JP2022538092A - 抗－ｃｄ１２３抗体、抗－ｃｄ１２３キメラ抗原受容体および抗－ｃｄ１２３キメラ抗原受容体ｔ細胞 - Google Patents

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Abstract

本発明は、ヒトインターロイキン３（ＩＬ３）受容体のα鎖に特異的に結合する抗-ＣＤ１２３モノクローナル抗体、またはその断片に関する。さらに、本発明はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする単離された核酸分子に関する。ここで、前記ＣＡＲは前記核酸分子によってコードされるポリペプチド、ならびにそのような抗体または抗体の断片を有する単離キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）分子、抗-ＣＤ１２３結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および少なくとも刺激ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを有する抗体、またはその抗体の断片を含む。本発明はまた、ＣＡＲをコードする核酸分子を有するベクター、ならびに前記ベクターを含むＴ細胞、また、癌などの哺乳動物における増殖性疾患の治療のためのＣＡＲ分子を発現しているＴ細胞の使用に関する。

Description

本発明は、モノクローナル抗体およびその使用に関するものである。
特に、本発明は、ヒトインターロイキン３（ＩＬ３）受容体のα鎖に特異的に結合する抗-ＣＤ１２３モノクローナル抗体、またはその断片に関する。
本発明はさらに、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする単離された核酸分子に関するものであって、前記ＣＡＲは前記核酸分子によってコードされるポリペプチド、ならびにそのような抗体または抗体の断片を有する単離キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）分子、抗-ＣＤ１２３結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および少なくとも刺激ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを有する抗体、またはその抗体の断片を含む。
本発明はまた、ＣＡＲをコードする核酸分子を有するベクター、ならびに前記ベクターを含むＴ細胞に関するものである。本発明はまた、癌などの哺乳動物における増殖性疾患の治療のためのＣＡＲ分子を発現しているＴ細胞の使用に関するものである。
癌との闘いは世界的な課題である。芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＢＰＤＣＮ）は、まれな侵攻性の癌である。常に侵攻性の白血病の散在に進行する広い皮膚病変を有する形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）の前駆細胞に由来するクローン病である。この種の癌の全生存期間（ＯＳ）の中央値は８～１２カ月である。
ＢＰＤＣＮの予後、治療ともに著しく不良である。強化化学療法を受けた対象のほぼ全員が数週間から数カ月後に再発するため、その化学療法の効果がない。
ジフテリア毒素に融合したヒトインターロイキン３（ＩＬ３）のみからなるＳＬ－４０１と呼ばれる融合タンパク質による治療をもたらす。参考文献：アンジェロ－デレタラ Ｆ，ロギー Ａ，フランケル ＡＥ，ラマルティー Ｂ，セイユ Ｅ，ビーチッレ Ｓ他、体内および対外における芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍のインターロイキン－３受容体標的生物学的製剤ＳＬ－４０１に対する感受性、ヒーマトロジィカ、２０１５、１００（２）：２２３－３０。
本発明により前記状況は改善されている。
出願人は、インターロイキン－３（ＩＬ３）受容体のα鎖であるＣＤ１２３－と呼ばれるタンパク質が、ＢＤＰＣＮ患者全員の癌細胞に過剰に発現されていたことを発見した。参考文献：ガルナッシュ－オットー Ｆ、フォイヤール Ｊ、フェラン Ｃ、ビーチッレ Ｓ、トリモロー Ｆ、セイユ Ｅ他，形質細胞様樹状細胞白血病の拡大された診断基準，ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・ヒーマトロジィ、２００９、１４５（５）：６２４－３６。
結果として、本発明は、治療標的としてＣＤ１２３を用いることに着目する。
この文脈において、またＣＤ１２３を目的とする生物療法を開発する目的で、出願人はヒトＣＤ１２３に特異的に結合する抗-ＣＤ１２３モノクローナル抗体（ＭＡ）の作製、開発、スクリーニングおよび選択に成功した。一般的にこれらの抗体は治療に使用され得る。より具体的には、形質細胞様樹状細胞腫瘍型白血病および他のＣＤ１２３を発現する病理に対する武器として治療に使用され得る。
癌と闘う急速に進化しつつある技術は、改変されたＴ細胞（またはＴリンパ球）を使用するものである。これらのＴ細胞はいわゆるキメラ抗原受容体を含む。キメラ抗原受容体は、癌細胞によって発現される標的抗原に対して特異的に指向され、一般にＣＡＲと呼ばれる。
これを踏まえて、出願人は、新たに開発された抗-ＣＤ１２３抗体を用いて、癌細胞と特異的かつ効率的に戦うように、ＣＤ１２３を特異的に標的とするＣＡＲを発現するようにＴ細胞を遺伝子組み換えるため、多数の困難を克服した。
この新しい治療武器は、ＢＰＤＣＮ患者またはＢＰＤＣＮの再発患者、ならびに強化化学療法、ＳＬ－４０１での療法、造血幹細胞同種移植または他の治療法による治療されたＢＰＤＣＮ患者に適用し得る。
前記課題を解決するため、本発明の一実施形態は、９．５×１０―９ Ｍ未満のＫＤ値、９．０×１０―４ ｓ-1未満の解離速度定数Ｋoff、少なくとも７×１０４ Ｍｓ-1の会合速度定数Ｋonを有することを特徴とする抗原ＣＤ１２３に特異的に結合する抗体であって、
前記抗体は、ＡＢ１、ＡＢ２、ＡＢ３、ＡＢ４、ＡＢ５、およびＡＢ６からなる群から選択され、
―ＡＢ１は、重鎖および軽鎖を含み、重鎖は、配列番号２５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、軽鎖は、配列番号２６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み；
―ＡＢ２は、重鎖および軽鎖を含み、重鎖は、配列番号２７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、およびアミノ酸配列番号３に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、軽鎖は、配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み；
―ＡＢ３は、重鎖および軽鎖を含み、重鎖は、配列番号２９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、軽鎖は、配列番号３０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号６のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み；
―ＡＢ４は、重鎖および軽鎖を含み、重鎖は、配列番号３１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、軽鎖は、配列番号３２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み；
―ＡＢ５は、重鎖および軽鎖を含み、重鎖は、配列番号３３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、軽鎖は、配列番３４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、
―ＡＢ６は、重鎖および軽鎖を含み、重鎖は、配列番３５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、軽鎖は、配列番３６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む、抗体。
本発明の実施態様によれば、ＡＢ１は、配列番号８５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する重鎖、及び配列番号８６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する軽鎖を含み、
前記重鎖は、配列番号２５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、
前記軽鎖は、配列番号２６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み；
ＡＢ２は、配列番号８７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する重鎖、および配列番号８８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する軽鎖を含み、
前記重鎖は、アミノ酸配列配列番号２７に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の相同性をする相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、
前記軽鎖は、配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み；
ＡＢ３は、配列番号８９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する重鎖、および配列番号９０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する軽鎖を含み、
前記重鎖は、配列番号２９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の相同性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、
前記軽鎖は、配列番号３０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み；
ＡＢ４は、配列番号９１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する重鎖、および配列番号９２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する軽鎖を含み、
前記重鎖は、配列番号３１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１９のアミノ酸配列対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号７のアミノ酸配列対して少なくとも９０％の相同性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、
前記軽鎖は、配列番号３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み；
ＡＢ５は、配列番号９３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する重鎖、および配列番号９４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する軽鎖を含み、
前記重鎖は、配列番号３３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、およびミノ酸配列番号９に対して少なくとも９０％の相同性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、
前記軽鎖は、配列番３４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み；
ＡＢ６は、配列番号９５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する重鎖、および配列番号９６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する軽鎖を含み、
前記重鎖は、配列番号３５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、
前記軽鎖であって、配列番号３６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む。
本発明の好ましい実施形態によれば、ＡＢ１は配列番号８５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する重鎖、および配列番号８６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖を含み、
前記重鎖であって、配列番号２５のアミノ酸配列からなる相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３のアミノ酸配列からなる相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１のアミノ酸配列からなる相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、
前記軽鎖であって、配列番号２６のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１４のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号２のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み；
ＡＢ２は配列番号８７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する重鎖、および配列番号８８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖を含み、
前記重鎖であって、配列番号２７のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１５のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号３のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、
前記軽鎖であって、配列番号２８のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１６のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号４のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み；
ＡＢ３は配列番号８９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する重鎖、および配列番号９０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖を含み、
前記重鎖であって、配列番号２９のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１７のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号５のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、
前記軽鎖であって、配列番号３０のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１７のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号６のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み；
ＡＢ４は配列番号９１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する重鎖、および配列番号９２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖を含み、
前記重鎖であって、配列番号３１のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１９のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号７のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、
前記軽鎖であって、配列番号３２のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２０のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号８のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み；
ＡＢ５は配列番号９３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する重鎖、および配列番号９４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖を含み、
前記重鎖であって、配列番号３３のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２１のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号９のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、
前記軽鎖であって、配列番号３４のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２２のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１０のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み；
ＡＢ６は配列番号９５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する重鎖、および配列番号９６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖を含み、
前記重鎖であって、配列番号３５のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２３のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１１のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、
前記軽鎖であって、配列番号３６のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２４のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１２のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む。
本発明の別の実施形態によれば、ＡＢ１の重鎖は、配列番号３７のアミノ酸配列のみからなる第一フレームワーク領域（ＦＲ１）、配列番号３８のアミノ酸配列のみからなる第二フレームワーク領域（ＦＲ２）、配列番号３９のアミノ酸配列のみからなる第三フレームワーク領域（ＦＲ３）、配列番号４０のアミノ酸配列のみからなる第四フレームワーク領域（ＦＲ４）を含む可変領域を有し、ＡＢ１の軽鎖は、配列番号６１のアミノ酸配列のみからなる第一フレームワーク領域（ＦＲ１）、配列番号６２のアミノ酸配列のみからなる第二フレームワーク領域（ＦＲ２）、配列番号６３のアミノ酸配列のみからなる第三フレームワーク領域（ＦＲ３）、配列番号６４のアミノ酸配列のみからなる第四フレームワーク領域（ＦＲ４）を含む可変領域を有し；
ＡＢ２の重鎖は、配列番号４１のアミノ酸配列のみからなる第一フレームワーク領域（ＦＲ１）、配列番号４２のアミノ酸配列のみからなる第二フレームワーク領域（ＦＲ２）、配列番号４３のアミノ酸配列のみからなる第三フレームワーク領域（ＦＲ３）、配列番号４４のアミノ酸配列のみからなる第四フレームワーク領域（ＦＲ４）を含む可変領域を有し、ＡＢ２の軽鎖は、配列番号６５のアミノ酸配列のみからなる第一フレームワーク領域（ＦＲ１）、配列番号６６のアミノ酸配列のみからなる第二フレームワーク領域（ＦＲ２）、配列番号６７のアミノ酸配列のみからなる第三フレームワーク領域（ＦＲ３）、配列番号６８のアミノ酸配列のみからなる第四フレームワーク領域（ＦＲ４）を含む可変領域を有し；
ＡＢ３の重鎖は、配列番号４５のアミノ酸配列のみからなる第一フレームワーク領域（ＦＲ１）、配列番号４６のアミノ酸配列のみからなる第二フレームワーク領域（ＦＲ２）、配列番号４７のアミノ酸配列のみからなる第三フレームワーク領域（ＦＲ３）、配列番号４８のアミノ酸配列のみからなる第四フレームワーク領域（ＦＲ４）を含む可変領域を有し、ＡＢ３の軽鎖は、配列番号６９のアミノ酸配列のみからなる第一フレームワーク領域（ＦＲ１）、配列番号７０のアミノ酸配列のみからなる第二フレームワーク領域（ＦＲ２）、配列番号７１のアミノ酸配列のみからなる第三フレームワーク領域（ＦＲ３）、配列番号７２のアミノ酸配列のみからなる第四フレームワーク領域（ＦＲ４）を含む可変領域を有し；
ＡＢ４の重鎖は、配列番号４９のアミノ酸配列のみからなる第一フレームワーク領域（ＦＲ１）、配列番号５０のアミノ酸配列のみからなる第二フレームワーク領域（ＦＲ２）、配列番号５１のアミノ酸配列のみからなる第三フレームワーク領域（ＦＲ３）、配列番号５２のアミノ酸配列のみからなる第四フレームワーク領域（ＦＲ４）を含む可変領域を有し、ＡＢ４の軽鎖は、配列番号７３のアミノ酸配列のみからなる第一フレームワーク領域（ＦＲ１）、配列番号７４のアミノ酸配列のみからなる第二フレームワーク領域（ＦＲ２）、配列番号７５のアミノ酸配列のみからなる第三フレームワーク領域（ＦＲ３）、配列番号７６のアミノ酸配列のみからなる第四フレームワーク領域（ＦＲ４）を含む可変領域を有し；
ＡＢ５の重鎖は、配列番号５３のアミノ酸配列のみからなる第一フレームワーク領域（ＦＲ１）、配列番号５４のアミノ酸配列のみからなる第二フレームワーク領域（ＦＲ２）、配列番号５５のアミノ酸配列のみからなる第三フレームワーク領域（ＦＲ３）、配列番号５６のアミノ酸配列のみからなる第四フレームワーク領域（ＦＲ４）を含む可変領域を有し、ＡＢ５の軽鎖は、配列番号７７のアミノ酸配列のみからなる第一フレームワーク領域（ＦＲ１）、配列番号７８のアミノ酸配列のみからなる第二フレームワーク領域（ＦＲ２）、配列番号７９のアミノ酸配列のみからなる第三フレームワーク領域（ＦＲ３）、配列番号８０のアミノ酸配列のみからなる第四フレームワーク領域（ＦＲ４）を含む可変領域を有し；
ＡＢ６の重鎖は、配列番号５７のアミノ酸配列のみからなる第一フレームワーク領域（ＦＲ１）、配列番号５８のアミノ酸配列のみからなる第二フレームワーク領域（ＦＲ２）、配列番号５９のアミノ酸配列のみからなる第三フレームワーク領域（ＦＲ３）、配列番号６０のアミノ酸配列のみからなる第四フレームワーク領域（ＦＲ４）を含む可変領域を有し、ＡＢ６の軽鎖は、配列番号８１のアミノ酸配列のみからなる第一フレームワーク領域（ＦＲ１）、配列番号８２のアミノ酸配列のみからなる第二フレームワーク領域（ＦＲ２）、配列番号８３のアミノ酸配列のみからなる第三フレームワーク領域（ＦＲ３）、配列番号８４のアミノ酸配列からなる第四フレームワーク領域（ＦＲ４）を含む可変領域を有する。
本発明の別の実施形態によれば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする単離された核酸分子であって、前記ＣＡＲは、抗-ＣＤ１２３結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および少なくとも刺激ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗体または抗体断片を含み、かつ抗-ＣＤ１２３結合ドメインを有する抗体、またはその抗体の断片を含むことを特徴とし、
前記抗-ＣＤ１２３結合ドメインは、下記重鎖および軽鎖を含む：
（i）配列番号２５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖、ならびに配列番号２６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む軽鎖；
（ii）配列番号２７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖、ならびに配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む軽鎖；
（iii）配列番号２９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖、ならびに配列番号３０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む軽鎖；
（iv）配列番号３１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖、ならびに配列番号３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む軽鎖；
（v）配列番号３３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖、ならびに配列番号３４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む軽鎖；
または、
（vi）配列番号３５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖、ならびに配列番号３６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む軽鎖。
実施形態によれば、本発明の単離された核酸分子の抗－ＣＤ１２３結合ドメインは、抗体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、またはその他の抗体の断片からなる群より選択され、ｓｃＦｖが好ましい。 別の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインはＣＤ３－ゼータ（ＣＤ３ζ）であり、必要により、ＣＤ２８、４．１ＢＢ、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ），ＯＸ－４０およびその結合からなる群より選択される共刺激ドメインを含む。
本発明の別の実施態様は、単離されたポリペプチド分子は前述した核酸分子によってコードされることを特徴とする。
本発明のさらなる態様は、単離されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）分子は抗体または抗体の断片を含むことを特徴とし、前記抗体または抗体の断片は、抗－ＣＤ１２３結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および少なくとも刺激ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、
前記抗－ＣＤ１２３結合ドメインは、下記重鎖および軽鎖を含む：
（i）配列番号２５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖、ならびに配列番号２６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む軽鎖；
（ii）配列番号２７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖、ならびに配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む軽鎖；
（iii）配列番号２９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖、ならびに配列番号３０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む軽鎖；
