JP2022544825A - 細胞免疫療法のためのリンパ球枯渇投与レジメン - Google Patents

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Abstract

本発明は、癌ならびに他の障害および疾患を治療するための、キメラ抗原受容体または外因性Ｔ細胞受容体を発現する遺伝子改変細胞を含む方法および組成物、ならびにその医薬組成物を包含する。さらに、本明細書では、本明細書に提供される遺伝子改変細胞の投与前、投与と同時、または投与後に、治療を必要とする対象のリンパ球を枯渇させる方法が提供される。

Description

本発明は、腫瘍学、癌免疫療法、分子生物学および組換え核酸技術の分野に関する。特に、本発明は、キメラ抗原受容体または外因性Ｔ細胞受容体を含む遺伝子改変細胞、ならびに癌および他の障害および疾患の治療のためのそれに関連する方法および組成物に関する。本発明はさらに、本明細書に提供される遺伝子改変細胞による治療前、治療と同時、または治療後に、対象のリンパ球を枯渇させるための方法および組成物に関する。
ＥＦＳ－ＷＥＢを介してテキストファイルとして提出された配列表の参照
本出願は、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介してＡＳＣＩＩ形式で提出され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる配列表を含む。２０２０年８月２０日に作成された上記ＡＳＣＩＩコピーは、Ｐ１０９０７００４３ＷＯ００－ＳＥＱ－ＥＰＧと名付けられ、サイズが８キロバイトである。
Ｔ細胞養子免疫療法は、癌治療のための有望な手法である。この戦略は、特定の腫瘍関連抗原に対する特異性を高めるために遺伝子改変された単離されたヒトＴ細胞を利用する。遺伝子改変は、抗原特異性をＴ細胞に移すためのキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または外因性Ｔ細胞受容体の発現を伴い得る。外因性Ｔ細胞受容体とは対照的に、キメラ抗原受容体は、モノクローナル抗体の可変ドメインからそれらの特異性を得る。したがって、キメラ抗原受容体を発現するＴ細胞（ＣＡＲ Ｔ細胞）は、主要組織適合遺伝子複合体に制限されない様式で腫瘍免疫反応性を誘導する。今日まで、Ｔ細胞養子免疫療法は、Ｂ細胞悪性腫瘍（例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）および慢性リンパ性白血病）、多発性骨髄腫、神経芽腫、神経膠芽腫、進行性神経膠腫、卵巣癌、中皮腫、黒色腫および膵癌を含む多くの癌のための臨床療法として利用されてきた。
現在、ＣＡＲ Ｔ細胞療法の前に、患者は、リンパ球枯渇を目的に、１ラウンドの化学療法によって前処置される。リンパ球枯渇化学療法剤は、典型的には、フルダラビン、シクロホスファミドまたはそれらの組合せである。これは、典型的には、ＣＡＲ Ｔ細胞の注射の３日前～１週間前に行われる。自己細胞療法に関しては、これは一般に、入ってくるＣＡＲ Ｔ細胞が宿主の微小環境から利益を受け、入ってくるＣＡＲ Ｔ細胞の増殖を促進するための空間を作るのに十分な宿主リンパ球を排除するのに十分である（非特許文献１を参照）。
注入されるＣＡＲ Ｔ細胞の宿主対移植片拒絶の可能性が高まるため、同種異系ＣＡＲ Ｔ細胞による治療はさらに複雑である。リンパ球枯渇が不十分であると、宿主がＣＡＲ Ｔ細胞に対する免疫応答を誘発し、その増殖能を制限し、効果を制限する可能性がある。この問題を克服するための１つの手法が、宿主免疫細胞を標的とするがＣＡＲ Ｔ細胞を標的としない生物学的薬剤または他の薬剤を利用することである。Ｐｏｉｒｏｔ ｅｔ ａｌ．は、ＴＡＬＥＮを使用してＣＡＲＴ細胞を操作して、αβ Ｔ細胞受容体、および宿主リンパ球上に発現される第２のタンパク質ＣＤ５２の両方を欠損した細胞を生成する手法を記載している（非特許文献２を参照）。該著者らは、次いで、抗ＣＤ５２抗体を利用して宿主リンパ球をさらに枯渇させた。しかし、ＣＤ５２抗体（例えばアレムツズマブ）は、毒性を示す可能性があり、再発性多発性硬化症などの重度の自己免疫疾患では骨髄移植前の免疫除去療法中に使用されるため、この手法には欠点がある（非特許文献３を参照）。さらに、ＣＤ５２抗体は、長い半減期を有することが知られている。そのため、患者は、重度かつ長期の血球減少症を発症するリスクが高い。
したがって、同種異系細胞免疫療法の宿主対移植片拒絶を予防するための治療前リンパ球枯渇レジメンに対する必要性は満たされていない。
Ｈａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｄｒｕｇｓ ７７（３）（２０１７） Ｐｏｉｒｏｔ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１８）７５（２０１５） Ｐｏｉｒｅ ａｎｄ Ｂｅｓｉｅｎ，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｌ Ｔｈｅｒ．（８）１１，２０１２
本明細書では、細胞表面上にＣＤ３を欠き、１つ以上の目的のポリペプチド（例えば、キメラ抗原受容体または外因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ））を発現する遺伝子改変細胞を含む細胞免疫療法による治療前または治療中の、それを必要とする対象に対するリンパ球枯渇のための方法および組成物が提供される。本明細書では、本発明のリンパ球枯渇レジメンを受けた対象に対して、本明細書に開示される遺伝子改変細胞を用いて、癌などの疾患を治療するための組成物および方法がさらに提供される。本発明は、本発明による細胞免疫療法の細胞表面上には存在しないが宿主リンパ球上で発現される抗原（例えばＣＤ３）に特異的に結合する抗体の投与が、細胞免疫療法に影響を与えずに宿主免疫細胞の枯渇を助けるという発見に部分的に基づく。リンパ球枯渇のための本組成物および方法は、細胞免疫療法薬の宿主対移植片拒絶の可能性または重症度を低減するのに有用であり、同時に、入ってくる細胞免疫療法薬の拡大も可能にする。
したがって、一態様では、本発明は、それを必要とする対象の癌を治療するための免疫療法の方法であって、対象のリンパ球の集団を枯渇させるのに有効な量で、ＣＤ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を対象に投与すること、および細胞表面上に検出可能なＣＤ３を有しない遺伝子改変Ｔ細胞の集団を含む組成物を対象に投与することを含み、遺伝子改変Ｔ細胞の集団が、そのゲノム内に、遺伝子改変Ｔ細胞によって発現されるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または外因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする外因性ポリヌクレオチドを含む方法を提供する。
一実施形態では、方法は、遺伝子改変Ｔ細胞の集団を含む組成物の投与前に、リンパ球枯渇化学療法剤または追加のリンパ球枯渇抗体を対象に投与することをさらに含む。
いくつかのそのような実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、遺伝子改変Ｔ細胞の集団を含む組成物の投与前に対象に投与される。他のそのような実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、遺伝子改変Ｔ細胞の集団を含む組成物の投与と同時に対象に投与される。さらに他のそのような実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、遺伝子改変Ｔ細胞の集団を含む組成物の投与後に対象に投与される。
別の態様では、本発明は、それを必要とする対象の癌を治療するための免疫療法の方法であって、細胞表面上に検出可能なＣＤ３を有しない遺伝子改変Ｔ細胞の集団を含む組成物を対象に投与することを含み、遺伝子改変Ｔ細胞の集団が、そのゲノム内に、遺伝子改変細胞によって発現されるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または外因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする外因性ポリヌクレオチドを含み、対象には、対象のリンパ球の集団を枯渇させるのに有効な量で、リンパ球枯渇化学療法剤と、ＣＤ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片とが以前に投与されている方法を提供する。
本明細書に提供される方法のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、遺伝子改変Ｔ細胞の集団の投与の１～３０日前に対象に投与される。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、リンパ球枯渇化学療法剤の投与前に対象に投与される。他の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、リンパ球枯渇化学療法剤の投与と同時に対象に投与される。なおさらなる実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、化学療法剤の投与後に対象に投与される。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１．０ｍｇ／ｋｇの用量で対象に投与される。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、二重特異性抗体、二重可変免疫グロブリンドメイン、一本鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）、ｓｄＡｂ、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体様タンパク質足場、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ´）２分子およびタンデムｄｉ－ｓｃＦｖからなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、遺伝子改変Ｔ細胞に検出可能に結合しない。
いくつかの実施形態では、遺伝子改変Ｔ細胞の集団を含む組成物は、１×１０３～１×１０９遺伝子改変細胞／ｋｇの用量で対象に投与される。
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇化学療法剤は、遺伝子改変Ｔ細胞の集団を含む組成物の投与の３日以上前に投与される。
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇化学療法剤は、遺伝子改変Ｔ細胞の集団を含む組成物の投与の７日以内前に投与される。
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇化学療法剤は、フルダラビン、シクロホスファミド、ベンダムスチン、メルファラン、６－メルカプトプリン（６－ＭＰ）、ダウノルビシン、シタラビン、Ｌ－アスパラギナーゼ、メトトレキセート、プレドニゾン、デキサメタゾン、ネララビンであり、追加のリンパ球枯渇抗体は、抗ＣＤ５２抗体（例えばアレムツズマブ）もしくはリツキシマブまたはそれらの組合せである。
いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、約２５０～１５００ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。一定の実施形態では、シクロホスファミドは、約５００～１０００ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドの用量は、約２５０～１５００ｍｇ／ｍ２／日、約３００～１５００ｍｇ／ｍ２／日、約３５０～１５００ｍｇ／ｍ２／日、約４００～１５００ｍｇ／ｍ２／日、約４５０～１５００ｍｇ／ｍ２／日、約５００～１５００ｍｇ／ｍ２／日、約５５０～１５００ｍｇ／ｍ２／日または約６００～１５００ｍｇ／ｍ２／日である。別の実施形態では、シクロホスファミドの用量は、約２５０～１５００ｍｇ／ｍ２／日、約３５０～１０００ｍｇ／ｍ２／日、約４００～９００ｍｇ／ｍ２／日、約４５０～８００ｍｇ／ｍ２／日、約４５０～７００ｍｇ／ｍ２／日、約４５０～６００ｍｇ／ｍ２／日または約４５０～５５０ｍｇ／ｍ２／日である。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドの用量は、約２５０ｍｇ／ｍ２／日、約３５０ｍｇ／ｍ２／日、約４００ｍｇ／ｍ２／日、約４５０ｍｇ／ｍ２／日、約５００ｍｇ／ｍ２／日、約５５０ｍｇ／ｍ２／日、約６００ｍｇ／ｍ２／日、約６５０ｍｇ／ｍ２／日、約７００ｍｇ／ｍ２／日、約８００ｍｇ／ｍ２／日、約９００ｍｇ／ｍ２／日または約１０００ｍｇ／ｍ２／日である。
一定の実施形態では、シクロホスファミドは、約５００ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。別の実施形態では、シクロホスファミドは、遺伝子改変Ｔ細胞の集団を含む組成物の投与の５日前から開始して２～３日前まで連日約５００ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。別の実施形態では、シクロホスファミドは、遺伝子改変Ｔ細胞の集団を含む組成物の投与の５日前から開始して２日前まで連日約５００ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。そのような一実施形態では、シクロホスファミドは、遺伝子改変Ｔ細胞の集団を含む組成物の投与の５日前から開始して３日前まで連日約５００ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。
一定の実施形態では、シクロホスファミドは、約１０００ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。そのような一実施形態では、シクロホスファミドは、遺伝子改変Ｔ細胞の集団を含む組成物の投与の４日前から開始して２～３日前まで連日約１０００ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。そのような一実施形態では、シクロホスファミドは、遺伝子改変Ｔ細胞の集団を含む組成物の投与の４日前から開始して２日前まで連日約１０００ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。そのような一実施形態では、シクロホスファミドは、遺伝子改変Ｔ細胞の集団を含む組成物の投与の４日前から開始して３日前まで連日約１０００ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。
いくつかの実施形態では、フルダラビンは、１０～４０ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビンの用量は、約１０～１００ｍｇ／ｍ２／日、約１５～１００ｍｇ／ｍ２／日、約２０～１００ｍｇ／ｍ２／日、約２５～９００ｍｇ／ｍ２／日、約３０～９００ｍｇ／ｍ２／日、約３５～１００ｍｇ／ｍ２／日、約４０～１００ｍｇ／ｍ２／日、約４５～１００ｍｇ／ｍ２／日、約５０～１００ｍｇ／ｍ２／日、約５５～１００ｍｇ／ｍ２／日または約６０～１００ｍｇ／ｍ２／日である。他の実施形態では、フルダラビンの用量は、約１０～１００ｍｇ／ｍ２／日、約１０～９０ｍｇ／ｍ２／日、約１０～８０ｍｇ／ｍ２／日、約１０～７０ｍｇ／ｍ２／日、約１０～６０ｍｇ／ｍ２／日、約１０～５０ｍｇ／ｍ２／日、約１０～４５ｍｇ／ｍ２／日、約２０～４０ｍｇ／ｍ２／日、約２５～３５ｍｇ／ｍ２／日または約２８～３２ｍｇ／ｍ２／日である。一定の実施形態では、フルダラビンの用量は、約１０ｍｇ／ｍ２／日、１５ｍｇ／ｍ２／日、２０ｍｇ／ｍ２／日、２５ｍｇ／ｍ２／日、３０ｍｇ／ｍ２／日、３５ｍｇ／ｍ２／日、約４０ｍｇ／ｍ２／日、約４５ｍｇ／ｍ２／日、約５０ｍｇ／ｍ２／日、約５５ｍｇ／ｍ２／日、約６０ｍｇ／ｍ２／日、約６５ｍｇ／ｍ２／日、約７０ｍｇ／ｍ２／日、約７５ｍｇ／ｍ２／日、約８０ｍｇ／ｍ２／日、約８５ｍｇ／ｍ２／日、約９０ｍｇ／ｍ２／日、約９５ｍｇ／ｍ２／日または約１００ｍｇ／ｍ２／日である。
一定の実施形態では、フルダラビンは、３０ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。別の実施形態では、フルダラビンは、遺伝子改変Ｔ細胞の集団を含む組成物の投与の５日前から開始して２～３日前まで連日約３０ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。別の実施形態では、フルダラビンは、遺伝子改変Ｔ細胞の集団を含む組成物の投与の５日前から開始して２日前まで連日約３０ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。そのような一実施形態では、フルダラビンは、遺伝子改変Ｔ細胞の集団を含む組成物の投与の５日前から開始して３日前まで連日約３０ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。別のそのような実施形態では、フルダラビンは、遺伝子改変Ｔ細胞の集団を含む組成物の投与の７日前から開始して２～３日前まで連日約３０ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。別のそのような実施形態では、フルダラビンは、遺伝子改変Ｔ細胞の集団を含む組成物の投与の７日前から開始して２日前まで連日約３０ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。別のそのような実施形態では、フルダラビンは、遺伝子改変Ｔ細胞の集団を含む組成物の投与の７日前から開始して３日前まで連日約３０ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇化学療法剤は、追加のリンパ球枯渇化学療法剤、手術、放射線および遺伝子療法からなる群から選択される追加の癌療法と組み合わせて投与される。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲは、癌細胞の表面上の分子に特異的に結合する。一定の実施形態では、キメラ抗原受容体は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＢＣＭＡ、ＣＬＬ１、ＣＳ１（ＳＬＡＭＦ７）、ＭＵＣ１、ＦＬＴ３、ＨＰＶ１６ Ｅ６またはＨＰＶ１６ Ｅ７に特異的に結合する。
いくつかの実施形態では、外因性ポリヌクレオチドは、遺伝子改変Ｔ細胞のゲノム内の標的遺伝子内にある。一定の実施形態では、標的遺伝子は、ＴＣＲα遺伝子、ＴＣＲα定常（ＴＲＡＣ：ＴＣＲ ａｌｐｈａ ｃｏｎｓｔａｎｔ）遺伝子、ＴＣＲβ遺伝子またはＴＣＲβ定常（ＴＲＢＣ：ＴＣＲ ｂｅｔａ ｃｏｎｓｔａｎｔ）遺伝子からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、遺伝子改変Ｔ細胞は、内因性Ｔ細胞受容体の検出可能な細胞表面発現を有しない。
いくつかの実施形態では、遺伝子改変Ｔ細胞は、ヒトＴ細胞、またはそれに由来する細胞である。
いくつかの実施形態では、癌は、癌腫、リンパ腫、肉腫、芽細胞腫、骨髄腫および白血病の癌からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、癌は、肺癌、黒色腫、乳癌、前立腺癌、結腸癌、腎細胞癌、卵巣癌、神経芽腫、横紋筋肉腫、多発性骨髄腫、白血病、リンパ腫、急性リンパ芽球性白血病、小細胞肺癌、ホジキンリンパ腫および小児急性リンパ芽球性白血病からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、癌は、Ｂ細胞起源の癌からなる群から選択される。一定の実施形態では、Ｂ細胞起源の癌は、Ｂ系統急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫およびＢ細胞非ホジキンリンパ腫からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、対象はヒト対象である。
いくつかの実施形態では、方法は、癌の症状を治療または低減するのに有効である。
いくつかの実施形態では、方法は、宿主対移植片病を治療または予防するのに有効である。
いくつかの実施形態では、免疫療法は同種異系細胞免疫療法である。
いくつかの実施形態では、遺伝子改変Ｔ細胞は、（ａ）染色体内の認識配列に対して特異性を有する操作されたヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチドを含む第１の核酸であって、操作されたヌクレアーゼが、Ｔ細胞内で発現される第１の核酸と、（ｂ）外因性ポリヌクレオチドを含む鋳型核酸と、を含む１つ以上の核酸によってＴ細胞をトランスフェクトすることを含む方法であって、操作されたヌクレアーゼが、認識配列で染色体内に切断部位を生成し、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲをコードする外因性ポリヌクレオチドが、切断部位で染色体に挿入される方法によって、Ｔ細胞の染色体内にＣＡＲまたは外因性ＴＣＲをコードする外因性ポリヌクレオチドを挿入することによって生成される。
いくつかの実施形態では、鋳型核酸は、ウイルスベクターを使用してＴ細胞に導入される。一定の実施形態では、ウイルスベクターは組換えＡＡＶベクターである。
いくつかの実施形態では、操作されたヌクレアーゼは、操作されたメガヌクレアーゼ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、ＴＡＬＥＮ、コンパクトＴＡＬＥＮ、ＣＲＩＳＰＲ系ヌクレアーゼまたはｍｅｇａＴＡＬである。
いくつかの実施形態では、操作されたヌクレアーゼは、操作されたメガヌクレアーゼである。
別の態様では、（ａ）ＣＤ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片と、（ｂ）遺伝子改変Ｔ細胞の集団を含む組成物であって、遺伝子改変Ｔ細胞の集団が、そのゲノム内に、遺伝子改変Ｔ細胞によって発現されるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または外因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする外因性ポリヌクレオチドを含む組成物と、を含むキットが本明細書に提供される。
別の態様では、（ａ）リンパ球枯渇化学療法剤と、（ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片と、（ｃ）遺伝子改変Ｔ細胞の集団を含む組成物であって、遺伝子改変Ｔ細胞の集団が、そのゲノム内に、遺伝子改変Ｔ細胞によって発現されるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または外因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする外因性ポリヌクレオチドを含む組成物と、を含むキットが本明細書に提供される。
本明細書に提供されるキットのいくつかの実施形態では、リンパ球枯渇化学療法剤は、フルダラビン、シクロホスファミドまたはそれらの組合せである。
いくつかの実施形態では、外因性ポリヌクレオチドは、遺伝子改変Ｔ細胞のゲノム内の標的遺伝子内にある。一定の実施形態では、標的遺伝子は、ＴＣＲα遺伝子、ＴＣＲα定常（ＴＲＡＣ）遺伝子、ＴＣＲβ遺伝子またはＴＣＲβ定常（ＴＣＢＣ）遺伝子からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、遺伝子改変Ｔ細胞は、ヒトＴ細胞、またはそれに由来する細胞である。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲは、癌細胞の表面上の分子に特異的に結合する。一定の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＢＣＭＡまたはＣＬＬ１に特異的に結合する。
いくつかの実施形態では、キットは、癌を治療する際のキットの構成要素の使用説明書をさらに含む。
別の態様では、本発明は、対象における標的細胞の数を減少させるための方法であって、（ａ）ＣＤ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片の１つ以上の有効用量を投与することを含むリンパ球枯渇レジメンを対象に投与すること、および（ｂ）ヒト免疫細胞の集団を含む医薬組成物の有効量を対象に投与すること、を含み、複数のヒト免疫細胞が、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲを発現する遺伝子改変ヒト免疫細胞であり、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲが、標的細胞上の抗原に対する特異性を有する細胞外リガンド結合ドメインを含む方法を提供する。
いくつかの実施形態では、遺伝子改変ヒト免疫細胞は、不活性化ＴＣＲα遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子改変ヒト免疫細胞は、不活性化ＴＣＲα定常領域（ＴＲＡＣ）遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子改変ヒト免疫細胞は、不活性化ＴＣＲβ遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子改変ヒト免疫細胞は、不活性化ＴＣＲβ定常領域（ＴＲＢＣ）遺伝子を含む。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片の１つ以上の有効用量は、対象の内因性リンパ球の集団を枯渇させる。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、二重特異性抗体、二重可変免疫グロブリンドメイン、一本鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）、ｓｄＡｂ、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体様タンパク質足場、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ´）２分子およびタンデムｄｉ－ｓｃＦｖからなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、遺伝子改変ヒト免疫細胞に検出可能に結合しない。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、医薬組成物の投与前に対象に投与される。一定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、医薬組成物の投与と同時に対象に投与される。一定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、医薬組成物の投与後に対象に投与される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約０．００１ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約０．００５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約０．１ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約０．５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約１ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約２．５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約１０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約１５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約２０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約２５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約３０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約３５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約４０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約４５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約５０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約６０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約７０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約８０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約９０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約１００ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約１１０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約１２０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約１３０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約１４０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約１５０ｍｇ／ｋｇである。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、医薬組成物の投与の１～３０日前に対象に投与される。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、医薬組成物の投与前１０日以内に対象に投与される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片は、医薬組成物の投与の１時間前、２時間前、３時間前、４時間前、５時間前、６時間前、７時間前、８時間前、９時間前、１０時間前、１１時間前、１２時間前、１３時間前、１４時間前、１５時間前、１６時間前、１７時間前、１８時間前、１９時間前、２０時間前、２１時間前、２２時間前、２３時間前、２４時間前、１日前、２日前、３日前、４日前、５日前、６日前、７日前、８日前、９日前、１０日前、１１日前、１２日前、１３日前、１４日前、１５日前、１６日前、１７日前、１８日前、１９日前、２０日前、２１日前、２２日前、２３日前、２４日前、２５日前、２６日前、２７日前、２８日前、２９日前もしくは３０日前またはそれ以上前に投与される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片は、医薬組成物の投与の１時間後、２時間後、３時間後、４時間後、５時間後、６時間後、７時間後、８時間後、９時間後、１０時間後、１１時間後、１２時間後、１３時間後、１４時間後、１５時間後、１６時間後、１７時間後、１８時間後、１９時間後、２０時間後、２１時間後、２２時間後、２３時間後、２４時間後、１日後、２日後、３日後、４日後、５日後、６日後、７日後、８日後、９日後、１０日後、１１日後、１２日後、１３日後、１４日後、１５日後、１６日後、１７日後、１８日後、１９日後、２０日後、２１日後、２２日後、２３日後、２４日後、２５日後、２６日後、２７日後、２８日後、２９日後もしくは３０日後またはそれ以上後に投与される。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、静脈内投与される。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、経口投与される。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、皮下投与される。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約１×１０４～約１×１０８遺伝子改変ヒト免疫細胞／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約１×１０５～約１×１０７遺伝子改変ヒト免疫細胞／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約１×１０５～約６×１０６遺伝子改変ヒト免疫細胞／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約３×１０５～約６×１０６遺伝子改変ヒト免疫細胞／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約３×１０５～約３×１０６遺伝子改変ヒト免疫細胞／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約０．５×１０６遺伝子改変ヒト免疫細胞／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約１．０×１０６遺伝子改変ヒト免疫細胞／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約２．０×１０６遺伝子改変ヒト免疫細胞／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約３．０×１０６遺伝子改変ヒト免疫細胞／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物の用量は、３×１０８以下の遺伝子改変ヒト免疫細胞を含む。
いくつかの実施形態では、方法は、第２の用量の医薬組成物を対象に投与することをさらに含む。
いくつかの実施形態では、方法は、医薬組成物の投与前に、１つ以上のリンパ球枯渇剤の１つ以上の有効用量を対象に投与することをさらに含む。
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、抗体またはその抗原結合断片の投与前、および医薬組成物の投与前に対象に投与される。一定の実施形態では、リンパ球枯渇剤は、抗体またはその抗原結合断片の投与と同時に、および医薬組成物の投与前に対象に投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、抗体またはその抗原結合断片の投与後、および医薬組成物の投与前に対象に投与される。
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、フルダラビン、シクロホスファミド、ベンダムスチン、メルファラン、６－メルカプトプリン（６－ＭＰ）、ダウノルビシン、シタラビン、Ｌ－アスパラギナーゼ、メトトレキセート、プレドニゾン、デキサメタゾン、ネララビンまたはそれらの組合せである。
一定の実施形態では、リンパ球枯渇剤はシクロホスファミドである。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、約２５０～１５００ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。一定の実施形態では、シクロホスファミドは、約５００～１０００ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドの用量は、約２５０～１５００ｍｇ／ｍ２／日、約３００～１５００ｍｇ／ｍ２／日、約３５０～１５００ｍｇ／ｍ２／日、約４００～１５００ｍｇ／ｍ２／日、約４５０～１５００ｍｇ／ｍ２／日、約５００～１５００ｍｇ／ｍ２／日、約５５０～１５００ｍｇ／ｍ２／日または約６００～１５００ｍｇ／ｍ２／日である。別の実施形態では、シクロホスファミドの用量は、約２５０～１５００ｍｇ／ｍ２／日、約３５０～１０００ｍｇ／ｍ２／日、約４００～９００ｍｇ／ｍ２／日、約４５０～８００ｍｇ／ｍ２／日、約４５０～７００ｍｇ／ｍ２／日、約４５０～６００ｍｇ／ｍ２／日または約４５０～５５０ｍｇ／ｍ２／日である。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドの用量は、約２５０ｍｇ／ｍ２／日、約３５０ｍｇ／ｍ２／日、約４００ｍｇ／ｍ２／日、約４５０ｍｇ／ｍ２／日、約５００ｍｇ／ｍ２／日、約５５０ｍｇ／ｍ２／日、約６００ｍｇ／ｍ２／日、約６５０ｍｇ／ｍ２／日、約７００ｍｇ／ｍ２／日、約８００ｍｇ／ｍ２／日、約９００ｍｇ／ｍ２／日または約１０００ｍｇ／ｍ２／日である。
いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、約５００～１０００ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、約５００ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、医薬組成物の投与の５日前から開始して２日前まで連日約５００ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、医薬組成物の投与の５日前から開始して３日前まで連日約５００ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、約１０００ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、医薬組成物の投与の４日前から開始して２日前まで連日約１０００ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、医薬組成物の投与の４日前から開始して３日前まで連日約１０００ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。
