JP2022546609A - ウイルス感染症の治療のための組成物及び方法 - Google Patents

ウイルス感染症の治療のための組成物及び方法 Download PDF

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Abstract

ウイルス感染症の治療のための組成物及び方法は、Ｆｃ単量体、Ｆｃドメイン、及びＦｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミン結合ペプチドに繋げられたウイルス・ノイラミニダーゼの阻害剤（例えば、ザナミビル、ペラミビルまたはその類縁体）を含有する複合体を含む。特に、複合体はウイルス感染症（例えばインフルエンザウイルス感染症）の治療に使用され得る。【選択図】なし

Description

背景
医療分野において、インフルエンザに対する新規な抗ウイルス治療の必要性はかなり大きく、かつ著しく喫緊である。インフルエンザウイルスは、インフルエンザすなわちインフルの原因物質であるが、世界全体で毎年３００万～５００万症例の重度の病及びおよそ５００，０００人の死亡の原因となっている。ほとんどの人々は約１～２週間でインフルエンザから完全に回復するが、他の人々は、生命を脅かす合併症、例えば肺炎を発症する。このため、インフルエンザは、特に若年者、老齢者または慢性疾患有病者にとっては、命取りになり得る。免疫系が弱いまたは低下している人々、例えば、進行ＨＩＶ感染症の人々、または移植臓器拒絶反応を防止するために免疫系が医学的に抑制されている移植患者は、インフルエンザに関係する合併症のリスクがより高い。妊婦及び幼い子供も合併症のリスクが高い。
インフルエンザに対する抗ウイルス治療の開発は難題であり続けている。いくつかのインフルエンザ抗ウイルス剤は診療所での使用が承認されており、これらの薬剤はワクチンを準備する間、疾患重症度を調節し世界的流行病に歯止めを掛けるのに重要な役割を果たす。しかしながら、最も一般的に使用されている阻害剤に対する薬剤耐性株が出現した。
インフルエンザ抗ウイルス剤は大抵、インフルエンザウイルス粒子の表面に提示されるタンパク質を標的とする。インフルエンザウイルスのエンベロープは、ウイルス感染及び拡散において肝要な役割を果たす２つの免疫優勢糖タンパク質であるヘマグルチニン及びノイラミニダーゼを含有する。ヘマグルチニンはそれと表面シアル酸との相互作用によってウイルスと宿主細胞との結合を引き起こし、それによって侵入が開始される。ノイラミニダーゼは、感染宿主細胞の表面上のグリカン構造からシアル酸（末端ノイラミン酸残基）を切り離して子孫ウイルスを遊離させて宿主細胞から周囲の未感染細胞へのウイルスの拡散を可能にするエキソグリコシダーゼ酵素である。したがって、ノイラミニダーゼの阻害は抗ウイルス薬の薬理標的として役立つ。ウイルス拡散を減らすために使用されるウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤は同定されており、これにはオセルタミビル（タミフル（商標））、ザナミビル（リレンザ（商標））及びペラミビル（ラピバブ（商標））が含まれる。
しかしながら、移植レシピエントにおけるインフルエンザは依然、長期のウイルス排出を特徴としており、薬物耐性株を生む可能性を高めている。インフルエンザを治療するための新たなより効果的な療法が必要とされている。
本開示は、ウイルス成長を阻害するための複合体、組成物及び方法、ならびにウイルス感染症を治療する方法に関する。詳しくは、そのような複合体は、Ｆｃ単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに複合した、インフルエンザウイルス・ノイラミニダーゼを阻害する部分（例えば、ザナミビル、ペラミビルまたはその類縁体）の単量体または二量体を含有する。複合体中のノイラミニダーゼ阻害剤（例えば、ザナミビル、ペラミビルまたはその類縁体）はウイルス粒子の表面上のノイラミニダーゼを指向する。複合体中のＦｃ単量体またはＦｃドメインは免疫細胞上、例えば好中球上のＦｃγＲ（例えば、ＦｃＲｎ、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃγＲＩＩＩｂ）に結合して食作用及びエフェクター機能、例えば抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を活性化させ、かくして、免疫細胞によるウイルス粒子の貪食及び破壊が引き起こされ、複合体の抗ウイルス活性がさらに増強される。アルブミンまたはアルブミン結合ペプチドは、例えばアルブミンとリサイクリング胎児性Ｆｃ受容体との結合によって、複合体の半減期を延ばし得る。そのような組成物は、ウイルス成長を阻害する方法、ならびにウイルス感染症、例えば、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス及びＣ型インフルエンザウイルスに起因するものを治療する方法において有用である。
第１の態様において、本発明は、
式（Ｄ－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）、（１）もしくは（２）のいずれか１つで表される複合体：

Figure 2022546609000001
 〔式中、各Ａ１及び各Ａ２は独立して式（Ａ－Ｉ）～（Ａ－ＸＩＩ）：

Figure 2022546609000002
 のいずれか１つから選択され、
Ｒ１は、－ＯＨ、－ＮＨ２、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、及び－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨＲ６から選択され、Ｒ２及びＲ３は各々独立して、－Ｈ、－ＯＨ、－Ｆ、－Ｃｌ、及び－Ｂｒから選択され、Ｒ４は、－ＣＯ２Ｈ、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２、－ＳＯ３Ｈから選択され、Ｒ５は、－ＣＯＣＨ３、－ＣＯＣＦ３、－ＳＯ２ＣＨ３から選択され、Ｘは、－Ｏ－、及び－Ｓ－から選択され、Ｙは、



Figure 2022546609000003
 から選択され、
Ｒ６は、

Figure 2022546609000004
 から選択され、
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ２０アルキル、Ｃ３－Ｃ２０シクロアルキル、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択され、Ｒ８は、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択され、
ｎは１または２であり、
各Ｅは、Ｆｃドメイン単量体、アルブミンタンパク質、アルブミンタンパク質結合ペプチドまたはＦｃ結合ペプチドを含み、
Ｌは、Ｅに、ならびに各Ａ１のまたはＡ１及びＡ２の各々の各Ｙに共有結合しているリンカーであり、
Ｔは１～２０の整数であり、
式（Ｄ－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）、（１）または（２）の中の各波線は、Ｌが各Ｅに共有結合していることを表す〕、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とする。
いくつかの実施形態では、ｎは１であり、各Ｅは、Ｆｃドメイン単量体（例えば、配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有するＦｃドメイン単量体）、アルブミンタンパク質（例えば、配列番号１３９～１４１のいずれか１つの配列を有するアルブミンタンパク質）、アルブミンタンパク質結合ペプチドまたはＦｃ結合ペプチドを含む。
いくつかの実施形態では、ｎは２であり、各Ｅは、Ｆｃドメイン単量体（例えば、配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有するＦｃドメイン単量体）を含み、Ｆｃドメイン単量体は二量体化してＦｃドメインを形成し、
Ｌは、各Ｅに、ならびに各Ｙ、あるいはＡ１及び／またはＡ２の各々に共有結合しているリンカーであり、
Ｔは１～２０の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０）であり、式（Ｄ－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）、（１）または（２）の中の各波線は、Ｌが（例えば共有結合またはリンカーによって）各Ｅに共有結合していることを表し、またはその薬学的に許容される塩である。Ｔが１よりも大きい（例えばＴが、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）場合、各Ａ１－Ｌまたは各Ａ１－Ｌ－Ａ２は独立して選択され得る（例えば、本明細書に記載のＡ１－ＬまたはＡ１－Ｌ－Ａ２構造のいずれかから独立して選択され得る）。
本明細書に記載の態様のいずれかの好ましい実施形態では、ｎは２であり、各Ｅは、Ｆｃドメイン単量体（例えば、配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有するＦｃドメイン単量体）を含む。２つのＦｃドメイン単量体を有する複合体（例えば、式（１）、式（２）、ｎが２に等しいときの式（Ｄ－Ｉ）、またはｎが２に等しいときの式（Ｍ－Ｉ）の複合体）において、Ｆｃドメイン単量体は二量体化してＦｃドメインを形成する。
別の態様では、本発明は、式（Ｄ－Ｉ）で表される複合体：

Figure 2022546609000005
 〔式中、各Ｅは、Ｆｃドメイン単量体（例えば、配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有するＦｃドメイン単量体）を含み、各Ａ１－Ｌ－Ａ２中のＬは、Ｅ中のヒンジシステインの硫黄原子に、ならびにＡ１及びＡ２の各々に共有結合しているリンカーであり、ｎは１または２であり（例えばｎが２である場合、２つのＦｃドメイン単量体は二量体化してＦｃドメインを形成する）、Ｔは１～２０の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０）であり、Ｅに連結されている波線は、各Ａ１－Ｌ－Ａ２が（例えば共有結合またはリンカーによって）Ｅ中のヒンジシステインの硫黄原子に共有結合していることを表す〕、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とする。Ｔが１よりも大きい（例えばＴが、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）場合、各Ａ１－Ｌ－Ａ２は独立して選択され得る（例えば、本明細書に記載のＡ１－Ｌ－Ａ２構造のいずれかから独立して選択され得る）。
別の態様では、本発明は、式（Ｄ－Ｉ）で表される複合体：
Figure 2022546609000006
 〔式中、各Ｅは、Ｆｃドメイン単量体（例えば、配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有するＦｃドメイン単量体）を含み、各Ａ１－Ｌ－Ａ２中のＬは、Ｅ中の表面露出リジンの窒素原子に、ならびにＡ１及びＡ２の各々に共有結合しているリンカーであり、ｎは１または２であり（例えばｎが２である場合、２つのＦｃドメイン単量体は二量体化してＦｃドメインを形成する）、Ｔは１～２０の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０）であり、Ｅに連結されている波線は、各Ａ１－Ｌ－Ａ２が（例えば共有結合またはリンカーによって）Ｅ中の表面露出リジンの窒素原子に共有結合していることを表す〕、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とする。Ｔが１よりも大きい（例えばＴが、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）場合、各Ａ１－Ｌ－Ａ２は独立して選択され得る（例えば、本明細書に記載のＡ１－Ｌ－Ａ２構造のいずれかから独立して選択され得る）。いくつかの実施形態では、Ａ１及びＡ２の各々は独立して、式（Ａ－Ｉ）、（Ａ－ＩＩ）、（Ａ－ＶＩ）または（Ａ－ＶＩＩ）のいずれか１つから選択され得る。他の実施形態では、Ａ１及びＡ２の各々は独立して式（Ａ－Ｉ）から選択され得る。
別の態様では、本発明は、式（Ｍ－Ｉ）で表される複合体：
Figure 2022546609000007
 〔式中、各Ｅは、Ｆｃドメイン単量体（例えば、配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有するＦｃドメイン単量体）を含み、各Ｌ－Ａ１中のＬは、Ｅ中のヒンジシステインの硫黄原子に、及びＡ１に共有結合しているリンカーであり、ｎは１または２であり（例えばｎが２である場合、２つのＦｃドメイン単量体は二量体化してＦｃドメインを形成する）、Ｔは１～２０の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０）であり、Ｅに連結されている波線は、各Ｌ－Ａ１が（例えば共有結合またはリンカーによって）Ｅ中のヒンジシステインの硫黄原子に共有結合していることを表す〕、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とする。Ｔが１よりも大きい（例えばＴが、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）場合、各Ａ１は独立して、式（Ａ－Ｉ）～（Ａ－ＸＩＩ）で表される任意の構造から選択され得る。いくつかの実施形態では、各Ａ１は独立して、式（Ａ－Ｉ）、（Ａ－ＩＩ）、（Ａ－ＶＩ）または（Ａ－ＶＩＩ）のいずれか１つから選択され得る。他の実施形態では、各Ａ１は独立して式（Ａ－Ｉ）から選択され得る。
別の態様では、本発明は、式（Ｍ－Ｉ）で表される複合体：
Figure 2022546609000008
 〔式中、各Ｅは、Ｆｃドメイン単量体（例えば、配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有するＦｃドメイン単量体）を含み、各Ｌ－Ａ１中のＬは、Ｅ中の表面露出リジンの窒素原子に、及びＡ１に共有結合しているリンカーであり、ｎは１または２であり（例えばｎが２である場合、２つのＦｃドメイン単量体は二量体化してＦｃドメインを形成する）、Ｔは１～２０の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０）であり、Ｅに連結されている波線は、各Ｌ－Ａ１が（例えば共有結合またはリンカーによって）Ｅ中の表面露出リジンの窒素原子に共有結合していることを表す〕、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とする。Ｔが１よりも大きい（例えばＴが、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）場合、各Ａ１は独立して、式（Ａ－Ｉ）～（Ａ－ＸＩＩ）で表される任意の構造から選択され得る。いくつかの実施形態では、各Ａ１は独立して、式（Ａ－Ｉ）、（Ａ－ＩＩ）、（Ａ－ＶＩ）または（Ａ－ＶＩＩ）のいずれか１つから選択され得る。他の実施形態では、各Ａ１は独立して式（Ａ－Ｉ）から選択され得る。
一態様において、本開示は、式（１）で表される複合体：
Figure 2022546609000009
 〔式中、各Ａ１及び各Ａ２は独立して式（Ａ－Ｉ）～（Ａ－ＸＩＩ）のいずれか１つから選択され、
各ＥはＦｃドメイン単量体（例えば、配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有するＦｃドメイン単量体）を含み、各Ａ１－Ｌ－Ａ２中のＬは、各Ｅ中のヒンジシステインの硫黄原子に、ならびにＡ１及びＡ２の各々に共有結合しているリンカーであり、Ｔは１～２０の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０）であり、２つのＥに連結されている２本の波線は、各Ａ１－Ｌ－Ａ２が（例えば共有結合またはリンカーによって）２つのＥの中の２つのヒンジシステインの硫黄原子の対に共有結合していることを表す〕、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とする。Ｔが１よりも大きい（例えばＴが、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）場合、各Ａ１－Ｌ－Ａ２は独立して選択され得る（例えば、本明細書に記載のＡ１－Ｌ－Ａ２構造のいずれかから独立して選択され得る）。いくつかの実施形態では、Ａ１及びＡ２の各々は独立して、式（Ａ－Ｉ）、（Ａ－ＩＩ）、（Ａ－ＶＩ）または（Ａ－ＶＩＩ）のいずれか１つから選択され得る。他の実施形態では、Ａ１ Ａ２の各々は独立して式（Ａ－Ｉ）から選択され得る。
別の態様では、本開示は、式（１）で表される複合体：
Figure 2022546609000010
 〔式中、各Ａ１及び各Ａ２は独立して式（Ａ－Ｉ）～（Ａ－Ｖ）のいずれか１つから選択され、各ＥはＦｃドメイン単量体（例えば、配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有するＦｃドメイン単量体）を含み、各Ａ１－Ｌ－Ａ２中のＬは、各Ｅ中のヒンジシステインの硫黄原子に、ならびにＡ１及びＡ２の各々に共有結合しているリンカーであり、Ｔは１～２０の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０）であり、２つのＥに連結されている２本の波線は、各Ａ１－Ｌ－Ａ２が（例えば共有結合またはリンカーによって）２つのＥの中の２つのヒンジシステインの硫黄原子の対に共有結合していることを表す〕、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とする。Ｔが１よりも大きい（例えばＴが、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）場合、各Ａ１－Ｌ－Ａ２は独立して選択され得る（例えば、本明細書に記載のＡ１－Ｌ－Ａ２構造のいずれかから独立して選択され得る）。
別の態様では、本開示は、式（１）で表される複合体：
Figure 2022546609000011
 〔式中、各Ａ１及び各Ａ２は独立して式（Ａ－ＶＩ）～（Ａ－ＩＸ）のいずれか１つから選択され、各ＥはＦｃドメイン単量体（例えば、配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有するＦｃドメイン単量体）を含み、各Ａ１－Ｌ－Ａ２中のＬは、各Ｅ中のヒンジシステインの硫黄原子に、ならびにＡ１及びＡ２の各々に共有結合しているリンカーであり、Ｔは１～２０の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０）であり、２つのＥに連結されている２本の波線は、各Ａ１－Ｌ－Ａ２が（例えば共有結合またはリンカーによって）２つのＥの中の２つのヒンジシステインの硫黄原子の対に共有結合していることを表す〕、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とする。Ｔが１よりも大きい（例えばＴが、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）場合、各Ａ１－Ｌ－Ａ２は独立して選択され得る（例えば、本明細書に記載のＡ１－Ｌ－Ａ２構造のいずれかから独立して選択され得る）。
別の態様では、本発明は、式（２）で表される複合体：
Figure 2022546609000012
 〔式中、各Ａ１は独立して式（Ａ－Ｉ）～（Ａ－ＸＩＩ）のいずれか１つから選択され、各ＥはＦｃドメイン単量体（例えば、配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有するＦｃドメイン単量体）を含み、各Ｌ－Ａ１中のＬは、Ｅ中のヒンジシステインの中の硫黄原子に、及びＡ１に共有結合しているリンカーであり、Ｔは１～２０の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０）であり、２つの硫黄原子に連結されている２本の波線は、各Ｌ－Ａ１が（例えば共有結合またはリンカーによって）２つのＥの中の２つのヒンジシステインの硫黄原子の対に共有結合していることを表す〕、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とする。Ｔが１よりも大きい（例えばＴが、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）場合、各Ａ１は独立して式（Ａ－Ｉ）～（Ａ－ＸＩＩ）のいずれか１つから選択され得る。いくつかの実施形態では、Ａ１及びＡ２の各々は独立して、式（Ａ－Ｉ）、（Ａ－ＩＩ）、（Ａ－ＶＩ）または（Ａ－ＶＩＩ）のいずれか１つから選択され得る。他の実施形態では、Ａ１ Ａ２の各々は独立して式（Ａ－Ｉ）から選択され得る。
別の態様では、本発明は、式（２）で表される複合体：
Figure 2022546609000013
 〔式中、各Ａ１は独立して式（Ａ－Ｉ）～（Ａ－Ｖ）のいずれか１つから選択され、各ＥはＦｃドメイン単量体（例えば、配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有するＦｃドメイン単量体）を含み、各Ｌ－Ａ１中のＬは、Ｅ中のヒンジシステインの中の硫黄原子に、及びＡ１に共有結合しているリンカーであり、Ｔは１～２０の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０）であり、２つの硫黄原子に連結されている２本の波線は、各Ｌ－Ａ１が（例えば共有結合またはリンカーによって）２つのＥの中の２つのヒンジシステインの硫黄原子の対に共有結合していることを表す〕、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とする。Ｔが１よりも大きい（例えばＴが、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）場合、各Ａ１は独立して式（Ａ－Ｉ）～（Ａ－Ｖ）のいずれか１つから選択され得る。
別の態様では、本発明は、式（２）で表される複合体：
Figure 2022546609000014
 〔式中、各Ａ１は独立して式（Ａ－ＶＩ）～（Ａ－ＩＸ）のいずれか１つから選択され、各ＥはＦｃドメイン単量体（例えば、配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有するＦｃドメイン単量体）を含み、各Ｌ－Ａ１中のＬは、Ｅ中のヒンジシステインの中の硫黄原子に、及びＡ１に共有結合しているリンカーであり、Ｔは１～２０の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０）であり、２つの硫黄原子に連結されている２本の波線は、各Ｌ－Ａ１が（例えば共有結合またはリンカーによって）２つのＥの中の２つのヒンジシステインの硫黄原子の対に共有結合していることを表す〕、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とする。Ｔが１よりも大きい（例えばＴが、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）場合、各Ａ１は独立して式（Ａ－ＶＩ）～（Ａ－ＩＸ）のいずれか１つから選択され得る。
上記実施形態のいずれかの、いくつかの実施形態では、各Ｅは、配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有するＦｃドメイン単量体を含む。
いくつかの実施形態では、対になっている硫黄原子の少なくとも１つは、配列番号１０または配列番号１１のヒンジシステイン、すなわち配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１０、Ｃｙｓ１３、Ｃｙｓ１６またはＣｙｓ１８に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）である。いくつかの実施形態では、対になっている硫黄原子は、配列番号１０もしくは配列番号１１の中のＣｙｓ１０とＣｙｓ１３、配列番号１０もしくは配列番号１１の中のＣｙｓ１０とＣｙｓ１６、配列番号１０もしくは配列番号１１の中のＣｙｓ３０とＣｙｓ１８、配列番号１０もしくは配列番号１１の中のＣｙｓ１３とＣｙｓ３６、配列番号１０もしくは配列番号１１の中のＣｙｓ１３とＣｙｓ３８、及び／または配列番号１０もしくは配列番号１１の中のＣｙｓ３６とＣｙｓ３８に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）である。いくつかの実施形態では、Ｔが２である場合、対になっている硫黄原子は、配列番号１０もしくは配列番号１１の中のＣｙｓ１０とＣｙｓ１３、または配列番号１０もしくは配列番号１１の中のＣｙｓ３６とＣｙｓ３８（例えばそれに対応する硫黄原子）である。
いくつかの実施形態では、硫黄原子の対は、各Ｅから１つずつの、システインの硫黄原子を含み、つまり、Ｌ－Ａはそれに結合している硫黄原子と一緒になって２つのＦｃドメイン（例えば、配列番号１０または配列番号１１の配列を含む２つのＦｃドメイン）の間の架橋を形成している。いくつかの実施形態では、硫黄原子の対は、１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１０に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１０に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）である。いくつかの実施形態では、硫黄原子の対は、１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１３に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１３に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）である。いくつかの実施形態では、硫黄原子の対は、１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１６に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１６に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）である。いくつかの実施形態では、硫黄原子の対は、１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１８に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１８に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）である。
いくつかの実施形態では、Ｔが２である場合、硫黄原子の対は、１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１０に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１０に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）、及び１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１３に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１３に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）である。いくつかの実施形態では、Ｔが２である場合、硫黄原子の対は、１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１０に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１０に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）、及び１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１６に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１６に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）である。いくつかの実施形態では、Ｔが２である場合、硫黄原子の対は、１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１０に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１０に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）、及び１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１８に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１８に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）である。
いくつかの実施形態では、Ｔが２である場合、硫黄原子の対は、１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１３に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１３に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）、及び１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１６に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１６に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）である。いくつかの実施形態では、Ｔが２である場合、硫黄原子の対は、１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１３に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１３に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）、及び１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１８に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１８に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）である。
いくつかの実施形態では、Ｔが２である場合、硫黄原子の対は、１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１６に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１６に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）、及び１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１８に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１８に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）である。
いくつかの実施形態では、Ｔが３である場合、硫黄原子の対は、１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１０に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１０に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）；１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１３に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１３に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）；及び１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１６に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１６に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）である。いくつかの実施形態では、Ｔが３である場合、硫黄原子の対は、１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１０に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１０に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）；１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１３に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１３に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）；及び１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１８に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１８に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）である。いくつかの実施形態では、Ｔが３である場合、硫黄原子の対は、１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１０に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１０に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）；１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１８に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１８に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）；及び１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１６に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１６に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）である。いくつかの実施形態では、Ｔが３である場合、硫黄原子の対は、１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１３に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１３に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）；１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１８に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１８に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）；及び１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１６に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１６に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）である。
いくつかの実施形態では、Ｔが３である場合、硫黄原子の対は、１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１０に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１０に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）；１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１３に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１３に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）；１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１６に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１６に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）；及び１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１８に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号１０または配列番号１１のＣｙｓ１８に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）である。
いくつかの実施形態では、複合体は構造：
Figure 2022546609000015
 〔式中、ａ、ｂ、ｃ及びｄの各々は独立して０または１であり、ａ、ｂ、ｃまたはｄが０であるとき２つの硫黄原子はジスルフィド結合を形成している〕1b
を有する。
いくつかの実施形態では、ａは１であり、ｂ、ｃ及びｄは０である。いくつかの実施形態では、ａ及びｂは１であり、ｃ及びｄは０である。いくつかの実施形態では、ａ及びｃは１であり、ｂ及びｄは０である。いくつかの実施形態では、ａ及びｄは１であり、ｂ及びｃは０である。いくつかの実施形態では、ａ、ｂ及びｃは１であり、ｄは０である。いくつかの実施形態では、ａ、ｂ及びｄは１であり、ｃは０である。いくつかの実施形態では、ａ、ｃ及びｄは１であり、ｂは０である。いくつかの実施形態では、ｂ及びｃは１であり、ａ及びｄは０である。いくつかの実施形態では、ｂ及びｄは１であり、ａ及びｃは０である。いくつかの実施形態では、ｂ、ｃ及びｄは１であり、ａは０である。いくつかの実施形態では、ｃ及びｄは１であり、ａ及びｂは０である。いくつかの実施形態では、ａ、ｂ、ｃ及びｄは１である。
いくつかの実施形態では、各Ｅは配列
ＭＶＲＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４）
を含む。
いくつかの実施形態では、各Ｅは配列
ＭＶＲＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＹＩＴＲＥＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３３）
を含む。
いくつかの実施形態では、対になっている硫黄原子の少なくとも１つは、配列番号４または配列番号３３のヒンジシステイン、すなわちＣｙｓ１０及び／またはＣｙｓ１３に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）である。いくつかの実施形態では、硫黄原子の対は、配列番号４または配列番号３３の中のＣｙｓ１０及びＣｙｓ１３に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）である。
いくつかの実施形態では、硫黄原子の対は、各Ｅから１つずつの、システインの硫黄原子を含み、つまり、Ｌ－Ａはそれに結合している硫黄原子と一緒になって２つのＦｃドメイン（例えば、配列番号４または配列番号３３の配列を含む２つのＦｃドメイン）の間の架橋を形成している。いくつかの実施形態では、硫黄原子の対は、１つのＥからの配列番号４または配列番号３３のＣｙｓ１０に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号４または配列番号３３のＣｙｓ１０に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）である。いくつかの実施形態では、硫黄原子の対は、１つのＥからの配列番号４または配列番号３３のＣｙｓ１３に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号４または配列番号３３のＣｙｓ１３に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）である。いくつかの実施形態では、Ｔが２である場合、硫黄原子の対は、１つのＥからの配列番号４または配列番号３３のＣｙｓ１０に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号４または配列番号３３のＣｙｓ１０に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）、及び１つのＥからの配列番号４または配列番号３３のＣｙｓ１３に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号４または配列番号３３のＣｙｓ１３に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）である。
いくつかの実施形態では、複合体は構造：
Figure 2022546609000016
 〔式中、ａ及びｂの各々は独立して０または１であり、ａまたはｂが０であるとき２つの硫黄原子はジスルフィド結合を形成している〕
を有する。いくつかの実施形態では、ａは１であり、ｂは０である。いくつかの実施形態では、ａは０であり、ｂは１である。いくつかの実施形態では、ａ及びｂは１である。
いくつかの実施形態では、対になっている硫黄原子の少なくとも１つは、配列番号８のヒンジシステイン、すなわちＣｙｓ１０及び／またはＣｙｓ１３に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）である。いくつかの実施形態では、硫黄原子の対は、配列番号８の中のＣｙｓ１０及びＣｙｓ１３に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）である。
いくつかの実施形態では、硫黄原子の対は、各Ｅから１つずつの、システインの硫黄原子を含み、つまり、Ｌ－Ａはそれに結合している硫黄原子と一緒になって２つのＦｃドメイン（例えば、配列番号８の配列を含む２つのＦｃドメイン）の間の架橋を形成している。いくつかの実施形態では、硫黄原子の対は、１つのＥからの配列番号８のＣｙｓ１０に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号８のＣｙｓ１０に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）である。いくつかの実施形態では、硫黄原子の対は、１つのＥからの配列番号８のＣｙｓ１３に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号８のＣｙｓ１３に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）である。いくつかの実施形態では、Ｔが２である場合、硫黄原子の対は、１つのＥからの配列番号８のＣｙｓ１０に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号８のＣｙｓ１０に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）、及び１つのＥからの配列番号８のＣｙｓ１３に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）と、もう１つのＥからの配列番号８のＣｙｓ１３に対応する硫黄原子（例えばそれの硫黄原子）である。
いくつかの実施形態では、複合体は構造：
Figure 2022546609000017
 〔式中、ａ及びｂの各々は独立して０または１であり、ａまたはｂが０であるとき２つの硫黄原子はジスルフィド結合を形成している〕
を有する。いくつかの実施形態では、ａは１であり、ｂは０である。いくつかの実施形態では、ａは０であり、ｂは１である。いくつかの実施形態では、ａ及びｂは１である。
いくつかの実施形態では、複合体は構造：
Figure 2022546609000018
 〔式中、ａ及びｂの各々は独立して０または１であり、ａまたはｂが０であるとき２つの硫黄原子はジスルフィド結合を形成している〕
を有する。いくつかの実施形態では、ａは１であり、ｂは０である。いくつかの実施形態では、ａは０であり、ｂは１である。いくつかの実施形態では、ａ及びｂは１である。
いくつかの実施形態では、複合体は構造：
Figure 2022546609000019
 〔式中、ａ及びｂの各々は独立して０または１であり、ａまたはｂが０であるとき２つの硫黄原子はジスルフィド結合を形成している〕
を有する。いくつかの実施形態では、ａは１であり、ｂは０である。いくつかの実施形態では、ａは０であり、ｂは１である。いくつかの実施形態では、ａ及びｂは１である。
いくつかの実施形態では、複合体は構造：
Figure 2022546609000020
 〔式中、ａ及びｂの各々は独立して０または１であり、ａまたはｂが０であるとき硫黄原子はチオールである〕
を有する。いくつかの実施形態では、ａは１であり、ｂは０である。いくつかの実施形態では、ａは０であり、ｂは１である。いくつかの実施形態では、ａ及びｂは１である。
先の３つの態様のいくつかの実施形態では、窒素原子は、表面露出リジンの窒素、例えば、配列番号１０または配列番号１１のＬｙｓ３５、Ｌｙｓ６３、Ｌｙｓ７７、Ｌｙｓ７９、Ｌｙｓ１０６、Ｌｙｓ１２３、Ｌｙｓ１２９、Ｌｙｓ１８１、Ｌｙｓ２０３、Ｌｙｓ２２８またはＬｙｓ２３６に対応する窒素原子（例えばそれの窒素原子）である。いくつかの実施形態では、窒素原子は、配列番号１０または配列番号１１のＬｙｓ６５、Ｌｙｓ７９、Ｌｙｓ１０８、Ｌｙｓ２３０及び／またはＬｙｓ２３８に対応する窒素原子（例えばそれの窒素原子）である。
いくつかの実施形態では、複合体は構造：
Figure 2022546609000021
 〔式中、ａ、ｂ、ｃ、ｄ及びｅの各々は独立して０または１であり、ａ、ｂ、ｃ、ｄまたはｅが０であるとき２つの窒素原子はＮＨ２である〕を有する。いくつかの実施形態では、ａは１であり、ｂ、ｃ、ｄ及びｅは０である。いくつかの実施形態では、ｂは１であり、ａ、ｃ、ｄ及びｅは０である。いくつかの実施形態では、ｃは１であり、ａ、ｂ、ｄ及びｅは０である。いくつかの実施形態では、ｄは１であり、ａ、ｂ、ｃ及びｅは０である。いくつかの実施形態では、ｅは１であり、ａ、ｂ、ｃ及びｄは０である。いくつかの実施形態では、ａ及びｂは１であり、ｃ、ｄ及びｅは０である。いくつかの実施形態では、ａ及びｃは１であり、ｂ、ｄ及びｅは０である。いくつかの実施形態では、ａ及びｄは１であり、ｂ、ｃ及びｅは０である。いくつかの実施形態では、ａ及びｅは１であり、ｂ、ｃ及びｄは０である。いくつかの実施形態では、ｂ及びｃは１であり、ａ、ｄ及びｅは０である。いくつかの実施形態では、ｂ及びｄは１であり、ａ、ｃ及びｅは０である。いくつかの実施形態では、ｂ及びｅは１であり、ａ、ｃ及びｄは０である。いくつかの実施形態では、ｃ及びｄは１であり、ａ、ｂ及びｅは０である。いくつかの実施形態では、ｃ及びｅは１であり、ａ、ｂ及びｄは０である。いくつかの実施形態では、ｄ及びｅは１であり、ａ、ｂ及びｃは０である。いくつかの実施形態では、ａ、ｂ及びｃは１であり、ｄ及びｅは０である。いくつかの実施形態では、ａ、ｂ及びｄは１であり、ｃ及びｅは０である。いくつかの実施形態では、ａ、ｂ及びｅは１であり、ｃ及びｄは０である。いくつかの実施形態では、ａ、ｃ及びｄは１であり、ｂ及びｅは０である。いくつかの実施形態では、ａ、ｃ及びｅは１であり、ｂ及びｄは０である。いくつかの実施形態では、ａ、ｄ及びｅは１であり、ｂ及びｃは０である。いくつかの実施形態では、ｂ、ｃ及びｄは１であり、ａ及びｅは０である。いくつかの実施形態では、ｂ、ｄ及びｅは１であり、ａ及びｃは０である。いくつかの実施形態では、ｃ、ｄ及びｅは１であり、ａ及びｂは０である。
本明細書に記載の複合体のいずれかの、いくつかの実施形態では、複合体は、Ｆｃドメインを含むホモ二量体を形成する。本明細書に記載の複合体のいくつかの実施形態では、Ｅは別のＥとホモ二量体化してＦｃドメインを形成する。
別の態様において、本発明は、（Ｄ－Ｉ）で表される複合体：
Figure 2022546609000022
 〔式中、Ｅは、アルブミンタンパク質（例えば、配列番号１３９～１４１のいずれか１つの配列を有するアルブミンタンパク質）、アルブミン結合ペプチドまたはＦｃ結合ペプチドを含み、各Ａ１－Ｌ－Ａ２中のＬは、独立してＥ中の表面露出システインの硫黄原子または表面露出リジンの窒素原子と、Ａ１及びＡ２の各々とに共有結合しているリンカーであり、ｎは１であり、Ｔは１～２０の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０）であり、Ｅに連結されている波線は、各Ａ１－Ｌ－Ａ２が独立してＥ中の溶媒曝露システインの硫黄原子または溶媒曝露リジンの窒素原子に共有結合していることを表す〕、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とする。Ｔが１より大きい（例えばＴが、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）場合、各Ａ１－Ｌ－Ａ２は独立して選択され得る（例えば、本明細書に記載のＡ１－Ｌ－Ａ２構造のいずれかから独立して選択され得る）。いくつかの実施形態では、Ａ１ Ａ２の各々は独立して式（Ａ－Ｉ）、（Ａ－ＩＩ）、（Ａ－ＶＩ）または（Ａ－ＶＩＩ）のいずれか１つから選択され得る。他の実施形態では、Ａ１ Ａ２の各々は独立して式（Ａ－Ｉ）から選択され得る。
上記の好ましい実施形態では、ｘは２である。
別の態様では、本発明は、式（Ｍ－Ｉ）で表される複合体：
Figure 2022546609000023
 〔式中、Ｅは、アルブミンタンパク質（例えば、配列番号１３９～１４１のいずれか１つの配列を有するアルブミンタンパク質）、アルブミン結合ペプチドまたはＦｃ結合ペプチドを含み、各Ｌ－Ａ１中のＬは、独立してＥ中の表面露出システインの硫黄原子または表面露出リジンの窒素原子と、Ａ１とに共有結合しているリンカーであり、ｎは１であり、Ｔは１～２０の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０）であり、Ｅに連結されている波線は、各Ｌ－Ａ１が独立してＥ中の溶媒曝露システインの硫黄原子または溶媒曝露リジンの窒素原子に共有結合していることを表す〕、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とする。Ｔが１よりも大きい（例えばＴが、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）場合、各Ａ１は独立して、式（Ａ－Ｉ）～（Ａ－ＸＩＩ）で表される任意の構造から選択され得る。いくつかの実施形態では、各Ａ１は独立して、式（Ａ－Ｉ）、（Ａ－ＩＩ）、（Ａ－ＶＩ）または（Ａ－ＶＩＩ）のいずれか１つから選択され得る。他の実施形態では、各Ａ１は独立して式（Ａ－Ｉ）から選択され得る。上記の好ましい実施形態では、ｘは２である。
いくつかの実施形態では、各Ｅは、配列番号１３９～１４１のいずれか１つの配列を有するアルブミンタンパク質を含む。
いくつかの実施形態では、Ｔは１であり、Ｌ－Ａ１は、配列番号１３９のＣｙｓ３４に対応する硫黄原子に共有結合している。
表１ａの中間体は、本明細書に記載または例示されている方法のいずれかを含めた当業者に知られている任意の好適な方法によってＦｃドメインまたはＦｃドメイン単量体に（例えばリンカーによって）複合され得る。いくつかの実施形態では、複合体（例えば式（１）、（２）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、または（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）のいずれか１つで表される複合体）はＥを含み、ＥはＦｃドメイン単量体またはＦｃドメイン（例えば、各Ｆｃドメイン単量体が独立して配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有しているＦｃドメイン単量体またはＦｃドメイン）である。好ましい実施形態では、Ｅの１つ以上の表面露出リジン残基の１つ以上の窒素原子、またはＥ中の１つ以上の表面露出システインの１つ以上の硫黄原子は、共有結合によってリンカー（例えば、ＰＥＧ２～ＰＥＧ２０リンカー）と複合している。Ｅに複合しているリンカーは、反応して本明細書に記載のＩｎｔのいずれか（例えば表１ａのＩｎｔ）との共有結合を形成し得るように官能化されたものであり得る。好ましい実施形態では、Ｅは、アジド基で官能化されたリンカーと複合しており、Ｉｎｔ（例えば表１ａのＩｎｔ）はアルキン基で官能化されている。Ｅのリンカー－アジドと、Ｉｎｔのリンカー－アルキンとの（例えばクリックケミストリーによる）複合によって本発明の複合体、例えば、式（５）で表される複合体が形成される。さらに他の実施形態では、Ｅは、アルキン基で官能化されたリンカーと複合しており、Ｉｎｔ（例えば表１ａのＩｎｔ）はアジド基で官能化されている。Ｅのリンカー－アルキンと、Ｉｎｔのリンカー－アジドとの（例えばクリックケミストリーによる；例えば図１０３参照）複合によって本発明の複合体、例えば、式（１）、（２）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、または（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）のいずれか１つで表される複合体が形成される。


Figure 2022546609000024
Figure 2022546609000025
Figure 2022546609000026
Figure 2022546609000027
Figure 2022546609000028
Figure 2022546609000029
Figure 2022546609000030
Figure 2022546609000031
Figure 2022546609000032
Figure 2022546609000033
Figure 2022546609000034
Figure 2022546609000035
Figure 2022546609000036
Figure 2022546609000037
Figure 2022546609000038
Figure 2022546609000039
Figure 2022546609000040
Figure 2022546609000041
別の態様では、本発明は、表１ｂの複合体を特徴とする。表１ｂの各複合体は、示されている式（Ｍ－Ｉ）または式（Ｄ－Ｉ）のいずれかの複合体に対応する。表１ｂの複合体は、表１ａのＩｎｔとリンカーとが共有結合的に反応してこのリンカーが今度はＥ（例えば、Ｆｃドメイン単量体、アルブミンタンパク質、アルブミンタンパク質結合ペプチドまたはＦｃ結合ペプチド）と複合することによって形成された複合体を含む。いくつかの実施形態では、共有結合によって表１ａのＩｎｔをＥに結合させるように、Ｉｎｔの反応性部分（例えば、アルキンまたはアジド基）は、Ｅに共有結合している（Ｌ’で表される）リンカーの対応する反応性基（例えばアルキンまたはアジド基）と反応する。表１ｂに示されているように、Ｌ’は、（Ｍ－１）または（Ｄ－Ｉ）において定義されるＬの残部に対応する（例えばＬ’は、ＩｎｔとＥとを共有結合で結び合わせているリンカーである）。例えば、Ｌ’は、（Ｉｎｔと、Ｅに複合したリンカーとのクリックケミストリー反応によって形成された）トリアゾール、及びリンカー（例えば、ＰＥＧ２～ＰＥＧ２０リンカー）を含み得、このリンカーが今度はＥのアミノ酸側鎖に複合する（例えば図１０３を参照されたい）。
いくつかの実施形態では、表１ｂの複合体においてｎは１または２である。ｎが１である場合、各Ｅは、Ｆｃドメイン単量体（例えば、配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有するＦｃドメイン単量体）、アルブミンタンパク質（例えば、配列番号１３９～１４１のいずれか１つの配列を有するアルブミンタンパク質）、アルブミンタンパク質結合ペプチドまたはＦｃ結合ペプチドを含む。ｎが２である場合、各ＥはＦｃドメイン単量体（例えば、配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有するＦｃドメイン単量体）を含み、Ｆｃドメイン単量体は二量体化してＦｃドメインを形成する。
表１ｂの任意の複合体のいくつかの実施形態では、Ｔは１～２０の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０）である。本開示はさらに、表２の複合体のいずれかの集団を提供し、ここで、Ｔの平均値は１～２０である（例えば、Ｔの平均値は１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である）。いくつかの実施形態では、Ｔの平均値は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である。ある実施形態では、平均Ｔは１～１０（例えば、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５または１０）である。ある実施形態では、平均Ｔは１～５（例えば、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９または５）である。いくつかの実施形態では、平均Ｔは５～１０（例えば、５、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０）である。いくつかの実施形態では、平均Ｔは２．５～７．５（例えば、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７、７．１、７．２、７．３、７．４または７．５）である。
表１ｂの複合体の中の波線は、各Ｌ’－ＩｎｔがＥ中のアミノ酸側鎖（例えば、Ｅ中の表面露出リジンの窒素原子または表面露出システインの硫黄原子）またはその薬学的に許容される塩に共有結合していることを表す。


Figure 2022546609000042
Figure 2022546609000043
Figure 2022546609000044
Figure 2022546609000045
Figure 2022546609000046
Figure 2022546609000047
Figure 2022546609000048
Figure 2022546609000049
Figure 2022546609000050
Figure 2022546609000051
Figure 2022546609000052
Figure 2022546609000053
Figure 2022546609000054
Figure 2022546609000055
Figure 2022546609000056
Figure 2022546609000057
Figure 2022546609000058
Figure 2022546609000059
Figure 2022546609000060
Figure 2022546609000061
Figure 2022546609000062
Figure 2022546609000063
Figure 2022546609000064
Figure 2022546609000065
Figure 2022546609000066
Figure 2022546609000067
Figure 2022546609000068
Figure 2022546609000069
Figure 2022546609000070
Figure 2022546609000071
Figure 2022546609000072
いくつかの実施形態では、各Ｅは、配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有するＦｃドメイン単量体を含む。他の実施形態では、各Ｅは、配列番号６３または配列番号６４のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である配列を有するＦｃドメイン単量体を含む。他の実施形態では、各Ｅは、配列番号６３または配列番号６４のアミノ酸配列を有するＦｃドメイン単量体を含む。他の実施形態では、各Ｅは、配列番号６７または配列番号６８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である配列を有するＦｃドメイン単量体を含む。他の実施形態では、各Ｅは、配列番号６７または配列番号６８のアミノ酸配列を有するＦｃドメイン単量体を含む。他の実施形態では、各Ｅは、配列番号７２または配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である配列を有するＦｃドメイン単量体を含む。他の実施形態では、各Ｅは、配列番号７２または配列番号７３のアミノ酸配列を有するＦｃドメイン単量体を含む。他の実施形態では、各Ｅは、配列番号７６または配列番号７７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である配列を有するＦｃドメイン単量体を含む。他の実施形態では、各Ｅは、配列番号７６または配列番号７７のアミノ酸配列を有するＦｃドメイン単量体を含む。他の実施形態では、各Ｅは、配列番号８１または配列番号８２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である配列を有するＦｃドメイン単量体を含む。他の実施形態では、各Ｅは、配列番号８１または配列番号８２のアミノ酸配列を有するＦｃドメイン単量体を含む。他の実施形態では、各Ｅは、配列番号８５または配列番号８６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である配列を有するＦｃドメイン単量体を含む。他の実施形態では、各Ｅは、配列番号８５または配列番号８６のアミノ酸配列を有するＦｃドメイン単量体を含む。
別の態様において、本発明は、複合体であって、（ｉ）第１部分Ａ１、（ｉｉ）第２部分Ａ２、（ｉｉｉ）Ｆｃドメイン単量体またはＦｃドメイン、ならびに（ｉｖ）Ａ１及びＡ２に、かつＦｃドメイン単量体またはＦｃドメインに共有結合しているリンカーを含み；各Ａ１及び各Ａ２が、独立して式（Ａ－Ｉ）～（Ａ－ＸＩＩ）のいずれか１つから選択されるものである、当該複合体を特徴とする。いくつかの実施形態では、Ａ１及びＡ２の各々は独立して、式（Ａ－Ｉ）、（Ａ－ＩＩ）、（Ａ－ＶＩ）または（Ａ－ＶＩＩ）のいずれか１つから選択され得る。他の実施形態では、Ａ１及びＡ２の各々は独立して式（Ａ－Ｉ）から選択され得る。上記の好ましい実施形態では、ｘは２である。
別の態様において、本発明は、（ｉ）第１部分Ｉｎｔ、（ｉｉ）Ｆｃドメイン単量体またはＦｃドメイン、ならびに（ｉｖ）Ｉｎｔに、かつＦｃドメイン単量体またはＦｃドメインに共有結合しているリンカーを含み；各Ｉｎｔが、独立して表１ａの中間体のいずれか１つから選択されるものである、当該複合体を特徴とする。
別の態様において、本発明は、複合体であって、（ｉ）第１部分Ａ１、（ｉｉ）第２部分Ａ２、（ｉｉｉ）アルブミンタンパク質、アルブミンタンパク質結合ペプチドまたはＦｃ結合ペプチド、ならびに（ｉｖ）Ａ１及びＡ２に、かつアルブミンタンパク質、アルブミンタンパク質結合ペプチドまたはＦｃ結合ペプチドに共有結合しているリンカーを含み；各Ａ１及び各Ａ２が、独立して式（Ａ－Ｉ）～（Ａ－ＸＩＩ）のいずれか１つから選択されるものである、当該複合体を特徴とする。いくつかの実施形態では、Ａ１及びＡ２の各々は独立して、式（Ａ－Ｉ）、（Ａ－ＩＩ）、（Ａ－ＶＩ）または（Ａ－ＶＩＩ）のいずれか１つから選択され得る。他の実施形態では、Ａ１及びＡ２の各々は独立して式（Ａ－Ｉ）から選択され得る。上記の好ましい実施形態では、ｘは２である。
別の態様において、本発明は、式（Ｄ－Ｉ）で表される複合体：
Figure 2022546609000073
 〔式中、各Ａ１及び各Ａ２は独立して式（Ａ－Ｉ）～（Ａ－ＸＩＩ）のいずれか１つから選択され、各Ｅは、Ｆｃドメイン単量体（例えば、配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有するＦｃドメイン単量体）、アルブミンタンパク質（例えば、配列番号１３９～１４１のいずれか１つの配列を有するアルブミンタンパク質）、アルブミンタンパク質結合ペプチドまたはＦｃ結合ペプチドを含み、ｎは１または２であり、Ｔは１～２０の整数であり（例えばＴは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０であり）、Ｌは、Ｅ、Ａ１及びＡ２の各々に共有結合しているリンカーである〕、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とする。Ｔが１よりも大きい（例えばＴが、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）場合、各Ａ１－Ｌ－Ａ２は独立して選択され得る（例えば、本明細書に記載のＡ１－Ｌ－Ａ２構造のいずれかから独立して選択され得る）。いくつかの実施形態では、Ａ１及びＡ２の各々は独立して式（Ａ－Ｉ）、（Ａ－ＩＩ）、（Ａ－ＶＩ）または（Ａ－ＶＩＩ）のいずれか１つから選択され得る。他の実施形態では、Ａ１及びＡ２の各々は独立して式（Ａ－Ｉ）から選択され得る。
別の態様において、本発明は、式（Ｄ－Ｉ）で表される複合体：
Figure 2022546609000074
 〔式中、各Ａ１及び各Ａ２は独立して式（Ａ－Ｉ）～（Ａ－Ｖ）のいずれか１つから選択され、各Ｅは、Ｆｃドメイン単量体（例えば、配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有するＦｃドメイン単量体）、アルブミンタンパク質（例えば、配列番号１３９～１４１のいずれか１つの配列を有するアルブミンタンパク質）、アルブミンタンパク質結合ペプチドまたはＦｃ結合ペプチドを含み、ｎは１または２であり、Ｔは１～２０の整数であり（例えばＴは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０であり）、Ｌは、Ｅ、Ａ１及びＡ２の各々に共有結合しているリンカーである〕、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とする。Ｔが１よりも大きい（例えばＴが、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）場合、各Ａ１－Ｌ－Ａ２は独立して選択され得る（例えば、本明細書に記載のＡ１－Ｌ－Ａ２構造のいずれかから独立して選択され得る）。
別の態様において、本発明は、式（Ｄ－Ｉ）で表される複合体：
Figure 2022546609000075
 〔式中、各Ａ１及び各Ａ２は独立して式（Ａ－ＶＩ）～（Ａ－ＩＸ）のいずれか１つから選択され、各Ｅは、Ｆｃドメイン単量体（例えば、配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有するＦｃドメイン単量体）、アルブミンタンパク質（例えば、配列番号１３９～１４１のいずれか１つの配列を有するアルブミンタンパク質）、アルブミンタンパク質結合ペプチドまたはＦｃ結合ペプチドを含み、ｎは１または２であり、Ｔは１～２０の整数であり（例えばＴは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０であり）、Ｌは、Ｅ、Ａ１及びＡ２の各々に共有結合しているリンカーである〕、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とする。Ｔが１よりも大きい（例えばＴが、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）場合、各Ａ１－Ｌ－Ａ２は独立して選択され得る（例えば、本明細書に記載のＡ１－Ｌ－Ａ２構造のいずれかから独立して選択され得る）。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＩ）：
Figure 2022546609000076
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＩ－１）：
Figure 2022546609000077
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＩ－２）：
Figure 2022546609000078
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＩ－３）：
Figure 2022546609000079
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である（例えば、ｙ１及びｙ２は各々独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、Ｌ’は窒素原子である。
いくつかの実施形態では、複合体は、
Figure 2022546609000080
 から選択される構造を有する。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＩ－４）：



Figure 2022546609000081
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＩ－５）：
Figure 2022546609000082
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である（例えば、ｙ１及びｙ２は各々独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、Ｌ’は窒素原子である。
いくつかの実施形態では、複合体は、
Figure 2022546609000083
 から選択される構造、またはその薬学的に許容される塩を有する。
いくつかの実施形態では、複合体は、


Figure 2022546609000084
Figure 2022546609000085
から選択される構造、またはその薬学的に許容される塩を有する。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＩ－６）：
Figure 2022546609000086
 〔式中、Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ２０アルキル、Ｃ３－Ｃ２０シクロアルキル、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択される〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、Ｒ７はＣ１－Ｃ２０アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピルまたはブチル）から選択される。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＩ－７）：
Figure 2022546609000087
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＩ－８）：
Figure 2022546609000088
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である（例えば、ｙ１及びｙ２は各々独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、Ｌ’は窒素原子である。
いくつかの実施形態では、複合体は構造
Figure 2022546609000089
 またはその薬学的に許容される塩を有する。
いくつかの実施形態では、複合体は構造
Figure 2022546609000090
 またはその薬学的に許容される塩を有する。
いくつかの実施形態では、複合体は構造



Figure 2022546609000091
 またはその薬学的に許容される塩を有する。
いくつかの実施形態では、複合体は構造
Figure 2022546609000092
Figure 2022546609000093
またはその薬学的に許容される塩を有する。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＩ－９）：
Figure 2022546609000094
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＩ－１０）：


Figure 2022546609000095
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である（例えば、ｙ１及びｙ２は各々独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、Ｌ’は窒素原子である。
いくつかの実施形態では、複合体は構造
Figure 2022546609000096
 またはその薬学的に許容される塩を有する。
いくつかの実施形態では、複合体は
Figure 2022546609000097
 の構造、またはその薬学的に許容される塩を有する。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＩＩ）：
Figure 2022546609000098
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＩＩ－１）：

Figure 2022546609000099
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＩＩ－２）：
Figure 2022546609000100
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＩＩ－３）：

Figure 2022546609000101
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である（例えば、ｙ１及びｙ２は各々独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、Ｌ’は窒素原子である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＩＩ－４）：
Figure 2022546609000102
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＩＩ－５）：
Figure 2022546609000103
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である（例えば、ｙ１及びｙ２は各々独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、Ｌ’は窒素原子である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＩＩ－６）：
Figure 2022546609000104
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＩＩ－７）：
Figure 2022546609000105
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である（例えば、ｙ１及びｙ２は各々独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、Ｌ’は窒素原子である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＩＩ－８）：
Figure 2022546609000106
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＩＩ－９）：
Figure 2022546609000107
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である（例えば、ｙ１及びｙ２は各々独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、Ｌ’は窒素原子である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＶ）：
Figure 2022546609000108
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＶ－１）：
Figure 2022546609000109
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＶ－２）：
Figure 2022546609000110
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である（例えば、ｙ１及びｙ２は各々独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、Ｌ’は窒素原子である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－Ｖ）：
Figure 2022546609000111
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－Ｖ－１）：
Figure 2022546609000112
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－Ｖ－２）：
Figure 2022546609000113
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－Ｖ－３）：
Figure 2022546609000114
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である（例えば、ｙ１及びｙ２は各々独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、Ｌ’は窒素原子である。いくつかの実施形態では、ｙ１及びｙ２が各々１であるか、ｙ１及びｙ２が各々２であるか、またはｙ１及びｙ２が各々３である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－Ｖ－４）：
Figure 2022546609000115
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－Ｖ－５）：
Figure 2022546609000116
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である（例えば、ｙ１及びｙ２は各々独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、Ｌ’は窒素原子である。いくつかの実施形態では、ｙ１及びｙ２が各々１であるか、ｙ１及びｙ２が各々２であるか、またはｙ１及びｙ２が各々３である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－Ｖ－６）：
Figure 2022546609000117
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－Ｖ－７）：
Figure 2022546609000118
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－Ｖ－８）：
Figure 2022546609000119
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である（例えば、ｙ１及びｙ２は各々独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、Ｌ’は窒素原子である。いくつかの実施形態では、ｙ１及びｙ２が各々１であるか、ｙ１及びｙ２が各々２であるか、またはｙ１及びｙ２が各々３である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－Ｖ－９）：
Figure 2022546609000120
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－Ｖ－１０）：
Figure 2022546609000121
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である（例えば、ｙ１及びｙ２は各々独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、Ｌ’は窒素原子である。いくつかの実施形態では、ｙ１及びｙ２が各々１であるか、ｙ１及びｙ２が各々２であるか、またはｙ１及びｙ２が各々３である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＶＩ）：
Figure 2022546609000122
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＶＩ－１）：
Figure 2022546609000123
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＶＩ－２）：
Figure 2022546609000124
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＶＩ－３）：
Figure 2022546609000125
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である（例えば、ｙ１及びｙ２は各々独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、Ｌ’は窒素原子である。いくつかの実施形態では、ｙ１及びｙ２が各々１であるか、ｙ１及びｙ２が各々２であるか、またはｙ１及びｙ２が各々３である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＶＩ－４）：
Figure 2022546609000126
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＶＩ－５）：
Figure 2022546609000127
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である（例えば、ｙ１及びｙ２は各々独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、Ｌ’は窒素原子である。いくつかの実施形態では、ｙ１及びｙ２が各々１であるか、ｙ１及びｙ２が各々２であるか、またはｙ１及びｙ２が各々３である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＶＩ－６）：
Figure 2022546609000128
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＶＩ－７）：
Figure 2022546609000129
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である（例えば、ｙ１及びｙ２は各々独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、Ｌ’は窒素原子である。いくつかの実施形態では、ｙ１及びｙ２が各々１であるか、ｙ１及びｙ２が各々２であるか、またはｙ１及びｙ２が各々３である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＶＩ－８）：
Figure 2022546609000130
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＶＩ－９）：
Figure 2022546609000131
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である（例えば、ｙ１及びｙ２は各々独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、Ｌ’は窒素原子である。いくつかの実施形態では、ｙ１及びｙ２が各々１であるか、ｙ１及びｙ２が各々２であるか、またはｙ１及びｙ２が各々３である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＶＩＩ）：
Figure 2022546609000132
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｒ１はＯＨである。本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｒ１はＮＨ２である。本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｒ１は－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＶＩＩＩ）：
Figure 2022546609000133
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＶＩＩＩ－１）：
Figure 2022546609000134
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＶＩＩＩ－２）：
Figure 2022546609000135
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＶＩＩＩ－３）：
Figure 2022546609000136
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である（例えば、ｙ１及びｙ２は各々独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、Ｌ’は窒素原子である。
いくつかの実施形態では、複合体は、
Figure 2022546609000137
 から選択される構造、またはその薬学的に許容される塩を有する。
いくつかの実施形態では、複合体が式（Ｄ－ＶＩＩＩ－４）：
Figure 2022546609000138
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＶＩＩＩ－５）：
Figure 2022546609000139
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である（例えば、ｙ１及びｙ２は各々独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、Ｌ’は窒素原子である。
いくつかの実施形態では、複合体は、
Figure 2022546609000140
 から選択される構造、またはその薬学的に許容される塩を有する。
いくつかの実施形態では、複合体は構造


Figure 2022546609000141
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＶＩＩＩ－６）：
Figure 2022546609000142
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＶＩＩＩ－７）：
Figure 2022546609000143
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である（例えば、ｙ１及びｙ２は各々独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、Ｌ’は窒素原子である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＶＩＩＩ－８）：
Figure 2022546609000144
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＶＩＩＩ－９）：
Figure 2022546609000145
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である（例えば、ｙ１及びｙ２は各々独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、Ｌ’は窒素原子である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＶＩＩＩ－１０）：
Figure 2022546609000146
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＶＩＩＩ－１１）：
Figure 2022546609000147
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である（例えば、ｙ１及びｙ２は各々独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、Ｌ’は窒素原子である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＸ）：
Figure 2022546609000148
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＸ－１）：
Figure 2022546609000149
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＸ－２）：

Figure 2022546609000150
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＸ－３）：
Figure 2022546609000151
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＸ－４）：
Figure 2022546609000152
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＸ－５）：
Figure 2022546609000153
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＸ－６）：
Figure 2022546609000154
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－Ｘ）：
Figure 2022546609000155
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－Ｘ－１）：
Figure 2022546609000156
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－Ｘ－２）：
Figure 2022546609000157
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－Ｘ－３）：
Figure 2022546609000158
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、ＬまたはＬ’は、１つ以上の、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキレン、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリーレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリーレン、Ｏ、Ｓ、ＮＲｉ、Ｐ、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノを含み、Ｒｉは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキル、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリール、または任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールである。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、ＬまたはＬ’の主鎖は、１つ以上の、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキレン、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリーレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリーレン、Ｏ、Ｓ、ＮＲｉ、Ｐ、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノからなり、Ｒｉは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキル、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリール、または任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールである。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、ＬまたはＬ’はオキソで置換されている。いくつかの実施形態では、ＬまたはＬ’の主鎖は２５０個以下の原子を含む。いくつかの実施形態では、ＬまたはＬ’は、アミド、カルバメート、スルホニルまたは尿素リンケージを形成することができる。いくつかの実施形態では、ＬまたはＬ’は結合である。いくつかの実施形態では、ＬまたはＬ’は原子である。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、各Ｌは式（Ｄ－Ｌ－Ｉ）：
Figure 2022546609000159
 〔式中、ＬＡは、式ＧＡ１－（ＺＡ１）ｇ１－（ＹＡ１）ｈ１－（ＺＡ２）ｉ１－（ＹＡ２）ｊ１－（ＺＡ３）ｋ１－（ＹＡ３）ｌ１－（ＺＡ４）ｍ１－（ＹＡ４）ｎ１－（ＺＡ５）ｏ１－ＧＡ２で表され、ＬＢは、式ＧＢ１－（ＺＢ１）ｇ２－（ＹＢ１）ｈ２－（ＺＢ２）ｉ２－（ＹＢ２）ｊ２－（ＺＢ３）ｋ２－（ＹＢ３）ｌ２－（ＺＢ４）ｍ２－（ＹＢ４）ｎ２－（ＺＢ５）ｏ２－ＧＢ２で表され、ＬＣは、式ＧＣ１－（ＺＣ１）ｇ３－（ＹＣ１）ｈ３－（ＺＣ２）ｉ３－（ＹＣ２）ｊ３－（ＺＣ３）ｋ３－（ＹＣ３）ｌ３－（ＺＣ４）ｍ３－（ＹＣ４）ｎ３－（ＺＣ５）ｏ３－ＧＣ２で表され、ＧＡ１はＱとの結合であり、ＧＡ２はＡ１との結合であり、ＧＢ１はＱとの結合であり）、ＧＢ２はＡ２との結合であり、ＧＣ１はＱとの結合であり、ＧＣ２は、Ｅとの結合であり、またはＥに複合している官能基と反応することができる官能基（例えば、マレイミドとシステイン、アミンと活性カルボン酸、チオールとマレイミド、活性スルホン酸とアミン、イソシアネートとアミン、アジドとアルキン、及びアルケンとテトラジン）であり、ＺＡ１、ＺＡ２、ＺＡ３、ＺＡ４、ＺＡ５、ＺＢ１、ＺＢ２、ＺＢ３、ＺＢ４、ＺＢ５、ＺＣ１、ＺＣ２、ＺＣ３、ＺＣ４及びＺＣ５の各々は独立して、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキレン、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリーレン、または任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリーレンであり、ＹＡ１、ＹＡ２、ＹＡ３、ＹＡ４、ＹＢ１、ＹＢ２、ＹＢ３、ＹＢ４、ＹＣ１、ＹＣ２、ＹＣ３及びＹＣ４の各々は独立して、Ｏ、Ｓ、ＮＲｉ、Ｐ、カルボニル、チオカルボニル、スルホニ
ル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノであり、Ｒｉは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキル、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリール、または任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールであり、ｇ１、ｈ１、ｉ１、ｊ１、ｋ１、ｌ１、ｍ１、ｎ１、ｏ１、ｇ２、ｈ２、ｉ２、ｊ２、ｋ２、ｌ２、ｍ２、ｎ２、ｏ２、ｇ３、ｈ３、ｉ３、ｊ３、ｋ３、ｌ３、ｍ３、ｎ３及びｏ３の各々は独立して０または１であり、Ｑは、窒素原子、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキレン、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリーレン、または任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリーレンである〕
で表される。
いくつかの実施形態では、ＬＣは、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに対する２つの結合点（例えば２つのＧＣ２）を有し得る。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｌはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）リンカーを含む。ＰＥＧリンカーには、繰り返し単位構造（－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－）ｎを有するリンカーが含まれ、式中、ｎは２～１００の整数である。ポリエチレングリコールリンカーは、（例えば式（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）のいずれか１つの複合体において）ノイラミニダーゼ阻害剤とＥとを共有結合で結び合わせ得る。ポリエチレングリコールリンカーは、（例えば式（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）のいずれか１つの複合体において）第１ノイラミニダーゼ阻害剤と第２ノイラミニダーゼ阻害剤とを共有結合で結び合わせ得る。ポリエチレングリコールリンカーは、（例えば式（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）のいずれか１つの複合体において）ノイラミニダーゼ阻害剤二量体とＥとを共有結合で結び合わせ得る。ポリエチレングリコールリンカーは、ＰＥＧ２～ＰＥＧ１００（例えば、ＰＥＧ２、ＰＥＧ３、ＰＥＧ４、ＰＥＧ５、ＰＥＧ５～ＰＥＧ１０、ＰＥＧ１０～ＰＥＧ２０、ＰＥＧ２０～ＰＥＧ３０、ＰＥＧ３０～ＰＥＧ４０、ＰＥＧ５０～ＰＥＧ６０、ＰＥＧ６０～ＰＥＧ７０、ＰＥＧ７０～ＰＥＧ８０、ＰＥＧ８０～ＰＥＧ９０、ＰＥＧ９０～ＰＥＧ１００）のいずれか１つから選択され得る。いくつかの実施形態では、ＬｃはＰＥＧリンカーを含み、ＬＣがＱ及びＥの各々と共有結合している。
いくつかの実施形態では、Ｌは、


Figure 2022546609000160
Figure 2022546609000161
Figure 2022546609000162
Figure 2022546609000163
Figure 2022546609000164
Figure 2022546609000165
Figure 2022546609000166
Figure 2022546609000167
Figure 2022546609000168
Figure 2022546609000169
Figure 2022546609000170
〔式中、ｚ１及びｚ２は各々独立して１～２０の整数であり、Ｒ９は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ２０アルキル、Ｃ３－Ｃ２０シクロアルキル、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択される〕
である。
いくつかの実施形態では、Ｌは、
Figure 2022546609000171
Figure 2022546609000172
Figure 2022546609000173
Figure 2022546609000174

であり、式中、Ｒ＊は結合であり、または任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキレン、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリーレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリーレン、Ｏ、Ｓ、ＮＲｉ、Ｐ、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート及びイミノのうちの１つ以上を含み、Ｒｉは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキル、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリール、または任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールである。
いくつかの実施形態では、Ｙは
Figure 2022546609000175
 であり、Ｌは
Figure 2022546609000176
 である。
いくつかの実施形態では、Ｙは
Figure 2022546609000177
 であり、Ｌは
Figure 2022546609000178
 である。
いくつかの実施形態では、Ｙは
Figure 2022546609000179
 であり、Ｌは
Figure 2022546609000180
 である。
いくつかの実施形態では、Ｙは
Figure 2022546609000181
 であり、Ｌは
Figure 2022546609000182
 である。
別の態様において本発明は、式（Ｍ－Ｉ）で表される複合体：
Figure 2022546609000183
 〔式中、各Ａ１は独立して式（Ａ－Ｉ）～（Ａ－ＸＩＩ）のいずれか１つから選択され、
各Ｅは、Ｆｃドメイン単量体（例えば、配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有するＦｃドメイン単量体）、アルブミンタンパク質（例えば、配列番号１３９～１４１のいずれか１つの配列を有するアルブミンタンパク質）、アルブミンタンパク質結合ペプチドまたはＦｃ結合ペプチドを含み、ｎは１または２であり、Ｔは１～２０の整数であり（例えば、Ｔは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０であり）、Ｌは、Ｅ及びＡ１の各々に共有結合しているリンカーである〕、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とする。Ｔが１より大きい（例えばＴが、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）場合、各Ａ１は独立して式（Ａ－Ｉ）～（Ａ－ＸＩＩ）のいずれか１つから選択され得る。いくつかの実施形態では、各Ａ１は独立して式（Ａ－Ｉ）、（Ａ－ＩＩ）、（Ａ－ＶＩ）または（Ａ－ＶＩＩ）のいずれか１つから選択され得る。他の実施形態では、各Ａ１は独立して式（Ａ－Ｉ）から選択され得る。
別の態様において本発明は、式（Ｍ－Ｉ）で表される複合体：
Figure 2022546609000184
 〔式中、各Ａ１は独立して式（Ａ－Ｉ）～（Ａ－Ｖ）のいずれか１つから選択され、各Ｅは、Ｆｃドメイン単量体（例えば、配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有するＦｃドメイン単量体）、アルブミンタンパク質（例えば、配列番号１３９～１４１のいずれか１つの配列を有するアルブミンタンパク質）、アルブミンタンパク質結合ペプチドまたはＦｃ結合ペプチドを含み、ｎは１または２であり、Ｔは１～２０の整数であり（例えば、Ｔは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０であり）、Ｌは、Ｅ及びＡ１の各々に共有結合しているリンカーである〕、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とする。Ｔが１より大きい（例えばＴが、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）場合、各Ａ１は独立して式（Ａ－Ｉ）～（Ａ－Ｖ）のいずれか１つから選択され得る。
別の態様において本発明は、式（Ｍ－Ｉ）で表される複合体：
Figure 2022546609000185
 〔式中、各Ａ１は独立して式（Ａ－ＶＩ）～（Ａ－ＩＸ）のいずれか１つから選択され、各Ｅは、Ｆｃドメイン単量体（例えば、配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有するＦｃドメイン単量体）、アルブミンタンパク質（例えば、配列番号１３９～１４１のいずれか１つの配列を有するアルブミンタンパク質）、アルブミンタンパク質結合ペプチドまたはＦｃ結合ペプチドを含み、ｎは１または２であり、Ｔは１～２０の整数であり（例えば、Ｔは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０であり）、Ｌは、Ｅ及びＡ１の各々に共有結合しているリンカーである〕、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とする。Ｔが１より大きい（例えばＴが、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）場合、各Ａ１は独立して式（Ａ－ＶＩ）～（Ａ－ＩＸ）のいずれか１つから選択され得る。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＩＩ）：
Figure 2022546609000186
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＩＩ－１）：
Figure 2022546609000187
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＩＩ－２）：
Figure 2022546609000188
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＩＩ－３）：
Figure 2022546609000189
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１は１～２０の整数である（例えばｙ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＩＩ－４）：
Figure 2022546609000190
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＩＩ－５）：
Figure 2022546609000191
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１は１～２０の整数である（例えばｙ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は構造
Figure 2022546609000192
 またはその薬学的に許容される塩を有する。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＩＩ－６）：
Figure 2022546609000193
 〔式中、Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ２０アルキル、Ｃ３－Ｃ２０シクロアルキル、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択される〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、Ｒ７はＣ１－Ｃ２０アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピルまたはブチル）から選択される。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＩＩ－７）：
Figure 2022546609000194
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＩＩ－８）：
Figure 2022546609000195
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１は１～２０の整数である（例えばｙ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は構造
Figure 2022546609000196
 を有する。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＩＩ－９）：
Figure 2022546609000197
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＩＩ－１０）：
Figure 2022546609000198
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１は１～２０の整数である（例えばｙ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は構造
Figure 2022546609000199
 またはその薬学的に許容される塩を有する。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＩＩＩ）：
Figure 2022546609000200
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＩＩＩ－１）：
Figure 2022546609000201
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＩＩＩ－２）：
Figure 2022546609000202
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＩＩＩ－３）：


Figure 2022546609000203
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１は１～２０の整数である（例えばｙ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＩＩＩ－４）：
Figure 2022546609000204
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＩＩＩ－５）：
Figure 2022546609000205
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１は１～２０の整数である（例えばｙ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＩＩＩ－６）：
Figure 2022546609000206
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＩＩＩ－７）：
Figure 2022546609000207
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１は１～２０の整数である（例えばｙ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＩＩＩ－８）：
Figure 2022546609000208
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＩＩＩ－９）：
Figure 2022546609000209
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１は１～２０の整数である（例えばｙ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＩＶ）：
Figure 2022546609000210
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＩＶ－１）：
Figure 2022546609000211
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＩＶ－２）：
Figure 2022546609000212
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１は１～２０の整数である（例えばｙ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－Ｖ）：
Figure 2022546609000213
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－Ｖ－１）：
Figure 2022546609000214
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－Ｖ－２）：
Figure 2022546609000215
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－Ｖ－３）：
Figure 2022546609000216
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１は１～２０の整数である（例えばｙ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－Ｖ－４）：



Figure 2022546609000217
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－Ｖ－５）：
Figure 2022546609000218
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１は１～２０の整数である（例えばｙ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－Ｖ－６）：



Figure 2022546609000219
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－Ｖ－７）：
Figure 2022546609000220
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－Ｖ－８）：


Figure 2022546609000221
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１は１～２０の整数である（例えばｙ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－Ｖ－９）：
Figure 2022546609000222
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－Ｖ－１０）：

Figure 2022546609000223
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１は１～２０の整数である（例えばｙ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＶＩ）：
Figure 2022546609000224
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＶＩ－１）：
Figure 2022546609000225
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＶＩ－２）：
Figure 2022546609000226
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＶＩ－３）：

Figure 2022546609000227
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１は１～２０の整数である（例えばｙ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＶＩ－４）：
Figure 2022546609000228
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＶＩ－５）：
Figure 2022546609000229
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１は１～２０の整数である（例えばｙ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＶＩ－６）：
Figure 2022546609000230
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＶＩ－７）：
Figure 2022546609000231
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１は１～２０の整数である（例えばｙ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＶＩ－８）：
Figure 2022546609000232
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＶＩ－９）：
Figure 2022546609000233
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１は１～２０の整数である（例えばｙ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＶＩＩ）：
Figure 2022546609000234
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｒ１はＯＨである。本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｒ１はＮＨ２である。本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｒ１は－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＶＩＩＩ）：
Figure 2022546609000235
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＶＩＩＩ－１）：
Figure 2022546609000236
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＶＩＩＩ－２）：
Figure 2022546609000237
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＶＩＩＩ－３）：
Figure 2022546609000238
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１は１～２０の整数である（例えばｙ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＶＩＩＩ－４）：
Figure 2022546609000239
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＶＩＩＩ－５）：
Figure 2022546609000240
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１は１～２０の整数である〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は、
Figure 2022546609000241
 の構造またはその薬学的に許容される塩を有する。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＶＩＩＩ－６）：
Figure 2022546609000242
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体が式（Ｍ－ＶＩＩＩ－７）：
Figure 2022546609000243
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１は１～２０の整数である（例えばｙ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＶＩＩＩ－８）：
Figure 2022546609000244
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＶＩＩＩ－９）：
Figure 2022546609000245
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１は１～２０の整数である（例えばｙ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＶＩＩＩ－１０）：
Figure 2022546609000246
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＶＩＩＩ－１１）：
Figure 2022546609000247
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、ｙ１は１～２０の整数である（例えばｙ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＩＸ）：
Figure 2022546609000248
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＩＸ－１）：
Figure 2022546609000249
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＩＸ－２）：
Figure 2022546609000250
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＩＸ－３）：

Figure 2022546609000251
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＩＸ－４）：
Figure 2022546609000252
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＩＸ－５）：
Figure 2022546609000253
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＩＸ－６）：
Figure 2022546609000254
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－Ｘ）：
Figure 2022546609000255
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－Ｘ－１）：
Figure 2022546609000256
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－Ｘ－２）：
Figure 2022546609000257
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－Ｘ－３）：
Figure 2022546609000258
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、ＬまたはＬ’は、１つ以上の、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキレン、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリーレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリーレン、Ｏ、Ｓ、ＮＲｉ、Ｐ、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノを含み、Ｒｉは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキル、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリール、または任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールである。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、ＬまたはＬ’の主鎖は、１つ以上の、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキレン、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリーレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリーレン、Ｏ、Ｓ、ＮＲｉ、Ｐ、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノからなり、Ｒｉは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキル、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリール、または任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールである。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、ＬまたはＬ’はオキソで置換されている。いくつかの実施形態では、ＬまたはＬ’の主鎖は２５０個以下の原子を含む。いくつかの実施形態では、ＬまたはＬ’は、アミド、カルバメート、スルホニルまたは尿素リンケージを形成することができる。いくつかの実施形態では、ＬまたはＬ’は結合である。いくつかの実施形態では、ＬまたはＬ’は原子である。いくつかの実施形態では、Ｌ’は窒素原子である。
いくつかの実施形態では、各Ｌは式（Ｍ－Ｌ－１）：
Ｊ１－（Ｑ１）ｇ－（Ｔ１）ｈ－（Ｑ２）ｉ－（Ｔ２）ｊ－（Ｑ３）ｋ－（Ｔ３）ｌ－（Ｑ４）ｍ－（Ｔ４）ｎ－（Ｑ５）ｏ－Ｊ２
〔式中、Ｊ１はＡ１との結合であり、Ｊ２はＥとの結合であり、またはＥに複合している官能基と反応することができる官能基（例えば、マレイミドとシステイン、アミンと活性カルボン酸、チオールとマレイミド、活性スルホン酸とアミン、イソシアネートとアミン、アジドとアルキン、及びアルケンとテトラジン）であり、Ｑ１、Ｑ２、Ｑ３、Ｑ４及びＱ５の各々は独立して、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキレン、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリーレン、または任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリーレンであり、Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３、Ｔ４の各々は独立して、Ｏ、Ｓ、ＮＲｉ、Ｐ、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノであり、Ｒｉは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキル、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリール、または任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールであり、ｇ、ｈ、ｉ、ｊ、ｋ、ｌ、ｍ、ｎ及びｏの各々は独立して０または１である〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、Ｊ２は、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに対する２つの結合点（例えば２つのＪ２）を有し得る。
いくつかの実施形態では、Ｌは、
Figure 2022546609000259
 であり、式中、ｄは１～２０の整数である（例えばｄは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）。
いくつかの実施形態では、Ｌは、
Figure 2022546609000260
 〔式中、ｄ及びｅの各々は独立して１～２６の整数である〕、
またはその薬学的に許容される塩である。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｌはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）リンカーを含む。ＰＥＧリンカーには、繰り返し単位構造（－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－）ｎを有するリンカーが含まれ、式中、ｎは２～１００の整数である。ポリエチレングリコールリンカーは、（例えば式（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）のいずれか１つの複合体において）ノイラミニダーゼ阻害剤とＥとを共有結合で結び合わせ得る。ポリエチレングリコールリンカーは、（例えば式（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）のいずれか１つの複合体において）第１ノイラミニダーゼ阻害剤と第２ノイラミニダーゼ阻害剤とを共有結合で結び合わせ得る。ポリエチレングリコールリンカーは、（例えば式（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）のいずれか１つの複合体において）ノイラミニダーゼ阻害剤二量体とＥとを共有結合で結び合わせ得る。ポリエチレングリコールリンカーは、ＰＥＧ２～ＰＥＧ１００（例えば、ＰＥＧ２、ＰＥＧ３、ＰＥＧ４、ＰＥＧ５、ＰＥＧ５～ＰＥＧ１０、ＰＥＧ１０～ＰＥＧ２０、ＰＥＧ２０～ＰＥＧ３０、ＰＥＧ３０～ＰＥＧ４０、ＰＥＧ５０～ＰＥＧ６０、ＰＥＧ６０～ＰＥＧ７０、ＰＥＧ７０～ＰＥＧ８０、ＰＥＧ８０～ＰＥＧ９０、ＰＥＧ９０～ＰＥＧ１００）のいずれか１つから選択され得る。いくつかの実施形態では、ＬｃはＰＥＧリンカーを含み、ＬＣがＱ及びＥの各々と共有結合している。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｒ１は－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２である。本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｒ２は－Ｆである。本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｒ３は－Ｆである。本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｒ４は－ＣＯ２Ｈである。本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｒ５は－ＣＯＣＨ３である。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、ＬがＥの表面露出リジンの窒素原子に共有結合しているか、またはＬがＥの表面露出システインの硫黄原子に共有結合している。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、ＥはＦｃドメイン単量体である。いくつかの実施形態では、ｎは２であり、各Ｅは二量体化してＦｃドメインを形成する。
いくつかの実施形態では、ｎは２であり、各ＥはＦｃドメイン単量体であり、各Ｅは二量体化してＦｃドメインを形成し、複合体は式（Ｄ－Ｉ－１）：
Figure 2022546609000261
 〔式中、ＪはＦｃドメインであり、Ｔは１～２０の整数である（例えば、Ｔは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は、
Figure 2022546609000262
 の構造またはその薬学的に許容される塩を有する。
いくつかの実施形態では、ｎは２であり、各ＥはＦｃドメイン単量体であり、各Ｅは二量体化してＦｃドメインを形成し、複合体は式（Ｍ－Ｉ－１）：

Figure 2022546609000263
 〔式中、ＪはＦｃドメインであり、Ｔは１～２０の整数である（例えば、Ｔは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅは配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有する。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅは、アルブミンタンパク質、アルブミンタンパク質結合ペプチドまたはＦｃ結合ペプチドである。いくつかの実施形態では、Ｅが、アルブミンタンパク質、アルブミンタンパク質結合ペプチドまたはＦｃ結合ペプチドである場合、ｎは１である。
いくつかの実施形態では、ｎは１であり、Ｅは、アルブミンタンパク質、アルブミンタンパク質結合ペプチドまたはＦｃ結合ペプチドであり、複合体は式（Ｄ－Ｉ－２）：
Figure 2022546609000264
 〔式中、Ｅは、アルブミンタンパク質、アルブミンタンパク質結合ペプチドまたはＦｃ結合ペプチドであり、Ｔは１～２０の整数である〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、ｎは１であり、Ｅは、アルブミンタンパク質、アルブミンタンパク質結合ペプチドまたはＦｃ結合ペプチドであり、複合体は式（Ｍ－Ｉ－２）：
Figure 2022546609000265
 〔式中、Ｅは、アルブミンタンパク質、アルブミンタンパク質結合ペプチドまたはＦｃ結合ペプチドであり、Ｔは１～２０の整数である〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１３９～１４１のいずれか１つの配列を有するアルブミンタンパク質である。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｔは、１、２、３、４または５である。
別の態様において、本発明は、本明細書に記載の複合体のいずれかの構造を有する複合体の集団（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの式を有する複合体の集団）を提供し、ここで、Ｔの平均値は１～２０である（例えば、Ｔの平均値は、１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である）。いくつかの実施形態では、Ｔの平均値は、約１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５、１５、１５．５、１６、１６．５、１７、１７．５、１８、１８．５、１９、１９．５または２０である。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｔが１より大きい（例えばＴが、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）場合、各Ａ１－Ｌ－Ａ２は独立して選択され得る（例えば、本明細書に記載のＡ１－Ｌ－Ａ２構造のいずれかから独立して選択され得る）。いくつかの実施形態では、Ｅは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれより多くの異なるＡ１－Ｌ－Ａ２部分と複合し得る。いくつかの実施形態では、Ｅは第１Ａ１－Ｌ－Ａ２部分及び第２Ａ１－Ｌ－Ａ２部分と複合し得る。いくつかの実施形態では、第１Ａ１－Ｌ－Ａ２部分のＡ１及びＡ２は独立して式（Ａ－ＩＩＩ）～（Ａ－Ｖ）のいずれか１つから選択され、第２Ａ１－Ｌ－Ａ２部分のＡ１及びＡ２は独立して式（Ａ－Ｉ）、（Ａ－ＩＩ）、（Ａ－ＶＩ）、（Ａ－ＶＩＩ）、（Ａ－ＶＩＩＩ）及び（Ａ－ＩＸ）のいずれか１つから選択される。
いくつかの実施形態では、各第１Ａ１－Ｌ－Ａ２部分はＥのリジン残基（例えば、Ｅの表面露出リジン残基の窒素原子）と特異的に複合しており、各第２Ａ１－Ｌ－Ａ２部分はＥのシステイン残基（例えば、Ｅの表面露出システイン残基の硫黄原子）と特異的に複合している。いくつかの実施形態では、各第１Ａ１－Ｌ－Ａ２部分はＥのシステイン残基（例えば、Ｅの表面露出システイン残基の硫黄原子）と特異的に複合しており、各第２Ａ１－Ｌ－Ａ２部分はＥのリジン残基（例えば、Ｅの表面露出リジン残基の窒素原子）と特異的に複合している。
いくつかの実施形態では、Ｅに複合している第１Ａ１－Ｌ－Ａ２部分の数は１～１０の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０）である。いくつかの実施形態では、Ｅに複合している第２Ａ１－Ｌ－Ａ２部分の数は１～１０の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０）である。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｔが１より大きい（例えばＴが、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）場合、各Ａ１－Ｌは独立して選択され得る（例えば、本明細書に記載のＡ１－Ｌ構造のいずれかから独立して選択され得る）。いくつかの実施形態では、Ｅは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれより多くの異なるＡ１－Ｌ部分と複合し得る。いくつかの実施形態では、Ｅは第１Ａ１－Ｌ部分及び第２Ａ１－Ｌ部分と複合している。いくつかの実施形態では、第１Ａ１－Ｌ部分のＡ１は式（Ａ－ＩＩＩ）～（Ａ－Ｖ）のいずれか１つから選択され、第２Ａ１－Ｌ部分のＡ１は、式（Ａ－Ｉ）、（Ａ－ＩＩ）、（Ａ－ＶＩ）、（Ａ－ＶＩＩ）、（Ａ－ＶＩＩＩ）または（Ａ－ＩＸ）のいずれか１つから選択される。
いくつかの実施形態では、各第１Ａ１－Ｌ部分はＥのリジン残基（例えば、Ｅの表面露出リジン残基の窒素原子）と特異的に複合しており、各第２Ａ１－Ｌ部分はＥのシステイン残基（例えば、Ｅの表面露出システイン残基の硫黄原子）と特異的に複合している。いくつかの実施形態では、各第１Ａ１－Ｌ部分はＥのシステイン残基（例えば、Ｅの表面露出システイン残基の硫黄原子）と特異的に複合しており、各第２Ａ１－Ｌ部分はＥのリジン残基（例えば、Ｅの表面露出リジン残基の窒素原子）と特異的に複合している。
いくつかの実施形態では、Ｅに複合している第１Ａ１－Ｌ部分の数は１～１０の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０）である。いくつかの実施形態では、Ｅに複合している第２Ａ１－Ｌ部分の数は１～１０の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０）である。
別の態様において本発明は、式（Ｄ’－Ｉ）で表される複合体：
Figure 2022546609000266
 〔式中、各Ａ１は独立して式（Ａ－ＩＩＩ）～（Ａ－Ｖ）のいずれか１つから選択され、各Ａ２は独立して式（Ａ－Ｉ）、（Ａ－ＩＩ）、（Ａ－ＶＩ）、（Ａ－ＶＩＩ）、（Ａ－ＶＩＩＩ）及び（Ａ－ＩＸ）のいずれか１つから選択され、各Ｅは、Ｆｃドメイン単量体（例えば、配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有するＦｃドメイン単量体）、アルブミンタンパク質（例えば、配列番号１３９～１４１のいずれか１つの配列を有するアルブミンタンパク質）、アルブミンタンパク質結合ペプチドまたはＦｃ結合ペプチドを含み、ｎは１または２であり、Ｔ１は１～１０の整数であり（例えばＴ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０であり）、Ｌ１は、Ｅと各Ａ１とに共有結合しているリンカーであり、Ｔ１は１～１０の整数であり（例えばＴ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０であり）、Ｌ２は、Ｅと各Ａ２とに共有結合しているリンカーであり、Ｔ２は１～１０の整数である（例えばＴ２は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０である）〕、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とする。
いくつかの実施形態では、各Ａ１－Ｌ－Ａ１はＥのリジン残基（例えば、Ｅの表面露出リジン残基の窒素原子）と特異的に複合しており、各Ａ２－Ｌ－Ａ２はＥのシステイン残基（例えば、Ｅの表面露出システイン残基の硫黄原子）と特異的に複合している。いくつかの実施形態では、各Ａ１－Ｌ－Ａ１部分はＥのシステイン残基（例えば、Ｅの表面露出システイン残基の硫黄原子）と特異的に複合しており、各Ａ２－Ｌ－Ａ２部分はＥのリジン残基（例えば、Ｅの表面露出リジン残基の窒素原子）と特異的に複合している。
別の態様において、本発明は、式（Ｍ’－Ｉ）で表される複合体：

Figure 2022546609000267
 〔式中、各Ａ１は独立して式（Ａ－ＩＩＩ）～（Ａ－Ｖ）のいずれか１つの（Ｍ－ＩＸ）から選択され、各Ａ２は独立して式（Ａ－Ｉ）、（Ａ－ＩＩ）、（Ａ－ＶＩ）、（Ａ－ＶＩＩ）、（Ａ－ＶＩＩＩ）及び（Ａ－ＩＸ）のいずれか１つから選択され、各Ｅは、Ｆｃドメイン単量体（例えば、配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有するＦｃドメイン単量体）、アルブミンタンパク質（例えば、配列番号１３９～１４１のいずれか１つの配列を有するアルブミンタンパク質）、アルブミンタンパク質結合ペプチドまたはＦｃ結合ペプチドを含み、ｎは１または２であり、Ｔ１は１～１０の整数であり（例えばＴ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０であり）、Ｌ１は、ＥとＡ１とに共有結合しているリンカーであり、Ｔ１は１～１０の整数であり（例えばＴ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０であり）、Ｌ２は、ＥとＡ２とに共有結合しているリンカーであり、Ｔ２は１～１０の整数である（例えばＴ２は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０である）〕、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とする。
いくつかの実施形態では、各Ａ１－ＬはＥのリジン残基（例えば、Ｅの表面露出リジン残基の窒素原子）と特異的に複合しており、各Ａ２－ＬはＥのシステイン残基（例えば、Ｅの表面露出システイン残基の硫黄原子）と特異的に複合している。いくつかの実施形態では、各Ａ１－Ｌ部分はＥのシステイン残基（例えば、Ｅの表面露出システイン残基の硫黄原子）と特異的に複合しており、各Ａ２－Ｌ部分はＥのリジン残基（例えば、Ｅの表面露出リジン残基の窒素原子）と特異的に複合している。
別の態様において、本発明は、本明細書に記載の複合体（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ））のいずれか１つの複合体）のいずれか、またはその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物を提供する。
別の態様において、本発明は、ウイルス感染症を有するまたはウイルス感染症を有すると推定される対象を治療する方法であって、有効量の本明細書に記載の複合体または組成物のいずれか（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの複合体）を対象に投与することを含む、当該方法を提供する。
別の態様において、本発明は、ウイルス感染症の予防的治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、有効量の本明細書に記載の複合体または組成物のいずれか（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの複合体）を対象に投与することを含む、当該方法を提供する。
いくつかの実施形態では、ウイルス感染症は、インフルエンザウイルスまたはパラインフルエンザウイルスによって引き起こされるものである。いくつかの実施形態では、ウイルス感染症は、Ａ型、Ｂ型もしくはＣ型インフルエンザウイルス、またはパラインフルエンザウイルスである。
いくつかの実施形態では、対象は免疫低下状態にある。
いくつかの実施形態では、対象は、体液性免疫不全、Ｔ細胞欠損症、好中球減少症、無脾症または補体欠損症と診断されている。
いくつかの実施形態では、対象は免疫抑制療法で治療されている、または治療されようとしている。
いくつかの実施形態では、対象は、免疫抑制を引き起こす疾患と診断されている。いくつかの実施形態では、疾患はがんまたは後天性免疫不全症候群である。いくつかの実施形態では、がんは、白血病、リンパ腫または多発性骨髄腫である。
いくつかの実施形態では、対象は、造血幹細胞移植を受けたことがある、または受けようとしている。
いくつかの実施形態では、対象は、臓器移植を受けたことがある、または受けようとしている。
いくつかの実施形態では、対象は、続発感染症またはその発症リスクを有する。いくつかの実施形態では、続発感染症は、細菌感染症（例えば、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、及び／またはＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、ウイルス感染症、または真菌感染症である。特定の実施形態では、続発感染症はＭＲＳＡである。ある実施形態では、続発感染症は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅである。いくつかの実施形態では、続発感染症は呼吸器感染症（例えば呼吸器の感染症）である。いくつかの実施形態では、続発感染症は、肺炎（例えば細菌性またはウイルス性肺炎）に関連するもの（例えばそれを引き起こすもの）である。いくつかの実施形態では、対象は、肺炎またはその発症リスクを有する。
別の態様では、本開示は、インフルエンザ感染症と診断された対象における続発感染症を予防する方法であって、本明細書に記載の複合体または組成物を対象に投与することを含む、当該方法を特徴とする。いくつかの実施形態では、方法は、複合体４５、または複合体４５を含む医薬組成物を対象に投与することを含む。
いくつかの実施形態では、インフルエンザ感染症と診断された対象に本発明の複合体または組成物を投与することは、続発感染症を発症する可能性を、（例えばインフルエンザに罹患しており複合体または組成物で処置されていない対象に比べて）例えば１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２００％、３００％、４００％、５００％、またはそれより大きく低下させる。例えば、インフルエンザ感染症と診断された対象に本発明の複合体または組成物を投与することは、続発感染症（例えば、ＭＲＳＡ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、及び／またはＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）を発症する可能性を、例えば１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２００％、３００％、４００％、５００％、またはそれより大きく低下させる。いくつかの実施形態では、複合体または組成物は、筋肉内、静脈内、皮内、動脈内、腹膜腔内、病巣内、頭蓋内、関節内、前立腺内、胸膜内、気管内、鼻腔内、硝子体内、膣内、直腸内、局所、腫瘍内、腹膜内、皮下、結膜下、小嚢内、経粘膜、心嚢内、臍帯内、眼内、経口、局部、吸入、注射または輸注投与される。
いくつかの実施形態では、対象は第２治療剤で治療される。いくつかの実施形態では、第２治療剤は抗ウイルス剤である。いくつかの実施形態では、抗ウイルス剤は、ピモジビル（ｐｉｍｏｖｉｄｉｒ）、オセルタミビル、ザナミビル、ペラミビル、ラニナミビル、アマンタジンまたはリマンタジンから選択される。特定の実施形態では、第２治療剤はピモジビル（ｐｉｍｏｖｉｄｉｒ）である。いくつかの実施形態では、第２治療剤はウイルスワクチンである。いくつかの実施形態では、ウイルスワクチンは対象においてＡ型、Ｂ型もしくはＣ型インフルエンザウイルス、またはパラインフルエンザウイルスに対する免疫応答を誘発する。
いくつかの実施形態では、複合体は抗ウイルス剤と組み合わせて投与され、抗ウイルス剤はバロキサビルである。ある実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＩ－６）で表される。他の実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＩ－７）で表される。ある実施形態では、各Ｅは、配列番号６３～１３８のいずれか１つの配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有するＦｃドメインを含む。特定の実施形態では、各Ｅは、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６７、配列番号６８、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７６、配列番号７７、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８５または配列番号８６のいずれか１つの配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有するＦｃドメインを含む。特定の実施形態では、各Ｅは、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６７、配列番号６８、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７６、配列番号７７、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８５または配列番号８６のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＦｃドメインを含む。好ましい実施形態では、複合体は、複合体４５（例えば複合体４５ａまたは４５ｂ）または複合体４６である。
ある実施形態では、複合体及びバロキサビルは逐次投与される。他の実施形態では、複合体及びバロキサビルは同時に投与される。
一態様において、本開示は、ａ）有効量の請求項１～２１５のいずれか１項に記載の複合体または組成物、及びｂ）第２治療剤を対象に投与することによって、対象においてウイルス感染症を治療または予防する方法を提供する。ある実施形態では、複合体は、対象がウイルス感染症を有したか、ウイルス感染症を有すると推定されたかまたはウイルスに曝露された後に、対象に投与される。いくつかの実施形態では、複合体は対象に予防的に投与される。ある実施形態では、第２治療剤は、対象がウイルス感染症を有したか、ウイルス感染症を有すると推定されたかまたはウイルスに曝露された後に、対象に投与される。いくつかの実施形態では、第２治療剤は対象に予防的に投与される。いくつかの実施形態では、第２治療剤は複合体の３０日以内、１４日以内、７日以内、２日以内または２４時間日以内に投与される。特定の実施形態では、第２治療剤は複合体の２日以内に投与される。ある実施形態では、第２治療剤は抗ウイルス剤（例えば、ピモジビル（ｐｉｍｏｖｉｄｉｒ）、オセルタミビル、ザナミビル、ペラミビル、ラニナミビル、アマンタジン、バロキサビル マルボキシル、バロキサビル酸、リマンタジン、またはその薬学的に許容される塩）である。特定の実施形態では、抗ウイルス剤は、バロキサビル マルボキシル、バロキサビル酸、またはその薬学的に許容される塩である。ある実施形態では、バロキサビル マルボキシルは、２０～９０ｍｇ（例えば、２５～５０ｍｇ、４５～７０ｍｇ、または６５～９０ｍｇ）の量で投与される。いくつかの実施形態では、バロキサビル マルボキシルは、経口投与される。ある実施形態では、バロキサビル マルボキシルは、単回用量として投与される。他の実施形態では、バロキサビル マルボキシルは、１回よりも多い回数の用量として投与される。特定の実施形態では、バロキサビル マルボキシルは、２０～４０ｍｇの量で投与される。他の実施形態では、バロキサビル マルボキシルは、３０～８０ｍｇの量で投与される。ある実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＩ－６）で表される。他の実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＩＩ－７）で表される。ある実施形態では、各Ｅは、配列番号６３～１３８のいずれか１つの配列と少なくとも９５％同一である配列を有する。特定の実施形態では、各Ｅは、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６７、配列番号６８、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７６、配列番号７７、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８５または配列番号８６のいずれか１つの配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有するＦｃドメインを含む。特定の実施形態では、各Ｅは、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６７、配列番号６８、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７６、配列番号７７、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８５または配列番号８６のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＦｃドメインを含む。ある実施形態では、複合体は、複合体４５（例えば複合体４５ａまたは４５ｂ）または複合体４６である。特定の実施形態では、複合体は、筋肉内、静脈内、皮内、動脈内、腹膜腔内、病巣内、頭蓋内、関節内、前立腺内、胸膜内、気管内、鼻腔内、硝子体内、膣内、直腸内、局所、腫瘍内、腹膜内、皮下、結膜下、小嚢内、経粘膜、心嚢内、臍帯内、眼内、経口、局部、吸入、注射または輸注投与される。いくつかの実施形態では、複合体は静脈内投与される。いくつかの実施形態では、複合体は筋肉内投与される。いくつかの実施形態では、ウイルス感染症は、インフルエンザウイルスまたはパラインフルエンザウイルスによって引き起こされるものである。ある実施形態では、ウイルスは、Ａ型、Ｂ型もしくはＣ型インフルエンザウイルス、またはパラインフルエンザウイルスである。
いくつかの実施形態では、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つ（例えば、式（１）、（２）、（３）、（４）、（５）、（Ｄ－Ｉ）、（Ｄ－ＩＩ）、（Ｄ－ＩＩ－１）、（Ｄ－ＩＩ－２）、（Ｄ－ＩＩ－３）、（Ｄ－ＩＩ－４）、（Ｄ－ＩＩ－５）、（Ｄ－ＩＩ－６）、（Ｄ－ＩＩ－７）、（Ｄ－ＩＩ－８）、（Ｄ－ＩＩ－９）、（Ｄ－ＩＩ－１０）、（Ｄ－ＩＩＩ）、（Ｄ－ＩＩＩ－１）、（Ｄ－ＩＩＩ－２）、（Ｄ－ＩＩＩ－３）、（Ｄ－ＩＩＩ－４）、（Ｄ－ＩＩＩ－５）、（Ｄ－ＩＩＩ－６）、（Ｄ－ＩＩＩ－７）、（Ｄ－ＩＩＩ－８）、（Ｄ－ＩＩＩ－９）、（Ｄ－ＩＶ）、（Ｄ－ＩＶ－１）、（Ｄ－ＩＶ－２）、（Ｄ－Ｖ）、（Ｄ－Ｖ－１）、（Ｄ－Ｖ－２）、（Ｄ－Ｖ－３）、（Ｄ－Ｖ－４）、（Ｄ－Ｖ－５）、（Ｄ－Ｖ－６）、（Ｄ－Ｖ－７）、（Ｄ－Ｖ－８）、（Ｄ－Ｖ－９）、（Ｄ－Ｖ－１０）、（Ｄ－ＶＩ）、（Ｄ－ＶＩ－１）、（Ｄ－ＶＩ－２）、（Ｄ－ＶＩ－３）、（Ｄ－ＶＩ－４）、（Ｄ－ＶＩ－５）、（Ｄ－ＶＩ－６）、（Ｄ－ＶＩ－７）、（Ｄ－ＶＩ－８）、（Ｄ－ＶＩ－９）、（Ｄ－ＶＩＩ）、（Ｄ－ＶＩＩＩ）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－１）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－２）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－３）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－４）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－５）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－６）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－７）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－８）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－９）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－１０）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－１１）、（Ｄ－ＩＸ）、（Ｄ－ＩＸ－１）、（Ｄ－ＩＸ－２）、（Ｄ－ＩＸ－３）、（Ｄ－ＩＸ－４）、（Ｄ－ＩＸ－５）、（Ｄ－ＩＸ－６）、（Ｄ－Ｘ）、（Ｄ－Ｘ－１）、（Ｄ－Ｘ－２）、（Ｄ－Ｘ－３）、（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ－ＸＩ－１）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）、（Ｍ－ＩＩ）、（Ｍ－ＩＩ－１）、（Ｍ－ＩＩ－２）、（Ｍ－ＩＩ－３）、（Ｍ－ＩＩ－４）、（Ｍ－ＩＩ－５）、（Ｍ－ＩＩ－６）、（Ｍ－ＩＩ－７）、（Ｍ－ＩＩ－８）、（Ｍ－ＩＩ－９）、（Ｍ－ＩＩ－１０）、（Ｍ－ＩＩＩ）、（Ｍ－ＩＩＩ－１）、（Ｍ－ＩＩＩ－２）、（Ｍ－ＩＩＩ－３）、（Ｍ－ＩＩＩ－４）、（Ｍ－ＩＩＩ－５）、（Ｍ－ＩＩＩ－６）、（Ｍ－ＩＩＩ－７）、（Ｍ－ＩＩＩ－８）、（Ｍ－ＩＩＩ－９）、（Ｍ－ＩＶ）、（Ｍ－ＩＶ－１）、（Ｍ－ＩＶ－２）、（Ｍ－Ｖ）、（Ｍ－Ｖ－１）、（Ｍ－Ｖ－２）、（Ｍ－Ｖ－３）、（Ｍ－Ｖ－４）、（Ｍ－Ｖ－５）、（Ｍ－Ｖ－６）、（Ｍ－Ｖ－７）、（Ｍ－Ｖ－８）、（Ｍ－Ｖ－９）、（Ｍ－Ｖ－１０）、（Ｍ－ＶＩ）、（Ｍ－ＶＩ－１）、（Ｍ－ＶＩ－２）、（Ｍ－ＶＩ－３）、（Ｍ－ＶＩ－４）、（Ｍ－ＶＩ－５）、（Ｍ－ＶＩ－６）、（Ｍ－ＶＩ－７）、（Ｍ－ＶＩ－８）、（Ｍ－ＶＩ－９）、（Ｍ－ＶＩＩ）、（Ｍ－ＶＩＩＩ）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－１）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－２）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－３）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－４）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－５）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－６）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－７）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－８）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－９）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－１０）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－１１）、（Ｍ－ＩＸ）、（Ｍ－ＩＸ－１）、（Ｍ－ＩＸ－２）、（Ｍ－ＩＸ－３）、（Ｍ－ＩＸ－４）、（Ｍ－ＩＸ－５）、（Ｍ－ＩＸ－６）、（Ｍ－Ｘ）、（Ｍ－Ｘ－１）、（Ｍ－Ｘ－２）、（Ｍ－Ｘ－３）、（Ｍ－ＸＩ）、（Ｍ－ＸＩ－１）または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つ）において、Ｆｃドメインの代わりにＦｃドメイン含有構成物が使用されていてもよく、Ｆｃドメイン単量体の代わりにＦｃドメイン単量体含有構成物が使用されていてもよい。本明細書に記載の式のいずれか（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つ）において、ｎが１である場合、ＥはＦｃドメイン単量体含有構成物である。本明細書に記載の式のいずれか（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つ）において、ｎが２である場合、ＥはＦｃドメイン含有構成物である。
ある実施形態では、Ｆｃドメイン含有構成物は抗体または抗体断片である。抗体は、任意の形態の免疫グロブリン、重鎖抗体、軽鎖抗体、ＬＲＲベース抗体、または抗体様の特性を有する他のタンパク質足場、さらには当技術分野で知られている他の任意の免疫学的結合部分、例えば抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’２、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、Ｆｅｂ、ｓｃＦｖまたはＳＭＩＰ）を含み得る。様々なクラスの抗体のサブユニット構造体及び３次元配置が当技術分野で知られている。抗体断片は、抗体の抗原決定領域のような抗体に由来するまたはそれとの相同性が大きい部分を含んだ結合部分を含み得る。例示的な抗体断片としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’２、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、Ｆｅｂ、ｓｃＦｖ及びＳＭＩＰが挙げられる。
特定の実施形態では、抗体または抗体断片は、ヒト、マウス、ラクダ類（例えば、ラマ、アルパカまたはラクダ）、ヤギ、ヒツジ、ウサギ、ニワトリ、モルモット、ハムスター、ウマまたはラットの抗体または抗体断片である。具体的な実施形態では、抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭまたはイントラボディである。ある実施形態では、抗体断片は、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ、ｄＡｂ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’２、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、ＦｅｂまたはＳＭＩＰを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメイン含有構成物（例えば抗体または抗体断片）は、１つ以上の標的（例えば抗原）に対する結合特異性を付与する。
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメイン含有構成物（例えば抗体または抗体断片）が結合する１つ以上の標的（例えば抗原）は、ウイルス（例えばインフルエンザ）タンパク質、例えばノイラミニダーゼまたはヘマグルチニンである。いくつかの実施形態では、抗体または抗体断片はウイルス表面抗原を認識する。いくつかの実施形態では、抗体または抗体断片はヘマグルチニンを標的とする。ヘマグルチニン指向性抗体としては、モノクローナル抗体、例えば、ＣＲ６２６１、ＣＲ８０２０、ＭＥＤＩ８８５２、ＭＨＡＡ４５４９Ａ及びＶＩＳ４１０が挙げられる。いくつかの実施形態では、抗体または抗体断片は、インフルエンザヘマグルチニンを標的として広範に中和する抗体または抗体断片（例えば、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４２９：２６９４－２７０９（２０１７）に記載されている抗体または抗体断片）である。いくつかの実施形態では、抗体または抗体断片はウイルスマトリックスタンパク質（例えばマトリックス２タンパク質）を標的とする。ＴＣＮ０３２はマトリックス２タンパク質指向性モノクローナル抗体である。
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメイン含有構成物（例えば抗体または抗体断片）は１つ以上の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメイン含有構成物は、Ａ型インフルエンザ反応性を有するｓｄＡｂ、例えばＡ型インフルエンザのヘマグルチニンに結合するｓｄＡｂ（例えば、Ｌａｕｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．３６２：５９８－６０２（２０１８）に記載されているＳＤ３６またはＳＤ３８）を含む抗体または抗体断片である。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメイン含有構成物は、Ｂ型インフルエンザ反応性を有するｓｄＡｂ、例えばＢ型インフルエンザのヘマグルチニンに結合するｓｄＡｂ（例えば、Ｌａｕｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．３６２：５９８－６０２（２０１８）に記載されているＳＤ８３またはＳＤ８４）を含む抗体または抗体断片である。
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメイン含有構成物は、２つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個またはそれより多く）のｓｄＡｂを含むマルチドメイン抗体（ＭＤＡｂ）またはマルチドメイン抗体断片である。いくつかの実施形態では、ＭＤＡｂまたはその断片は、Ａ型インフルエンザのヘマグルチニンに結合する１つ以上のｓｄＡＢ、及びＢ型インフルエンザのヘマグルチニンに結合する１つ以上のｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、ＭＤＡｂは、Ｌａｕｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．３６２：５９８－６０２（２０１８）に記載されているＪＮＪ－７４４５（ＭＤ３６０６としても知られる）である。手短に述べると、ＪＮＪ－７４４５は、Ａ型インフルエンザのヘマグルチニンに結合する２つのｓｄＡｂ（ＳＤ３６及びＳＤ３８）と、Ｂ型インフルエンザのヘマグルチニンに結合する２つのｓｄＡｂ（ＳＤ８３及びＳＤ８４）とを含み、これらがＦｃドメイン（ＩｇＧ１）に繋げられている、ＭＤＡｂである。ｓｄＡｂは、ラマをインフルエンザワクチンならびにＨ７及びＨ２組換えヘマグルチニンで免疫することによって製造された。
別の態様において本発明は、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つ（例えば、式（１）、（２）、（３）、（４）、（５）、（Ｄ－Ｉ）、（Ｄ－ＩＩ）、（Ｄ－ＩＩ－１）、（Ｄ－ＩＩ－２）、（Ｄ－ＩＩ－３）、（Ｄ－ＩＩ－４）、（Ｄ－ＩＩ－５）、（Ｄ－ＩＩ－６）、（Ｄ－ＩＩ－７）、（Ｄ－ＩＩ－８）、（Ｄ－ＩＩ－９）、（Ｄ－ＩＩ－１０）、（Ｄ－ＩＩＩ）、（Ｄ－ＩＩＩ－１）、（Ｄ－ＩＩＩ－２）、（Ｄ－ＩＩＩ－３）、（Ｄ－ＩＩＩ－４）、（Ｄ－ＩＩＩ－５）、（Ｄ－ＩＩＩ－６）、（Ｄ－ＩＩＩ－７）、（Ｄ－ＩＩＩ－８）、（Ｄ－ＩＩＩ－９）、（Ｄ－ＩＶ）、（Ｄ－ＩＶ－１）、（Ｄ－ＩＶ－２）、（Ｄ－Ｖ）、（Ｄ－Ｖ－１）、（Ｄ－Ｖ－２）、（Ｄ－Ｖ－３）、（Ｄ－Ｖ－４）、（Ｄ－Ｖ－５）、（Ｄ－Ｖ－６）、（Ｄ－Ｖ－７）、（Ｄ－Ｖ－８）、（Ｄ－Ｖ－９）、（Ｄ－Ｖ－１０）、（Ｄ－ＶＩ）、（Ｄ－ＶＩ－１）、（Ｄ－ＶＩ－２）、（Ｄ－ＶＩ－３）、（Ｄ－ＶＩ－４）、（Ｄ－ＶＩ－５）、（Ｄ－ＶＩ－６）、（Ｄ－ＶＩ－７）、（Ｄ－ＶＩ－８）、（Ｄ－ＶＩ－９）、（Ｄ－ＶＩＩ）、（Ｄ－ＶＩＩＩ）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－１）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－２）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－３）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－４）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－５）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－６）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－７）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－８）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－９）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－１０）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－１１）、（Ｄ－ＩＸ）、（Ｄ－ＩＸ－１）、（Ｄ－ＩＸ－２）、（Ｄ－ＩＸ－３）、（Ｄ－ＩＸ－４）、（Ｄ－ＩＸ－５）、（Ｄ－ＩＸ－６）、（Ｄ－Ｘ）、（Ｄ－Ｘ－１）、（Ｄ－Ｘ－２）、（Ｄ－Ｘ－３）、（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ－ＸＩ－１）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）、（Ｍ－ＩＩ）、（Ｍ－ＩＩ－１）、（Ｍ－ＩＩ－２）、（Ｍ－ＩＩ－３）、（Ｍ－ＩＩ－４）、（Ｍ－ＩＩ－５）、（Ｍ－ＩＩ－６）、（Ｍ－ＩＩ－７）、（Ｍ－ＩＩ－８）、（Ｍ－ＩＩ－９）、（Ｍ－ＩＩ－１０）、（Ｍ－ＩＩＩ）、（Ｍ－ＩＩＩ－１）、（Ｍ－ＩＩＩ－２）、（Ｍ－ＩＩＩ－３）、（Ｍ－ＩＩＩ－４）、（Ｍ－ＩＩＩ－５）、（Ｍ－ＩＩＩ－６）、（Ｍ－ＩＩＩ－７）、（Ｍ－ＩＩＩ－８）、（Ｍ－ＩＩＩ－９）、（Ｍ－ＩＶ）、（Ｍ－ＩＶ－１）、（Ｍ－ＩＶ－２）、（Ｍ－Ｖ）、（Ｍ－Ｖ－１）、（Ｍ－Ｖ－２）、（Ｍ－Ｖ－３）、（Ｍ－Ｖ－４）、（Ｍ－Ｖ－５）、（Ｍ－Ｖ－６）、（Ｍ－Ｖ－７）、（Ｍ－Ｖ－８）、（Ｍ－Ｖ－９）、（Ｍ－Ｖ－１０）、（Ｍ－ＶＩ）、（Ｍ－ＶＩ－１）、（Ｍ－ＶＩ－２）、（Ｍ－ＶＩ－３）、（Ｍ－ＶＩ－４）、（Ｍ－ＶＩ－５）、（Ｍ－ＶＩ－６）、（Ｍ－ＶＩ－７）、（Ｍ－ＶＩ－８）、（Ｍ－ＶＩ－９）、（Ｍ－ＶＩＩ）、（Ｍ－ＶＩＩＩ）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－１）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－２）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－３）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－４）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－５）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－６）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－７）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－８）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－９）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－１０）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－１１）、（Ｍ－ＩＸ）、（Ｍ－ＩＸ－１）、（Ｍ－ＩＸ－２）、（Ｍ－ＩＸ－３）、（Ｍ－ＩＸ－４）、（Ｍ－ＩＸ－５）、（Ｍ－ＩＸ－６）、（Ｍ－Ｘ）、（Ｍ－Ｘ－１）、（Ｍ－Ｘ－２）、（Ｍ－Ｘ－３）または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つ）で表される複合体を含み、Ｅは抗体または抗体断片である。好ましい実施形態では、Ｅが抗体または抗体断片である場合、ｎは１である。いくつかの実施形態では、抗体または抗体断片は、本明細書に記載の任意の抗体または抗体断片、例えば、ウイルスヘマグルチニンに結合するモノクローナル抗体（例えば、ＣＲ６２６１、ＣＲ８０２０、ＭＥＤＩ８８５２、ＭＨＡＡ４５４９ＡまたはＶＩＳ４１０）；ウイルスヘマグルチニンを標的として広範に中和する抗体もしくは抗体断片（例えば、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４２９：２６９４－２７０９（２０１７）に記載されている抗体または抗体断片）；ウイルスヘマグルチニンを標的とするｓｄＡｂ（例えば、ＳＤ３６、ＳＤ３８、ＳＤ８３またはＳＤ８４）；またはウイルスヘマグルチニンを標的とするＭＤＡｂもしくはその断片（例えばＪＮＪ－７４４５）を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号６のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号２０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号２１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号２２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号２３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号２４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号２５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号２６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号２７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号２８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号２９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号３０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号３０のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号３１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号３１のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号３２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号３２のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号３３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号３３のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号３４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号３４のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号３５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号３６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号３６のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号３７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号３７のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号３８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号３８のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号３９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号３９のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号４０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号４０のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号４１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号４１のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号４２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号４２のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号４３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号４３のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号４４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号４５のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号４６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号４６のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号４７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号４７のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号４８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号４８のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号４９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号５０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号５０のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号５１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号５２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号５２のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号５３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号５４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号５４のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号５５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号５５のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号５６のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号５７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号５８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号５８のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号５９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号５９のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号６０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号６０のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号６１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号６１のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号６２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号６２のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号６３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号６４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号６４のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号６５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号６５のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号６６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号６６のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号６７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号６７のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号６８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号６８のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号６９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号６９のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号７０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号７０のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号７１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号７１のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号７２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号７２のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号７３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号７４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号７５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号７６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号７６のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号７７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号７７のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号７８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号７８のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号７９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号７９のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号８０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号８０のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号８１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号８１のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号８２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号８２のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号８３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号８３のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号８４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号８５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号８５のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号８６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号８６のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号８７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号８７のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号８８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号８８のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号８９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号８９のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号９０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号９１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号９２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号９２のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号９３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号９４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号９４のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号９５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号９５のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号９６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号９６のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号９７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号９７のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号９８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号９８のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号９９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号９９のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１００のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１００のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１０１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１０１のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１０２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１０２のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１０３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１０３のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１０４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１０４のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１０５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１０５のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１０６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１０６のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１０７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１０７のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１０８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１０８のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１０９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１０９のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１１０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１１０のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１１１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１１１のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１１２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１１２のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１１３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１１３のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１１４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１１４のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１１５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１１５のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１１６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１１６のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１１７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１１７のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１１８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１１８のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１１９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１１９のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１２０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１２０のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１２１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１２１のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１２２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１２２のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１２３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１２３のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１２４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１２４のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１２５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１２５のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１２６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１２６のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１２７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１２７のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１２８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１２８のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１２９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１２９のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１３０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１３０のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１３１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１３１のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１３２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１３２のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１３３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１３３のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１３４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１３４のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１３５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１３５のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１３６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１３６のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１３７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１３７のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１３８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１３８のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１３９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１３９のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１４０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１４０のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｅ（例えば各Ｅ）は配列番号１４５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、配列番号１４１のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、ＥはＦｃドメイン単量体を含み、Ｆｃドメイン単量体（例えば、配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有するＦｃドメイン単量体）は、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ（ＹＴＥ）に対応する３重の突然変異を含む。本明細書中で使用する場合、（例えば特定の配列番号の）特定のアミノ酸残基「に対応する」アミノ酸は、（例えば特定の配列の）特定の残基と並ぶことが当業者に理解されるであろう任意のアミノ酸残基を含むと理解されるべきである。例えば、配列番号１～１３８のいずれか１つが突然変異してＹＴＥ突然変異を含んでいてもよい。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、ＥはＦｃドメイン単量体を含み、Ｆｃドメイン単量体（例えば、配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有するＦｃドメイン単量体）は、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ（ＬＳ）に対応する２重の突然変異体を含む。本明細書中で使用する場合、（例えば特定の配列番号の）特定のアミノ酸残基「に対応する」アミノ酸は、（例えば特定の配列の）特定の残基と並ぶことが当業者に理解されるであろう任意のアミノ酸残基を含むと理解されるべきである。例えば、配列番号１～１３８のいずれか１つが突然変異してＬＳ突然変異を含んでいてもよい。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、ＥはＦｃドメイン単量体を含み、Ｆｃドメイン単量体（例えば、配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有するＦｃドメイン単量体）は、Ｎ４３４Ｈに対応する突然変異体を含む。本明細書中で使用する場合、（例えば特定の配列番号の）特定のアミノ酸残基「に対応する」アミノ酸は、（例えば特定の配列の）特定の残基と並ぶことが当業者に理解されるであろう任意のアミノ酸残基を含むと理解されるべきである。例えば、配列番号１～１３８のいずれか１つが突然変異してＮ４３４Ｈ突然変異を含んでいてもよい。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、ＥはＦｃドメイン単量体を含み、Ｆｃドメイン単量体（例えば、配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有するＦｃドメイン単量体）は、Ｃ２２０Ｓに対応する突然変異体を含む。本明細書中で使用する場合、（例えば特定の配列番号の）特定のアミノ酸残基「に対応する」アミノ酸は、（例えば特定の配列の）特定の残基と並ぶことが当業者に理解されるであろう任意のアミノ酸残基を含むと理解されるべきである。例えば、配列番号１～１３８のいずれか１つが突然変異してＣ２２０Ｓ突然変異を含んでいてもよい。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｆｃドメイン単量体（例えば、配列番号１～９５のいずれか１つの配列を有するＦｃドメイン単量体）は、Ｖ３０９Ｄ／Ｑ３１１Ｈ／Ｎ４３４Ｓ（ＤＨＳ）に対応する３重の突然変異を含む。本明細書中で使用する場合、（例えば特定の配列番号の）特定のアミノ酸残基「に対応する」アミノ酸は、（例えば特定の配列の）特定の残基と並ぶことが当業者に理解されるであろう任意のアミノ酸残基を含むと理解されるべきである。例えば、配列番号１～９５のいずれか１つが突然変異してＤＨＳ突然変異を含んでいてもよい。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、ＥはＦｃドメイン単量体を含み、Ｆｃドメイン単量体（例えば、配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有するＦｃドメイン単量体）は、Ｆｃドメイン単量体の断片（例えば、配列番号１～１３８からの少なくとも２５（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０またはそれ以上の）、少なくとも５０（例えば、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５またはそれ以上の）、少なくとも７５（例えば、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００またはそれ以上の）連続アミノ酸の長さを有する断片である。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの複合体）では、Ｅの１つ以上の表面露出リジン残基の１つ以上の窒素原子、またはＥ中の１つ以上の表面露出システインの１つ以上の硫黄原子は、共有結合によってリンカー（例えばＰＥＧ２～ＰＥＧ２０リンカー）と複合している。Ｅに複合しているリンカーは、反応して本明細書に記載の任意のＡ１－Ｌまたは任意のＡ２－Ｌ－Ａ１のＬとの共有結合を形成し得るように官能化されたものであり得る。好ましい実施形態では、Ｅは、アジド基で官能化されたリンカーと複合しており、Ａ１－Ｌまたは任意のＡ２－Ｌ－Ａ１のＬはアルキン基で官能化されている。Ｅのリンカー－アジドと、Ａ１－ＬまたはＡ２－Ｌ－Ａ１のリンカー－アルキンとの（例えばクリックケミストリーによる）複合によって本発明の複合体、例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つで表される複合体が形成される。さらに他の実施形態では、Ｅは、アルキン基で官能化されたリンカーと複合しており、任意のＡ１－Ｌまたは任意のＡ２－Ｌ－Ａ１のＬはアジド基で官能化されている。Ｅのリンカー－アルキンと、Ａ１－ＬまたはＡ２－Ｌ－Ａ１のリンカー－アジドとの（例えばクリックケミストリーによる、例えば図１０３を参照する）複合によって本発明の複合体、例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）で表される複合体が形成される。本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの波線は、Ｅと、Ａ１－ＬまたはＡ２－Ｌ－Ａ１のＬとの共有結合を表し得る。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの波線は、リンカー（例えばＰＥＧ２～ＰＥＧ２０リンカー）であって反応性部分で官能化されておりその結果として反応性部分が（例えば上記のように、例えば図１０３を参照して、アジド官能化リンカーとアルキン官能化リンカーとのクリックケミストリーによって）本明細書に記載の任意のＡ１－Ｌまたは任意のＡ２－Ｌ－Ａ１のＬとの共有結合を形成している当該リンカーに、Ｅの１つ以上のアミノ酸側鎖（例えば、Ｅの１つ以上の表面露出リジン残基の１つ以上の窒素原子、またはＥ中の１つ以上の表面露出システインの１つ以上の硫黄原子）が複合していることを表し得る。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、（Ａ－Ｉ）で表される構造：
Figure 2022546609000268
 を有する。
好ましい実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、（Ａ－Ｉ）で表される構造を有し、Ｒ１は－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２であり、Ｒ４は－ＣＯ２Ｈであり、Ｒ５は－ＣＯＣＨ３であり、及び／またはＸは－Ｏ－である。好ましい実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、
Figure 2022546609000269
 で表されるザナミビルの構造を有する。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、（Ａ－ＩＩ）：
Figure 2022546609000270
 で表される構造を有する。
好ましい実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は（Ａ－ＩＩ）で表される構造を有し、Ｒ１は－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２であり、Ｒ２はＨまたはＦであり、Ｒ３はＨまたはＦであり、Ｒ４は－ＣＯ２Ｈであり、Ｒ５は－ＣＯＣＨ３であり、及び／またはＸは－Ｏ－である。好ましい実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、
Figure 2022546609000271
 で表される構造を有する。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、（Ａ－ＩＩＩ）：
Figure 2022546609000272
 で表される構造を有する。
好ましい実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、（Ａ－ＩＩＩ）で表される構造を有し、Ｒ１は－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２であり、Ｒ４は－ＣＯ２Ｈであり、及び／またはＲ５は－ＣＯＣＨ３である。好ましい実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、
Figure 2022546609000273
 で表されるペラミビルの構造を有する。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、（Ａ－ＩＶ）：
Figure 2022546609000274
 で表される構造を有する。
好ましい実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、（Ａ－ＩＶ）で表される構造を有し、Ｒ１は－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２であり、Ｒ４は－ＣＯ２Ｈであり、及び／またはＲ５は－ＣＯＣＨ３である。好ましい実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、
Figure 2022546609000275
 で表される構造を有する。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、（Ａ－Ｖ）：
Figure 2022546609000276
 で表される構造を有する。
好ましい実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、（Ａ－Ｖ）で表される構造を有し、Ｒ１は－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２であり、Ｒ４は－ＣＯ２Ｈであり、及び／またはＲ５は－ＣＯＣＨ３である。好ましい実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、
Figure 2022546609000277
 で表される構造を有する。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、（Ａ－ＶＩ）：
Figure 2022546609000278
 で表される構造を有する。
好ましい実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、（Ａ－ＶＩ）で表される構造を有し、Ｒ１は－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２であり、Ｒ４は－ＣＯ２Ｈであり、Ｒ５は－ＣＯＣＨ３であり、及び／またはＸは－Ｏ－である。好ましい実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、
Figure 2022546609000279
 で
表されるザナミビルの構造を有する。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、（Ａ－ＶＩＩ）：
Figure 2022546609000280
 で表される構造を有する。
好ましい実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、（Ａ－ＶＩＩ）で表される構造を有し、Ｒ１は－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２であり、Ｒ２はＨまたはＦであり、Ｒ３はＨまたはＦであり、Ｒ４は－ＣＯ２Ｈであり、Ｒ５は－ＣＯＣＨ３であり、及び／またはＸは－Ｏ－である。好ましい実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、
Figure 2022546609000281
 で表される構造を有する。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、（Ａ－ＶＩＩＩ）：
Figure 2022546609000282
 で表される構造を有する。
好ましい実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、（Ａ－ＶＩＩＩ）で表される構造を有し、Ｒ１は－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２であり、Ｒ５は－ＣＯＣＨ３であり、及び／またはＸは－Ｏ－である。好ましい実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、
Figure 2022546609000283
 で表される構造を有する。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、（Ａ－ＩＸ）：
Figure 2022546609000284
 で表される構造を有する。
好ましい実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、（Ａ－ＩＸ）で表される構造を有し、Ｒ１は－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２であり、Ｒ２はＨまたはＦであり、Ｒ３はＨまたはＦであり、Ｒ５は－ＣＯＣＨ３であり、及び／またはＸは－Ｏ－である。好ましい実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、
Figure 2022546609000285
 で表される構造を有する。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、（Ａ－Ｘ）：
Figure 2022546609000286
 で表される構造を有する。
好ましい実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、（Ａ－Ｘ）で表される構造を有し、Ｒ１は－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２であり、Ｒ３はＨであり、Ｒ５は－ＣＯＣＨ３であり、及び／またはＸは－Ｏ－である。好ましい実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、
Figure 2022546609000287
 で表されるスルホザナミビルの構造を有する。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、（Ａ－ＸＩ）：
Figure 2022546609000288
 で表される構造を有する。
好ましい実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、（Ａ－ＸＩ）で表される構造を有し、Ｒ４は－ＣＯ２Ｈであり、及び／またはＲ５は－ＣＯＣＨ３である。好ましい実施形態では、アルケンは（Ｅ）、（Ｚ）、または（Ｅ）／（Ｚ）のラセミ混合物である。好ましい実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、
Figure 2022546609000289
 で表されるＡ－３１５６７５（Ａｂｂｏｔｔ）の構造を有する。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、（Ａ－ＸＩＩ）：
Figure 2022546609000290
 で表される構造を有する。
好ましい実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、（Ａ－ＸＩＩ）で表される構造を有し、Ｒ４は－ＣＯ２Ｈである。好ましい実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は、
Figure 2022546609000291
 で表されるＡ－３１５６７５（Ａｂｂｏｔｔ）の構造を有する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体１またはその任意の位置異性体であり、薬物抗体比（ＤＡＲ）（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体１の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体２またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体２の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体３またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体３の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体４またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体４の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体５またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体５の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体６またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体６の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体７またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体７の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体８またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体８の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体９またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体９の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体１０またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体１０の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体１１またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体１１の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体１２またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体１２の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体１３またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体１３の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体１４またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体１４の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体１５またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体１５の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体１６またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体１６の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体１７またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体１７の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体１８またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体１８の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体１９またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体１９の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体２０またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体２０の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体２１またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体２１の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体２２またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体２２の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体２３またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体２３の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体２４またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体２４の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体２５またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体２５の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体２６またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体２６の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体２７またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体２７の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体２８またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体２８の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体２９またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体２９の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体３０またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体３０の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体３１またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体３１の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体３２またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体３２の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体３３またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体３３の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体３４またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体３４の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体３５またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体３５の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体３６またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体３６の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体３７またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体３７の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体３８またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体３８の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体３９またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体３９の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体４０またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体４０の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体４１またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体４１の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体４２またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体４２の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体４３またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体４３の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体４４またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体４４の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体４５（例えば複合体４５ａまたは複合体４５ｂ）またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体４５（例えば複合体４５ａまたは複合体４５ｂ）の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体４６またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体４６の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体４７またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体４７の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体４８またはその任意の位置異性体であり、ＤＡＲ（例えばＴ）は、０．５～１０．０、例えば、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。いくつかの実施形態では、ＤＡＲは、０．５～２．０、２．０～４．０、４．０～６．０、６．０～８．０、または８．０～１０．０である。別の態様において、本発明は、複合体の集団であって、各複合体が複合体４８の構造を有し、複合体の集団の平均ＤＡＲ（例えばＴ）が１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である、当該集団を提供する。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、本発明は、式（Ｄ－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）、（１）もしくは（２）のいずれか１つで表される複合体、またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、ここで、式中の各Ａ１及び各Ａ２は、独立して式（Ａ－ＸＩＩＩ）：
Figure 2022546609000292
 のいずれか１つから選択され、
Ｒ１は、－ＯＨ、－ＮＨ２、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、及び－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨＲ６から選択され、Ｒ４は、－ＣＯ２Ｈ、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２、－ＳＯ３Ｈから選択され、Ｒ５は、－ＣＯＣＨ３、－ＣＯＣＦ３、－ＳＯ２ＣＨ３から選択され、Ｘは、－Ｏ－、及び－Ｓ－から選択され、Ｙは、



