JP2022550417A - 産卵低下症候群ウイルスtFiberタンパク質フラグメント、それにより製造されたワクチン組成物、製造方法及び応用 - Google Patents
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Abstract
Description
1.1 EDSVウイルスDNAの抽出
ウイルスDNA抽出キットの明細書に従って、0.2mlの感染産卵低下症候群ウイルスHX株(Egg Drop Syndrome Virus,Strain HX、保存番号はCCTCC NO:V201942であり、保存日は2019年06月19日であり、保存住所は中国武漢・武漢大学である)のSPFアヒル胚尿膜腔液を無菌の1.5ml遠心管に取り入れ、0.4mlのVBを試料液に加え、渦流混合し、室温で10分間静置した。0.45mlのAD緩衝液を試料液に加え、激しく均一に混合した。VBカラムを2ml集合管に入れ、0.6mlの混合液をVBカラムに入れ、14000g、1分間遠心する一方、残りの混合液をVBカラムに加え、14000g、1分間遠心し、2ml集合管を破棄し、VBカラムを新しい2ml集合管に入れ、0.4mlのW1緩衝液を加え、14000g、30秒間遠心した。0.6mlの洗浄緩衝液をVBカラムに加え、14000g、30秒間遠心した後、緩衝液を加えずに3分間遠心した。VBカラムを新しい1.5mlの遠心管に入れ、50μlのRNaseフリー水を加えて膜中央に置き、3分間静置し、14000g、1分間遠心し、遠心して得られた液体は、DNA溶液である。
最適化後、ファイバー遺伝子を中国蘇州金唯智生物科技有限会社に送って全配列合成を行って、ファイバー遺伝子コドン最適化配列を含むpUC57-EDS-ファイバープラスミドを取得した。
実施例1で製造されたpET28a-EDS-tFiber発現菌株を、50-100μg/mlカナマイシンを含有するLB培地に接種した。接種量は、1%(V/V)であった。そして、37℃で振盪培養した。OD600=0.4~0.6である時、28℃で30分間放置した。イソプロピル-β-D-チオガラクトピラノシド(IPTG)を加えて、最終濃度が0.1~1.0mMになるようにし、28℃で24時間振盪培養した。培養が完了した後、菌体を収集し、PBS(塩化ナトリウム8g、塩化カリウム0.2g、リン酸水素二ナトリウム1.44g、リン酸二水素カリウム0.24g、pH7.4に調整し、1Lに定容する)を用いて菌体を再懸濁し、超音波破砕し、遠心して上澄みを取得した。発現産物中、可溶性目的タンパク質の含有量が比較的多く、即ち、可溶性tFiberタンパク質フラグメントの発現量が比較的多く、tFiberタンパク質フラグメントのAGP価が1:512に達し、内毒素含有量が0.46×105EU/mlであり、HA活性がなかった。
1.5ml遠心管に処理すべき溶液0.5ml及び最終濃度が1%(V/V)であるトリトンX-114(トリトンX-114)5μlを加え、ボルテックス振盪した。サンプルを氷上に5分間放置した。サンプルをボルテックス振盪及び冷却した後、遠心管を直ちに37℃湯浴に入れ、5分間温浴して、新たな二相を産生させた。その後、サンプルを37℃で60秒間遠心した。遠心後、目的タンパク質は上層に残った一方、内毒素を含有する洗浄剤は、油滴の形態で遠心管の底部に残留した。内毒素を除去する操作全体を3回繰返し行った。測定した結果、tFiberタンパク質フラグメントのAGP価は、1:512に達し、内毒素含有量は、0.009×105EU/mlに減少した。
実施例3の方法通りに精製した後のtFiberタンパク質フラグメントを鉱油アジュバントにゆっくり加える同時に、モーターを始動し、17500r/minで5分間攪拌した。攪拌を終了する前に、1%チメロサール溶液を加えて、その最終濃度が0.01%になるようにした。具体的な配合比率を、表3に示す。
