JP2023002712A - S.ピオゲネスcas9変異遺伝子及びこれによってコードされるポリペプチド - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、EFS-Webを介してASCIIフォーマットにおいて提出された配列表を含み、参照によりその全体を本明細書に組み込む。2015年12月18日に作成されたASCIIコピーは、IDT01-009-PCT_ST25.txtという名称であり、___バイトサイズである。
本発明は、Cas9変異遺伝子、これによってコードされるポリペプチド及びCRISPR-Cas系の組成物におけるこれらの使用に関する。
第1の態様において、単離された変異Cas9タンパク質が提供されている。単離された変異Cas9タンパク質は、規則的な間隔をもってクラスター化された短鎖反復回文配列(CRISPR)/CRISPR関連タンパク質エンドヌクレアーゼ系(「CRISPR/Casエンドヌクレアーゼ系」)において活性である。得られたCRISPR/Casエンドヌクレアーゼ系は、野生型CRISPR/Casエンドヌクレアーゼ系と比較して、減少したオフターゲット編集活性及び維持されたオンターゲット編集活性を示す。
野生型及び変異Cas9タンパク質のDNA及びアミノ酸配列。
以下のリストでは、本発明に記載されている異なる野生型(WT)及び変異Cas9ヌクレアーゼを示す。多くの場合、1つより多いコドンが同一のアミノ酸をコードし得るので、多くの異なるDNA配列が同一のアミノ酸(AA)配列をコード/発現し得ることが、当業者によって理解される。以下に示されているDNA配列は例としてのみ与えられ、同一のタンパク質(例えば、同一のアミノ酸配列)をコードする他のDNA配列が意図されている。NLSドメインなどのようなさらなる特徴、要素又はタグが、前記配列に付加されてもよいことがさらに理解される。Cas9単独並びにC末端及びN末端の両方のSV40NLSドメイン及びHISタグと融合されたCas9としてこれらのタンパク質についてのアミノ酸及びDNA配列を示す、WT Cas9及び変異R691A Cas9についての例を示す。他のCas9変異体について、アミノ酸配列のみが提供されているが、NLS及びHisタグドメインの類似の付加が、哺乳動物細胞における使用のための組換えタンパク質を産生する際の使用を容易にするために付加されてもよいことが意図されている。WT配列と異なる変異は、下線付きの太字フォントを使用して明瞭に示されている。
E.コリにおける発現のためにコドン最適化されたWT SpyCas9 DNA配列。
H.サピエンス(H.sapiens)における発現のためにコドン最適化されたWT SpyCas9 DNA配列。
E.コリにおける発現のためにコドン最適化されたR691A変異SpyCas9 DNA配列。
H.サピエンスにおける発現のためにコドン最適化されたR691A変異SpyCas9 DNA配列。
WT SpyCas9 AA配列。
NLSドメイン及びHIS-Tag精製ドメインが付加されたWT SpyCas9 AA配列。
R691A変異SpyCas9 AA配列。
NLSドメイン及びHIS-Tag精製ドメインが付加されたR691A変異SpyCas9 AA配列。
R494C変異SpyCas9 AA配列。
R494A変異SpyCas9 AA配列。
N522K変異SpyCas9 AA配列。
N522A変異SpyCas9 AA配列。
N588D変異SpyCas9 AA配列。
N588A変異SpyCas9 AA配列。
N612A変異SpyCas9 AA配列。
T657A変異SpyCas9 AA配列。
S663A変異SpyCas9 AA配列。
N692D変異SpyCas9 AA配列。
N692A変異SpyCas9 AA配列。
S730G変異SpyCas9 AA配列。
S730A変異SpyCas9 AA配列。
T740A変異SpyCas9 AA配列。
R765G変異SpyCas9 AA配列。
R765A変異SpyCas9 AA配列。
T770K変異SpyCas9 AA配列。
N776A変異SpyCas9 AA配列。
R778A変異SpyCas9 AA配列。
R783A変異SpyCas9 AA配列。
S793A変異SpyCas9 AA配列。
N803D変異SpyCas9 AA配列。
N803A変異SpyCas9 AA配列。
S845A変異SpyCas9 AA配列。
N854K変異SpyCas9 AA配列。
N854A変異SpyCas9 AA配列。
S872A変異SpyCas9 AA配列。
R925C変異SpyCas9 AA配列。
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R691S変異SpyCas9 AA配列。
R691N変異SpyCas9 AA配列。
R691D変異SpyCas9 AA配列。
R691C変異SpyCas9 AA配列。
R691Q変異SpyCas9 AA配列。
R691E変異SpyCas9 AA配列。
R691G変異SpyCas9 AA配列。
R691H変異SpyCas9 AA配列。
R691I変異SpyCas9 AA配列。
R691L変異SpyCas9 AA配列。
R691K変異SpyCas9 AA配列。
R691M変異SpyCas9 AA配列。