Figure 2022546609000293
 から選択され、
Ｒ６は、

Figure 2022546609000294
 から選択され、
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ２０アルキル、Ｃ３－Ｃ２０シクロアルキル、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ
１５ヘテロアリールから選択され、
Ｒ８は、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択され、
Ｒ９は、－Ｈ、ハロゲン（例えばＣｌまたはＦ、－ＯＲ１０、－ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ７、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキル、Ｃ３－Ｃ２０シクロアルキル、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択され、
Ｒ１０は、Ｃ１－Ｃ２０アルキル、Ｃ３－Ｃ２０シクロアルキル、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択され、
ｎは１または２であり、
各Ｅは、Ｆｃドメイン単量体、アルブミンタンパク質、アルブミンタンパク質結合ペプチドまたはＦｃ結合ペプチドを含み、
Ｌは、Ｅに、ならびに各Ａ１のまたはＡ１及びＡ２の各々の各Ｙに共有結合しているリンカーであり、
Ｔは１～２０の整数であり、
式（Ｄ－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）、（１）または（２）の中の各波線は、Ｌが各Ｅに共有結合していることを表す。
いくつかの実施形態では、各Ａ１及び各Ａ２は式（Ａ－ＸＩＩＩ－１）：
Figure 2022546609000295
 で表される。
いくつかの実施形態では、各Ａ１及び各Ａ２は独立して式（Ａ－ＸＩＩＩ－１ａ）～（Ａ－ＸＩＩＩ－１ｄ）：
Figure 2022546609000296
 のいずれか１つから選択される。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＸＩ）：
Figure 2022546609000297
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｄ－ＸＩ－１）：
Figure 2022546609000298
 〔式中、Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ２０アルキル、Ｃ３－Ｃ２０シクロアルキル、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択される〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＸＩ）：
Figure 2022546609000299
 で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、複合体は式（Ｍ－ＸＩ－１）：
Figure 2022546609000300
 〔式中、Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ２０アルキル、Ｃ３－Ｃ２０シクロアルキル、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択される〕
で表され、またはその薬学的に許容される塩である。
定義
本発明の理解を容易にするために、いくつかの用語を以下に定義する。本明細書中で定義される用語は、本発明が該当する分野の当業者によって一般的に理解される意味を有する。「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」などの用語は、単数形の実体だけに言及することを意図しておらず、例示のために特定の例が用いられ得る一般的部類を含む。本明細書中の専門用語は、本発明の特定の実施形態を説明するために使用されているが、その用法は、特許請求の範囲の中で画定されている場合を除き、本発明を制限しない。
「ノイラミニダーゼ阻害剤」または「ウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤」という用語は、本明細書中で使用される場合、（例えば、Ａ型、Ｂ型またはＣ型インフルエンザウイルスからの）酵素インフルエンザウイルス・ノイラミニダーゼの活性を低下させる化合物を指す。ノイラミニダーゼ阻害剤は、当業者に知られている方法、例えば、インフルエンザウイルスプラーク減少アッセイにおける例えば濃度２０μＭ未満（例えば、１０μＭ未満、５μＭ未満、２μＭ未満、１μＭ未満、５００ｎＭ未満または１００ｎＭ未満）でのウイルス複製の減少によって同定され得る。当業者に知られているウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤としては、ザナミビル、スルホザナミビル、ペラミビル、及びＡ－３１５６７５（Ａｂｂｏｔｔ）が挙げられる（例えば、Ｈａｄｈａｚｉ ｅｔ ａｌ．Ａ ｓｕｌｆｏｚａｎａｍｉｖｉｒ ａｎａｌｏｇｕｅ ｈａｓ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ａｃｔｉｖｉｔｙ．ＣｈｅｍＭｅｄＣｈｅｍ Ｃｏｍｍ．１３：７８５－７８９（２０１８）、及びＩｎ ｖｉｔｒｏ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ａ－３１５６７５，ａ ｈｉｇｈｌｙ ｐｏｔｅｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ Ａ ａｎｄ Ｂ ｓｔｒａｉｎ ｏｆ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ｎｅｕｒａｍｉｎｉｄａｓｅｓ ａｎｄ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ４６（４）：１０１４－１０２１（２００２）を参照されたい）。本発明のウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤には、ザナミビル、スルホザナミビル、ペラミビル、Ａ－３１５６７５、及びその類縁体、例えば、式（Ａ－Ｉ）～（Ａ－ＸＩＩＩ）：
Figure 2022546609000301
 〔式中、Ｒ１は、－ＯＨ、－ＮＨ２、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、及び－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨＲ６から選択され、Ｒ２及びＲ３は各々独立して、－Ｈ、－ＯＨ、－Ｆ、－Ｃｌ及び－Ｂｒから選択され、Ｒ４は、－ＣＯ２Ｈ、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２、－ＳＯ３Ｈから選択され、Ｒ５は、－ＣＯＣＨ３、－ＣＯＣＦ３、－ＳＯ２ＣＨ３から選択され、Ｘは、－Ｏ－、及び－Ｓ－から選択され、Ｙは、
Figure 2022546609000302
 から選択され、Ｒ６は、
Figure 2022546609000303
 から選択され、Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ２０アルキル、Ｃ３－Ｃ２０シクロアルキル、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択され、Ｒ８は、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択され、Ｒ９は、－Ｈ、ハロゲン（例えば、Ｃｌ、ＦまたはＢｒ）、－ＯＲ１０、－ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ７、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキル、Ｃ３－Ｃ２０シクロアルキル、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択され、Ｒ１０は、Ｃ１－Ｃ２０アルキル、Ｃ３－Ｃ２０シクロアルキル、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択される〕
のウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤が含まれる。
本明細書中で使用する場合、「ノイラミニダーゼ活性を阻害する」という用語は、例えば本明細書中の実施例２におけるノイラミニダーゼ阻害アッセイに従って測定したときの、１，０００ｎＭ以下のＩＣ５０を意味する。具体的には、ＩＣ５０は、試験管内での５０％阻害に必要とされるインフルエンザウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤の濃度を表す。いくつかの態様において、ノイラミニダーゼ阻害アッセイによるＩＣ５０が１００ｎＭ以下または１０ｎＭ以下であることは、化合物がノイラミニダーゼ活性を阻害していることを示唆している。
「ウイルス感染症」とは、宿主生物（例えばヒト対象）における病原となるウイルス（例えばインフルエンザウイルス）成長を意味する。ウイルス感染症は、ウイルス集団（複数可）の存在が宿主の体に損傷を与えている任意の状況であり得る。したがって、過剰な量のウイルス集団が対象の体の中もしくは上に存在する場合、またはウイルス集団（複数可）の存在が対象の細胞もしくは他の組織に損傷を与えている場合、対象はウイルス感染症に「罹患している」。
本明細書中で使用する場合、「Ｆｃドメイン単量体」という用語は、少なくともヒンジドメインと、第２及び第３抗体定常ドメイン（ＣＨ２及びＣＨ３）またはそれらの機能性断片（例えば、（ｉ）別のＦｃドメイン単量体と二量体化してＦｃドメインを形成すること及び（ｉｉ）Ｆｃ受容体に結合することができる断片）とを含むポリペプチド鎖を指す。Ｆｃドメイン単量体は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＡまたはＩｇＤを含めた任意の免疫グロブリン抗体アイソタイプ（例えばＩｇＧ）であり得る。加えて、Ｆｃドメイン単量体はＩｇＧサブタイプ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）（例えばＩｇＧ１）であってもよい。Ｆｃドメイン単量体は、抗原認識領域として作用することができる免疫グロブリンの部分、例えば可変ドメインまたは相補性決定領域（ＣＤＲ）を何ら含まない。本明細書に記載の複合体の中のＦｃドメイン単量体は、ＦｃドメインとＦｃ受容体との相互作用を変化させる、野生型Ｆｃドメイン単量体配列からの１つ以上の変更（例えば、１～１０、１～８、１～６、１～４個のアミノ酸置換、付加または欠失）を含有し得る。好適な変更の例は当技術分野で知られている。ある実施形態では、ヒトＦｃドメイン単量体（例えば、ＩｇＧ重鎖、例えばＩｇＧ１）は、Ａｓｎ２０８、Ｇｌｕ２１６、Ａｓｐ２２１、Ｌｙｓ２２２またはＣｙｓ２２６のいずれかからＬｙｓ４４７にある重鎖のカルボキシ末端まで延びている領域を含む。Ｆｃ領域のＣ末端Ｌｙｓ４４７は、Ｆｃ領域の構造または安定性に影響を与えることなく、存在していてもいなくてもよい。Ｃ末端Ｌｙｓ４４７は、ポリペプチドの発現時にタンパク質分解的に切断され得る。本明細書に記載のＦｃドメイン単量体のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｃ末端Ｌｙｓ４４７は任意選択的に、存在しているかまたは存在していない。本開示は特に、Ｌｙｓ４４７に対応するＣ末端Ｌｙｓを含んでいない配列番号１～４、１１、１６、１９、２０、３２～３７、４８～５３、及び６０～６８のいずれかを企図する。（例えば配列番号６０～７７のいずれか１つの）Ｆｃ領域のＮ末端Ｎ（Ａｓｎ）は、Ｆｃ領域の構造または安定性に影響を与えることなく、存在していてもいなくてもよい。Ｎ末端Ａｓｎは、ポリペプチドの発現時に脱アミド化され得る。本明細書に記載のＦｃドメイン単量体のいずれかの、いくつかの実施形態では、Ｎ末端Ａｓｎは任意選択的に、存在しているかまたは存在していない。本開示は特に、Ｎ末端Ａｓｎを含んでいない配列番号６０～７７のいずれかを企図する。本明細書中で特に明記しない限り、ＩｇＧまたはＦｃドメイン単量体の中のアミノ酸残基の付番は、例えばＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載されているような、Ｋａｂａｔ ＥＵ指標とも呼称される抗体のためのＥＵ付番体系に従う。
本明細書中で使用する場合、「Ｆｃドメイン」という用語は、Ｆｃ受容体に結合することができる２つのＦｃドメイン単量体の二量体を指す。野生型Ｆｃドメインにおいて２つのＦｃドメイン単量体は、２つのＣＨ３抗体定常ドメインの間の相互作用によって二量体化し、いくつかの実施形態では、二量体化している２つのＦｃドメイン単量体のヒンジドメインの間に１つ以上のジスルフィド結合が形成される。「共有結合している」という用語は、複合体の２つの部分が、複合体の当該２つの部分の中の２つの原子の間に形成された共有結合によって互いに繋がっていることを意味する。
本明細書中で使用する場合、「Ｆｃ結合ペプチド」という用語は、Ｆｃドメイン、例えば本明細書に記載のＦｃドメインのいずれかに対する親和性及び結合機能を有する５～５０（例えば、５～４０、５～３０、５～２０、５～１５、５～１０、１０～５０、１０～３０、または１０～２０）アミノ酸残基のアミノ酸配列を有するポリペプチドを指す。Ｆｃ結合ペプチドペプチドは由来が様々であり得、例えば、合成、ヒト、マウスまたはラットに由来し得る。本発明のＦｃ結合ペプチドには、本発明の化合物との複合（例えば、リンカーによる場合を含めて、ノイラミニダーゼ阻害剤単量体または二量体との複合）のための部位を提供し得るものである溶媒曝露システインまたはリジン残基を１つ以上（例えば、２つ、３つ、４つまたは５つ）含むように操作されたＦｃ結合ペプチドが含まれる。Ｆｃ結合ペプチドは、単一の溶媒曝露システインまたはリジンを含有してこれによって本発明の化合物の部位特異的な複合を可能にしていることが最も好ましかろう。Ｆｃ結合ペプチドは、天然に存在するアミノ酸残基のみを含んでいてもよいし、または天然に存在しないアミノ酸残基を１つ以上含んでいてもよい。天然に存在しないアミノ酸残基（例えば、天然に存在しないアミノ酸残基の側鎖）は、含まれている場合、本発明の化合物（例えば、リンカーによる場合を含めて、ノイラミニダーゼ阻害剤単量体または二量体）に対する結合点として使用され得る。本発明のＦｃ結合ペプチドは、直鎖状であってもよいし、または環状であってもよい。本発明のＦｃ結合ペプチドには、当業者に知られている任意のＦｃ結合ペプチドが含まれる。
本明細書で使用する場合、「アルブミンタンパク質」という用語は、天然に存在するアルブミンタンパク質（例えばヒト血清アルブミン）またはその変異体、例えば天然に存在するアルブミンタンパク質の操作型変異体に対応するアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。アルブミンタンパク質の変異体には、多型、断片、例えばドメイン及びサブドメイン、ならびに融合タンパク質（例えば、Ｃ末端またはＮ末端に融合、例えばポリペプチドリンカーを有するアルブミンタンパク質）が含まれる。好ましくは、アルブミンタンパク質は、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、またはその変異体もしくは断片、最も好ましくはその機能性変異体もしくは断片のアミノ酸配列を有する。本発明のアルブミンタンパク質は、配列番号１３９～１４１のいずれか１つとの少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するタンパク質を含む。本発明のアルブミンタンパク質には、本発明の化合物との複合（例えば、リンカーによる場合を含めて、ノイラミニダーゼ阻害剤単量体または二量体との複合）のための部位を提供し得るものである溶媒曝露システインまたはリジン残基を１つ以上（例えば、２つ、３つ、４つまたは５つ）含むように操作されたアルブミンタンパク質が含まれる。アルブミンタンパク質は、単一の溶媒曝露システインまたはリジンを含有してこれによって本発明の化合物の部位特異的な複合を可能にしていることが最も好ましかろう。アルブミンタンパク質は、天然に存在するアミノ酸残基のみを含んでいてもよいし、または天然に存在しないアミノ酸残基を１つ以上含んでいてもよい。天然に存在しないアミノ酸残基（例えば、天然に存在しないアミノ酸残基の側鎖）は、含まれている場合、本発明の化合物（例えば、リンカーによる場合を含めて、ノイラミニダーゼ阻害剤単量体または二量体）に対する結合点として使用され得る。
本明細書中で使用する場合、「アルブミンタンパク質結合ペプチド」という用語は、アルブミンタンパク質、例えば本明細書に記載のアルブミンタンパク質のいずれかに対する親和性及び結合機能を有する５～５０（例えば、５～４０、５～３０、５～２０、５～１５、５～１０、１０～５０、１０～３０、または１０～２０）アミノ酸残基のアミノ酸配列を有するポリペプチドを指す。好ましくは、アルブミンタンパク質結合ペプチドは、天然に存在する血清アルブミン、最も好ましくはヒト血清アルブミンに結合する。アルブミンタンパク質結合ペプチドは由来が様々であり得、例えば、合成、ヒト、マウスまたはラットに由来し得る。本発明のアルブミンタンパク質結合ペプチドには、本発明の化合物との複合（例えば、リンカーによる場合を含めて、ノイラミニダーゼ阻害剤単量体または二量体との複合）のための部位を提供し得るものである溶媒曝露システインまたはリジン残基を１つ以上（例えば、２つ、３つ、４つまたは５つ）含むように操作されたアルブミンタンパク質結合ペプチドが含まれる。アルブミンタンパク質結合ペプチドは、単一の溶媒曝露システインまたはリジンを含有してこれによって本発明の化合物の部位特異的な複合を可能にしていることが最も好ましかろう。アルブミンタンパク質結合ペプチドは、天然に存在するアミノ酸残基のみを含んでいてもよいし、または天然に存在しないアミノ酸残基を１つ以上含んでいてもよい。天然に存在しないアミノ酸残基（例えば、天然に存在しないアミノ酸残基の側鎖）は、含まれている場合、本発明の化合物（例えば、リンカーによる場合を含めて、ノイラミニダーゼ阻害剤単量体または二量体）に対する結合点として使用され得る。本発明のアルブミンタンパク質結合ペプチドは、直鎖状であってもよいし、または環状であってもよい。本発明のアルブミンタンパク質結合ペプチドには、当業者に知られている任意のアルブミンタンパク質結合ペプチドが含まれ、その例は本明細書中に提供されている。さらなる例示的なアルブミンタンパク質結合ペプチドは米国特許出願第２００５／０２８７１５３号に示されており、参照によりこの全体を本明細書に援用する。
本明細書中で使用する場合、「表面露出アミノ酸」または「溶媒曝露アミノ酸」、例えば、表面露出システインまたは表面露出リジンは、タンパク質を取り囲んでいる溶媒との接触が可能なアミノ酸を指す。表面露出アミノ酸は、天然に存在するものであってもよいし、またはタンパク質の操作型変異体（例えば置換または挿入）であってもよい。いくつかの実施形態では、表面露出アミノ酸は、置換されたときにタンパク質の三次元構造を実質的に変化させないアミノ酸である。
「リンカー」、「Ｌ」及び「Ｌ’」という用語は、本明細書中で使用される場合、複合体中の２つ以上の構成要素の間（例えば、本明細書に記載の複合体の中の２つのノイラミニダーゼ阻害剤の間、本明細書に記載の複合体の中のノイラミニダーゼ阻害剤とＦｃドメインまたはアルブミンタンパク質との間、及び本明細書に記載の複合体の中の２つのノイラミニダーゼ阻害剤の二量体とＦｃドメインまたはアルブミンタンパク質との間）の共有結合リンケージまたは連結子を指す。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体は、三価の構造を有するリンカー（例えば三価リンカー）を含有し得る。三価リンカーは３本のアームを有し、各アームは複合体の構成要素に共有結合で繋げられている（例えば、第１アームは第１ノイラミニダーゼ阻害剤と複合しており、第２アームは第２ノイラミニダーゼ阻害剤と複合しており、第３アームはＦｃドメインまたはアルブミンタンパク質と複合している）。
リンカーとして使用され得る分子は、同じまたは異なるものであり得る少なくとも２つの官能基、例えば、２つのカルボン酸基、２つのアミン基、２つのスルホン酸基、カルボン酸基とマレイミド基、カルボン酸基とアルキン基、カルボン酸基とアミン基、カルボン酸基とスルホン酸基、アミン基とマレイミド基、アミン基とアルキン基、またはアミン基とスルホン酸基を含む。第１官能基は複合体中の第１構成要素との共有結合リンケージを形成し得、第２官能基は複合体中の第２構成要素との共有結合リンケージを形成し得る。三価リンカーのいくつかの実施形態では、リンカーの２本のアームは２つのジカルボン酸を含有し得、ここで、第１カルボン酸は複合体中の第１ノイラミニダーゼ阻害剤との共有結合リンケージを形成するものであり得、第２カルボン酸は複合体中の第２ノイラミニダーゼ阻害剤との共有結合リンケージを形成するものであり得、そして、リンカーの３本目のアームは複合体中のＦｃドメインまたはアルブミンタンパク質との共有結合リンケージのためのものであり得る。ジカルボン酸の例は本明細書中にさらに記載されている。いくつかの実施形態では、１つ以上のマレイミド基を含有する分子がリンカーとして使用され得、この場合、マレイミド基は複合体中の構成要素（例えばＦｃドメインまたはアルブミンタンパク質）の中のシステインとの炭素－硫黄リンケージを形成し得る。いくつかの実施形態では、１つ以上のアルキン基を含有する分子がリンカーとして使用され得、この場合、アルキン基は複合体中の構成要素（例えばＦｃドメインまたはアルブミンタンパク質）の中のアジドとの１，２，３－トリアゾールリンケージを形成し得る。いくつかの実施形態では、１つ以上のアジド基を含有する分子がリンカーとして使用され得、この場合、アジド基は複合体中の構成要素（例えばＦｃドメインまたはアルブミンタンパク質）の中のアルキンとの１，２，３－トリアゾールリンケージを形成し得る。いくつかの実施形態では、１つ以上のビススルホン基を含有する分子がリンカーとして使用され得、この場合、ビススルホン基は複合体中の構成要素（例えばＦｃドメインまたはアルブミンタンパク質）のアミン基とのリンケージを形成し得る。いくつかの実施形態では、１つ以上のスルホン酸基を含有する分子がリンカーとして使用され得、この場合、スルホン酸基は複合体中の構成要素とのスルホンアミドリンケージを形成し得る。いくつかの実施形態では、１つ以上のイソシアネート基を含有する分子がリンカーとして使用され得、この場合、イソシアネート基は複合体中の構成要素との尿素リンケージを形成し得る。いくつかの実施形態では、１つ以上のハロアルキル基を含有する分子がリンカーとして使用され得、この場合、ハロアルキル基は複合体中の構成要素との共有結合リンケージ、例えばＣ－Ｎ及びＣ－Ｏリンケージを形成し得る。
いくつかの実施形態では、リンカーは２つ以上の構成要素の間に空間、剛直性及び／または柔軟性を提供する。いくつかの実施形態では、リンカーは結合、例えば共有結合であり得る。「結合」という用語は、化学結合、例えば、アミド結合、ジスルフィド結合、Ｃ－Ｏ結合、Ｃ－Ｎ結合、Ｎ－Ｎ結合、Ｃ－Ｓ結合、または化学反応、例えば化学的複合によって作り出された任意の種類の結合を指す。いくつかの実施形態では、リンカーは２５０個以下の原子を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは２５０個以下の非水素原子を含む。いくつかの実施形態では、リンカーの主鎖は２５０個以下の原子を含む。リンカーの「主鎖」は、複合体のある部分から複合体の別の部分までの最短経路（例えば、第１ノイラミニダーゼ阻害剤と第２ノイラミニダーゼ阻害剤とを繋げている最短経路）を一緒になって形成しているリンカー中の原子を指す。リンカーの主鎖中の原子は、複合体のある部分と複合体の別の部分との繋ぎ（例えば、第１ノイラミニダーゼ阻害剤と第２ノイラミニダーゼ阻害剤との繋ぎ）に直接関与している。例えば、リンカーの主鎖中の炭素に結合している水素原子は、複合体のある部分と複合体の別の部分との繋ぎに直接関与しているとはみなされない。
いくつかの実施形態では、リンカーは、例えば合成ポリマー（例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ポリマー）に由来する合成基を含み得る。いくつかの実施形態では、リンカーは１つ以上のアミノ酸残基、例えばＤ－またはＬ－アミノ酸残基を含み得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、アミノ酸配列（例えば、１～２５アミノ酸、１～１０アミノ酸、１～９アミノ酸、１～８アミノ酸、１～７アミノ酸、１～６アミノ酸、１～５アミノ酸、１～４アミノ酸、１～３アミノ酸、１～２アミノ酸または１アミノ酸配列）の残基であり得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、１個以上、例えば、１～１００個、１～５０個、１～２５個、１～１０個、１～５個、または１～３個の任意選択的に置換されたアルキレン、任意選択的に置換されたヘテロアルキレン（例えばＰＥＧ単位）、任意選択的に置換されたアルケニレン、任意選択的に置換されたヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたアルキニレン、任意選択的に置換されたヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたシクロアルキレン、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたアリーレン、任意選択的に置換されたヘテロアリーレン（例えばピリジン）、Ｏ、Ｓ、ＮＲｉ（Ｒｉは、Ｈ、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたヘテロアルキル、任意選択的に置換されたアルケニル、任意選択的に置換されたヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたアルキニル、任意選択的に置換されたヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたシクロアルケニル、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたシクロアルキニル、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたアリール、または任意選択的に置換されたヘテロアリールである）、Ｐ、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノを含み得る。例えば、リンカーは、１つ以上の任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキレン、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキレン（例えばＰＥＧ単位）、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニレン（例えばＣ２アルケニレン）、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキレン（例えば、シクロプロピレン、シクロブチレン）、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリーレン（例えばＣ６アリーレン）、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリーレン（例えば、イミダゾール、ピリジン）、Ｏ、Ｓ、ＮＲｉ（Ｒｉは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキル、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリール、または任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールである）、Ｐ、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノを含み得る。
本明細書中で使用する場合、「アルキル」、「アルケニル」及び「アルキニル」という用語は、置換されていないときにＣ及びＨのみを含有する、直鎖及び分岐鎖の一価置換基ならびにこれらの組合せを含む。アルキル基が少なくとも１つの炭素－炭素二重結合または炭素－炭素三重結合を含んでいる場合、当該アルキル基はそれぞれ「アルケニル」または「アルキニル」基と呼称され得る。アルキル、アルケニルまたはアルキニル基が一価であることは、アルキル、アルケニルまたはアルキニル基に任意選択の置換基が付いていることを含まない。例えば、アルキル、アルケニルまたはアルキニル基が化合物に結合している場合、アルキル、アルケニルまたはアルキニル基が一価であることが意味するのは、それが化合物に結合しており、アルキル、アルケニルまたはアルキニル基上に存在し得る追加の置換基を何ら含んでいない、ということである。いくつかの実施形態では、アルキルまたはヘテロアルキル基は、例えば、１～２０、１～１８、１～１６、１～１４、１～１２、１～１０、１～８、１～６、１～４、または１～２個の炭素原子を含有し得る（例えば、Ｃ１－Ｃ２０、Ｃ１－Ｃ１８、Ｃ１－Ｃ１６、Ｃ１－Ｃ１４、Ｃ１－Ｃ１２、Ｃ１－Ｃ１０、Ｃ１－Ｃ８、Ｃ１－Ｃ６、Ｃ１－Ｃ４、またはＣ１－Ｃ２）。いくつかの実施形態では、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニルまたはヘテロアルキニル基は、例えば、２～２０、２～１８、２～１６、２～１４、２～１２、２～１０、２～８、２～６、または２～４個の炭素原子を含有し得る（例えば、Ｃ２－Ｃ２０、Ｃ２－Ｃ１８、Ｃ２－Ｃ１６、Ｃ２－Ｃ１４、Ｃ２－Ｃ１２、Ｃ２－Ｃ１０、Ｃ２－Ｃ８、Ｃ２－Ｃ６、またはＣ２－Ｃ４）。例としては、メチル、エチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、２－プロペニル、及び３－ブチニルが挙げられるが、これらに限定されない。
「シクロアルキル」という用語は、本明細書中で使用される場合、一価の飽和または不飽和の非芳香環式アルキル基を表す。シクロアルキルは例えば３～２０個の炭素を有し得る（例えば、Ｃ３－Ｃ７、Ｃ３－Ｃ８、Ｃ３－Ｃ９、Ｃ３－Ｃ１０、Ｃ３－Ｃ１１、Ｃ３－Ｃ１２、Ｃ３－Ｃ１４、Ｃ３－Ｃ１６、Ｃ３－Ｃ１８、またはＣ３－Ｃ２０シクロアルキル）。シクロアルキルの例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル及びシクロヘプチルが挙げられるが、これらに限定されない。シクロアルキル基が少なくとも１つの炭素－炭素二重結合を含む場合、当該シクロアルキル基は「シクロアルケニル」基と呼称され得る。シクロアルケニルは例えば４～２０個の炭素を有し得る（例えば、Ｃ４－Ｃ７、Ｃ４－Ｃ８、Ｃ４－Ｃ９、Ｃ４－Ｃ１０、Ｃ４－Ｃ１１、Ｃ４－Ｃ１２、Ｃ４－Ｃ１４、Ｃ４－Ｃ１６、Ｃ４－Ｃ１８、またはＣ４－Ｃ２０シクロアルケニル）。例示的なシクロアルケニル基としては、シクロペンテニル、シクロヘキセニル及びシクロヘプテニルが挙げられるが、これらに限定されない。シクロアルキル基が少なくとも１つの炭素－炭素三重結合を含む場合、当該シクロアルキル基は「シクロアルキニル」基と呼称され得る。シクロアルキニルは例えば８～２０個の炭素を有し得る（例えば、Ｃ８－Ｃ９、Ｃ８－Ｃ１０、Ｃ８－Ｃ１１、Ｃ８－Ｃ１２、Ｃ８－Ｃ１４、Ｃ８－Ｃ１６、Ｃ８－Ｃ１８、またはＣ８－Ｃ２０シクロアルキニル）。「シクロアルキル」という用語は、１つ以上の炭素が単環の２つの非隣接構成員を架橋している架橋型多環式構造を有する環式化合物、例えばビシクロ［２．２．１］ヘプチル及びアダマンタンも含む。「シクロアルキル」という用語は、二環式、三環式及び四環式縮合環構造、例えばデカリン及びスピロ環式化合物も含む。
「アリール」という用語は、本明細書中で使用される場合、環系全体にわたる電子分布に関して芳香族性の特徴を有する任意の単環系または縮合二環もしくは三環系、例えば、フェニル、ナフチルまたはフェナントレンを指す。いくつかの実施形態では、環系は、５～１５個の環構成員原子または５～１０個の環構成員原子を含有する。アリール基は例えば５～１５個の炭素を有し得る（例えば、Ｃ５－Ｃ６、Ｃ５－Ｃ７、Ｃ５－Ｃ８、Ｃ５－Ｃ９、Ｃ５－Ｃ１０、Ｃ５－Ｃ１１、Ｃ５－Ｃ１２、Ｃ５－Ｃ１３、Ｃ５－Ｃ１４、またはＣ５－Ｃ１５アリール）。「ヘテロアリール」という用語も、Ｏ、Ｓ及びＮから選択される１つ以上、例えば、１～４、１～３、１、２、３または４個のヘテロ原子を含有するそのような単環系または縮合二環系を指す。ヘテロアリール基は例えば２～１５個の炭素を有し得る（例えば、Ｃ２－Ｃ３、Ｃ２－Ｃ４、Ｃ２－Ｃ５、Ｃ２－Ｃ６、Ｃ２－Ｃ７、Ｃ２－Ｃ８、Ｃ２－Ｃ９、Ｃ２－Ｃ１０、Ｃ２－Ｃ１１、Ｃ２－Ｃ１２、Ｃ２－Ｃ１３、Ｃ２－Ｃ１４、またはＣ２－Ｃ１５ヘテロアリール）。ヘテロ原子を含むことによって、５員環を含むことを６員環と同様に芳香族とみなすことが可能になる。かくして、典型的なヘテロアリール系には、例えば、ピリジル、ピリミジル、インドリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾトリアゾリル、イソキノリル、キノリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾフラニル、チエニル、フリル、ピロリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾイソオキサゾリル及びイミダゾリルが含まれる。互変異性体が可能であるため、フタルイミドなどの基もヘテロアリールとみなされる。いくつかの実施形態では、１～２個の窒素原子を任意選択的に含有するアリールまたはヘテロアリール基は５員または６員芳香環系である。いくつかの実施形態では、アリールまたはヘテロアリール基は、任意選択的に置換されたフェニル、ピリジル、インドリル、ピリミジル、ピリダジニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾイミダゾリル、ピラゾリル、イミダゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリルまたはイミダゾピリジニルである。いくつかの実施形態では、アリール基はフェニルである。いくつかの実施形態では、アリール基は、アリール置換基などの置換基で任意選択的に置換されたもの、例えばビフェニルであり得る。
「アルカリール」という用語は、アルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン基に連結されているアリール基を指す。化合物がアルカリール基に結合している場合、大抵、アルカリールのアルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン部分が化合物に結合している。いくつかの実施形態では、アルカリールは、Ｃ６－Ｃ３５アルカリール（例えば、Ｃ６－Ｃ１６、Ｃ６－Ｃ１４、Ｃ６－Ｃ１２、Ｃ６－Ｃ１０、Ｃ６－Ｃ９、Ｃ６－Ｃ８、Ｃ７またはＣ６アルカリール）であり、ここで、炭素の数は、アルカリールのアリール部分とアルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン部分との両方の炭素の総数を表す。アルカリールの例としては、（Ｃ１－Ｃ８）アルキレン（Ｃ６－Ｃ１２）アリール、（Ｃ２－Ｃ８）アルケニレン（Ｃ６－Ｃ１２）アリール、または（Ｃ２－Ｃ８）アルキニレン（Ｃ６－Ｃ１２）アリールが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、アルカリールはベンジルまたはフェネチルである。ヘテロアルカリールにおいては、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子が、アルカリール基のアルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン部分の中に存在していてもよく、及び／またはアルカリール基のアリール部分の中に存在していてもよい。任意選択的に置換されたアルカリールにおいて置換基は、アルカリール基のアルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン部分上に存在していてもよく、及び／またはアルカリール基のアリール部分上に存在していてもよい。
「アミノ」という用語は、本明細書中で使用される場合、－Ｎ（Ｒｘ）２、または－Ｎ＋（Ｒｘ）３を表し、式中の各Ｒｘは、独立してＨ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルカリール、シクロアルキルであるか、または２つのＲｘが合わさってヘテロシクロアルキルを形成している。いくつかの実施形態では、アミノ基は－ＮＨ２である。
「アルカミノ」という用語は、本明細書に記載のアミノ基がアルキレン（例えばＣ１－Ｃ５アルキレン）、アルケニレン（例えばＣ２－Ｃ５アルケニレン）またはアルキニレン基（例えばＣ２－Ｃ５アルキニレン）に結合したものを指す。化合物がアルカミノ基に結合している場合、大抵、アルカミノのアルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン部分が化合物に結合している。アルカミノのアミノ部分は、－Ｎ（Ｒｘ）２、または－Ｎ＋（Ｒｘ）３を指し、式中の各Ｒｘは、独立してＨ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルカリール、シクロアルキルであるか、または２つのＲｘが合わさってヘテロシクロアルキルを形成している。いくつかの実施形態では、アルカミノのアミノ部分は－ＮＨ２である。アルカミノ基の一例はＣ１－Ｃ５アルカミノ、例えばＣ２アルカミノ（例えばＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２またはＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２）である。ヘテロアルカミノ基においては、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１つ以上、例えば、１～４、１～３、１、２、３または４個のヘテロ原子がヘテロアルカミノ基のアルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン部分の中に存在し得る。いくつかの実施形態では、アルカミノ基は任意選択的に置換されていてもよい。置換されているアルカミノ基において置換基は、アルカミノ基のアルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン部分中に存在していてもよく、及び／またはアルカミノ基のアミノ部分上に存在していてもよい。
「アルカミド」という用語は、本明細書中で使用される場合、アミド基がアルキレン（例えばＣ１－Ｃ５アルキレン）、アルケニレン（例えばＣ２－Ｃ５アルケニレン）またはアルキニレン（例えばＣ２－Ｃ５アルキニレン）基に結合したものを指す。化合物がアルカミド基に結合している場合、大抵、アルカミドのアルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン部分が化合物に結合している。アルカミドのアミド部分は、－Ｃ（Ｏ）－Ｎ（Ｒｘ）２を指し、式中の各Ｒｘは、独立してＨ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルカリール、シクロアルキルであるか、または２つのＲｘが合わさってヘテロシクロアルキルを形成している。いくつかの実施形態では、アルカミドのアミド部分は、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２である。アルカミド基は、－（ＣＨ２）２－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２または－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２であり得る。ヘテロアルカミド基においては、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１つ以上、例えば、１～４、１～３、１、２、３または４個のヘテロ原子がヘテロアルカミド基のアルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン部分の中に存在し得る。いくつかの実施形態では、アルカミド基は任意選択的に置換されていてもよい。置換されているアルカミド基において置換基は、アルカミド基のアルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン部分中に存在していてもよく、及び／またはアルカミド基のアミド部分上に存在していてもよい。
「アルキレン」、「アルケニレン」及び「アルキニレン」という用語は、本明細書中で使用される場合、指定の大きさを有する二価基を指す。いくつかの実施形態では、アルキレンは、例えば、１～２０、１～１８、１～１６、１～１４、１～１２、１～１０、１～８、１～６、１～４、または１～２個の炭素原子を含有し得る（例えば、Ｃ１－Ｃ２０、Ｃ１－Ｃ１８、Ｃ１－Ｃ１６、Ｃ１－Ｃ１４、Ｃ１－Ｃ１２、Ｃ１－Ｃ１０、Ｃ１－Ｃ８、Ｃ１－Ｃ６、Ｃ１－Ｃ４、またはＣ１－Ｃ２）。いくつかの実施形態では、アルケニレンまたはアルキニレンは、例えば、２～２０、２～１８、２～１６、２～１４、２～１２、２～１０、２～８、２～６、または２～４個の炭素原子（例えば、Ｃ２－Ｃ２０、Ｃ２－Ｃ１８、Ｃ２－Ｃ１６、Ｃ２－Ｃ１４、Ｃ２－Ｃ１２、Ｃ２－Ｃ１０、Ｃ２－Ｃ８、Ｃ２－Ｃ６、またはＣ２－Ｃ４）を含有し得る。アルキレン、アルケニレン及び／またはアルキニレンには直鎖及び分岐鎖形態ならびにこれらの組合せが含まれる。アルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン基が二価であることは、アルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン基に任意選択の置換基が付いていることを含まない。例えば、２つのノイラミニダーゼ阻害剤は、アルキレン、アルケニレン及び／またはアルキニレンまたはその組合せを含むリンカーによって互いに結合していてもよい。リンカー中のアルキレン、アルケニレン及び／またはアルキニレン基の各々は、アルキレン、アルケニレン及び／またはアルキニレン基の両端にある２つの結合に関して二価であるとみなされる。例えば、リンカーが、－（任意選択的に置換されたアルキレン）－（任意選択的に置換されたアルケニレン）－（任意選択的に置換されたアルキレン）－を含む場合、アルケニレンは、それとリンカーの端部にある２つのアルキレンとの結合に関して二価であるとみなされる。アルケニレンに任意選択の置換基が付いていることは、アルケニレンが二価であることには含まれない。アルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン基（例えば、リンカー中のアルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン基）の二価的性質は、基の両端に関するものであり、アルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン基中に存在し得る任意選択の置換基を含まない。それらは二価であるので、それらは複合体の複数（例えば２つ）の部分、例えば第１ノイラミニダーゼ阻害剤及び第２ノイラミニダーゼ阻害剤を繋ぎ合わせることができる。アルキレン、アルケニレン及び／またはアルキニレン基は、本明細書中に示されるアルキル、アルケニル及びアルキニル基の置換基として典型的に適した基で置換され得る。例えばＣ＝Ｏは、オキソ（＝Ｏ）で置換されたＣ１アルキレンである。例えば－ＨＣＲ－Ｃ≡Ｃ－は、任意選択的に置換されたアルキニレンとみなされ得、任意選択の置換基Ｒを有していても二価基とみなされる。ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン及び／またはヘテロアルキニレン基は、アルキレン、アルケニレン及び／またはアルキニレン基が１つ以上、例えば、１～４、１～３、１、２、３または４個のヘテロ原子、例えば、Ｎ、Ｏ及びＳを含んだものを指す。例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ポリマーまたはＰＥＧポリマー中のＰＥＧ単位－（ＣＨ２）２－Ｏ－は、１つ以上の酸素原子を含有するヘテロアルキレンとみなされる。
本明細書中で使用する場合、「併用療法」または「組み合わせて投与される」とは、本明細書に記載の複合体（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの複合体）と、１つの（または１つよりも多くの）異なる薬剤または治療とが、ウイルス感染症に対する規定の治療計画の一部として対象に投与されることを意味する。治療計画は、対象に対する別個の薬剤の効果が重なり合うように、各薬剤の用量及び投与の周期性を規定する。いくつかの実施形態では、複合体及び１つ以上の薬剤の送達は同時または同時進行的に行われ、複合体と１つ以上の薬剤とが共製剤化されてもよい。いくつかの実施形態では、複合体及び１つ以上の薬剤は共製剤化されず、定められた投薬計画の一環として逐次的な様式で投与される。いくつかの実施形態では、複合体と１つ以上の薬剤または治療とを組み合わせて施すことは、ウイルス感染症に関係する症候または他のパラメータの軽減が、１つの薬剤または治療を単独でまたは他のものの非存在下で送達した場合に認められるものに比べて、より大きくなるようなものである。複合体及び１つ以上の薬剤の効果は、部分的に相加的に、全体的に相加的に、または相加的よりも大きく（例えば相乗的に）なり得る。各治療剤の逐次的な、または実質的に同時の投与は、経口経路、静脈内経路、筋肉内経路、及び粘膜組織を介した直接吸収を含むがこれらに限定されない任意の適切な経路によって行われ得る。治療剤は、同じ経路によって、または異なる経路によって投与され得る。例えば、本明細書に記載の複合体が静脈内注射によって投与され得る一方、組合せの第２治療剤は経口投与され得る。
「シクロアルキレン」という用語は、本明細書中で使用される場合、化合物の２つの部分を繋ぎ合わせている二価の環式基を指す。例えば、シクロアルキレン基中の１つの炭素が化合物の１つの部分に繋げられ得る一方、シクロアルキレン基中の別の炭素は化合物の別の部分に繋げられ得る。シクロアルキレン基は、飽和または不飽和の非芳香環基を含み得る。シクロアルキレンはシクロアルキレンの環部分に例えば３～２０個の炭素を有し得る（例えば、Ｃ３－Ｃ７、Ｃ３－Ｃ８、Ｃ３－Ｃ９、Ｃ３－Ｃ１０、Ｃ３－Ｃ１１、Ｃ３－Ｃ１２、Ｃ３－Ｃ１４、Ｃ３－Ｃ１６、Ｃ３－Ｃ１８、またはＣ３－Ｃ２０シクロアルキレン）。シクロアルキレン基が少なくとも１つの炭素－炭素二重結合を含む場合、シクロアルキレン基は「シクロアルケニレン」基と呼称され得る。シクロアルケニレンはシクロアルケニレンの環部分に例えば４～２０個の炭素を有し得る（例えば、Ｃ４－Ｃ７、Ｃ４－Ｃ８、Ｃ４－Ｃ９、Ｃ４－Ｃ１０、Ｃ４－Ｃ１１、Ｃ４－Ｃ１２、Ｃ４－Ｃ１４、Ｃ４－Ｃ１６、Ｃ４－Ｃ１８、またはＣ４－Ｃ２０シクロアルケニル）。シクロアルキレン基が少なくとも１つの炭素－炭素三重結合を含む場合、シクロアルキレン基は「シクロアルキニレン」基と呼称され得る。シクロアルキニレンはシクロアルキニレンの環部分に例えば４～２０個の炭素を有し得る（例えば、Ｃ４－Ｃ７、Ｃ４－Ｃ８、Ｃ４－Ｃ９、Ｃ４－Ｃ１０、Ｃ４－Ｃ１１、Ｃ４－Ｃ１２、Ｃ４－Ｃ１４、Ｃ４－Ｃ１６、Ｃ４－Ｃ１８、またはＣ８－Ｃ２０シクロアルキニレン）。シクロアルキレン基は、本明細書中に示されるアルキル、アルケニル及びアルキニル基の置換基として典型的に適した基で置換され得る。ヘテロシクロアルキレンは、シクロアルキレン基が１つ以上、例えば、１～４、１～３、１、２、３または４個のヘテロ原子、例えば、Ｎ、Ｏ及びＳを含んだものを指す。シクロアルキレンの例としてはシクロプロピレン及びシクロブチレンが挙げられるが、これらに限定されない。テトラヒドロフランはヘテロシクロアルキレンとみなされ得る。
「アリーレン」という用語は、本明細書中で使用される場合、化合物の複数の（例えば２つまたは３つの）部分を繋ぎ合わせている多価（例えば二価または三価）アリール基を指す。例えば、アリーレン基中の１つの炭素が化合物の１つの部分に繋げられ得る一方、アリーレン基中の別の炭素は化合物の別の部分に繋げられ得る。アリーレンは、アリーレンのアリール部分に例えば５～１５個の炭素を有し得る（例えば、Ｃ５－Ｃ６、Ｃ５－Ｃ７、Ｃ５－Ｃ８、Ｃ５－Ｃ９、Ｃ５－Ｃ１０、Ｃ５－Ｃ１１、Ｃ５－Ｃ１２、Ｃ５－Ｃ１３、Ｃ５－Ｃ１４、またはＣ５－Ｃ１５アリーレン）。アリーレン基は、本明細書中に示されるアルキル、アルケニル及びアルキニル基の置換基として典型的に適した基で置換され得る。ヘテロアリーレンは、芳香族基が１つ以上、例えば、１～４、１～３、１、２、３または４個のヘテロ原子、例えば、Ｎ、Ｏ及びＳを含んだものを指す。ヘテロアリーレン基は例えば２～１５個の炭素を有し得る（例えば、Ｃ２－Ｃ３、Ｃ２－Ｃ４、Ｃ２－Ｃ５、Ｃ２－Ｃ６、Ｃ２－Ｃ７、Ｃ２－Ｃ８、Ｃ２－Ｃ９、Ｃ２－Ｃ１０、Ｃ２－Ｃ１１、Ｃ２－Ｃ１２、Ｃ２－Ｃ１３、Ｃ２－Ｃ１４、またはＣ２－Ｃ１５ヘテロアリーレン）。
「任意選択的に置換された」という用語は、本明細書中で使用される場合、０個、１個またはそれより多くの置換基、例えば、０～２５、０～２０、０～１０または０～５個の置換基を有することを意味する。置換基には、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルカリール、アシル、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルキニル、ヘテロアルカリール、ハロゲン、オキソ、シアノ、ニトロ、アミノ、アルカミノ、ヒドロキシ、アルコキシ、アルカノイル、カルボニル、カルバモイル、グアニジニル、ウレイド、アミジニル、上記の基または部分のいずれか、及び上記の基または部分のいずれかのヘテロ型が含まれるが、これらに限定されない。置換基としては、限定されないが、Ｆ、Ｃｌ、メチル、フェニル、ベンジル、ＯＲ、ＮＲ２、ＳＲ、ＳＯＲ、ＳＯ２Ｒ、ＯＣＯＲ、ＮＲＣＯＲ、ＮＲＣＯＮＲ２、ＮＲＣＯＯＲ、ＯＣＯＮＲ２、ＲＣＯ、ＣＯＯＲ、アルキル－ＯＯＣＲ、ＳＯ３Ｒ、ＣＯＮＲ２、ＳＯ２ＮＲ２、ＮＲＳＯ２ＮＲ２、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＳｉＲ３及びＮＯ２が挙げられ、式中の各Ｒは独立してＨ、アルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニルまたはヘテロアリールであり、同一または隣接原子上の任意選択の置換基のうち２つが結び合わさって、３～８個の環構成員を含有する任意選択的に置換された芳香または非芳香縮合環を形成していることもあるし、または同一原子上の任意選択の置換基のうち２つが結び合わさって、３～８個の環構成員を含有する任意選択的に置換された芳香または非芳香、飽和または不飽和の環を形成していることもある。
任意選択的に置換された基または部分は、原子の１つ（例えば水素原子）が任意選択的に別の置換基で置き換えられた基または部分（例えば上記の基または部分のいずれか１つ）を指す。例えば、任意選択的に置換されたアルキルは、メチル基の水素原子が例えばＯＨで置き換えられている任意選択的に置換されたメチルであり得る。別の例を挙げると、ヘテロアルキルまたはその二価対応物であるヘテロアルキレンに付いている置換基が、炭素に付いている水素、またはＮなどのヘテロ原子に付いている水素に取って代わっていてもよい。例えば、基－Ｒ－ＮＨ－Ｒ－の中の水素原子が、アルカミド置換基、例えば－Ｒ－Ｎ［（ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）２］－Ｒに置き換わっていてもよい。
大抵において、任意選択の置換基は非妨害性置換基である。「非妨害性置換基」は、ウイルス・ノイラミニダーゼとの結合かインフルエンザウイルスの増殖の阻害かのどちらかを行う本明細書に記載の複合体（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの複合体）の能力を残しておく置換基を指す。したがって、いくつかの実施形態では、置換基はそのような活性の度合いを変化させることがある。しかしながら、複合体がウイルス・ノイラミニダーゼとの結合能力またはウイルス増殖阻害能力を保持している限り、置換基は「非妨害性」として分類されることになる。例えば、非妨害性置換基は、ウイルスプラーク減少アッセイで１０μＭ以下のＩＣ５０値、例えば実施例２でインフルエンザウイルス・ノイラミニダーゼに対する５００ｎＭ以下のＩＣ５０値に基づく抗ウイルス有効性を提供する化合物の能力を残しておくであろう。したがって、置換基はプラーク減少またはインフルエンザウイルス・ノイラミニダーゼ阻害に基づく阻害の度合いを変化させることがある。しかしながら、本明細書の化合物、例えば、式（Ａ－Ｉ）、（Ａ－ＩＩ）、（Ａ－ＩＩＩ）、（Ａ－ＩＶ）、（Ａ－Ｖ）、（Ａ－ＶＩ）、（Ａ－ＶＩＩ）、（Ａ－ＶＩＩＩ）、（Ａ－ＩＸ）、（Ａ－Ｘ）、（Ａ－ＸＩ）、（Ａ－ＸＩＩ）及び（Ａ－ＸＩＩＩ）の化合物がインフルエンザウイルス・ノイラミニダーゼ活性阻害能力を保持している限り、置換基は「非妨害性」として分類されることになる。ウイルスプラーク減少、または任意の化合物のインフルエンザウイルス・ノイラミニダーゼ阻害能力を決定するための複数のアッセイが当技術分野で利用可能であり、いくつかは以下の実施例の中で例示されている。
「ヘテロ」という用語は、化学基または部分を表現するために使用される場合、炭素または水素ではない少なくとも１つのヘテロ原子、例えば、Ｎ、Ｏ及びＳを有することを意味する。上記の基または部分のいずれか１つは、それが少なくとも１つのヘテロ原子を含有する場合、ヘテロと呼称され得る。例えば、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルケニルまたはヘテロシクロアルキニル基は、例えばＮ、Ｏ及びＳから独立して選択される１つ以上のヘテロ原子をシクロアルキル、シクロアルケニルまたはシクロアルキニル基が有したものを指す。ヘテロシクロアルケニル基の一例はマレイミドである。例えば、ヘテロアリール基は、例えばＮ、Ｏ及びＳから独立して選択される１つ以上のヘテロ原子を芳香族基が有したものを指す。本明細書に記載の基または部分の中の水素原子を置き換えた置換基の中に１つ以上のヘテロ原子が含まれていてもよい。例えば、任意選択的に置換されたヘテロアリール基は、ヘテロアリール基中の水素原子の１つが置換基（例えばメチル）で置換されている場合、置換基が１つ以上のヘテロ原子を含有していてもよい（例えばメタノール）。
「アシル」という用語は、本明細書中で使用される場合、構造：
Figure 2022546609000304
 〔式中、ＲZは、任意選択的に置換されたアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、アルカリール、アルカミノ、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルキニル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルケニル、ヘテロシクロアルキニル、ヘテロアリール、ヘテロアルカリールまたはヘテロアルカミノである〕
を有する基を指す。
「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、本明細書中で使用される場合、任意のハロゲン原子、例えば、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを指す。本明細書に記載の基または部分のいずれか１つは、それがハロアルキルのように少なくとも１つのハロゲン原子を含有する場合、「ハロ部分」と呼称され得る。
「ヒドロキシル」という用語は、本明細書中で使用される場合、－ＯＨ基を表す。
「オキソ」という用語は、本明細書中で使用される場合、原子と酸素原子との間に二重結合が存在する構造＝Ｏを有する置換基を指す。
「カルボニル」という用語は、本明細書中で使用される場合、構造：
Figure 2022546609000305
 を有する基を指す。
「チオカルボニル」という用語は、本明細書中で使用される場合、構造：
Figure 2022546609000306
 を有する基を指す。
「ホスフェート」という用語は、本明細書中で使用される場合、構造：
Figure 2022546609000307
 を有する基を表す。
「ホスホリル」という用語は、本明細書中で使用される場合、構造：
Figure 2022546609000308
 を有する基を表す。
「スルホニル」という用語は、本明細書中で使用される場合、構造：
Figure 2022546609000309
 を有する基を表す。
「イミノ」という用語は、本明細書中で使用される場合、構造：
Figure 2022546609000310
 〔式中、Ｒは任意選択の置換基である〕
を有する基を表す。
「Ｎ保護基」という用語は、本明細書中で使用される場合、合成手順の間にアミノ基を望ましくない反応から守ることを意図した基を表す。一般的に使用されるＮ保護基は、Ｇｒｅｅｎｅ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，”５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２０１４）の中で開示されており、参照によりこれを本明細書に援用する。Ｎ保護基としては、例えば、アシル、アリーロイル、及びカルバミル基、例えば、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ピバロイル、ｔ－ブチルアセチル、２－クロロアセチル、２－ブロモアセチル、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチル、フタリル、ｏ－ニトロフェノキシアセチル、α－クロロブチリル、ベンゾイル、カルボキシベンジル（ＣＢｚ）、４－クロロベンゾイル、４－ブロモベンゾイル、４－ニトロベンゾイル、及び不斉補助剤、例えば保護されているまたは保護されていないＤ、ＬまたはＤ，Ｌ－アミノ酸残基、例えば、アラニン、ロイシン、フェニルアラニン；スルホニル含有基、例えばベンゼンスルホニル及びｐ－トルエンスルホニル；カルバメート形成基、例えば、ベンジルオキシカルボニル、ｐ－クロロベンジルオキシカルボニル、ｐ－メトキシベンジルオキシカルボニル、ｐ－ニトロベンジルオキシカルボニル、２－ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ－ブロモベンジルオキシカルボニル、３，４－ジメトキシベンジルオキシカルボニル、３，５－ジメトキシベンジルオキシカルボニル、２，４－ジメトキシベンジルオキシカルボニル、４－メトキシベンジルオキシカルボニル、２－ニトロ－４，５－ジメトキシベンジルオキシカルボニル、３，４，５－トリメトキシベンジルオキシカルボニル、１－（ｐ－ビフェニリル）－１－メチルエトキシカルボニル、α，α－ジメチル－３，５－ジメトキシベンジルオキシカルボニル、ベンズヒドリルオキシカルボニル、ｔ－ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）、ジイソプロピルメトキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、エトキシカルボニル、メトキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、２，２，２－トリクロロエトキシカルボニル、フェノキシカルボニル、４－ニトロフェノキシカルボニル、フルオレニル－９－メトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、シクロペンチルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、シクロヘキシルオキシカルボニル、及びフェニルチオカルボニル；アルカリール基、例えば、ベンジル、トリフェニルメチル及びベンジルオキシメチル；ならびにシリル基、例えばトリメチルシリルが挙げられる。
「アミノ酸」という用語は、本明細書中で使用される場合、天然に存在するアミノ酸及び天然に存在しないアミノ酸を意味する。
「天然に存在するアミノ酸」という用語は、本明細書中で使用される場合、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、及びＶａｌを含むアミノ酸を意味する。
「天然に存在しないアミノ酸」という用語は、本明細書中で使用される場合、哺乳動物において天然に産生されることまたは見つかることがないアルファアミノ酸を意味する。天然に存在しないアミノ酸の例としては、Ｄ－アミノ酸；システインの硫黄原子に結合したアセチルアミノメチル基を有するアミノ酸；ペグ化アミノ酸；式ＮＨ２（ＣＨ２）ｎＣＯＯＨ〔式中、ｎは２－６である〕のオメガアミノ酸、中性非極性アミノ酸、例えば、サルコシン、ｔ－ブチルアラニン、ｔ－ブチルグリシン、Ｎ－メチルイソロイシン、及びノルロイシン；オキシメチオニン；フェニルグリシン；シトルリン；メチオニンスルホキシド；システイン酸；オルニチン；ジアミノ酪酸；３－アミノアラニン；３－ヒドロキシ－Ｄ－プロリン；２，４－ジアミノ酪酸；２－アミノペンタン酸；２－アミノオクタン酸、２－カルボキシピペラジン；ピペラジン－２－カルボン酸、２－アミノ－４－フェニルブタン酸；３－（２－ナフチル）アラニン、及びヒドロキシプロリンが挙げられる。他のアミノ酸は、α－アミノ酪酸、α－アミノ－α－メチルブチレート、アミノシクロプロパン－カルボキシレート、アミノイソ酪酸、アミノノルボルニル－カルボキシレート、Ｌ－シクロヘキシルアラニン、シクロペンチルアラニン、Ｌ－Ｎ－メチルロイシン、Ｌ－Ｎ－メチルメチオニン、Ｌ－Ｎ－メチルノルバリン、Ｌ－Ｎ－メチルフェニルアラニン、Ｌ－Ｎ－メチルプロリン、Ｌ－Ｎ－メチルセリン、Ｌ－Ｎ－メチルトリプトファン、Ｄ－オルニチン、Ｌ－Ｎ－メチルエチルグリシン、Ｌ－ノルロイシン、α－メチル－アミノイソブチレート、α－メチルシクロヘキシルアラニン、Ｄ－α－メチルアラニン、Ｄ－α－メチルアルギニン、Ｄ－α－メチルアスパラギン、Ｄ－α－メチルアスパルテート、Ｄ－α－メチルシステイン、Ｄ－α－メチルグルタミン、Ｄ－α－メチルヒスチジン、Ｄ－α－メチルイソロイシン、Ｄ－α－メチルロイシン、Ｄ－α－メチルリジン、Ｄ－α－メチルメチオニン、Ｄ－α－メチルオルニチン、Ｄ－α－メチルフェニルアラニン、Ｄ－α－メチルプロリン、Ｄ－α－メチルセリン、Ｄ－Ｎ－メチルセリン、Ｄ－α－メチルスレオニン、Ｄ－α－メチルトリプトファン、Ｄ－α－メチルチロシン、Ｄ－α－メチルバリン、Ｄ－Ｎ－メチルアラニン、Ｄ－Ｎ－メチルアルギニン、Ｄ－Ｎ－メチルアスパラギン、Ｄ－Ｎ－メチルアスパルテート、Ｄ－Ｎ－メチルシステイン、Ｄ－Ｎ－メチルグルタミン、Ｄ－Ｎ－メチルグルタメート、Ｄ－Ｎ－メチルヒスチジン、Ｄ－Ｎ－メチルイソロイシン、Ｄ－Ｎ－メチルロイシン、Ｄ－Ｎ－メチルリジン、Ｎ－メチルシクロヘキシルアラニン、Ｄ－Ｎ－メチルオルニチン、Ｎ－メチルグリシン、Ｎ－メチルアミノイソブチレート、Ｎ－（１－メチルプロピル）グリシン、Ｎ－（２－メチルプロピル）グリシン、Ｄ－Ｎ－メチルトリプトファン、Ｄ－Ｎ－メチルチロシン、Ｄ－Ｎ－メチルバリン、γ－アミノ酪酸、Ｌ－ｔ－ブチルグリシン、Ｌ－エチルグリシン、Ｌ－ホモフェニルアラニン、Ｌ－α－メチルアルギニン、Ｌ－α－メチルアスパルテート、Ｌ－α－メチルシステイン、Ｌ－α－メチルグルタミン、Ｌ－α－メチルヒスチジン、Ｌ－α－メチルイソロイシン、Ｌ－α－メチルロイシン、Ｌ－α－メチルメチオニン、Ｌ－α－メチルノルバリン、Ｌ－α－メチルフェニルアラニン、Ｌ－α－メチルセリン、Ｌ－α－メチルトリプトファン、Ｌ－α－メチルバリン、Ｎ－（Ｎ－（２，２－ジフェニルエチル）カルバミルメチルグリシン、１－カルボキシ－１－（２，２－ジフェニル－エチルアミノ）シクロプロパン、４－ヒドロキシプロリン、オルニチン、２－アミノベンゾイル（アントラニロイル）、Ｄ－シクロヘキシルアラニン、４－フェニル－フェニルアラニン、Ｌ－シトルリン、α－シクロヘキシルグリシン、Ｌ－１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－３－カルボン酸、Ｌ－チアゾリジン－４－カルボン酸、Ｌ－ホモチロシン、Ｌ－２－フリルアラニン、Ｌ－ヒスチジン（３－メチル）、Ｎ－（３－グアニジノプロピル）グリシン、Ｏ－メチル－Ｌ－チロシン、Ｏ－グリカン－セリン、メタ－チロシン、ノル－チロシン、Ｌ－Ｎ，Ｎ’，Ｎ”－トリメチルリジン、ホモリジン、ノルリジン、Ｎ－グリカンアスパラギン、７－ヒドロキシ－１，２，３，４－テトラヒドロ－４－フルオロフェニルアラニン、４－メチルフェニルアラニン、ビス－（２－ピコリル）アミン、ペンタフルオロフェニルアラニン、インドリン－２－カルボン酸、２－アミノ安息香酸、３－アミノ－２－ナフトエ酸、不斉ジメチルアルギニン、Ｌ－テトラヒドロイソキノリン－１－カルボン酸、Ｄ－テトラヒドロイソキノリン－１－カルボン酸、１－アミノ－シクロヘキサン酢酸、Ｄ／Ｌ－アリルグリシン、４－アミノ安息香酸、１－アミノ－シクロブタンカルボン酸、２または３または４－アミノシクロヘキサンカルボン酸、１－アミノ－１－シクロペンタンカルボン酸、１－アミノインダン－１－カルボン酸、４－アミノ－ピロリジン－２－カルボン酸、２－アミノテトラリン－２－カルボン酸、アゼチジン－３－カルボン酸、４－ベンジル－ピロリジン－２－カルボン酸、ｔｅｒｔ－ブチルグリシン、ｂ－（ベンゾチアゾリル－２－イル）－アラニン、ｂ－シクロプロピルアラニン、５，５－ジメチル－１，３－チアゾリジン－４－カルボン酸、（２Ｒ，４Ｓ）４－ヒドロキシピペリジン－２－カルボン酸、（２Ｓ，４Ｓ）及び（２Ｓ，４Ｒ）－４－（２－ナフチルメトキシ）－ピロリジン－２－カルボン酸、（２Ｓ，４Ｓ）及び（２Ｓ，４Ｒ）４－フェノキシ－ピロリジン－２－カルボン酸、（２Ｒ，５Ｓ）及び（２Ｓ，５Ｒ）－５－フェニル－ピロリジン－２－カルボン酸、（２Ｓ，４Ｓ）－４－アミノ－１－ベンゾリル－ピロリジン－２－カルボン酸、ｔ－ブチルアラニン、（２Ｓ，５Ｒ）－５－フェニル－ピロリジン－２－カルボン酸、１－アミノメチル－シクロヘキサン－酢酸、３，５－ビス－（２－アミノ）エトキシ－安息香酸、３，５－ジアミノ－安息香酸、２－メチルアミノ－安息香酸、Ｎ－メチルアントラニル酸、Ｌ－Ｎ－メチルアラニン、Ｌ－Ｎ－メチルアルギニン、Ｌ－Ｎ－メチルアスパラギン、Ｌ－Ｎ－メチルアスパラギン酸、Ｌ－Ｎ－メチルシステイン、Ｌ－Ｎ－メチルグルタミン、Ｌ－Ｎ－メチルグルタミン酸、Ｌ－Ｎ－メチルヒスチジン、Ｌ－Ｎ－メチルイソロイシン、Ｌ－Ｎ－メチルリジン、Ｌ－Ｎ－メチルノルロイシン、Ｌ－Ｎ－メチルオルニチン、Ｌ－Ｎ－メチルスレオニン、Ｌ－Ｎ－メチルチロシン、Ｌ－Ｎ－メチルバリン、Ｌ－Ｎ－メチル－ｔ－ブチルグリシン、Ｌ－ノルバリン、α－メチル－γ－アミノブチレート、４，４’－ビフェニルアラニン、α－メチルシクロペンチルアラニン、α－メチル－α－ナフチルアラニン、α－メチルペニシラミン、Ｎ－（４－アミノブチル）グリシン、Ｎ－（２－アミノエチル）グリシン、Ｎ－（３－アミノプロピル）グリシン、Ｎ－アミノ－α－メチルブチレート、α－ナフチルアラニン、Ｎ－ベンジルグリシン、Ｎ－（２－カルバミルエチル）グリシン、Ｎ－（カルバミルメチル）グリシン、Ｎ－（２－カルボキシエチル）グリシン、Ｎ－（カルボキシメチル）グリシン、Ｎ－シクロブチルグリシン、Ｎ－シクロデシルグリシン、Ｎ－シクロヘプチルグリシン、Ｎ－シクロヘキシルグリシン、Ｎ－シクロデシルグリシン、Ｎ－シクロドデシルグリシン、Ｎ－シクロオクチルグリシン、Ｎ－シクロプロピルグリシン、Ｎ－シクロウンデシルグリシン、Ｎ－（２，２－ジフェニルエチル）グリシン、Ｎ－（３，３－ジフェニルプロピル）グリシン、Ｎ－（３－グアニジノプロピル）グリシン、Ｎ－（１－ヒドロキシエチル）グリシン、Ｎ－（ヒドロキシエチル））グリシン、Ｎ－（イミダゾリルエチル））グリシン、Ｎ－（３－インドリルエチル）グリシン、Ｎ－メチル－γ－アミノブチレート、Ｄ－Ｎ－メチルメチオニン、Ｎ－メチルシクロペンチルアラニン、Ｄ－Ｎ－メチルフェニルアラニン、Ｄ－Ｎ－メチルプロリン、Ｄ－Ｎ－メチルスレオニン、Ｎ－（１－メチルエチル）グリシン、Ｎ－メチル－ナフチルアラニン、Ｎ－メチルペニシラミン、Ｎ－（ｐ－ヒドロキシフェニル）グリシン、Ｎ－（チオメチル）グリシン、ペニシラミン、Ｌ－α－メチルアラニン、Ｌ－α－メチルアスパラギン、Ｌ－α－メチル－ｔ－ブチルグリシン、Ｌ－メチルエチルグリシン、Ｌ－α－メチルグルタメート、Ｌ－α－メチルホモフェニルアラニン、Ｎ－（２－メチルチオエチル）グリシン、Ｌ－α－メチルリジン、Ｌ－α－メチルノルロイシン、Ｌ－α－メチルオルニチン、Ｌ－α－メチルプロリン、Ｌ－α－メチルスレオニン、Ｌ－α－メチルチロシン、Ｌ－Ｎ－メチル－ホモフェニルアラニン、Ｎ－（Ｎ－（３，３－ジフェニルプロピル）カルバミルメチルグリシン、Ｌ－ピログルタミン酸、Ｄ－ピログルタミン酸、Ｏ－メチル－Ｌ－セリン、Ｏ－メチル－Ｌ－ホモセリン、５－ヒドロキシリジン、α－カルボキシグルタメート、フェニルグリシン、Ｌ－ピペコリン酸（ホモプロリン）、Ｌ－ホモロイシン、Ｌ－リジン（ジメチル）、Ｌ－２－ナフチルアラニン、Ｌ－ジメチルドパまたはＬ－ジメトキシ－フェニルアラニン、Ｌ－３－ピリジルアラニン、Ｌ－ヒスチジン（ベンゾイルオキシメチル）、Ｎ－シクロヘプチルグリシン、Ｌ－ジフェニルアラニン、Ｏ－メチル－Ｌ－ホモチロシン、Ｌ－β－ホモリジン、Ｏ－グリカン－スレオニン、オルト－チロシン、Ｌ－Ｎ，Ｎ’－ジメチルリジン、Ｌ－ホモアルギニン、ネオトリプトファン、３－ベンゾチエニルアラニン、イソキノリン－３－カルボン酸、ジアミノプロピオン酸、ホモシステイン、３，４－ジメトキシフェニルアラニン、４－クロロフェニルアラニン、Ｌ－１，２，３，４－テトラヒドロノルハルマン－３－カルボン酸、アダマンチルアラニンアラニン、対称性ジメチルアルギニン、３－カルボキシチオモルホリン、Ｄ－１，２，３，４－テトラヒドロノルハルマン－３－カルボン酸、３－アミノ安息香酸、３－アミノ－１－カルボキシメチル－ピリジン－２－オン、１－アミノ－１－シクロヘキサンカルボン酸、２－アミノシクロペンタンカルボン酸、１－アミノ－１－シクロプロパンカルボン酸、２－アミノインダン－２－カルボン酸、４－アミノ－テトラヒドロチオピラン－４－カルボン酸、アゼチジン－２－カルボン酸、ｂ－（ベンゾチアゾール－２－イル）－アラニン、ネオペンチルグリシン、２－カルボキシメチルピペリジン、ｂ－シクロブチルアラニン、アリルグリシン、ジアミノプロピオン酸、ホモ－シクロヘキシルアラニン、（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシピペリジン－２－カルボン酸、オクタヒドロインドール－２－カルボン酸、（２Ｓ，４Ｒ）及び（２Ｓ，４Ｒ）－４－（２－ナフチル）、ピロリジン－２－カルボン酸、ニペコチン酸、（２Ｓ，４Ｒ）及び（２Ｓ，４Ｓ）－４－（４－フェニルベンジル）ピロリジン－２－カルボン酸、（３Ｓ）－１－ピロリジン－３－カルボン酸、（２Ｓ，４Ｓ）－４－トリチルメルカプト－ピロリジン－２－カルボン酸、（２Ｓ，４Ｓ）－４－メルカプトプロリン、ｔ－ブチルグリシン、Ｎ，Ｎ－ビス（３－アミノプロピル）グリシン、１－アミノ－シクロヘキサン－１－カルボン酸、Ｎ－メルカプトエチルグリシン、ならびにセレノシステインである。いくつかの実施形態では、アミノ酸残基は荷電性または極性であり得る。荷電アミノ酸としては、アラニン、リジン、アスパラギン酸もしくはグルタミン酸、またはその天然に存在しない類縁体が挙げられる。極性アミノ酸としては、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、セリン、スレオニン、チロシン、メチオニンもしくはトリプトファン、またはその天然に存在しない類縁体が挙げられる。特に、いくつかの実施形態ではアミノ酸中の末端アミノ基がアミド基またはカルバメート基であり得ることが企図される。
本明細書中で使用する場合、「同一性パーセント（％）」という用語は、配列を整列させ必要に応じてギャップを導入して最大の同一性パーセントを得た後に基準配列のアミノ酸残基と同一となっている、候補配列、例えばＦｃＩｇＧ、またはその断片のアミノ酸残基の百分率を指す（つまり、ギャップは最適なアラインメントのために候補及び基準配列の片方または両方に導入され得、非相同配列は比較目的のために無視され得る）。同一性パーセントを決定する目的のためのアラインメントは、当技術分野の様々な方法によって、例えば公的に入手可能であるコンピュータソフトウェア、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアを使用して、成し遂げられ得る。当業者であれば、比較する配列の完全長にわたって最大限のアラインメントを成し遂げるのに必要な何らかのアルゴリズムを含めた、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。いくつかの実施形態では、所与の基準配列に対する、それとの、またはそれと対比したときの、所与の候補配列（あるいは、所与の基準配列に対する、それとの、またはそれと対比したときの特定のアミノ酸配列同一性パーセントを有するまたは含む所与の候補配列、とも表現され得る）のアミノ酸配列同一性パーセントは、以下：
１００×（Ａ／Ｂの分数）
のとおりに計算され、式中、Ａは、候補配列と基準配列とのアラインメントにおいて同一であると評価されたアミノ酸残基の数であり、Ｂは、基準配列中のアミノ酸残基の総数である。候補配列の長さが基準配列の長さと等しくないいくつかの実施形態では、基準配列に対する候補配列のアミノ酸配列同一性パーセントは、候補配列に対する基準配列のアミノ酸配列同一性パーセントと等しくはならないであろう。
２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列は、上記のように最大限の一致のためのアラインメントを行ったときに２つの配列の中のヌクレオチドまたはアミノ酸の配列が同じである場合に、「同一である」といわれている。２つの配列の比較は通常、配列が類似している局所領域の同定及び比較のために配列を比較枠にわたって比較することによって実施される。本明細書中で使用する場合、「比較枠」は、配列と同じ連続位置数の基準配列との比較が２つの配列の最適なアラインメントの後に行われ得る、少なくとも約１５連続位置、約２０連続位置、約２５連続位置の、またはそれより大きな（例えば、約３０～約７５連続位置、または約４０～約５０連続位置の）セグメントを指す。
「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「治療すること（ｔｏ ｔｒｅａｔ）」という用語は、本明細書中で使用される場合、対象におけるウイルス感染症（例えばインフルエンザ感染症などのウイルス感染症）の治療処置を指す。いくつかの実施形態では、治療処置は、ウイルス感染症の進行を減速させるもの、対象の転帰を改善するもの、及び／または感染症を排除するものであり得る。いくつかの実施形態では、対象におけるウイルス感染症の治療処置は、治療処置の非存在下でのウイルス感染症の状態及び／または症状と比較して、ウイルス感染症に関連する１つ以上の症候または症状を緩和または改善するもの、ウイルス感染症の程度を弱めるもの、ウイルス感染症の状態を安定させる（つまり悪化させない）もの、ウイルス感染症の拡散を防止するもの、及び／またはウイルス感染症の進行を遅らせるもしくは減速させるものであり得る。
「Ｔの平均値」という用語は、本明細書中で使用される場合、複合体の集団の中でＦｃドメインまたはアルブミンタンパク質に複合しているノイラミニダーゼ阻害剤の単量体またはノイラミニダーゼ阻害剤の二量体の平均数を指す。いくつかの実施形態では、複合体の集団の中で、Ｆｃドメイン単量体に複合しているノイラミニダーゼ阻害剤の単量体またはノイラミニダーゼ阻害剤の二量体の平均数は１～２０であり得る（例えば、Ｔの平均値は１～２、１～３、１～４、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、１．５～３．５、２．５～４．５、３．５～５．５、４．５～６．５、５．５～７．５、６．５～８．５、７．５～９．５、または８．５～１０．５である）。いくつかの実施形態では、Ｔの平均値は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である。
「対象」という用語は、本明細書中で使用される場合、ヒト、非ヒト霊長類または他の哺乳動物、例えば、限定されないが、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、シチメンチョウ、ヤギ、魚類、サル、ニワトリ、ラット、マウス、及びヒツジであり得る。
「治療的有効量」という用語は、本明細書中で使用される場合、対象において所望の効果をもたらす上で、または本明細書に記載の症状もしくは障害（例えばウイルス感染症、例えばインフルエンザ感染症）を有する対象を治療する上で有効である量、例えば薬学的用量を指す。本明細書において「治療的有効量」が、１回分以上の用量または任意の投薬量もしくは経路で及び／または単独でもしくは他の治療剤（例えば本明細書に記載の抗ウイルス剤）との組合せで所望の治療的及び／または予防的効果をもたらす量と解釈され得ることも、理解されるべきである。例えば、ウイルス感染症の治療のために使用される本明細書に記載の複合体（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの複合体）を投与することに関して、複合体の有効量は、例えば、複合体の投与なしで得られる応答と比較してウイルス感染症の進行を予防する、減速させるまたは逆転させるのに十分な量である。
本明細書中で使用する場合、「医薬組成物」という用語は、少なくとも１つの有効成分（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの複合体）、ならびに有効成分を投与方法に適したものにすることを可能にする１つ以上の賦形剤及び希釈剤を含有する、医療用または医薬製剤を指す。本開示の医薬組成物は、本明細書に記載の複合体（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの複合体）に適合する薬学的に許容される成分を含む。
本明細書中で使用する場合、「薬学的に許容される担体」という用語は、医薬組成物中の賦形剤または希釈剤を指す。例えば、薬学的に許容される担体は、活性な複合体（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、または（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＶＩ）のいずれか１つの複合体）を懸濁または溶解させることができるビヒクルであり得る。薬学的に許容される担体は、製剤の他成分との相溶性を有しレシピエントに有害でないものでなければならない。本開示において、薬学的に許容される担体は、本明細書に記載の複合体に十分な薬学的安定性を提供するものでなければならない。担体の性質は投与様式によって様々である。例えば、経口投与のためには固体担体が好ましく、静脈内投与のためには水溶液担体（例えば、ＷＦＩ、及び／または緩衝液）が一般的に使用される。
「薬学的に許容される塩」は、本明細書中で使用される場合、健全な医学的判断の範囲内で過度の毒性、刺激及び／またはアレルギー反応を伴わずに本明細書に記載の方法における使用に適する、本明細書に記載の複合体（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの複合体）の塩を表す。薬学的に許容される塩は当技術分野でよく知られている。例えば、薬学的に許容される塩は、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ（Ｅｄｓ．Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ ａｎｄ Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ），Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ，２００８に記載されている。塩は、本明細書に記載の複合体の最終的な単離及び精製の間に系中で調製され得るか、または別々に、遊離塩基基を好適な有機酸と反応させることによって調製され得る。
「薬物抗体比」または「ＤＡＲ」という用語は、本明細書に記載の抗体、Ｆｃドメインまたはアルブミンタンパク質に複合している低分子薬部分（例えば、低分子薬単量体または二量体の平均数）の平均数を指す。本明細書に記載のいくつかの実施形態では、ＤＡＲは（例えば式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）の中の）「Ｔ」で表される。本明細書中で使用する場合、Ｆｃドメイン、抗体またはアルブミンタンパク質に複合している各単量体部分（例えば各々のザナミビルまたはペラミビル単量体）または各二量体部分（例えば各々のザナミビル二量体またはペラミビル二量体）は１．０のＤＡＲ値（例えば１．０の「Ｔ」値）に相当する。例えば、４つのザナミビル単量体に複合したＦｃドメインは４．０のＤＡＲ（例えば４．０の「Ｔ」）を有することになろう。４つのザナミビル二量体（例えば計８つのザナミビル分子）に複合したＦｃドメインも４．０のＤＡＲ（例えば４．０の「Ｔ」）を有することになろう。ＤＡＲは、分子の集団、例えば、Ｆｃドメイン、抗体またはアルブミンタンパク質の集団の平均ＤＡＲとしても算出され得る。ＤＡＲ値は、薬物の有効性、力価、薬物動態または毒性に影響を与え得る。
「続発感染症」という用語は、本明細書中で使用される場合、対象においてその対象における別の（一次と呼称される）感染症の間または後に（例えば、一次インフルエンザ感染症の間または後に）起こる感染症を指す。続発感染症は、一次感染症によって引き起こされる場合もあるし、または一次感染症の治療によって引き起こされる場合もある。場合によっては、一次感染症は免疫系を変化させて対象を続発感染症に対してより罹患しやすくする。場合によっては、一次感染症の治療は対象を続発感染症に対してより罹患しやすくする。例えば、インフルエンザウイルスには、例えば呼吸器の細菌性続発感染症などの続発感染症（例えば続発感染症の発症リスクの上昇）が付随してきた。インフルエンザ感染症に関連する続発感染症は、インフルエンザの罹患率及び死亡率を上昇させる。続発感染症には共感染症が含まれる。「続発感染症」及び「共感染症」という用語は本明細書において互換的に使用される。
「約」という用語は、本明細書中で使用される場合、±５％までの偏差を表す。例えば、約１０％は９．５％～１０．５％を意味する。
値の範囲に示されるいかなる値も、上限と下限の両方、ならびに上限及び下限の範囲の中に入っている任意の値を含む。
「（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）」という用語は、本明細書中で使用される場合、（１）、（２）、（３）、（４）、（５）、（Ｄ－Ｉ）、（Ｄ－ＩＩ）、（Ｄ－ＩＩ－１）、（Ｄ－ＩＩ－２）、（Ｄ－ＩＩ－３）、（Ｄ－ＩＩ－４）、（Ｄ－ＩＩ－５）、（Ｄ－ＩＩ－６）、（Ｄ－ＩＩ－７）、（Ｄ－ＩＩ－８）、（Ｄ－ＩＩ－９）、（Ｄ－ＩＩ－１０）、（Ｄ－ＩＩＩ）、（Ｄ－ＩＩＩ－１）、（Ｄ－ＩＩＩ－２）、（Ｄ－ＩＩＩ－３）、（Ｄ－ＩＩＩ－４）、（Ｄ－ＩＩＩ－５）、（Ｄ－ＩＩＩ－６）、（Ｄ－ＩＩＩ－７）、（Ｄ－ＩＩＩ－８）、（Ｄ－ＩＩＩ－９）、（Ｄ－ＩＶ）、（Ｄ－ＩＶ－１）、（Ｄ－ＩＶ－２）、（Ｄ－Ｖ）、（Ｄ－Ｖ－１）、（Ｄ－Ｖ－２）、（Ｄ－Ｖ－３）、（Ｄ－Ｖ－４）、（Ｄ－Ｖ－５）、（Ｄ－Ｖ－６）、（Ｄ－Ｖ－７）、（Ｄ－Ｖ－８）、（Ｄ－Ｖ－９）、（Ｄ－Ｖ－１０）、（Ｄ－ＶＩ）、（Ｄ－ＶＩ－１）、（Ｄ－ＶＩ－２）、（Ｄ－ＶＩ－３）、（Ｄ－ＶＩ－４）、（Ｄ－ＶＩ－５）、（Ｄ－ＶＩ－６）、（Ｄ－ＶＩ－７）、（Ｄ－ＶＩ－８）、（Ｄ－ＶＩ－９）、（Ｄ－ＶＩＩ）、（Ｄ－ＶＩＩＩ）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－１）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－２）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－３）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－４）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－５）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－６）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－７）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－８）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－９）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－１０）、（Ｄ－ＶＩＩＩ－１１）、（Ｄ－ＩＸ）、（Ｄ－ＩＸ－１）、（Ｄ－ＩＸ－２）、（Ｄ－ＩＸ－３）、（Ｄ－ＩＸ－４）、（Ｄ－ＩＸ－５）、（Ｄ－ＩＸ－６）、（Ｄ－Ｘ）、（Ｄ－Ｘ－１）、（Ｄ－Ｘ－２）、（Ｄ－Ｘ－３）、（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ－ＸＩ－１）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）、（Ｍ－ＩＩ）、（Ｍ－ＩＩ－１）、（Ｍ－ＩＩ－２）、（Ｍ－ＩＩ－３）、（Ｍ－ＩＩ－４）、（Ｍ－ＩＩ－５）、（Ｍ－ＩＩ－６）、（Ｍ－ＩＩ－７）、（Ｍ－ＩＩ－８）、（Ｍ－ＩＩ－９）、（Ｍ－ＩＩ－１０）、（Ｍ－ＩＩＩ）、（Ｍ－ＩＩＩ－１）、（Ｍ－ＩＩＩ－２）、（Ｍ－ＩＩＩ－３）、（Ｍ－ＩＩＩ－４）、（Ｍ－ＩＩＩ－５）、（Ｍ－ＩＩＩ－６）、（Ｍ－ＩＩＩ－７）、（Ｍ－ＩＩＩ－８）、（Ｍ－ＩＩＩ－９）、（Ｍ－ＩＶ）、（Ｍ－ＩＶ－１）、（Ｍ－ＩＶ－２）、（Ｍ－Ｖ）、（Ｍ－Ｖ－１）、（Ｍ－Ｖ－２）、（Ｍ－Ｖ－３）、（Ｍ－Ｖ－４）、（Ｍ－Ｖ－５）、（Ｍ－Ｖ－６）、（Ｍ－Ｖ－７）、（Ｍ－Ｖ－８）、（Ｍ－Ｖ－９）、（Ｍ－Ｖ－１０）、（Ｍ－ＶＩ）、（Ｍ－ＶＩ－１）、（Ｍ－ＶＩ－２）、（Ｍ－ＶＩ－３）、（Ｍ－ＶＩ－４）、（Ｍ－ＶＩ－５）、（Ｍ－ＶＩ－６）、（Ｍ－ＶＩ－７）、（Ｍ－ＶＩ－８）、（Ｍ－ＶＩ－９）、（Ｍ－ＶＩＩ）、（Ｍ－ＶＩＩＩ）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－１）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－２）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－３）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－４）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－５）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－６）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－７）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－８）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－９）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－１０）、（Ｍ－ＶＩＩＩ－１１）、（Ｍ－ＩＸ）、（Ｍ－ＩＸ－１）、（Ｍ－ＩＸ－２）、（Ｍ－ＩＸ－３）、（Ｍ－ＩＸ－４）、（Ｍ－ＩＸ－５）、（Ｍ－ＩＸ－６）、（Ｍ－Ｘ）、（Ｍ－Ｘ－１）、（Ｍ－Ｘ－２）、（Ｍ－Ｘ－３）、（Ｍ－ＸＩ）、（Ｍ－ＸＩ－１）または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの式を表す。
本明細書に記載の複合体の他の特徴及び利点は以下の詳細な説明及び特許請求の範囲から明らかとなろう。
ノイラミニダーゼ阻害剤単量体または二量体をＦｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに例えばリンカーによって複合させる例示的な方法を描写した画像である。 配列番号１の配列を有するＦｃドメイン単量体から形成されたＦｃドメインの非還元及び還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥならびに模式図を示す。 配列番号３の配列を有するＦｃドメイン単量体から形成されたＦｃドメインの非還元及び還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥならびに模式図を示す。 配列番号５の配列を有するＦｃドメイン単量体から形成されたＦｃドメインの非還元及び還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥならびに模式図を示す。 配列番号７の配列を有するＦｃドメイン単量体から形成されたＦｃドメインの非還元及び還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥならびに模式図を示す。 配列番号９の配列を有するＦｃドメイン単量体から形成されたＦｃドメインの非還元及び還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥならびに模式図を示す。 配列番号１２の配列を有するＦｃドメイン単量体から形成されたＦｃドメインの非還元及び還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥならびに模式図を示す。 配列番号１４の配列を有するＦｃドメイン単量体から形成されたＦｃドメインの非還元及び還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥならびに模式図を示す。 複合体１の非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥを示す。 複合体２の非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥを示す。 複合体３の非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥを示す。 複合体４の非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥを示す。 複合体５の非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥを示す。 複合体６の非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥを示す。 Ｉｎｔ－２及び複合体１のＨ１Ｎ１ノイラミニダーゼ阻害アッセイからのＩＣ５０値を示すグラフである。 複合体１～６のＨ１Ｎ１ノイラミニダーゼ阻害アッセイからのＩＣ５０値を示すグラフである。 複合体１～６のＨ３Ｎ２ノイラミニダーゼ阻害アッセイからのＩＣ５０値を示すグラフである。 Ａ～Ｃは、複合体３（Ａ）、複合体４（Ｂ）または複合体６（Ｃ）で処理されたＡ５４９細胞の生存率によって細胞を示す一連のグラフである。 Ａ～Ｅは、ヒト上皮細胞において病原性インフルエンザウイルス株Ａ／ＷＳＮ／３３ Ｈ１Ｎ１（Ａ）、Ａ／Ｗｙｏｍｉｎｇ／３／０３ Ｈ３Ｎ２（Ｂ）、Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０４／０９ Ｈ１Ｎ１ ｐｄｍ（Ｃ）、Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／０４ Ｈ５Ｎ１ ＨＡＬｏ（Ｄ）、またはＢ／Ｌｅｅ／４０ Ｖｉｃｔｏｒｉａ（Ｅ）の成長を阻害する複合体３の能力を示す一連のグラフである。 Ａ～Ｅは、ヒト上皮細胞において病原性インフルエンザウイルス株Ａ／ＷＳＮ／３３ Ｈ１Ｎ１（Ａ）、Ａ／Ｗｙｏｍｉｎｇ／３／０３ Ｈ３Ｎ２（Ｂ）、Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０４／０９ Ｈ１Ｎ１ ｐｄｍ（Ｃ）、Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／０４ Ｈ５Ｎ１ ＨＡＬｏ（Ｄ）、またはＢ／Ｌｅｅ／４０ Ｖｉｃｔｏｒｉａ（Ｅ）の成長を阻害する複合体３の能力を示す一連のグラフである。 Ａ～Ｅは、ヒト上皮細胞において病原性インフルエンザウイルス株Ａ／ＷＳＮ／３３ Ｈ１Ｎ１（Ａ）、Ａ／Ｗｙｏｍｉｎｇ／３／０３ Ｈ３Ｎ２（Ｂ）、Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０４／０９ Ｈ１Ｎ１ ｐｄｍ（Ｃ）、Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／０４ Ｈ５Ｎ１ ＨＡＬｏ（Ｄ）、またはＢ／Ｌｅｅ／４０ Ｖｉｃｔｏｒｉａ（Ｅ）の成長を阻害する複合体４の能力を示す一連のグラフである。 Ａ～Ｅは、ヒト上皮細胞において病原性インフルエンザウイルス株Ａ／ＷＳＮ／３３ Ｈ１Ｎ１（Ａ）、Ａ／Ｗｙｏｍｉｎｇ／３／０３ Ｈ３Ｎ２（Ｂ）、Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０４／０９ Ｈ１Ｎ１ ｐｄｍ（Ｃ）、Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／０４ Ｈ５Ｎ１ ＨＡＬｏ（Ｄ）、またはＢ／Ｌｅｅ／４０ Ｖｉｃｔｏｒｉａ（Ｅ）の成長を阻害する複合体４の能力を示す一連のグラフである。 Ａ～Ｅは、ヒト上皮細胞において病原性インフルエンザウイルス株Ａ／ＷＳＮ／３３ Ｈ１Ｎ１（Ａ）、Ａ／Ｗｙｏｍｉｎｇ／３／０３ Ｈ３Ｎ２（Ｂ）、Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０４／０９ Ｈ１Ｎ１ ｐｄｍ（Ｃ）、Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／０４ Ｈ５Ｎ１ ＨＡＬｏ（Ｄ）、またはＢ／Ｌｅｅ／４０ Ｖｉｃｔｏｒｉａ（Ｅ）の成長を阻害する複合体６の能力を示す一連のグラフである。 Ａ～Ｅは、ヒト上皮細胞において病原性インフルエンザウイルス株Ａ／ＷＳＮ／３３ Ｈ１Ｎ１（Ａ）、Ａ／Ｗｙｏｍｉｎｇ／３／０３ Ｈ３Ｎ２（Ｂ）、Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０４／０９ Ｈ１Ｎ１ ｐｄｍ（Ｃ）、Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／０４ Ｈ５Ｎ１ ＨＡＬｏ（Ｄ）、またはＢ／Ｌｅｅ／４０ Ｖｉｃｔｏｒｉａ（Ｅ）の成長を阻害する複合体６の能力を示す一連のグラフである。 Ａ～Ｅは、ヒト上皮細胞において病原性インフルエンザウイルス株Ａ／ＷＳＮ／３３ Ｈ１Ｎ１（Ａ）、Ａ／Ｗｙｏｍｉｎｇ／３／０３ Ｈ３Ｎ２（Ｂ）、Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０４／０９ Ｈ１Ｎ１ ｐｄｍ（Ｃ）、Ｂ／Ｌｅｅ／４０ Ｖｉｃｔｏｒｉａ（Ｄ）、またはＡ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／０４（Ｅ）の成長を阻害する複合体６の能力をオセルタミビルと比較して示す一連のグラフである。 Ａ～Ｅは、ヒト上皮細胞において病原性インフルエンザウイルス株Ａ／ＷＳＮ／３３ Ｈ１Ｎ１（Ａ）、Ａ／Ｗｙｏｍｉｎｇ／３／０３ Ｈ３Ｎ２（Ｂ）、Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０４／０９ Ｈ１Ｎ１ ｐｄｍ（Ｃ）、Ｂ／Ｌｅｅ／４０ Ｖｉｃｔｏｒｉａ（Ｄ）、またはＡ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／０４（Ｅ）の成長を阻害する複合体６の能力をオセルタミビルと比較して示す一連のグラフである。 Ｆｃ（ｈＩｇＧ１）単独と比較して複合体６の相対マウス血清濃度を示すグラフである。 致死性マウスインフルエンザモデルにおけるマウス体重に対する複合体６の影響を示すグラフである。試験は実施例２９に記載のとおりに実施した。 致死性マウスインフルエンザモデルにおける生存率に対する複合体６の影響を示すグラフである。試験は実施例２９に記載のとおりに実施した。 致死性マウスインフルエンザモデルにおけるマウス体重に対する複合体６の影響を示すグラフである。試験は実施例３０に記載のとおりに実施した。 致死性マウスインフルエンザモデルにおける生存率に対する複合体６の影響を示すグラフである。試験は実施例３０に記載のとおりに実施した。 アミノ酸残基、例えば表面露出リジンの窒素原子に対するオキシム複合によってノイラミニダーゼ阻害剤単量体または二量体をＦｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに例えばリンカーによって複合させる方法を描写した画像である。 アミノ酸残基、例えば表面露出リジンの窒素原子に対するチオエーテル複合によってノイラミニダーゼ阻害剤単量体または二量体をＦｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに例えばリンカーによって複合させる方法を描写した画像である。 再架橋システイン複合、例えばＦｃドメイン単量体またはＦｃドメインにおける２つのヒンジシステインの硫黄原子対に対する再架橋システイン複合によってノイラミニダーゼ阻害剤単量体または二量体をＦｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに例えばリンカーによって複合させる方法を描写した画像である。 Ａ～Ｆは、致死性マウスインフルエンザモデルにおける複合体６で処理されたマウスの生存率を示す一連のグラフである。オセルタミビル（タミフル（商標））対照、２０ｍｇ／ｋｇ、１日２回、感染の８時間後から開始（Ａ）；複合体６、５０ｍｇ／ｋｇ、感染の２８日前に１回分の用量（Ｂ）；複合体６、１０ｍｇ／ｋｇ、感染の２８日前に１回分の用量（Ｃ）；複合体６、５ｍｇ／ｋｇ、感染の２８日前に１回分の用量（Ｄ）；複合体６、２．５ｍｇ／ｋｇ、感染の２８日前に１回分の用量（Ｅ）；または複合体６、１．２５ｍｇ／ｋｇ、感染の２８日前に１回分の用量（Ｆ）のいずれかでマウスを処理した。この試験は実施例３３に記載のとおりに実施した。 Ａ～Ｆは、致死性マウスインフルエンザモデルにおける生存率によって判定したとき複合体６がオセルタミビル（タミフル（商標））と比較して処理枠を広げることを示す一連のグラフである。感染の４時間前にビヒクル（ＰＢＳ）、Ｆｃ単独 １０ｍｐｋ、もしくは複合体６（Ａ）；感染の８時間後に複合体６もしくはオセルタミビル（タミフル（商標））（Ｂ）；感染の２４時間後に複合体６もしくはオセルタミビル（タミフル（商標））（Ｃ）；感染の４８時間後に複合体６もしくはオセルタミビル（タミフル（商標））（Ｄ）；感染の７２時間後に複合体６もしくはオセルタミビル（タミフル（商標））（Ｅ）；または感染の９６時間後に複合体６もしくはオセルタミビル（タミフル（商標））（Ｆ）のいずれかでマウスを処理した。試験は実施例３４に記載のとおりに実施した。 １４日間ラット用量範囲探索毒性試験において複合体６の投与後に体重増加に対する有意な影響が全く認められなかったことを示すグラフである。試験は実施例３５に記載のとおりに実施した。 Ａ～Ｄは、致死性マウスインフルエンザモデルにおける生存率によって判定したとき複合体６がオセルタミビル（タミフル（商標））と比較して処理枠を広げることを示す一連のグラフである。オセルタミビル（タミフル（商標））対照、２０ｍｇ／ｋｇ、１日２回、感染の８時間後から開始（Ａ）；複合体６、１０ｍｇ／ｋｇ、感染の４時間前に１回分の用量（Ｂ）；複合体６、２ｍｇ／ｋｇ、感染の４時間前に１回分の用量（Ｃ）；または複合体６、０．４ｍｇ／ｋｇ、感染の４日前に１回分の用量（Ｄ）のいずれかでマウスを処理した。試験は実施例３７に記載のとおりに実施した。 致死性マウスインフルエンザモデルにおけるマウス体重に対する複合体６の影響を示すグラフである。試験は実施例３７に記載のとおりに実施した。 複合体６をＩＶ投与した後の７日間ラット薬物動態試験を示すグラフである。試験は実施例３８に記載のとおりに実施した。 複合体６をＩＶ投与した後の１４日間ラット薬物動態試験を示すグラフである。試験は実施例３９に記載のとおりに実施した。 複合体６のＩＶ及びＳＣ投与を比較する２８日間ラット薬物動態試験を示すグラフである。試験は実施例４０に記載のとおりに実施した。 複合体６をＩＶ投与した後の２８日間非ヒト霊長類薬物動態試験を示すグラフである。試験は実施例４１に記載のとおりに実施した。 複合体６をＩＶ投与した後のマウス肺分布薬物動態試験を示すグラフである。試験は実施例４２に記載のとおりに実施した。 複合体６のＩＶ、ＳＣ及びＩＭ投与を比較する５日間マウス薬物動態試験を示すグラフである。試験は実施例４３に記載のとおりに実施した。 複合体８の非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥを示す。 複合体６の構造を示す。 ３７℃で２４時間インキュベートされた複合体６を対照及び無希釈化合物と比較する、試験管内での２４時間マウス血漿中安定性試験を示すグラフである。 ３７℃で２４時間インキュベートされた複合体６を対照及び無希釈化合物と比較する、試験管内での２４時間ヒト血漿中安定性試験を示すグラフである。 マウス肝臓ミクロソーム細胞において３７℃で２４時間インキュベートされた複合体６を、対照としての加熱殺滅マウス肝臓ミクロソーム細胞と比較する、２４時間マウス肝臓ミクロソーム安定性試験を示すグラフである。 ヒト肝臓ミクロソーム細胞において３７℃で２４時間インキュベートされた複合体６を、対照としての加熱殺滅マウス肝臓ミクロソーム細胞と比較する、２４時間ヒト肝臓ミクロソーム安定性試験を示すグラフである。 ウイルス攻撃後の１５日間にわたるマウスにおける体重変化％を示すグラフである。試験は実施例６６に記載のとおりに実施した。 ウイルス攻撃後の１５日間にわたるマウスの生存率％を示すグラフである。試験は実施例６６に記載のとおりに実施した。 ｈＩｇＧ１ Ｆｃ（ＷＴ）及びｈＩｇＧ１ Ｆｃ（Ｎ２９７Ａ）と比較して複合体６及び複合体１２のＦｃγ受容体ＩＩＩＡに対する結合性を示すグラフである。試験は実施例６７に記載のとおりに実施した。 Ｆｃγ受容体ＩＩＩＡに対する複合体６及び複合体の結合性を示すグラフである。試験は実施例６７に記載のとおりに実施した。 複合体６をＩＶ投与した後の７日間非ヒト霊長類毒物動態試験を示すグラフである。試験は実施例６８に記載のとおりに実施した。 複合体６のＩＶ及びＳＣ投与を比較する２８日間非ヒト霊長類薬物動態試験を示すグラフである。試験は実施例６８に記載のとおりに実施した。 複合体１２の非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥを示す。 異なる薬物抗体比（ＤＡＲ）の値を有する複合体１３（複合体１３ａ、複合体１３ｂ、複合体１３ｃ、複合体１３ｄ、複合体１３ｅ、複合体１３ｆ及び複合体１３ｇ）の非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥを示す。 ウイルス攻撃後の３５日間にわたる免疫低下マウスの生存率％を示すグラフである。０．３ｍｇ／ｋｇ複合体６処理群は１００％の生存率のままであったが、明確に示すためにグラフ中で少しずらされている。試験は実施例９５に記載のとおりに実施した。 ウイルス攻撃後の３５日間にわたる免疫低下マウスにおける体重変化％を示すグラフである。試験は実施例９５に記載のとおりに実施した。 Ａ型インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）に感染したマウスモデルの肺において複合体６の投与が用量依存的ウイルスクリアランスをもたらすこと、及びこのウイルスクリアランスがＰＢＳ対照、Ｆｃ単独対照またはオセルタミビル対照に比べてより大きいことを示すグラフである。この試験は実施例９６に記載のとおりに実施した。 Ａ型インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）に感染したマウスモデルの肺において複合体６の投与が炎症性サイトカインの用量依存的減少をもたらすことを示すグラフである。この試験は実施例９７に記載のとおりに実施した。 ＢＡＬＢ／ｃ ＳＣＩＤ（免疫低下）マウス及びＣＤ－１マウス（免疫正常）における複合体６の薬物動態を示すグラフである。この試験は実施例９８に記載のとおりに実施した。 複合体３３を描いた画像である。 Ａ～Ｂは、ＬＤ９5の３倍のマウス適合性Ａ型インフルエンザＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）で鼻腔内攻撃されたＢＡＬＢ／ｃマウスにおける体重変化（％）を示すグラフである。この試験は実施例１３３に記載のとおりに実施した。 図６３Ａは、感染後４日目のウイルス負担量を示すグラフである。この試験は実施例１３３に記載のとおりに実施した。図６３Ｂは、感染後４日目のウイルス負担量の対数減少を示すグラフである。この試験は実施例１３３に記載のとおりに実施した。 図６４Ａは、ＰＢＳ対照またはＦｃ単独対照と比較してＡ型インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）に感染したマウスモデルにおいて複合体３３の投与がウイルス負担量の用量依存的減少をもたらすことを示すグラフである。この試験は実施例１３３に記載のとおりに実施した。図６４Ｂは、感染後４日目のウイルス負担量の対数減少を示すグラフである。この試験は実施例１３３に記載のとおりに実施した。 Ａ～Ｅは、複合体３３の投与がＴＮＦ－α（Ａ）、ＩＬ－６（Ｂ）、ＩＮＦ－γ（Ｃ）、ＭＣＰ－１（Ｄ）、及びＭＩＰ－１α（Ｅ）のサイトカインレベルの用量依存的倍率減少をもたらすことを示す一連の棒グラフである。この試験は実施例１３３に記載のとおりに実施した。 ３７℃及び６０℃でのインキュベーション７日目におけるＩｎｔ－８０の安定性をＩｎｔ－４と比較して示すクロマトグラフである。この試験は実施例１４２に記載のとおりに実施した。 ウイルス阻害剤による淘汰圧の下での薬剤耐性突然変異ウイルス株の出現の可能性を評価するために、複合体６、オセルタミビル、バロキサビルまたはＰＢＳ対照の存在下でのＡ５４９細胞におけるＡ／ＣＡ／０９ ｐｄｍの連続継代を示すグラフである。この試験は実施例１４７に記載のとおりに実施した。 ウイルス阻害剤による淘汰圧の下での薬剤耐性突然変異ウイルス株の出現の可能性を評価するために、複合体６、複合体３３、オセルタミビル、バロキサビルまたはＰＢＳ対照の存在下でのＭＤＣＫ細胞におけるＡ／ＷＳＮ／１９３３の連続継代を示すグラフである。この試験は実施例１４７に記載のとおりに実施した。 Ａ型インフルエンザＨ１Ｎ１に対する複合体６によるＡＤＣＣのＭＯＩ依存的増大を示すグラフである。この試験は実施例１５２に記載のとおりに実施した。 ＭＯＩが１であるときの、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対する複合体６によるＡＤＣＣの用量依存的増大を示すグラフである。この試験は実施例１５２に記載のとおりに実施した。 Ａ～Ｃは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１、Ａ）、Ａ型インフルエンザ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（Ｂ）、及びＡ型インフルエンザ／ＨＫ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２、Ｃ）に対する複合体３３におけるＭＯＩ依存的増大を示すグラフである。この試験は実施例１５２に記載のとおりに実施した。 Ｂ型インフルエンザ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）に対する複合体３３によるＡＤＣＣのＭＯＩ依存的増大を示すグラフである。この試験は実施例１５２に記載のとおりに実施した。 Ａ～Ｂは、ＭＯＩが１であるとき（Ａ）及びＭＯＩが１０であるとき（Ｂ）の、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４に対する複合体３３によるＡＤＣＣの用量依存的増大を示すグラフである。この試験は実施例１５２に記載のとおりに実施した。 Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対する対照完全長モノクローナル抗体ゲジブマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）によるＡＤＣＣのＭＯＩ依存的増大を示すグラフである。この試験は実施例１５２に記載のとおりに実施した。 Ａ～Ｂは、ＭＯＩが１であるとき（Ａ）及びＭＯＩが１０であるとき（Ｂ）の、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４に対する対照完全長モノクローナル抗体ゲジブマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）によるＡＤＣＣの用量依存的増大を示すグラフである。この試験は実施例１５２に記載のとおりに実施した。 Ａ型インフルエンザＨ１Ｎ１に対する複合体６によるＡＤＣＰのＭＯＩ依存的増大を示すグラフである。この試験は実施例１５３に記載のとおりに実施した。 ＭＯＩが１であるとき（Ａ）及びＭＯＩが１０であるとき（Ｂ）の、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対する複合体６によるＡＤＣＰの用量依存的増大を示すグラフである。この試験は実施例１５２に記載のとおりに実施した。 Ａ～Ｃは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１、Ａ）、Ａ型インフルエンザ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（Ｂ）、及びＡ型インフルエンザ／ＨＫ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２、Ｃ）に対する複合体３３におけるＭＯＩ依存的増大を示すグラフである。この試験は実施例１５２に記載のとおりに実施した。 Ｂ型インフルエンザ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）に対する複合体３３によるＡＤＣＰのＭＯＩ依存的増大を示すグラフである。この試験は実施例１５３に記載のとおりに実施した。 Ａ～Ｂは、ＭＯＩが１であるとき（Ａ）及びＭＯＩが１０であるとき（Ｂ）の、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４に対する複合体３３によるＡＤＣＰの用量依存的増大を示すグラフである。この試験は実施例１５３に記載のとおりに実施した。 Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）２対する対照完全長モノクローナル抗体ゲジブマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）によるＡＤＣＰのＭＯＩ依存的増大を示すグラフである。この試験は実施例１５３に記載のとおりに実施した。 Ａ～Ｂは、ＭＯＩが１であるとき（Ａ）及びＭＯＩが１０であるとき（Ｂ）の、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４に対する対照完全長モノクローナル抗体ゲジブマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）によるＡＤＣＰの用量依存的増大を示すグラフである。この試験は実施例１５３に記載のとおりに実施した。 ウイルス阻害剤による淘汰圧の下での薬剤耐性突然変異ウイルス株の出現の可能性を評価するために、複合体４５ｂ、オセルタミビル、バロキサビルまたはＰＢＳ対照の存在下でのＭＤＣＫ細胞におけるＡ／Ｃａ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍの連続継代を示すグラフである。この試験は実施例１６５に記載のとおりに実施した。 ＩＶ、ＳＣ及びＩＭ投与を比較するマウスＰＫ試験において複合体４５ｂの血漿中レベルを示すグラフである。血漿中濃度レベルをＮＡ捕捉によって決定した。この試験は実施例１７３に記載のとおりに実施した。 ＩＶ、ＳＣ及びＩＭ投与を比較するマウスＰＫ試験において複合体４５ｂの血漿中レベルを示すグラフである。血漿中濃度レベルをｈＩｇＧ Ｆｃ捕捉によって決定した。この試験は実施例１７３に記載のとおりに実施した。 複合体４５ｂの血漿中レベルにおける用量線形性をＮＡ捕捉によって示すグラフである。この試験は実施例１７４に記載のとおりに実施した。 複合体４５ｂの血漿中レベルにおける用量線形性をｈＩｇＧ捕捉によって示すグラフである。この試験は実施例１７４に記載のとおりに実施した。 マウスＰＫ試験において５０ｍｇ／ｋｇ及び５ｍｇ／ｋｇのＳＣ投薬での複合体４５ｂの血漿中濃度を示すグラフである。ノイラミニダーゼ被覆プレートを使用してＥＬＩＳＡによって血漿中濃度を決定した。この試験は実施例１７５に記載のとおりに実施した。 ５ｍｇ／ｋｇの複合体４５ｂのＩＶ及びＳＶ投与を比較して複合体４５ｂの血漿中濃度を示すグラフである。ノイラミニダーゼ被覆プレートを使用してＥＬＩＳＡによって血漿中濃度を決定した。この試験は実施例１７５に記載のとおりに実施した。 非ヒト霊長類カニクイザルにおいて複合体４５ｂの血漿中濃度を示すグラフである。ノイラミニダーゼ被覆プレートを使用してＥＬＩＳＡによって血漿中濃度を決定した。この試験は実施例１７６に記載のとおりに実施した。 非ヒト霊長類カニクイザルにおいて複合体４５ｂの血漿中濃度を示すグラフである。血漿中濃度をｈＩｇＧ Ｆｃ捕捉によって決定した。この試験は実施例１７６に記載のとおりに実施した。 非ヒト霊長類カニクイザルにおいて１日目から１４日目までの複合体４５ｂの血漿中濃度を示すグラフである。血漿中濃度をノイラミニダーゼ（ＮＡ）捕捉及びＦｃ捕捉によって決定した。この試験は実施例１７６に記載のとおりに実施した。 フェレットＰＫ試験においてノイラミニダーゼ（ＮＡ）捕捉及びＦｃ捕捉によって決定された複合体４５ｂ（３ｍｐｋ ＩＶ）の血漿中濃度を示すグラフである。この試験は実施例１８３に記載のとおりに実施した。 フェレットＰＫ試験においてＨ１Ｎ１ノイラミニダーゼ（ＮＡ）捕捉によって決定された複合体４５ｂの鼻腔洗浄レベルを示すグラフである。この試験は実施例１８６に記載のとおりに実施した。 フェレットＰＫ試験においてｈＩｇＧ Ｆｃ捕捉によって決定された複合体４５ｂの鼻腔洗浄レベルを示すグラフである。この試験は実施例１８６に記載のとおりに実施した。 オセルタミビル（１０ｍｇ／ｋｇ、１日２回×５）またはビヒクルと比較して複合体４５ｂ（０．３ｍｇ／ｋｇ、単回）の投与の後の臨床所見の比較を示すグラフである。この試験は実施例１８２に記載のとおりに実施した。 非ヒト霊長類ＰＫ試験においてＦｃ捕捉によって決定された複合体４５ｂ（２ｍｐｋ ＩＶ）の血漿中レベルを複合体４６（２ｍｐｋ ＩＶ）と比較して示すグラフである。この試験は実施例１８９に記載のとおりに実施した。 マウスにおいて複合体４５ｂの血漿中濃度レベルを複合体４５ｂの気道上皮被覆液（ＥＬＦ）中レベルと比較して示すグラフである。この試験は実施例１９１に記載のとおりに実施した。 ＳＣＩＤマウスＰＫ試験においてＨ１Ｎ１ Ｆｃ捕捉によって決定された複合体４５ｂの血漿中レベルを示すグラフである。この試験は実施例１９２に記載のとおりに実施した。 ＳＣＩＤマウスＰＫ試験においてノイラミニダーゼ（ＮＡ）捕捉によって決定された複合体４５ｂの血漿中レベルを示すグラフである。この試験は実施例１９２に記載のとおりに実施した。 マウスＰＫ試験においてノイラミニダーゼ（ＮＡ）捕捉によって決定された複合体４５ｂの血漿中レベルを複合体４６と比較して示すグラフである。この試験は実施例１９３に記載のとおりに実施した。 複合体４５及び複合体４６を描いた画像である。 アジド官能化Ｆｃドメイン単量体またはＦｃドメインと複合前中間体（Ｉｎｔ）との例示的なクリックケミストリー複合を描写した画像である。 実施例２００に記載のメチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）による続発細菌感染症モデルのための実験手順を描写した画像である。 Ａ～Ｂは、複合体４５ｂによる処置の後の続発感染症マウスモデルの生存率パーセント（Ａ）及びＣＦＵ／ｇ肺（Ｂ）を示すグラフである。この試験は実施例２００に記載のとおりに実施した。 実施例２００に記載のＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅによる続発細菌感染症モデルのための実験手順を描写した画像である。 Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの続発感染症モデルにおいて複合体４５ｂによる処置の後のマウスの生存率パーセントを示すグラフである。この試験は実施例２００に記載のとおりに実施した。 Ａ～Ｂは、Ａ型インフルエンザ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００４（Ｈ５Ｎ１）によるウイルス攻撃の７日前に１回行った複合体４５ａによる処置の後のマウスの生存率（Ａ）及び平均体重（Ｂ）を示すグラフである。攻撃感染及び複合体４５ａによる処置の後、１０ｍｇ／ｋｇ用量では１００％の防御が認められ、０．３及び３．０ｍｇ／ｋｇ用量では８０％の防御が認められ、１ｍｇ／ｋｇ用量では７０％の防御が認められた（Ａ）。プラセボ群での３０％の生存率は異常であり、よって、１ｍｇ／ｋｇ用量は有意な防御をもたらさなかった。加えて、全ての用量は体重減少に対する有意な防御をもたらした（Ｂ）。（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１）。この試験は実施例２０１に記載のとおりに実施した。 Ａ～Ｂは、Ａ型インフルエンザ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００４（Ｈ５Ｎ１）によるウイルス攻撃の４時間後に１回行った複合体４５ａによる処置の後のマウスの生存率（Ａ）及び平均体重（Ｂ）を示すグラフである。攻撃感染及び複合体４５ａによる処置の後、１、３及び１０ｍｇ／ｋｇ用量では１００％の防御が認められ、０．３ｍｇ／ｋｇ用量では７０％の防御が認められた（Ａ）。プラセボ群での３０％の生存率は異常であり、よって、０．３ｍｇ／ｋｇ用量は有意な防御をもたらさなかった。加えて、全ての用量は体重減少に対する有意な防御をもたらした（Ｂ）。（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１）。この試験は実施例２０１に記載のとおりに実施した。 Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０４／２００９ Ｈ１Ｎ１ノイラミニダーゼ（ＮＡ）（ＰＤＢコード３ＴＩ５）に複合した（球棒モデルで示される）四量体型ザナミビルの結晶構造図を描いた画像である。四量体中の隣接するＮＡ活性部位の間の直線距離を示す。Ｆｃ担体との（ＮＨＳエステルによる）結合のために選択されたザナミビル上の位置Ｃ７が強調表示されている。ザナミビル上のＣ７は、溶媒に曝露されており、立体的に妨げられておらず、結合親和性に対する影響を最小限に抑えてＣ７と複合することを可能にしている。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 複合体４５ｂに使用されるＦｃ構築物境界のみを示すように編集された完全長ｈＩｇＧ１（ＰＤＢコード１ＨＺＨ）の構造の半透明分子表面を表した画像である。複合体４５ｂにおいて優先的に複合したリジンの位置を緑色で示す。複合体４５ｂは、Ｎ末端拡張型ｈＩｇＧ１ Ｆｃ上のリジンと安定的に複合したザナミビル二量体（Ｉｎｔ－８３、右側に示す構造）の多価複合体であり、平均薬物抗体比（ＤＡＲ）が４．５：１である。Ｆｃドメイン表面の複合しているリジンの空間的配置、ならびにＰＥＧリンカーの長さ及び柔軟性は、ＮＡ四量体中の複数の活性部位の同時係合を可能にするようにザナミビル二量体間に、同一ウイルス粒子上の隣接ＮＡ四量体の間に、または単一の複合体４５ｂ分子を介して異なるウイルス粒子の上のＮＡ四量体の間に、十分な（９０Ａを上回る）隔たりが存在した状態で、Ｉｎｔ．８３二量体が複合体４５ｂ上に集まることをもたらす。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１１Ａ～１１１Ｊは、Ｆｃγ受容体に結合してＡＤＣＣを誘発している複合体４５ｂを示すグラフである。Ａ～Ｄは、ＥＬＩＳＡによって判定して複合体４５ｂがヒトＦｃγ ＲＩ（図１１１Ａ）、ＲＩＩａ（図１１１Ｂ）、ＲＩＩｂ（図１１１Ｃ）及びＲＩＩＩａ（図１１１Ｄ）に結合することを示す。図１１１Ｅ～１１１Ｈは、ＥＬＩＳＡによって判定して複合体４５ｂがネズミＦｃγ ＲＩ（図１１１Ｅ）、ＲＩＩＩ（図１１１Ｆ）、ＲＩＩｂ（図１１１Ｇ）及びＲＩＶ（図１１１Ｈ）に結合することを示す。図１１１Ｉ～１１１Ｊは、レポーター細胞を使用して複合体４５ｂが用量依存的（図１１１Ｉ）及びＭＯＩ依存的（図１１１Ｊ）に抗体依存性細胞傷害を誘導することを示す。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１１Ａ～１１１Ｊは、Ｆｃγ受容体に結合してＡＤＣＣを誘発している複合体４５ｂを示すグラフである。Ａ～Ｄは、ＥＬＩＳＡによって判定して複合体４５ｂがヒトＦｃγ ＲＩ（図１１１Ａ）、ＲＩＩａ（図１１１Ｂ）、ＲＩＩｂ（図１１１Ｃ）及びＲＩＩＩａ（図１１１Ｄ）に結合することを示す。図１１１Ｅ～１１１Ｈは、ＥＬＩＳＡによって判定して複合体４５ｂがネズミＦｃγ ＲＩ（図１１１Ｅ）、ＲＩＩＩ（図１１１Ｆ）、ＲＩＩｂ（図１１１Ｇ）及びＲＩＶ（図１１１Ｈ）に結合することを示す。図１１１Ｉ～１１１Ｊは、レポーター細胞を使用して複合体４５ｂが用量依存的（図１１１Ｉ）及びＭＯＩ依存的（図１１１Ｊ）に抗体依存性細胞傷害を誘導することを示す。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１１Ａ～１１１Ｊは、Ｆｃγ受容体に結合してＡＤＣＣを誘発している複合体４５ｂを示すグラフである。Ａ～Ｄは、ＥＬＩＳＡによって判定して複合体４５ｂがヒトＦｃγ ＲＩ（図１１１Ａ）、ＲＩＩａ（図１１１Ｂ）、ＲＩＩｂ（図１１１Ｃ）及びＲＩＩＩａ（図１１１Ｄ）に結合することを示す。図１１１Ｅ～１１１Ｈは、ＥＬＩＳＡによって判定して複合体４５ｂがネズミＦｃγ ＲＩ（図１１１Ｅ）、ＲＩＩＩ（図１１１Ｆ）、ＲＩＩｂ（図１１１Ｇ）及びＲＩＶ（図１１１Ｈ）に結合することを示す。図１１１Ｉ～１１１Ｊは、レポーター細胞を使用して複合体４５ｂが用量依存的（図１１１Ｉ）及びＭＯＩ依存的（図１１１Ｊ）に抗体依存性細胞傷害を誘導することを示す。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１１Ａ～１１１Ｊは、Ｆｃγ受容体に結合してＡＤＣＣを誘発している複合体４５ｂを示すグラフである。Ａ～Ｄは、ＥＬＩＳＡによって判定して複合体４５ｂがヒトＦｃγ ＲＩ（図１１１Ａ）、ＲＩＩａ（図１１１Ｂ）、ＲＩＩｂ（図１１１Ｃ）及びＲＩＩＩａ（図１１１Ｄ）に結合することを示す。図１１１Ｅ～１１１Ｈは、ＥＬＩＳＡによって判定して複合体４５ｂがネズミＦｃγ ＲＩ（図１１１Ｅ）、ＲＩＩＩ（図１１１Ｆ）、ＲＩＩｂ（図１１１Ｇ）及びＲＩＶ（図１１１Ｈ）に結合することを示す。図１１１Ｉ～１１１Ｊは、レポーター細胞を使用して複合体４５ｂが用量依存的（図１１１Ｉ）及びＭＯＩ依存的（図１１１Ｊ）に抗体依存性細胞傷害を誘導することを示す。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１１Ａ～１１１Ｊは、Ｆｃγ受容体に結合してＡＤＣＣを誘発している複合体４５ｂを示すグラフである。Ａ～Ｄは、ＥＬＩＳＡによって判定して複合体４５ｂがヒトＦｃγ ＲＩ（図１１１Ａ）、ＲＩＩａ（図１１１Ｂ）、ＲＩＩｂ（図１１１Ｃ）及びＲＩＩＩａ（図１１１Ｄ）に結合することを示す。図１１１Ｅ～１１１Ｈは、ＥＬＩＳＡによって判定して複合体４５ｂがネズミＦｃγ ＲＩ（図１１１Ｅ）、ＲＩＩＩ（図１１１Ｆ）、ＲＩＩｂ（図１１１Ｇ）及びＲＩＶ（図１１１Ｈ）に結合することを示す。図１１１Ｉ～１１１Ｊは、レポーター細胞を使用して複合体４５ｂが用量依存的（図１１１Ｉ）及びＭＯＩ依存的（図１１１Ｊ）に抗体依存性細胞傷害を誘導することを示す。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１１Ａ～１１１Ｊは、Ｆｃγ受容体に結合してＡＤＣＣを誘発している複合体４５ｂを示すグラフである。Ａ～Ｄは、ＥＬＩＳＡによって判定して複合体４５ｂがヒトＦｃγ ＲＩ（図１１１Ａ）、ＲＩＩａ（図１１１Ｂ）、ＲＩＩｂ（図１１１Ｃ）及びＲＩＩＩａ（図１１１Ｄ）に結合することを示す。図１１１Ｅ～１１１Ｈは、ＥＬＩＳＡによって判定して複合体４５ｂがネズミＦｃγ ＲＩ（図１１１Ｅ）、ＲＩＩＩ（図１１１Ｆ）、ＲＩＩｂ（図１１１Ｇ）及びＲＩＶ（図１１１Ｈ）に結合することを示す。図１１１Ｉ～１１１Ｊは、レポーター細胞を使用して複合体４５ｂが用量依存的（図１１１Ｉ）及びＭＯＩ依存的（図１１１Ｊ）に抗体依存性細胞傷害を誘導することを示す。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１１Ａ～１１１Ｊは、Ｆｃγ受容体に結合してＡＤＣＣを誘発している複合体４５ｂを示すグラフである。Ａ～Ｄは、ＥＬＩＳＡによって判定して複合体４５ｂがヒトＦｃγ ＲＩ（図１１１Ａ）、ＲＩＩａ（図１１１Ｂ）、ＲＩＩｂ（図１１１Ｃ）及びＲＩＩＩａ（図１１１Ｄ）に結合することを示す。図１１１Ｅ～１１１Ｈは、ＥＬＩＳＡによって判定して複合体４５ｂがネズミＦｃγ ＲＩ（図１１１Ｅ）、ＲＩＩＩ（図１１１Ｆ）、ＲＩＩｂ（図１１１Ｇ）及びＲＩＶ（図１１１Ｈ）に結合することを示す。図１１１Ｉ～１１１Ｊは、レポーター細胞を使用して複合体４５ｂが用量依存的（図１１１Ｉ）及びＭＯＩ依存的（図１１１Ｊ）に抗体依存性細胞傷害を誘導することを示す。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１１Ａ～１１１Ｊは、Ｆｃγ受容体に結合してＡＤＣＣを誘発している複合体４５ｂを示すグラフである。Ａ～Ｄは、ＥＬＩＳＡによって判定して複合体４５ｂがヒトＦｃγ ＲＩ（図１１１Ａ）、ＲＩＩａ（図１１１Ｂ）、ＲＩＩｂ（図１１１Ｃ）及びＲＩＩＩａ（図１１１Ｄ）に結合することを示す。図１１１Ｅ～１１１Ｈは、ＥＬＩＳＡによって判定して複合体４５ｂがネズミＦｃγ ＲＩ（図１１１Ｅ）、ＲＩＩＩ（図１１１Ｆ）、ＲＩＩｂ（図１１１Ｇ）及びＲＩＶ（図１１１Ｈ）に結合することを示す。図１１１Ｉ～１１１Ｊは、レポーター細胞を使用して複合体４５ｂが用量依存的（図１１１Ｉ）及びＭＯＩ依存的（図１１１Ｊ）に抗体依存性細胞傷害を誘導することを示す。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１１Ａ～１１１Ｊは、Ｆｃγ受容体に結合してＡＤＣＣを誘発している複合体４５ｂを示すグラフである。Ａ～Ｄは、ＥＬＩＳＡによって判定して複合体４５ｂがヒトＦｃγ ＲＩ（図１１１Ａ）、ＲＩＩａ（図１１１Ｂ）、ＲＩＩｂ（図１１１Ｃ）及びＲＩＩＩａ（図１１１Ｄ）に結合することを示す。図１１１Ｅ～１１１Ｈは、ＥＬＩＳＡによって判定して複合体４５ｂがネズミＦｃγ ＲＩ（図１１１Ｅ）、ＲＩＩＩ（図１１１Ｆ）、ＲＩＩｂ（図１１１Ｇ）及びＲＩＶ（図１１１Ｈ）に結合することを示す。図１１１Ｉ～１１１Ｊは、レポーター細胞を使用して複合体４５ｂが用量依存的（図１１１Ｉ）及びＭＯＩ依存的（図１１１Ｊ）に抗体依存性細胞傷害を誘導することを示す。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１１Ａ～１１１Ｊは、Ｆｃγ受容体に結合してＡＤＣＣを誘発している複合体４５ｂを示すグラフである。Ａ～Ｄは、ＥＬＩＳＡによって判定して複合体４５ｂがヒトＦｃγ ＲＩ（図１１１Ａ）、ＲＩＩａ（図１１１Ｂ）、ＲＩＩｂ（図１１１Ｃ）及びＲＩＩＩａ（図１１１Ｄ）に結合することを示す。図１１１Ｅ～１１１Ｈは、ＥＬＩＳＡによって判定して複合体４５ｂがネズミＦｃγ ＲＩ（図１１１Ｅ）、ＲＩＩＩ（図１１１Ｆ）、ＲＩＩｂ（図１１１Ｇ）及びＲＩＶ（図１１１Ｈ）に結合することを示す。図１１１Ｉ～１１１Ｊは、レポーター細胞を使用して複合体４５ｂが用量依存的（図１１１Ｉ）及びＭＯＩ依存的（図１１１Ｊ）に抗体依存性細胞傷害を誘導することを示す。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１２Ａ～１１２Ｍは、Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおけるインフルエンザによる致死的攻撃に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１２Ａは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）による致死的攻撃に対して感染の２時間後にＳＣ投薬された０．０１～１ｍｇ／ｋｇの範囲の複合体４５ｂの、生存率における用量応答を示すグラフである。図１１２Ｂ～１１２Ｈは、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（図１１２Ｂ）、Ａ／ＷＳＮ／１９３３（Ｈ１Ｎ１）（図１１２Ｃ）、Ａ／ＣＡ／１２／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９（図１１２Ｄ）、Ａ／Ｔｅｘａｓ／２３／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９ Ｈ２７５Ｙ（図１１２Ｅ）、Ａ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（図１１２Ｆ）、Ｂ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６（Ｙａｍａｇａｔａ）（図１１２Ｇ）、及びＢ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）（図１１２Ｈ）に対するＳＣ投与された複合体４５ｂの最小保護的用量の有効性を示すグラフである。図１１２Ｉは、ＢＳＬ－３系統Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００５（Ｈ５Ｎ１）に対する複合体４５の有効性を示すグラフである。図１１２Ｊは、感染後４日目の肺でのウイルス負担量を示す棒グラフである。図１１２Ｋ～１１２Ｌは、ＩＬ－６（図１１２Ｋ）及びＭＣＰ－１（図１１２Ｌ）の肺サイトカインレベルを示すグラフである。図１１２Ｍは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対してＳＣ投与された複合体４５ｂの最小保護的用量を示すグラフである。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１２Ａ～１１２Ｍは、Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおけるインフルエンザによる致死的攻撃に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１２Ａは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）による致死的攻撃に対して感染の２時間後にＳＣ投薬された０．０１～１ｍｇ／ｋｇの範囲の複合体４５ｂの、生存率における用量応答を示すグラフである。図１１２Ｂ～１１２Ｈは、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（図１１２Ｂ）、Ａ／ＷＳＮ／１９３３（Ｈ１Ｎ１）（図１１２Ｃ）、Ａ／ＣＡ／１２／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９（図１１２Ｄ）、Ａ／Ｔｅｘａｓ／２３／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９ Ｈ２７５Ｙ（図１１２Ｅ）、Ａ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（図１１２Ｆ）、Ｂ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６（Ｙａｍａｇａｔａ）（図１１２Ｇ）、及びＢ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）（図１１２Ｈ）に対するＳＣ投与された複合体４５ｂの最小保護的用量の有効性を示すグラフである。図１１２Ｉは、ＢＳＬ－３系統Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００５（Ｈ５Ｎ１）に対する複合体４５の有効性を示すグラフである。図１１２Ｊは、感染後４日目の肺でのウイルス負担量を示す棒グラフである。図１１２Ｋ～１１２Ｌは、ＩＬ－６（図１１２Ｋ）及びＭＣＰ－１（図１１２Ｌ）の肺サイトカインレベルを示すグラフである。図１１２Ｍは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対してＳＣ投与された複合体４５ｂの最小保護的用量を示すグラフである。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１２Ａ～１１２Ｍは、Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおけるインフルエンザによる致死的攻撃に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１２Ａは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）による致死的攻撃に対して感染の２時間後にＳＣ投薬された０．０１～１ｍｇ／ｋｇの範囲の複合体４５ｂの、生存率における用量応答を示すグラフである。図１１２Ｂ～１１２Ｈは、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（図１１２Ｂ）、Ａ／ＷＳＮ／１９３３（Ｈ１Ｎ１）（図１１２Ｃ）、Ａ／ＣＡ／１２／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９（図１１２Ｄ）、Ａ／Ｔｅｘａｓ／２３／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９ Ｈ２７５Ｙ（図１１２Ｅ）、Ａ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（図１１２Ｆ）、Ｂ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６（Ｙａｍａｇａｔａ）（図１１２Ｇ）、及びＢ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）（図１１２Ｈ）に対するＳＣ投与された複合体４５ｂの最小保護的用量の有効性を示すグラフである。図１１２Ｉは、ＢＳＬ－３系統Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００５（Ｈ５Ｎ１）に対する複合体４５の有効性を示すグラフである。図１１２Ｊは、感染後４日目の肺でのウイルス負担量を示す棒グラフである。図１１２Ｋ～１１２Ｌは、ＩＬ－６（図１１２Ｋ）及びＭＣＰ－１（図１１２Ｌ）の肺サイトカインレベルを示すグラフである。図１１２Ｍは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対してＳＣ投与された複合体４５ｂの最小保護的用量を示すグラフである。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１２Ａ～１１２Ｍは、Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおけるインフルエンザによる致死的攻撃に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１２Ａは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）による致死的攻撃に対して感染の２時間後にＳＣ投薬された０．０１～１ｍｇ／ｋｇの範囲の複合体４５ｂの、生存率における用量応答を示すグラフである。図１１２Ｂ～１１２Ｈは、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（図１１２Ｂ）、Ａ／ＷＳＮ／１９３３（Ｈ１Ｎ１）（図１１２Ｃ）、Ａ／ＣＡ／１２／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９（図１１２Ｄ）、Ａ／Ｔｅｘａｓ／２３／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９ Ｈ２７５Ｙ（図１１２Ｅ）、Ａ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（図１１２Ｆ）、Ｂ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６（Ｙａｍａｇａｔａ）（図１１２Ｇ）、及びＢ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）（図１１２Ｈ）に対するＳＣ投与された複合体４５ｂの最小保護的用量の有効性を示すグラフである。図１１２Ｉは、ＢＳＬ－３系統Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００５（Ｈ５Ｎ１）に対する複合体４５の有効性を示すグラフである。図１１２Ｊは、感染後４日目の肺でのウイルス負担量を示す棒グラフである。図１１２Ｋ～１１２Ｌは、ＩＬ－６（図１１２Ｋ）及びＭＣＰ－１（図１１２Ｌ）の肺サイトカインレベルを示すグラフである。図１１２Ｍは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対してＳＣ投与された複合体４５ｂの最小保護的用量を示すグラフである。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１２Ａ～１１２Ｍは、Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおけるインフルエンザによる致死的攻撃に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１２Ａは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）による致死的攻撃に対して感染の２時間後にＳＣ投薬された０．０１～１ｍｇ／ｋｇの範囲の複合体４５ｂの、生存率における用量応答を示すグラフである。図１１２Ｂ～１１２Ｈは、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（図１１２Ｂ）、Ａ／ＷＳＮ／１９３３（Ｈ１Ｎ１）（図１１２Ｃ）、Ａ／ＣＡ／１２／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９（図１１２Ｄ）、Ａ／Ｔｅｘａｓ／２３／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９ Ｈ２７５Ｙ（図１１２Ｅ）、Ａ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（図１１２Ｆ）、Ｂ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６（Ｙａｍａｇａｔａ）（図１１２Ｇ）、及びＢ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）（図１１２Ｈ）に対するＳＣ投与された複合体４５ｂの最小保護的用量の有効性を示すグラフである。図１１２Ｉは、ＢＳＬ－３系統Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００５（Ｈ５Ｎ１）に対する複合体４５の有効性を示すグラフである。図１１２Ｊは、感染後４日目の肺でのウイルス負担量を示す棒グラフである。図１１２Ｋ～１１２Ｌは、ＩＬ－６（図１１２Ｋ）及びＭＣＰ－１（図１１２Ｌ）の肺サイトカインレベルを示すグラフである。図１１２Ｍは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対してＳＣ投与された複合体４５ｂの最小保護的用量を示すグラフである。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１２Ａ～１１２Ｍは、Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおけるインフルエンザによる致死的攻撃に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１２Ａは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）による致死的攻撃に対して感染の２時間後にＳＣ投薬された０．０１～１ｍｇ／ｋｇの範囲の複合体４５ｂの、生存率における用量応答を示すグラフである。図１１２Ｂ～１１２Ｈは、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（図１１２Ｂ）、Ａ／ＷＳＮ／１９３３（Ｈ１Ｎ１）（図１１２Ｃ）、Ａ／ＣＡ／１２／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９（図１１２Ｄ）、Ａ／Ｔｅｘａｓ／２３／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９ Ｈ２７５Ｙ（図１１２Ｅ）、Ａ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（図１１２Ｆ）、Ｂ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６（Ｙａｍａｇａｔａ）（図１１２Ｇ）、及びＢ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）（図１１２Ｈ）に対するＳＣ投与された複合体４５ｂの最小保護的用量の有効性を示すグラフである。図１１２Ｉは、ＢＳＬ－３系統Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００５（Ｈ５Ｎ１）に対する複合体４５の有効性を示すグラフである。図１１２Ｊは、感染後４日目の肺でのウイルス負担量を示す棒グラフである。図１１２Ｋ～１１２Ｌは、ＩＬ－６（図１１２Ｋ）及びＭＣＰ－１（図１１２Ｌ）の肺サイトカインレベルを示すグラフである。図１１２Ｍは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対してＳＣ投与された複合体４５ｂの最小保護的用量を示すグラフである。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１２Ａ～１１２Ｍは、Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおけるインフルエンザによる致死的攻撃に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１２Ａは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）による致死的攻撃に対して感染の２時間後にＳＣ投薬された０．０１～１ｍｇ／ｋｇの範囲の複合体４５ｂの、生存率における用量応答を示すグラフである。図１１２Ｂ～１１２Ｈは、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（図１１２Ｂ）、Ａ／ＷＳＮ／１９３３（Ｈ１Ｎ１）（図１１２Ｃ）、Ａ／ＣＡ／１２／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９（図１１２Ｄ）、Ａ／Ｔｅｘａｓ／２３／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９ Ｈ２７５Ｙ（図１１２Ｅ）、Ａ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（図１１２Ｆ）、Ｂ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６（Ｙａｍａｇａｔａ）（図１１２Ｇ）、及びＢ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）（図１１２Ｈ）に対するＳＣ投与された複合体４５ｂの最小保護的用量の有効性を示すグラフである。図１１２Ｉは、ＢＳＬ－３系統Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００５（Ｈ５Ｎ１）に対する複合体４５の有効性を示すグラフである。図１１２Ｊは、感染後４日目の肺でのウイルス負担量を示す棒グラフである。図１１２Ｋ～１１２Ｌは、ＩＬ－６（図１１２Ｋ）及びＭＣＰ－１（図１１２Ｌ）の肺サイトカインレベルを示すグラフである。図１１２Ｍは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対してＳＣ投与された複合体４５ｂの最小保護的用量を示すグラフである。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１２Ａ～１１２Ｍは、Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおけるインフルエンザによる致死的攻撃に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１２Ａは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）による致死的攻撃に対して感染の２時間後にＳＣ投薬された０．０１～１ｍｇ／ｋｇの範囲の複合体４５ｂの、生存率における用量応答を示すグラフである。図１１２Ｂ～１１２Ｈは、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（図１１２Ｂ）、Ａ／ＷＳＮ／１９３３（Ｈ１Ｎ１）（図１１２Ｃ）、Ａ／ＣＡ／１２／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９（図１１２Ｄ）、Ａ／Ｔｅｘａｓ／２３／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９ Ｈ２７５Ｙ（図１１２Ｅ）、Ａ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（図１１２Ｆ）、Ｂ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６（Ｙａｍａｇａｔａ）（図１１２Ｇ）、及びＢ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）（図１１２Ｈ）に対するＳＣ投与された複合体４５ｂの最小保護的用量の有効性を示すグラフである。図１１２Ｉは、ＢＳＬ－３系統Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００５（Ｈ５Ｎ１）に対する複合体４５の有効性を示すグラフである。図１１２Ｊは、感染後４日目の肺でのウイルス負担量を示す棒グラフである。図１１２Ｋ～１１２Ｌは、ＩＬ－６（図１１２Ｋ）及びＭＣＰ－１（図１１２Ｌ）の肺サイトカインレベルを示すグラフである。図１１２Ｍは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対してＳＣ投与された複合体４５ｂの最小保護的用量を示すグラフである。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１２Ａ～１１２Ｍは、Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおけるインフルエンザによる致死的攻撃に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１２Ａは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）による致死的攻撃に対して感染の２時間後にＳＣ投薬された０．０１～１ｍｇ／ｋｇの範囲の複合体４５ｂの、生存率における用量応答を示すグラフである。図１１２Ｂ～１１２Ｈは、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（図１１２Ｂ）、Ａ／ＷＳＮ／１９３３（Ｈ１Ｎ１）（図１１２Ｃ）、Ａ／ＣＡ／１２／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９（図１１２Ｄ）、Ａ／Ｔｅｘａｓ／２３／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９ Ｈ２７５Ｙ（図１１２Ｅ）、Ａ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（図１１２Ｆ）、Ｂ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６（Ｙａｍａｇａｔａ）（図１１２Ｇ）、及びＢ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）（図１１２Ｈ）に対するＳＣ投与された複合体４５ｂの最小保護的用量の有効性を示すグラフである。図１１２Ｉは、ＢＳＬ－３系統Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００５（Ｈ５Ｎ１）に対する複合体４５の有効性を示すグラフである。図１１２Ｊは、感染後４日目の肺でのウイルス負担量を示す棒グラフである。図１１２Ｋ～１１２Ｌは、ＩＬ－６（図１１２Ｋ）及びＭＣＰ－１（図１１２Ｌ）の肺サイトカインレベルを示すグラフである。図１１２Ｍは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対してＳＣ投与された複合体４５ｂの最小保護的用量を示すグラフである。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１２Ａ～１１２Ｍは、Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおけるインフルエンザによる致死的攻撃に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１２Ａは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）による致死的攻撃に対して感染の２時間後にＳＣ投薬された０．０１～１ｍｇ／ｋｇの範囲の複合体４５ｂの、生存率における用量応答を示すグラフである。図１１２Ｂ～１１２Ｈは、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（図１１２Ｂ）、Ａ／ＷＳＮ／１９３３（Ｈ１Ｎ１）（図１１２Ｃ）、Ａ／ＣＡ／１２／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９（図１１２Ｄ）、Ａ／Ｔｅｘａｓ／２３／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９ Ｈ２７５Ｙ（図１１２Ｅ）、Ａ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（図１１２Ｆ）、Ｂ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６（Ｙａｍａｇａｔａ）（図１１２Ｇ）、及びＢ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）（図１１２Ｈ）に対するＳＣ投与された複合体４５ｂの最小保護的用量の有効性を示すグラフである。図１１２Ｉは、ＢＳＬ－３系統Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００５（Ｈ５Ｎ１）に対する複合体４５の有効性を示すグラフである。図１１２Ｊは、感染後４日目の肺でのウイルス負担量を示す棒グラフである。図１１２Ｋ～１１２Ｌは、ＩＬ－６（図１１２Ｋ）及びＭＣＰ－１（図１１２Ｌ）の肺サイトカインレベルを示すグラフである。図１１２Ｍは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対してＳＣ投与された複合体４５ｂの最小保護的用量を示すグラフである。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１２Ａ～１１２Ｍは、Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおけるインフルエンザによる致死的攻撃に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１２Ａは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）による致死的攻撃に対して感染の２時間後にＳＣ投薬された０．０１～１ｍｇ／ｋｇの範囲の複合体４５ｂの、生存率における用量応答を示すグラフである。図１１２Ｂ～１１２Ｈは、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（図１１２Ｂ）、Ａ／ＷＳＮ／１９３３（Ｈ１Ｎ１）（図１１２Ｃ）、Ａ／ＣＡ／１２／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９（図１１２Ｄ）、Ａ／Ｔｅｘａｓ／２３／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９ Ｈ２７５Ｙ（図１１２Ｅ）、Ａ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（図１１２Ｆ）、Ｂ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６（Ｙａｍａｇａｔａ）（図１１２Ｇ）、及びＢ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）（図１１２Ｈ）に対するＳＣ投与された複合体４５ｂの最小保護的用量の有効性を示すグラフである。図１１２Ｉは、ＢＳＬ－３系統Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００５（Ｈ５Ｎ１）に対する複合体４５の有効性を示すグラフである。図１１２Ｊは、感染後４日目の肺でのウイルス負担量を示す棒グラフである。図１１２Ｋ～１１２Ｌは、ＩＬ－６（図１１２Ｋ）及びＭＣＰ－１（図１１２Ｌ）の肺サイトカインレベルを示すグラフである。図１１２Ｍは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対してＳＣ投与された複合体４５ｂの最小保護的用量を示すグラフである。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１２Ａ～１１２Ｍは、Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおけるインフルエンザによる致死的攻撃に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１２Ａは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）による致死的攻撃に対して感染の２時間後にＳＣ投薬された０．０１～１ｍｇ／ｋｇの範囲の複合体４５ｂの、生存率における用量応答を示すグラフである。図１１２Ｂ～１１２Ｈは、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（図１１２Ｂ）、Ａ／ＷＳＮ／１９３３（Ｈ１Ｎ１）（図１１２Ｃ）、Ａ／ＣＡ／１２／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９（図１１２Ｄ）、Ａ／Ｔｅｘａｓ／２３／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９ Ｈ２７５Ｙ（図１１２Ｅ）、Ａ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（図１１２Ｆ）、Ｂ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６（Ｙａｍａｇａｔａ）（図１１２Ｇ）、及びＢ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）（図１１２Ｈ）に対するＳＣ投与された複合体４５ｂの最小保護的用量の有効性を示すグラフである。図１１２Ｉは、ＢＳＬ－３系統Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００５（Ｈ５Ｎ１）に対する複合体４５の有効性を示すグラフである。図１１２Ｊは、感染後４日目の肺でのウイルス負担量を示す棒グラフである。図１１２Ｋ～１１２Ｌは、ＩＬ－６（図１１２Ｋ）及びＭＣＰ－１（図１１２Ｌ）の肺サイトカインレベルを示すグラフである。図１１２Ｍは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対してＳＣ投与された複合体４５ｂの最小保護的用量を示すグラフである。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１２Ａ～１１２Ｍは、Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおけるインフルエンザによる致死的攻撃に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１２Ａは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）による致死的攻撃に対して感染後２時間目にＳＣ投薬された０．０１～１ｍｇ／ｋｇの範囲の複合体４５ｂの、生存率における用量応答を示すグラフである。図１１２Ｂ～１１２Ｈは、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（図１１２Ｂ）、Ａ／ＷＳＮ／１９３３（Ｈ１Ｎ１）（図１１２Ｃ）、Ａ／ＣＡ／１２／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９（図１１２Ｄ）、Ａ／Ｔｅｘａｓ／２３／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９ Ｈ２７５Ｙ（図１１２Ｅ）、Ａ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（図１１２Ｆ）、Ｂ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６（Ｙａｍａｇａｔａ）（図１１２Ｇ）、及びＢ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）（図１１２Ｈ）に対するＳＣ投与された複合体４５ｂの最小保護的用量の有効性を示すグラフである。図１１２Ｉは、ＢＳＬ－３系統Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００５（Ｈ５Ｎ１）に対する複合体４５の有効性を示すグラフである。図１１２Ｊは、感染後４日目の肺でのウイルス負担量を示す棒グラフである。図１１２Ｋ～１１２Ｌは、ＩＬ－６（図１１２Ｋ）及びＭＣＰ－１（図１１２Ｌ）の肺サイトカインレベルを示すグラフである。図１１２Ｍは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対してＳＣ投与された複合体４５ｂの最小保護的用量を示すグラフである。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１３Ａ～１１３Ｊは、Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおけるインフルエンザによる致死的攻撃に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１３Ａは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）による致死的攻撃に対して感染後２時間目にＳＣ投薬された０．０１～１ｍｇ／ｋｇの範囲の複合体４５ｂの用量応答を示すグラフである。図１１３Ｂ～１１３Ｈは、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（図１１３Ｂ）、Ａ／ＷＳＮ／１９３３（Ｈ１Ｎ１）（図１１３Ｃ）、Ａ／ＣＡ／１２／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９（図１１３Ｄ）、Ａ／Ｔｅｘａｓ／２３／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９ Ｈ２７５Ｙ（図１１３Ｅ）、Ａ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（図１１３Ｆ）、Ｂ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６（Ｙａｍａｇａｔａ）（図１１３Ｇ）、及びＢ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）（図１１３Ｈ）に対して最小保護的用量の複合体４５ｂをＳＣ投与した後の体重変化パーセントを示す。図１１３Ｉは、ＢＳＬ－３系統Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００５（Ｈ５Ｎ１）に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１３Ｊは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対して最小保護的用量の複合体４５ｂをＳＣ投与したときの体重変化を示すグラフである。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１３Ａ～１１３Ｊは、Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおけるインフルエンザによる致死的攻撃に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１３Ａは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）による致死的攻撃に対して感染後２時間目にＳＣ投薬された０．０１～１ｍｇ／ｋｇの範囲の複合体４５ｂの用量応答を示すグラフである。図１１３Ｂ～１１３Ｈは、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（図１１３Ｂ）、Ａ／ＷＳＮ／１９３３（Ｈ１Ｎ１）（図１１３Ｃ）、Ａ／ＣＡ／１２／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９（図１１３Ｄ）、Ａ／Ｔｅｘａｓ／２３／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９ Ｈ２７５Ｙ（図１１３Ｅ）、Ａ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（図１１３Ｆ）、Ｂ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６（Ｙａｍａｇａｔａ）（図１１３Ｇ）、及びＢ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）（図１１３Ｈ）に対して最小保護的用量の複合体４５ｂをＳＣ投与した後の体重変化パーセントを示す。図１１３Ｉは、ＢＳＬ－３系統Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００５（Ｈ５Ｎ１）に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１３Ｊは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対して最小保護的用量の複合体４５ｂをＳＣ投与したときの体重変化を示すグラフである。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１３Ａ～１１３Ｊは、Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおけるインフルエンザによる致死的攻撃に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１３Ａは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）による致死的攻撃に対して感染後２時間目にＳＣ投薬された０．０１～１ｍｇ／ｋｇの範囲の複合体４５ｂの用量応答を示すグラフである。図１１３Ｂ～１１３Ｈは、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（図１１３Ｂ）、Ａ／ＷＳＮ／１９３３（Ｈ１Ｎ１）（図１１３Ｃ）、Ａ／ＣＡ／１２／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９（図１１３Ｄ）、Ａ／Ｔｅｘａｓ／２３／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９ Ｈ２７５Ｙ（図１１３Ｅ）、Ａ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（図１１３Ｆ）、Ｂ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６（Ｙａｍａｇａｔａ）（図１１３Ｇ）、及びＢ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）（図１１３Ｈ）に対して最小保護的用量の複合体４５ｂをＳＣ投与した後の体重変化パーセントを示す。図１１３Ｉは、ＢＳＬ－３系統Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００５（Ｈ５Ｎ１）に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１３Ｊは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対して最小保護的用量の複合体４５ｂをＳＣ投与したときの体重変化を示すグラフである。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１３Ａ～１１３Ｊは、Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおけるインフルエンザによる致死的攻撃に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１３Ａは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）による致死的攻撃に対して感染後２時間目にＳＣ投薬された０．０１～１ｍｇ／ｋｇの範囲の複合体４５ｂの用量応答を示すグラフである。図１１３Ｂ～１１３Ｈは、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（図１１３Ｂ）、Ａ／ＷＳＮ／１９３３（Ｈ１Ｎ１）（図１１３Ｃ）、Ａ／ＣＡ／１２／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９（図１１３Ｄ）、Ａ／Ｔｅｘａｓ／２３／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９ Ｈ２７５Ｙ（図１１３Ｅ）、Ａ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（図１１３Ｆ）、Ｂ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６（Ｙａｍａｇａｔａ）（図１１３Ｇ）、及びＢ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）（図１１３Ｈ）に対して最小保護的用量の複合体４５ｂをＳＣ投与した後の体重変化パーセントを示す。図１１３Ｉは、ＢＳＬ－３系統Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００５（Ｈ５Ｎ１）に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１３Ｊは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対して最小保護的用量の複合体４５ｂをＳＣ投与したときの体重変化を示すグラフである。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１３Ａ～１１３Ｊは、Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおけるインフルエンザによる致死的攻撃に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１３Ａは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）による致死的攻撃に対して感染後２時間目にＳＣ投薬された０．０１～１ｍｇ／ｋｇの範囲の複合体４５ｂの用量応答を示すグラフである。図１１３Ｂ～１１３Ｈは、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（図１１３Ｂ）、Ａ／ＷＳＮ／１９３３（Ｈ１Ｎ１）（図１１３Ｃ）、Ａ／ＣＡ／１２／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９（図１１３Ｄ）、Ａ／Ｔｅｘａｓ／２３／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９ Ｈ２７５Ｙ（図１１３Ｅ）、Ａ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（図１１３Ｆ）、Ｂ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６（Ｙａｍａｇａｔａ）（図１１３Ｇ）、及びＢ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）（図１１３Ｈ）に対して最小保護的用量の複合体４５ｂをＳＣ投与した後の体重変化パーセントを示す。図１１３Ｉは、ＢＳＬ－３系統Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００５（Ｈ５Ｎ１）に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１３Ｊは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対して最小保護的用量の複合体４５ｂをＳＣ投与したときの体重変化を示すグラフである。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１３Ａ～１１３Ｊは、Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおけるインフルエンザによる致死的攻撃に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１３Ａは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）による致死的攻撃に対して感染後２時間目にＳＣ投薬された０．０１～１ｍｇ／ｋｇの範囲の複合体４５ｂの用量応答を示すグラフである。図１１３Ｂ～１１３Ｈは、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（図１１３Ｂ）、Ａ／ＷＳＮ／１９３３（Ｈ１Ｎ１）（図１１３Ｃ）、Ａ／ＣＡ／１２／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９（図１１３Ｄ）、Ａ／Ｔｅｘａｓ／２３／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９ Ｈ２７５Ｙ（図１１３Ｅ）、Ａ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（図１１３Ｆ）、Ｂ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６（Ｙａｍａｇａｔａ）（図１１３Ｇ）、及びＢ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）（図１１３Ｈ）に対して最小保護的用量の複合体４５ｂをＳＣ投与した後の体重変化パーセントを示す。図１１３Ｉは、ＢＳＬ－３系統Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００５（Ｈ５Ｎ１）に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１３Ｊは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対して最小保護的用量の複合体４５ｂをＳＣ投与したときの体重変化を示すグラフである。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１３Ａ～１１３Ｊは、Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおけるインフルエンザによる致死的攻撃に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１３Ａは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）による致死的攻撃に対して感染後２時間目にＳＣ投薬された０．０１～１ｍｇ／ｋｇの範囲の複合体４５ｂの用量応答を示すグラフである。図１１３Ｂ～１１３Ｈは、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（図１１３Ｂ）、Ａ／ＷＳＮ／１９３３（Ｈ１Ｎ１）（図１１３Ｃ）、Ａ／ＣＡ／１２／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９（図１１３Ｄ）、Ａ／Ｔｅｘａｓ／２３／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９ Ｈ２７５Ｙ（図１１３Ｅ）、Ａ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（図１１３Ｆ）、Ｂ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６（Ｙａｍａｇａｔａ）（図１１３Ｇ）、及びＢ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）（図１１３Ｈ）に対して最小保護的用量の複合体４５ｂをＳＣ投与した後の体重変化パーセントを示す。図１１３Ｉは、ＢＳＬ－３系統Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００５（Ｈ５Ｎ１）に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１３Ｊは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対して最小保護的用量の複合体４５ｂをＳＣ投与したときの体重変化を示すグラフである。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１３Ａ～１１３Ｊは、Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおけるインフルエンザによる致死的攻撃に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１３Ａは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）による致死的攻撃に対して感染後２時間目にＳＣ投薬された０．０１～１ｍｇ／ｋｇの範囲の複合体４５ｂの用量応答を示すグラフである。図１１３Ｂ～１１３Ｈは、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（図１１３Ｂ）、Ａ／ＷＳＮ／１９３３（Ｈ１Ｎ１）（図１１３Ｃ）、Ａ／ＣＡ／１２／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９（図１１３Ｄ）、Ａ／Ｔｅｘａｓ／２３／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９ Ｈ２７５Ｙ（図１１３Ｅ）、Ａ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（図１１３Ｆ）、Ｂ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６（Ｙａｍａｇａｔａ）（図１１３Ｇ）、及びＢ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）（図１１３Ｈ）に対して最小保護的用量の複合体４５ｂをＳＣ投与した後の体重変化パーセントを示す。図１１３Ｉは、ＢＳＬ－３系統Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００５（Ｈ５Ｎ１）に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１３Ｊは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対して最小保護的用量の複合体４５ｂをＳＣ投与したときの体重変化を示すグラフである。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１３Ａ～１１３Ｊは、Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおけるインフルエンザによる致死的攻撃に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１３Ａは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）による致死的攻撃に対して感染後２時間目にＳＣ投薬された０．０１～１ｍｇ／ｋｇの範囲の複合体４５ｂの用量応答を示すグラフである。図１１３Ｂ～１１３Ｈは、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（図１１３Ｂ）、Ａ／ＷＳＮ／１９３３（Ｈ１Ｎ１）（図１１３Ｃ）、Ａ／ＣＡ／１２／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９（図１１３Ｄ）、Ａ／Ｔｅｘａｓ／２３／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９ Ｈ２７５Ｙ（図１１３Ｅ）、Ａ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（図１１３Ｆ）、Ｂ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６（Ｙａｍａｇａｔａ）（図１１３Ｇ）、及びＢ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）（図１１３Ｈ）に対して最小保護的用量の複合体４５ｂをＳＣ投与した後の体重変化パーセントを示す。図１１３Ｉは、ＢＳＬ－３系統Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００５（Ｈ５Ｎ１）に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１３Ｊは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対して最小保護的用量の複合体４５ｂをＳＣ投与したときの体重変化を示すグラフである。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 図１１３Ａ～１１３Ｊは、Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおけるインフルエンザによる致死的攻撃に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１３Ａは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）による致死的攻撃に対して感染後２時間目にＳＣ投薬された０．０１～１ｍｇ／ｋｇの範囲の複合体４５ｂの用量応答を示すグラフである。図１１３Ｂ～１１３Ｈは、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（図１１３Ｂ）、Ａ／ＷＳＮ／１９３３（Ｈ１Ｎ１）（図１１３Ｃ）、Ａ／ＣＡ／１２／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９（図１１３Ｄ）、Ａ／Ｔｅｘａｓ／２３／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９ Ｈ２７５Ｙ（図１１３Ｅ）、Ａ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（図１１３Ｆ）、Ｂ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６（Ｙａｍａｇａｔａ）（図１１３Ｇ）、及びＢ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）（図１１３Ｈ）に対して最小保護的用量の複合体４５ｂをＳＣ投与した後の体重変化パーセントを示す。図１１３Ｉは、ＢＳＬ－３系統Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００５（Ｈ５Ｎ１）に対する複合体４５ｂの有効性を示すグラフである。図１１３Ｊは、Ａ型インフルエンザ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対して最小保護的用量の複合体４５ｂをＳＣ投与したときの体重変化を示すグラフである。この試験は実施例２０３に記載のとおりに実施した。 Ａ～Ｂは、Ａ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）の致死性マウスモデルにおいて５ｍｇ／ｋｇのヒト等価用量（１日２回×５日）または５０ｍｇ／ｋｇの１０×ヒト等価用量（１日２回×５日）でのオセルタミビルの有効性を生存率（Ａ）及び体重変化（Ｂ）で示す一対のグラフである。 Ａ～Ｃは、Ａ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）の致死的攻撃による感染後４日目のＮＦ－α（Ａ）、ＫＣ（Ｂ）、ＭＩＰ－１α（Ｃ）の肺サイトカインレベルを示す棒グラフである。 図１１６Ａ～１１６Ｂは、Ａ型インフルエンザ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍに対する複合体４５ｂの、単回用量のＳＣ、ＩＭまたはＩＶ投与後の有効性を生存率パーセント（図１１１Ａ）及び体重変化パーセント（図１１６Ｂ）で示すグラフである。 図１１６Ａ～１１６Ｂは、Ａ型インフルエンザ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍに対する複合体４５ｂの、単回用量のＳＣ、ＩＭまたはＩＶ投与後の有効性を生存率パーセント（図１１１Ａ）及び体重変化パーセント（図１１６Ｂ）で示すグラフである。 図１１６Ｃ～１１６Ｄは、ＮＡ捕捉（図１１６Ｃ）またはＦｃ捕捉（図１１６Ｄ）によって決定された、マウスにおける単回用量のＳＣ、ＩＭまたはＩＶ投与後の複合体４５ｂの１６８時間にわたる血漿中レベルを示すグラフである。 図１１６Ｃ～１１６Ｄは、ＮＡ捕捉（図１１６Ｃ）またはＦｃ捕捉（図１１６Ｄ）によって決定された、マウスにおける単回用量のＳＣ、ＩＭまたはＩＶ投与後の複合体４５ｂの１６８時間にわたる血漿中レベルを示すグラフである。 Ａ～Ｃは、ヒト（Ａ）、カニクイザル（Ｂ）及びマウス（Ｃ）に対するＦｃＲｎの結合のパターンがｈＩｇＧ１ Ｆｃまたは完全長ＩｇＧ１アイソタイプ対照と同程度であり、ｐＨ５．８ではより強く結合し、ｐＨ７．４では結合性が低下したことを示すグラフである。 Ａ～Ｃは、ヒト（Ａ）、カニクイザル（Ｂ）及びマウス（Ｃ）に対するＦｃＲｎの結合のパターンがｈＩｇＧ１ Ｆｃまたは完全長ＩｇＧ１アイソタイプ対照と同程度であり、ｐＨ５．８ではより強く結合し、ｐＨ７．４では結合性が低下したことを示すグラフである。 Ａ～Ｃは、ヒト（Ａ）、カニクイザル（Ｂ）及びマウス（Ｃ）に対するＦｃＲｎの結合のパターンがｈＩｇＧ１ Ｆｃまたは完全長ＩｇＧ１アイソタイプ対照と同程度であり、ｐＨ５．８ではより強く結合し、ｐＨ７．４では結合性が低下したことを示すグラフである。 図１１８Ａ～１１８Ｆは、複合体４５ｂの作用が長続きすることを示すグラフである。図１１８Ａは、１～１００ｍｇ／ｋｇの範囲でのマウスにおけるＳＣ投与の後の複合体４５ｂの血漿中レベルの用量応答を示すグラフである。図１１８Ｂは、マウスの血漿、ＥＬＦ及び肺でのＳＣ投薬後の複合体４５ｂのレベルを示すグラフである。図１１８Ｃ～Ｆは、致死的攻撃の２８日前に投薬された複合体４５ｂによってもたらされる、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（図１１８Ｃ）、Ａ／ＨＫ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（図１１８Ｄ）、Ｂ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）（図１１８Ｅ）及びＢ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６（Ｙａｍａｇａｔａ）（図１１８Ｆ）に対する防御を生存率パーセントで示す。 図１１８Ａ～１１８Ｆは、複合体４５ｂの作用が長続きすることを示すグラフである。図１１８Ａは、１～１００ｍｇ／ｋｇの範囲でのマウスにおけるＳＣ投与の後の複合体４５ｂの血漿中レベルの用量応答を示すグラフである。図１１８Ｂは、マウスの血漿、ＥＬＦ及び肺でのＳＣ投薬後の複合体４５ｂのレベルを示すグラフである。図１１８Ｃ～Ｆは、致死的攻撃の２８日前に投薬された複合体４５ｂによってもたらされる、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（図１１８Ｃ）、Ａ／ＨＫ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（図１１８Ｄ）、Ｂ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）（図１１８Ｅ）及びＢ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６（Ｙａｍａｇａｔａ）（図１１８Ｆ）に対する防御を生存率パーセントで示す。 図１１８Ａ～１１８Ｆは、複合体４５ｂの作用が長続きすることを示すグラフである。図１１８Ａは、１～１００ｍｇ／ｋｇの範囲でのマウスにおけるＳＣ投与の後の複合体４５ｂの血漿中レベルの用量応答を示すグラフである。図１１８Ｂは、マウスの血漿、ＥＬＦ及び肺でのＳＣ投薬後の複合体４５ｂのレベルを示すグラフである。図１１８Ｃ～Ｆは、致死的攻撃の２８日前に投薬された複合体４５ｂによってもたらされる、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（図１１８Ｃ）、Ａ／ＨＫ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（図１１８Ｄ）、Ｂ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）（図１１８Ｅ）及びＢ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６（Ｙａｍａｇａｔａ）（図１１８Ｆ）に対する防御を生存率パーセントで示す。 図１１８Ａ～１１８Ｆは、複合体４５ｂの作用が長続きすることを示すグラフである。図１１８Ａは、１～１００ｍｇ／ｋｇの範囲でのマウスにおけるＳＣ投与の後の複合体４５ｂの血漿中レベルの用量応答を示すグラフである。図１１８Ｂは、マウスの血漿、ＥＬＦ及び肺でのＳＣ投薬後の複合体４５ｂのレベルを示すグラフである。図１１８Ｃ～Ｆは、致死的攻撃の２８日前に投薬された複合体４５ｂによってもたらされる、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（図１１８Ｃ）、Ａ／ＨＫ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（図１１８Ｄ）、Ｂ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）（図１１８Ｅ）及びＢ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６（Ｙａｍａｇａｔａ）（図１１８Ｆ）に対する防御を生存率パーセントで示す。 図１１８Ａ～１１８Ｆは、複合体４５ｂの作用が長続きすることを示すグラフである。図１１８Ａは、１～１００ｍｇ／ｋｇの範囲でのマウスにおけるＳＣ投与の後の複合体４５ｂの血漿中レベルの用量応答を示すグラフである。図１１８Ｂは、マウスの血漿、ＥＬＦ及び肺でのＳＣ投薬後の複合体４５ｂのレベルを示すグラフである。図１１８Ｃ～Ｆは、致死的攻撃の２８日前に投薬された複合体４５ｂによってもたらされる、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（図１１８Ｃ）、Ａ／ＨＫ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（図１１８Ｄ）、Ｂ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）（図１１８Ｅ）及びＢ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６（Ｙａｍａｇａｔａ）（図１１８Ｆ）に対する防御を生存率パーセントで示す。 図１１８Ａ～１１８Ｆは、複合体４５ｂの作用が長続きすることを示すグラフである。図１１８Ａは、１～１００ｍｇ／ｋｇの範囲でのマウスにおけるＳＣ投与の後の複合体４５ｂの血漿中レベルの用量応答を示すグラフである。図１１８Ｂは、マウスの血漿、ＥＬＦ及び肺でのＳＣ投薬後の複合体４５ｂのレベルを示すグラフである。図１１８Ｃ～Ｆは、致死的攻撃の２８日前に投薬された複合体４５ｂによってもたらされる、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（図１１８Ｃ）、Ａ／ＨＫ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（図１１８Ｄ）、Ｂ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）（図１１８Ｅ）及びＢ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６（Ｙａｍａｇａｔａ）（図１１８Ｆ）に対する防御を生存率パーセントで示す。 複合体４５ａ低用量群の生存率曲線を示すグラフである。この試験は実施例２０９に記載のとおりに実施した。 対照、ならびに０．３及び０．０３ｍｇ／ｋｇの複合体４５ａのカプランマイヤー生存率曲線を示すグラフである。この試験は実施例２１０に記載のとおりに実施した。 対照、ならびに０．１ｍｇ／ｋｇの（プロテインＡカラム精製された）複合体４５ａ及び＊複合体４５ａ（プロテインＡカラム素通り画分）のカプランマイヤー生存率曲線を示すグラフである。この試験は実施例２１５に記載のとおりに実施した。 対照、ならびに０．１ｍｇ／ｋｇの複合体４５ａ及び４６のカプランマイヤー生存率曲線を示すグラフである。この試験は実施例２１６に記載のとおりに実施した。
本開示は、ウイルス感染症（例えばインフルエンザウイルス感染症）を治療するための複合体、組成物及び方法を特徴とする。本明細書に開示される複合体は、Ｆｃ単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに複合した、ウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤（例えば、ザナミビル、ペラミビル、またはその類縁体）の単量体または二量体を含む。複合体中のノイラミニダーゼ阻害剤（例えば、ザナミビル、ペラミビル、またはその類縁体）はウイルス粒子の表面上のノイラミニダーゼを指向する。複合体中のＦｃ単量体またはＦｃドメインは免疫細胞上、例えば好中球上のＦｃγＲ（例えば、ＦｃＲｎ、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃγＲＩＩＩｂ）に結合して食作用及びエフェクター機能、例えば抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を活性化させ、かくして、免疫細胞によるウイルス粒子の貪食及び破壊が引き起こされ、複合体の抗ウイルス活性がさらに増強される。アルブミンまたはアルブミン結合ペプチドは、例えばアルブミンとリサイクリング胎児性Ｆｃ受容体との結合によって、複合体の半減期を延はし得る。そのような組成物は、ウイルス成長を阻害する方法、ならびにウイルス感染症、例えば、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス及びＣ型インフルエンザウイルスに起因するものを治療する方法において有用である。
Ｉ．ウイルス感染症
本明細書に記載の化合物及び医薬組成物（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ））は、ウイルス感染症（例えばインフルエンザウイルス感染症、例えば、Ａ型、Ｂ型、Ｃ型インフルエンザ、またはパラインフルエンザ）を治療するために使用され得る。
ウイルス感染症とは、宿主生物（例えばヒト対象）における病原となるウイルス（例えばインフルエンザウイルス）成長を意味する。ウイルス感染症は、ウイルス集団（複数可）の存在が宿主の体に損傷を与えている任意の状況であり得る。したがって、過剰な量のウイルス集団が対象の体の中もしくは上に存在する場合、またはウイルス集団（複数可）の存在が対象の細胞もしくは他の組織に損傷を与えている場合、対象はウイルス感染症に罹患している。
インフルエンザは、「インフル」として一般に知られているが、インフルエンザウイルスによって引き起こされる感染性疾患である。症候は軽度～重度であり得る。最も一般的な症候としては、高熱、鼻水、喉の痛み、筋肉痛、頭痛、咳及び疲労感が挙げられる。これらの症候は典型的にはウイルスへの曝露の２日後から始まり、ほとんどのものは持続しても１週間未満である。しかしながら、咳は２週間よりも長く持続することがある。小児では吐き気及び嘔吐があり得るが、成人ではこれらはあまり一般的でない。インフルエンザの合併症には、ウイルス性肺炎、二次性細菌性肺炎、副鼻腔感染症、及び健康問題既往、例えば喘息既往もしくは心不全既往の悪化が含まれ得る。重度の合併症は、免疫系が弱っている対象、例えば、若年者、老齢者、免疫系を弱める病気を有する者、及び治療処置を受けている結果として免疫系が弱っている者において起こり得る。
インフルエンザに罹患している対象は、続発感染症（例えば、続発細菌、ウイルスまたは真菌感染症）、特に、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、及び／またはＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅなどの細菌感染症を発症する高いリスクも有している。細菌性続発感染症はインフルエンザ感染症の罹患率及び死亡率をさらに上昇させる。
３種類のインフルエンザウイルス、すなわちＡ型、Ｂ型及びＣ型がヒト対象を侵す。大抵、ウイルスは咳またはくしゃみによって空気を介して拡散される。これは、大概は比較的短い距離にわたって起こると考えられている。それは、ウイルスで汚染された表面に触ってその後に口または目を触ることによっても拡散され得る。人は症候を示す前及び間の両方において他人への感染力を有し得る。感染は、ウイルスの存在について喉、痰または鼻を検査することによって確認され得る。複数の高速検査が利用可能であるが、結果が陰性であってもなお感染している可能性がある。インフルエンザ感染の診断にはウイルスのＲＮＡを検出するポリメラーゼ連鎖反応の一種が用いられ得る。
ＩＩ．本開示の複合体
本明細書では、ウイルス感染症（例えばインフルエンザ感染症）の治療に有用な合成複合体を提供する。本明細書に開示される複合体は、１つ以上の単量体ノイラミニダーゼ阻害剤に、または１つ以上の、２つのノイラミニダーゼ阻害剤の二量体（例えば、ザナミビル、スルホザナミビル、ペラミビル、Ａ－３１５６７５、またはその類縁体から選択されるノイラミニダーゼ阻害剤）に複合した、Ｆｃドメインまたはアルブミンタンパク質を含む。２つのノイラミニダーゼ阻害剤の二量体は、ノイラミニダーゼ阻害剤（例えば、式（Ａ－Ｉ）、（Ａ－ＩＩ）、（Ａ－ＩＩＩ）、（Ａ－ＩＶ）、（Ａ－Ｖ）、（Ａ－ＶＩ）、（Ａ－ＶＩＩ）、（Ａ－ＶＩＩＩ）、（Ａ－ＩＸ）、（Ａ－Ｘ）、（Ａ－ＸＩ）、（Ａ－ＸＩＩ）または（Ａ－ＸＩＩＩ）の第１ノイラミニダーゼ阻害剤）、及び第２ノイラミニダーゼ阻害剤（例えば、式（Ａ－Ｉ）、（Ａ－ＩＩ）、（Ａ－ＩＩＩ）、（Ａ－ＩＶ）、（Ａ－Ｖ）、（Ａ－ＶＩ）、（Ａ－ＶＩＩ）、（Ａ－ＶＩＩＩ）、（Ａ－ＩＸ）、（Ａ－Ｘ）、（Ａ－ＸＩ）、（Ａ－ＸＩＩ）または（Ａ－ＸＩＩＩ）の第２ノイラミニダーゼ阻害剤）を含む。第１及び第２ノイラミニダーゼ阻害剤はリンカーによって互いに繋がっている。
理論に拘泥するものではないが、いくつかの態様において、本明細書に記載の複合体は、複合体中のノイラミニダーゼ阻害剤部分とウイルス粒子の表面上のタンパク質との相互作用によってウイルス粒子の表面に結合する（例えば、インフルエンザウイルス粒子の表面上のウイルス・ノイラミニダーゼ酵素に結合する）。ノイラミニダーゼ阻害剤は、感染宿主細胞の表面上のグリカン構造からシアル酸、すなわち末端ノイラミン酸残基を切り離して子孫ウイルスを遊離させ宿主細胞から周囲の未感染細胞へのウイルスの拡散を可能にするエンベロープ糖タンパク質であるノイラミニダーゼを妨害する。
本発明の複合体は、Ｆｃドメイン、Ｆｃ単量体またはＦｃ結合ペプチドに複合したノイラミニダーゼ阻害剤単量体及び二量体を含む。本明細書に記載の複合体の中のＦｃドメインは免疫細胞上のＦｃγＲ（例えば、ＦｃＲｎ、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃγＲＩＩＩｂ）に結合する。本明細書に記載の複合体の中のＦｃドメインと、免疫細胞上のＦｃγＲとの結合は食作用及びエフェクター機能、例えば抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を活性化させ、かくして、免疫細胞によるウイルス粒子の貪食及び破壊が引き起こされ、複合体の抗ウイルス活性がさらに増強される。
本発明の複合体は、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに複合したノイラミニダーゼ阻害剤単量体及び二量体を含む。アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドは、例えばアルブミンとリサイクリング胎児性Ｆｃ受容体との結合によって、複合体の半減期を延ばし得る。
本明細書に提供される複合体は、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つで表される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体は、Ｆｃドメインまたはアルブミンタンパク質に複合した１つ以上のノイラミニダーゼ阻害剤の単量体を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体は、Ｆｃドメインまたはアルブミンタンパク質に複合した１つ以上のノイラミニダーゼ阻害剤の二量体を含む。いくつかの実施形態では、ｎが２である場合、Ｅ（Ｆｃドメイン単量体）は二量体化してＦｃドメインを形成する。
本明細書に記載の複合体は、当技術分野の利用可能な化学合成技術を用いて合成され得る。官能基が複合体形成で利用可能でない場合には、分子を当技術分野でよく知られている従来の化学合成技術を用いて誘導体化してもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体は１つ以上のキラル中心を含有する。複合体は、単離された各立体異性体、及びラセミ混合物を含めた様々な度合いのキラル純度の立体異性体の混合物を含む。それはまた、形成され得る様々なジアステレオマー、エナンチオマー及び互変異性体も包含する。
ノイラミニダーゼ阻害剤
本明細書に記載の複合体の構成要素は、インフルエンザウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤部分である。インフルエンザウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤は、感染宿主細胞の表面上のグリカン構造からシアル酸、すなわち末端ノイラミン酸残基を切り離して子孫ウイルスを遊離させ宿主細胞から周囲の未感染細胞へのウイルスの拡散を可能にするエンベロープ糖タンパク質であるノイラミニダーゼを妨害する。インフルエンザウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤の例としては、ザナミビル（リレンザ）、スルホザナミビル、Ａ－３１５６７５、及びペラミビルが挙げられる。加えて、ザナミビル、スルホザナミビル、Ａ－３１５６７５及びペラミビルの誘導体、例えば文献中に見出されるものは、ノイラミニダーゼ阻害剤活性を有し、本明細書の化合物のノイラミニダーゼ阻害剤部分として有用である（例えば、Ｈａｄｈａｚｉ ｅｔ ａｌ．Ａ ｓｕｌｆｏｚａｎａｍｉｖｉｒ ａｎａｌｏｇｕｅ ｈａｓ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ａｃｔｉｖｉｔｙ．ＣｈｅｍＭｅｄＣｈｅｍ Ｃｏｍｍ．１３：７８５－７８９（２０１８）、及びＩｎ ｖｉｔｒｏ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ａ－３１５６７５，ａ ｈｉｇｈｌｙ ｐｏｔｅｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ Ａ ａｎｄ Ｂ ｓｔｒａｉｎ ｏｆ ｉｎｆｌｕｅｎｚｅ ｖｉｒｕｓ ｎｅｕｒａｍｉｎｉｄａｓｅｓ ａｎｄ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ４６（４）：１０１４－１０２１（２００２）を参照されたい）。
本明細書に記載の複合体は２種類に分かれる：（１）Ｆｃドメインまたはアルブミンタンパク質にノイラミニダーゼ阻害剤の二量体が１つ以上複合したもの、及び（２）Ｆｃドメインまたはアルブミンタンパク質にノイラミニダーゼ阻害剤の単量体が１つ以上複合したもの。ノイラミニダーゼ阻害剤の二量体は、リンカー、例えば本明細書に記載のリンカーによって互いに繋がっている。
本発明のウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤には、ザナミビル、スルホザナミビル、Ａ－３１５６７５、ペラミビル、及びその類縁体、例えば、式（Ａ－Ｉ）～（Ａ－ＸＩＩＩ）：



