ２Ｂ１１；配列番号２１
ＯＲ２Ｌ２；配列番号２４
ＯＲ１Ｑ１；配列番号２７
ＯＲ１０Ｐ１；配列番号３０
ＯＲ４Ｌ１；配列番号３３
〔１２〕好ましくは、前記ＯＲ１１Ｇ２と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号３６で示されるアミノ酸配列と、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、さらに好ましくは９８％以上、さらにより好ましくは９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドである、〔２〕～〔６〕のいずれか１項記載の方法。

〔１３〕好ましくは、以下：
前記嗅覚受容体ポリペプチドに試験物質を添加すること、及び
該試験物質に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定すること、
を含む、〔１〕～〔１２〕のいずれか１項記載の方法。
〔１４〕好ましくは、前記試験物質に対する前記嗅覚受容体ポリペプチドの応答を増強する試験物質を、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤として選択することをさらに含む、〔１３〕記載の方法。
〔１５〕好ましくは、対照群における前記嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定することをさらに含む、〔１３〕記載の方法。
〔１６〕好ましくは、前記試験物質に対する前記嗅覚受容体ポリペプチドの応答を前記対照群と比べて増強する試験物質を、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤として選択することをさらに含み、
より好ましくは、前記試験物質に対する前記嗅覚受容体ポリペプチドの応答を前記対照群と比較して１２０％以上に増強する試験物質を、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤として選択するか、又は、前記試験物質に対する前記嗅覚受容体ポリペプチドの応答を前記対照群と比較して統計学的に有意に増強する試験物質を、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤として選択することをさらに含む、
〔１５〕記載の方法。
〔１７〕好ましくは、以下：
前記嗅覚受容体ポリペプチドに試験物質及び該嗅覚受容体ポリペプチドのアゴニストを添加すること、及び
該アゴニストに対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定すること、
を含む、〔１〕～〔１２〕のいずれか１項記載の方法。
〔１８〕好ましくは、前記アゴニストに対する前記嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する試験物質を、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤として選択することをさらに含む、〔１７〕記載の方法。
〔１９〕好ましくは、対照群における前記アゴニストに対する前記嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定することをさらに含む、〔１７〕記載の方法。
〔２０〕好ましくは、前記アゴニストに対する前記嗅覚受容体ポリペプチドの応答を前記対照群と比べて抑制する試験物質を、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤として選択することをさらに含み、
より好ましくは、前記アゴニストに対する前記嗅覚受容体ポリペプチドの応答を前記対照群と比較して６０％以下に抑制する試験物質を、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤として選択するか、又は、前記アゴニストに対する前記嗅覚受容体ポリペプチドの応答を前記対照群と比較して統計学的に有意に抑制する試験物質を、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤として選択することをさらに含む、
〔１９〕記載の方法。
〔２１〕好ましくは、前記アゴニストが複素環式芳香族化合物であり、より好ましくは、含窒素複素環式芳香族化合物であり、さらに好ましくは、インドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種である、〔１７〕～〔２０〕のいずれか１項記載の方法。
〔２２〕好ましくは、前記嗅覚受容体ポリペプチドが、該嗅覚受容体ポリペプチドを発現するように遺伝的に操作された組換え細胞上に発現されている、〔１〕～〔２１〕のいずれか１項記載の方法。
〔２３〕好ましくは、前記嗅覚受容体ポリペプチドの応答が、ＥＬＩＳＡもしくはレポータージーンアッセイによる細胞内ｃＡＭＰ量測定、カルシウムイメージングもしくはＴＧＦα ｓｈｅｄｄｉｎｇａｓｓａｙによるカルシウムイオン量測定、又はアフリカツメガエル卵母細胞を用いた二電極膜電位固定法による細胞膜内外の電位変化測定により測定される、〔１〕～〔２２〕のいずれか１項記載の方法。
〔２４〕好ましくは、前記試験物質を官能試験により評価することをさらに含む、〔１〕～〔２３〕のいずれか１項記載の方法。

