JP2023004912A - 抗体誘導性ポリペプチド及びワクチン - Google Patents

Abstract

【課題】対象におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の治療又は予防に有用な抗体誘導性ポリペプチド、及び当該抗体誘導性ポリペプチドを含むワクチンを提供する。【解決手段】以下の（ａ）～（ｆ）に記載のポリペプチド群から選択され、かつ、抗体誘導性を有する、ポリペプチド：（ａ）配列番号１の３３６～３６１位、４０６～４３２位、又は４４６～４８０位の部位内の連続する７個以上のアミノ酸からなるポリペプチド；（ｂ）前記（ａ）に記載のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列と、８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、ポリペプチド；（ｃ）前記（ａ）又は（ｂ）に記載のポリペプチドを部分配列として含み、配列番号１の前記部分配列以外の部位を含まない、ポリペプチド；（ｄ）配列番号１の１１４４～１１６１位又は１１７４～１２０２位の部位内の連続する１０個以上のアミノ酸からなるポリペプチド；（ｅ）前記（ｄ）に記載のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列と、８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、ポリペプチド；及び（ｆ）前記（ｄ）又は（ｅ）に記載のポリペプチドを部分配列として含み、配列番号１の前記部分配列以外の部位を含まない、ポリペプチド。【選択図】なし

Description

本発明は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の治療又は予防のための、抗体誘導性ペプチド及びワクチンに関する。

コロナウイルスは、ニドウイルス目コロナウイルス科オルソコロナウイルス亜科よりなるＲＮＡウイルスの一群である。コロナウイルスは、ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡゲノムと、らせん対称のヌクレオカプシドを持つエンベロープウイルスであり、カプシド表面からこん棒型の突起が突き出た特徴的な形状を有する。コロナウイルスは、ＲＮＡウイルスの中でも大型のウイルスであり、そのゲノムサイズは約２６～３２キロベースである。

コロナウイルスは、哺乳類、鳥類等に感染性疾患を引き起こすＲＮＡウイルスとして知られ、特に、軽度～重篤の気道感染症を引き起こすことが知られる。ヒトにおいては、コロナウイルスは、軽症の場合は一般的な風邪の原因ウイルス（風邪の原因ウイルスは、コロナウイルス以外にも多数知られる）となるが、ＳＡＲＳ、ＭＥＲＳ等の一部のコロナウイルスは、より致命的な症状を引き起こすことが知られる。特に、２０１９年に中国で発見された新型コロナウイルスであるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、短期間に全世界に蔓延し、有効な治療薬、ワクチンが存在しなかったという背景もあり、多数の感染者及び死者を出すこととなった。現在も、その数は増え続けており、早急にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のワクチン及び治療薬の開発と普及が達成されることが望まれている。

ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２には、そのウイルス表面に、宿主細胞の受容体に結合するスパイクタンパク質が存在する。このスパイクタンパク質は、三量体構造を有する糖タンパク質であり、各ポリペプチド鎖は、Ｎ末端ドメイン（ＮＴＤ）、受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）及びＳ２ドメインから構成される。受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）には、「ダウン型構造」と「アップ型構造」が存在し、アップ型構造のＲＢＤが宿主細胞表面のアンジオテンシン変異酵素ＩＩ（ＡＣＥ２）受容体に結合することが明らかにされている（非特許文献１）。一方、コロナウイルスのＳ２ドメインは、感染の際に、ウイルスと宿主細胞との膜融合に関与することが知られている（非特許文献２）。

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を予防するためのワクチンとして、現在、スパイクタンパク質（Ｓ抗原）の大部分をコードするｍＲＮＡを脂質ナノ粒子等のキャリア分子に封入したｍＲＮＡワクチンに加えて、Ｓ抗原遺伝子配列を導入したアデノウイルス発現ベクター、発現ＤＮＡワクチン、組換え蛋白等が開発されている。

D. Wrapp et al., Science, Vol. 367, pp. 1260-1263 (2020) A. C. Wallis et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 114, pp. 11157-11162 (2017)

ｍＲＮＡワクチンは、感染性がない、生産が安価で比較的簡便である、等の利点を有するが、ＲＮＡ分子の安定性が低い、副反応が強く表れやすい、生体内での翻訳及び発現効率に個体差が生じやすい、等の課題も存在する。

一方、Ｓ抗原全体を用いるワクチンでは、潜在的に抗体依存性感染増強（ＡＤＥ；ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ）を惹起する抗体種を生成するリスクがある。実際に、高齢者の重症ＣＯＶＩＤ－１９患者血清中において、一定割合でＡＤＥを誘導する抗体の存在が報告されている。最近、ＣＯＶＩＤ－１９患者血清を用いて、このＡＤＥ惹起能を示す抗体が認識するエピトープが同定され、ワクチンからこれらのエピトープを除去することでＡＤＥリスクが避けられる可能性が見えてきた。

本発明は、対象におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の治療又は予防に有用な抗体誘導性ポリペプチド、及び当該ポリペプチドを含むワクチンを提供することを目的とする。

本発明者らは、Ｓ抗原、特にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染責任部位であるＲＢＤ部位全体及びＳ２ドメインＨＲ１／２領域全体を網羅的に検討することにより、新規な中和抗体誘導ポリペプチド（中和抗体エピトープ）を複数見出し、これらのポリペプチドがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染を治療又は予防するための抗体誘導に有用であることを見出した。また、ＣＯＶＩＤ－１９患者血清が共通して認識する新規な抗体エピトープを複数見出し、これらのエピトープ配列を有するポリペプチドが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染を治療又は予防するための抗体誘導に有用であることを見出し、本発明を完成させるに至った。

すなわち、本明細書によれば、以下の発明が提供される。
（１）以下の（ａ）～（ｆ）に記載のポリペプチド群から選択され、かつ、抗体誘導性を有する、ポリペプチド：
（ａ）配列番号１の３３６～３６１位、４０６～４３２位、又は４４６～４８０位の部位内の連続する７個以上のアミノ酸からなるポリペプチド；
（ｂ）前記（ａ）に記載のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列と、８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、ポリペプチド；
（ｃ）前記（ａ）又は（ｂ）に記載のポリペプチドを部分配列として含み、配列番号１の前記部分配列以外の部位を含まない、ポリペプチド；
（ｄ）配列番号１の１１４４～１１６１位又は１１７４～１２０２位の部位内の連続する１０個以上のアミノ酸からなるポリペプチド；
（ｅ）前記（ｄ）に記載のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列と、８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、ポリペプチド；及び
（ｆ）前記（ｄ）又は（ｅ）に記載のポリペプチドを部分配列として含み、配列番号１の前記部分配列以外の部位を含まない、ポリペプチド。
（２）以下の（ａ）～（ｃ）に記載のポリペプチド群から選択される、（１）に記載のポリペプチド：
（ａ）配列番号１の３３６～３６１位、４０６～４３２位、又は４４６～４８０位の部位内の連続する７個以上のアミノ酸からなるポリペプチド；
（ｂ）前記（ａ）に記載のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列と、８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、ポリペプチド；及び
（ｃ）前記（ａ）又は（ｂ）に記載のポリペプチドを部分配列として含み、配列番号１の前記部分配列以外の部位を含まない、ポリペプチド。
（３）以下の（ｄ）～（ｆ）に記載のポリペプチド群から選択される、（１）に記載のポリペプチド：
（ｄ）配列番号１の１１４４～１１６１位又は１１７４～１２０２位の部位内の連続する１０個以上のアミノ酸からなるポリペプチド；
（ｅ）前記（ｄ）に記載のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列と、８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、ポリペプチド；及び
（ｆ）前記（ｄ）又は（ｅ）に記載のポリペプチドを部分配列として含み、配列番号１の前記部分配列以外の部位を含まない、ポリペプチド。
（４）（１）に記載のポリペプチドのうち少なくとも１種類のポリペプチドを含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の治療又は予防のためのワクチン。
（５）（２）に記載のポリペプチドのうち少なくとも１種類のポリペプチド、及び、（３）に記載のポリペプチドのうち少なくとも１種類のポリペプチドを含む、（４）に記載のワクチン。
（６）ポリペプチドがキャリア分子と結合したコンジュゲートとして含まれる、（４）又は（５）に記載のワクチン。
（７）複数種のポリペプチドが同一キャリア分子上に結合したコンジュゲートとして含まれる、（４）～（６）のいずれかに記載のワクチン。
（８）コンジュゲートが、ポリペプチドがキャリア分子上で架橋した環状構造を有する、（６）又は（７）に記載のワクチン。
（９）粘膜ワクチンである、（７）又は（８）に記載のワクチン。
（１０）舌下ワクチンである、（９）に記載のワクチン。
（１１）（１）に記載のポリペプチドのうち少なくとも１種類のポリペプチドを含む、抗体誘導組成物。
（１２）配列番号４０～４４のいずれかで示されるアミノ酸配列の連続する７個以上のアミノ酸からなるポリペプチドである、（１）に記載のポリペプチド。
（１３）（４）～（１０）のいずれかに記載のワクチンを対象に投与する工程を含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染を治療又は予防する方法。

