JP2022550671A

JP2022550671A - 植物活性物質およびその抗汚染効果

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Publication number: JP2022550671A
Application number: JP2022513211A
Authority: JP
Inventors: ムハンメドマジード; カリヤナムナガブシャナム; ラクシュミムンドクル
Original assignee: サミ－サビンサグループリミテッド
Priority date: 2019-08-26
Filing date: 2020-08-26
Publication date: 2022-12-05
Anticipated expiration: 2040-08-26
Also published as: US11351102B2; CN114630650A; WO2021041559A1; CA3152792A1; EP4021397A1; JP7679359B2; EP4021397A4; CN114630650B; KR20220049575A; US20210059919A1

Abstract

本発明は、１０質量％以上のオロキシリンＡ、１０質量％以上のバイカレインおよび２質量％以上のクリシンを含む組成物；９５質量％オキシレスベラトロール；９５質量％テトラヒドロクルクミン；９０質量％プテロスチルベン；ならびに少なくとも１０質量％のβ－グルコガリンおよび少なくとも１０質量％の全ムチン酸ガレートを含む組成物を含む群から選択される１種または植物活性物質を使用して、ＵＶ放射および環境汚染物質の有害な効果に対して哺乳動物の皮膚を保護するための方法を開示する。本発明は、前述の植物活性物質を使用して、環境汚染物質およびＵＶ放射に曝露された哺乳動物の皮膚を浄化し若返らせるための方法も開示する。【図１】

Description

関連出願の相互参照
これは、２０１９年８月２６日出願の米国仮出願第６２８９１９１３号に基づく優先権を主張するＰＣＴ出願であり、その主題は参照により本明細書に組み込まれる。
本発明は概して、様々な植物源から単離される天然の生理活性分子の抗汚染効果に関する。詳細には、本発明は、有害なＵＶ放射および環境汚染物質に対して皮膚を保護するための植物活性物質の使用に関する。

人々の全身の健康に対する大気汚染の影響は多様である。これは、いくつかの健康問題を引き起こすことにより、我々の日常生活に影響を及ぼす。これらの汚染物質の主要な影響のうちの１つは、酸化損傷を引き起こすか、または細胞タンパク質、ＤＮＡおよび脂質の正常な機能を妨げることから、皮膚に現れる。皮膚は様々な汚染物質に曝露されており、それにより早期皮膚老化、色素沈着斑もしくはざ瘡が引き起こされるか、またはアトピー性皮膚炎、乾癬、さらには皮膚がんなどのより重篤な皮膚科の問題がもたらされる（English, J.S., R.S. Dawe, and J. Ferguson, Environmental effects and skin disease. Br Med Bull, 2003. 68: p. 129-42）。
主な汚染発生源には、粒子状物質、多環芳香族炭化水素（ＰＡＨ）、揮発性有機化合物（ＶＯＣ）、窒素および硫黄酸化物、一酸化炭素、オゾンならびに重金属が含まれる（Baudouin, C., et al., Environmental pollutants and skin cancer. Cell Biol Toxicol, 2002. 18(5): p. 341-8）。有毒ガス（ＣＯ２、ＣＯ、ＳＯ２、ＮＯ、ＮＯ２）、低分子量炭化水素、残留性有機汚染物質（例えば、ダイオキシン）、重金属（例えば、鉛、水銀）および粒子状物質（ＰＭ）は、発生源から形成される一次汚染物質を形成する。オゾン（Ｏ３）、ＮＯ２、ペルオキシアセチルナイトレート、過酸化水素およびアルデヒドを含む二次汚染物質は、一次汚染物質を伴う化学および光化学反応を介して、大気中で形成される（Kampa, M. and E. Castanas, Human health effects of air pollution. Environ Pollut, 2008. 151(2): p. 362-7）。ベンゾ（ａ）ピレン（ＢａＰ）が主要な成分である一部の環境汚染物質は、潜在的に危険である。ＢａＰは、国際がん研究機関（ＩＡＲＣ）によりクラス１の発癌物質として特定されている。ＢａＰは、非常に有毒な過酸化物、キノン、硫黄および窒素誘導体へと代謝される。ＢａＰの主な発生源は、輸送に関連する排出物（ガソリン燃焼、タールマカダム、およびタイヤの摩耗、石炭および木材）である。他の発生源は、管理されていない火、ごみの焼却および産業排出物由来でありうる。

炭素粒子およびＰＡＨで被覆されたこれらの汚染物質は皮膚を損傷し、皮膚バリアの変質、酸化ストレス、炎症、および細胞の劣化をもたらす。これらの汚染物質は、色素増加症、炎症、コラーゲン分解、エラスチン分解などの、皮膚に関連するいくつかの特定の問題を引き起こす。ＵＶＡなどの環境汚染物質は、マトリックスタンパク質のエラスチンおよびコラーゲンを分解する酵素であるマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）の形成を上方制御し、これが防止されなければ、皮膚の弾力の著しい低下およびシワの増大がもたらされうる（Risom, L., P. Moller, and S. Loft, Oxidative stress-induced DNA damage by particulate air pollution. Mutat Res, 2005. 592(1-2): p. 119-37; Moller, P. and S. Loft, Oxidative damage to DNA and lipids as biomarkers of exposure to air pollution. Environ Health Perspect, 2010. 118(8): p. 1126-36）。ＵＶＡは、ＵＶＢと比較して皮膚により深く浸透することが可能であり、光老化、光発癌および光線皮膚症に寄与し、線維芽細胞および皮膚内部のより深くにある細胞における酸化ストレスを増大させる。青色光（携帯端末、ＴＶ、ラップトップ／デスクトップ画面からの光）が、同様の影響を及ぼすと報告されている（Godley et al., Blue Light Induces Mitochondrial DNA Damage and Free Radical Production in Epithelial Cells, The Journal Of Biological Chemistry, 2005, 280(22):21061-21066）。皮膚に対する様々な大気汚染物質の影響が、以下の先行技術文献にまとめられている。
ａ．Araviiskaia et al., The impact of airborne pollution on skin, J Eur Acad Dermatol Venereol. 2019; 33(8): 1496-1505.
ｂ．Drakaki et al., Air pollution and the skin, Front. Environ. Sci., 2014; 2:1-6
ｃ．Doris Day, The Impact of Pollution on The Skin, HCP live, The Impact of Pollution on The Skin, Source: hcplive.com/view/the-impact-of-pollution-on-the-skin、２０２０年８月２０日アクセス。

抗汚染製品は、
ａ．抗酸化活性により、有害な活性酸素種に対して皮膚組織を保護すること
ｂ．炎症およびアレルギー反応を低下させること
ｃ．汚染物質に曝露されると皮膚内で生じる細胞死を停止させることにおいて役立つこと
により、様々な大気汚染物質のインパクトを防止すると考えられる。

植物ベースの製品は現在、毒性が低いというその性質によってより注目を集めている。ウコン、ココナツ、ココア、バジル、タマネギ、緑茶、コロハ、カンゾウ、ローズマリー、アロエなどの精油および植物抽出物が、皮膚ケア製品に使用されている（Aburjai & Natsheh, Plants used in cosmetics, Phytotherapy Research, 2003; 17(9), 987-1000. doi:10.1002/ptr.1363）。クルクマ・ロンガ（ウコン）（Ｃｕｒｃｕｍａｌｏｎｇａ）から単離されるテトラヒドロクルクミンは、その皮膚美白効果により報告されている（Majeed et al.、米国特許第６６５３３２７号）。レスベラトロールおよびオキシレスベラトロールも、皮膚ケアおよび皮膚美白効果について周知である。オロキシルム・インディクム（ソリザヤノキ）（Ｏｒｏｘｙｌｕｍｉｎｄｉｃｕｍ）の果実も皮膚に良いと報告されており、皮膚疾患の治療に使用されている（Chauhan et al., Shyonak, Sona Patha (Oroxylum indicum) - Properties, benefits and dosage, Planet Ayurveda, planetayurveda.com/library/shyonak-oroxylum-indicum/、２０２０年８月２２日アクセス）。プテロカルプス・マルスピウム（Ｐｔｅｒｏｃａｒｐｕｓｍａｒｓｕｐｉｕｍ）抽出物も、その皮膚美白および抗老化効果について報告されている（Majeed et al., An Open-Label Single-Arm, Monocentric Study Assessing the Efficacy and Safety of Natural Pterostilbene (Pterocarpus marsupium) for Skin Brightening and Antiaging Effects, Clin Cosmet Investig Dermatol. 2020; 13: 105-116）。しかし、皮膚ケアおよび皮膚美白に使用される全ての製品が、有害な汚染物質に対して皮膚を保護するのに効果的なわけではないことは、一般的な専門知識である。有害な汚染物質に対する最大の保護を付与する、植物から単離される１種または複数種の生理活性分子を含む天然の組成物を発見するという、満たされていない産業上の必要性が未だ存在する。さらに、組成物は汚染物質から皮膚を保護することができ、かつ環境汚染物質に曝露された皮膚を浄化し若返らせることもできなければならない。本発明は、９５質量％オキシレスベラトロール；９５質量％テトラヒドロクルクミン；少なくとも１０質量％β－グルコガリンおよび少なくとも１０質量％の全ムチン酸ガレート（ｔｏｔａｌｍｕｃｉｃａｃｉｄｇａｌｌａｔｅ）を含む組成物；ならびに１０質量％以上のオロキシリンＡ、１０質量％以上のバイカレインおよび２質量％以上のクリシンを含む組成物を含む群から選択される１種または複数種の生理活性分子を含む組成物を開示することにより、上記の問題を解決する。

