JP2022538829A - 癌治療のためのＳＩＲＰγの阻害 - Google Patents

Abstract

腫瘍又は癌を有する対象を治療する方法が本明細書において提供される。例示的な実施形態において、この方法は、対象における腫瘍又は癌に対する免疫応答を増加すること、又は対象におけるＴ細胞のエフェクター活性を増加する、若しくはＴ細胞の抑制活性を低減することを含む。例示的な実施形態において、この方法は、対象において腫瘍又は癌を治療するのに有効な量で、ＳＩＲＰγバインダー、例えばＳＩＲＰγ阻害剤を対象に投与することを含む。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる、２０１９年６月２４日出願の米国仮特許出願第６２／８６５，５３７号への優先権を主張する。

電子的に提出された材料の参照による組み込み
本明細書において同時に提出され、且つ以下同定されるコンピューターで読み取り可能なヌクレオチド／アミノ酸配列表は、その全体が参照により組み込まれる：９６，０００バイト ＡＳＣＩＩ（テキスト）ファイル名「Ａ－２３９６＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」；２０２０年６月９日作成。

免疫チェックポイント阻害療法は、種々の癌に対して耐久性のある免疫応答を誘導することが示されている。しかしながら、抗ＰＤ１／ＰＤＬ１などの免疫療法に対する患者の応答は、ごく低いパーセンテージの患者に限られる。ＰＤ１は、Ｔ細胞活性化中にアップレギュレートされるＴ細胞上で発現される多くの共抑制性受容体の１つであり、ＰＤ－Ｌ１とのその相互作用によって、Ｔ細胞活性化が制限される。抗ＰＤ－１は阻害経路を十分にブロックし、種々の腫瘍内のＴ細胞を回復させるが、他の多くの抑制性受容体がＴ細胞上に発現することが可能である。したがって、Ｔ細胞上の新規な抑制性受容体を探求し、さらに同定することによって、免疫療法の標的が広がり、且つ癌を治療する有効性が高度に進歩するだろう。

ＳＩＲＰγが、ヒトＴ細胞における潜在的な新規な抑制性受容体であることを実証するデータを初めて本明細書に提供する。これらのデータは意外なことに、Ｔ細胞共刺激分子としてＳＩＲＰγを提案する先行する研究で示されていた（Ｐｉｃｃｉｏ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０５（６）：２４２１－２４２７（２００５）；Ｌｅｉｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔｅｒｓ１２８（２）：８９－９７（２０１０））。ＳＩＲＰγの発現、調節、及び機能が評価され、ＳＩＲＰγが、Ｔ細胞及び活性化ＮＫ細胞上で主に発現し、且つ記憶ＣＤ８ Ｔ細胞及び消耗Ｔ細胞を浸潤する腫瘍において高度に発現されることが実証された。本明細書ではＳＩＲＰγの過剰発現がＣＤ８ Ｔ細胞エフェクターサイトカイン放出を阻害し、ＳＩＲＰγのノックアウト発現（ＣＲＩＳＰＲを介した）が、Ｔ細胞増殖及びＴ細胞仲介サイトカイン産生によって測定されるＴ細胞のエフェクター状態を高めることも実証された。さらに、ヒトＴｒｅｇ細胞におけるＳＩＲＰγの過剰発現は、Ｔｒｅｇ細胞抑制機能を高める。さらに、ＣＤ４７とＳＩＲＰγの相互作用のブロックが、Ｔ細胞増殖及びＩＦＮγ分泌の増強を達成する必要条件ではないこと、ＳＩＲＰγのＴ細胞抑制機能は、ＳＩＲＰγの固有のエピトープによって仲介され得ること、並びにＳＩＲＰγのＤ１及びＤ２の界面に結合する分子が、Ｔ細胞機能の向上に有用であり得ることも、本明細書のデータから裏付けられる。

特定の理論に束縛されるものではないが、これらのデータから、対象における腫瘍又は癌治療のために、対象におけるＴ細胞のエフェクター活性を増加するための、又はＴ細胞の抑制活性を低減するための、ＳＩＲＰγバインダー、例えばＳＩＲＰγ阻害剤の使用が裏付けられる。したがって、一実施形態において、本発明は、対象における腫瘍又は癌を治療する方法であって、ＳＩＲＰγバインダー、例えばＳＩＲＰγ阻害剤を有効量で対象に投与することを含む方法に関する。本開示は、腫瘍若しくは癌を有する対象におけるＴ細胞のエフェクター活性を増加し、又はＴ細胞の抑制活性を低減する方法も提供する。例示的な実施形態において、この方法は、対象においてエフェクター活性を増加し、又は抑制活性を低減するのに有効な量で、ＳＩＲＰγバインダー、例えばＳＩＲＰγ阻害剤を対象に投与することを含む。対象における腫瘍若しくは癌に対する免疫応答を高める方法はさらに、本明細書に提供される。例示的な実施形態において、その方法は、腫瘍若しくは癌に対する免疫応答を増加するのに有効な量で、ＳＩＲＰγバインダー、例えばＳＩＲＰγ阻害剤を対象に投与することを含む。種々の態様において、対象は、肝細胞癌（ＨＣＣ）、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、肺癌、又は乳癌を有し、任意選択的に、その対象は非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する。

様々な場合において、ＳＩＲＰγバインダーは、ＳＩＲＰγの免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメイン１（Ｄ１）に結合する。種々の態様において、ＳＩＲＰγバインダーは、ＳＩＲＰγのＤ１及びＩｇドメイン２（Ｄ２）に結合する。例示的な態様において、ＳＩＲＰγバインダーは、Ｄ１及びＤ２のどちらにも、任意にＤ１とＤ２の界面にて結合する。例示的な場合において、ＳＩＲＰγバインダーはエピトープに結合し、それにＳＩＲＰγモノクローナル抗体ＯＸ１１７が結合し、任意に、ＳＩＲＰγバインダーが、ＳＩＲＰγへの結合において、ＳＩＲＰγに結合することが知られている参照抗体（例えば、ＯＸ１１７）と競合する。種々の場合におけるＳＩＲＰγバインダーは、ＯＸ１１７と同じ、又はそれ以上の親和性でＳＩＲＰγと結合し、任意に、ＳＩＲＰγバインダーは、ＯＸ１１７、又はその抗原結合性断片である。種々の態様におけるＳＩＲＰγバインダーは、ＳＩＲＰγのアミノ酸残基Ｑ８、Ｅ１０、Ｇ１０９、Ｋ１１、Ｌ１２、及びＤ１４９のうちの１つ又は複数と水素結合を形成する。ＳＩＲＰγバインダーは、一部の態様においてＳＩＲＰγに結合すると、ＳＩＲＰγの高次構造変化を生じさせる。種々の場合において、ＳＩＲＰγバインダーは同時に２つのＳＩＲＰγ分子に結合し、又はＳＩＲＰγ二量体化を促進する。任意に、ＳＩＲＰγバインダーは、ＣＤ４７結合部位とオーバーラップしないエピトープに結合する。種々の態様において、ＳＩＲＰγバインダーは、ＳＩＲＰγに結合する抗原結合性タンパク質である。任意に、抗原結合性タンパク質は、抗体、抗原結合性抗体断片、又は抗体タンパク質産物である。一部の態様において、抗原結合性タンパク質は、ＳＩＲＰγのＣＤ４７結合部位内のエピトープで結合する。

本発明に開示の方法の種々の場合において、ＳＩＲＰγバインダーはＳＩＲＰγ阻害剤である。一部の態様において、ＳＩＲＰγ阻害剤は、対象の細胞におけるＳＩＲＰγの発現を低減し、任意にＳＩＲＰγ阻害剤は、対象のＴ細胞上のＳＩＲＰγの細胞表面発現を低減する。任意に、Ｔ細胞は、対象のエフェクターＴ細胞である。種々の場合において、ＳＩＲＰγ阻害剤は、ＳＩＲＰγと、ＳＩＲＰγ結合パートナー、任意に、ＣＤ４７との結合相互作用を低減する。

腫瘍若しくは癌を有する対象においてＴ細胞のエフェクター活性を増加し、又は抑制活性を低減する、本発明に開示の方法の例示的な態様において、Ｔ細胞は、腫瘍又は腫瘍微小環境内に位置する。種々の場合において、Ｔ細胞は、腫瘍浸潤Ｔ細胞である。一部の態様において、Ｔ細胞は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）である。例示的な場合において、Ｔ細胞は消耗Ｔ細胞、任意に、消耗したＣＤ８＋ Ｔ細胞である。例示的な場合において、Ｔ細胞は、記憶細胞、任意に、ＣＤ８＋記憶細胞又はＣＤ４＋中枢記憶細胞である。

対象における腫瘍又は癌に対する免疫応答を高める本発明に開示の方法の例示的な態様において、免疫応答は、Ｔ細胞によって媒介される。種々の態様において、Ｔ細胞は、腫瘍又は腫瘍微小環境内に位置する。種々の場合において、Ｔ細胞は腫瘍浸潤Ｔ細胞である。一部の態様において、Ｔ細胞は制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）である。例示的な場合において、Ｔ細胞は消耗Ｔ細胞であり、任意に、消耗したＣＤ８＋ Ｔ細胞である。例示的な場合において、Ｔ細胞は、記憶細胞であり、任意にＣＤ８＋記憶細胞又はＣＤ４＋中枢記憶細胞である。

本開示はさらに、腫瘍又は癌を有する対象を治療する方法を提供する。例示的な実施形態において、その方法は、対象における腫瘍又は癌に対する免疫応答を高める本発明に開示の方法のいずれか１つに従って、対象における腫瘍又は癌に対する免疫応答を高めることを含む。例示的な実施形態において、この方法は、腫瘍又は癌を有する対象におけるＴ細胞のエフェクター活性を増加する、又はＴ細胞の抑制活性を低減する本発明に開示の方法のいずれか１つに従って、対象におけるＴ細胞のエフェクター活性を増加すること、又はＴ細胞の抑制活性を低減することを含む。

本発明に開示の医薬組成物及び方法の更なる実施形態及び態様が以下に提供される。

図１Ａ～１Ｃは、ＳＩＲＰγがヒトＴ細胞及びＮＫＴ細胞上に発現されることを実証する。図１Ａは、２９３Ｔ細胞上に過剰発現された、ＳＩＲＰγ、特異的に検出されたＳＩＲＰγに対する抗体を示す一連のＦＡＣＳプロットである。図１Ｂは、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）からの異なるタイプの細胞上でのＳＩＲＰγ発現を示す一連のＦＡＣＳプロットである。図１Ｃは、Ｔ細胞上のＳＩＲＰγ発現レベルがＴＣＲ刺激によって変化しないことを示す。 同上。 図２Ａ及び２Ｂは、ＳＩＲＰγが記憶Ｔ細胞上で高度に発現することを実証する。図２Ａは、Ｔ細胞の異なるサブセットにおける発現を示す一連のＦＡＣＳプロットである。ＣＤ８＋記憶Ｔ細胞は、ヒトＰＢＭＣ試料においてＣＤ８＋エフェクターＴ細胞よりも高度なＳＩＲＰγ発現を有する。図２Ｂは、異なる健康なドナー４名のＰＢＭＣからのＴ細胞の異なるサブセットにおけるＳＩＲＰγ発現の平均蛍光強度（ＭＦＩ）の定量化である。有意性は、対応のあるｔ検定を用いて、^＊＊＊ｐ≦０．０００２、^＊＊ｐ≦０．００２１、^＊ｐ≦０．０３３２、及びｎｓ ｐ＞０．０５と示す。エラーバーは±ＳＥＭを表す。 図３Ａ～３Ｃは、ＳＩＲＰγが、腫瘍浸潤した消耗Ｔ細胞上で発現を増加することを実証する。図３Ａは、ＨＣＣ試料からの腫瘍浸潤したＴ細胞の異なるサブセット上でのＳＩＲＰγの発現を比較するグラフである。図３Ｂは、ＣＲＣ試料からの腫瘍浸潤したＴ細胞の異なるサブセット上でのＳＩＲＰγの発現を比較するグラフである。図３Ｃは、肺癌試料からの腫瘍浸潤したＴ細胞の異なるサブセット上でのＳＩＲＰγの発現を比較するグラフである。ＳＩＲＰγは、腫瘍Ｔｒｅｇ（ＣＤ４－ＣＴＬＡ４）及び消耗ＣＤ８ Ｔ細胞（ＣＤ８－ＬＡＹＮ）の両方において非常に特異的な発現パターンを示し、星印でマークした。 同上。 ＳＩＲＰγが、反復ＴＣＲ再刺激から誘導される消耗Ｔ細胞上で発現を増加したことを実証する。図４は、異なる３名の健康なドナーからの、生体外で再刺激された消耗Ｔ細胞及び従来のＴ細胞上でのＳＩＲＰγの発現を示す一連のＦＡＣＳプロットである。 Ｔ細胞上でのＳＩＲＰγ過剰発現がＩＦＮγ分泌を阻害したことを実証する。図５Ａは、ＳＩＲＰγ過剰発現及びＴ細胞再刺激の実験フローを示す略図である。ＰａｎＴ細胞が、ヒトＰＢＭＣから単離され、αＣＤ３／ＣＤ２８ダイナビーズ（Ｄｙｎａｂｅａｄ）によって３日間活性化された。活性化Ｔ細胞をレトロウイルス（ＲＶ）に感染させて、Ｔ細胞上にＳＩＲＰγを過剰発現させ（ＲＶ－ＳＩＲＰγ）、又はコントロールとしてＳＩＲＰγコード配列を含まないＲＶベクターに感染させた（ＲＶ－Ｖｅｃ）。遠心感染から５日後に、ＧＦＰ＋ ＣＤ４又はＣＤ８ Ｔ細胞をＦＡＣＳ選別し、ヒトＩＬ２と共に２日間休止した。次いで、休止Ｔ細胞を、プレート結合αＣＤ３及び可溶性ＣＤ２８抗体で２４時間再刺激した。細胞上澄をＥＬＩＳＡ分析のために回収した。図５Ｂは、ＣＤ４＋ Ｔ細胞及びＣＤ８＋ Ｔ細胞の両方でのヒトＳＩＲＰγ発現を示す、一連のフローサイトメトリーのプロットである。遠心感染して３日後に、ヒトＳＩＲＰγ抗体で細胞を染色した。図５Ｃは、細胞上澄におけるヒトＩＦＮγのＥＬＩＳＡである。有意性が、グラフィックプリズムからの二元配置分散分析（ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）試験を用いて、^＊＊＊＊ｐ≦０．０００１、^＊＊＊ｐ≦０．０００２、^＊＊ｐ≦０．００２１、^＊ｐ≦０．０３３２、及びｎｓ ｐ＞０．０５と示す。エラーバーは±ＳＥＭを表す。データは、少なくとも５つの独立した実験を表す。図５Ｄは、５つの独立した実験からの細胞上澄におけるヒトＩＦＮγのＥＬＩＳＡの対応のあるｔ検定である。^＊は、対応のあるｔ検定を用いてｐ値＜０．０５を意味する。 同上。 図６Ａ～６Ｆは、Ｔ細胞上のＳＩＲＰγノックダウンが、ＩＦＮγ分泌を増強したことを実証する。図６Ａは、ＳＩＲＰγノックダウン及びＴ細胞再刺激の実験フローを示す略図である。ＰａｎＴ細胞が、ヒトＰＢＭＣから単離され、αＣＤ３／ＣＤ２８ダイナビーズによって２日間活性された。ＳＩＲＰγゲノム領域に標的化するＣＲＩＳＰＲ ｇＲＮＡ（ガイドＲＮＡ）を、活性化Ｔ細胞にトランスフェクトしてＴ細胞上のＳＩＲＰγ発現をノックダウンするか（ＳＩＲＰγ ＫＯ）、又はコントロールをトランスフェクトした。トランスフェクトして３日後に、ＦＡＣＳ選別前に２４時間、Ｔ細胞をαＣＤ３／ＣＤ２８で活性化した。ＳＩＲＰγ－ＣＤ４又はＣＤ８ Ｔ細胞をＦＡＣＳ選別し、ヒトＩＬ２と共に２日間休止した。次いで、休止Ｔ細胞をプレート結合αＣＤ３及び可溶性ＣＤ２８抗体で２４時間再刺激した。ＥＬＩＳＡ分析のために、細胞上澄を回収した。図６Ｂは、標的化ゲノム領域から増幅されたＰＣＲ産物のゲル分析である。矢印は、ｇＲＮＡ標的化ゲノム領域上の欠失を示す。図６Ｃは、ノックアウト後のＳＩＲＰγ発現のｑＰＣＲ分析である。有意性は、グラフィックプリズムからの対応のないｔ検定用いて、^＊＊＊＊ｐ≦０．０００１、^＊＊＊ｐ≦０．０００２、^＊＊ｐ≦０．００２１、^＊ｐ≦０．０３３２、及びｎｓ ｐ＞０．０５と示す。エラーバーは±ＳＥＭを表す。図６Ｄは、ＣＲＩＳＰＲノックダウン後のＣＤ４＋ Ｔ細胞及びＣＤ８＋ Ｔ細胞の両方のヒトＳＩＲＰγ発現を示す一連のフローサイトメトリーのプロットである。遠心感染から４日後に、ヒトＳＩＲＰγ抗体で細胞を染色した。図６Ｅは、ＣＲＩＳＰＲノックアウト後の、総ＣＤ４又はＣＤ８ Ｔ細胞におけるＳＩＲＰγ＋細胞のパーセンテージの定量化である。図６Ｆは、２つの独立した実験からの細胞上澄におけるヒトＩＦＮγのＥＬＩＳＡである。有意性は、グラフィックプリズムからの二元配置分散分析試験を用いて、^＊＊＊＊ｐ≦０．０００１、^＊＊＊ｐ≦０．０００２、^＊＊ｐ≦０．００２１、^＊ｐ≦０．０３３２、及びｎｓ ｐ＞０．０５と示す。エラーバーは±ＳＥＭを表す。 同上。 図７Ａ～７Ｆは、Ｔｒｅｇ細胞上のＳＩＲＰγ過剰発現がＴｒｅｇの抑制機能を増強したことを実証する。図７Ａは、非小細胞肺癌組織からの腫瘍浸潤リンパ球上でのＳＩＲＰγの発現を示す、一連のＦＡＣＳプロット及びヒストグラムである。図７Ｂは、ＳＩＲＰγ過剰発現及びＴｒｅｇ細胞抑制アッセイの実験フローを示す略図である。ヒトＰＢＭＣから単離され、且つαＣＤ３／ＣＤ２８ダイナビーズによって２日間活性化されたｐａｎＴ細胞から、Ｔｒｅｇ細胞をＦＡＣＳ選別した。活性化Ｔｒｅｇ細胞にレトロウイルスをトランスフェクトして、Ｔｒｅｇ細胞上でＳＩＲＰγ（ＲＶ－ＳＩＲＰγ）を過剰発現させるか、又はコントロール（ＲＶ－Ｖｅｃ）としてＳＩＲＰγコード配列を含まないＲＶベクターに感染させた。遠心感染から５日後に、抑制アッセイに添加する前に、ＧＦＰ＋ Ｔｒｅｇ細胞をＦＡＣＳ選別し、ヒトＩＬ２（２００Ｕ／ｍｌ）と共に一晩休止した。抑制アッセイをセットアップした日に、異なる健康なドナーＰＢＭＣからレスポンダーＣＤ４ Ｔ細胞を単離し、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）で標識化した。休止Ｔｒｅｇ細胞をＣＴＶ標識レスポンダーＣＤ４ Ｔ細胞と様々な比で混合した。同種ＤＣを添加し、ＣＤ４ Ｔ細胞増殖をＣＴＶ希釈によって測定した。図７Ｃは、レトロウイルス遠心感染後のＴｒｅｇ細胞上のヒトＳＩＲＰγ発現を示す、一連のフローサイトメトリープロットである。遠心感染から５日後に、細胞をヒトＳＩＲＰγ抗体で染色した。図７Ｄは、ＦＡＣＳ選別コントロール又はＳＩＲＰγ過剰発現Ｔｒｅｇ細胞上でのヒトＦＯＸＰ３発現を示す一連のフローサイトメトリープロットである。図７Ｅは、コントロール及びＳＩＲＰγ過剰発現Ｔｒｅｇのいずれかと混合されたＴ細胞でのＣＴＶ希釈を示す一連のフローサイトメトリープロットである。図７Ｆは、Ｔｒｅｇとレスポンダー細胞との様々な比での細胞増殖のパーセンテージを示すグラフである。^＊は、スチューデントｔ検定を用いたｐ値＜０．０５を意味する。エラーバーは±ＳＥＭを表す。 同上。 図８Ａ～８Ｆから、ＳＩＲＰγ抗体が、Ｔ細胞増殖に対して非特異的な抑制効果を有することが実証される。図８Ａは、ＳＩＲＰγ（ＳＩＲＰγ ＫＯ）、ＣＤ４７（ＣＤ４７ ＫＯ）、又はＳＩＲＰγとＣＤ４７（ＤＫＯ）の両方をＣＲＩＳＰＲノックアウトした後の、ジャーカットＴ細胞上でのＳＩＲＰγ（左のプロット）及びＣＤ４７（右のプロット）の発現を示す、一連のＦＡＣＳプロットである。アイソタイプ一致コントロール抗体（アイソタイプ）又はトランスフェクトされていないコントロール細胞（ＮＴコントロール）を使用したプロットをそれぞれのパネルに示す。図８Ｂは、ジャーカットＴ細胞上でのＳＩＲＰγ－Ｆｃ及びＳＩＲＰα－Ｆｃタンパク質の結合分析を示す。すべてのＦｃ融合タンパク質を５μｇ／ｍｌで添加した。ＰＥ結合抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃを使用して、フローサイトメトリーによって、細胞への融合タンパク質の結合を検出した。図８Ｃは、ジャーカットＴ細胞上のＳＩＲＰγ－Ｆｃ結合に関する抗ＳＩＲＰγ抗体（ＬＳＢ２．２０及びＯＸ１１９）のアンタゴニスト活性研究を示す。すべてのＩｇＧ－Ｆｃタンパク質を５μｇ／ｍｌで添加し、すべての抗体を１０μｇ／ｍｌで添加した。ＩｇＧ抗体（ｍＩｇＧ）をコントロールとして使用した。ＰＥ結合抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃを使用して、フローサイトメトリーによって、細胞への融合タンパク質の結合を検出した。図８Ｄは、Ｔ細胞：ＤＣ比１０：１にて同種異系樹状細胞（ＤＣ）で７日間刺激された健康なドナーからのＰＢＭＣから単離されたヒトｐａｎＴ細胞のカウント／分（ＣＰＭ）を示すグラフである。培養０日目に１０μｇ／ｍｌで抗体を添加した。Ｔ細胞増殖を標準３Ｈ－チミジン取り込みアッセイによって測定した。図８Ｅは、Ｔ細胞：ＤＣ比１０：１にて同種異系樹状細胞（ＤＣ）で７日間刺激された、コントロールＴ細胞、ＳＩＲＰγノックアウト又はＣＤ４７ノックアウトｐａｎＴ細胞のＣＰＭを示すグラフである。培養０日目に１０μｇ／ｍｌで抗体を添加した。Ｔ細胞増殖を標準３Ｈ－チミジン取り込みアッセイによって測定した。図８Ｆは、様々な濃度のプレート結合抗ＣＤ３で３日間刺激された、健康なドナーからのＰＢＭＣから単離されたヒトｐａｎＴ細胞又はＣＤ８ Ｔ細胞である。ＳＩＲＰγ又はＣＤ４７に対する抗体を、培養０日目に１０μｇ／ｍｌで添加した。Ｔ細胞増殖を標準３Ｈ－チミジン取り込みアッセイによって測定した。 同上。 同上。 図９Ａ～９Ｅから、ＳＩＲＰγの特異的なエピトープに結合するＳＩＲＰγ抗体クローンＯＸ１１７が、Ｔ細胞増殖及びサイトカイン分泌を高めることが実証されている。図９Ａは、ＳＩＲＰγを過剰発現する親ジャーカットＴ細胞及びジャーカットＴ細胞上でのＳＩＲＰγ抗体の結合を示す一連のＦＡＣＳプロットである。図９Ｂは、抗体ＯＸ１１７のみが、ジャーカットＴ細胞上のＳＩＲＰγ－Ｆｃタンパク質の結合を変化させることを示す。ジャーカットＴ細胞は、１０μｇ／ｍｌにてＳＩＲＰγ抗体で予備処理された。ＳＩＲＰγ－Ｆｃタンパク質を１０μｇ／ｍｌで添加した。ＰＥ結合抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃを用いたフローサイトメトリーによって、細胞への融合タンパク質の結合を検出した。図９Ｃ及び９Ｄは、特異的な抗ＳＩＲＰγ抗体クローンＯＸ１１７が、増殖及びサイトカイン産生の促進において、ヒトｐａｎＴ細胞に対する最も強力なアンタゴニスト活性を有することを示す。ＳＩＲＰγ抗体で１０μｇ／ｍｌにてプレートをコーティングした。プレート結合ＳＩＲＰγ抗体と共に、健康なドナーからのＰＢＭＣから単離されたヒトｐａｎＴ細胞をＩｍｍｕｎｏＣｕｌｔ ＣＤ３／ＣＤ２８ Ｔ細胞活性化剤で３日間刺激した。図９Ｃにおいて、Ｔ細胞増殖を標準３Ｈ－チミジン取り込みアッセイによって測定した。図９Ｄは、４８時間刺激されたヒトｐａｎＴ細胞からの細胞上澄中のヒトＩＦＮγのＣＢＡ分析である。図９Ｅは、ＳＩＲＰγとＦａｂＯＸ１１７との間の、及びＳＩＲＰαとＣＤ４７複合体との間の結合性エピトープの概要であり、ＣＤ４７及びＦａｂＯＸ１１７がＳＩＲＰγ上の様々な残基に結合することを示す（Ｎｅｔｔｌｅｓｈｉｐ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ １３：１３（２０１３））。 市販のＳＩＲＰγ抗体の特性及びＴ細胞上でのその機能を要約した表を示す。

