JP2023078366A

JP2023078366A - ポリペプチドの放射性標識

Info

Publication number: JP2023078366A
Application number: JP2023045468A
Authority: JP
Inventors: ダドゥキン，ヴァディム; Dudkin Vadim; ゴールドバーグ，シャロム; GOLDBERG Shalom; エアハート，ジョセフ; Erhardt Joseph; ソルター，リース; Salter Rhys; マクデヴィット，テラサ，エム．; M Mcdevitt Theresa
Original assignee: Janssen Biotech Inc
Current assignee: Janssen Biotech Inc
Priority date: 2017-12-18
Filing date: 2023-03-22
Publication date: 2023-06-06
Also published as: ZA202004424B; PH12020550690A1; EA202091420A1; US20210017099A1; SG11202004906QA; KR20200100094A; BR112020012099A2; IL275242A; AU2018388467A1; WO2019125982A1; MX2020006395A; CN111491670A; JP2021506842A; EP3727474A1; CA3085465A1

Abstract

【課題】クリックケミストリーを使用して、ポリペプチドを放射性金属イオンで標識する方法を提供する。【解決手段】放射性金属イオンでポリペプチドを標識する方法であって、第１のクリック反応パートナーに共有結合したポリペプチドを含む修飾ポリペプチドを提供することと、キレート化部分に会合した前記放射性金属イオンを含む放射性錯体を提供することと、ここで、前記キレート化部分が、第２のクリック反応パートナーに共有結合したキレート剤を含み、前記第１のクリック反応パートナーが前記第２のクリック反応パートナーと反応することによって、前記ポリペプチドを前記放射性金属イオンで標識化することを可能にする条件下で、前記修飾ポリペプチドを前記放射性錯体と接触させることとを含む、方法とする。【選択図】なし

Description

（電子的に提出された配列表の参照）
本出願は、２０１８年１２月７日付で作成された「ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ
」というファイル名のＡＳＣＩＩ形式の配列表としてＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子的に提
出され、約１３．２ｋＢのサイズを有する配列表を含む。ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して提出さ
れた配列表は、本明細書の一部であり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

（関連出願の相互参照）
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）に従って２０１７年１２月１８日出願の米国特
許仮出願第６２／５９９，８３０号に対する優先権が与えられ、その開示の全容が参照に
より本明細書に組み込まれる。

（発明の分野）
本発明は、抗体などのポリペプチドを放射性標識する方法に関する。詳しくは、本発明
は、クリックケミストリーを使用して、ポリペプチドを放射性金属イオンで標識する方法
に関する。本発明はまた、放射性標識ポリペプチドの医薬組成物及び使用にも関する。

アルファ粒子放出放射性核種は、高エネルギーと短距離作用との組み合わせのため癌治
療法に非常に有望であり、ほとんどが腫瘍細胞に限局されて、強力に殺傷する可能性を提
供する（Ｋｉｍ，Ｙ．Ｓ．ａｎｄＭ．Ｗ．Ｂｒｅｃｈｂｉｅｌ，Ａｎｏｖｅｒｖｉｅ
ｗｏｆｔａｒｇｅｔｅｄａｌｐｈａｔｈｅｒａｐｙ．ＴｕｍｏｕｒＢｉｏｌ，
２０１２．３３（３）：ｐ．５７３－９０）。抗体、スキャフォルドタンパク質、小分子
リガンド、アプタマー、又は癌抗原に特異的な他の結合部分を使用する、アルファ－エミ
ッタの標的化送達は、腫瘍への放射線核種の選択的送達の方法を提供して、それらの効力
を強化し、オフターゲット効果を軽減する方法を提供する。一般的な実施では、結合部分
をアルファ線放射性金属に結合するキレータに付着させて、放射性錯体を生成する。多く
のかかる例は、標的化リガンドとしてモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を使用して、放射性
免疫複合体として知られているものを生成する。

アクチニウム－２２５（^２２５Ａｃ）は、医療用途に特に関心があるアルファ線放射性
同位体である（Ｍｉｅｄｅｒｅｒｅｔａｌ．，Ｒｅａｌｉｚｉｎｇｔｈｅｐｏｔ
ｅｎｔｉａｌｏｆｔｈｅＡｃｔｉｎｉｕｍ－２２５ｒａｄｉｏｎｕｃｌｉｄｅ
ｇｅｎｅｒａｔｏｒｉｎｔａｒｇｅｔｅｄａｌｐｈａｐａｒｔｉｃｌｅｔｈｅ
ｒａｐｙａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．ＡｄｖＤｒｕｇＤｅｌｉｖＲｅｖ，２００
８．６０（１２）：７１－８２）。^２２５Ａｃの１０日半減期は、放射性複合体の生成を
促進するのに十分な長さであるが、抗体などの送達ビヒクルの循環薬物動態と一致させる
ために十分短い。そのため、^２２５Ａｃの放射性免疫複合体は、特に関心がある。加えて
、^２２５Ａｃは、安定した同位体^２０９Ｂｉに達する前に最終的に４つのアルファ粒子を
放出する一連の工程で減衰することで効力が増す。医療用途のための別の放射性同位体は
、撮像に適したガンマ線照射及び放射線治療に適した中エネルギーベータ線照射の両方を
放出する、ルテチウム－１７７（^１７７Ｌｕ）である。^１７７Ｌｕ標識ペプチドは、正常
な組織損傷の低減を実証し、^１７７Ｌｕ標識は、治療及び撮像の両方に対して単一の放射
性標識剤を使用することが可能であることが示されている（ＫｗｅｋｋｅｂｏｏｍＤＪ
，ｅｔａｌ．［１７７Ｌｕ－ＤＯＴＡＯＴｙｒ３］ｏｃｔｒｅｏｔａｔｅ：ｃｏｍｐａ
ｒｉｓｏｎｗｉｔｈ［１１１Ｉｎ－ＤＴＰＡｏ］ｏｃｔｒｅｏｔｉｄｅｉｎｐａｔ
ｉｅｎｔｓ．ＥｕｒＪＮｕｃｌＭｅｄ．２００１；２８：ｐ．１３１９－１３２５
）．治療用途に使用される他の放射性同位体としては、例えば、ベータエミッタ又はアル
ファエミッタ、例えば、トリウム、ラジウム、^３２Ｐ、^４７Ｓｃ、^６７Ｃｕ、^７７Ａｓ、
^８９Ｓｒ、^９０Ｙ、^９９Ｔｃ、^１０５Ｒｈ、^１０９Ｐｄ、^１１１Ａｇ、^１３１Ｉ、^１５３
Ｓｍ、^１５９Ｇｄ、^１６５Ｄｙ、^１６６Ｈｏ、^１６９Ｅｒ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^１
^９４Ｉｒ、^１９８Ａｕ、^１９９Ａｕ、^２１１Ａｔ、^２１２Ｐｂ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ
、^２２３Ｒａ、^２５５Ｆｍ、及び^２２７Ｔｈ等が挙げられる。撮像用途に使用される他の
放射性同位体としては、例えば、^６２Ｃｕ、^６４Ｃｕ、^６７Ｇａ、^６８Ｇａ、^８６Ｙ、^８
^９Ｚｒ、及び^１１１Ｉｎなどのガンマ線放出放射性同位体が挙げられる。

以前の臨床プログラム及び前臨床プログラムは、アクチニウムキレート化のため、１，
４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）を使
用してきた。しかしながら、アクチニウムのＤＯＴＡキレート化は、困難となる可能性が
あることが知られており（Ｄｅａｌ，Ｋ．Ａ．，ｅｔａｌ．，Ｉｍｐｒｏｖｅｄｉｎ
ｖｉｖｏｓｔａｂｉｌｉｔｙｏｆａｃｔｉｎｉｕｍ－２２５ｍａｃｒｏｃｙｃ
ｌｉｃｃｏｍｐｌｅｘｅｓ．ＪＭｅｄＣｈｅｍ，１９９９．４２（１５）：ｐ．２
９８８－９２）、多くの場合、過酷な条件又は抗体当たりの高レベルのＤＯＴＡを必要と
する。結果として、「１ステップ」及び「２ステップ」の放射性標識法として知られる２
つの異なるアプローチが利用されており、それぞれ独自の欠点がある。

アクチニウムを含む２つの化学的工程を含む「２ステップ」法が最初に開発された（Ｍ
ｃＤｅｖｉｔｔ，Ｍ．Ｒ．，ｅｔａｌ．，Ｔｕｍｏｒｔｈｅｒａｐｙｗｉｔｈｔ
ａｒｇｅｔｅｄａｔｏｍｉｃｎａｎｏｇｅｎｅｒａｔｏｒｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０
０１．２９４（５５４６）：ｐ．１５３７－４０）。^２２５Ａｃを、２Ｍ酢酸バッファー
を５５℃～６０℃で３０分間使用して、ｐＨ４．５～５において高放射線化学収率（約９
５％）で二官能性キレータ（ＢＦＣ）ＤＯＴＡ－イソチオシアネート（ＤＯＴＡ－ＳＣＮ
）によりキレート化した。その後、^２２５ＡｃＤＯＴＡ－ＳＣＮを標的化抗体と反応さ
せて、放射性免疫複合体を生成した。２ステップ法の主な欠点は、約９０％のＳＣＮが標
識化条件に耐えられないため、インプット^２２５Ａｃの約９０％が、抗体に複合化するこ
とができない非反応形態のＤＯＴＡに複合化していることである。これにより、収率が低
く（典型的には約１０％のみ）、コストが高くなるだけでなく、比放射能も低下して、最
終的な複合体の有効性を制限する場合がある。

「１－ステップ」法は、アクチニウム用に最近開発された（Ｍａｇｕｉｒｅ，Ｗ．Ｆ．
，ｅｔａｌ．，Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ１－ｓｔｅｐｒａｄｉｏｌａｂｅｌｉｎｇｏ
ｆｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｔｏｈｉｇｈｓｐｅｃｉｆｉｃ
ａｃｔｉｖｉｔｙｗｉｔｈ２２５Ａｃｆｏｒａｌｐｈａ－ｐａｒｔｉｃｌｅ
ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙｏｆｃａｎｃｅｒ．ＪＮｕｃｌＭｅｄ，
２０１４．５５（９）：ｐ．１４９２－８）。この方法には、アクチニウムを含む化学反
応工程が１つしかない。ＤＯＴＡ－ＳＣＮを最初に抗体に複合体した。次いで、^２２５Ａ
ｃを穏やかな条件下（３７℃、ｐＨ７．５）下でＤＯＴＡ－ｍＡｂにキレート化し、最大
８０％の放射線化学収率を得た。しかしながら、高レベルのＤＯＴＡ（抗体当たり約１０
以上）を複合化して、高収率を達成することが必要であった。高いキレータ：抗体比（Ｃ
ＡＲ）、この場合は高いＤＯＴＡ：Ａｂ比（ＤＡＲ）の種は免疫反応性が低下している可
能性が高くなり、更に、平均ＤＡＲは１０である可能性があるが、^２２５Ａｃは平均より
も更に高い比率の集団に対してキレート化している可能性がある。したがって、この方法
は、^２２５Ａｃを抗体－キレータ複合体の少なくとも活性画分に連結するリスクがある。
更に、鉄、亜鉛、及び銅などの一般的な金属のキレート化を回避するために、金属を含ま
ない条件下で抗体及びＤＯＴＡ－ｍＡｂ複合体を取り扱う必要があり、生成プロセスに大
きな課題をもたらす。

クリックケミストリーは、Ｓｈａｒｐｌｅｓｓによって２００１年に導入された化学的
アプローチであり、少量の単位を一緒に結合することによって物質を迅速かつ確実に生成
するように調整された化学的手法である。例えば、Ｋｏｌｂ，ＦｉｎｎａｎｄＳｈａ
ｒｐｌｅｓｓＡｎｇｅｗａｎｄｔｅＣｈｅｍｉｅＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＥ
ｄｉｔｉｏｎ（２００１）４０：２００４－２０２１；Ｅｖａｎｓ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ
ｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００７）６０：３８４－３９５を参
照されたい。カップリング反応（一部は「クリックケミストリー」として分類され得る）
としては、限定されないが、活性化酸又はハロゲン化アシルからのエステル、チオエステ
ル、アミドの形成（例えば、ペプチドカップリングなど）；求核置換反応（例えば、ハロ
ゲン化物の求核置換又は歪環系（strained ring system）の開環など）；アジド－アルキ
ンとヒュスゲン環化付加反応（例えば、１，２，３－トリアゾールリンカーを形成するた
めのアジドとアルキン間の１，３－双極子付加環化反応）；チオリン付加反応；イミン形
成；テトラジンとトランス－シクロオクテン（ＴＣＯ）との間のディールス・アルダー反
応；及びマイケル付加反応（例えば、マレイミド付加反応）が挙げられる。

アルキンとアジドとの間のクリックケミストリー反応は、典型的には、１，３－シクロ
付加反応を促進するために銅触媒の添加を必要とし、銅触媒アジド－アルキンシクロ付加
（ＣｕＡＡＣ）反応として知られている。しかしながら、シクロオクチン又はシクロオク
チン誘導体とアジドとの間のクリックケミストリー反応は、典型的には銅触媒の添加を必
要とせず、代わりに、歪み促進型アジド－アルキン付加環化反応（ＳＰＡＡＣ：strain-p
romoted azide-alkyne cycloaddition）を介して進行する（Ｄｅｂｅｔｓ，Ｍ．Ｆ．，ｅ
ｔａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎｗｉｔｈｓｔｒａｉｎｅｄａｌｋｅｎ
ｅｓａｎｄａｌｋｙｎｅｓ．ＡｃｃＣｈｅｍＲｅｓ，２０１１．４４（９）：ｐ
．８０５－１５）。

部位特異性は、ランダム複合化と比較して、部位特異的方法により、ＡＤＣの有効性と
安全性の両方を高められることが実証されていることから、抗体－薬物複合体（ＡＤＣ：
antibody-drug conjugate）分野において主要な注目領域となっている（Ａｇａｒｗａｌ
，Ｐ．ａｎｄＣ．Ｒ．Ｂｅｒｔｏｚｚｉ，Ｓｉｔｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｔｉｂｏ
ｄｙ－ｄｒｕｇｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ：ｔｈｅｎｅｘｕｓｏｆｂｉｏｏｒｔｈｏ
ｇｏｎａｌｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｐｒｏｔｅｉｎｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ａｎｄ
ｄｒｕｇｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．ＢｉｏｃｏｎｊｕｇＣｈｅｍ，２０１５．２６（
２）：ｐ．１７６－９２）。同様の安全性及び有効性の利益が、放射性免疫複合体に関し
て達成され得ると考えられる。

上記のように、高比放射能及び高収率を有する安定した放射性免疫複合体を生成する効
率的な方法に対するニーズが技術分野において依然として存在する。

本発明は、抗体などのポリペプチドを放射線標識するためにクリックケミストリーを使
用する方法を提供することによって、このニーズを満たす。本発明の方法では、放射性金
属の使用の低減を必要とし、初期放射性錯体を生成するために使用される工程において無
金属条件のみを必要としながら、アジド修飾抗体、及びアルキン基を含むキレート化部分
に会合した放射性金属イオンを含む放射性錯体を、クリックケミストリー反応で使用して
、低キレータ：抗体比（ＣＡＲ）、及び高放放射線化学収率を有する安定な放射性免疫複
合体を生成する。本発明の方法は、安全性、有効性、及び均一性を高めながら、放射性免
疫複合体を製造するための以前の方法を簡略化する。

一般的な一態様では、本発明は、放射性金属イオンでポリペプチドを標識する方法に関
し、方法は、
ａ．第１のクリック反応パートナーに共有結合したポリペプチドを含む修飾ポリペプチ
ドを提供することと、
ｂ．キレート化部分に会合した放射性金属イオンを含む放射性錯体を提供することと、
ここで、キレート化部分が、第２のクリック反応パートナーに共有結合したキレート剤を
含み、
ｃ．第１のクリック反応パートナーが第２のクリック反応パートナーと反応することに
よって、ポリペプチドを放射性金属イオンで標識することを可能にする条件下で、修飾ポ
リペプチドを放射性錯体と接触させることと、を含む。

別の一般的な態様では、本発明は、本発明の方法によって調製された放射性標識ポリペ
プチドと、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物に関する。

別の一般的な態様では、本発明は、腫瘍性の疾患又は障害の治療を必要とする対象にお
ける腫瘍性の疾患又は障害を治療する方法であって、対象に本発明の医薬組成物を投与す
ること、を含む方法に関する。

別の一般的な態様では、本発明は、
ａ．第１のクリック反応パートナーに共有結合したポリペプチドを含む修飾ポリペプチ
ドと、
ｂ．キレート化部分に会合した放射性金属イオンを含む放射性錯体であって、キレート
化部分が、第２のクリック反応パートナーに共有結合したキレート剤を含む、放射性錯体
と、を含む組み合わせ又はキットに関し、
ここで、組み合わせ又はキットは、ポリペプチドを放射性金属イオンで標識するために
使用される。

他の一般的な態様では、本発明は、本発明の方法によって調製される放射性標識ポリペ
プチドを含む治療剤又は診断剤（「セラノスティック剤」）に関する。

上述の「課題を解決するための手段」及び以降の「発明を実施するための形態」は、添
付の図面と併せて読むことでより良好に理解されるであろう。本発明は、図面に示される
実施形態そのものに限定されない点は理解されるべきである。

図面は、以下のとおりである。
本発明の方法による抗体の放射性標識の概略図を示す。ランダム複合化が図に示され、アジドが部位特異的にモノクローナル抗体（ｍＡｂ）に複合化されている場合、同様の放射性標識スキームが使用される。本出願の一実施形態による、クリックケミストリーを介する^８９Ｚｒ－ＤＯＴＡ－ｍＡｂの改善された２段階調製の合成スキームを示す。Ｉｎ－１１１放射性免疫複合体の細胞結合を示し、結合した放射能は、細胞数の増加と共に増加する。特に、Ａは、本出願の実施形態による、ＰＳＭＡ結合抗体（「ＰＳＭＢ１２７」）Ｉｎ－１１１放射性免疫複合体及びヒトトランスフェリンＩｎ－１１１放射性複合体による、ヒト前立腺癌細胞株Ｃ４－２Ｂ（ＰＳＭＡ＋、トランスフェリン受容体＋）への結合を示し、Ｂは、本出願の実施形態によるＥＧＦＲ結合抗体、セツキシマブ及びパニツムマブＩｎ－１１１放射性免疫複合体によるヒト類表皮癌細胞株Ａ４３１（ＥＧＦＲ＋）への結合、並びにこれらの複合体の対照（ＥＧＦＲ－）ヒトＡＭＬ細胞株ＭＯＬＭ－１３への結合の欠如を示す。本出願の一実施形態による、抗ＰＳＭＡｍＡｂＩｎ－１１１放射性免疫複合体で処理したヒト前立腺癌細胞株Ｃ４－２ＢにおけるＩｎ－１１１の細胞内部移行の動態を示し、表面結合したＩｎ－１１１は、細胞表面から急速に消失して、細胞内で再分布された。マウス腫瘍異種移植片研究の結果を示し、マウスにヒト前立腺癌ＬＮＣａＰ細胞を移植し、腫瘍が１００ｍｍ^３に達した際に、放射能範囲又はアイソタイプ対照（このシステム放射性複合体に存在しないウイルス標的に結合するヒトＩｇＧ４抗体）の単回用量の本出願の一実施形態によるクリック放射性標識抗ＰＳＭＡｍＡｂ（「ＰＳＭＢ１２７」）アクチニウム放射性複合体でマウスを治療した。詳しくは、各群の腫瘍体積を示し、群の半分未満が生存するまでのサイズをプロットした。マウス腫瘍異種移植片研究の結果を示し、マウスにヒト前立腺癌ＬＮＣａＰ細胞を移植し、腫瘍が１００ｍｍ^３に達した際に、放射能範囲又はアイソタイプ対照（このシステム放射性複合体に存在しないウイルス標的に結合するヒトＩｇＧ４抗体）の単回用量の本出願の一実施形態によるクリック放射性標識抗ＰＳＭＡｍＡｂ（「ＰＳＭＢ１２７」）アクチニウム放射性複合体でマウスを治療した。詳しくは、対照ｍＡｂ群の生存曲線を示す。マウス腫瘍異種移植片研究の結果を示し、マウスにヒト前立腺癌ＬＮＣａＰ細胞を移植し、腫瘍が１００ｍｍ^３に達した際に、放射能範囲又はアイソタイプ対照（このシステム放射性複合体に存在しないウイルス標的に結合するヒトＩｇＧ４抗体）の単回用量の本出願の一実施形態によるクリック放射性標識抗ＰＳＭＡｍＡｂ（「ＰＳＭＢ１２７」）アクチニウム放射性複合体でマウスを治療した。詳しくは、抗ＰＳＭＡｍＡｂ群の生存曲線を示す。

発明の背景において、また、本明細書全体を通じて各種刊行物、論文及び特許を引用又
は記載する。これら参照文献の各々はその全容が参照により本明細書に組み込まれる。本
明細書に含まれる文書、操作、材料、デバイス、物品などの考察は、本発明のコンテキス
トを与えるためのものである。かかる考察は、これらの事物のいずれか又は全てが、開示
又は特許請求されるいかなる発明に対しても先行技術の一部を構成することを容認するも
のではない。

別の定義がなされない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本
発明が属する技術分野の当業者に一般的に理解されるものと同じ意味を有する。そうでな
い場合、本明細書で引用される特定の用語は、本明細書に記載される意味を有するもので
ある。本明細書に引用する全ての特許、公開された特許出願及び刊行物は、参照によって
恰もその全体が本明細書に記載されているものと同様にして組み込まれる。

本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ
」は、特に文脈上明らかでない限り、複数の指示対象物を含むことに留意すべきである。

本明細書及び以下の特許請求の範囲を通して、文脈上必要としない限り、用語「含む（
comprise）」並びに「含む（comprises）」及び「含む（comprising）」などの変形は、
指定の整数若しくはステップ又は整数若しくはステップの群を含むが、任意の他の整数若
しくはステップ又は整数若しくはステップの群を除外するものではないことを意味すると
理解されるであろう。本明細書で使用するとき、用語「含む」は、用語「含有する」又は
「含む（including）」に置き換えることができ、又はときに本明細書で使用するとき、
用語「有する」に置き換えることもできる。

