JP2022549971A - クリプトフィシン抗がん剤の生体触媒合成 - Google Patents

クリプトフィシン抗がん剤の生体触媒合成 Download PDF

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Abstract

本開示は、がんの治療に有用なクリプトフィシン中間体、クリプトフィシン類似体、およびクリプトフィシンキメラ分子、ならびにこれらの化合物を生成する方法およびがんを治療する方法を提供する。【選択図】図９

Description

本開示は、一般に、大腸がんなどのがんの治療、そのリスクの低減、またはその症状の改善の方法などにおける、天然発生型化合物の類似体およびその使用に関する。
政府の利益に関する陳述
本発明は、米国国立衛生研究所によって授与されたＧＭ０７６４７７およびＧＭ１１８１０１の下で政府の支援を受けてなされた。政府は、本発明においてある特定の権利を有する。
ポリケチドシンターゼ（ＰＫＳ）、非リボソームペプチドシンテターゼ（ＮＲＰＳ）、およびそれらのハイブリッド（ＰＫＳ／ＮＲＰＳ）は、無数の複雑な天然生成物を生成するモジュラータンパク質である。これらのタンパク質は、比較的単純な化学的ビルディングブロック（マロン酸塩、マロン酸塩誘導体、および／またはアミノ酸）のグループを選択し、幅広い生物学的活性を持つ多様な足場を構築する。１～２これらの天然生成物の大きなクラスであるマクロサイクル３は、それらの生物学的に活性な立体配座に固定され、かつペプチド結合を分解から保護することができる拘束された環構造を含む。４これらの重要な分子の生合成は、典型的には、チオエステラーゼ（ＴＥ）ドメイン、セリン、ヒスチジン、アスパラギン酸触媒トライアドを利用するα，β－ヒドロラーゼによって終了され、位置および立体特異的環化をもたらす。４～５これらの酵素が選択性を支配し、かつ加水分解よりも生産的な大環状化のための線状基質を組織化する分子メカニズムは、十分に理解されておらず、それは広範囲の生体触媒として使用するためにこれらの酵素を予測し、最終的に調整する能力を制限してきた。これらの別個の酵素を利用することは、医薬品化学の探索のための既存の合成ツールボックスを拡張するための方法論の継続的な追求において比類のない資産となるであろう。６～８
構造研究およびインビトロ生化学的分析の両方で構成されるＰＫＳおよびＮＲＰＳ ＴＥに関する先駆的な研究により、環化を媒介する複雑な触媒メカニズムに関する重要な洞察が得られた。ＮＲＰＳ由来のチロシジンおよびダプトマイシンＴＥ系では、固相ペプチド合成を利用して、様々な生物活性を有する新規の大環状類似体を提供する一連の非天然鎖伸長中間体を配合した。９～１１この基質耐性は、基質の事前組織化を可能にする水素結合ネットワークに起因している。したがって、ＴＥは、生産的な触媒作用に重要であると思われる分子内求核試薬として用いられているアミノ酸を除いて、最小限の影響を及ぼすと仮定された。１２これは、サーファクチンおよびフェンギシン生合成経路からのＮＲＰＳ ＴＥの構造研究によってさらに裏付けられる。各々が、主に非極性および芳香族アミノ酸で構成される大きなお椀型の活性部位を有し、特定の相互作用は主に線状ＮＲＰＳ基質のヒドロキシル含有Ｃ末端で発生する。１３～１４
エリスロマイシン（ＤＥＢＳ）およびピクロマイシン（Ｐｉｋ）経路のＰＫＳ ＴＥに関する研究もまた、構造的および生化学的検査から利益を得ている。この研究は、特定の官能基相互作用およびよりチャネル型の活性部位に見られる疎水性パッキングの両方の複雑な相互作用が、生産的な環化に必要であることを示している。１５～１７ＤＥＢＳおよびＰｉｋＴＥの両方にいくつかの必要な拘束があるにもかかわらず、新しい大環状生成物を配合することができたドッキングおよび合成基質の組み合わせによって示されるように、非必須元素にはある程度の柔軟性が観察された。１６、１８～１９合理的なエンジニアリングを利用して、ＰｉｋＴＥの基礎となる触媒メカニズムを変更する単一の活性部位変異が生成され、以前はアクセスできなかった１２員マクロラクトンの生産的な大環状化が促進された。２０これらの説得力のある研究は、様々な系における大環状化の複雑さを浮き彫りにし続けている。大規模での大環状化を支配する要因の理解を深めるには、ＰＫＳ、ＮＲＰＳ、およびＰＫＳ／ＮＲＰＳハイブリッドＴＥのさらなる調査が必要である。この知識を利用することで、ＴＥ基質の柔軟性を拡大したタンパク質エンジニアリングの取り組みがすでに促進されており、これらの方針に沿った継続的な取り組みは、より活性な薬理学的に関連性のある小分子ライブラリの生成が促進されることが期待される。
クリプトフィシンは、混合ＰＫＳ／ＮＲＰＳ生合成系によって生成されるデプシペプチド天然生成物のクラスである。２１～２２それらは、Ｎｏｓｔｏｃ ｓｐ．ＡＴＣＣ ５３７８９で強力な抗真菌剤として最初に同定され２３、その後、Ｎｏｓｔｏｃ ｓｐ．ＧＳＶ ２２４で最も強力な抗増殖性微小管結合剤の１つとして再発見された。２４最初の医薬品化学スクリーニングの取り組みは、β－エポキシド官能基が最大活性に必要であり、かつほとんどの修飾が効力に有害であることを示した。ユニットＣにジェミナル－ジメチル官能基を含んだ、合成類似体であるクリプトフィシン５２（図１）を、プラチナ抵抗性卵巣がんの治療のための臨床試験に導入した。２５～２７重大な疾患の安定化および全体的な陽性結果を示したにもかかわらず、用量を制限する末梢神経障害および広範なインビボ有効性の欠如により、試験は中止された。２５、２８クリプトフィシン５２の臨床試験は終了したが、このクラスの代謝物は、治療が困難な薬剤抵抗性のがんに特に効果的であるため、さらなるリード最適化のための説得力のある足場となり続けている。２９最近、クリプトフィシンは、これがこれらの化合物で観察される全身毒性を回避し得るため、抗体薬物コンジュゲート（ならびにＲＧＤペプチド３０および葉酸３１とのコンジュゲート化を含む他の直接標的化剤）の潜在的なペイロードとして広く調査されている。３２～３６抗がん剤としてのクリプトフィシンには依然として大きな関心があるが、リード最適化における課題、ならびにそれらの製造のための費用のかかる合成の取り組みは、探査を妨げてきた。ＣｒｐＴＥの強力な機能の以前の兆候に基づいて２１、特にクリプトフィシン足場の未踏の領域で、継続的な類似体生成および生物学的評価のための化学酵素的アプローチを拡大することに動機付けられた。
クリプトフィシン生合成の最終ステップは、ＣｒｐＴＥを介した鎖伸長中間体の大環状化である。２１切除されたＣｒｐＴＥは、天然および修飾基質の容易な環化を様々な程度で触媒して、クリプトフィシン３、５１（図１）、および元々はＥｌｉ ＬｉｌｌｙでＬＹ４０４２９１として合成されたユニットＡに末端オレフィンを含む非天然クリプトフィシンを配合することができることを示した。３７さらに、ＣｒｐＴＥは、クリプトフィシン２４および５１の生成において、上流のＮＲＰＳモジュールであるＣｒｐＤ－Ｍ２とトランスでさらに操作することにより、有用性も示した。２２これらの研究は、医学的に重要な新規クリプトフィシン類似体の生成のための、ＣｒｐＴＥの独自の固有の柔軟性および多用途の生体触媒としてのその可能性を示した。その目的に向けて、ＣｒｐＴＥ基質耐性をプローブするように設計された一連の新規のクリプトフィシン鎖伸長中間体を生成し、臨床試験で同定された制限（末梢神経障害および広範なインビボ有効性を制限する用量）に対処し得る類似体を生成する取り組みに着手した。２５、２８
前述の観察を考慮すると、大腸がんなどのがんの治療、その発症のリスクの低減、またはそれに関連する症状の改善における、クリプトフィシン類似体などの化合物類似体を合成および使用することにおいて有用である方法および基質の必要性が当該技術分野で存在し続けていることが明らかである。
本開示は、式Ｉの化合物を提供し、
Figure 2022549971000002
式中、Ａｒは、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される１～３個の環ヘテロ原子を有する５～７員複素環式アリール基であり、任意選択で、Ｃ１－５アルキルおよびＬ－Ｒ６から独立して選択される１～３個の置換基で置換されており、Ｒ１は、塩素、臭素、もしくはヨウ素であり、Ｒ２は、ＯＨもしくはＯＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＲであり、またはＲ１およびＲ２は一緒に、（１）それらが結合している炭素間の二重結合を示すか、もしくは（２）それらが結合している炭素とβ－エポキシド環を形成し、Ｒ３およびＲ４の各々は独立して、Ｈ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ０－６アルキレン－ＯＨ、もしくはＣ０－６アルキレン－ＮＨ（Ｒ）であり、またはＲ３およびＲ４は、それらが結合している炭素原子と一緒に、スピロＣ３－５シクロアルキルもしくは１個の窒素環原子を有するスピロ３～５員ヘテロシクロアルキルを形成し、
Ｒ５は、Ｃ１－６アルキル、Ｃ０－６アルキレン－ＯＨ、またはＣ０－６アルキレン－ＮＨ（Ｒ）であり、Ｒは、Ｈ、Ｃ１－６アルキル、またはＬ－Ｒ６であり、Ｌは、リンカーであり、Ｒ６は、反応性化学基であり、Ｘは、Ｏ、ＮＨ、もしくはＮＭｅであり、但し、化合物または塩が０または１ Ｌ－Ｒ６を含むことを条件とする。
いくつかの実施形態では、Ａｒは、任意選択で、メチルおよびイソプロピルから選択される１～３個の置換基で置換されている、ピリジル、ピラジニル、イミダゾリル、またはオキサゾリルを含む。
様々な実施形態では、（１）Ａｒは、
Figure 2022549971000003
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、Ｈであり、（２）Ａｒは、
Figure 2022549971000004
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、ＨもしくはＣＨ３であり、（３）Ａｒは、
Figure 2022549971000005
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、ＨもしくはＣＨ３であり、（４）Ａｒは、
Figure 2022549971000006
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、Ｈであり、（５）Ａｒは、
Figure 2022549971000007
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、Ｈであり、（６ｄ）Ａｒは、
Figure 2022549971000008
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、Ｈであり、（７）Ａｒは、
Figure 2022549971000009
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、ＨもしくはＣＨ３であり、（８）Ａｒは、
Figure 2022549971000010
 であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、ＨもしくはＣＨ３であり、（９）Ａｒは、
Figure 2022549971000011
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、Ｈであり、または（１０）Ａｒは、
Figure 2022549971000012
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、Ｈである。
本明細書に記載される化合物および塩を生成する方法が本明細書にさらに提供され、化合物または塩を形成するための大環状化に好適な条件下で、セコクリプトフィシン中間体をクリプトフィシンチオエステラーゼと接触させることを含む。
本明細書に記載される化合物もしくは塩、およびペプチド、タンパク質、または抗体を含むコンジュゲートもまた本明細書に提供される。いくつかの場合では、抗体および化合物または塩は、化合物または塩の反応性化学基および抗体上の相補的反応性基を介して共有結合されている。
本開示の他の態様は、本明細書に開示される化合物を含む薬学的組成物、対象におけるがんを治療または予防するための医薬品の調製に使用するための本明細書に開示される化合物、および対象においてがんを治療する方法における本明細書に開示される化合物の使用を含む。
本開示の他の特徴および利点は、図面を含む以下の詳細な説明から明らかになるであろう。しかしながら、詳細な説明および特定の例は、本開示の好ましい実施形態を示すが、本開示の趣旨および範囲内である様々な変更および修正はこの詳細な説明から当業者には明らかになるため、単に例示としてのみ与えられることを理解されたい。
選択されたクリプトフィシン類似体の構造を表す。 出発物質のピークが黒色、生成物のピークが青色、および加水分解副生成物が緑色である、類似体２３ ａ～ｍの分析スケールＣｒｐＴＥ環化反応のＴＯＦ－ＬＣＭＳ分析。 出発物質のピークが黒色、生成物のピークが青色、および加水分解副生成物が緑色である、類似体２３ ａ～ｍの分析スケールＣｒｐＴＥ環化反応のＴＯＦ－ＬＣＭＳ分析。 Ａ）ユニットＡ断片の合成の概略図。Ｂ）ユニット２段階の合成反応を模式的に示す。 ユニットＢ断片の合成の概略図。 ユニットＡＢ断片の合成の概略図。 Ａ）ユニットＣＤ断片の合成の概略図。Ｂ）ユニットＣＤ合成反応を模式的に示す。 セコクリプトフィシン中間体の精緻化の概略図。 Ｃｒｐ ＴＥ反応の加水分解分析に対する変換パーセント、単離収率、および環化。 Ｃｒｐ ＴＥ反応の加水分解分析に対する変換パーセント、単離収率、および環化。 Ｃｒｐ ＴＥ反応の加水分解分析に対する変換パーセント、単離収率、および環化。 ＨＣＴ－１１６ヒト大腸がんにおけるクリプトフィシン類似体のＩＣ５０値。
クリプトフィシンは、治療が困難な薬剤抵抗性のがんに対して非常に強力な抗増殖活性を示す大環状デプシペプチドのファミリーである。最近、これらの分子は、抗体薬物コンジュゲートの潜在的なペイロードとして注目を集め続けており、これらのチューブリン結合剤の適切な生体分子への結合を促進するための代替合成戦略ならびに類似体の継続的な必要性を強調している。この複雑な分子グループの合成および誘導体化に直面している特有の課題により、より有望な類似体にアクセスするように設計された化学酵素的合成を調査することになった。
クリプトフィシンチオエステラーゼ（ＣｒｐＴＥ）は、２０を超える天然クリプトフィシン代謝物の大環状化を触媒する用途の広い酵素であり、非天然誘導体の生成のための類を見ない生体触媒としてのその使用を含む医薬品開発戦略を構想することを可能にする。この目的のために、天然ユニットＡのベンジル基の代替として複素環式芳香族基を含む１２個の新しいユニットＡ－Ｂ－Ｃ－Ｄ線状鎖伸長中間体の拡張可能な合成を開発した。各中間体のＮ－アセチルシステアミン活性化形態は、野生型の切除されたＣｒｐＴＥを使用して大環状生成物へのターンオーバーについて評価され、それはこの酵素の並外れた柔軟性を示した。セミ分取スケール反応を実施して、単離、構造の特性評価、およびさらなる生物学的評価を行い、ピコモル効力の低いｄｅｓ β－エポキシ類似体を明らかにした。
本明細書に開示される研究は、スチレン官能基を含み、かつ低いｐＭ効力を達成するためのエポキシド基の必要性を排除する、これまでに生成された最も強力なクリプトフィシン類似体のうちの１つの同定および生物学的評価を可能にした。この研究からの非天然基質に対するＣｒｐＴＥの選択性および特異性に関する貴重な洞察は、ＣｒｐＴＥを、類を見ない状況および生物学的に活性な分子の生成のためのより大きな酵素カスケードの一部としての両方で用いられ得る強力でより広い範囲の触媒として確立する。
より具体的には、最新技術に基づいて、非天然基質に対するＣｒｐＴＥの選択性を調査した。３７天然鎖伸長中間体と末端オレフィンを含む基質との間に観察された環化対加水分解の比率は、最適な環化にはアリール環が必要であることを示した。しかしながら、様々なサイズおよび官能基置換のアリール環が十分に許容されるかどうかは不明なままであった。３７この部位は、それがクリプトフィシンの構造－活性相関研究（ＳＡＲ）で未踏の領域を表し、かつ水溶性を増加させ得る戦術的な生物学的等価体の使用に有利な位置であるために、操作のために選択され、より良好なインビボ有効性ならびに潜在的に減少した毒性がもたらされる。２６、２８ＣｒｐＴＥを利用してこれらの新規クリプトフィシンを配合すると、重要な新しい類似体の生成が可能になり、また非天然スターターユニットの組み込みのための酵素の柔軟性に関する独自の洞察も得られる。これらの酵素の選択性に採用されている認識因子をよりよく理解することで、創薬プロセスを支援する生体触媒プラットフォームで使用するための調整可能な基質耐性を有するＴＥを設計する能力がさらに拡大される。
化合物、およびがんを治療することにおけるこれらの化合物の使用が本明細書に開示される。本開示の一態様は、一般に、対象における結腸、乳房、白血病、前立腺、卵巣、中枢神経系、または非小細胞肺がんなどのがんを治療するための、本明細書に記載される化合物もしくは薬学的に許容される塩、またはそのような化合物もしくはその薬学的に許容される塩を含む薬学的に許容される組成物の使用に関連する。
本開示の化合物
本開示は、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供し、
Figure 2022549971000013
式中、
Ａｒは、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される１～３個の環ヘテロ原子を有する５～７員複素環式アリール基であり、任意選択で、Ｃ１－５アルキルおよびＬ－Ｒ６から独立して選択される１～３個の置換基で置換されており、
Ｒ１は、塩素、臭素、もしくはヨウ素であり、
Ｒ２は、ＯＨもしくはＯＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＲであり、または
Ｒ１およびＲ２は一緒に、（１）それらが結合している炭素間の二重結合を示すか、もしくは（２）それらが結合している炭素とβ－エポキシド環を形成し、
Ｒ３およびＲ４の各々は独立して、Ｈ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ０－６アルキレン－ＯＨ、もしくはＣ０－６アルキレン－ＮＨ（Ｒ）であり、または
Ｒ３およびＲ４は、それらが結合している炭素原子と一緒に、スピロＣ３－５シクロアルキルもしくは１個の窒素環原子を有するスピロ３～５員ヘテロシクロアルキルを形成し、
Ｒ５は、Ｃ１－６アルキル、Ｃ０－６アルキレン－ＯＨ、またはＣ０－６アルキレン－ＮＨ（Ｒ）であり、
Ｒは、Ｈ、Ｃ１－６アルキル、またはＬ－Ｒ６であり、
Ｌは、リンカーであり、
Ｒ６は、反応性化学基であり、
Ｘは、Ｏ、ＮＨ、もしくはＮＭｅであり、
但し、化合物または塩が０または１ Ｌ－Ｒ６を含むことを条件とする。
Ａｒは、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される１～３個の環ヘテロ原子を有する５～７員複素環式アリール基であり、任意選択で、Ｃ１－５アルキルおよびＬ－Ｒ６から独立して選択される１～３個の置換基で置換されている。本明細書で使用される場合、「複素環式アリール」という用語は、合計５～７個の環原子を有し、かつ芳香環中の窒素、酸素、および硫黄原子から選択される１～３個のヘテロ原子を含む、単環式芳香環を指す。別途指示されない限り、複素環式アリール基は、非置換であり得るか、または１個以上、特に、１～３個の置換基で置換され得る。いくつかの場合では、複素環式アリール基は、本明細書で議論されるように、Ｃ１－５アルキルまたはＬ－Ｒ６部分で置換されている。複素環式アリール基の例としては、チエニル、フリル、ピリジル、ピロリル、オキサゾリル、トリアジニル、トリアゾリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、イミダゾリル、ピラジニル、ピリミジニル、チアゾリル、およびチアジアゾリルが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの場合では、複素環式アリール（Ａｒ）は、任意選択で、メチルおよびイソプロピルから選択される１～３個の置換基で置換されている、ピリジル、ピラジニル、イミダゾリル、またはオキサゾリルを含む。いくつかの場合では、Ａｒは、Ｌ－Ｒ６で置換されている。
本明細書で使用される場合、「アルキル」という用語は、１～３０個の炭素原子、例えば、１～２０個の炭素原子、または１～１０個の炭素原子を含有する直鎖および分岐の飽和炭化水素基を指す。Ｃｎという用語は、アルキル基が「ｎ」個の炭素原子を有することを意味している。例えば、Ｃ４アルキルは、４個の炭素原子を有するアルキル基を指す。Ｃ１－Ｃ６アルキルは、全範囲（例えば、１～６個の炭素原子）、ならびにすべてのサブグループ（例えば、１～６、２～５、１～５、３～６、１、２、３、４、５、および６個の炭素原子）を包含する炭素原子数を有するアルキル基を指す。アルキル基の非限定的な例としては、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル（２－メチルプロピル）、ｔ－ブチル（１，１－ジメチルエチル）、３，３－ジメチルペンチル、および２－エチルヘキシルが挙げられる。別途指示されない限り、アルキル基は、非置換アルキル基または置換アルキル基であり得る。
本明細書で使用される「アルキレン」という用語は、置換基を有するアルキル基を指す。例えば、「アルキレン－ＯＨ」という用語は、ヒドロキシ基で置換されているアルキル基を指す。例えば、アルキレン基は、－ＣＨ２ＣＨ２－または－ＣＨ２－であり得る。Ｃｎという用語は、アルキレン基が「ｎ」個の炭素原子を有することを意味する。例えば、Ｃ１－６アルキレンは、全範囲ならびにすべてのサブグループを包含する炭素原子数を有するアルキレン基を指す。Ｃ０という用語、直接結合を示し、－Ｃ０アルキレン－ＯＨは、ＯＨ置換基を示す。別途指示されない限り、アルキレン基は、非置換アルキレン基または置換アルキレン基であり得る。
本明細書で使用される場合、「シクロアルキル」という用語は、３～１２個の炭素原子（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２個の炭素原子）を含む脂肪族環式炭化水素基を指す。Ｃｎという用語は、シクロアルキル基が「ｎ」個の炭素原子を有することを意味する。例えば、Ｃ５シクロアルキルとは、環に５個の炭素原子を有するシクロアルキル基を指す。Ｃ３－Ｃ５シクロアルキルとは、全範囲（例えば、３～５個の炭素原子）、ならびにすべてのサブグループ（例えば、３～４、４～５、２、４、および５個の炭素原子）を包含する炭素原子数を有するシクロアルキル基を指す。シクロアルキル基の非限定的な例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、およびシクロオクチルが挙げられる。別途指示されない限り、シクロアルキル基は、非置換シクロアルキル基または置換シクロアルキル基であり得る。本明細書に記載されるシクロアルキル基は、単離され得るか、スピロ環である得るか、または別のシクロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、アリール基、および／もしくはヘテロアリール基に融合され得る。別途指示されない限り、シクロアルキル基が、別のシクロアルキル基に融合されている場合、シクロアルキル基の各々は、３～１２個の炭素原子を含み得る。別途指示されない限り、シクロアルキル基は、非置換または置換であり得る。
本明細書で使用される場合、「ヘテロシクロアルキル」という用語は、環が、独立して、酸素、窒素、および硫黄から選択される１～３個のヘテロ原子を含むことを除いて、シクロアルキルと同様に定義される。特に、「ヘテロシクロアルキル」という用語は、合計３～１０個の原子（例えば、３～５個、または５～１０個）を含む環を指し、そのうちの１、２、３、または３個の原子は、独立して、酸素、窒素、および硫黄からなる群から選択されるヘテロ原子であり、環の残りの原子は炭素原子である。いくつかの場合では、ヘテロシクロアルキルは、１個の窒素環原子を有するスピロ３～５員環である。ヘテロシクロアルキル基の非限定的な例には、アゼチジン、アジリジン、ピロリジン、ピペリジン、ピラゾリジン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン、ジヒドロフラン、モルホリンなどが挙げられる。いくつかの場合では、ヘテロシクロアルキルは、アゼチジン、アジリジン、またはピロリジンを含む。ヘテロシクロアルキルは、置換または非置換であり得る。
本明細書で使用される場合、「置換」という用語は、化学官能基を修飾するために使用されるとき、官能基上の少なくとも１個の水素ラジカルを置換基で置き換えることを指す。置換基には、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシル、オキシ、アルコキシ、ヘテロアルコキシ、エステル、チオエステル、カルボキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、アミド、アセトアミド、およびハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨード）が含まれ得るが、これらに限定されない。化学官能基が複数の置換基を含むとき、その置換基は、同じ炭素原子または２個以上の異なる炭素原子に結合することができる。
本明細書で使用される場合、「リンカー」という用語は、分子（例えば、本明細書に記載される化合物およびその塩）の２つの部分を結合する部分を指す。リンカーの非限定的な例には、１～１０個のアミノ酸を有するペプチド、１～１５個のエチレングリコールモノマーを有するポリエチレングリコール、およびβ－グルクロン酸が挙げられる。いくつかの場合では、Ｌは、１～１０個のアミノ酸を有するペプチドを含む。いくつかの場合では、アミノ酸は、アラニン（Ａｌａ）、シトルリン（Ｃｉｔ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、グリシン（Ｇｌｙ）、リジン（Ｌｙｓ）、アセチル－リジン（ＡｃＬｙｓ）、プロリン（Ｐｒｏ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、およびバリン（Ｖａｌ）からなる群から選択される。いくつかの場合では、Ｌは、１～１５個（例えば、５～１５、３～１０、３～１５、５～１０個）のエチレングリコールモノマーを有するポリエチレングリコールを含む。いくつかの場合では、Ｌは、β－グルクロン酸を含む。いくつかの場合では、β－グルクロン酸は、フラノースを含む。いくつかの場合では、β－グルクロン酸は、ピラノースを含む。
いくつかの場合では、Ｌは、構造
Figure 2022549971000014
を有する。
いくつかの場合では、Ｌは、単（すなわち、直接共有）結合、エステル結合、アミド結合、スルフィド結合、ジスルフィド結合、パラ－アミノベンジル（ＰＡＢ）基を介して、またはパラ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢＣ）基を介して式（Ｉ）の化合物に結合される。いくつかの場合では、Ｌは、単結合を介して結合される。いくつかの場合では、Ｌは、エステル結合を介して結合される。いくつかの場合では、Ｌは、アミド結合を介して結合される。いくつかの場合では、Ｌは、パラ－アミノベンジル（ＰＡＢ）基を介して結合される。
本明細書で使用される場合、「反応性化学基」という用語は、別の相補的な官能基と反応して共有結合を形成することができる化学官能基を指す。反応性基は、相補的官能基（例えば、カルボン酸、塩化アシルなど）の存在下で、アミド官能基が形成され得るようなアミンであり得る。反応性化学基のいくつかの特定の非限定的な例は、マレイミド基、マレイミドカプロイル基、マレイミドＰＥＧ基、ブロモアセトアミド基、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル、およびＯ－アルキルヒドロキシルアミンである。いくつかの場合では、Ｒ６は、マレイミド基を含む。いくつかの場合では、Ｒ６は、マレイミドカプロイル基を含む。いくつかの場合では、Ｒ６は、マレイミドＰＥＧ基を含む。いくつかの場合では、Ｒ６は、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステルを含む。いくつかの場合では、Ｒ６は、Ｏ－アルキルヒドロキシルアミンを含む。
いくつかの場合では、（１）Ａｒは、
Figure 2022549971000015
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、Ｈであり、（２）Ａｒは、
Figure 2022549971000016
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、ＨもしくはＣＨ３であり、（３）Ａｒは、
Figure 2022549971000017
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、ＨもしくはＣＨ３であり、（４）Ａｒは、
Figure 2022549971000018
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、Ｈであり、（５）Ａｒは、
Figure 2022549971000019
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、Ｈであり、（６）Ａｒは、
Figure 2022549971000020
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、Ｈであり、（７）Ａｒは、
Figure 2022549971000021
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、ＨもしくはＣＨ３であり、（８）Ａｒは、
Figure 2022549971000022
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、ＨもしくはＣＨ３であり、（９）Ａｒは、
Figure 2022549971000023
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、Ｈであり、または（１０）Ａｒは、
Figure 2022549971000024
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、Ｈである。いくつかの場合では、Ａｒは、
Figure 2022549971000025
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、Ｈである。いくつかの場合では、Ａｒは、
Figure 2022549971000026
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、ＨまたはＣＨ３である。いくつかの場合では、Ａｒは、
Figure 2022549971000027
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、ＨまたはＣＨ３である。いくつかの場合では、Ａｒは、
Figure 2022549971000028
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、Ｈである。いくつかの場合では、Ａｒは、
Figure 2022549971000029
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、Ｈである。いくつかの場合では、Ａｒは、
Figure 2022549971000030
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、Ｈである。いくつかの場合では、Ａｒは、
Figure 2022549971000031
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、ＨまたはＣＨ３である。いくつかの場合では、Ａｒは、
Figure 2022549971000032
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、ＨまたはＣＨ３である。いくつかの場合では、Ａｒは、
Figure 2022549971000033
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、Ｈである。いくつかの場合では、Ａｒは、
Figure 2022549971000034
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、Ｈである。
いくつかの場合では、Ｒ１およびＲ２は一緒に、それらが結合している炭素間の二重結合を示す。いくつかの場合では、Ｒ１およびＲ２は一緒に、それらが結合している炭素とともにβ－エポキシド環を形成する。いくつかの場合では、Ｒ１は、Ｃｌであり、Ｒ２は、ＯＨである。いくつかの場合では、Ｒ１は、Ｃｌであり、Ｒ２は、ＯＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ２である。
いくつかの場合では、（１）Ａｒは、
Figure 2022549971000035
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、ＨもしくはＣＨ３であり、Ｒ５は、ＣＨ（ＣＨ３）２であり、（２）Ａｒは、
Figure 2022549971000036
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、ＨもしくはＣＨ３であり、Ｒ５は、ＣＨ（ＣＨ３）２であり、または（３）Ａｒは
Figure 2022549971000037
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、ＨまたはＣＨ３であり、Ｒ５は、ＣＨ（ＣＨ３）２である。いくつかの場合では、Ａｒは、
Figure 2022549971000038
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、ＨもしくはＣＨ３であり、Ｒ５は、ＣＨ（ＣＨ３）２である。いくつかの場合では、Ａｒは、
Figure 2022549971000039
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、ＨもしくはＣＨ３であり、Ｒ５は、ＣＨ（ＣＨ３）２である。いくつかの場合では、Ａｒは、
Figure 2022549971000040
であり、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、ＨまたはＣＨ３であり、Ｒ５は、ＣＨ（ＣＨ３）２である。
いくつかの場合では、Ｒ３は、ＮＨ２、ＮＨＭｅ、ＣＨ２－ＮＨ２、またはＣＨ２－ＮＨＭｅである。いくつかの場合では、Ｒ３は、ＮＨ２である。いくつかの場合では、Ｒ３は、ＮＨＭｅである。いくつかの場合では、Ｒ３は、ＣＨ２－ＮＨ２である。いくつかの場合では、Ｒ３は、ＣＨ２－ＮＨＭｅである。いくつかの場合では、Ｒ３は、ＯＨまたはＣＨ２－ＯＨである。いくつかの場合では、Ｒ３は、ＯＨである。いくつかの場合では、Ｒ３は、ＣＨ２－ＯＨである。
いくつかの場合では、Ｒ５は、ＮＨ２、ＮＨＭｅ、（ＣＨ）ＣＨ３ＮＨ２、または（ＣＨ）ＣＨ３ＮＨＭｅである。いくつかの場合では、Ｒ５は、ＮＨ２である。いくつかの場合では、Ｒ５は、ＮＨＭｅである。いくつかの場合では、Ｒ５は、（ＣＨ）ＣＨ３ＮＨ２である。いくつかの場合では、Ｒ５は、（ＣＨ）ＣＨ３ＮＨＭｅである。
いくつかの場合では、Ｘは、Ｏである。いくつかの場合では、Ｘは、ＮＨまたはＮＭｅである。いくつかの場合では、Ｘは、ＮＨである。いくつかの場合では、Ｘは、ＮＭｅである。
いくつかの場合では、化合物は、以下からなる群から選択される。
Figure 2022549971000041
いくつかの場合では、Ａｒは、
Figure 2022549971000042
である。いくつかの場合では、Ｒ２は、ＯＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＬ（Ｒ６）であり、Ｒ１は、Ｃｌである。
いくつかの場合では、Ｒ３は、ＮＨ－ＬＲ６であり、Ｒ４は、Ｈである。いくつかの場合では、（１）Ａｒは、
Figure 2022549971000043
 であり、Ｒ１およびＲ２は一緒に、二重結合またはβ－エポキシドを示し、Ｒ５は、ＣＨ（ＣＨ３）２であり、（２）Ａｒは、
Figure 2022549971000044
であり、Ｒ１およびＲ２は一緒に、二重結合もしくはβ－エポキシドを示し、Ｒ５は、ＣＨ（ＣＨ３）２であり、または（３）Ａｒは、
Figure 2022549971000045
であり、Ｒ１およびＲ２は一緒に、二重結合もしくはβ－エポキシドを示し、Ｒ５は、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ（ＣＨ３）２である。いくつかの場合では、Ａｒは、
Figure 2022549971000046
であり、Ｒ１およびＲ２は一緒に、二重結合もしくはβ－エポキシドを示し、Ｒ５は、ＣＨ（ＣＨ３）２である。いくつかの場合では、Ａｒは、
Figure 2022549971000047
であり、Ｒ１およびＲ２は一緒に、二重結合もしくはβ－エポキシドを示し、Ｒ５は、ＣＨ（ＣＨ３）２である。いくつかの場合では、Ａｒは、
Figure 2022549971000048
であり、Ｒ１およびＲ２は一緒に、二重結合もしくはβ－エポキシドを示し、Ｒ５は、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ（ＣＨ３）２である。
いくつかの場合では、Ｒ５は、ＮＨ－ＬＲ６である。いくつかの場合では、（１）Ａｒは、
Figure 2022549971000049
 であり、Ｒ１およびＲ２は一緒に、二重結合またはβ－エポキシドを示し、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、ＨもしくはＣＨ３であり、（２）Ａｒは、
Figure 2022549971000050
であり、Ｒ１およびＲ２は一緒に、二重結合もしくはβ－エポキシドを示し、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、ＨもしくはＣＨ３であり、または（３）Ａｒは、
Figure 2022549971000051
であり、Ｒ１およびＲ２は一緒に、二重結合もしくはβ－エポキシドを示し、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、ＨもしくはＣＨ３である。いくつかの場合では、Ａｒは、
Figure 2022549971000052
であり、Ｒ１およびＲ２は一緒に、二重結合もしくはβ－エポキシドを示し、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、ＨもしくはＣＨ３である。いくつかの場合では、Ａｒは、
Figure 2022549971000053
であり、Ｒ１およびＲ２は一緒に、二重結合もしくはβ－エポキシドを示し、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、ＨもしくはＣＨ３である。いくつかの場合では、Ａｒは、
Figure 2022549971000054
であり、Ｒ１およびＲ２は一緒に、二重結合もしくはβ－エポキシドを示し、Ｒ３は、ＣＨ３であり、Ｒ４は、ＨもしくはＣＨ３である。
