JP2022537359A

JP2022537359A - Ｍａｇｅ－ａ４ｔ細胞受容体およびその使用方法

Info

Publication number: JP2022537359A
Application number: JP2021575366A
Authority: JP
Inventors: ナタリーバウワーマン，; ケイガンギュラー，; ジョアンナハンセン，
Original assignee: Regeneron Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Regeneron Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2019-06-18
Filing date: 2020-06-17
Publication date: 2022-08-25
Also published as: MA56548A; US20220324939A1; MX2021015946A; KR20220035387A; CO2022000281A2; WO2020257288A3; EP3986938A4; CL2021003366A1; AU2020295401A1; CL2024000119A1; IL289042A; CA3144253A1; CN114585646B; EP3986938A2; CN114585646A; BR112021025548A2; WO2020257288A2

Abstract

本発明は、ＨＬＡ提示がん精巣抗原黒色腫関連抗原Ａ４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチドに特異的に結合する単離されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、ならびにそれらの単離されたＴＣＲを使用する治療および診断の方法を提供する。

Description

関連出願
本出願は、２０１９年６月１８日に出願された米国仮特許出願第６２／８６２，７２６号、および２０１９年７月９日に出願された米国仮特許出願第６２／８７１，７９３号の優先権を主張する。前述の出願の各々の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出されている配列表を含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０２０年６月１５日に作成された当該ＡＳＣＩＩコピーは、１１８００３＿００３２０＿ＳＬ．ｔｘｔと名付けられ、サイズは３４４，８３２バイトである。

Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）は、免疫グロブリン可変（Ｖ）領域および定常（Ｃ）領域に類似するα鎖およびβ鎖を含む膜結合ヘテロ二量体である。ＴＣＲα鎖は、Ｃ－α鎖に共有結合したＶ－α鎖を含み、一方、β鎖は、Ｃ－β鎖に共有結合したＶ－β鎖を含む。Ｖ－α鎖およびＶ－β鎖は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）（ヒトではＨＬＡ複合体として知られている）との関連で抗原に結合することができるポケットまたは裂開を形成する。（ＤａｖｉｓＡｎｎ．Ｒｅｖ．ｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ３：５３７（１９８５）；ＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ３ｒｄＥｄ．，Ｗ．ＰａｕｌＥｄ．ＮｅｗＹｏｒｋ（１９９３））。

ＴＣＲは、治療剤を開発するためのプラットフォームとして独自の利点を有する免疫系の主要なエフェクターである。抗体治療剤は、血液および細胞外空間における病原体の認識、または細胞表面上のタンパク質標的に限定されるが、Ｔ細胞受容体は、細胞内タンパク質に由来する抗原を含む、細胞表面上でＭＨＣ分子によって提示される抗原を認識することができる。提示された抗原を認識して活性化するＴ細胞のサブタイプに応じて、ＴＣＲは、様々な免疫応答を制御する際に関与することができる。例えば、Ｔ細胞は、Ｂ細胞の抗体産生細胞への分化の誘導を通して体液性免疫応答の調節に関与する。さらに、活性化したＴ細胞は、細胞媒介性免疫応答を開始するように作用する。加えて、ＴＣＲは、細胞の死滅を媒介し、Ｂ細胞の増殖を増加させ、がん、アレルギー、ウイルス感染症、および自己免疫障害を含む様々な障害の発症および重症度に影響を与えることが報告されている。

ＴＣＲの機能の観点において、抗原特異的ＴＣＲは、抗原を発現する腫瘍にＴ細胞を再指向させるそれらの能力に関して、免疫療法での使用について評価されている。ＴＣＲは、長さが８～１２個のアミノ酸のみの小さなペプチドに結合し、それらは主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）によって標的細胞の表面で結合される。したがって、ＴＣＲは、がんに由来する細胞内抗原またはウイルスタンパク質を認識することができるが、それはこれらの抗原が、表面ＭＨＣとの関連でペプチドとして処理および提示されるためである。したがって、ＴＣＲは、細胞に浸透できない抗体または療法には利用可能ではない、追加の内部細胞標的を認識することができる。

しかしながら、この業界の課題は、患者に投与したときに免疫原性を欠き、関心対象の特定のペプチド抗原に対して微細特異性を有するＴＣＲを、ＭＨＣ上の他のペプチドまたは天然タンパク質レパートリーに認められる類似のエピトープと交差反応することなく、操作することである。

ＭＡＧＥ－Ａ４、または黒色腫関連抗原Ａ４は、Ｘ染色体上の周知のがん－精巣抗原（ＣＴＡ）である。ＭＡＧＥ－Ａ４の機能は不明であるが、細胞周期の進行／調節、転写制御、細胞の生存および／またはアポトーシスに関与している可能性がある。例えば、ＭＡＧＥ－Ａ４の過剰発現は、自発的に形質転換した口腔ケラチン細胞の増殖を促進し、Ｇ１における細胞の増殖停止を阻害することが示されている（Ｂｈａｎ，ｅｔａｌ．（２０１２）ＯｎｃｏｌＲｅｐ２８（４）：１４９６）。

ＭＡＧＥ－Ａ４は、頭頸部扁平上皮がん、非小細胞肺がんなどの肺がん、食道扁平上皮がん、結腸がん、膀胱がん、粘膜および皮膚黒色腫、卵巣がん、例えば、漿液性がん、および子宮がんなどの異なる組織型の多くの腫瘍によって多量に発現されるが、正常な健康な成人組織では、ＭＡＧＥ－Ａ４の発現は精巣に限定される。

ＭＡＧＥ－Ａ４抗原がその制限された発現パターンとともに免疫応答を誘発する能力は、ＭＡＧＥ－Ａ４をがん免疫療法における優れた候補にしている。
ＭＡＧＥ－Ａ４抗原に特異的に結合するＴ細胞受容体に基づく新規標的化剤、ならびにかかる薬剤を治療および診断の設定において製造および使用するための方法に関して当技術分野で満たされていない要求がある。

ＤａｖｉｓＡｎｎ．Ｒｅｖ．ｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ３：５３７（１９８５）ＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ３ｒｄＥｄ．，Ｗ．ＰａｕｌＥｄ．ＮｅｗＹｏｒｋ（１９９３）Ｂｈａｎ，ｅｔａｌ．（２０１２）ＯｎｃｏｌＲｅｐ２８（４）：１４９６

