JP2022539365A

JP2022539365A - 癌及び他の疾患の治療用Ｉｄタンパク質の化学阻害剤

Info

Publication number: JP2022539365A
Application number: JP2021577301A
Authority: JP
Inventors: ヨナタンスリーマン; ゲオルクセドルマイアー; ニコルユング; シュテファンブレーゼ; ジモーネグレースレ
Original assignee: ウニベルジテートハイデルベルク
Priority date: 2019-07-02
Filing date: 2020-06-10
Publication date: 2022-09-08
Also published as: EP3760614B1; EP3760614A1; EP3994123C0; EP3994123B1; EP3760614B8; WO2021001128A1; EP3994123A1; US20220259172A1

Abstract

本発明は、Ｉｄ１及び／又はＩｄ３の発現を阻害する化合物、また癌、並びにＩｄ１及び／又はＩｄ３の発現に関連する他の疾患及び状態の治療におけるそれらの使用に関する。【選択図】なし

Description

本発明は、Ｉｄ１及び／又はＩｄ３の発現を阻害する化合物、また癌、並びにＩｄ１及び／又はＩｄ３の発現に関連する他の疾患及び状態の治療におけるそれらの使用に関する。

癌の効果的な治療は、満たされていない主要な臨床的ニーズであり続けている。２０１８年には、世界中でおよそ１８００万人の新たな癌の症例が発生し、２０３０年までに毎年２３６０万人の新規症例へと増加すると予測されている。現在、世界中の全死亡者のおよそ６人に１人が癌によるものであり、これは２０１８年の９６０万人の死亡に相当する。これらの死亡のおよそ９０％は、転移の直接的及び間接的な影響によって引き起こされていると推定される。転移性疾患は本質的に不治の状態が続いており、新たな治療法が緊急に必要とされている。問題の規模を考えると、世界の癌治療薬市場は２０２３年までに１７８８億６３００万ドルに上ると概算される。

癌幹細胞理論では、腫瘍の成長が、自己複製し、不均一な子孫を生じさせ、新たな腫瘍の成長を開始することができる癌幹細胞（ＣＳＣ）のサブセットによって駆動されると述ベられている。非ＣＳＣ亜集団において腫瘍細胞はこれらの特性を持たないため、非腫瘍形成性である。ＣＳＣの存在は、例えば、幹細胞特性を有する腫瘍細胞を標的とすることにより、癌を効果的に治療することが可能なはずであるといった予測される多くの重要な派生効果を有する。転移は体の様々な臓器に新たな腫瘍を播種することによって引き起こされることから、ＣＳＣは定義上、新たな腫瘍の成長を開始することができる唯一の細胞であるため、幹細胞性を標的にすることも転移を予防又は治療する手段となるはずである。最近の証拠により、休眠（dormant：増殖休止）中の腫瘍細胞が幹細胞性を獲得することで、それらの腫瘍細胞が明白な転移として成長することになるかもしれないことが示唆されている。

ｉｎｖｉｖｏでの腫瘍の発生は、現在、ＣＳＣを定義する際の判断基準である。公開された研究の大部分では、腫瘍細胞とマトリゲルとの同時注入を使用して、ｉｎｖｉｖｏでの腫瘍発生率を決定している。乳癌及びメラノーマの同系動物モデルでは、マトリゲル、ラミニン、及びコラーゲンがいずれも、腫瘍の取り込み率に対して強力で顕著な増強効果を有することを示すことができた。遺伝子発現プロファイリング及びその後の検証により、これらのＥＣＭコンポーネントで構成される３Ｄ微小環境内での腫瘍細胞の培養が、転写調節因子Ｉｄ１及びＩｄ３の発現を強くアップレギュレートすることを示した。このアップレギュレーションは、少なくとも部分的には、自己産生ＢＭＰが細胞の周りに局所的に蓄積することによって３Ｄマトリックスで促進されるオートクリンＢＭＰシグナル伝達によって説明される。

Ｉｄ１及びＩｄ３は、原発腫瘍及び転移性成長の開始において極めて重要な役割を果たすことが示されている遺伝子である。それらの遺伝子は、神経膠腫及び結腸直腸癌を含む幾つかの種類の腫瘍のＣＳＣ特性を決定及び維持することに関係している。したがって、それらの発現は、多くの種類の癌の予後不良と相関している。幹細胞特性を調節する役割に加えて、Ｉｄ１及びＩｄ３は、個別に又は共に、腫瘍細胞の浸潤性及び化学療法への耐性の促進に関与している。

Ｉｄ１及び／又はＩｄ３レベルが上昇した癌実体としては、前立腺癌、Ｂ急性リンパ芽球性白血病、非小細胞肺癌、卵巣腫瘍、食道扁平上皮癌、乳癌、及びメラノーマが挙げられる。多くの場合、Ｉｄ１及びＩｄ３は腫瘍組織で共発現しており、両方のＩｄタンパク質を同時に阻害することの重要性を強調する。

Ｉｄ１及びＩｄ３は、それぞれＶＥＧＦ－ＡとＶＥＧＦ－Ｃのアップレギュレーションを介して部分的に、血管新生とリンパ管新生の誘導にも関与する。したがって、これらの遺伝子の阻害は、腫瘍細胞自体への直接的な影響を通じてだけでなく、血管新生及びリンパ管新生の阻害を通じても、腫瘍の成長及び進行を阻害する可能性がある。血管新生及びリンパ管新生は癌以外の多くの疾患の特徴であるため、Ｉｄ１及び／又はＩｄ３の阻害はこれらの状況でも治療上の影響を与える可能性がある。

Ｉｄ１及びＩｄ３はどちらも免疫細胞の分化状態の決定に関与しており、免疫調節不全を伴う疾患の重要な要因である。Ｉｄ１は、骨髄由来サプレッサー細胞集団を拡大し、樹状細胞の分化及びＣＤ８^＋Ｔ細胞の増殖を阻害する。これにより、腫瘍促進性の免疫抑制性免疫環境が生成される。Ｉｄ３は、Ｔ_Ｈ１７ヘルパーＴ細胞の分化を阻害し、Ｆｏｘｐ３^＋Ｔ_ｒｅｇ細胞の生成を促進する。Ｆｏｘｐ３^＋Ｔ_ｒｅｇ細胞は、Ｔ細胞免疫を抑制し、寛容を助長し、癌との関連で抗癌免疫応答を阻害する。さらに、Ｉｄ３は、Ｔ細胞がγδ運命をとることを促すとともに、αβ運命の結果に反対するための強力なＴＣＲシグナルに必要である。腫瘍性γδ Ｔ細胞は、免疫抑制性腫瘍微小環境を誘導し、それらの細胞が産生するサイトカインを介して血管新生を刺激し、樹状細胞エフェクター機能を妨害し、ＰＤ－Ｌ１経路を介して抗腫瘍Ｔ細胞免疫を阻害することにより、腫瘍の進行を促進する。したがって、Ｉｄ１及びＩｄ３の阻害は、腫瘍細胞への直接的な影響によってだけでなく、腫瘍促進性の免疫抑制微小環境を抑制することによっても、腫瘍の成長及び進行を阻害する可能性がある。これらの観察結果は、Ｉｄ１及びＩｄ３の阻害剤が、免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせた癌の治療に有用である可能性があることも示している。

Ｉｄ１は、上皮間葉転換（ＥＭＴ：epithelial-to-mesenchymal transition）の媒介に関与しており、これは転移において重要なプロセスであると考えられている。さらに、ＥＭＴは、肺、肝臓、腎臓、又は心臓の線維症等の幾つかの線維性疾患に寄与する。直接的な証拠により、肝線維形成におけるＩｄ１の重要な役割が示唆されている。Ｉｄ１／Ｉｄ３の機能を阻害すると、ＥＭＴが損なわれ、それによって転移及び線維症が妨げられる可能性がある。

最近、Ｉｄ３のノックダウンにより、メラノーマ細胞がベムラフェニブ治療に対してより感受性が高くなることが示され、メラノーマの適応療法耐性の媒介におけるＩｄ３の可能性のある役割が示唆された。興味深いことに、鼻咽頭癌細胞におけるパクリタキセル治療への耐性は、Ｒａｆ／ＭＥＫ経路の活性化によって媒介され、その結果、Ｉｄ１レベルが上昇する。ＢＲＡＦ／ＭＥＫ阻害剤とＩｄ１／Ｉｄ３阻害剤を組み合わせると、メラノーマ治療の改善に有用となる可能性がある。

Ｉｄ１及びＩｄ３の発現及び活性は、希少疾患にも関係している。Ｉｄ１は、希少なリンパ増殖性障害であるキャッスルマン病で中心的な役割を果たす。Ｉｄ３は、軟骨内骨化による骨格外骨形成を特徴とする希少な遺伝性疾患である進行性骨化性線維異形成症（ＦＯＰ）の発症において役割を果たす。したがって、Ｉｄ１及びＩｄ３の阻害は、これらの疾患の治療的有用性を持つ可能性がある。

正常な生理学的状況では、Ｉｄ１は脂肪生成分化を阻害し、Ｉｄ３も同様の役割を果たしている可能性がある。したがって、Ｉｄ１及び／又はＩｄ３の阻害は、ｉｎｖｉｖｏでの脂肪生成の調節、又は培養幹細胞、特にｉＰＳＣの分化の調節との関連で有益となる可能性がある。

さらに、Ｉｄ３は、栄養膜の子宮壁への着床を阻害することが報告されており、再発性流産に関係がある。したがって、Ｉｄ３の阻害は、自然妊娠中又は体外受精手順の一環として、着床を促進し、流産を阻害することによって妊孕性を高め得る。

Ｉｄタンパク質又は遺伝子発現を標的とするための幾つかの戦略が報告されている。ペプチドベースのアプローチは、ｉｎｖｉｔｒｏ及びｉｎｖｉｖｏで使用されてきた。治療のためにこれらのアプローチを使用することの難しさは、標的細胞への分子の送達及び物質の薬理学的特性を含む。さらに、小分子阻害剤が調査されてきた。しかしながら、Ｉｄ以外の多くの他の遺伝子の発現も影響を受けたため、それぞれのアプローチには特異性がなかった。