一定の実施形態では、リンパ球枯渇剤はフルダラビンである。いくつかの実施形態では、フルダラビンは、１０～４０ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビンの用量は、約１０～１００ｍｇ／ｍ２／日、約１５～１００ｍｇ／ｍ２／日、約２０～１００ｍｇ／ｍ２／日、約２５～９００ｍｇ／ｍ２／日、約３０～９００ｍｇ／ｍ２／日、約３５～１００ｍｇ／ｍ２／日、約４０～１００ｍｇ／ｍ２／日、約４５～１００ｍｇ／ｍ２／日、約５０～１００ｍｇ／ｍ２／日、約５５～１００ｍｇ／ｍ２／日または約６０～１００ｍｇ／ｍ２／日である。他の実施形態では、フルダラビンの用量は、約１０～１００ｍｇ／ｍ２／日、約１０～９０ｍｇ／ｍ２／日、約１０～８０ｍｇ／ｍ２／日、約１０～７０ｍｇ／ｍ２／日、約１０～６０ｍｇ／ｍ２／日、約１０～５０ｍｇ／ｍ２／日、約１０～４５ｍｇ／ｍ２／日、約２０～４０ｍｇ／ｍ２／日、約２５～３５ｍｇ／ｍ２／日または約２８～３２ｍｇ／ｍ２／日である。一定の実施形態では、フルダラビンの用量は、約１０ｍｇ／ｍ２／日、１５ｍｇ／ｍ２／日、２０ｍｇ／ｍ２／日、２５ｍｇ／ｍ２／日、３０ｍｇ／ｍ２／日、３５ｍｇ／ｍ２／日、約４０ｍｇ／ｍ２／日、約４５ｍｇ／ｍ２／日、約５０ｍｇ／ｍ２／日、約５５ｍｇ／ｍ２／日、約６０ｍｇ／ｍ２／日、約６５ｍｇ／ｍ２／日、約７０ｍｇ／ｍ２／日、約７５ｍｇ／ｍ２／日、約８０ｍｇ／ｍ２／日、約８５ｍｇ／ｍ２／日、約９０ｍｇ／ｍ２／日、約９５ｍｇ／ｍ２／日または約１００ｍｇ／ｍ２／日である。いくつかの実施形態では、フルダラビンは、３０ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビンは、医薬組成物の投与の５日前から開始して２日前まで連日約３０ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビンは、医薬組成物の投与の５日前から開始して３日前まで連日約３０ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビンは、医薬組成物の投与の７日前から開始して２～３日前まで連日約３０ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇レジメンは、生物学的リンパ球枯渇剤の有効用量を対象に投与することを含まない。一定の実施形態では、リンパ球枯渇レジメンは、生物学的リンパ球枯渇剤を対象に投与することを含まない。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇レジメンは、生物学的リンパ球枯渇剤の１つ以上の有効用量を対象に投与することを含む。一定の実施形態では、生物学的リンパ球枯渇剤は、モノクローナル抗体またはその断片である。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体またはその断片は、Ｔ細胞抗原に対する特異性を有する。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体またはその断片は、抗ＣＤ５２モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体は、アレムツズマブまたはＡＬＬＯ－６４７である。
いくつかの実施形態では、生物学的リンパ球枯渇剤は、抗体またはその抗原結合断片の投与前、および医薬組成物の投与前に対象に投与される。一定の実施形態では、生物学的リンパ球枯渇剤は、抗体またはその抗原結合断片の投与と同時に、および医薬組成物の投与前に対象に投与される。いくつかの実施形態では、生物学的リンパ球枯渇剤は、抗体またはその抗原結合断片の投与後、および医薬組成物の投与前に対象に投与される。
いくつかの実施形態では、対象には、追加の化学療法剤、手術、放射線および遺伝子療法からなる群から選択される追加の療法が施される。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲをコードする導入遺伝子は、ＴＣＲα遺伝子、ＴＲＡＣ遺伝子、ＴＣＲβ遺伝子またはＴＲＢＣ遺伝子内の、遺伝子改変ヒト免疫細胞のゲノムに挿入され、導入遺伝子は、ＴＣＲα遺伝子、ＴＲＡＣ遺伝子、ＴＣＲβ遺伝子またはＴＲＢＣ遺伝子の発現を破壊する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲをコードする導入遺伝子は、ＴＲＡＣ遺伝子に挿入される。一定の実施形態では、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲをコードする導入遺伝子は、操作されたメガヌクレアーゼ、ＴＡＬＥＮ、コンパクトＴＡＬＥＮ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、ｍｅｇａＴＡＬまたはＣＲＩＳＰＲ系ヌクレアーゼの認識配列に挿入される。一定の実施形態では、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲをコードする導入遺伝子は、ＴＲＡＣ遺伝子内の配列番号１を含む遺伝子操作されたメガヌクレアーゼ認識配列に挿入される。特定の実施形態では、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲをコードする導入遺伝子は、ＴＲＡＣ遺伝子内の配列番号１の１３位と１４位との間に挿入される。
いくつかの実施形態では、遺伝子改変ヒト免疫細胞は、内因性α／βＴＣＲの検出可能な細胞表面発現を有しない。
いくつかの実施形態では、遺伝子改変ヒト免疫細胞は、ＣＤ３の検出可能な細胞表面発現を有しない。
いくつかの実施形態では、ヒト免疫細胞は、対象に由来する。一定の実施形態では、ヒト免疫細胞は、対象に由来しない。
いくつかの実施形態では、方法は、癌の症状を治療または低減するのに有効である。
いくつかの実施形態では、方法は、宿主対移植片病を治療または予防するのに有効である。
いくつかの実施形態では、免疫療法は同種異系細胞免疫療法である。
いくつかの実施形態では、ヒト免疫細胞は、ヒトＴ細胞もしくはそれに由来する細胞、またはヒトナチュラルキラー（ＮＫ）細胞もしくはそれに由来する細胞である。一定の実施形態では、ヒト免疫細胞はヒトＴ細胞である。
いくつかの実施形態では、標的細胞は癌細胞である。いくつかの実施形態では、癌細胞は血液癌細胞である。いくつかの実施形態では、癌細胞は、固形腫瘍に由来する。
いくつかの実施形態では、標的細胞の数が減少する。いくつかの実施形態では、方法は、対象の癌のサイズを減少させる。いくつかの実施形態では、方法は、対象の癌を根絶する。
いくつかの実施形態では、癌細胞は、Ｂ細胞起源の癌、または多発性骨髄腫に由来する。一定の実施形態では、Ｂ細胞起源の癌は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）または非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。いくつかの実施形態では、ＮＨＬは、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）またはびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である。いくつかの実施形態では、癌細胞は、固形腫瘍癌に由来する。
いくつかの実施形態では、対象は、以前の免疫療法に対して抵抗性である。一定の実施形態では、対象は、以前のＣＡＲ Ｔ細胞免疫療法に対して抵抗性である。一定の実施形態では、対象は、以前のＣＡＲ ＮＫ細胞免疫療法に対して抵抗性である。一定の実施形態では、対象は、以前の外因性ＴＣＲ／Ｔ細胞免疫療法に対して抵抗性である。一定の実施形態では、対象は、以前の外因性ＴＣＲ／ＮＫ細胞免疫療法に対して抵抗性である。
いくつかの実施形態では、遺伝子改変ヒト免疫細胞はＣＡＲを含み、ＣＡＲの細胞外リガンド結合ドメインは一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ８αヒンジドメイン（配列番号１１）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ８α膜貫通ドメイン（配列番号１０）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、１つ以上のＴＲＡＦ結合ドメインを含む共刺激ドメインを含む。一定の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号３を含む第１のドメインと、配列番号４または５を含む第２のドメインとを含む共刺激ドメインを含む。一定の実施形態では、ＣＡＲは、ｎｏｖｅｌ ６（Ｎ６）共刺激ドメイン（配列番号６）または４－１ＢＢ共刺激ドメイン（配列番号７）を含む。一定の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメイン（配列番号８）を含む。
いくつかの実施形態では、遺伝子改変ヒト免疫細胞は、集団内のヒト免疫細胞の約４０％～約７５％を占める。特定の実施形態では、遺伝子改変ヒト免疫細胞は、集団内のヒト免疫細胞の約５０％～約７０％を占める。
いくつかの実施形態では、遺伝子改変ヒト免疫細胞は、医薬組成物の投与後少なくとも１日にわたってインビボで増殖する。一定の実施形態では、遺伝子改変ヒト免疫細胞は、医薬組成物の投与後約１日目から約２１日目までの間にインビボで増殖する。一定の実施形態では、末梢血単核球内のＤＮＡ １ｍｇ当たりのＣＡＲ導入遺伝子または外因性ＴＣＲ導入遺伝子のコピー数は、投与前に存在するコピー数と比較した場合、医薬組成物の投与後最大２１日間にわたって上昇する。
いくつかの実施形態では、Ｃ反応性タンパク質、フェリチン、ＩＬ－６、インターフェロンγまたはそれらの任意の組合せの血清濃度は、医薬組成物の投与後少なくとも１日にわたって、０日目の濃度と比較して上昇する。
いくつかの実施形態では、方法は、癌などの疾患を治療するための免疫療法であり、対象は、免疫療法の方法に対して部分奏効または完全奏効を達成する。一定の実施形態では、部分奏効または完全奏効は、医薬組成物の投与後少なくとも２８日間にわたって維持される。
別の態様では、本発明は、標的細胞の集団をヒト免疫細胞の集団と接触させることを含む、標的細胞の集団を死滅させる方法であって、ヒト免疫細胞の集団が、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲを発現する複数の遺伝子改変ヒト免疫細胞を含み、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲが、標的細胞上に存在する抗原に対して特異性を有し、遺伝子改変ヒト免疫細胞が、内因性α／βＴＣＲの成分をコードする不活性化遺伝子を含み、標的細胞が、ＣＤ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片の存在下でヒト免疫細胞の集団と接触させられる方法を提供する。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
いくつかの実施形態では、不活性化遺伝子はＴＣＲα遺伝子である。いくつかの実施形態では、不活性化遺伝子はＴＲＡＣ遺伝子である。いくつかの実施形態では、不活性化遺伝子はＴＣＲβ遺伝子である。いくつかの実施形態では、不活性化遺伝子はＴＲＢＣ遺伝子である。
いくつかの実施形態では、遺伝子改変ヒト免疫細胞は、内因性ＣＤ３の検出可能な細胞表面発現を有しない。いくつかの実施形態では、遺伝子改変ヒト免疫細胞は、内因性α／βＴＣＲの検出可能な細胞表面発現を有しない。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、遺伝子改変ヒト免疫細胞に結合しない。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、上記遺伝子改変ヒト免疫細胞を死滅させない。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲをコードする導入遺伝子は、ＴＣＲα遺伝子、ＴＲＡＣ遺伝子、ＴＣＲβ遺伝子またはＴＲＢＣ遺伝子内の、遺伝子改変ヒト免疫細胞のゲノムに挿入され、導入遺伝子は、ＴＣＲα遺伝子、ＴＲＡＣ遺伝子、ＴＣＲβ遺伝子またはＴＲＢＣ遺伝子の発現を破壊する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲをコードする導入遺伝子は、ＴＲＡＣ遺伝子に挿入される。一定の実施形態では、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲをコードする導入遺伝子は、操作されたメガヌクレアーゼ、ＴＡＬＥＮ、コンパクトＴＡＬＥＮ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、ｍｅｇａＴＡＬまたはＣＲＩＳＰＲ系ヌクレアーゼの認識配列に挿入される。一定の実施形態では、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲをコードする導入遺伝子は、ＴＲＡＣ遺伝子内の配列番号１を含む遺伝子操作されたメガヌクレアーゼ認識配列に挿入される。特定の実施形態では、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲをコードする導入遺伝子は、ＴＲＡＣ遺伝子内の配列番号１の１３位と１４位との間に挿入される。
いくつかの実施形態では、ヒト免疫細胞は、標的細胞と同じ対象に由来する。一定の実施形態では、ヒト免疫細胞は、標的細胞と同じ対象に由来しない。
いくつかの実施形態では、ヒト免疫細胞は、ヒトＴ細胞もしくはそれに由来する細胞、またはヒトナチュラルキラー（ＮＫ）細胞もしくはそれに由来する細胞である。一定の実施形態では、ヒト免疫細胞はヒトＴ細胞である。
いくつかの実施形態では、標的細胞は癌細胞である。
いくつかの実施形態では、遺伝子改変ヒト免疫細胞はＣＡＲを含み、ＣＡＲの細胞外リガンド結合ドメインは一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ８αヒンジドメイン（配列番号１１）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ８α膜貫通ドメイン（配列番号１０）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、１つ以上のＴＲＡＦ結合ドメインを含む共刺激ドメインを含む。一定の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号３を含む第１のドメインと、配列番号４または５を含む第２のドメインとを含む共刺激ドメインを含む。一定の実施形態では、ＣＡＲは、ｎｏｖｅｌ ６（Ｎ６）共刺激ドメイン（配列番号６）または４－１ＢＢ共刺激ドメイン（配列番号７）を含む。一定の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメイン（配列番号８）を含む。
いくつかの実施形態では、遺伝子改変ヒト免疫細胞は、集団内のヒト免疫細胞の約４０％～約７５％を占める。特定の実施形態では、遺伝子改変ヒト免疫細胞は、集団内のヒト免疫細胞の約５０％～約７０％を占める。
いくつかの実施形態では、遺伝子改変ヒト免疫細胞と標的細胞との比は１０：１である。いくつかの実施形態では、遺伝子改変ヒト免疫細胞と標的細胞との比は８：１である。いくつかの実施形態では、遺伝子改変ヒト免疫細胞と標的細胞との比は６：１である。いくつかの実施形態では、遺伝子改変ヒト免疫細胞と標的細胞との比は４：１である。いくつかの実施形態では、遺伝子改変ヒト免疫細胞と標的細胞との比は２：１である。いくつかの実施形態では、遺伝子改変ヒト免疫細胞と標的細胞との比は１：１である。いくつかの実施形態では、遺伝子改変ヒト免疫細胞と標的細胞との比は１：２である。いくつかの実施形態では、遺伝子改変ヒト免疫細胞と標的細胞との比は１：４である。いくつかの実施形態では、遺伝子改変ヒト免疫細胞と標的細胞との比は１：６である。いくつかの実施形態では、遺伝子改変ヒト免疫細胞と標的細胞との比は１：８である。いくつかの実施形態では、遺伝子改変ヒト免疫細胞と標的細胞との比は１：１０である。
いくつかの実施形態では、ヒト免疫細胞の集団と標的細胞とは、インビトロ（すなわち、エクスビボ）で接触させられる。いくつかの実施形態では、ヒト免疫細胞の集団と標的細胞とは、対象内でインビボで接触させられる。いくつかの実施形態では、対象には、ヒト免疫細胞の集団を含む医薬組成物と、抗体またはその抗原結合断片の１つ以上の有効用量を含むリンパ球枯渇レジメンとが投与される。いくつかの実施形態では、対象における標的細胞は、癌細胞である。いくつかの実施形態では、医薬組成物およびリンパ球枯渇レジメンの投与は、対象の癌細胞の数を減少させるための免疫療法である。
別の態様では、本発明は、医薬品として使用するための、本明細書に記載の遺伝子改変細胞またはその集団を提供する。本開示はさらに、それを必要とする対象の疾患を治療するための医薬品の製造における、本明細書に記載の遺伝子改変細胞またはその集団の使用を提供する。いくつかの実施形態では、医薬品は、それを必要とする対象に対する癌の治療、例えば、癌免疫療法の方法に有用である。
別の態様では、本発明は、医薬品として使用するための、本明細書に記載の抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片を提供する。本開示はさらに、それを必要とする対象の疾患を治療するための医薬品の製造における、本明細書に記載の抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。いくつかの実施形態では、医薬品は、それを必要とする対象に対する癌の治療、例えば、癌免疫療法の方法に有用である。
別の態様では、本発明は、医薬品として使用するための、本明細書に記載の遺伝子改変細胞またはその集団と、本明細書に記載の抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片との組合せを提供する。本開示はさらに、それを必要とする対象の疾患を治療するための医薬品の製造における、本明細書に記載の遺伝子改変細胞またはその集団、および本明細書に記載の抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。いくつかの実施形態では、医薬品は、それを必要とする対象に対する癌の治療、例えば、癌免疫療法の方法に有用である。
配列の簡単な説明
配列番号１は、ＴＲＣ１－２認識配列（センス鎖）の核酸配列を示す。
配列番号２は、ＴＲＣ１－２認識配列（アンチセンス鎖）の核酸配列を示す。
配列番号３は、ＴＲＡＦ結合ドメインのアミノ酸配列を示す。
配列番号４は、ＴＲＡＦ結合ドメインのアミノ酸配列を示す。
配列番号５は、ＴＲＡＦ結合ドメインのアミノ酸配列を示す。
配列番号６は、Ｎｏｖｅｌ６（Ｎ６）共刺激ドメインのアミノ酸配列を示す。
配列番号７は、４－１ＢＢ共刺激ドメインのアミノ酸配列を示す。
配列番号８は、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列を示す。
配列番号９は、野生型Ｉ－ＣｒｅＩホーミングエンドヌクレアーゼのアミノ酸配列を示す。
配列番号１０は、ＣＤ８α膜貫通ドメインのアミノ酸配列を示す。
配列番号１１は、ＣＤ８αヒンジドメインのアミノ酸配列を示す。
配列番号１２は、ＴＲＣ１－２Ｌ．１５９２メガヌクレアーゼのアミノ酸配列を示す。
補体依存性細胞傷害性アッセイにおけるＣＤ３－ＣＡＲ Ｔ細胞またはＣＤ３＋Ｔ細胞のいずれかの殺傷率を示す折れ線グラフを提供する。図１Ａは、漸増量のウマ抗ヒト胸腺細胞グロブリン抗体（ＡＴＧＡＭ）の存在下でのＣＡＲ Ｔ細胞の殺傷率を示す。図１Ｂは、ＣＤ３特異的抗体の存在下でのＣＡＲ Ｔ細胞またはＣＤ３＋Ｔ細胞の殺傷率を示す。
発明の詳細な説明
１．１ 参考文献および定義
本明細書で言及される特許および科学文献は、当業者に利用可能な知識を確立する。本明細書に引用される発行された米国特許、許可された出願、公開された外国出願、およびＧｅｎＢａｎｋデータベース配列を含む参考文献は、各々が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されているのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
本発明は、様々な形態で具体化することができ、本明細書に記載の実施形態に限定されると解釈されるべきではない。むしろ、これらの実施形態は、本開示が徹底的かつ完全であり、本発明の範囲を当業者に十分に伝えるように提供される。例えば、一実施形態に関して示された特徴は、他の実施形態に組み込むことができ、特定の実施形態に関して示された特徴は、その実施形態から削除することができる。さらに、本発明から逸脱しない、本明細書で提案される実施形態に対する多数の変形および追加は、本開示に照らして当業者には明らかであろう。
別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書における本発明の説明で使用される用語は、特定の実施形態のみを説明するためのものであり、本発明を限定することを意図するものではない。
本明細書で言及されるすべての刊行物、特許出願、特許および他の参考文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書で使用される場合、「ａ」、「ａｎ」または「ｔｈｅ」は、１つまたは複数を意味することができる。例えば、「ａ」細胞は、単一の細胞または多数の細胞を意味することができる。
本明細書で使用される場合、特に明記しない限り、単語「または」は、「および／または」の包括的な意味で使用され、「いずれか／または」の排他的な意味では使用されない。
本明細書で使用される場合、ヌクレオチド配列またはアミノ酸配列に関して用語「外因性」または「異種」は、純粋に合成されている配列、外来種に由来する配列、または同じ種に由来する場合、意図的なヒトの介入によって組成および／またはゲノム遺伝子座がその天然の形態から実質的に改変されている配列を意味することを意図している。
本明細書で使用される場合、ヌクレオチド配列またはタンパク質に関して用語「内因性」は、細胞内に天然に含まれるか、または細胞によって発現される配列またはタンパク質を意味することを意図している。
本明細書で使用される場合、用語「ヌクレアーゼ」および「エンドヌクレアーゼ」は、ポリヌクレオチド鎖内のホスホジエステル結合を切断する天然に存在するか、または操作された酵素を指すために区別なく使用される。
本明細書で使用される場合、用語「メガヌクレアーゼ」は、１２塩基対を超える認識配列で二本鎖ＤＮＡに結合するエンドヌクレアーゼを指す。いくつかの実施形態では、本開示のメガヌクレアーゼの認識配列は、２２塩基対である。メガヌクレアーゼは、Ｉ－ＣｒｅＩ（配列番号９）に由来するエンドヌクレアーゼであり得、例えば、ＤＮＡ結合特異性、ＤＮＡ切断活性、ＤＮＡ結合親和性または二量体化特性に関して天然のＩ－ＣｒｅＩと比較して改変されたＩ－ＣｒｅＩの操作された変異体を指し得る。Ｉ－ＣｒｅＩのそのような改変された変異体を生成するための方法は、当技術分野で公知である（例えば、参照によりその全体が組み込まれる国際公開第２００７／０４７８５９号パンフレット）。本明細書で使用されるメガヌクレアーゼは、ヘテロ二量体として二本鎖ＤＮＡに結合する。メガヌクレアーゼはまた、一対のＤＮＡ結合ドメインがペプチドリンカーを使用して単一のポリペプチドに連結されている「一本鎖メガヌクレアーゼ」であり得る。用語「ホーミングエンドヌクレアーゼ」は、用語「メガヌクレアーゼ」と同義である。本開示のメガヌクレアーゼは、本明細書に記載の標的細胞内で発現させた場合に実質的に非毒性であり、それにより、本明細書に記載の方法を使用して測定した場合、細胞生存率への有害な影響、またはメガヌクレアーゼ切断活性の顕著な低下を観察することなく、細胞をトランスフェクトし、３７°Ｃで維持することができる。
本明細書で使用される場合、用語「一本鎖メガヌクレアーゼ」は、リンカーによって連結された一対のヌクレアーゼサブユニットを含むポリペプチドを指す。一本鎖メガヌクレアーゼは、Ｎ末端サブユニット－リンカー－Ｃ末端サブユニットという構成を有する。２つのメガヌクレアーゼサブユニットは、一般に、アミノ酸配列が同一ではなく、同一ではないＤＮＡ配列に結合する。したがって、一本鎖メガヌクレアーゼは、典型的には、擬似パリンドローム認識配列または非パリンドローム認識配列を切断する。一本鎖メガヌクレアーゼは、実際には二量体ではないが、「一本鎖ヘテロ二量体」または「一本鎖ヘテロ二量体メガヌクレアーゼ」と呼ばれ得る。明確にするために、特に明記しない限り、用語「メガヌクレアーゼ」は、二量体メガヌクレアーゼまたは一本鎖メガヌクレアーゼを指すことができる。
本明細書で使用される場合、用語「リンカー」は、２つのヌクレアーゼサブユニットを単一のポリペプチドに連結するために使用される外因性ペプチド配列を指す。リンカーは、天然タンパク質に見られる配列を有してもよいか、または天然タンパク質には見られない人工配列であってよい。リンカーは、可撓性であり得、二次構造を欠いていてもよいか、または生理学的条件下で特定の三次元構造を形成する傾向を有してもよい。リンカーは、限定するものではないが、各々参照によりその全体が組み込まれる米国特許第８，４４５，２５１号明細書、米国特許第９，３４０，７７７号明細書、米国特許第９，４３４，９３１号明細書および米国特許第１０，０４１，０５３号明細書に包含されるものを含むことができる。
本明細書で使用される場合、用語「ＴＡＬＥＮ」は、限定するものではないが、制限エンドヌクレアーゼ、ホーミングエンドヌクレアーゼ、Ｓ１ヌクレアーゼ、マングビーンヌクレアーゼ、膵臓ＤＮＡｓｅ Ｉ、ミクロコッカルヌクレアーゼおよび酵母ＨＯエンドヌクレアーゼを含むエンドヌクレアーゼまたはエキソヌクレアーゼ由来のヌクレアーゼドメインまたはその活性部分に融合した複数のＴＡＬドメインリピートを含むＤＮＡ結合ドメインを含むエンドヌクレアーゼを指す。例えば、参照によりその全体が組み込まれるＣｈｒｉｓｔｉａｎ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１８６：７５７－７６１を参照されたい。ＴＡＬＥＮの設計に有用なヌクレアーゼドメインには、限定するものではないが、ＦｏｋＩ、ＦｏＭ、ＳｔｓＩ、ＨｈａＩ、ＨｉｎｄＩＩＩ、Ｎｏｄ、ＢｂｖＣＩ、ＥｃｏＲＩ、ＢｇｌＩおよびＡｌｗＩを含むＩＩｓ型制限エンドヌクレアーゼ由来のものが含まれる。追加のＩＩｓ型制限エンドヌクレアーゼは、参照によりその全体が組み込まれる国際公開第２００７／０１４２７５号パンフレットに記載されている。いくつかの実施形態では、ＴＡＬＥＮのヌクレアーゼドメインは、ＦｏｋＩヌクレアーゼドメインまたはその活性部分である。ＴＡＬドメインリピートは、キサントモナス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ）属の植物病原体による感染過程で使用されるタンパク質のＴＡＬＥ（転写活性化因子様エフェクター）ファミリーに由来し得る。ＴＡＬドメインリピートは、異なる１２番目および１３番目のアミノ酸を有する３３～３４アミノ酸配列である。リピート可変ジペプチド（ＲＶＤ：ｒｅｐｅａｔ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｉｐｅｐｔｉｄｅ）と呼ばれるこれらの２つの位置は高度に可変的であり、特異的ヌクレオチド認識と強い相関を示す。ＤＮＡ標的配列内の各塩基対が、ＲＶＤから生じる特異性を有する単一のＴＡＬリピートによって接触される。いくつかの実施形態では、ＴＡＬＥＮは、１６～２２個のＴＡＬドメインリピートを含む。ＴＡＬＥＮによるＤＮＡ切断は、非特異的中央領域（すなわち、「スペーサ」）に隣接する２つのＤＮＡ認識領域（すなわち、「ハーフサイト」）を必要とする。ＴＡＬＥＮに関して用語「スペーサ」は、ＴＡＬＥＮを構成する各単量体によって認識および結合される２つの核酸配列を分離する核酸配列を指す。ＴＡＬドメインリピートは、天然に存在するＴＡＬＥタンパク質由来の天然配列であり得るか、または合理的手段もしくは実験的手段によって再設計されて、所定のＤＮＡ配列に結合するタンパク質を産生することができる（例えば、各々参照によりその全体が組み込まれるＢｏｃｈ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２６（５９５９）：１５０９－１５１２およびＭｏｓｃｏｕ ａｎｄ Ｂｏｇｄａｎｏｖｅ（２００９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２６（５９５９）：１５０１を参照）。特定の配列を認識し、それに結合するようにＴＡＬＥＮを操作する方法、ならびにＲＶＤおよびそれらの対応する標的ヌクレオチドの例については、米国特許公開第２０１１０１４５９４０号明細書および国際公開第２０１０／０７９４３０号パンフレットも参照されたい。いくつかの実施形態では、各ヌクレアーゼ（例えば、ＦｏｋＩ）単量体は、異なるＤＮＡ配列を認識し、それに結合するＴＡＬエフェクター配列に融合することができ、２つの認識部位が近接している場合にのみ、この不活性単量体は一緒になって機能性酵素を生成する。用語「ＴＡＬＥＮ」は、ＴＡＬＥＮスペーサ配列に隣接する上流ハーフサイトおよび下流ハーフサイトに結合し、スペーサ配列内に切断部位を生成するために協調して働く単一のＴＡＬＥＮタンパク質、または代替的に、一対のＴＡＬＥＮタンパク質（すなわち、左ＴＡＬＥＮタンパク質および右ＴＡＬＥＮタンパク質）を指し得ることが理解される。所定のＤＮＡ遺伝子座またはスペーサ配列を考慮して、当技術分野で公知のいくつかのプログラムを使用して、上流ハーフサイトおよび下流ハーフサイトが同定され得る（Ｋｏｒｎｅｌ Ｌａｂｕｎ；Ｔｅｓｓａ Ｇ．Ｍｏｎｔａｇｕｅ；Ｊａｍｅｓ Ａ．Ｇａｇｎｏｎ；Ｓｕｍｍｅｒ Ｂ．Ｔｈｙｍｅ；Ｅｉｖｉｎｄ Ｖａｌｅｎ．（２０１６）．ＣＨＯＰＣＨＯＰ ｖ２：ａ ｗｅｂ ｔｏｏｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｎｅｘｔ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＲＩＳＰＲ ｇｅｎｏｍｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ；ｄｏｉ：１０．１０９３／ｎａｒ／ｇｋｗ３９８；Ｔｅｓｓａ Ｇ．Ｍｏｎｔａｇｕｅ；Ｊｏｓｅ Ｍ．Ｃｒｕｚ；Ｊａｍｅｓ Ａ．Ｇａｇｎｏｎ；Ｇｅｏｒｇｅ Ｍ．Ｃｈｕｒｃｈ；Ｅｉｖｉｎｄ Ｖａｌｅｎ．（２０１４）．ＣＨＯＰＣＨＯＰ：ａ ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ ａｎｄ ＴＡＬＥＮ ｗｅｂ ｔｏｏｌ ｆｏｒ ｇｅｎｏｍｅ ｅｄｉｔｉｎｇ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．４２．Ｗ４０１－Ｗ４０７）。ＴＡＬＥＮ認識配列は、単一のＴＡＬＥＮタンパク質のＤＮＡ結合配列（すなわち、ハーフサイト）として、または代替的に、上流ハーフサイトと、スペーサ配列と、下流ハーフサイトとを含むＤＮＡ配列として同定され得ることも理解される。
本明細書で使用される場合、用語「コンパクトＴＡＬＥＮ」は、限定するものではないが、ＭｍｅＩ、ＥｎｄＡ、Ｅｎｄ１、Ｉ－ＢａｓＩ、Ｉ－ＴｅｖＩＩ、Ｉ－ＴｅｖＩＩＩ、Ｉ－ＴｗｏＩ、ＭｓｐＩ、ＭｖａＩ、ＮｕｃＡおよびＮｕｃＭを含む、Ｉ－ＴｅｖＩホーミングエンドヌクレアーゼの任意の部分、または米国特許出願第２０１３０１１７８６９号明細書（参照によりその全体が組み込まれる）の表２に列挙されているエンドヌクレアーゼのいずれかに任意の方向で融合した１つ以上のＴＡＬドメインリピートを有するＤＮＡ結合ドメインを含むエンドヌクレアーゼを指す。コンパクトＴＡＬＥＮは、ＤＮＡプロセシング活性のために二量体化を必要とせず、介在するＤＮＡスペーサを有する二重標的部位の必要性を軽減する。いくつかの実施形態では、コンパクトＴＡＬＥＮは、１６～２２個のＴＡＬドメインリピートを含む。
本明細書で使用される場合、用語「ｍｅｇａＴＡＬ」は、操作された配列特異的ホーミングエンドヌクレアーゼを有する転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）ＤＮＡ結合ドメインを含む一本鎖エンドヌクレアーゼを指す。
本明細書で使用される場合、用語「ジンクフィンガーヌクレアーゼ」または「ＺＦＮ」は、限定するものではないが、制限エンドヌクレアーゼ、ホーミングエンドヌクレアーゼ、Ｓ１ヌクレアーゼ、マングビーンヌクレアーゼ、膵臓ＤＮＡｓｅ Ｉ、ミクロコッカルヌクレアーゼおよび酵母ＨＯエンドヌクレアーゼを含むエンドヌクレアーゼまたはエキソヌクレアーゼ由来のヌクレアーゼドメインに融合したジンクフィンガーＤＮＡ結合ドメインを含むキメラタンパク質を指す。ジンクフィンガーヌクレアーゼの設計に有用なヌクレアーゼドメインには、限定するものではないが、ＦｏｋＩ、ＦｏＭおよびＳｔｓＩ制限酵素を含むＩＩｓ型制限エンドヌクレアーゼ由来のものが含まれる。追加のＩＩｓ型制限エンドヌクレアーゼは、参照によりその全体が組み込まれる国際公開第２００７／０１４２７５号パンフレットに記載されている。ジンクフィンガードメインの構造は、亜鉛イオンの配位によって安定化される。１つ以上のジンクフィンガードメインを含むＤＮＡ結合タンパク質は、配列特異的にＤＮＡに結合する。ジンクフィンガードメインは、天然配列であり得るか、または合理的手段もしくは実験的手段によって再設計されて、２～１０塩基対によって分離された一対の９塩基対のハーフサイトを含む、長さが約１８塩基対の所定のＤＮＡ配列に結合するタンパク質を産生することができる。例えば、各々参照によりその全体が組み込まれる米国特許第５，７８９，５３８号明細書、米国特許第５，９２５，５２３号明細書、米国特許第６，００７，９８８号明細書、米国特許第６，０１３，４５３号明細書、米国特許第６，２００，７５９号明細書ならびに国際公開第９５／１９４３１号パンフレット、国際公開第９６／０６１６６号パンフレット、国際公開第９８／５３０５７号パンフレット、国際公開第９８／５４３１１号パンフレット、国際公開第００／２７８７８号パンフレット、国際公開第０１／６０９７０号パンフレット、国際公開第０１／８８１９７号パンフレットおよび国際公開第０２／０９９０８４号パンフレットを参照されたい。この操作されたタンパク質ドメインをＦｏｋＩヌクレアーゼなどのヌクレアーゼドメインに融合することによって、ゲノムレベルの特異性でＤＮＡ切断を標的とすることが可能である。標的部位、ジンクフィンガータンパク質の選択、ならびにジンクフィンガーヌクレアーゼの設計および構築のための方法は、当業者に公知であり、各々参照によりその全体が組み込まれる米国特許公開第２００３０２３２４１０号明細書、米国特許公開第２００５０２０８４８９号明細書、米国特許公開第２００５０６４４７４号明細書、米国特許公開第２００５００２６１５７号明細書、米国特許公開第２００６０１８８９８７号明細書および国際公開第０７／０１４２７５号パンフレットに詳細に記載されている。ジンクフィンガーの場合、ＤＮＡ結合ドメインは、典型的には、２～１０塩基対の「スペーサ配列」によって分離された一対の９塩基対の「ハーフサイト」を含む１８ｂｐ認識配列を認識し、ヌクレアーゼによる切断は、平滑末端、または可変長の５´オーバーハング（多くの場合、４塩基対）を作り出す。用語「ジンクフィンガーヌクレアーゼ」は、ジンクフィンガーヌクレアーゼスペーサ配列に隣接する上流ハーフサイトおよび下流ハーフサイトに結合し、スペーサ配列内に切断部位を生成するために協調して働く単一のジンクフィンガータンパク質、または代替的に、一対のジンクフィンガータンパク質（すなわち、左ＺＦＮタンパク質および右ＺＦＮタンパク質）を指し得ることが理解される。所定のＤＮＡ遺伝子座またはスペーサ配列を考慮して、当技術分野で公知のいくつかのプログラムを使用して、上流ハーフサイトおよび下流ハーフサイトが同定され得る（Ｍａｎｄｅｌｌ ＪＧ，Ｂａｒｂａｓ ＣＦ ３ｒｄ．Ｚｉｎｃ Ｆｉｎｇｅｒ Ｔｏｏｌｓ：ｃｕｓｔｏｍ ＤＮＡ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎｓ ｆｏｒ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｎｕｃｌｅａｓｅｓ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２００６Ｊｕｌ １；３４（Ｗｅｂ Ｓｅｒｖｅｒ ｉｓｓｕｅ）：Ｗ５１６－２３）。ジンクフィンガーヌクレアーゼ認識配列は、単一のジンクフィンガーヌクレアーゼタンパク質のＤＮＡ結合配列（すなわち、ハーフサイト）として、または代替的に、上流ハーフサイトと、スペーサ配列と、および下流ハーフサイトとを含むＤＮＡ配列として同定され得ることも理解される。
本明細書で使用される場合、用語「ＣＲＩＳＰＲヌクレアーゼ」または「ＣＲＩＳＰＲ系ヌクレアーゼ」は、ポリヌクレオチド内の認識部位にハイブリダイズすることによって関連エンドヌクレアーゼによる核酸切断を導くガイドＲＮＡと会合するＣａｓ９などのＣＲＩＳＰＲ（クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート）関連（Ｃａｓ）エンドヌクレアーゼまたはその変異体を指す。一定の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲヌクレアーゼは、クラス２ＣＲＩＳＰＲ酵素である。これらの実施形態のいくつかでは、ＣＲＩＳＰＲヌクレアーゼは、クラス２のＩＩ型酵素、例えばＣａｓ９である。他の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲヌクレアーゼは、クラス２のＶ型酵素、例えばＣｐｆ１である。ガイドＲＮＡは、直接リピートと、標的認識部位に相補的なガイド配列（内因性ＣＲＩＳＰＲ系の文脈では、多くの場合スペーサと呼ばれる）とを含む。一定の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ系は、ガイドＲＮＡ上に存在する直接リピート配列（ｔｒａｃｒメイト配列と呼ばれることもある）に相補的（完全にまたは部分的に）であるｔｒａｃｒＲＮＡ（トランス活性化ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ）をさらに含む。特定の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲヌクレアーゼは、この酵素が、標的ポリヌクレオチドの一本鎖を切断し、ニッカーゼとして機能し、標的ＤＮＡの一本鎖のみを切断する能力を欠くように、対応する野生型酵素に対して変異させることができる。ニッカーゼとして機能するＣＲＩＳＰＲ酵素の非限定的な例には、ＲｕｖＣ Ｉ触媒ドメイン内にＤ１０Ａ変異を有するか、またはＨ８４０Ａ変異、Ｎ８５４Ａ変異もしくはＮ８６３Ａ変異を有するＣａｓ９酵素が挙げられる。所定のＤＮＡ遺伝子座を考慮して、当技術分野で公知のいくつかのプログラムを使用して、認識配列が同定され得る（Ｋｏｒｎｅｌ Ｌａｂｕｎ；Ｔｅｓｓａ Ｇ．Ｍｏｎｔａｇｕｅ；Ｊａｍｅｓ Ａ．Ｇａｇｎｏｎ；Ｓｕｍｍｅｒ Ｂ．Ｔｈｙｍｅ；Ｅｉｖｉｎｄ Ｖａｌｅｎ．（２０１６）．ＣＨＯＰＣＨＯＰ ｖ２：ａ ｗｅｂ ｔｏｏｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｎｅｘｔ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＲＩＳＰＲ ｇｅｎｏｍｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ；ｄｏｉ：１０．１０９３／ｎａｒ／ｇｋｗ３９８；Ｔｅｓｓａ Ｇ．Ｍｏｎｔａｇｕｅ；Ｊｏｓｅ Ｍ．Ｃｒｕｚ；Ｊａｍｅｓ Ａ．Ｇａｇｎｏｎ；Ｇｅｏｒｇｅ Ｍ．Ｃｈｕｒｃｈ；Ｅｉｖｉｎｄ Ｖａｌｅｎ．（２０１４）．ＣＨＯＰＣＨＯＰ：ａ ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ ａｎｄ ＴＡＬＥＮ ｗｅｂ ｔｏｏｌ ｆｏｒ ｇｅｎｏｍｅ ｅｄｉｔｉｎｇ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．４２．Ｗ４０１－Ｗ４０７）。