R691F変異SpyCas9 AA配列。
R691P変異SpyCas9 AA配列。
R691T変異SpyCas9 AA配列。
R691W変異SpyCas9 AA配列。
R691Y変異SpyCas9 AA配列。
R691V変異SpyCas9 AA配列。
高いオンターゲット活性を保持しながら、オフターゲット切断を減少させた変異Cas9ペプチドを富化するための細菌遺伝子スクリーニング。
以下の実施例は、約250,000個の変異体クローンのライブラリーから、後のより詳細な特徴付けのために、目的の候補Cas9変異酵素を同定するためにE.コリにおいて行った遺伝子スクリーニングを詳述する。
新規Cas9変異体のプラスミド送達は、オンターゲット活性を維持しながら、オフターゲット遺伝子を減少させる。
新規Cas9変異体のRNP送達は、オンターゲット編集活性を維持しながら、オフターゲット編集活性を減少させる。
プラスミド及びRNP送達法を使用した、位置R691におけるさらなるアミノ酸変異の試験。
これまで、部位R691は、WT並びに変異体R691A及びR691Sとして特徴付けられてきた。本実施例は、Cas9におけるこの位置での17個の他の可能なアミノ酸置換の活性を実証している。
Claims (34)
- CRISPR/Casエンドヌクレアーゼ系において活性である単離された変異Cas9タンパク質であって、CRISPR/Casエンドヌクレアーゼ系が、野生型CRISPR/Casエンドヌクレアーゼ系と比較して、減少したオフターゲット編集活性及び維持されたオンターゲット編集活性を示す、単離された変異Cas9タンパク質。
- (a)R494、N522、N588、N612、T657、S663、R691、N692、S730、T740、R765、T770、N776、R778、R783、S793、N803、S845、N854、S872及びR925の位置から選択される、WT-Cas9タンパク質に導入された単一置換変異、又は
(b)R494、N522、N588、N612、T657、S663、R691、N692、S730、T740、R765、T770、N776、R778、R783、S793、N803、S845、N854、S872及びR925の位置のうちの2つから選択される、WT-Cas9タンパク質に導入された二重置換変異
からなる群から選択される置換変異を含む、請求項1に記載の単離された変異Cas9タンパク質。 - R494C又はR494A;N522K又はN522A;N588D又はN588A;N612A;T657A;S663A;R691S又はR691A;N692D又はN692A;S730G又はS730A;T740A;R765G又はR765A;T770K又はT770A;N776A;R778A;R783A;S793A;N803D又はN803A;S845A;N854K又はN854A;S872A;及びR925C又はR925Aの位置のうちの2つから選択される、WT-Cas9タンパク質に導入された二重置換変異からなる群から選択される置換変異を含む、請求項1に記載の単離された変異Cas9タンパク質。
- 配列番号7~38からなる群から選択される、請求項1に記載の単離された変異Cas9タンパク質。
- 配列番号39~88からなる群から選択される、請求項1に記載の単離された変異Cas9タンパク質。
- 変異Cas9タンパク質、及び
gRNA複合体
を含む、単離されたリボ核タンパク質複合体であって、
前記単離されたリボ核タンパク質複合体は、CRISPR/Casエンドヌクレアーゼ系として活性であり、得られたCRISPR/Casエンドヌクレアーゼ系が、野生型CRISPR/Casエンドヌクレアーゼ系と比較して、減少したオフターゲット編集活性及び維持されたオンターゲット編集活性を示す、単離されたリボ核タンパク質複合体。 - gRNAが、化学量論(1:1)比のcrRNA及びtracrRNAを含む、請求項6に記載の単離されたリボ核タンパク質複合体。
- gRNAが、
所与の遺伝子座についての特定の編集標的部位に対するAlt-R(商標)crRNAを含む単離されたcrRNA、及び
Alt-R(商標)tracrRNAを含むtracrRNA
を含む、請求項6に記載の単離されたリボ核タンパク質複合体。 - gRNAがsgRNAを含む、請求項6に記載の単離されたリボ核タンパク質複合体。
- 変異Cas9タンパク質が、
(a)R494、N522、N588、N612、T657、S663、R691、N692、S730、T740、R765、T770、N776、R778、R783、S793、N803、S845、N854、S872及びR925の位置から選択される、WT-Cas9タンパク質に導入された単一置換変異、又は
(b)R494、N522、N588、N612、T657、S663、R691、N692、S730、T740、R765、T770、N776、R778、R783、S793、N803、S845、N854、S872及びR925の位置のうちの2つから選択される、WT-Cas9タンパク質に導入された二重置換変異