本発明は、ＭＨＣ（ＨＬＡ－Ａ２）との関連でＭＡＧＥ－Ａ４ペプチド抗原に対して作成されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を提供する。特定された独自のＴＣＲ配列は、ＨＬＡ分子の溝に存在する小ペプチドＭＡＧＥ－Ａ４に対する特異的結合を示しており、レポーターアッセイにおいてＴ細胞の活性化を表している。さらに、本発明のＴＣＲは、他の「似ている」ペプチドと交差反応しない。

したがって、一態様において、本発明は、ＫＶＬＥＨＶＶＲＶ（配列番号６０９）（ＭＡＧＥ－Ａ４２８６～２９４）のアミノ酸配列を含むＨＬＡ－Ａ２提示がん精巣抗原黒色腫関連抗原４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチドに特異的に結合するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、単離されたＴＣＲ、または単離された細胞で発現されるＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、相補的決定領域（ＣＤＲ）３を含むアルファ鎖可変ドメインを含み、ＣＤＲ３は、式Ｉ：
Ｎ_１－Ｎ_２－Ｎ_３－Ｎ_４－Ｎ_５－Ｎ_６－Ｎ_７－Ｎ_８－Ｎ_９－Ｎ_１０－Ｎ_１１－Ｎ_１２－Ｎ_１３－Ｎ_１４－Ｎ_１５（式Ｉ）
のアミノ酸配列を含み、
式中、Ｎ_１は、非極性アミノ酸であり、
Ｎ_２は、Ｖａｌであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_３は、Ｔｙｒ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｇｌｕ、Ｍｅｔ、Ａｌａ、またはＰｈｅであり、
Ｎ_４は、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、またはＭｅｔであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_５は、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、Ｍｅｔ、Ｇｌｙ、またはＬｙｓであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_６は、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｐｒｏ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、またはＴｈｒであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_７は、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｔｒｐ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｉｌｅ、Ｇｌｎ、またはＬｅｕであり、
Ｎ_８は、Ｈｉｓ、Ｔｒｐ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ｔｙｒ、またはＡｌａであり、
Ｎ_９は、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｌｙｓ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、またはＡｒｇであり、
Ｎ_１０は、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、Ａｓｐ、またはＳｅｒであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_１１は、Ｐｈｅ、Ａｓｎ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、またはＧｌｕであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_１２は、Ｌｙｓ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、またはＡｓｐであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_１３は、ＬｙｓまたはＧｌｙであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_１４は、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、またはＴｙｒであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_１５は、Ｔｙｒ、Ｇｌｎ、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、またはＡｒｇである。

一実施形態において、Ｎ_１は、Ａｌａ、Ｉｌｅ、またはＧｌｙである。

別の態様において、本発明は、ＫＶＬＥＨＶＶＲＶ（配列番号６０９）（ＭＡＧＥ－Ａ４２８６～２９４）のアミノ酸配列を含む、ＨＬＡ－Ａ２提示がん精巣抗原黒色腫関連抗原４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチドに特異的に結合するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、相補的決定領域（ＣＤＲ）３を含むベータ鎖可変ドメインを含み、ＣＤＲ３は、式ＩＩ：
Ｎ_１－Ｎ_２－Ｎ_３－Ｎ_４－Ｎ_５－Ｎ_６－Ｎ_７－Ｎ_８－Ｎ_９－Ｎ_１０－Ｎ_１１－Ｎ_１２－Ｎ_１３－Ｎ_１４－Ｎ_１５－Ｎ_１６－Ｎ_１７－Ｎ_１８（式ＩＩ）
のアミノ酸配列を含み、
式中、Ｎ_１は、ＡｌａまたはＳｅｒであり、
Ｎ_２は、Ａｌａ、Ｓｅｒ、またはＴｈｒであり、
Ｎ_３は、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、またはＴｒｐであり、
Ｎ_４は、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ａｓｐ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓであり、
Ｎ_５は、ＧｌｙまたはＡｓｐであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_６は、ＰｈｅまたはＡｒｇであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_７は、Ｔｒｐ、Ｐｈｅ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、またはＶａｌであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_８は、Ｐｒｏ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｔｙｒ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、またはＧｌｙであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_９は、Ａｓｐであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_１０は、Ａｒｇであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_１１は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、またはＴｈｒであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_１２は、Ｓｅｒ、Ｔｒｐ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ａｒｇ、Ｍｅｔ、Ｔｙｒ、またはＧｌｎであり、
Ｎ_１３は、Ｇｌｙであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_１４は、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、またはＨｉｓであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_１５は、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｔｙｒ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、またはＰｒｏであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_１６は、Ｇｌｕ、Ｐｒｏ、Ｌｙｓ、Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、またはＧｌｎであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_１７は、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｔｙｒ、またはＧｌｎであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_１８は、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ、Ｔｙｒ、またはＴｈｒである。

一実施形態において、アルファ鎖可変ドメインは、ＣＤＲ１およびＣＤＲ２をさらに含み、ＣＤＲ１は、表２に示されるアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ１アミノ酸配列のうちのいずれか１つを含み、ＣＤＲ２は、独立して、表２に示されるアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ２アミノ酸配列のうちのいずれか１つを含む。

別の実施形態において、ベータ鎖可変ドメインは、ＣＤＲ１およびＣＤＲ２をさらに含み、ＣＤＲ１は、表２に示されるベータ鎖可変ＣＤＲ１アミノ酸配列のうちのいずれか１つを含み、ＣＤＲ２は、独立して、表２に示されるベータ鎖可変ドメインＣＤＲ２アミノ酸配列のうちのいずれか１つを含む。

ＴＣＲは、少なくとも１つのＴＣＲアルファ鎖可変ドメインおよび／または少なくとも１つのベータ鎖可変ドメインを含み得るか、あるいはＴＣＲは、ＴＣＲアルファ鎖可変ドメインおよびＴＣＲベータ鎖可変ドメインを含み得る。

一実施形態において、ＴＣＲは、表４に列挙されるアルファ鎖可変ドメイン配列のうちのいずれか１つ内に含まれるアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、表４に列挙されるベータ鎖可変ドメイン配列のうちのいずれか１つ内に含まれるベータ鎖可変ドメインＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、を含む。

別の実施形態において、ＴＣＲは、表４に列挙されるアルファ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインを含む。

さらに別の実施形態において、ＴＣＲは、表４に列挙されるベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインを含む。

一実施形態において、ＴＣＲは、（ａ）表４に列挙されるアルファ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインと、（ｂ）表４に列挙されるベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインと、を含む。