さらに、天然生成物及び物質が検討されてきたが、Ｉｄ発現を阻害するためのそれらの特異性はほとんど調査されていない。かかる物質の中で、カンナビジオール（ＣＢＤ）は転写レベルでＩｄ１の発現を阻害し、幾つかの前臨床試験ではＣＢＤが腫瘍の成長及び転移を阻害できることが示唆されている。同所性乳癌モデルにおける原発腫瘍の成長及び肺転移のＣＢＤ誘発性阻害は、腫瘍組織におけるＩｄ１レベルの低下と関連した。カンナビジオールはＣＢ１及びＣＢ２に対する親和性が低く、これはＣＢＤが非向精神性であるとされる理由を説明する。ＣＢＤは神経膠腫モデルにおいてＩｄ１の発現を阻害し、その結果、ｉｎｖｉｖｏでの浸潤を減少させ、担腫瘍マウスの生存期間を延長した。しかしながら、Ｉｄ１以外の他の遺伝子もＣＢＤによって調節されている。それにもかかわらず、Ｉｄタンパク質の治療的阻害のための現在のアプローチの中で、ＣＢＤは、向精神効果がないこと、その薬理学的特性、及びそれが忍容性良好であるという事実のために、ベンチマークとして浮上している。

上記を考慮して、本発明の根底にある技術的課題は、Ｉｄ１及び／又はＩｄ３の阻害手段の提供、並びにＩｄ１及び／又はＩｄ３発現に関連する疾患及び状態の治療のためのそれぞれの使用である。

上記の技術的課題の解決は、特許請求の範囲を特徴とする実施の形態によって達成される。

特に、第１の態様において、本発明は、式（Ｉ）による構造を有する化合物：

（式中、
Ｒ’は、Ｈ若しくはメチルであり、
Ｒ^ａは、Ｈ、アルキル、若しくはシクロアルキルであり、
Ｒ^ｂは、Ｈ、アルキル、若しくはシクロアルキルであり、
Ｒ^ｃは、Ｈ、アルキル、若しくはシクロアルキルであり、又は、
Ｒ^ａ、Ｒ^ｂ及びＲ^ｃの２つは、それぞれ共に連結して５員若しくは６員の脂環式環を形成し、
Ｒ^ｄは、アルキル、アリール又は－ＣＨ_２－アリールであり、該アリール部分は、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ハロゲン及びトリフルオロメチルからなる群から選択される１つ以上の基によって置換され得る）に関する。

式（Ｉ）の化合物に関して、「アルキル」は、直鎖又は分岐鎖のＣ_１～Ｃ_２４、特にＣ_１～Ｃ_１０、より詳しくはＣ_１～Ｃ_６アルキル基を意味する。

さらに、式（Ｉ）の化合物に関して、「アリール」は、非置換又は置換されたＣ_６～Ｃ_１０アリール基、好ましくはフェニル基を意味し、ハロゲン原子、直鎖又は分岐鎖のＣ_１～Ｃ_６アルキル基（これらは更にハロゲン原子、好ましくはフッ素原子、例えば－ＣＦ_３基によって置換され得る）、Ｃ_１～Ｃ_６アルコキシ基（これらは更にハロゲン官能化された基、好ましくはフッ素基、例えば－ＯＣＦ_３基によって置換され得る）、ヒドロキシ基、及びジメチルアミノのような一置換又は二置換のアミノ基を含むアミノ基からなる基から選択される１つ以上の置換基を有する。

－ＣＨ_２－アリール基は、特にベンジル基、－ＣＨ_２－メシチレン基、又は－ＣＨ_２－ピリジル基であり、ピリジン部分の窒素原子に対してオルト、メタ、又はパラ位に－ＣＨ_２置換を有する。

本発明の式（Ｉ）による化合物の好ましい実施の形態において、上記化合物は、式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）又は（Ｉｄ）のいずれか１つによる構造を有する：

（式中、
Ｒ^ｅは、－ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_２ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_３ＣＨ_３、ベンジル又はヒドロキシベンジルであり、
ｎは、０又は１である）；

（式中、
Ｒ^ｆは、－（ＣＨ_２）_５ＣＨ_３又は－（ＣＨ_２）_６ＣＨ_３である）；

（式中、
各基Ｒ^ｇは、Ｈであるか、又は両方のＲ^ｇが共に連結して、５員の脂環式環を形成する）；

（式中、
両方のＲ^ｈが共に連結して、５員の脂環式環を形成する）。

特に好ましい実施の形態において、本発明の式（Ｉ）による化合物は、以下の化合物Ｘ６６３２、Ｘ６７６０、Ｘ６７７９、Ｘ６６３１、Ｘ６７７７、Ｘ６７６８、Ｘ６６３３、Ｘ５５４９／Ｘ１３８４、Ｘ８１、Ｘ１０６、Ｘ１３１２、Ｘ６９４５、Ｘ６９１０、Ｘ６４０４、Ｘ６７７０、Ｘ６７７８、Ｘ６７５８、Ｘ６９４４、Ｘ７７７６、及びＸ７４０１からなる群から選択され、化合物Ｘ６６３２、Ｘ６７６０、Ｘ８１、及びＸ１０６が特に好ましく、化合物Ｘ６６３２が更により好ましい：

第２の態様において、本発明は、式（ＩＩ）による構造を有する化合物を含む化合物に関する：

（式中、
Ｘは、ＣＨ又はＮであり、
Ｙは、ＣＨ_２若しくはＮＲであり、Ｒは、Ｈ、アルキル、アリール若しくは－ＣＨ_２－アリールであるか、又はＹは、不在であり、
Ｚは、ＣＨ_２若しくはＮＲであり、Ｒは、Ｈ、アルキル、アリール若しくは－ＣＨ_２－アリールであるか、又はＺは、不在であり、
Ｒ^１は、アルキル又は－ＣＨ_２－アリールであり、
Ｒ^２は、アルキル、アリール又は－ＣＨ_２－アリールであり、
Ｒ^３は、Ｈ、アルキル、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、Ｉ、ＣＮ又はＣＦ_３である）。

式（ＩＩ）の化合物に関して、「アルキル」は、直鎖又は分岐鎖のＣ_１～Ｃ_２４、特にＣ_１～Ｃ_１０、より詳しくはＣ_１～Ｃ_６アルキル基を意味する。

さらに、式（ＩＩ）の化合物に関して、「アリール」は、非置換又は置換されたＣ_６～Ｃ_１０アリール基、好ましくはフェニル基を意味し、ハロゲン原子、直鎖又は分岐鎖のＣ_１～Ｃ_６アルキル基（これらは更にハロゲン原子、好ましくはフッ素原子、例えば－ＣＦ_３基によって置換され得る）、Ｃ_１～Ｃ_６アルコキシ基（これらは更にハロゲン官能化された基、好ましくはフッ素基、例えば－ＯＣＦ_３基によって置換され得る）、ヒドロキシ基、及びジメチルアミノのような一置換又は二置換のアミノ基を含むアミノ基からなる基から選択される１つ以上の置換基を有する。

好ましい実施の形態において、アリール部分は、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ハロゲン及びトリフルオロメチルからなる群から選択される１つ以上の基によって置換され得る。

本発明の式（ＩＩ）による化合物の更に好ましい実施の形態において、上記化合物は、式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）又は（ＩＩｃ）のいずれか１つによる構造を有する：

（式中、
Ｒ^１は、アルキル又は－ＣＨ_２－アリールであり、
Ｒ^４は、Ｈ又はＣＦ_３である）；

（式中、
Ｒ^１は、アルキル又は－ＣＨ_２－アリールである）；

（式中、
Ｒ^１は、アルキル又は－ＣＨ_２－アリールであり、
Ｒ^２は、アリールである）。

特に好ましい実施の形態において、本発明の式（ＩＩ）による化合物は、以下の化合物Ｘ８７０６、Ｘ８７６５、Ｘ８１６６、Ｘ８７６２、Ｘ８７０２、Ｘ８５７２、Ｘ８７６６、Ｘ８５７１、及びＸ８０３５からなる群から選択され、化合物Ｘ８７０６、Ｘ８１６６、Ｘ８７６６、及びＸ８０３５が特に好ましく、化合物Ｘ８１６６が更により好ましい：

第３の態様において、本発明は、医学で使用される本発明の化合物に関する。

第４の態様において、本発明は、Ｉｄ１及び／又はＩｄ３を発現する細胞に関連する状態又は疾患、血管新生に依存する状態又は疾患、及び／又はリンパ管新生に依存する状態又は疾患の予防又は治療に使用される本発明の化合物に関する。

Ｉｄ１及び／又はＩｄ３を発現する細胞に関連する状態又は疾患は、腫瘍形成の開始、腫瘍転移の開始、腫瘍の成長、転移の成長、腫瘍促進性免疫応答、腫瘍細胞の播種、及び癌、好ましくは前立腺癌、Ｂ急性リンパ芽球性白血病、非小細胞肺癌、卵巣腫瘍、食道扁平上皮癌、乳癌、及びメラノーマの状況からなる群から選択することができる。

さらに、血管新生に依存する状態又は疾患は、腫瘍形成の開始、腫瘍転移の開始、腫瘍の成長、転移の成長、血管接着、血管線維腫、動静脈奇形、関節炎、粥状動脈硬化巣、角膜移植片血管新生、創傷治癒の遅延、糖尿病性網膜症、肉芽形成、熱傷、血管腫、血友病性関節症、肥厚性瘢痕、血管新生緑内障、偽関節骨折（non-union fracture）、オスラー－ウェーバー症候群、乾癬、化膿性肉芽腫、後水晶体線維増殖症、強皮症、癌、トラコーマ、及びフォンヒッペル－リンダウ症候群からなる群から選択することができる。

さらに、リンパ管新生に依存する状態又は疾患は、臓器移植、癌、フィラリア症、ゴーハム病、ドライアイ疾患、肺線維症、炎症性腸疾患、糖尿病、慢性炎症性疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、炎症性関節炎、潰瘍性大腸炎、乾癬、及び眼表面疾患からなる群から選択することができる。

第５の態様において、本発明は、キャッスルマン病、進行性骨化性線維異形成症（ＦＯＰ）、流産、及び線維症からなる群から選択される状態又は疾患の予防又は治療に使用される本発明の化合物に関する。

第６の態様において、本発明は、癌幹細胞の標的化、血管新生の阻害、腫瘍細胞の化学感受性の増強、腫瘍細胞休眠の誘導、腫瘍細胞休眠の維持、ＥＭＴ（上皮間葉転換）の阻害、ＶＥＧＦ－Ａ（血管内皮成長因子Ａ）発現の抑制、ＶＥＧＦ－Ｃ（血管内皮成長因子Ｃ）発現の抑制、幹細胞及びｉＰＳＣ（人工多能性幹細胞）の分化の誘導、子宮壁への栄養膜の着床の改善、免疫細胞のＴＧＦ－ベータ（トランスフォーミング成長因子ベータ）免疫抑制表現型の予防、及び／又は骨髄由来サプレッサー細胞の阻害に使用される本発明の化合物に関する。