本発明の主な目的は、９５質量％オキシレスベラトロール；９５質量％テトラヒドロクルクミン；少なくとも１０質量％のβ－グルコガリンおよび少なくとも１０質量％の全ムチン酸ガレートを含む組成物；ならびに１０質量％以上のオロキシリンＡ、１０質量％以上のバイカレインおよび２質量％以上のクリシンを含む組成物からなる群から選択される１種または複数種の成分を含む組成物を使用して、ＵＶ放射および環境汚染物質の有害な効果に対して哺乳動物の皮膚を保護するための方法を開示することである。
本発明の他の目的は、９５質量％オキシレスベラトロール；９５質量％テトラヒドロクルクミン；９０質量％プテロスチルベン；少なくとも１０質量％のβ－グルコガリンおよび少なくとも１０質量％の全ムチン酸ガレートを含む組成物；ならびに１０質量％以上のオロキシリンＡ、１０質量％以上のバイカレインおよび２質量％以上のクリシンを含む組成物からなる群から選択される１種または複数種の成分を含む組成物を使用して、環境汚染物質およびＵＶ放射に曝露された哺乳動物の皮膚を浄化し若返らせるための方法を開示することである。
本発明は上記の目的を満たし、さらなる関連の利点を提供する。

最も好ましい実施形態では、本発明は、ＵＶ放射および環境汚染物質の有害な効果に対して哺乳動物の皮膚を保護するための方法であって、１０質量％以上のオロキシリンＡ、１０質量％以上のバイカレインおよび２質量％以上のクリシンを含む組成物；９５質量％オキシレスベラトロール；９５質量％テトラヒドロクルクミン；９０質量％プテロスチルベン；ならびに少なくとも１０質量％のβ－グルコガリンおよび少なくとも１０質量％の全ムチン酸ガレートを含む組成物からなる群から選択される１種または複数種の成分を含む組成物を、そのような保護を必要とする哺乳動物に局所投与するステップを含む、方法を開示する。

最も好ましい実施形態では、本発明は、環境汚染物質およびＵＶ放射に曝露された哺乳動物の皮膚を浄化し若返らせるための方法であって、１０質量％以上のオロキシリンＡ、１０質量％以上のバイカレインおよび２質量％以上のクリシンを含む組成物；９５質量％オキシレスベラトロール；９５質量％テトラヒドロクルクミン；９０質量％プテロスチルベン；ならびに少なくとも１０質量％のβ－グルコガリンおよび少なくとも１０質量％の全ムチン酸ガレートを含む組成物からなる群から選択される１種または複数種の成分を含む組成物を、そのような効果を必要とする哺乳動物に局所投与するステップを含む、方法を開示する。
本発明の他の特性および利点は、例によって本発明の原理を例証する、以下のより詳細な説明より明らかとなる。

オロキシリン、バイカレインおよびクリシンを含む組成物を用いた、ＵＶＡおよびＢａＰ誘導性の損傷に対するヒトＨａＣａＴケラチノサイト細胞の保護を示すグラフ表示である。オロキシリン、バイカレインおよびクリシンを含む組成物を用いた、重金属により誘導されるＲＯＳの低下を示すグラフ表示である。オロキシリン、バイカレインおよびクリシンを含む組成物を用いた、ＵＶＡ誘導性ＲＯＳの低下を示すグラフ表示である。オロキシリン、バイカレインおよびクリシンを含む組成物を用いた、ＵＶＢ誘導性ＲＯＳの低下を示すグラフ表示である。オロキシリン、バイカレインおよびクリシンを含む組成物による、スーパーオキシドジスムターゼ活性の用量依存性の増大を示すグラフ表示である。ＵＥ－未曝露、ＵＶ－曝露オロキシリン、バイカレインおよびクリシンを含む組成物による、グルタチオンペルオキシダーゼ活性の用量依存性の減少を示すグラフ表示である。ＵＥ－未曝露、ＵＶ－曝露 β－グルコガリンを含む組成物を用いた、ＵＶＡおよびＢａＰ誘導性の損傷に対するヒトＨａＣａＴケラチノサイト細胞の保護を示すグラフ表示である。 β－グルコガリンを含む組成物を用いた、重金属により誘導されるＲＯＳの低下を示すグラフ表示である。 β－グルコガリンを含む組成物を用いた、ＵＶＡ誘導性ＲＯＳの低下を示すグラフ表示である。 β－グルコガリンを含む組成物を用いた、ＵＶＢ誘導性ＲＯＳの低下を示すグラフ表示である。 β－グルコガリンを含む組成物による、スーパーオキシドジスムターゼ活性の用量依存性の増大を示すグラフ表示である。ＵＥ－未曝露、ＵＶ－曝露 β－グルコガリンを含む組成物による、グルタチオンペルオキシダーゼ活性の用量依存性の減少を示すグラフ表示である。ＵＥ－未曝露、ＵＶ－曝露９５％テトラヒドロクルクミンを用いた、ＵＶＡおよびＢａＰ誘導性の損傷に対するヒトＨａＣａＴケラチノサイト細胞の保護を示すグラフ表示である。９５％テトラヒドロクルクミンを用いた、重金属により誘導されるＲＯＳの低下を示すグラフ表示である。９５％テトラヒドロクルクミンを用いた、ＵＶＡ誘導性ＲＯＳの低下を示すグラフ表示である。９５％テトラヒドロクルクミンを用いた、ＵＶＢ誘導性ＲＯＳの低下を示すグラフ表示である。９５％テトラヒドロクルクミンによる、スーパーオキシドジスムターゼ活性の用量依存性の増大を示すグラフ表示である。ＵＥ－未曝露、ＵＶ－曝露９５％テトラヒドロクルクミンによる、グルタチオンペルオキシダーゼ活性の用量依存性の減少を示すグラフ表示である。ＵＥ－未曝露、ＵＶ－曝露９５％オキシレスベラトロールを用いた、ＵＶＡおよびＢａＰ誘導性の損傷に対するヒトＨａＣａＴケラチノサイト細胞の保護を示すグラフ表示である。９５％オキシレスベラトロールを用いた、重金属により誘導されるＲＯＳの低下を示すグラフ表示である。９５％オキシレスベラトロールを用いた、ＵＶＡ誘導性ＲＯＳの低下を示すグラフ表示である。９５％オキシレスベラトロールを用いた、ＵＶＢ誘導性ＲＯＳの低下を示すグラフ表示である。９５％オキシレスベラトロールによる、スーパーオキシドジスムターゼ活性の用量依存性の増大を示すグラフ表示である。ＵＥ－未曝露、ＵＶ－曝露９５％オキシレスベラトロールによる、グルタチオンペルオキシダーゼ活性の用量依存性の減少を示すグラフ表示である。ＵＥ－未曝露、ＵＶ－曝露

最も好ましい実施形態では、本発明は、ＵＶ放射および環境汚染物質の有害な効果に対して哺乳動物の皮膚を保護するための方法であって、１０質量％以上のオロキシリンＡ、１０質量％以上のバイカレインおよび２質量％以上のクリシンを含む組成物を、そのような保護を必要とする哺乳動物に局所投与するステップを含む、方法を開示する。関連の実施形態では、組成物は、９５質量％オキシレスベラトロール；９５質量％テトラヒドロクルクミン；９０質量％プテロスチルベン；ならびに少なくとも１０質量％のβ－グルコガリンおよび少なくとも１０質量％の全ムチン酸ガレートを含む組成物からなる群から選択される１種または複数種の成分をさらに含む。別の関連の態様では、環境汚染物質は、粒子状物質、多環芳香族炭化水素（ＰＡＨ）、揮発性有機化合物（ＶＯＣ）、界面活性剤、窒素および硫黄酸化物、一酸化炭素、オゾン、ならびに重金属を含むリストから選択されるがこれらに限定されない。さらに別の関連の態様では、組成物は、抗酸化酵素のレベルを増大させ、ＲＯＳレベルを減少させ、炎症マーカーのレベルを低下させることにより皮膚の保護を付与する。別の関連の態様では、抗酸化酵素は、グルタチオンペルオキシダーゼ、スーパーオキシドジスムターゼおよびカタラーゼからなる群から選択される。別の関連の態様では、炎症マーカーは、インターロイキン（ＩＬ）－１アルファ、ＩＬ－１ベータ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－アルファおよびＩＬ－８からなる群から選択される。別の関連の態様では、炎症マーカーはＩＬ－８である。