21日齢のSPF鶏40羽を取り、1群毎に10ずつ4群に分けた。第1群~第3群に対してそれぞれ実施例4で製造されたワクチン1~ワクチン3を頚部皮下注射して免疫させ、免疫用量は、0.5mlであった。第4群に対して0.5mlの生理食塩水を頚部皮下注射して、ブランク対照とした。全ての試験鶏は全部隔離飼育され、免疫前及び免疫後21日目に、鶏毎にそれぞれ採血し、血清を分離し、血清中の産卵低下症候群HI抗体価を測定した。その結果を、表4に示す。
115日齢のハイラインブラウン産卵鶏(Hy-LINE Brown Laying Hens)40羽を取り、1群毎に10ずつ4群に分け、第5群~第7群に対してそれぞれ実施例4で製造されたワクチン1~ワクチン3を頚部皮下注射して免疫させ、免疫用量は、0.5mlであった。第8群に対して0.5mlの生理食塩水を頚部皮下注射して、ブランク対照とした。免疫前及び免疫後21日目に、鶏毎にそれぞれ採血し、血清を分離し、血清の産卵低下症候群HI抗体価を測定した。産卵率が90%程度に達した時(免疫後6週)、4群全ての試験鶏に全部HX株で強毒ウイルスチャレンジさせる。1羽毎に10倍希釈毒1mlを経口摂取させた。ウイルス含有量は、106.5EID50であった。ウイルスチャレンジ後、6週間観察し、鶏群の摂食、気力、糞便等の状况を観察し、産卵数を記録し、産卵率を計算した。その結果を、表5に示す。
42日齢のチェリーバレーアヒル40羽を取り、1群毎に10羽ずつ4群に分けた。第9群~第11群に対してそれぞれ実施例4で製造されたワクチン1~ワクチン3を頚部皮下注射し免疫させ、免疫用量は、0.5mlであった。第12組に対して0.5mlの生理食塩水を頚部皮下注射して、ブランク対照とした。すべての試験アヒルは全部隔離飼育され、免疫前及び免疫後21日目に、アヒル1羽毎にそれぞれ採血し、血清を分離し、血清中の産卵低下症候群HI抗体価を測定した。測定結果を、表6に示す。
実施例1の方法を参照してpET28a-EDS-ファイバー発現菌株を構築し、実施例2方法に従ってファイバー全長タンパク質を製造した。ファイバータンパク質のHA価は1:512であり、AGP価は1:64であり、内毒素含有量は0.51×105EU/mlであった。実施例3の方法に従って内毒素を除去した。測定した結果、ファイバータンパク質のAGP価は1:64に達し、内毒素含有量は0.009×105EU/mlに減少した。
21日齢のSPF鶏を30羽を取り、1群毎に10羽ずつ3群に分けた。第13群、第14群に対してそれぞれ実施例4で製造されたワクチン2、実施例8で製造されたワクチン4を頚部皮下注射して免疫させ、免疫用量は、0.5mlであった。第15群に対して0.5mlの生理食塩水を頚部皮下注射して、ブランク対照とした。全ての試験鶏は全部隔離飼育され、免疫前及び免疫後21日目に、鶏毎にそれぞれ採血し、血清を分離し、血清の産卵低下症候群HI抗体価を測定した。その結果を、表8に示す。
ニューカッスル病ウイルス(遺伝子VII型)N7a株(Newcastle Disease Virus(genotypeVII)、strain N7a)(中国典型培養物保存中心に保存され、保存番号はCCTCC NO:V201545であり、保存日は2015年10月19日であり、保存住所は中国武漢・武漢大学であり、中国特許出願CN107281479Aに開示されている))を取り、滅菌生理食塩水で適当に希釈(10-4又は10-5)して10~11日齢易感染鶏胚に1胚毎に0.1mlずつ接種した後、37℃で孵化を続けた。接種後48~120時間内に死亡及び生存した鶏胚を選んで、尿膜腔液を収穫した。ウイルス含有量を測定した結果、108.0EID50/0.1mlであった。最終濃度が0.1%であるホルムアルデヒド溶液(V/V)を加え、37℃で不活化した。この間、4~6時間おきに一回攪拌し、16時間不活化して、完全に不活化した後、後に利用するために備えておいた。