本発明の使用のための化合物の好ましい実施の形態において、上記化合物は、免疫チェックポイント阻害剤、ＢＲＡＦ（Ｂ－Ｒａｆ）阻害剤、ＭＥＫ（ＭＡＰＫ／ＥＲＫキナーゼ）阻害剤、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗腫瘍抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤、有糸分裂阻害剤、ホルモン療法、シグナル伝達阻害剤、遺伝子発現モジュレーター、アポトーシス誘導剤、血管新生阻害剤、免疫療法、免疫複合体、毒素送達分子、小分子キナーゼ阻害剤、抗体ベースの療法、養子細胞移植、カルメット・ゲラン桿菌（Bacillus Calmette-Guerin）療法、癌ワクチン、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法、サイトカイン療法、遺伝子療法、及び腫瘍溶解性ウイルス療法からなる群から選択される、１つ以上の更なる化合物及び／又は治療法と組み合わせて投与される。

第７の態様において、本発明は、本発明の第１、第２、及び第３の態様で規定される１つ以上の化合物を、それを必要とする被験体に投与する工程を含む、本発明の上記の第４、第５、及び第６の態様で規定される状態及び／又は疾患のいずれかを予防又は治療する方法に関する。好ましい実施の形態において、被験体はヒト被験体である。

本発明の化合物は、Ｉｄ１及びＩｄ３の二重阻害、既知の化合物と比較してＩｄ１及び／又はＩｄ３のより強力な阻害、既知の化合物と比較して改善された医薬特性、及び既知の化合物と比較して低下した細胞毒性を有利に提供する。

図面は以下を示す。

ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９によるＩｄ１及びＩｄ３の遺伝的除去がｉｎｖｉｖｏでのメラノーマ細胞の腫瘍成長を有意に損なうことを示す図である。マウスメラノーマ細胞（Ｂ１６－Ｆ１０又はＲｅｔ）をマトリゲルと同系マウスモデルに同時注入した。（Ａ）Ｉｄ１又はＩｄ３の単一ノックダウンは、ｉｎｖｉｖｏでのＲｅｔ細胞の腫瘍成長を損なう。（Ｂ）Ｂ１６－Ｆ１０及びＲｅｔメラノーマ細胞におけるＩｄ１及びＩｄ３の同時ノックダウンは、ｉｎｖｉｖｏでの腫瘍成長を有意に阻害する。（Ｃ）Ｒｅｔ細胞におけるＩｄ１及びＩｄ３の同時ノックダウンは、ｉｎｖｉｖｏでの腫瘍成長の阻害において単一ノックダウンと比較して優れている。相対的な腫瘍成長を、対応する対照群の平均値への正規化によって示す。エラーバー＝ＳＥＭ。＊ｐ≦０．０５；＊＊＊ｐ≦０．００１。Ｉｄ１及びＩｄ３が失われると３Ｄマトリゲル培養で成長するコロニーが有意に減少することを示す図である。Ｂ１６－Ｆ１０（左パネル）又はＲｅｔ（右パネル）対照又はＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９Ｉｄ１／Ｉｄ３細胞を３Ｄマトリゲル（１０ｍｇ／ｍｌ）に蒔き、分析前に６日間成長させた。４８ウェルプレートの各ウェルの６つの位置にあるコロニーの数を、各ｚレベルでカウントした（位置ごとに５～１０のｚレベルを撮像した）。Ｂ１６－Ｆ１０細胞においてＢＭＰ４が媒介するＩｄ１及びＩｄ３の発現を阻害する可能性についてのカンナビジオール（ＣＢＤ）に構造的に関連する化合物の化合物ライブラリースクリーンからのウエスタンブロット例を示す図である。このサブセットで試験された３３種の化合物のうち、１８種はＢＭＰ４（１０ｎｇ／ｍｌ）と、ＤＭＳＯ、ＣＢＤ（１０μＭ）又は試験化合物（１０μＭ）とで同時処理した２４時間後にＩｄ１及びＩｄ３のタンパク質レベルを低下させた。ＢＯＩＬＥＤ－Ｅｇｇ分析が、ＣＢＤと比較してＸ８１６６の薬理学的特性が優れていることを示す図である。脳又は腸の推定透過法（ＢＯＩＬＥＤ－Ｅｇｇ：Brain Or IntestinaL EstimateD permeation method）は、小分子の親油性（ＷＬＯＧＰ）及び極性（ｔＰＳＡ）によって、消化管吸収及び脳アクセスを予測する。Ｘ６６３２及びＸ８１６６がｉｎｖｉｖｏでメラノーマの成長及び発生を有意に阻害することを示す図である。Ｂ１６－Ｆ１０細胞（Ａ）又はＲｅｔ（Ｂ）細胞を、同系マウスにマトリゲルと共に同時注入した。マウスを最初の１４日間、ＤＭＳＯ、ＣＢＤ、Ｘ６６３２又はＸ８１６６を用いて毎日処理（腹腔内注射）した。数字は、各群の腫瘍を有する動物の数を示す。棒グラフは、最初の動物が規定の（legal）腫瘍サイズの限界に達した日の各群の平均腫瘍体積を示す。カプラン－マイヤー曲線は、腫瘍の発生の尺度として、腫瘍のない動物の割合をパーセントで示す。エラーバー＝ＳＥＭ。^＊／＃ｐ＝０．０５；＃＃／^＊＊ｐ＝０．０１；＃＃＃／^＊＊＊ｐ＝０．００１。^＊ＤＭＳＯと比較、＃ＣＢＤと比較。Ｘ８１６６がＣＢＤ及びＸ６６３２より細胞毒性が少ないことを示す図である。（Ａ）Ｉｄ１及びＩｄ３の発現の喪失は、２Ｄ培養におけるＢ１６－Ｆ１０細胞及びＲｅｔ細胞の増殖を有意に変化させない。（Ｂ）カンナビジオール（ＣＢＤ）は、Ｘ８１６６よりもマウス胚性線維芽細胞（ＭＥＦ）に対してより毒性がある。（Ｃ）高濃度のＣＢＤは、Ｘ８１６６と比較してＢ１６－Ｆ１０細胞及びＲｅｔ細胞でより細胞毒性がある。Ｘ８１６６が３Ｄマトリゲルにおいてメラノーマ細胞の成長を阻害することを示す図である。Ｂ１６－Ｆ１０（Ａ）若しくはＲｅｔ（Ｂ）対照、又はＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９Ｉｄ１／Ｉｄ３細胞を３Ｄマトリゲル（１０ｍｇ／ｍｌ）に蒔き、分析前に６日間成長させた。Ｂ１６－Ｆ１０細胞又はＲｅｔ細胞を、ＤＭＳＯ又はＸ８１６６（７．５μＭ）で毎日処理した。４８ウェルプレートの各ウェルの６つの位置にあるコロニーの数を、各ｚレベルでカウントした（位置ごとに５～１０のｚレベルを撮像した）。Ｉｄ１及びＩｄ３の阻害に必要なインドール型及びインダゾール型の化合物の化学空間を決定するための分析を示す図である。（Ａ）Ｒｅｔ細胞を、溶解前にＢＭＰ４及び指定の化合物（３．３μＭ）で２４時間処理した。（Ｂ）Ｂ１６－Ｆ１０細胞又はＲｅｔ細胞を、溶解前にＢＭＰ４及び指定の化合物（１０μＭ）で２４時間処理した。Ｉｄ１及びＩｄ３の阻害に必要なクマリン型化合物の化学空間を決定するための分析を示す図である。（Ａ）Ｂ１６－Ｆ１０細胞又はＲｅｔ細胞を、溶解前にＢＭＰ４及び指定の化合物（１０μＭ）で２４時間処理した。（Ｂ）幾つかの化合物は３．３μＭでＩｄ１及びＩｄ３の発現を阻害するが、ＣＢＤはこの濃度でＩｄ１又はＩｄ３の発現を阻害しない。ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）及びリンパ管内皮細胞（ＬＥＣ）を、ＥＧＭ（商標）－２ＭＶ微小血管内皮細胞成長培地－２ＳｉｎｇｌｅＱｕｏｔｓ（商標）キット（いずれもLonza、それぞれ、カタログ番号ＣＣ－３１５６及びＣＣ４１７６）を添加したＥＢＭ（商標）－２内皮細胞成長基礎培地（以下、内皮細胞成長培地と称する）で培養した。ＨＵＶＥＣ及びＬＥＣを、指定の濃度のＸ６６３２の存在下で、又は溶媒対照としてＤＭＳＯを用いて培養した。２４時間後、細胞を回収した。溶解物をウエスタンブロットし、Ｉｄ１及びＩｄ３に対する抗体でプローブした。ビンキュリン抗体でプローブされたウエスタンブロットは、ローディング対照としての役割を果たした。ＨＵＶＥＣ（Ａ）及びＬＥＣ（Ｂ）を内皮細胞成長培地で培養した。細胞を指定の濃度のＸ６６３２と共にインキュベートした。ＤＭＳＯとのインキュベーションは溶媒対照としての役割を果たした。指定の期間培養した後、細胞をＣｙＱＵＡＮＴ（商標）細胞増殖アッセイキット（Thermo Fisher Scientific）で染色した。ＣｙＱＵＡＮＴ（商標）色素は、二本鎖ＤＮＡに組み込まれると、４８５ｎｍで励起された後に蛍光を発し、ＤＮＡ含有量を細胞数の尺度として使用できるようにする。プレートを３７℃で１５分間インキュベートして、ＣｙＱＵＡＮＴ（商標）色素をＤＮＡに取り込ませた。TecanのＩｎｆｉｎｉｔｅＭ２００リーダーを使用して、４８５ｎｍで励起し、各ウェルにおいて２５の位置で、５３０ｎｍで発光（シグナル強度）を検出することにより、蛍光を測定した。ＨＵＶＥＣ又はＬＥＣを、１ミリリットルあたり１．６×１０^４細胞で２０％メチルセルロースを含む内皮細胞成長培地に再懸濁した。２５マイクロリットルの細胞懸濁液を非接着性プラスチックプレート上に液滴としてピペットで移し、次いでそれを反転させてハンギングドロップ培養物を形成した。プレートを３７℃で２４時間インキュベートした。スフェロイドを回収し、０．５％メチルセルロースを含むＩ型コラーゲン（２ｍｇ／ｍｌ）に包埋した。重合後、ゲルを、Ｘ６６３２（１０μＭ）の存在下又は不在下で５０ｎｇ／ｍｌｈＶＥＧＦ－Ａを含む内皮細胞成長培地、又は溶媒対照としてのＤＭＳＯを用いて培養した。顕微鏡に基づく画像取得を使用して、２４時間の培養後に出芽を評定した。代表的な画像を示す。