ＳＩＲＰγ、ＳＩＲＰγバインダー、及びＳＩＲＰγ阻害剤
ＣＤ１７２ｇ、ＳＩＲＰＢ２、ＳＩＲＰ－Ｂ２、及びｂＡ７７Ｃ３．１としても知られる、シグナル調節タンパク質γ（ＳＩＲＰγ又はＳＩＲＰＧ）は、シグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）ファミリーのメンバーであり、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーにも属する。ＳＩＲＰファミリーの他のメンバーと同様に、ＳＩＲＰγは、３つのＩ型膜貫通糖タンパク質を有し、それぞれが、細胞外領域、１回膜貫通ドメイン、及び短細胞質ドメインを構成する３つのＩｇ様ドメインを有する。ＳＩＲＰ受容体ファミリーの他のメンバーと異なり、ＳＩＲＰγは、下流シグナル伝達分子をリクルートして、細胞シグナル伝達を仲介する、細胞質免疫受容体チロシンベースの抑制性モチーフ（ＩＴＩＭ）を欠いている。ＳＩＲＰγは、受容体型チロシンキナーゼ結合シグナル伝達プロセスの負の調節及び抗原提示細胞へのリンパ球のインテグリン非依存性接着において機能する。ＳＩＲＰγはヒト血液、胸腺及び脾臓組織において高度に発現する。ヒトＰＢＭＣ内で、ＳＩＲＰγは主に、Ｔ細胞及び活性化ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上で発現する。さらに、腫瘍及び隣接組織のＲＮＡｓｅｑプロファイリングでの最近のいくつかの研究から、ＳＩＲＰγは、種々の腫瘍から単離されたＴ細胞上で高度に発現することが分かった。ＳＩＲＰαと同様に、ＳＩＲＰγはＣＤ４７に結合するが、ＳＩＲＰαよりも親和性が低い（Ｂｒｏｏｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７３（４）：２５６２－２５７０（２００４））。免疫システムにおけるＳＩＲＰγ及びその役割は、ｖａｎ Ｂｅｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７５（１２）：７７８１－７７８７（２００５）に概説されている。ＳＩＲＰγの結晶構造は、Ｎｅｔｔｌｅｓｈｉｐ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ １３：１３（２０１３）に記載されている。

ＳＩＲＰγ遺伝子は多型遺伝子であり、ヒト染色体２０（ａｒｍ ｐ１３）上で見いだされ、８個のエクソンを含む。いくつかのＳＩＲＰγバリアントは、ヒトの集団において説明されており、かかるＳＩＲＰγバリアントのタンパク質配列は、アクセッション番号ＮＰ＿００１０３４５９７．１（アイソフォーム３前駆体；配列番号１）、ＮＰ＿０６１０２６．２（アイソフォーム１前駆体；配列番号３）、及びＮＰ＿５４３００６．２（アイソフォーム２前駆体；配列番号５）として、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）ウェブサイトにて見つられ得る。ＳＩＲＰγのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）配列は、アクセッション番号ＮＭ＿００１０３９５０８．１（転写物バリアント３；配列番号２）；アクセッション番号ＮＭ＿０１８５５６．４（転写物バリアント１；配列番号４）；及びアクセッション番号ＮＭ＿０８０８１６．２（転写物バリアント２；配列番号６）として見出され得る。バリアントの中でも、ＳＩＲＰγイントロン内の保護イントロンバリアントｒｓ２２８１８０８が、いくつかのゲノムワイド関連研究を通じて、１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）発症のリスクの低減に関連することが確認されている。ｒｓ２２８１８０８イントロンバリアントの最近の研究から、ＳＮＰバリアントによってＴ細胞上でのＳＩＲＰγ発現の低減をもたらすことが示された。しかしながら、ＳＩＲＰγの生物活性はまだ、大半が未知であり、一部にはマウスにおけるホモログ遺伝子の欠損のためである。

先行する研究によって、抗ＳＩＲＰγ又は抗ＣＤ４７抗体が、混合リンパ球反応において同種異系未成熟ＤＣによって誘発されるＩＦＮγのＴ細胞増殖及びＴ細胞分泌を阻害し得ることが示された（Ｐｉｃｃｉｏ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１０５：２４２１－２４２７，２００５）。しかしながら、これらの先行する研究において、抗ＳＩＲＰγ抗体の結合性エピトープは未知であり、Ｔ細胞増殖に対する抗ＳＩＲＰγ抗体の抑制効果のメカニズムは不明である。かかる研究において、抗体によるＣＤ４７及びＳＩＲＰγの相互作用のブロックが、Ｔ細胞増殖の減少の原因であるか否かは不明であり、ＣＤ４７とのその相互作用を伴う機能を超えるＳＩＲＰγの更なる生物学的機能があるか否かははっきりとしていない。

本発明に開示の方法の例示的な実施形態において、ＳＩＲＰγバインダーは対象に投与される。本明細書で使用される、「ＳＩＲＰγバインダー」という用語は、ＳＩＲＰγに結合して、ＳＩＲＰγとの結合性相互作用を形成する、いずれかの化合物又は分子を意味する。例示的な態様において、ＳＩＲＰγバインダーは、小分子量化合物、アミノ酸、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、ポリマー、炭水化物、脂質、核酸、オリゴヌクレオチド、ＤＮＡ又はＲＮＡを含む、或いは小分子量化合物、アミノ酸、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、ポリマー、炭水化物、脂質、核酸、オリゴヌクレオチド、ＤＮＡ又はＲＮＡである。任意に、ＳＩＲＰγバインダーは、例えば、本明細書に記載の抗原結合性タンパク質などのタンパク質である。一部の実施形態において、ＳＩＲＰγバインダーは、抗体又はその抗原結合性断片である。

種々の場合において、ＳＩＲＰγとＳＩＲＰγバインダーとの間に形成される結合性相互作用は、非共有結合性相互作用である。例えば、ＳＩＲＰγバインダーは、種々の態様において、ＳＩＲＰγの１つ若しくは複数のアミノ酸残基と共にイオン結合、ファンデルワールス相互作用、疎水性結合、及び／又は水素結合を形成し得る。任意に、非共有結合性相互作用は、可逆的、非共有結合性相互作用である。結合性相互作用は、ＳＩＲＰγとＳＩＲＰγバインダーの間のＫ_Ｄ、平衡解離定数、ｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎ比に関して説明され得る。ＳＩＲＰγバインダーのＫ_Ｄ値が低いほど、ＳＩＲＰγに対するＳＩＲＰγバインダーの親和性が高くなる。例示的な態様において、ＳＩＲＰγに対するＳＩＲＰγバインダーのＫ_Ｄ値は、マイクロモル、ナノモル、ピコモル又はフェントモルである。例示的な態様において、本明細書に提供される抗原結合性タンパク質のＫ_Ｄは、約１０^－４～１０^－６Ｍ、又は１０^－７～１０^－９Ｍ、又は１０^－１０～１０^－１２Ｍ、又は１０^－１３～１０^－１５Ｍの範囲内である。例示的な態様において、ＳＩＲＰγバインダーは、Ｋ_Ｄ約０．０１ｎＭ～約２０ｎＭ、０．０２ｎＭ～２０ｎＭ、０．０５ｎＭ～２０ｎＭ、０．０５ｎＭ～１５ｎＭ、０．１ｎＭ～１５ｎＭ、０．１ｎＭ～１０ｎＭ、１ｎＭ～１０ｎＭ、又は５ｎＭ～１０ｎＭでＳＩＲＰγに結合する。

種々の場合において、ＳＩＲＰγバインダーは、ＳＩＲＰγのＤ１に結合し、且つ／又はＳＩＲＰγのＣＤ４７結合部位に結合する。種々の態様において、ＳＩＲＰγバインダーは、ＳＩＲＰγのＤ１及びＩｇドメイン２（Ｄ２）に結合する。例示的な態様において、ＳＩＲＰγバインダーはＤ１とＤ２の両方に、任意にＤ１とＤ２の界面にて結合する。任意に、ＳＩＲＰγバインダーは、ＣＤ４７以外のＳＩＲＰγ結合パートナーの結合部位に結合する。図９Ｅは、ＳＩＲＰγ、そのＩｇドメイン及びＣＤ４７結合部位の説明図を提供する。例示的な場合において、ＳＩＲＰγバインダーは、ＳＩＲＰγモノクローナル抗体ＯＸ１１７がそれに結合する、エピトープに結合する。一部の実施形態において、ＳＩＲＰγバインダーは、ＳＩＲＰγに結合するためのＳＩＲＰγに結合することが既知の参照抗体（例えば、ＯＸ１１７）と競合する。種々の場合におけるＳＩＲＰγバインダーは、ＯＸ１１７と同じ又はそれ以上の親和性でＳＩＲＰγに結合する。一部の実施形態において、ＳＩＲＰγバインダーは、ＯＸ１１７、又はその抗原結合性断片である。図９Ｅは、ＳＩＲＰγと、ＯＸ１１７抗体のｆａｂと、の結合性相互作用の説明図を提供する。種々の態様におけるＳＩＲＰγバインダーは、ＳＩＲＰγのアミノ酸残基Ｑ８、Ｅ１０、Ｇ１０９、Ｋ１１、Ｌ１２、及びＤ１４９のうちの１つ又は複数と水素結合を形成する。一部の実施形態において、ＳＩＲＰγバインダーは、ＳＩＲＰγのアミノ酸残基Ｑ８、Ｅ１０、Ｇ１０９、Ｋ１１、Ｌ１２、及びＤ１４９のそれぞれと水素結合を形成する。一部の実施形態において、ＳＩＲＰγバインダーは、ＣＤ４７結合部位とオーバーラップしないエピトープに結合する。

例示的な場合において、ＳＩＲＰγに結合すると、ＳＩＲＰγバインダーは、Ｔ細胞活性化、Ｔ細胞増殖及びサイトカイン分泌を増強する。一部の場合において、開示の方法は、コントロールに対していずれかの程度又はレベルまで、Ｔ細胞活性化、Ｔ細胞増殖及びサイトカイン分泌を増加する。例えば、一部の態様において、開示の方法によって提供される増加は、コントロールに対して、少なくとも又は約１％～約１０％の増加（例えば、少なくとも又は約１％の増加、少なくとも又は約２％の増加、少なくとも又は約３％の増加、少なくとも又は約４％の増加、少なくとも又は約５％の増加、少なくとも又は約６％の増加、少なくとも又は約７％の増加、少なくとも又は約８％の増加、少なくとも又は約９％の増加、少なくとも又は約９．５％の増加、少なくとも又は約９．８％の増加、少なくとも又は約１０％の増加）である。例示的な実施形態において、開示の方法によって提供される増加は、コントロールに対して１００％を超える増加、例えば、２００％、３００％、４００％、５００％、６００％、７００％、８００％、９００％又は１０００％の増加である。例示的な実施形態において、Ｔ細胞活性化、Ｔ細胞増殖及びサイトカイン分泌は、コントロールに対して、少なくとも又は約１．５倍、少なくとも又は約２．０倍、少なくとも又は約３．０倍、少なくとも又は約４．０倍、少なくとも又は約５．０倍、少なくとも又は約１０．０倍、少なくとも又は約２５倍、少なくとも又は約５０倍、少なくとも又は約７５倍、又は少なくとも又は約１００倍以上増加する。種々の態様におけるコントロールは、ＳＩＲＰγバインダーがＳＩＲＰγに結合することのない、Ｔ細胞活性化、Ｔ細胞増殖及びサイトカイン分泌である。

例示的な場合において、ＳＩＲＰγバインダーは、ＳＩＲＰγに結合すると、ＳＩＲＰγの高次構造変化を起こす。ＳＩＲＰγの高次構造変化は、結合パートナーの結合部位のアクセシビリティ（ａｃｃｅｓｓｉｂｉｌｉｔｙ）を変化させ得る。高次構造変化は、異なる結合パートナーがＳＩＲＰγに結合することも可能にし得る。さらに、又はその代わりとして、高次構造変化は、ＳＩＲＰγ分子の二量体化又は多量体化を起こし得る。例示的な態様において、ＳＩＲＰγの二量体化又は多量体化は、１つ又は複数の結合パートナーがＳＩＲＰγに結合することを防ぐ。例示的な態様において、ＳＩＲＰγの二量体化又は多量体化は、ＳＩＲＰγへの１つ又は複数の結合パートナーの結合を増強する。種々の場合において、ＳＩＲＰγバインダーは同時に、２つのＳＩＲＰγ分子に結合するか、又はＳＩＲＰγ二量体化を促進する。

一部の実施形態において、ＳＩＲＰγバインダーは、ＳＩＲＰγの機能をブロックし、例えば、ＳＩＲＰγバインダーはＳＩＲＰγ阻害剤である。したがって、本発明に開示の方法の例示的な実施形態において、ＳＩＲＰγ阻害剤が対象に投与される。本明細書で使用される、「ＳＩＲＰγ阻害剤」という用語は、ＳＩＲＰγの機能を低減する、又は阻害する、いずれかの化合物若しくは分子を意味する。例示的な場合において、ＳＩＲＰγ阻害剤は、ＳＩＲＰγにＳＩＲＰγ結合パートナーが結合すると、後に続くシグナル伝達を低減する。種々の場合において、ＳＩＲＰγ阻害剤は、ＳＩＲＰγと、ＳＩＲＰγ結合パートナーとの結合性相互作用を低減する。種々の態様において、ＳＩＲＰγ阻害剤は、対象の細胞におけるＳＩＲＰγの発現を低減する。一部の実施形態において、ＳＩＲＰγ阻害剤はＳＩＲＰγに結合する。他の実施形態において、ＳＩＲＰγ阻害剤はＳＩＲＰγ結合パートナーに結合する。

本明細書で使用される、「阻害」及び「低減」という用語、並びにそれに由来する単語は、１００％又は完全な阻害又は阻止又は低減を必ずしも意味するものではない。むしろ、当業者が、潜在的な利点又は治療効果を有すると認識される、様々な程度の阻害及び／又は低減がある。この点で、本開示のＳＩＲＰγ阻害剤は、ＳＩＲＰγ機能を任意の量又はレベルに低減又は阻害し得る。例示的な実施形態において、ＳＩＲＰγ阻害剤によって提供される低減又は阻害は、少なくとも若しくは約１０％の低減又は阻害（例えば、少なくとも若しくは約２０％の低減又は阻害、少なくとも若しくは約３０％の低減又は阻害、少なくとも若しくは約４０％の低減又は阻害、少なくとも若しくは約５０％の低減又は阻害、少なくとも若しくは約６０％の低減又は阻害、少なくとも若しくは約７０％の低減又は阻害、少なくとも若しくは約８０％の低減又は阻害、少なくとも若しくは約９０％の低減又は阻害、少なくとも若しくは約９５％の低減又は阻害、少なくとも若しくは約９８％の低減又は阻害、少なくとも若しくは約９９％の低減又は阻害、或いは約１００％の低減又は阻害）である。

例示的な態様において、ＳＩＲＰγ阻害剤は、対象の細胞におけるＳＩＲＰγの発現を低減する。特定の場合において、ＳＩＲＰγ阻害剤は、Ｔ細胞上でのＳＩＲＰγの細胞表面発現を低減する。例示的な態様において、Ｔ細胞は、腫瘍又は腫瘍微小環境内に位置する。種々の場合において、Ｔ細胞は、腫瘍浸潤Ｔ細胞である。例示的な態様において、Ｔ細胞は制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）である。種々の態様において、Ｔ細胞は消耗Ｔ細胞、任意に、消耗ＣＤ８＋ Ｔ細胞である。任意に、Ｔ細胞は記憶細胞である。種々の態様において、記憶細胞はＣＤ８＋記憶細胞又はＣＤ４＋中枢記憶細胞である。例示的な場合において、ＳＩＲＰγ阻害剤は、ＳＩＲＰγをコードする核酸を標的とする分子である。例示的な場合において、ＳＩＲＰγ阻害剤は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を仲介するアンチセンス分子である。ＲＮＡｉは、標的ｍＲＮＡが配列特異的に分解される、植物及び動物における遺伝子調節のユビキタスなメカニズムである（Ｓｈａｒｐ，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．，１５，４８５－４９０（２００１）；Ｈｕｔｖａｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖ．，１２，２２５－２３２（２００２）；Ｆｉｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３９１，８０６－８１１（１９９８）；Ｚａｍｏｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，１０１，２５－３３（２０００））。天然ＲＮＡ分解プロセスは、ｄｓＲＮＡ－特異的エンドヌクレアーゼダイサー（Ｄｉｃｅｒ）によって開始され、低分子干渉ＲＮＡと呼ばれる、長さ２１～２５のヌクレオチドの二本鎖断片への長鎖ｄｓＲＮＡ前駆体の切断が促進される（ｓｉＲＮＡ；短鎖干渉ＲＮＡとしても知られる）（Ｚａｍｏｒｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ．１０１，２５－３３（２０００）；Ｅｌｂａｓｈｉｒ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．，１５，１８８－２００（２００１）；Ｈａｍｍｏｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，４０４，２９３－２９６（２０００）；Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，４０９，３６３－３６６（２００１））。ｓｉＲＮＡは、標的ｍＲＮＡを認識及び切断する大きなタンパク質複合体へと取り込まれる（Ｎｙｋａｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，１０７，３０９－３２１（２００１））。細胞でのｓｉＲＮＡの成熟におけるダイサーの必要性は、様々な哺乳動物細胞におけるトランスフェクトされた遺伝子及び内因性遺伝子の発現を阻害する、合成２１－ヌクレオチドｓｉＲＮＡ二重鎖を導入することによって回避することができる（Ｅｌｂａｓｈｉｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，４１１：４９４－４９８（２００１））。例示的な態様において、ＳＩＲＰγ阻害剤はＲＮＡｉを仲介し、種々の場合に、ＳＩＲＰγタンパク質をコードする核酸（例えば、ｍＲＮＡ）の発現の阻害に特異的なｓｉＲＮＡ分子である。本明細書で使用される「ｓｉＲＮＡ」という用語は、ＲＮＡｉを指示する、又は仲介することができる、約１０～約５０個のヌクレオチド（又はヌクレオチド類似体）を含むＲＮＡ（又はＲＮＡ類似体）を意味する。例示的な実施形態において、ｓｉＲＮＡ分子は、約１５～約３０個のヌクレオチド（又はヌクレオチド類似体）又は約２０～約２５個のヌクレオチド（又はヌクレオチド類似体）、例えば、２１～２３個のヌクレオチド（又はヌクレオチド類似体）を含む。ｓｉＲＮＡは二本鎖又は一本鎖、好ましくは二本鎖であることができる。

代替の態様において、ＳＩＲＰγ阻害剤は、ＳＩＲＰγタンパク質をコードする核酸（例えば、ｍＲＮＡ）の発現の阻害に特異的な、短鎖ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）分子である。本明細書で使用される「ｓｈＲＮＡ」という用語は、一本鎖ＲＮＡが部分的に回文塩基配列を含有し、そこに二本鎖構造（つまり、ヘアピン構造）を形成する、塩基対約２０個以上の分子を意味する。ｓｈＲＮＡは、ヘアピン構造へと折り畳まれるｓｉＲＮＡ（又はｓｉＲＮＡ類似体）であり得る。ｓｈＲＮＡは通常、およそ２１個のヌクレオチドアンチセンス、及びヘアピンのセンス（ｓｅｎｓｅ）部分、長さ約２～約６ヌクレオチドの非ループ側の任意のオーバーハング、及び例えば長さ約３～１０ヌクレオチドであり得るループ部分を含む、約４５～約６０個のヌクレオチドを含む。ｓｈＲＮＡは化学的に合成することができる。代替方法として、逆方向にＤＮＡ配列のセンス鎖及びアンチセンス鎖を連結し、鋳型としてＤＮＡを用いてＴ７ ＲＮＡポリメラーゼで生体外にてＲＮＡを合成することによって、ｓｈＲＮＡを産生することができる。いずれかの理論又はメカニズムに束縛されることは望まないが、ｓｈＲＮＡが細胞内に導入された後に、ｓｈＲＮＡは約２０塩基以上の長さに（例えば、典型的には２１、２２、２３塩基）分解され、ＲＮＡｉを生じ、抑制効果が起こされると考えられる。したがって、ｓｈＲＮＡはＲＮＡｉを誘発し、したがって、開示の有効な成分として使用することができる。ｓｈＲＮＡは好ましくは、３’－突出末端を有し得る。二本鎖部分の長さは特に制限されないが、好ましくは約１０個以上のヌクレオチド、より好ましくは約２０個以上のヌクレオチドである。ここで、３’－突出末端は、好ましくはＤＮＡ、より好ましくは、長さが少なくとも２ヌクレオチドのＤＮＡ、さらにより好ましくは長さが２～４ヌクレオチドのＤＮＡであり得る。