一実施形態において、ＴＣＲは、（ａ）配列番号１、１７、３３、４９、６５、８１、９７、１１３、１２９、１４５、１６１、１７７、１９３、２０９、２２５、２４１、２５７、２７３、２８９、３０５、３２１、３３７、３５３、３６９、３８５、４０１、４１７、４３３、４４９、４６５、４８１、４９７、５１３、５２９、５４５、５６１、５７７、および５９３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ１ドメインと、（ｂ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、３８６、４０２、４１８、４３４、４５０、４６６、４８２、４９８、５１４、５３０、５４６、５６２、５７８、および５９４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ２ドメインと、（ｃ）配列番号３、１９、３５、５１、６７、８３、９９、１１５、１３１、１４７、１６３、１７９、１９５、２１１、２２７、２４３、２５９、２７５、２９１、３０７、３２３、３３９、３５５、３７１、３８７、４０３、４１９、４３５、４５１、４６７、４８３、４９９、５１５、５３１、５４７、５６３、５７９、および５９５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ３ドメインと、（ｄ）配列番号９、２５、４１、５７、７３、８９、１０５、１２１、１３７、１５３、１６９、１８５、２０１、２１７、２３３、２４９、２６５、２８１、２９７、３１３、３２９、３４５、３６１、３７７、３９３、４０９、４２５、４４１、４５７、４７３、４８９、５０５、５２１、５３７、５５３、５６９、５８５、および６０１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインＣＤＲ１と、（ｅ）配列番号１０、２６、４２、５８，７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、３９４、４１０、４２６、４４２、４５８、４７４、４９０、５０６、５２２、５３８、５５４、５７０、５８６、および６０２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインＣＤＲ２と、（ｆ）配列番号１１、２７、４３、５９、７５、９１、１０７、１２３、１３９、１５５、１７１、１８７、２０３、２１９、２３５、２５１、２６７、２８３、２９９、３１５、３３１、３４７、３６３、３７９、３９５、４１１、４２７、４４３、４５９、４７５、４９１、５０７、５２３、５３９、５５５、５７１、５８７、および６０３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインＣＤＲ３と、を含む。

一実施形態において、ＴＣＲは、配列番号７／１５、２３／３１、３９／４７、５５／６３、７１／７９、８７／９５、１０３／１１１、１１９／１２７、１３５／１４３、１５１／１５９、１６７／１７５、１８３／１９１、１９９／２０７、２１５／２２３、２３１／２３９、２４７／２５５、２６３／２７１、２７９／２８７、２９５／３０３、３１１／３１９、３２７／３３５、３４３／３５１、３５９／３６７、３７５／３８３、３９１／３９９、４０７／４１５、４２３／４３１、４３９／４４７、４５５／４６３、４７１／４７９、４８７／４９５、５０３／５１１、５１９／５２７、５３５／５４３、５５１／５５９、５６７／５７５、５８３／５９１、および５９９／６０７からなる群から選択されるアルファ鎖可変ドメイン／ベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列対を含む。

一実施形態において、ＴＣＲは、配列番号７／１５、２３／３１、３９／４７、５５／６３、７１／７９、８７／９５、１０３／１１１、１１９／１２７、１３５／１４３、１５１／１５９、１６７／１７５、１８３／１９１、１９９／２０７、２１５／２２３、２３１／２３９、２４７／２５５、２６３／２７１、２７９／２８７、２９５／３０３、３１１／３１９、３２７／３３５、３４３／３５１、３５９／３６７、３７５／３８３、３９１／３９９、４０７／４１５、４２３／４３１、４３９／４４７、４５５／４６３、４７１／４７９、４８７／４９５、５０３／５１１、５１９／５２７、５３５／５４３、５５１／５５９、５６７／５７５、５８３／５９１、および５９９／６０７からなる群から選択されるアルファ鎖可変ドメイン／ベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列対内に含まれるＣＤＲ配列を含む。

別の実施形態において、ＴＣＲは、配列番号８７／３１、２３／９５、２３１／６０７、２３１／２２３、２３１／５９１、２３１／２５５、２３１／２７１、２３１／７９、２３１／４７、２３１／３９９、５９９／２３９、５９９／２２３、５９９／５９１、５９９／２５５、５９９／２７１、５９９／７９、５９９／４７、５９９／３９９、２１５／２３９、２１５／６０７、２１５／５９１、２１５／２５５、２１５／２７１、２１５／７９、２１５／４７、２１５／３９９、５８３／２３９、５８３／６０７、５８３／２２３、５８３／２５５、５８３／２７１、５８３／７９、５８３／４７、５８３／３９９、２４７／２３９、２４７／６０７、２４７／２２３、２４７／５９１、２４７／２７１、２４７／７９、２４７／４７、２４７／３９９、２６３／２３９、２６３／６０７、２６３／２２３、２６３／５９１、２６３／２５５、２６３／７９、２６３／４７、２６３／３９９、７１／２３９、７１／６０７、７１／２２３、７１／５９１、７１／２５５、７１／２７１、７１／４７、７１／３９９、３９／２３９、３９／６０７、３９／２２３、３９／５９１、３９／２５５、３９／２７１、３９／７９、３９／３９９、３９１／２３９、３９１／６０７、３９１／２２３、３９１／５９１、３９１／２５５、３９１／２７１、３９１／７９、３９１／４７、４３９／１２７、４３９／３１９、４３９／２８７、４３９／１５、４３９／１１１、４３９／３８３、４３９／１９１、４３９／５１１、４３９／５２７、４３９／５５９、４３９／２０７、１１９／４４７、１１９／３１９、１１９／２８７、１１９／１５、１１９／１１１、１１９／３８３、１１９／１９１、１１９／５１１、１１９／５２７、１１９／５５９、１１９／２０７、３１１／４４７、３１１／１２７、３１１／２８７、３１１／１５、３１１／１１１、３１１／３８３、３１１／１９１、３１１／５１１、３１１／５２７、３１１／５５９、３１１／２０７、２７９／４４７、２７９／１２７、２７９／３１９、２７９／１５、２７９／１１１、２７９／３８３、２７９／１９１、２７９／５１１、２７９／５２７、２７９／５５９、２７９／２０７、７／４４７、７／１２７、７／３１９、７／２８７、７／１１１、７／３８３、７／１９１、７／５１１、７／５２７、７／５５９、７／２０７、１０３／４４７、１０３／１２７、１０３／３１９、１０３／２８７、１０３／１５、１０３／３８３、１０３／１９１、１０３／５１１、１０３／５２７、１０３／５５９、１０３／２０７、３７５／４４７、３７５／１２７、３７５／３１９、３７５／２８７、３７５／１５、３７５／１１１、３７５／１９１、３７５／５１１、３７５／５２７、３７５／５５９、３７５／２０７、１８３／４４７、１８３／１２７、１８３／３１９、１８３／２８７、１８３／１５、１８３／１１１、１８３／３８３、１８３／５１１、１８３／５２７、１８３／５５９、１８３／２０７、５０３／４４７、５０３／１２７、５０３／３１９、５０３／２８７、５０３／１５、５０３／１１１、５０３／３８３、５０３／１９１、５０３／５２７、５０３／５５９、５０３／２０７、５１９／４４７、５１９／１２７、５１９／３１９、５１９／２８７、５１９／１５、５１９／１１１、５１９／３８３、５１９／１９１、５１９／５１１、５１９／５５９、５１９／２０７、５５１／４４７、５５１／１２７、５５１／３１９、５５１／２８７、５５１／１５、５５１／１１１、５５１／３８３、５５１／１９１、５５１／５１１、５５１／５２７、５５１／２０７、１９９／４４７、１９９／１２７、１９９／３１９、１９９／２８７、１９９／１５、１９９／１１１、１９９／３８３、１９９／１９１、１９９／５１１、１９９／５２７、および１９９／５５９からなる群から選択されるアルファ鎖可変ドメイン／ベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列対を含む。