Figure 2022546609000311
 〔式中、Ｒ１は、－ＯＨ、－ＮＨ２、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、及び－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨＲ６から選択され、Ｒ２及びＲ３は各々独立して、－Ｈ、－ＯＨ、－Ｆ、－Ｃｌ及び－Ｂｒから選択され、Ｒ４は、－ＣＯ２Ｈ、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２、－ＳＯ３Ｈから選択され、Ｒ５は、－ＣＯＣＨ３、－ＣＯＣＦ３、－ＳＯ２ＣＨ３から選択され、Ｘは、－Ｏ－、及び－Ｓ－から選択され、Ｙは、
Figure 2022546609000312
 から選択され、Ｒ６は、

Figure 2022546609000313
 から選択され、Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ２０アルキル、Ｃ３－Ｃ２０シクロアルキル、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択され、Ｒ８は、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択され、Ｒ９は、－Ｈ、ハロゲン（例えば、Ｃｌ、ＦまたはＢｒ）、－ＯＲ１０、－ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ７、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキル、Ｃ３－Ｃ２０シクロアルキル、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択され、Ｒ１０は、Ｃ１－Ｃ２０アルキル、Ｃ３－Ｃ２０シクロアルキル、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択される〕
のウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤が含まれる。式（Ａ－Ｉ）、（Ａ－ＩＩ）、（Ａ－ＩＩＩ）、（Ａ－ＩＶ）、（Ａ－Ｖ）、（Ａ－ＶＩ）、（Ａ－ＶＩＩ）、（Ａ－ＶＩＩＩ）、（Ａ－ＩＸ）、（Ａ－Ｘ）、（Ａ－ＸＩ）、（Ａ－ＸＩＩ）または（Ａ－ＸＩＩＩ）のウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤は、Ｙを介して複合体に共有結合しているのが最も好ましい。
好ましくは、ウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤は、ザナミビル、スルホザナミビル、ペラミビルまたはＡ－３１５６７５：
Figure 2022546609000314
 から選択される。
Ｆｃドメインまたはアルブミンタンパク質にノイラミニダーゼ阻害剤の二量体が繋げられている複合体
本明細書に記載の複合体は、１つ以上のノイラミニダーゼ阻害剤の二量体に共有結合で繋げられた、Ｆｃドメイン、Ｆｃ単量体、Ｆｃ結合ペプチド、及びアルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドを含む。２つのノイラミニダーゼ阻害剤の二量体は、第１ノイラミニダーゼ阻害剤（例えば、式（Ａ－Ｉ）～（Ａ－ＸＩＩＩ）の第１ウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤）、及び第２ノイラミニダーゼ阻害剤（例えば、式（Ａ－Ｉ）～（Ａ－ＸＩＩＩ）の第２ウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤）を含む。第１及び第２ノイラミニダーゼ阻害剤は、リンカー、例えば本明細書に記載のリンカーによって互いに繋がっている。ノイラミニダーゼ阻害剤の二量体のいくつかの実施形態では、第１及び第２ノイラミニダーゼ阻害剤は同じである。いくつかの実施形態では、第１及び第２ノイラミニダーゼ阻害剤は異なっている。
ノイラミニダーゼ阻害剤の二量体には、ザナミビルまたはその類縁体（例えば、（Ａ－Ｉ）、（Ａ－ＩＩ）、（Ａ－ＶＩ）、（Ａ－ＶＩＩ）、（Ａ－ＶＩＩＩ）、（Ａ－ＩＸ）、（Ａ－Ｘ）または（Ａ－ＸＩＩＩ））のホモ二量体が含まれる。例えば、本発明のノイラミニダーゼ阻害剤二量体には、各Ａ１及び各Ａ２が、（Ａ－Ｉ）、（Ａ－ＩＩ）、（Ａ－ＶＩ）、（Ａ－ＶＩＩ）、（Ａ－ＶＩＩＩ）、（Ａ－ＩＸ）、（Ａ－Ｘ）及び（Ａ－ＸＩＩＩ）から選択されるものである、構造Ａ１－Ｌ－Ａ２を有する二量体が含まれる。
ノイラミニダーゼ阻害剤の二量体には、ペラミビルまたはその類縁体（例えば、（Ａ－ＩＩＩ）、（Ａ－ＩＶ）または（Ａ－Ｖ））のホモ二量体が含まれる。例えば、本発明のノイラミニダーゼ阻害剤二量体には、各Ａ１及び各Ａ２を（Ａ－ＩＩＩ）、（Ａ－ＩＶ）及び（Ａ－Ｖ）から選択されるものとする構造Ａ１－Ｌ－Ａ２を有する二量体が含まれる。
ノイラミニダーゼ阻害剤の二量体には、ザナミビルまたはその類縁体とその類縁体のペラミビル（ｐｅｒａｍｉｖｉｒ ｏｆ ａｎａｌｏｇｓ ｔｈｅｒｅｏｆ）（例えば（Ａ－Ｉ）～（Ａ－ＸＩＩＩ））を含んだヘテロ二量体が含まれる。例えば、本発明のノイラミニダーゼ阻害剤二量体には、各Ａ１を（Ａ－Ｉ）、（Ａ－ＩＩ）、（Ａ－ＶＩ）、（Ａ－ＶＩＩ）、（Ａ－ＶＩＩＩ）、（Ａ－ＩＸ）、（Ａ－Ｘ）及び（Ａ－ＸＩＩＩ）から選択されるものとし、各Ａ２を（Ａ－ＩＩＩ）、（Ａ－ＩＶ）及び（Ａ－Ｖ）から選択されるものとする、構造Ａ１－Ｌ－Ａ２を有する二量体が含まれる。
いくつかの実施形態では、Ｔが１よりも大きい（例えばＴが、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）場合、各Ａ１－Ｌ－Ａ２は独立して選択され得る（例えば、本明細書に記載のＡ１－Ｌ－Ａ２構造のいずれかから独立して選択され得る）。いくつかの実施形態では、Ｅは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれより多くの異なるＡ１－Ｌ－Ａ２部分と複合し得る。いくつかの実施形態では、Ｅは、第１Ａ１－Ｌ－Ａ２部分及び第２Ａ１－Ｌ－Ａ２部分と複合している。いくつかの実施形態では、第１Ａ１－Ｌ－Ａ２部分のＡ１及びＡ２は、式（Ａ－ＩＩＩ）～（Ａ－Ｖ）：
Figure 2022546609000315
 のいずれか１つから独立して選択され、第２Ａ１－Ｌ－Ａ２部分のＡ１及びＡ２は、式（Ａ－Ｉ）、（Ａ－ＩＩ）、（Ａ－ＶＩ）、（Ａ－ＶＩＩ）、（Ａ－ＶＩＩＩ）、（Ａ－ＩＸ）、（Ａ－Ｘ）または（Ａ－ＸＩＩＩ）：
Figure 2022546609000316
 のいずれか１つから独立して選択される。
いくつかの実施形態では、第１Ａ１－Ｌ－Ａ２部分はＥのリジン残基（例えばＥの表面露出リジン残基の窒素原子）と特異的に複合しており、第２Ａ１－Ｌ－Ａ２部分はＥのシステイン残基（例えばＥの表面露出システイン残基の硫黄原子）と特異的に複合している。いくつかの実施形態では、第１Ａ１－Ｌ－Ａ２部分はＥのシステイン残基（例えばＥの表面露出システイン残基の硫黄原子）と特異的に複合しており、第２Ａ１－Ｌ－Ａ２部分はＥのリジン残基（例えばＥの表面露出リジン残基の窒素原子）と特異的に複合している。
いくつかの実施形態では、本開示は、以下の式で表される複合体またはその薬学的に許容される塩を提供する：


Figure 2022546609000317
Figure 2022546609000318
Figure 2022546609000319
Figure 2022546609000320
Figure 2022546609000321
Figure 2022546609000322
Figure 2022546609000323
Figure 2022546609000324
Figure 2022546609000325
Figure 2022546609000326
Figure 2022546609000327
Figure 2022546609000328
Figure 2022546609000329
Figure 2022546609000330
Figure 2022546609000331
Figure 2022546609000332
Figure 2022546609000333
Figure 2022546609000334
Figure 2022546609000335
Figure 2022546609000336
Figure 2022546609000337
Figure 2022546609000338
Figure 2022546609000339
Figure 2022546609000340
Figure 2022546609000341
またはその薬学的に許容される塩。
本明細書に記載の複合体において、Ｅに連結された波線は、Ｆｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドにノイラミニダーゼ阻害剤の二量体が１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０個）結合し得ることを表す。いくつかの実施形態では、ｎが１である場合、Ｆｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドにノイラミニダーゼ阻害剤の二量体が１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個）結合し得る。いくつかの実施形態では、ｎが２である場合、Ｆｃドメインにノイラミニダーゼ阻害剤の二量体が１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０個）結合し得る。本明細書に記載の複合体の中の波線は、１つ以上のノイラミニダーゼ阻害剤の二量体とＦｃドメインまたはアルブミンタンパク質の中の原子との間の単一の結合とみなされるべきでない。いくつかの実施形態では、Ｔが１である場合、Ｆｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドの中の原子にノイラミニダーゼ阻害剤の二量体が１つ結合し得る。いくつかの実施形態では、Ｔが２である場合、Ｆｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドの中の原子にノイラミニダーゼ阻害剤の二量体が２つ結合し得る。
本明細書中でさらに説明されるように、本明細書に記載の複合体の中のリンカー（例えばＬまたはＬ’）は分岐構造であってもよい。本明細書中でさらに説明されるように、本明細書に記載の複合体の中のリンカー（例えばＬまたはＬ’）は、多価構造、例えば、それぞれ２本または３本のアームを有する二価または三価構造であってもよい。リンカーが３本のアームを有するときのいくつかの実施形態では、アームのうち２本は第１及び第２ノイラミニダーゼ阻害剤に結合し得、第３のアームはＦｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに結合し得る。
上記式で表される、１つ以上のノイラミニダーゼ阻害剤の二量体に共有結合で繋げられたＦｃドメインを有する複合体において、ｎが２である場合、２つのＦｃドメイン単量体（各Ｆｃドメイン単量体はＥで表される）が二量体化してＦｃドメインを形成する。
Ｆｃドメインまたはアルブミンタンパク質にノイラミニダーゼ阻害剤の単量体が繋げられている複合体
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体は、１つ以上のノイラミニダーゼ阻害剤の単量体に共有結合で繋げられた、Ｆｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドを含む。Ｆｃドメイン単量体またはアルブミンタンパク質と、１つ以上のノイラミニダーゼ阻害剤の単量体との複合体は、リンカー、例えば本明細書に記載のリンカーのいずれかを介してノイラミニダーゼ阻害剤の単量体の各々にＦｃドメインまたはアルブミンタンパク質を繋げることによって形成され得る。
本明細書に記載の１つ以上のノイラミニダーゼ阻害剤の単量体に共有結合で繋げられたＦｃドメインまたはアルブミンタンパク質を有する複合体において、Ｅに連結された波線は、Ｆｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドにノイラミニダーゼ阻害剤の単量体が１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０個）結合し得ることを表す。いくつかの実施形態では、ｎが１である場合、Ｆｃドメイン単量体またはアルブミンタンパク質にノイラミニダーゼ阻害剤の単量体が１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個）結合し得る。いくつかの実施形態では、ｎが２である場合、Ｆｃドメインにノイラミニダーゼ阻害剤の単量体が１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０個）結合し得る。本明細書に記載の複合体の中の波線は、１つ以上のノイラミニダーゼ阻害剤の単量体とＦｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドの中の原子との間の単一の結合とみなされるべきでない。いくつかの実施形態では、Ｔが１である場合、Ｆｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドの中の原子にノイラミニダーゼ阻害剤の単量体が１つ結合し得る。いくつかの実施形態では、Ｔが２である場合、Ｆｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドの中の原子にノイラミニダーゼ阻害剤の単量体が２つ結合し得る。
いくつかの実施形態では、Ｔが１より大きい（例えばＴが、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）場合、各Ａ１－Ｌは独立して選択され得る（例えば、本明細書に記載のＡ１－Ｌ構造のいずれかから独立して選択され得る）。いくつかの実施形態では、Ｅは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれより多くの異なるＡ１－Ｌ部分と複合し得る。いくつかの実施形態では、Ｅは第１Ａ１－Ｌ部分及び第２Ａ１－Ｌ部分と複合している。いくつかの実施形態では、第１Ａ１－Ｌ部分のＡ１は式（Ａ－ＩＩＩ）～（Ａ－Ｖ）：



Figure 2022546609000342
 のいずれか１つから選択され、第２Ａ１－Ｌ部分のＡ１は、式（Ａ－Ｉ）、（Ａ－ＩＩ）、（Ａ－ＶＩ）、（Ａ－ＶＩＩ）、（Ａ－ＶＩＩＩ）、（Ａ－ＩＸ）、（Ａ－Ｘ）または（Ａ－ＸＩＩＩ）：
Figure 2022546609000343
 のいずれか１つから選択される。
いくつかの実施形態では、第１Ａ１－Ｌ部分はＥのリジン残基（例えば、Ｅの表面露出リジン残基の窒素原子）と特異的に複合しており、第２Ａ１－Ｌ部分はＥのシステイン残基（例えば、Ｅの表面露出システイン残基の硫黄原子）と特異的に複合している。いくつかの実施形態では、第１Ａ１－Ｌ部分はＥのシステイン残基（例えば、Ｅの表面露出システイン残基の硫黄原子）と特異的に複合しており、第２Ａ１－Ｌ部分はＥのリジン残基（例えば、Ｅの表面露出リジン残基の窒素原子）と特異的に複合している。
本明細書にさらに記載されるとおり、本明細書に記載の１つ以上のノイラミニダーゼ阻害剤の単量体に共有結合で繋げられたＦｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドを有する複合体の中のリンカー（例えばＬまたはＬ’）は、２本のアームを有する二価構造であり得る。二価リンカー中の片方のアームはノイラミニダーゼ阻害剤の単量体に結合し得、もう片方のアームは、Ｆｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに結合し得る。
いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される１つ以上のノイラミニダーゼ阻害剤の単量体に共有結合で繋げられたＦｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドを含有する複合体は、以下の式：


Figure 2022546609000344
Figure 2022546609000345
Figure 2022546609000346
Figure 2022546609000347
Figure 2022546609000348
Figure 2022546609000349
Figure 2022546609000350
Figure 2022546609000351
Figure 2022546609000352
Figure 2022546609000353
Figure 2022546609000354
Figure 2022546609000355
Figure 2022546609000356
Figure 2022546609000357
Figure 2022546609000358
Figure 2022546609000359
Figure 2022546609000360
Figure 2022546609000361
Figure 2022546609000362
Figure 2022546609000363
Figure 2022546609000364
Figure 2022546609000365
Figure 2022546609000366
Figure 2022546609000367
Figure 2022546609000368
のいずれか１つで表され、またはその薬学的に許容される塩である。
上記式で表される、１つ以上のノイラミニダーゼ阻害剤の単量体に共有結合で繋げられたＦｃドメインを有する複合体において、ｎが２である場合、２つのＦｃドメイン単量体（各Ｆｃドメイン単量体はＥで表される）は二量体化してＦｃドメインを形成する。
ザナミビルまたはその類縁体を含む複合体の位置異性体
複合体（例えば本明細書中に詳しく記載される単量体型または二量体型複合体）は、混合物または位置異性体として製造され得る。合成の容易さ、熱安定性、酸化安定性、薬物動態（例えば代謝安定性または生物学的利用能）、エフェクター結合性または治療有効性などの理由により、特定の位置異性体または位置異性体の混合物が好まれ得る。
いくつかの実施形態では、本発明の複合体は、ザナミビルまたはその類縁体（例えば、（Ａ－Ｉ）、（Ａ－ＩＩ）、（Ａ－ＶＩ）、（Ａ－ＶＩＩ）、（Ａ－ＶＩＩＩ）、（Ａ－ＩＸ）、（Ａ－Ｘ）または（Ａ－ＸＩＩＩ）のいずれか）を含む。ザナミビルまたはその類縁体は、例えばＣ７位（例えば、（Ａ－Ｉ）、（Ａ－ＩＩ）、（Ａ－Ｘ）または（Ａ－ＸＩＩＩ）を参照されたい）またはＣ９位（例えば（Ａ－ＶＩ）または（Ａ－ＶＩＩ）を参照されたい）を介して、Ｆｃドメインまたはアルブミンタンパク質に（例えばリンカーによって）複合され得る：
Figure 2022546609000369
Figure 2022546609000370
本開示は単量体型複合体の集団（例えば式（Ｍ－Ｉ）の複合体の集団）を含み、複合体の当該集団は、本明細書に記載の単量体型複合体のいずれか、及びその対応する位置異性体の１つ以上を含む。例えば、複合体の集団は、（１）ザナミビルまたはその類縁体がＣ７位でＦｃドメインまたはアルブミンタンパク質に（例えばリンカーによって）複合したもの、及び（２）ザナミビルまたはその類縁体がＣ９位でＦｃドメインまたはアルブミンタンパク質に（例えばリンカーによって）複合したものを含み得る。
単量体型複合体の集団は、Ｃ９連結複合体に対するＣ７連結複合体の指定の比率を有し得る。例えば、複合体の集団は、実質的に１００％のＣ７連結複合体及び実質的に０％のＣ９連結複合体を有し得る。複合体の集団は、約９５％のＣ７連結複合体及び約５％のＣ９連結複合体を有し得る。複合体の集団は、約９０％のＣ７連結複合体及び約１０％のＣ９連結複合体を有し得る。複合体の集団は、約８５％のＣ７連結複合体及び約１５％のＣ９連結複合体を有し得る。複合体の集団は、約８０％のＣ７連結複合体及び約２０％のＣ９連結複合体を有し得る。複合体の集団は、約７５％のＣ７連結複合体及び約２５％のＣ９連結複合体を有し得る。複合体の集団は、約７０％のＣ７連結複合体及び約３０％のＣ９連結複合体を有し得る。複合体の集団は、約６５％のＣ７連結複合体及び約３５％のＣ９連結複合体を有し得る。複合体の集団は、約６０％のＣ７連結複合体及び約４０％のＣ９連結複合体を有し得る。複合体の集団は、約５５％のＣ７連結複合体及び約４５％のＣ９連結複合体を有し得る。複合体の集団は、約５０％のＣ７連結複合体及び約５０％のＣ９連結複合体を有し得る。複合体の集団は、約４５％のＣ７連結複合体及び約５５％のＣ９連結複合体を有し得る。複合体の集団は、約４０％のＣ７連結複合体及び約６０％のＣ９連結複合体を有し得る。複合体の集団は、約３５％のＣ７連結複合体及び約６５％のＣ９連結複合体を有し得る。複合体の集団は、約３０％のＣ７連結複合体及び約７０％のＣ９連結複合体を有し得る。複合体の集団は、約２５％のＣ７連結複合体及び約７５％のＣ９連結複合体を有し得る。複合体の集団は、約２０％のＣ７連結複合体及び約８０％のＣ９連結複合体を有し得る。複合体の集団は、約１５％のＣ７連結複合体及び約８５％のＣ９連結複合体を有し得る。複合体の集団は、約１０％のＣ７連結複合体及び約９０％のＣ９連結複合体を有し得る。複合体の集団は、実質的に０％のＣ７連結複合体及び実質的に１００％のＣ９連結複合体を有し得る。
複合体の集団は、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６０％、６５％、６０％、５５％または５０％より多くのＣ７連結複合体を有し得る。
複合体の集団は、５０％、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％または１％より少ないＣ９連結複合体を有し得る。
本開示はまた、二量体型複合体の集団（例えば、式（Ｄ－Ｉ）の複合体の集団）も含み、複合体の当該集団は、本明細書に記載の二量体型複合体のいずれか、及びその対応する位置異性体の１つ以上を含む。例えば、複合体の集団は、（１）Ｃ７－Ｃ７二量体（例えば、二量体の両方のザナミビルまたはその類縁体の部分がそれらの各Ｃ７位でＦｃドメインまたはアルブミンタンパク質に（例えばリンカーによって）複合している）、（２）、Ｃ９－Ｃ９二量体（例えば、二量体の両方のザナミビルまたはその類縁体の部分がそれらの各Ｃ９位でＦｃドメインまたはアルブミンタンパク質に（例えばリンカーによって）複合している）、及び／または（３）Ｃ７－Ｃ７二量体（例えば、片方のザナミビルまたはその類縁体の部分がそのＣ７位でＦｃドメインまたはアルブミンタンパク質に（例えばリンカーによって）複合しており、もう片方のザナミビルまたはその類縁体の部分がそのＣ９位でＦｃドメインまたはアルブミンタンパク質に（例えばリンカーによって）複合している）を含み得る。
二量体型複合体の集団は、Ｃ７－Ｃ９連結複合体、Ｃ９－Ｃ９連結複合体に対するＣ７－Ｃ７連結複合体の指定の比率を有し得る。例えば、複合体の集団は、実質的に１００％のＣ７－Ｃ７連結複合体、及び実質的に０％のＣ７－Ｃ９またはＣ９－Ｃ９連結複合体を有し得る。複合体の集団は、実質的に１００％のＣ９－Ｃ９連結複合体、及び実質的に０％のＣ７－Ｃ７またはＣ７－Ｃ９連結複合体を有し得る。複合体の集団は、実質的に１００％のＣ７－Ｃ９連結複合体、及び実質的に０％のＣ７－Ｃ７またはＣ９－Ｃ９連結複合体を有し得る。
複合体の集団は、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６０％、６５％、６０％、５５％または５０％より多いＣ７－Ｃ７連結複合体を有し得る。
複合体の集団は、５０％、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％または１％より少ないＣ９－Ｃ９連結複合体を有し得る。
複合体の集団は、５０％、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％または１％より少ないＣ７－Ｃ９連結複合体を有し得る。
位置異性体の上記集団のいずれかにおいて、（例えば（Ｍ－Ｉ）または（Ｄ－Ｉ）の）Ａ１及び／またはＡ２は、ザナミビルまたは本明細書に記載のザナミビル類縁体のいずれか（例えば、（Ａ－Ｉ）、（Ａ－ＩＩ）、（Ａ－ＶＩ）、（Ａ－ＶＩＩ）、（Ａ－ＶＩＩＩ）、（Ａ－ＩＸ）、（Ａ－Ｘ）または（Ａ－ＸＩＩＩ）のいずれか）から選択され得る。詳しくは、Ｃ７連結ザナミビルまたはその類縁体は、（Ａ－Ｉ）、（Ａ－ＩＩ）、（Ａ－Ｘ）及び（Ａ－ＸＩＩＩ）で表され、Ｃ９連結ザナミビルまたはその類縁体は（Ａ－ＶＩ）または（Ａ－ＶＩＩ）で表される。位置異性体、例えば、Ｃ７、Ｃ９、Ｃ７－Ｃ７、Ｃ７－Ｃ９、及びＣ９－Ｃ９連結位置異性体を調製する例示的方法は、実施例１００～１０３、１２３及び１２４に記載されている。場合によっては、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上、または実質的に１００％のＣ７連結単量体型複合体またはＣ７－Ｃ７連結二量体型複合体を有するのが好ましいことがある。これらの場合、例えば実施例１０３及び実施例１２３に記載の方法のような、実質的にＣ７連結単量体型またはＣ７－Ｃ７連結二量体型の中間体を形成する方法で中間体を調製するのが好ましいことがある。実施例１０３の方法は、主としてＣ７またはＣ７－Ｃ７連結中間体を得るために用いられる方法の例であり、本明細書に記載の任意の中間体を調製するために用いられ得る。位置Ｃ９に修飾（例えばＯＨ以外の置換基）を有するザナミビル類縁体（例えば（Ａ－ＸＩＩＩ）で表されるザナミビル類縁体）は、Ｃ７連結ザナミビルからＣ９連結ザナミビルへの転位を妨げることによってＣ９連結ザナミビルに対するＣ７連結ザナミビルの比率を高め得る。例示的なＣ９修飾ザナミビル類縁体は本明細書に記載されている（例えば、Ｄ－ＸＩまたはＭ－ＸＩで表される複合体、例えば複合体４７（Ｉｎｔ－９１）または複合体４８（Ｉｎｔ－９２）を参照されたい）。
好ましい実施形態では、複合体は、式（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの複合体であり、Ａ１及び／またはＡ２が式（Ａ－Ｉ）、（Ａ－ＩＩ）、（Ａ－Ｘ）または（Ａ－ＸＩＩＩ）で表され、Ｙが、

Figure 2022546609000371
 であり、式中、Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ２０アルキル、Ｃ３－Ｃ２０シクロアルキル、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択される。好ましい実施形態では、Ａ１及び／またはＡ２は式（Ａ－Ｉ）（例えばザナミビル）で表される。好ましい実施形態では、Ｒ７はＣ１－Ｃ２０アルキル（例えば、－ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）である。そのような複合体は、Ｃ７リンケージの安定性の向上を呈してＣ７からＣ９への転位がより少なくなることが示された（例えば、Ｄ－ＩＩ－６またはＤ－ＩＩ－７で表される複合体、例えば複合体４５（Ｉｎｔ－８３）または複合体４６（Ｉｎｔ－８３）を参照されたい）。したがって、得られる生成物は、より均質であり有効性の向上を呈すると予測される。好ましい複合体は、より均質であり、Ｃ７連結ザナミビルの割合が高くなっており（例えば、実質的に純粋であり、例えば、純度が９５％超、９６％超、９７％超、９８％超または９９％超であり）、インフルエンザに対する有効性を保持している。
ＩＩＩ．Ｆｃドメイン単量体及びＦｃドメイン
Ｆｃドメイン単量体は、ヒンジドメイン、ＣＨ２抗体定常ドメイン、及びＣＨ３抗体定常ドメインを含む。Ｆｃドメイン単量体は、免疫グロブリン抗体アイソタイプＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＡまたはＩｇＤのものであり得る。Ｆｃドメイン単量体は、任意の免疫グロブリン抗体アイソタイプ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）のものであってもよい。Ｆｃドメイン単量体は、任意の免疫グロブリン抗体アロタイプ（例えば、ＩＧＨＧ１＊０１（すなわちＧ１ｍ（ｚａ））、ＩＧＨＧ１＊０７（すなわちＧ１ｍ（ｚａｘ））、ＩＧＨＧ１＊０４（すなわちＧ１ｍ（ｚａｖ））、ＩＧＨＧ１＊０３（Ｇ１ｍ（ｆ））、ＩＧＨＧ１＊０８（すなわちＧ１ｍ（ｆａ））、ＩＧＨＧ２＊０１、ＩＧＨＧ２＊０６、ＩＧＨＧ２＊０２、ＩＧＨＧ３＊０１、ＩＧＨＧ３＊０５、ＩＧＨＧ３＊１０、ＩＧＨＧ３＊０４、ＩＧＨＧ３＊０９、ＩＧＨＧ３＊１１、ＩＧＨＧ３＊１２、ＩＧＨＧ３＊０６、ＩＧＨＧ３＊０７、ＩＧＨＧ３＊０８、ＩＧＨＧ３＊１３、ＩＧＨＧ３＊０３、ＩＧＨＧ３＊１４、ＩＧＨＧ３＊１５、ＩＧＨＧ３＊１６、ＩＧＨＧ３＊１７、ＩＧＨＧ３＊１８、ＩＧＨＧ３＊１９、ＩＧＨＧ２＊０４、ＩＧＨＧ４＊０１、ＩＧＨＧ４＊０３またはＩＧＨＧ４＊０２）のもの（例えば、Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．ＩｇＧ ｓｕｂｃｌａｓｓｅｓ ａｎｄ ａｌｌｏｔｙｐｅｓ：ｆｒｏｍ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｔｏ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．５（５２０）：１－１７（２０１４）に記載されているもの）であってもよい。Ｆｃドメイン単量体はまた、任意の種（例えば、ヒト、ネズミまたはマウス）のものであり得る。Ｆｃドメイン単量体の二量体は、白血球の表面上に位置する受容体であるＦｃ受容体に結合することができるＦｃドメインである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の中のＦｃドメイン単量体は、配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有するＦｃドメイン単量体と比較して１つ以上のアミノ酸置換、付加及び／または欠失を含有し得る。いくつかの実施形態では、Ｎ結合型グリコシル化を防ぐためにＦｃ本明細書に記載の複合体の中のＦｃドメイン単量体中のＡｓｎがＡｌａに置き換わっていてもよい（例えば、ＡｓｎからＡｌａへの置換を＊で標示した配列番号１２～１５を参照されたい）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の中のＦｃドメイン単量体はさらに、追加でＣｙｓ付加を含有していてもよい（例えば、Ｃｙｓ付加を＊で標示した配列番号９、１０及び１１を参照されたい）。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の中のＦｃドメイン単量体は、Ｆｃドメイン単量体のＮ末端またはＣ末端に結合した付加的部分、例えば、アルブミン結合ペプチド、精製ペプチド（例えば６ヒスチジンペプチド（ＨＨＨＨＨＨ（配列番号１４６））またはシグナル配列（例えばＩＬ２シグナル配列ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１４７））を含む。いくつかの実施形態では、複合体中のＦｃドメイン単量体は、いかなる抗体可変領域、例えば、ＶＨ、ＶＬ、相補性決定領域（ＣＤＲ）または超可変領域（ＨＶＲ）も含有しない。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の中のＦｃドメイン単量体は、以下に示す配列番号１～１３８のいずれか１つの配列と少なくとも９５％同一（例えば、９７％、９９％または９９．５％同一）である配列を有し得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の中のＦｃドメイン単量体は、以下に示す配列番号１～１３８のいずれか１つの配列を有し得る。
Figure 2022546609000372
Figure 2022546609000373
Figure 2022546609000374
Figure 2022546609000375
Figure 2022546609000376
Figure 2022546609000377
Figure 2022546609000378
Figure 2022546609000379
Figure 2022546609000380
Figure 2022546609000381
Figure 2022546609000382
Figure 2022546609000383
Figure 2022546609000384
Figure 2022546609000385
Figure 2022546609000386
Figure 2022546609000387
Figure 2022546609000388
Figure 2022546609000389
Figure 2022546609000390
Figure 2022546609000391
Figure 2022546609000392
Figure 2022546609000393
Figure 2022546609000394
Figure 2022546609000395
Figure 2022546609000396
Figure 2022546609000397
Figure 2022546609000398
Figure 2022546609000399
Figure 2022546609000400
本明細書中で定義されるとおり、Ｆｃドメインは、ＣＨ３抗体定常ドメイン間の相互作用、及び二量体化する２つのＦｃドメイン単量体のヒンジドメイン間に形成される１つ以上のジスルフィド結合によって二量体化する、２つのＦｃドメイン単量体を含む。Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体、例えば、Ｆｃガンマ受容体（すなわちＦｃγ受容体（ＦｃγＲ））、Ｆｃアルファ受容体（すなわちＦｃα受容体（ＦｃαＲ））、Ｆｃイプシロン受容体（すなわちＦｃε受容体（ＦｃεＲ））及び／または胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に結合する最小限の構造を形成する。いくつかの実施形態では、本発明のＦｃドメインは、Ｆｃγ受容体（例えば、ＦｃＲｎ、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩａ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩｂ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩａ（ＣＤ１６ａ）、ＦｃγＲＩＩＩｂ（ＣＤ１６ｂ））、及び／またはＦｃγＲＩＶ及び／または胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に結合する。
いくつかの実施形態では、本発明のＦｃドメイン単量体またはＦｃドメインは、非グリコシル化Ｆｃドメイン単量体またはＦｃドメイン（例えば、Ｆｃ受容体（例えばＦｃＲｎ）との係合を維持するＦｃドメイン単量体または及びＦｃドメインである。例えば、Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体との係合を維持する非グリコシル化ＩｇＧ１変異体（例えば、グリコシル化モチーフのＮ２９７及び／またはＴ２９９にアミノ酸置換を有するＩｇＧ１）である。例示的な非グリコシル化Ｆｃドメイン、及び非グリコシル化Ｆｃドメインを作る方法は、例えば本明細書に全体が援用されるＳａｚｉｎｓｋｙ Ｓ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｇ１ ｖａｒｉａｎｔｓ ｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅｌｙ ｅｎｇａｇｅ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ Ｆｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，ＰＮＡＳ，２００８，１０５（５１）：２０１６７－２０１７２に記載されているように、当技術分野において既知である。
いくつかの実施形態では、本発明のＦｃドメインまたはＦｃドメイン単量体は、胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する結合性を増強するように操作される。例えば、Ｆｃドメインは、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ（ＹＴＥ）に対応する三重突然変異を含み得る（例えば、ＹＴＥ突然変異を有するヒトまたはヒト化ＩｇＧ１などのＩｇＧ１、例えば、配列番号３３、配列番号３６、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５６または配列番号５７）。Ｆｃドメインは、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ（ＬＳ）に対応する二重突然変異体を含んでいてもよい（例えば、ＬＳ突然変異を有するヒトまたはヒト化ＩｇＧ１などのＩｇＧ１、例えば、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５４、配列番号５５または配列番号５９）。Ｆｃドメインは、Ｎ４３４Ｈに対応する単一の突然変異体を含んでいてもよい（例えば、Ｎ４３４Ｈ突然変異を有するヒトまたはヒト化ＩｇＧ１などのＩｇＧ１）。Ｆｃドメインは、Ｃ２２０Ｓに対応する単一の突然変異体を含んでいてもよい（例えば、Ｃ２２０Ｓ突然変異を有するヒトまたはヒト化ＩｇＧ１などのＩｇＧ１、例えば、配列番号３４、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４及び配列番号９５）。Ｆｃドメインは、Ｃ２２０Ｓ／Ｌ３０９Ｄ／Ｑ３１１Ｈ／Ｎ４３４Ｓ（ＣＤＨＳ）に対応する四重突然変異体（例えば、ＩｇＧ１、例えばＤＨＳ突然変異を有するヒトまたはヒト化ＩｇＧ１、例えば配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６及び配列番号１１７）を含み得る。Ｆｃドメインは、Ｌ３０９Ｄ／Ｑ３１１Ｈ／Ｎ４３４Ｓ（ＤＨＳ）に対応する三重突然変異体（例えば、ＩｇＧ１、例えばＤＨＳ突然変異を有するヒトまたはヒト化ＩｇＧ１、例えば配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７及び配列番号１３８）を含み得る。Ｆｃドメインは、ＦｃＲｎに対する結合性を増強する上記突然変異の１つ以上の組合せを含んでいてもよい。ＦｃＲｎに対する結合性が増強されるとＦｃドメイン含有複合体の半減期が延び得る。例えば、ＦｃＲｎに対する結合性を向上させる１つ以上のアミノ酸突然変異（例えば、ＹＴＥ突然変異、ＬＳ突然変異またはＮ４３４Ｈ突然変異）を組み込むと複合体の半減期は、ＦｃＲｎ結合性を増強する突然変異を有していない対応するＦｃドメインを有する複合体に比べて５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％．１００％、２００％、３００％、４００％、５００％またはそれより大きく延び得る。ＦｃＲＮに対する結合性が増強された例示的なＦｃドメイン、及びＦｃＲＮに対する結合性が増強されたＦｃドメインを作る方法は、例えば本明細書に全体が援用されるＭａｅｄａ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ＩｇＧ１ ｖａｒｉａｎｔ ｗｉｔｈ ｅｎｈａｎｃｅｄ ＦｃＲｎ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｎｄ ｗｉｔｈｏｕｔ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｏ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ｆａｃｔｏｒ ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｙ，ＭＡＢＳ，２０１７，９（５）：８４４－８５３に記載されているように、当技術分野において既知である。
本明細書中で使用する場合、（例えば特定の配列番号の）特定のアミノ酸残基「に対応する」アミノ酸は、（例えば特定の配列の）特定の残基と並ぶことが当業者によって理解されるであろう任意のアミノ酸残基を含むと理解されるべきである。例えば、アミノ酸配列の「対応する残基」を突然変異させることによって、配列番号１～１３８のいずれか１つが突然変異してＹＴＥ突然変異、ＬＳ突然変異及び／またはＮ４３４Ｈ突然変異を含んでいてもよい。
本明細書中で使用する場合、特定の配列番号の特定のシステイン残基「に対応する」硫黄原子は、特定の配列の特定のシステインと並ぶことが当業者によって理解されるであろう任意のシステイン残基の硫黄原子を含むと理解されるべきである。ヒトＩｇＧ１（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ０１８５７；配列番号１４２）と、ヒトＩｇＧ２（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ０１８５９；配列番号１４３）と、ヒトＩｇＧ３（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ０１８６０；配列番号１４４）と、ヒトＩｇＧ４（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ０１８６１；配列番号１４５）とのタンパク質配列アラインメントを以下に示す（Ｃｌｕｓｔａｌ Ｏｍｅｇａマルチプルペアワイズアラインメントを用いて整列させた）。アラインメントは、（四角内に符号・で示される）互い「に対応している」システイン残基（例えばシステイン残基の硫黄原子）を示している。当業者であれば、本明細書に記載の特定の配列番号（例えば配列番号１～１３８のいずれか１つ）の特定のシステインの任意の硫黄原子に対応するシステインの硫黄原子を決定するために本発明の任意のＩｇＧ変異体とのそのようなアラインメントを容易に実施することができよう。例えば、当業者であれば、配列番号１０のＣｙｓ１０（Ｆｃドメインのヒンジ領域の保存されたＣＰＰＣモチーフの最初のシステイン）が例えば、ＩｇＧ１のＣｙｓ１０９、ＩｇＧ２のＣｙｓ１０６、ＩｇＧ３のＣｙｓ１５６、配列番号１のＣｙｓ２９、配列番号２のＣｙｓ９、配列番号３のＣｙｓ３０、または配列番号１０のＣｙｓ１０に対応していることを容易に判定できよう。
いくつかの実施形態では、本発明のＦｃドメインまたはＦｃドメイン単量体は配列番号３９～１３８のいずれか１つの配列を有し、Ｎ末端に付加アミノ酸（Ｘａａ）ｘを、及び／またはＣ末端に付加アミノ酸（Ｘａａ）ｚをさらに含んでいてもよく、ここで、Ｘａａは任意のアミノ酸であり、ｘ及びｚは、０以上の自然数であり、大抵は１００未満、好ましくは１０未満、より好ましくは０、１、２、３、４または５である。いくつかの実施形態では、付加アミノ酸は配列番号８１の１つ以上の連続アミノ酸と少なくとも７０％（例えば、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）同一である。例えば、付加アミノ酸は、ＩｇＧ１（配列番号１１９）のＬｙｓ３３０に対応するＣ末端上の単一のアミノ酸であってもよい。
本明細書中で使用する場合、特定の配列番号の特定のリジン残基「に対応する」窒素原子は、特定の配列の特定のリジンと並ぶことが当業者によって理解されるであろう任意のリジン残基の窒素原子を含むと理解されるべきである。ヒトＩｇＧ１（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ０１８５７；配列番号１４２）と、ヒトＩｇＧ２（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ０１８５９；配列番号１４３）と、ヒトＩｇＧ３（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ０１８６０；配列番号１４４）と、ヒトＩｇＧ４（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ０１８６１；配列番号１４５）とのタンパク質配列アラインメントを以下に示す（Ｃｌｕｓｔａｌ Ｏｍｅｇａマルチプルペアワイズアラインメントを用いて整列させた）。アラインメントは、（四角内に符号＊で示される）互い「に対応している」リジン残基（例えばリジン残基の窒素原子）を示している。当業者であれば、本明細書に記載の特定の配列番号（例えば配列番号１～１３８のいずれか１つ）の特定のリジンの任意の窒素原子に対応するリジンの窒素原子を決定するために本発明の任意のＩｇＧ変異体とのそのようなアラインメントを容易に実施することができよう。例えば、当業者であれば、配列番号１０のＬｙｓ３５が例えば、ＩｇＧ１のＬｙｓ１２９、ＩｇＧ２のＬｙｓ１２６、ＩｇＧ３のＬｙｓ１７６、配列番号１のＬｙｓ５１、配列番号２のＬｙｓ３１、配列番号３のＬｙｓ５０、または配列番号１０のＬｙｓ３０に対応していることを容易に判定できよう。


Figure 2022546609000401
免疫細胞の活性化
Ｆｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）は免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）のＦｃ部分と結合し、免疫賦活及び調節において重要な役割を果たす。例えば、免疫複合体（ＩＣ）中のＩｇＧ Ｆｃドメインは高いアビディティでＦｃγＲに係合し、かくして、免疫細胞活性化を調節するシグナル伝達カスケードが誘発される。ヒトＦｃγＲファミリーはいくつかの活性化型受容体（ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃγＲＩＩＩｂ）及び１つの抑制型受容体（ＦｃγＲＩＩｂ）を含有する。ＦｃγＲシグナル伝達は、活性化型ＦｃγＲのための免疫チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、及び抑制型受容体ＦｃγＲＩＩｂのための免疫チロシン抑制モチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する細胞内ドメインによって媒介される。いくつかの実施形態では、ＦｃγＲとＦｃドメインとの結合はＳｒｃファミリーキナーゼによるＩＴＡＭリン酸化をもたらし、これがＳｙｋファミリーキナーゼを活性化させ、ＰＩ３Ｋ及びＲａｓ経路を含む下流シグナル伝達網を誘起する。
本明細書に記載の複合体において、複合体のノイラミニダーゼ阻害剤の単量体または二量体を含んでいる部分は、ウイルス・ノイラミニダーゼに結合してそれを阻害し、ウイルス複製の阻害をもたらすが、一方、複合体のＦｃドメイン部分は免疫細胞上のＦｃγＲ（例えば、ＦｃＲｎ、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃγＲＩＩＩｂ）に結合して食作用及びエフェクター機能、例えば抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を活性化させ、かくして、免疫細胞によるウイルス粒子の貪食及び破壊が引き起こされ、複合体の抗ウイルス活性がさらに増強される。本明細書に記載の複合体によって活性化され得る免疫細胞の例としては、マクロファージ、好中球、好酸球、好塩基球、リンパ球、濾胞樹状細胞、ナチュラルキラー細胞及びマスト細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
組織分布
治療薬は、体循環に進入した後に体組織に分配される。分布は通常は不均一である、というのも、血液灌流、組織結合性、局部ｐＨ及び細胞膜の透過性に差があるからである。組織内への薬物の進入速度は、組織への血流の速度、組織質量、及び血液と組織との間の分配特性によって決まる。脈管構造が十分に発達している領域では、細胞膜を横切る拡散が律速段階でない限り、（進入及び排出速度が同じである場合に）血液と組織との間の分配平衡に達するのがより速い。大きさ、形状、電荷、標的結合性、ＦｃＲｎ及び標的結合機序、投与経路、ならびに配合組成は組織分布に影響を及ぼす。
場合によっては、本明細書に記載の複合体は、肺組織に分配されるように最適化され得る。場合によっては、複合体は、投与後２時間以内に、気道上皮被覆液での分布濃度率が血漿での複合体の濃度の少なくとも３０％となる。ある実施形態では、投与後２時間以内に濃度率が少なくとも４５％となる。いくつかの実施形態では、投与後２時間以内に濃度率が少なくとも５５％となる。特に、投与後２時間以内に濃度率が少なくとも６０％となる。実施例１９０及び図９８に示されるように、注射後２時間目までには、残りの時間を経てＡＵＣによって測定されたＦｃドメインを有する複合体（配列番号７３）のＥＬＦ中レベルが、驚くべきことに血漿曝露レベルの約６０％となり、このことは、複合体がほぼ即時に血漿から肺内のＥＬＦに分配されることを示している。これは、Ｆｃ含有複合体が速やかに肺に分布し、血漿でのレベルに対して相対的に高い濃度を肺において維持することを実証している。
ＩＶ．アルブミンタンパク質及びアルブミンタンパク質結合ペプチド
アルブミンタンパク質
本発明のアルブミンタンパク質は、天然に存在するアルブミン、またはその変異体、例えば天然に存在するアルブミンタンパク質の操作型変異体であり得る。変異体には、多型、断片、例えばドメイン及びサブドメイン、ならびに融合タンパク質が含まれる。アルブミンタンパク質は、いかなる供給源から得られるアルブミンタンパク質の配列を含んでいてもよい。好ましくは、供給源は哺乳動物、例えばヒトまたはウシである。最も好ましくは、アルブミンタンパク質はヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）またはその変異体である。ヒト血清アルブミンには、ヒトに天然に存在するアミノ酸配列を有する任意のアルブミンタンパク質、及びその変異体が含まれる。アルブミンタンパク質コード配列は、ヒト遺伝子に対応するｃＤＮＡの単離及び配列決定のための当業者に知られている方法によって得ることができる。本発明のアルブミンタンパク質は、配列番号１３９もしくは配列番号１４０に示されるヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）のアミノ酸配列、または配列番号１４１に示されるマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）のアミノ酸配列、またはその変異体もしくは断片、好ましくはその機能性変異体もしくは断片を含み得る。断片または変異体は、機能性であってもなくてもよいし、またはアルブミンの機能をある程度保持していてもよい。例えば、断片または変異体は、ＨＳＡまたはＭＳＡなどのアルブミン受容体と結合する能力を、親アルブミン（例えば、断片または変異体を得る元となる親アルブミン）の能力の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％または１０５％保持していてもよい。相対結合能は、当技術分野で知られている方法、例えば表面プラズモン共鳴によって決定され得る。
アルブミンタンパク質は、ヒト血清アルブミンなどのアルブミンタンパク質の天然に存在する多型変異体であってもよい。ヒト血清アルブミンの変異体または断片は、大抵、ヒト血清アルブミンまたはマウス血清アルブミンのリガンド結合活性の少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％または７０％、好ましくは８０％、９０％、９５％、１００％または１０５％、またはそれ以上を有しているものである。
アルブミンタンパク質はウシ血清アルブミンのアミノ酸配列を含んでいてもよい。ウシ血清アルブミンタンパク質には、ウシに天然に存在するアミノ酸配列を有する任意のアルブミン、例えば、Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔ受託番号Ｐ０２７６９で表されるもの、及び本明細書中で定義されるその変異体が含まれる。ウシ血清アルブミンタンパク質には、完全長ウシ血清アルブミンまたは本明細書中で定義されるその変異体の断片も含まれる。
アルブミンタンパク質は、イヌ（例えばＳｗｉｓｓｐｒｏｔ受託番号Ｐ４９８２２－１）、ブタ（例えばＳｗｉｓｓｐｒｏｔ受託番号Ｐ０８８３５－１）、ヤギ（例えばＳｉｇｍａ製品番号Ａ２５１４またはＡ４１６４）、ネコ（例えばＳｗｉｓｓｐｒｏｔ受託番号Ｐ４９０６４－１）、ニワトリ（例えばＳｗｉｓｓｐｒｏｔ受託番号Ｐ１９１２１－１）、オボアルブミン（例えばニワトリオボアルブミン）（例えばＳｗｉｓｓｐｒｏｔ受託番号Ｐ０１０１２－１）、シチメンチョウオボアルブミン（例えばＳｗｉｓｓｐｒｏｔ受託番号Ｏ７３８６０－１）、ロバ（例えばＳｗｉｓｓｐｒｏｔ受託番号Ｑ５ＸＬＥ４－１）、モルモット（例えばＳｗｉｓｓｐｒｏｔ受託番号Ｑ６ＷＤＮ９－１）、ハムスター（例えば、ＤｅＭａｒｃｏ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｆｏｒ Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ ３７（１１）：１２０１－１２０８（２００７）に記載のもの）、ウマ（例えばＳｗｉｓｓｐｒｏｔ受託番号Ｐ３５７４７－１）、アカゲザル（例えばＳｗｉｓｓｐｒｏｔ受託番号Ｑ２８５２２－１）、マウス（例えばＳｗｉｓｓｐｒｏｔ受託番号Ｐ０７７２４－１）、ハト（例えば、Ｋｈａｎ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．３０（３－４），１７１－８（２００２）で定義されているもの）、ウサギ（例えばＳｗｉｓｓｐｒｏｔ受託番号Ｐ４９０６５－１）、ラット（例えばＳｗｉｓｓｐｒｏｔ受託番号Ｐ０２７７０－１）、またはヒツジ（例えばＳｗｉｓｓｐｒｏｔ受託番号Ｐ１４６３９－１）からの血清アルブミンの１つに由来するアルブミンの配列を含み得、本明細書中で定義されるその変異体及び断片を含む。
アルブミンの多くの天然に存在する突然変異体形態が当業者に知られている。アルブミンの天然に存在する突然変異体形態は例えば、Ｐｅｔｅｒｓ，ｅｔ ａｌ．Ａｌｌ Ａｂｏｕｔ Ａｌｂｕｍｉｎ：Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．，ｐ．１７０－１８１（１９９６）に記載されている。
本発明のアルブミンタンパク質には、天然に存在するアルブミンタンパク質の変異体が含まれる。変異体アルブミンは、保存的か非保存的かのどちらかである少なくとも１つのアミノ酸突然変異、例えば、挿入、欠失または置換によって生じるアミノ酸突然変異を有するアルブミンタンパク質を指し、但し、そのような変更は、少なくとも１つの基本的特性が大幅に変化していない（例えば、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％または４０％よりも大きく変化していない）アルブミンタンパク質をもたらすものであることを条件とする。アルブミンタンパク質の活性を定義し得る例示的な特性としては、結合活性（例えば、ビリルビンまたは脂肪酸、例えば長鎖脂肪酸に対する結合特異性または親和性を含む）、浸透圧、または特定ｐＨ範囲での挙動が挙げられる。
典型的にはアルブミンタンパク質変異体は、天然に存在するアルブミンタンパク質、例えば配列番号１３９～１４１のいずれか１つのアルブミンタンパク質との少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、好ましくは少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するものである。
組換えヒトアルブミンを製造及び精製する方法は十分に確立されており（Ｓｌｅｅｐ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，８（１）：４２－６（１９９０））、薬学的用途のための組換えヒトアルブミンの製造（Ｂｏｓｓｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ４５（１）：５７－６７（２００５））を含む。ＨＳＡの三次元構造はＸ線結晶構造解析によって明らかにされている（Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２４４（４９０９）：１１９５－８（１９９８））、Ｓｕｇｉｏ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１２（６）：４３９－４６（１９９９））。ＨＳＡポリペプチド鎖は３５個のシステイン残基を有するが、これらは、１７個のジスルフィド結合と、成熟タンパク質の位置３４にある対形成していない（例えば遊離の）１個のシステインとを形成している。ＨＳＡのＣｙｓ－３４は、分子とアルブミンとの複合のために使用されたことがあり（Ｌｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ １４（１７）：４３９５－８（２００４）、Ｔｈｉｂａｕｄｅａｕ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ １６（４）：１０００－８（２００５））、部位特異的な複合のための部位を提供する。
配列番号１３９（ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、変異体１）
ＤＡＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＤＬＧＥＥＮＦＫＡＬＶＬＩＡＦＡＱＹＬＱＱＣＰＦＥＤＨＶＫＬＶＮＥＶＴＥＦＡＫＴＣＶＡＤＥＳＡＥＮＣＤＫＳＬＨＴＬＦＧＤＫＬＣＴＶＡＴＬＲＥＴＹＧＥＭＡＤＣＣＡＫＱＥＰＥＲＮＥＣＦＬＱＨＫＤＤＮＰＮＬＰＲＬＶＲＰＥＶＤＶＭＣＴＡＦＨＤＮＥＥＴＦＬＫＫＹＬＹＥＩＡＲＲＨＰＹＦＹＡＰＥＬＬＦＦＡＫＲＹＫＡＡＦＴＥＣＣＱＡＡＤＫＡＡＣＬＬＰＫＬＤＥＬＲＤＥＧＫＡＳＳＡＫＱＲＬＫＣＡＳＬＱＫＦＧＥＲＡＦＫＡＷＡＶＡＲＬＳＱＲＦＰＫＡＥＦＡＥＶＳＫＬＶＴＤＬＴＫＶＨＴＥＣＣＨＧＤＬＬＥＣＡＤＤＲＡＤＬＡＫＹＩＣＥＮＱＤＳＩＳＳＫＬＫＥＣＣＥＫＰＬＬＥＫＳＨＣＩＡＥＶＥＮＤＥＭＰＡＤＬＰＳＬＡＡＤＦＶＥＳＫＤＶＣＫＮＹＡＥＡＫＤＶＦＬＧＭＦＬＹＥＹＡＲＲＨＰＤＹＳＶＶＬＬＬＲＬＡＫＴＹＥＴＴＬＥＫＣＣＡＡＡＤＰＨＥＣＹＡＫＶＦＤＥＦＫＰＬＶＥＥＰＱＮＬＩＫＱＮＣＥＬＦＥＱＬＧＥＹＫＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＮＬＧＫＶＧＳＫＣＣＫＨＰＥＡＫＲＭＰＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＱＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＤＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＥＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＮＡＥＴＦＴＦＨＡＤＩＣＴＬＳＥＫＥＲＱＩＫＫＱＴＡＬＶＥＬＶＫＨＫＰＫＡＴＫＥＱＬＫＡＶＭＤＤＦＡＡＦＶＥＫＣＣＫＡＤＤＫＥＴＣＦＡＥＥＧＫＫＬＶＡＡＳＱＡＡＬＧＬ
配列番号１４０（ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、変異体２）
ＲＧＶＦＲＲＤＡＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＤＬＧＥＥＮＦＫＡＬＶＬＩＡＦＡＱＹＬＱＱＣＰＦＥＤＨＶＫＬＶＮＥＶＴＥＦＡＫＴＣＶＡＤＥＳＡＥＮＣＤＫＳＬＨＴＬＦＧＤＫＬＣＴＶＡＴＬＲＥＴＹＧＥＭＡＤＣＣＡＫＱＥＰＥＲＮＥＣＦＬＱＨＫＤＤＮＰＮＬＰＲＬＶＲＰＥＶＤＶＭＣＴＡＦＨＤＮＥＥＴＦＬＫＫＹＬＹＥＩＡＲＲＨＰＹＦＹＡＰＥＬＬＦＦＡＫＲＹＫＡＡＦＴＥＣＣＱＡＡＤＫＡＡＣＬＬＰＫＬＤＥＬＲＤＥＧＫＡＳＳＡＫＱＲＬＫＣＡＳＬＱＫＦＧＥＲＡＦＫＡＷＡＶＡＲＬＳＱＲＦＰＫＡＥＦＡＥＶＳＫＬＶＴＤＬＴＫＶＨＴＥＣＣＨＧＤＬＬＥＣＡＤＤＲＡＤＬＡＫＹＩＣＥＮＱＤＳＩＳＳＫＬＫＥＣＣＥＫＰＬＬＥＫＳＨＣＩＡＥＶＥＮＤＥＭＰＡＤＬＰＳＬＡＡＤＦＶＥＳＫＤＶＣＫＮＹＡＥＡＫＤＶＦＬＧＭＦＬＹＥＹＡＲＲＨＰＤＹＳＶＶＬＬＬＲＬＡＫＴＹＥＴＴＬＥＫＣＣＡＡＡＤＰＨＥＣＹＡＫＶＦＤＥＦＫＰＬＶＥＥＰＱＮＬＩＫＱＮＣＥＬＦＥＱＬＧＥＹＫＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＮＬＧＫＶＧＳＫＣＣＫＨＰＥＡＫＲＭＰＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＱＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＤＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＥＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＮＡＥＴＦＴＦＨＡＤＩＣＴＬＳＥＫＥＲＱＩＫＫＱＴＡＬＶＥＬＶＫＨＫＰＫＡＴＫＥＱＬＫＡＶＭＤＤＦＡＡＦＶＥＫＣＣＫＡＤＤＫＥＴＣＦＡＥＥＧＫＫＬＶＡＡＳＱＡＡＬＧＬ
配列番号１４１（マウス血清アルブミン（ＭＳＡ））
ＲＧＶＦＲＲＥＡＨＫＳＥＩＡＨＲＹＮＤＬＧＥＱＨＦＫＧＬＶＬＩＡＦＳＱＹＬＱＫＣＳＹＤＥＨＡＫＬＶＱＥＶＴＤＦＡＫＴＣＶＡＤＥＳＡＡＮＣＤＫＳＬＨＴＬＦＧＤＫＬＣＡＩＰＮＬＲＥＮＹＧＥＬＡＤＣＣＴＫＱＥＰＥＲＮＥＣＦＬＱＨＫＤＤＮＰＳＬＰＰＦＥＲＰＥＡＥＡＭＣＴＳＦＫＥＮＰＴＴＦＭＧＨＹＬＨＥＶＡＲＲＨＰＹＦＹＡＰＥＬＬＹＹＡＥＱＹＮＥＩＬＴＱＣＣＡＥＡＤＫＥＳＣＬＴＰＫＬＤＧＶＫＥＫＡＬＶＳＳＶＲＱＲＭＫＣＳＳＭＱＫＦＧＥＲＡＦＫＡＷＡＶＡＲＬＳＱＴＦＰＮＡＤＦＡＥＩＴＫＬＡＴＤＬＴＫＶＮＫＥＣＣＨＧＤＬＬＥＣＡＤＤＲＡＥＬＡＫＹＭＣＥＮＱＡＴＩＳＳＫＬＱＴＣＣＤＫＰＬＬＫＫＡＨＣＬＳＥＶＥＨＤＴＭＰＡＤＬＰＡＩＡＡＤＦＶＥＤＱＥＶＣＫＮＹＡＥＡＫＤＶＦＬＧＴＦＬＹＥＹＳＲＲＨＰＤＹＳＶＳＬＬＬＲＬＡＫＫＹＥＡＴＬＥＫＣＣＡＥＡＮＰＰＡＣＹＧＴＶＬＡＥＦＱＰＬＶＥＥＰＫＮＬＶＫＴＮＣＤＬＹＥＫＬＧＥＹＧＦＱＮＡＩＬＶＲＹＴＱＫＡＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＡＡＲＮＬＧＲＶＧＴＫＣＣＴＬＰＥＤＱＲＬＰＣＶＥＤＹＬＳＡＩＬＮＲＶＣＬＬＨＥＫＴＰＶＳＥＨＶＴＫＣＣＳＧＳＬＶＥＲＲＰＣＦＳＡＬＴＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＫＡＥＴＦＴＦＨＳＤＩＣＴＬＰＥＫＥＫＱＩＫＫＱＴＡＬＡＥＬＶＫＨＫＰＫＡＴＡＥＱＬＫＴＶＭＤＤＦＡＱＦＬＤＴＣＣＫＡＡＤＫＤＴＣＦＳＴＥＧＰＮＬＶＴＲＣＫＤＡＬＡ
アルブミンタンパク質の複合
本発明のアルブミンタンパク質は、（例えば、ノイラミニダーゼ阻害剤単量体または二量体のリンカー部分によって）本発明の任意の化合物に（例えば共有結合で）複合され得る。アルブミンタンパク質は、低分子タンパク質複合体を製造するための当業者によく知られている任意の方法によって本発明の任意の化合物に複合され得る。これは、溶媒曝露システインまたはリジンなどの溶媒曝露アミノ酸に対する共有結合による複合を含み得る。例えば、ヒト血清アルブミンは、配列番号１３９のＣｙｓ３４または配列番号１４０のＣｙｓ４０に対応する硫黄原子に対する共有結合リンケージによって本発明の化合物に複合され得る。
本発明のアルブミンタンパク質は、アルブミンタンパク質のＣ末端部またはＮ末端部の１０アミノ酸残基以内に位置するアミノ酸によって本発明の任意の化合物に複合され得る。アルブミンタンパク質は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５または２０個以上のアミノ酸のＣ末端またはＮ末端ポリペプチド融合を含み得る。Ｃ末端またはＮ末端ポリペプチド融合は、１つ以上の溶媒曝露システインまたはリジン残基を含み得、これが本発明の化合物の共有結合による複合（例えば、リンカーによる場合を含めて、ノイラミニダーゼ阻害剤単量体または二量体との複合）に使用され得る。
本発明のアルブミンタンパク質には、本発明の化合物との複合（例えば、リンカーによる場合を含めて、ノイラミニダーゼ阻害剤単量体または二量体との複合）のための部位を提供し得るものである１つ以上の溶媒曝露システインまたはリジン残基を含むように操作された任意のアルブミンタンパク質が含まれる。アルブミンタンパク質は、単一の溶媒曝露システインまたはリジンを含有してこれによって本発明の化合物の部位特異的な複合を可能にしていることが最も好ましかろう。１つ以上の複合可能システイン残基を含んだアルブミンタンパク質の操作型変異体を製造する例示的な方法は米国特許出願第２０１７／００８１３８９号に示されており、参照によりこの全体を本明細書に援用する。手短に述べると、好ましいアルブミンタンパク質変異体は、対形成していない（例えば遊離の）単一の溶媒曝露システイン残基を含んでこれによってリンカーとシステイン残基との部位特異的な複合を可能にしているものである。
対形成していない溶媒曝露システイン残基との化学的複合を可能にする操作がなされたアルブミンタンパク質としては、以下のアルブミンタンパク質変異体が挙げられる：
（ａ）配列番号１３９のＬ５８５、Ｄ１、Ａ２、Ｄ５６２、Ａ３６４、Ａ５０４、Ｅ５０５、Ｔ７９、Ｅ８６、Ｄ１２９、Ｄ５４９、Ａ５８１、Ｄ１２１、Ｅ８２、Ｓ２７０、Ｑ３９７及びＡ５７８のいずれかに対応するアミノ酸残基のところにシステインによる非システインアミノ酸残基の置換を有するアルブミンタンパク質、
（ｂ）配列番号１３９のＬ５８５、Ｄ１、Ａ２、Ｄ５６２、Ａ３６４、Ａ５０４、Ｅ５０５、Ｔ７９、Ｅ８６、Ｄ１２９、Ｄ５４９、Ａ５８１、Ｄ１２１、Ｅ８２、Ｓ２７０、Ｑ３９７及びＡ５７８のいずれかに対応するアミノ酸残基のＮもしくはＣ末端側に隣接する位置にシステインの挿入を有するアルブミンタンパク質、
（ｃ）配列番号９６のＣ３６９、Ｃ３６１、Ｃ９１、Ｃ１７７、Ｃ５６７、Ｃ３１６、Ｃ７５、Ｃ１６９、Ｃ１２４もしくはＣ５５８のいずれかに対応する残基のところに、遊離チオール基を有する対形成していないシステインを有するように操作されたものであり、配列番号１３９のＣ３６０、Ｃ３１６、Ｃ７５、Ｃ１６８、Ｃ５５８、Ｃ３６１、Ｃ９１、Ｃ１２４、Ｃ１６９もしくはＣ５６７に対応する残基の欠失もしくは置換によって作り出されていてもいなくてもよい、アルブミンタンパク質、及び／または
（ｄ）アルブミンタンパク質のＮもしくはＣ末端にシステインを付加したもの。
本発明のいくつかの実施形態では、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び／または（ｄ）の置換、欠失、付加または挿入事象の最終的結果としてポリペプチド配列の複合可能システイン残基の数が親アルブミン配列に比べて増加する。本発明のいくつかの実施形態では、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び／または（ｄ）の置換、欠失、付加または挿入事象の最終的結果としてポリペプチド配列の複合可能システイン残基の数は１つになり、かくして、部位特異的な複合が可能になる。
単一の溶媒曝露リジン残基を有してこれによってリンカーとリジン残基との部位特異的な複合を可能にしているアルブミンタンパク質も、好ましいアルブミンタンパク質変異体として挙げられる。そのような変異体は、上記方法のいずれかを含めたアルブミンタンパク質の操作（例えば、挿入、欠失、置換、またはＣ末端もしくはＮ末端融合）によって作り出され得る。
アルブミンタンパク質結合ペプチド
生物活性化合物とアルブミンタンパク質結合ペプチドとを複合させることで生物活性化合物の薬力学の変化、例えば、組織取込み、浸透及び拡散の変化をもたらすことができる。好ましい実施形態では、アルブミンタンパク質結合ペプチドと本発明の化合物（例えば、リンカーによる場合を含めて、ノイラミニダーゼ阻害剤単量体または二量体）とを複合させることで、化合物単独の場合と比較して有効性が向上する、または化合物の毒性が低下する。
本発明のアルブミンタンパク質結合ペプチドは、アルブミンタンパク質、例えば本明細書に記載のアルブミンタンパク質のいずれかに対する親和性及び結合機能を有する５～５０（例えば、５～４０、５～３０、５～２０、５～１５、５～１０、１０～５０、１０～３０、または１０～２０）アミノ酸残基のアミノ酸配列を有する任意のポリペプチドを含む。好ましくは、アルブミンタンパク質結合ペプチドは、天然に存在する血清アルブミン、最も好ましくはヒト血清アルブミンに結合する。アルブミンタンパク質結合ペプチドは由来が様々であり得、例えば、合成、ヒト、マウスまたはラットに由来し得る。本発明のアルブミンタンパク質結合ペプチドには、本発明の化合物との複合（例えば、リンカーによる場合を含めて、ノイラミニダーゼ阻害剤単量体または二量体との複合）のための部位を提供し得るものである溶媒曝露システインまたはリジン残基を１つ以上（例えば、２つ、３つ、４つまたは５つ）含むように操作されたアルブミンタンパク質結合ペプチドが含まれる。アルブミンタンパク質結合ペプチドは、単一の溶媒曝露システインまたはリジンを含有してこれによって本発明の化合物の部位特異的な複合を可能にしていることが最も好ましかろう。アルブミンタンパク質結合ペプチドは、天然に存在するアミノ酸残基のみを含んでいてもよいし、または天然に存在しないアミノ酸残基を１つ以上含んでいてもよい。天然に存在しないアミノ酸残基（例えば、天然に存在しないアミノ酸残基の側鎖）は、含まれている場合、本発明の化合物（例えば、リンカーによる場合を含めて、ノイラミニダーゼ阻害剤単量体または二量体）に対する結合点として使用され得る。本発明のアルブミンタンパク質結合ペプチドは、直鎖状であってもよいし、または環状であってもよい。本発明のアルブミンタンパク質結合ペプチドには、当業者に知られている任意のアルブミンタンパク質結合ペプチドが含まれ、その例は本明細書中に提供されている。
好ましくは、アルブミンタンパク質結合ペプチド、及びアルブミンタンパク質結合ペプチドを含む複合体は、約１００μＭ未満、好ましくは約１００ｎＭ未満の解離定数Ｋｄによって特徴付けられる親和性でアルブミンタンパク質（例えばヒト血清アルブミン）に結合し、最も好ましくは他の血漿タンパク質に実質的に結合しない。そのような化合物の具体例は直鎖状または環状ペプチドであり、好ましくはその長さが約１０～２０アミノ酸残基であり、任意選択的にＮ末端もしくはＣ末端またはその両方において修飾されている。
アルブミンタンパク質結合ペプチドには、以下の一般式を含む直鎖状及び環状ペプチドが含まれ、式中、Ｘａａは任意のアミノ酸である：
配列番号１４８
Ｘａａ－Ｘａａ－Ｃｙｓ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｃｙｓ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｐｈｅ－Ｃｙｓ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｔｒｐ－Ｐｒｏ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ
配列番号１４９
Ｖａｌ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｉｌｅ－Ｃｙｓ－Ｐｈｅ
配列番号１５０
Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－Ｘａａ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｃｙｓ
配列番号１５１
Ａｓｐ－Ｘａａ－Ｃｙｓ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｘａａ－Ｔｒｐ－Ｇｌｙ－Ｃｙｓ－Ｌｅｕ－Ｔｒｐ
配列番号１５２
Ｔｒｐ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｘａａ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｘａａ－Ａｌａ－Ｘａａ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｃｙｓ
配列番号１５３
Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｘａａ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ－Ｔｒｐ
本発明のアルブミンタンパク質結合ペプチドにはさらに、直鎖状または環状であり得る以下のペプチド配列のいずれかが含まれる：
配列番号１５４ ＤＬＣＬＲＤＷＧＣＬＷ
配列番号１５５ ＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷ
配列番号１５６ ＭＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＧＤ
配列番号１５７ ＱＲＬＭＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＥＤＤＥ
配列番号１５８ ＱＧＬＩＧＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＧＲＳＶ
配列番号１５９ ＱＧＬＩＧＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＧＲＳＶＫ
配列番号１６０ ＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＥＤＤ
配列番号１６１ ＲＬＭＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＥＤＤ
配列番号１６２ ＭＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＥＤＤ
配列番号１６３ ＭＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＥＤ
配列番号１６４ ＲＬＭＥＤＩＣＬＡＲＷＧＣＬＷＥＤＤ
配列番号１６５ ＥＶＲＳＦＣＴＲＷＰＡＥＫＳＣＫＰＬＲＧ
配列番号１６６ ＲＡＰＥＳＦＶＣＹＷＥＴＩＣＦＥＲＳＥＱ
配列番号１６７ ＥＭＣＹＦＰＧＩＣＷＭ
配列番号１５４～１６７のアルブミンタンパク質結合ペプチドは、Ｎ末端に付加アミノ酸（Ｘａａ）ｘを、及び／またはＣ末端に付加アミノ酸（Ｘａａ）ｚをさらに含んでいてもよく、ここで、Ｘａａは任意のアミノ酸であり、ｘ及びｚは、０以上の自然数であり、大抵は１００未満、好ましくは１０未満、より好ましくは０、１、２、３、４または５である。
さらなる例示的なアルブミンタンパク質結合ペプチドは米国特許出願第２００５／０２８７１５３号に示されており、参照によりこの全体を本明細書に援用する。
アルブミンタンパク質結合ペプチドの複合
本発明のアルブミンタンパク質結合ペプチドは、（例えば、ノイラミニダーゼ阻害剤単量体または二量体のリンカー部分によって）本発明の任意の化合物に（例えば共有結合で）複合され得る。アルブミンタンパク質結合ペプチドは、ペプチド－低分子複合体を製造するための当業者に知られている任意の方法によって本発明の任意の化合物に複合され得る。これは、アミノ酸残基、例えば、システイン、リジンまたは非天然アミノ酸の側鎖基に対する共有結合による複合を含み得る。あるいは、共有結合による複合が、Ｃ末端で（例えば、Ｃ末端カルボン酸に対して、またはＣ末端残基の側鎖基に対して）、またはＮ末端で（例えば、Ｎ末端アミノ基に対して、またはＮ末端アミノ酸の側鎖基に対して）起こってもよい。
Ｖ．リンカー
リンカーは、本明細書に記載の複合体の中の２つ以上の構成要素の間（例えば、本明細書に記載の複合体の中の２つのノイラミニダーゼ阻害剤の間、本明細書に記載の複合体の中のノイラミニダーゼ阻害剤とＦｃドメインまたはアルブミンタンパク質との間、及び本明細書に記載の複合体の中の２つのノイラミニダーゼ阻害剤の二量体とＦｃドメインまたはアルブミンタンパク質との間）のリンケージまたは連結子を指す。
ノイラミニダーゼ阻害剤の二量体に共有結合で繋げられたＦｃドメインまたはアルブミンタンパク質を有する複合体の中のリンカー
本明細書に記載の１つ以上のノイラミニダーゼ阻害剤の二量体に共有結合で繋げられたＦｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドを含有する複合体において、複合体中のリンカー（例えばＬまたはＬ’）は分岐構造であってもよい。本明細書にさらに記載されるように、本明細書に記載の複合体の中のリンカー（例えばＬまたはＬ’）は多価構造、例えばそれぞれ二価または三価構造であってもよい。リンカーが３本のアームを有する場合のいくつかの実施形態では、アームのうち２本は第１及び第２ノイラミニダーゼ阻害剤と結合し得、３本目のアームは、Ｆｃドメイン単量体及びＦｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドと結合し得る。リンカーが２本のアームを有する場合のいくつかの実施形態では、片方のアームはＦｃドメインまたはアルブミンタンパク質に結合し得、もう片方のアームは、２つのノイラミニダーゼ阻害剤のうちの１つに結合し得る。他の実施形態では、２本のアームを有するリンカーは、１つ以上のノイラミニダーゼ阻害剤の二量体に共有結合で繋げられたＦｃドメインまたはアルブミンタンパク質を含有する複合体に２つのノイラミニダーゼ阻害剤を結合させるために使用され得る。
いくつかの実施形態では、１つ以上のノイラミニダーゼ阻害剤の二量体に共有結合で繋げられたＦｃドメインまたはアルブミンタンパク質を有する複合体の中のリンカーは、式（Ｄ－Ｌ－Ｉ）：
Figure 2022546609000402
 〔式中、ＬＡは、式ＧＡ１－（ＺＡ１）ｇ１－（ＹＡ１）ｈ１－（ＺＡ２）ｉ１－（ＹＡ２）ｊ１－（ＺＡ３）ｋ１－（ＹＡ３）ｌ１－（ＺＡ４）ｍ１－（ＹＡ４）ｎ１－（ＺＡ５）ｏ１－ＧＡ２で表され、ＬＢは、式ＧＢ１－（ＺＢ１）ｇ２－（ＹＢ１）ｈ２－（ＺＢ２）ｉ２－（ＹＢ２）ｊ２－（ＺＢ３）ｋ２－（ＹＢ３）ｌ２－（ＺＢ４）ｍ２－（ＹＢ４）ｎ２－（ＺＢ５）ｏ２－ＧＢ２で表され、ＬＣは、式ＧＣ１－（ＺＣ１）ｇ３－（ＹＣ１）ｈ３－（ＺＣ２）ｉ３－（ＹＣ２）ｊ３－（ＺＣ３）ｋ３－（ＹＣ３）ｌ３－（ＺＣ４）ｍ３－（ＹＣ４）ｎ３－（ＺＣ５）ｏ３－ＧＣ２で表され、ＧＡ１は式（Ｄ－Ｌ－Ｉ）中のＱとの結合であり、ＧＡ２は第１ノイラミニダーゼ阻害剤（例えばＡ１）との結合であり、ＧＢ１は式（Ｄ－Ｌ－Ｉ）中のＱとの結合であり、ＧＢ２は第２ノイラミニダーゼ阻害剤（例えばＡ２）との結合であり、ＧＣ１は式（Ｄ－Ｌ－Ｉ）中のＱとの結合であり、ＧＣ２は、Ｆｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質もしくはアルブミンタンパク質結合ペプチドとの結合であり、またはＦｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質もしくはアルブミンタンパク質結合ペプチドに複合している官能基と反応することができる官能基（例えば、マレイミドとシステイン、アミンと活性カルボン酸、チオールとマレイミド、活性スルホン酸とアミン、イソシアネートとアミン、アジドとアルキン、及びアルケンとテトラジン）であり、ＺＡ１、ＺＡ２、ＺＡ３、ＺＡ４、ＺＡ５、ＺＢ１、ＺＢ２、ＺＢ３、ＺＢ４、ＺＢ５、ＺＣ１、ＺＣ２、ＺＣ３、ＺＣ４及びＺＣ５の各々は独立して、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキレン、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアル
キニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリーレン、または任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリーレンであり、ＹＡ１、ＹＡ２、ＹＡ３、ＹＡ４、ＹＢ１、ＹＢ２、ＹＢ３、ＹＢ４、ＹＣ１、ＹＣ２、ＹＣ３及びＹＣ４の各々は独立して、Ｏ、Ｓ、ＮＲｉ、Ｐ、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノであり、Ｒｉは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキル、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリール、または任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールであり、ｇ１、ｈ１、ｉ１、ｊ１、ｋ１、ｌ１、ｍ１、ｎ１、ｏ１、ｇ２、ｈ２、ｉ２、ｊ２、ｋ２、ｌ２、ｍ２、ｎ２、ｏ２、ｇ３、ｈ３、ｉ３、ｊ３、ｋ３、ｌ３、ｍ３、ｎ３及びｏ３の各々は独立して０または１であり、Ｑは、窒素原子、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキレン、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリーレン、または任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリーレンである〕
で表される。
いくつかの実施形態では、ＬＣはＦｃドメイン（例えば２つのＧＣ２）に対する２つの結合点を有し得る。いくつかの実施形態では、Ｌはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）リンカーを含む。ＰＥＧリンカーには、繰り返し単位構造（－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－）ｎを有するリンカーが含まれ、式中、ｎは２～１００の整数である。ポリエチレングリコールリンカーは、（例えば式（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）のいずれか１つの複合体において）ノイラミニダーゼ阻害剤とＥとを共有結合で結び合わせ得る。ポリエチレングリコールリンカーは、（例えば式（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）のいずれか１つの複合体において）第１ノイラミニダーゼ阻害剤と第２ノイラミニダーゼ阻害剤とを共有結合で結び合わせ得る。ポリエチレングリコールリンカーは、（例えば式（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）のいずれか１つの複合体において）ノイラミニダーゼ阻害剤二量体とＥとを共有結合で結び合わせ得る。ポリエチレングリコールリンカーは、ＰＥＧ２～ＰＥＧ１００（例えば、ＰＥＧ２、ＰＥＧ３、ＰＥＧ４、ＰＥＧ５、ＰＥＧ５～ＰＥＧ１０、ＰＥＧ１０～ＰＥＧ２０、ＰＥＧ２０～ＰＥＧ３０、ＰＥＧ３０～ＰＥＧ４０、ＰＥＧ５０～ＰＥＧ６０、ＰＥＧ６０～ＰＥＧ７０、ＰＥＧ７０～ＰＥＧ８０、ＰＥＧ８０～ＰＥＧ９０、ＰＥＧ９０～ＰＥＧ１００）のいずれか１つから選択され得る。いくつかの実施形態では、ＬｃはＰＥＧリンカーを含み、ＬＣがＱ及びＥの各々と共有結合している。
本明細書に記載の複合体に使用され得る式（Ｄ－Ｌ－Ｉ）のリンカーとしては、


Figure 2022546609000403
Figure 2022546609000404
Figure 2022546609000405
Figure 2022546609000406
Figure 2022546609000407
Figure 2022546609000408
Figure 2022546609000409
Figure 2022546609000410
Figure 2022546609000411
Figure 2022546609000412
〔式中、ｚ１及びｚ２は各々独立して１～２０の整数であり、Ｒ９は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ２０アルキル、Ｃ３－Ｃ２０シクロアルキル、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択される〕
が挙げられるが、これらに限定されない。
式（Ｄ－Ｌ－Ｉ）のリンカーにはまた、



Figure 2022546609000413
Figure 2022546609000414
Figure 2022546609000415
Figure 2022546609000416
Figure 2022546609000417
のいずれかも含まれ得る。
ノイラミニダーゼ阻害剤の単量体に共有結合で繋げられたＦｃドメインまたはアルブミンタンパク質を有する複合体の中のリンカー
本明細書に記載の１つ以上のノイラミニダーゼ阻害剤の単量体に共有結合で繋げられたＦｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドを含有する複合体において、複合体中のリンカー（例えばＬまたはＬ’）は、２本のアームを有する二価構造であり得る。二価リンカー中の片方のアームはノイラミニダーゼ阻害剤の単量体に結合し得、もう片方のアームは、Ｆｃドメイン単量体及びＦｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに結合し得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の中の１つ以上のノイラミニダーゼ阻害剤の単量体は各々独立して、Ｆｃドメイン単量体及びＦｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドの中の原子に連結され得る。
いくつかの実施形態では、リンカーは式（Ｍ－Ｌ－Ｉ）：
Ｊ１－（Ｑ１）ｇ－（Ｔ１）ｈ－（Ｑ２）ｉ－（Ｔ２）ｊ－（Ｑ３）ｋ－（Ｔ３）ｌ－（Ｑ４）ｍ－（Ｔ４）ｎ－（Ｑ５）ｏ－Ｊ２
〔式中、Ｊ１はノイラミニダーゼ阻害剤との結合であり、Ｊ２は、Ｆｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質もしくはアルブミンタンパク質結合ペプチドとの結合であり、またはＦｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質もしくはアルブミンタンパク質結合ペプチドに複合している官能基と反応することができる官能基（例えば、マレイミドとシステイン、アミンと活性カルボン酸、チオールとマレイミド、活性スルホン酸とアミン、イソシアネートとアミン、アジドとアルキン、及びアルケンとテトラジン）であり、Ｑ１、Ｑ２、Ｑ３、Ｑ４及びＱ５の各々は独立して、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキレン、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリーレン、または任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリーレンであり、Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３、Ｔ４の各々は独立して、Ｏ、Ｓ、ＮＲｉ、Ｐ、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノであり、Ｒｉは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキル、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリール、または任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールであり、ｇ、ｈ、ｉ、ｊ、ｋ、ｌ、ｍ、ｎ及びｏの各々は独立して０または１である〕
で表される。
いくつかの実施形態では、Ｊ２は、Ｆｃドメイン単量体及びＦｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに対する２つの結合点（例えば２つのＪ２）を有し得る。
本明細書に記載の複合体に使用され得る式（Ｍ－Ｌ－Ｉ）のリンカーとしては、
Figure 2022546609000418
 〔式中、ｄは１～２０の整数である（例えば、ｄは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書に記載の複合体に使用され得る式（Ｍ－Ｌ－Ｉ）のリンカーとしては、
Figure 2022546609000419
 〔式中、ｄ及びｅの各々は独立して１～２６の整数である〕
が挙げられるが、これらに限定されない。
連結基
いくつかの実施形態では、リンカーは、本明細書に記載の複合体の中のノイラミニダーゼ阻害剤と、Ｆｃドメイン単量体及びＦｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質もしくはアルブミンタンパク質結合ペプチドとの間に、または本明細書に記載の複合体の中の２つのノイラミニダーゼ阻害剤の間に空間、剛直性及び／または柔軟性を提供する。いくつかの実施形態では、リンカーは、結合、例えば共有結合、例えば、アミド結合、ジスルフィド結合、Ｃ－Ｏ結合、Ｃ－Ｎ結合、Ｎ－Ｎ結合、Ｃ－Ｓ結合、または化学反応、例えば化学的複合によって作り出された任意の種類の結合であり得る。いくつかの実施形態では、リンカー（式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つに示されるＬまたはＬ’）は２５０個以下の原子（例えば、１～２、１～４、１～６、１～８、１～１０、１～１２、１～１４、１～１６、１～１８、１～２０、１～２５、１～３０、１～３５、１～４０、１～４５、１～５０、１～５５、１～６０、１～６５、１～７０、１～７５、１～８０、１～８５、１～９０、１～９５、１～１００、１～１１０、１～１２０、１～１３０、１～１４０、１～１５０、１～１６０、１～１７０、１～１８０、１～１９０、１～２００、１～２１０、１～２２０、１～２３０、１～２４０、または１～２５０個の原子（複数可）；２５０、２４０、２３０、２２０、２１０、２００、１９０、１８０、１７０、１６０、１５０、１４０、１３０、１２０、１１０、１００、９５、９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３５、３０、２８、２６、２４、２２、２０、１８、１６、１４、１２、１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１個の原子（複数可））を含む。いくつかの実施形態では、リンカー（ＬまたはＬ）は２５０個以下の非水素原子（例えば、１～２、１～４、１～６、１～８、１～１０、１～１２、１～１４、１～１６、１～１８、１～２０、１～２５、１～３０、１～３５、１～４０、１～４５、１～５０、１～５５、１～６０、１～６５、１～７０、１～７５、１～８０、１～８５、１～９０、１～９５、１～１００、１～１１０、１～１２０、１～１３０、１～１４０、１～１５０、１～１６０、１～１７０、１～１８０、１～１９０、１～２００、１～２１０、１～２２０、１～２３０、１～２４０、または１～２５０個の非水素原子（複数可）；２５０、２４０、２３０、２２０、２１０、２００、１９０、１８０、１７０、１６０、１５０、１４０、１３０、１２０、１１０、１００、９５、９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３５、３０、２８、２６、２４、２２、２０、１８、１６、１４、１２、１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１個の非水素原子（複数可））を含む。いくつかの実施形態では、リンカー（ＬまたはＬ）の主鎖は、２５０個以下の原子（例えば、１～２、１～４、１～６、１～８、１～１０、１～１２、１～１４、１～１６、１～１８、１～２０、１～２５、１～３０、１～３５、１～４０、１～４５、１～５０、１～５５、１～６０、１～６５、１～７０、１～７５、１～８０、１～８５、１～９０、１～９５、１～１００、１～１１０、１～１２０、１～１３０、１～１４０、１～１５０、１～１６０、１～１７０、１～１８０、１～１９０、１～２００、１～２１０、１～２２０、１～２３０、１～２４０、または１～２５０個の原子（複数可）；２５０、２４０、２３０、２２０、２１０、２００、１９０、１８０、１７０、１６０、１５０、１４０、１３０、１２０、１１０、１００、９５、９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３５、３０、２８、２６、２４、２２、２０、１８、１６、１４、１２、１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１個の原子（複数可）を含む。リンカーの「主鎖」は、複合体のある部分から複合体の別の部分までの最短経路を一緒になって形成しているリンカー中の原子を指す。リンカーの主鎖中の原子は、複合体のある部分と複合体の別の部分との繋ぎに直接関与している。例えば、リンカーの主鎖中の炭素に結合している水素原子は、複合体のある部分と複合体の別の部分との繋ぎに直接関与しているとはみなされない。
リンカー（ＬまたはＬ’）を作るために使用され得る分子は、少なくとも２つの官能基、例えば２つのカルボン酸基を含む。三価リンカーのいくつかの実施形態では、リンカーの２本のアームは２つのジカルボン酸を含有し得、ここで、第１カルボン酸は複合体中の第１ノイラミニダーゼ阻害剤との共有結合リンケージを形成するものであり得、第２カルボン酸は複合体中の第２ノイラミニダーゼ阻害剤との共有結合リンケージを形成するものであり得、そして、リンカーの３本目のアームは複合体中のＦｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドとの共有結合リンケージ（例えばＣ－Ｏ結合）のためのものであり得る。二価リンカーのいくつかの実施形態では、二価リンカーは２つのカルボン酸を含有し得、ここで、第１カルボン酸は複合体中のある構成要素（例えばノイラミニダーゼ阻害剤）との共有結合リンケージを形成するものであり得、第２カルボン酸は複合体中の別の構成要素（例えば、Ｆｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチド）との共有結合リンケージ（例えばＣ－Ｓ結合またはＣ－Ｎ結合）を形成するものであり得る。
いくつかの実施形態では、ジカルボン酸分子がリンカー（例えばジカルボン酸リンカー）として使用され得る。例えば、１つ以上のノイラミニダーゼ阻害剤の二量体に共有結合で繋げられたＦｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドを含有する複合体において、ジカルボン酸分子中の第１カルボン酸は第１ノイラミニダーゼ阻害剤のヒドロキシルまたはアミン基と共有結合リンケージを形成し得、第２カルボン酸は第２ノイラミニダーゼ阻害剤のヒドロキシルまたはアミン基と共有結合リンケージを形成し得る。
リンカーを形成するために使用され得るジカルボン酸分子の例としては、

Figure 2022546609000420
Figure 2022546609000421

〔式中、ｎは１～２０の整数である（例えば、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
が挙げられるが、これらに限定されない。
リンカーを形成するために使用され得るジカルボン酸分子の他の例としては、


Figure 2022546609000422
Figure 2022546609000423
が挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されているものなどのジカルボン酸分子は、１つ以上の追加の置換基を含有するようにさらに官能化され得る。ジカルボン酸がさらに官能化されて、例えば、Ｆｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに対する（例えば、ＰＥＧリンカーなどのリンカーによる）結合点を提供していてもよい。
いくつかの実施形態では、ノイラミニダーゼ阻害剤がＦｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに結合している場合、連結基は、原子１～２５個分の間隔で離隔したカルボン酸部分及びアミノ部分を含む部分を含み得る。そのような連結基の例としては、