本発明を以下の実施例によって更に説明するが、これらに限定されない。

材料及び方法：
式ＩＩａによる化合物（例えば、化合物Ｘ６６３２）への合成経路
ａ）ＫＨＭＤＳ、ＴＨＦ、ジブロモアルカン、－１６℃～室温、１６時間、７８％；ｂ）ＤＩＢＡＬ－Ｈ、ＤＣＭ、－７８℃、１時間、９２％；ｃ）１）臭化ｎ－プロピルトリフェニルホスホニウム、ＫＨＭＤＳ、ＴＨＦ、０℃～１０℃、３０分、２）出発物質、１０℃、１時間、９９％；ｄ）Ｐｄ／Ｃ、Ｈ_２－雰囲気、酢酸エチル、２４時間、９７％；ｅ）１．）ＴＭＥＤＡ、ジエチルエーテル、０℃、ｎ－ＢｕＬｉ、２時間、室温、２．）０℃、ＤＭＦ、４時間、室温、９１％；ｆ）ＡｌＣｌ_３、ＮａＩ、ＡＣＮ、ＤＣＭ、１．５時間、室温、８０％；ｇ）無水ヘキサン酸、Ｋ_２ＣＯ_３、マイクロ波照射（１８０℃、６５分、３００Ｗ）、８２％；ｈ）ＣＨ_２Ｃｌ_２（５．００当量）中のＢＢｒ_３、ＣＨ_２Ｃｌ_２、－７８℃～室温（３０分）、９２％（スキーム１）。

式Ｉｂ（Ｒ^１＝ブチル）による化合物の合成（スキーム２）

ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９
この研究で使用されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９Ｉｄ１／Ｉｄ３クローンの生成は以前に報告されている。要するに、細胞を、製造業者のプロトコルに従って、リポフェクタミン２０００試薬を使用して、ｇＲＮＡベクター、ｈＣａｓ９プラスミド及び配列特異的一本鎖ドナーオリゴヌクレオチドで同時トランスフェクトした。単一細胞クローンを拡大し、配列特異的プライマーを用いてＩｄ１遺伝子及びＩｄ３遺伝子のゲノムＤＮＡ配列の変化についてスクリーニングした。ゲノムＤＮＡ配列に変化を有するコロニーを選択し、ウエスタンブロット分析によってＩｄ１／３タンパク質の発現を確認した。Ｉｄ１／３タンパク質に特異的なバンドを欠くコロニーを選択し、９６ウェルに単一細胞として蒔き、続いてゲノム変化、並びにＩｄ１及びＩｄ３のタンパク質発現の喪失について分析した。親細胞株から得られた単一細胞クローンを対照として使用した。

３Ｄマトリゲルアッセイ
細胞（２×１０^３）をマトリゲルと混合して、１５０μｌの細胞／マトリゲル（１０ｍｇ／ｍｌ、＃３５４２６２、Corning Inc.）溶液を得て、これを４８ウェルプレートのウェルに蒔いた。ゲルを３７℃で３０分間固化させた後、５００μｌの完全成長培地で覆った。６日間の培養後、画像分析で全ての細胞に焦点を合わせるため、ＬｅｉｃａＤＭＩ６０００Ｂ顕微鏡を使用して、全てのウェルの６つの異なるｘ／ｙ位置、及び各位置に最低５つの水平層（ｚレベル）を使用して画像をキャプチャした。画像分析を、Ｆｉｊｉソフトウェアを使用して次のように実施した：最初に、画像を８ビットファイル（０（黒）から２５５（白）までのピクセル値）に変換した。スケールを、ｄｉｓｔａｎｃｅ＝０、ｋｎｏｗｎ＝０、ｐｉｘｅｌ＝１、及びｕｎｉｔ＝ｐｉｘｅｌｇｌｏｂａｌに設定した。統合された半自動ｍａｇｉｃｗａｎｄｔｏｏｌを使用して、全ての画像で焦点が合っている各コロニーの輪郭を検出した。輪郭がコロニーの形態と一致するようになったら、塗りつぶし機能を使用してコロニーを白く塗りつぶした（ピクセル値２５５）。ピクセル値の閾値処理（閾値＝２５５）により、塗りつぶされたコロニーの黒（背景）及び白（コロニー）の画像を取得することができた。「粒子の分析」機能を適用して、最小ピクセルサイズが１５００のコロニーの面積及び周囲長を測定した。浸潤指数を以下の通り計算した：浸潤指数＝（周囲長）^２／面積、結果として浸潤の単位のない測定値をもたらす。

ｉｎｖｉｖｏでの腫瘍の成長及び発生
トリプシン／ＥＤＴＡを使用して細胞を回収し、ＰＢＳで洗浄した。指定された数の生きているメラノーマ細胞を、１００μｌのＰＢＳ中の同系マウスの脇腹に皮下注射した。同時注入実験では、指定された数の生細胞を１００μｌのマトリゲルＨＣ（１０ｍｇ／ｍｌ、＃３５４２６２、Corning Inc.）に再懸濁し、脇腹に皮下注射した。腫瘍体積を、式４／３π（ｄ_１／２×ｄ_２／２×ｄ_３／２）（式中、ｄ_１～ｄ_３は、３次元での腫瘍の直径を表す）を使用して計算した。動物をＤＭＳＯ、ＣＢＤ、Ｘ６６３２又はＸ８１６６（腹腔内でＤＭＳＯ中３０μｌ）で１４日間処理した。全ての動物実験は地方自治体によって承認され、ドイツの法的要件に従って実施された。腫瘍始原細胞（ＴＩＣ）の頻度及びｐ値を、ＥＬＤＡソフトウェアを使用して計算した。

化合物のスクリーン
Ｉｄ１及びＩｄ３の発現に対する阻害効果を有する化合物をスクリーニングするために、細胞をＢＭＰ４（１０ｎｇ／ｍｌ、３１５－２７、Peprotech）及び指定された濃度の物質で２４時間同時に刺激した。ＤＭＳＯは溶媒対照としての役割を果たした。Ｉｄ１及びＩｄ３の発現レベルへの影響をウエスタンブロッティングで分析した。

ウエスタンブロット
標準的な方法を使用してウエスタンブロット分析を行った。以下の抗体をタンパク質検出に使用した：Ｉｄ１（１９５－１４、CalBioreagents）、Ｉｄ３（１７－３、CalBioreagents）、β－アクチン（ＡＣ－１５、Sigma Aldrich）、ビンキュリン（ＶＩＮ－１１－５、Sigma Aldrich）。タンパク質バンドを、ＨＲＰ複合化二次抗体（Ｐ０４４７、Ｐ０４４８、Agilent Technologies）及び増強された化学発光（３２１０６、Thermo Fisher Scientific）を使用して検出した。

実施例１：
癌療法の標的としてのＩｄ１及びＩｄ３の確立
メラノーマの発生及び成長におけるＩｄ１及びＩｄ３の役割を実証するため、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ゲノム編集を使用して、Ｂ１６－Ｆ１０及びＲｅｔのメラノーマ細胞でこれらの遺伝子を恒久的にオフにした。次いで、腫瘍細胞を同系の実験動物に皮下移植し、メラノーマの発生及び成長を対照と比較した。

Ｉｄ１又はＩｄ３のいずれかが失われると、ｉｎｖｉｖｏでのＲｅｔ細胞の腫瘍成長が強く有意に減少した（図１Ａ）。Ｉｄ１及びＩｄ３の同時喪失は、ｉｎｖｉｖｏでのＢ１６－Ｆ１０細胞及びＲｅｔ細胞の腫瘍成長を有意に阻害したが（図１Ｂ）、単一のノックアウト細胞よりも顕著な効果があった（図１Ｃ）。最終的に全ての動物が腫瘍を発症したが、腫瘍成長の開始も大幅に遅延し（表１）、細胞に強化された腫瘍発生特性を与える幹細胞特性におけるＩｄ１及びＩｄ３の役割と一致した。さらに、Ｉｄ１及びＩｄ３の喪失は、ｉｎｖｉｔｒｏでの３Ｄマトリゲル培養におけるＢ１６－Ｆ１０細胞及びＲｅｔ細胞の増殖を有意に損なった（図２）。Ｒｅｔ細胞では、Ｉｄ１及びＩｄ３の発現が失われると、浸潤挙動の低下が観察された（図２、左パネル）。これらの結果は、Ｉｄ１及びＩｄ３を標的にすることには治療上の価値があるはずであることを示す。

５個又は５０個のＢ１６－Ｆ１０若しくはＲｅｔの対照、又はＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９細胞を、同系マウスにマトリゲル（１０ｍｇ／ｍｌ）と同時注入した。各群（対照又はＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９Ｉｄ１／Ｉｄ３）は、２４匹の動物（試験した３つの細胞クローンのそれぞれについて８匹の動物）で構成された。腫瘍細胞注入の２８日後～３０日後に１０００ｍｍ^３を超えるサイズの腫瘍が存在した場合、腫瘍の発生を記録した。腫瘍始原細胞（ＴＩＣ）の頻度を、限界希釈分析（ＥＬＤＡ）ソフトウェアを使用して測定した。

実施例２：
特有の化学ライブラリーのスクリーニングによりＩｄ１及びＩｄ３タンパク質発現の新規阻害剤を特定する
ＣＢＤに構造的に関連する１６８種の新規化合物を含む特有の化学ライブラリーを合成した。Ｂ１６－Ｆ１０及びＲｅｔのメラノーマ細胞をＢＭＰ４で処理して、Ｉｄ１及びＩｄ３の発現を誘導し、同時にそれぞれの化合物で２４時間個別に処理した。ＣＢＤと比較してＩｄ１及びＩｄ３タンパク質の発現を阻害する化合物の能力を、ウエスタンブロッティング分析を使用して評定した。化合物のおよそ３分の１は、Ｉｄ１及びＩｄ３の両方のタンパク質発現に対して阻害効果を有し、２２種はＣＢＤよりも強力にＩｄ１及びＩｄ３の発現を減少させた（図３、表２）。最も強い阻害活性を示す化合物は、Ｘ８１、Ｘ１０６、Ｘ６６３２、Ｘ６７６０、Ｘ８０３５、Ｘ８１６６、Ｘ８７０６及びＸ８７６６であった。