本発明によれば、対象におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染予防に有用な抗体誘導性ポリペプチド、及び当該ポリペプチドを含むワクチンを提供することが可能である。

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＲＢＤの部位の各種ポリペプチドを感作したマウスの血清ＩｇＧのＲＢＤタンパク質認識能を示す棒グラフである。縦軸は、各種血清ＩｇＧのＲＢＤタンパク質への結合性を示す。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＲＢＤの部位の＃３、＃７、＃１１のポリペプチドを感作したマウスの血清による、ＡＣＥ２－ＲＢＤ結合阻害能を示す棒グラフである。縦軸はＡＣＥ２のＲＢＤへの結合性を示す。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＲＢＤの部位の＃１、＃５、＃１１のポリペプチドを感作したマウスの血清、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の回復患者の血清による、ＡＣＥ２－ＲＢＤ結合阻害能を示す棒グラフである。縦軸はＡＣＥ２のＲＢＤへの結合性、横軸は、各種血清の希釈率を示す。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳ２ドメインの部位の各種ポリペプチドを感作したマウスの血清ＩｇＧによる、Ｓ２ドメインタンパク質認識能を示す棒グラフである。縦軸は、各種血清ＩｇＧのＳ２ドメインタンパク質への結合性を示す。 混合コンジュゲートポリペプチド（＃７、＃１１、＃１１１及び＃１１５）を感作したマウスにおける、追加の繰り返しの舌下感作（ＳＬＩＴ）によるＩｇＧ抗体量の変化を示す棒グラフである。縦軸は各抗体のペプチド認識能を示す。（Ａ）は、高用量ＳＬＩＴ群、低用量ＳＬＩＴ群及びコントロール群のマウス血清中のＩｇＧの、＃７及び＃１１の混合コンジュゲートへの反応性を示す。（Ｂ）は、高用量ＳＬＩＴ群、低用量ＳＬＩＴ群及びコントロール群のマウス血清中のＩｇＧの、＃１１１のコンジュゲートへの反応性を示す。（Ｃ）は、高用量ＳＬＩＴ群、低用量ＳＬＩＴ群及びコントロール群のマウス血清中のＩｇＧの、＃１１５のコンジュゲートへの反応性を示す。 混合コンジュゲートポリペプチド（＃７、＃１１、＃１１１及び＃１１５）を感作したマウスにおける、追加の繰り返しの舌下感作（ＳＬＩＴ）によるＩｇＡ抗体量の変化を示す棒グラフである。縦軸は各抗体のペプチド認識能を示す。（Ａ）は、高用量ＳＬＩＴ群、低用量ＳＬＩＴ群及びコントロール群のマウス血清中のＩｇＡの、＃７及び＃１１の混合コンジュゲートへの反応性を示す。（Ｂ）は、高用量ＳＬＩＴ群、低用量ＳＬＩＴ群及びコントロール群のマウス血清中のＩｇＡの、＃１１１のコンジュゲートへの反応性を示す。（Ｃ）は、高用量ＳＬＩＴ群、低用量ＳＬＩＴ群及びコントロール群のマウス血清中のＩｇＡの、＃１１５のコンジュゲートへの反応性を示す。 ＃７、＃１０及び＃１１を提示した抗原をそれぞれ感作したマウスの血清の、変異型ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＲＢＤエピトープ提示抗原への反応性を示すグラフである。（Ａ）は、＃７認識血清の野生型、Ｋ４１７Ｎ変異ＲＢＤエピトープへの反応性を示す。（Ｂ）は、＃１０認識血清の野生型、Ｌ４５２Ｒ変異ＲＢＤエピトープへの反応性を示す。（Ｃ）は＃１１認識血清の野生型、Ｔ４７８Ｋ変異ＲＢＤエピトープへの反応性を示す。 各種コンジュゲートペプチドを感作したマウスより採取した抗血清およびそれら抗血清組合せの、擬似型レンチウイルスのＡＣＥ２発現ＣＲＦＫ細胞への感染防除能を示すグラフである。

［１］定義
本明細書において、「ポリペプチド」とは、複数のアミノ酸がペプチド結合することによって形成される分子をいう。構成するアミノ酸数が多いポリペプチド分子のみならず、アミノ酸数が少ない低分子量の分子（オリゴペプチド）も本発明のポリペプチドに包含される。

本明細書において、「抗体誘導性」とは、対象におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染に対する防除機能としての液性免疫を誘導し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する抗体を産生させる特性を指す。特に、対象におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する中和抗体の産生を誘導する特性を指す。

本明細書において、「ワクチン」とは、対象における細菌、ウイルス、アレルゲン等の病原の侵入による疾患又は体調不良の治療又は予防を目的として、対象の病原に対する免疫（抗体産生能）を誘導するために投与される医薬組成物を指す。

本明細書において「対象」とは、哺乳類及び鳥類を指す。鳥類は、脊索動物門脊椎動物亜門鳥綱に属する動物を指し、例えば、ニワトリ、アヒル、ウズラ、ガチョウ、カモ、シチメンチョウ、セキセイインコ、オウム、オシドリ、ハクチョウ等が挙げられる。哺乳類は、ヒト及びヒト以外を包含する、脊索動物門脊椎動物亜門哺乳網に属する動物を指し、例えば、ヒト、チンパンジーを含む霊長類、イヌ、ネコなどのペット動物、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ヤギなどの家畜動物、マウス、ラットなどの齧歯類、動物園で飼育される哺乳類動物などが含まれる。本明細書における対象は、好ましくは、ヒトである。

本明細書において、アミノ酸配列の「配列同一性」は、ＢＬＡＳＴ（https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）等のタンパク質検索システムを用いて、ギャップを導入して、又はギャップを導入しないで、決定することができる値をいう。また、本明細書において「数個」における「数」とは、２～１０の整数、好ましくは２～６の整数、２～４の整数、２若しくは３の整数、又は２の整数を表す。

本明細書において、「アジュバント」とは、ワクチン内の抗体誘導性物質と共に対象に投与されることで、その抗体誘導効果を高めることが可能な物質をいう。

本明細書において、「配合比」は、特に説明のない限り、いずれも重量比で示される。また、「％」で示される濃度は、特に説明のない限り、いずれも重量％を示す。

［２］抗体誘導性ポリペプチド
本発明のポリペプチドは、以下の（ａ）～（ｆ）に記載のポリペプチド群から選択され、かつ、抗体誘導性を有する、ポリペプチドである。
（ａ）配列番号１の３３６～３６１位、４０６～４３２位、又は４４６～４８０位の部位内の連続する７個以上のアミノ酸からなるポリペプチド；
（ｂ）前記（ａ）に記載のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列と、８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、ポリペプチド；
（ｃ）前記（ａ）又は（ｂ）に記載のポリペプチドを部分配列として含み、配列番号１の前記部分配列以外の部位を含まない、ポリペプチド；
（ｄ）配列番号１の１１４４～１１６１位又は１１７４～１２０２位の部位内の連続する７個以上のアミノ酸からなるポリペプチド；
（ｅ）前記（ｄ）に記載のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列と、８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、ポリペプチド；及び
（ｆ）前記（ｄ）又は（ｅ）に記載のポリペプチドを部分配列として含み、配列番号１の前記部分配列以外の部位を含まない、ポリペプチド。

本発明のポリペプチドは、上記の構成を有することで、抗体誘導性を有し、ペプチドワクチン、コンジュゲートワクチン等として対象に投与することでＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染予防に有用である、という効果を有する。

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の宿主細胞への感染に関与するスパイクタンパク質は、配列番号１に示すアミノ酸配列を有することが知られる。特に、宿主細胞への結合に関与する受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）、宿主細胞との膜融合に関与するＳ２ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染責任部位である。ＲＢＤは、配列番号２（配列番号１のアミノ酸配列の３１６～５１９位に相当）のアミノ酸配列を有することが知られる。Ｓ２ドメインには、ＨＲ１領域とＨＲ２領域とが存在し、それぞれ配列番号３（配列番号１のアミノ酸配列の９１０～１０３２位に相当）、配列番号４（配列番号１のアミノ酸配列の１１４１～１２２３位に相当）のアミノ酸配列を有することが知られる。

本発明者らは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＲＢＤ及びＳ２ドメインのアミノ酸配列を構成するポリペプチドのうち、特定のポリペプチドについて、マウス及び／又はヒトにおいて高い抗体誘導性を有することを見出した。前記の特定のポリペプチドは、以下の配列番号５～９に示す配列である。
CPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNC（配列番号５：３３６－３６１）
EVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGC（配列番号６：４０６－４３２）
GGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPC（配列番号７：４４６－４８０）
ELDSFKEELDKYFKNHTS（配列番号８：１１４４－１１６１）
ASVVNIQKEIDRLNEVAKNLNESLIDLQE（配列番号９：１１７４－１２０２）