別の実施形態において、ＴＣＲは、配列番号８７／３１、２３／９５、２３１／６０７、２３１／２２３、２３１／５９１、２３１／２５５、２３１／２７１、２３１／７９、２３１／４７、２３１／３９９、５９９／２３９、５９９／２２３、５９９／５９１、５９９／２５５、５９９／２７１、５９９／７９、５９９／４７、５９９／３９９、２１５／２３９、２１５／６０７、２１５／５９１、２１５／２５５、２１５／２７１、２１５／７９、２１５／４７、２１５／３９９、５８３／２３９、５８３／６０７、５８３／２２３、５８３／２５５、５８３／２７１、５８３／７９、５８３／４７、５８３／３９９、２４７／２３９、２４７／６０７、２４７／２２３、２４７／５９１、２４７／２７１、２４７／７９、２４７／４７、２４７／３９９、２６３／２３９、２６３／６０７、２６３／２２３、２６３／５９１、２６３／２５５、２６３／７９、２６３／４７、２６３／３９９、７１／２３９、７１／６０７、７１／２２３、７１／５９１、７１／２５５、７１／２７１、７１／４７、７１／３９９、３９／２３９、３９／６０７、３９／２２３、３９／５９１、３９／２５５、３９／２７１、３９／７９、３９／３９９、３９１／２３９、３９１／６０７、３９１／２２３、３９１／５９１、３９１／２５５、３９１／２７１、３９１／７９、３９１／４７、４３９／１２７、４３９／３１９、４３９／２８７、４３９／１５、４３９／１１１、４３９／３８３、４３９／１９１、４３９／５１１、４３９／５２７、４３９／５５９、４３９／２０７、１１９／４４７、１１９／３１９、１１９／２８７、１１９／１５、１１９／１１１、１１９／３８３、１１９／１９１、１１９／５１１、１１９／５２７、１１９／５５９、１１９／２０７、３１１／４４７、３１１／１２７、３１１／２８７、３１１／１５、３１１／１１１、３１１／３８３、３１１／１９１、３１１／５１１、３１１／５２７、３１１／５５９、３１１／２０７、２７９／４４７、２７９／１２７、２７９／３１９、２７９／１５、２７９／１１１、２７９／３８３、２７９／１９１、２７９／５１１、２７９／５２７、２７９／５５９、２７９／２０７、７／４４７、７／１２７、７／３１９、７／２８７、７／１１１、７／３８３、７／１９１、７／５１１、７／５２７、７／５５９、７／２０７、１０３／４４７、１０３／１２７、１０３／３１９、１０３／２８７、１０３／１５、１０３／３８３、１０３／１９１、１０３／５１１、１０３／５２７、１０３／５５９、１０３／２０７、３７５／４４７、３７５／１２７、３７５／３１９、３７５／２８７、３７５／１５、３７５／１１１、３７５／１９１、３７５／５１１、３７５／５２７、３７５／５５９、３７５／２０７、１８３／４４７、１８３／１２７、１８３／３１９、１８３／２８７、１８３／１５、１８３／１１１、１８３／３８３、１８３／５１１、１８３／５２７、１８３／５５９、１８３／２０７、５０３／４４７、５０３／１２７、５０３／３１９、５０３／２８７、５０３／１５、５０３／１１１、５０３／３８３、５０３／１９１、５０３／５２７、５０３／５５９、５０３／２０７、５１９／４４７、５１９／１２７、５１９／３１９、５１９／２８７、５１９／１５、５１９／１１１、５１９／３８３、５１９／１９１、５１９／５１１、５１９／５５９、５１９／２０７、５５１／４４７、５５１／１２７、５５１／３１９、５５１／２８７、５５１／１５、５５１／１１１、５５１／３８３、５５１／１９１、５５１／５１１、５５１／５２７、５５１／２０７、１９９／４４７、１９９／１２７、１９９／３１９、１９９／２８７、１９９／１５、１９９／１１１、１９９／３８３、１９９／１９１、１９９／５１１、１９９／５２７、および１９９／５５９からなる群から選択されるアルファ鎖可変ドメイン／ベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列対内に含まれるＣＤＲ配列を含む。

いくつかの実施形態において、本発明は、配列番号６６８／６７６、１０３／１１１、４３９／４４７、および５０３／５１１からなる群から選択されるアルファ鎖可変ドメイン／ベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列対内に含まれるＣＤＲを含むＴＣＲを提供する。いくつかの実施形態において、本開示のＴＣＲは、アルファ鎖可変ドメイン相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびにベータ鎖可変ドメインＣＤＲ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、これらは、ａ）配列番号６６２、６６３、６６４、６７０、６７１、および６７２、ｂ）配列番号９７、９８、９９、１０５、１０６、および１０７、ｃ）配列番号４３３、４３４、４３５、４４１、４４２、および４４３、ならびにｄ）配列番号４９７、４９８、４９９、５０５、５０６、および５０７のそれぞれのアミノ酸配列を含む。

本発明はまた、本発明のＴＣＲのうちのいずれか１つ以上との結合を完了するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ、または単離された細胞で発現されるＴＣＲ）を提供する。

いくつかの実施形態において、本発明のＴＣＲは、検出可能部分をさらに含む。

本発明はさらに、本発明のＴＣＲのうちのいずれかと、薬学的に許容される担体または希釈剤と、を含む医薬組成物、ならびに本発明のＴＣＲのうちのいずれかを提示する単離された細胞を提供する。