からなる群から選択される置換変異を含む、請求項6に記載の単離されたリボ核タンパク質複合体。 - 変異Cas9タンパク質が、R494C又はR494A;N522K又はN522A;N588D又はN588A;N612A;T657A;S663A;R691S又はR691A;N692D又はN692A;S730G又はS730A;T740A;R765G又はR765A;T770K又はT770A;N776A;R778A;R783A;S793A;N803D又はN803A;S845A;N854K又はN854A;S872A;及びR925C又はR925Aの位置のうちの2つから選択される、WT-Cas9タンパク質に導入された二重置換変異からなる群から選択される置換変異を含む、請求項6に記載の単離されたリボ核タンパク質複合体。
- 変異Cas9タンパク質が、配列番号7~38からなる群から選択される、請求項6に記載の単離されたリボ核タンパク質複合体。
- 変異Cas9タンパク質が、配列番号39~88からなる群から選択される、請求項6に記載の単離されたリボ核タンパク質複合体。
- 変異Cas9タンパク質をコードする単離された核酸であって、変異Cas9タンパク質が、CRISPR/Casエンドヌクレアーゼ系において活性であり、CRISPR/Casエンドヌクレアーゼ系が、野生型CRISPR/Casエンドヌクレアーゼ系と比較して、減少したオフターゲット編集活性及び維持されたオンターゲット編集活性を示す、核酸。
- 変異Cas9タンパク質が、
(a)R494、N522、N588、N612、T657、S663、R691、N692、S730、T740、R765、T770、N776、R778、R783、S793、N803、S845、N854、S872及びR925の位置から選択される、WT-Cas9タンパク質に導入された単一置換変異、又は
(b)R494、N522、N588、N612、T657、S663、R691、N692、S730、T740、R765、T770、N776、R778、R783、S793、N803、S845、N854、S872及びR925の位置のうちの2つから選択される、WT-Cas9タンパク質に導入された二重置換変異からなる群から選択される置換変異を含む、請求項14に記載の変異Cas9タンパク質をコードする単離された核酸。 - 変異Cas9タンパク質が、R494C又はR494A;N522K又はN522A;N588D又はN588A;N612A;T657A;S663A;R691S又はR691A;N692D又はN692A;S730G又はS730A;T740A;R765G又はR765A;T770K又はT770A;N776A;R778A;R783A;S793A;N803D又はN803A;S845A;N854K又はN854A;S872A;及びR925C又はR925Aの位置のうちの2つから選択される、WT-Cas9タンパク質に導入された二重置換変異からなる群から選択される置換変異を含む、請求項14に記載の変異Cas9タンパク質をコードする単離された核酸。
- 変異Cas9タンパク質が、配列番号7~38からなる群から選択される、請求項14に記載の変異Cas9タンパク質をコードする単離された核酸。
- 変異Cas9タンパク質が、配列番号39~88からなる群から選択される、請求項14に記載の変異Cas9タンパク質をコードする単離された核酸。
- 変異Cas9タンパク質及びgRNAを含むCRISPR/Casエンドヌクレアーゼ系であって、野生型CRISPR/Casエンドヌクレアーゼ系と比較して、減少したオフターゲット編集活性及び維持されたオンターゲット編集活性を示すCRISPR/Casエンドヌクレアーゼ系。
- DNA発現ベクターによってコードされる、請求項19に記載のCRISPR/Casエンドヌクレアーゼ系。
- DNA発現ベクターが、プラスミドによるベクターを含む、請求項19に記載のCRISPR/Casエンドヌクレアーゼ系。
- DNA発現ベクターが、細菌発現ベクター及び真核細胞発現ベクターから選択される、請求項19に記載のCRISPR/Casエンドヌクレアーゼ系。
- gRNAが、化学量論(1:1)比のcrRNA及びtracrRNAを含む、請求項19に記載のCRISPR/Casエンドヌクレアーゼ系。
- crRNAが、所与の遺伝子座についての特定の編集標的部位に対するAlt-R(登録商標)crRNAを含み、tracrRNAが、Alt-R(登録商標)tracrRNAを含む、請求項23に記載のCRISPR/Casエンドヌクレアーゼ系。
- gRNAがsgRNAを含む、請求項19に記載のCRISPR/Casエンドヌクレアーゼ系。
- 変異Cas9タンパク質が、
(a)R494、N522、N588、N612、T657、S663、R691、N692、S730、T740、R765、T770、N776、R778、R783、S793、N803、S845、N854、S872及びR925の位置から選択される、WT-Cas9タンパク質に導入された単一置換変異、又は
(b)R494、N522、N588、N612、T657、S663、R691、N692、S730、T740、R765、T770、N776、R778、R783、S793、N803、S845、N854、S872及びR925の位置のうちの2つから選択される、WT-Cas9タンパク質に導入された二重置換変異