以下、実施例を示し、本発明をより具体的に説明する。

実施例１複素環式芳香族化合物に応答する嗅覚受容体の同定
１）嗅覚受容体発現細胞の作製
コンセンサス嗅覚受容体を、特願２０２１－１０３６７５の実施例に記載の方法と同様にしてデザインした。コンセンサス嗅覚受容体をデザインするにあたり、目的の嗅覚受容体遺伝子の相同遺伝子候補の検索はＮＣＢＩＢＬＡＳＴを用いて行った。得られた遺伝子群についてオルソログ群を特定した。
具体的には、ＢＬＡＳＴにより検索された相同性上位の遺伝子から、目的の嗅覚受容体と同じ名称をもつ遺伝子を哺乳類オルソログとして選択した。例えばヒトＯＲ１２Ｄ３の場合、ヒトＯＲ１２Ｄ３（ＮＰ＿１１２２２１．１）のアミノ酸配列をｑｕｅｒｙ配列とし、検索対象生物名を哺乳類としたＢＬＡＳＴにより検索された相同性上位の２５０遺伝子の中から、名称にＯＲ１２Ｄ３を含む１３５遺伝子を選択した。これら１３５遺伝子を哺乳類オルソログとして特定した。これら１３５遺伝子にヒトＯＲ１２Ｄ３を加えた計１３６遺伝子のアミノ酸配列について以下に述べるようにアラインメント解析及びコンセンサスアミノ酸の特定を行った。他のヒト嗅覚受容体、ＯＲ１２Ｄ２、ＯＲ１１Ｈ７、ＯＲ１１Ｌ１、ＯＲ１１Ｈ１２、ＯＲ２Ｂ１１、ＯＲ２Ｌ２、ＯＲ１Ｑ１、ＯＲ１０Ｐ１、ＯＲ４Ｌ１及びＯＲ１１Ｇ２についても同様にコンセンサスアミノ酸の特定を行った。尚、異なる嗅覚受容体名称体系が用いられているＭｕｓｍｕｓｃｕｌｕｓ及びＲａｔｔｕｓｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓの遺伝子に関しては、検索結果上位２５０遺伝子にこれら遺伝子が含まれていた場合、最も相同性が高い遺伝子を１つずつ選択した。
また、ヒトＯＲ１１Ｈ２の場合、ヒト１１Ｈ２（ＮＰ＿００１１８４２１６．２）のアミノ酸配列をｑｕｅｒｙ配列とした以外は上記の場合と同様にして哺乳類オルソログ群の特定を試みたが、哺乳類オルソログとして１遺伝子しか選択されなかった。そこでヒトＯＲ１１Ｈ２のアミノ酸配列をｑｕｅｒｙ配列として検索された相同性上位の２５０遺伝子の中から、ヒトＯＲ１１Ｈ２と相同性が高いパラログであるヒトＯＲ１１Ｈ１２（ＮＰ＿００１０１３３７２．１）に着目し、哺乳類オルソログ群を特定し、９５遺伝子を哺乳類オルソログとして選択した。これら９５遺伝子にヒトＯＲ１１Ｈ２、ヒトＯＲ１１Ｈ２の哺乳類オルソログ及びヒトＯＲ１１Ｈ１２を加えた計９８遺伝子のアミノ酸配列について以下に述べるようにアラインメント解析及びコンセンサスアミノ酸の特定を行った。