Figure 2022546609000424
 〔式中、ｎは１～２０の整数である（例えば、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
が挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、連結基は、カルボン酸部分及びアミノ酸部分を含む部分、例えば本明細書に記載のものを含み得、１つ以上の追加の官能基を含有するようにさらに官能化され得る。そのような連結基は、例えばＦｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに対する（例えば、ＰＥＧリンカーなどのリンカーによる）結合点を提供するようにさらに官能化され得る。いくつかの実施形態では、ノイラミニダーゼ阻害剤がＦｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに結合している場合、連結基は、原子１～２５個分の間隔で離隔した２つのまたはアミノ部分（ｔｗｏ ｏｒ ａｍｉｎｏ ｍｏｉｅｔｉｅｓ）（例えばジアミノ部分）を含む部分を含み得る。そのような連結基の例としては、
Figure 2022546609000425
 〔式中、ｎは１～２０の整数である（例えば、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である）〕
が挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、連結基は、ジアミノ部分、例えば本明細書に記載のものを含み得、１つ以上の追加の官能基を含有するようにさらに官能化され得る。そのようなジアミノ連結基は、例えばＦｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに対する（例えば、ＰＥＧリンカーなどのリンカーによる）結合点を提供するようにさらに官能化され得る。
いくつかの実施形態では、アジド基を含有する分子を使用してリンカーが形成され得、この場合、アジド基はアルキンとの環化付加を経て１，２，３－トリアゾールリンケージを形成し得る。いくつかの実施形態では、アルキン基を含有する分子を使用してリンカーが形成され得、この場合、アルキン基はアジドとの環化付加を経て１，２，３－トリアゾールリンケージを形成し得る。いくつかの実施形態では、マレイミド基を含有する分子を使用してリンカーが形成され得、この場合、マレイミド基はシステインと反応してＣ－Ｓリンケージを形成し得る。いくつかの実施形態では、１つ以上のスルホン酸基を含有する分子を使用してリンカーが形成され得、この場合、スルホン酸基はノイラミニダーゼ阻害剤中の連結される窒素とのスルホンアミドリンケージを形成し得る。いくつかの実施形態では、１つ以上のイソシアネート基を含有する分子を使用してリンカーが形成され得、この場合、イソシアネート基はノイラミニダーゼ阻害剤中の連結される窒素との尿素リンケージを形成し得る。いくつかの実施形態では、１つ以上のハロアルキル基を含有する分子を使用してリンカーが形成され得、この場合、ハロアルキル基はノイラミニダーゼ阻害剤との共有結合リンケージ、例えばＣ－Ｎ及びＣ－Ｏリンケージを形成し得る。
いくつかの実施形態では、リンカー（ＬまたはＬ’）は、例えば合成ポリマー（例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ポリマー）に由来する合成基を含み得る。いくつかの実施形態では、リンカーは１つ以上のアミノ酸残基を含み得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、アミノ酸配列（例えば、１～２５アミノ酸、１～１０アミノ酸、１～９アミノ酸、１～８アミノ酸、１～７アミノ酸、１～６アミノ酸、１～５アミノ酸、１～４アミノ酸、１～３アミノ酸、１～２アミノ酸または１アミノ酸配列）であり得る。いくつかの実施形態では、リンカー（ＬまたはＬ’）は、１つ以上の任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキレン、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキレン（例えばＰＥＧ単位）、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニレン（例えばＣ２アルケニレン）、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキレン（例えば、シクロプロピレン、シクロブチレン）、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリーレン（例えばＣ６アリーレン）、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリーレン（例えば、イミダゾール、ピリジン）、Ｏ、Ｓ、ＮＲｉ（Ｒｉは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキル、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリール、または任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールである）、Ｐ、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノを含み得る。
複合体形成化学
（例えば式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの複合体の中の）ノイラミニダーゼ阻害剤単量体または二量体は、当業者に知られている任意の標準的な複合体形成化学によってＦｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに例えばリンカーで複合され得る。以下の複合体形成化学が、例えばＰＥＧリンカー（例えば官能化ＰＥＧリンカー）と、Ｆｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドとの複合のために特に企図される。
リンカーを使用する、複合体中の２つ以上の構成要素の共有結合による複合は、よく知られている有機化学合成技術及び方法を用いて成し遂げられ得る。２つの構成要素に付いている相補的な官能基が互いに反応して共有結合を形成し得る。相補的な反応性官能基の例としては、例えば、マレイミドとシステイン、アミンと活性カルボン酸、チオールとマレイミド、活性スルホン酸とアミン、イソシアネートとアミン、アジドとアルキン、及びアルケンとテトラジンが挙げられるが、これらに限定されない。ポリペプチド（例えば、Ｆｃドメイン単量体、Ｆｃドメイン、Ｆｃ結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチド）に対する部位特異的な複合は、当技術分野で知られている技術を用いて成し遂げられ得る。Ｆｃドメインに対する小分子の部位特異的な複合のための例示的な技術は、Ａｇａｒｗａｌｌ．Ｐ．，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２６：１７６－１９２（２０１５）の中で提供されている。
アミノ基と反応することができる官能基の他の例としては、例えばアルキル化及びアシル化剤が挙げられる。代表的なアルキル化剤としては、（ｉ）α－ハロアセチル基、例えば、ＸＣＨ２ＣＯ－（式中、Ｘ＝Ｂｒ、ＣｌまたはＩ）、（ｉｉ）マイケル型反応か、環カルボニル基に対する付加によるアシル化かのどちらかによってアミノ基と反応するものであるＮ－マレイミド基、（ｉｉｉ）アリールハライド、例えば、ニトロハロ芳香族基、（ｉｖ）アルキルハライド、（ｖ）アミノ基とのシッフ塩基形成が可能なアルデヒドまたはケトン、（ｖｉ）アミノ、スルフヒドリルまたはフェノール性ヒドロキシル基と反応し得るものであるエポキシド、例えばエピクロロヒドリン及びビスオキシラン、（ｖｉｉ）アミノ、スルフヒドリル及びヒドロキシル基などの求核剤に対する反応性を有するものである塩素含有ｓ－トリアジン、（ｖｉｉｉ）開環によるアミノ基などの求核剤に対する反応性を有するものであるアジリジン、（ｉｘ）スクアリン酸ジエチルエステル、ならびに（ｘ）α－ハロアルキルエーテルが挙げられる。
アミノ反応性アシル化基の例としては、例えば、（ｉ）イソシアネート及びイソチオシアネート、（ｉｉ）塩化スルホニル、（ｉｉｉ）酸ハライド、（ｉｖ）活性エステル、例えばニトロフェニルエステルもしくはＮ－ヒドロキシスクシンイミジルエステル、またはその誘導体（例えば、アジド－ＰＥＧ２－ＰＥＧ４０－ＮＨＳエステル）、（ｖ）酸無水物、例えば、混成、対称またはＮ－カルボン酸無水物、（ｖｉ）アシルアジド、ならびに（ｖｉｉ）イミドエステルが挙げられる。アルデヒド及びケトンはアミンと反応してシッフ塩基を形成し得、これは還元的アミノ化によって安定化され得る。
反応前に特定の官能基を例えばさらなる反応性または選択性の付与のために他の官能基に変換してもよいことは理解されよう。この目的のために有用な方法の例としては、ジカルボン酸無水物などの試薬を使用するアミンからカルボキシルへの変換；Ｎ－アセチルホモシステインチオラクトン、Ｓ－アセチルメルカプトコハク酸無水物、２－イミノチオランまたはチオール含有スクシンイミジル誘導体などの試薬を使用するアミンからチオールへの変換；α－ハロアセテートなどの試薬を使用するチオールからカルボキシルへの変換；エチレンイミンまたは２－ブロモエチルアミンなどの試薬を使用するチオールからアミンへの変換；カルボジイミドなどの試薬に続いてジアミンを使用するカルボキシルからアミンへの変換；ならびにトシルクロリドなどの試薬の使用に続いてチオアセテートによるエステル交換及び酢酸ナトリウムによるチオールへの加水分解を行う、アルコールからチオールへの変換が挙げられる。
いくつかの実施形態では、本発明のリンカー（例えばＬまたはＬ’、例えばＤ－Ｌ－ＩのＬＣ）を（例えば本明細書に記載の方法のいずれかによって）Ｅ（例えばＦｃドメインまたはアルブミンタンパク質）と複合させる。本発明の好ましい実施形態では、リンカーを、（ａ）Ｅのリジンに対するチオ尿素リンケージ（すなわち、－ＮＨ（Ｃ＝Ｓ）ＮＨ－）、（ｂ）Ｅのリジンに対するカルバメートリンケージ（すなわち、－ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）－Ｏ）、（ｃ）還元的アミノ化によるＥ及びリジンとの間のアミンリンケージ（すなわち、－ＮＨＣＨ２）、（ｄ）Ｅのリジンに対するアミド（すなわち、－ＮＨ－（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２）、（ｅ）リンカーのマレイミドとＥのシステインとの間のシステイン－マレイミド複合体、（ｆ）リンカーとＥの炭水化物（例えばＦｃドメイン単量体またはＦｃドメインのグリコシル基）との間の還元的アミノ化によるアミンリンケージ（すなわち、－ＮＨＣＨ２）、（ｇ）Ｅの２つのシステインにリンカーが複合した再架橋システイン複合体、（ｈ）リンカーとＥの炭水化物（例えばＦｃドメイン単量体またはＦｃドメインのグリコシル基）との間のオキシムリンケージ、（ｉ）リンカーとＥのアミノ酸残基との間のオキシムリンケージ、（ｊ）リンカーとＥとの間のアジドリンケージ、（ｋ）Ｅに対するリンカーの直接的アシル化、または（ｌ）リンカーとＥとの間のチオエーテルリンケージによって複合させる。
いくつかの実施形態では、リンカーはＥと複合しており、リンケージが構造－ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）Ｘ－を含み、式中のＸは、Ｏ、ＨＮまたは結合である。いくつかの実施形態では、リンカーはＥと複合しており、リンカーの残部とＥとの間のリンケージが構造－ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ－を含む。
いくつかの実施形態では、リンカー（例えば活性エステル、例えばニトロフェニルエステルもしくはＮ－ヒドロキシスクシンイミジルエステル、またはその誘導体（例えば官能化ＰＥＧリンカー（例えば、アジド－ＰＥＧ２～ＰＥＧ４０－ＮＨＳエステル）はＥと複合しており、Ｔ（例えばＤＡＲ）が０．５～１０．０、例えば、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８．０、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０．０である。これらの場合、Ｅ－（ＰＥＧ２～ＰＥＧ４０）－アジドはクリック複合体形成によって、末端アルキンリンカー（例えばＬまたはＬ’、例えばＤ－Ｌ－ＩのＬＣ）を有するＩｎｔと反応し得る。クリック複合体形成の間、アジド（例えば、Ｆｃ－（ＰＥＧ２～ＰＥＧ４０）－アジド）とアルキン（例えば、末端アルキンリンカー（例えばＬまたはＬ’、例えばＤ－Ｌ－ＩのＬＣ）を有するＩｎｔ）との銅触媒反応で５員ヘテロ原子環が形成される。いくつかの実施形態では、Ｅに複合するリンカーは末端アルキンであり、末端アジドを有するＩｎｔと複合する。Ｅ－（ＰＥＧ２～ＰＥＧ４０）－アジドの調製物例示的な調製については実施例７、８、６１、８４、８８及び１２４に記載されている。クリック複合体形成によって調製された例示的な複合体は図４３、図６１及び図１０２に描かれている。クリックケミストリー複合体形成手順は図１０３に描写されている。当業者であればクリックケミストリー複合体形成による最終生成物を容易に理解するであろう。
例示的な連結方策（例えば、ノイラミニダーゼ阻害剤の単量体または二量体をＥに例えばリンカーによって繋げる方法）は図１、２８、２９、３０、４３及び６１にさらに描かれている。
ＶＩ．併用療法
抗ウイルス剤
いくつかの実施形態では、１つ以上の抗ウイルス剤を本明細書に記載の複合体（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの複合体）と組み合わせて投与（例えば、実質的に同時に（例えば、同じ医薬組成物として、または別個の医薬組成物として）投与、または異なる時間に別々に投与）してもよい。抗ウイルス剤は、複合体と実質的に同時に（例えば、同じ医薬組成物の中に入った状態で、または別個の医薬組成物として）投与されてもよいし、または複合体よりも前もしくは後に（例えば、１日、２日、５日、１週間、２週間、３週間、１ヶ月、２ヶ月、６ヶ月もしくは１２ヶ月のまたはそれよりも長い期間以内に）投与されてもよい。いくつかの実施形態では、複合体は（例えば、筋肉内、皮内、鼻腔内または皮下への）注射によって投与され、抗ウイルス剤は経口投与される。最も好ましくは、複合体は静脈内投与され、抗ウイルス剤は経口投与される。
いくつかの実施形態では、複合体は予防的に（例えば、対象がウイルスと接触する前に）投与され、抗ウイルス剤は、対象がウイルス感染症を有した後、ウイルス感染症を有すると予測された後、またはウイルスに曝露された後に投与される。いくつかの実施形態では、複合体及び抗ウイルス剤はどちらも、対象がウイルス感染症を有した後、ウイルス感染症を有すると予測された後、またはウイルスに曝露された後に投与される。いくつかの実施形態では、複合体及び抗ウイルス剤はどちらも予防的に投与される。
複合体及び抗ウイルス剤は、同じ医薬組成物に、または別個の医薬組成物に製剤化され得る。好ましい実施形態では、複合体及び抗ウイルス剤は、別個の医薬組成物に製剤化される（例えば、異なる投与経路のために製剤化される）。いくつかの実施形態では、複合体及び抗ウイルス剤は、同時に（例えば実質的に同じ時間に、例えば、５分、３０分、１～６時間、１～１２時間または１日以内に）、または逐次的に（例えば、異なる時間に、例えば１日よりも長く隔てて）投与される。抗ウイルス剤及び複合体が逐次的に投与されるという条件の下で、抗ウイルス剤は、複合体の投与から１～５０（例えば、１～１５、１０～２５、２０～３５、３０～４５、または３５～５０）回後に投与される（例えば、複合体の１日後、２日後、５日後、１週間後、２週間後、３週間後、１ヶ月後、２ヶ月後、６ヶ月後もしくは１２ヶ月後、またはそれよりもいっそう後の投与）。
場合によっては、本明細書に記載の複合体（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの複合体）の投与の後に抗ウイルス剤の投与は、それを必要とする対象において１日に、１週間に、１ヶ月に、半年に、１年に、または医学的に必要な時に１回以上（例えば、１～１０回以上；１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０回）行われる。
いくつかの実施形態では、抗ウイルス剤はインフルエンザウイルスの治療のための抗ウイルス剤である。例えば、抗ウイルス剤は、Ｍ２イオンチャネル遮断薬、ノイラミニダーゼ阻害剤（例えば長時間作用性ノイラミニダーゼ阻害剤）、ポリメラーゼ阻害剤、ヘマグルチニン阻害剤、融合タンパク質阻害剤、ＣＯＸ－２阻害剤、またはＰＰＡＲアゴニストであり得る。抗ウイルス剤はウイルスか宿主対象かのどちらかを標的とし得る。本明細書に記載の複合体（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの複合体）と併用される、インフルエンザウイルスの治療のための抗ウイルス剤は、ピモジビル（ｐｉｍｏｖｉｄｉｒ）、オセルタミビル、ザナミビル、ペラミビル、ラニナミビル、ＣＳ－８９５８、アマンタジン、リマンタジン、シアノビリン－Ｎ、キャップ依存性エンドヌクレアーゼ阻害剤（例えば、バロキサビル マルボキシル）、ポリメラーゼ阻害剤（例えば、Ｔ－７０５）、ＰＢ２阻害剤（例えば、ＪＮＪ－６３６２３８７２）、複合体型シアリダーゼ（例えばＤＡＳ１８１）、チアゾリド（例えばニタゾキサニド）、ＣＯＸ阻害剤、ＰＰＡＲアゴニスト、ヘマグルチニン指向性抗体（例えば、ＣＲ６２６１、ＣＲ８０２０、ＭＥＤＩ８８５２、ＭＨＡＡ４５４９ＡまたはＶＩＳ４１０などのモノクローナル抗体）、または宿主もしくはウイルス遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡ、またはそのプロドラッグ、またはその薬学的に許容される塩から選択され得る。
好ましくは、抗ウイルス剤は、複合体とは異なる治療標的を指向するもの、例えば、Ｍ２イオンチャネル遮断薬、ポリメラーゼ阻害剤、ヘマグルチニン阻害剤、ウイルス複製阻害剤（例えばキャップ依存性エンドヌクレアーゼ阻害剤）、融合タンパク質阻害剤、ＣＯＸ－２阻害剤、またはＰＰＡＲアゴニストである。最も好ましくは、抗ウイルス剤はキャップ依存性エンドヌクレアーゼ阻害剤（例えば、バロキサビル マルボキシル）である。いくつかの実施形態では、抗ウイルス剤は、式（Ｄ－ＩＩ－６）で表される複合体と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、抗ウイルス剤は、式（Ｄ－ＩＩ－７）で表される複合体と組み合わせて投与される。好ましい実施形態では、抗ウイルス剤（例えば、バロキサビル マルボキシル）は、式（Ｄ－ＩＩ－６）で表される複合体と組み合わせて投与される。最も好ましくは、抗ウイルス剤（例えば、バロキサビル マルボキシル）は、式（Ｄ－ＩＩ－７）で表される複合体と組み合わせて投与される。より好ましくは、複合体は複合体４５または複合体４６である。
バロキサビル
いくつかの実施形態では、バロキサビル マルボキシル（ＢＸＭ、プロドラッグ形態）もしくはバロキサビル酸（ＢＸＡ、活性形態）、またはその任意の塩（Ｏｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ．８：９６３３，２０１８、Ｊａｐｉｃ ＣＴＩ－１５３０９０、Ｊａｐｉｃ ＣＴＩ－１６３４１７；参照によりこれらの各々の全体を本明細書に援用する）は、本明細書に記載の複合体（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの複合体）と組み合わせて投与され得る（例えば、実質的に同時に（例えば、同じ医薬組成物で、または別個の医薬組成物で）投与され得るか、または異なる時間に別個に投与され得る）。
Figure 2022546609000426
いくつかの実施形態では、バロキサビル マルボキシル、バロキサビル酸またはその塩は、成人１日あたり約０．１ｍｇ～約３０００ｍｇ、好ましくは約０．１ｍｇ～約１０００ｍｇ、最も好ましくは約１０ｍｇ～約１００ｍｇの範囲（例えば、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７０ｍｇ、約８０ｍｇ、約９０ｍｇまたは約１００ｍｇ）の投薬量で必要に応じて数回に分けて投与される。いくつかの実施形態では、バロキサビル マルボキシル、バロキサビル酸またはその塩は、複合体と組み合わせて投与される場合、標準治療と比較して漸減される用量または頻度で投与される。複合体は、本明細書に記載の用量で投与され得る。
いくつかの実施形態では、バロキサビル マルボキシル、バロキサビル酸またはその塩は、複合体よりも頻繁に投与される。例えば、複合体は１２ヶ月、６ヶ月、３ヶ月、２ヶ月、１ヶ月に１回、３週間に１回、２週間に１回、または週１回投与され得る。バロキサビル マルボキシル、バロキサビル酸またはその塩は、１日３回、１日２回、１日１回、２～６日に１回、週１回、または２週間に１回投与され得る。いくつかの実施形態では、バロキサビル マルボキシル、バロキサビル酸またはその塩は、本明細書に記載の複合体の投与の後（例えば、６ヶ月、３ヶ月、２ヶ月、１ヶ月、３週間、２週間または１週間以内、）に１回以上（例えば、１～１０回以上；１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０回以上）投与される。
いくつかの実施形態では、バロキサビル マルボキシル、バロキサビル酸またはその塩は、経口投与される。
いくつかの実施形態では、バロキサビル マルボキシル、バロキサビル酸またはその塩は、１日あたり約０．０１ｍｇ～約１０００ｍｇ、好ましくは約０．０５ｍｇ～約５００ｍｇの範囲の投薬量で、例えば経口投与される。バロキサビル マルボキシル（ゾフルーザ（商標））の剤形及び強さはよく知られており、４０ｋｇ以上８０ｋｇ未満の成人には単回の４０ｍｇ経口用量であり、８０ｋｇ以上の成人には単回の８０ｍｇ経口用量である。小児対象（例えば１２歳以下及び４０ｋｇ以上の対象）のためのバロキサビル マルボキシル（ゾフルーザ（商標））の剤形及び強さはよく知られており、４０ｋｇ以上８０ｋｇ未満の小児対象には単回の４０ｍｇ経口用量であり、８０ｋｇ以上の小児対象には単回の８０ｍｇ経口用量である。
本発明の複合体と組み合わせて投与される場合にバロキサビル（例えば、バロキサビル マルボキシル、バロキサビル酸またはその塩）の有効性は、例えばバロキサビルと複合体との相乗的相互作用によって、増強され得る。これは、バロキサビルを有効性の低下を伴わずに（例えば現在の臨床標準治療と比較して）低減された用量で投与することを可能にし得る。これは、バロキサビルの投与に関連する副作用を減らすという利点を有する。いくつかの実施形態では、バロキサビル マルボキシル、バロキサビル酸またはその塩は、低減された、または臨床未満の用量で投与される（例えば、本明細書に記載の複合体がない場合に比べて少ない、及び／または現在の臨床標準治療に比べて少ない用量（例えば４０ｍｇ経口用量よりも少ない用量（例えば、０．０１～４０ｍｇの範囲の用量（例えば、０．５ｍｇ、１．０ｍｇ、１．５ｍｇ、２．０ｍｇ、２．５ｍｇ、５．０ｍｇ、７．５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、１８ｍｇ、２０ｍｇ、２３ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇまたは３８ｍｇの経口用量）））で投与される）。バロキサビル マルボキシル（ゾフルーザ（商標））は、本明細書に記載の任意の複合体を以前に投与されたことがある対象においてインフルエンザウイルス感染症を治療するのに十分な任意の量で提供され得る。
抗ウイルスワクチン
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体のいずれか１つ（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの複合体）を抗ウイルスワクチン（例えば、対象におけるウイルスに対して向けられる免疫応答を誘発する組成物）と組み合わせて投与する。抗ウイルスワクチンは、複合体と実質的に同時に（例えば、同じ医薬組成物として、または別個の医薬組成物として）投与されてもよいし、または複合体よりも前もしくは後に（例えば、１日、２日、５日、１週間、２週間、３週間、１ヶ月、２ヶ月、６ヶ月または１２ヶ月またはそれより長い期間の内に）投与されてもよい。
いくつかの実施形態では、ウイルスワクチンは、対象におけるＡ型、Ｂ型、Ｃ型インフルエンザウイルスまたはパラインフルエンザウイルスに対する免疫応答を誘発する免疫原を含む。いくつかの実施形態では、免疫原は不活化ウイルスである（例えば、ワクチンは、Ａ型、Ｂ型、Ｃ型インフルエンザウイルスまたはパラインフルエンザウイルスまたはその任意の組合せの精製及び不活化された材料を含有する３価インフルエンザワクチンである）。いくつかの実施形態では、ワクチンを筋肉内注射として与える。いくつかの実施形態では、ワクチンは、減毒（弱毒化）された生ウイルスを含有する生ウイルスワクチンである。いくつかの実施形態では、ワクチンは鼻腔用スプレーとして投与される。
ＶＩＩ．方法
本明細書に記載の方法は、例えば、対象におけるウイルス感染症（例えばインフルエンザウイルス感染症）を防御または治療する方法、及びウイルス粒子の成長を防止する、安定させる、または阻害する方法を含む。対象におけるウイルス感染症（例えばインフルエンザウイルス感染症）を治療する方法は、本明細書に記載の複合体（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの複合体）またはその医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、ウイルス感染症はインフルエンザウイルス（例えば、Ａ型、Ｂ型、Ｃ型インフルエンザウイルスまたはパラインフルエンザウイルス）によって引き起こされる。いくつかの実施形態では、ウイルス感染症はウイルスの耐性株によって引き起こされる。ウイルス粒子の成長を防止する、安定させる、もしくは阻害する、またはウイルスの複製及び拡散を防止する方法は、ウイルスを、またはウイルス成長が許容されやすい部位を本明細書に記載の複合体（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの複合体）またはその医薬組成物に接触させることを含む。
本開示はまた、続発感染症（例えば続発細菌感染症、続発ウイルス感染症または続発真菌感染症）またはその発症リスクを有する対象においてウイルス感染症（例えばインフルエンザウイルス感染症）から防御するまたはそれを治療する方法であって、本明細書に記載の複合体または組成物を対象に投与することを含む、当該方法も提供する。本開示はさらに、インフルエンザ感染症と診断された対象における続発感染症を予防する方法であって、本明細書に記載の複合体または組成物を対象に投与することを含む、当該方法を提供する。いくつかの実施形態では、続発感染症は、細菌感染症（例えば、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、及び／またはＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、ウイルス感染症、または真菌感染症である。特定の実施形態では、続発感染症はＭＲＳＡである。ある実施形態では、続発感染症はＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅである。いくつかの実施形態では、続発感染症は呼吸器感染症（例えば呼吸器の感染症）である。いくつかの実施形態では、続発感染症は、肺炎（例えば細菌性またはウイルス性肺炎）に関連するもの（例えばそれを引き起こすもの）である。いくつかの実施形態では、対象は、肺炎またはその発症リスクを有する。
さらに、本明細書に記載の方法は、本明細書に記載の複合体（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの複合体）を対象に投与することによって対象におけるウイルス感染症を防御または治療する方法も含む。いくつかの実施形態では、方法は、抗ウイルス剤または抗ウイルスワクチンを対象に投与することをさらに含む。
本明細書に記載の方法はまた、（１）本明細書に記載の複合体（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの複合体）、及び（２）抗ウイルス剤または抗ウイルスワクチンを対象に投与することによって上記対象におけるウイルス感染症を防御または治療する方法も含む。本明細書に記載の方法はまた、ウイルスを、またはウイルス成長が許容されやすい部位を（１）本明細書に記載の複合体（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの複合体）、及び（２）抗ウイルス剤または抗ウイルスワクチンに接触させることによって、ウイルス粒子の成長を防止する、安定させる、もしくは阻害する、またはウイルスの複製もしくは拡散を防止する方法も含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの複合体）を先に投与し、続いて抗ウイルス剤または抗ウイルスワクチンを単独で投与する。いくつかの実施形態では、抗ウイルス剤または抗ウイルスワクチンを先に投与し、続いて本明細書に記載の複合体を単独で投与する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体、及び抗ウイルス剤または抗ウイルスワクチンを実質的に同時に（例えば、同じ医薬組成物として、または別個の医薬組成物として）投与する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体、または抗ウイルス剤もしくは抗ウイルスワクチンを先に投与し、続いて本明細書に記載の複合体、及び抗ウイルス剤または抗ウイルスワクチンを実質的に同時に（例えば、同じ医薬組成物として、または別個の医薬組成物として）投与する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体、及び抗ウイルス剤または抗ウイルスワクチンを先に実質的に同時に（例えば、同じ医薬組成物として、または別個の医薬組成物として）投与し、続いて本明細書に記載の複合体、または抗ウイルス剤もしくは抗ウイルスワクチンを単独で投与する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの複合体）と、抗ウイルス剤または抗ウイルスワクチンとを一緒に（例えば、同じもしくは別個の医薬組成物として実質的に同時に、または同じ治療計画の中で別個に）投与する場合、複合体及び抗ウイルス剤または抗ウイルスワクチンの各々によるウイルス複製の阻害は、各々を治療計画の中で単独で使用した場合の複合体及び抗ウイルス剤または抗ウイルスワクチンの各々によるウイルス複製の阻害に比べてより大きくなり得る（例えばより低い濃度で起こり得る）。
ＶＩＩＩ．医薬組成物及び調製
本明細書に記載の複合体は、本明細書に記載の方法に使用するための医薬組成物に製剤化され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体は単独で医薬組成物に製剤化され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体は抗ウイルス剤または抗ウイルスワクチンと組み合わせて医薬組成物に製剤化され得る。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、本明細書に記載の複合体（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つで表される複合体）、ならびに薬学的に許容される担体及び賦形剤を含む。
医薬組成物に許容される担体及び賦形剤は、採用される投薬量及び濃度でレシピエントに対して無毒である。許容される担体及び賦形剤には、緩衝剤、例えば、ホスフェート、シトレート、ＨＥＰＥＳ及びＴＡＥ、酸化防止剤、例えばアスコルビン酸及びメチオニン、保存剤、例えば、塩化ヘキサメトニウム、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、レゾルシノール及び塩化ベンザルコニウム、タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン、ゼラチン、デキストラン及び免疫グロブリン、親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン、アミノ酸残基、例えば、グリシン、グルタミン、ヒスチジン及びリジン、ならびに炭水化物、例えば、グルコース、マンノース、スクロース及びソルビトールが含まれ得る。
他の賦形剤の例としては、付着防止剤、結合剤、コーティング剤、圧縮助剤、崩壊剤、色素、保湿剤、乳化剤、フィラー（希釈剤）、膜形成剤またはコーティング剤、香味剤、香料、滑剤（流動性増強剤）、滑沢剤、収着剤、懸濁もしくは分散剤、または甘味剤が挙げられるが、これらに限定されない。例示的な賦形剤としては、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム（二塩基性）、ステアリン酸カルシウム、クロスカルメロース、架橋ポリビニルピロリドン、クエン酸、クロスポビドン、システイン、エチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、マルチトール、マンニトール、メチオニン、メチルセルロース、メチルパラベン、微結晶セルロース、ポリエチレングリコール、ポビドン、アルファ化澱粉、プロピルパラベン、パルミチン酸レチニル、セラック、二酸化ケイ素、カルボキシメチルセルロースナトリウム、クエン酸ナトリウム、澱粉グリコール酸ナトリウム、ソルビトール、澱粉（トウモロコシ）、ステアリン酸、ステアリン酸、スクロース、タルク、二酸化チタン、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣ及びキシリトールが挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書の複合体は、薬学的に許容される塩としての調製が可能であるように電離基を有し得る。これらの塩は、無機もしくは有機酸を含んだ酸付加塩であり得、または本明細書の複合体の酸形態の場合には塩は無機もしくは有機塩基から調製され得る。複合体は、薬学的に許容される酸または塩基の付加生成物として調製された薬学的に許容される塩として調製または使用されることが多い。好適な薬学的に許容される酸及び塩基は当技術分野でよく知られており、例えば、酸付加塩を形成するためには塩酸、硫酸、臭化水素酸、酢酸、乳酸、クエン酸または酒石酸であり、塩基性塩を形成するためには水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化アンモニウム、カフェイン、種々のアミンなどである。適切な塩を調製する方法は当技術分野で十分に確立されている。
代表的な酸付加塩としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、カンファー酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプトン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、２－ヒドロキシ－エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチニン酸塩、過硫酸塩、３－フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩及び吉草酸塩が挙げられるが、これらに限定されない。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム及びマグネシウム、ならびに無毒のアンモニウム、第四級アンモニウム及びアミンカチオン、例えば、限定されないが、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン及びエチルアミンが挙げられるが、これらに限定されない。
投与経路及び投薬量に応じて、本明細書に記載の方法に使用される本明細書の複合体またはその医薬組成物を、容易な送達を可能にするのに適した医薬組成物に製剤化することになる。複合体（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの複合体）またはその医薬組成物は、筋肉内、静脈内（例えば、静脈内への使用に適した溶媒系に溶かした無菌溶液として）、皮内、動脈内、腹膜腔内、病巣内、頭蓋内、関節内、前立腺内、胸腔内、気管内、鼻腔内、硝子体内、膣内、直腸内、局所、腫瘍内、腹膜内、皮下、結膜下、小嚢内、粘膜、心嚢内、臍帯内、眼内、経口（例えば、錠剤、カプセル剤、カプレット剤、ゲルキャップ剤またはシロップ剤）、局所（例えば、クリーム剤、ゲル剤、ローション剤または軟膏剤）、局部、吸入、注射、または輸注（例えば、連続輸注、標的細胞を直接曝露させる局部的灌流、カテーテル、洗浄、クリームまたは脂質組成物）投与されるように製剤化され得る。投与経路に応じて本明細書の複合体またはその医薬組成物は例えば、錠剤、カプセル剤、丸剤、散剤、顆粒剤、懸濁剤、乳剤、液剤、ハイドロゲルを含めたゲル剤、ペースト剤、軟膏剤、クリーム剤、膏薬、ドレンチ剤、浸透圧薬物送達装置、坐剤、浣腸剤、注射剤、埋植剤、スプレー剤、イオン導入による送達に適した調製物、またはエアゾール剤の形態であり得る。組成物は従来の薬務に従って製剤化され得る。
本明細書に記載の複合体は、当技術分野で知られている様々な方法で製剤化され得る。ヒト及び動物対象の治療として使用するためには本明細書に記載の複合体は医薬組成物または動物用組成物として製剤化され得る。治療する対象（例えばヒト）、投与様式、及び望まれる治療の種類、例えば予防または療法に応じて、本明細書に記載の複合体はこれらのパラメータに添った方法で製剤化される。そのような技術の概要は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ（２０１２）、及びＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊ．Ｓｗａｒｂｒｉｃｋ ａｎｄ Ｊ．Ｃ．Ｂｏｙｌａｎ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（２０１３）の中に見出され、参照によりこれらの各々を本明細書に援用する。
製剤は、全身投与または局所もしくは局部投与に適した方法で調製され得る。全身製剤は、注射（例えば、筋肉内、静脈内または皮下注射）のために設計されたものを含み、または経皮、経粘膜もしくは経口投与のために調製されたものであってもよい。製剤は一般に、希釈剤、ならびに場合によって佐薬、緩衝剤及び保存剤を含むことになる。複合体は、リポソーム製剤またはマイクロエマルジョンとしても投与され得る。全身投与には、比較的非侵襲的な方法、例えば、坐剤、経皮パッチの使用、経粘膜送達、及び鼻腔内投与も含まれ得る。経口投与も本明細書の複合体に適している。好適な形態としては、当技術分野で理解されるようにシロップ剤、カプセル剤及び錠剤が挙げられる。
医薬組成物を注射製剤の形態で非経口投与することもできる。注射用の医薬組成物は、無菌溶液または任意の薬学的に許容される脂質をビヒクルとして使用して製剤化され得る。脂質による溶液または懸濁液に適した固体形態として製剤を調製してもよい。薬学的に許容されるビヒクルとしては、無菌水、生理食塩水、及び細胞培地（例えば、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、α－改変イーグル培地（α－ＭＥＭ）、Ｆ－１２培地）が挙げられるが、これらに限定されない。そのような注射組成物はまた、一定量の無毒な補助物質、例えば、湿潤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、例えば酢酸ナトリウム及びソルビタンモノラウレートを含有していてもよい。製剤化方法は当技術分野において既知であり、例えば、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍ．Ｇｉｂｓｏｎ，Ｔａｙｌｏｒ ＆Ｆｒａｎｃｉｓ Ｇｒｏｕｐ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ（２００９）を参照されたい。
医薬組成物を経口製剤の形態で調製することができる。経口使用のための製剤には、有効成分（複数可）を無毒の薬学的に許容される賦形剤との混合物の中に含有する錠剤が含まれる。これらの賦形剤は、例えば、不活性な希釈剤またはフィラー（例えば、スクロース、ソルビトール、砂糖、マンニトール、微結晶セルロース、澱粉、例えばジャガイモ澱粉、炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム、硫酸カルシウムまたはリン酸ナトリウム）；造粒及び崩壊剤（例えば、微結晶セルロースを含めたセルロース誘導体、ジャガイモ澱粉を含めた澱粉、クロスカルメロースナトリウム、アルギネートまたはアルギン酸）；結合剤（例えば、スクロース、グルコース、ソルビトール、アラビアガム、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、澱粉、アルファ化澱粉、微結晶セルロース、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリドンまたはポリエチレングリコール）；ならびに滑沢剤、滑剤及び付着防止剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、シリカ、水素添加植物油またはタルク）であり得る。経口使用のための製剤は、チュアブル錠としても、または有効成分と不活性固体希釈剤（例えば、ジャガイモ澱粉、ラクトース、微結晶セルロース、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリン）とが混合された硬ゼラチンカプセル剤としても、あるいは有効成分と水または油媒体、例えば、ピーナッツ油、流動パラフィンもしくはオリーブ油とが混合された軟ゼラチンカプセル剤としても提供され得る。散剤、顆粒剤及び小丸剤は、錠剤及びカプセル剤について上に述べた原料を使用して従来の方法で例えばミキサー、流動床装置または噴霧乾燥設備を使用して調製され得る。
経口製剤のための他の薬学的に許容される賦形剤としては、着色剤、香味剤、可塑剤、保湿剤及び緩衝剤が挙げられるが、これらに限定されない。経口使用のための製剤は、チュアブル錠としても、または有効成分と不活性固体希釈剤（例えば、ジャガイモ澱粉、ラクトース、微結晶セルロース、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリン）とが混合された硬ゼラチンカプセル剤としても、あるいは有効成分と水または油媒体、例えば、ピーナッツ油、流動パラフィンもしくはオリーブ油とが混合された軟ゼラチンカプセル剤としても提供され得る。散剤、顆粒剤及び小丸剤は、錠剤及びカプセル剤について上に述べた原料を使用して従来の方法で例えばミキサー、流動床装置または噴霧乾燥設備を使用して調製され得る。
本明細書に記載の複合体（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの複合体）またはその医薬組成物の溶解制御放出または拡散制御放出は、複合体の錠剤、カプセル剤、小丸剤もしくは顆粒製剤を適切にコーティングすることによって、または適切なマトリックスの中に複合体を組み込むことによって成し遂げられ得る。制御放出型コーティングは、上記のコーティング物質、及び／または例えばセラック、蜜蝋、ｇｌｙｃｏｗａｘ、カスターワックス、カルナウバ蝋、ステアリルアルコール、モノステアリン酸グリセリル、ジステアリン酸グリセリル、パルミトステアリン酸グリセロール、エチルセルロース、アクリル樹脂、ｄｌ－ポリ乳酸、酢酸酪酸セルロース、ポリ塩化ビニル、ポリ酢酸ビニル、ビニルピロリドン、ポリエチレン、ポリメタクリレート、メチルメタクリレート、２－ヒドロキシメタクリレート、メタクリレートハイドロゲル、１，３ブチレングリコール、メタクリル酸エチレングリコール及び／またはポリエチレングリコールのうちの１つ以上を含み得る。制御放出マトリックス製剤において、マトリックス材料も、例えば、水和メチルセルロース、カルナウバ蝋及びステアリルアルコール、カーボポール９３４、シリコーン、トリステアリン酸グリセリル、アクリル酸メチル－メタクリル酸メチル、ポリ塩化ビニル、ポリエチレン及び／またはハロゲン化フルオロカーボンを含み得る。
医薬組成物は、必要に応じて単位用量形態で形成されてもよい。医薬組成物中に含まれる活性成分、例えば本明細書に記載の複合体（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの複合体）の量は、指定範囲内で好適な用量（例えば、０．０１～１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内の用量）を提供するような量とする。
ＩＸ．投与経路及び投薬量
本明細書に記載の方法のいずれかにおいて、本明細書の複合体は、ウイルス感染症（例えばインフルエンザ感染症）の治療もしくは防御、またはウイルス（例えばインフルエンザウイルス）の増殖もしくは拡散の防止、安定化もしくは抑制に適した任意の経路で投与され得る。本明細書に記載の複合体は、薬学的に許容される希釈剤、担体または賦形剤と共にヒト、飼育ペット、家畜または他の動物に投与され得る。いくつかの実施形態では、投与することは、本明細書に記載の複合体（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの複合体）のいずれかまたは組成物の筋肉内、静脈内（例えば、静脈内への使用に適した溶媒系に溶かした無菌溶液として）、皮内、動脈内、腹膜腔内、病巣内、頭蓋内、関節内、前立腺内、胸腔内、気管内、鼻腔内、硝子体内、膣内、直腸内、局所、腫瘍内、腹膜内、皮下、結膜下、小嚢内、粘膜、心嚢内、臍帯内、眼内、経口（例えば、錠剤、カプセル剤、カプレット剤、ゲルキャップ剤またはシロップ剤）、局所（例えば、クリーム剤、ゲル剤、ローション剤または軟膏剤）、局部、吸入、注射、または輸注（例えば、連続輸注、標的細胞を直接曝露させる局部的灌流、カテーテル、洗浄、クリームまたは脂質組成物）投与を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体に加えて抗ウイルス剤も投与する場合、抗ウイルス剤またはその医薬組成物も、本明細書に記載の投与経路のいずれかで投与され得る。
本明細書に記載の複合体（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの複合体）またはその医薬組成物の投薬量は、投与経路、治療する疾患（例えばウイルス感染症の程度及び／または症状）、及び身体特性、例えば、対象の年齢、体重、全身の健康状態を含めた因子によって決まる。典型的には、単回用量が含有する複合体またはその医薬組成物の量は、毒性をあまりもたらさずにウイルス感染症を効果的に予防する、遅くする、または治療する量であり得る。医薬組成物は、０．０１～５００ｍｇ／ｋｇの範囲（例えば、０．０１、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０または５００ｍｇ／ｋｇ）、より具体的な実施形態では約０．１～約３０ｍｇ／ｋｇ、より具体的な実施形態では約１～約３０ｍｇ／ｋｇの投薬量の本明細書に記載の複合体を含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの複合体）と抗ウイルス剤または抗ウイルスワクチンとを組み合わせて（例えば、同じもしくは別個の医薬組成物として実質的に同時に、または同じ治療計画の中で別個に）投与する場合、本明細書に記載の複合体の必要投薬量は、治療計画の中で複合体を単独で使用する場合の複合体の必要投薬量よりも少なくなり得る。
本明細書に記載の複合体（例えば、式（１）～（５）、（Ｄ－Ｉ）～（Ｄ－ＸＩ）、（Ｄ’－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）～（Ｍ－ＸＩ）、または（Ｍ’－Ｉ）のいずれか１つの複合体）またはその医薬組成物は、それを必要とする対象に例えば、１日に、１週間に、１ヶ月に、半年に、１年に、または医学的必要に応じて、１回以上（例えば、１～１０回以上；１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０回）投与され得る。投薬量は単一あるいは複数の投薬計画において提供され得る。投与間のタイミングは、病状が改善するにつれて減少してもよく、または患者の健康状態が悪化するにつれて増加してもよい。投薬量及び投与頻度は、一般的な因子、例えば、感染の程度、及び対象の種々のパラメータに応じて医師によって調整され得る。
以下の実施例は、本明細書に記載の組成物及び方法がどのように用いられ得、作られ得、評価され得るかについての説明を当業者に提供するために示したものであり、純粋に本発明を例示することを意図したものであり、本発明者らが自らの発明であるとみなす範囲を限定する意図はない。
実施例１：Ｆｃ構築物の調製
タンパク質構築物（配列番号１、３、５、７、９、１２及び１４）を含むアミノ酸の逆翻訳物を固相合成によって合成した。オリゴヌクレオチド鋳型をｐｃＤＮＡ３．１（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）のクローニング部位ＢａｍＨＩ及びＸｈｏＩ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｉｐｓｗｉｃｈ，ＭＡ，ＵＳＡ）にクローニングし、ヒトインターロイキン－２またはヒトアルブミンに由来するシグナル配列を含ませた。ｐｃＤＮＡ３．１プラスミドをＴｏｐ１０ Ｅ．ｃｏｌｉ細胞（ＬｉｆｅＴｅｃｈ）に形質転換した。ＤＮＡを増幅し、抽出し、ＰＵＲＥＬＩＮＫ（登録商標）ＨｉＰｕｒｅプラスミドフィルターＭａｘｉｐｒｅｐキット（ＬｉｆｅＴｅｃｈ）を使用して精製した。プラスミドＤＮＡを、製造業者のプロトコールに従ってＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３トランスフェクションキット（ＬｉｆｅＴｅｃｈ）を使用してＨＥＫ－２９３細胞に送達した。細胞を遠心分離し、濾過し、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ，ＵＳＡ）を使用して上清を精製した。ゲル中に１～２μｇの各分子を装填すること及びｉｎｓｔａｎｔ Ｂｌｕｅ染色を用いて染色することによってビストリス４～１２％のＳＤＳ ＰＡＧＥゲルを使用して精製分子を分析した。各ゲルは、示された分子量基準を有する分子量ラダーを含んでいた（図２～８）。還元及び非還元レーンを「Ｒ」及び「ＮＲ」で表す。図２～８は、Ｆｃドメインの非還元及び還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥが、それぞれ配列番号１、３、５、７、９、１２及び１４の配列を有するＦｃドメイン単量体から形成されていることを示している。
実施例２．ザナミビル中間体の合成
Figure 2022546609000427
ステップａ．
Figure 2022546609000428
 ５－アセトアミド－７，８，９－Ｏ－トリアセチル－２，６－無水－４－アジド－３，４，５－トリデオキシ－Ｄ－グリセロ－Ｄ－ガラクト－ノナ－２－エン酸メチル（４．５６ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（１５ｍＬ）に溶解させ、溶液をおよそ１３℃に冷却した。トリフェニルホスフィン（２．８９ｇ、１１ｍｍｏｌ）を数回に分けて２０分間かけて添加した。得られた混合物をおよそ１３℃で室温になるまで２時間撹拌し、その後ＬｉＯＨ（２４ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の水（１．５ｍＬ）溶液を滴加した。２８時間撹拌した後、反応混合物にＮ，Ｎ’－ビス－ｂｏｃ－１－グアニルピラゾール（３．２６ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）及び４－ジメチルアミノピリジン（２４４．４ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を１．５日間撹拌した。次いでそれを酢酸エチル：ヘキサンの１：１混合物（１００ｍＬ）で希釈し、水（３０ｍＬ）で抽出した。水層を酢酸エチル（３０ｍＬ）で逆抽出した。合わせた有機層をロータリーエバポレーションによって濃縮した。残渣をＣ１８逆相カラムクロマトグラフィー（１５０ｇ、２５～７０％のアセトニトリル及び水）で精製した。集めた画分を室温でロータリーエバポレーションによって濃縮した。濁った水溶液が得られ、生成物の大半はフラスコにゲルとして沈澱した。その後、溶液を酢酸エチル（１５０ｍＬ）で抽出した。有機層を使用してゲル物質を再溶解させた。次いでそれをＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ロータリーエバポレーションによって濃縮し、高真空下でさらに乾燥させて表題化合物を白色泡状物として得た。収率６．２４ｇ、９２．８％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝６７３．２。
ステップｂ．
Figure 2022546609000429
 ステップａからの生成物（６．２４ｇ、９．２８ｍｍｏｌ）の無水ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）溶液を氷水浴中で冷却し、０．５ＭのナトリウムメトキシドのＭｅＯＨ溶液（２６ｍＬ、１３ｍｍｏｌ）をゆっくり添加した。反応物を１時間撹拌し、次いでそのｐＨを４ＮのＨＣｌのジオキサン溶液（３ｍＬ）の滴加によって慎重に７～７．５に調整した。溶媒を室温を超えない温度でロータリーエバポレーションによって除去した。残渣を酢酸エチル及びヘキサンの２：１混合物（１５０ｍＬ）で希釈し、得られた溶液を水（２０ｍＬ）で抽出した。水層を酢酸エチル（３０ｍＬ）で逆抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ロータリーエバポレーションによって濃縮し、高真空下でさらに乾燥させた。生成物をさらに精製することなく次のステップへ移した。収率５．０３ｇ、９９．２％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝５４７．２。
ステップｃ．
Figure 2022546609000430
 ステップｂの生成物（７１３ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）を含んだ無水ＤＣＭ（６ｍＬ）を氷水浴中で冷却し、４－ジメチルアミノピリジン（１５９．８ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（５２０ｍｇ、４ｍｍｏｌ）を添加した。その後、混合物にクロロギ酸４－ニトロフェニル（３５６．６ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（２ｍＬ）溶液を滴加した。その後、氷水浴を取り外し、反応混合物を３時間撹拌し、ＬＣＭＳ（必要に応じて追加のクロロギ酸４－ニトロフェニルを添加してもよい）によって追跡した。反応終了後、それを水（１０ｍＬ）でクエンチさせ、有機層を抽出し、ロータリーエバポレーションによって濃縮した。残渣をＣ１８逆相カラムクロマトグラフィー（１００ｇ、２０～７０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。集めた画分の中のアセトニトリルを室温でロータリーエバポレーションによって除去した。その後、水層を酢酸エチルとヘキサンとの１：１混合物（１２０ｍＬ）で抽出した。水層を酢酸エチル（３０ｍＬ）で逆抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ロータリーエバポレーションによって濃縮し、高真空下でさらに乾燥させて表題化合物を白色固体として得た。収率５２０ｍｇ、７０％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝５７３．２。
実施例３．リンカー１の合成
Figure 2022546609000431
ステップａ．
Figure 2022546609000432
 Ｚ－Ｄ－グルタミン酸γ－メチルエステル（２．０ｇ、６．７７ｍｍｏｌ）とグリシンメチルエステルＨＣｌ（１．２８２ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）とを無水ＤＭＦ（７ｍＬ）中に含んだ混合物に、ＤＩＰＥＡ（２．０２ｇ、１５．５７ｍｍｏｌ）を添加し、続いてＨＡＴＵ（２．６６ｇ、７．０ｍｍｏｌ）を数回に分けて２５分間かけて添加した。ＨＡＴＵが溶解した後、追加量のＤＩＰＥＡ（１．１５ｇ、８．８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１．５時間撹拌し、その後、５％のＨＣｌ水溶液（１００ｍＬ）及びＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×２）で抽出した。有機層をロータリーエバポレーションによって濃縮した。残渣を水（１００ｍＬ）及びＥｔＯＡｃ／ヘキサン（２：１、１５０ｍＬ）で再抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ロータリーエバポレーションによって濃縮し、高真空下でさらに乾燥させて白色固体を得た。粗生成物をさらに精製することなく次のステップへ移した。収率２．３ｇ、９３％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３６７。
ステップｂ．
Figure 2022546609000433
 ステップａの生成物（２．３ｇ、６．２９ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨとＴＨＦとの１：１混合物（１０ｍＬ）に溶解させた。溶液を氷水浴中で冷却した後、ＬｉＯＨ一水和物（６３０ｍｇ、１５ｍｍｏｌ）の水（９ｍＬ）溶液を数回に分けて１．５時間かけて添加した。さらに２時間撹拌した後、４ＮのＨＣｌを含んだジオキサン（３．７ｍＬ）で反応混合物を中和した。有機溶媒を室温でロータリーエバポレーションによって部分的に除去した。残存している物質をそのままＲＰＬＣ（１５０ｇ、０～３９％のアセトニトリル及び水）で精製した。収率２．０３ｇ、２ステップを通して８８．７％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３３９．２。
ステップｃ．
Figure 2022546609000434
 ステップｂの生成物（１．４１ｇ、４．１７ｍｍｏｌ）とＮ－Ｂｏｃ－１，６－ジアミノヘキサン（１．９９ｇ、９．２ｍｍｏｌ）とを無水ＤＭＦ（６ｍＬ）及びＤＩＰＥＡ（１．３ｇ、１０ｍｍｏｌ）の中に含んだ混合物に、ＨＡＴＵ（３．５ｇ、９．２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液をシリンジポンプで１１ｍＬ／ｈｒの速度で添加した。ＨＡＴＵの添加を終えてすぐに反応物を３０分間撹拌し、そのままＲＰＬＣ（１５０ｇ、０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した１０～５０％のアセトニトリル及び水）で精製した。収率１．３ｇ、４２．４％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝７３５、［Ｍ－Ｂｏｃ＋Ｈ］＋＝６３５．４。
ステップｄ．
Figure 2022546609000435
 ステップｃの生成物（１．３ｇ、１．７７ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（２０ｍＬ）に溶解させ、Ｐｄ／Ｃを溶液に添加した。混合物を水素下で４時間撹拌した。Ｐｄ／Ｃを濾別し、濾液をロータリーエバポレーションによって濃縮し、高真空下でさらに乾燥させた。収率１．０３ｇ、９６．９％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝６０１。
ステップｅ．
Figure 2022546609000436
 加熱乾燥させた反応フラスコに窒素を流し、４－アジド酪酸（７７ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（９２ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）及び無水ＤＭＦ（０．５ｍＬ）を充填した。固体が溶解するまで混合物を撹拌し、その後、ＤＣＣ（１２５．５ｍｇ、０．６０８ｍｍｏｌ）を添加した。１時間撹拌した後、ステップｄの生成物（３００ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した。反応物を６時間撹拌し、そのままＲＰＬＣ（１５０ｇ、０１．％のＴＦＡを調整剤として使用した１０～７０％のアセトニトリル及び水）を用いて精製した。回収された画分を凍結乾燥させて白色固体を得た（ＬＣＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝７１２、［Ｍ－Ｂｏｃ＋Ｈ］＋＝６１２）。材料をＤＣＭ（約２ｍＬ）及びＴＦＡ（約１ｍＬ）に再溶解させ、１５分間撹拌した。次いでそれをロータリーエバポレーションによって濃縮し、残渣をＲＰＬＣ（５０ｇ、０～４０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率２５５ｍｇ、６８．９％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝５１２、［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝２５６。
実施例４．Ｉｎｔ－１の合成
Figure 2022546609000437
ステップａ．
Figure 2022546609000438
 ザナミビル中間体（実施例２）（５３２．５ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（２ｍＬ）溶液にＤＭＡＰ（４９０ｍｇ、４ｍｍｏｌ）を添加し、続いて炭酸ビス（ペンタフルオロフェニル）（３８５ｍｇ、０．９１１ｍｍｏｌ）を添加した。一晩撹拌した後、リンカー１（実施例３）（２４５．６ｍｇ、０．３３２ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（１ｍＬ）及びＤＩＰＥＡ（９１ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）の中に含んだ溶液を反応混合物に添加した。反応を２時間継続し、その後、ＲＰＬＣ（１００ｇ、５～６７％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率１３５ｍｇ、２３．８％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝８４５．９。
ステップｂ．
Figure 2022546609000439
 ステップａの生成物（１３５ｍｇ、０．０７９ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（０．５ｍＬ）に溶解させ、溶液を室温で２０分間撹拌した。次いでそれをそのままＲＰＬＣ（５０ｇ、５～３２％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率８８ｍｇ、８５．１％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝６５４．８。
ステップｃ．
Figure 2022546609000440
 ステップｂの生成物（８８ｍｇ、０．０６７３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１．５ｍＬ）溶液を氷水浴中で冷却し、ＬｉＯＨ（５ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を含んだ水（０．５ｍＬ）を添加した。混合物を５時間撹拌した後、それを４ＮのＨＣｌのジオキサン溶液（０．１ｍＬ）で酸性化し、ＨＰＬＣ（０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した５～２０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率７６．４ｍｇ、７８％。ＬＣＭでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝６１４．８。
実施例５．リンカー２の合成
Figure 2022546609000441
ステップａ．
Figure 2022546609000442
 プロパルギル－ＰＥＧ４－酸（３６４．４ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（２ｍＬ）溶液にＨＡＴＵ（５５８．９ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ）を添加した。撹拌して全てのカップリング試薬を溶解させた後、ＤＩＰＥＡ（３９０ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を添加し、１０分間撹拌した。ステップｄの生成物であるリンカー１（実施例３、ステップｄ）（７０１．１ｍｇ、１．１６７ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１ｍＬ）溶液を添加した。得られた混合物を３０分間撹拌し、そのままＲＰＬＣ（１００ｇ、５～６０％のアセトニトリル及び水）で精製した。収率８３０ｍｇ、８４．４％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝８４３。
ステップｂ．
Figure 2022546609000443
 ステップａの生成物をＴＨＦ（５ｍＬ）に溶解させ、４ＮのＨＣｌのジオキサン溶液（２．５ｍＬ）で処理した。室温で一晩撹拌した後、反応混合物をロータリーエバポレーションによって濃縮した。残渣をアセトニトリル／水（１：１、１６ｍＬ）に再溶解させ、溶液を凍結乾燥させた。粗生成物さらに精製することなく次のステップへ移した。収率７６１．８ｍｇ、１００％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝６４３．８。
実施例６．Ｉｎｔ－２の合成
Figure 2022546609000444
ステップａ．


Figure 2022546609000445
 加熱乾燥させた反応フラスコに窒素を流し、ザナミビル中間体（実施例２）（５３３．６ｍｇ、０．８１２ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（９９．８ｍｇ、０．８１ｍｍｏｌ）、及び無水ＤＣＭ（１ｍＬ）を充填した。撹拌して出発物質を溶解させた後、溶液を氷水浴中で冷却し、クロロギ酸４－ニトロフェニル（２４２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を５時間撹拌し、その後、リンカー２（実施例５）（２２８．４ｍｇ、０．３１９ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（１ｍＬ）及びＤＩＰＥＡ（１３０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の中に含んだ溶液に添加した。反応物を一晩撹拌し、ＲＰＬＣ（１５０ｇ、０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した２０～６５％のアセトニトリル及び水）によって精製した。集めた画分を凍結乾燥させた。収率１７８．３ｍｇ、３０．４％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝９２０．５、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝６１４．２。
ステップｂ．
Figure 2022546609000446
 ステップａの生成物（１７８．３ｍｇ、０．０９６９ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（０．５ｍＬ）に溶解させた。溶液を２０分間撹拌し、次いでそのままＨＰＬＣ（０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した０～２５％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率９１．８ｍｇ、５６．８％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝７２０．４、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝４８０．６。
ステップｃ．
Figure 2022546609000447
 ステップｂの生成物（９１．８ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１ｍＬ）に溶解させ、溶液を氷水浴中で冷却した。ＬｉＯＨ一水和物（２１ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を含んだ水（１ｍＬ）を数回に分けて１時間かけて添加した。さらに２時間撹拌した後、反応混合物を４ＮのＨＣｌのジオキサン溶液（０．３ｍＬ）で酸性化し、ＨＰＬＣ（０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した０～２０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率３６．２ｍｇ、５９．４％．％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝６８０．３、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝４５４．０。
実施例７．ｈ－ＩｇＧ１ Ｆｃ－ＰＥＧ４－アジドの合成
ＰＥＧ４－アジドＮＨＳエステル（９８％、１８０μｍｏｌ、９．５当量、７１．４ｍｇを含んだ０．５ｍＬのＤＭＦをｐＨ７．４のＰＢＳ １×緩衝液で３．６０ｍＬに希釈した溶液）を、ｈ－ＩｇＧ１ Ｆｃの溶液（配列番号４）（１１０３ｍｇを７０．０ｍＬのｐＨ７．４ ＰＢＳの中に含んだもの、ＭＷ約５８，０００Ｄａ、１９．０μｍｏｌ）に添加し、混合物を周囲温度で１２時間穏やかに振盪した。遠心濃縮器（３０，０００ＭＷＣＯ）を使用して溶液を約１．５ｍＬの体積に濃縮した。粗混合物をＰＢＳ ｐＨ７．４で１：１０に希釈し、再び濃縮した。この洗浄手順を合計３回繰り返した。この洗浄手順によって低分子試薬が除去された。濃縮されたＦｃ－ＰＥＧ４－アジドをｐＨ７．４のＰＢＳ １×緩衝液で７０．０ｍＬに希釈してクリック複合体形成に備えた。精製された材料を、Ｎａｎｏｄｒｏｐ（商標）ＵＶ可視分光光度計を使用して（ｈ－ＩｇＧ１のアミノ酸配列に基づいて算出された消衰係数を用いて）定量した。精製後の収量は定量的である。ＭＡＬＤＩによって決定してＤＡＲ＝４．３である。ＤＡＲ値は、ＰＥＧ４－アジドＮＨＳエステルの当量を略線形関係で変化させることによって調節され得る。例えば、７．０当量のＰＥＧ４－アジドＮＨＳエステルを使用する場合、ＤＡＲ値は３．０となろう。
本明細書に記載の任意の複合体のためのＦｃをコードする核酸構築物は、アミノ酸Ｌｙｓ４４７（例えばＣ末端リジン残基）を含むＦｃをコードする核酸配列を含み得る。発現時にＦｃのＣ末端リジンはタンパク質分解的に切断され、Ｌｙｓ４４７を欠く（例えばＣ末端リジン残基を欠く）配列を有するＦｃをもたらす。Ｃ末端リジンの存在または非存在は、Ｆｃまたは対応する複合体の特質を変化させない。
実施例８．組換えマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）－ＰＥＧ４－アジドの合成
ＰＥＧ４－アジドＮＨＳエステル（９８％、８１．７μｍｏｌ、４．５当量、３２．４ｍｇを含んだ０．３ｍＬのＤＭＦをｐＨ７．４のＰＢＳ １×緩衝液で１．６３ｍＬに希釈した溶液）を、組換えマウス血清アルブミン（配列番号８０）の溶液（１２００ｍｇを７５．０ｍＬのｐＨ７．４ ＰＢＳの中に含んだもの、ＭＷ約６６，０００Ｄａ、１８．２μｍｏｌ）に添加し、混合物を周囲温度で１２時間穏やかに振盪した。遠心濃縮器（３０，０００ＭＷＣＯ）を使用して溶液を約１．５ｍＬの体積に濃縮した。粗混合物をＰＢＳ ｐＨ７．４で１：１０に希釈し、再び濃縮した。この洗浄手順を合計３回繰り返した。この洗浄手順によって低分子試薬が除去された。濃縮されたＭＳＡ－ＰＥＧ４－アジドをｐＨ７．４のＰＢＳ １×緩衝液で７５．０ｍＬに希釈してクリック複合体形成に備えた。精製された材料を、Ｎａｎｏｄｒｏｐ（商標）ＵＶ可視分光光度計を使用して（ｈ－ＩｇＧ１のアミノ酸配列に基づいて算出された消衰係数を用いて）定量した。精製後の収量は定量的である。ＭＡＬＤＩによって決定してＤＡＲ＝３．５である。ＤＡＲ値は、ｈ－ＩｇＧ１ Ｆｃ（実施例７）と同様にＰＥＧ４－アジドＮＨＳエステルの当量を変化させることによって調整され得る。
実施例９．複合体１の合成
ｈ－ＩｇＧ１ Ｆｃ－ＰＥＧ４－アジド（実施例７）のＰＢＳ溶液（５０ｍｇ、２．８１５ｍＬ、０．８５９１μｍｏｌ）を、Ｉｎｔ－２（実施例６）（３５．２ｍｇ、０．０２２１７ｍｍｏｌ）が入った１５ｍＬ容の遠心管に加えた。混合物を穏やかに振盪して全てのＩｎｔ－２を溶解させた後、Ｌ－アスコルビン酸ナトリウム（５９．４ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）と硫酸銅（ＩＩ）（１０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）とＴＨＰＴＡ（２３ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）とをＰＢＳ ７．４ 緩衝液（１ｍＬ）中に含んだ溶液を３４４μｌ添加した。得られた混合物を穏やかに一晩振盪した。それを、実施例８に記載したように親和性クロマトグラフィーによってプロテインＡカラムで精製し、続いてサイズ排除クロマトグラフィーで精製した。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析で平均質量は６３７９７Ｄａであった（ＤＡＲ＝３．４）。収量２７．３９ｍｇ、収率５５％。図９は複合体１の非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥを示す。
実施例１０．複合体の精製
粗混合物をＰＢＳ ｐＨ７．４で１：１０に希釈し、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ，ＵＳＡ）を用いて精製し、続いてサイズ排除クロマトグラフィー（ＨｉＬｏａｄ ２６／６００ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００ ｐｇ，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ，ＵＳＡ）によって精製した。精製された複合体を含有する画分を溜めて、遠心濃縮器（３０，０００ＭＷＣＯ）を使用しておよそ２０ｍｇ／ｍＬに濃縮した。精製された材料を、Ｎａｎｏｄｒｏｐ（商標）ＵＶ可視分光光度計を使用して、ｈＩｇＧ１ Ｆｃ（ｍｙｃ）のアミノ酸配列に基づいて算出された消衰係数を用いて定量した。１μｇの各分子をゲルに装填すること及びＩｎｓｔａｎｔ Ｂｌｕｅ（Ｅｘｐｅｄｅｏｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して染色することによってビストリス４～１２％のＳＤＳ ＰＡＧＥゲルを使用して精製分子を分析した。各ゲルは、示された分子量基準を有する分子量ラダーを含んでいた。収率を算出し、純度をＡｇｉｌｅｎｔ分析用ＨＰＬＣによって決定した。Ｍａｌｄｉ ＭＳによって生成物のピーク及びＭＷを調べ、最終ＤＡＲを算出した。
実施例１１．Ｉｎｔ－３の合成
Figure 2022546609000448
ステップａ．
Figure 2022546609000449
 プロパルギル－ＰＥＧ４－酸（２６０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）とＨＡＴＵ（３８０．２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）とを無水ＤＭＦ（１ｍＬ）中に含んだ溶液に、ＤＩＰＥＡ（１３０ｍｇ）を添加した。５分間撹拌した後、ＮＨ－ビス（ＰＥＧ３－Ｂｏｃ）（５００ｍｇ、０．８８１ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌を室温で一晩継続した。次いでそれをそのままＲＰＬＣ ９１００ｇ、０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した５～５０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率６８３ｍｇ、９５．８％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝８１０．４、［Ｍ－Ｂｏｃ＋Ｈ］＋＝７１０．４、［（Ｍ－２Ｂｏｃ＋２Ｈ）／２］＋＝３０５．８。
ステップｂ．
Figure 2022546609000450
 ステップａの生成物をＴＦＡ（１ｍＬ）に溶解させた。溶液を２時間撹拌し、次いでそのままＲＰＬＣ（１００ｇ、０～３０％のアセトニトリル及び水）で精製した。収率５８９ｍｇ、９８．７％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝３０５．８。
ステップｃ．
Figure 2022546609000451
 加熱乾燥させた反応フラスコに窒素を流し、ザナミビル中間体（実施例２）（５７２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）及び無水ＤＣＭ（１ｍＬ）を充填した。撹拌して出発物質を溶解させた後、溶液を氷水浴中で冷却し、クロロギ酸４－ニトロフェニル（３０２．４ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を添加し、続いてＤＭＡＰ（２２．４ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を５時間撹拌し、その後、クエンチ水（０．２ｍＬ）を添加した。１０分間撹拌した後、ステップｂの生成物（２５６．７ｍｇ、０．３５５ｍｍｏｌ）を含んだ無水ＤＭＦ（１ｍＬ）及びＤＩＰＥＡ（１６３．８ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ）を添加した。撹拌を２時間継続し、次いで反応物をそのままＲＰＬＣ（１５０ｇ、０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した２０～６５％のアセトニトリル及び水）によって精製した。集めた画分を凍結乾燥させた。不純物が多少混入している所望の生成物の収量４２２．８ｍｇ、収率６９％未満。材料をさらに精製することなく次のステップへ移した。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝９０３．９、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝６０３．２。
ステップｄ．
Figure 2022546609000452
 ステップｃの生成物（４２２．８ｍｇ、０．２４５ｍｍｏｌ未満）をＴＦＡ（１ｍＬ）に溶解させた。溶液を２０分間撹拌し、次いでそのままＨＰＬＣ（０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した５～２５％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率１６９．７ｍｇ、２ステップを通して２９．２％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝７０４．０、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝４６９．６。
ステップｅ．
Figure 2022546609000453
 ステップｄの生成物（１６９．７ｍｇ、０．０９２３ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１．５ｍＬ）に溶解させ、溶液を氷水浴中で冷却した。ＬｉＯＨ一水和物（２１ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を含んだ水（１ｍＬ）を数回に分けて１時間かけて添加した。一晩撹拌した後、反応混合物をＤｏｗｅｘ ５０Ｗ ｘ ８ 水素型によって酸性化し、ＲＰＬＣ（０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した０～３０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率１０７．９ｍｇ、６６．９％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝６６３．８、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝４４２．９。
実施例１２．複合体２の合成
標題複合体を、Ｉｎｔ－３（実施例１１）を使用して複合体１（実施例９）と同様に調製した。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析で平均質量は６３５６１Ｄａであった（ＤＡＲ＝３．３）。収量４３．４ｍｇ、収率４３％。図１０は複合体２の非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥを示す。
実施例１３．Ｉｎｔ－４の合成
Figure 2022546609000454
ステップａ．
Figure 2022546609000455
 加熱乾燥させた反応フラスコに窒素を流し、ザナミビル中間体（実施例２）（３４３．２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）及び無水ＤＣＭ（１．５ｍＬ）を充填した。溶液を氷水浴中で冷却し、ＤＩＰＥＡ（２３４ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）を添加し、続いてクロロギ酸４－ニトロフェニル（１２１ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（６７．４ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を１５分間撹拌し、その後、追加量のクロロギ酸４－ニトロフェニル（１２１ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）を添加した。２時間撹拌した後、水（０．２ｍＬ）を添加して未反応のクロロホルメートをクエンチさせた。１０分間撹拌した後、反応混合物にプロパルギル－ＰＥＧ４－アミン（１８５ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（０．５ｍＬ）溶液を添加した。反応を１時間継続し、次いでそのままＲＰＬＣ（１００ｇ、０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した５～６０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。集めた画分を凍結乾燥させた。収率３５５ｍｇ、７１．３％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝８３０．２。
ステップｂ．
Figure 2022546609000456
ステップａの生成物（３５５ｍｇ、０．４２８ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（１ｍＬ）に溶解させた。溶液を一晩撹拌し、次いでそのままＲＰＬＣ（０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した５～２５％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率２６０．２ｍｇ、２ステップを通して７０．９％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝６３０．２。
ステップｃ．
Figure 2022546609000457
 ステップｂの生成物（２６０．２ｍｇ、０．３０３ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１．５ｍＬ）に溶解させた。溶液を氷水浴中で冷却した後、ＬｉＯＨ一水和物（４２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の水（１ｍＬ）溶液を数回に分けて１時間かけて添加した。反応物を一晩撹拌し、その後、Ｄｏｗｅｘ ５０Ｗ ｘ ８ 水素型で酸性化し、ＲＰＬＣ（０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した０～５０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率７８．１ｍｇ、９９％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝５９０．２。
実施例１４．複合体３の合成
標題複合体を、Ｉｎｔ－４（実施例１３）を使用して複合体１（実施例９）と同様に調製した。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析で平均質量は６１１８２Ｄａであった（ＤＡＲ＝３．４）。収量５０．８９ｍｇ、収率５１％。図１１は複合体３の非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥを示す。
実施例１５．Ｉｎｔ－５の合成
Figure 2022546609000458
ステップａ．
Figure 2022546609000459
 加熱乾燥させた反応フラスコに窒素を流し、（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ）－３－（（Ｓ）－１－アセトアミド－２－エチルブチル）－４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－２－ヒドロキシシクロペンタンカルボン酸メチル（３２０．４ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）及び無水ＤＣＭ（２ｍＬ）を充填した。溶液を氷水浴中で冷却し、ＤＩＰＥＡ（３１２ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）を添加し、続いてクロロギ酸４－ニトロフェニル（１６１．３ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（９８ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を１５分間撹拌し、その後、追加量のクロロギ酸４－ニトロフェニル（１６１．３ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を２時間撹拌し、その後、水（０．２ｍＬ）を添加して未反応のクロロホルメートをクエンチさせた。１０分間撹拌した後、プロパルギル－ＰＥＧ４－アミン（２５９ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（０．５ｍＬ）溶液を添加した。反応物を１時間撹拌し、次いでそのままＲＰＬＣ（１００ｇ、０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した５～６０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。回収された画分を凍結乾燥させた。収率３９１．２ｍｇ、７４．４％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝６５８．３、［Ｍ－Ｂｏｃ＋Ｈ］＋＝５５８．３。
ステップｂ．
Figure 2022546609000460
 ステップａの生成物（３９１．２ｍｇ、０．５９５ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（０．８ｍＬ）に溶解させ、溶液を室温で２０分間撹拌した。次いでそれをそのままＲＰＬＣ（１００ｇ、５～６０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率３２３．２ｍｇ、８１％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝５５８．３。
ステップｃ．
Figure 2022546609000461
 ステップｂの生成物（３２３．２ｍｇ、０．４８２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２ｍＬ）溶液にＮ，Ｎ’－ビス－Ｂｏｃ－１－グアニルピラゾール（２２４．４ｍｇ、０．７２３ｍｍｏｌ）及びＰＩＰＥＡ（２６０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１日間撹拌し、その後、水（３ｍＬ）及びＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：１、８ｍＬ）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ロータリーエバポレーションによって濃縮した。残渣をＴＦＡ（約１ｍＬ）に再溶解させ、溶液を一晩撹拌した。次いでそれをそのままＲＰＬＣ（１００ｇ、０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した０～３０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。集めた画分を凍結乾燥させた。収率２５４．２ｍｇ、８３．２％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝６００．３、［Ｍ－Ｂｏｃ＋Ｈ］＋＝３００．６。
ステップｄ．
Figure 2022546609000462
 ステップｃの生成物（２５４．２ｍｇ、０．３５６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１．５ｍＬ）に溶解させ、溶液を氷水浴中で冷却した。ＣａＣｌ２二水和物（４１９ｍｇ、２．８５ｍｍｏｌ）を添加し、その後、ＫＯＨ（１１２ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を含んだ水（２ｍＬ）のうち１．８ｍＬを、数回に分けて１時間かけて添加した。さらに３時間撹拌した後、反応混合物をＤｏｗｅｘ ５０Ｗ ｘ ８ 水素型によって酸性化し、ＲＰＬＣ（０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した０～３０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率１０２ｍｇ、４９．８％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝５８６．４、［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝２９３．８。
実施例１６．複合体４の合成
標題複合体を、Ｉｎｔ－５（実施例１５）を使用して複合体１（実施例９）と同様に調製した。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析で平均質量は６３００２Ｄａであった（ＤＡＲ＝３．４）。収量４９．３１５ｍｇ、収率４９％。図１２は複合体４の非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥを示す。
実施例１７．Ｉｎｔ－６の合成
Figure 2022546609000463
ステップａ．

Figure 2022546609000464
 加熱乾燥させた反応フラスコに窒素を流し、（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ）－３－（（Ｓ）－１－アセトアミド－２－エチルブチル）－４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－２－ヒドロキシシクロペンタンカルボン酸メチル（２８０．４ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）及び無水ＤＣＭ（１ｍＬ）を充填した。撹拌して出発物質を溶解させた後、ＤＭＡＰ（８５．７ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）を溶液に添加し、続いて炭酸ビス（ペンタフルオロフェニル）（２９５．６ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を１時間撹拌し、その後、リンカー２（実施例５）（１５７．５ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（１ｍＬ）及びＤＩＰＥＡ（１３０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の中に含んだ溶液に添加した。反応物を一晩撹拌し、ＲＰＬＣ（５０ｇ、５～９０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。集めた画分を凍結乾燥させた。収率１３４．１ｍｇ、４０．７％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝７４８．６。
ステップｂ．
Figure 2022546609000465
 ステップａの生成物（１３４．１ｍｇ、０．０８９６ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（０．５ｍＬ）に溶解させた。溶液を２０分間撹拌し、次いでそのままＲＰＬＣ（５０ｇ、５～６０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率１０８．４ｍｇ、９３．４％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝６４８．３、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝４３２．８。
ステップｃ．
Figure 2022546609000466
 ステップｂの生成物（１０８．４ｍｇ、０．０８３７ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１ｍＬ）溶液にＮ，Ｎ’－ビス－ｂｏｃ－１－グアニルピラゾール（８１．３ｍｇ、０．２８５ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＰＡ（６５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で２．５日間撹拌し、次いでそのままＲＰＬＣ（１００ｇ、４０～７５％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率７３．６ｍｇ、４９．４％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝５９４．２。
ステップｄ．
Figure 2022546609000467
ステップｃの生成物（７３．６ｍｇ、０．０４１ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（０．５ｍＬ）に溶解させた。溶液を２０分間撹拌し、次いでそのままＲＰＬＣ（５０ｇ、５～６０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率６２．１ｍｇ、９４．１％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝６９０．４、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝４６０．８。
ステップｅ．
Figure 2022546609000468
 ステップｄの生成物（６２．１ｍｇ、０．０３８６ｍｍｏｌ）を含んだＴＨＦ（３ｍＬ）を氷水浴中で冷却し、４５％ｗ／ｗのＫＯＨ溶液（０．２ｍＬ）を数回に分けて１時間かけて添加した。反応物をさらに２時間撹拌し、その後、４ＮのＨＣｌのジオキサン溶液（０．８ｍＬ）で酸性化し、ヘキサン（１０ｍＬ）及び水（１．５ｍＬ）で抽出した。水層をＨＰＬＣ（０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した０～２０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率３６．２ｍｇ、５９．４％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝６７６．５、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝４５１．４。
実施例１８．複合体５の合成
標題複合体を、Ｉｎｔ－６（実施例１７）を使用して複合体１（実施例９）と同様に調製した。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析で平均質量は６３５６１Ｄａであった（ＤＡＲ＝３．３）。収量４３．４ｍｇ、収率４３％。図１３は複合体５の非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥを示す。
実施例１９．Ｉｎｔ－７の合成
Figure 2022546609000469
ステップａ．
Figure 2022546609000470
 プロパルギル－ＰＥＧ４－酸（６０９ｍｇ、２．３４ｍｍｏｌ）とＮＨ－ビス（ＰＥＧ１－アジド）（５００ｍｇ、２．０５５ｍｍｏｌ）とを無水ＤＭＦ（２ｍＬ）中に含んだ溶液に、ＨＡＴＵ（８８９．７ｍｇ、２．３４ｍｍｏｌ）を数回に分けて５分間かけて添加した。撹拌して全てのカップリング試薬を溶解させた後、ＤＩＰＥＡ（３９０ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌を１時間継続した。次いでそれをそのままＲＰＬＣ（１００ｇ、５～４０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率９１８ｍｇ、９２％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４８６．２。
ステップｂ．
Figure 2022546609000471
 ステップａの生成物（９１８ｍｇ、１．８９ｍｍｏｌ）をＴＨＦに溶解させ、溶液を約１３℃に冷却した。トリフェニルホスフィン（１．１４１ｇ、４．３５ｍｍｏｌ）を数回に分けて１０分間かけて添加した。得られた混合物を約１３℃から室温になるまで２時間撹拌した。ＬｉＯＨ一水和物（４２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を水（２ｍＬ）及びＭｅＯＨ（１ｍＬ）の中に含んだ溶液を添加した。撹拌を２０時間継続した後、反応物をＲＰＬＣ（１００ｇ、０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した０～３０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率８２５ｍｇ、６５．９％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４３４．４。
ステップｃ．


Figure 2022546609000472
 加熱乾燥させた反応フラスコに窒素を流し、ザナミビル中間体（実施例２）（８６５ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ）及び無水ＤＣＭ（５ｍＬ）を充填した。撹拌して出発物質を溶解させた後、溶液を氷水浴中で冷却し、クロロギ酸４－ニトロフェニル（３６５．３ｍｇ、１．８１ｍｍｏｌ）を添加し、続いてＤＭＡＰ（１５２．２ｍｇ、０．７５５ｍｍｏｌ）を添加した。氷水浴を取り外し、混合物を３時間撹拌した。追加量のクロロギ酸４－ニトロフェニル（３０４．４ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌を１時間継続した。その後、反応物を水（１ｍＬ）でクエンチさせた。１時間にわたって激しく撹拌した後、反応混合物を水（２０ｍＬ×２）及びＤＣＭ（２０ｍＬ）で抽出した。有機層を一晩撹拌し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ロータリーエバポレーションによって濃縮した。材料をさらに精製することなく次のステップへ移した。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝７３８．２。
ステップｄ．
Figure 2022546609000473
 ステップｂの生成物（４２９．７ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（２６０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）との混合物を無水ＴＨＦ（１ｍＬ）中に含んだ溶液を、ステップｃの生成物に滴加した。得られた混合物を２時間撹拌し、次いでそのままＲＰＬＣ（１００ｇ、１０～６５％のアセトニトリル及び水）によって精製した。集めた画分の中のアセトニトリルを室温でロータリーエバポレーションによって除去した。不均一な水層をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で抽出し、その後、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で逆抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ロータリーエバポレーションによって濃縮乾固した。収率４４２ｍｇ、４１．７％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝８１５．８、［（Ｍ－Ｂｏｃ＋２Ｈ）／２］＋＝７６５．８、［（Ｍ－２Ｂｏｃ＋２Ｈ）／２］＋＝７１６。
ステップｅ．
Figure 2022546609000474
 ステップｄの生成物（４４１ｍｇ、０．２７１ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（１ｍＬ）に溶解させた。溶液を２０分間撹拌し、次いでそのままＨＰＬＣ（０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した５～２０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率３０８ｍｇ、７７．９％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝６１５．８、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝４１１。
ステップｆ．
Figure 2022546609000475
 ステップｅの生成物（３０８ｍｇ、０．２１１ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１ｍＬ）及び水（０．５ｍＬ）に溶解させ、溶液を氷水浴中で冷却した。ＬｉＯＨ一水和物（４２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の水（１ｍＬ）溶液を数回に分けて１時間かけて添加した。反応物を一晩撹拌し、４ＮのＨＣｌのジオキサン溶液（０．２５ｍＬ）によって酸性化し、ＲＰＬＣ（０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した０～２０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率１９８ｍｇ、６４％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝５７５．８、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝３８４．２。
実施例２０．複合体６の合成
標題複合体を、Ｉｎｔ－７（実施例１９）（配列番号１８）を使用して複合体１（実施例９）と同様に調製した。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析で平均質量は６２８５４．Ｄａであった（ＤＡＲ＝３．１）。収量１７５．４ｍｇ、収率５０％。図１４は複合体６の非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥを示す。得られた複合体は図４３に描かれている。
実施例２１．Ｉｎｔ－８の合成

Figure 2022546609000476
ステップａ．
Figure 2022546609000477
 ５－アセトアミド－７，８，９－Ｏ－トリアセチル－２，６－無水－４－アジド－３，４，５－トリデオキシ－Ｄ－グリセロ－Ｄ－ガラクト－ノナ－２－エン酸メチル（１．８ｇ、４．０ｍｍｏｌ）を４０ｍＬのメタノールに溶解させ、その後、４００ｍｇの５％Ｐｄ／Ｃ及び１．１ｇのＢｏｃ無水物（５．０ｍｍｏｌ）で処理し、その後、反応混合物を水素雰囲気下で１時間、室温で撹拌した。パラジウム炭を濾過によって除去した。濾液を濃縮し、精製せずに次のステップに使用した。
ステップｂ．

Figure 2022546609000478
 先のステップからの生成物を２０ｍＬの無水メタノールに溶解させ、その後、氷水浴中で冷却しながら２ｍＬのナトリウムメトキシド含有メタノール（０．５Ｍ）の滴加によって処理した。２時間後、反応の進行をＬＣＭＳによって見極めた。反応物を１ＮのＨＣｌでｐＨ５～６にクエンチさせた。得られた溶液を濃縮し、０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した５％～１００％のアセトニトリル及び水で溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：（Ｍ＋Ｈ）＋＝４０５。
ステップｃ．

Figure 2022546609000479
 ５－アセトアミド－２，６－無水－４－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］－３，４，５－トリデオキシ－Ｄ－エリスロ－ノナ－２－エン酸メチル（０．４ｇ、１ｍｍｏｌ）を、１０ｍＬのアセトン、４ｍＬの２，２－ジメトキシプロパン及び２０ｍｇのｐ－トルエンスルホン酸水和物（０．１ｍｍｏｌ）に溶解させた。得られた溶液を室温で一晩撹拌し、その後、１ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３でクエンチさせた。混合物を濃縮し、調整剤を含まない５％～１００％のアセトニトリル及び水で溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：（Ｍ＋Ｈ）＋＝４４５。
ステップｄ．

Figure 2022546609000480
 氷水浴によって冷却しながら、５－アセトアミド－２，６－無水－４－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］－３，４，５－トリデオキシ－８，９－Ｏ－（１－メチルエチリデン）－Ｄ－エリスロ－ノナ－２－エン酸メチル（０．２５ｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を含んだ５ｍＬの無水ＴＨＦに水素化ナトリウム（４０ｍｇ、油中６０％、１．０ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を０．５時間撹拌し、その後、ブロモ酢酸ベンジル（０．２３ｇ、１．０ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を２時間撹拌し、１０％の塩化アンモニウムを含んだ水５ｍＬでクエンチさせた。その後、溶液を５０ｍＬの酢酸エチルで希釈した。有機層を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。乾燥させた有機溶液を濃縮し、調整剤を含まない５％～１００％のアセトニトリル及び水で溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：（Ｍ＋Ｈ）＋＝５９３。
実施例２２．Ｉｎｔ－９の合成



Figure 2022546609000481
ステップａ．
Figure 2022546609000482
 ５－アセトアミド－７，８，９－Ｏ－トリアセチル－２，６－無水－４－アジド－３，４，５－トリデオキシ－Ｄ－グリセロ－Ｄ－ガラクト－ノナ－２－エン酸メチル（１０ｇ、２２ｍｍｏｌ）を１００ｍＬのメタノールに溶解させ、その後、油浴で６０℃に加熱し、ＳｎＣｌ２（５．７ｇ、２０ｍｍｏｌ）を３回に分けて溶液に添加した（注意、気体発生あり）。反応混合物を１０分間撹拌したが、ＨＰＬＣによればこの時間に反応が終了した。反応溶液を５０ｍｌの飽和ＮａＨＣＯ３の溶液及び５０ｇのセライトに、激しく撹拌しながらゆっくり添加した。得られたスラリーを濾過した。濾液をＢｏｃ２Ｏ（６．６ｇ、３０ｍｍｏｌ、１．５当量）で処理した。室温で２時間経過した後、溶液を濃縮してほとんどのメタノールを除去し、２００ｍｌのＤＣＭに溶解させ、１００ｍｌのＤＣＭで２回抽出した。合わせた抽出液を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、さらに精製することなく次のステップに使用した。粗収率１２ｇ、１００％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ＋Ｈ＝５３１。
ステップｂ．
Figure 2022546609000483
 先のステップからの材料を６０ｍＬの無水メタノールに溶解させ、その後、氷水浴で冷却しながら１０ｍｌのナトリウムメトキシド含有メタノール（０．５Ｍ）で処理した。反応の進行をＬＣＭＳによって追跡したが、この反応は２時間後に終了した。反応物を１ＮのＨＣｌでｐＨ５～６にクエンチさせた。得られた溶液を濃縮し、０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した０％～３０％のアセトニトリル及び水で溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。生成物の収率７．２ｇ、８０％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ＋Ｈ＝４０５。
ステップｃ．
Figure 2022546609000484
 先のステップからの生成物（３．５ｇ、８．５ｍｍｏｌ）と、ＣＤＩ（２．８ｇ、２当量）と、トリメチルアミン（４．２ｍｌ、３０ｍｍｏｌ）と、ＤＭＡＰ（２４０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）との溶液をアセトニトリル（５０ｍｌ）中で一晩加熱し、その後、濃縮し、調整剤を含まない０％～３０％のアセトニトリル及び水で溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。所望の生成物の収率２．３ｇ、６０％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ＋Ｈ＝４３１。
ステップｄ．
Figure 2022546609000485
 水素化ナトリウム（４００ｍｇ、油中６０％、１０ｍｍｏｌ）を、先のステップからの生成物（１．４５ｇ、３．３ｍｍｏｌ）を含んだ５０ｍｌの無水ＴＨＦに氷水浴下で添加した（水分に敏感な反応）。得られた溶液を０．５時間撹拌し、その後、ブロモ酢酸ｔｅｒｔブチル（２ｇ、１０ｍｍｏｌ）を上記溶液に添加し、得られた溶液を６０℃まで一晩加熱し、酢酸でクエンチさせた。得られた溶液を濃縮し、ＴＦＡを調整剤として含んだ０％～５０％のアセトニトリル及び水で溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。収率１ｇ、５７％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ＋Ｈ＝５９３。
ステップｅ．

Figure 2022546609000486
 先のステップからの生成物（１．２ｇ、２．２ｍｍｏｌ）を１０ｍｌのＴＦＡと共に室温で一晩撹拌し、脱保護の進行をＬＣＭＳによって追跡した。得られた溶液を濃縮し、精製せずに次のステップに使用した。残渣を２０ｍｌのＴＨＦに再溶解させ、その後、Ｎ，Ｎ’－ビス－ｂｏｃ－１－グアニルピラゾール（１ｇ、３．３ｍｍｏｌ）、４－ジメチルアミノピリジン（１２０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．７ｍｌ、５ｍｍｏｌ）を溶液に添加し、得られた溶液を２時間、６０℃に加熱した。得られた溶液を濃縮し、調整剤を含まない０％～５０％のアセトニトリル及び水で溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。収率７００ｍｇ、８４％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ＋Ｈ＝６３１。
ステップｆ．
Figure 2022546609000487
 リンカー３（実施例１９に記載のとおりに調製したもの）（７３ｍｇｇ、０．１４ｍｍｏｌ）と先のステップの生成物（２００ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ、２．２当量）とをＤＭＦ（３０ｍｌ）中に含んだ溶液に、ＥＤＣ（１００ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｔ（６５ｍｇ、３ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（０．１４ｍｌ、１ｍｍｏｌ）を室温で添加した。溶液を一晩撹拌した。得られた溶液を濃縮し、調整剤を含まない０％～５０％のアセトニトリル及び水で溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。収率１２０ｍｇ、５２％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ／２＋Ｈ＝８３０。
ステップｇ．
Figure 2022546609000488
 水酸化リチウム（２４ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を含んだ２ｍｌのＨ２Ｏを、先のステップからの生成物（１２０ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）を２ｍｌのＴＨＦ及び１ｍｌのＭｅＯＨの中に含んだ溶液に添加し、ＬＣＭＳで反応の進行を追跡した。終了後、溶液にイオン交換樹脂ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ（登録商標）ＩＲＮ－７７を添加してｐＨ１に調整し、その後、得られた溶液を濾過し、濾液を濃縮し、精製せずに次のステップに使用した。得られた化合物を室温で２ｍｌのＴＦＡで処理し、溶液を４０℃で一晩撹拌し、その後、濃縮し、ＴＦＡを調整剤として使用した０％～２０％のアセトニトリル及び水で溶離させるＨＰＬＣによって精製した。収量６０ｍｇ、収率７４％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：［Ｍ／２］＋１＝５８９．８。
実施例２３。ノイラミニダーゼ阻害アッセイ
２’－（４－メチルウンベリフェリル）－アルファ－Ｄ－Ｎ－アセチルノイラミン酸（ＭＵＮＡＮＡ）基質を使用するノイラミニダーゼ阻害アッセイを以下に記載のとおりに実施した。手短に述べると、５０μＬの精製された組換えインフルエンザウイルス・ノイラミニダーゼ（０．１ｎｇ／μＬ、５０ｍＭのトリス、５ｍＭのＣａＣｌ２、２００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５）を５０μＬの阻害剤と混合し、室温で３０分間インキュベートした。反復１回につき各阻害剤の少なくとも５つの濃度を適切な範囲で用いた。インキュベート後、５０ｍＭのトリス、５ｍＭのＣａＣｌ２、２００ｍＭのＮａＣｌ（ｐＨ７．５）の中に４００μＭのＭＵＮＡＮＡを含んだもの５０μＬを、１２チップピペット（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）を使用して溶液に添加して、反応を開始させた。陽性及び陰性対照を１２ウェルレーンの各々の中に含ませた。プレート上の各レーンで反応を開始した後、反応混合物をすぐさまＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）に装填し、３６５ｎｍの励起波長及び４４５ｎｍの発光波長での蛍光を２５分間にわたって定量した。陽性対照がおよそ１，０００の蛍光信号を生成した単一の時間点を選択した。全てのアッセイは３反復で行い、各阻害剤のＩＣ５０値を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを用いて阻害百分率に対するｌｏｇ［阻害剤］のシグモイド近似によって算出した。図１５は、複合体１及びＩｎｔ－２についての線形範囲にわたるＲＦＵ／ｍｉｎとしての速度論データのプロットを示し、ノイラミニダーゼ阻害剤として複合体１の方が有効性が高いことを示している。図１６及び図１７は、それぞれｒＨ１Ｎ１ノイラミニダーゼ及びｒＨ３Ｎ２ノイラミニダーゼに対する複合体１～６についてのアッセイ結果を示す（表２）。

Figure 2022546609000489
実施例２４：細胞毒性アッセイ
複合体１、２、３及び６を細胞毒性について試験した。９６ウェル培養プレートでのＭＤＣＫ細胞への接種のために、各複合体の１０μＭから出発して１０個の２倍段階希釈液を３反復で調製した。処置から４日後にＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏキットを使用して細胞生存能を決定した。ＸＬｆｉｔ用量応答モデルを用いて５０％細胞毒性濃度（ＣＣ５０）を算出した（表３）。複合体３を除く全ての試験化合物について、１０μＭまでは細胞毒性が認められなかった。複合体３の場合、細胞変性効果（ＣＰＥ）アッセイ（実施例２３参照）におけるＥＣ５０はこのアッセイでのＣＣ５０の７２５分の１である。
Figure 2022546609000490
実施例２５．細胞変性効果アッセイ
ＣＰＥに基づくマイクロ中和アッセイ＃１
哺乳動物細胞をインフルエンザウイルスによる感染及び破壊から保護するノイラミニダーゼ複合体の能力を測定するために、細胞変性効果（ＣＰＥ）に基づくマイクロ中和アッセイを行った。手短に述べると、９６ウェルプレートに播種したＭＤＣＫ細胞への１時間の接種のために、各複合体の０．２５μＭから出発する２倍段階希釈液２０個を反復調製した。１時間のインキュベーションのために感染多重度（ＭＯＩ）０．００１のＩＮＦＶ ＣＡ／０９ウイルスを細胞に添加した。インキュベート後４日目に細胞をクリスタルバイオレットで染色し、ＸＬｆｉｔ用量応答モデルを用いる各ＴＡの５０パーセント効果濃度（ＥＣ５０）の算出のために光学濃度を読み取った。ザナミビルを対照薬及び陽性対照として使用した。ヒトＦｃを陰性対照として含めた。複合体１、２、３及び６はどれもザナミビル対照よりも優れた性能を示し、ザナミビルに比べて２２７分の１～４２分の１の低さのＥＣ５０を示した（表４）。

Figure 2022546609000491
ＣＰＥに基づくマイクロ中和アッセイ＃２
さらなるＣＰＥに基づくマイクロ中和アッセイを行って複合体６及び複合体７の試験管内での活性をさらに評価した。手短に述べると、１６０ｎＭの出発濃度で試験品を調製し、合計１０個の２倍希釈液を作った。その後、試験品希釈液とＡ型インフルエンザウイルス（ＩＮＦＶ ＣＡ／０９）とを単層に対して０．００１の感染多重度で予混合した。１時間後、９６ウェルプレートで標準条件下で成長させて７０～８０％コンフルエンスにしたメイディンダービーイヌ腎臓（ＭＤＣＫ）細胞に、試験品＋ウイルスミックスを添加した。ザナミビル対照については、試験される複合体よりも有効性が低いと予想されたために出発濃度を９６００ｎＭとしたことを除けば同じ処理をした。４日間インキュベートした後、単層をクリスタルバイオレットで染色し、（単層の健康状態を反映する）光学濃度を決定して５０％効果濃度（ＥＣ５０）をＸＬｆｉｔ用量応答モデルを用いて算出した（ｉｄｂｓ；ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｉｄｂｓ．ｃｏｍ）。
表５に示されるとおり、４９６ｎＭの濃度のザナミビルがウイルス媒介細胞変性効果を半分減少させた。対照的に、複合体６はＥＣ５０がたったの４．６４ｎＭとなって活性がおよそ１００倍高かった。複合体７は活性をさらにおよそ１５倍向上させ、ＥＣ５０をｎＭ未満のレベルに下げた。
Figure 2022546609000492
実施例２６．細胞生存能アッセイ
Ａ５４９細胞を化合物処理の１日前に９６ウェルプレートに播種した。細胞を濃度１μＭ～１０ｎＭの複合体３（図１８Ａ）、複合体４（図１８Ｂ）または複合体６（図１８Ｃ）のいずれかで２４時間処理した。その後、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏｗ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて細胞生存能を測定した。結果は３回の生物学的反復の平均及び標準偏差を表す。ウイルス成長アッセイ（実施例２７）に用いたいずれかの濃度で、どの濃度でどの複合体についても細胞生存能に対する影響は認められなかった。
実施例２７．ウイルス成長アッセイ
ヒト上皮細胞における関心対象の病原性インフルエンザウイルス株の成長を阻害するノイラミニダーゼ複合体の濃度を測定するために、ウイルスプラーク減少アッセイを行った。手短に述べると、化合物処理の１日前にＡ５４９細胞を２４ウェルプレートに播種した。細胞を濃度１μＭ～１０ｎＭの化合物で２時間処理し、示されたウイルス株に０．０１のＭＯＩで１時間のインキュベーションで感染させた。ウイルスを除去し、細胞を洗浄し、濃度１μＭ～１０ｎＭの化合物に再び接触させた。示された時間点で上清を回収し、ＭＤＣＫ細胞におけるプラークアッセイ法を用いて力価決定した。結果は３回の生物学的反復の平均及び標準偏差を表す。オセルタミビルを対照薬及び陽性対照として使用した。複合体３（図１９のＡ～Ｅ）、複合体４（図２０のＡ～Ｅ）または複合体６（図２１のＡ～Ｅ、及び図２２のＡ～Ｅ）はどれもオセルタミビル対照よりも優れた性能を示し、１００分の１の濃度でオセルタミビルと同程度であるかまたはそれよりも（大抵）優れているプラーク減少を示した。各試験品について、細胞生存能アッセイ（実施例２６）を用いて、（あり得る細胞毒性について試験品を評価するために）Ａ５４９細胞に対する化合物の影響を評価した。手短に述べると、Ａ５４９細胞を化合物処理の１日前に９６ウェルプレートに播種した。細胞を濃度１μＭ～１０ｎＭの化合物で２４時間処理した。その後、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏｗ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて細胞生存能を測定した。結果は３回の生物学的反復の平均及び標準偏差を表す。
実施例２８．マウス血清中半減期
薬物動態（ＰＫ）試験では２０～２２グラムの雌のＣＤ－１マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を使用した。マウスに尾静脈から５０ｍｇ／ｋｇの試験品（１０ｍｌ／ｋｇの用量体積）を静脈注射した。標準的なＩＡＣＵＣ承認飼育条件下で動物を飼育した。適時に動物の非最終採血を（後眼窩、頬または尾静脈で）行い、凝固を防止するために血液をＥＤＴＡ管内に採集した。採集された血液を遠心分離にかけ（２，０００ｘｇ、１０分間）、経時試験品濃度の分析のために血漿を抜き取った。
各時間点での複合体６またはｈＩｇＧ１ Ｆｃの血漿中濃度をサンドイッチＥＬＩＳＡによって以下のとおりに測定した：複合体６分子をノイラミニダーゼ被覆プレート上か抗ｈＩｇＧ１抗体被覆プレート上かのどちらかに捕捉し、その後、ＨＲＰ複合抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃ抗体を使用して検出した。ｈＩｇＧ１は、抗ｈＩｇＧ１ Ｆｃ抗体を使用して捕捉された。複合体６（またはｈＩｇＧ１ Ｆｃ）標準曲線の４ＰＬ非線形回帰を用いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍでタンパク質濃度を算出した。方法についてのより詳細な説明を以下に示す。
Ｑｉａｇｅｎ Ｎｉ－ＮＴＡ ＨｉｓＳｏｒｂプレート（カタログ番号３５０６１、Ｑｉａｇｅｎ）を、Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０４／２００９（Ｈ１Ｎ１）からのノイラミニダーゼ（１１０５８－ＶＮＡＨＣ、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏ）か、抗ＩｇＧ１ Ｆｃ抗体かのどちらかを含んだ１×ＫＰＬ被覆用緩衝液（５１５０－００４１、ＳｅｒａＣａｒｅ）で被覆した。試験品を捕捉するために抗ＩｇＧ１ Ｆｃ抗体を使用する場合、異なるエピトープに結合する捕捉及び検出抗ＩｇＧ１ Ｆｃ抗体を選択した。プレートを室温で１時間インキュベートした。血漿試料の段階希釈液を播種し、室温で２時間インキュベートした（試料希釈剤：Ｔｗｅｅｎ２０を０．０５％としたＰＢＳの中に０．５％の脱脂粉乳＋３％のヤギ血清を含んだもの；１：９００のナイーブマウス血漿終濃度）。５００～０．２３０ｎｇ／ｍＬの範囲の複合体６またはｈＩｇＧ１ Ｆｃ標準曲線を各プレートで反復して作成した。
２時間のインキュベーションの後、Ｔｗｅｅｎ２０を０．０５％含んだ３００ｕＬのＰＢＳでプレートを５回洗浄した。その後、試料希釈剤で１：２０００に希釈したＨＲＰ複合抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ Ｆ（ａｂ’）２（Ｊａｃｋｓｏｎ ７０９－０３６－０９８）によって室温で１時間、プレート上のノイラミニダーゼ（または抗ｈＩｇＧ１ Ｆｃ抗体）に結合した複合体６を探った。その後、Ｔｗｅｅｎ２０を０．０５％含んだ３００ｕＬのＰＢＳでプレートを８回洗浄し、ＴＭＢ基質で７分間発色させた。１ＮのＨ２ＳＯ４で反応を停止させた。４５０ｎｍで吸光度を読み取った。ｈＩｇＧ１ Ｆｃに同様のプロトコールを用いたが、この場合、抗ｈＩｇＧ１ Ｆｃ抗体のみを捕捉のために使用した。ノイラミニダーゼか抗ｈＩｇＧ１ Ｆｃ抗体かのどちらかによる捕捉を用いて異なる時間点で測定した複合体６の量は実験誤差範囲内で同程度であり、無変化の複合体が生体内で安定であることが示唆された。
試験試料中の全複合体６（またはｈＩｇＧ１ Ｆｃ）を、複合体６（またはｈＩｇＧ１ Ｆｃ）標準曲線の非線形回帰解析（シグモイド、４ＰＬ解析）に続いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６を用いて内挿した。ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェアを使用してＰＫパラメータを算出した。複合体６とｈＩｇＧ１ Ｆｃとを比較する曲線を図２３に示し、肝要なＰＫパラメータを表６に示す。予想外なことに、血漿曝露及び終末相半減期は野生型ｈＩｇＧ１ Ｆｃに比べて複合体６の方が著しく良好である。８日間のＡＵＣはｈＩｇＧ１ Ｆｃの場合よりも複合体６の場合の方が３倍高く、複合体６の終末相半減期は２１４時間であり、これ対してヒトＩｇＧ１ Ｆｃでは５２時間である。
Figure 2022546609000493
実施例２９．致死性マウスインフルエンザモデルにおける複合体６の有効性：試験＃１
複合体６を雌のＢＡＬＢ／ｃマウスにおける致死性Ａ型ＩＮＦＶ Ｈ１Ｎ１インフルエンザ感染症に対して評価した。実験はマウス５匹の群を７つ含んでいた。０日目に全てのマウスを１×ＬＤ９０のＨ１Ｎ１ Ａ／Ｔｅｘａｓ／３６／９１で攻撃した。群１～６には攻撃の４時間前に静脈注射で処置を施した（表７）。ヒトＩｇＧ１（Ｆｃ単独）をさらなる陰性対照として含めた。群７にはリン酸オセルタミビルを１日２回、感染の８時間後から始めて５日間にわたって経口送達によって与えた。攻撃後１５日間にわたって全てのマウスを体重減少（図２４、表８）及び生存（図２５、表９）について追跡評価した。
複合体６で処置したマウスは、試験した全ての濃度において単回用量で１００％の生存率を示し、これに比べてビヒクル対照及びｈＩｇＧ１対照群ではそれぞれ２０％及び０％の生存率であった。群サイズが小さい（ｎ＝５）にもかかわらず、結果はビヒクル群と比較して統計的に有意であった（ｐ＝０．０１３５）。複合体６は、リン酸オセルタミビル群に比べて５００分の１の低さの累積用量（ｍｇ／ｋｇ表示）で同程度の有効性を示した。全ての複合体６用量においてマウスは実験の全期間を通して体重を維持し、オセルタミビル対照群の場合よりも優れていた。
Figure 2022546609000494
Figure 2022546609000495
Figure 2022546609000496
実施例３０．致死性マウスインフルエンザモデルにおける複合体６の有効性：試験＃２
複合体６を雌のＢＡＬＢ／ｃマウスにおける致死性Ａ型ＩＮＦＶ Ｈ３Ｎ２インフルエンザ感染症に対して評価した。実験はマウス５匹の群を１１個含んでいた。０日目に全てのマウスを１×ＬＤ９０のＨ３Ｎ２ Ａ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／１／６８で攻撃した。群１～１０には攻撃の４時間前に静脈注射で処置を施した（表１０）。ヒトＩｇＧ１（Ｆｃ単独）をさらなる陰性対照として含めた。群１１にはリン酸オセルタミビルを１日２回、感染の８時間後から始めて５日間にわたって経口送達によって与えた。攻撃後１５日間にわたって全てのマウスを体重減少（図２６）及び生存（図２７、表１１）について追跡評価した。
複合体６で処置したマウスは、０．４ｍｇ／ｋｇに下げるまでは単回用量で１００％の生存率を示し、０．２ｍｇ／ｋｇの単回用量で８０％の生存率を示し、これに比べてビヒクル対照及びｈＩｇＧ１対照群ではそれぞれ０％の生存率であった。オセルタミビル対照群ではマウスの８０％が生き残った。群サイズが小さい（ｎ＝５）にもかかわらず、ビヒクル群と比較したとき結果は統計的に有意であった（ｐ＝０．０１２８）。複合体６は、リン酸オセルタミビル群に比べて１０００分の１の低さの累積用量（ｍｇ／ｋｇ表示）で同程度の有効性を示した。全ての複合体６用量においてマウスは０．４ｍｇ／ｋｇに下げるまでは体重を５％以内に維持し、オセルタミビル対照群の場合よりも優れていた。
Figure 2022546609000497
Figure 2022546609000498
実施例３１．Ｉｎｔ－１０の合成
Figure 2022546609000499
ステップａ．
Figure 2022546609000500
５－アセトアミド－７，８，９－Ｏ－トリアセチル－２，６－無水－４－アジド－３，４，５－トリデオキシ－Ｄ－グリセロ－Ｄ－ガラクト－ノナ－２－エン酸メチル（ＳＭ－１、１０ｇ、２２ｍｍｏｌ）を１００ｍＬのメタノールに溶解させ、その後、油浴で６０°Ｃに加熱し、溶液にＳｎＣｌ２（５．７ｇ、２０ｍｍｏｌ）を３回に分けて添加した（注意、気体発生あり）。反応混合物を１０分間撹拌したが、ＨＰＬＣによればこの時間に反応が終了した。反応溶液を５０ｍｌの飽和ＮａＨＣＯ３の溶液及び５０ｇのセライトに、激しく撹拌しながらゆっくり添加した。得られたスラリーを濾過した。濾液をＢｏｃ２Ｏ（６．６ｇ、３０ｍｍｏｌ、１．５当量）で処理した。室温で２時間経過した後、溶液を濃縮してほとんどのメタノールを除去し、２００ｍｌのＤＣＭに溶解させ、１００ｍｌのＤＣＭで２回抽出した。合わせた抽出液を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、さらに精製することなく次のステップに使用した。粗収率１２ｇ、１００％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ＋Ｈ＝５３１。
ステップｂ．
Figure 2022546609000501
 先のステップからの材料を６０ｍＬの無水メタノールに溶解させ、その後、氷水浴で冷却しながら１０ｍｌのナトリウムメトキシド含有メタノール（０．５Ｍ）で処理した。反応の進行をＬＣＭＳによって追跡したが、この反応は２時間後に終了した。反応物を１ＮのＨＣｌでｐＨ５～６にクエンチさせた。得られた溶液を濃縮し、０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した０％～３０％のアセトニトリル及び水で溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。生成物の収率７．２ｇ、８０％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ＋Ｈ＝４０５。
ステップｃ．

Figure 2022546609000502
 先のステップからの中間体（３．５ｇ、８．５ｍｍｏｌ）と、ＣＤＩ（２．８ｇ、２当量）と、トリメチルアミン（４．２ｍｌ、３０ｍｍｏｌ）と、ＤＭＡＰ（２４０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）との溶液をＤＭＦ（５０ｍｌ）中で６０℃で一晩加熱し、その後、濃縮し、０％～３０％のアセトニトリルで溶離させ調整剤を含まずになされるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。所望の生成物の収率２．３ｇ、６０％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ＋Ｈ＝４３１。
ステップｄ．
Figure 2022546609000503
 Ｉｎｔ－４（１．４５ｇ、３．３ｍｍｏｌ）を含んだ５０ｍｌの無水ＴＨＦに氷水浴下で水素化ナトリウム（４００ｍｇ、油中６０％、１０ｍｍｏｌ）を添加した（水分に敏感な反応）。得られた溶液を０．５時間撹拌し、その後、ブロモ酢酸ｔｅｒｔ－ブチル（２ｇ、１０ｍｍｏｌ） を上記溶液に添加した。得られた溶液を６０℃に一晩に加熱し、酢酸でクエンチさせ、濃縮し、ＴＦＡを調整剤として含んだ０％～５０％のアセトニトリル及び水で溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。収率１ｇ、５７％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ＋Ｈ＝５９３。（ＨＰＬＣによれば反応物中に不純物がほとんどないが、単離収率は低い）。
ステップｆ．
Figure 2022546609000504
 先のステップからの中間体（１．２ｇ、２．２ｍｍｏｌ）を１０ｍｌのＴＦＡと共に室温で一晩撹拌した。脱保護の進行をＬＣＭＳで追跡した。得られた溶液を濃縮し、精製せずに次のステップに使用した。
先の反応からの残渣を２０ｍｌのＴＨＦに溶解させ、その後、Ｎ，Ｎ’－ビス－ｂｏｃ－１－グアニルピラゾール（１ｇ、３．３ｍｍｏｌ）、４－ジメチルアミノピリジン（１２０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．７ｍｌ、５ｍｍｏｌ）を溶液に添加し、得られた溶液を６０℃に２時間加熱した。得られた溶液を濃縮し、調整剤を含まない０％～５０％のアセトニトリル及び水で溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。収率７００ｍｇ、８４％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ＋Ｈ＝６３１。
ステップｇ．
Figure 2022546609000505
 リンカー３（実施例１９に記載のとおりに調製された）（７３ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）と先のステップからの中間体（２００ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ、２．２当量）とをＤＭＦ（３０ｍｌ）中に含んだ溶液に、ＥＤＣ（１００ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｔ（６５ｍｇ、３ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（０．１４ｍｌ、１ｍｍｏｌ）を室温で添加した。溶液を一晩撹拌した。得られた溶液を濃縮し、調整剤なしで０～５０％のアセトニトリル及び水で溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。収率１２０ｍｇ、５２％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ／２＋Ｈ＝８３０。
ステップｈ．

Figure 2022546609000506
 水酸化リチウム（２４ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を含んだ２ｍＬの水を、先のステップからの中間体（１２０ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）を２ｍｌのＴＨＦ及び１ｍｌのＭｅＯＨの中に含んだ溶液に添加した。ＬＣＭＳによって反応終了となった後、溶液をイオン交換樹脂ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ（登録商標）ＩＲＮ－７７でクエンチさせてｐＨ＝１に調整し、その後、溶液を濾過し、濾液を濃縮し、さらに精製せずに次のステップに入った。先のステップからの中間体を室温で２ｍｌのＴＦＡで一晩４０℃で処理した。粗反応物を濃縮し、ＴＦＡを調整剤として使用した０％～２０％のアセトニトリル及び水でＨＰＬＣによって精製した。収量６０ｍｇ、収率７４％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：［Ｍ／２］＋１＝５８９．８。
実施例３２．複合体７の合成
Ｆｃ－ＰＥＧ４－アジド（各Ｆｃドメイン単量体は配列番号３８の配列を有する）をＰＢＳ×１緩衝液溶液中に含んだ溶液（１００ｍｇ、１．２８μｍｏｌ、６．１ｍＬ、ＭＷ＝５７２６０Ｄａ、ＤＡＲ＝３．６）を、Ｉｎｔ－１０（実施例３１に記載のとおりに調製した）（ＴＦＡ塩、４４ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ）、調製したてのＣｕＳＯ４のｐＨ７．４ ＰＢＳ溶液（５０．０ｍＭ、２０当量の０．７ｍＬ）、トリス（３－ヒドロキシプロピルトリアゾリルメチル）－アミン（ＴＨＰＴＡ、５０．０ｍＭ、２０当量の０．７ｍＬ）及びアスコルビン酸ナトリウム（５０．０ｍＭ、３０当量の１．０５ｍＬ）に添加した。得られた均質な溶液を振盪台で１２時間撹拌した。粗溶液をｐＨ７．４のＰＢＳで１ｍｇ／ｍＬの終濃度に希釈し、１ｍＬの体積への限外濾過（１０，０００ＭＷＣＯ）２回を行った。その後、粗混合物をＰＢＳ ｐＨ７．４で１：１０に希釈し、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ，ＵＳＡ）を使用して精製し、続いてサイズ排除クロマトグラフィーで精製した。精製された材料を、ＮＡＮＯＤＲＯＰ（商標）ＵＶ可視分光光度計を使用して（複合に使用されたＦｃのアミノ酸配列に基づいて算出された消衰係数を用いて定量し、遠心濃縮器（１０，０００ＭＷＣＯ）を使用しておよそ１０ｍｇ／ｍＬに濃縮した。１～２μｇの各分子をゲルに装填すること及びｉｎｓｔａｎｔ Ｂｌｕｅ染色を用いて染色することによってビストリス４～１２％のＳＤＳ ＰＡＧＥゲルを使用して精製分子を分析した。各ゲルは、示された分子量基準を有する分子量ラダーを含んでいた。収率は典型的には４０～６０％である。ＭＡＬＤＩ ＭＳ分析によって、平均質量６３６３３の質量範囲（６００００～９００００）が示された。平均ＤＡＲ＝４．５。
実施例３３．致死性マウスインフルエンザモデルにおける複合体６の有効性：試験＃３
複合体６を雌のＢＡＬＢ／ｃマウスにおける致死性Ａ型ＩＮＦＶ Ｈ１Ｎ１インフルエンザ感染症に対して評価した。実験はマウス５匹の群を７つ含んでいた。０日目に全てのマウスを１×ＬＤ９０のＨ１Ｎ１ Ａ／Ｔｅｘａｓ／３６／９１で攻撃した。群１～６には攻撃の２８日前に静脈注射で処置を施した（表１２）。ビヒクル（ＰＢＳ）をさらなる陰性対照として含めた。群７にはリン酸オセルタミビルを１日２回、感染の８時間後から始めて５日間にわたって経口送達によって与えた。攻撃後１５日間にわたって全てのマウスを生存（図３１のＡ～Ｆ）について追跡評価した。
複合体６で処置したマウスは、２．５ｍｇ／ｋｇに下げるまでは全ての濃度において単回用量で１００％の生存率を示し、１．２５ｍｇ／ｋｇで８０％の生存率を示し、これに比べてビヒクル対照群では０％の生存率であった。オセルタミビル対照群では全てのマウスが生き残った。どの複合体６群に対する投薬も感染の２８日前の１回であったという事実にもかかわらず、複合体６は、リン酸オセルタミビル群に比べて２０分の１の低さの累積用量（ｍｇ／ｋｇ表示）でオセルタミビルと同程度の有効性を示した。
Figure 2022546609000507
実施例３４．致死性マウスインフルエンザモデルにおける複合体６の有効性：試験＃４
複合体６を雌のＢＡＬＢ／ｃマウスにおける致死性Ａ型ＩＮＦＶ Ｈ１Ｎ１インフルエンザ感染症に対して評価した。実験はマウス５匹の群を１３個含んでいた。０日目に全てのマウスを１×ＬＤ９０のＨ１Ｎ１ Ａ／Ｔｅｘａｓ／３６／９１で攻撃した。表１３に概要を示しているとおり、全ての複合体６群（８～１３）に単回の１０ｍｇ／ｋｇ用量の静脈注射を攻撃の前後の異なる時間に施した。ビヒクル（ＰＢＳ）及びＦｃのみを陰性対照として含めた。表１３に概要を示しているとおり、群３～７にはリン酸オセルタミビル（２０ｍｇ／ｋｇ）を１日２回、感染後の異なる時間点から始めて５日間にわたって経口送達によって与えた。攻撃後１５日間にわたって全てのマウスを生存（図３２のＡ～Ｆ）について追跡評価した。
感染後２４時間目まで処置した場合、複合体６で処置したマウスは１０ｍｇ／ｋｇの単回用量で１００％の生存率を示し、感染から４８及び７２時間後ではそれぞれ６０％及び８０％の生存率を示した。オセルタミビル対照群では、感染の４８及び７２時間後に処置を開始した群において生存率はそれぞれ０％及び２０％に急激に落ち込んだ。これらの結果は、Ａ型インフルエンザ感染症を治療する上で複合体６がオセルタミビル群に比べてより優れた治療適用枠を有する可能性があることを示唆している。
Figure 2022546609000508
実施例３５．複合体６の毒性試験
１４日間ラット用量範囲探索毒性試験において複合体６の安全性を評価した。試験の０及び７日目に、５ｍｐｋか、２０ｍｐｋか、５０ｍｐｋかのいずれかの複合体６を静脈内投与によってラットに投与した。ビヒクル対照と比較してどの試験用量においても体重増加（図３３）、臓器重量、食餌摂取に対する有意な影響は認められなかった。血漿曝露量（ＡＵＣによって測定した）は用量に比例して増加した。これらの前臨床安全性結果は、高い治療指数と一致している。所見のまとめを表１４に示す。


Figure 2022546609000509
実施例３６．３つの異なる経路による致死性マウスインフルエンザモデル用量での複合体６の有効性：試験＃５
複合体６を雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）における致死性ＩＡＶ Ｈ１Ｎ１インフルエンザ感染症に対して評価した。攻撃ウイルス（Ａ／Ｔｅｘａｓ／３６／９１）は、マウスにおいて致死性感染症を引き起こすことができるマウス適合型単離物である。実験はマウス５匹の群を１５個含んでいた。０日目に全てのマウスを、イソフルランで軽く麻酔した後にＬＤ９０の１倍のウイルスで５０μｌの体積の鼻腔内接種によって攻撃した。群１～１４には攻撃の４時間前に単回処置を施した（表１５）。異なる投薬経路によって複合体６の力価を決定するために、一致した濃度の複合体（１０、２、０．４及び０．１ｍｇ／ｋｇ）の投薬を静脈注射か、筋肉注射か、皮下注射かのいずれかによって行った。ビヒクル（ＰＢＳ）のみの群に加えて、ヒトＩｇＧ１（Ｆｃ単独）をさらなる陰性対照（群２）として含めた。群１５にはリン酸オセルタミビルを１日２回、感染の８時間後から始めて５日間にわたって経口送達によって与えた。１４日間にわたって全てのマウスを生存（表１５）について追跡評価した。
複合体６で処置したマウスは、インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）による攻撃に対して１０、２または０．４ｍｇ／ｋｇの単回用量で１４日目に投薬経路にかかわらず１００％の生存率を示した。試験品の最低濃度でのみ、静脈内投薬と筋肉内投薬と皮下投薬との間に単一マウス差異がみられた（表１６；それぞれ６０、８０及び１００％の生存率）。これらの結果は、複合体６の保護的肺濃度が複数の投薬経路によって得られることを強く示唆している。

Figure 2022546609000510
Figure 2022546609000511
実施例３７．致死性マウスインフルエンザモデルにおけるオセルタミビル耐性単離物に対する複合体６の有効性：試験＃６
複合体６を雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）における致死性ＩＡＶ Ｈ１Ｎ１インフルエンザ感染症に対して評価した。攻撃ウイルス（Ａ／Ｐｅｒｔｈ／２６１／２００９）は、ノイラミニダーゼ阻害剤オセルタミビルに対する耐性を招くＨ２７５Ｙ突然変異を保有するマウス適合型単離物である。実験はマウス５匹の群を１０個含んでいた。０日目に、イソフルランで軽く麻酔したマウスに対してＬＤ９０の１倍のＡ／Ｐｅｒｔｈ／２６１／２００９（Ｈ１Ｎ１）で５０μｌの体積の鼻腔内接種を行うことによって全てのマウスを攻撃した。群１～９には攻撃の４時間前に静脈注射による単回処置を施した（表１７）。ビヒクル（ＰＢＳ）のみの群に加えて、ヒトＩｇＧ１（Ｆｃ単独）をさらなる陰性対照として含めた。群１０にはリン酸オセルタミビルを１日２回、感染の８時間後から始めて５日間にわたって経口送達によって与えた。攻撃後１５日間にわたって全てのマウスを生存（図３４のＡ～Ｄ、表１８）及び体重減少（図３５、表１９）について追跡評価した。
複合体６で処置したマウスは、インフルエンザ（Ａ／Ｐｅｒｔｈ／２６１／２００９）による攻撃に対して５０、１０及び２ｍｇ／ｋｇの単回用量で１００％の生存率を示した。さらに、群サイズが小さい（ｎ＝５）にもかかわらず、これらの結果はビヒクル対照に対して統計的に有意であった（表１８）。０．４、０．２または０．１ｍｇ／ｋｇの複合体６濃度では生存率が６０％であった一方、ビヒクル（ＰＢＳ）のみまたはｈＩｇＧ１のみ（Ｆｃのみ）の投薬を行った場合に試験の最後まで生き残ったマウスはいなかった。オセルタミビル群は、オセルタミビル感受性単離物に対して保護的であると以前に示された用量（２０ｍｇ／ｋｇ、１日２回×５日）による処置にもかかわらず、生き残った動物は１匹しかいなかった（２０％の有効性）。これらの結果は、攻撃ウイルスがオセルタミビルに対して耐性であり複合体６に対して感受性であることを裏付けている。
Ｈ２７５Ｙ突然変異を含有する突然変異体に対する複合体６の力価は、体重データによってさらに支持された（図３５、表１９）。２ｍｇ／ｋｇ以上の濃度で単回用量の複合体６を受けている群は５％以下の一時的体重減少を示した。

Figure 2022546609000512
Figure 2022546609000513
Figure 2022546609000514
実施例３８。試験品の静脈内投与に続く７日間ラットＰＫ試験
ラット薬物動態（ＰＫ）試験は、４６～４９日齢の雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットを使用してＳｅｖｅｎｔｈ Ｗａｖｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｍａｒｙｌａｎｄ Ｈｅｉｇｈｔｓ，ＭＯ）によって実施された。ラットに尾静脈から７５ｍｇ／ｋｇの試験品（５ｍｌ／ｋｇの用量体積）を静脈注射した。標準的なＩＡＣＵＣ承認飼育条件下で動物を飼育した。適時に動物の非最終採血を（後眼窩、頬または尾静脈で）行い、凝固を防止するために血液をＫ２ＥＤＴＡ管内に採集した。採集された血液を遠心分離にかけ（２，０００ｘｇ、１０分間）、経時試験品濃度の分析のために血漿を抜き取った。
各時間点での複合体６またはｈＩｇＧ１ Ｆｃの血漿中濃度をサンドイッチＥＬＩＳＡによって以下のとおりに測定した：複合体６分子をノイラミニダーゼ被覆プレート上か抗ｈＩｇＧ１抗体被覆プレート上かのどちらかに捕捉し、その後、ＨＲＰ複合抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃ抗体を使用して検出した。ｈＩｇＧ１は、抗ｈＩｇＧ１ Ｆｃ抗体を使用して捕捉された。複合体６（またはｈＩｇＧ１ Ｆｃ）標準曲線の４ＰＬ非線形回帰を用いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍでタンパク質濃度を算出した。方法についてのより詳細な説明を以下に示す。
Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ ９６ウェルプレート（カタログ番号１２－５６５－１３６、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を、Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０４／２００９（Ｈ１Ｎ１）からのノイラミニダーゼ（１１０５８－ＶＮＡＨＣ、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）か、抗ＩｇＧ１ Ｆｃ抗体かのどちらかを含んだ１×ＫＰＬ被覆用緩衝液（５１５０－００４１、ＳｅｒａＣａｒｅ）で被覆した。試験品を捕捉するために抗ＩｇＧ１ Ｆｃ抗体を使用する場合、異なるエピトープに結合する捕捉及び検出抗ＩｇＧ１ Ｆｃ抗体を選択した。プレートを旋回プレート振盪器（５００ｒｐｍ）上で１時間、室温でインキュベートした。血漿試料の段階希釈液を播種し、室温で２時間インキュベートした（試料希釈剤：Ｔｗｅｅｎ２０を０．０５％としたＰＢＳの中に１％のＢＳＡを含んだもの＋１：９００のナイーブラット血漿終濃度）。５００～０．２３０ｎｇ／ｍＬの範囲の複合体６またはｈＩｇＧ１ Ｆｃ標準曲線を各プレートで反復して作成した。
２時間のインキュベーションの後、Ｔｗｅｅｎ２０を０．０５％含んだ３００μＬのＰＢＳでプレートを５回洗浄した。その後、試料希釈剤で１：１，０００に希釈したＨＲＰ複合抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ Ｆ（ａｂ’）２（７０９－０３６－０９８、Ｊａｃｋｓｏｎ）によって室温で１時間、プレート上のノイラミニダーゼ（または抗ｈＩｇＧ１ Ｆｃ抗体）に結合した複合体６を探った。その後、Ｔｗｅｅｎ２０を０．０５％含んだ３００μＬのＰＢＳでプレートを８回洗浄し、ＴＭＢ基質で７～８分間発色させた。１ＮのＨ２ＳＯ４で反応を停止させた。４５０ｎｍで吸光度を読み取った。ｈＩｇＧ１ Ｆｃに同様のプロトコールを用いたが、この場合、抗ｈＩｇＧ１ Ｆｃ抗体のみを捕捉のために使用した。ノイラミニダーゼか抗ｈＩｇＧ１ Ｆｃ抗体かのどちらかによる捕捉を用いて異なる時間点で測定した複合体６の量は実験誤差範囲内で同程度であり、無変化の複合体が生体内で安定であることが示唆された。
試験試料中の全複合体６（またはｈＩｇＧ１ Ｆｃ）を、複合体６（またはｈＩｇＧ１ Ｆｃ）標準曲線の非線形回帰解析（シグモイド、４ＰＬ解析）に続いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６を用いて内挿した。複合体６とｈＩｇＧ１ Ｆｃとを比較する曲線を図３６に示す。ノイラミニダーゼか抗ｈＩｇＧ１ Ｆｃ抗体かのどちらかによる捕捉を用いて異なる時間点で測定した複合体６の量は実験誤差範囲内で同程度であり、無変化の複合体が生体内で安定であることが示唆された。
実施例３９．試験品の静脈内投与に続く１４日間ラットＰＫ試験
ラット（ＰＫ）試験は、４６～４９日齢の雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットを使用してＳｅｖｅｎｔｈ Ｗａｖｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｍａｒｙｌａｎｄ Ｈｅｉｇｈｔｓ，ＭＯ）によって実施された。１日目及び８日目に、ラットに尾静脈から５、２０または５０ｍｇ／ｋｇの試験品（５ｍｌ／ｋｇの用量体積）を静脈注射した。標準的なＩＡＣＵＣ承認飼育条件下で動物を飼育した。適時に動物の非最終採血を（後眼窩、頬または尾静脈で）行い、凝固を防止するために血液をＫ２ＥＤＴＡ管内に採集した。採集された血液を遠心分離にかけ（２，０００ｘｇ、１０分間）、経時試験品濃度の分析のために血漿を抜き取った。
各時間点での複合体６の血漿中濃度をサンドイッチＥＬＩＳＡによって以下のとおりに測定した：複合体６分子をノイラミニダーゼ被覆プレート上に捕捉し、その後、ＨＲＰ複合抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃ抗体を使用して検出した。ｈＩｇＧ１は、抗ｈＩｇＧ１ Ｆｃ抗体を使用して捕捉された。複合体６標準曲線の４ＰＬ非線形回帰を用いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍでタンパク質濃度を算出した。方法についてのより詳細な説明を以下に示す。Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ ９６ウェルプレート（カタログ番号１２－５６５－１３６、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を、Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０４／２００９（Ｈ１Ｎ１）からのノイラミニダーゼ（１１０５８－ＶＮＡＨＣ、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）を含んだ１×ＫＰＬ被覆用緩衝液（５１５０－００４１、ＳｅｒａＣａｒｅ）で被覆した。プレートを旋回プレート振盪器（５００ｒｐｍ）上で１時間、室温でインキュベートした。血漿試料の段階希釈液を播種し、室温で２時間インキュベートした（試料希釈剤：Ｔｗｅｅｎ２０を０．０５％としたＰＢＳの中に１％のＢＳＡを含んだもの＋１：９００のナイーブラット血漿終濃度）。５００～０．２３０ｎｇ／ｍＬの範囲の複合体６標準曲線を各プレートで反復して作成した。
２時間のインキュベーションの後、Ｔｗｅｅｎ２０を０．０５％含んだ３００μＬのＰＢＳでプレートを５回洗浄した。その後、試料希釈剤で１：１，０００に希釈したＨＲＰ複合抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ Ｆ（ａｂ’）２（７０９－０３６－０９８、Ｊａｃｋｓｏｎ）によって室温で１時間、プレート上のノイラミニダーゼに結合した複合体６を探った。その後、Ｔｗｅｅｎ２０を０．０５％含んだ３００μＬのＰＢＳでプレートを８回洗浄し、ＴＭＢ基質で７～８分間発色させた。１ＮのＨ２ＳＯ４で反応を停止させた。４５０ｎｍで吸光度を読み取った。
試験試料中の全複合体６（またはｈＩｇＧ１ Ｆｃ）を、複合体６標準曲線の非線形回帰解析（シグモイド、４ＰＬ解析）に続いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６を用いて内挿した。図３７に示す複合体６を比較する曲線は、線形用量比例関係を示している。
実施例４０．試験品の静脈内投与と皮下投与とを比較する２８日間ラットＰＫ試験
ラットＰＫ試験は、４６～４９日齢の雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットを使用してＳｅｖｅｎｔｈ Ｗａｖｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｍａｒｙｌａｎｄ Ｈｅｉｇｈｔｓ，ＭＯ）によって実施された。ラットに５ｍｇ／ｋｇの試験品（５ｍｌ／ｋｇの用量体積）を静脈注射または皮下注射した。標準的なＩＡＣＵＣ承認飼育条件下で動物を飼育した。適時に動物の非最終採血を（後眼窩、頬または尾静脈で）行い、凝固を防止するために血液をＫ２ＥＤＴＡ管内に採集した。採集された血液を遠心分離にかけ（２，０００ｘｇ、１０分間）、経時試験品濃度の分析のために血漿を抜き取った。
各時間点での複合体６またはｈＩｇＧ１ Ｆｃの血漿中濃度をサンドイッチＥＬＩＳＡによって以下のとおりに測定した：複合体６分子をノイラミニダーゼ被覆プレート上に捕捉し、その後、ＨＲＰ複合抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃ抗体を使用して検出した。複合体６標準曲線の４ＰＬ非線形回帰を用いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍでタンパク質濃度を算出した。方法についてのより詳細な説明を以下に示す。
Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ ９６ウェルプレート（カタログ番号１２－５６５－１３６、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を、Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０４／２００９（Ｈ１Ｎ１）からのノイラミニダーゼ（１１０５８－ＶＮＡＨＣ、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）を含んだ１×ＫＰＬ被覆用緩衝液（５１５０－００４１、ＳｅｒａＣａｒｅ）で被覆した。プレートを旋回プレート振盪器（５００ｒｐｍ）上で１時間、室温でインキュベートした。血漿試料の段階希釈液を播種し、室温で２時間インキュベートした（試料希釈剤：Ｔｗｅｅｎ２０を０．０５％としたＰＢＳの中に１％のＢＳＡを含んだもの＋１：９００のナイーブラット血漿終濃度）。５００～０．２３０ｎｇ／ｍＬの範囲の複合体６標準曲線を各プレートで反復して作成した。
２時間のインキュベーションの後、Ｔｗｅｅｎ２０を０．０５％含んだ３００μＬのＰＢＳでプレートを５回洗浄した。その後、試料希釈剤で１：１，０００に希釈したＨＲＰ複合抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ Ｆ（ａｂ’）２（７０９－０３６－０９８、Ｊａｃｋｓｏｎ）によって室温で１時間、プレート上のノイラミニダーゼに結合した複合体６を探った。その後、Ｔｗｅｅｎ２０を０．０５％含んだ３００μＬのＰＢＳでプレートを８回洗浄し、ＴＭＢ基質で７～８分間発色させた。１ＮのＨ２ＳＯ４で反応を停止させた。４５０ｎｍで吸光度を読み取った。
試験試料中の全複合体６（またはｈＩｇＧ１ Ｆｃ）を、複合体６標準曲線の非線形回帰解析（シグモイド、４ＰＬ解析）に続いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６を用いて内挿した。図３８中の複合体６を比較する曲線は、皮下注射及び静脈注射での血漿中レベルが２４時間目に収束し、３３６時間目まで実験誤差範囲内で同程度であったことを示している。
実施例４１．試験品の静脈内投与に続く２８日間非ヒト霊長類ＰＫ試験
非ヒト霊長類（ＮＨＰ）ＰＫ試験は、体重が２．５～６．５ｋｇの範囲である４．５～８歳の雄及び雌のカニクイザルを使用してＢＴＳ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）によって実施された。ＮＨＰに５または２０ｍｇ／ｋｇの試験品（５ｍｌ／ｋｇの用量体積）を伏在静脈または橈側皮静脈から静脈注射した。標準的なＩＡＣＵＣ承認飼育条件下で動物を飼育した。適時に動物の非最終採血を（大腿静脈または橈側皮静脈から）行い、凝固を防止するために血液をＫ２ＥＤＴＡ管内に採集した。採集された血液を遠心分離にかけ（２，０００ｘｇ、１０分間）、経時試験品濃度の分析のために血漿を抜き取った。
各時間点での複合体６の血漿中濃度をサンドイッチＥＬＩＳＡによって以下のとおりに測定した：複合体６分子をノイラミニダーゼ被覆プレート上に捕捉し、その後、ＨＲＰ複合抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃ抗体を使用して検出した。複合体６標準曲線の４ＰＬ非線形回帰を用いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍでタンパク質濃度を算出した。方法についてのより詳細な説明を以下に示す。
Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ ９６ウェルプレート（カタログ番号１２－５６５－１３６、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を、Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０４／２００９（Ｈ１Ｎ１）からのノイラミニダーゼ（１１０５８－ＶＮＡＨＣ、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）を含んだ１×ＫＰＬ被覆用緩衝液（５１５０－００４１、ＳｅｒａＣａｒｅ）で被覆した。プレートを旋回プレート振盪器（５００ｒｐｍ）上で１時間、室温でインキュベートした。血漿試料の段階希釈液を播種し、室温で２時間インキュベートした（試料希釈剤：Ｔｗｅｅｎ２０を０．０５％としたＰＢＳの中に１％のＢＳＡを含んだもの＋１：２，５００のナイーブカニクイザル血漿終濃度）。５００～０．２３０ｎｇ／ｍＬの範囲の複合体６標準曲線を各プレートで反復して作成した。
２時間のインキュベーションの後、Ｔｗｅｅｎ２０を０．０５％含んだ３００μＬのＰＢＳでプレートを５回洗浄した。その後、試料希釈剤で１：１，０００に希釈したＨＲＰ複合抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ Ｆ（ａｂ’）２（７０９－０３６－０９８、Ｊａｃｋｓｏｎ）によって室温で１時間、プレート上のノイラミニダーゼに結合した複合体６を探った。その後、Ｔｗｅｅｎ２０を０．０５％含んだ３００μＬのＰＢＳでプレートを８回洗浄し、ＴＭＢ基質で７～８分間発色させた。１ＮのＨ２ＳＯ４で反応を停止させた。４５０ｎｍで吸光度を読み取った。
試験試料中の全複合体６を、複合体６（またはｈＩｇＧ１ Ｆｃ）標準曲線の非線形回帰解析（シグモイド、４ＰＬ解析）に続いてＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６を用いて内挿した。ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェアを使用してＰＫパラメータを算出した。複合体６を比較する曲線を図３９に示し、肝要なＰＫパラメータのまとめを表２０に示す。用量応答は、静脈注射される５ｍｇ／ｋｇと２０ｍｇ／ｋｇとの間で線形であり、両方の用量にまたがっておよそ９日の半減期をもたらす（マウス／ラットと同程度）。

Figure 2022546609000515
実施例４２．試験品の静脈内投与に続くマウス肺分布ＰＫ試験
６週齢の雄のＣＤ－１マウスを使用してマウスＰＫ試験を実施した。マウスに尾静脈から１０ｍｇ／ｋｇの試験品（５ｍｌ／ｋｇの用量体積）を静脈注射した。標準的なＩＡＣＵＣ承認飼育条件下で動物を飼育した。示された時間点で動物を安楽死させて（心臓穿刺による）Ｋ２ＥＤＴＡ管内への血液採集及び肺採集を行った。血液を遠心分離にかけ（２，０００ｘｇ、１０分間）血漿を得た。肺を計量し、１．５ｍｌ容の管において無菌使い捨て乳棒（Ｚ３５９９４７、Ｓｉｇｍａ）を使用して１１．６４ｍＬの組織タンパク質抽出試薬（７８５１０、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）と０．２４ｍｌのプロテアーゼ阻害剤カクテル（７８４１０、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）と０．１２ｍｌのＥＤＴＡとからなるホモジナイズ用緩衝液１００μＬの中でホモジナイズした。ホモジナイズを１～２分行った後、体積をホモジナイズ用緩衝液で１ｍＬに調節し、試料を氷上で定期的に穏やかな渦流撹拌によって混合しながら２０分間インキュベートした。ホモジネートを１０分間、８，０００ｘｇの遠心分離にかけ、上清を経時試験品濃度の分析のために取っておいた。
各時間点での複合体６の血漿中及び肺内濃度をサンドイッチＥＬＩＳＡによって以下のとおりに測定した：複合体６分子をノイラミニダーゼ被覆プレート上に捕捉し、ＨＲＰ複合抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃ抗体を使用して検出した。複合体６標準曲線の４ＰＬ非線形回帰を用いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍでタンパク質濃度を算出した。方法についてのより詳細な説明を以下に示す。
Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ ９６ウェルプレート（カタログ番号１２－５６５－１３６、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を、Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０４／２００９（Ｈ１Ｎ１）からのノイラミニダーゼ（１１０５８－ＶＮＡＨＣ、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）を含んだ１×ＫＰＬ被覆用緩衝液（５１５０－００４１、ＳｅｒａＣａｒｅ）で被覆した。プレートを旋回プレート振盪器（５００ｒｐｍ）上で１時間、室温でインキュベートした。血漿試料の段階希釈液を播種し、室温で２時間インキュベートした（試料希釈剤：Ｔｗｅｅｎ２０を０．０５％としたＰＢＳの中に１％のＢＳＡを含んだもの＋１：１００のナイーブマウス血漿終濃度）。５００～０．２３０ｎｇ／ｍＬの範囲の複合体６標準曲線を各プレートで反復して作成した。
２時間のインキュベーションの後、Ｔｗｅｅｎ２０を０．０５％含んだ３００μＬのＰＢＳでプレートを５回洗浄した。その後、試料希釈剤で１：１，０００に希釈したＨＲＰ複合抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ Ｆ（ａｂ’）２（７０９－０３６－０９８、Ｊａｃｋｓｏｎ）によって室温で１時間、プレート上のノイラミニダーゼに結合した複合体６を探った。その後、Ｔｗｅｅｎ２０を０．０５％含んだ３００μＬのＰＢＳでプレートを８回洗浄し、ＴＭＢ基質で７～８分間発色させた。１ＮのＨ２ＳＯ４で反応を停止させた。４５０ｎｍで吸光度を読み取った。
試験試料中の全複合体６を、複合体６標準曲線の非線形回帰解析（シグモイド、４ＰＬ解析）に続いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６を用いて内挿した。複合体６の血漿中及び肺内濃度を比較する曲線を図４０に示す。予想外なことに、ｔ＝１時間（１９．５μｇ／ｇ肺組織、約３１０ｎＭ）で肺Ｃｍａｘに達した。複合体６による肺曝露は血漿に対しておよそ１０％であった。
実施例４３．試験品の静脈内投与、皮下投与及び筋肉内投与を比較する５日間マウスＰＫ試験
６週齢の雄のＣＤ－１マウスを使用してマウスＰＫ試験を実施した。マウスに尾静脈から５ｍｇ／ｋｇの試験品（５ｍｌ／ｋｇの用量体積）を静脈注射した。標準的なＩＡＣＵＣ承認飼育条件下で動物を飼育した。適時に動物の非最終採血を（後眼窩、頬または尾静脈で）行い、凝固を防止するために血液をＫ２ＥＤＴＡ管内に採集した。採集された血液を遠心分離にかけ（２，０００ｘｇ、１０分間）、経時試験品濃度の分析のために血漿を抜き取った。
各時間点での複合体６の血漿中濃度をサンドイッチＥＬＩＳＡによって以下のとおりに測定した：複合体６分子をノイラミニダーゼ被覆プレート上に捕捉し、その後、ＨＲＰ複合抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃ抗体を使用して検出した。複合体６（またはｈＩｇＧ１ Ｆｃ）標準曲線の４ＰＬ非線形回帰を用いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍでタンパク質濃度を算出した。方法についてのより詳細な説明を以下に示す。
Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ ９６ウェルプレート（カタログ番号１２－５６５－１３６、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を、Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０４／２００９（Ｈ１Ｎ１）からのノイラミニダーゼ（１１０５８－ＶＮＡＨＣ、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）を含んだ１×ＫＰＬ被覆用緩衝液（５１５０－００４１、ＳｅｒａＣａｒｅ）で被覆した。プレートを旋回プレート振盪器（５００ｒｐｍ）上で１時間、室温でインキュベートした。血漿試料の段階希釈液を播種し、室温で２時間インキュベートした（試料希釈剤：Ｔｗｅｅｎ２０を０．０５％としたＰＢＳの中に１％のＢＳＡを含んだもの＋１：１００のナイーブマウス血漿終濃度）。５００～０．２３０ｎｇ／ｍＬの範囲の複合体６標準曲線を各プレートで反復して作成した。
２時間のインキュベーションの後、Ｔｗｅｅｎ２０を０．０５％含んだ３００μＬのＰＢＳでプレートを５回洗浄した。その後、試料希釈剤で１：１，０００に希釈したＨＲＰ複合抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ Ｆ（ａｂ’）２（７０９－０３６－０９８、Ｊａｃｋｓｏｎ）によって室温で１時間、プレート上のノイラミニダーゼに結合した複合体６を探った。その後、Ｔｗｅｅｎ２０を０．０５％含んだ３００μＬのＰＢＳでプレートを８回洗浄し、ＴＭＢ基質で７～８分間発色させた。１ＮのＨ２ＳＯ４で反応を停止させた。４５０ｎｍで吸光度を読み取った。
試験試料中の全複合体６を、複合体６標準曲線の非線形回帰解析（シグモイド、４ＰＬ解析）に続いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６を用いて内挿した。複合体６を比較する曲線を図４１に示す。静脈注射、筋肉注射及び皮下注射での曝露レベルは同程度でありＡＵＣがそれぞれ２０８２、１９４４及び２５００であった。
実施例４４．マウスにおける有効性及び複数種におけるＰＫはヒト対象における非頻回予防的投薬を支持する
マウス、ラット及び霊長類ＰＫ試験に基づくマウス有効性投薬のアロメトリックスケーリングを用いてヒト対象における投薬及びＰＫパラメータを予測した。アロメトリックスケーリングは２８日間マウス予防試験での２．５ｍｇ／ｋｇ有効用量で曲線下面積（ＡＵＣ）に基づくものであった（実施例３３参照）。
カニクイザルのみからのアロメトリックスケーリングでは、単純なアロメトリック等式：ＣＬ（ヒト）＝ＣＬ（サル）・［ＢＷ（ヒト）／ＢＷ（サル）］Ｗを用いてカニクイザルＰＫデータ（実施例４１）のみに基づいてヒトクリアランス（ＣＬ）を算出した（式中、ＢＷ＝体重であり、ｗは０．８５に固定したスケーリング指数である）。カニクイザルのみからのスケーリングの結果を表２１に示す。
マウスラットカニクイザルからのアロメトリックスケーリングでは、以下のアロメトリック等式：ＣＬ＝ａ・ＢＷｘに従って動物種からのヒトクリアランス（ＣＬ）を対数－対数スケールで動物体重（ＢＷ）に対してプロットした（式中、ａは係数であり、ｘはアロメトリック等式の指数である）。係数ａ及び指数ｘはそれぞれ線形回帰線の切片及び傾きから求めた。マウスラットカニクイザルからのスケーリングの結果を表２２に示す。
次いで、各々の上記アルゴリズムによって算出されたヒトクリアランス値を使用して、（実施例３３のマウス２．５ｍｇ／ｋｇ用量からの）３７００ｕｇ－ｈｒ／ｍＬの有効性ＡＵＣ目標を達成するのに必要とされる対応するヒト用量を以下の式を用いて算出した：用量＝ＣＬ・ＡＵＣ。
Figure 2022546609000516
Figure 2022546609000517
実施例４５．Ｉｎｔ－１１の合成

Figure 2022546609000518
ステップａ．
Figure 2022546609000519
 （４－ブロモブチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（１１．２ｇ、６０ｍｍｏｌ）と（４－アミノブチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（１０ｇ、４０ｍｍｏｌ）とがＤＭＦ（１５０ｍＬ）に溶解している溶液を、炭酸カリウム（１６．４ｇ、１２０ｍｍｏｌ）で処理し、その後、８０℃で６時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭ（５００ｍｌ）とブライン（１００ｍｌ）との間で分配した。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、その後、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶液を濾過し、濃縮し、０．１％のＴＦＡを調整剤として含んだ１０％～１００％のアセトニトリル及び水で溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。生成物の収率１１．０ｇ、７７％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ＋Ｈ＝３６０．４。
ステップｂ．
Figure 2022546609000520
 先のステップからの生成物（０．４ｇ、１．１１ｍｍｏｌ）とＦｍｏｃ－ＯＳｕ（０．４５ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）とをＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解させ、その後、Ｎ－メチルモルホリン（０．２２ｍｌ、２ｍｍｏｌ）で処理し、室温で１時間撹拌した。反応物を濃縮し、調整剤としての０．１％のＴＦＡを含まない１０％～１００％のアセトニトリル及び水で溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。生成物の収率４５０ｍｇ、６９％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ／２＋Ｈ＝５８２．４。
ステップｃ．
Figure 2022546609000521
 先のステップからの生成物（０．４ｇ、０．７ｍｍｏｌ）を室温で０．５時間、ＴＦＡ（５ｍＬ）で処理し、その後、濃縮乾固し、さらに精製せずに次のステップに使用した。このステップでの収量は定量的であった。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ／２＋Ｈ＝３８２．３。
ステップｄ．
Figure 2022546609000522
 先のステップからのＦｍｏｃジアミン（２４ｍｇ、０．０６３ｍｍｏｌ）を、カルボン酸（８０ｍｇ、０．１２６ｍｍｏｌ、Ｉｎｔ－１０合成のステップｆに記載のもの）のＤＭＦ（５ｍＬ）溶液に添加し、その後、ＨＡＴＵ（５０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）で処理し、続いてＮ－メチルモルホリン（０．０６ｍｌ、０．５０ｍｍｏｌ）で処理した。１時間撹拌した後、得られた溶液を濃縮し、調整剤としてのＴＦＡを含まない１０％～１００％のアセトニトリル及び水で溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。生成物の収率８０ｍｇ、７９％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ／２＋Ｈ＝８０３．９。
ステップｅ．
Figure 2022546609000523
 先のステップからの生成物（８０ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）を、１％のＤＢＵ（１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン）を含んだＤＭＦ（２ｍＬ）で処理し、室温で撹拌した。ＬＣＭＳによって反応終了となった時（１５分）にそれを濃縮し、その後、ＴＦＡ（２ｍＬ）で処理し、室温で３０分間撹拌した。反応溶液を濃縮し、０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した１０％～１００％のアセトニトリル及び水で溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。生成物の収量はＴＦＡ塩として５２ｍｇであった。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ／２＋Ｈ＝４９２．７。
ステップｆ．
Figure 2022546609000524
 先のステップからの生成物を水（２ｍＬ）に溶解させ、その後、水酸化リチウム（１ｍＬの水の中に１２ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）溶液で処理した。生成する反応物をＬＣＭＳで追跡した。１０分間撹拌した後、反応物を０．１ｍｌの酢酸でクエンチさせた。得られた溶液を濃縮し、０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した０％～３０％のアセトニトリル及び水で溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。生成物の収率：ＴＦＡ塩として３０ｍｇ、６６％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ／２＋Ｈ＝４５２．７。Ｍ／３＋Ｈ＝３０２．１。
実施例４６．Ｉｎｔ－１２の合成
Figure 2022546609000525
ステップａ．