例示的な態様において、ＳＩＲＰγ阻害剤はマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）である。本明細書において使用される、「マイクロＲＮＡ」という用語は、小さな（例えば、１５～２２ヌクレオチド）、非コーティングＲＮＡ分子を意味し、ｍＲＮＡ分子でのその塩基対は翻訳抑制又は標的分解を介して遺伝子発現を抑制する。マイクロＲＮＡ及びその治療可能性は当技術分野で記述されている。例えば、Ｍｕｌｌｉｇａｎ，ＭｉｃｒｏＲＮＡ：Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，Ｎｏｖａ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，Ｈａｕｐｐａｕｇｅ，ＮＹ，２０１１；Ｂａｄｅｒ ａｎｄ Ｌａｍｍｅｒｓ，“Ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ”Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｐａｇｅｓ ５２－５５（Ｍａｒｃｈ ２０１１）を参照されたい。

例示的な場合において、ＳＩＲＰγ阻害剤は、ＳＩＲＰγ結合パートナーがＳＩＲＰγに結合すると後に続くシグナル伝達を低減する。種々の態様において、ＳＩＲＰγ阻害剤は、ＳＩＲＰγにＣＤ４７が結合すると、後に続くシグナル伝達、例えばＴ細胞経内皮移動を引き起こすＣＤ４７－ＳＩＲＰγ結合性相互作用によって誘導される内皮細胞におけるシグナル伝達を低減する（Ｓｔｅｆａｎｉｄａｋｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １１２：１２８０－１２８９（２００８））。種々の態様において、ＳＩＲＰγ阻害剤は、ＳＩＲＰγ免疫グロブリンドメインＤ１（Ｄ１）及び／又は免疫グロブリンドメインＤ２（Ｄ２）にＳＩＲＰγ結合パートナーが結合すると、後に続くシグナル伝達を低減する。１つの場合には、ＳＩＲＰγ阻害剤は、ＳＩＲＰγ免疫グロブリンドメインＤ１と免疫グロブリンドメインＤ２との界面にＳＩＲＰγ結合パートナーが結合すると、後に続くシグナル伝達を低減する。種々の態様において、ＳＩＲＰγ阻害剤は、活性化Ｔ細胞によってＩＦＮγの分泌を増強する。

種々の場合において、ＳＩＲＰγ阻害剤は、ＳＩＲＰγと、ＳＩＲＰγ結合パートナーとの結合性相互作用を低減する。例示的な態様において、ＳＩＲＰγ阻害剤は、ＳＩＲＰγと、ＳＩＲＰγ結合パートナーとの結合性相互作用の少なくとも又は約１０％を阻害する（例えば、結合性相互作用の少なくとも又は約２０％、結合性相互作用の少なくとも又は約３０％、結合性相互作用の少なくとも又は約４０％、結合性相互作用の少なくとも又は約５０％、結合性相互作用の少なくとも又は約６０％、結合性相互作用の少なくとも又は約７０％、結合性相互作用の少なくとも又は約８０％、結合性相互作用の少なくとも又は約９０％、結合性相互作用の少なくとも又は約９５％、結合性相互作用の少なくとも又は約９８％、結合性相互作用の少なくとも又は約９９％、或いは結合性相互作用の約１００％）。他の場合において、ＳＩＲＰγ結合パートナーは、ＳＩＲＰγ免疫グロブリンドメインＤ１と免疫グロブリンドメインＤ２の界面に結合する。種々の場合において、ＳＩＲＰγ結合パートナーはＣＤ４７である。種々の態様において、ＳＩＲＰγ結合パートナーは、Ｄ１及び／又はＤ２に結合する。

例示的な態様において、ＳＩＲＰγ阻害剤は、ＣＤ４７又は他のＳＩＲＰγ結合パートナーに結合するＳＩＲＰγの可溶性部分である。種々の態様において、ＳＩＲＰγの可溶性部分は、ＣＤ４７又は他のＳＩＲＰγ結合パートナーに結合すると、ヌル応答、例えばＳＩＲＰγ－ＣＤ４７仲介シグナル伝達の欠如を引き起こすデコイである。種々の態様において、ＳＩＲＰγの可溶性部分は、ＳＩＲＰγアミノ酸配列の少なくともアミノ酸２９～３６０を含む。例示的な態様において、ＳＩＲＰγの可溶性部分は、配列番号ＮＰ＿０６１０２６．２、ヒトＳＩＲＰγアミノ酸配列の少なくともアミノ酸２９～３６０を含む。

一部の実施形態において、ＳＩＲＰγ阻害剤は、ＣＤ４７又は他のＳＩＲＰγ結合パートナーに結合するＳＩＲＰγ－Ｆｃである。種々の態様において、ＳＩＲＰγ－Ｆｃは、ＣＤ４７又は他のＳＩＲＰγ結合パートナーに結合すると、ヌル応答、例えばＳＩＲＰγ－ＣＤ４７仲介シグナル伝達の欠如を引き起こすデコイである。種々の態様において、ＳＩＲＰγ－Ｆｃは、ＳＩＲＰγアミノ酸配列の少なくともアミノ酸２９～３６０を含む。

一部の実施形態において、ＳＩＲＰγ阻害剤はＣＲＩＳＰＲ ｇＲＮＡである。ＣＲＩＳＰＲノックアウトシステムは、ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）及びＣＲＩＳＰＲ関連エンドヌクレアーゼ（Ｃａｓタンパク質）を含有する。本明細書で使用される、「ｇＲＮＡ」という用語は、塩基対約１００以上の短鎖ＲＮＡ分子を意味する。ｇＲＮＡは、ヌクレオチドスペーサー約２０塩基対及びＣａｓタンパク質結合に必要な骨格（ｓｃａｆｆｏｌｄ）配列を含有する。ｇＲＮＡの５’末端に向かって２０塩基対を変えることによって、その配列に相補的ないずれかのゲノム領域に向かって、ｇＲＮＡを標的化することができる。長さ２０塩基対のヌクレオチドスペーサーを化学的に合成し、骨格ＲＮＡにアニールして、生体外でｇＲＮＡを形成することができる。ｇＲＮＡの完全長は生体外にて化学的に合成することができる。代替方法としては、Ｕ６ ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーターによってドライブされるウイルスベクターによって、ｇＲＮＡを産生することができる。目的の２０塩基対標的配列がすぐに、プロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）に先行する。ｇＲＮＡが、相補的塩基対によってＣａｓヌクレアーゼを標的配列にガイドし、Ｃａｓヌクレアーゼは、ＰＡＭ配列の数個のヌクレオチド上流の二本鎖切断を仲介する。標的細胞は、非相同末端結合（ＮＨＥＪ）、又は二本鎖切断を修復する相同組換え修復（ＨＤＲ）を用いる。多くの場合には、ＮＨＥＪは、標的化ＤＮＡ領域において欠失、挿入、又はフレームシフト変異を起こし、標的化遺伝子の機能欠損変異を生じる。

例示的な態様において、ＳＩＲＰγ阻害剤は、ＳＩＲＰγに結合するＣＤ４７の可溶性部分である。種々の態様において、ＣＤ４７の可溶性部分は、ＳＩＲＰγに結合すると、ヌル応答、例えばＳＩＲＰγ－ＣＤ４７仲介シグナル伝達の欠如を引き起こすデコイである。種々の態様において、ＣＤ４７の可溶性部分は、ＣＤ４７アミノ酸配列の少なくともアミノ酸２６～１３３を含む。例示的な態様において、ＣＤ４７の可溶性部分は、配列番号ＮＰ＿００１７６８．１、ヒトＣＤ４７アミノ酸配列の少なくともアミノ酸２６～１３３を含む。

抗原結合性タンパク質
例示的な場合において、ＳＩＲＰγバインダー、例えば、ＳＩＲＰγ阻害剤は、ＳＩＲＰγに結合する抗原結合性タンパク質である。例示的な態様において、ＳＩＲＰγ阻害剤は、ＳＩＲＰγ又はＳＩＲＰγ結合パートナー（例えば、ＣＤ４７）に結合する抗原結合性タンパク質である。種々の態様における抗原結合性タンパク質は、抗体、抗原結合性抗体断片、又は抗体タンパク質産物である。本明細書において使用される、「抗体」という用語は、重鎖と軽鎖を含み、且つ可変領域と定常領域を含む、既知の免疫グロブリンフォーマットを有するタンパク質を意味する。例えば、抗体は、それぞれの対が、１本の「軽」鎖（通常、分子量約２５ｋＤａを有する）と１本の「重」鎖（通常、分子量約５０～７０ｋＤａを有する）を有する、２つの同一対のポリペプチド鎖の「Ｙ形」構造であるＩｇＧであり得る。抗体は可変領域と定常領域を有する。ＩｇＧフォーマットにおいて、可変領域は一般に、約１００～１１０以上のアミノ酸であり、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、主に抗原認識を担い、異なる抗原に結合する抗体の中でもかなり変化する。定常領域は、抗体が免疫システムの細胞及び分子をリクルートすることを可能にする。可変領域は、各軽鎖及び重鎖のＮ末端領域で構成され、定常領域は、重鎖及び軽鎖のそれぞれのＣ末端部分で構成される（Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｏｌｅｃｕｌｅ ａｎｄ ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｇｅｎｅｓ”，Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｅ Ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｄｉｓｅａｓｅ，４^ｔｈ ｅｄ．Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｌｔｄ．／Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，（１９９９））。

抗体のＣＤＲの一般構造及び特性は、当技術分野で記述されている。簡潔には、抗体骨格において、ＣＤＲは、それらが抗原結合性及び認識を主に担う領域を構成する、重鎖及び軽鎖可変領域内に埋め込まれる。可変領域は通常、フレームワーク領域内に（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．．，１９９１によってフレームワーク領域１～４、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４と指定される；Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，１９８７も参照のこと）、少なくとも３つの重鎖又は軽鎖ＣＤＲを含む（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．．，１９９１，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｎ．Ｉ．Ｈ．，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．；Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．．，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７－８８３も参照のこと）。

抗体は、当技術分野で公知のいずれかの定常領域を含み得る。ヒト軽鎖はカッパ及びラムダ軽鎖として分類される。重鎖は、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファ、又はイプシロンとして分類され、抗体のアイソタイプはＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＥとそれぞれ定義される。ＩｇＧは、限定されないが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４などのいくつかのサブクラスを有する。ＩｇＭは、限定されないが、ＩｇＭ１及びＩｇＭ２などのサブクラスを有する。本開示の実施形態は、抗体のすべてのかかるクラス又はアイソタイプを含む。軽鎖定常領域は、例えば、カッパ－又はラムダ型軽鎖定常領域、例えば、ヒトのカッパ－又はラムダ型軽鎖定常領域であることができる。重鎖定常領域は、例えば、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、又はミュー型重鎖定常領域、例えばヒトアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、又はミュー型重鎖定常領域であることができる。したがって、例示的な実施形態において、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４のいずれか１つを含む、アイソタイプＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、又はＩｇＭの抗体である。一部の実施形態において、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４抗体である。

抗体は、モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体であり得る。一部の実施形態において、抗体は、哺乳動物、例えば、マウス、ウサギ、ヤギ、ウマ、ニワトリ、ハムスター、ヒト等によって産生される天然抗体と実質的に類似の配列を含む。この点から、抗体は、哺乳動物抗体、例えば、マウス抗体、ウサギ抗体、ヤギ抗体、ウマ抗体、ニワトリ抗体、ハムスター抗体、ヒト抗体等としてみなすことができる。特定の態様において、抗体はヒト抗体である。特定の態様において、抗体は、キメラ抗体又はヒト化抗体である。「キメラ抗体」という用語は、２種類以上の異なる抗体からのドメインを含有する抗体を意味する。キメラ抗体は、例えば一方の種からの定常ドメインと、第２の種からの可変ドメインを含有し得て、或いはより一般的には、少なくとも２つの種からのアミノ酸配列のストレッチを含有し得る。キメラ抗体は、同一種内の２つ以上の異なる抗体のドメインも含有し得る。抗体に関して使用される場合に「ヒト化」という用語は、起源抗体よりも、真のヒト抗体により類似した構造及び免疫機能を有するように遺伝子操作された、非ヒト由来の少なくともＣＤＲ領域を有する抗体を意味する。例えば、ヒト化は、ヒト抗体への、マウス抗体などの非ヒト抗体からのＣＤＲのグラフト化を含み得る。ヒト化は、非ヒト配列をヒト配列により類似させるための、選択アミノ酸置換も含み得る。

抗体は、例えば、パパイン及びペプシンなどの酵素によって断片に切断することができる。パパインは抗体を切断して、２つのＦａｂ断片と１つのＦｃ断片が生成される。ペプシンは抗体を切断し、Ｆ（ａｂ’）_２断片及びｐＦｃ’断片が生成される。本開示の例示的な態様において、抗原結合性タンパク質は、抗体の抗原結合性断片である。本明細書で使用される、「抗原結合性抗体断片」という用語は、抗体の抗原に結合することができる抗体の部分を意味し、「抗原結合性断片」又は「抗原結合性部分」としても知られる。例示的な場合において、抗原結合性抗体断片は、Ｆａｂ断片又はＦ（ａｂ’）_２断片である。

種々の態様において、抗原結合性タンパク質は抗体タンパク質産物である。本明細書において使用される、「抗体タンパク質産物」という用語は、種々の場合において抗体の構造に基づくが、天然では見られない、いくつかの抗体代替物のいずれか１つを意味する。一部の態様において、抗体タンパク質産物は、少なくとも約１２～１５０ｋＤａの範囲内の分子量を有する。特定の態様において、抗体タンパク質産物は、より大きなオーダーの結合価でない場合には、単量体（ｎ＝１）から、二量体（ｎ＝２）、三量体（ｎ＝３）、四量体（ｎ＝４）までの範囲の結合価（ｎ）を有する。一部の態様における抗体タンパク質産物は、完全抗体構造をベースとする産物及び／又は完全抗原結合性能力を維持する抗体断片、例えば、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ及びＶＨＨ／ＶＨ（以下に記述する）を模擬する産物である。

その完全抗原結合部位を維持する最小の抗原結合性抗体断片は、全体的に可変（Ｖ）領域からなるＦｖ断片である。可溶性、可動性アミノ酸ペプチドリンカーが、分子の安定化のためにｓｃＦｖ（単鎖断片可変）断片にＶ領域を連結するために使用され、或いは、定常（Ｃ）ドメインがＶ領域に付加されて、Ｆａｂ断片［断片、抗原結合性］が形成される。ｓｃＦｖ断片とＦａｂ断片のどちらも、宿主細胞、例えば、原核生物宿主細胞において容易に産生することができる。他の抗体タンパク質産物としては、ジスルフィド結合安定化ｓｃＦｖ（ｄｓ－ｓｃＦｖ）、単鎖Ｆａｂ（ｓｃＦａｂ）、並びにオリゴマー化ドメインに連結されたｓｃＦｖからなる異なるフォーマットを含む、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｙ）、テトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｙ）又はミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）（ｍｉｎｉＡｂ）などの二量体及び多量体抗体フォーマットが挙げられる。最小断片は、ラクダ科の重鎖ＡｂのＶＨＨ／ＶＨ並びに単一ドメインＡｂ（ｓｄＡｂ）である。新規な抗体フォーマットの作成に最も多く使用される構成単位は、単鎖可変（Ｖ）－ドメイン抗体断片（ｓｃＦｖ）であり、約１５個のアミノ酸残基のペプチドリンカーによって連結された重鎖及び軽鎖（ＶＨ及びＶＬドメイン）からのＶドメインを含む。ぺプチボディ又はペプチド－Ｆｃ融合物は、さらに他の抗体タンパク質産物である。ぺプチボディの構造は、Ｆｃドメイン上にグラフト化された生物活性ペプチドからなる。ぺプチボディは当技術分野で十分に記述されている。例えば、Ｓｈｉｍａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．．，ｍＡｂｓ ４（５）：５８６－５９１（２０１２）を参照のこと。

他の抗体タンパク質産物としては、単鎖抗体（ＳＣＡ）；ダイアボディ；トリアボディ；テトラボディ；二重特異性又は三重特異性抗体等が挙げられる。二重特異性抗体は、主な５つのクラス：ＢｓＩｇＧ、付加ＩｇＧ、ＢｓＡｂ断片、二重特異性融合タンパク質及びＢｓＡｂコンジュゲートに分けられ得る。例えば、Ｓｐｉｅｓｓ ｅｔ ａｌ．．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６７（２）Ｐａｒｔ Ａ：９７－１０６（２０１５）を参照のこと。

例示的な態様において、抗原結合性タンパク質は、二重特異性Ｔ細胞誘導（ＢｉＴＥ（登録商標））分子である。ＢｉＴＥ（登録商標）分子は、異なる抗体の２つのｓｃＦｖを含む融合タンパク質である。一方はＣＤ３に結合し、もう一方は標的抗原に結合する。ＢｉＴＥ（登録商標）分子は当技術分野で公知である。例えば、Ｈｕｅｈｌｓ ｅｔ ａｌ．．，Ｉｍｍｕｎｏ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ９３（３）：２９０－２９６（２０１５）；Ｒｏｓｓｉ ｅｔ ａｌ．．，ＭＡｂｓ ６（２）：３８１－９１（２０１４）；Ｒｏｓｓ ｅｔ ａｌ．．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ １２（８）：ｅ０１８３３９０を参照のこと。

種々の態様において、抗原結合性タンパク質（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）がＳＩＲＰγに結合する。一部の態様における抗原結合性タンパク質は、非共有結合的及び可逆的様式でＳＩＲＰγに結合する。例示的な実施形態において、抗原結合性タンパク質の結合強度は、その親和性、ＳＩＲＰγの結合部位とＳＩＲＰγ結合パートナーとの相互作用の強度の程度の点から説明され得る。例示的な態様において、抗原結合性タンパク質は、ＳＩＲＰγに対する高い親和性を有し、したがって、低親和性抗原結合性タンパク質よりも短期間で多くの量のＳＩＲＰγを結合させる。例示的な態様において、抗原結合性タンパク質はＳＩＲＰγに対する低親和性を有し、したがって高親和性抗原結合性タンパク質よりも長期間で少ない量のＳＩＲＰγを結合させる。例示的な態様において、その抗原結合性タンパク質は、少なくとも１０^５Ｍ^－１、少なくとも１０^６Ｍ^－１、少なくとも１０^７Ｍ^－１、少なくとも１０^８Ｍ^－１、少なくとも１０^９Ｍ^－１、又は少なくとも１０^１０Ｍ^－１である平衡会合定数、ＫＡを有する。当業者によって理解されるように、ＫＡは、ｐＨ、温度及び緩衝剤組成などの因子によって影響を受け得る。

例示的な実施形態において、ＳＩＲＰγへの抗原結合性タンパク質（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）の結合強度は、その感度の点から記述され得る。Ｋ_Ｄは、抗原結合性タンパク質と、ＳＩＲＰγとの間の平衡解離定数、ｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎ比である。Ｋ_Ｄ及びＫＡは反比例する。Ｋ_Ｄ値は、抗原結合性タンパク質の濃度（特定の実験に必要な抗原結合性タンパク質の量）に関係する。Ｋ_Ｄ値が低いほど（必要とされる濃度が低いほど）、抗原結合性タンパク質の親和性が高くなる。例示的な態様において、ＳＩＲＰγへの抗原結合性タンパク質の結合強度は、Ｋ_Ｄの点から説明され得る。例示的な態様において、抗原結合性タンパク質のＫ_Ｄは、約１０^－１Ｍ、約１０^－２Ｍ、約１０^－３Ｍ、約１０^－４Ｍ、約１０^－５Ｍ、約１０^－６Ｍ、又はそれ以下である。例示的な態様において、抗原結合性タンパク質のＫ_Ｄは、マイクロモル、ナノモル、ピコモル又はフェントモルである。例示的な態様において、抗原結合性タンパク質のＫ_Ｄは、約１０^－４～１０^－６Ｍ、又は１０^－７～１０^－９Ｍ、又は１０^－１０～１０^－１２Ｍ、又は１０^－１３～１０^－１５Ｍの範囲内である。例示的な態様において、抗原結合性タンパク質は、約０．０４ｎＭ以上のＫ_ＤでヒトＳＩＲＰγに結合する。例示的な態様において、抗原結合性タンパク質は、Ｋ_Ｄ約０．０１ｎＭ～約２０ｎＭ、０．０２ｎＭ～２０ｎＭ、０．０５ｎＭ～２０ｎＭ、０．０５ｎＭ～１５ｎＭ、０．１ｎＭ～１５ｎＭ、０．１ｎＭ～１０ｎＭ、１ｎＭ～１０ｎＭ、又は５ｎＭ～１０ｎＭでヒトＳＩＲＰγに結合する。種々の態様において、そのＫＤは、ＳＩＲＰγがＣＤ４７に対して有するＫＤよりも低く、任意に約２３μＭ未満である。

任意に、抗原結合性タンパク質は、完全ヒト抗体又はその抗原結合性断片、ヒト化抗体又はその抗原結合性断片、キメラ抗体又はその抗原結合性断片を含む。抗原結合性タンパク質は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又は単鎖Ｆｖも含み得る。種々の態様において、ＳＩＲＰγ阻害剤は、抗ＳＩＲＰγ抗体の重鎖及び軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれ以上を含む。

特定の態様において、抗原結合性タンパク質は、ＳＩＲＰγ上のエピトープに結合し、任意に、そのエピトープは、ＳＩＲＰγのＣＤ４７結合部位内に、又はＣＤ４７結合部位に近い、又はＣＤ４７結合部位と異なる部位に位置する。種々の態様において、抗原結合性タンパク質は、ＳＬＬＰＶＧＰのアミノ酸配列（配列番号２１）；ＳＩＲＰγアミノ酸配列のアミノ酸２９～３５、ＬＴＫＲＮＮＭＤＦ（配列番号２２）、及びＫＦＲＫＧＳ（配列番号２３）を含むエピトープに結合する。