別の最も好ましい実施形態では、本発明は、環境汚染物質およびＵＶ放射に曝露された哺乳動物の皮膚を浄化し若返らせるための方法であって、１０質量％以上のオロキシリンＡ、１０質量％以上のバイカレインおよび２質量％以上のクリシンを含む組成物を、そのような効果を必要とする哺乳動物に局所投与するステップを含む、方法を開示する。関連の実施形態では、組成物は、９５質量％オキシレスベラトロール；９５質量％テトラヒドロクルクミン；９０質量％プテロスチルベン；ならびに少なくとも１０質量％のβ－グルコガリンおよび少なくとも１０質量％の全ムチン酸ガレートを含む組成物からなる群から選択される１種または複数種の成分をさらに含む。別の関連の態様では、環境汚染物質は、粒子状物質、多環芳香族炭化水素（ＰＡＨ）、揮発性有機化合物（ＶＯＣ）、界面活性剤、窒素および硫黄酸化物、一酸化炭素、オゾン、ならびに重金属を含むリストから選択されるがこれらに限定されない。さらに別の関連の態様では、組成物は、コラゲナーゼ活性を減少させ、抗酸化酵素のレベルを増大させ、ＲＯＳレベルを減少させ、炎症マーカーのレベルを低下させることにより皮膚の保護を付与する。別の関連の態様では、抗酸化酵素は、グルタチオンペルオキシダーゼ、スーパーオキシドジスムターゼおよびカタラーゼからなる群から選択される。別の関連の態様では、炎症マーカーは、インターロイキン（ＩＬ）－１アルファ、ＩＬ－１ベータ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－アルファおよびＩＬ－８からなる群から選択される。別の関連の態様では、炎症マーカーはＩＬ－８である。

別の最も好ましい実施形態では、本発明は、ＵＶ放射および環境汚染物質の有害な効果に対して哺乳動物の皮膚を保護するのに使用するための、１０質量％以上のオロキシリンＡ、１０質量％以上のバイカレインおよび２質量％以上のクリシンを含む組成物を開示する。関連の態様では、本発明は、環境汚染物質およびＵＶ放射に曝露された哺乳動物の皮膚を浄化し若返らせるのに使用するための、１０質量％以上のオロキシリンＡ、１０質量％以上のバイカレインおよび２質量％以上のクリシンを含む組成物を開示する。関連の実施形態では、組成物は、９５質量％オキシレスベラトロール；９５質量％テトラヒドロクルクミン；９０質量％プテロスチルベン；ならびに少なくとも１０質量％のβ－グルコガリンおよび少なくとも１０質量％の全ムチン酸ガレートを含む組成物からなる群から選択される１種または複数種の成分をさらに含む。別の関連の態様では、環境汚染物質は、粒子状物質、多環芳香族炭化水素（ＰＡＨ）、揮発性有機化合物（ＶＯＣ）、界面活性剤、窒素および硫黄酸化物、一酸化炭素、オゾン、ならびに重金属を含むリストから選択されるがこれらに限定されない。さらに別の関連の態様では、組成物は、コラゲナーゼ活性を減少させ、抗酸化酵素のレベルを増大させ、ＲＯＳレベルを減少させ、炎症マーカーのレベルを低下させることにより皮膚の保護を付与する。別の関連の態様では、抗酸化酵素は、グルタチオンペルオキシダーゼ、スーパーオキシドジスムターゼおよびカタラーゼからなる群から選択される。別の関連の態様では、炎症マーカーは、インターロイキン（ＩＬ）－１アルファ、ＩＬ－１ベータ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－アルファおよびＩＬ－８からなる群から選択される。別の関連の態様では、炎症マーカーはＩＬ－８である。関連の態様では、組成物は、医薬的に／薬用化粧品的に許容される賦形剤、補助剤、基剤、希釈剤、担体、調整剤、抗酸化物質、バイオアベイラビリティ増強剤、および保存料とともに製剤化され、かつ／または皮膚ケア成分を含有する製剤に組み込まれ、かつクリーム、ゲル、ローション、パウダー、セラム、油、懸濁剤、軟膏、石けん、スクラブ、乳剤、およびコンパクトの形態で局所投与される。

最も好ましい実施形態では、本発明は、ＵＶ放射および環境汚染物質の有害な効果に対して哺乳動物の皮膚を保護するための方法であって、９５質量％オキシレスベラトロールを含む組成物を、そのような保護を必要とする哺乳動物に局所投与するステップを含む、方法を開示する。関連の実施形態では、組成物は、１０質量％以上のオロキシリンＡ、１０質量％以上のバイカレインおよび２質量％以上のクリシンを含む組成物；９５質量％テトラヒドロクルクミン；９０質量％プテロスチルベン；ならびに少なくとも１０質量％のβ－グルコガリンおよび少なくとも１０質量％の全ムチン酸ガレートを含む組成物からなる群から選択される１種または複数種の成分をさらに含む。別の関連の態様では、環境汚染物質は、粒子状物質、多環芳香族炭化水素（ＰＡＨ）、揮発性有機化合物（ＶＯＣ）、界面活性剤、窒素および硫黄酸化物、一酸化炭素、オゾン、ならびに重金属を含むリストから選択されるがこれらに限定されない。さらに別の関連の態様では、組成物は、抗酸化酵素のレベルを増大させ、ＲＯＳレベルを減少させ、炎症マーカーのレベルを低下させることにより皮膚の保護を付与する。別の関連の態様では、抗酸化酵素は、グルタチオンペルオキシダーゼ、スーパーオキシドジスムターゼおよびカタラーゼからなる群から選択される。別の関連の態様では、炎症マーカーは、インターロイキン（ＩＬ）－１アルファ、ＩＬ－１ベータ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－アルファおよびＩＬ－８からなる群から選択される。別の関連の態様では、炎症マーカーはＩＬ－８である。

別の最も好ましい実施形態では、本発明は、環境汚染物質およびＵＶ放射に曝露された哺乳動物の皮膚を浄化し若返らせるための方法であって、９５質量％オキシレスベラトロールを含む組成物を、そのような効果を必要とする哺乳動物に局所投与するステップを含む、方法を開示する。関連の実施形態では、組成物は、１０質量％以上のオロキシリンＡ、１０質量％以上のバイカレインおよび２質量％以上のクリシンを含む組成物；９５質量％テトラヒドロクルクミン；９０質量％プテロスチルベン；ならびに少なくとも１０質量％のβ－グルコガリンおよび少なくとも１０質量％の全ムチン酸ガレートを含む組成物からなる群から選択される１種または複数種の成分をさらに含む。別の関連の態様では、環境汚染物質は、粒子状物質、多環芳香族炭化水素（ＰＡＨ）、揮発性有機化合物（ＶＯＣ）、界面活性剤、窒素および硫黄酸化物、一酸化炭素、オゾン、ならびに重金属を含むリストから選択されるがこれらに限定されない。さらに別の関連の態様では、組成物は、コラゲナーゼ活性を減少させ、抗酸化酵素のレベルを増大させ、ＲＯＳレベルを減少させ、炎症マーカーのレベルを低下させることにより皮膚の保護を付与する。別の関連の態様では、抗酸化酵素は、グルタチオンペルオキシダーゼ、スーパーオキシドジスムターゼおよびカタラーゼからなる群から選択される。別の関連の態様では、炎症マーカーは、インターロイキン（ＩＬ）－１アルファ、ＩＬ－１ベータ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－アルファおよびＩＬ－８からなる群から選択される。別の関連の態様では、炎症マーカーはＩＬ－８である。

別の最も好ましい実施形態では、本発明は、ＵＶ放射および環境汚染物質の有害な効果に対して哺乳動物の皮膚を保護するのに使用するための、９５質量％オキシレスベラトロールを含む組成物を開示する。関連の態様では、本発明は、環境汚染物質およびＵＶ放射に曝露された哺乳動物の皮膚を浄化し若返らせるのに使用するための、９５質量％オキシレスベラトロールを含む組成物を開示する。関連の実施形態では、組成物は、１０質量％以上のオロキシリンＡ、１０質量％以上のバイカレインおよび２質量％以上のクリシンを含む組成物；９５質量％テトラヒドロクルクミン；９０質量％プテロスチルベン；ならびに少なくとも１０質量％のβ－グルコガリンおよび少なくとも１０質量％の全ムチン酸ガレートを含む組成物からなる群から選択される１種または複数種の成分をさらに含む。別の関連の態様では、環境汚染物質は、粒子状物質、多環芳香族炭化水素（ＰＡＨ）、揮発性有機化合物（ＶＯＣ）、界面活性剤、窒素および硫黄酸化物、一酸化炭素、オゾン、ならびに重金属を含むリストから選択されるがこれらに限定されない。さらに別の関連の態様では、組成物は、コラゲナーゼ活性を減少させ、抗酸化酵素のレベルを増大させ、ＲＯＳレベルを減少させ、炎症マーカーのレベルを低下させることにより皮膚の保護を付与する。別の関連の態様では、抗酸化酵素は、グルタチオンペルオキシダーゼ、スーパーオキシドジスムターゼおよびカタラーゼからなる群から選択される。別の関連の態様では、炎症マーカーは、インターロイキン（ＩＬ）－１アルファ、ＩＬ－１ベータ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－アルファおよびＩＬ－８からなる群から選択される。関連の態様では、組成物は、医薬的に／薬用化粧品的に許容される賦形剤、補助剤、基剤、希釈剤、担体、調整剤、抗酸化物質、バイオアベイラビリティ増強剤、および保存料とともに製剤化され、かつ／または皮膚ケア成分を含有する製剤に組み込まれ、かつクリーム、ゲル、ローション、パウダー、セラム、油、懸濁剤、軟膏、石けん、スクラブ、乳剤、およびコンパクトの形態で局所投与される。