消化管吸収及び脳アクセスは、２つの重要な薬物動態パラメータである。脳又は腸の推定透過法（ＢＯＩＬＥＤ－Ｅｇｇ）は、小分子の親油性（ＷＬＯＧＰ）及び極性（ｔＰＳＡ）によって、消化管吸収及び脳アクセスを予測する。同定された化合物のＢＯＩＬＥＤ－Ｅｇｇ分析は、ＣＢＤと比較してＸ８１６６のより良い薬物動態特性を予測するが、Ｘ６６３２はＣＢＤと同様の特性を有する（図４）。これらの予測値とｉｎｖｉｔｒｏ溶解度分析に基づいて、Ｘ６６３２及びＸ８１６６をその後の実験で更に調査した。

実施例３：
ＣＢＤよりも良好に腫瘍の成長を阻害する新規化合物
選択したＩｄ１／Ｉｄ３を阻害する化合物の抗腫瘍特性を調査するため、実験マウスの群（群あたり８匹）にＢ１６－Ｆ１０又はＲｅｔのメラノーマ細胞を皮下注射した。メラノーマ細胞の移植後の最初の２週間は、溶媒対照としてのＤＭＳＯ、参照化合物としてのＣＢＤ、又は試験物質Ｘ６６３２及びＸ８１６６をマウスに毎日注射した（図５）。メラノーマの発生及び成長を、９０日間にわたって評定した。化合物Ｘ６６３２及びＸ８１６６は、ＤＭＳＯ処理と比較してメラノーマの成長及び発生を有意に阻害した（図５）。Ｘ８１６６はＣＢＤと比較して腫瘍の成長及び発生をより有意に阻害したが、Ｘ６６３２はＢ１６－Ｆ１０実験ではＣＢＤよりも有意に効果的であり、Ｒｅｔ実験では腫瘍の発生及び成長が減少する傾向を示した。重要なことに、Ｂ１６－Ｆ１０細胞を注射してＸ８１６６で処理した動物はいずれも腫瘍を有さず、Ｘ６６３２で処理した３匹の動物だけが腫瘍を有していたが、ＤＭＳＯで処理した全ての動物及びＣＢＤで処理した８匹のマウスのうち７匹が腫瘍を発症した。マウスにＲｅｔ細胞を注射し、Ｘ６６３２又はＸ８１６６で処理した場合、Ｘ６６３２群の１匹のマウスとＸ８１６６群の２匹のマウスも腫瘍を発症しなかった。これらの結果は、Ｘ６６３２、特にＸ８１６６が腫瘍の発生を防ぎ、メラノーマの成長を阻害する可能性があることを示す。

試験した化合物の中で、Ｘ８１６６は最も優れた毒性プロファイルを示した（処理したマウスにおいてＸ８１６６では毒性の痕跡は観察されなかった）。対照的に、ＣＢＤの毎日の腹腔内注射は、Ｒｅｔ細胞由来の腫瘍を用いた実験で２匹のマウスの死をもたらした（死因は不明）。さらに、実験の終わりにマウスを屠殺した際、全てのＣＢＤ処理マウスは腸器官に毒性関連の損傷を示した。

ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ゲノム編集によるＩｄ１及びＩｄ３発現の遺伝的除去は、３Ｄ培養におけるメラノーマ細胞の成長及び浸潤性を阻害したが（図２）、標準的な２Ｄプラスチック培養におけるメラノーマ細胞の増殖を有意に変化させなかった（図６Ａ）。２Ｄ培養では、Ｘ８１６６はまた、メラノーマ細胞の増殖及び非形質転換マウス胚性線維芽細胞（ＭＥＦ）に対して、主に高濃度で中程度の阻害効果しかなかった（図６Ｂ、図６Ｃ）。Ｉｄ１及びＩｄ３の遺伝子欠失と同様に、Ｘ８１６６はまた、３Ｄマトリゲルにおいてメラノーマ細胞の成長を著しく損なった（図７）。対照的に、ＣＢＤ及びＸ６６３２の処理は、２Ｄ培養でメラノーマ細胞とＭＥＦの両方の増殖を強く阻害し、細胞毒性のためＣＢＤ及びＸ６６３２の毎日の適用を使用した３Ｄアッセイを実施することができなかった。まとめると、これらの観察結果は、ＣＢＤ及びＸ６６３２がＩｄ１及びＩｄ３の発現の阻害に加えてメラノーマ細胞に追加の効果を及ぼすことを示唆する。重要なことに、これらのデータはまた、Ｘ８１６６が他の試験物質よりもオフターゲット効果が少ないことを示し、Ｉｄ１及びＩｄ３の遺伝子欠失の効果を表現型コピーし、Ｘ８１６６が他の物質よりもはるかに特異的なＩｄ１及びＩｄ３の阻害剤であることを示唆する。

要約すると、これらのデータは、ＣＢＤと比較してＩｄ１及びＩｄ３の発現に対して優れた阻害効果を発揮する新規物質クラスを特定する。Ｘ６６３２及びＸ８１６６は、２つの独立した同系マウスモデルにおけるメラノーマの成長及び発生の強力な阻害剤であることが実証され、Ｘ８１６６がマウス及び非形質転換細胞にとって忍容性良好であることが示される。

実施例４：
Ｉｄ１／Ｉｄ３発現の阻害に必要な化学空間の定義
化合物Ｘ８１６６及びＸ６６３２は、インドール及びクマリンの化合物クラスに属する。Ｘ８１６６は、ｉｎｖｉｖｏ研究及びＭＥＦにおける細胞毒性に関して優れていることが示されたが、化合物Ｘ６６３２は、細胞内のＩｄ１／Ｉｄ３発現の阻害においてより強力であった。ｉｎｖｉｖｏの結果が得られた元の化合物と比較してそれらの可能性を決定し、Ｉｄ１及びＩｄ３発現の阻害に必要な化学空間を決定するため、両方の化合物クラスの誘導体を更なるｉｎｖｉｔｒｏ研究で試験した。

Ｉｄ１及びＩｄ３の発現に対して阻害活性を示したインダゾール型及びインドール型の化合物を図８に示し、それらの化学構造を本出願で説明する。阻害活性を有する３つの密接に関連する化合物サブクラスを特定した。

Ｉｄ１及びＩｄ３の発現に対して阻害活性を示したクマリン型化合物を図９に示し、それらの化学構造を本出願で説明する。

実施例５：
化合物Ｘ６６３２の合成
１－（３，５－ジメトキシフェニル）シクロヘキサン－１－カルボニトリル

２００ｍＬの無水テトラヒドロフラン中の７．５０ｇの２－（３，５－ジメトキシフェニル）アセトニトリル（４２．３ｍｍｏｌ、１．００当量）の溶液に、－１６℃にてアルゴン向流下で、２５．３ｇのＫＨＭＤＳ（１２７ｍｍｏｌ、３．００当量）を加えた。混合物を同じ温度で３分間撹拌し、次いで５０ｍＬの無水テトラヒドロフランで希釈した６．２４ｍＬの１，４－ジブロモペンタン（１０．６ｇ、４６．６ｍｍｏｌ、１．１０当量）を滴加した。混合物を室温まで温め、一晩撹拌した。塩化アンモニウム溶液（１５０ｍＬ）を加えることにより反応物をクエンチし、１００ｍＬのジエチルエーテルで希釈した。有機層を３×２００ｍＬのジエチルエーテルで抽出し、合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下での揮発性物質の除去及びフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ／ＥｔＯＡｃ５：１）による精製により、８．０９ｇ（７８％）の純粋な生成物を無色の油状物として得た。分析データは文献と一致する。

R_f (CH/EtOAc 5:1): 0.43。-¹H NMR (300 MHz, CDCl₃): δ = 6.63 (d, J = 2.2 Hz, 2H, 2 × H_Ar), 6.40 (t, J = 2.2 Hz, 1H, H_Ar), 3.81 (s, 6H, 2 × OCH₃), 2.21 - 2.16 (m, 2H, CH₂), 1.93 - 1.65 (m, 6H, CH₂), 1.46 - 1.02 (m, 2H, CH₂) ppm。

１－（３，５－ジメトキシフェニル）シクロヘキサン－１－カルバルデヒド

アルゴン雰囲気下で２５０ｍＬの無水ジクロロメタン中の７．９７ｇの１－（３，５－ジメトキシフェニル）シクロヘキサン－１－カルボニトリル（３２．５ｍｍｏｌ、１．００当量）の溶液を－７８℃に冷却し、８１．２ｍＬのＤＩＢＡＬ－Ｈ（ジクロロメタン中１ｍ、８１．２ｍｍｏｌ、２．５０当量）を滴加した。混合物を同じ温度で更に１時間撹拌し、次いで１２０ｍＬの１０％酒石酸カリウムナトリウム水溶液を滴加することにより反応物をクエンチした。室温まで解凍した後、混合物を更に４０分間撹拌し、水層を３×２００ｍＬの酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を３００ｍＬのブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下での揮発性物質の除去及びフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ／ＥｔＯＡｃ１０：１）による精製により、７．３９ｇ（９２％）の純粋な生成物を無色の油状物として得た。分析データは文献と一致する。R_f (CH/EtOAc 20:1): 0.20。-¹H NMR (300 MHz, CDCl₃): δ = 9.34 (s, 1H, CHO), 6.46 (d, J = 2.2 Hz, 2H, 2 × H_Ar), 6.37 (t, J = 2.2 Hz, 1H, H_Ar), 3.78 (s, 6H, 2 × OCH₃), 2.27-2.22 (m, 2H, CH₂), 1.85-1.78 (m, 2H, CH₂), 1.69-1.57 (m, 3H, CH₂), 1.52-1.25 (m, 3H, CH₂) ppm。

（Ｚ）－１－（１－（ブタ－１－エン－１－イル）シクロヘキシル）－３，５－ジメトキシベンゼン

０℃の３００ｍＬの無水テトラヒドロフラン中の３６．３ｇの臭化ｎ－プロピルトリフェニルホスホニウム（９４．３ｍｍｏｌ、３．００当量）の懸濁液に、１８．８ｇのＫＨＭＤＳ（９４．３ｍｍｏｌ、３．００当量）をアルゴン向流下で加えた。混合物を１０℃で３０分間撹拌し、５０ｍＬの無水テトラヒドロフラン中の７．８１ｇの１－（３，５－ジメトキシフェニル）シクロヘキサン－１－カルバルデヒド（３３．７ｍｍｏｌ、１．００当量）の溶液を滴加した。更に６０分間撹拌した後、２００ｍＬの塩化アンモニウム溶液を加えることにより反応物をクエンチした。水層を３×２００ｍＬのジエチルエーテルで抽出し、合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下での揮発性物質の除去及びフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ／ＥｔＯＡｃ１０：１）による精製により、８．６２ｇ（９９％）の純粋な生成物を無色の油状物として得た。分析データは文献と一致する。