（iv）配列番号３１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖、ならびに配列番号３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む軽鎖；
（v）配列番号３３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖、ならびに配列番号３４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む軽鎖；
または、
（vi）配列番号３５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖、ならびに配列番号３６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む軽鎖。
本発明の別の実施態様は、単離されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）分子であって、前記ＣＡＲは前述のとおりであることを特徴とする。
本発明の別の実施態様は、発現ベクターに本発明の核酸分子を含むことを特徴とし、前記ベクターは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、プラスミド、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターからなる群より選択される。
本発明の別の実施態様は、改変された免疫細胞に本発明の核酸分子または本発明のベクターを含むことを特徴とする。本発明の一実施態様において、細胞は、その膜において、前述したＣＡＲを発現する。
一実施形態によれば、細胞は医薬として有用であり、優先して哺乳動物、好ましくはヒトにおける増殖性疾患の治療に有用である。前記増殖性疾患は、ＣＤ１２３過剰発現関連する疾患であって、好ましくは芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍(ＢＰＤＣＮ)の治療に有用である。
本発明のさらなる実施形態は、医薬組成物であって、前述した改変された免疫細胞および医薬賦形剤を含むことを特徴とする。
本発明のさらに別の実施態様は、免疫細胞を改変する方法であって、前述した発現ベクターを有する細胞の形質移入を含むことを特徴とする。
本発明のさらなる態様は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする単離された核酸分子を特徴とし、核酸分子は、配列番号９７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、優先的には９０％、より優先的には９５％、最も優先的には１００％の同一性を有する配列からなる。
本発明の他の特徴および利点は、以下の、例示的で非限定的な方法で与えられた具体的な例の記載、および以下の図を読むと目立つ、および／または明確になるであろう。
本発明の抗体の重鎖および軽鎖の両方の相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、相補的決定領域２（ＣＤＲ２）および相補的決定領域３（ＣＤＲ３）のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す図である； 本発明の抗体の重鎖のフレームワーク領域１（ＦＲ１）、フレームワーク領域２（ＦＲ２）、フレームワーク領域３（ＦＲ３）およびフレームワーク領域４（ＦＲ４）のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す図である； 本発明の抗体の軽鎖のフレームワーク領域１（ＦＲ１）、フレームワーク領域２（ＦＲ２）、フレームワーク領域３（ＦＲ３）およびフレームワーク領域４（ＦＲ４）のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す図である； 本発明の第一抗体の、軽鎖のコンセンサスアミノ酸配列および重鎖のコンセンサスアミノ酸配列を示す図である； 本発明の第二抗体の、軽鎖のコンセンサスアミノ酸配列および重鎖のコンセンサスアミノ酸配列を示す図である； 本発明の第三抗体の、軽鎖のコンセンサスアミノ酸配列および重鎖のコンセンサスアミノ酸配列を示す図である； 本発明の第四抗体の、軽鎖のコンセンサスアミノ酸配列および重鎖のコンセンサスアミノ酸配列を示す図である； 本発明の第五抗体の、軽鎖のコンセンサスアミノ酸配列および重鎖のコンセンサスアミノ酸配列を示す図である； 本発明命名された第六抗体の軽鎖のコンセンサスアミノ酸配列および重鎖のコンセンサスアミノ酸配列を示す図である； 正常な造血細胞およびＢＰＤＣＮ上のＣＤ１２３発現の評価に基づくフローサイトメトリーグラフを示す図である； ＢＰＤＣＮおよび他の非ｐＤＣ急性白血病におけるＣＤ１２３発現の評価に基づく表およびフローサイトメトリーグラフである； 本発明のキメラ抗原受容体のデザインの図、本発明のキメラ抗原受容体を含む本発明によるＴ細胞の産生と相対的なウェスタンブロットおよびフローサイトメトリーグラフである； 本発明によるキメラ抗原受容体の核酸配列を示す図である； 形質移入されないＴ細胞と比較した本発明によるＣＡＲ Ｔ細胞の表現型のアッセイと相対的なフローサイトメトリーグラフである； 本発明のキメラ抗原受容体および形質移入されない細胞を有する標的細胞を共培養する図、ならびに本発明のＣＡＲのＢＰＤＣＮ細胞株およびＢＰＤＣＮ患者由来異種移植細胞に対する特異的細胞毒性と相対的なフローサイトメトリーグラフである； ＣＤ１２３+標的細胞との共培養における本発明のＣＤ１２３Ｒ ＣＡＲ Ｔ細胞の機能特性化と相対的なフローサイトメトリーグラフである； ＢＰＤＣＮ細胞株（ＣＡＬ－１）および患者由来の異種移植細胞（ＰＤＸ）に対する本発明のＴ細胞の生体内の抗腫瘍活性に関する異種移植モデルの図、生物発光イメージングおよびそれに相応のグラフ、ならびにフローサイトメトリーグラフである； ＢＰＤＣＮ細胞株（ＣＡＬ－１）に対する本発明のＴ細胞の生体内の抗腫瘍活性に関する異種移植モデルの図、生物発光イメージングおよびそれと相対的なグラフである； 異なる細胞型におけるＣＤ１２３発現に関する蛍光グラフ、腫瘍および正常組織におけるＣＤ１２３発現の免疫組織化学画像、ＣＤ１２３発現と相対的なフローサイトメトリーグラフ、本発明の自己Ｔ細胞の産生のダイアグラム、および低レベルでＣＤ１２３を発現する細胞に対して、ＣＤ１２３に対して本発明のＴ細胞の相対毒性のフローサイトメトリーグラフである； 細胞株（ＣＡＬ－１およびＤＡＵＤＩ）に対する自己Ｔ細胞のＴ細胞の毒性の評価と相対的なフローサイトメトリーに基づくグラフを示す；および 自己ＢＰＤＣＮ芽細胞に対する特異的細胞毒性を誘導したＢＰＤＣＮ患者由来の本発明のＣＤ１２３ Ｔ細胞と相対的なフローサイトメトリーグラフである。
ここの図および記載は、ほとんどの場合、明確な性質の要素を含んでいる。したがって、記載および図は、本発明をより良く理解するために使用されているだけでなく、必要に応じて、その定義に寄与するためにも使用されている。
本記載では、「および／または」という用語は、一つ又はそれ以上が起こり得る関連するケースを包含するものとして解釈されるべきである。例えば、「タンパク質又はタンパク質配列は、標準的な組換え方法および／または合成方法を用いて調製することができる」という表現は、タンパク質又はタンパク質配列が、標準的な組換え方法および合成方法の両方を用いて調製され得ること、またはタンパク質又はタンパク質配列が、標準的な組換え方法を用いて調製され得ることを示し、または、タンパク質又はタンパク質配列が合成方法を用いて調製され得ることを示す。より一般的には、「Ａおよび／またはＢ」のような表現で使用される「および／または」という用語は、「ＡおよびＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」および「Ｂ」を含むことが意図されている。同様に、「Ａ、Ｂ、および／またはＣ」のような表現で使用される用語「および／または」は、以下の実施形態の各々を包含することを意図している：Ａ、Ｂ、およびＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡおよびＣ；ＡおよびＢ；ＢおよびＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；およびＣ（単独）。
「含む」という用語は、特に言及されたすべての特徴のほか、任意の、追加の、不特定の特徴を包含するものとして解釈されるべきである。より一般的には、用語「含む」は、記載されたステップまたは要素、あるいはステップまたは要素の群を含むことを意味するが、他のステップまたは要素、あるいはステップまたは要素の群を除外しないことを意味すると理解されるであろう。「からなる」という用語は、具体的に言及されている特徴以外の特徴が存在しないと解釈される。さらに、不定冠詞「ａ」または「ａｎ」は、複数を除外しない。
「一実施形態は」、「特定の実施形態」、「ある実施形態」、「追加の実施形態」、「別の実施形態」または「さらなる実施形態」、または「一実施態様」、「特定の実施態様」、「ある実施態様」、「追加の実施態様」、「別の実施態様」または「さらなる実施態様」、その組合せ全体を参照すると、実施態様に関連して記述された特定の特徴、構造または特質が、本発明の少なくとも１つの実施形態に含まれることを意味する。冠詞「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、ここでは、１つまたは１つ以上（すなわち、少なくとも１つ）の文法の対象の冠詞を意味で使用される。
「遺伝子」という用語は、アミノ酸の特定の配列をコードするＤＮＡ配列（核酸配列またはヌクレオチド配列）を意味する。遺伝子は、１つ以上のタンパク質または酵素の全てまたは一部を含む。遺伝子が発現される条件を少なくとも部分的に決定する調節ＤＮＡ配列（プロモーター配列など）を含んでもよい。構造遺伝子ではない遺伝子の一部は、ＤＮＡからＲＮＡに転写されるものもあるが、アミノ酸配列に転写されるものはない。他の遺伝子は、構造遺伝子の調節因子として、あるいはＤＮＡ転写の調節因子として機能することもよい。特に、遺伝子という用語は、タンパク質をコードするゲノム配列、すなわち調節因子、プロモーター、イントロンおよびエキソン配列を含む配列を意図してもよい。
２つ以上の核酸配列またはアミノ酸配列の文脈においての「同一」または「パーセント」（％）、「同一」という用語は、配列同一性の一部として任意の保存的アミノ酸置換を考慮せず、比較して最大対応のためにアラインメント（必要であればギャップを導入）した場合に、同じであるか、または同じであるヌクレオチドまたはアミノ酸残基の特定割合を有する２つ以上の配列またはサブ配列を意味する。同一性のパーセントは、シークエンス比較ソフトウェアまたはアルゴリズムを用いて、または目視検査によって測定することができる。アミノ酸またはヌクレオチド配列のアラインメントを得るために用いることができる様々なアルゴリズムおよびソフトウェアが当該技術分野においてよく知られている。配列アラインメントアルゴリズムのそのような非限定的な例の１つであるアルゴリズムは下記文献に記載された：カーリン他，米国科学アカデミー紀要，８７：２２６４－２２６８，１９９０。その修正したものは、カーリン他，米国科学アカデミー紀要，９０：５８７３－５８７７，１９９３に記載されていた。さらに、ＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれた（アルツシュール他，ヌークレーイク・アシッド・リサーチ，２５：３３８９－３４０２，１９９１）。ギャップ付きＢＬＡＳＴは、下記文献に記載されているように使用することもできる：
アルツシュール他，ヌークレーイク アシッド リサーチ，２５：３３８９－３４０２，１９９７。ＢＬＡＳＴ－２、ＷＵＢＬＡＳＴ－２（アルツシュール他，酵素学実験法，２６６：４６０－４８０、１９９６）、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ－２（ジェネンテック社、サウス・サンフランシスコ、カリフォルニア州）またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）は、配列をアラインメントするために使えるその他の公的に利用可能なソフトウェアプログラムである。さらに、ニードルマンおよび ヴンシュ（ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー，（４８）：４４４－４５３，１９７０）のアルゴリズムを用いて、２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントを決定することができる（例えば、Ｂｌｏｓｓｕｍ ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれかを用い、ギャップペナルティ１６、１４、１２、１０、８、６、または４および長のペナルティ１、２、３、４、５のいずれかを用いる）。あるいは、ヌクレオチド又はアミノ酸配列間の同一性のパーセントは、マイアズおよびミラのアルゴリズムを用いて決定することができる（ＣＡＢＩＯＳ，４：１１－１７，１９８９）。例えば、パーセント同一性は、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）を用いて、および、長のペナルティ１２およびギャップペナルティ４の残基表を有するＰＡＭ１２０を用いて決定することができる。特定のアラインメントソフトウェアによる最大アラインメントのための適切なパラメータは、当業者によって決定することができる。通常、アライメントソフトウェアのデフォルトパラメータが使用される。
「参照配列と少なくとも８５％同一である」配列、または「参照配列と少なくとも８５％同一である何か」は、その全長において、参照配列の全長と８５％以上、特に９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する配列である。文脈において、本明細書には、「同一性の割合」は、ペアワイズアラインメントを用いて計算される（すなわち、２つの配列がその全長にわたって比較される）。前述したように、２つ以上の配列の同一性を比較する方法は、当該技術分野においてよく知られている。例えば、ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋウェブサイト上で入手可能なＥＭＢＯＳＳ Ｎｅｅｄｌｅなどのバイオインフォマティクスツールまたはプログラムを用いて、本発明のペアワイズ配列アラインメントを作成することができる。一般的に、それらの全長を考慮した場合、２つの配列の最適アラインメント（ギャップを含む）を見出すため、多数のバイオインフォマティクスツールおよびプログラムは、ニードルマン－ ヴンシュアルゴリズム(ニードルマンおよび ヴンシュ，１９７０、ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー．４８：４４３－４５３）を使用している。しかしながら、他のアルゴリズムは、様々なバイオインフォマティクスツールまたはプログラムにおいて実装されでもよい。
より一般的に、本発明の目的上、「配列同一性」または「配列相同性」は、比較ウィンドウにおいて、２つのアラインメントされた配列を比較することによって計算される。配列アラインメントにより、比較ウィンドウ内の２つの配列の両方に共通の位置（ヌクレオチドまたはアミノ酸）の数を決定することが可能にさせる。次に、共通の位置の数を比較ウィンドウにおける位置の総数で除し、１００を乗じて相同性の割合を求める。配列同一性の割合の決定は、手動で、または周知のバイオインフォマティクスコンピュータプログラムによって行うことができる。
本発明による、２つのポリペプチド間の同一性の割合は、１０．０に等しい「ギャップ・オープン」パラメータ、０．５に等しい「ギャップ・エクステンド」パラメータを有するＥＭＢＯＳＳ：Ｎｅｅｄｌｅ（ｇｌｏｂａｌ）プログラムを用いて計算することができる。
参照配列に「少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性」のアミノ酸配列を有する（またはからなる）タンパク質、またはその一部は、参照配列と比べ、欠失、挿入および／または置換などの突然変異を含むことがある。
置換の場合、参照配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列からなるタンパク質は、参照配列以外の別の種に由来する相同配列（すなわち、「相同性」）に対応してもよい。アミノ酸の置換は、保存的なまたは非保存的なものである。保存的な置換は、１つのアミノ酸が、類似の側鎖、すなわち類似の構造的および／または類似の化学的特性を有する別のアミノ酸に置換される置換である。この点に関しては、下記の間で保存的置換が起こる可能性がある：
-非極性側鎖を有するアミノ酸：グリシン（Ｇｌｙ）、アラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイシン（ｌｉｅ）、プロリン（Ｐｒｏ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、トリプトファン(Ｔｒｐ);
-無電荷極性側鎖を有するアミノ酸：アスパラギン（Ａｓｎ）、グルタミン（Ｇｉｎ）、セリン（Ｓｅｒ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、チロシン（Ｔｙｒ）、システイン（Ｃｙｓ）；
-酸性側鎖を有するアミノ酸：アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸(Ｇｌｕ);
-塩基性側鎖を有するアミノ酸：リシン（Ｌｙｓ）、アルギニン（Ａｒｇ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）；
-β分岐側鎖を有するアミノ酸：トレオニン（Ｔｈｒ）、バリン（Ｖａｌ）、イソロイシン（ｌｉｅ）；
-芳香族側鎖を有するアミノ酸：チロシン（Ｔｙｒ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）。
前記の間で非保存的置換がランダムに起こることがある。タンパク質の三次元構造内の個々のアミノ酸の位置によっては、保存的置換とか、非保存的置換とか、別の定義が与えられることがある。
本発明に使用されている技術は、特に指定のない限り、技術者が知っている化学、生化学、有機化学、分子生物学、微生物学、組換えＤＮＡ技術、遺伝学、遺伝および／またはバイオテクノロジー細胞工学、免疫学、および細胞生物学の方法を用いる。必要に応じて、そのような方法を実例の目的で記載する。これらの方法や他の技術のほとんどは文献に記載されている。例えば、サンブルック他，分子クローニング：実験室マニュアル（第３版，２００１年）；サンブルック他，分子クローニング：実験室マニュアル（第２版，１９８９年）；マニアティス他，分子クローニング：実験室マニュアル（１９８２年); オーズベル他，分子生物学の現行の実施要綱（ジョン・ウィリー＆サンズ，２００８年7月更新）；分子生物学の実施要綱の略：分子生物学の現行の実施要綱からの方法の概要、ジョン・ウィリー＆サンズ，第４版，１９９９年；ＤＮＡクローニング：実践アプローチ，第１、２巻（ＩＲＬプレス，オックスフォード，１９８５年）；複合ゲノムの解析技術、アーナンド、アメリカプレス、１９９２年；転写と翻訳，Ｂ.ネームズおよび Ｓ.ヒギンス，１９８４年；分子クローニングための実践ガイド，ペルバル，１９８４年；抗体，ハーロウおよびラーエー，コールドスプリングハーバーラボラトリープレス，コールド・スプリング・ハーバー，１９９８年;免疫学の現行の実施要綱，Ｑ．Ｅ．コリガン，Ａ．Ｍ．クルイスビーク，Ｄ．Ｈ．マルグリーズ，Ｅ．Ｍ．シェヴァチおよびＷ．ストロバー，１９９１；免疫学年鑑。特に定義しない限り、本明細書において使用される全ての技術的および科学的用語は、本発明の分野において当業者が一般的に理解しているものと同じ意味を有する。本明細書に記載されている方法および材料と同様または同等のいずれの方法および材料も、本発明の実施または試験に使用することができるが、組成物、方法および材料の好ましい実施形態を本明細書に記載する。
技術者に理解されているおよび本明細書に記載するように、「免疫グロブリン」とも呼ばれ「抗体」は、２つの重鎖および２つの軽鎖を含む。各重鎖は可変領域と第１、第２、第３定常領域からなり、各軽鎖は可変領域と定常領域からなる。２つの重鎖はジスルフィド結合で互いに結合し、各重鎖はジスルフィド結合で軽鎖と結合している。
哺乳類では、λ（Ｉ）とκ（ｋ）の２種類の軽鎖がある。さらに、抗体分子の機能活性を決定する５つの主要な重鎖クラス（またはアイソタイプ）がａ、ｄ、ｅ、ｙ、およびｍとして分類される: ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭである。
それぞれの鎖は異なる配列ドメインを含む。軽鎖は可変ドメイン（ＶＬ）と定常ドメイン（ＣＬ）の２つのドメインまたは領域を含む。重鎖は可変ドメイン（ＶＨ）と３つの定常ドメイン（ＣＨＩ、ＣＨ２およびＣＨ３、総称してＣＨと呼ぶ）の４つのドメインを含む。より正確に言えば、完全な抗体は“Ｙ”の形をしている。Ｙの付け根または茎は、２本の重鎖がジスルフィド結合で結合した第２および第３の定常領域（およびＩｇＥとＩｇＭについては、第４の定常領域）からなり、ヒンジを形成する鎖間ジスルフィド結合と呼ばれることもある。重鎖ｙ、ｄは３つの縦に並んでいる（インライン)Ｉｇドメインからなる定常領域と、柔軟性が加わるためのヒンジ領域を有する。重鎖ｍとｅは４つの免疫グロブリン領域からなる定常領域を有する。第２および第３の定常領域は、それぞれ「ＣＨ２領域」および「ＣＨ３領域」と称される。Ｙの各腕または分枝は、単一軽鎖の可変領域および定常領域に結合した単一の重鎖の可変領域および第一定常領域を含む。軽鎖および重鎖の可変領域は抗原結合を担う。より一般的には、軽鎖および重鎖の可変領域（ＶＬおよびＶＨ）が抗原への結合認識および特異性を決定する。軽鎖および重鎖の定常領域（ＣＬおよびＣＨ）は、抗体鎖会合、分泌、経胎盤移動性、補体結合、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）への結合などの重要な生物学的特性を付与する。Ｆｖ断片は免疫グロブリンのＦａｂ断片のＮ末端部分であり、１つの軽鎖と１つの重鎖の可変部からなる。抗体の特異性は、抗体結合部位と抗原決定子との間の構造的相補性に存する。
抗体結合部位は、主として超可変または相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基で構成される。時折、超可変領域以外の残基またはフレームワーク領域（ＦＲ）残基がドメイン全体の構造、したがって結合部位に影響を及ぼすことがある。相補性決定領域またはＣＤＲは、本来の免疫グロブリン結合部位の天然のＦｖ領域の結合親和性および特異性を一緒に画定するアミノ酸配列を指す。各免疫グロブリンの軽鎖および重鎖は３つのＣＤＲがあり、一般にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と命名され、より詳細には、それぞれＣＤＲ１－Ｌ、ＣＤＲ２－Ｌ、ＣＤＲ３－ＬおよびＣＤＲ１－Ｈ、ＣＤＲ２－Ｈ、ＣＤＲ３－Ｈと命名される。他の命名法は、文献において見出すことができる。このように、抗体の重鎖の可変領域に位置するＣＤＲは、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３と称することができるが、抗体の軽鎖の可変領域に位置するＣＤＲは、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３と称することができる。異なる特異性をもつ抗体（すなわち、異なる抗原に対する異なる結合部位）は異なるＣＤＲをもつ。したがって、従来の抗体抗原結合部位は、重鎖および軽鎖Ｖ領域の各々からのＣＤＲセットを含む６つのＣＤＲを含む。
前述したように、軽鎖および重鎖の可変領域は、超可変ＣＤＲ領域によって分断された「フレームワーク」領域と呼ばれる領域を含む。ＣＤＲはカバット他による配列またはチョーシア他により構造のような下記文献に記載されている方法で画定または識別されていることができる。例えば、カバット他による配列：ウ，ＴＴおよびカバット，Ｅ．Ａ．，ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・メディシン，１３２（２）：２１１－５０，１９７０；ボーデン，Ｐ．およびラバトＥ．Ａ．，米国科学アカデミー紀要，８４：２４４０－２４４３，１９８７；カバット他，免疫学に注目されているタンパク質の配列，アメリカ合衆国保健福祉省，１９９１年、またはチョーシア他による構造：チョーシア，Ｃ．およびレスキ，Ａ．Ｍ．，ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー．，１９６（４）：９０１－９１７，１９８７；チョーシア，Ｃ．他，ネイチャー，３４２：８７７－８８３，１９８９。
異なる軽鎖または重鎖のフレームワーク領域の配列は、ヒトなどの生物種内で比較的保存されている。より一般的には、「フレームワーク領域」（ＦＲ)は単一種の異なる免疫グロブリン間で比較的保存されている。抗体のフレームワーク領域は、構成する軽鎖および重鎖のすべてのフレームワーク領域のいくぶん組合わせであり、すなわち抗体が折りたたまれて活性をもつときに、三次元空間においてＣＤＲが位置を決めさせて、並べている。ＣＤＲは、主として抗原のエピトープへの結合の要因である。前述したように、各鎖のＣＤＲはＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３と呼ばれる。実際、ＣＤＲにはＮ末端から順に番号がつけられている。免疫グロブリンの軽鎖および重鎖は、それぞれＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４と名付けられた４つのＦＲを有し、さらに正確には、軽鎖ＦＲ１－Ｌ、ＦＲ２－Ｌ、ＦＲ３－Ｌ、ＦＲ４－Ｌ、および軽鎖ＦＲ１－Ｈ、ＦＲ２－Ｈ、ＦＲ３－Ｈ、ＦＲ４－Ｈである。それに応じて、軽鎖可変ドメインは、（ＦＲｌ－Ｌ）－（ＣＤＲｌ－Ｌ）－（ＦＲ２－Ｌ）－（ＣＤＲ２－Ｌ）－（ＦＲ３－Ｌ）－（ＣＤＲ３－Ｌ）－（ＦＲ４－Ｌ）と指定され、重鎖可変領域は（ＦＲｌ－Ｈ）－（ＣＤＲｌ－Ｈ）－（ＦＲ２－Ｈ）－（ＣＤＲ２－Ｈ）－（ＦＲ３－Ｈ）－（ＣＤＲ３－Ｈ）－（ＦＲ４－Ｈ）と指定され得る。当業者がＣＤＲのアミノ酸配列を知ることにより、フレームワーク領域ＦＲ１－Ｌ，ＦＲ２－Ｌ，ＦＲ３－Ｌ，ＦＲ４－Ｌおよび／またはＦＲ１－Ｈ，ＦＲ２－Ｈ ＦＲ３－Ｈ，ＦＲ４－Ｈを容易に決定することができる。
本明細書における参考文献の「ＶＨ」または「ＶＨ」は、抗体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、または本願に開示されている他の抗体断片を含む免疫グロブリン重鎖の可変領域を指す。「ＶＬ」または「ＶＬ」への言及は、抗体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、または本願に開示されている他の抗体断片を含む免疫グロブリン軽鎖の可変領域を指す。
本明細書中で使用される、「抗体」または「免疫グロブリン」という用語は、主に従来の抗体、特にモノクローナル抗体、およびその断片、ならびにそれらの単一ドメイン抗体およびその断片、特に単一ドメイン抗体の可変重鎖を意味し、さらにキメラ抗体、ヒト化、二重特異的または多重特異的抗体を意味する。抗体は、ヒト抗体、ネズミ抗体、またはヒト化抗体であることを好ましい。
「モノクローナル抗体」または「ｍＡｂ」は、Ｂリンパ球の単一クローンによって、または単一抗体の重鎖および軽鎖遺伝子がトランスフェクトされた細胞によって産生される抗体である。モノクローナル抗体は、例えば、骨髄腫細胞と免疫脾臓細胞との融合からハイブリッド抗体形成細胞を産生することによって、または組換え技術、すなわち、タンパク質工学による産生によって、当該技術分野分野においてよく知られている方法によって産生される。モノクローナル抗体には、ヒト化モノクローナル抗体が含まれる。より一般的には、モノクローナル抗体は、特定の抗原に対して指向される単一のアミノ酸組成物の分子であり、当該技術分野で知られているもの以外の特定の方法による抗体の産生を必要とするものと解釈されない。
「キメラ抗体」という用語は、その最も広い意味で、１つの抗体から１つ以上の領域、および１つ以上の他の抗体から１つ以上の領域を含み、操作された抗体を意味する。特に、キメラ抗体は、非ヒト動物に由来する抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインを含み、ＣＨ領域および別の抗体、特にヒト抗体のＣＬドメインと関連している。ヒト以外の動物としては、マウス、ラット、ハムスター、ラビット等の任意の動物を用いることができる。キメラ抗体はまた、少なくとも２つの異なる抗原に対して特異性を有する多特異的抗体を示すことができる。