最も好ましい実施形態では、本発明は、ＵＶ放射および環境汚染物質の有害な効果に対して哺乳動物の皮膚を保護するための方法であって、９５質量％テトラヒドロクルクミンを含む組成物を、そのような保護を必要とする哺乳動物に局所投与するステップを含む、方法を開示する。関連の実施形態では、組成物は、１０質量％以上のオロキシリンＡ、１０質量％以上のバイカレインおよび２質量％以上のクリシンを含む組成物；９５質量％オキシレスベラトロール；９０質量％プテロスチルベン；ならびに少なくとも１０質量％のβ－グルコガリンおよび少なくとも１０質量％の全ムチン酸ガレートを含む組成物からなる群から選択される１種または複数種の成分をさらに含む。別の関連の態様では、環境汚染物質は、粒子状物質、多環芳香族炭化水素（ＰＡＨ）、揮発性有機化合物（ＶＯＣ）、界面活性剤、窒素および硫黄酸化物、一酸化炭素、オゾン、ならびに重金属を含むリストから選択されるがこれらに限定されない。さらに別の関連の態様では、組成物は、抗酸化酵素のレベルを増大させ、ＲＯＳレベルを減少させ、炎症マーカーのレベルを低下させることにより皮膚の保護を付与する。別の関連の態様では、抗酸化酵素は、グルタチオンペルオキシダーゼ、スーパーオキシドジスムターゼおよびカタラーゼからなる群から選択される。別の関連の態様では、炎症マーカーは、インターロイキン（ＩＬ）－１アルファ、ＩＬ－１ベータ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－アルファおよびＩＬ－８からなる群から選択される。別の関連の態様では、炎症マーカーはＩＬ－８である。

別の最も好ましい実施形態では、本発明は、環境汚染物質およびＵＶ放射に曝露された哺乳動物の皮膚を浄化し若返らせるための方法であって、９５質量％テトラヒドロクルクミンを含む組成物を、そのような効果を必要とする哺乳動物に局所投与するステップを含む、方法を開示する。関連の実施形態では、組成物は、１０質量％以上のオロキシリンＡ、１０質量％以上のバイカレインおよび２質量％以上のクリシンを含む組成物；９５質量％オキシレスベラトロール；９０質量％プテロスチルベン；ならびに少なくとも１０質量％のβ－グルコガリンおよび少なくとも１０質量％の全ムチン酸ガレートを含む組成物からなる群から選択される１種または複数種の成分をさらに含む。別の関連の態様では、環境汚染物質は、粒子状物質、多環芳香族炭化水素（ＰＡＨ）、揮発性有機化合物（ＶＯＣ）、界面活性剤、窒素および硫黄酸化物、一酸化炭素、オゾン、ならびに重金属を含むリストから選択されるがこれらに限定されない。さらに別の関連の態様では、組成物は、コラゲナーゼ活性を減少させ、抗酸化酵素のレベルを増大させ、ＲＯＳレベルを減少させ、炎症マーカーのレベルを低下させることにより皮膚の保護を付与する。別の関連の態様では、抗酸化酵素は、グルタチオンペルオキシダーゼ、スーパーオキシドジスムターゼおよびカタラーゼからなる群から選択される。別の関連の態様では、炎症マーカーは、インターロイキン（ＩＬ）－１アルファ、ＩＬ－１ベータ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－アルファおよびＩＬ－８からなる群から選択される。別の関連の態様では、炎症マーカーはＩＬ－８である。

別の最も好ましい実施形態では、本発明は、ＵＶ放射および環境汚染物質の有害な効果に対して哺乳動物の皮膚を保護するのに使用するための、９５質量％テトラヒドロクルクミンを含む組成物を開示する。関連の態様では、本発明は、環境汚染物質およびＵＶ放射に曝露された哺乳動物の皮膚を浄化し若返らせるのに使用するための、９５質量％テトラヒドロクルクミンを含む組成物を開示する。関連の実施形態では、組成物は、１０質量％以上のオロキシリンＡ、１０質量％以上のバイカレインおよび２質量％以上のクリシンを含む組成物；９５質量％オキシレスベラトロール；９０質量％プテロスチルベン；ならびに少なくとも１０質量％のβ－グルコガリンおよび少なくとも１０質量％の全ムチン酸ガレートを含む組成物からなる群から選択される１種または複数種の成分をさらに含む。別の関連の態様では、環境汚染物質は、粒子状物質、多環芳香族炭化水素（ＰＡＨ）、揮発性有機化合物（ＶＯＣ）、界面活性剤、窒素および硫黄酸化物、一酸化炭素、オゾン、ならびに重金属を含むリストから選択されるがこれらに限定されない。さらに別の関連の態様では、組成物は、コラゲナーゼ活性を減少させ、抗酸化酵素のレベルを増大させ、ＲＯＳレベルを減少させ、炎症マーカーのレベルを低下させることにより皮膚の保護を付与する。別の関連の態様では、抗酸化酵素は、グルタチオンペルオキシダーゼ、スーパーオキシドジスムターゼおよびカタラーゼからなる群から選択される。別の関連の態様では、炎症マーカーは、インターロイキン（ＩＬ）－１アルファ、ＩＬ－１ベータ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－アルファおよびＩＬ－８からなる群から選択される。関連の態様では、組成物は、医薬的に／薬用化粧品的に許容される賦形剤、補助剤、基剤、希釈剤、担体、調整剤、抗酸化物質、バイオアベイラビリティ増強剤および保存料とともに製剤化され、かつ／または皮膚ケア成分を含有する製剤に組み込まれ、かつクリーム、ゲル、ローション、パウダー、セラム、油、懸濁剤、軟膏、石けん、スクラブ、乳剤、およびコンパクトの形態で局所投与される。

最も好ましい実施形態では、本発明は、ＵＶ放射および環境汚染物質の有害な効果に対して哺乳動物の皮膚を保護するための方法であって、少なくとも１０質量％のβ－グルコガリンおよび少なくとも１０質量％の全ムチン酸ガレートを含む組成物を、そのような保護を必要とする哺乳動物に局所投与するステップを含む、方法を開示する。関連の実施形態では、組成物は、１０質量％以上のオロキシリンＡ、１０質量％以上のバイカレインおよび２質量％以上のクリシンを含む組成物；９５質量％オキシレスベラトロール；９０質量％プテロスチルベン；ならびに９５質量％テトラヒドロクルクミン（Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｃｕｒｕｃｍｉｎ）からなる群から選択される１種または複数種の成分をさらに含む。別の関連の態様では、環境汚染物質は、粒子状物質、多環芳香族炭化水素（ＰＡＨ）、揮発性有機化合物（ＶＯＣ）、界面活性剤、窒素および硫黄酸化物、一酸化炭素、オゾン、ならびに重金属を含むリストから選択されるがこれらに限定されない。さらに別の関連の態様では、組成物は、抗酸化酵素のレベルを増大させ、ＲＯＳレベルを減少させ、炎症マーカーのレベルを低下させることにより皮膚の保護を付与する。別の関連の態様では、抗酸化酵素は、グルタチオンペルオキシダーゼ、スーパーオキシドジスムターゼおよびカタラーゼからなる群から選択される。別の関連の態様では、炎症マーカーは、インターロイキン（ＩＬ）－１アルファ、ＩＬ－１ベータ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－アルファおよびＩＬ－８からなる群から選択される。別の関連の態様では、炎症マーカーはＩＬ－８である。

別の最も好ましい実施形態では、本発明は、環境汚染物質およびＵＶ放射に曝露された哺乳動物の皮膚を浄化し若返らせるための方法であって、少なくとも１０質量％のβ－グルコガリンおよび少なくとも１０質量％の全ムチン酸ガレートを含む組成物を、そのような効果を必要とする哺乳動物に局所投与するステップを含む、方法を開示する。関連の実施形態では、組成物は、１０質量％以上のオロキシリンＡ、１０質量％以上のバイカレインおよび２質量％以上のクリシンを含む組成物；９５質量％オキシレスベラトロール；９０質量％プテロスチルベン；ならびに９５質量％テトラヒドロクルクミン（Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｃｕｒｕｃｍｉｎ）からなる群から選択される１種または複数種の成分をさらに含む。別の関連の態様では、環境汚染物質は、粒子状物質、多環芳香族炭化水素（ＰＡＨ）、揮発性有機化合物（ＶＯＣ）、界面活性剤、窒素および硫黄酸化物、一酸化炭素、オゾン、ならびに重金属を含むリストから選択されるがこれらに限定されない。さらに別の関連の態様では、組成物は、コラゲナーゼ活性を減少させ、抗酸化酵素のレベルを増大させ、ＲＯＳレベルを減少させ、炎症マーカーのレベルを低下させることにより皮膚の保護を付与する。別の関連の態様では、抗酸化酵素は、グルタチオンペルオキシダーゼ、スーパーオキシドジスムターゼおよびカタラーゼからなる群から選択される。別の関連の態様では、炎症マーカーは、インターロイキン（ＩＬ）－１アルファ、ＩＬ－１ベータ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－アルファおよびＩＬ－８からなる群から選択される。別の関連の態様では、炎症マーカーはＩＬ－８である。