本明細書に開示される化合物は、薬学的に許容される塩の形態であり得る。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される塩」という用語は、正しい医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応等を伴うことなく、ヒトおよび下等動物の組織との接触での使用に好適であり、妥当な利益／リスク比に相応する塩を指す。薬学的に許容される塩は、当該技術分野で周知である。例えば、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅらは、参照によって本明細書に組み込まれるＪ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９７７，６６，１－１９において、薬学的に許容される塩を詳細に記載している。本発明の化合物の薬学的に許容される塩には、好適な無機および有機酸および塩基に由来するものが含まれる。薬学的に許容される非毒性酸付加塩の例は、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、および過塩素酸などの無機酸、または酢酸、トリフルオロ酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸、もしくはマロン酸などの有機酸で形成されるか、またはイオン交換などの当該技術分野で使用される他の方法を使用することによって形成されるアミノ基の塩である。他の薬学的に許容される塩には、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩（ｃａｍｐｈｏｒａｔｅ）、樟脳スルホン酸塩（ｃａｍｐｈｏｒｓｕｌｆｏｎａｔｅ）、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、２－ヒドロキシ－エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩（ｐｅｃｔｉｎａｔｅ）、過硫酸塩、３－フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが含まれる。カルボン酸または他の酸性官能基を含む化合物の塩は、好適な塩基と反応させることによって調製され得る。かかる塩には、アルカリ金属、アルカリ土類金属、アルミニウム塩、アンモニウム、Ｎ＋（Ｃ１－４アルキル）４塩、および有機塩基の塩、例えば、トリメチルアミン、トリエチルアミン、モルホリン、ピリジン、ピペリジン、ピコリン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン、２－ヒドロキシエチルアミン、ビス－（２－ヒドロキシエチル）アミン、トリ－（２－ヒドロキシエチル）アミン、プロカイン、ジベンジルピペリジン、デヒドロアビエチルアミン、Ｎ，Ｎ’－ビスデヒドロアビエチルアミン、グルカミン、Ｎ－メチルグルカミン、コリジン、キニン、キノリン、ならびにリジンおよびアルギニンなどの塩基性アミノ酸が含まれるが、これらに限定されない。本発明は、本明細書に開示される化合物の任意の塩基性窒素含有基の四級化も企図する。水溶性もしくは油溶性または分散性産生物は、かかる四級化によって得られ得る。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属塩には、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどが含まれる。さらなる薬学的に許容される塩には、適切な場合、非毒性のアンモニウム、四級アンモニウム、および対イオンを使用して形成されるアミンカチオン、例えば、ハロゲン化物、水酸化物、カルボン酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、低級アルキルスルホン酸塩、およびアリールスルホン酸塩などが含まれる。
本明細書に記載される化合物もしくは塩、およびペプチド、タンパク質、または抗体を含むコンジュゲートもまた本明細書に提供される。いくつかの場合では、コンジュゲートは、本明細書に記載される化合物または塩および抗体を含む。いくつかの場合では、抗体および化合物または塩は、化合物または塩の反応性化学基および抗体上の相補的反応性基を介して共有結合されている。いくつかの場合では、抗体上の相補的反応性基は、アミンを含む。いくつかの場合では、アミンは、抗体上のリジンのε－アミンである。
いくつかの場合では、抗体は、モノクローナル抗体またはナノボディである。いくつかの場合では、抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの場合では、抗体は、ナノボディである。いくつかの場合では、モノクローナル抗体は、ブレンツキシマブ、セツキシマブ、ゲムツズマブ、パニツムマブ、オファツムマブ、リツキシマブ、またはトラスツズマブである。いくつかの場合では、ナノボディは、単一ドメイン抗体またはラクダ科動物抗体である。
本開示の化合物の合成
本明細書に開示される化合物は、市販の出発物質、文献で知られている化合物を使用して、または容易に調製された中間体から、当業者に既知のまたは本明細書の教示に照らした標準的な合成方法および手順を採用することによって、様々な方法で調製することができる。有機分子の調製ならびに官能基の変換および操作のための標準的な合成方法ならびに手順は、関連する科学文献または当分野の標準的な教科書から得ることができる。いずれか１つまたはいくつかの情報源に限定されることはないが、Ｓｍｉｔｈ，Ｍ．Ｂ．，Ｍａｒｃｈ，Ｊ．，Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２００１、およびＧｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９９などの定評のある著作は、当業者に既知である、有用で認知された有機合成の参考教科書である。例えば、本明細書に開示される化合物は、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９６３；８５：２１４９、Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．１９８５；１０：３９４－４１４、Ｌａｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９３；１１５：６２４７、Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ．１９９４；４４：１８３、Ｏ’Ｄｏｎｎｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９６；１１８：６０７０、Ｓｔｅｗａｒｔ ａｎｄ Ｙｏｕｎｇ，Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｆｒｅｅｍａｎ（１９６９）、Ｆｉｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，３ｒｄ ｅｄ．，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１０５－２５３（１９７６）、およびＥｒｉｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，３ｒｄ ｅｄ．，ｖｏｌ．２，ｐｐ．２５７－５２７（１９７６）に記載されているものを含む固相合成技術によって合成され得る。合成方法の以下の説明は、本開示の化合物の調製のための一般的な手順を示すことを意図するもので、限定するためのものではない。
本明細書に開示される合成プロセスは、多種多様な官能基を許容することができ、したがって、様々な代替出発物質を使用することができる。本プロセスは、一般に、プロセス全体の最後またはその近くで所望の最終化合物を提供するが、特定の場合では、化合物をその薬学的に許容される塩、エステル、またはプロドラッグにさらに変換することが望ましいことがある。
本明細書に記載される化合物または塩を生成する方法もまた提供され、化合物または塩を形成するための大環状化に好適な条件下で、セコクリプトフィシン中間体をクリプトフィシンチオエステラーゼと接触させることを含む。いくつかの場合では、大環状化は、大環状ラクトン化である。
いくつかの場合では、クリプトフィシンチオエステラーゼは、ポリケチドシンターゼタンパク質複合体、非リボソームタンパク質シンテターゼタンパク質複合体、またはハイブリッドポリケチドシンターゼ／非リボソームペプチドシンテターゼタンパク質複合体に由来する。いくつかの場合では、クリプトフィシンチオエステラーゼは、ハイブリッドポリケチドシンターゼ／非リボソームペプチドシンテターゼタンパク質複合体に由来する。
いくつかの場合では、方法は、セコクリプトフィシンをクリプトフィシンＰ４５０と接触させて、Ｒ１、Ｒ２、およびそれらが結合している炭素の間にβエポキシド環を形成することをさらに含む。いくつかの場合では、クリプトフィシンＰ４５０は、クリプトフィシンエポキシダーゼである。
薬学的組成物、投薬、および投与経路
本明細書に記載される化合物（例えば、式Ｉの化合物またはその化合物の薬学的に許容される塩）と、薬学的に許容される賦形剤とを含む薬学的組成物（時に、本明細書で互換的に製剤と称される）がさらに提供される。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」という用語は、本開示の化合物などの参照物質、または化合物もしくは特定の賦形剤を含む組成物が、患者または対象への投与に安全で好適であることを意味する。「薬学的に許容される賦形剤」という用語は、活性成分（複数可）の生物学的活性の有効性を妨げず、それが投与される宿主に対して毒性がない媒体を指す。賦形剤は、活性医薬成分（ＡＰＩ）以外の、任意の薬学的に許容される添加剤、担体、希釈剤、アジュバント、または他の成分であり得る。
本明細書に記載される化合物は、治療有効量（例えば、がんの症状を予防または緩和するのに十分な量）で対象に投与され得る。化合物は、単独で、または薬学的に許容される組成物もしくは製剤の一部として、投与され得る。加えて、化合物は、一度に投与されても、複数回投与されても、またはある期間にわたって実質的に一様に送達されてもよい。化合物の用量が、経時的に変化し得ることにも留意されたい。
特定の対象に対する特定の投与レジメンは、化合物、投与される化合物の量、投与経路、ならびに任意の副作用の原因および程度に部分的に依存するであろう。本開示による対象（例えば、ヒトなどの哺乳動物）に投与される化合物の量は、妥当な時間枠にわたって所望の応答をもたらすのに十分でなければならない。「治療有効量」という用語は、特定の疾患または状態（例えば、がん）の１つ以上の症状を改善、減弱、または排除するか、あるいは特定の疾患または状態の１つ以上の症状の発症を予防または遅延する化合物または治療的活性化合物の組み合わせの量を意味する。投与量は、典型的には、投与の経路、タイミング、および頻度に依存する。したがって、臨床医は、投与量の力価を定め、最適な治療効果を得るために投与経路を修正し、従来の範囲探索の技術は、当業者に既知である。
単に例として、この方法は、上記の要因に応じて、例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ～最大約１００ｍｇ／ｋｇの化合物またはそれ以上を投与することを含む。他の実施形態では、投与量は、１ｍｇ／ｋｇ～最大約１００ｍｇ／ｋｇ、または５ｍｇ／ｋｇ～最大約１００ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇ～最大約１００ｍｇ／ｋｇの範囲である。ある状況では、長期の治療を必要とし、より低い用量の化合物を、複数回にわたって投与することを伴う場合もあるか、または伴わない場合もある。所望の場合、化合物の用量は、１日を通して適切な間隔で別個に、任意に単位剤形で投与される２、３、４、５、６、またはそれ以上の下位用量として投与される。治療期間は、患者の特定の状態および疾患の種類に依存し、１日～数ヶ月間続き得る。
本明細書に開示される化合物（例えば、式Ｉの化合物）を含む薬学的組成物などの生理学的に許容される組成物を投与する好適な方法は、当該技術分野で周知である。２つ以上の経路を使用して化合物を投与することができるが、特定の経路は別の経路よりも迅速かつ効果的な反応を提供し得る。状況に応じて、化合物を含む薬学的組成物は、体腔に適用または滴下注入され、皮膚もしくは粘膜を通じて吸収され、摂取され、吸入され、かつ／または循環血液中に導入される。例えば、ある特定の状況では、薬剤を含む薬学的組成物を、経口で、静脈内、腹腔内、脳内（実質内）、脳室内、筋肉内、眼内、動脈内、門脈内、病巣内、髄内、髄腔内、心室内、経皮、皮下、腹腔内、鼻腔内、腸内、局所、舌下、尿道、膣内、もしくは直腸手段による注射によって、徐放系によって、または埋め込みデバイスによって送達することが望ましい。所望の場合、化合物は、目的とする領域に供給する、髄腔内投与、脳内（実質内）投与、脳室内投与、または動脈内もしくは静脈内投与によって局所投与される。あるいは、組成物は、所望の化合物が吸収またはカプセル化された膜、スポンジ、または別の適切な材料の埋め込みによって局所投与される。埋め込みデバイスが使用される場合、このデバイスは、一態様では、任意の好適な組織または臓器に埋め込まれ、所望の化合物の送達は、例えば、拡散、徐放性ボーラス、または連続投与を介する。
投与を容易にするために、化合物は、様々な態様では、担体（例えば、ビヒクル、アジュバント、または希釈剤）を含む生理学的に許容される組成物に製剤化される。採用される特定の担体は、溶解度および化合物との反応性の欠如などの化学物理的考慮事項、ならびに投与経路のみによって制限される。生理学的に許容される担体は、当該技術分野で周知である。注射可能物の使用に好適な例示的薬学的形態には、滅菌水溶液または分散液、および注射可能な滅菌溶液または分散液の即時調製用の滅菌粉末が含まれる（例えば、米国特許第５，４６６，４６８号を参照されたい）。注射可能な製剤は、例えば、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｙ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ．Ｐａ．，Ｂａｎｋｅｒ ａｎｄ Ｃｈａｌｍｅｒｓ，ｅｄｓ．，ｐａｇｅｓ ２３８－２５０（１９８２）、およびＡＳＨＰ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｎ Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ Ｄｒｕｇｓ，Ｔｏｉｓｓｅｌ，４ｔｈ ｅｄ．，ｐａｇｅｓ ６２２－６３０（１９８６））にさらに記載されている。化合物を含む薬学的組成物は、一態様では、かかる薬学的組成物の使用に関する指示を提供するパッケージング材料とともに、容器内に配置される。一般に、かかる指示には、試薬濃度、ならびにある特定の実施形態では、薬学的組成物を再構成するのに必要であり得る賦形剤成分または希釈剤（例えば、水、生理食塩水、またはＰＢＳ）の相対量を説明する具体的な表現が含まれる。
非経口注射に好適な組成物は、生理学的に許容される滅菌水性もしくは非水性溶液、分散液、懸濁液、または乳濁液、および注射可能な滅菌溶液または分散液に再構成するための滅菌粉末を含み得る。好適な水性および非水性担体、希釈剤、溶媒、またはビヒクルの例としては、水、エタノール、ポリオール（プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロールなど）、それらの好適な混合物、植物油（オリーブ油など）、およびオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルが挙げられる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング剤の使用によって、分散液の場合には必要な粒径の維持によって、かつ界面活性剤の使用によって維持され得る。
これらの組成物は、保存剤、湿潤剤、乳化剤、および分散剤などのアジュバントも含み得る。微生物汚染は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などを添加することによって防止され得る。また、等張剤、例えば、糖、塩化ナトリウムなどを含むことが望ましい場合もある。注射可能な薬学的組成物の長期吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの使用によってもたらされ得る。
経口投与用の固体剤形には、カプセル剤、錠剤、粉剤、および顆粒剤が含まれる。かかる固体剤形では、活性化合物は、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウムなどの少なくとも１つの通例の不活性賦形剤（もしくは担体）、または（ａ）充填剤または増量剤、例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、マンニトール、およびケイ酸、（ｂ）結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、およびアカシア、（ｃ）保湿剤、例えば、グリセロール、（ｄ）崩壊剤、例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、ある特定の複合ケイ酸塩、および炭酸ナトリウム、（ａ）溶解遅延剤、例えば、パラフィン、（ｆ）吸収促進剤、例えば、四級アンモニウム化合物、（ｇ）湿潤剤、例えば、セチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロール、（ｈ）吸着剤、例えば、カオリンおよびベントナイト、（ｉ）滑沢剤、例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、またはそれらの混合物と混合される。カプセル剤および錠剤の場合、剤形は、緩衝剤も含み得る。同様のタイプの固体組成物を、賦形剤、例えば、ラクトースまたは乳糖、ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどを使用して、軟および硬充填ゼラチンカプセル剤中の充填剤として使用することもできる。
錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸剤、および顆粒剤などの固体剤形は、コーティングおよびシェル、例えば、腸溶性コーティングおよび当該技術分野で周知の他のものを用いて調製され得る。固体剤形は、乳白剤も含み得る。さらに、固体剤形は、それらが活性化合物（複数可）を腸管のある特定の部分に遅延様式で放出するように、包埋組成物であり得る。使用され得る包埋組成物の例は、ポリマー物質およびワックスである。活性化合物は、任意選択で、１つ以上の賦形剤を含むマイクロカプセル化形態でもあり得る。
経口投与用の液体剤形には、薬学的に許容される乳濁液、溶剤、懸濁液、シロップ剤、およびエリキシル剤が含まれる。活性化合物に加えて、液体剤形は、当該技術分野で一般に使用される不活性希釈剤、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ソルビタンのポリエチレングリコールおよび脂肪酸エステル、またはこれらの物質の混合物などを含み得る。
かかる不活性希釈剤に加えて、組成物は、アジュバント、例えば、湿潤剤、乳化剤、および懸濁化剤、甘味剤、香味剤、ならびに芳香剤も含み得る。懸濁液は、活性化合物に加えて、懸濁剤、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール、およびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天、ならびにトラガカント、またはこれらの物質の混合物などを含み得る。
直腸投与用の組成物は、好ましくは、坐薬であり、これは、本開示の化合物を、通常の室温では固体であるが体温で液体になり、それ故に直腸または膣腔内で溶解して本活性化合物を放出する好適な非刺激性賦形剤または担体、例えば、カカオバター、ポリエチレングリコール、または坐薬ワックスなどと混合することによって調製され得る。
本発明の方法で使用される組成物は、ミセルまたはリポソームで製剤化され得る。かかる製剤には、立体的に安定化されたミセルまたはリポソームおよび立体的に安定化された混合ミセルまたはリポソームが含まれる。リポソームおよびミセルの脂質二重層は細胞の原形質膜と縮合し、閉じ込められた内容物を細胞内区画に送達することが知られているため、そのような製剤は細胞内送達を促進することができる。
製剤化されると、溶液は、投与製剤に適合する方法で、治療的に有効な量で投与される。製剤は、注射液、薬物放出カプセルなどの様々な剤形で容易に投与される。例えば、水溶液での非経口投与の場合、必要に応じて溶液を好適に緩衝し、液体希釈剤を十分な生理食塩水またはグルコースで最初に等張にする必要がある。これらの特定の水溶液は、静脈内、筋肉内、皮下、および腹腔内投与に特に好適である。
投与の頻度は、薬剤の薬物動態パラメーターと投与経路に依存する。最適な薬学的製剤は、投与経路および所望の投与量に応じて、当業者によって決定されるであろう。例えば、参照によって本明細書に組み込まれる、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄ．（１９９０）Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，ｐａｇｅｓ １４３５－１７１２を参照されたい。そのような製剤は、投与された薬剤の物理的状態、安定性、インビボ放出の速度およびインビボクリアランスの速度に影響を与える可能性がある。投与経路に応じて、体重、体表面積または臓器の大きさに応じて適切な用量が計算される。適切な治療用量を決定するために必要な計算のさらなる改良は、特に本明細書に開示される投与量情報およびアッセイ、ならびに動物またはヒトでの臨床試験で観察された薬物動態データに照らして、過度の実験なしに当業者によって日常的に行われる。
採用される正確な用量は、宿主、獣医学またはヒト医学のいずれであるか、状態の性質および重症度、例えば治療される疾患または障害、投与様式、および使用される特定の活性物質を含むいくつかの要因に依存する。化合物は、任意の従来の経路によって、特に経腸的に、そして一態様では、錠剤またはカプセルの形態で経口的に投与され得る。投与される化合物は、医薬的な使用のため、特に目的の疾患の予防的または治療的治療で使用する上で適切なように遊離形態または薬学的に許容される塩の形態であり得る。これらの手段は、疾患状態の進行速度を遅くし、自然な方法で身体がプロセスの方向を逆転させるのを助ける。
本発明の薬学的組成物および治療方法は、ヒト医学および獣医学の分野で有用であることが理解されよう。したがって、治療される対象は、一態様では哺乳動物である。代表的な態様では、哺乳動物は、ヒトである。
人体に対して実施される方法の特許を禁止する管轄区域においては、組成物のヒト対象への「投与」の意味は、ヒト対象が任意の手法（例えば、経口、吸入、局所適用、注射、挿入など）で自己投与するであろう制御された物質を処方することに限定されるものとする。特許可能な主題を定義する法律または規制に則った最も広い合理的な解釈が意図されている。人体に対して実施される方法の特許を禁止しない管轄区域では、組成物の「投与」は、人体に対して実施される方法と前述の活動の両方を含む。
使用方法
本明細書に記載される化合物（例えば、式Ｉの化合物およびそれらのコンジュゲート）は、がんの治療に使用され得る。本明細書で使用される場合、「治療すること」、「治療する」、または「治療」などの用語は、予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）（例えば、予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ））および緩和的な治療を含む。本明細書に開示される化合物は、治療が困難なまたは薬剤抵抗性のがんの治療に特に有利である。本明細書に記載される化合物が治療に有用であるがんの非限定的な例には、結腸、乳房、白血病、前立腺、卵巣、中枢神経系、または非小細胞肺がんが挙げられる。
いくつかの場合では、がんは、結腸がんである。いくつかの場合では、がんは、乳がんである。いくつかの場合では、がんは、白血病である。いくつかの場合では、がんは、前立腺がんである。いくつかの場合では、がんは、卵巣がんである。いくつかの場合では、がんは、中枢神経系がんである。いくつかの場合では、がんは、脳がんである。いくつかの場合では、がんは、肺がんである。いくつかの場合では、がんは、非小細胞肺がんである。
本明細書に記載される化合物は、例えば、卵巣がんを有するヒト対象のがんを減少または予防するために使用され得る。特定の例では、化合物または混合物は、蒸留水と混合することなどによって経口投与される。別の例では、試験化合物または混合物は、生理食塩水または蒸留水などで静脈内投与される。いくつかの例では、試験化合物による治療は、単回用量または反復用量であり得る。試験化合物は、約６時間毎、約１２時間毎、約２４時間毎（毎日）、約４８時間毎、約７２時間毎、または約毎週投与され得る。反復用量による治療は、ある期間の間、例えば、約１週間～１２ヶ月、例えば、約１週間～約６ヶ月、または約２週間～約３ヶ月、または約１～２ヶ月の間継続し得る。化合物の投与も無期限に継続し得る。試験化合物の用量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約４００ｍｇ／ｋｇ、例えば、約１ｍｇ／ｋｇ～約３００ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ～２００ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ～約７５ｍｇ／ｋｇ、または約２５ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇである。
細胞、適切な動物モデル、または罹患した対象におけるそのような疾患を治療するための試験化合物の有効性を評価するための方法は、当業者に既知である。本明細書で使用される場合、「患者」および「対象」という用語は、互換的に使用され、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、およびヒツジ（例えば、非ヒト動物）およびヒトなどの動物を意味する。特定の患者または対象は、哺乳動物（例えば、ヒト）である。患者と対象という用語には、男性および女性が含まれる。
がんを治療するための医薬品の調製における本明細書に開示される化合物の使用もまた、本明細書に提供される。
本明細書の開示は、以下の実施例を参照することによって、より容易に理解されるであろう。
実施例１
材料および方法
特に明記されていない限り、化学試薬および溶媒は、ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｏａｋｗｏｏｄ、Ｃｏｍｂｉ ｂｌｏｃｋｓ、Ｃｈｅｍ ｉｍｐｅｘ、およびＴｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから購入した。カナマイシン硫酸塩およびイソプロピル－β－Ｄ－チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）は、Ｇｏｌｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから入手した。リゾチームは、ＲＰＩから購入した。イミダゾールは、ＡＫ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから購入した。タンパク質濃縮に使用されるＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ遠心式フィルターは、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅから購入した。
脱イオン水を、Ｑ－Ｇａｒｄ ２／Ｑｕａｎｔｕｍ Ｅｘ Ｕｌｔｒａｐｕｒｅ ｏｒｇａｎｅｘカートリッジを使用してＭｉｌｌｉ－Ｑシステム（ＥＭＤ Ｍｉｌｉｐｏｒｅ）から入手した。Ｅ．ｃｏｌｉ増殖用の培地構成成分は、ＥＭＤ Ｍｉｌｉｐｏｒｅ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、およびＴｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから購入した。グリセロールを、ＢＤＨからＶＷＲを介して購入した。ＬＢブロスおよびＬＢ寒天培地（Ｍｉｌｌｅｒ）を、ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅから事前に作製された顆粒形態で購入した。ＴＢブロスを、個別に購入した構成成分から作製し、４％ｖ／ｖグリセロールで構成された。培地および溶液を、使用前にオートクレーブまたは滅菌濾過した。すべての溶液について、製造業者の仕様に従って校正されたＶＷＲ ｓｙｍｐｈｏｎｙ ＳＢ７０Ｐ ｐＨメーターを使用してｐＨをモニタリングした。
化学的コンピテントのＥ．ｃｏｌｉ Ｂｌ２１（ＤＥ３）を、タンパク質の過剰発現に使用した。これらの細胞を、Ｚｙｍｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈから購入したＭｉｘａｎｄＧｏ緩衝液キットに付属の説明書に従って調製した。光学密度（ＯＤ６００）を、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ ＢｉｏＰｈｏｔｏｍｅｔｅｒを使用して測定した。
特に明記されていない限り、すべての反応は、乾燥窒素雰囲気下で、火炎乾燥ガラス器具で行った。高温で実行される反応は、ＩＫＡ ＲＥＴ ｃｏｎｔｒｏｌ ｖｉｓｃ（モデルＲＳ ２３２ Ｃ）によって制御され、反応は約２１～２３℃の室温（ｒｔ）で実行され、室温よりも低温で実行される反応は、氷浴（０℃）、ドライアイス／アセトン（－７８℃）、またはイソプロパノール／ＴｈｅｒｍｏＮＥＳＬＡＢ（モデルＣＣ１００）中で、長時間および／または他の温度で実行された。特に明記されていない限り、市販の出発物質および試薬を受け取ったまま使用した。ジクロロメタンを、ＦｉｓｈｅｒからＨＰＬＣグレードとして購入し、直接使用した。テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎジメチルホルムアミド、およびピリジンを、無水の不安定な形態で購入した（ＥＭＤ ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＤｒｉＳｏｌｖ）。反応物で使用する前に、アセトンをＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。ジイソプロピルアミンおよびトリメチルアミンを、使用直前に水素化カルシウムから蒸留した。
１Ｈ ＮＭＲスペクトルを、Ｖａｒｉａｎ ６００ ＮＭＲ Ｓｙｓｔｅｍ（６００ＭＨｚ）またはＶａｒｉａｎ ４００－ＭＲ（４００ＭＨｚ）分光計のいずれかで記録した。化学シフトは、溶媒共鳴を内部標準（ＣＤＣｌ３ ７．２６およびＣＤ３ＯＤ ３．３１ｐｐｍ）として使用して、百万分率（ｐｐｍ）で報告されている。データを次のように報告する：化学シフト、多重度（ｓ＝シングレット、ｄ＝ダブレット、ｔ＝トリプレット、ｑ＝カルテット、ｐ＝ペンテット、ｈ＝ヘクステット）、結合定数（Ｈｚ）、および積分値。プロトンデカップリングされた１３Ｃ ＮＭＲスペクトルを、Ｖａｒｉａｎ ６００ ＮＭＲ Ｓｙｓｔｅｍ（１５０ＭＨｚ）またはＶａｒｉａｎ ４００－ＭＲ（１００ＭＨｚ）分光計で記録した。化学シフトは、残留溶媒ピーク（ＣＤＣｌ３、７７．０ｐｐｍまたはＣＤ３ＯＤ ４９．０）に対して使用するｐｐｍで報告されている。高分解能質量スペクトルを、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ６５００または６５４５ Ｑ－ＴＯＦ ＬＣ／ＭＳで入手した。分析反応を、６２３０ ＴＯＦ ＬＣ／ＭＳに接続されたＡｇｉｌｅｎｔ １２９０ ｉｎｆｉｎｉｔｙ ＩＩ ＨＰＬＣモジュール（２５４ｎＭでモニタリング）によって評価した。
分析薄層クロマトグラフィーを、ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ ０．２５ｍｍシリカゲルＦ２５４プレートで行った。可視化は、２５４ｎｍのＵＶランプと、過マンガン酸カリウム（ＫＭＮＯ４）、セリウムモリブデン酸アンモニウム（ＣＡＭ）、またはｐ－アニスアルデヒドのいずれかとの組み合わせによって達成された。精製を、ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｌｉｃａ Ｇｅｌ ６０（４０～６３ｕｍ）またはＢｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ ｏｎｅ－ｆｌａｓｈ精製システムを使用した強制空気フラッシュクロマトグラフィーによって行った。Ｂｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ ｏｎｅ精製システムで使用されるカラムには、Ｂｉｏｔａｇｅ ＳＮＡＰ Ｕｌｔｒａ、ＳｉｌｉａＳｅｐ、ＳｉｌｉａＳｅｐＨＰ、およびＳｉｌｉａＳｅｐアミンカートリッジが含まれる。
実施例２
化学合成
１．ユニットＡ合成
化合物２を、図３Ｂに示されるように、市販のＳ１から２つのステップにわたって合成した。すべてのスペクトルは、以前の文献レポートに従った。１、２
（Ｒ）－４－ベンジル－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－ヒドロキシ－５－（（４－メトキシベンジル）オキシ）－２ビニルペンタノイル）オキサゾリジン－２－オン（Ｓ３）。
内部温度プローブを備えた３つ口フラスコに、ＣＨ２Ｃｌ２（３０５ｍＬ、０．１Ｍ）中の１（７．５０２ｇ、３０．５８ｍｍｏｌ、１当量）の溶液を添加し、－７８℃まで冷却した。これをジブチルボロントリフルオロメタンスルホネート（ＤＣＭ中１Ｍ、３３．６４ｍＬ、３３．６４ｍｍｏｌ、１．１当量）、およびＥｔ３Ｎ（６．０２ｍＬ、４２．８ｍｍｏｌ、１．４当量）で処理した。－７８℃で１時間後、反応物を０℃まで温め、３０分間撹拌した。溶液を－７８℃まで再冷却し、ＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍＬ）中のアルデヒド２（８．３１ｇ、４２．８１ｍｍｏｌ、１．４当量）の溶液で処理し、１時間撹拌し、０℃まで温めた。０℃で１時間後、リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７、５００ｍＭ、３０ｍＬ）、続いてメタノール（３０ｍＬ）を添加した。２０分後、温度を１０℃未満に保ちながら、３０％Ｈ２Ｏ２（３０ｍＬ）を添加し、混合物を０℃で１時間撹拌した。有機物を減圧下で除去し、残りの水層を酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物を１Ｎ ＨＣｌ、５％ＮａＨＣＯ３水溶液、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物を、フラッシュクロマトグラフィー（３３％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、３（１１．９８ｇ、収率８９％）を透明で無色の油として得た：Ｒｆ＝０．２（３３％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）；１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３） δ ７．３１（ｄｄｄ、Ｊ＝７．４、６．４、１．３Ｈｚ、２Ｈ）、７．２８－７．２５（ｍ、２Ｈ）、７．２４－７．２１（ｍ、２Ｈ）、７．２０－７．１５（ｍ、２Ｈ）、６．０４（ｄｄｄｄ、Ｊ＝１７．６、１０．０、９．０、１．１Ｈｚ、１Ｈ）、５．３９－５．３６（ｍ、１Ｈ）、５．３６－５．３４（ｍ、１Ｈ）、４．６８（ｄｄｔ、Ｊ＝１１．４、６．３、３．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．５８－４．５１（ｍ、１Ｈ）、４．４２（ｓ、２Ｈ）、４．２５－４．１９（ｍ、１Ｈ）、４．１８－４．１１（ｍ、２Ｈ）、３．７８（ｄ、Ｊ＝１．１Ｈｚ、３Ｈ）、３．６９－３．６４（ｍ、１Ｈ）、３．６４－３．５６（ｍ、１Ｈ）、３．２８－３．１７（ｍ、１Ｈ）、２．７４（ｄｄ、Ｊ＝１３．４、９．５Ｈｚ、１Ｈ）、１．９３－１．７８（ｍ、１Ｈ）、１．７４（ｄｔ、Ｊ＝１４．５、７．０Ｈｚ、１Ｈ）、１．５５（ｓ、２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３） δ １７３．４６、１５９．１９、１５２．９０、１３５．０４、１３１．６７、１３０．１４、１２９．４２、１２９．３０、１２８．９１、１２７．３５、１２１．００、１１３．７８、７２．８７、７０．５４、６７．７４、６５．９５、５５．２５、５５．１７、５２．５３、３７．５８、３３．８７；ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ２５Ｈ２９ＮＯ６［Ｍ＋Ｎａ］４６２．１８８７、実測値４６２．１８８５
（Ｒ）－４－ベンジル－３－（（２Ｒ，３Ｓ）－３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）－５－（（４－メトキシベンジル）オキシ）－２－ビニルペンタノイル）オキサゾリジン－２－オン（３）。
ＣＨ２Ｃｌ２（１３５ｍＬ、０．３Ｍ）中のＳ３（１７．５６ｇ、３９．９５ｍｍｏｌ、１当量）および２，６－ルチジン（４６．２８ｍＬ、７９．９１ｍｍｏｌ、２当量）の溶液に、ｔｅｒｔ－ブチルシリルトリフルオロメタンスルホネート（１１．６ｍＬ、５９．９ｍｍｏｌ、１．５当量）を添加し、撹拌した。室温で１８時間後、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）を添加し、３０分間撹拌し、有機層を分離し、水層をＣＨ２Ｃｌ２（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物を１Ｎ ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物を、フラッシュクロマトグラフィー（２０％ＥｔＯＡＣ／ヘキサン）によって精製して、３（１８．０８ｇ、収率８４％）を淡い黄色の油として得た：Ｒｆ＝０．６（３３％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３） δ ７．３３－７．２６（ｍ、３Ｈ）、７．２５（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、７．１８（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、２Ｈ）、６．８５（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、２Ｈ）、６．００（ｄｄｄ、Ｊ＝９、９．３、１８．２Ｈｚ、１Ｈ）、５．２７（ｄ、Ｊ＝１０．２Ｈｚ、１Ｈ）、５．２６（ｄ、Ｊ＝１８．１Ｈｚ、１Ｈ）、４．５８（ｄｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、８．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．５６－４．５２（ｍ、１Ｈ）、４．４１（ｄ、Ｊ＝１１．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．３６（ｄ、Ｊ＝１１．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．２１（ｔｄ、Ｊ＝５．２Ｈｚ、６．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．０５（ｄｄ、Ｊ＝２Ｈｚ、９．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．８６（ｔ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．７８（ｓ、３Ｈ）、３．５９（ｔｄ、Ｊ＝６．５、９．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．４８（ｄｔ、Ｊ＝６．２、９．４Ｈｚ、１Ｈ）、３．２３（ｄｄ、Ｊ＝３．０、１３．４Ｈｚ、１Ｈ）、２．７０（ｄｄ、Ｊ＝９．７、１３．４Ｈｚ、１Ｈ）、１．９５－１．８５（ｍ、２Ｈ）、０．８６（ｓ、９Ｈ）、０．０２（ｓ、３Ｈ）、０．０１（ｓ、３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３） δ １７２．６２、１５９．２４、１５３．０２、１３５．５８、１３４．２４、１３０．８６、１２９．６８、１２９．４９、１２９．１０、１２７．４８、１１９．７０、１１３．８６、７２．７７、７１．２９、６６．０３、６５．９４、５５．６６、５５．４８、５３．３９、３７．７３、３５．４７、２６．０２、１８．２２、－４．２３、－４．３８；ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３１Ｈ４３ＮＯ６Ｓｉ［Ｍ＋Ｎａ］５７６．２７５２、実測値５７６．２７６７。
