CN114630650A - 植物活性物及其防污染效果 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了用于保护哺乳动物皮肤抵御UV辐射和环境污染物的有害效果的方法，其使用选自包含如下的组合物的一种或多种植物活性物：不少于10％w/w木蝴蝶素A，不少于10％w/w黄芩素，和不少于2％w/w白杨素；95％w/w氧化白藜芦醇；95％w/w四氢姜黄素；90％w/w紫檀芪，以及包含至少10％w/wβ‑没食子酸萄糖苷和至少10％w/w总粘酸没食子酸酯的组合物。本发明还公开了使用前述的植物活性物使暴露于环境污染物和UV辐射的哺乳动物皮肤净化和复原的方法。
Description
相关申请的交叉引用
此为要求来自于2019年8月26日提交的美国临时申请编号62891913的优先权的PCT申请，将所述美国临时申请的主题内容通过引用整体并入。
技术领域
本发明总体上涉及从不同植物来源分离的天然生物活性分子的防污染效果。具体地，本发明涉及植物活性物用于保护皮肤抵御(免受)有害的UV辐射和环境污染物的用途。
背景技术
空气污染对群体的总体健康的影响是多重的。其通过导致若干健康问题影响我们的日常生活。这些污染物的主要影响之一在皮肤上显现，因为其导致氧化性损伤或干预细胞蛋白、DNA、和脂质的正常功能。皮肤暴露于各种污染物，由此导致过早皮肤老化、色素斑、或痤疮，或者导致更严重的皮肤病问题，诸如特应性皮炎、牛皮癣、和甚至皮肤癌(English,J.S.,R.S.Dawe,and J.Ferguson,Environmental effects and skin disease.Br MedBull,2003.68:p.129-42)。
主要污染来源包括颗粒物质、多环芳族烃(PAH)、挥发性有机化合物(VOC)、氮和硫的氧化物、一氧化碳、臭氧、和重金属(Baudouin,C.等人,Environmental pollutants andskin cancer.Cell Biol Toxicol,2002.18(5):p.341-8)。有毒气体(CO2、CO、SO2、NO、NO2)、低分子量烃、持久的有机污染物(例如二噁英)、重金属(例如铅、汞)、和颗粒物质(PM)形成由所述来源形成的一次污染物。二次污染物(其包括臭氧(O3)、NO2、过氧硝酸乙酰酯、过氧化氢、和醛)在大气中通过与一次污染物相关的化学和光化学反应而形成(Kampa,M.andE.Castanas,Human health effects of air pollution.Environ Pollut,2008.151(2):p.362-7)。苯并[a]芘(BaP)在其中是主要组分的一些环境污染物是潜在地危险的。BaP被国际癌症研究所(IARC)认定为1类致癌物。BaP受代谢成为过氧化物、醌、硫、和含氮衍生物，其为高度毒性的。BaP的主要来源是涉及交通的排放物(石油燃烧，柏油路，轮胎磨损，煤和木)。其它来源可为不受控的火灾，废物焚化和工业排放物。
包覆有碳颗粒的这些污染物和PAH损伤皮肤，并且导致皮肤屏障改变、氧化性应激、炎症、和细胞退化。这些污染物导致若干具体的与皮肤相关的问题，如色素沉积过度、炎症、胶原崩解、弹性蛋白崩解，等等。环境污染物(如UVA)上调了基质金属蛋白酶(MMP)(使基质蛋白的弹性蛋白和胶原退化的酶)的形成，其若不加预防则可导致皮肤弹性显著降低以及起皱增多(Risom,L.,P.Moller和S.Loft,Oxidative stress-induced DNA damage byparticulate air pollution.Mutat Res,2005.592(1-2):第119-37页；Moller,P.和S.Loft,Oxidative damage to DNAand lipids as biomarkers of exposure to airpollution.Environ Health Perspect,2010.118(8):第1126-36页)。UVA可比UVB更深地穿透到皮肤中，并且促进光致老化、光致致癌、光致皮肤病，并且增加成纤维细胞和在皮肤内较深处的细胞的氧化性应激。据报道，蓝光(来自移动电话(mobile)、TV、笔记本电脑/台式机屏幕的光)造成类似效果(Godley等人,Blue Light induces Mitochondrial DNADamage and Free Radical Production in Epithelial Cells,The Journal OfBiological Chemistry,2005,280(22):21061–21066)。不同空气污染物对皮肤的影响汇总于以下现有技术文献中：
a.Araviiskaia et al.,The impact of airborne pollution on skin,J EurAcad Dermatol Venereol.2019；33(8):1496–1505.
b.Drakaki et al.,Air pollution and the skin,Front.Environ.Sci.,2014；2:1-6
c.Doris Day,The Impact of Pollution on The Skin，HCP live，The Impactof Pollution on The Skin，来源：hcplive.com/view/the-impact-of-pollution-on-the-skin,于2020年8月20日获取。
据信，防污染产品通过如下预防不同空气污染物的影响：
a.由于抗氧化剂活性保护皮肤组织抵御有害的反应性氧物种，
b.降低炎症和过敏反应
c.帮助使当暴露于污染物时皮肤内发生的细胞死亡停止。
由于其较低毒性的性质，基于植物的产品如今正在获得更多关注。植物(如姜黄、椰、可可、罗勒、洋葱、绿茶、葫芦巴、甘草、迷迭香、芦荟等)的精油和提取物用于皮肤护理产品中(Aburjai&Natsheh,Plants used in cosmetics,Phytotherapy Research,2003；17(9),987–1000.doi:10.1002/ptr.1363)。从姜黄分离的四氢姜黄素因其皮肤增亮(lighten)效果而被报道(Majeed等人，美国专利编号6653327)。白藜芦醇和氧化白藜芦醇也以其皮肤护理和皮肤增亮效果而为人熟知。还报道，木蝴蝶的果实对皮肤有益，并且用于皮肤疾病的治疗中(Chauhan等人,Shyonak,Sona Patha(Oroxylum indicum)-Properties,benefits and dosage,Planet Ayurveda,planetayurveda.com/library/shyonak-oroxylum-indicum/,2020年8月22日可得)。