本発明のポリペプチドは、配列番号５～９のアミノ酸配列を有するポリペプチドをいずれも包含するが、これらに限定されず、配列番号５～９のアミノ酸配列と８０％以上、好ましくは８５％以上又は９０％以上の配列相同性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドも包含する。あるいは、配列番号５～９のアミノ酸配列を有するポリペプチド中の１個又は数個のアミノ酸が改変されたポリペプチドも包含する。一般に、あるポリペプチドの中の２０％未満、特に１５％未満又は１０％未満のアミノ酸の改変、あるいは、１個、又は数個のアミノ酸の改変は、元のポリペプチドの機能に影響を及ぼさないと考えられ、場合によっては元のポリペプチドの所望の機能を強化することさえあると考えられている。実際、元のアミノ酸配列と比較して、１個、又は数個のアミノ酸残基が改変された（すなわち、置換、欠失、付加及び／又は挿入された）アミノ酸配列で構成される改変ポリペプチドは、元のポリペプチドの生物活性を保持することが知られている（Mark et al.,1984,Proc Natl Acad Sci USA,81:5662-5666, Zoller and Smith,1982,Nucleic Acids Res.10:6487-6500, Dalbadie-McFarland et al.,1982,Proc Natl Acad Sci USA.79:6409-6413）。したがって、上記（ｂ）及び（ｅ）のポリペプチドも抗体誘導性を発揮し得る。

また、本発明のポリペプチドは、配列番号５～９内の連続するアミノ酸配列を有するポリペプチド（上記改変ポリペプチドを包含する）のみでなく、これを一部分として含み、配列番号１の他の部位を含まない、ポリペプチド、すなわち、上記（ｃ）及び（ｆ）のポリペプチドも包含する。

なお、天然のタンパク質を構成する２０種類のアミノ酸は、低極性側鎖を有する中性アミノ酸（Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ａｌａ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ）、親水性側鎖を有する中性アミノ酸（Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｔｙｒ、Ｃｙｓ）、酸性アミノ酸（Ａｓｐ、Ｇｌｕ）、塩基性アミノ酸（Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ）、芳香族アミノ酸（Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ）のように類似の性質を有するものにグループ分けでき、これらの間での置換であればポリペプチドの性質が変化しないことが多いことが知られている。したがって、配列番号５～９のアミノ酸配列中のアミノ酸残基を置換する場合には、これらの各グループの間で置換することにより、抗体誘導性を維持できる可能性が高くなる。

ワクチン開発の重大な課題として、抗体依存性感染増強（Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎt：ＡＤＥ）があり、抗体誘導性の高い抗原については、ＡＤＥの問題を解消することが重要な要件とされる。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＡＤＥエピトープは、表１に示す部位であることが最近明らかにされた（doi.org/10.1101/2020.10.08.20209114を参照のこと）。本発明のポリペプチドは、下記のいずれのＡＤＥエピトープにも該当しないことから、高い抗体誘導性と安全性とを備えたポリペプチドであることが確認された。

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２には、Ｎ５０１、Ｅ４８４、Ｌ４５２等の変異株が報告されているが、本発明のポリペプチドは、これらの主要な変異株に対しても感染阻害能を有する。

本発明のポリペプチドの調製方法は、特に限定されず、本技術分野で使用される公知のポリペプチド調製のための手法、例えば、Ｆｍｏｃ固相合成法、Ｂｏｃ固相合成法等のペプチド固相合成法、組換え大腸菌による生成等をいずれも使用することができる。

［２－１］第１態様のポリペプチド（ＲＢＤポリペプチド）
本発明の第１態様のポリペプチドは、以下の（ａ）～（ｃ）に記載のポリペプチド群から選択される。
（ａ）配列番号１の３３６～３６１位、４０６～４３２位、又は４４６～４８０位の部位内の連続する７個以上のアミノ酸からなるポリペプチド；
（ｂ）前記（ａ）に記載のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列と、８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、ポリペプチド；
（ｃ）前記（ａ）又は（ｂ）に記載のポリペプチドを部分配列として含み、配列番号１の前記部分配列以外の部位を含まない、ポリペプチド。

本発明の第１態様のポリペプチドは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＲＢＤの部位のポリペプチドである。本発明者らは、ＲＢＤの部位のポリペプチドのうち、高い抗体誘導性を有する特定のポリペプチドについて、コンジュゲートワクチンとしてマウスに感作した場合に、得られた抗体がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＲＢＤのＡＣＥ２受容体への結合を抑制することを確認した。

前記の特定のポリペプチドは、配列番号５～７の配列を有するポリペプチドである。
CPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNC（配列番号５）
EVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGC（配列番号６）
GGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPC（配列番号７）

本発明の第１態様のポリペプチドは、配列番号５～７のポリペプチドを包含する。しかし、これらに限定されず、（ａ）配列番号１の３３６～３６１位、４０６～４３２位（好ましくは４１１～４２７位）、又は４４６～４８０位（好ましくは４５９～４８０位）の部位内の連続する７個以上、好ましくは連続する８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１又は２２個以上のアミノ酸からなるポリペプチド；（ｂ）前記（ａ）に記載のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列と８０％以上、好ましくは８５％、９０％又は９５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチド；及び（ｃ）前記（ａ）又は（ｂ）に記載のポリペプチドを部分配列として含み、配列番号１の前記部分配列以外の部位を含まない、ポリペプチドを包含する。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は多くの変異型が知られるが、いずれの変異型ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＲＢＤを構成するポリペプチドであってもよい。

本発明の第１態様のポリペプチドは、既知の変異型ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（変異株）のＲＢＤを構成するポリペプチド、例えば、下記の配列番号４０～４４のいずれかで示されるアミノ酸配列の連続する７個以上のアミノ酸からなるポリペプチドであってもよい。
APGQTGNIADYNYKLPDDFTGC （配列番号４０：Ｋ４１７Ｎ）
GGNYNYRYRLFRKSNLKPFERD （配列番号４１：Ｌ４５２Ｒ）
SNLKPFERDISTEIYQAGNTPC （配列番号４２：Ｓ４７７Ｎ）
SNLKPFERDISTEIYQAGSKPC （配列番号４３：Ｔ４７８Ｋ）
SNLKPFERDISTEIYQAGNKPC （配列番号４４：Ｓ４７７Ｎ／Ｔ４７８Ｋ）
対象において、特に特定の変異株に対する抗体誘導をさせる場合、該変異株の対応するアミノ酸配列のポリペプチドを使用することが好ましい。これにより、標的とする変異株に対して、より有効な抗体誘導が可能である。

本発明の第１態様のポリペプチドは、対象に投与することで、対象におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＲＢＤに対する抗体産生を誘導し、これにより対象の体内にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が侵入した場合にも、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＲＢＤを介したＡＣＥ２受容体への結合を抑制することで感染を防ぐことが可能である。

［２－２］第２態様のポリペプチド（Ｓ２ドメインポリペプチド）
本発明の第２態様のポリペプチドは、以下の（ｄ）～（ｆ）に記載のポリペプチド群から選択される。
（ｄ）配列番号１の１１４４～１１６１位又は１１７４～１２０２位の部位内の連続する１０個以上のアミノ酸からなるポリペプチド；
（ｅ）前記（ｄ）に記載のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列において、８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、ポリペプチド；及び
（ｆ）前記（ｄ）又は（ｅ）に記載のポリペプチドを部分配列として含み、配列番号１の前記部分配列以外の部位を含まない、ポリペプチド。

本発明の第２態様のポリペプチドは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳ２ドメインを構成するポリペプチドである。本発明者らは、Ｓ２ドメインを構成するポリペプチドのうち、高い抗体誘導性を有する特定のポリペプチドを同定した。

前記の特定のポリペプチドは、配列番号８及び９の配列を有するポリペプチドである。
ELDSFKEELDKYFKNHTS（配列番号８）
ASVVNIQKEIDRLNEVAKNLNESLIDLQE（配列番号９）

本発明の第２態様のポリペプチドは、配列番号８、９のポリペプチドを包含する。しかし、これらに限定されず、（ｄ）配列番号１の１１４４～１１６１位又は１１７４～１２０２位の部位内の連続する７個以上、好ましくは連続する８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、又は１８個以上のアミノ酸からなるポリペプチド；（ｅ）前記（ｄ）に記載のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列と８０％以上、好ましくは８５％又は９０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチド；及び（ｆ）前記（ｄ）又は（ｅ）に記載のポリペプチドを部分配列として含むポリペプチドを包含する。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は多くの変異型が知られるが、いずれの変異型ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳ２ドメインを構成するポリペプチドであってもよい。