例示的な態様において、抗原結合性タンパク質は、ＳＩＲＰγへの結合に関して、ＳＩＲＰγに結合することが知られている参照抗体（例えば、ＯＸ１１７）と競合する、完全ヒト抗体又はその抗原結合性断片、ヒト化抗体又はその抗原結合性断片、キメラ抗体又はその抗原結合性断片、又はＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又は単鎖Ｆｖを含む。例示的な態様において、抗原結合性タンパク質は、参照抗体（例えば、ＯＸ１１７）が結合する、エピトープに結合する。例示的な態様において、抗原結合性タンパク質は、参照抗体（例えば、ＯＸ１１７）のＫ_Ｄと類似の、又は同じＳＩＲＰγに対するＫ_Ｄを示す。例示的な態様において、抗原結合性タンパク質は、参照抗体（例えば、ＯＸ１１７）のＫ_Ｄよりも低いＳＩＲＰγに対するＫ_Ｄを示し、したがって、参照抗体と比べてＳＩＲＰγに対する高い親和性を示す。抗原結合性タンパク質のリガンド又は標的に対する結合親和性を決定するための適切な技術は当技術分野で公知であり、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）に基づく方法、フローサイトメトリー又は蛍光顕微鏡検査法に基づく方法、ＫｉｎＥｘＡ（登録商標）法が挙げられる（例えば、国際公開第２０１９１４０１９６号パンフレット、Ａｚｉｍｚａｄｅｈ ａｎｄ Ｒｅｇｅｎｍｏｒｔｅｌ，Ｊ Ｍｏｌ Ｒｅｃｏｇｎｉｔ ３（３）：１０８－１１６（１９９０）；Ｓｃｈｕｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ Ｐｒｏｔｏｃ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ Ｃｈａｐｔｅｒ １７：Ｕｎｉｔ １７．６（２００４）；Ｔｓｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ２３（６）：８３６－８４６（２００２）；Ｖａｎ Ｒｅｇｅｎｍｏｒｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｎｖｅｓｔ ２６（１－２）：６７－８２（１９９７）参照）。

例示的な場合において、ＳＩＲＰγへの結合に関して参照抗体（例えば、ＯＸ１１７）と競合する抗原結合性タンパク質は、生体外での競合的結合アッセイにおいてＳＩＲＰγに結合される抗ＳＩＲＰγ抗体（例えば、ＯＸ１１７）の量を低減する。例示的な態様において、本開示の抗原結合性タンパク質の存在下でＳＩＲＰγに結合される参照抗体（例えば、ＯＸ１１７）の量は、少なくとも又は約２５％、少なくとも又は約３０％、少なくとも又は約３５％、少なくとも又は約４０％、少なくとも又は約４５％、少なくとも又は約５０％、少なくとも又は約５５％、少なくとも又は約６０％、少なくとも又は約６５％、少なくとも又は約７０％、少なくとも又は約７５％、少なくとも又は約８０％、少なくとも又は約８５％、少なくとも又は約９０％或いはそれ以上（例えば、少なくとも又は約９５％、少なくとも又は約９８％）減少する。種々の態様において、本開示の抗原結合性タンパク質は、ＳＩＲＰγと参照抗体との結合性相互作用を阻害し、その阻害はＩＣ_５０によって特徴付けられる。種々の態様において、抗原結合性タンパク質は、ＳＩＲＰγと参照抗体との結合性相互作用の阻害に関して約２５０ｎＭ未満のＩＣ_５０を示す。種々の態様において、抗原結合性タンパク質は、ＩＣ_５０約２００ｎＭ未満、約１５０ｎＭ未満、約１００ｎＭ未満、約５０ｎｍ未満、約２５ｎｍ未満、約１０ｎｍ未満、約５ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、０．５ｎＭ未満又は０．１ｎＭ未満を示す。

ＳＩＲＰγに結合する参照抗体（例えば、ＯＸ１１７）の低減された量の決定に使用することができる適切な競合的結合アッセイは、ＳＩＲＰγへの結合に関して参照抗体（例えば、ＯＸ１１７）と競合する、本発明に開示の抗原結合性タンパク質（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）の存在下にて、ＳＩＲＰγ又はＳＩＲＰγを発現する細胞と共に参照抗体（例えば、ＯＸ１１７）をインキュベートする工程を含む。ＳＩＲＰγに結合する参照抗体（例えば、ＯＸ１１７）の量は、ＳＩＲＰγへの結合に関して競合する本開示の抗原結合性タンパク質（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）を使用して、及び使用せず測定される。

種々の場合において、本開示の抗原結合性タンパク質は、ＳＩＲＰγへの結合に関して参照抗体と競合し、それによって、ＦＡＣＳに基づくアッセイによって決定される、参照抗体に結合するＳＩＲＰγの量が低減され、そのアッセイでは、参照抗体のＦｃに結合するフルオロフォア結合型二次抗体の蛍光が、本開示の抗原結合性タンパク質の特定の量の非存在下又は存在下にて測定される。種々の態様において、ＦＡＣＳに基づくアッセイは、参照抗体、フルオロフォア結合型二次抗体、及びＳＩＲＰγを発現する細胞を用いて行われる。種々の態様において、細胞を遺伝子操作して、ＳＩＲＰγを過剰発現させる。一部の態様において、その細胞は、ＳＩＲＰγを発現するようにウイルスベクターで形質導入されたＨＥＫ２９３Ｔ細胞である。代替の態様において、その細胞は内因的にＳＩＲＰγを発現する。ＦＡＣＳに基づくアッセイを行う前に、一部の態様では、ＳＩＲＰγを内因的に発現する細胞が、低ＳＩＲＰγ発現細胞又は高ＳＩＲＰγ発現細胞として予め決定される。

他の結合アッセイ、例えば、抗原又はそのエピトープへの結合に関して他の抗原結合性タンパク質と競合する、抗体の能力を試験する競合的結合アッセイ又は競合アッセイは当技術分野で公知である。例えば、適切な受容体－リガンド競合アッセイが、参照により本明細書に組み込まれる、国際特許出願公開第２０１９１４０１９６号パンフレットに記載されている。例えば、Ｔｒｉｋｈａ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ １１０：３２６－３３５（２００４）；Ｔａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ９８（１１）：１０８５－１０９１（１９９８）；米国特許出願公開第２０１４０１７８９０５号明細書、Ｃｈａｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ ４６：１６８－１７１（２０１７）；Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ ５２５：８９－９１（２０１７）；Ｇｏｏｌｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｖｅｔ Ｄｉａｇｎ Ｉｎｖｅｓｔ ２９（２）：２５０－２５３（２０１７）；Ｈｕｎｔｅｒ ａｎｄ Ｃｏｃｈｒａｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ ２５０：２１－４４（２０１６）；Ｃｏｘ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ．２０１２ Ｍａｙ １［Ｕｐｄａｔｅｄ ２０１９ Ｊｕｌ ８］．Ｉｎ：Ｓｉｔｔａｍｐａｌａｍ ＧＳ，Ｇｒｏｓｓｍａｎ Ａ，Ｂｒｉｍａｃｏｍｂｅ Ｋ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｉｔｏｒｓ．Ａｓｓａｙ Ｇｕｉｄａｎｃｅ Ｍａｎｕａｌ［Ｉｎｔｅｒｎｅｔ］．Ｂｅｔｈｅｓｄａ（ＭＤ）：Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ＆ Ｃｏｍｐａｎｙ ａｎｄ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ａｄｖａｎｃｉｎｇ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ；２００４－：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｂｏｏｋｓ／ＮＢＫ９２４３４／から入手可能；Ｃｌａｒｋｅ，Ｗｉｌｌｉａｍ，“Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ ｆｏｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ”，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓ，Ｖｏｌｕｍｅ ５，ｐａｇｅｓ ９５－１１２（２００４）、及びＧｏｏｌｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｖｅｔ Ｄｉａｇｎ Ｉｎｖｅｓｔ ２９（２）：２５０－２５３（２０１７）を参照のこと。例示的な態様において、ＳＩＲＰγバインダーは、これらの参考文献に記載のアッセイのいずれかによって決定されるように、ＳＩＲＰγへの結合に関してＯＸ１１７と競合する。

癌の治療
本開示は、腫瘍又は癌を有する対象を治療する方法を提供する。例示的な実施形態において、癌を治療する方法は、対象における腫瘍又は癌の治療に有効な量で、ＳＩＲＰγバインダー（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）を対象に投与することを含む。一部の実施形態において、ＳＩＲＰγバインダーはＳＩＲＰγ阻害剤である。一部の実施形態において、癌を治療する方法は、対象における腫瘍又は癌の治療に有効な量で、ＳＩＲＰγ上のエピトープに結合する抗原結合性タンパク質（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）を対象に投与することを含む。

本明細書において考察されるＳＩＲＰγ上のエピトープに結合する抗原結合性タンパク質のいずれか（例えば、ＳＩＲＰγバインダー及びＳＩＲＰγ阻害剤）が、かかる方法に使用され得る。特定の態様において、ＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）は、ＳＩＲＰγ上のエピトープに結合する。一部の実施形態において、ＳＩＲＰγ上のエピトープは、ＳＩＲＰγのＣＤ４７結合部位内に、又はＣＤ４７結合部位に近い、又はＣＤ４７結合部位と異なる部位に位置する。種々の態様において、ＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）は、ＳＬＬＰＶＧＰのアミノ酸配列（配列番号２１）；ＳＩＲＰγアミノ酸配列のアミノ酸２９～３５、ＬＴＫＲＮＮＭＤＦ（配列番号２２）、及びＫＦＲＫＧＳ（配列番号２３）を含むエピトープに結合する。

種々の場合において、ＳＩＲＰγバインダーは、Ｄ１に結合し、且つ／又はＳＩＲＰγのＣＤ４７結合部位に結合する。種々の態様において、ＳＩＲＰγバインダーは、ＳＩＲＰγのＤ１及びＩｇドメイン２（Ｄ２）に結合する。例示的な態様において、ＳＩＲＰγバインダーは、Ｄ１とＤ２の両方に、任意にＤ１とＤ２の界面にて結合する。任意に、ＳＩＲＰγバインダーは、ＣＤ４７以外のＳＩＲＰγ結合パートナーの結合部位に結合する。図９Ｅは、ＳＩＲＰγ、そのＩｇドメイン及びＣＤ４７結合部位の説明図を提供する。例示的な場合において、ＳＩＲＰγバインダーは、ＳＩＲＰγモノクローナル抗体ＯＸ１１７がそれに結合する、エピトープに結合し、任意に、ＳＩＲＰγバインダーは、ＳＩＲＰγへの結合に関して、ＳＩＲＰγに結合することが既知の参照抗体（例えば、ＯＸ１１７）と競合する。一部の実施形態において、ＳＩＲＰγバインダーは、ＳＩＲＰγへの結合に関して、ＯＸ１１７と競合する。種々の場合におけるＳＩＲＰγバインダーは、ＯＸ１１７と同じ又はそれ以上の親和性を有するＳＩＲＰγに結合する。一部の実施形態において、ＳＩＲＰγバインダーは、ＯＸ１１７、又はその抗原結合性断片である。図９Ｅは、ＳＩＲＰγと、ＯＸ１１７抗体のｆａｂと、の結合性相互作用の説明図を提供する。種々の態様におけるＳＩＲＰγバインダーは、ＳＩＲＰγのアミノ酸残基Ｑ８、Ｅ１０、Ｇ１０９、Ｋ１１、Ｌ１２、及びＤ１４９のうちの１つ又は複数と水素結合を形成する。種々の態様において、ＳＩＲＰγバインダーは、ＳＩＲＰγのアミノ酸残基Ｑ８、Ｅ１０、Ｇ１０９、Ｋ１１、Ｌ１２、及びＤ１４９のそれぞれと水素結合を形成する。任意に、ＳＩＲＰγバインダーは、ＣＤ４７結合部位と重複しないエピトープに結合する。

例示的な場合において、ＳＩＲＰγに結合すると、ＳＩＲＰγバインダーは、Ｔ細胞活性化、Ｔ細胞増殖及びサイトカイン分泌を増強する。一部の場合において、開示の方法は、コントロールに対していずれかの程度又はレベルまで、Ｔ細胞活性化、Ｔ細胞増殖及びサイトカイン分泌を増加する。例えば、一部の態様において、開示の方法によって提供される増加は、コントロールに対して、約１％～約１０％の増加（例えば、少なくとも又は約１％の増加、少なくとも又は約２％の増加、少なくとも又は約３％の増加、少なくとも又は約４％の増加、少なくとも又は約５％の増加、少なくとも又は約６％の増加、少なくとも又は約７％の増加、少なくとも又は約８％の増加、少なくとも又は約９％の増加、少なくとも又は約９．５％の増加、少なくとも又は約９．８％の増加、少なくとも又は約１０％の増加）である。例示的な実施形態において、開示の方法によって提供される増加は、コントロールに対して１００％を超える、例えば、２００％、３００％、４００％、５００％、６００％、７００％、８００％、９００％又は１０００％の増加である。例示的な実施形態において、Ｔ細胞活性化、Ｔ細胞増殖及びサイトカイン分泌は、コントロールに対して、少なくとも又は約１．５倍、少なくとも又は約２．０倍、少なくとも又は約３．０倍、少なくとも又は約４．０倍、少なくとも又は約５．０倍、少なくとも又は約１０．０倍、少なくとも又は約２５倍、少なくとも又は約５０倍、少なくとも又は約７５倍、又は少なくとも又は約１００倍以上増加する。種々の態様におけるコントロールは、ＳＩＲＰγへのＳＩＲＰγバインダーの結合がない、Ｔ細胞活性化、Ｔ細胞増殖及びサイトカイン分泌である。

例示的な場合において、ＳＩＲＰγバインダーは、ＳＩＲＰγに結合すると、ＳＩＲＰγの高次構造変化を起こす。種々の場合におけるＳＩＲＰγの高次構造変化は、結合パートナーの結合部位のアクセシビリティを変化させ得る。任意に、種々の態様における高次構造変化は、異なる結合パートナーがＳＩＲＰγに結合することも可能にする。さらに、又はその代わりとして、高次構造変化は、ＳＩＲＰγ分子の二量体化又は多量体化を起こし得る。例示的な態様において、ＳＩＲＰγの二量体化又は多量体化は、１つ又は複数の結合パートナーがＳＩＲＰγに結合することを防ぐ。例示的な態様において、ＳＩＲＰγの二量体化又は多量体化は、ＳＩＲＰγに結合する１つ又は複数の結合パートナーの結合を増強する。種々の場合において、ＳＩＲＰγバインダーは同時に、２つのＳＩＲＰγ分子に結合するか、又はＳＩＲＰγ二量体化を促進する。

本明細書において使用される「治療」という用語並びにそれに関連する言葉は、１００％の治療又は完全な治療を必ずしも意味しない。むしろ、潜在的な利点又は治療効果を有することが当業者によって認識される、様々な程度の治療がある。これに関して、本開示の癌を治療する方法は、いずれかの量又はいずれかのレベルの治療を提供することができる。さらに、本開示の方法によって提供される治療は、治療される癌の１つ又は複数の病状又は症状又は兆候の治療を含み得る。また、本開示の方法によって提供される治療は、癌の進行を遅らせることを含み得る。例えば、この方法は、Ｔ細胞活性（例えば、Ｔ細胞エフェクター活性）の増加又は腫瘍若しくは癌に対する免疫応答の増加、腫瘍若しくは癌増殖又は全身腫瘍組織量の低減、腫瘍細胞の拡散転移の低減、腫瘍若しくは癌細胞の細胞死の増加、又は腫瘍退縮の増加、Ｔ細胞抑制活性の低減等によって、癌を治療することができる。上述のことに従って、腫瘍又は癌を有する対象においてＴ細胞のエフェクター活性を増加する、又は抑制活性を低減する方法が本明細書において提供される。例示的な実施形態において、その方法は、対象においてエフェクター活性を増加する、又は抑制活性を低減するのに有効な量で、対象にＳＩＲＰγ阻害剤を投与することを含む。また、上述のことに従って、対象における腫瘍又は癌に対する免疫応答を高める方法が本明細書において提供される。例示的な実施形態において、その方法は、腫瘍又は癌に対する免疫応答を高めるのに有効な量でＳＩＲＰγ阻害剤を対象に投与することを含む。

種々の態様において、その方法は、癌の発症又は再発を少なくとも１日、２日、４日、６日、８日、１０日、１５日、３０日、２ヵ月、３ヵ月、４ヵ月、６ヵ月、１年、２年、３年、４年、又はそれ以上遅らせる目的で治療する。種々の態様において、その方法は、対象の生存期間を増加する目的で治療する。例示的な態様において、本開示の方法は、拡散転移の出現又は発症を遅らせる目的で治療を提供する。種々の場合において、その方法は、新たな拡散転移の出現又は発症を遅らせる目的で治療を提供する。

ＳＩＲＰγバインダー医薬組成物、投与の経路及びタイミング
以下の実施形態では、ＳＩＲＰγに結合する、本発明の抗原結合性タンパク質（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）の医薬組成物、その投与の経路及びタイミングが開示される。一部の実施形態において、抗原結合性タンパク質は、ＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）である。

一部の実施形態において、ＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）は、医薬組成物の一部として対象に投与される。他の実施形態において、医薬組成物は、ＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー若しくはＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）又は薬剤として許容されるその塩を含む。種々の態様において、ＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）の薬剤として許容される塩は、ＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）を最終的に単離及び精製する間にその場で調製され、或いは適切な酸と遊離塩基官能基を反応させて別々に調製される。薬剤として許容される酸付加塩を形成するために用いることができる酸の例としては、例えば、無機酸、例えば、塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、及びリン酸、及び有機酸、例えば、シュウ酸、マレイン酸、コハク酸、及びクエン酸が挙げられる。種々の態様における酸付加塩としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、ショウ脳酸塩、カンファースルホン酸塩、ジグルコン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２－ヒドロキシエタンスルホン酸塩（イソチオネート（ｉｓｏｔｈｉｏｎａｔｅ））、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３－フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、リン酸塩、グルタミン酸塩、重炭酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩及びウンデカン酸塩である。

種々の態様において、ＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）の薬剤として許容される塩は、塩基付加塩である。塩基付加塩もまた、ＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）を最終的に単離及び精製する間に、或いは薬剤として許容される金属カチオンの水酸化物、炭酸塩若しくは重炭酸塩など適切な塩基と、又はアンモニア若しくは有機第１級、第２級、若しくは第３級アミンと、カルボン酸含有部位との反応によって、その場で製造することもできる。種々の場合において、ＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）の薬剤として許容される塩は、アルカリ金属又はアルカリ土類金属、例えば、特にリチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、及びアルミニウム塩等、並びに非毒性第４級アンモニア、及びアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアンモニウム、ジメチルアンモニウム、トリメチルアンモニウム、トリエチルアンモニウム、ジエチルアンモニウム、及びエチルアンモニウムなどのアミンカチオンをベースとするカチオンである。塩基付加塩の形成に有用な他の代表的な有機アミンとしては、例えば、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペリジン、ピペラジン等が挙げられる。さらに、塩基性窒素含有基は、塩化、臭化、及びヨウ化メチル、エチル、プロピル、及びブチルなどの低級アルキルハロゲン化物；塩化、臭化、及びヨウ化メデシル、ラウリル、ミリスチル、及びステアリルなどの長鎖ハロゲン化物；臭化ベンジル及びフェネチルなどのアリールアルキルハロゲン化物などとしてのかかるＳＩＲＰγ阻害剤で四級化され得る。それによって、水溶性又は油溶性又は分散性生成物が得られる。

種々の態様において、本発明に開示の方法の、ＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）は、対象に投与する前に、薬剤として許容される担体、希釈剤、又は賦形剤と配合される。投与経路及び他の因子に応じて、特定のＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）は、例えば、酸性化剤、添加剤、吸着剤、エアロゾル噴射剤、空気置換剤（ａｉｒ ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ ａｇｅｎｔ）、アルカリ化剤、固化防止剤、抗凝固薬、抗菌の保存剤、酸化防止剤、防腐剤、塩基、バインダー、緩衝剤、キレート剤、コーティング剤、着色剤、乾燥剤、清浄剤、希釈剤、消毒剤、崩壊剤、分散剤、溶解向上剤、染料、皮膚軟化剤、乳化剤、エマルジョン安定剤、充填剤、皮膜形成剤、香味向上剤、着香剤、流動性向上剤、ゲル化剤、造粒剤、湿潤剤（ｈｕｍｅｃｔａｎｔ）、滑沢剤、粘膜付着性、軟膏ベース、軟膏、油性賦形剤、有機塩基、口中錠ベース、顔料、可塑剤、研磨剤（ｐｏｌｉｓｈｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、保存剤、金属イオン封鎖剤、皮膚浸透剤、可溶化剤、溶媒、安定剤、坐剤ベース、表面活性剤、界面活性剤、懸濁化剤、甘味剤、治療薬、増粘剤、等張化剤、毒性剤、粘度向上剤、吸水剤、水混和性共溶媒、水軟化剤、又は湿潤剤（ｗｅｔｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）などの１種又は複数種の更なる薬剤として許容される成分と混合され得る。

本発明に開示の方法のＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）は、いずれかの適切な投与経路を経て、対象に投与することができる。例えば、ＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）は、非経口的、経鼻、経口、肺内、局所、経腟、又は経直腸投与を介して対象に投与することができる。投与経路についての以下の考察は、例示的な実施形態を単に説明するために提供され、いずれにしてもその範囲を制限すると解釈すべきではない。

例示的な態様において、本発明に開示の方法の、ＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）は、非経口投与用に配合される。「非経口」という用語は、消化管を通してではなく、皮下、筋肉内、髄腔内、又は静脈内などの他の経路によることを意味する。非経口投与に適した配合物としては、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤、意図するレシピエントの血液との等張性を配合物に付与する溶質を含有し得る、水性及び非水性、等張性滅菌注入溶液、並びに懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤、及び保存剤を含み得る水性及び非水性滅菌懸濁液が挙げられる。ＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）は、薬剤として許容される界面活性剤、例えば石鹸若しくは洗浄剤、懸濁化剤、例えばペクチン、カルボマー、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、又はカルボキシメチルセルロース、又は乳化剤及び他の薬剤補助剤を添加して、或いは添加することなく、水、生理食塩水、水性ブドウ糖及び関連する糖溶液、エタノール若しくはヘキサデシルアルコールなどのアルコール、プロピレングリコール若しくはポリエチレングリコールなどのグリコール、ジメチルスルホキシド、グリセロール、２，２－ジメチル－ｌ５３－ジオキソラン－４－メタノールなどのケタール、エーテル、ポリ（エチレングリコール）４００、オイル、脂肪酸、脂肪酸エステル若しくはグリセリド、又はアセチル化脂肪酸グリセリドなどの滅菌液体又は液体の混合物など、薬剤担体中の生理学的に許容される希釈剤と共に投与され得る。非経口配合物において使用することができるオイルとしては、石油、動物油、植物油又は合成油が挙げられる。オイルの具体的な例としては、ラッカセイ、ダイズ、ゴマ、綿実、トウモロコシ、オリーブ油、ペトロラタム、及び鉱油が挙げられる。非経口配合物においての使用に適した脂肪酸としては、オレイン酸、ステアリン酸、及びイソステアリン酸が挙げられる。オレイン酸エチル及びミリスチン酸イソプロピルは、適切な脂肪酸エステルの例である。例示的な態様において、非経口投与用の配合物としては、石鹸が挙げられる。非経口配合物においての使用に適した石鹸としては、脂肪性アルカリ金属、アンモニウム、及びトリエタノールアミン塩が挙げられ、適切な界面活性剤としては、（ａ）例えば、ジメチルジアルキルアンモニウムハロゲン化物、及びアルキルピリジニウムハロゲン化物などのカチオン性界面活性剤、（ｂ）例えば、アルキル、アリール、及びオレフィンスルホン酸塩、アルキル、オレフィン、エーテル、及びモノグリセリド硫酸塩、及びスルホコハク酸塩などのアニオン性界面活性剤、（ｃ）例えば、脂肪族アミン酸化物、脂肪酸アルカノールアミド、及びポリオキシエチレンポリプロピレンコポリマーなどの非イオン性界面活性剤、（ｄ）例えば、アルキル－β－アミノプロピオン酸塩、及び２－アルキル－イミダゾリン第４級アンモニウム塩などの両性界面活性剤、及び（ｅ）その混合物が挙げられる。例示的な場合において、保存剤及び緩衝剤が非経口的配合物中に存在する。注入部位での刺激作用を最小限にする、又は除くために、かかる組成物は、親水親油バランス（ＨＬＢ）約１２～約１７を有する、１種又は複数種の非イオン界面活性剤を含有し得る。かかる配合物中の界面活性剤の量は通常、約５～約１５重量％の範囲である。適切な界面活性剤としては、ポリエチレングリコールソルビタン脂肪酸エステル、例えばモノオレイン酸ソルビタン、及びプロピレングリコールとのプロピレンオキシドの縮合によって形成される、エチレンオキシドと疎水性塩基との高分子量付加物が挙げられる。一部の態様における非経口配合は、アンプル、及びバイアル、シリンジなどの１回量又は複数回量密閉容器内にあり、且つ使用直前に注入するための、滅菌液体賦形剤、例えば水のみ添加する必要があるフリーズドライ（凍結乾燥）条件で保管することができる。一部の態様における即時調合注入溶液及び懸濁液は、先に記述される種類の滅菌粉末、顆粒、及び錠剤から調製される。