花榈木提取物也由于其皮肤增亮和抗老化效果而报道(Majeed等人,An Open-Label Single-Arm,Monocentric Study Assessing theEfficacy and Safety of Natural Pterostilbene(Pterocarpus marsupium)for SkinBrightening and Antiaging Effects,Clin Cosmet Investig Dermatol.2020；13:105–116)。然而，以下是公知技术常识：并非所有用于皮肤护理和皮肤增亮的产品在保护皮肤抵御有害污染物方面将是有效的。仍然存在以下未满足的工业需求：寻找从植物分离的包含一种或多种生物活性分子的天然组合物，其赋予最大的抵御有害污染物的保护。进一步地，所述组合物必须能够保护皮肤免受污染物影响，且还净化和复原(回春，再生，rejuvenate)暴露于环境污染物的皮肤。本发明通过公开包含选自如下的一种或多种生物活性分子的组合物解决了以上问题：95％w/w氧化白藜芦醇；95％w/w四氢姜黄素；包含至少10％w/wβ-没食子酸萄糖苷和至少10％w/w总粘酸没食子酸酯的组合物，和包含不少于10％w/w木蝴蝶素A、不少于10％w/w黄芩素和不少于2％w/w白杨素的组合物。
本发明的主要目的是为了公开使用包含一种或多种选自如下的成分的组合物保护哺乳动物皮肤抵御UV辐射和环境污染物的有害效果的方法：95％w/w氧化白藜芦醇；95％w/w四氢姜黄素；包含至少10％w/wβ-没食子酸萄糖苷和至少10％w/w总粘酸没食子酸酯的组合物，和包含不少于10％w/w木蝴蝶素A、不少于10％w/w黄芩素和不少于2％w/w白杨素的组合物。
本发明的其它目的是公开使用包含一种或多种选自如下的成分的组合物使暴露于环境污染物和UV辐射的哺乳动物皮肤净化和复原的方法：95％w/w氧化白藜芦醇；95％w/w四氢姜黄素；90％w/w紫檀芪；包含至少10％w/wβ-没食子酸萄糖苷和至少10％w/w总粘酸没食子酸酯的组合物，和包含不少于10％w/w木蝴蝶素A、不少于10％w/w黄芩素和不少于2％w/w白杨素的组合物。
本发明满足上述目标并且进一步提供相关优点。
发明内容
在较优选实施方式中，本发明公开了用于保护哺乳动物皮肤抵御UV辐射和环境污染物的有害效果的方法，所述方法包含向需要这样的保护的哺乳动物局部施用包含选自以下的一种或多种成分的组合物的步骤：包含不少于10％w/w木蝴蝶素A、不少于10％w/w黄芩素、和不少于2％w/w白杨素的组合物；95％w/w氧化白藜芦醇；95％w/w四氢姜黄素；90％w/w紫檀芪，和包含至少10％w/wβ-没食子酸萄糖苷和至少10％w/w总粘酸没食子酸酯的组合物。
在最优选实施方式中，本发明公开了用于使暴露于环境污染物和UV辐射的哺乳动物皮肤净化和复原的方法，所述方法包含向需要这样的效果的哺乳动物局部施用包含选自以下的一种或多种成分的组合物的步骤：包含不少于10％w/w木蝴蝶素A、不少于10％w/w黄芩素、和不少于2％w/w白杨素的组合物；95％w/w氧化白藜芦醇；95％w/w四氢姜黄素；90％w/w紫檀芪，和包含至少10％w/wβ-没食子酸萄糖苷和至少10％w/w总粘酸没食子酸酯的组合物。
由以下更详细的通过实例方式说明本发明原理的描述，本发明的特征和优点将变得明晰。
附图说明
图1是显示使用包含木蝴蝶素、黄芩素和白杨素的组合物保护人HaCaT角质形成细胞抵御UVA和BaP诱导的损伤的图示。
图2a是显示使用包含木蝴蝶素、黄芩素和白杨素的组合物降低由重金属诱导的ROS的图示。
图2b是显示使用包含木蝴蝶素、黄芩素和白杨素的组合物降低UVA诱导的ROS的图示。
图2c是显示使用包含木蝴蝶素、黄芩素和白杨素的组合物降低UVB诱导的ROS的图示。
图3a是显示由包含木蝴蝶素、黄芩素和白杨素的组合物引起的超氧化物歧化酶活性依赖于剂量的增加的图示。UE-未暴露的，UV-暴露的
图3b是显示由包含木蝴蝶素、黄芩素、和白杨素的组合物引起的谷胱甘肽过氧化物酶活性依赖于剂量的下降的图示。UE-未暴露的,UV-暴露的
图4是显示使用包含β-没食子酸萄糖苷的组合物保护人HaCaT角质形成细胞抵御UVA和BaP诱导的损伤的图示。
图5a是显示使用包含β-没食子酸萄糖苷的组合物降低由重金属诱导的ROS的图示。
图5b是显示使用包含β-没食子酸萄糖苷的组合物降低UVA诱导的ROS的图示。
图5c是显示使用包含β-没食子酸萄糖苷的组合物降低UVB诱导的ROS的图示。
图6a是显示由包含β-没食子酸萄糖苷的组合物引起的超氧化物歧化酶活性依赖于剂量的增加的图示。UE-未暴露的,UV-暴露的
图6b是显示由包含β-没食子酸萄糖苷的组合物引起的谷胱甘肽过氧化物酶活性依赖于剂量的减少。UE-未暴露的,UV-暴露的
图7是显示使用95％四氢姜黄素保护人HaCaT角质形成细胞抵御UVA和BaP诱导的损伤的图示。
图8a是显示使用95％四氢姜黄素降低重金属诱导的ROS的图示。
图8b是显示使用95％四氢姜黄素降低UVA诱导的ROS的图示。
图8c是显示使用95％四氢姜黄素降低UVB诱导的ROS的图示。
图9a是显示由95％四氢姜黄素引起的超氧化物歧化酶活性依赖于剂量的增加的图示。UE-未暴露的,UV-暴露的
图9b是显示由95％四氢姜黄素引起的谷胱甘肽过氧化物酶活性依赖于剂量的减少的图示。UE-未暴露的,UV-暴露的
图10是显示使用95％氧化白藜芦醇保护人HaCaT角质形成细胞抵御UVA和BaP诱导的损伤的图示。
图11a是显示使用95％氧化白藜芦醇降低重金属诱导的ROS的图示。
图11b是显示使用95％氧化白藜芦醇降低UVA诱导的ROS的图示。
图11c是显示使用95％氧化白藜芦醇降低UVB诱导的ROS的图示。
图12a是显示由95％氧化白藜芦醇引起的超氧化物歧化酶活性依赖于剂量的增加的图示。UE-未暴露的,UV-暴露的
图12b是显示由95％氧化白藜芦醇引起的谷胱甘肽过氧化物酶活性依赖于剂量的减少的图示。UE-未暴露的,UV-暴露的
具体实施方式
在最优选实施方式中，本发明公开了用于保护哺乳动物皮肤抵御UV辐射和环境污染物的有害效果的方法，所述方法包含向需要这样的保护的哺乳动物局部施用如下组合物的步骤：所述组合物包含不少于10％w/w木蝴蝶素A、不少于10％w/w黄芩素、和不少于2％w/w白杨素。在相关的实施方式中，所述组合物进一步包含选自以下的一种或多种成分：95％w/w氧化白藜芦醇；95％w/w四氢姜黄素；90％w/w紫檀芪，以及包含至少10％w/wβ-没食子酸萄糖苷和至少10％w/w总粘酸没食子酸酯的组合物。在另外的相关方面中，所述环境污染物选自但不限于：颗粒物质、多环芳族烃(PAH)、挥发性有机化合物(VOC)、洗涤剂、氮和硫的氧化物、一氧化碳、臭氧、和重金属。在仍另外的相关方面中，所述组合物通过增加抗氧化剂酶水平、并且减少ROS水平、并且降低炎症标志物水平而赋予皮肤保护。在另外的相关方面中，所述抗氧化剂酶选自谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶、和过氧化氢酶(触酶，catalase)。在另外的相关方面中，所述炎症标志物选自白细胞介素(IL)-1α、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α和IL-8。在另外的相关方面中，所述炎症标志物为IL-8。
