JP2022541955A - 試薬カード、検出方法および応用 - Google Patents
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Abstract
試薬カード、検出方法および応用であって、トップカバーとボトムカバーとは位置決め孔（Ｄ０１）と位置決めポスト（Ｇ０１）を介して係着することによって試験紙ストリップを固定し、ボトムカバーの内部にスロット構造（Ｄ０２、Ｄ０６）、突起プラットホーム（Ｄ０４）が設置され、スロット構造（Ｄ０２、Ｄ０６）内に支持突起（Ｄ０３）が設置され、支持突起（Ｄ０３）の高さは突起プラットホーム（Ｄ０４）の高さ以下であり、トップカバーには、固定板（Ｇ０２、Ｇ０３、Ｇ０４、Ｇ０６）、反応窓（Ｇ０５）、試料添加孔（Ａ）、検出液孔（Ｂ）が設置され、トップカバーとボトムカバーとが位置決め孔（Ｄ０１）と位置決めポスト（Ｇ０１）を介して係着された後、トップカバーの固定板（Ｇ０２、Ｇ０３、Ｇ０４、Ｇ０６）と検出液孔（Ｂ）の押圧で、試験紙ストリップの中部は上方に突出し、水平面と「アーチブリッジ」構造を形成する。この「アーチブリッジ」構造は検出液の液体の試験紙ストリップにおける流れ方向とクロマトグラフィ速度を制御し、さらに試薬カードの検出結果の正確度と精度を向上させ、微量試料を正確に検出する目的を達成する。【選択図】図６ｂ
Description
本出願は、２００９年７月１９日に中国専利局に提出した、出願番号が２０１９１０６５７０８１．５であり、発明名称が「試薬カード、検出方法および応用」である中国特許出願の優先権を主張し、その全内容は引用により本出願に組み込まれるものとする。
本発明は試薬カードに関し、具体的には微量試料のインビトロにおける正確で簡便な検出用の試薬カード、検出方法および応用である。
ＰＯＣＴ、すなわち即時検査（ｐｏｉｎｔ－ｏｆ－ｃａｒｅ ｔｅｓｔｉｎｇ）とは、患者の隣で行う臨床検査とベッドサイド検査（ｂｅｄｓｉｄｅ ｔｅｓｔｉｎｇ）を指し、通常は必ずしも臨床検査師ではなく、サンプリング現場で即時に分析を行い、標本が実験室で検査される時の複雑な処理手順を省き、検査結果を迅速に得る新しい方法である。
試薬カードは即時検査において一般的に使用されるツールであり、血液、尿、糞便、および他の体液中の生化学的物質、例えば血清、血漿、および尿中のビリルビンおよびタンパク質、グルコース、ヘム、ケトン体、亜硝酸塩、ウロビリノーゲンなどのバイオマーカーを検査するために利用される。
試薬カードはカードケース（トップカバーおよびボトムカバー）とカードケース内の試験紙ストリップから構成され、試験紙ストリップはボトムカバーのスロット内に固定され、トップカバーとボトムカバーを係合してから試薬カードとして組み立てられる。
現在の高速検出技術は、一般的には、試料体積に対して少なくとも１０μＬを必要とする。しかし、臨床的には、例えば涙液試料のように、わずか１μＬまたはそれよりも少ない量しか得られない試料もある。
従来の高速検出技術では、試料体積が非常に微量、例えば２μＬである場合、試料に対して希釈などの追加ステップの操作処理を行うと、必然的に検出感度、精度および正確度を低下させ、検出操作の複雑さを増大させ、ツールに対する要求が高まり、エラーを発生する確率が高くなる。
従来の高速検出技術は、その感度が一般的に０．０５ｎｇ／ｍＬ（蛍光免疫検出０．１ｎｇ／ｍＬ、量子ドット０．０５ｎｇ／ｍＬ）であり、精度が一般的に５％～１５％である。検出対象物の総量検出下限値で計算する場合、約０．５ｐｇであり、微量試料では試験が困難である。
眼疾患では、眼器官の感受性および脆弱性のために、それらは検出に対して要求が高いが、実際の操作では、目から採取できる試料の涙液、房水、眼表面リンス液はすべて微量試料に属するため、検出の難易度が高い。例えば患者の眼赤腫、結膜うっ血が発生した場合、臨床医師は検出技術を借りず、病因を判断することが困難であり、感染かアレルギーかによって引き起こされ、病因を正確かつ迅速に診断することは薬剤使用の指導に対して非常に重要な作用を有する。アレルギーによる場合には抗アレルギー薬を使用したり、感染による場合、例えばウイルス感染またはアメーバ感染の場合には抗ウイルスまたは対応する抗アメーバ感染治療を使用する。誤診により感染した眼に抗アレルギー薬、ひいてはホルモンが使用された場合、患者の病状がさらに深刻に悪化し、ひいては深刻な医療事故を引き起こす可能性がある。
これに鑑み、本発明は試薬カードを提供し、カードケース構造の特別な設計によって、検出液の液体の試験紙ストリップにおける流れ方向およびクロマトグラフィ速度を制御し、臨床上の微量試料を正確に検出する目的を達成し、従来技術における問題を解決するために利用される。
本発明は試薬カードを提供し、トップカバーと、ボトムカバーと、前記トップカバーと前記ボトムカバーで固定される試験紙ストリップとを含む試薬カードであって、
前記ボトムカバー内部にスロット構造、突起プラットホームが設置され、前記スロット構造内に支持突起が設置され、前記支持突起の高さは突起プラットホームの高さ以下であり、
前記トップカバーには固定板、反応窓、試料添加孔、検出液孔が設置され、前記反応窓、試料添加孔、検出液孔が順次に設置され、前記固定板は前記反応窓の両側に分布し、
前記試験紙ストリップを前記ボトムカバーのスロット構造に入れて固定した後、前記試験紙ストリップは前記突起プラットホームと支持突起によって支持され、前記トップカバーと前記ボトムカバーが位置決め孔と位置決めポストによって係着された後、前記トップカバーの固定板と検出液孔の押圧で、前記試験紙ストリップの中部は上方に突出する。
前記ボトムカバー内部にスロット構造、突起プラットホームが設置され、前記スロット構造内に支持突起が設置され、前記支持突起の高さは突起プラットホームの高さ以下であり、
前記トップカバーには固定板、反応窓、試料添加孔、検出液孔が設置され、前記反応窓、試料添加孔、検出液孔が順次に設置され、前記固定板は前記反応窓の両側に分布し、
前記試験紙ストリップを前記ボトムカバーのスロット構造に入れて固定した後、前記試験紙ストリップは前記突起プラットホームと支持突起によって支持され、前記トップカバーと前記ボトムカバーが位置決め孔と位置決めポストによって係着された後、前記トップカバーの固定板と検出液孔の押圧で、前記試験紙ストリップの中部は上方に突出する。
好ましくは、前記試験紙ストリップは３層又は４層構造を含み、第１層は底板であり、第２層は反応膜であり、第３層は吸収パッド、結合パッドおよびクッションパッドである。あるいは、第１層は底板であり、第２層は反応膜とクッションパッドであり、第３層は吸収パッドと結合パッドである。あるいは、第１層は底板であり、第２層は反応膜であり、第３層は吸収パッドと結合パッドであり、第４層はクッションパッドである。
前記反応膜は前記底板の中部に設置され、前記反応膜上に検出線Ｔと品質制御線Ｃが分布され、前記検出線Ｔと前記品質制御線Ｃは前記反応窓に対応し、
前記反応膜の一端に結合パッドが設置され、前記反応膜の他端に吸収パッドが設置され、前記結合パッドは前記試料添加孔に対応し、
前記結合パッドの上または下にクッションパッドが設置され、または前記結合パッドは前記クッションパッドに当接し、前記クッションパッドは前記検出液孔に対応する。
前記反応膜の一端に結合パッドが設置され、前記反応膜の他端に吸収パッドが設置され、前記結合パッドは前記試料添加孔に対応し、