本明細書で使用される場合、用語「鋳型核酸」、「ドナー鋳型」または「修復鋳型」は、細胞のゲノム内の切断部位に挿入されることが望ましい核酸配列を指す。そのような鋳型核酸またはドナー鋳型は、例えば、目的のタンパク質（例えばＣＡＲ）をコードする導入遺伝子、例えば外因性導入遺伝子を含むことができる。鋳型核酸またはドナー鋳型は、鋳型の挿入が望まれる、ゲノム内の切断部位に隣接する、それぞれ５´配列および３´配列と相同性を有する５´相同アームおよび３´相同アームを含むことができる。挿入は、例えば、相同組換え修復（ＨＤＲ）によって達成することができる。
本明細書で使用される場合、タンパク質に関して用語「組換え」または「操作された」は、タンパク質をコードする核酸およびタンパク質を発現する細胞または生物への遺伝子操作技術の適用の結果として変化したアミノ酸配列を有することを意味する。核酸に関して用語「組換え」または「操作された」は、遺伝子操作技術の適用の結果として変化した核酸配列を有することを意味する。遺伝子操作技術には、限定するものではないが、ＰＣＲクローニング技術およびＤＮＡクローニング技術；トランスフェクション、形質転換および他の遺伝子移入技術；相同組換え；部位特異的変異誘発；ならびに遺伝子融合が含まれる。この定義によれば、天然に存在するタンパク質と同一のアミノ酸配列を有するが、異種宿主でのクローニングおよび発現によって生成されるタンパク質は、組換えまたは操作されていると考えられない。
本明細書で使用される場合、用語「野生型」は、同じタイプの遺伝子の対立遺伝子集団内の最も一般的な天然対立遺伝子（すなわち、ポリヌクレオチド配列）を指し、ここで、野生型対立遺伝子によってコードされるポリペプチドは、その元の機能を有する。用語「野生型」はまた、野生型対立遺伝子によってコードされるポリペプチドを指す。野生型対立遺伝子（すなわち、ポリヌクレオチド）および野生型ポリペプチドは、野生型配列と比較して１つ以上の変異および／または置換を含む、ミュータントまたは変異体の対立遺伝子およびポリペプチドと区別可能である。野生型対立遺伝子または野生型ポリペプチドは、生物に対して正常な表現型を付与することができるが、ミュータントまたは変異体の対立遺伝子またはポリペプチドは、場合によっては、変化した表現型を付与することができる。野生型ヌクレアーゼは、組換えヌクレアーゼまたは天然に存在しないヌクレアーゼと区別可能である。用語「野生型」はまた、特定の遺伝子の野生型対立遺伝子を有する細胞、生物および／または対象、または比較のために使用される細胞、生物および／または対象を指すことができる。
本明細書で使用される場合、用語「遺伝子改変」は、ゲノムＤＮＡ配列が組換え技術によって意図的に改変されている細胞もしくは生物、またはその先祖のゲノムＤＮＡ配列が組換え技術によって意図的に改変されている細胞もしくは生物を指す。本明細書で使用される場合、用語「遺伝子改変」は、用語「トランスジェニック」を包含する。
組換えタンパク質に関して本明細書で使用される場合、用語「改変」は、参照配列（例えば、野生型配列または天然配列）と比較した組換え配列内のアミノ酸残基の任意の挿入、欠失または置換を意味する。
本明細書で使用される場合、用語「認識配列」または「認識部位」は、ヌクレアーゼによって結合および切断されるＤＮＡ配列を指す。メガヌクレアーゼの場合、認識配列は、４塩基対によって分離された一対の逆位９塩基対の「ハーフサイト」を含む。一本鎖メガヌクレアーゼの場合、該タンパク質のＮ末端ドメインは第１のハーフサイトと接触し、該タンパク質のＣ末端ドメインは第２のハーフサイトと接触する。メガヌクレアーゼによる切断は、４塩基対の３´オーバーハングを生じる。「オーバーハング」または「粘着末端」は、二本鎖ＤＮＡ配列のエンドヌクレアーゼ切断によって生じ得る短い一本鎖ＤＮＡセグメントである。Ｉ－ＣｒｅＩ由来のメガヌクレアーゼおよび一本鎖メガヌクレアーゼの場合、オーバーハングは、２２塩基対の認識配列の塩基１０～１３を含む。コンパクトＴＡＬＥＮの場合、認識配列は、Ｉ－ＴｅｖＩドメインによって認識される第１のＣＮＮＮＧＮ配列と、それに続く長さ４～１６塩基対の非特異的スペーサと、それに続くＴＡＬ－エフェクタードメインによって認識される長さ１６～２２ｂｐの第２の配列（この配列は、典型的には５´Ｔ塩基を有する）とを含む。コンパクトＴＡＬＥＮによる切断は、２塩基対の３´オーバーハングを生じる。ＣＲＩＳＰＲヌクレアーゼの場合、認識配列は、ガイドＲＮＡが結合して切断を導く、典型的には１６～２４塩基対の配列である。ガイド配列と認識配列との間の完全な相補性は、切断をもたらすために必ずしも必要ではない。ＣＲＩＳＰＲヌクレアーゼによる切断は、ＣＲＩＳＰＲヌクレアーゼに応じて、平滑末端（例えば、クラス２、ＩＩ型ＣＲＩＳＰＲヌクレアーゼによる）またはオーバーハング末端（例えば、クラス２、Ｖ型ＣＲＩＳＰＲヌクレアーゼによる）を生じ得る。ＣｐｆＩ ＣＲＩＳＰＲヌクレアーゼが利用される実施形態では、ＣｐｆＩ ＣＲＩＳＰＲヌクレアーゼを含むＣＲＩＳＰＲ複合体による切断は、５´オーバーハングをもたらし、一定の実施形態では、５ヌクレオチド５´オーバーハングをもたらす。各ＣＲＩＳＰＲヌクレアーゼ酵素はまた、ガイドＲＮＡに相補的な認識配列の近くにあるＰＡＭ（プロトスペーサ隣接モチーフ）配列の認識も必要とする。正確な配列、ＰＡＭの長さ要件、および標的配列からの距離は、ＣＲＩＳＰＲヌクレアーゼ酵素に応じて異なるが、ＰＡＭは、典型的には、標的／認識配列に隣接する２～５塩基対の配列である。特定のＣＲＩＳＰＲヌクレアーゼ酵素のＰＡＭ配列は当技術分野で公知であり（例えば、各々参照によりその全体が組み込まれる米国特許第８，６９７，３５９号明細書および米国特許公開第２０１６０２０８２４３号明細書を参照）、新規ＣＲＩＳＰＲヌクレアーゼ酵素または操作されたＣＲＩＳＰＲヌクレアーゼ酵素のＰＡＭ配列は、当技術分野で公知の方法、例えばＰＡＭ枯渇アッセイを使用して同定され得る（例えば、その全体が本明細書に組み込まれるＫａｒｖｅｌｉｓ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｍｅｔｈｏｄｓ １２１－１２２：３－８を参照）。ジンクフィンガーの場合、ＤＮＡ結合ドメインは、典型的には、２～１０塩基対によって分離された一対の９塩基対の「ハーフサイト」を含む１８ｂｐ認識配列を認識し、ヌクレアーゼによる切断は、平滑末端、または可変長の５´オーバーハング（多くの場合、４塩基対）を作り出す。
本明細書で使用される場合、用語「標的部位」または「標的配列」は、ヌクレアーゼの認識配列を含む、細胞の染色体ＤＮＡの領域を指す。
本明細書で使用される場合、用語「標的遺伝子」は、外因性ポリヌクレオチド（例えば、キメラ抗原受容体をコードする）が挿入されたか、または挿入され得る細胞（例えばＴ細胞）のゲノム内の遺伝子を指す。いくつかの実施形態では、標的遺伝子は、ヌクレアーゼによって認識される標的部位または標的配列を含む。いくつかの実施形態では、標的遺伝子は、α／βＴ細胞受容体の成分をコードする遺伝子である。いくつかの実施形態では、標的遺伝子は、Ｔ細胞受容体α定常領域（ＴＲＡＣ）遺伝子内にある。
本明細書で使用される場合、用語「特異性」は、ヌクレアーゼが、認識配列と呼ばれる、塩基対の特定の配列でのみ、または認識配列の特定のセットでのみ二本鎖ＤＮＡ分子に結合し、それを切断する能力を意味する。認識配列のセットは、特定の保存された位置または配列モチーフを共有するが、１つ以上の位置で縮重し得る。高度に特異的なヌクレアーゼは、１つのみまたはごく少数の認識配列を切断することができる。特異性は、当技術分野で公知の任意の方法によって決定され得る。
本明細書で使用される場合、用語「相同組換え」または「ＨＲ」は、修復鋳型として相同ＤＮＡ配列を使用して二本鎖ＤＮＡ切断が修復される天然の細胞プロセスを指す（例えば、Ｃａｈｉｌｌ ｅｔ ａｌ．（２００６），Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１１：１９５８－１９７６を参照）。相同ＤＮＡ配列は、細胞に送達された内因性染色体配列または外因性核酸であり得る。
本明細書で使用される場合、用語「非相同末端結合」または「ＮＨＥＪ」は、２つの非相同ＤＮＡセグメントの直接結合によって二本鎖ＤＮＡ切断が修復される天然の細胞プロセスを指す（例えば、Ｃａｈｉｌｌ ｅｔ ａｌ．（２００６），Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１１：１９５８－１９７６を参照）。非相同末端結合によるＤＮＡ修復はエラーを起こしやすく、修復部位でのＤＮＡ配列の鋳型なしの付加または欠失を頻繁にもたらす。場合によっては、標的認識配列での切断は、標的認識部位でＮＨＥＪをもたらす。遺伝子のコード配列内の標的部位のヌクレアーゼ誘導切断と、それに続くＮＨＥＪによるＤＮＡ修復とは、遺伝子機能を破壊するフレームシフト変異などの変異をコード配列に導入することができる。したがって、操作されたヌクレアーゼを使用して、細胞集団内の遺伝子を効果的にノックアウトすることができる。本明細書で使用される場合、「標的配列を破壊する」は、遺伝子機能を妨害し、それによって、コードされるポリペプチド／発現産物の発現および／または機能を妨げる変異（例えばフレームシフト変異）の導入を指す。
本明細書で使用される場合、用語「破壊された」または「破壊する」または「発現を破壊する」または「標的配列を破壊する」は、遺伝子機能を妨害し、それによって、コードされるポリペプチド／発現産物の発現および／または機能を妨げる変異（例えばフレームシフト変異）の導入を指す。例えば、遺伝子のヌクレアーゼ媒介性破壊は、切断型タンパク質の発現、および／または野生型機能を保持しないタンパク質の発現をもたらし得る。さらに、遺伝子へのドナー鋳型の導入は、コードされたタンパク質の発現、切断型タンパク質の発現、および／または野生型機能を保持しないタンパク質の発現をもたらさない可能性がある。
本明細書で使用される場合、用語「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」は、免疫エフェクター細胞（例えばヒトＴ細胞）上に抗原に対する特異性を付与するか、または移す操作された受容体を指す。キメラ抗原受容体は、少なくとも細胞外リガンド結合ドメインまたは細胞外リガンド結合部分と、膜貫通ドメインと、細胞内ドメインとを含み、細胞内ドメインは、１つ以上のシグナル伝達ドメインおよび／または共刺激ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインまたは細胞外リガンド結合部分は、抗体または抗体断片である。これに関連して、用語「抗体断片」は、抗原のエピトープと特異的に相互作用する（例えば、結合、立体障害、安定化／不安定化、空間分布によって）能力を保持する、抗体の少なくとも一部を指すことができる。抗体断片の例には、限定するものではないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ´、Ｆ（ａｂ´）２、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ抗体断片、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、線状抗体、単一ドメイン抗体、例えばｓｄＡｂ（ＶＬまたはＶＨのいずれか）、ラクダＶＨＨドメイン、抗体断片から形成された多重特異性抗体、例えば、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片、ならびに抗体の単離されたＣＤＲまたは他のエピトープ結合断片が挙げられる。抗原結合断片はまた、単一ドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、ナノボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ－ＮＡＲおよびｂｉｓ－ｓｃＦｖに組み込まれ得る（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ａｎｄ Ｈｕｄｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２３：１１２６－１１３６，２００５を参照）。抗原結合断片はまた、フィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３）などのポリペプチドに基づく足場にグラフトされ得る（フィブロネクチンポリペプチドミニボディを記載する米国特許第６，７０３，１９９号明細書を参照）。
いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインまたは細胞外リガンド結合部分は、特定のエピトープまたは抗原（例えば、癌細胞または他の疾患を引き起こす細胞もしくは粒子などの細胞の表面上に優先的に存在するエピトープまたは抗原）に対する特異性をもたらす、モノクローナル抗体に由来する一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）の形態である。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、リンカー配列を介して結合される。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、マウス、ヒト化または完全ヒトである。
キメラ抗原受容体の細胞外リガンド結合ドメインはまた、Ｂリンパ球上の自己抗原特異的Ｂ細胞受容体によって認識され、したがって、抗体媒介性自己免疫疾患では自己反応性Ｂリンパ球を特異的に標的とし、殺傷するようにＴ細胞を導くことができる自己抗原を含むことができる（Ｐａｙｎｅ ｅｔ ａｌ．（２０１６），Ｓｃｉｅｎｃｅ ３５３（６２９５）：１７９－１８４を参照）。そのようなＣＡＲはキメラ自己抗体受容体（ＣＡＡＲ）と呼ぶことができ、それらの使用は本発明に包含される。キメラ抗原受容体の細胞外ドメインはまた、目的の抗原に対する天然のリガンド、または目的の抗原に結合する能力を保持する天然のリガンドの断片を含むことができる。
細胞内刺激ドメインは、抗原結合後に免疫エフェクター細胞に活性化シグナルを伝達する１つ以上の細胞質シグナル伝達ドメインを含むことができる。そのような細胞質シグナル伝達ドメインには、限定するものではないが、ＣＤ３ζが含まれ得る。
細胞内刺激ドメインはまた、リガンド結合後に増殖シグナルおよび／または細胞生存シグナルを伝達する１つ以上の細胞内共刺激ドメインを含むことができる。場合によっては、共刺激ドメインは、１つ以上のＴＲＡＦ結合ドメインを含むことができる。そのようなＴＲＡＦ結合ドメインは、例えば、配列番号３～５に記載されるものを含み得る。そのような細胞内共刺激ドメインは、当技術分野で公知のもののいずれかであり得、限定するものではないが、例えば、Ｎｏｖｅｌ６（「Ｎ６」；配列番号６）を含む、国際公開第２０１８／０６７６９７号パンフレットに開示されている共刺激ドメインを含み得る。共刺激ドメインの追加の例には、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７；配列番号７）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ８、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、またはそれらの任意の組合せが挙げられ得る。
キメラ抗原受容体は、ヒンジまたはスペーサ配列を介して細胞外リガンド結合ドメインに結合している膜貫通ドメインを含む追加の構造要素をさらに含む。膜貫通ドメインは、任意の膜結合タンパク質または膜貫通タンパク質に由来し得る。例えば、膜貫通ポリペプチドは、Ｔ細胞受容体（例えば、α、β、γまたはζ、ＣＤ３複合体を構成するポリペプチド）、ＩＬ２受容体ｐ５５（鎖）、ｐ７５（β鎖）もしくはγ鎖、Ｆｃ受容体（例えば、Ｆｃｙ受容体ＩＩＩ）のサブユニット鎖、またはＣＤ８α鎖などのＣＤタンパク質のサブユニットであり得る。一定の例では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８αドメイン（配列番号１０）である。あるいは、膜貫通ドメインは、合成であり得、ロイシンおよびバリンなどの疎水性残基を主に含み得る。
ヒンジ領域とは、膜貫通ドメインを細胞外リガンド結合ドメインに連結するように機能する任意のオリゴペプチドまたはポリペプチドを指す。例えば、ヒンジ領域は、最大３００個のアミノ酸、好ましくは１０～１００個のアミノ酸、最も好ましくは２５～５０個のアミノ酸を含み得る。ヒンジ領域は、天然に存在する分子の全部もしくは一部、例えば、ＣＤ８、ＣＤ４もしくはＣＤ２８の細胞外領域の全部もしくは一部、または抗体定常領域の全部もしくは一部に由来し得る。あるいは、ヒンジ領域は、天然に存在するヒンジ配列に対応する合成配列であってよいか、または完全に合成されたヒンジ配列であってよい。特定の例では、ヒンジドメインは、ヒトＣＤ８α鎖、ＦｃｙＲｌｌｌａ受容体またはＩｇＧ１の一部を含むことができる。一定の例では、ヒンジ領域は、ＣＤ８αドメイン（配列番号１１）であり得る。
本明細書で使用される場合、用語「外因性Ｔ細胞受容体」または「外因性ＴＣＲ」は、ＴＣＲを内因的に発現してもしなくてもよい免疫エフェクター細胞（例えばヒトＴ細胞）のゲノムにその配列が導入されるＴＣＲを指す。免疫エフェクター細胞上の外因性ＴＣＲの発現は、特定のエピトープまたは抗原（例えば、癌細胞または他の疾患を引き起こす細胞もしくは粒子の表面上に優先的に存在するエピトープまたは抗原）に対する特異性を付与することができる。そのような外因性Ｔ細胞受容体は、α鎖およびβ鎖を含むことができるか、または代替的に、γ鎖およびδ鎖を含み得る。本発明において有用な外因性ＴＣＲは、目的の任意の抗原またはエピトープに対する特異性を有し得る。
本明細書で使用される場合、標的タンパク質（すなわち、内因的に発現されるタンパク質）に関して用語「発現減少」は、対照細胞と比較した場合の遺伝子改変細胞による内因性タンパク質の発現の何らかの減少を指す。減少したという用語はまた、対照細胞の集団と比較して、阻害性核酸によって標的とされる内因性タンパク質を発現する細胞の集団内の細胞の割合の減少を指すことができる。例示的かつ非限定的な阻害性核酸には、限定するものではないが、短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ヘアピンｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）または前駆体ｍｉＲＮＡが含まれ得る。阻害性核酸は、マイクロＲＮＡ適合ｓｈＲＮＡをさらに含むことができる。そのような減少は、最大５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または最大９９％であり得る。用語「減少した」は、標的タンパク質または内因性タンパク質の部分的または不完全なノックダウンを包含し、本明細書に記載のヌクレアーゼによる遺伝子不活性化によって達成されるものなどの完全なノックダウンとは区別されることが理解される。
アミノ酸配列および核酸配列の両方に関して本明細書で使用される場合、用語「パーセント同一性」、「配列同一性」、「パーセンテージ類似性」、「配列類似性」などは、アライメントされたアミノ酸残基またはヌクレオチド間の類似性を最大にし、同一または類似の残基またはヌクレオチドの数、残基またはヌクレオチドの総数、ならびに配列アライメントにおけるギャップの存在および長さの関数である、配列のアライメントに基づく２つの配列の類似性の程度の尺度を指す。標準的なパラメータを使用して配列類似性を決定するために、様々なアルゴリズムおよびコンピュータプログラムが利用可能である。本明細書で使用される場合、配列類似性は、アミノ酸配列のためのＢＬＡＳＴｐプログラムおよび核酸配列のためのＢＬＡＳＴｎプログラムを使用して測定され、これらはいずれもＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）から入手可能であり、例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０；Ｇｉｓｈ ａｎｄ Ｓｔａｔｅｓ（１９９３），Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．３：２６６－２７２；Ｍａｄｄｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９９６），Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：１３１－１４１；Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９７），Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３ ８９－３４０２）；Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０００），Ｊ．Ｃｏｍｐｕｔ．Ｂｉｏｌ．７（１－２）：２０３－１４に記載されている。本明細書で使用される場合、２つのアミノ酸配列のパーセント類似性とは、ＢＬＡＳＴｐアルゴリズムのための以下のパラメータに基づくスコアである：ワードサイズ＝３；ギャップオープニングペナルティ＝－１１；ギャップ拡張ペナルティ＝－１；およびスコア行列＝ＢＬＯＳＵＭ６２。本明細書で使用される場合、２つの核酸配列のパーセント類似性とは、ＢＬＡＳＴｎアルゴリズムのための以下のパラメータに基づくスコアである：ワードサイズ＝１１；ギャップオープニングペナルティ＝－５；ギャップ拡張ペナルティ＝－２；マッチ報酬＝１；およびミスマッチペナルティ＝－３。
２つのタンパク質またはアミノ酸配列の改変に関して本明細書で使用される場合、用語「に対応する」は、第１のタンパク質の特定の改変が第２のタンパク質の改変と同じアミノ酸残基の置換であること、および２つのタンパク質が標準的な配列アライメント（例えば、ＢＬＡＳＴｐプログラムを使用する）に供される場合、第１のタンパク質の改変のアミノ酸位置が第２のタンパク質の改変のアミノ酸位置に対応するか、またはアライメントすることを示すために使用される。したがって、第１のタンパク質におけるアミノ酸「Ａ」への残基「Ｘ」の改変は、残基ＸおよびＹが配列アライメントで互いに対応する場合、ＸおよびＹが異なる数であり得るという事実にもかかわらず、第２のタンパク質におけるアミノ酸「Ａ」への残基「Ｙ」の改変に対応する。
本明細書で使用される場合、用語「Ｔ細胞受容体α遺伝子」または「ＴＣＲα遺伝子」は、交換可能であり、Ｔ細胞受容体αサブユニットをコードする、Ｔ細胞内の遺伝子座を指す。Ｔ細胞受容体αは、再編成の前または後のＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ番号６９５５を指すことができる。Ｔ細胞受容体α遺伝子は、再編成後、内因性プロモータと、再編成されたＶセグメントおよびＪセグメントと、内因性スプライスドナー部位と、イントロンと、内因性スプライスアクセプター部位と、サブユニットコードエクソンを含むＴ細胞受容体α定常領域遺伝子座とを含む。
本明細書で使用される場合、用語「Ｔ細胞受容体α定常領域」または「ＴＣＲα定常領域」は、Ｔ細胞受容体α遺伝子のコード配列を指す。ＴＣＲα定常領域は、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ番号２８７５５によって同定される野生型配列およびその機能的変異体を含む。
本明細書で使用される場合、用語「Ｔ細胞受容体β遺伝子」または「ＴＣＲβ遺伝子」は、Ｔ細胞受容体βサブユニットをコードする、Ｔ細胞内の遺伝子座を指す。Ｔ細胞受容体β遺伝子は、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ番号６９５７を指すことができる。
本明細書で使用される場合、用語「組換えＤＮＡ構築物」、「組換え構築物」、「発現カセット」、「発現構築物」、「キメラ構築物」、「構築物」および「組換えＤＮＡ断片」は、本明細書で区別なく使用され、一本鎖ポリヌクレオチドまたは二本鎖ポリヌクレオチドである。組換え構築物は、限定するものではないが、天然には一緒に見られない制御配列およびコード配列を含む、核酸断片の人工的な組合せを含む。例えば、組換えＤＮＡ構築物は、異なる供給源に由来する制御配列およびコード配列、または同じ供給源に由来し、天然に見られるものとは異なる様式で配置された制御配列およびコード配列を含み得る。そのような構築物は、単独で使用されてもよいか、またはベクターと組み合わせて使用されてもよい。
本明細書で使用される場合、用語「ベクター」または「組換えＤＮＡベクター」は、所与の宿主細胞内でポリペプチドをコードする配列の転写および翻訳が可能な複製系および配列を含む構築物であり得る。ベクターが使用される場合、ベクターの選択は、当業者に周知のように、宿主細胞を形質転換するために使用される方法に依存する。ベクターには、限定するものではないが、プラスミドベクターおよび組換えＡＡＶベクター、または遺伝子を標的細胞に送達するのに適した当技術分野で公知の任意の他のベクターが含まれ得る。当業者であれば、本発明の単離されたヌクレオチドまたは核酸配列のいずれかを含む宿主細胞を首尾よく形質転換、選択および増殖させるためにベクター上に存在しなければならない遺伝的要素を十分に認識している。いくつかの実施形態では、「ベクター」はウイルスベクターも指す。ウイルスベクターには、限定するものではないが、レトロウイルス（すなわち、レトロウイルスベクター）、レンチウイルス（すなわち、レンチウイルスベクター）、アデノウイルス（すなわち、アデノウイルスベクター）およびアデノ随伴ウイルス（すなわち、ＡＡＶベクター）が含まれ得る。
本明細書で使用される用語「抗体」は、所望の抗原結合活性を示す限り、限定するものではないが、動物種由来の抗体（例えば、ラクダ抗体、ヤギ抗体、マウス抗体、ウサギ抗体など）、ヒト化抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、ナノボディ、モノボディおよび抗体断片を含む様々な抗体構造を包含する。抗体の他の例には、限定するものではないが、二重可変免疫グロブリンドメイン、一本鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ；例えば、重鎖のみの抗体）、ダイアボディ、トリアボディ、抗体様タンパク質足場、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ´）２分子およびタンデムｄｉ－ｓｃＦｖが挙げられる。
さらに、用語「抗体」は、１つ以上の重（Ｈ）鎖および／または１つ以上の軽（Ｌ）鎖を含む免疫グロブリン分子を含む。鎖は、ジスルフィド結合およびその多量体（例えばＩｇＭ）によって相互接続され得る。各重鎖（ＨＣ）は、重鎖可変領域（またはドメイン）（本明細書ではＨＣＶＲまたはＶＨと略す）および重鎖定常領域（またはドメイン）を含む。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含む。各軽鎖（ＬＣ）は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲまたはＶＬと略す）および軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、１つのドメイン（ＣＬ１）を含む。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって以下の順序で配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、１－Ｒ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４免疫グロブリン分子は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスであり得る。ＶＨ領域およびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる保存度が高い領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域にさらに細分することができる。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって以下の順序で配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。
本明細書で使用される場合、用語「ＣＤＲ」または「相補性決定領域」は、重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内に見られる不連続な抗原結合部位を指す。これらの特定の領域は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２，６６０９－６６１６（１９７７）およびＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ．（１９９１）、ならびにＣｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）およびＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５（１９９６）によって記載されており、ここで、定義は、互いに比較した場合のアミノ酸残基の重複またはサブセットを含む。上記で引用した参考文献の各々によって定義されるＣＤＲを包含するアミノ酸残基を比較のために記載する。好ましくは、用語「ＣＤＲ」は、配列比較に基づいて、Ｋａｂａｔによって定義されるＣＤＲである。
本明細書で使用される「インタクト」または「完全長」抗体は、４つのポリペプチド鎖、２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む抗体を指す。一実施形態では、インタクト抗体はインタクトＩｇＧ抗体である。
本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、例えば、天然に存在する変異を含有するかまたはモノクローナル抗体調製物の生成中に生じる可能性のある変異体抗体を除いて、同一であるおよび／または同じエピトープに結合し、そのような変異体は、一般に少量存在する。典型的には異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。したがって、修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体集団から得られる抗体の特徴を示し、特定の方法による抗体の生成を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、限定するものではないが、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、およびヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部または一部を含むトランスジェニック動物を利用する方法を含む様々な技術によって作製され得、そのような方法、およびモノクローナル抗体を作製するための他の例示的な方法は、本明細書に記載されている。
本明細書で使用される用語「ヒト抗体」は、フレームワーク領域およびＣＤＲ領域の両方がヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する抗体を指す。さらに、抗体が定常領域を含む場合、その定常領域もヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダム変異誘発もしくは部位特異的変異誘発、またはインビボでの体細胞変異によって導入された変異）を含み得る。ただし、本明細書で使用される用語「ヒト抗体」は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖細胞系に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列にグラフトされている抗体を含むことを意図しない。
用語「ヒト化抗体」は、マウスなどの１つの哺乳動物種の生殖細胞系に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列にグラフトされている抗体を指すことを意図する。ヒトフレームワーク配列内で追加のフレームワーク領域改変を行ってもよい。抗体、例えば非ヒト抗体の「ヒト化形態」は、ヒト化を受けた抗体を指す。
用語「キメラ抗体」は、可変領域配列が１つの種に由来し、定常領域配列が別の種に由来する抗体、例えば、可変領域配列がマウス抗体に由来し、定常領域配列がヒト抗体に由来する抗体を指すことを意図する。
抗体の「抗体断片」、「抗原結合断片」または「抗原結合部分」は、インタクト抗体の一部を含み、インタクト抗体が結合する抗原に結合する、インタクト抗体以外の分子を指す。抗体断片の例には、限定するものではないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ´、Ｆａｂ´－ＳＨ、Ｆ（ａｂ´）２；ダイアボディ；線状抗体；一本鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）；単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、および抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられる。
本明細書で使用される場合、用語「特異的に結合する」は、結合タンパク質（例えば、完全長抗体または抗原結合断片、例えば、ｓｃＦｖまたはｓｄＡｂ）が他のタンパク質ではなく標的分子（例えばＣＤ３）を認識し、それと複合体を形成する能力を指し、結合タンパク質は、生理学的条件下で比較的安定である。特異的結合は、少なくとも約１×１０６Ｍ以下の平衡解離定数を特徴とすることができる（例えば、平衡解離定数が小さいほど結合が緊密になることを示す）。２つの分子が特異的に結合するかどうかを決定する方法は、当技術分野で周知であり、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴などを含む。
本明細書で使用される場合、用語「検出可能に結合しない」は、バックグラウンドよりも顕著に高いレベルで細胞（例えば遺伝子改変細胞）に結合しない、例えば、バックグラウンドを１０％、８％、６％、５％または１％未満超えるレベルで細胞に結合する抗体を指す。いくつかの実施形態では、抗体は、アイソタイプ対照抗体よりも１０％、８％、６％、５％または１％未満高いレベルで細胞に結合する。一例では、結合は、ウエスタンブロッティング、フローサイトメトリー、ＥＬＩＳＡ、抗体パニングおよび／またはＢｉａｃｏｒｅ分析によって検出される。
本明細書で使用される場合、「ＣＤ３の検出可能な細胞表面発現」は、標準的な実験方法を使用して細胞（例えば、本明細書に記載の遺伝子改変細胞）の細胞表面上のＣＤ３を検出する能力を指す。そのような方法には、例えば、ＣＤ３に特異的な免疫染色および／またはフローサイトメトリーが含まれ得る。細胞上のＣＤ３の細胞表面発現を検出する方法には、本明細書の実施例に記載されているもの、および例えば、ＭａｃＬｅｏｄ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ２５（４）：９４９－９６１に記載されているものが含まれる。
本明細書で使用される場合、「内因性ＴＣＲの検出可能な細胞表面発現」は、標準的な実験方法を使用して免疫細胞の細胞表面上のＴＣＲ複合体（例えばα／βＴＣＲ複合体）の１つ以上の成分を検出する能力を指す。そのような方法には、例えば、ＴＣＲ自体の成分、例えば、ＴＣＲα鎖もしくはＴＣＲβ鎖に、または集合した細胞表面ＴＣＲ複合体の成分、例えば、ＣＤ３に特異的な免疫染色および／またはフローサイトメトリーが含まれ得る。免疫細胞上の内因性ＴＣＲ（例えば、α／βＴＣＲ）の細胞表面発現を検出する方法には、本明細書の実施例に記載されているもの、および例えば、ＭａｃＬｅｏｄ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ２５（４）：９４９－９６１に記載されているものが含まれる。
本明細書で使用される場合、用語「細胞表面上に検出可能なＣＤ３がない」は、当技術分野における標準的な方法（例えば、免疫染色、フローサイトメトリー、ＥＬＩＳＡ、抗体パニングおよび／またはＢｉａｃｏｒｅ分析）を使用して検出される、遺伝子改変細胞または遺伝子改変細胞の集団の表面上のＣＤ３の検出の欠如を指す。いくつかの実施形態では、遺伝子改変細胞または遺伝子改変細胞の集団は、対応する対照細胞または対照細胞集団と比較して、１０％、８％、６％、５％または１％未満のレベルのＣＤ３を有する。
本明細書で使用される場合、用語「免疫細胞」は、免疫系（先天性および／または適応）の一部であり、造血起源のものである任意の細胞を指す。免疫細胞の非限定的な例には、リンパ球、Ｂ細胞、Ｔ細胞、単球、マクロファージ、樹状細胞、顆粒球、巨核球、単球、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、骨髄性抑制性細胞、自然リンパ球系細胞、血小板、赤血球、胸腺細胞、白血球、好中球、肥満細胞、好酸球、好塩基球および顆粒球が挙げられる。
本明細書で使用される場合、「ヒトＴ細胞」または「Ｔ細胞」は、ドナー、特にヒトドナーから単離されたＴ細胞を指す。Ｔ細胞およびそれに由来する細胞には、培養で継代されていない単離されたＴ細胞、不死化せずに細胞培養条件下で継代および維持されたＴ細胞、ならびに不死化され、細胞培養条件下で無期限に維持され得るＴ細胞が含まれる。
本明細書で使用される場合、「ヒトＮＫ細胞」または「ＮＫ細胞」は、ドナー、特にヒトドナーから単離されたＮＫ細胞（すなわち、ナチュラルキラー細胞）を指す。ＮＫ細胞およびそれに由来する細胞には、培養で継代されていない単離されたＮＫ細胞、不死化せずに細胞培養条件下で継代および維持されたＮＫ細胞、ならびに不死化され、細胞培養条件下で無期限に維持され得るＮＫ細胞が含まれる。
本明細書で使用される場合、「ヒトＢ細胞」または「Ｂ細胞」は、ドナー、特にヒトドナーから単離されたＢ細胞を指す。Ｂ細胞およびそれに由来する細胞には、培養で継代されていない単離されたＴ細胞、不死化せずに細胞培養条件下で継代および維持されたＢ細胞、ならびに不死化され、細胞培養条件下で無期限に維持され得るＢ細胞が含まれる。
本明細書で使用される場合、「対照」または「対照細胞」は、遺伝子改変細胞の遺伝子型または表現型の変化を測定するための基準点を提供する細胞を指す。対照細胞は、例えば、（ａ）野生型細胞、すなわち、遺伝子改変細胞をもたらした遺伝子変異のための出発物質と同じ遺伝子型の野生型細胞；（ｂ）遺伝子改変細胞と同じ遺伝子型であるが、ヌル構築物を用いて（すなわち、目的の形質に既知の影響を及ぼさない構築物を用いて）形質転換された細胞；または（ｃ）遺伝子改変細胞と遺伝的に同一であるが、変化した遺伝子型もしくは表現型の発現を誘導する条件もしくは刺激もしくは追加の遺伝子改変に曝露されていない細胞を含み得る。