R_f (CH/EtOAc 5:1): 0.65。-¹H NMR (300 MHz, CDCl₃): δ = 6.58 (d, J = 2.3 Hz, 2H, 2 × H_Ar), 6.28 (t, J = 2.3 Hz, 1H, H_Ar), 5.63 (dt, J = 11.2 Hz, J = 1.7 Hz, 1H, H_DB), 5.34 (dt, J= 11.2 Hz, J = 7.4 Hz, 1H, H_DB), 3.78 (s, 6H, 2 × OCH₃), 1.95-1.90 (m, 2H, CH₂), 1.72-1.56 (m, 9H, CH₂), 1.31-1.24 (m, 1H, CH₂), 0.72 (t, J = 7.5 Hz, 3H, CH₃) ppm。

１－（１－ブチルシクロヘキシル）－３，５－ジメトキシベンゼン

酢酸エチル中の８．５０ｇの（（Ｚ）－１－（１－（ブタ－１－エン－１－イル）シクロヘキシル）－３，５－ジメトキシベンゼンの溶液に、活性炭上のパラジウム１．７３ｇ（１０％Ｐｄ／Ｃ）を加えた。水素ガスを溶液に数時間バブリングし、続いて水素雰囲気下で２４時間維持した。Ｃｅｌｉｔｅ（商標）による濾過、酢酸エチルによるすすぎ、揮発性物質の除去により、８．３１ｇ（９７％）の純粋な生成物を無色の油状物として得た。分析データは文献と一致する。

R_f (CH/EtOAc 5:1): 0.68。-¹H NMR (300 MHz, CDCl₃): δ = 6.48 (d, J = 2.3 Hz, 2H, 2 × H_Ar), 6.3 (t, J = 2.3 Hz, 1H, H_Ar), 3.80 (s, 6H, 2 × OCH₃), 2.02-1.98 (m, 2H, CH₂), 1.57-1.36 (m, 10H, 5 × CH₂), 1.18-1.09 (m, 2H, CH₂), 0.96-0.88 (m, 2H, CH₂), 0.78 (t, J = 7.3 Hz, 3H, CH₃) ppm。

４－（１－ブチルシクロヘキシル）－２，６－ジメトキシベンズアルデヒド

８．２６ｇの１－（１－ブチルシクロヘキシル）－３，５－ジメトキシベンゼン（２９．９ｍｍｏｌ、１．００当量）を６０ｍＬのジエチルエーテルに溶解し、６．７２ｍＬのＴＭＥＤＡ（５．２１ｇ、４４．８ｍｍｏｌ、１．５０当量）を滴加した。溶液を０℃に冷却し、１７．９ｍＬのｎ－ブチルリチウム（ｎ－ヘキサン中２．５ｍ、４４．８ｍｍｏｌ、１．５０当量）をゆっくりと加えた。室温で４時間撹拌した後、溶液を０℃に冷却し、６．８９ｍＬのジメチルホルムアミド（６．５５１ｇ、８９．７ｍｍｏｌ、３．００当量）を加え、混合物を室温で更に４時間撹拌した。６０ｍＬのブラインを加えることにより反応物をクエンチし、３×１５ｍＬのジエチルエーテルで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、揮発性物質を減圧下で除去し、次いで残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ／ＥｔＯＡｃ１０：１）により精製して、８．３１ｇ（９１％）の生成物を黄色の油状物として得て、これを次の工程で直接使用した。分析データは文献と一致する。

R_f (CH/ EtOAc 10:1): 0.19。-¹H NMR (300 MHz, CDCl₃): δ = 10.46 (s, 1H, CHO), 6.52 (s, 2H, 2 × H_Ar), 3.89 (s, 6H, 2 × OCH₃), 2.07-1.94 (m, 2H, CH₂), 1.66 - 1.33 (m, 10H, 5 × CH₂), 1.29-1.04 (m, 2H, CH₂), 1.01-0.85 (m, 2H, CH₂), 0.79 (t, J = 7.3 Hz, 3H, CH₃) ppm。

４－（１－ブチルシクロヘキシル）－２－ヒドロキシ－６－メトキシベンズアルデヒド

８．００ｇの４－（１－ブチルシクロヘキシル）－２，６－ジメトキシベンズアルデヒド（１．００当量、２６．３ｍｍｏｌ）を１００ｍＬの乾燥アセトニトリルと５０ｍＬの乾燥ジクロロメタンの混合物に溶解し、０℃に冷却し、８．７６ｇの三塩化アルミニウム（６５．７ｍｍｏｌ、２．５０当量）及び９．８５ｇのヨウ化ナトリウム（６５．７ｍｍｏｌ、２．５０当量）をアルゴン向流下でゆっくりと加えた。反応混合物を室温で１．５時間撹拌し、水でクエンチし、３×３０ｍＬのジクロロメタンで抽出し、合わせた有機層をチオ硫酸ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、揮発性物質を除去した後、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ／ＥｔＯＡｃ４０：１）により精製して、６．１１ｇ（８０％）の黄色の油状物を得た。分析データは文献と一致する。

R_f (CH/EtOAc 40:1): 0.26。-¹H NMR (300 MHz, CDCl₃): δ = 11.92 (s, 1H, C2-OH), 10.26 (s, 1H, CHO), 6.51 (d, J = 1.3 Hz, 1H, H_Ar), 6.34 (d, J = 1.3 Hz, 1H H_Ar), 3.88 (s, 3H, OCH₃), 2.00-1.32 (m, 12H, 6 × CH₂), 1.20-1.10 (m, 2H, CH₂), 0.96-0.88 (m, 2H, CH₂), 0.79 (t, J = 7.3 Hz, 3H, CH₃) ppm。

７－（１－ブチルシクロヘキシル）－５－メトキシ－３－ブチル－２Ｈ－クロメン－２－オン

２００ｍｇの４－（１－ブチルシクロヘキシル）－２－ヒドロキシ－６－メトキシベンズアルデヒド（０．６９ｍｍｏｌ、１．００当量）、０．５６ｍＬの無水ヘキサン酸（５１７ｍｇ、２．４１ｍｍｏｌ、３．５０当量）及び４．８ｍｇの炭酸カリウム（２７０μｍｏｌ、０．０５当量）をマイクロ波バイアルに入れ、１８０℃で６５分間、３００Ｗのマイクロ波照射で加熱した。得られた混合物を室温まで冷却し、砕いた氷に注ぎ、重炭酸ナトリウムでｐＨを約７に調整した。次いで、混合物を３×５０ｍＬの酢酸エチルで抽出し、合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下での揮発性物質の除去及びフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ／ＥｔＯＡｃ１００：１）による精製により、２１０ｍｇ（８２％）の灰白色の固体を得た。

R_f (CH/EtOAc 50:1): 0.31。-MP: 143.8 ℃ - ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ = 7.81 (s, 1H, 4-CH), 6.90-6.86 (m, 1H, H_Ar), 6.66 (d, J = 1.5 Hz, 1H, H_Ar), 3.92 (s, 3H, OCH₃), 2.55 (t, J = 7.7 Hz, 2H, CH₂), 2.11-1.94 (m, 2H, CH₂), 1.70-1.30 (m, 14H, 7 × CH₂), 1.13 (p, J = 7.3 Hz, 2H, CH₂), 1.00-0.85 (m, 5H, CH₂, CH₃), 0.77 (t, J = 7.3 Hz, 3H, CH₃) ppm。-¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃): δ = 162.4 (C_quart., COO), 155.4 (C_quart., C_Ar), 154.2 (C_quart., C_Ar), 152.4 (C_quart., C_Ar), 133.5 (+, 4-C_ArH), 127.2(C_quart., C_Ar), 108.0 (C_quart., C_Ar), 107.9 (+, C_ArH), 103.9 (+, C_ArH), 55.9 (+, OCH₃), 43.6(C_quart., C_CH), 42.3 (-, CH₂), 36.5 (-, 2 × CH₂), 30.8 (-, CH₂), 30.5 (-, CH₂), 26.6 (-, CH₂), 25.8 (-, CH₂), 23.4 (-, CH₂), 22.6 (-, 2 × CH₂), 14.1 (+, CH₃), 14.0 (+, CH₃) ppm。-IR (KBr): v~ = 2926 (m), 2854 (w), 1714 (m), 1613 (m), 1570 (w), 1495 (w), 1453 (m), 1413 (m), 1376 (w), 1344 (w), 1291 (w), 1245 (m), 1163 (w), 1104 (m), 1073 (w), 1044 (m), 991 (m), 943 (w), 906 (w), 834 (w), 798 (w), 760 (w), 712 (w), 684 (w), 653 (w), 558 (w), 494 (vw), 429 (vw) cm^-1。-MS (70 eV, EI): m/z (%) = 370 (96) [M]⁺, 328 (7), 327 (8), 315 (10), 314 (45), 313 (100) [M - C₄H₉]⁺, 274 (6), 271 (5), 259 (5), 246 (10), 245 (54), 233 (19), 203 (7), 202 (11), 189 (5), 81 (7)。-HRMS(C₂₄H₃₄O₃):計算値370.2502、実測値370.2502。－元素分析：C₂₄H₃₄O₃:計算値C77.80、H9.25、実測値：C77.78、H9.43。

７－（１－ブチルシクロヘキシル）－５－ヒドロキシ－３－ブチル－２Ｈ－クロメン－２－オン

１１６ｍｇの７－（１－ブチルシクロヘキシル）－５－メトキシ－３－ブチル－２Ｈ－クロメン－２－オン（３５６μｍｏｌ、１．００当量）を５ｍＬの乾燥ジクロロメタンに溶解した。溶液を－７８℃に冷却し、１．７８ｍＬの三臭化ホウ素（ジクロロメタン中１ｍ、１．７８ｍｍｏｌ、５．００当量）を滴加した。混合物をこの温度で３０分間撹拌し、次いで室温まで温めた。重炭酸ナトリウムの添加により、０℃で１６時間後に反応物をクエンチした。水層を３×１５ｍＬのジクロロメタンで抽出し、合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、揮発性物質を減圧下で除去した。次いで、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ／ＥｔＯＡｃ５：１）により精製して、生成物を１１６ｍｇ（９２％）の白色固体として得た。