H9亜型鳥インフルエンザウイルスHF株(鳥インフルエンザウイルス(H9亜型)HF株(Avian Influenza Virus(Subtype H9),Strain HF)、保存番号はCCTCC NO:V201941であり、保存日は2019年06月19日であり、保存住所は中国武漢・武漢大学である)ウイルス種を取り、無菌生理食塩水で10-3に希釈し(ウイルス液0.1mlを取って0.9ml無菌生理食塩水に加え、振盪混合した後、この通りにまた二回希釈する)、10日齢易感染鶏胚(北京梅里亜維通実験動物技術有限会社から購入したSPF種卵を使用して自体的に孵化する)を1胚毎に0.1ml(105EID50含有)ずつ尿膜腔を介して接種した。接種後、針の穴を密封し、36~37℃に置いて孵化を続けた。転卵する必要はなかった。96時間後に取り出して、気室に対して上向きに直立させ、2~8℃で12~24時間冷却した。冷却後の鶏胚に対して胚液を収穫した。ウイルス含有量を測定した結果、108.5EID50/0.1mlであった。最終濃度が0.1%であるホルムアルデヒド溶液(V/V)を加え、37℃で不活化した。この間、4~6時間おきに一回攪拌し、24時間不活化し、完全に不活化した後、後に利用するために備えておいた。
鶏伝染性気管支炎ウイルスM41株(中国獣医薬品監察所から購入)を取り、滅菌生理食塩水で適当に希釈(10-2或10-3)して10~11日齢易感染鶏胚を1胚毎に0.1mlずつ接種し、接種後、36~37℃で孵化を続けた。接種後24~48時間内で死亡及び生存した鶏胚を選んで、尿膜腔液を収穫した。ウイルス含有量を測定した結果、106.0EID50/0.1mlであった。最終濃度が0.1%であるホルムアルデヒド溶液(V/V)を加え、37℃で不活化した。この間、4~6時間おきに一回攪拌し、16時間不活化し、完全に不活化した後、後に利用するために備えておいた。
13.1 VP2 cDNA製造
ウイルスRNA抽出キット操作通りに感染鶏伝染性ファブリキウス嚢病ウイルス超強毒成都株のSPF鶏ファブリキウス嚢からIBDVウイルスRNAを抽出し、ランダムプライマーを用いて逆転写を行った。VP2遺伝子5’末端及び3’末端の保存領域配列によってオリゴヌクレオチドプライマーを合成した。合成オリゴヌクレオチドプライマーの配列を、表9に示す。そして、PCR増幅を行い、アガロースゲルエクストラクションキットを利用して回収し、-20℃で保存した。
上記のように製造されたVP2 cDNAを取り、二重酵素切断を行い、酵素切断後のフラグメントをpColdIIIベクターに連結させた。連結産物を直接大腸菌BL21(DE3)に転化させて、100μgのアンピシリンを含有するLB固体培地に塗布し、一晩培養させて、生えて出たコロニーは、pColdIII-VP2/E.ColiBL21(DE3)菌株であった。
培養タンクで通気培養し、容積で70%培地及び落花生油消泡剤を入れた。滅菌後、培地量の2%~4%でpColdIII-VP2/E.ColiBL21(DE3)菌株種液を接種し、37℃で培養した。菌液のOD600値が0.6~1.0になった時、0.2mol/Lα-乳糖を加えて、最終濃度が0.02mol/Lとなるようににして、再び5~8時間培養し続けた。
14.1 ファイバー-2タンパク質cDNA製造
ウイルスRNA抽出キット操作通りに感染禽アデノウイルスFAV-HN株(禽アデノウイルス、FAV-HN株(Fowl aviadenovirus,strain FAV-HN)、保存番号はCCTCC NO:V201609であり、保存機関は中国典型培養物保存中心であり、保存住所は中国武漢・武漢大学であり、保存日は2016年2月29日であり、中国特許出願CN107523556Aに開示されている)からFADVウイルスDNAを抽出した。ファイバー-2タンパク質遺伝子5’末端及び3’末端の保存領域配列によってオリゴヌクレオチドプライマーを合成した。合成オリゴヌクレオチドプライマー配列を、表10に示す。そして、PCR増幅を行い、アガロースゲルエクストラクションキットを利用して回収し、-20℃で保存した。
最適化後、ファイバー-2タンパク質遺伝子を中国蘇州金唯智生科技有限会社に送り、全配列合成を行い、それぞれpET28aプラスミドに連結させた。連結後のプラスミドを大腸菌BL21(DE3)に転化させ、単クローンを選び、100μgカナマイシンを含有するLB培地で一晩培養させた。プラスミドを抽出した後、配列測定及び分析を行った。陽性クローンは、pET28a-FADV-ファイバー-2発現菌株であった。