在另外的最优选实施方式中，本发明公开了用于使暴露于环境污染物和UV辐射的哺乳动物皮肤净化并且复原的方法，所述方法包含向需要这样的效果的哺乳动物局部施用如下组合物的步骤，所述组合物包含不少于10％w/w木蝴蝶素A、不少于10％w/w黄芩素、和不少于2％w/w白杨素。在相关的实施方式中，所述组合物进一步包含选自以下的一种或多种成分：95％w/w氧化白藜芦醇；95％w/w四氢姜黄素；90％w/w紫檀芪，以及包含至少10％w/wβ-没食子酸萄糖苷和至少10％w/w总粘酸没食子酸酯的组合物。在另外的相关方面中，所述环境污染物选自但不限于：颗粒物质、多环芳族烃(PAH)、挥发性有机化合物(VOC)、洗涤剂、氮和硫的氧化物、一氧化碳、臭氧、和重金属。在仍另外的相关方面中，所述组合物通过减少胶原酶活性、增加抗氧化剂酶水平、和减少ROS水平、和降低炎症标志物水平而赋予皮肤保护。在另外的相关方面中，所述抗氧化剂酶选自谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶、和过氧化氢酶。在另外的相关方面中，所述炎症标志物选自白细胞介素(IL)-1α、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、和IL-8。在另外的相关方面中，所述炎症标志物为IL-8。
在另外的较优选实施方式中，本发明公开了用于保护哺乳动物皮肤抵御UV辐射和环境污染物的有害效果的组合物，其包含不少于10％w/w木蝴蝶素A、不少于10％w/w黄芩素、和不少于2％w/w白杨素。在相关方面中，本发明公开了用于在使暴露于环境污染物和UV辐射的哺乳动物皮肤净化并且复原中使用的组合物，其包含不少于10％w/w木蝴蝶素A、不少于10％w/w黄芩素、和不少于2％w/w白杨素。在相关的实施方式中，所述组合物进一步包含选自以下的一种或多种成分：95％w/w氧化白藜芦醇；95％w/w四氢姜黄素；90％w/w紫檀芪，以及包含至少10％w/wβ-没食子酸萄糖苷和至少10％w/w总粘酸没食子酸酯的组合物。在另外的相关方面中，所述环境污染物选自但不限于：颗粒物质、多环芳族烃(PAH)、挥发性有机化合物(VOC)、洗涤剂、氮和硫的氧化物、一氧化碳、臭氧、和重金属。在仍另外的相关方面中，所述组合物通过减少胶原酶活性、增加抗氧化剂酶水平、并且减少ROS水平、并且降低炎症标志物水平而赋予皮肤保护。在另外的相关方面中，所述抗氧化剂酶选自谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶、和过氧化氢酶。在另外的相关方面中，所述炎症标志物选自白细胞介素(IL)-1α、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、和IL-8。在另外的相关方面中，所述炎症标志物为IL-8。在相关方面中，所述组合物使用药学上/药用化妆品上可接受的赋形剂、助剂、主药(基材，base)、稀释剂、载剂、调节剂、抗氧化剂、生物利用率增强剂、和防腐剂配制，和/或并入到含有皮肤护理成分并且以乳剂、凝胶、洗液、粉末、乳清、油、悬浮体、药膏、皂、摩擦膏(scrub)、乳液、和压实体(compact)的形式局部施用的配制物中。
在最优选实施方式中，本发明公开了用于保护哺乳动物皮肤抵御UV辐射和环境污染物的有害效果的方法，所述方法包含向需要这样的保护的哺乳动物局部施用包含95％w/w氧化白藜芦醇的组合物的步骤。在相关的实施方式中，所述组合物进一步包含选自以下的一种或多种成分：包含不少于10％w/w木蝴蝶素A、不少于10％w/w黄芩素、和不少于2％w/w白杨素的组合物；95％w/w四氢姜黄素；90％w/w紫檀芪，以及包含至少10％w/wβ-没食子酸萄糖苷和至少10％w/w总粘酸没食子酸酯的组合物。在另外的相关方面中，所述环境污染物选自但不限于：颗粒物质、多环芳族烃(PAH)、挥发性有机化合物(VOC)、洗涤剂、氮和硫的氧化物、一氧化碳、臭氧、和重金属。在仍另外的相关方面中，所述组合物通过增加抗氧化剂酶水平、并且减少ROS水平、并且降低炎症标志物水平而赋予皮肤保护。在另外的相关方面中，所述抗氧化剂酶选自谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶、和过氧化氢酶。在另外的相关方面中，所述炎症标志物选自白细胞介素(IL)-1α、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、和IL-8。在另外的相关方面中，所述炎症标志物为IL-8。
在另外的最优选实施方式中，本发明公开了用于使暴露于环境污染物和UV辐射的哺乳动物皮肤净化并且复原的方法，所述方法包含向需要这样的效果的哺乳动物局部施用包含95％w/w氧化白藜芦醇的组合物的步骤。在相关的实施方式中，所述组合物进一步包含选自以下的一种或多种成分：包含不少于10％w/w木蝴蝶素A、不少于10％w/w黄芩素、和不少于2％w/w白杨素的组合物；95％w/w四氢姜黄素；90％w/w紫檀芪，以及包含至少10％w/wβ-没食子酸萄糖苷和至少10％w/w总粘酸没食子酸酯的组合物。在另外的相关方面中，所述环境污染物选自但不限于：颗粒物质、多环芳族烃(PAH)、挥发性有机化合物(VOC)、洗涤剂、氮和硫的氧化物、一氧化碳、臭氧、和重金属。在仍另外的相关方面中，所述组合物通过减少胶原酶活性、增加抗氧化剂酶水平、并且减少ROS水平并且降低炎症标志物水平而赋予皮肤保护。在另外的相关方面中，所述抗氧化剂酶选自谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶、和过氧化氢酶。在另外的相关方面中，所述炎症标志物选自白细胞介素(IL)-1α、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、和IL-8。在另外的相关方面中，所述炎症标志物为IL-8。