一態様において、本発明は、本発明のＴＣＲのうちのいずれかのアルファ鎖可変ドメインをコードするポリヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド分子を提供する。

別の態様において、本発明は、本発明のＴＣＲのうちのいずれかのベータ鎖可変ドメインをコードするポリヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド分子を提供する。

本発明はまた、本発明のポリヌクレオチド分子を含むベクター、本発明のベクターを発現する細胞を提供する。

一態様において、本発明は、ＭＡＧＥ－Ａ４関連疾患または障害を有する対象を治療する方法を提供する。本方法は、治療有効量のＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ、または単離された細胞で発現されるＴＣＲ）、医薬組成物、または本発明の複数の細胞を対象に投与することを含み、それによって対象を治療する。

一実施形態において、ＭＡＧＥ－Ａ４関連疾患または障害は、ＭＡＧＥ－Ａ４関連がんである。

一実施形態において、ＭＡＧＥ－Ａ４関連がんは、脂肪肉腫、神経芽細胞腫、骨髄腫、黒色腫、転移性黒色腫、滑膜肉腫、膀胱がん、食道がん、食道扁平上皮がん、肝細胞がん、頭頸部がん、非小細胞肺がん、卵巣がん、卵巣上皮がん、前立腺がん、乳がん、星状細胞腫瘍、多形性膠芽腫、未分化星状細胞腫、脳腫瘍、卵管がん、原発性腹腔がん、進行性固形腫瘍、軟組織肉腫、肉腫、骨髄異形成症候群、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、転移性固形腫瘍、結腸がん、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈｃａｎｃｅｒ）、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ）、横紋筋肉腫、粘液様円形細胞脂肪肉腫、または再発性非小細胞肺がんである。

本発明のいくつかの実施形態において、ＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ、または単離された細胞で発現されるＴＣＲ）、医薬組成物、または本発明の複数の細胞は、第２の治療剤と組み合わせて対象に投与される。

ＴＣＲ、医薬組成物、または複数の細胞は、対象に、皮下、静脈内、皮内、腹腔内、経口、筋肉内、または頭蓋内に投与され得る。

一態様において、本発明は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする単離された核酸分子を提供し、ＴＣＲは、ＫＶＬＥＨＶＶＲＶ（配列番号６０９）（ＭＡＧＥ－Ａ４２８６～２９４）のアミノ酸配列を含む、ＨＬＡ－Ａ２提示がん精巣抗原黒色腫関連抗原４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチドに特異的に結合し、ＴＣＲは、（ａ）発光アッセイによって決定されるときに、予測されるオフターゲットペプチドを発現する細胞に結合しない特性と、（ｂ）ＴＣＲ媒介性Ｔ細胞シグナル伝達発光バイオアッセイによって決定されるときに、Ｔ細胞応答を、患者由来ＭＡＧＥ－Ａ４特異的ＴＣＲよりも約２倍大きく活性化する特性と、（ｃ）ＴＣＲ媒介性Ｔ細胞シグナル伝達発光バイオアッセイによって決定されるときに、Ｔ細胞応答を、親和性成熟した（例えば、ファージディスプレイによる）ＭＡＧＥ－Ａ４特異的ＴＣＲよりも約２倍大きく活性化する特性と、からなる群から選択される特性を有する。

一実施形態において、単離された核酸分子は、少なくとも１つのＴＣＲアルファ鎖可変ドメインおよび／または少なくとも１つのベータ鎖可変ドメインをコードする。

一実施形態において、ＴＣＲは、表４に列挙されるアルファ鎖可変ドメイン配列のうちのいずれか１つ内に含まれるアルファ鎖可変ドメイン相補的決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、表４に列挙されるベータ鎖可変ドメイン配列のうちのいずれか１つ内に含まれるベータ鎖可変ドメインＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、を含む。

別の実施形態において、ＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ、または単離された細胞で発現されるＴＣＲ）は、表４に列挙されるアルファ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインを含む。

一実施形態において、単離された抗原結合タンパク質は、（ａ）配列番号１、１７、３３、４９、６５、８１、９７、１１３、１２９、１４５、１６１、１７７、１９３、２０９、２２５、２４１、２５７、２７３、２８９、３０５、３２１、３３７、３５３、３６９、３８５、４０１、４１７、４３３、４４９、４６５、４８１、４９７、５１３、５２９、５４５、５６１、５７７、および５９３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ１ドメインと、（ｂ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、３８６、４０２、４１８、４３４、４５０、４６６、４８２、４９８、５１４、５３０、５４６、５６２、５７８、および５９４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ２ドメインと、（ｃ）配列番号３、１９、３５、５１、６７、８３、９９、１１５、１３１、１４７、１６３、１７９、１９５、２１１、２２７、２４３、２５９、２７５、２９１、３０７、３２３、３３９、３５５、３７１、３８７、４０３、４１９、４３５、４５１、４６７、４８３、４９９、５１５、５３１、５４７、５６３、５７９、および５９５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ３ドメインと、（ｄ）配列番号９、２５、４１、５７、７３、８９、１０５、１２１、１３７、１５３、１６９、１８５、２０１、２１７、２３３、２４９、２６５、２８１、２９７、３１３、３２９、３４５、３６１、３７７、３９３、４０９、４２５、４４１、４５７、４７３、４８９、５０５、５２１、５３７、５５３、５６９、５８５、および６０１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインＣＤＲ１と、（ｅ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、３９４、４１０、４２６、４４２、４５８、４７４、４９０、５０６、５２２、５３８、５５４、５７０、５８６、および６０２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインＣＤＲ２と、（ｆ）配列番号１１、２７、４３、５９、７５、９１、１０７、１２３、１３９、１５５、１７１、１８７、２０３、２１９、２３５、２５１、２６７、２８３、２９９、３１５、３３１、３４７、３６３、３７９、３９５、４１１、４２７、４４３、４５９、４７５、４９１、５０７、５２３、５３９、５５５、５７１、５８７、および６０３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインＣＤＲ３と、を含む。