「抗体」または「免疫グロブリン」という用語は、より最近記載さ、開発された「単一ドメイン抗体」の意味も含む。単一ドメイン抗体は、その相補的決定領域（ＣＤＲ）が単一ドメインポリペプチドの一部である抗体である。単一ドメイン抗体の例としては、重鎖抗体、軽鎖を自然に欠いた抗体、従来の４鎖抗体に由来する単一ドメイン抗体、ならびに改変された単一ドメイン抗体が挙げられる。単一ドメイン抗体は、任意の科、特にマウス、ヒトまたはラビットに由来することができる。単一ドメイン抗体は、軽鎖を欠く重鎖抗体として知られる自然に生じる単一ドメイン抗体であってもよい。特に、ラクダ科（Camelidae）（例えば、ラクダ、ドロメダリー、ラマ、アルパカおよびグアナコ）は、自然に軽鎖を欠いた重鎖抗体を産生する。
これらの軽鎖を欠く単一ドメイン抗体の可変重鎖は、当該技術分野では「ＶＨＨ」または「ナノボディ」として知られている。従来のＶＨドメインと同様に、ＶＨＨは４つのフレームワーク領域（ＦＲｓ）と３つの相補的決定領域（ＣＤＲｓ）を含む。ナノボディが従来の抗体よりも特に有利な点の一つは、ＩｇＧ分子よりも約１０倍小さいことである。その結果、適切に折りたたまれた機能性ナノボディを高収率で生体外の発現により生産することができる。さらに、当該技術分野において、ナノボディが非常に安定であり、タンパク質分解酵素の作用に対して抵抗性であるとの記載がある。ナノボディの性質と生産についての総説がる、たとえば、ハームセンおよびデハードＨＪ，応用微生物学およびバイオテクノロジー．，２００７年，１１月，７７（ｌ）：１３－２２。
ある好適な実施形態において、抗体は、腫瘍細胞上の表面タンパク質に特異的に結合するヒト化抗体（ヒト化モノクローナル抗体など）である。「ヒト化」抗体は、ヒトフレームワーク領域および非ヒト（例えば、マウス、ラット、または合成）免疫グロブリンからの１以上のＣＤＲを含む免疫グロブリンである。そこで、ＣＤＲを除いてヒト化免疫グロブリンのすべての部分は、天然のヒト免疫グロブリン配列の対応する部分と実質的に同一である。ヒト化または他のモノクローナル抗体は、抗原結合または他の免疫グロブリン機能に実質的に影響を及ぼさない、さらなる保存アミノ酸の置換を有してもよい。ヒト化抗体は遺伝子工学によって構築してもよい（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号を参照）。
より一般的には、「ヒト化モノクローナル抗体」という用語は、ヒトにおける免疫応答を回避または最小化するために、完全または部分的に非ヒト起源であり、特定のアミノ酸、特に重鎖および軽鎖のフレームワーク領域を置換するように改変されたモノクローナル抗体を意味する。ヒト化抗体の定常ドメインは、ほとんどの場合、ヒトＣＨドメインおよびＣＬドメインのである。当該技術分野において、抗体配列のヒト化のため様々な方法はよく知られている；例えば、アルマグロおよびフランソン，２００８，フロンティア イン バイオサイエンス．１３：１６１９－１６３３による総説を参照されたい。一般的に用いられる方法の１つは、いわゆるＣＤＲ移植または抗体再形成である。この技術は、一般的にはマウス抗体であるドナー抗体のＣＤＲ配列を、異なる特異性のヒト抗体のフレームワーク骨格へ移植することを含む。ＣＤＲ移植は、ＣＤＲ移植非ヒト抗体の結合特異性および親和性、ひいては生物学的活性を低下させる可能性があるので、親抗体の結合特異性および親和性を保持するために、ＣＤＲ移植抗体の選択された位置に逆突然変異を導入してもよい。可能性のある逆突然変異の位置の同定は、文献および抗体データベースで入手可能な情報を用いて行うことができる。逆突然変異の候補となるアミノ酸残基は、典型的には、抗体分子の表面に位置するものであるが、隠れでいる、または表面露出程度低い残基は、通常は変わらないになるであろう。ＣＤＲ移植および逆突然変異に対する別のヒト化技術のリサーフェイシングは、非ヒト起源の非表面露出残基を保持しつつ、表面残基をヒト残基に改変させる方法である。いわゆる誘導セレクションとして知られている別の代替技術を使用して、ネズミまたはラットなどの抗体から親抗体のエピトープおよび結合特性を保存する完全ヒト抗体を誘導することができる。参考文献：ジェスパー他，バイオテクノロジー，１２，８９９，１９９４。さらにヒト化の方法は、いわゆる４Ｄ－ヒト化である。４Ｄ－ヒト化の実施要綱は、特許出願ＷＯ２００９０３２６６１Ａ１（またはＵＳ２０１１００２７２６６）に記載され、以下の４Ｄヒト化の応用として、ラト抗体可変軽および重ドメイン（ＶＬおよびＶＨ）をヒト化することに例示されている。一例を挙げれば、ラット抗体相同性モデルはＰＤＢ構造をテンプレートとして用いて典型的にはＭＯＥソフトウェア（ｖ．２０１ １．１０－ケミカルコンピューティンググループ，ケベック州，カナダ）で実行された。参考文献：ベルマン他，ヌークレーイク アシッド リサーチ，２８：２３５－２４２，２０００。続いて、ＭＯＥにおいで実施された標準プロシージャを用いてエネルギー最小化にする。次に、分子動力学（ＭＤ）シミュレーションを、ラット抗体の最小化３Ｄ相同性モデル（ＭＯＥソフトウェアで行われた）で実施し、ＬＧＣＲ／ＳＤＩによって設計され、ＭＯＥ内で利用可能な７つの代表的な軽鎖（ｖｋｌ， ｖｋ２ ， ｖｋ３， ｖｋ４ ， ｖｌａｍｂｄａｌ ， ｖｌａｍｂｄａ２， ｖｌａｍｂｄａ３）および７つの代表的な重鎖(ｖｈｌ ａ， ｖｈｌ ｂ， ｖｈ２ ， ｖｈ３， ｖｈ４ ， ｖｈ５， ｖｈ６）に由来する４９のヒトモデルなどと比較した。例えば、ＣＤＲ外側の疎水性、静電性成分および配列の同一性の両方が最も優れた連鎖（Ｖｋｘ－Ｖｈｘ）の１つのモデルが、４Ｄ－ヒト化のために選択された。ラット抗体可変ドメインと選択されたモデルとのペアワイズ関連については、対応する相同性モデルのα炭素の最適な３Ｄ重層に基づいて、典型的に配列をアラインメントした。次いで、望ましくないモチーフを考慮し、変化させた。最後に、得られたヒト化配列を、例えば、ＩＥＤＢデータベース（ｈｔｔｐ://ｗｗｗ.ｉｍｍｕｎｅｅｐｉｔｏｐｅ.ｏｒｇ；バージョン２０１２／０１／３０は現地でアクセス可能）に対して配列類似性のためにブラストし、いずれの配列にも、記載されている既知のＢ細胞またはＴ細胞エピトープを含まないことを保証した。
キメラ抗体については、ヒト化は、典型的には可変領域配列のフレームワーク領域の修飾を含む。
ＣＤＲの一部であるアミノ酸残基は、典型的には、ヒト化に関して改変されないであろうが、ある場合には、例えばグリコシル化部位、脱アミド化部位または望ましくないシステイン残基を除去するために、個々のＣＤＲアミノ酸残基を改変することが望ましいであろう。Ｎ－結合型グリコシル化は、トリペプチド配列Ａｓｎ－Ｘ－ＳｅｒまたはＡｓｎ－Ｘ－Ｔｈｒのアスパラギン残基にオリゴ糖鎖の付着によって起こされ、ここでＸはＰｒｏ以外の任意のアミノ酸であってもよい。Ｎ－グリコシル化部位の除去は、ＡｓｎまたはＳｅｒ／Ｔｈｒ残基のどちらかを別の残基に変異させることによって、特に保存的置換によって達成され得る。アスパラギンおよびグルタミン残基の脱アミド化は、ｐＨおよび表面露出などの因子によって起こる可能性がある。主としてＡｓｎ－Ｇｌｙ配列に存在する場合、また、程度は低いがＡｓｎ－Ａｌａのような他のジペプチド配列に少なく存在する場合、アスパラギン残基は特に脱アミド化を受けやすい。このような脱アミド化部位、特にＡｓｎ－ＧｌｙがＣＤＲ配列中に存在する場合、前記部位を除去することが望ましく、一般的に、保存的置換によって関連する残基の１つを除去する。関与する残基の１つを除去するためのＣＤＲ配列における置換も、本発明に包含されることが意図される。
「抗体」という用語は、その抗原結合断片を含む。このような「断片」は、インタクト抗体の一部、特にインタクト抗体の抗原結合領域または可変領域を含む。抗体断片の例には、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ）’２断片、Ｆｖ、単鎖Ｆｖタンパク質（“ｓｃＦｖ”）および抗原結合を担う全長抗体の一部、ジアボディ、抗体フラグメントから形成されるダイアボディ、二重特異的および多重特異的抗体が含まれる。従来の抗体の断片は、重鎖抗体またはＶＨＨのような単一ドメイン抗体でもよい。「Ｆａｂ」という用語は、分子量約５０，０００の抗体断片と抗原結合活性を意味し、これに、Ｈ鎖のＮ末端側の約半分とＬ鎖全体が、タンパク質分解酵素、パパインでＩｇＧを処理して得られた断片のうち、ジスルフィド結合を介して結合する。「Ｆ（ａｂ’）２」という用語は、分子量約１００，０００および抗原結合活性を有する抗体断片を意味するし、これに、タンパク質分解酵素でＩｇＧを処理して得られた断片のうち、ヒンジ領域のジスルフィド結合を介して結合したＦａｂより少し大きい。「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含み、ここでこれらのドメインは、単一のポリペプチド鎖中、どちら方位にでも（例えば、ＶＬ－ＶＨまたはＶＨ－ＶＬ）存在する。単一鎖は、所望の標的に特異的な融合細胞のＶ領域遺伝子を形成してクローン化され得る。このような融合細胞の生産は慣例になった。例えば、オルランディ他、米国科学アカデミー紀要、１９８９、８６： ３８３３－３８３７において、可変領域重鎖（ＶＨ）および可変領域軽鎖（ＶＬ）のクローニングに使用し得る技術が、記載されている。
通常、ｓｃＦｖポリペプチドは、さらに、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にする、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間のポリペプチドリンカーを含む。より具体的には、単鎖Ｆｖ（「ｓｃＦｖ」）ポリペプチドは、共有結合したＶＨ：：ＶＬヘテロダイマであり、通常、これはペプチドをコードするリンカーによって連結された遺伝子をコードするＶＨおよびＶＬを含む遺伝子融合物から発現される。いくつかの実施形態において、ヒトｓｃＦｖ断片は、特に遺伝子組換え技術を用いることによって、適切な構造で保持されるＣＤＲを含む。二価および多価の抗体断片は、一価のｓｃＦｖの会合によって自発に形成されでもよく、二価のｓｃ（Ｆｖ）２のようなペプチドリンカーによって一価のｓｃＦｖを共役させることによって形成されでもよい。「ｄｓＦｖ」はジスルフィド結合によって安定化されたＶＨ：：ＶＬヘテロダイマである。「（ｄｓＦｖ）２」は、ペプチドリンカーによって結合された２つのｄｓＦｖを意味する。「二重特異抗体」または「ＢｓＡｂ」という用語は、一般的に、抗体を意味し、これは単一分子内の２つの抗体の抗原結合部位を結合する。よって、ＢｓＡｂは２つの異なる抗原を同時に結合することができる。ＥＰ２０５０７６４Ａ１に記載されているように、遺伝子工学は、望ましい結合性およびエフェクター機能を有する抗体または抗体誘導体の設計、修正、製造のためにますます頻繁に利用されてきた。用語「多重特異的抗体」は、単一分子内の２つ以上の抗体の抗原結合部位を結合する抗体を意味する。用語「二重特異性抗体」とは、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体断片を指し、その断片は、同じポリペプチド鎖（ＶＨ－ＶＬ）中に、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。同じ鎖上の２つのドメイン間でのペアリングには短過ぎるリンカーを使用することによって、前記ドメインは、別の鎖の相補的ドメインと対合させられ、２つの抗原結合部位を生成する。
本発明は、腫瘍細胞に向け細胞毒性を転換する能力を有するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の発現用のベクターを遺伝的に改変された免疫エフェクター細胞を提供する。ＣＡＲは、標的抗原（例えば、腫瘍抗原）に対する抗体ベースの特異性をＴ細胞受容体活性化細胞内ドメインと組み合わせて、特異的な抗腫瘍細胞性免疫活性を示すキメラタンパク質を生成する分子である。本明細書中で使用されている「キメラ」という用語は、異なるタンパク質または異なる起源のＤＮＡの一部から構成されることを記述する。ＣＡＲの主な特徴は、免疫エフェクター細胞特異性を方向転換する能力であり、それにより、主要組織適合性（ＭＨＣ）非依存的に、標的抗原発現細胞の細胞死を媒介することができる分子の増殖、サイトカイン産生、食作用または産生を誘発し、モノクローナル抗体、可溶性リガンドまたは細胞特異的共受容体の細胞特異的ターゲティング能力を利用する。
本明細書中で使用されている「結合ドメイン」、「細胞外結合ドメイン」、「抗原特異的結合ドメイン」、および「細胞外抗原特異的結合ドメイン」という用語は、互換的に使用され、目的の標的抗原に特異的に結合する能力をＣＡＲに提供する。結合ドメインは、生物学的分子（例えば、細胞表面受容体または腫瘍タンパク質、脂質、多糖類、または他の細胞表面標的分子、もしくはその成分）を特異的に認識し、結合する能力を有する任意のタンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、またはペプチドをふくんでもよい。結合ドメインは、任意の天然に存在な、合成の、半合成の、または組換え的に産生された、対象となる生物学的分子の結合パートナーを含む。本明細書中で使用されている「特定の結合親和性」または「特定的に結合する」または「特定的に結合した」または「特定の結合」または「特定的に標的にする」という用語は、バックグラウンド結合よりも大きな結合親和性がある分子と別の分子を結合することを表す。結合ドメイン（または結合ドメインを含む結合タンパク質または結合ドメインを含む融合タンパク質を含むＣＡＲ）、例えば約１０５Ｍ-1以上の親和性またはＫａ(すなわち、１／Ｍの単位との特定の結合相互作用の平衡会合定数）を有する標的分子に、結合または会合させれば、標的分子に「特異的に結合する」。本開示により、結合ドメインポリペプチドとＣＡＲタンパク質との親和性は、競合的イライザ（ＥＬＩＳＡ）(酵素結合免疫吸着アッセイ）のような従来の技術を用いて容易に決定することができる。さらに、親和性に関連する結合の定性・定量化、いわゆるＫＤ値で決定することができる。ＫＤは抗体の親和性および感受性と相関する。平衡解離定数ＫＤは、抗体とその抗原とのｋ０ｆｆ／ｋ０ｎの比率である。ＫＤと親和性は反比例している。ＫＤ値は抗体の濃度（特定の実験に必要な抗体の量）に比例しているので、ＫＤ値が低いほど（濃度が低いほど）、抗体の親和性が高くなる。ＫＤは、抗体の抗体会合速度（ｋon）に対する抗体の解離速度（ｋoff）との比であり、抗体の解離速度（ｋoff）とは抗原から解離するの速さ、抗体会合速度（ｋon）とはその抗原に結合するの速さである。本願明細書ＫＤ値は、特定の抗体/抗原相互作用のｋonとｋoff率を測定し、これらの値の比率を用いてＫＤ値を計算することによって決定された。より一般に、モノクローナル抗体の親和性とは、１つの分子がそのリガンドに結合する強さである。それは、一般的に平衡解離定数（ＫＤ）によって測定され、報告される。これは二分子相互作用の強度を評価し、順位付けするために用いられる。抗原への抗体結合は可逆的な過程であり、結合反応の速度は反応物質の濃度に比例する。平衡状態において、［抗体]｜[抗原］複合体の形成の速度はその構成成分［抗体]+[抗原］への解離速度と等しい。反応速度定数の計測は、均衡定数または親和定数（１／ＫＤ）を定義するために用いることができる。要するに、ＫＤ値が小さいほど、その標的に対する抗体の親和性が大きくなる。
ＣＡＲの結合ドメインには、一般的に１つ以上の「ヒンジ領域」を有している。
ヒンジ領域は、適切な細胞間接触、抗原結合および活性化を可能にするために、抗原結合ドメインをエフェクター細胞表面から離れた位置に配置する役割を果たす。ＣＡＲは、結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に１つ以上のヒンジ領域を有してもよい。当技術分野において記載されているように、ヒンジ領域は、天然、合成、半合成、または組換え源に由来してもよい。
「膜貫通ドメイン」は、細胞外結合部分と細胞内シグナル伝達ドメインを融合するＣＡＲ部分である。膜貫通ドメインはＣＡＲを免疫エフェクター細胞の細胞膜に固定する。当該技術分野において記載されているように、膜貫通領域は、天然、合成、半合成、または組換え源に由来してもよい。
好適な実施形態において、本発明のＣＡＲは、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。「細胞内シグナリングドメイン」とは、標的抗原への有効なＣＡＲ結合のメッセージを免疫エフェクター細胞の内部に導入し、例えば、活性化、サイトカイン産生、増殖およびＣＡＲ結合標的細胞への細胞傷害性因子の放出を含む細胞傷害活性、または細胞外ＣＡＲドメインへの抗原結合で誘発される他の細胞応答を誘発することに関与するＣＡＲの部分を意味する。「エフェクター機能」とは、細胞の特殊な機能を意味する。Ｔ細胞のエフェクター機能は、細胞溶解活性またはサイトカインの分泌を含む活性であり得る。したがって、本明細書において、「細胞内シグナル伝達ドメイン」とは、タンパク質の部分を意味し、このタンパク質の部分は、細胞が特殊な機能を果たすように、「エフェクター機能」のシグナルを変換する。当該技術分野において記載されているように、完全な細胞内シグナル伝達ドメインまたは細胞内シグナル伝達ドメインの切断された部分を使用してもよい。当業者が理解するように、効果的な切断部分は、完全なドメインと実質的に同様なエフェクター機能シグナルを変換しなければならない。ここで、「細胞内シグナル伝達ドメイン」という用語は、エフェクター機能シグナルに十分に変換し得る胞内シグナル伝達ドメインの任意の切断部分を含むことを意味する。
本発明の好適な実施形態において、ＣＡＲは、ヒンジ領域ＩｇＧｌ－ＣＨ２－ＣＨ３（ＩｇＧｌの第１の部分は膜に局在させ、ＩｇＧｌの第２の部分は細胞外に局在させる）を有し、膜貫通ドメイン（ＣＤ２８の第１の部分は膜に局在させ、ＣＤ２８の第２の部分は細胞質に細胞内に局在させる）としてＣＤ２８を有する。ＣＤ８αは、膜貫通ドメインおよびヒンジ領域としても使用され得る。ＩｇＧ４に由来する配列を使用してもよい。
当技術分野から知られているように、Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）を介して生成されるシグナルだけでは、Ｔ細胞の完全な活性化には不十分であり、二次シグナルまたは補助刺激シグナルも必要である。よって、Ｔ細胞の活性化は、二つの異なるクラスの細胞内シグナル伝達ドメイン：ＴＣＲを介して抗原依存性の一次活性化を開始させる一次シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体）と、二次シグナルまたは任意の補助刺激シグナルを提供するために抗原非依存的に作用する補助刺激シグナル伝達ドメインによって媒介されると言える。好適な実施形態において、本発明のＣＡＲは、１以上の「補助刺激シグナル伝達ドメイン」を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。したがって、他の好適な実施形態において、本発明の単離核酸分子は、少なくとも１つの共刺激ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインをコードされ、したがって、結果物としての細胞内シグナル伝達ドメインは、それゆえ少なくとも１つの共刺激ドメインを含む。
本明細書中において使用される、「共刺激シグナル伝達ドメイン」または「共刺激ドメイン」という用語は、補助刺激分子の細胞内シグナル伝達ドメインを意味する。補助刺激分子は、抗原受容体またはＦｃ受容体以外の細胞表面分子であり、抗原に結合する際に効率的なＴ細胞の活性化／機能に必要な第二のシグナルを提供する。
本明細書では、「ポリペプチド」、「ポリペプチド断片」、「ペプチド」および「タンパク質」という用語を互換的に使用し、逆に明記しない限り、すなわちアミノ酸の配列のような従来の意味を有する。ポリペプチドは特定の長さに限定されず、全長のタンパク質配列またはその断片を含んでもよい。ポリマーは直鎖状または分枝状であってもよく、修飾されたアミノ酸を含んでもよく、非アミノ酸により中断されでもよい。さらに、ポリペプチドは、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化のような翻訳後修飾、または標識成分との結合のような他の操作もしくは修飾を有していてもよい。より一般的には、天然および／または非天然に生じる任意の修飾を有していてもよい。本発明のポリペプチドが抗体に基づくという事実を考えると、いくつかの実施形態において、ポリペプチドは単一鎖または関連鎖として生じ得る。ポリペプチドは、当該技術分野で公知の任意の技術、例えば、組換え技術および／または合成技術を用いて調製することができる。より詳細には、本明細書に記載されるポリペプチドは、本開示のＣＡＲ、または本明細書に開示されるＣＡＲの１以上のアミノ酸からの欠失、付加、および／または置換を有する配列を包含する。
本明細書中において使用される「単離ペプチド」または「単離ポリペプチド」などは、細胞環境からのペプチドまたはポリペプチド分子の生体外単離および／または精製、また細胞の他の成分との会合を意味する。同様に、「単離細胞」は、生体内組織または器官から得られ、細胞外マトリックスを実質的に含まない細胞を意味する。
本明細書中において使用される「ベクター」という用語は、別の核酸分子を転移または輸送することができる核酸分子を意味する。より一般的には、「ベクター」とは、宿主細胞内で目的の遺伝子または配列を１つ以上送達し、発現することができる構築物を意味する。輸送または転移されるべき核酸は、当該技術分野で公知の任意の方法、例えば挿入によってベクター核酸分子に連結される。ベクターは、細胞内での自律的複製を指示する配列を含んでもよく、または宿主細胞ＤＮＡへの組み込みを可能にするのに十分な配列を含んでもよい。本発明は、本発明のＣＡＲをコードする核酸分子を含むベクターも提供する。ベクターは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ファージベクター、プラスミド、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターから選択されでもよい。本発明のベクターは、ＥＦ－１αプロモーターのようなプロモーターを含むことを好ましい。本明細書中においで使用される「プロモーター」という用語は、ＲＮＡポリメラーゼが結合するポリヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮＡ）の認識部位を意味する。当業者が知っているように、ＲＮＡポリメラーゼはプロモーターに動作可能に連結されたポリヌクレオチドの転写を起こさせる。特定の実施形態において、Ｔ細胞において安定かつ長期的なＣＡＲ発現を提供するプロモーターからＣＡＲを含むポリヌクレオチドを発現することが望ましい場合がある。プロモーターの制御下でのＣＡＲ発現は、標的抗原を発現する細胞に対してＴ細胞を指令するのに十分な発現レベルをさらに保証する。
レトロウイルスは、遺伝子送達用の一般的なツールである。いくつかの実施形態において、レトロウイルスは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードするポリヌクレオチドを細胞、優先的に免疫細胞に送達するために使用される。本明細書中において使用される「レトロウイルス」という用語は、そのゲノムＲＮＡを線状二本鎖ＤＮＡコピーに逆転写し、続いてそのゲノムＤＮＡを宿主ゲノムに共有結合的に組み込むＲＮＡウイルスを意味する。いったんウイルスが宿主ゲノムに組み込まれると、「プロウイルス」と呼ばれる。プロウイルスはＲＮＡポリメラーゼのテンプレートとして働き、新しいウイルス粒子をつくるのに必要な構造タンパク質や酵素をコードするＲＮＡ分子の発現を指令する。結果として、本発明のベクターで形質移入されたＴ細胞は、安定な、長期的かつ持続的なＣＡＲ媒介Ｔ細胞応答を産生することができる。特定の実施態様において、Ｔ細胞は、本発明のＣＡＲによるコードされたレンチウイルスベクター、すなわちレンチウイルスで形質移入される。「レンチウイルスベクター」という用語は、主としてレンチウイルスに由来する長末端反復（ＬＴＲ）を含む構造的および機能的遺伝要素、またはその一部を含むウイルスベクターまたはプラスミドを意味する。「レンチウイルス」という用語は、複合レトロウイルスの集団（または属）を意味する。よく知られているレンチウイルスには、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ、例えば１型または２型);ビスナ／マエディウイルス（ＶＭＶ）; ヤギ関節炎脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）; 馬伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）;ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）（ＦＩＶ）；ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）;およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）がある。「自己不活性化」（ＳＩＮ）ベクターという用語は、複製欠損ベクターを意味し、例えば、レトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターであって、ここで、Ｕ３領域として知られる３’ ＬＴＲエンハンサー・プロモーター領域が、ウイルス複製の一回目を超えてウイルス転写を防止するために（例えば、欠失または置換によって）修飾されている。
「精製された」および「単離された」という用語は、本発明のポリペプチド、または抗体、またはヌクレオチド配列のような分子を指す場合、示された分子が、同じタイプの他の生物学的巨大分子が無いことを意味する。より具体的には、本明細書中において使用される「精製された」という用語は、少なくとも８５％、９０％、９５％または９８％の重量パーセントの同じタイプの生物学的巨大分子が存在することを意味する。より具体的には、特定のポリペプチドにコードする「単離された」核酸分子というのは、対象のポリペプチドをコードさせない、他の核酸分子を実質的に含まない核酸分子を意味する；しかし、該分子は、組成物の基本的な特徴に有害に影響しない、いくつかの追加の塩基または部分を含んでもよい。
「抗原」、「標的」または「標的抗原」という用語は、抗体または抗体様結合タンパク質によって結合することが可能な分子または分子の一部を意味する。
さらに、前記用語は、動物において使用され得る抗体を産生するための分子または分子の一部を意味し、前記抗体はその抗原のエピトープに結合し得る。標的抗原は、１つ以上のエピトープがあってもよい。抗体または抗体様結合タンパク質によって認識される各標的抗原に関して、抗体様結合タンパク質は、標的抗原を認識するインタクト抗体と競合することができる。
用語「ＣＤ１２３」、「ＩＬ－３Ｒａ」または「ＩＬ－３Ｒα」、「インターロイキン－３受容体アルファ」または「インターロイキン－３受容体α」は本明細書中で互換的に使用され１ＩＬ－３Ｒは、リガンド特異的αサブユニット、およびインターロイキン３（ＩＬ３）、コロニー刺激因子２の受容体によって共有されるシグナル伝達共通βサブユニット（ＣＤ１３１としても知られる）、コロニー刺激因子（ＣＳＦ２／ＧＭ－ＣＳＦ）、およびインターロイキン５（ＩＬ５）からなる。ＣＤ１２３／ＩＬ－３ＲａとＩＬ３との結合はβサブユニットに依存する。βサブユニットはリガンド結合により活性化され、ＩＬ３の生物活性に必要である。ＣＤ１２３についての前述の用語の全ては、本明細書に示されるタンパク質または核酸配列のいずれかを意味することができる。「ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒａ」という用語は、プロセシングされていない「完全長」ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒａ、ならびに細胞内でのプロセシングから生じる任意の形態のＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒａを包含する。この用語は、ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒａタンパク質または核酸の天然に存在する変異体、例えばスプライス変異体、対立遺伝子変異体およびイソ型も包含する。本明細書に記載されたＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒａポリペプチドおよびポリヌクレオチドは、ヒト組織型からまたは別の供給源からなどの様々な供給源から単離され、または組換え体または合成方法によって調製されてもよい。ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒａ配列の例には、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００２１７４＆ＮＭ＿００２１８３（ヒトＣＤ１２３変異体１のためのタンパク質および核酸配列）、およびＮＰ＿００１２５４６４２＆ＮＭ＿００１２６７７１３（ヒトＣＤ１２３変異体２のためのタンパク質および核酸配列）が含まれるが、これらに限定されない。