Figure 2022546609000526
 （４－ブロモブチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（４．８ｇ、１９ｍｍｏｌ）とプロパルギル－ＰＥＧ４アミン（２ｇ、８．６ｍｍｏｌ）とをＤＭＦ（５０ｍＬ）中に含んだ溶液に炭酸カリウム（３．６ｇ、２６ｍｍｏｌ）に添加した。溶液を８０℃で６時間撹拌し、その後、ＤＣＭ（２００ｍｌ）とブライン（５０ｍｌ）との間で分配した。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、その後、０．１％のＴＦＡを調整剤として含んだ１０％～１００％のアセトニトリル及び水で溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。生成物の収率３．５ｇ、７０％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ／２＋Ｈ＝５７４．４。
ステップｂ．
Figure 2022546609000527
 先のステップからの生成物（３．５ｇ，８．６ｍｍｏｌ）を室温で０．５時間、ＴＦＡ（２０ｍｌ）で処理し、その後、濃縮乾固し、水に溶解させ、冷凍し、凍結乾燥させ、さらに精製せずに次のステップに使用した。このステップでの収量は定量的であった。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ／２＋Ｈ＝３７４．３。
ステップｃ．
Figure 2022546609000528
 先のステップからのジアミンＴＦＡ塩（３７ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を、カルボン酸（１３０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ、Ｉｎｔ－１０合成のステップｆに記載のもの）を１０ｍｌのＤＭＦの中に含んだ溶液に添加し、その後、ＨＡＴＵ（８０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）及びＮ－メチルモルホリン（０．２５ｍｌ、２ｍｍｏｌ）で処理した。得られた溶液を１時間撹拌し、次いで濃縮し、調整剤としての０．１％のＴＦＡを含まない１０％～１００％のアセトニトリル及び水で溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。生成物の収率１２０ｍｇ、７５％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ／２＋Ｈ＝７９９．９。
ステップｄ．
Figure 2022546609000529
 先のステップからの生成物（１２０ｍｇ、０．０７５ｍｍｏｌ）を２ｍｌのトリフルオロ酢酸で処理し、室温で３０分間撹拌した。得られた溶液を濃縮し、水（２ｍＬ）に溶解させ、その後、水酸化リチウム（１２ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）が水（１ｍＬ）に溶解した溶液で処理した。得られた溶液を１０分間撹拌し、その後、０．１ｍｌの酢酸でわずかに酸性にし、濃縮し、０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した０％～３０％のアセトニトリル及び水で溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。生成物の収率、ＴＦＡ塩として４８ｍｇ、５７％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ／２＋Ｈ＝５５９．７５７。Ｍ／３＋Ｈ＝３７３．５。
実施例４７．複合体８の合成
ｈ－ＩｇＧ１ Ｆｃ－ＰＥＧ４－アジドをＰＢＳ×１緩衝液溶液中に含んだ溶液（１００ｍｇ、１．７１μｍｏｌ、７．０１１ｍＬ、ＭＷ＝５８２００Ｄａ、ＤＡＲ＝３．７）を、アルキン誘導体化低分子（Ｉｎｔ－１２ＴＦＡ塩、４５ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ）、調製したてのＣｕＳＯ４のｐＨ７．４ ＰＢＳ溶液（５０．０ｍＭの０．７ｍＬ、２０当量）、トリス（３－ヒドロキシプロピルトリアゾリルメチル）－アミン（ＴＨＰＴＡ、５０．０ｍＭの０．７ｍＬ、２０当量）、及びアスコルビン酸ナトリウム（５０．０ｍＭの１．０５ｍＬ、３０当量）に添加した。得られた均質な溶液を振盪台によって１２時間撹拌した。粗溶液をｐＨ７．４のＰＢＳで１ｍｇ／ｍＬの終濃度に希釈し、１ｍＬの体積への限外濾過（１０，０００ＭＷＣＯ）２回を行った。その後、粗混合物をＰＢＳ ｐＨ７．４で１：１０に希釈し、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ，ＵＳＡ）を使用して精製し、続いてサイズ排除クロマトグラフィーで精製した。精製された材料を、ＮＡＮＯＤＲＯＰ（商標）ＵＶ可視分光光度計を使用して（複合に使用されたＦｃのアミノ酸配列に基づいて算出された消衰係数を用いて定量し、遠心濃縮器（１０，０００ＭＷＣＯ）を使用しておよそ１０ｍｇ／ｍＬに濃縮した。１～２μｇの各分子をゲルに装填すること及びｉｎｓｔａｎｔ Ｂｌｕｅ染色を用いて染色することによってビストリス４～１２％のＳＤＳ ＰＡＧＥゲルを使用して精製分子を分析した。各ゲルは、示された分子量基準を有する分子量ラダーを含んでいた（図４２）。収率は典型的には４０～６０％である。ＭＡＬＤＩ ＭＳ分析によって、平均質量６２３５８の質量範囲（６００００～９００００）が示された。平均ＤＡＲ＝３。
実施例４８．ＣＰＥアッセイ及び致死性マウスインフルエンザモデルにおける選定阻害剤の試験管内及び生体内での力価とそれらのＦｃ複合体との比較
本明細書に記載のノイラミニダーゼ阻害剤をＦｃと複合させることによってウイルス複製アッセイ及び生体内有効性モデルにおけるそれらの活性が増強されることを実証するために、本発明者らは、細胞変性効果（ＣＰＥ）アッセイ及び致死性マウスインフルエンザ感染モデルにおける選定未複合阻害剤の活性をそのＦｃ複合体と比較した。ＣＰＥマイクロ中和アッセイでは、１時間のインキュベーションのために感染多重度（ＭＯＩ）０．００１のＡ型ＩＮＦＶ（Ａ／ＣＡ／０９ Ｈ１Ｎ１）及びＭＯＩ０．０１のＢ型ＩＮＦＶを１時間接種するための、各試験品（ＴＡ）の１６０ｎＭまたは４００ｎＭ（ザナミビル及びオセルタミビル対照では９６００ｎＭ）から出発する２倍段階希釈液１０個を反復調製した。その後、ＴＡ－ウイルスミックスを、９６ウェルプレートに播種されたＭＤＣＫ細胞に添加し、１時間インキュベートした。Ａ型ＩＮＦＶ感染後３日目及びＢ型ＩＮＦＶ（Ｂ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ）感染後５日目に細胞を固定し、クリスタルバイオレットで染色し、ＸＬｆｉｔ用量応答モデルを用いる各ＴＡの５０パーセント効果濃度（ＥＣ５０）の算出のために光学濃度を読み取った。９６ウェル培養プレート内のＭＤＣＫ細胞への接種のために反復調製された各ＴＡの１６０ｎＭまたは４００ｎＭから出発する２倍段階希釈液１０個を使用して、各ＴＡの固有の細胞毒性も評価した。処置の３及び５日後にＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏキットを使用して細胞生存能を決定した。ＸＬｆｉｔ用量応答モデルを用いて５０％細胞毒性濃度（ＣＣ５０）を算出した。試験した最高濃度まで、どのＴＡについても細胞毒性が認められなかった。ＣＰＥに基づくマイクロ中和アッセイのまとめを表２３に示す。

Figure 2022546609000530
表２３にまとめたデータは、ＣＰＥマイクロ中和アッセイにおいてノイラミニダーゼ二量体のＦｃ複合形態がその未複合対応物よりも優れた活性を有していることを実証している。複合体６をＩｎｔ－７と比較した場合、Ａ型ＩＮＦＶ及びＢ型ＩＮＦＶに対するそれぞれ１６６倍及び２倍の増強が認められた。複合体８をＩｎｔ－１２と比較した場合、Ａ型ＩＮＦＶ及びＢ型ＩＮＦＶに対するそれぞれ２６倍及び２倍の増強が認められた。
致死性ＩＡＶ Ｈ１Ｎ１インフルエンザ感染モデルにおいて、雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）を使用して複合体６を、表２３にまとめた試験から最も有力であるノイラミニダーゼ阻害剤二量体（Ｆｃとの複合を可能にする三量体リンカーをなくしたＩｎｔ－１２に対応する、二量体のみであるＩｎｔ－１１）と比較した。攻撃ウイルス（ＰＲ８としても知られるＡ／Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／０８／１９３４）は、ＬＤ９０がマウス１匹あたりおよそ３０プラーク形成単位（ｐｆｕ）であるマウス適合型単離物である。
実験はマウス５匹の群を８つ含んでいた。０日目に、ケタミン／キシラジン（それぞれ１５０及び１０ｍｇ／ｋｇ）の混合物で麻酔したマウスに対する体積５０μｌの鼻腔内接種によってＬＤ９０の１０倍のＰＲ８で全てのマウスを攻撃した。攻撃の２時間後に静脈注射によってビヒクル、ｈＩｇＧ１ Ｆｃのみ、複合体６またはＩｎｔ－１１の単回処置を群（表２４、群１～６）に施した。群７にはＩｎｔ－１１（１５ｍｇ／ｋｇ）を毎日２回（１日２回）、５日間にわたって同じく静脈注射によって施した。群８にはオセルタミビル（１５ｍｇ／ｋｇ）を１日２回、５日間にわたって経口的に与えた（経口投与した）。ウイルス攻撃後１０日間にわたって全てのマウスを生存（表２５）及び体重減少（データ示さず）について追跡評価した。
予想通り、ビヒクルまたはｈＩｇＧ１ Ｆｃのみで処置したマウスは７日目までに感染症で死亡した（表２５）。１０回用量（計１５０ｍｇ／マウス）のオセルタミビルで処置したマウスは統計的に有意な死亡の遅れを呈したが、１０日目まで生き残った動物は１匹のみであった。０．３または３ｍｇ／ｋｇの単回用量の複合体６を受けている全てのマウスが試験の最後まで生き残り、実験を通して正味の体重増加を示した。重要なことに、試験を通して、０．３または３ｍｇ／ｋｇのＩｎｔ－１１を受けている全てのマウスが死亡し、死亡の遅れがビヒクル及びｈＩｇＧ１ Ｆｃのみの対照と比較して最小限（２日以下）であるにすぎなかった。ｈＩｇＧ１ Ｆｃ（群２）には抗ウイルス活性が本来備わっていないことから、このことは、複合体６の活性の大幅な改善が、表２３にまとめた結果から示唆されるようにＦｃ上での多価提示によってアビディティが向上したこと、ならびに薬物動態が改善されたこと及びＦｃ媒介免疫係合が役に立ったことの結果である、ということを示唆している。阻害剤二量体単独と複合体６との活性の差は両方の用量濃度において統計的に有意であった（群３と群６、及び群４と群５を比較されたい；表２５）。複合体６と等価な有効性を認めるためには質量基準で５００倍大きなＩｎｔ－１１累積用量が必要となる。
Figure 2022546609000531
Figure 2022546609000532
実施例４９．Ｉｎｔ－１３（（５Ｒ）－（（１Ｒ）－アセチルアミノ－（２Ｓ）－メトキシ－（２Ｓ）－メチルペンチル）－（４Ｓ）－Ｅ／Ｚ－［３－（プロパルギル－ＰＥＧ４）－プロペニル］－ピロリジン－（２Ｒ）－カルボン酸）の合成
Figure 2022546609000533
ステップａ．（２Ｒ）－（（１Ｒ）－アセチルアミノ－（２Ｓ）－メトキシ－（２Ｓ）－メチルペンチル）－（５Ｒ）－カルボキシ－（３Ｓ）－Ｚ－プロペニルピロリジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル。
（５Ｒ）－（（１Ｒ）－アセチルアミノ－（２Ｓ）－メトキシ－（２Ｓ）－メチルペンチル）－（４Ｓ）－Ｚ－プロペニルピロリジン－（２Ｒ）－カルボン酸ＨＣｌ塩（参考文献ＪＡＣＳ，２００２，１２４，４７１６－４７２１に従って調製した；１．０ｍｍｏｌ）を含んだアセトニトリル（１０ｍＬ）の撹拌混合物に水酸化トリメチルアンモニウム（１．５ｍｍｏｌ）を添加する。３時間室温で撹拌した後、炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（４当量）を添加する。反応が終了してすぐに全ての揮発性物質を真空技術によって蒸発させる。残渣を水（１０ｍｌ）で希釈する。酢酸エチル（１０ｍｌ）を添加し、１Ｍの硫酸水溶液を水層がｐＨ約３に達するまで添加する。水層をさらに２アリコートの酢酸エチル（１０ｍＬ）で洗浄する。合わせた有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過及び濃縮する。残渣をクロマトグラフィー技術によって精製して所望の生成物を得る。
ステップｂ．（２Ｒ）－（（１Ｒ）－アセチルアミノ－（２Ｓ）－メトキシ－（２Ｓ）－メチルペンチル）－（５Ｒ）－カルボキシメチル－（３Ｓ）－Ｚ－プロペニルピロリジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル。
（２Ｒ）－（（１Ｒ）－アセチルアミノ－（２Ｓ）－メトキシ－（２Ｓ）－メチルペンチル）－（５Ｒ）－カルボキシ－（３Ｓ）－Ｚ－プロペニルピロリジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル（１．０ｍｍｏｌ）を含んだジクロロメタン（５．０ｍＬ）及びメタノール（１．０ｍＬ）の０℃の撹拌混合物に、（トリメチルシリル）ジアゾメタン（１．１ｍｍｏｌ）をゆっくり添加する。温度を緩やかに周囲温度に達せしめる間、混合物を終了まで撹拌する。全ての揮発性物質を真空技術によって蒸発させる。必要に応じて残渣をクロマトグラフィー技術によって精製して所望の生成物を得る。
ステップｃ．（２Ｒ）－（（１Ｒ）－アセチルアミノ－（２Ｓ）－メトキシ－（２Ｓ）－メチルペンチル）－（５Ｒ）－カルボキシメチル－（３Ｓ）－ホルミルピロリジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル。
（２Ｒ）－（（１Ｒ）－アセチルアミノ－（２Ｓ）－メトキシ－（２Ｓ）－メチルペンチル）－（５Ｒ）－カルボキシメチル－（３Ｓ）－Ｚ－プロペニルピロリジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル（１ｍｍｏｌ）を含んだジクロロメタン（１５ｍＬ）の室温混合物を－７８℃に冷却する。溶存オゾンのかすかな青色を帯びるまで溶液にオゾンをバブリングする。青色が消失するまで溶液に窒素をバブリングし、その後、ジメチルスルホキシド（４．０ｍｍｏｌ）を添加し、フラスコを冷凍庫（－２０℃）へ移し、１時間置く。溶液を濃縮し、残渣をクロマトグラフィー技術によって精製して所望の生成物を得る。
ステップｄ．（２Ｒ）－（（１Ｒ）－アセチルアミノ－（２Ｓ）－メトキシ－（２Ｓ）－メチルペンチル）－（５Ｒ）－カルボキシメチル－（３Ｓ）－Ｅ／Ｚ－［３－（プロパルギル－ＰＥＧ４）－プロペニル］ピロリジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル。
プロパルギル－ＰＥＧ４－ホスホニウムブロミド（１．０ｍｍｏｌ）を含んだＤＭＦ（５．０ｍＬ）の０℃の撹拌混合物に水素化ナトリウム（１．１ｍｍｏｌ）を添加し、１０分後、温度を周囲温度に上げる。撹拌を１時間継続し、その後、（２Ｒ）－（（１Ｒ）－アセチルアミノ－（２Ｓ）－メトキシ－（２Ｓ）－メチルペンチル）－（５Ｒ）－カルボキシメチル－（３Ｓ）－ホルミルピロリジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル（１．０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．０ｍＬ）に入れて添加する。終了してすぐに反応を飽和塩化アンモニウム溶液でクエンチさせる。水溶液を酢酸エチルで７回抽出し、合わせた有機相をブラインで洗浄し、乾燥させ、蒸発濃縮する。残渣をクロマトグラフィー技術によって精製して所望の生成物を得る。
ステップｅ．（２Ｒ）－（（１Ｒ）－アセチルアミノ－（２Ｓ）－メトキシ－（２Ｓ）－メチルペンチル）－（５Ｒ）－カルボキシ－（３Ｓ）Ｅ／Ｚ－［３－（プロパルギル－ＰＥＧ４）－プロペニル］ピロリジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル。
（２Ｒ）－（（１Ｒ）－アセチルアミノ－（２Ｓ）－メトキシ－（２Ｓ）－メチルペンチル）－（５Ｒ）－カルボキシメチル－（３Ｓ）－Ｅ／Ｚ－［３－（プロパルギル－ＰＥＧ４）－プロペニル］ピロリジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル（１．０ｍｍｏｌ）を含んだテトラヒドロフラン（１２．０ｍＬ）及び水（３．０ｍＬ）の０℃の撹拌混合物に、水酸化リチウム（１．１ｍｍｏｌ）を添加する。撹拌を継続し、１５分後に温度を周囲温度に上げる。終了してすぐに、余剰のＡＭＢＥＲＬＩＴＥ（登録商標）ＩＲＮ－７７樹脂の添加によって溶液を酸性のｐＨにする。混合物を濾過し、濾液を真空技術によって濃縮し、表題化合物を得る。必要に応じて残渣をクロマトグラフィー技術によって精製して所望の生成物を得る。
ステップｆ．（５Ｒ）－（（１Ｒ）－アセチルアミノ－（２Ｓ）－メトキシ－（２Ｓ）－メチルペンチル）－（４Ｓ）－Ｅ／Ｚ－［３－（プロパルギル－ＰＥＧ４）－プロペニル］－ピロリジン－（２Ｒ）－カルボン酸。
（２Ｒ）－（（１Ｒ）－アセチルアミノ－（２Ｓ）－メトキシ－（２Ｓ）－メチルペンチル）－（５Ｒ）－カルボキシ－（３Ｓ）Ｅ／Ｚ－［３－（プロパルギル－ＰＥＧ４）－プロペニル］ピロリジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル（１．０ｍｍｏｌ）及び２－メチル－２－ブテン（０．５ｍＬ）を含んだジクロロメタン（８．０ｍＬ）の０℃の撹拌混合物に、トリフルオロ酢酸（４．０ｍＬ）を添加する。１０分後、温度を周囲温度に上げる。終了してすぐに全ての揮発性物質を真空技術によって蒸発させる。残渣をクロマトグラフィー技術によって精製して所望の生成物を得る。
実施例５０．複合体９の合成
ｈＩｇＧ１ Ｆｃ－ＰＥＧ４－アジドをｐＨ７．４のＰＢＳ ×１緩衝液溶液の中に含んだ溶液（１００ｍｇ、１．７１μｍｏｌ、７．０１１ｍＬ、ＭＷ＝５８，２００Ｄａ、ＤＡＲ＝３．７）を、Ｉｎｔ－１３（（５Ｒ）－（（１Ｒ）－アセチルアミノ－（２Ｓ）－メトキシ－（２Ｓ）－メチルペンチル）－（４Ｓ）－Ｅ／Ｚ－［３－（プロパルギル－ＰＥＧ４）－プロペニル］－ピロリジン－（２Ｒ）－カルボン酸）（０．０３１ｍｍｏｌ）を含んだｐＨ７．４のＰＢＳ ×１緩衝液溶液（２．４５ｍＬ）、硫酸銅（０．６２ｍｍｏｌ）、トリス（３－ヒドロキシプロピルトリアゾリルメチル）－アミン（０．６２ｍｍｏｌ）、及びアスコルビン酸ナトリウム（０．９３ｍｍｏｌ）に添加する。得られた均質な溶液を振盪台で１２時間穏やかに振盪する。粗溶液をｐＨ７．４のＰＢＳで１ｍｇ／ｍＬの終濃度に希釈し、１ｍＬの体積への限外濾過（１０，０００ＭＷＣＯ）２回を行う。その後、粗混合物をＰＢＳ ｐＨ７．４で１：１０に希釈し、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ，ＵＳＡ）を使用して精製し、続いてサイズ排除クロマトグラフィーで精製する。精製された材料を、ＮＡＮＯＤＲＯＰ（商標）ＵＶ可視分光光度計を使用して（複合に使用されたＦｃのアミノ酸配列に基づいて算出された消衰係数を用いて定量し、遠心濃縮器（１０，０００ＭＷＣＯ）を使用しておよそ１０ｍｇ／ｍＬに濃縮する。１～２ｕｇの各分子をゲルに装填すること及びｉｎｓｔａｎｔ Ｂｌｕｅ染色を用いて染色することによってビストリス４～１２％のＳＤＳ ＰＡＧＥゲルを使用して精製分子を分析する。各ゲルは、示された分子量基準を有する分子量ラダーを含む。ＭＡＬＤＩ ＭＳ分析を用いて平均ＤＡＲを決定する。
実施例５１．プロパルギル－ＰＥＧ４－ホスホニウムブロミドの合成

Figure 2022546609000534
 プロパルギル－ＰＥＧ４－ブロミド（１．０ｍｍｏｌ）とトリフェニルホスフィン（１．２ｍｍｏｌ）とをトルエン（１０ｍＬ）中に含んだ混合物を還流する。終了してすぐに混合物を周囲温度に冷却する。固体を濾過し、さらなる精製を何ら行わずに次のステップに使用する。
実施例５２．Ｉｎｔ－１４（（５Ｒ）－［（１Ｒ）－（プロパルギル－ＰＥＧ４－カルボキシアミド）－（２Ｓ）－メトキシ－（２Ｓ）－メチルペンチル］－（４Ｓ）－Ｚ－プロペニルピロリジン－（２Ｒ）－カルボン酸ＨＣｌ塩）の合成
Figure 2022546609000535
ステップａ．Ｎ－｛（２．Ｓ）－メトキシ－（（１Ｒ）－［１－（４－メトキシベンジル）－５－オキソ－（３Ｓ）－Ｚ－プロペニルピロリジン－（２Ｒ）－イル］－（２Ｓ）－メチルペンチル｝－（プロパルギル－ＰＥＧ４）－カルボキシアミド。
｛（２Ｓ）－メトキシ－（１Ｒ）－［１－（４－メトキシベンジル）－５－オキソ－（３Ｓ）－Ｚ－プロペニルピロリジン－（２Ｒ）－イル］－（２Ｓ）－メチルペンチル｝－カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル（それは参考文献ＪＡＣＳ，２００２，１２４，４７１６－４７２１に従って調製した；１．０ｍｍｏｌ）を含んだ無水ジクロロメタン（５ｍＬ）の０℃の撹拌混合物に、トリフルオロ酢酸（１０ｍｍｏｌ）を添加し、温度を周囲温度に上げる。終了してすぐに溶媒を減圧下で除去する。得られた残渣をジクロロメタン（２０ｍＬ）に溶解させ、重炭酸ナトリウムの飽和水溶液で抽出する。有機層を分離し、乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、蒸発濃縮する。粗製アミンをＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解させ、０℃で撹拌下でプロパルギル－ＰＥＧ４－酸（１．１ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（３．０ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（１．１ｍｍｏｌ）で処理する。反応が終了してすぐに、全ての揮発性物質を真空技術によって蒸発させる。残渣を酢酸エチル（１５ｍｌ）中に取り、重炭酸ナトリウムの飽和水溶液（１０ｍＬ）で洗浄し、その後、１Ｍの硫酸水溶液（１０ｍＬ）で洗浄する。合わせた有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過及び濃縮する。残渣をクロマトグラフィー技術によって精製して所望の生成物を得る。
ステップｂ．（２Ｒ）－（（１Ｒ）－（プロパルギル－ＰＥＧ４－カルボキシアミド）－（２Ｓ）－メトキシ－（２Ｓ）－メチルペンチル）－（５Ｒ）－オキソ－（３Ｓ）－Ｚ－プロペニルピロリジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル。
Ｎ－｛（２．Ｓ）－メトキシ－（１Ｒ）－［１－（４－メトキシベンジル）－５－オキソ－（３Ｓ）－Ｚ－プロペニルピロリジン－（２Ｒ）－イル］－（２Ｓ）－メチルペンチル｝－（プロパルギル－ＰＥＧ４）－カルボキシアミド（１．０ｍｍｏｌ）をアセトニトリルと水（１０：１、５ｍＬ）との混合物中に含んだ撹拌溶液に、硝酸セリウムアンモニウム（２．０ｍｍｏｌ）を少しずつ４５℃で１時間かけて添加し、終了まで撹拌を継続する。反応を重炭酸ナトリウムの飽和水溶液（５ｍＬ）でクエンチさせる。水層をＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、蒸発濃縮して粗製物を得、これをさらに精製せずに次のステップに使用する。材料をアセトニトリル（５ｍＬ）に溶解させ、炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（１．５ｍｍｏｌ）を添加し、続いてトリエチルアミン（２．０ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（触媒量）を添加する。終了してすぐに反応物を塩化アンモニウムの飽和溶液（５ｍＬ）でクエンチさせる。水層をＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を乾燥させる（硫酸ナトリウム）。全ての揮発性物質を真空技術によって除去する。必要に応じて残渣をクロマトグラフィー技術によって精製して所望の生成物を得る。
ステップｃ．（２Ｒ）－（（１Ｒ）－（プロパルギル－ＰＥＧ４－カルボキシアミド）－（２Ｓ）－メトキシ－（２Ｓ）－メチルペンチル）－（５Ｒ／Ｓ）－メトキシ－（３Ｓ）－Ｚ－プロペニルピロリジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル。
（２Ｒ）－（（１Ｒ）－（プロパルギル－ＰＥＧ４－カルボキシアミド）－（２Ｓ）－メトキシ－（２Ｓ）－メチルペンチル）－（５Ｒ）－オキソ－（３Ｓ）－Ｚ－プロペニルピロリジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル（１．０ｍｍｏｌ）を含んだＴＨＦ（８ｍＬ）の－７８℃の撹拌溶液に、ＳＵＰＥＲ－ＨＹＤＲＩＤＥ（登録商標）（ＴＨＦ中１Ｍ、２．２ｍｍｏｌ）を添加する。３０分後、反応混合物を重炭酸ナトリウムの飽和水溶液（４ｍＬ）及び３０％の過酸化水素（５滴）でクエンチさせる。混合物を室温に温め、さらに３０分間撹拌し、水層をＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、溶媒を蒸発させてヘミアミナールを得、これをさらに精製せずに使用する。上記生成物のメタノール（１６ｍＬ）溶液にｐ－トルエンスルホン酸水和物（０．１ｍｍｏｌ）を室温で添加する。反応混合物を一晩撹拌し、重炭酸ナトリウムの飽和水溶液（１０ｍＬ）でクエンチさせる。メタノールを減圧下で除去し、水（１０ｍＬ）を得られた残渣に添加し、ＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で抽出する。有機物を分離し、ブライン及び硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過及び濃縮する。必要に応じて残渣をクロマトグラフィー技術によって精製して所望の生成物を得る。
ステップｄ．（２Ｒ）－（（１Ｒ）－（プロパルギル－ＰＥＧ４－カルボキシアミド）－（２Ｓ）－メトキシ－（２Ｓ）－メチルペンチル）－（５Ｒ）－シアノ－（３Ｓ）－Ｚ－プロペニルピロリジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル。
（２Ｒ）－（（１Ｒ）－（プロパルギル－ＰＥＧ４－カルボキシアミド）－（２Ｓ）－メトキシ－（２Ｓ）－メチルペンチル）－（５Ｒ／Ｓ）－メトキシ－（３Ｓ）－Ｚ－プロペニルピロリジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル（１．０ｍｍｏｌ）を含んだジクロロメタン（２０ｍＬ）の－７８℃の撹拌溶液に、トリメチルシリルシアニド（２．０ｍｍｏｌ）を添加し、続いて三フッ化ホウ素ジエチルエテラート（１．２ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を－７８℃から－５０℃まで３時間の期間にわたって撹拌する。重炭酸ナトリウムの飽和水溶液（４０ｍＬ）を添加し、水層をＥｔＯＡｃ（３×１５ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下で濃縮する。エピマーシアノ誘導体の混合物からなる得られた残渣をクロマトグラフィー技術によって精製して所望の生成物を得る。
ステップｅ．（５Ｒ）－［（１Ｒ）－（プロパルギル－ＰＥＧ４－カルボキシアミド）－（２Ｓ）－メトキシ－（２Ｓ）－メチルペンチル］－（４Ｓ）－Ｚ－プロペニルピロリジン－（２Ｒ）－カルボン酸ＨＣｌ塩。
（２Ｒ）－（（１Ｒ）－（プロパルギル－ＰＥＧ４－カルボキシアミド）－（２Ｓ）－メトキシ－（２Ｓ）－メチルペンチル）－（５Ｒ）－シアノ－（３Ｓ）－Ｚ－プロペニルピロリジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル（１．０ｍｍｏｌ）のＡｃＯＨ（１０ｍＬ）溶液に、１２ＮのＨＣｌ（１０ｍＬ）を室温で添加する。溶液を室温で終了まで撹拌し、溶媒を減圧下で蒸発させる。必要に応じて残渣をクロマトグラフィー技術によって精製して所望の生成物を得る。
実施例５３．複合体１０の合成
ｈＩｇＧ１ Ｆｃ－ＰＥＧ４－アジドをｐＨ７．４のＰＢＳ ×１緩衝液溶液の中に含んだ溶液（１００ｍｇ、１．７１μｍｏｌ、７．０１１ｍＬ、ＭＷ＝５８，２００Ｄａ、ＤＡＲ＝３．７）を、Ｉｎｔ－１４（（５Ｒ）－［（１Ｒ）－（プロパルギル－ＰＥＧ４－カルボキシアミド）－（２Ｓ）－メトキシ－（２Ｓ）－メチルペンチル］－（４Ｓ）－Ｚ－プロペニルピロリジン－（２Ｒ）－カルボン酸ＨＣｌ塩）（０．０３１ｍｍｏｌ）を含んだｐＨ７．４のＰＢＳ ×１緩衝液溶液（２．４５ｍＬ）、硫酸銅（０．６２ｍｍｏｌ）、トリス（３－ヒドロキシプロピルトリアゾリルメチル）－アミン（０．６２ｍｍｏｌ）、及びアスコルビン酸ナトリウム（０．９３ｍｍｏｌ）に添加する。得られた均質な溶液を振盪台で１２時間穏やかに振盪する。粗溶液をｐＨ７．４のＰＢＳで１ｍｇ／ｍＬの終濃度に希釈し、１ｍＬの体積への限外濾過（１０，０００ＭＷＣＯ）２回を行う。その後、粗混合物をＰＢＳ ｐＨ７．４で１：１０に希釈し、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ，ＵＳＡ）を使用して精製し、続いてサイズ排除クロマトグラフィーで精製する。精製された材料を、ＮＡＮＯＤＲＯＰ（商標）ＵＶ可視分光光度計を使用して（複合に使用されたＦｃのアミノ酸配列に基づいて算出された消衰係数を用いて定量し、遠心濃縮器（１０，０００ＭＷＣＯ）を使用しておよそ１０ｍｇ／ｍＬに濃縮する。１～２μｇの各分子をゲルに装填すること及びｉｎｓｔａｎｔ Ｂｌｕｅ染色を用いて染色することによってビストリス４～１２％のＳＤＳ ＰＡＧＥゲルを使用して精製分子を分析する。各ゲルは、示された分子量基準を有する分子量ラダーを含む。ＭＡＬＤＩ ＭＳ分析を用いて平均ＤＡＲを決定する。
実施例５４．Ｉｎｔ－１５のＨＣｌ塩の合成
Figure 2022546609000536
ステップａ．Ｎ－｛（２．Ｓ）－メトキシ－（（１Ｒ）－［１－（４－メトキシベンジル）－５－オキソ－（３Ｓ）－Ｚ－プロペニルピロリジン－（２Ｒ）－イル］－（２Ｓ）－メチルペンチル｝－（３－ブチニル）－カルボキシアミド。
｛（２Ｓ）－メトキシ－（１Ｒ）－［１－（４－メトキシベンジル）－５－オキソ－（３Ｓ）－Ｚ－プロペニルピロリジン－（２Ｒ）－イル］－（２Ｓ）－メチルペンチル｝－カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル（それは参考文献ＪＡＣＳ，２００２，１２４，４７１６－４７２１に従って調製した；１．０ｍｍｏｌ）を含んだ無水ジクロロメタン（５ｍＬ）の０℃の撹拌混合物に、トリフルオロ酢酸（１０ｍｍｏｌ）を添加し、温度を周囲温度に上げる。終了してすぐに溶媒を減圧下で除去する。得られた残渣をジクロロメタン（２０ｍＬ）に溶解させ、重炭酸ナトリウムの飽和水溶液で抽出する。有機層を分離し、乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、蒸発濃縮する。粗製アミンをＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解させ、０℃で撹拌下で４－ペンチン酸（１．１ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（３．０ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（１．１ｍｍｏｌ）で処理する。反応が終了してすぐに、全ての揮発性物質を真空技術によって蒸発させる。残渣を酢酸エチル（１５ｍｌ）中に取り、重炭酸ナトリウムの飽和水溶液（１０ｍＬ）で洗浄し、その後、１Ｍの硫酸水溶液（１０ｍＬ）で洗浄する。合わせた有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過及び濃縮する。残渣をクロマトグラフィー技術によって精製して所望の生成物を得る。
ステップｂ．（２Ｒ）－（（１Ｒ）－（４－ペンチノイル）－（２Ｓ）－メトキシ－（２Ｓ）－メチルペンチル）－（５Ｒ）－オキソ－（３Ｓ）－Ｚ－プロペニルピロリジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル。
Ｎ－｛（２．Ｓ）－メトキシ－（（１Ｒ）－［１－（４－メトキシベンジル）－５－オキソ－（３Ｓ）－Ｚ－プロペニルピロリジン－（２Ｒ）－イル］－（２Ｓ）－メチルペンチル｝－（３－ブチニル）－カルボキシアミド（１．０ｍｍｏｌ）をアセトニトリルと水との混合物（１０：１、５ｍＬ）の中に含んだ撹拌混合物に、硝酸セリウムアンモニウム（２．０ｍｍｏｌ）を少しずつ４５℃で１時間かけて添加し、終了まで撹拌を継続する。反応を重炭酸ナトリウムの飽和水溶液（５ｍＬ）でクエンチさせる。水層をＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、蒸発濃縮して粗製物を得、これをさらに精製せずに次のステップに使用する。材料をアセトニトリル（５ｍＬ）に溶解させ、炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（１．５ｍｍｏｌ）を添加し、続いてトリエチルアミン（２．０ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（触媒量）を添加する。終了してすぐに反応物を塩化アンモニウムの飽和溶液（５ｍＬ）でクエンチさせる。水層をＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を乾燥させる（硫酸ナトリウム）。全ての揮発性物質を真空技術によって除去する。必要に応じて残渣をクロマトグラフィー技術によって精製して所望の生成物を得る。
ステップｃ．（２Ｒ）－（（１Ｒ）－（４－ペンチノイル）－（２Ｓ）－メトキシ－（２Ｓ）－メチルペンチル）－（５Ｒ／Ｓ）－メトキシ－（３Ｓ）－Ｚ－プロペニルピロリジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル。
（２Ｒ）－（（１Ｒ）－（２Ｒ）－（（１Ｒ）－（ ４－ペンチノイル）－（２Ｓ）－メトキシ－（２Ｓ）－メチルペンチル）－（５Ｒ）－オキソ－（３Ｓ）－Ｚ－プロペニルピロリジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル（１．０ｍｍｏｌ）を含んだＴＨＦ（８ｍＬ）の－７８℃の撹拌溶液に、ＳＵＰＥＲ－ＨＹＤＲＩＤＥ（登録商標）（ＴＨＦ中１Ｍ、２．２ｍｍｏｌ）を添加する。３０分後、反応混合物を重炭酸ナトリウムの飽和水溶液（４ｍＬ）及び３０％の過酸化水素（５滴）でクエンチさせる。混合物を室温に温め、さらに３０分間撹拌し、水層をＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、溶媒を蒸発させてヘミアミナールを得、これをさらに精製せずに使用する。上記生成物のメタノール（１６ｍＬ）溶液にｐ－トルエンスルホン酸水和物（０．１ｍｍｏｌ）を室温で添加する。反応混合物を一晩撹拌し、重炭酸ナトリウムの飽和水溶液（１０ｍＬ）でクエンチさせる。メタノールを減圧下で除去し、水（１０ｍＬ）を得られた残渣に添加し、ＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で抽出する。有機物を分離し、ブライン及び硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過及び濃縮する。必要に応じて残渣をクロマトグラフィー技術によって精製して所望の生成物を得る。
ステップｄ．（２Ｒ）－（（１Ｒ）－（４－ペンチノイル）－（２Ｓ）－メトキシ－（２Ｓ）－メチルペンチル）－（５Ｒ）－シアノ－（３Ｓ）－Ｚ－プロペニルピロリジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル。
（２Ｒ）－（（１Ｒ）－（４－ペンチノイル）－（２Ｓ）－メトキシ－（２Ｓ）－メチルペンチル）－（５Ｒ／Ｓ）－メトキシ－（３Ｓ）－Ｚ－プロペニルピロリジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル（１．０ｍｍｏｌ）を含んだジクロロメタン（２０ｍＬ）の－７８℃の撹拌溶液に、トリメチルシリルシアニド（２．０ｍｍｏｌ）を添加し、続いて三フッ化ホウ素ジエチルエテラート（１．２ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を－７８℃から－５０℃まで３時間の期間にわたって撹拌する。重炭酸ナトリウムの飽和水溶液（４０ｍＬ）を添加し、水層をＥｔＯＡｃ（３×１５ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下で濃縮する。エピマーシアノ誘導体の混合物からなる得られた残渣をクロマトグラフィー技術によって精製して所望の生成物を得る。
ステップｅ．
Ｎ－｛（２．Ｓ）－メトキシ－（（１Ｒ）－［１－（４－メトキシベンジル）－５－オキソ－（３Ｓ）－Ｚ－プロペニルピロリジン－（２Ｒ）－イル］－（２Ｓ）－メチルペンチル｝－（３－ブチニル）－カルボキシアミド（１．０ｍｍｏｌ）と、ビス－［Ｎ’－（２－アジドエチル）］－イミノ二酢酸アミド（０．５ｍｍｏｌ）と、１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－メタンアミンと、１－（フェニルメチル）－Ｎ，Ｎ－ビス［１－（フェニルメチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル］メチル］－（０．１ｍｍｏｌ）と、アスコルビン酸ナトリウム（１．０ｍｍｏｌ）とをエタノール（５ｍＬ）及び水（５ｍＬ）の中に含んだ撹拌混合物に、硫酸銅（０．１ｍｍｏｌ）を添加する。終了してすぐに反応物をＳｉｌｉａＭｅｔＳ ＴＡＡｃＯＮａ（０．３ｍｍｏｌ）で３０分間処理する。反応物を濾過し、全ての揮発性物質を真空技術によって蒸発させる。残渣をクロマトグラフィー技術によって精製して所望の生成物を得る。
ステップｆ．
ステップｅからの中間体（１．０ｍｍｏｌ）と、プロパルギル－ＰＥＧ４－酸（１．０５ｍｍｏｌ）と、ＤＩＰＥＡ（３．０ｍｍｏｌ）とを含んだＤＭＦ（１０ｍＬ）の０℃の撹拌溶液に、ＨＡＴＵ（２．０ｍｍｏｌ）を添加する。全ての揮発性物質を真空技術によって蒸発させ、残渣をクロマトグラフィー技術によって精製して所望の生成物を得る。
ステップｇ．Ｉｎｔ－１５のＨＣｌ塩
ステップｆからの中間体（１．０ｍｍｏｌ）のＡｃＯＨ（１０ｍＬ）溶液に、１２ＮのＨＣｌ（１０ｍＬ）を室温で添加する。終了まで溶液を室温で撹拌し、溶媒を減圧下で蒸発させる。必要に応じて残渣をクロマトグラフィー技術によって精製して所望の生成物を得る。
実施例５５．複合体１１の合成
ｈＩｇＧ１ Ｆｃ－ＰＥＧ４－アジドをｐＨ７．４のＰＢＳ ×１緩衝液溶液の中に含んだ溶液（１００ｍｇ、１．７１μｍｏｌ、７．０１１ｍＬ、ＭＷ＝５８，２００Ｄａ、ＤＡＲ＝３．７）を、Ｉｎｔ－１５ＨＣｌ塩（０．０３１ｍｍｏｌ）を含んだｐＨ７．４のＰＢＳ ×１緩衝液溶液（２．４５ｍＬ）、硫酸銅（０．６２ｍｍｏｌ）、トリス（３－ヒドロキシプロピルトリアゾリルメチル）－アミン（０．６２ｍｍｏｌ）、及びアスコルビン酸ナトリウム（０．９３ｍｍｏｌ）に添加する。得られた均質な溶液を振盪台で１２時間穏やかに振盪する。粗溶液をｐＨ７．４のＰＢＳで１ｍｇ／ｍＬの終濃度に希釈し、１ｍＬの体積への限外濾過（１０，０００ＭＷＣＯ）２回を行う。その後、粗混合物をＰＢＳ ｐＨ７．４で１：１０に希釈し、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ，ＵＳＡ）を使用して精製し、続いてサイズ排除クロマトグラフィーで精製する。精製された材料を、ＮＡＮＯＤＲＯＰ（商標）ＵＶ可視分光光度計を使用して（複合に使用されたＦｃのアミノ酸配列に基づいて算出された消衰係数を用いて定量し、遠心濃縮器（１０，０００ＭＷＣＯ）を使用しておよそ１０ｍｇ／ｍＬに濃縮する。１～２μｇの各分子をゲルに装填すること及びｉｎｓｔａｎｔ Ｂｌｕｅ染色を用いて染色することによってビストリス４～１２％のＳＤＳ ＰＡＧＥゲルを使用して精製分子を分析する。各ゲルは、示された分子量基準を有する分子量ラダーを含む。ＭＡＬＤＩ ＭＳ分析を用いて平均ＤＡＲを決定する。
実施例５６．ビス－［Ｎ’－（２－アジドエチル）］－イミノ二酢酸アミドの合成。

Figure 2022546609000537
ステップａ．ビス－［Ｎ’－（２－アジドエチル）］－Ｎ－Ｂｏｃ－イミノ二酢酸アミド。
Ｎ－Ｂｏｃ－イミノ二酢酸（１．０ｍｍｏｌ）と、２－アジドエタン－１－アミン塩酸塩（２．０ｍｍｏｌ）と、ＤＩＰＥＡ（６．０ｍｍｏｌ）とをＤＭＦ（１０ｍＬ）中に含んだ０℃の撹拌溶液に、ＨＡＴＵ（２．０ｍｍｏｌ）を添加する。全ての揮発性物質を真空技術によって蒸発させ、残渣をクロマトグラフィー技術によって精製して所望の生成物を得る。
ステップｂ．ビス－［Ｎ’－（２－アジドエチル）］－イミノ二酢酸アミド。
ビス－［Ｎ’－（２－アジドエチル）］－Ｎ－Ｂｏｃ－イミノ二酢酸アミド（１．０ｍｍｏｌ）と２－メチル－２－ブテン（０．５ｍＬ）とをジクロロメタン（８．０ｍＬ）中に含んだ０℃の撹拌混合物に、トリフルオロ酢酸（４．０ｍＬ）を添加する。１０分後、温度を周囲温度に上げる。終了してすぐに全ての揮発性物質を真空技術によって蒸発させる。残渣をクロマトグラフィー技術によって精製して所望の生成物を得る。
実施例５７．Ｉｎｔ－１６の合成
ＰＥＧ４－アルキンリンカーに複合しておりＦｃドメインまたはアルブミンタンパク質にさらに複合し得るスルホザナミビルの単量体を、以下の合成スキームに従って製造する。スルホザナミビル出発物質は、Ｈａｄｈａｚｉ ｅｔ ａｌ．Ａ ｓｕｌｆｏｚａｎａｍｉｖｉｒ ａｎａｌｏｇｕｅ ｈａｓ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ａｃｔｉｖｉｔｙ．ＣｈｅｍＭｅｄＣｈｅｍ Ｃｏｍｍ．１３：７８５－７８９（２０１８）に従って製造される。
Figure 2022546609000538
実施例５８．Ｉｎｔ－１７の合成
ＰＥＧ４－アルキンリンカーに複合しておりＦｃドメインまたはアルブミンタンパク質にさらに複合し得るスルホザナミビルの二量体を、以下の合成スキームに従って製造する。スルホザナミビル出発物質は、Ｈａｄｈａｚｉ ｅｔ ａｌ．Ａ ｓｕｌｆｏｚａｎａｍｉｖｉｒ ａｎａｌｏｇｕｅ ｈａｓ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ａｃｔｉｖｉｔｙ．ＣｈｅｍＭｅｄＣｈｅｍ Ｃｏｍｍ．１３：７８５－７８９（２０１８）に従って製造される。
Figure 2022546609000539
実施例５９．複合体１２の合成
アジド官能化非グリコシル化Ｆｃ（７０ｍｇ、４．７ｍＬ、１．３７０９μｍｏｌ）の溶液を、アルキン誘導体化低分子（２９．８ｍｇ、０．０２１６ｍｍｏｌ、Ｉｎｔ－７）が入った１５ｍＬ容の遠心管に加えた。穏やかに振盪して全ての固体を溶解させた後、混合物に、Ｌ－アスコルビン酸ナトリウム（５９．４ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）と硫酸銅（ＩＩ）（１５．９ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）とＴＨＰＴＡ（４３．５ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）とを含んだＰＢＳ ７．４緩衝液（１ｍｌ）の混合物溶液２０６μｌを添加した。得られた混合物を穏やかに一晩振盪した。それを、実施例８に記載したようにプロテインＡカラムで親和性クロマトグラフィーによって精製し、続いてサイズ排除クロマトグラフィーで精製した。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析で平均質量は５６，１７７Ｄａであった（ＤＡＲ＝３．６）。収量１０．１ｍｇ、収率１４％。複合体１２の非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥを図５４に示す。
実施例６０．Ｉｎｔ－１８の合成
Figure 2022546609000540
ステップａ．（１７－｛４－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］ブチル｝－１６－オキソ－４，７，１０，１３－テトラオキサ－１７－アザヘンイコサ－１－イン－２１－イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチルの合成

Figure 2022546609000541
 ［アザンジイルジ（ブタン－４，１－ジイル）］ビスカルバミン酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（実施例４５のステップａからの１．５ｇ、４．１７ｍｍｏｌ）とプロパルギル－ＰＥＧ４－酸（１．０８ｇ、４．１７ｍｍｏｌ）とをＤＣＭ（４０ｍＬ）中に含んだ溶液に、ＥＤＣ（１．０ｇ、５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（６５０ｍｇ、５ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（１．４ｍｌ、１０ｍｍｏｌ）を室温で添加し、その後、室温で一晩撹拌した。得られた溶液を濃縮し、調整剤を含んでいない１０％～１００％のアセトニトリル及び水で溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。収率１．９ｇ、７６％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ＋Ｈ＝６０２．４。
ステップｂ．Ｎ，Ｎ－ビス（４－アミノブチル）－４，７，１０，１３－テトラオキサヘキサデカ－１５－イン－１－アミドの合成
Figure 2022546609000542
 （１７－｛４－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］ブチル｝－１６－オキソ－４，７，１０，１３－テトラオキサ－１７－アザヘンイコサ－１－イン－２１－イル）カルバミン酸Ｔｅｒｔ－ブチル（１．９０、３．１ｍｍｏｌ）を２０ｍｌのＴＦＡで室温で０．５時間で処理し、次いで濃縮乾固し、さらに精製せずに次のステップに使用した。このステップでの収量は定量的である。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ／２＋Ｈ＝４０２．３。
ステップｃ．全保護Ｉｎｔ－１８の合成
Figure 2022546609000543
 Ｎ，Ｎ－ビス（４－アミノブチル）－４，７，１０，１３－テトラオキサヘキサデカ－１５－イン－１－アミド（０．１５０ｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を、エーテルに繋げられたザナミビル酸（０．４００ｇ、０．６３ｍｍｏｌ、実施例３１のステップｆに記載）のＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液に添加し、その後ＥＤＣ（０．２００ｇ、１．０ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．１３５ｇ、１．００ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（０．１４ｍｌ、１．００ｍｍｏｌ）で一晩、室温で処理した。得られた溶液を濃縮し、調整剤としての０．１％のＴＦＡを含んでいない１０％～１００％のアセトニトリル及び水で溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。生成物の収率３１０ｍｇ、６０．３％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ／２＋Ｈ＝８１３．９。
ステップｄ．Ｉｎｔ－１８の合成
Figure 2022546609000544
 先のステップからの生成物（３００ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸（２ｍＬ）で処理し、室温で３０分間撹拌した。得られた溶液を濃縮し、水（２ｍＬ）に再溶解させ、その後、水酸化リチウム（２４ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を溶解させた水（１ｍＬ）溶液で処理した。反応物を１０分間撹拌し、その後、０．１ｍｌの酢酸でクエンチさせ、濃縮し、０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した０％～５０％のアセトニトリル及び水で溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。生成物の収率１４０ｍｇ、５２％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ／２＋Ｈ＝５７３．８、Ｍ／３＋Ｈ＝３８２．９。
実施例６１．複合体１３ａのためのＰＥＧ４－アジドＦｃの合成
ｃ－０．０５ＭのＰＥＧ４－アジドＮＨＳエステルのＤＭＦ／ＰＢＳ溶液の調製
ＰＥＧ４－アジドＮＨＳエステル（８０．５ｍｇ）を０℃でＤＭＦ（０．５０ｍＬ）に溶解させ、３．５０ｍＬのＰＢＳ １×緩衝液を０℃で添加することによって４．０６３ｍＬに希釈した。この溶液を、このＰＥＧ４－アジドＮＨＳエステルのＰＢＳ ×１溶液の当量の調節によって様々な薬物抗体比（ＤＡＲ）値を有する他のＰＥＧ４－アジドＦｃを調製するために使用した。
ＰＥＧ４－アジドＦｃの調製
０．０５ＭのＰＥＧ４－アジドＮＨＳエステルのＰＢＳ ×１緩衝液溶液（０．０９８４ｍＬ、４．９２μｍｏｌ、２．５当量）を、ｈ－ＩｇＧ１ Ｆｃの溶液（１０５ｍｇを５．０３１ｍＬのｐＨ７．４のＰＢＳの中に含んだもの、ＭＷ約５３，３６０Ｄａ、１．９６８μｍｏｌ）に添加し、混合物を穏やかに周囲温度で１２時間振盪した。遠心濃縮器（３０，０００ＭＷＣＯ）を使用して溶液を約１．５ｍＬの体積に濃縮した。粗混合物をＰＢＳ ｐＨ７．４で１：１０に希釈し、再び濃縮した。この洗浄手順を合計３回繰り返した。この洗浄手順によって未反応のアジド試薬が除去された。濃縮されたＦｃ－ＰＥＧ４－アジドをｐＨ７．４のＰＢＳ １×緩衝液で５．０３ｍＬに希釈してクリック複合体形成に備えた。精製された材料を、ＮＡＮＯＤＲＯＰ（商標）ＵＶ可視分光光度計を使用して（ｈ－ＩｇＧ１のアミノ酸配列に基づいて算出された消衰係数を用いて）定量した。緩衝液交換／精製の後の収量は定量的であった。
本明細書に記載の任意の複合体のためのＦｃをコードする核酸構築物は、Ｌｙｓ４４７（例えばＣ末端リジン残基）及び／またはＮ末端ネズミＩｇＧシグナル配列を含むＦｃのアミノ酸配列をコードする核酸配列を含み得る。発現時にＦｃのＣ末端リジン及び存在する場合のＮ末端ネズミＩｇＧシグナル配列はタンパク質分解的に切断され、Ｌｙｓ４４７（例えばＣ末端リジン残基）及び発現構築物中に存在する場合のＮ末端ネズミＩｇＧシグナル配列を欠くアミノ酸配列を有するＦｃをもたらす。Ｃ末端リジンの存在または非存在は、Ｆｃまたは対応する複合体の特質を変化させない。
実施例６２．複合体１３ａの合成
クリック試薬溶液の調製：０．００５０ＭのＣｕＳＯ４をＰＢＳ緩衝液中に含んだ溶液：２０．０ｍｇのＣｕＳＯ４を２５．０ｍＬのＰＢＳ ×１に溶解させ、その後、上記ＣｕＳＯ４溶液を２２．０ｍＬ取り、１８９．４ｍｇのＢＴＴＡＡ及び１０９０ｍｇのアスコルビン酸Ｎａを添加して透明な溶液（０．００５０ＭのＣｕＳＯ４、０．０２０ＭのＢＴＴＡＡ、及び０．２５Ｍのアスコルビン酸ナトリウム）を得た。
アジド官能化Ｆｃ（１００ｍｇ、４．７９ｍＬ、１．８７μｍｏｌ、配列番号３５）の溶液を、アルキン誘導体化低分子Ｉｎｔ－１８（１１．２ｍｇ、０．００７５０ｍｍｏｌ、実施例６０で調製したもの）が入った１５ｍＬ容の遠心管に加えた。穏やかに振盪して全ての固体を溶解させた後、溶液を３．００ｍＬの上記クリック試薬溶液で処理した。得られた無色の均質な溶液を穏やかに一晩振盪した。それをプロテインＡカラムで親和性クロマトグラフィーによって精製し、続いてサイズ排除クロマトグラフィーで精製した（実施例１０の一般複合体精製プロトコール参照）。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析で平均質量は５５，９１３Ｄａであった（ＤＡＲ＝１．７）。収量５４．０ｍｇ、収率５４％。
複合体１３ａのためのＦｃをコードする核酸構築物は、Ｃ末端リジン残基及びＮ末端ネズミＩｇＧシグナル配列を含むものである配列番号３５のアミノ酸配列をコードする核酸を含んでいた。発現時に複合体１３ａのＦｃのＣ末端リジン及びＮ末端ネズミＩｇＧシグナル配列はタンパク質分解的に切断され、Ｌｙｓ４４７（例えばＣ末端リジン残基）及びＮ末端ネズミＩｇＧシグナル配列を欠く配列を有するＦｃをもたらす。Ｃ末端リジンの存在または非存在は、Ｆｃまたは対応する複合体の特質を変化させない。
実施例６３．複合体１３ｂ、複合体１３ｃ、複合体１３ｄ、複合体１３ｅ、複合体１３ｆ及び複合体１３ｇの合成
複合体１３ｂ、複合体１３ｃ、複合体１３ｄ、複合体１３ｅ、複合体１３ｆ及び複合体１３ｇのＰＥＧ４－アジドＦｃを、下表に記載のとおりにＰＥＧ４－アジドＮＨＳエステルの当量数を調節して複合体１３ａのＰＥＧ４－アジドＦｃ（実施例６１）と同様にして調製した。複合体１３ｂ、複合体１３ｃ、複合体１３ｄ、複合体１３ｅ、複合体１３ｆ及び複合体１３ｇを実施例６２の複合体１３ａと同様にして調製したが、この場合、指向性部分（Ｉｎｔ－１８）の当量数を所望のＤＡＲ値（表２６）に基づいて調節し、使用したクリック試薬溶液の体積は、実施例６２の手順に採用したのと同じ体積であった。ＤＡＲ値、分子量及び収率を下表に列挙する。生成物である複合体を、実施例８に記載したようにプロテインＡカラムで親和性クロマトグラフィーによって精製し、続いてサイズ排除クロマトグラフィーで精製した。複合体１３ａ～１３ｇの非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥを図５５に示す。
Figure 2022546609000545
実施例６４．複合体６の試験管内での安定性
マウス及びヒトの両方の新鮮なＫ２ＥＤＴＡ処理済み血漿及び肝臓ミクロソームを使用して、複合体６の試験管内での安定性を実証する。血漿中で３７℃で２４時間インキュベートした後の薬物抗体比（ＤＡＲ）エンベロープを比較することによって、試験管内でのマウス及びヒト血漿中安定性をＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析検出によって決定した。マウス及びヒトミクロソームを使用した肝臓ミクロソーム安定性も、３７℃で２４時間のインキュベーションの後にＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析検出を用いて実施した。これは、Ｆｃタンパク質上、リンカー上または標的部分上に存在し得る代謝的に不安定な部位を同定するために行われた。
６４．１ 血漿中安定性試料調製
まず、３ｍｇ／ｍＬの複合体６ ６０μＬを１２０μＬの血漿と混合した。各血漿タイプを２本の管に等分して入れた。各血漿タイプからの一方のアリコートをすぐに冷凍した。残りのアリコートを水浴（３７℃）中に２４時間入れた。ＭＡＧＮＥ（登録商標）プロテインＡビーズ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を、穏やかに渦流撹拌してビーズを懸濁させることによって平衡化させた。５０μＬのビーズスラリーを１．５ｍＬ容の微量遠心管に加えてマグネットスタンド上に１０秒間置くことを両方の血漿タイプについて反復して行った。１０秒後、保存用緩衝液を除去して捨てた。５００μＬの結合／洗浄用緩衝液（０．１％のＢＳＡを含んだ１×ＰＢＳ ｐＨ７．４）を、ビーズが入った１．５ｍＬ容の微量遠心管に加えた。ビーズを混合（渦流撹拌）し、マグネットスタンド上に１０秒間置いた。１０秒後、結合／洗浄用緩衝液を除去して捨てた。５０μＬの緩衝液（１×ＰＢＳ、ｐＨ７．４）を、ビーズが入った微量遠心管に加えた。５０μＬの血漿混合物をビーズに添加し、穏やかに渦流撹拌して混ぜ合わせた。管振盪器を使用して試料を室温で６０分間混合してビーズが懸濁状態に保たれることを確保した。混合後、管をマグネットスタンド上に１０秒間置き、上清を除去した。５００μＬの緩衝液（１×ＰＢＳ、ｐＨ７．４）を添加し、穏やかに渦流撹拌して混ぜ合わせた。混合後、管をマグネットスタンド上に１０秒間置き、続いて洗浄用緩衝液を除去して捨てた。洗浄ステップを合計２回繰り返して洗浄した。５００μＬの緩衝液（１×ＰＢＳ、ｐＨ７．４）で２回洗浄した後、３回のそれぞれ５００μＬ、２００μＬ及び１００μＬの水による洗浄を実施した。管に適切な体積の水を加え、穏やかに渦流撹拌してよく混ぜ合わせ、その後、マグネットスタンド上に１０秒間置き、その後、水を除去して捨てた。水による３回目の洗浄の後、３０μＬの溶出用緩衝液（９０：１０：０．４の水：アセトニトリル：ＴＦＡ）をビーズに添加した。管振盪器を使用して溶出用緩衝液及び試料を室温で３０分間混合した。混合後、管をマグネットスタンド上に１０秒間置き、試料を含有する溶出用緩衝液を取り出して保存した。２μＬの試料を２μＬのＭＡＬＤＩマトリックス（２０ｍｇ／ｍＬのシナピン酸を含んだ７０：３０：０．１の水：アセトニトリル：ＴＦＡ）と混合し、二重層技術を用いてＭＡＬＤＩターゲットプレート上にスポットした。その後、試料をＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析によって分析した。
６４．２ 肝臓ミクロソーム試料調製
５００ｍＭのｐＨ７．５のトリス－ＨＣｌ、及び５０ｍＭの塩化マグネシウム六水和物を使用して１０ｘ緩衝液を作った。ＡＣＶ－００６をｐＨ７．４の１×ＰＢＳで５０μＭに希釈した。肝臓ミクロソームを解凍し、渦流撹拌した。各種（ヒト及びマウス）の肝臓ミクロソームのアリコートを対照としての使用のために７０℃で１５分間加熱殺滅した。両方の種について反応混合物を表２７に従って調製した。管を水浴（３７℃）中で２４時間インキュベートした。試料を分析のために５９．１からのプロトコールに従ってＭＡＧＮＥ（登録商標）プロテインＡビーズ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して抽出した。

Figure 2022546609000546
６４．３ 試料及びデータの分析
フルスキャンのＭＡＬＤＩ－ＴＯＦマススペクトルを得るためにＢｒｕｋｅｒ Ｃｏｍｐａｓｓ Ｆｌｅｘ Ｃｏｎｔｒｏｌ ｖｅｒｓｉｏｎ ３．４を使用して試料が取得された（表２８）。取得質量範囲での内部較正物としてＢＳＡを使用した。Ｂｒｕｋｅｒ Ｃｏｍｐａｓｓ Ｆｌｅｘ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｖｅｒｓｉｏｎ ３．４ソフトウェアを使用してデータをさらに解析した。加えて、対照のＤＡＲパターンを試験試料のＤＡＲパターンと比較した。

Figure 2022546609000547
６４．４ 結果
マウス及びヒトの両方の新鮮なＫ２ＥＤＴＡ処理血漿及び肝臓ミクロソームにおける試験管内での安定性について、試験化合物である複合体６（図４３）を試験した。
新鮮なＫ２ＥＤＴＡマウス及びヒト血漿に複合体６を１ｍｇ／ｍＬの終濃度でスパイクした。血漿を２つのアリコートに分割し、一方をすぐに冷凍し、もう一方を３７℃の水浴中で２４時間インキュベートした。インキュベーションの終了時に試料をＭＡＧＮＥ（登録商標）プロテインＡ磁気ビーズによって血漿マトリックスから抽出した。血漿とのインキュベーションに続いて、試料をＤＡＲの変化についてＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析によって分析した。マウス（図４４）またはヒト（図４５）のどちらの血漿とインキュベートしても複合体６はＤＡＲに何ら変化を生じさせないことが分かった。
終濃度０．５ｍｇ／ｍＬの活性または加熱殺滅肝臓ミクロソームのどちらかと、終濃度５ｍＭのＭｇＣｌ２とを含有する５０ｍＭのｐＨ７．５のトリス－ＨＣｌ緩衝液溶液の中に５μＭの終濃度で、複合体６の肝臓ミクロソームでの安定性を試験した。全ての試料を３７℃の一定温度でインキュベートし、インキュベーションの間、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）再生溶液を利用して連続的な補因子利用可能性を提供した。インキュベーションは２４時間にわたって行った。インキュベーションの最後に試料をプロテインＡ磁気ビーズによってミクロソームマトリックスから抽出した。肝臓ミクロソームとのインキュベーションの後、試料をＤＡＲの変化についてＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析によって分析した。マウス（図４６）またはヒト（図４７）のどちらの肝臓ミクロソームとのインキュベーションでも複合体６はＤＡＲに何ら変化を生じさせないことが分かった。
３７℃で２４時間インキュベートした後の試験管内血漿中安定性は、マウスまたはヒトのどちらにおいても複合体６Ｆｃ、リンカーまたは指向性部分に変質がないことを示唆している。同様に、マウス及びヒトの両方の肝臓ミクロソームにおいてインキュベーション後に変質がないことが認められ、代謝産物の非存在が示唆された。これらの試験管内試験の結果は、これが、生物学的不安定性を有し得る分解物を伴う安定化合物であることを支持している。
実施例６５．致死性マウスモデルにおけるＡ型インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）に対する様々な薬物抗体比（ＤＡＲ）の複合体１３の有効性
複合体１３を雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）における致死性ＩＡＶ Ｈ１Ｎ１インフルエンザ感染症に対して評価した。攻撃ウイルス（Ａ／Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／８／１９３４）は、マウスに致死性感染症を引き起こすことができるマウス適合型単離物である。この実験はマウス５匹の群を１３個含んでいた。０日目に全てのマウスを、ケタミン／キシラジン（それぞれ１５０及び１０ｍｇ／ｋｇ）の混合物で麻酔した後にＬＤ９５の３倍のウイルスで３０μｌの体積の鼻腔内接種によって攻撃した。
群１～１３には、試験品またはビヒクル（ＰＢＳ）のウイルス攻撃から２時間後に単回静脈注射処置を施した。試験では、複合体１３ａ、複合体１３ｃ、複合体１３ｄ及び複合体１３ｇ（それぞれ１．７、３．８、５．８及び１０．３のＤＡＲ）に対応する複合体１３の４つの異なるＤＡＲ構築物を評価した。複合体１３ａ、複合体１３ｃ、複合体１３ｄ及び複合体１３ｇの合成については実施例６１～実施例６３に記載する。各構築物を０．０３、０．１及び０．３ｍｇ／ｋｇで評価した。各複合体の一般試験デザインを表２９にまとめる。
Figure 2022546609000548
０．３ｍｇ／ｋｇでは全ての構築物が完全に保護的であったが、これに対して０．０３ｍｇ／ｋｇで活性な構築物はなく（全ての群で０％の生存率）、低用量が閾値有効用量未満であることが示唆された。しかしながら、０．１ｍｇ／ｋｇの複合体を受けている群は区別され得る（表３０）。この用量レベルでは、ＤＡＲが１．７、３．８及び５．８である複合体はビヒクルのみで処置したマウスに比べて有意により保護的であった（ｐ＝０．００２７）。しかしながら、ＤＡＲが高い構築物（１０．３）は、ビヒクルのみで処置したマウスに比べて有意により保護的ではなかった（ｐ＝０．０９１）。ＤＡＲが高い構築物が活性を失うことの根底にある機序は今のところ不明であるが、より短い半減期を招く抗体再循環の妨害を含めたいくつかの因子によって引き起こされている可能性がある。
Figure 2022546609000549
実施例６６．複合体６及び複合体１２の生体内での有効性
複合体６、及びＮ２９７ＡでのＦｃ突然変異を有する類縁体である複合体１２を、雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）における致死性ＩＡＶ Ｈ１Ｎ１インフルエンザ感染症に対して評価した。攻撃ウイルス（Ａ／Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／８／３４）は、マウス適合型単離物である。実験は群１つあたりマウスを５匹含んでいた。マウスをケタミン／キシラジン（１５０／１０ｍｇ／ｋｇ）で麻酔し、ＬＤ９５の３～５倍のインフルエンザウイルスで３０μＬの体積の鼻腔内接種によって攻撃した。感染の２時間後に単回１用量の処置を静脈注射によって施した。陰性対照としてＰＢＳを与えた。攻撃後１５日間にわたって全てのマウスを体重減少％（図４８）及び生存（図４９）について追跡評価した。
実施例６７．試験管内での複合体６及び複合体１２のＦｃγ受容体ＩＩＩＡ結合性
複合体６、及びＮ２９７ＡでのＦｃ突然変異を有する類縁体である複合体１２のＦｃｙＲＩＩＩＡに対する結合性をＥＬＩＳＡによって評価した。プレートを１μｇ／ｍＬの組換えヒトＦｃγＲＩＩＩＡで一晩被覆した。翌日、プレートを１％のＢＳＡ溶液で１時間ブロッキングした。複合体を０．０１～１０００ｎＭの用量応答範囲でプレートに加え、２時間インキュベートした。ペルオキシダーゼ複合抗ヒトＦｃと共に１時間インキュベートすること、及びその後にＴＭＢ基質試薬と共に１０～１５分間インキュベートすることによって結合を検出した。４５０ｎｍでの吸光度を読み取ることによって結合性を決定した（図５０及び図５１）。
実施例６８．生体内での複合体６血漿試料分析
血漿試料中の複合体６をノイラミニダーゼ捕捉検出ＥＬＩＳＡによって定量した。手短に述べると、分子をノイラミニダーゼ被覆プレート上に捕捉し、その後、ＨＲＰ複合抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃ抗体を使用して検出した。複合体６標準曲線の４ＰＬ非線形回帰を用いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍでタンパク質濃度を算出した。方法についてのより詳細な説明を以下に示す。
Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ ９６ウェルプレート（カタログ番号１２－５６５－１３６、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を、Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０４／２００９（Ｈ１Ｎ１）からの０．１Ｕ／ウェルのノイラミニダーゼ（１１０５８－ＶＮＡＨＣ、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）を含んだ１×ＫＰＬ被覆用緩衝液（５１５０－００４１、ＳｅｒａＣａｒｅ）で被覆した。プレートを旋回プレート振盪器（５００ｒｐｍ）上で１時間、室温でインキュベートした。血漿試料の段階希釈液を播種し、室温で２時間インキュベートした（試料希釈剤：Ｔｗｅｅｎ２０を０．０２５％としたＰＢＳの中に０．５％のＢＳＡを含んだもの＋１：２，５００のナイーブカニクイザル血漿終濃度）。０．２３０～５００ｎｇ／ｍＬの範囲の複合体６標準曲線を各プレートで反復して作成した。２時間のインキュベーションの後、Ｔｗｅｅｎ２０を０．０５％含んだ３００μＬのＰＢＳでプレートを５回洗浄した。その後、試料希釈剤で１：１，０００に希釈したＨＲＰ複合抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ Ｆ（ａｂ’）２（７０９－０３６－０９８、Ｊａｃｋｓｏｎ）によって室温で１時間、プレート上のノイラミニダーゼに結合した複合体６を探った。その後、Ｔｗｅｅｎ２０を０．０５％含んだ３００ｕＬのＰＢＳでプレートを８回洗浄し、ＴＭＢ基質で７～８分間発色させた。１ＮのＨ２ＳＯ４で反応を停止させた。４５０ｎｍで吸光度を読み取った。血漿試料中の複合体６を、標準曲線の非線形回帰解析（シグモイド、４ＰＬ解析）に続いてＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６を用いて内挿した。
その後、得られた平均血漿中濃度を用いて薬物動態パラメータを、Ｐｈｏｅｎｉｘ ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ ７．０を用いた非コンパートメント解析によって算出した。
薬物動態（ＴＫ）、群２（静脈注射、５ｍｇ／ｋｇ）及び群３（静脈注射、２０ｍｇ／ｋｇ）
投与後１日目（表３１）及び８日目（表３２）に雄及び雌の動物の間で濃度は、同じ用量群内で同程度であった。両日にまたがって平均血漿曝露量は用量にほぼ比例して増加するようであった。２回目の用量投与の後、異なる用量群にまたがって約３０％のわずかな蓄積が認められた。異なる用量群にまたがる１日目及び８日目の平均血漿中濃度のプロットを図５２に示す。
Figure 2022546609000550
Figure 2022546609000551
薬物動態（ＰＫ）、群４（静脈注射、１０ｍｇ／ｋｇ）及び群５（皮下注射、１０ｍｇ／ｋｇ）
静脈内投与後、雄及び雌の動物からの血漿中濃度は同程度であった。静脈内投与後、長い終末相半減期をもたらす非常に低いクリアランスが認められた（表３３Ａ及び表３３Ｂ）。
Figure 2022546609000552
皮下投与後、最大濃度に達するまでの時間に達したのは投薬から７２時間後であったが、濃度は投薬後の６７２時間を通して測定可能であった（表３４Ａ及び表３４Ｂ）。皮下投薬後の生物学的利用能はおよそ１３９％と高かった。１０ｍｇ／ｋｇの静脈内投与と皮下投与との経時血漿中濃度の比較を図５３に示す。

Figure 2022546609000553
実施例６９．致死性マウスモデルにおけるインフルエンザＡ／Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対する複合体６の有効性
複合体６を雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）における致死性ＩＡＶ Ｈ１Ｎ１インフルエンザ感染症に対して評価した。攻撃ウイルス（Ａ／Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／８／１９３４）は、マウスに致死性感染症を引き起こすことができるマウス適合型単離物である。実験はマウス５匹の群を７つ含んでいた。０日目に全てのマウスを、ケタミン／キシラジン（それぞれ１５０及び１０ｍｇ／ｋｇ）の混合物で麻酔した後にＬＤ９５の３倍のウイルスで３０μｌの体積の鼻腔内接種によって攻撃した。死亡及び体重を毎日記録し、体重が２０％減少した動物がいれば死亡と記録した。試験群にウイルス攻撃の２時間後に複合体６、ｈＩｇＧ１ Ｆｃ対照、またはビヒクル（ＰＢＳ）の単回静脈注射処置を施した。オセルタミビルを与える群には、ウイルス攻撃の２時間後から始めて５日間にわたって１日２回、経口的に投薬した。試験デザインを表３５にまとめる。
Figure 2022546609000554
予想通り、ビヒクルまたはｈＩｇＧ１ Ｆｃのみを受けているマウスは６日目までに感染症で死亡した。同様に、低用量（５ｍｇ／ｋｇ；５日間にわたって１日２回）のオセルタミビルで処置したマウスは８日目までに死に至った（表３６）。しかしながら、２０ｍｇ／ｋｇのオセルタミビルを同じ投薬計画で与えたマウスは完全に保護された（ｐ＝０．００２７）。オセルタミビルについて認められたこととは対照的に、複合体６で処置したマウスは、単回静脈注射用量による全ての用量レベル（１０、２及び０．４ｍｇ／ｋｇ）において完全に保護された（ｐ＝０．００２７）。
Figure 2022546609000555
複合体６の力価は毎日の体重測定によってさらに支持された。予想通り、ビヒクルまたはｈＩｇＧ１ Ｆｃで処置したマウスは定常的な体重減少を、２０％を超過するまで呈し、この時にそれらを死亡と記録した（表３７）。５ｍｇ／ｋｇのオセルタミビルで処置した群も、８日目に死に至るまで一貫して体重減少を呈した。高用量（２０ｍｇ／ｋｇ）のオセルタミビルで処置したマウスは定常的ながら少ない体重減少を示したが、これは回復前に８日目に１４％に達した。
対照及びオセルタミビル処置マウスとは対照的に、複合体６を受けている群は試験全体を通して最低用量濃度（０．４ｍｇ／ｋｇ）においてさえ健常な体重を維持した（表３７）。複合体６処置マウスの中で最も大きな一時的体重減少は、２ｍｇ／ｋｇ用量群の１４日目のたったの２％であった。生存及び体重測定の両方によって、複合体６はたったの０．４ｍｇ／ｋｇの単回静脈注射用量でインフルエンザＡ／Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／８／１９３４からの堅牢な保護を示した。
Figure 2022546609000556
実施例７０．複合体１４の合成
ＰＥＧ－アジド－Ｆｃ（配列番号３５）及びＩｎｔ－７（実施例１９）を使用して標題複合体を複合体１３ａ（実施例６２）と同様に調製した。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析で平均質量は５６，５０２．Ｄａであった（ＤＡＲ＝２．１）。収率４３．４ｍｇ、４３．４％。
実施例７１．複合体１５の合成
この複合体はＰＥＧ４－アジド－Ｆｃ（配列番号３５、実施例６１）及びＩｎｔ－１２（実施例４６）によって実施例６２（複合体１３ａ）と同様に調製された。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析で平均質量は５６，５２８．Ｄａであった（ＤＡＲ＝２．２）。収率４０．０ｍｇ、４０．０％。
実施例７２．複合体１６の合成
この複合体はＰＥＧ４－アジド－Ｆｃ（配列番号３５、実施例６１）及びＩｎｔ－１０（実施例３１）によって実施例６２（複合体１３ａ）と同様に調製された。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析で平均質量は５６，５０７．Ｄａであった（ＤＡＲ＝２．１）。収率４１．７ｍｇ、４２％。
実施例７３．Ｉｎｔ－１９の合成
Figure 2022546609000557
ステップａ．

Figure 2022546609000558
 ［２－（２－ブロモエトキシ）エチル］カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（１．８ｇ、６．６ｍｍｏｌ）とプロパルギル－ＰＥＧ４アミン（０．７ｇ、３．０ｍｍｏｌ）とを３０ｍｌのＤＭＦの中に含んだ溶液に、炭酸カリウム（１．２ｇ、９ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を８０℃で６時間撹拌し、その後、ＤＣＭ（２００ｍＬ）とブライン（５０ｍＬ）との間で分画した。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濾過してすぐに、得られた濾液を濃縮し、０．１％のＴＦＡを調整剤として含んだ１０％～１００％のアセトニトリル及び水で溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。生成物の収率１．０ｇ、６５％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ／２＋Ｈ＝６０６．４。
ステップｂ．
Figure 2022546609000559
 先のステップからの生成物（１．０ｇ、１．６ｍｍｏｌ）を室温で０．５時間、ＴＦＡ（１０ｍＬ）で処理し、その後、濃縮乾固し、さらに精製せずに次のステップに使用した。このステップでの収量は定量的であった。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ／２＋Ｈ＝４０６．３。
ステップｃ．
Figure 2022546609000560
 先のステップからの生成物（１２０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を、エーテルザナミビル酸（２３０ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ、実施例３１）を１０ｍｌのＤＭＦの中に含んだ溶液で処理した。この溶液にＥＤＣ（１００ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（６５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（０．１４ｍｌ、１ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を室温で一晩撹拌し、その後、調整剤としてのＴＦＡを含んでいない１０％～１００％のアセトニトリル及び水で溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。生成物の収率１８０ｍｇ、６０．２％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ／２＋Ｈ＝８１６．９。
ステップｄ．
Figure 2022546609000561
 先のステップからの生成物（１８０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を室温で３０分間、トリフルオロ酢酸（２ｍＬ）で処理した。得られた溶液を濃縮し、水（２ｍＬ）に溶解させ、その後、水酸化リチウム（２４ｍｇ、１ｍｍｏｌ）が水（１ｍＬ）に溶解した溶液で処理した。得られた溶液を１０分間撹拌し、その後、０．１ｍｌの酢酸でクエンチさせた。溶液を濃縮し、０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した０％～５０％のアセトニトリル及び水で溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。生成物の収率１４０ｍｇ、５２％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ／２＋Ｈ＝５７５．８、Ｍ／３＋Ｈ＝３８４．２。
実施例７４．複合体１７の合成
この複合体は、ＰＥＧ４－アジド－Ｆｃ（配列番号３５、実施例６１）及びＩｎｔ－１９（実施例７３）によって実施例６２（複合体１３ａ）と同様に調製された。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析で平均質量は５６，６７２．Ｄａであった（ＤＡＲ＝２．２）。収率３６．７ｍｇ、３６．７％。
実施例７５．Ｉｎｔ－２０の合成

Figure 2022546609000562
ステップａ．
Figure 2022546609000563
 イミノ二酢酸ジエチル（３．１ｇ、１６．０６ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（３６ｍＬ）溶液に、臭化ベンジル（２．３８ｍＬ、１９．６４ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（６．４４ｇ、４６．４６ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を７０℃で１６時間加熱した。室温に冷却した後、反応混合物を水希釈し、第三ブチルメチルエーテル（３×１００ｍＬ）で抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、その後、濃縮した。残渣を順相シリカゲルクロマトグラフィー（Ｉｓｃｏ、０～１０％の酢酸エチル及びヘキサン）によって精製した。収率３．１３ｇ、６９．８％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２８０．２。
ステップｂ．
Figure 2022546609000564
 ステップａからのジ－エチルエステル（３．２ｇ、１１．２ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（５ｍＬ）溶液を、ＬｉＡＬＨ４（４２５ｍｇ、１４．２ｍｍｏｌ）を含んだＴＨＦ（２ｍＬ）が入った丸底フラスコに窒素ガス下で０℃でゆっくり添加した。シリンジをＴＨＦ（２×５ｍＬ）ですすいだ。得られた混合物を一晩かけてゆっくり室温に温めた。メタノール（２ｍＬ）をゆっくり添加して反応物をクエンチさせ、続いてＮａＯＨ水（１ｍＬ）を添加した。得られた混合物を１時間撹拌し、その後、真空下で濾過した。濾液を濃縮し、精製せずに次のステップに使用した。収率２．４ｇ、１０９％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１９６．２。
ステップｃ．
Figure 2022546609000565
 先のステップからの生成物（１．０２ｇ、５．２４ｍｍｏｌ）を含んだ無水ＴＨＦ（４ｍＬ）を、ＮａＨ（純度６０％、２．０９ｇ、５２．４ｍｍｏｌ）及びＴＨＦ（５ｍＬ）が入ったフラスコに０℃で窒素ガス下でゆっくり添加した。得られた混合物を１時間撹拌し、続いて、３－（Ｂｏｃ－アミノ）プロピルブロミド（３．８ｇ、１５．７ｍｍｏｌ）を含んだＴＨＦ（２０ｍＬ）を滴加した。反応混合物をゆっくり室温に温め、３日間撹拌した。反応物を０℃に冷却し、その後、水（６ｍＬ）でクエンチさせ、１時間撹拌した。それを酢酸エチル（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を１ＮのＨＣｌ水溶液及びブラインで洗浄した。それをＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過及び濃縮した。残渣を順相クロマトグラフィー（Ｉｓｃｏ、０～５％のメタノール及びジクロロメタン）によって精製した。収率９８４ｍｇ、３７％。ＬＣＭＳでの実測イオン［Ｍ＋Ｈ］＋＝５１０．０。
ステップｄ．
Figure 2022546609000566
 水酸化パラジウム（５４３ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）を、ステップｃの生成物（９８５．３ｍｇ、１．９３ｍｍｏｌ）を含んだ無水メタノール（１９．５ｍＬ）が入ったフラスコにＨ２雰囲気下で加えた。得られた混合物を室温で１６時間撹拌した。次いでそれをセライトのパッドで濾過し、メタノールで洗浄し、濃縮した。残渣を精製せずに次のステップへ移した。収率８２８．６ｍｇ、１０２％。ＬＣＭＳでの実測イオン［Ｍ＋Ｈ］＋＝４２０．０。
ステップｅ．
Figure 2022546609000567
 ステップｄの生成物（８２９ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ）を含んだＨ２Ｏ：ＴＨＦ（１：１、１６ｍＬ）を０℃まで冷却した。この溶液にＮａ２ＣＯ３（３１４ｍｇ、２．９６ｍｍｏｌ）を添加し、続いてＦｍｏｃ Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（８２６ｍｇ、２．３７ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温に温め、ＬＣＭＳによって終了となるまで撹拌し、その後、酢酸エチルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過及び濃縮した。残渣を順相クロマトグラフィー（Ｉｓｃｏ、０～６０％の酢酸エチル及びヘキサン）によって精製した。収率７８４ｍｇ、６２％。ＬＣＭＳでの実測イオン［Ｍ＋Ｈ－Ｂｏｃ］＋＝５４２．０。
ステップｆ．
Figure 2022546609000568
 ステップｅの生成物（１．０１ｇ、１．５７ｍｍｏｌ）を室温で１時間、ＴＦＡ（５ｍＬ）及びＣＨ２Ｃｌ２（９ｍＬ）の中で撹拌し、その後、減圧下で濃縮した。残渣をＲＰＬＰ（Ｉｓｃｏ、調整剤を含んでいない５～１００％のメタノール及び水）によって精製した。収率９０３ｍｇ、８６％。ＬＣＭＳでの実測イオン［Ｍ＋Ｈ］＋＝４４２．２。
ステップｇ．
Figure 2022546609000569
 エーテルザナミビル酸（３４０ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）と、ステップｆの生成物（１１１ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ、実施例３１）と、ＨＡＴＵ（２０６ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）とを無水ＤＭＦ（３ｍＬ）中に含んだ混合物に、ＤＩＥＡ（１６２ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で１時間撹拌し、次いでそのままＲＰＬＣ（Ｉｓｃｏ、調整剤を含んでいない３０～１００％のメタノール及び水）で精製した。収率２４９ｍｇ、６１％。ＬＣＭＳでの実測イオン［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝８３３．８。
ステップｈ．
Figure 2022546609000570
 ステップｇの生成物（２４９ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（０．５ｍＬ）溶液に、ＳｉｌａＭｅｔＳチオール（１．２ｇ、１．４７ｍｍｏｌ）及び１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン（１２ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を１．５時間撹拌し、その後、濾過して直接、ＨＡＴＵ（６９ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）、プロパルギルＰＥＧ－４酸（４３ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（４３ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）が入ったバイアルで受けた。反応混合物を１時間撹拌し、次いでそのままＲＰＬＣ（Ｉｓｃｏ、調整剤を含んでいない３０～１００％のメタノール及び水）で精製した。収率２９８ｍｇ、１１８％。ＬＣＭＳでの実測イオン［（Ｍ＋２Ｈ－Ｂｏｃ）／２］＋＝８４３．９。
ステップｉ．
Figure 2022546609000571
 ステップｈの生成物（２９８ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（３ｍＬ）及びＣＨ２Ｃｌ２（３ｍＬ）に溶解させ、溶液を室温で１６時間撹拌した。次いでそれを減圧下で濃縮し、ＨＰＬＣ（ＡＣＣＱ Ｉｓｃｏ、０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した０～２５％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率１１２ｍｇ、４４％。ＬＣＭＳでの実測イオン［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝６４３．８、及び［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝４２９．６。
ステップｊ．
Figure 2022546609000572
 ステップｉの生成物（１１２ｍｇ、０．０７２ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（４ｍＬ）及び水（２ｍＬ）の中に含んだ溶液に、ＬｉＯＨ（１０．６ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を室温で１時間撹拌し、その後、ＴＦＡで酸性化し、減圧下で濃縮した。残渣をＨＰＬＣ（ＡＣＣＱ Ｉｓｃｏ、０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した０～２５％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率３７ｍｇ、３６％。ＬＣＭＳでの実測イオン［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝６０３．８、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝４０２．９。
実施例７６．複合体１８の合成
アジド官能化非グリコシル化Ｆｃ（１００ｍｇ、５．４ｍＬ、１．８７μｍｏｌ、配列番号３５）の溶液を、アルキン誘導体化低分子（１６．１ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ、Ｉｎｔ－２０）が入った１５ｍＬ容の遠心管に加えた。穏やかに振盪して固体を溶解させた後、混合物を、Ｌ－アスコルビン酸ナトリウム（１４９ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ、０．２５Ｍ）と硫酸銅（ＩＩ）（２．４ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ、０．００５Ｍ）とＢＴＴＡＡ（２５．８ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ、０．０２Ｍ）とをＰＢＳ ７．４ 緩衝液３ｍＬの中に含んだ予混合溶液に添加した。得られた溶液を穏やかに一晩振盪した。それをプロテインＡカラムで親和性クロマトグラフィーによって精製し、続いてサイズ排除クロマトグラフィー（実施例１０の一般複合体精製プロトコール参照）で精製した。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析で平均質量は５６８２６Ｄａであった（ＤＡＲ２．２）。収率３６．６４ｍｇ、３７％。
複合体１８のためのＦｃをコードする核酸構築物は、Ｃ末端リジン残基及びＮ末端ネズミＩｇＧシグナル配列を含むものである配列番号３５のアミノ酸配列をコードする核酸を含んでいた。発現時に複合体１８のＦｃのＣ末端リジン及びＮ末端ネズミＩｇＧシグナル配列はタンパク質分解的に切断され、Ｌｙｓ４４７（例えばＣ末端リジン残基）及びＮ末端ネズミＩｇＧシグナル配列を欠く配列を有するＦｃをもたらす。Ｃ末端リジンの存在または非存在は、Ｆｃまたは対応する複合体の特質を変化させない。
実施例７７．Ｉｎｔ－２１の合成
Figure 2022546609000573
ステップａ．
Figure 2022546609000574
 ２－（２－Ｂｏｃ－アミノエトキシ）エタノール（６．１５ｇ、３０ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（６０ｍｌ）溶液に、ＤＩＰＥＡ（７．８ｇ、６０ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（３６６．６ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を添加した。その後、Ｐ－トルエンスルホニルクロリド（６．８６ｇ、３６ｍｍｏｌ）を数回に分けて３０分かけて添加した。得られた混合物を３日間撹拌し、それをロータリーエバポレーションによって濃縮し、ＲＰＬＣ（調整剤を含んでいない２０％～７０％のアセトニトリル／水）によって精製した。収率３．７１ｇ、３４．４％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ－Ｂｏｃ＋Ｈ］＋＝２６０。
ステップｂ．
Figure 2022546609000575
 ステップａの生成物（２．１ｇ、５．８３ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１０ｍｌ）溶液に、炭酸ナトリウム（１．２４ｇ、１１．７ｍｍｏｌ）及びモノ－Ｎ－Ｂｏｃ－１，４－ジアミノブタン（１．３２ｇ、７ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を６０℃で１日間加熱した。その後、塩を濾別し、濾液をロータリーエバポレーションによって濾過した。残渣をＲＰＬＣ（１００ｇ、０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した５～５０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率１．９４ｇ、８８．６％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３７６．０。
ステップｃ．

Figure 2022546609000576
 ＰＥＧ－４酸プロパルギル（７８１ｍｇ、３ｍｍｏｌ）とＨＡＴＵ（１．１４ｇ、３ｍｍｏｌ）とを無水ＤＭＦ（３ｍｌ）中に含んだ溶液に、ＤＩＰＥＡ（３９０ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を添加し、続いて、ステップｂの生成物（９４０ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（３９０ｍｇ、３ｍｍｏｌ）とを無水ＤＭＦ（３ｍｌ）中に含んだ溶液を添加した。反応混合物を３０分間撹拌し、次いでそのままＲＰＬＣ（１００ｇ、０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した５～８０％のアセトニトリル及び水）で精製した。収率９６０．２ｍｇ、６５．３％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝６１８．３、［Ｍ－Ｂｏｃ＋Ｈ］＋＝５１８．３。
ステップｄ．
Figure 2022546609000577
 ステップｃの生成物（９６０．２ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（６ｍｌ）に溶解させた。４ＮのＨＣｌのジオキサン（４ｍｌ）溶液を添加し、反応混合物を一晩撹拌した。次いでそれをロータリーエバポレーションによって濃縮した。残渣を水（３ｍｌ×３）及び酢酸エチル（１０ｍｌ）で抽出した。合わせた水層を凍結乾燥させた。収率７６０ｍｇ、９５．１％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４１８．０。
ステップｅ．

Figure 2022546609000578
 エーテルザナミビル酸（３１５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）とＨＡＴＵ（１９０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）とを無水ＤＭＦ（１ｍｌ）中に含んだ混合物に、ステップｄのジアミン生成物（１４８ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（１６５ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）とを無水ＤＭＦ（１ｍｌ）中に含んだ溶液を数回に分けて２０分かけて添加した。添加後、反応物をさらに３０分間撹拌し、そのままＲＰＬＣ（５０ｇ、０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した３０～９０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率２３３ｍｇ、５６．７％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝８２１．３。
ステップｆ．
Figure 2022546609000579
 ステップｅの生成物（２３３ｍｇ、０．１４２ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（１．５ｍｌ）に溶解させ、溶液を３０℃で３０分間加熱した。次いでそれを濃縮し、そのままＲＰＬＣ（０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した０～３０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率１２０ｍｇ、５７．４％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝６２１．４、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝４１４．７。
ステップｇ．
Figure 2022546609000580
 ステップｆの生成物（１２０ｍｇ、０．０８１６ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２ｍｌ）溶液に、ＬｉＯＨ一水和物（６３ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）の水（２ｍｌ）溶液を添加した。得られた混合物を１．５時間撹拌し、その後、ロータリーエバポレーションによって濃縮した。残渣を４ＮのＨＣｌのジオキサン（０．５ｍｌ）溶液で酸性化し、ＨＰＬＣ（０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した０～１５％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率９８．２ｍｇ、８６．６％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝５８１．８、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝３８８．２。
実施例７８．複合体１９の合成
この複合体は、ＰＥＧ４－アジド－Ｆｃ（配列番号３５、実施例６１）及びＩｎｔ－２１（実施例７８）によって実施例６２（複合体１３ａ）と同様に調製された。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析で平均質量は５６，５４８．Ｄａであった（ＤＡＲ＝２．１）。収率３９．７ｍｇ、３９．７％。
実施例７９．Ｉｎｔ－２２の合成
Figure 2022546609000581
ステップａ．
Figure 2022546609000582
 エーテルザナミビル酸（１．８ｇ、２．８ｍｍｏｌ 実施例３１）とプロパルギル－ＰＥＧ４－アミン（０．８２ｇ、３．５ｍｍｏｌ。１．２当量）とをジクロロメタン（５０ｍＬ）中に含んだ混合物に、ＥＤＣ（１．０ｇ、５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．６５ｇ、５ｍｍｏｌ）、及びＤＩＥＡ（１．４ｍｌ、１０ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を室温で一晩撹拌し、濃縮し、調整剤としての０．１％のＴＦＡを含んでいない１０％～１００％のアセトニトリル及び水で溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。生成物の収率１．３５ｇ、５０．２％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ＋Ｈ＝８３０．４。
ステップｂ．
Figure 2022546609000583
 先のステップからの生成物（１．３５ｇ、１．６ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸（２０ｍＬ）で３０分間室温で処理した。得られた溶液を濃縮し、水（１０ｍＬ）及びＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解させ、その後、水酸化リチウム（１２０ｍｇ、５ｍｍｏｌ）の水（１０ｍＬ）溶液で処理した。反応溶液を１０分間撹拌し、その後、０．５ｍｌの酢酸でクエンチさせた。反応物を濃縮し、０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した０％～５０％のアセトニトリル及び水で溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。生成物の収率５１０ｍｇ、５２．８％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ＋Ｈ＝６０４．３。
実施例８０．複合体２０の合成
この複合体は、ＰＥＧ４－アジド－Ｆｃ（配列番号３５、実施例６１）及びＩｎｔ－２２（実施例７９）によって実施例６２（複合体１３ａ）と同様に調製された。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析で平均質量は５５，５０８．Ｄａであった（ＤＡＲ＝２．３）。収率３７．０ｍｇ、３７．０％。
実施例８１．Ｉｎｔ－２３の合成

Figure 2022546609000584
ステップａ．
Figure 2022546609000585
 Ｎ－Ｂｏｃ－１．４－ジアミノブタン（９４１．５ｍｇ、５ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１０ｍｌ）溶液に、炭酸ナトリウム（１．０６ｇ、１０ｍｍｏｌ）及び３－（Ｂｏｃ－アミノ）プロピルブロミド（１．４３ｇ、６ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を５０℃で１日間加熱した。その後、塩を濾過し、ロータリーエバポレーションによって濃縮した。残渣をＲＰＬＣ（１００ｇ、０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した５～５０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率１．３５ｇ、５８．８％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３４６．０。
ステップｂ．
Figure 2022546609000586
 ＰＥＧ－４酸プロパルギル（７８１ｍｇ、３ｍｍｏｌ）とＨＡＴＵ（１．１４ｇ、３ｍｍｏｌ）とを無水ＤＭＦ（３ｍｌ）中に含んだ溶液に、ＤＩＰＥＡ（３９０ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を添加し、続いて、ステップａの生成物（８６３．８ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（３９０ｍｇ、３ｍｍｏｌ）とを無水ＤＭＦ（３ｍｌ）中に含んだ溶液を添加した。反応混合物を３０分間撹拌し、次いでそのままＲＰＬＣ（１００ｇ、０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した５～８０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率１．１９ｇ、８１％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝５８８．３。
ステップｃ．
Figure 2022546609000587
 ステップｂの生成物（１．１９ｇ、２．０２ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（６ｍｌ）に溶解させた。４ＮのＨＣｌのジオキサン（４．５ｍｌ）溶液を添加し、反応混合物を１日間撹拌した。次いでそれをロータリーエバポレーションによって濃縮した。残渣を水（３ｍｌ×３）及び酢酸エチル（１５ｍｌ）で抽出した。合わせた水層を凍結乾燥させた。収量９４０ｍｇ、定量的収量。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３８８．３。
ステップｄ．
Figure 2022546609000588
 エーテルザナミビル酸（３１５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ、実施例３１）と、ＨＡＴＵ（２０９．１ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）とを無水ＤＭＦ（１ｍｌ）中に含んだ混合物に、ＤＩＰＥＡ（６５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を添加した。５分後、ステップｃの生成物（１７０ｍｇ、０．４３９ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（１３０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）とを無水ＤＭＦ（１ｍｌ）中に含んだ溶液を数回に分けて２０分かけて添加した。反応物をさらに３０分間撹拌し、次いでそのままＲＰＬＣ（５０ｇ、０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した３０～９０％のアセトニトリル及び水）で精製した。収率２０８ｍｇ、５１．６％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝８０６．７。
ステップｅ．
Figure 2022546609000589
 ステップｄの生成物（２０８ｍｇ、０．１２９ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（１．５ｍｌ）に溶解させ、溶液を３０℃で３０分間加熱した。次いでそれをそのままＲＰＬＣ（１００ｇ、０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した０～３０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率１３４ｍｇ、７２％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝６０６．８、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝４０５．０。
ステップｆ．
Figure 2022546609000590
 ステップｅの生成物（１３４ｍｇ、０．０９３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２ｍｌ）溶液に、ＬｉＯＨ一水和物（６３ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）の水（２ｍｌ）溶液を添加した。得られた混合物を１．５時間撹拌し、その後、ロータリーエバポレーションによって濃縮した。残渣を４ＮのＨＣｌのジオキサン（０．５ｍｌ）溶液によって酸性化し、ＨＰＬＣ（０．１％のＴＦＡを調整剤として使用して０～１５％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率７８．４ｍｇ、６２％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝５６６．４、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝３７８．４。
実施例８２．複合体２１の合成
この複合体は、ＰＥＧ４－アジド－Ｆｃ（配列番号３５、実施例６１）及びＩｎｔ－２３（実施例８１）によって実施例６２（複合体１３ａ）と同様に調製された。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析で平均質量は５６，５０３．Ｄａであった（ＤＡＲ＝２．２）。収率３４．４ｍｇ、３４％。
実施例８３．細胞変性効果（ＣＰＥ）アッセイにおける高病原性Ａ型インフルエンザＨ７Ｎ９及び２つのＢ型インフルエンザ単離物に対する複合体１３～２１の活性
合計９つの複合体（表３８）を、１００、１０、１及び０．１ｎＭの濃度にしてＣＰＥアッセイにおいてリバビリンと比較した。ＣＰＥアッセイは標準的な方法論に従うものであったが、手短に述べると、９６ウェルプレート内の８０～１００％コンフルエントなＭＤＣＫ細胞の単層を利用した。これに試験品を３反復で添加し、ＣＰＥ効果が目視で明らかになるまで３７℃（＋５％のＣＯ２）でインキュベートした。ＣＰＥを認めてからすぐに細胞層を０．０１１％の中性紅でおよそ２時間染色した。その後、ソレンセンのクエン酸塩緩衝液／エタノールの５０：５０混合物を添加し、３０分間インキュベートし、その後、分光光度計でＡ５４０を読み取り、ＥＣ５０／ＣＣ５０値を回帰解析によって算出した。
全ての複合体はインフルエンザＢ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６に対する顕著な活性を有し、ＥＣ５０値が３．０５～３３．５ｎｍの範囲であった（表３９）。複合体は平均してリバビリンよりも２７５倍優位な力価を示した（３，２５０ｎＭのＥＣ５０）。１００ｎＭよりも大きいＥＣ５０を有していた複合体１４は例外として、インフルエンザＢ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／６０／２００８に対する複合体の活性はＢ／Ｆｌｏｒｉｄａに対して認められるのと非常に似通っていた。
重要なことに、全ての複合体は高病原性インフルエンザＡ／Ａｎｈｕｉ／１／２０１３（Ｈ７Ｎ９）単離物に対しても非常に活性であった。この単離物に対する全ての複合体の平均ＥＣ５０は２１．２ｎＭ（１２～２８．５ｎＭの範囲）であり、これに比べてリバビリンでは１４，０００ｎＭであった。最後に、試験した濃度においてＭＤＣＫ単層に対する複合体の直接的な細胞毒性影響は何ら検出されなかった。

Figure 2022546609000591
Figure 2022546609000592
実施例８４．複合体２２の合成
ステップａ．ＰＥＧ４－アジドＩＶＩＧの合成
０．０５ＭのＰＥＧ４－アジドＮＨＳエステルのＤＭＦ／ＰＢＳ溶液の調製：６．０５ｍｇのＰＥＧ４－アジドＮＨＳエステルを０．０５０ｍＬのＤＭＦに０℃で溶解させ、０．２５０ｍＬのＰＢＳ １×緩衝液を０℃で添加することによって０．３０５ｍＬに希釈した。この溶液を、このＰＥＧ４－アジドＮＨＳエステルのＰＢＳ溶液の当量の調節によって様々なＤＡＲ値を有する他のＰＥＧ４－アジドＩＶＩＧを調製するために使用した。
ＰＥＧ４－アジドＩＶＩＧの調製：０．０５ＭのＰＥＧ４－アジドＮＨＳエステルのＰＢＳ緩衝液溶液（０．３０１ｍＬ、１５．０μｍｏｌ、５．５当量）をＩＶＩＧ（静脈注射用免疫グロブリン、Ｂａｘｔｅｒ））の溶液（４０７ｍｇを９．２５ｍＬのｐＨ７．４のＰＢＳの中に含んだもの、ＭＷ約１４８８６３Ｄａ、１．９６８μｍｏｌ）に添加し、混合物を周囲温度で穏やかに１２時間振盪した。遠心濃縮器（１００，０００ＭＷＣＯ）を使用して溶液を約１．５ｍＬの体積に濃縮した。粗混合物をＰＢＳ ｐＨ７．４で１：１０に希釈し、再び濃縮した。この洗浄手順を合計３回繰り返した。この洗浄手順によって低分子試薬が除去された。濃縮されたＩＶＩＧ－ＰＥＧ４－アジドをｐＨ７．４のＰＢＳ １×緩衝液で９．２５ｍＬに希釈してクリック複合体形成に備えた。精製された材料を、ＮＡＮＯＤＲＯＰ（商標）ＵＶ可視分光光度計を使用して（ＩＶＩＧのアミノ酸配列に基づいて算出された消衰係数を用いて）定量した。精製後の収量は定量的である。
ステップｂ．複合体の合成
クリック試薬溶液を調製した：０．００５０ＭのＣｕＳＯ４を含んだＰＢＳ緩衝液溶液：１０．０ｍｇのＣｕＳＯ４を１２．５３ｍＬのＰＢＳ ×１に溶解させ、その後、０．００５０ＭのＣｕＳＯ４溶液を６．００ｍＬ取り、５７．７ｍｇのＢＴＴＡＡ（ＣＡＳ番号１３３４１７９－８５－９）及び２９７．６ｍｇのアスコルビン酸ナトリウムを添加してクリック試薬溶液（０．００５０ＭのＣｕＳＯ４、０．０２０ＭのＢＴＴＡＡ、及び０．２５Ｍのアスコルビン酸ナトリウム）を得た。
アジド官能化ＩＶＩＧ（１４０ｍｇ、３．１７ｍＬ、０．９３６μｍｏｌ、ＩＶＩＧ－リンカー１－アジド）の溶液を、アルキン誘導体化低分子（８．４ｍｇ、０．００６１８ｍｍｏｌ、６．６当量、実施例６０に記載のもの）が入った１５ｍＬ容の遠心管に加えた。穏やかに振盪して全ての固体を溶解させた後、１．５０ｍＬの上記クリック試薬溶液（Ｌ－アスコルビン酸ナトリウム、０．２５Ｍ、７４．２ｍｇ、０．３７４ｍｍｏｌ、硫酸銅（ＩＩ）０．００５０Ｍ、１．２ｍｇ、０．００７５ｍｍｏｌ、及びＢＴＴＡＡ ０．０２０Ｍ、１２．９ｍｇ、０．０３００ｍｍｏｌ）。得られた混合物を穏やかに一晩振盪した。それをプロテインＡカラムで親和性クロマトグラフィーによって精製し、続いてサイズ排除クロマトグラフィーで精製した（実施例１０の複合体精製プロトコール参照）。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析で平均質量は１５１８７３Ｄａであった（ＤＡＲ＝２．７）。収量５１．０ｍｇ、収率３６％。
実施例８５．複合体２３の合成
複合体２３は、クリック複合体形成ステップにおいて適切なアルキン官能化低分子（実施例８１に記載のＩｎｔ－２３）を代わりに使用して複合体２２と同様に調製された。
実施例８６．複合体２４の合成
複合体２４は、クリック複合体形成ステップにおいて適切なアルキン官能化低分子（実施例１９に記載のもの）を代わりに使用して複合体２２と同様に調製された。
実施例８７．致死性マウスモデルにおけるＢ型インフルエンザに対する複合体１３、１４及び２１の有効性
複合体を雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）における致死性Ｂ型インフルエンザのインフルエンザ感染症に対して評価した。攻撃ウイルス（Ｂ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／０４）は、マウスに致死性感染症を引き起こすことができるマウス適合型単離物である。実験はマウス５匹の群を１１個含んでいた。０日目に全てのマウスを、ケタミン／キシラジン（それぞれ１５０及び１０ｍｇ／ｋｇ）の混合物で麻酔した後にＬＤ９５の３倍のウイルスで３０μｌの体積の鼻腔内接種によって攻撃した（マウス１匹あたりおよそ１Ｅ４個）。
ウイルス攻撃の２時間後に、試験品、ビヒクル（ＰＢＳ）またはＦｃのみの対照（ｈＩｇＧ１ Ｆｃ）の単回静脈注射処置を全ての群に施した。試験では、同一のＦｃ単量体に複合したＩｎｔ－１８、Ｉｎｔ－７及びＩｎｔ－２３（それぞれ複合体１３、１４及び２１）を３．０、１．０及び０．３ｍｇ／ｋｇで評価した。マウスを２週間追跡評価し、体重減少が２０％を超えるかまたは瀕死状態にあると認められる動物を死亡と記録した。
ビヒクルまたはＦｃのみの対照で処置した全てのマウスは７日目までに死に至った。対照的に、複合体１３、１４及び２１を施したマウスは、０．３ｍｇ／ｋｇの単回静脈注射用量を受けた後に完全に保護された（表４０）。予想通り、１．０または３．０ｍｇ／ｋｇの複合体を受けている群は同様に完全に保護された。Ｂ型インフルエンザに対する全ての複合体の力価は、試験全体を通してどの複合体処置群でも５％未満の一時的体重減少を示している毎日の体重測定（表４１）によってさらに支持された。Ａ型インフルエンザＨ１Ｎ１及びＨ３Ｎ２亜型に対して、用量による複合体１３、１４及び２１の活性は複合体６の活性と同程度である。複合体６及び１４は同一の（Ｉｎｔ－７に対応する）標的指向性部分を有するので、単一の複合体が、優勢な季節性インフルエンザ型（Ａ型インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）、Ａ型インフルエンザ（Ｈ３Ｎ２）及びＢ型インフルエンザ）に対して活性であり得る。
Figure 2022546609000593

Figure 2022546609000594
実施例８８．複合体２５、複合体２６、複合体２７及び複合体２８のためのＰＥＧ４－アジドＦｃの合成
０．０５ＭのＰＥＧ４－アジドＮＨＳエステルのＤＭＦ／ＰＢＳ ×１溶液の調製：２７．４０ｍｇのＰＥＧ４－アジドＮＨＳエステルを０．１５５ｍＬのＤＭＦに０℃で溶解させ、１．２００ｍＬのＰＢＳ １×緩衝液を０℃で添加することによって希釈した。この溶液を、このＰＥＧ４－アジドＮＨＳエステル ＰＢＳ ×１溶液の当量の調節によって様々なＤＡＲ値を有する他のＰＥＧ４－アジドＦｃを調製するために使用した。
ＰＥＧ４－アジドＦｃ（配列番号４８）の調製：０．０５ＭのＰＥＧ４－アジドＮＨＳエステル ＰＢＳ ×１緩衝液溶液（０．０９８４ｍＬ、４．９２μｍｏｌ、２．５当量）を、ｈ－ＩｇＧ１ Ｆｃ（配列番号４８）の溶液（２３４ｍｇを１３．６０５ｍＬのｐＨ７．４のＰＢＳの中に含んだもの、ＭＷ約５７，９７６Ｄａ、４．０３６μｍｏｌ）に添加し、混合物を周囲温度で２時間、穏やかに振盪した。遠心濃縮機（３０，０００ＭＷＣＯ）を使用して溶液を約２ｍＬの体積に濃縮した。粗混合物をＰＢＳ ｐＨ７．４で１：７に希釈し、再び濃縮した。この洗浄手順を合計３回繰り返した。この洗浄手順によって低分子試薬が除去された。濃縮されたＦｃ（配列番号４８）－ＰＥＧ４－アジドをｐＨ７．４のＰＢＳ １×緩衝液で１３．６０ｍＬに希釈してクリック複合体形成に備えた。精製された材料を、ＮＡＮＯＤＲＯＰ（商標）ＵＶ可視分光光度計を使用して（ｈ－ＩｇＧ１のアミノ酸配列に基づいて算出された消衰係数を用いて）定量した。
ＰＥＧ４－アジドＦｃ（配列番号５０）の調製は、上記ＰＥＧ４－アジドＦｃ（配列番号４８）と同様であった。
実施例８９．複合体２５の合成
クリック試薬溶液の調製：０．００５０ＭのＣｕＳＯ４をＰＢＳ ×１緩衝液中に含んだ溶液：１０．０ｍｇのＣｕＳＯ４を１２．５３ｍＬのＰＢＳ ×１に溶解させ、その後、このＣｕＳＯ４溶液を１０．００ｍＬ取り、８６．１ｍｇのＢＴＴＡＡ及び４９５．３ｍｇのアスコルビン酸Ｎａを添加してクリック試薬溶液（０．００５０ＭのＣｕＳＯ４、０．０２０ＭのＢＴＴＡＡ、及び０．２５Ｍのアスコルビン酸ナトリウム）を得た。このクリック試薬溶液は複合体２５及び複合体２６のために使用されることになる。
アジド官能化Ｆｃの溶液（７８．０ｍｇ、４．５３５ｍＬ、１．３５μｍｏｌ、配列番号４８－ＰＥＧ４－アジド）を、アルキン誘導体化低分子（１３．２ｍｇ、８．８８μｍｏｌ、Ｉｎｔ－２３）が入った１５ｍＬ容の遠心管に加えた。穏やかに振盪して全ての固体を溶解させた後、混合物に、（Ｌ－アスコルビン酸ナトリウム、０．２５Ｍ、１０６．６ｍｇ、０．５３８ｍｍｏｌ、硫酸銅（ＩＩ）０．００５０Ｍ、１．７２ｍｇ、０．０１０７ｍｍｏｌ、及びＢＴＴＡＡ ０．０２０Ｍ、１８．５ｍｇ、０．０４３１ｍｍｏｌ）の上記クリック試薬溶液２．１５３ｍＬを添加した。得られた混合物を周囲温度で穏やかに６時間振盪した。それをプロテインＡカラムで親和性クロマトグラフィーによって精製し、続いてサイズ排除クロマトグラフィーで精製した（実施例１０の複合体精製プロトコール参照）。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析で平均質量は６０９７３Ｄａであった（ＤＡＲ＝２．１）。収量５０．３ｍｇ、収率６４％。
複合体２５のためのＦｃをコードする核酸構築物は、Ｃ末端リジン残基及びＮ末端ネズミＩｇＧシグナル配列を含むものである配列番号４８のアミノ酸配列をコードする核酸を含んでいた。発現時に複合体２５のＦｃのＣ末端リジン及びＮ末端ネズミＩｇＧシグナル配列はタンパク質分解的に切断され、Ｌｙｓ４４７（例えばＣ末端リジン残基）及びＮ末端ネズミＩｇＧシグナル配列を欠く配列を有するＦｃをもたらす。Ｃ末端リジンの存在または非存在は、Ｆｃまたは対応する複合体の特質を変化させない。
実施例９０．複合体２６の合成
複合体２６は、同じバッチのＰＥＧ４－アジドＦｃ（配列番号４８）及びアルキン誘導体化低分子（Ｉｎｔ－７）を使用することによって複合体２５と同様に調製された。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析で平均質量は６１０６８Ｄａであった（ＤＡＲ＝２．２）。収量４９．５ｍｇ、収率６３％。
実施例９１．複合体２７の合成
クリック試薬溶液の調製：０．００５０ＭのＣｕＳＯ４をＰＢＳ ×１緩衝液中に含んだ溶液：１０．０ｍｇのＣｕＳＯ４を１２．５３ｍＬのＰＢＳ ×１に溶解させ、その後、このＣｕＳＯ４溶液を１２．００ｍＬ取り、１０３．３ｍｇのＢＴＴＡＡ及び５９４．３ｍｇのアスコルビン酸Ｎａを添加してクリック試薬溶液（０．００５０ＭのＣｕＳＯ４、０．０２０ＭのＢＴＴＡＡ、及び０．２５Ｍのアスコルビン酸ナトリウム）を得た。このクリック試薬溶液は複合体２８のために使用されることになる。
アジド官能化Ｆｃ（８０．０ｍｇ、４．５３５ｍＬ、１．３８μｍｏｌ、配列番号５０－ＰＥＧ４－アジド）を、アルキン誘導体化低分子（１３．５ｍｇ、９．１０μｍｏｌ、Ｉｎｔ－２３）が入った１５ｍＬ容の遠心管に加えた。穏やかに振盪して全ての固体を溶解させた後、混合物に２．２１ｍＬの上記クリック試薬溶液（Ｌ－アスコルビン酸ナトリウム、０．２５Ｍ、１０９．３ｍｇ、０．５５２ｍｍｏｌ、硫酸銅（ＩＩ）０．００５０Ｍ、１．７６ｍｇ、０．０１１０ｍｍｏｌ、及びＢＴＴＡＡ ０．０２０Ｍ、１９．０ｍｇ、０．０４４１ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を周囲温度で穏やかに６時間振盪した。それをプロテインＡカラムで親和性クロマトグラフィーによって精製し、続いてサイズ排除クロマトグラフィーで精製した（実施例１０の複合体精製プロトコール参照）。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析で平均質量は６１４４７Ｄａであった（ＤＡＲ＝２．５）。収量３７．１ｍｇ、収率４６％。
複合体２７のためのＦｃをコードする核酸構築物は、Ｃ末端リジン残基及びＮ末端ネズミＩｇＧシグナル配列を含むものである配列番号５０のアミノ酸配列をコードする核酸を含んでいた。発現時に複合体２７のＦｃのＣ末端リジン及びＮ末端ネズミＩｇＧシグナル配列はタンパク質分解的に切断され、Ｌｙｓ４４７（例えばＣ末端リジン残基）及びＮ末端ネズミＩｇＧシグナル配列を欠く配列を有するＦｃをもたらす。Ｃ末端リジンの存在または非存在は、Ｆｃまたは対応する複合体の特質を変化させない。
実施例９２．複合体２８の合成
複合体２８は、同じバッチのＰＥＧ４－アジドＦｃ（配列番号５０）及びアルキン誘導体化低分子（Ｉｎｔ－７）を使用することによって複合体２７と同様に調製された。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析で平均質量は６１３８８Ｄａであった（ＤＡＲ＝２．４）。収量４４．６ｍｇ、収率５６％。
実施例９３．細胞変性効果（ＣＰＥ）アッセイにおける高病原性Ａ型インフルエンザ（Ｈ５Ｎ１、Ｈ７Ｎ９）に対する複合体６及び複合体２１の活性
本発明の複合体の力価を決定する試験管内アッセイを、概して標準的手順に従ってＢＳＬ－３（高病原性）Ａ型インフルエンザに対して行った。手短に述べると、異なる濃度の複合体をウイルス（およそ２５０ＴＣＩＤ５０）と混合し、３５℃で１時間インキュベートした。インキュベーション後、混合物を８０～９０％コンフルエントなＭＤＣＫ細胞の単層に添加した。９０分のインキュベーションの後、細胞を洗浄し、複合体を再塗布した。その後、ウイルス拡散を最小限に抑えるために単層にカルボキシメチルセルロースを重ね、２日間インキュベートした。２日間の培養の後、細胞をＰＢＳで洗浄し、１０％のホルマリンで固定した。固定後、ＭＤＣＫ単層をＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００で透過処理し、インフルエンザ核タンパク質に対するマウスｍＡｂで免疫染色した。単層を読み取り、ウェル１つあたりの染色された面積を算出してＥＣ５０／１００値を決定した。
試験の結果を表４２にまとめるが、これは、汎流行の可能性を有する高病原性株に対する複合体６及び複合体２１の力価を実証している。重要なことに、どちらの複合体も４つのＨ５Ｎ１単離物及び１つのＨ７Ｎ９単離物に対して１５ｎＭ以下のＥＣ１００値を呈した。対照的に、オセルタミビルはたった１つの単離物（Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１１９４／２００４）に対しておよそ１５ｎＭのＥＣ１００を有し、他の高病原性株に対しては１２５ｎＭから１０００ｎＭ超までに及ぶ値を有していた。これらの結果は、強毒性インフルエンザを原因とする汎流行に対処する複合体６及び複合体２１の可能性がオセルタミビルのそれよりも高いことを示唆している。
Figure 2022546609000595
実施例９４．細胞変性効果（ＣＰＥ）アッセイにおける異なる感染多重度（ＭＯＩ）でのＡ型インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）に対する複合体６及び複合体２１の活性
ＭＤＣＫ細胞を、（ＴＣ処理した）９６ウェルプレート内のＭＥＭ培地に４×１０４細胞／ウェルで播種し、３７℃、５％ＣＯ２で１８～２４時間インキュベートした。用量範囲１．９３～１００００ｎＭの試験品（ザナミビル、オセルタミビル、バロキサビル、複合体６及び複合体２１）をインフルエンザＡ／ＷＳＮ／１９３３と共に、ウイルス：細胞の感染多重度（ＭＯＩ）を０．００１～１として室温（ＲＴ）で１時間インキュベートした。１時間後、予備インキュベートされたウイルス及び試験品を、９０～１００％コンフルエントなＭＤＣＫ細胞の単層に添加し、室温で１時間インキュベートした。
１時間後、Ｌ－グルタミン及びペニシリン／ストレプトマイシンが補充されたＭＥＭ培地をウェルに加えた。感染細胞を３７℃、５％ＣＯ２で７２時間インキュベートした。細胞をクリスタルバイオレットで固定及び染色した後にＣＰＥを決定した。ＥＣ５０を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６ソフトウェアを使用して非線形回帰解析によって算出した。表４３に示すＣＰＥアッセイの結果は、試験管内で、特に高ＭＯＩにおいて複合体６及び複合体２１が標準治療剤よりも優れていることを示している。
Figure 2022546609000596
実施例９５．致死性重症複合免疫不全症マウスモデルにおけるＡ型インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）に対する複合体６の有効性
複合体を雄のＢＡＬＢ／ｃ重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）マウス（株＃００１８０３；Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）における致死性Ａ型インフルエンザ感染症に対して評価した。攻撃ウイルス（Ａ／Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／０８／１９３４）は、マウスにおける致死性感染症を引き起こすことができるマウス適合型単離物である。実験は、各々マウス５匹の群を５つ含んでいた。０日目に全てのマウスを、ケタミンとキシラジンとの混合物（それぞれ１５０及び１０ｍｇ／ｋｇ）で麻酔した後にＬＤ９５の３倍のウイルスで３０μｌの体積の鼻腔内接種によって攻撃した（マウス１匹あたりおよそ１Ｅ３個）。
ウイルス攻撃の２時間後に試験品の複合体６、ビヒクル（ＰＢＳ）またはＦｃのみの対照（ｈＩｇＧ１ Ｆｃ）の単回静脈注射処置を全ての群に施した。試験では、複合体６の３つの異なる用量濃度（０．３、１．０または３．０ｍｇ／ｋｇ）を評価した。マウスを５週間追跡評価し、体重減少が２０％を超えるかまたは瀕死状態にあると認められる動物を死亡と記録した。動物の全身の健康を追跡評価するために体重も記録した。
ビヒクルまたはＦｃのみの対照で処置した全てのマウスは２週目までに死に至った。対照的に、複合体６を施したマウスは、１または３ｍｇ／ｋｇの単回静脈注射用量を受けた後に試験の継続期間にわたって完全に保護された（図５６、表４４）。複合体６の用量を０．３ｍｇ／ｋｇに下げると生存率は試験の最後までに２０％に落ち込んだ。０．３ｍｇ／ｋｇ用量では３週間にわたって完全に保護された。この重症免疫不全症モデルにおける複合体６の力価は体重データによってさらに支持された（図５７、表４５）。１または３ｍｇ／ｋｇ用量濃度の複合体６を施した群は、試験全体を通して３％未満の一時的体重減少を呈したにすぎなかった。しかも、試験の最後にはどちらの用量群も正味の体重増加を示した（それぞれ７．５及び２．２％）。最低濃度の複合体６（０．３ｍｇ／ｋｇ）を投薬した群は、試験の最初の３週間を通して一時的体重減少が４％未満であり、その後、４週目に感染の兆候を示し、最終的に５匹中４匹の動物が死亡に至った。
まとめると、これらのデータは、致死的攻撃をしたマウスをたった１ｍｇ／ｋｇの単回静脈注射用量の複合体で保護することによって複合体６の力価を実証している。加えて、この保護は５週間の試験継続期間を通して長続きするものであった。これは、インフルエンザ感染症を排除するのに必須となるＴ及びＢ免疫細胞が完全に欠損したマウスで極端な免疫不全モデルにおいて成し遂げられた。このデータは、免疫正常患者及び免疫不全患者の両方の集団を治療するための複合体６の使用を支持している。
Figure 2022546609000597
Figure 2022546609000598
実施例９６．肺における複合体６用量依存的ウイルスクリアランス
３×１０２ＰＦＵ／マウス（ＬＤ９５の３倍）のマウス適合型インフルエンザＡ／Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）で鼻腔内に攻撃した６～８週齢の雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）において有効性試験を行った。複合体６またはヒトＩｇＧ１ Ｆｃ対照を、攻撃の２時間後に０．１～３ｍｇ／ｋｇの単回静脈内（ＩＶ）用量として投与した。オセルタミビルは感染の２時間後から始めて４日間にわたって１日２回、５または１５ｍｇ／ｋｇで経口的に投薬された。体重（ＢＷ）を４日間記録した。感染の４日後にマウスをＣＯ２によって殺し、両方の肺葉を採取した。ＭａｇＮＡ Ｌｙｓｅｒ（Ｒｏｃｈｅ）を使用して肺を１ｍＬのＰＢＳの中で１ｍｍのシリカビーズによってホモジナイズした。ホモジナイゼーションは６，０００ｒｐｍで６０秒間行い、実施の合間は氷上で５分間冷却した。肺ホモジナイゼーションの後、管を１０分間、６００ｘｇで遠心分離にかけ、上清を新しい管に移した。
肺の（プラーク形成単位（ＰＦＵ）として測定される）ウイルス負担量を決定するために、肺ホモジネートの上清を感染用緩衝液で１０－１から１０－６までの範囲で希釈した。１００μＬのウイルス希釈液を２４ウェルプレート内のコンフルエントなＭＤＣＫ細胞の単層に添加し、１５分ごとに振盪しながら室温で１時間インキュベートした。ウイルスを除去した後、Ａｖｉｃｅｌを含有する液体上かけ培地をＭＤＣＫ細胞に添加した。細胞を３７℃、５％ＣＯ２で４０時間インキュベートした。インキュベーション後、培地を除去し、細胞をクリスタルバイオレットで染色してプラークの数を数えた。肺の重量に対してＰＦＵを算出した（ＰＦＵ／ｇ肺）。
この試験の結果は、低用量の複合体６がオセルタミビル（ＴＡＭＩＦＬＵ（登録商標））よりも良好にウイルス負担量の桁を速やかに低下させることを実証している（図５８、表４６）。この観察結果は臨床的重要性を有する、というのも、重度のインフルエンザ感染症は上気道感染から肺へのウイルスの移動によって引き起こされるからである。
Figure 2022546609000599
実施例９７．肺内の炎症サイトカインの複合体６用量依存的減少
３×１０２ＰＦＵ／マウス（ＬＤ９５の３倍）のマウス適合型インフルエンザＡ／Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）で鼻腔内に攻撃した６～８週齢の雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）において有効性試験を行った。複合体６またはヒトＩｇＧ１ Ｆｃ対照を、攻撃の２時間後に０．１～３ｍｇ／ｋｇの単回静脈内（ＩＶ）用量として投与した。オセルタミビルは感染の２時間後から始めて４日間にわたって１日２回、５または１５ｍｇ／ｋｇで経口的に投薬された。体重（ＢＷ）を４日間記録した。感染の４日後にマウスをＣＯ２によって殺し、両方の肺葉を採取した。ＭａｇＮＡ Ｌｙｓｅｒ（Ｒｏｃｈｅ）を使用して肺を１ｍＬのＰＢＳの中で１ｍｍのシリカビーズによってホモジナイズした。ホモジナイゼーションは６，０００ｒｐｍで６０秒間行い、実施の合間は氷上で５分間冷却した。肺ホモジナイゼーションの後、管を１０分間、６００ｘｇで遠心分離にかけ、上清を新しい管に移した。
サイトカイン分析のために、肺ホモジネートの上清を９６ウェルプレート内で２倍に段階希釈した。ＩＮＦ－γ、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６、ＭＩＰ－１α及びＭＣＰ－１のサイトカインレベルを、ＥＬＩＳＡによって製造者の指示（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）に従って決定した。
重度のインフルエンザによる瀕死状態及び死亡は、突き詰めていくと、ウイルスによって誘発される肺内への炎症促進性サイトカイン流入が原因である。Ｆｃ－複合体を使用してインフルエンザを治療することの１つのあり得る懸念事項は、Ｆｃ断片がサイトカイン誘発性炎症を増悪させることになるのかという点である。Ｈ１Ｎ１致死性感染症モデルの結果は、正反対のこと：感染肺組織における炎症促進性サイトカイン（例えばＴＮＦα及びＩＬ－６）の複合体６用量依存的減少を示している（図５９、表４７）。
Figure 2022546609000600
実施例９８．生体内複合体６血漿試料分析。ＣＤ－１及びＢＡＬＢ／ｃ重症複合免疫不全症マウスにおけるＰＫの比較。
血漿試料中の複合体６をノイラミニダーゼ捕捉検出ＥＬＩＳＡによって定量した。手短に述べると、分子をノイラミニダーゼ被覆プレート上に捕捉し、その後、ＨＲＰ複合抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃ抗体を使用して検出した。複合体６標準曲線の４ＰＬ非線形回帰を用いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍでタンパク質濃度を算出した。方法についてのより詳細な説明を以下に示す。
Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ ９６ウェルプレート（カタログ番号１２－５６５－１３６、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を、Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０４／２００９（Ｈ１Ｎ１）からの０．１Ｕ／ウェルのノイラミニダーゼ（１１０５８－ＶＮＡＨＣ、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）を含んだ１×ＫＰＬ被覆用緩衝液（５１５０－００４１、ＳｅｒａＣａｒｅ）で被覆した。プレートを旋回プレート振盪器（５００ｒｐｍ）上で１時間、室温でインキュベートした。血漿試料の段階希釈液を播種し、室温で２時間インキュベートした（試料希釈剤：Ｔｗｅｅｎ２０を０．０２５％としたＰＢＳの中に０．５％のＢＳＡを含んだもの＋１：２，５００のナイーブマウス血漿終濃度）。０．２３０～５００ｎｇ／ｍＬの範囲の複合体６標準曲線を各プレートで反復して作成した。２時間のインキュベーションの後、Ｔｗｅｅｎ２０を０．０５％含んだ３００μＬのＰＢＳでプレートを５回洗浄した。その後、試料希釈剤で１：１，０００に希釈したＨＲＰ複合抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ Ｆ（ａｂ’）２（７０９－０３６－０９８、Ｊａｃｋｓｏｎ）によって室温で１時間、プレート上のノイラミニダーゼに結合した複合体を探った。その後、Ｔｗｅｅｎ２０を０．０５％含んだ３００μＬのＰＢＳでプレートを８回洗浄し、ＴＭＢ基質で７～８分間発色させた。１ＮのＨ２ＳＯ４で反応を停止させた。４５０ｎｍで吸光度を読み取った。血漿試料中の複合体６を、標準曲線の非線形回帰解析（シグモイド、４ＰＬ解析）に続いてＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６を用いて内挿した。
ＰＫプロファイル、ＣＤ－１対ＢＡＬＢ／ｃ ＳＣＩＤマウス
ＳＣＩＤ及びＣＤ－１（免疫正常）マウスに静脈内投与された５ｍｇ／ｋｇの複合体６は、似通ったＰＫプロファイルを示した（図６０）。試料採取した時間点において濃度は同程度であった。２段階ＰＫプロファイルは２４時間の分配段階とそれに続く緩やかな排除段階とを含む。複合体６の血漿中レベルは、１週間の試験を通してＣｍａｘレベルに比べて高いままであった（約１０μｇ／ｍｌ）。
実施例９９．プロパルギルジアミン中央リンカーの合成
Figure 2022546609000601
ステップａ．

Figure 2022546609000602
 ２－（２－Ｂｏｃ－アミノエトキシ）エタノール（１６．０ｇ、７８．０ｍｍｏｌ）とＣＢｒ４（３１．０ｇ、９３．５ｍｍｏｌ）とをＤＣＭ（１００ｍＬ）中に含んだ０℃の溶液をＰＰｈ３（２４．５ｇ、９３．５ｍｍｏｌ）でゆっくり１５分かけて処理した（発熱あり）。添加している間、内部温度を３０℃未満に保った。ＰＰｈ３の添加の後、反応物を一晩室温で撹拌した。粗反応物を油になるまで濃縮し、その後、１０％酢酸エチル／ヘキサンで８０％酢酸エチル／ヘキサンまで溶離させる順相クロマトグラフィーによって精製した。採取管の内部に油滴を含有する画分を合わせ、無色の油になるまで濃縮した。収率１８．１ｇ、８６％。
ステップｂ．
Figure 2022546609000603
 ステップａの生成物の溶液（１０ｇ、３７．３ｍｍｏｌ）と、ベンジルアミン（１．６０ｇ、１４．９ｍｍｏｌ）と、Ｋ２ＣＯ３（６．１９ｇ、４４．８ｍｍｏｌ）とをＤＭＦ（２０ｍＬ）の中に含んだ溶液を油浴中で７５℃で８時間加熱した。混合物を濾過し、濃縮し、ＲＰＬＣ（５％のＡＣＮ／水から１００％のＡＣＮまで）によって精製した。収率６．８ｇ、９５％。
ステップｃ．
Figure 2022546609000604
 ステップｂの生成物（５．３５ｇ、８．９８ｍｍｏｌ）のＣＨＣｌ３／ＥｔＯＨ（１：２０、１００ｍＬ）溶液に、２０％のＰｄ（ＯＨ）２／Ｃ（１．２６ｇ、１／８０ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を周囲温度で水素バルーン下で一晩撹拌した。反応混合物をセライトパッドで濾過した。溶媒を除去し、精製せずに次のステップに移した。
ステップｄ．
Figure 2022546609000605
 ステップｃの生成物を２０ｍＬのＤＭＦ／ジクロロメタン（１：５）に再溶解させた。この遊離アミン溶液に、プロパルギルＰＥＧ４酸（２．３６ｇ、８．９８ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（２．５７ｇ、１３．５ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｔ（１．８３ｇ、１３．５ｍｍｏｌ）及びヒューニッヒ塩基（３．１３ｍＬ、１８．０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４時間撹拌し、次いで濃縮し、ＲＰＬＣ（１０％ＡＣＮ／水から６０％ＡＣＮ／水まで）によって精製した。収率４．００ｇ、２ステップを通して７０％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ－Ｂｏｃ＋Ｈ］＋＝５３４．２、［Ｍ＋Ｈ］＋＝６３４．２。
ステップｅ．
Figure 2022546609000606
 ステップｄの生成物（４．００ｇ、６．３１ｍｍｏｌ）を、４ＮのＨＣｌを含んだジオキサン（３０ｍＬ）で２時間処理した。余分なＨＣｌ及びジオキサンをロータリーエバポレーションによって除去し、残存物を高真空下でさらに乾燥させてＩｎｔ－１０を２ＨＣｌ塩として得た。収率３．１５ｇ、９９％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４３４．２。
実施例１００．Ｉｎｔ－７ａ（Ｃ７－Ｃ７異性体）の合成
Figure 2022546609000607
ステップａ．
Figure 2022546609000608
５－アセトアミド－７，８，９－Ｏ－トリアセチル－２，６－無水－４－アジド－３，４，５－トリデオキシ－Ｄ－グリセロ－Ｄ－ガラクト－ノナ－２－エン酸メチル（３０ｇ、６５．７ｍｍｏｌ）をメタノール（１００ｍＬ）に溶解させ、リンドラー触媒（１５ｇ）と合わせ、得られた混合物に水素を流し、水素を３０分ごとに上部空間に流しながら５時間にわたって撹拌した。ＨＰＬＣによって反応終了と判定された後、セライトで触媒を濾別した。濾液を次のステップに使用した。
先のステップからの粗製アミン（１８．９ｇ、４３．８ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ’－ビス－ｂｏｃ－１－グアニルピラゾール（１４．３ｇ、４６．０ｍｍｏｌ）、及びＤＩＥＡ（９．９ｍｌ、５７．０ｍｍｏｌ）を含んだメタノール（１００ｍＬ）で処理した。得られた溶液を、ＬＣＭＳによって全ての出発物質が消費されたと判定されるまで室温で撹拌した（約３０分）。溶液を泡状物になるまで濃縮し、高真空下で一晩保存し、その後、さらに精製せずに次のステップに使用した。
先のステップからの粗製トリアセテート（４３．８ｍｍｏｌ）を１００ｍＬの無水メタノールに溶解させ、その後、ナトリウムメトキシドを含んだメタノール（１．９ｍＬ、２５％のメタノール溶液、８．７６ｍｍｏｌ）で室温で処理した。反応の進行をＬＣＭＳによって追跡したが、これは１０分後に終了した。反応物を１ＮのＨＣｌでｐＨ約７にクエンチさせた。得られた溶液を濃縮し、１０％～１００％のアセトニトリル及び水で溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。この精製にＴＦＡ調整剤は使用しなかった。生成物の収率１５．６ｇ、６５％。
ステップｂ．

Figure 2022546609000609
 ステップａの生成物（５．４７ｇ、１０ｍｍｏｌ）とＤＭＡＰ（１．２２２ｇ、１０ｍｍｏｌ）との混合物を無水ＴＨＦ（３０ｍｌ）に溶解させた。氷水浴中で冷却した後、溶液を１，１’－カルボニルジイミダゾール（２．６ｇ、１６ｍｍｏｌ）でゆっくり処理し、その後、０℃で３０分間撹拌し、続いて６０℃で２時間加熱した。次いでそれを室温に冷却し、水（５０ｍｌ）及びＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：１、１００ｍｌ）で抽出した。有機層を水（５０ｍｌ×３）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ロータリーエバポレーションによって濃縮した。白色の泡状生成物を高真空下でさらに乾燥させ、さらに精製せずに次のステップに使用した。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝５７３．２。
ステップｃ．