前記結合パッドの上または下にクッションパッドが設置され、または前記結合パッドは前記クッションパッドに当接し、前記クッションパッドは前記検出液孔に対応する。
好ましくは、前記スロット構造の数は２つであり、前記突起プラットホームの両側に分布される。
好ましくは、前記スロット構造には、１～５個の支持突起が設置される。
好ましくは、前記スロット構造には、１～５個の支持突起が設置される。
好ましくは、前記スロット構造内には、３つの支持突起が設置される。
好ましくは、前記検出液孔に対応する前記スロット構造の両辺には、導流口が対称的に設置される。
好ましくは、前記検出液孔に対応する前記スロット構造の両辺には、導流口が対称的に設置される。
好ましくは、前記スロット構造の深さは１．２～１．７ｍｍであり、前記支持突起の高さは０．１～０．１５ｍｍであり、前記突起プラットホームの高さは０．１５～０．２５ｍｍである。
好ましくは、前記固定板の数は４つであり、それぞれ前記試験紙ストリップを固定するための第１固定板、前記試験紙ストリップを固定するための第２固定板、前記試験紙ストリップにおける前記吸収パッドと反応膜との結合を固定するための第３固定板、前記試験紙ストリップにおける前記反応膜と結合パッドとの結合を固定するための第４固定板である。前記第４固定板は、前記試料添加孔と前記反応窓との間に設置され、前記第１固定板、第２固定板、および第３固定板は、前記反応窓の他側に分布される。
好ましくは、第１固定板、第２固定板、第３固定板、第４固定板の幅は３～５ｍｍである。第１固定板、第２固定板の高さは１．０～１．５ｍｍであり、第３固定板、第４固定板の高さは０．１～０．３ｍｍである。
好ましくは、前記試料添加孔は漏斗状構造であり、トップカバーの正面円直径は４～６ｍｍであり、トップカバー内部円の直径は３～５ｍｍであり、突起高さは０．１～０．２ｍｍであり、孔壁と水平面とは３０°～４５°の角度をなす。
好ましくは、前記検出液孔は漏斗状構造であり、トップカバーの正面円直径は６～８ｍｍであり、トップカバーの内部円直径は１～３ｍｍであり、突起高さは０．３～０．５ｍｍであり、孔壁と水平面とは３０°～４５°の角度をなす。
好ましくは、前記反応窓は楕円形リング構造であり、トップカバーの正面楕円の長さは１５０～２００ｍｍであり、幅は７０～９０ｍｍであり、トップカバー内部円直径は１３０～１５０ｍｍであり、突起高さは０．１～０．２ｍｍであり、孔壁と水平面は３０°～４５°の角度をなし、反応窓内底部と試験紙ストリップの接触面は０．０１～０．０２ｍｍの垂直突起である。
好ましくは、前記トップカバーは、表面がねじ山状または凸状の突起構造である手持ち端部を含む。
好ましくは、前記トップカバーと前記ボトムカバーとは、位置決め孔および位置決めポストを介して係着される。
好ましくは、前記トップカバーと前記ボトムカバーとは、位置決め孔および位置決めポストを介して係着される。
前記反応膜に分布される検出線Ｔは、１本、２本または複数の本数である。
さらに、本出願は、上記の試薬カードのいずれかを使用して実現される検出方法をさらに提供する。
さらに、本出願は、上記の試薬カードのいずれかを使用して実現される検出方法をさらに提供する。
試料添加孔に試料を添加するステップ（１）において、
試料を収集した後、試料を前記試料添加孔内の結合パッドに添加し、結合パッド上にナノマイクロスフェア結合抗体、すなわち抗体ナノマイクロスフェアを有し、試料中の検出対象物は結合パッドの抗体ナノマイクロスフェアと免疫結合して抗体ナノマイクロスフェア複合物を形成し、
検出液孔に検出液を添加するステップ（２）において、
検出液孔に検出液を添加した後、検出液は試験紙ストリップの吸水パッド端部の方向に沿ってクロマトグラフィを開始し、検出液のクロマトグラフィは試料添加孔の位置を通過して結合パッドにおける検出対象物と結合していない抗体ナノマイクロスフェアおよび検出対象物と既に結合した抗体ナノマイクロスフェア複合物を溶解し、検出液の試験紙ストリップにおけるクロマトグラフィは「登坂、平行、降坂」を経て、検出液は試験紙ストリップにおいて移動し、「平行」段階で２回目の免疫認識反応を行い、ステップ（１）におけた抗体ナノマイクロスフェア複合物は検出線Ｔで２回目の免疫認識反応を行い、かつ発色を開始し、一方、検出線Ｔと反応しなかった抗体ナノマイクロスフェアは、前進運動を継続し、質量制御線Ｃと結合して発色する。
試料を収集した後、試料を前記試料添加孔内の結合パッドに添加し、結合パッド上にナノマイクロスフェア結合抗体、すなわち抗体ナノマイクロスフェアを有し、試料中の検出対象物は結合パッドの抗体ナノマイクロスフェアと免疫結合して抗体ナノマイクロスフェア複合物を形成し、
検出液孔に検出液を添加するステップ（２）において、
検出液孔に検出液を添加した後、検出液は試験紙ストリップの吸水パッド端部の方向に沿ってクロマトグラフィを開始し、検出液のクロマトグラフィは試料添加孔の位置を通過して結合パッドにおける検出対象物と結合していない抗体ナノマイクロスフェアおよび検出対象物と既に結合した抗体ナノマイクロスフェア複合物を溶解し、検出液の試験紙ストリップにおけるクロマトグラフィは「登坂、平行、降坂」を経て、検出液は試験紙ストリップにおいて移動し、「平行」段階で２回目の免疫認識反応を行い、ステップ（１）におけた抗体ナノマイクロスフェア複合物は検出線Ｔで２回目の免疫認識反応を行い、かつ発色を開始し、一方、検出線Ｔと反応しなかった抗体ナノマイクロスフェアは、前進運動を継続し、質量制御線Ｃと結合して発色する。
好ましくは、試料添加孔内に添加した試料は０．１～５０μＬであり、検出液孔内に検出液を０～１５０μＬ添加する。
好ましくは、前記試薬カードは反応が完了した後、機器でＴ、Ｃ線の信号値を検出するか、または色票でＴ、Ｃ線の色深度を対比することで試料中の検出対象物の濃度を計算する。
好ましくは、前記試薬カードは反応が完了した後、機器でＴ、Ｃ線の信号値を検出するか、または色票でＴ、Ｃ線の色深度を対比することで試料中の検出対象物の濃度を計算する。
好ましくは、上記検出方法は、涙液、創傷滲出液、組織液、汗、房水、眼表面のリンス液などの微量試料の検出に用いられ、また、通常試料の血液（末梢血、血清、血漿）、唾液、尿などの通常試料の検出にも用いられる。ペット、牧畜業、農業、魚類、食品、環境保護検出などの他の非臨床的試料の検出にも使用することができる。
前記支持突起の高さが前記突起プラットホームの高さ以下であるため、試験紙ストリップをスロットに入れて固定した後、試験紙ストリップは両端のスロット内における支持突起の支持で「ブリッジ」の構造を形成する。トップカバーとボトムカバーが位置決め孔と位置決めポストを介して係着する過程において、トップカバーにおける固定板、試料添加孔、検出液孔は突起プラットホームと協働して下向きに押圧し、中間部位の反応膜は上方に突起し、水平面と「アーチブリッジ」構造を形成する。この「アーチブリッジ」構造は検出液の液体の試験紙ストリップにおける流れ方向とクロマトグラフィ速度を制御し、さらに試薬カードの検出結果の正確度と精度を向上させ、臨床上の微量試料を正確に検出する目的を達成し、従来のＰＯＣＴ微量試料検出製品の市場上の空白を埋める。
本発明の実施例又は従来技術における技術的解決手段をより明確に説明するために、以下、実施例または従来技術の説明で使用する必要がある図面について簡単に説明する。明らかなことに、以下に説明する図面は、本発明のいくつかの実施例に過ぎず、当業者にとっては、創造的な労力をせず、これらの図面に基づいて他の図面を得ることもできる。
トップカバーの概略図である。