「抗-ＣＤ１２３抗体」、「抗-ＩＬ-３Ｒａ抗体」または「抗―ＩＬ－３Ｒα抗体」、「ＣＤ１２３に特異的に結合する抗体」または「ＩＬ－３Ｒａ/ＩＬ－３Ｒαに特異的に結合する抗体」という用語は、ＣＤ１２３をターゲティングする際の診断および／または治療薬として有用であるようにＣＤ１２３と結合することができる十分な親和性を有する抗体を意味する。特に明記しない限り、抗―ＣＤ１２３抗体の非関連非ＣＤ１２３タンパク質への結合の範囲は、測定したＣＤ１２３に対する抗体の結合の約１０％未満である。より一般的に、「特異的に結合」という用語は、抗体がその抗原結合ドメインを介してエピトープに結合し、その結合が抗原結合ドメインとエピトープとの間にある程度の相補性を伴うことを示す。この定義によれば、抗体は、ランダムな無関係なエピトープに結合するより、の抗原結合ドメインを介して、そのエピトープに結合するとき「特異的に結合する」と言われる。「特異性」という用語は、ある抗体があるエピトープに結合する相対的親和性を認定するために本明細書中において使用されている。例えば、抗体「Ａ」は、所定のエピトープに対して、抗体「Ｂ」より高い特異性を有するとみなされ、または抗体「Ａ」は、関連エピトープ「Ｄ」より高い特異性でエピトープ「Ｃ」に結合すると言われる。よって、本発明の抗体または抗原結合断片は、ＣＤ１２３抗原に特異的に結合し、その点で、非ＣＤ１２３抗原より、ＣＤ１２３抗原に対して高い結合特異性（任意の種からの）を有する。より詳細には、本発明の抗体または抗原結合断片はヒトＣＤ１２３抗原に特異的に結合し、その点で、非ヒトＣＤ１２３抗原（例えば、マウスまたはラットＣＤ１２３）より、ヒトＣＤ１２３抗原に対して高い結合特異性を有する。ときに、「優先的に結合する」という用語は、抗体が関連エピトープ、相似なエピトープ、同族のエピトープ、または類似なエピトープよりもと容易にエピトープに対して特異的に結合することを示す。したがって、所定のエピトープに優先的に結合する抗体は、そのような抗体が関連エピトープと交差反応し得るにもかかわらず、関連エピトープより前記所定のエピトープに結合しやすいであろう。例えば、本発明の抗体または抗原結合断片は、マウスＣＤ１２３よりもヒトＣＤ１２３抗原に優先的に結合し得る。
前述によれば、本発明の抗体、ＣＡＲ、ベクターまたは細胞に関する用語は容易に導き出される。実際、記述の一般的な文脈では、必ずしも上記のラベルとまったく同じで表現される必要はない。逸脱することがある。例えば、Ｔ細胞のＣＡＲを言及する場合、必ずしもＣＡＲが特定の抗原に向けられる部分、すなわち「抗－何か」を含むことを特定することはない。したがって、より一般的な注目すべき点として、ＣＤ１２３に特異的に結合する部分を含む本発明のＣＡＲは、抗―ＣＤ１２３ ＣＡＲだけでなく、ＣＤ１２３ ＣＡＲも称され得る。同様の方法で、本発明によるＣＤ１２３に特異的に結合するＣＡＲを形質移入されたＴ細胞は、ＣＤ１２３ ＣＡＲ Ｔ細胞と称され得る。
本明細書中で使用される「治療」は、疾患または病理学的状態の症状または病理に対する任意の有益なまたは望ましい効果を含み、治療されている疾患または状態、例えば癌の、１以上の測定可能なマーカーにおける任意の軽減を含くんでもよい。治療は、症状の軽減、または疾患もしくは状態に関する何らかの改善のいずれかを含くんでもよい。さらに治療とは、病気や状態の進行を遅らせることであってもよい。したがって、「治療」という用語は、必ずしも疾患または状態の完全な根絶または治癒、またはそれらに関連する症状を意味しない。このことを念頭に置いて、本発明の開示は、それを必要とする被験体に、本発明のＴ細胞の治療有効量を投与することを含むＢＰＤＣＮの治療または予防を提供する。
前述に照らして、本明細書中に記載されるＴ細胞は、単独で、または医薬組成物（医薬製剤とも呼ばれる）として投与されでもよい。「医薬組成物」または「医薬製剤」という用語は、活性成分の生物学的活性が有効であることを可能にするような調剤であり、投与しよう組成物／製剤が被験体に対して許容できない毒性がある他の成分を含まない調製物を意味する。当該製剤は無菌のものでもよい。薬学的組成物は、本発明によるＴ細胞を単独で、または１つ以上の薬学的または生理学的に受容可能な担体、希釈剤または賦形剤との配合物を含んでもよい。前記組成物は、中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などの緩衝液；
ブドウ糖、マンノース、スクロースまたはデキストラン、マンニトールなどの炭水化物；タンパク質；グリシンなどのポリペプチドまたはアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡまたはグルタチオンなどのキレート剤；補助剤、および安定剤を含んでもよい。「薬学的に許容される」または「生理学的に許容される」という用語は、妥当な利益／リスク比に見合った、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題または合併症を伴わずにヒトおよび動物の組織と接触させて使用するのに適合、健全な医学的判断の範囲内の化合物、材料、組成物、および／または剤形を意味する。本発明の組成物は、非経口投与用に製剤化されることを好ましい。「非経口投与」とは、経腸投与および局所投与以外の投与様式を意味してもよい。通常、非経口投与は、血管内、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、腫瘍内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内および胸骨内注射および／または注入によって行われる。優先的に、ＣＡＲ修飾Ｔ細胞または本発明の組成物は、腫瘍、リンパ節、全身循環、または感染部位への直接注射によって被験体に投与される。一般に、本発明は、ＣＤ１２３を過剰発現する疾患、特にＢＰＤＣＮを有する患者と診断された被験体を治療するに対して有用である。治療は、対象から免疫エフェクター細胞を除去すること、本明細書中で意図されるようにＣＡＲをコードされる核酸を含むベクターで前記免疫エフェクター細胞を遺伝的に修飾し、それによって改変された免疫エフェクター細胞の集団を産生すること、および就職された免疫エフェクター細胞の集団を同一対象に投与することを含む。好ましい実施形態では、免疫エフェクター細胞はＴ細胞である。投与の量、頻度は、患者の身体状態（患者の状態、患者の疾患の種類および重症度）によって決定される。動物モデルの助けを借りて適切な投与量を決定し、その後に臨床試験を行うこともある。投与量を指す場合、「有効量」という用語は、具体的に記載された目的を遂行するのに十分な量である。遺伝子改変Ｔ細胞のような活性成分のいわゆる「治療有効量」は、患者の疾患およびその状態、年齢、性別、および体重などの因子に依存し、さらに、患者において所望の応答を誘導する細胞の能力に依存してもよい。治療有効量とは、治療上有益な効果が、ウイルスまたは形質移入された治療細胞の任意の毒性または有害な効果より勝るものでもある。本明細書に記載するＴ細胞を含む医薬組成物は、１０４～１０9細胞／ｋｇ体重、好ましくは１０５～１０６細胞／ｋｇ体重の投与量で投与することができ、これらの範囲内の全ての整数値を含むと言える。より一般的には、「治療有効量」という用語は、被験体における疾患または障害を治療するために有効な抗体、活性成分または他の薬物の量を意味する。癌の場合、薬剤の治療有効量は、癌細胞の数量を減少させること；腫瘍サイズを減少させること；末梢器官への癌細胞浸潤を阻害すること（すなわち、ある程度癌を減速させるか、止めること）；腫瘍転移を阻害すること（すなわち、ある程度減速させるか、癌を止めること）；腫瘍増殖をある程度阻害するか、または止めること；癌に関連する症状の１つ以上をある程度緩和すること；および／または無増悪生存期間（ＰＦＳ）、無病生存期間（ＤＦＳ）、または全生存期間（ＯＳ）、完全寛解（ＣＲ）、部分寛解（ＰＲ）、または一部の症例では安定な疾病状態（ＳＤ）、進行性の疾患（ＰＤ）の減少、無増悪期間（ＴＴＰ）の減少、またはそのいずれかの組み合わせなどの良好な反応をもたらす。「予防的有効量」とは、所望の予防結果を達成するために、投与量および必要な期間において有効な量を意味する。通常、予防的有効量は、疾患の前またはより早期の段階で被験体において予防的にン使用されるので、治療的有効量よりも少ない。
特定の実施形態において、本明細書に記載される免疫エフェクター細胞の生体外操作または遺伝子改変の前に、細胞の供給源は被験体から取る。特定の実施態様において、本発明のＣＡＲをその膜で発現する免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞を含む。Ｔ細胞は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺問題、感染部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織、および腫瘍を含むが、これらに限定されない多数の供給源から取ることができる。特定の実施形態では、Ｔ細胞は、フィコール（ＦＩＣＯＬＬ商標）分離などの当業者に公知の任意の数の技術を使用して、被験体から収集された血液の単位から取ることができる。別の実施形態において、個体の循環血液からの細胞は、アフェレーシスによって取る。アフェレーシス製品は、一般的にリンパ球を含む。リンパ球はＴ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球、赤血球、および血小板を含む。１つの実施形態において、アフェレーシスによって収集された細胞は、血漿分画を除去し、その後の処理のための適切な緩衝液または媒体中に細胞を配置するために洗浄されでもよい。他の実施形態において、Ｔ細胞は、赤血球を溶解し、かつ単球を除去させることにより、末梢血単核細胞から単離される。例えば、パーコール（ＰＥＲＣＯＬＬ商標）勾配を介する遠心分離。ＣＤ３、ＣＤ４またはＣＤ８のような１つまたはいくつかのマーカーを発現するＴ細胞の特定の亜集団を、正または負の選択技術によってさらに単離することができる。例えば、負の選択によるＴ細胞群の濃縮は、負の選択された細胞上に発現されない表面マーカーに向けられた抗体の組合せで達成することができる。
より一般的な文脈において、本明細書は、ＣＡＲを発現するように、生体外でＴ細胞の遺伝子的に改変（または遺伝子修飾して）を行い、ＣＡＲ Ｔ細胞をその必要がある患者、好ましくはヒトに注入する細胞療法を強調する。注入された細胞は患者の腫瘍細胞を死滅させることができる。前述したように、抗体療法とは異なり、ＣＡＲを含むＴ細胞は、生体内に複製することができ、その結果、持続的な腫瘍制御につながり得る長期持続性をもたらす。さらに、ＣＡＲは、抗体由来受容体による、結合された任意の細胞表面分子へのエフェクターＴ細胞の方向転換および活性化を可能にし、そしてＭＨＣ拘束（ＭＨＣ拘束性抗原認識; ＭＨＣは主要組織適合性複合体の略称である）とは無関係である。前述したように、本発明の遺伝子改変されたＴ細胞は、患者自身から採取されたＴ細胞（自己の）から出発して構築されるが、骨髄または末梢造血幹細胞同種移植文脈（ドナーリンパ球の注入）において同種遺伝子改変されたＴ細胞を提供するために、他の同種ドナーから出発することもできる。本発明によるＣＡＲ分子を発現する前記Ｔ細胞は、哺乳動物、好ましくはヒトにおける増殖性疾患を治療するのに有用である。
本発明のいくつかの実施形態において、本発明のポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドを有する細胞は、直接毒性（すなわち、同種投与における移植片対宿主病、ＧｖＨＤ）および／または遺伝子改変された細胞の制御不能な増殖のリスクを低下させるために、誘導可能な自殺遺伝子を含む自殺遺伝子を使用する。特定の態様において、自殺遺伝子は、ポリヌクレオチドまたは細胞を有する宿主に対して免疫原性ではない。使用され得る自殺遺伝子の特定の例は、誘導性カスパーゼ－９（ｉＣＡＳＰ９）、単純ヘルペスチミジンキナーゼ（ＨＳＶ－ｔｋ）、ＣＤ２０、切断型ＥＧＦＲ、カスパーゼ－８またはシトシン脱アミノ化酵素である。カスパーゼ－９は、特異な化学的に誘導された二量体化（ＣＩＤ）を用いて活性化することができる。他のシステムは、代謝させるプロドラッグ（ガンシクロビル，Ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ）、または結合抗体（リツキシマブ，Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ、セツキシマブ，Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）によって活性化されることがある。
本発明は、実験データおよび実施例を参照して、さらに詳細に記載される。以下の詳細な説明はＢＰＤＣＮに集中するが、本発明は、ＣＤ１２３の過剰発現が起こる任意の疾患についての改善および／または解決策を一般的に提供することができる。本発明の主要な焦点は、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍(ＢＰＤＣＮ)の治療を提供することである。
ＢＰＤＣＮは、皮膚病変を有する形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）の前駆に由来するクローン病であり、侵攻性の白血病の散在に進行する。参考文献：芽細胞性の形質細胞様樹状細胞腫瘍:現状と展望、マリア ロサリア サピエンツァ、アレッサンドロ ピレリ、エンリコ デレンツィーニ、フェデリカ メッレ他，キャンサー、２０１９。ＢＰＤＣＮの予後は不良であり、当該技術分野では、有効な治療またはそれに関する報告は存在しない。ほとんどの患者は、最初に強化化学療法に応答するが、その後再発する。最大規模の対象シリーズにおける全生存期間（ＯＳ）の中央値は８～１２ヵ月である。および標的治療によって処置された患者においてさえ、そのデータの唯一の例外は、同種造血幹細胞移植（ａｌｌｏ－ＨＳＣＴ）を受けた患者に関するものである。参考文献：ルーシュ－ヴァイル Ｄ、ディートリッヒ Ｓ、ブーメンディル Ａ、ポルジ Ｅ、ブロン Ｄ、カレラス Ｅ他，芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍において持続的な疾患疾病管理を提供することができる幹細胞移植：血液および骨髄移植の欧州グループ，ブラド，２０１３，１２１（３):４４０－６；パガノ Ｌ、ヴァレンティーニ ＣＧ、グラマティコ Ｓ、プルソニ Ａ，芽細胞性の形質細胞様樹状細胞腫瘍：診断基準と治療アプローチ、英国血液学雑誌，２０１６，１７４（２）：１８８－２０２；カーファン・ダバージャ ＭＡ，ラザロ ＨＭ，ニシホリ Ｔ，マフーズ ＲＡ，ハマダニ Ｍ．，芽細胞性の形質細胞様樹状細胞腫瘍における診断および治療の進展：造血細胞移植を中心にしている血液と骨髄移植の生物学：米国血液と骨髄移植学会誌，２０１３，１９（７），１００６－１２；ペンマルジュ Ｎ、ラーエー ＡＡ、スウィート ＫＬ、スタイン ＡＳ、ヴァス Ｓ、ブルーム Ｗ他，芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍に対するタグラクソフスプ，ニューイングランド・ジャーナル・オブ・メディシン,２０１９，３８０（１７），１６２８－３７。しかしながら、ほとんどの高齢患者はこのアプローチに適格ではない。化学療法抵抗性の白血病とみなせる白血病に対しては、改善させた治療法が必要である。本発明の出願人は、新たな治療標的を同定した。インターロイキン（ＩＬ）３受容体α鎖（ＣＤ１２３）は、好塩基球やｐＤＣのみで生体に高発現することから、貴重な標的であることが証明されている。当該技術分野は、ＣＤ１２３が、正常な造血ＣＤ３４+、ＣＤ３４+前駆細胞、単球および内皮細胞においても低レベルで発現されるが、造血幹細胞上では発現されないことをさらに開示している。参考文献：タウシッヒ ＤＣ、ピアース ＤＪ、シンプソン Ｃ、ロハティナー ＡＺ、リスター ＴＡ、ケリー Ｇ他，多発性骨髄性マーカーを発現する造血幹細胞：急性骨髄性白血病の血液の起源および標的療法に対する意味，ブラド，２００５，１０６（１３）：４０８６－９２；アドラ アル・マワリール，デビッド ギリスおよびイアン ルイス，ＦＬＴ３／ＩＴＤ陽性クローンを描写する白血病幹細胞の免疫プロフィール ＣＤ３４＋／ＣＤ３８－／ＣＤ１２３＋，ジャーナル・オブ・ヘマトロジー＆オンコロジー，２０１６，９：６１。
ＢＰＤＣＮと闘うために、発明者たちは、一般的に、抗原ＣＤ１２３が、診断時および化学療法後の再発例の両方においてＢＰＤＣＮ中で均一かつ高度に発現されると考えてきた。参考文献：ガルナッシュ－ オットー Ｆ，フォイヤール Ｊ，フェラン Ｃ，ビーチッレ Ｓ，トリモロー Ｆ，セイユ Ｅ他，形質細胞様樹状細胞白血病の拡大された診断基準，ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・ヒーマトロジィ、２００９、１４５（５）：６２４－３６。さらに、発明者らは、ＣＤ１２３がＩＬ－３受容体の成分であり、ＩＬ－３受容体はｐＤＣ生存細胞が必要であるｐＤＣ系統の重要な推進力であると考えた。参考文献：ブロートン ＳＥ，ダーガット Ｕ，ヘラクレス ＴＲ，ネロ ＴＬ，グリンバルディストン ＭＡ，ボンダー ＣＳ他，ＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－３／ＩＬ－５サイトカイン受容体ファミリー：ガンド認識からシグナリングの開始まで，免疫学的レビュー，２０１２，２５０ （１）：２７７－３０２；ハラ Ｔ，ミヤジマ Ａ．，造血におけるインターロイキン３受容体システムを介した機能とシグナル伝達，幹細胞，１９９６，１４（６）：６０５－１８;およびテスタ Ｕ， ペロシ Ｅ，フランケル Ａ．，悪性血液疾患における膜バイオマーカーであり治療標的，バイオマーカー・リサーチ，２０１４、２（１）：４。本発明者らは、このＩＬ－３受容体を標的とすることにより、ＢＰＤＣＮ細胞に対する有害なシグナル伝達経路が誘導される可能性があると仮定した。
ＣＤ１２３は急性骨髄性白血病（ＡＭおよび急性リンパ性白血病（ＡＬＬ））において急性転化始動に関与することが報告されている。参考文献：エヒンガーＡ，クレイマー Ｍ，ロリグ Ｃ，ティード Ｃ，ボーンハウザー Ｍ，フォン・ボナン Ｍ他，急性骨髄性白血病において、ＣＤ３３およびＣＤ１２３の細胞表面の発見レベルおよび分布，ブラド キャンサー ジャーナル，２０１４，４：ｅ２１８。さらに、ＣＤ３４＋「白血病始原細胞（ＬＩＣ）」成分にＣＤ１２３を発現され、有害な臨床的影響を伴うことが報告されている。参考文献：ベルギーズ Ｆ，グリーン ＡＳ，タンブリーニ Ｊ，サリー ＪＥ，ガイヤール Ｂ，コルニレ・ルフェーヴル Ｐ他，急性骨髄性白血病の有害転帰を予測するＣＤ３４＋ＣＤ３８１ｏｗ／－ＣＤ１２３＋芽球の高値: 急性白血病および血液疾患の西東グループ（ＧＯＥＬＡＭＳ）研究，ヒーマトロジィカ，２０１１，９６（１２):１７９２－８；レヤ Ｔ，モリソン ＳＪ，クラーク ＭＦ，ワイズマン ＩＬ，幹細胞、癌、癌幹細胞，ネイチャー，２００１，４１４（６８５９）：１０５－１１。しかし、ＢＰＤＣＮでは、患者に存在する未熟なＬＩＣ数の増加するがかどうかは不明である。出願人は、意外に、本発明者により収集された特定のＢＰＤＣＮ症例において、白血病バルク細胞より高いレベルのＣＤ１２３発現は芽球細胞の低成分に観察された。次に、出願人は、ＬＩＣである場合、標的とするＣＤ１２３は、前記の細胞が除去され、ＢＰＤＣＮ患者の再発が減少し得ると仮定した。次いで、出願人は、ＢＰＤＣＮの標的免疫療法としてＣＤ１２３を積極的に選択した。
さらに、出願人は、生体内および生体外にＣＤ１２３を発現する細胞を標的とするＩＬ－３と連絡したジフテリア毒素を含む融合タンパク質であるＳＬ－４０１に対するＢＰＤＣＮ細胞の感受性を示した。参考文献：アンジェロ－デレタラ Ｆ， ロギー Ａ， フランケル ＡＥ， ラマルティー Ｂ， セイユ Ｅ， ビーチッレ Ｓ他，体内および対外における芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍のインターロイキン－３受容体標的生物学的製剤ＳＬ－４０１に対する感受性、ヒーマトロジィカ、２０１５、１００（２）：２２３－３０。また、ＢＰＤＣＮ患者において臨床反応が報告されている。参考文献：フランケル ＡＥ， ウー ＪＨ，アーン Ｃ，ペンマルジュ Ｎ，メデイロス ＢＣ，キャロルウェイ ＨＥ他，ＳＬ－４０１の活性、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍患者におけるインターロイキン－３受容体に対する標的療法，ブラド，２０１４，１２４（３）：３８５－９２。
当技術分野においで知られているように、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を用いた養子Ｔ細胞療法は、再発リスクを伴う血液悪性腫瘍を治療する有望な方法である。参考文献：グルップ ＳＡ，カロス Ｍ，バレット Ｄ，アプレン Ｒ，ポーター ＤＬ，ラインガルド ＳＲ他，急性リンパ性白血病の治療用のキメラ抗原受容体改変されたＴ細胞，ニューイングランド・ジャーナル・オブ・メディシン，３６８（１６）１５０９－１８;コッヘンダーファー ＪＮ，ダドリー ＭＥ，カシム ＳＨ，サマーヴィル ＲＰ，カーペンター ＲＯ，ステトラー・スティーブンソン Ｍ他，抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体を発現する自己Ｔ細胞を用いて、化学療法-難治のびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫および緩慢性Ｂ細胞悪性疾患を効果的に治療することができる。臨床腫瘍学ジャーナル：アメリカ臨床腫瘍学会公報，２０１５，３３（６），５４０－９。
本発明の実施形態によれば、ＣＡＲは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の細胞内シグナル伝達鎖に連結されたモノクローナル抗体（ＭＡｂ）の重鎖および軽鎖の単鎖可変断片（ＳｃＦｖ）で作られるように遺伝子改変されている。好ましくは、細胞内部分のＣＡＲは、ＣＤ３ζ、より良い活性化と細胞シグナル伝達を可能にするＣＤ２８および４－１ＢＢのような共刺激ドメインを含む。ＣＡＲは第３世代のＣＡＲとみなされる。アンドリュー Ｄ． フェスナック，カール Ｈ． ＪｕｎｅおよびＢｒｕｃｅ Ｌ． Ｌｅｖｉｎｅ，Ｔ細胞改変：のレビューを参照のこと：癌免疫療法の有望性と挑戦，ネイチャー，１６巻, ２０１６年９月というレビューには、ＣＡＲの詳細を紹介している。ＳｃＦＶは、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）提示との独立な抗原を認識し得る。
生体外およびマウス患者腫瘍組織移植モデル（ＰＤＸ）を用いた急性骨髄性白血病の根絶におけるＣＡＲ ＣＤ１２３の有効性に関する報告がなされている。参考文献：マルディロス Ａ，ドス サントス Ｃ，マクドナルド Ｔ，ブラウン ＣＥ，オウ Ｘ，ブッデ ＬＥ他，ＣＤ１２３特異的キメラ抗原受容体を発現するＴ細胞は、ヒト急性骨髄性白血病に対して特異的な細胞溶解エフェクター機能と抗腫瘍効果を示す，ブラド、２０１３、１２２（１８):３１３８－４８; ギル Ｓ， タシアン ＳＫ， ルエラ Ｍ， シェストバ Ｏ， Ｌｉ Ｙ， ポーター ＤＬ他，キメラ抗原受容体で修飾されたＴ細胞を用いてヒト急性骨髄性白血病および骨髄破壊に対する前臨床ターゲティング，ブラド、２０１４、１２３（１５):２３４３－５４; トカラ Ｒ，オリバレス Ｓ，ミ Ｔ，マイティ Ｓ，デニガー Ｄ，ハルス Ｈ他，ＣＤ１２３＋腫瘍を標的としたＶＬドメインとＶＨドメインのミックスアンドマッチによるキメラ抗原受容体を発現するため、眠り姫システム（Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙ Ｓｙｓｔｅｍ）を用いたＴ細胞の回復特異性，プロス・ワン，２０１６、１１（８):e０１５９４７７;Ｃｕｍｍｉｎｓ ＫＤ， ギル Ｓ．，抗－ＣＤ１２３キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲＴ）:進化する血液悪性腫瘍の治療方法、および抗原陰性の再発に対する奥の手，白血病とリンパ腫，２０１８、５９（７）：１５３９－５３；テタマンティ Ｓ， マリン Ｖ， ピチットラ Ｉ， マグナーニ ＣＦ， ジョルダーノ アッティアネーゼ ＧＭ， クリビオリ Ｅ他，新規ＣＤ１２３特異キメラ抗原受容体により回復されたサイトカイン誘導性キラー細胞による急性骨髄性白血病の標的化，ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・ヘマトロジー、１６１（３）：３８９－４０１；タシアン ＳＫ， ケンダリアン ＳＳ， Ｓｈｅｎ Ｆ， ルエラ Ｍ， シェストバ Ｏ，コズロフスキー Ｍ他，ヒト急性骨髄性白血病のマウス異種移植モデルにおけるキメラ抗原受容体T細胞の除去の最適化，ブラド，２０１７；１２９（１７）：２３９５－４０７。別のグループは、ＣＡＲ ＣＤ１２３が、マウスモデルにおける株化ＢＰＤＣＮ細胞株（ＣＡＬ－１）およびＣＤ１２３+原発ＢＰＤＣＮサンプルに対して活性があることを示した。しかし、このＣＡＲは同種異系の状況のみ用いられる。さらに自殺体系を有する第二世代がある。参考文献：サイ Ｔ，ガレット Ｒ，ダブル Ａ，スミス Ｊ，カヴァソス Ａ，コノプレフ Ｓ他，芽球性形質細胞腫（ＢＰＤＣＮ）に対する抗－ＣＤ１２３ ＣＡＲ－Ｔ細胞の前臨床研究，ブラド，２０１６，１２８（２２）：４０３９。しかし、増えつつある臨床試験は、ＣＡＲ療法を受けた患者が毒性を発症することを示している。有効なＣＡＲの開発における大きな問題である。出願者は、先行技術の問題を克服するため特別なＣＡＲを開発した。より詳細には、出願者は、第三世代レトロウイルスおよびレンチウイルスＣＡＲの両方を改変された。本発明のＣＡＲにより、先行技術の問題、特に細胞毒性に関する問題を克服された。本発明のＣＡＲは、ＢＰＤＣＮのいくつかのマウスモデルの生体内および生体外でのＢＰＤＣＮ細胞（ＢＰＤＣＮ細胞株、ＰＤＸ細胞および初代ＢＰＤＣＮ細胞）に対する機能活性を改善した。ＣＤ１２３ロー陽性細胞に対するそれらの潜在的細胞毒性の評価は非常に有望である。
本発明によれば、ヒトＣＤ１２３に対するモノクローナル抗体（Ｍａｂ）を産出された。本発明のモノクローナル抗体は、同種および自己の両方の場合において使用することができる。
抗ＣＤ１２３モノクローナル抗体の産出方法は、組換えＣＤ１２３タンパク質によるマウスの免疫化を含めていた。５匹の入手可能な参照番号＃３０１－Ｒ３－０２５であるマウスを組換えＣＤ１２３で免疫した（Ｒ＆Ｄシステム，ミネソタ州， ＵＳＡから入手可能）。免疫化は、フットパッドおよび／または腹腔内投与により行った。リンパ節および／または脾臓Ｂ細胞を用いて、Ｍａｂを分泌する融合細胞を産出された。ＣＤ１２３＋およびＣＤ１２３―細胞株を用いて、ＭＡｂの親和性および特異性に基づいて融合細胞を選択された。
本発明によれば、６つの特異抗体が選択され、それぞれ１８Ｂ４Ｄ５（本明細書ではＡＢ１、または時にＢ４Ｄ５と略記されている）、１７Ｆ７Ｂ２（本明細書ではＡＢ２とも呼ばれている）、１１Ｂ６Ｅ６（本明細書ではＡＢ３とも呼ばれている）、１４Ｇ１２Ｄ７（本明細書ではＡＢ４とも呼ばれている）、１１Ａ１２Ｃ６（本明細書ではＡＢ５とも呼ばれている）および１５Ｅ１１Ｂ７（本明細書ではＡＢ６とも呼ばれている）と命名された。ＳＡＮＧＥＲ法に準じて、分子特性およびＤＮＡ配列を決定された。
ヴィジョンクエスト（ＶＱＵＥＳＴ）オンラインツールを使用するＩＭＧＴ(R)データベースに対して、コンセンサスヌクレオチド配列のアラインメント後にＶＤＪおよびＶＪ遺伝子再編成を配列され、同定された。参考文献：ブロシェット Ｘ，ルフラン ＭＰ，ジュディケッリ Ｖ．，ＩＭＧＴ／Ｖ－ＱＵＥＳＴ：標準化されたＶ－ＪおよびＶ－Ｄ－Ｊ配列解析用のＩＧとＴＲの高度に特注化され、統合されたシステム，核酸研究，２００８；３６(ウェブシークエンス):Ｗ５０３－８。本発明の６つの抗体のそれぞれの配列（ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列）を図１～９にリストされている。