からなる群から選択される置換変異を含む、請求項19に記載のCRISPR/Casエンドヌクレアーゼ系。 - 変異Cas9タンパク質が、R494C又はR494A;N522K又はN522A;N588D又はN588A;N612A;T657A;S663A;R691S又はR691A;N692D又はN692A;S730G又はS730A;T740A;R765G又はR765A;T770K又はT770A;N776A;R778A;R783A;S793A;N803D又はN803A;S845A;N854K又はN854A;S872A;及びR925C又はR925Aの位置のうちの2つから選択される、WT-Cas9タンパク質に導入された二重置換変異からなる群から選択される置換変異を含む、請求項19に記載のCRISPR/Casエンドヌクレアーゼ系。
- 変異Cas9タンパク質が、配列番号7~38からなる群から選択される、請求項19に記載のCRISPR/Casエンドヌクレアーゼ系。
- 変異Cas9タンパク質が、配列番号39~88からなる群から選択される、請求項19に記載のCRISPR/Casエンドヌクレアーゼ系。
- オフターゲット編集活性を減少させる及び/又はオンターゲット編集活性を増加させる遺伝子編集を実施する方法であって、
候補編集標的部位遺伝子座を、変異Cas9タンパク質を有する活性CRISPR/Casエンドヌクレアーゼ系と接触させるステップを含み、前記活性CRISPR/Casエンドヌクレアーゼ系が、野生型CRISPR/Casエンドヌクレアーゼ系と比較して、減少したオフターゲット編集活性及び維持されたオンターゲット編集活性を示す、方法。 - 変異Cas9タンパク質が、
(a)R494、N522、N588、N612、T657、S663、R691、N692、S730、T740、R765、T770、N776、R778、R783、S793、N803、S845、N854、S872及びR925の位置から選択される、WT-Cas9タンパク質に導入された単一置換変異又は
(b)R494、N522、N588、N612、T657、S663、R691、N692、S730、T740、R765、T770、N776、R778、R783、S793、N803、S845、N854、S872及びR925の位置のうちの2つから選択される、WT-Cas9タンパク質に導入された二重置換変異
からなる群から選択される置換変異を含む、請求項30に記載の方法。 - 変異Cas9タンパク質が、R494C又はR494A;N522K又はN522A;N588D又はN588A;N612A;T657A;S663A;R691A;N692D又はN692A;S730G又はS730A;T740A;R765G又はR765A;T770K又はT770A;N776A;R778A;R783A;S793A;N803D又はN803A;S845A;N854K又はN854A;S872A;及びR925C又はR925Aの位置のうちの2つから選択される、WT-Cas9タンパク質
に導入された二重置換変異からなる群から選択される置換変異を含む、請求項30に記載の方法。 - 変異Cas9タンパク質が、配列番号7~38からなる群から選択される、請求項30に記載の方法。
- 変異Cas9タンパク質が、配列番号39~88からなる群から選択される、請求項30に記載の方法。
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WO2022238958A1 (en) | 2021-05-12 | 2022-11-17 | Crispr Therapeutics Ag | Multiplex gene editing |
WO2022266139A2 (en) | 2021-06-14 | 2022-12-22 | Graphite Bio, Inc. | Methods to genetically engineer hematopoietic stem and progenitor cells for red cell specific expression of therapeutic proteins |
CN118647714A (zh) * | 2021-07-02 | 2024-09-13 | 综合Dna技术公司 | 通过宽扫描诱变发现的化脓性链球菌cas9中的新突变证明dna切割活性的增强 |
CN113774085B (zh) * | 2021-08-20 | 2023-08-15 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 | 一种单碱基编辑工具TaC9-ABE及其应用 |
CN117230041A (zh) * | 2022-10-25 | 2023-12-15 | 山东舜丰生物科技有限公司 | 编辑活性提高的Cas蛋白及其应用 |
WO2024102947A1 (en) * | 2022-11-09 | 2024-05-16 | The Regents Of The University Of California | Cas12a system for combinatorial transcriptional repression in eukaryotic cells |
WO2024137533A1 (en) | 2022-12-19 | 2024-06-27 | Graphite Bio, Inc. | Improved peptide inhibitors of p53 binding protein 53bp1 |