ボトムカバーの概略図である。
試験紙ストリップの実施例１の概略図である。
試験紙ストリップの実施例２の概略図である。
試験紙ストリップの実施例３の概略図である。
試薬カードの概略図である。
トップカバーの正面概略図である。
トップカバーの裏面概略図である。
トップカバーの断面概略図である。
ボトムカバーの正面概略図である。
ボトムカバーの裏面概略図である。
ボトムカバーの断面概略図である。
試薬カードの分解概略図である。
試薬カードの断面概略図である。
試薬カード組み立て後の断面概略図である。
試薬カード組み立て後の断面部分拡大図である。
本発明の実施例は、従来技術に存在する問題を解決するための試薬カードを提供する。
以下、本発明の実施例における技術解決手段を明確かつ詳細に説明するが、説明した実施例は本発明の一部に過ぎず、すべての実施例ではないことは明らかである。創造的な労働なしに、本発明の実施例に基づいて当業者によって得られる他のすべての実施例は、本発明の保護範囲内に属するものである。
以下、本発明の実施例における技術解決手段を明確かつ詳細に説明するが、説明した実施例は本発明の一部に過ぎず、すべての実施例ではないことは明らかである。創造的な労働なしに、本発明の実施例に基づいて当業者によって得られる他のすべての実施例は、本発明の保護範囲内に属するものである。
以下、本発明をより詳細に説明するために、図面を参照しながら本発明が提供する試薬カードを具体的に説明する。
図１～図４を参照すると、本発明は、トップカバー、ボトムカバー、試験紙ストリップを含む試薬カードを提供する。前記トップカバーと前記ボトムカバーとは位置決め孔と位置決めポストを介して係着することによって試験紙ストリップを固定する。トップカバーに位置決めポストＧ０１が設置され、ボトムカバーに位置決め孔Ｄ０１が設置され、位置決めポストＧ０１と位置決め孔Ｄ０１の嵌合によって試験紙ストリップを固定する。位置決めポストＧ０１の位置は前、中、後ろにおいて三組が対称的に分布され、位置決めポストＧ０１の高さは２．５～３．５ｍｍであり、直径は１．０～１．５ｍｍであり、主に試薬カードを支持し固定する役割を果たす。位置決め孔Ｄ０１の位置は前、中、後ろにおいて三組が対称的に分布され、ポスト孔の高さは２．５～３．５ｍｍであり、直径は１．１～１．６ｍｍであり、トップカバーのポストと係合して試薬カードを支持し固定する役割を果たす。
図１～図４を参照すると、本発明は、トップカバー、ボトムカバー、試験紙ストリップを含む試薬カードを提供する。前記トップカバーと前記ボトムカバーとは位置決め孔と位置決めポストを介して係着することによって試験紙ストリップを固定する。トップカバーに位置決めポストＧ０１が設置され、ボトムカバーに位置決め孔Ｄ０１が設置され、位置決めポストＧ０１と位置決め孔Ｄ０１の嵌合によって試験紙ストリップを固定する。位置決めポストＧ０１の位置は前、中、後ろにおいて三組が対称的に分布され、位置決めポストＧ０１の高さは２．５～３．５ｍｍであり、直径は１．０～１．５ｍｍであり、主に試薬カードを支持し固定する役割を果たす。位置決め孔Ｄ０１の位置は前、中、後ろにおいて三組が対称的に分布され、ポスト孔の高さは２．５～３．５ｍｍであり、直径は１．１～１．６ｍｍであり、トップカバーのポストと係合して試薬カードを支持し固定する役割を果たす。
図６Ａ～６Ｃに示すように、前記ボトムカバーの内部にスロット構造（Ｄ０２、Ｄ０６）、および突起プラットホームＤ０４が設置される。前記スロット構造内に支持突起Ｄ０３が設置され、前記支持突起Ｄ０３の高さは前記突起プラットホームＤ０４の高さ以下である。
図５Ａ～５Ｃに示すように、前記カバーには固定板（Ｇ０２、Ｇ０３、Ｇ０４、Ｇ０６）、反応窓Ｇ０５、試料添加孔Ａ、検出液孔Ｂが設置される。前記反応窓Ｇ０５、試料添加孔Ａ、検出液孔Ｂが順次に設置される。前記固定板（Ｇ０２、Ｇ０３、Ｇ０４、Ｇ０６）は前記反応窓Ｇ０５の両側に分布される。
前記試験紙ストリップを前記ボトムカバーのスロット構造（Ｄ０２、Ｄ０６）に入れて固定した後、前記試験紙ストリップは前記突起プラットホームＤ０４と支持突起Ｄ０３によって支持され、前記トップカバーと前記ボトムカバーは位置決め孔と位置決めポストによって係着された後、前記トップカバーの固定板（Ｇ０２、Ｇ０３、Ｇ０４、Ｇ０６）と検出液孔Ｂの押圧で、前記試験紙ストリップの中部は上方に突出する。
図３に示すように、前記試験紙ストリップは３層または４層構造を含み、第１層は底板１であり、材料は好ましくはＰＶＣであり、第２層は反応膜４であり、第３層は吸収パッド７、結合パッド３とクッションパッド２である。あるいは、第１層は底板１であり、第２層は反応膜４であり、第３層は吸収パッド７と結合パッド３であり、第４層はクッションパッド２である。
前記反応膜４は前記底板１の中部に設置され、前記反応膜４上に検出線Ｔ５と品質制御線Ｃ６が分布され、前記検出線Ｔ５と品質制御線Ｃ６は前記反応窓Ｇ０５に対応する。前記検出線Ｔ５は、２つの疾患を区別するために使用される２本であってもよい。
前記反応膜４の一端に結合パッド３が設置され、前記反応膜４の他端に吸収パッド７が設置され、前記結合パッド３は前記試料添加孔Ａに対応する。
前記結合パッド３にはクッションパッド２が設置され、または前記結合パッド３は前記クッションパッド２に当接し、前記クッションパッド２は前記検出液孔Ｂに対応する。
前記結合パッド３にはクッションパッド２が設置され、または前記結合パッド３は前記クッションパッド２に当接し、前記クッションパッド２は前記検出液孔Ｂに対応する。
前記スロット構造の数量は二つであり、それぞれ第１スロット構造Ｄ０２と第２スロット構造Ｄ０６であり、第１スロット構造Ｄ０２と第２スロット構造Ｄ０６は前記突起プラットホームＤ０４の両側に分布される。
前記スロット構造内に１～５個の支持突起が設置される。好ましくは、図６Ａ～図６Ｃに示されるように、前記スロット構造には３つの支持突起が設置され、第１スロット構造Ｄ０２および第２スロット構造Ｄ０６にはそれぞれ３つの支持突起Ｄ０３が設置される。
前記検出液孔Ｂに対応する前記第２スロット構造Ｄ０６の両辺に導流口Ｄ０５が対称的に設置される。２組の導流口Ｄ０５はスロットの両端に対称的に設置され、検出液の試験紙ストリップに沿うクロマトグラフィを確保し、試薬カードの表面張力によって液体がカードケースに粘着したり、試験紙ストリップの裏面に浸み込んだりすることを避ける。
第１スロット構造Ｄ０２および第２スロット構造Ｄ０６の幅は３～５ｍｍであり、長さは１０～１８ｍｍであり、深さは１．２～１．７ｍｍであり、前記支持突起Ｄ０３の高さは０．１～０．１５ｍｍであり、幅は３～５ｍｍであり、前記突起プラットホームＤ０４の高さは０．１５～０．２５ｍｍである。支持突起Ｄ０３は橋脚の動作原理と類似しており、スロット内の両端にいずれも分布され、吸収パッド端に３つ設置され、試験紙ストリップを固定し支持する役割を果たす。
前記固定板の数は４つで、それぞれ前記試験紙ストリップを固定するための第１固定板Ｇ０２、前記試験紙ストリップを固定するための第２固定板Ｇ０３、前記試験紙ストリップにおける前記吸収パッドと反応膜との結合を固定するための第３固定板Ｇ０４、前記試験紙ストリップにおける前記反応膜と結合パッドとの結合を固定するための第４固定板Ｇ０６である。前記第４固定板Ｇ０６は、前記試料添加孔と前記反応窓との間に設置され、前記第１固定板Ｇ０２、第２固定板Ｇ０３、および第３固定板Ｇ０４は、前記反応窓Ｇ０５の他側に分布される。