実施例1で製造されたpET28a-FADV-ファイバー-2/E.ColiBL21(DE3)菌株を50-100μg/mlカナマイシンを含有するLB培地に接種した。接種量は、1%(V/V)であり、37℃で振盪培養した。OD600値が0.4~0.6に達した時に、28℃で30分間放置した。イソプロピル-β-D-チオガラクトピラノシド(IPTG)を加えて、その最終濃度が1.0mMになるようにして、28℃で24時間振盪培養した。
実施例3で精製された産卵低下症候群ウイルスtFiberタンパク質フラグメント抗原を、それぞれ実施例10で製造された鶏ニューカッスル病抗原、実施例11で製造された鳥インフルエンザ抗原、実施例12で製造された鶏伝染性気管支炎抗原、実施例13で製造された伝染性ファブリキウス嚢抗原、及び実施例14で製造された禽アデノウイルス抗原と比率どおりに混合して、鉱油アジュバントに加える同時に、モーターを始動し、17500r/minで5分間攪拌した。攪拌を終了する前に、1%チメロサール溶液を加えて、その最終濃度が0.01%になるようにした。具体的な配合比率を、表11、12、13、14に示す。
16.1 産卵低下症候群ウイルス部分免疫原性試験
21日齢のSPF鶏170羽を取り、1群毎に10羽ずつ17群に分けた。第16群~第31群に対してぞれぞれ実施例15で製造されたワクチン5~ワクチン20を0.5ml/羽で頚部皮下注射し免疫させた。第32群に対して0.5mlの生理食塩水を皮下注射して、ブランク対照とした。すべての試験鶏は全部隔離飼育し、免疫後21日目に、鶏1羽毎にそれぞれ採血し、血清を分離し、血清中の産卵低下症候群HI抗体価を測定した。その結果を、表15に示す。
21日齢のSPF鶏130羽を取り、1群毎に10羽ずつ13群に分けた。第33群~第44群に対してそれぞれ実施例15で製造されたワクチン5、及びワクチン10~ワクチン20を20μl/羽で頚部皮下注射して免疫させた。第45群に対して20μlの生理食塩水を皮下注射して、ウイルスチャレンジ対照とした。すべての試験鶏は、全部隔離して飼育し、免疫後21日目に、第33群~第44群の免疫鶏を第45群のウイルスチャレンジ対照鶏と共に採血し、血清を分離した。ニューカッスル病ウイルスHI抗体を検出する同時に、ニューカッスル病強毒HN1101株ウイルス液を用いて筋肉注射によりウイルスチャレンジした。14日間観察し、発病、死亡及び保護数を記録した。その結果を、表16に示す。
21日齢のSPF鶏80羽を取り、1群毎に10羽ずつ8群に分けた。第46群~第52群に対してそれぞれ実施例15で製造されたワクチン6、ワクチン10、ワクチン14及びワクチン17~ワクチン20を0.3ml/羽で頚部皮下注射して免疫させた。第53群に対して0.3mlの生理食塩水を皮下注射して、ウイルスチャレンジ対照とした。すべての試験鶏は、全部隔離飼育し、免疫後21日目に、第46群~第52群免疫鶏を第53群対照鶏と共に採血し、血清を分離した。H9亜型鳥インフルエンザHI抗体価を検出する同時に、HF株ウイルス液を用いて鶏1羽毎に0.2ml(107.0EID50含有)ずつ静脈注射してウイルスチャレンジした。ウイルスチャレンジ後5日目に、総排出腔スワッブを採集し、処理を経た後、10~11日齢SPF鶏胚5個を尿膜腔接種した。孵育して5日間観察し、死んだ胚か生きている胚かを問わず、いずれも鶏胚液赤血球凝集価を測定すべきであった。各スワッブサンプル別に接種した5個の鶏胚のうち、一個の鶏胚液の凝集価でも1:16(微量測定法)以上である場合、ウイルス分離が陽性であると判定され得る。ウイルス分離が陰性であるサンプルに対して、一回ブラインド継代した後で判定すべきであった。免疫群は、少なくとも9羽の鶏のウイルス分離が陰性となるべきであり、コントロール群は、少なくとも4羽の鶏のウイルス分離が陽性となるべきであった。その結果を、表17に示す。