特定した遺伝子群についてのアラインメント解析はＣｌｕｓｔａｌＷを用いて行い、嗅覚受容体間で高度に保存されたアミノ酸もしくはアミノ酸モチーフを基準に、最適化するようにさらに調整した。アラインメント結果に基づき、Ｊａｌｖｉｅｗを用いてコンセンサス嗅覚受容体の設計を行った。該アラインメントにおいて、基準となるオリジナルのヒト嗅覚受容体アミノ酸配列の各アミノ酸位置に相当する位置に該基準アミノ酸配列のアミノ酸残基と異なり且つ出現頻度が５０％以上のアミノ酸残基が１種存在する場合に該基準アミノ酸配列のアミノ酸残基を該アミノ酸残基に改変した。尚、基準となるオリジナルのヒト嗅覚受容体アミノ酸配列の各アミノ酸位置に相当する位置に該基準アミノ酸配列のアミノ酸残基と異なり且つ出現頻度が５０％のアミノ酸残基が１種存在する場合であっても、該基準アミノ酸配列のアミノ酸残基の出現頻度も５０％の場合には該基準アミノ酸配列のアミノ酸残基を改変しなかった。該アラインメントにおいて、基準となるオリジナルのヒト嗅覚受容体アミノ酸配列の各アミノ酸位置に相当する位置に出現頻度が４０％以上で欠失が存在する場合に該基準アミノ酸配列のアミノ酸残基を欠失に改変した。一方で、基準となるオリジナルのヒト嗅覚受容体アミノ酸配列の欠失位置に相当する位置に出現頻度が６０％以上でアミノ酸が存在する場合に該基準アミノ酸配列の欠失位置に最も保存性の高いアミノ酸を挿入するよう改変した。最も保存性の高いアミノ酸が２種以上ある場合は、最も分子量が小さいアミノ酸を挿入するように改変した。
設計における嗅覚受容体のトポロジーの確認は、ＴＭＨＭＭ（ＴｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅＨｉｄｄｅｎＭａｒｋｏｖＭｏｄｅｌ）を使用した。デザインした各種嗅覚受容体ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列は、そのアミノ酸配列に対応する塩基配列コドンをヒト培養細胞での発現用に最適化した上でＤＮＡ合成により獲得した。コンセンサスＯＲ１２Ｄ３、コンセンサスＯＲ１２Ｄ２、コンセンサスＯＲ１１Ｈ７、コンセンサスＯＲ１１Ｌ１、コンセンサスＯＲ１１Ｈ１２、コンセンサスＯＲ１１Ｈ２、コンセンサスＯＲ２Ｂ１１、コンセンサスＯＲ２Ｌ２、コンセンサスＯＲ１Ｑ１、コンセンサスＯＲ１０Ｐ１、コンセンサスＯＲ４Ｌ１、コンセンサスＯＲ１１Ｇ２をコードするコドンを最適化した塩基配列を、それぞれ、配列番号２、５、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５に示す。この塩基配列の両末端にはＥｃｏＲＩ、ＸｈｏＩサイトを付加しており、ｐＭＥ１８Ｓベクター上のＦｌａｇ－Ｒｈｏタグ配列の下流に作製したＥｃｏＲＩ、ＸｈｏＩサイトへと組換えた。また、培養細胞内で作られた嗅覚受容体タンパク質を細胞膜上へ移行するヒトＲＴＰ１Ｓをコードする遺伝子を、別のｐＭＥ１８ＳベクターのＥｃｏＲＩ、ＸｈｏＩサイトへ組込み、ｐＭＥ１８Ｓ－ＲＴＰ１Ｓベクターを作製した。

表６に示す組成の反応液を調製し、クリーンベンチ内で２０分静置した後、９６ウェルプレート（ＢＤ）の各ウェルに添加した。尚、嗅覚受容体ＯＲ１１Ｈ２、ＯＲ１１Ｈ１２、ＯＲ２Ｌ２、ＯＲ２Ｌ３については、表７に示す組成を用いた。次いで、ＤＭＥＭ（Ｎａｃａｌａｉ）で懸濁させたＨＥＫ２９３細胞を１００μＬずつ各ウェルに２×１０⁵細胞／ｃｍ²で播種し、３７℃、５％ＣＯ₂を保持したインキュベータ内で２４時間培養した。対照として、嗅覚受容体を発現させない細胞（Ｍｏｃｋ）を用意した。

２）ルシフェラーゼアッセイ
ＨＥＫ２９３細胞に発現させた嗅覚受容体は、細胞内在性のＧαＳと共役しアデニル酸シクラーゼを活性化することで、細胞内ｃＡＭＰ量を増加させる。におい応答測定には、細胞内ｃＡＭＰ量の増加をホタルルシフェラーゼ遺伝子（ｆｌｕｃ２Ｐ－ＣＲＥ－ｈｙｇｒｏ）由来の発光値としてモニターするルシフェラーゼレポータージーンアッセイを用いた。また、ＣＭＶプロモータ下流にウミシイタケルシフェラーゼ遺伝子を融合させたもの（ｈＲｌｕｃ２Ｐ－ＣＭＶ－ｈｙｇｒｏ）を同時に遺伝子導入し、遺伝子導入効率や細胞数の誤差を補正する内部標準として用いた。