前記第１固定板Ｇ０２、第２固定板Ｇ０３、第３固定板Ｇ０４、第４固定板Ｇ０６の幅は３～５ｍｍである。前記第１固定板Ｇ０２、第２固定板Ｇ０３の高さは１．０～１．５ｍｍであり、第３固定板Ｇ０４、第４固定板Ｇ０６の高さは０．１～０．３ｍｍである。
第１固定板Ｇ０２、第２固定板Ｇ０３はカードケース組み立て後の試験紙ストリップを固定するために用いられ、他のメーカーの試験紙ストリップが接着テープで固定される方式と異なる。第３固定板Ｇ０４は主に試験紙ストリップにおける吸収パッド７と反応膜４との結合を固定するために用いられ、免疫クロマトグラフィ後期に引き続きクロマトグラフィ移動をする牽引力が液体にあることを確保する。第４固定板Ｇ０６は主に試験紙ストリップにおける結合パッド３と反応膜４との結合を固定するために用いられ、それによってステップ１における反応物と溶液が順調に反応膜４に到達し、ステップ２の反応を行う。
前記試料添加孔Ａは漏斗状構造であり、トップカバーの正面円直径は４～６ｍｍであり、トップカバーの内部円直径は３～５ｍｍであり、突起高さは０．１～０．２ｍｍであり、孔壁と水平面とは３０°～４５°の角度をなす。広口設計は微量の試料を添加する時に試験紙ストリップの結合パッド３と接触することに有利であり、また多種の器具が試料を採取した後の試料添加を容易にし、結合パッドに十分に吸収される。
前記検出液孔Ｂは漏斗状構造であり、トップカバーの正面円直径は６～８ｍｍであり、トップカバーの内部円直径は１～３ｍｍであり、突起高さは０．３～０．５ｍｍであり、孔壁と水平面とは３０°～４５°の角度をなす。漏斗形設計によって検出液を加えた後に液体を貯蔵し、液圧を形成して液体を結合パッド３、反応膜４方向に移動することを駆動する。高さ０．３～０．５ｍｍの突起がボトムカバーと結合した後にスロット部位のクッションパット２を押圧し、容量は約９０μＬであり、毛管作用で液体を指向的にゆっくり放出し、液体の流速が速すぎて、ステップ１での免疫反応が不十分になることを避ける。
前記反応窓Ｇ０５は楕円形構造であり、トップカバーの正面楕円の長さは１５０～２００ｍｍであり、幅は７０～９０ｍｍであり、トップカバーの内部円の直径は１３０～１５０ｍｍであり、突起高さは０．１～０．２ｍｍであり、孔壁と水平面とは３０°～４５°の角度をなし、反応窓内底部と試験紙ストリップの接触面は０．０１～０．０２ｍｍの垂直突起である。０．０１～０．０２ｍｍの垂直突起の設計は液体の反応膜４におけるクロマトグラフィ運動時に内側突起のエッジ効果の影響を受けることを避ける。同時に、突起の高さは０．１～０．２ｍｍで試料添加孔Ａの高さと同じであり、いずれも検出液Ｂ０．３～０．５ｍｍより低く、試薬カード内部の空気の流通を保証し、液体のクロマトグラフィ過程中に気圧の影響を受けないようにする。反応窓Ｇ０５は免疫反応のステップ２の反応部位であり、反応が終わった後、機器でＴ、Ｃ線の信号値を検出するか、または色票でＴ、Ｃ線の色深度を対比することで試料中の検出対象物の濃度を計算することができる。
前記トップカバーは、表面がねじ山状または凸状の突起構造である手持ち端部Ｃを含む。
突起プラットホームＤ０４の長さは１５．０～０．０ｍｍであり、幅は３．０～５．０ｍｍであり、高さは０．１５～０．２５ｍｍである。この突起プラットホームＤ０４はカトップバーの反応窓に位置し、ステップ２の免疫結合反応を行う部位である。前記支持突起Ｄ０３の高さが前記突起プラットホームＤ０４の高さ以下であるため、試験紙ストリップをスロットに入れて固定した後、試験紙ストリップは両端スロット内の支持突起Ｄ０３の支持で「ブリッジ」の構造を形成する。トップカバーとボトムカバーが位置決め孔と位置決めポストを介して係着する過程において、トップカバーにおける固定板（Ｇ０２、Ｇ０３、Ｇ０４、Ｇ０６）、試料添加孔Ａ、検出液孔Ｂは突起プラットホームＤ０４と協働して下向きに押圧され、試験紙ストリップの中間部位の反応膜４の水平面を持ち上げ、中間部位の反応膜４は上向きに０．１５～０．２５ｍｍ突出し、水平面と「アーチブリッジ」構造を形成する（図８ｂ参照）。この「アーチブリッジ」構造の形成は試薬カードの検出結果の正確度と精度に重要な役割を有する。この設計は以下の二つの役割を有する。一つ目は、クロマトグラフィ速度を制御し、反応膜分子篩の作用をさらに拡大させることである。液体はクロマトグラフィの過程で、試験紙ストリップの水平面が徐々に上昇し、液体のクロマトグラフィ時に登坂状態にあり、その時、クロマトグラフィ速度が遅くなり、ステップ２の反応時間を延長し、ステップ１で十分に結合されなかった検出対象物は移動中にさらに認識結合され、クロマトグラフィ速度を遅くした場合、さらに反応膜分子篩の作用を発揮し、一部の試料中の非目標物を分離する。ステップ２で十分に反応した後、液体は降坂状態を開始し、かつ吸収パッドの作用下で、クロマトグラフィ速度は加速し、全反応過程は１０～１５ｍｉｎ内に完成し、試薬カードの液体クロマトグラフィ速度は約４５ｍｍ／ｓである。二つ目は、液体の流れを統一化することである。つまり、試薬ストリップは「アーチブリッジ」の構造を形成し（図８ｂ参照）、液体は毛管作用で同じ方向にクロマトグラフィ運動し、検出液を滴下する時に液圧によって液体が四方に拡散し、検出対象物を流出させる状況を避け、微量試料液の有効検出濃度を保証する。
突起プラットホームＤ０４の長さは１５．０～０．０ｍｍであり、幅は３．０～５．０ｍｍであり、高さは０．１５～０．２５ｍｍである。この突起プラットホームＤ０４はカトップバーの反応窓に位置し、ステップ２の免疫結合反応を行う部位である。前記支持突起Ｄ０３の高さが前記突起プラットホームＤ０４の高さ以下であるため、試験紙ストリップをスロットに入れて固定した後、試験紙ストリップは両端スロット内の支持突起Ｄ０３の支持で「ブリッジ」の構造を形成する。トップカバーとボトムカバーが位置決め孔と位置決めポストを介して係着する過程において、トップカバーにおける固定板（Ｇ０２、Ｇ０３、Ｇ０４、Ｇ０６）、試料添加孔Ａ、検出液孔Ｂは突起プラットホームＤ０４と協働して下向きに押圧され、試験紙ストリップの中間部位の反応膜４の水平面を持ち上げ、中間部位の反応膜４は上向きに０．１５～０．２５ｍｍ突出し、水平面と「アーチブリッジ」構造を形成する（図８ｂ参照）。この「アーチブリッジ」構造の形成は試薬カードの検出結果の正確度と精度に重要な役割を有する。この設計は以下の二つの役割を有する。一つ目は、クロマトグラフィ速度を制御し、反応膜分子篩の作用をさらに拡大させることである。液体はクロマトグラフィの過程で、試験紙ストリップの水平面が徐々に上昇し、液体のクロマトグラフィ時に登坂状態にあり、その時、クロマトグラフィ速度が遅くなり、ステップ２の反応時間を延長し、ステップ１で十分に結合されなかった検出対象物は移動中にさらに認識結合され、クロマトグラフィ速度を遅くした場合、さらに反応膜分子篩の作用を発揮し、一部の試料中の非目標物を分離する。ステップ２で十分に反応した後、液体は降坂状態を開始し、かつ吸収パッドの作用下で、クロマトグラフィ速度は加速し、全反応過程は１０～１５ｍｉｎ内に完成し、試薬カードの液体クロマトグラフィ速度は約４５ｍｍ／ｓである。二つ目は、液体の流れを統一化することである。つまり、試薬ストリップは「アーチブリッジ」の構造を形成し（図８ｂ参照）、液体は毛管作用で同じ方向にクロマトグラフィ運動し、検出液を滴下する時に液圧によって液体が四方に拡散し、検出対象物を流出させる状況を避け、微量試料液の有効検出濃度を保証する。
さらに、本出願は、上記の試薬カードのいずれかを使用して実現される検出方法をさらに提供する。