本明細書で使用される場合、用語「リンパ球」は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｔ細胞またはＢ細胞を含む。
本明細書で使用される場合、用語「リンパ球の集団を枯渇させる」または「リンパ球枯渇」は、対象の内因性リンパ球の減少、例えば、対照と比較して（例えば、治療を受けている対象における開始量と比較して、所定の閾値と比較して、または未治療対象と比較して）、１つ以上のリンパ球（例えば、ＮＫ細胞、Ｔ細胞および／またはＢ細胞）が少なくとも約１％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％または最大１００％減少することを指す。
本明細書で使用される場合、用語「治療」または「対象を治療する」は、疾患を有する対象への本発明の遺伝子改変細胞（例えば、遺伝子改変Ｔ細胞）または遺伝子改変細胞の集団（例えば、遺伝子改変Ｔ細胞の集団）の投与を指す。これらの用語はまた、例えば、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片を含むリンパ球枯渇レジメンの投与を指し得る。例えば、対象は、癌などの疾患を有し得、治療は、疾患を治療するための免疫療法を表すことができる。治療の望ましい効果には、限定するものではないが、疾患の発生または再発の予防、症状の緩和、疾患の何らかの直接的または間接的な病理学的結果の減少、疾患進行の速度の低下、疾患状態の改善または緩和、および寛解、または予後の改善が含まれる。いくつかの態様では、本明細書に記載の遺伝子改変細胞または遺伝子改変細胞の集団は、本発明の医薬組成物の形態で治療中に投与される。
用語「有効量」または「治療有効量」は、有益な、または望ましい生物学的結果および／または臨床的結果をもたらすのに十分な量を指す。治療有効量は、使用される製剤または組成物、疾患およびその重症度、ならびに治療される対象の年齢、体重、体調および応答性に応じて変化する。具体的な実施形態では、本発明の遺伝子改変細胞もしくは遺伝子改変細胞の集団または本明細書に開示される医薬組成物の有効量は、対象の疾患の少なくとも１つの症状を低減する。疾患が癌である実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物の有効量は、癌の増殖もしくは転移のレベルを低下させるか、癌の部分的もしくは完全な応答もしくは寛解を引き起こすか、または対象の癌の少なくとも１つの症状を低減する。
本明細書で使用される場合、用語「有効用量」は、内因性リンパ球の数を減少させるかまたは排除するのに十分な、リンパ球枯渇レジメンの一部として投与される化合物の用量を指す。
本明細書で使用される場合、用語「癌」は、悪性の増殖または腫瘍を引き起こす異常で制御されない細胞分裂を特徴とする任意の新生物性疾患（浸潤性または転移性にかかわらず）を包含すると理解されるべきである。
本明細書で使用される場合、用語「癌腫」は、上皮細胞から構成される悪性の増殖を指す。
本明細書で使用される場合、用語「白血病」は、造血器官／造血系の悪性腫瘍を指し、一般に、血液および骨髄中の白血球およびその前駆体の異常な増殖および発達を特徴とする。
本明細書で使用される場合、用語「肉腫」は、胚性結合組織のような物質から構成され、一般に、線維性の物質、不均一または均一な物質に埋め込まれた密集した細胞から構成される腫瘍を指す。
本明細書で使用される場合、用語「黒色腫」は、皮膚および他の器官のメラニン細胞系から生じる腫瘍を指す。
本明細書で使用される場合、用語「リンパ腫」は、リンパ球から発生する血液細胞腫瘍の群を指す。
本明細書で使用される場合、用語「芽細胞腫」は、前駆細胞または芽球（未成熟または胚性組織）の悪性腫瘍によって引き起こされる癌のタイプを指す。
本明細書で使用される場合、変数に関する数値範囲の列挙は、その範囲内の値のいずれかに等しい変数を用いて本発明が実施され得ることを伝えることを意図している。したがって、本質的に離散的な変数の場合、変数は、範囲の終点を含む、数値範囲内の任意の整数値に等しくなり得る。同様に、本質的に連続的な変数の場合、変数は、範囲の終点を含む、数値範囲内の任意の実数値に等しくなり得る。一例として、限定するものではないが、０～２の値を有すると記載されている変数は、その変数が本質的に離散的である場合、０、１または２の値をとることができ、その変数が本質的に連続的である場合、０．０、０．１、０．０１、０．００１の値、または０以上２以下の任意の他の実数値をとることができる。
２．１ 発明の原理
本明細書では、細胞表面上にＣＤ３を欠くように改変され、１つ以上の目的のポリペプチド（例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または外因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ））を発現する遺伝子改変細胞による治療前または治療中の、それを必要とする対象に対するリンパ球枯渇のための方法および組成物が提供される。したがって、本明細書では、本発明のリンパ球枯渇レジメンを受けた対象に対して本明細書に開示される遺伝子改変細胞を用いて、癌などの疾患を治療するための組成物および方法がさらに提供される。
本発明は、細胞免疫療法（例えば、本明細書に記載の遺伝子改変Ｔ細胞）の細胞表面上には存在しないが宿主リンパ球上で発現される抗原（例えばＣＤ３）に特異的に結合する生物製剤（例えば抗体）の投与が、細胞免疫療法に影響を与えずに宿主免疫細胞の枯渇を助けるという発見に部分的に基づく。リンパ球枯渇のための本組成物および方法は、同種異系細胞免疫療法などの免疫療法の宿主対移植片拒絶の可能性または重症度を低減するのに有用であり、同時に、入ってくる細胞免疫療法薬の拡大も可能にする。
したがって、疾患（例えば癌）の症状または重症度を治療または低減するために、細胞表面上に検出可能なＣＤ３を有さず、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲをコードする外因性ポリヌクレオチドを含む遺伝子改変細胞の集団を投与する方法であって、個体が、対象のリンパ球を枯渇させるのに有効な量の抗ＣＤ３抗体（またはその抗原結合断片）および／またはリンパ球枯渇化学療法剤による治療を以前に、同時に、または後に受ける方法が本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、本発明のリンパ球枯渇レジメンと組み合わせた、本明細書に開示されるキメラ抗原受容体または外因性ＴＣＲを含む遺伝子改変細胞の投与は、宿主細胞、または本開示の遺伝子改変細胞によって標的とされ得る癌などの疾患の症状または重症度を治療または低減する。それを必要とする対象の癌を治療するための免疫療法の方法であって、宿主細胞、または本明細書に開示される遺伝子改変細胞と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を対象に投与することを含む方法も本明細書に開示される。
２．２ 抗ＣＤ３抗体
本発明はさらに、ＣＤ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片（すなわち、抗ＣＤ３抗体）を用いて対象を治療する方法を含む。本明細書に提供される抗ＣＤ３抗体は、本明細書に提供される遺伝子改変細胞の投与前、投与中または投与後にリンパ球枯渇を助けるためにＣＤ３＋細胞を死滅させる方法に有用である。本発明の遺伝子改変細胞は、細胞表面上に検出可能なＣＤ３を有しないため、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞に影響を与えずに内因性宿主リンパ球の枯渇を助け、それによって、宿主対移植片拒絶の可能性を低減し、対象に投与された遺伝子改変細胞の細胞増殖を促進することができる。
抗ＣＤ３抗体には、ＣＤ３ポリペプチド、例えばヒトＣＤ３ポリペプチドに特異的に結合する抗体およびその抗原結合断片が含まれる。ＣＤ３ Ｔ細胞共受容体は、ＣＤ３γ鎖と、ＣＤ３δ鎖と、２つのＣＤ３ε鎖とを含むタンパク質複合体からなる。抗ＣＤ３抗体は、ＣＤ３ポリペプチド上の任意のドメインまたは領域上のエピトープに結合することができる。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書の抗ＣＤ３抗体は、ＣＤ３δ、ＣＤ３εおよび／またはＣＤ３γに特異的に結合し得る。
抗ＣＤ３抗体は、ＣＤ３に特異的に結合する任意の抗体であり得る。ＣＤ３抗体は、動物（例えば齧歯類）起源もしくはヒト起源のものであり得るか、または部分的もしくは完全にヒト化された抗体であり得る。限定するものではないが、ムロモナブ－ＣＤ３（Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ ＯＫＴ３（商標））、オテリキシズマブ、テプリズマブ、フォラルマブ（ｆｏｒａｌｕｍａｂ）（例えば、国際公開第２０１８０４４９４８号パンフレットを参照）、Ｒｅｓｉｍｍｕｎｅ（登録商標）（Ａｎｇｉｍｍｕｎｅ ＬＬＣ）またはビシリズマブを含むいくつかの抗ＣＤ３抗体が知られている。いくつかの実施形態では、抗体は、ムロモナブ－ＣＤ３、オテリキシズマブ、テプリズマブ、フォラルマブ、Ｒｅｓｉｍｍｕｎｅ（登録商標）またはビシリズマブのうちの１つ以上と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％相同である。
抗ＣＤ３抗体およびその抗原結合断片のためのいくつかの製剤、用量および投与スケジュールは、当技術分野で公知であり、本発明の方法に有用である。例えば、ムロモナブ－ＣＤ３（Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ ＯＫＴ３）のいくつかの製剤および投与スケジュールは、例えば、ＮＣＴ０１２８７１９５、ＮＣＴ０１２０５０８７、ＮＣＴ００６１９３７２、ＮＣＴ０００２７４４３、ＮＣＴ００４５０９８３およびＮＣＴ００００４４８２の識別子の下にｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖで提供されるプロトコルに、ならびに例えば、Ｗｉｌｄｅ ａｎｄ Ｇｏａ，Ｄｒｕｇｓ（１９９６）Ｖｏｌ．５１（５）：８６５－８９４に見出され得る。
本発明の方法に有用なオテリキシズマブのいくつかの製剤、用量および投与スケジュールは、例えば、ＮＣＴ０１２２２０７８、ＮＣＴ０２０００８１７、ＮＣＴ００９４６２５７、ＮＣＴ０１０７７５３１、ＮＣＴ０１１１４５０３、ＮＣＴ００４５１３２１、ＮＣＴ０１１２３０８３およびＮＣＴ００６７８８８６の識別子の下にｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖで提供されるプロトコルに、ならびに例えば、Ａｒｏｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ（２０１４）Ｖｏｌ．３７（１０）：２７４６－２７５４に見出され得る。
本発明の方法に有用なテプリズマブのいくつかの製剤、用量および投与スケジュールは、例えば、ＮＣＴ０４２７０９４２、ＮＣＴ００９５４９１５、ＮＣＴ０１０３０８６１、ＮＣＴ０３８７５７２９、ＮＣＴ０３７５１００７、ＮＣＴ００３７８５０８、ＮＣＴ０１１８９４２２、ＮＣＴ００９２０５８２、ＮＣＴ００８７０８１８およびＮＣＴ００３８５６９７の識別子の下にｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖで提供されるプロトコルに見出され得る。
本発明の方法に有用なフォラルマブのいくつかの製剤、用量および投与スケジュールは、例えば、ＮＣＴ０３２９１２４９の識別子の下にｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖで提供されるプロトコルに、ならびに国際特許公開第ＷＯ２００５１１８６３５号パンフレットおよび国際特許公開第ＷＯ２０１８０４４９４８号パンフレットに見出され得る。
本発明の方法に有用なＲｅｓｉｍｍｕｎｅ（登録商標）のいくつかの製剤、用量および投与スケジュールは、例えば、ＮＣＴ０２９４３６４２、ＮＣＴ００６１１２０８、ＮＣＴ０２９９０４１６およびＮＣＴ０１８８８０８１の識別子の下にｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖで提供されるプロトコルに、ならびに国際特許公開第ＷＯ２０１３１５８２５６号パンフレットおよび米国特許第７６９６３３８号明細書および米国特許第８２１７１５８号明細書に見出され得る。
本発明の方法に有用なビシリズマブのいくつかの製剤、用量および投与スケジュールは、例えば、ＮＣＴ００３０７８２７、ＮＣＴ００２６７３０６、ＮＣＴ００２７９４３５、ＮＣＴ００２７９４２２、ＮＣＴ００２６７７０９、ＮＣＴ００２６７７２２、ＮＣＴ００３５５９０１、ＮＣＴ００７２０６２９、ＮＣＴ００５０２２９４、ＮＣＴ０００３２２９２、ＮＣＴ０００３２２７９、ＮＣＴ０００３２３０５およびＮＣＴ００００６００９の識別子の下にｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖで提供されるプロトコルに見出され得る。
例示的な実施形態では、ＣＤ３ポリペプチドに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。一実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、本明細書に記載の抗ＣＤ３抗体の重鎖と、本明細書に記載の抗ＣＤ３抗体の軽鎖可変領域とを含む。一実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、本明細書に記載の抗ＣＤ３抗体のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖と、本明細書に記載の抗ＣＤ３抗体のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む。別の実施形態では、抗ＣＤ３抗体はＩｇＧ抗体である。別の実施形態では、抗ＣＤ３抗体はＩｇＧ１抗体である。別の実施形態では、抗ＣＤ３抗体はＩｇＧ２ａ抗体である。別の実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、Ｆｃ受容体または補体に結合しない重鎖Ｆｃ領域を含む。
別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、本明細書の抗ＣＤ３抗体に対して少なくとも９５％の同一性、例えば、本明細書の抗ＣＤ３抗体に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。一定の実施形態では、抗体は、本明細書の抗ＣＤ３抗体またはその変異体のＨＣ可変ドメインを含む改変された重鎖（ＨＣ）可変領域を含み、この変異体は、（ｉ）１、２、３、４または５個のアミノ酸の置換、付加または欠失が抗ＣＤ３抗体と異なり、（ｉｉ）最大５、４、３、２または１個のアミノ酸の置換、付加または欠失が抗ＣＤ３抗体と異なり、（ｉｉｉ）１～５、１～３、１～２、２～５または３～５個のアミノ酸の置換、付加または欠失が抗ＣＤ３抗体と異なり、および／または（ｉｖ）抗ＣＤ３抗体に対して少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｉ）～（ｉｖ）のいずれかでは、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換または非保存的アミノ酸置換であり得る。
２．３ 追加のリンパ球枯渇剤
本発明はさらに、追加のリンパ球枯渇剤（例えば、リンパ球枯渇のための化学療法剤）を含む組成物、および本明細書に提供される遺伝子改変細胞の投与前に追加のリンパ球枯渇剤を用いて対象を治療する方法を含む。追加のリンパ球枯渇剤（例えば、リンパ球枯渇のための化学療法剤、例えば、シクロホスファミドおよび／またはフルダラビン）による細胞療法の前の患者の前処置またはプレコンディショニングは、対象の内因性宿主リンパ球の数を減少させることによって細胞療法の効果を改善し、それによって、投与された細胞が、対象に投与された後に増殖するためのさらに最適な環境を提供する。いくつかの実施形態では、１、２、３、４つまたはそれ以上の追加のリンパ球枯渇剤が、本明細書に記載の方法に従って抗ＣＤ３抗体と組み合わされ得る。
本方法による抗ＣＤ３抗体とともに、いくつかの追加のリンパ球枯渇剤を使用することができる。いくつかの実施形態では、追加のリンパ球枯渇剤は、リンパ球枯渇性であるが骨髄破壊性ではない。抗ＣＤ３抗体とともに使用するのに適した例示的かつ非限定的な追加のリンパ球枯渇剤には、リンパ球枯渇化学療法剤、例えば、シクロホスファミド、ベンダムスチン、フルダラビン、メルファラン、６－メルカプトプリン（６－ＭＰ）、ダウノルビシン、シタラビン、Ｌ－アスパラギナーゼ、メトトレキセート、プレドニゾン、デキサメタゾン、ネララビン、ならびに追加のリンパ球枯渇抗体、例えば、抗ＣＤ５２抗体（例えばＣＡＭＰＡＴＨ）およびリツキシマブおよびそれらの組合せが含まれる。
いくつかの実施形態では、追加のリンパ球枯渇剤は、リンパ球枯渇抗体および／またはリンパ球枯渇化学療法剤である。いくつかの実施形態では、追加のリンパ球枯渇剤はリンパ球枯渇化学療法剤である。いくつかの実施形態では、追加のリンパ球枯渇剤はリンパ球枯渇抗体である。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇化学療法剤は、シクロホスファミドまたはフルダラビンである。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇化学療法剤はフルダラビンである。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇化学療法剤はシクロホスファミドである。一定の実施形態では、本明細書の方法は、リンパ球枯渇化学療法剤の組合せ、例えば、フルダラビンとシクロホスファミドとの組合せを投与することを含む。いくつかの実施形態では、対象は、本明細書に記載の投与スケジュールに従って、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片、フルダラビンおよびシクロホスファミドの組合せによって治療される。
２．４ リンパ球枯渇の方法
本開示は、本明細書に提供される遺伝子改変細胞（例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または外因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するように改変され、細胞表面上のＣＤ３または内因性ＴＣＲを欠くように改変された細胞）の投与前または投与中に、リンパ球枯渇化学療法剤および／またはＣＤ３に特異的に結合する抗体（すなわち、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片）を使用してリンパ球の集団を枯渇させる方法を提供する。本発明のリンパ球枯渇方法は、遺伝子改変細胞の宿主対移植片拒絶の可能性または重症度を低減するのに有用であり、同時に、入ってくる細胞の増殖も可能にする。
追加のリンパ球枯渇剤（例えばリンパ球枯渇化学療法剤）および／または抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片は、遺伝子改変細胞の投与前の対照と比較して（例えば、治療を受けている対象における開始量と比較して、所定の閾値と比較して、または未治療対象と比較して）、例えば、１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上だけ対象のリンパ球を枯渇させるか、または対象のリンパ球の量を減少させるのに有効な量で投与され得る。リンパ球数の減少は、当技術分野で公知の従来の技術を使用して、例えば、抗体による治療中に様々な間隔で対象から採取した血液試料中の特徴的なリンパ球細胞表面抗原を発現する細胞のフローサイトメトリー分析によってモニタリングされ得る。いくつかの実施形態によれば、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片および／または追加のリンパ球枯渇剤（例えばリンパ球枯渇化学療法剤）によるリンパ球枯渇療法に応答してリンパ球の濃度が最小値に達した場合、医師は、リンパ球枯渇療法を終了してもよく、本明細書に提供される遺伝子改変細胞の投与のために対象の準備を開始してもよい。一定の実施形態では、本明細書に提供される遺伝子改変細胞は、細胞表面上に検出可能なレベルのＣＤ３を有しないため、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の初回投与中または初回投与後に１回以上代替的または追加的に投与され得る。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片は、対象のＣＤ３＋リンパ球を減少させるのに適した投与量で対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約１５０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約２．５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約１．０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１．０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約０．５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約０．５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約０．０５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００５、約０．０１、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．１、約１ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ、約１１０ｍｇ／ｋｇ、約１２０ｍｇ／ｋｇ、約１３０ｍｇ／ｋｇ、約１４０ｍｇ／ｋｇまたは約１５０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約０．００１ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約０．００５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約０．１ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約０．５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約１ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約２．５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約１０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約１５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約２０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約２５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約３０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約３５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約４０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約４５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約５０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約６０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約７０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約８０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約９０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約１００ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約１１０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約１２０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約１３０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約１４０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約１５０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約０．１ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約０．２５ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約０．５ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約０．７５ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約１ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約２．５ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約５ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約７．５ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約１０ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約１５ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約２０ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約２５ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約３０ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約３５ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約４０ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約４５ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約５０ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約７５ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約１００ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約２００ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約３００ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約４００ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約５００ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約６００ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約７００ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約８００ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約９００ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約１０００ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約２０００ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約３０００ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約４０００ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約５０００ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約６０００ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約７０００ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約８０００ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約９０００ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の投与量は、約１００００ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、対象への遺伝子改変細胞の投与前、投与中または投与後に投与される。
抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片は、対象のリンパ球を枯渇させるのに有効な時点で対象に投与され得る。例えば、いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片は、遺伝子改変細胞の投与の１時間前～１ヶ月前またはそれ以上前に対象に投与される。したがって、いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１時間前、２時間前、３時間前、４時間前、５時間前、６時間前、７時間前、８時間前、９時間前、１０時間前、１１時間前、１２時間前、１３時間前、１４時間前、１５時間前、１６時間前、１７時間前、１８時間前、１９時間前、２０時間前、２１時間前、２２時間前、２３時間前、２４時間前、１日前、２日前、３日前、４日前、５日前、６日前、７日前、８日前、９日前、１０日前、１１日前、１２日前、１３日前、１４日前、１５日前、１６日前、１７日前、１８日前、１９日前、２０日前、２１日前、２２日前、２３日前、２４日前、２５日前、２６日前、２７日前、２８日前、２９日前もしくは３０日前またはそれ以上前に投与される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１４日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１３日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１２日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１１日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１０日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の９日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の８日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の７日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の６日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の５日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の４日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の３日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１日前に投与される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１４日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１３日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１２日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１１日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１０日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の９日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の８日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の７日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の６日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の５日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の４日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の３日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２日前に投与される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１４日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１３日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１２日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１１日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１０日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の９日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の８日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の７日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の６日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の５日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の４日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の３日前に投与される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１４日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１３日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１２日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１１日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１０日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の９日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の８日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の７日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の６日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の５日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の４日前に投与される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１３日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１１日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の９日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の７日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の５日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の３日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで隔日投与される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１３日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１１日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の９日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の７日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の５日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日前まで隔日投与される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１４日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１２日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１０日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の８日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の６日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の４日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで隔日投与される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１４日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１２日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１０日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の８日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の６日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日前まで隔日投与される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片は、遺伝子改変細胞の投与と同時に対象に投与される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片は、遺伝子改変細胞の投与の１時間後～１ヶ月後またはそれ以上後に対象に投与される。