21日齢のSPF鶏80羽を取り、1群毎に10羽ずつ8群に分けた。第54群~第60群に対してそれぞれ鶏伝染性気管支炎生ワクチン(H120株)1羽分(0.05ml)を点眼、点鼻接種した。接種後21日目に、第61群対照鶏と共に採血し、血清を分離した。同時に、第54群~第60群の各群に対して実施例15で製造されたワクチン7、ワクチン11、ワクチン14、ワクチン15、ワクチン16、ワクチン19、ワクチン20を0.3ml/羽で頚部皮下注射して免疫させた。接種後28日目に、第61群ウイルスチャレンジ対照鶏と共にそれぞれ採血し、血清を分離し、第54~第60群免疫鶏に対して、生ワクチン1次免疫後21日目及び不活化ワクチン免疫後28日目に、二回にかけて採集した血清(第61群ウイルスチャレンジ対照鶏も同じ時間で血清を採集)に対してHI抗体価を測定した。免疫群の2次免疫血清のHI抗体価の幾何平均数は、1次免疫血清のHI抗体価の幾何平均数の4倍以上であり、非免疫コントロール群の血清のHI抗体価の幾何平均値は、1:8以下であった(微量測定法)。同時に、鶏伝染性気管支炎M41強毒を用いて鶏1羽毎に103.0EID50点鼻ウイルスチャレンジさせて、ウイルスチャレンジ実験を行った。その結果を、表18に示す。
21日齢のSPF鶏60羽を取り、1群毎に10羽ずつ6群に分けた。第62群~第66群に対してそれぞれ実施例15で製造されたクチン8、ワクチン12、ワクチン15、ワクチン17、ワクチン19を0.3ml/羽で頚部皮下注射して免疫させた。第67群に対して0.3mlの生理食塩水を皮下注射して、ウイルスチャレンジ対照とした。すべての試験鶏は、全部隔離飼育し、免疫後21日目に、第62群~第67群に対して、1羽毎に100倍希釈した鶏伝染性ファブリキウス嚢病強毒BC6-85((CVCC AV7株)、中国獣医薬品監察所から購入)株ウイルス液0.1mlずつ(実際ウイルス含有量≧100個BID)を点眼手段により接種した。ウイルスチャレンジ後、毎日鶏別臨床表現を観察し、発病及び死亡鶏数を記録した。72~96時間経過後、生き残った鶏を捕殺し、1羽毎に解剖し、ファブリキウス嚢等の病変を観察した。免疫鶏は、少なくとも8羽が正常で、ファブリキウス嚢病変が出現しないべきであった。対照鶏は、少なくとも4羽の鶏が発病し、明らかなファブリキウス嚢病変(例えば、胸筋又は股間筋にストリップ状出血、ファブリキウス嚢腫れ又は萎縮、黄変、内部にゼリー状分泌物有り等のうち一種以上の病変)が出現すべきであった。その結果を、表19に示す。
21日齢のSPF鶏60羽を取り、1群毎に10羽ずつ6群に分けた。第68群~第72群に対してそれぞれ実施例15で製造されたワクチン9、ワクチン13、ワクチン16、ワクチン18、ワクチン20を0.3ml/羽で頚部皮下注射し免疫させた。第73群に対して0.3mlの生理食塩水を皮下注射して、ウイルスチャレンジ対照とした。すべての試験鶏は、全部隔離飼育し、免疫後21日目に、FAV-HN株ウイルス液を用いて筋肉注射によってチャレンジさせた。14日間観察して、発病、死亡及び保護数を記録した。その結果を、表20に示す。
Claims (14)
- 産卵低下症候群ウイルスtFiberタンパク質フラグメントであって、
前記産卵低下症候群ウイルスtFiberタンパク質フラグメントの遺伝子は、SEQ ID NO.2又はその縮重配列に示される通りである、産卵低下症候群ウイルスtFiberタンパク質フラグメント。 - ワクチン組成物であって、
前記ワクチン組成物は、免疫量の請求項1に記載の産卵低下症候群ウイルスtFiberタンパク質フラグメント又は免疫量の請求項1に記載の産卵低下症候群ウイルスtFiberタンパク質フラグメントの遺伝子が組換えられた生ベクターと、薬学的に許容されるベクターとを含む、ワクチン組成物。 - 前記産卵低下症候群ウイルスtFiberタンパク質フラグメントの含有量は、AGP価≧1:8である、請求項2に記載のワクチン組成物。
- 産卵低下症候群ウイルスtFiberタンパク質フラグメントの含有量は、AGP価1:8~1:32である、請求項2に記載のワクチン組成物。
- 前記薬学的に許容されるベクターはアジュバントであり、前記アジュバントは、(1)鉱油、アルミニウムアジュバント、サポニン、アブリジン、DDA、(2)油中水型乳剤、水中油型乳剤、水中油中水型乳剤、或いは(3)アクリル酸又はメタクリル酸の重合体、無水マレイン酸とアルケニル誘導体との共重合体、及びRIBIアジュバントシステム、ブロック共重合体、SAF-M、モノホスホリル脂質A、アブリジン脂質-アミンアジュバント、大腸菌易熱性エンテロトキシン、コレラ毒素、IMS1314、ムラミルジペプチド、モンタニドISA206、ゲルアジュバントのうちの1つ又は複数を含み、