試料添加孔に試料を添加するステップ（１）において、
試料を収集した後、試料を前記試料添加孔内の結合パッドに添加し、結合パッド上にナノマイクロスフェア結合抗体、すなわち抗体ナノマイクロスフェアを有し、試料中の検出対象物は結合パッドにおける抗体ナノマイクロスフェアと免疫結合して抗体ナノマイクロスフェア複合物を形成する。
試料添加孔に試料を添加するステップ（１）において、
試料を収集した後、試料を前記試料添加孔内の結合パッドに添加し、結合パッド上にナノマイクロスフェア結合抗体、すなわち抗体ナノマイクロスフェアを有し、試料中の検出対象物は結合パッドにおける抗体ナノマイクロスフェアと免疫結合して抗体ナノマイクロスフェア複合物を形成する。
検出液孔に検出液を添加するステップ（２）において、
検出液孔に検出液を添加した後、検出液は試験紙ストリップの吸水パッド端部の方向に沿ってクロマトグラフィを開始し、検出液は試料添加孔の位置を通過して結合パッドにおける検出対象物と結合していない抗体ナノマイクロスフェアおよび検出対象物と既に結合した抗体ナノマイクロスフェア複合物を溶解し、検出液の試験紙ストリップにおけるクロマトグラフィは「登坂、平行、降坂」（図８ｂ参照）を経て、検出液は試験紙ストリップにおいて移動し、「平行」段階で２回目の免疫認識反応を行い、ステップ（１）におけた抗体ナノマイクロスフェア複合物は検出線Ｔで２回目の免疫認識反応を行い、かつ発色を開始する。一方、検出線Ｔと反応しなかった抗体ナノマイクロスフェアは、前進運動を継続し、質量制御線Ｃと結合して発色する。
検出液孔に検出液を添加した後、検出液は試験紙ストリップの吸水パッド端部の方向に沿ってクロマトグラフィを開始し、検出液は試料添加孔の位置を通過して結合パッドにおける検出対象物と結合していない抗体ナノマイクロスフェアおよび検出対象物と既に結合した抗体ナノマイクロスフェア複合物を溶解し、検出液の試験紙ストリップにおけるクロマトグラフィは「登坂、平行、降坂」（図８ｂ参照）を経て、検出液は試験紙ストリップにおいて移動し、「平行」段階で２回目の免疫認識反応を行い、ステップ（１）におけた抗体ナノマイクロスフェア複合物は検出線Ｔで２回目の免疫認識反応を行い、かつ発色を開始する。一方、検出線Ｔと反応しなかった抗体ナノマイクロスフェアは、前進運動を継続し、質量制御線Ｃと結合して発色する。
試料添加孔の試料添加は０．１～５０μＬであり。検出液孔内に検出液を０～１５０μＬ添加する。
前記試薬カードは反応が完了した後、機器でＴ、Ｃ線の信号値を検出するか、または色票でＴ、Ｃ線の色深度を対比することで試料中の検出対象物の濃度を計算し、Ｃ線の発色が十分であるかどうかは本試薬カードが完了したかどうか、測定値が正確であるかどうかを評価する重要な指標である。Ｃ線は品質管理線であり、試薬カードテスト結果の読み取りに対して重要な役割を果たし、Ｃ線は十分に発色し、かつ既定の数値に達してからこそ、検出結果が有効であると判断することができる。Ｃ線は発色せず、測定値が低い場合、干渉が存在する可能性があり、検出結果は無効である。Ｃ線発色が不十分であり、測定値が低く、使用者に操作ミスの可能性が示唆され、検出結果が無効であった。
前記試薬カードは反応が完了した後、機器でＴ、Ｃ線の信号値を検出するか、または色票でＴ、Ｃ線の色深度を対比することで試料中の検出対象物の濃度を計算し、Ｃ線の発色が十分であるかどうかは本試薬カードが完了したかどうか、測定値が正確であるかどうかを評価する重要な指標である。Ｃ線は品質管理線であり、試薬カードテスト結果の読み取りに対して重要な役割を果たし、Ｃ線は十分に発色し、かつ既定の数値に達してからこそ、検出結果が有効であると判断することができる。Ｃ線は発色せず、測定値が低い場合、干渉が存在する可能性があり、検出結果は無効である。Ｃ線発色が不十分であり、測定値が低く、使用者に操作ミスの可能性が示唆され、検出結果が無効であった。
上記検出方法は、涙液、創傷滲出液、組織液、汗、房水、眼表面のリンス液の検出に用いられる。
微量試料の検出に対して、試料の利用率を向上させ、検出対象物を相応の抗体に十分に認識させ、免疫結合反応を発生させることは検出結果の正確性と確実性を確保するかなめであり、本試薬カードの設計において主に以下の４つの方面から実現される。
微量試料の検出に対して、試料の利用率を向上させ、検出対象物を相応の抗体に十分に認識させ、免疫結合反応を発生させることは検出結果の正確性と確実性を確保するかなめであり、本試薬カードの設計において主に以下の４つの方面から実現される。
（１）試料の添加
試薬カード正面（トップカバー）の設計は試料添加孔Ａと検出液孔Ｂがあり、試料量が１～５μＬの場合、微量の試料を採集した後、試料を試料添加孔Ａ内の結合パッドに加え、さらに検出液孔Ｂに検出液を滴下し、免疫クロマトグラフィの反応を開始し、全過程の操作が簡単である。
試薬カード正面（トップカバー）の設計は試料添加孔Ａと検出液孔Ｂがあり、試料量が１～５μＬの場合、微量の試料を採集した後、試料を試料添加孔Ａ内の結合パッドに加え、さらに検出液孔Ｂに検出液を滴下し、免疫クロマトグラフィの反応を開始し、全過程の操作が簡単である。
試料添加孔Ａは試験紙ストリップの結合パッドにあり、結合パッドの材質は親水性のガラスセルロースであり、結合パッドにナノ粒子で標識された抗体ＡＢ－１があり、試料を直接に結合パッドに加え、親水性の材質は試料の拡散に有利であり、それによって試料中の検出対象物と粒子で標識された抗体ＡＢ－１を識別して免疫結合を発生させ、試料の利用率はほぼ１００％に達し、かつ０．１～５μＬの微量の液体は、後続のクロマトグラフィ反応を引き起こさない。代替的には、より多くの体積の試料を加え、≧５０μＬで、試料を直接添加した後に検出を行う。
（２）第１段階の免疫反応
試料を試料添加孔Ａに加えた後、検出対象物はナノマイクロスフェアで標識された抗体ＡＢ－１と結合し、二重抗体サンドイッチ法による「サンドイッチ」構造の底層と中間層を形成し、免疫クロマトグラフィ方による検出の第１段階の反応を完成する。
試料を試料添加孔Ａに加えた後、検出対象物はナノマイクロスフェアで標識された抗体ＡＢ－１と結合し、二重抗体サンドイッチ法による「サンドイッチ」構造の底層と中間層を形成し、免疫クロマトグラフィ方による検出の第１段階の反応を完成する。
（３）免疫クロマトグラフィの過程における液体の流れ方向および流速の制御
検出液孔Ｂに検出液を添加した後、検出液の液体は試験紙ストリップの吸水パッド端の方向に沿ってクロマトグラフィを開始し、開始から全反応が完了するまでの過程において、液体の試験紙ストリップにおけるクロマトグラフィは「登坂、平行、降坂」（図８ｂ参照）を経て、液体の流れ方向および流速の制御はすべて試薬カードの特別な設計に依存して完成される。
検出液孔Ｂに検出液を添加した後、検出液の液体は試験紙ストリップの吸水パッド端の方向に沿ってクロマトグラフィを開始し、開始から全反応が完了するまでの過程において、液体の試験紙ストリップにおけるクロマトグラフィは「登坂、平行、降坂」（図８ｂ参照）を経て、液体の流れ方向および流速の制御はすべて試薬カードの特別な設計に依存して完成される。
（４）第２段階の免疫反応
液体は試験紙ストリップの上を移動して「平行」段階で２回目の免疫認識反応を行い、検出線Ｔと完全な「サンドイッチ」構造を形成し、かつ発色を開始し、色の濃さは検出対象物である「サンドイッチ」中間層の含有量と正に相関する。一方、Ｔ線と反応しないナノマイクロスフェアは前方に移動し続け、質量制御線Ｃと結合して発色する。試薬カードは反応が完了した後、機器でＴ、Ｃ線の信号値を検出するか、または、色票でＴ、Ｃ線の色深度を対比することで試料中の検出対象物の濃度を計算することができ、Ｃ線の発色が十分であるかどうかは本試薬カードの反応が完了したかどうか、測定値が正確であるかどうかを評価する重要な指標である。