図１は、本発明１８Ｂ４Ｄ５、１７Ｆ７Ｂ２、１１Ｂ６Ｅ６、１４Ｇ１２Ｄ７、１１Ａ１２Ｃ６および１５Ｅ１１Ｂ７の抗体の重鎖および軽鎖の両方の相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、相補的決定領域２（ＣＤＲ２）および相補的決定領域３（ＣＤＲ３）のそれぞれのヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。
図２は、本発明１８Ｂ４Ｄ５、１７Ｆ７Ｂ２、１１Ｂ６Ｅ６、１４Ｇ１２Ｄ７、１１Ａ１２Ｃ６および１５Ｅ１１Ｂ７の抗体の重鎖のフレームワーク領域１（ＦＲ１）、フレームワーク領域２（ＦＲ２）、フレームワーク領域３（ＦＲ３）およびフレームワーク領域４（ＦＲ４）のそれぞれヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。
図３は、本発明１８Ｂ４Ｄ５、１７Ｆ７Ｂ２、１１Ｂ６Ｅ６、１４Ｇ１２Ｄ７、１１Ａ１２Ｃ６および１５Ｅ１１Ｂ７の抗体の軽鎖のフレームワーク領域１（ＦＲ１）、フレームワーク領域２（ＦＲ２）、フレームワーク領域３（ＦＲ３）およびフレームワーク領域４（ＦＲ４）のそれぞれヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。
図４は、８Ｂ４Ｄ５またはＢ４Ｄ５と命名された本発明の第一抗体ＡＢ１の重鎖のコンセンサスアミノ酸配列および軽鎖のコンセンサスアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に対応するアミノ酸は、読み順にそれぞれ左から右にハイライトされている。
図５は、１７Ｆ７Ｂ２と命名された本発明の第二抗体ＡＢ２の重鎖のコンセンサスアミノ酸配列および軽鎖のコンセンサスアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に対応するアミノ酸は、読み順にそれぞれ左から右にハイライトされている。
図６は、１１Ｂ６Ｅ６と命名された本発明の第三抗体ＡＢ３の重鎖のコンセンサスアミノ酸配列および軽鎖のコンセンサスアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に対応するアミノ酸は、読み順にそれぞれ左から右にハイライトされている。
図７は、１４Ｇ１２Ｄ７と命名された本発明の第四抗体ＡＢ４の重鎖のコンセンサスアミノ酸配列および軽鎖のコンセンサスアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に対応するアミノ酸は、読み順にそれぞれ左から右にハイライトされている。
図８は、１１Ａ１２Ｃ６と命名された本発明の第五抗体ＡＢ５の重鎖のコンセンサスアミノ酸配列および軽鎖のコンセンサスアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に対応するアミノ酸は、読み順にそれぞれ左から右にハイライトされている。
図９は、１５Ｅ１１Ｂ７と命名された本発明の六抗体ＡＢ６の重鎖のコンセンサスアミノ酸配列および軽鎖のコンセンサスアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に対応するアミノ酸は、読み順にそれぞれ左から右にハイライトされている。
重鎖ＶＨおよびＪＨ、ならびに軽鎖ＶＫおよびＪＫについての各配列相同性を表１に示す。
Figure 2022538092000001
本発明の抗体のＣＤ１２３に対する親和性を、ストレプトアビジンバイオセンサーで検査する。ここでは、ＫＤ値を決定するために、７つの異なった濃度のＣＤ１２３を本発明の固定化抗体上で使用された。
結果は、フォルテバイオ（ＦｏｒｔeＢｉｏ）から提供されたオクテット（Ｏｃｔｅｔ）システムによる分析された。
抗体親和性の結果を表２に示されている。
Figure 2022538092000002
本発明の研究に使用される細胞、特に本明細書の実施例および結果の適用上の細胞は、ヒトから得られた。より詳細に、ＢＰＤＣＮ患者由来の初代細胞（ＤＣ－２００８－７１３及びＤＣ－２０１６－２７９１収集物）を用いて、ＣＤ１２３発現評価、細胞毒性分析、およびＰＤＸ（初代由来異種移植片）を産生させるため、ＮＳＧマウスにおける初代細胞の増幅を行った。参考文献：フィリップ Ｌ．他，芽球性プラスマサイトイド樹状細胞腫に対する新しい治療アプローチとしてのボルテゾミブ，ヒーマトロジィカ，２０１７。これらの症例は、出願人が確立したＢＰＤＣＮの診断のための現行の推奨に従って特性評価を行った。参考文献：ガルナッシュ－ オットー Ｆ， フォイヤール Ｊ， フェラン Ｃ， ビーチッレ Ｓ， トリモロー Ｆ， セイユ Ｅ他，形質細胞様樹状細胞白血病の拡大された診断基準，ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・ヒーマトロジィ、２００９、１４５（５）：６２４－３６。スワードロー，Ｓ．Ｈ．，カンポ，Ｅ．，ハリス，Ｎ．Ｌ．，ヤッフー，Ｅ．Ｓ．，ピレリ，Ｓ．Ａ．，スタイン，Ｈ．，ティーレ，Ｊ．，アーバー，Ｄ．Ａ．，ハッサージ，Ｒ．Ｐ．，ル・ボー，Ｍ．Ｍ．，オラジ，Ａ．＆シーベルト，Ｒ．（２０１７），血液・リンパ系腫瘍のＷＨＯ分類。血液・リンパ系腫瘍のＷＨＯ分類における（スワードロー，Ｓ．Ｈ．，カンポ，Ｅ．，ハリス，Ｎ．Ｌ．，ヤッフー，Ｅ．Ｓ．，ピレリ，Ｓ．Ａ．，スタイン，Ｈ．，ティーレ，Ｊ．，アーバー，Ｄ．Ａ．，ハッサージ，Ｒ．Ｐ．，ル・ボー，Ｍ．Ｍ．，オラジ，Ａ．＆シーベルト，Ｒ．により編集された。）９８－１０６ページ、リヨン，フランス。ＰＤＸ細胞Ｐ１２７Ｂ、Ｐ２５Ｂ、ＣＭ６０９１５，Ｆ１３－ＣＡＬ１及びＦ１３－ＬＡを適当な培養培地で生体外培養した。ＣＤ１２３＋ＢＰＤＣＮ細胞株（ＧＥＮ２．２およびＣＡＬ－１、日本の長崎大学のマエダ博士）およびＣＤ１２３―細胞株（Ｄａｕｄｉ、Ｊｕｒｋａｔ、ＨＬ－６０、ＲＥＨ）の二つ細胞株がある。ＣＤ１２３を発現するようにレンチウイルス形質移入によりＫ５６２ ＣＤ１２３細胞株を産生された。ＣＤ１２３発現を研究するために、正常血液（ｎ＝１９）および骨髄（ｎ＝４）、急性白血病（骨髄性ＡＭＬ、ｎ＝３）およびリンパ腫（Ｂ－ＡＬＬ、ｎ＝３;Ｔ－ＡＬＬ，ｎ＝３）由来の細胞は健常ドナーおよび／または患者から取得された。本発明では、遺伝子改変Ｔ細胞を産生するために末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）が使用された。ＰＢＭＣは、フランス血液センター(ＥＦＳ Ｂ／ＦＣ、ブザンソン、フランス）で採取した健常ドナーまたは臍帯血サンプルをフィコール（ＦＩＣＯＬＬ商標）勾配密度遠心法（市販のＦＩＣＯＬＬ－ＰＡＱＵＥTMを使用）により単離された。
別段の定めがない限り、ここでの統計解析は平均値で表せている。記載された実施形態におけるすべての統計解析は、グラフパッド・プリズム（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ）７（グラフパッド・ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ）社提供、アメリカカリフォルニア州サンディエゴ）を用いて実施した。２集団間の比較はスチューデントのｔ検定（Ｓｔｕｄｅｎｔ ｔ ｔｅｓｔ）により評価された。生存研究はカプラン・マイヤー曲線とログランク（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）検定により評価された。
フローサイトメトリーを用いて、正常造血細胞およびＢＰＤＣＮ細胞上のＣＤ１２３発現のプロファイルを試験された。本発明Ｂ４Ｄ５（ＡＢ１）の抗体および市販の抗ＣＤ１２３抗体（６Ｈ６）を用いて、正常細胞およびＢＰＤＣＮ患者細胞におけるＣＤ１２３発現のプロファイルを決定された。より詳細に、正常な血および骨髄細胞、すなわち正常なｐＤＣ（ＣＤ３０４で標的化）、単球（ＣＤ１４＋）、リンパ球（ＣＤ４５＋ハイ／ＳＳＣロー）、顆粒球（ＣＤ４５＋、ＳＳＣハイおよびＦＳＣハイ）およびＣＳＨ／前駆細胞（ＣＤ３４＋）を、ＢＰＤＣＮ患者細胞（ＣＤ４５＋ロー、ＣＤ３０４＋）と比較された。平均蛍光強度比（ＭＦＩＲ）は、ＣＤ１２３の平均蛍光強度（ＭＦＩ）をアイソタイプ対照ｍＡｂの１つで除して計算された。２より高いＭＦＩＲがある時、細胞はＣＤ１２３発現に対して陽性であると考えられた。参考文献：Ｇａｒａｎｄ Ｒ， Ｒｏｂｉｌｌａｒｄ Ｎ．，急性白血病および慢性リンパ増殖性疾患の免疫表現型の特徴：実践的推奨と分類血液学と細胞療法，血液学および細胞治療，１９９６；３８（６）：４７１－８６。正常ｐＤＣとＢＰＤＣＮでＣＤ１２３は最も高い（それぞれ１３０．６［１１８．４～１４６．８］、ｎ＝５と１３６［１０２．１～１５８．１］、ｎ＝５）。単球（２０．７［４．５～５１．１］、ｎ＝７）およびＣＤ３４＋細胞（２３．７［１９．２～３２．２］、ｎ＝４）で低発現は検出されるが、リンパ球（１．４［１～２．４］、ｎ＝７）および多核細胞（１．１［１．１～１．２］、ｎ＝３）はＣＤ１２３を発現されない。
図１０は、正常な造血細胞およびＢＰＤＣＮでＣＤ１２３発現の評価に基づくフローサイトメトリーグラフを示す。特に、市販の抗体６Ｈ６との比較において、正常造血細胞上およびＢＢ４Ｄ５抗体を用いたＢＰＤＣＮでのＣＤ１２３発現の評価に基づくフローサイトメトリーグラフを示す。アイソタイプコントロールは白色で、抗―ＣＤ１２３ Ｂ４Ｄ５は黒色で現れている。前述したように、正常細胞を、末梢血および骨髄（図１０ Ａに参照する）、ＢＰＤＣＮ細胞株（ＣＡＬ－１およびＧＥＮ ２．２）、ＰＤＸ （Ｐ１２７Ｂ－Ｍ５）およびＢＰＤＣＮ患者の初代細胞（図１０ Ｂに参照する）において評価された。さらに、リンパ球（ｎ＝７および１２）、単球（ｎ＝７および１２）、顆粒球（ｎ＝３および５）、正常ｐＤＣ（ｎ＝５および７）での抗－ＣＤ１２３ Ｂ４Ｄ５および６Ｈ６市販抗体を用いて、ＭＦＩＲ（アイソタイプ対照ｍＡｂの１つによるＣＤ１２３の平均蛍光強度の比）によりＣＤ１２３発現を評価された。ＣＤ３４集団については、図１０ＣにＣＤ１２３レベル発現の差が観察されないから、血液および骨髄サンプル（ｎ＝４および７）からのデータを統合された。
さらに、いくつかの非ｐＤＣ急性白血病をＢ４Ｄ５モノクローナル抗体で試験された。ＢＰＤＣＮがＡＭＬ、ＢまたはＴリンパ性急性白血病より高いレベルのＣＤ１２３を発現されたことを出願人は確認した。
図１１は、ＢＰＤＣＮおよび他の非ｐＤＣ急性白血病におけるＣＤ１２３発現の評価に基づく表およびフローサイトメトリーのグラフを示す。図１１は、リンパ球（ｎ＝１２）、単球（ｎ＝１２）、顆粒球（ｎ＝５）、正常ｐＤＣ（ｎ＝７）での６Ｈ６市販抗体を用いて、ＭＦＩＲ（ＣＤ１２３の平均蛍光強度の比をアイソタイプ対照ｍＡｂの１で割った値）によって評価したＣＤ１２３発現を示す（図１１ Ａに参照する）。ＣＤ１２３レベル発現の差が観察されないから、血液および骨髄サンプル（ｎ＝４および７）からのデータを統合された。ＣＤ３４集団での発現は、骨髄上で評価される。図１１は、Ｂ－ＬＡＬ、Ｔ－ＬＡＬおよびＡＭＬ細胞株でのＣＤ１２３の発現のフローサイトメトリー評価も示し、ＣＤ１２３ Ｂ４Ｄ５抗体を用いた患者初代細胞上のＣＤ１２３発現は黒色で現れ、アイソタイプ対照は白色で現れている（図１１ Ｂに参照する）。非ｐＤＣ急性白血病におけるＣＤ１２３発現量は、ＢＰＤＣＮ患者の１つよりも低い（図１１ Ｂに参照する）。
図１２は、本発明のキメラ抗原受容体、本発明のキメラ抗原受容体を含む本発明によるＴ細胞の産生に関するウェスタンブロットおよびフローサイトメトリーグラフの設計の図を示す。
図１２は、本発明によるＣＤ１２３ ＣＡＲ Ｔ細胞の設計および産生を示す。本発明の抗体ＡＢ１を用いて、抗ＣＤ１２３ ＣＡＲ Ｔ細胞を構築した。本発明の本実施形態のＣＡＲは、Ｂ４Ｄ５（ＡＢ１）のｓｃＦｖ、Ｔ細胞の活性化の特異的ドメイン（ＣＤ３ζ）および２つの共活性化ドメイン（ＣＤ２８および４.ＩＢＢ）に基づく。ＣＡＲ、２Ａ配列（２Ａ自己切断ペプチドをコードする）および選択マーカーＡＣＤ１９（短縮ＣＤ１９）をコードする配列を、ｐＳＦＧレトロウイルスベクター(ＳＦＧ．ＣＡＲ ＣＤ１２３．ＩＲＥＳ．ＡＣＤ１９ベクター）にクローンした。ＳＦＧ．ＣＡＲ ＣＤ１２３．ＩＲＥＳ．△ＣＤ１９ベクターにより形質移入されたＰＧ１３パッケージング細胞株からレトロウイルス上清を産生された。
本発明の別の実施形態によれば、レンチウイルス構築物も産生された：同じＣＡＲ配列はＥＦｌαプロモーターの制御下にあり、下流はＴ２Ａリボソームスキップ配列および短縮されたヒトＣＤ１９形質移入マーカーである。
レトロウイルスおよびレンチウイルスの実施形態の両方を、図１２ Ａに示召される。より詳細に、第３世代のレトロウイルス型抗－ＣＤ１２３ ＣＡＲベクトル（ＣＤ１２３Ｒ ＣＡＲ）と第３世代のレルチビル系抗－ＣＤ１２３ ＣＡＲベクトル（ＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲ）の概略図を図１２に示す。本発明のＢ４Ｄ５抗体に由来するｓｃＦｖ ＣＤ１２３を、Ｔ細胞シグナル伝達ドメインＣＤ２８、４ＩＢＢおよびＣＤ３ζに融合させる。選択マーカー（△ＣＤ１９）も示されている。本発明の遺伝子改変初代Ｔ細胞は、ウイルス形質移入により産生された。形質移入前の２日間、ＰＢＭＣをＣＤ３／ＣＤ２８ダイナビーズ（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ）(ライフテクノロジーズ社、カリフォルニア州、アメリカ）で活性化された。６－ウェル－レトロネクチン（ＰＢＳ中１．２μｇ／ｃｍ2、４℃で一晩置く、タカラ、日本）－コーティングプレート（６－ｗｅｌｌ－ｒｅｔｒｏｎｅｃｔｉｎ－ｃｏａｔｅｄ ｐｌａｔｅ）で、レトロウイルス形質移入を行われた。次に、レトロウイルス粒子を用いて細胞をスピン導入された（１．５時間、２０００ｇ、１０℃）。レンチウイルスの形質移入のために、ＭＯＩ＝１０、ｌｈ、３２℃で、細胞を８００ｇでスピン導入された。形質移入効率は、ＣＤ３＋細胞上の△ＣＤ１９細胞表面マーカー発現を同定するためにフローサイトメトリー解析を行うことによって測定された。逆導入された陽性細胞をマイクロビーズ（ＣＤ１９マイクロビーズ、ミルテニーバイオテク、ベルギッシュグラートバハ、ドイツ）で磁気的に標識し、製造者のプロトコールに従ってＭＡＣＳ(R)カラムに装填された。レトロウイルスの形質移入により得られたＴ細胞についてランスデュースされたＴ細胞はＣＤ１２３Ｒ ＣＡＲと命名され、レンチビラルの形質移入により得られたＴ細胞についてランスデュースされたＴ細胞はＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲと命名される。同じドナーから、導入されていないＴ細胞（Ｃ０と呼ばれる）を採取し、前記と同様に培養したが、ウイルスによる形質移入は行わなかった：これらの細胞はすべての実験で対照として用いられる。ＣＤ１２３ ＣＡＲ Ｔ細胞を２１日間増殖させ、凍結保存した。
本発明の記載された実施形態の目的のために、特に明記しない限り、ＢＰＤＣＮ患者由来形質移入Ｔ細胞に基づいて細胞毒性を評価することができる。より詳細には、ＢＰＤＣＮ患者由来のＴ細胞（ＤＣ ２０１６－２７９１）は、ヒトＣＤ３／ＣＤ２８ダイナビーズおよび磁気選択を用いてＰＢＭＣから活性化される。陰性断片には、ＣＡＲおよびＢリンパ球の細胞毒性を評価することに用いられるＢＰＤＣＮ芽球（血球百分率数で６０％）が含まれる。さらに、Ｔ細胞は、前述のようにレンチウイルス構築物で形質移入される。１０日後、形質移入効率およびＣＡＲ発現は、前述されているようにフローサイトメトリーによって測定される。細胞毒性活性を、Ｅ：Ｔ比＝５：１、２４時間で、ＢＰＣＮ芽球に対して評価された。
本発明の記載された実施形態の目的のために、特に明記しない限り、免疫表現型アッセイを以下のように実施することができる。抗体結合は、ＬＳＲ ＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターまたはＢＤ ＦＡＣＳ ＣＡＮＴＯ ＩＩで検出し、Ｄｉｖａソフトウェア（ＢＤ バイオサイエンス社、ニュージャージー州、アメリカ）で分析された。分析するため、適切にマッチさせたアイソタイプ対照を含める。簡単に述べると、Ｔ細胞はＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９で染色される。ＣＤ３＋／ＣＤ１９＋Ｔ細胞はＣＤ１２３ ＣＡＲ Ｔ細胞である。ＢＰＤＣＮ細胞、細胞株およびＰＤＸは、より多くの結果を得るために、Ｂ４Ｄ５（ＣＡＲ構築に使用されるＡＢ１）および市販の抗体（すなわち６Ｈ６）を用いるＣＤ１２３染色で特徴付けられる。抗ＣＤ４５（Ｔ細胞はＣＤ４５ハイ／ＳＳＣローであり、顆粒球はＣＤ４５＋／ＳＳＣハイ／ＦＳＣハイである）、ＣＤ３０４（正常ｐＤＣ）、ＣＤ１４（単球）、およびＣＤ３４（ＣＳＨ／前駆細胞）を用いて正常血および骨髄検体を分析される。患者由来のＢＰＤＣＮサンプルを、ＣＤ５６、ＣＤ４、ＣＤ３０３、ＣＤ３０４、ＣＤ４５で染色される。本発明のいくつかの実施形態は、ＢＰＤＣＮマウスモデルを参照する。よって、ＢＰＤＣＮマウスモデルにおいて、芽球数(抗－ヒトｈＣＤ４５、ｈＣＤ１２３）およびＴ細胞（Ｃ０およびＣＤ１２３ ＣＡＲ）（ｈＣＤ３、ｈＣＤ１９）を、ＢＤ ＴｒｕＣｏｕｎｔチューブを用いて血液細胞試料中で毎週モニターされる。ヒト化マウスでは、末梢血をフローサイトメトリー（アチューンＮｘＴフローサイトメーター、ライフテクノロジーズ）により分析し、マウス屠殺後の骨髄中の全白血球（ｈＣＤ４５＋）、単球（ＣＤ４５／ＳＳＣ＋ミディアム、ｈＣＤ３３＋）、Ｂリンパ球（ｈＣＤ１９＋）、Ｔリンパ球（ｈＣＤ３＋）、ｐＤＣ（ｈＣＤ１２３＋、ｈＣＤ３０４＋）およびＣＳＨ／前駆細胞（ＣＤ３４＋）のヒト細胞を定量する。細胞表面の表現型の特徴づけに用いたモノクローナル抗体を表３に示す。
Figure 2022538092000003
Figure 2022538092000004
本明細書に記載されるいくつかの実施形態は、生体外細胞毒性評価および機能分析をさらに言及される。このために、製造業者のプロトコールに従って、Ｃ０またはＣＤ１２３ ＣＡＲ Ｔ細胞（１・１０６細胞／ｍＬ）を細胞増殖色素ｅＦｌｕｏｒ ４５０（サーモフィッシャーサイエンティフィック社、エキュブラン、スイス）で標識される。次に、標識された細胞を適当なエフェクター／ターゲット（Ｅ：Ｔ）比で、標的細胞（ＣＡＬ－１、ＧＥＮ ２．２、ＤＡＵＤＩ、ＨＬ－６０、Ｋ５６２ ＣＤ１２３およびＰＤＸ）とともに３７℃で２４時間または１５時間（ＰＤＸ）培養される。共培養後、標的細胞（７－ＡＡＤ＋ ＣＤ１２３＋細胞）の細胞死を評価するために、細胞を７－ＡＡＤ(ベックマン・コールター）、抗－ＣＤ３、抗ＣＤ１９（Ｃ０またはＣＡＲ Ｔ細胞を評価するため）および抗－ＣＤ１２３で標識される。生体外でＣＤ１０７ａＰＥ脱顆粒評価のため、ＣＤ１２３ ＣＡＲ Ｔ細胞の機能性を試験され、製造業者のプロトコールに従って、ゴルジプラス（商標 ＢＤ ＧｏｌｇｉＰｌｕｇTM）（ＢＤ バイオサイアンス）を有するＢＤ サイトフィックス・サイトパーマ（商標）（Ｃｙｔｏｆｉｘ／ＣｙｔｏｐｅｒｍTM）プラス固定・透過溶液キットで、ＩＦＮγＰＥ細胞内産生を実施された。製造業者のプロトコールに従って、ＣＡＲ ヒトＴｈｌ／Ｔｈ２／Ｔｈｌ７サイトカインキット（ＢＤ バイオサイアンス）により、共培養の上清を分析された。ＨＭＥＣ付着細胞株または初代単球に対するＣＡＲ細胞毒性は、製造業者のプロトコールに従って、ＭＴＴ細胞増殖試験（シグマ－アルドリッチ社、ミズーリ州、アメリカ）を用いて評価される。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態は、組織マイクロアレイおよび免疫組織化学をさらに言及する。Ｂ４Ｄ５（ＡＢ１）抗体の特異性は、各臓器あたり３名の個々のドナー(ＵＳ バイオマックス、ロックビル、アメリカ）の９０組織コア（３０臓器）を含む組織マイクロアレイ( Ｔｉｓｓｕｅ ＭｉｃｒｏＡｒｒａｙ)により分析される。免疫染色は、ＵｌｔｒａＶｉｅｗ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＤＡＢ 検出キット(ベンタナ社、アメリカ）を用いて検出し、ＮＤＰ．ｖｉｅｗ２ソフトウェアで画像解析を実行された。染色強度は、陰性（０）、弱い染色（１＋）、中程度の染色（２＋）、または陽性の染色（３＋）、強い染色（４＋）の順に段階付けされる。ＣＤ１２３（ＣＡＬ－１）高値または陰性
（Ｄａｕｄｉ）発現細胞株を、それぞれ陽性または陰性対照として用いる。ＣＤ１２３染色を示した各組織（結腸、胃、筋肉、食道、皮膚、甲状腺）について、患者３名のパラフィン包埋正常組織に対する免疫組織化学（ＩＨＣ）によりＣＤ１２３発現を制御し、２名のＢＰＤＣＮ患者の皮膚と比較した。
さらに、本明細書に記載されるいくつかの実施形態は、ＣＡＲ ＣＤ１２３効率を評価するための生体内モデルを言及される。そのために、ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／ＩＬ２Ｒγｃ欠損（ＮＳＧ）マウス（６～８週齢、ジャクソン研究所、サクラメント、カリフォルニア州、アメリカ）に、照射（２．５Ｇｙ）され、ＣＡＬ－１（１・１０６／マウス）またはＰＤＸ細胞（２・１０６／マウス）を発現する適当な数のルシフェラーゼを静脈内接種さる。ＢＰＤＣＮ細胞の生着と定量については記載された。フィリップ Ｌ，セロリ Ａ，ボーレリチャード Ｅ，ジェーヌヴリン Ａ，ビーチッレ Ｓ，ペラン Ｓ他，芽球性形質細胞性樹状細胞新生物の新しい治療法としてのボルテゾミブ，ヒーマトロジィカ，２０１７、１０２（１１): ８６１－８．ＣＡＬ－１モデルでは、３日目にＴ細胞（形質移入されずまたは形質移入された）を尾静脈に注入された。生着をＢＬＩ測定により毎週モニターされた：イメージング(ＩＶＩＳ Ｌｕｍｉｎａ Ｓｅｒｉｅｓ ＩＩＩ，パーキンエルマー社，マサチューセッツ州，アメリカ）前１０分以内にマウスに、３ｍｇルシフェリン(ＶｉｖｏＧｌｏ Ｌｕｃｉｆｅｒｉｎ、＃Ｐ１０４３、プロメガ、ウィスコンシン州、アメリカ）を腹腔内投与された。ＰＤＸモデルにおいて、ＢＰＤＣＮ芽球が血液検体中に検出された場合、マウスにＴ細胞を投与された。芽球数は、抗ｈＣＤ４５、抗ＣＤ１２３およびＢＤ ＴｒｕＣｏｕｎｔチューブを用いてフローサイトメトリーにより１０日毎にモニタリングされる。
本明細書に記載されたいくつかの他の実施形態は、ＣＤ１２３ロー細胞に対するＣＡＲ毒性の評価を言及する。このために、ヒト化マウスモデルを使用されている。より詳細には、ヒト化マウスモデル（雌性ｈＣＤ３４生着されたマウスＮＯＤ／Ｓｈｉ－ｓｃｉｄ／ＩＬ－２Ｒγｎｕｌｌ免疫不全マウス株:ｈｕ－ＮＯＧ)を用いて、本発明のＣＡＲの正常ヒト造血細胞（ｎ＝３ドナー）において生体内毒性を研究する。１５日目に、２匹のヒト化マウスを屠殺された；ＣＤ１２３ ＣＡＲ Ｔ細胞またはＣ０を得るため、Ｔ細胞を脾臓から採取され、形質移入された。０日目に、２匹のヒト化マウス（同じ供与体で作製された）に２０・１０６Ｃ０またはＣＤ１２３ ＣＡＲを眼窩後方に注射される。５日目およびＤ１５日目に、血液および屠殺後（１５日目のみ）骨髄中のＨＳＣ／前駆細胞において、総白血球、単球、ＢおよびＴリンパ球、ｐＤＣおよび好塩基球を定量される。正常な自己のＣＤ３４細胞に対するＣＡＲ Ｔ－細胞の生体外細胞毒性の評価のために、犠牲されたヒト化マウスの骨髄およびＣＤ１２３ ＣＡＲから得た、磁気的に仕分けられたＣＤ３４＋細胞（ＣＤ３４マイクロビーズ、ミルテニーバイオテク)を使用することができる。あるいは、上記と同じヒト化マウス（ｎ＝３）から得られたＴ細胞から産生されたＣ０を使用することができる。共培養は、ＢＰＤＣＮ細胞について５：１のＥ：Ｔ比で記載されているのと同じ条件で行う。ＣＤ１２３ ＣＡＲまたはＣ０との共培養後の生存できるｈＣＤ３４+の数を比較される。ＣＡＲ ＣＤ１２３と共培養された臍帯血から磁気的に仕分けられたＣＤ３４細胞または同じ臍帯血Ｔリンパ球（ｎ＝３）から産生されたＣ０を用いて同じ実験を行われる。
図１２は形質移入効率を示す（図１２Ｂに参照する）。形質移入効率は、ＣＤ３およびＣＤ１９を共発現するＴ細胞の定量により評価された。レトロウイルス構築物において、平均１７．８％の可変形質移入レベルが観察された（［３－５７％］、ｎ＝４３）。これは、ＣＡＲ Ｔ細胞を効果的に使用するために磁気選択を用いて制御できる可変形質移入能力を示すことができる（形質移入Ｔ細胞の純度は９０%＋９．５%([６０～９８．５％］、ｎ＝４３）。より詳細には、図１２の項目Ｂは、本発明のＴ細胞に対する磁気細胞分離の前後の、本発明の形質移入されたＴ細胞（ＣＤ１２３ ＣＡＲ Ｔ細胞または抗－ＣＤ１２３ ＣＡＲ Ｔ細胞）と比較して、形質移入されていないＴ細胞（Ｃ０）の代表的な表現型ＣＤ３／ＣＤ１９を示す。レンチウイルス形質移入は良好な形質移入効率を示す（９１．２%＋５．２２、ｎ＝６）（図１２Ｂを参照する）。
本発明の目的のために、形質移入された細胞におけるＣＡＲ構築の発現の評価は、ウェスタンブロット法によって行うことができる。より詳細には、本発明による形質移入されていないＴ細胞（Ｃ０）およびＣＤ１２３ ＣＡＲ Ｔ細胞は、プロテアーゼ阻害剤カクテル（完全ミニＥＤＴＡフリー；ロシュ、フランス）を添加したＲＩＰＡ緩衝液中で超音波処理によって溶解される。等量のタンパク質をＳＤＳ－ＰＡＧＥで分画し、ＰＶＤＦ膜(バイオ・ラッド、カリフォルニア州、アメリカ）に電気転写させた。ヒトＣＤ３ζ鎖（５１～６５２７ＧＲ、ＢＤバイオサイエンス)に結合した一次抗体（１：１０００で希釈）を有する膜を一晩プローブされた。内部のローディング・コントロールとしてβ－アクチン（クローンＡＣ１５、＃Ａ５４４１、シグマ－アルドリッチ、ミズーリ州、アメリカ）を認識する抗体（希釈１：１０６）を添加される。免疫検出を実施するために、二次抗体を添加される（１：６０００で希釈）：ヒツジ抗マウスＩｇＧ（＃５１５－０３５－０６２、ジャクソン、ペンシルベニア州、アメリカ）。化学発光は、適切な検出試薬（クラリティ（Ｃｌａｒｉｔｙ、商標）、Ｗｅｓｔｅｒｎ ＥＣＬ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ、バイオ・ラッド、クレッシエ、スイス）を加え、カメラおよびＢｉｏ－ＩＤソフトウェア（ヴィルバー ルーマット、コレジアンフランス、フランス）を用いて検出される。
図１２はウェスタンブロットも示す（図１２Ｃに参照する）。本発明のＣＡＲの発現は、３つの実験において免疫ブロットにより検証された（図１２Ｃ）。内因性ＣＤ３ζ鎖に相当する低いバンド（１６ｋＤａ）が形質移入されたおよび形質移入されないＴ細胞溶解物で検出されたが、ＣＤ１２３ ＣＡＲ Ｔ細胞においｇｄＣＤ１２３ ＣＡＲ構築物の理論的サイズに相当する５５ｋＤａにさらなるバンドが現われる。形質移入されないＴ細胞には、このバンドは存在しない。より詳細には、図１２の項目Ｃは、遺伝子改変Ｔ細胞（ＣＡＲ）に由来する細胞溶解物におけるＣＤ１２３ ＣＡＲタンパク質発現（５５ｋＤａ、内因性ＣＤ３ ζ（１６ｋＤａ）と比較してＣＡＲコンストラクトに融合したＣＤ３ζ）のウェスタンブロット分析を、Ｃ０における発現なしと比較して示す。
図１２は、サイトメトリーフロー分析も示す（図１２Ｄおよび図１２Ｅに参照する）。Ｔ細胞上のＣＤ１２３ ＣＡＲの表面発現は、ビオチン複合されたＣＤ１２３タンパク質を用いてフローサイトメトリー分析により確認された。タンパク質ＣＤ１２３の固定化は、形質移入されたＴ細胞（ＣＤ１２３Ｒ ＣＡに対して、Ｒ１６％＋１１．５、ｎ＝８，ＣＤ１２３L ＣＡに対して、３１．５％＋１２．２、ｎ＝９)にのみ起こったに対して、形質移入されないのは０％である。図１２のＤ項目は、フローサイトメトリーによるＣＡＲ細胞表面発現を示す：ＣＤ１２３ ＣＡＲおよびＣ０をビオチン複合されたＣＤ１２３タンパク質プラスストレプトアビジンＰＥ（ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎＰＥ）で染色される。より具体的には、図１２のＤ項に発現の例を示され、図１２のＥ項に計１７の異なる実験（ＣＤ１２３Ｒ ＣＡＲに対して、ｎ＝８、ＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲに対して、ｎ＝９）の平均値を示されている。形質移入されない細胞において発現は検出されなかった。
より一般的には、本発明の目的のために、形質移入された細胞におけるＣＡＲの表面発現の評価は、フローサイトメトリーによって行われる。より詳細には、形質移入されたＴ細胞の細胞表面上の抗－ＣＤ１２３ ｓｃＦＶの発現は、フローサイトメトリーによって調べられる。Ｔ－細胞（１００，０００個の細胞）は、常温、１時間で、０．２５μｇビオチン化ＣＤ１２３タンパク質で、次いでＰＥ複後型プタビジン（ＢＤバイオサイエンス）で染色される。次いで、Ｃ０と比較してＣＤ３＋ＣＤ１９＋ＣＡＲ細胞上のＣＤ１２３の固定化を評価される。