Family Cites Families (30)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP3257675B2 (ja) | 1990-10-12 | 2002-02-18 | マックス−プランク−ゲゼルシャフト ツール フェルデルング デル ビッセンシャフテン エー.ファウ. | 修飾リボザイム |
US6248878B1 (en) | 1996-12-24 | 2001-06-19 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Nucleoside analogs |
US9895451B2 (en) | 2011-12-02 | 2018-02-20 | Yale University | Formulations for targeted release of agents to low pH tissue environments or cellular compartments and methods of use thereof |
DE202013012610U1 (de) | 2012-10-23 | 2017-11-24 | Toolgen, Inc. | Zusammensetzung zum Spalten einer Ziel-DNA, umfassend eine für die Ziel-DNA spezifische guide-RNA und eine Cas-Protein-codierende Nukleinsäure oder ein Cas-Protein, sowie deren Verwendung |
US8697359B1 (en) | 2012-12-12 | 2014-04-15 | The Broad Institute, Inc. | CRISPR-Cas systems and methods for altering expression of gene products |
ES2658401T3 (es) * | 2012-12-12 | 2018-03-09 | The Broad Institute, Inc. | Suministro, modificación y optimización de sistemas, métodos y composiciones para la manipulación de secuencias y aplicaciones terapéuticas |
ES2598115T3 (es) | 2012-12-12 | 2017-01-25 | The Broad Institute, Inc. | Ingeniería de sistemas, métodos y composiciones de guía optimizadas para manipulación de secuencias |
WO2014124226A1 (en) | 2013-02-07 | 2014-08-14 | The Rockefeller University | Sequence specific antimicrobials |
US9234213B2 (en) * | 2013-03-15 | 2016-01-12 | System Biosciences, Llc | Compositions and methods directed to CRISPR/Cas genomic engineering systems |
KR102271292B1 (ko) | 2013-03-15 | 2021-07-02 | 더 제너럴 하스피탈 코포레이션 | Rna-안내 게놈 편집의 특이성을 증가시키기 위한 rna-안내 foki 뉴클레아제(rfn)의 용도 |
BR112016003591A8 (pt) | 2013-08-22 | 2018-01-30 | Du Pont | promotor u6 de polimerase iii de soja e métodos de uso |
US10435685B2 (en) | 2014-08-19 | 2019-10-08 | Pacific Biosciences Of California, Inc. | Compositions and methods for enrichment of nucleic acids |
JP6190995B2 (ja) | 2014-11-17 | 2017-09-06 | 国立大学法人 東京医科歯科大学 | 簡便で高効率の遺伝子改変非ヒト哺乳動物の作製方法 |
US10900034B2 (en) | 2014-12-03 | 2021-01-26 | Agilent Technologies, Inc. | Guide RNA with chemical modifications |
EP3234133B1 (en) | 2014-12-18 | 2020-11-11 | Integrated DNA Technologies, Inc. | Crispr-based compositions and methods of use |
CN107250373A (zh) | 2015-01-12 | 2017-10-13 | 麻省理工学院 | 通过微流体递送实现的基因编辑 |