在另外的最优选实施方式中，本发明公开了用于保护哺乳动物皮肤抵御UV辐射和环境污染物的有害效果的组合物，包含95％w/w氧化白藜芦醇。在相关方面中，本发明公开了用于使暴露于环境污染物和UV辐射的哺乳动物皮肤净化和复原的包含95％w/w氧化白藜芦醇的组合物。在相关的实施方式中，所述组合物进一步包含选自以下的一种或多种成分：包含不少于10％w/w木蝴蝶素A、不少于10％w/w黄芩素和不少于2％w/w白杨素的组合物，95％w/w四氢姜黄素；90％w/w紫檀芪，以及包含至少10％w/wβ-没食子酸萄糖苷和至少10％w/w总粘酸没食子酸酯的组合物。在另外的相关方面中，所述环境污染物选自但不限于：颗粒物质、多环芳族烃(PAH)、挥发性有机化合物(VOC)、洗涤剂、氮和硫的氧化物、一氧化碳、臭氧、和重金属。在仍另外的相关方面中，所述组合物通过减少胶原酶活性、增加抗氧化剂酶水平、并且减少ROS水平、并且降低炎症标志物水平而赋予皮肤保护。在另外的相关方面中，所述抗氧化剂酶选自谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶、和过氧化氢酶。在另外的相关方面中，所述炎症标志物选自白细胞介素(IL)-1α、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、和IL-8。在相关方面中，所述组合物使用药学上/药用化妆品上可接受的赋形剂、助剂、主药、稀释剂、载剂、调节剂、抗氧化剂、生物利用率增强剂、和防腐剂配制，和/或并入到含有皮肤护理成分并且以乳剂、凝胶、洗液、粉末、乳清、油、悬浮体、药膏、皂、摩擦膏、乳液、和压实体的形式局部施用的配制物中。
在最优选实施方式中，本发明公开了用于保护哺乳动物皮肤抵御UV辐射和环境污染物的有害效果的方法，所述方法包含向需要这样的保护的哺乳动物局部施用包含95％w/w四氢姜黄素的组合物的步骤。在相关的实施方式中，所述组合物进一步包含选自以下的一种或多种成分：包含不少于10％w/w木蝴蝶素A、不少于10％w/w黄芩素、和不少于2％w/w白杨素的组合物；95％w/w氧化白藜芦醇；90％w/w紫檀芪，以及包含至少10％w/wβ-没食子酸萄糖苷和至少10％w/w总粘酸没食子酸酯的组合物。在另外的相关方面中，所述环境污染物选自但不限于：颗粒物质、多环芳族烃(PAH)、挥发性有机化合物(VOC)、洗涤剂、氮和硫的氧化物、一氧化碳、臭氧、和重金属。在仍另外的相关方面中，所述组合物通过增加抗氧化剂酶水平、并且减少ROS水平、并且降低炎症标志物水平而赋予皮肤保护。在另外的相关方面中，所述抗氧化剂酶选自谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶、和过氧化氢酶。在另外的相关方面中，所述炎症标志物选自白细胞介素(IL)-1α、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、和IL-8。在另外的相关方面中，所述炎症标志物为IL-8。
在另外的最优选实施方式中，本发明公开了用于使暴露于环境污染物和UV辐射的哺乳动物皮肤净化并且复原的方法，所述方法包含向需要这样的效果的哺乳动物局部施用包含95％w/w四氢姜黄素的组合物的步骤。在相关的实施方式中，所述组合物进一步包含选自以下的一种或多种成分：包含不少于10％w/w木蝴蝶素A、不少于10％w/w黄芩素、和不少于2％w/w白杨素的组合物；95％w/w氧化白藜芦醇；90％w/w紫檀芪，以及包含至少10％w/wβ-没食子酸萄糖苷和至少10％w/w总粘酸没食子酸酯的组合物。在另外的相关方面中，所述环境污染物选自但不限于：颗粒物质、多环芳族烃(PAH)、挥发性有机化合物(VOC)、洗涤剂、氮和硫的氧化物、一氧化碳、臭氧、和重金属。在仍另外的相关方面中，所述组合物通过减少胶原酶活性、增加抗氧化剂酶水平、并且减少ROS水平、并且降低炎症标志物水平而赋予皮肤保护。在另外的相关方面中，所述抗氧化剂酶选自谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶、和过氧化氢酶。在另外的相关方面中，所述炎症标志物选自白细胞介素(IL)-1α、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、和IL-8。在另外的相关方面中，所述炎症标志物为IL-8。
在另外的较优选实施方式中，本发明公开了用于保护哺乳动物皮肤抵御UV辐射和环境污染物的有害效果的包含95％w/w四氢姜黄素的组合物。在相关方面中，本发明公开了用于使暴露于环境污染物和UV辐射的哺乳动物皮肤净化并且复原的包含95％w/w四氢姜黄素的组合物。在相关的实施方式中，所述组合物进一步包含选自以下的一种或多种成分：包含不少于10％w/w木蝴蝶素A、不少于10％w/w黄芩素、和不少于2％w/w白杨素的组合物，95％w/w氧化白藜芦醇；90％w/w紫檀芪，以及包含至少10％w/wβ-没食子酸萄糖苷和至少10％w/w总粘酸没食子酸酯的组合物。在另外的相关方面中，所述环境污染物选自但不限于：颗粒物质、多环芳族烃(PAH)、挥发性有机化合物(VOC)、洗涤剂、氮和硫的氧化物、一氧化碳、臭氧、和重金属。在仍另外的相关方面中，所述组合物通过减少胶原酶活性、增加抗氧化剂酶水平、并且减少ROS水平、并且降低炎症标志物水平而赋予皮肤保护。在另外的相关方面中，所述抗氧化剂酶选自谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶、和过氧化氢酶。在另外的相关方面中，所述炎症标志物选自白细胞介素(IL)-1α、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、和IL-8。在相关方面中，所述组合物使用药学上/药用化妆品上可接受的赋形剂、助剂、主药、稀释剂、载剂、调节剂、抗氧化剂、生物利用率增强剂、和防腐剂配制，和/或并入到含有皮肤护理成分并且以乳剂、凝胶、洗液、粉末、乳清、油、悬浮体、药膏、皂、摩擦膏、乳液、和压实体的形式局部施用的配制物中。
在最优选实施方式中，本发明公开了用于保护哺乳动物皮肤抵御UV辐射和环境污染物的有害效果的方法，所述方法包含向需要这样的保护的哺乳动物局部施用包含至少10％w/wβ-没食子酸萄糖苷和至少10％w/w总粘酸没食子酸酯的组合物的步骤。在相关的实施方式中，所述组合物进一步包含选自以下的一种或多种成分：包含不少于10％w/w木蝴蝶素A、不少于10％w/w黄芩素、和不少于2％w/w白杨素的组合物；95％w/w氧化白藜芦醇；90％w/w紫檀芪，以及95％w/w四氢姜黄素。在另外的相关方面中，所述环境污染物选自但不限于：颗粒物质、多环芳族烃(PAH)、挥发性有机化合物(VOC)、洗涤剂、氮和硫的氧化物、一氧化碳、臭氧、和重金属。在仍另外的相关方面中，所述组合物通过增加抗氧化剂酶水平、并且减少ROS水平、并且降低炎症标志物水平而赋予皮肤保护。在另外的相关方面中，所述抗氧化剂酶选自谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶、和过氧化氢酶。在另外的相关方面中，所述炎症标志物选自白细胞介素(IL)-1α、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、和IL-8。在另外的相关方面中，所述炎症标志物为IL-8。