したがって、いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１時間後、２時間後、３時間後、４時間後、５時間後、６時間後、７時間後、８時間後、９時間後、１０時間後、１１時間後、１２時間後、１３時間後、１４時間後、１５時間後、１６時間後、１７時間後、１８時間後、１９時間後、２０時間後、２１時間後、２２時間後、２３時間後、２４時間後、１日後、２日後、３日後、４日後、５日後、６日後、７日後、８日後、９日後、１０日後、１１日後、１２日後、１３日後、１４日後、１５日後、１６日後、１７日後、１８日後、１９日後、２０日後、２１日後、２２日後、２３日後、２４日後、２５日後、２６日後、２７日後、２８日後、２９日後もしくは３０日後またはそれ以上後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与前および遺伝子改変細胞の投与後に、前述の期間のいずれかにわたって投与される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与前に投与され、遺伝子改変細胞の投与後に継続される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１時間後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１２時間後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１日後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２日後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の３日後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の４日後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の５日後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の６日後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の７日後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の８日後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の９日後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１０日後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１１日後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１２日後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１３日後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１４日後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１５日後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１６日後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１７日後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１８日後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１９日後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２０日後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２１日後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２２日後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２３日後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２４日後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２５日後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２６日後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２７日後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２８日後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２９日後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の３０日後に投与される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後に連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後に隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後３日ごとに投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後４日ごとに投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後５日ごとに投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後６日ごとに投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後７日ごとに投与される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与と同じ日に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与と同じ日に開始して遺伝子改変細胞の投与の１日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与と同じ日に開始して遺伝子改変細胞の投与の２日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与と同じ日に開始して遺伝子改変細胞の投与の３日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与と同じ日に開始して遺伝子改変細胞の投与の４日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与と同じ日に開始して遺伝子改変細胞の投与の５日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与と同じ日に開始して遺伝子改変細胞の投与の６日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与と同じ日に開始して遺伝子改変細胞の投与の７日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与と同じ日に開始して遺伝子改変細胞の投与の８日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与と同じ日に開始して遺伝子改変細胞の投与の９日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与と同じ日に開始して遺伝子改変細胞の投与の１０日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与と同じ日に開始して遺伝子改変細胞の投与の１１日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与と同じ日に開始して遺伝子改変細胞の投与の１２日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与と同じ日に開始して遺伝子改変細胞の投与の１３日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与と同じ日に開始して遺伝子改変細胞の投与の１４日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与と同じ日に開始して遺伝子改変細胞の投与の１４日超後まで連日投与される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の５日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の６日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の７日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の８日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の９日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の１０日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の１１日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の１２日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の１３日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の１４日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の１４日超後まで連日投与される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の５日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の６日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の７日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の８日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の９日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の１０日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の１１日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の１２日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の１３日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の１４日後まで連日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の１４日超後まで連日投与される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与と同じ日に開始して遺伝子改変細胞の投与の２日後まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与と同じ日に開始して遺伝子改変細胞の投与の４日後まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与と同じ日に開始して遺伝子改変細胞の投与の６日後まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与と同じ日に開始して遺伝子改変細胞の投与の８日後まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与と同じ日に開始して遺伝子改変細胞の投与の１０日後まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与と同じ日に開始して遺伝子改変細胞の投与の１２日後まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与と同じ日に開始して遺伝子改変細胞の投与の１４日後まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与と同じ日に開始して遺伝子改変細胞の投与の１４日超後まで隔日投与される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１日後に開始して遺伝子改変細胞の投与の３日後まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１日後に開始して遺伝子改変細胞の投与の５日後まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１日後に開始して遺伝子改変細胞の投与の７日後まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１日後に開始して遺伝子改変細胞の投与の９日後まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の１１日後まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の１３日後まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の１５日後まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の１日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の１５日超後まで隔日投与される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日後まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の６日後まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の８日後まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の１０日後まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の１２日後まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の１４日後まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与の２日後から開始して遺伝子改変細胞の投与の１４日超後まで隔日投与される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後、例えば、対照と比較して１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上だけ対象の宿主リンパ球を枯渇させるか、対象の宿主リンパ球を減少させるか、または対象の宿主リンパ球の量の減少を維持するのに必要な期間にわたって投与され続ける。したがって、いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後１日にわたって投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後２日間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後３日間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後４日間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後５日間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後６日間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後７日間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後８日間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後９日間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後１０日間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後１１日間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後１２日間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後１３日間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後１４日間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後１５日間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後１６日間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後１７日間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後１８日間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後１９日間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後２０日間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後２１日間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後２２日間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後２３日間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後２４日間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後２５日間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後２６日間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後２７日間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後２８日間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後２９日間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後３０日間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後１ヶ月間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後２ヶ月間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後３ヶ月間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後４ヶ月間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後５ヶ月間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後６ヶ月間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後７ヶ月間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後８ヶ月間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後９ヶ月間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後１０ヶ月間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後１１ヶ月間投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、遺伝子改変細胞の投与後１２ヶ月間投与される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体の個々の投与量は、１日当たり１回、２回、３回、４回またはそれ以上対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、１日当たり１回対象に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、１日当たり２回対象に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、１日当たり３回対象に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、１日当たり４回対象に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、対象に連続投与される。
リンパ球枯渇を達成するために、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片は、単独で、または本明細書に記載の追加のリンパ球枯渇剤（例えば、リンパ球枯渇化学療法剤、例えば、フルダラビンおよびシクロホスファミド）と組み合わせて投与され得る。いくつかの実施形態では、１、２、３、４またはそれ以上の追加のリンパ球枯渇剤が、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片を含むリンパ球枯渇レジメンで投与され得る。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片は、追加のリンパ球枯渇剤（例えばリンパ球枯渇化学療法剤）の投与前に投与される。例えば、いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片は、追加のリンパ球枯渇剤（例えばリンパ球枯渇化学療法剤）の投与の１時間前～１ヶ月前またはそれ以上前に投与される。例えば、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片は、追加のリンパ球枯渇剤の投与の１時間前、２時間前、３時間前、４時間前、５時間前、６時間前、７時間前、８時間前、９時間前、１０時間前、１１時間前、１２時間前、１３時間前、１４時間前、１５時間前、１６時間前、１７時間前、１８時間前、１９時間前、２０時間前、２１時間前、２２時間前、２３時間前、２４時間前、１日前、２日前、３日前、４日前、５日前、６日前、７日前、８日前、９日前、１０日前、１１日前、１２日前、１３日前、１４日前、１５日前、１６日前、１７日前、１８日前、１９日前、２０日前、２１日前、２２日前、２３日前、２４日前、２５日前、２６日前、２７日前、２８日前、２９日前もしくは３０日前またはそれ以上前に投与され得る。
他の実施形態では、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片は、追加のリンパ球枯渇剤（例えばリンパ球枯渇化学療法剤）の投与後に投与される。例えば、いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片は、追加のリンパ球枯渇剤の投与の１時間後～１ヶ月後またはそれ以上後（例えば、１時間後、２時間後、３時間後、４時間後、５時間後、６時間後、７時間後、８時間後、９時間後、１０時間後、１１時間後、１２時間後、１３時間後、１４時間後、１５時間後、１６時間後、１７時間後、１８時間後、１９時間後、２０時間後、２１時間後、２２時間後、２３時間後、２４時間後、１日後、２日後、３日後、４日後、５日後、６日後、７日後、８日後、９日後、１０日後、１１日後、１２日後、１３日後、１４日後、１５日後、１６日後、１７日後、１８日後、１９日後、２０日後、２１日後、２２日後、２３日後、２４日後、２５日後、２６日後、２７日後、２８日後、２９日後もしくは３０日後またはそれ以上後）に投与される。
他の実施形態では、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片は、追加のリンパ球枯渇剤（例えばリンパ球枯渇化学療法剤）と組み合わせて投与される。すなわち、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片は、追加のリンパ球枯渇剤と同時に投与される。
本明細書に提供される遺伝子改変細胞の投与前にリンパ球枯渇を促進するために、遺伝子改変細胞の投与前に追加のリンパ球枯渇剤（例えばリンパ球枯渇化学療法剤）を対象に投与してもよい。例えば、リンパ球枯渇剤（例えばリンパ球枯渇化学療法剤）は、遺伝子改変細胞の投与の１日前～１ヶ月前（例えば、１日前、２日前、３日前、４日前、５日前、６日前、７日前、８日前、９日前、１０日前、１１日前、１２日前、１３日前、１４日前、１５日前、１６日前、１７日前、１８日前、１９日前、２０日前、２１日前、２２日前、２３日前、２４日前、２５日前、２６日前、２７日前、２８日前、２９日前または３０日前）に投与され得る。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇化学療法剤は、遺伝子改変細胞の投与の３日以上前に対象に投与される。一定の実施形態では、リンパ球枯渇化学療法剤の投与は、遺伝子改変細胞の投与の少なくとも１～２日前に終了する。
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇化学療法剤は、連続する８日間の各々に１日当たりの単回用量として、連続する７日間の各々に１日当たりの単回用量として、連続する６日間の各々に１日当たりの単回用量として、連続する５日間の各々に１日当たりの単回用量として、連続する４日間の各々に１日当たりの単回用量として、連続する３日間の各々に１日当たりの単回用量として、連続する２日間の各々に１日当たりの単回用量として、または１日に単回用量として投与され得る。
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の１４日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の１３日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の１２日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の１１日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の１０日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の９日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の８日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の７日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の６日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の５日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の４日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の３日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の２日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の１日前に投与される。
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の１４日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の１３日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の１２日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の１１日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の１０日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の９日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の８日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の７日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の６日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の５日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の４日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の３日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の２日前に投与される。
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の１４日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の１３日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の１２日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の１１日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の１０日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の９日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の８日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の７日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の６日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の５日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の４日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の３日前に投与される。
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の１４日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の１３日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の１２日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の１１日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の１０日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の９日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の８日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の７日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の６日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の５日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日前まで連日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の４日前に投与される。
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の１３日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の１１日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の９日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の７日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の５日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の３日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の１日前まで隔日投与される。
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の１３日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の１１日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の９日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の７日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の５日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の３日前まで隔日投与される。
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の１４日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の１２日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の１０日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の８日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の６日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の４日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の２日前まで隔日投与される。