本発明の第２態様のポリペプチドは、対象に投与することで、対象におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳ２ドメインに対する抗体産生を誘導し、これにより対象の体内にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が侵入した場合にも、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳ２のＳ２ドメインを介した宿主細胞との膜融合を抑制することで感染を防ぐことが可能である。

［３］ワクチン
本発明のワクチンは、「［２］抗体誘導性ポリペプチド」の項に記載した本発明のポリペプチドのうち、少なくとも１種類のポリペプチドを含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の治療又は予防のためのワクチンである。すなわち、本発明のワクチンは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するペプチドワクチンである。

本発明のワクチンは、本発明のポリペプチドを１種類のみ含んでいてもよく、また、複数種類含んでいてもよい。本発明のワクチンは、好ましくは、下記に示す第１態様のポリペプチドのうち少なくとも１種類と、第２態様のポリペプチドのうち少なくとも１種類とを含む。

（ｉ）第１態様のポリペプチド
以下の（ａ）～（ｃ）に記載のポリペプチド群から選択される、ポリペプチド。
（ａ）配列番号１の３３６～３６１位、４０６～４３２位、又は４４６～４８０位の部位内の連続する７個以上のアミノ酸からなるポリペプチド；
（ｂ）前記（ａ）に記載のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列と、８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、ポリペプチド；
（ｃ）前記（ａ）又は（ｂ）に記載のポリペプチドを部分配列として含み、配列番号１の前記部分配列以外の部位を含まない、ポリペプチド。

（ｉｉ）第２態様のポリペプチド
以下の（ｄ）～（ｆ）に記載のポリペプチド群から選択される。
（ｄ）配列番号１の１１４４～１１６１位又は１１７４～１２０２位の部位内の連続する１０個以上のアミノ酸からなるポリペプチド；
（ｅ）前記（ｄ）に記載のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列と、８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、ポリペプチド；及び
（ｆ）前記（ｄ）又は（ｅ）に記載のポリペプチドを部分配列として含み、配列番号１の前記部分配列以外の部位を含まない、ポリペプチド。

すなわち、第１態様のポリペプチドはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＲＢＤの部位のポリペプチドであり、第２態様のポリペプチドはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳ２ドメインの部位のポリペプチドである。本発明のワクチンの好適な形態は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＲＢＤとＳ２ドメインの２つの部位のポリペプチドを含む。２つの部位のポリペプチドを含むことで、対象に投与した場合に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染におけるＡＣＥ２受容体への結合と、宿主細胞との膜融合の２つのステップを両方阻害することができ、対象をＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染から二重で防御することが可能となる。

本発明のワクチンが、第１態様のポリペプチドと第２態様のポリペプチドとを含有する場合、これらの配合比は、特に限定しないが、例えば、１：１０～１０：１、好ましくは１：５～５：１とすることができる。より好ましい配合比は、１：１である。第１様態のポリペプチド及び第２様態ポリペプチドとして、各々複数種のポリペプチドを用いる場合も、各態様のポリペプチドの配合比は、特に限定しないが、例えば、１：１０～１０：１、好ましくは１：５～５：１とすることができる。より好ましい配合比は、１：１である。

本発明のワクチンに含まれるポリペプチドの形態は、抗体誘導性が維持されていれば特に制限されず、リニアペプチドの状態であってもよいが、キャリア分子と結合したコンジュゲートの形態であってもよい。ここでいう「キャリア分子」は、ポリペプチドの抗体誘導性を維持又は向上させるために使用される分子であり、例えば、アルブミン、サイログロブリン、オボアルブミン（ＯＶＡ）、デキストラン、セファロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）、さらに臨床使用されたキャリア分子として、ホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、ＣＲＭ１９７等が挙げられる。特に、ＯＶＡ，ＫＬＨ、ＣＲＭ１９７を好適に使用できる。

コンジュゲートにおけるポリペプチドの結合形態は、ポリペプチドの抗体誘導性が維持されていれば特に限定されない。コンジュゲートは、一分子のキャリア分子上に１種類のポリペプチドが結合する形態としてもよく、また、一分子のキャリア分子上に複数種類のポリペプチドが結合する形態としてもよい。一分子のキャリア分子上に複数のポリペプチドが結合する場合、各ポリペプチドがそれぞれキャリア分子上に直接結合していてもよい。ポリペプチドは、コンジュゲート分子上にリニア状に結合していてもよく、キャリア分子上に、リンカー構造体等を介して架橋して、キャリア分子と共に環状構造を形成していてもよい。特に、環状に閉じたコンジュゲートは、エピトープ部位の形状が安定し、本来のポリペプチドの立体構造（ループ構造、ヘリックス構造等）が形成されるため、好適に使用できる。なおリンカー構造体には、ヘテロ官能基リンカー試薬（ＳＭＣＣ（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ ４－（Ｎ－ｍａｌｅｉｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ）ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ－１－ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ））、Ｓｕｌｆｏ－ＳＭＣＣ、ＬＣ－ＳＭＣＣ、ＥＭＣＳ（Ｎ－ε－ｍａｌｅｍｉｄｏｃａｐｒｏｙｌ－ｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ ｅｓｔｅｒ）、ＳＭＰＢ（ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ ４－（ｐ－ｍａｌｅｉｍｉｄｏｐｈｅｎｙｌ）ｂｕｔｙｒａｔｅ）、ＭＢＳ（ｍ－ｍａｌｅｉｍｉｄｏｂｅｎｚｏｙｌ－Ｎ－ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ ｅｓｔｅｒ等）等を使用することができる。

上記のような環状構造を有するコンジュゲートの調製方法は、特に限定されないが、例えば、下記の方法とすることができる。キャリア分子、例えばＯＶＡに２分子以上のリンカー分子（例えば、マレイミド基を有する分子）を結合させ、ポリペプチドを、キャリア分子上のリンカー分子の数に対して過剰量とならない量で添加して反応させる。ここで、ポリペプチドの末端にＳＨ基を有するアミノ酸残基（例えば、システイン）がない場合は、例えば、ポリペプチドを予め両末端にシステイン残基（好ましくはシステイン残基を含む２－３アミノ酸残基）が付加された状態で調製して、両末端にＳＨ基がある構造とすることができる。両末端のＳＨ基がそれぞれ別のマレイミド分子と結合することにより架橋され、キャリア分子－リンカー分子－ポリペプチドで環状構造が形成される。

本発明のワクチンの投与経路は、特に限定されず、経口、経鼻、舌下、皮下、筋肉内等の公知のいずれの投与経路としてもよい。中でも、経口、経鼻及び舌下等で投与される粘膜ワクチンとすることが好ましい。さらに、舌下ワクチンとすることが好ましい。粘膜ワクチンは、ＩｇＧ等に代表される全身系の免疫を誘導するのに加えて、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の侵入口である粘膜面における粘膜免疫、特に抗原特異的分泌型ＩｇＡ応答を効率的に誘発することが知られる。そのため、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染侵入防止と、全身系免疫での防御の二重の感染防御が可能である。

本発明のワクチンは、アジュバントを含有してもよい。アジュバントは、本技術分野で公知のいずれのアジュバントを使用してもよい。公知のアジュバントとしては、フロイント完全及び／又は不完全アジュバント、ビタミンＥ、モンタミド、ミョウバン、ポリＩＣ及びその誘導体（ポリＩＣＬＣ等）、スクアレン及び／又はトコフェロール、Ｑｕｉｌｌｙａ ｓａｐｏｎａｒｉａのサポニンに由来するＱＳ－２１、ＭＰＬ（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍ）、ＱＳ２１（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍ）、サルモネラ属のＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｍｉｎｎｅｓｏｔａ Ｒ５９５リポ多糖類、その非毒性誘導体であるＭＰＬ（３－脱アシル化－４’－モノホスホリルリピッドＡ）、並びにＱＳ－７、ＱＳ－１７、ＱＳ－１８及びＱＳ－Ｌ１（So H.S., et al., Molecular and cells, Vol. 7, pp. 178-186 (1997)）等が挙げられる。

本発明のワクチンにおけるポリペプチド（各種ポリペプチドの合計量）とアジュバントとの配合比は、特に限定しないが、例えば、通常のワクチンに適用される配合比とすることができる。

本発明のワクチンは、抗体誘導性ポリペプチドに加えて、必要に応じて薬学的に許容される担体を含有してもよい。ここでいう「製薬上許容可能な担体」とは、製剤技術分野において通常使用する添加剤をいう。例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、充填剤、乳化剤、流動添加調節剤、滑沢剤等が挙げられる。