本明細書で使用するとき、「からなる」は、特許請求の範囲の要素において指定されて
いない任意の要素、ステップ、又は成分を除外する。本明細書で使用するとき、「から本
質的になる」は、特許請求の範囲の基本的かつ新規の特徴に実質的に影響を及ぼさない材
料又はステップは除外しない。本発明の態様又は実施形態に関連して本明細書で使用する
とき、本開示の範囲を変化させるために、「含む（comprising）」、「含有する」、「含
む（including）」、及び「有する」という上記用語のいずれかを、用語「からなる」又
は「から本質的になる」に置き換えることができる。

本明細書で使用するとき、複数の列挙された要素間の接続的な用語「及び／又は」は、
個々の及び組み合わされた選択肢の両方を包含するものとして理解される。例えば、２つ
の要素が「及び／又は」によって接続される場合、第１の選択肢は、第２の要素なしの第
１の要素の適用性を指す。第２の選択肢は、第１の要素なしの第２の要素が適用可能であ
ることを指す。第３の選択肢は、第１及び第２の要素が一緒に適用可能であることを指す
。これらの選択肢のうちのいずれか１つは、本明細書で使用される用語「及び／又は」の
要件を満たすことが理解される。選択肢のうちの２つ以上の同時適用性もまた、意味に含
まれることが理解され、したがって、用語「及び／又は」の要件を満たす。

本出願の読者を助けるため、明細書の記載は、様々な段落若しくはセクションに分けら
れているか、又は本出願の様々な実施形態に向けられている。これらの分離は、段落又は
セクション又は実施形態の実体を別の段落又はセクション又は実施形態の実体から切り離
すものと見なされるべきではない。反対に、当業者であれば、本明細書の記載が広範な用
途を有し、想到され得る様々な段落、パラグラフ、及び文章の全ての組み合わせを包含す
ることを理解するであろう。任意の実施形態の考察は、単なる例示であることを意味する
ものであり、特許請求の範囲を含む本開示の範囲がこれらの実施例に限定されることを示
唆することを意図するものではない。

ポリペプチドのクリック放射性標識
既知の手順とは対照的に、本発明の方法は、例えば、それを必要とする対象、例えば、
ヒトにおける医療用途に好適な、放射性免疫複合体の生成のための改善された方法を提供
する。特に、本明細書に記載の方法は、限定されないが、^２２５Ａｃ、^１１１Ｉｎ及び^８
^９Ｚｒを含む金属イオンの高収率のキレート化と低ＤＡＲの両方に対するプロセスを提供
することにより、現在の方法の主要な制限に対処する。本発明は、放射性標識された診断
目的（例えば、^８９Ｚｒ若しくは^１１１Ｉｎで標識された場合）又は治療目的（例えば、
^２２５Ａｃで標識された場合）用の生産に使用できるアジド－ｍＡｂ複合体等のアジド標
識ポリペプチドの単一のバッチの生成を可能にし、放射性標識が、アジド標識ポリペプチ
ドのバッチ内の同じ部位（複数の場合もある）に付着し、部位特異的修飾又はランダムア
ジド複合化のいずれかによって取得され得る。例えば、ランダムアジド複合化の場合、ア
ジド修飾部位の単一分布を含むアジド標識ポリペプチドのバッチのサンプルは、本発明の
クリックケミストリーを使用して、異なる目的で放射性標識することができる。

クリックケミストリーに依拠する、「クリック放射性標識」と呼ばれる本発明の方法は
、（１）第１のクリックケミストリー反応パートナー、例えば、アジド部分を含む、抗体
などの修飾ポリペプチドを得ることと、（２）キレート化部分と会合した、放射性金属イ
オン、例えば、^２２５Ａｃ、^１１１Ｉｎ、又は^８９Ｚｒを含む放射性錯体を得ることであ
って、ここで、キレート化部分が、第２のクリックケミストリー反応パートナー、例えば
、ＤＯＴＡ－ジベンゾシクロオクチン（ＤＯＴＡ－ＤＢＣＯ）又はデフェロキサミン－Ｄ
ＢＣＯ（ＤＦＯ－ＤＢＣＯ）などのアルキン基に共有結合されたキレート剤を含み、及び
（３）アジド部分とアルキン基との間の歪み促進型アジド－アルキン付加環化反応（ＳＰ
ＡＡＣ）などの、修飾ペプチドのクリックケミストリー反応パートナーと、放射性錯体と
の間の反応を行うことと、を含む。

本発明の方法は、低ｐＨ又は高ｐＨ及び／又は高温条件下での放射性金属のキレート化
を可能にして効率を最大化することができ、これは、アルキン反応パートナーを不活性化
するリスクを伴わずに達成され得る。アジド－ｍＡｂと放射性錯体との間の効率的なキレ
ート化及び効率的なＳＰＡＡＣ反応により、低アジド：ｍＡｂ比であっても高い放射線化
学収率で放射性免疫複合体を生成することができる。本発明の方法では、微量金属を除外
しなければならない唯一の工程は、キレート化部分に対する放射性金属イオンキレート化
であり、抗体の生産、精製、及び複合化の工程は、金属を含まない条件下で行われる必要
はない。

本明細書で使用するとき、用語「クリックケミストリー」は、Ｓｈａｒｐｌｅｓｓによ
って導入された化学哲学を指し、反応基を含む小さな単位を一緒に結合することによって
共有結合を迅速かつ確実に生成するように調整された化学を説明する（上記のＫｏｌｂ，
ｅｔａｌ．を参照されたい）。クリックケミストリーは、特定の反応を指すものではな
いが、自然界に見られる反応を模倣する反応を含むがこれらに限定されない概念を指す。
いくつかの実施形態では、クリックケミストリー反応はモジュール式であり、広範囲であ
り、化学収率が高く、害のない副生成物を生成し、立体特異的であり、単一の反応生成物
との反応を選択するための大きな熱力学的駆動力を示し、及び／又は生理学的条件下で実
施することができる。いくつかの実施形態では、クリックケミストリー反応は、高い原子
経済性を示し、単純な反応条件下で実施することができ、容易に利用可能な出発物質及び
試薬を使用し、毒性溶媒を使用せず、又は水などの無害な若しくは容易に除去される溶媒
を使用し、及び／又は結晶化若しくは蒸留などの非クロマトグラフィー法による単純な生
成物の単離を提供する。特定の実施形態では、クリックケミストリー反応は、アジド（－
Ｎ３）とアルキン又はアルキン部分との間のヒュイゲン環付加反応又は１，３－双極子付
加環化反応であり、１，２，４－トリアゾールリンカーを形成する。

一般的な態様では、本発明は、放射性金属イオンでポリペプチド、アプタマー又は小分
子リガンドを標識する方法に関し、方法は、
ａ．第１のクリック反応パートナーに共有結合したポリペプチドを含む修飾ポリペプチ
ドを提供することと、
ｂ．キレート化部分に会合した放射性金属イオンを含む放射性錯体を提供することと、
ここで、キレート化部分が、第２のクリック反応パートナーに共有結合したキレート剤を
含み、
ｃ．第１のクリック反応パートナーが第２のクリック反応パートナーと反応することに
よって、ポリペプチドを放射性金属イオンで標識することを可能にする条件下で、修飾ポ
リペプチドを放射性錯体と接触させることと、を含む。

本明細書で使用するとき、用語「ポリペプチド」は、ペプチド結合を介して連結された
、天然に存在する構造変異体、及びそれらの合成非天然起源のアナログで構成されるポリ
マーを指す。用語「ポリペプチド」は、任意のサイズ、構造、又は機能のポリペプチドを
指す。典型的には、ポリペプチドは、少なくとも３個のアミノ酸長である。ポリペプチド
は、天然起源、組み換え型、若しくは合成型、又はこれらの任意の組み合わせであり得る
。合成ポリペプチドは、例えば、自動ポリペプチド合成装置を使用して合成することがで
きる。好ましい実施形態によれば、ポリペプチドは、抗体、好ましくはモノクローナル抗
体、又はそのフラグメント、その抗原結合フラグメント等である。好ましい実施形態によ
れば、抗体又はそのフラグメントは、癌抗原に特異的である。他の実施形態によれば、ポ
リペプチドは、遺伝子操作されたドメイン又はスキャフォルドタンパク質である。

本明細書で使用する場合、用語「抗体」又は「免疫グロブリン」は広い意味で用いられ
、ポリクローナル抗体を含む免疫グロブリン又は抗体分子、マウス、ヒト、ヒト適合、ヒ
ト化、及びキメラモノクローナル抗体、並びにそれらの抗原結合フラグメントを含むモノ
クローナル抗体を含む。

一般に抗体とは、特定の抗原に対する結合特異性を示すタンパク質又はペプチド鎖であ
り、本明細書では「標的」と称される。抗体の構造は、公知である。免疫グロブリンは、
重鎖定常ドメインのアミノ酸配列に応じて５つの主なクラス、すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＤ
、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭに割り当てることができる。ＩｇＡ及びＩｇＧは、アイソ
タイプのＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４として更に細
分類される。したがって、本発明の抗体は、５つの主要なクラス又は対応する下位クラス
のいずれかのものであることができる。本発明の抗体はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、
又はＩｇＧ４であることが好ましい。いずれの脊椎動物種の抗体軽鎖も、それらの定常ド
メインのアミノ酸配列に基づいて２つの明確に異なるタイプ、すなわちκ及びλのうちの
一方に割り当てることができる。したがって、本発明の抗体は、κ又はλ軽鎖定常ドメイ
ンを含有することができる。特定の実施形態に従うと、本発明の抗体は、マウス抗体又は
ヒト抗体の重鎖及び／又は軽鎖定常領域を含む。４つのＩｇＧサブクラスのそれぞれは、
エフェクター機能として既知の異なる生物学的機能を有する。これらのエフェクター機能
は、一般に、Ｆｃ受容体（ＦｃγＲ）との相互作用によって、又はＣ１ｑの結合及び補体
の固定によって媒介される。ＦｃγＲへの結合は、抗体依存性細胞媒介性細胞溶解をもた
らし得るが、補体因子への結合は、補体媒介性細胞溶解をもたらし得る。本発明に有用な
抗体は、エフェクター機能を有さないか又は最小であってもよいが、ＦｃＲｎに結合する
その能力を保持する。

本明細書で使用するとき、用語「抗原結合フラグメント」は、例えば、ダイアボディ、
Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖフラグメント、ジスルフィド安定化Ｆｖフラグ
メント（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、
ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、単鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、単
一ドメイン抗体（ｓｄａｂ）、ｓｃＦｖ二量体（二価ダイアボディ）、１つ以上のＣＤＲ
を含む抗体の一部分から形成される多重特異的抗体、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノボ
ディ、ドメイン抗体、二価ドメイン抗体、又は抗原に結合するが完全な抗体構造を含まな
い任意の他の抗体フラグメントなどの抗体フラグメントを指す。抗原結合断片は、親抗体
又は親抗体断片が結合する同じ抗原に結合することができる。本明細書で使用するとき、
用語「単鎖抗体」は、約１５～約２０個のアミノ酸の短いペプチドによって接続される重
鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、この分野における従来の単鎖抗体を指す。本明細書
で使用するとき、用語「単一ドメイン抗体」は、重鎖可変領域及び重鎖定常領域を含むか
、又は重鎖可変領域のみを含む、この分野における従来の単一ドメイン抗体を指す。

本明細書で使用するとき、用語「スキャフォルド」又は「スキャフォルドタンパク質」
は、標的結合ドメインを有し、標的に結合することができる任意のタンパク質を指す。ス
キャフォルドは、大部分が構造的である「フレームワーク」と、標的と接触して特異的結
合を提供する「結合ドメイン」と、を含む。スキャフォルドの結合ドメインは、スキャフ
ォルドの１つの連続配列によって定義される必要はない。特定の場合、スキャフォルドは
、より大きい結合タンパク質の一部であってもよく、それ自体は、複数のスキャフォルド
を含む多量体結合タンパク質の一部であってもよい。特定の結合タンパク質は、２つ以上
の異なるエピトープに結合することができるという点で、二重特異的又は多重特異的であ
り得る。スキャフォルドは、単鎖抗体由来であってもよく、又はスキャフォルドは抗体由
来でなくてもよい。

本開示を考慮して当業者に既知のポリペプチドの化学修飾又は酵素修飾のための任意の
方法を使用して、本発明のポリペプチドを、第１のクリック反応パートナーに共有結合さ
せることができる。各ポリペプチド鎖のＮ末端及びリジン残基の側鎖に存在する第一級ア
ミンと反応するアミン反応性基を、ポリペプチドのランダム修飾の方法で使用することが
できる。本発明での使用に好適なアミン反応性基の例としては、限定されないが、Ｎ－ヒ
ドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）、置換ＮＨＳ、例えばスルホ－ＮＨＳ、イソチオシア
ネート、並びにテトラ及びペルフルオロフェニルエステルが挙げられる。システイン残基
の側鎖に存在するチオール又はスルフヒドリルと反応するチオール反応性基を、ポリペプ
チドのランダム修飾の方法で使用することができる。本発明での使用に好適なチオール反
応性基の例としては、限定されないが、マレイミド、ハロアセチル、及びフェニルオキサ
ジアゾールスルホンが挙げられる。好ましい実施形態によれば、修飾ポリペプチドは、第
１のクリック反応パートナー（例えば、ＮＨＳ－アジド）に共有結合した求電子物質と、
リジンの側鎖、好ましくはアミノ側鎖とを反応させることによって得られる。

本発明の方法は更に、部位特異的放射性標識ポリペプチドの産生を可能にする。本発明
のクリック放射標識法は、アジド基を抗体に部位特異的に導入する確立された方法を利用
することにより、放射性免疫複合体の部位特異的生成を容易にする（Ｌｉ，Ｘ．，ｅ
ｔａｌ．Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｗｅｌｌ－ｄｅｆｉｎｅｄａｎｔｉｂｏ
ｄｙ－ｄｒｕｇｃｏｎｊｕｇａｔｅｓｔｈｒｏｕｇｈｇｌｙｃａｎｒｅｍｏｄｅ
ｌｉｎｇａｎｄｓｔｒａｉｎ－ｐｒｏｍｏｔｅｄａｚｉｄｅ－ａｌｋｙｎｅｃｙ
ｃｌｏａｄｄｉｔｉｏｎｓ．ＡｎｇｅｗＣｈｅｍＩｎｔＥｄＥｎｇｌ，２０１４
．５３（２８）：ｐ．７１７９－８２；Ｘｉａｏ，Ｈ．，ｅｔａｌ．，Ｇｅｎｅｔｉｃ
ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎｏｆｍｕｌｔｉｐｌｅｕｎｎａｔｕｒａｌａｍｉ
ｎｏａｃｉｄｓｉｎｔｏｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｍａｍｍａｌｉａｎｃｅｌｌ
ｓ．ＡｎｇｅｗＣｈｅｍＩｎｔＥｄＥｎｇｌ，２０１３．５２（５２）：ｐ．１
４０８０－３）。部位特異的方法でタンパク質又は抗体に分子を付着させる方法は、技術
分野において知られており、当業者に既知の抗体を部位特異的に標識する任意の方法を、
本開示を考慮して本発明で使用することができる。本発明での使用に好適な抗体を部位特
異的に修飾する方法の例としては、限定されないが、修飾システイン残基（例えば、ＴＨ
ＩＯＭＡＢ（商標））の組み込み、非天然アミノ酸又はグリカン（例えば、セレノシステ
イン、ｐ－ＡｃＰｈｅ、ホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ、ＳＭＡＲＴａｇ（商標））
など）、及び酵素法（例えば、グリコトランスフェラーゼ、エンドグリコシダーゼ、微生
物又は細菌トランスグルタミナーゼ（ＭＴＧ又はＢＴＧ）、ソルターゼＡなど）の使用が
挙げられる。好ましい実施形態によれば、修飾ポリペプチドは、最も内側のＧｌｃＮＡｃ
をそのままＦｃに残して、その部位でのアジド糖の部位特異的取り込みを可能にする、Ｇ
ｌｙｃＩＮＡＴＯＲ（Ｇｅｎｏｖｉｓ）などの抗体のＦｃ－グリコシル化部位のコアＧｌ
ｃＮａｃ残基間のβ－１，４結合に特異的な細菌エンドグリコシダーゼにより、抗体又は
その抗原結合フラグメントをトリミングすることによって得られる、抗体又はその抗原結
合フラグメントである。次いで、トリミングされた抗体又はその抗原結合フラグメントを
、ＧａｌＴガラクトシルトランスフェラーゼ又はＧａｌＮａｃトランスフェラーゼなどの
糖転移酵素の存在下で、ＵＤＰ－Ｎ－アジドアセチルガラクトサミン（ＵＤＰ－ＧａｌＮ
ａｚ）又はＵＤＰ－６－アジド６－デオキシＧａｌＮａｃなどのアジド標識糖と反応させ
て、修飾抗体又はその抗原結合フラグメントを得ることができる。他の好ましい実施形態
によれば、修飾ポリペプチドは、抗体又はその抗原結合フラグメントをアミダーゼでグリ
コシル化することによって得られる抗体又はその抗原結合フラグメントである。次いで、
得られた脱グリコシル化抗体又はその抗原結合フラグメントを、アジドアミン、好ましく
は３－アジドプロピルアミン、６－アジドヘキシルアミン、又は任意のアジドリンカーア
ミン若しくは任意のアジドアルキルアミン、アジド－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）
－アミンなど、例えば、Ｏ－（２－アミノエチル）－Ｏ’－（２－アジドエチル）テトラ
エチレングリコール、Ｏ－（２－アミノエチル）－Ｏ’－（２－アジドエチル）ペンタエ
チレングリコール、Ｏ－（２－アミノエチル）－Ｏ’－（２－アジドエチル）トリエチレ
ングリコールなどと反応させて、又は微生物トランスグルタミナーゼの存在下で反応させ
て、修飾抗体又はその抗原結合フラグメントを得ることができる。

本明細書で使用するとき、用語「アプタマー」は、高親和性でその標的に特異的に結合
することができる一本鎖オリゴヌクレオチド（一本鎖ＤＮＡ又はＲＮＡ分子）を指す。ア
プタマーは、様々な有機及び無機物質を標的とする分子として使用することができる。

本明細書で使用するとき、用語「小分子リガンド」は、低分子量有機化合物を指す。本
明細書で使用するとき、小分子リガンドは、約１０００ダルトン未満のサイズを有する化
合物を指すことができ、実験室で合成され得るか、又は天然に見られ得る化合物を指すこ
とができる。

本明細書で使用するとき、用語「クリック反応パートナー」又は「クリックケミストリ
ーハンドル」は、クリックケミストリー反応に加わることができる反応物質又は反応性基
を指す。クリック反応パートナーは、天然起源の生体分子にまれに見られ、生体分子に対
して化学的に不活性であるが、例えば、アジド反応性又はアルキン反応性基と反応させた
場合、反応は、生物学的に関連する条件下、例えば、過剰な熱又は過酷な反応物質の不在
下などの細胞培養条件において、効率的に反応を行うことができる。一般に、クリックケ
ミストリー反応は、互いに反応することができるクリック反応パートナーを含む、少なく
とも２つの分子を必要とする。互いに反応性であるこのようなクリック反応パートナーは
、本明細書ではクリックケミストリーハンドル対、又はクリックケミストリー対と呼ばれ
ることがある。いくつかの実施形態では、クリック反応パートナーは、アジド及び歪を付
与したアルキン、例えばシクロオクチン、又は任意の他のアルキンである。他の実施形態
では、クリック反応パートナーは、反応性ジエン及び好適なテトラジン求ジエン体である
。例えば、トランス－シクロオクテン、ノルボルネン、又はビスシクロノネンは、クリッ
ク反応対として好適なテトラジン求ジエン体と対にすることができる。更に他の実施形態
では、テトラゾールは、紫外線の存在下で活性化されていないアルケンと対になって、「
光クリック」反応対と呼ばれるクリック反応対を作ることができる。他の実施形態では、
クリック反応パートナーは、システイン及びマレイミドである。例えば、ペプチドに由来
するシステイン（例えば、ＧＧＧＣ）を、キレート剤（例えば、ＮＯＴＡ）に会合してい
るマレイミドと反応させることができる。他の好適なクリックケミストリーハンドルが当
業者に知られている（例えば、Ｓｐｉｃｅｒｅｔａｌ．，Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｃｈ
ｅｍｉｃａｌｐｒｏｔｅｉｎｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ．ＮａｔｕｒｅＣｏｍｍｕ
ｎｉｃａｔｉｏｎｓ．２０１４；５：ｐ．４７４０を参照されたい）。他の実施形態では
、クリック反応パートナーは、ホスフィン及びアジドなどのシュタウディンガーライゲー
ション成分である。他の実施形態では、クリック反応パートナーは、テトラジンなどのジ
エン、及びトランス－シクロオクテン（ＴＣＯ）又はノルボルネンなどのアルケンなどの
ディールス・アルダー反応成分である。例示的なクリック反応パートナーは、米国特許出
願公開第２０１３０２６６５１２号明細書及び国際公開第２０１５０７３７４６号パンフ
レットに記載されており、両方のクリック反応パートナーについての関連する説明は、参
照により本明細書に組み込まれる。好ましい実施形態によれば、第１及び第２のクリック
反応パートナーのうちの一方がアルキン基を含み、クリック反応パートナーの他方がアジ
ドを含む。他の好ましい実施形態によれば、第１及び第２のクリック反応パートナーの一
方がアルケン基を含み、クリック反応パートナーの他方がジエンを含む。

本明細書で使用するとき、用語「アルキン」、「アルキン基」又は「アルキン部分」は
、炭素－炭素三重結合を含む官能基を指す。アルキン部分としては、末端アルキン及び環
状アルキン、好ましくはアジド基と反応性の末端アルキン及び環状アルキンが挙げられる
。末端アルキンは、三重結合炭素原子に結合した少なくとも１つの水素原子を有する。環
状アルキンは、１つ以上の三重結合を含むシクロアルキル環である。環状アルキンの例と
しては、限定されないが、ビシクロノニン（ＢＣＮ）、ジフルオロシクロオクチン（ＤＩ
ＦＯ）、ジベンゾシクロオクチン（ＤＩＢＯ）、ケト－ＤＩＢＯ、ビアリールアザシクロ
オクチノン（ＢＡＲＡＣ）、ジベンゾアザシクロオクチン（ＤＩＢＡＣ）、ジメトキシア
ザシクロオクチン（ＤＩＭＡＣ）、ジベンゾシクロオクチン（ＤＢＣＯ）、ジフルオロベ
ンゾシクロオクチン（ＤＩＦＢＯ）、モノベンゾシクロオクチン（ＭＯＢＯ）、及びテト
ラメトキシＤＩＢＯ（ＴＭＤＩＢＯ）などのシクロオクチン及びシクロオクチン誘導体が
挙げられる。好ましい実施形態によれば、第１及び第２のクリック反応パートナーの一方
は、環状アルキン、好ましくはＤＢＣＯを含む。好ましい実施形態によれば、クリック反
応パートナーの他方は、アジド、好ましくはＮＨＳ－アジドを含む。