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の１４日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の１２日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の１０日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の８日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日前まで隔日投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇剤は、遺伝子改変細胞の投与の６日前から開始して遺伝子改変細胞の投与の４日前まで隔日投与される。
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇化学療法剤はシクロホスファミドであり、シクロホスファミドは、連続する５日間の各々に１日当たりの単回用量として、連続する４日間の各々に１日当たりの単回用量として、連続する３日間の各々に１日当たりの単回用量として、連続する２日間の各々に１日当たりの単回用量として、または１日に単回用量として投与される。一定の実施形態では、シクロホスファミドは、連続する３日間にわたり１日当たり一用量として、または連続する２日間にわたり１日当たり一用量として投与される。一定の実施形態では、シクロホスファミドの投与は、遺伝子改変細胞の投与の少なくとも１～３日前に終了する。
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇化学療法剤はフルダラビンであり、フルダラビンは、連続する５日間の各々に１日当たりの単回用量として、連続する４日間の各々に１日当たりの単回用量として、連続する３日間の各々に１日当たりの単回用量として、連続する２日間の各々に１日当たりの単回用量として、または１日に単回用量として投与される。他の実施形態では、フルダラビンは、連続する５日間にわたり１日当たり一用量として、または連続する３日間にわたり１日当たり一用量として投与される。一定の実施形態では、フルダラビンの投与は、遺伝子改変細胞の投与の少なくとも１～２日前に終了する。
いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、遺伝子改変細胞を含む組成物の投与の５日前から開始して３日前まで連日対象に投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、遺伝子改変細胞を含む組成物の投与の５日前から開始して２日前まで連日対象に投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、遺伝子改変細胞を含む組成物の投与の４日前から開始して３日前まで連日対象に投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、遺伝子改変細胞を含む組成物の投与の４日前から開始して２日前まで連日対象に投与される。
特定の実施形態では、フルダラビンは、遺伝子改変細胞を含む組成物の投与の５日前から開始して３日前まで連日対象に投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビンは、遺伝子改変細胞を含む組成物の投与の５日前から開始して２日前まで連日対象に投与される。他の特定の実施形態では、フルダラビンは、遺伝子改変細胞を含む組成物の投与の７日前から開始して３日前まで連日対象に投与される。他の特定の実施形態では、フルダラビンは、遺伝子改変細胞を含む組成物の投与の７日前から開始して２日前まで連日対象に投与される。
一定の実施形態では、シクロホスファミドは、遺伝子改変細胞を含む組成物の投与の５日前から開始して３日前まで連日対象に投与され、フルダラビンは、遺伝子改変細胞を含む組成物の投与の５日前から開始して３日前まで連日対象に投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、遺伝子改変細胞を含む組成物の投与の５日前から開始して２日前まで連日対象に投与され、フルダラビンは、遺伝子改変細胞を含む組成物の投与の５日前から開始して２日前まで連日対象に投与される。
他の実施形態では、シクロホスファミドは、遺伝子改変細胞を含む組成物の投与の４日前から開始して３日前まで連日対象に投与され、フルダラビンは、遺伝子改変細胞を含む組成物の投与の７日前から開始して３日前まで連日ある用量で対象に投与される。他の実施形態では、シクロホスファミドは、遺伝子改変細胞を含む組成物の投与の４日前から開始して２日前まで連日対象に投与され、フルダラビンは、遺伝子改変細胞を含む組成物の投与の７日前から開始して２日前まで連日ある用量で対象に投与される。
いくつかの実施形態では、追加のリンパ球枯渇化学療法剤はメルファランである。メルファランの好適な投与は、当技術分野で公知である。メルファランは、単回用量当たり約１ｍｇ／日～約３０ｍｇ／日の量で投与され得る（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標）（ＮＤＡ）の処方情報を参照）。各個々の投与量は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、１ヶ月またはそれ以上にわたって１日に１、２、３、４回またはそれ以上投与され得る。各個々の投与量は、２日ごと、３日ごと、４日ごと、５日ごと、６日ごと、１週間ごと、２週間ごと、３週間ごと、１ヶ月ごとまたはそれ以上ごとに繰り返され得る。
いくつかの実施形態では、追加のリンパ球枯渇化学療法剤はベンダムスチンである。ベンダムスチンの好適な投与は、当技術分野で公知である。ベンダムスチンは、約１０ｍｇ／ｍ２／日～約２００ｍｇ／ｍ２／日の量で投与され得る（ベンダムスチンの処方情報を参照）。各個々の投与量は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、１ヶ月またはそれ以上にわたって１日に１、２、３、４回またはそれ以上投与され得る。各個々の投与量は、２日ごと、３日ごと、４日ごと、５日ごと、６日ごと、１週間ごと、２週間ごと、３週間ごと、１ヶ月ごとまたはそれ以上ごとに繰り返され得る。
いくつかの実施形態では、追加のリンパ球枯渇化学療法剤はメルカプトプリンである。メルカプトプリンの好適な投与は、当技術分野で公知である。メルカプトプリンは、約０．５～約５ｍｇ／ｋｇ／日の量で投与され得る（Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（登録商標）の処方情報を参照）。各個々の投与量は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、１ヶ月またはそれ以上にわたって１日に１、２、３、４回またはそれ以上投与され得る。各個々の投与量は、２日ごと、３日ごと、４日ごと、５日ごと、６日ごと、１週間ごと、２週間ごと、３週間ごと、１ヶ月ごとまたはそれ以上ごとに繰り返され得る。
いくつかの実施形態では、追加のリンパ球枯渇化学療法剤はダウノルビシンである。ダウノルビシンの好適な投与は、当技術分野で公知である。ダウノルビシンは、約１０～約５００ｍｇ／ｍ２／日の量で投与され得る（ダウノルビシンの処方情報を参照）。各個々の投与量は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、１ヶ月またはそれ以上にわたって１日に１、２、３、４回またはそれ以上投与され得る。各個々の投与量は、２日ごと、３日ごと、４日ごと、５日ごと、６日ごと、１週間ごと、２週間ごと、３週間ごと、１ヶ月ごとまたはそれ以上ごとに繰り返され得る。
いくつかの実施形態では、追加のリンパ球枯渇化学療法剤はシタラビンである。シタラビンの好適な投与は、当技術分野で公知である（ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標）の処方情報を参照）。シタラビンは、約１ｍｇ／日～約１００ｍｇ／日の量で投与され得る。各個々の投与量は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、１ヶ月またはそれ以上にわたって連続して１日に１、２、３、４回またはそれ以上投与され得る。各個々の投与量は、２日ごと、３日ごと、４日ごと、５日ごと、６日ごと、１週間ごと、２週間ごと、３週間ごと、１ヶ月ごとまたはそれ以上ごとに繰り返され得る。
いくつかの実施形態では、追加のリンパ球枯渇化学療法剤はＬ－アスパラギナーゼである。Ｌ－アスパラギナーゼの好適な投与は、当技術分野で公知である（Ｅｌｓｐａｒ（登録商標）の処方情報を参照）。Ｌ－アスパラギナーゼは、約１００Ｉ．Ｕ．／ｋｇ／日～約１，５００Ｉ．Ｕ．／ｋｇ／日の量で投与され得る。各個々の投与量は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、１ヶ月またはそれ以上にわたって１日に１、２、３、４回またはそれ以上投与され得る。各個々の投与量は、２日ごと、３日ごと、４日ごと、５日ごと、６日ごと、１週間ごと、２週間ごと、３週間ごと、１ヶ月ごとまたはそれ以上ごとに繰り返され得る。
いくつかの実施形態では、追加のリンパ球枯渇化学療法剤はメトトレキセートである。メトトレキセートの好適な投与は、当技術分野で公知である（メトトレキセートの処方情報を参照）。メトトレキセートは、約１ｍｇ／ｍ２／日～約１０ｍｇ／ｍ２／日の量で投与され得る。各個々の投与量は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、１ヶ月またはそれ以上にわたって１日に１、２、３、４回またはそれ以上投与され得る。各個々の投与量は、２日ごと、３日ごと、４日ごと、５日ごと、６日ごと、１週間ごと、２週間ごと、３週間ごと、１ヶ月ごとまたはそれ以上ごとに繰り返され得る。
いくつかの実施形態では、追加のリンパ球枯渇化学療法剤は、プレドニゾロンまたはプレドニゾンである。メトトレキセートの好適な投与は、当技術分野で公知である（Ｐｒａｐｒｅｄ ＯＤＴ（登録商標）の処方情報を参照）。プレドニゾロンまたはプレドニゾンは、約１ｍｇ／日～約１００ｍｇ／日の量で投与され得る。各個々の投与量は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、１ヶ月またはそれ以上にわたって１日に１、２、３、４回またはそれ以上投与され得る。各個々の投与量は、２日ごと、３日ごと、４日ごと、５日ごと、６日ごと、１週間ごと、２週間ごと、３週間ごと、１ヶ月ごとまたはそれ以上ごとに繰り返され得る。
いくつかの実施形態では、追加のリンパ球枯渇化学療法剤は、プレドニゾロンまたはプレドニゾンである。プレドニゾロンまたはプレドニゾンの好適な投与は、当技術分野で公知である（Ｏｐｒａｐｒｅｄ ＯＤＴ（登録商標）の処方情報を参照）。プレドニゾロンまたはプレドニゾンは、約１ｍｇ／日～約１００ｍｇ／日の量で投与され得る。各個々の投与量は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、１ヶ月またはそれ以上にわたって１日に１、２、３、４回またはそれ以上投与され得る。各個々の投与量は、２日ごと、３日ごと、４日ごと、５日ごと、６日ごと、１週間ごと、２週間ごと、３週間ごと、１ヶ月ごとまたはそれ以上ごとに繰り返され得る。
いくつかの実施形態では、追加のリンパ球枯渇化学療法剤はネララビンである。ネララビンの好適な投与は、当技術分野で公知である（ＡＲＲＡＮＯＮ（登録商標）の処方情報を参照）。ネララビンは、約５００ｍｇ／ｍ２／日～約２０００ｍｇ／ｍ２／日の量で投与され得る。各個々の投与量は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、１ヶ月またはそれ以上にわたって１日に１、２、３、４回またはそれ以上投与され得る。各個々の投与量は、２日ごと、３日ごと、４日ごと、５日ごと、６日ごと、１週間ごと、２週間ごと、３週間ごと、１ヶ月ごとまたはそれ以上ごとに繰り返され得る。
いくつかの実施形態では、追加のリンパ球枯渇剤はリツキシマブである。リツキシマブの好適な投与は、当技術分野で公知である（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）の処方情報を参照）。リツキシマブは、約１００ｍｇ／ｍ２／日～約３０００ｍｇ／ｍ２／日の量で投与され得る。各個々の投与量は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、１ヶ月またはそれ以上にわたって１日に１、２、３、４回またはそれ以上投与され得る。各個々の投与量は、２日ごと、３日ごと、４日ごと、５日ごと、６日ごと、１週間ごと、２週間ごと、３週間ごと、１ヶ月ごとまたはそれ以上ごとに繰り返され得る。
いくつかの実施形態では、追加のリンパ球枯渇剤はアレムツズマブである。アレムツズマブの好適な投与は、当技術分野で公知である（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標）の処方情報を参照）。アレムツズマブは、約１ｍｇ／日～約３０ｍｇ／日の量で投与され得る。各個々の投与量は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、１ヶ月またはそれ以上にわたって１日に１、２、３、４回またはそれ以上投与され得る。各個々の投与量は、２日ごと、３日ごと、４日ごと、５日ごと、６日ごと、１週間ごと、２週間ごと、３週間ごと、１ヶ月ごとまたはそれ以上ごとに繰り返され得る。
本発明では、リンパ球枯渇化学療法剤の用量は、所望の効果に応じて、例えば、内因性リンパ球の減少を調節し、および／または有害事象の重症度を制御するために調整され得る。
例えば、リンパ球枯渇化学療法剤がシクロホスファミドである実施形態では、シクロホスファミドの用量は、約２５０ｍｇ／ｍ２／日超および約１５００ｍｇ／ｍ２／日未満であり得る。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドの用量は、約２５０～１５００ｍｇ／ｍ２／日、約３００～１５００ｍｇ／ｍ２／日、約３５０～１５００ｍｇ／ｍ２／日、約４００～１５００ｍｇ／ｍ２／日、約４５０～１５００ｍｇ／ｍ２／日、約５００～１５００ｍｇ／ｍ２／日、約５５０～１５００ｍｇ／ｍ２／日または約６００～１５００ｍｇ／ｍ２／日である。別の実施形態では、シクロホスファミドの用量は、約２５０～１５００ｍｇ／ｍ２／日、約３５０～１０００ｍｇ／ｍ２／日、約４００～９００ｍｇ／ｍ２／日、約４５０～８００ｍｇ／ｍ２／日、約４５０～７００ｍｇ／ｍ２／日、約４５０～６００ｍｇ／ｍ２／日または約４５０～５５０ｍｇ／ｍ２／日である。一定の実施形態では、シクロホスファミドの用量は、約２５０ｍｇ／ｍ２／日、約３５０ｍｇ／ｍ２／日、約４００ｍｇ／ｍ２／日、約４５０ｍｇ／ｍ２／日、約５００ｍｇ／ｍ２／日、約５５０ｍｇ／ｍ２／日、約６００ｍｇ／ｍ２／日、約６５０ｍｇ／ｍ２／日、約７００ｍｇ／ｍ２／日、約８００ｍｇ／ｍ２／日、約９００ｍｇ／ｍ２／日または約１０００ｍｇ／ｍ２／日である。特定の一実施形態では、シクロホスファミドの用量は、約５００ｍｇ／ｍ２／日である。特定の一実施形態では、シクロホスファミドの用量は、約１０００ｍｇ／ｍ２／日である。
本発明では、フルダラビンの用量も、所望の効果に応じて調整され得る。例えば、フルダラビンの用量は、１０ｍｇ／ｍ２／日超および１００ｍｇ／ｍ２／日未満であり得る。いくつかの実施形態では、フルダラビンの用量は、約１０～１００ｍｇ／ｍ２／日、約１５～１００ｍｇ／ｍ２／日、約２０～１００ｍｇ／ｍ２／日、約２５～９００ｍｇ／ｍ２／日、約３０～９００ｍｇ／ｍ２／日、約３５～１００ｍｇ／ｍ２／日、約４０～１００ｍｇ／ｍ２／日、約４５～１００ｍｇ／ｍ２／日、約５０～１００ｍｇ／ｍ２／日、約５５～１００ｍｇ／ｍ２／日または約６０～１００ｍｇ／ｍ２／日である。他の実施形態では、フルダラビンの用量は、約１０～１００ｍｇ／ｍ２／日、約１０～９０ｍｇ／ｍ２／日、約１０～８０ｍｇ／ｍ２／日、約１０～７０ｍｇ／ｍ２／日、約１０～６０ｍｇ／ｍ２／日、約１０～５０ｍｇ／ｍ２／日、約１０～４５ｍｇ／ｍ２／日、約２０～４０ｍｇ／ｍ２／日、約２５～３５ｍｇ／ｍ２／日または約２８～３２ｍｇ／ｍ２／日である。一定の実施形態では、フルダラビンの用量は、約１０ｍｇ／ｍ２／日、１５ｍｇ／ｍ２／日、２０ｍｇ／ｍ２／日、２５ｍｇ／ｍ２／日、３０ｍｇ／ｍ２／日、３５ｍｇ／ｍ２／日、約４０ｍｇ／ｍ２／日、約４５ｍｇ／ｍ２／日、約５０ｍｇ／ｍ２／日、約５５ｍｇ／ｍ２／日、約６０ｍｇ／ｍ２／日、約６５ｍｇ／ｍ２／日、約７０ｍｇ／ｍ２／日、約７５ｍｇ／ｍ２／日、約８０ｍｇ／ｍ２／日、約８５ｍｇ／ｍ２／日、約９０ｍｇ／ｍ２／日、約９５ｍｇ／ｍ２／日または約１００ｍｇ／ｍ２／日である。特定の一実施形態では、フルダラビンの用量は、約３０ｍｇ／ｍ２／日である。
いくつかの実施形態では、シクロホスファミドの用量は約２５０～１５００ｍｇ／ｍ２／日であり、フルダラビンの用量は約１０～１００ｍｇ／ｍ２／日である。一定の実施形態では、シクロホスファミドの用量は約５００ｍｇ／ｍ２／日であり、フルダラビンの用量は約３０ｍｇ／ｍ２／日である。他の特定の実施形態では、シクロホスファミドの用量は約１０００ｍｇ／ｍ２／日であり、フルダラビンの用量は約３０ｍｇ／ｍ２／日である。
特定の実施形態では、シクロホスファミドは、遺伝子改変細胞を含む組成物の投与の５日前から開始して３日前まで連日約５００ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。特定の実施形態では、シクロホスファミドは、遺伝子改変細胞を含む組成物の投与の５日前から開始して２日前まで連日約５００ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。他の特定の実施形態では、シクロホスファミドは、遺伝子改変細胞を含む組成物の投与の４日前から開始して３日前まで連日約１０００ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。他の特定の実施形態では、シクロホスファミドは、遺伝子改変細胞を含む組成物の投与の４日前から開始して２日前まで連日約１０００ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。
特定の実施形態では、フルダラビンは、遺伝子改変細胞を含む組成物の投与の５日前から開始して３日前まで連日約３０ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。特定の実施形態では、フルダラビンは、遺伝子改変細胞を含む組成物の投与の５日前から開始して２日前まで連日約３０ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。他の特定の実施形態では、フルダラビンは、遺伝子改変細胞を含む組成物の投与の７日前から開始して３日前まで連日約３０ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。他の特定の実施形態では、フルダラビンは、遺伝子改変細胞を含む組成物の投与の７日前から開始して２日前まで連日約３０ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。一定の実施形態では、シクロホスファミドは、遺伝子改変細胞を含む組成物の投与の５日前から開始して３日前まで連日約５００ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与され、フルダラビンは、遺伝子改変細胞を含む組成物の投与の５日前から開始して３日前まで連日約３０ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。一定の実施形態では、シクロホスファミドは、遺伝子改変細胞を含む組成物の投与の５日前から開始して２日前まで連日約５００ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与され、フルダラビンは、遺伝子改変細胞を含む組成物の投与の５日前から開始して２日前まで連日約３０ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。
なおさらなる実施形態では、シクロホスファミドは、遺伝子改変細胞を含む組成物の投与の４日前から開始して３日前まで連日約１０００ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与され、フルダラビンは、遺伝子改変細胞を含む組成物の投与の７日前から開始して３日前まで連日約３０ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。なおさらなる実施形態では、シクロホスファミドは、遺伝子改変細胞を含む組成物の投与の４日前から開始して２日前まで連日約１０００ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与され、フルダラビンは、遺伝子改変細胞を含む組成物の投与の７日前から開始して２日前まで連日約３０ｍｇ／ｍ２／日の用量で対象に投与される。
ＣＤ３特異的抗体の投与への言及は、その抗原結合断片の投与を包含することが理解される。
２．５ 医薬組成物
本発明の別の態様では、本開示は、リンパ球枯渇化学療法剤と、ＣＤ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片（すなわち、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片）と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。本発明はまた、薬学的に許容される担体と、本明細書に記載の遺伝子改変免疫細胞または遺伝子改変免疫細胞の集団とを含む医薬組成物を提供する。
そのような医薬組成物は、公知の技術に従って調製することができる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（２１ｓｔ ｅｄ．２００５）を参照されたい。本開示による医薬製剤の製造では、細胞を典型的には薬学的に許容される担体と混合し、得られた組成物を対象（例えば、ヒト）に投与する。薬学的に許容される担体は、言うまでもなく、製剤中の任意の他の成分と適合性であるという意味で許容されなければならず、対象にとって有害であってはならない。いくつかの実施形態では、本開示の医薬組成物は、対象の疾患（例えば癌）の治療に有用な１つ以上の追加の薬剤をさらに含む。
本開示はまた、医薬品として使用するための、本明細書に記載の遺伝子改変細胞（例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または外因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現し、細胞表面上にＣＤ３を発現しないように改変されたＴ細胞）またはその集団を提供する。本開示はさらに、それを必要とする対象の疾患を治療するための医薬品の製造における、本明細書に記載の遺伝子改変細胞またはその集団の使用を提供する。そのような一態様では、医薬品は、それを必要とする対象に対する癌免疫療法に有用である。
いくつかの実施形態では、本開示の医薬組成物および医薬品は、Ｔ細胞養子免疫療法によって標的とされ得る任意の疾患状態を治療するために有用である。特定の実施形態では、本開示の医薬組成物および医薬品は、癌の治療における免疫療法として有用である。本開示の医薬組成物および医薬品を用いて治療され得る癌の非限定的な例には、癌腫、リンパ腫、肉腫、黒色腫、芽細胞腫、白血病、骨髄腫および胚細胞腫瘍、例えば、限定するものではないが、Ｂ細胞起源の癌、神経芽腫、骨肉腫、前立腺癌、腎細胞癌、横紋筋肉腫、肝癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、骨癌、膵癌、皮膚癌、頭頸部癌、乳癌、肺癌、皮膚悪性黒色腫または眼内悪性黒色腫、腎癌、子宮癌、卵巣癌、結腸直腸癌、結腸癌、直腸癌、肛門領域の癌、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、精巣癌、子宮癌、卵管の癌、子宮内膜の癌、子宮頸部の癌、膣の癌、外陰の癌、非ホジキンリンパ腫、食道の癌、小腸の癌、内分泌系の癌、甲状腺の癌、副甲状腺の癌、副腎の癌、軟部組織の肉腫、尿道の癌、陰茎の癌、小児の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱の癌、腎臓または尿管の癌、腎盂の癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊椎軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、アスベストによって誘発されるものを含む環境誘発性癌、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性リンパ腫、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、急性リンパ芽球性白血病、菌状息肉症、未分化大細胞リンパ腫およびＴ細胞リンパ腫、ならびに上記癌の任意の組合せがある。一定の実施形態では、Ｂ細胞起源の癌には、限定するものではないが、Ｂ系統急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、プレＢ ＡＬＬ（小児適応症）、マントル細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、バーキットリンパ腫およびＢ細胞非ホジキンリンパ腫が含まれる。いくつかの例では、癌には、限定するものではないが、Ｂ細胞起源の癌、または多発性骨髄腫が含まれ得る。いくつかの例では、Ｂ細胞起源の癌は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）または非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。いくつかの例では、Ｂ細胞起源の癌は、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）またはびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である。
２．６ キット
本発明の別の態様では、治療レジメン、例えば、リンパ球枯渇、および／または癌の治療に有用な材料を含むキットが提供される。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の遺伝子改変細胞（例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または外因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現し、細胞表面上にＣＤ３を発現しないように改変されたＴ細胞）の集団を含む組成物、および／またはリンパ球枯渇剤（例えば、フルダラビンおよび／またはシクロホスファミドなどのリンパ球枯渇化学療法剤）と組み合わせてキットとして包装された抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片を含む。キットは、対象への単位用量の投与を補助する任意の構成要素、例えば、粉末形態を再構成するためのバイアル、注射用シリンジ、カスタマイズされたＩＶ送達系などをさらに含むことができる。さらに、単位用量キットは、組成物の調製および投与のための説明書を含むことができる。
一定の実施形態では、キットは、ＣＤ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片と、本明細書に記載の遺伝子改変Ｔ細胞（例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または外因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現し、細胞表面上にＣＤ３を発現しないように改変されたＴ細胞）の集団を含む組成物とを含む。他の実施形態では、キットは、リンパ球枯渇化学療法剤と、ＣＤ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片と、本明細書に記載の遺伝子改変Ｔ細胞の集団を含む組成物とを含む。
さらに、キットは、使用説明書を含む添付文書を含み得る。例えば、使用説明書は、組成物の使用者に、リンパ球枯渇化学療法剤（例えば、フルダラビン、シクロホスファミドまたはそれらの組合せ）、および／または本明細書に記載の遺伝子改変細胞（例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または外因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現し、細胞表面上にＣＤ３を発現しないように改変されたＴ細胞）を含む組成物とともに対象に抗ＣＤ３抗体組成物を投与するように指示し得る。一定の実施形態では、使用説明書は、組成物の使用者に、癌を有する対象に、本明細書に記載の遺伝子改変細胞の投与前または投与と同時にリンパ球枯渇を達成するのに有効な量で、化学療法剤と組み合わせた抗ＣＤ３抗体組成物を投与するように指示する。
キットは、対象１例に対する単回使用単位用量、特定の対象に対する複数回使用（一定用量で、または治療が進行するにつれて個々の化合物の効力が変化し得る）として製造され得るか、またはキットは、複数の対象への投与に適した複数回用量を含み得る（「バルク包装」）。キット構成要素は、カートン、ブリスターパック、ボトル、チューブなどに組み立てられ得る。
２．７ キメラ抗原受容体および外因性Ｔ細胞受容体
本明細書では、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または外因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現する遺伝子改変細胞が提供される。一般に、本開示のＣＡＲは、少なくとも細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内ドメインとを含む。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、リガンド結合ドメインまたはリガンド結合部分とも称される標的特異的結合エレメントを含む。いくつかの実施形態では、細胞内ドメインまたは細胞質ドメインは、少なくとも１つの共刺激ドメインと、１つ以上のシグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ζなどとを含む。
いくつかの実施形態では、本発明において有用なＣＡＲは、リガンド結合ドメインまたはリガンド結合部分とも称される細胞外標的特異的結合エレメントを含む。リガンド結合ドメインの選択は、標的細胞の表面を規定するリガンドのタイプおよび数に依存する。例えば、リガンド結合ドメインは、特定の疾患状態に関連する標的細胞上の細胞表面マーカとして作用するリガンドを認識するように選択され得る。したがって、ＣＡＲにおいてリガンド結合ドメインに対するリガンドとして作用し得る細胞表面マーカの例には、ウイルス、細菌および寄生虫の感染、自己免疫疾患、ならびに癌細胞に関連するものが挙げられ得る。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、腫瘍細胞上の抗原に特異的に結合する所望のリガンド結合部分を操作することによって、目的の腫瘍特異的抗原を標的とするように操作される。本開示の文脈では、「腫瘍抗原」または「腫瘍特異的抗原」は、癌などの特定の過剰増殖性障害に共通の抗原を指す。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲの細胞外リガンド結合ドメインは、目的の任意の抗原またはエピトープ、特に目的の任意の癌抗原またはエピトープに特異的である。非限定的な例として、いくつかの実施形態では、標的の抗原は、腫瘍関連表面抗原、例えば、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＥＧＦＲ変異体ＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ７９Ｂ、ＩＬ１ＲＡＰ、グリピカン３（ＧＰＣ３）、ＣＬＬ－１、ジシアロガングリオシドＧＤ２、乳管上皮ムチン、ｇｐ３６、ＴＡＧ－７２、スフィンゴ糖脂質、神経膠腫関連抗原、Ｂ－ヒト絨毛性ゴナドトロピン、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）、レクチン反応性ＡＦＰ、チログロブリン、ＲＡＧＥ－１、ＭＮ－ＣＡ ＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２（ＡＳ）、腸管カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、Ｍ－ＣＳＦ、プロスターゼ、プロスターゼ特異的抗原（ＰＳＡ）、ＰＡＰ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＡ－Ｉａ、ｐ５３、プロスタイン、ＰＳＭＡ、生存およびテロメラーゼ、前立腺癌腫瘍抗原－１（ＰＣＴＡ－１）、ＭＡＧＥ、ＥＬＦ２Ｍ、好中球エラスターゼ、エフリンＢ２、インスリン増殖因子（ＩＧＦ１）－１、ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＧＦＩ受容体、メソテリン、腫瘍特異的ペプチドエピトープを提示する主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子、５Ｔ４、ＲＯＲ１、Ｎｋｐ３０、ＮＫＧ２Ｄ、腫瘍間質抗原、フィブロネクチンのエクストラドメインドメインＡ（ＥＤＡ）およびエクストラドメインドメインＢ（ＥＤＢ）、およびテネイシン－ＣのＡｌドメイン（ＴｎＣ Ａｌ）および線維芽細胞関連タンパク質（ｆａｐ）；系統特異的抗原もしくは組織特異的抗原、例えば、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＴＬＡ－４、Ｂ７－１（ＣＤ８０）、Ｂ７－２（ＣＤ８６）、エンドグリン、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子、ＢＣＭＡ（ＣＤ２６９、ＴＮＦＲＳＦ １７）、ＣＳ１、またはウイルス特異的表面抗原、例えば、ＨＩＶ特異的抗原（ＨＩＶ ｇｐｌ２０など）；ＥＢＶ特異的抗原、ＣＭＶ特異的抗原、ＨＰＶ特異的抗原、例えば、Ｅ６またはＥ７癌タンパク質、Ｌａｓｓｅウイルス特異的抗原、インフルエンザウイルス特異的抗原、ならびにこれらの表面マーカの任意の誘導体または変異体である。
いくつかの例では、細胞外リガンド結合ドメインまたは細胞外リガンド結合部分は、抗体または抗体断片である。抗体断片は、例えば、抗原のエピトープと特異的に相互作用する（例えば、結合、立体障害、安定化／不安定化、空間分布によって）能力を保持する、抗体の少なくとも一部であり得る。抗体断片の例には、限定するものではないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ´、Ｆ（ａｂ´）２、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ抗体断片、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、線状抗体、単一ドメイン抗体、例えばｓｄＡｂ（ＶＬまたはＶＨのいずれか）、ラクダＶＨＨドメイン、抗体断片から形成された多重特異性抗体、例えば、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片、ならびに抗体の単離されたＣＤＲまたは他のエピトープ結合断片が挙げられる。抗原結合断片はまた、単一ドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、ナノボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ－ＮＡＲおよびｂｉｓ－ｓｃＦｖに組み込まれ得る（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ａｎｄ Ｈｕｄｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ２３：１１２６－１１３６，２００５を参照）。抗原結合断片はまた、フィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３）などのポリペプチドに基づく足場にグラフトされ得る（フィブロネクチンポリペプチドミニボディを記載する米国特許第６，７０３，１９９号明細書を参照）。
いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインまたは細胞外リガンド結合部分は、特定のエピトープまたは抗原（例えば、癌細胞または他の疾患を引き起こす細胞もしくは粒子などの細胞の表面上に優先的に存在するエピトープまたは抗原）に対する特異性をもたらす、モノクローナル抗体に由来する一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）の形態である。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、リンカー配列を介して結合される。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、マウス、ヒト化または完全ヒトである。
いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体の細胞外ドメインは、Ｂリンパ球上の自己抗原特異的Ｂ細胞受容体によって認識され、したがって、抗体媒介性自己免疫疾患では自己反応性Ｂリンパ球を特異的に標的とし、殺傷するようにＴ細胞を導くことができる自己抗原をさらに含む（Ｐａｙｎｅ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．３５３（６２９５）：１７９－１８４を参照）。そのようなＣＡＲは、キメラ自己抗体受容体（ＣＡＡＲ）と呼ばれ得る。
いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体の細胞外ドメインは、目的の抗原に対する天然のリガンド、または目的の抗原に結合する能力を保持する天然のリガンドの断片を含むことができる。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ヒンジまたはスペーサ配列を介して細胞外リガンド結合ドメインまたは自己抗原を細胞内シグナル伝達ドメインおよび共刺激ドメインと連結する膜貫通ドメインを含む。膜貫通ドメインは、任意の膜結合タンパク質または膜貫通タンパク質に由来し得る。例えば、膜貫通ポリペプチドは、Ｔ細胞受容体（すなわち、α、β、γまたはζ、ＣＤ３複合体を構成するポリペプチド）、ＩＬ２受容体ｐ５５（鎖）、ｐ７５（β鎖）もしくはγ鎖、Ｆｃ受容体（例えば、Ｆｃｙ受容体ＩＩＩ）のサブユニット鎖、またはＣＤ８α鎖などのＣＤタンパク質のサブユニットであり得る。あるいは、膜貫通ドメインは、合成であり得、ロイシンおよびバリンなどの疎水性残基を主に含み得る。特定の例では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８α膜貫通ポリペプチド（例えば配列番号１０）である。