KR20190112855A (ko) | 2015-01-28 | 2019-10-07 | 파이어니어 하이 부렛드 인터내쇼날 인코포레이팃드 | Crispr 하이브리드 dna/rna 폴리뉴클레오티드 및 사용 방법 |
CA2978314A1 (en) * | 2015-03-03 | 2016-09-09 | The General Hospital Corporation | Engineered crispr-cas9 nucleases with altered pam specificity |
JP2018513681A (ja) | 2015-03-31 | 2018-05-31 | エクセリゲン サイエンティフィック, インコーポレイテッドExeligen Scientific, Inc. | 細胞または生物のゲノムへのDNA配列の標的化組み込みのためのCas9レトロウイルスインテグラーゼおよびCas9レコンビナーゼ系 |
EP3280803B1 (en) | 2015-04-06 | 2021-05-26 | The Board of Trustees of the Leland Stanford Junior University | Chemically modified guide rnas for crispr/cas-mediated gene regulation |
US20160362667A1 (en) * | 2015-06-10 | 2016-12-15 | Caribou Biosciences, Inc. | CRISPR-Cas Compositions and Methods |
US9790490B2 (en) | 2015-06-18 | 2017-10-17 | The Broad Institute Inc. | CRISPR enzymes and systems |
MX2017016289A (es) * | 2015-06-18 | 2018-08-15 | Broad Inst Inc | Mutaciones de la enzima crispr que reducen los efectos fuera del blanco. |
KR20240090567A (ko) * | 2015-08-28 | 2024-06-21 | 더 제너럴 하스피탈 코포레이션 | 조작된 crispr-cas9 뉴클레아제 |
US10369232B2 (en) | 2015-09-21 | 2019-08-06 | Arcturus Therapeutics, Inc. | Allele selective gene editing and uses thereof |
US20170246260A1 (en) | 2016-02-25 | 2017-08-31 | Agenovir Corporation | Modified antiviral nuclease |
CN109415729B (zh) | 2016-04-21 | 2022-12-09 | 生命技术公司 | 具有降低毒性的基因编辑试剂 |
CN106244591A (zh) | 2016-08-23 | 2016-12-21 | 苏州吉玛基因股份有限公司 | 修饰crRNA在CRISPR/Cpf1基因编辑系统中的应用 |
US10717978B2 (en) * | 2016-10-07 | 2020-07-21 | Integrated Dna Technologies, Inc. | S. pyogenes CAS9 mutant genes and polypeptides encoded by same |
IT201700016321A1 (it) | 2017-02-14 | 2018-08-14 | Univ Degli Studi Di Trento | Mutanti di cas9 ad alta specificita' e loro applicazioni. |
-
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Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
NATURE, vol. 523, JPN6021031497, 2015, pages 481 - 485, ISSN: 0005170687 * |
NATURE, vol. 529, JPN6021031506, 2016, pages 490 - 495, ISSN: 0005170685 * |
SCIENCE, vol. 351, no. 6268, JPN6021031503, 2016, pages 84 - 88, ISSN: 0005170686 * |
XAVIER TADEO: "IDT Launches New CRISPR with Increased Editing Efficiency", LABCRITICS [ONLINE], JPN7021003177, 2015, ISSN: 0005170688 * |
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