例示的な態様において、ＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）は、注入用に配合される。注射可能の配合物は本開示に従う。注射可能な組成物に有効な薬剤担体の条件は当業者にはよく知られている（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｙ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ，Ｂａｎｋｅｒ ａｎｄ Ｃｈａｌｍｅｒｓ，ｅｄｓ．，ｐａｇｅｓ ２３８－２５０（１９８２）、及びＡＳＨＰ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｎ Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ Ｄｒｕｇｓ，Ｔｏｉｓｓｅｌ，４ｔｈ ｅｄ．，ｐａｇｅｓ ６２２－６３０（１９８６）参照）。

任意に、ＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）は、皮下注射によって対象に投与される。

種々の場合において、ＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）は、対象に経口投与される。経口投与に適した配合物は、（ａ）液体溶液、例えば、水、生理食塩水若しくはオレンジジュースなどの希釈剤に溶解された本開示の有効量の類似物；（ｂ）それぞれが固体若しくは顆粒として、所定量の活性成分を含有する、カプセル剤、サッシェ、錠剤、口中錠、及びトローチ剤；（ｃ）粉末；（ｄ）適切な液体中の懸濁液；及び（ｅ）適切なエマルジョンからなり得る。液体配合物は、薬剤として許容される界面活性剤を添加した、又は添加しない、希釈剤、例えば水、及びアルコール、例えば、エタノール、ベンジルアルコール、及びポリエチレンアルコールを含み得る。カプセル形態は、例えば、界面活性剤、滑沢剤、及び不活性充填剤、例えばラクトース、ショ糖、リン酸カルシウム、及びトウモロコシデンプンを含有する、通常のハード若しくはソフトシェルゼラチンタイプであり得る。錠剤の形態は、ラクトース、ショ糖、マンニトール、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、アルギン酸、微結晶性セルロース、アカシア、ゼラチン、ガーゴム、コロイド状二酸化ケイ素、クロスカルメロースナトリウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、及び他の賦形剤、着色剤、希釈剤、緩衝剤、崩壊剤、湿潤剤、保存剤、着香剤、及び他の薬理学的に適合性の賦形剤のうちの１つ又は複数を含み得る。口中錠の形態は、香味、通常ショ糖及びアカシア又はトラガカントゴムにおいて本開示の類似物を含み得て、且つトローチ（ｐａｓｔｉｌｌｅ）は、当技術分野で公知の賦形剤の他に含有する、ゼラチン及びグリセリン、又はショ糖及びアカシア、エマルジョン、ゲル等の不活性ベース中に本開示の類似物を含む。

ＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）は、例えば、毎日（１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、１日５回、１日６回）、週に３回、週に２回、２日毎、３日毎、４日毎、５日毎、６日毎、毎週、隔週、３週毎、毎月、又は隔月など、いずれかの投与計画に従って投与され得る。

投与量
以下の実施形態では、ＳＩＲＰγに結合する本発明の抗原結合性タンパク質（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）の投与量を開示する。一部の実施形態において、抗原結合性タンパク質は、ＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）である。

ＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）は、本明細書に記載のように、Ｔ細胞のエフェクター活性を増加する、又は抑制活性を低減する、或いは対象において腫瘍若しくは癌に対する免疫応答を増加する方法に有用であると考えられ、したがって、１つ又は複数の疾患、例えば癌を治療又は予防する方法において有用であると考えられる。投与されるＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー若しくはＳＩＲＰγ阻害剤、又は抗原結合性タンパク質（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）の量又は用量は、妥当な時間枠にわたって対象又は動物において、例えば治療的又は予防的応答をもたらすのに十分であるべきである。例えば、ＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー若しくはＳＩＲＰγ阻害剤、又は抗原結合性タンパク質（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）（例えば、ＳＩＲＰγ阻害剤）の用量は、投与した時点から、約１～約４日間又は約１～約４週間以上、例えば、約５～約２０週間以上の期間、癌を治療するのに十分であるべきである。特定の実施形態において、その期間はさらに長くなり得る。用量は、特定の作用薬の有効性、及び治療される動物（例えば、ヒト）の状態、並びに治療される動物（例えば、ヒト）の体重によって決定されるだろう。

投与量を決定する多くのアッセイが当技術分野で公知である。本明細書における目的では、ＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー若しくはＳＩＲＰγ阻害剤、又は抗原結合性タンパク質（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）を所定の用量で、各セットが異なる用量で与えられる、セットの哺乳動物の中の哺乳動物に投与した場合の、活性化Ｔ細胞によるＩＦＮγの分泌を比較することを含むアッセイを用いて、臨床試験において哺乳動物に投与される開始用量を決定することができる。活性化Ｔ細胞によるＩＦＮγの分泌を測定する方法は、当技術分野で公知であり、本明細書に記述される。

ＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー若しくはＳＩＲＰγ阻害剤、又は抗原結合性タンパク質（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）の用量は、特定の作用薬の投与に伴い得る有害な副作用の存在、性質及び程度によって決定される。通常、主治医が、年齢、体重、全身の健康状態、食餌、性別、投与されるべきＳＩＲＰγバインダー、ＳＩＲＰγ阻害剤、又はＳＩＲＰγに結合する抗原結合性タンパク質（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）、投与経路、及び治療される症状の重症度など様々な因子を考慮して、個々の患者を、それを用いて治療する、ＳＩＲＰγバインダー、ＳＩＲＰγ阻害剤、又はＳＩＲＰγに結合する抗原結合性タンパク質（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）の投薬量を決定する。一例として、及び本開示に制限することを意図せず、本発明に開示の方法のＳＩＲＰγバインダー、ＳＩＲＰγ阻害剤、又はＳＩＲＰγに結合する抗原結合性タンパク質（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）の用量は、約０．０００１～約１ｇ／ｋｇ（治療される対象の体重／日）、約０．０００１～約０．００１ｇ／ｋｇ体重／日、又は約０．０１ｍｇ～約１ｇ／ｋｇ体重／日であり得る。

放出制御配合物
以下の実施形態に、ＳＩＲＰγに結合する本発明の抗原結合性タンパク質（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）の放出制御配合物が開示される。一部の実施形態において、抗原結合性タンパク質は、ＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）である。

一部の実施形態において、本明細書に記載のようにＳＩＲＰγに結合する、ＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）は、デポー剤形へと修飾することができ、その結果その様式では、それが投与される体内へと、時間及び体内での位置に関してコントロールされて作用薬が放出される（例えば、米国特許第４，４５０，１５０号明細書参照）。ＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）のデポー剤形は、ＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）と、ポリマーなどの多孔性若しくは非多孔性材料を含む、例えば植込み可能な組成物であり得て、ＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）は、材料によって封入される、又は材料全体を通して、及び／若しくは非多孔性材料の分解を通じて拡散される。次いで、デポー剤は、対象の体内の目的位置へ埋め込まれ、ＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）は、所定の速度で植込錠から放出される。

種々の態様において、ＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）を含む医薬組成物は、生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）の放出プロファイルのいずれかのタイプを有するように修飾され得る。一部の態様において、医薬組成物は、即時放出、放出制御、徐放性（ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ）、徐放性（ｅｘｔｅｎｄｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ）、遅延放出、又は２相性放出配合物である。放出制御用のペプチドを製剤化する方法は、当技術分野で公知である。例えば、Ｑｉａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｐｈａｒｍ ３７４：４６－５２（２００９）及び国際特許出願公開第２００８／１３０１５８号パンフレット、国際特許出願公開第２００４／０３３０３６号パンフレット；国際特許出願公開第２０００／０３２２１８号パンフレット；及び国際特許出願公開第１９９９／０４０９４２号パンフレットを参照のこと。

種々の場合において、ＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）を含む医薬組成物はさらに、長期間の貯蔵及び／又は送達作用のために、例えば、ミセル若しくはリポソームを、又は他のカプセル化形態を含み得る。

組み合わせ
以下の実施形態では、ＳＩＲＰγに結合する、本発明の抗原結合性タンパク質（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）の組み合わせが開示される。一部の実施形態において、抗原結合性タンパク質は、ＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）である。

種々の場合において、ＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤は、例えば更なる医薬活性を含まず、対象に単独で投与される。種々の態様において、ＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）は、化学療法薬と併せて対象に投与される。本発明に開示の方法での使用に適した化学療法薬は当技術分野で公知であり、限定されないが、米国特許第６，６３０，１２４号明細書に記載のように、白金配位化合物、トポイソメラーゼ阻害剤、抗生物質、有糸分裂阻害アルカロイド及びジフルオロヌクレオシドが挙げられる。

一部の実施形態において、化学療法薬は白金配位化合物である。「白金配位化合物」という用語は、イオン形態で白金を提供する、いずれかの腫瘍細胞増殖阻害化合物を意味する。一部の実施形態において、白金配位化合物は、シス－ジアミンジアクオ白金（ＩＩ）－イオン；クロロ（ジエチレントリアミン）－白金（ＩＩ）塩化物；ジクロロ（エチレンジアミン）－白金（ＩＩ）、ジアミン（１，１－シクロブタンジカルボキシラト）白金（ＩＩ）（カルボプラチン）；スピロプラチン；イプロプラチン；ジアミン（２－エチルマロナト）－白金（ＩＩ）；エチレンジアミンマロナト白金（ＩＩ）；アクア（１，２－ジアミノシクロヘキサン）－スルファト白金（ＩＩ）；（１，２－ジアミノシクロヘキサン）マロナト白金（ＩＩ）；（４－カロキシフタラト（ｃａｒｏｘｙｐｈｔｈａｌａｔｏ））（１，２－ジアミノシクロヘキサン）白金（ＩＩ）；（１，２－ジアミノシクロヘキサン）－（イソシトラト）白金（ＩＩ）；（１，２－ジアミノシクロヘキサン）シス（ピルバト）白金（ＩＩ）；（１，２－ジアミノシクロヘキサン）オキサラト白金（ＩＩ）；オルマプラチン；又はテトラプラチンである。

一部の実施形態において、シスプラチンは、本発明の組成物及び方法に用いられる白金配位化合物である。シスプラチンは、Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ－Ｓｑｕｉｂｂ ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎからＰＬＡＴＩＮＯＬ（商標）の名称で市販されており、水、滅菌生理食塩水又は他の適切な賦形剤で構成するための粉末として入手可能である。本発明において使用するのに適した他の白金配位化合物は公知であり、市販されており、且つ／又は既知の技術によって調製することができる。シスプラチン、又はシス－ジクロロジアミン白金ＩＩは、種々のヒト固形悪性腫瘍の治療において化学療法薬として長年にわたり上手く使用されてきた。最近では、他のジアミノ白金錯体も、種々のヒト固形悪性腫瘍の治療において化学療法薬として有効性を示している。かかるジアミノ白金錯体としては、限定されないが、スピロ白金及びカルボ白金が挙げられる。シスプラチン及び他のジアミノ白金錯体は、ヒトにおける化学治療剤として広く使用されてきたが、それらは高投与量レベルで送達されなければならず、このため腎臓障害などの毒性問題を引き起こし得る。

一部の実施形態では、化学療法薬はトポイソメラーゼ阻害剤である。トポイソメラーゼは、真核細胞のＤＮＡトポロジーを変更することができる酵素である。トポイソメラーゼは細胞機能及び細胞増殖に重要である。一般に、真核細胞には２つのクラスのトポイソメラーゼ、Ｉ型及びＩＩ型がある。トポイソメラーゼＩは、分子量がおよそ１００，０００の単量体酵素である。この酵素はＤＮＡに結合し、一過性の一本鎖切断を生じさせ、二重らせんをほどき（又は二重らせんがほどけるのを可能にし）、続いてＤＮＡ鎖から解離する前に、切断を再接合する。種々のトポイソメラーゼ阻害剤が、卵巣癌、乳癌、食道癌又は非小細胞肺癌に罹患しているヒトの治療において臨床的有効性を示している。

一部の態様において、トポイソメラーゼ阻害剤は、カンプトテシン又はカンプトテシン類似体である。カンプトテシンは、中国原産のＣａｍｐｔｏｔｈｅｃａ ａｃｃｕｍｉｎａｔａの木、及びインド原産のＮｏｔｈａｐｏｄｙｔｅｓ ｆｏｅｔｉｄａの木によって産生される、水不溶性細胞毒性アルカロイドである。カンプトテシンは、多くの腫瘍細胞の増殖を阻害する。カンプトテシン類似体クラスの化合物は一般に、ＤＮＡトポイソメラーゼＩの特異的な阻害剤である。カンプトテシン類似体クラスの化合物としては、限定されないが、トポテカン、イリノテカン及び９－アミノ－カンプトテシンが挙げられる。

更なる実施形態において、化学療法薬は、１９９１年４月２日に発行された米国特許第５，００４，７５８号明細書、及び２０’公報番号、欧州特許第０３２１１２２号明細書として１９８９年６月２１日に公開された欧州特許出願第８８３１１３６６．４号明細書；１９８６年８月５日に発行された米国特許第４，６０４，４６３号明細書、及び１９８５年４月１７日に公開された欧州特許出願公開第０１３７１４５号明細書；１９８４年９月２５日に発行された米国特許第４，４７３，６９２号明細書、及び１９８３年３月１６日に公開された欧州特許出願公開第００７４２５６号明細書；１９８５年１０月８日に発行された米国特許第４，５４５，８８０号明細書、及び１９８３年３月１６日に公開された欧州特許出願公開第００７４２５６号明細書；１９８３年９月１４日に公開された欧州特許出願公開第００８８６４２号明細書；Ｗａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２９，２３５８－２３６３（１９８６）；Ｎｉｔｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．１４ｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｇｒ．Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｋｙｏｔｏ，１９８５，Ｔｏｋｙｏ Ｐｒｅｓｓ，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｓｅｃｔｉｏｎ １，ｐ．２８－３０に請求されている、又は記載されている、腫瘍細胞増殖阻害カンプトテシン類似体であり、特にＣＰＴ－１１と呼ばれる化合物である。ＣＰＴ－１１は、４－（ピペリジノ）－ピペリジン側鎖が１０－ヒドロキシ－７－エチルカンプトテシンのＣ－１０にてカルバメート結合によって連結しているカンプトテシン類似体である。ＣＰＴ－１１は現在、ヒト臨床試験が行われており、イリノテカンとも呼ばれる；Ｗａｎｉ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２３，５５４（１９８０）；Ｗａｎｉ ｅｔ．ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３０，１７７４（１９８７）；１９８２年８月３日に発行された米国特許第４，３４２，７７６号明細書；１９９０年９月１３日に出願された米国特許出願第５８１，９１６号明細書、及び１９９１年３月２０日に公開された欧州特許出願公開第４１８０９９号明細書；１９８５年４月２３日に発行された米国特許第４，５１３，１３８号明細書、及び１９８３年３月２３日に公開された欧州特許出願公開第００７４７７０号明細書；１９８３年８月１６日に発行された米国特許第４，３９９，２７６号明細書、及び１９８２年７月２８日に公開された欧州特許出願公開第００５６６９２号明細書；そのそれぞれの開示内容全体が、参照により本明細書に組み込まれる。上記のカンプトテシン類似体クラスの化合物のすべては、市販されており、且つ／又は上記の参考文献に記載の技術を含む既知の技術によって調製することができる。トポイソメラーゼ阻害剤は、トポテカン、イリノテカン及び９－アミノカンプトテシンからなる群から選択され得る。

カンプトテシン類似体クラスの多くの化合物（その薬剤として許容される塩、含水化合物及び溶媒和化合物を含む）の調製、並びにカンプトテシン類似体クラスのかかる化合物と、不活性な薬剤として許容される担体又は希釈剤とを含む経口及び非経口医薬組成物の調製は、１９９１年４月２日に発行された米国特許第５，００４，７５８号明細書、及び欧州特許第０３２１１２２号明細書として１９８９年６月２１日に公開された欧州特許出願第８８３１１３６６．４号明細書に広範に記載されており、その教示は、参照により本明細書に組み込まれる。

さらに他の実施形態において、化学療法薬は抗生作用化合物である。適切な抗生物質としては、限定されないが、ドキソルビシン、マイトマイシン、ブレオマイシン、ダウノルビシン及びストレプトゾシンが挙げられる。

一部の実施形態では、化学治療剤は有糸分裂阻害アルカロイドである。一般に、有糸分裂阻害アルカロイドは、ニチニチソウ（Ｃａｎｔｈａｒａｎｔｈｕｓ ｒｏｓｅｕｓ）から抽出することができ、抗癌化学療法剤として有効であることが分かっている。多くの半合成誘導体が化学的及び薬理学的に研究されている（Ｏ．Ｖａｎ Ｔｅｌｌｉｎｇｅｎ ｅｔ ａｌ，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１２，１６９９－１７１６（１９９２）を参照）。本発明の有糸分裂阻害アルカロイドとしては、限定されないが、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、パクリタキセル（ＰＴＸ；タキソール（Ｔａｘｏｌ）（登録商標））及びビノレルビンが挙げられる。後者の２つの有糸分裂阻害アルカロイドは、それぞれＥｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ、及びＰｉｅｒｒｅ Ｆａｂｒｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから市販されている（米国特許第５，６２０，９８５号明細書参照）。本発明の例示的な態様において、有糸分裂阻害アルカロイドはビノレルビンである。

本開示の他の実施形態において、化学療法薬はジフルオロヌクレオシドである。２’－デオキシ－２’，２’－ジフルオロヌクレオシドは、抗ウイルス活性を有すると当技術分野において公知である。かかる化合物は、米国特許第４，５２６，９８８号明細書及び米国特許第４，８０８６１４号明細書に開示され、教示されている。欧州特許出願公開第１８４，３６５号明細書には、これらの同じジフルオロヌクレオシドが腫瘍崩壊活性を有することが開示されている。特定の態様において、本発明の組成物及び方法で使用される２’－デオキシ－２’，２’－ジフルオロヌクレオシドは、ゲムシタビン塩酸塩としても知られる２’－デオキシ－２’，２’－ジフルオロシチジン塩酸塩である。ゲムシタビンは市販されており、又は米国特許第４，５２６，９８８号明細書、米国特許第４，８０８，６１４号明細書、及び米国特許第５，２２３，６０８号明細書に開示され、教示されている多段階プロセスで合成することができ、これらの教示は参照により本明細書に組み込まれる。

例示的な態様において、その化学療法薬はホルモン療法剤である。例示的な場合において、ホルモン療法剤は、例えば、レトロゾール、タモキシフェン、バゼドキシフェン、エキセメスタン、リュープロレリン、ゴセレリン、フルベストラント、アナストロゾール、又はトレミフェンである。例示的な態様において、ホルモン療法剤は、黄体形成ホルモン（ＬＨ）遮断薬、例えば、ゴセレリン、又はＬＨ放出ホルモン（ＲＨ）アゴニストである。例示的な態様において、ホルモン療法剤は、ＥＲ標的化剤（例えば、フルベストラント又はタモキシフェン）、ラパマイシン、ラパマイシン類似体（例えば、エベロリムス、テムシロリムス、リダフォロリムス（ｒｉｄａｆｏｒｏｌｉｍｕｓ）、ゾタロリムス（ｚｏｔａｒｏｌｉｍｕｓ）、及び３２－デキソ－ラパマイシン）、抗ＨＥＲ２薬（例えば、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ラパチニブ、Ｔ－ＤＭ１、又はネラチニブ）又はＰＩ３Ｋ阻害剤（例えば、タセリシブ（ｔａｓｅｌｉｓｉｂ）、アルペリシブ（ａｌｐｅｌｉｓｉｂ）又はブパリシブ（ｂｕｐａｒｌｉｓｉｂ））である。

例示的な態様において、化学療法薬は、パルボシクリブ（ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ）、リボシクリブ（ｒｉｂｏｃｉｃｌｉｂ）、又はアベマシクリブ（ａｂｅｍａｃｉｃｌｉｂ）などのＣＤＫ４／６阻害剤である（例えば、Ｋｎｕｄｓｅｎ ａｎｄ Ｗｉｔｋｉｅｗｉｃｚ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｃａｎｃｅｒ ３（１）：３９－５５（２０１７）参照）。

対象
本開示の例示的な実施形態において、対象は、限定されないが、マウス及びハムスターなどのげっ歯目（ｏｒｄｅｒ Ｒｏｄｅｎｔｉａ）の哺乳動物、及びウサギなどの兎形目（ｏｒｄｅｒ Ｌｏｇｏｍｏｒｐｈａ）の哺乳動物、ネコ科（ネコ）及びイヌ科（イヌ）を含む食肉目（ｏｒｄｅｒ Ｃａｒｎｉｖｏｒａ）の哺乳動物、ウシ科（ウシ）及びイノシシ科（ブタ）を含む偶蹄目（ｏｒｄｅｒ Ａｒｔｉｏｄａｃｔｙｌａ）の哺乳動物、又はウマ科（ウマ）を含む奇蹄目（ｏｒｄｅｒ Ｐｅｒｓｓｏｄａｃｔｙｌａ）の哺乳動物を含む哺乳動物である。一部の態様において、哺乳動物は、霊長目（ｏｒｄｅｒ Ｐｒｉｍａｔｅｓ）、セボイド（Ｃｅｂｏｉｄ）目若しくはシモイド（Ｓｉｍｏｉｄ）目（サル）の哺乳動物、又は類人猿科（ヒト及び類人猿）の哺乳動物である。一部の態様において、哺乳動物はヒトである。