Figure 2022546609000610
 ステップｂの生成物が入った反応フラスコを窒素で脱気洗浄し、無水ＤＣＭ（５０ｍｌ）に溶解させ、次いで氷水浴中で冷却した。冷却された溶液にＤＭＡＰ（４．８９ｇ、４０ｍｍｏｌ）を添加し、続いて４－ニトロフェニルクロロホルメート（６．０５ｇ、３０ｍｍｏｌ）を数回に分けて２０分かけて添加した。溶液を０℃で撹拌し、その後、室温に１時間温めた。１時間ではＬＣＭＳが出発物質を示すので、追加のＤＭＡＰ（１．２２ｇ、１０ｍｍｏｌ）及び４－ニトロフェニルクロロホルメート（１ｇ、５ｍｍｏｌ）を添加した。反応を４時間継続し、その後、２つのシリカゲルカラム（２２０ｇ、２０％のＥｔＯＡｃ及びヘキサンで予湿したもの）で精製し、２０％～８０％のＥｔＯＡｃ及びヘキサンで溶離させた。収率４．４２ｇ、２ステップで５９．９％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝７３８．２。
ステップｄ．
Figure 2022546609000611
 ステップｃの生成物（３．２ｇ。４．３４ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（３ｍｌ）溶液に、プロパルギルジアミン中央リンカー（１．２６ｇ、２．５ｍｍｏｌ、実施例９９に記載のもの）とＤＩＰＥＡ（１．６８ｇ、１３ｍｍｏｌ）とを無水ＤＭＦ（５ｍｌ）中に含んだ混合物を数回に分けて３０分かけて添加した。反応物を室温で２時間撹拌した。次いでそれを濃縮し、ＲＰＬＣ（ＴＦＡ調整剤なし、３０％～９０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝８１５．８、［（Ｍ－Ｂｏｃ＋２Ｈ）／２］＋＝７６５．８、［（Ｍ－２Ｂｏｃ＋２Ｈ）／２］＋＝７１６。収率３．３３ｇ、９４．２％。
ステップｅ．

Figure 2022546609000612
 ステップｄの生成物（３．３３ｇ、２．０４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５ｍｌ）及びＴＦＡ（５ｍｌ）に溶解させ、その後、３５℃で約６時間撹拌した。反応物をＬＣＭＳによって追跡した。終了となった時に溶液を濃縮し、ＲＰＬＣ（ＴＦＡなし、５～３０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝６１５．８、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝４１１。収率２．２９ｇ、９１．３％。
ステップｆ．
Figure 2022546609000613
 ステップｅの生成物（６１．５ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ／水（１：１、０．６ｍｌ）に溶解させた。溶液を－６℃（塩／氷浴）に冷却した後、１．０ＭのＬｉＯＨ（０．３ｍｌ、０．３ｍｍｏｌ）を滴加し、反応物を３０分間撹拌した。次いでそれを４ＮのＨＣｌのジオキサン（７５μｌ）溶液でｐＨ約７．０にクエンチさせ、そのまま分取ＨＰＬＣ（Ｉｓｃｏ ＡＣＣＱ ｐｒｅｐ，Ｌｕｎａ ５μｍ Ｃ１８（２） １００Å ＬＣカラム１００ｍｍ×３０ｍｍ；０．１％のＴＦＡを使用して勾配：０％のアセトニトリル／水で２分間、次いで０％～１５％のアセトニトリル／水で１２分間、次いで無勾配で１５％のアセトニトリルで１０分間）によって精製した。収率４５ｍｇ、６５．３％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝５７５．８、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝３８４．２。分析保持時間：６．０１３分。条件：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ ＨＰＬＣカラム、３μｍ ＷＸ－Ｃ１８ １１０Å、１００ｍｍ×３ｍｍ、０．１％のＴＦＡを使用して５～９５％のアセトニトリル及び水の勾配で２５分かけて溶離させる。
実施例１０１．Ｉｎｔ－７ｂ（Ｃ７－Ｃ９異性体）の合成
Figure 2022546609000614
 Ｃ７－Ｃ９ヘテロ二量体（Ｉｎｔ－７ｂ）は、反応を０℃で行いＨＰＬＣ（保持時間：６．１１２分）によって追跡すること以外はＩｎｔ－７ａ（Ｃ７－Ｃ７異性体、実施例１００）と同様に調製された。条件：実施例１００のＩｎｔ－７ａの合成を参照されたく、また、Ｃ７－Ｃ９異性体が大部分を占める時（約３時間）この異性体を、Ｉｎｔ－７ａの単離に用いたのと同じ条件を用いて単離する。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝５７５．８、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝３８４．２。
実施例１０２．の合成Ｉｎｔ－７ｃ（Ｃ９－Ｃ９異性体）
Figure 2022546609000615
 Ｉｎｔ－７ｃ（Ｃ９－Ｃ９ ｉｓｏｍｅｒ）は、反応を０℃で行いＨＰＬＣ（保持時間：６．２３２分）によって追跡すること以外はＩｎｔ－７ａ（Ｃ７－Ｃ７異性体、実施例１００）と同様に調製された。条件：実施例１００のＩｎｔ－７ａの合成を参照されたく、また、Ｃ９－Ｃ９異性体が大部分を占める時（約６時間）この異性体を、Ｉｎｔ－７ａの単離に用いたのと同じ条件を用いて単離する。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝５７５．８、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝３８４．２。
実施例１０３．Ｉｎｔ－７の合成（アセトニド経路）

Figure 2022546609000616
ステップａ．
Figure 2022546609000617
 ５－アセトアミド－７，８，９－Ｏ－トリアセチル－２，６－無水－４－アジド－３，４，５－トリデオキシ－Ｄ－グリセロ－Ｄ－ガラクト－ノナ－２－エン酸メチル（１０．０ｇ、２２ｍｍｏｌ）を６０ｍＬの無水メタノールに溶解させ、その後、氷浴中で冷却しながらナトリウムメトキシドを含んだメタノール２０ｍｌ（メタノール中０．５Ｍ、１０ｍｍｏｌ）で処理した。反応の進行をＬＣＭＳによって追跡したが、これは２時間後に終了した。その後、イオン交換樹脂Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲＮ－７７を使用することによって反応物のｐＨを５～６の値に調整した。混合物を濾過して樹脂を除去し、真空下で蒸発乾固させた。得られた油をさらに精製せずに次のステップに使用した。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ＋Ｈ＝３３１．１。
ステップｂ．
Figure 2022546609000618
 先のステップからの生成物を７０ｍｌのアセトン中に含んだ溶液に、３０ｍｌの２，２－ジメトキシプロパン及びｐ－トルエンスルホン酸一水和物（４００ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）を添加し、得られた溶液を室温で一晩撹拌した。この時間の最後に重炭酸ナトリウム（１７０ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を濃縮乾固した。得られた残渣を精製せずに次のステップに使用した。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ＋Ｈ＝３７１．２。
ステップｃ．
Figure 2022546609000619
 先のステップからの材料を６０ｍｌのメタノール中に含んだ溶液に、５．０ｇのリンドラー触媒を添加した。得られた混合物に３０分ごとに水素を流し、５時間撹拌した。ＨＰＬＣによって反応終了と判定された後、セライトで触媒を濾別した。濾液を精製せずに次のステップに使用した。
先のステップからの粗生成物を含んだ６０ｍｌのＴＨＦをＮ，Ｎ’－ビス－ｂｏｃ－１－グアニルピラゾール（９．３ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（９．９ｍｌ、５７．０ｍｍｏｌ）で処理した。得られた溶液を、ＬＣＭＳで判定して出発物質が消費されるまで（４時間）室温で撹拌した。溶液を濃縮し、２０％～８０％の酢酸エチル／ジクロロメタンで溶離させるフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。収率８．８ｇ、４ステップで５９．０％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ＋Ｈ５８７．３。
ステップｄ．
Figure 2022546609000620
 先のステップからの生成物（６．５ｇ、１１ｍｍｏｌ）が入った反応フラスコを窒素で脱気洗浄し、無水ジクロロメタン（１００ｍｌ）に溶解させた。溶液を氷水浴中で冷却した後、ＤＭＡＰ（４．８９ｇ、４０ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌して溶解させ、その後、０℃～室温で１時間撹拌しながら４－ニトロフェニルクロロホルメート（５．５８ｇ、２８ｍｍｏｌ）を数回に分けて添加した。ＬＣＭＳは１時間では出発物質を示すので、追加のＤＭＡＰ（１．２２ｇ、１０ｍｍｏｌ）及び４－ニトロフェニルクロロホルメート（１．０ｇ、５ｍｍｏｌ）を添加した。反応をさらに４時間継続し、その後、濃縮し、２０％～８０％の酢酸エチル／ジクロロメタンで溶離させるフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。収率５．１ｇ、５９．９％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝７５２．２。
ステップｅ．
Figure 2022546609000621
 先のステップからの炭酸ニトロフェニル（１．８ｇ。２．３ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（２０ｍｌ）溶液に、中央リンカー（０．５１ｇ、１．０ｍｍｏｌ、数回に分けて３０分かけて添加する）とＤＩＰＥＡ（１．４ｍｌ、１０ｍｍｏｌ）とを無水ＤＭＦ（２０ｍｌ）中に含んだ混合物を添加した。反応物を室温で一晩撹拌し、次いで濃縮し、０％～１０％のメタノール／ジクロロメタンで溶離させるフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。収率１．３５ｇ、８０％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝８３０．４、［（Ｍ－Ｂｏｃ＋２Ｈ）／２］＋＝７８０．４、［（Ｍ－２Ｂｏｃ＋２Ｈ）／２］＋＝７３０．４。
ステップｆ．
Figure 2022546609000622
 先のステップからの生成物（２００ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を２ｍｌのＭｅＯＨ及び２ｍｌのＴＨＦに溶解させ、その後、水酸化リチウム（２４ｍｇ、１ｍｍｏｌ）が２ｍｌの水に溶解した溶液で処理した。反応物を室温で１０分間撹拌し、この時にＨＰＬＣは反応終了を示した。イオン交換樹脂Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲＮ－７７を使用することによって反応物のｐＨを５～６の値に調整し、濾過して樹脂を除去した。粗生成物を真空下で蒸発乾固させ、精製によって次のステップに使用した。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝８１５．４、［（Ｍ－Ｂｏｃ＋２Ｈ）／２］＋＝７６５．４、［（Ｍ－２Ｂｏｃ＋２Ｈ）／２］＋＝７１５．４。
ステップｇ．
Figure 2022546609000623
 ステップｇからの生成物（４００ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を５ｍｌのジクロロメタン及び５ｍｌのＴＦＡに溶解させ、得られた反応溶液を室温で撹拌した。反応の進行をＬＣＭＳによって追跡した。反応終了後（６時間）、溶液を揮発乾固させ、その後、４ｍＬの水及び４ｍｌのアセトニトリルに溶解させた。得られた溶液を室温でもう２時間撹拌し、この時にＬＣＭＳはアセトニド保護基の完全な脱保護を示す。この混合物を濃縮し、０．１％のＴＦＡを含んだ５％～４０％のアセトニトリル／水で溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。収率２７０ｍｇ、６８．０％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝５７５．８、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝３８４．２。
実施例１０４．Ｉｎｔ－７ａ、Ｉｎｔ－７ｂ及びＩｎｔ－７ｃのＮＭＲ結果
Ｉｎｔ－７ａのＮＭＲ
Figure 2022546609000624
 １Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ５．９１－５．８９（ｍ，２Ｈ），５．００－４．９６（ｍ，２Ｈ），４．５８－４．５３（ｍ，２Ｈ），４．４２－４．３７（ｍ，２Ｈ），４．２０－４．１７（ｍ，６Ｈ），４．０２－３．９７（ｍ，２Ｈ），３．７８－３．４９（ｍ，２８Ｈ），３．２９－３．１８（ｍ，４Ｈ），２．８６（ｔ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ），２．８５－２．７２（ｍ，２Ｈ），１．９６（ｓ，３Ｈ），１．９５（ｓ，３Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ１７１．７３，１７０．８０，１７０．２９，１６１．９５，１５６．０６，１５５．０８，１５４．９９，１４４．０７，１４３．９３，１１６．４１，１１４．１０，１０６．０３，１０５．８６，７７．７１，７４．４６，７３．２２，６８．６２，６８．５４，６８．５０，６８．３８，６８．１２，６８．００，６７．９４，６７．６７，６７．６４，６７．５３，６７．２０，６６．９６，６５．４４，６１．５３，５６．１７，４９．７４，４９．６４，４７．３７，４５．１７，３９．１６，３９．０６，３１．７３，１９．９６，１９．９２。
Ｉｎｔ－７ｂのＮＭＲ
Figure 2022546609000625
 １Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ５．９１－５．８７（ｍ，２Ｈ），５．０４－４．９５（ｍ，１Ｈ），４．５８－４．４８（ｍ，２Ｈ），４．４５－４．３７（ｍ，３Ｈ），４．２０－４．１０（ｍ，５Ｈ），４．０８－３．９８（ｍ，２Ｈ），３．７９－３．４４（ｍ，２９Ｈ），３．２９－３．１８（ｍ，４Ｈ），２．８８－２．７０（ｍ，３Ｈ），２．０２（ｓ，３Ｈ），１．９６－１．９４（ｍ，３Ｈ）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ：８．２８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ，－ＮＨ），７．９８（ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，２Ｈ，－ＮＨ），７．７８（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ，－ＮＨ），７．６０（ｔ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ，－ＮＨ），７．２０（ｂｓ，２Ｈ，－ＮＨ），７．０６（ｂｓ，２Ｈ，－ＮＨ），５．６９（ｂｓ，１Ｈ），５．６７（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．８３（ｄｄ，Ｊ＝９．２，２．２Ｈｚ，１Ｈ），４．４５（ｄｔ，Ｊ＝９，２．５Ｈｚ，１Ｈ），４．３７（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），４．３３－４．２４（ｍ，２Ｈ），４．１３（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，２Ｈ），４．０５－４．３２（ｍ，４１Ｈ），３．２３（ｍ，１Ｈ），３．１５－３．０９（ｍ，２Ｈ），３．０６－３．０２（ｍ，２Ｈ），２．５９（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），１．９１（ｓ，３Ｈ），１．７８（ｓ，３Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ：１７３．１９，１７２．９８，１７２．２５，１７１．７５，１６４．２６，１６３．８２，１５７．８８，１５７．５５，１５６．５１，１４６．０９，１０７．２１，１０６．９３，１０６．５９，７９．２２，７６．１９，７５．９２，７４．７２，７４．６８，７０．１２，７０．０８，７０．０３，６９．９９，６９．９２，６９．８８，６９．６６，６９．４８，６９．１２，６９．０１，６８．９４，６８．７３，６８．６９，６８．５０，６８．１９，６７．０８，６６．９３，６６．７９，６３．０４，５７．６８，５１．２４，５１．１５，５０．１３，４８．８７，４８．７２，４６．７２，４６．５８，４６．２３，４０．６４，４０．４１，３３．２１，２１．４９，２１．４５，２１．４０。
Ｉｎｔ－７ｃのＮＭＲ
Figure 2022546609000626
 １Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ：５．８８（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，２Ｈ），４．５０（ｄｔ，Ｊ＝８．５，２．７Ｈｚ，２Ｈ），４．４３（ｄｄｄ，Ｊ＝９．７，３．９，１．５Ｈｚ，２Ｈ），４．３９（ｄｄ，Ｊ＝１１．５，２．４Ｈｚ，２Ｈ），４．２５－４．１６（ｍ，２Ｈ），４．１９（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，２Ｈ），４．１３（ｄｔ，Ｊ＝１１．５，５．９Ｈｚ，２Ｈ），４．０５（ｍ，２Ｈ），３．７７（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７２－３．５５（ｍ，２２Ｈ），３．５１（ｍ，４Ｈ），３．３５－３．２３（ｍ，４Ｈ），２．８６（ｔ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），２．７４（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），２．０２（ｓ，６Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ：１７３．０３，１６３．７６，１５７．８９，１５７．５４，１４５．６０，１０７．２１，７９．２８，７６．２９，７４．７０，７０．１１，７０．０７，７０．０３，６９．９２，６９．７０，６９．４７，６８．９６，６８．８９，６８．７２，６８．５４，６８．１９，６７．０５，６６．７５，５７．６９，５０．０９，４８．６９，４８．０８，４６．１０，４０．４４，４０．３８，３３．２３，２１．４２。
実施例１０５．Ｉｎｔ－６０の合成
Figure 2022546609000627
ステップａ．
先に調製されたエーテル－ザナミビル酸（１．００ｇ、１．５８６ｍｍｏｌ、実施例３１）と、２－アジドエチルアミン塩酸塩（２１３ｍｇ、１．７４４ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（１．１０５ｍＬ、６．３４３ｍｍｏｌ）とをＤＭＦ（８．０ｍＬ）中に含んだ０℃の撹拌溶液に、ＨＡＴＵ（６１５ｍｇ、１．６１８ｍｍｏｌ）を添加した。温度を周囲温度に上げ、終了まで撹拌を継続した。全ての揮発性物質を真空技術によって除去した。残渣を酢酸エチルに取り、１Ｍの硫酸の水溶液（１×５０ｍＬ）で洗浄し、その後、重炭酸ナトリウムの飽和水溶液（３×２０ｍＬ）及びブライン（１×５０ｍＬ）で洗浄した。得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、揮発性物質を真空技術によって除去した。こうして８１６ｍｇの所望の中間体アジドが高い純度で得られ、何ら精製することなく次のステップに使用した。（ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝６９９．２）。記載した粗製材料（８１６ｍｇ、１．１６８ｍｍｏｌ）と、ジプロパルギルアミン（５４ｍｇ、０．５８４ｍｍｏｌ）と、トリス（（１－ベンジル－４－トリアゾリル）メチル）アミン（３１ｍｇ、０．０５８ｍｍｏｌ）と、アスコルビン酸ナトリウム（５８ｍｇ、０．２９２ｍｍｏｌ）とをエタノール（１０ｍＬ）及び水（５ｍＬ）の中に含んだ撹拌溶液に、硫酸銅（１０ｍｇ、０．０６１ｍｍｏｌ）を添加した。終了してすぐに銅捕捉剤ＳｉｌｉａＭｅｔＳ ＴＡＡｃＯＮａ（３００ｍｇ、負荷０．４５ｍｍｏｌ／ｇ）を添加し、撹拌を１時間継続した。混合物の濾過をジクロロメタンによる補助を伴って行った。濾液を重炭酸ナトリウムの飽和溶液で洗浄した。さらに水層をジクロロメタンで（３回）洗浄した。合わせた有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過及び濃縮した。残渣を、０％～１００％のヘキサン及び酢酸エチルに続いて０％～３０％のジクロロメタンで溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフィーを用いてシリカカラムによって精製した。収量８１７ｍｇ、収率９４％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝７４５．８、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝４９７．５。
ステップｂ．
ステップａの生成物（８１７ｍｇ、０．５４８ｍｍｏｌ）と、プロパルギル－ＰＥＧ４－酸（１８５ｍｇ、０．７１２ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（２８６μＬ、１．６４４ｍｍｏｌ）とをＤＭＦ（７．０ｍＬ）中に含んだ０℃の撹拌溶液に、ＨＡＴＵ（２１２ｍｇ、０．５４４ｍｍｏｌ）を添加した。温度を周囲温度に上げ、終了まで撹拌を継続した。全ての揮発性物質を真空技術によって除去した。残渣をＨＰＬＣ（０～９０％のメタノール及び水）によって精製した。収率５２０ｍｇ、５６％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝８６６．８、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝５７８．４。
ステップｃ．
ステップｂ化合物（５２０ｍｇ、０．３００ｍｍｏｌ）を２－メチル－２－ブテン（０．２５ｍＬ）、ジクロロメタン（４．０ｍＬ）及びＴＦＡ（２．０ｍＬ）の中に含んだ撹拌溶液を、ガス発生が止むまで撹拌した。全ての揮発性物質を真空技術によって除去した。残渣をＨＰＬＣ（０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した０～３０％のメタノール及び水）によって精製した。収率２２１ｍｇ、４７％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝６６６．８、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝４４４．８。
ステップｄ．
０℃で撹拌しているステップｃの生成物（２２１ｍｇ、０．１４２ｍｍｏｌ）の水（３．０ｍＬ）溶液に、水酸化リチウム（２０ｍｇ、０．８５０ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を酢酸（１２０μＬ）でクエンチさせ、全ての揮発性物質を真空技術によって除去した。残渣をＨＰＬＣ（０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した０～２０％のメタノール及び水）によって精製した。収率１３０ｍｇ、６２％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝６２６．８、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝４１８．２。
実施例１０６．複合体２９の合成
アジド官能化非グリコシル化Ｆｃ（配列番号３５）をｐＨ７．４のＰＢＳ×１緩衝液（１００ｍｇ、１０ｍＬ、１．８７４μｍｏｌ）中に含んだ溶液を、アルキン誘導体化低分子（１７ｍｇ、０．０１１２ｍｍｏｌ；実施例１０５、Ｉｎｔ－６０）と、硫酸銅（４ｍｇ、０．０２２５ｍｍｏｌ）と、トリス（３－ヒドロキシプロピルトリアゾリルメチル）－アミン（３９ｍｇ、０．０９００ｍｍｏｌ）と、アスコルビン酸ナトリウム（７．４ｍｇ、０．３７５ｍｍｏｌ）とをｐＨ７．４のＰＢＳ×１緩衝液（１０．５０ｍＬ）の中に含んだ溶液が入った遠心管に加えた。得られた混合物を穏やかに一晩振盪した。それをプロテインＡカラムで親和性クロマトグラフィーによって精製し、続いてサイズ排除クロマトグラフィー（実施例１０参照）で精製した。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析で平均質量は５６９３８Ｄａであった（ＤＡＲ＝２．３）。収量４９．９ｍｇ、収率４９％。
複合体２９のためのＦｃをコードする核酸構築物は、Ｃ末端リジン残基及びＮ末端ネズミＩｇＧシグナル配列を含むものである配列番号３５のアミノ酸配列をコードする核酸を含んでいた。発現時に複合体２９のＦｃのＣ末端リジン及びＮ末端ネズミＩｇＧシグナル配列はタンパク質分解的に切断され、Ｌｙｓ４４７（例えばＣ末端リジン残基）及びＮ末端ネズミＩｇＧシグナル配列を欠く配列を有するＦｃをもたらす。Ｃ末端リジンの存在または非存在は、Ｆｃまたは対応する複合体の特質を変化させない。
実施例１０７．Ｉｎｔ－６５の合成
Figure 2022546609000628
ステップａ．
先に調製したエーテル－ザナミビル酸（２．００ｇ、３．１７２ｍｍｏｌ、実施例３１）と４－メチルモルホリン（０．６２８ｍＬ、５．７０９ｍｍｏｌ）とをテトラヒドロフラン（３０ｍＬ）中に含んだ０℃の撹拌溶液に、クロロギ酸イソブチル（０．６１７ｍＬ、４．７５７４ｍｍｏｌ）を添加した。１０分後、温度を周囲温度に上げ、撹拌を２０分間継続した。温度を０℃に下げ戻し、水素化ホウ素ナトリウム（３６０ｍｇ、９．５１５ｍｍｏｌ）を一度に添加し、続いて（１０ｍＬ）を５分かけて滴加した。終了してすぐに反応物を酢酸（２．８６０ｍＬ、５０ｍｍｏｌ）でクエンチさせ、５分後に温度を周囲温度に上げ、その間、ガス発生が止むまで撹拌を継続した。全ての揮発性物質を蒸発させ、残渣をジクロロメタン中に懸濁させ、濾過した。濾液を濃縮し、残渣を、３％のメタノールを調整剤として使用した２０％～１００％のヘキサン及び酢酸エチルで溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフィーを用いてシリカカラムによって精製した。収量１．３０２ｇ、収率６６％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋Ｈ）］＋＝６１７．２。
ステップｂ．
ステップａの生成物（１．２５ｇ、２．０２７ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１．０９５ｍＬ、６．２８４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１５ｍＬ）中に含んだ０℃の撹拌溶液に、メタンスルホニルクロリド（０．３１４ｍｍｏｌ、４．０５４ｍｍｏｌ）を添加した。終了してすぐに反応物を水（１５ｍＬ）で処理した。層を分離し、ジクロロメタン層をブライン、次いで硫酸マグネシウムで乾燥させ、その後、濾過した。溶液を濃縮し、残渣をＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解させ、温度を５０℃に上げながらアジ化ナトリウム（２６４ｍｇ、４．０５４ｍｍｏｌ）を添加した。１８時間後に終了が認められ、全ての揮発性物質を真空技術によって蒸発させた。残渣を、３％のメタノールを調整剤として使用した２０％～１００％のヘキサン及び酢酸エチルで溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフィーを用いてシリカカラムによって精製した。収量７６７ｍｇ、収率５９％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋Ｈ）］＋＝６４２．２。
ステップｃ．
ステップｂの生成物（４９６ｍｇ、０．７７３ｍｍｏｌ）と、ジプロパルギルアミン（３６ｍｇ、０．３８６ｍｍｏｌ）と、トリス（（１－ベンジル－４－トリアゾリル）メチル）アミン（４１ｍｇ、０．０７７ｍｍｏｌ）と、アスコルビン酸ナトリウム（１１５ｍｇ、０．５８０ｍｍｏｌ）とをエタノール（１６ｍＬ）及び水（８ｍＬ）の中に含んだ撹拌溶液に、硫酸銅（１３ｍｇ、０．０８１ｍｍｏｌ）を添加した。終了してすぐに銅捕捉剤ＳｉｌｉａＭｅｔＳ ＴＡＡｃＯＮａ（６００ｍｇ、負荷０．４５ｍｍｏｌ／ｇ）を添加し、撹拌を１時間継続した。混合物の濾過をジクロロメタンによる補助を伴って行った。濾液を重炭酸ナトリウムの飽和溶液で洗浄した。さらに水層をジクロロメタンで（３回）洗浄した。合わせた有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、全ての揮発性物質を真空技術によって蒸発させた。残渣と、プロパルギル－ＰＥＧ４－酸（１５１ｍｇ、０．５８０ｍｍｏｌ））と、ＤＩＰＥＡ（３３７μＬ、１．９３３ｍｍｏｌ）とをＤＭＦ（１０．０ｍＬ）中に含んだ０℃の撹拌溶液に、ＨＡＴＵ（２２０ｍｇ、０．５８０ｍｍｏｌ）を添加した。温度を周囲温度に上げ、終了まで撹拌を継続した。全ての揮発性物質を真空技術によって除去した。残渣をＨＰＬＣ（０～９０％のメタノール及び水）によって精製した。収率４５７ｍｇ、７３％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝８０９．８、［（Ｍ＋２Ｈ－Ｂｏｃ）／２］＋＝７５９．８。
ステップｄ．
ステップｃの化合物（４５１ｍｇ、０．２７９ｍｍｏｌ）を２－メチル－２－ブテン（０．２５ｍＬ）、ジクロロメタン（４．０ｍＬ）及びＴＦＡ（２．０ｍＬ）の中に含んだ撹拌溶液を、ガス発生が止むまで撹拌した。全ての揮発性物質を真空技術によって除去した。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝６０９．８、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝４０７．０。残渣をテトラヒドロフラン（６ｍＬ）及び水（６ｍＬ）の中に含んだ０℃の撹拌溶液に、水酸化リチウム（２４０ｍｇ、１０．０３ｍｍｏｌ）を添加した。終了してすぐに反応物を酢酸（０．６３８ｍＬ、１１．１４ｍｍｏｌ）でクエンチさせ、全ての揮発性物質を真空技術によって除去した。残渣をＨＰＬＣ（０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した０～９０％のメタノール及び水）によって精製した。収率２０９ｍｇ、６７％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝５６９．８、［（Ｍ＋２Ｈ－Ｂｏｃ）／２］＋＝３８０．３。
実施例１０８．複合体３０の合成
アジド官能化非グリコシル化Ｆｃ（実施例７、配列番号３５）をｐＨ７．４のＰＢＳ×１緩衝液（５０ｍｇ、５ｍＬ、１．８７４μｍｏｌ）の中に含んだ溶液を、アルキン誘導体化低分子（８．７ｍｇ、０．００６４ｍｍｏｌ、Ｉｎｔ－６５）と、硫酸銅（２ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）と、トリス（３－ヒドロキシプロピルトリアゾリルメチル）－アミン（２２ｍｇ、０．０５０８ｍｍｏｌ）と、アスコルビン酸ナトリウム（２５ｍｇ、０．１２７ｍｍｏｌ）とをｐＨ７．４のＰＢＳ×１緩衝液（９．５０ｍＬ）の中に含んだ溶液が入った遠心管に加えた。得られた混合物を穏やかに一晩振盪した。それをプロテインＡカラムで親和性クロマトグラフィーによって精製し、続いてサイズ排除クロマトグラフィー（実施例１０参照）で精製した。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析で平均質量は６１５４８Ｄａであった（ＤＡＲ＝２．４）。収量３２．３３ｍｇ、収率６７％。
複合体３０のためのＦｃをコードする核酸構築物は、Ｃ末端リジン残基及びＮ末端ネズミＩｇＧシグナル配列を含むものである配列番号３５のアミノ酸配列をコードする核酸を含んでいた。発現時に複合体３０のＦｃのＣ末端リジン及びＮ末端ネズミＩｇＧシグナル配列はタンパク質分解的に切断され、Ｌｙｓ４４７（例えばＣ末端リジン残基）及びＮ末端ネズミＩｇＧシグナル配列を欠く配列を有するＦｃをもたらす。Ｃ末端リジンの存在または非存在は、Ｆｃまたは対応する複合体の特質を変化させない。
実施例１０９：炭酸ｐ－ニトロフェニル ザナミビル中間体の合成
Figure 2022546609000629
ステップａ．
Figure 2022546609000630
 トリアセトキシ－アジドザナミビル中間体（１０．０ｇ、２２ｍｍｏｌ）を６０ｍＬの無水メタノールに溶解させ、その後、氷水浴中で冷却しながら、２０ｍｌのナトリウムメトキシドを含んだメタノール（メタノール中０．５Ｍ、１０ｍｍｏｌ）で処理した。反応の進行をＬＣＭＳによって追跡したが、これは２時間後に終了となった。その後、イオン交換樹脂Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲＮ－７７を使用することによって反応溶液のｐＨを５～６の値に調整した。混合物を濾過して樹脂を除去し、真空下で蒸発乾固させた。得られた油をさらに精製せずに次のステップに使用した。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ＋Ｈ＝３３１．１。
ステップｂ．

Figure 2022546609000631
 先のステップからの生成物を７０ｍｌのアセトンの中に含んだ溶液に、３０ｍｌの２，２－ジメトキシプロパン及びｐ－トルエンスルホン酸一水和物（４００ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）を添加し、得られた溶液を室温で一晩撹拌した。この時間の最後に重炭酸ナトリウム（１７０ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を濃縮乾固した。得られた残渣を精製せずに次のステップに使用した。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ＋Ｈ＝３７１．２。
ステップｃ及びｄ．
Figure 2022546609000632
 先のステップからの材料を６０ｍｌのメタノールの中に含んだ溶液に、５．０ｇのリンドラー触媒を添加した。得られた混合物に３０分ごとに水素を流し、５時間撹拌した。ＨＰＬＣによって反応終了と判定された後、セライトで触媒を濾別した。濾液を精製せずに次のステップに使用した。
先のステップからの粗生成物を含んだ６０ｍｌのＴＨＦをＮ，Ｎ’－ビス－ｂｏｃ－１－グアニルピラゾール（９．３ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（９．９ｍｌ、５７．０ｍｍｏｌ）で処理した。得られた溶液を、ＬＣＭＳで判定して出発物質が消費されるまで（４時間）室温で撹拌した。溶液を濃縮し、２０％～８０％の酢酸エチル／ジクロロメタンで溶離させるフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。収率８．８ｇ、４ステップで５９．０％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ＋Ｈ５８７．３。
ステップｅ．
Figure 2022546609000633
 先のステップからの生成物（６．５ｇ、１１ｍｍｏｌ）が入った反応フラスコを窒素で脱気洗浄し、無水ジクロロメタン（１００ｍｌ）に溶解させた。溶液を氷水浴中で冷却した後、ＤＭＡＰ（４．８９ｇ、４０ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌して溶解させ、その後、０℃～室温で１時間撹拌しながら４－ニトロフェニルクロロホルメート（５．５８ｇ、２８ｍｍｏｌ）を数回に分けて添加した。ＬＣＭＳは１時間では出発物質を示すので、追加のＤＭＡＰ（１．２２ｇ、１０ｍｍｏｌ）及び４－ニトロフェニルクロロホルメート（１．０ｇ、５ｍｍｏｌ）を添加した。反応をさらに４時間継続し、その後、濃縮し、２０％～８０％の酢酸エチル／ジクロロメタンで溶離させるフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。収率５．１ｇ、５９．９％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝７５２．２。
実施例１１０．Ｉｎｔ－７１の合成
Figure 2022546609000634
ステップａ．
Figure 2022546609000635
 ２－（２－Ｂｏｃ－アミノエトキシ）エタノール（６．１５ｇ、３０ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（６０ｍｌ）溶液に、ＤＩＰＥＡ（７．８ｇ、６０ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（３６６．６ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を添加した。その後、Ｐ－トルエンスルホニルクロリド（６．８６ｇ、３６ｍｍｏｌ）を数回に分けて３０分かけて添加した。得られた混合物を３日間撹拌し、それをロータリーエバポレーションによって濃縮し、ＲＰＬＣ（２０％～７０％のアセトニトリル／水）によって精製した。収率３．７１ｇ、３４．４％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ－Ｂｏｃ＋Ｈ］＋＝２６０。
ステップｂ．
Figure 2022546609000636
 ステップａの生成物（２．１ｇ、５．８３ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１０ｍｌ）溶液に、炭酸ナトリウム（１．２４ｇ、１１．７ｍｍｏｌ）及びＮ－Ｂｏｃ－１，４－ジアミノブタン（１．３２ｇ、７ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を６０℃で１日間加熱した。その後、塩を濾別し、濾液をロータリーエバポレーションによって濃縮した。残渣をＲＰＬＣ（１００ｇ、５～５０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率１．９４ｇ、８８．６％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３７６．０。
ステップｃ．
Figure 2022546609000637
 プロパルギルＰＥＧ－４酸（７８１ｍｇ、３ｍｍｏｌ）とＨＡＴＵ（１．１４ｇ、３ｍｍｏｌ）とを無水ＤＭＦ（３ｍｌ）中に含んだ溶液に、ＤＩＰＥＡ（３９０ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を添加し、続いて、ステップｂの生成物（９４０ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（３９０ｍｇ、３ｍｍｏｌ）とを無水ＤＭＦ（３ｍｌ）中に含んだ溶液を添加した。反応混合物を３０分間撹拌し、次いでそのままＲＰＬＣ（０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した５～８０％のアセトニトリル及び水）で精製した。収率９６０．２ｍｇ、６５．３％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝６１８．３、［Ｍ－Ｂｏｃ＋Ｈ］＋＝５１８．３。
ステップｄ．
Figure 2022546609000638
 ステップｃの生成物（９６０．２ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（６ｍｌ）に溶解させた。４ＮのＨＣｌのジオキサン（４ｍｌ）溶液を添加し、反応混合物を一晩撹拌した。次いでそれをロータリーエバポレーションによって濃縮した。残渣を水（３×３ｍｌ）及び酢酸エチル（１０ｍｌ）で抽出した。合わせた水層を凍結乾燥させた。収率７６０ｍｇ、９５．１％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４１８．０。
ステップｅ．
Figure 2022546609000639
 ステップｄの生成物（５５６．２ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（７４１ｍｇ、５．７ｍｍｏｌ）とを無水ＤＭＦ（３ｍｌ）中に含んだ混合物に、ザナミビルのｐ－ニトロフェニル炭酸エステル（１．６７ｇ、２．２６ｍｍｏｌ、実施例１０９に記載のもの）を数回に分けて２０分かけて添加した。反応物を１時間撹拌し、次いでそのままＲＰＬＣ（０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した３０％～９０％のアセトニトリル／水）で精製した。収率１．３５ｇ、７４％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝８０７．９。
ステップｆ．
Figure 2022546609000640
 ステップｅの生成物（１．３５ｇ、０．８３６ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（５ｍｌ）に溶解させた。反応物を３０℃で１時間加熱し、それをそのままＲＰＬＣ（０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した０％～３５％のアセトニトリル／水）によって精製した。収率１．００ｇ、８２．９％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝６０７．８。
ステップｇ．
Figure 2022546609000641
 ステップｆの生成物（１．００ｇ、０．６９３ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１２ｍｌ）に溶解させ、次いで氷水浴中で冷却した。次いでそれをＬｉＯＨ一水和物（２８６ｍｇ、６．６ｍｍｏｌ）の水（９ｍｌ）溶液で処理した。得られた混合物を一晩撹拌し、その後、４ＮのＨＣｌのジオキサン（２ｍｌ）溶液によって酸性化した。有機溶媒をロータリーエバポレーションによって除去した後、残渣を分取ＨＰＬＣ（Ｉｓｃｏ ＡＣＣＱ ｐｒｅｐ，Ｌｕｎａ ５μｍ Ｃ１８（２） １００Å ＬＣカラム１００ｍｍ×３０ｍｍ；勾配：０．１％のＴＦＡを使用して０％のアセトニトリル／水で２分間、次いで０％～１５％のアセトニトリル／水で１２分間、次いで無勾配で１５％のアセトニトリルで１０分間）によって精製した。収率２７５．９ｍｇ、２９．２％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝５６７．８、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝３７８．９。
実施例１１１．複合体３１の合成
１５ｍｌ容の無菌遠心管に、アスコルビン酸ナトリウム（６８．１ｍｇ、０．３４４ｍｍｏｌ）、ＴＨＰＴＡ（１４．９ｍｇ、０．０３４４ｍｍｏｌ）、アルキン誘導体化低分子（１７．５ｍｇ、０．００９５３ｍｍｏｌ、実施例１１０に記載のもの）及び緩衝液ＰＢＳ ７．４（１ｍｌ）を充填した。渦流撹拌によって撹拌して全てを溶解させた後、Ｐｅｇ４アジドＦｃ（５０ｍｇ、０．０００８５８８ｍｍｏｌ、実施例７に記載のもの、配列番号１８）を添加し、続いてＣｕＳＯ４（２．０５ｍｇ、０．０１２９ｍｍｏｌ）のＰＢＳ（０．５ｍｌ）溶液を添加した。混合物を２０時間穏やかに回転させ、その後、プロテインＡカラムで親和性クロマトグラフィーによって精製し、続いてサイズ排除クロマトグラフィーで精製した。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析で平均質量は６３５８６Ｄａであった（ＤＡＲ＝３．８）。収量３２．８ｍｇ、収率６６％。
実施例１１２．の合成Ｉｎｔ－７２
Figure 2022546609000642
ステップａ．
Figure 2022546609000643
 Ｎ－Ｂｏｃ－１，４－ジアミノブタン（１．５６ｇ、８．２８ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（７ｍｌ）溶液に、炭酸ナトリウム（７４２ｍｇ、７ｍｍｏｌ）及び５－（Ｂｏｃ－アミノ）－１－ペンチルブロミド（１．７３ｇ、６．５ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を５０℃で２４時間加熱した。その後、塩を濾別し、濾液をロータリーエバポレーションによって濃縮した。残渣をＲＰＬＣ（０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した５％～５０％のアセトニトリル／水）によって精製した。収率２ｇ、６３．２％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３７４．４。
ステップｂ．
Figure 2022546609000644
 プロパルギルＰＥＧ－４酸（１．３ｇ、５ｍｍｏｌ）とＨＡＴＵ（２．１ｇ、５．５ｍｍｏｌ）とを無水ＤＭＦ（６ｍｌ）中に含んだ溶液に、ＤＩＰＥＡ（１．３ｇ、１０ｍｍｏｌ）を添加した。５分後、反応混合物をステップａの生成物（２ｇ、４．１ｍｍｏｌ）に添加し、１時間撹拌した。次いでそれをそのままＲＰＬＣ（０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した５％～８０％のアセトニトリル／水）によって精製した。収率２．３４ｇ、９５％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝６１６．４、［Ｍ－Ｂｏｃ＋Ｈ］＋＝５１６．４。
ステップｃ．
Figure 2022546609000645
 ステップｂの生成物（２．３４ｇ、３．８ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（１２ｍｌ）に溶解させた。４ＮのＨＣｌのジオキサン（１０ｍｌ）溶液を添加し、反応混合物を一晩撹拌した。次いでそれをロータリーエバポレーションによって濃縮した。残渣をアセトニトリル／水（１：１、約１６ｍｌ）に再溶解させ、溶液を凍結乾燥させた。粗生成物をさらに精製せずに次のステップへ移した。収量１．９１ｇ、定量的収率。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４１６．４。
ステップｄ．
Figure 2022546609000646
 ザナミビルのｐ－ニトロフェニル炭酸エステル（２．２５ｇ、３．０５ｍｍｏｌ、実施例１０９に記載のもの）の無水ＤＣＭ（３ｍｌ）溶液に、ステップｃの生成物（６１０ｍｇ、１．２４９ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（１．０５ｇ、８．１ｍｍｏｌ）とを無水ＤＭＦ（４ｍｌ）中に含んだ混合物を数回に分けて２０分かけて添加した。１時間撹拌した後、反応混合物を濃縮し、ＲＰＬＣ（０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した３０％～８０％のアセトニトリル／水）によって精製した。収率１．７３ｇ、８５．９％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝８０６．８、［（Ｍ－Ｂｏｃ＋２Ｈ）／２］＋＝７５６．８。
ステップｅ．
Figure 2022546609000647
 ステップｄの生成物（１．７３ｇ、１．０７３ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（５ｍｌ）に溶解させた。溶液を３０℃で３時間加熱した後、それをそのままＲＰＬＣ（０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した０％～３５％のアセトニトリル／水）によって精製した。収率１．１７６ｇ、７６．１％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝６０６．８、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝４０５。
ステップｆ．


Figure 2022546609000648
 ステップｅの生成物（１．１７６ｇ、０．８１７ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１２ｍｌ）に溶解させ、溶液を氷水浴中で冷却した。それをＬｉＯＨ一水和物（３４４．４ｍｇ、８．２ｍｍｏｌ）の水（９ｍｌ）溶液の滴加によって処理した。得られた混合物を一晩撹拌し、その後、４ＮのＨＣｌのジオキサン（２ｍｌ）溶液によって酸性化した。有機溶媒をロータリーエバポレーションによって除去した後、残渣を分取ＨＰＬＣ（Ｉｓｃｏ ＡＣＣＱ ｐｒｅｐ，Ｌｕｎａ ５μｍ Ｃ１８（２） １００Å ＬＣカラム１００ｍｍ×３０ｍｍ；勾配：０．１％のＴＦＡを使用して０％のアセトニトリル／水で２分間、次いで０％～１５％のアセトニトリル／水で１２分間、次いで無勾配で１５％のアセトニトリルで１０分間）によって精製した。収率１０８ｍｇ、９．７％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝５６６．８、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝３７８．２。
実施例１１３．複合体３２の合成
１５ｍｌ容の無菌遠心管に、アスコルビン酸ナトリウム（６８．１ｍｇ、０．３４４ｍｍｏｌ）、ＴＨＰＴＡ（１４．９ｍｇ、０．０３４４ｍｍｏｌ）、実施例１１２からの生成物であるＩｎｔ－７２（１７．５ｍｇ、０．００９５３ｍｍｏｌ）及びＰＢＳ ７．４（１ｍｌ）を充填した。渦流撹拌によって撹拌して全てを溶解させた後、アジドＦｃ（５０ｍｇ、０．０００８５８８ｍｍｏｌ、配列番号４を有する実施例７に記載のもの）を添加し、続いてＣｕＳＯ４（２．０５ｍｇ、０．０１２９ｍｍｏｌ）のＰＢＳ（０．５ｍｌ）溶液を添加した。混合物を２０時間穏やかに回転させた。それをプロテインＡカラムで親和性クロマトグラフィーによって精製し、続いてサイズ排除クロマトグラフィーで精製した。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析で平均質量は６３５８８．Ｄａであった（ＤＡＲ＝３．８）。収量３０．９ｍｇ、収率６２％。
複合体３２のためのＦｃをコードする核酸構築物は、Ｃ末端リジン残基を含むものである配列番号４のアミノ酸配列をコードする核酸を含んでいた。発現時に複合体３２のＦｃのＣ末端リジンはタンパク質分解的に切断され、Ｌｙｓ４４７を欠く（例えばＣ末端リジン残基を欠く）配列を有するＦｃをもたらす。Ｃ末端リジンの存在または非存在は、Ｆｃまたは対応する複合体の特質を変化させない。
実施例１１４．Ｉｎｔ－７３の合成

Figure 2022546609000649
ステップａ．
Figure 2022546609000650
 ザナミビルのｐ－ニトロフェニル炭酸エステル（６９８．４ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ、実施例１０９に記載のもの）の無水ＤＣＭ（２ｍｌ）溶液に、プロパルギルジアミン中央リンカー（２０９ｍｇ、０．４２６ｍｍｏｌ、実施例１１０に記載のもの）とＤＩＰＥＡ（３３０．８ｍｇ、２．５６ｍｍｏｌ）とを無水ＤＭＦ（２ｍｌ）中に含んだ混合物を数回に分けて１０分かけて添加した。反応物を室温で１時間撹拌した。次いでそれを濃縮し、ＲＰＬＣ（ＴＦＡ調整剤なし、３０％～８５％のアセトニトリル／水）によって精製した。収率５３１ｍｇ、６９．２％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝８０７．８、［（Ｍ－Ｂｏｃ＋２Ｈ）／２］＋＝７５７．８。
ステップｂ．
Figure 2022546609000651
 ステップｂの生成物（５３１ｍｇ、０．３２９ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１．５ｍｌ）及びＴＦＡ（１．５ｍｌ）に溶解させ、その後、３５℃で３時間撹拌した。それを濃縮し、ＲＰＬＣ（ＴＦＡ調整剤なし、５％～３０％のアセトニトリル／水）によって精製した。収率３８７ｍｇ、９７．１％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝６０７．６、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝４０５．４。
ステップｃ．
Figure 2022546609000652
 ステップｂの生成物（１２１．４ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を１．０ＭのＮａＣｌ溶液（３ｍｌ）及びアセトニトリル（１ｍｌ）に溶解させた。溶液を－８℃（塩／氷浴）に冷却した後、１．０ＭのＮａＯＨ（０．４ｍｌ、０．４ｍｍｏｌ）を滴加し、反応物を－１４～－８℃で６時間撹拌した。次いでそれを４ＮのＨＣｌのジオキサン溶液（１００μｌ）で中和し、そのまま分取ＨＰＬＣ（Ｉｓｃｏ ＡＣＣＱ ｐｒｅｐ，Ｌｕｎａ ５μｍ Ｃ１８（２） １００Å ＬＣカラム１００ｍｍ×３０ｍｍ；勾配：０．１％のＴＦＡを使用して０％のアセトニトリル／水で２分間、次いで０％～１７．８％のアセトニトリル／水で１２分間、次いで無勾配で１７．８％のアセトニトリルで１０分間）によって精製した。収率８５．５ｍｇ、６２．８％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝５６７．８、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝３７８．９。
実施例１１５．Ｉｎｔ－７４の合成
Figure 2022546609000653
ステップａ．
Figure 2022546609000654
 Ｎ－Ｂｏｃ－２－（２－アミノ－エトキシ）エチルアミン（１．２ｇ、５ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（５ｍｌ）溶液に、炭酸ナトリウム（６９１ｍｇ、５ｍｍｏｌ）及びＮ－Ｂｏｃ－６－ブロモ－ヘキシルアミン（１．４ｇ、５ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を７０℃で２４時間加熱した。その後、塩を濾別し、濾液をロータリーエバポレーションによって濃縮した。残渣をＲＰＬＣ（０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した５％～５０％のアセトニトリル／水）によって精製した。収率４４４ｍｇ、２２％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４０４．３。
ステップｂ．
Figure 2022546609000655
 プロパルギルＰＥＧ－４酸（３４２．６ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ）とＨＡＴＵ（６０１．５ｍｇ、１．５８ｍｍｏｌ）とを無水ＤＭＦ（２ｍｌ）中に含んだ溶液に、ＤＩＰＥＡ（２５８ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を添加した。５分後、反応混合物をステップａの生成物（４４４．３ｍｇ、０．８５８ｍｍｏｌ）に添加し、１時間撹拌した。次いでそれをそのままＲＰＬＣ（０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した５％～８０％のアセトニトリル／水）によって精製した。収率２９７．１ｍｇ、５３．６％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝６４６．２、［Ｍ－Ｂｏｃ＋Ｈ］＋＝５４６．２。
ステップｃ．
Figure 2022546609000656
 ステップｂの生成物（２９７．１ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（２ｍｌ）に溶解させた。４ＮのＨＣｌのジオキサン（４ｍｌ）溶液を添加し、反応混合物を一晩撹拌した。次いでそれをロータリーエバポレーションによって濃縮し、分取ＨＰＬＣ（０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した５％～５０％のアセトニトリル／水）によって精製した。収率２３９．６ｍｇ、７７．３％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４４６．２。
ステップｄ．

Figure 2022546609000657
 ザナミビルのｐ－ニトロフェニル炭酸エステル（５２３．８ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ、実施例１０９に記載のもの）の無水ＤＣＭ（２ｍｌ）溶液に、ステップｃの生成物（２３９．６ｍｇ、０．３５６ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（２４５．５ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）とを無水ＤＭＦ（２ｍｌ）中に含んだ混合物を数回に分けて１０分かけて添加した。反応物を室温で１時間撹拌した。次いでそれを濃縮し、ＲＰＬＣ（ＴＦＡ調整剤なし、３０％～８５％のアセトニトリル／水）によって精製した。収率５５３ｍｇ、９６．５％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝８２１．８、［（Ｍ－Ｂｏｃ＋２Ｈ）／２］＋＝７７１．８。
ステップｅ．
Figure 2022546609000658
 ステップｄの生成物（５５３ｍｇ、０．３４３ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１．５ｍｌ）及びＴＦＡ（１．５ｍｌ）に溶解させ、その後、３５℃で３時間撹拌した。それを濃縮し、ＲＰＬＣ（ＴＦＡ調整剤なし、５％～３０％のアセトニトリル／水）によって精製した。収率４２４．６ｍｇ、９９．６％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝６２１．６、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝４１５．０。
ステップｆ．
Figure 2022546609000659
 ステップｅの生成物（４２４．６ｍｇ、０３４２ｍｍｏｌ）を１．０ＭのＮａＣｌ溶液（４ｍｌ）及びアセトニトリル（４ｍｌ）に溶解させた。溶液を－１１℃（塩／氷浴）に冷却した後、１．０ＭのＮａＯＨ（１．５３ｍｌ、１．５３ｍｍｏｌ）を滴加し、反応物を－１４～－８℃で６時間撹拌した。次いでそれを４ＮのＨＣｌのジオキサン溶液（３７５μｌ）でクエンチさせ、そのまま分取ＨＰＬＣ（Ｉｓｃｏ ＡＣＣＱ ｐｒｅｐ，Ｌｕｎａ ５μｍ Ｃ１８（２） １００Å ＬＣカラム１００ｍｍ×３０ｍｍ；勾配：０．１％のＴＦＡを使用して０％のアセトニトリル／水で２分間、次いで０％～２０．９％のアセトニトリル／水で１３．６分間、次いで無勾配で２０．９％のアセトニトリルで１０分間）によって精製した。収率４３９ｍｇ、９２．３％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝５８１．８、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝３８８．２。
実施例１１６．Ｉｎｔ－７５の合成
Figure 2022546609000660
ステップａ．
Figure 2022546609000661
 カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（４－オキソブチル）（８５０ｍｇ、４．５４ｍｇ）とＮ－｛２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］エチル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（１．９９ｇ、８ｍｍｏｌ）との混合物をＤＣＭ（３０ｍｌ）に溶解させ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過及び濃縮した後、残渣を無水ＤＣＭ（２０ｍｌ）に再溶解させた。酢酸（６４１ｍｇ、１１ｍｍｏｌ）を添加し、続いてトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（３．４ｇ、１６ｍｍｏｌ）を数回に分けて１時間かけて添加した。反応混合物を一晩撹拌し、その後、ＡｃＯＨ（３ｍｌ）及びＭｅＯＨ（１０ｍｌ）でクエンチさせた。混合物を濾過し、濾液をロータリーエバポレーションによって濃縮し、ＲＰＬＣ（５％～４５％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率６１８ｍｇ、３２．５％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４２０．４。
ステップｂ．
Figure 2022546609000662
 この化合物は、実施例１１５のステップｂの生成物と同様に調製された。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝６６２．４、［Ｍ－Ｂｏｃ＋Ｈ］＋＝５６２．４。
ステップｃ．
Figure 2022546609000663
 この化合物は、実施例１１５のステップｃの生成物と同様に調製された。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４６２．４。
ステップｄ．
Figure 2022546609000664
 この化合物は、実施例１１５のステップｄの生成物と同様に調製。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝８２９．８、［（Ｍ－Ｂｏｃ＋２Ｈ）／２］＋＝７７９．８。
ステップｅ．
Figure 2022546609000665
 この化合物は、実施例１１５のステップｅの生成物と同様に調製された。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝６２９．８、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝４２０．２。
ステップｆ．
Figure 2022546609000666
 この化合物は、実施例１１５のステップｆの生成物と同様に調製された。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝５９８．８、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝３９３．６。
実施例１１７．Ｉｎｔ－７６の合成
Figure 2022546609000667
ステップａ．
Figure 2022546609000668
 Ｎ－Ｂｏｃ－ｐｅｇ－１トシラート（１．５４ｇ、４．２８ｍｍｏｌ、実施例１１０に記載のもの）の無水ＴＨＦ（８ｍｌ）溶液に、Ｎ－２｛２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］エチル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（１．５９ｇ、６．４２ｍｍｏｌ）及び炭酸ナトリウム（４５３．７ｍｇ、４．２８ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物５０℃で２４時間加熱した。固体を濾別し、アセトニトリルで洗浄した。濾液を濃縮し、ＲＰＬＣ（１００ｇ、５～９０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率１．１５ｇ、６１．７％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４３６．４。
ステップｂ．
Figure 2022546609000669
 この化合物は、実施例１１５のステップｂからの生成物と同様に調製された。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝６７８．２、［Ｍ－Ｂｏｃ＋Ｈ］＋＝５７８．２。
ステップｃ．
Figure 2022546609000670
 この化合物は、実施例１１５のステップｃの生成物と同様に調製された。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４７８．２。
ステップｄ．
Figure 2022546609000671
 この化合物は、実施例１１５のステップｄからの生成物と同様に調製された。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝８３７．６、［（Ｍ－Ｂｏｃ＋２Ｈ）／２］＋＝７６７．８。
ステップｅ．
Figure 2022546609000672
 この化合物は、実施例１１５のステップｅからの生成物と同様に調製された。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝６３７．５、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝４２５．６。
ステップｆ．
Figure 2022546609000673
 この化合物は、実施例１１５のステップｆからの生成物と同様に調製された。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝５９７．８、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝３９９．０。
実施例１１８ Ｉｎｔ－６７の合成
Figure 2022546609000674
ステップａ．
Figure 2022546609000675
 先に調製したエーテルザナミビル酸出発物質（０．９０ｇ、１．４３ｍｍｏｌ、実施例２２に記載のもの）及びＮ－メチルモルホリン（０．２３ｍＬ、２．１４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（３５ｍＬ）に溶解させ、窒素雰囲気下、０℃（氷水浴）で冷却した。シリンジでクロロギ酸イソブチル（２ｍＬのＤＣＭの中に０．２４ｍＬ、１．８５ｍｍｏｌ）を５分の期間をかけて滴加した。混合物を０℃で３０分間撹拌し、次いで周囲温度で１５分間撹拌し、次いで０℃に冷却し、そうして水素化ホウ素ナトリウム（５ｍＬのメタノールに溶解している５４０ｍｇ、１４．３ｍｍｏｌ）を５分かけて滴加した。反応物を１５分間撹拌し、この時点で（ＬＣ／ＭＳによれば）全ての出発物質が消費された。数滴（約１ｍＬ）の氷酢酸を添加して混合物を酸性化した（ｐＨ約５）。混合物を酢酸エチル及び水で希釈し、酢酸エチルで（３回）抽出した。有機層をブラインで洗浄し、有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、ロータリーエバポレータで濃縮した。粗製材料をシリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、まずはセライト上で乾燥させ、次いで０％～１０％のメタノールを含んだＤＣＭで３０分かけて溶離させた。収率０．６６ｇ、７５％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝６１７．２。
ステップｂ．

Figure 2022546609000676
 先のステップからの生成物（０．６６ｇ、１．１０ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのＤＣＭの中に含んだ撹拌混合物に、トリエチルアミン（０．３０ｍＬ、１．３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を窒素雰囲気下で０℃に冷却し（氷水浴）、その後、シリンジでのメシルクロリド（０．１５ｇ、１．３ｍｍｏｌ）の滴加によって５分かけて処理した。氷浴を取り外し、反応物を４５分間撹拌した。反応物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液でクエンチさせ、その後、ＤＣＭで抽出した（３回）。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ロータリーエバポレータで濃縮した。収率０．７４ｇ、９９％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝６９５．２。中間体を精製せずに次のステップへ移した。
ステップｃ．
Figure 2022546609000677
 先のステップからのメシラート（０．７４ｇ、１．１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍＬ）中で８０℃で３当量のアジ化ナトリウム（０．２１ｇ、３．３ｍｍｏｌ）と共に５時間撹拌した。混合物を水で希釈し、ＤＣＭで抽出した（３回）。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。収率０．６７ｇ、９５％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝６４２．４。アジドを精製せずに次のステップへ移した。
ステップｄ．
Figure 2022546609000678
 先のステップからのアジド（０．６７ｇ、１．０４ｍｍｏｌ）を、１気圧の水素ガス下、リンドラー触媒（３００ｍｇ）の存在下で１２時間メタノール（２０ｍＬ）中で撹拌した。混合物をセライトで濾過し、濃縮して表題化合物を透明な油として得た。アミンを精製せずに次のステップへ移した。収率０．３７ｇ、３ステップで５４％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝６１６．２。
ステップｅ．
Figure 2022546609000679
 ＥＤＣ（１５０ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）を、先のステップからのアミン（３７０ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）と、プロパルギル－ｐｅｇ４－カルボン酸（１８８ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）と、トリエチルアミン（０．１００ｍＬ、０．７２ｍｍｏＬ）とがＤＭＦ（４ｍＬ）に溶解している撹拌溶液に添加した。反応物を周囲温度で２時間撹拌し、次いでそのままＲＰＬＣ（調整剤なし、１０％～９５％のアセトニトリル／水、３０分勾配）で精製した。純粋な画分を溜め、凍結乾燥させ、そのまま次のステップへ移した。収率４９０ｍｇ、８０％。ＬＣ／ＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝８５８．２。
ステップｆ．
Figure 2022546609000680
 先のステップからの生成物（４９０ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）を含んだＴＦＡ（４ｍＬ）を４５分間撹拌し、次いで濃縮し、ロータリーエバポレータでメタノール（３倍）と共沸させた。ＬＣ／ＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝６５８．２。残渣を、ＬｉＯＨ（４３ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）を含有する１／１のメタノール／水の中で３０分間撹拌した。反応物を数滴の氷酢酸で中和し、ロータリーエバポレータで体積を半分に減らした。粗生成物を半分取ＨＰＬＣ（０％～７５％のアセトニトリル／水、０．１％のＴＦＡ、３０分勾配）によって精製した。純粋な画分を溜め、凍結乾燥させて表題化合物を得た。収率１０５ｍｇ、３ステップで２９％。ＬＣ／ＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝６１８．２。
実施例１１９．Ｉｎｔ－６８の合成
Figure 2022546609000681
ステップａ．
Figure 2022546609000682
 クロロギ酸ｐ－ニトロフェニル（０．２３ｇ、１．１４ｍｍｏｌ）を、第一級アルコール（０．４７ｇ、０．７６ｍｍｏｌ、実施例１１８に記載のもの）とトリエチルアミン（０．２１ｍＬ、１．５２ｍｍｏｌ）とがＤＣＭ（１５ｍＬ、無水）に溶解している撹拌混合物に添加した。反応物を１時間撹拌し、その後、追加でトリメチルアミン（０．２１ｍＬ）及びクロロギ酸ｐ－ニトロフェニル（２３０ｍｇ）を添加し、撹拌をもう１時間継続し、この時に混合物を水で希釈しＤＣＭで抽出した（３回）。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒をロータリーエバポレーションによって除去した。粗残渣をＤＣＭ（３ｍＬ）に溶解させ、セライト上に載せ、シリカゲルクロマトグラフィー（０％～７０％の酢酸エチル／ヘキサン、３０分勾配）によって精製した。純粋な画分を溜め、濃縮して表題化合物を白色の固体として得た。収率５２５ｍｇ、８８％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝７８２．２。
ステップｂ．
Figure 2022546609000683
 トリエチルアミン（０．１４ｍＬ、０．９７ｍｍｏｌ）を、プロパルギル－ｐｅｇ４－アミン（１８１ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）を１ｍＬのアセトニトリルの中に含んだ撹拌溶液に添加した。トリエチルアミン／プロパルギル－ｐｅｇ４－アミン混合物を先のステップからの生成物（２ｍＬのアセトニトリルの中に含まれた５１０ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）に添加し、１時間撹拌し、この時点で全ての出発物質が消費された。溶媒をロータリーエバポレータで除去した。粗残渣をＲＰＬＣ（２０～９５％のアセトニトリル／水、３０分勾配、調整剤なし）で精製した。収率４７５ｍｇ、８３％。ＬＣ／ＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝８７４．２。
ステップｃ．
Figure 2022546609000684
 先のステップからの生成物（４７５ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（５ｍＬ）中で２時間撹拌し、次いで濃縮し、ロータリーエバポレータでメタノール（３倍）と共沸させた。ＬＣ／ＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝６７４．２。残渣を、ＬｉＯＨ（４９ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）を含有するメタノール／水の１：１混合物で３０分間撹拌した。反応を氷酢酸で中和し、その後、ロータリーエバポレーションによって濃縮した。生成物を半分取ＨＰＬＣ（０％～７５％のアセトニトリル／水、０．１％のＴＦＡ、３０分勾配）によって精製した。純粋な画分を溜め、凍結乾燥させた。収率２０４ｍｇ、５９％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝６３４．２。
実施例１２０ Ｉｎｔ－７７の合成
Figure 2022546609000685
ステップａ．
Figure 2022546609000686
 ＨＡＴＵ（１．５ｍＬのＤＭＦの中に０．４４ｇ、１．１６ｍｍｏｌ）を、プロパルギル－ｐｅｇ４－アミン（０．２４ｇ、１．０５ｍｍｏｌ）と、ビス－Ｂｏｃ－Ｄ－オルニチン（０．３５ｇ、１．０５ｍｍｏｌ）と、トリエチルアミン（０．５９ｍＬ、４．２１ｍｍｏｌ）とをＤＭＦ（２ｍＬ）中に含んだ撹拌溶液に添加した。反応物を周囲温度で１時間撹拌し、次いでそのままＲＰＬＣ（５％～９０％のアセトニトリル／水、０．１％のＴＦＡ、３５分勾配）で精製した。純粋な画分を溜め、凍結乾燥させて生成物を粘稠な透明の油として得た。ＬＣ／ＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝５４６．２。
Ｂｏｃ保護された中間体を、４ＮのＨＣＬを含んだジオキサン（１０ｍＬ）の中で４５分分間、周囲温度で撹拌した。溶媒をロータリーエバポレーションによって除去し、その後、得られた残渣をＤＩ水（２０ｍＬ）に溶解させ、冷凍し、凍結乾燥させて生成物を透明な油として得た。収率３１０ｍｇ、２ステップで７０％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３４６．２。
ステップｂ．
Figure 2022546609000687
 先のステップからの生成物（９６ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）と、トリエチルアミン（０．１５ｍＬ、１．１１ｍｍｏｌ）とを含んだアセトニトリル（２ｍＬ）を、ザナミビルのｐ－ニトロフェニル炭酸エステルの撹拌溶液（６ｍＬのアセトニトリルの中に４３５ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ、実施例１１８に記載のもの）に添加し、周囲温度で１２時間、次いで８０℃で２時間撹拌した。溶媒を除去し、粗残渣をＲＰＬＣ（調整剤なし、１０～９５％のアセトニトリル／水、３５分勾配）によって精製した。純粋な画分を溜め、ロータリーエバポレータで濃縮した。ＬＣ／ＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝８１５．８。
この中間体をＴＦＡ（５ｍＬ）中で４５分間撹拌し、次いで濃縮し、高真空下で乾燥させた。ＬＣ／ＭＳでの実測イオン［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝６１５．８。
このＴＦＡ塩を、ＬｉＯＨ（２７ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）を含有する（１／１）ＭｅＯＨ／ＤＩ水（５ｍＬ）の中で３０分間、０℃で撹拌した。混合物を氷酢酸で酸性化した（ｐＨ約５）。メタノールをロータリーエバポレーションによって除去し、得られた残渣を半分取ＨＰＬＣ（５％～７０％のアセトニトリル／水、０．１％のＴＦＡ、３５分勾配）によって精製した。純粋な画分を溜め、凍結乾燥させた。収率３５ｍｇ、３ステップで１１％。ＬＣ／ＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝５７５．８。
実施例１２１．Ｉｎｔ－７８の合成
Figure 2022546609000688
ステップａ．
Figure 2022546609000689
 プロパルギル－Ｐｅｇ４－酸（６４０ｍｇ、２．４６ｍｍｏｌ）、ジオール－ＨＣｌ塩（３５０ｍｇ、２．４６ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（４７１ｍｇ、２．４６ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３７７ｍｇ、２．４６ｍｍｏｌ）、及びトリエチルアミン（２４９ｍｇ、２．４６ｍｍｏｌ）を周囲温度で４時間、ＤＭＦ（３ｍＬ）中で撹拌した。混合物をそのままＲＰＬＣ（調整剤なし、０％～８０％のアセトニトリル／水、３５分勾配）で精製した。純粋な画分を溜め、濃縮して透明な油を得た。収率５８０ｍｇ、６８％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３４８．４。
ステップｂ．
Figure 2022546609000690
 クロロギ酸ｐ－ニトロフェニル（１．２３ｇ、１．２５ｍｍｏｌ）を、先のステップからの生成物（５３０ｍｇ、６．１０ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（９２５ｍｇ、９．１５ｍｍｏｌ）とをＤＣＭ（２５ｍＬ）の中に含んだ撹拌溶液に添加し、その後、窒素雰囲気下で０℃に冷却した。混合物を０℃で１５分間、次いで室温で２時間撹拌した。反応物を脱イオン水で希釈し、ＤＣＭ（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。粗残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（１０％～１００％の酢酸エチル／ヘキサン、２５分勾配）によって精製して生成物を白色の固体として得た。収率２５０ｍｇ、２４％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝６７８．２。
ステップｃ．
Figure 2022546609000691
 アミン官能化ザナミビル（５０５ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ、実施例１１８に記載のもの）とトリエチルアミン（０．１５ｍＬ、１．１１ｍｍｏｌ）とを含んだアセトニトリル（２ｍＬ）を、先のステップの生成物（２２０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１０ｍＬ）中に含んだ撹拌溶液に添加し、周囲温度で４時間撹拌した。反応物をロータリーエバポレータで濃縮した。得られた残渣をＲＰＬＣ（調整剤なし、１５％～９５％のアセトニトリル／水、３５分勾配）によって精製した。純粋な画分を溜め、ロータリーエバポレータで濃縮した。ＬＣ／ＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝８１５．２。
この中間体をＴＦＡ（５ｍＬ）中で４５分間撹拌し、次いで濃縮し、高真空下で乾燥させた。ＬＣ／ＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝６１５．２。
得られたＴＦＡ塩を、ＬｉＯＨ（７１ｍｇ、２．９８ｍｍｏｌ）を含有する（１／１）ＭｅＯＨ／ＤＩ水（５ｍＬ）中で３０分間、０℃で撹拌した。混合物を氷酢酸で酸性化した（ｐＨ約５）。メタノールをロータリーエバポレータによって除去し、半分取ＨＰＬＣ（５％～７０％のアセトニトリル／水、０．１％のＴＦＡ、３５分勾配）によって精製した。純粋な画分を溜め、凍結乾燥させた。収率１２５ｍｇ、３ステップで２９％。ＬＣ／ＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝５７５．８。
実施例１２２．Ｉｎｔ－４ａの合成
Figure 2022546609000692
ステップａ．
Figure 2022546609000693
 プロパルギル－Ｐｅｇ４－アミン（１６５ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）を、ザナミビルのｐ－ニトロフェニル炭酸エステル（３５０ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ，実施例１０９に記載のもの）を含んだアセトニトリル（２０ｍＬ）の撹拌溶液に添加した。反応物を周囲温度で１時間撹拌し、その後、溶媒をロータリーエバポレータで除去した。残渣をＲＰＬＣ（調整剤なし、１０％～９５％のアセトニトリル／水、３０分勾配）によって精製した。純粋な画分を溜め、凍結乾燥させて、ｂｏｃ保護された中間体を白色の固体として得た。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝８３０．２。
この中間体をＴＦＡ（５ｍＬ）中で３０分間、周囲温度で撹拌した。溶媒をロータリーエバポレータによって除去し、残渣をＲＰＬＣ（１０％～９５％のアセトニトリル／水、０．１％のＴＦＡ、３０分勾配）によって精製した。純粋な画分を溜め、凍結乾燥させて生成物を白色の固体として得た。収率１５５ｍｇ、２ステップで５２％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝６３０．２。
ステップｂ．
Figure 2022546609000694
 先のステップからの生成物（１４０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を、ＬｉＯＨ（２１ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）を含有するメタノール：水（８ｍＬ）の１：３混合物中で２０分間、０℃で撹拌した。混合物を数滴の氷酢酸で酸性化し、ロータリーエバポレータで濃縮した。粗製材料を半分取ＨＰＬＣ（５％～９５％のアセトニトリル／水、０．１％のＴＦＡ、３０分勾配）によって精製した。純粋な画分を溜め、凍結乾燥させて生成物を白色の固体として得た。収率６０ｍｇ、４５％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝５９０．２。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ５．８６（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ），４．９９（ｄｄ，Ｊ＝９．０，２．７Ｈｚ，１Ｈ），４．５５（ｄｄ，Ｊ＝９．７，２．７Ｈｚ，１Ｈ），４．３８（ｄｄ，Ｊ＝８．６，２．６Ｈｚ，１Ｈ），４．２４－４．１４（ｍ，１Ｈ），４．１９（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，２Ｈ），４．０２－３．９８（ｍ，１Ｈ），３．７４－３．５９（ｍ，１３Ｈ），３．５４（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．５２－３．４８（ｍ，１Ｈ），３．２９－３．２２（ｍ，２Ｈ），２．８４（ｔ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），１．９６（ｓ，３Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ１７２．３３，１６３．６８，１５７．５４，１５６．５８，１０６．８０，７９．２３，７５．９１，７４．５６，７０．１８，７０．１３，６９．９６，６９．８７，６９．５９，６９．５１，６９．１４，６８．７４，６２．９８，５７．６７，５１．１１，４０．５４，２１．３７。
実施例１２３．Ｉｎｔ－４ｂの合成
Figure 2022546609000695
 Ｐｅｇ官能化中間体（１００ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ、実施例１２２に記載のもの）を、ＬｉＯＨ（１２ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）を含有するメタノール：水（５ｍＬ）の１：３混合物中で２時間、周囲温度で撹拌した。混合物を氷酢酸で酸性化し、ロータリーエバポレータによって濃縮した。粗製材料をＲＰＬＣ（脱イオン水中５～９５％のアセトニトリル、０．１％のＴＦＡ、３０分勾配）によって精製した。純粋な画分を溜め、凍結乾燥させて生成物を白色の固体として得た。収率２１ｍｇ、３１％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝５９０．２。
１Ｈ ＮＭＲ（メタノール－ｄ４）δ：５．８６（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ），４．４８（ｄｄ，Ｊ＝８．６，２．７Ｈｚ，１Ｈ），４．４２（ｄｄ，Ｊ＝９．６，１．４Ｈｚ，１Ｈ），４．３８（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ），４．２２－４．１９（ｍ，１Ｈ），４．１９（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，２Ｈ），４．１６－４．１２（ｄｄ，Ｊ＝１１．５，６Ｈｚ，１Ｈ），４．０９－４．０２（ｍ，１Ｈ），３．７５－３．５８（ｍ，１３Ｈ），３．５５（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），３．３３－３．２９（ｍ，２Ｈ），２．８４（ｔ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），２．０２（ｓ，３Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ１７２．９４，１６３．８２，１５７．９０，１５７．５３，１０６．８０，７９．２３，７６．１８，７４．５５，７０．１９，７０．１３，６９．９６，６９．９０，６９．６１，６８．９６，６８．７４，６８．１７，６６．６９，５７．６７，５０．１１，４０．４３，２１．３３。
実施例１２４．アジドＦｃの合成の一般手順
ＰＥＧ４－アジドＮＨＳエステル（０．０５０Ｍ）のＤＭＦ／ＰＢＳ溶液の調製：１６．７５ｍｇのＰＥＧ４－アジドＮＨＳエステルを０．１００ｍＬのＤＭＦに０℃で溶解させ、０℃でＰＢＳ １×緩衝液を添加することによって０．８３７ｍＬに希釈した。この溶液を、このＰＥＧ４－アジドＮＨＳエステルのＰＢＳ溶液の当量を調節することによる様々なＤＡＲ値を有する他のＰＥＧ４－アジドＦｃの調製のために使用した。
本明細書に記載の任意の複合体のためのＦｃをコードする核酸構築物は、Ｃ末端リジン残基及びＮ末端ネズミＩｇＧシグナル配列を含むＦｃのアミノ酸配列（例えば配列番号４８～５３のいずれか１つ）をコードする核酸を含み得る。発現時に複合体のＦｃのＣ末端リジン及びＮ末端ネズミＩｇＧシグナル配列はタンパク質分解的に切断され、Ｌｙｓ４４７（例えばＣ末端リジン残基）及びＮ末端ネズミＩｇＧシグナル配列を欠く配列を有するＦｃをもたらす。Ｃ末端リジンの存在または非存在は、Ｆｃまたは対応する複合体の特質を変化させない。
配列番号４８のｈ－ＩｇＧ１ Ｆｃ（８．８００ｍＬのｐＨ７．４ ＰＢＳの中に１０７．２ｍｇ、ＭＷ約５７８９１Ｄａ、１．８５２μｍｏｌ）の前処理：Ｆｃ溶液を４つの遠心濃縮器（３０，０００ＭＷＣＯ、１５ｍＬ）に移し、ＰＢＳ ×１緩衝液で１５ｍＬに希釈し、濃縮して約１．５ｍＬの体積に濃縮した。残渣をＰＢＳ ｐＨ７．４で１：１０に希釈し、再び濃縮した。この洗浄手順を合計４回繰り返し、その後、８．８０ｍＬに希釈した。
ＰＥＧ４－アジドＦｃの調製：０．０５０ＭのＰＥＧ４－アジドＮＨＳエステルのＰＢＳ緩衝液溶液（０．５９３ｍＬ、２９．６μｍｏｌ、１６当量）をｈ－ＩｇＧ１ Ｆｃ（配列番号４８）の上記溶液に添加し、混合物を周囲温度で２時間、振盪回転させた。溶液を、４つの遠心濃縮器（３０，０００ＭＷＣＯ、１５ｍＬ）を使用して約１．５ｍＬの体積に濃縮した。粗混合物をＰＢＳ ｐＨ７．４で１：１０に希釈し、再び濃縮した。この洗浄手順を合計３回繰り返した。濃縮されたＦｃ－ＰＥＧ４－アジドをｐＨ７．４のＰＢＳ緩衝液で８．８０ｍＬに希釈してクリック複合体形成に備えた。精製された材料を、ＮＡＮＯＤＲＯＰ（商標）ＵＶ可視分光光度計を使用して（ｈ－ＩｇＧ１のアミノ酸配列に基づいて算出された消衰係数を用いて）定量した。精製後の収量は定量的であった。
実施例１２５．複合体３４の合成
アジド官能化Ｆｃ（４０ｍｇ、２．５ｍＬ、０．６９μｍｏｌ、実施例１２４のアジドＦｃの一般的調製において記載されているもの、配列番号１８）を、アルキン誘導体化低分子（６．０ｍｇ、８．２３μｍｏｌ、Ｉｎｔ－６７、実施例１１８）が入った１５ｍＬ容の遠心管に加えた。穏やかに撹拌して全ての固体を溶解させた後、混合物を、Ｌ－アスコルビン酸ナトリウム塩（５４ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）と、硫酸銅（ＩＩ）（０．８８ｍｇ、５．５μｍｏｌ）と、ＢＴＴＡ（９．４ｍｇ、２２μｍｏｌ）とをＰＢＳ ７．４緩衝液（１．０９ｍＬ）の中に含んだ溶液に添加した。得られた混合物を一晩穏やかに回転させた。次いでそれをプロテインＡカラムで親和性クロマトグラフィーによって精製し、続いてサイズ排除クロマトグラフィーで精製した（一般複合体精製プロトコール参照）。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析で平均質量は６４，６７８Ｄａであった（ＤＡＲ＝７．２）。収量２４ｍｇ、収率５４％。
実施例１２６．複合体３５の合成
アジド官能化Ｆｃ（４０ｍｇ、２．５ｍＬ、０．６９μｍｏｌ、実施例１２４のアジドＦｃの一般的調製において記載されているもの、配列番号１８）を、アルキン誘導体化低分子（６．１ｍｇ、８．２３μｍｏｌ、Ｉｎｔ－６８実施例１１９）が入った１５ｍＬ容の遠心管に加えた。穏やかに撹拌して全ての固体を溶解させた後、混合物を、Ｌ－アスコルビン酸ナトリウム塩（５４ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）と、硫酸銅（ＩＩ）（０．８８ｍｇ、５．５μｍｏｌ）と、ＢＴＴＡ（９．４ｍｇ、２２μｍｏｌ）とをＰＢＳ ７．４緩衝液（１．０９ｍＬ）の中に含んだ溶液に添加した。得られた溶液を一晩穏やかに回転させた。次いでそれをプロテインＡカラムで親和性クロマトグラフィーによって精製し、続いてサイズ排除クロマトグラフィーで精製した（一般複合体精製プロトコール参照）。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析で平均質量は６４，８３０Ｄａであった（ＤＡＲ＝７．３）。収量２３ｍｇ、収率５２％。
実施例１２７．複合体３６の合成
アジド官能化Ｆｃ（５０ｍｇ、２．５ｍＬ、０．８６μｍｏｌ、実施例１２４のアジドＦｃの一般的調製において記載されているもの、配列番号１８）を、アルキン誘導体化低分子（７．１ｍｇ、５．２μｍｏｌ、Ｉｎｔ－７７実施例１２０）が入った１５ｍＬ容の遠心管に加えた。穏やかに撹拌して全ての固体を溶解させた後、混合物を、Ｌ－アスコルビン酸ナトリウム塩（６８ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）と、硫酸銅（ＩＩ）（１．１ｍｇ、６．９μｍｏｌ）と、ＢＴＴＡ（１２ｍｇ、２７μｍｏｌ）とをＰＢＳ ７．４緩衝液（１．３７ｍＬ）の中に含んだ溶液に添加した。得られた混合物を一晩穏やかに回転させた。次いでそれをプロテインＡカラムで親和性クロマトグラフィーによって精製し、続いてサイズ排除クロマトグラフィーで精製した（一般複合体精製プロトコール参照）。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析で平均質量は６３，３００Ｄａであった（ＤＡＲ＝３．６）。収量３７ｍｇ、収率７３％。
実施例１２８．複合体３７の合成
アジド官能化Ｆｃ（７０ｍｇ、２．５ｍＬ、１．２μｍｏｌ、実施例１２４のアジドＦｃの一般的調製において記載されているもの、配列番号１８）を、アルキン誘導体化低分子（１３．３ｍｇ、９．６μｍｏｌ、Ｉｎｔ ７８、実施例１２１）が入った１５ｍＬ容の遠心管に加えた。穏やかに撹拌して全ての固体を溶解させた後、混合物を、Ｌ－アスコルビン酸ナトリウム塩（９６ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）と、硫酸銅（ＩＩ）（１．６ｍｇ、１０μｍｏｌ）と、ＢＴＴＡ（１７ｍｇ、３８μｍｏｌ）とをＰＢＳ ７．４緩衝液（１．９２ｍＬ）の中に含んだ溶液に添加した。得られた混合物を一晩穏やかに振盪した。次いでそれをプロテインＡカラムで親和性クロマトグラフィーによって精製し、続いてサイズ排除クロマトグラフィーで精製した（一般複合体精製プロトコール参照）。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析で平均質量は６３，５７４Ｄａであった（ＤＡＲ＝３．６）。収量４２ｍｇ、収率６１％。
実施例１２９．複合体３３の合成
クリック試薬溶液の調製：０．００５０ＭのＣｕＳＯ４をＰＢＳ緩衝液中に含んだ溶液：１０．０ｍｇのＣｕＳＯ４を１２．５３ｍＬのＰＢＳに溶解させ、その後、このＣｕＳＯ４溶液を５．００ｍＬ取り、４３．１ｍｇのＢＴＴＡＡ（ＣＡＳ番号１３３４１７９－８５－９）及び２４７．５ｍｇのアスコルビン酸ナトリウムを添加してクリック試薬溶液（０．００５０ＭのＣｕＳＯ４、０．０２０ＭのＢＴＴＡＡ、及び０．２５Ｍのアスコルビン酸ナトリウム）を得た。
アジド官能化Ｆｃ（１０４．９ｍｇ、８．６０ｍＬ、１８．１μｍｏｌ、実施例１２４、配列番号７３）の溶液を、アルキン誘導体化低分子（２９．７ｍｇ、１９．９μｍｏｌ、実施例１００に記載のもの、Ｆｃ上のアジド１つにつき２．５当量）が入った１５ｍＬ容の遠心管に加えた。穏やかに振盪して全ての固体を溶解させた後、混合物を、（Ｌ－アスコルビン酸ナトリウム、０．２５Ｍ、１０８６μｍｏｌ、硫酸銅（ＩＩ）０．００５０Ｍ、２１．７μｍｏｌ、及びＢＴＴＡＡ ０．０２０Ｍ、８６．９μｍｏｌ）のクリック試薬溶液（４．３４ｍＬ）で処理した。得られた混合物を室温で穏やかに６時間回転させた。それをプロテインＡカラムで親和性クロマトグラフィーによって精製し、続いてサイズ排除クロマトグラフィーで精製した（一般複合体精製プロトコール参照）。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析で平均質量は６４５５０Ｄａであった（ＤＡＲ＝４．６）。９８％純度で収量９０．７ｍｇ。得られた複合体は図６１に描かれている。
複合体３３のためのＦｃをコードする核酸構築物は、Ｃ末端リジン残基を含むものである配列番号６４のアミノ酸配列をコードする核酸を含んでいた。発現時に複合体３３のＦｃのＣ末端リジンはタンパク質分解的に切断され、配列番号７３の配列を有するＦｃをもたらす。Ｃ末端リジンの存在または非存在は、Ｆｃまたは対応する複合体の特質を変化させない。
実施例１３０．致死性マウスモデルにおけるインフルエンザＢ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／６０／２００８に対する複合体３３の有効性
試験品を雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）における致死性Ｂ型インフルエンザのインフルエンザ感染症に対して評価した。攻撃ウイルス（Ｂ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／６０／２００８）は、マウスに致死性感染症を引き起こすことができるマウス適合型単離物である。実験は、各々マウス５匹の群を１０個含んでいた。０日目に全てのマウスを、イソフルランで麻酔した後にＬＤ９５の３倍のウイルスで５０μｌの体積の鼻腔内接種によって攻撃した（マウス１匹あたりおよそ１Ｅ５個のウイルス）。
ウイルス攻撃の２時間後に複合体３３（実施例１２９）、ビヒクル（ＰＢＳ）またはＦｃのみの対照（ｈＩｇＧ１ Ｆｃ）の単回静脈注射処置を全ての群に施した。別の群には、オセルタミビル（２０ｍｇ／ｋｇ、５日間にわたって１日２回）による経口的処置をウイルス攻撃の８時間後から始めた。試験では、複合体３３の７つの異なる用量濃度（１０、３、１、０．３、０．１、０．０３及び０．０１ｍｇ／ｋｇ）を評価した。マウスを２週間追跡評価し、体重減少が２０％を超えるかまたは瀕死状態にあると認められる動物を死亡と記録した。動物の全身の健康を追跡評価するために体重も記録した。
ビヒクルまたはＦｃのみの対照で処置した全てのマウスは予想通り８日目までに死に至った。対照的に、複合体３３を施した全てのマウスは、１０ｍｇ／ｋｇから０．３ｍｇ／ｋｇの低さまでの単回静脈注射用量を受けた後に試験の継続期間にわたって完全に保護された（表４８）。対照的に、オセルタミビル処置群は、実験を通してこれらのマウスが受けた累積用量が２００ｍｇ／ｋｇであったにもかかわらず、４０％の生存率しかもたらさなかった。複合体３３の力価は毎日の体重測定によってさらに支持された（表４９、群内での最初の死亡までのデータのみ示す）。０．３ｍｇ／ｋｇの複合体３３で処理したマウスは、一日で７％の最大値に達する一時的体重減少を呈したにすぎなかった。まとめると、この試験は、Ｙａｍａｇａｔａ系統のインフルエンザ株に対する複合体３３の、Ｂ型インフルエンザ感染を示す２つのパラメータ（生存及び体重）によって測定される力価を実証している。

Figure 2022546609000696
Figure 2022546609000697
実施例１３１．位置異性体の特徴記載
単量体及び二量体中間体は、特定の位置異性体または位置異性体の混合物として製造され得る。実施例１００～１０２には、Ｉｎｔ－７位置異性体（Ｃ７－Ｃ７、実施例１００；Ｃ７－Ｃ９、実施例１０１；Ｃ９－Ｃ９、実施例１０２；最適化されたＣ７－Ｃ７、実施例１０３）をいかにして調製するかを示した。それらに記載されている方法は、本明細書に記載の任意の中間体の位置異性体の混合物を分離するために用いられ得る。先に記載した複合前中間体の合成でのＣ７及びＣ９連結単量体、ならびにＣ７－Ｃ７、Ｃ７－Ｃ９及びＣ９－Ｃ９連結二量体の相対パーセント（％）量の特徴記載を表５０に示す。

Figure 2022546609000698
実施例１３２．致死性マウスモデルにおけるインフルエンザＡ／Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／８／３４（Ｈ１Ｎ１）に対する皮下投薬された複合体３３の有効性
複合体３３を雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）における致死性ＩＡＶ Ｈ１Ｎ１インフルエンザ感染症に対して評価した。攻撃ウイルス（Ａ／Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／８／１９３４）は、マウスに致死性感染症を引き起こすことができるマウス適合型単離物である。実験はマウス５匹の群を６つ含んでいた。０日目に全てのマウスを、ケタミン／キシラジン（それぞれ１５０及び１０ｍｇ／ｋｇ）の混合物で麻酔した後にＬＤ９５の３倍のウイルスで３０μｌの体積の鼻腔内接種によって攻撃した。死亡及び体重を毎日記録し、体重が２０％減少した動物がいれば死亡と記録した。ウイルス攻撃の２時間後に試験群に複合体３３、ｈＩｇＧ１ Ｆｃ対照、またはビヒクル（ＰＢＳ）の単回皮下注射（ＳＣ）処置を施した。試験デザインを表５１にまとめる。

Figure 2022546609000699
予想通り、ビヒクルまたはｈＩｇＧ１ Ｆｃ対照を受けているマウスは６～７日目に感染症で死亡した（表５２）。しかしながら、複合体３３で処置したマウスは１、０．３及び０．１ｍｇ／ｋｇの用量レベルで完全に保護された。複合体３３に関して死亡は０．０３ｍｇ／ｋｇの最低用量濃度でのみみられた。

Figure 2022546609000700
複合体３３の力価は毎日の体重測定によってさらに支持された。予想通り、ビヒクルまたはｈＩｇＧ１ Ｆｃで処置したマウスは定常的な体重減少をそれが２０％を超えるまで呈し、この時にそれを死亡と記録した（表５３）。
対照マウスとは対照的に、１、０．３及び０．１ｍｇ／ｋｇの複合体３３を受けている群は、試験の全体にわたって健常な体重を維持し、８％未満（０．１ｍｇ／ｋｇ用量群、８日目、表５３）よりも大きな一時的体重減少を一度も呈しなかった。生存及び体重測定の両方によって、複合体３３はたったの０．１ｍｇ／ｋｇの単回皮下注射用量でインフルエンザＡ／Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／８／１９３４の致死的攻撃からの堅牢な保護を示した。
Figure 2022546609000701
実施例１３３．Ａ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対する複合体３３の有効性、肺のＰＦＵ負担量及びサイトカインレベル
３Ｅ２ ＰＦＵ／マウス（ＬＤ９５の３倍）のマウス適合型インフルエンザＡ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）で鼻腔内攻撃した６～８週齢の雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）における複合体３３の有効性試験を行った。攻撃の２時間後に複合体３３またはヒトＩｇＧ１ Ｆｃ対照を０．１～３ｍｇ／ｋｇの単回皮下注射（ＳＣ）用量として投与した。オセルタミビルについては、感染の２時間後から始めて４日間にわたって１日２回、経口的に５または５０ｍｇ／ｋｇを投薬した。バロキサビルについては、０．５％のメチルセルロースの中に再懸濁させ、感染の２時間後から始めて４日間にわたって１日２回、経口的に３０ｍｇ／ｋｇを投薬した（表５４）。体重（ＢＷ）を４日間記録した（図。図６２のＡ～Ｂ。感染の４日後にマウスをＣＯ２によって殺し、両方の肺葉を採取した。ＭａｇＮＡ Ｌｙｓｅｒ（Ｒｏｃｈｅ）を使用して肺を１ｍＬのＰＢＳの中で１ｍｍのシリカビーズによってホモジナイズした。ホモジナイゼーションは６，０００ｒｐｍで６０秒間行い、実施の合間は氷上で５分間冷却した。肺ホモジナイゼーションの後、管を１０分間、６００ｘｇで遠心分離にかけ、上清を新しい管に移した。
Figure 2022546609000702
ＰＦＵの決定のために、肺ホモジネートの上清を、１０－１～１０－６の範囲の感染用緩衝液で希釈した。ウイルス希釈液１００μＬを２４ウェルプレート内のコンフルエントなＭＤＣＫ細胞の単層に添加し、１５分ごとに振盪しながら室温で１時間インキュベートした。ウイルスを除去した後、Ａｖｉｃｅｌを含有する液体オーバーレイ培地をＭＤＣＫ細胞に添加した。細胞を３７℃、５％ＣＯ２で４０時間インキュベートした。インキュベーション後、培地を除去し、細胞をクリスタルバイオレットで染色してプラークの数を数えた。肺の重量に対してプラーク形成単位（ＰＦＵ）を算出した（ＰＦＵ／ｇ肺）。
サイトカイン分析のために、９６ウェルプレート内で肺ホモジネートの上清を２倍に段階希釈した。ＩＮＦ－γ、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６、ＭＩＰ－１α及びＭＣＰ－１のサイトカインレベルをＥＬＩＳＡによって製造者の指示（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）に従って決定した。マウスモデルにおけるインフルエンザによる致死的攻撃の後、肺ＰＦＵ負担量（図６３のＡ～Ｂ）及び肺サイトカインレベルを感染後４日目に決定した（それぞれ表５５、表５６）。複合体３３はウイルス負担量の用量依存的対数減少を示し、０．１ｍｇ／ｋｇで０．７、０．３ｍｇ／ｋｇで１．８８、１ｍｇ／ｋｇで３、３ｍｇ／ｋｇで３．８となった。５ｍｇ／ｋｇ及び５０ｍｇ／ｋｇのオセルタミビルはウイルス負担量に対する中等度の効果を有し、対数減少がそれぞれ０．８６及び２となった。バロキサビルはウイルス負担量を検出限界１ｅ２ ＰＦＵ／ｍＬ未満に減少させ、それによってウイルス負担量をＰＢＳ対照に比べて５．９９対数よりも大きく減少させた。
予想通り、陰性対照であるＰＢＳとｈＩｇＧ１ Ｆｃとの間には、生物学的に重要な差異は認められなかった。
マウスモデルにおいてＡ型インフルエンザで攻撃して感染後４日目に複合体３３は用量依存的にウイルス負担量を減少させる（表５５、図６４のＡ～Ｂ）。同様に、マウスモデルにおいてＡ型インフルエンザで攻撃して感染後４日目に複合体３３は、未感染対照と比較して用量依存的なＴＮＦ－α、ＩＬ－６、ＩＮＦ－γ、ＭＣＰ－１及びＭＩＰ－１αのサイトカインレベル（それぞれ図６５のＡ～Ｅ）の倍数減少を示した（表５６）。
Figure 2022546609000703
Figure 2022546609000704
複合体３３の３ｍｇ／ｋｇの最高試験濃度は、未感染対照マウスと同様に感染期間全体を通して体重減少がないことを示した（表５７）。
Figure 2022546609000705
実施例１３４．致死性重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）マウスモデルにおけるＡ型インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）に対する複合体３３の有効性
試験品を雌のＢＡＬＢ／ｃ ｓｃｉｄマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）における致死性Ａ型インフルエンザのインフルエンザ感染症に対して評価した。攻撃ウイルス（Ａ／Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／８／１９３４）は、マウスに致死性感染症を引き起こすことができるマウス適合型単離物である。実験は、各々マウス５匹の群を１１個含んでいた。０日目に全てのマウスを、ケタミン／キシラジン（それぞれ１５０及び１０ｍｇ／ｋｇ）の混合物で麻酔した後にＬＤ９５の３倍のウイルスで３０μｌの体積の鼻腔内接種によって攻撃した（マウス１匹あたりおよそ１Ｅ３個のウイルス）。
ウイルス攻撃の２時間後、群にビヒクル（ＰＢＳ）、ｈＩｇＧ１ Ｆｃ対照または複合体３３（３、１、０．３、０．１、０．０３ｍｇ／ｋｇ）の単回皮下注射処置を施した。試験の別個の部門は、バロキサビル マルボキシル（ＤＣ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｓｈａｎｇｈａｉ，Ｃｈｉｎａ）で同じくウイルス攻撃の２時間後から始めて１日２回、１日間にわたって経口的に処置したマウスの３つの群からなっていた。マウスを２週間にわたって追跡評価し、体重減少が２０％を超えるかまたは瀕死状態にあると認められる動物を死亡と記録した。
試験の最後（１４日目）において、複合体３３を受けているマウスは３～０．１ｍｇ／ｋｇの全ての用量濃度で完全に保護された（表５８）。複合体３３は、０．０３ｍｇ／ｋｇの最低試験濃度で致死的ウイルス攻撃からの保護に失敗したのみであった。予想通り、ビヒクルまたはｈＩｇＧ１ Ｆｃを受けている群は保護されなかった。バロキサビルで処置したマウスも、より著しく高い６０及び２０ｍｇ／ｋｇの累積用量においてではあるが保護され、６ｍｇ／ｋｇの合計用量では１４日目に４０％のマウスしか生き残っていなかった。
Figure 2022546609000706
この重症免疫不全症のモデルでの複合体３３の力価は、体重に基づいても明らかであった（表５９）。死亡記録情報に基づいて完全な保護をもたらす複合体の最低濃度は、０．１ｍｇ／ｋｇであった。この用量レベルでは、群の最大平均体重減少は一時的なものであり、（２日目に起こる）５％未満の減少であった。さらに、１及び３ｍｇ／ｋｇ用量レベルでの群の体重差は未感染マウスと比較して１４日目に２％未満の差を示した。
まとめると、このデータは、致死的攻撃をしたマウスをたった０．１ｍｇ／ｋｇの単回皮下注射用量の複合体で保護することによって複合体３３の力価を実証している。これは、インフルエンザ感染症を排除するのに必須となるＴ及びＢ免疫細胞が完全に欠損したマウスを使用して免疫不全症の重症モデルにおいて成し遂げられた。このデータは、免疫不全患者集団を治療するための複合体３３の使用を支持している。
Figure 2022546609000707
実施例１３５．致死性マウスモデルにおけるインフルエンザＡ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍに対して皮下投薬された複合体３３の有効性
複合体３３を雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）における致死性ＩＡＶ Ｈ１Ｎ１インフルエンザ感染症に対して評価した。攻撃ウイルス（Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ）は、マウスに致死性感染症を引き起こすことができる汎流行型単離物である。実験はマウス５匹の群を６つ含んでいた。０日目に全てのマウスを、ケタミン／キシラジン（それぞれ１５０及び１０ｍｇ／ｋｇ）の混合物で麻酔した後にＬＤ９５の３倍のウイルスで３０μｌの体積の鼻腔内接種によって攻撃した。死亡及び体重を毎日記録し、体重が２０％減少した動物がいれば死亡と記録した。
ウイルス攻撃の２時間後に試験群に複合体３３、ｈＩｇＧ１ Ｆｃ対照、またはビヒクル（ＰＢＳ）の単回皮下注射（ＳＣ）処置を施した。試験デザイン及び用量レベルを表６０にまとめる。

Figure 2022546609000708
予想通り、ビヒクルまたはｈＩｇＧ１ Ｆｃ対照を受けているマウスは６～７日目に感染症で死亡した（表６１）。しかしながら、複合体３３で処置したマウスは、１ｍｇ／ｋｇでは完全に保護され、０．３ではほぼそうであった（生存率８０％）。複合体３３に関して著しい死亡はより低い０．１及び０．０３ｍｇ／ｋｇの用量濃度でのみみられた。

Figure 2022546609000709
複合体３３の力価は毎日の体重測定によってさらに支持された。予想通り、ビヒクルまたはｈＩｇＧ１ Ｆｃで処置したマウスは定常的な体重減少をそれが２０％を超えるまで呈し、この時にそれを死亡と記録した（表６２）。
対照マウスとは対照的に、１ｍｇ／ｋｇの複合体３３を受けているマウスは、３日目をピークとするおよそ１０％の一時的な体重減少を呈したにすぎなかった（表６２）。生存及び体重測定の両方によって、複合体３３は、皮下投与される単回の１ｍｇ／ｋｇの用量でインフルエンザＡ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍの致死的攻撃からの堅牢な保護を示した。この試験で使用した臨床的に重要な汎流行株に対する活性は、重度インフルエンザ感染症の治療における複合体３３の有用性を支持している。

Figure 2022546609000710
実施例１３６．遅い治療の致死性マウスモデルにおけるインフルエンザＡ／Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対して静脈内（ＩＶ）投薬された複合体３３の有効性
複合体３３を雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）における致死性Ａ型インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）感染症に対して評価した。攻撃ウイルス（Ａ／Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／８／１９３４）は、マウスに致死性感染症を引き起こすことができるマウス適合型単離物である。０日目に全てのマウスを、ケタミン／キシラジン（それぞれ１５０及び１０ｍｇ／ｋｇ）の混合物で麻酔した後にＬＤ９５の３倍のウイルスで３０μｌの体積の鼻腔内接種によって攻撃した。死亡及び体重を毎日記録し、体重が２０％減少した動物がいれば死亡と記録した。
試験デザインは表６３に詳しく示されており、複数の部門からなる。対照部門は、ウイルス攻撃の２４時間後に投薬されるビヒクル（ＰＢＳ）及びｈＩｇＧ１ Ｆｃのみの群を含む（未感染群もこの部門の一部であった）。第２部門は、処置開始を２４、４８または７２時間遅らせてヒト化用量の４倍を投薬されるオセルタミビルからなっていた。最終３部門は、１０、３または１ｍｇ／ｋｇの単回静脈注射用量として投与される複合体３３からなっており、各々は上記オセルタミビル部門と同じ計画で投薬された。
予想通り、ビヒクル及びｈＩｇＧ１ Ｆｃはウイルス攻撃の２４時間後に投薬された場合に保護的ではなく、７日目までに全てが死亡した。投薬が２４時間遅れた場合、本発明者らの技量ではオセルタミビルはヒト化用量の４倍（２００ｍｇ／ｋｇの累積用量）であってさえ有効性が部分的でしかなかった（表６４、生存率４０％）。しかしながら、同じ２４時間用量計画で複合体３３は全ての濃度（１０、３及び１ｍｇ／ｋｇ）において完全に保護的であった。
ウイルス攻撃後に投薬がまる４８時間遅れた場合、オセルタミビルがもはや有効ではなかった（生存率０％）一方、複合体３３は１０及び３ｍｇ／ｋｇの用量で８０％保護的であった。投薬が７２時間目まで遅れた場合、１０ｍｇ／ｋｇの用量の複合体３３だけが部分的な保護（４０％）を示した。複合体３３の有効性は、毎日の体重測定に基づいても明らかであった（表６５）。これはＴ＋２４時間の群において特に顕著であり、この場合、どの複合体３３群でも３％未満の減少が認められたが、これは一時的なものであり１日目に起こった。この試験において複合体３３は、インフルエンザの承認治療剤であるオセルタミビルよりも有効である。



Figure 2022546609000711



Figure 2022546609000712
Figure 2022546609000713
実施例１３７．複合体３８（Ｉｎｔ－７３）、複合体３９（Ｉｎｔ－７４）、複合体４０（Ｉｎｔ－７５）及び複合体４１（Ｉｎｔ－７６）の合成
１５ｍｌ容の無菌遠心管に、アスコルビン酸ナトリウム（６８．３ｍｇ、０．３４５ｍｍｏｌ）、ＢＴＴＡＡ（１１．９ｍｇ、０．０２７６ｍｍｏｌ）と、実施例１１４（Ｉｎｔ－７３）、１１５（Ｉｎｔ－７４）、１１６（Ｉｎｔ－７５）または１１７（Ｉｎｔ－７６）からの生成物（０．００９５３ｍｍｏｌ）と、ＰＢＳ ７．４（１ｍｌ）とを充填した。均質になるまで試薬を渦流撹拌し、その後、アジドＦｃ（５０ｍｇ、０．０００８６２４ｍｍｏｌ、実施例１２４に記載のもの、配列番号７３）と混合し、続いてＣｕＳＯ４（１．１ｍｇ、０．００６９ｍｍｏｌ）の水（０．５ｍｌ）溶液と混合した。混合物を１２時間回転させ、その後、プロテインＡカラムで親和性クロマトグラフィーによって精製し、続いてサイズ排除クロマトグラフィーで精製した。複合体をＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析によって特性評価した（典型的にはＤＡＲ＝４．５）。収率は典型的には５０％である。
複合体３８～４１のためのＦｃをコードする核酸構築物は、Ｃ末端リジン残基を含むものである配列番号６４のアミノ酸配列をコードする核酸を含んでいた。発現時に複合体３８～４１のＦｃのＣ末端リジンはタンパク質分解的に切断され、配列番号７３の配列を有するＦｃをもたらす。Ｃ末端リジンの存在または非存在は、Ｆｃまたは対応する複合体の特質を変化させない。
実施例１３８．Ｉｎｔ－７９の合成
Figure 2022546609000714
ステップａ．
Figure 2022546609000715
 ザナミビルエーテル－酸（０．９０ｇ、１．４３ｍｍｏｌ、実施例３１）及びＮ－メチルモルホリン（０．２３ｍＬ、２．１４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（３５ｍＬ）に溶解させ、窒素雰囲気下で０℃に冷却した（氷水浴）。クロロギ酸イソブチル（２ｍＬのＤＣＭの中に０．２４ｍＬ、１．８５ｍｍｏｌ）をシリンジで５分の期間を掛けて滴加した。混合物を０℃で３０分間、次いで周囲温度で１５分間撹拌し、次いで０℃に冷却した。水素化ホウ素ナトリウム（５ｍＬのメタノールに溶解した５４０ｍｇ、１４．３ｍｍｏｌ）を５分掛けて滴加した。反応物を１５分間撹拌し、この時点で（ＬＣ／ＭＳによれば）全ての出発物質が消費された。数滴（約１ｍＬ）の氷酢酸を添加して混合物を酸性化した（ｐＨ約５）。酢酸エチル及び水で希釈し、酢酸エチルで（３回）抽出した。有機層をブラインで洗浄し、有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、ロータリーエバポレータで濃縮した。粗製材料を（最初にセライト上に載せて）シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０～１０％のメタノール、３０分）によって精製した。収率０．６６ｇ、７５％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝６１７．２。
ステップｂ．
Figure 2022546609000716
アルコールの撹拌混合物（２０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２の中に０．６６、１．１ｍｏｌ）にトリエチルアミン（０．３０ｍＬ、１．３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１気圧の窒素の下で０℃に冷却し（氷水浴）、メシルクロリド（１５０ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）をシリンジで５分掛けて滴加した。氷浴を取り外し、反応物を４５分間撹拌した。混合物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液で希釈し、ＤＣＭで（３回）抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ロータリーエバポレータで濃縮した。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝６９５．２。中間体を精製せずに次のステップに移した。
メシル酸ザナミビルＤＭＦ中で８０℃で３当量のアジ化ナトリウムと共に５時間撹拌した。混合物を水で希釈し、ＤＣＭで（３回）抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝６９５．２。アジドを精製せずに次のステップに移した。
ザナミビルアジド（６７０ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ）をリンドラー触媒（３００ｍｇ）の存在下、１気圧の水素ガスの下で１２時間にわたってメタノール（２０ｍＬ）中で撹拌した。混合物をセライトで濾過し、濃縮して表題化合物を透明な油として得た。アミンを精製せずに次のステップに移した。収率０．３７ｇ、３ステップで５４％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝６１６．２。
ステップｃ．
Figure 2022546609000717
 ３－（ベンジルアミノ）プロパン酸メチル（１ｇ、５．２ｍｍｏｌ）、４－ブロモブタン酸メチル（１．２ｇ、６．２ｍｍｏｌ）、及びジイソプロピルエチルアミン（１．３４ｍＬ、７．８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍＬ）中で４時間、６５℃で撹拌した。ほとんどの溶媒をロータリーエバポレータで除去し、粗製材料をシリカゲルクロマトグラフィー（Ｉｓｃｏ、０～９％のメタノールを含んだＤＣＭ、３０分勾配）によって精製してベンジル保護中間体を透明な油として得た。ベンジル保護中間体を１気圧の水素ガスの下で２０％の水酸化パラジウム炭素（３００ｍｇ）の存在下で１２時間、メタノール（２０ｍＬ）中で撹拌した。混合物をセライトで濾過し、濃縮して表題化合物を透明な油として得た。収率０．７２ｇ、６９％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２０４．２。
ステップｄ．
Figure 2022546609000718
 ステップｃの生成物（０．７０ｇ、２．１６ｍｍｏｌ）、プロパルギルＰＥＧ－４酸（０．６３ｍｇ、２．３８ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１．２６ｇ、３．２４ｍｍｏｌ）を含んだＤＭＦ（２ｍＬ）を室温で撹拌し、続いてＤＩＥＡ（１．１５ｍＬ、６．４９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２時間撹拌し、その後、逆相液体クロマトグラフィー（Ｉｓｃｏ、０．１％のＴＦＡを調整剤として含んだ５～５０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率８４０ｍｇ、８７％。ＬＣＭＳでの実測イオン［Ｍ＋Ｈ］＋＝４４６．２。
ステップｅ．
Figure 2022546609000719
 ステップｄの生成物（８４０ｍｇ、１．８５ｍｍｏｌ）とＬｉＯＨ（１１３．１ｍｇ、４．７２ｍｍｏｌ）とをＨ２Ｏ：ＭｅＯＨ（１：２、９ｍＬ）の中に含んだ溶液を、室温で２時間撹拌した。その後、反応物をＴＦＡで酸性化した。得られた溶液を濃縮し、その後、逆相液体クロマトグラフィー（Ｉｓｃｏ、０％～２０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率４５４．５ｍｇ、５９％。ＬＣＭＳでの実測イオン［Ｍ＋Ｈ］＋＝４１８．２。
ステップｆ．
Figure 2022546609000720
 ステップｂの生成物（３３４．７ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）と、ステップｅの生成物（１０２ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）と、ＨＡＴＵ（２７３．２５ｍｇ、０．７０４ｍｍｏｌ）とを無水ＤＭＦ（３ｍＬ）中に含んだ溶液に、室温でＤＩＥＡ（２１７ｍｇ、１６．４ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を１時間撹拌し、その後、ＲＰＬＣ（調整剤を含んでいない２０％～１００％のメタノール及び水）によって精製した。収率２０６．５ｍｇ、５５％。ＬＣＭＳでの実測イオン［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝８０６．８。
ステップｇ．
Figure 2022546609000721
 ステップｆの生成物（２０６．５ｍｇ、０．１２８ｍｍｏｌ）とＴＦＡ（３ｍＬ）とを含んだＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）を室温で一晩撹拌し、その後、減圧下で濃縮した。得られた残渣を半分取ＨＰＬＣ（０．１％のＴＦＡを調整剤として含んだ０％～３０％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率１４４．５ｍｇ、６９％。ＬＣＭＳでの実測イオン［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝６０６．８。
ステップｈ．
Figure 2022546609000722
 ステップｇの生成物（１４４．５ｍｇ、０．１１９ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（９ｍＬ）及び水（３ｍＬ）の中に含んだ溶液に、ＬｉＯＨ（１８ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を室温で１時間撹拌し、その後、ＴＦＡで酸性化し、減圧下で濃縮した。残渣を半分取ＨＰＬＣ（０．１％のＴＦＡを調整剤として使用した０％～２５％のアセトニトリル及び水）によって精製した。収率４５ｍｇ、２８％。ＬＣＭＳでの実測イオン［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝５６６．８。
実施例１３９．複合体４２の合成
アジド官能化Ｆｃの溶液（５０ｍｇ、５．４ｍＬ、０．８５９μｍｏｌ、実施例１２４、配列番号１８）を、アルキン誘導体化低分子（７．８７ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ、実施例１３８）が入った１０ｍＬ容の遠心管に加えた。穏やかに振盪して全ての固体を溶解させた後、混合物を、Ｌ－アスコルビン酸ナトリウム（０．６８ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ、０．２５Ｍ）と、硫酸銅（ＩＩ）（１．１ｍｇ、０．００６９ｍｍｏｌ、０．００５Ｍ）と、ＢＴＴＡＡ（１１．８ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ、０．０２Ｍ）とをＰＢＳ ７．４緩衝液中に含んだ３ｍＬの予混合溶液に添加した。得られた溶液を穏やかに一晩回転させた。それをプロテインＡカラムで親和性クロマトグラフィーによって精製し、続いてサイズ排除クロマトグラフィーで精製した（一般複合体精製プロトコール参照）。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析で平均質量は６３６２３Ｄａであった（ＤＡＲ３．８）。収率３６．０１ｍｇ、７２％。
実施例１４０．Ｉｎｔ－８０の合成
Figure 2022546609000723
ステップａ．
Figure 2022546609000724
 ザナミビルのｐ－ニトロフェニル炭酸エステル（０．３ｇ。０．４ｍｍｏｌ、実施例１０３）の無水ジクロロメタン（５ｍｌ）溶液に、プロパルギル－ＰＥＧ４－メチルアミン（０．１１ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（０．１４ｍｌ、１．０ｍｍｏｌ）とを含んだ無水ＤＭＦ（５ｍｌ）を添加した。反応物を室温で一晩撹拌し、その後、濃縮し、０％～１０％のメタノール／ジクロロメタンで溶離させるフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。収率０．２８ｇ、８１％。ＬＣＭＳでの実測イオン：（Ｍ＋Ｈ）＋＝８５８．４、（Ｍ－Ｂｏｃ）＋Ｈ＋＝７５８．４。
ステップｂ．
Figure 2022546609000725
 先のステップからの生成物（２８０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を２ｍｌのＭｅＯＨ及び２ｍｌのＴＨＦに溶解させ、その後、水酸化リチウム（２４ｍｇ、１ｍｍｏｌ）が２ｍｌの水に溶解している溶液で処理した。反応物を室温で１０分間撹拌し、この時にＨＰＬＣは反応が終了したことを示した。イオン交換樹脂Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲＮ－７７を使用することによって反応物のｐＨを５～６の値に調整し、その後、濾過して樹脂を除去した。粗濾液を真空下で蒸発乾固させ、精製によって次のステップに使用し、収量は定量的であった。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：（Ｍ＋Ｈ）＋＝８４４．４、（Ｍ－Ｂｏｃ＋Ｈ）＋＝７４４．４。
ステップｃ．
Figure 2022546609000726
 ステップｂの生成物を２ｍｌのジクロロメタン及び２ｍｌのＴＦＡに溶解させ、室温で撹拌した。反応の進行をＬＣＭＳで追跡した。反応終了後（６時間）、溶液を揮発乾固させ、その後、２ｍＬの水及び２ｍｌのアセトニトリルに溶解させた。得られた溶液を室温でさらに２時間撹拌し、この時にＬＣＭＳはアセトニトリル保護基の完全な脱保護を示す。この混合物を濃縮し、０．１％のＴＦＡを調整剤として含んだ５％～４０％のアセトニトリル／水で溶離させるＩｓｃｏ ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。収率１８０ｍｇ、７８．０％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：（Ｍ＋Ｈ）＋＝６０４．２。
実施例１４１．Ｉｎｔ－４と比較したＩｎｔ－８０の安定性データ
Ｉｎｔ－８０（実施例１４０）及びＩｎｔ－４（実施例１３）を脱イオン水で１０ｍｇ／ｍＬに可溶化させ、その後、１×ＰＢＳで１：１０に希釈して１ｍｇ／ｍＬの終濃度とした。試料を３７℃または６０℃で１週間インキュベートした。２５μＬのアリコートをＨＰＬＣのために７５μＬの水で希釈した。Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｈ－Ｃｌａｓｓ ＵＰＬＣをＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｂｉｏｚｅｎ ＰＳ－Ｃ１８カラム（１５０×２．１ｍｍ、１．６ｕｍ）と共に使用して、ギ酸を０．１％含んだ水からギ酸を０．１％含んだアセトニトリルまでの勾配を、
以下のとおりに作った：５％のＢを０～１分、５～２０％のＢを１～２０分。検出は、ダイオードアレイ検出器を使用して２４０ｎｍで行った。Ｉｎｔ－８０は６０℃で１週間を通して分解が１％未満であったが、Ｉｎｔ－４は同じ期間を通して１５％の分解を示した。（図６６）。
実施例１４２．複合体４３の合成
クリック試薬溶液の調製：０．００５０ＭのＣｕＳＯ４をＰＢＳ ×１緩衝液中に含んだ溶液：１０．０ｍｇのＣｕＳＯ４を１２．５３ｍＬのＰＢＳ ×１に溶解させ、その後、このＣｕＳＯ４溶液を１０．００ｍＬ取り、８６．１ｍｇのＢＴＴＡＡ及び４９５．３ｍｇのアスコルビン酸Ｎａを添加してクリック試薬溶液（０．００５０ＭのＣｕＳＯ４、０．０２０ＭのＢＴＴＡＡ、及び０．２５Ｍのアスコルビン酸ナトリウム）を得た。
アジド官能化Ｆｃの溶液（７８．０ｍｇ、４．５３５ｍＬ、１．３５μｍｏｌ、実施例１２４、配列番号７３）を、アルキン誘導体化低分子（１３．２ｍｇ、８．８８μｍｏｌ、Ｉｎｔ－８０、実施例１４０）が入った１５ｍＬ容の遠心管に加えた。穏やかに振盪して全ての固体を溶解させた後、混合物に、（Ｌ－アスコルビン酸ナトリウム、０．２５Ｍ、１０６．６ｍｇ、０．５３８ｍｍｏｌ、硫酸銅（ＩＩ）０．００５０Ｍ、１．７２ｍｇ、０．０１０７ｍｍｏｌ、及びＢＴＴＡＡ ０．０２０Ｍ、１８．５ｍｇ、０．０４３１ｍｍｏｌ）の上記クリック試薬溶液２．１５３ｍＬを添加した。得られた混合物を周囲温度で穏やかに６時間振盪した。それをプロテインＡカラムで親和性クロマトグラフィーによって精製し、続いてサイズ排除クロマトグラフィーで精製した（複合体精製プロトコール参照）。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析で平均質量は６４，０１２Ｄａであった（ＤＡＲ＝７．０）。収量５０．３ｍｇ、収率６２％。
複合体４３のためのＦｃをコードする核酸構築物は、Ｃ末端リジン残基を含むものである配列番号６４のアミノ酸配列をコードする核酸を含んでいた。発現時に複合体４３のＦｃのＣ末端リジンはタンパク質分解的に切断され、配列番号７３の配列を有するＦｃをもたらす。Ｃ末端リジンの存在または非存在は、Ｆｃまたは対応する複合体の特質を変化させない。
実施例１４３．Ｉｎｔ－８１の合成
Figure 2022546609000727
ステップａ．
Figure 2022546609000728
 Ｎ－Ｂｏｃ－Ｎ－Ｍｅ－グリシノール（３．５ｇ、２０ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（２０ｍＬ）中に含んだ、氷水浴で冷却され十分に撹拌された溶液に、臭化アリル（３．６ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）を添加し、続いて微粉砕ＫＯＨ粉末（３．５ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）を１５分掛けて添加した。得られた溶液を室温で一晩撹拌した。得られた混合物を５％のＨＯＡｃ水溶液（５０ｍＬ）と酢酸エチル（２００ｍｌ）との間で分配した。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過及び濃縮し、その後、１０％～８０％の酢酸エチル／ヘキサンで溶離させるフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。生成物の収率４．１ｇ、９５％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ＋Ｈ＝２１６．３。
ステップｂ．
Figure 2022546609000729
 ステップａからの化合物（８．０ｇ、３７ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（５０ｍＬ）及びＤＣＭ（５０ｍｌ）の中に含んだ溶液に、淡青色に見えるまでオゾンを－７８℃でバブリングした。未反応のオゾンを、１０分間の酸素のバブリングによって除去し、その後、ＮａＢＨ４（１．６ｇ、４０ｍｍｏｌ）を少しずつ１０分掛けて添加した。全てのＮａＢＨ４を添加した後、混合物を徐々に室温に温めた。得られた溶液を酢酸エチル（１００ｍｌ）とブライン（５０ｍｌ）との間で分配した。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、油になるまで濃縮し、その後、１０％～８０％の酢酸エチル／ジクロロメタンで溶離させるフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。生成物の収率５．０ｇ、６２％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ＋Ｈ＝２２０．２。
ステップｃ．
Figure 2022546609000730
 先のステップからの生成物（４．４ｇ、２０ｍｍｏｌ）とＣＢｒ４（１０．０ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）とをＤＣＭ（５０ｍＬ）中に含んだ０℃の溶液に、ＰＰｈ３（８．０ｇ、３０ｍｍｏｌ）をゆっくり１５分掛けて添加した（発熱あり）。添加している間、内部温度を３０℃未満に保った。ＰＰｈ３の添加の後、反応物を一晩室温で撹拌した。粗反応物を油になるまで濃縮し、その後、１０％酢酸エチル／ヘキサンで８０％酢酸エチル／ヘキサンまで溶離させる順相クロマトグラフィーによって精製した。採取管の内部に油滴を含有する画分を合わせ、無色の油になるまで濃縮した。４．０ｇ、７０．５％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ＋Ｈ＝２８２．１。
ステップｄ．
Figure 2022546609000731
 ステップｃの生成物（４ｇ、１４ｍｍｏｌ）と、ベンジルアミン（０．６０ｇ、５．７ｍｍｏｌ）と、Ｋ２ＣＯ３（２．３５ｇ、１７ｍｍｏｌ）とをＤＭＦ（２０ｍＬ）中に含んだ溶液を油浴中で７５℃で８時間加熱した。混合物を濾過し、濃縮し、ＲＰＬＣ（５％ＡＣＮ／水～１００％ＡＣＮ）によって精製した。収率２．１ｇ、７２．７％。
ステップｅ．
Figure 2022546609000732
 ステップｄの生成物（１．３ｇ、２．０ｍｍｏｌ）がＣＨＣｌ３／ＥｔＯＨ（１：２０、２０ｍＬ）に溶解している溶液に、２０％のＰｄ（ＯＨ）２／Ｃ（０．５０ｇ）を添加した。反応物をバルーンからの水素の下で周囲温度で一晩撹拌した。反応混合物をセライトパッドで濾過し、その後、ロータリーエバポレータによって濃縮し、さらに精製せずに次のステップに移した。
ステップｆ．
Figure 2022546609000733
 ステップｅの生成物を１０ｍＬのＤＭＦに溶解させ、その後、室温でプロパルギルＰＥＧ４酸（０．５２ｇ、２．０ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（０．６ｇ、３．０ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｔ（０．４５ｇ、３ｍｏｌ）及びヒューニッヒ塩基（０．７ｍＬ、５．０ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を４時間撹拌し、次いで濃縮し、ＲＰＬＣ（１０％ＡＣＮ／水～６０％ＡＣＮ／水）によって精製した。収率０．４３ｇ、２ステップで６５％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ－Ｂｏｃ＋Ｈ］＋＝５６２．４、［Ｍ＋Ｈ］＋＝６６２．４。
ステップｇ．
Figure 2022546609000734
 ステップｄの生成物（７０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（２ｍＬ）で２時間、室温で処理した。ＴＦＡをロータリーエバポレーションによって除去し、残存する油を高真空下で１２時間さらに乾燥させて所望の生成物をビス－ＴＦＡ塩として得た。収量は定量的であった。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４６２．４。
ステップｈ．
Figure 2022546609000735
 実施例１０９に記載の炭酸ニトロフェニル（０．７２ｇ。０．９５ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（５ｍｌ）溶液に、ステップｇのジアミン（０．３ｇ、０．４３ｍｍｏｌ、数回に分けて３０分掛けて添加した）とＤＩＰＥＡ（０．２８ｍｌ、２ｍｍｏｌ）とを無水ＤＭＦ（２０ｍｌ）中に含んだ混合物を添加した。反応物を室温で一晩添加し、次いで濃縮し、０％～１０％のメタノール／ジクロロメタンで溶離させるフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。収率０．６３ｇ、８６％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝８４４．４、［（Ｍ－Ｂｏｃ＋２Ｈ）／２］＋＝７９４．４、［（Ｍ－２Ｂｏｃ＋２Ｈ）／２］＋＝７４４．４。
ステップｉ．
Figure 2022546609000736
 先のステップからの生成物（６００ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）を５ｍｌのＭｅＯＨ及び５ｍｌのＴＨＦに溶解させ、その後、水酸化リチウム（４８ｍｇ、２ｍｍｏｌ）が２ｍｌの水に溶解している溶液で処理した。反応物を室温で１０分間撹拌し、この時にＨＰＬＣは反応が終了したことを示した。イオン交換樹脂Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲＮ－７７を使用することによって反応溶液のｐＨを５～６の値に調整し、その後、濾過して樹脂を除去した。粗生成物をロータリーエバポレーションによって蒸発乾固させ、精製によって次のステップに使用した。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝８２９．９、［（Ｍ－Ｂｏｃ＋２Ｈ）／２］＋＝７７９．４、［（Ｍ－２Ｂｏｃ＋２Ｈ）／２］＋＝７２９．４。
ステップｊ．
Figure 2022546609000737
 ステップｉからの生成物を５ｍｌのジクロロメタン及び５ｍｌのＴＦＡに溶解させ、室温で撹拌した。反応の進行をＬＣＭＳで追跡した。反応終了後（６時間）、溶液を揮発乾固させ、その後、４ｍＬの水及び４ｍｌのメタノールに溶解させた。得られた溶液を室温でさらに２時間撹拌し、この時にＬＣＭＳはアセトニトリル保護基の完全な脱保護を示す。この混合物を濃縮し、０．１％のＴＦＡを調整剤として含んだ５％～４０％のアセトニトリル／水で溶離させるＩｓｃｏ ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標）液体クロマトグラフを用いて逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。収率３８０ｍｇ、７１．０％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝５８９．８、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝３９２．５。
実施例１４４．Ｉｎｔ－８２の合成
Figure 2022546609000738
 表題化合物は実施例１４３のＩｎｔ－８１と同様に調製され、ステップａのＮ－Ｂｏｃ－Ｎ－Ｍｅ－グリシノールはＮ－Ｂｏｃ－Ｎ－エチル－グリシノールで置き換えた。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：［Ｍ／２］＋１＝６０３．８、［Ｍ／３］＋１＝４０２．９。
実施例１４５．Ｉｎｔ－８３の合成
Figure 2022546609000739
ステップａ．
Figure 2022546609000740
 ＣＢＺ保護－アミノ－ｐｅｇ１－ブロミド（７．６ｇ、２５．２ｍｍｏｌ）、ベンジルアミン（１．１ｇ、１０．１ｍｍｏｌ）、及び炭酸カリウム（２．８ｇ、２．８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍＬ）中で６０℃で１２時間撹拌した。溶液をロータリーエバポレータで濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（０～１０％のメタノールを含んだＤＣＭ、３０分勾配）によって精製して生成物を透明の粘稠な油として得た。収率３．２グラム、５７％。ＬＣ／ＭＳでの実測イオン［Ｍ＋Ｈ］＋＝５５０．２。
ステップｂ．
Figure 2022546609000741
 ステップａの生成物（１．９ｇ、３．５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２０ｍＬ）に溶解させ、窒素雰囲気下で氷／水浴によって０℃に冷却した。ＬＡＨ（６．９ｍｌ、１３．８ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中２Ｍ）をシリンジで１０分の期間を掛けて滴加した。混合物を還流で２時間撹拌し、その後、氷／水浴によって０℃に冷却した。１ｍＬの水を滴加し、続いて１ｍＬのＮａＯＨ水溶液（重量で１５％）を滴加した。３ｍＬの水を添加し、混合物を１５分間撹拌し、この時に２ｇの硫酸マグネシウムを添加した。混合物を１０分間撹拌し、その後、セライトで濾過し、追加で２回の１０ｍｌ分のＴＨＦで洗浄し、合わせた濾液をロータリーエバポレータによって濃縮した。残渣をアセトニトリル（２０ｍＬ）に取り、トリエチルアミン（１．４ｇ、１３．８ｍｍｏｌ）及びｂｏｃ無水物（３．０ｇ、１３．８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を４５分間撹拌し、逆相ＨＰＬＣ（５～９５％のアセトニトリル／脱イオン水、０．１％のＴＦＡ調整剤、３０分勾配）によって精製した。収率１．４ｇ、７９％。ＬＣ／ＭＳでの実測イオン［Ｍ＋Ｈ］＋＝５１０．２。
ステップｃ．
Figure 2022546609000742
 この実施例のステップｂからの生成物（１ｇ、１．９ｍｍｏｌ）を、水酸化パラジウム（２００ｍｇ）の存在下、メタノール（２５ｍＬ）中で２時間撹拌した。混合物をセライトで濾過し、濃縮して生成物を透明な油として得、これをさらに精製せずに使用した。収率０．７３ｇ、８９％。ＬＣ／ＭＳでの実測イオン［Ｍ＋Ｈ］＋＝４２０．４。
ステップｄ．
Figure 2022546609000743
 ステップｃからの生成物（０．７３ｇ、１．７ｍｍｏｌ）、プロパルギル－ｐｅｇ４－トシラート（０．９１ｇ、２．４ｍｍｏｌ）、及びジイソプロピルエチルアミン（０．７６ｇ、５．９ｍｍｏｌ）を、８５℃のＤＭＦ（５ｍＬ）中で４時間撹拌した。混合物をロータリーエバポレータで濃縮し、その後、逆相ＨＰＬＣ（５～９５％のアセトニトリル／ＤＩ水、０．１％のＴＦＡ調整剤、３０分勾配）によって精製して生成物を透明の粘稠な油として得た。収率０．８９ｇ、８２％。ＬＣ／ＭＳでの実測イオン［Ｍ＋Ｈ］＋＝６３４．４。
ステップｅ．
Figure 2022546609000744
 ステップｄからの生成物（０．８９ｇ、１．４ｍｍｌ）を（ジオキサン中）４ＮのＨＣｌの中で４５分間、周囲温度で撹拌した。混合物をロータリーエバポレータで濃縮し、ベンゼン（３倍）と共沸させた。得られた残渣を脱イオン水（１５ｍＬ）に取り、冷凍及び凍結乾燥させて生成物を透明な油、ビス－ＨＣｌ塩として得た。収率０．６５ｇ、９１％。ＬＣ／ＭＳでの実測イオン［Ｍ＋Ｈ｝＋＝４３４．４。
ステップｆ．


Figure 2022546609000745
 この化合物の合成において残り４つのステップは実施例１４３のＩｎｔ－８１の合成に用いたのと同様であった。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：（Ｍ＋２Ｈ）／２＝５７５．８。
実施例１４６ａ．Ｉｎｔ－８３の代替合成Ｉ


Figure 2022546609000746
 実施例１４５に記載の生成物Ｉｎｔ－８３は当業者によって、上記反応スキームを代わりに用いて本発明の特許に記載の方法を用いて調製され得る。
実施例１４６ｂ．Ｉｎｔ－８３の代替合成ＩＩ
実施例１４５に記載の生成物Ｉｎｔ－８３は、代わりに以下の反応スキームを用いて、この特許に記載される方法を用いて当業者によって調製され得る。
Figure 2022546609000747
ａの合成。

Figure 2022546609000748
 氷水浴で冷却された、十分に撹拌されたＮ－Ｂｏｃ－Ｎ－Ｍｅ－グリシノール（３．５ｇ、２０ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（２０ｍＬ）溶液に、臭化アリル（３．６ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）を添加し、続けて微粉砕ＫＯＨ粉末（３．５ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）を１５分間掛けて添加した。得られた溶液を室温で一晩撹拌した。得られた混合物を５％ＨＯＡｃ水溶液（５０ｍＬ）と酢酸エチル（２００ｍｌ）との間で分配した。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、その後、１０％から８０％までの酢酸エチル／ヘキサンで溶離させるフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。生成物の収率４．１ｇ、９５％。ＬＣＭＳでの実測イオン：Ｍ＋Ｈ＝２１６．３。
ｂの合成。
Figure 2022546609000749
 ａ（８．０ｇ、３７ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（５０ｍＬ）及びＤＣＭ（５０ｍｌ）の中に含んだ－７８℃の溶液にオゾンを淡青色になるまでバブリングした。酸素を１０分間バブリングすることによって未反応のオゾンを除去し、その後、ＮａＢＨ４（１．６ｇ、４０ｍｍｏｌ）を少量ずつ１０分間掛けて添加した。全てのＮａＢＨ４が添加された後に、混合物を徐々に室温に温めた。得られた溶液を酢酸エチル（１００ｍｌ）とブライン（５０ｍｌ）との間で分配した。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、油になるまで濃縮し、その後、１０％から８０％までの酢酸エチル／ジクロロメタンで溶離させるフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。生成物の収率５．０ｇ、６２％。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：Ｍ＋Ｈ＝２２０．２。
ｃの合成。

Figure 2022546609000750
 氷浴中で冷却された、ｂ（４．４ｇ、２０ｍｍｏｌ）とＣＢｒ４（１０．０ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）とのＤＣＭ（５０ｍＬ）溶液に、ＰＰｈ３（８．０ｇ、３０ｍｍｏｌ）をゆっくりと１５分間掛けて添加した（発熱性）。添加している最中は内部温度を３０℃未満に保った。ＰＰｈ３の添加後、反応物を室温で一晩撹拌した。粗反応物を油になるまで濃縮し、その後、１０％酢酸エチル／ヘキサンから８０％酢酸エチル／ヘキサンまでで溶離させる順相クロマトグラフィーによって精製した。採取管内で油滴を含有している画分をＬＣＭＳによる確認の後に合わせ、濃縮して無色の油を得た。４．０ｇ、７０．５％。ＬＣＭＳによる実測イオン（複数可）：Ｍ＋Ｈ＝２８２．１。
ｄの合成。

Figure 2022546609000751
 ｃ（４．４ｇ、１５．５ｍｍｏｌ）とプロパルギル－ＰＥＧ４－アミン（１．５ｇ、６．４ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（３．３ｇ、２５．８ｍｍｏｌ）とのＤＭＦ（２０ｍＬ）溶液を油浴中で７５℃で１８時間加熱した。混合物を濾過し、濃縮し、ＲＰＬＣ（５％ＡＣＮ／水から１００％ＡＣＮまで）によって精製した。収率３．８５ｇ、９２％。ＬＣ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＝６３４．２。
ｅの合成。

Figure 2022546609000752
 生成物ｄ（３．８５、６．１ｍｍｏｌ）をＨＣｌ（ジオキサン中４Ｎ、１５ｍＬ）で２時間、室温で処理した。ロータリーエバポレーションによって溶媒を除去し、残った油を脱イオン水（２０ｍＬ）に溶解させ、冷凍し、凍結乾燥させて生成物を淡黄色の油として得た。収率は定量的であった。ＬＣＭＳでの実測イオン：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４３４．２。
ｆの合成。