在另外的最优选实施方式中，本发明公开了用于使暴露于环境污染物和UV辐射的哺乳动物皮肤净化并且复原的方法，所述方法包含向需要这样的效果的哺乳动物局部施用包含至少10％w/wβ-没食子酸萄糖苷和至少10％w/w总粘酸没食子酸酯的组合物的步骤。在相关的实施方式中，所述组合物进一步包含选自以下的一种或多种成分：包含不少于10％w/w木蝴蝶素A、不少于10％w/w黄芩素、和不少于2％w/w白杨素的组合物；95％w/w氧化白藜芦醇；90％w/w紫檀芪，以及95％w/w四氢姜黄素。在另外的相关方面中，所述环境污染物选自但不限于：颗粒物质、多环芳族烃(PAH)、挥发性有机化合物(VOC)、洗涤剂、氮和硫的氧化物、一氧化碳、臭氧、和重金属。在仍另外的相关方面中，所述组合物通过减少胶原酶活性、增加抗氧化剂酶水平、并且减少ROS水平、并且降低炎症标志物水平而赋予皮肤保护。在另外的相关方面中，所述抗氧化剂酶选自谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶、和过氧化氢酶。在另外的相关方面中，所述炎症标志物选自白细胞介素(IL)-1α、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、和IL-8。在另外的相关方面中，所述炎症标志物为IL-8。
在另外的最优选实施方式中，本发明公开了用于保护哺乳动物皮肤抵御UV辐射和环境污染物的有害效果的包含至少10％w/wβ-没食子酸萄糖苷和至少10％w/w总粘酸没食子酸酯的组合物。在相关方面中，本发明公开了用于使暴露于环境污染物和UV辐射的哺乳动物皮肤净化并且复原的包含至少10％w/wβ-没食子酸萄糖苷和至少10％w/w总粘酸没食子酸酯的组合物。在相关的实施方式中，所述组合物进一步包含选自以下的一种或多种成分：包含不少于10％w/w木蝴蝶素A、不少于10％w/w黄芩素、和不少于2％w/w白杨素的组合物，95％w/w氧化白藜芦醇；90％w/w紫檀芪，和95％四氢姜黄素。在另外的相关方面中，所述环境污染物选自但不限于：颗粒物质、多环芳族烃(PAH)、挥发性有机化合物(VOC)、洗涤剂、氮和硫的氧化物、一氧化碳、臭氧、和重金属。在仍另外的相关方面中，所述组合物通过减少胶原酶活性、增加抗氧化剂酶水平、并且减少ROS水平、并且降低炎症标志物水平而赋予皮肤保护。在另外的相关方面中，所述抗氧化剂酶选自谷胱甘肽过氧化物酶、氧化物歧化酶、和过氧化氢酶。在另外的相关方面中，所述炎症标志物选自白细胞介素(IL)-1α、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、和IL-8。在另外的相关方面中，所述炎症标志物为IL-8。在相关方面中，所述组合物使用药学上/药用化妆品上可接受的赋形剂、助剂、主药、稀释剂、载剂、调节剂、抗氧化剂、生物利用率增强剂、和防腐剂配制，和/或并入到含有皮肤护理成分并且以乳剂、凝胶、洗液、粉末、乳清、油、悬浮体、药膏、皂、摩擦膏、乳液、和压实体的形式局部施用的配制物中。
在相关方面中，一种或多种皮肤护理成分选自但不限于：α硫辛酸，甜菜根提取物，乳香树提取物，β乳香酸，乳香树油，积雪草提取物，三萜，印度藤黄提取物，花青苷，椰子提取物和果汁，毛喉鞘蕊花提取物，毛喉素，毛喉鞘蕊花油，四氢胡椒碱，鞣花酸，没食子提取物，多酚，高良姜提取物，甘草酸，绿茶提取物，表没食子儿茶精没食子酸酯，甘草提取物，甘草酸一铵，柠檬苦素类化合物，齐墩果酸，化妆品肽(连接至Lys-Thr-Thr-Lys-Ser的齐墩果酸，连接至Lys-Val-Lys的齐墩果酸)，橄榄苦苷，荜拔酰胺提取物，胡椒碱，鞣花酸，石榴提取物(水溶)，紫檀芪，白藜芦醇，檀香紫檀提取物，迷迭香提取物，迷迭香酸，余甘子提取物，β没食子酸萄糖苷，四氢姜黄素，撒尔维亚(鼠尾草)叶提取物，熊果酸，皂苷，白芝麻(芝麻)种子提取物，芝麻素和芝麻酚林，辣木油，辣木种子提取物，马栗提取物，牡荆油，木香酸，乙基抗坏血酸，摩洛哥坚果油，柠檬皮提取物，姜黄根油，大麦β葡聚糖，辅酶Q10，橄榄油，鳄梨油，和蔓越莓油。
在另外的相关方面中，一种或多种抗氧化剂和抗炎症剂选自但不限于：维生素A、D、E、K、C、B络合物，迷迭香酸，α硫辛酸，鞣花酸，甘草酸，表没食子儿茶精没食子酸酯，植物多酚，光甘草定，辣木油，齐墩果酸，橄榄苦苷，鼠尾草酸，尿刊酸，植烯，类脂酸(lipoidacid)，硫辛酰胺，铁蛋白，甲磺酸去铁胺，胆红素，胆汁绿，黑色素，泛醌，泛醌醇，抗坏血酸基棕榈酸酯，Mg抗坏血酸基磷酸盐，乙酸抗坏血酸基酯，生育酚和衍生物诸如维生素E乙酸酯，尿酸，α-葡糖基芸香苷，过氧化氢酶和超氧化物歧化酶，谷胱甘肽，硒化合物，丁基化的羟基茴香醚(BHA)，丁基化的羟基甲苯(BHT)，偏亚硫酸钠(SMB)，没食子酸丙酯(PG)和氨基酸半胱氨酸。
在另外的相关方面中，一种或多种生物利用率增强剂选自但不限于：胡椒碱，四氢胡椒碱，槲皮素，大蒜提取物，姜提取物，和柚皮苷。
阐述最优选实施方式的具体的说明性实施例包括在下文中。
实施例
实施例1：方法
植物活性物
包含不少于10％w/w木蝴蝶素A、不少于10％w/w黄芩素、和不少于2％w/w白杨素的组合物是由木蝴蝶(Oroxylum indicum)的树皮通过美国专利编号10555982中概述的工艺获得的。所述组合物可作为
从Sami Labs Limited购得。95％w/w氧化白藜芦醇是从野波罗蜜(Artocarpus lakoocha)使用标准化的内部工艺而标准化的，并且其也可作为
从Sami Labs Limited购得。包含95％w/w四氢姜黄素的植物活性物是使用工业上可行的工艺从姜黄(Curcuma longa)分离的，并且其也可作为
从SamiLabs Limited得到。包含至少10％w/wβ-没食子酸萄糖苷和至少10％w/w总粘酸没食子酸酯的组合物是从余甘果(Emblica officinalis)标准化的，并且可作为
从SamiLabs Limited购得。90％w/w紫檀芪的组合物是从花榈木(Pterocarpus marsupium)使用标准化的工艺而分离并且标准化的，并且也可作为
从Sami Labs Limited购得。
ROS分析
细胞可透过的非荧光染料2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)进入细胞，并且DCFH-DA上的乙酸酯基团被细胞酯酶裂解，将非荧光DCFH截留在细胞内。通过细胞内生成的反应性氧物种的后续氧化产生荧光DCF，其可在485/520Ex:Em波长处被检测到。样品的清除活性是通过当与不具有抗氧化剂的对照物比较时的荧光降低而指示的。
在37℃和5％CO2下，将人HaCaT角质形成细胞/小鼠成纤维细胞维持在含有25mM葡萄糖以及具有抗生素的10％经热失活的胎牛血清的DMEM中。当细胞为70-80％铺满(confluent)时，将其胰蛋白酶化、洗涤、并且以5x104细胞/孔的接种密度接种于96孔板中。允许细胞通宵粘附。在将细胞暴露于污染物之前，通过改变不同植物活性物的非毒性浓度将其预处理60分钟。在存在植物活性物的情况下，将细胞暴露于以下污染物。