本明細書で使用するとき、用語「ジエン」は、２つの炭素－炭素二重結合を有し、これ
らの二重結合が１，３位で結合している化合物を指す。ジエンの二重結合は、シス又はト
ランスのいずれかであり得る。ジエンの例としては、テトラジン又はテトラゾール基が挙
げられるが、これらに限定されない。

本明細書で使用するとき、用語「アルケン」、「アルケン基」又は「アルケン部分」は
、炭素－炭素二重結合を含む不飽和炭化水素分子を指す。特定の実施形態によれば、アル
ケンは、２～１００個の炭素原子を含むことができる。アルケンの例としては、ノルボル
ネン及びトランス－シクロオクテン（ＴＣＯ）が挙げられるが、これらに限定されない。
他の好ましい実施形態によれば、第１及び第２のクリック反応パートナーの一方は、アル
ケン基、好ましくはノルボルネン又はＴＣＯを含む。好ましい実施形態によれば、他のク
リック反応パートナーは、ジエン、好ましくはテトラジン又はテトラゾール基を含む。

本明細書で使用するとき、用語「共有結合した」は、少なくとも１つの共有結合を介し
て、ポリペプチドが第１のクリック反応パートナーに付着され、キレート剤が、少なくと
も１つの共有結合を介して第２のクリック反応パートナーに付着されていることを意味す
る。結合は、直接、すなわちリンカーを含なくてもよく、又は間接的に、すなわちリンカ
ーを介してもよい。

本明細書で使用するとき、用語「リンカー」は、ポリペプチド又はキレート剤をクリッ
ク反応パートナーにつなぐ化学部分を指す。本開示を考慮して当業者に既知の任意の好適
なリンカーを本発明で使用することができる。リンカーは、例えば、単一の共有結合、置
換若しくは非置換アルキル、置換若しくは非置換ヘテロアルキル部分、ポリエチレングリ
コール（ＰＥＧ）リンカー、ペプチドリンカー、糖系リンカー、又はジスルフィド結合、
若しくはバリン－シトルリン－ＰＡＢなどのプロテアーゼ開裂部位などの開裂可能なリン
カーであり得る。

本明細書で使用するとき、用語「放射性金属イオン」又は「放射活性金属イオン」は、
粒子及び／又は光子を放出する元素の１つ以上の同位体を指す。本開示を考慮して当業者
に既知の任意の放射性金属を本発明で使用することができる。本発明での使用に好適な放
射性金属の例としては、限定されないが、^３２Ｐ、^４７Ｓｃ、^６２Ｃｕ、^６４Ｃｕ、^６７
Ｃｕ、^６７Ｇａ、^６８Ｇａ、^７７Ａｓ、^８６Ｙ、^８９Ｚｒ、^８９Ｓｒ、^９０Ｙ、^９９Ｔｃ
、^１０５Ｒｈ、^１０９Ｐｄ、^１１１Ａｇ、^１１１Ｉｎ、^１１７Ｓｎ、^１３１Ｉ、^１５３Ｓ
ｍ、^１５９Ｇｄ、^１６５Ｄｙ、^１６６Ｈｏ、^１６９Ｅｒ、^１７７Ｌｕ、^１８６Ｒｅ、^１８
^８Ｒｅ、^１９４Ｉｒ、^１９８Ａｕ、^１９９Ａｕ、^２１１Ａｔ、^２１２Ｐｂ、^２１２Ｂｉ、
^２１３Ｂｉ、^２２３Ｒａ、^２２５Ａｃ、^２２７Ｔｈ、及び^２５５Ｆｍが挙げられる。本明
細書で使用するとき、用語「診断エミッタ」は、診断又は撮像用途において有用な放射性
金属イオンを指す。診断エミッタの例としては、限定されないが、^６２Ｃｕ、^６４Ｃｕ、
^６７Ｇａ、^６８Ｇａ、^８６Ｙ、^８９Ｚｒ、及び^１１１Ｉｎなどのガンマエミッタが挙げら
れる。本明細書で使用するとき、用語「治療エミッタ」は、治療用途において有用な放射
性金属イオンを指す。治療エミッタの例としては、限定されないが、ベータ又はアルファ
エミッタ、例えば、トリウム、ラジウム、^３２Ｐ、^４７Ｓｃ、^６７Ｃｕ、^７７Ａｓ、^８９
Ｓｒ、^９０Ｙ、^９９Ｔｃ、^１０５Ｒｈ、^１０９Ｐｄ、^１１１Ａｇ、^１３１Ｉ、^１５３Ｓｍ
、^１５９Ｇｄ、^１６５Ｄｙ、^１６６Ｈｏ、^１６９Ｅｒ、^１７７Ｌｕ、^１８６Ｒｅ、^１８８
Ｒｅ、^１９４Ｉｒ、^１９８Ａｕ、^１９９Ａｕ、^２１１Ａｔ、^２１２Ｐｂ、^２１２Ｂｉ、^２
^１３Ｂｉ、^２２３Ｒａ、^２２５Ａｃ、^２５５Ｆｍ及び^２２７Ｔｈが挙げられる。好ましい
実施形態によれば、放射性金属イオンは^２２５Ａｃである。他の実施形態によれば、ポリ
ペプチドは、事前標的化又はセラノスティック用途で使用するため非金属放射性標識で標
識することができる。本発明における使用に適した非金属放射性標識の例としては、限定
されないが、^１２５Ｉ及び^１８Ｆが挙げられる。

本明細書に記載の放射性錯体は、キレート化部分と会合した放射性金属イオンを含む。
本発明の実施形態によると、キレート化部分は、クリック反応パートナーに共有結合した
キレート剤を含み、本明細書では「二官能性キレータ」と呼ばれることもある。

本明細書で使用するとき、用語「キレート剤」又は「キレータ」は、^２２５Ａｃなどの
放射性金属、又は金属が、配位結合を介してキレート化され得る化学化合物を指す。本開
示を考慮して当業者に知られている任意のキレート剤を本発明で使用することができる。
一実施形態では、キレート剤は大環状分子を含む。本発明での使用に好適な大環状分子を
含むキレート剤の例としては、限定されないが、デフェロキサミン（ＤＦＯ）、エチレン
ジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、及びジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）が挙げ
られる。別の実施形態では、キレート剤は、開鎖配位子を含む。本発明における使用に適
した開鎖配位子を含むキレート剤の例としては、限定されないが、１，４，７，１０－テ
トラアザシクロドデカン－Ｎ、Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’－四酢酸（ＤＯＴＡ）、１，４，
７，１０，１３，１６－ヘキサアザシクロヘキサデカン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’，
Ｎ’’’’，Ｎ’’’’’－ヘキサ酢酸（ＨＥＨＡ）、１，４，７，１０，１３－ペンタ
アザシクロペンタナデカン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’，Ｎ’’’’－ペンタ酢酸（Ｐ
ＥＰＡ）、Ｍａｃｒｏｐａ（Ｔｈｉｅｌｅｅｔａｌ．，ＡｎＥｉｇｈｔｅｅｎ－Ｍ
ｅｍｂｅｒｅｄＭａｃｒｏｃｙｃｌｉｃＬｉｇａｎｄｆｏｒＡｃｔｉｎｉｕｍ－
２２５ＴａｒｇｅｔｅｄＡｌｐｈａＴｈｅｒａｐｙ．ＡｎｇｅｗＣｈｅｍＩｎ
ｔＥｄＥｎｇｌ．２０１７Ｎｏｖ１３；５６（４６）：ｐ．１４７１２－１４７
１７）、１，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカン－１，４，８，１１－四酢酸
（ＴＥＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テト
ラプロピオン酸（ＤＯＴＰＡ）、１，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカン－１
，４，８，１１－テトラプロピオン酸（ＴＥＴＰＡ）、及び１，４，７，１０－テトラア
ザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトラメチレンホスホン酸（ＤＯＴＭＰ）が挙げ
られる。好ましい実施形態によれば、キレート剤は、式（Ｉ）：

の構造
（式中、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３及びＲ_４は、それぞれ独立してＣＨＱＣＯ_２Ｘであり、
Ｑは、独立して、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル又は（Ｃ_１～Ｃ_２アルキル）フェニルであ
り、
Ｘは、独立して、水素、ベンジル、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルであり、
Ｚは、（ＣＨ２）_ｎＹであり、
ｎは、１～１０であり、
Ｙは、第２のクリック反応パートナーに共有結合した求電子性又は求核性部分であり、
或いは、Ｚは水素である；並びに
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３及びＲ_４は、それぞれ独立してＣＨＱＣＯ_２Ｘであり、
Ｑは、独立して、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル又は（Ｃ_１～Ｃ_２アルキル）フェニルであ
り、
Ｘは、独立して、水素、ベンジル、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、又は第２のクリック反応パー
トナーに共有結合した求電子性又は求核性部分である）
を含む。

好ましい実施形態によれば、キレート化部分は、式（ＩＩ）：

の構造を含む。

好ましい実施形態によれば、キレート化部分は、式（ＩＩＩ）：

を含む。

一実施形態では、本発明は、本発明の方法を使用して、２つ以上の放射性金属イオンで
ポリペプチドを標識する方法に関する。例えば、２つの放射性金属イオンでポリペプチド
を標識する方法は、
ａ．第１のクリック反応パートナー及び第２のクリック反応パートナーに共有結合した
ポリペプチドを含む修飾ポリペプチドを提供することと、
ｂ．キレート化部分に会合した第１の放射性金属イオンを含む第１の放射性錯体を提供
することと、ここで、キレート化部分が、第３のクリック反応パートナーに共有結合した
キレート剤を含み、
ｃ．キレート化部分に会合した第２の放射性金属イオンを含む第２の放射性錯体を提供
することと、ここでキレート化部分が、第４のクリック反応パートナーに共有結合したキ
レート剤を含み、
ｄ．第１のクリック反応パートナーが第３のクリック反応パートナーと反応し、第２の
クリック反応パートナーが第４のクリック反応パートナーと反応することによって、ポリ
ペプチドを第１及び第２の放射性金属イオンで標識することを可能にする条件下で、修飾
ポリペプチドを第１及び第２の放射性錯体と接触させることと、を含む。

好ましい実施形態によれば、第１及び第２のクリック反応パートナーの一方がアルキン
基を含み、第１及び第２のクリック反応パートナーの他方がアジドを含み、第３及び第４
のクリック反応パートナーの一方がアルケン基を含み、第３及び第４のクリック反応パー
トナーの他方がジエンを含む。

好ましい実施形態によれば、第１又は第２の放射性金属イオンが診断エミッタであり、
他方が治療エミッタである。好ましい実施によれば、第１及び第２の放射性金属イオンの
両方が治療エミッタである。

クリックケミストリー反応を実施するための条件は、技術分野において知られており、
本開示を考慮して当業者に既知のクリックケミストリー反応を実施するための任意の条件
を本発明で使用することができる。条件の例としては、限定されないが、ｐＨ４～１０及
び温度２０℃～７０℃において、１：１～１０００：１の比で、修飾ポリペプチド及び放
射性錯体をインキュベートすることが挙げられる。

本発明のクリック放射性標識方法の生成物は、本開示を考慮して当業者に既知の方法を
使用して分析することができる。例えば、ＬＣ／ＭＳ分析を使用して、標識ポリペプチド
に対するキレータの比を決定することができ、分析サイズ排除クロマトグラフィーを使用
して、ポリペプチド及びポリペプチド複合体のオリゴマー状態を決定することができ、放
射線化学収率を、簡易薄層クロマトグラフィー（例えば、ｉＴＬＣ－ＳＧ）によって決定
することができ、放射化学的純度を、サイズ排除ＨＰＬＣによって測定することができる
。例示的な方法は、本明細書に、例えば、以下の実施例に記載される。

医薬組成物及び治療方法
本発明のクリック放射性標識法は、プレ標的化アプローチに改良されてもよい（Ｋｒａ
ｅｂｅｒ－Ｂｏｄｅｒｅ，Ｆ．，ｅｔａｌ．，Ａｐｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇｓｙｓ
ｔｅｍｆｏｒｔｕｍｏｒＰＥＴｉｍａｇｉｎｇａｎｄｒａｄｉｏｉｍｍｕｎ
ｏｔｈｅｒａｐｙ．ＦｒｏｎｔＰｈａｒｍａｃｏｌ，２０１５．６：ｐ．５４）。まず
、アジド－ｍＡｂを投与し、標的細胞に結合させ、経時的に循環から排除させるか、又は
除去剤で取り除く。続いて、放射性錯体を投与し、標的部位に結合したアジド－ｍＡｂｓ
とのＳＰＡＡＣ反応を受けると、残りの未結合の放射性錯体は、循環から急速に排除され
る（Ｄｅａｌ，Ｋ．Ａ．，ｅｔａｌ．，Ｉｍｐｒｏｖｅｄｉｎｖｉｖｏｓｔａｂ
ｉｌｉｔｙｏｆａｃｔｉｎｉｕｍ－２２５ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃｃｏｍｐｌｅ
ｘｅｓ．ＪＭｅｄＣｈｅｍ，１９９９．４２（１５）：ｐ．２９８８－９２）。この
プレ標的化技術は、対象の標的部位における放射性金属イオン局在を強化する方法を提供
する。

したがって、別の一般的な態様では、本発明は、本発明の方法によって調製された放射
性標識ポリペプチドと、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物に関する。

本明細書で使用するとき、用語「担体」は、あらゆる賦形剤、希釈剤、充填剤、塩、バ
ッファー、安定剤、可溶化剤、油、脂質、脂質含有小胞、ミクロスフェア、リポソーム封
入体、又は医薬製剤で使用するための技術分野では公知の他の材料を指す。担体、賦形剤
又は希釈剤の特性は、特定の用途の投与経路によって決まる点は理解されよう。本明細書
で使用するころの「医薬上許容できる担体」なる用語は、本発明による組成物の効果又は
本発明による組成物の生物活性を妨げない無毒性材料を指す。特定の実施形態によれば、
本開示を考慮して、抗体に基づく又は放射性錯体に基づく医薬組成物での使用に好適な、
任意の薬学的に許容可能な担体を本発明において使用することができる。

具体的な実施形態によれば、本明細書に記載される組成物は、対象への想定される投与
経路に適するように製剤化される。例えば、本明細書に記載の組成物は、静脈内、皮下、
筋肉内、又は腫瘍内への投与に適するように製剤化することができる。

特定の実施形態によれば、修飾ポリペプチド及び放射性錯体は、同じ又は異なる組成物
で投与することができる。

別の一般的な態様では、本発明は、腫瘍性の疾患又は障害の治療を必要とする対象にお
ける腫瘍性の疾患又は障害を治療する方法であって、対象に本発明の医薬組成物を投与す
ることを含む方法に関する。

特定の実施形態によれば、本発明の方法は、治療有効用量の本発明の医薬組成物を投与
することを含み、ここで、組成物は、腫瘍性の疾患又は障害に関連する細胞を標的化する
ための放射性標識ポリペプチドを含み、標的化すると、^２２５Ａｃ及びその娘核種からの
アルファ粒子が標的細胞に送達され、標的細胞に対する細胞毒性効果を引き起こし、それ
によって腫瘍性の疾患又は障害を治療する。

特定の実施形態によれば、治療有効量の修飾ポリペプチド及び放射性錯体は、異なる組
成物で投与される。

本明細書で使用するとき、用語「治療的有効量」は、対象に所望の生物学的又は薬理的
応答を惹起する活性成分又は構成成分の量を指す。治療有効量は、記載される目的に対し
て経験的かつ一般的な方法で決定することができる。例えば、所望によりインビトロアッ
セイを用いて、最適な用量範囲の特定に役立てることができる。具体的な有効量の選択は
、治療又は予防される疾病、伴う症状、患者の体重、患者の免疫状態、及び当業者が知っ
ている他の因子を含むいくつかの因子の考慮に基づいて、当業者によって（例えば、臨床
試験により）決定することができる。また、製剤に用いられる正確な用量は、投与経路及
び疾患の重症度に応じて決まり、医師の判断及び各患者の状況に従って決定されるべきで
ある。有効量は、インビトロ又は動物モデル試験系から導かれる用量応答曲線から推定す
ることができる。

本明細書で使用するとき、用語「治療する（treat）」、「治療する（treating）」、
及び「治療（treatment）」はいずれも、腫瘍性の疾患又は障害などの放射活性金属イオ
ンの投与が有益となり得る疾患、障害、又は病態に関連する少なくとも１つの測定可能な
物理的パラメータの改善又は回復を指すことを意図するものであり、これは対象において
必ずしも認識可能であるわけではないが、対象において認識可能である場合もある。「治
療する（treat）」、「治療する（treating）」、及び「治療（treatment）」なる用語は
また、疾患、障害、又は病態の退縮を生じる、その進行を防止する、又は少なくともその
進行を遅らせることを指す場合もある。特定の実施形態では、「治療する（treat）」、
「治療する（treating）」、及び「治療（treatment）」は、腫瘍性の疾患又は障害など
の放射活性金属イオンの投与が有益となり得る疾患、障害、若しくは病態に関連する１つ
又は２つ以上の症状の緩和、進展若しくは発症の予防、又はその期間の短縮を指す。具体
的な実施形態では、「治療する」、「治療する」、及び「治療」は、疾患、障害、又は病
態の再発の防止を指す。具体的な実施形態では、「治療する」、「治療する」、及び「治
療」は、疾患、障害、又は病態を有する対象の生存率の向上を指す。具体的な実施形態で
は、「治療する」、「治療する」、及び「治療」は、対象における疾患、障害、又は病態
の消失を指す。

腫瘍性の疾患又は障害の例としては、限定されないが、播種性癌、固体腫瘍癌、肥大、
冠動脈疾患若しくは血管閉塞性疾患、感染細胞、微生物若しくはウイルスに関連する疾患
若しくは障害、又は関節リウマチ（ＲＡ）などの炎症性細胞に関連する疾患若しくは障害
が挙げられる。

本明細書で使用するところの「対象」なる用語は、動物、好ましくは哺乳動物を指す。
具体的な実施形態によれば、対象は、非霊長類（例えば、ラクダ、ロバ、シマウマ、ウシ
、ブタ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ネコ、イヌ、ラット、ウサギ、モルモット、マーモセット
又はマウス）、又は霊長類（例えば、サル、チンパンジー、又はヒト）を含む哺乳動物で
ある。具体的な実施形態では、対象はヒトである。

修飾ポリペプチド及び放射性錯体の任意の投薬スケジュールを、本開示を考慮して使用
することができる。一般に、修飾ポリペプチド及び放射性錯体が異なる組成物で投与され
る場合、放射性錯体は、修飾抗体が投与された後の任意の時間に投与することができる。

特定の実施形態に従えば、腫瘍性の疾患又は障害の治療で使用される組成物を、関連す
る腫瘍性の疾患又は障害の治療に有効な他の作用物質と組み合わせて使用することができ
る。

本明細書で使用するとき、用語「併用される」は、対象への２種以上の治療薬の投与と
の関連において、複数の治療薬の使用を指す。「併用される」なる用語の使用は、治療が
対象に投与される順序を限定しない。例えば、第１の治療薬（例えば、本明細書に記載さ
れる組成物）を、対象への第２の治療薬の投与の前（例えば、５分、１５分、３０分、４
５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７
２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、又は１
２週間前）、同時に、又はその後（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２
時間、４時間、６時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間
、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、又は１２週間後）に投与
することができる。

別の一般的な態様では、本発明は、本発明の方法によって調製された放射性標識抗体と
、薬学的に許容可能な担体と、を含み、放射性標識抗体の免疫学的特性が保存されている
、セラノスティック剤に関する。

本明細書で使用するとき、用語「セラノスティック」は、診断及び治療の機能のいずれ
かを提供する能力を指す。一実施形態では、セラノスティック剤は、診断及び治療の両方
の機能を提供する。別の実施形態では、セラノスティック剤は、診断機能のない活性薬剤
である。更に別の実施形態では、セラノスティック剤は、診断に有用であるが治療機能の
ない薬剤である。

好ましい実施形態によれば、放射性金属イオンは、診断エミッタ、好ましくは^８９Ｚｒ
である。他の好ましい実施形態によれば、放射性金属イオンは、治療エミッタ、好ましく
は^２２５Ａｃである。好ましい実施形態によれば、セラノスティック剤は、診断及び治療
の両方の機能を、それを必要とする対象に提供するために使用される。

組み合わせ及びキット
本明細書では、以下を含む組み合わせが提供される：
ａ．第１のクリック反応パートナーに共有結合したポリペプチドを含む修飾ポリペプチ
ドと、
ｂ．キレート化部分に会合した放射性金属イオンを含む放射性錯体であって、キレート
化部分が、第２のクリック反応パートナーに共有結合したキレート剤を含む、放射性錯体
と、を含む組み合わせ又はキットに関し、
ここで、組み合わせは、ポリペプチドを放射性金属イオンで標識するために使用される
。

特定の実施形態によれば、本発明の組み合わせは、ポリペプチドを放射性金属イオンで
標識するために使用される反応混合物である。他の実施形態によれば、組み合わせは、ｉ
ｎｖｉｔｒｏ又はｉｎｖｉｖｏで放射性標識ポリペプチドを生成するために使用され
るパック又はキットである。所望により、薬剤若しくは生物学的製品の製造、使用又は販
売を規制する政府機関により指定された形式の注意書き又は指示書を組み合わせに随伴さ
せることができ、この注意書きは、ヒトへの投与に対しての製造、使用又は販売について
の機関による認可を反映する。本明細書に包含される組み合わせを、上記のポリペプチド
を放射性金属イオンで標識する方法、又は腫瘍性の疾患若しくは障害の治療を必要とする
対象における腫瘍性の疾患若しくは障害を治療する方法において使用することができる。