R_f (CH/EtOAc 5:1): 0.43。-MP: 154.0 ℃ - ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ = 7.89 (s, 1H, 4-CH), 6.83 (d, J = 1.4 Hz, 1H, H_Ar), 6.73 (d, J = 1.5 Hz, 1H, H_Ar), 6.54 (s, 1H, OH), 2.70-2.48 (m, 2H, CH₂), 2.04-1.93 (m, 2H, CH₂), 1.68-1.58 (m, 2H, CH₂), 1.57-1.27 (m, 12H, 6 × CH₂), 1.17-1.05 (m, 2H, CH₂), 0.94 (t, J = 7.3 Hz, 3H, CH₃), 0.92-0.83 (m, 2H, CH₂), 0.75 (t, J = 7.3 Hz, 3H, CH₃) ppm。-¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃): δ = 163.3 (C_quart., COO), 154.3 (C_quart., C_Ar), 152.7 (C_quart., C_Ar), 152.2 (C_quart., C_Ar), 134.3 (+, 4-C_ArH), 126.8 (C_quart., C_Ar), 109.1 (+, C_ArH), 107.5 (+, C_ArH), 107.1 (C_quart., C_Ar), 43.8 (-, CH₂), 42.0 (C_quart., C_CH), 36.4 (-, 2 × CH₂), 30.7 (-, CH₂), 30.5 (-, CH₂), 26.6 (-, CH₂), 25.8 (-, CH₂), 23.4 (-, CH₂), 22.6 (-, CH₂), 22.5 (-, 2 × CH₂), 14.1 (+, CH₃), 14.0 (+, CH₃) ppm。-IR (KBr): v~ = 3171 (w), 2925 (w), 2853 (w), 1670 (m), 1613 (m),1573 (w), 1451 (w), 1421 (m), 1345 (w), 1288 (w), 1253 (w), 1185 (w), 1124 (w), 1101 (w), 1066 (w), 939 (w), 862 (w), 842 (w), 782 (w), 745 (w), 728 (w), 608 (vw), 529 (w), 414 (vw) cm^-1。_-MS (70 eV, EI): m/z (%) = 356 (71) [M]⁺, 331 (8), 314 (12), 301 (8), 300 (46), 299 (100) [M - C₄H₉]⁺, 281 (8), 262 (7), 260 (9)。-HRMS(C₂₃H₃₂O₃):計算値356.2346、実測値356.2347。－元素分析：C₂₃H₃₂O₃：計算値C77.49、H9.05、実測値C77.27、H9.09。

実施例６：
化合物Ｘ８１６６の合成

１－Ｈインドール（１．００ｇ、８．５４ｍｍｏｌ、１．００当量）を不活性雰囲気下で５０ｍＬの乾燥ＤＭＦに溶解した。水素化ナトリウム（５１２ｍｇ、１２．８０ｍｍｏｌ、１．５０当量）及び１－ヨードブタン（２．３６ｇ、１．４６ｍＬ、１３ｍｍｏｌ、１．５０当量）を０℃で加え、反応物を２１℃で一晩撹拌した。反応物を氷上に注ぎ、酢酸エチルで有機相を抽出することによって、反応の後処理を行った。合わせた有機層をＮａ_２ＣＯ_３で乾燥し、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。粗生成物をシクロヘキサン：酢酸エチル５０：１でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。Ｒ_ｆ＝０．７３（シクロヘキサン／酢酸エチル４：１）。

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃, ppm) δ = 0.98 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 1.39 (dq, J = 15.1 Hz, J = 7.4 Hz, 2H), 1.81-1.91 (m, 2H), 4.16 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 6.53 (dd, J = 3.1 Hz, J = 0.7 Hz, 1H), 7.11-7.17 (m, 2H), 7.25 (td, J = 7.6 Hz, J = 1.1 Hz, 1H), 7.39 (dd, J = 8.3 Hz, J = 0.7 Hz, 1H), 7.68 (dt, J = 7.8 Hz, J = 0.9 Hz, 1H)。¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃, ppm) δ = 14.0, 20.5, 32.6, 46.4, 101.1, 109.7, 119.4, 121.2, 121.6, 128.1, 128.8, 136.2. EI (m/z, 70 eV, 15 ℃): 173 (52), 130 (100)。HRMS(C₁₂H₁₅N):計算値173.1199、実測値173.1199；IR (ATR, v~) = 3050, 2955, 2928, 2870, 1611, 1572, 1509, 1483, 1461, 1399, 1376, 1365, 1351, 1334, 1314, 1256, 1240, 1198, 1153, 1138, 1112, 1085, 1027, 1011, 942, 922, 884, 840, 762, 736, 714, 691, 606, 585, 569, 487, 464, 425, 395, 382 cm^-1。

１－ブチルインドール（６７１ｍｇ、３．８８ｍｍｏｌ、１．００当量）を４０ｍＬの無水塩化メチレン（Ｎ_２雰囲気）に溶解し、ヘキサン中のジメチルアルマニリウム；塩化物（１Ｍ、４．６５ｍＬ、４．６５ｍｍｏｌ、１．２０当量）を０℃で加えた。反応物を０℃で１５分間撹拌し、２－フェニルアセチルクロリド（１．２０ｇ、１．０２ｍＬ、７．７５ｍｍｏｌ、１．００当量）を加えた。反応物を室温に戻し、２１℃で１４時間撹拌した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で洗浄することによって、反応の後処理を行った。有機層を分離し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、溶媒を減圧下で蒸発させた。粗生成物をシクロヘキサン：酢酸エチル（勾配：１０：１→４：１）でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、８５％の収率（９５５ｍｇ、３．３ｍｍｏｌ）で標的化合物を得た。Ｒ_ｆ＝０．４１（シクロヘキサン／酢酸エチル４：１）。

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃, ppm) δ = 0.91 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 1.30 (dq, J = 15.1 Hz, J = 7.4 Hz, 2H), 1.72-1.86 (m, 2H), 4.03-4.16 (m, 4H), 7.13-7.35 (m, 8H), 7.72 (s, 1H), 8.33-8.44 (m, 1H)；¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃, ppm) δ = 13.6, 20.0, 31.8, 46.9, 47.0, 109.8, 116.1, 122.6, 122.8, 123.3, 126.6, 126.7, 127.3, 128.5, 128.5, 129.3, 129.3, 134.9, 135.9, 136.7, 192.7；EI (m/z, 70 eV, 100 ℃): 291 (12), 200 (100), 144 (20)。HRMS(C₂₀H₂₁ON):計算値291.1618、実測値291.1617；IR (ATR, v~) = 3117, 3050, 2958, 2928, 2870, 1624, 1575, 1526, 1492, 1483, 1464, 1433, 1385, 1338, 1284, 1235, 1206, 1184, 1155, 1129, 1104, 1076, 1055, 1031, 1012, 952, 929, 915, 871, 857, 841, 800, 777, 746, 719, 697, 643, 610, 602, 579, 554, 521, 481, 429 cm^-1。

実施例７：
Ｘ６６３２は血管新生及びリンパ管新生を阻害する
培養された増殖中のヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）におけるＩｄ１及びＩｄ３の発現に対するＸ６６３２の効果を調べた。Ｘ６６３２は、Ｉｄ１及びＩｄ３のタンパク質発現を完全に無効にした（図１０Ａ）。クマリン誘導体４－メチルウンベリフェロン（４－ＭＵ）は、Ｉｄ１又はＩｄ３の発現を低下させなかった。ＢＭＰ受容体アイソタイプＡＬＫ２及びＡＬＫ３のアンタゴニストであるＬＤＮ－１９３１８９は、Ｉｄ１及びＩｄ３発現の阻害の陽性対照基準としての役割を果たした。更なる実験では、Ｘ６６３２がＨＵＶＥＣ及びリンパ管内皮細胞（ＬＥＣ）の両方において、Ｉｄ１及びＩｄ３のタンパク質の発現を阻害することがわかった（図１０Ｂ）。これらの結果と一致して、Ｘ６６３２はＨＵＶＥＣとＬＥＣの両方の増殖を用量依存的に阻害した（図１１）。

ＨＵＶＥＣ及びＬＥＣにおけるＩｄ１及びＩｄ３の発現、並びにそれらの増殖に対するＸ６６３２の阻害活性は、Ｘ６６３２が血管新生及びリンパ管新生に影響を与える可能性があることを示唆する。これが事実であるかどうかを判断するため、内皮細胞スフェロイドからの血管新生及びリンパ管新生の出芽に対するＸ８１６６の影響を調査した。この目的のため、ＨＵＶＥＣ及びＬＥＣをハンギングドロップ培養物でスフェロイドとして成長させた。次いで、スフェロイドをコラーゲンに包埋した。Ｘ６６３２の存在下及び不在下でのスフェロイドからの出芽を、顕微鏡に基づく画像分析を使用してモニターした。図１２に示すように、Ｘ６６３２は、ＨＵＶＥＣとＬＥＣの両方のスフェロイドからの出芽を実質的に阻害した。まとめると、これらの結果は、Ｘ６６３２が血管新生とリンパ管新生の両方を阻害できることを示唆する。

Claims

式（Ｉ）による構造を有する化合物：

（式中、
Ｒ’は、Ｈ若しくはメチルであり、
Ｒ^ａは、Ｈ、アルキル、若しくはシクロアルキルであり、
Ｒ^ｂは、Ｈ、アルキル、若しくはシクロアルキルであり、
Ｒ^ｃは、Ｈ、アルキル、若しくはシクロアルキルであり、又は、
Ｒ^ａ、Ｒ^ｂ及びＲ^ｃの２つは、それぞれ共に連結して５員若しくは６員の脂環式環を形成し、
Ｒ^ｄは、アルキル、アリール又は－ＣＨ_２－アリールであり、該アリール部分は、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ハロゲン及びトリフルオロメチルからなる群から選択される１つ以上の基によって置換され得る）。
式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）又は（Ｉｄ）のいずれか１つによる構造を有する、請求項１に記載の化合物：

（式中、
Ｒ^ｅは、－ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_２ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_３ＣＨ_３、ベンジル又はヒドロキシベンジルであり、
ｎは、０又は１である）；