別の実施形態において、ＴＣＲは、配列番号８７／３１、２３／９５、２３１／６０７、２３１／２２３、２３１／５９１、２３１／２５５、２３１／２７１、２３１／７９、２３１／４７、２３１／３９９、５９９／２３９、５９９／２２３、５９９／５９１、５９９／２５５、５９９／２７１、５９９／７９、５９９／４７、５９９／３９９、２１５／２３９、２１５／６０７、２１５／５９１、２１５／２５５、２１５／２７１、２１５／７９、２１５／４７、２１５／３９９、５８３／２３９、５８３／６０７、５８３／２２３、５８３／２５５、５８３／２７１、５８３／７９、５８３／４７、５８３／３９９、２４７／２３９、２４７／６０７、２４７／２２３、２４７／５９１、２４７／２７１、２４７／７９、２４７／４７、２４７／３９９、２６３／２３９、２６３／６０７、２６３／２２３、２６３／５９１、２６３／２５５、２６３／７９、２６３／４７、２６３／３９９、７１／２３９、７１／６０７、７１／２２３、７１／５９１、７１／２５５、７１／２７１、７１／４７、７１／３９９、３９／２３９、３９／６０７、３９／２２３、３９／５９１、３９／２５５、３９／２７１、３９／７９、３９／３９９、３９１／２３９、３９１／６０７、３９１／２２３、３９１／５９１、３９１／２５５、３９１／２７１、３９１／７９、３９１／４７、４３９／１２７、４３９／３１９、４３９／２８７、４３９／１５、４３９／１１１、４３９／３８３、４３９／１９１、４３９／５１１、４３９／５２７、４３９／５５９、４３９／２０７、１１９／４４７、１１９／３１９、１１９／２８７、１１９／１５、１１９／１１１、１１９／３８３、１１９／１９１、１１９／５１１、１１９／５２７、１１９／５５９、１１９／２０７、３１１／４４７、３１１／１２７、３１１／２８７、３１１／１５、３１１／１１１、３１１／３８３、３１１／１９１、３１１／５１１、３１１／５２７、３１１／５５９、３１１／２０７、２７９／４４７、２７９／１２７、２７９／３１９、２７９／１５、２７９／１１１、２７９／３８３、２７９／１９１、２７９／５１１、２７９／５２７、２７９／５５９、２７９／２０７、７／４４７、７／１２７、７／３１９、７／２８７、７／１１１、７／３８３、７／１９１、７／５１１、７／５２７、７／５５９、７／２０７、１０３／４４７、１０３／１２７、１０３／３１９、１０３／２８７、１０３／１５、１０３／３８３、１０３／１９１、１０３／５１１、１０３／５２７、１０３／５５９、１０３／２０７、３７５／４４７、３７５／１２７、３７５／３１９、３７５／２８７、３７５／１５、３７５／１１１、３７５／１９１、３７５／５１１、３７５／５２７、３７５／５５９、３７５／２０７、１８３／４４７、１８３／１２７、１８３／３１９、１８３／２８７、１８３／１５、１８３／１１１、１８３／３８３、１８３／５１１、１８３／５２７、１８３／５５９、１８３／２０７、５０３／４４７、５０３／１２７、５０３／３１９、５０３／２８７、５０３／１５、５０３／１１１、５０３／３８３、５０３／１９１、５０３／５２７、５０３／５５９、５０３／２０７、５１９／４４７、５１９／１２７、５１９／３１９、５１９／２８７、５１９／１５、５１９／１１１、５１９／３８３、５１９／１９１、５１９／５１１、５１０／５５９、５１９／２０７、５５１／４４７、５５１／１２７、５５１／３１９、５５１／２８７、５５１／１５、５５１／１１１、５５１／３８３、５５１／１９１、５５１／５１１、５５１／５２７、５５１／２０７、１９９／４４７、１９９／１２７、１９９／３１９、１９９／２８７、１９９／１５、１９９／１１１、１９９／３８３、１９９／１９１、１９９／５１１、１９９／５２７、および１９９／５５９からなる群から選択されるアルファ鎖可変ドメイン／ベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列対を含む。

一実施形態において、単離された抗原結合タンパク質は、（ａ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、３２４、３４０、３５６、３７２、３８８、４０４、４２０、４３６、４５２、４６８、４８４、５００、５１６、５３２、５４８、５６４、５８０、および５９６からなる群から選択される核酸配列によってコードされるアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ１と、（ｂ）配列番号５、２１、３７、５３、６９、８５、１０１、１１７、１３３、１４９、１６５、１８１、１９７、２１３、２２９、２４５、２６１、２７７、２９３、３０９、３２５、３４１、３５７、３７３、３８９、４０５、４２１、４３７、４５３、４６９、４８５、５０１、５１７、５３３、５４９、５６５、５８１、および５９７からなる群から選択される核酸配列によってコードされるアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ２と、（ｃ）配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、３２６、３４２、３５８、３７４、３９０、４０６、４２２、４３８、４５４、４７０、４８６、５０２、５１８、５３４、５５０、５６６、５８２、および５９８からなる群から選択される核酸配列によってコードされるアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ３と、（ｄ）配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３３２、３４８、３６４、３８０、３９６、４１２、４２８、４４４、４６０、４７６、４９２、５０８、５２４、５４０、５５６、５７２、５８８、および６０４からなる群から選択される核酸配列によってコードされるベータ鎖可変ドメインＣＤＲ１と、（ｅ）配列番号１３、２９、４５、６１、７７、９３、１０９、１２５、１４１、１５７、１７３、１８９、２０５、２２１、２３７、２５３、２６９、２８５、３０１、３１７、３３３、３４９、３６５、３８１、３９７、４１３、４２９、４４５、４６１、４７７、４９３、５０９、５２５、５４１、５５７、５７３、５８９、および６０５からなる群から選択される核酸配列によってコードされるベータ鎖可変ドメインＣＤＲ２と、（ｆ）配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３３４、３５０、３６６、３８２、３９８、４１４、４３０、４４６、４６２、４７８、４９４、５１０、５２６、５４２、５５８、５７４、５９０、および６０６からなる群から選択される核酸配列によってコードされるベータ鎖可変ドメインＣＤＲ３と、を含む。

一実施形態において、ＴＣＲは、配列番号８／１６、２４／３２、４０／４８、５６／６４、７２／８０、８８／９６、１０４／１１２、１２０／１２８、１３６／１４４、１５２／１６０、１６８／１７６、１８４／１９２、２００／２０８、２１６／２２４、２３２／２４０、２４８／２５６、２６４／２７２、２８０／２８８、２９６／３０４、３１２／３２０、３２８／３３６、３４４／３５２、３６０／３６８、３７６／３８４、３９２／４００、４０８／４１６、４２４／４３２、４４０／４４８、４５６／４６４、４７２／４８０、４８８／４９６、５０４／５１２、５２０／５２８、５３６／５４４、５５２／５６０、５６８／５７６、５８４／５９２、６００／６０８からなる群から選択されるアルファ鎖可変ドメイン／ベータ鎖可変ドメイン核酸配列対を含む。