例示的な態様において、対象は癌又は腫瘍を有する。一部の態様における癌は、急性リンパ性癌、急性骨髄性白血病、胞巣状横紋筋肉腫、骨癌、脳腫瘍、乳癌、肛門、肛門管若しくは肛門直腸の癌、眼球の癌、肝内胆管癌、関節の癌、頚部、胆嚢、若しくは胸膜の癌、鼻、鼻腔、若しくは中耳の癌、口腔癌、外陰部の癌、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性癌、結腸癌、食道癌、子宮頚癌、胃腸のカルチノイド腫瘍、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、腎臓癌、喉頭癌、肝癌、肺癌、悪性中皮腫、黒色腫、多発性骨髄腫、上咽頭癌、非ホジキンリンパ腫、卵巣の癌、膵臓癌、腹膜、網、及び腸間膜癌、咽頭癌、前立腺癌、直腸の癌、腎臓の癌（例えば、腎細胞癌（ＲＣＣ））、小腸癌、軟部組織癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、輸尿管癌、及び泌尿器の膀胱癌からなる群から選択される癌である。特定の態様において、癌は、頭頸部癌、卵巣癌、頚部癌、膀胱癌及び食道癌、膵臓癌、胃腸癌、胃癌、乳癌、子宮内膜癌及び結腸直腸癌、肝細胞癌、膠芽腫、膀胱癌、肺癌、例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、細気管支肺胞上皮癌からなる群から選択される。特定の実施形態において、腫瘍は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、頭頚部癌、腎臓癌、トリプルネガティブ乳癌、又は胃癌である。例示的な態様において、対象は、腫瘍（例えば、固形腫瘍、血液悪性腫瘍、又はリンパ性悪性疾患）を有し、医薬組成物が、対象における腫瘍を治療するのに有効な量で対象に投与される。他の例示的な態様において、腫瘍は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、頭頚部癌、腎臓癌、乳癌、黒色腫、卵巣癌、肝癌、膵臓癌、結腸癌、前立腺癌、胃癌、リンパ腫又は白血病であり、医薬組成物が、対象における腫瘍を治療するのに有効な量で対象に投与される。

任意に、対象は、肝細胞癌（ＨＣＣ）、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、肺癌、任意に非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する。

免疫抑制の軽減及び免疫応答の増強
特定の理論に束縛されるものではないが、本明細書に記載のＳＩＲＰγに結合する抗原結合性タンパク質（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）は、Ｔ細胞のエフェクター活性を増加し、又はＴ細胞の抑制活性を低減するのに有用である。一部の実施形態において、抗原結合性タンパク質はＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤である。また、本明細書に記載のＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）は、腫瘍又は癌に対する免疫応答を高めるのに有用であると仮定される。したがって、本開示は、腫瘍又は癌を有する対象においてＴ細胞のエフェクター活性を増加し、又はＴ細胞の抑制活性を低減する方法を提供する。例示的な実施形態において、その方法は、ＳＩＲＰγに結合する抗原結合性タンパク質（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）を、対象においてエフェクター活性を増加し、又は抑制活性を低減するのに有効な量で対象に投与することを含む。一部の実施形態において、抗原結合性タンパク質は、ＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤である。また、本開示はそれに応じて、対象において腫瘍若しくは癌に対する免疫応答を高める方法を提供する。例示的な実施形態において、その方法は、ＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）を、腫瘍若しくは癌に対する免疫応答を高めるのに有効な量で対象に投与することを含む。

本開示の方法によって提供されるＴ細胞のエフェクター活性の増加は、コントロールに対して少なくとも又は約１％～約１０％の増加（例えば、少なくとも又は約１％の増加、少なくとも又は約２％の増加、少なくとも又は約３％の増加、少なくとも又は約４％の増加、少なくとも又は約５％の増加、少なくとも又は約６％の増加、少なくとも又は約７％の増加、少なくとも又は約８％の増加、少なくとも又は約９％の増加、少なくとも又は約９．５％の増加、少なくとも又は約９．８％の増加、少なくとも又は約１０％の増加）であり得る。本開示の方法によって提供されるＴ細胞のエフェクター活性の増加は、コントロールに対して少なくとも又は約１０％～約９５％を超える増加（例えば、少なくとも又は約１０％の増加、少なくとも又は約２０％の増加、少なくとも又は約３０％の増加、少なくとも又は約４０％の増加、少なくとも又は約５０％の増加、少なくとも又は約６０％の増加、少なくとも又は約７０％の増加、少なくとも又は約８０％の増加、少なくとも又は約９０％の増加、少なくとも又は約９５％の増加、少なくとも又は約９８％の増加、少なくとも又は約９９％の増加、又は約１００％の増加）であり得る。例示的な態様において、コントロールは、ＳＩＲＰγに結合する本発明に開示のＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）で治療されてない、癌若しくは腫瘍又は対象若しくは対象の集団であり、或いはその対象又は対象の集団はプラシーボで処置された。

本開示の方法によって提供される腫瘍又は癌に対する免疫応答の増加は、コントロールに対して、少なくとも又は約１％～約１０％の増加（例えば、少なくとも又は約１％の増加、少なくとも又は約２％の増加、少なくとも又は約３％の増加、少なくとも又は約４％の増加、少なくとも又は約５％の増加、少なくとも又は約６％の増加、少なくとも又は約７％の増加、少なくとも又は約８％の増加、少なくとも又は約９％の増加、少なくとも又は約９．５％の増加、少なくとも又は約９．８％の増加、少なくとも又は約１０％の増加）であり得る。本開示の方法によって提供される腫瘍又は癌に対する免疫応答の増加は、コントロールに対して、少なくとも又は約１０％～約９５％を超える増加（例えば、少なくとも又は約１０％の増加、少なくとも又は約２０％の増加、少なくとも又は約３０％の増加、少なくとも又は約４０％の増加、少なくとも又は約５０％の増加、少なくとも又は約６０％の増加、少なくとも又は約７０％の増加、少なくとも又は約８０％の増加、少なくとも又は約９０％の増加、少なくとも又は約９５％の増加、少なくとも又は約９８％の増加、少なくとも又は約９９％の増加、又は約１００％の増加）であり得る。例示的な態様において、コントロールは、本発明に開示のＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）で治療されてない、癌若しくは腫瘍又は対象若しくは対象の集団であり、或いはその対象又は対象の集団はプラシーボで処置された。

本開示の方法によって提供されるＴ細胞の抑制活性の低減は、コントロールに対して、少なくとも又は約１％～約１０％の低減（例えば、少なくとも又は約１％の低減、少なくとも又は約２％の低減、少なくとも又は約３％の低減、少なくとも又は約４％の低減、少なくとも又は約５％の低減、少なくとも又は約６％の低減、少なくとも又は約７％の低減、少なくとも又は約８％の低減、少なくとも又は約９％の低減、少なくとも又は約９．５％の低減、少なくとも又は約９．８％の低減、少なくとも又は約１０％の低減）であり得る。本開示の方法によって提供されるＴ細胞の抑制活性の低減は、コントロールに対して、少なくとも又は約１０％～９５％を超える低減（例えば、少なくとも又は約１０％の低減、少なくとも又は約２０％の低減、少なくとも又は約３０％の低減、少なくとも又は約４０％の低減、少なくとも又は約５０％の低減、少なくとも又は約６０％の低減、少なくとも又は約７０％の低減、少なくとも又は約８０％の低減、少なくとも又は約９０％の低減、少なくとも又は約９５％の低減、少なくとも又は約９８％の低減、少なくとも又は約９９％の低減、又は約１００％の低減）であり得る。例示的な態様において、コントロールは、本発明に開示のＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）で治療されてない、癌若しくは腫瘍又は対象若しくは対象の集団であり、或いはその対象又は対象の集団はプラシーボで処置された。

Ｔ細胞のエフェクター活性を増加する、又は抑制活性を低減する方法に関して、種々の態様におけるＴ細胞は、腫瘍又は腫瘍微小環境内に位置し、任意に、Ｔ細胞は腫瘍浸潤Ｔ細胞である。一部の態様において、Ｔ細胞は制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）である。種々の態様において、Ｔ細胞は消耗Ｔ細胞、任意に、消耗ＣＤ８＋ Ｔ細胞である。特定の場合において、Ｔ細胞は記憶細胞であり、任意に、記憶細胞はＣＤ８＋記憶細胞又はＣＤ４＋中枢記憶細胞である。

腫瘍若しくは癌に対する免疫応答を増加する方法に関して、免疫応答は、種々の態様においてＴ細胞によって仲介される。任意に、Ｔ細胞は、腫瘍又は腫瘍微小環境内に位置する。種々の場合において、Ｔ細胞は腫瘍浸潤Ｔ細胞である。一部の態様において、Ｔ細胞は制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）である。種々の態様において、Ｔ細胞は消耗Ｔ細胞、任意に、消耗ＣＤ８＋ Ｔ細胞である。特定の場合において、Ｔ細胞は記憶細胞であり、任意に、記憶細胞はＣＤ８＋記憶細胞又はＣＤ４＋中枢記憶細胞である。

例示的な態様において、Ｔ細胞のエフェクター活性を増加する、又は抑制活性を低減する本発明に開示の方法、或いは腫瘍若しくは癌に対する免疫応答を増加する本発明に開示の方法の対象は、本明細書に記載の対象である。種々の態様において、対象は腫瘍若しくは癌を有する。任意に、対象は、肝細胞癌（ＨＣＣ）、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、肺癌、任意に、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、又は乳癌を有する。

特定の理論に束縛されるものではないが、対象におけるＴ細胞のエフェクター活性の増加又は抑制活性の低減、及び／又は腫瘍若しくは癌に対する免疫応答の増加によって、対象において腫瘍若しくは癌の治療が導かれる。したがって、本開示はさらに、腫瘍又は癌を有する対象を治療する方法を提供する。例示的な実施形態において、その方法は、対象におけるＴ細胞のエフェクター活性の増加又は抑制活性の低減、及び／又は対象における腫瘍又は癌に対する免疫応答の増加を含む。ＳＩＲＰγに結合するＳＩＲＰγバインダー又はＳＩＲＰγ阻害剤（例えば、抗体又はその抗原結合性断片）を対象に投与することを含む、上述の治療方法の考察及び詳細は、本明細書に記述される治療方法（対象におけるＴ細胞のエフェクター活性の増加又は抑制活性の低減、及び／又は対象における腫瘍又は癌に対する免疫応答の増加を含む）に該当する。

以下の実施例は本発明を単に例証するために示され、その範囲を決して制限するものではない。

以下に記載の研究では、ヒトにおけるＳＩＲＰγのＴ細胞特異的な発現パターンが確認される。Ｔ細胞の大部分がＳＩＲＰγを高度に発現するが、興味深いことに、記憶ＣＤ８ Ｔ細胞及び腫瘍浸潤ＣＤ８消耗細胞は、他のＴ細胞と比較して、ＳＩＲＰγの高い発現を示した。乳房腫瘍及び黒色腫腫瘍組織からのＣＤ８ ＴＩＬのキャラクタリゼーションについての以前の研究から、腫瘍ＣＤ８ ＴＩＬは主にエフェクター記憶細胞であることが示唆されている。記憶Ｔ細胞と消耗Ｔ細胞の両方でのＳＩＲＰγ発現パターンが高いことから、ＳＩＲＰγは、腫瘍環境内でＴ細胞エフェクター機能にネガティブに影響し得ることが示唆される。興味深いことに、本明細書における生体外機能データは、この仮説と一致し、ＳＩＲＰγがＴ細胞エフェクター機能の負の制御因子であることが確認される。さらに、ＳＩＲＰγはＴｒｅｇ抑制機能を高めた。これらのデータから、Ｔ細胞及びＴｒｅｇの両方でＳＩＲＰγを標的化して腫瘍に対する免疫応答を向上させることによる、潜在的な治療的介入への洞察が得られる。

実施例１
以下の実施例に、実施例で使用される材料及び方法が記載される。

細胞の調製及びＭＡＣＳビーズ選別：Ｆｉｃｏｌｌ Ｈｙｐａｑｕｅ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇ，ＰＡ）密度勾配を用いて、健康なドナーからの血液試料から、ＰＢＭＣを単離した。Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ｍｉｃｒｏｂｅａｄ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｋｉｔｓ（＃１３０－０９６－５３５及び１３０－０９６－４９５、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して、製造元説明書に従ってＰａｎＴ細胞及びＣＤ８ Ｔ細胞をＰＢＭＣから単離した。ヒト調節性Ｔ細胞を単離するために、ヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞単離キット（Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｋｉｔ）（１３０－０９６－５３３、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して、ＰＢＭＣからＣＤ４＋ Ｔ細胞を単離し、続いて製造元のプロトコルに従ってＣＤ２５マイクロビーズ（１３０－０９２－９８３，Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）でＣＤ２５＋ Ｔ細胞をＭＡＣＳマイクロビーズした。最後に、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７－ヒト調節性Ｔ細胞をＦＡＣＳ選別した。選別されたｐａｎＴ、ＣＤ８及びＴｒｅｇ細胞を、ダウンストリーム機能アッセイにかけた。

ＣＤ８消耗の生体外での誘導：精製ヒトＣＤ８ Ｔ細胞を１～２×１０^６細胞／ｍｌでシーディングし、抗ＣＤ３（ＵＣＨＴ１、０．２μｇ／ｍｌ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及び抗ＣＤ２８（ＣＤ２８．２、２μｇ／ｍｌ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）刺激に３～４日間かけた。抗ＣＤ３（ＵＣＨＴ１、１μｇ／ｍｌ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及び抗ＣＤ２８（ＣＤ２８．２、２μｇ／ｍｌ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で、ＣＤ８ Ｔ細胞を３～４日ごとに再刺激した。上述のように、細胞を少なくとも２ラウンド、再刺激にかけた。

フローサイトメトリー抗体染色：多色フローサイトメトリー分析に使用される抗ヒト抗体は：ＣＤ３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、３４４８０４）、ＣＤ４（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、３００５２０）、ＣＤ８（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、３０１０４０）、ＳＩＲＰγ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、３３６６０６）、マウスＩｇＧ１ Ｋアイソタイプコントロール（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、４００１１２）、ＣＤ１４（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、５５８１２１）、ＣＤ５６（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、３１８３２１）、ＣＤ４５ＲＡ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、３０４１１２）、ＣＣＲ７（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、３５３２３２）、ＣＤ１２７（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、３５１３１８）、Ｆｏｘｐ３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、３２０２１４）を含んだ。ＰＢＭＣ試料をＭＡＣＳ緩衝液で洗浄し、蛍光標識された抗ヒト抗体で染色した。Ｆｏｘｐ３細胞内染色については、細胞を細胞内固定化及び透過処理用バッファーセット（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、００－５５２３－００）で固定化し、Ｆｏｘｐ３抗体で染色した。ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェア（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して、ＬＳＲＩＩでフローサイトメトリーデータを取得した。Ｆｌｏｗ Ｊｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ，Ａｓｈｌａｎｄ，ＯＲ）を使用して、データを分析した。

ＳＩＲＰγ過剰発現、Ｔ細胞再刺激及びサイトカインの検出：ヒトＴ細胞においてヒトＳＩＲＰγを過剰発現させるために、ヒトＳＩＲＰγをＭＳＣＶ－ＩＲＥＳ－ＥＧＦＰレトロウイルスベクターにクローニングした。Ｔ細胞を感染させる前に、ｐＡｍｐｈｏパッケージングシステム（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、＃６３１５３０）を使用して、レトロウイルスを産生した。Ｔ細胞感染のために、Ｍｉｌｔｅｎｙｉから市販のヒトＰａｎＴ細胞単離キットを使用して、ヒトＰＢＭＣからｐａｎＴ細胞を単離し、比１：１にてダイナビーズヒトＴ－活性化剤ＣＤ３／ＣＤ２８（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、＃１１１３１Ｄ）で７２時間活性化した。７２時間後に、ダイナビーズを除去し、２０００ｒｐｍにて３２℃で１時間、活性化Ｔ細胞をレトロウイルスに遠心感染させた。

レトロウイルス遠心感染後５日目に、ＧＦＰ＋ヒトＳＩＲＰγ過剰発現Ｔ細胞をＦＡＣＳ選別し、ヒトＩＬ２で２日間休止した。等しい数のコントロール又はヒトＳＩＲＰγ過剰発現ＣＤ８又はＣＤ４ Ｔ細胞を９６丸底ウェルにシーディングし、プレート結合抗ＣＤ３（０．５μｇ／ｍｌ）及び抗ＣＤ２８（１μｇ／ｍｌ）（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ １６－００３７－８５及び１６－０２８９－８５）で再刺激した。再刺激して２４時間後に、細胞上澄を回収し、ヒトＩＦＮγをＥＬＩＳＡ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、８８－７３１６－８８）によって測定した。

ナイーブＴ細胞におけるＣＲＩＳＰＲノックアウト：ナイーブＴ細胞におけるＣＲＩＳＰＲノックアウトのために、等モル濃度のＡｌｔ－Ｒ ｃｒＲＮＡ及びＡｌｔ－Ｒ ｔｒａｃｒＲＮＡ（ＩＤＴ）オリゴを混合することによって、ｃｒＲＮＡ－ｔｒａｃｒＲＮＡ二重鎖を作製した。ＰＣＲサーマルサイクラーにおいて９５℃で５分間加熱することによって、混合オリゴをアニーリングし、混合物を室温にゆっくりと冷却した。３つのｃｒＲＮＡ－ｔｒａｃｒＲＮＡ二重鎖（それぞれ１５０ｐｍｏｌに等しい３μｌ、合計９μｌ）及びＴｒｕｅＣｕｔ Ｃａｓ９タンパク質ｖ２ ６μｌ（１８０ｐｍｏｌに等しい）（カタログ番号Ａ３６４９９；Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、５μｇ／ｍｌ）を、上下にピペット操作することによって穏やかに混合し、室温にて１０～２０分間インキュベートした。９６ウェルプレート１ウェルに当たり完全Ｔ細胞培地２００μｌを予熱した。１～２００万個のＴ細胞を一次細胞ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｉｏｎ溶液２０μｌ（Ｐ２一次細胞４Ｄ－Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ Ｘ ｋｉｔ Ｓ［３２ＲＣＴ、Ｖ４ＸＰ－２０３２；Ｌｏｎｚａ］）に再懸濁した。Ｔ細胞を混合し、丸底９６ウェルプレートにおいて室温にて、１５μｌ ＲＮＰと共に２分間インキュベートした。細胞／ＲＮＰ混合物をＮｕｃｌｅｏｆｅｃｔｉｏｎキュベットストリップ（４Ｄ－Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ Ｘ ｋｉｔ Ｓ；Ｌｏｎｚａ）に移した。４Ｄ ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒを使用して、細胞を電気穿孔した。ヒトナイーブＴ細胞集団のパルスはＥＨ１００である。ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｉｏｎ後に、予め温められたＴ細胞培地を使用して、９６ウェルプレートにトランスフェクト細胞を移動した。休止ヒトＴ細胞を１×１０^６／ウェルにて２００μｌ完全Ｔ細胞培地中で３～５日間培養した（ＩＬ２及びＩＬ７と共に）。電気穿孔後５日目に、ＦＡＣＳによってノックダウンを確認した。以下のｃｒＲＮＡターゲティング配列が研究に使用された：ＳＩＲＰγ－ｃｒＲＮＡ１：５’－ＧＧＧＡＣＣＣＧＴＣＣＴＧＴＧＧＴＴＣＡＧ－３’（配列番号７）、ＳＩＲＰγ－ｃｒＲＮＡ２：５’－ＡＡＡＡＧＧＧＡＧＣＣＣＴＧＡＧＡＡＣＧ－３’（配列番号８）、ＳＩＲＰγ－ｃｒＲＮＡ３：５’－ＧＴＡＴＧＴＧＣＣＧＡＣＡＴＣＴＧＣＴＧ－３’（配列番号９）、ＣＤ４７－ｃｒＲＮＡ１：５’－ＴＡＣＧＴＡＡＡＧＴＧＧＡＡＡＴＴＴＡＡ－３’（配列番号１０）、ＣＤ４７－ｃｒＲＮＡ２：５’－ＴＴＴＧＣＡＣＴＡＣＴＡＡＡＧＴＣＡＧＴ－３’（配列番号１１）、ＣＤ４７－ｃｒＲＮＡ３：５’－ＴＣＣＡＴＡＴＴＡＧＴＡＡＣＡＡＡＧＣＡ－３’（配列番号１２）、ＰＤ１－ｃｒＲＮＡ１：５’－ＧＣＡＧＴＴＧＴＧＴＧＡＣＡＣＧＧＡＡＧ－３’（配列番号１３）、ＰＤ１－ｃｒＲＮＡ２：５’－ＧＧＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＣＧＣＴＣＡＴＧ－３’（配列番号１４）、ＰＤ１－ｃｒＲＮＡ３：５’－ＧＡＴＣＴＧＣＧＣＣＴＴＧＧＧＧＧＣＣＡ－３’（配列番号１５）。

活性化Ｔ細胞及びジャーカットＴ細胞におけるＣＲＩＳＰＲノックアウト：ダイナビーズヒトＴ－活性化剤ＣＤ３／ＣＤ２８（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、＃１１１３１Ｄ）で比１：１にて、ヒトｐａｎＴ細胞を４８時間活性化した。４８時間後、ダイナビーズを除去し、１００，０００～２００，０００活性化Ｔ細胞を一次細胞ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｉｏｎ溶液２０μｌ（Ｐ２一次細胞４Ｄ－Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ Ｘ ｋｉｔ Ｓ［３２ＲＣＴ、Ｖ４ＸＰ－２０３２；Ｌｏｎｚａ］）に再懸濁し、ＲＮＰ複合体と混合した。細胞／ＲＮＰ混合物をＮｕｃｌｅｏｆｅｃｔｉｏｎキュベットストリップ（４Ｄ－Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ Ｘ ｋｉｔ Ｓ；Ｌｏｎｚａ）に移した。４Ｄ ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒを使用して、細胞を電気穿孔した。ヒト活性化Ｔ細胞集団のパルスはＣＭ１３８である。ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｉｏｎ後に、予め温めたＴ細胞培地を使用して、９６ウェルプレートにトランスフェクト細胞を移動した。ヒトＴ細胞を１×１０^５／ウェルにて２００μｌ完全Ｔ細胞培地中で培養した（ＩＬ２と共に）。電気穿孔後２日目に、ＦＡＣＳによってノックダウンをチェックした。

ジャーカットＴ細胞ノックアウトのために、２００，０００個のジャーカットＴ細胞を一次細胞ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｉｏｎ溶液２０μｌ（Ｐ４一次細胞４Ｄ－Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ Ｘ ｋｉｔ Ｓ［３２ＲＣＴ、Ｖ４ＸＰ－４０３２；Ｌｏｎｚａ］）に再懸濁し、ＲＮＰ複合体と混合した。細胞／ＲＮＰ混合物をＮｕｃｌｅｏｆｅｃｔｉｏｎキュベットストリップ（４Ｄ－Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ Ｘ ｋｉｔ Ｓ；Ｌｏｎｚａ）に移した。ＣＭ１３８プログラムと共に４Ｄ ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒを使用して、細胞を電気穿孔した。電気穿孔後３日目に、細胞表面のタンパク質発現に基づいて、ノックアウトＴ細胞をＦＡＣＳ選別し、今後の実験のためにさらに拡大した。