15焦耳/m2的UVA强度，持续60分钟，
4.6焦耳/m2的UV-B强度，持续10分钟
重金属(各自以0.25mm的氯化钴和硝酸铅)，持续6小时
细胞内ROS在通过如下的特定处理时长之后确定：向所有孔以10μg/孔的浓度添加新鲜制备的DCFH-DA试剂，并且在37℃下培育30分钟。荧光在BMG FluoStar Optima微板读取器中在485:520(Ex:Em)nm的波长处记录。
在存在UVA的情况下对于多环芳族烃的保护
多环芳族烃(PAH)是一类致突变并且致瘤的环境污染物。PAH在环境中广泛存在，由天然材料的不完全燃烧和烟草烟产生(Connell,D.W.；Hawker,D.W.；Warne,M.J.；Vowles,P.P.:Polycyclic aromatic hydrocarbons(PAHs).In Introduction intoEnvironmental Chemistry(McCombs,K.和Starkweather,A.W.,eds),1997,pp.205-217,CRC Press LLC,Boca Raton,FL.2.Shaw,G.R.；Connell,D.W.:Prediction andmonitoring of the carcinogenicity of polycyclic aromatic compounds(PACs).Rev.Environ.Contam.Toxic.,1994,135,1-62.)。PAH自身是生物惰性的并且为了呈现基因毒性需要代谢活动。PAH吸收UVA区域中的光，与氧或其它分子反应以生成反应性中间体(Yu H,Xia Q,Yan J,等人，Photoirradiation of polycyclic aromatic hydrocarbonswith UVA light-apathway leading to the generation of reactive oxygen species,lipid peroxidation,and dna damage.Int J Environ Res Public Health.2006；3:348-354)。因而，PAH可通过光照射“活化”以导致光诱导的细胞毒性。因而，PAH的使用UVA照射的光照射代表导致细胞毒性和DNA损伤的污染物。
在96孔板中，人HaCaT角质形成细胞以1x104细胞/孔的密度接种。允许细胞通宵粘附。将它们与不同浓度的植物活性物一起用以0.5mM浓度的苯并[a]芘(一种PAH)预处理50分钟，所述苯并[a]芘暴露于在17焦耳/m2的强度的UVA。将细胞使用无菌缓冲液洗涤，且添加具有各自浓度的植物活性物的新鲜培养介质(2％的FBS)，随后在37℃下在CO2培育器中培育24小时。向细胞添加中性红(Neutral Red)(25μg/mL)(盐酸3-氨基-7-二甲基氨基-2-甲基吩嗪)，持续3小时。细胞的NR摄取是通过如下确定的：使细胞胞溶，并且在Tecan微板读取器(TECAN Ltd，门内多夫，瑞士)中读取在540nm的吸光度。
抗氧化剂分析
细胞抗氧化剂被污染物消耗(耗尽)。在体外研究植物活性物在细胞中增加这些抗氧化剂酶的能力。将人HaCaT角质形成细胞以5x105个细胞/孔的密度接种于6孔板中。所述细胞用植物活性物预处理1小时，并且将其暴露于17焦耳/m2的UVA强度，持续50分钟。使用无菌缓冲液洗涤细胞，添加具有各自浓度的植物活性物的新鲜培养介质(2％的FBS)，随后在37℃下在CO2培育器中培育24小时。制备细胞溶胞产物，并且估计超氧化物歧化酶(SOD)水平和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)。
超氧化物歧化酶(SOD)活性的估计
通过使用试剂盒(kit)的按照制造商的指南(Elabsciences)的WST-1方法测量细胞溶胞产物中SOD的活性。黄质氧化酶(XO)可催化WST-1，与O2-反应，以生成水溶的甲瓒(甲
formazan)染料。SOD可催化超氧阴离子的歧化，因此反应可被SOD抑制，并且SOD的活性与甲瓒染料的量是负相关的。因此，SOD的活性可通过WST-1产物的比色分析确定。
谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性的估计
谷胱甘肽过氧化物酶活性根据Hafeman等人(1974)的方法确定。谷胱甘肽过氧化物酶在谷胱甘肽(GSH)的存在下使H2O2降解，由此将其消耗。剩余GSH使用DTNB而测量，DTNB产生着色的络合物。
向体积为100μl的细胞溶胞产物，0.2mM GSH、0.05mM H2O2和1mM NaN3，总体积为250μl，用1M磷酸钠缓冲液(pH 7.0)。所述反应在37℃下培育10分钟，并且通过添加50μl的25％TCA而停止。在3000rpm下将反应混合物离心10分钟，并且向0.1ml的上清液添加0.1ml的0.4M Na2HPO4和50μl的1mM DTNB。在37℃下培育10分钟之后，以412nm测量黄色形成强度。酶活性以单位/mg蛋白计。
DPPH自由基清除分析
反应性氧物种(ROS)(包括超氧化物、羟基、过氧基、和烷氧基自由基)通过正常代谢过程产生。在正常条件下，这些自由基通过细胞抗氧化剂清除，并且保持平衡。辐射、毒素和污染物增加ROS，其可诱导对生物分子(诸如脂质、核酸、蛋白和碳水化合物)的氧化性损伤。这些ROS诱导的损伤导致皮肤刺激、炎症、老化、癌症和很多其它疾病。α,α-二苯基-β-苦基偕腙肼(DPPH)自由基清除方法是用于评估化合物的抗氧化潜能的首选途径之一。
材料
设备：Tecan微板读取器(TECAN Ltd，门内多夫，瑞士)
试剂：0.1mM的在乙醇中的DPPH，0.1M磷酸盐缓冲的盐水(pH7.4)
微量滴定板：96孔微量滴定板(Corning，USA)
程序
DPPH在甲醇溶液(methanolic solution)中是稳定的自由基，具有在520nm的吸光度。若所述自由基通过抗氧化剂分子清除，则所得溶液显现黄色。细胞外代谢产物的氢原子或电子供给能力通过紫色DPPH甲醇溶液的漂白测量。
不同浓度的多种植物活性物在甲醇中稀释。对于DPPH自由基清除分析，遵循如较早描述的方法(Clarke等人，2013)，在96孔板中将20μL的不同浓度的样品与180μL的甲醇中的DPPH混合。将板在黑暗中保持15分钟，之后使用微板读取器(TECAN Ltd，门内多夫，瑞士)以540nm测量溶液的吸光度。同时记录空白(DMSO，甲醇)和标准物(甲醇中的TBHQ溶液)。使用可变的浓度筛选提取物，以确立抑制浓度(IC50，将DPPH吸光度降低50％的浓度)。
如下计算由基清除活性，
其中，
B＝对照溶液的吸光度(DPPH的OD)
C＝对照溶液(空白)的吸光度(仅甲醇的OD)
S＝测试溶液的吸光度
C＝测试溶液(空白)的吸光度
抗炎症活性