上記１）で作製した培養物から、培地を取り除き、新しい培地で調製した試験物質溶液（インドール（ＣＡＳ：１２０－７２－９、東京化成工業）又はスカトール（ＣＡＳ：８３－３４－１、関東化学）、濃度範囲０μＭ、１μＭ、３μＭ、１０μＭ、３０μＭ、１００μＭ、３００μＭ）を７５μＬ添加した。細胞をＣＯ₂インキュベータ内で４時間培養し、ルシフェラーゼ遺伝子を細胞内で十分に発現させた。ルシフェラーゼ活性は、Ｄｕａｌ－Ｇｌｏ^TMｌｕｃｉｆｅｒａｓｅａｓｓａｙｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて、製品の操作マニュアルに従って測定した。９６ウェルプレートの各ウェルにおいて、試験物質刺激により誘導されたホタルルシフェラーゼ由来の発光値をウミシイタケルシフェラーゼ由来の発光値で除した値（ｆｌｕｃ／ｈＲｌｕｃ）をシグナルとして算出し解析に用いた。各トランスフェクション条件でのシグナルに対して、におい物質による刺激を行わない条件のシグナル値（ｆｌｕｃ／ｈＲｌｕｃ）を０％、１０μＭホルスコリンで刺激した時のシグナル値（ｆｌｕｃ／ｈＲｌｕｃ）を１００％として基準化を行い、Ｒｅｓｐｏｎｓｅ（％）として解析に用いた。

３）結果
試験したコンセンサス嗅覚受容体のうち、インドール又はスカトールに応答した嗅覚受容体を図７に示す。図７には個々の嗅覚受容体について各濃度のインドール又はスカトールに対する応答値を示す。試験した最高濃度３００μＭに対する各嗅覚受容体の応答値（Ｒｅｓｐｏｎｓｅ（％））と、受容体を発現させないＭｏｃｋ条件の細胞の応答値（Ｒｅｓｐｏｎｓｅ（％））との間には統計学上有意な差が認められた（Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓｔ－ｔｅｓｔ、Ｐ＜０．０５）。なお、各嗅覚受容体において、におい物質による刺激を行わない条件のシグナル値（ｆｌｕｃ／ｈＲｌｕｃ）と、最高濃度３００μＭで刺激した条件のシグナル値（ｆｌｕｃ／ｈＲｌｕｃ）を比較しても同じ統計学手法における有意差が認められた。表８及び９中の数値は、Ｒｅｓｐｏｎｓｅ（％）値をシグモイド曲線に回帰することにより算出されたＥＣ₅₀（μＭ）である。図７に挙げられているが、表８及び９でＥＣ₅₀（μＭ）の記載がない嗅覚受容体は、インドール又はスカトールに応答できる受容体であるものの、今回試験した濃度範囲ではシグモイド曲線に回帰するために十分なデータが得られず、ＥＣ₅₀が算出されなかったことを意味する。したがって、コンセンサスＯＲ１２Ｄ３、コンセンサスＯＲ１２Ｄ２、コンセンサスＯＲ１１Ｈ７、コンセンサスＯＲ１１Ｌ１、コンセンサスＯＲ１１Ｈ１２、コンセンサスＯＲ１１Ｈ２、コンセンサスＯＲ２Ｂ１１、コンセンサスＯＲ２Ｌ２、コンセンサスＯＲ１Ｑ１、コンセンサスＯＲ１０Ｐ１、コンセンサスＯＲ４Ｌ１及びコンセンサスＯＲ１１Ｇ２は、インドールに応答した。なかでも、コンセンサスＯＲ１２Ｄ３、コンセンサスＯＲ１２Ｄ２、コンセンサスＯＲ１１Ｈ７、コンセンサスＯＲ１１Ｌ１、コンセンサスＯＲ１１Ｈ１２及びコンセンサスＯＲ１１Ｇ２については、インドールに対する用量依存的な応答も確認した。また、コンセンサスＯＲ１２Ｄ３、コンセンサスＯＲ１２Ｄ２、コンセンサスＯＲ１１Ｈ７、コンセンサスＯＲ１１Ｌ１、コンセンサスＯＲ１１Ｈ１２、コンセンサスＯＲ１１Ｈ２、コンセンサスＯＲ２Ｂ１１、コンセンサスＯＲ２Ｌ２、コンセンサスＯＲ１Ｑ１、コンセンサスＯＲ１０Ｐ１、コンセンサスＯＲ４Ｌ１及びコンセンサスＯＲ１１Ｇ２は、スカトールに応答した。なかでも、コンセンサスＯＲ１２Ｄ３、コンセンサスＯＲ１２Ｄ２、コンセンサスＯＲ１１Ｈ７、コンセンサスＯＲ１１Ｌ１、コンセンサスＯＲ１１Ｈ１２、コンセンサスＯＲ１１Ｈ２及びコンセンサスＯＲ１１Ｇ２については、スカトールに対する用量依存的な応答も確認した。ＯＲ１１Ｇ２がインドールやスカトールに応答することは知られており（特許文献４）、コンセンサスＯＲ１１Ｇ２がインドールやスカトールに応答するとの結果は斯かる知見と整合するものである。よって、コンセンサスＯＲ１２Ｄ３、コンセンサスＯＲ１２Ｄ２、コンセンサスＯＲ１１Ｈ７、コンセンサスＯＲ１１Ｌ１、コンセンサスＯＲ１１Ｈ１２、コンセンサスＯＲ１１Ｈ２、コンセンサスＯＲ２Ｂ１１、コンセンサスＯＲ２Ｌ２、コンセンサスＯＲ１Ｑ１、コンセンサスＯＲ１０Ｐ１、コンセンサスＯＲ４Ｌ１及びコンセンサスＯＲ１１Ｇ２がインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種の複素環式芳香族化合物に応答することが判明した。