液体は試験紙ストリップの上を移動して「平行」段階で２回目の免疫認識反応を行い、検出線Ｔと完全な「サンドイッチ」構造を形成し、かつ発色を開始し、色の濃さは検出対象物である「サンドイッチ」中間層の含有量と正に相関する。一方、Ｔ線と反応しないナノマイクロスフェアは前方に移動し続け、質量制御線Ｃと結合して発色する。試薬カードは反応が完了した後、機器でＴ、Ｃ線の信号値を検出するか、または、色票でＴ、Ｃ線の色深度を対比することで試料中の検出対象物の濃度を計算することができ、Ｃ線の発色が十分であるかどうかは本試薬カードの反応が完了したかどうか、測定値が正確であるかどうかを評価する重要な指標である。
カードケース構造の特殊な設計により、検出液の液体の試験紙ストリップにおける流れ方向とクロマトグラフィ速度を制御し、臨床上の微量試料を正確に検出する目的を達成し、従来のＰＯＣＴ微量試料検出製品の市場上の空白を埋める。
検出方法の実施例１
本出願が提供する試薬カードはドライアイ症の補助診断に用いることができる。
試料添加孔に試料を添加するステップ（１）において、
涙液試料を収集した後、１μＬの涙液試料を前記試料添加孔内の結合パッドに添加し、結合パッド上にナノマイクロスフェア結合リンホトキシン-α（ＬＴＡ）抗体、すなわち抗体ナノマイクロスフェアを有し、試料中の検出対象物は結合パッド上の抗体ナノマイクロスフェアと免疫結合して抗体ナノマイクロスフェア複合物を形成する。
本出願が提供する試薬カードはドライアイ症の補助診断に用いることができる。
試料添加孔に試料を添加するステップ（１）において、
涙液試料を収集した後、１μＬの涙液試料を前記試料添加孔内の結合パッドに添加し、結合パッド上にナノマイクロスフェア結合リンホトキシン-α（ＬＴＡ）抗体、すなわち抗体ナノマイクロスフェアを有し、試料中の検出対象物は結合パッド上の抗体ナノマイクロスフェアと免疫結合して抗体ナノマイクロスフェア複合物を形成する。
検出液孔に検出液を添加するステップ（２）において、
検出液孔にリンホトキシン-α（ＬＴＡ）検出液を添加した後、検出液は試験紙ストリップの吸水パッド端部の方向に沿ってクロマトグラフィを開始し、検出液のクロマトグラフィは試料添加孔の位置を通過して結合パッドにおける検出対象物と結合していない抗体ナノマイクロスフェアおよび検出対象物と既に結合した抗体ナノマイクロスフェア複合物を溶解し、検出液の試験紙ストリップにおけるクロマトグラフィは「登坂、平行、降坂」（図８ｂ参照）を経て、検出液は試験紙ストリップにおいて移動し、「平行」段階で２回目の免疫認識反応を行い、ステップ（１）におけた抗体ナノマイクロスフェア複合物は検出線Ｔで２回目の免疫認識反応を行い、かつ発色を開始する。一方、検出線Ｔと反応しなかった抗体ナノマイクロスフェアは、前進運動を継続し、質量制御線Ｃと結合して発色する。複数回の試験を経て、感度は０．１５ｎｇ／ｍＬに達し、精度ＣＶは５％～１０％に達する。
検出液孔にリンホトキシン-α（ＬＴＡ）検出液を添加した後、検出液は試験紙ストリップの吸水パッド端部の方向に沿ってクロマトグラフィを開始し、検出液のクロマトグラフィは試料添加孔の位置を通過して結合パッドにおける検出対象物と結合していない抗体ナノマイクロスフェアおよび検出対象物と既に結合した抗体ナノマイクロスフェア複合物を溶解し、検出液の試験紙ストリップにおけるクロマトグラフィは「登坂、平行、降坂」（図８ｂ参照）を経て、検出液は試験紙ストリップにおいて移動し、「平行」段階で２回目の免疫認識反応を行い、ステップ（１）におけた抗体ナノマイクロスフェア複合物は検出線Ｔで２回目の免疫認識反応を行い、かつ発色を開始する。一方、検出線Ｔと反応しなかった抗体ナノマイクロスフェアは、前進運動を継続し、質量制御線Ｃと結合して発色する。複数回の試験を経て、感度は０．１５ｎｇ／ｍＬに達し、精度ＣＶは５％～１０％に達する。
検出方法の実施例２
本出願が提供する試薬カードは炎症の補助診断に用いることができる。
試料添加孔に試料を添加するステップ（１）において、
房水試料を収集した後、０．５μＬの房水試料を前記試料添加孔内の結合パッドに添加し、結合パッド上にナノマイクロスフェア結合マトリックスメタロプロテイナーゼ９（ＭＭＰ－９）抗体、すなわち抗体ナノマイクロスフェアを有し、試料中の検出対象物は結合パッド上の抗体ナノマイクロスフェアと免疫結合して抗体ナノマイクロスフェア複合物を形成する。
本出願が提供する試薬カードは炎症の補助診断に用いることができる。
試料添加孔に試料を添加するステップ（１）において、
房水試料を収集した後、０．５μＬの房水試料を前記試料添加孔内の結合パッドに添加し、結合パッド上にナノマイクロスフェア結合マトリックスメタロプロテイナーゼ９（ＭＭＰ－９）抗体、すなわち抗体ナノマイクロスフェアを有し、試料中の検出対象物は結合パッド上の抗体ナノマイクロスフェアと免疫結合して抗体ナノマイクロスフェア複合物を形成する。
検出液孔に検出液を添加するステップ（２）において、
検出液孔にマトリックスメタロプロテイナーゼ９（ＭＭＰ－９）検出液を添加した後、検出液は試験紙ストリップの吸水パッド端部の方向に沿ってクロマトグラフィを開始し、検出液は試料添加孔の位置を通過して結合パッドにおける検出対象物と結合していない抗体ナノマイクロスフェアおよび検出対象物と既に結合した抗体ナノマイクロスフェア複合物を溶解し、検出液の試験紙ストリップにおけるクロマトグラフィは「登坂、平行、降坂」（図８ｂ参照）を経て、検出液は試験紙ストリップにおいて移動し、「平行」段階で２回目の免疫認識反応を行い、ステップ（１）におけた抗体ナノマイクロスフェア複合物は検出線Ｔで２回目の免疫認識反応を行い、かつ発色を開始する。一方、検出線Ｔと反応しなかった抗体ナノマイクロスフェアは、前進運動を継続し、質量制御線Ｃと結合して発色する。複数回の試験を経て、感度は１．０ｎｇ／ｍＬに達し、精度ＣＶは５％～１０％に達する。
検出液孔にマトリックスメタロプロテイナーゼ９（ＭＭＰ－９）検出液を添加した後、検出液は試験紙ストリップの吸水パッド端部の方向に沿ってクロマトグラフィを開始し、検出液は試料添加孔の位置を通過して結合パッドにおける検出対象物と結合していない抗体ナノマイクロスフェアおよび検出対象物と既に結合した抗体ナノマイクロスフェア複合物を溶解し、検出液の試験紙ストリップにおけるクロマトグラフィは「登坂、平行、降坂」（図８ｂ参照）を経て、検出液は試験紙ストリップにおいて移動し、「平行」段階で２回目の免疫認識反応を行い、ステップ（１）におけた抗体ナノマイクロスフェア複合物は検出線Ｔで２回目の免疫認識反応を行い、かつ発色を開始する。一方、検出線Ｔと反応しなかった抗体ナノマイクロスフェアは、前進運動を継続し、質量制御線Ｃと結合して発色する。複数回の試験を経て、感度は１．０ｎｇ／ｍＬに達し、精度ＣＶは５％～１０％に達する。
検出方法の実施例３
本出願が提供する試薬カードはアレルギー性結膜炎の補助診断に用いることができる。
試料添加孔に試料を添加するステップ（１）において、