実施形態
本発明は以下の非限定的な実施形態も提供する。

実施形態１は、放射性金属イオンでポリペプチドを標識する方法であって、
ａ．第１のクリック反応パートナーに共有結合したポリペプチドを含む修飾ポリペプチ
ドを提供することと、
ｂ．キレート化部分に会合した放射性金属イオンを含む放射性錯体を提供することと、
ここで、キレート化部分が、第２のクリック反応パートナーに共有結合したキレート剤を
含み、
ｃ．第１のクリック反応パートナーが第２のクリック反応パートナーと反応することに
よって、ポリペプチドを放射性金属イオンで標識することを可能にする条件下で、修飾ポ
リペプチドを放射性錯体と接触させることと、を含む。

実施形態１ａは、キレート剤が大環状分子を含む、実施形態１に記載の方法である。

実施形態１ｂは、キレート剤が、開鎖配位子を含む、実施形態１に記載の方法である。

実施形態２は、第１及び第２のクリック反応パートナーの一方がアルキン基を含み、ク
リック反応パートナーの他方がアジドを含む、実施形態１に記載の方法である。

実施形態３は、第１のクリック反応パートナーがアジド基を含み、第２のクリック反応
パートナーがアルキン基を含む、実施形態２に記載の方法である。

実施形態３ａは、アルキン基が末端アルキンを含む、実施形態２又は３に記載の方法で
ある。

実施形態３ｂは、アルキン基が、環状アルキン、好ましくはシクロオクチン又はシクロ
オクチン誘導体を含む、実施形態２又は３に記載の方法である。

実施形態３ｃは、アルキン基がビシクロノニン（ＢＣＮ：bicyclononyne）を含む、実
施形態３ｂに記載の方法である。

実施形態３ｄは、アルキン基が、ジフルオロ化シクロオクチン（ＤＩＦＯ）を含む、実
施形態３ｂに記載の方法である。

実施形態３ｅは、アルキン基がジベンゾシクロオクチン（ＤＩＢＯ）を含む、実施形態
３ｂに記載の方法である。

実施形態３ｆは、アルキン基が、ビアリールアザシクロオクチン（ＢＡＲＡＣ）を含む
、実施形態３ｂに記載の方法である。

実施形態３ｇは、アルキン基がジベンゾアザシクロオクチン（ＤＩＢＡＣ）を含む、実
施形態３ｂに記載の方法である。

実施形態３ｈは、アルキン基がジメトキシアザシクロオクチン（ＤＩＭＡＣ）を含む、
実施形態３ｂに記載の方法である。

実施形態３ｉは、アルキン基がジベンゾシクロオクチン（ＤＢＣＯ）を含む、実施形態
３ｂに記載の方法である。

実施形態３ｊは、アルキン基がジフルオロベンゾシクロオクチン（ＤＩＦＢＯ）を含む
、実施形態３ｂに記載の方法である。

実施形態３ｋは、アルキン基がモノベンゾシクロオクチン（ＭＯＢＯ）を含む、実施形
態３ｂに記載の方法である。

実施形態３ｌは、アルキン基がテトラメトキシＤＩＢＯ（ＴＭＤＩＢＯ）を含む、実施
形態３ｂに記載の方法である。

実施形態３ｍは、アジド基がＮＨＳ－アジドを含む、実施形態２～３ｌのいずれか１つ
に記載の方法である。

実施形態４は、第１及び第２のクリック反応パートナーの一方がアルケン基を含み、ク
リック反応パートナーの他方がジエンを含む、実施形態１に記載の方法である。

実施形態４ａは、ジエンがテトラジン又はテトラゾール基を含む、実施形態４に記載の
方法である。

実施形態４ｂは、アルケン基がノルボルネンを含む、実施形態４又は４ａに記載の方法
である。

実施形態４ｃは、アルケン基がトランス－シクロオクテン（ＴＣＯ）を含む、実施形態
４又は４ａに記載の方法である。

実施形態５は、ポリペプチドが、抗体又はその抗原結合フラグメントである、実施形態
１～４ｃのいずれか１つに記載の方法である。

実施形態６は、抗体が、モノクローナル抗体又はその抗原結合フラグメントである、実
施形態５に記載の方法である。

実施形態６ａは、修飾ポリペプチドが、１つ以上のアジド基をポリペプチドにランダム
に複合化させることによって得られる、実施形態１～６のいずれか１つに記載の方法であ
る。

実施形態６ｂは、修飾ポリペプチドが、第１のクリック反応パートナーの部位特異的組
み込みによって得られる修飾抗体又はその抗原結合フラグメントである、実施形態１～６
のいずれか１つに記載の方法。

実施形態６ｃは、修飾抗体又はその抗原結合フラグメントが、抗体のＦｃ－グリコシル
化部位のコアＧｌｃＮａｃ残基（複数の場合もある）間のβ－１，４結合に特異的な細菌
エンドグリコシダーゼで抗体又はその抗原結合フラグメントをトリミングして、トリミン
グされた抗体又はその抗原結合フラグメントを得ること、及び糖転移酵素、好ましくはＧ
ａｌＴガラクトシルトランスフェラーゼの存在下で、トリミングされた抗体又はその抗原
結合フラグメントをアジド糖、好ましくはＵＤＰ－ＧａｌＮａｚアジド糖基質と反応させ
ることにより得られる、実施形態６ｂに記載の方法である。

実施形態６ｄは、修飾抗体又はその抗原結合フラグメントが、抗体又はその抗原結合フ
ラグメントをアミダーゼで脱グリコシル化して、脱グリコシル化抗体又はその抗原結合フ
ラグメントを得ること、及び脱グリコシル化抗体又はその抗原結合フラグメントを、微生
物トランスグルタミナーゼの存在下でアジドアミン、好ましくは３－アジドプロピルアミ
ンと反応させることによって得られる、実施形態６ｂに記載の方法である。

実施形態６ｅは、抗体が、ヒト前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）又はその抗原結合フラ
グメントに結合する抗体であり、好ましくは抗体は、配列番号３の配列のＨＣＣＤＲ１
配列、配列番号４のＨＣＣＤＲ２配列、配列番号５のＨＣＣＤＲ３配列、配列番号６
の軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１配列、配列番号７のＬＣＣＤＲ２配列、及び配列番号８のＬＣ
ＣＤＲ３配列を含む、実施形態６～６ｄのいずれか１つに記載の方法である。

実施形態６ｆは、抗体が、配列番号９のＨＣ配列及び配列番号１０のＬＣ配列を含む、
実施形態６ｅに記載の方法である。

実施形態７は、放射性金属イオンが、^３２Ｐ、^４７Ｓｃ、^６７Ｃｕ、^７７Ａｓ、^８９Ｓ
ｒ、^９０Ｙ、^９９Ｔｃ、^１０５Ｒｈ、^１０９Ｐｄ、^１１１Ａｇ、^１３１Ｉ、^１５３Ｓｍ、
^１５９Ｇｄ、^１６５Ｄｙ、^１６６Ｈｏ、^１６９Ｅｒ、^１７７Ｌｕ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒ
ｅ、^１９４Ｉｒ、^１９８Ａｕ、^１９９Ａｕ、^２１１Ａｔ、^２１２Ｐｂ、^２１２Ｂｉ、^２１
^３Ｂｉ、^２２３Ｒａ、^２２５Ａｃ、^２５５Ｆｍ、^２２７Ｔｈ、^６２Ｃｕ、^６４Ｃｕ、^６７
Ｇａ、^６８Ｇａ、^８６Ｙ、^８９Ｚｒ、又は^１１１Ｉｎである、実施形態１～６ｄのいずれ
か１つに記載の方法である。

実施形態７ａは、放射性金属イオンが^２２５Ａｃである、実施形態１～６ｄのいずれか
１つに記載の方法である。

実施形態７ｂは、放射性金属イオンが^１１１Ｉｎである、実施形態１～６ｄのいずれか
１つに記載の方法である。

実施形態７ｃは、放射性金属イオンが^８９Ｚｒである、実施形態１～６ｄのいずれか１
つに記載の方法である。

実施形態８は、キレート化部分が、リンカーを介して第２のクリック反応パートナーに
共有結合している、実施形態１～７ｃのいずれか１つに記載の方法である。

実施形態９は、第１のクリック反応パートナーに共有結合したスルフヒドリル基と、側
鎖上の求電子物質、好ましくは、ポリペプチド上の又はポリペプチドに導入されているリ
ジンのアミノ側鎖を反応させて、修飾ポリペプチド、好ましくはＮＨＳ－アジドを得るこ
とを更に含む、実施形態１～８のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１０は、修飾ポリペプチドが、直接又はリンカーを介して、アジド、テトラジ
ン、又はテトラゾール基に共有結合したポリペプチドを含む、実施形態１～９のいずれか
１つに記載の方法である。

実施形態１１は、キレート剤が大環状分子、好ましくは式（Ｉ）：

の構造
（式中、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３及びＲ_４は、それぞれ独立してＣＨＱＣＯ_２Ｘであり、
Ｑは、独立して、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル又は（Ｃ_１～Ｃ_２アルキル）フェニルであ
り、
Ｘは、独立して、水素、ベンジル、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルであり、
Ｚは、（ＣＨ２）_ｎＹであり、
ｎは、１～１０であり、
Ｙは、第２のクリック反応パートナーに共有結合した求電子性又は求核性部分であり、
或いは、Ｚは水素である；並びに
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３及びＲ_４は、それぞれ独立してＣＨＱＣＯ_２Ｘであり、
Ｑは、独立して、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル又は（Ｃ_１～Ｃ_２アルキル）フェニルであ
り、
Ｘは、独立して、水素、ベンジル、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、又は第２のクリック反応パー
トナーに共有結合した求電子性又は求核性部分である）
を含む、実施形態１～１０のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１２は、キレート化部分が式（ＩＩ）：

の構造を含む、実施形態１～１１のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１２ａは、キレート化部分が、開鎖配位子を有するキレート剤を含み、好まし
くは、キレート化部分が式（ＩＩＩ）：

実施形態１２ｂは、キレート化部分が、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン
－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’－四酢酸（ＤＯＴＡ）、デフェロキサミン（ＤＦＯ）、１
，４，７，１０，１３，１６－ヘキサアザシクロヘキサデカン－Ｎ、Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’
’’，Ｎ’’’’，Ｎ’’’’’－ヘキサ酢酸（ＨＥＨＡ）、１，４，７，１０，１３－
ペンタアザシクロペンタナデカン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’，Ｎ’’’’－ペンタ酢
酸（ＰＥＰＡ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（
ＤＴＰＡ）、Ｍａｃｒｏｐａ（Ｔｈｉｅｌｅｅｔａｌ．，ＡｎＥｉｇｈｔｅｅｎ－
ＭｅｍｂｅｒｅｄＭａｃｒｏｃｙｃｌｉｃＬｉｇａｎｄｆｏｒＡｃｔｉｎｉｕｍ
－２２５ＴａｒｇｅｔｅｄＡｌｐｈａＴｈｅｒａｐｙ．ＡｎｇｅｗＣｈｅｍＩ
ｎｔＥｄＥｎｇｌ．２０１７Ｎｏｖ１３；５６（４６）：ｐ．１４７１２－１４
７１７）、１，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカン－１，４，８，１１－四酢
酸（ＴＥＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テ
トラプロピオン酸（ＤＯＴＰＡ）、１，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカン－
１，４，８，１１－テトラプロピオン酸（ＴＥＴＰＡ）、及び１，４，７，１０－テトラ
アザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトラメチレンホスホン酸（ＤＯＴＭＰ）から
なる群から選択されるキレート剤を含む、実施形態１～１０のいずれか１つに記載の方法
である。

実施形態１２ｃは、キレート剤が、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－Ｎ
，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’－四酢酸（ＤＯＴＡ）を含む、実施形態１２ｂに記載の方法で
ある。

実施形態１２ｄは、キレート剤がデフェロキサミン（ＤＦＯ）を含む、実施形態１２ｂ
に記載の方法である。

実施形態１３は、放射性金属イオン、好ましくは^２２５Ａｃ、^１１１Ｉｎ又は^８９Ｚｒ
を用いて、ポリペプチド、好ましくは抗体又はその抗原結合フラグメントを標識する方法
であって、
ａ．アジド、テトラジン、又はテトラゾール基に共有結合したポリペプチド、又は抗体
若しくはその抗原結合フラグメントを含む、修飾ポリペプチド、好ましくは修飾抗体又は
その抗原結合フラグメントを提供することと、
ｂ．放射性金属イオン、好ましくはキレート化部分に会合した^２２５Ａｃ、^１１１Ｉｎ
又は^８９Ｚｒを含む放射性錯体を提供することと、ここで、キレート化部分が、アルキン
又はアルケン基に共有結合したキレート剤を含み、並びに
ｃ．アジド、テトラジン、又はテトラゾール基がアルキン又はアルケン基と反応するこ
とによって、ポリペプチド又は抗体又はその抗原結合フラグメントを放射性金属イオン、
好ましくは^２２５Ａｃ、^１１１Ｉｎ、又は^８９Ｚｒで標識することを可能にする条件下で
、修飾ポリペプチド又は抗体又はその抗原結合フラグメントを放射性錯体と接触させるこ
と、を含み、
キレート剤が、式（Ｉ）：

（式中、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３及びＲ_４は、それぞれ独立してＣＨＱＣＯ_２Ｘであり、
Ｑは、独立して、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル又は（Ｃ_１～Ｃ_２アルキル）フェニルであ
り、
Ｘは、独立して、水素、ベンジル、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルであり、
Ｚは、（ＣＨ２）_ｎＹであり、
ｎは、１～１０であり、
Ｙは、アルキン基に共有結合した求電子性又は求核性部分であり、
或いは、Ｚは水素である；並びに
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３及びＲ_４は、それぞれ独立してＣＨＱＣＯ_２Ｘであり、
Ｑは、独立して、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル又は（Ｃ_１～Ｃ_２アルキル）フェニルであ
り、
Ｘは、独立して、水素、ベンジル、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、又はアルキン基に共有結合し
た求電子性又は求核性部分である）
の構造を含む、方法である。

実施形態１３ａは、キレート剤が、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－Ｎ
，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’－四酢酸（ＤＯＴＡ）を含む、実施形態１３に記載の方法であ
る。

実施形態１３ｂは、キレート化部分が式（ＩＩ）：

の構造を含む、実施形態１３に記載の方法である。

実施形態１３ｄは、放射性金属イオン、好ましくは^２２５Ａｃ、^１１１Ｉｎ又は^８９Ｚ
ｒを用いて、ポリペプチド、好ましくは抗体又はその抗原結合フラグメントを標識する方
法であって、
ａ．アジド、テトラジン、又はテトラゾール基に共有結合したポリペプチド、又は抗体
若しくはその抗原結合フラグメントを含む、修飾ポリペプチド、好ましくは修飾抗体又は
その抗原結合フラグメントを提供することと、
ｂ．放射性金属イオン、好ましくはキレート化部分に会合した^２２５Ａｃ、^１１１Ｉｎ
又は^８９Ｚｒを含む放射性錯体を提供することと、ここで、キレート化部分が、アルキン
又はアルケン基に共有結合したキレート剤を含み、並びに
ｃ．アジド、テトラジン、又はテトラゾール基がアルキン又はアルケン基と反応するこ
とによって、ポリペプチド又は抗体又はその抗原結合フラグメントを放射性金属イオン、
好ましくは^２２５Ａｃ、^１１１Ｉｎ、又は^８９Ｚｒで標識することを可能にする条件下で
、修飾ポリペプチド又は抗体又はその抗原結合フラグメントを放射性錯体と接触させるこ
と、を含み、
ここで、キレート剤が、開鎖配位子、好ましくは、デフェロキサミン（ＤＦＯ）を含む
、方法である。

実施形態１４は、キレート剤が、リンカーを介してアルキン又はアルケン基に共有結合
している、実施形態１３～１３Ｃのいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１５は、アジド、好ましくはＮＨＳ－アジドに共有結合したスルフヒドリル基
と、側鎖上の求電子物質、好ましくは、ポリペプチド上の又はポリペプチド好ましくは、
抗体又はその抗原結合フラグメントに導入されているリジンのアミノ側鎖を反応させて、
修飾ポリペプチド、又は抗体若しくはその抗原結合フラグメントを得ることを更に含む、
実施形態１３～１４のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１６は、ポリペプチド、好ましくは抗体又はその抗原結合フラグメントが、リ
ンカーを介してアジドに共有結合している、実施形態１３～１５のいずれか１つに記載の
方法である。

実施形態１７は、ポリペプチドが、抗体又はその抗原結合フラグメントであり、放射性
金属イオンが、^２２５Ａｃ、^１１１Ｉｎ又は^８９Ｚｒであり、キレート化部分が式（ＩＩ
）：

の構造を含む、実施形態１３に記載の方法である。

実施形態１７ａは、ポリペプチドが、その抗体又は抗原結合フラグメントであり、放射
性金属イオンが、^２２５Ａｃ、^１１１Ｉｎ又は^８９Ｚｒであり、キレート化部分が式（Ｉ
ＩＩ）：

の構造を含む、実施形態１３ｃに記載の方法である。

実施形態１７ｂは、ポリペプチドが、ヒト前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）又はその抗
原結合フラグメントに結合する抗体であり、好ましくは抗体は、配列番号３の配列のＨＣ
ＣＤＲ１配列、配列番号４のＨＣＣＤＲ２配列、配列番号５のＨＣＣＤＲ３配列、
配列番号６の軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１配列、配列番号７のＬＣＣＤＲ２配列、及び配列番
号８のＬＣＣＤＲ３配列を含む、実施形態１３～１７ａのいずれか１つに記載の方法。

実施形態１７ｃは、抗体が、配列番号９のＨＣ配列及び配列番号１０のＬＣ配列を含む
、実施形態１７ｂに記載の方法である。

実施形態１８は、２つの放射性金属イオンでポリペプチドを二重に標識する方法であっ
て、
ａ．第１のクリック反応パートナー及び第２のクリック反応パートナーに共有結合した
ポリペプチドを含む修飾ポリペプチドを提供することと、
ｂ．キレート化部分に会合した第１の放射性金属イオンを含む第１の放射性錯体を提供
することと、ここで、キレート化部分が、第３のクリック反応パートナーに共有結合した
キレート剤を含み、
ｃ．キレート化部分に会合した第２の放射性金属イオンを含む第２の放射性錯体を提供
することと、ここでキレート化部分が、第４のクリック反応パートナーに共有結合したキ
レート剤を含み、
ｄ．第１のクリック反応パートナーが第３のクリック反応パートナーと反応し、第２の
クリック反応パートナーが第４のクリック反応パートナーと反応することによって、ポリ
ペプチドを第１及び第２の放射性金属イオンで標識することを可能にする条件下で、修飾
ポリペプチドを第１及び第２の放射性錯体と接触させることと、を含む。

実施形態１９は、第１及び第２のクリック反応パートナーの一方がアルキン基を含み、
第１及び第２のクリック反応パートナーの他方がアジドを含み、第３及び第４のクリック
反応パートナーの一方がアルケン基を含み、第３及び第４のクリック反応パートナーの他
方がジエンを含む、実施形態１８に記載の方法である。

実施形態２０は、第１又は第２の放射性金属イオンが診断エミッタであり、他方が治療
エミッタである、実施形態１８又は１９に記載の方法である。

実施形態２１は、第１及び第２の放射性金属イオンの両方が治療エミッタである、実施
形態１８又は１９に記載の方法である。

実施形態２１ａは、診断エミッタが、^６２Ｃｕ、^６４Ｃｕ、^６７Ｇａ、^６８Ｇａ、^８６
Ｙ、^８９Ｚｒ、又は^１１１Ｉｎである、実施形態２０又は２１に記載の方法である。

実施形態２１ｂは、治療エミッタが、^３２Ｐ、^４７Ｓｃ、^６７Ｃｕ、^７７Ａｓ、^８９Ｓ
ｒ、^９０Ｙ、^９９Ｔｃ、^１０５Ｒｈ、^１０９Ｐｄ、^１１１Ａｇ、^１３１Ｉ、^１５３Ｓｍ、
^１５９Ｇｄ、^１６５Ｄｙ、^１６６Ｈｏ、^１６９Ｅｒ、^１７７Ｌｕ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒ
ｅ、^１９４Ｉｒ、^１９８Ａｕ、^１９９Ａｕ、^２１１Ａｔ、^２１２Ｐｂ、^２１２Ｂｉ、^２１
^３Ｂｉ、^２２３Ｒａ、^２２５Ａｃ、^２５５Ｆｍ、又は^２２７Ｔｈである、実施形態２０～
２１ａのいずれか１つに記載の方法である。

実施形態２２は、実施形態１～２１ｂのいずれか１つに記載の方法によって調製された
放射性標識ポリペプチドと、薬学的に許容可能な担体とを含む、医薬組成物である。

実施形態２３は、疾患又は障害、特に腫瘍性の疾患又は障害の治療又は診断を必要とす
る対象において、疾患又は障害、特に腫瘍性の疾患又は障害を治療又は診断する方法であ
って、実施形態２２の組成物を対象に投与することを含む方法である。

実施形態２４は、医薬組成物が、順次投与される２つの組成物を含み、第１の組成物が
修飾ポリペプチドを含み、第２が放射性錯体（複数の場合もある）を含む、実施形態２３
に記載の方法である。

実施形態２５は、実施形態１～２１ｂのいずれか１つに記載の方法によって調製された
放射性標識抗体と、薬学的に許容可能な担体と、を含み、放射性標識抗体の免疫学的特性
が保存されている、セラノスティック剤である。

実施形態２６は、放射性金属イオンが、診断エミッタ、好ましくは^８９Ｚｒである、実
施形態２５に記載のセラノスティック剤である。

実施形態２７は、放射性金属イオンが、治療エミッタ、好ましはく^２２５Ａｃである、
実施形態２５に記載のセラノスティック剤である。

実施形態２７ａは、放射性金属イオンが^１１１Ｉｎである、実施形態２５に記載のセラ
ノスティック剤である。

実施形態２７ｂは、ポリペプチドが、ヒト前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）又はその抗
原結合フラグメントに結合する抗体であり、好ましくは抗体は、配列番号３の配列のＨＣ
ＣＤＲ１配列、配列番号４のＨＣＣＤＲ２配列、配列番号５のＨＣＣＤＲ３配列、
配列番号６の軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１配列、配列番号７のＬＣＣＤＲ２配列、及び配列番
号８のＬＣＣＤＲ３配列を含む、実施形態２５～２７ａのいずれか１つに記載のセラノ
スティック剤である。