賦形剤としては、単糖、二糖類、シクロデキストリン及び多糖類のような糖（より具体的には、限定はしないが、グルコース、スクロース、ラクトース、ラフィノース、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、デキストリン、マルトデキストリン、デンプン及びセルロースを含む）、金属塩（例えば、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム若しくはリン酸カルシウム、硫酸カルシウム、硫酸マグネシウム、炭酸カルシウム）、クエン酸、酒石酸、グリシン、低、中、高分子量のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、リン脂質、リゾリン脂質、コレステロール、脂肪酸、プルロニック、カオリン、ケイ酸、あるいはそれらの組み合わせが例として挙げられる。

結合剤としては、トウモロコシ、コムギ、コメ、若しくはジャガイモのデンプンを用いたデンプン糊、単シロップ、グルコース液、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、セラック及び／又はポリビニルピロリドン等が例として挙げられる。

崩壊剤としては、前記デンプンや、乳糖、カルボキシメチルデンプン、架橋ポリビニルピロリドン、アガー、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、アルギン酸若しくはアルギン酸ナトリウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド又はそれらの塩が例として挙げられる。

充填剤としては、前記糖及び／又はリン酸カルシウム（例えば、リン酸三カルシウム、若しくはリン酸水素カルシウム）が例として挙げられる。

乳化剤としては、ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステルが例として挙げられる。

流動添加調節剤及び滑沢剤としては、ケイ酸塩、タルク、ステアリン酸塩又はポリエチレングリコールが例として挙げられる。

このような担体は、主として前記剤形形成を容易にし、また剤形及び薬理効果を維持するために用いられるものであり、必要に応じて適宜使用すればよい。上記の添加剤の他、必要であれば矯味矯臭剤、可溶化剤、懸濁剤、希釈剤、界面活性剤、安定剤、吸収促進剤、増量剤、付湿剤、保湿剤、吸着剤、崩壊抑制剤、コーティング剤、着色剤、保存剤、抗酸化剤、香料、風味剤、甘味剤、緩衝剤等を含むこともできる。

本発明のワクチンは、薬剤の薬理効果を失わない範囲において、他の薬剤を含有することもできる。例えば、注射剤の場合であれば、抗生物質を所定量含有していても良い。

本発明のワクチンの剤形は、抗体誘導性ポリペプチド、及び他の付加的な成分の効果を維持できる形態であれば特に限定しない。舌下投与のための剤形としては、例えば、錠剤が挙げられる。経口投与のための剤形としては、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤等が挙げられる。皮下投与のための剤形としては、例えば、注射剤、湿布剤、経皮吸収剤等が挙げられる。筋肉内投与のための剤形としては、注射剤が挙げられる。

本発明のワクチンは、抗体誘導性ポリペプチドを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の治療又は予防に効果的で、かつ、重篤な副作用が生じない量で含むことが好ましい。例えば、抗体誘導性ポリペプチドの投与量（キャリア分子を含まない）が、合計で０．０１～１００μｇ／ｋｇ体重、特に０．１～５．０μｇ／ｋｇ体重となるように調製されることが好ましい。

本発明のワクチンの投与回数は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２への抗体産生が十分に誘導され、かつ重篤な副作用が生じない限り、特に限定しないが、例えば、１日１回、１か月間投与できる。また、週１回～３回の間歇投与で１か月まで投与できる。投与期間は、２週間でもよく、休薬して、蔓延期（シーズン）の前に集中して２週間投与のような感作もできる。

［４］抗体誘導組成物
本発明の抗体誘導組成物は、「［２］抗体誘導性ポリペプチド」の項に記載した本発明のポリペプチドのうち、少なくとも１種類のポリペプチドを含むことを特徴とする。

本発明の抗体誘導組成物は、本発明のポリペプチドのうち、少なくとも１種類を含むことで、動物に投与した場合に、当該動物においてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する抗体を産生させることが可能である。当該動物の血清を採取することで、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するポリクローナル抗体、当該動物の脾臓細胞からハイブリドーマを調製することで、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するモノクローナル抗体を調製することが可能である。本発明の抗体誘導組成物は、高い抗体誘導性を有するポリペプチドを使用することで、効率的にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する抗体を産生することが可能である。

本発明の抗体誘導組成物を投与する動物としては、ウサギ、モルモット、ヤギ、ヒツジ、ウシ、ブタ、ラット、マウス、ニワトリ、ラクダ、アルパカ等が挙げられる。

本発明の抗体誘導組成物は、本発明のポリペプチドを１種類のみ含んでいてもよく、また、複数種類含んでいてもよい。本発明の抗体誘導組成物は、本発明の第１態様のポリペプチドのうち少なくとも１種類と、本発明に第２態様のポリペプチドのうち少なくとも１種類とを含んでいてもよい。

本発明の抗体誘導組成物に含まれるポリペプチドの形態は、抗体誘導性が維持されていれば特に制限されず、リニアペプチドの状態であっても、キャリア分子と結合したコンジュゲートの形態であってもよい。コンジュゲートにおけるポリペプチドの結合形態は、ポリペプチドの抗体誘導性が維持されていれば特に限定されない。コンジュゲートは、一分子のキャリア分子上に１種類のポリペプチドが結合する形態としてもよく、また、一分子のキャリア分子上に複数種類のポリペプチドが結合する形態としてもよい。一分子のキャリア分子上に複数のポリペプチドが結合する場合、各ポリペプチドがそれぞれキャリア分子上に直接結合していてもよい。ポリペプチドは、コンジュゲート分子上にリニア状に結合していてもよく、また、キャリア分子上でリンカー構造体等を介して架橋して、キャリア分子と共に環状構造を形成していてもよい。

本発明の抗体誘導組成物の投与経路は、特に限定されないが、通常は、皮下又は筋肉内に注射剤投与を行う。

本発明の抗体誘導組成物は、アジュバントを含有してもよい。アジュバントは、本技術分野で公知のいずれのアジュバントを使用してもよい。本発明のワクチンにおけるポリペプチド（各種ポリペプチドの合計量）とアジュバントとの配合比は、特に限定しないが、例えば、通常のワクチンに適用される配合比とすることができる。

本発明の抗体誘導組成物は、抗体誘導性ポリペプチドを、投与される動物において十分に抗体が産生され、かつ、重篤な副作用が生じない量で含むことが好ましい。例えば、抗体誘導性ポリペプチドの投与量（キャリア分子を含まない）が、合計で０．０１～１００μｇ／ｋｇ体重、特に０．１～５．０μｇ／ｋｇ体重となるように調製されることが好ましい。

本発明の抗体誘導組成物に含まれる他の成分等、その他の詳細な条件は、特に矛盾のない限り、「［３］ワクチン」の項に記載される条件と同様である。

［５］ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染を治療又は予防する方法
本発明のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染を治療又は予防する方法（以下、単に「本発明の治療方法」とも称する）は、「［３］ワクチン」の項に記載した、本発明のワクチンを対象に投与する工程を含むことを特徴とする。

本発明の治療方法の対象、投与するワクチンの剤形、含有成分等の詳細な条件は、特に矛盾のない限り、「［３］ワクチン」の項に記載の通りである。

以下、本発明をより詳細に説明するために実施例を示すが、本発明の範囲を実施例の範囲に限定することを意図するものではない。

［実施例１］ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２部分配列ポリペプチドのコンジュゲートの調製
表２に示す＃１～１４及び＃１０１～１１７のポリペプチドを、Ｆｍｏｃ合成法により調製した。表２に示すポリペプチドのうち、末端にシステイン残基がないものについては、Ｎ末端側にはシステイン－セリン－グルタミン（ＣＳＧ）、Ｃ末端側にはグルタミン－セリン－システイン（ＧＳＣ）等の配列の１～３アミノ酸残基を付加して調製した。ポリペプチドの純度及び分子量の確認は、ＨＰＬＣ及びマススペクトルで常法に従って行った。

次いで、各ポリペプチドについて、ＯＶＡをキャリア分子として環状コンジュゲートを調製した。マレイミド活性化ＯＶＡ（Ｉｍｊｅｃｔ（商標）Ｍａｌｅｉｍｉｄｅ－Ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｏｖａｌｂｕｍｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ社製））を、チューブ内のコンジュゲーションバッファーに溶解させ、氷冷上で各ポリペプチドの水溶液を添加し、室温で一晩静置した。Ｌ－システインを加えて残存するマレイミド基をブロックした後、－３０℃で保存した。

［実施例２］各コンジュゲートによるマウスの感作
実施例２で調製されたコンジュゲートのうち、＃１～１４、＃１０１～１０５、及び＃１０７～１１７のポリペプチドのコンジュゲートを使用して、マウスの感作試験を実施した。１０μｇ／１００μＬのサポニンを含むＰＢＳでコンジュゲートを０．１ｍｇ／ｍＬとなるように溶解して感作液を調製し、２５０μＬずつに分注して－２０℃で保存した。６週齢のマウス（ＢＡＬＢ／ｃ）を１週間順化した後、コンジュゲート溶液を投与した。感作液は、１００μＬ／匹の量で皮下投与した。投与は２週間間隔で、３回又は４回行った。採血は最終のブーストから２週間後に行った。採血後、各血清についてＥＬＩＳＡを用いて抗体価を確認した。