（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）－５－（（４－メトキシベンジル）オキシ）－２－ビニルペンタン－１－オール（４）。
０℃に冷却したテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（６２５ｍＬ、０．０５Ｍ）中の３（１７．２２ｇ、３１．１４ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、Ｈ２Ｏ（２４０ｍＬ）中のＮａＢＨ４（５．８９１ｇ、１５５．７ｍｍｏｌ、５当量）の溶液を添加した。０℃で１０分後、溶液を室温まで温め、５時間撹拌した。反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（２００ｍＬ）を添加することによってクエンチし、混合物を室温で１時間撹拌した。ＴＨＦを減圧下で除去し、水層をＥｔＯＡｃ（３×７５ｍＬ）で抽出し、有機物を合わせ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物を、フラッシュクロマトグラフィー（１８％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、４（１０．０４ｇ、収率８５％）を無色の油として得た：Ｒｆ＝０．２５（２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３） δ ７．２５（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、６．８８（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、２Ｈ）、５．７１（ｄｄｄ、Ｊ＝１７．３、１０．４、８．６Ｈｚ、１Ｈ）、５．１７（ｄ、Ｊ＝１０．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．１０（ｄ、Ｊ＝１７．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．４３（ｄ、Ｊ＝１１．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．３８（ｄ、Ｊ＝１１．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．０４－３．９４（ｍ、１Ｈ）、３．８０（ｓ、３Ｈ）、３．７５（ｄｔ、Ｊ＝１０．８、６．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．６１（ｄｄｄ、Ｊ＝１１．０、７．０、５．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．４６（ｔ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、２Ｈ）、２．４３（ｑｄ、Ｊ＝７．６、２．７Ｈｚ、１Ｈ）、２．１５（ｔ、Ｊ＝５．７Ｈｚ、１Ｈ）、１．８８－１．６８（ｍ、２Ｈ）、０．８８（ｓ、９Ｈ）、０．０９（ｓ、３Ｈ）、０．０６（ｓ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３） δ １５９．２８、１３５．６０、１３０．６１、１２９．４１、１１８．６７、１１３．８９、７２．７２、７１．０６、６６．６３、６３．６７、５５．４３、５１．３４、３４．１１、２５．９８、１８．１４、－４．４１、－４．４２；ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ２１Ｈ３６Ｏ４Ｓｉ［Ｍ＋Ｎａ］４０３．２２７５、実測値４０３．２２７１。
（５Ｓ，６Ｓ）－５－（２－（（４－メトキシベンジル）オキシ）エチル）－２，２，３，３，９，９，１０，１０－オクタメチル－６－ビニル－４，８－ジオキサ－３，９－ジシラウンデカン（５）。３、４
０℃に冷却した乾燥ピリジン（２５０ｍＬ、０．１Ｍ）中の４（９．８１ｇ、２５．８ｍｍｏｌ、１当量）の撹拌溶液に、ｐ－トルエンスルホニルクロリド（７．３７２ｇ、３８．６６ｍｍｏｌ、１．５当量）を添加した。混合物を３０分間撹拌し、室温まで温めた。４時間後、混合物を０℃まで再冷却し、０．５Ｎ ＨＣｌ（３００ｍＬ）をゆっくりと添加した。水層をジエチルエーテル（３×２００ｍＬ）で抽出し、有機物を合わせ、１Ｍ ＨＣｌ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物を、クロマトグラフプラグ（１８％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を使用して精製して、５（１１．６７ｇ、収率８４％）を無色の油として得た：Ｒｆ＝０．４（２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３） δ ７．７５（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．３０（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．２１（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、６．８６（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、５．５８（ｄｄｄ、Ｊ＝８．７、１０．３、１７．３Ｈｚ、１Ｈ）、５．１２（ｄｄ、Ｊ＝１．２、９．２Ｈｚ、１Ｈ）、５．０４（ｄ、Ｊ＝１７．２Ｈｚ、１Ｈ）、４．３９（ｄ、Ｊ＝１１．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．３３（ｄ、Ｊ＝１１．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．０８（ｄｄ、Ｊ＝６．６、９．４Ｈｚ、１Ｈ）、３．９４（ｄｄ、Ｊ＝７．４、９．４Ｈｚ、１Ｈ）、３．９３－３．８９（ｍ、１Ｈ）、３．７９（ｓ、３Ｈ）、３．３５（ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）、２．４６－２．４２（ｍ、１Ｈ）、２．４２（ｓ、３Ｈ）、１．７４－１．５７（ｍ、２Ｈ）、０．７８（ｓ、９Ｈ）、－０．０１（ｓ、３Ｈ）、－０．０５（ｓ、３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３） δ １５９．３０、１４４．８０、１３３．４４、１３３．１５、１３０．５３、１２９．９１、１２９．３９、１２８．１４、１１９．７９、１１３．９２、７２．７３、７０．５４、６８．８３、６６．３６、５５．４３、４８．６１、３４．６４、２５．９１、２１．７７、１８．１１、－４．２５、－４．６９；ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ２８Ｈ４２Ｏ６ＳＳｉ［Ｍ＋Ｎａ］５５７．２３６４、実測値５５７．２３７０。
ｔｅｒｔ－ブチル（（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（（４－メトキシベンジル）オキシ）－４－メチルヘキサ－５－エン－３－イル）オキシ）ジメチルシラン（６）。５
０℃に冷却した乾燥ＴＨＦ（７０ｍＬ、０．１Ｍ）中の５（３．７２ｇ、６．９６ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、水素化トリエチルホウ素リチウム（ＴＨＦ中１Ｍ、１７．３９ｍＬ、１７．３９ｍｍｏｌ、２．５当量）を１０分間にわたって添加した。反応物を０℃で撹拌し、室温まで温め、さらに２時間撹拌した。反応物を０℃まで冷却し、水（１５ｍＬ）、３Ｎ ＮａＯＨ（１５ｍＬ）、３０％Ｈ２Ｏ２（１５ｍＬ）をゆっくりと添加しながらクエンチし、３０分間撹拌した。有機物を減圧下で除去し、水層をＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物を、フラッシュクロマトグラフィー（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、６（１．８７ｇ、収率７４％）を透明で無色の油として得た：Ｒｆ＝０．５（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）；１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３） δ ７．２５（ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ、２Ｈ）、６．８７（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、２Ｈ）、５．７６（ｄｄｄ、Ｊ＝１７．４、１０．１、７．３Ｈｚ、１Ｈ）、４．９９（ｄ、Ｊ＝９．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．９８（ｄ、Ｊ＝１８．１Ｈｚ、１Ｈ）、４．４３（ｄ、Ｊ＝１１．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．３８（ｄ、Ｊ＝１１．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．８０（ｓ、３Ｈ）、３．７６（ｄｔ、Ｊ＝８．０、４．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．５２－３．４２（ｍ、２Ｈ）、２．２９（ｔｄ、Ｊ＝７．１、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、１．７４－１．６０（ｍ、２Ｈ）、０．９９（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）、０．８８（ｓ、９Ｈ）、０．０５（ｓ、３Ｈ）、０．０３（ｓ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３） δ １５９．２３、１４０．８４、１３０．８５、１２９．３９、１１４．６７、１１３．８７、７２．６８、７２．６５、６７．２４、５５．４３、４３．５８、３３．３６、２６．０５、１８．２７、１４．６８、－４．２６、－４．３９；ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ２１Ｈ３６Ｏ３Ｓｉ［Ｍ＋Ｈ］３６４．２４３４、実測値３６４．２４３９。
（ｔｅｒｔ－ブチル（（（３Ｓ，４Ｒ，Ｅ）－１－（（４－メトキシベンジル）オキシ）－４－メチル－６－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ヘキサ－５－エン－３－イル）オキシ）ジメチルシラン（７）。６
乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ、０．２Ｍ）中のＨｏｖｅｙｄａ Ｇｒｕｂｂｓ ＩＩ（０．１０ｇ、０．１６ｍｍｏｌ、０．０５当量）の溶液を、Ｎ２下で、還流コンデンサを備えた２つ口フラスコに添加した。これにオレフィン６（１．１５ｇ、３．１５ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、続いてビニルボロン酸ピナコールエステル（１．０７ｍＬ、６．３１ｍｍｏｌ、３当量、溶出液として１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用してＳｉＯ２のプラグに通し、使用直前に安定剤を除去）を添加し、反応物を１８時間還流で加熱した。残留物を冷却し、濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって直接精製して、７（１．１０ｇ、収率７４％）を淡い黄色の油として得た：Ｒｆ＝０．３５（５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３） δ ７．２５（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、２Ｈ）、６．８７（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、６．５６（ｄｄ、Ｊ＝１８．１、６．６Ｈｚ、１Ｈ）、５．４３（ｄ、Ｊ＝１８．１Ｈｚ、１Ｈ）、４．４１（ｄ、Ｊ＝１８．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．３８（ｄ、Ｊ＝１７．９Ｈｚ、１Ｈ）、３．８７－３．７５（ｍ、１Ｈ）、３．８０（ｄ、Ｊ＝０．８Ｈｚ、３Ｈ）、３．５５－３．３８（ｍ、２Ｈ）、２．４０（ｑ、Ｊ＝６．２Ｈｚ、１Ｈ）、１．６６（ｑ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、２Ｈ）、１．２６（ｓ、１２Ｈ）、１．００（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）、０．８７（ｄ、Ｊ＝０．８Ｈｚ、９Ｈ）、０．０３（ｓ、３Ｈ）、０．０２（ｓ、３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３） δ １５９．３１、１５６．２１、１３０．８８、１２９．５２、１１３．９６、８３．２６、７２．７７、７２．４５、６７．４２、５５．５０、４５．５３、３２．９３、２６．１２、２５．０６、２４．９６、１８．３２、１３．３２、－４．２０、－４．４２；ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ２７Ｈ４７ＢＯ５Ｓｉ［Ｍ＋Ｈ］４９１．３３５９、実測値４９１．３３５０。
（３Ｓ，４Ｒ，Ｅ）－３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）－４－メチル－６－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ヘキサ－５－エン－１－オール（Ｓ４）。
室温でのＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍＬ、０．１５Ｍ）および水（１．４９ｍＬ）中の７（１．９０ｇ、３．８７ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＤＤＱ（１．３２ｇ、５．８１ｍｍｏｌ、１．５当量）を添加し、混合物を１時間撹拌した。反応物を、飽和ＮａＨＣＯ３でクエンチし、１０分間撹拌し、水で希釈した。有機層を分離し、水層をＣＨ２Ｃｌ２（２×５０ｍＬ）で抽出し、有機物を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物を、フラッシュクロマトグラフィー（１２％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、Ｓ４（１．２１ｇ、収率８３％）を無色の油として得た：Ｒｆ＝０．１５（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）；１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３） δ ６．５４（ｄｄ、Ｊ＝１８．１、６．６Ｈｚ、１Ｈ）、５．４６（ｄｄ、Ｊ＝１８．１、１．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．８７（ｄｄｄ、Ｊ＝７．９、５．０、３．８Ｈｚ、１Ｈ）、３．７７－３．６７（ｍ、２Ｈ）、２．４９（ｐｄｄ、Ｊ＝６．８、５．０、１．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．０３（ｔ、Ｊ＝５．４Ｈｚ、１Ｈ）、１．７１－１．６３（ｍ、２Ｈ）、１．２６（ｄ、Ｊ＝１．７Ｈｚ、１２Ｈ）、１．０１（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）、０．８９（ｓ、９Ｈ）、０．０８（ｓ、３Ｈ）、０．０７（ｓ、３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３） δ １５５．７２、８３．０７、７４．２４、６０．６３、４４．９２、３４．１５、２５．８４、２４．８０、２４．７１、１７．９８、１２．８１、－４．４１、－４．６９；ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ１９Ｈ３９ＢＯ４Ｓｉ［Ｍ＋Ｈ］３７１．２７８３、実測値３７１．２７７８。
（３Ｓ，４Ｒ，Ｅ）－３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）－４－メチル－６－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ヘキサ－５－エナル（８）。
開いた丸底フラスコに、ＣＨ２Ｃｌ２（４１ｍＬ、０．１Ｍ）中のアルコールＳ４（１．００ｇ、４．０９ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、ＮａＨＣＯ３（１．７２ｇ、２０．４５ｍｍｏｌ、５当量）およびデスマーチンペルヨージナン（２．０８ｇ、４．９１ｍｍｏｌ、１．２当量）で処理した。反応物を室温で１時間撹拌し、１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液（５０ｍＬ）でクエンチし、両方の層が透明になるまで撹拌した。有機物を分離し、水層をＣＨ２Ｃｌ２（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物を、フラッシュクロマトグラフィー（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、８（０．７６８ｇ、収率７７％）を無色の油として得た：Ｒｆ＝０．５（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３） δ ９．７５（ｄｄ、Ｊ＝２．１、１．１Ｈｚ、１Ｈ）、６．５０（ｄｄ、Ｊ＝１８．１、６．６Ｈｚ、１Ｈ）、５．４６（ｄ、Ｊ＝１８．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．２２（ｄｔ、Ｊ＝８．１、４．２Ｈｚ、１Ｈ）、２．５４－２．４２（ｍ、２Ｈ）、２．４１－２．３３（ｍ、１Ｈ）、１．２５（ｓ、１２Ｈ）、１．０１（ｄｄ、Ｊ＝６．９、０．９Ｈｚ、３Ｈ）、０．８５（ｄ、Ｊ＝０．８Ｈｚ、９Ｈ）、０．０５（ｓ、３Ｈ）、０．０２（ｓ、３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３） δ ２０２．４７、１５４．６８、８３．３６、７０．８９、４７．１７、４５．５４、２９．８６、２５．９２、２４．９８、２４．８８、１８．１６、１３．０３、－４．３３、－４．５６；ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ１９Ｈ３７ＢＯ４Ｓｉ［Ｍ＋Ｈ］３６８．２５５４、実測値３６８．２５５０。
２．ユニットＢ合成
Ｓ５は、図４に示されるように、および以前に報告されたように、市販の９から３つのステップで合成した。７
メチル（Ｒ）－３－（３－クロロ－４－メトキシフェニル）－２－（２－（ジエトキシホスホリル）アセトアミド）プロパノエート（１２）。
開いたフラスコに、Ｓ５（１．１０ｇ、３．２０ｍｍｏｌ、１当量）および４Ｍ ＨＣｌ／ジオキサン（２０ｍＬ）を添加した。混合物を３０分間激しく撹拌し、減圧下で濃縮した。得られた白色の固体１０を直接使用した。
化合物１０をＤＭＦ（３２ｍＬ、０．１Ｍ）中に懸濁し、２－（ジエトキシホスホリル）酢酸１１（０．６９２ｇ、３．５２ｍｍｏｌ、１．１当量）、ＥＤＣ・ＨＣｌ（０．７３１ｇ、３．８４ｍｍｏｌ、１．２当量）、ＨＯＢｔ水和物（０．５９１ｇ、３．８４ｍｍｏｌ、１．２当量）、およびＤＩＰＥＡ（１．０３ｇ、１．４０ｍＬ、８．００ｍｍｏｌ、２．５当量）で処理し、室温で１８時間撹拌した。反応物を半飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（３０ｍＬ）でクエンチし、水層をＤＣＭで抽出（３×３０ｍＬ）し、有機物を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物を、フラッシュクロマトグラフィーシステム（１～７％メタノール／ＤＣＭ）で精製して、１２（０．９０ｍｇ、収率６７％）を透明で無色油として得た：Ｒｆ＝０．２（２．５％メタノール／ＤＣＭ）；１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３） δ ７．１６（ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．０９（ｂｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．０４（ｄｄ、Ｊ＝８．４、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．８４（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．７８（ｔｄ、Ｊ＝７．１、５．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．１３（ｄｔ、Ｊ＝１４．９、７．２Ｈｚ、１Ｈ）、４．０６（ｄｑ、Ｊ＝８．２、７．１Ｈｚ、２Ｈ）、３．８５（ｓ、３Ｈ）、３．７０（ｓ、３Ｈ）、３．０８（ｄｄ、Ｊ＝１４．２、５．４Ｈｚ、１Ｈ）、２．９７（ｄｄ、Ｊ＝１４．２、６．８Ｈｚ、１Ｈ）、２．８５（ｄ、Ｊ＝１０．７Ｈｚ、１Ｈ）、２．８１（ｄ、Ｊ＝１０．５Ｈｚ、１Ｈ）、１．３１（ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、３Ｈ）、１．２７（ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３） δ １７１．４５、１６３．９５、１６３．９３、１５４．２４、１３１．０９、１２９．１５、１２８．７２、１２２．４８、１１２．２２、７７．３７、７７．１６、７６．９５、６２．９５（ｄ、Ｊ＝１５．３Ｈｚ）、６２．９１（ｄ、Ｊ＝１５．３）、５６．２５、５３．９４、５２．５２、３６．８８、３５．７０、３４．８３、１６．４８、１６．４３、１６．３９；ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ１７Ｈ２５ＣｌＮＯ７Ｐ［Ｍ＋Ｈ］４２１．１０５７、実測値４２１．１０５３。
３．ユニットＡ／Ｂ類似体の合成および特性評価
メチル（Ｒ）－２－（（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）－５－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）－６－メチル－８－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）オクタ－２，７－ジエンアミド）－３－（３－クロロ－４－メトキシフェニル）プロパノエート（１３）。
乾燥ＴＨＦ（１５ｍＬ、０．１Ｍ）中の１２（０．６３ｇ、１．４９ｍｍｏｌ、１当量）の懸濁液を０℃まで冷却し、ＮａＨ（油中６０％懸濁液、０．０５５ｇ、１．６４ｍｍｏｌ、１．１当量）で処理した。ＴＨＦ（５ｍＬ）中のアルデヒド８（０．５５ｇ、１．４９ｍｍｏｌ、１当量）を滴下で添加する前に、反応物を３０分間撹拌した。反応物を０℃で１時間撹拌させ、半飽和ＮＨ４Ｃｌ（１０ｍＬ）でクエンチした。有機物を減圧下で除去し、残りの水層をＤＣＭ（３×５０ｍＬ）で抽出し、有機物を合わせ、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィーシステム（６～４５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、１３（０．５４５ｇ、収率５７．４％）を透明で無色の油として得た：Ｒｆ＝０．２５（２５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）；１Ｈ ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ７．２１（ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．１０（ｄｄ、Ｊ＝８．５、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９７（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．７５（ｄｔ、Ｊ＝１５．２、７．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．５７（ｄｄ、Ｊ＝１８．０、７．７Ｈｚ、１Ｈ）、５．９６（ｄ、Ｊ＝１５．３Ｈｚ、１Ｈ）、５．３８（ｄ、Ｊ＝１８．３Ｈｚ、１Ｈ）、４．６８（ｄｄ、Ｊ＝８．９、５．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．７３（ｑ、Ｊ＝５．４Ｈｚ、１Ｈ）、３．７０（ｓ、３Ｈ）、３．１１（ｄｄ、Ｊ＝１４．０、５．６Ｈｚ、１Ｈ）、２．９０（ｄｄ、Ｊ＝１４．０、９．０Ｈｚ、１Ｈ）、２．４１－２．２５（ｍ、３Ｈ）、１．２６（ｓ、１２Ｈ）、１．０１（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）、０．８９（ｓ、９Ｈ）、０．０６（ｓ、３Ｈ）、０．０３（ｓ、３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ：（１００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ １７３．２８、１６７．９８、１５７．３３、１５５．４２、１４３．２８、１３１．８２、１３１．３３、１２９．７０、１２６．２９、１２３．２０、１１３．３４、８４．４１、７６．０９、５６．５５、５５．１９、５２．７２、４６．４８、３８．３８、３７．３０、２６．４７、２５．１４、２５．１０、１９．００、１５．８１、－３．９９、－４．３０；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値Ｃ３２Ｈ５１ＢＣｌＮＯ７Ｓｉ［Ｍ＋Ｈ］６３５．３２１６、実測値６３５．３２１５。
４．一般的な鈴木カップリング手順
ＴＬＣ（２～１２時間）で評価される通り、長いチューブに、１３（１当量）、Ｋ３ＰＯ４（２．５当量）、ヨウ化アリール（２当量）、およびＰｄ２（ｄｂａ）３（０．０５当量）を添加し、１，２ジクロロエタンおよび水（４：１、０．１Ｍ）の混合物中に懸濁し、完了するまで激しく撹拌した。反応物を０．５Ｍ ＨＣｌおよびＥｔＯＡｃで希釈し、水層をＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出した。有機物を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、本明細書に示されるようにフラッシュクロマトグラフィーシステムによって精製した。
メチル（Ｒ）－２－（（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）－５－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）－６－メチル－８－フェニルオクタ－２，７－ジエンアミド）－３－（３－クロロ－４－メトキシフェニル）プロパノエート（１４ａ）。
一般的な鈴木手順に従って反応を行い、フラッシュクロマトグラフィーシステム（ＳｉＯ２、２０～５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を使用して精製して、１４ａ（０．０８６ｇ、収率９３％）を淡い黄色の油として得た：Ｒｆ＝０．３５（２５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ７．３３（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、７．２７（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、７．２１（ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．１８（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．１０（ｄｄ、Ｊ＝８．４、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９６（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．７８（ｄｔ、Ｊ＝１５．２、７．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．３８（ｄ、Ｊ＝１６．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．１９（ｄｄ、Ｊ＝１６．０、８．２Ｈｚ、１Ｈ）、５．９６（ｄ、Ｊ＝１５．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．６９（ｄｄ、Ｊ＝８．９、５．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．８３（ｓ、３Ｈ）、３．８０（ｑ、１Ｈ）、３．７０（ｓ、３Ｈ）、３．１１（ｄｄ、Ｊ＝１４．０、５．６Ｈｚ、１Ｈ）、２．９０（ｄｄ、Ｊ＝１４．０、９．０Ｈｚ、１Ｈ）、２．４４（ｑ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．３７（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、２Ｈ）、１．１１（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）、０．９０（ｓ、９Ｈ）、０．０６（ｓ、３Ｈ）、０．０５（ｓ、３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） １７３．２８、１６８．０３、１５５．４１、１４３．５０、１３９．０３、１３３．１０、１３１．８２、１３１．７３、１３１．３３、１２９．６７、１２９．５０、１２８．０４、１２７．０６、１２６．１７、１２３．１８、１１３．３３、７６．５４、５６．５３、５５．１５、５２．７２、４４．１１、３８．６２、３７．２７、２６．４４、１８．９８、１６．８０、－４．０１、－４．３２．；ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３２Ｈ４４ＣｌＮＯ５Ｓｉ［Ｍ＋Ｈ］５８６．２７５０、実測値５８６．２７５４。
メチル（Ｒ）－２－（（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）－５－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）－６－メチル－８－（ピリジン－２－イル）オクタ－２，７－ジエンアミド）－３－（３－クロロ－４－メトキシフェニル）プロパノエート（１４ｂ）。
一般的な鈴木手順に従って反応を行い、フラッシュクロマトグラフィー（Ｓｉ－ＮＨ２、２０～５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、１４ｂ（０．０７８ｇ、収率４５％）を淡い黄色の油として得た：Ｒｆ＝０．１５（５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ８．４４（ｄ、Ｊ＝４．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．７６（ｔｄ、Ｊ＝７．８、１．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．４６（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．２４（ｄｄ、Ｊ＝７．８、５．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．２１（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．１０（ｄｄ、Ｊ＝８．５、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９６（ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．７７（ｄｔ、Ｊ＝１５．３、７．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．６４（ｄｄ、Ｊ＝１６．０、８．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．４９（ｄ、Ｊ＝１６．０Ｈｚ、１Ｈ）、５．９８（ｄ、Ｊ＝１５．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．７０（ｄｄ、Ｊ＝９．０、５．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．８７－３．８４（ｍ、１Ｈ）、３．８３（ｍ、３Ｈ）、３．７０（ｓ、３Ｈ）、３．１１（ｄｄ、Ｊ＝１４．０、５．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．９０（ｄｄ、Ｊ＝１４．０、９．０Ｈｚ、１Ｈ）、２．５１（ｈ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、１Ｈ）、２．３８（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、１．１４（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）、０．９０（ｓ、９Ｈ）、０．０６（ｓ、３Ｈ）、０．０５（ｓ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ １７３．２７、１６７．９５、１５７．１７、１５５．４１、１４９．７４、１４３．２４、１３９．０５、１３８．６６、１３１．８３、１３１．３４、１３１．１２、１２９．７０、１２６．３８、１２３．３８、１２３．１７、１２２．３４、１１３．３４、７６．２６、５６．５３、５５．１５、５２．７３、４４．０６、３８．６２、３７．３１、２６．４３、１８．９７、１６．４７、－４．０４、－４．３４．ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３１Ｈ４３ＣｌＮ２Ｏ５Ｓｉ［Ｍ＋Ｈ］５８７．２７０３、実測値５８７．２７０５。
メチル（Ｒ）－２－（（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）－５－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）－６－メチル－８－（ピリジン－３－イル）オクタ－２，７－ジエンアミド）－３－（３－クロロ－４－メトキシフェニル）プロパノエート（１４ｃ）。
一般的な鈴木手順に従って反応を行い、フラッシュクロマトグラフィーシステム（Ｓｉ－ＮＨ２、１６～６０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、１４ｃ（０．０４９ｇ、収率７２％）を淡い黄色の油として得た：Ｒｆ＝０．１５（５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）；１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ８．４９（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、８．３５（ｄｄ、Ｊ＝４．９、１．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．８５（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．３７（ｄｄ、Ｊ＝８．０、４．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．２１（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．１０（ｄｄ、Ｊ＝８．４、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９６（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．７８（ｄｔ、Ｊ＝１５．２、７．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．４３（ｄ、Ｊ＝１６．１Ｈｚ、１Ｈ）、６．３６（ｄｄ、Ｊ＝１６．１、７．９Ｈｚ、１Ｈ）、５．９７（ｄｔ、Ｊ＝１５．３、１．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．７０（ｄｄ、Ｊ＝８．９、５．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．８５－３．７９（ｍ、１Ｈ）、３．８３（ｓ、３Ｈ）、３．７０（ｓ、３Ｈ）、３．１１（ｄｄ、Ｊ＝１４．０、５．６Ｈｚ、１Ｈ）、２．９１（ｄｄ、Ｊ＝１４．０、９．０Ｈｚ、１Ｈ）、２．４９（ｔｄ、Ｊ＝７．２、４．７Ｈｚ、１Ｈ）、２．３８（ｄｄｄ、Ｊ＝７．４、５．８、１．４Ｈｚ、２Ｈ）、１．１３（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）、０．９０（ｓ、９Ｈ）、０．０６（ｓ、３Ｈ）、０．０５（ｓ、３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ １７３．２７、１６７．９７、１５５．４３、１４８．２８、１４８．１３、１４３．２１、１３６．８８、１３５．４８、１３４．７１、１３１．８２、１３１．３５、１２９．６８、１２７．６６、１２６．３１、１２５．２８、１２３．２０、１１３．３９、７６．３２、５６．５６、５５．１５、５２．７２、４４．２４、３８．６９、３７．２９、２６．４２、１８．９６、１６．６５、－４．００、－４．３４；ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３１Ｈ４３ＣｌＮ２Ｏ５Ｓｉ［Ｍ＋Ｈ］５８７．２７０３、実測値５８７．２７０２。
メチル（Ｒ）－２－（（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）－５－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）－６－メチル－８－（ピリジン－４－イル）オクタ－２，７－ジエンアミド）－３－（３－クロロ－４－メトキシフェニル）プロパノエート（１４ｄ）。