実施形態２７ｃは、セラノスティック剤が、配列番号９のＨＣ配列及び配列番号１０の
ＬＣ配列を含む、実施形態２７ｂに記載の方法である。

実施形態２７ｄは、放射性標識抗体が式（ＩＶ）：

式（ＩＶ）（ＤＯＴＡ－Ａｃ－ＤＢＣＯ－タンパク質）の式を有するか、或いは、^２２
^５Ａｃが、^３２Ｐ、^４７Ｓｃ、^６７Ｃｕ、^７７Ａｓ、^８９Ｓｒ、^９０Ｙ、^９９Ｔｃ、^１０
^５Ｒｈ、^１０９Ｐｄ、^１１１Ａｇ、^１３１Ｉ、^１５３Ｓｍ、^１５９Ｇｄ、^１６５Ｄｙ、^１
^６６Ｈｏ、^１６９Ｅｒ、^１７７Ｌｕ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^１９４Ｉｒ、^１９８Ａｕ
、^１９９Ａｕ、^２１１Ａｔ、^２１２Ｐｂ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、^２２３Ｒａ、^２５５
Ｆｍ、^２２７Ｔｈ、^６２Ｃｕ、^６４Ｃｕ、^６７Ｇａ、^６８Ｇａ、^８６Ｙ、^８９Ｚｒ、又は
^１１１Ｉｎなどの別の放射性金属イオンで置換されている、実施形態２５～２７ｃのいず
れか１つに記載のセラノスティック剤である。

実施形態２７ｅは、放射性標識抗体が式（Ｖ）：

式（Ｖ）（ＤＯＴＡ－Ｉｎ－ＤＢＣＯタンパク質）
の式を有する、実施形態２５～２７ｃのいずれか１つに記載のセラノスティック剤であ
る。

実施形態２７ｆは、放射性標識抗体が式（ＶＩ）：

式（ＶＩ）（ＤＦＯ－ＺｒＤＢＣＯ－タンパク質）の式を有するか、或いは、^８９Ｚ
ｒが、^３２Ｐ、^４７Ｓｃ、^６７Ｃｕ、^７７Ａｓ、^８９Ｓｒ、^９０Ｙ、^９９Ｔｃ、^１０５Ｒ
ｈ、^１０９Ｐｄ、^１１１Ａｇ、^１３１Ｉ、^１５３Ｓｍ、^１５９Ｇｄ、^１６５Ｄｙ、^１６６
Ｈｏ、^１６９Ｅｒ、^１７７Ｌｕ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^１９４Ｉｒ、^１９８Ａｕ、^１
^９９Ａｕ、^２１１Ａｔ、^２１２Ｐｂ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、^２２３Ｒａ、^２２５Ａｃ
、^２５５Ｆｍ、^２２７Ｔｈ、^６２Ｃｕ、^６４Ｃｕ、^６７Ｇａ、^６８Ｇａ、^８６Ｙ、又は^１
^１１Ｉｎなどの別の放射性金属イオンで置換されている、実施形態２５～２７ｃのいずれ
か１つに記載のセラノスティック剤である。

実施形態２７ｇは、放射性標識抗体が式（ＶＩＩ）：

式（ＶＩＩ）（ＤＯＴＡ－Ｚｒ－ＤＢＣＯ－タンパク質）
の式を有する、実施形態２５～２７ｃのいずれか１つに記載のセラノスティック剤であ
る。

実施形態２７ｈは、放射性標識抗体が３未満のキレータ：抗体比（ＣＡＲ）を有する、
実施形態２５～２７ｇのいずれか１つに記載のセラノスティック剤である。

実施形態２７ｉは、放射性標識抗体が２のキレータ：抗体比（ＣＡＲ）を有する、実施
形態２５～２７ｈのいずれか１つに記載のセラノスティック剤である。

実施形態２８は、
ａ．第１のクリック反応パートナーに共有結合したポリペプチドを含む修飾ポリペプチ
ドと、
ｂ．キレート化部分に会合した放射性金属イオンを含む放射性錯体であって、キレート
化部分が、第２のクリック反応パートナーに共有結合したキレート剤を含む、放射性錯体
と、を含む組み合わせ又は好ましくはキットに関し、
ここで、組み合わせは、ポリペプチドを放射性金属イオンで標識するために使用される
。

実施形態２８ａは、キレート剤が大環状分子を含む、実施形態２８の組み合わせ又はキ
ットである。

実施形態２８ｂは、キレート剤が、開鎖配位子を含む、実施形態２８に記載の組み合わ
せである。

実施形態２９は、ｉｎｖｉｔｒｏで第１及び第２のクリック反応パートナー間の反応
を介して、ポリペプチドを放射性金属イオンで標識するために使用される、実施形態２８
に記載の組み合わせ又はキットである。

実施形態３０は、ｉｎｖｉｖｏで第１及び第２のクリック反応パートナー間の反応を
介して、ポリペプチドを放射性金属イオンで標識するために使用される、実施形態２８に
記載の組み合わせ又はキットである。

実施形態３１は、第１のクリック反応パートナーに共有結合したポリペプチドを含む修
飾ポリペプチドを含む、組成物である。

実施形態３２は、キレート化部分に会合した放射性金属イオンを含む放射性錯体を含む
組成物であって、キレート化部分が、第２のクリック反応パートナーに共有結合したキレ
ート剤を含む、組成物である。

実施形態３２ａは、キレート剤が大環状分子を含む、実施形態３２に記載の組成物であ
る。

実施形態３２ｂは、キレート剤が、開鎖配位子を含む、実施形態３２に記載の組成物で
ある。

実施形態３３は、ポリペプチドが、抗体又はその抗原結合フラグメントである、実施形
態２８～３０のいずれか１つに記載の組み合わせ若しくはキット、又は実施形態３１若し
くは３２に記載の組成物である。

実施形態３３ａは、抗体が、ヒト前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）又はその抗原結合フ
ラグメントに結合することができ、好ましくは抗体は、配列番号３の配列のＨＣＣＤＲ
１配列、配列番号４のＨＣＣＤＲ２配列、配列番号５のＨＣＣＤＲ３配列、配列番号
６の軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１配列、配列番号７のＬＣＣＤＲ２配列、及び配列番号８のＬ
ＣＣＤＲ３配列を含む、実施形態３３に記載の方法。

実施形態３３ｂは、抗体が、配列番号９のＨＣ配列及び配列番号１０のＬＣ配列を含む
、実施形態３３ａに記載の組み合わせ又はキット又は組成物である。

実施形態３３ｃは、抗体又はその抗原結合フラグメントが、アジド基に共有結合してい
る、実施形態３３ａ又は３３ｂに記載の組み合わせ又はキット又は組成物である。

実施形態３３ｄは、抗体又はその抗原結合フラグメントが、アジド基にランダムに共有
結合している、実施形態３３ｃの組み合わせ又はキット又は組成物である。

実施形態３３ｅは、抗体又はその抗原結合フラグメントが、アジド基に部位特異的に共
有結合している、実施形態３３ｃの組み合わせ又はキット又は組成物である。

実施形態３３ｆは、抗体又はその抗原結合フラグメントが、抗体のＦｃ－グリコシル化
部位のコアＧｌｃＮａｃ残基（複数の場合もある）間のβ－１，４結合に特異的な細菌エ
ンドグリコシダーゼで抗体又はその抗原結合フラグメントをトリミングして、トリミング
された抗体又はその抗原結合フラグメントを得ること、及び糖転移酵素、好ましくはＧａ
ｌＴガラクトシルトランスフェラーゼの存在下で、トリミングされた抗体又はその抗原結
合フラグメントをアジド糖、好ましくはＵＤＰ－ＧａｌＮａｚアジド糖基質と反応させる
ことを含む方法を介してアジド基に共有結合されている、実施形態３３ｅに記載の組み合
わせ又はキット又は組成物である。

実施形態３３ｇは、修飾抗体又はその抗原結合フラグメントが、抗体又はその抗原結合
フラグメントをアミダーゼで脱グリコシル化して、脱グリコシル化抗体又はその抗原結合
フラグメントを得ること、及び脱グリコシル化抗体又はその抗原結合フラグメントを、微
生物トランスグルタミナーゼの存在下でアジドアミン、好ましくは３－アジドプロピルア
ミンと反応させることを含む方法によって得られる、実施形態３３ｅに記載の組み合わせ
又はキット又は組成物である。

実施形態３４は、放射性金属イオンが、^２２５Ａｃ、^１１１Ｉｎ又は^８９Ｚｒを含む、
実施形態３３～３３ｇのいずれか１つに記載の組み合わせ、キット又は組成物である。

実施形態３５は、キレート剤が、大環状分子、好ましくは式（Ｉ）：

の構造
（式中、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３及びＲ_４は、それぞれ独立してＣＨＱＣＯ_２Ｘであり、
Ｑは、独立して、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル又は（Ｃ_１～Ｃ_２アルキル）フェニルであ
り、
Ｘは、独立して、水素、ベンジル、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルであり、
Ｚは、（ＣＨ２）_ｎＹであり、
ｎは、１～１０であり、
Ｙは、アルキン基に共有結合した求電子性又は求核性部分であり、
或いは、Ｚは水素である；並びに
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３及びＲ_４は、それぞれ独立してＣＨＱＣＯ_２Ｘであり、
Ｑは、独立して、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル又は（Ｃ_１～Ｃ_２アルキル）フェニルであ
り、
Ｘは、独立して、水素、ベンジル、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、又はアルキン基に共有結合し
た求電子性又は求核性部分である）
を含む、実施形態３４に記載の組み合わせ、キット又は組成物である。

実施形態３６は、求電子性又は求核性部分が、リンカーを介してアルキン基に共有結合
している、実施形態３５に記載の組み合わせ、キット又は組成物である。

実施形態３７は、キレート化部分が式（ＩＩ）：

の構造を含む、実施形態３５又は３６に記載の組み合わせ、キット又は組成物である。

実施形態３７ａは、キレート化部分が、開鎖配位子を有するキレート剤を含み、好まし
くはキレート化部分が式（ＩＩＩ）：

の構造を含む、実施形態３４に記載の組み合わせ、キット又は組成物である。

実施形態３８は、ポリペプチドが、リンカーを介してアジドに共有結合している、実施
形態３４～３７のいずれか１つに記載の組み合わせ、キット又は組成物である。

実施形態３９は、疾患又は障害、特に腫瘍性の疾患若しくは障害を治療又は診断する方
法であって、実施形態２５～２７ｄのいずれか１つに記載のセラノスティック剤、又は実
施形態２８及び３３～３８のいずれか１つに記載の組み合わせを対象に投与することを含
む、方法である。

実施形態４０は、疾患又は障害、特に腫瘍性の疾患又は障害を、疾患又は障害、特に腫
瘍性疾患又は障害の治療又は診断を必要とする対象において治療又は診断する方法であっ
て、実施形態３１の組成物及び実施形態３２の組成物を対象に投与することを含み、好ま
しくはポリペプチドが抗体である、方法である。

以下の本発明の実施例は、本発明の本質を更に説明するためのものである。以下の実施
例は本発明を限定するものではなく、本発明の範囲は添付の請求項によって定められる点
を理解されたい。

実施例１：アジド／ハンドルの抗体へのランダム複合化
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）：「ＰＳＭＢ１２７」と表され、本明細書では「抗ＰＳ
ＭＡｍＡｂ」と称されるヒト前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）に結合するヒトＩｇＧ４
抗体は、配列番号３の配列の重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１配列、配列番号４のＨＣＣＤＲ２配
列、配列番号５のＨＣＣＤＲ３配列、配列番号６の軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１配列、配列番
号７のＬＣＣＤＲ２配列、及び配列番号８のＬＣＣＤＲ３配列を有し、また配列番号
９のＨＣ配列及び配列番号１０のＬＣ配列を有する。抗ＰＳＭＡｍＡｂを発現させ、標
準クロマトグラフィー法を用いて精製した。

本明細書で「対照ｍＡｂ」と称される抗ＰＭＳＡｍＡｂのヒトＩｇＧ４Ｓ２２８Ｐ
／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ（ＩｇＧ４－ＰＡＡ）抗体アイソタイプ対照は、配列番号１の
ＨＣ配列及び配列番号２のＬＣ配列を有する。市販の抗体トラスツズマブ（ハーセプチン
）、セツキシマブ（アービタックス）、ペルツズマブ（パージェタ）、及びパニツムマブ
（ベクティビックス）をそれぞれＲｏｃｈｅ、Ｌｉｌｌｙ、Ｒｏｃｈｅ、及びＡｍｇｅｎ
ら購入した。マウス抗ヒトＨｅｒ２ｍＡｂをＢｉｏＸＣｅｌｌ（カタログ番号ＢＥ０２
７７）から得た。トラスツズマブ、ペルツズマブ、及び抗ヒトＨｅｒ２ｍＡｂは、ヒト
Ｈｅｒ２に結合する。セツキシマブ及びパニツムマブは、ヒトＥＧＦＲに結合する。

複合化：１０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ５．２、リン酸緩衝生理食塩水ｐＨ７、又は他の
相溶性バッファー中の抗体の原液（１～１０ｍｇ／ｍＬ）を、２０％（重量／重量）の１
Ｍ炭酸ナトリウムバッファーｐＨ９と混合しして最終ｐＨを約９にした。ＮＨＳ－ＰＥＧ
４－アジド（Ｔｈｅｒｍｏカタログ番号２６１３０）をＤＭＳＯに溶解して最終濃度を１
００ｍＭにし、０．２％（重量／重量）の原液を添加して、ｍＡｂに対して約３～１０の
モル過剰を生成した。反応物を２２℃で１０分間インキュベートした後、１ＭＴｒｉｓ
（ｐＨ７．５）を添加しながらクエンチして、最終濃度を５０ｍＭＴｒｉｓにした。

精製：７ＫＭＷのカットオフ（Ｔｈｅｒｍｏ）を有するＺｅｂａ脱塩カラム、透析、
標準タンパク質Ａ親和性クロマトグラフィー、又は別の適合性のある方法などの方法を使
用して、アジド－ｍＡｂ複合体を精製し、相溶性バッファー（ＰＢＳ；２０ｍＭＨＥＰ
ＥＳ１５０ｍＭ、ＮａＣｌｐＨ７．５；又は１０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ５．２）に
交換した。精製後、５０ＫＭＷカットオフ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を有するＡｍｉｃｏ
ｎ濃縮装置を使用して、複合体を１０～２０ｍｇ／ｍＬに濃縮した。

ＬＣ／ＭＳ分析：キレータ：抗体比（ＣＡＲ）を、ＡｇｉｌｅｎｔＰＬＲＰ－Ｓカラ
ム（３００－Ａｎｇｓｔｒｏｍ、２．１ｘ１５０ｍｍ、カタログ番号ＰＬ１９１２－３３
０１）を備えたＡｇｉｌｅｎｔＧ６２２４ＭＳ－ＴＯＦ装置を用いるＬＣ／ＭＳ分析
によって決定した（表１）。質量スペクトルを、質量１４０～１７０ｋＤａに対するｍ／
ｚ範囲２０００～３２００にわたって最大エントロピーアルゴリズムを使用してデコンボ
リューションした。

分析的サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）：分析的ＳＥＣを行い、抗体及び抗体
複合体のオリゴマー状態を決定し、複合化プロセスが凝集をもたらさなかったことを確認
した。ＴｏｓｏｈＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷｘｌ（ＴｏｓｏｈＢｉｏｓｃｉｅｎ
ｃｅ＃０８５４１）７．８ｍｍ×３０ｃｍカラムを備えたＡｇｉｌｅｎｔ１２００シ
リーズＨＰＬＣを使用した。移動相１×ＰＢＳ、流量０．８ｍｌ／ｍｌ、注入量：１５μ
Ｌ、タンパク質濃度０．１～２ｍｇ／ｍＬ。

実施例２：アジド／ハンドルの非抗体ポリペプチドへのランダム複合化
非抗体ポリペプチド：トランスフェリン、ヒトホロ－トランスフェリンを、Ｒ＆ＤＳ
ｙｓｔｅｍｓ（カタログ番号２９１４－ＨＴ）から購入し、水に溶解して１０ｍｇ／ｍＬ
にした。ヒト表皮成長因子（ＥＧＦ）であるＥＧＦを、ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ
（カタログ番号１０６０５－ＨＮＡＥ）から購入した。

複合化：１０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ５．２、リン酸緩衝生理食塩水ｐＨ７、又は他の
相溶性バッファー中のポリペプチドの原液（１～１０ｍｇ／ｍＬ）を、２０％（重量／重
量）の１Ｍ炭酸ナトリウムバッファーｐＨ９と混合しして最終ｐＨ約９にした。ＮＨＳ－
ＰＥＧ４－アジド（Ｔｈｅｒｍｏカタログ番号２６１３０）をＤＭＳＯに溶解して最終濃
度を１００ｍＭにし、０．２％（重量／重量）の原液を添加して、タンパク質に対して約
３～１０のモル過剰を生成した。反応物を２２℃で１０分間インキュベートした後、１Ｍ
ＴｒｉｓｐＨ７．５でクエンチしながら、最終濃度を５０ｍＭにした。複合化効率を
表２に示す。

実施例３：アジド糖の抗体グリカンへの部位特異的組み込み
抗体グリカンを、Ｆｃグリコシル化部位（複数の場合もある）内のコアＧｌｃＮａｃ残
基間のβ－１，４結合に特異的な細菌エンドグリコシダーゼであるＧｌｙｃＩＮＡＴＯＲ
（Ｇｅｎｏｖｉｓ）でトリミングし、後でアジド糖の部位特異的組み込みに使用すること
ができる、最も内側のＧｌｃＮａｃをＦｃ上にそのまま残した。より具体的には、カラム
（Ｇｅｎｏｖｉｓ）に充填されたアガロースビーズ上に固定化したＧｌｙｃＩＮＡＴＯＲ
を、Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水ｐＨ７．４（ＴＢＳ）中で平衡化した。５～１０ｍｇ／ｍＬ
のｍＡｂ１ｍＬを樹脂に添加し、室温で１時間ロッカー（rocker）上でインキュベート
し、１００Ｘｇで１分間回転させることにより溶出した。カラムを０．５ｍＬのＴＢＳで
３回溶出した。トリミングされたｍＡｂを含む溶出液をプールし、供給されたバッファー
添加剤（Ｇｅｎｏｖｉｓ）をＵＤＰ－ＧＡＬＮａｚアジド糖基質及びＧａｌＴガラクトシ
ルトランスフェラーゼ酵素と共に添加した。反応混合物を、３０℃で一晩撹拌した。最終
的なアジドｍＡｂを、ＡＫＴＡＡｖａｎｔ機器でｍＡｂ選択カラム（ＧＥ）を用いて精
製した。アジド修飾をＬＣ－ＭＳによって確認し、ＣＡＲが正確に２であると決定した。

実施例４：３－アジドプロピルアミンの微生物トランスグルタミナーゼ（ＭＴＧ）によ
る部位特異的組み込み
アジド基は、記載のとおり、本質的にＧｌｎ２９５位で抗体に対して部位特異的に配置
された（Ｄｅｎｎｌｅｒｅｔａｌ．Ｔｒａｎｓｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ－ｂａｓｅｄ
ｃｈｅｍｏ－ｅｎｚｙｍａｔｉｃｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎａｐｐｒｏａｃｈｙｉ
ｅｌｄｓｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇｃｏｎｊｕｇａｔｅ
ｓ．ＢｉｏｃｏｎｊＣｈｅｍ２０１４Ｍａｒ１９；２５（３）：ｐ．５６９－７
８）。抗ＰＳＭＡｍＡｂを、最も内側のＧｌｃＮａｃ残基と、高マンノース、ハイブリ
ッド、及び複合オリゴ糖のアスパラギン残基との間で切断し、保存されている（例えば、
ＦｃＡｓｎ２９７）及び保存されていない（例えば、ＦａｂＮ－グリカン）両方のグ
リコシル化部位に由来するＮ－グリカンを含む、全てのＮ－グリカンの完全な脱グリコシ
ル化及び放出を可能にするアミダーゼである、ＲａｐｉｄＰＮＧａｓｅＦ（Ｎｅｗ
ＥｎｇｌａｎｄＢｉｏｌａｂｓ）で脱グリコシル化した。酢酸ナトリウムバッファー（
ｐＨ５．２）中、１ｍｇ／ｍＬの抗体１０ｍＬを、５μＬのＰＮＧａｓｅＦと共に３７
℃で一晩インキュベートし、脱グリコシル化をＬＣ－ＭＳにより確認した。ＰＮＧａｓｅ
Ｆを４サイクルの濃縮で除去し、Ａｍｉｃｏｎデバイス（５０ＫＤａカットオフ）で希
釈した。３－アジドプロピルアミン（３－ＡＰＡ；クリックケミストリーツール）の複合
化については、０．５ＭＨＥＰＥＳｐＨ７．５を２％（重量／重量）添加することに
より、脱グリコシル化ｍＡｂ（０．５～１ｍｇ／ｍＬ）をｐＨ７～７．５にした。１００
当量の３－ＡＰＡを、ＭＴＧであるアクチビンＴＩトランスグルタミナーゼ（Ａｊｉｎｏ
ｍｏｔｏ）５～１０％重量／体積と共に添加した。反応物を３７℃で１～４時間インキュ
ベートした後、標準クロマトグラフィー法を用いてｍＡｂＳｅｌｅｃｔＳｕｒｅカラム
でアジド修飾ｍＡｂを精製した。複合体をＬＣ－ＭＳによって手特性評価し、ＣＡＲが２
であると判定した。