コンセンサス嗅覚受容体のにおい物質に対する応答は、オリジナルの嗅覚受容体の嗅細胞での応答を反映している。よって、上記の結果から、オリジナルのＯＲ１２Ｄ３、ＯＲ１２Ｄ２、ＯＲ１１Ｈ７、ＯＲ１１Ｌ１、ＯＲ１１Ｈ１２、ＯＲ１１Ｈ２、ＯＲ２Ｂ１１、ＯＲ２Ｌ２、ＯＲ１Ｑ１、ＯＲ１０Ｐ１、ＯＲ４Ｌ１及びＯＲ１１Ｇ２が複素環式芳香族化合物の受容体として同定された。

Claims

試験物質添加後のＯＲ１２Ｄ３、ＯＲ１２Ｄ２、ＯＲ１１Ｈ７、ＯＲ１１Ｌ１、ＯＲ１１Ｈ１２、ＯＲ１１Ｈ２、ＯＲ２Ｂ１１、ＯＲ２Ｌ２、ＯＲ１Ｑ１、ＯＲ１０Ｐ１、ＯＲ４Ｌ１及びこれらと同等の機能を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種の嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定することを含む、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤の評価及び／又は選択方法。
試験物質添加後のＯＲ１１Ｇ２及びこれと同等の機能を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種の嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定することをさらに含む、請求項１記載の方法。
前記複素環式芳香族化合物を原因とするにおいが糞便臭又は口臭である、請求項１又は２記載の方法。
前記複素環式芳香族化合物がインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種である、請求項１～３のいずれか１項記載の方法。
前記ＯＲ１２Ｄ３が配列番号１で示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドであり、前記ＯＲ１２Ｄ２が配列番号４で示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドであり、前記ＯＲ１１Ｈ７が配列番号７で示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドであり、前記ＯＲ１１Ｌ１が配列番号１０で示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドであり、前記ＯＲ１１Ｈ１２が配列番号１３で示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドであり、前記ＯＲ１１Ｈ２が配列番号１６で示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドであり、前記ＯＲ２Ｂ１１が配列番号１９で示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドであり、前記ＯＲ２Ｌ２が配列番号２２で示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドであり、前記ＯＲ１Ｑ１が配列番号２５で示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドであり、前記ＯＲ１０Ｐ１が配列番号２８で示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドであり、前記ＯＲ４Ｌ１が配列番号３１で示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドである、請求項１～４のいずれか１項記載の方法。
前記ＯＲ１１Ｇ２が配列番号３４で示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドである、請求項２～５のいずれか１項記載の方法。
前記ＯＲ１２Ｄ３と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号１で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ１２Ｄ２と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ１１Ｈ７と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号７で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ１１Ｌ１と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号１０で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ１１Ｈ１２と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号１３で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ１１Ｈ２と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号１６で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ２Ｂ１１と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号１９で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ２Ｌ２と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号２２で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ１Ｑ１と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号２５で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ１０Ｐ１と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号２８で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ４Ｌ１と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号３１で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドである、
請求項１～６のいずれか１項記載の方法。
前記ＯＲ１１Ｇ２と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号３４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドである、請求項２～７のいずれか１項記載の方法。
前記ＯＲ１２Ｄ３と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号１で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号１で示されるアミノ酸配列の下記表１の（１）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所に（２）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ１２Ｄ２と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号４で示されるアミノ酸配列の下記表１の（３）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所に（４）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ１１Ｈ７と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号７で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号７で示されるアミノ酸配列の下記表１の（５）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所に（６）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ１１Ｌ１と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号１０で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号１０で示されるアミノ酸配列の下記表１の（７）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所に（８）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ１１Ｈ１２と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号１３で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号１３で示されるアミノ酸配列の下記表１の（９）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所に（１０）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ１１Ｈ２と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