図１３は、本発明によるＣＡＲの核酸配列を示す。ＣＡＲは、本発明のモノクローナル抗体ＡＢ１で構築される。ペプチドシグナル、Ｔａｇ ＨＡ、重鎖、ヒンジ１、軽鎖、ヒンジ２、ＣＤ２８、４．ＩＢＢ、ＣＤ３ζに対応する核酸はそれぞれ、読み順に左から右へと異なる色調で強調されている。
よって、本発明の目的は、キメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）をコードする単離された核酸分子であって、核酸分子が、配列番号９７に対して少なくとも８５％、優先的に９０％、より優先的に９５％の同一性を有する配列からなる。
本発明の他の目的は、キメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）をコードする単離された核酸分子であって、核酸は配列番号：９７のアミノ酸配列からなる。
図１４は、形質移入されないＴ細胞と比較した本発明によるＣＡＲ Ｔ細胞の表現型のアッセイに関するフローサイトメトリーグラフを示す。
本実施形態のＣＡＲ ＣＤ１２３細胞産物は、ＣＤ４ Ｔ細胞（５８％［２２．６～８４．８％］、ｎ＝２３）およびＣＤ８ Ｔ細胞（３９．６% [１６．１～７４．９％］、ｎ＝２３)の混合物を含む。ＣＤ４／ＣＤ８の比について、導入されていないＴ細胞と導入されたＴ細胞との間の差は観測されない。図１４の項目Ａは、１０の異なったドナーに基づいた１０回の実験において、Ｔ細胞Ｃ０および遺伝子組換え細胞（ＧＭＣ） ＣＤ１２３Ｒ ＣＡＲ Ｔ細胞におけるＣＤ８集団（ＣＤ４集団と対比）の割合を示す。全体として、形質移入されおよび形質移入されない細胞（ｎｓ、ｐ＝０、５７）、両集団（ＣＤ４およびＣＤ８）の再分配に有意な差はない（図１４Ａに参照する）。図１４の項目Ｂは、ＣＤ４５ＲＡおよびＣＤ４５ＲＯ、ならびにＣＤ９５およびＣＣＲ７の発現に基づく記憶Ｔ細胞表現型のフローサイトメトリー分析の代表例を示す（図１４Ｂに参照する）。図４のＣ項目とＤ項目は、それぞれ、ＣＤ４とＣＤ８のＣＤ１２３Ｒ ＣＡＲ Ｔ細胞（ＧＭＣ）のＴ亜集団の再配分を、３ドナーのＣ０と比較したものである。ＴＥＦＦ：エフェクターＴ細胞、ＴＥＭ：エフェクター記憶Ｔ細胞、ＴＣＭ：中心記憶Ｔ細胞、ＴＳＣＭ：記憶Ｔ細胞。
図１５は、本発明のキメラ抗原受容体を有する標的細胞および形質移入されない細胞の図、ならびに本発明のＣＡＲのＢＰＤＣＮ細胞株およびＢＰＤＣＮ患者由来異種移植片細胞に対する特異的細胞毒性、さらに標的化の特異性を示すＣＤ１２３陰性細胞に対するフローサイトメトリーグラフを示す。
より一般的には、図１５は、本発明のＣＡＲのＢＰＤＣＮ細胞株およびＢＰＤＣＮ患者由来異種移植細胞に対する特異的細胞毒性を示す。各グラフについて、平均値及び標準偏差を示す。
図１５の項目Ａの左側に示している図は、ＢＰＤＣＮ細胞に対してＣ０およびＣＤ１２３ ＣＡＲ Ｔ細胞を共培養する一般的な原理であり、続いてフローサイトメトリーの結果が右側に示している。ＣＤ１２３ ＣＡＲ Ｔ細胞毒性（例えば、標的細胞にアポトーシスを誘導する能力）を評価するために、標的細胞を、Ｅ：Ｔ比１０：１（ＣＤ１２３Ｒ ＣＡＲ）または５：１（ＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲ）または単独１：０（対照）で、エフェクターＴ細胞（Ｃ０またはＣＤ１２３ ＣＡＲ）と１６ｈ（ＰＤＸ）または２４ｈ（ＣＡＬ－１、ＧＥＮ ２．２、ＤＡＵＤＩ、ＲＥＨ）と共培養された（図１５Ａに参照する）。Ｔ細胞は、ＢＰＤＣＮ細胞死を検出することを可能にするために、ｅＤｙｅ細胞増殖および７－ＡＡＤ染色を用いて標的化される。生きている標的細胞は７－ＡＡＤ－ ＣＤ１２３＋（灰色）である。ＣＡＲ ＣＤ１２３培養液またはＣ０培養液中の生きた標的細胞（７ＡＡＤ－／ＣＤ１２３＋）の数を培養液単独と比較して消耗の割合は算出された。ＣＡＲ産生に用いられるＴリンパ球は標的細胞と同種異系であるため、Ｃ０培養条件（Ｔ細胞の同種異系性にリンクする）で細胞毒性が得られる。これをＣＡＲ ＣＤ１２３培養で得られた細胞毒性と比較される。Ｃ０またはＣＤ１２３ ＣＡＲ条件の特異的細胞毒性は、標的単独条件における死の％と比較して、標的細胞死の％を表した。
図１５の項目ＢはフローサイトメトリーによるＢＰＤＮ細胞株（ＣＡＬ－１およびＧＥＮ２．２）のＣＤ１２３発現を示し、図１５の項目Ｃは、Ｅ：Ｔ比１０：１で共培養されたＣＡＬ－１およびＧＥＮ２．２（ＣＡＬ－１、ｎ＝２２およびＧＥＮ２．２、ｎ＝１０）に対するＣＤＲ ＣＡＲ Ｔ細胞特異的細胞傷害性を示し、図１５の項目Ｄは、フローサイトメトリーによるＢＰＤＣＮ ＰＤＸｓ細胞におけるＣＤ１２３発現を示し、図１５の項目ＥはＣＤ１２３＋ ＰＤＸｓ細胞（Ｐ１２７Ｂ－Ｍ５に対して、ｎ＝９、およびＰ２５Ｂ－Ｍ１に対して、ｎ＝６）に対するＣＤ１２３ ＣＡＲ Ｔ細胞の細胞傷害性を示している。ＣＤ１２３Ｒ ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＣＡＬ－１細胞株（ＣＤ１２３Ｒ ＣＡＲによる６９．１％±２７．４ ｖｓ Ｃ０による２２．２％±１１．８の消耗、ｎ＝２２、ｐ＜０．０００１）、ＧＥＮ ２．２細胞株（ＣＤ１２３Ｒ ＣＡＲによる６５．７％±２６．４ ｖｓ Ｃ０による２５．３％±１２．２、ｎ＝１０、ｐ＝０．０００４）、ならびにＰＤＸ細胞（ＣＤ１２３Ｒ ＣＡＲによる６８％±２２．２ ｖｓ Ｃ０による１３％±２９．５、ｎ＝１５）と共培養する時、強い抗原特異的細胞毒性を示した（図１５Ｂ、Ｃ、ＤおよびＥに参照する）。
図１５の項目Ｆの左側に示している図は、フローサイトメトリーによるＡＵＤＩおよびＲＥＨ細胞株におけるＣＤ１２３発現の欠乏であり、右側に示している図は、Ｃ０およびＣＤ１２３との共培養後これらの細胞株（ＤＡＵＤＩ、ｎ＝６およびＲＥＨ、ｎ＝４）の生存率を示す。ＣＤ１２３－細胞株ＤＡＵＤＩ及びＲＥＨには細胞毒性は認められなかった（図１５Ｆに参照する）。
図１５の項目Ｇは、Ｃ０またはＣＤ１２３Ｒ ＣＡＲ Ｔ細胞との共培養前に、ｌｈについてＣＡＬ－１をＢ４Ｄ５抗体で培養する条件での細胞死亡率のグラフを示す。ＣＡＬ－１細胞をＢ４Ｄ５ ＣＤ１２３抗体（ＡＢ１）で事前培養することにより、ＣＤ１２３Ｒ ＣＡＲ Ｔ細胞の特殊なサイトバリューの確認を実施される。事前培養は、ｎ＝５のＣＤ１２３Ｒ ＣＡＲ Ｔ細胞の細胞毒性の阻害を誘発される。ＣＡＲ ＣＤ１２３細胞毒性の阻害は、Ｃ０で観察される細胞死（ＣＤ１２３ ＣＡＲに対して、２７．２％±１３．７、Ｃ０に対して、１７．２％±１１、（ｎｓ、ｐ＝０．２３６８、ｎ＝５））と同様のＣＤ１２３Ｒ ＣＡＲによる死亡レベルにつながる（図１５Ｇに参照する）。実際に、生体外でＣＤ１２３+白血球に対して特定の細胞毒性を示す。
図１５の項Ｈは、ＣＡＬ－１（Ｅ：Ｔ＝１０：１、ｎ＝３またはＥ：Ｔ＝５：１、ｎ＝５）、ＧＥＮ２．２（Ｅ：Ｔ＝５：１、ｎ＝３）、および２ＰＤＸ（Ｅ：Ｔ＝５：１、Ｐ１２７Ｂ－Ｍ３、ｎ＝３およびＦ１３－ＣＡＬ－１－Ｍ２、ｎ＝３）に対するＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲの特殊な細胞毒性を示す。細胞毒性試験は、Ｅ：Ｔ＝１０：１および５：１比率でのＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲを用いて検証された（図１５Ｈに参照する）。ＣＡＬ－１については、Ｅ：Ｔ比が５：１に等しい場合、ＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲに対して９４．６％±６．１の消耗が観察されることに対し、Ｃ０に対して１６．６％±１８．７（ｐ＜０．０００１、ｎ＝５）であり、ＧＥＮ２．２：ＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲに対して、９６．７％±４．９の消耗に対し、Ｃ０に対して７％±１１．９（ｐ＝０．００３２、ｎ＝３）であり； ＰＤＸ：ＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲに対して８７．５％±６．８の消耗対し、Ｃ０に対して２１．２％±２２．７（ｐ＜０．０００１、ｎ＝６）である（図１５Ｈに参照する）。
図１５の項目Ｉは、Ｃ０およびＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲ Ｔ細胞との共培養後のＣＤ１２３細胞株（ＤＡＵＤＩ、ｎ＝３およびＨＬ－６０、ｎ＝４）の生存率を示している。再び、ＣＤ１２３細胞株、ＨＬ－６０およびＤＡＵＤＩに対する毒性は観察されない（ＣＤ１２３ＣＡＲに対して、ＨＬ－６０の実行可能性 ７３．８±７．３ ｖｓ Ｃ０に対して７２．５±１５．５、ｎ＝４；ＣＤ１２３ＣＡＲに対して、ＤＡＵＤＩの実行可能性 ９３±９．９ ｖｓ Ｃ０に対して９４．１±８．４、ｎ＝３）（図３Ｉに参照する）。
図１６は、ＣＤ１２３＋標的細胞との共培養における本発明のＣＤ１２３Ｒ ＣＡＲ Ｔ細胞の機能特性化と比較したフローサイトメトリーのグラフを示す。
図１６の項Ａは、Ｅ：Ｔが１０：１の６ｈのＣＡＬ－１細胞株との共培養後の形質移入されない細胞（Ｃ０）と比較したＣＤ１２３ＲのＣＤ１０７ａ発現による代表的な脱顆粒アッセイを示す。図１６の項目Ｂは、６回の実験の平均値＋／－ＳＤ、＊ｐ＝０，０２５３を表すヒストグラムを示す。ＣＤ１２３Ｒ ＣＡＲ Ｔ細胞のエフェクター関数を決定するために、共培養後に異なったパラメータを測定された。ＣＤ１２３Ｒ ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＣＤ１０７ａ（ＣＤ１２３Ｒ ＣＡＲに対して、１０．７％±７．６、Ｃ０に対して２．４±１．３、ｐ＝０．０２５３、ｎ＝６、ｃｆ）を一定量で発現したため、脱顆粒する（図１６Ａおよび図１６Ｂに参照する）。
図１６の項目Ｃは、ＣＡＬ－１との共培養の２４時間後の染色細胞内サイトカインＩＦＮ－ｙを示す。図１６の項目Ｄは、３回の実験の平均値＋／－ＳＤ、＊ｐ＝０，０３１４を表すヒストグラムを示す。ＣＤ１２３Ｒ ＣＡＲ Ｔ細胞は、細胞内区画（ＣＤ１２３Ｒ ＣＡＲに対して、１１％±４．７、Ｃ０に対して、２％±０．７、ｐ＝０．０３１４、ｎ＝３）（図４Ｃ＆Ｄ）においてＩＦＮ－ｇを分泌し、ＣＤ１２３Ｒ ＣＡＲ Ｔ細胞の活性化を示す（図１６Ｃおよび図１６Ｄに参照する）。
図１６の項目Ｅは、共培養上清におけるヒトＴｈｌ／Ｔｈ２／Ｔｈｌ７分析の１６の代表的なサイトカインビーズアレイヒトを示す（上から下まで:ＩＬ－２；ＩＬ－６；ＩＬ－４；ＩＬ－１０；ＴＮＦ；ＩＦＮ－γ；ＩＬ－１７ａ－カラーの場合、赤＝ＩＬ－２；オレンジ＝ＩＬ－６；黄＝ＩＬ－４；緑＝ＩＬ－１０；青＝ＴＮＦ；紺＝ＩＦＮ－Ｙ；紫＝ＩＬ－１７ａ）。ＣＤ１２３ ＣＡＲと共培養（ＣＤ１２３Ｒ ＣＡＲと共に、ＩＬ－１０：９１．４ｐｇ／ｍＬ±１９．４に対して、Ｃ０と共に、３１．６±６．８，ｎ＝５）の上清にＩＦＮ－γおよびＩＬ－１０（ＣＢＡ分析）のより高レベルを見出された（図１６Ｅに参照する）。
１６のＦ項は、ｎ＝３で、異なる標的細胞との共培養後のＣＤ１２３ＲおよびＣ０にＩＮＦ－ｇの分泌の平均を表すヒストグラムを示す。ＩＦＮ－γ分泌（ＣＤ１２３ ＣＡＲに対して２８８ｐｇ／ｍｌ±７０、Ｃ０に対して、１４７ｐｇ／ｍｌ±６７、ｎ＝５）の有意な増加が観察された。ＣＤ１２３ ＤＡＵＤＩ細胞株との共培養においてＩＦＮ－γを分泌しないため、分泌はＣＤ１２３Ｒ ＣＡＲ Ｔ－細胞の特有である（図１６Ｆに参照する）。
図１６の項Ｇは、ｎ＝５で、Ｂ４Ｄ５抗体と事前インキュベートされたＣＡＬ－１との共培養後のＣＤ１２３ ＣＡＲのＣＢＡ分析により測定される条件でのＩＦＮ－γの分泌グラフを示す。本発明のＣＤ１２３ Ｂ４Ｄ５抗体と事前にインキュベートしたＣＡＬ－１細胞がＣ０で観察される細胞毒性のレベルにつながる場合、ＣＤ１２３Ｒ ＣＡＲ Ｔ細胞による生産されたＩＦＮ－γは減少された（図１６Ｇに参照する）。ＩＬ１０も増加したが、レベルがより低い（ＣＤ１２３ ＣＡＲに対して、９１ｐｇ／ｍＬ±１９、Ｃ０に対して、３１±６、ｎ＝５）（図１６Ｅに参照する）。
図１７は、ＢＰＤＣＮ細胞株（ＣＡＬ－１）および一次由来異種移植細胞（ＰＤＸ）に対する本発明のＴ細胞の生体内抗腫瘍活性に関する異種移植モデル、生物発光イメージングおよびそれに関連するグラフ、ならびにフローサイトメトリーグラフの図を示す。
より一般的には、図１７は、ＣＡＬ－１およびＰＤＸ（初代由来の異種移植または患者由来の異種移植）に対する生体内抗がん剤活動を示す。
図１７の項目Ａは、異種移植モデルの一般的なダイアグラムを示す。このモデルは、ＣＡＬ－１ルシフェラーゼ細胞株（１・１０６）またはＰＤＸ（２・１０６）静脈内注射の１日前に照射（２，５Ｇｙ）される６～８週齢ＮＳＧマウスに基づく。Ｃ０ Ｔ細胞または本発明のＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲを含むＴ細胞は、ＣＡＬ－１モデルまたはフローサイトメトリーによる血液サンプルにＣＤ４５＋／ＣＤ１２３＋ ＢＰＤＣＮ細胞を検出された時、３日目に尾静脈（５または１０・１０６／マウス）に注入される。
図１７の項目Ｂは、３３日間のＣＡＲ 抗－ＣＤ１２３またはＣ０療法の前および間の両方における生物発光イメージング分析の写真を示す。×印は死亡したマウスを示す。図１７のＣ項は、Ｃ０（点線）とＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲ（実線）で治療されたマウスにおいで検出された生物発光（ａｃｔｓ／ｓ）の定量化の図を示す。ＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲと比較してＣ０で処理されたものの方が、白血病浸潤を反映した光明度はより高い。これは、本発明のＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲがＢＰＣＮを抑制および／または治療する能力を実証する。ＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲの一服で治療したマウスの全生存は、Ｃ０治療したマウス（４１対２６、５マウス／集団、ｐ＝０．００１７対数順位検定）、と比較して高い生存率を示す（図１７ＢおよびＣに参照する）。
図１７の項目Ｄは、マウスの全生存期間解析の図を示す。Ｃ０で治療されたマウス（各集団ｎ＝５マウス）と比較して、本発明のＣＡＲで治療されたマウスでは、生存における有意な増加が起こることは明らかであるようである。本発明のＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲは、ＢＰＤＣＮを投入量依存的に抑制する。このことは、ＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲの１０・１０６投入量が、ＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲ５・１０６の投入量より優れた生存を起こすことによって支持された。腫瘍量が少ないことによってさらに支持された（５・１０６Ｔ細胞の４１対１０・１０６Ｔ細胞の５５、マウス／集団５匹、ｐ＝０．０１７３、対数順位検定）（図１７Ｄに参照する）。
図１７に関連する前述の同じ実験は、ＣＤ１２３Ｒ ＣＡＲ、すなわち、発明のレトロウイルス版でさらに検証される。
よって、図１８は、ＢＰＤＣＮ細胞株（ＣＡＬ－１）に対する本発明のＴ細胞の生体内抗腫瘍活性に関する異種移植モデル、生物発光イメージングおよびそのグラフの図を示す。
より一般的には、図１８は、ＣＡＬ－１に対するＣＤ１２３Ｒ ＣＡＲ Ｔ細胞の生体内抗腫瘍活性を示す。図１８の項目Ａは、異種移植モデルの概略図を示す:ＮＳＧマウスをＣＡＬ－１ルシフェラーゼ注射（１・１０６／マウス）の前日に照射（２，５Ｇｙ）した。３日目に尾静脈にＣ０とＧＭＣ（１０・１０６）を注射した（図１８Ａに参照する）。図１８のＢ項は、ＣＡＬ－１ルシフェラーゼ移植に続く、ＣＤ１２３Ｒ ＣＡＲ Ｔ－細胞またはＣ０治療後の生物発光イメージングを示す。図１８の項目Ｃは、マウスの全生存期間解析の図を示す。生存分析では、ＣＤ１２３Ｒ ＣＡＲで治療されたマウスは、Ｃ０で治療されたマウス（ｎ＝５ マウス）と比較して有意な生存を示す。
結果として、本発明のＣＡＲは、ＢＰＤＣＮに対する効果な治療である。
図１７に示すように、本発明のＬｅ ＣＡＲレンチウイルスバージョンをさらに検査された。
より詳細には、結果はＰＤＸモデルにおいて確認される（図１７Ａに参照する）。
図１７の項目Ｅは、Ｃ０またはＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲ治療時に行った血液免疫測定の代表例を示す。ヒトＴ細胞および初代ＢＰＤＣＮ細胞は、ｈＣＤ４５発現に基づいて識別可能である。Ｃ０（ｈＣＤ４５ハイ／ＣＤ１２３－／ＣＤ３＋ ＣＤ１９－）またはＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲ（ｈＣＤ４５ハイ／ＣＤ１２３－／ＣＤ３＋ ＣＤ１９＋）は灰色（データははカラーであって：青色）であり、ＢＰＤＣＮ細胞（ｈＣＤ４５ロー／ＣＤ１２３＋）は黒色（カラーの場合：ピンク）である。図１７の項目Ｆは、Ｃ０（黒線、またはデータはカラーであり場合は青線）またはＣＤ１２３ ＣＡＲ（灰線、またはデータはカラーであり場合は赤線）による治療の間に、ＬＡＮ ＰＤＸを注射したマウスの血液における平均ＢＰＤＣＮ細胞数のグラフ。図１７の項目Ｇは、ＰＤＸ異種移植マウスの全生存率を示すグラフを示す。図１７の項目Ｇは、ＰＤＸ異種移植マウスの全生存率を示す。Ｃ０で治療されたマウスと比較して、ＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲで治療されマウスの生存率が高い（ｐ＝０，０１）。より具体的には、ＰＤＦＸ １３－ＬＡＮモデルでは、注射の７８日後、全てのマウスの血液に、ＢＰＤＣＮ細胞が検出される：１グループは５・１０６のＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲを受け（ＢＰＤＣＮ細胞の平均：２４ブラスト／μＬ［１－５６］、ｎ＝８）、もう１グループは５・１０６のＣ０（２６ブラスト／μＬ［１－６６］、ｎ＝８）。マウスは２５日間に、トラクオント分析を用いて血液分析によってモニタリングされる。７日目に、マウス血液サンプルにおけるＢＰＤＣＮ細胞およびＴ－細胞を定量される（図１７ＥおよびＦに参照する）。フォローアップの間に、ＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲで治療された時のサーキュレーティングＢＰＣＮ細胞数の抑制が可能であり（図１７Ｃに参照する）、マウスのより高い全生存（ＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲ治療の３１日対Ｃ０治療の２０日、ｐ＝０．０１０３）が示された（図１７Ｇに参照する）。全体として、ＢＰＤＣＮ株及びＰＤＸ細胞を有するモデルで得られた結果は、発明に係るＣＡＲ ＣＤ１２３Ｌが、生体内おけるＢＰＤＣＮの抑制を可能にすることを示した。
本発明のＣＡＲレトロウイルスバージョンは、レンチウイルスバージョンについて示されたものと類似の実験において確認されている。
図１９は、異なる細胞型におけるＣＤ１２３発現に対する蛍光グラフ、腫瘍および正常組織におけるＣＤ１２３発現の免疫組織化学像、ＣＤ１２３発現に対するフローサイトメトリーグラフ、本発明の自己Ｔ細胞の産生のダイアグラム、および低レベルでＣＤ１２３を発現する細胞に対する本発明のＴ細胞のＣＤ１２３に対する相対的毒性のフローサイトメトリーグラフを示す。
より一般的には、図１９は、ＣＤ１２３を低レベルで発現する細胞に対する発明のＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲ Ｔ細胞の毒性の評価を示す。
前述により、抗－ＣＤ１２３抗体（本発明のＢ４Ｄ５および市販の抗体６Ｈ６）は、ＣＤ１２３と類似する染色を示される（図１０Ｃに参照する）。よって、ＢＰＤＣＮと比較して、正常造血細胞および内皮細胞株（ＨＭＥＣ）でのＣＤ１２３発現を比較するため、６Ｈ６抗体を使用された。
図１９の項目Ａは、異なる細胞株におけるＣＤ１２３発現のグラフを示す。
血液および骨髄サンプル中のリンパ球（ｎ＝３１）、単球（ｎ＝２２）、正常ｐＤＣ（ｎ＝３０）、正常骨髄および内皮ＨＭＥＣ細胞株（ｎ＝４）に中のＣＤ３４細胞（ｎ＝１６）に対するＢＰＤＣＮ （ｎ＝６０）のＣＤ１２３発現を比較するため、６Ｈ６市販抗体を用いて研究される。結果をＭＦＩに示す（図１９Ａに参照する）。ＢＰＤＣＮ細胞（ＭＦＩ＝１１６７７［２９６２－３３４３９］、ｎ＝６０）および正常ｐＤＣ（ＭＦＩ＝３４３５２［１７８２２－７６６１０］、ｎ＝３０）と比較した、単球（ＭＦＩ＝１７０４［７７８－４５７８］、ｎ＝２２）、内皮細胞株（ＭＦＩ＝１２５２［６０２－２２８３］、ｎ＝４）およびＣＤ３４＋細胞（ＭＦＩ＝８７４［３２６－１４２４］、ｎ＝１６）で低い発現が検出される。本発明のＣＤ１２３ ＣＡＲは、生体内ＣＤ１２３ハイＢＰＤＣＮ細胞よりＣＤ１２３ロー細胞に対する細胞毒性が少なくなっている。
組織上のＣＤ１２３発現を評価するために、本発明のＡＢ１（または１８Ｂ４Ｄ５抗体）を用いて組織マイクロアレイを行なわれる。このために、１臓器あたり３名の個々のドナーの９０組織コア（３０臓器）を含む米国食品医薬品局標準凍結組織アレイ（ＵＳ バイオマックス、ロックビル、メリーランド州、アメリカ）を使用された。免疫染色はＵｌｔｒａＶｉｅｗ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＤＡＢ 検出キット （ベンタナ社、アメリカ）を用いて検出された。画像を取得され、ＮＤＰ．ｖｉｅｗ ２．０ソフトウェアで分析された。染色強度は、陰性（０）、弱染色（１＋）、中等度（２＋）、陽性（３＋）、強（４＋）の順に段階付けした。ハイＣＤ１２３（Ｃａｌ－１）または陰性（Ｄａｕｄｉ）発現細胞株を、それぞれ陽性または陰性対照として使用された。
表４に組織マイクロアレイの結果を示す。
Figure 2022538092000005
結果は、ＣＤ１２３の特異的組織細胞での有意な発現がなく、リンパ節、胃、結腸、筋肉、食道、皮膚および甲状腺におけるいくつかの内皮細胞のみがＣＤ１２３を発現したことを示す。
図１９のＢ項目は、腫瘍組織（ＢＰＤＣＮ）および正常組織におけるＢ４Ｄ５抗体との免疫組織化学の写真である。前記組織における内皮細胞でのＣＤ１２３発現のレベルとＢＰＤＣＮでのＣＤ１２３発現のレベルを比較するために、本発明のＡＢ１（１８Ｂ４Ｄ５）抗体を有する３つの正常組織でのＩＨＣを実現された。発現は、ＢＰＤＣＮ患者（ｎ＝２）の皮膚病変で得られた発現レベルと比較される。２名の患者の皮膚病変でのＣＤ１２３発現レベルが高く、被験組織の内皮細胞での発現レベルが低い（図１９Ｂに参照する）。図より詳細には、ＢＰＤＣＮ患者１および患者２は、ＢＰＤＣＮ細胞の皮内芽球浸潤において高いＣＤ１２３発現を示す。異なる健常組織のＣＤ１２３免疫染色は、内皮細胞で低レベルのＣＤ１２３発現が示される（矢印）。特定の組織細胞はＣＤ１２３陰性である。低非特異的標識は胃および甲状腺分泌物で認められる。
両アプローチは、単球、ＣＤ３４＋細胞および内皮細胞における低レベルのＣＤ１２３を示し、これは本発明のＣＡＲ ＣＤ１２３の「腫瘍上の標的」低可能性を示す。
図１９の項目Ｃは、ＣＤ１２３ Ｋ５３２の代表的な発現を示す。より詳細には、単独で、またはＣ０もしくはＣＤ１２３ ＣＡＲと共に２４時間、Ｅ：Ｔ比＝５：１で培養された生きたＫ５６２ ＣＤ１２３株におけるＣＤ１２３の代表的発現が示される。ＣＤ１２３領域は、固有のＫ５６２株（ＣＤ１２３である）によって限定され、ＣＤ１２３領域は、単球およびＨＭＥＣ細胞における最大発現に対応する。ＣＤ１２３ＰＯＳはＣＡＬ－１発現のレベルを表し、ＣＤ１２３ハイはＣＡＬ－１より高いレベルを表す。このモデル化は、標的細胞でのＣＤ１２３表現レベルと、異なるレベルのＣＤ１２３（Ｋ５６２ ＣＤ１２３）を発現するＫ５６２細胞株を用いたＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲの死滅効率との関係を示す。前述したように、細胞株はＣ０またはＣＤ１２３ ＣＡＲと共培養するもしくは単独で培養される。それらのＣＤ１２３発現のレベルに応じて、Ｋ５６２細胞の持続性の集団全体の割合で比較を行われた、すなわちＣＤ１２３－、ＣＤ１２３ロー（単球および内皮ＨＭＥＣ細胞でのＣＤ１２３発現の最大に相当する）、ＣＤ１２３＋／ハイ（ＣＡＬ－１その他でのＣＤ１２３発現のレベルに相当する）（図１９Ｃに参照する）。
図１９の項目Ｄは、Ｋ５６２の各サブグループにおける細胞の割合のグラフを示す。ｎ＝３の場合、細胞をＣＡＲ ＣＤ１２３とともに培養する時、Ｋ５６２ ＣＤ１２３ロー細胞の割合は減少しないが、Ｋ５６２ ＣＤ１２３ｐｏｓ／ハイ細胞は消失した；Ｋ５６２ ＣＤ１２３－細胞の割合は増加した（ＣＤ１２３＋が減少するため）。より具体的には、各発現レベルに関してのＫ５６２セルの分布は、単独またはＣ０との共培養するとき同様であることに対し、Ｋ５６２ ＣＤ１２３がＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲと共培養するとき、陽性／ハイ陽性のＣＤ１２３細胞の割合は有意に減少した（ｎ＝３、ｐ＝０．０００１）（結果的にＣＤ１２３細胞の割合が増加した）（図１９Ｄに参照する）。さらに、ＣＤ１２３ロー細胞については、Ｃ０またはＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲを用いた培養する間に持続細胞の割合が類似し、ＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲのＣ１２３ロー細胞に対する有意な細胞毒性を示されない。これは、本発明のＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲが、弱い発現された細胞に何の影響も与えない、または非常に少ないＣＤ１２３高発現された細胞の死滅能力を実証する。
図１９の項目Ｅは、標的細胞増殖の阻害に対するグラフを示す。ＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲ Ｔの細胞毒性を内皮細胞系統ＨＭＥＣおよび初代単細胞で評価された。１８時間の共培養後の増殖の阻害は、増殖試験（ＭＴＴ細胞増殖試験）を用いて評価される。細胞増殖の阻害の割合を示される。ＣＡＬ－１をＣＤ１２３陽性対照として、ＤＡＵＤＩをＣＤ１２３陰性対照として使用される（図１９Ｅに参照する）。
図１９の項目Ｆは、ヒトＣＤ３４＋移植されたヒト化マウスからの自己ＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲ Ｔ－細胞の実験中の生成の図を示す。図１９の項目Ｇは、ＣＤ３４の細胞に対するＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲの細胞毒性のグラフを示す。ＣＤ３４細胞の２つの供給源が使用される。ヒト化マウスから作出されたＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲ Ｔ－細胞を産生された。さらに、臍帯血は、同じ臍帯血から選別されたＣＤ３４＋細胞で培養したＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲ Ｔ細胞の産生に使用され、＊＊ｐは０，００１９である。
図１９の項目Ｈは、自己ＣＡＲ Ｔ細胞またはＣ０との共培養後のマウス骨髄由来のＣＤ３４＋細胞でのＣＤ１２３の代表的な発現を示す。ＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲは、ＨＭＥＣを発現するＣＤ１２３ローの低溶解レベルを誘導し、内皮細胞に対するＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲの潜在的な低毒性を示す。ＣＤ１２３はＣＤ３４＋細胞に低水準で発現されるため、前記２つの戦略を用いてＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲ Ｔ細胞の生体外の細胞毒性を検討された。まず、臍帯血から選別されたＴ細胞を形質移入してＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲまたはＣ０ Ｔ細胞を産生し、自己臍帯血から選別されたＣＤ３４＋細胞と共同培養した；ＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲによるＣＤ３４＋細胞の消耗は観察されない（ＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲの消耗に対して５．７％±５．１、Ｃ０の消耗に対して１１．７％±１０．２、ｎ＝３、ｐ＝０．４１）（図１９Ｇに参照する）。次に、自己ＣＤ３４細胞、と共培養したＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲまたはＣ０を産生するため、ヒト化マウスから選別されたヒトＴ細胞を使用される（図１９Ｆ、ＧおよびＨに参照する）。ＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲ Ｔ細胞またはＣ０細胞との共同培養により、ＣＤ３４＋細胞（ＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲに対して１２．７％±１６．３、Ｃ０に対しで２．７％±３．１、ｎｓ、ｐ＝０．３５４２、ｎ＝３）の低消耗につながる（図１９Ｇに参照する）。ＣＤ３４＋／ＣＤ１２３＋亜集団（ＣＤ３４＋細胞の３８％および１６％に相当する、ｎ＝２）に焦点を当てると、ＣＤ３４／ＣＤ１２３＋細胞のみがＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲ（８２．１％±０．６の消耗）で殺されるが、ＣＤ３４＋／ＣＤ１２３細胞は生存のままである（３．５％±４．９の消耗）ことが観察される（図１９ＧおよびＨに参照する）。