実施例５：二官能性キレータ（ＢＦＣ）への放射性金属のキレート化
^２２５Ａｃ－ＤＯＴＡ－Ｇａ－ＤＢＣＯの合成：^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３をＯａｋＲ
ｉｄｇｅＮａｔｉｏｎａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙから購入した。１，４，７，１０－
テトラアザシクロドデカン、１－（グルタル酸）－４，７，１０－トリ酢酸－（３－アミ
ノ－プロパン酸）ジベンゾシクロ－オクチン（ＤＯＴＡ－Ｇａ－ＤＢＣＯ）をカスタム合
成した。合成はＢｅｒｎｈａｒｄｅｔａｌ．Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．２０１２，１８
，７８３４－７８４１に基づいた。ＤＢＣＯ－アミン（３－アミノ－１－［（５－アザ－
３，４：７，８－ジベンゾシクロオクタ－１－イン）－５－イル］－１－プロパノン（Ｓ
ｉｇｍａ）をＤＯＴＡ－ＧＡ無水物と反応させ、生成物を逆相ＨＰＬＣで精製した。

アクチニウム－２２５の定量は、ＣａｐｉｎｔｅｃＣＲＣ－５５ＴＷ線量キャリブレ
ータを使用して達成され、これにより、^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３を０．１ＮＨＣｌに溶
解して１０ｍＣｉ／ｍＬの溶液を作製した。プラスチックバイアル中の酢酸テトラメチル
アンモニウム（１Ｍ溶液、７．５μＬ、７．５μｍｏｌ）、ＤＯＴＡ－ＧＡ－ＤＢＣＯ（
１ｍｇ／ｍＬ水溶液、２．５μＬ、３．４ｎｍｏｌ）及びＮａＯＨ（０．１Ｎ、２．５μ
Ｌ、０．２５μｍｏｌ）の溶液に、^２２５Ａｃ（ＮＯ_３）_３（０．１ＮＨＣｌ５μＬ
中１０ｍＣｉ／ｍＬ、５０μＣｉ、０．００３８ｎｍｏｌ）を添加した。混合物のｐＨは
ｐＨ紙により約６．５であることが観察された。バイアルを、８０℃及び２９０ｒｐｍで
３０分間振盪ブロック上に置き、バイアルを室温まで冷却した。

^１１１Ｉｎ－ＤＯＴＡ－ＧＡ－ＤＢＣＯの合成：０．０５ＭＨＣｌ中の^１１１ＩｎＣ
ｌ３をＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅから購入した。プラスチックバイアル中の酢酸テトラ
メチルアンモニウム（１Ｍ溶液、７．５μＬ、７．５μｍｏｌ）、ＤＯＴＡ－ＧＡ－ＤＢ
ＣＯ（１ｍｇ／ｍＬ水溶液、２．５μＬ、３．４ｎｍｏｌ）及びＨＣｌ（０．１Ｎ、５μ
Ｌ）の溶液に、０．０５ＮＨＣｌ中の^１１１ＩｎＣｌ_３（５μＬ、Ｃａｐｉｎｔｅｃ
ＣＲＣ－５５ＴＷ線量キャリブレータによる測定で１０４．３μＣｉ、０．００２２ｎｍ
ｏｌ）を添加した。混合物のｐＨはｐＨ紙により約５．５であることが観察された。バイ
アルを、６０℃及び２９０ｒｐｍで３０分間振盪ブロック上に置き、バイアルを室温まで
冷却した。

^８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ＤＢＣＯの合成：^８９Ｚｒシュウ酸塩を３ＤＩｍａｇｉｎｇから
購入した。ＤＦＯ－ＤＢＣＯは、Ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃｓ（テキサス州プレイノ、カタ
ログ番号Ｂ－７７３）から購入し、ＤＭＳＯに溶解して０．５ｍｇ／ｍＬにし、水で２５
μｇ／ｍＬに希釈した。

２ｍＣｉのＺｒ－８９を金属を含まないマイクロ遠心管に移し、１Ｍのシュウ酸を添加
して合計容量を８０μＬにした。１２μＬの２Ｍ炭酸カリウムを２μＬずつ添加し、混合
物をバブリングが停止するまでピペット先端で撹拌した。次に、１２０μＬの１ＭＨＥ
ＰＥＳを加え、続いて３００μＬの水を添加した。溶液のｐＨを試験し、必要に応じてｐ
Ｈを６～６．５まで上昇させるために追加の２Ｍ炭酸カリウムを添加した。１３６μＬの
ＤＦＯ－ＤＢＣＯストック（３．４μｇ）を加え、反応物を室温で１時間インキュベート
した。０．５μＬの反応物を、ＴＬＣＧｒｅｅｎストリップ（Ｂｉｏｄｅｘ）上にスポ
ットし、２０％ＮａＣｌで溶出することによって分析した。溶出後、Ｚｒ－８９の大部分
がベースラインに留まることを確実にするため、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＣｙｃｌｏｎ
ｅＰｌｕｓ蛍光体イメージャーでストリップをスキャンし、ＤＦＯ－ＤＢＣＯによるキ
レート化を示した。

^８９Ｚｒ－ＤＯＴＡ－ＧＡ－ＤＢＣＯの合成：水に、Ｓｅｐ－ｐａｋＬｉｇｈｔＱ
ＭＡ強陰イオン交換カートリッジ（ジオールシリカ上のアクリル酸／アクリルアミドコポ
リマー、表面感応性：Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_３Ｎ（ＣＨ_３）_３ ^＋Ｃｌ^－、孔径３００Å
、粒子径３７～５５μｍ、イオン交換容量２３０μｅｑ／グラム）、ＭｅＣＮ（６ｍＬ）
を添加し、続いて０．９％生理食塩水（１０ｍＬ）、次に水（１０ｍＬ）を添加した。１
．０Ｍシュウ酸（２μＬ、２９０μＣｉ）中の^８９Ｚｒ（ｏｘ）_２の溶液を、プレコンデ
ィションしたカートリッジに添加した。次いで、カートリッジを脱イオン水（２０ｍｌ）
で洗浄して過剰なシュウ酸を除去した後、１．０ＭＨＣｌ（水性）（各１００μＬ）で
^８９ＺｒＣｌ_４をカラムから溶出し、２４８μＣｉ（８６％）の回収率で合計容量４００
μｌを取得し、放射能の大部分は画分３にあった。次いで、合わせた有機抽出物を蒸発乾
燥固した。

１０μＬのＤＯＴＡ－ＧＡ－ＤＢＣＯ（１．０ｍｇ／ｍＬの金属を含まない水、１０μ
ｇ、１３．６ｎｍｏｌ）を^８９ＺｒＣｌ_４（２６８ｕＣｉ、５０μＬ）に添加した。ＤＯ
ＴＡ－ＧＡ－ＤＢＣＯ／^８９Ｚｒの溶液を１５０μＬの１．０ＭＨＥＰＥＳで希釈した
。混合物のｐＨをｐＨ７．５に調整した（Ｐａｎｄｙａｅｔａｌ．，Ｚｉｒｃｏｎｉ
ｕｍｔｅｔｒａａｚａｍａｃｒｏｃｙｃｌｅｃｏｍｐｌｅｘｅｓｄｉｓｐｌａｙ
ｅｘｔｒａｏｒｄｉｎａｒｙｓｔａｂｉｌｉｔｙａｎｄｐｒｏｖｉｄｅａｎｅ
ｗｓｔｒａｔｅｇｙｆｏｒｚｉｒｃｏｎｉｕｍ－８９－ｂａｓｅｄｒａｄｉｏｐ
ｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．ＣｈｅｍＳｃｉ．２０１７
Ｍａｒ１；８（３）：ｐ．２３０９－２３１４）。次いで、溶液を９０℃で６０分間イ
ンキュベートした。^８９Ｚｒ－ＤＯＴＡ－ＧＡ－ＤＢＣＯ錯体の収率は、１％ＮＨ_４ＯＨ
溶液で溶出されるＳＰＣ２５カラム（ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ部品番号ＳＰＣ２５１
２０－５０Ｇ）により９８％と決定された。キレート化されていない^８９Ｚｒはカラム上
に留まるが、^８９Ｚｒ－ＤＯＴＡ－ＧＡ－ＤＢＣＯ錯体は溶出される。

実施例６：抗ＰＳＭＡｍＡｂのクリック標識放射性複合体の合成
本発明の方法による、放射線標識抗体の概略図について、図１及び図２を参照されたい
。

ＰＢＳ又は他の相溶性バッファー（１０～２０ｍｇ／ｍＬ）中の抗ＰＳＭＡｍＡｂ－
ジベンゾ－［１，２，３］－トリアゾロアゾシン－Ｇａ－ＤＯＴＡ－２２５Ａｃ（部位特
異的、ＣＡＲ＝２）：ランダム又は部位特異的アジド修飾抗体（部位特異的、ＣＡＲ＝２
又はランダム、１～４の平均ＣＡＲ）を、記載されるとおりに生成した^２２５Ａｃ－ＤＯ
ＴＡ－ＧＡ－ＤＢＣＯの溶液に添加した。混合物の最終ｐＨはｐＨ紙により約６．５であ
った。反応溶液を穏やかに撹拌し、１５ｍＬのＮａＯＡｃバッファー、１０ｍＭ、ｐＨ６
～６．５、又は別の相溶性のバッファーでプレコンディショニングしたＰＤ－１０カラム
（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）で精製する前に、室温で３時間放置した。反応混合物を
、プレコンディショニングされたＰＤ－１０カラムのリザーバにピペットで移し、溶出液
をプラスチック管に回収した。反応バイアルをＮａＯＡｃバッファーで洗浄し（０．２ｍ
Ｌで３回）、洗浄液をＰｄ－１０カラムのリザーバにピペットで移し、溶出液を回収した
。ＮａＯＡｃバッファーをＰＤ－１０カラムのリザーバに連続的に適用し、溶出液をプラ
スチック管に回収し、溶出液の合計１０ｍＬを回収するまで、各管に約１ｍＬの溶出液を
回収した。

回収した各分画の純度を、移動相としてクエン酸塩－Ｈ_２Ｏ－ＭｅＯＨ溶液を使用する
ｉＴＬＣ－ＳＧ（Ａｇｉｌｅｎｔ）によって評価した。純粋な画分（複数の場合もある）
を合わせて、１０ｍＭのＮａＯＡｃバッファー中で最終生成物を得た。生成物溶液を、化
学的及び放射線化学的純度についてＨＰＬＣにより分析した。標準曲線を使用して、生成
物溶液中の抗体濃度をＵＶ吸収により測定した。次いで、ＣａｐｉｎｔｅｃＣＲＣ－５
５ＴＷ線量キャリブレータを使用して、生成物溶液の放射能を定量した。

ＡＣ－２２５キレート化の品質管理：精製した生成物の品質管理としてジエチレントリ
アミン五酢酸（ＤＴＰＡ）を使用するキレート化チャレンジを用いた。１０ｍＭのＮａ_５
ＤＴＰＡ水溶液を、^２２５Ａｃ標識ｍＡｂを含有するサンプル溶液に添加して、［ＤＰＴ
Ａ］／［ｍＡｂ］＝５００～１，０００にした。５０ｍＭのＮａ_５ＤＴＰＡ水溶液を、^２
^２５Ａｃ標識ｍＡｂを含有する溶液中の精製生成物のアリコートに添加して、［ＤＰＴＡ
］／［ｍＡｂ］＝５０，０００～１００，０００にした。２つの混合物を、室温及び２９
０ｒｐｍで３０分間振盪ブロック上に置いた。混合物をｉＴＬＣ－ＳＧ上にスポットし、
クエン酸塩－Ｈ_２Ｏ－ＭｅＯＨを移動相として展開した。これらの条件下で、遊離^２２５
Ａｃは溶媒フロントに移動し、結合した^２２５Ａｃ－ｍＡｂはベースラインに留まる。

抗ＰＳＭＡｍＡｂ－ジベンゾ－［１，２，３］－トリアゾロアゾシン－ＧＡ－ＤＯＴ
Ａ－^１１１Ｉｎの合成：１０ｍＭＮａＯＡｃ中のランダム又は部位特異的アジド修飾抗
ＰＳＭＡｍＡｂ（部位特異的、ＣＡＲ＝２又はランダム、１～４の平均ＣＡＲ）を、記
載されるとおりに生成した^１１１Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＧＡ－ＤＢＣＯの溶液に添加した。反
応溶液を穏やかに撹拌し、ＰＤ－１０カラムを通過させる前に、室温で２時間放置した。
ＰＤ－１０カラムを、カラムにより１５ｍＬのＮａＯＡｃバッファー、１０ｍＭ、ｐＨ６
～６．５を通過させてプレコンディショニングし、洗浄液を廃棄した。次いで、反応混合
物を、プレコンディショニングされたＰＤ－１０カラムのリザーバにピペットで移し、溶
出液をプラスチック管に回収した。反応バイアルをＮａＯＡｃバッファーで洗浄し（０．
２ｍＬで３回）、洗浄液をＰＤ－１０カラムのリザーバにピペットで移し、溶出液を回収
した。ＮａＯＡｃバッファーをＰＤ－１０カラムのリザーバに連続的に適用し、溶出液を
プラスチック管に回収し、溶出液の合計１０ｍＬを回収するまで、各管に約１ｍＬの溶出
液を回収した。

回収した各画分の純度を、１０ｍＭＥＤＴＡ水溶液（ｐＨ＝５～６）を移動相として
用いてｉＴＬＣ－ＳＧによって評価した。純粋な画分（複数の場合もある）を合わせて、
１０ｍＭのＮａＯＡｃバッファー中で最終生成物を得た。生成物溶液を、化学的及び放射
線化学的純度についてＨＰＬＣにより分析した。標準曲線を使用して、生成物溶液中の抗
体濃度をＵＶ吸収により測定した。次いで、ＣａｐｉｎｔｅｃＣＲＣ－５５ＴＷ線量キ
ャリブレータを使用して、生成物溶液の放射能を定量した。

Ｉｎ－１１１キレート化の品質管理：精製した生成物の品質管理としてＤＴＰＡを使用
するキレート化チャレンジを用いた：１０ｍＭのＮａ_５ＤＴＰＡ水溶液を、^１１１Ｉｎ標
識化ｍＡｂを含有するサンプル溶液に添加して、［ＤＴＰＡ］／［ｍＡｂ］＝１０００～
１０，０００にした。混合物を、室温及び２９０ｒｐｍで３０分間振盪ブロック上に置い
た。混合物をｉＴＬＣ－ＳＧ上にスポットし、１０ｍＭＥＤＴＡ水溶液（ｐＨ＝５～６
）を移動相として展開した。遊離^１１１Ｉｎ又は緩く結合した^１１１は溶媒フロントに移
動し、しっかりと結合した^１１１Ｉｎ－ｍＡｂはベースラインに留まる。

抗ＰＳＭＡｍＡｂ－ジベンゾ－［１，２，３］－トリアゾロアゾシン－ＤＦＯ－ＺＲ
－８９の合成
１０ｍＭＨＥＰＥＳ５０ｍＭＮａＣｌｐＨ７．５、又は他の相溶性バッファー
中のランダムアジド修飾抗ＰＳＭＡｍＡｂ（１～４の平均ＣＡＲ、同様の手順を部位特
異的アジド－ｍＡｂにより実施することができる）８００μｇを、記載されるとおりに生
成した^８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ＤＢＣＯ溶液に添加し、３７℃で１．５時間インキュベートし
た後、ＰＤ－１０カラムを通過させた。ＰＤ－１０カラムを、１５ｍＬの等張生理食塩水
をカラムに通し、洗浄液を廃棄した。次いで、反応混合物を、プレコンディショニングさ
れたＰＤ－１０カラムのリザーバにピペットで移し、溶出液をプラスチック管に回収した
。生理食塩水をＰＤ－１０カラムのリザーバに連続的に適用し、溶出液をプラスチック管
に回収し、合計１０ｍＬの溶出液を回収するまで、各管に約０．５ｍＬの溶出液を回収し
た。各画分及びカラム上に残った物質の放射能を、線量キャリブレータで測定した。生成
物のピーク、通常は画分４～７をプールして最終生成物を得た。生成物溶液を、化学的及
び放射線化学的純度についてＨＰＬＣにより分析した。標準曲線を使用して、生成物溶液
中の抗体濃度をＵＶ吸収により測定した。線量キャリブレータを使用して、生成物溶液の
放射能を定量した。

抗ＰＭＳＡｍＡｂ－ＤＯＴＡ－^８９Ｚｒの合成
２０ｍＭＨＥＰＥＳ５０ｍＭＮａＣｌｐＨ７．５（１０．１ｍｇ／ｍＬ、２００μ
Ｌ、約１３．５ｎｍｏｌ）中のランダムアジド複合化により修飾されたアジド修飾抗ＰＳ
ＭＡｍＡｂ複合体（ＣＡＲ＝１～４）を、上記のとおり生成した^８９Ｚｒ－ＤＯＴＡ－
ＧＡ－ＤＢＣＯの溶液に添加した。混合物の最終ｐＨを７．０に調整した。反応溶液を３
７℃で２時間インキュベートし、続いて０．９％生理食塩水、ＨＥＰＥＳバッファー、又
はＰＢＳのいずれかでＰＤ－１０カラム（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）で精製して、６
４％で生成物^８９Ｚｒ－ＤＯＴＡ－ｍＡｂを得た。

Ｚｒ－８９キレート化の品質管理：Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂについては、精製した生成物
をＨＰＬＣのみで分析した。これらの複合体は、ＤＴＰＡ又はＥＤＴＡでチャレンジした
ときにＺｒ－８９を保持しなかった。Ｚｒ－ＤＯＴＡ－ｍＡｂにＥＤＴＡを３３ｍＭに添
加してチャレンジし、室温で一晩インキュベートした。ＰＤ－１０カラムを通過させるこ
とによってチャレンジ後の複合体を分析すると、放射能の８０％を保持することがわかっ
た。

実施例７：クリック標識放射性複合体の分析的特性評価
放射線化学変換の決定
放射化学変換（％ＲＡ変換；表３～５を参照されたい）を、ｉＴＬＣ－ＳＧ（シリカゲ
ル（ＳＧ）を含浸したバインダレスガラスマイクロファイバークロマトグラフィー紙を使
用する簡易薄層クロマトグラフィー（ｉＴＬＣ））によって決定した。％ＲＡ変換値は、
（放射性出発物質及び副生成物の異なる保持時間の）生成物ピークの放射線シグナルの積
分値を、ベースライン及び溶媒フロントの間に存在する全ての放射線シグナルピークを積
分するときに得られる値で除算することによって計算される。次いで、この生成物の割合
を変換率として表す。

Ａｃ－２２５を組み込んだ生成物については、約０．１～１μＣｉの^２２５Ａｃを含む
サンプル溶液を、下端から約２ｃｍのｉＴＬＣ－ＳＧストリップのベースラインにスポッ
トした。ｉＴＬＣ－ＳＧストリップを、クエン酸－水－メタノール移動相（２０ｍＬ０
．４Ｍクエン酸三ナトリウム／３ｍＬ２ＮＨＣｌ／２．３ｍＬＭｅＯＨ）を使用し
て展開し、室温で乾燥させ、分析前に最低６時間保管した（２２５Ａｃ及び全ての娘核種
の永年平衡に達する）。９９ｍＴｃ設定を使用して、ＢｉｏｓｃａｎＡＲ２０００放射
線ＴＬＣ撮像スキャナを使用してｉＴＬＣ－ＳＧをスキャンした。

Ｉｎ－１１１キレートについては、下側端からおよそ２ｃｍのｉＴＬＣ－ＳＧストリッ
プのベースラインに、約０．５～２．５μＣｉの^１１１Ｉｎを含むサンプル溶液をスポッ
トした。１０ｍＭのＥＤＴＡｐＨ５～６を移動相として用いてｉＴＬＣ－ＳＧストリッ
プを展開した後、室温で乾燥させた。Ｉｎ－１１１設定を使用して、ＢｉｏｓｃａｎＡ
Ｒ２０００放射線ＴＬＣ撮像スキャナを使用して、乾燥したｉＴＬＣ－ＳＧをスキャンし
た。

Ｚｒ－８９キレートの場合、％ＲＡ変換は、線量キャリブレータでカウントして決定さ
れるとおり、生成物ピークに対する放射能を、ＰＤ－１０カラムにおける放射能を含む総
放射能で割ることで決定した。

放射性標識タンパク質の放射化学純度を決定する
Ａｃ－２２５及びＩｎ－１１１キレートの放射化学的純度（％ＲＡ純度、表３～４を参
照されたい）を、ＳＥ－ＨＰＬＣ（サイズ排除ＨＰＬＣ）によって決定した。Ａｃ－２２
５については、ＴｏｓｏｈＴＳＫｇｅｌカラム（Ｇ３０００ＳＷ×ｌ７．８ｍｍ×３０
ｃｍ、５μｍ）を使用し、カラムをＤＰＢＳバッファー（×１、カルシウム及びマグネシ
ウムを含まない）で溶出させた。流量：０．７ｍＬ／分、２０分の運転、室温。ＨＰＬＣ
後、溶出液を予め番号付けしたバイアルに回収し、各バイアルに０．５分又は１分の溶出
液画分を回収した。溶出液を含むバイアルを室温で６時間超放置して、^２２５Ａｃがその
娘核種との永続平衡に達することを可能にした。次いで、各バイアル内の放射能を、Ｃａ
ｐｉｎｔｅｃＣＲＣ－５５ＴＷウェルカウンタで計数した。バイアル内の放射能に基づ
いて、放射性クロマトグラムを再構成した。

Ｉｎ－１１１については、ＴｏｓｏｈＴＳＫｇｅｌカラム（Ｇ３０００ＳＷ×ｌ７．
８ｍｍ×３０ｃｍ、５μｍ）を使用した。カラムをＤＰＢＳバッファー（×１、カルシウ
ム及びマグネシウムを含まない）で溶出させた。流量：０．７ｍＬ／分、２０分の運転、
室温。上記のＨＰＬＣシステム及びＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ放射性フロー検出器Ｒａｄ
ｉｏｍａｔｉｃ６２５ＴＲを使用して放射能検出を行い、Ｉｎ－１１１設定を使用する
０．５ｍＬのフローセル及び１．４ｍＬ／分の流量で使用するＵｌｔｉｍａＦｌｏＴＭ
Ｍカクテルを備えている。

Ｚｒ－８９（表５を参照されたい）については、ＴｏｓｏｈＴＳＫｇｅｌカラム（Ｇ
３０００ＳＷ×ｌ７．８ｍｍ×３０ｃｍ、５μｍ）を使用した。カラムを、クエン酸塩緩
衝生理食塩水で溶出させた。流量：１ｍＬ／分、２０分の運転、室温。上記のＨＰＬＣシ
ステム及びＢｉｏｓｃａｎＦｌｏｗＣｏｕｎｔ機器に連結されたＢｅｃｋｍａｎフロ
ーフロースルー検出器を使用して、放射能の検出を行った。