別の最も好ましい実施形態では、本発明は、ＵＶ放射および環境汚染物質の有害な効果に対して哺乳動物の皮膚を保護するのに使用するための、少なくとも１０質量％のβ－グルコガリンおよび少なくとも１０質量％の全ムチン酸ガレートを含む組成物を開示する。関連の態様では、本発明は、環境汚染物質およびＵＶ放射に曝露された哺乳動物の皮膚を浄化し若返らせるのに使用するための、少なくとも１０質量％のβ－グルコガリンおよび少なくとも１０質量％の全ムチン酸ガレートを含む組成物を開示する。関連の実施形態では、組成物は、１０質量％以上のオロキシリンＡ、１０質量％以上のバイカレインおよび２質量％以上のクリシンを含む組成物；９５質量％オキシレスベラトロール；９０質量％プテロスチルベン；ならびに９５％テトラヒドロクルクミンからなる群から選択される１種または複数種の成分をさらに含む。別の関連の態様では、環境汚染物質は、粒子状物質、多環芳香族炭化水素（ＰＡＨ）、揮発性有機化合物（ＶＯＣ）、界面活性剤、窒素および硫黄酸化物、一酸化炭素、オゾン、ならびに重金属を含むリストから選択されるがこれらに限定されない。さらに別の関連の態様では、組成物は、コラゲナーゼ活性を減少させ、抗酸化酵素のレベルを増大させ、ＲＯＳレベルを減少させ、炎症マーカーのレベルを低下させることにより皮膚の保護を付与する。別の関連の態様では、抗酸化酵素は、グルタチオンペルオキシダーゼ、スーパーオキシドジスムターゼおよびカタラーゼからなる群から選択される。別の関連の態様では、炎症マーカーは、インターロイキン（ＩＬ）－１アルファ、ＩＬ－１ベータ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－アルファおよびＩＬ－８からなる群から選択される。別の関連の態様では、炎症マーカーはＩＬ－８である。関連の態様では、組成物は、医薬的に／薬用化粧品的に許容される賦形剤、補助剤、基剤、希釈剤、担体、調整剤、抗酸化物質、バイオアベイラビリティ増強剤、および保存料とともに製剤化され、かつ／または皮膚ケア成分を含有する製剤に組み込まれ、かつクリーム、ゲル、ローション、パウダー、セラム、油、懸濁剤、軟膏、石けん、スクラブ、乳剤、およびコンパクトの形態で局所投与される。

関連の態様では、１種または複数種の皮膚ケア成分は、アルファリポ酸、ビートルート抽出物、ボスウェリア・セラタ（Ｂｏｓｗｅｌｌｉａｓｅｒｒａｔａ）抽出物、βボスウェリア酸、ボスウェリア・セラタ油、センテラ・アシアティカ（Ｃｅｎｔｅｌｌａａｓｉａｔｉｃａ）抽出物、トリテルペン、ガルシニア・インディカ（Ｇａｒｃｉｎｉａｉｎｄｉｃａ）抽出物、アントシアニン、ココス・ヌシフェラ（Ｃｏｃｏｓｎｕｃｉｆｅｒａ）抽出物および果汁、コレウス・フォルスコリ（Ｃｏｌｅｕｓｆｏｒｓｋｏｈｌｉｉ）抽出物、フォルスコリン、コレウス・フォルスコリ油、テトラヒドロピペリン、エラグ酸、没食子抽出物、ポリフェノール、ガランガ抽出物、グリチルリチン酸、緑茶抽出物、没食子酸エピガロカテキン、カンゾウ抽出物、グリチルリチン酸モノアンモニウム、リモノイド、オレアノール酸、化粧品用ペプチド（Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｔｈｒ－Ｌｙｓ－Ｓｅｒに結合したオレアノール酸、Ｌｙｓ－Ｖａｌ－Ｌｙｓに結合したオレアノール酸）、オレウロペイン、ピペルロングミン抽出物、ピペリン、エラグ酸、ザクロ抽出物（水溶性）、プテロスチルベン、レスベラトロール、プテロカルプス・サンタリヌス（Ｐｔｅｒｏｃａｒｐｕｓｓａｎｔａｌｉｎｕｓ）抽出物、ローズマリー抽出物、ロスマリン酸、アムラ抽出物、ベータグルコガリン、テトラヒドロクルクミン、サルビア・オフィシナリス（ＳａｌｖｉａＯｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）（セージ）葉抽出物、ウルソール酸、サポニン、セサムム・インディクム（Ｓｅｓａｍｕｍｉｎｄｉｃｕｍ）（ゴマ）種子抽出物、セサミンおよびセサモリン、モリンガ油、モリンガ種子抽出物、トチノキ抽出物、バイテックス油、キシメニン酸、エチルアスコルビン酸、アルガン油、レモン果皮抽出物、ウコン油、オオムギベータグルカン、コエンザイムＱ１０、オリーブ油、アボカド油およびクランベリー油からなる群から選択されるがこれらに限定されない。

別の関連の態様では、１種または複数種の抗酸化物質および抗炎症剤は、ビタミンＡ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、Ｃ、Ｂ複合体、ロスマリン酸、アルファリポ酸、エラグ酸、グリチルリチン酸、没食子酸エピガロカテキン、植物ポリフェノール、グラブリジン、モリンガ油、オレアノール酸、オレウロペイン、カルノシン酸、ウロカニン酸、フィトエン、リポイド酸（ｌｉｐｏｉｄａｃｉｄ）、リポアミド、フェリチン、デスフェラール、ビリルビン（ｂｉｌｌｉｒｕｂｉｎ）、ビリベルジン（ｂｉｌｌｉｖｅｒｄｉｎ）、メラニン、ユビキノン、ユビキノール、パルミチン酸アスコルビル、リン酸アスコルビルＭｇ、酢酸アスコルビル、トコフェロールおよびビタミンＥアセテートなどの誘導体、尿酸、α－グルコシルルチン、カタラーゼ（ｃａｌａｌａｓｅ）およびスーパーオキシドジスムターゼ、グルタチオン、セレン化合物、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、メタ重亜硫酸ナトリウム（ＳＭＢ）、没食子酸プロピル（ＰＧ）およびアミノ酸システインからなる群から選択されるがこれらに限定されない。
別の関連の態様では、１種または複数種のバイオアベイラビリティ増強剤は、ピペリン、テトラヒドロピペリン、ケルセチン、ニンニク抽出物、ショウガ抽出物およびナリンギンの群から選択されるがこれらに限定されない。
本明細書は、最も好ましい実施形態を明示する具体的で例証的な実施例を以下に含む。

（実施例１）：方法論
植物活性物質
１０質量％以上のオロキシリンＡ、１０質量％以上のバイカレインおよび２質量％以上のクリシンを含む組成物を、米国特許第１０５５５９８２号のプロセスアウトラインによりオロキシルム・インディクム（ソリザヤノキ）の樹皮から得た。組成物は、ＳａｍｉＬａｂｓＬｉｍｉｔｅｄからＳａｂｒｏｘｙ（登録商標）として市販されている。９５質量％オキシレスベラトロールを、標準化された内部プロセスを使用してアルトカルプス・ラクーチャ（ラクチパンノキ）（Ａｒｔｏｃａｒｐｕｓｌａｋｏｏｃｈａ）から標準化したが、これはＳａｍｉＬａｂｓＬｉｍｉｔｅｄからＡｒｔｏｎｏｘ（登録商標）として市販もされている。９５質量％テトラヒドロクルクミンを含む植物活性物質を、商業的に利用可能なプロセスを使用してクルクマ・ロンガ（ウコン）から単離したが、ＳａｍｉＬａｂｓＬｉｍｉｔｅｄからＳａｂｉｗｈｉｔｅ（登録商標）として入手可能でもある。少なくとも１０質量％のβ－グルコガリンおよび少なくとも１０質量％の全ムチン酸ガレートを含む組成物を、エンブリカ・オフィシナリス（Ｅｍｂｌｉｃａｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）から標準化したが、ＳａｍｉＬａｂｓＬｉｍｉｔｅｄからＳａｂｅｒｒｙ（登録商標）として市販されている。９０質量％プテロスチルベン組成物を、標準化されたプロセスを使用してプテロカルプス・マルスピウムから単離および標準化したが、ＳａｍｉＬａｂｓＬｉｍｉｔｅｄからＰｔｅｒｏｗｈｉｔｅ（登録商標）として市販もされている。