ノックアウトＴ細胞の再刺激：ＣＲＩＳＰＲノックアウト後３日目に、Ｔ細胞を再刺激し、ＣＲＩＳＰＲノックアウト後４日目にＳＩＲＰγ－ＣＤ４又はＣＤ８ Ｔ細胞をＦＡＣＳ選別した。選別されたＳＩＲＰγノックアウトＴ細胞をヒトＩＬ２で２日間休止した。等しい数のコントロール又はヒトＳＩＲＰγノックアウトＣＤ８又はＣＤ４ Ｔ細胞を、９６丸底ウェルにシーディングし、プレート結合抗ＣＤ３（０．５μｇ／ｍｌ）及び抗ＣＤ２８（１μｇ／ｍｌ）で再刺激した。再刺激して２４時間後に、細胞上澄を回収し、ヒトＩＦＮγをＥＬＩＳＡによって測定した。

リアルタイムＰＣＲ：ｑＲＴ－ＰＣＲのために、製造元の説明書に従ってＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９送達して９日後に、選別及び再刺激されたコントロール又はＳＩＲＰγ－Ｔ細胞から、全ＲＮＡを単離した。ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＶ Ｆｉｒｓｔ－Ｓｔｒａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ（＃１８０９１０５０、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用してこれらのＲＮＡから、ｃＤＮＡを逆転写し、ＴａｑＭａｎ遺伝子発現アッセイキット／プローブセット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ３（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）でｑＲＴ－ＰＣＲを行った。この研究で使用されたプライマーは以下の通りであった：ＧＡＰＤＨ：Ｈｓ０３９２９０９７＿ｇ１、ＳＩＲＰγＦ：５’－ＡＧＧＴＧＡＧＧＡＧＧＡＧＣＴＡＣＡＧＡ－３’（配列番号１６）、ＳＩＲＰγＲ：５’－ＧＧＴＣＣＡＡＣＴＣＣＴＣＴＧＡＡＣＣＡ－３’（配列番号１７）、ＳＩＲＰγプローブ：５’－ＣＣＣＴＧＣＴＴＣＣＣＧＴＧＧＧＡＣＣＣＧ－３’（配列番号１８）。試料間のＳＩＲＰγ発現をＧＡＰＤＨに正規化した。

標的領域のＰＣＲ増幅及び解析：製造元の説明書に従って、Ｑｉａｇｅｎ ＤＮｅａｓｙ Ｂｌｏｏｄ ＆ Ｔｉｘｘｕｅ ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用し、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９送達して９日後に、選別及び再刺激されたコントロール又はＳＩＲＰγ－Ｔ細胞から、ゲノムＤＮＡを単離した。ＳＩＲＰγ標的部位を含有するゲノム領域が、以下のプライマー：ＳＩＲＰγＦ：５’－ＣＣＡＧＡＴＴＧＧＧＡＡＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＴＧＴ－３’（配列番号１９）、ＳＩＲＰγＲ：５’－ＧＧＣＡＴＧＴＴＧＴＧＡＧＧＧＴＴＡＡＡＴＧＡＧＡ－３’（配列番号２０）を使用してＰＣＲ増幅された。Ｑｉａｇｅｎ Ｇｅｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｋｉｔを使用して、２％（ｗｔ／ｖｏｌ）アガロースゲル含有ＳＹＢＲ Ｓａｆｅ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）上でＰＣＲ産物をゲル電気泳動によって分析し、又は精製し、サンガー（ｓａｎｇｅｒ）シーケンシングにかけた。

Ｔｒｅｇ細胞でのＳＩＲＰγ発現及びＴｒｅｇ抑制アッセイ：ヒト制御性Ｔ細胞においてヒトＳＩＲＰγを過剰発現させるために、ＦＡＣＳ選別されたＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７－Ｔｒｅｇ細胞を、２００Ｕ／ｍｌヒトＩＬ２（２０２－ＩＬ－０１０／ＣＦ、Ｒ＆Ｄ）の存在下にて比１：１でダイナビーズヒトＴ－活性化剤ＣＤ３／ＣＤ２８（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、＃１１１３１Ｄ）で４８時間活性化した。４８時間後に、ダイナビーズを除去し、２０００ｒｐｍにて３２℃で１時間、活性化Ｔ細胞をレトロウイルスに遠心感染させた。レトロウイルス遠心感染後５日目に、ＧＦＰ＋ヒトＳＩＲＰγ過剰発現Ｔｒｅｇ細胞をＦＡＣＳ選別し、抑制アッセイをセットアップする前に一晩、ヒトＩＬ２で休止した。

抑制アッセイをセットアップする前に、ナイーブＣＤ４ Ｔ細胞単離キット（１３０－０９４－１３１、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して、異なる健康なドナーＰＢＭＣから、レスポンダーＣＤ４ Ｔ細胞を単離し、ｃｅｌｌ ｔｒａｃｅ ｖｉｏｌｅｔ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｋｉｔ（Ｃ３４５５７、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）によって、単離されたＣＤ４ Ｔ細胞を標識した。休止Ｔｒｅｇ細胞をＣＴＶ標識レスポンダーＣＤ４ Ｔ細胞と異なる比で混合した。同種ＤＣを反応に添加し、ＣＤ４ Ｔ細胞増殖をＣＴＶ希釈によって測定した。

混合リンパ球反応及びＴ細胞増殖アッセイ：ＣＲＩＳＰＲノックダウン後６日目に、Ｔ細胞を混合リンパ球反応（ＭＬＲ）又はＴＣＲ刺激増殖にかけた。１０，０００同種異系ＤＣ（刺激因子）と共に、健康なドナー（レスポンダー）からの１００，０００ｐａｎＴ細胞をインキュベートすることによって、ＭＬＲが実施された。７日目に標準３Ｈチミジン取り込みアッセイによって、Ｔ細胞増殖を測定した。

ＴＣＲ刺激のために、単離Ｔ細胞又はＣＲＩＳＰＲノックアウトＴ細胞を、ｍＡｂ抗ＣＤ３（ＯＫＴ３、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）の段階稀釈でプレコート９６ウェル丸底プレート上にプレーティングした。抗ＣＤ４７ ｍＡｂ（Ｂ６Ｈ１２）、抗ＳＩＲＰγ（ＬＳＢ２．２０）、又はコントロールマウスＩｇＧをＴ細胞培養液に指定のように添加した。７２時間後に、Ｔ細胞増殖を標準３Ｈ－チミジン取り込みアッセイによって測定した。

ＳＩＲＰ－ＩｇＧ融合タンパク質：ＳＩＲＰγ及びＳＩＲＰαの細胞外ドメインをＰＣＲによって増幅し、ヒトＩｇＧ融合タンパク質のＦｃ部分をコードするＤＮＡ断片とインフレームであるｐＴＴ５．２－ＣＭＶベクターにクローン化した。ＳＩＲＰγ及びＳＩＲＰαキメラｃＤＮＡを２９３細胞において一過的に発現させ、分泌ＳＩＲＰ－ＩｇＧ融合タンパク質を、タンパク質Ａ上の培養上澄から精製した。

結合アッセイ：ＳＩＲＰγ及びＣＤ４７に対する抗体の非存在下にて、ＳＩＲＰγ及びＳＩＲＰα－ＩｇＧ ＦＣタンパク質（５μｇ／ｍＬ）を種々の細胞と共に４℃で１時間インキュベートした。次いで、細胞をＦＡＣＳ染色緩衝剤で２回洗浄し、抗ＩｇＧ－ＦＣ（ＰＥ）抗体（１：５０）で４℃にて１５分間染色した。２回の洗浄後に、細胞への融合タンパク質の結合が、ＰＥ結合型抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃ（＃４０９３０４、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を用いたフローサイトメトリーによって検出され、続いてＦＡＣＳ分析が行われた。

生体外での抗体干渉（ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ）アッセイ：ＳＩＲＰγ抗体（１０μｇ／ｍＬ）をジャーカット細胞と共に室温にて３０分間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳ染色緩衝剤で洗浄し、ＳＩＲＰγ－Ｆｃ融合タンパク質（１０μｇ／ｍＬ）と共に４℃で３０分間インキュベートした。次いで、細胞をＦＡＣＳ染色緩衝剤で２回洗浄し、抗ＩｇＧ－Ｆｃ（ＰＥ）抗体（＃４０９３０４、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、１：５０）で４℃にて１５分間染色した。２回の洗浄後、細胞への融合タンパク質の結合は、フローサイトメトリーによって検出され、ＦＡＣＳ分析が行われた。

抗体架橋及びＴ細胞増殖アッセイ：９６ウェルプレートが、４℃にて１０μｇ／ｍＬ ＳＩＲＰγ抗体（５０μｌ／ウェル）で一晩コーティングされた。次の日、健康なドナーからのｐａｎＴ細胞をウェルにおいてプレーティングし、Ｔ細胞をＩｍｍｕｎｏＣｕｌｔ（商標）ヒトＣＤ３／ＣＤ２８ Ｔ細胞活性化剤（＃１０９７１、Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で刺激した。３日目に標準３Ｈチミジン取り込みアッセイによって、Ｔ細胞増殖を測定した。細胞培養上澄を回収し、Ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ Ｂｅａｄ Ａｒｒａｙ（ＣＢＡ）（＃５５８２６９、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）分析にかけた。

統計的解析：統計的有意性は、グラフィックプリズムを用いてｔ検定を実施することによって決定した。有意性は、^＊＊＊ｐ≦０．０００２、^＊＊ｐ≦０．００２１、^＊ｐ≦０．０３３２、及びｎｓ ｐ＞０．０５として示す。

実施例２
この実施例から、ＳＩＲＰγがＴ細胞上で高度に発現されることが実証されている。

Ｔ細胞におけるＳＩＲＰγの機能の研究のために、ＳＩＲＰγの発現プロファイルを免疫細胞集団において最初に調べた。ＳＩＲＰγ抗体の特異性は、２９３Ｔ細胞の細胞表面の過剰発現ＳＩＲＰγタンパク質の特異的な認識によって確認された（図１Ａ）。ヒトＰＢＭＣ細胞上のＳＩＲＰγの細胞表面染色から、ＳＩＲＰγが主に、ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋ Ｔ細胞上で発現するが、ＣＤ１４^＋単球上では発現しないことが分かった（図１Ｂ）。ＳＩＲＰγは、休止段階にてヒトＣＤ４及びＣＤ８ Ｔ細胞の両方での高レベルの発現を示した。ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞は、細胞表面上のポジティブなＳＩＲＰγ発現も示した。このデータは、以前の研究（Ｐｉｃｃｉｏ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１０５：２４２１－２４２７（２００５））と一致し、ＳＩＲＰγの発現がＴ細胞特異的であることが示される。

以前の研究（Ｐｉｃｃｉｏ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１０５：２４２１－２４２７（２００５））から、抗ＳＩＲＰγ抗体によるＳＩＲＰγ受容体ライゲーションは、Ｔ細胞増殖の共刺激因子として機能することが判明しており、ＳＩＲＰγとＴ細胞受容体（ＴＣＲ）との潜在的な相互作用が示唆される。ＳＩＲＰγ発現がＴＣＲシグナル伝達によって調節されるかを試験するために、Ｔ細胞を抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体で刺激し、刺激Ｔ細胞によってＳＩＲＰγの発現レベルを調べた。ＳＩＲＰγは、Ｔ細胞上での高い発現レベルを維持し、その発現レベルは、ＴＣＲ刺激の間、変化しなかった（図１Ｃ）。

実施例３
この実施例から、ＳＩＲＰγが、記憶Ｔ細胞及び腫瘍浸潤消耗Ｔ細胞上で高い発現を有することが実証される。

記憶及びエフェクターＴ細胞のサブセットにおけるＳＩＲＰγの発現プロファイルをさらに理解するために、複数の健康なドナーＰＢＭＣからのＴ細胞を、抗体を用いて染色した。ナイーブＴ細胞、中枢記憶、エフェクター記憶及びエフェクターＴ細胞が、ＣＤ４５ＲＡ及びＣＣＲ７染色によって同定された。ＣＤ８＋記憶Ｔ細胞によって、エフェクターＴ細胞及びナイーブＴ細胞と比較して、ＳＩＲＰγの有意に高い発現が実証された（図２Ａ及び２Ｂ）。ＣＤ４ Ｔ細胞集団内で、中枢記憶ＣＤ４ Ｔ細胞は、エフェクターＴ細胞よりもＳＩＲＰγの高い発現を実証した（図２Ａ及び２Ｂ）。これらのデータによって、ＳＩＲＰγが、免疫制御中にＴ細胞の記憶機能に寄与し得ることが示唆される。

興味深いことに、腫瘍浸潤Ｔ細胞の単細胞ＲＮＡシーケンシングのプロファイリングから、ＳＩＲＰγは、消耗ＣＤ８ Ｔ細胞、並びにＨＣＣ、ＣＲＣ及び肺癌などの異なるタイプのヒト癌から単離された腫瘍Ｔｒｅｇにおいて高度に発現することが分かった（図３Ａ～３Ｃ）。腫瘍におけるＳＩＲＰγと腫瘍浸潤消耗ＣＤ８^＋ Ｔ細胞との関連は以前に報告されていないため、生体外で誘導された消耗ＣＤ８^＋ Ｔ細胞上のその発現及び調節がさらに特徴付けられた。ＳＩＲＰγタンパク質発現は、低用量のαＣＤ３ ＴＣＲ活性化、Ｔ細胞消耗を模倣する条件で、生体外にて繰り返し刺激されたＣＤ８^＋ Ｔ細胞上で増加した（図４）。消耗Ｔ細胞におけるＳＩＲＰγの高い発現パターンは、エフェクターサイトカイン産生の減少、並びにＴｉｍ３及びＰＤ１などの他のＴ細胞消耗マーカーの発現の増加と相関し、腫瘍微小環境内でＴ細胞消耗のマーカーとしてＳＩＲＰγが役割を果たし得ることが示唆される。

実施例４
この実施例から、ＳＩＲＰγが、Ｔ細胞エフェクターサイトカイン放出を阻害することが実証される。

Ｔ細胞におけるＳＩＲＰγの機能を研究するために、Ｔ細胞におけるＳＩＲＰγのレトロウイルス仲介過剰発現が、腫瘍浸潤ＣＤ８ Ｔ細胞上のＳＩＲＰγの高発現を模倣するために行われた。ＣＤ８ Ｔ細胞上のＳＩＲＰγ発現の増加が、レトロウイルスの感染後３日目に確認された（図５Ｂ）。興味深いことに、ＳＩＲＰγ過剰発現ＣＤ８ Ｔ細胞は、コントロールのウイルス感染細胞による発現よりも有意に低いＩＦＮγを産生し（図５Ｃ～５Ｄ）、ＣＤ８ Ｔ細胞におけるＳＩＲＰγの阻害的役割が裏付けられる。

ＳＩＲＰγがＴ細胞エフェクター機能の負の制御因子であるか否かをさらに評価するために、ＣＲＩＳＰＲを使用して、ヒトＴ細胞上のＳＩＲＰγのレベルをノックダウンした。ＳＩＲＰγのＣＲＩＳＰＲノックダウンの成功は、ゲノム、ｍＲＮＡ、及びタンパク質レベルで評価された。ＳＩＲＰγガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）のＣＲＩＳＰＲ送達によって、標的ＳＩＲＰγゲノムコード領域の欠失、ＳＩＲＰγ ｍＲＮＡ発現、及びＴ細胞表面上でのＳＩＲＰγタンパク質発現の有意な低減が引き起こされた（図６Ｂ～６Ｅ）。注目すべきことには、ＴＣＲシグナルで生体外にて刺激した場合に、ＳＩＲＰγ発現の低減は、ＣＤ８ Ｔ細胞においてＩＦＮγの分泌を有意に増強し（図６Ｆ）、ＳＩＲＰγが、Ｔ細胞の負の制御因子として機能することが示される。本明細書に記載のように、Ｔ細胞共刺激分子としてのＳＩＲＰγを示唆する以前の研究（Ｐｉｃｃｉｏ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０５（６）：２４２１－２４２７（２００５）；Ｌｅｉｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔｅｒｓ １２８（２）：８９－９７（２０１０））を想定すると、これらの結果は意外であった。

実施例５
この実施例から、ＳＩＲＰγは調節性Ｔ細胞抑制機能を高め、且つＳＩＲＰγに対するモノクローナル抗体は、Ｔ細胞増殖に対して抑制効果を有することが実証される。

腫瘍浸潤性Ｔ細胞での以前のＲＮＡシーケンシングプロファイリングからも、ＳＩＲＰγが、ＨＣＣ、ＣＲＣ及び肺癌内のＴｒｅｇにおいてアップレギュレートされることが示唆される（図３Ａ～３Ｃ）。乳癌におけるＳＩＲＰγ発現の増加はさらに、実証されている（Ａｓｃｅｎｓｉｏｎ：ＧＳＥ８９２２５データセット；Ｐｉｔａｓ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２０１６ Ｎｏｖ １５；４５（５）：１１２２－１１３４）。非Ｔｒｅｇにおける発現と比較して、腫瘍浸潤ＴｒｅｇにおけるＳＩＲＰγの高い発現が、ＮＳＣＬＣ腫瘍試料において確認された（図７Ａ）。レトロウイルスの形質導入によるヒトＴｒｅｇ細胞におけるＳＩＲＰγの過剰発現は、Ｔｒｅｇ上でのＦＯＸＰ３発現レベルを変化させなかった（図７Ｃ～７Ｄ）。しかしながら、ＳＩＲＰγは、生体外抑制アッセイにおけるＴ細胞増殖でのＴｒｅｇ抑制活性を高めた（図７Ｅ～７Ｆ）。これらのデータから、腫瘍環境内のＴｒｅｇにおけるＳＩＲＰγの高発現は、エフェクターＴ細胞機能の抑制の一因となることが示唆される。これらのデータから、ＳＩＲＰγの阻害によって、腫瘍環境内のＴ細胞増殖のレベルの増加が引き起こされ得ることも示唆される。

以前の研究（Ｐｉｃｃｉｏ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１０５：２４２１－２４２７（２００５））から、ＣＤ４７はＳＩＲＰγのリガンドであることが示された。Ｐｉｃｃｉｏらは、抗ＳＩＲＰγ ｍＡｂ及び抗ＣＤ４７ ｍＡｂが、Ｔ細胞増殖及びＳＩＲＰγ共刺激Ｔ細胞増殖のライゲーションを阻害し、その結果、Ｔ細胞機能の正の制御因子としてＳＩＲＰγが裏付けられることも示した。しかしながら、ＳＩＲＰγ過剰発現及びＳＩＲＰγノックアウトシステムを使用することによって、本明細書に記載の研究によって、ＳＩＲＰγはＴ細胞機能の負の制御因子であることが示唆される。以前の結果と本明細書に記載の結果との矛盾をさらに調べるために、生体外でのＴ細胞増殖中のＳＩＲＰγに対するｍＡｂの機能が試験された。ＳＩＲＰγとＣＤ４７との相互作用をブロックすることができる機能性ブロッキングｍＡｂをスクリーニングするために、ジャーカットＴ細胞におけるＳＩＲＰγとＣＤ４７が、ＣＲＩＳＰＲによって枯渇された（図８Ａ）。ＣＤ４７ノックアウト細胞系を使用することによって、ＣＤ４７依存的様式でＴ細胞表面にＳＩＲＰγが結合することが確認された（図８Ｂ）。さらに、ジャーカットＴ細胞上でのＳＩＲＰγ－ＣＤ４７の相互作用を機能的にブロックする、ｍＡｂクローンＬＳＢ２．２０及びＯＸ１１９が、生体外結合アッセイによって同定された（図８Ｃ）。

混合リンパ球反応（ＭＬＲ）中、一部の抗ＳＩＲＰγ ｍＡｂがＴ細胞増殖を阻害した（図８Ｄ）。さらに、抗ＳＩＲＰγ抗体での治療によって、ＴＣＲリガンドの段階稀釈の存在下にてＴ細胞の活性化が阻害された（８Ｅ）。興味深いことに、上記のＣＲＩＳＰＲ仲介方法によってＳＩＲＰＧ遺伝子をノックダウンした場合に、抑制効果がまだ確認されたことから、抗ＳＩＲＰγ抗体の抑制効果は、ＳＩＲＰγの存在に依存しなかった（図８Ｆ）。これらの特定の抗体の活性は、オフターゲット効果が原因であり得る、又はＣＤ４７と相互作用するＳＩＲＰγ上の残基が、その活性を仲介するために他のタンパク質との相互作用に必要とされるという可能性がある。

実施例６
この実施例から、ＳＩＲＰγの特定のエピトープに結合する抗ＳＩＲＰγモノクローナル抗体は、Ｔ細胞増殖及び機能を高め得ることが実証される。

Ｔ細胞機能に対するＳＩＲＰγの抑制効果を探求するために、市販のＳＩＲＰγ抗体のパネルをＳＩＲＰγに結合し、ＣＤ４７－ＳＩＲＰγ相互作用の遮断薬として働く、その能力についてスクリーニングした。Ｔ細胞を抗ＳＩＲＰγモノクローナル抗体クローンＬＳＢ２．２０、クローンＯＸ１１７、クローンＯＸ１１９、ＬＳ－Ｃ４８４７６５、クローン４Ｆ８Ｃ１０（ＭＡＢ２１４２５）で、又はポリクローナル抗ＳＩＲＰγ抗体（ＡＦ４４８６）で処理し、図９Ａに示すようにＴ細胞への抗体の結合をＦＡＣＳによってアッセイし、いくつかの抗ＳＩＲＰγ抗体は、ジャーカット細胞上で内因的に発現された、又は外因的に過剰発現されたＳＩＲＰγに結合することができた（図９Ａ）。

Ｔ細胞上のＳＩＲＰγとその結合パートナーとの結合相互作用を変化させる抗ＳＩＲＰγ抗体の能力が、生体外抗体ブロッキングアッセイを実施することによって評価された。このアッセイにおいて、場合により、ＣＤ４７又はＴ細胞によって発現された他の未同定の受容体など、ＳＩＲＰγ結合パターンとのその相互作用によって、ＳＩＲＰγ－ＦｃはＴ細胞に結合する。この時点で、ＣＤ４７は、ＳＩＲＰγに対する既知の唯一の高親和性受容体である（図８Ｃ）。しかしながら、ＳＩＲＰγ抗体の非存在下にて、ＳＩＲＰγはＴ細胞上でも発現するため、Ｔ細胞表面上でＣＤ４７及び／又は他の推定の結合パートナーと潜在的にシス型で相互作用し得る。結果として、これらの潜在的なシス型相互作用は、このアッセイにおいてＴ細胞上のその結合パートナーとＳＩＲＰγ－Ｆｃの結合を阻害し得る。しかしながら、抗ＳＩＲＰγ抗体のプレインキュベーションが、細胞表面上での相互作用、ＳＩＲＰγとその結合パターンのシス型相互作用を妨害する場合には、細胞表面上でこれらの結合パターンが放出され、続いてこのアッセイにおいてＳＩＲＰγ－Ｆｃタンパク質と相互作用し得る。Ｔ細胞へのＳＩＲＰγ－Ｆｃの結合が、種々の抗ＳＩＲＰγ抗体の存在下にて測定され、抗ＳＩＲＰγ抗体の非存在下での結合と比較された。図９Ｂに示すように、抗ＳＩＲＰγ抗体クローンＬＳＢ２．２０又はクローンＯＸ１１９で予め処理された細胞は、ＳＩＲＰγ－Ｆｃの増強された結合を持たず、これらの抗体は、ＳＩＲＰγとＣＤ４７との相互作用をブロックすることが以前に示されていたが、これらの抗体クローンとのＳＩＲＰγ－ＣＤ４７相互作用の破壊によって、ＳＩＲＰγ－Ｆｃ融合タンパク質との更なる相互作用のための、より多くのＣＤ４７又は他の結合パートナーは放出されないことが示唆される。これらのデータから、これらの抗体の親和性が、Ｔ細胞表面上の間でのシス型相互作用を放出するには十分に強くない、又はＣＤ４７及びＳＩＲＰγが細胞表面上にてシス型で相互作用しないことが示唆された。さらに、これらの抗体はまた、ＳＩＲＰγと他の推定結合パートナーとの潜在的な相互作用をブロックしない。興味深いことに、クローンＬＳＢ２．２０及びＯＸ１１９と異なり、クローンＯＸ１１７治療から、ＳＩＲＰγ－Ｆｃ融合タンパク質の増強した結合が示された。ＯＸ１１９は、ＣＤ４７とのエピトープ相互作用と異なるＳＩＲＰγ上のエピトープに結合することが知られており（図９Ｅ）、これらの結果から、ＯＸ１１７は、ジャーカット細胞表面上でＳＩＲＰγと、他の推定結合性タンパク質との相互作用をブロックすることができ得ると示唆される。クローンＯＸ１１７での治療後、ジャーカット細胞は、ＳＩＲＰγ－Ｆｃ融合タンパク質によるその結合のための推定結合パートナーを放出した（図９Ｂ）。