ヒンジ領域とは、膜貫通ドメインを細胞外リガンド結合ドメインに連結するように機能する任意のオリゴペプチドまたはポリペプチドを指す。例えば、ヒンジ領域は、最大３００個のアミノ酸、好ましくは１０～１００個のアミノ酸、最も好ましくは２５～５０個のアミノ酸を含み得る。ヒンジ領域は、天然に存在する分子の全部もしくは一部、例えば、ＣＤ８、ＣＤ４もしくはＣＤ２８の細胞外領域の全部もしくは一部、または抗体定常領域の全部もしくは一部に由来し得る。あるいは、ヒンジ領域は、天然に存在するヒンジ配列に対応する合成配列であってよいか、または完全に合成されたヒンジ配列であってよい。特定の例では、ヒンジドメインは、ヒトＣＤ８α鎖、ＦｃｙＲｌｌｌａ受容体またはＩｇＧ１の一部を含むことができる。一定の例では、ヒンジ領域は、ＣＤ８αドメイン（例えば配列番号１１）であり得る。
ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲが配置された細胞の正常なエフェクター機能のうちの少なくとも１つの活性化、および／または増殖経路および細胞生存経路の活性化を担う。用語「エフェクター機能」は、細胞の特殊な機能を指す。Ｔ細胞のエフェクター機能は、例えば、細胞溶解活性、またはサイトカインの分泌を含むヘルパー活性であり得る。ＣＤ３ζ（配列番号８）などの細胞内シグナル伝達ドメインは、細胞外ドメインの結合に応答して細胞に活性化シグナルを提供することができる。説明されるように、活性化シグナルは、細胞のエフェクター機能、例えば、細胞溶解活性またはサイトカイン分泌などを誘導することができる。
細胞内刺激ドメインはまた、リガンド結合後に増殖シグナルおよび／または細胞生存シグナルを伝達する１つ以上の細胞内共刺激ドメインを含むことができる。場合によっては、共刺激ドメインは、１つ以上のＴＲＡＦ結合ドメインを含むことができる。そのようなＴＲＡＦ結合ドメインは、例えば、配列番号３～５に記載されるものを含み得る。そのような細胞内共刺激ドメインは、当技術分野で公知のもののいずれかであり得、限定するものではないが、例えば、Ｎｏｖｅｌ６（「Ｎ６」；配列番号６）を含む、国際公開第２０１８／０６７６９７号パンフレットに開示されている共刺激ドメインを含み得る。共刺激ドメインの追加の例には、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７；配列番号７）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ８、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、またはそれらの任意の組合せが挙げられ得る。特定の実施形態では、共刺激ドメインはＮ６ドメインである。別の特定の実施形態では、共刺激ドメインは４－１ＢＢ共刺激ドメインである。
本明細書に開示されるキメラ抗原受容体の細胞内ドメインは、指定された順序またはランダムな順序で互いに連結され得る。一定の実施形態では、本明細書に開示されるキメラ抗原受容体の細胞内ドメインは、２～３０アミノ酸長の短いポリペプチドリンカーまたはスペーサ領域を含み得る。他の実施形態では、本明細書に開示されるキメラ抗原受容体の細胞内ドメインは、２～１０アミノ酸長の短いポリペプチドリンカーまたはスペーサ領域を含み得る。いくつかの実施形態では、リンカーまたはスペーサ領域は、グリシンおよびセリンを実質的に含むアミノ酸配列を含み得る。
ＣＡＲは、任意のタイプの癌細胞に特異的であり得る。そのような癌には、限定するものではないが、本明細書の他の箇所に記載されている癌のいずれかが含まれ得る。
本明細書に開示されるＣＡＲは、本明細書に開示されるドメインのうちのいずれか１つ以上の、本明細書に記載の配列を有するドメイン（例えば、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内（細胞質）ドメイン、シグナル伝達ドメインまたはそれらの任意の組合せ）、またはその変異体、またはその断片（例えば、キメラ抗原受容体活性に必要な機能を保持する変異体および／または断片）を含み得ることを理解されたい。いくつかの実施形態では、変異体は、配列に対して１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸変化を有する。いくつかの実施形態では、変異体は、天然配列もしくは野生型配列、または本明細書に提供される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、９０％～９５％、少なくとも９５％または少なくとも９９％同一である配列を有する。いくつかの実施形態では、断片は、本明細書に提供される配列よりも１～５、５～１０、１０～２０、２０～３０、３０～４０または４０～５０アミノ酸は短い。いくつかの実施形態では、断片は、提供される配列のＮ末端領域、Ｃ末端領域または両末端領域ではさらに短い。いくつかの実施形態では、断片は、本明細書に提供される配列内のアミノ酸数の８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％または９５％～９９％を含む。
さらに、本明細書に開示されるキメラ抗原受容体またはその変異体をコードする、本明細書に記載の核酸またはポリヌクレオチドのいずれも、組換え技術などの常用的な方法によって調製することができることを理解されたい。本明細書に記載のキメラ抗原受容体を調製するための方法は、いくつかの実施形態では、少なくとも細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内ドメインとを含む、本明細書に開示されるキメラ抗原受容体またはその変異体のドメインの各々を含むポリペプチドをコードする核酸の生成を含み得る。特定の実施形態では、核酸は、シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインをコードする。別の特定の実施形態では、核酸は、共刺激シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインをコードする。いくつかの実施形態では、核酸は、細胞外ドメインと膜貫通ドメインとの間のヒンジ領域をコードする。
他の実施形態では、遺伝子改変細胞は、外因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする核酸配列を含む。そのような外因性Ｔ細胞受容体は、α鎖およびβ鎖を含むことができるか、または代替的に、γ鎖およびδ鎖を含み得る。本発明において有用な外因性ＴＣＲは、目的の任意の抗原またはエピトープに対する特異性を有し得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子改変細胞は、不活性化されたＴＣＲα遺伝子、ＴＲＡＣ遺伝子、ＴＣＲβ遺伝子またはＴＲＢＣ遺伝子を含む。本発明の遺伝子改変細胞を生成するためのこれらの遺伝子の不活性化は、遺伝子が発現されている少なくとも一方または両方の対立遺伝子で起こる。したがって、一方または両方の遺伝子の不活性化は、内因性ＴＣＲα鎖タンパク質または内因性ＴＣＲβ鎖タンパク質の発現を妨げる。これらのタンパク質の発現は、細胞表面上の内因性α／βＴＣＲの集合に必要である。したがって、ＴＣＲα遺伝子および／またはＴＣＲβ遺伝子の不活性化は、内因性α／βＴＣＲの検出可能な細胞表面発現を有しない遺伝子改変細胞をもたらす。内因性α／βＴＣＲはＣＤ３を組み込んでいる。したがって、α／βＴＣＲの成分をコードする不活性化遺伝子を有する細胞は、結果として、ＣＤ３の検出可能な細胞表面発現を有しない。
いくつかの例では、ＴＣＲα遺伝子、ＴＲＡＣ遺伝子、ＴＣＲβ遺伝子またはＴＲＢＣ遺伝子は、導入遺伝子（例えば、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲをコードする導入遺伝子）の挿入によって不活性化される。導入遺伝子の挿入は、内因性ＴＣＲα鎖または内因性ＴＣＲβ鎖の発現を破壊するため、Ｔ細胞表面上の内因性α／βＴＣＲの集合を妨げ、同様に細胞表面上のＣＤ３の発現を妨げる。いくつかの例では、導入遺伝子は、ＴＲＡＣ遺伝子に挿入される。特定の例では、導入遺伝子は、配列番号１を含む操作されたメガヌクレアーゼ認識配列でＴＲＡＣ遺伝子に挿入される。特定の例では、導入遺伝子は、ヌクレオチド１３位と１４位との間で配列番号１に挿入される。
本明細書で使用される場合、「内因性α／βＴＣＲの検出可能な細胞表面発現」は、標準的な実験方法を使用して免疫細胞の細胞表面上のＴＣＲ複合体（例えば、α／βＴＣＲ複合体）の１つ以上の成分を検出する能力を指す。そのような方法には、例えば、ＴＣＲ自体の成分、例えば、ＴＣＲα鎖もしくはＴＣＲβ鎖に、または集合した細胞表面ＴＣＲ複合体の成分、例えば、ＣＤ３に特異的な免疫染色および／またはフローサイトメトリーが含まれ得る。免疫細胞上の内因性ＴＣＲ（例えば、α／βＴＣＲ）の細胞表面発現を検出する方法には、本明細書の実施例に記載されているもの、および例えば、ＭａｃＬｅｏｄ ｅｔ ａｌ．（２０１７）に記載されているものが含まれる。
同様に、「ＣＤ３の検出可能な細胞表面発現」は、当技術分野で標準的な実験方法を使用して検出される場合、本明細書に記載の遺伝子改変細胞または本明細書に記載の遺伝子改変細胞の集団の表面上のＣＤ３の検出の欠如を指す。免疫細胞上のＣＤ３の細胞表面発現を検出する方法には、ＭａｃＬｅｏｄ ｅｔ ａｌ．（２０１７）に記載されているものが含まれる。
本発明によって改変されたヒト免疫細胞は、目的のヌクレアーゼおよび／または外因性配列の導入前に活性化を必要とし得る。例えば、免疫細胞（例えばＴ細胞）と、可溶性であるかまたは支持体（例えばビーズ）にコンジュゲートさせた抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体とを細胞を活性化するのに十分な期間にわたって接触させることができる。
本明細書に記載の遺伝子改変細胞は、１つ以上の誘導可能な自殺遺伝子を発現するようにさらに改変され得、自殺遺伝子の誘導は、細胞死を引き起こし、インビトロまたはインビボでの細胞の選択的破壊を可能にする。いくつかの例では、自殺遺伝子は、細胞傷害性ポリペプチド、非毒性プロドラッグを細胞傷害性薬物に変換する能力を有するポリペプチド、および／または細胞内の細胞傷害性遺伝子経路を活性化するポリペプチドをコードすることができる。すなわち、自殺遺伝子は、それ自体で、または他の化合物の存在下で細胞死を引き起こす産物をコードする核酸である。そのような自殺遺伝子の代表的な例には、単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼをコードするものがある。追加の例には、水痘帯状疱疹ウイルスのチミジンキナーゼをコードする遺伝子、および５－フルオロシトシンを高毒性化合物５－フルオロウラシルに変換することができる細菌遺伝子シトシンデアミナーゼがある。自殺遺伝子には、非限定的な例として、カスパーゼ－９、カスパーゼ－８またはシトシンデアミナーゼをコードする遺伝子も含まれる。いくつかの例では、カスパーゼ－９は、特定の二量体化化学誘導物質（ＣＩＤ：ｃｈｅｍｉｃａｌ ｉｎｄｕｃｅｒ ｏｆ ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）を使用して活性化され得る。自殺遺伝子はまた、細胞を治療用モノクローナル抗体および／または細胞傷害性モノクローナル抗体に対して感受性にする、細胞の表面で発現されるポリペプチドをコードすることができる。さらなる例では、自殺遺伝子は、抗ＣＤ２０ｍＡｂリツキシマブによって認識される抗原モチーフと、自殺遺伝子を発現する細胞の選択を可能にするエピトープとを含む組換え抗原性ポリペプチドをコードすることができる。例えば、２つのリツキシマブ結合エピトープとＱＢＥｎｄ１０結合エピトープとを含む、国際公開第２０１３１５３３９１号パンフレットに記載されているＲＱＲ８ポリペプチドを参照されたい。そのような遺伝子の場合、リツキシマブを対象に投与して、必要に応じて細胞枯渇を誘導することができる。さらなる例では、自殺遺伝子は、切断型ＥＧＦＲポリペプチドと組み合わせて発現されるＱＢＥｎｄ１０結合エピトープを含み得る。
遺伝子改変免疫細胞がＣＡＲまたは外因性ＴＣＲを発現するそれらの実施形態の一部では、そのような細胞は、内因性Ｔ細胞受容体（例えば、α／βＴ細胞受容体）の検出可能な細胞表面発現を有しない。したがって、本発明はさらに、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲを発現し、ＣＤ３の検出可能な細胞表面発現を有しない遺伝子改変細胞の集団を提供する。そのような細胞は、ＴＣＲα／β受容体の成分をコードする不活性化遺伝子、例えば、ＴＣＲα遺伝子、ＴＲＡＣ遺伝子、ＴＣＲβ遺伝子またはＴＲＢＣ遺伝子を含むことができる。例えば、集団は、ＣＡＲ（すなわち、ＣＡＲ＋である）または外因性Ｔ細胞受容体（すなわち、ｅｘｏＴＣＲ＋）を発現し、ＣＤ３の検出可能な細胞表面発現を有しない、本発明の複数の遺伝子改変細胞を含むことができる。本発明の様々な実施形態では、集団内の細胞の少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または最大１００％が、本明細書に記載の遺伝子改変細胞である。特定の例では、集団は、ＣＤ３－およびＣＡＲ＋の両方である、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または最大１００％の細胞を含むことができる。別の特定の例では、集団は、ＣＤ３－およびｅｘｏＴＣＲ＋の両方である、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または最大１００％の細胞を含むことができる。
２．８ 核酸分子
本発明の遺伝子改変細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または外因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする外因性ポリヌクレオチドを含む。したがって、本明細書では、本発明の遺伝子改変細胞を生成するための核酸分子が提供される。
核酸分子は、キメラ抗原受容体または外因性ＴＣＲの発現を促進する様々なプロモータを含むことができる。好適なプロモータの一例は、最初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモータ配列である。このプロモータ配列は、それに作動可能に連結された任意のポリヌクレオチド配列の高レベルの発現を促進することができる強力な構成的プロモータ配列である。好適なプロモータの別の例は、伸長成長因子－１α（ＥＦ－１α：Ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ－１α）である。ただし、限定するものではないが、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモータ、マウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）長末端反復（ＬＴＲ）プロモータ、ＭｏＭｕＬＶプロモータ、トリ白血病ウイルスプロモータ、エプスタイン・バーウイルス最初期プロモータ、ラウス肉腫ウイルスプロモータ、ならびにヒト遺伝子プロモータ、例えば、限定するものではないが、アクチンプロモータ、ミオシンプロモータ、ヘモグロビンプロモータおよびクレアチンキナーゼプロモータを含む他の構成的プロモータ配列も使用され得る。さらに、本開示は、構成的プロモータの使用に限定されるべきではない。誘導性プロモータもまた、本開示の一部として企図される。誘導性プロモータの使用は、そのような発現が望まれる場合に作動可能に連結されるポリヌクレオチド配列の発現をオンにすることができるか、または発現が望まれない場合に発現をオフにすることができる分子スイッチを提供する。誘導性プロモータの例には、限定するものではないが、メタロチオネインプロモータ、グルココルチコイドプロモータ、プロゲステロンプロモータおよびテトラサイクリンプロモータが挙げられる。
合成プロモータも本開示の一部として企図される。例えば、特定の実施形態では、キメラ抗原受容体または外因性ＴＣＲの発現を促進するプロモータは、ＪｅＴプロモータである（国際公開第２００２／０１２５１４号パンフレットを参照）。
いくつかの実施形態では、プロモータは、所望の結果に基づいて選択される。本明細書に開示されるポリヌクレオチドの発現のタイミング、位置および／またはレベルを調節するために、発現カセットに異なるプロモータを使用することによって、異なる用途が強化され得ることが認識される。そのような発現構築物はまた、所望であれば、プロモータ調節領域（例えば、誘導性発現、構成的発現、環境的に調節された発現もしくは発生的に調節された発現、または細胞特異的／選択的発現もしくは組織特異的／選択的発現を付与するもの）、転写開始部位、リボソーム結合部位、ＲＮＡプロセシングシグナル、転写終結部位および／またはポリアデニル化シグナルを含み得る。
遺伝子改変細胞内のＣＡＲまたは外因性Ｔ細胞受容体の発現を評価するために、本発明の核酸分子は、コードされた細胞表面タンパク質の存在を検出するために使用され得るエピトープを場合により含むことができる。本明細書に記載されるいくつかの例では、ＣＡＲコード配列は、抗ＣＤ３４抗体および／または抗ＥＧＦＲ抗体を使用する検出を可能にするＱＢｅｎｄ１０エピトープおよび／またはＥＧＦＲエピトープを含み得る（各々参照によりその全体が本明細書に組み込まれる国際公開第２０１１／０５６８９４号パンフレット、国際公開第２０１３／１５３３９１号パンフレットおよび国際公開第２０１９／０７０８５６号パンフレットを参照）。
他の例では、核酸分子はまた、ウイルスベクターを介してトランスフェクトまたは感染されることが求められる細胞の集団からの発現細胞の同定および選択を容易にするために、選択マーカ遺伝子もしくはレポータ遺伝子のいずれか、またはその両方を含むことができる。他の態様では、選択マーカは、別個のＤＮＡ片に担持され、同時トランスフェクション手順で使用され得る。宿主細胞内の発現を可能にするための適切な制御配列に、選択マーカおよびレポータ遺伝子の両方を隣接させてもよい。有用な選択マーカには、例えば、抗生物質耐性遺伝子および蛍光マーカ遺伝子が含まれる。
本明細書では、本開示の核酸分子を含むベクターも提供される。いくつかの実施形態では、核酸分子は、限定するものではないが、プラスミド、ファージミド、ファージ誘導体、動物ウイルスまたはコスミドを含むベクターにクローニングされる。特定の目的のベクターには、発現ベクター、複製ベクター、プローブ生成ベクターおよび配列決定ベクターが含まれる。
他の実施形態では、本発明の核酸分子は、ウイルスベクター、例えば、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクターおよびアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター上に提供される。ウイルスベクター技術は当技術分野で周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（２００１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）、ならびに他のウイルス学および分子生物学の手引書に記載されている。ベクターとして有用なウイルスには、限定するものではないが、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、ヘルペスウイルスおよびレンチウイルスが含まれる。一般に、好適なベクターは、少なくとも１つの生物において機能的な複製起点と、プロモータ配列と、好都合な制限エンドヌクレアーゼ部位と、１つ以上の選択マーカとを含む（例えば、国際公開第０１／９６５８４号パンフレット、国際公開第０１／２９０５８号パンフレットおよび米国特許第６，３２６，１９３号明細書）。
２．９ 遺伝子改変細胞およびその集団
本明細書では、少なくとも１つの外因性ポリヌクレオチド配列を含むように遺伝子改変された細胞が提供される。具体的な実施形態では、遺伝子改変細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または外因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする外因性ポリヌクレオチドを含む。さらに、本発明の遺伝子改変細胞は、例えば、Ｔ細胞受容体複合体（例えば、Ｔ細胞受容体α定常領域（ＴＲＡＣ）遺伝子またはＴ細胞受容体β定常領域（ＴＲＢＣ）遺伝子）の１つ以上の成分をコードする標的遺伝子に外因性ポリヌクレオチドを挿入することによって、細胞表面上に検出可能なＣＤ３または内因性ＴＣＲを有しないように改変される。
本開示の一定の実施形態では、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲをコードする核酸分子または発現カセットは、遺伝子改変細胞のゲノム内に存在する（すなわち、組み込まれている）。特定の実施形態では、外因性核酸分子は、操作されたヌクレアーゼによって生成されるものなど、二本鎖切断によって生成される切断部位での標的挿入によって細胞の染色体に挿入される。
一実施形態では、遺伝子改変細胞は、細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）のゲノム内に配置された、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲをコードする外因性核酸またはポリヌクレオチド分子を含む。いくつかの実施形態では、外因性ポリヌクレオチドは、細胞の標的遺伝子内に配置される。様々な例では、標的遺伝子は、内因性α／βＴＣＲの成分、例えば、ＴＣＲα遺伝子、ＴＲＡＣ遺伝子、ＴＣＲβ遺伝子またはＴＲＢＣ遺伝子をコードすることができる。一定の実施形態では、外因性ポリヌクレオチドは、内因性Ｔ細胞受容体α定常領域遺伝子内、例えば、ＴＲＡＣ遺伝子のエクソン１内に配置される（例えば、ＰＣＴ米国特許第２０１６／０５５４７２号明細書またはＰＣＴ米国特許第２０１６／０５５４９２号明細書を参照）。他の実施形態では、外因性ポリヌクレオチドは、内因性ＴＲＢＣ遺伝子内に配置される。特定の実施形態では、標的遺伝子への外因性ポリヌクレオチドの挿入は、標的遺伝子によってコードされる完全長ポリペプチドの発現を妨げる。例えば、ＴＲＡＣ遺伝子またはＴＲＢＣ遺伝子への外因性ポリヌクレオチドの挿入は、それぞれＴＲＣαポリペプチドまたはＴＲＣβポリペプチドの完全長発現を妨げ、それによって、遺伝子改変細胞の細胞表面上の、ＣＤ３の全部または実質的に全部（例えば、８０％、９０％、９５％またはそれ以上を超える）を含む内因性Ｔ細胞受容体複合体の集合を妨げることができる。
いくつかの実施形態では、遺伝子改変細胞は真核細胞である。一定の他の実施形態では、細胞はヒト細胞である。他の実施形態では、遺伝子改変細胞は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、単球、好中球、好酸球、細胞傷害性Ｔリンパ球、制御性Ｔ細胞またはそれらの任意の組合せ）である。免疫細胞の集団は、任意の供給源、例えば、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）、骨髄、組織、例えば、脾臓組織、リンパ節組織、胸腺組織または腫瘍組織から得ることができる。所望の細胞のタイプを得るのに適した供給源は、当業者には明らかであろう。いくつかの実施形態では、免疫細胞の集団は、ＰＢＭＣに由来する。いくつかの実施形態では、遺伝子改変細胞は、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）に由来する免疫細胞である。
特定の実施形態では、遺伝子改変細胞は、ＣＤ３または内因性ＴＣＲ複合体の検出可能な細胞表面発現を欠くように改変されたＴ細胞またはＮＫ細胞、特にヒトＴ細胞またはヒトＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、初代Ｔ細胞または初代ＮＫ細胞である。Ｔ細胞およびＮＫ細胞は、末梢血単核球、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織および腫瘍を含むいくつかの供給源から得ることができる。本開示の一定の実施形態では、当技術分野で利用可能な任意の数のＴ細胞株およびＮＫ細胞株が使用され得る。本開示のいくつかの実施形態では、Ｔ細胞およびＮＫ細胞は、当業者に公知の任意の数の技術を使用して、対象から採取された血液単位から得られる。一実施形態では、個体の循環血液由来の細胞がアフェレーシスによって得られる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞またはＮＫ細胞は、ｉＰＳＣに由来する。
本明細書に記載のＣＡＲまたは外因性ＴＣＲを発現することができ、ＣＤ３または内因性ＴＣＲ複合体の検出可能な細胞表面発現を欠く細胞を調製する方法は、単離された細胞をエクスビボで増殖させることを含み得る。細胞の増殖は、例えば、細胞を増殖させるか、または細胞を増殖させるように刺激することによって、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲを発現することができる細胞の数を増加させる任意の方法を含み得る。細胞の増殖を刺激する方法は、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲの発現に使用される細胞のタイプに依存し、当業者には明らかであろう。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲまたは外因性ＴＣＲを発現し、ＣＤ３または内因性ＴＣＲ複合体の検出可能な細胞表面発現を欠く細胞は、対象への投与前にエクスビボで増殖される。
本開示はさらに、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲをコードする外因性ポリヌクレオチドを含み、ＣＤ３または内因性ＴＣＲ複合体の検出可能な細胞表面発現を欠く、本明細書に記載の複数の遺伝子改変細胞を含む遺伝子改変細胞の集団を提供する。したがって、本発明の様々な実施形態では、遺伝子改変細胞の集団が提供され、集団内の細胞の少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または最大１００％は、本明細書に開示されるＣＡＲまたは外因性ＴＣＲを含み、ＣＤ３または内因性ＴＣＲ複合体の検出可能な細胞表面発現を有しない遺伝子改変細胞である。一定の実施形態では、遺伝子改変細胞の集団が提供され、集団内の細胞の少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または最大１００％は、本明細書に記載のＣＡＲまたは外因性ＴＣＲを発現し、ＣＤ３または内因性ＴＣＲ複合体の検出可能な細胞表面発現を有しない。
２．１０ 遺伝子改変細胞の生成方法
本開示は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または外因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を含み、ＣＤ３または内因性ＴＣＲ複合体の検出可能な細胞表面発現を欠く遺伝子改変細胞を生成する方法を提供する。具体的な実施形態では、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲをコードする外因性ポリヌクレオチドを含み、ＣＤ３または内因性ＴＣＲ複合体の検出可能な細胞表面発現を有しないように細胞を改変する方法が提供される。本開示の他の態様では、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲをコードする核酸分子または発現カセットは、細胞のゲノムに組み込まれるか、または代替的な一実施形態では、細胞のゲノムに組み込まれない。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲをコードする核酸は、当技術分野で公知の任意の技術を使用して細胞に導入される。具体的な実施形態では、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲをコードする核酸を含むベクターまたは発現カセットは、ウイルスベクター（すなわち、ウイルス）を使用して細胞に導入される。そのようなベクターは当技術分野で公知であり、レンチウイルス（すなわち、レンチウイルスベクター）、アデノウイルス（すなわち、アデノウイルスベクター）およびアデノ随伴ウイルス（すなわち、ＡＡＶベクター）を含む（Ｖａｎｎｕｃｃｉ，ｅｔ ａｌ．（２０１３ Ｎｅｗ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３６：１－２２に概説されている）。本開示において有用な組換えＡＡＶは、細胞へのウイルスの形質導入、および細胞へのヌクレアーゼ遺伝子の挿入、ならびに特定の実施形態では細胞ゲノムへのヌクレアーゼ遺伝子の挿入に適した任意の血清型を有することができる。特定の実施形態では、組換えＡＡＶは、ＡＡＶ２、ＡＡＶ６またはＡＡＶ８の血清型を有する。組換えＡＡＶはまた、宿主細胞内で第２鎖ＤＮＡ合成を必要としないように自己相補的であり得る（ＭｃＣａｒｔｙ，ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．８：１２４８－５４）。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される核酸分子は、ＤＮＡ（例えば、環状もしくは線状化プラスミドＤＮＡまたはＰＣＲ産物）またはＲＮＡの形態で細胞に送達される。操作されたヌクレアーゼ遺伝子がＤＮＡ形態（例えば、プラスミド）で送達される、および／またはウイルス（例えば、ＡＡＶまたはレンチウイルス）を介して送達されるいくつかの実施形態では、遺伝子は、本明細書に記載されるように、プロモータに作動可能に連結されるか、または発現カセット上に見出される。いくつかの実施形態では、プロモータは、ウイルスプロモータ、例えば、ウイルスベクター由来の内因性プロモータ（例えば、レンチウイルスベクターのＬＴＲ）、または周知のサイトメガロウイルスプロモータもしくはＳＶ４０ウイルス初期プロモータである。他の実施形態では、プロモータは、ＪｅＴプロモータなどの合成プロモータである。一定の実施形態では、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲをコードする遺伝子は、標的細胞（例えば、ヒトＴ細胞またはヒトＮＫ細胞）内で遺伝子発現を優先的に促進する単数のプロモータ（または複数のプロモータ）に作動可能に連結される。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲをコードする核酸分子は、当技術分野で公知の方法を使用して、ナノ粒子に共有結合もしくは非共有結合されるか、またはそのようなナノ粒子内にカプセル化される（Ｓｈａｒｍａ，ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｂｉｏｍｅｄ Ｒｅｓ Ｉｎｔ．２０１４）。ナノ粒子は、長さスケールが＜１μｍ、好ましくは＜１００ｎｍであるナノスケール送達系である。そのようなナノ粒子は、金属、脂質、ポリマーまたは生物学的高分子から構成されるコアを使用して設計され得、核酸分子または発現カセットの複数のコピーが、ナノ粒子コアに付着またはカプセル化され得る。これにより、各細胞に送達されるＤＮＡのコピー数が増加するため、各核酸分子の細胞内発現が増加して、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲが細胞内で発現される可能性が最大になる。そのようなナノ粒子の表面は、ポリマーまたは脂質（例えば、キトサン、カチオン性ポリマーまたはカチオン性脂質）によってさらに修飾されて、その表面が細胞送達とペイロードの取り込みとを増強するための追加の機能性を付与するコア－シェルナノ粒子を形成し得る（Ｊｉａｎ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ．３３（３０）：７６２１－３０）。ナノ粒子は、ナノ粒子を適切な細胞型に導くために、および／または細胞取り込みの可能性を高めるために、標的化分子にさらに有利に結合され得る。そのような標的化分子の例には、細胞表面受容体に特異的な抗体、および細胞表面受容体の天然リガンド（または天然リガンドの一部）が挙げられる。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲをコードする核酸分子は、リポソーム内にカプセル化されるか、またはカチオン性脂質を使用して複合体化される（例えば、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ，Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｏｒｐ．，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ；Ｚｕｒｉｓ ｅｔ ａｌ．（２０１５）ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３３：７３－８０；Ｍｉｓｈｒａ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｊ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．２０１１：８６３７３４を参照）。リポソームおよびリポプレックス製剤は、ペイロードを分解から保護し、細胞の細胞膜との融合および／または細胞の細胞膜の破壊を通して細胞の取り込みおよび送達効率を促進することができる。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲをコードする核酸分子は、ポリマー足場（例えば、ＰＬＧＡ）内にカプセル化されるか、またはカチオン性ポリマー（例えば、ＰＥＩ、ＰＬＬ）を使用して複合体化される（Ｔａｍｂｏｌｉ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｔｈｅｒ Ｄｅｌｉｖ．２（４）：５２３－５３６）。いくつかの実施形態では、ｃ ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲをコードする核酸分子または発現カセットは、ミセルに自己集合する両親媒性分子と組み合わされる（Ｔｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｇｅｎｅ Ｍｅｄ．９（１１）：９５６－６６）。ポリマーミセルは、凝集を防止し、電荷相互作用をマスクし、細胞外の非特異的相互作用を低減することができる親水性ポリマー（例えばポリエチレングリコール）によって形成されたミセルシェルを含み得る。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲをコードする核酸分子は、細胞への送達のためのエマルジョンとして製剤化される。用語「エマルジョン」は、限定するものではないが、水不混和性相が水相と混合された場合に、無極性残基（例えば、長い炭化水素鎖）を水から遠ざけ、極性頭部基を水に向ける疎水力の結果として形成することができる脂質構造を含む、任意の水中油型、油中水型、水中油中水型または油中水中油型の分散液または液滴を指す。これらの他の脂質構造には、限定するものではないが、単層、少層（ｐａｕｃｉｌａｍｅｌｌａｒ）および多層の脂質小胞、ミセルおよびラメラ相が含まれる。エマルジョンは、水相および親油性相（典型的には油および有機溶媒を含有する）から構成される。エマルジョンはまた、１つ以上の界面活性剤を含有することが多い。ナノエマルジョン製剤は、例えば、各々参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許出願第２００２／００４５６６７号明細書および米国特許出願第２００４／００４３０４１号明細書ならびに米国特許第６，０１５，８３２号明細書、米国特許第６，５０６，８０３号明細書、米国特許第６，６３５，６７６号明細書および米国特許第６，５５９，１８９号明細書に記載されているように周知である。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲをコードする核酸分子は、多機能ポリマーコンジュゲート、ＤＮＡデンドリマーおよびポリマーデンドリマーに共有結合または非共有結合する（Ｍａｓｔｏｒａｋｏｓ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｎａｎｏｓｃａｌｅ．７（９）：３８４５－５６；Ｃｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ．９７（１）：１２３－４３）。デンドリマー生成は、ペイロードの容量およびサイズを制御することができ、高いペイロード容量を提供することができる。さらに、複数の表面基の提示を利用して、安定性を改善し、非特異的相互作用を低減することができる。
遺伝子を細胞に導入し、発現させる方法は、当技術分野で公知である。発現ベクターに関連して、ベクターは、当技術分野における任意の方法によって宿主細胞、例えば、哺乳動物細胞、細菌細胞、酵母細胞または昆虫細胞に容易に導入することができる。例えば、発現ベクターは、物理的手段、化学的手段または生物学的手段によって宿主細胞に移入することができる。ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための物理的方法には、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクション、微粒子銃、マイクロインジェクション、エレクトロポレーションなどが含まれる。ベクターおよび／または外因性核酸を含む、細胞を生成する方法は、当技術分野で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（２００１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）を参照されたい。宿主細胞にポリヌクレオチドを導入するための好ましい方法は、リン酸カルシウムトランスフェクションである。目的のポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための生物学的方法には、ＤＮＡベクターおよびＲＮＡベクターの使用が含まれる。ウイルスベクター、特にレトロウイルスベクターは、哺乳動物、例えばヒト細胞に遺伝子を挿入するための最も広く使用されている方法となっている。他のウイルスベクターは、レンチウイルス、ポックスウイルス、単純ヘルペスウイルスＩ、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルスなどに由来し得る。例えば、米国特許第５，３５０，６７４号明細書および米国特許第５，５８５，３６２号明細書を参照されたい。ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための化学的手段には、コロイド分散系、例えば、高分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズ、ならびに水中油型エマルジョン、ミセル、混合ミセルおよびリポソームを含む脂質に基づく系が含まれる。インビトロおよびインビボで送達ビヒクルとして使用するための例示的なコロイド系は、リポソーム（例えば人工膜小胞）である。