Figure 2022546609000753
 ｆ（０．６８ｇ、１．３４ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（０．８７ｇ、６．７ｍｍｏｌ）とが無水ＤＭＦ（５ｍｌ）に溶解した溶液に、ｆ（２．１ｇ、２．８ｍｍｏｌ）を数回に分けて１時間掛けて添加した。反応物を室温で一晩撹拌し、その後、濃縮し、０％から１０％までのメタノール／ジクロロメタンで溶離させるフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。収率１．４５ｇ、６７％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝８２９．８。
ｇの合成。
Figure 2022546609000754
 生成物ｆ（１．４５ｇ、０．８７ｍｍｏｌ）を３ｍｌのＭｅＯＨに溶解させ、その後、水酸化リチウム（９０ｍｇ、３．８ｍｍｏｌ）が脱イオン水（６ｍＬ）に溶解した溶液で処理した。反応物を室温で１５分間撹拌し、この時のＬＣＭＳは反応が完了したことを示していた。Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲＮ－７７イオン交換樹脂を使用することによって反応溶液のｐＨを５～６の値に調整し、その後、濾過して樹脂を除去した。濾液をロータリーエバポレーションによって濃縮乾固し、さらなる精製を行うことなく次のステップに使用した。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝８１５．９。
加水分解生成物をジクロロメタン（５ｍＬ）及びＴＦＡ（１０ｍＬ）に溶解させ、室温で撹拌した。反応の進行をＬＣＭＳによって監視した。Ｂｏｃ除去の完了（約４時間）の後、溶液をロータリーエバポレータで濃縮乾固し、その後、８ｍｌの水に溶解させた。得られた溶液を室温でもう２時間撹拌し、この時のＬＣＭＳはアセトニド保護基が完全に除去されたことを示していた。この混合物を濃縮し、０．１％のＴＦＡを調整剤として含んだ５％から４０％までのアセトニトリル／水で溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフィーを用いる逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）によって精製した。３ステップで収率７８０ｍｇ、６５．０％。ＬＣＭＳによる実測イオン（複数可）：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝５７５．８、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝３８４．８。
実施例１４７．耐性インフルエンザウイルスの選択のための連続継代実験
ウイルス阻害剤による選択圧の下での薬物耐性突然変異体ウイルス株の出現の可能性を評価するために、連続継代試験を複合体６及び複合体３３についてオセルタミビル及びバロキサビル対照薬と比較して行った。連続継代試験はＡ５４９かＭＤＣＫ細胞かのどちらかを使用して行った。継代は以下のとおりに行った：ウェル１つあたり１５０，０００個のＡ５４９またはＭＤＣＫ細胞を、ＦＢＳが１０％、ＰＳが１％、ＮａＰｙｒが１％、及びＨＥＰＥＳが１％である５００μｌのＤＭＥＭに入れて播種し（１２ウェル）、およそ２４時間インキュベートした。細胞がおよそ８０％コンフルエンシーに達した時点でそれをＰＢＳで一度洗浄し、化合物またはＰＢＳ単独の存在下で２時間、通常の培養条件の下でインキュベートした。試験品の濃度を、後の継代のための十分なウイルス産生を維持しながらウイルスを最大限阻害するのに必要とされる濃度に最適化した。連続継代実験に用いた試験品の濃度を図６７及び図６８に示す。その後、室温で１時間、ＰＢＳ、ウシアルブミン３５％、及びＣａ２＋／Ｍｇ２＋を含有する緩衝液の中で細胞を０．０１または０．０５ＭＯＩ（それぞれＭＤＣＫ及びＡ５４９細胞；感染用緩衝液で１５０μｌに希釈した）で感染させ、続いて接種材料を除去し、ＰＳが１％、ＮａＰｙｒが１％、及びＨＥＰＥＳが１％であるＤＭＥＭ（ＦＢＳなし）で細胞を一度洗浄した。その後、ＰＳが１％、ＮａＰｙｒが１％、ＨＥＰＥＳが１％、及びＴＰＣＫ処理トリプシンが１μｇ／ｍｌであるＤＭＥＭで希釈された試験品の存在下で細胞を２４時間インキュベートした。インキュベーション後、ウイルス上清を採取し、細胞及び残屑を遠心分離（５分、４℃、１，４００ｘｇ）によって除去した。その後、上清を、
ｉ プラークアッセイによってウイルス力価を定量するため
ｉｉ 赤血球凝集アッセイを行って化合物による阻害を逃れたウイルスがあるか否かを判定するため
ｉｉｉ 新しく播種したＡ５４９またはＭＤＣＫ細胞を化合物の存在下で再感染させるため
に使用した。
１０回の継代のために、またはオセルタミビル及びバロキサビル対照に対する耐性が認められるまで、プロセスを繰り返した。２連続継代にわたって薬物の存在下での力価上昇が一旦検出されればウイルスはプラーク精製され得る。プラーク精製に続いて８つ全てのゲノムセグメントの配列決定及びＰＢＳ処理対照ウイルスとの比較を行って、逃れた突然変異体が検出され得る。２つの異なる連続継代実験のまとめを図６７及び図６８に示す。図６７にまとめた実験では、Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０４／０９／ Ｈ１Ｎ１ ｐｄｍに感染したＡ５４９細胞を使用して複合体６を、オセルタミビル及びバロキサビルと比較した。複合体６、バロキサビル及びオセルタミビルはそれぞれ０．５ｎＭ、０．５ｎＭ及び２００ｎＭで使用した。複合体６では、（耐性突然変異体の出現がないことを示唆して）１１回の継代を通してウイルス力価の上昇が認められなかった一方、バロキサビル及びオセルタミビルでの力価は、それぞれ５回及び１１回の継代の後に、ＰＢＳ対照に認められたのと同程度のレベルに上昇した。図６８にまとめた実験では、Ａ／ＷＳＮ／１９３３ Ｈ１Ｎ１に感染したＭＤＣＫ細胞を使用して複合体６及び複合体３３を、オセルタミビル及びバロキサビルと比較した。複合体６、複合体３３、バロキサビル及びオセルタミビルはそれぞれ４ｎＭ、２ｎＭ、４ｎＭ及び５０ｎＭで使用した。複合体６及び複合体３３では、（耐性突然変異体の出現がないことを示唆して）１０回の継代を通してウイルス力価の上昇が認められなかった一方、バロキサビル及びオセルタミビルでの力価は、それぞれ５回及び１０回の継代の後に、ＰＢＳ対照に認められたのと同程度のレベルに上昇した。
実施例１４８．複合体６ａの合成
表題複合体は、Ｉｎｔ－７ａ（実施例１００）を使用して複合体６（実施例２０）と同様に調製された。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析において平均質量は６２０６３．Ｄａ（ＤＡＲ＝２．７）であった。収量１７５．４ｍｇ、５０％収率。
実施例１４９．複合体６ｂの合成
表題複合体は、Ｉｎｔ－７ｂ（実施例１０１）を使用して複合体６（実施例２０）と同様に調製された。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析において平均質量は６２０６３．Ｄａ（ＤＡＲ＝２．８）であった。収量１７５．４ｍｇ、５０％収率。
実施例１５０．複合体６ｃの合成
表題複合体は、Ｉｎｔ－７ｃ（実施例１０２）を使用して複合体６（実施例２０）と同様に調製された。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析において平均質量は６２７８２．Ｄａ（ＤＡＲ＝３．２）であった。収量１７５．４ｍｇ、５０％収率。
実施例１５１．複合体４４の合成
この複合体は、ＰＥＧ４－アジド－Ｆｃ（配列番号７３、実施例１２４と同様に調製された）とＩｎｔ－２２（実施例７９）とを使用して実施例８０（複合体２０）と同様に調製された。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析において平均質量は６２，８８２Ｄａ（ＤＡＲ＝５．６）であった。
複合体４４のためのＦｃをコードする核酸構築物は、Ｃ末端リジン残基を含むものである配列番号６４のアミノ酸配列をコードする核酸を含んでいた。発現時に複合体４４のＦｃのＣ末端リジンはタンパク質分解的に切断され、配列番号７３の配列を有するＦｃをもたらす。Ｃ末端リジンの存在または非存在は、Ｆｃまたは対応する複合体の特質を変化させない。
実施例１５２．抗体依存性細胞傷害アッセイ
複合体６及び複合体３３を抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）について試験した。ＭＤＣＫ細胞の単層をＡ型インフルエンザまたはＢ型インフルエンザ株に０．００１～１０のＭＯＩで感染させ、３７℃で１８～２４時間、５％ＣＯ２中でインキュベートした。ＡＤＣＣは、市販のレポート細胞株（ＰＲＯＭＥＧＡ）によって製造業者の指示に従って決定された。手短に述べると、試験品を１～１０，０００ｎＭの範囲の濃度で適切なウェルに加え、３７℃で１５分間、５％ＣＯ２中でインキュベートした。発光を読み取ることによってＡＤＣＣを定量した。複合体６をインフルエンザＡ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対して試験して、ＡＤＣＣのＭＯＩ依存的増大（図６９）、及び１のＭＯＩでのＡＤＣＣの用量依存的増大（図７０）が示された。複合体３３を、図７１Ａ～７１ＣのインフルエンザＡ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）及びインフルエンザＡ／ＨＫ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）、ならびにインフルエンザＢ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ、図７２）に対して試験し、複合体３３によるＡＤＣＣのＭＯＩ依存的増大が示された。複合体３３はまた、１のＭＯＩ（図７３Ａ）及び１０のＭＯＩ（図７３Ｂ）でのインフルエンザＡ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対するＡＤＣＣの用量依存的増大も示した。モノクローナル抗体ゲジブマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）を陽性対照として使用して完全長抗体の受容体結合性をＦｃ複合体のそれと比較した。ゲジブマブも、インフルエンザＡ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１、図７４）に対して試験した場合にＡＤＣＣのＭＯＩ依存的増大を示し、また、１のＭＯＩ（図７５Ａ）及び１０のＭＯＩ（図７５Ｂ）でのインフルエンザＡ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対するＡＤＣＣの用量依存的増大を示した。
実施例１５３．抗体依存性細胞貪食アッセイ
複合体６及び複合体３３を抗体依存性細胞貪食について試験した。ＭＤＣＫ細胞の単層をＡ型インフルエンザまたはＢ型インフルエンザ株に０．００１～１０のＭＯＩで感染させ、３７℃で１８～２４時間、５％ＣＯ２中でインキュベートした。ＡＤＣＰは、市販のレポート細胞株（ＰＲＯＭＥＧＡ）によって製造業者の指示に従って決定された。手短に述べると、試験品を１～１０，０００ｎＭの範囲の濃度で適切なウェルに加え、３７℃で１５分間、５％ＣＯ２中でインキュベートした。発光を読み取ることによってＡＤＣＰを定量した。複合体６をインフルエンザＡ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対して試験して、ＡＤＣＰのＭＯＩ依存的増大（図７６）、ならびに１のＭＯＩ（図７７Ａ）及び１０のＭＯＩ（図７７Ｂ）でのＡＤＣＰの用量依存的増大が示された。複合体３３を、インフルエンザＡ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）及びインフルエンザＡ／ＨＫ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（それぞれ図７８Ａ～７８Ｃ）、ならびにインフルエンザＢ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ、図７９）に対して試験し、複合体３３によるＡＤＣＰのＭＯＩ依存的増大が示された。複合体３３はまた、１のＭＯＩ（図８０Ａ）及び１０のＭＯＩ（図８０Ｂ）でのインフルエンザＡ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対するＡＤＣＰの用量依存的増大も示した。ゲジブマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）を陽性対照として使用して完全長抗体の受容体結合性をＦｃ複合体のそれと比較した。ゲジブマブも、インフルエンザＡ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１、図８１）に対して試験した場合にＡＤＣＰのＭＯＩ依存的増大を示し、また、１のＭＯＩ（図８２Ａ）及び１０のＭＯＩ（図８２Ｂ）でのインフルエンザＡ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対するＡＤＣＰの用量依存的増大を示した。
実施例１５４．生Ａ型インフルエンザウイルス、またはノイラミニダーゼ耐性突然変異体の溶解物でのノイラミニダーゼ阻害
ノイラミニダーゼ阻害（ＮＡＩ）。試験品を、３７℃、５％ＣＯ２で２０分間、ノイラミニダーゼ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）または生ウイルスとインキュベートした。２’－（４－メチルウンベリフェリル）－α－Ｄ－Ｎアセチルノイラミン酸基質を適切なウェルに加え、３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートした。励起３５５ｎｍ／発光４６０ｎｍでの蛍光を読み取ることによってＮＡＩを判定した。ノイラミニダーゼ耐性突然変異体及び生インフルエンザウイルスについてノイラミニダーゼ阻害が判定された（表６６、表６７、表６８及び表６９）。
Figure 2022546609000755
Figure 2022546609000756

Figure 2022546609000757

Figure 2022546609000758
実施例１５５．細胞変性効果アッセイ
哺乳動物細胞をインフルエンザウイルスによる感染及び破壊から防護する複合体６及び複合体３３の能力を測定するために、実施例２５に述べられている細胞変性効果（ＣＰＥ）に基づくマイクロ中和アッセイを、少し改変して行った。手短に述べると、ＭＤＣＫ細胞の単層をＡ型インフルエンザまたはＢ型インフルエンザ株に、０．００１から１まで変動する適切なＭＯＩで感染させた。試験品を０．１～１０，０００ｎＭの範囲の濃度で添加し、３７℃、５％ＣＯ２でＡ型インフルエンザについては３日間、またはＢ型インフルエンザについては５日間インキュベートした。クリスタルバイオレット染色によって、５９５ｎｍでの吸光度を読み取ることによってＣＰＥを判定した。結果を以下の表７０、表７１、表７２及び表７３に示す。

Figure 2022546609000759
Figure 2022546609000760
Figure 2022546609000761
Figure 2022546609000762
実施例１５６．複合体４５の合成
複合体４５は、ＰＥＧ４－アジド－Ｆｃ（実施例１２４と同様に調製された配列番号７２（複合体４５ａ）か配列番号７３（複合体４５ｂ）かのどちらか）と、Ｉｎｔ－８３（実施例１４５）とを使用して複合体３３（実施例１２９）と同様に調製された。複合体４５ｂの精製調製物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析において平均質量は６２，９２７Ｄａ（ＤＡＲ＝４．２）であった。様々なＤＡＲを有する複合体４５ａの調製も本明細書に記載されている（実施例１９９）。複合体４５という用語を用いる場合、何らかの特定のＤＡＲに限定していると見なされるべきではない。得られた複合体は図１０２に描かれている。
複合体４５という用語は、本明細書中で使用される場合、複合体４５ａ及び複合体４５ｂを両方とも包含することを意味する。本出願人は、配列番号７２（複合体４５ａ）及び配列番号７３（複合体４５ｂ）がそれぞれＦｃアロタイプＧ１ｍ（ｆ）及びＧ１ｍ（ｆａ）においてのみ異なっていることを記しておく。異なるアロタイプは、本明細書に記載の特質に関して同じ挙動をすることが予期される。
複合体４５ａのためのＦｃをコードする核酸構築物は、Ｃ末端リジン残基を含むものである配列番号６３のアミノ酸配列をコードする核酸を含んでいた。発現時に複合体４５ａのＦｃのＣ末端リジンはタンパク質分解的に切断され、配列番号７２の配列を有するＦｃをもたらす。同様に、複合体４５ｂのためのＦｃをコードする核酸構築物は、配列番号６４のアミノ酸配列をコードする核酸を含んでいたが、得られるＦｃは配列番号７３の配列を有する。Ｃ末端リジンの存在または非存在は、Ｆｃまたは対応する複合体の特質を変化させない。
実施例１５７．致死性重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）マウスモデルにおけるＡ型インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）に対する複合体４５ｂの有効性
試験品を、雌のＢＡＬＢ／ｃ ｓｃｉｄマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）における致死性Ａ型インフルエンザによるインフルエンザ感染症に対して評価した。攻撃ウイルス（Ａ／Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／８／１９３４）は、マウスにおいて致死性感染症を引き起こすことができるマウス適合型単離物である。実験はマウス５匹の群を１０個含んでいた。０日目に全てのマウスを、ケタミン／キシラジン（それぞれ１５０及び１０ｍｇ／ｋｇ）の混合物で麻酔した後にＬＤ９５の３倍のウイルスで３０μｌの体積の鼻腔内接種によって攻撃した（マウス１匹あたりおよそ１Ｅ３ウイルス）。
群にビヒクル（ＰＢＳ）、ｈＩｇＧ１ Ｆｃ対照、または複合体４５ｂの単回ＳＣ処置を、ウイルス攻撃の２時間後に施した。別個の試験部門は、バロキサビル マルボキシル（ＤＣ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｓｈａｎｇｈａｉ，Ｃｈｉｎａ）による１日２回、１日間の経口処置が同じくウイルス攻撃の２時間後から開始される、マウスの３つの群からなっていた。試験デザインを表７４にまとめる。マウスを４週間にわたって追跡評価し、体重減少が２０％を超えるかまたは瀕死状態にあると認められる動物を死亡と記録した。
Figure 2022546609000763
試験最後（２８日目）に、複合体４５ｂを受けているマウスは、１０～０．３ｍｇ／ｋｇの全ての用量濃度において完全に保護された（表７５）。複合体４５ｂは、０．１ｍｇ／ｋｇの最低試験濃度においてのみ、致死的ウイルス攻撃を防御することができなかった。予想通り、ビヒクルまたはｈＩｇＧ１ Ｆｃを受けている群は保護されなかった。バロキサビルで処置したマウスも保護されたとはいえ累積用量は著しく高い２０ｍｇ／ｋｇであり（生存率８０％）、総用量６ｍｇ／ｋｇのときには２８日目まで生存したマウスが６０％しかいなかった。
Figure 2022546609000764
この重症免疫不全のモデルにおける複合体４５ｂの有効性は、体重に基づいても明らかであった（表７６）。死亡率読み値に基づく完全な保護をもたらす複合体の最低濃度は０．３ｍｇ／ｋｇであった。この用量レベルでは、群の最大の平均体重減少は一時的なものであり、３％未満の減少となった（４日目に起こった）。さらに、完全に保護された群全てにおいて体重の差は未感染マウスと比較して無視できるほど小さかった。
Figure 2022546609000765
まとめると、これらのデータは、致死的攻撃がなされたマウスをわずか０．３ｍｇ／ｋｇの単回ＳＣ用量の複合体で保護することによって複合体４５ｂの有効性を実証している。これは、インフルエンザ感染症を排除する上で必須となるＴ及びＢ免疫細胞が完全に欠損しているマウスによる免疫不全の重症モデルにおいて成し遂げられた。これらのデータは、免疫不全患者集団を治療するための複合体４５ｂの使用を支持している。
実施例１５８．皮下に投薬された複合体４５ｂのインフルエンザＡ／Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／８／３４（Ｈ１Ｎ１）に対する有効性
複合体４５ｂを雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）における致死性ＩＡＶ Ｈ１Ｎ１インフルエンザ感染症に対して評価した。攻撃ウイルス（Ａ／Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／８／１９３４）は、マウスにおいて致死性感染症を引き起こすことができるマウス適合型単離物である。実験はマウス５匹の群を７つ含んでいた。０日目に全てのマウスを、ケタミン／キシラジン（それぞれ１５０及び１０ｍｇ／ｋｇ）の混合物で麻酔した後にＬＤ９５の３倍のウイルスで３０μｌの体積の鼻腔内接種によって攻撃した。死亡率及び体重を１４日間にわたって毎日記録し、体重が２０％減少した動物がいれば死亡と記録した。
群に複合体４５ｂ（１、０．３、０．１、０．０３または０．０１ｍｇ／ｋｇ）、ｈＩｇＧ１ Ｆｃ対照またはビヒクル（ＰＢＳ）の単回皮下（ＳＣ）処置を、ウイルス攻撃の２時間後に施した。試験デザインを表７７にまとめる。
Figure 2022546609000766
予想通り、ビヒクルまたはｈＩｇＧ１ Ｆｃ対照を受けているマウスは６日目に感染症で死亡した（表７８）。しかしながら、複合体４５ｂで処置したマウスは１、０．３及び０．１ｍｇ／ｋｇの用量レベルで完全に保護された。複合体４５ｂに関して死亡は０．０３及び０．０１ｍｇ／ｋｇの最低用量濃度でのみみられた。

Figure 2022546609000767
複合体４５ｂの力価は毎日の体重測定によってさらに支持された。予想通り、ビヒクルまたはｈＩｇＧ１ Ｆｃで処置したマウスは定常的な体重減少をそれが２０％を超えるまで呈し、この時にそれを死亡と記録した（表７８）。
対照マウスとは対照的に、１、０．３及び０．１ｍｇ／ｋｇの複合体４５ｂを受けているマウスは、試験の全体を通して健康体重を維持し、たったの７％未満の一時的体重減少しか示さなかった（０．１ｍｋ／ｋｇ用量群、７日目、表７９）。生存及び体重測定の両方によって、複合体４５ｂは、皮下投与される単回のわずか０．１ｍｇ／ｋｇの用量でインフルエンザＡ／Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／８／１９３４の致死的攻撃からの堅牢な保護を示した。


Figure 2022546609000768
実施例１５９．致死性マウスモデルにおけるインフルエンザＡ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍに対する皮下投与された複合体４５ｂの有効性。
複合体４５ｂを雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）における致死性ＩＡＶ Ｈ１Ｎ１インフルエンザ感染症に対して評価した。攻撃ウイルス（Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ）は、マウスに致死的感染症を引き起こすことができる世界的流行病単離物である。実験はマウス５匹の群を５つ含んでいた。０日目に全てのマウスを、ケタミン／キシラジン（それぞれ１５０及び１０ｍｇ／ｋｇ）の混合物で麻酔した後にＬＤ９５の３倍のウイルスで３０μｌの体積の鼻腔内接種によって攻撃した。死亡及び体重を毎日記録し、体重が２０％減少した動物がいれば死亡と記録した。
試験群にウイルス攻撃の２時間後に複合体４５ｂまたはビヒクル（ＰＢＳ）の単回皮下（ＳＣ）処置を施した。試験デザイン及び用量レベルを表８０にまとめる。

Figure 2022546609000769
予想通り、ビヒクルを受けているマウスは７日目までに感染症で死亡した（表８１）。しかしながら、複合体４５ｂで処置したマウスはわずか０．３ｍｇ／ｋｇの濃度で完全に保護され、０．１ｍｇ／ｋｇでは部分的に保護された（生存率６０％）。高病原性の世界的流行病株からの完全な保護が１ｍｇ／ｋｇ未満の単回用量で達成されることは、臨床的に重要なＡ型インフルエンザに対する複合体４５ｂの力価を実証している。


Figure 2022546609000770
複合体４５ｂの力価は毎日の体重測定によってさらに支持された。予想通り、ビヒクルで処置したマウスは定常的な体重減少をそれが２０％を超えるまで呈し、この時にそれを死亡と記録した（表８２）。
対照マウスとは対照的に、３、１または０．３ｍｇ／ｋｇの複合体４５ｂを受けているマウスは、３～５日目をピークとするおよそ１０％の一時的体重減少を示したにすぎなかった（表８２）。試験の最後（１４日目）までにこれらのマウスは概ねその出発時体重に回復した（またはそれを超過した）。生存及び体重測定の両方によって、複合体４５ｂは、皮下投与される単回の０．３ｍｇ／ｋｇの用量でインフルエンザＡ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍの致死的攻撃からの堅牢な保護を示した。この試験に使用した臨床的に重要な世界的流行病株に対する活性は、重篤なインフルエンザ感染症を治療する上での複合体４５ｂの有用性を支持している。
Figure 2022546609000771
実施例１６０．致死性マウスモデルにおけるインフルエンザＡ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）に対する皮下投薬された複合体４５ｂの有効性。
複合体４５ｂを雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）における致死性ＩＡＶ Ｈ３Ｎ２インフルエンザ感染症に対して評価した。攻撃ウイルス（Ａ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／１／１９６８）は、マウスに致死的感染症を引き起こすことができるマウス適合型単離物である。実験はマウス５匹の群を３つ含んでいた。０日目に全てのマウスを、ケタミン／キシラジン（それぞれ１５０及び１０ｍｇ／ｋｇ）の混合物で麻酔した後にＬＤ９５の３倍のウイルスで３０μｌの体積の鼻腔内接種によって攻撃した。死亡及び体重を毎日記録し、体重が２０％減少した動物がいれば死亡と記録した。
試験群にウイルス攻撃の２時間後に複合体４５ｂまたはビヒクル（ＰＢＳ）の単回皮下（ＳＣ）処置を施した。試験デザインを表８３にまとめる。
Figure 2022546609000772
予想通り、ビヒクルを受けているマウスは７日目までに感染症で死亡した（表８４）。しかしながら、複合体４５ｂで処置したマウスは１及び０．３ｍｇ／ｋｇの用量レベルで完全に保護された。この試験では、０．３ｍｇ／ｋｇよりも少ない複合体４５ｂの投薬は行わなかった。
Figure 2022546609000773
複合体４５ｂの力価は毎日の体重測定によってさらに支持された。予想通り、ビヒクルで処置したマウスは定常的な体重減少をそれが２０％を超えるまで呈し、この時にそれを死亡と記録した（表８５）。
対照マウスとは対照的に、１及び０．３ｍｇ／ｋｇの複合体４５ｂを受けているマウスは、試験の全体を通してほぼ健康体重を維持し、たったの１１％未満の一時的体重減少しか示さず、その後、試験の最後までにはその出発時体重あたりまで回復した（表８５）。生存及び体重測定の両方によって、複合体４５ｂは、皮下投与される単回のわずか０．３ｍｇ／ｋｇの用量でＡ型インフルエンザ（Ｈ３Ｎ２）の致死的攻撃からの堅牢な保護を示した。


Figure 2022546609000774
実施例１６１．致死性マウスモデルにおけるＢ型インフルエンザ（Ｖｉｃｔｏｒｉａ系統）に対する複合体４５ｂの有効性
複合体４５ｂを雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）における致死性Ｂ型インフルエンザ感染症に対して評価した。攻撃ウイルス（Ｂ／Ｍａｌａｙｓｉａ／８／１９３４）は、マウスに致死的感染症を引き起こすことができるマウス適合型単離物である。実験はマウス５匹の群を６つ含んでいた。０日目に全てのマウスを、ケタミン／キシラジン（それぞれ１５０及び１０ｍｇ／ｋｇ）の混合物で麻酔した後にＬＤ９５の３倍のウイルスで３０μｌの体積の鼻腔内接種によって攻撃した（マウス１匹あたりおよそ１Ｅ４）。
ウイルス攻撃の２時間後に試験品、ビヒクル（ＰＢＳ）またはＦｃのみの対照（ｈＩｇＧ１ Ｆｃ）の単回皮下処置を全ての群に施した。試験では、複合体４５ｂの１、０．３、０．１及び０．０３ｍｇ／ｋｇの濃度を評価した。マウスを２週間追跡評価し、体重減少が２０％を超えるかまたは瀕死状態にあると認められる動物を死亡と記録した。
ビヒクルまたはＦｃのみの対照で処置したマウスは全て７日目までに死亡に至った。対照的に、１、０．３または０．１ｍｇ／ｋｇの複合体４５ｂを受けているマウスは、単回皮下投薬を受けた後に完全に保護された（表８６）。Ｂ型インフルエンザに対する複合体４５ｂの力価は、０．３ｍｇ／ｋｇでの５％未満の一時的減少を示している毎日の体重測定によってさらに支持された（表８７）。
Figure 2022546609000775

Figure 2022546609000776
実施例１６２．致死性マウスモデルにおけるＢ型インフルエンザ（Ｙａｍａｇａｔａ系統）に対する複合体４５ｂの有効性
複合体４５ｂを雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）における致死性Ｂ型インフルエンザ感染症に対して評価した。攻撃ウイルス（Ｂ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６）は、マウスに致死的感染症を引き起こすことができるマウス適合型単離物である。実験はマウス５匹の群を７つ含んでいた。０日目に全てのマウスを、ケタミン／キシラジン（それぞれ１５０及び１０ｍｇ／ｋｇ）の混合物で麻酔した後にＬＤ９５の３倍のウイルスで３０μｌの体積の鼻腔内接種によって攻撃した（マウス１匹あたりおよそ３Ｅ４）。
ウイルス攻撃の２時間後に試験品、ビヒクルまたはＦｃのみの対照（ｈＩｇＧ１ Ｆｃ）の単回皮下処置を全ての群に施した。試験では、複合体４５ｂの３～０．０３ｍｇ／ｋｇの濃度を評価した。マウスを２週間追跡評価し、体重減少が２０％を超えるかまたは瀕死状態にあると認められる動物を死亡と記録した。
ビヒクルで処置したマウスが全て８日目までに死亡に至った一方、ｈＩｇＧ１ Ｆｃ対照の死亡は８０％であった。対照的に、複合体４５ｂを受けているマウスは全ての試験濃度において、単回皮下投薬を受けた後に完全に保護された（表８８）。
Figure 2022546609000777
Ｂ型インフルエンザ（Ｙａｍａｇａｔａ）に対する複合体４５ｂの力価は、最低試験濃度０．０３ｍｇ／ｋｇでの４％未満の一時的減少を示している毎日の体重測定によってさらに支持された（表８９）。

Figure 2022546609000778
実施例１６３．２８日間マウス予防モデルにおけるインフルエンザＨ１Ｎ１、Ｈ３Ｎ２及びＢ（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）に対する複合体４５ｂの有効性
複合体４５ｂを雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）における季節性インフルエンザ亜型（Ｈ１Ｎ１、Ｈ３Ｎ２及びＢ（Ｖｉｃｔｏｒｉａ系統））による致死的攻撃に対して評価した。実験は、４匹の動物からなっていた群６（ビヒクル、Ａ／ＨＫ／１／６８攻撃）を除けば、マウス５匹の群を１３個含んでいた。０日目に単回用量で３、１または０．３ｍｇ／ｋｇの複合体４５ｂをマウスに皮下（ＳＣ）投与した。対照マウスも同じ経路によってビヒクル（ＰＢＳ）またはｈＩｇＧ１ Ｆｃのみで処置した。試験品の投与から２８日後にマウスをＬＤ９５の３倍の下記季節性インフルエンザ亜型の１つで鼻腔内攻撃した：
Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）
Ａ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）
Ｂ／Ｍａｌａｙｓｉａ／８／１９３４（Ｂ、Ｖｉｃｔｏｒｉａ系統）
ウイルス攻撃のためにマウスをケタミン／キシラジン（それぞれ１５０及び１０ｍｇ／ｋｇ）の混合物で麻酔し、ウイルスを３０μｌの体積で与えた。死亡及び体重を毎日記録し、体重が２０％減少した動物がいれば死亡と記録した。
試験のＨ１Ｎ１部門では、ビヒクルのみで処置した全てのマウスは７日目までに感染症で死亡した。Ｆｃのみの対照も保護的でなく、試験の最後（４２日目、ウイルス攻撃から１４日後）において生存率がたったの２０％であった。他方、複合体４５ｂは、１ｍｇ／ｋｇの単回ＳＣ投薬の後にこの世界的流行病株に対して１ヶ月にわたって完全に保護的であった（Ｐ＝０．００２０、表９０）。最低試験濃度（０．３ｍｇ／ｋｇ）においてさえ、試験の最後に８０％のマウスが生存していた。毎日の体重（ＢＷ）パーセント測定は、このモデルにおける複合体４５ｂの有効性をさらに支持し（表９１）、１ｍｇ／ｋｇにおいてマウスにはこの高病原性株に対して典型的である１２．１％の一時的減量があったが、これは試験の最後までには概ね回復した（出発時の値の９６．５％）。
Figure 2022546609000779
Figure 2022546609000780
試験のＨ３Ｎ２部門（Ａ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／１／１９６８）では、ビヒクルのみで処置した全てのマウスは８日目までに感染症で死亡した。ビヒクルのみによる処置とは対照的に、全ての複合体４５ｂ濃度は、０．３ｍｇ／ｋｇの用量レベルでさえも完全に保護的であった（Ｐ＝０．０００７、表９２）。試験のＨ１Ｎ１部門でみられたように、毎日のＢＷ測定はＨ３Ｎ２亜型に対する複合体４５ｂの有効性をさらに支持し（表９３）、０．３ｍｇ／ｋｇにおいてマウスには１１％未満の一時的減量があったが試験の最後までにはＢＷが概ね回復した（出発時の値の９８．４％）。

Figure 2022546609000781
Figure 2022546609000782
試験の最終部門は、Ｖｉｃｔｏｒｉａ系統のＢ型インフルエンザに対する複合体４５ｂの有効性を判定した。この試験の他の部門でみられたものに典型的なことであるが、ビヒクルのみで処置したマウスは７日目までに感染症で死亡した。Ｈ１Ｎ１亜型に対する結果と同様に、Ｂ型インフルエンザによる致死的攻撃に対して１ｍｇ／ｋｇの単回ＳＣ用量は、複合体４５ｂ投与の１ヶ月後において完全に保護的であった（表９４、Ｐ＝０．００３１）。最低試験濃度（０．１ｍｇ／ｋｇ）では６０％のマウスが生存した。試験の他の部門でのように、ＢＷデータは複合体４５ｂの力価を支持している。Ｂ／Ｍａｌａｙｓｉａ株に対しては、１ｍｇ／ｋｇで処置した動物は６％未満の一時的ＢＷ減少を示し、これは試験の最後までには回復した（表９５、１００．２％）。

Figure 2022546609000783

Figure 2022546609000784
実施例１６４．試験管内でのプラーク減少アッセイ
２４ウェルプレート内に播種したメイディンダービー犬腎臓（ＭＤＣＫ）細胞においてプラーク減少アッセイを実施した。１０％のＦＢＳを含有する０．５ｍＬの培地（ＤＭＥＭ）に５００，０００個のＭＤＣＫ細胞を播種し、およそ２４時間インキュベートした。試験品ならびに、使用ウイルスであるＨ１Ｎ１ ＷＴ（Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／１２／２０１２）及びＨ２７５Ｙ（Ａ／Ｔｅｘａｓ／２３／２０１２）、Ｈ３Ｎ２ ＷＴ（Ａ／Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ／１２／２００７）及びＥ１１９Ｖ（Ａ／Ｔｅｘａｓ／１２／２００７）、ならびにＢ（Ｂ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４）を、ＰＢＳとウシアルブミン３５％とＣａ２＋／Ｍｇ２＋とを含有する緩衝液で希釈した。複合体４５ｂ、及びバロキサビル、ザナミビル オセルタミビル対照薬をウイルスと３０分間室温で予備インキュベートし、その後にそれらを、培地除去及び１回のＰＢＳによる洗浄が行われた後のＭＤＣＫ細胞の単層に添加した。各薬物－ウイルス組合せのＭＯＩは、ＰＢＳ対照ウェルにおいて３０個のプラークを目標とするように選択された。吸着を１時間行い、ウイルス－試験品混和物を除去し、感染細胞を、１．２５％のＡｖｉｃｅｌとＤＭＥＭと０．０１％のＤＥＡＥ－デキストランと２μｇ／ｍＬのＴＰＣＫトリプシンとの混合物で希釈された試験品の存在下で４８時間インキュベートした。４８時間後、今度はＡｖｉｃｅｌ混合物を除去し、細胞をパラホルムアルデヒドで固定し、１％のクリスタルバイオレットで染色してプラークを計数した。全ての薬物は０．３～１００ｎＭの範囲の６つの濃度で試験された。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用してＥＣ５０値（ｎＭ）を算出した。結果を表９６にまとめる。
Figure 2022546609000785
複合体４５ｂはプラーク減少アッセイにおいて、試験した全てのＨ１Ｎ１、Ｈ３Ｎ２及びＢ株に対するその強力な活性を示し、３つの対照薬剤のどれよりも低いＥＣ５０値を与えた（表９６）。加えて、オセルタミビル耐性を付与するＮＡ突然変異Ｅ１１９Ｖ及びＨ２７５Ｙの存在による複合体４５ｂの活性への影響は最小限に抑えられた。
実施例１６５．耐性インフルエンザウイルスの選択のための連続継代実験
ウイルス阻害剤による選択圧の下での薬剤耐性突然変異体ウイルス株の出現の可能性を評価するために、連続継代試験を複合体４５ｂについてオセルタミビル及びバロキサビル対照薬と比較して行った。連続継代試験はＭＤＣＫ細胞を使用して行った。継代は以下のとおりに行った：ウェル（２４ウェル）１つあたり５００，０００個のＭＤＣＫ細胞を、ＦＢＳが１０％、ＰＳが１％、ＮａＰｙｒが１％、及びＨＥＰＥＳが１％である５００μｌのＤＭＥＭに入れて播種し、およそ２４時間インキュベートした。細胞がおよそ８０％コンフルエンシーに達した時点でそれをＰＢＳで一度洗浄し、化合物またはＰＢＳ単独の存在下で２時間、通常の培養条件の下でインキュベートした。選択剤濃度を、後の継代のための十分なウイルス産生を維持しながらウイルスを最大限阻害するのに必要とされる濃度に最適化した。連続継代実験に用いた複合体４５ｂ、バロキサビル及びオセルタミビルの濃度はそれぞれ４ｎＭ、４ｎＭ及び２００ｎＭであった。細胞を、ＰＢＳ、ウシアルブミン３５％、及びＣａ２＋／Ｍｇ２＋を含有する緩衝液の中で室温で１時間、０．０１のＭＯＩでＡ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９ Ｈ１Ｎ１ ｐｄｍに感染させ、続いて接種材料を除去し、ＰＳが１％、ＮａＰｙｒが１％、及びＨＥＰＥＳが１％であるＤＭＥＭ（ＦＢＳなし）で細胞を一度洗浄した。その後、ＰＳが１％、ＮａＰｙｒが１％、ＨＥＰＥＳが１％、及びＴＰＣＫ処理トリプシンが２μｇ／ｍｌであるＤＭＥＭで希釈された選択剤の存在下で細胞を２４時間インキュベートした。インキュベーション後、ウイルス上清を採取し、細胞及び残屑を遠心分離（５分、４℃、１，４００ｘｇ）によって除去した。その後、上清を、
ｉ プラークアッセイによってウイルス力価を定量するため ｉｉ 赤血球凝集アッセイを行って化合物による阻害を逃れたウイルスがあるか否かを判定するため
ｉｉｉ 新しく播種したＭＤＣＫ細胞を化合物の存在下で再感染させるため
に使用した。
１０回の継代にわたってプロセスを繰り返した。薬物の存在下での力価上昇が一旦検出されればウイルスはプラーク精製され得る。プラーク精製に続いて８つ全てのゲノムセグメントの配列決定及びＰＢＳ処理対照ウイルスとの比較を行って、逃れた突然変異体が検出され得る。連続継代実験のまとめを図８３に示す。複合体４５ｂでは、（耐性突然変異体の出現がないことを示唆して）１０回の継代を通してウイルス力価の上昇が認められなかった一方、バロキサビル及びオセルタミビルの力価は、それぞれ６回及び８回の継代の後に、ＰＢＳ対照に認められたのと同程度のレベルに上昇した。
実施例１６６．細胞変性効果アッセイ
哺乳動物細胞をインフルエンザウイルスによる感染及び破壊から防護する複合体４５ｂの能力を測定するために、実施例２５に述べられている細胞変性効果（ＣＰＥ）に基づくマイクロ中和アッセイを、少し改変して行った。手短に述べると、ＭＤＣＫ細胞の単層をＡ型またはＢ型インフルエンザ株に、０．００１から１まで変動する適切なＭＯＩで感染させた。試験品を０．１～１０，０００ｎＭの範囲の濃度で添加し、３７℃、５％ＣＯ２でＡ型インフルエンザについては３日間、またはＢ型インフルエンザについては５日間インキュベートした。クリスタルバイオレット染色によって、５９５ｎｍでの吸光度を読み取ることによってＣＰＥを判定した。結果を以下の表９７及び表９８に示す。


Figure 2022546609000786

Figure 2022546609000787
実施例１６７．生Ａ型インフルエンザウイルスまたはノイラミニダーゼ耐性突然変異体の溶解物を使用するノイラミニダーゼ阻害
ノイラミニダーゼ阻害（ＮＡＩ）。試験品を３７℃、５％ＣＯ２で２０分間、ノイラミニダーゼ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）または生ウイルスとインキュベートした。２’－（４－メチルウンベリフェリル）－α－Ｄ－Ｎ－アセチルノイラミン酸基質を適切なウェルに加え、３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートした。３５５ｎｍ励起／４６０ｎｍ発光での蛍光を読み取ることによってＮＡＩを判定した。ノイラミニダーゼ耐性突然変異体及び生インフルエンザウイルスについてノイラミニダーゼ阻害が判定された（表９９、表１００、表１０１、表１０２及び表１０３）。

Figure 2022546609000788

Figure 2022546609000789
Figure 2022546609000790
Figure 2022546609000791
Figure 2022546609000792
実施例１６８．抗体依存性細胞貪食アッセイ
複合体４５ｂを抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）について試験した。ＭＤＣＫ細胞の単層をＡ型インフルエンザまたはＢ型インフルエンザ株に０．００１～１０のＭＯＩで感染させ、３７℃で１８～２４時間、５％ＣＯ２中でインキュベートした。ＡＤＣＰは、市販のレポート細胞株（ＰＲＯＭＥＧＡ）によって製造業者の指示に従って決定された。手短に述べると、試験品を１～１０，０００ｎＭの範囲の濃度で適切なウェルに加え、３７℃で１５分間、５％ＣＯ２中でインキュベートした。発光を読み取ることによってＡＤＣＰを定量した。複合体４５ｂ及びＦｃ単独（実施例１２４と同様にして調製された配列番号７３）をインフルエンザＡ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）及びインフルエンザＡ／ＨＫ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（表１０４～１０６）、ならびにインフルエンザＢ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ、表１０７）に対して試験して、複合体４５ｂによるＡＤＣＰのＭＯＩ依存的増大が示された。複合体４５ｂは、１０のＭＯＩのインフルエンザＡ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）及びインフルエンザＡ／ＨＫ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（それぞれ表１０８～１１０）、ならびにインフルエンザＢ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ、図１１１）に対するＡＤＣＰの用量依存的増大も示した。
Figure 2022546609000793
Figure 2022546609000794
Figure 2022546609000795
Figure 2022546609000796

Figure 2022546609000797
Figure 2022546609000798

Figure 2022546609000799
Figure 2022546609000800
実施例１６９．抗体依存性細胞傷害アッセイ
複合体４５ｂを抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）について試験した。ＭＤＣＫ細胞の単層をＡ型インフルエンザまたはＢ型インフルエンザ株に０．００１～１０のＭＯＩで感染させ、３７℃で１８～２４時間、５％ＣＯ２中でインキュベートした。ＡＤＣＣは、市販のレポート細胞株（ＰＲＯＭＥＧＡ）によって製造業者の指示に従って決定された。手短に述べると、試験品を１～１０，０００ｎＭの範囲の濃度で適切なウェルに加え、３７℃で１５分間、５％ＣＯ２中でインキュベートした。発光を読み取ることによってＡＤＣＣを定量した。複合体４５ｂ及びＦｃ単独（実施例１２４と同様にして調製された配列番号７３）をインフルエンザＡ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）及びインフルエンザＡ／ＨＫ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（それぞれ表１１２～１１４）、ならびにインフルエンザＢ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ、表１１５）に対して試験して、複合体４５ｂによるＡＤＣＣのＭＯＩ依存的増大が示された。複合体４５ｂは、１０のＭＯＩのインフルエンザＡ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）及びインフルエンザＡ／ＨＫ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）（それぞれ表１１６～１１８）、ならびにインフルエンザＢ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ、図１１９）に対するＡＤＣＣの用量依存的増大も示した。
Figure 2022546609000801

Figure 2022546609000802
Figure 2022546609000803
Figure 2022546609000804
Figure 2022546609000805
Figure 2022546609000806
Figure 2022546609000807
Figure 2022546609000808
実施例１７０．致死性マウスインフルエンザモデルにおける複合体４５ｂの有効性：試験＃５８
複合体４５ｂを雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（６～８週齢、ｎ＝５／群）において致死性インフルエンザＡ／ＰＲ／８／１９３４（３Ｅ２ＰＦＵ）に対して評価した。試験デザインを表１２０に示す。感染後のｔ＝＋２時間に試験品を使用してマウスを、複合体４５ｂについては単回用量で、または対照薬剤については４日間にわたって１日２回、（ＳＣ）処置した。全てのマウスを体重について毎日追跡評価した。感染後４日目にマウスを屠殺し、両側の肺葉を採取した。肺をホモジナイズしてウイルス負担量及び免疫応答を決定した。データを表１２１～１２３に示す。

Figure 2022546609000809
Figure 2022546609000810
Figure 2022546609000811
Figure 2022546609000812
実施例１７１．致死性マウスインフルエンザモデルにおける複合体４５ｂの有効性：試験＃５５
複合体４５ｂを雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（６～８週齢、ｎ＝５／群）において致死性インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（３Ｅ４ＰＦＵ）に対して評価した。試験デザインを表１２４に示す。感染後のｔ＝＋２時間に試験品を使用してマウスを、複合体４５ｂについては単回用量で、または対照薬剤については４日間にわたって１日２回、（ＳＣ）処置した。全てのマウスを体重について毎日追跡評価した。感染後４日目にマウスを屠殺し、両側の肺葉を採取した。肺をホモジナイズしてウイルス負担量及び免疫応答を決定した。データを表１２５及び表１２６Ａ～１２６Ｂに示す。

Figure 2022546609000813
Figure 2022546609000814
Figure 2022546609000815
Figure 2022546609000816
実施例１７２．試験管内での複合体４５ｂの種間交差Ｆｃ受容体結合性
複数の種からのＦｃガンマ受容体に対する複合体４５ｂの結合を、以下に記載するＥＬＩＳＡ法を用いて実施した。Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ ９６ウェルプレートを４℃で一晩、炭酸塩緩衝液中に入った１μｇ（１００μＬ／ウェル）の複合体４５ｂでコーティングした。同じ条件下で非複合ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ、及びアイソタイプ対照抗体によるコーティングも一晩行った。翌日、３００μＬ／ウェルの、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０が補充されたｐＨ７．４の１×のＰＢＳ（ＰＢＳＴ）でプレートを５回洗浄し、その後、旋回プレート振盪器上で１時間室温で、２００μＬ／ウェルのＰＢＳＴ中１％のＢＳＡでブロッキングした。プレートを３００μＬ／ウェルのＰＢＳＴで５回洗浄し、その後、組換えＨｉｓタグ付きＦｃガンマ受容体を希釈剤（０．５％のＢＳＡを含みＴｗｅｅｎ２０が０．０２５％であるＰＢＳ）の中に含んだ２回の２倍段階希釈液（０．５～１，０００ｎｇ、１００μＬ／ウェル）と室温で２時間振盪しながらインキュベートした。ヒト及びカニクイザルＦｃγＲ１／ＣＤ６４を２５ｎｇ／１００μＬ／ウェルの出発濃度でスクリーニングした。プレートを３００μＬ／ウェルのＰＢＳＴで５回洗浄し、その後、希釈剤で１：１，０００に希釈された１００μＬ／ウェルのマウス抗Ｈｉｓ ＨＲＰ抗体（カタログ番号ＭＡＢ０５０Ｈ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）と室温で１時間、振盪しながらインキュベートした。プレートを３００μＬ／ウェルのＰＢＳＴで洗浄の合間に１分間のインキュベーションを挟んで８回洗浄し、１００μＬ／ウェルのＴＭＢ基質試薬を使用して５～１０分間発色させた。反応を１００μＬ／ウェルの１ＮのＨ２ＳＯ４で停止し、ＥｎＳｐｉｒｅ多モードプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して４５０ｎｍでの吸光度を読んだ。結合曲線の非線形回帰解析（シグモイド、４ＰＬ）を用いてＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍバージョン８によって半数効果濃度（ＥＣ５０）を算出した。複数の種からのＦｃＲｎ受容体に対する複合体４５ｂの結合性を、以下の改変を加えて本質的にはＦｃガンマ結合ＥＬＩＳＡについて記載されているとおりに実施した。ブロッキングステップに続いて結合アッセイを、ＦｃＲｎ結合に最適なｐＨであるｐＨ５．８、及びｐＨ７．４で反復して実施した。
複合体４５ｂは、マウス、ヒト、ラット及びカニクイザルからのＦｃガンマ受容体にヒトＩｇＧ１ Ｆｃと同程度のアビディティーで結合した（表１２７）。複合体４５ｂは、免疫阻害Ｆｃガンマ受容体に比べてより高いアビディティーで免疫活性化Ｆｃガンマ受容体に結合した。ｐＨ５．８において複合体４５ｂは全ての種からのＦｃＲｎ受容体にヒトＩｇＧ１ Ｆｃと等価なアビディティーで結合した。予想通り、ｐＨ７．４において複合体４５ｂのＦｃＲｎ結合性は低下した（表１２７）。


Figure 2022546609000817
実施例１７３．複合体４５ｂのＩＶ、ＳＣ及びＩＭ投与を比較する７日間マウスＰＫ試験
６週齢の雄のＣＤ－１マウスを使用してマウスＰＫ試験を実施した。マウスに５ｍｇ／ｋｇの試験品（５ｍｌ／ｋｇの用量体積）をＩＶ、ＳＣ及びＩＭ注射した。標準的なＩＡＣＵＣ承認飼育条件下で動物を飼育した。適時に動物の非最終採血を（後眼窩、頬または尾静脈で）行い、凝固を防止するために血液をＫ２ＥＤＴＡ管内に採集した。採集された血液を遠心分離にかけ（２，０００ｘｇ、１０分間）、試験品濃度の経時的分析のために血漿を抜き取った。各時間点での複合体４５ｂの血漿中濃度をサンドイッチＥＬＩＳＡによって以下のとおりに測定した：複合体４５ｂ分子をノイラミニダーゼ被覆プレート上に捕捉し、その後、ＨＲＰ複合抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃ抗体を使用して検出した。複合体４５ｂ（またはｈＩｇＧ１ Ｆｃ）標準曲線の４ＰＬ非線形回帰を用いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍでタンパク質濃度を算出した。方法についてのより詳しい説明は、上に提供されている。複合体４５ｂを比較する曲線を図８４に示し、ｈＩｇＧ１ Ｆｃ（配列番号７３）を比較する曲線を図８５に示す。複合体４５ｂ血漿曝露レベルはＳＣとＩＭとで同程度であり、ＳＣまたはＩＭのいずれの経路からの生物学的利用能もＩＶ投与と比較しておよそ７７％となった（表１２８～１３０）。複合体４５ｂ血漿中濃度は、全ての経路について注射後およそ２４時間目に等価であった。

Figure 2022546609000818
Figure 2022546609000819
Figure 2022546609000820
実施例１７４．複合体４５ｂの用量線形性を比較する７日間マウスＰＫ試験
６週齢の雄のＣＤ－１マウスを使用してマウスＰＫ試験を実施した。マウスに１、３、１０、３０または１００ｍｇ／ｋｇの試験品（５ｍｌ／ｋｇの用量体積）をＳＣ注射した。標準的なＩＡＣＵＣ承認飼育条件下で動物を飼育した。適時に動物の非最終採血を（後眼窩、頬または尾静脈で）行い、凝固を防止するために血液をＫ２ＥＤＴＡ管内に採集した。採集された血液を遠心分離にかけ（２，０００ｘｇ、１０分間）、試験品濃度の経時的分析のために血漿を抜き取った。各時間点での複合体４５ｂの血漿中濃度をサンドイッチＥＬＩＳＡによって以下のとおりに測定した：複合体４５ｂ分子をノイラミニダーゼ被覆プレート上に捕捉し、その後、ＨＲＰ複合抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃ抗体を使用して検出した。複合体４５ｂ（またはｈＩｇＧ１ Ｆｃ）標準曲線の４ＰＬ非線形回帰を用いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍでタンパク質濃度を算出した。方法についてのより詳しい説明は上に提供されている。ＮＡ及びＦｃ捕捉によって検出された複合体４５ｂを比較する曲線をそれぞれ図８６及び８７に示す。マウスでは複合体４５ｂの１～１００ｍｇ／ｋｇのＳＣ投与での妥当な線形用量比例性が認められた（表１３１）。


Figure 2022546609000821
実施例１７５．複合体４５ｂのＩＶまたはＳＣ投与の後の１４日間ラットＰＫ試験
ラットＰＫ試験は、４６～４９日齢の雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットを使用してＳｅｖｅｎｔｈ Ｗａｖｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｍａｒｙｌａｎｄ Ｈｅｉｇｈｔｓ，ＭＯ）によって実施された。ラットに尾静脈を介して５ｍｇ／ｋｇの複合体４５ｂをＩＶ注射したか、または５もしくは５０ｍｇ／ｋｇの試験品（５ｍｌ／ｋｇの用量体積）をＳＣ注射した（図８８～８９）。標準的なＩＡＣＵＣ承認飼育条件下で動物を飼育した。適時に動物の非最終採血を（後眼窩、頬または尾静脈で）行い、凝固を防止するために血液をＫ２ＥＤＴＡ管内に採集した。採集された血液を遠心分離にかけ（２，０００ｘｇ、１０分間）、試験品濃度の経時的分析のために血漿を抜き取った（表１３２）。各時間点での複合体４５ｂの血漿中濃度をサンドイッチＥＬＩＳＡによって以下のとおりに測定した：複合体４５ｂ分子をノイラミニダーゼ被覆プレート上に捕捉し、その後、ＨＲＰ複合抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃ抗体を使用して検出した（表１３３～１３４）。ｈＩｇＧ１は抗ｈＩｇＧ１ Ｆｃ抗体を使用して捕捉された。複合体４５ｂ標準曲線の４ＰＬ非線形回帰を用いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍでタンパク質濃度を算出した。方法についてのより詳しい説明は上に提供されている。図８８に示される複合体４５ｂを比較する曲線は線形用量比例性を実証している。ＩＶ及びＳＣ投与での複合体４５ｂ血漿中レベルは注射後２４時間目に収束する（図８９）。データを表１３５及び表１３６に示す。
Figure 2022546609000822
Figure 2022546609000823
Figure 2022546609000824
Figure 2022546609000825
Figure 2022546609000826
Figure 2022546609000827
実施例１７６．複合体４５ｂのＳＣ投与の後の１４日間非ヒト霊長類ＰＫ試験
非ヒト霊長類（ＮＨＰ）ＰＫ試験は、体重が２．５～６．５ｋｇの範囲である４．５～８歳の雄及び雌のカニクイザルを使用してＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒによって実施された。１日目及び８日目にＮＨＰに５または２０ｍｇ／ｋｇの試験品（５ｍｌ／ｋｇの用量体積）をＳＣ注射した。標準的なＩＡＣＵＣ承認飼育条件下で動物を飼育した。適時に動物の非最終採血を（大腿静脈または橈側皮静脈を介して）行い、凝固を防止するために血液をＫ２ＥＤＴＡ管内に採集した。採集された血液を遠心分離にかけ（２，０００ｘｇ、１０分間）、試験品濃度の経時的分析のために血漿を抜き取った（表１３７）。各時間点での複合体４５ｂの血漿中濃度をサンドイッチＥＬＩＳＡによって以下のとおりに測定した：複合体４５ｂ分子をノイラミニダーゼ被覆プレート上に捕捉し、その後、ＨＲＰ複合抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃ抗体を使用して検出した（図９０～９１）。複合体４５ｂ標準曲線の４ＰＬ非線形回帰を用いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍでタンパク質濃度を算出した。方法についてのより詳しい説明は上に提供されている。複合体４５ｂを比較する曲線を図９２に示す。用量応答は５～２０ｍｇ／ｋｇのＳＣにおいて線形である。８日目の複合体４５ｂの２回目の投与の後に複合体４５ｂの蓄積が認められた。


Figure 2022546609000828
実施例１７７．致死性マウスインフルエンザモデルにおけるオセルタミビル耐性単離物に対する複合体４５ｂの有効性
複合体４５ｂを雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）における致死性ＩＡＶ Ｈ１Ｎ１インフルエンザ感染症に対して評価した。攻撃ウイルス（Ａ／Ｐｕｅｒｔｈ／２６１／２００９）は、ノイラミニダーゼ阻害剤に対する耐性をもたらすＨ２７５Ｙ突然変異を保有するマウス適合型単離物である。
実験はマウス５匹の群を９つ含んでいた。０日目に全てのマウスを、イソフルランで軽く麻酔したマウスに対するＬＤ９０の２倍のＡ／Ｐｕｅｒｔｈ／２６１／２００９（Ｈ１Ｎ１）で５０μｌの体積の鼻腔内接種によって攻撃した。群１～８には、攻撃後２時間目にＳＣによる単回処置を与えた。ビヒクル（ＰＢＳ）のみの群に加えて、ヒトＩｇＧ１（Ｆｃ単独）をさらなる陰性対照として含めた。群９には、リン酸オセルタミビルを感染後８時間目から開始して５日間にわたって１日２回、経口送達によって与えた（表１３８）。全てのマウスを攻撃後１４日間にわたって生存（表１３９）及び体重減少（表１４０）について追跡評価した。
複合体４５ｂで処置したマウスは、１０、３、１及び０．３ｍｇ／ｋｇの単回用量によってインフルエンザ（Ａ／Ｐｕｅｒｔｈ／２６１／２００９）による攻撃に対する１００％の生存率を示した。さらに、群サイズが小さい（ｎ＝５）にもかかわらず、これらの結果はビヒクル対照に対して統計的に有意であった（表１３９）。ビヒクル（ＰＢＳ）を投薬した場合に試験の最後まで生存したマウスはおらず、ｈＩｇＧ１ Ｆｃのみで処置した場合には２０％しか生存しなかった。オセルタミビル群は、以前にオセルタミビル感受性単離物から保護すると示された用量（２０ｍｇ／ｋｇ、１日２回×５日）で処置されたにもかかわらず、生存がなかった。これらの結果は、攻撃ウイルスがオセルタミビルに対して耐性であり複合体４５ｂに対して感受性であることを裏付けている。
Ｈ２７５Ｙ突然変異を含有するインフルエンザに対する複合体４５ｂの力価は体重データによってさらに支持された（表１４０）。１ｍｇ／ｋｇ以上の濃度の単回用量の複合体４５ｂを受けている群は３％以下の一時的体重減少を示したが、これは試験の最後までには回復した。

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Figure 2022546609000831
実施例１７８．致死性マウスインフルエンザモデルにおける第２オセルタミビル耐性単離物に対する複合体４５ｂの有効性
実施例１７７に示されているものと類似する試験において、複合体４５ｂを、オセルタミビルに対する耐性を付与するＨ２７５Ｙ突然変異を保有する第２のＡ型インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）単離物に対する活性について試験した。この試験のために、Ａ／Ｔｅｘａｓ／２３／２０１２において突然変異を起こさせた。以前と同様に、ＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ、６～８週齢）を使用し、ＬＤ９５の２倍（５Ｅ４ｐｆｕ／マウス）で鼻腔内攻撃した。ウイルス攻撃の２時間後から開始して５日間にわたって１日２回、２０ｍｇ／ｋｇのオセルタミビルを経口投薬した。他の全ての試験品は、表１４１に列挙されているとおりＳＣ投薬された。動物を１４日間にわたって追跡評価し、体重（ＢＷ）を毎日記録した。動物の体重減少が２０％に達した場合にはそれを死亡と記録した。
Figure 2022546609000832
以前の試験と同様に、ビヒクル対照もｈＩｇＧ１ Ｆｃ（配列番号７３）のみの対照も致死的攻撃からの保護をもたらさなかった（それぞれ２０及び０％の生存率、表１４２）。対照的に、０．３～３．０ｍｇ／ｋｇの範囲の濃度の複合体４５ｂで処置した群は致死的攻撃から完全に保護された。さらに、０．１ｍｇ／ｋｇの複合体４５ｂは部分的保護を示し、試験の１４日間を通して生存率が６０％であった。しかしながら、２００ｍｇの合計用量のオセルタミビルは、予想通りにマウスをウイルス攻撃から保護することができなかった。ＢＷデータ（表１４３；群内での最初の死亡までの記録）は生存率結果を反映して、保護群（複合体４５、０．３～３．０ｍｇ／ｋｇ）では一時的な体重減少しかみられなかった。この試験で試験されたオセルタミビル突然変異（Ｈ２７５Ｙ）は、この試験によって複合体４５ｂに対する感受性が高いことが示される臨床的に重要な突然変異である。

Figure 2022546609000833
Figure 2022546609000834
実施例１７９．致死性マウスモデルにおけるインフルエンザＡ／ＷＳＮ／１９３３（Ｈ１Ｎ１）に対する皮下投薬された複合体４５ｂの有効性
複合体４５ｂを雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）における致死性ＩＡＶ Ｈ１Ｎ１インフルエンザ感染症に対して評価した。攻撃ウイルス（Ａ／ＷＳＮ／１９３３）は、マウスに致死的感染症を引き起こすことができるマウス適合型単離物である。実験はマウス５匹の群を７つ含んでいた。０日目に全てのマウスを、ケタミン／キシラジン（それぞれ１５０及び１０ｍｇ／ｋｇ）の混合物で麻酔した後にＬＤ９５の３倍のウイルスで３０μｌの体積の鼻腔内接種（２Ｅ３ウイルス／マウス）によって攻撃した。死亡及び体重を２１日間にわたって毎日記録し、体重が２０％減少した動物がいればそれを死亡と記録した。
ウイルス攻撃後２時間目に試験群に３、１、０．３、０．１もしくは０．０３ｍｇ／ｋｇの複合体４５ｂの単回皮下（ＳＣ）処置、またはｈＩｇＧ１ Ｆｃ対照もしくはビヒクル（ＰＢＳ）を１０ｍｌ／ｋｇの用量体積で与えた。試験デザインを表１４４にまとめる。
Figure 2022546609000835
予想通り、ビヒクルまたはｈＩｇＧ１ Ｆｃ対照を受けているマウスはそれぞれ７日目または８日目に感染症で死亡した（表１４５）。しかしながら、複合体４５ｂで処置したマウスは、０．３ｍｇ／ｋｇにまで下げた濃度で完全に保護され、０．１では８０％が保護された。複合体４５ｂによる保護の完全な消失は０．０３ｍｇ／ｋｇの最低用量濃度においてのみみられた。

Figure 2022546609000836
毎日の体重測定結果は生存観察結果と一致していた。予想通り、ビヒクルまたはｈＩｇＧ１ Ｆｃで処置したマウスは体重の定常的減少をそれが２０％を上回るまで示し、この時点でそれを死亡と記録した（表１４６）。
対照マウスとは対照的に、３、１及び０．３ｍｇ／ｋｇの複合体４５ｂを受けている群は試験全体を通して健康体重を維持し、３％未満の一時的体重減少（１ｍｋ／ｋｇの用量群、１８日目；表１４６）しか示さなかった。生存及び体重測定の両方によって、複合体４５ｂはわずか０．３ｍｇ／ｋｇの単回ＳＣ用量でインフルエンザＡ／ＷＳＮ／１９３３の致死的攻撃からの堅牢な保護を示した。

Figure 2022546609000837
実施例１８０．治療遅延の致死性マウスモデルにおけるインフルエンザＡ／Ｔｅｘａｓ／３６／９１（Ｈ１Ｎ１）に対する静脈内投薬された複合体４５ｂの有効性
複合体４５ｂを雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）における致死性Ａ型インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）感染症に対して評価した。攻撃ウイルス（Ａ／Ｔｅｘａｓ／３６／９１）は、マウスに致死的感染症を引き起こすことができるマウス適合型単離物である。０日目に全てのマウスを、ケタミン／キシラジン（それぞれ１５０及び１０ｍｇ／ｋｇ）の混合物で麻酔した後にＬＤ９５の２倍のウイルス（約７５ウイルス／マウス）で５０μｌの鼻腔内接種によって攻撃した。死亡及び体重を１５日間にわたって毎日記録し、体重が２０％減少した動物がいればそれを死亡と記録した。
試験デザインは表１４７に詳しく示され、複数の部門からなる。対照部門は、ウイルス攻撃の２４時間後に投薬されるビヒクル（ＰＢＳ）及びｈＩｇＧ１ Ｆｃのみの群を含む（未感染群もこの部門の一部である）。第２部門は、処置開始を２４、４８、７２または９６時間遅延させてヒト化用量の４倍で投薬されるオセルタミビルからなっていた。最後の部門は、各々上記のオセルタミビル部門と同じスケジュールで投薬するものとする１または３ｍｇ／ｋｇの単回ＩＶ用量で投与される複合体４５ｂからなっていた。
予想通り、ビヒクル及びｈＩｇＧ１ Ｆｃは、ウイルス攻撃の２４時間後に投薬された場合には保護的でなく、６日目までに完全な死亡をもたらした。この試験においてオセルタミビルは、２４時間遅れて投薬された場合、ヒト化用量の４倍（２００ｍｇ／ｋｇの累積用量）で部分的に有効であったにすぎなかった（表１４８、生存率８０％）。攻撃後４８時間目では、オセルタミビルの有効性はよりいっそう低く落ち込み、試験の最後には４０％のマウスしか生存していなかった。オセルタミビル処置が７２または９６時間目まで遅延した場合には保護が全くなかった。
対照的に、複合体４５ｂは、投薬が２４時間遅延した場合、１及び３ｍｇ／ｋｇで完全に保護的であった。攻撃後４８時間目では、３ｍｇ／ｋｇの群はなおも完全に保護され、１ｍｇ／ｋｇもほぼそうであり生存率が８０％であった。７２時間目では、１ｍｇ／ｋｇはまたも８０％の保護を示したが、３ｍｇ／ｋｇは２０％の保護しか示さなかった。まとめると、この治療遅延モデルにおいて、生存率によって測定した場合、１及び３ｍｇ／ｋｇの複合体４５ｂの用量群は両方ともオセルタミビルよりも優れた力価を示す。同様に注目すべきこととして、複合体４５ｂの合計用量が１または３ｍｇ／ｋｇであった一方、オセルタミビルは２００ｍｇ／ｋｇで与えられた。
予想通り、体重データは生存に関する知見を支持し（表１４９）、概して、複合体４５ｂ処置マウスの体重保持がより優れていることを示している。複合体４５ｂ処置マウスにおいて体重は、オセルタミビル処置群がよりはるかに高い用量を受けたにもかかわらず、統計的に有意ではないとはいえより良好に保持される。

Figure 2022546609000838

Figure 2022546609000839
Figure 2022546609000840
 実施例１８１．１４日間カニクイザル用量範囲探索毒性試験において評価した複合体４５ｂの安全性
試験の０日目及び７日目に、カニクイザルに５ｍｐｋまたは２０ｍｐｋまたは５０ｍｐｋの複合体４５ｂを皮下注射によって投与した。ビヒクル対照と比較して、体重増加、臓器重量、食餌摂取に対する有意な影響はどの試験用量においても認められなかった。（ＡＵＣによって測定された）血漿曝露量は用量とともに比例的に増加した。これらの前臨床安全性結果は、致死性マウスインフルエンザモデルにおけるインフルエンザ感染症からの２８日間の保護のために必要なＡＵＣに対する毒性試験での最高用量からのＡＵＣ比率を基準とした高い治療指数（５４倍）と一致している。どの試験用量においても、試験品に関する副作用は何ら認められなかった。観察結果のまとめを表１５０に示す。
Figure 2022546609000841
実施例１８２．非致死性フェレットモデルにおけるインフルエンザＡ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍに対する皮下投薬された複合体４５ｂの有効性。
フェレットにおけるＡ型インフルエンザ感染症は概して、ヒトにおいてみられるのと類似した発症機序を有すると考えられている。このため、臨床的に重要なインフルエンザＡ／ＣＡ／０７／０９及びＨ１Ｎ１世界的流行病株で攻撃した非致死性フェレットモデルにおいて複合体４５ｂを試験した。手短に述べると、雄のフェレット（３～５月齢）をＴｒｉｐｅ Ｆ ｆａｒｍｓから入手し、Ａ型インフルエンザＨ１Ｎ１に対する抗体を欠くことを確認した。各フェレットに、攻撃の２４±２．０時間前の単回静脈内（ＩＶ）注射による複合体４５ｂ、ビヒクル（ＰＢＳ）もしくはｈＩｇＧ１ Ｆｃのいずれか、またはインフルエンザウイルス接種の４±０．５時間前から開始される強制経口投与によるリン酸オセルタミビル（２０ｍｇ／ｋｇ）を与えた。オセルタミビルの投与はウイルス接種後に１日２回で（１２±１．５時間隔てて）５日間にわたって継続された。試験濃度及び実験デザインの詳細を表１５１に示す。
フェレットを、ケタミン（２５ｍｇ／ｋｇ）及びキシラジン（２ｍｇ／ｋｇ）で麻酔した後に０．５ｍＬの体積で１Ｅ６個のインフルエンザＡ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）の感染性粒子によって鼻腔内攻撃した。試験品の投与の場合も動物を上記と同様に麻酔した。試験の継続期間は１４日間であり、読み値は、毎日の体重（ＢＷ）、臨床兆候、体温、及び表１５１中に列挙される時間での鼻腔洗浄液（０．５ｍＬ）または喉スワブからなっていた。鼻腔洗浄液のウイルス負担量は、ＭＤＣＫ細胞を使用した標準的なプラークアッセイを用いて決定された。喉スワブのウイルス負担量は、標準的なｑＰＣＲ法を用いて実施された。（３ｍｇ／ｋｇの複合体４５ｂを投薬された）群６の動物からは５分目、２、２４、７２及び１２０時間目に血漿試料も得た。表１５２に詳しく示されているとおり、ビヒクル（ＰＢＳ）またはＦｃのみで処置した対照動物はＢＷが１日目から減少し始めて６日目にピークに達した（それぞれ１０．８及び１０．１％）。同様のＢＷの低下は最低複合体４５ｂ用量（０．３ｍｇ／ｋｇ）においてもみられた。対照的に、１～３０ｍｇ／ｋｇの複合体で処置されたフェレットはＢＷ減少においておよそ５０％の低下を示した。
ＢＷに基づいて予測されるように、複合体４５ｂは、フェレットにおいて主要なインフルエンザ感染部位である鼻腔洗浄液からのウイルス負担量の低減も示した（表１５３及び表１５４）。複合体４５ｂの有効性は、最高用量でビヒクル処置動物に対して相対的に対数２に近い減少が達成された２日目の負担量において最も顕著に示された。さらには、複合体４５ｂによるウイルス力価の低下は３０～１ｍｇ／ｋｇにおいて用量応答的である。この傾向は、４日目の力価では、（２～４日目のビヒクル処置力価の低下から明らかなように）非致死性フェレットモデルにおいて免疫系がより大きな役割を果たすのでやや弱められたとはいえ概ね再現した。
２つの主要な試験読み値（鼻腔での力価、及びＢＷ）に基づくと、総合的にこれらのデータは、ヒト疾患に類似する重要なモデルにおいて治療的濃度で上気道に到達する複合体４５ｂの能力を実証している。
Figure 2022546609000842
Figure 2022546609000843
Figure 2022546609000844
Figure 2022546609000845
体温変化（午前及び午後）も記録し、表１５５中に列挙する。試験を通しての体温変化は、鼻腔負担量及び体重でみられた複合体４５ｂの有効性を概ね支持している。最も注目されるのは、複合体４５ｂまたはオセルタミビルで処置した時に動物が体温上昇を示す時間がビヒクル処置フェレットに比べて全体的に減少することである。
この試験では、動物を毎日観察し、インフルエンザの臨床症候及びその重症度を記録した。この非致死性モデルでは、くしゃみが、技術者によって記録された病気の優勢な兆候であった（表１５６）。ビヒクル処置フェレットと比較して、複合体４５ｂまたは陽性対照で処置された動物は、くしゃみをすることがより少なく、これが群１よりも早く消散した。図９６では明瞭にするために０．３ｍｇ／ｋｇ処置群をビヒクル及びオセルタミビル群と一緒にグラフに示している。
この試験において複合体４５ｂは全ての読み値（鼻腔負担量、体重、体温及び臨床スコア）によって、ビヒクル処置動物に比べて強力な活性を示した。重要なことに、この試験の主要な読み値である鼻腔洗浄液のウイルス負担量を減少させる上で複合体４５ｂは、著しくより高い用量のオセルタミビルに比べてより強力であった。ヒト疾患を模擬すると認識されている重要なモデルにおいて認められた複合体４５ｂの有効性は、この候補の治療的可能性を支持している。
Figure 2022546609000846
Figure 2022546609000847
実施例１８３．単回ＩＶ注射３ｍｇ／ｋｇの後のフェレットにおける複合体４５ｂの５日間ＰＫ分析
フェレットＰＫ試験は、３～５月齢の雄のフェレットを使用してＩＩＴ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＩＩＴＲＩ）によって実施された。フェレット（ｎ＝５）に３ｍｇ／ｋｇ（２ｍＬの用量体積）の複合体４５ｂを単回静脈内（ＩＶ）注射によって投与し、その２４時間後に１×１０６プラーク形成単位（ＰＦＵ）のＡ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）インフルエンザウイルスで鼻腔内攻撃した。投薬及びウイルス攻撃の前にケタミン（２５ｍｇ／ｋｇ）とキシラジン（２ｍｇ／ｋｇ）との混合物を使用してフェレットに麻酔した。投薬後５分目、２、２４、７２及び１２０時間目に血液（約０．５～１ｍＬ）を採取し、血漿を得るために処理した。（ＰＢＳによる０．５ｍＬの）鼻腔洗浄液を２、４、６及び８日目に採集した。複合体４５ｂ分子をノイラミニダーゼ（ＮＡ）またはＦｃ被覆プレート上に捕捉し、その後、ＨＲＰ複合抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃ抗体を使用して検出した。複合体４５ｂ標準曲線の４ＰＬ非線形回帰を用いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍでタンパク質濃度を算出した。平均血漿中濃度を用いて、Ｐｈｏｅｎｉｘ ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ７．０．を使用して薬物動態パラメータを算出した。方法についてのより詳しい説明を以下に提供する。
ＮＡ捕捉ＥＬＩＳＡでは、Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ ９６ウェルプレート（カタログ番号１２－５６５－１３６、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を、Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）からの０．１Ｕ／ウェルのＮＡ（カタログ番号１１０５８－ＶＮＡＨＣ、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）を含んだ１×のＸＰＬコーティング用緩衝液（カタログ番号５１５０－００４１、ＳｅｒａＣａｒｅ）でコーティングした。プレートを旋回プレート振盪器上で室温で１時間インキュベートした（５００ｒｐｍ）。血漿試料の段階希釈液を播種し、室温で２時間、振盪しながらインキュベートした（試料希釈剤：０．５％のＢＳＡを含みＴｗｅｅｎ２０が０．０２５％であるＰＢＳ＋終濃度が１：１００であるナイーブフェレット血漿；鼻腔洗浄液試料から血漿を除去した）。０．２３０～５００ｎｇ／ｍＬの範囲の複合体４５ｂ標準曲線を各プレートで反復して作成した。２時間のインキュベーションの後、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０を含んだ３００μＬのＰＢＳでプレートを５回洗浄した。その後、試料希釈剤で１：２，０００に希釈したＨＲＰ複合抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ Ｆ（ａｂ’）２抗体（カタログ番号７０９－０３６－０９８、Ｊａｃｋｓｏｎ）によって室温で１時間、プレート上のＮＡに結合した複合体を探った。その後、Ｔｗｅｅｎ２０を０．０５％含んだ３００μＬのＰＢＳでプレートを８回洗浄し、ＴＭＢ基質で７～８分間発色させた。１ＮのＨ２ＳＯ４で反応を停止させた。ＥｎＳｐｉｒｅ多モードプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）によって４５０ｎｍで吸光度を読み取った。標準曲線の非線形回帰解析（シグモイド、４ＰＬ解析）に続いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍバージョン８を使用して血漿試料中の複合体４５ｂを内挿した。その後、得られた平均血漿中濃度を使用してＰｈｏｅｎｉｘ ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ７．０．を使用するノンコンパートメント解析によって薬物動態パラメータを算出した。
Ｆｃ捕捉ＥＬＩＳＡでは、Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ ９６ウェルプレート（カタログ番号１２－５６５－１３６、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を、０．１μｇ／１００μＬ／ウェルのマウス抗ヒトＩｇＧ（ＣＨ２ドメイン）クローンＲ１０Ｚ８Ｅ９（カタログ番号ＭＣＡ５７４８Ｇ、ＢｉｏＲａｄ）を含んだ炭酸塩緩衝液（カタログ番号Ｃ３０４１、ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＳｉｇｍａ）で一晩、４℃でコーティングした。プレートを３００μＬ／ウェルのＰＢＳＴで５回洗浄し、２００μＬ／ウェルの、５％の脱脂粉乳（カタログ番号９９９９Ｓ、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を含んだＰＢＳＴで１時間、旋回プレート振盪器上で振盪しながら室温でブロッキングした（５００ｒｐｍ）。血漿試料の段階希釈液を播種し、室温で２時間、振盪しながらインキュベートした（試料希釈剤：２．５％の脱脂粉乳を含みＴｗｅｅｎ２０が０．０２５％であるＰＢＳ＋終濃度が１：１００であるナイーブフェレット血漿；鼻腔洗浄液試料から血漿を除去した）。０．０３～５５ｎｇ／ｍＬの範囲の複合体４５ｂ標準曲線を各プレートで反復して作成した。２時間のインキュベーションの後、３００μＬ／ウェルのＰＢＳでプレートを５回洗浄した。その後、試料希釈剤で１：２，０００に希釈したＨＲＰ複合抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ Ｆ（ａｂ’）２（カタログ番号７０９－０３６－０９８、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）によって、室温で振盪しながら１時間、プレート上のＦｃに結合した複合体を探った。その後、３００μＬ／ウェルのＰＢＳＴでプレートを８回洗浄し、ＴＭＢ基質試薬（カタログ番号５５５２１４、ＢＤ）で７～８分間発色させた。１００μＬ／ウェルの１ＮのＨ２ＳＯ４で反応を停止させ、ＥｎＳｐｉｒｅ多モードプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）によって４５０ｎｍで吸光度を読み取った。非線形回帰解析、及び上記のように算出されたＰＫパラメータを使用して血漿試料中の複合体４５ｂを内挿した。
血漿及び鼻腔洗浄液の複合体４５ｂレベルを比較するＰＫプロファイルをそれぞれ図９３及び図９４に示す。ＮＡ及びＦｃ捕捉ＥＬＩＳＡにおいて、類似した複合体４５ｂ血漿曝露レベルが認められた。３ｍｇ／ｋｇでの単回ＩＶ投薬の５日後に平均複合体４５ｂフェレット血漿中濃度は約１０μｇ／ｍＬであった。鼻腔洗浄液でのレベルは、一致する時間点での血漿でのレベルのおよそ３～５％であった。
実施例１８４．高度ウイルス攻撃致死性マウスモデルにおけるインフルエンザＡ／ＰＲ／８／３４（Ｈ１Ｎ１）に対する皮下投薬された複合体４５ｂの有効性
複合体４５ｂを雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）における致死性ＩＡＶ Ｈ１Ｎ１インフルエンザ感染症に対して評価した。攻撃ウイルス（Ａ／ＰＲ／８／３４）は、マウスに致死的感染症を引き起こすことができるマウス適合型単離物である。実験は、２つの実験部門においてマウス５匹の群を１０個含んでいた。０日目に全てのマウスを、ケタミン／キシラジン（それぞれ１５０及び１０ｍｇ／ｋｇ）の混合物で麻酔した後にＬＤ９５の２倍のウイルスで３０μｌの体積の鼻腔内接種（１倍、群１～５）によって、またはＬＤ９５の５０倍（２５倍、群６～１０）で攻撃した。死亡及び体重を１４日間にわたって毎日記録し、体重が２０％減少した動物がいればそれを死亡と記録した。１０ｍｌ／ｋｇの用量体積でのウイルス攻撃から２時間後に試験群に３、１、０．３または０．１ｍｇ／ｋｇの複合体４５ｂの単回皮下（ＳＣ）処置を与えた。試験デザインを表１５７にまとめる。
１倍試験部門では、ビヒクル処置マウスは６日目に攻撃ウイルスで死亡した。対照的に、複合体４５ｂは並外れた力価を示し、１倍ウイルス攻撃マウスを最低用量で完全に保護した（表１５８Ａ）。体重データ（表１５９Ａ）は一時的な体重減少を示したが、これは全ての複合体４５ｂ処置マウスにおいて試験の最後までに概ね回復した。
２５倍多いウイルス（ＬＤ９５の５０倍）で攻撃した群では、マウスはより早く感染で死亡し、５日目までに８０％が死に至り、６日目までに１００％が死亡した（表１５８Ｂ）。複合体４５ｂで処置したマウスは、１または３ｍｇ／ｋｇで完全に保護された一方、０．３ｍｇ／ｋｇの群は生存率が６０％であった。驚くべきことに、より大きいウイルス攻撃においてさえ１及び３ｍｇ／ｋｇ処置はあまり大きくない体重減少を示したにすぎず、正味の体重増加をもって試験が終えられた（表１５９Ｂ）。
この試験は、非常に高いウイルス力価による攻撃においてさえ複合体４５ｂの並外れた力価を実証した。
Figure 2022546609000848
Figure 2022546609000849
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実施例１８５．細胞変性効果（ＣＰＥ）アッセイにおける高病原性Ａ型インフルエンザ（Ｈ５Ｎ１、Ｈ７Ｎ９）に対する複合体４５ｂの活性
複合体４５ｂの力価を決定する試験管内アッセイをＢＳＬ－３（高病原性）Ａ型インフルエンザに対して行い、概して標準的手順に従った。手短に述べると、異なる濃度の試験品をウイルス（およそ２５０％ＴＣＩＤ５０）と混合し、３５℃で１時間インキュベートした。インキュベーション後、混合物をＭＤＣＫ細胞の８０～９０％コンフルエントな単層に添加した。９０分インキュベートした後、細胞を洗浄し、試験品を再塗布した。その後、ウイルス拡散を最小限に抑えるために単層にカルボキシメチルセルロースを重ね、２日間インキュベートした。２日間の培養の後、細胞をＰＢＳで洗浄し、１０％のホルマリンで固定した。固定後、ＭＤＣＫ単層をＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００で透過性処理し、インフルエンザ核タンパク質に対するマウスｍＡｂで免疫染色した。単層を読み取り、ウェル１つあたりの染色領域を計数してＥＣ５０／１００値を決定した。
試験の結果は表１６０にまとめて示され、世界的流行病の可能性を有する高病原性株に対する複合体４５ｂの力価を実証している。重要なことに、複合体４５ｂは４つのＨ５Ｎ１及び１つのＨ７Ｎ９単離物に対して１７ｎＭ以下のＩＣ５０値を与えた。対照的に、オセルタミビル及びザナミビルは、このパネルにおいて高病原性株の不完全な網羅を示した。最も注目されたのは、重要なＨ７Ｎ９単離物に対するそれらの活性の欠如であった。これに対し、複合体４５ｂは、この単離物（０．５ｎＭ）に対して非常に強力であった。これらの結果は、強毒性インフルエンザによる世界的流行病を治療する複合体４５ｂの潜在能力がオセルタミビル及びザナミビルのそれよりも優れておりバロキサビルとほぼ等しいことを示唆している。
Figure 2022546609000853
実施例１８６．３０、１０、３、１または０．３ｍｇ／ｋｇでの単回ＩＶ注射の後のフェレット鼻腔洗浄液における複合体４５ｂの８日間ＰＫ分析
フェレットＰＫ試験は、３～５月齢の雄のフェレットを使用してＩＩＴ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＩＩＴＲＩ）によって実施された。フェレット（ｎ＝５）に３０、１０、３、１または０．３ｍｇ／ｋｇ（２ｍＬの用量体積）の複合体４５ｂを単回静脈内（ＩＶ）注射によって投与し、その２４時間後に１×１０６プラーク形成単位（ＰＦＵ）のＡ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）インフルエンザウイルスで鼻腔内攻撃した。投薬及びウイルス攻撃の前にケタミン（２５ｍｇ／ｋｇ）とキシラジン（２ｍｇ／ｋｇ）との混合物を使用してフェレットに麻酔した。ケタミン（２５ｍｇ／ｋｇ）及びキシラジン（２ｍｇ／ｋｇ）で麻酔し、ペニシリン（１００Ｕ／ｍＬ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）及びゲンタマイシン（５０μｇ／ｍＬ）が補充された０．５ｍＬの無菌ＰＢＳを各鼻腔内に注入し、排出された流体を検体カップに採集することによって、攻撃後２、４、６及び８日目に鼻腔洗浄液を採集した。回収された鼻腔洗浄液の体積を記録し、複合体４５ｂの濃度をＦｃ捕捉ＥＬＩＳＡによって決定した。複合体４５ｂ分子をノイラミニダーゼ被覆プレート上または抗ｈＩｇＧ１抗体被覆プレート上に捕捉し、その後、ＨＲＰ複合抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃ抗体を使用して検出した。ｈＩｇＧ１は、抗ｈＩｇＧ１ Ｆｃ抗体を使用して捕捉された。
手短に述べると、Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ ９６ウェルプレート（カタログ番号１２－５６５－１３６、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を、０．１μｇ／１００μＬ／ウェルのマウス抗ヒトＩｇＧ（ＣＨ２ドメイン）クローンＲ１０Ｚ８Ｅ９（カタログ番号ＭＣＡ５７４８Ｇ、ＢｉｏＲａｄ）を含んだ炭酸塩緩衝液（カタログ番号Ｃ３０４１、ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＳｉｇｍａ）で一晩、４℃でコーティングした。プレートを３００μＬ／ウェルのＰＢＳＴで５回洗浄し、２００μＬ／ウェルの、５％の脱脂粉乳（カタログ番号９９９９Ｓ、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を含んだＰＢＳＴで１時間、旋回プレート振盪器上で振盪しながら室温でブロッキングした（５００ｒｐｍ）。鼻腔洗浄液試料をまず、マトリックス一致希釈剤（ナイーブ動物からの、０．５％のＢＳＡ及び０．０２５％のＴｗｅｅｎ２０を含んだＰＢＳによる鼻腔洗浄液の１：１０希釈液）で１：１０に希釈し、その後、３倍に段階希釈し、１００μＬ／ウェルをプレートに加え、振盪しながら室温で２時間インキュベートした。０．０３～５５ｎｇ／ｍＬの範囲の複合体４５ｂ標準曲線を各プレートで反復して作成した。２時間のインキュベーションの後、３００μＬ／ウェルのＰＢＳＴでプレートを５回洗浄した。その後、１００μＬ／ウェルの、試料希釈剤で１：２，０００に希釈したＨＲＰ複合抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ Ｆ（ａｂ’）２（カタログ番号７０９－０３６－０９８、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）によって、室温で振盪しながら１時間、プレート上のＦｃに結合した複合体４５ｂを探った。その後、３００μＬ／ウェルのＰＢＳＴでプレートを８回洗浄し、１００μＬ／ウェルのＴＭＢ基質試薬（カタログ番号５５５２１４、ＢＤ）で７～８分間発色させた。１００μＬ／ウェルの１ＮのＨ２ＳＯ４で反応を停止させ、ＥＮＳＰＩＲＥ（登録商標）多モードプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）によって４５０ｎｍで吸光度を読み取った。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍバージョン８を使用して標準曲線の非線形回帰解析（シグモイド、４ＰＬ解析）に従ってフェレット鼻腔洗浄液試料中の複合体４５ｂを内挿した。フェレット鼻腔洗浄液中の複合体４５ｂレベルを比較するＰＫプロファイルを図９４及び図９５に示す。０．３～３０ｍｇ／ｋｇのＩＶにおいて複合体４５ｂのフェレット鼻腔洗浄液中レベルの用量比例的上昇が認められた。０．３ｍｇ／ｋｇコホートにおいて８日目の時間点はＦｃ捕捉検出の限界未満であった（１ｎｇ／ｍＬ）。
実施例１８７．３つの異なる経路によって投薬したときの致死性マウスインフルエンザモデルにおけるＡ型インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）に対する複合体４５ｂの有効性
複合体４５ｂを雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）における致死性ＩＡＶ Ｈ１Ｎ１インフルエンザ感染症に対して評価した。攻撃ウイルス（Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９）は、マウスに致死的感染症を引き起こすことができる世界的流行病単離物である。実験はマウス５匹の群を１０個含んでいた。０日目に全てのマウスを、ケタミン／キシラジン（それぞれ１００及び１０ｍｇ／ｋｇ）で軽く麻酔した後にＬＤ９５の３倍のウイルス（約３Ｅ４ウイルス／マウス）で３０μｌの体積の鼻腔内接種によって攻撃した。攻撃の２時間後に群に複合体４５ｂまたはビヒクル（ＰＢＳ）の単回処置を静脈内（ＩＶ）、筋肉内（ＩＭ）または皮下（ＳＣ）に与えた（表１６０）。死亡及び体重（ＢＷ）を１４日間にわたって毎日追跡評価した。２０％超の体重が減少している動物がいればそれを死亡と記録した。
Figure 2022546609000854
異なる用量経路ごとの複合体４５ｂの力価を決定するために、複合体の一致した濃度（１、０．３及び０．１ｍｇ／ｋｇ）をＩＶ、ＩＭまたはＳＣのいずれかで投薬した。生存率によって測定した場合、全ての投薬経路は、複合体４５ｂをＳＣ投薬した場合の最低有効用量であると先に決定された０．１ｍｇ／ｋｇでのどの投薬経路によっても１００％有効となった（表１６１）。しかしながら、ビヒクルで処置したマウスは６日目までに死亡が８０％に達した。生存率によって測定した場合、これらのデータは投薬経路によらない複合体４５ｂの等価な力価を実証している。

Figure 2022546609000855
体重データは、複合体４５ｂがどの投薬経路によっても非常に強力であることを実証して生存率データを強く支持している（表１６２）。この強毒性の世界的流行病単離物では典型的なことであるが、マウスは３日目または４日目のあたりでおよそ１０％のＢＷ減少を示した。印象深いことに、投薬経路によって同じ用量濃度でのＢＷの差は最小限に変化したにすぎなかった（斜体参照、表１６２）。この試験からのＢＷデータは、複合体４５ｂが投薬経路によらずに有効であるという結論をさらに支持している。


Figure 2022546609000856
２つの異なる読み値によって複合体４５ｂは、ＩＶ、ＳＣまたはＩＭ投薬経路によって投薬された場合に等しく有効であることが見出された。複合体４５ｂの投薬経路の柔軟性は重要な利点であり、必要に応じて入院及び外来患者の場面で様々な製剤及び投薬経路を可能にする。
実施例１８８ 複合体４６の合成
クリック試薬溶液の調製：０．００５０ＭのＣｕＳＯ４を含んだＰＢＳ緩衝液：１０．０ｍｇのＣｕＳＯ４を１２．５３ｍＬのＰＢＳに溶解させ、その後、このＣｕＳＯ４溶液を５．００ｍＬ採り、４３．１ｍｇのＢＴＴＡＡ（ＣＡＳ番号１３３４１７９－８５－９）及び２４７．５ｍｇのアスコルビン酸ナトリウムを添加してクリック試薬溶液を得た（０．００５０ＭのＣｕＳＯ４、０．０２０ＭのＢＴＴＡＡ、及び０．２５Ｍのアスコルビン酸ナトリウム、）。
１５ｍＬ容の遠心管の中に入ったアジド官能化Ｆｃ（６５．５ｍｇ、１０．０ｍＬ、１．１３μｍｏｌ、アジドＤＡＲ約５．９、配列番号７６）に、アルキン誘導体化小分子（２２．７ｍｇ、１５．２μｍｏｌ、実施例１４５のＩｎｔ－８３で表され、各アジド１つあたり３．０当量のＦｃ）を添加した。穏やかに掻き混ぜて全ての固体を溶解させた後、混合物をクリック試薬溶液（１．８０ｍＬ）で処理した。得られた混合物を周囲温度で１２時間にわたって穏やかに回転させた。それを親和性クロマトグラフィーによってプロテインＡカラムで精製し、続いてサイズ排除クロマトグラフィー（一般的な複合体精製プロトコールを参照されたい）で精製した。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析において平均質量は６６．４２０Ｄａ（ＤＡＲ＝５．８）となった。収量５７ｍｇ、純度９８％。得られた複合体は図１０２に描かれている。
本出願人は、Ｆｃアロタイプの違いに対応する配列番号７７のアミノ酸配列を有するＦｃドメインを代わりに使用して複合体４６を調製してもよいことを記しておく。異なるアロタイプは、本明細書に記載の特質に関して同じ挙動をすると予期される。
本出願人はさらに、複合体４６のためのＦｃをコードする核酸構築物が、Ｃ末端リジン残基を含むものである配列番号６７のアミノ酸配列をコードする核酸を含んでいたことを記しておく。発現時に複合体４６のＦｃのＣ末端リジンはタンパク質分解的に切断され、配列番号７６の配列を有するＦｃをもたらす。Ｃ末端リジンの存在または非存在はＦｃまたは対応する複合体の特質を変化させない。
実施例１８９．複合体４５ｂ及び複合体４６のＩＶ投与の後の３０日間比較非ヒト霊長類ＰＫ試験
非ヒト霊長類（ＮＨＰ）ＰＫ試験は、体重が３．５～８．５ｋｇの範囲である５～９歳の雄及び雌のカニクイザルを使用してＢＴＳ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）によって実施された。ＮＨＰに２ｍｇ／ｋｇの試験品（０．４ｍＬ／ｋｇの用量体積）をＩＶ注射した。標準的なＩＡＣＵＣ承認飼育条件下で動物を飼育した。適時に動物の非最終採血を（大腿静脈または橈側皮静脈を介して）行い、凝固を防止するために血液をＫ２ＥＤＴＡ管内に採集した。採集された血液を遠心分離にかけ（２，０００ｘｇ、１０分間）、試験品濃度の経時的分析のために血漿を抜き取った（表１６３）。各時間点での複合体４５ｂ及び複合体４６の血漿中濃度をサンドイッチＥＬＩＳＡによって測定した。手短に述べると、試験品をＦｃ被覆プレート上に捕捉し、その後、ＨＲＰ複合抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃ抗体を使用して検出した。複合体４５ｂまたは複合体４６の標準曲線の４ＰＬ非線形回帰を用いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍでタンパク質濃度を算出した。方法についてのより詳しい説明は上に提供されている。複合体４５ｂと複合体４６とを比較する曲線を図９７に示す。複合体４６は、複合体４５ｂの約１０日と比較して顕著に改善された約４５日の終末相半減期を示す。複合体４６のＡＵＣは複合体４５ｂのＡＣＵよりも２倍大きい（表１６３）。








Figure 2022546609000857
実施例１９０．細胞変性効果（ＣＰＥ）アッセイにおけるＡ型インフルエンザ季節性株、世界的流行病株及び薬剤耐性株に対する複合体４５ｂ及び標準治療対照の活性
複合体４５ｂの力価をオセルタミビル、ザナミビル及びバロキサビルの対照と比較して決定する試験管内アッセイを、実施例１６６で実施したように行い、概して標準的手順に従った。データを表１６４～１６７に示す。
Figure 2022546609000858
Figure 2022546609000859
Figure 2022546609000860
Figure 2022546609000861
実施例１９１．複合体４５ｂの血漿中及び気道上皮被覆液（ＥＬＦ）中濃度を比較する１４日間マウスＰＫ試験
Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓからの雌のＢＡＬＢ／ｃマウスを試験開始前に５日間にわたって順応させた。ケージ１つあたり３～６匹の動物を、食餌及び水を自由に摂取できる状態で飼育した。全ての手順はＮｅｃＳｏｍｅ ＩＡＣＵＣの方針及び指針に従って実施された。動物に２０ｍｇ／ｋｇの試験品（１０ｍＬ／ｋｇの用量体積）を皮下（ＳＣ）注射した。選択された時間点において３匹のマウスをＣＯ２吸入によって安楽死させた。心臓穿刺によって血液を血漿保持のためのＫ２ＥＤＴＡ管に採集した。血液採集に続いて、気管支を露出させること、２３Ｇの管材アダプタを挿入すること、及び無菌の１×のＰＢＳ ｐＨ７．４による０．５ｍＬ洗浄を２回実施することによって気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）を実施した。回収流体体積を記録及び保持した。ＢＡＬ手順が完了した時点で肺を取り出し、計量し、－８０℃で保存した。－８０℃での試料の保存の前に、尿素定量アッセイに使用するために血漿及びＢＡＬ流体（ＢＡＬＦ）のアリコートを傾斜法によって取り分けた。採集されたＢＡＬＦを１２，０００ＲＰＭで５分間、室温で遠心分離にかけて肺胞マクロファージをペレット化し、ペレット及び上清を両方とも後援者への出荷時まで－８０℃で保存した。各時間点において複合体４５ｂの血漿中濃度を上に詳しく記載されるように間接ＥＬＩＳＡによって測定した。手短に述べると、複合体４５ｂ分子をノイラミニダーゼ（ＮＡ）被覆プレート上に捕捉し、その後、ＨＲＰ複合抗ヒトＩｇＧ Ｆｃγ特異的Ｆ（ａｂ’）２を使用して検出した。同じＥＬＩＳＡを、上記のとおりに採集したＢＡＬＦに対して実施した。複合体４５ｂ標準曲線の４ＰＬ非線形回帰を用いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍで複合体４５ｂ血漿中濃度を算出した。ＥＬＦ体積、及びＥＬＦ中の複合体４５ｂの濃度は、以前に記載がなされたように希釈マーカーとして尿素を使用して決定された（Ｒｅｎｎａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８６ Ｊ Ａｐｐｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ ６０：５３２－５３８）。複合体４５ｂをＥＬＦ中レベルと比較する曲線を図９８に示す。注射後２時間目までに複合体４５ｂの気道上皮被覆液（ＥＬＦ）中レベルは残りの期間にわたって血漿曝露レベル（ＡＵＣ）の約６０％となり、ほぼ即時に複合体４５ｂが血漿から肺のＥＬＦへと分配されることを示唆している（図９８、表１６８）。
Figure 2022546609000862
実施例１９２．ＳＣＩＤマウスにおける複合体４５ｂのＩＶ、ＳＣ及びＩＭ投与を比較する７日間マウスＰＫ試験
適応免疫系を欠く６週齢の雄の重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）マウスを使用してマウスＰＫ試験を実施した。マウスに５ｍｇ／ｋｇの試験品（１０ｍＬ／ｋｇの用量体積）をＩＶ、ＳＣまたはＩＭ注射した。標準的なＩＡＣＵＣ承認飼育条件下で動物を飼育した。適時に動物の非最終採血を（後眼窩、頬または尾静脈で）行い、凝固を防止するために血液をＫ２ＥＤＴＡ管内に採集した。採集された血液を遠心分離にかけ（２，０００ｘｇ、１０分間）、試験品濃度の経時的分析のために血漿を抜き取った。各時間点での複合体４５ｂの血漿中濃度を、上に詳しく記載されるＥＬＩＳＡによって測定した。手短に述べると、複合体４５ｂ分子をノイラミニダーゼ（ＮＡ）被覆プレート上に捕捉し、その後、ＨＲＰ複合抗ヒトＩｇＧ Ｆｃγ特異的（Ｆａｂ’）２を使用して検出した。Ｆｃ捕捉ＥＬＩＳＡでは、抗ｈＩｇＧ１ Ｆｃ抗体を使用してｈＩｇＧ１を捕捉し、その後、ＨＲＰ複合抗ヒトＩｇＧ Ｆｃγ特異的（Ｆａｂ’）２を使用して検出した。複合体４５ｂ標準曲線の４ＰＬ非線形回帰を用いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍでタンパク質濃度を算出した。７日間にわたってＳＣＩＤマウスにおける複合体４５ｂのＰＫプロファイルを比較する曲線を図９９～１００に示す。ＳＣ及びＩＭでの複合体４５ｂ血漿曝露レベルは同程度であり、ＳＣまたはＩＭ経路のどちらかから得られた生物学的利用能もＩＶ投与と比較しておよそ７７％であった。注射後およそ２４時間目に複合体４５ｂ血漿中濃度は全ての投薬経路において等価であった。
実施例１９３．複合体４６に対して複合体４５ｂのＳＣ投与を比較する７日間マウスＰＫ試験
６週齢の雄のＣＤ－１マウスを使用してマウスＰＫ試験を実施した。マウスに１０ｍｇ／ｋｇの試験品（１０ｍＬ／ｋｇの用量体積）をＳＣ注射した。標準的なＩＡＣＵＣ承認飼育条件下で動物を飼育した。適時に動物の非最終採血を（後眼窩、頬または尾静脈で）行い、凝固を防止するために血液をＫ２ＥＤＴＡ管内に採集した。採集された血液を遠心分離にかけ（２，０００ｘｇ、１０分間）、試験品濃度の経時的分析のために血漿を抜き取った。各時間点での複合体４５ｂの血漿中濃度を、上に詳しく記載される間接ＥＬＩＳＡによって測定した。手短に述べると、複合体４５ｂ分子をノイラミニダーゼ（ＮＡ）被覆プレート上に捕捉し、その後、ＨＲＰ複合抗ヒトＩｇＧ Ｆｃγ特異的（Ｆａｂ’）２を使用して検出した。複合体４５ｂ標準曲線の４ＰＬ非線形回帰を用いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍでタンパク質濃度を算出した。複合体４５ｂ及び複合体４６の７日間ＰＫプロファイルを比較する曲線を図１０１に示す。複合体４６の血漿曝露レベルは複合体４６よりもおよそ５０％高かった。マウスにおいて、ＷＴヒトＩｇＧ１と比較してヒトＩｇＧ１ ＹＴＥ Ｆｃ変異体の半減期は、中性ｐＨでのマウスＦｃＲｎ結合の増強のために短くなることが知られており、これは、酸性ｐＨでのマウスＦｃＲｎに対する結合性の改善を否定するものである（Ｄａｌｌ’ ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．２００２ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６９：５１７１－５１８０。
実施例１９４．複合体４５ｂ及びバロキサビルの併用治療
細胞変性効果（ＣＰＥ）。ＭＤＣＫ Ｓｉａｔ１細胞の単層を、０．０１から１まで変化する適切なＭＯＩでＡ型インフルエンザ亜型に感染させた。複合体４５ｂを単独で、または１～１，０００ｎＭの標準治療剤、例えばバロキサビルと組み合わせて試験し、Ａ型インフルエンザのために３７℃、５％ＣＯ２で３日間インキュベートした。クリスタルバイオレット染色によってＣＰＥを、５９５ｎｍでの吸光度を読み取ることによって決定した。データを表１６９～１７２に示す。バロキサビルと組み合わせて使用すると複合体４５ｂは、バロキサビルがそのＥＣ５０よりも低い濃度で存在する場合でさえ、単独使用時よりも著しく低い濃度でウイルス複製の阻害に有効となる（ＥＣ５０が１０倍よりも大きく低減される）。
Figure 2022546609000863
Figure 2022546609000864
Figure 2022546609000865
Figure 2022546609000866
実施例１９５．Ｉｎｔ－９１の合成
Figure 2022546609000867
ステップａ．

Figure 2022546609000868
 先に調製されたザナミビル誘導体（１．９９３ｇ、２．３６２ｍｍｏｌ、実施例７９に記載のＩｎｔ－２２）を含んだメタノール（３０ｍＬ）の０℃の撹拌溶液に、ＤＢＵ（２．４ｍＬ）を添加した。温度を周囲温度に上げ、１時間後に反応物は所望の生成物を排他的に生成した。全ての揮発性物質をロータリーエバポレーションによって除去した。残渣をシリカカラムによって０％から３０％までのメタノール及びジクロロメタンで溶離させるＩｓｃｏ ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標）液体クロマトグラフィーを用いて精製した。収率１．５８４ｇ、８２％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋Ｈ＋Ｎａ）］＋＝８４０．０、［（Ｍ＋Ｈ）］＋＝８１８．２。
ステップｂ．
Figure 2022546609000869
 ステップａの生成物（５００ｍｇ、０．６１１ｍｍｏｌ）を含んだピリジン（１５．０ｍＬ）の０℃の撹拌溶液にトシルクロリド（１４６ｍｇ、０．７６４ｍｍｏｌ）５．０ｍＬのジクロロメタン）を、シリンジポンプを利用して１時間かけて添加した。トシルクロリドが完全に消費された時に（ＨＰＬＣ追跡評価）、トシルクロリドの等しいアリコートを同様にして添加し、この添加はもう２回繰り返された（反応終了時のトシルクロリドの合計当量は５であった）。反応をメタノール（０．５ｍＬ）でクエンチし、全ての揮発性物質をロータリーエバポレーションによって除去した。残渣をシリカカラムによって０％から３０％までのメタノール及びジクロロメタンで溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフィーを用いて精製した。収率０．４２９ｇ、７２％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋Ｈ）］＋＝９７２．２。
ステップｃ．
Figure 2022546609000870
 ステップｂの生成物（５４７ｍｇ、０．５６３ｍｍｏｌ）を含んだＤＭＦ（５．０ｍＬ）の撹拌溶液に１８－クラウン－６（５９ｍｇ、０．２２５ｍｍｏｌ）及びアジ化ナトリウム（１８３ｍｇ、２．８１４ｍｍｏｌ）を添加し、その後、温度を５０℃に上げた。ＬＣＭＳによって反応終了となった後すぐに全ての揮発性物質をロータリーエバポレーションによって除去した。残渣をシリカカラムによって０％から３０％までのメタノール及びジクロロメタンで溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフィーを用いて精製した。収率０．３３３ｇ、７０％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋Ｈ）］＋＝８４３．２。
ステップｄ．
Figure 2022546609000871
 ステップｃの生成物（５４８ｍｇ、０．６５０ｍｍｏｌ）を含んだＴＨＦ（８．０ｍＬ）の撹拌溶液にシクロプロパン酸のＮ－ヒドロキシスクシンイミジルエステル（２３７ｍｇ、１．３００ｍｍｏｌ）及びトリメチルホスフィン（１３３μＬ、１．３００ｍｍｏｌ）を添加した。ＬＣＭＳによって終了となった後すぐに全ての揮発性物質をロータリーエバポレーションによって除去した。残渣をシリカカラムによって０％から５０％までのメタノール及びジクロロメタンで溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフィーを用いて精製した。収率０．４８８ｇ、８５％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋Ｈ）］＋＝８８５．２。
ステップｅ．
Figure 2022546609000872
 ステップｄの生成物（４８８ｍｇ、０．５５１ｍｍｏｌ）を含んだテトラヒドロフラン及び水（２．０ｍＬ）の０℃の撹拌溶液に水酸化リチウム（１４ｍｇ、０．６０６ｍｍｏｌ）を添加した。ＬＣＭＳによって終了となった後、アンバーライトＩＲＮ－７７をｐＨが酸性になるまで添加した。混合物を酢酸エチルの補助を伴って濾過し、樹脂を捨てた。全ての揮発性物質をロータリーエバポレーションによって除去し、粗製材料をジクロロメタン（４．０ｍＬ）及びＴＦＡ（２．０ｍＬ）に溶解させた。終了となった後、全ての揮発性物質をロータリーエバポレーションによって除去した。残渣をＨＰＬＣ（調整剤としてＴＦＡを０．１％使用して０％から４０％までのメタノール及び水）によって精製した。収率３７０ｍｇ、８６％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋Ｈ）］＋＝６７１．２。
実施例１９６．複合体４７の合成
アジド官能化Ｆｃ（５０ｍｇ、５．０ｍＬ、０．８６２μｍｏｌ、配列番号７３、ＤＡＲ－７．０）の溶液を、アルキン官能化小分子（６．１ｍｇ、７．７６０μｍｏｌ、Ｉｎｔ－９１、実施例１９５に記載のとおりに調製された）が入った４０ｍＬ容の遠心管に加えた。穏やかに振盪して全ての固体を溶解させた後、それを、Ｌ－アスコルビン酸ナトリウム（１２．３ｍｇ、６２．０８μｍｏｌ）と硫酸銅（ＩＩ）（２．５ｍｇ、１５．５２μｍｏｌ）とＢＴＴＡＡ（２６．７ｍｇ、６２．０８μｍｏｌ）とを含んだＰＢＳ７．４緩衝液（６．９８４ｍＬ）の溶液に添加した。得られた混合物を一晩穏やかに振盪した。それを親和性クロマトグラフィーによってプロテインＡカラムで精製し、続いてサイズ排除クロマトグラフィー（本明細書中に示される一般的な複合体精製プロトコールを参照されたい）で精製した。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析において平均質量は６４．４２３Ｄａ（ＤＡＲ＝６．９）となった。収量３５．３ｍｇ、収率７０％。
複合体４７のためのＦｃをコードする核酸構築物は、Ｃ末端リジン残基を含むものである配列番号６４のアミノ酸配列をコードする核酸を含んでいた。発現時に複合体４７のＦｃのＣ末端リジンはタンパク質分解的に切断され、配列番号７３の配列を有するＦｃをもたらす。Ｃ末端リジンの存在または非存在はＦｃまたは対応する複合体の特質を変化させない。
実施例１９７．カルバメートＩｎｔ－９２の合成
Figure 2022546609000873
ステップａ．

Figure 2022546609000874
 実施例２１に記載のとおりに調製された中間体（５．１５ｇ、１２．７４ｍｍｏｌ）をアセトン（１００ｍＬ）に溶解させた。アンバーライトＩＲＮ－７７酸性樹脂を添加して、ｐＨ紙で測定される約４のｐＨをもたらした。全ての出発物質が消費されるまで反応物を加熱した。冷却してすぐに反応を濾過し、濾液をロータリーエバポレーションによって濃縮した。残渣をシリカカラムによって０％から３０％までのメタノール及びジクロロメタンで溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフィーを用いて精製した。収率３．５３５ｇ、６２％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋Ｈ＋Ｎａ）］＋＝４６７．２、［（Ｍ＋Ｈ－ｔ－Ｂｕ）］＋＝３８９．２、［（Ｍ＋Ｈ－Ｂｏｃ）］＋＝３４５．２。
ステップｂ．
Figure 2022546609000875
 ステップａの生成物（３．２５８ｇ、７．３９１ｍｍｏｌ）及びｐ－ニトロフェノールクロロホルメート（２．９７９ｇ、１４．７８ｍｍｏｌ）を含んだピリジン（８０ｍＬ）の撹拌溶液にＤＭＡＰ（１．８０６ｇ、１４．７８ｍｍｏｌ）を添加した。１８時間後、追加のｐ－ニトロフェノールクロロホルメート（１．４９０ｇ、７．３９１ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（０．９０３ｇ、７．３９１ｍｍｏｌ）を添加した。反応完了時に全ての揮発性物質をロータリーエバポレーションによって除去した。残渣をＤＣＭ（２５０ｍＬ）の中に溶け込ませ、濾過した。濾液を２Ｎの硫酸の溶液で洗浄し（３×１００ｍＬ）、その後、重炭酸ナトリウムの飽和溶液で洗浄した（３×１００ｍＬ）。有機物をブライン（２００ｍＬ）で乾燥させ、その後、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカカラムによって０％から１００％までのアセトン及びヘキサンで溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフィーを用いて精製した。収率４．１２２ｇ、９１％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋Ｈ＋Ｎａ）］＋＝６３２．１、［（Ｍ＋Ｈ）］＋＝５５４．０、［（Ｍ＋Ｈ－Ｂｏｃ）］＋＝５１０．２。
ステップｃ．
Figure 2022546609000876
 ステップｂの生成物（４．００ｇ、６．５６２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（２．４００ｍＬ、１３．７８ｍｍｏｌ）を含んだＤＣＭ（４０ｍＬ）の０℃の撹拌溶液に、プロパルギル－ＰＥＧ４－アミンを添加した。温度を周囲温度に上げ、ＬＣＭＳによって終了となるまで撹拌を継続した。全ての揮発性物質をロータリーエバポレーションによって除去した。残渣をシリカカラムによって０％から５０％までのメタノール及びジクロロメタンで溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフィーを用いて精製した。収率４．１３０ｇ、９０％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋Ｈ＋Ｎａ）］＋＝７２４．１、［（Ｍ＋Ｈ－Ｂｏｃ）］＋＝６０２．２。
ステップｄ．
Figure 2022546609000877
 ステップｃからの生成物（４．１３ｇ、５．８８５ｍｍｏｌ）を酢酸（２４ｍＬ）及び（１２ｍＬ）に溶解させ、その後、ＬＣＭＳによって完全な変換が認められるまで撹拌した。反応物をロータリーエバポレーションによって濃縮した。この残渣（４．６０ｇ、５．３４０ｍｍｏｌ）を含んだピリジン（１５０ｍＬ）の撹拌溶液に、トシルＣｌ（１．３９２ｇ、７．２９９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液をシリンジポンプによってゆっくりと添加した。Ｔｏｓ－Ｃｌが消費された後に追加量（１．３９２ｇ、７．２９９ｍｍｏｌ）を添加した。出発物質が完全に変換されてからすぐに全ての揮発性物質をロータリーエバポレーションによって除去した。残渣をシリカカラムによって０％から５０％までのメタノール及びジクロロメタンで溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフィーを用いて精製した。収率３．３８０ｇ、７１％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋Ｈ＋Ｎａ）］＋＝８３８．０、［（Ｍ＋Ｈ－Ｂｏｃ）］＋＝７１６．２。
ステップｅ．
Figure 2022546609000878
 ステップｄのトシラート（３．２８０ｇ、４．０２０ｍｍｏｌ）を含んだＤＭＦ（３０ｍＬ）の撹拌溶液に１８－クラウン－６（４２５ｍｇ、１．６０８ｍｍｏｌ）及びアジ化ナトリウム（１．３０７ｇ、２０．１０ｍｍｏｌ）を添加し、その後、温度を５０℃に上げた。ＬＣＭＳによって終了となった後すぐに全ての揮発性物質をロータリーエバポレーションによって蒸発させた。残渣をシリカカラムによって０％から５０％までのメタノール及びジクロロメタンで溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフィーを用いて精製した。収率２．６５１ｇ、９６％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋Ｈ＋Ｎａ）］＋＝７０９．２、［（Ｍ＋Ｈ－Ｂｏｃ）］＋＝５８７．２。
ステップｆ．
Figure 2022546609000879
 ステップｅの生成物（２．６４９ｍｇ、３．８５８ｍｍｏｌ）を含んだＴＨＦ（２０ｍＬ）の撹拌溶液にシクロプロパン酸のＮ－ヒドロキシスクシンイミジルエステル（１．４１３ｇ、７．７１５ｍｍｏｌ）及びトリメチルホスフィン（７９５μＬ、７．７１５ｍｍｏｌ）を添加した。ＬＣＭＳによって反応終了となった後すぐに全ての揮発性物質をロータリーエバポレーションによって蒸発させた。残渣をシリカカラムによって０％から５０％までのメタノール及びジクロロメタンで溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフィーを用いて精製した。収率１．７４４ｇ、６２％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋Ｈ）］＋＝７２９．２。
ステップｇ．
Figure 2022546609000880
 ステップｆの生成物（１．７４４ｇ、２．３９３ｍｍｏｌ）を含んだＤＣＭ（１５ｍＬ）の０℃の撹拌溶液にＴＦＡ（１５ｍＬ）を添加し、その後、温度を周囲温度に上げた。全ての出発物質が消費された後すぐに揮発性物質をロータリーエバポレーションによって除去した。この粗製物のＬＣＭＳ分析は［（Ｍ＋Ｈ）］＋＝６２９．２であることを示した。この物質を、ＤＩＰＥＡ（７．５０２ｍＬ、４３．０７ｍｍｏｌ）を含んだＤＣＭ（１５ｍＬ）の０℃の撹拌溶液の中に溶け込ませ、ビス－Ｂｏｃ－ｐ－ニトロフェノールクロロホルメート（８１７ｍｇ、２．６３２ｍｍｏｌ）で処理した。出発物質が消費された後すぐに全ての揮発性物質をロータリーエバポレーションによって除去した。残渣をシリカカラムによって０％から５０％までのメタノール及びジクロロメタンで溶離させるＩｓｃｏ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）液体クロマトグラフィーを用いて精製した。収率６３１ｍｇ、３０％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋Ｈ）］＋＝８７１．２。
ステップｈ．
Figure 2022546609000881
 ステップｇの生成物（３１５ｍｇ、０．３６２ｍｍｏｌ）を含んだアセトニトリル（４．０ｍＬ）及び１．０ＭのＮａＣｌの水（８ｍＬ）溶液の０℃の撹拌溶液に、１．０ＭのＮａＯＨ水溶液（１５ｍｇ、３８０μＬ、０．３８０ｍｍｏｌ）を添加した。温度をゆるやかに周囲温度に達せしめながら撹拌を一晩継続した。反応物を酢酸（１００μＬ）でクエンチし、全ての揮発性物質をロータリーエバポレーションによって除去した。残渣をＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９：１の中に懸濁させ、濾過した。全ての揮発性物質をロータリーエバポレーションによって除去した。この粗製物質のＬＣＭＳ分析は、所望の［（Ｍ＋Ｈ）］＋＝８５７．２を有する主要ピークを示した。残渣をＤＣＭ（３．０ｍＬ）及びＴＦＡ（３．０ｍＬ）に溶解させてｂｏｃ基を除去した。ＬＣＭＳで終了となった後すぐに全ての揮発性物質をロータリーエバポレーションによって除去した。残渣をＨＰＬＣ（調整剤としてＴＦＡを０．１％使用して０％から４０％までのメタノール及び水）によって精製した。収率３７０ｍｇ、８６％。ＬＣＭＳでの実測イオン：［（Ｍ＋Ｈ）］＋＝６５７．２。
実施例１９８．複合体４８の合成
アジド官能化Ｆｃ（３３．３ｍｇ、３．３３ｍＬ、０．５７６μｍｏｌ、配列番号７３、ＤＡＲ－７．０）の溶液を、アルキン官能化小分子（６．１ｍｇ、７．７６０μｍｏｌ、実施例１９７に記載のとおりに調製されたＩｎｔ－９２）が入った５０ｍＬ容の遠心管に加えた。穏やかに振盪して全ての固体を溶解させた後、この溶液を、Ｌ－アスコルビン酸ナトリウム（８．６ｍｇ、１１．２１μｍｏｌ）と硫酸銅（ＩＩ）（２．５ｍｇ、１５．５２μｍｏｌ）とＢＴＴＡＡ（２６．７ｍｇ、６２．０８μｍｏｌ）とを含んだＰＢＳ７．４緩衝液（６．９８４ｍＬ）の溶液に添加した。得られた混合物を一晩穏やかに旋回振盪した。それを親和性クロマトグラフィーによってプロテインＡカラムで精製し、続いてサイズ排除クロマトグラフィー（本明細書中に示される一般的な複合体精製プロトコールを参照されたい）で精製した。精製された最終生成物のＭａｌｄｉ ＴＯＦ分析において平均質量は６３．７３４Ｄａ（ＤＡＲ＝６．２）となった。収量３５．３ｍｇ、収率６３％。
複合体４８のためのＦｃをコードする核酸構築物は、Ｃ末端リジン残基を含むものである配列番号６４のアミノ酸配列をコードする核酸を含んでいた。発現時に複合体４８のＦｃのＣ末端リジンはタンパク質分解的に切断され、配列番号７３の配列を有するＦｃをもたらす。Ｃ末端リジンの存在または非存在はＦｃまたは対応する複合体の特質を変化させない。
実施例１９９．ノイラミニダーゼ阻害に対するＤＡＲの影響
ノイラミニダーゼ阻害（ＮＡＩ）
試験品を指定のＰＦＵ／ｍＬの生ウイルスと３７℃、５％ＣＯ２で２０分間インキュベートした。ＮＡ－Ｆｌｕｏｒ基質を適切なウェルに添加し、３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートした。３５５ｎｍ励起／４６０ｎｍ発光で蛍光を読み取ることによってＮＡＩを決定した。式：ＮＡＩ％＝（１－（ＦｌウイルスとＴＡ－Ｆｌウイルスなし））／（Ｆｌウイルスのみ－Ｆｌウイルスなし）×１００を用いてＮＡＩ％を算出した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍの中の非線形回帰解析ソフトウェアを使用してＩＣ５０を算出した。
複合体４５ａはインフルエンザＡ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対して、ＤＡＲ３．３以上でＤＡＲ依存的に増大し最大活性に達する活性を示した（表１７３）。
Ａ／Ｂｅｔｈｅｓｄａ／９５６／２００６（Ｈ３Ｎ２）Ｒ２９２Ｋ突然変異体はオセルタミビルに対する耐性を示し、ザナミビルに対する低下した感受性を示した。複合体４５ａはこの突然変異体に対しても変わりがなく、インフルエンザに対してＤＡＲ３．３以上でＤＡＲ依存的に増大し最大活性に達する活性を示した（表１７３）。
Figure 2022546609000882
実施例２００．続発感染マウスモデル
ＭＲＳＡによる続発細菌感染モデル
３Ｅ３ＰＦＵ／マウス（致死量未満）のＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（Ｖｉｒａｐｕｒ、ロット番号Ｅ１０２０Ａ１）で鼻腔内攻撃した６～８週齢の雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）において有効性試験を行った。攻撃後２時間目に０．３～３ｍｇ／ｋｇの単回皮下（ＳＣ）用量として複合体４５ｂまたはヒトＩｇＧ１ Ｆｃ対照を投与した。感染後６日目にマウスを５Ｅ７コロニー形成単位（ＣＦＵ）の致死量未満用量のメチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）ＴＣＨ１５１６で鼻腔内攻撃した（図１０４）。
細菌肺負担量の決定のために、マウスをＣＯ２で屠殺し、両側の肺葉を採取してＭＲＳＡによる感染の２４時間後の細菌負担量を決定した。ＭａｇＮＡ Ｌｙｓｅｒ（Ｒｏｃｈｅ）を使用して肺を１ｍＬのＰＢＳの中で１ｍｍのシリカビーズでホモジナイズした。ホモジナイゼーションを６，０００ｒｐｍで６０秒間行い、実施の合間に氷上で５分間冷却した。ＣＦＵを決定するために肺ホモジネートをＰＢＳで１０倍段階希釈し、ＬＡプレート上に播種した。ＣＦＵを肺の重量に対して算出した（ＣＦＵ／ｇ肺）。生存試験のために動物の全身の健康状態を追跡評価し、体重（ＢＷ）を１４日間にわたって毎日記録した。瀕死状態、または２０％を上回る体重（ＢＷ）減少を呈している動物を死亡と記録した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（バージョン６．０７）で生存率、ＢＷ曲線及び統計解析を実施した。
複合体４５ｂは、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍの亜致死的攻撃とこれに続くＭＲＳＡによる亜致死的感染による細菌重複感染マウスモデルに対する保護を示した。ｈＩｇＧ１ Ｆｃで処置したマウスにおいて２つの亜致死的感染は累積的に１００％の死亡を招いた（図１０５Ａ）。インフルエンザによる疾患を防止するための０．３または３ｍｇ／ｋｇの複合体４５ｂ処置はマウスの１００％の生存をもたらした。複合体４５ｂは、ｈＩｇＧ１ Ｆｃと比較して、ＭＲＳＡによる攻撃の２４時間後の肺の細菌負担量の低減を示した（図１０５Ｂ）。複合体４５ｂ処置後の細菌負担量は、ＭＲＳＡのみで攻撃したマウスにみられた負担量と同程度であった。
これらのデータは、インフルエンザ感染症に関連する死亡の原因となるＳ．ａｕｒｅｕｓ重複感染などのインフルエンザによる感染からの合併症を緩和する複合体４５ｂの可能性を実証している。
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅによる続発細菌感染モデル
３Ｅ１ＰＦＵ／マウス（致死量未満）のＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ（Ｖｉｒａｐｕｒ、ロット番号１５１２Ｂ４）で鼻腔内攻撃した６～８週齢の雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）において有効性試験を行った（図１０６）。攻撃後２時間目に０．３ｍｇ／ｋｇの単回皮下（ＳＣ）用量として複合体４５ｂまたはヒトＩｇＧ１ Ｆｃ対照を投与した。感染後６日目にマウスを１Ｅ５ＣＦＵの致死量未満用量のＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（ＳＰＮ）６３０１株で鼻腔内攻撃した。動物の全身の健康状態を追跡評価し、ＢＷを１４日間にわたって毎日記録した。瀕死状態、または２０％を上回るＢＷ減少を呈している動物を死亡と記録した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（バージョン６．０７）で生存率、ＢＷ曲線及び統計解析を実施した。
複合体４５ｂは、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍの亜致死的攻撃とこれに続くＳＰＮによる亜致死的感染による細菌重複感染マウスモデルに対する保護を示した。ｈＩｇＧ１ Ｆｃで処置したマウスにおいて２つの亜致死的感染は累積的に１００％の死亡を招いた。インフルエンザによる疾患を防止するための０．３ｍｇ／ｋｇの複合体４５ｂ処置はマウスの１００％の生存をもたらし、細菌重複感染の最も一般的な原因であるＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに対して、インフルエンザによる感染からの合併症を緩和する複合体４５ｂの可能性を実証した（図１０７）。細菌重複感染は、インフルエンザに関連する死亡の大きな原因である。
実施例２０１．ＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるＡ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００４（Ｈ５Ｎ１）ウイルス感染症の複合体４５ａ治療のための投薬最適化試験
この実験のために、雌の１８～２０ｇのＢＡＬＢ／ｃマウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）から得た。マウスを使用前に６日間隔離し、ユタ州立大学のＬａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＣｅｎｔｅｒにてＴｅｋｌａｄ Ｒｏｄｅｎｔ Ｄｉｅｔ（Ｈａｒｌａｎ Ｔｅｋｌａｄ）及び水道水で飼育した。
高病原性トリインフルエンザＡ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００４（Ｈ５Ｎ１）をＣｅｎｔｅｒｓ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ（Ａｔｌａｎｔａ，ＧＡ）から入手した。メイディンダービーイヌ腎臓（ＭＤＣＫ）細胞（アメリカンタイプカルチャーコレクション、Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）においてウイルス増殖を行った。親ウイルスを一回継代して攻撃プールを調製した。その後、攻撃プールをＭＤＣＫ細胞で力価測定を行ってから使用した。
動物の数及び試験群は表１７４に記載される。マウスの群を皮下（ＳＣ）注射によって０．３、１、３及び１０ｍｇ／ｋｇ用量の複合体４５ａで１回処置することをウイルス感染の７日前かウイルス感染の４時間後かのどちらかに行った。ウイルス攻撃投薬の陽性対照として使用されるオセルタミビル（１０ｍｇ／ｋｇ）の投与は、感染後４時間目から開始して１日２回、強制経口投与によって行われた。プラセボとして使用される非複合Ｆｃは、複合体４５ａと同様の方法で投与された。加えて、体重比較のために３つの非処置対照マウスを飼育した。
インフルエンザウイルス攻撃のためにマウスをケタミン／キシラジン（５０ｍｇ／ｋｇ／５ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内注射によって麻酔し、その後、鼻腔内経路によって９０μｌの接種材料体積でマウス１匹あたりおよそ５プラーク形成単位（１×ＬＤ９０）のウイルスで攻撃した。
マウスの計量を処置前及びその後１日おきに行って、ウイルス感染症による体重減少の改善に対する治療の効果を評価した。全てのマウスを２１日間にわたって瀕死及び死亡について観察した。
カプランマイヤー生存曲線を作成し、Ｐｒｉｓｍ８．３（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．）においてＧｅｈａｎ－Ｂｒｅｓｌｏｗ－Ｗｉｌｃｏｃｓｏｎ検定を用いてログランク（マンテル・コックス）検定及びこれに続くペアワイズ比較によって比較した。Ｐｒｉｓｍ８．３を使用して平均体重を一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）とこれに続くテューキーの多重比較検定によって解析した。
Figure 2022546609000883
ウイルス感染の７日前における複合体４５ａによる処置の後には、１０ｍｇ／ｋｇの用量で１００％の保護が認められ、０．３及び３ｍｇ／ｋｇの用量で８０％の保護が認められ、１ｍｇ／ｋｇの用量で７０％の保護が認められた（図１０８Ａ）。プラセボ群での３０％の生存率は珍しく、それゆえ１ｍｇ／ｋｇの用量は有意な保護をもたらさなかった。加えて、全ての用量は体重減少からの有意な保護をもたらした（図１０８Ｂ）。
ウイルス感染の４時間後における複合体４５ａによる処置の後には、１、３及び１０ｍｇ／ｋｇ用量で１００％の保護が認められ、０．３ｍｇ／ｋｇの用量で７０％の保護が認められた（図１０９Ａ）。プラセボ群で３０％の生存率が認められたため、０．３ｍｇ／ｋｇの用量は有意な保護をもたらさなかった。加えて、全ての用量は体重減少からの有意な保護をもたらした（図１０９Ｂ）。
実施例２０２．酵素結合レクチンアッセイ（ＥＬＬＡ）
Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｖｉｓ．Ｅｘｐ．Ｄｏｉ：１０．３７９１／５４５７３、２０１６）の中で報告されているようなＥＬＬＡアッセイを行った。手短に述べると、Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ ９６ウェルプレート（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を４℃で一晩、１×のＫＰＬコーティング用緩衝液（ＳｅｒａＣａｒｅ）の中に入った２．５μｇのフェツイン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）でコーティングした。翌日、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０が補充されたｐＨ７．４のＰＢＳ（ＰＢＳＴ）でプレートを洗浄した。試験品は０．００１～１０００ｎＭで試験され、５０μＬ／ウェルで添加された。１ｅ５～１ｅ６ＰＦＵ／ウェルのインフルエンザウイルスを５０μＬ／ウェルで加えた。プレートを３７℃、５％ＣＯ２で１６～１８時間インキュベートした。プレートを洗浄した後、ＨＲＰと複合したピーナッツアグルチニン（ＰＮＡ－ＨＲＰ）０．１３μｇと２時間インキュベートし、再び洗浄し、１００μＬ／ウェルのＴＭＢ基質（ＢＤ）で３～５分間発色させた。反応を１００μＬ／ウェルの１ＮのＨ２ＳＯ４によって停止させた。ＥｎＳｐｉｒｅ多モードプレートリーダーを使用して４５０ｎｍでの吸光度を読み取った。非線形回帰解析（用量－応答（阻害））を用いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍバージョン８でＩＣ５０を算出した。
複合体４５ｂは、ＥＬＬＡにおいてＡ型及びＢ型インフルエンザ株に対するＩＣ５０がによって、セルタミビルまたはザナミビルに比べて向上した力価を示した（表１７５）。
Figure 2022546609000884
実施例２０３．インフルエンザウイルスノイラミニダーゼに対する潜在的な多価結合を可能にする複合体４５ｂの属性
複合体４５ｂは、Ｉｎｔ－８３とＮ末端が伸張されたｈＩｇＧ１ Ｆｃドメイン（配列番号７３）との化学的及び生物学的に安定した複合体である。図１１０Ｂに示されるように、Ｉｎｔ－８３は、ザナミビル単量体をおよそ１８Å離隔させる柔軟な１５Åの中央リンカーに、ザナミビルのＣ７ヒドロキシル上のメチルカルバメート部分を介して対称に融合した、ザナミビル二量体を含んでいる。Ｉｎｔ－８３の複数のコピーがＦｃドメイン上の表面露出リジン残基に３２原子の柔軟なポリエチレングリコール（ＰＥＧ）系クロスリンカーによって複合しているが、このリンカーは、伸びきった場合にそれらをＦｃの表面から３５～４０Å突出させるものである（図１１０Ｂ）。特定の溶媒曝露リジン残基が複合のための部位となった（図１１０Ｂ）。複合体４５ｂに用いられた、Ｆｃに対するＩｎｔ－８３の平均比は、４．５：１であった。複合体４５ｂの合成は実施例１５６に記載されている。好ましい複合部位の空間的分布（図１１０Ｂ）は、クロスリンカーの長さ及び柔軟性と相まって、原理的には複合体４５ｂが同時に四量体中の複数のＮＡ活性部位（それぞれ約４５または７０Å、図１１０Ａ）と相互作用することを可能にする。加えて、複合体４５ｂにおけるＩｎｔ－８３の離隔は、ＮＡ活性部位が同じビリオン上の隣接ＮＡ四量体（２５～３０Å）との間、または２つのビリオン（１６Å）との間に架橋するのを可能にする。
試験管内での複合体４５ｂの普遍的な活性、及び低い耐性の可能性
本発明者らは、小分子基質を使用する標準的なノイラミニダーゼ阻害（ＮＡＩ）アッセイを用いて免疫関与の非存在下での複合体４５ｂの本質的な抗ウイルス活性を調査した。複合体４５ｂはＡ型及びＢ型インフルエンザに対する強力な活性を示し、ＩＣ５０中央値がそれぞれＡ型インフルエンザＨ１Ｎ１株に対しては１．７ｎＭ（ｎ＝７、１．１～４．８ｎＭの範囲）、Ａ型インフルエンザＨ３Ｎ２株に対しては４．２ｎＭ（ｎ＝６、０．３～１４．９ｎＭの範囲）、及びＢ型インフルエンザ株に対しては４．４ｎＭ（ｎ＝６、１．０～２０．７ｎＭの範囲）となった（表１７６）。全体的に複合体４５ｂは性能がザナミビル及びオセルタミビルと類似していたが、Ｂ型インフルエンザ株に対してはオセルタミビルよりも強力であった（表１７６）。重要なことに、複合体４５ｂのＩＣ５０は、承認済みのノイラミニダーゼ阻害剤に対する低減された感受性を有する臨床的に重要な変異体に対しても変わりがなかった。複合体４５ｂの活性は、Ｈ１Ｎ１亜型のＨ２７５Ｙに対しては１．７ｎＭであり、Ｅ１１９Ｖでは２．６ｎＭであり、Ｈ３Ｎ２亜型のＲ２９２Ｋでは１．２ｎＭであり、またはＢ型のＲ１５２Ｋでは６．７ｎＭであった。オセルタミビルまたはザナミビルはこれらの変異体に対して力価が最大でそれぞれ１００倍超、または１０倍超失われた（表１７７）。複合体４５ｂは、Ｈ５Ｎ１及びＨ７Ｎ９ウイルスからの細胞溶解物に対する強力な活性を保持し、ＩＣ５０がそれぞれ１．９ｎＭ及び１．２ｎＭであった（表１７８）。オセルタミビル及びザナミビルはＨ５Ｎ１に対して同程度の活性を有していたが、オセルタミビル及びザナミビルはＨ７Ｎ９に対して活性を失い、ＩＣ５０がそれぞれ１μＭ超または１００ｎＭ超であった（表１７８）。
Figure 2022546609000885
Figure 2022546609000886
Figure 2022546609000887
次に本発明者らは、基質として大きな糖タンパク質を使用する酵素結合レクチンアッセイ（ＥＬＬＡ）において複合体４５ｂの活性を試験した。ＥＬＬＡアッセイにおけるシアル酸（Ｓｉａ）の提示は細胞の表面上でのＮＡ基質提示とより類似している。結果として基質への接近はより制限され、ＥＬＬＡアッセイにおけるＮＡ活性は、ＮＡ活性部位への接近を阻止する因子によって影響を受けることが示されている（Ｃｈｅｎ Ｙ．Ｑ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．９３：ｄｏｉ．１０．１１２８／ＪＶＩ．０１５２６－１８，２０１９）。興味深いことに、上記のような小分子基質を使用するＮＡ阻害結果と対照して、インフルエンザＡ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対する複合体４５ｂの活性はザナミビル及びオセルタミビルに比べて増強された（１０倍超）（表１７９）。複合体４５ｂでは、Ｆｃドメインによる、ＮＡ四量体間もしくはＮＡ四量体中の隣接ＮＡ活性部位の立体障害、またはウイルス凝集をもたらす多価標的係合が、ＥＬＬＡアッセイにおいてみられた力価の増強に寄与した可能性がある。