一般的な鈴木手順に従って反応を行い、フラッシュクロマトグラフィーシステム（Ｓｉ－ＮＨ２、１５～５５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、１４ｄ（０．０６２ｇ、収率７１％）を淡い黄色の油として得た：Ｒｆ＝０．２５（５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）；１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ δ ８．４２（ｄ、Ｊ＝５．９Ｈｚ、２Ｈ）、７．３７（ｄ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、２Ｈ）、７．２１（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．１０（ｄｄ、Ｊ＝８．５、２．１Ｈｚ、１Ｈ）、６．９７（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．７８（ｄｔ、Ｊ＝１５．２、７．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．５６（ｄｄ、Ｊ＝１６．０、８．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．４１（ｄ、Ｊ＝１６．０Ｈｚ、１Ｈ）、５．９７（ｄ、Ｊ＝１５．３Ｈｚ、１Ｈ）、４．６９（ｄｄ、Ｊ＝９．０、５．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．８６－３．８１（ｍ、１Ｈ）、３．８３（ｓ、３Ｈ）、３．７０（ｓ、３Ｈ）、３．１１（ｄｄ、Ｊ＝１４．１、５．６Ｈｚ、１Ｈ）、２．９１（ｄｄ、Ｊ＝１４．１、９．０Ｈｚ、１Ｈ）、２．５１（ｔｄ、Ｊ＝１３．３、６．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．３８（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、２Ｈ）、１．１３（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）、０．９０（ｓ、９Ｈ）、０．０６（ｓ、３Ｈ）、０．０６（ｓ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） １３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ １７３．２８、１６７．９６、１５５．４４、１５０．２３、１４７．６８、１４３．０５、１３９．９６、１３１．８３、１３１．３６、１２９．６７、１２９．１９、１２６．３７、１２３．２０、１２２．３２、１１３．４０、７６．１９、５６．５６、５５．１４、５２．７３、４４．２４、３８．７５、３７．２８、２６．４１、１８．９６、１６．５６、－４．０２、－４．３６；ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３１Ｈ４３ＣｌＮ２Ｏ５Ｓｉ［Ｍ＋Ｈ］５８７．２７０３、実測値５８７．２６９９。
メチル（Ｒ）－２－（（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）－５－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）－６－メチル－８－（ピラジン－２－イル）オクタ－２，７－ジエンアミド）－３－（３－クロロ－４－メトキシフェニル）プロパノエート（１４ｅ）。
一般的な鈴木手順に従って反応を行い、フラッシュクロマトグラフィーシステム（Ｓｉ－ＮＨ２、２０～５５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、１４ｅ（０．１１５ｇ、収率６５％）を淡い黄色の油として得た：Ｒｆ＝０．２（５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）；１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ８．５７（ｄ、Ｊ＝１．５Ｈｚ、１Ｈ）、８．５１（ｓ、１Ｈ）、８．３９（ｄ、Ｊ＝２．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．２１（ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．１０（ｄｄ、Ｊ＝８．４、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９６（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．９０（ｄｄ、Ｊ＝１５．９、８．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．７８（ｄｔ、Ｊ＝１５．２、７．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．５４（ｄ、Ｊ＝１６．０Ｈｚ、１Ｈ）、５．９８（ｄ、Ｊ＝１５．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．７０（ｄｄ、Ｊ＝８．９、５．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．８６－３．８４（ｍ、１Ｈ）、３．８３（ｓ、３Ｈ）、３．７０（ｓ、３Ｈ）、３．１１（ｄｄ、Ｊ＝１４．０、５．６Ｈｚ、１Ｈ）、２．９１（ｄｄ、Ｊ＝１４．０、９．０Ｈｚ、１Ｈ）、２．５５（ｑ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、１Ｈ）、２．４１－２．３３（ｍ、２Ｈ）、１．１５（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）、０．８９（ｓ、９Ｈ）、０．０６（ｓ、３Ｈ）、０．０５（ｓ、３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ １７３．２７、１６７．９３、１５５．４２、１５２．９９、１４５．４９、１４３．８９、１４３．４９、１４３．０７、１４１．７７、１３１．８２、１３１．３４、１２９．６９、１２７．８８、１２６．４１、１２３．１９、１１３．３８、７６．２０、５６．５６、５５．１５、５２．７３、４４．１３、３８．７４、３７．３０、２６．４２、１８．９７、１６．４６、－４．０１、－４．３６；ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３０Ｈ４２ＣｌＮ３Ｏ５Ｓｉ［Ｍ＋Ｈ］５８８．２６５５、実測値５８８．２６５９。
メチル（Ｒ）－２－（（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）－５－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）－６－メチル－８－（１－メチル－１Ｈ－ピロゾール－５－イル）オクタ－２，７－ジエンアミド）－３－（３－クロロ－４－メトキシフェニル）プロパノエート（１４ｆ）。
一般的な鈴木手順に従って反応を行い、フラッシュクロマトグラフィーシステム（Ｓｉ－ＮＨ２、２０～７０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、１４ｆ（０．０４４ｇ、収率６３％）を淡い黄色の油として得た：Ｒｆ＝０．１（５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）；１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ７．３４（ｄ、Ｊ＝２．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．２０（ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．１０（ｄｄ、Ｊ＝８．４、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９６（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．７８（ｄｔ、Ｊ＝１５．２、７．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．３８（ｄ、Ｊ＝１５．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．３３（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、６．２１（ｄｄ、Ｊ＝１５．９、８．３Ｈｚ、１Ｈ）、５．９７（ｄｔ、Ｊ＝１５．４、１．３Ｈｚ、１Ｈ）、４．６９（ｄｄ、Ｊ＝８．９、５．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．８２（ｓ、３Ｈ）、３．８１－３．７９（ｍ、１Ｈ）、３．８０（ｓ、３Ｈ）、３．７０（ｓ、３Ｈ）、３．１１（ｄｄ、Ｊ＝１４．０、５．６Ｈｚ、１Ｈ）、２．９１（ｄｄ、Ｊ＝１４．０、８．９Ｈｚ、１Ｈ）、２．４８（ｈ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、１Ｈ）、２．３８（ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、２Ｈ）、１．１２（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）、０．８９（ｓ、９Ｈ）、０．０６（ｓ、３Ｈ）、０．０５（ｓ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ １７３．２８、１６７．９８、１５５．４４、１４３．０９、１４２．８３、１３９．１４、１３８．５２、１３１．８１、１３１．３６、１２９．６７、１２６．３３、１２３．２１、１１８．１１、１１３．４１、１０３．４２、７６．２３、５６．５７、５５．１７、５２．７２、４４．２０、３８．７９、３７．２８、３６．４５、２６．４２、１８．９７、１６．７７、－３．９９、－４．３６；ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３０Ｈ４４ＣｌＮ３Ｏ５Ｓｉ［Ｍ＋Ｈ］５９０．２８１２、実測値５９０．２８１１。
メチル（Ｒ）－２－（（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）－５－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）－６－メチル－８－（１－メチル－１Ｈ－ピロゾール－３－イル）オクタ－２，７－ジエンアミド）－３－（３－クロロ－４－メトキシフェニル）プロパノエート（１４ｇ）。
一般的な鈴木手順に従って反応を行い、フラッシュクロマトグラフィー（Ｓｉ－ＮＨ２、１６～５５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、１４ｇ（０．０６５ｇ、収率７１％）を淡い黄色の油として得た：Ｒｆ＝０．２５（５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）；１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ７．４６（ｄ、Ｊ＝２．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．２１（ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．１０（ｄｄ、Ｊ＝８．５、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９６（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．７５（ｄｔ、Ｊ＝１５．２、７．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．３０（ｄ、Ｊ＝２．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．１７（ｄｄ、Ｊ＝１６．２、８．１Ｈｚ、１Ｈ）、５．９６（ｄ、Ｊ＝１５．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．６９（ｄｄ、Ｊ＝９．０、５．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．８３（ｓ、３Ｈ）、３．７８（ｑ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．７０（ｓ、３Ｈ）、３．１１（ｄｄ、Ｊ＝１４．１、５．６Ｈｚ、１Ｈ）、２．９１（ｄｄ、Ｊ＝１４．０、９．０Ｈｚ、１Ｈ）、２．４２（ｐ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、１Ｈ）、２．３８－２．３０（ｍ、２Ｈ）、１．０９（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）、０．９０（ｓ、９Ｈ）、０．０６（ｓ、３Ｈ）、０．０４（ｓ、３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ １７３．２９、１６７．９９、１５５．４３、１５２．１２、１４３．４３、１３４．９５、１３３．０３、１３１．８２、１３１．３７、１２９．７１、１２６．２８、１２３．２９、１２３．２２、１１３．３８、１０３．２２、７６．４４、５６．５５、５５．１６、５２．７１、４３．９５、３８．６０、３８．５２、３７．３３、２６．４４、１８．９８、１６．４８、－４．０４、－４．３２；ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３０Ｈ４４ＣｌＮ３Ｏ５Ｓｉ［Ｍ＋Ｈ］５９０．２８１２、実測値５９０．２８０９。
メチル（Ｒ）－２－（（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）－５－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）－６－メチル－８－（１－メチル－１Ｈ－ピロゾール－４－イル）オクタ－２，７－ジエンアミド）－３－（３－クロロ－４－メトキシフェニル）プロパノエート（１４ｈ）。
一般的な鈴木手順に従って反応を行い、フラッシュクロマトグラフィーシステム（Ｓｉ－ＮＨ２、１６～６０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、１４ｈ（０．０８５ｇ、収率９２％）を淡い黄色の油として得た：Ｒｆ＝０．２（５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ７．５３（ｓ、１Ｈ）、７．４７（ｓ、１Ｈ）、７．２１（ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．１０（ｄｄ、Ｊ＝８．４、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９６（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．７７（ｄｔ、Ｊ＝１５．２、７．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．１８（ｄ、Ｊ＝１６．０Ｈｚ、１Ｈ）、５．９５（ｄ、Ｊ＝１５．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．８９（ｄｄ、Ｊ＝１６．１、８．２Ｈｚ、１Ｈ）、４．６９（ｄｄ、Ｊ＝８．９、５．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．８３（ｓ、３Ｈ）、３．７５（ｑ、Ｊ＝５．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．７０（ｓ、３Ｈ）、３．１１（ｄｄ、Ｊ＝１４．０、５．６Ｈｚ、１Ｈ）、２．９０（ｄｄ、Ｊ＝１４．０、９．０Ｈｚ、１Ｈ）、２．４１－２．２７（ｍ、３Ｈ）、１．０６（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）、０．８９（ｓ、９Ｈ）、０．０５（ｓ、３Ｈ）、０．０３（ｓ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ１７３．２９、１６８．０３、１５５．４２、１４３．６７、１３７．６１、１３１．８３、１３１．５８、１３１．３５、１２９．６８、１２９．３３、１２６．１０、１２３．１８、１２２．４５、１２１．２４、１１３．３６、７６．６０、５６．５５、５５．１５、５２．７２、４４．１６、３８．７２、３８．３２、３７．２８、２６．４４、１８．９８、１６．４５、－４．０５、－４．３１；ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３０Ｈ４４ＣｌＮ３Ｏ５Ｓｉ［Ｍ＋Ｈ］５９０．２８１２、実測値５９０．２８１３。
メチル（Ｒ）－２－（（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）－５－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）－８－（１－イソプロピル－１Ｈ－ピロゾール－４－イル）－６－メチルオクタ－２，７－ジエンアミド）－３－（３－クロロ－４－メトキシフェニル）プロパノエート（１４ｉ）。
一般的な鈴木手順に従って反応を行い、フラッシュクロマトグラフィー（アミンカラム、２０～５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、１４ｉ（０．０５６ｇ、収率８３％）を淡い黄色の油として得た：Ｒｆ＝０．３５（５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）；１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ １Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール－ｄ４） δ ７．６１（ｓ、１Ｈ）、７．４８（ｓ、１Ｈ）、７．２１（ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．１０（ｄｄ、Ｊ＝８．４、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９６（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．７７（ｄｔ、Ｊ＝１５．２、７．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．２０（ｄ、Ｊ＝１６．１Ｈｚ、１Ｈ）、５．９５（ｄ、Ｊ＝１５．３Ｈｚ、１Ｈ）、５．９０（ｄｄ、Ｊ＝１６．１、８．１Ｈｚ、１Ｈ）、４．６９（ｄｄ、Ｊ＝８．９、５．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．４６（ｈｅｐｔ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．８３（ｓ、３Ｈ）、３．７５（ｑ、Ｊ＝５．４Ｈｚ、１Ｈ）、３．７０（ｓ、３Ｈ）、３．１１（ｄｄ、Ｊ＝１４．０、５．６Ｈｚ、１Ｈ）、２．９１（ｄｄ、Ｊ＝１４．０、８．９Ｈｚ、１Ｈ）、２．４６－２．２９（ｍ、３Ｈ）、１．４６（ｄ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、６Ｈ）、１．０７（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）、０．９０（ｓ、９Ｈ）、０．０６（ｓ、３Ｈ）、０．０３（ｓ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ １３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ｃｄ３ｏｄ） δ １７３．２９、１６８．０４、１５５．４２、１４３．７２、１３７．１８、１３１．８３、１３１．３５、１２９．６８、１２６．０９、１２３．１９、１２１．８８、１２１．４３、１１３．３６、７６．６５、５６．５５、５５．１６、５４．９９、５２．７２、４４．１６、３８．２７、３７．２８、２６．４４、２３．０７、１８．９９、１６．３８、－４．０４、－４．３２；ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３２Ｈ４８ＣｌＮ３Ｏ５Ｓｉ［Ｍ＋Ｈ］６１８．３１２５、実測値６１８．３１２９。
メチル（Ｒ）－２－（（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）－５－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）－８－（３，５－ジメチルイソオキサゾール－４－イル）－６－メチルオクタ－２，７－ジエンアミド）－３－（３－クロロ－４－メトキシフェニル）プロパノエート（１４ｊ）。
一般的な鈴木手順に従って反応を行い、フラッシュクロマトグラフィー（アミンカラム、１０～５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、１４ｊ（０．０５７ｇ、収率８５％）を淡い黄色の油として得た：Ｒｆ＝０．３５（３３％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）；１Ｈ ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ７．２０（ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．１０（ｄｄ、Ｊ＝８．３、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９６（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．７６（ｄｔ、Ｊ＝１５．２、７．６Ｈｚ、１Ｈ）、６．１１（ｄ、Ｊ＝１６．３Ｈｚ、１Ｈ）、５．９６（ｄ、Ｊ＝１５．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．９０（ｄｄ、Ｊ＝１６．４、８．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．６８（ｄｄ、Ｊ＝９．０、５．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．８３－３．７７（ｍ、１Ｈ）、３．７０（ｓ、３Ｈ）、３．１２（ｄｄ、Ｊ＝１４．０、５．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．９０（ｄｄ、Ｊ＝１４．０、９．０Ｈｚ、１Ｈ）、２．４６－２．３３（ｍ、３Ｈ）、２．３８（ｓ、３Ｈ） ２．２６（ｓ、３Ｈ）、１．１１（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）、０．９０（ｓ、９Ｈ）、０．０７（ｓ、３Ｈ）、０．０６（ｓ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ：（１００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ １７３．２７、１６７．９８、１６６．４６、１５９．５９、１５５．４２、１４３．２１、１３５．８０、１３１．８１、１３１．３３、１２９．６７、１２６．２１、１２３．１７、１１９．０１、１１４．２３、１１３．３６、７６．３５、５６．５４、５５．１７、５２．７３、４４．６５、３９．１５、３７．２６、２６．４２、１８．９７、１７．６８、１１．５０、１１．４０、－３．９５、－４．３８；ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３１Ｈ４５ＣｌＮ２Ｏ６Ｓｉ［Ｍ＋Ｈ］６０５．２８０８、実測値６０５．２８０１。
５．ユニットＣ／Ｄの特性評価
Figure 2022549971000055
図６Ｂに示されるように、１９および２０を市販の１５から合成した。すべてのスペクトルは、公開された文献に従った。８～１１
（Ｓ）－１－（（２－アセトアミドエチル）チオ）－４－メチル－１－オキソペンタン－２－イル（Ｒ）－３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－２－メチルプロパノエート（２１）。
ＤＭＦ（０．１Ｍ）中の１９の溶液に、ＥＤＣ ＨＣｌ（１．５当量）およびＨＯＢｔ（１．２当量）を添加し、反応物を３０分間撹拌した。触媒ＤＭＡＰ（０．０５当量）を添加する前に、ＮＡｃを添加し、１０分間撹拌した。反応物を１２時間撹拌し、水およびＥｔＯＡｃで希釈し、水層を抽出し（２×４０ｍＬ）、有機物を合わせ、飽和ＮＨ４Ｃｌ（２×１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。有機物を減圧下で除去し、残りの残留物をフラッシュクロマトグラフィーシステム（１～１０％メタノール／ＤＣＭ）で精製して、２１を白色の固体として得た。スペクトルは、公開された文献に従った。１２
（Ｓ）－１－（（２－アセトアミドエチル）チオ）－４－メチル－１－オキソペンタン－２－イル ３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－２，２－ジメチルプロパノエート（２２）。
ＤＭＦ（０．１Ｍ）中の２０の溶液に、ＥＤＣ ＨＣｌ（１．５当量）およびＨＯＢｔ（１．２当量）を添加し、反応物を３０分間撹拌した。触媒ＤＭＡＰ（０．０５当量）を添加する前に、ＮＡｃを添加し、１０分間撹拌した。反応物を１２時間撹拌し、水およびＥｔＯＡｃで希釈し、水層を抽出し（２×４０ｍＬ）、有機物を合わせ、飽和ＮＨ４Ｃｌ（２×１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。有機物を減圧下で除去し、残りの残留物を本明細書に開示されるフラッシュクロマトグラフィーシステム（１～１０％メタノール／ＤＣＭ）で精製して、２２を白色の固体として得た。スペクトルは、公開された文献に従った。１２
６．セコクリプトフィシン合成および類似体の特性評価
一般的なペプチドカップリング手順
１４ａ～ｍ（１当量）を、１，２ジクロロエタン（０．２Ｍ）中に懸濁し、水酸化トリメチルスズ（４当量）で処理し、８０℃で４時間加熱した。反応物を冷却し、ＤＣＭで希釈し、１Ｎ ＨＣｌ（２回）で洗浄した。粗酸を直接使用した。
同時に、２１または２２（１．１当量）を４Ｍ ＨＣｌ／ジオキサン（５ｍＬ）中に懸濁し、室温で１時間撹拌し、濃縮して、直接使用した。
１４ａ～ｍの酸をＤＣＭ中に懸濁し、０℃まで冷却し、ＨＡＴＵ（１．１当量）で処理した。２１または２２アミン塩をＤＣＭ中に懸濁し、ＤＩＰＥＡ（２．５当量）で処理し、０℃まで冷却し、混合物に添加した。反応物を一晩撹拌させ、室温まで温めた。混合物を半飽和重炭酸ナトリウムで希釈し、水層をＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出し、有機物を合わせ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、本明細書で指定されるように精製した。解析的分析に利用される場合は、ＨｙｄｒｏＲＰ Ｃ１８（２５０×１０．０ｍｍ、４ミクロン）で脱保護する前に、２０～８０％水／アセトニトリル勾配を３ｍＬ／分の流量で使用して、カップリング手順中に生成された任意のジアステレオマー除去するためにさらにＨＰＬＣ精製を行った。本明細書に開示されるフラッシュクロマトグラフィーシステムで精製した直後に、中間体を使用して半分取反応を行った。
一般的な脱保護手順．
粗カップリング生成物を、開いたポリプロピレンバイアル中のアセトニトリル（０．１Ｍ）中に懸濁した。ＴＬＣによってモニタリングされるように、これを３３％ＨＦ水溶液（２当量）で処理し、反応が完了するまで撹拌させた。反応物をＤＣＭで希釈し、水層は塩基性になるまで飽和ＮａＨＣＯ３をゆっくりと添加することによってクエンチした。次いで、水層をＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出し、有機物を合わせ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、本明細書で指定されるように精製した。ジアステレオマー比（ｄｒ）を、ＮＭＲによって見られる通りに報告する。
（Ｓ）－１－（（２－アセトアミドエチル）チオ）－４－メチル－１－オキソペンタン－２－イル（Ｒ）－３－（（Ｒ）－３－（３－クロロ－４－メトキシフェニル）－２－（（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）－５－ヒドロキシ－６－メチル－８－フェニルオクタ－２，７－ジエンアミド）プロパンアミド）－２－メチルプロパノエート（２３ａ）。
一般的なカップリング手順に従って反応を実行し、フラッシュクロマトグラフィーシステム（１～１０％メタノール／ＤＣＭ）で精製した。Ｒｆ＝０．５（５％メタノール／ＤＣＭ）。次に、これを、一般的な脱保護手順に従って脱保護し、フラッシュクロマトグラフィーシステム（２～１４％メタノール／ＤＣＭ）によって精製して、２３ａ（０．０５１ｇ、３つのステップにわたって収率４２％、１０：１ ｄｒ）を透明で無色の油として得た：Ｒｆ＝０．３５（１０％メタノール／ＤＣＭ）。１Ｈ ＮＭＲ：（６００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ７．３７（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．２７（ｔ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、２Ｈ）、７．２５（ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．１８（ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．１４（ｄｄ、Ｊ＝８．４、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９７（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．８１（ｄｔ、Ｊ＝１５．１、７．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．４１（ｄ、Ｊ＝１５．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．２３（ｄｄ、Ｊ＝１５．９、８．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．０１（ｄ、Ｊ＝１５．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．２１（ｄｄ、Ｊ＝９．６、４．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．５８（ｄｄ、Ｊ＝８．１、７．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．８３（ｓ、３Ｈ）、３．６５（ｄｔ、Ｊ＝８．７、４．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．４８（ｄｄ、Ｊ＝１３．５、６．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．３４－３．２７（ｍ、２Ｈ）、３．１９（ｄｄ、Ｊ＝１３．５、７．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．０６－２．９７（ｍ、３Ｈ）、２．８５（ｄｄ、Ｊ＝１３．７、８．１Ｈｚ、１Ｈ）、２．７０（ｈ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、１Ｈ）、２．４４－２．３５（ｍ、２Ｈ）、２．３５－２．２８（ｍ、１Ｈ）、１．９１（ｓ、３Ｈ）、１．８０－１．７４（ｍ、１Ｈ）、１．７４－１．６９（ｍ、１Ｈ）、１．６６－１．５９（ｍ、１Ｈ）、１．１５（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）、１．１０（ｄ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、３Ｈ）、０．９４（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）、０．９１（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ：（１５０ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） ２００．３４、１７５．０６、１７３．４９、１７３．４２、１６８．０７、１５５．４０、１４３．５１、１３９．０５、１３２．５０、１３２．０９、１３１．９１、１３１．５０、１２９．８４、１２９．４８、１２８．０５、１２７．１４、１２６．０８、１２３．２０、１１３．３５、７８．６３、７５．３４、５６．５７、５６．２４、４４．２１、４２．７３、４１．９５、４０．５７、３９．８５、３８．８２、３８．０７、２８．５８、２５．７４、２３．４８、２２．５４、２１．９７、１７．５３、１４．８７；ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３９Ｈ５２ＣｌＮ３Ｏ８Ｓ［Ｍ＋Ｈ］７５８．３２３６、実測値７５８．３２３８。
（Ｓ）－１－（（２－アセトアミドエチル）チオ）－４－メチル－１－オキソペンタン－２－イル（Ｒ）－３－（（Ｒ）－３－（３－クロロ－４－メトキシフェニル）－２－（（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）－５－ヒドロキシ－６－メチル－８－（ピリジン－２－イル）オクタ－２，７－ジエンアミド）プロパンアミド）－２－メチルプロパノエート（２３ｂ）。
一般的なカップリング手順に従って反応を実行し、フラッシュクロマトグラフィーシステム（１～１０％メタノール／ＤＣＭ）によって精製した。Ｒｆ＝０．６５（１０％メタノール／ＤＣＭ）。次いで、これを、一般的な脱保護手順に従って脱保護し、フラッシュクロマトグラフィーシステム（２～１５％メタノール／ＤＣＭ）によって精製して、２３ｂ（０．０２５ｇ、３つのステップにわたって収率３８％、７：１ ｄｒ）を透明で無色の油として得た：Ｒｆ＝０．２５（１０％メタノール／ＤＣＭ）；１Ｈ ＮＭＲ：（６００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ８．４４（ｄ、Ｊ＝４．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．７６（ｔｄ、Ｊ＝７．７、１．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．５１（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．２６（ｄ、Ｊ＝２．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．２５－７．２２（ｍ、１Ｈ）、７．１４（ｄｄ、Ｊ＝８．４、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９７（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．８１（ｄｔ、Ｊ＝１５．０、７．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．６７（ｄｄ、Ｊ＝１６．０、８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．５２（ｄ、Ｊ＝１６．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．０２（ｄ、Ｊ＝１５．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．２１（ｄｄ、Ｊ＝９．５、４．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．５８（ｄｄ、Ｊ＝８．１、６．９Ｈｚ、１Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．６８（ｄｔ、Ｊ＝８．７、４．７Ｈｚ、１Ｈ）、３．４８（ｄｄ、Ｊ＝１３．５、６．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．３３－３．３０（ｓ、２Ｈ）、３．２１（ｄｄ、Ｊ＝１３．５、７．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．０５－２．９９（ｍ、３Ｈ）、２．８５（ｄｄ、Ｊ＝１３．８、８．１Ｈｚ、１Ｈ）、２．７１（ｈ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、１Ｈ）、２．５１－２．４４（ｍ、１Ｈ）、２．４４－２．３７（ｍ、１Ｈ）、２．３７－２．２９（ｍ、１Ｈ）、１．９１（ｓ、３Ｈ）、１．８１－１．６９（ｍ、２Ｈ）、１．６７－１．５９（ｍ、１Ｈ）、１．１８（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）、１．１１（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）、０．９５（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）、０．９２（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ２００．３４、１７５．０９、１７３．４９、１７３．４２、１６８．０５、１５７．３０、１５５．４３、１４９．７１、１４３．２９、１３８．７４、１３８．６１、１３１．９２、１３１．５６、１３１．３５、１２９．８５、１２６．２７、１２３．３６、１２２．３２、１１３．４２、１１１．４３、７８．６７、７５．１２、５６．６１、５６．２５、４４．０８、４２．７５、４１．９７、４０．６０、３９．８７、３８．７５、３８．０９、２８．６１、２５．７６、２３．４６、２２．５４、２１．９９、１７．１０、１４．８６；ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３８Ｈ５１ＣｌＮ４Ｏ８Ｓ［Ｍ＋Ｈ］７５９．３１８９、実測値７５９．３１８４。
（Ｓ）－１－（（２－アセトアミドエチル）チオ）－４－メチル－１－オキソペンタン－２－イル（Ｒ）－３－（（Ｒ）－３－（３－クロロ－４－メトキシフェニル）－２－（（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）－５－ヒドロキシ－６－メチル－８－（ピリジン－３－イル）オクタ－２，７－ジエンアミド）プロパンアミド）－２－メチルプロパノエート（２３ｃ）。