いくつかの実施形態では、本発明は、内因性ＴＣＲまたはその成分（例えばＣＤ３）の検出可能な細胞表面発現を有しない細胞を生成するための標的遺伝子への本明細書に開示される核酸分子の導入をさらに提供する。一定の実施形態では、核酸分子は、ポリペプチドのコード配列を含む標的遺伝子に存在する認識配列に導入される。
例えば、いくつかの実施形態では、本発明は、内因性ＴＣＲまたはその成分（例えばＣＤ３）の検出可能な細胞表面発現を有しない細胞を生成するためのＴ細胞受容体α遺伝子への本明細書に開示される核酸分子の導入を提供する。一定の実施形態では、核酸分子は、Ｔ細胞受容体αサブユニットのコード配列を含むＴ細胞受容体α定常領域遺伝子に存在する認識配列に導入される。したがって、核酸分子の導入は、内因性Ｔ細胞受容体αサブユニットの発現を破壊し、その結果、細胞表面での内因性Ｔ細胞受容体の発現を破壊する。内因性Ｔ細胞受容体がなければ、細胞はまた、細胞表面上にＣＤ３を欠く。特定の実施形態では、そのような認識配列は、Ｔ細胞受容体α定常領域遺伝子のエクソン１内に存在し得る。
いくつかの実施形態では、本発明は、内因性ＴＣＲまたはその成分（例えばＣＤ３）の検出可能な細胞表面発現を有しない細胞を生成するためのＴ細胞受容体β遺伝子への本明細書に開示される核酸分子の導入をさらに提供する。一定の実施形態では、核酸分子は、Ｔ細胞受容体βサブユニットのコード配列を含むＴ細胞受容体β定常領域遺伝子に存在する認識配列に導入される。したがって、核酸分子の導入は、内因性Ｔ細胞受容体αサブユニットの発現を破壊し、その結果、細胞表面での内因性Ｔ細胞受容体の発現を妨げる。
いくつかの実施形態では、本発明は、Ｔ細胞（例えば、内因性ＴＣＲおよび／またはＣＤ３の成分）に見られる遺伝子を標的とする、本発明による遺伝子改変細胞への阻害性核酸分子の導入をさらに提供する。例えば、阻害性核酸分子は、Ｔ細胞受容体αサブユニットまたはＴ細胞受容体βサブユニットを標的とし、Ｔ細胞受容体αサブユニットペプチドまたはＴ細胞受容体βサブユニットペプチドの生成を妨げ、それによって、細胞表面上のＣＤ３の発現を制限し得る。あるいは、阻害性核酸は、ＣＤ３を直接標的とし得るか、または内因性ＴＣＲおよびＣＤ３の成分の両方を標的とし得る。本明細書では、Ｔ細胞（例えば、内因性ＴＣＲおよび／またはＣＤ３の成分）に見られる遺伝子の発現を減少させるために、１、２、３、４またはそれ以上の阻害性核酸を使用してもよいことが企図される。例示的かつ非限定的な阻害性核酸分子には、限定するものではないが、ＲＮＡ干渉分子、例えば、短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ヘアピンｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）または前駆体ｍｉＲＮＡが含まれる。阻害性核酸分子は、マイクロＲＮＡ適合ｓｈＲＮＡをさらに含むことができる。
ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、ｍｅｇａＴＡＬおよびＣＲＩＳＰＲ系の使用を含む、内因性ＴＣＲ遺伝子の発現を破壊するためのヌクレアーゼの使用が開示されている（例えば、Ｏｓｂｏｒｎ ｅｔ ａｌ．（２０１６），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ２４（３）：５７０－５８１；Ｅｙｑｕｅｍ ｅｔ ａｌ．（２０１７），Ｎａｔｕｒｅ５４３：１１３－１１７；米国特許第８，９５６，８２８号明細書；米国特許公開第２０１４／０３０１９９０号明細書；米国特許公開第２０１２／０３２１６６７号明細書）。ヒトＴＲＡＣ遺伝子のＤＮＡ標的を切断するための操作されたメガヌクレアーゼの具体的な使用も以前に開示されている。例えば、ＴＣＲα定常領域遺伝子のエクソン１内の認識配列を標的とするように操作されたＩ－ＯｎｕＩメガヌクレアーゼの変異体を開示した国際公開第２０１４／１９１５２７号パンフレット。さらに、国際公開第２０１７／０６２４３９号パンフレットおよび国際公開第２０１７／０６２４５１号パンフレットでは、出願人らは、ＴＣＲα定常領域遺伝子のエクソン１内の認識配列に対して特異性を有する操作されたメガヌクレアーゼを開示した。これらには、ＴＲＡＣ遺伝子のエクソン１内のＴＲＣ１－２認識配列（配列番号１）に対して特異性を有する「ＴＲＣ１－２メガヌクレアーゼ」が含まれた。´４３９および´４５１の刊行物はまた、ＴＣＲα定常領域遺伝子内の切断部位へのＣＡＲコード配列または外因性ＴＣＲコード配列の標的挿入のための方法を開示した。
操作されたメガヌクレアーゼ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、ＴＡＬＥＮ、コンパクトＴＡＬＥＮ、ＣＲＩＳＰＲ系ヌクレアーゼまたはｍｅｇａＴＡＬを含む任意の操作されたヌクレアーゼをドナー鋳型の標的挿入に使用することができる。
例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）は、ゲノム内の所定の部位を認識および切断するように操作することができる。ＺＦＮは、エンドヌクレアーゼまたはエキソヌクレアーゼ（例えば、ＦｏｋＩ制限酵素などのＩＩｓ型制限エンドヌクレアーゼ）由来のヌクレアーゼドメインに融合したジンクフィンガーＤＮＡ結合ドメインを含むキメラタンパク質である。ジンクフィンガードメインは、天然配列であり得るか、または合理的手段もしくは実験的手段によって再設計されて、長さが約１８塩基対の所定のＤＮＡ配列に結合するタンパク質を産生することができる。この操作されたタンパク質ドメインをヌクレアーゼドメインに融合することによって、ゲノムレベルの特異性でＤＮＡ切断を標的とすることが可能である。ＺＦＮは、広範囲の真核生物に対する遺伝子の付加、除去および置換を標的とするために広く使用されている（Ｓ．Ｄｕｒａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ３３，５９７８（２００５）に概説されている）。
同様に、ＴＡＬ－エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）を生成して、ゲノムＤＮＡの特定の部位を切断することができる。ＺＦＮと同様に、ＴＡＬＥＮは、エンドヌクレアーゼまたはエキソヌクレアーゼ（例えば、ＦｏｋＩ制限酵素などのＩＩｓ型制限エンドヌクレアーゼ）に融合した操作された部位特異的ＤＮＡ結合ドメインを含む（Ｍａｋ，ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｓｔｒｕｃｔ Ｂｉｏｌ．２３：９３－９に概説されている）。ただし、この場合、ＤＮＡ結合ドメインは、各々単一のＤＮＡ塩基対を特異的に認識するＴＡＬ－エフェクタードメインのタンデムアレイを含む。
コンパクトＴＡＬＥＮは、二量体化の必要性を回避する代替的なエンドヌクレアーゼ構造である（Ｂｅｕｒｄｅｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ．４：１７６２）。コンパクトＴＡＬＥＮは、Ｉ－ＴｅｖＩホーミングエンドヌクレアーゼ、または米国特許出願第２０１３０１１７８６９号明細書の表２に列挙されているエンドヌクレアーゼのいずれか由来のヌクレアーゼドメインに融合した操作された部位特異的ＴＡＬ－エフェクターＤＮＡ結合ドメインを含む。コンパクトＴＡＬＥＮは、ＤＮＡプロセシング活性のために二量体化を必要としないため、コンパクトＴＡＬＥＮは単量体として機能的である。
ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系に基づく操作されたエンドヌクレアーゼも当技術分野で公知である（Ｒａｎ，ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｎａｔ Ｐｒｏｔｏｃ．８：２２８１－２３０８；Ｍａｌｉ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｎａｔ Ｍｅｔｈｏｄｓ．１０：９５７－６３）。ＣＲＩＳＰＲ系は、２つの成分、すなわち、（１）ＣＲＩＳＰＲヌクレアーゼと、（２）ヌクレアーゼをゲノム内の目的の位置に導く約２０ヌクレオチドの標的化配列を含む短い「ガイドＲＮＡ」とを含む。ＣＲＩＳＰＲ系はまた、ｔｒａｃｒＲＮＡを含み得る。各々が異なる標的化配列を有する複数のガイドＲＮＡを同じ細胞内で発現させることによって、ゲノム内の複数の部位に対して同時にＤＮＡ切断を標的化することが可能である。
１２塩基対を超える認識配列で二本鎖ＤＮＡに結合する操作されたメガヌクレアーゼを本開示の方法に使用することができる。メガヌクレアーゼは、Ｉ－ＣｒｅＩに由来するエンドヌクレアーゼであり得、例えば、ＤＮＡ結合特異性、ＤＮＡ切断活性、ＤＮＡ結合親和性または二量体化特性に関して天然のＩ－ＣｒｅＩと比較して改変された、Ｉ－ＣｒｅＩの操作された変異体を指し得る。Ｉ－ＣｒｅＩのそのような改変された変異体を生成するための方法は、当技術分野で公知である（例えば、参照によりその全体が組み込まれる国際公開第２００７／０４７８５９号パンフレット）。本明細書で使用されるメガヌクレアーゼは、ヘテロ二量体として二本鎖ＤＮＡに結合する。メガヌクレアーゼはまた、一対のＤＮＡ結合ドメインがペプチドリンカーを使用して単一のポリペプチドに連結されている「一本鎖メガヌクレアーゼ」であり得る。
ｍｅｇａＴＡＬと呼ばれるヌクレアーゼは、操作された配列特異的ホーミングエンドヌクレアーゼを有する転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）ＤＮＡ結合ドメインを含む一本鎖エンドヌクレアーゼである。
本明細書に記載の導入遺伝子は、例えば、ＴＣＲα遺伝子、ＴＲＡＣ遺伝子、ＴＣＲβ遺伝子またはＴＲＢＣ遺伝子内の任意の位置に挿入することができ、その結果、導入遺伝子の挿入により、内因性ポリペプチド、すなわち、内因性ＴＣＲα鎖または内因性ＴＣＲβ鎖の発現が破壊される。いくつかの例では、導入遺伝子は、配列番号１を含むメガヌクレアーゼ認識配列でＴＲＡＣ遺伝子に挿入され得る。特定の例では、導入遺伝子は、配列番号１の１３位と１４位との間に挿入される。
特定の実施形態では、本発明を実施するために使用されるヌクレアーゼは、一本鎖メガヌクレアーゼである。一本鎖メガヌクレアーゼは、リンカーペプチドによって連結されたＮ末端サブユニットおよびＣ末端サブユニットを含む。２つのドメインの各々は、認識配列の半分（すなわち、認識ハーフサイト）を認識し、ＤＮＡ切断の部位は、この２つのサブユニットの界面付近の認識配列の中央にある。ＤＮＡ鎖切断は、メガヌクレアーゼによるＤＮＡ切断が一対の４塩基対の３´一本鎖オーバーハングを生成するように、４塩基対によって相殺される。例えば、操作された一本鎖メガヌクレアーゼを使用するヌクレアーゼ媒介性挿入は、国際公開第２０１７／０６２４３９号パンフレットおよび国際公開第２０１７／０６２４５１号パンフレットに開示されている。ドナー鋳型のヌクレアーゼ媒介性挿入は、配列番号１２を含む操作された一本鎖メガヌクレアーゼを使用して達成することもできる。
いくつかの実施形態では、操作されたヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡが細胞に送達され、これにより、操作されたヌクレアーゼをコードする該遺伝子が細胞のゲノムに組み込まれる可能性を低減する。
操作されたヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡは、当技術分野で公知の方法、例えば、インビトロ転写を使用して生成することができる。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、改変された５´キャップを含む。そのような改変された５´キャップは当技術分野で公知であり、限定するものではないが、抗逆キャップ類似体（ＡＲＣＡ：ａｎｔｉ－ｒｅｖｅｒｓｅ ｃａｐ ａｎａｌｏｇ）（米国特許第７０７４５９６号明細書）、７－メチル－グアノシン、ＣｌｅａｎＣａｐ（登録商標）類似体、例えばＣａｐ１類似体（Ｔｒｉｌｉｎｋ；Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を含み得るか、または例えばワクシニアキャップ酵素などを使用して酵素的にキャップされ得る。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、ポリアデニル化され得る。ｍＲＮＡは、コードされた操作されたヌクレアーゼの発現および／またはｍＲＮＡ自体の安定性を増強するために、様々な５´および３´非翻訳配列エレメントを含み得る。そのようなエレメントには、例えば、ウッドチャック肝炎ウイルス翻訳後制御エレメントなどの翻訳後制御エレメントが含まれ得る。ｍＲＮＡは、ヌクレオシド類似体への天然に存在するヌクレオシドの修飾を含み得る。当技術分野で公知の任意のヌクレオシド類似体が、本方法に使用するために想定される。そのようなヌクレオシド類似体には、例えば、米国特許第８，２７８，０３６号明細書に記載されているものが含まれ得る。特定の実施形態では、ヌクレオシド修飾は、プソイドウリジンへのウリジンの修飾、および／またはＮ１－メチルプソイドウリジンへのウリジンの修飾を含み得る。
別の特定の実施形態では、操作されたヌクレアーゼをコードする核酸は、一本鎖ＤＮＡ鋳型を使用して細胞に導入され得る。一本鎖ＤＮＡは、操作されたヌクレアーゼをコードする配列の上流および／または下流に５´および／または３´ＡＡＶ逆方向末端反復配列（ＩＴＲ）をさらに含むことができる。他の実施形態では、一本鎖ＤＮＡは、操作されたヌクレアーゼをコードする配列の上流および／または下流に５´および／または３´相同アームをさらに含むことができる。
他の実施形態では、本発明のヌクレアーゼをコードする遺伝子は、線状化ＤＮＡ鋳型を使用して細胞に導入される。そのような線状化ＤＮＡ鋳型は、当技術分野で公知の方法によって生成することができる。例えば、環状プラスミドＤＮＡが細胞に導入される前に線状化されるように、ヌクレアーゼをコードするプラスミドＤＮＡが、１つ以上の制限酵素によって消化され得る。
導入遺伝子を細胞に導入するための本明細書に詳述されているものを含む、当技術分野で公知の様々な異なる機構によってゲノムＤＮＡを切断するために、精製された操作されたヌクレアーゼタンパク質、または操作されたヌクレアーゼをコードする核酸が細胞に送達され得る。
２．１１ 遺伝子改変細胞の投与方法
本明細書に開示される別の態様は、それを必要とする対象への本開示の遺伝子改変細胞（例えば、ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲを発現し、細胞表面上にＣＤ３を発現しないように改変されたＴ細胞）の投与である。例えば、遺伝子改変細胞の集団の有効量が、疾患、疾患の症状、または疾患のマーカを有する対象に投与され得る。特定の実施形態では、疾患は癌であり得、本発明の遺伝子改変免疫細胞の投与は、同種異系細胞免疫療法などの免疫療法を表す。
例えば、細胞表面ＣＡＲまたは外因性ＴＣＲを発現する、本明細書に記載の外因性ポリヌクレオチドを含む細胞の集団の有効量が、疾患を有する対象に投与され得る。したがって、本開示はまた、哺乳動物の標的細胞集団または組織にＴ細胞媒介性免疫応答を提供する方法であって、ＣＡＲ Ｔ細胞を哺乳動物に投与する工程を含み、ＣＡＲが、腫瘍抗原などの所定の標的と特異的に相互作用する細胞外リガンド結合ドメインと、ＣＤ３ζなどの少なくとも１つのシグナル伝達ドメイン、および場合により１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインとを含む方法を提供する。投与されたＣＡＲ Ｔ細胞は、レシピエントにおける増殖を減少させるか、数を減少させるか、または標的細胞を死滅させることができる。そのような方法はまた、例えば、外因性ＴＣＲを発現する遺伝子改変Ｔ細胞、またはＣＡＲもしくは外因性ＴＣＲを発現する遺伝子改変ＮＫ細胞の投与を含み得る。抗体療法とは異なり、本開示の遺伝子改変細胞は、インビボで複製および増殖し、長期持続性をもたらすことができ、これにより、疾患の持続的制御をもたらし得る。
一定の実施形態では、遺伝子改変細胞の集団が提供され、集団内の細胞の少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または最大１００％は、本明細書に記載の遺伝子改変細胞（例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または外因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現し、細胞表面上にＣＤ３を発現しないように改変された細胞の集団）である。
さらに、遺伝子改変細胞の増殖を促進し、宿主対移植片拒絶の可能性または重症度を低減するために、対象は、遺伝子改変細胞の投与前、投与と同時、または投与後に、本明細書に記載のリンパ球枯渇レジメンを受け得る。特定の実施形態では、対象には、本明細書で提供されるリンパ球枯渇化学療法剤および／またはＣＤ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片（すなわち、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片）を含むリンパ球枯渇療法が施される。対象には、リンパ球枯渇療法を実施した同じ医師または異なる医師などから、本明細書に記載の遺伝子改変細胞（例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または外因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現し、細胞表面上にＣＤ３を発現しないように改変された細胞）が投与され得る。
対象には、例えば、１×１０３～１×１０９遺伝子改変細胞／ｋｇの投与量で遺伝子改変細胞が投与され得る。したがって、いくつかの実施形態では、対象には、約１×１０３～約１×１０９遺伝子改変細胞／ｋｇの投与量で、本明細書に記載の遺伝子改変細胞が投与される。いくつかの実施形態では、対象には、約１×１０４～約１×１０７遺伝子改変細胞／ｋｇの投与量で、本明細書に記載の遺伝子改変細胞が投与される。いくつかの実施形態では、対象には、約１×１０５～約１×１０６遺伝子改変細胞／ｋｇの投与量で、本明細書に記載の遺伝子改変細胞が投与される。
本明細書に記載の遺伝子改変細胞またはリンパ球枯渇レジメンを含む組成物の可能な投与経路の例には、非経口（例えば、静脈内（ＩＶ）、筋肉内（ＩＭ）、皮内、皮下（ＳＣ）または注入）投与が挙げられる。さらに、投与は、連続注入または単回もしくは複数回のボーラスによるものであり得る。具体的な実施形態では、薬剤の一方または両方は、約１２時間未満、約１０時間未満、約８時間未満、約６時間未満、約４時間未満、約３時間未満、約２時間未満または約１時間未満の期間にわたって注入される。さらに他の実施形態では、注入は、最初はゆっくり行われ、次いで経時的に増加される。
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子改変細胞は、癌を治療する目的のために腫瘍抗原を標的とする。そのような癌には、限定するものではないが、本明細書の他の箇所に記載されている癌が含まれ得る。
癌が本開示の遺伝子改変細胞を用いて治療されるこれらの実施形態のいくつかでは、遺伝子改変細胞が投与された対象に、限定するものではないが、遺伝子療法、放射線、手術または化学療法剤（すなわち、化学療法）を含む追加の治療剤または治療がさらに施される。
「有効量」または「治療量」が示される場合、投与される本開示の組成物の正確な量は、年齢、体重、腫瘍サイズ（存在する場合）、感染または転移の程度、および対象の状態の個人差を考慮して医師により決定され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子改変細胞を含む医薬組成物は、それらの範囲内のあらゆる整数値を含めて、１０３～１０９細胞／ｋｇ体重の投与量で投与される。さらなる実施形態では、投与量は、それらの範囲内のあらゆる整数値を含めて、１０５～１０６細胞／ｋｇ体重である。いくつかの実施形態では、細胞組成物は、これらの投与量で複数回投与される。遺伝子改変細胞は、免疫療法では一般に知られている注入技術を使用することによって投与され得る（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｗ Ｅｎｇ．Ｊ．ｏｆ Ｍｅｄ．３１９：１６７６，１９８８を参照）。特定の対象に対する最適な投与量および治療レジメンは、疾患の徴候について対象をモニタリングし、それに応じて治療を調整することによって、医学の当業者によって容易に決定され得る。
いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子改変細胞の投与は、標的疾患または病状の少なくとも１つの症状を低減する。例えば、本開示の遺伝子改変細胞の投与は、Ｂ細胞起源の癌などの癌の少なくとも１つの症状を低減することができる。Ｂ細胞起源の癌などの癌の症状は、当技術分野で周知であり、公知の技術によって決定され得る。
本発明は、以下の実施例によってさらに説明されるが、これらは限定として解釈されるべきではない。当業者であれば、常用的な実験のみを使用して、本明細書に記載の特定の物質および手順に対する多数の等価物を認識するか、または確認することができるであろう。そのような等価物は、以下の実施例に続く特許請求の範囲に包含されることが意図される。
実施例１
ＣＡＲ Ｔ細胞溶解の防止における抗ＣＤ３抗体の使用
方法
白血球フェレーシス産物は、ＨｅｍａＣａｒｅ（対象Ｄ２７０１８５由来：健康な同意ドナー）から供給された。ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ抗ヒトＣＤ４およびＣＤ８マイクロビーズならびにＣｌｉｎｉＭＡＣＳセパレータ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して、Ｔ細胞を濃縮した。５％プールヒトＡＢ血清（Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）および１０ｎｇ／ｍｌインターロイキン－２（ＩＬ－２：ＣｅｌｌＧｅｎｉｘ）を補充したＸｕｒｉ Ｔ細胞増殖培地（ＧＥ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）中で３日間にわたり、ＴｒａｎｓＡｃｔ抗ＣＤ３／ＣＤ２８（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を用いて、Ｔ細胞を刺激した。３日目に、Ｔ細胞に、Ｌｏｎｚａ ４－Ｄ Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒを使用したエレクトロポレーションによって、ＴＲＣ １－２Ｌ．１５９２メガヌクレアーゼ（ＰＣＴ国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０２７０１９号明細書を参照）をコードするｍＲＮＡ（ＴｒｉＬｉｎｋ）を１×１０６細胞当たり１μｇ投与した。エレクトロポレーションした細胞に、２０，０００ウイルスゲノム／細胞のＭＯＩでＡＡＶ７２０６を直ちに形質導入した。エレクトロポレーション／形質導入の５日後、ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製のＣＤ３選択キットを使用して、ＣＤ３＋細胞を枯渇させた。
ＣＤ３枯渇抗体に対する感受性を測定するために、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ：ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）アッセイを行った。丸底９６ウェルプレートのウェル内で、３０％のｏｆｆ－ｔｈｅ－ｃｌｏｔヒト血清（Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）と、示された濃度のＡＴＧＡＭ（ウマ抗ヒト胸腺細胞グロブリン、Ｐｆｉｚｅｒ）またはフォラルマブバイオシミラー（Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｌａｂｓ）とを補充した２００μｌのＸｕｒｉ培地に、２．０×１０５細胞をプレーティングした。培養物を３７°Ｃで２４時間インキュベートした後、１μｇ／ｍｌヨウ化プロピジウム（Ｓｉｇｍａ）を用いて標識し、ＣｙｔｏＦＬＥＸ－ＬＸ（Ｂｅｃｋｍａｎ－Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して生細胞数について分析した。
結果
ＣＤ３枯渇ＣＡＲ Ｔ細胞調製物をＡＴＧＡＭに曝露し、殺傷率を計算した（図１Ａ）。Ａｂなし対照と比較して、ほぼ全部のＣＡＲ Ｔ細胞が、８００μｇ／ｍｌのＡＴＧＡＭの存在下で死滅した。約８０％が４００μｇ／ｍｌの存在下で死滅し、ほぼ半分が２００μｇ／ｍｌの存在下で死滅した。これは、血清活性およびアッセイ時間が、抗体媒介性細胞傷害効率の範囲を視覚化するのに適切であったことを示す。
示された濃度のフォラルマブバイオシミラー（３０～４０００ｎｇ／ｍｌ）に、ＣＤ３枯渇ＣＡＲ Ｔ調製物または未編集ＣＤ３＋Ｔ細胞を曝露した。細胞溶解率を図１Ｂに示す。ゼロ抗体対照試料と比較して、ＣＡＲ Ｔ試料では中程度のレベルのＣＤＣしか観察されず（１０％以下）、フォラルマブバイオシミラー濃度とともにＣＤＣが増加することは見られなかった。ただし、ＣＤ３＋対照Ｔ細胞は、試験した全濃度で効果的に死滅し、用量依存的な増加は、フォラルマブバイオシミラーが１０００ｎｇ／ｍｌ未満で存在し、最大ＣＤＣレベルが約６５％死滅であった場合に明らかである。
結論
フォラルマブバイオシミラーは、ＣＤ３＋Ｔ細胞の補体依存性溶解を効果的に媒介するが、ＴＲＡＣ編集ＣＡＲ Ｔ細胞は、この薬物に耐性である。ＣＡＲ Ｔ注入後にフォラルマブバイオシミラーを投与される患者のＴＲＡＣ編集ＣＡＲ Ｔ細胞は、患者の内因性Ｔ細胞が排除されている間に枯渇を選択的に生き延び、宿主の免疫系によるＣＡＲ Ｔ細胞の拒絶をおそらく遅らせることが予測される。

Claims (48)

  1. それを必要とする対象の癌を治療するための免疫療法の方法であって、
    （ａ）前記対象のリンパ球の集団を枯渇させるのに有効な量で、ＣＤ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を前記対象に投与すること、および
    （ｂ）細胞表面上に検出可能なＣＤ３を有しない遺伝子改変Ｔ細胞の集団を含む組成物を前記対象に投与することを含み、
    遺伝子改変Ｔ細胞の前記集団が、そのゲノム内に、前記遺伝子改変Ｔ細胞によって発現されるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または外因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする外因性ポリヌクレオチドを含む方法。
  2. 遺伝子改変Ｔ細胞の前記集団を含む前記組成物の投与前に、リンパ球枯渇化学療法剤または追加のリンパ球枯渇抗体を前記対象に投与することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
  3. 前記抗体またはその抗原結合断片が、遺伝子改変Ｔ細胞の前記集団を含む前記組成物の投与前に前記対象に投与される、請求項１または請求項２に記載の方法。
  4. 前記抗体またはその抗原結合断片が、遺伝子改変Ｔ細胞の前記集団を含む前記組成物の投与と同時に前記対象に投与される、請求項１または請求項２に記載の方法。
  5. 前記抗体またはその抗原結合断片が、遺伝子改変Ｔ細胞の前記集団を含む前記組成物の投与後に前記対象に投与される、請求項１または請求項２に記載の方法。
  6. それを必要とする対象の癌を治療するための免疫療法の方法であって、細胞表面上に検出可能なＣＤ３を有しない遺伝子改変Ｔ細胞の集団を含む組成物を前記対象に投与することを含み、
    遺伝子改変Ｔ細胞の前記集団が、そのゲノム内に、前記遺伝子改変Ｔ細胞によって発現されるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または外因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする外因性ポリヌクレオチドを含み、
    前記対象には、前記対象のリンパ球の集団を枯渇させるのに有効な量で、リンパ球枯渇化学療法剤と、ＣＤ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片とが以前に投与されている方法。
  7. それを必要とする対象の癌を治療するための免疫療法の方法であって、前記対象のリンパ球の集団を枯渇させるのに有効な量で、ＣＤ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を前記対象に投与することを含み、
    前記対象には、細胞表面上に検出可能なＣＤ３を有しない遺伝子改変Ｔ細胞の集団を含む組成物が以前に投与されており、
    遺伝子改変Ｔ細胞の前記集団が、そのゲノム内に、前記遺伝子改変Ｔ細胞によって発現されるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または外因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする外因性ポリヌクレオチドを含む方法。
  8. 前記抗体またはその抗原結合断片が、遺伝子改変Ｔ細胞の前記集団の投与の１～３０日前に前記対象に投与される、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
  9. 前記抗体またはその抗原結合断片が、前記リンパ球枯渇化学療法剤の投与前に前記対象に投与される、請求項２から６のいずれか一項に記載の方法。
  10. 前記抗体またはその抗原結合断片が、前記リンパ球枯渇化学療法剤の投与と同時に前記対象に投与される、請求項２から６のいずれか一項に記載の方法。
  11. 前記抗体またはその抗原結合断片が、前記リンパ球枯渇化学療法剤の投与後に前記対象に投与される、請求項２から６のいずれか一項に記載の方法。
  12. 前記抗体またはその抗原結合断片が、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１．０ｍｇ／ｋｇの用量で前記対象に投与される、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
  13. 前記抗体またはその抗原結合断片が、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、二重特異性抗体、二重可変免疫グロブリンドメイン、一本鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）、ｓｄＡｂ、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体様タンパク質足場、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ´）２分子およびタンデムｄｉ－ｓｃＦｖからなる群から選択される、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
  14. 前記抗体またはその抗原結合断片が、前記遺伝子改変Ｔ細胞に検出可能に結合しない、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
  15. 遺伝子改変Ｔ細胞の前記集団を含む前記組成物が、１×１０３～１×１０９遺伝子改変細胞／ｋｇの用量で前記対象に投与される、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
  16. 前記リンパ球枯渇化学療法剤が、遺伝子改変Ｔ細胞の前記集団を含む前記組成物の投与の３日以上前に投与される、請求項２から１５のいずれか一項に記載の方法。
  17. 前記リンパ球枯渇化学療法剤が、遺伝子改変Ｔ細胞の前記集団を含む前記組成物の投与の７日以内前に投与される、請求項２から１５のいずれか一項に記載の方法。
  18. 前記リンパ球枯渇化学療法剤が、フルダラビン、シクロホスファミド、ベンダムスチン、メルファラン、６－メルカプトプリン（６－ＭＰ）、ダウノルビシン、シタラビン、Ｌ－アスパラギナーゼ、メトトレキセート、プレドニゾン、デキサメタゾン、ネララビンであり、前記追加のリンパ球枯渇抗体が、抗ＣＤ５２抗体（例えばアレムツズマブ）もしくはリツキシマブまたはそれらの組合せである、請求項２から１７のいずれか一項に記載の方法。
  19. シクロホスファミドが、約２５０～１５００ｍｇ／ｍ２／日の用量で前記対象に投与される、請求項１８に記載の方法。
  20. シクロホスファミドが、約５００～１０００ｍｇ／ｍ２／日の用量で前記対象に投与される、請求項１８に記載の方法。
  21. シクロホスファミドが、約５００ｍｇ／ｍ２／日の用量で前記対象に投与される、請求項１８に記載の方法。
  22. シクロホスファミドが、遺伝子改変Ｔ細胞の前記集団を含む前記組成物の投与の５日前から開始して２～３日前まで連日約５００ｍｇ／ｍ２／日の用量で前記対象に投与される、請求項２１に記載の方法。
  23. シクロホスファミドが、約１０００ｍｇ／ｍ２／日の用量で前記対象に投与される、請求項１８に記載の方法。
  24. シクロホスファミドが、遺伝子改変Ｔ細胞の前記集団を含む前記組成物の投与の４日前から開始して２～３日前まで連日約１０００ｍｇ／ｍ２／日の用量で前記対象に投与される、請求項２３に記載の方法。
  25. フルダラビンが、１０～４０ｍｇ／ｍ２／日の用量で前記対象に投与される、請求項１８に記載の方法。
  26. フルダラビンが、３０ｍｇ／ｍ２／日の用量で前記対象に投与される、請求項１８に記載の方法。
  27. フルダラビンが、遺伝子改変Ｔ細胞の前記集団を含む前記組成物の投与の５日前から開始して２～３日前まで連日約３０ｍｇ／ｍ２／日の用量で前記対象に投与される、請求項２６に記載の方法。
  28. フルダラビンが、遺伝子改変Ｔ細胞の前記集団を含む前記組成物の投与の７日前から開始して２～３日前まで連日約３０ｍｇ／ｍ２／日の用量で前記対象に投与される、請求項２６に記載の方法。
  29. 前記リンパ球枯渇化学療法剤が、追加の化学療法剤、手術、放射線および遺伝子療法からなる群から選択される追加の癌療法と組み合わせて投与される、請求項２から２８のいずれか一項に記載の方法。
  30. 前記ＣＡＲまたは前記外因性ＴＣＲが、癌細胞の表面上の分子に特異的に結合する、請求項１から２９のいずれか一項に記載の方法。
  31. 前記ＣＡＲが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＢＣＭＡ、ＣＬＬ１、ＣＳ１（ＳＬＡＭＦ７）、ＭＵＣ１、ＦＬＴ３、ＨＰＶ１６ Ｅ６またはＨＰＶ１６ Ｅ７に特異的に結合する、請求項３０に記載の方法。
  32. 前記外因性ポリヌクレオチドが、前記遺伝子改変Ｔ細胞のゲノム内の標的遺伝子内にある、請求項１から３１のいずれか一項に記載の方法。
  33. 前記標的遺伝子が、ＴＣＲα遺伝子、ＴＣＲα定常（ＴＲＡＣ）遺伝子、ＴＣＲβ遺伝子またはＴＣＲβ定常（ＴＲＢＣ）遺伝子からなる群から選択される、請求項３２に記載の方法。
  34. 前記遺伝子改変Ｔ細胞が、内因性Ｔ細胞受容体の検出可能な細胞表面発現を有しない、請求項１から３３のいずれか一項に記載の方法。
  35. 前記遺伝子改変Ｔ細胞が、ヒトＴ細胞、またはそれに由来する細胞である、請求項１から３４のいずれか一項に記載の方法。
  36. 前記癌が、癌腫、リンパ腫、肉腫、芽細胞腫、骨髄腫および白血病の癌からなる群から選択される、請求項１から３５のいずれか一項に記載の方法。
  37. 前記癌が、肺癌、黒色腫、乳癌、前立腺癌、結腸癌、腎細胞癌、卵巣癌、神経芽腫、横紋筋肉腫、白血病、リンパ腫、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、小細胞肺癌、ホジキンリンパ腫および小児急性リンパ芽球性白血病からなる群から選択される、請求項１から３６のいずれか一項に記載の方法。
  38. 前記癌が、Ｂ細胞起源の癌からなる群から選択される、請求項１から３５のいずれか一項に記載の方法。
  39. Ｂ細胞起源の前記癌が、Ｂ系統急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病およびＢ細胞非ホジキンリンパ腫からなる群から選択される、請求項３８に記載の方法。
  40. （ａ）ＣＤ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片と、
    （ｂ）遺伝子改変Ｔ細胞の集団を含む組成物であって、遺伝子改変Ｔ細胞の前記集団が、そのゲノム内に、前記遺伝子改変Ｔ細胞によって発現されるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または外因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする外因性ポリヌクレオチドを含む組成物と、
    を含むキット。
  41. （ａ）リンパ球枯渇化学療法剤と、
    （ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片と、
    （ｃ）遺伝子改変Ｔ細胞の集団を含む組成物であって、遺伝子改変Ｔ細胞の前記集団が、そのゲノム内に、前記遺伝子改変Ｔ細胞によって発現されるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または外因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする外因性ポリヌクレオチドを含む組成物と、
    を含むキット。
  42. 前記リンパ球枯渇化学療法剤が、フルダラビン、シクロホスファミドまたはそれらの組合せである、請求項４１に記載のキット。
  43. 前記外因性ポリヌクレオチドが、前記遺伝子改変Ｔ細胞のゲノム内の標的遺伝子内にある、請求項４０から４２のいずれか一項に記載のキット。
  44. 前記標的遺伝子が、ＴＣＲα遺伝子、ＴＲＡＣ遺伝子、ＴＣＲβ遺伝子またはＴＲＢＣ遺伝子からなる群から選択される、請求項４３に記載のキット。
  45. 前記遺伝子改変Ｔ細胞が、ヒトＴ細胞、またはそれに由来する細胞である、請求項４０から４４のいずれか一項に記載のキット。
  46. 前記ＣＡＲまたは前記外因性ＴＣＲが、癌細胞の表面上の分子に特異的に結合する、請求項４０から４５のいずれか一項に記載のキット。
  47. 前記ＣＡＲが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＢＣＭＡまたはＣＬＬ１に特異的に結合する、請求項４６に記載のキット。
  48. 癌を治療する際の前記キットの構成要素の使用説明書をさらに含む、請求項４０から４７のいずれか一項に記載のキット。
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