［実施例３］ＲＢＤの部位のポリペプチドで感作したマウス血清のＲＢＤ認識能
実施例２で得られたマウス血清のうち、＃１～１４のコンジュゲートを感作して得られた血清について、ＲＢＤ認識能を調査した。

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＲＢＤタンパク質（ＡＢ ｃｌｏｎａｌ社製、Ｎｏ．ＲＰ０１２５８）を１００ｍｇ／ウェルの量で固相化したマイクロウェルプレートに、各血清をＰＢＳ（リン酸緩衝液）で３００倍、１０００倍及び３０００倍に希釈した試料を分注して、３０分間インキュベーションを行った。各ウェルをＰＢＳＴ（Ｔｗｅｅｎ２０を０．０５％含むＰＢＳ）で洗浄した後、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）標識抗マウスＩｇＧモノクローナル抗体溶液を加えて、インキュベーションした。各ウェルをＰＢＳＴで洗浄した後、基質溶液（テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）溶液））を加えて所定時間インキュベーションした後、１Ｎ硫酸を加えて反応を停止させた。反応停止後、マイクロウェルプレートリーダーで、各ウェルの４５０ｎｍの吸光度を測定した。

各試料の吸光度を図１に示す。特に＃３、＃７・＃８及び＃１１のマウス血清でＲＢＤの認識能が高いことが判明した。

［実施例４］ＡＣＥ２－ＲＢＤ結合阻害試験
実施例３で得られたマウス血清のうち、ＲＢＤ認識能の高かった＃７及び＃１１について、ＡＣＥ２とＲＢＤの結合に与える影響を検討した。併せて、同意を取得したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染から回復した５名の患者（Ａ～Ｅ）の血清についても同様の検討を行った。

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＲＢＤタンパク質（ＡＢ ｃｌｏｎａｌ社製、Ｎｏ．ＲＰ０１２５８）を固相化した９６穴マイクロウェルプレートに、各マウス血清及び各患者血清をＰＢＳで１００倍、１０００倍及び１００００倍に希釈した試料を分注して、インキュベーションした。試料と併せて、陽性コントロールとしての市販のマウス抗ＲＢＤポリクローナル抗体（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ社製、Ｎｏ．４０５９２－Ｔ６２）のＰＢＳ希釈液を分注し、同様にインキュベーションを行った。各ウェルに、組換えヒトＡＣＥ２タンパク質（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ社製、Ｎｏ．１０１０８－Ｈ０８Ｈ－Ｂ）をＰＢＳで希釈した溶液を加え、さらにインキュベーションした。各ウェルをＰＢＳＴで洗浄した後、ＨＲＰ標識抗ヒトＡＣＥ２モノクローナル抗体溶液を加えてインキュベーションした。各ウェルをＰＢＳＴで洗浄した後、基質溶液（ＴＭＢ溶液）を加えて所定時間インキュベーションした後、１Ｎ硫酸を加えて反応を停止させた。反応停止後、マイクロウェルプレートリーダーで、各ウェルの４５０ｎｍの吸光度を測定した。

図２に、＃３、＃７、＃１１のマウス血清及び陽性コントロールのＡＣＥ２－ＲＢＤ結合阻害試験の結果を示す。いずれのマウス血清においても、ＡＣＥ２とＲＢＤとの結合を阻害することが確認された。特に、＃１１のマウス血清については、１００倍希釈の条件で陽性コントロールと同等の阻害能を示すことが確認された。

図３に、＃１、＃５、＃１１のマウス血清及びＡ～Ｅの患者血清のＡＣＥ２－ＲＢＤ結合阻害試験の結果を示す。図３（Ａ）は、＃１、＃５、＃１１のマウス血清の阻害効果を比較した結果である。＃１、＃５のマウス血清ではほとんど阻害が見られなかったのに対し、＃１１のマウス血清では阻害が確認された。図３（Ｂ）は、＃１１のマウス血清と５名の回復患者の血清の阻害効果を比較した結果である。最も高い阻害効果を示すＡの患者を除けば、＃１１のマウス血清は４名の患者とほぼ同等のＡＣＥ２－ＲＢＤ結合阻害効果を示すことが確認された。

［実施例５］Ｓ２ドメインの部位のポリペプチドで感作したマウス血清のＳ２ドメイン認識能
実施例３で得られたマウス血清のうち、＃１０１～１１７のコンジュゲートを感作して得られた血清について、Ｓ２ドメイン認識能を調査した。

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳ２ドメインタンパク質（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ社製、Ｎｏ．４０５９０－Ｖ０８Ｂ）を固相化した９６穴マイクロウェルプレートに、各血清をＰＢＳで３０倍、１００倍及び１０００倍に希釈した試料を分注して、インキュベーションした。試料と併せて、陽性コントロールとしての市販のマウス抗Ｓ２ドメインポリクローナル抗体（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ社製、Ｎｏ．４０５９０－Ｔ６２）のＰＢＳ希釈液と、陰性コントロールとしてのＰＢＳを分注し、同様にインキュベーションを行った。各ウェルをＰＢＳＴで洗浄した後、ＨＲＰ標識抗マウスＩｇＧモノクローナル抗体溶液を加えて、インキュベーションした。各ウェルをＰＢＳＴで洗浄した後、基質溶液（ＴＭＢ溶液）を加えて所定時間インキュベーションした後、１Ｎ硫酸を加えて反応を停止させた。反応停止後、マイクロウェルプレートリーダーで、各ウェルの４５０ｎｍの吸光度を測定した。

各試料の吸光度を図４に示す。特に＃１１１及び＃１１４・＃１１５のマウス血清でＳ２ドメインの認識能が高いことが判明した。これらのマウス血清は、いずれもＳ２ドメインのＨＲ２領域のポリペプチドを感作したマウスの血清であった。

［実施例６］Ｓ２ドメインの部位のポリペプチドと回復者血清の反応性試験
１つずつのポリペプチドを提示したキャリア抗原を用いたＥＬＩＳＡ系を用いて、５名の回復者血清とＳ２ドメインの各ポリペプチドとの反応性を検討した。＃１０１～１１７の各ポリペプチド提示抗原を９６穴マイクロウェルプレート（ＮＵＮＣ社Ｍｕｌｔｉｓｏｒｐ）にコートし、ＢＳＡ／ＰＢＳＴ溶液でブロッキングを行った。同意を取得したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染から回復した５名の患者Ａ～Ｅの血清をそれぞれＢＳＡ入りＰＢＳで希釈し、各ポリペプチド提示抗原に反応させた。ＰＢＳＴで洗浄したのと、ＨＲＰ標識抗ヒトＩｇＧ抗体溶液を添加し、３０分間インキュベーションした。洗浄後に基質溶液（テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）溶液）を加え、所定時間後の基質発色を４５０ｎｍで定量した。

各患者血清Ａ～Ｅにおいて最も強く認識されたポリペプチド（メジャー）及び２番目に強く認識されたポリペプチド（マイナー）を表２に示す。５名の患者血清中の抗体が、＃１１１及び＃１１４／＃１１５のいずれかに強く反応することから、これらの部位がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する抗体産生能獲得に重要な部位であることが確認された。

［実施例７］コンジュゲートポリペプチドのマウス舌下投与（ＳＬＩＴ）試験
（１）皮下投与用感作液の調製
４種のコンジュゲート（＃７、＃１１、＃１１１及び＃１１５）の１ｍｇ／ｍＬ ＰＢＳ溶液を各１７．５μＬ分取して混合した。ここに１００ｍｇ／ｍＬのサポニン／ＰＢＳ溶液を３．５μＬ加えて混合した後、ＰＢＳで３５０μＬになるまで希釈して皮下投与用感作液を得た。舌下投与用感作液は、－２０℃で保存した。

（２）舌下投与用感作液の調製
４種のコンジュゲート（＃７、＃１１、＃１１１及び＃１１５）の１ｍｇ／ｍＬ ＰＢＳ溶液を各２０μＬ分取して混合した。ここに１００ｍｇ／ｍＬのサポニン／ＰＢＳ溶液を１μＬ加えて、８１μＬの舌下投与用感作液を得た。舌下投与用感作液は、－２０℃で保存した。

（３）マウスへの皮下投与
６週齢のマウス（ＢＡＬＢ／ｃ）を１週間順化した後、コンジュゲート溶液を投与した。感作液は、１００μＬ／匹の量で皮下投与した。皮下投与は２週間間隔で２回行った。