使用Duoset ELISA试剂盒(R&D体系，Cat No.DY208)测量分析上清液中的IL8。
抗胶原酶活性
胶原酶是如下的基质金属蛋白酶之一：消化胶原和细胞外基质(ECM)的其它组分。ECM充当使皮肤结构稳定的支架，并且还帮助皮肤细胞的增生和代谢功能。胶原损失导致皮肤的皱纹和下垂。胶原酶抑制分析的原理基于如下事实：底物DQTM明胶与荧光蛋白(一种荧光化合物)结合。在DQTM明胶中，荧光淬灭。DQTM明胶被胶原酶高效地消化，以得到可测量的荧光化合物。荧光的增加与酶活性成比例。在存在抗胶原酶化合物情况下，荧光的量对于固定的酶和底物浓度将减少。
材料
设备——BMG FLUOstar Optima(荧光微板读取器)
试剂：磷酸盐缓冲液(pH 7.4)
胶原酶的酶分析试剂盒(
胶原酶，明胶酶分析试剂盒，Invitrogen，USA)
微量滴定板——96孔微量滴定板(黑色)——Corning，USA。
所述分析是在96孔黑色微滴定板中进行的。以DQ明胶作为底物的来自溶组织梭菌(Clostridium histolyticum)的IV型用于所述化验。使用20l的明胶底物(12.5g/ml)预先培育不同浓度的各种植物活性物。添加100l的胶原酶的酶溶液(最终浓度-0.4U/ml)，并且在30分钟之后以Em:485nm和Ex:520nm测量荧光强度。记录对照(缓冲液)的酶活性
如下计算抑制百分数：
B——在存在酶的情况下的荧光。
BC——在不存在酶活性的情况下的荧光
T——在存在抑制剂的情况下酶活性的荧光
TC——抑制剂单独的荧光
实施例2：包含木蝴蝶素A、黄芩素和白杨素的组合物的防污染效果
针对UVA和BaP的保护
以3.12-25μg/ml的浓度包含蝴蝶素A、黄芩素和白杨素的组合物赋予针对UVA+BaP的依赖于剂量的保护(图1)。相似地，所述组合物降低通过暴露于重金属(图2a)、UVA(图2b)、和UVB(图2c)生成的ROS。
使抗氧化剂酶活性正常化
暴露于UV降低超氧化物歧化酶浓度并且增加谷胱甘肽过氧化物酶活性。所述组合物恢复角质形成细胞中的正常酶活性(图3a和3b)
抑制由污染物诱导的炎症细胞因子
包含木蝴蝶素A、黄芩素和白杨素的组合物抑制由污染物诱导的IL-8的产生(表1)
表1：通过包含木蝴蝶素A、黄芩素和白杨素的组合物的IL-8抑制
| 浓度(μg/ml) | IL-8的抑制％ |
| 12.5 | 6.37 |
| 25.00 | 15.61 |
抗氧化活性
包含木蝴蝶素A、黄芩素和白杨素的组合物通过以依赖于剂量的方式抑制DPPH自由基而展现突出的抗氧化活性，其中IC50为5.1μg/ml(表2)。
表2：包含木蝴蝶素A、黄芩素和白杨素的组合物的DPPH自由基清除活性
| 浓度(μg/ml) | 抑制％ |
| 50.00 | 95.13 |
| 25.00 | 92.88 |
| 12.50 | 87.28 |
| 6.25 | 56.22 |
| 3.125 | 28.96 |
| IC50 | 5.1(μg/ml) |
抗胶原酶活性
有害污染物通过使胶原降解而损伤皮肤。包含木蝴蝶素A、黄芩素和白杨素的组合物通过抑制所述酶(胶原酶)而抑制胶原降解(表3)。
表3：包含木蝴蝶素A、黄芩素和白杨素的组合物的抗胶原酶活性
| 浓度(μg/ml) | 抑制％ |
| 200 | 48.13 |
| 100 | 33.37 |
| 50 | 23.65 |
| 25 | 13.5 |
实施例3：β-没食子酸萄糖苷组合物的防污染效果
针对UVA和BaP的保护
在3.12-25μg/ml浓度的β-没食子酸萄糖苷组合物赋予针对UVA+BaP的依赖于剂量的保护(图4)。相似地，所述组合物降低通过暴露于重金属(图5a)、UVA(图5b)、和UVB(图5c)生成的ROS。
使抗氧化剂酶活性正常化
暴露于UV降低超氧化物歧化酶浓度并且增加谷胱甘肽过氧化物酶活性。所述组合物恢复角质形成细胞中的正常酶活性(图6a和6b)。
抑制由污染物诱导的炎症细胞因子
β-没食子酸萄糖苷抑制由污染物诱导的IL-8的产生(表4)
表4：通过β-没食子酸萄糖苷组合物引起的IL-8抑制
| 浓度(μg/ml) | IL-8的抑制％ |
| 12.5 | 5.16 |
| 25.00 | 14.13 |
抗氧化活性
β-没食子酸萄糖苷组合物通过以依赖于剂量的方式抑制DPPH自由基而展现突出的抗氧化活性，其中IC50为4.34μg/ml(表5)。
表5：β-没食子酸萄糖苷组合物的DPPH自由基清除活性
| 浓度(μg/ml) | 抑制％ |
| 25.00 | 93.75 |
| 12.50 | 93.75 |
| 6.25 | 84.82 |
| 3.125 | 61.31 |
| 1.56 | 36.90 |
| IC50 | 4.34(μg/ml) |
抗胶原酶活性
β-没食子酸萄糖苷组合物通过抑制所述酶(胶原酶)而抑制胶原降解(表6)。
表6：β-没食子酸萄糖苷组合物的抗胶原酶活性
| 浓度(μg/ml) | 抑制％ |
| 1000 | 47.78 |
| 500 | 28.38 |
| 250 | 16.87 |
| 125 | 13.66 |
实施例4：95％四氢姜黄素的防污染效果
针对UVA和BaP的保护
以1.25-10μg/ml的浓度的四氢姜黄素赋予针对UVA+BaP的依赖于剂量的保护(图7)。相似地，所述组合物降低通过暴露于重金属(图8a)、UVA(图8b)、和UVB(图8c)生成的ROS。
使抗氧化剂酶活性正常化
暴露于UV降低超氧化物歧化酶浓度并且增加谷胱甘肽过氧化物酶活性。四氢姜黄素恢复角质形成细胞中的正常酶活性(图9a和9b)
抑制由污染物诱导的炎症细胞因子
四氢姜黄素抑制由污染物诱导的IL-8的产生(表7)
表7：通过四氢姜黄素引起的IL-8抑制
| 浓度(μg/ml) | IL-8的抑制％ |
| 12.5 | 6.07 |
抗氧化活性
四氢姜黄素通过以依赖于剂量的方式抑制DPPH自由基而展现突出的抗氧化活性，其中IC50为2.29μg/ml(表8)。
表8：四氢姜黄素的DPPH自由基清除活性
| 浓度(μg/ml) | 抑制％ |
| 12.50 | 86.68 |
| 6.25 | 70.39 |
| 3.125 | 62.34 |
| 1.56 | 32.89 |
| 0.78 | 22.20 |
| IC50 | 2.29(μg/ml) |
抗胶原酶活性
四氢姜黄素通过抑制所述酶(胶原酶)而抑制胶原降解(表9)
表9：四氢姜黄素的抗胶原酶活性
| 浓度(μg/ml) | 抑制％ |
| 500 | 16.10 |
| 250 | 无活性 |
实施例4：95％氧化白藜芦醇的防污染效果
针对UVA和BaP的保护
以3.12-12.5μg/ml的浓度的氧化白藜芦醇赋予针对UVA+BaP的依赖于剂量的保护(图10)。相似地，所述组合物降低通过暴露于重金属(图11a)、UVA(图11b)、和UVB(图11c)生成的ROS。