ＲＯＳアッセイ
細胞透過性の非蛍光色素２’，７’－ジクロロフルオレセイン二酢酸（ＤＣＦＨ－ＤＡ）が細胞に流入し、ＤＣＦＨ－ＤＡの酢酸基が細胞エステラーゼにより切断され、細胞内に非蛍光ＤＣＦＨが捕捉される。その後の、細胞内で発生する活性酸素種による酸化によって、４８５／５２０Ｅｘ：Ｅｍ波長で検出可能な蛍光ＤＣＦが生じる。試料の消去活性は、抗酸化物質なしの対照と比較した際の蛍光の減少により示される。

ヒトＨａＣａＴケラチノサイト細胞／マウス線維芽細胞を、１０％熱失活ウシ胎児血清および抗生物質とともに２５ｍＭグルコースを含有するＤＭＥＭ中で、３７℃および５％ＣＯ２で維持した。細胞が７０～８０％コンフルエントになると、これらをトリプシン処理し、洗浄して、５ｘ１０４細胞／ウェルの密度で播種される密度で、９６ウェルプレートに播種した。細胞を一晩かけて接着させた。汚染物質に曝露する前に、細胞を、多様な非毒性濃度の様々な植物活性物質で６０分間前処理した。細胞を、植物活性物質存在下で以下の汚染物質に曝露した。
ＵＶＡ強度１５ジュール／ｍ２に６０分間
ＵＶ－Ｂ強度４．６ジュール／ｍ２に１０分間
重金属（各０．２５ｍｍの塩化コバルトおよび硝酸鉛）に６時間
一定の処理期間後、新たに調製されたＤＣＦＨ－ＤＡ試薬を、全てのウェルに濃度１０μｇ／ウェルで添加し、３７℃で３０分間インキュベートすることにより、細胞内ＲＯＳを決定した。ＢＭＧＦｌｕｏＳｔａｒＯｐｔｉｍａマイクロプレートリーダーにおける波長４８５：５２０（Ｅｘ：Ｅｍ）ｎｍでの蛍光を記録した。

ＵＶＡ存在下での多環芳香族炭化水素に対する保護
多環芳香族炭化水素（ＰＡＨ）は、変異原性および腫瘍原性の環境汚染要因物のクラスである。ＰＡＨは、天然物質の不完全燃焼およびタバコの煙から生成される環境に広く存在する（Connell, D. W.; Hawker, D. W.; Warne, M. J.; Vowles, P. P.: Polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs). In Introduction into Environmental Chemistry (McCombs, K., and Starkweather, A. W., eds), 1997, pp. 205-217, CRC Press LLC, Boca Raton, FL. 2. Shaw, G. R.; Connell, D. W.: Prediction and monitoring of the carcinogenicity of polycyclic aromatic compounds (PACs). Rev. Environ. Contam. Toxic., 1994, 135, 1-62）。ＰＡＨ自体は生物学的に不活性であり、遺伝毒性を及ぼすためには代謝活性化を必要とする。ＰＡＨはＵＶＡ範囲の光を吸収し、酸素または他の分子と反応して反応性の中間体を発生させる（Yu H, Xia Q, Yan J, et al. Photoirradiation of polycyclic aromatic hydrocarbons with UVA light - a pathway leading to the generation of reactive oxygen species, lipid peroxidation, and dna damage. Int J Environ Res Public Health.2006;3:348-354）。ゆえに、ＰＡＨは光の照射により「活性化され」、光誘導性の細胞毒性を引き起こしうる。ゆえに、ＵＶＡ照射によるＰＡＨの光照射は、細胞毒性およびＤＮＡ損傷を引き起こす汚染物質となる。

ヒトＨａＣａＴケラチノサイト細胞を、９６ウェルプレートに１ｘ１０４細胞／ウェルの密度で播種した。細胞を一晩かけて接着させた。これらを、様々な濃度の植物活性物質とともに、０．５ｍＭ濃度の、ＰＡＨとしてのベンゾ（ａ）ピレンで５０分間前処理し、強度１７ジュール／ｍ２のＵＶＡに曝露した。細胞を無菌の緩衝液で洗浄し、それぞれの濃度の植物活性物質とともに新たな培養培地（２％ＦＢＳ）を添加し、その後ＣＯ２インキュベーター内で、３７℃で２４時間インキュベートした。ニュートラルレッド（２５μｇ／ｍＬ）（３－アミノ－７－ジメチルアミノ－２－メチルフェナジン塩酸塩）を、細胞に３時間添加した。細胞を溶解させ、Ｔｅｃａｎマイクロプレートリーダー（ＴＥＣＡＮＬｔｄ、Ｍａｎｎｅｄｏｒｆ、スイス）で５４０ｎｍでの吸光度を読み取ることにより、細胞によるＮＲの取り込みを決定した。

抗酸化アッセイ
細胞抗酸化物質は汚染物質により枯渇する。植物活性物質の、細胞内でこれらの抗酸化酵素を増大させる能力をｉｎｖｉｔｒｏで研究した。ヒトＨａＣａＴケラチノサイト細胞を、６ウェルプレートに５ｘ１０５細胞／ウェルの密度で播種した。細胞を植物活性物質で１時間前処理し、ＵＶＡ強度１７ジュール／ｍ２に５０分間曝露した。細胞を無菌の緩衝液で洗浄し、それぞれの濃度の植物活性物質とともに新たな培養培地（２％ＦＢＳ）を添加し、その後ＣＯ２インキュベーター内で、３７℃で２４時間インキュベートした。細胞ライセートを調製し、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）レベルおよびグルタチオンペルオキシダーゼ（ＧＰｘ）を推定した。
スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）活性の推定
製造業者の説明書き（Ｅｌａｂｓｃｉｅｎｃｅｓ）の通りに、キットを使用して、細胞ライセートにおけるＳＯＤの活性をＷＳＴ－１法により測定した。キサンチンオキシダーゼ（ＸＯ）はＯ２－とのＷＳＴ－１反応を触媒し、水溶性ホルマザン色素を発生させることができる。ＳＯＤはスーパーオキシドアニオンの不均化を触媒することができ、ゆえにこの反応はＳＯＤにより阻害可能であり、ＳＯＤの活性はホルマザン色素の量と負の相関関係にある。したがって、ＳＯＤの活性は、ＷＳＴ－１生成物の比色分析により決定可能である。

グルタチオンペルオキシダーゼ（ＧＰｘ）活性の推定
Hafeman et al. (1974)の方法に従って、グルタチオンペルオキシダーゼ活性を決定した。グルタチオンペルオキシダーゼは、グルタチオン（ＧＳＨ）存在下でＨ２Ｏ２を分解し、それによりＧＳＨを枯渇させる。残ったＧＳＨを、有色の複合体をもたらすＤＴＮＢを使用して測定する。
体積１００μｌの細胞ライセートに、１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０）で総体積２５０μｌにした、０．２ｍＭＧＳＨ、０．０５ｍＭＨ２Ｏ２および１ｍＭＮａＮ３。反応を３７℃で１０分間インキュベートし、２５％ＴＣＡ５０μｌを添加することにより停止させた。反応混合物を３０００ｒｐｍで１０分間遠心処理し、上清０．１ｍｌに、０．４ＭＮａ２ＨＰＯ４０．１ｍｌおよび１ｍＭＤＴＮＢ５０μｌを添加した。３７℃での１０分間のインキュベーション後、黄色形成の強度を４１２ｎｍで測定した。酵素活性を単位／ｍｇタンパク質として表した。
ＤＰＰＨ－フリーラジカル消去アッセイ
スーパーオキシド、ヒドロキシル、ペルオキシルおよびアルコキシラジカルを含む活性酸素種（ＲＯＳ）は、正常な代謝過程により生成される。正常な状態では、これらのフリーラジカルは細胞抗酸化物質により消去され、平衡状態を保つ。放射線、毒素および汚染物質は、脂質、核酸、タンパク質および炭水化物などの生体分子への酸化損傷を誘導しうるＲＯＳを増大させる。これらのＲＯＳ誘導性の損傷は、皮膚刺激、炎症、老化、がんおよび多くの他の疾患を引き起こす。α、α－ジフェニル－β－ピクリルヒドラジル（ＤＰＰＨ）フリーラジカル消去法は、化合物の抗酸化能を評価するための最初のアプローチの１つである。

材料
機器：Ｔｅｃａｎマイクロプレートリーダー（ＴＥＣＡＮＬｔｄ、Ｍａｎｎｅｄｏｒｆ、スイス）
試薬：０．１ｍＭＤＰＰＨエタノール溶液、０．１Ｍリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）
マイクロタイタープレート：９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＵＳＡ）
手順
ＤＰＰＨは、５２０ｎｍで吸光度を有する、メタノール溶液中の安定なフリーラジカルである。フリーラジカルが抗酸化分子により消去された場合、生じる溶液は黄色に見える。紫色のＤＰＰＨメタノール溶液の退色により、細胞外代謝物の水素原子または電子供与能力を測定した。