さらに、前述のヒト化マウスモデルにおける、生体内における自己造血細胞に対するＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲ反応性を研究した。ヒトＣＤ１２３ ＣＡＲ Ｔ細胞またはＣ０はヒトＴ細胞から産生された。形質移入効率は５５．４％±９．２（ｎ＝３）で、このＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲ Ｔ－細胞の効率は、再注入前の生体外で検証された。
図２０は、ＣＡＬ－１およびＨＬ－６０に対するヒト化マウスからのＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲ Ｔ細胞の毒性の評価に関するフローサイトメトリーに基づくグラフを示す。より具体的には、自己のＣＡＬ－１およびＣＤ１２３の陰性のＨＬ－６０細胞に対するヒト化マウスから得られたＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲ Ｔ細胞の毒性が示された。ＣＡＲ ＣＤ１２３では９８．６％（±０．５％、ｎ＝３）のＣＡＬ－１細胞の消耗に対し、Ｃ０では、わずか０．７％（±０．６、ｎ＝３）であり、ＣＤ１２３ ＨＬ－６０細胞株に対するＣ０とＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲの消耗の差はないことを観察される。
図１９の第１項は、ヒト化マウスにおけるＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲの生体内毒性の代表例のグラフ化を示す。それぞれのウスについて、Ｄ－５とＤ１５（血液：ＢおよびＴリンパ球、単球、ｐＤＣ）の間のヒト造血集団の倍率変化（ｆｏｌｄ チャンｇｅ、ＦＣ）を測定される。ヒト免疫細胞集団（Ｔ，Ｂ細胞、単球、ｐＤＣ、好塩基球）における２つのマウスグループ（Ｃ０およびＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲ）の間の有意な差は見られない。５日目は参照として、Ｃ０またはＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲ注射後１５日目の各免疫担当細胞亜集団（総ｈＣＤ４５＋細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、単球）の倍率変化を計算される。ｎ＝３の細胞計数は、後眼窩サンプルによって採取された末梢血から行われる。代表的な例を示す。
図１９の項目Ｊは、ｎ＝３ドナーのＣ０またはＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲ Ｔ－ｃｅｌｌ注入後１５日経過したヒト化マウスにおけるＣＤ３４＋細胞の割合のグラフを示す。簡単に、ＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲを注入されたマウスのＦＣを、Ｃ０を注入されたマウスのＦＣと比較された（図１９ＩおよびＪに参照する）。
３つの実験において、２つのマウスグループ（Ｃ０とＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲ）間のＴ、Ｂリンパ球、単球、ｐＤＣの数の差は観測されない。Ｄ１５のみで骨髄ＣＤ３４＋細胞を分析され、Ｃ０を注入されたマウスとＣＤ１２３ カールを注入されたマウス（ｎ＝３）との間で比較すると、ヒトＣＤ４５＋細胞におけるＣＤ３４の数の割合の有意な減少は観察されない（図１９Ｊに参照する）。
これらのデータにより、ＣＤ１２３ロー造血細胞に対して本発明のＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲの細胞毒性が欠如または少なくとも極めて低いことを確認される。さらに、データにより、ＣＤ１２３＋亜集団に対する選択的細胞毒性を確認される。生体内では、循環単球、リンパ球およびｐＤＣならびに骨髄ＣＤ３４＋細胞に対する有意な影響は観察されない。
図２１は、フローサイトメトリーおよび、自己ＢＰＤＣＮ芽球に対して、特異的な細胞毒性を誘導したＢＰＤＣＮ患者由来のＣＤ１２３ ＣＡＲ Ｔ細胞に関するグラフを示す。前記結果は、患者の自己ＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲ Ｔ細胞は、正常血球（ＢおよびＴリンパ球）に対して細胞毒性なしに、生体外での初代ＢＰＤＣＮ芽球の除去に成功したことを示す。
図２１の項Ａは、ＣＤ３／ＣＤ１９表現型について、形質移入されないＴ細胞（Ｃ０）と、本発明の形質移入されたＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較されるフローサイトメトリー・表現型・アッセイのグラフを示す。ＢＰＤＣＮ患者１例について、自己Ｔ細胞を用いて効果的なＣＤ１２３ ＣＡＲ Ｔ細胞およびＣ０を作製された。９日後には７９．２％を超える形質移入効率が得られた（図２１Ａに参照する）この効率は、健常ドナーのＴ細胞で達成されたものと同様である（図２１Ｂに参照する）。
図２１の項目Ｂは、ビオチン複合されたＣＤ１２３タンパク質プラスストレプトアビジンＰＥを用いて、ＣＤ１２３ ＣＡＲ細胞表面発現のフローサイトメトリーのグラフを示す。これは、ビオチン複合されたＣＤ１２３タンパク質を有するＣＤ１２３ ＣＡＲ細胞表面発現の対照である（図２１Ｂに参照する）。
図２１の項目Ｃは、ＣＤ３／ＣＤ２８磁気選択／活性化後の患者陰性分画のグラフである。グレーのデータ（カラーの場合：ピンク）は芽球細胞（ＣＤ４５ロー、ＣＤ３－、ＣＤ１９－、ＣＤ３０３＋、ＣＤ１２３ハイ）、ダーククレーのデータ（カラーの場合：青色）はＴリンパ球細胞（ＣＤ４５ハイ、ＣＤ３＋、ＣＤ１９－、ＣＤ３０３－、ＣＤ１２３－）、ライトグレーのデータ（カラーの場合：橙色）はＢリンパ球細胞（ＣＤ４５ハイ、ＣＤ３－、ＣＤ１９＋、ＣＤ３０３－、ＣＤ１２３－）を表す。より詳細には、患者のＢＰＤＣＮ芽球に対する自己ＣＡＲ Ｔ細胞の機能的活性を試験される。芽球分画はＴ細胞選択の陰性分画から構成される。これは、ＢＰＤＣＮ芽球（グレー／ピンクの集団：ＣＤ４５ロー／ＣＤ３－／ＣＤ１９－／ＣＤ３０３＋／ＣＤ１２３ハイ）、Ｔ細胞（青／ダーククレーの集団：ＣＤ４５ハイ／ＣＤ３＋／ＣＤ１９－／ＣＤ３０３－／ＣＤ１２３－）およびＢ細胞（オレンジ／ライトグレーの集団：ＣＤ４５ハ／ＣＤ３－／ＣＤ１９＋／ＣＤ３０３－／ＣＤ１２３－）で構成される（図２１Ｃ参照する）。Ｅ：Ｔ比５：１で、２４ｈの自己芽球分画により、ＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲとＣ０の共培養を行われる。
図２１の項目Ｄは、フローサイトメトリーのグラフおよび細胞生存率のダイアグラムを示す。それは、５：１のＥ：Ｔ比で（オレンジ＝Ｂ細胞；ピンク＝ＢＰＤＣＮ芽球；青＝Ｔ細胞、グレー＝Ｃ０またはＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲ）との共培養２４ｈ後の自己のＢＰＣＮ芽球に対するＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲ Ｔ細胞の特殊な細胞毒性を示す。より詳細には、ＣＤ１２３－細胞（Ｔ細胞及びＢ細胞）に細胞毒性を示さないＢＰＤＣＮ芽球（ＣＤ１２３＋）の９５％の除去が認められる。患者は、血液に単球がないため、自己単球に関する毒性評価の実施ができない。まとめると、これらの結果を総合すると、本発明の自己ＣＤ１２３Ｌ ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＰＤＣＮ芽球を生体外で除去することは選択的に有効であることが示された。
前述したように、ＢＰＤＣＮはほとんどの症例で進行し、極めて予後不良な侵攻性白血病になるクローン性疾患である。治療の改善が必要である。ＢＰＤＣＮ細胞は化学療法に感受性であるが、それにもかかわらず、患者は再発し、第二選択治療に抵抗性を示す。本発明は、ＢＰＤＣＮ患者において高度に発現される「キー抗原」であるＣＤ１２３に対する標的療法を提供する。より詳細には、本発明は、特異的に設計されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に基づく治療を用いるＢＰＤＣＮ治療に使用される。本発明は、患者のＢＰＤＣＮ細胞を選択的に標的化し、滅亡させることを可能にする。さらに、本発明は、ＢＰＤＣＮにおいて長期間持続する緩解を提供する。
したがって、本発明は、ＣＤ１２３に特異的に認識および／または特異的に結合される三世代ＣＡＲにより遺伝的に改変されたＴ細胞に提供する。本発明のＣＡＲは、レトロウイルスまたはレンチウイルス方法を用いて製造される。レトロウイルスまたはレンチウイルス方法は、抗腫瘍活性を媒介する。本発明のＣＤ１２３ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＢＰＤＣＮ細胞を特異的に溶解することができる。より詳細には、本発明のＣＤ１２３ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、異なるＢＰＤＣＮ標的、すなわちＢＰＤＣＮ株ＣＡＬ－１およびＧＥＮ２．２および／またはＢＰＤＣＮ ＰＤＸおよび初代ＢＰＤＣＮ患者細胞を特異的に溶解することができる。本発明のＣＡＲをこれらの標的細胞で培養されると、ＩＦＮ－γ放出、ＣＤ１０７ａ脱顆粒等、体外でのエフェクター機能が活性化される。本発明のＣＡＲの機能性は、標的細胞によるＣＤ１２３発現に特異的である。実際に、本発明の抗ＣＤ１２３抗体（例えばＡＢ１）と事前培養よって、ＣＤ１２３発現がブロックされる場合、細胞毒性およびサイトカイン分泌が逆転される。さらに、本発明の驚くべき効果があり、本発明のＣＡＲをＣＤ１２３－株（Ｄａｕｄｉ、ＲＥＨ、ＨＬ－６０）と共培養した場合に、細胞毒性（または実質的になし）および／またはサイトカインの分泌が起こらない。生体内において、本発明のＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＢＰＤＣＮ株に対して抗白血病活性を示す。本発明のこのプラスの効果は、ＢＰＤＣＮ罹患被験者（例えば、マウス）の長期生存が可能となることである。
当該技術分野は、ＣＤ１２３を標的とする薬剤、すなわち抗体を開示する。参考文献：リ ＲＢ、ウ Ｃ、ウォルター ＭＫ、ヴァリエール-ダグラス Ｊ他，急性骨髄性白血病に有効なＣＤ１２３指向性抗体薬物複合体ＳＧＮ－ＣＤ１２３Ａの特性評価、モレキュラー・キャンサー・キュラーピューピューティクス，２０１８，１７（２）：５５４－６４；シャ ＬＨ、ビオンド Ｍ、バスフィールド ＳＪ、アルーダ Ａ、ヨウ Ｘ、ヴァイロ Ｇ、他，抗－ＣＤ１２３抗体ＣＳＬ３６２と緩解のＡＭＬ患者からのＮＫとの併用によるＡＤＣＣ活性のＣＤ１２３の標的検証および前臨床での評価、ブラッド・キャンサ・ジャーナル，２０１７、７（６）；コフトゥン Ｙ、ジョーンズ ＧＥ、アダムス Ｓ、ハーヴェイ Ｌ、オーデット ＣＡ、ヴィルヘルム Ａ他，ＣＤ１２３を標的とする抗体薬物複合体、ＩＭＧＮ６３２、正常な骨髄細胞を残しながらＡＭＬを根絶するためのデザイン，ブラッド・アドバンス，２０１８、２（８）：８４８－５８；融合タンパク質［フランケル ＡＥ、ウー ＪＨ、アーン Ｃ、ペンマルジュ Ｎ、メデイロス ＢＣ、キャロルウェイ ＨＥ他，ＳＬ－４０１の活性，芽球性形質細胞性樹状細胞新生物患者を対象としたインターロイキン－３受容体に対する標的治療薬、ブラッド、１２４（３）：３８５－９２］、ＢｉＴｅｓ［ピチットラ I、アンジョス-アフォンソ Ｆ、ラッサイリ Ｆ、テタマンティ Ｓ、スピネリ Ｏ他，ＣＤ３３／ＣＤ１２３抗原に対するキメラ型抗原受容体 が生体内で原発急性骨髄性白血病細胞を効率的に標的にすること、ルゥーキィーミィア、２８（８）：１５９６－６０５；チュー ＳＹ、ポン Ｅ、チン Ｈ、フン Ｓ、チャン ＥＷ、エンドー ＮＡ他，長寿命の抗－ＣＤ１２３抗－ＣＤ３二重特異性抗体による免疫療法は、サルにおけるＴ細胞媒介したヒトＡＭＬ細胞株およびＣＤ１２３＋細胞の死滅を有効に促進する：急性骨髄性白血病に対する可能な両方，ブラッド，２０１４、１２４（２１）：２３１６；およびルエラ Ｍ，バレット ＤＭ，ケンダリアン ＳＳ，シェストバ Ｏ，ホフマン ＴＪ，ペラッツェッリ Ｊ他，ＣＤ１９とＣＤ１２３の二重標的により、ＣＤ１９指向性免疫療法後の抗原性喪失再発を予防する，ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション、２０１６、１２６（１０）：３８１４－２６］、ＤＡＲＴ［アル・フサイーニ Ｍ，レティグ ＭＰ，レティグリッチー ＪＫ，カルポワ Ｄ，ユイ ＧＬ，アイセンベルグ ＬＧ他，Ｔ細胞指向型二重親和性再度標的化プラットフォームを用いた急性骨髄性白血病におけるＣＤ１２３の標的化、ブラッド、２０１６、１２７（１）：１２２－３１］、トリプレボディーまたはＣＡＲ Ｔ細胞［ギル Ｓ，タシアン ＳＫ，ルエラ Ｍ，シェストバ Ｏ，リ Ｙ，ポーター ＤＬ他，キメラ抗原受容体修飾T細胞を使用したヒト急性骨髄性白血病の前臨床試験における標的化と骨髄破壊、ブラッド、１２３（１５）：２３４３－５４；および、テタマンティ Ｓ，マリン Ｖ，ピチットラ Ｉ，マグナーニ ＣＦ， ジョルダーノ アッティアネーゼ ＧＭ，クリビオリ Ｅ他，新規ＣＤ１２３特異的キメラ抗原受容体でリダイレクトされたサイトカイン誘導性キラー細胞による急性骨髄性白血病の標的化、，ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・ヒーマトロジィ：２０１３， １６１（３） ：３８９－４０１］。これらの研究には、ＡＭＬに対する抗ＣＤ１２３療法の有効性を示すものもあるが、正常な造血に対する様々なマイナスの影響はまだ報告されていない。参考文献：ペンマルジュ Ｎ，ラーエー ＡＡ，スウィート ＫＬ，スタイン ＡＳ，ヴァス Ｓ，ブルーム Ｗ他，芽球性形質細胞性樹状細胞腫瘍におけるタグラクソフスプ、ニューイングランド・ジャーナル・オブ・メディシン、２０１９、３８０（１７）：１６２８－３７。一次治療時にＢＰＤＣＮ患者３２例を対象にＳＬ－４０１（ジフテリア毒素に関連するＩＬ３）を用いた最近の研究では、患者の７２％および２４ヵ月時点での生存患者の５２％（同種移植を受けた患者の４５％を含む）について臨床的完全奏効が得られている。既治療１５例においての奏効率は６７％、全生存期間中央値は８．５カ月であった。しかし、７８％の患者においでマイナスの副作用（グレード３以上）が観察され、試験では３例の患者の死亡につながっている。その結果、毒性が大きな懸念となる。本発明より、この問題に対して大幅に改善された。
本発明の活性ＣＡＲについて、ＢＰＤＣＮ患者（およびＡＭＬ患者についても）に関する臨床治験が実施される。重大な毒性事象および／またはマイナスの影響は報告されていない。
組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）および免疫組織化学（ＩＨＣ）により、本発明の抗体（例えば、１８Ｂ４Ｄ５）を用いてＣＡＲを産生する場合、ＣＤ１２３ロー細胞において細胞毒性が全く生じないまたは低い生じることを確認される。さらに、ＨＭＥＣの内生細胞株において、本発明のＣＡＲ ＣＤ１２３Ｌの細胞毒性が全く生じないまたは低く生じる。
本発明の自己ＣＡＲ ＣＤ１２３を注射されたヒト化マウスから集められた生体内データは、本発明のＣＤ１２３ ＣＡＲで治療されたマウスに対して、全ＣＤ４５＋細胞、Ｔ細胞およびＢ細胞ならびに単球の血液亜集団に対して有意な効果を示さない。当該技術分野は、ＣＡＲ Ｔ細胞によって潜在的に誘導される問題を報告した。いわゆるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）は頻繁であり、単球がＣＲＳ発症中にＩＬ－１およびＩＬ－６の主要な供給源であることを示す研究がある。参考文献：ジアブリディス Ｔ，ファン・デル・ステーゲン ＳＪＣ，アイケム Ｊ，ハミエ Ｍ，ピエジッリ Ａ，サデライン Ｍ．，ＣＡＲ Ｔ細胞誘導されたサイトカイン放出症候群はマクロファージが介在し、ＩＬ－１遮断により軽減される，ネイチャーメディシン、２０１８、２４（６）：７３１－８；およびノレリ Ｍ，カミサ Ｂ，バルビエラ Ｇ，ファルコーネ Ｌ，ピュアヴェドルジ Ａ，ジェノバ Ｍ他，サイトカイン放出症候群に単球由来ＩＬ－１およびＩＬ－６は、差別的に要求されたおよびＣＡＲ Ｔ細胞による神経毒性，ネイチャーメディシン、２０１８、２４（６）：７３９－４８。本発明の発明者達、本発明のＣＤ１２３ ＣＡＲ Ｔ－細胞による生体内の潜在的な低レベルの単球消耗がＣＲＳを制限することに関与し得る（単球は低レベルのＣＤ１２３を発現するため）と考えるに至るデータを提供する。
ヒトにおける治療を目的に、本発明のＣＡＲを調整するため、本発明のＴ細胞の実施形態は、自殺遺伝子、すなわちシステムｉＣＡＳＰ９／リミドゥシドを含む。参考文献：ワルダ Ｗ，ラロサ Ｆ，ネト・ダ・ローシャ Ｍ，トラッド Ｒ，デコーニンク Ｅ，ファジュルーン Ｚ他，ＩＬ１ＲＡＰを発現するＣＭＬ造血幹細胞はキメラ抗原受容体改変されたＴ細胞による標的化ができる、キャンサー・リサーチ、２０１９、７９（３）：６６３－７５。
本発明はさらに、生体外および生体内でＢＰＤＣＮのＣＤ１２３＋芽球を特異的に標的化および殺傷することができる、正常なＣＤ１２３ロー細胞について評価された安全プロファイルを有する、抗ＣＤ１２３ ＣＡＲ Ｔ細胞を提供する。レンチウイルス方法は、良好な再現性ある導入遺伝子発現を可能にし、これは生体外および生体内で良好な活性がある。臨床応用および臨床開発においては、本発明のＣＡＲはレンチウイルス版が好ましい。参考文献：ズフレイ Ｒ，ドネロ ＪＥ，トロノ Ｄ，ホープ ＴＪ，ウッドチャック肝炎ウイルスの転写後制御エレメントはレトロウイルスベクターで導入した遺伝子の発現を促進する，ジャーナル・オブ・バイロロジー、１９９９、７３（４）：２８８６－９２；ミヨシ Ｈ，ブロマー Ｕ，タカハシ Ｍ，ゲージ ＦＨ，ベルマ ＩＭ，自己不活性化レンチウイルスベクターの開発，ジャーナル・オブ・バイロロジー、１９９８、７２（１０）：８１５０－７；ズフレイ Ｒ，ダル Ｔ，マンデル ＲＪ，ブコフスキー Ａ，キーロス Ｄ，ナルディーニ Ｌ，他、自己不活性化レンチウイルスベクターによる安全かつ効率的な生体内遺伝子発現，ジャーナル・オブ・バイロロジー、１９９８、７２（１２）：９８７３－８０。
そこで、本発明の目的は、添付されている請求項において定義される。本発明のさらなる目的は、配列同一性の代わりに配列相同性に言及して、添付されている請求項において定義される。
そこで、本発明の実施形態は、ＡＢ１、ＡＢ２、ＡＢ３、ＡＢ４、ＡＢ５およびＡＢ６からなる群から選択される抗体対象とし、ここでは
ＡＢ１は、重鎖および軽鎖を有し、重鎖であって、配列番号２５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、軽鎖であって、配列番号２６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み；
ＡＢ２は、重鎖および軽鎖を含み、重鎖であって、配列番号２７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、およびアミノ酸配列番号３に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、軽鎖であって、配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み；
ＡＢ３は、重鎖および軽鎖を含み、重鎖であって、配列番号２９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、軽鎖であって、配列番号３０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み；
ＡＢ４は、重鎖および軽鎖を含み、重鎖であって、配列番号３１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、軽鎖であって、配列番号３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み；
ＡＢ５は、重鎖および軽鎖を含み、重鎖であって、配列番号３３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、軽鎖であって、配列番３４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、
ＡＢ６は、重鎖および軽鎖を含み、重鎖であって、配列番号３５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、軽鎖であって、配列番３６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む。
本発明の別の目的は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする単離された核酸分子、または単離されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）分子であって、前記ＣＡＲは、抗-ＣＤ１２３結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および少なくとも刺激ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗体または抗体断片を含み、かつ抗-ＣＤ１２３結合ドメインを有する抗体、またはその抗体の断片を含むことを特徴とし、
前記抗-ＣＤ１２３結合ドメインは、下記結合ドメインからなる：
（i）配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖、および配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む軽鎖；
（ii）配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）含む重鎖、およびに配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）含む軽鎖；
（iii）配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）含む重鎖、およびに配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）含む軽鎖；
（iv）配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）含む重鎖、およびに配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）含む軽鎖；
（v）配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）含む重鎖、およびに配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）含む軽鎖；または、
（vi）配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）含む重鎖、およびに配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、優先的に１００％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）含む軽鎖；
本発明の別の実施形態は、上記のＣＡＲであるが、配列同一性の代わりに配列相同性に言及したものである。
本発明の別の目的は、上記に定義される核酸分子からなる発現ベクター、ならびに前記定義される核酸分子からなる改変された免疫細胞（Ｔ細胞など）である。本発明によれば、細胞は、哺乳動物、好ましくはヒトにおける増殖性疾患の治療に用いる薬剤として使用することができ、ここで増殖性疾患はＣＤ１２３過剰発現、好ましくは芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＢＰＤＣＮ）に関連する疾患である。さらに、本発明は、前記に定義されるように、改変された免疫細胞からなる医薬組成物を対象とする。さらに、本発明は、上述のように発現ベクターを有する細胞の形質移入を含む免疫細胞を改変する方法を対象とする。
本発明の別の実施形態は、請求項に記載された核酸分子を含む操作された免疫細胞を特徴とし、ここで細胞がＴ細胞またはナチュラルキラー細胞である。
本発明の他の定義は、ＡＢ１、ＡＢ２、ＡＢ３、ＡＢ４、ＡＢ５およびＡＢ６からなる群より選択される、抗原ＣＤ１２３に特異的に結合する抗体を包含してもよい、
ＡＢ１は、配列番号８５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する重鎖、および配列番号８６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する軽鎖を含み；
ＡＢ２は、配列番号８７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する重鎖、および配列番号８８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する軽鎖を含み；
ＡＢ３は、配列番号８９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する重鎖、および配列番号９０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する軽鎖を含み；
ＡＢ４は、配列番号９１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する重鎖、および配列番号９２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する軽鎖を含み；
ＡＢ５は、配列番号９３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する重鎖、および配列番号９４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する軽鎖を含み；
ＡＢ６は、配列番号９５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する重鎖、および配列番号９６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する軽鎖を含み；
また、ここで前記抗体は９．５×１０―９ Ｍ未満のＫＤ値、９．０×１０―４ ｓ-1未満の解離率Ｋoff、少なくとも７×１０４ Ｍｓ-1の会合速度定数Ｋonを有する。
１つの実施形態において、ＣＤ１２３結合ドメインはｓｃＦｖであり、ｓｃＦｖは、配列番号：２、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：８、配列番号：１０、配列番号：１２、配列番号：１４、配列番号：１６、配列番号：１８、配列番号：２０、配列番号：２２、配列番号：２４、配列番号：２６、配列番号：２８、配列番号：３０、配列番号：３２、配列番号：３４、または配列番号：３６の軽鎖可変領域の、１個、２個または３個以上、３０個、２０個または１０個以下の組み換えを有するアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域、および配列番号：１、配列番号：３、配列番号：５、配列番号：７、配列番号：９、配列番号：１１、配列番号：１３、配列番号：１５、配列番号：１７、配列番号：１９、配列番号：２１、配列番号：２３、配列番号：２５、配列番号：２７、配列番号：２９、配列番号：３１、配列番号：３３、または配列番号：３５の重鎖可変領域の、１個、２個または３個以上、３０個、２０個または１０個以下の組み換えを有するアミノ酸配列からなる重鎖可変領域から構成される。