眼表面リンス液試料を収集した後、２．２μＬの眼表面リンス液試料を前記試料添加孔内の結合パッドに添加し、結合パッド上にナノマイクロスフェア結合総免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）抗体、すなわち抗体ナノマイクロスフェアを有し、試料中の検出対象物は結合パッド上の抗体ナノマイクロスフェアと免疫結合して抗体ナノマイクロスフェア複合物を形成する。
本出願が提供する試薬カードはアレルギー性結膜炎の補助診断に用いることができる。
試料添加孔に試料を添加するステップ（１）において、
眼表面リンス液試料を収集した後、２．２μＬの眼表面リンス液試料を前記試料添加孔内の結合パッドに添加し、結合パッド上にナノマイクロスフェア結合総免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）抗体、すなわち抗体ナノマイクロスフェアを有し、試料中の検出対象物は結合パッド上の抗体ナノマイクロスフェアと免疫結合して抗体ナノマイクロスフェア複合物を形成する。
検出液孔に検出液を添加するステップ（２）において、
検出液孔に総免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）検出液を添加した後、検出液は試験紙ストリップの吸水パッド端部の方向に沿ってクロマトグラフィを開始し、検出液のクロマトグラフィは試料添加孔の位置を通過して結合パッドにおける検出対象物と結合していない抗体ナノマイクロスフェアおよび検出対象物と既に結合した抗体ナノマイクロスフェア複合物を溶解し、検出液の試験紙ストリップにおけるクロマトグラフィは「登坂、平行、降坂」（図８ｂ参照）を経て、検出液は試験紙ストリップにおいて移動し、「平行」段階で２回目の免疫認識反応を行い、ステップ（１）におけた抗体ナノマイクロスフェア複合物は検出線Ｔで２回目の免疫認識反応を行い、かつ発色を開始する。一方、検出線Ｔと反応しなかった抗体ナノマイクロスフェアは、前進運動を継続し、質量制御線Ｃと結合して発色する。複数回の試験を経て、感度は０．５ＩＵ／ｍＬに達し、精度ＣＶは５％～１０％に達する。
検出液孔に総免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）検出液を添加した後、検出液は試験紙ストリップの吸水パッド端部の方向に沿ってクロマトグラフィを開始し、検出液のクロマトグラフィは試料添加孔の位置を通過して結合パッドにおける検出対象物と結合していない抗体ナノマイクロスフェアおよび検出対象物と既に結合した抗体ナノマイクロスフェア複合物を溶解し、検出液の試験紙ストリップにおけるクロマトグラフィは「登坂、平行、降坂」（図８ｂ参照）を経て、検出液は試験紙ストリップにおいて移動し、「平行」段階で２回目の免疫認識反応を行い、ステップ（１）におけた抗体ナノマイクロスフェア複合物は検出線Ｔで２回目の免疫認識反応を行い、かつ発色を開始する。一方、検出線Ｔと反応しなかった抗体ナノマイクロスフェアは、前進運動を継続し、質量制御線Ｃと結合して発色する。複数回の試験を経て、感度は０．５ＩＵ／ｍＬに達し、精度ＣＶは５％～１０％に達する。
検出方法の実施例４
本出願が提供する試薬カードは結膜炎の補助診断、アレルギーまたはウイルス感染による結膜炎の鑑別診断に用いることができる。
本出願が提供する試薬カードは結膜炎の補助診断、アレルギーまたはウイルス感染による結膜炎の鑑別診断に用いることができる。
試料添加孔に試料を添加するステップ（１）において、
眼表面リンス液試料を収集した後、２．２μＬの眼表面リンス液試料を前記試料添加孔内の結合パッドに添加し、結合パッド上にナノマイクロスフェア結合総免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）抗体およびウイルス抗体、すなわち抗体ナノマイクロスフェアを有し、試料中の検出対象物は結合パッド上の抗体ナノマイクロスフェアと免疫結合して抗体ナノマイクロスフェア複合物を形成する。
眼表面リンス液試料を収集した後、２．２μＬの眼表面リンス液試料を前記試料添加孔内の結合パッドに添加し、結合パッド上にナノマイクロスフェア結合総免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）抗体およびウイルス抗体、すなわち抗体ナノマイクロスフェアを有し、試料中の検出対象物は結合パッド上の抗体ナノマイクロスフェアと免疫結合して抗体ナノマイクロスフェア複合物を形成する。
検出液孔に検出液を添加するステップ（２）において、
検出液孔に総免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）とウイルス検出液を添加した後、検出液は試験紙ストリップの吸水パッド端部の方向に沿ってクロマトグラフィを開始し、検出液のクロマトグラフィは試料添加孔の位置を通過して結合パッドにおける検出対象物と結合していない抗体ナノマイクロスフェアおよび検出対象物と既に結合した抗体ナノマイクロスフェア複合物を溶解し、検出液の試験紙ストリップにおけるクロマトグラフィは「登坂、平行、降坂」（図８ｂ参照）を経て、検出液は試験紙ストリップにおいて移動し、「平行」段階で２回目の免疫認識反応を行い、ステップ（１）におけた抗体ナノマイクロスフェア複合物は２本の検出線Ｔ（それぞれウイルス検出線Ｔと総ＩｇＥ検出線Ｔ）で２回目の免疫認識反応を行い、かつ発色を開始し、ウイルス検出線Ｔと総ＩｇＥ検出線Ｔの発色状況によって眼疾患が具体的にウイルス感染によるものかアレルギーによるものかを判断することができる。一方、検出線Ｔと反応しなかった抗体ナノマイクロスフェアは、前進運動を継続し、質量制御線Ｃと結合して発色する。複数回の実験を経て、感度が０．５ＩＵ／ｍＬまたは０．５ｎｇ／ｍＬに達する。精度ＣＶは５％～１０％に達する。
検出液孔に総免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）とウイルス検出液を添加した後、検出液は試験紙ストリップの吸水パッド端部の方向に沿ってクロマトグラフィを開始し、検出液のクロマトグラフィは試料添加孔の位置を通過して結合パッドにおける検出対象物と結合していない抗体ナノマイクロスフェアおよび検出対象物と既に結合した抗体ナノマイクロスフェア複合物を溶解し、検出液の試験紙ストリップにおけるクロマトグラフィは「登坂、平行、降坂」（図８ｂ参照）を経て、検出液は試験紙ストリップにおいて移動し、「平行」段階で２回目の免疫認識反応を行い、ステップ（１）におけた抗体ナノマイクロスフェア複合物は２本の検出線Ｔ（それぞれウイルス検出線Ｔと総ＩｇＥ検出線Ｔ）で２回目の免疫認識反応を行い、かつ発色を開始し、ウイルス検出線Ｔと総ＩｇＥ検出線Ｔの発色状況によって眼疾患が具体的にウイルス感染によるものかアレルギーによるものかを判断することができる。一方、検出線Ｔと反応しなかった抗体ナノマイクロスフェアは、前進運動を継続し、質量制御線Ｃと結合して発色する。複数回の実験を経て、感度が０．５ＩＵ／ｍＬまたは０．５ｎｇ／ｍＬに達する。精度ＣＶは５％～１０％に達する。
上記の説明は、本発明の好ましい実施形態に過ぎず、当業者であれば、本発明の原理から逸脱することなく、本発明の保護の範囲とみなすべきであるいくつかの修正および修飾を行うことも可能であることに理解されたい。
１ 底板
２ クッションパット
３ 結合パッド
４ 反応膜
５ 検出線Ｔ
６ 品質制御線Ｃ
７ 吸収パッド
Ｇ０１ 位置決めポスト
Ｇ０２ 第１固定板
Ｇ０３ 第２固定板
Ｇ０４ 第３固定板
Ｇ０５ 反応窓
Ｇ０６ 第４固定板
Ａ 試料添加孔
Ｂ 検出液孔
Ｃ 手持ち端部
Ｄ０１ 位置決め孔