一般的なカップリング手順に従って反応を実行し、フラッシュクロマトグラフィーシステム（１～１０％メタノール／ＤＣＭ）によって精製した。Ｒｆ＝０．６５（１０％メタノール／ＤＣＭ）。次いで、これを、一般的な脱保護手順に従って脱保護し、フラッシュクロマトグラフィーシステム（２～１５％メタノール／ＤＣＭ）によって精製して、最終生成物２３ｃ（０．０３７ｇ、３つのステップにわたって収率５１％、７：１ ｄｒ）を透明で無色の油として得た：Ｒｆ＝０．２５（１０％メタノール／ＤＣＭ）；１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ８．５２（ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．３６（ｄｄ、Ｊ＝４．９、１．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．８９（ｄｔ、Ｊ＝８．１、１．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．３７（ｄｄｄ、Ｊ＝８．０、４．９、０．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．２６（ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．１４（ｄｄ、Ｊ＝８．４、２．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．９７（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．８１（ｄｔ、Ｊ＝１５．２、７．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．４６（ｄ、Ｊ＝１６．１Ｈｚ、１Ｈ）、６．４１（ｄｄ、Ｊ＝１６．０、７．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．０２（ｄ、Ｊ＝１５．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．２１（ｄｄ、Ｊ＝９．５、４．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．５９（ｄｄ、Ｊ＝８．０、６．８Ｈｚ、１Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．６７（ｄｔ、Ｊ＝８．０、４．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．４８（ｄｄ、Ｊ＝１３．５、６．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．３３－３．３０（ｍ、２Ｈ） ３．２０（ｄｄ、Ｊ＝１３．５、６．９Ｈｚ、１Ｈ）、３．０４－３．００（ｍ、３Ｈ） ２．８５（ｄｄ、Ｊ＝１３．７、８．１Ｈｚ、１Ｈ） ２．７０（ｈ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、１Ｈ）、２．５１－２．３６（ｍ、２Ｈ）、２．３６－２．２８（ｍ、１Ｈ）、１．９１（ｓ、３Ｈ）、１．８３－１．６８（ｍ、２Ｈ）、１．６５－１．６１（ｍ、１Ｈ）、１．１７（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）、１．１０（ｄ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、３Ｈ）、０．９５（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）、０．９２（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ２００．３４、１７５．０８、１７３．４８、１７３．４２、１６８．０４、１５５．４２、１４８．２７、１４８．２２、１４３．３０、１３６．３４、１３５．５２、１３４．７９、１３１．９１、１３１．５３、１２９．８５、１２７．９５、１２６．１９、１２５．２４、１２３．２３、１１３．４１、７８．６６、７５．１６、５６．６０、５６．２４、４４．３３、４２．７５、４１．９７、４０．５９、３９．８６、３８．８７、３８．０８、２８．６０、２５．７６、２３．４７、２２．５４、２１．９９、１７．３４、１４．８６；ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３８Ｈ５１ＣｌＮ４Ｏ８Ｓ［Ｍ＋Ｈ］７５９．３１８９、実測値７５９．３１９２。
（Ｓ）－１－（（２－アセトアミドエチル）チオ）－４－メチル－１－オキソペンタン－２－イル（Ｒ）－３－（（Ｒ）－３－（３－クロロ－４－メトキシフェニル）－２－（（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）－５－ヒドロキシ－６－メチル－８－（ピリジン－４－イル）オクタ－２，７－ジエンアミド）プロパンアミド）－２－メチルプロパノエート（２３ｅ）。
一般的なカップリング手順に従って反応を実行し、フラッシュクロマトグラフィーシステム（１～１０％メタノール／ＤＣＭ）によって精製した。Ｒｆ＝０．６５（１０％メタノール／ＤＣＭ）。次いで、これを、一般的な脱保護手順に従って脱保護し、フラッシュクロマトグラフィーシステム（２～１５％メタノール／ＤＣＭ）によって精製して、最終生成物２３ｅ（０．０４８ｇ、３つのステップにわたって収率４９％、１１：１ ｄｒ）を透明で無色の油として得た：Ｒｆ＝０．２５（１０％メタノール／ＤＣＭ）；１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ８．４２（ｄ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．４０（ｄ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．２５（ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．１４（ｄｄ、Ｊ＝８．５、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９７（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．８０（ｄｔ、Ｊ＝１５．０、７．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．６１（ｄｄ、Ｊ＝１６．０、８．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．４４（ｄ、Ｊ＝１５．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．０１（ｄ、Ｊ＝１５．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．２１（ｄｄ、Ｊ＝９．５、４．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．５８（ｄｄ、Ｊ＝８．１、６．９Ｈｚ、１Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．６７（ｄｔ、Ｊ＝７．９、４．７Ｈｚ、１Ｈ）、３．４８（ｄｄ、Ｊ＝１３．５、６．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．３３－３．３０（ｍ、２Ｈ） ３．２０（ｄｄ、Ｊ＝１３．５、７．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．０４－３．００（ｍ、３Ｈ）、２．８５（ｄｄ、Ｊ＝１３．８、８．１Ｈｚ、１Ｈ）、２．７０（ｈ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、１Ｈ）、２．５１－２．４２（ｍ、１Ｈ）、２．４２－２．２５（ｍ、２Ｈ）、１．９１（ｓ、３Ｈ）、１．８２－１．６８（ｍ、２Ｈ）、１．６３（ｄｄｄ、Ｊ＝１３．１、８．１、４．０Ｈｚ、１Ｈ）、１．１７（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）、１．１０（ｄ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、３Ｈ）、０．９４（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）、０．９２（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ２００．３４、１７５．０８、１７３．４８、１７３．４２、１６８．０２、１５５．４３、１５０．２０、１４７．７３、１４３．１８、１３９．５０、１３１．９２、１３１．５３、１２９．８４、１２９．４２、１２６．２５、１２３．２４、１２２．３９、１１３．４２、７８．６７、７５．０３、５６．６１、５６．２３、４４．３０、４２．７５、４１．９７、４０．６０、３９．８７、３８．９０、３８．０９、２８．６１、２５．７６、２３．４６、２２．５４、２１．９９、１７．１９、１４．８６．；ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３８Ｈ５１ＣｌＮ４Ｏ８Ｓ［Ｍ＋Ｈ］７５９．３１８９、実測値７５９．３１８７。
（Ｓ）－１－（（２－アセトアミドエチル）チオ）－４－メチル－１－オキソペンタン－２－イル（Ｒ）－３－（（Ｒ）－３－（３－クロロ－４－メトキシフェニル）－２－（（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）－５－ヒドロキシ－６－メチル－８－（ピラジン－２－イル）オクタ－２，７－ジエンアミド）プロパンアミド）－２－メチルプロパノエート（２３ｇ）。
一般的なカップリング手順に従って反応を実行し、フラッシュクロマトグラフィーシステム（１～１０％メタノール／ＤＣＭ）によって精製した。Ｒｆ＝０．６５（１０％メタノール／ＤＣＭ）。次いで、これを、一般的な脱保護手順に従って脱保護し、フラッシュクロマトグラフィーシステム（２～１５％メタノール／ＤＣＭ）によって精製して、最終生成物２３ｇ（０．０２１ｇ、３つのステップにわたって収率２５％、９：１ ｄｒ）を透明で無色の油として得た：Ｒｆ＝０．２５（１０％メタノール／ＤＣＭ）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ８．６２（ｓ、１Ｈ）、８．５１（ｓ、１Ｈ）、８．３９（ｄ、Ｊ＝２．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．２６（ｄ、Ｊ＝２．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．１４（ｄｄ、Ｊ＝８．５、２．１Ｈｚ、１Ｈ）、６．９７（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．９３（ｄｄ、Ｊ＝１５．９、８．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．８１（ｄｔ、Ｊ＝１４．９、７．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．５７（ｄ、Ｊ＝１６．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．０２（ｄ、Ｊ＝１５．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．２１（ｄｄ、Ｊ＝９．４、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、４．５８（ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．６９（ｄｔ、Ｊ＝９．０、４．７Ｈｚ、１Ｈ）、３．４８（ｄｄ、Ｊ＝１３．４、６．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．３７－３．２４（ｍ、２Ｈ）、３．２０（ｄｄ、Ｊ＝１３．５、７．１Ｈｚ、１Ｈ）、３．０７－２．９７（ｍ、１Ｈ）、３．０３（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．８５（ｄｄ、Ｊ＝１３．７、８．２Ｈｚ、１Ｈ）、２．７０（ｈ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、１Ｈ）、２．５６－２．４２（ｍ、１Ｈ）、２．４１－２．２５（ｍ、２Ｈ） １．９１（ｓ、３Ｈ）、１．８２－１．６８（ｍ、２Ｈ）、１．６２（ｄｄｄ、Ｊ＝１３．１、８．１、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、１．１９（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）、１．１０（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、３Ｈ）、０．９５（ｄ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、３Ｈ）、０．９２（ｄ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１５１ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ２００．３４、１７５．０８、１７３．４７、１７３．４２、１６８．０３、１５５．４２、１５３．０９、１４５．３９、１４３．８９、１４３．４６、１４３．２０、１４１．３８、１３１．９１、１３１．５４、１２９．８６、１２８．２２、１２６．２８、１２３．２４、１１３．４２、７８．６７、７５．０１、５６．６２、５６．２４、４４．２１、４２．７５、４１．９７、４０．６０、３９．８６、３８．８０、３８．０９、２８．６１、２５．７６、２３．４６、２２．５４、２１．９９、１６．９９、１４．８６．ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３７Ｈ５０ＣｌＮ５Ｏ８Ｓ［Ｍ＋Ｈ］７６０．３１４１、実測値７６０．３１４３。
（Ｓ）－１－（（２－アセトアミドエチル）チオ）－４－メチル－１－オキソペンタン－２－イル（Ｒ）－３－（（Ｒ）－３－（３－クロロ－４－メトキシフェニル）－２－（（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）－５－ヒドロキシ－６－メチル－８－（１－メチル－１Ｈ－ピロゾール－５－イル）オクタ－２，７－ジエンアミド）プロパンアミド）－２－メチルプロパノエート（２３ｈ）。
一般的なカップリング手順に従って反応を実行し、フラッシュクロマトグラフィーシステム（１～１０％メタノール／ＤＣＭ）によって精製した。Ｒｆ＝０．６５（１０％メタノール／ＤＣＭ）。次いで、これを、一般的な脱保護手順に従って脱保護し、フラッシュクロマトグラフィーシステム（２～１５％メタノール／ＤＣＭ）によって精製して、最終生成物２３ｈ（０．０２２、３つのステップにわたって収率２９％、９：１ ｄｒ）を透明で無色の油として得た：Ｒｆ＝０．２５（１０％メタノール／ＤＣＭ）；１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ７．３４（ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．２５（ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．１４（ｄｄ、Ｊ＝８．４、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９７（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．８１（ｄｔ、Ｊ＝１５．０、７．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．４２（ｄ、Ｊ＝１５．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．３８（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、６．２５（ｄｄ、Ｊ＝１５．９、８．６Ｈｚ、１Ｈ）、６．０１（ｄｄ、Ｊ＝１５．４、１．５Ｈｚ、１Ｈ）、５．２１（ｄｄ、Ｊ＝９．５、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、４．５８（ｄｄ、Ｊ＝８．１、７．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．８２（ｓ、３Ｈ）、３．６５（ｄｔ、Ｊ＝８．０、４．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．４８（ｄｄ、Ｊ＝１３．５、６．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．３３－３．３０（ｍ、２Ｈ） ３．２０（ｄｄ、Ｊ＝１３．５、７．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．０３（ｔｄ、Ｊ＝６．６、１．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．０３－３．００（ｍ、１Ｈ） ２．８５（ｄｄ、Ｊ＝１３．８、８．１Ｈｚ、１Ｈ）、２．７０（ｈ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、１Ｈ）、２．５０－２．３６（ｍ、２Ｈ）、２．３６－２．２８（ｍ、１Ｈ）、１．９１（ｓ、３Ｈ）、１．８２－１．６８（ｍ、２Ｈ）、１．６３（ｄｄｄ、Ｊ＝１３．２、８．１、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、１．１５（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）、１．１０（ｄ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、３Ｈ）、０．９５（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、３Ｈ）、０．９２（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ：（１５０ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ２００．３４、１７５．０７、１７３．４７、１７３．４１、１６８．０３、１５５．４１、１４３．２５、１４２．８４、１３９．１０、１３７．９５、１３１．９０、１３１．５１、１２９．８４、１２６．２０、１２３．２１、１１８．４１、１１３．４０、１０３．５６、７８．６６、７５．００、５６．６０、５６．２４、４４．３４、４２．７４、４１．９６、４０．５９、３９．８６、３８．８６、３８．０９、２８．６０、２５．７５、２３．４７、２２．５４、２１．９９、１７．３１、１４．８７；ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３７Ｈ５２ＣｌＮ５Ｏ８Ｓ［Ｍ＋Ｈ］７６２．３２９８、実測値７６２．３２９５。
（Ｓ）－１－（（２－アセトアミドエチル）チオ）－４－メチル－１－オキソペンタン－２－イル（Ｒ）－３－（（Ｒ）－３－（３－クロロ－４－メトキシフェニル）－２－（（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）－５－ヒドロキシ－６－メチル－８－（１－メチル－１Ｈ－ピロゾール－３－イル）オクタ－２，７－ジエンアミド）プロパンアミド）－２－メチルプロパノエート（２３ｉ）。
一般的なカップリング手順に従って反応を実行し、フラッシュクロマトグラフィー（１～１０％メタノール／ＤＣＭ）によって精製した。Ｒｆ＝０．６５（１０％メタノール／ＤＣＭ）。次いで、これを、一般的な脱保護手順に従って脱保護し、フラッシュクロマトグラフィー（２～１５％メタノール／ＤＣＭ）によって精製して、最終生成物２３ｉ（０．０１９、３つのステップにわたって収率３４％、１１：１ ｄｒ）を透明で無色の油として得た：Ｒｆ＝０．２５（１０％メタノール／ＤＣＭ）；１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ７．４６（ｄ、Ｊ＝２．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．２６（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．１４（ｄｄ、Ｊ＝８．５、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９７（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．７９（ｄｔ、Ｊ＝１５．１、７．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．３４（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．３２（ｄ、Ｊ＝１６．６Ｈｚ、１Ｈ）、６．２１（ｄｄ、Ｊ＝１６．１、８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．０１（ｄ、Ｊ＝１５．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．２１（ｄｄ、Ｊ＝９．５、４．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．５８（ｄｄ、Ｊ＝８．１、７．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．８４（ｓ、６Ｈ）、３．６３（ｄｔ、Ｊ＝８．７、４．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．４８（ｄｄ、Ｊ＝１３．５、６．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．３３－３．２９（ｍ、２Ｈ）、３．２０（ｄｄ、Ｊ＝１３．５、７．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．０５－２．９９（ｍ、３Ｈ）、２．８５（ｄｄ、Ｊ＝１３．７、８．１Ｈｚ、１Ｈ）、２．７０（ｈ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、１Ｈ）、２．４１－２．３３（ｍ、２Ｈ）、２．３０（ｄｔ、Ｊ＝１５．４、７．８Ｈｚ、１Ｈ）、１．９１（ｓ、３Ｈ）、１．８２－１．６８（ｍ、２Ｈ）、１．６３（ｄｄｄ、Ｊ＝１３．２、８．１、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、１．１３（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）、１．１０（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）、０．９５（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）、０．９２（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ：（１５０ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ２００．３５、１７５．０８、１７３．５０、１７３．４３、１６８．０７、１５５．４２、１５２．１７、１４３．４４、１３４．４５、１３３．０２、１３１．９１、１３１．５４、１２９．８７、１２６．１７、１２３．６２、１２３．２３、１１３．３９、１０３．２７、７８．６５、７５．１９、５６．５９、５６．２７、４４．０２、４２．７５、４１．９７、４０．５９、３９．８６、３８．７２、３８．６０、３８．０９、２８．５９、２５．７６、２３．４７、２２．５４、２１．９８、１７．２４、１４．８６．ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３７Ｈ５２ＣｌＮ５Ｏ８Ｓ［Ｍ＋Ｈ］７６２．３２９８、実測値７６２．３２９５。
（Ｓ）－１－（（２－アセトアミドエチル）チオ）－４－メチル－１－オキソペンタン－２－イル（Ｒ）－３－（（Ｒ）－３－（３－クロロ－４－メトキシフェニル）－２－（（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）－５－ヒドロキシ－６－メチル－８－（１－メチル－１Ｈ－ピロゾール－４－イル）オクタ－２，７－ジエンアミド）プロパンアミド）－２－メチルプロパノエート（２３ｊ）。
一般的なカップリング手順に従って反応を実行し、フラッシュクロマトグラフィーシステム（１～１０％メタノール／ＤＣＭ）によって精製した。Ｒｆ＝０．６５（１０％メタノール／ＤＣＭ）。次いで、これを、一般的な脱保護手順に従って脱保護し、フラッシュクロマトグラフィーシステム（２～１５％メタノール／ＤＣＭ）によって精製して、最終生成物２３ｊ（０．０６５ｇ、３つのステップにわたって収率４８％１１：１ ｄｒ）を透明で無色の油として得た：Ｒｆ＝０．２５（１０％メタノール／ＤＣＭ）；１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ７．５４（ｓ、１Ｈ）、７．５０（ｓ、１Ｈ）、７．２５（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．１３（ｄｄ、Ｊ＝８．２、２．１Ｈｚ、１Ｈ）、６．９７（ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．８０（ｄｔ、Ｊ＝１５．０、７．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．２２（ｄ、Ｊ＝１６．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．００（ｄ、Ｊ＝１６．１、１Ｈ）、５．９４（ｄｄ、Ｊ＝１６．０、８．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．２１（ｄｄ、Ｊ＝９．５、４．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．５８（ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．６０（ｄｔ、Ｊ＝８．５、４．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．４８（ｄｄ、Ｊ＝１３．５、６．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．３３－３．３０（ｍ、２Ｈ）、３．２０（ｄｄ、Ｊ＝１３．５、６．９Ｈｚ、１Ｈ）、３．０３（ｔ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．０３－３．００（ｍ、１Ｈ）、２．８５（ｄｄ、Ｊ＝１３．７、８．２Ｈｚ、１Ｈ）、２．７０（ｈ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、１Ｈ）、２．４０－２．２３（ｍ、３Ｈ）、１．９１（ｓ、３Ｈ）、１．８１－１．６８（ｍ、２Ｈ）、１．６３（ｔｄ、Ｊ＝９．２、８．６、４．４Ｈｚ、１Ｈ）、１．１０（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、６Ｈ）、０．９５（ｄ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、３Ｈ）、０．９２（ｄ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ２００．３５、１７５．０８、１７３．４９、１７３．４２、１６８．１０、１５５．４３、１４３．５７、１３７．７２、１３１．９２、１３１．５４、１３０．８９、１２９．８４、１２９．３９、１２６．０５、１２３．２４、１２２．４７、１２１．６０、１１３．４２、７８．６７、７５．３９、５６．６１、５６．２４、４４．１４、４２．７５、４１．９７、４０．６０、３９．８６、３８．７１、３８．６５、３８．０８、２８．６０、２５．７６、２３．４６、２２．５４、２１．９９、１７．３８、１４．８６．ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３７Ｈ５２ＣｌＮ５Ｏ８Ｓ［Ｍ＋Ｈ］７６２．３２９８、実測値７６２．３２９４。
（Ｓ）－１－（（２－アセトアミドエチル）チオ）－４－メチル－１－オキソペンタン－２－イル（Ｒ）－３－（（Ｒ）－３－（３－クロロ－４－メトキシフェニル）－２－（（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）－５－ヒドロキシ－８－（１－イソプロピル－１Ｈ－ピロゾール－４－イル）－６－メチルオクタ－２，７－ジエンアミド）プロパンアミド）－２－メチルプロパノエート（２３ｌ）。
一般的なカップリング手順に従って反応を実行し、フラッシュクロマトグラフィー（１～１０％メタノール／ＤＣＭ）によって精製した。Ｒｆ＝０．６５（１０％メタノール／ＤＣＭ）。次いで、これを、一般的な脱保護手順に従って脱保護し、フラッシュクロマトグラフィー（２～１５％メタノール／ＤＣＭ）によって精製して、最終生成物２３ｌ（０．０２５、３つのステップにわたって収率３８％、９：１ ｄｒ）を透明で無色の油として得た：Ｒｆ＝０．２５（１０％メタノール／ＤＣＭ）；１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ７．６４（ｓ、１Ｈ）、７．５１（ｓ、１Ｈ）、７．２５（ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．１４（ｄｄ、Ｊ＝８．４、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９７（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．８０（ｄｔ、Ｊ＝１５．０、７．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．２３（ｄ、Ｊ＝１６．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．００（ｄ、Ｊ＝１５．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．９４（ｄｄ、Ｊ＝１６．０、８．５Ｈｚ、１Ｈ）、５．２１（ｄｄ、Ｊ＝９．５、４．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．５８（ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．４６（ｈｅｐｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．６１（ｄｔ、Ｊ＝８．６、４．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．４８（ｄｄ、Ｊ＝１３．５、６．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．３３－３．３０（ｍ、２Ｈ）、３．２０（ｄｄ、Ｊ＝１３．５、７．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．０３（ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、２Ｈ）、３．０３－３．００（ｍ、１Ｈ）、２．８５（ｄｄ、Ｊ＝１３．８、８．１Ｈｚ、１Ｈ）、２．７０（ｈ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、１Ｈ）、２．４３－２．２３（ｍ、３Ｈ）、１．９１（ｓ、３Ｈ）、１．８２－１．６９（ｍ、２Ｈ）、１．６３（ｄｄｄ、Ｊ＝１３．２、８．１、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、１．４７（ｄ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、６Ｈ）、１．１１（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）、１．１０（ｄ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、３Ｈ）、０．９５（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、３Ｈ）、０．９２（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ２００．３６、１７５．０８、１７３．４９、１７３．４４、１６８．１１、１５５．４２、１４３．５９、１３７．３０、１３１．９２、１３１．５２、１３０．６４、１２９．８５、１２６．０４（２）、１２３．２２、１２１．９０、１２１．８２、１１３．３９、７８．６５、７５．４１、５６．５９、５６．２４、５４．９９、４４．１５、４２．７４、４１．９７、４０．５９、３９．８６、３８．６７、３８．０７、２８．５９、２５．７６、２３．４８、２３．０８、２２．５４、２１．９７、１７．４４、１４．８６．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値Ｃ３９Ｈ５６ＣｌＮ５Ｏ８Ｓ［Ｍ＋Ｈ］７９０．３６１１、実測値７９０．３６０８。
（Ｓ）－１－（（２－アセトアミドエチル）チオ）－４－メチル－１－オキソペンタン－２－イル（Ｒ）－３－（（Ｒ）－３－（３－クロロ－４－メトキシフェニル）－２－（（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）－８－（３，５－ジメチルイソオキサゾール－４－イル）－５－ヒドロキシ－６－メチルオクタ－２，７－ジエンアミド）プロパンアミド）－２－メチルプロパノエート（２３ｍ）。
一般的なカップリング手順に従って反応を実行し、フラッシュクロマトグラフィー（１～１０％メタノール／ＤＣＭ）によって精製した。Ｒｆ＝０．６５（１０％メタノール／ＤＣＭ）。次いで、これを、一般的な脱保護手順に従って脱保護し、フラッシュクロマトグラフィー（２～１５％メタノール／ＤＣＭ）によって精製して、最終生成物２３ｍ（０．０１５ｇ、３つのステップにわたって収率４３％、８：１ ｄｒ）を透明で無色の油として得た：Ｒｆ＝０．２５（１０％メタノール／ＤＣＭ）；１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ７．２５（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．１４（ｄｄ、Ｊ＝８．４、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９７（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．８１（ｄｔ、Ｊ＝１５．０、７．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．１４（ｄ、Ｊ＝１６．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．０１（ｄ、Ｊ＝１５．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．９３（ｄｄ、Ｊ＝１６．３、８．５Ｈｚ、１Ｈ）、５．２１（ｄｄ、Ｊ＝９．５、４．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．５７（ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．６３（ｄｔ、Ｊ＝８．５、４．７Ｈｚ、１Ｈ）、３．４８（ｄｄ、Ｊ＝１３．５、６．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．３３－３．３０（ｍ、２Ｈ） ３．２０（ｄｄ、Ｊ＝１３．５、７．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．０３（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．０２－２．９９（ｍ、１Ｈ） ２．８５（ｄｄ、Ｊ＝１３．７、８．１Ｈｚ、１Ｈ）、２．７０（ｈ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、１Ｈ）、２．３９（ｓ、３Ｈ）、２．３８－２．３０（ｍ、３Ｈ）、２．２８（ｓ、３Ｈ）、１．９１（ｓ、３Ｈ）、１．８２－１．６７（ｍ、２Ｈ）、１．６３（ｄｄｄ、Ｊ＝１２．６、８．２、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、１．１４（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）、１．１０（ｄ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、３Ｈ）、０．９５（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、３Ｈ）、０．９２（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ２００．３６、１７５．０８、１７３．４９、１７３．４４、１６８．０４、１６６．５４、１５９．７３、１５５．４２、１４３．３５、１３５．５３、１３１．９０、１３１．５０、１２９．８５、１２６．１３、１２３．２２、１１９．１８、１１４．２５、１１３．３８、７８．６５、７５．０９、５６．５９、５６．２６、４４．８５、４２．７４、４１．９７、４０．５９、３９．８６、３８．９４、３８．０９、２８．５９、２５．７６、２３．４８、２２．５３、２１．９７、１７．６９、１４．８６、１１．４７、１１．２９．ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３８Ｈ５３ＣｌＮ４Ｏ９Ｓ［Ｍ＋Ｈ］７７７．３２９５、実測値７７７．３２９３。
７．ジェムジメチルセコクリプトフィシン
（Ｓ）－１－（（２－アセトアミドエチル）チオ）－４－メチル－１－オキソペンタン－２－イル ３－（（Ｒ）－３－（３－クロロ－４－メトキシフェニル）－２－（（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）－５－ヒドロキシ－６－メチル－８－（ピリジン－３－イル）オクタ－２，７－ジエンアミド）プロパンアミド）－２，２－ジメチルプロパノエート（２３ｄ）。