（４）マウスへの舌下投与
２回目の皮下投与から２週間経過したマウスに舌下投与を行った。イソフルラン気化器によりマウスを麻酔した後、マウスを仰向けに補定してピンセットで口を開いた。ピペットの先でマウスの舌を上にあげ、舌下に舌下投与用感作液１０μＬ（高用量）又は３μＬ(低用量)滴下した。その後、マウスを１分間静置した。舌下投与は週３回、計６回実施し、最後の投与の２日後に各マウスの採血を行った。舌下投与を高用量で行ったマウス群を高用量ＳＬＩＴ群、低用量で行ったマウス群を低用量ＳＬＩＴ群とした。２回目の皮下投与後、舌下投与を行わない以外は同様の処置を行ったマウス群をコントロール群とした。各マウス群は６匹とした（ｎ＝６）。

（５）マウスの抗体価測定（ＩｇＧ、ＩｇＡ）
＃７と＃１１のコンジュゲートを重量比１：１で混合して、９６穴マイクロウェルプレートに固相化した。併せて、＃１１１、＃１１５のコンジュゲートをそれぞれ別の９６穴マイクロウェルプレートに固相化した。コンジュゲートが固相化されたマイクロウェルプレートに、各マウス血清をＰＢＳで希釈した試料を分注して、インキュベーションした。各ウェルをＰＢＳＴで洗浄した後、ＨＲＰ標識抗マウスＩｇＧ抗体又はＨＲＰ標識抗マウスＩｇＡ抗体のＰＢＳ溶液を添加して、インキュベーションした。各ウェルとＰＢＳＴで洗浄した後、各ウェルをＰＢＳＴで洗浄した後、基質溶液（ＴＭＢ溶液）を加えて所定時間インキュベーションした後、１Ｎ硫酸を加えて反応を停止させた。反応停止後、マイクロウェルプレートリーダーで、各ウェルの４５０ｎｍの吸光度を測定した。

各マウスの抗ＲＢＤ抗体価の測定結果を図５、図６に示す。図５（Ａ）は、高用量ＳＬＩＴ群、低用量ＳＬＩＴ群及びコントロール群のマウス血清中のＩｇＧの、＃７及び＃１１の混合コンジュゲートへの反応性を示す。図５（Ｂ）は、高用量ＳＬＩＴ群、低用量ＳＬＩＴ群及びコントロール群のマウス血清中のＩｇＧの、＃１１１のコンジュゲートへの反応性を示す。図５（Ｃ）は、高用量ＳＬＩＴ群、低用量ＳＬＩＴ群及びコントロール群のマウス血清中のＩｇＧの、＃１１５のコンジュゲートへの反応性を示す。図６（Ａ）は、高用量ＳＬＩＴ群、低用量ＳＬＩＴ群及びコントロール群のマウス血清中のＩｇＡの、＃７及び＃１１の混合コンジュゲートへの反応性を示す。図６（Ｂ）は、高用量ＳＬＩＴ群、低用量ＳＬＩＴ群及びコントロール群のマウス血清中のＩｇＡの、＃１１１のコンジュゲートへの反応性を示す。図６（Ｃ）は、高用量ＳＬＩＴ群、低用量ＳＬＩＴ群及びコントロール群のマウス血清中のＩｇＡの、＃１１５のコンジュゲートへの反応性を示す。高用量のコンジュゲートを舌下投与したマウス群においては、皮下投与のみのマウス群と比較して、いずれのコンジュゲートに対しても有意に反応性の高いＩｇＧ抗体及びＩｇＡ抗体が生成された。

［実施例８］ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ＲＢＤ分子の各エピトープ認識抗体の、変異型ＲＢＤ分子の相同エピトープ提示抗原への反応性
Ｋ４１７Ｎ、Ｌ４５２Ｒ、Ｔ４７８Ｋの変異をそれぞれ有するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤエピトープを提示した変異エピトープ抗原を、実施例１と同様の手法で作製した。

各変異ＲＢＤエピトープを結合させた抗原を、９６穴マイクロウェルプレートに１００ｎｇ／ウェルの量で固相化した。併せて、実施例３と同様に野生型ＲＢＤエピトープ抗原固相化プレートを調製した。実施例２で得られた抗血清のうち、＃７、＃１０及び＃１１をＰＢＳで３００倍、１５００倍、７５００倍、３７５００倍、１８８０００倍及び９４００００倍に希釈し、＃７の血清はＫ４１７Ｎの変異型、＃１０の血清はＬ４５２Ｒの変異型、＃１１の血清はＴ４７８Ｋの変異エピトープ抗原を固相化したプレートに分注した。プレートを３０分間インキュベーションした後、各ウェルをＰＢＳＴで洗浄し、ＨＲＰ標識抗マウスＩｇＧモノクローナル抗体溶液を加えて、インキュベーションした。各ウェルをＰＢＳＴで洗浄した後、基質溶液を加えて所定時間インキュベーションした後、１Ｎ硫酸を加えて反応を停止させた。反応停止後、マイクロウェルプレートリーダーで、各ウェルの４５０ｎｍの吸光度を測定した。試験はｎ＝２で行い、平均値を求めた。

各試料の吸光度を図７に示す。＃７及び＃１１のマウス血清では、変異型ＲＢＤへの反応性について、野生型ＲＢＤへの反応性よりは少し低いものの、十分に高い反応性を示すことが示された。一方＃１０のマウス血清では、野生型ＲＢＤの中和エピトープと変異型ＲＢＤ相同エピトープへの反応性がほぼ同等であることが示された。したがって、ＲＢＤタンパク質に変異を有するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２についても、同定した中和エピトープ認識抗体が感染防除効果を有することが示唆された。

［実施例９］コンジュゲートポリペプチド感作マウス抗血清による、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２擬似型レンチウイルスのＣＲＦＫ細胞への感染防除効果
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質を表面に有する擬似型レンチウイルスを調製して、これをＡＣＥ２を表面に発現する細胞に感染させる、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の擬似感染系を構築した（Pisil Y., et al., Pathogens, 10, 153 (2021)を参照のこと）。この擬似感染系を用いて、以下の手順で、コンジュゲートポリペプチドから誘導された抗体が中和活性を有するかを評価した。

（１）マウス抗血清および混合血清の調製
実施例２で作製した各エピトープ認識抗体（＃１、＃３、＃５、＃７、＃１１、＃１１１、＃１１４、＃１１５など）を含む各抗血清および各エピトープ抗血清の混合血清（２血清または３血清を均等に混合）を作製した。

（２）細胞培養
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ３２１６）及びネコ腎由来細胞（ＣＲＦＫ細胞、ＡＴＣＣ ＣＣＬ－９４）を、１０％（ｖ／ｖ）の熱不活化ウシ胎児血清、２ｍＭピルビン酸ナトリウム及び４ｍＭ Ｌ－グルタミンを添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で、それぞれ培養した。各培養液より、トリプシン／ＥＤＴＡ溶液を用いて細胞を回収した。すべての細胞株は、５％ＣＯ_２雰囲気下で３７℃に維持した。

（３）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を有する擬似型レンチウイルスの作製
すべてのＤＮＡプラスミドのクローニングは、Al-Allaf, F.A., et al., Microbes Infect., Vol. 12, pp. 768-777 (2013)に記載の通り、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｓｔｂｌ３細胞への形質転換により行った。レンチウイルスの擬似型ウイルスを、Cronin J., et al., Curr. Gene Ther., Vol. 5, pp. 387-398 (2005)に記載の通り構築した。すなわち、１μｇ／ｍＬの２０１９－ｎＣｏｖ＿ｐｃＤＮＡ３．１（＋）－Ｐ２Ａ－ｅＧＦＰスパイクベクター（Ｎｏ．ＭＣ＿０１０１０８７（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｕｄ社））に由来するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を表面に有する擬似型レンチウイルスを、１μｇ／ｍＬのＨＩＶ－１ ＮＬ４－３ΔＥｎｖΔｖｐｒルシフェラーゼレポーターベクター（ｐＮＬ４－３．Ｌｕｃ．Ｒ－Ｅ－、Ｎｏ．３４１８、ＮＩＨより提供）（Chen B. K., et al., J. Virol., Vol. 68, pp. 654-660 (1994)を参照のこと）と共に、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞の５×１０^５細胞／ｍＬにトランスフェクトして調製した。さらに、２００μＬのＯｐｔｉ－ＭＥＭ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ社）、８μＬのＸ－Ｔｒｅｍｅ ＨＰトランスフェクション試薬（シグマ・アルドリッチ社）を添加して、トランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｔ細胞を５％ＣＯ_２雰囲気下で３７℃、２日間培養した。上清を回収して０．４５ｍｍフィルターに通し、生成したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を表面に有する擬似型レンチウイルス粒子を得た。