様々な濃度の各種植物活性物質をメタノールで希釈した。ＤＰＰＨラジカル消去アッセイでは、以前に記載された方法（Clarke et al., 2013）に従って、様々な濃度の試料２０μＬを、９６ウェルプレートでＤＰＰＨメタノール１８０μＬと混合した。プレートを暗所で１５分間保持し、その後マイクロプレートリーダー（ＴＥＣＡＮＬｔｄ、Ｍａｎｎｅｄｏｒｆ、スイス）を使用して、溶液の吸光度を５４０ｎｍで測定した。ブランク（ＤＭＳＯ、メタノール）および標準物質（ＴＢＨＱメタノール溶液）を同時に記録した。変動する濃度で抽出物をスクリーニングして、阻害濃度（ＩＣ５０、ＤＰＰＨ吸光度を５０％低下させる濃度）を確立した。
フリーラジカル消去活性を以下のように算出した。
（Ｂ－Ｃ）－（Ｓ－Ｃ）
％消去活性＝－－－－－－－－－－－Ｘ１００
（Ｂ－Ｃ）
式中、
Ｂ＝参照溶液の吸光度（ＤＰＰＨのＯＤ）
Ｃ＝参照溶液ブランクの吸光度（メタノールのみのＯＤ）
Ｓ＝試験溶液の吸光度
Ｃ＝試験溶液ブランクの吸光度

抗炎症活性
ＤｕｏｓｅｔＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＤＹ２０８）を使用して、アッセイ上清中のＩＬ８を測定した。
抗コラゲナーゼ活性
コラゲナーゼは、コラーゲンおよび細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の他の成分を消化する、マトリックスメタロプロテアーゼの１種である。ＥＣＭは皮膚構造を安定化させるための足場として機能し、皮膚細胞の増殖および代謝機能においても役立つ。コラーゲンを失うと、皮膚のシワおよびたるみにつながる。コラゲナーゼ阻害アッセイの原理は、基質ＤＱ（商標）ゼラチンが、フルオレセイン（ｆｌｕｏｒｅｃｅｉｎ）－蛍光化合物に結合していることに基づく。ＤＱ（商標）ゼラチンでは蛍光が消光されている。ＤＱ（商標）ゼラチンはコラゲナーゼにより効率的に消化され、測定可能な蛍光化合物を生じる。蛍光の増大は酵素活性に比例する。抗コラゲナーゼ化合物存在下で、蛍光の量は一定の酵素および基質濃度に対して減少するはずである。

材料
機器－ＢＭＧＦＬＵＯｓｔａｒＯｐｔｉｍａ（蛍光マイクロプレートリーダー）
試薬：リン酸緩衝液（ｐＨ７．４）
コラゲナーゼ酵素アッセイキット（Ｅｎｚｃｈｅｋ（登録商標）コラゲナーゼ、ゼラチナーゼアッセイキット、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＵＳＡ）
マイクロタイタープレート－９６ウェルマイクロタイタープレート（黒）－Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＵＳＡ。
９６ウェル黒マイクロタイタープレートでアッセイを実施した。基質としてのＤＱゼラチンを有するクロストリジウム・ヒストリチクム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ）由来のＩＶ型をアッセイに使用した。様々な濃度の各種植物活性物質を、ゼラチン基質（１２．５□ｇ／ｍｌ）２０□ｌとともに事前にインキュベートした。コラゲナーゼ酵素溶液（最終濃度－０．４Ｕ／ｍｌ）１００□ｌを添加し、３０分後にＥｍ：４８５ｎｍおよびＥｘ：５２０ｎｍで蛍光強度を測定した。対照（緩衝液）の酵素活性を記録した。

阻害パーセントを以下のように算出する。
（Ｂ－ＢＣ）－（Ｔ－Ｃ）
阻害％＝－－－－－－－－－－－－－－Ｘ１００
（Ｂ－ＢＣ）
Ｂ－酵素存在下での蛍光
ＢＣ－酵素活性非存在下での蛍光
Ｔ－阻害剤存在下での酵素活性の蛍光
ＴＣ－阻害剤単独の蛍光

（実施例２）：オロキシリン（ｏｘｏｘｙｌｉｎ）Ａ、バイカレインおよびクリシンを含む組成物の抗汚染効果
ＵＶＡおよびＢａＰに対する保護
濃度３．１２～２５μｇ／ｍｌのオロキシリンＡ、バイカレインおよびクリシンを含む組成物は、ＵＶＡ＋ＢａＰに対する用量依存性の保護を付与した（図１）。同様に、組成物は、重金属（図２ａ）、ＵＶＡ（図２ｂ）およびＵＶＢ（図２ｃ）への曝露により発生するＲＯＳを低下させた。
抗酸化酵素活性の正常化
ＵＶへの曝露により、スーパーオキシドジスムターゼ濃度が低下し、グルタチオンペルオキシダーゼ活性が増大した。組成物は、ケラチノサイトにおける正常な酵素活性を回復させた（図３ａおよび３ｂ）。

汚染物質により誘導される炎症性サイトカインの阻害
オロキシリンＡ、バイカレインおよびクリシンを含む組成物は、汚染物質により誘導されるＩＬ－８の生成を阻害した（表１）。

抗酸化活性
オロキシリンＡ、バイカレインおよびクリシンを含む組成物は、ＩＣ５０５．１μｇ／ｍｌで、用量依存的にＤＰＰＨラジカルを阻害することにより、優れた抗酸化活性を示した（表２）。

抗コラゲナーゼ活性
有害な汚染物質は、コラーゲンを分解することにより皮膚を損傷する。オロキシリンＡ、バイカレインおよびクリシンを含む組成物は、酵素コラゲナーゼを阻害することによりコラーゲン分解を阻害した（表３）。

（実施例３）：β－グルコガリン組成物の抗汚染効果
ＵＶＡおよびＢａＰに対する保護
濃度３．１２～２５μｇ／ｍｌのβ－グルコガリン組成物は、ＵＶＡ＋ＢａＰに対する用量依存性の保護を付与した（図４）。同様に、組成物は、重金属（図５ａ）、ＵＶＡ（図５ｂ）およびＵＶＢ（図５ｃ）への曝露により発生するＲＯＳを低下させた。
抗酸化酵素活性の正常化
ＵＶへの曝露により、スーパーオキシドジスムターゼ濃度が低下し、グルタチオンペルオキシダーゼ活性が増大した。組成物は、ケラチノサイトにおける正常な酵素活性を回復させた（図６ａおよび６ｂ）。

汚染物質により誘導される炎症性サイトカインの阻害
β－グルコガリンは、汚染物質により誘導されるＩＬ－８の生成を阻害した（表４）。

抗酸化活性
β－グルコガリン組成物は、ＩＣ５０４．３４μｇ／ｍｌで、用量依存的にＤＰＰＨラジカルを阻害することにより、優れた抗酸化活性を示した（表５）。

抗コラゲナーゼ活性
β－グルコガリン組成物は、酵素コラゲナーゼを阻害することによりコラーゲン分解を阻害した（表６）。

（実施例４）：９５％テトラヒドロクルクミンの抗汚染効果
ＵＶＡおよびＢａＰに対する保護
濃度１．２５～１０μｇ／ｍｌのテトラヒドロクルクミン（Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｃｕｒｕｃｍｉｎ）は、ＵＶＡ＋ＢａＰに対する用量依存性の保護を付与した（図７）。同様に、組成物は、重金属（図８ａ）、ＵＶＡ（図８ｂ）およびＵＶＢ（図８ｃ）への曝露により発生するＲＯＳを低下させた。
抗酸化酵素活性の正常化
ＵＶへの曝露により、スーパーオキシドジスムターゼ濃度が低下し、グルタチオンペルオキシダーゼ活性が増大した。テトラヒドロクルクミン（Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｃｕｒｕｃｍｉｎ）は、ケラチノサイトにおける正常な酵素活性を回復させた（図９ａおよび９ｂ）。

汚染物質により誘導される炎症性サイトカインの阻害
テトラヒドロクルクミン（Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｃｕｒｕｃｍｉｎ）は、汚染物質により誘導されるＩＬ－８の生成を阻害した（表７）。

抗酸化活性
テトラヒドロクルクミン（Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｃｕｒｕｃｍｉｎ）は、ＩＣ５０２．２９μｇ／ｍｌで、用量依存的にＤＰＰＨラジカルを阻害することにより、優れた抗酸化活性を示した（表８）。

抗コラゲナーゼ活性
テトラヒドロクルクミン（Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｃｕｒｕｃｍｉｎ）は、酵素コラゲナーゼを阻害することによりコラーゲン分解を阻害した（表９）。

（実施例４）９５％オキシレスベラトロールの抗汚染効果
ＵＶＡおよびＢａＰに対する保護
濃度３．１２～１２．５μｇ／ｍｌのオキシレスベラトロールは、ＵＶＡ＋ＢａＰに対する用量依存性の保護を付与した（図１０）。同様に、組成物は、重金属（図１１ａ）、ＵＶＡ（図１１ｂ）およびＵＶＢ（図１１ｃ）への曝露により発生するＲＯＳを低下させた。
抗酸化酵素活性の正常化
ＵＶへの曝露により、スーパーオキシドジスムターゼ濃度が低下し、グルタチオンペルオキシダーゼ活性が増大した。オキシレスベラトロールは、ケラチノサイトにおける正常な酵素活性を回復させた（図１２ａおよび１２ｂ）。