一般的なカップリング手順に従って反応を実行し、フラッシュクロマトグラフィーシステム（１～１０％メタノール／ＤＣＭ）によって精製した。Ｒｆ＝０．６５（１０％メタノール／ＤＣＭ）。次いで、これを、一般的な脱保護手順に従って脱保護し、フラッシュクロマトグラフィーシステム（２～１５％メタノール／ＤＣＭ）によって精製して、最終生成物２３ｄ（０．０１９ｇ、３つのステップにわたって収率５１％、１０：１ ｄｒ）を透明で無色の油として得た：Ｒｆ＝０．２５（１０％メタノール／ＤＣＭ）；１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ８．５２（ｄ、Ｊ＝２．３Ｈｚ、１Ｈ）、８．３５（ｄｄ、Ｊ＝４．８、１．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．８９（ｄｔ、Ｊ＝８．０、２．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．３７（ｄｄ、Ｊ＝８．０、４．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．２８（ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．１５（ｄｄ、Ｊ＝８．４、２．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．９６（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．８０（ｄｔ、Ｊ＝１５．０、７．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．４６（ｄ、Ｊ＝１６．１Ｈｚ、１Ｈ）、６．４０（ｄｄ、Ｊ＝１６．０、７．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．０１（ｄ、Ｊ＝１５．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．２０（ｄｄ、Ｊ＝９．５、３．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．６５（ｄｄ、Ｊ＝８．５、６．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．９２（ｐ、Ｊ＝６．２Ｈｚ、２Ｈ）、３．８３（ｓ、３Ｈ）、３．６６（ｄｔ、Ｊ＝８．７、４．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．４４－３．３６（ｍ、２Ｈ）、３．３３－３．２９（ｍ、２Ｈ）、３．１１－３．００（ｍ、３Ｈ）、２．８５（ｄｄ、Ｊ＝１３．９、８．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．４４（ｔｄ、Ｊ＝７．２、４．３Ｈｚ、１Ｈ）、２．３９（ｄｔ、Ｊ＝１３．０、６．４Ｈｚ、１Ｈ）、２．３２（ｄｔ、Ｊ＝１４．９、７．６Ｈｚ、１Ｈ）、１．９１（ｓ、３Ｈ）、１．８３－１．６９（ｍ、２Ｈ）、１．６４（ｄｄｄ、Ｊ＝１３．４、８．４、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、１．１４（ｓ、３Ｈ） １．１４（ｄ、３Ｈ）、１．１３（ｄ、３Ｈ）、０．９５（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）、０．９２（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ２００．５３、１７６．８６、１７３．７６、１７３．４２、１６８．１７、１５５．３８、１４８．２６、１４８．２１、１４３．３６、１３６．３５、１３５．５２、１３４．８０、１３１．８９、１３１．６９、１２９．８２、１２７．９６、１２６．１６、１２５．２５、１２３．２３、１１３．４１、７８．８１、７５．１５、６４．７４、５６．６１、５６．３９、４７．８９、４４．６９、４４．３１、４１．９４、３９．８６、３８．８８、３７．８６、２８．７３、２５．８７、２５．２６、２３．４９、２３．２６、２３．１８、２２．５９、２１．９５、１７．３５．ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３９Ｈ５３ＣｌＮ４Ｏ８Ｓ［Ｍ＋Ｈ］７７３．３３４５、実測値７７３．３３５３。
（Ｓ）－１－（（２－アセトアミドエチル）チオ）－４－メチル－１－オキソペンタン－２－イル ３－（（Ｒ）－３－（３－クロロ－４－メトキシフェニル）－２－（（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）－５－ヒドロキシ－６－メチル－８－（ピリジン－４－イル）オクタ－２，７－ジエンアミド）プロパンアミド）－２，２－ジメチルプロパノエート（２３ｆ）。
一般的なカップリング手順に従って反応を実行し、フラッシュクロマトグラフィーシステム（１～１０％メタノール／ＤＣＭ）によって精製した。Ｒｆ＝０．６５（１０％メタノール／ＤＣＭ）。次いで、これを、一般的な脱保護手順に従って脱保護し、フラッシュクロマトグラフィーシステム（２～１５％メタノール／ＤＣＭ）によって精製して、最終生成物２３ｆ（０．０３９ｇ、３つのステップにわたって収率４５％、１２：１ ｄｒ）を透明で無色の油として得た：Ｒｆ＝０．２５（１０％メタノール／ＤＣＭ）；１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ８．４１（ｄ、Ｊ＝６．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．４０（ｄ、Ｊ＝６．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．２７（ｄ、Ｊ＝１．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．１５（ｄｄ、Ｊ＝８．５、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９６（ｄｄ、Ｊ＝８．５、１．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．７９（ｄｔ、Ｊ＝１４．５、７．１Ｈｚ、１Ｈ）、６．６１（ｄｄ、Ｊ＝１６．０、８．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．４３（ｄ、Ｊ＝１６．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．００（ｄ、Ｊ＝１５．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．２０（ｄｄ、Ｊ＝９．５、３．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．６５（ｄｄ、Ｊ＝８．４、６．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．８３（ｓ、３Ｈ）、３．６６（ｄｔ、Ｊ＝８．５、４．４Ｈｚ、１Ｈ）、３．４０（ｄ、Ｊ＝１３．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．３６（ｄ、Ｊ＝１２．９Ｈｚ、１Ｈ）、３．３２－３．２９（ｍ、２Ｈ）、３．１２－２．９９（ｍ、３Ｈ）、２．８５（ｄｄ、Ｊ＝１４．０、８．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．５１－２．４２（ｍ、１Ｈ）、２．４１－２．３４（ｍ、１Ｈ）、２．３５－２．２７（ｍ、１Ｈ）、１．９０（ｓ、３Ｈ）、１．８１－１．６８（ｍ、２Ｈ）、１．６８－１．６０（ｍ、１Ｈ）、１．１６（ｓ、６Ｈ）、１．１５（ｄ、Ｊ＝５．１Ｈｚ、３Ｈ）、０．９５（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）、０．９２（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ２００．５３、１７６．８６、１７３．６７、１７３．４２、１６８．１４、１５５．３８、１５０．１５、１４７．７８、１４３．２３、１３９．５４、１３１．９０、１３１．６８、１２９．８１、１２９．４２、１２６．２１、１２３．２４、１２２．４１、１１３．４３、７８．８１、７５．０１、５６．６１、５６．３３、４７．７８、４４．６９、４４．２８、４１．９４、３９．８６、３８．９２、３７．８６、２８．７３、２５．８７、２３．４９、２３．２６、２３．１８、２２．５９、２１．９５、１７．２０．；ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３９Ｈ５３ＣｌＮ４Ｏ８Ｓ［Ｍ＋Ｈ］７７３．３３４５、実測値７７３．３３５３。
（Ｓ）－１－（（２－アセトアミドエチル）チオ）－４－メチル－１－オキソペンタン－２－イル ３－（（Ｒ）－３－（３－クロロ－４－メトキシフェニル）－２－（（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）－５－ヒドロキシ－６－メチル－８－（１－メチル－１Ｈ－ピロゾール－４－イル）オクタ－２，７－ジエンアミド）プロパンアミド）－２，２－ジメチルプロパノエート（２３ｋ）。
一般的なカップリング手順に従って反応を実行し、フラッシュクロマトグラフィーシステム（１～１０％メタノール／ＤＣＭ）によって精製した。Ｒｆ＝０．６５（１０％メタノール／ＤＣＭ）。次いで、これを、一般的な脱保護手順に従って脱保護し、フラッシュクロマトグラフィーシステム（２～１５％メタノール／ＤＣＭ）によって精製して、最終生成物２３ｋ（０．０６０、３つのステップにわたって収率４１％、１０：１ ｄｒ）を透明で無色の油として得た：Ｒｆ＝０．２５（１０％メタノール／ＤＣＭ）；１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ７．５５（ｓ、１Ｈ）、７．５０（ｓ、１Ｈ）、７．２８（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．１５（ｄｄ、Ｊ＝８．５、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９６（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．７９（ｄｔ、Ｊ＝１４．９、７．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．２１（ｄ、Ｊ＝１６．１Ｈｚ、１Ｈ）、５．９９（ｄ、Ｊ＝１５．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．９３（ｄｄ、Ｊ＝１６．０、８．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．２０（ｄｄ、Ｊ＝９．６、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、４．６５（ｄｄ、Ｊ＝８．６、６．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．８３（ｓ、３Ｈ）、３．６０（ｄｔ、Ｊ＝８．８、４．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．４０（ｄ、Ｊ＝１３．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．３５（ｄ、Ｊ＝１３．９Ｈｚ、１Ｈ）、３．３３－３．２９（ｍ、２Ｈ）、３．１２－２．９８（ｍ、３Ｈ）、２．８５（ｄｄ、Ｊ＝１３．９、８．６Ｈｚ、１Ｈ）、２．３２（ｍ、３Ｈ）、１．９１（ｓ、３Ｈ）、１．８３－１．６８（ｍ、２Ｈ）、１．６４（ｄｄｄ、Ｊ＝１２．８、８．４、３．８Ｈｚ、１Ｈ）、１．１６（ｓ、６Ｈ）、１．１０（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）、０．９６（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）、０．９２（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ２００．５４、１７６．８５、１７３．６８、１７３．４４、１６８．２２、１５５．３８、１４３．６２、１３７．７１、１３１．９０、１３１．６８、１３０．８６、１２９．８１、１２９．３９、１２６．００、１２３．２３、１２２．４７、１２１．６０、１１３．４０、７８．８０、７５．３７、５６．６０、５６．３５、４７．７７、４４．６８、４４．１２、４１．９４、３９．８６、３８．７２、３８．６７、３７．８５、２８．７３、２５．８７、２３．４９、２３．２５、２３．１７、２２．５９、２１．９４、１７．４０．ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３８Ｈ５４ＣｌＮ５Ｏ８Ｓ［Ｍ＋Ｈ］７７６．３４５４、実測値７７６．３４５７。
８．生体触媒クリプトフィシン合成および類似体の特性評価
一般的な手順分析スケール反応．
１．５ｍＬのエッペンドルフチューブに、ＤＭＳＯ中に懸濁したリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．２、１００ｍＭ、３００μＬ）、ＤＭＳＯ（５％）、およびセコ基質（５０μＭ）を添加した。次いで、これを、ＣｒｐＴＥ酵素（リン酸緩衝液中、ｐＨ＝７．２ １００ｍＭ、０．５μＭ）で処理し、３０℃で１２時間振盪した。反応が完了すると、水層を０．３００ｍＬの酢酸エチルで抽出し、１５０μＬを取り出し、ＨＰＬＣバイアルに直接乾燥させ、７０μＬのメタノール中に再懸濁した。これを、ＴＯＦ－ＭＳでの分析に使用した。
一般的な手順半分取スケール反応．
２５０ｍＬのエルレンマイヤーフラスコにＤＭＳＯ（５％）を添加し、基質（７５μＭ）をＤＭＳＯ中に懸濁した。ＣｒｐＴＥ酵素（０．５μＭ）で処理する前に、これをリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．２、１００ｍＭ）で希釈し、３０℃で２０分間温めた。アセトンで１：１ｖ／ｖに希釈する前に、反応物を１００ＲＰＭで、３０℃で１２時間振盪し、冷凍庫で－２０℃まで冷却した。沈殿したタンパク質をセライトを通して濾過し、アセトンで洗浄し、有機物を減圧下で除去し、残りの水層をＤＣＭ ３×２０ｍＬで抽出した。有機物を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。反応物を、３ｍＬ／分の流量で２０～８０％水／アセトニトリル勾配を使用するＨｙｄｒｏＲＰ Ｃ１８（２５０×１０．０ｍｍ、４ミクロン）を使用して精製した。
（３Ｓ，６Ｒ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）－１０－（３－クロロ－４－メトキシベンジル）－３－イソブチル－６－メチル－１６－（（Ｒ，Ｅ）－４－（ピリジン－２－イル）ブタ－３－エン－２－イル）－１，４－ジオキサ－８，１１－ジアザシクロヘキサデック－１３－エン－２，５，９，１２－テトラオン（２５ｂ）。
セミ分取スケール反応の一般的な手順に従って、反応を実行し、精製した。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ８．４６（ｄｄ、Ｊ＝５．０、０．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．７８（ｔｄ、Ｊ＝７．７、１．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．４８（ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．２８（ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．２６（ｄｄｄ、Ｊ＝７．５、５．０、１．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．１７（ｄｄ、Ｊ＝８．５、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９８（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．７１（ｄｄｄ、Ｊ＝１５．１、１１．１、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．６１－６．５７（ｍ、２Ｈ）、５．９３（ｄｄ、Ｊ＝１５．１、１．９Ｈｚ、１Ｈ）、５．０９（ｄｄｄ、Ｊ＝１１．３、６．９、１．９Ｈｚ、１Ｈ）、４．９３（ｄｄ、Ｊ＝９．９、３．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．５２（ｄｄ、Ｊ＝１１．３、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．５８（ｄｄ、Ｊ＝１３．８、３．３Ｈｚ、１Ｈ）、３．２７（ｄｄ、Ｊ＝１３．８、３．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．１８（ｄｄ、Ｊ＝１４．５、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、２．８０－２．７３（ｍ、２Ｈ）、２．７３－２．６５（ｍ、２Ｈ）、２．３９（ｄｔ、Ｊ＝１４．５、１１．２Ｈｚ、１Ｈ）、１．６９－１．５２（ｍ、２Ｈ）、１．３４（ｄｄｄ、Ｊ＝１４．１、８．８、３．６Ｈｚ、１Ｈ）、１．１８（ｄ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、６Ｈ）、０．７４（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）、０．７１（ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１５１ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ １７７．５３、１７４．０４、１７２．２２、１６８．３３、１５６．６０、１５５．３６、１４９．９９、１４３．４１、１３８．７４、１３７．５８、１３２．２３、１３２．１０、１３１．４９、１２９．２８、１２５．６２、１２３．７１、１２３．２７、１２２．８２、１１３．５０、７８．４８、７２．８６、５７．３５、５６．６０、４３．４６、４１．１９、４０．８８、３８．９８、３７．９９、３６．３６、５．６２、２３．２０、２１．６６、１７．５３、１５．０６．ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３４Ｈ４２ＣｌＮ３Ｏ７［Ｍ＋Ｈ］６４０．２７８４、実測値６４０．２７８８。
（３Ｓ，６Ｒ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）－１０－（３－クロロ－４－メトキシベンジル）－３－イソブチル－６－メチル－１６－（（Ｒ，Ｅ）－４－（ピリジン－３－イル）ブタ－３－エン－２－イル）－１，４－ジオキサ－８，１１－ジアザシクロヘキサデック－１３－エン－２，５，９，１２－テトラオン（２５ｃ）。
セミ分取スケール反応の一般的な手順に従って、反応を実行し、精製した。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ８．５３（ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．３８（ｄｄ、Ｊ＝４．８、１．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．９２（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．４０（ｄｄ、Ｊ＝８．０、４．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．２８（ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．１７（ｄｄ、Ｊ＝８．４、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９８（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．７１（ｄｄｄ、Ｊ＝１５．１、１１．２、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．５３（ｄ、Ｊ＝１５．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．３０（ｄｄ、Ｊ＝１５．９、８．９Ｈｚ、１Ｈ）、５．９３（ｄｄ、Ｊ＝１５．２、１．９Ｈｚ、１Ｈ）、５．０８（ｄｄｄ、Ｊ＝１１．２、７．２、１．９Ｈｚ、１Ｈ）、４．９３（ｄｄ、Ｊ＝９．９、３．７Ｈｚ、１Ｈ）、４．５２（ｄｄ、Ｊ＝１１．２、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．５８（ｄｄ、Ｊ＝１３．８、３．３Ｈｚ、１Ｈ）、３．２７（ｄｄ、Ｊ＝１３．８、３．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．１８（ｄｄ、Ｊ＝１４．５、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、２．８０－２．６３（ｍ、４Ｈ）、２．３７（ｄｔ、Ｊ＝１４．４、１１．１Ｈｚ、１Ｈ）、１．６９－１．５５（ｍ、２Ｈ）、１．３１（ｄｄｄ、Ｊ＝１４．１、８．９、３．７Ｈｚ、１Ｈ）、１．１９（ｄ、Ｊ＝３．５Ｈｚ、３Ｈ）、１．１８（ｄ、Ｊ＝２．９Ｈｚ、３Ｈ）、０．７４（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）、０．７０（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ １８０．３０、１７７．５３、１７４．０３、１７２．２１、１６８．３３、１５５．３６、１４８．７１、１４８．４０、１４３．４２、１３５．５５、１３４．９６、１３４．８６、１３２．２１、１３１．４９、１２９．２８、１２８．７７、１２５．６２、１２５．４０、１１３．４９、７８．４７、７２．８０、５７．３６、５６．６０、４３．７５、４１．１８、４０．９４、３８．９７、３７．８８、３６．３５、２５．６０、２３．１８、２１．６９、１７．５０、１５．０６．ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３４Ｈ４２ＣｌＮ３Ｏ７［Ｍ＋Ｈ］６４０．２７８４、実測値６４０．２７８９
（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）－１０－（３－クロロ－４－メトキシベンジル）－３－イソブチル－６，６－ジメチル－１６－（（Ｒ，Ｅ）－４－（ピリジン－３－イル）ブタ－３－エン－２－イル）－１，４－ジオキサ－８，１１－ジアザシクロヘキサデック－１３－エン－２，５，９，１２－テトラオン（２５ｄ）。
セミ分取スケール反応の一般的な手順に従って、反応を実行し、精製した。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ８．５３（ｓ、１Ｈ）、８．３８（ｄ、Ｊ＝４．７Ｈｚ、１Ｈ）、７．９２（ｄｔ、Ｊ＝８．０、１．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．４０（ｄｄ、Ｊ＝８．０、４．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．２８（ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．１７（ｄｄ、Ｊ＝８．４、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９８（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．７２（ｄｄｄ、Ｊ＝１５．２、１１．２、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．５３（ｄ、Ｊ＝１５．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．３０（ｄｄ、Ｊ＝１６．０、８．９Ｈｚ、１Ｈ）、５．９２（ｄｄ、Ｊ＝１５．１、１．９Ｈｚ、１Ｈ）、５．０７（ｄｄｄ、Ｊ＝１１．１、７．２、１．８Ｈｚ、２Ｈ）、４．９６（ｄｄ、Ｊ＝９．９、３．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．５１（ｄｄ、Ｊ＝１１．３、３．８Ｈｚ、１Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．４６（ｄ、Ｊ＝１３．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．１８（ｄｄ、Ｊ＝１４．５、３．８Ｈｚ、１Ｈ）、３．０８（ｄ、Ｊ＝１３．７Ｈｚ、１Ｈ）、２．７４（ｄｄ、Ｊ＝１４．５、１１．４Ｈｚ、１Ｈ）、２．７４－２．６２（ｍ、２Ｈ）、２．３６（ｄｔ、Ｊ＝１４．４、１１．２Ｈｚ、１Ｈ）、１．６６－１．５５（ｍ、２Ｈ）、１．３７－１．２６（ｍ、３Ｈ）、１．２０（ｓ、３Ｈ）、１．１８（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）、１．１６（ｓ、３Ｈ）、０．７４（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、３Ｈ）、０．７０（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ １８０．０３、１７８．９４、１７３．６８、１７２．０１、１６８．２２、１５５．３７、１４８．７１、１４８．４０、１４３．６３、１３５．５５、１３４．８５、１３２．１７、１３１．４６、１２９．２６、１２８．７８、１２５．４３、１２３．２８、１１３．５０、７８．４３、７２．５８、５７．４８、５６．６０、４７．３９、４４．０２、４３．７５、４０．９２、３７．９２、３６．４８、３１．６４、２５．８５、２３．３２、２３．２９、２３．２２、２１．６５、１７．４９．ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３５Ｈ４４ＣｌＮ３Ｏ７［Ｍ＋Ｈ］６５４．２９４１、実測値６５４．２９４０。
（３Ｓ，６Ｒ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）－１０－（３－クロロ－４－メトキシベンジル）－３－イソブチル－６－メチル－１６－（（Ｒ，Ｅ）－４－（ピリジン－４－イル）ブタン－３－エン－２－イル）－１，４－ジオキサ－８，１１－ジアザシクロヘキサデック－１３－エン－２，５，９，１２－テトラオン（２５ｅ）。
セミ分取スケール反応の一般的な手順に従って、反応を実行し、精製した。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ８．４３（ｄ、Ｊ＝６．２Ｈｚ、２Ｈ）、７．４２（ｄ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、２Ｈ）、７．２７（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．１５（ｄｄ、Ｊ＝８．５、２．１Ｈｚ、１Ｈ）、６．９６（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．６９（ｄｄｄ、Ｊ＝１５．１、１１．１、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．５０－６．４７（ｍ、２Ｈ）、５．９１（ｄｄ、Ｊ＝１５．２、１．８Ｈｚ、１Ｈ）、５．０８（ｄｄ、Ｊ＝１０．７、８．３Ｈｚ、１Ｈ）、４．９０（ｄｄ、Ｊ＝９．９、３．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．５１（ｄｄ、Ｊ＝１１．２、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、３．８２（ｓ、３Ｈ）、３．５６（ｄｄ、Ｊ＝１３．８、３．３Ｈｚ、１Ｈ）、３．２５（ｄｄ、Ｊ＝１３．８、２．９Ｈｚ、１Ｈ）、３．１６（ｄｄ、Ｊ＝１４．５、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、２．７７－２．６２（ｍ、４Ｈ）、２．３４（ｄｔ、Ｊ＝１４．７、１１．２Ｈｚ、１Ｈ）、１．６７－１．５１（ｍ、２Ｈ）、１．２８（ｄｄｄ、Ｊ＝１２．９、８．７、３．５Ｈｚ、１Ｈ）、１．１７（ｄ、Ｊ＝２．６Ｈｚ、３Ｈ）、１．１６（ｄ、Ｊ＝２．０Ｈｚ、３Ｈ）、０．７２（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、３Ｈ）、０．６８（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ １７７．５５、１７４．０２、１７２．１７、１６８．３１、１５５．３６、１５０．４２、１４７．１２、１４３．３３、１３８．６３、１３２．２１、１３１．４９、１３０．２３、１２９．２８、１２５．６６、１２３．２７、１２２．４９、１１３．４９、７８．３５、７２．７８、５７．３６、５６．６０、４３．６７、４１．１７、４０．９１、３８．９６、３７．８８、３６．３５、２５．６０、２３．１５、２１．６６、１７．３５、１５．０６．ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３４Ｈ４２ＣｌＮ３Ｏ７［Ｍ＋Ｈ］６４０．２７８４、実測値６４０．２７８７。
（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）－１０－（３－クロロ－４－メトキシベンジル）－３－イソブチル－６，６－ジメチル－１６－（（Ｒ，Ｅ）－４－（ピリジン－４－イル）ブタ－３－エン－２－イル）－１，４－ジオキサ－８，１１－ジアザシクロヘキサデック－１３－エン－２，５，９，１２－テトラオン（２５ｆ）。
セミ分取スケール反応の一般的な手順に従って、反応を実行し、精製した。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ８．４５（ｄ、Ｊ＝５．７Ｈｚ、２Ｈ）、７．４４（ｄ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、２Ｈ）、７．２８（ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．１７（ｄｄ、Ｊ＝８．４、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９８（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．７２（ｄｄｄ、Ｊ＝１５．１、１１．２、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．５１（ｓ、１Ｈ）、６．５０（ｄ、Ｊ＝４．６Ｈｚ、１Ｈ）、５．９２（ｄｄ、Ｊ＝１５．１、１．９Ｈｚ、１Ｈ）、５．０９（ｄｄｄ、Ｊ＝１１．３、７．２、１．９Ｈｚ、１Ｈ）、４．９５（ｄｄ、Ｊ＝９．９、３．３Ｈｚ、１Ｈ）、４．５１（ｄｄ、Ｊ＝１１．３、３．７Ｈｚ、１Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．４６（ｄ、Ｊ＝１３．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．１８（ｄｄ、Ｊ＝１４．６、３．８Ｈｚ、１Ｈ）、３．０８（ｄ、Ｊ＝１３．６Ｈｚ、１Ｈ）、２．７４（ｄｄ、Ｊ＝１４．５、１１．３Ｈｚ、１Ｈ）、２．７４－２．６６（ｍ、２Ｈ）、２．３５（ｄｔ、Ｊ＝１４．５、１１．２Ｈｚ、１Ｈ）、１．６７－１．５４（ｍ、２Ｈ）、１．３７－１．２４（ｍ、１Ｈ）、１．１９（ｓ、３Ｈ）、１．１８（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）、１．１６（ｓ、３Ｈ）、０．７４（ｄ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、３Ｈ）、０．７１（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ １７７．５９、１７４．０５、１７２．３２、１６８．３６、１５５．３４、１４３．６３、１３７．８６、１３２．２１、１３１．４８、１３０．２６、１２９．６３、１２９．２８、１２５．５０、１２３．２４、１２２．４６、１２１．９８、１１３．４６、７８．６８、７２．９１、５７．３７、５６．５８、４３．６８、４１．１８、４０．８７、３８．９５、３８．７５、３７．８４、３６．３６、２５．６４、２３．１８、２１．６７、１７．７５、１５．０７．ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３５Ｈ４４ＣｌＮ３Ｏ７［Ｍ＋Ｈ］６５４．２９４１、実測値６５４．２９４７。
（３Ｓ，６Ｒ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）－１０－（３－クロロ－４－メトキシベンジル）－３－イソブチル－６－メチル－１６－（（Ｒ，Ｅ）－４－（ピラジン－２－イル）ブタ－３－エン－２－イル）－１，４－ジオキサ－８，１１－ジアザシクロヘキサデック－１３－エン－２，５，９，１２－テトラオン（２５ｇ）。
セミ分取スケール反応の一般的な手順に従って、反応を実行し、精製した。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ８．６１（ｄ、Ｊ＝１．５Ｈｚ、１Ｈ）、８．５４（ｄｄ、Ｊ＝２．６、１．５Ｈｚ、１Ｈ）、８．４２（ｄ、Ｊ＝２．６Ｈｚ １Ｈ）、７．２８（ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．１７（ｄｄ、Ｊ＝８．４、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９８（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．８４（ｄｄ、Ｊ＝１５．７、８．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．７１（ｄｄｄ、Ｊ＝１５．２、１１．２、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．６４（ｄ、Ｊ＝１５．７Ｈｚ、１Ｈ）、５．９３（ｄｄ、Ｊ＝１５．１、１．９Ｈｚ、１Ｈ）、５．１１（ｄｄｄ、Ｊ＝１１．３、６．８、２．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．９４（ｄｄ、Ｊ＝９．７、３．７Ｈｚ、１Ｈ）、４．５３（ｄｄ、Ｊ＝１１．２、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．５８（ｄｄ、Ｊ＝１３．８、３．４Ｈｚ、１Ｈ）、３．２７（ｄｄ、Ｊ＝１３．７、３．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．１８（ｄｄ、Ｊ＝１４．５、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、２．８１－２．７２（ｍ、３Ｈ）、２．６９（ｄｄｔ、Ｊ＝１４．２、３．７、１．９Ｈｚ、１Ｈ）、２．３８（ｄｔ、Ｊ＝１４．６、１１．２Ｈｚ、１Ｈ）、１．７０－１．５７（ｍ、２Ｈ）、１．３６（ｄｄｄ、Ｊ＝１４．１、８．７、３．７Ｈｚ、１Ｈ）、１．１９（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）、１．１９（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、３Ｈ）、０．７６（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）、０．７３（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ １７７．５３、１７４．０３、１７２．１８、１６８．３２、１５５．３６、１５２．５２、１４５．６９、１４４．１５、１４３．９２、１４３．３３、１４０．１５、１３２．２２、１３１．４８、１２９．２８、１２８．８３、１２５．６５、１２３．２７、１１３．５０、７８．４５、７２．８３、５７．３５、５６．６０、４３．３７、４１．１９、４０．９１、３８．９８、３８．０３、３６．３５、２５．６５、２３．２３、２１．７４、１７．３７、１５．０７．ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値［Ｍ＋Ｈ］６４１．２７３７、実測値６４１．２７４２。
（３Ｓ，６Ｒ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）－１０－（３－クロロ－４－メトキシベンジル）－３－イソブチル－６－メチル－１６－（（Ｒ，Ｅ）－４－（１－メチル－１Ｈ－ピロゾール－５－イル）ブタ－３－エン－２－イル）－１，４－ジオキサ－８，１１－ジアザシクロヘキサデック－１３－エン－２，５，９，１２－テトラオン（２５ｈ）。
セミ分取スケール反応の一般的な手順に従って、反応を実行し、精製した。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ７．３６（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．２８（ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．１７（ｄｄ、Ｊ＝８．５、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９８（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．７１（ｄｄｄ、Ｊ＝１５．１、１１．２、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．５２（ｄ、Ｊ＝１５．８Ｈｚ、１Ｈ）、６．４２（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、６．１４（ｄｄ、Ｊ＝１５．８、９．０Ｈｚ、１Ｈ）、５．９３（ｄｄ、Ｊ＝１５．１、１．９Ｈｚ、１Ｈ）、５．０７（ｄｄｄ、Ｊ＝１１．３、６．９、１．９Ｈｚ、１Ｈ）、４．９３（ｄｄ、Ｊ＝９．８、３．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．５２（ｄｄ、Ｊ＝１１．３、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、３．８４（ｓ、６Ｈ）、３．５９（ｄｄ、Ｊ＝１３．８、３．３Ｈｚ、１Ｈ）、３．２７（ｄｄ、Ｊ＝１３．８、３．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．１８（ｄｄ、Ｊ＝１４．５、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、２．７９－２．７３（ｍ、２Ｈ）、２．７３－２．６２（ｍ、２Ｈ）、２．３５（ｄｔ、Ｊ＝１４．６、１１．２Ｈｚ、１Ｈ）、１．７１－１．５７（ｍ、２Ｈ）、１．３５（ｄｄｄ、Ｊ＝１４．０、８．６、３．５Ｈｚ、１Ｈ）、１．１９（ｄ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、３Ｈ）、１．１７（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）、０．７７（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、６Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ：（１５０ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ １７７．５８、１７４．０４、１７２．２２、１６８．３２、１５５．３５、１４３．４０、１４２．２９、１３９．２７、１３６．８１、１３２．２０、１３１．４８、１２９．２８、１２５．６１、１２３．２４、１１９．１８、１１３．４６、１０３．６８、７８．３９、７２．８４、５７．３９、５６．５８、４３．６８、４１．１６、４０．９６、３８．９６、３７．９６、３６．５１、３６．３６、２５．６９、２３．２５、２１．７６、１７．５３、１５．０８．ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３３Ｈ４３ＣｌＮ４Ｏ７［Ｍ＋Ｈ］６４３．２８９３、実測値６４３．２８９０。
（３Ｓ，６Ｒ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）－１０－（３－クロロ－４－メトキシベンジル）－３－イソブチル－６－メチル－１６－（（Ｒ，Ｅ）－４－（１－メチル－１Ｈ－ピロゾール－３－イル）ブタ－３－エン－２－イル）－１，４－ジオキサ－８，１１－ジアザシクロヘキサデック－１３－エン－２，５，９，１２－テトラオン（２５ｉ）。