^＊工程１は、アクチニウム－２２５のＤＯＴＡ－ＧＡ－ＤＢＣＯへのキレート化である
。
^＊＊工程２は、タンパク質に対する二官能性キレートのクリック反応である。

^＊工程１は、インジウム－１１１のＤＯＴＡ－ＧＡ－ＤＢＣＯへのキレート化である。
^＊＊工程２は、タンパク質に対する二官能性キレートのクリック反応である。

実施例８：修飾ｍＡｂとＤＯＴＡ－ＧＡ－ＤＢＣＯとのクリック反応
１～１０ｍｇ／ｍＬのランダム及び部位特異的アジド－ｍＡｂ（抗ＰＳＭＡｍＡｂ、
セツキシマブ、パニツムマブ、トラツズマブ、ペルツズマブ）を、５倍～２０倍の過剰の
キレート化していないＤＯＴＡ－ＧＡ－ＤＢＣＯと混合し、室温又は３７℃で１～２４時
間インキュベートした。ｍＡｂをＺｅｂａ脱塩脱水カラム（Ｔｈｅｒｍｏ）で脱塩し、Ａ
ｍｉｃｏｎ遠心分離機（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で濃縮し、バッファーで再希釈し、再度濃
縮して、残りのＤＢＣＯ－ＤＯＴＡを全て除去した。全ての遊離アジドのＤＢＣＯ－ＤＯ
ＴＡとの完全なクリック反応を、ＬＣ－ＭＳにより確認した。

実施例９：修飾ｍＡｂとＤＦＯ－ＤＢＣＯとのクリック反応
１～１０ｍｇ／ｍＬのランダム及び部位特異的抗ＰＳＭＡｍＡｂアジド－ｍＡｂを、
５倍～２０倍の過剰のキレート化されていないＤＯＴＡ－ＧＡ－ＤＦＯと混合し、室温又
は３７℃で１～２４時間インキュベートした。ｍＡｂをＺｅｂａ脱塩脱水カラム（Ｔｈｅ
ｒｍｏ）で脱塩し、Ａｍｉｃｏｎ遠心分離機（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で濃縮し、バッファ
ーで再希釈し、再度濃縮して、残りのＤＢＣＯ－ＤＦＯを全て除去した。全ての遊離アジ
ドとＤＢＣＯ－ＤＦＯとの完全なクリック反応を、ＬＣ－ＭＳにより確認した。

実施例１０：細胞結合（ＦＡＣＳ）
アジド修飾抗体、ＤＯＴＡ－ＤＢＣＯ－アジド修飾抗体、及びＤＦＯ－ＤＢＣＯ－アジ
ド修飾抗体の細胞結合を、表１に記載の複合体の親ｍＡｂと比較した。ｍＡｂ標的を発現
する細胞株を、濃度範囲の抗体又は複合体で処理し、結合をフローサイトメトリーによっ
て測定した。パニツムマブ及びセツキシマブ複合体をＥＧＦＲ＋Ａ４３１細胞への結合に
ついて評価した。ハーセプチン及びペルツズマブを、ＨＥＲ２＋ＳＫ－ＢＲ－３細胞への
結合について評価した。抗ＰＳＭＡｍＡｂを、ＰＳＭＡ＋Ｃ４－２ｂ細胞への結合につ
いて評価した。

細胞株：Ｃ４－２Ｂ細胞、ヒト前立腺癌細胞株をＪａｎｓｓｅｎＯｎｃｏｌｏｇｙ（
ペンシルベニア州スプリングハウス）から入手した。ヒト類表皮癌細胞株であるＡ４３１
細胞、及びヒト乳癌細胞株であるＳＫ－ＢＲ－３細胞を、もともとはＡＴＣＣ（バージニ
ア州マナッサス）由来の細胞を用いるＪａｎｓｓｅｎＢｉｏＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ
（ペンシルベニア州スプリングハウス）から入手した。ＥＧＦＲ受容体陰性ＭＯＬＭ－１
３ヒト急性骨髄性白血病浮遊細胞を、２０％熱不活化ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ）を添加
したＲＰＭＩ１６４０＋２５ｍＭＨｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）で維持した。細胞を、１０
％ＦＢＳ（Ｇｉｂｏ、マサチューセッツ州ウォルサム）を含むＲＰＭＩ１６４０＋２５ｍ
ＭＨＥＰＥＳ（Ｇｉｂｏ、マサチューセッツ州ウォルサム）を用いて増殖させた。

フローサイトメトリー：酵素を含まない細胞解離バッファー（Ｇｉｂｃｏ、マサチュー
セッツ州ウォルサム）を使用してフラスコから細胞を剥離させ、４０μｍフィルタ（Ｆａ
ｌｃｏｎ）で濾過した。９６ウェルＵ底プレートに、１ウェル当たり５Ｘ１０^４個の細胞
を播種した。細胞を、ＢＳＡ染色バッファー（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カリフォル
ニア州サンノゼ）で希釈した複合抗体又は親抗体と共に、４℃で１時間インキュベートし
た。細胞を、染色バッファーで２回洗浄した。次いで、細胞を暗所にて４℃で３０分間、
ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７タグ付き抗ヒトＩｇＧ二次抗体（ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕ
ｎｏＲｅｓｅａｒｃｈＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）と共にインキュベートした。２次抗
体を、３％ロバ血清（ＲｏｃｋｌａｎｄＩｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）を含有する
染色バッファーで１：２００に希釈した。最後の１０分間のインキュベーションでは、Ｓ
ＹＴＯＸ（商標）ＧｒｅｅｎＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄＳｔａｉｎ（ＴｈｅｒｍｏＦ
ｉｓｈｅｒ）を最終濃度３０ｎＭで細胞に添加した。細胞を染色バッファーで２回洗浄し
た後、染色バッファー中の最終容量２５μＬ／ウェルで再懸濁し、ｉＱｕｅＳｃｒｅｅ
ｎｅｒフローサイトメータ（Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ）で読み取った。データを分析するた
めに、ＦｏｒｅＣｙｔソフトウェアを使用した。高核酸染色を伴う事象を除外することに
より、生細胞を決定した。平均蛍光強度（ＭＦＩ：Mean fluorescence intensity）を生
細胞で決定し、抗体濃度ｖｓＭＦＩの対数としてＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ７（Ｇ
ｒａｐｈＰａｄＳｏｆｔｗａｒｅ）でグラフ化した。非線形回帰曲線フィットをデータ
に加え、ＥＣ_５０値を計算した。

試験した全てのｍＡｂ及び複合体について、親ｍＡｂ及び修飾ｍＡｂは、同様の細胞結
合を示した（表６）。

実施例１１：Ｉｎ－１１１細胞結合アッセイ
細胞結合を、表４に記載のＩｎ－１１１放射性標識タンパク質を用いて放射測定アッセ
イで測定した。抗ＰＳＭＡｍＡｂ及びトランスフェリンを、Ｃ４－２Ｂ細胞（ＰＳＭＡ
＋及びトランスフェリン＋）で試験した。セツキシマブ及びパニツムマブを、Ａ４３１細
胞（ＥＧＦＲ＋）及びＭＯＬＭ－１３細胞（ＥＧＦＲ－）に対して試験した。

接着細胞を、酵素不含細胞解離バッファー（Ｇｉｂｃｏ）で剥離した。剥離した接着細
胞及び回収された浮遊細胞を計数し、冷染色バッファー（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ
）で洗浄した。２００μＬの染色バッファー中の様々な数の細胞を、微小遠心管に添加し
、氷上に置いた。０．５μＣｉのＩｎ－１１１標識タンパク質を各管に添加し、氷上で１
時間インキュベートした。細胞を冷ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）で洗浄し、未結合の抗体を除去
し、５００μＬの冷ＰＢＳ中に再懸濁した。サンプルを計数バイアルに移し、ガンマ計数
（ＨｉｄｅｘＡｕｔｏｍａｔｉｃＧａｍｍａＣｏｕｎｔｅｒ）によって細胞関連放
射能を測定した。

試験サンプルからのカウント毎分（ＣＰＭ：Counts per minute）を、既知量のＩｎ－
１１１標識タンパク質を使用して作成した線形回帰を用いてＣＰＭ値を使用し、Ｉｎ－１
１１μＣｉに変換した。μＣｉ境界値を、以下の計算を使用して、モル結合（Ｍｏｌｅｓ
Ｂｏｕｎｄ）に変換した：（μＣｉ結合／比放射能）／ＭＷｍＡｂ又はタンパク質。
各データ点は、３重の反応の平均±ＳＤである。

クリック標識Ｉｎ－１１１抗ＰＳＭＡｍＡｂ及びＩｎ－１１１トランスフェリンは、
Ｃ４－２Ｂ細胞に結合し、細胞数が増加すると細胞関連放射能が増加した（図３Ａ）。ク
リック標識Ｉｎ－１１１抗ＥＧＦＲ抗体であるパニツムマブ及びセツキシマブはＡ４３１
細胞に結合し、細胞数が増加すると細胞関連放射能が増加した。陰性対照ＭＯＬＭ－１３
細胞では、クリック標識抗ＥＧＦＲ抗体の特異的結合は検出されなかった（図３Ｂ）。

実施例１２：インジウム細胞取り込みアッセイ
Ｃ４－２Ｂ細胞におけるＩｎ－１１１クリック標識抗ＰＳＭＡｍＡｂの内在化の動態
を決定した。

細胞を、６０ｍｍディッシュ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）当たり３×１０^６細胞で播種し、３７
℃の加湿ＣＯ_２インキュベータ内に一晩置いた。播種培地を除去し、２ｍＬの冷染色バッ
ファー（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で置き換えた。次いで、ディッシュを氷上に置い
た。０．５μＣｉのＩｎ－１１１標識抗体を各ディッシュに添加し、氷上で１時間インキ
ュベートした。細胞を冷ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）で洗浄し、細胞表面から未結合の抗体を除
去した。以下に記載されるとおり、様々な時点で、細胞を表面膜結合放射能及び細胞内放
射能についてアッセイした。

酸洗浄ストリッピング手順を用いて表面結合放射能をストリッピングした：１．５ｍＬ
のストリッピングバッファー（５０ｍｍグリシン、１５０ｍｍＮａＣｌｐＨ２．７、
２５μｇ／ｍＬまで添加されたペプシン（Ａｍｒｅｓｃｏ）を含む）を細胞に加え、ディ
ッシュを氷上で１５分間インキュベートした。ストリッピングバッファーを計数バイアル
に移した。細胞を冷ＰＢＳで洗浄し、洗浄液を計数バイアルに移した。放射能をガンマ計
数（ＨｉｄｅｘＡｕｔｏｍａｔｉｃＧａｍｍａＣｏｕｎｔｅｒ）によりアッセイし
た。表面膜結合放射能を、ストリッピングバッファー＋ＰＢＳ洗浄液の合計として決定し
た。

細胞溶解物を調製することによって細胞内放射能をアッセイした：表面結合放射能をス
トリップし、細胞を洗浄した後、１．５ｍＬの１ＭＮａＯＨ（Ｔｅｋｎｏｖａ）を細胞
に加え、ディッシュを氷上で５分間インキュベートした。表面ストリップ細胞溶解物を、
計数バイアルに移した。皿を冷ＰＢＳで洗浄し、洗浄液を計数バイアルに移した。放射能
をガンマ計数（ＨｉｄｅｘＡｕｔｏｍａｔｉｃＧａｍｍａＣｏｕｎｔｅｒ）により
アッセイした。細胞内放射能を、表面ストリップ細胞溶解物＋ＰＢＳ洗浄液の合計として
決定した。

時間＝０のサンプルについて、細胞を、氷上での初期抗体結合直後の表面膜結合放射能
及び細胞内放射能についてアッセイした。１０分間、３０分間、１時間及び２時間のサン
プルについて、初期抗体結合後に３ｍＬの細胞培養培地を各ディッシュに添加し、ディッ
シュを３７℃の加湿ＣＯ_２インキュベータに入れた。各時点でディッシュをインキュベー
タから取り出し、氷上に置いた。細胞培養培地を計数バイアルに移し、細胞を冷ＰＢＳで
洗浄した。ＰＢＳ洗浄液を計数バイアルに回収した。細胞を、記載されるとおりに、表面
膜結合放射能及び細胞内放射能についてアッセイした。各時点で、細胞溶解前に、ストリ
ッピングバッファーの代わりにＰＢＳで細胞をインキュベートすることにより、ストリッ
ピングされていないサンプルを作製した。これらのサンプルを使用して、ストリッピング
効率を評価し、結果をストリッピングしたサンプルと比較した。

試験サンプルからのＣＰＭを、既知量のＩｎ－１１１標識ｍＡｂを使用して作成した線
形回帰からのＣＰＭ値を用いてμＣｉＩｎ－１１１に変換した。細胞表面膜上（ストリ
ッピングされたサンプル）及び細胞内（溶解したサンプル）のＩｎ－１１１ｍＡｂの局
在率（％）を、以下の式：局在率％＝１００^＊（サンプルμＣｉ／平均合計μＣｉ）を使
用して決定し、ここで合計μＣｉは、インキュベーション培地、ＰＢＳ洗浄液、グリシン
リンス、及び溶解した細胞を含む全ての回収されたサンプルの合計を指す。各データ点は
、３重の反応の平均±ＳＤである。

表面結合したＩｎ－１１１は、細胞表面から急速に消失し、細胞内に再分配された。ス
トリッピング技術は、時間０において、細胞表面関連放射能の約８０％を放出し、インキ
ュベーションの終わりまでに、２０％のみがストリッピングによって放出され、放射能の
６０％超が細胞溶解物中にあった（図４）。

実施例１３：マウス腫瘍異種移植モデルにおける有効性
抗ＰＳＭＡｍＡｂ－ＤＯＴＡ－ＡＣ－２２５の線量決定研究：雄性ＮＳＧマウス（１
群当たりｎ＝８）に１０^６ＬＮＣａｐ細胞を皮下移植し、腫瘍を１００～１５０ｍｍ^３に
増殖させた。マウスに、放射能範囲（１０ｎＣｉ、２５ｎＣｉ、７０ｎＣｉ、２００ｎＣ
ｉ）の抗ＰＳＭＡｍＡｂ－アジド－ＤＯＴＡ－^２２５Ａｃ又はアイソタイプ対照、対照
ｍＡｂ－アジド－ＤＯＴＡ－^２２５Ａｃの単回用量を静脈内注射した。マウス１匹当たり
の注入量を、コールド抗体で合計１０μｇのタンパク質にした。腫瘍測定及び体重を１週
間に２回記録した。腫瘍サイズが１，５００ｍｍ^３を超えたときに動物を安楽死させたか
、又は体重減少が２０％を超えたときに安楽死させた。

抗ＰＳＭＡｍＡｂ－ＤＯＴＡ－Ａｃ－２２５は、特に高放射線量の単回投薬後の腫瘍
増殖阻害を示し、また全ての線量でアイソタイプ対照よりも優れた腫瘍増殖阻害を示す（
図５Ａ）。いずれの線量の対照ｍＡｂ放射性複合体も、ビヒクル対照と同様の生存曲線を
有した（図５Ｂ；表７）；抗ＰＳＭＡｍＡｂ複合体は、放射線量が増加すると生存率が
増加し、明らかな用量反応を示した（図５Ｃ；表７）。２０９日後に試験を終了すると、
３匹のいずれも抗ＰＳＭＡｍＡｂ２００ｎＣｉ群からのマウスが残り、検出可能な腫瘍
を示さなかった。

本発明の実施形態は、単なる例示であることを意図しており、当業者は、本発明の特定
の手順に対する多数の等価物を、日常的な実験のみを用いて認識するか、又は確認するこ
とができるであろう。かかる等価物はいずれも、本発明の範囲内であると見なされ、以下
の特許請求の範囲に含まれる。

本明細書に引用される全ての参照（特許出願、特許又は文献を含む）は、その全体を参
照することにより、それぞれの個別の文献又は特許若しくは特許出願書があらゆる目的の
ためにその全体が参照により組み込まれることを具体的かつ個別に示した場合と同程度に
あらゆる目的のために本明細書に組み込まれる。

本明細書に引用される全ての参照（特許出願、特許又は文献を含む）は、その全体を参照することにより、それぞれの個別の文献又は特許若しくは特許出願書があらゆる目的のためにその全体が参照により組み込まれることを具体的かつ個別に示した場合と同程度にあらゆる目的のために本明細書に組み込まれる。

以下の態様を包含し得る。
［１］放射性金属イオンでポリペプチドを標識する方法であって、
ａ．第１のクリック反応パートナーに共有結合した前記ポリペプチドを含む修飾ポリペプチドを提供することと、
ｂ．キレート化部分に会合した前記放射性金属イオンを含む放射性錯体を提供することと、ここで、前記キレート化部分が、第２のクリック反応パートナーに共有結合したキレート剤を含み、
ｃ．前記第１のクリック反応パートナーが前記第２のクリック反応パートナーと反応することによって、前記ポリペプチドを前記放射性金属イオンで標識化することを可能にする条件下で、前記修飾ポリペプチドを前記放射性錯体と接触させることと、を含む、方法。
［２］前記第１及び第２のクリック反応パートナーの一方がアルキン基を含み、前記クリック反応パートナーの他方がアジドを含み、又は前記第１及び第２のクリック反応パートナーの一方がアルケン基を含み、前記クリック反応パートナーの他方がジエンを含む、上記［１］に記載の方法。
［３］前記ポリペプチドが、抗体又はその抗原結合フラグメントである、上記［１］又は［２］に記載の方法。
［４］前記抗体が抗ＰＳＭＡモノクローナル抗体である、上記［３］に記載の方法。
［５］前記放射性金属イオンが、 ^２２５Ａｃ、 ^１１１Ｉｎ、又は ^８９Ｚｒである、上記［１］～［４］のいずれか一項に記載の方法。
［６］側鎖上の求電子物質を前記第１のクリック反応パートナーに共有結合したスルフヒドリル基と反応させて、前記修飾ポリペプチドを得ることを更に含む、上記［１］～［４］のいずれか一項に記載の方法。
［７］前記修飾ポリペプチドが、前記第１のクリック反応パートナーの部位特異的組み込みによって得られる修飾抗体又はその抗原結合フラグメントである、上記［１］～［５］いずれか一項に記載の方法。
［８］前記修飾抗体又はその抗原結合フラグメントが、前記抗体のＦｃ－グリコシル化部位のコアＧｌｃＮａｃ残基間のβ－１，４結合に特異的な細菌エンドグリコシダーゼで抗体又はその抗原結合フラグメントをトリミングして、トリミングされた抗体又はその抗原結合フラグメントを得ること、及びＧａｌＴガラクトシルトランスフェラーゼ又はＧａｌＮａｃトランスフェラーゼ等の糖転移酵素の存在下で、前記トリミングされた抗体又はその抗原結合フラグメントをアジド標識糖と反応させることにより、前記修飾抗体又はその抗原結合フラグメントを得ること、を含む方法によって得られる、上記［７］に記載の方法。
［９］前記アジド標識糖が、ＵＤＰ－Ｎ－アジドアセチルガラクトサミン（ＵＤＰ－ＧａｌＮａｚ）又はＵＤＰ－６－アジド６－デオキシＧａｌＮＡｃである、上記［８］に記載の方法。
［１０］前記糖転移酵素が、ＧａｌＴガラクトシルトランスフェラーゼ又はＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼである、上記［８］に記載の方法。
［１１］前記修飾抗体又はその抗原結合フラグメントが、抗体又はその抗原結合フラグメントをアミダーゼで脱グリコシル化して、脱グリコシル化抗体又はその抗原結合フラグメントを得ること、及び前記脱グリコシル化抗体又はその抗原結合フラグメントを、微生物トランスグルタミナーゼの存在下でアジドアミンと反応させることによって、前記修飾ポリペプチドを得ること、を含む方法によって得られる、上記［７］に記載の方法。
［１２］前記アジドアミンが、３－アジドプロピルアミン、６－アジドヘキシルアミン、Ｏ－（２－アミノエチル）－Ｏ’－（２－アジドエチル）テトラエチレングリコール、Ｏ－（２－アミノエチル）－Ｏ’－（２－アジドエチル）ペンタエチレングリコール、及びＯ－（２－アミノエチル）－Ｏ’－（２－アジドエチル）トリエチレングリコールから選択される、上記［１１］に記載の方法。
［１３］前記修飾ポリペプチドが、直接又はリンカーを介して、アジド、テトラジン、又はテトラゾール基に共有結合した前記ポリペプチドを含む、上記［１］に記載の方法。
［１４］前記キレート剤が、式（Ｉ）：

（式中、Ｒ _１、Ｒ _２、Ｒ _３及びＲ _４は、それぞれ独立してＣＨＱＣＯ _２Ｘであり、
Ｑは、独立して、水素、Ｃ _１～Ｃ _４アルキル又は（Ｃ _１～Ｃ _２アルキル）フェニルであり、
Ｘは、独立して、水素、ベンジル、Ｃ _１～Ｃ _４アルキルであり、
Ｚは、（ＣＨ２） _ｎＹであり、
ｎは、１～１０であり、
Ｙは、前記第２のクリック反応パートナーに共有結合した求電子性又は求核性部分であり、
或いは、Ｚは水素である；並びに
Ｒ _１、Ｒ _２、Ｒ _３及びＲ _４は、それぞれ独立してＣＨＱＣＯ _２Ｘであり、
Ｑは、独立して、水素、Ｃ _１～Ｃ _４アルキル又は（Ｃ _１～Ｃ _２アルキル）フェニルであり、
Ｘは、独立して、水素、ベンジル、Ｃ _１～Ｃ _４アルキル、又は前記第２のクリック反応パートナーに共有結合した求電子性又は求核性部分である）の構造を有するマクロサイクルを含む、
又は、前記キレート剤が、開鎖配位子を含む、上記［１］に記載の方法。
［１５］前記キレート化部分が、式（ＩＩ）：