前記アジュバントの含有量は5%~70%V/Vである、請求項2に記載のワクチン組成物。 - サポニンは、クイルA、QS-21、GPI-0100であり、前記アジュバントの含有量は30%から70%である、請求項5に記載のワクチン組成物。
- 前記アジュバントの含有量は66%V/Vである、請求項5に記載のワクチン組成物。
- 前記生ベクターは、組換え弱毒化サルモネラ菌、組換えニューカッスル病ウイルス、組換え痘ウイルスである、請求項2に記載のワクチン組成物。
- 前記ワクチン組成物は、鶏ニューカッスル病ウイルス抗原、鳥インフルエンザウイルス抗原、鶏伝染性気管支炎ウイルス抗原、鶏伝染性ファブリキウス嚢病ウイルス抗原、禽アデノウイルス抗原、鳥レオウイルス抗原、大腸菌抗原、アビバクテリウム・パラガリナラム抗原、マイコプラズマ・シノビエ抗原、鶏マイコプラズマ・ガリセプチカム抗原、パスツレラ・ムルトシダ抗原、マレック病ウイルス抗原、鳥脳脊髄炎ウイルス抗原、及び鶏伝染性喉頭気管炎ウイルス抗原からなる群のうちの1つ又は複数を更に含む、請求項2に記載のワクチン組成物。
- 前記ワクチン組成物は、鶏ニューカッスル病ウイルス不活化抗原、鳥インフルエンザウイルス不活化抗原、鶏伝染性気管支炎ウイルス不活化抗原、鶏伝染性ファブリキウス嚢病ウイルスサブユニット抗原、禽アデノウイルス不活化抗原又はサブユニット抗原からなる群のうちの1つ又は複数を更に含む、請求項9に記載のワクチン組成物。
- 前記鶏ニューカッスル病ウイルス不活化抗原はN7a株不活化抗原であり、前記鳥インフルエンザウイルス不活化抗原はHF株不活化抗原であり、前記鶏伝染性気管支炎ウイルス不活化抗原はM41株不活化抗原であり、前記鶏伝染性ファブリキウス嚢病ウイルスサブユニット抗原は鶏伝染性ファブリキウス嚢病ウイルスVP2タンパク質であり、前記禽アデノウイルス不活化抗原はFAV-HN株不活化抗原であり、前記禽アデノウイルスサブユニット抗原は禽アデノウイルスペントンタンパク質又はファイバー-2タンパク質である、請求項10に記載のワクチン組成物。
- 前記産卵低下症候群ウイルスtFiberタンパク質フラグメント含有量はAGP価1:8~1:32であり、前記鶏ニューカッスル病ウイルス不活化抗原含有量は不活化前に108.0~109.0EID50/0.1mlであり、前記鳥インフルエンザウイルス不活化抗原含有量は不活化前に106.5~108.5EID50/0.1mlであり、前記鶏伝染性気管支炎ウイルス不活化抗原含有量は不活化前に106.0~107.0EID50/0.1mlであり、前記鶏伝染性ファブリキウス嚢病ウイルスVP2タンパク質含有量はAGP価1:16~1:128であり、前記禽アデノウイルスペントンタンパク質含有量はAGP価1:2~1:16であり、前記禽アデノウイルスファイバー-2タンパク質含有量はAGP価1:2~1:16である、請求項11に記載のワクチン組成物。
- 前記産卵低下症候群ウイルスtFiberタンパク質フラグメント含有量はAGP価1:8~1:32であり、前記鶏ニューカッスル病ウイルス不活化抗原含有量は不活化前に108.0EID50/0.1mlであり、前記鳥インフルエンザウイルス不活化抗原含有量は不活化前に108.0EID50/0.1mlであり、前記鶏伝染性気管支炎ウイルス不活化抗原含有量は不活化前に106.0EID50/0.1mlであり、前記鶏伝染性ファブリキウス嚢病ウイルスVP2タンパク質含有量はAGP価1:16であり、前記禽アデノウイルスペントンタンパク質含有量はAGP価1:4であり、前記禽アデノウイルスファイバー-2タンパク質含有量はAGP価1:4である、請求項11に記載のワクチン組成物。
- 産卵低下症候群を予防及び/又は治療する薬物の製造における、請求項2か13のいずれか一項に記載のワクチン組成物の応用。
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