セミ分取スケール反応の一般的な手順に従って、反応を実行し、精製した。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ７．４７（ｄ、Ｊ＝２．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．２６（ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．１５（ｄｄ、Ｊ＝８．４、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９６（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．６８（ｄｄｄ、Ｊ＝１５．１、１１．１、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．３６（ｄ、Ｊ＝１６．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．３３（ｄ、Ｊ＝２．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．０５（ｄｄ、Ｊ＝１６．０、９．０Ｈｚ、１Ｈ）、５．９０（ｄｄ、Ｊ＝１５．２、１．９Ｈｚ、１Ｈ）、５．００（ｄｄｄ、Ｊ＝１１．３、７．１、２．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．９０（ｄｄ、Ｊ＝１０．０、３．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．５０（ｄｄ、Ｊ＝１１．２、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、３．５６（ｄｄ、Ｊ＝１３．８、３．３Ｈｚ、１Ｈ）、３．２５（ｄｄ、Ｊ＝１３．８、３．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．１６（ｄｄ、Ｊ＝１４．５、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、２．７７－２．７１（ｍ、２Ｈ）、２．６５（ｄｄｔ、Ｊ＝１４．５、４．１、２．１Ｈｚ、１Ｈ）、２．６１－２．５１（ｍ、１Ｈ）、２．３４（ｄｔ、Ｊ＝１４．６、１１．２Ｈｚ、１Ｈ）、１．６８－１．６１（ｍ、１Ｈ）、１．５７（ｄｄｄ、Ｊ＝１４．８、１０．０、５．０Ｈｚ、１Ｈ）、１．３５（ｄｄｄ、Ｊ＝１４．２、９．０、３．６Ｈｚ、１Ｈ）、１．１７（ｄ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、３Ｈ）、１．１２（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）、０．７６（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）、０．７４（ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ １７７．５６、１７４．０５、１７２．２８、１６８．３５、１５５．３５、１５１．５２、１４３．５２、１３３．５８、１３３．１５、１３２．２３、１３１．４９、１２９．２８、１２５．５７、１２４．５２、１２３．２６、１１３．４９、１０３．６４、７８．５２、７２．９３、５７．３６、５６．６０、４３．５７、４１．１９、４０．８３、３８．９７、３８．６５、３７．８９、３６．３６、２５．６８、２３．１６、２１．６２、１７．６１、１５．０６．ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３５Ｈ４７ＣｌＮ４Ｏ７［Ｍ＋Ｈ］６７１．３２０６、実測値６７１．３０２５。
（３Ｓ，６Ｒ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）－１０－（３－クロロ－４－メトキシベンジル）－３－イソブチル－６－メチル－１６－（（Ｒ，Ｅ）－４－（１－メチル－１Ｈ－ピロゾール－４－イル）ブタ－３－エン－２－イル）－１，４－ジオキサ－８，１１－ジアザシクロヘキサデック－１３－エン－２，５，９，１２－テトラオン（２５ｊ）。
セミ分取スケール反応の一般的な手順に従って、反応を実行し、精製した。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ７．６１（ｓ、１Ｈ）、７．５１（ｓ、１Ｈ）、７．２８（ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．１７（ｄｄ、Ｊ＝８．４、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９８（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．７０（ｄｄｄ、Ｊ＝１５．２、１１．２、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．２７（ｄ、Ｊ＝１５．９Ｈｚ、１Ｈ）、５．９２（ｄｄ、Ｊ＝１５．２、１．９Ｈｚ、１Ｈ）、５．８０（ｄｄ、Ｊ＝１５．９、８．９Ｈｚ、１Ｈ）、４．９９（ｄｄｄ、Ｊ＝１１．３、７．１、１．９Ｈｚ、１Ｈ）、４．９２（ｄｄ、Ｊ＝１０．０、３．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．５２（ｄｄ、Ｊ＝１１．３、３．８Ｈｚ、１Ｈ）、３．８４（ｄ、Ｊ＝１．８Ｈｚ、６Ｈ）、３．５８（ｄｄ、Ｊ＝１３．８、３．３Ｈｚ、１Ｈ）、３．２７（ｄｄ、Ｊ＝１３．８、２．９Ｈｚ、１Ｈ）、３．１８（ｄｄ、Ｊ＝１４．５、３．８Ｈｚ、１Ｈ）、２．８１－２．７０（ｍ、２Ｈ）、２．６９－２．６０（ｍ、１Ｈ）、２．５０（ｐ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、１Ｈ）、２．３３（ｄｔ、Ｊ＝１４．５、１１．２Ｈｚ、１Ｈ）、１．７１－１．５６（ｍ、２Ｈ）、１．３８（ｄｄｄ、Ｊ＝１３．２、９．０、３．６Ｈｚ、１Ｈ）、１．１８（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、３Ｈ）、１．１１（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）、０．７８（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）、０．７６（ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ １７７．５９、１７４．０５、１７２．３２、１６８．３６、１５５．３４、１４３．６３、１３７．８６、１３２．２１、１３１．４８、１３０．２６、１２９．６３、１２９．２８、１２５．５０、１２３．２４、１２２．４６、１２１．９８、１１３．４６、７８．６８、７２．９１、５７．３７、５６．５８、４３．６８、４１．１８、４０．８７、３８．９５、３８．７５、３７．８４、３６．３６、２５．６４、２３．１８、２１．６７、１７．７５、１５．０７．ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３３Ｈ４３ＣｌＮ４Ｏ７［Ｍ＋Ｈ］６４３．２８９３、実測値６４３．２８９０。
（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）－１０－（３－クロロ－４－メトキシベンジル）－３－イソブチル－６，６－ジメチル－１６－（（Ｒ，Ｅ）－４－（１－メチル－１Ｈ－ピロゾール－４－イル）ブタ－３－エン－２－イル）－１，４－ジオキサ－８，１１－ジアザシクロヘキサデック－１３－エン－２，５，９，１２－テトラオン。
セミ分取スケール反応の一般的な手順に従って、反応を実行し、精製した。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） ７．６０（ｓ、１Ｈ）、７．５１（ｓ、１Ｈ）、７．２７（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．１６（ｄｄ、Ｊ＝８．５、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９７（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．７０（ｄｄｄ、Ｊ＝１５．２、１１．２、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．２７（ｄ、Ｊ＝１５．９Ｈｚ、１Ｈ）、５．９０（ｄｄ、Ｊ＝１５．１、１．９Ｈｚ、１Ｈ）、５．７９（ｄｄ、Ｊ＝１５．９、８．９Ｈｚ、１Ｈ）、４．９７（ｄｄｄ、Ｊ＝１１．３、７．１、１．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．９４（ｄｄ、Ｊ＝９．９、３．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．５０（ｄｄ、Ｊ＝１１．４、３．７Ｈｚ、１Ｈ）、３．８３（ｓ、３Ｈ）、３．８３（ｓ、３Ｈ）、３．４５（ｄ、Ｊ＝１３．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．１７（ｄｄ、Ｊ＝１４．５、３．７Ｈｚ、１Ｈ）、３．０７（ｄ、Ｊ＝１３．６Ｈｚ、１Ｈ）、２．７３（ｄｄ、Ｊ＝１４．５、１１．４Ｈｚ、１Ｈ）、２．６５（ｄｔ、Ｊ＝１４．７、２．４Ｈｚ、１Ｈ）、２．５０（ｈ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、２．３２（ｄｔ、Ｊ＝１４．４、１１．２Ｈｚ、１Ｈ）、１．６８－１．５７（ｍ、２Ｈ）、１．４３－１．３６（ｍ、１Ｈ）、１．１９（ｓ、３Ｈ）、１．１５（ｓ、３Ｈ）、１．１１（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）、０．７７（ｔ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、６Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ １７８．９７、１７３．７０、１７２．１２、１６８．２５、１５５．３７、１４３．８３、１３７．８６、１３２．１７、１３１．４６、１３０．２６、１２９．６３、１２９．２６、１２５．３３、１２３．２７、１２２．４８、１２１．９８、１１３．４９、７８．６５、７２．６９、５７．４７、５６．５９、４７．４０、４４．０１、４３．６８、４０．８５、３８．７５、３７．８８、３６．４９、２５．９０、２３．３２、２３．２８、２３．２０、２１．６４、１７．７４．ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３４Ｈ４５ＣｌＮ４Ｏ７［Ｍ＋Ｈ］６５６．２９７７、実測値６５６．２９７３。
（３Ｓ，６Ｒ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）－１０－（３－クロロ－４－メトキシベンジル）－３－イソブチル－１６－（（Ｒ，Ｅ）－４－（１－イソプロピル－１Ｈ－ピロゾール－４－イル）ブタ－３－エン－２－イル）－６－メチル－１，４－ジオキサ－８，１１－ジアザシクロヘキサデック－１３－エン－２，５，９，１２－テトラオン（２５ｌ）。
セミ分取スケール反応の一般的な手順に従って、反応を実行し、精製した。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ７．７０（ｓ、１Ｈ）、７．５３（ｓ、１Ｈ）、７．２８（ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．１７（ｄｄ、Ｊ＝８．４、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９８（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．７０（ｄｄｄ、Ｊ＝１５．１、１１．２、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．２８（ｄ、Ｊ＝１５．８Ｈｚ、１Ｈ）、５．９２（ｄｄ、Ｊ＝１５．２、１．９Ｈｚ、１Ｈ）、５．７９（ｄｄ、Ｊ＝１５．９、８．９Ｈｚ、１Ｈ）、４．９８（ｄｄｄ、Ｊ＝１１．２、７．５、２．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．９１（ｄｄ、Ｊ＝１０．０、３．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．５２（ｄｄ、Ｊ＝１１．２、３．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．４７（ｐ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、１Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．５８（ｄｄ、Ｊ＝１３．８、３．３Ｈｚ、１Ｈ）、３．２７（ｄｄ、Ｊ＝１３．７、３．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．１８（ｄｄ、Ｊ＝１４．５、３．８Ｈｚ、１Ｈ）、２．７９－２．７１（ｍ、２Ｈ）、２．７１－２．６３（ｍ、１Ｈ）、２．５０（ｈ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、２．３３（ｄｔ、Ｊ＝１４．５、１１．２Ｈｚ、１Ｈ）、１．７２－１．５４（ｍ、２Ｈ）、１．４６（ｄ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、６Ｈ）、１．３７（ｄｄｄ、Ｊ＝１４．２、９．０、３．６Ｈｚ、１Ｈ）、１．１８（ｄ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、３Ｈ）、１．１２（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）、０．７７（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）、０．７４（ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ １７７．６０、１７４．０５、１７２．３３、１６８．３７、１５５．３５、１４３．６４、１３７．４０、１３２．２１、１３１．４８、１３０．１２、１２９．２８、１２６．３４、１２５．５１、１２３．２５、１２２．６７、１２１．３８、１１３．４６、７８．６７、７２．９３、５７．３８、５６．５９、５５．０７、４３．８０、４１．１８、４０．８７、３８．９６、３７．８５、３６．３７、２５．６４、２３．３１、２３．０９、２１．７０、１７．７９、１５．０７．ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３５Ｈ４７ＣｌＮ４Ｏ７［Ｍ＋Ｈ］６７１．３２０６、実測値６７１．３０２５。
（３Ｓ，６Ｒ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）－１０－（３－クロロ－４－メトキシベンジル）－１６－（（Ｒ，Ｅ）－４－（３，５－ジメチルイソオキサゾール－４－イル）ブタ－３－エン－２－イル）－３－イソブチル－６－メチル－１，４－ジオキサ－８，１１－ジアザシクロヘキサデック－１３－エン－２，５，９，１２－テトラオン（２５ｍ）。
セミ分取スケール反応の一般的な手順に従って、反応を実行し、精製した。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ ７．２８（ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．１７（ｄｄ、Ｊ＝８．４、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９８（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．６９（ｄｄｄ、Ｊ＝１５．１、１１．１、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．２３（ｄ、Ｊ＝１６．２Ｈｚ、１Ｈ）、５．９３（ｄｄ、Ｊ＝１５．１、１．９Ｈｚ、１Ｈ）、５．８０（ｄｄ、Ｊ＝１６．２、８．９Ｈｚ、１Ｈ）、５．０６（ｄｄｄ、Ｊ＝１１．３、６．７、１．９Ｈｚ、１Ｈ）、４．９３（ｄｄ、Ｊ＝９．７、３．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．５１（ｄｄ、Ｊ＝１１．２、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．５７（ｄｄ、Ｊ＝１３．７、３．３Ｈｚ、１Ｈ）、３．２７（ｄｄ、Ｊ＝１３．８、３．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．１７（ｄｄ、Ｊ＝１４．５、３．９Ｈｚ、１Ｈ）、２．８０－２．７１（ｍ、２Ｈ）、２．６７（ｄｄｔ、Ｊ＝１４．６、４．０、２．０Ｈｚ、１Ｈ）、２．５８（ｄｔ、Ｊ＝８．８、６．６Ｈｚ、１Ｈ）、２．４０（ｓ、３Ｈ）、２．３５（ｄｔ、Ｊ＝１４．５、１１．４Ｈｚ、１Ｈ）、２．２８（ｓ、３Ｈ）、１．７０－１．５３（ｍ、２Ｈ）、１．３３（ｄｄｄ、Ｊ＝１４．１、８．７、３．８Ｈｚ、１Ｈ）、１．１８（ｄ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、３Ｈ）、１．１５（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）、０．７９（ｄ、Ｊ＝３．７Ｈｚ、３Ｈ）、０．７８（ｄ、Ｊ＝３．８Ｈｚ、３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ） δ １７７．５３、１７４．０４、１７２．２３、１６８．３４、１６６．９５、１５９．５３、１５５．３５、１４３．４０、１３４．３６、１３２．１９、１３１．４８、１２９．２９、１２５．６５、１２３．２４、１２０．１９、１１３．７８、１１３．４６、７８．５３、７２．７７、５７．４０、５６．５８、４４．２２、４１．１６、４１．０２、３８．９５、３７．８７、３６．３５、２５．６２、２３．２０、２１．７７、１７．８３、１５．０７、１１．５５、１１．４５．ＨＲＭＳ（ＥＳ）計算値Ｃ３４Ｈ４４ＣｌＮ３Ｏ８［Ｍ＋Ｈ］６５８．２８９０、実測値６５８．２８９３。
一般的なタンパク質発現および精製手順
タンパク質は、変更されたプロトコルを使用して成長および精製された。１２ｐＥＴ－２８ ｂ（＋）－ＣｒｐＴＥ構築物をＢＬ２１（ＤＥ３）に形質転換し、５０μｇ／ｍＬカナマイシンを補充したＬＢ寒天プレート上で、３７℃で一晩増殖させた。コロニーを採取し、５０μｇ／ｍＬカナマイシンを補充した２５ｍＬ ＬＢブロスで、３７℃で一晩増殖させた。５０μｇ／ｍＬのカナマイシンを含む６リットルのＴＢ発現培地にそれぞれ、４ｍＬの一晩培養物を接種し、ＯＤ６００が１．２に達するまで約５時間インキュベートした（３７℃、２００ｒｐｍ）。フラスコを振盪機から取り出し、氷浴で１５分間冷却した（温度約２０℃）。フラスコを振盪に戻し、１００μＭのＩＰＴＧを添加してタンパク質発現を開始し、２０℃で１８時間進行させた。６，０００ｘｇで３０分間遠心分離して細胞を採取した。
次いで、細胞ペレットを溶解緩衝液（１０ｍＬ／ｇ細胞ペレット、１００ｍＭリン酸ナトリウム、２０ｍＭイミダゾール、３００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ８）中に再懸濁し、１ｍｇ Ｄｎａｓｅ（Ｓｉｇｍａ）で処理した。溶液を氷上に置き、超音波処理（５０秒休止で１２×１０秒）に晒した。次いで、懸濁液を４℃で３０分間、５０，０００×ｇで遠心分離した。上清を回収し、０．４５μｍフィルターを通した後、１０ｍＬ ＮｉＮＴＡレジンカラムに充填した。カラムを１０カラム容量の洗浄緩衝液（１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液、５０ｍＭイミダゾール、３００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ８）で洗浄し、タンパク質を１５ｍＬ溶出緩衝液（１００ｍＭリン酸ナトリウム、３００ｍＭイミダゾール、３００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ８）を使用して溶出した。次いで、溶出液を２．５ｍＬに濃縮し、ＰＤ－１０緩衝液交換／脱塩カラム（ストレージバッファー、１００ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．２で事前に平衡化）に晒し、液体窒素で瞬間冷凍し、保存のために－８０℃に置いた。試料をＮｕＰＡＧＥ４～１２％ビス－トリスタンパク質ゲルで実行し、純度を確認した。
実施例２の参照
１．Ｓｈａｎｋａｒａｉａｈ，Ｇ．；Ｋｕｍａｒ，Ｔ．Ｖ．；Ｒｅｄｄｙ，Ｇ．Ｖ．；Ｒａｏ，Ｊ．Ｍ．；Ｂａｂｕ，Ｋ．Ｓ．Ｓｔｅｒｅｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ（－）－Ｐｉｎｉｄｉｎｏｎｅ．Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ ２０１３，９６，９９０－９９６．
２．Ｇａｏ，Ｘ．；Ｈａｎ，Ｈ．；Ｋｒｉｓｃｈｅ，Ｍ．Ｊ．Ｄｉｒｅｃｔ Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｃｙｃｌｉｃ Ｐｏｌｙｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ Ｓｔｅｒｅｏｐｏｌｙａｄｓ ｖｉａ Ｄｏｕｂｌｅ Ｄｉａｓｔｅｒｅｏ－ ａｎｄ Ｅｎａｎｔｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ Ｉｒｉｄｉｕｍ－Ｃａｔａｌｙｚｅｄ Ｃｒｏｔｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ １，３－Ｄｉｏｌｓ：Ｂｅｙｏｎｄ Ｓｔｅｐｗｉｓｅ Ｃａｒｂｏｎｙｌ Ａｄｄｉｔｉｏｎ ｉｎ Ｐｏｌｙｋｅｔｉｄｅ Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ２０１１，１３３，１２７９５－１２８００．
３．Ｐｈｕｋａｎ，Ｐ．；Ｂａｕｅｒ，Ｍ．；Ｍａｉｅｒ，Ｍ．Ｅ．Ｆａｃｉｌｅ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａｌｋｅｎｅｓ ａｎｄ ｄｉｅｎｅｓ ｆｒｏｍ ｔｏｓｙｌａｔｅｓ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ－Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ ２００３，１３２４－１３２８．
４．Ｋｏｔｏｋｕ，Ｎ．；Ｋａｔｏ，Ｔ．；Ｎａｒｕｍｉ，Ｆ．；Ｏｈｔａｎｉ，Ｅ．；Ｋａｍａｄａ，Ｓ．；Ａｏｋｉ，Ｓ．；Ｏｋａｄａ，Ｎ．；Ｎａｋａｇａｗａ，Ｓ．；Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｍ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ １５，２０－ｔｒｉａｍｉｄｅ ａｎａｌｏｇｕｅ ｗｉｔｈ ｐｏｌａｒ ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ ｏｎ ｔｈｅ ｐｈｅｎｙｌ ｒｉｎｇ ｏｆ ａｒｅｎａｓｔａｔｉｎ Ａ，ａｎ ｅｘｔｒｅｍｅｌｙ ｐｏｔｅｎｔ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ｓｐｏｎｇｅａｎ ｄｅｐｓｉｐｅｐｔｉｄｅ．Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００６，１４，７４４６－７４５７．
５．Ｋｒｉｓｈｎａｍｕｒｔｈｙ，Ｓ．Ｒａｐｉｄ Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｌｋｙｌ Ｔｏｓｙｌａｔｅｓ ｗｉｔｈ Ｌｉｔｈｉｕｍ Ｔｒｉｅｔｈｙｌｂｏｒｏｈｙｄｒｉｄｅ－Ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ ａｎｄ Ａｄｖａｎｔａｇｅｏｕｓ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｆｏｒ Ｄｅｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｉｍｐｌｅ ａｎｄ Ｈｉｎｄｅｒｅｄ Ａｌｃｏｈｏｌｓ－Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ Ｖａｒｉｏｕｓ Ｈｙｄｒｉｄｅ Ｒｅａｇｅｎｔｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｏｍｅｔａｌｌｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９７８，１５６，１７１－１８１．
６．Ｍｏｒｒｉｌｌ，Ｃ．；Ｇｒｕｂｂｓ，Ｒ．Ｈ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ ｖｉｎｙｌ ｂｏｒｏｎａｔｅｓ ｖｉａ ｒｕｔｈｅｎｉｕｍ－ｃａｔａｌｙｚｅｄ ｏｌｅｆｉｎ ｃｒｏｓｓ－ｍｅｔａｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔ ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｔｏ ｖｉｎｙｌ ｈａｌｉｄｅｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００３，６８，６０３１－６０３４．
７．ＭｃＣｕｂｂｉｎ，Ｊ．Ａ．；Ｍａｄｄｅｓｓ，Ｍ．Ｌ．；Ｌａｕｔｅｎｓ，Ｍ．Ｔｏｔａｌ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ ａｎａｌｏｇｕｅｓ ｖｉａ ａ ｓｃａｆｆｏｌｄ ａｐｐｒｏａｃｈ．Ｏｒｇ Ｌｅｔｔ ２００６，８，２９９３－６．
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実施例３
セコクリプトフィシン鎖伸長中間体の合成．
ＣｒｐＴＥの基質範囲を試験し、ならびに新規のクリプトフィシンマクロラクトンを生成するために、ユニットＡのアリール基の後期多様化に適したＮＡｃ活性化セコ鎖伸長中間体の拡張可能な合成を開発した。類似体は、ユニットＡＢおよびユニットＣＤ－ＮＡｃを含む２つの主要な中間体を使用して収束的に合成した。ユニットＡＢの製剤化は、以前に報告された鈴木カップリング戦略と同様にキラル補助化学を利用した。３８最後のホーナー・ワズワース・エモンスオレフィン化（ＨＷＥ）を用いて、ユニットＡとＢの間に重要な接合部を形成した。ＮＡｃ認識要素を含むユニットＣＤは、商業的かつ容易に操作されたアミノ酸誘導体のペプチドカップリングによって生成した。
そのために、ユニットＡを、Ｎ－クロトニルオキサゾリジノン１およびアルデヒド２を含むエバンス不斉アルドールを使用して合成し（図３）、それにより、高いｄｒ（＞２０：１）で優れた収率が得られ、所望の（２Ｒ，３Ｓ）付加物が得られた。その後のＴＢＳトリフルオロメタンスルホネートでシリル化して３を生成し、キラル補助剤で還元的開裂によりアルコール４を生成した。３９トシル化により５を生成し、水素化トリエチルホウ素リチウムでの連続還元的脱酸素により、所望の中間体６を得た。４０この段階で、ビニルボロン酸ピナコールエステルを、Ｈｏｖｅｙｄａ－Ｇｒｕｂｂｓクロスメタセシスを介して導入し、将来の多様化のために所望の鈴木ハンドルで７を得た。３８２，３－ジクロロ－５，６－ジシアノ－１，４－ベンゾキノン（ＤＤＱ）によるｐ－メトキシベンジル（ＰＭＢ）保護基の除去と、それに続く８へのデスマーチンペルヨージナン（ＤＭＰ）酸化により、ＨＷＥオレフィン化に必要なユニットＡアルデヒド断片が得られた。４１
ホスホネートパートナー１２（図５）を、市販のＤ－チロシンメチルエステル塩酸塩９で開始して合成し、それは以前に記載されるように４つのステップで１０に変換された。４２その後のジエチルホスホノ酢酸（１１）でのペプチドカップリングにより、所望のホスホネート１２が得られた。ここから、ＨＷＥオレフィン化条件を探究し、ＴＨＦ中の水素化ナトリウムを使用して最適な条件を得ると、これにより、正しい異性体（全体収率７０％、約５：１のＥ：Ｚ生成物比）の５７％の収率で多様化可能なユニットＡＢ断片１０が得られた。
ユニットＣＤ－ＮＡｃを、市販のロイシン酸１５から容易に合成した（図６）。酸官能基の最初のベンジル保護により１６が生成され、続いてβ－アミノ酸１７または１８とカップリングして所望のエステルが生成された。これらのエステルは、Ｈ２／Ｐｄ水素化分解を介して容易に脱保護され、酸１９または２０を得た。４３これらの酸をＮ－アセチルシステアミンとカップリングさせて、所望のユニットＣＤ断片２１または２２を得た。
多様化可能な基質１３を手に、２１または２２とのカップリングおよび連続的な鈴木多様化を調査した。不安定な官能基およびラセミ化により、最終的なペプチドカップリングの前に鈴木多様化は不可能であった。基質１３の鈴木条件をスクリーニングすると、Ｐｄ２（ｄｂａ）３およびＫ３ＰＯ４を利用して、検出可能なラセミ化のない良好から優れた収率で、一連の新規のユニットＡＢクリプトフィシン類似体１４ａ～ｍ（図５）を生成する手順が得られた。
最終的なセコクリプトフィシン鎖伸長中間体の精緻化は、ユニットＡＢとユニットＣＤとのカップリングを介して達成された（図７）。メチルエステル１４ａ～ｍの鹸化は、ラセミ化の影響を受けやすいことが証明され、様々な加水分解手順のスクリーニングにより、水酸化トリメチルスズが得られ、これにより、対応する酸が検出可能なラセミ化なしで、良好な収率で提供された（図７）。４４４Ｍ ＨＣｌ／ジオキサンによる２１または２２の同時Ｂｏｃ脱保護、およびその後の０℃での１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェート、ヘキサフルオロホスフェートアザベンゾトリアゾールテトラメチルウロニウム（ＨＡＴＵ）とのペプチドカップリングにより、最小限のラセミ化で、良好な収率で、ＴＢＳ保護中間体が生成された（７：１～１２：１ ｄｒ、図７）。ジアステレオマーを、ＴＢＳ基を除去する前に逆相ＨＰＬＣを使用して分解した。最後に、アセトニトリル中のＨＦ水溶液を使用したシリル基の脱保護により、所望のセコクリプトフィシンＮＡｃ類似体が得られた（図７、２３ａ～ｍ）。
実施例４
ユニットＡ複素環を有するＣｒｐＴＥの分析的基質変換アッセイ．
多様化可能な合成を携えて、新しく生成されたユニットＡ鎖伸長中間体に対するＣｒｐＴＥの柔軟性の調査を開始した（図２、２３ａ～ｍ）。ＣｒｐＴＥ類似体の初期セットには、天然ベンゼン環の代わりに６員環複素環が含まれていた（図２、２３ｂ～ｇ）。初期の分析スケール反応は、天然ベンジル基質と比較して、生成物への顕著なターンオーバーを明らかにした。ここでは、天然ベンジル基質（２３ａ）が、９：１の環化：加水分解比で６８％の全体的な変換を示した。対照的に、２－、３－、４－およびピラジン基質は、出発物質の完全なターンオーバーと、ほとんど検出不可能なレベルの加水分解副産物を示した（図２、２３ｂ、２３ｃ、２３ｅ、２３ｇ）。これは、図８で見られる変換％ならびに環化対加水分解の比率（２４ｂ、２４ｃ、２４ｅ、および２４ｇ）に反映され、これらはすべて、天然基質２４ａと比較した場合、大幅により大きかった（９１～９６％の変換、＞１０：１の環化：加水分解比率）。
非天然ユニットＡ類似体のセットは、様々なアルキル鎖を有する５員環芳香族複素環を含むように拡大された。２－、３－、および４－メチルピラゾール誘導体（２３ｈ～ｊ）を合成し、ベンジル基質２３ａを対照として利用して、同じ分析アッセイで試験した。２－メチルピラゾールおよび３－メチルピラゾール基は、８５％および８４％で以前の６員環複素環よりもわずかに低い変換％を示した（図８、２４ｈおよび２４ｉ）。これらの基質は６員環類似体よりも効率的に処理されていないにもかかわらず、それらは、野生型ＣｒｐＴＥによって触媒される、天然基質よりも対応するデプシペプチドクリプトフィシン類似体へのより高い変換％を保持する。興味深いことに、４－メチルピラゾール環（２３ｊ）を組み込むと、測定可能な出発物質または加水分解副生成物を含まない、生成物へのほぼ完全な変換が示された。
より大きなアルキル鎖を組み込むことにより、４－イソプロピルピラゾール基（図２、２３ｉ）は、ＣｒｐＴＥ結合ポケットの潜在的なサイズ制限に関する重要な洞察を提供した。加水分解生成物は観察されなかったが、反応終了後の出発物質の不完全な消費は、生成物へのほぼ定量的な変換を示したそのメチル対応物と比較して低い変換％（８３％）をもたらした。このより大きなアルキル置換基は、この類似体で見られる全体的な変換の低下につながる酵素内の立体的制約を示し得る。最後に、ジメチルイソオキサゾール基質２３ｍを調べた。この化合物は、天然基質と比較して同様の変換％を示し（図８、２４ｍ）、かなりの量の出発物質が残っていた。
実施例５
ユニットＡクリプトフィシン類似体の単離および特性評価
反応生成物の単離された収率、完全な構造特性、および生物学的評価を得るために、すべての反応は、分析反応と同じ条件を使用して、１０ｍｇの半分取スケールで実施した。これらの結果は、分析反応で観察された変換パーセントと密接に対応していた。６員複素環２４ｂ、ｃ、ｅ、およびｆは、６２～６６％の良好な収率で単離された（図８）。５員環２４ｈ～２４ｊ、２４ｉ、および２４ｍもまた１０ｍｇスケールで実行され、５５％～６９％で変動する収率で単離された（図８）。これらの化学酵素反応から生成されたすべての新規のクリプトフィシン類似体は、ＨＲＭＳ、１ＨＮＭＲ、および１３ＣＮＭＲによって確認され、その後、生物学的活性について試験した。
実施例６
新規のスチレンクリプトフィシン類似体の生物学的評価．
クリプトフィシン類似体の各々は、様々な細胞株にわたる効力の相対比較としてゾーンアッセイを使用して評価され（表１を参照されたい）、各類似体のＩＣ５０は、ＨＣＴ－１１６ヒト大腸がん細胞株で決定された。初期のモノメチルユニットＣ類似体の効力は、存在する複素環式環に応じて、活性に有意な変動を示した（図９）。６員環複素環の場合、ＩＣ５０値は、類似体のピリジルセット内でも広範囲にわたり、２－ピリジル類似体は、３－ピリジル－（２４ｃ）および４－ピリジル－（２４ｅ）含有類似体（０．８６０ｎＭおよび０．５１ｎＭ、図９）よりも３桁少ない、１０２ｎＭのＩＣ５０を示した。５員環は、ほぼ６桁にわたって、ＩＣ５０値にさらに大きな差を示した。イソオキサゾール環（２４ｍ）を含めると、活性が大幅に低下し、ＩＣ５０値は１．４μＭであった。しかしながら、４－メチルピラゾール環（２４ｊ）の導入により、低ピコモルの類似体が提供され、これまでに観察された中で最も強力なクリプトフィシン類似体の１つとなった。
Figure 2022549971000056
Figure 2022549971000057
実施例７
Ｇｅｍ－ジメチル類似体の製剤化および生物学的評価．
ＣｒｐＴＥ生体触媒で試験するための類似体の本設計をガイドするために本明細書に開示されたデータを利用して、ジェミナルジメチルユニットＣ類似体を、上位３つの類似体：末端３－ピリジル－、４－ピリジルｌ－、または４－メチル－ピラゾールを有するユニットＡについて本明細書に記載される化学を利用して合成した。ユニットＣおよびＤの間のエステル結合は、代謝的に不安定であることが知られており、この不安定な位置に隣接する２番目のメチル基の付加は、薬物の半減期を改善することが知られている。４５～４６ベンジル含有ユニットＡにｇｅｍ－ジメチル（ユニットＣ）を含めると、加水分解副産物の増加があったことを示した（１０：１に対して６：１の環化対加水分解）。３７新しい類似体２０ｄ、ｆ、およびｋは、最初に、加水分解対環化の比率、ならびにそれらのモノメチル対応物への変換％を直接比較するための分析スケールで試験された。３つすべてが、ＣｒｐＴＥとインキュベートしたときに加水分解活性の増加（図２および８）、ならびに未反応の出発物質のより高いパーセンテージを示し、これは、以前の初見と一致している。マクロサイクルへの全体的な変換が低いにもかかわらず、対応する鎖伸長中間体は、天然基質とほぼ同じ効率で処理され、分子のＰＫＳおよびＮＲＰＳ由来部分の両方に非天然官能基を含む基質に対するＣｒｐＴＥの顕著な柔軟性をさらに示す。
これらの類似体をまた、ゾーンアッセイおよびＨＣＴ－１１６のＩＣ５０の両方で試験した。ジェムジメチル部分を組み込むと、この細胞株の３つの類似体すべての効力の減少がもたらされ、この部位での代謝をブロックする代替的な方法が、より大きな効力の類似体をもたらすという予想をもたらした。
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１１．Ｔｒａｕｇｅｒ，Ｊ．Ｗ．；Ｋｏｈｌｉ，Ｒ．Ｍ．；Ｍｏｏｔｚ，Ｈ．Ｄ．；Ｍａｒａｈｉｅｌ，Ｍ．Ａ．；Ｗａｌｓｈ，Ｃ．Ｔ．，Ｐｅｐｔｉｄｅ ｃｙｃｌｉｚａｔｉｏｎ ｃａｔａｌｙｓｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｔｈｉｏｅｓｔｅｒａｓｅ ｄｏｍａｉｎ ｏｆ ｔｙｒｏｃｉｄｉｎｅ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ．Ｎａｔｕｒｅ ２０００，４０７（６８０１），２１５－２１８．
１２．Ｔｒａｕｇｅｒ，Ｊ．Ｗ．；Ｋｏｈｌｉ，Ｒ．Ｍ．；Ｗａｌｓｈ，Ｃ．Ｔ．，Ｃｙｃｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｂａｃｋｂｏｎｅ－ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｃａｔａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｔｈｉｏｅｓｔｅｒａｓｅ ｄｏｍａｉｎ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｔｙｒｏｃｉｄｉｎｅ ｎｏｎｒｉｂｏｓｏｍａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ－Ｕｓ ２００１，４０（２４），７０９２－７０９８．
１３．Ｂｒｕｎｅｒ，Ｓ．Ｄ．；Ｗｅｂｅｒ，Ｔ．；Ｋｏｈｌｉ，Ｒ．Ｍ．；Ｓｃｈｗａｒｚｅｒ，Ｄ．；Ｍａｒａｈｉｅｌ，Ｍ．Ａ．；Ｗａｌｓｈ，Ｃ．Ｔ．；Ｓｔｕｂｂｓ，Ｍ．Ｔ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃｙｃｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｌｉｐｏｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｓｕｒｆａｃｔｉｎ ｂｙ ｔｈｅ ｔｈｉｏｅｓｔｅｒａｓｅ ｄｏｍａｉｎ ＳｒｆＴＥ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２００２，１０（３），３０１－３１０．
１４．Ｓａｍｅｌ，Ｓ．Ａ．；Ｗａｇｎｅｒ，Ｂ．；Ｍａｒａｈｉｅｌ，Ｍ．Ａ．；Ｅｓｓｅｎ，Ｌ．Ｏ．，Ｔｈｅ ｔｈｉｏｅｓｔｅｒａｓｅ ｄｏｍａｉｎ ｏｆ ｔｈｅ ｆｅｎｇｙｃｉｎ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｃｌｕｓｔｅｒ：Ａ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｂａｓｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｏｎ－ｒｉｂｏｓｏｍａｌ ｌｉｐｏｐｅｐｔｉｄｅ．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２００６，３５９（４），８７６－８８９．
１５．Ａｋｅｙ，Ｄ．Ｌ．；Ｋｉｔｔｅｎｄｏｒｆ，Ｊ．Ｄ．；Ｇｉｒａｌｄｅｓ，Ｊ．Ｗ．；Ｆｅｃｉｋ，Ｒ．Ａ．；Ｓｈｅｒｍａｎ，Ｄ．Ｈ．；Ｓｍｉｔｈ，Ｊ．Ｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｍａｃｒｏｌａｃｔｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｂｙ ｔｈｅ ｐｉｋｒｏｍｙｃｉｎ ｔｈｉｏｅｓｔｅｒａｓｅ．Ｎａｔｕｒｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２００６，２（１０），５３７－５４２．