（式中、
Ｒ^ｆは、－（ＣＨ_２）_５ＣＨ_３又は－（ＣＨ_２）_６ＣＨ_３である）；

（式中、
各基Ｒ^ｇは、Ｈであるか、又は両方のＲ^ｇが共に連結して、５員の脂環式環を形成する）；

（式中、
両方のＲ^ｈが共に連結して、５員の脂環式環を形成する）。
以下の化合物Ｘ６６３２、Ｘ６７６０、Ｘ６７７９、Ｘ６６３１、Ｘ６７７７、Ｘ６７６８、Ｘ６６３３、Ｘ５５４９／Ｘ１３８４、Ｘ８１、Ｘ１０６、Ｘ１３１２、Ｘ６９４５、Ｘ６９１０、Ｘ６４０４、Ｘ６７７０、Ｘ６７７８、Ｘ６７５８、Ｘ６９４４、Ｘ７７７６、及びＸ７４０１からなる群から選択される、請求項１又は２に記載の化合物：
医学で使用される、請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物。
Ｉｄ１及び／又はＩｄ３を発現する細胞に関連する状態又は疾患、
血管新生に依存する状態又は疾患、及び／又は、
リンパ管新生に依存する状態又は疾患、
の予防又は治療に使用される、請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物。
前記Ｉｄ１及び／又はＩｄ３を発現する細胞に関連する状態又は疾患が、腫瘍形成の開始、腫瘍転移の開始、腫瘍の成長、転移の成長、腫瘍促進性免疫応答、腫瘍細胞の播種、及び癌からなる群から選択される、請求項５に記載の使用のための化合物。
前記血管新生に依存する状態又は疾患が、腫瘍形成の開始、腫瘍転移の開始、腫瘍の成長、転移の成長、血管接着、血管線維腫、動静脈奇形、関節炎、粥状動脈硬化巣、角膜移植片血管新生、創傷治癒の遅延、糖尿病性網膜症、肉芽形成、熱傷、血管腫、血友病性関節症、肥厚性瘢痕、血管新生緑内障、偽関節骨折、オスラー－ウェーバー症候群、乾癬、化膿性肉芽腫、後水晶体線維増殖症、強皮症、癌、トラコーマ、及びフォンヒッペル－リンダウ症候群からなる群から選択される、請求項５に記載の使用のための化合物。
前記リンパ管新生に依存する状態又は疾患が、臓器移植、癌、フィラリア症、ゴーハム病、ドライアイ疾患、肺線維症、炎症性腸疾患、糖尿病、慢性炎症性疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、炎症性関節炎、潰瘍性大腸炎、乾癬、及び眼表面疾患からなる群から選択される、請求項５に記載の使用のための化合物。
キャッスルマン病、進行性骨化性線維異形成症（ＦＯＰ）、流産、及び線維症からなる群から選択される状態又は疾患の予防又は治療に使用される、請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物。
癌幹細胞の標的化、血管新生の阻害、腫瘍細胞の化学感受性の増強、腫瘍細胞休眠の誘導、腫瘍細胞休眠の維持、ＥＭＴ（上皮間葉転換）の阻害、ＶＥＧＦ－Ａ（血管内皮成長因子Ａ）発現の抑制、ＶＥＧＦ－Ｃ（血管内皮成長因子Ｃ）発現の抑制、幹細胞及びｉＰＳＣ（人工多能性幹細胞）の分化の誘導、子宮壁への栄養膜の着床の改善、免疫細胞のＴＧＦ－ベータ（トランスフォーミング成長因子ベータ）免疫抑制表現型の予防、及び／又は骨髄由来サプレッサー細胞の阻害に使用される、請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物。
前記化合物が、免疫チェックポイント阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗腫瘍抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤、有糸分裂阻害剤、ホルモン療法、シグナル伝達阻害剤、遺伝子発現モジュレーター、アポトーシス誘導剤、血管新生阻害剤、免疫療法、免疫複合体、毒素送達分子、小分子キナーゼ阻害剤、抗体ベースの療法、養子細胞移植、カルメット・ゲラン桿菌療法、癌ワクチン、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法、サイトカイン療法、遺伝子療法、及び腫瘍溶解性ウイルス療法からなる群から選択される、１つ以上の更なる化合物及び／又は治療法と組み合わせて投与される、請求項４～１０のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
Ｉｄ１及び／又はＩｄ３を発現する細胞に関連する状態又は疾患、
血管新生に依存する状態又は疾患、及び／又は、
リンパ管新生に依存する状態又は疾患、
の予防又は治療に使用される、式（ＩＩ）による構造を有する化合物：

（式中、
Ｘは、ＣＨ又はＮであり、
Ｙは、ＣＨ_２若しくはＮＲであり、Ｒは、Ｈ、アルキル、アリール若しくは－ＣＨ_２－アリールであるか、又はＹは、不在であり、
Ｚは、ＣＨ_２若しくはＮＲであり、Ｒは、Ｈ、アルキル、アリール若しくは－ＣＨ_２－アリールであるか、又はＺは、不在であり、
Ｒ^１は、アルキル又は－ＣＨ_２－アリールであり、
Ｒ^２は、アルキル、アリール又は－ＣＨ_２－アリールであり、
Ｒ^３は、Ｈ、アルキル、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、Ｉ、ＣＮ又はＣＦ_３であり、
ここで、アリール部分は、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ハロゲン及びトリフルオロメチルからなる群から選択される１つ以上の基によって置換され得る）。
前記Ｉｄ１及び／又はＩｄ３を発現する細胞に関連する状態又は疾患が、腫瘍形成の開始、腫瘍転移の開始、腫瘍の成長、転移の成長、腫瘍促進性免疫応答、腫瘍細胞の播種、及び癌からなる群から選択される、請求項１２に記載の使用のための化合物。
前記血管新生に依存する状態又は疾患が、腫瘍形成の開始、腫瘍転移の開始、腫瘍の成長、転移の成長、血管接着、血管線維腫、動静脈奇形、関節炎、粥状動脈硬化巣、角膜移植片血管新生、創傷治癒の遅延、糖尿病性網膜症、肉芽形成、熱傷、血管腫、血友病性関節症、肥厚性瘢痕、血管新生緑内障、偽関節骨折、オスラー－ウェーバー症候群、乾癬、化膿性肉芽腫、後水晶体線維増殖症、強皮症、癌、トラコーマ、及びフォンヒッペル－リンダウ症候群からなる群から選択される、請求項１２に記載の使用のための化合物。
前記リンパ管新生に依存する状態又は疾患が、臓器移植、癌、フィラリア症、ゴーハム病、ドライアイ疾患、肺線維症、炎症性腸疾患、糖尿病、慢性炎症性疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、炎症性関節炎、潰瘍性大腸炎、乾癬、及び眼表面疾患からなる群から選択される、請求項１２に記載の使用のための化合物。
キャッスルマン病、進行性骨化性線維異形成症（ＦＯＰ）、流産、及び線維症からなる群から選択される状態又は疾患の予防又は治療に使用される、式（ＩＩ）による構造を有する化合物：

（式中、
Ｘは、ＣＨ又はＮであり、
Ｙは、ＣＨ_２若しくはＮＲであり、Ｒは、Ｈ、アルキル、アリール若しくは－ＣＨ_２－アリールであるか、又はＹは、不在であり、
Ｚは、ＣＨ_２若しくはＮＲであり、Ｒは、Ｈ、アルキル、アリール若しくは－ＣＨ_２－アリールであるか、又はＺは、不在であり、
Ｒ^１は、アルキル又は－ＣＨ_２－アリールであり、
Ｒ^２は、アルキル、アリール又は－ＣＨ_２－アリールであり、
Ｒ^３は、Ｈ、アルキル、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、Ｉ、ＣＮ又はＣＦ_３であり、
ここで、アリール部分は、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ハロゲン及びトリフルオロメチルからなる群から選択される１つ以上の基によって置換され得る）。
癌幹細胞の標的化、血管新生の阻害、腫瘍細胞の化学感受性の増強、腫瘍細胞休眠の誘導、腫瘍細胞休眠の維持、ＥＭＴ（上皮間葉転換）の阻害、ＶＥＧＦ－Ａ（血管内皮成長因子Ａ）発現の抑制、ＶＥＧＦ－Ｃ（血管内皮成長因子Ｃ）発現の抑制、幹細胞及びｉＰＳＣ（人工多能性幹細胞）の分化の誘導、子宮壁への栄養膜の着床の改善、免疫細胞のＴＧＦ－ベータ（トランスフォーミング成長因子ベータ）免疫抑制表現型の予防、及び／又は骨髄由来サプレッサー細胞の阻害に使用される、式（ＩＩ）による構造を有する化合物：

（式中、
Ｘは、ＣＨ又はＮであり、
Ｙは、ＣＨ_２若しくはＮＲであり、Ｒは、Ｈ、アルキル、アリール若しくは－ＣＨ_２－アリールであるか、又はＹは、不在であり、
Ｚは、ＣＨ_２若しくはＮＲであり、Ｒは、Ｈ、アルキル、アリール若しくは－ＣＨ_２－アリールであるか、又はＺは、不在であり、
Ｒ^１は、アルキル又は－ＣＨ_２－アリールであり、
Ｒ^２は、アルキル、アリール又は－ＣＨ_２－アリールであり、
Ｒ^３は、Ｈ、アルキル、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、Ｉ、ＣＮ又はＣＦ_３であり、
ここで、アリール部分は、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ハロゲン及びトリフルオロメチルからなる群から選択される１つ以上の基によって置換され得る）。
式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）又は（ＩＩｃ）のいずれか１つによる構造を有する、請求項１２～１７のいずれか一項に記載の使用のための化合物：

（式中、
Ｒ^１は、アルキル又は－ＣＨ_２－アリールであり、
Ｒ^４は、Ｈ又はＣＦ_３である）；

（式中、
Ｒ^１は、アルキル又は－ＣＨ_２－アリールである）；

（式中、
Ｒ^１は、アルキル又は－ＣＨ_２－アリールであり、
Ｒ^２は、アリールである）。
前記化合物が、免疫チェックポイント阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗腫瘍抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤、有糸分裂阻害剤、ホルモン療法、シグナル伝達阻害剤、遺伝子発現モジュレーター、アポトーシス誘導剤、血管新生阻害剤、免疫療法、免疫複合体、毒素送達分子、小分子キナーゼ阻害剤、抗体ベースの療法、養子細胞移植、カルメット・ゲラン桿菌療法、癌ワクチン、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法、サイトカイン療法、遺伝子療法、及び腫瘍溶解性ウイルス療法からなる群から選択される、１つ以上の更なる化合物及び／又は治療法と組み合わせて投与される、請求項１２～１８のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
以下の化合物Ｘ８７０６、Ｘ８７６５、Ｘ８１６６、Ｘ８７６２、Ｘ８７０２、Ｘ８５７２、Ｘ８７６６、Ｘ８５７１、及びＸ８０３５からなる群から選択される化合物。