一実施形態において、ＣＤ１２３結合ドメインはｓｃＦｖであり、ｓｃＦｖは、（i）配列番号：２６、配列番号：２８、配列番号：３０、配列番号：３２、配列番号：３４、または配列番号：３６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号：１４、配列番号：１６、配列番号：１８、配列番号：２０、配列番号：２２、または配列番号：２４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、配列番号：２、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：８、配列番号：１０、または配列番号：１２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）からなる軽鎖可変領域、および（ii）配列番号：２５、配列番号：２７、配列番号：２９、配列番号：３１、配列番号：３３、または配列番号：３５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号：１３、配列番号：１５、配列番号：１７、配列番号：１９、配列番号：２１、または配列番号：２３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、配列番号：１、配列番号：３、配列番号：５、配列番号：７、配列番号：９、または配列番号：１１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）からなる重鎖可変領域から構成される。
一実施形態において、抗－ＣＤ１２３結合ドメインは、ヒンジ領域によって膜貫通ドメインに連結されている。コードされたＣＡＲはＣＤ ２８の膜貫通ドメインを含むことが好ましい。
一実施形態において、ヒンジ領域はＩｇＧｌのヒンジ配列またはその９５～９９％の同一性を有する配列を含む。さらなる実施形態において、ヒンジ領域は、ＩｇＧ４のヒンジ配列またはその９５～９９％の同一性を有する配列を含む。さらなる実施形態において、ヒンジ領域は、ＩｇＧｌもしくはＩｇＧ４もしくはＣＤ８αのＣＨ２－ＣＨ３領域、またはその９５～９９％の同一性を有する配列から構成してもよい。
好ましい実施形態において、機能的細胞内シグナル伝達ドメインの少なくとも１つの補助刺激ドメインは、４.ＩＢＢおよび／またはＣＤ３ζから得られる共刺激ドメインからなる群より選択される１以上のタンパク質から得られる。

Claims (15)

  1. 抗原ＣＤ１２３に特異的に結合する抗体であって、
    前記抗体は、ＡＢ１、ＡＢ２、ＡＢ３、ＡＢ４、ＡＢ５、およびＡＢ６のみからなる群から選択され、
    前記抗体は、９．５×１０―９ Ｍ未満のＫＤ値、９．０×１０―４ ｓ-1未満の解離率Ｋoff、少なくとも７×１０４ Ｍｓ-1の会合速度定数Ｋonを有し、
    ここで、ＡＢ１は、重鎖および軽鎖を含み、重鎖は、配列番号２５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、軽鎖は、配列番号２６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み；
    ＡＢ２は、重鎖および軽鎖を含み、重鎖は、配列番号２７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、およびアミノ酸配列番号３に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、軽鎖は、配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み；
    ＡＢ３は、重鎖および軽鎖を含み、重鎖は、配列番号２９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、軽鎖は、配列番号３０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号６のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み；
    ＡＢ４は、重鎖および軽鎖を含み、重鎖は、配列番号３１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、軽鎖は、配列番号３２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み；
    ＡＢ５は、重鎖および軽鎖を含み、重鎖は、配列番号３３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、軽鎖は、配列番３４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、
    ＡＢ６は、重鎖および軽鎖を含み、重鎖は、配列番３５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、軽鎖であって、配列番３６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む、抗体。
  2. 請求項１に記載の抗体であって、ＡＢ１は、配列番号８５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する重鎖、及び配列番号８６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する軽鎖を含み、
    前記重鎖は、配列番号２５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、
    前記軽鎖は、配列番号２６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み：
    ＡＢ２は、配列番号８７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する重鎖、および配列番号８８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する軽鎖を含み、
    前記重鎖は、アミノ酸配列配列番号２７に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の相同性をする相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、
    前記軽鎖は、配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み；
    ＡＢ３は、配列番号８９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する重鎖、および配列番号９０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する軽鎖を含み、
    前記重鎖は、配列番号２９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の相同性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、
    前記軽鎖は、配列番号３０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み；
    ＡＢ４は、配列番号９１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する重鎖、および配列番号９２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する軽鎖を含み、
    前記重鎖は、配列番号３１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１９のアミノ酸配列対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号７のアミノ酸配列対して少なくとも９０％の相同性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、
    前記軽鎖は、配列番号３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み；
    ＡＢ５は、配列番号９３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する重鎖、および配列番号９４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する軽鎖を含み、
    前記重鎖は、配列番号３３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、およびミノ酸配列番号９に対して少なくとも９０％の相同性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、
    前記軽鎖は、配列番３４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み；
    ＡＢ６は、配列番号９５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する重鎖、および配列番号９６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する軽鎖を含み、
    前記重鎖は、配列番号３５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、
    前記軽鎖は、配列番号３６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む、抗体。
  3. 請求項１または２のいずれかに記載の抗体であって、ＡＢ１は、配列番号８５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する重鎖、及び配列番号８６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖含み、
    前記重鎖は、配列番号２５のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１のみからなる相補的決定領域３（ＣＤＲ３）含み、
    前記軽鎖は、配列番号２６のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１４のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号２のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域３（ＣＤＲ３）含み：
    ＡＢ２は、配列番号８７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する重鎖、および配列番号８８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖含み、
    前記重鎖は、アミノ酸配列配列番号２７のみからなる相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１５のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の相同性をする相補的決定領域３（ＣＤＲ３）含み、
    前記軽鎖は、配列番号２８のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１６のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号４のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域３（ＣＤＲ３）含み；
    ＡＢ３は、配列番号８９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する重鎖、および配列番号９０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖含み、
    前記重鎖は、配列番号２９のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１７のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の相同性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）含み、
    前記軽鎖は、配列番号３０のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１８のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号６のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域３（ＣＤＲ３）含み；
    ＡＢ４は、配列番号９１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する重鎖、および配列番号９２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖含み、
    前記重鎖は、配列番号３１のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１９のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号７のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域３（ＣＤＲ３）含み、
    前記軽鎖は、配列番号３２のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２０のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号８のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域３（ＣＤＲ３）含み；
    ＡＢ５は、配列番号９３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する重鎖、および配列番号９４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖含み、
    前記重鎖は、配列番号３３のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２１のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、およびミノ酸配列番号９にのみからなる相補的決定領域３（ＣＤＲ３）含み、
    前記軽鎖は、配列番３４のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２２のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１０のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域３（ＣＤＲ３）含み、；
    ＡＢ６は、配列番号９５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する重鎖、および配列番号９６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖含み、
    前記重鎖は、配列番号３５のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２３のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１１のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域３（ＣＤＲ３）含み、
    前記軽鎖は、配列番号３６のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２４のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１２のアミノ酸配列のみからなる相補的決定領域３（ＣＤＲ３）含む、抗体。
  4. 請求項１～３のいずれか1項に記載の抗体であって、
    ＡＢ１の重鎖は、配列番号３７のアミノ酸配列のみからなる第一フレームワーク領域（ＦＲ１）、配列番号３８のアミノ酸配列のみからなる第二フレームワーク領域（ＦＲ２）、配列番号３９のアミノ酸配列のみからなる第三フレームワーク領域（ＦＲ３）、配列番号４０のアミノ酸配列のみからなる第四フレームワーク領域（ＦＲ４）を含む可変領域を有し、
    ＡＢ１の軽鎖は、配列番号６１のアミノ酸配列のみからなる第一フレームワーク領域（ＦＲ１）、配列番号６２のアミノ酸配列のみからなる第二フレームワーク領域（ＦＲ２）、配列番号６３のアミノ酸配列のみからなる第三フレームワーク領域（ＦＲ３）、配列番号６４のアミノ酸配列のみからなる第四フレームワーク領域（ＦＲ４）を含む可変領域を有し；
    ＡＢ２の重鎖は、配列番号４１のアミノ酸配列のみからなる第一フレームワーク領域（ＦＲ１）、配列番号４２のアミノ酸配列のみからなる第二フレームワーク領域（ＦＲ２）、配列番号４３のアミノ酸配列のみからなる第三フレームワーク領域（ＦＲ３）、配列番号４４のアミノ酸配列のみからなる第四フレームワーク領域（ＦＲ４）を含む可変領域を有し、
    ＡＢ２の軽鎖は、配列番号６５のアミノ酸配列のみからなる第一フレームワーク領域（ＦＲ１）、配列番号６６のアミノ酸配列のみからなる第二フレームワーク領域（ＦＲ２）、配列番号６７のアミノ酸配列のみからなる第三フレームワーク領域（ＦＲ３）、配列番号６８のアミノ酸配列のみからなる第四フレームワーク領域（ＦＲ４）を含む可変領域を有し；
    ＡＢ３の重鎖は、配列番号４５のアミノ酸配列のみからなる第一フレームワーク領域（ＦＲ１）、配列番号４６のアミノ酸配列のみからなる第二フレームワーク領域（ＦＲ２）、配列番号４７のアミノ酸配列のみからなる第三フレームワーク領域（ＦＲ３）、配列番号４８のアミノ酸配列のみからなる第四フレームワーク領域（ＦＲ４）を含む可変領域を有し、
    ＡＢ３の軽鎖は、配列番号６９のアミノ酸配列のみからなる第一フレームワーク領域（ＦＲ１）、配列番号７０のアミノ酸配列のみからなる第二フレームワーク領域（ＦＲ２）、配列番号７１のアミノ酸配列のみからなる第三フレームワーク領域（ＦＲ３）、配列番号７２のアミノ酸配列のみからなる第四フレームワーク領域（ＦＲ４）を含む可変領域を有し；
    ＡＢ４の重鎖は、配列番号４９のアミノ酸配列のみからなる第一フレームワーク領域（ＦＲ１）、配列番号５０のアミノ酸配列のみからなる第二フレームワーク領域（ＦＲ２）、配列番号５１のアミノ酸配列のみからなる第三フレームワーク領域（ＦＲ３）、配列番号５２のアミノ酸配列のみからなる第四フレームワーク領域（ＦＲ４）を含む可変領域を有し、
    ＡＢ４の軽鎖は、配列番号７３のアミノ酸配列のみからなる第一フレームワーク領域（ＦＲ１）、配列番号７４のアミノ酸配列のみからなる第二フレームワーク領域（ＦＲ２）、配列番号７５のアミノ酸配列のみからなる第三フレームワーク領域（ＦＲ３）、配列番号７６のアミノ酸配列のみからなる第四フレームワーク領域（ＦＲ４）を含む可変領域を有し；
    ＡＢ５の重鎖は、配列番号５３のアミノ酸配列のみからなる第一フレームワーク領域（ＦＲ１）、配列番号５４のアミノ酸配列のみからなる第二フレームワーク領域（ＦＲ２）、配列番号５５のアミノ酸配列のみからなる第三フレームワーク領域（ＦＲ３）、配列番号５６のアミノ酸配列のみからなる第四フレームワーク領域（ＦＲ４）を含む可変領域を有し、
    ＡＢ５の軽鎖は、配列番号７７のアミノ酸配列のみからなる第一フレームワーク領域（ＦＲ１）、配列番号７８のアミノ酸配列のみからなる第二フレームワーク領域（ＦＲ２）、配列番号７９のアミノ酸配列のみからなる第三フレームワーク領域（ＦＲ３）、配列番号８０のアミノ酸配列のみからなる第四フレームワーク領域（ＦＲ４）を含む可変領域を有し；
    ＡＢ６の重鎖は、配列番号５７のアミノ酸配列のみからなる第一フレームワーク領域（ＦＲ１）、配列番号５８のアミノ酸配列のみからなる第二フレームワーク領域（ＦＲ２）、配列番号５９のアミノ酸配列のみからなる第三フレームワーク領域（ＦＲ３）、配列番号６０のアミノ酸配列のみからなる第四フレームワーク領域（ＦＲ４）を含む可変領域を有し、
    ＡＢ６の軽鎖は、配列番号８１のアミノ酸配列のみからなる第一フレームワーク領域（ＦＲ１）、配列番号８２のアミノ酸配列のみからなる第二フレームワーク領域（ＦＲ２）、配列番号８３のアミノ酸配列のみからなる第三フレームワーク領域（ＦＲ３）、配列番号８４のアミノ酸配列のみからなる第四フレームワーク領域（ＦＲ４）を含む可変領域を有する、抗体。
  5. キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする単離された核酸分子であって、前記ＣＡＲは、抗-ＣＤ１２３結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および少なくとも刺激ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインからなる抗体または抗体断片を含む、
    前記抗-ＣＤ１２３結合ドメインは、
    （i）配列番号２５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖、
    ならびに配列番号２６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む軽鎖；
    （ii）配列番号２７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖、
    ならびに配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む軽鎖；
    （iii）配列番号２９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖、
    ならびに配列番号３０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む軽鎖；
    （iv）配列番号３１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖、
    ならびに配列番号３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む軽鎖；
    （v）配列番号３３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖、
    ならびに配列番号３４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む軽鎖；
    または、
    （vi）配列番号３５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖、
    ならびに配列番号３６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む軽鎖、からなる単離された核酸分子。
  6. 請求項５に記載の単離された核酸分子であって、抗－ＣＤ１２３結合ドメインは、抗体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、またはその他の抗体の断片からなる群より選択され、好ましくはｓｃＦｖである、核酸分子。
  7. 請求項５または６のいずれかに記載の単離された核酸分子であって、細胞内シグナル伝達ドメインはＣＤ３－ゼータ（ＣＤ３ζ）であり、必要により、ＣＤ２８、４．１ＢＢ、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ），ＯＸ－４０およびその結合からなる群より選択される共刺激ドメインを含む、核酸分子。
  8. 請求項５～７のいずれか１項に記載の単離された核酸分子によって、コードされる単離されたポリペプチド分子。
  9. 単離されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）分子であって、抗体または抗体の断片を含み、前記抗体または抗体の断片は、抗－ＣＤ１２３結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および少なくとも刺激ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）分子、
    前記抗－ＣＤ１２３結合ドメインは、
    （i）配列番号２５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖、
    ならびに配列番号２６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む軽鎖；
    （ii）配列番号２７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖、
    ならびに配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む軽鎖；
    （iii）配列番号２９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖、
    ならびに配列番号３０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む軽鎖；
    （iv）配列番号３１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖、
    ならびに配列番号３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む軽鎖；
    （v）配列番号３３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖、
    ならびに配列番号３４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む軽鎖；
    または、
    （vi）配列番号３５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖、
    ならびに配列番号３６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域２（ＣＤＲ２）、および配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む。
  10. 請求項６または７のいずれか１項に記載のＣＡＲである単離されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）分子。
  11. 請求項５～７のいずれか１項に記載の核酸分子を含む発現ベクターであって、
    前記ベクターは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、プラスミド、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターからなる群より選択される、発現ベクター。
  12. 請求項５～７のいずれか１項に記載の核酸分子または発明のベクターを含む改変された免疫細胞。
  13. 細胞であって、請求項１２に記載の薬品として有用である、細胞。
  14. 細胞であって、請求項１２または１３のいずれか１項に記載の医薬として有用であり、優先して哺乳動物、好ましくはヒトにおける増殖性疾患の治療に有用であり、前記増殖性疾患は、ＣＤ１２３過剰発現関連する疾患であって、好ましくは芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍(ＢＰＤＣＮ)の治療に有用である、細胞。
  15. 医薬組成物であって、請求項１２～１４のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞および医薬賦形剤を含む、医薬組成物。
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