１６．Ｔｓａｉ，Ｓ．Ｃ．；Ｍｉｅｒｃｋｅ，Ｌ．Ｊ．Ｗ．；Ｋｒｕｃｉｎｓｋｉ，Ｊ．；Ｇｏｋｈａｌｅ，Ｒ．；Ｃｈｅｎ，Ｊ．Ｃ．Ｈ．；Ｆｏｓｔｅｒ，Ｐ．Ｇ．；Ｃａｎｅ，Ｄ．Ｅ．；Ｋｈｏｓｌａ，Ｃ．；Ｓｔｒｏｕｄ，Ｒ．Ｍ．，Ｃｒｙｓｔａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍａｃｒｏｃｙｃｌｅ－ｆｏｒｍｉｎｇ ｔｈｉｏｅｓｔｅｒａｓｅ ｄｏｍａｉｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｒｙｔｈｒｏｍｙｃｉｎ ｐｏｌｙｋｅｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ： Ｖｅｒｓａｔｉｌｉｔｙ ｆｒｏｍ ａ ｕｎｉｑｕｅ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｃｈａｎｎｅｌ．Ｐ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ２００１，９８（２６），１４８０８－１４８１３．
１７．Ｇｉｒａｌｄｅｓ，Ｊ．Ｗ．；Ａｋｅｙ，Ｄ．Ｌ．；Ｋｉｔｔｅｎｄｏｒｆ，Ｊ．Ｄ．；Ｓｈｅｒｍａｎ，Ｄ．Ｈ．；Ｓｍｉｔｈ，Ｊ．Ｌ．；Ｆｅｃｉｋ，Ｒ．Ａ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ｐｏｌｙｋｅｔｉｄｅ ｍａｃｒｏｌａｃｔｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｐｏｌｙｋｅｔｉｄｅ－ｂａｓｅｄ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｌａｂｅｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２００６，２（１０），５３１－５３６．
１８．Ｐｉｎｔｏ，Ａ．；Ｗａｎｇ，Ｍ．；Ｈｏｒｓｍａｎ，Ｍ．；Ｂｏｄｄｙ，Ｃ．Ｎ．，６－Ｄｅｏｘｙｅｒｙｔｈｒｏｎｏｌｉｄｅ Ｂ Ｓｙｎｔｈａｓｅ Ｔｈｉｏｅｓｔｅｒａｓｅ－Ｃａｔａｌｙｚｅｄ Ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｚａｔｉｏｎ Ｉｓ Ｈｉｇｈｌｙ Ｓｔｅｒｅｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ．Ｏｒｇ Ｌｅｔｔ ２０１２，１４（９），２２７８－２２８１．
１９．Ｈａｎｓｅｎ，Ｄ．Ａ．；Ｋｏｃｈ，Ａ．Ａ．；Ｓｈｅｒｍａｎ，Ｄ．Ｈ．，Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｔｈｉｏｅｓｔｅｒａｓｅ Ｂｏｔｔｌｅｎｅｃｋ ｉｎ ｔｈｅ Ｐｉｋｒｏｍｙｃｉｎ Ｐａｔｈｗａｙ ｔｈｒｏｕｇｈ Ｆｕｌｌ－Ｍｏｄｕｌｅ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｏｆ Ｕｎｎａｔｕｒａｌ Ｐｅｎｔａｋｅｔｉｄｅｓ．Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ ２０１７，１３９（３８），１３４５０－１３４５５．
２０．Ｋｏｃｈ，Ａ．Ａ．；Ｈａｎｓｅｎ，Ｄ．Ａ．；Ｓｈｅｎｄｅ，Ｖ．Ｖ．；Ｆｕｒａｎ，Ｌ．Ｒ．；Ｈｏｕｋ，Ｋ．Ｎ．；Ｊｉｍｅｎｅｚ－Ｏｓｅｓ，Ｇ．；Ｓｈｅｒｍａｎ，Ｄ．Ｈ．，Ａ Ｓｉｎｇｌｅ Ａｃｔｉｖｅ Ｓｉｔｅ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ Ｐｉｋｒｏｍｙｃｉｎ Ｔｈｉｏｅｓｔｅｒａｓｅ Ｇｅｎｅｒａｔｅｓ ａ Ｍｏｒｅ Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ Ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｚａｔｉｏｎ Ｃａｔａｌｙｓｔ．Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ ２０１７，１３９（３８），１３４５６－１３４６５．
２１．Ｍａｇａｒｖｅｙ，Ｎ．Ａ．；Ｂｅｃｋ，Ｚ．Ｑ．；Ｇｏｌａｋｏｔｉ，Ｔ．；Ｄｉｎｇ，Ｙ．；Ｈｕｂｅｒ，Ｕ．；Ｈｅｍｓｃｈｅｉｄｔ，Ｔ．Ｋ．；Ａｂｅｌｓｏｎ，Ｄ．；Ｍｏｏｒｅ，Ｒ．Ｅ．；Ｓｈｅｒｍａｎ，Ｄ．Ｈ．，Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈｅｍｏｅｎｚｙｍａｔｉｃ ａｓｓｅｍｂｌｙ ｏｆ ｔｈｅ ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎｓ．Ｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ａｇｅｎｔｓ ｆｒｏｍ ｃｙａｎｏｂｉｏｎｔｓ．ＡＣＳ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｂｉｏｌｏｇｙ ２００６，１（１２），７６６－７９．
２２．Ｄｉｎｇ，Ｙ．；Ｒａｔｈ，Ｃ．Ｍ．；Ｂｏｌｄｕｃ，Ｋ．Ｌ．；Ｈａｋａｎｓｓｏｎ，Ｋ．；Ｓｈｅｒｍａｎ，Ｄ．Ｈ．，Ｃｈｅｍｏｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ａｇｅｎｔｓ ｂｙ ａｎ ｅｓｔｅｒ ｂｏｎｄ－ｆｏｒｍｉｎｇ ｎｏｎ－ｒｉｂｏｓｏｍａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ ｍｏｄｕｌｅ．Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ ２０１１，１３３（３７），１４４９２－５．
２３．Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｒ．Ｅ．；Ｈｉｒｓｃｈ，Ｃ．Ｆ．；Ｓｅｓｉｎ，Ｄ．Ｆ．；Ｆｌｏｒ，Ｊ．Ｅ．；Ｃｈａｒｔｒａｉｎ，Ｍ．；Ｆｒｏｍｔｌｉｎｇ，Ｒ．Ｅ．；Ｈａｒｒｉｓ，Ｇ．Ｈ．；Ｓａｌｖａｔｏｒｅ，Ｍ． Ｊ．；Ｌｉｅｓｃｈ，Ｊ．Ｍ．；Ｙｕｄｉｎ，Ｋ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ｆｒｏｍ Ｃｕｌｔｕｒｅｄ Ａｌｇａｅ．Ｊ Ｉｎｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ １９９０，５（２－３），１１３－１２３．
２４．Ｓｍｉｔｈ，Ｃ．Ｄ．；Ｚｈａｎｇ，Ｘ．Ｑ．；Ｍｏｏｂｅｒｒｙ，Ｓ．Ｌ．；Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ，Ｇ．Ｍ．Ｌ．；Ｍｏｏｒｅ，Ｒ．Ｅ．，Ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ－ａ Ｎｅｗ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ Ａｇｅｎｔ Ａｃｔｉｖｅ ａｇａｉｎｓｔ Ｄｒｕｇ－Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １９９４，５４（１４），３７７９－３７８４．
２５．Ｄ’Ａｇｏｓｔｉｎｏ，Ｇ．；ｄｅｌ Ｃａｍｐｏ，Ｊ．；Ｍｅｌｌａｄｏ，Ｂ．；Ｉｚｑｕｉｅｒｄｏ，Ｍ．Ａ．；Ｍｉｎａｒｉｋ，Ｔ．；Ｃｉｒｒｉ，Ｌ．；Ｍａｒｉｎｉ，Ｌ．；Ｐｅｒｅｚ－Ｇｒａｃｉａ，Ｊ．Ｌ．；Ｓｃａｍｂｉａ，Ｇ．，Ａ ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ ｐｈａｓｅ ＩＩ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ ａｎａｌｏｇ ＬＹ３５５７０３ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｐｌａｔｉｎｕｍ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｏｖａｒｉａｎ ｃａｎｃｅｒ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｃａｎｃｅｒ：ｏｆｆｉｃｉａｌ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｏｃｉｅｔｙ ２００６，１６（１），７１－６．
２６．Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ，Ｊ．Ｐ．；Ｓｕｎ，Ｗ．；Ｇａｌｌａｇｈｅｒ，Ｍ．；Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｒ．；Ｖａｕｇｈｎ，Ｄ．；Ｓｃｈｕｃｈｔｅｒ，Ｌ．；Ａｌｇａｚｙ，Ｋ．；Ｈａｈｎ，Ｓ．；Ｅｎａｓ，Ｎ．；Ｅｌｌｉｓ，Ｄ．；Ｔｈｏｒｎｔｏｎ，Ｄ．；Ｏ’Ｄｗｙｅｒ，Ｐ．Ｊ．，Ｐｈａｓｅ Ｉ ｔｒｉａｌ ｏｆ ｔｈｅ ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ ａｎａｌｏｇｕｅ ＬＹ３５５７０３ ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ ａｓ ａｎ ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｉｎｆｕｓｉｏｎ ｏｎ ａ ｄａｙ １ ａｎｄ ８ ｓｃｈｅｄｕｌｅ ｅｖｅｒｙ ２１ ｄａｙｓ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｃａｎｃｅｒ ｒｅｓｅａｒｃｈ：ａｎ ｏｆｆｉｃｉａｌ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００２，８（８），２５２４－９．
２７．Ｓｅｓｓａ，Ｃ．；Ｗｅｉｇａｎｇ－Ｋｏｈｌｅｒ，Ｋ．；Ｐａｇａｎｉ，Ｏ．；Ｇｒｅｉｍ，Ｇ．；Ｍｏｒａ，Ｏ．；Ｄｅ Ｐａｓ，Ｔ．；Ｂｕｒｇｅｓｓ，Ｍ．；Ｗｅｉｍｅｒ，Ｉ．；Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｒ．，Ｐｈａｓｅ Ｉ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ ａｎａｌｏｇｕｅ ＬＹ３５５７０３ ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ ｏｎ ａ ｓｉｎｇｌｅ ｉｎｔｅｒｍｉｔｔｅｎｔ ｏｒ ｗｅｅｋｌｙ ｓｃｈｅｄｕｌｅ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ２００２，３８（１８），２３８８－２３９６．
２８．Ｅｄｅｌｍａｎ，Ｍ．Ｊ．；Ｇａｎｄａｒａ，Ｄ．Ｒ．；Ｈａｕｓｎｅｒ，Ｐ．；Ｉｓｒａｅｌ，Ｖ．；Ｔｈｏｒｎｔｏｎ，Ｄ．；ＤｅＳａｎｔｏ，Ｊ．；Ｄｏｙｌｅ，Ｌ．Ａ．，Ｐｈａｓｅ ２ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ ５２（ＬＹ３５５７０３） ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｐｌａｔｉｎｕｍ ｂａｓｅｄ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ａｄｖａｎｃｅｄ ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ．Ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ２００３，３９（２），１９７－９．
２９．Ｅｇｇｅｎ，Ｍ．；Ｇｅｏｒｇ，Ｇ．Ｉ．，Ｔｈｅ ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎｓ：ｔｈｅｉｒ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｒｅｖｉｅｗｓ ２００２，２２（２），８５－１０１．
３０．Ｎａｈｒｗｏｌｄ，Ｍ．；Ｗｅｉｓｓ，Ｃ．；Ｂｏｇｎｅｒ，Ｔ．；Ｍｅｒｔｉｎｋ，Ｆ．；Ｃｏｎｒａｄｉ，Ｊ．；Ｓａｍｍｅｔ，Ｂ．；Ｐａｌｍｉｓａｎｏ，Ｒ．；Ｒｏｙｏ Ｇｒａｃｉａ，Ｓ．；Ｐｒｅｕｓｓｅ，Ｔ．；Ｓｅｗａｌｄ，Ｎ．，Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｏｆ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎｓ ａｎｄ ＲＧＤ－ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｅｎｔｅｒ ｔａｒｇｅｔ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｅｎｄｏｃｙｔｏｓｉｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２０１３，５６（５），１８５３－６４．
３１．Ｌｅａｍｏｎ，Ｃ．Ｐ．；Ｗａｎｇ，Ｙ．；Ｖｌａｈｏｖ，Ｉ．Ｒ．；Ｙｏｕ，Ｆ．；Ｋｌｅｉｎｄｌ，Ｐ．Ｊ．；Ｓａｎｔｈａｐｕｒａｍ，Ｈ．Ｋ．Ｒ．Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ ｓｐａｃｅｒ ｌｉｎｋｅｒｓ．ＷＯ２００９／００２９９３Ａ１、２００８／１２／３１／，２００８．
３２．Ｓｕ，Ｄ．；Ｋｏｚａｋ，Ｋ．Ｒ．；Ｓａｄｏｗｓｋｙ，Ｊ．；Ｙｕ，Ｓ．Ｆ．；Ｆｏｕｒｉｅ－Ｏ’Ｄｏｎｏｈｕｅ，Ａ．；Ｎｅｌｓｏｎ，Ｃ．；Ｖａｎｄｌｅｎ，Ｒ．；Ｏｈｒｉ，Ｒ．；Ｌｉｕ，Ｌ．Ｎ．；Ｎｇ，Ｃ．；Ｈｅ，Ｊ．Ｔ．；Ｄａｖｉｓ，Ｈ．；Ｌａｕ，Ｊ．；Ｄｅｌ Ｒｏｓａｒｉｏ，Ｇ．；Ｃｏｓｉｎｏ，Ｅ．；ｄｅｌａ Ｃｒｕｚ－Ｃｈｕｈ，Ｊ．；Ｍａ，Ｙ．；Ｚｈａｎｇ，Ｄ．Ｌ．；Ｄａｒｗｉｓｈ，Ｍ．；Ｃａｉ，Ｗ．Ｗ．；Ｃｈｅｎ，Ｃ．Ｊ．；Ｚｈｏｕ，Ｈ．Ｘ．；Ｌｕ，Ｊ．Ｗ．；Ｌｉｕ，Ｙ．Ｃ．；Ｋａｕｒ，Ｓ．；Ｘｕ，Ｋ．Ｙ．；Ｐｉｌｌｏｗ，Ｔ．Ｈ．，Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｐａｙｌｏａｄ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｂｙ Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ Ｓｉｔｅ ａｎｄ Ｌｉｎｋｅｒ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ ２０１８，２９（４），１１５５－１１６７．
３３．Ｖｅｒｍａ，Ｖ．Ａ．；Ｐｉｌｌｏｗ，Ｔ．Ｈ．；ＤｅＰａｌａｔｉｓ，Ｌ．；Ｌｉ，Ｇ．；Ｐｈｉｌｌｉｐｓ，Ｇ．Ｌ．；Ｐｏｌｓｏｎ，Ａ．Ｇ．；Ｒａａｂ，Ｈ．Ｅ．；Ｓｐｅｎｃｅｒ，Ｓ．；Ｚｈｅｎｇ，Ｂ．，Ｔｈｅ ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎｓ ａｓ ｐｏｔｅｎｔ ｐａｙｌｏａｄｓ ｆｏｒ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ．Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ ２０１５，２５（４），８６４－８６８．
３４．Ｂｉｇｏｔ，Ａ．；Ｂｏｕｃｈａｒｄ，Ｈ．；Ｂｒｕｎ，Ｍ．－Ｐ．；Ｃｌｅｒｃ，Ｆ．；Ｚｈａｎｇ，Ｊ．Ｎｏｖｅｌ Ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ａｎｄ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，Ｔｈｅｉｒ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ．ＷＯ２０１７／０７６９９８（Ａ１）、２０１７／０５／１１／，２０１７．
３５．Ｓｔｅｉｎｋｕｈｌｅｒ，Ｍ．Ｃ．；Ｇａｌｌｉｎａｒｉ，Ｍ．Ｐ．；Ｏｓｓｗａｌｄ，Ｂ．；Ｓｅｗａｌｄ，Ｎ．；Ｒｉｔｚｅｆｅｌｄ，Ｍ．；Ｆｒｅｓｅ，Ｍ．Ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ－Ｂａｓｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｗｉｔｈ Ｎｏｖｅｌ Ｓｅｌｆ－Ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ Ｌｉｎｋｅｒｓ．ＷＯ２０１６／１４６６３８（Ａ１）、２０１６／０９／２２／，２０１６．
３６．Ｂｏｕｃｈａｒｄ，Ｈ．；Ｂｒｕｎ，Ｍ．－Ｐ．；Ｃｏｍｍｅｒｃｏｎ，Ａ．；Ｚｈａｎｇ，Ｊ．Ｎｏｖｅｌ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｔｈｅｒｅｏｆ，ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ Ｔｈｅｒｅｏｆ．ＷＯ２０１１／００１０５２（Ａ１）、２０１１／０１／０６／，２０１１．
３７．Ｂｅｃｋ，Ｚ．Ｑ．；Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｃ．Ｃ．；Ｍａｇａｒｖｅｙ，Ｎ．Ａ．；Ｇｅｏｒｇ，Ｇ．Ｉ．；Ｓｈｅｒｍａｎ，Ｄ．Ｈ．，Ｃｈｅｍｏｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ／ａｒｅｎａｓｔａｔｉｎ ｎａｔｕｒａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ－Ｕｓ ２００５，４４（４１），１３４５７－１３４６６．
３８．Ｂｏｌｄｕｃ，Ｋ．Ｌ．；Ｌａｒｓｅｎ，Ｓ．Ｄ．；Ｓｈｅｒｍａｎ，Ｄ．Ｈ．，Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ，ｄｉｖｅｒｇｅｎｔ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ ｕｎｉｔ Ａ ａｎａｌｏｇｕｅｓ．Ｃｈｅｍ Ｃｏｍｍｕｎ（Ｃａｍｂ）２０１２．
３９．Ｋｏｔｏｋｕ，Ｎ．；Ｋａｔｏ，Ｔ．；Ｎａｒｕｍｉ，Ｆ．；Ｏｈｔａｎｉ，Ｅ．；Ｋａｍａｄａ，Ｓ．；Ａｏｋｉ，Ｓ．；Ｏｋａｄａ，Ｎ．；Ｎａｋａｇａｗａ，Ｓ．；Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｍ．，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ １５，２０－ｔｒｉａｍｉｄｅ ａｎａｌｏｇｕｅ ｗｉｔｈ ｐｏｌａｒ ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ ｏｎ ｔｈｅ ｐｈｅｎｙｌ ｒｉｎｇ ｏｆ ａｒｅｎａｓｔａｔｉｎ Ａ，ａｎ ｅｘｔｒｅｍｅｌｙ ｐｏｔｅｎｔ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ｓｐｏｎｇｅａｎ ｄｅｐｓｉｐｅｐｔｉｄｅ．Ｂｉｏｏｒｇａｎ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ２００６，１４（２２），７４４６－７４５７．
４０．Ｋｒｉｓｈｎａｍｕｒｔｈｙ，Ｓ．，Ｒａｐｉｄ Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｌｋｙｌ Ｔｏｓｙｌａｔｅｓ ｗｉｔｈ Ｌｉｔｈｉｕｍ Ｔｒｉｅｔｈｙｌｂｏｒｏｈｙｄｒｉｄｅ－Ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ ａｎｄ Ａｄｖａｎｔａｇｅｏｕｓ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｆｏｒ Ｄｅｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｉｍｐｌｅ ａｎｄ Ｈｉｎｄｅｒｅｄ Ａｌｃｏｈｏｌｓ－Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ Ｖａｒｉｏｕｓ Ｈｙｄｒｉｄｅ Ｒｅａｇｅｎｔｓ．Ｊ Ｏｒｇａｎｏｍｅｔ Ｃｈｅｍ １９７８，１５６（１），１７１－１８１．
４１．Ｇｈｏｓｈ，Ａ．Ｋ．；Ｓｗａｎｓｏｎ，Ｌ．，Ｅｎａｎｔｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ（＋）－ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ ５２（ＬＹ３５５７０３），ａ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉｍｉｔｏｔｉｃ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ａｇｅｎｔ．Ｊ Ｏｒｇ Ｃｈｅｍ ２００３，６８（２５），９８２３－６．
４２．ＭｃＣｕｂｂｉｎ，Ｊ．Ａ．；Ｍａｄｄｅｓｓ，Ｍ．Ｌ．；Ｌａｕｔｅｎｓ，Ｍ．，Ｔｏｔａｌ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ ａｎａｌｏｇｕｅｓ ｖｉａ ａ ｓｃａｆｆｏｌｄ ａｐｐｒｏａｃｈ．Ｏｒｇ Ｌｅｔｔ ２００６，８（１４），２９９３－６．
４３．Ｍａｓｔ，Ｃ．Ａ．；Ｅｉｓｓｌｅｒ，Ｓ．；Ｓｔｏｎｃｉｕｓ，Ａ．；Ｓｔａｍｍｌｅｒ，Ｈ．Ｇ．；Ｎｅｕｍａｎｎ，Ｂ．；Ｓｅｗａｌｄ，Ｎ．，Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ａｎｄ ｖｅｒｓａｔｉｌｅ ｓｔｅｒｅｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎｓ．Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００５，１１（１６），４６６７－７７．
４４．Ｎｉｃｏｌａｏｕ，Ｋ．Ｃ．；Ｅｓｔｒａｄａ，Ａ．Ａ．；Ｚａｋ，Ｍ．；Ｌｅｅ，Ｓ．Ｈ．；Ｓａｆｉｎａ，Ｂ．Ｓ．，Ａ ｍｉｌｄ ａｎｄ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ｏｆ ｅｓｔｅｒｓ ｗｉｔｈ ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｔｉｎ ｈｙｄｒｏｘｉｄｅ．Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ Ｉｎｔ Ｅｄｉｔ ２００５，４４（９），１３７８－１３８２．
４５．Ｗａｇｎｅｒ，Ｍ．Ｍ．；Ｐａｕｌ，Ｄ．Ｃ．；Ｓｈｉｈ，Ｃ．；Ｊｏｒｄａｎ，Ｍ．Ａ．；Ｗｉｌｓｏｎ，Ｌ．；Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｄ．Ｃ．，Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ ５２（ＬＹ３５５７０３）ｉｎ ｈｕｍａｎ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ．Ｃａｎｃｅｒ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ １９９９，４３（２），１１５－１２５．
４６．Ｇｏｌａｋｏｔｉ，Ｔ．；Ｏｇｉｎｏ，Ｊ．；Ｈｅｌｔｚｅｌ，Ｃ．Ｅ．；ＬｅＨｕｓｅｂｏ，Ｔ．；Ｊｅｎｓｅｎ，Ｃ．Ｍ．；Ｌａｒｓｅｎ，Ｌ．Ｋ．；Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ，Ｇ．Ｍ．Ｌ．；Ｍｏｏｒｅ，Ｒ．Ｅ．；Ｍｏｏｂｅｒｒｙ，Ｓ．Ｌ．；Ｃｏｒｂｅｔｔ，Ｔ．Ｈ．；Ｖａｌｅｒｉｏｔｅ，Ｆ．Ａ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ，ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ，ｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｓｔｕｄｉｅｓ，ａｎｄ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎｓ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ １８ ｎｅｗ ａｎａｌｏｇｓ ｆｒｏｍ Ｎｏｓｔｏｃ ｓｐ ｓｔｒａｉｎ ＧＳＶ ２２４（ｖｏｌ １１７，ｐｇ １２０３０，１９９５）．Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ １９９６，１１８（１３），３３２３－３３２３．
本明細書の本開示から、本開示の特定の実施形態は、例示の目的で本明細書に記載されているが、本開示の趣旨および範囲から逸脱することなく、様々な修正がなされ得ることが理解されるであろう。

Claims (44)

  1. 式Ｉの構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩であって、
    Figure 2022549971000058
     式中、
    Ａｒが、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される１～３個の環ヘテロ原子を有する５～７員複素環式アリール基であり、任意選択で、Ｃ１－５アルキルおよびＬ－Ｒ６から独立して選択される１～３個の置換基で置換されており、
    Ｒ１が、塩素、臭素、もしくはヨウ素であり、
    Ｒ２が、ＯＨもしくはＯＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＲであり、または
    Ｒ１およびＲ２が一緒に、（１）それらが結合している炭素間の二重結合を示すか、もしくは（２）それらが結合している炭素とβ－エポキシド環を形成し、
    Ｒ３およびＲ４の各々が独立して、Ｈ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ０－６アルキレン－ＯＨ、もしくはＣ０－６アルキレン－ＮＨ（Ｒ）であり、または
    Ｒ３およびＲ４が、それらが結合している炭素原子と一緒に、スピロＣ３－５シクロアルキルもしくは１個の窒素環原子を有するスピロ３～５員ヘテロシクロアルキルを形成し、
    Ｒ５が、Ｃ１－６アルキル、Ｃ０－６アルキレン－ＯＨ、またはＣ０－６アルキレン－ＮＨ（Ｒ）であり、
    Ｒが、Ｈ、Ｃ１－６アルキル、またはＬ－Ｒ６であり、
    Ｌが、リンカーであり、
    Ｒ６が、反応性化学基であり、
    Ｘが、Ｏ、ＮＨ、もしくはＮＭｅであり、
    但し、前記化合物または塩が０または１ Ｌ－Ｒ６を含むことを条件とする、式Ｉの構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  2. Ａｒが、任意選択で、メチルおよびイソプロピルから選択される１～３個の置換基で置換されている、ピリジル、ピラジニル、イミダゾリル、またはオキサゾリルを含む、請求項１に記載の化合物または塩。
  3. （１）Ａｒが、
    Figure 2022549971000059
     であり、Ｒ３が、ＣＨ３であり、Ｒ４が、Ｈであり、
    （２）Ａｒが、
    Figure 2022549971000060
     であり、Ｒ３が、ＣＨ３であり、Ｒ４が、ＨもしくはＣＨ３であり、
    （３）Ａｒが、
    Figure 2022549971000061
     であり、Ｒ３が、ＣＨ３であり、Ｒ４が、ＨもしくはＣＨ３であり、
    （４）Ａｒが、
    Figure 2022549971000062
     であり、Ｒ３が、ＣＨ３であり、Ｒ４が、Ｈであり、
    （５）Ａｒが、
    Figure 2022549971000063
     であり、Ｒ３が、ＣＨ３であり、Ｒ４が、Ｈであり、
    （６）Ａｒが、
    Figure 2022549971000064
     であり、Ｒ３が、ＣＨ３であり、Ｒ４が、Ｈであり、
    （７）Ａｒが、
    Figure 2022549971000065
     であり、Ｒ３が、ＣＨ３であり、Ｒ４が、ＨもしくはＣＨ３であり、
    （８）Ａｒが、
    Figure 2022549971000066
     であり、Ｒ３が、ＣＨ３であり、Ｒ４が、ＨもしくはＣＨ３であり、
    （９）Ａｒが、
    Figure 2022549971000067
     であり、Ｒ３が、ＣＨ３であり、Ｒ４が、Ｈであり、または
    （１０）Ａｒが、
    Figure 2022549971000068
     であり、Ｒ３が、ＣＨ３であり、Ｒ４が、Ｈである、請求項１に記載の化合物または塩。
  4. Ｒ１およびＲ２が一緒に、それらが結合している炭素間の二重結合を示す、請求項１、２、または３に記載の化合物または塩。
  5. （１）Ａｒが、
    Figure 2022549971000069
     であり、Ｒ３が、ＣＨ３であり、Ｒ４が、ＨもしくはＣＨ３であり、Ｒ５が、ＣＨ（ＣＨ３）２であり、
    （２）Ａｒが、
    Figure 2022549971000070
     であり、Ｒ３が、ＣＨ３であり、Ｒ４が、ＨもしくはＣＨ３であり、Ｒ５が、ＣＨ（ＣＨ３）２であり、または
    （３）Ａｒが、
    Figure 2022549971000071
     であり、Ｒ３が、ＣＨ３であり、Ｒ４が、ＨもしくはＣＨ３であり、Ｒ５が、ＣＨ（ＣＨ３）２である、請求項４に記載の化合物または塩。
  6. Ｒ１およびＲ２が一緒に、それらが結合している炭素間にβ－エポキシド環を形成する、請求項１、２、または３に記載の化合物または塩。
  7. （１）Ａｒが、
    Figure 2022549971000072
     であり、Ｒ３が、ＣＨ３であり、Ｒ４が、ＨもしくはＣＨ３であり、Ｒ５が、ＣＨ（ＣＨ３）２であり、
    （２）Ａｒが、
    Figure 2022549971000073
     であり、Ｒ３が、ＣＨ３であり、Ｒ４が、ＨもしくはＣＨ３であり、Ｒ５が、ＣＨ（ＣＨ３）２であり、または
    （３）Ａｒが、
    Figure 2022549971000074
     であり、Ｒ３が、ＣＨ３であり、Ｒ４が、ＨもしくはＣＨ３であり、Ｒ５が、ＣＨ（ＣＨ３）２である、請求項６に記載の化合物または塩。
  8. Ｒ１が、Ｃｌであり、Ｒ２が、ＯＨである、請求項１、２、または３に記載の化合物または塩。
  9. （１）Ａｒが、
    Figure 2022549971000075
     であり、Ｒ３が、ＣＨ３であり、Ｒ４が、ＨもしくはＣＨ３であり、Ｒ５が、ＣＨ（ＣＨ３）２であり、
    （２）Ａｒが、
    Figure 2022549971000076
     であり、Ｒ３が、ＣＨ３であり、Ｒ４が、ＨもしくはＣＨ３であり、Ｒ５が、ＣＨ（ＣＨ３）２であり、または
    （３）Ａｒが、
    Figure 2022549971000077
     であり、Ｒ３が、ＣＨ３であり、Ｒ４が、ＨもしくはＣＨ３であり、Ｒ５が、ＣＨ（ＣＨ３）２である、請求項８に記載の化合物または塩。
  10. Ｒ１が、Ｃｌであり、Ｒ２が、ＯＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ２である、請求項１、２、または３に記載の化合物または塩。
  11. （１）Ａｒが、
    Figure 2022549971000078
     であり、Ｒ３が、ＣＨ３であり、Ｒ４が、ＨもしくはＣＨ３であり、Ｒ５が、ＣＨ（ＣＨ３）２であり、
    （２）Ａｒが、
    Figure 2022549971000079
     であり、Ｒ３が、ＣＨ３であり、Ｒ４が、ＨもしくはＣＨ３であり、Ｒ５が、ＣＨ（ＣＨ３）２であり、または
    （３）Ａｒが、
    Figure 2022549971000080
     であり、Ｒ３が、ＣＨ３であり、Ｒ４が、ＨもしくはＣＨ３であり、Ｒ５が、ＣＨ（ＣＨ３）２である、請求項１０に記載の化合物または塩。
  12. Ｒ３が、ＮＨ２、ＮＨＭｅ、ＣＨ２－ＮＨ２、またはＣＨ２－ＮＨＭｅである、請求項１、２、４、６、８、および１０のいずれか一項に記載の化合物または塩。
  13. Ｒ３が、ＯＨまたはＣＨ２－ＯＨである、請求項１、２、４、６、８、および１０のいずれか一項に記載の化合物または塩。
  14. Ｒ５が、ＮＨ２、ＮＨＭｅ、（ＣＨ）ＣＨ３ＮＨ２、または（ＣＨ）ＣＨ３ＮＨＭｅである、請求項１、２、４、６、８、１０、１２、および１３のいずれか一項に記載の化合物または塩。
  15. Ｘが、Ｏである、請求項１～１４のいずれか一項に記載の化合物または塩。
  16. Ｘが、ＮＨまたはＮＭｅである、請求項１～１４のいずれか一項に記載の化合物または塩。
  17. 前記構造が、以下からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物または塩。
    Figure 2022549971000081
  18. Ａｒが、
    Figure 2022549971000082
     である、請求項１に記載の化合物または塩。
  19. Ｒ２が、ＯＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＬ（Ｒ６）であり、Ｒ１が、Ｃｌである、請求項１に記載の化合物または塩。
  20. （１）Ａｒが、
    Figure 2022549971000083
     であり、Ｒ３が、ＣＨ３であり、Ｒ４が、ＨもしくはＣＨ３であり、Ｒ５が、ＣＨ（ＣＨ３）２であり、
    （２）Ａｒが、
    Figure 2022549971000084
     であり、Ｒ３が、ＣＨ３であり、Ｒ４が、ＨもしくはＣＨ３であり、Ｒ５が、ＣＨ（ＣＨ３）２であり、または
    （３）Ａｒが、
    Figure 2022549971000085
     であり、Ｒ３が、ＣＨ３であり、Ｒ４が、ＨもしくはＣＨ３であり、Ｒ５が、ＣＨ（ＣＨ３）２である、請求項１９に記載の化合物または塩。
  21. Ｒ３が、ＮＨ－ＬＲ６であり、Ｒ４が、Ｈである、請求項１に記載の化合物または塩。
  22. （１）Ａｒが、
    Figure 2022549971000086
     であり、Ｒ１およびＲ２が一緒に、二重結合もしくはβ－エポキシドを示し、Ｒ５が、ＣＨ（ＣＨ３）２であり、
    （２）Ａｒが、
    Figure 2022549971000087
     であり、Ｒ１およびＲ２が一緒に、二重結合もしくはβ－エポキシドを示し、Ｒ５が、ＣＨ（ＣＨ３）２であり、または
    （３）Ａｒが、
    Figure 2022549971000088
     であり、Ｒ１およびＲ２が一緒に、二重結合もしくはβ－エポキシドを示し、Ｒ５が、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ（ＣＨ３）２である、請求項２１に記載の化合物または塩。
  23. Ｒ５が、ＮＨ－ＬＲ６である、請求項１に記載の化合物または塩。
  24. （１）Ａｒが、
    Figure 2022549971000089
     であり、Ｒ１およびＲ２が一緒に、二重結合もしくはβ－エポキシドを示し、Ｒ３が、ＣＨ３であり、Ｒ４が、ＨもしくはＣＨ３であり、
    （２）Ａｒが、
    Figure 2022549971000090
     であり、Ｒ１およびＲ２が一緒に、二重結合もしくはβ－エポキシドを示し、Ｒ３が、ＣＨ３であり、Ｒ４が、ＨもしくはＣＨ３であり、または
    （３）Ａｒが、
    Figure 2022549971000091
     であり、Ｒ１およびＲ２が一緒に、二重結合もしくはβ－エポキシドを示し、Ｒ３が、ＣＨ３であり、Ｒ４が、ＨもしくはＣＨ３である、請求項２３に記載の化合物または塩。
  25. Ｌが、（ａ）１～１０個のアミノ酸を有するペプチド、（ｂ）１～１５個のエチレングリコールモノマーを有するポリエチレングリコール、もしくは（ｃ）β－グルクロン酸、または上記の任意の組み合わせを含む、請求項１８～２４のいずれか一項に記載の化合物または塩。
  26. 前記アミノ酸が、アラニン（Ａｌａ）、シトルリン（Ｃｉｔ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、グリシン（Ｇｌｙ）、リジン（Ｌｙｓ）、アセチル－リジン（ＡｃＬｙｓ）、プロリン（Ｐｒｏ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、およびバリン（Ｖａｌ）からなる群から選択される、請求項２５に記載の化合物または塩。
  27. Ｌが、単結合、エステル結合、アミド結合、スルフィド結合、ジスルフィド結合、パラ－アミノベンジル（ＰＡＢ）基を介して、またはパラ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢＣ）基を介して結合される、請求項１８～２６のいずれか一項に記載の化合物または塩。
  28. Ｒ６が、マレイミド基、マレイミドカプロイル基、マレイミドＰＥＧ基、ブロモアセトアミド基、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル、Ｏ－アルキルヒドロキシルアミン、またはそれらの組み合わせを含む、請求項１６～２７のいずれか一項に記載の化合物または塩。
  29. 請求項１～２８のいずれか一項に記載の化合物または塩を生成する方法であって、前記化合物または塩を形成するための大環状化に好適な条件下で、セコクリプトフィシン中間体をクリプトフィシンチオエステラーゼと接触させることを含む、方法。
  30. 前記大環状化が、大環状ラクトン化である、請求項２９に記載の方法。
  31. 前記クリプトフィシンチオエステラーゼが、ポリケチドシンターゼタンパク質複合体、非リボソームタンパク質シンテターゼタンパク質複合体、またはハイブリッドポリケチドシンターゼ／非リボソームペプチドシンテターゼタンパク質複合体に由来する、請求項３０に記載の方法。
  32. 前記クリプトフィシンチオエステラーゼが、ハイブリッドポリケチドシンターゼ／非リボソームペプチドシンテターゼタンパク質複合体に由来する、請求項３１に記載の方法。
  33. 前記セコクリプトフィシンをクリプトフィシンＰ４５０と接触させて、Ｒ１、Ｒ２、およびそれらが結合している炭素の間にβエポキシド環を形成することをさらに含む、請求項２９に記載の方法。
  34. 前記クリプトフィシンＰ４５０が、クリプトフィシンエポキシダーゼである、請求項３３に記載の方法。
  35. 請求項１～２８のいずれか一項に記載の化合物または塩、および薬学的に許容される賦形剤を含む、薬学的組成物。
  36. 請求項１８～２８のいずれか一項に記載の化合物もしくは塩、およびペプチド、タンパク質、または抗体を含む、コンジュゲート。
  37. 前記抗体および前記化合物または塩が、前記化合物または塩の前記反応性化学基および前記抗体上の相補的反応性基を介して共有結合されている、請求項３６に記載のコンジュゲート。
  38. 前記抗体上の前記相補的反応性基が、アミンを含む、請求項３７に記載のコンジュゲート。
  39. 前記アミンが、前記抗体上のリジンのε－アミンである、請求項３８に記載のコンジュゲート。
  40. 前記抗体が、モノクローナル抗体またはナノボディである、請求項３６～３９のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
  41. 前記ナノボディが、単一ドメイン抗体またはラクダ科動物抗体である、請求項４０に記載のコンジュゲート。
  42. 前記モノクローナル抗体が、ブレンツキシマブ、セツキシマブ、ゲムツズマブ、パニツムマブ、オファツムマブ、リツキシマブ、またはトラスツズマブである、請求項４０に記載のコンジュゲート。
  43. がんの治療における、請求項１～２８のいずれか一項に記載の化合物もしくは塩、または請求項３７～４２のいずれか一項に記載のコンジュゲートの使用。
  44. 前記がんが、結腸、乳房、白血病、前立腺、卵巣、中枢神経系、または非小細胞肺がんである、請求項４３に記載の使用。
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