１μｇ／ｍＬの２０１９－ｎＣｏｖ ｃＤＮＡ３．１プラスミド又は１μｇ／ｍＬの２０１９－ｎＣｏｖ ＣＭＶプラスミドを、１μｇ／ｍＬのｐＳＧΔｅｎｖベクター（Ｎｏ．１１０５１、ＮＩＨより提供）と共にＨＥＫ２９３Ｔ細胞にトランスフェクトしてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を表面に有する擬似型レンチウイルス粒子を生成した。

（４）ＡＣＥ２発現細胞株の作製
ＣＲＦＫ細胞を、１０％ウシ胎児血清、２％ Ｌ－グルタミン及び２％ピルビン酸を添加したＤＭＥＭを入れた６ウェルプレート中に２．５×１０^５細胞／ｍＬの濃度で播種した。細胞株を１日間、６０～８０％コンフルエントに達するまで培養した。２μｇ／ｍＬにｐｃＤＮＡ３．１＋／Ｃ－（Ｋ）ＤＹＫ－ＡＣＥ２プラスミド（Ｎｏ．ＭＣ＿０１０１０８６（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｕｄ社））を、２００μＬのＯｐｔｉ－ＭＥＭ、８μＬのＸ－Ｔｒｅｍｅ ＨＰトランスフェクション試薬を用いて細胞株にトランスフェクトした。トランスフェクトした細胞を、６ウェルプレートに２．５×１０^５細胞／ｍＬの濃度で播種し、５％ＣＯ_２雰囲気下で、３７℃、１日間インキュベートした。その後、細胞を平底９６穴マイクロウェルプレート（ファルコン社）に播種した。

（５）中和アッセイ
（１）で得られた各抗血清を培地で１８倍、３６倍、７２倍に希釈した（アッセイ時最終希釈倍率は４５倍、９０倍、１８０倍）。２種又は３種の抗血清を混合した混合血清については、含まれる各血清の濃度がさらに１／２又は１／３となるように希釈した。陽性コントロールとして、市販の重症ＣＯＶＩＤ－１９回復者ＩｇＧ陽性血清（Ｎｏ．ＣｏＶ－ＰｏｓＧ－Ｓ、Ｒａｙ Ｂｉｏｔｅｃｈ社製）の７２０倍希釈液をさらに上記と同様に培地で希釈して使用した。９６穴マイクロウェルプレートに、血清希釈液各１８０μＬを添加した。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を表面に有する擬似型レンチウイルス粒子（ＬｐＶＳｐｉｋｅ（＋））の試料を解凍して、培地で６０００ＲＬＵ（Relative Luciferase Unit）／ｍＬまで希釈し、９６穴マイクロウェルプレート中の血清希釈液（エピトープ認識抗血清または混合血清等）に各６０μＬ加えた。５％ＣＯ_２雰囲気下で、３７℃、１時間インキュベートした。

ＡＣＥ２発現ＣＲＦＫ細胞を、９６穴マイクロウェルプレート中の１００μＬの培地に２．５×１０^５細胞／ｍＬの濃度で播種し、１日間培養した。インキュベート後の各種マウス血清希釈液各１５０μＬを、播種したＣＲＦＫ細胞を含むマイクロプレートに添加した。５％ＣＯ_２雰囲気下で３７℃、２日間インキュベートした。マウス血清に代えてヒト抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＩｇＧ抗体（Ｎｏ．Ｅ－ＡＢ－Ｖ１０２１、Ｅｌａｂｓｃｉｅｎｃｅ社）を添加したウェルを陽性コントロール、マウス血清に代えて培地を添加したウェルを陰性コントロールとした。また、細胞及び抗血清を含まないウェルをブランクとした。各試験はｎ＝３で行った。各ウェルについて、ルシフェラーゼ活性を測定した。

ルシフェラーゼ活性の測定は、Ishida Y., et al., J. Gen. Virol., Vol. 97, pp. 1249-1260 (2016)及びMatsuda K., et al., Virology, Vol. 399, pp. 134-143 (2010)に記載の方法で実施した。概説すると、以下の方法を用いた。各ウェルに５０μＬの細胞溶解試薬（東洋ビーネット社）を加え、１５分間攪拌した。細胞溶解液３０μＬを回収し、９６穴マイクロウェルプレート（Ｆ９６ ＭｉｃｒｏＷｅｌｌ ｗｈｉｔｅ ｐｌａｔｅ（Ｎｕｎｃ社））に移し、各ウェルに３０μＬの発光基質を加えた。マイクロプレートリーダ―（ＴｒｉＳｔａｒ ＬＢ ９４１(Ｂｅｒｔｈｏｒｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）)とＭｉｋｒｏＷｉｎソフトウェア（Ｌａｂｓｉｓ Ｌａｂｏｒｓｙｓｔｅｍｅ社）を用いて発光量を測定し、定量した。各実測値からブランク値を減じた値を測定値とした。陰性コントロールの測定値を１００％として、各測定値の相対値を算出した。各試験はｎ＝３で行った。

（６）結果
各コンジュゲートペプチドで免疫したマウスの抗血清による、擬似型レンチウイルスのＡＣＥ２発現ＣＲＦＫ細胞への感染防除効果を図８に示す。図中、「ＩｇＧ」は陽性コントロール血清の結果を示す。＃７＋＃１１、＃７＋＃１１１、＃１１＋＃１１１、＃７、＃１１１のコンジュゲートペプチドで免疫したマウスの抗血清および混合血清では、濃度依存的に擬似ウイルスの感染が防除されることが示された。なお、ＲＢＤタンパク質認識能のない＃１、＃５エピトープ認識抗体およびその混合血清に、疑似ウイルスの感染阻害能は認められなかった。

Claims (12)

1. 以下の（ａ）～（ｆ）に記載のポリペプチド群から選択され、かつ、抗体誘導性を有する、ポリペプチド：
   （ａ）配列番号１の３３６～３６１位、４０６～４３２位、又は４４６～４８０位の部位内の連続する７個以上のアミノ酸からなるポリペプチド；
   （ｂ）前記（ａ）に記載のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列と、８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、ポリペプチド；
   （ｃ）前記（ａ）又は（ｂ）に記載のポリペプチドを部分配列として含み、配列番号１の前記部分配列以外の部位を含まない、ポリペプチド；
   （ｄ）配列番号１の１１４４～１１６１位又は１１７４～１２０２位の部位内の連続する１０個以上のアミノ酸からなるポリペプチド；
   （ｅ）前記（ｄ）に記載のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列と、８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、ポリペプチド；及び
   （ｆ）前記（ｄ）又は（ｅ）に記載のポリペプチドを部分配列として含み、配列番号１の前記部分配列以外の部位を含まない、ポリペプチド。
2. 以下の（ａ）～（ｃ）に記載のポリペプチド群から選択される、請求項１に記載のポリペプチド：
   （ａ）配列番号１の３３６～３６１位、４０６～４３２位、又は４４６～４８０位の部位内の連続する７個以上のアミノ酸からなるポリペプチド；
   （ｂ）前記（ａ）に記載のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列と、８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、ポリペプチド；及び
   （ｃ）前記（ａ）又は（ｂ）に記載のポリペプチドを部分配列として含み、配列番号１の前記部分配列以外の部位を含まない、ポリペプチド。
3. 以下の（ｄ）～（ｆ）に記載のポリペプチド群から選択される、請求項１に記載のポリペプチド：
   （ｄ）配列番号１の１１４４～１１６１位又は１１７４～１２０２位の部位内の連続する１０個以上のアミノ酸からなるポリペプチド；
   （ｅ）前記（ｄ）に記載のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列と、８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、ポリペプチド；及び
   （ｆ）前記（ｄ）又は（ｅ）に記載のポリペプチドを部分配列として含み、配列番号１の前記部分配列以外の部位を含まない、ポリペプチド。
4. 請求項１に記載のポリペプチドのうち少なくとも１種類のポリペプチドを含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の治療又は予防のためのワクチン。
5. 請求項２に記載のポリペプチドのうち少なくとも１種類のポリペプチド、及び、請求項３に記載のポリペプチドのうち少なくとも１種類のポリペプチドを含む、請求項４に記載のワクチン。
6. ポリペプチドがキャリア分子と結合したコンジュゲートとして含まれる、請求項４に記載のワクチン。
7. 複数種のポリペプチドが同一キャリア分子上に結合したコンジュゲートとして含まれる、請求項６に記載のワクチン。
8. コンジュゲートが、ポリペプチドがキャリア分子上で架橋した環状構造を有する、請求項６に記載のワクチン。
9. 粘膜ワクチンである、請求項４に記載のワクチン。
10. 舌下ワクチンである、請求項９に記載のワクチン。
11. 請求項１に記載のポリペプチドのうち少なくとも１種類のポリペプチドを含む、抗体誘導組成物。
12. 配列番号４０～４４のいずれかで示されるアミノ酸配列の連続する７個以上のアミノ酸からなるポリペプチドである、請求項１に記載のポリペプチド。
    

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