Figure 2022546609000888
細胞変性効果（ＣＰＥ）アッセイでは複合体４５ｂとザナミビル及びオセルタミビルとの間によりいっそう大きな隔たりが認められた。複合体４５ｂはＡ型及びＢ型インフルエンザに対する強力な活性を示し、ＭＤＣＫ ＳＩＡＴ１において、またはマウス適合型インフルエンザ株の場合にはＭＤＣＫ細胞において、ＥＣ５０中央値がそれぞれＡ型インフルエンザＨ１Ｎ１株では１．３ｎＭ（ｎ＝６、０．４３～３２．４ｎＭの範囲）、Ａ型インフルエンザＨ３Ｎ２株では０．９ｎＭ（ｎ＝４、０．０４～３６．６ｎＭ）、及びＢ型インフルエンザ株では７．４ｎＭ（ｎ＝４、１．５～１２．８ｎＭ）となった（表１７９）。注目すべきことに、試験したインフルエンザ株のいくつかに対して複合体４５ｂはオセルタミビル及びザナミビルよりも３対数大きい活性を有していた（表１７６）。細胞ベースマイクロ中和アッセイにおいて複合体４５ｂを高病原性株に対して試験した場合、複合体４５ｂのＥＣ５０はＨ５Ｎ１株に対しては１．７ｎＭであり（ｎ＝４）、Ｈ７Ｎ９株に対しては５．３ｎＭであった（ｎ＝１）（表１８０）。ＭＤＣＫ－ＳＩＡＴ１またはＭＤＣＫ細胞において複合体４５ｂのＣＣ５０は１０，０００ｎＭ超であった（データ示さず）。したがって、細胞ベースアッセイにおいてＡ型及びＢ型インフルエンザに対する複合体４５ｂの算出された選択性指数（ＳＩ）は１，０００倍超であった。
Figure 2022546609000889
ＣＰＥアッセイに加えて、複合体４５ｂを、２つの商業的に有力なインフルエンザ抗ウイルス薬であるオセルタミビル及びバロキサビルと比較するために、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍに感染したＭＤＣＫ細胞を使用して連続継代実験を行った。複合体４５ｂはどちらの対照よりも優れた耐性プロファイルを有し、実験の１０代の継代全体にわたって抗ウイルス活性の低下がないことを示した。バロキサビル及びオセルタミビルの抗ウイルス活性は、それぞれ６代及び８代の継代の後に、薬物なしの対照のそれに比べて低下した。後のオセルタミビル継代での薬物耐性ウイルスプラークからのウイルスゲノムの配列決定は、臨床（ＲＥＦ）において認められたことがあるＮＡ活性部位突然変異（Ｅ１１９Ｋ）によって耐性が付与されたことを示していた。
複合体４５ｂによる免疫細胞係合
複合体４５ｂのためのタンパク質担体としてヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインを選択したのは、それが最も長い循環半減期を有して最も大きな活性化をもたらすヒト抗体ＩｇＧアイソタイプであるからであった。複合体４５ｂとの異質なリジン複合方策を利用しているにもかかわらず本発明者らは、非複合Ｆｃ対照及びヒトＩｇＧ１と比較して複合体４５ｂに関して、試験された全てのヒト及びマウスＦｃγ受容体に対する類似したＦｃγ受容体結合性を認めた（図１１１Ａ～１１１Ｈ）。機能アッセイにおいて複合体４５ｂは、インフルエンザＡ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）感染ＭＤＣＫ ＳＩａｔ１細胞に対するＭＯＩ依存性（図１１１Ｉ）及び用量依存性（図１１１Ｊ）において強力な抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘発した。かくして、複合体４５ｂはＦｃγ受容体に結合すること及び機能的に免疫細胞に係合することができる。
複合体４５ｂは多回致死的インフルエンザ攻撃モデルにおいて非常に有効である
試験管内で認められた複合体４５ｂの力価及び抗ウイルス薬効範囲は、動物感染モデルにおける有効性に解釈される。Ａ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ、Ａ／ＷＳＮ／１９３３（Ｈ１Ｎ１）、Ａ／ＣＡ／１２／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９、Ａ／Ｔｅｘａｓ／２３／２０１２（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ０９ Ｈ２７５Ｙ変異体、Ａ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）、Ｂ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６（Ｙａｍａｇａｔａ）、及びＢ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）に対して、複合体４５ｂの単回の０．３ｍｇ／ｋｇ以下の皮下（ＳＣ）投薬は致死的マウス攻撃モデルにおいて完全に保護的であった（図１１２Ａ～１１２Ｈ）。複合体４５ｂによる処置は、最小保護的投薬の後に、限られた一時的であるにすぎない体重減少を招くことがあった（図１１３Ａ～１１３Ｈ）。マウスにおいてトリ世界的流行病株Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００４（Ｈ５Ｎ１）に対して試験した場合、複合体４５ｂは０．３ｍｇ／ｋｇでは７０％の保護を示し、１ｍｇ／ｋｇ以上では１００％の保護を示した（図１１２Ｉ）。マウスにおいてヒト化用量の６倍のオセルタミビルは９０％保護的であるにすぎなかった（図１１２Ｉ）。
複合体４５ｂの有効性をよりよく定量するため及びその性能をオセルタミビルと比較するために、マウス適合型インフルエンザＡ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）による致死的攻撃モデルの後で感染後４日目に肺でのウイルス負担量及びサイトカインレベルを測定した。このモデルでは、複合体４５ｂの最低保護的用量は０．１ｍｇ／ｋｇ（ＳＣ）であり（図１１２Ａ）、約５％の一時的体重（ＢＷ）減少を伴った（図１１３Ａ）。複合体４５ｂは、プラークアッセイによって決定した場合に０．１ｍｇ／ｋｇでは１．０６対数、０．３ｍｇ／ｋｇでは２．１２対数、及び１ｍｇ／ｋｇでは３．１７対数、及び３ｍｇ／ｋｇでは３．６３対数という肺ウイルス負担量（肺組織でのＰＦＵ／ｇ）の用量依存的低減を実証した。これに比べて、ヒト等価（５ｍｇ／ｋｇ）用量（１日２回×４日）またはヒト等価用量の１０倍（５０ｍｇ／ｋｇ）（１日２回×４日）で投薬されたオセルタミビルは用量応答を示さず、中程度の約０．８対数のウイルス負担量低減となった。興味深いことに、試験された２つのオセルタミビル用量は異なる生存結果をもたらした。５日間にわたって１日２回投薬された５ｍｇ／ｋｇまたは５０ｍｇ／ｋｇのオセルタミビルは、それぞれ０％または８０％の生存率をもたらした（図１１４Ａ～１１４Ｂ）。
肺損傷を招きかねない潜在的に有害な免疫応答を軽減することにおける複合体４５ｂの有効性を理解するために、特定の炎症性及び肺損傷サイトカインのレベルを同じ時間点で測定した。複合体４５ｂは用量依存的にレベルを効果的に低減し、測定された全てのサイトカインは３ｍｇ／ｋｇ用量において未感染対照と同程度のレベルに近くなった（図１１２Ｋ～１１２Ｌ、及び図１１５Ａ～１１５Ｃ。総合して、複合体４５ｂによって誘導されるサイトカイン低減の大きさは、試験された全てのサイトカインについてヒト等価用量のオセルタミビルによる処置によって得られるものよりも顕著であり、ＫＣ、ＭＩＰ－１ａ、ＭＣＰ－１についてはヒト等価用量の１０倍のオセルタミビルで処置したマウスに比べてより優れていた（図１１２Ｋ～１１２Ｌ、及び図１１５Ａ～１１５Ｃ）。これらのデータは、オセルタミビルで認められなかった肺における複合体４５ｂによるサイトカインレベルの低下と相関する強力で用量依存的なウイルス負担量低減を複合体４５ｂが誘導することを実証している。
複合体４５ｂについて、有効性に対する投薬経路の影響を評価した。Ａ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍに対してマウスを使用する致死的攻撃モデルにおいて、複合体４５ｂは０．１ｍｇ／ｋｇで静脈内（ＩＶ）、筋肉内（ＩＭ）またはＳＣ投与後に完全に保護的であった（図１１６Ａ～１１６Ｂ）。ＩＶ、ＩＭまたはＳＣ投薬後のマウスの血漿中レベルを比較すると、酵素結合免疫吸着（ＥＬＩＳＡ）アッセイによって決定される複合体４５ｂの血漿レベルは２４時間後に同程度であった。特筆すべきこととして、２つの異なるＥＬＩＳＡ捕捉方法を用いて複合体４５ｂの血漿中レベルを測定したが、一方は、抗ヒトＦｃ捕捉抗体を利用してＦｃレベルを測定するものであり、もう一方は、捕捉のためにウイルスＮＡを利用して完全な複合体を検出するものであった（図１１６Ｃ～１１６Ｄ）。両方法によって測定される複合体４５ｂの血漿中レベルは実験誤差範囲内で同一であり、複合体４５ｂが生体内で完全な複合体として安定していることを示していた。
複合体４５ｂは免疫低下宿主において非常に有効である
インフルエンザによる重症感染症及びインフルエンザ感染症からの合併症のための高リスク群は、高齢及び免疫低下状態を含む。免疫低下背景における複合体４５ｂの有効性を決定するために本発明者らは、成熟Ｔ細胞及びＢ細胞を欠き補体が欠損している重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）マウスにおいて複合体４５ｂの有効性を決定した。Ａ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍに感染したＳＣＩＤマウスにおいて複合体４５ｂは単回０．３ｍｇ／ｋｇ用量で完全な保護を示し（図１１２Ｍ）、これは免疫正常マウスでの同じ保護的用量である。
まとめると、これらの結果は、健常及び高リスク集団において普遍的なインフルエンザ防御を提供する複合体４５ｂの可能性を際立たせている。
複合体４５ｂは予防モデルにおいて長期間持続する作用を示す
薬物動態（ＰＫ）プロファイリング、予防的有効性、及び前臨床毒性試験は、普遍的なインフルエンザ予防のための持続的長期作用性薬剤としての複合体４５ｂの使用の可能性をさらに際立たせる。複合体４５ｂの半減期は、マウス及びカニクイザルにおける単回ＩＶ投与の後に決定され、それぞれ１及び４週間ＰＫ試験において５～１０日の範囲である。これらの結果はｍＡＢに典型的なものであり、マウス、カニクイザル及びヒトＦｃＲｎに対する複合体４５ｂ、ｈＩｇＧ１ Ｆｃ及び完全長ヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体の結合曲線がｐＨに依存して同程度であることによって支持される（図１１７Ａ～１１７Ｃ）。複合体４５ｂは、マウスにおいて１～１００ｍｇ／ｋｇの広い用量範囲にわたって用量線形ＰＫを呈する（図１１８Ａ）。マウスモデルにおいて複合体４５ｂは血漿と肺との間に速やかな平衡を確立して治療適応症に対する作用の速やかな開始を可能にし、高レベルで気道上皮被覆液（ＥＬＦ）へと分配される（図１１８Ｂ）。ＥＬＦ中において高レベルの複合体４５ｂは速やかに現れ、約６０％の血漿レベルで持続した（図１１８Ｂ）。
予防の場面での複合体４５ｂの有効性を評価し、致死的インフルエンザ攻撃モデルにおける保護のために必要とされる目標血漿中レベルを決定するために、マウスに感染の２８日前に投薬を行った。１ｍｇ／ｋｇの単回ＳＣ用量は、インフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍ、Ａ／ＨＫ／１／１９６８（Ｈ３Ｎ２）、Ｂ／Ｍａｌａｙｓｉａ／２５０６／２００４（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）及びＢ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６（Ｙａｍａｇａｔａ）に対する完全な保護をもたらした（図１１８Ｃ～１１８Ｆ）。感染時に測定された、保護のために必要とされる対応する複合体４５ｂ血漿中レベルは、０．５μｇ／ｍＬ（８ｎＭ、データ示さず）であった。複数種のＰＫ、及び保護のために必要とされる複合体４５ｂの目標血漿中レベルは、ヒトにおける長期予防のために必要とされるヒト用量を見積もるために用いられることになり、また、前臨床毒性試験において複合体４５ｂの治療限界を見積もるために使用された。カニクイザルで行われた２週間用量範囲探索毒性試験において、最高試験用量（２０ｍｇ／ｋｇ）で有害事象は認められなかった。２０ｍｇ／ｋｇを投薬されたサル及び１ｍｇ／ｋｇを投薬されたマウスでの血漿曝露比率に基づく治療指数（ＴＩ）は５０超である（表１８１及び表１８２）。この安全性限界は、複合体４５ｂの高い力価及び持続的曝露（データ示さす）を組み込むアロメトリックスケーリングと相まって、ヒトにおいて１～２回の投薬で複合体４５ｂによるインフルエンザの季節全体にわたる保護が成し遂げられ得ることを示唆している。
Figure 2022546609000890
Figure 2022546609000891
カニクイザル毒性試験において、５または２０ｍｇ／ｋｇでの毎週２回のＳＣ投薬の後に、ＢＷ、臨床化学、血液学、凝固、サイトカインまたは検尿に対して有害作用は認められなかった（データ示さず）。
実施例２０４．致死性マウスインフルエンザモデルでのＡ型インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）に対する複合体４５ａの最適薬物抗体比（ＤＡＲ）の決定
雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）において、複合体４５ａのＤＡＲ変異体を致死性Ｈ１Ｎ１インフルエンザ感染モデルで評価した。攻撃ウイルス（Ａ／Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／８／１９３４）は、マウスに致死的感染症を引き起こすことができるマウス適合型単離物である。実験はマウス５匹の群を合計２５個有する２つの試験部門を含んでいた。０日目に全てのマウスを、ケタミン／キシラジン（それぞれ１００及び１０ｍｇ／ｋｇ）で軽く麻酔した後にＬＤ９５の３倍のウイルス（約２Ｅ４ウイルス／マウス）で３０μｌの体積の鼻腔内接種によって攻撃した。ウイルス攻撃の２時間後に群に筋肉内（ＩＭ）投与によって複合体４５ａ、複合体４５ａのＤＡＲ変異体、Ｆｃのみ、またはビヒクル（ＰＢＳ）の単回処置を与えた。０．４、１．０、３．３、４．７、５．１または７．３の平均ＤＡＲで複合体４５ａ変異体を試験した。死亡及び体重（ＢＷ）を１４日間にわたって毎日追跡評価した。２０％超のＢＷが減少しているマウスがいればそれを死亡と記録した。各試験部門のための実験概要を表１８３及び表１８４にまとめる。

Figure 2022546609000892
Figure 2022546609000893
最初の試験部門において、０．４、１．０、３．３または４．７の平均ＤＡＲを有する変異体を０．０３、０．１及び０．３ｍｇ／ｋｇの濃度（ウイルス攻撃に関してＴ＋２時間における単回ＩＭ投与）で実施した。この試験において、ビヒクル（ＰＢＳ）処置マウスは７日目までに感染で死亡し、Ｆｃのみ（配列番号７２）で処置したものは６日目に死に至った（表１８５）。対照的に、１．０、３．３及び４．７の平均ＤＡＲを有する複合体４５ａ変異体は、最高用量濃度（０．３ｍｇ／ｋｇ）で完全に保護された。平均ＤＡＲ０．４の複合体だけは、保護を提供することができずマウスが９日目までに死に至り、それが試験複合体の最低力価平均ＤＡＲを有することが示された。次の最低複合体用量（０．１ｍｇ／ｋｇ）では、３．３または４．７の平均ＤＡＲを有する複合体で処置したマウスのみが完全に保護された。２つの低い方の平均ＤＡＲの複合体（０．４及び１．０）はこの用量でそれぞれ７日目及び９日目に死に至った。最後の用量群（０．０３ｍｇ／ｋｇ）では、４．７の平均ＤＡＲを有する複合体４５ａのみがいくらかの力価（８０％の生存率）を示した。死亡データに基づけば、この試験部門において明瞭な傾向がはっきりと認められ、平均ＤＡＲが大きくなるにつれて力価が向上した。
部門１試験群のＢＷデータは、死亡データにみられた傾向を支持した（表１８６）。例えば、０．３ｍｇ／ｋｇ用量群において、１．０、３．３及び４．７の平均ＤＡＲを有する複合体４５ａ変異体は、死亡率に基づけば全て保護的であったが、平均ＤＡＲ１．０の変異体を受けているマウスのＢＷ減少は、平均ＤＡＲがより高い構築物に比べてより大きかった。これは、用量を０．１ｍｇ／ｋｇに下げた場合、平均ＤＡＲ１．０の変異体による保護の消失をもたらした。同様に、０．１ｍｇ／ｋｇでは、平均ＤＡＲ３．３の変異体を受けているマウスは死亡率に基づけば致死的攻撃から保護されたが、平均ＤＡＲ４．７の変異体で処置した動物よりもＢＷ減少が大きかった。両試験の読み値（死亡及びＢＷ）によれば、平均ＤＡＲが大きくなるにつれてより高い力価がみられた。

Figure 2022546609000894

Figure 2022546609000895
試験の部門２では、４．７、５．１及び７．３の平均ＤＡＲを有する複合体４５ａ変異体を部門１と同じ用量レベル（０．３、０．１及び０．０３ｍｇ／ｋｇ）で評価した。部門１でみられた結果とは対照的に、平均ＤＡＲが４．７よりも大きくなっても複合体４５ａの力価は向上しなかった。死亡及びＢＷに基づけば３つ全てのＤＡＲ変異体は力価がほぼ等しかった（それぞれ表１８７及び表１８８）。これらのより高いＤＡＲの構築物では、有効性モデルにおいてみられる通常の実験誤差範囲に入るわずかな差がみられたにすぎなかった（部門２のビヒクル処置動物の死亡までの時間がわずかにより早いことに留意されたい）。後の点は、平均ＤＡＲ４．７の複合体が第１部門では０．０３ｍｇ／ｋｇで保護的であったが部門２ではそうでなかったという観察結果を含む。総合的に、両試験部門の結果は、４．７の平均ＤＡＲまでは力価が明確に上昇するが平均ＤＡＲをさらに大きくしてもより高い力価にはつながらないことを示している。したがって、４．７の平均ＤＡＲは、複合体４５ａの最大力価をもたらす最小平均ＤＡＲである。

Figure 2022546609000896

Figure 2022546609000897
実施例２０５．致死性マウスモデルにおけるＡ型インフルエンザ世界的流行病株（Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／１２／２０１２、Ｈ１Ｎ１）に対する複合体４５ａの力価の決定。
雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）において致死性Ｈ１Ｎ１インフルエンザ感染モデルで複合体４５ａを評価した。攻撃ウイルス（Ａ／ＣＡ／１２／２０１２）は、マウスに致死的感染症を引き起こすことができる世界的流行病単離物である。実験はマウス５匹の群を７つ含んでいた。０日目に全てのマウスを、ケタミン／キシラジン（それぞれ１００及び１０ｍｇ／ｋｇ）で軽く麻酔した後にＬＤ９５の３倍のウイルス（３Ｅ４ウイルス／マウス）で３０μｌの体積の鼻腔内接種によって攻撃した。ウイルス攻撃の２時間後に群に複合体４５ａ、ｈＩｇＧ１ Ｆｃまたはビヒクル（ＰＢＳ）の単回処置を筋肉内（ＩＭ）投与（右腹側）によって与えた。複合体４５ａを３、１、０．３、０．１及び０．０３ｍｇ／ｋｇの濃度で試験した。死亡及び体重（ＢＷ）を２１日間にわたって毎日追跡評価した。２０％超のＢＷが減少しているマウスがいればそれを死亡と記録した。実験概要を表１８９にまとめる。
Figure 2022546609000898
この試験において複合体４５ａの単回ＩＭ投与は、０．３、１及び３ｍｇ／ｋｇでマウスを季節性世界的流行病（Ｈ１Ｎ１）インフルエンザ単離物による致死的攻撃から完全に保護した（表１９０）。加えて、低い方から２つの用量群（０．１及び０．０３ｍｇ／ｋｇ）ではそれぞれ生存率６０％及び２０％の部分的保護（ビヒクルに対して）がみられた。対照的に、ビヒクル処置動物は８日目までに感染症で死亡した一方、ｈＩｇＧ１ Ｆｃのみで処置した動物は死亡率が８０％に達した。複合体４５ａの力価はＢＷデータによっても支持された。完全に保護的な用量（３、１及び０．３ｍｇ／ｋｇ）で処置したマウスは３～５日目あたりで一時的なＢＷ減少を呈し、その後、試験の最後（２１日目）を経て着実にＢＷが回復した（表１９１）。まとめると、この試験は、死亡及びＢＷ読み値の両方によって、重要な世界的流行病インフルエンザ単離物に対する複合体４５ａの力価を実証した。
Figure 2022546609000899
Figure 2022546609000900
実施例２０６．致死性マウスインフルエンザモデルにおけるＡ型インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）に対するバロキサビルと併用された複合体４５ｂの有効性
雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）において複合体４５ｂを致死性ＩＡＶ Ｈ１Ｎ１インフルエンザ感染症に対して評価した。攻撃ウイルス（Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９）は、マウスに致死的感染症を引き起こすことができる世界的流行病単離物である。実験は、各々マウス５匹の群を１１個含んでいた。０日目に全てのマウスを、ケタミン／キシラジン（それぞれ１００及び１０ｍｇ／ｋｇ）で軽く麻酔した後にＬＤ９５の３倍のウイルス（約３Ｅ４ウイルス／マウス）で３０μｌの体積の鼻腔内接種によって攻撃した。（攻撃の２時間後に）群に、ビヒクル、複合体４５ｂ、バロキサビル マルボキシル（ＤＣ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、カタログ番号ＤＣ１１０５６、０．５％メチルセルロースの中に懸濁したもの）、または組合せによる処置を与えた。バロキサビルは３日間にわたって１日２回経口（ＰＯ）投薬され、複合体４５ｂは単回用量として皮下（ＳＣ）投与された（表１９２）。死亡及び体重（ＢＷ）を１４日間にわたって毎日追跡評価した。２０％超のＢＷが減少しているマウスがいればそれを死亡と記録した。
Figure 2022546609000901
複合体４５ｂ及びバロキサビルの力価を別個に決定するために、各分子について用量範囲を決定した。複合体４５ｂについては、生存率に基づけば０．１及び０．３ｍｇ／ｋｇが保護的であった一方、０．０１及び０．０３は保護的でなかった（表１９３）。バロキサビルについては１及び３ｍｇ／ｋｇは１４日目まで死亡を遅らせることはできたが防止することはできなかった。対照的に、１０ｍｇ／ｋｇ用量のバロキサビルは８０％保護的であった。
併用試験のために中程度の用量のバロキサビル（３ｍｇ／ｋｇ）を０．０１、０．０３及び０．１ｍｇ／ｋｇの複合体４５ｂと組み合わせて投薬した（群９～１１）。表１９３に示されるように、０．０３ｍｇ／ｋｇの複合体４５ｂも３ｍｇ／ｋｇのバロキサビルも個別には保護的でない。しかしながら、重要なことに、それらは併用されると試験期間全体にわたって８０％の保護を示した（群１０）。
Figure 2022546609000902
体重データはさらに、組み合わせて投与された２つの分子の増強された活性を示している（表１９４）。０．１／３ｍｇ／ｋｇ（複合体４５ｂ／バロキサビル）で投薬した場合、体重減少の劇的な軽減が認められた。０．１ｍｇ／ｋｇで投薬される複合体４５ｂ自体は保護的ではあるが、動物は４日目に１８．８％の体重減少を示す。しかしながら、この用量は非保護的用量のバロキサビル（３ｍｇ／ｋｇ）と共に投与されると最大ＢＷ減少を４．５％に軽減する（群１１）。
Figure 2022546609000903
この重要な試験において２つの異なる群は、バロキサビルの共投与によって複合体４５ｂの増強された力価を実証した。また、見落とすべきでないことは、２つの化合物が互いの活性を阻害しないという重大な観察結果である。その逆が正しく、併用がより効果的である、という観察結果は、臨床に反映される可能性がある利点である。
実施例２０７．複合体４５ａの代替合成
Figure 2022546609000904
ステップａ．
Figure 2022546609000905
アジド－ＰＥＧ４－ＴＦＰエステル（０．１ｇ、０．０６７ｍｍｏｌ）とアルキン官能化二量体（０．０３８３ｇ、０．０８７１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．０ｍＬ）溶液を、硫酸銅（ＩＩ）（０．００２７ｇ、０．０１６８ｍｍｏｌ）とアスコルビン酸ナトリウム（０．０１３３ｇ、０．０６７ｍｍｏｌ）とＴＨＰＴＡ（０．０１１６ｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）との室温の水（１．５ｍＬ）溶液で処理した。その後、反応物を窒素で３回脱気洗浄し、窒素雰囲気下で撹拌した。３０分後のＬＣＭＳは出発物質が完全に消費されたことを示す。反応物を４００μＬの酢酸で酸性化し、その後、ＴＦＡ０．１％で５％から１００％までのアセトニトリル／水の勾配で溶離させる逆相クロマトグラフィーによって直接精製した。生成物含有画分を合わせ、冷凍し、一晩凍結乾燥した。三重ＴＦＡ塩の収率は６９％であった。ＬＣＭＳでの実測イオン（複数可）：（Ｍ＋２Ｈ）＋２＝７９５．４、（Ｍ＋３Ｈ）＋３＝５３０．８、（Ｍ＋４Ｈ）＋４＝３９８．４。
ステップｂ．
Figure 2022546609000906
 Ｆｃ（５．２ｍＬ中に０．１００ｇ、１．７１７μｍｏｌ、ＭＷ＝５８，２１８、配列番号７２）を含んだｐＨ＝７．４のＰＢＳ緩衝液を、先のステップからの固体ＴＦＰエステル（０．０２７３ｇ、１７．１７μｍｏｌ）で処理した。ホウ酸塩緩衝液（１２０μＬ、１Ｍ、ｐＨ８．５）でｐＨを約７．０に調整し、次いで室温で穏やかに振揺した。１．５時間後のＭａｌｄｉ ＴＯＦは３．３の平均ＤＡＲを示し、これはさらなる混合を経ても変化しなかった。２４時間後に追加のＴＦＰエステル（０．００７３ｇ、４．６μｍｏｌ）を添加し、振揺をもう３時間継続した。粗製複合体を一般的な精製方法に従ってプロテインＡ及びＳＥＣで精製した。プロテインＡ後の合計収率は約８３％であり、ＳＥＣ後には約７７％であった。精製された複合体のＭａｌｄｉ ＴＯＦは６３，５７４の平均質量を示し、これは４．０の平均ＤＡＲに相当する。
実施例２０７に記載される代替合成は、Ｆｃを銅＋２及びアスコルビン酸ナトリウムに曝露することを回避するので有益であり、プロテインＡ精製単独の後に分析的ＳＥＣによる純度９８．９％のより清浄な粗製複合体をもたらす。このレベルの純度では、時間を非常に費やしコストがかかるものであるＳＥＣ精製をなくすことが可能となり得る。アジド－ＰＥＧ４－ＮＨＳエステルによる最初の試みは部分的にしか成功しなかった、というのも、ＮＨＳエステルは反応性が高すぎて精製できず、粗製クリック反応混合物をＦｃと混合せねばならず、それゆえ銅の除去及び（アスコルビン酸ナトリウムへの曝露による）高分子量凝集物の除去が必要となるからである。その上、この手法は２よりも大きなＤＡＲをもたらさなかった。逆相精製及び凍結乾燥に耐えるのに十分に安定である、反応性がより低い活性エステル（ＴＦＰテトラフルオロフェノール）を使用した次の試みは、アジドＴＦＰエステルとのクリック反応をＦｃとは別個に行い、精製し、それからＦｃと混合することを可能にする。実施例２０７では４．０の平均ＤＡＲが得られ、より多くのＴＦＰエステルの添加によってより高いＤＡＲが可能である。
複合体４５ａのためのＦｃをコードする核酸構築物は、Ｃ末端リジン残基を含むものである配列番号６３のアミノ酸配列をコードする核酸を含んでいた。発現時に複合体４５ａのＦｃのＣ末端リジンはタンパク質分解的に切断され、配列番号７２の配列を有するＦｃをもたらす。Ｃ末端リジンの存在または非存在はＦｃまたは対応する複合体の特質を変化させない。
実施例２０８．致死性マウスインフルエンザモデルにおけるＡ型インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）に対するバロキサビルと併用された複合体４５ａの有効性（確認試験）
雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）において致死性ＩＡＶ Ｈ１Ｎ１インフルエンザ感染症に対して複合体４５ａをバロキサビル マルボキシル（ＢＸＭ）と組み合わせて評価した。これは、初回実験において同じ組合せが試験された実施例２０６に対する追跡評価であり、当該実施例２０６では複合体４５ａのために皮下投薬経路が用いられたが、今回の試験では代わりに筋肉内（ＩＭ）投薬経路を用いた。攻撃ウイルス（Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９）は、マウスに致死的感染症を引き起こすことができる世界的流行病単離物である。実験はマウス５匹の群を８つ含んでいた。０日目に全てのマウスを、ケタミン／キシラジン（それぞれ１００及び１０ｍｇ／ｋｇ）で軽く麻酔した後にＬＤ９５の３倍のウイルス（３Ｅ４ウイルス／マウス）で３０μｌの体積の鼻腔内接種によって攻撃した。（攻撃の２時間後に）群に、ビヒクル、ｈＩｇＧ１ Ｆｃのみ、複合体４５ａ、ＢＸＭ（ＤＣ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、カタログ番号ＤＣ１１０５６；０．５％メチルセルロースの中に懸濁させたもの）、または組合せによる処置を与えた。ＢＸＭは３日間にわたって１日２回、経口（ＰＯ）投薬され、複合体４５ａは単回用量としてＩＭによって投与された（表１９５）。死亡及び体重（ＢＷ）を２１日間にわたって毎日追跡評価した。２日連続で２０％超のＢＷが減少しているマウスがいればそれを死亡と記録した。
Figure 2022546609000907
複合体４５ａ及びＢＸＭの別個の力価を決定するために各分子について用量範囲を決定した。複合体４５ａについては、生存率に基づけば０．１ｍｇ／ｋｇの用量が保護的であった一方、０．０３ｍｇ／ｋｇ用量は保護的でなかった（表１９６）。ＢＸＭについては、１０ｍｇ／ｋｇ（１日２回×３日）を受けている群は保護されたが、３ｍｇ／ｋｇを同じ計画で受けている群は保護されなかった。ビヒクルまたはｈＩｇＧ１ Ｆｃのみを投与された群は保護されなかった。上記の結果に基づいて予想されるように、複合体４５ａ（０．１ｍｇ／ｋｇ）とＢＸＭ（３ｍｇ／ｋｇ）との組合せも、完全に保護された。
群７の動物には、複合体４５ａ（０．０３ｍｇ／ｋｇ）とＢＸＭ（３ｍｇ／ｋｇ）との組合せをどちらも有効未満のレベルで与えた。どちらの試験品も、個別に投与された場合にはあまり保護的ではなかったが、組み合わさるとそれらは完全に保護的であった（表１９６）。その上、群７内の動物は、５．２％（３日目）を超えない一時的なＢＷ減少を呈したにすぎなかった（表１９７）。試験の最後までにこの群はその出発時ＢＷを超えて２１日目に初期ＢＷの１０６．３％に達した。複合体４５ａとＢＸＭとの間に拮抗作用を何ら呈さないことに加えて、その逆が認められ、これら２つの治療剤による共治療の利益が加わったことを示唆していた。
Figure 2022546609000908

Figure 2022546609000909
実施例２０９．致死性マウスモデルにおける２０２０－２０２１北半球用四価ワクチン（Ａ／Ｈａｗａｉｉ／７０／２０１９ｐｄｍ、Ｈ１Ｎ１）の成分に対する複合体４５ａの力価の決定
雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）の致死性Ｈ１Ｎ１インフルエンザ感染モデルにおいて複合体４５ａを評価した。攻撃ウイルス（Ａ／Ｈａｗａｉｉ／７０／２０１９）は、マウスに致死的感染症を引き起こすことができる世界的流行病Ｈ１Ｎ１単離物である。それはまた、２０２０－２０２１北半球用四価ワクチンの推奨成分でもある。
実験は群１つあたりマウス５匹とする９つの群を含んでいた。０日目に全てのマウスを、ケタミン／キシラジン（それぞれ１００及び１０ｍｇ／ｋｇ）で麻酔した後にＬＤ９５の２倍のウイルス（２Ｅ３ウイルス／マウス）で３０μｌの体積の鼻腔内接種によって攻撃した。ウイルス攻撃の２時間後に群に、複合体４５ａ、、ｈＩｇＧ１ Ｆｃまたはビヒクル（ＰＢＳ）の単回処置を鼻腔内（ＩＭ、５ｍｌ／ｋｇ用量体積）投与（右腹側）によって与えた。複合体４５ａを３、１、０．３、０．１、０．０３及び０．０１ｍｇ／ｋｇの濃度で試験した。未感染群も対照として試験に含めた。死亡及び体重（ＢＷ）を２１日間にわたって毎日追跡評価した。２日連続で２０％のＢＷ減少を維持しているマウスがいればそれを死亡と記録した。実験概要を表１９８にまとめる。
この試験では複合体４５ａの単回ＩＭ投与は０．３、１及び３ｍｇ／ｋｇでマウスをＡ／ＨＡ／７０／２０１９（Ｈ１Ｎ１）による致死的攻撃から完全に保護した（表１９９）。これらの用量レベルでの複合体４５ａの力価はビヒクル処置動物と比較して有意であった（Ｐ＝０．００３１）。対照的に、ビヒクル及びｈＩｇＧ１ Ｆｃで処置した動物は５日目に１００％の死亡率に達した。０．１及び０．０３ｍｇ／ｋｇ用量群では部分的保護もみられたが（それぞれ６０及び２０％の生存率）、ビヒクル処置動物と比較して統計的に有意ではなかった。総合的に、生存率データは複合体４５ａがこの重要なインフルエンザ単離物に対して強力であることを実証し、低い方の用量の群では明瞭な用量応答が明らかとなった（図１１９）。
複合体４５ａの力価はＢＷデータによっても支持された。完全に保護的な用量（３、１及び０．３ｍｇ／ｋｇ）で処置したマウスは３日目に一時的なＢＷ減少を呈し（０．３ｍｇ／ｋｇの複合体４５ａ用量では最大で１２％のＢＷ減少）、その後、試験の最後（２１日目）を経て着実にＢＷが回復した（表２００）。ＢＷの傾向は試験の生存率結果に反映され、このＨ１Ｎ１単離物に対する複合体の有効性を支持した。
まとめると、この試験は、死亡率及びＢＷ読み値の両方によって、重要な世界的流行病インフルエンザ単離物に対する複合体４５ａの力価を実証した。Ａ／ＨＡ／７０／２０１９は、２０２０北半球用ワクチンに含むために選択されてきたため、それは臨床的に重要な単離物であり公衆衛生に対する脅威であると考えられている。この世界的流行病株に対する、０．３ｍｇ／ｋｇの単回ＩＭ用量による複合体４５ａの力価は、インフルエンザに対する治療剤としてのその開発の継続を支持している。

Figure 2022546609000910
Figure 2022546609000911
Figure 2022546609000912
実施例２１０．４週間致死性マウスモデルにおけるインフルエンザＡ／Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対する複合体４５ａの有効性
雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）における致死性ＩＡＶ Ｈ１Ｎ１インフルエンザ感染症に対して複合体４５ａを評価した。攻撃ウイルス（Ａ／Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／８／１９３４）は、マウスに致死的感染症を引き起こすことができるマウス適合型単離物である。実験はマウス５匹の群を７つ含んでいた。０日目に全てのマウスを、ケタミン／キシラジン（それぞれ１５０及び１０ｍｇ／ｋｇ）の混合物で麻酔した後にＬＤ９５の３倍のウイルスで３０μｌの体積の鼻腔内（ＩＮ）接種によって攻撃した。唯一の例外は、体重（ＢＷ）対照として使用された未感染マウスからなる群１であった。死亡及びＢＷを２８日間にわたって毎日記録し、２連続日にわたって累積的な２０％の体重減少を有するマウスがいればそれを死亡と記録した。
ウイルス攻撃後２時間目に試験群に、複合体４５ａ（０．０１～０．３ｍｇ／ｋｇ）、ｈＩｇＧ１ Ｆｃのみ（０．３ｍｇ／ｋｇ、配列番号７２）、またはビヒクル（ＰＢＳ）の単回筋肉内（ＩＭ）注射を与えた。注射は右後肢の大腿筋において５ｍｌ／ｋｇの用量体積で行った。
Figure 2022546609000913
ビヒクルのみで処置した動物は５日目に死に至り始め、７日目に死亡率が１００％となった。同様に、（複合体の抗ウイルス性部分を欠く）ｈＩｇＧ１ Ｆｃのみで処置したマウスは、７日目に感染で全て死亡した（図１２０及び表２０２）。対照的に、０．１及び０．３ｍｇ／ｋｇの複合体４５ａを受けている群は、試験の最後の２８日目まで完全に保護された。ビヒクルのみで処置したマウスに対する相対的なこの生存率の差は統計的に有意であった（対数順位（マンテル・コックス）検定によって両群ともにＰ＝０．００２０）。しかしながら、０．０１及び０．０３ｍｇ／ｋｇの用量レベルで投与された複合体４５ａは有効未満となり、それぞれ８及び７日目に１００％の死亡率に達した（図１２０及び表２０２）。
Figure 2022546609000914
生存に加えてＢＷについても試験全体にわたって毎日追跡評価した。未感染マウス（群１）は着実にＢＷが増加して試験の最後までにはその出発時ＢＷの１０８．７％に達し、試験動物が全体的に良好な健康状態にあることを示していた（表２０３）。対照的に、陰性対照群（２及び３）は１日目にＢＷが減少し始め、ついにはそれぞれ５日目及び６日目に各群内の最初の動物が死に至った。群内での最初の死亡の後は群が偏った集団になるのでＢＷ値を記録しなかった。
保護的用量の複合体４５ａで処置したマウス（群４及び群５）は、５％未満の一時的なＢＷ減少を呈したにすぎなかった。試験の最後までにはこれらの群は両方ともその出発時ＢＷを超えた（それぞれ１０５．９及び１０８．７％）。予想通り、複合体４５ａサブ保護的用量を受けているマウス（群６及び群７）は、動物が死に至りはじめるまで、着実な体重の減少を示した。
総合すると、このデータは、Ａ型インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）による致死的攻撃に対する複合体４５ａの力価を示している。重要なことに、１ｍｇ／ｋｇ未満の単回ＩＭ注射によって保護が成し遂げられた。最後に、ウイルス攻撃後のまる４週間にわたって動物を追跡したが、保護された動物は感染症が完全に取り除かれた可能性が最も高かったとことが示された。
Figure 2022546609000915
実施例２１１．致死性マウスモデルにおけるインフルエンザＨ１Ｎ１ Ａ／ＣＡ／１２／２０１２及びＡ／ＰＲ／８／１９３４に対する複合体４５ａ及びオセルタミビルの有効性
雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）において２つのインフルエンザＨ１Ｎ１亜型（Ａ／ＰＲ／８／３４及びＡ／ＣＡ１２／１２）による致死的攻撃に対して複合体４５ａ及びオセルタミビルを評価した。実験は、２つの実験部門に分割された、マウス５匹の１０個の群を含んでいた（表２０４）。Ｔ＋２時間目にマウスに単回用量で０．３ｍｇ／ｋｇの複合体４５ａを筋肉内（ＩＭ）投与した。さらに、Ｔ＋２時間目にマウスに５または５０ｍｇ／ｋｇのオセルタミビルを５日間にわたって１日２回、経口投与した。対照マウスは、ビヒクル（ＰＢＳ）またはｈＩｇＧ１ ＦｃのみでＩＭ処置された。化合物投与の２時間前にマウスにＬＤ９５の３倍のＡ／ＰＲ／８／３４（３Ｅ２ｐｆｕ）またはＡ／ＣＡ／１２／１２（３Ｅ４ｐｆｕ）で鼻腔内攻撃を行った。ウイルス攻撃のためにマウスをケタミン／キシラジン（そｒぞれ１５０及び１０ｍｇ／ｋｇ）の混合物で麻酔し、ウイルスを３０μｌの体積で与えた。死亡及び体重（ＢＷ）を１４日間にわたって毎日記録し、２０％のＢＷ減少を有する動物がいればそれを死亡と記録した。
Ａ／ＰＲ／８／３４攻撃に対しては、ビヒクルまたはＦｃのみ（配列番号７２）で処置したマウスは７日目までに感染で死亡した一方、０．３ｍｇ／ｋｇの複合体４５ａを投与されたマウスは完全に保護された（表２０５）。オセルタミビル処置動物では、５０ｍｇ／ｋｇ用量が８０％保護的であった一方、５ｍｇ／ｋｇの用量は死亡を１０日目まで遅らせたにすぎなかった。Ａ／ＣＡ／１２／１２に対しては、ビヒクル及びＦｃ対照動物は６日目までに死亡率が１００％に達し、またしても、０．３ｍｇ／ｋｇ用量の複合体４５ａは完全に保護的であった。対照的に、オセルタミビルは５ｍｇ／ｋｇでは非保護的であり、５０ｍｇ／ｋｇ用量群でさえ生存率はたったの４０％であった。両試験部門のＢＷデータは死亡率についての知見を支持している（表２０５～２０８）。
まとめると、このデータは、単回の０．３ｍｇ／ｋｇの複合体の投薬による優れた活性が、オセルタミビルと比較して、後者を５または５０ｍｇ／ｋｇで５日間にわたって１日２回投薬した場合でさえより優れていることを実証している。

Figure 2022546609000916
Figure 2022546609000917
Figure 2022546609000918
Figure 2022546609000919
Figure 2022546609000920
実施例２１２．２８日間マウス予防モデルにおけるインフルエンザＢ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６（Ｙａｍａｇａｔａ）に対する複合体４５ａの有効性。
雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）において複合体４５ａをＢ型インフルエンザ季節性インフルエンザ亜型（Ｂ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６）による致死的攻撃に対して評価した。実験はマウス５匹の群を７つ含んでいた。０日目にマウスに単回用量で３、１、０．３、０．０１または０．３ｍｇ／ｋｇの複合体４５ａの皮下（ＳＣ）投与を行った。対照マウスも同じ経路によってビヒクル（ＰＢＳ）またはｈＩｇＧ１ Ｆｃのみで処置した。試験品の投与から２８日後にマウスにＬＤ９５の３倍のＢ／Ｆｌｏｒｉｄａによる鼻腔内攻撃を行った。実験デザインのまとめを表２０９に示す。ウイルス攻撃のためにマウスをケタミン／キシラジン（それぞれ１５０及び１０ｍｇ／ｋｇ）の混合物で麻酔し、ウイルスを３０μｌの体積で与えた。死亡及び体重（ＢＷ）を２１日間にわたって毎日記録し、２０％の体重減少を有する動物がいればそれを死亡と記録した。
ビヒクルのみで処置したマウスは７日目までに死に至った一方、Ｆｃのみの陰性対照で処置したマウスは８日目までに感染症で死亡した（表２１０）。対照的に、１または３ｍｇ／ｋｇの複合体４５ａを受けているマウスは試験期間全体を通して完全に保護された。０．３ｍｇ／ｋｇで処置された群４の動物も８０％の生存率を示した。０．１ｍｇ／ｋｇの用量濃度では生存率は４０％に落ち込み、０．０３ｍｇ／ｋｇでは複合体４５ａによる保護が得られなかった。ＢＷデータ（表２１１）は死亡の結果を反映し、完全に保護的な用量（１及び３ｍｇ／ｋｇ）を受けているマウスは、５％未満の一時的なＢＷ低下を４日目に示し、その後にその出発時ＢＷに回復した。
まとめると、これらのデータは、インフルエンザの重要な季節性亜型に対する複合体４５ａの堅牢な力価を支持している。それはまた、インフルエンザに対する長期予防薬としての複合体４５ａの有用性を実証している。
Figure 2022546609000921
Figure 2022546609000922
Figure 2022546609000923
実施例２１３．複合体４５ａのＦｃ媒介免疫寄与
３Ｅ２ＰＦＵ／マウス（ＬＤ９５の３倍）のマウス適合型インフルエンザＡ／Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）で、または３ｅ４ＰＦＵ／マウスのインフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍで鼻腔内攻撃した６～８週齢の雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）またはＦｃｅｒ１ｇ－／－モデル５８３（Ｔａｃｏｎｉｃ）において、有効性試験を行った。ＡＶＣまたは対照－ヒトＩｇＧ１ ＦｃもしくはＰＢＳを、示されているように皮下（ＳＣ）または筋肉内（ＩＭ）投与される単回用量として、攻撃後２時間目に０．０３～３ｍｇ／ｋｇで投与した。体重（ＢＷ）を毎日記録した。２連続日にわたって２０％を上回る体重減少として、または動物が瀕死状態にある場合に、死亡を定義した。
ウイルス負担量及びサイトカイン分析のために、感染後４日目にマウスをＣＯ２によって屠殺し、両方の肺葉を採取した。ＭａｇＮＡ Ｌｙｓｅｒ（Ｒｏｃｈｅ）を使用して肺を１ｍＬのＰＢＳの中で１ｍｍのシリカビーズでホモジナイズした。ホモジナイゼーションを６，０００ｒｐｍで６０秒間行い、実施の合間に氷上で５分間冷却した。肺ホモジナイゼーション後に管を６００ｘｇで１０分間遠心分離にかけ、上清を新しい管に移した。ＰＦＵを決定するために肺ホモジネートの上清を感染用緩衝液で１０－１～１０－６の範囲に希釈した。１００μＬのウイルス希釈液を２４ウェルプレート内のＭＤＣＫ細胞のコンフルエントな単層に添加し、１５分ごとに振揺しながら室温で１時間にわたってインキュベートした。ウイルスを除去した後、Ａｖｉｃｅｌを含有する液体被覆用培地をＭＤＣＫ細胞に添加した。細胞を３７℃、５％ＣＯ２で４０時間インキュベートした。インキュベート後、培地を除去し、細胞をクリスタルバイオレットで染色してプラークを計数し、肺の重量に対するプラーク形成単位（ＰＦＵ）を算出した（ＰＦＵ／ｇ肺）。サイトカイン分析のために、９６ウェルプレートにおいて肺ホモジネートの上清を２倍に段階希釈した。ＩＬ－６、ＭＩＰ－１α及びＭＣＰ－１のサイトカインレベルをＥＬＩＳＡによって製造業者（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）の指示に従って決定した。
０．０３ｍｇ／ｋｇまたはより高い用量の複合体４５ａは、Ｂａｌｂ／Ｃ（ＷＴ）及びＦｃｅｒ１ｇ－／－（ＫＯ）マウスにおいてインフルエンザＡ／ＣＡ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）ｐｄｍによる致死的攻撃に対して完全に保護的であり（表２１２参照）、複合体４５ａの保護がＦｃ媒介免疫寄与とは独立したものであることが示唆された。
Figure 2022546609000924
０．１ｍｇ／ｋｇ以上の用量の複合体４５ａは、Ｂａｌｂ／ＣマウスにおいてインフルエンザＡ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）による致死的攻撃に対して完全に保護的であった（表２１３参照）。ＷＴ Ｂａｌｂ／ｃマウスにおける免疫寄与を見極めるために、非グリコシル化Ｆｃ突然変異体（Ｎ２９７Ａ）による複合体４５ａの変異型である複合体４９（例えば、Ｎ２９７Ａ突然変異をさらに含んだ配列番号７２を含むＦｃ）を作った。このＦｃ突然変異体は、概ね無効にされた免疫エフェクター機能をもたらすことが知られている。複合体４９も０．１ｍｇ／ｋｇで保護的であり、複合体４５ａによって与えられる保護がＦｃ媒介免疫寄与とは独立したものであることを示唆していた。複合体４５ａの有効性がＦｃ媒介免疫エフェクター機能の増大によって増強され得るか否かを判定するために、複合体４５ａ変異体を、ＤＥ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）突然変異を含むＦｃ（例えば、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ突然変異をさらに含んだ配列番号７２を含むＦｃ）に複合したもの、つまり複合体５０とした。複合体５０は０．１ｍｇ／ｋｇ以上の用量で完全に保護的であり、これは複合体４５ａの活性と同程度であった。しかしながら、０．０３ｍｇ／ｋｇの複合体５０による処置の後に１匹のマウスが生存した。したがって、ＤＡＲ４．５の複合体４５ａの活性は、Ｆｃ媒介免疫寄与とは独立したものである。
Figure 2022546609000925
マウスモデルにおけるインフルエンザによる致死的攻撃の後、肺ＰＦＵ負担量及び肺サイトカインレベルを感染後４日目に決定した。複合体４５ａ及び複合体４９は、ウイルス負担量の同程度のレベルへの用量依存的対数減少を示した（表２１４参照）。複合体５０は０．１ｍｇ／ｋｇではウイルス負担量のより大きな減少を示し、複合体４５ａまたは複合体４９の場合よりもそれぞれ０．９６または０．８３対数だけ高かった。陰性対照とＰＢＳとｈＩｇＧ１ Ｆｃとの間には、予想通り、生物学的に重要な差異が認められなかった。
Figure 2022546609000926
同様に、複合体４５ａ及び複合体４９はサイトカインＩＬ－６、ＭＩＰ－１ａ、ＭＣＰ－１を同程度のレベルまで用量依存的に減少させた（表２１５参照）。複合体５０に関しては０．１ｍｇ／ｋｇではＩＬ－６及びＭＩＰ－１ａがわずかにより低いレベルとなったとはいえ、同程度のレベルが認められた。０．１ｍｇ／ｋｇの複合体５０は、複合体４５ａ及び複合体４９と比較すると、ヒトきわ上昇したＭＣＰ－１レベルを示した。陰性対照とＰＢＳとｈＩｇＧ１ Ｆｃとの間には、予想通り、生物学的に重要な差異が認められなかった。


Figure 2022546609000927
実施例２１４．インフルエンザ２０２０－２０２１ワクチン株に対する複合体４５ａの有効性
ノイラミニダーゼ阻害（ＮＡＩ）．
ＮＡＩ活性を、市販のＮＡ－Ｆｌｕｏｒキットを使用して決定した。手短に述べると、生ウイルスを１ｅ５ＰＦＵ／ｍＬに調整し、９６ウェルプレート（黒色）内の適切なウェルに加えた。試験品を０．００１～１，０００ｎＭの範囲の濃度で適切なウェルに加えた。ウイルスと試験品とを３７℃、５％ＣＯ２で２０～３０分間インキュベートした。次に、ＮＡ基質を各ウェルに加え、３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートした。３５５ｎｍ励起／４６０ｎｍ発光の蛍光を読み取ることによってＮＡＩを決定した。非線形回帰解析を用いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍバージョン８によってＩＣ５０を算出した（用量応答（阻害））。
北半球用インフルエンザワクチン株２０２０－２１に対するＮＡＩにおいて複合体４５ａはＩＣ５０によって、オセルタミビルまたはザナミビルに比べて同程度の力価を示した（表２１６）。
Figure 2022546609000928
酵素結合レクチンアッセイ（ＥＬＬＡ）．
Ｎｕｎｃ Ｍｘｉｓｏｒｐ９６ウェルプレート（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）に、２．５μｇのフェツイン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を含んだ１×のＫＰＬコーティング用緩衝液（ＳｅｒａＣａｒｅ）をコーティングして４℃で一晩経過させた。翌日、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０が補充されたｐＨ７．４のＰＢＳ（ＰＢＳＴ）でプレートを洗浄した。試験品は０．００１～１０００ｎＭで試験され、５０μＬ／ウェルで添加することとした。５ｅ４～５ｅ５ＰＦＵ／ｍＬのインフルエンザウイルスを５０μＬ／ウェルで添加した。プレートを３７℃、５％ＣＯ２で１６～１８時間インキュベートした。プレートを洗浄した後、ＨＲＰ（ＰＮＡ－ＨＲＰ）に複合したピーナッツアグルチニン０．１３μｇを緩衝液１００ｕＬ中に含んだものを添加して２時間経過させ、再び洗浄し、１００μＬ／ウェルのＴＭＢ基質（ＢＤ）で３～５分間発色させた。１００μＬ／ウェルの１ＮのＨ２ＳＯ４によって反応を停止させた。４５０ｎｍでの吸光度をＥｎＳｐｉｒｅ多モードプレートリーダーで読み取った。非線形回帰解析を用いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍバージョン８によってＩＣ５０を算出した（用量応答（阻害））。
北半球用インフルエンザワクチン株２０２０－２１に対するＮＡＩにおいて複合体４５ａはＩＣ５０によって、オセルタミビルまたはザナミビルに比べて向上した力価を示した（表２１７）。

Figure 2022546609000929
プラーク減少アッセイ（ＰＲＡ）．
０．３～１００ｎＭの範囲の試験品を、０．２８％のウシ血清アルブミンとＣａ２＋／Ｍｇ２＋とを含んだＰＢＳを含有する緩衝液の中で３０分間、室温（ＲＴ）でウイルスとインキュベートした。２４ウェルプレート内のメイディンダービーイヌ腎臓（ＭＤＣＫ）細胞のコンフルエントな単層をＰＢＳで１回洗浄した。試験品とウイルスとのインキュベーションの後、両者をＭＤＣＫ細胞に添加した。薬物－ウイルスの各組合せのＭＯＩは、ＰＢＳ対照ウェル内に目標３０プラークとなるように選択された。１時間後にウイルス及び試験品を除去し、１．２５％のＡｖｉｃｅｌと、ＤＭＥＭと、０．０１％のＤＥＡＥ－デキストランと、２μｇ／ｍＬのＴＰＣＫトリプシンとの混合物で希釈した試験品の存在下で感染細胞を３５℃で４８時間インキュベートした。４８時間後にＡｖｉｃｅｌ混合物を除去し、細胞をパラホルムアルデヒドで固定し、１％のクリスタルバイオレットで染色してプラークを計数した。非線形回帰解析を用いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍバージョン８によってＥＣ５０を算出した（用量応答（阻害））。
北半球用インフルエンザワクチン株２０２０－２１に対するＰＲＡにおいて複合体４５ａはＥＣ５０によって、オセルタミビル、ザナミビルまたはバロキサビルに比べて向上した力価を示した（表２１８）。

Figure 2022546609000930
細胞変性効果（ＣＰＥ）．
９６ウェルプレート内のＭＤＣＫ Ｓｉａｔ１細胞のコンフルエントな単層を、０．０１～１０，０００ｎＭの範囲の濃度の試験品とインキュベートした。ＲＴで１時間インキュベートした後、ＭＯＩ０．０１のインフルエンザウイルスを加えた。ＲＴでもう１時間インキュベートした後、プレートをＡ型インフルエンザについては３時間、またはＢ型インフルエンザについては５日間、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。クリスタルバイオレット染色によって、５９５ｎｍの吸光度を読み取ることによってＣＰＥを決定した。非線形回帰解析を用いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍバージョン８によってＥＣ５０を算出した（用量応答（阻害））。
北半球用インフルエンザワクチン株２０２０－２１に対するＰＲＡにおいて複合体４５ａはＥＣ５０によって、オセルタミビル、ザナミビルまたはバロキサビルに比べて向上した力価を示した（表２１９）。

Figure 2022546609000931
実施例２１５．致死性マウスモデルにおけるインフルエンザＡ／Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）に対する複合体４５ａ（＊プロテインＡカラム精製済み、及び＊プロテインＡカラム素通り画分）の有効性
雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）における致死性ＩＡＶ Ｈ１Ｎ１インフルエンザ感染症に対して複合体４５ａ（プロテインＡ精製済み）及び＊複合体４５ａ（プロテインＡカラム素通り画分）を評価した。攻撃ウイルス（Ａ／Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／８／１９３４）は、マウスに致死的感染症を引き起こすことができるマウス適合型単離物である。実験はマウス５匹の群を１３個含んでおり、目的は、３つの試験薬剤の間で相対力価を評価することであった。０日目に全てのマウスを、ケタミン／キシラジン（それぞれ１５０及び１０ｍｇ／ｋｇ）の混合物で麻酔した後にＬＤ９５の３倍のウイルス（５Ｅ２ｐｆｕ）で３０μｌの体積の鼻腔内（ＩＮ）接種によって攻撃した。群１は、ビヒクルのみで処置した対照マウスからなっており、残りの群には０．０１～０．３ｍｇ／ｋｇの範囲の用量の複合体の１つを与えた。死亡及び体重（ＢＷ）を１４日間にわたって毎日記録し、２連続日にわたって累積して２０％の体重が減少した動物がいればそれを死亡と記録した。
試験群には、ウイルス攻撃後２時間目に試験品の単回筋肉内（ＩＭ）注射を与えた（試験概要は表２２０に詳しく示される）。注射は右後肢の大腿筋に５ｍｌ／ｋｇの用量体積で行った。

Figure 2022546609000932
ビヒクルのみで処置した動物は６日目に死に至り始め、８日目までには死亡率が１００％となった（図１２１及び表２２１）。対照的に、両方の複合体（例えば、プロテインＡカラム精製済み複合体４５ａ、及びプロテインＡカラム素通り画分＊複合体４５ａ）は、０．１及び０．３ｍｇ／ｋｇにおいて試験の最後（１４日目）を経て完全に保護的であった。２つの最低試験濃度（０．０３及び０．０１ｍｇ／ｋｇ）では、全くないかまたは部分的な保護がみられた（複合体４５ａではそれぞれ４０％及び０％；＊複合体４５ａでは８０％及び４０％）。しかしながら、０．０３及び０．０１ｍｇ／ｋｇでは複合体間の差は統計的に有意でなく（対数順位マンテル・コックス試験）、おそらくは試験濃度が非常に低いことによる通常の実験変動を表している。

Figure 2022546609000933
全ての用量群について体重（ＢＷ）データ（表２２２）も評価した。予想通り、ＢＷデータは生存率データを概ね反映し、どの複合体でも全ての完全に保護的な用量は一時的な減量とその後の試験の終了までの回復を示した。これらの用量群では、１４日目の平均ＢＷは１００％以上であった。まとめると、このデータは、Ａ型インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）に対する致死的攻撃に対する３つ全ての複合体の力価を実証している。重要なことに、保護は０．１ｍｇ／ｋｇの単回ＩＭ注射によって成し遂げられた。この試験で評価した条件によって、複合体４５ａ及び＊複合体４５ａ（すなわち、プロテインＡカラムに結合しなかった複合体）は同程度の力価を実証した。

Figure 2022546609000934
実施例２１６．致死的感染症試験でのインフルエンザＡ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９ｐｄｍ（Ｈ１Ｎ１）に対するヒト化マウスモデル（ＦｃＲｎ）における複合体４５ａ及び４６の比較
雌のＢ６．Ｃｇ－Ｆｃｇｒｔｔｍ１Ｄｃｒ Ｔｇ（ＦＣＧＲＴ）３２Ｄｃｒ／ＤｃｒＪマウス（６～８週齢、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ＃０１４５６５）における致死的ＩＡＶ Ｈ１Ｎ１インフルエンザ感染症に対して複合体４５ａ及び４６を評価した。これらのマウスには、抗体またはＦｃ含有治療薬の半減期の延長に必須となる因子であるヒト胎児性受容体（ＦｃＲｎ）が発現する。複合体４６は、ヒト及びカニクイザルにおいて半減期を延ばすことが示されたＹＴＥ Ｆｃ突然変異を含有する。ＹＴＥ突然変異は野生型マウスにおいてサイレントであるが、ＦｃＲｎが発現している遺伝子導入マウス種ではそれは許容される。それゆえ、本発明者らは、複合体４５ａ、及びＹＴＥが存在している点以外は複合体４５ａと同一である複合体４６について相対的有効性を評価して、半減期の延長が力価上の利益を提供するか否かを－７日予防モデルにおいて判定した。
攻撃ウイルス（Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９）は、マウスに致死的感染症を引き起こすことができるＨ１Ｎ１世界的流行病単離物である。実験はマウス５匹の群を１０個含んでいた（表２２３）。ウイルス攻撃の７日前にマウスに単回用量の試験品を右後肢の大腿筋への筋肉内（ＩＭ）注射によって５ｍｌ／ｋｇの用量体積で投与した。０日目に全てのマウスを、ケタミン／キシラジン（それぞれ１５０及び１０ｍｇ／ｋｇ）の混合物で麻酔した後にＬＤ９５の３倍のウイルス（３Ｅ４ｐｆｕ）で３０μｌの体積の鼻腔内（ＩＮ）接種によって攻撃した。群１は、ビヒクルのみで処置した対照マウスからなっており、群２の動物にはＦｃのみ（ｈＩｇＧ１ Ｆｃ）を投薬し、残りの群には１～０．０３ｍｇ／ｋｇの範囲の用量の複合体の１つを与えた。死亡及び体重（ＢＷ）を１４日間にわたって毎日記録し、２連続日にわたって累積して２０％の体重が減少した動物がいればそれを死亡と記録した。
生存率データは表２２４に示されるが、対照動物（群１及び２）が予想通り６日目に全て死に至ったことを示している。対照的に、どちらかの複合体を１．０または０．３ｍｇ／ｋｇで受けているマウスは試験の最後（２１日目）を経て完全に保護された。最低用量濃度（０．０３ｍｇ／ｋｇ）では、どちらの複合体でも明らかな有意な保護がなかった。しかしながら、０．１ｍｇ／ｋｇでは、複合体４５ａと複合体４６とで力価の相対差が明白であった。ビヒクルまたはＦｃのみを投薬した動物と比較して、野生型Ｆｃ配列を含有する複合体４５ａは有意により強力ではなかった一方、複合体４６で処置された動物は有意に強力であった（生存率８０％、ビヒクルに対して相対的にＰ＝０．００１６）（図１２２）。これらのデータは、複合体４６のＹＴＥ突然変異が、おそらくは半減期の延長ゆえに、複合体４５ａに勝る力価上の利益を提供することを示唆している。全ての試験群のＢＷデータは表２２５に列挙され、生存率データを支持している。
まとめると、この試験は、複合体４５ａに対して相対的に複合体４６の力価の増大を実証している。どちらの複合体も同一な標的指向性部分を有していることから、複合体４６の有効性の向上はＹＴＥ突然変異によるものであるということになる。この結論は、ウイルス攻撃前の日に試験動物（０．１ｍｇ／ｋｇ用量群）から収集された両複合体の血漿中レベル（複合体４５ａは０．０９μｇ／ｍｌ；複合体４６は０．４８μｇ／ｍｌ）によって支持される。ウイルス攻撃時の複合体４６のより高い血漿中レベルは複合体４５ａに比べてより優れた保護をもたらした。
Figure 2022546609000935
Figure 2022546609000936
Figure 2022546609000937
実施例２１７．ヒト感染症の早期段階の発病機序を模倣するＡ型インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）マウスモデルでの複合体４５ａの有効性
この特許に提供される先の実施例は、ウイルス攻撃中にマウスをケタミン／キシラジン（それぞれ１５０及び１０ｍｇ／ｋｇ）で重く鎮静するモデルを利用した。鼻腔内（ＩＮ）ウイルス攻撃（ＬＤ９５の３倍を３０μｌで）の後にマウスを回復するまで（およそ３０分間）仰臥位に保つ。これは肺（下気道またはＬＲＴ）内へのウイルスの流入を増強して抗インフルエンザ治療薬のための堅牢かつ非常に再現性が高いスクリーニングモデルを生成する。しかしながらそれは、通常はより少ないウイルス粒子がヒトの上気道（ＵＲＴ）に播種されるという自然な感染プロセスを複製するものではない。本試験は、ウイルスをＵＲＴに播種すること及び２つの異なる攻撃接種材料を研究することによって自然な感染プロセスをより忠実に模倣することを企図したものであった。
本試験は雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）を利用し、これをマウスに致死的感染症を引き起こすことができる世界的流行病単離物であるインフルエンザＡ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）によって３Ｅ４（ＬＤ９５の３倍）及び３Ｅ３ｐｆｕ／マウスで攻撃した。ウイルス攻撃はイソフルラン（３％）麻酔下のマウスに対して３０μｌの体積のＩＮ接種によって行われた。実験はマウス５匹の群を１３個含んでおり、全体的な試験デザインは表２２６に示される。ウイルス攻撃の３日前にマウスに０．００１～０．３ｍｇ／ｋｇの単回ＩＭ（大腿筋）用量の複合体４５ａを投与した。陰性対照動物はＰＢＳのみで処置された。１つの群にはウイルスの代わりにＰＢＳを使用して「偽感染」させた。死亡及びＢＷを１４日間にわたって毎日記録し、２連続日にわたって累積して２０％の体重が減少した動物がいればそれを死亡と記録した。
試験からの生存率結果を表２２７にまとめる。両方のウイルス濃度（３Ｅ３及び３Ｅ４ｐｆｕ／マウス）においてビヒクル処置マウスは予想通り死亡から完全には保護されなかった。３Ｅ３のＰＢＳ群は死亡率が１００％に達し、これに対して３Ｅ４では６０％となった。直感に反しているが、これは、ＵＲＴモデルにおける通常の実験変動の結果である可能性がある。重要なことに、複合体４５ａは、０．０３ｍｇ／ｋｇにまで下げた単回ＩＭ用量で３Ｅ４ｐｆｕによる攻撃に対して完全に保護的であった。３Ｅ３部門では、複合体４５ａは単回の０．０１ｍｇ／ｋｇ用量で完全な保護を提供した（ビヒクルに対してＰ＝０．００３１）。生存評価項目に基づいて複合体４５ａによって得られる際立った保護は、マウスのＵＲＴにおける優れたＰＫ及び活性を示している。
試験動物のＢＷデータは表２２８に示されているが、生存率データの結果を反映している。３Ｅ４攻撃部門において、完全に保護的であった最低用量（０．０３ｍｇ／ｋｇ）群は偽（ＰＢＳ）感染マウスと比較して一時的な体重減少を呈したにすぎず、最終ＢＷ（１４日目）は互いの１．５％以内であった。３Ｅ３部門において最低保護的用量（０．０１ｍｇ／ｋｇ）は、試験の最後に偽感染動物の約５％以内であった。
まとめると、この試験は、複合体４５ａがマウスのＵＲＴにおいて並外れた曝露量を有しており、致命的感染症が発生する場所であるＬＲＴの中へのウイルスの拡散を予防する上で極めて効果的であることを示している。さらには、処置マウスにおいてＢＷが保存されること、及び明らかな臨床症候がないことは、複合体４５ａがＡ型インフルエンザに対して優れた予防薬として作用する可能性を有することを示している。

Figure 2022546609000938
Figure 2022546609000939
Figure 2022546609000940
実施例２１８．遅延処置マウスモデルにおけるインフルエンザＡ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）に対する複合体４５ａの用量経路ごとの有効性
雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、６～８週齢）における致死的Ａ型インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）感染症に対して複合体４５ａを評価した。攻撃ウイルス（Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９）は、マウスに致死的感染症を引き起こすことができる世界的流行病単離物である。実験はマウス５匹の群を７つ含んでいた。全体的な試験デザインは表２２９に示されるが、手短に述べると、０日目に全てのマウスを、ケタミン／キシラジン（それぞれ１５０及び１０ｍｇ／ｋｇ）の混合物で麻酔した後にＬＤ９５の２～３倍のウイルスで３０μｌの体積の鼻腔内（ＩＮ）接種によって攻撃した。ウイルス攻撃後２４時間目に試験群に複合体４５ａ（０．０３～０．３ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（ＰＢＳ）の単回の筋肉内（ＩＭ）または静脈内（ＩＶ）注射を与えた。ＩＭ注射は１０ｍｌ／ｋｇの用量体積で右後肢の大腿筋に行われた。ＩＶ注射は同じ用量体積で尾静脈に投与された。死亡及びＢＷを１４日間にわたって毎日記録し、２連続日にわたって累積して２０％の体重が減少した動物がいればそれを死亡と記録した。
試験からの生存率結果を表２３０にまとめる。ビヒクル（ＰＢＳ）で処置したマウスは攻撃後に急速にＢＷが減少し始めて５日目に１００％の死亡率に達した。０．３ｍｇ／ｋｇの用量の複合体４５ａをＩＶ（群２）またはＩＭ（群５）によって受けている動物は試験の最後（１４日目）を経て完全に保護された。両群はまた、同程度のＢＷ傾向も呈し、体重が一過的に減少した後に回復し、最終的には試験の最後までにその初期ＢＷを超過した（表２３１）。
試験した最低複合体４５ａ用量（０．０３ｍｇ／ｋｇ）では、全てのマウスが投薬経路によらずに６日目までに感染で死亡した。中間用量群（０．１ｍｇ／ｋｇ）は、ＩＶによって投薬された場合には４０％の生存率を示し、ＩＭによって投薬された場合には保護的でなかった（生存率０％）。しかしながら、この差異は統計的に有意ではなかった（Ｐ＝０．０９９３）。まとめると、この試験は、Ａ型インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）の重要な世界的流行病単離物に対する１ｍｇ／ｋｇ未満の単回のＩＶまたはＩＭ用量による複合体４５ａの力価を実証した。重要なことに、両投薬経路間で有効性は同程度であり、外来患者の場面で使用（ＩＭ投薬）される複合体４５ａの能力を示していた。最後に、複合体４５ａは、投薬を２４時間遅らせたにもかかわらず完全に保護的であり、初回ウイルス接種材料に確立／増殖の時間を許容するものであった。これは、複合体４５ａが予防薬及び治療薬の両方としての治療的用途を有し得ることを示唆している。

Figure 2022546609000941
Figure 2022546609000942

Figure 2022546609000943
実施例２１９．Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットにおける複合体４５ａの単回用量皮下範囲探索試験ならびに単回用量毒性及び毒物動態（２週間曝露）試験
この試験の目的は、雄及び雌のラットにおいて忍容性を評価し、その後、雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットに単回皮下（ＳＣ）用量として投与された複合体４５ａの毒性及び毒物動態（ＴＫ）を評価することであった。
この試験は、２段階からなっていた：第１段階の忍容性（群１～３）、ならびに第２段階の毒性学（群４～７）及びサテライトＴＫ（群８～１０）。第１段階の各処置群は、１匹の雌及び１匹の雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットを含んでいた。第１段階のラットには、１００ｍｇ／ｋｇの複合体４５ａ（群１）、２００ｍｇ／ｋｇの複合体４５ａ（群２）、または４００ｍｇ／ｋｇの複合体４５ａ（群３）のいずれかを単一の日に５ｍＬ／ｋｇの用量体積のＳＣ注射（群３では５ｍＬ×２箇所、肩甲骨中間部と背腰部）によって投与した。各第２段階毒性学群（群４～７）は、５匹の雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットを含んでいた。各第２段階サテライトＴＫ群（群８～１０）は、４匹の雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットを含んでいた。第１段階での忍容性に基づいて第２段階のラットにＰＢＳ（群４）、５０ｍｇ／ｋｇの複合体４５ａ（群５及び８）、１５０ｍｇ／ｋｇの複合体４５ａ（群６及び９）または４００ｍｇ／ｋｇの複合体４５ａ（群７及び１０）のいずれかを単一の日に５ｍＬ／ｋｇの用量体積のＳＣ注射（群７及び１０では群３のための５ｍＬ×２箇所、肩甲骨中間部と背腰部）によって投与した。
第１段階の臨床所見は１～３日目に１日２回記録され、詳しい所見は無作為化して記録された。第２段階の臨床所見は１～１５日目に１日２回記録され、詳しい所見は１日目（投薬前）及び１４日目に記録された。第１段階では投薬前の無作為化された体重測定結果を記録した。第２段階では１日目、３日目、７日目、１４日目、及び剖検前の１５日目の無作為化された体重測定結果を記録した。第２段階では１、４、７、１０、１２及び１４日目の食餌摂取測定結果を記録した。投薬後０．５、１、２、４、８、２４、７２、１２０、１６８、２４０及び３３６時間目に複合体４５ａへの全身曝露の分析のために血漿試料をサテライトＴＫラット（群８～１０）から採取した。１４日目から１５日目までの２４時間にわたって毒性学ラット（群４～７）から尿試料を採取した。血液学、化学及び凝固評価項目の評価のための血液試料を１５日目に毒性学ラット（群４～７）から採取した。血液採取に続いて剖検を毒性学ラット（群４～７）に行った。プロトコールによって指定された組織を採取し、肉眼で評価し、選択された臓器を計量し、組織を顕微鏡評価のために固定した。その後、組織を処理し、顕微鏡評価を行った。
忍容性：
試験品に関係した異常所見がないことに基づけば、単回皮下注射（各投薬日に片方あるいは両方の部位）としての４００ｍｇ／ｋｇ未満の複合体４５ａの投与は、雄及び雌のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットにおいて３日目まで良好に忍容された。
毒物動態：
複合体４５ａ血漿中レベルは２週間の曝露期間にわたって維持され、ノイラミニダーゼ（ＮＡ）捕捉アッセイとＦｃ捕捉アッセイとで同程度であった。この観察結果は、（Ｆｃ基に繋げられた少なくとも１つの標的部分を含有する）完全な分子が生体内での用量投薬の後に安定したままであったことを示唆していた。平均血漿中曝露量は５０ｍｇ／ｋｇから４００ｍｇ／ｋｇまでほぼ用量比例的に増加するようであった。
毒性学：
体重、食餌摂取、臨床所見、臓器重量、血液学的パラメータ、臨床化学、巨視的知見及び微視的知見において試験品に関係した変化がないこと基づけば、単回皮下注射としての４００ｍｇ／ｋｇ未満の複合体４５ａの投与（２箇所から投与された高用量）は、雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットにおいて最長１４日間にわたって良好に忍容された。この用量は、３１２，０００及び３１９，０００μｇ・ｈｒ／ｍＬの平均ＡＵＣ０－ｉｎｆ値、ならびにＮＡ捕捉及びＦｃ捕捉アッセイでのそれぞれ１１５０及び９７４μｇ／ｍＬの平均Ｃｍａｘ値に相当するものであった。
実施例２２０．Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットにおける複合体４５ａの単回用量皮下範囲探索試験ならびに単回用量毒性及び毒物動態（２週間曝露）試験
この試験の目的は、雄及び雌のラットにおいて忍容性を評価し、その後、雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットに単回皮下（ＳＣ）用量として投与された複合体４５ａの毒性及び毒物動態を評価することであった。第２段階の雄の動物に５０、１５０または４００ｍｇ／ｋｇ／用量の複合体４５ａを投与した。
全ての試験動物は、計画屠殺時まで生き残った。臓器重量、血液学的パラメータ、臨床化学、巨視的知見及び微視的知見において試験品に関係した変化はなかった。記録された微視的知見は対照動物及び試験品曝露群において同程度の発生率で存在していたか、またはこの系統及び月齢のラットに一般的にみられる偶発的な「バックグラウンド」知見を表していると考えられた。
列挙される実施形態
１．式（Ｄ－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）、（１）もしくは（２）のいずれか１つで表される複合体：
Figure 2022546609000944
 〔式中、各Ａ１及び各Ａ２は独立して式（Ａ－Ｉ）～（Ａ－ＸＩＩ）：

Figure 2022546609000945
で表され、
Ｒ１は、－ＯＨ、－ＮＨ２、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、及び－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨＲ６から選択され、
Ｒ２及びＲ３は各々独立して、－Ｈ、－ＯＨ、－Ｆ、－Ｃｌ、及び－Ｂｒから選択され、
Ｒ４は、－ＣＯ２Ｈ、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２、－ＳＯ３Ｈから選択され、
Ｒ５は、－ＣＯＣＨ３、－ＣＯＣＦ３、－ＳＯ２ＣＨ３から選択され、
Ｘは、－Ｏ－、及び－Ｓ－から選択され、
Ｙは、
Figure 2022546609000946
 から選択され、
Ｒ６は、
Figure 2022546609000947
 から選択され、
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ２０アルキル、Ｃ３－Ｃ２０シクロアルキル、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択され、
Ｒ８は、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択され、
ｎは１または２であり、
各Ｅは、Ｆｃドメイン単量体、アルブミンタンパク質、アルブミンタンパク質結合ペプチドまたはＦｃ結合ペプチドを含み、
Ｌは、Ｅに、ならびに各Ａ１のまたはＡ１及びＡ２の各々の各Ｙに共有結合しているリンカーであり、
Ｔは１～２０の整数であり、
式（Ｄ－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）、（１）または（２）の中の各波線は、Ｌが各Ｅに共有結合していることを表す〕、
またはその薬学的に許容される塩。
２．前記複合体が式（Ｄ－Ｉ）：
Figure 2022546609000948
 〔式中、各Ａ１及び各Ａ２は独立して式（Ａ－Ｉ）～（Ａ－ＸＩＩ）のいずれか１つから選択され、
各Ｅは、Ｆｃドメイン単量体、アルブミンタンパク質、アルブミンタンパク質結合ペプチドまたはＦｃ結合ペプチドを含み、
ｎは１または２であり、
Ｔは１～２０の整数であり、
前記Ｅに連結されている波線は、各Ａ１－Ｌ－Ａ２がＥに共有結合していることを表す〕
で表される、実施形態１に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
３．各Ａ１及び各Ａ２が独立して式（Ａ－Ｉ）、（Ａ－ＩＩ）、（Ａ－ＶＩ）もしくは（Ａ－ＶＩＩ）のいずれか１つから選択され、
各ＥがＦｃドメイン単量体、アルブミンタンパク質、アルブミンタンパク質結合ペプチドもしくはＦｃ結合ペプチドを含み、
ｎが１もしくは２であり、
Ｔが１～２０の整数であり、
前記Ｅに連結されている波線が、各Ａ１－Ｌ－Ａ２がＥに共有結合していることを表す、実施形態２に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
４．各Ａ１及び各Ａ２が式（Ａ－Ｉ）で表される、実施形態３に記載の複合体、またはその薬学的に許容される塩。
５．前記複合体が式（Ｄ－ＩＩ）：
Figure 2022546609000949
 で表される、実施形態１～４のいずれか１項に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
６．前記複合体が式（Ｄ－ＩＩ－１）：
Figure 2022546609000950
 で表される、実施形態５に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
７．前記複合体が式（Ｄ－ＩＩ－２）：
Figure 2022546609000951
 で表される、実施形態６に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
８．前記複合体が式（Ｄ－ＩＩ－３）：
Figure 2022546609000952
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態７に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
９．Ｌ’が窒素原子である、実施形態８に記載の複合体。
１０．前記複合体が、
Figure 2022546609000953
 から選択される構造を有する、実施形態９に記載の複合体。
１１．前記複合体が式（Ｄ－ＩＩ－４）：
Figure 2022546609000954
 で表される、実施形態６に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１２．前記複合体が式（Ｄ－ＩＩ－５）：
Figure 2022546609000955
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態１１に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１３．Ｌ’が窒素原子である、実施形態１２に記載の複合体。
１４．前記複合体が、
Figure 2022546609000956
 から選択される構造を有する、実施形態１３に記載の複合体。
１５．前記複合体が、
Figure 2022546609000957
 の構造を有する、実施形態１１に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１６．前記複合体が式（Ｄ－ＩＩ－６）：
Figure 2022546609000958
 〔式中、Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ２０アルキル、Ｃ３－Ｃ２０シクロアルキル、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択される〕
で表される、実施形態６に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１７．Ｒ７が、Ｃ１－Ｃ２０アルキル、Ｃ３－Ｃ２０シクロアルキル、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択される、実施形態１６に記載の複合体。
１８．Ｒ７が、メチル、エチル、プロピルまたはブチルから選択される、実施形態１６または実施形態１７に記載の複合体。
１９．前記複合体が式（Ｄ－ＩＩ－７）：
Figure 2022546609000959
 で表される、実施形態１６～１８のいずれか１項に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
２０．前記複合体が式（Ｄ－ＩＩ－８）：
Figure 2022546609000960
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態１９に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
２１．前記複合体が、
Figure 2022546609000961
 の構造を有する、実施形態２０に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
２２．前記複合体が、


Figure 2022546609000962
 で表される、実施形態２１に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
２３．前記複合体が式（Ｄ－ＩＩ－９）：
Figure 2022546609000963
 で表される、実施形態１６～１８のいずれか１項に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
２４．前記複合体が式（Ｄ－ＩＩ－１０）：
Figure 2022546609000964
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態２３に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
２５．前記複合体が、
Figure 2022546609000965
 の構造を有する、実施形態２４に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
２６．前記複合体が式（Ｄ－ＩＩＩ）：
Figure 2022546609000966
 で表される、実施形態２もしくは実施形態３に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
２７．前記複合体が式（Ｄ－ＩＩＩ－１）：
Figure 2022546609000967
 で表される、実施形態２６に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
２８．前記複合体が式（Ｄ－ＩＩＩ－２）：
Figure 2022546609000968
 で表される、実施形態２７に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
２９．前記複合体が式（Ｄ－ＩＩＩ－３）：
Figure 2022546609000969
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態２８に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
３０．前記複合体が式（Ｄ－ＩＩＩ－４）：
Figure 2022546609000970
 で表される、実施形態２７に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
３１．前記複合体が式（Ｄ－ＩＩＩ－５）：
Figure 2022546609000971
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態３０に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
３２．前記複合体が式（Ｄ－ＩＩＩ－６）：
Figure 2022546609000972
 で表される、実施形態２７に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
３３．前記複合体が式（Ｄ－ＩＩＩ－７）：
Figure 2022546609000973
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態３２に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
３４．前記複合体が式（Ｄ－ＩＩＩ－８）：
Figure 2022546609000974
 で表される、実施形態２７に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
３５．前記複合体が式（Ｄ－ＩＩＩ－９）：
Figure 2022546609000975
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、そして３
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態３４に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
３６．前記複合体が式（Ｄ－ＩＶ）：
Figure 2022546609000976
 で表される、実施形態２に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
３７．前記複合体が式（Ｄ－ＩＶ－１）：
Figure 2022546609000977
 で表される、実施形態３６に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
３８．前記複合体が式（Ｄ－ＩＶ－２）：
Figure 2022546609000978
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態３７に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
３９．前記複合体が式（Ｄ－Ｖ）：
Figure 2022546609000979
 で表される、実施形態２もしくは実施形態３に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
４０．前記複合体が式（Ｄ－Ｖ－１）：
Figure 2022546609000980
 で表される、実施形態３９に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
４１．前記複合体が式（Ｄ－Ｖ－２）：
Figure 2022546609000981
 で表される、実施形態４０に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
４２．前記複合体が式（Ｄ－Ｖ－３）：
Figure 2022546609000982
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態４１に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
４３．Ｌ’が窒素原子である、実施形態４２に記載の複合体。
４４．ｙ１及びｙ２が各々１であるか、ｙ１及びｙ２が各々２であるか、またはｙ１及びｙ２が各々３である、実施形態４２に記載の複合体。
４５．前記複合体が式（Ｄ－Ｖ－４）：
Figure 2022546609000983
 で表される、実施形態４０に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
４６．前記複合体が式（Ｄ－Ｖ－５）：
Figure 2022546609000984
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態４５に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
４７．Ｌ’が窒素原子である、実施形態４６に記載の複合体。
４８．ｙ１及びｙ２が各々１であるか、ｙ１及びｙ２が各々２であるか、またはｙ１及びｙ２が各々３である、実施形態４６に記載の複合体。
４９．前記複合体が式（Ｄ－Ｖ－６）：
Figure 2022546609000985
 で表される、実施形態３９に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
５０．前記複合体が式（Ｄ－Ｖ－７）：
Figure 2022546609000986
 で表される、実施形態４９に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
５１．前記複合体が式（Ｄ－Ｖ－８）：
Figure 2022546609000987
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態５０に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
５２．Ｌ’が窒素原子である、実施形態５１に記載の複合体。
５３．ｙ１及びｙ２が各々１であるか、ｙ１及びｙ２が各々２であるか、またはｙ１及びｙ２が各々３である、実施形態５１に記載の複合体。
５４．前記複合体が式（Ｄ－Ｖ－９）：
Figure 2022546609000988
 で表される、実施形態４９に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
５５．前記複合体が式（Ｄ－Ｖ－１０）：
Figure 2022546609000989
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態５１に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
５６．Ｌ’が窒素原子である、実施形態５５に記載の複合体。
５７．ｙ１及びｙ２が各々１であるか、ｙ１及びｙ２が各々２であるか、またはｙ１及びｙ２が各々３である、実施形態５６に記載の複合体。
５８．前記複合体が式（Ｄ－ＶＩ）：
Figure 2022546609000990
 で表される、実施形態２もしくは実施形態３に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
５９．前記複合体が式（Ｄ－ＶＩ－１）：
Figure 2022546609000991
 で表される、実施形態５８に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
６０．前記複合体が式（Ｄ－ＶＩ－２）：
Figure 2022546609000992
 で表される、実施形態５９に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
６１．前記複合体が式（Ｄ－ＶＩ－３）：
Figure 2022546609000993
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態６０に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
６２．前記複合体が式（Ｄ－ＶＩ－４）：
Figure 2022546609000994
 で表される、実施形態５９に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
６３．前記複合体が式（Ｄ－ＶＩ－５）：
Figure 2022546609000995
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態６２に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
６４．前記複合体が式（Ｄ－ＶＩ－６）：
Figure 2022546609000996
 で表される、実施形態５９に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
６５．前記複合体が式（Ｄ－ＶＩ－７）：
Figure 2022546609000997
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態６４に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
６６．前記複合体が式（Ｄ－ＶＩ－８）：

Figure 2022546609000998
 で表される、実施形態５９に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
６７．前記複合体が式（Ｄ－ＶＩ－９）：
Figure 2022546609000999
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態６６に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
６８．前記複合体が式（Ｄ－ＶＩＩ）：
Figure 2022546609001000
 で表される、実施形態２もしくは実施形態３に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
６９．Ｒ１が－ＯＨである、実施形態３９～６８のいずれか１項に記載の複合体。
７０．Ｒ１が－ＮＨ２である、実施形態３９～６８のいずれか１項に記載の複合体。
７１．Ｒ１が－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２である、実施形態３９～６８のいずれか１項に記載の複合体。
７２．前記複合体が式（Ｄ－ＶＩＩＩ）：
Figure 2022546609001001
 で表される、実施形態２に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
７３．前記複合体が式（Ｄ－ＶＩＩＩ－１）：
Figure 2022546609001002
 で表される、実施形態７２に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
７４．前記複合体が式（Ｄ－ＶＩＩＩ－２）：

Figure 2022546609001003
 で表される、実施形態７３に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
７５．前記複合体が式（Ｄ－ＶＩＩＩ－３）：
Figure 2022546609001004
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態７４に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
７６．Ｌ’が窒素原子である、実施形態７５に記載の複合体。
７７．前記複合体が、
Figure 2022546609001005
 から選択される構造を有する、実施形態７５に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
７８．前記複合体が式（Ｄ－ＶＩＩＩ－４）：



Figure 2022546609001006
 で表される、実施形態７３に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
７９．前記複合体が式（Ｄ－ＶＩＩＩ－５）：
Figure 2022546609001007
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態７８に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
８０．Ｌ’が窒素原子である、実施形態７９に記載の複合体。
８１．前記複合体が、
Figure 2022546609001008
 から選択される構造を有する、実施形態７９に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
８２．前記複合体が、
Figure 2022546609001009
 の構造で表される、実施形態７８に記載の複合体。
８３．前記複合体が式（Ｄ－ＶＩＩＩ－６）：

Figure 2022546609001010
 で表される、実施形態７３に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
８４．前記複合体が式（Ｄ－ＶＩＩＩ－７）：

Figure 2022546609001011
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態８３に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
８５．前記複合体が式（Ｄ－ＶＩＩＩ－８）：

Figure 2022546609001012
 で表される、実施形態７３に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
８６．前記複合体が式（Ｄ－ＶＩＩＩ－９）：

Figure 2022546609001013
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態８５に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
８７．前記複合体が式（Ｄ－ＶＩＩＩ－１０）：
Figure 2022546609001014
 で表される、実施形態７２に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
８８．前記複合体が式（Ｄ－ＶＩＩＩ－１１）：
Figure 2022546609001015
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態８７に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
８９．前記複合体が式（Ｄ－ＩＸ）：

Figure 2022546609001016
 で表される、実施形態２に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
９０．前記複合体が式（Ｄ－ＩＸ－１）：

Figure 2022546609001017
 で表される、実施形態８９に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
９１．前記複合体が式（Ｄ－ＩＸ－２）：

Figure 2022546609001018
 で表される、実施形態９０に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
９２．前記複合体が式（Ｄ－ＩＸ－３）：
Figure 2022546609001019
 で表される、実施形態９０に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
９３．前記複合体が式（Ｄ－ＩＸ－４）：

Figure 2022546609001020
 で表される、実施形態９０に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
９４．前記複合体が式（Ｄ－ＩＸ－５）：

Figure 2022546609001021
 で表される、実施形態９０に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
９５．前記複合体が式（Ｄ－ＩＸ－６）：

Figure 2022546609001022
 で表される、実施形態９０に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
９６．前記複合体が式（Ｄ－Ｘ）：
Figure 2022546609001023
 で表される、実施形態２に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
９７．前記複合体が式（Ｄ－Ｘ－１）：
Figure 2022546609001024
 で表される、実施形態９６に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
９８．前記複合体が式（Ｄ－Ｘ－２）：

Figure 2022546609001025
 で表される、実施形態９７に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
９９．前記複合体が式（Ｄ－Ｘ－３）：

Figure 2022546609001026
 で表される、実施形態９７に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１００．ＬまたはＬ’が、１つ以上の、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキレン、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリーレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリーレン、Ｏ、Ｓ、ＮＲｉ、Ｐ、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノを含み、Ｒｉが、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキル、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリール、または任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールである、実施形態１～９９のいずれか１項に記載の複合体。
１０１．ＬまたはＬ’の主鎖が、１つ以上の、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキレン、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリーレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリーレン、Ｏ、Ｓ、ＮＲｉ、Ｐ、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノからなり、
Ｒｉが、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキル、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリール、または任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールである、
実施形態１００に記載の複合体。
１０２．ＬまたはＬ’がオキソで置換されている、実施形態１００または実施形態１０１に記載の複合体。
１０３．ＬまたはＬ’の主鎖が２５０個以下の原子を含む、実施形態１～１０２のいずれか１項に記載の複合体。
１０４．ＬまたはＬ’が、アミド、カルバメート、スルホニルまたは尿素リンケージを形成することができる、実施形態１～１０３のいずれか１項に記載の複合体。
１０５．ＬまたはＬ’が結合である、実施形態１～９９のいずれか１項に記載の複合体。
１０６．ＬまたはＬ’が原子である、実施形態１～９９のいずれか１項に記載の複合体。
１０７．各Ｌが式（Ｄ－Ｌ－Ｉ）：

Figure 2022546609001027
 〔式中、ＬＡは、式ＧＡ１－（ＺＡ１）ｇ１－（ＹＡ１）ｈ１－（ＺＡ２）ｉ１－（ＹＡ２）ｊ１－（ＺＡ３）ｋ１－（ＹＡ３）ｌ１－（ＺＡ４）ｍ１－（ＹＡ４）ｎ１－（ＺＡ５）ｏ１－ＧＡ２で表され、
ＬＢは、式ＧＢ１－（ＺＢ１）ｇ２－（ＹＢ１）ｈ２－（ＺＢ２）ｉ２－（ＹＢ２）ｊ２－（ＺＢ３）ｋ２－（ＹＢ３）ｌ２－（ＺＢ４）ｍ２－（ＹＢ４）ｎ２－（ＺＢ５）ｏ２－ＧＢ２で表され、
ＬＣは、式ＧＣ１－（ＺＣ１）ｇ３－（ＹＣ１）ｈ３－（ＺＣ２）ｉ３－（ＹＣ２）ｊ３－（ＺＣ３）ｋ３－（ＹＣ３）ｌ３－（ＺＣ４）ｍ３－（ＹＣ４）ｎ３－（ＺＣ５）ｏ３－ＧＣ２で表され、
ＧＡ１はＱとの結合であり、
ＧＡ２はＡ１との結合であり、
ＧＢ１はＱとの結合であり）、
ＧＢ２はＡ２との結合であり、
ＧＣ１はＱとの結合であり、
ＧＣ２は、Ｅとの結合であり、またはＥに複合している官能基と反応することができる官能基（例えば、マレイミドとシステイン、アミンと活性カルボン酸、チオールとマレイミド、活性スルホン酸とアミン、イソシアネートとアミン、アジドとアルキン、及びアルケンとテトラジン）であり、
ＺＡ１、ＺＡ２、ＺＡ３、ＺＡ４、ＺＡ５、ＺＢ１、ＺＢ２、ＺＢ３、ＺＢ４、ＺＢ５、ＺＣ１、ＺＣ２、ＺＣ３、ＺＣ４及びＺＣ５の各々は独立して、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキレン、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリーレン、または任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリーレンであり、
ＹＡ１、ＹＡ２、ＹＡ３、ＹＡ４、ＹＢ１、ＹＢ２、ＹＢ３、ＹＢ４、ＹＣ１、ＹＣ２、ＹＣ３及びＹＣ４の各々は独立して、Ｏ、Ｓ、ＮＲｉ、Ｐ、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノであり、
Ｒｉは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキル、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリール、または任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールであり、
ｇ１、ｈ１、ｉ１、ｊ１、ｋ１、ｌ１、ｍ１、ｎ１、ｏ１、ｇ２、ｈ２、ｉ２、ｊ２、ｋ２、ｌ２、ｍ２、ｎ２、ｏ２、ｇ３、ｈ３、ｉ３、ｊ３、ｋ３、ｌ３、ｍ３、ｎ３及びｏ３の各々は独立して０または１であり、
Ｑは、窒素原子、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキレン、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリーレン、または任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリーレン〕
で表される、実施形態１～１０６のいずれか１項に記載の複合体。
１０８．Ｌが、
Figure 2022546609001028
Figure 2022546609001029
Figure 2022546609001030
Figure 2022546609001031
Figure 2022546609001032
Figure 2022546609001033
Figure 2022546609001034
Figure 2022546609001035
Figure 2022546609001036
Figure 2022546609001037
Figure 2022546609001038
〔式中、ｚ１及びｚ２は各々独立して１～２０の整数であり、
Ｒ９は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ２０アルキル、Ｃ３－Ｃ２０シクロアルキル、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択される〕
から選択される、実施形態１０７に記載の複合体。
１０９．Ｙが
Figure 2022546609001039
 であり、Ｌが
Figure 2022546609001040
 である、実施形態１０８に記載の複合体。
１１０．Ｙが
Figure 2022546609001041
 であり、Ｌが

Figure 2022546609001042
 である。
１１１．Ｙが
Figure 2022546609001043
 であり、Ｌが
Figure 2022546609001044
 である、実施形態１０８に記載の複合体。
１１２．Ｙが
Figure 2022546609001045
 であり、Ｌが
Figure 2022546609001046
 である、実施形態１０８に記載の複合体。
１１３．前記複合体が、式（Ｍ－Ｉ）：
Figure 2022546609001047
 〔式中、各Ａ１は独立して式（Ａ－Ｉ）～（Ａ－ＸＩＩ）のいずれか１つから選択され、
各Ｅは、Ｆｃドメイン単量体、アルブミンタンパク質、アルブミンタンパク質結合ペプチドまたはＦｃ結合ペプチドを含み、
ｎは１または２であり、
Ｔは１～２０の整数であり、
Ｌは、Ｅ及びＡ１の各々に共有結合しているリンカーであり、
前記Ｅに連結されている波線は、各Ａ１－ＬがＥに共有結合していることを表す〕、
で表される、実施形態１に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１１４．各Ａ１が独立して式（Ａ－Ｉ）、（Ａ－ＩＩ）、（Ａ－ＶＩ）もしくは（Ａ－ＶＩＩ）のいずれか１つから選択され、
各Ｅが、Ｆｃドメイン単量体、アルブミンタンパク質、アルブミンタンパク質結合ペプチドもしくはＦｃ結合ペプチドを含み、
前記Ｅに連結されている波線が、各Ａ１－ＬがＥに共有結合していることを表す、
実施形態１１３に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１１５．各Ａ１が独立して式（Ａ－Ｉ）から選択される、実施形態１１４に記載の複合体。
１１６．前記複合体が式（Ｍ－ＩＩ）：
Figure 2022546609001048
 で表される、実施形態１１５に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１１７．前記複合体が式（Ｍ－ＩＩ－１）：
Figure 2022546609001049
 で表される、実施形態１１６に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１１８．前記複合体が式（Ｍ－ＩＩ－２）：
Figure 2022546609001050
 で表される、実施形態１１７に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１１９．前記複合体が式（Ｍ－ＩＩ－３）：
Figure 2022546609001051
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１は１～２０の整数である〕
で表される、実施形態１１８に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１２０．前記複合体が式（Ｍ－ＩＩ－４）：
Figure 2022546609001052
 で表される、実施形態１１９に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１２１．前記複合体が式（Ｍ－ＩＩ－５）：
Figure 2022546609001053
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１は１～２０の整数である〕
で表される、実施形態１２０に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１２２．前記複合体が、
Figure 2022546609001054
 の構造を有する、実施形態１２１に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１２３．前記複合体が式（Ｍ－ＩＩ－６）：

Figure 2022546609001055
 〔式中、Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ２０アルキル、Ｃ３－Ｃ２０シクロアルキル、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択される〕
で表される、実施形態１１６に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１２４．Ｒ７が、Ｃ１－Ｃ２０アルキル、Ｃ３－Ｃ２０シクロアルキル、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択される、実施形態１２３に記載の複合体。
１２５．Ｒ７が、メチル、エチル、プロピルまたはブチルから選択される、実施形態１２３または実施形態１２４に記載の複合体。
１２６．前記複合体が式（Ｍ－ＩＩ－７）：
Figure 2022546609001056
 で表される、実施形態１２３～１２５のいずれか１項に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１２７．前記複合体が式（Ｍ－ＩＩ－８）：

Figure 2022546609001057
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１は１～２０の整数である〕
で表される、実施形態１２６に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１２８．前記複合体が、

Figure 2022546609001058
 の構造を有する、実施形態１２７に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１２９．前記複合体が式（Ｍ－ＩＩ－９）：
Figure 2022546609001059
 で表される、実施形態１２７に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１３０．前記複合体が式（Ｍ－ＩＩ－１０）：

Figure 2022546609001060
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１は１～２０の整数である〕
で表される、実施形態１２９に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１３１．前記複合体が構造
Figure 2022546609001061
 を有する、実施形態１３０に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１３２．前記複合体が式（Ｍ－ＩＩＩ）：

Figure 2022546609001062
 で表される、実施形態１１３または実施形態１１４に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１３３．前記複合体が式（Ｍ－ＩＩＩ－１）：

Figure 2022546609001063
 で表される、実施形態１３２に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１３４．前記複合体が式（Ｍ－ＩＩＩ－２）：
Figure 2022546609001064
 で表される、実施形態１３３に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１３５．前記複合体が式（Ｍ－ＩＩＩ－３）：
Figure 2022546609001065
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態１３４に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１３６．前記複合体が式（Ｍ－ＩＩＩ－４）：
Figure 2022546609001066
 で表される、実施形態１３３に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１３７．前記複合体が式（Ｍ－ＩＩＩ－５）：

Figure 2022546609001067
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態１３６に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１３８．前記複合体が式（Ｍ－ＩＩＩ－６）：
Figure 2022546609001068
 で表される、実施形態１３３に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１３９．前記複合体が式（Ｍ－ＩＩＩ－７）：
Figure 2022546609001069
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態１３８に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１４０．前記複合体が式（Ｍ－ＩＩＩ－８）：
Figure 2022546609001070
 で表される、実施形態１３３に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１４１．前記複合体が式（Ｍ－ＩＩＩ－９）：
Figure 2022546609001071
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態１４０に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１４２．前記複合体が式（Ｍ－ＩＶ）：
Figure 2022546609001072
 で表される、実施形態１１３に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１４３．前記複合体が式（Ｍ－ＩＶ－１）：
Figure 2022546609001073
 で表される、実施形態１４２に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１４４．前記複合体が式（Ｍ－ＩＶ－２）：
Figure 2022546609001074
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態１４３に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１４５．前記複合体が式（Ｍ－Ｖ）：
Figure 2022546609001075
 で表される、実施形態１１３または実施形態１１４に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１４６．前記複合体が式（Ｍ－Ｖ－１）：
Figure 2022546609001076
 で表される、実施形態１４５に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１４７．前記複合体が式（Ｍ－Ｖ－２）：
Figure 2022546609001077
 で表される、実施形態１４６に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１４８．前記複合体が式（Ｍ－Ｖ－３）：
Figure 2022546609001078
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１は１～２０の整数である〕
で表される、実施形態１４７に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１４９．前記複合体が式（Ｍ－Ｖ－４）：
Figure 2022546609001079
 で表される、実施形態１４８に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１５０．前記複合体が式（Ｍ－Ｖ－５）：
Figure 2022546609001080
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１は１～２０の整数である〕
で表される、実施形態１４９に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１５１．前記複合体が式（Ｍ－Ｖ－６）：

Figure 2022546609001081
 で表される、実施形態１４５に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１５２．前記複合体が式（Ｍ－Ｖ－７）：

Figure 2022546609001082
 で表される、実施形態１５１に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１５３．前記複合体が式（Ｍ－Ｖ－８）：

Figure 2022546609001083
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１は１～２０の整数である〕
で表される、実施形態１５２に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１５４．前記複合体が式（Ｍ－Ｖ－９）：

Figure 2022546609001084
 で表される、実施形態１５１に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１５５．前記複合体が式（Ｍ－Ｖ－１０）：

Figure 2022546609001085
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１は１～２０の整数である〕
で表される、実施形態１５４に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１５６．前記複合体が式（Ｍ－ＶＩ）：

Figure 2022546609001086
 で表される、実施形態１１３または実施形態１１４に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１５７．前記複合体が式（Ｍ－ＶＩ－１）：
Figure 2022546609001087
 で表される、実施形態１５６に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１５８．前記複合体が式（Ｍ－ＶＩ－２）：
Figure 2022546609001088
 で表される、実施形態１５７に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１５９．前記複合体が式（Ｍ－ＶＩ－３）：
Figure 2022546609001089
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態１５８に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１６０．前記複合体が式（Ｍ－ＶＩ－４）：
Figure 2022546609001090
 で表される、実施形態１５７に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１６１．前記複合体が式（Ｍ－ＶＩ－５）：
Figure 2022546609001091
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態１６０に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１６２．前記複合体が式（Ｍ－ＶＩ－６）：
Figure 2022546609001092
 で表される、実施形態１５７に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１６３．前記複合体が式（Ｍ－ＶＩ－７）：
Figure 2022546609001093
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態１６２に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１６４．前記複合体が式（Ｍ－ＶＩ－８）：
Figure 2022546609001094
 で表される、実施形態１５７に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１６５．前記複合体が式（Ｍ－ＶＩ－９）：

Figure 2022546609001095
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態１６４に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１６６．前記複合体が式（Ｍ－ＶＩＩ）：

Figure 2022546609001096
 で表される、実施形態１１３に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１６７．Ｒ１がＯＨである、実施形態１１３～１６６のいずれか１項に記載の複合体。
１６８．Ｒ１がＮＨ２である、実施形態１１３～１６６のいずれか１項に記載の複合体。
１６９．Ｒ１が－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２である、実施形態１１３～１６６のいずれか１項に記載の複合体。
１７０．前記複合体が式（Ｍ－ＶＩＩＩ）：
Figure 2022546609001097
 で表される、実施形態１１３に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１７１．前記複合体が式（Ｍ－ＶＩＩＩ－１）：
Figure 2022546609001098
 で表される、実施形態１７０に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１７２．前記複合体が式（Ｍ－ＶＩＩＩ－２）：

Figure 2022546609001099
 で表される、実施形態１７１に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１７３．前記複合体が式（Ｍ－ＶＩＩＩ－３）：
Figure 2022546609001100
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１は１～２０の整数である〕
で表される、実施形態１７２に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１７４．前記複合体が式（Ｍ－ＶＩＩＩ－４）：

Figure 2022546609001101
 で表される、実施形態１７３に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１７５．前記複合体が式（Ｍ－ＶＩＩＩ－５）：

Figure 2022546609001102
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１は１～２０の整数である〕
で表される、実施形態１７４に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１７６．前記複合体が、
Figure 2022546609001103
 の構造を有する、実施形態１７５に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１７７．前記複合体が式（Ｍ－ＶＩＩＩ－６）：

Figure 2022546609001104
 で表される、実施形態１７１に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１７８．前記複合体が式（Ｍ－ＶＩＩＩ－７）：

Figure 2022546609001105
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態１７７に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１７９．前記複合体が式（Ｍ－ＶＩＩＩ－８）：
Figure 2022546609001106
 で表される、実施形態１７１に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１８０．前記複合体が式（Ｍ－ＶＩＩＩ－９）：
Figure 2022546609001107
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態１７９に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１８１．前記複合体が式（Ｍ－ＶＩＩＩ－１０）：
Figure 2022546609001108
 で表される、実施形態１８０に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１８２．前記複合体が式（Ｍ－ＶＩＩＩ－１１）：

Figure 2022546609001109
 〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
で表される、実施形態１８１に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１８３．前記複合体が式（Ｍ－ＩＸ）：
Figure 2022546609001110
 で表される、実施形態１１３に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１８４．前記複合体が式（Ｍ－ＩＸ－１）：
Figure 2022546609001111
 で表される、実施形態１８３に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１８５．前記複合体が式（Ｍ－ＩＸ－２）：
Figure 2022546609001112
 で表される、実施形態１８４に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１８６．前記複合体が式（Ｍ－ＩＸ－３）：
Figure 2022546609001113
 で表される、実施形態１８４に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１８７．前記複合体が式（Ｍ－ＩＸ－４）：
Figure 2022546609001114
 で表される、実施形態１８４に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１８８．前記複合体が式（Ｍ－ＩＸ－５）：
Figure 2022546609001115
 で表される、実施形態１８４に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１８９．前記複合体が式（Ｍ－ＩＸ－６）：


Figure 2022546609001116
 で表される、実施形態１８４に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１９０．前記複合体が式（Ｍ－Ｘ）：
Figure 2022546609001117
 で表される、実施形態１１３に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１９１．前記複合体が式（Ｍ－Ｘ－１）：

Figure 2022546609001118
 で表される、実施形態１９０に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１９２．前記複合体が式（Ｍ－Ｘ－２）：
Figure 2022546609001119
 で表される、実施形態１９１に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１９３．前記複合体が式（Ｍ－Ｘ－３）：

Figure 2022546609001120
 で表される、実施形態１９０に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
１９４．ＬまたはＬ’が、１つ以上の、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキレン、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリーレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリーレン、Ｏ、Ｓ、ＮＲｉ、Ｐ、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノを含み、
Ｒｉが、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキル、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリール、または任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールである、
実施形態１１３～１９３のいずれか１項に記載の複合体。
１９５．ＬまたはＬ’の主鎖が、１つ以上の、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキレン、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリーレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリーレン、Ｏ、Ｓ、ＮＲｉ、Ｐ、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノからなり、
Ｒｉが、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキル、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリール、または任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールである、
実施形態１９４に記載の複合体。
１９６．ＬまたはＬ’がオキソで置換されている、実施形態１９４または実施形態１９５に記載の複合体。
１９７．ＬまたはＬ’の主鎖が２５０個以下の原子を含む、実施形態１１３～１９６のいずれか１項に記載の複合体。
１９８．ＬまたはＬ’が、アミド、カルバメート、スルホニルまたは尿素リンケージを形成することができる、実施形態１１３～１９７のいずれか１項に記載の複合体。
１９９．ＬまたはＬ’が結合である、実施形態１１３～１９３のいずれか１項に記載の複合体。
２００．ＬまたはＬ’が原子である、実施形態１１３～１９３のいずれか１項に記載の複合体。
２０１．各Ｌが式（Ｍ－Ｌ－１）：
Ｊ１－（Ｑ１）ｇ－（Ｔ１）ｈ－（Ｑ２）ｉ－（Ｔ２）ｊ－（Ｑ３）ｋ－（Ｔ３）ｌ－（Ｑ４）ｍ－（Ｔ４）ｎ－（Ｑ５）ｏ－Ｊ２
〔式中、Ｊ１はＡ１との結合であり、
Ｊ２はＥとの結合であり、またはＥに複合している官能基と反応することができる官能基（例えば、マレイミドとシステイン、アミンと活性カルボン酸、チオールとマレイミド、活性スルホン酸とアミン、イソシアネートとアミン、アジドとアルキン、及びアルケンとテトラジン）であり、
Ｑ１、Ｑ２、Ｑ３、Ｑ４及びＱ５の各々は独立して、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキレン、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニレン、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリーレン、または任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリーレンであり、
Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３、Ｔ４の各々は独立して、Ｏ、Ｓ、ＮＲｉ、Ｐ、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノであり、
Ｒｉは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０アルキル、任意選択的に置換されたＣ１－Ｃ２０ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０アルキニル、任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ２０ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０シクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０シクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ４－Ｃ２０ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０シクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ８－Ｃ２０ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたＣ５－Ｃ１５アリール、または任意選択的に置換されたＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールであり、
ｇ、ｈ、ｉ、ｊ、ｋ、ｌ、ｍ、ｎ及びｏの各々は独立して０または１である〕
で表される、実施形態１１３～２００のいずれか１項に記載の複合体。
２０２．Ｒ１が－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２である、実施形態１～２０１のいずれか１項に記載の複合体。
２０３．Ｒ２が－Ｆである、実施形態１～２０２のいずれか１項に記載の複合体。
２０４．Ｒ３が－Ｆである、実施形態１～２０３のいずれか１項に記載の複合体。
２０５．Ｒ４が－ＣＯ２Ｈである、実施形態１～２０４のいずれか１項に記載の複合体。
２０６．Ｒ５が－ＣＯＣＨ３である、実施形態１～２０５のいずれか１項に記載の複合体。
２０７．Ｅに連結されている波線が、各Ａ１－Ｌまたは各Ａ１－Ｌ－Ａ２のＬがＥの表面露出リジンの窒素原子に共有結合していることを表す、実施形態１～２０６のいずれか１項に記載の複合体。
２０８．Ｅに連結されている波線が、各Ａ１－ＬのＬまたは各Ａ１－Ｌ－Ａ２のＬがＥの溶媒曝露システインの硫黄原子に共有結合していることを表す、実施形態１～２０６のいずれか１項に記載の複合体。
２０９．各ＥがＦｃドメイン単量体である、実施形態１～２０８のいずれか１項に記載の複合体。
２１０．ｎが２であり、各Ｅが二量体化してＦｃドメインを形成する、実施形態２０９に記載の複合体。
２１１．ｎが２であり、各ＥがＦｃドメイン単量体であり、各Ｅが二量体化してＦｃドメインを形成し、前記複合体が式（Ｄ－Ｉ－１）：

Figure 2022546609001121
 〔式中、ＪはＦｃドメインであり、
Ｔは１～２０の整数である〕
で表される、実施形態２～４のいずれか１項に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
２１２．前記複合体が、
Figure 2022546609001122
 の構造を有する、実施形態２１１に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
２１３．ｎが２であり、各ＥがＦｃドメイン単量体であり、各Ｅが二量体化してＦｃドメインを形成し、前記複合体が式（Ｍ－Ｉ－１）：

Figure 2022546609001123
 〔式中、ＪはＦｃドメインであり、
Ｔは１～２０の整数である〕
で表される、実施形態１１３～１１５のいずれか１項に記載の複合体、
またはその薬学的に許容される塩。
２１４．各Ｅが、配列番号１～１３８のいずれか１つの配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態２０９～２１３のいずれか１項に記載の複合体。
２１５．各Ｅが、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６７、配列番号６８、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７６、配列番号７７、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８５、配列番号８６、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９４、配列番号９５のいずれか１つの配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態２１４に記載の複合体。
２１６．各Ｅが配列番号６２のアミノ酸配列を含む、実施形態２１５に記載の複合体。
２１７．各Ｅが配列番号６３のアミノ酸配列を含む、実施形態２１５に記載の複合体。
２１８．各Ｅが配列番号６４のアミノ酸配列を含む、実施形態２１５に記載の複合体。
２１９．各Ｅが配列番号６７のアミノ酸配列を含む、実施形態２１５に記載の複合体。
２２０．各Ｅが配列番号６８のアミノ酸配列を含む、実施形態２１５に記載の複合体。
２２１．各Ｅが配列番号７２のアミノ酸配列を含む、実施形態２１５に記載の複合体。
２２２．各Ｅが配列番号７３のアミノ酸配列を含む、実施形態２１５に記載の複合体。
２２３．各Ｅが配列番号７６のアミノ酸配列を含む、実施形態２１５に記載の複合体。
２２４．各Ｅが配列番号７７のアミノ酸配列を含む、実施形態２１５に記載の複合体。
２２５．各Ｅが配列番号８０のアミノ酸配列を含む、実施形態２１５に記載の複合体。
２２６．各Ｅが配列番号８１のアミノ酸配列を含む、実施形態２１５に記載の複合体。
２２７．各Ｅが配列番号８２のアミノ酸配列を含む、実施形態２１５に記載の複合体。
２２８．各Ｅが配列番号８５のアミノ酸配列を含む、実施形態２１５に記載の複合体。
２２９．各Ｅが配列番号８６のアミノ酸配列を含む、実施形態２１５に記載の複合体。
２３０．各Ｅが配列番号９０のアミノ酸配列を含む、実施形態２１５に記載の複合体。
２３１．各Ｅが配列番号９１のアミノ酸配列を含む、実施形態２１５に記載の複合体。
２３２．各Ｅが配列番号９４のアミノ酸配列を含む、実施形態２１５に記載の複合体。
２３３．各Ｅが配列番号９５のアミノ酸配列を含む、実施形態２１５に記載の複合体。
２３４．Ｔが１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０である、実施形態２０９～２３３のいずれか１項に記載の複合体。
２３５．Ｔの平均値が１～１０である、実施形態２０９～２３３のいずれか１項に記載の複合体の集団。
２３６．Ｔの平均値が１～５である、実施形態２３５に記載の複合体の集団。
２３７．Ｔの平均値が３～７である、実施形態２３５に記載の複合体の集団。
２３８．Ｔの平均値が３．５～５．５である、実施形態２３６または実施形態２３７に記載の複合体の集団。
２３９．Ｔの平均値が約４．５である、実施形態２３６または実施形態２３７に記載の複合体の集団。
２４０．Ｔの平均値が５～１０である、実施形態２３５に記載の複合体の集団。
２４１．実施形態１～２３４のいずれかに記載の複合体もしくは実施形態２３５～２４０に記載の複合体の集団、またはその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
２４２．ウイルス感染症を有するまたはウイルス感染症を有すると推定される対象を治療する方法であって、有効量の実施形態１～２４１のいずれか１項に記載の複合体または組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
２４３．ウイルス感染症の予防的治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、有効量の実施形態１～２４１のいずれか１項に記載の複合体または組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
２４４．前記ウイルス感染症が、インフルエンザウイルスまたはパラインフルエンザウイルスによって引き起こされるものである、実施形態２４２または実施形態２４３に記載の方法。
２４５．前記ウイルス感染症が、Ａ型、Ｂ型もしくはＣ型インフルエンザウイルス、またはパラインフルエンザウイルスである、実施形態２４２～２４４のいずれか１項に記載の方法。
２４６．前記対象が免疫低下状態にある、実施形態２４２～２４５のいずれか１項に記載の方法。
２４７．前記対象が、体液性免疫不全、Ｔ細胞欠損症、好中球減少症、無脾症または補体欠損症と診断されている、実施形態２４２～２４６のいずれか１項に記載の方法。
２４８．前記対象が免疫抑制療法で治療されている、または治療されようとしている、実施形態２４２～２４７のいずれか１項に記載の方法。
２４９．前記対象が、免疫抑制を引き起こす疾患と診断されている、実施形態２４２～２４８のいずれか１項に記載の方法。
２５０．前記疾患ががんまたは後天性免疫不全症候群である、実施形態２４９に記載の方法。
２５１．前記がんが、白血病、リンパ腫または多発性骨髄腫である、実施形態２５０に記載の方法。
２５２．前記対象が、造血幹細胞移植を受けたことがある、または受けようとしている、実施形態２４２～２５１のいずれか１項に記載の方法。
２５３．前記対象が、臓器移植を受けたことがある、または受けようとしている、実施形態２４２～２５２のいずれか１項に記載の方法。
２５４．前記対象が、続発感染症またはその発症リスクを有する、実施形態２４２～２５３のいずれか１項に記載の方法。
２５５．インフルエンザ感染症と診断された対象における続発感染症を予防する方法であって、実施形態１～２４１のいずれか１項に記載の複合体または組成物を前記対象に投与することを含む、当該方法。
２５６．前記続発感染症が呼吸器感染症である、実施形態２５４または実施形態２５５に記載の方法。
２５７．前記続発感染症が、肺炎に関連するものである、実施形態２５４～２５６のいずれか１項に記載の方法。
２５８．前記続発感染症が、細菌感染症、ウイルス感染症、または真菌感染症である、実施形態２５４～２５７のいずれか１項に記載の方法。
２５９．前記続発感染症が細菌感染症である、実施形態２５８に記載の方法。
２６０．前記細菌感染症が、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、またはＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ感染症である、実施形態２５９に記載の方法。
２６１．前記細菌感染症がＭＲＳＡである、実施形態２６０に記載の方法。
２６２．前記細菌感染症がＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅである、実施形態２６０に記載の方法。
２６３．組成物の前記複合体が、筋肉内、静脈内、皮内、動脈内、腹膜腔内、病巣内、頭蓋内、関節内、前立腺内、胸膜内、気管内、鼻腔内、硝子体内、膣内、直腸内、局所、腫瘍内、腹膜内、皮下、結膜下、小嚢内、経粘膜、心嚢内、臍帯内、眼内、経口、局部、吸入、注射または輸注投与される、実施形態２４２～２６２のいずれか１項に記載の方法。
２６４．前記対象が第２治療剤で治療される、実施形態２４２～２６３のいずれか１項に記載の方法。
２６５．前記第２治療剤が抗ウイルス剤である、実施形態２６４に記載の方法。
２６６．前記抗ウイルス剤が、ピモジビル（ｐｉｍｏｖｉｄｉｒ）、オセルタミビル、ザナミビル、ペラミビル、ラニナミビル、アマンタジンまたはリマンタジンから選択される、実施形態２６４に記載の方法。
２６７．前記第２治療剤が抗ウイルスワクチンである、実施形態２６６に記載の方法。
２６８．前記抗ウイルスワクチンが前記対象においてＡ型、Ｂ型もしくはＣ型インフルエンザウイルス、またはパラインフルエンザウイルスに対する免疫応答を誘発する、実施形態２６７に記載の方法。
２６９．前記抗ウイルス剤がバロキサビルである、実施形態２６５に記載の方法。
２７０．前記複合体及びバロキサビルが逐次投与される、実施形態２６５に記載の方法。
２７１．前記複合体及びバロキサビルが同時投与される、実施形態２６５に記載の方法。
２７２．前記複合体が式（Ｄ－ＩＩ－６）で表される、実施形態２４２～２７１のいずれか１項に記載の方法。
２７３．Ｒ７が、Ｃ１－Ｃ２０アルキル、Ｃ３－Ｃ２０シクロアルキル、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択される、実施形態２７２に記載の方法。
２７４．Ｒ７が、メチル、エチル、プロピルまたはブチルから選択される、実施形態２７２または実施形態２７３に記載の方法。
２７５．前記複合体が式（Ｄ－ＩＩ－７）で表される、実施形態２７２～２７４に記載の方法。
２７６．各Ｅが、配列番号６３～６８のいずれか１つの配列と少なくとも９５％同一である配列を有する、実施形態２４２～２７５のいずれか１項に記載の方法。
２７７．各Ｅが、配列番号６３、配列番号６４、配列番号７２または配列番号７３の配列と少なくとも９５％同一である配列を有する、実施形態２４２～２７５のいずれか１項に記載の方法。
２７８．各Ｅが、配列番号６７、配列番号６８、配列番号７６または配列番号７７の配列と少なくとも９５％同一である配列を有する、実施形態２４２～２７５のいずれか１項に記載の方法。
２７９．前記複合体が複合体４５または複合体４６である、実施形態２４２～２７５のいずれか１項に記載の方法。
２８０．対象におけるウイルス感染症を治療または予防する方法であって、
ａ）実施形態１～２４１のいずれか１項に記載の複合体または組成物、及び
ｂ）第２治療剤
を前記対象に投与することを含む、前記方法。
２８１．前記対象がウイルス感染症を有したか、ウイルス感染症を有すると推定されたかまたはウイルスに曝露された後に、前記複合体が前記対象に投与される、実施形態２８０に記載の方法。
２８２．前記複合体が前記対象に予防的に投与される、実施形態２８０に記載の方法。
２８３．前記対象がウイルス感染症を有したか、ウイルス感染症を有すると推定されたかまたはウイルスに曝露された後に、前記第２治療剤が投与される、実施形態２７８～２８２のいずれか１項に記載の方法。
２８４．前記第２治療剤が前記対象に予防的に投与される、実施形態２７８～２８３のいずれか１項に記載の方法。
２８５．前記第２治療剤が前記複合体の２日以内に投与される、実施形態２７８～２８４のいずれか１項に記載の方法。
２８６．前記第２治療剤が抗ウイルス剤である、実施形態２７８～２８５のいずれか１項に記載の方法。
２８７．前記抗ウイルス剤が、ピモジビル（ｐｉｍｏｖｉｄｉｒ）、オセルタミビル、ザナミビル、ペラミビル、ラニナミビル、アマンタジン、バロキサビル マルボキシル、バロキサビル酸、リマンタジン、またはその薬学的に許容される塩である、実施形態２８６に記載の方法。
２８８．前記抗ウイルス剤が、バロキサビル マルボキシル、バロキサビル酸、またはその薬学的に許容される塩である、実施形態２８７に記載の方法。
２８９．前記バロキサビル マルボキシル、バロキサビル酸、またはその薬学的に許容される塩が、２０～９０ｍｇの量で投与される、実施形態２８８のいずれか１項に記載の方法。
２９０．前記バロキサビル マルボキシル、バロキサビル酸、またはその薬学的に許容される塩が、経口投与される、実施形態２８６に記載の方法。
２９１．前記バロキサビル マルボキシル、バロキサビル酸、またはその薬学的に許容される塩が、単回用量として投与される、実施形態２８９または実施形態２９０に記載の方法。
２９２．前記バロキサビル マルボキシル、バロキサビル酸、またはその薬学的に許容される塩が、１回よりも多い回数の用量として投与される、実施形態２８９または実施形態２９０に記載の方法。
２９３．前記バロキサビル マルボキシル、バロキサビル酸、またはその薬学的に許容される塩が、２０～４０ｍｇの量で投与される、実施形態２８９～２９２のいずれか１項に記載の方法。
２９４．前記バロキサビル マルボキシル、バロキサビル酸、またはその薬学的に許容される塩が、３０～８０ｍｇの量で投与される、実施形態２８９～２９２のいずれか１項に記載の方法。
２９５．前記複合体が式（Ｄ－ＩＩ－６）で表される、実施形態２７８～２９４のいずれか１項に記載の方法。
２９６．Ｒ７が、Ｃ１－Ｃ２０アルキル、Ｃ３－Ｃ２０シクロアルキル、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択される、実施形態２９５に記載の方法。
２９７．Ｒ７が、メチル、エチル、プロピルまたはブチルから選択される、実施形態２９５または実施形態２９６に記載の方法。
２９８．前記複合体が式（Ｄ－ＩＩ－７）で表される、実施形態２９５～２９７のいずれか１項に記載の方法。
２９９．各Ｅが、配列番号６３～６８のいずれか１つの配列と少なくとも９５％同一である配列を有する、実施形態２８０～２９８のいずれか１項に記載の方法。
３００．各Ｅが、配列番号６３、配列番号６４、配列番号７２または配列番号７３の配列と少なくとも９５％同一である配列を有する、実施形態２９９に記載の方法。
３０１．各Ｅが、配列番号６７、配列番号６８、配列番号７６または配列番号７７の配列と少なくとも９５％同一である配列を有する、実施形態３００に記載の方法。
３０２．前記複合体が複合体４５または複合体４６である、実施形態２８０～２９８のいずれか１項に記載の方法。
３０３．前記複合体が、筋肉内、静脈内、皮内、動脈内、腹膜腔内、病巣内、頭蓋内、関節内、前立腺内、胸膜内、気管内、鼻腔内、硝子体内、膣内、直腸内、局所、腫瘍内、腹膜内、皮下、結膜下、小嚢内、経粘膜、心嚢内、臍帯内、眼内、経口、局部、吸入、注射または輸注投与される、実施形態２８０～３０２のいずれか１項に記載の方法。
３０４．前記複合体が静脈内投与される、実施形態３０３に記載の方法。
３０５．前記複合体が皮下投与される、実施形態３０３に記載の方法。
３０６．前記複合体が筋肉内投与される、実施形態３０３に記載の方法。
３０７．前記ウイルス感染症が、インフルエンザウイルスまたはパラインフルエンザウイルスによって引き起こされるものである、実施形態２８０～３０６のいずれか１項に記載の方法。
３０８．前記ウイルス感染症が、Ａ型、Ｂ型もしくはＣ型インフルエンザウイルス、またはパラインフルエンザウイルスである、実施形態３０７に記載の方法。
他の実施形態
本発明をその特定の実施形態に関して記載してきたが、そのさらなる改変が可能であること、ならびに本発明の該当する技術分野で既知または慣例的である実施の範囲内に入るような及び本明細書中で先に示した本質的特徴に適用され得るような及び特許請求の範囲に従うような本発明からの逸脱を含めて本発明の原理に概して従う本発明のいかなる変形形態、用途または適合形態も本出願が包含することを意図していることは、理解されよう。上記明細書中で言及される全ての刊行物、特許及び特許出願はこれをもって参照により、各個の刊行物、特許または特許出願を具体的かつ個別に参照によりその全体を援用すると示すのと同じ程度に援用される。
１つ以上の好ましい実施形態についての詳細な説明が本明細書に提供されている。しかしながら、本発明が様々な形態で具現され得ることは理解されるべきである。したがって、本明細書中に開示される具体的な詳細は、限定するものと解釈されるべきではなく、特許請求の範囲のための基準として及び本発明を何らかの適切な様式で採用することを当業者に教示するための代表的基準として解釈されるべきである。

Claims (46)

  1. 式（Ｄ－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）、（１）もしくは（２）のいずれか１つで表される複合体：
    Figure 2022546609001124
     〔式中、各Ａ１及び各Ａ２は独立して式（Ａ－Ｉ）～（Ａ－ＸＩＩ）：
    Figure 2022546609001125
     で表され、
    Ｒ１は、－ＯＨ、－ＮＨ２、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、及び－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨＲ６から選択され、
    Ｒ２及びＲ３は各々独立して、－Ｈ、－ＯＨ、－Ｆ、－Ｃｌ、及び－Ｂｒから選択され、
    Ｒ４は、－ＣＯ２Ｈ、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２、－ＳＯ３Ｈから選択され、
    Ｒ５は、－ＣＯＣＨ３、－ＣＯＣＦ３、－ＳＯ２ＣＨ３から選択され、
    Ｘは、－Ｏ－、及び－Ｓ－から選択され、
    Ｙは、
    Figure 2022546609001126
     から選択され、
    Ｒ６は、

    Figure 2022546609001127
     から選択され、
    Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ２０アルキル、Ｃ３－Ｃ２０シクロアルキル、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択され、
    Ｒ８は、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択され、
    ｎは１または２であり、
    各Ｅは、Ｆｃドメイン単量体、アルブミンタンパク質、アルブミンタンパク質結合ペプチドまたはＦｃ結合ペプチドを含み、
    Ｌは、Ｅに、ならびに各Ａ１のまたはＡ１及びＡ２の各々の各Ｙに共有結合しているリンカーであり、
    Ｔは１～２０の整数であり、
    式（Ｄ－Ｉ）、（Ｍ－Ｉ）、（１）または（２）の中の各波線は、Ｌが各Ｅに共有結合していることを表す〕、
    またはその薬学的に許容される塩。
  2. 前記複合体が式（Ｄ－Ｉ）：
    Figure 2022546609001128
     〔式中、各Ａ１及び各Ａ２は独立して式（Ａ－Ｉ）～（Ａ－ＸＩＩ）のいずれか１つから選択され、
    各Ｅは、Ｆｃドメイン単量体、アルブミンタンパク質、アルブミンタンパク質結合ペプチドまたはＦｃ結合ペプチドを含み、
    ｎは１または２であり、
    Ｔは１～２０の整数であり、
    前記Ｅに連結されている波線は、各Ａ１－Ｌ－Ａ２のＬがＥに共有結合していることを表す〕
    で表される、請求項１に記載の複合体、
    またはその薬学的に許容される塩。
  3. 前記複合体が式（Ｄ－ＩＩ）：
    Figure 2022546609001129
     で表される、請求項１もしくは請求項２のいずれか１項に記載の複合体、
    またはその薬学的に許容される塩。
  4. 前記複合体が式（Ｄ－ＩＩ－１）：
    Figure 2022546609001130
     で表される、請求項３に記載の複合体、
    またはその薬学的に許容される塩。
  5. 前記複合体が式（Ｄ－ＩＩ－６）：
    Figure 2022546609001131
     〔式中、Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ２０アルキル、Ｃ３－Ｃ２０シクロアルキル、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択される〕
    で表される、請求項４に記載の複合体、
    またはその薬学的に許容される塩。
  6. Ｒ７が、Ｃ１－Ｃ２０アルキル、Ｃ３－Ｃ２０シクロアルキル、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択される、請求項５に記載の複合体。
  7. Ｒ７が、メチル、エチル、プロピルまたはブチルから選択される、請求項５または請求項６に記載の複合体。
  8. 前記複合体が式（Ｄ－ＩＩ－７）：
    Figure 2022546609001132
     で表される、請求項５～７のいずれか１項に記載の複合体、
    またはその薬学的に許容される塩。
  9. 前記複合体が式（Ｄ－ＩＩ－８）：
    Figure 2022546609001133
     〔式中、Ｌ’はＬの残部であり、
    ｙ１及びｙ２は各々独立して１～２０の整数である〕
    で表される、請求項８に記載の複合体、
    またはその薬学的に許容される塩。
  10. 前記複合体が、
    Figure 2022546609001134
     の構造を有する、請求項９に記載の複合体、
    またはその薬学的に許容される塩。
  11. 前記複合体が、
    Figure 2022546609001135
     の構造を有する、請求項１０に記載の複合体、
    またはその薬学的に許容される塩。
  12. 前記複合体が式（Ｍ－Ｉ）：
    Figure 2022546609001136
     〔式中、各Ａ１は独立して式（Ａ－Ｉ）～（Ａ－ＸＩＩ）のいずれか１つから選択され、
    各Ｅは、Ｆｃドメイン単量体、アルブミンタンパク質、アルブミンタンパク質結合ペプチドまたはＦｃ結合ペプチドを含み、
    ｎは１または２であり、
    Ｔは１～２０の整数であり、
    Ｌは、Ｅ及びＡ１の各々に共有結合しているリンカーであり、
    前記Ｅに連結されている波線は、各Ａ１－ＬのＬがＥに共有結合していることを表す〕
    で表される、請求項１に記載の複合体、
    またはその薬学的に許容される塩。
  13. 前記複合体が式（Ｍ－ＩＩ）：
    Figure 2022546609001137
     で表される、請求項１２に記載の複合体、
    またはその薬学的に許容される塩。
  14. 前記複合体が式（Ｍ－ＩＩ－６）：
    Figure 2022546609001138
     〔式中、Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ２０アルキル、Ｃ３－Ｃ２０シクロアルキル、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択される〕
    で表される、請求項１３に記載の複合体、
    またはその薬学的に許容される塩。
  15. Ｒ７が、Ｃ１－Ｃ２０アルキル、Ｃ３－Ｃ２０シクロアルキル、Ｃ３－Ｃ２０ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－Ｃ１５アリール、及びＣ２－Ｃ１５ヘテロアリールから選択される請求項１４に記載の複合体。
  16. Ｒ７が、メチル、エチル、プロピルまたはブチルから選択される、請求項１４または請求項１５に記載の複合体。
  17. Ｅに連結されている波線が、
    各Ａ１－Ｌまたは各Ａ１－Ｌ－Ａ２のＬがＥの溶媒曝露リジンの窒素原子に共有結合していること
    を表す、請求項１～１６のいずれか１項に記載の複合体。
  18. Ｅに連結されている波線が、
    各Ａ１－ＬのＬまたは各Ａ１－Ｌ－Ａ２のＬがＥの溶媒曝露リジンの硫黄原子に共有結合していること
    を表す、請求項１～１６のいずれか１項に記載の複合体。
  19. 各ＥがＦｃドメイン単量体である、請求項１～１８のいずれか１項に記載の複合体。
  20. ｎが２であり、各Ｅが二量体化してＦｃドメインを形成する、請求項１９に記載の複合体。
  21. ｎが２であり、各ＥがＦｃドメイン単量体であり、各Ｅが二量体化してＦｃドメインを形成し、前記複合体が式（Ｄ－Ｉ－１）：
    Figure 2022546609001139
     〔式中、ＪはＦｃドメインであり、
    Ｔは１～２０の整数である〕
    で表される、請求項２に記載の複合体、
    またはその薬学的に許容される塩。
  22. 前記複合体が、


    Figure 2022546609001140
     の構造を有する、請求項２１に記載の複合体、
    またはその薬学的に許容される塩。
  23. ｎが２であり、各ＥがＦｃドメイン単量体であり、各Ｅが二量体化してＦｃドメインを形成し、前記複合体が式（Ｍ－Ｉ－１）：
    Figure 2022546609001141
     〔式中、ＪはＦｃドメインであり、
    Ｔは１～２０の整数である〕
    で表される、請求項１２に記載の複合体、
    またはその薬学的に許容される塩。
  24. 各Ｅが、
    配列番号１～１３８のいずれか１つの配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列
    を含む、請求項１９～２３のいずれか１項に記載の複合体。
  25. 各Ｅが、
    配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６７、配列番号６８、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７６、配列番号７７、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８５、配列番号８６、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９４、配列番号９５のいずれか１つの配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列
    を含む、請求項２４に記載の複合体。
  26. 各Ｅが配列番号７２のアミノ酸配列を含む、請求項２５に記載の複合体。
  27. 各Ｅが配列番号７３のアミノ酸配列を含む、請求項２５に記載の複合体。
  28. 各Ｅが配列番号７６のアミノ酸配列を含む、請求項２５に記載の複合体。
  29. 各Ｅが配列番号７７のアミノ酸配列を含む、請求項２５に記載の複合体。
  30. Ｔが１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０である、請求項１９～２９のいずれか１項に記載の複合体。
  31. Ｔの平均値が１～１０、５～１０、１～５、３～７、または３．５～５．５である、請求項１９～２９のいずれか１項に記載の複合体の集団。
  32. Ｔの平均値が約４．５である、請求項１９～２９のいずれか１項に記載の複合体の集団。
  33. 請求項１～３２のいずれか１項に記載の複合体もしくは複合体の集団、またはその薬学的に許容される塩、及び
    薬学的に許容される賦形剤
    を含む、医薬組成物。
  34. ウイルス感染症を有するまたはウイルス感染症を有すると推定される対象を治療する方法であって、有効量の請求項１～３３のいずれか１項に記載の複合体、複合体の集団または医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
  35. ウイルス感染症の予防的治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、有効量の請求項１～３３のいずれか１項に記載の複合体、複合体の集団または医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
  36. 前記ウイルス感染症が、インフルエンザウイルスまたはパラインフルエンザウイルスによって引き起こされるものである、請求項３４または請求項３５に記載の方法。
  37. インフルエンザ感染症と診断された対象における続発感染症を予防する方法であって、請求項１～３３のいずれか１項に記載の複合体、複合体の集団または医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
  38. 前記対象が第２治療剤で治療される、請求項３４～３７のいずれか１項に記載の方法。
  39. 対象においてウイルス感染症を治療または予防する方法であって、
    ａ）請求項１～３３のいずれか１項に記載の複合体、複合体の集団または組成物、及び
    ｂ）第２治療剤
    を前記対象に投与することを含む、前記方法。
  40. 前記第２治療剤が抗ウイルス剤である、請求項３８または請求項３９のいずれか１項に記載の方法。
  41. 前記抗ウイルス剤が、ピモジビル（ｐｉｍｏｖｉｄｉｒ）、オセルタミビル、ザナミビル、ペラミビル、ラニナミビル、アマンタジン、バロキサビル マルボキシル、バロキサビル酸、リマンタジン、またはその薬学的に許容される塩である、請求項４０に記載の方法。
  42. 前記ウイルス感染症が、インフルエンザウイルスまたはパラインフルエンザウイルスによって引き起こされるものである、請求項３９～４１のいずれか１項に記載の方法。
  43. 前記複合体が式（Ｄ－ＩＩ－６）で表される、請求項３４～４２のいずれか１項に記載の方法。
  44. 前記複合体が式（Ｄ－ＩＩ－７）で表される、請求項３４～４３に記載の方法。
  45. 各Ｅが、
    配列番号７２、または配列番号７３、配列番号７６、または配列番号７７の配列と少なくとも９５％同一である配列を有する、請求項３４～４４のいずれか１項に記載の方法。
  46. 前記複合体が複合体４５または複合体４６である、請求項３４～４５のいずれか１項に記載の方法。
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