汚染物質により誘導される炎症性サイトカインの阻害
オキシレスベラトロールは、汚染物質により誘導されるＩＬ－８の生成を阻害した（表１０）。

抗酸化活性
オキシレスベラトロールは、ＩＣ５００．６１μｇ／ｍｌで、用量依存的にＤＰＰＨラジカルを阻害することにより、優れた抗酸化活性を示した（表１１）。

抗コラゲナーゼ活性
オキシレスベラトロールは、酵素コラゲナーゼを阻害することによりコラーゲン分解を阻害した（表１２）。

（実施例５）：生理活性組成物の組み合わせの抗汚染効果
生理活性組成物の組み合わせの効果を、それらの、ＨａＣａＴ細胞におけるＵＶＡ－ベンゾ（ａ）ピレンに対して保護する能力により評価した。結果を以下で表１３にまとめる。

個々の活性物質の活性について表１４で言及する。

結果は、オロキシリン、バイカレイン、クリシン組成物との組み合わせが相乗的な活性を示し、単独でまたは他の抗汚染剤と組み合わせて、製剤に組み込まれてよいことを示している。
様々な植物活性物質とともにオロキシリン、バイカレイン、クリシン組成物を含む組成物を、ＵＶＡ－ＢａＰ曝露に対するそれらの保護能力、ならびにＵＶＡおよび重金属誘導性ＲＯＳの消去について、さらに評価した。結果を以下の表にまとめる。

ＵＶ－ＡＢａＰ曝露に対する保護

ＵＶＡ誘導性ＲＯＳの低下

重金属誘導性ＲＯＳの低下

結果は、様々な植物活性物質とともにオロキシリン、バイカレイン、クリシン組成物を含む組成物が、ＵＶＡ－ＢａＰ曝露に対するそれらの保護能力、ならびにＵＶＡおよび重金属誘導性ＲＯＳの消去の、相乗的な増大を示すことを示した。
好ましい実施形態を参照して本発明を説明したが、本発明がそれに限定されないことは当業者により明確に理解される。むしろ、本発明の範囲は、添付の請求項と併せてのみ解釈されるべきである。

結果は、様々な植物活性物質とともにオロキシリン、バイカレイン、クリシン組成物を含む組成物が、ＵＶＡ－ＢａＰ曝露に対するそれらの保護能力、ならびにＵＶＡおよび重金属誘導性ＲＯＳの消去の、相乗的な増大を示すことを示した。
好ましい実施形態を参照して本発明を説明したが、本発明がそれに限定されないことは当業者により明確に理解される。むしろ、本発明の範囲は、添付の請求項と併せてのみ解釈されるべきである。
本発明のまた別の態様は、以下のとおりであってもよい。
〔１〕ＵＶ放射および環境汚染物質の有害な効果に対して哺乳動物の皮膚を保護するための方法であって、１０質量％以上のオロキシリンＡ、１０質量％以上のバイカレインおよび２質量％以上のクリシンを含む組成物を、そのような保護を必要とする哺乳動物に局所投与するステップを含む、方法。
〔２〕組成物が、９５質量％オキシレスベラトロール；９５質量％テトラヒドロクルクミン；９０質量％プテロスチルベン；ならびに少なくとも１０質量％のβ－グルコガリンおよび少なくとも１０質量％の全ムチン酸ガレートを含む組成物からなる群から選択される１種または複数種の成分をさらに含む、前記〔１〕に記載の方法。
〔３〕環境汚染物質が、粒子状物質、多環芳香族炭化水素、揮発性有機化合物、界面活性剤、窒素および硫黄酸化物、一酸化炭素、オゾン、ならびに重金属からなる群から選択される、前記〔１〕に記載の方法。
〔４〕組成物が、抗酸化酵素のレベルを増大させ、ＲＯＳレベルを減少させ、炎症マーカーのレベルを低下させることにより皮膚の保護を付与する、前記〔１〕に記載の方法。
〔５〕抗酸化酵素が、グルタチオンペルオキシダーゼ、スーパーオキシドジスムターゼおよびカタラーゼからなる群から選択される、前記〔４〕に記載の方法。
〔６〕炎症マーカーが、インターロイキン（ＩＬ）－１アルファ、ＩＬ－１ベータ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－アルファおよびＩＬ－８からなる群から選択される、前記〔４〕に記載の方法。
〔７〕炎症マーカーがＩＬ－８である、前記〔４〕に記載の方法。
〔８〕環境汚染物質およびＵＶ放射に曝露された哺乳動物の皮膚を浄化し若返らせるための方法であって、１０質量％以上のオロキシリンＡ、１０質量％以上のバイカレインおよび２質量％以上のクリシンを含む組成物を、そのような効果を必要とする哺乳動物に局所投与するステップを含む、方法。
〔９〕組成物が、９５質量％オキシレスベラトロール；９５質量％テトラヒドロクルクミン；９０質量％プテロスチルベン；ならびに少なくとも１０質量％のβ－グルコガリンおよび少なくとも１０質量％の全ムチン酸ガレートを含む組成物からなる群から選択される１種または複数種の成分をさらに含む、前記〔８〕に記載の方法。
〔１０〕環境汚染物質が、粒子状物質、多環芳香族炭化水素、揮発性有機化合物、界面活性剤、窒素および硫黄酸化物、一酸化炭素、オゾン、ならびに重金属からなる群から選択される、前記〔８〕に記載の方法。
〔１１〕組成物が、コラゲナーゼ活性を減少させ、抗酸化酵素のレベルを増大させ、ＲＯＳレベルを減少させ、炎症マーカーのレベルを低下させることにより皮膚の保護を付与する、前記〔８〕に記載の方法。
〔１２〕抗酸化酵素が、グルタチオンペルオキシダーゼ、スーパーオキシドジスムターゼおよびカタラーゼからなる群から選択される、前記〔１１〕に記載の方法。
〔１３〕炎症マーカーが、インターロイキン（ＩＬ）－１アルファ、ＩＬ－１ベータ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－アルファおよびＩＬ－８からなる群から選択される、前記〔１１〕に記載の方法。
〔１４〕炎症マーカーがＩＬ－８である、前記〔１１〕に記載の方法。

Claims

ＵＶ放射および環境汚染物質の有害な効果に対して哺乳動物の皮膚を保護するための方法であって、１０質量％以上のオロキシリンＡ、１０質量％以上のバイカレインおよび２質量％以上のクリシンを含む組成物を、そのような保護を必要とする哺乳動物に局所投与するステップを含む、方法。
組成物が、９５質量％オキシレスベラトロール；９５質量％テトラヒドロクルクミン；９０質量％プテロスチルベン；ならびに少なくとも１０質量％のβ－グルコガリンおよび少なくとも１０質量％の全ムチン酸ガレートを含む組成物からなる群から選択される１種または複数種の成分をさらに含む、請求項１に記載の方法。
環境汚染物質が、粒子状物質、多環芳香族炭化水素、揮発性有機化合物、界面活性剤、窒素および硫黄酸化物、一酸化炭素、オゾン、ならびに重金属からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
組成物が、抗酸化酵素のレベルを増大させ、ＲＯＳレベルを減少させ、炎症マーカーのレベルを低下させることにより皮膚の保護を付与する、請求項１に記載の方法。
抗酸化酵素が、グルタチオンペルオキシダーゼ、スーパーオキシドジスムターゼおよびカタラーゼからなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
炎症マーカーが、インターロイキン（ＩＬ）－１アルファ、ＩＬ－１ベータ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－アルファおよびＩＬ－８からなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
炎症マーカーがＩＬ－８である、請求項４に記載の方法。
環境汚染物質およびＵＶ放射に曝露された哺乳動物の皮膚を浄化し若返らせるための方法であって、１０質量％以上のオロキシリンＡ、１０質量％以上のバイカレインおよび２質量％以上のクリシンを含む組成物を、そのような効果を必要とする哺乳動物に局所投与するステップを含む、方法。
組成物が、９５質量％オキシレスベラトロール；９５質量％テトラヒドロクルクミン；９０質量％プテロスチルベン；ならびに少なくとも１０質量％のβ－グルコガリンおよび少なくとも１０質量％の全ムチン酸ガレートを含む組成物からなる群から選択される１種または複数種の成分をさらに含む、請求項８に記載の方法。
環境汚染物質が、粒子状物質、多環芳香族炭化水素、揮発性有機化合物、界面活性剤、窒素および硫黄酸化物、一酸化炭素、オゾン、ならびに重金属からなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
組成物が、コラゲナーゼ活性を減少させ、抗酸化酵素のレベルを増大させ、ＲＯＳレベルを減少させ、炎症マーカーのレベルを低下させることにより皮膚の保護を付与する、請求項８に記載の方法。
抗酸化酵素が、グルタチオンペルオキシダーゼ、スーパーオキシドジスムターゼおよびカタラーゼからなる群から選択される、請求項１１に記載の方法。
炎症マーカーが、インターロイキン（ＩＬ）－１アルファ、ＩＬ－１ベータ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－アルファおよびＩＬ－８からなる群から選択される、請求項１１に記載の方法。
炎症マーカーがＩＬ－８である、請求項１１に記載の方法。