Ｄ０２ 第１スロット構造
Ｄ０３ 支持突起
Ｄ０４ 突起プラットホーム
Ｄ０５ 導流口
Ｄ０６ 第２スロット構造。
２ クッションパット
３ 結合パッド
４ 反応膜
５ 検出線Ｔ
６ 品質制御線Ｃ
７ 吸収パッド
Ｇ０１ 位置決めポスト
Ｇ０２ 第１固定板
Ｇ０３ 第２固定板
Ｇ０４ 第３固定板
Ｇ０５ 反応窓
Ｇ０６ 第４固定板
Ａ 試料添加孔
Ｂ 検出液孔
Ｃ 手持ち端部
Ｄ０１ 位置決め孔
Ｄ０２ 第１スロット構造
Ｄ０３ 支持突起
Ｄ０４ 突起プラットホーム
Ｄ０５ 導流口
Ｄ０６ 第２スロット構造。
Claims (19)
- トップカバーと、ボトムカバーと、前記トップカバーと前記ボトムカバーで固定される試験紙ストリップとを含む試薬カードであって、
前記ボトムカバーの内部にスロット構造、突起プラットホームが設置され、前記スロット構造内に支持突起が設置され、前記支持突起の高さは前記突起プラットホームの高さ以下であり、
前記トップカバーには、固定板、反応窓、試料添加孔、検出液孔が設置され、前記反応窓、試料添加孔、検出液孔は順次に設置され、前記固定板は前記反応窓の両側に分布され、
前記試験紙ストリップを前記ボトムカバーのスロット構造に入れて固定した後、前記試験紙ストリップは前記突起プラットホームと支持突起によって支持され、前記トップカバーと前記ボトムカバーは位置決め孔と位置決めポストによって係着された後、前記トップカバーの固定板と検出液孔の押圧で、前記試験紙ストリップの中部は上方に突出することを特徴とする試薬カード。 - 前記試験紙ストリップは３層又は４層構造を含み、第１層は底板であり、第２層は反応膜であり、第３層は吸収パッド、結合パッドおよびクッションパッドであり、あるいは、第１層は底板であり、第２層は反応膜とクッションパッドであり、第３層は吸収パッドと結合パッドであり、あるいは、第１層は底板であり、第２層は反応膜であり、第３層は吸収パッドと結合パッドであり、第４層はクッションパッドであり、
前記反応膜は前記底板の中部に設置され、前記反応膜上に検出線Ｔと品質制御線Ｃが分布され、前記検出線Ｔと前記品質制御線Ｃは前記反応窓に対応し、
前記反応膜の一端に結合パッドが設置され、前記反応膜の他端に吸収パッドが設置され、前記結合パッドは前記試料添加孔に対応し、
前記結合パッドの上または下にクッションパッドが設置され、または前記結合パッドは前記クッションパッドに当接し、前記クッションパッドは前記検出液孔に対応することを特徴とする請求項１に記載の試薬カード。 - 前記スロット構造の数は２つであり、前記突起プラットホームの両側に分布されることを特徴とする請求項２に記載の試薬カード。
- 前記スロット構造内に１～５個の支持突起が設置されることを特徴とする請求項３に記載の試薬カード。
- 前記スロット構造内に３つの支持突起が設置されることを特徴とする請求項４に記載の試薬カード。
- 前記検出液孔に対応する前記スロット構造の両辺には、導流口が対称的に設置されることを特徴とする請求項５に記載の試薬カード。
- 前記スロット構造の深さは１．２～１．７ｍｍであり、前記支持突起の高さは０．１～０．１５ｍｍであり、前記突起プラットホームの高さは０．１５～０．２５ｍｍであることを特徴とする請求項６に記載の試薬カード。
- 前記固定板の数は４つであり、それぞれ前記試験紙ストリップを固定するための第１固定板、前記試験紙ストリップを固定するための第２固定板、前記試験紙ストリップにおける前記吸収パッドと反応膜との結合を固定するための第３固定板、前記試験紙ストリップにおける前記反応膜と結合パッドとの結合を固定するための第４固定板であり、前記第４固定板は、前記試料添加孔と前記反応窓との間に設置され、前記第１固定板、第２固定板、および第３固定板は、前記反応窓の他側に分布されることを特徴とする請求項７に記載の試薬カード。
- 第１固定板、第２固定板、第３固定板、第４固定板の幅は３～５ｍｍであり、第１固定板、第２固定板の高さは１．０～１．５ｍｍであり、第３固定板、第４固定板の高さは０．１～０．３ｍｍであることを特徴とする請求項８に記載の試薬カード。
- 前記試料添加孔は漏斗状構造であり、トップカバーの正面円直径は４～６ｍｍであり、トップカバーの内部円直径は３～５ｍｍであり、突起高さは０．１～０．２ｍｍであり、孔壁と水平面とは３０°～４５°の角度をなすことを特徴とする請求項９に記載の試薬カード。
- 前記検出液孔は漏斗状構造であり、トップカバーの正面円直径は６～８ｍｍであり、トップカバーの内部円直径は１～３ｍｍであり、突起高さは０．３～０．５ｍｍであり、孔壁と水平面とは３０°～４５°の角度をなすことを特徴とする請求項１０に記載の試薬カード。
- 前記反応窓は楕円形リング構造であり、トップカバーの正面楕円長は１５０～２００ｍｍであり、幅は７０～９０ｍｍであり、トップカバーの内部円直径は１３０～１５０ｍｍであり、突起高さは０．１～０．２ｍｍであり、孔壁と水平面とは３０°～４５°の角度をなし、反応窓内底部と試験紙ストリップスの接触面は０．０１～０．０２ｍｍの垂直突起であることを特徴とする請求項１１に記載の試薬カード。
- 前記トップカバーは、表面がねじ山状または凸状の突起構造である手持ち端部を含むことを特徴とする請求項１２に記載の試薬カード。
- 前記トップカバーと前記ボトムカバーとは、位置決め孔および位置決めポストを介して係着されることを特徴とする請求項１３に記載の試薬カード。
- 前記反応膜に分布された検出線Ｔは、１本、２本または複数の本数であることを特徴とする請求項１２に記載の試薬カード。
- 請求項１～１５のいずれか一項に記載の試薬カードを使用して実現する検出方法であって、
試料添加孔に試料を添加するステップ（１）において、
試料を収集した後、試料を前記試料添加孔内の結合パッドに添加し、結合パッド上にナノマイクロスフェア結合抗体、すなわち抗体ナノマイクロスフェアを有し、試料中の検出対象物は結合パッドの抗体ナノマイクロスフェアと免疫結合して抗体ナノマイクロスフェア複合物を形成し、
検出液孔に検出液を添加するステップ（２）において、
検出液孔に検出液を添加した後、検出液は試験紙ストリップの吸水パッド端部の方向に沿ってクロマトグラフィを開始し、検出液のクロマトグラフィは試料添加孔の位置を通過して結合パッドにおける検出対象物と結合していない抗体ナノマイクロスフェアおよび検出対象物と既に結合した抗体ナノマイクロスフェア複合物を溶解し、検出液の試験紙ストリップにおけるクロマトグラフィは「登坂、平行、降坂」を経て、検出液は試験紙ストリップにおいて移動し、「平行」段階で２回目の免疫認識反応を行い、ステップ（１）におけた抗体ナノマイクロスフェア複合物は検出線Ｔで２回目の免疫認識反応を行い、かつ発色を開始し、一方、検出線Ｔと反応しなかった抗体ナノマイクロスフェアは、前進運動を継続し、質量制御線Ｃと結合して発色することを特徴とする検出方法。 - 試料添加孔内に添加した試料は０．１～５０μＬであり、検出液孔内に検出液を０～１５０μＬ添加することを特徴とする請求項１６に記載の検出方法。
- 前記試薬カードは反応が完了した後、機器でＴ、Ｃ線の信号値を検出するか、または色票でＴ、Ｃ線の色深度を対比することで試料中の検出対象物の濃度を計算することを特徴とする請求項１７に記載の検出方法。
- 涙液、創傷滲出液、組織液、汗、房水、眼表面リンス液の微量試料の検出における請求項１５～１８のいずれか一項に記載の検出方法の応用。
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