号１６で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号１６で示されるアミノ酸配列の下記表２の（１）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所に（２）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ２Ｂ１１と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号１９で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号１９で示されるアミノ酸配列の下記表２の（３）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所に（４）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ２Ｌ２と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号２２で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号２２で示されるアミノ酸配列の下記表２の（５）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所に（６）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ１Ｑ１と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号２５で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号２５で示されるアミノ酸配列の下記表２の（７）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所に（８）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ１０Ｐ１と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号２８で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号２８で示されるアミノ酸配列の下記表２の（９）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所に（１０）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ４Ｌ１と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号３１で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号３１で示されるアミノ酸配列の下記表３の（１）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所に（２）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドである、
請求項１～８のいずれか１項記載の方法。
前記ＯＲ１１Ｇ２と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号３４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号３４で示されるアミノ酸配列の下記表４の（１）の各アミノ酸位置に相当する位置の少なくとも１箇所に（２）のアミノ酸残基を有し、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドである、請求項２～９のいずれか１項記載の方法。
前記ＯＲ１２Ｄ３と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号３で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ１２Ｄ２と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号６で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ１１Ｈ７と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号９で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ１１Ｌ１と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号１２で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ１１Ｈ１２と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号１５で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ１１Ｈ２と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号１８で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ２Ｂ１１と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号２１で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ２Ｌ２と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号２４で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ１Ｑ１と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号２７で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ１０Ｐ１と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号３０で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドであり、
前記ＯＲ４Ｌ１と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号３３で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつスカトールに応答性を有するポリペプチドである、
請求項１～６のいずれか１項記載の方法。
前記ＯＲ１１Ｇ２と同等の機能を有するポリペプチドが、配列番号３６で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつインドール及びスカトールからなる群より選択される少なくとも１種に応答性を有するポリペプチドである、請求項２～６のいずれか１項記載の方法。
前記嗅覚受容体ポリペプチドに試験物質を添加すること、及び
該試験物質に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定すること、
を含む、請求項１～１２のいずれか１項記載の方法。
前記試験物質に対する前記嗅覚受容体ポリペプチドの応答を増強する試験物質を、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤として選択することをさらに含む、請求項１３記載の方法。
対照群における前記嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定することをさらに含む、請求項１３記載の方法。
前記試験物質に対する前記嗅覚受容体ポリペプチドの応答を前記対照群と比べて増強する試験物質を、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤として選択することをさらに含む、請求項１５記載の方法。
前記嗅覚受容体ポリペプチドに試験物質及び該嗅覚受容体ポリペプチドのアゴニストを添加すること、及び
該アゴニストに対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定すること、
を含む、請求項１～１２のいずれか１項記載の方法。
前記アゴニストに対する前記嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する試験物質を、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤として選択することをさらに含む、請求項１７記載の方法。
対照群における前記アゴニストに対する前記嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定することをさらに含む、請求項１７記載の方法。
前記アゴニストに対する前記嗅覚受容体ポリペプチドの応答を前記対照群と比べて抑制する試験物質を、複素環式芳香族化合物を原因とするにおいの抑制剤として選択することをさらに含む、請求項１９記載の方法
前記嗅覚受容体ポリペプチドの応答が、ＥＬＩＳＡもしくはレポータージーンアッセイによる細胞内ｃＡＭＰ量測定、カルシウムイメージングもしくはＴＧＦα ｓｈｅｄｄｉｎｇａｓｓａｙによるカルシウムイオン量測定、又はアフリカツメガエル卵母細胞を用いた二電極膜電位固定法による細胞膜内外の電位変化測定により測定される、請求項１～２０のいずれか１項記載の方法。