使抗氧化剂酶活性正常化
暴露于UV降低超氧化物歧化酶浓度并且增加谷胱甘肽过氧化物酶活性。氧化白藜芦醇恢复角质形成细胞中的正常酶活性(图12a和12b)。
抑制由污染物诱导的炎症细胞因子
氧化白藜芦醇抑制由污染物诱导的IL-8的产生(表10)
表10：通过氧化白藜芦醇的IL-8抑制
| 浓度(μg/ml) | IL-8的抑制％ |
| 3.125 | 13.27 |
| 6.25 | 18.36 |
抗氧化活性
氧化白藜芦醇通过以依赖于剂量的方式抑制DPPH自由基而展现突出的抗氧化活性，其中IC50为0.61μg/ml(表11)。
表11：氧化白藜芦醇的DPPH自由基清除活性
| 浓度(μg/ml) | 抑制％ |
| 5.00 | 84.14 |
| 2.5 | 77.89 |
| 1.25 | 68.63 |
| 0.625 | 42.07 |
| 0.3125 | 22.9 |
| IC50 | 0.61(μg/ml) |
抗胶原酶活性
氧化白藜芦醇通过抑制酶(胶原酶)而抑制胶原降解(表12)。
表12：氧化白藜芦醇的抗胶原酶活性
| 浓度(μg/ml) | 抑制％ |
| 100 | 80.92 |
| 50 | 41.19 |
| 25 | 9.93 |
| 12.5 | 0.05 |
实施例5：生物活性组合物的组合的防污染效果
生物活性组合物的组合效果是通过其在HaCaT细胞中针对UVA-苯并[a]芘的保护能力评估的。结果列于以下表13中：
表13：生物活性组合物的组合的防污染效果
单独活性物的活性于表14中提及：
表14:
| 活性物 | 针对BaP的保护％ |
| 氧化白藜芦醇(6.25μg/ml) | 28.04 |
| 木蝴蝶素、黄芩素、白杨素组合物(12.5μg/ml) | 51.03 |
| β没食子酸萄糖苷组合物(25μg/ml) | 13.18 |
| 四氢姜黄素(5μg/ml) | 无活性 |
| 紫檀芪(2.5μgml) | 无活性 |
结果表明，具有木蝴蝶素、黄芩素、白杨素组合物的组合显示协同活性，并且可单独地或与其它防污染试剂组合地引入配制物中。
进一步评估包含木蝴蝶素、黄芩素、白杨素组合物以及不同植物活性物的组合物的其针对UVA-BaP暴露的保护以及UVA和重金属诱导的ROS的清除的能力。结果列于以下表中：
针对UV-A BaP暴露的保护
表15：使用包含木蝴蝶素、黄芩素、白杨素和氧化白藜芦醇的组合的针对UV-A BaP的保护
表16：使用包含木蝴蝶素、黄芩素、白杨素和四氢姜黄素的组合的针对UV-ABaP的保护
表17：使用包含木蝴蝶素、黄芩素、白杨素、和紫檀芪的组合的针对UV-ABaP的保护
表18：使用包含木蝴蝶素、黄芩素、白杨素和β-没食子酸萄糖苷组合物的组合的针对UV-A BaP的保护
UVA诱导的ROS的降低
表19：使用包含木蝴蝶素、黄芩素、白杨素和氧化白藜芦醇的组合的UV-A诱导的ROS的降低。
表20：使用包含木蝴蝶素、黄芩素、白杨素和四氢姜黄素的组合的UV-A诱导的ROS的降低。
表21：使用包含木蝴蝶素、黄芩素、白杨素和紫檀芪的组合的UV-A诱导的ROS的降低。
表22：使用包含木蝴蝶素、黄芩素、白杨素和β-没食子酸萄糖苷组合物的组合的UV-A诱导的ROS的降低。
重金属诱导的ROS的降低
表23：使用包含木蝴蝶素、黄芩素、白杨素和β-没食子酸萄糖苷组合物的组合的重金属诱导的ROS的降低。
表24：使用包含木蝴蝶素、黄芩素、白杨素和氧化白藜芦醇的组合的重金属诱导的ROS的降低。
表25：使用包含木蝴蝶素、黄芩素、白杨素和四氢姜黄素的组合的重金属诱导的ROS的降低
表26：使用包含木蝴蝶素、黄芩素、白杨素和紫檀芪的组合的重金属诱导的ROS的降低
结果表明，包含木蝴蝶素、黄芩素、白杨素组合物以及不同植物活性物的组合物协同增加了其针对UVA-BaP暴露的保护以及UVA和重金属诱导的ROS的清除的能力。
尽管参考优选实施方式描述了本发明，但本领域技术人员应清楚理解，本发明并不限于此。而是，本发明的范围应仅结合所附权利要求而解释。
Claims (14)
1.用于保护哺乳动物皮肤抵御UV辐射和环境污染物的有害效果的方法，所述方法包括向需要这样的保护的哺乳动物局部施用包含不少于10％w/w木蝴蝶素A、不少于10％w/w黄芩素和不少于2％w/w白杨素的组合物的步骤。
2.如权利要求1中所述的方法，其中所述组合物进一步包含选自以下的一种或多种成分：95％w/w氧化白藜芦醇；95％w/w四氢姜黄素；90％w/w紫檀芪，以及包含至少10％w/wβ-没食子酸萄糖苷和至少10％w/w总粘酸没食子酸酯的组合物。
3.如权利要求1中所述的方法，其中所述环境污染物选自颗粒物质、多环芳族烃、挥发性有机化合物、洗涤剂、氮和硫的氧化物、一氧化碳、臭氧和重金属。
4.如权利要求1中所述的方法，其中所述组合物通过增加抗氧化剂酶水平、和减少ROS水平、和降低炎症标志物水平而赋予皮肤保护。
5.如权利要求4中所述的方法，其中所述抗氧化剂酶选自谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶、和过氧化氢酶。
6.如权利要求4中所述的方法，其中所述炎症标志物选自白细胞介素(IL)-1α、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、和IL-8。
7.如权利要求4中所述的方法，其中所述炎症标志物为IL-8。
8.用于使暴露于环境污染物和UV辐射的哺乳动物皮肤净化和复原的方法，所述方法包括向需要这样的效果的哺乳动物局部施用包含不少于10％w/w木蝴蝶素A、不少于10％w/w黄芩素和不少于2％w/w白杨素的组合物的步骤。
9.如权利要求8中所述的方法，其中所述组合物进一步包含选自以下的一种或多种成分：95％w/w氧化白藜芦醇；95％w/w四氢姜黄素；90％w/w紫檀芪，以及包含至少10％w/wβ-没食子酸萄糖苷和至少10％w/w总粘酸没食子酸酯的组合物。
10.如权利要求8中所述的方法，其中所述环境污染物选自颗粒物质、多环芳族烃、挥发性有机化合物、洗涤剂、氮和硫的氧化物、一氧化碳、臭氧、和重金属。
11.如权利要求8中所述的方法，其中所述组合物通过减少胶原酶活性、增加抗氧化剂酶水平、和减少ROS水平、和降低炎症标志物水平而赋予皮肤保护。
12.如权利要求11中所述的方法，其中所述抗氧化剂酶选自谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶、和过氧化氢酶。
13.如权利要求11中所述的方法，其中所述炎症标志物选自白细胞介素(IL)-1α、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、和IL-8。
14.如权利要求11中所述的方法，其中所述炎症标志物为IL-8。
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