エフェクト抗ＳＩＲＰγ抗体はＴ細胞増殖を有し、ＩＦＮγ分泌も試験された。このアッセイにおいて、Ｔ細胞を抗ＳＩＲＰγモノクローナル抗体クローンＬＳＢ２．２０、クローンＯＸ１１７、クローンＯＸ１１９、ＬＳ－Ｃ４８４７６５、クローン４Ｆ８Ｃ１０（ＭＡＢ２１４２５）、ポリクローナル抗ＳＩＲＰγ抗体（ＡＦ４４８６）、３つの非特異的ＩｇＧコントロールのうちの１つで、又は抗体コントロールなしで処理した。Ｔ細胞増殖及びＩＦＮγ産生のレベルを測定した（図９Ｃ及び９Ｄ）。興味深いことに、ＳＩＲＰγ抗体クローンＯＸ１１７でのＴ細胞の処理から、生体外でのＴ細胞増殖及びＩＦＮγ分泌の統計学的に有意な、且つ最も高いレベルが実証された（図９Ｃ～９Ｄ）。ＯＸ１１７で処理されたＴ細胞によって分泌されるＩＦＮγのレベルは、ＬＳＢ２．２０で処理された細胞によって分泌されるＩＦＮγのレベルの２倍であり、ＯＸ１１９処理細胞によって分泌されるＩＦＮγのレベルの６倍を超えた。報告によれば、抗ＳＩＲＰγモノクローナル抗体クローンＯＸ１１７のｆａｂ断片が、その領域がＤ１と異なる（ＣＤ４７と相互作用する）、ＳＩＲＰγの第１及び第２免疫グロブリンドメイン（Ｄ１及びＤ２）の界面にてＳＩＲＰγに結合する（Ｎｅｔｔｌｅｓｈｉｐ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｓｔｒｕｃｔ Ｂｉｏｌ １３：１３（２０１３））。さらに、ＯＸ１１７が結合するエピトープはＳＩＲＰγモノクローナル抗体クローンＯＸ１１９及びＬＳＢ２．２０が結合するエピトープと異なる。このことから、ＯＸ１１７で確認されたＴ細胞増殖及びＩＦＮγ分泌は、ＳＩＲＰγへのＣＤ４７結合の直接的なブロッキングによって生じない可能性があることが示唆される。

市販の抗ＳＩＲＰγ抗体のパネルで実施した上記のアッセイからの結果の概要を図１０に提供する。まとめると、これらのデータは、特にＣＤ４７とのその相互作用を介した、ＳＩＲＰγの特異的な共刺激機能を裏付けない。代わりに、本発明者らは、Ｔ細胞増殖、活性化及びサイトカイン産生におけるＳＩＲＰγの新規な抑制機能を同定した。特定の抗体は、ＳＩＲＰγのこの抑制機能を妨げ、Ｔ細胞活性を増強し、それは、ＣＤ４７とＳＩＲＰγとの相互作用のブロッキングを通じて達成され得る。これらのデータから、ＳＩＲＰγのＴ細胞抑制機能が、ＳＩＲＰγの固有のエピトープによって仲介され得ること、及び限定されないが、ＯＸ１１７によって達成されるのと同様に、ＳＩＲＰγのＤ１及びＤ２の界面に結合する分子が、Ｔ細胞機能の増強に有用であり得ることも示唆される。

実施例７
この実施例によって、ＳＩＲＰγ阻害剤が対象における腫瘍若しくは癌に対する免疫応答を増加することが実証される。

Ｔ細胞は、腫瘍特異的な抗原を認識した場合に癌細胞を殺すことができる。Ｔ細胞特異的な死滅作用を増幅するために、Ｔ細胞を遺伝子操作して、腫瘍抗原特異的Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現させ、それによって、癌細胞が死滅する。ＳＩＲＰγのＣＲＩＳＰＲノックアウトは、抗原特異的なＴＣＲ－Ｔ又はＣＡＲ－Ｔ細胞上で行われる。腫瘍特異的な抗原を発現するヒト癌細胞を、コントロール又はＳＩＲＰγノックアウト抗原特異的なＴ細胞と共に共培養して、抗腫瘍免疫応答が測定される。ＳＩＲＰγノックアウト抗原特異的なＴ細胞の死滅活性は、生存癌細胞の定量化によって測定される。分泌ＩＦＮγは、標準ＥＬＩＳＡアッセイで検出される。ＳＩＲＰγノックアウト抗原特異的なＴ細胞は、ＩＦＮγ分泌の増加及び癌細胞死滅の増強を示す。腫瘍特異的な抗原としては、限定されないが、ＮＹ－ＥＳＯ－１及びＭＡＲＴ１／Ｍｅｌａｎ－Ａが挙げられる。

実施例８
この実施例から、ＳＩＲＰγ阻害剤が、対象における腫瘍サイズの減少及び／又は腫瘍成長の低減を導くことが実証される。

ＳＩＲＰγはマウス細胞上で発現されない。腫瘍成長に対するＳＩＲＰγの効果を試験するマウス腫瘍モデルを確立するために、ＮＯＤ ｓｃｉｄ γ（ＮＳＧ）免疫不全マウスに、特異的な腫瘍抗原を発現する、ヒト癌細胞又は細かく刻まれた患者由来腫瘍を移植する。コントロール又はＳＩＲＰγノックアウト抗原特異的なＴ細胞を生体外で遺伝子操作し、拡大する。腫瘍が一定のサイズに達した後（例えば、体積５０～１２０ｍｍ^３）、コントロール又はＳＩＲＰγノックアウト抗原特異的なＴ細胞をＮＳＧマウス内に養子移入し、腫瘍サイズを測定する。腫瘍特異的な抗原としては、限定されないが、ＮＹ－ＥＳＯ－１及びＭＡＲＴ１／Ｍｅｌａｎ－Ａが挙げられる。ＳＩＲＰγノックアウト抗原特異的なＴ細胞の移入を有するマウスは、腫瘍サイズ及び腫瘍成長の低減を示す。

生体内腫瘍モデルを確立して、腫瘍免疫応答に対するＳＩＲＰγ阻害剤の効果を試験するために、ヒト多能性幹細胞（ＨＰＳＣ）移植によって、ヒト化ＮＳＧ（ＨｕＮＳＧ）マウスを作製する。ヒトＣＤ３４＋ＨＰＳＣ移植から１２週後に、ヒト癌細胞をマウスに注入して、腫瘍を発生させる。代替方法としては、患者由来の異種移植片（ＰＤＸ）腫瘍モデルについては、細かく刻んだ患者由来の腫瘍をＨｕＮＳＧマウスに皮下注入する。腫瘍が一定のサイズ（例えば、体積５０～１２０ｍｍ^３）に達したら、処置が開始される。ＳＩＲＰγ阻害剤をＨｕＮＳＧマウスに静脈内注入し、腫瘍サイズ及び腫瘍体積を測定する。ＳＩＲＰγ阻害剤治療を受けたマウスは、腫瘍サイズ及び腫瘍成長の低減を示す。

本明細書に出版物、特許出願、及び特許などのすべての参考文献は、それぞれの参考文献があたかも、個々に及び具体的に参照により本明細書に組み込まれることが示されているかのごとく、且つ本明細書においてその全体が記載されているかのごとく同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。

開示内容を説明する文脈（特に、以下の特許請求の範囲の文脈）における「１つ（ａ）」及び「１つ（ａｎ）」及び「その（ｔｈｅ）」という用語の使用及び同様な指示は、本明細書において別段の指定がない限り、又は文脈とはっきりと矛盾していない限り、単数と複数のどちらも含むと解釈される。「含む」、「有する」、「包含する」、及び「含有する」という用語は、別段の指定がない限り、制約のない用語として解釈される（つまり、「～を含むが、限定されない」を意味する）。

本明細書における範囲の記載は、本明細書において別段の指定がない限り、範囲内にあるそれぞれ別々の値及びそれぞれの終点を個々に言及する速記法としての役割を果たすことが単に意図され、本明細書においてあたかも個々に記載されるように、それぞれ別々の値及び終点が本明細書に組み込まれる。

本明細書に記載のすべての方法が、本明細書において別段の指定がない限り、又は文脈とはっきりと矛盾しない限り、適切な順序で行うことができる。いずれかの、及びすべての実施例、又は本明細書に示される例示的な文言（例えば、「～など」）の使用は、単に開示内容をより良く説明することを意図するものであり、別段の主張がない限り、開示の範囲に制限を課さない。開示内容の実施に必須であるとして請求項に記載されていない要素を示すと、本明細書における文言は解釈すべきではない。

本開示の好ましい実施形態は、本明細書に記載され、開示内容を実施するために本発明者らに既知の最良の形態を含む。これらの好ましい実施形態の変形形態は、前述の明細書を読めば、当業者には明らかとなり得る。本発明者らは、かかる変形形態を適宜、当業者らが用いることを期待し、本発明者らは、本明細書に具体的に記載される以外の別の方法で実施されることを意図する。したがって、本開示は、該当する法律によって許可されるように、本明細書に添付される特許請求の範囲に記載の主題のすべての修正形態及び均等物を包含する。さらに、その可能性のあるすべての変形形態における上述の要素のいずれかの組み合わせは、本明細書に別段の指定がない限り、或いは文脈と明らかに矛盾しない限り、本開示によって包含される。

本開示の好ましい実施形態は、本明細書に記載され、開示内容を実施するために本発明者らに既知の最良の形態を含む。これらの好ましい実施形態の変形形態は、前述の明細書を読めば、当業者には明らかとなり得る。本発明者らは、かかる変形形態を適宜、当業者らが用いることを期待し、本発明者らは、本明細書に具体的に記載される以外の別の方法で実施されることを意図する。したがって、本開示は、該当する法律によって許可されるように、本明細書に添付される特許請求の範囲に記載の主題のすべての修正形態及び均等物を包含する。さらに、その可能性のあるすべての変形形態における上述の要素のいずれかの組み合わせは、本明細書に別段の指定がない限り、或いは文脈と明らかに矛盾しない限り、本開示によって包含される。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
(項目１)
腫瘍又は癌を有する対象を治療する方法であって、前記腫瘍又は癌を前記対象において治療するのに有効な量で、ＳＩＲＰγバインダーを前記対象に投与することを含む、方法。
(項目２)
腫瘍又は癌を有する対象においてＴ細胞のエフェクター活性を増加する、又はＴ細胞の抑制活性を低減する方法であって、前記対象において前記エフェクター活性を増加する、又は前記抑制活性を低減するのに有効な量で、前記対象にＳＩＲＰγバインダーを投与することを含む、方法。
(項目３)
対象において腫瘍又は癌に対する免疫応答を増加する方法であって、腫瘍又は癌に対する免疫応答を増加するのに有効な量で、ＳＩＲＰγバインダーを前記対象に投与することを含む、方法。
(項目４)
前記免疫応答が、Ｔ細胞によって仲介される、項目３に記載の方法。
(項目５)
前記Ｔ細胞が、腫瘍又は腫瘍微小環境内に位置する、項目２から４のいずれか一項に記載の方法。
(項目６)
前記Ｔ細胞が腫瘍浸潤性Ｔ細胞である、項目２から５のいずれか一項に記載の方法。
(項目７)
前記Ｔ細胞が制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）である、項目２から５のいずれか一項に記載の方法。
(項目８)
前記Ｔ細胞が、消耗Ｔ細胞、任意選択的に、消耗ＣＤ８＋ Ｔ細胞である、項目２から５のいずれか一項に記載の方法。
(項目９)
前記Ｔ細胞が記憶細胞である、項目２から５のいずれか一項に記載の方法。
(項目１０)
前記記憶細胞が、ＣＤ８＋記憶細胞又はＣＤ４＋中枢記憶細胞である、項目９に記載の方法。
(項目１１)
前記ＳＩＲＰγバインダーがＳＩＲＰγ阻害剤である、項目１から１０のいずれか一項に記載の方法。
(項目１２)
前記ＳＩＲＰγ阻害剤が、前記対象の細胞においてＳＩＲＰγの発現を低減し、任意選択的に、前記ＳＩＲＰγ阻害剤が、前記対象のＴ細胞上でのＳＩＲＰγの細胞表面発現を低減する、項目１１に記載の方法。
(項目１３)
前記Ｔ細胞が、前記対象のエフェクターＴ細胞である、項目１２に記載の方法。
(項目１４)
前記ＳＩＲＰγ阻害剤が、ＳＩＲＰγと、ＳＩＲＰγ結合パートナーとの結合性相互作用を低減する、項目１１から１３のいずれか一項に記載の方法。
(項目１５)
前記ＳＩＲＰγ結合パートナーがＣＤ４７である、項目１４に記載の方法。
(項目１６)
前記ＳＩＲＰγバインダーが、ＳＩＲＰγの免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメイン１（Ｄ１）に結合する、項目１から１５のいずれか一項に記載の方法。
(項目１７)
前記ＳＩＲＰγバインダーが、ＳＩＲＰγのＤ１及びＩｇドメイン２（Ｄ２）に結合する、項目１から１６のいずれか一項に記載の方法。
(項目１８)
前記ＳＩＲＰγバインダーが、Ｄ１とＤ２の両方に、任意選択的にＤ１とＤ２の界面にて結合する、項目１から１７のいずれか一項に記載の方法。
(項目１９)
前記ＳＩＲＰγバインダーが、ＳＩＲＰγモノクローナル抗体ＯＸ１１７が結合するエピトープに結合する、項目１から１８のいずれか一項に記載の方法。
(項目２０)
前記ＳＩＲＰγバインダーが、ＳＩＲＰγへの結合に関してＯＸ１１７と競合する、項目１から１９のいずれか一項に記載の方法。
(項目２１)
前記ＳＩＲＰγバインダーが、ＯＸ１１７と同じ、又はそれ以上の親和性でＳＩＲＰγに結合する、項目２０に記載の方法。
(項目２２)
前記ＳＩＲＰγバインダーがＯＸ１１７又はその抗原結合性断片である、項目１から２１のいずれか一項に記載の方法。
(項目２３)
前記ＳＩＲＰγバインダーが、ＳＩＲＰγのアミノ酸残基Ｑ８、Ｅ１０、Ｇ１０９、Ｋ１１、Ｌ１２、及びＤ１４９のうちの１つ又は複数と水素結合を形成する、項目１から２２のいずれか一項に記載の方法。
(項目２４)
前記ＳＩＲＰγバインダーが、ＳＩＲＰγに結合すると、ＳＩＲＰγの高次構造変化を生じる、項目１から２３のいずれか一項に記載の方法。
(項目２５)
前記ＳＩＲＰγバインダーが同時に、２つのＳＩＲＰγ分子に結合し、又はＳＩＲＰγ二量体化を促進する、項目１から２４のいずれか一項に記載の方法。
(項目２６)
前記ＳＩＲＰγバインダーが、前記ＣＤ４７結合部位とオーバーラップしないエピトープに結合する、項目１から２５のいずれか一項に記載の方法。
(項目２７)
前記ＳＩＲＰγバインダーが抗原結合性タンパク質である、項目１から２６のいずれか一項に記載の方法。
(項目２８)
前記抗原結合性タンパク質が、抗体、抗原結合性抗体断片、又は抗体タンパク質産物である、項目２７に記載の方法。
(項目２９)
前記抗原結合性タンパク質が、ＳＩＲＰγの前記ＣＤ４７結合部位内でエピトープに結合する、項目２７又は２８に記載の方法。
(項目３０)
前記対象が、肝細胞癌（ＨＣＣ）、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、肺癌、任意選択的に、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する、項目１から２９のいずれか一項に記載の方法。
(項目３１)
腫瘍又は癌を有する対象を治療する方法であって、項目１から３０のいずれか一項に従って、前記対象における前記腫瘍又は癌に対する免疫応答を増加することを含む、方法。
(項目３２)
腫瘍又は癌を有する対象を治療する方法であって、項目１から３１のいずれか一項に従って、前記対象におけるＴ細胞のエフェクター活性を増加する、又はＴ細胞の抑制活性を低減することを含む、方法。

Claims (32)

1. 腫瘍又は癌を有する対象を治療する方法であって、前記腫瘍又は癌を前記対象において治療するのに有効な量で、ＳＩＲＰγバインダーを前記対象に投与することを含む、方法。
2. 腫瘍又は癌を有する対象においてＴ細胞のエフェクター活性を増加する、又はＴ細胞の抑制活性を低減する方法であって、前記対象において前記エフェクター活性を増加する、又は前記抑制活性を低減するのに有効な量で、前記対象にＳＩＲＰγバインダーを投与することを含む、方法。
3. 対象において腫瘍又は癌に対する免疫応答を増加する方法であって、腫瘍又は癌に対する免疫応答を増加するのに有効な量で、ＳＩＲＰγバインダーを前記対象に投与することを含む、方法。
4. 前記免疫応答が、Ｔ細胞によって仲介される、請求項３に記載の方法。
5. 前記Ｔ細胞が、腫瘍又は腫瘍微小環境内に位置する、請求項２から４のいずれか一項に記載の方法。
6. 前記Ｔ細胞が腫瘍浸潤性Ｔ細胞である、請求項２から５のいずれか一項に記載の方法。
7. 前記Ｔ細胞が制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）である、請求項２から５のいずれか一項に記載の方法。
8. 前記Ｔ細胞が、消耗Ｔ細胞、任意選択的に、消耗ＣＤ８＋ Ｔ細胞である、請求項２から５のいずれか一項に記載の方法。
9. 前記Ｔ細胞が記憶細胞である、請求項２から５のいずれか一項に記載の方法。
10. 前記記憶細胞が、ＣＤ８＋記憶細胞又はＣＤ４＋中枢記憶細胞である、請求項９に記載の方法。
11. 前記ＳＩＲＰγバインダーがＳＩＲＰγ阻害剤である、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
12. 前記ＳＩＲＰγ阻害剤が、前記対象の細胞においてＳＩＲＰγの発現を低減し、任意選択的に、前記ＳＩＲＰγ阻害剤が、前記対象のＴ細胞上でのＳＩＲＰγの細胞表面発現を低減する、請求項１１に記載の方法。
13. 前記Ｔ細胞が、前記対象のエフェクターＴ細胞である、請求項１２に記載の方法。
14. 前記ＳＩＲＰγ阻害剤が、ＳＩＲＰγと、ＳＩＲＰγ結合パートナーとの結合性相互作用を低減する、請求項１１から１３のいずれか一項に記載の方法。
15. 前記ＳＩＲＰγ結合パートナーがＣＤ４７である、請求項１４に記載の方法。
16. 前記ＳＩＲＰγバインダーが、ＳＩＲＰγの免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメイン１（Ｄ１）に結合する、請求項１から１５のいずれか一項に記載の方法。
17. 前記ＳＩＲＰγバインダーが、ＳＩＲＰγのＤ１及びＩｇドメイン２（Ｄ２）に結合する、請求項１から１６のいずれか一項に記載の方法。
18. 前記ＳＩＲＰγバインダーが、Ｄ１とＤ２の両方に、任意選択的にＤ１とＤ２の界面にて結合する、請求項１から１７のいずれか一項に記載の方法。
19. 前記ＳＩＲＰγバインダーが、ＳＩＲＰγモノクローナル抗体ＯＸ１１７が結合するエピトープに結合する、請求項１から１８のいずれか一項に記載の方法。
20. 前記ＳＩＲＰγバインダーが、ＳＩＲＰγへの結合に関してＯＸ１１７と競合する、請求項１から１９のいずれか一項に記載の方法。
21. 前記ＳＩＲＰγバインダーが、ＯＸ１１７と同じ、又はそれ以上の親和性でＳＩＲＰγに結合する、請求項２０に記載の方法。
22. 前記ＳＩＲＰγバインダーがＯＸ１１７又はその抗原結合性断片である、請求項１から２１のいずれか一項に記載の方法。
23. 前記ＳＩＲＰγバインダーが、ＳＩＲＰγのアミノ酸残基Ｑ８、Ｅ１０、Ｇ１０９、Ｋ１１、Ｌ１２、及びＤ１４９のうちの１つ又は複数と水素結合を形成する、請求項１から２２のいずれか一項に記載の方法。
24. 前記ＳＩＲＰγバインダーが、ＳＩＲＰγに結合すると、ＳＩＲＰγの高次構造変化を生じる、請求項１から２３のいずれか一項に記載の方法。
25. 前記ＳＩＲＰγバインダーが同時に、２つのＳＩＲＰγ分子に結合し、又はＳＩＲＰγ二量体化を促進する、請求項１から２４のいずれか一項に記載の方法。
26. 前記ＳＩＲＰγバインダーが、前記ＣＤ４７結合部位とオーバーラップしないエピトープに結合する、請求項１から２５のいずれか一項に記載の方法。
27. 前記ＳＩＲＰγバインダーが抗原結合性タンパク質である、請求項１から２６のいずれか一項に記載の方法。
28. 前記抗原結合性タンパク質が、抗体、抗原結合性抗体断片、又は抗体タンパク質産物である、請求項２７に記載の方法。
29. 前記抗原結合性タンパク質が、ＳＩＲＰγの前記ＣＤ４７結合部位内でエピトープに結合する、請求項２７又は２８に記載の方法。
30. 前記対象が、肝細胞癌（ＨＣＣ）、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、肺癌、任意選択的に、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する、請求項１から２９のいずれか一項に記載の方法。
31. 腫瘍又は癌を有する対象を治療する方法であって、請求項１から３０のいずれか一項に従って、前記対象における前記腫瘍又は癌に対する免疫応答を増加することを含む、方法。
32. 腫瘍又は癌を有する対象を治療する方法であって、請求項１から３１のいずれか一項に従って、前記対象におけるＴ細胞のエフェクター活性を増加する、又はＴ細胞の抑制活性を低減することを含む、方法。

Images