の構造、又は式（ＩＩＩ）：

の構造を含む、上記［１］に記載の方法。
［１６］ ^２２５Ａ _Ｃ、 ^１１１Ｉｎ、又は ^８９Ｚｒで抗体又はその抗原結合フラグメントを標識する方法であって、
ａ．アジド、テトラジン、又はテトラゾール基に共有結合した抗体又はその抗原結合フラグメントを含む修飾抗体又はその抗原結合フラグメントを提供することと、
ｂ．キレート化部分に会合した ^２２５Ａ _Ｃ、 ^１１１Ｉｎ又は ^８９Ｚｒを含む放射性錯体を提供することと、ここで、前記キレート化部分が、アルキン又はアルケン基に共有結合したキレート剤を含み、並びに
ｃ．前記アジド、テトラジン、又はテトラゾール基が前記アルキン又はアルケン基と反応することによって、前記抗体又はその抗原結合フラグメントを ^２２５Ａ _Ｃ、 ^１１１Ｉｎ、又は ^８９Ｚｒで標識化することを可能にする条件下で、前記修飾抗体又はその抗原結合フラグメントを放射性錯体と接触させること、を含み、
前記キレート剤が、式（Ｉ）：

（式中、Ｒ _１、Ｒ _２、Ｒ _３及びＲ _４は、それぞれ独立してＣＨＱＣＯ _２Ｘであり、
Ｑは、独立して、水素、Ｃ _１～Ｃ _４アルキル又は（Ｃ _１～Ｃ _２アルキル）フェニルであり、
Ｘは、独立して、水素、ベンジル、Ｃ _１～Ｃ _４アルキルであり、
Ｚは、（ＣＨ２） _ｎＹであり、
ｎは、１～１０であり、
Ｙは、前記アルキン基に共有結合した求電子性又は求核性部分であり、
或いは、Ｚは水素である；並びに
Ｒ _１、Ｒ _２、Ｒ _３及びＲ _４は、それぞれ独立してＣＨＱＣＯ _２Ｘであり、
Ｑは、独立して、水素、Ｃ _１～Ｃ _４アルキル又は（Ｃ _１～Ｃ _２アルキル）フェニルであり、
Ｘは、独立して、水素、ベンジル、Ｃ _１～Ｃ _４アルキル、又は前記アルキン基に共有結合した求電子性又は求核性部分である）の構造を含む、
又は、前記キレート剤は、開鎖配位子を含む、方法。
［１７］側鎖上の求電子物質を前記アジド、テトラジン又はテトラゾール基に共有結合したスルフヒドリル基と反応させて、前記修飾抗体又はその抗原結合フラグメントを得ることを更に含む、上記［１６］に記載の方法。
［１８］前記修飾抗体又はその抗原結合フラグメントが、前記第１のクリック反応パートナーの部位特異的組み込みによって得られる、上記［１６］に記載の方法。
［１９］前記修飾抗体又はその抗原結合フラグメントが、前記抗体のＦｃ－グリコシル化部位のコアＧｌｃＮａｃ残基間のβ－１，４結合に特異的な細菌エンドグリコシダーゼで抗体又はその抗原結合フラグメントをトリミングして、トリミングされた抗体又はその抗原結合フラグメントを得ること、及び糖転移酵素の存在下で、前記トリミングされた抗体又はその抗原結合フラグメントをアジド標識糖と反応させることにより、修飾抗体又はその抗原結合フラグメントを得ること、を含む方法によって得られる、上記［１８］に記載の方法。
［２０］前記アジド標識糖が、ＵＤＰ－Ｎ－アジドアセチルガラクトサミン（ＵＤＰ－ＧａｌＮａｚ）又はＵＤＰ－６－アジド６－デオキシＧａｌＮＡｃである、上記［１９］に記載の方法。
［２１］前記糖転移酵素が、ＧａｌＴガラクトシルトランスフェラーゼ又はＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼから選択される、上記［１９］に記載の方法。
［２２］前記修飾抗体又はその抗原結合フラグメントが、抗体又はその抗原結合フラグメントをアミダーゼで脱グリコシル化して、脱グリコシル化抗体又はその抗原結合フラグメントを得ること、及び前記脱グリコシル化抗体又はその抗原結合フラグメントを、微生物トランスグルタミナーゼの存在下でアジドアミンと反応させることによって、前記修飾ポリペプチドを得ること、を含む方法によって得られる、上記［１６］に記載の方法。
［２３］前記アジドアミンが、３－アジドプロピルアミン、６－アジドヘキシルアミン、Ｏ－（２－アミノエチル）－Ｏ’－（２－アジドエチル）テトラエチレングリコール、Ｏ－（２－アミノエチル）－Ｏ’－（２－アジドエチル）ペンタエチレングリコール、及びＯ－（２－アミノエチル）－Ｏ’－（２－アジドエチル）トリエチレングリコールから選択される、上記［２２］に記載の方法。
［２４］前記キレート化部分が、式（ＩＩ）：

の構造又は式（ＩＩＩ）：

の構造を含む、上記［１６］に記載の方法。
［２５］２つの放射性金属イオンでポリペプチドを二重に標識する方法であって、
ａ．第１のクリック反応パートナー及び第２のクリック反応パートナーに共有結合した前記ポリペプチドを含む修飾ポリペプチドを提供することと
ｂ．キレート化部分に会合した前記第１の放射性金属イオンを含む第１の放射性錯体を提供することと、ここで、前記キレート化部分が、第３のクリック反応パートナーに共有結合したキレート剤を含み、
ｃ．キレート化部分に会合した前記第２の放射性金属イオンを含む第２の放射性錯体を提供することと、ここで前記キレート化部分が、第４のクリック反応パートナーに共有結合したキレート剤を含み、
ｄ．前記第１のクリック反応パートナーが前記第３のクリック反応パートナーと反応し、前記第２のクリック反応パートナーが前記第４のクリック反応パートナーと反応することによって、前記ポリペプチドを前記第１及び第２の放射性金属イオンで標識化することを可能にする条件下で、前記修飾ポリペプチドを前記放射性錯体と接触させることと、を含む、方法。
［２６］前記第１及び第２のクリック反応パートナーの一方がアルキン基を含み、前記第１及び第２のクリック反応パートナーの他方がアジドを含み、前記第３及び第４のクリック反応パートナーの一方がアルケン基を含み、前記第３及び第４のクリック反応パートナーの他方がジエンを含み、前記第１又は第２の放射性金属イオンが診断エミッタであり、前記他方が治療エミッタである、又は前記第１及び第２の放射性金属イオンの両方が治療エミッタである、上記［２５］に記載の方法。
［２７］上記［１］又は［１６］に記載の方法によって調製された放射性標識ポリペプチドと、薬学的に許容可能な担体とを含む、医薬組成物。
［２８］腫瘍性の疾患又は障害の治療を必要とする対象における、腫瘍性の疾患又は障害の治療方法であって、前記対象に、上記［２７］に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
［２９］上記［１］又は［１６］に記載の方法によって調製された放射性標識抗体と、薬学的に許容可能な担体と、を含み、前記放射性標識抗体の免疫学的特性が保存されている、セラノスティック剤。
［３０］上記［１］に記載の方法によって調製されるセラノスティック剤であって、
式（ＶＩＩＩ）：

又は式（ＩＸ）：

の構造を有する、セラノスティック剤。
［３１］前記放射性金属イオンが、 ^３２Ｐ、 ^４７Ｓｃ、 ^６７Ｃｕ、 ^７７Ａｓ、 ^８９Ｓｒ、 ^９０Ｙ、 ^９９Ｔｃ、 ^１０５Ｒｈ、 ^１０９Ｐｄ、 ^１１１Ａｇ、 ^１３１Ｉ、 ^１５３Ｓｍ、 ^１５９Ｇｄ、 ^１６５Ｄｙ、 ^１６６Ｈｏ、 ^１６９Ｅｒ、 ^１７７Ｌｕ、 ^１８６Ｒｅ、 ^１８８Ｒｅ、 ^１９４Ｉｒ、 ^１９８Ａｕ、 ^１９９Ａｕ、 ^２１１Ａｔ、 ^２１２Ｐｂ、 ^２１２Ｂｉ、 ^２１３Ｂｉ、 ^２２３Ｒａ、 ^２２５Ａｃ、 ^２５５Ｆｍ、 ^２２７Ｔｈ、 ^６２Ｃｕ、 ^６４Ｃｕ、 ^６７Ｇａ、 ^６８Ｇａ、 ^８６Ｙ、 ^８９Ｚｒ、又は ^１１１Ｉｎから選択される、上記［２９］に記載のセラノスティック剤。
［３２］組み合わせであって、
ａ．第１のクリック反応パートナーに共有結合したポリペプチドを含む修飾ポリペプチドと、
ｂ．キレート化部分に会合した放射性金属イオンを含む放射性錯体であって、前記キレート化部分が、第２のクリック反応パートナーに共有結合したキレート剤を含む、放射性錯体と、を含み、
前記組み合わせが、前記ポリペプチドを前記放射性金属イオンで標識するために使用される、組み合わせ。

Claims

放射性金属イオンでポリペプチドを標識する方法であって、
ａ．第１のクリック反応パートナーに共有結合した前記ポリペプチドを含む修飾ポリペ
プチドを提供することと、
ｂ．キレート化部分に会合した前記放射性金属イオンを含む放射性錯体を提供すること
と、ここで、前記キレート化部分が、第２のクリック反応パートナーに共有結合したキレ
ート剤を含み、
ｃ．前記第１のクリック反応パートナーが前記第２のクリック反応パートナーと反応す
ることによって、前記ポリペプチドを前記放射性金属イオンで標識化することを可能にす
る条件下で、前記修飾ポリペプチドを前記放射性錯体と接触させることと、を含む、方法
。
前記第１及び第２のクリック反応パートナーの一方がアルキン基を含み、前記クリック
反応パートナーの他方がアジドを含み、又は前記第１及び第２のクリック反応パートナー
の一方がアルケン基を含み、前記クリック反応パートナーの他方がジエンを含む、請求項
１に記載の方法。
前記ポリペプチドが、抗体又はその抗原結合フラグメントである、請求項１又は２に記
載の方法。
前記抗体が抗ＰＳＭＡモノクローナル抗体である、請求項３に記載の方法。
前記放射性金属イオンが、^２２５Ａｃ、^１１１Ｉｎ、又は^８９Ｚｒである、請求項１～
４のいずれか一項に記載の方法。
側鎖上の求電子物質を前記第１のクリック反応パートナーに共有結合したスルフヒドリ
ル基と反応させて、前記修飾ポリペプチドを得ることを更に含む、請求項１～４のいずれ
か一項に記載の方法。
前記修飾ポリペプチドが、前記第１のクリック反応パートナーの部位特異的組み込みに
よって得られる修飾抗体又はその抗原結合フラグメントである、請求項１～５いずれか一
項に記載の方法。
前記修飾抗体又はその抗原結合フラグメントが、前記抗体のＦｃ－グリコシル化部位の
コアＧｌｃＮａｃ残基間のβ－１，４結合に特異的な細菌エンドグリコシダーゼで抗体又
はその抗原結合フラグメントをトリミングして、トリミングされた抗体又はその抗原結合
フラグメントを得ること、及びＧａｌＴガラクトシルトランスフェラーゼ又はＧａｌＮａ
ｃトランスフェラーゼ等の糖転移酵素の存在下で、前記トリミングされた抗体又はその抗
原結合フラグメントをアジド標識糖と反応させることにより、前記修飾抗体又はその抗原
結合フラグメントを得ること、を含む方法によって得られる、請求項７に記載の方法。
前記アジド標識糖が、ＵＤＰ－Ｎ－アジドアセチルガラクトサミン（ＵＤＰ－ＧａｌＮ
ａｚ）又はＵＤＰ－６－アジド６－デオキシＧａｌＮＡｃである、請求項８に記載の方法
。
前記糖転移酵素が、ＧａｌＴガラクトシルトランスフェラーゼ又はＧａｌＮＡｃトラン
スフェラーゼである、請求項８に記載の方法。
前記修飾抗体又はその抗原結合フラグメントが、抗体又はその抗原結合フラグメントを
アミダーゼで脱グリコシル化して、脱グリコシル化抗体又はその抗原結合フラグメントを
得ること、及び前記脱グリコシル化抗体又はその抗原結合フラグメントを、微生物トラン
スグルタミナーゼの存在下でアジドアミンと反応させることによって、前記修飾ポリペプ
チドを得ること、を含む方法によって得られる、請求項７に記載の方法。
前記アジドアミンが、３－アジドプロピルアミン、６－アジドヘキシルアミン、Ｏ－（
２－アミノエチル）－Ｏ’－（２－アジドエチル）テトラエチレングリコール、Ｏ－（２
－アミノエチル）－Ｏ’－（２－アジドエチル）ペンタエチレングリコール、及びＯ－（
２－アミノエチル）－Ｏ’－（２－アジドエチル）トリエチレングリコールから選択され
る、請求項１１に記載の方法。
前記修飾ポリペプチドが、直接又はリンカーを介して、アジド、テトラジン、又はテト
ラゾール基に共有結合した前記ポリペプチドを含む、請求項１に記載の方法。
前記キレート剤が、式（Ｉ）：

（式中、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３及びＲ_４は、それぞれ独立してＣＨＱＣＯ_２Ｘであり、
Ｑは、独立して、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル又は（Ｃ_１～Ｃ_２アルキル）フェニルであ
り、
Ｘは、独立して、水素、ベンジル、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルであり、
Ｚは、（ＣＨ２）_ｎＹであり、
ｎは、１～１０であり、
Ｙは、前記第２のクリック反応パートナーに共有結合した求電子性又は求核性部分で
あり、
或いは、Ｚは水素である；並びに
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３及びＲ_４は、それぞれ独立してＣＨＱＣＯ_２Ｘであり、
Ｑは、独立して、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル又は（Ｃ_１～Ｃ_２アルキル）フェニルで
あり、
Ｘは、独立して、水素、ベンジル、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、又は前記第２のクリック反
応パートナーに共有結合した求電子性又は求核性部分であり、
或いは、前記キレート剤が、開鎖配位子を含む）
の構造を有するマクロサイクルを含む、請求項１に記載の方法。
前記キレート化部分が、式（ＩＩ）：

の構造、又は式（ＩＩＩ）：

の構造を含む、請求項１に記載の方法。
^２２５Ａ_Ｃ、^１１１Ｉｎ、又は^８９Ｚｒで抗体又はその抗原結合フラグメントを標識す
る方法であって、
ａ．アジド、テトラジン、又はテトラゾール基に共有結合した抗体又はその抗原結合フ
ラグメントを含む修飾抗体又はその抗原結合フラグメントを提供することと、
ｂ．キレート化部分に会合した^２２５Ａ_Ｃ、^１１１Ｉｎ又は^８９Ｚｒを含む放射性錯体
を提供することと、ここで、前記キレート化部分が、アルキン又はアルケン基に共有結合
したキレート剤を含み、並びに
ｃ．前記アジド、テトラジン、又はテトラゾール基が前記アルキン又はアルケン基と反
応することによって、前記抗体又はその抗原結合フラグメントを^２２５Ａ_Ｃ、^１１１Ｉｎ
、又は^８９Ｚｒで標識化することを可能にする条件下で、前記修飾抗体又はその抗原結合
フラグメントを放射性錯体と接触させること、を含み、
前記キレート剤が、式（Ｉ）：

（式中、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３及びＲ_４は、それぞれ独立してＣＨＱＣＯ_２Ｘであり、
Ｑは、独立して、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル又は（Ｃ_１～Ｃ_２アルキル）フェニルであ
り、
Ｘは、独立して、水素、ベンジル、Ｃ_１～Ｃ_４アルキルであり、
Ｚは、（ＣＨ２）_ｎＹであり、
ｎは、１～１０であり、
Ｙは、前記アルキン基に共有結合した求電子性又は求核性部分であり、
或いは、Ｚは水素である；並びに
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３及びＲ_４は、それぞれ独立してＣＨＱＣＯ_２Ｘであり、
Ｑは、独立して、水素、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル又は（Ｃ_１～Ｃ_２アルキル）フェニル
であり、
Ｘは、独立して、水素、ベンジル、Ｃ_１～Ｃ_４アルキル、又は前記アルキン基に共
有結合した求電子性又は求核性部分であり、
或いは、前記キレート剤は、開鎖配位子を含む）
の構造を含む、方法。
側鎖上の求電子物質を前記アジド、テトラジン又はテトラゾール基に共有結合したスル
フヒドリル基と反応させて、前記修飾抗体又はその抗原結合フラグメントを得ることを更
に含む、請求項１６に記載の方法。
前記修飾抗体又はその抗原結合フラグメントが、前記第１のクリック反応パートナーの
部位特異的組み込みによって得られる、請求項１６に記載の方法。
前記修飾抗体又はその抗原結合フラグメントが、前記抗体のＦｃ－グリコシル化部位の
コアＧｌｃＮａｃ残基間のβ－１，４結合に特異的な細菌エンドグリコシダーゼで抗体又
はその抗原結合フラグメントをトリミングして、トリミングされた抗体又はその抗原結合
フラグメントを得ること、及び糖転移酵素の存在下で、前記トリミングされた抗体又はそ
の抗原結合フラグメントをアジド標識糖と反応させることにより、修飾抗体又はその抗原
結合フラグメントを得ること、を含む方法によって得られる、請求項１８に記載の方法。
前記アジド標識糖が、ＵＤＰ－Ｎ－アジドアセチルガラクトサミン（ＵＤＰ－ＧａｌＮ
ａｚ）又はＵＤＰ－６－アジド６－デオキシＧａｌＮＡｃである、請求項１９に記載の方
法。
前記糖転移酵素が、ＧａｌＴガラクトシルトランスフェラーゼ又はＧａｌＮＡｃトラン
スフェラーゼから選択される、請求項１９に記載の方法。
前記修飾抗体又はその抗原結合フラグメントが、抗体又はその抗原結合フラグメントを
アミダーゼで脱グリコシル化して、脱グリコシル化抗体又はその抗原結合フラグメントを
得ること、及び前記脱グリコシル化抗体又はその抗原結合フラグメントを、微生物トラン
スグルタミナーゼの存在下でアジドアミンと反応させることによって、前記修飾ポリペプ
チドを得ること、を含む方法によって得られる、請求項１６に記載の方法。
前記アジドアミンが、３－アジドプロピルアミン、６－アジドヘキシルアミン、Ｏ－（
２－アミノエチル）－Ｏ’－（２－アジドエチル）テトラエチレングリコール、Ｏ－（２
－アミノエチル）－Ｏ’－（２－アジドエチル）ペンタエチレングリコール、及びＯ－（
２－アミノエチル）－Ｏ’－（２－アジドエチル）トリエチレングリコールから選択され
る、請求項２２に記載の方法。
前記キレート化部分が、式（ＩＩ）：

の構造又は式（ＩＩＩ）：

の構造を含む、請求項１６に記載の方法。
２つの放射性金属イオンでポリペプチドを二重に標識する方法であって、
ａ．第１のクリック反応パートナー及び第２のクリック反応パートナーに共有結合した
前記ポリペプチドを含む修飾ポリペプチドを提供することと
ｂ．キレート化部分に会合した前記第１の放射性金属イオンを含む第１の放射性錯体を
提供することと、ここで、前記キレート化部分が、第３のクリック反応パートナーに共有
結合したキレート剤を含み、
ｃ．キレート化部分に会合した前記第２の放射性金属イオンを含む第２の放射性錯体を
提供することと、ここで前記キレート化部分が、第４のクリック反応パートナーに共有結
合したキレート剤を含み、
ｄ．前記第１のクリック反応パートナーが前記第３のクリック反応パートナーと反応し
、前記第２のクリック反応パートナーが前記第４のクリック反応パートナーと反応するこ
とによって、前記ポリペプチドを前記第１及び第２の放射性金属イオンで標識化すること
を可能にする条件下で、前記修飾ポリペプチドを前記放射性錯体と接触させることと、を
含む、方法。
前記第１及び第２のクリック反応パートナーの一方がアルキン基を含み、前記第１及び
第２のクリック反応パートナーの他方がアジドを含み、前記第３及び第４のクリック反応
パートナーの一方がアルケン基を含み、前記第３及び第４のクリック反応パートナーの他
方がジエンを含み、前記第１又は第２の放射性金属イオンが診断エミッタであり、前記他
方が治療エミッタである、又は前記第１及び第２の放射性金属イオンの両方が治療エミッ
タである、請求項２５に記載の方法。
請求項１又は１６に記載の方法によって調製された放射性標識ポリペプチドと、薬学的
に許容可能な担体とを含む、医薬組成物。
腫瘍性の疾患又は障害の治療を必要とする対象における、腫瘍性の疾患又は障害の治療
方法であって、前記対象に、請求項２７に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法
。
請求項１又は１６に記載の方法によって調製された放射性標識抗体と、薬学的に許容可
能な担体と、を含み、前記放射性標識抗体の免疫学的特性が保存されている、セラノステ
ィック剤。
請求項１に記載の方法によって調製されるセラノスティック剤であって、
式（ＶＩＩＩ）：

又は式（ＩＸ）：

の構造を有する、セラノスティック剤。
前記放射性金属イオンが、^３２Ｐ、^４７Ｓｃ、^６７Ｃｕ、^７７Ａｓ、^８９Ｓｒ、^９０Ｙ
、^９９Ｔｃ、^１０５Ｒｈ、^１０９Ｐｄ、^１１１Ａｇ、^１３１Ｉ、^１５３Ｓｍ、^１５９Ｇｄ
、^１６５Ｄｙ、^１６６Ｈｏ、^１６９Ｅｒ、^１７７Ｌｕ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^１９４
Ｉｒ、^１９８Ａｕ、^１９９Ａｕ、^２１１Ａｔ、^２１２Ｐｂ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、^２
^２３Ｒａ、^２２５Ａｃ、^２５５Ｆｍ、^２２７Ｔｈ、^６２Ｃｕ、^６４Ｃｕ、^６７Ｇａ、^６８
Ｇａ、^８６Ｙ、^８９Ｚｒ、又は^１１１Ｉｎから選択される、請求項２９に記載のセラノス
ティック剤。
組み合わせであって、
ａ．第１のクリック反応パートナーに共有結合したポリペプチドを含む修飾ポリペプチ
ドと、
ｂ．キレート化部分に会合した放射性金属イオンを含む放射性錯体であって、前記キレ
ート化部分が、第２のクリック反応パートナーに共有結合したキレート剤を含む、放射性
錯体と、を含み、
前記組み合わせが、前記ポリペプチドを前記放射性金属イオンで標識するために使用さ
れる、組み合わせ。