本発明はまた、本発明の単離された核酸分子を含むベクターおよび本発明のベクターを含む単離された細胞を提供する。

一態様において、本発明は、ＭＡＧＥ－Ａ４関連疾患または障害を有する対象を治療する方法を提供し、対象に請求項４２に記載の複数の細胞を投与することを含み、それによって対象を治療する。

一実施形態において、複数の細胞は、対象に、第２の治療剤と組み合わせて投与される。

一態様において、本発明は、ＫＶＬＥＨＶＶＲＶ（配列番号６０９）（ＭＡＧＥ－Ａ４２８６～２９４）のアミノ酸配列を含むＨＬＡ－Ａ２提示がん精巣抗原黒色腫関連抗原４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチドに特異的に結合するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、単離されたＴＣＲ、または単離された細胞で発現されるＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、（ａ）発光アッセイによって決定されるときに、予測されるオフターゲットペプチドを発現する細胞に結合しない特性と、（ｂ）ＴＣＲ媒介性Ｔ細胞シグナル伝達発光バイオアッセイによって決定されるときに、患者由来ＭＡＧＥ－Ａ４特異的ＴＣＲよりも大きいシグナル対ノイズ比を有するＴ細胞応答を活性化する特性と、（ｃ）ＴＣＲ媒介性Ｔ細胞シグナル伝達発光バイオアッセイによって決定されるときに、Ｔ細胞応答を、親和性成熟した（例えば、ファージディスプレイによる）ＭＡＧＥ－Ａ４特異的ＴＣＲよりも約２倍大きく活性化する特性と、からなる群から選択される特性を有する。

いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、ＴＣＲ媒介性Ｔ細胞シグナル伝達発光バイオアッセイによって決定されるときに、Ｔ細胞応答を、患者由来ＭＡＧＥ－Ａ４特異的ＴＣＲよりも約２倍大きく、または約３倍大きく、または約４倍大きく活性化する。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、ＴＣＲ媒介性Ｔ細胞シグナル伝達発光バイオアッセイによって決定されるときに、Ｔ細胞応答を、親和性成熟した（例えば、ファージディスプレイによる）ＭＡＧＥ－Ａ４特異的ＴＣＲよりも約２倍大きく、または約３倍大きく、または約４倍大きく活性化する。

一態様において、本開示は、ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ（配列番号６１２）（ＭＡＧＥ－Ａ４２３０～２３９）のアミノ酸配列を含むＨＬＡ－Ａ２提示がん精巣抗原黒色腫関連抗原４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチドに特異的に結合するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、単離されたＴＣＲ、または単離された細胞によって発現されるＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、配列番号６２０、６３６、６５２、６６８、６８４、７００、７１６、７３２、７４８、７６４、７８０、７９６、８１２、８２８、８４４、および８６０のうちのいずれか１つのアルファ鎖可変ドメインとともに含まれる相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む。

一態様において、本開示は、ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ（配列番号６１２）（ＭＡＧＥ－Ａ４２３０～２３９）のアミノ酸配列を含むＨＬＡ－Ａ２提示がん精巣抗原黒色腫関連抗原４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチドに特異的に結合するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、単離されたＴＣＲ、または単離された細胞によって発現されるＴＣＲ）を提供し、ＴＣＲは、配列番号６２８、６４４、６６０、６７６、６９２、７０８、７２４、７４０、７５６、７７２、７８８、８０４、８２０、８３６、８５２、および８６８のうちのいずれか１つのベータ鎖可変ドメイン内に含まれる相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む。

いくつかの実施形態において、アルファ鎖可変ドメインは、ＣＤＲ１およびＣＤＲ２をさらに含み、ＣＤＲ１は、表６に示されるアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ１アミノ酸配列のうちのいずれか１つを含み、ＣＤＲ２は、独立して、表６に示されるアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ２アミノ酸配列のうちのいずれか１つを含む。いくつかの実施形態において、ベータ鎖可変ドメインは、ＣＤＲ１およびＣＤＲ２をさらに含み、ＣＤＲ１は、表６に示されるベータ鎖可変ＣＤＲ１アミノ酸配列のうちのいずれか１つを含み、ＣＤＲ２は、独立して、表６に示されるベータ鎖可変ドメインＣＤＲ２アミノ酸配列のうちのいずれか１つを含む。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、少なくとも１つのＴＣＲアルファ鎖可変ドメインおよび／または少なくとも１つのベータ鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、ＴＣＲアルファ鎖可変ドメインおよびＴＣＲベータ鎖可変ドメインを含む。

いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、表８に列挙されるアルファ鎖可変ドメイン配列のうちのいずれか１つ内に含まれるアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに表８に列挙されるベータ鎖可変ドメイン配列のうちのいずれか１つ内に含まれるベータ鎖可変ドメインＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、表８に列挙されるアルファ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、表８に列挙されるベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、（ａ）表８に列挙されるアルファ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインと、（ｂ）表８に列挙されるベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインと、を含む。

いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、（ａ）配列番号６１４、６３０、６４６、６６２、６７８、６９４、７１０、７２６、７４２、７５８、７７４、７９０、８０６、８２２、８３８、および８５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ１ドメインと、（ｂ）配列番号６１５、６３１、６４７、６６３、６７９、６９５、７１１、７２７、７４３、７５９、７７５、７９１、８０７、８２３、８３９、および８５５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ２ドメインと、（ｃ）配列番号６１６、６３２、６４８、６６４、６８０、６９６、７１２、７２８、７４４、７６０、７７６、７９２、８０８、８２４、８４０、および８５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ３ドメインと、（ｄ）配列番号６２２、６３８、６５４、６７０、６８６、７０２、７１８、７３４、７５０、７６６、７８２、７９８、８１４、８３０、８４６、および８６２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインＣＤＲ１と、（ｅ）配列番号６２３、６３９、６５５、６７１、６８７、７０３、７１９、７３５、７５１、７６７、７８３、７９９、８１５、８３１、８４７、および８６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインＣＤＲ２と、（ｆ）配列番号６２４、６４０、６５６、６７２、６８８、７０４、７２０、７３６、７５２、７６８、７８４、８００、８１６、８３２、８４８、および８６４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインＣＤＲ３と、を含む。

いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、配列番号６２０／６２８、６３６／６４４、６５２／６６０、６６８／６７６、６８４／６９２、７００／７０８、７１６／７２４、７３２／７４０、７４８／７５６、７６４／７７２、７８０／７８８、７９６／８０４、８１２／８２０、８２８／８３６、８４４／８５２、および８６０／８６８からなる群から選択されるアルファ鎖可変ドメイン／ベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列対を含む。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、配列番号６２０／６２８、６２０／６４４、６２０／６６０、６２０／６７６、６２０／６９２、６２０／７０８、６２０／７２４、６２０／７４０、６２０／７５６、６２０／７７２、６２０／７８８、６２０／８０４、６２０／８２０、６２０／８３６、６２０／８５２、６２０／８６８、６３６／６２８、６３６／６４４、６３６／６６０、６３６／６７６、６３６／６９２、６３６／７０８、６３６／７２４、６３６／７４０、６３６／７５６、６３６／７７２、６３６／７８８、６３６／８０４、６３６／８２０、６３６／８３６、６３６／８５２、６３６／８６８、６５２／６２８、６５２／６４４、６５２／６６０、６５２／６７６、６５２／６９２、６５２／７０８、６５２／７２４、６５２／７４０、６５２／７５６、６５２／７７２、６５２／７８８、６５２／８０４、６５２／８２０、６５２／８３６、６５２／８５２、６５２／８６８、６６８／６２８、６６８／６４４、６６８／６６０、６６８／６７６、６６８／６９２、６６８／７０８、６６８／７２４、６６８／７４０、６６８／７５６、６６８／７７２、６６８／７８８、６６８／８０４、６６８／８２０、６６８／８３６、６６８／８５２、６６８／８６８、６８４／６２８、６８４／６４４、６８４／６６０、６８４／６７６、６８４／６９２、６８４／７０８、６８４／７２４、６８４／７４０、６８４／７５６、６８４／７７２、６８４／７８８、６８４／８０４、６８４／８２０、６８４／８３６、６８４／８５２、６８４／８６８、７００／６２８、７００／６４４、７００／６６０、７００／６７６、７００／６９２、７００／７０８、７００／７２４、７００／７４０、７００／７５６、７００／７７２、７００／７８８、７００／８０４、７００／８２０、７００／８３６、７００／８５２、７００／８６８、７１６／６２８、７１６／６４４、７１６／６６０、７１６／６７６、７１６／６９２、７１６／７０８、７１６／７２４、７１６／７４０、７１６／７５６、７１６／７７２、７１６／７８８、７１６／８０４、７１６／８２０、７１６／８３６、７１６／８５２、７１６／８６８、７３２／６２８、７３２／６４４、７３２／６６０、７３２／６７６、７３２／６９２、７３２／７０８、７３２／７２４、７３２／７４０、７３２／７５６、７３２／７７２、７３２／７８８、７３２／８０４、７３２／８２０、７３２／８３６、７３２／８５２、７３２／８６８、７４８／６２８、７４８／６４４、７４８／６６０、７４８／６７６、７４８／６９２、７４８／７０８、７４８／７２４、７４８／７４０、７４８／７５６、７４８／７７２、７４８／７８８、７４８／８０４、７４８／８２０、７４８／８３６、７４８／８５２、７４８／８６８、７６４／６２８、７６４／６４４、７６４／６６０、７６４／６７６、７６４／６９２、７６４／７０８、７６４／７２４、７６４／７４０、７６４／７５６、７６４／７７２、７６４／７８８、７６４／８０４、７６４／８２０、７６４／８３６、７６４／８５２、７６４／８６８、７８０／６２８、７８０／６４４、７８０／６６０、７８０／６７６、７８０／６９２、７８０／７０８、７８０／７２４、７８０／７４０、７８０／７５６、７８０／７７２、７８０／７８８、７８０／８０４、７８０／８２０、７８０／８３６、７８０／８５２、７８０／８６８、７９６／６２８、７９６／６４４、７９６／６６０、７９６／６７６、７９６／６９２、７９６／７０８、７９６／７２４、７９６／７４０、７９６／７５６、７９６／７７２、７９６／７８８、７９６／８０４、７９６／８２０、７９６／８３６、７９６／８５２、７９６／８６８、８１２／６２８、８１２／６４４、８１２／６６０、８１２／６７６、８１２／６９２、８１２／７０８、８１２／７２４、８１２／７４０、８１２／７５６、８１２／７７２、８１２／７８８、８１２／８０４、８１２／８２０、８１２／８３６、８１２／８５２、８１２／８６８、８２８／６２８、８２８／６４４、８２８／６６０、８２８／６７６、８２８／６９２、８２８／７０８、８２８／７２４、８２８／７４０、８２８／７５６、８２８／７７２、８２８／７８８、８２８／８０４、８２８／８２０、８２８／８３６、８２８／８５２、８２８／８６８、８４４／６２８、８４４／６４４、８４４／６６０、８４４／６７６、８４４／６９２、８４４／７０８、８４４／７２４、８４４／７４０、８４４／７５６、８４４／７７２、８４４／７８８、８４４／８０４、８４４／８２０、８４４／８３６、８４４／８５２、８４４／８６８、８６０／６２８、８６０／６４４、８６０／６６０、８６０／６７６、８６０／６９２、８６０／７０８、８６０／７２４、８６０／７４０、８６０／７５６、８６０／７７２、８６０／７８８、８６０／８０４、８６０／８２０、８６０／８３６、８６０／８５２、および８６０／８６８からなる群から選択されるアルファ鎖可変ドメイン／ベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列対を含む。

いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、検出可能部分を含む。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、２．５超、３超、３．５超、４超、４．５超、５超、１０超、１５超、２０超、５０超、１００超、２００超、３００超、４００超、５００超、６００超、７００超、８００超、９００超、または１０００超のオンターゲット結合／オフターゲット結合値を有する。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、１０超のオンターゲット結合／オフターゲット結合値を有する。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、５００超のオンターゲット結合／オフターゲット結合値を有する。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、本明細書に記載のＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ、または単離された細胞で発現されるＴＣＲ）に対して結合において競合する。

一態様において、本開示は、本明細書に記載されるＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ、または単離された細胞で発現されるＴＣＲ）と、薬学的に許容される担体または希釈剤と、を含む、医薬組成物を提供する。一態様において、本開示は、本明細書に記載のＴＣＲを提示する単離された細胞を提供する。一態様において、本開示は、本明細書に記載のＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ、または単離された細胞で発現されるＴＣＲ）のアルファ鎖可変ドメインをコードするポリヌクレオチド配列を含む、単離されたポリ核酸を提供する。一態様において、本開示は、本明細書に記載のＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ、または単離された細胞で発現されるＴＣＲ）のベータ鎖可変ドメインをコードするポリヌクレオチド配列を含む、単離されたポリ核酸を提供する。一態様において、本開示は、本明細書に記載のポリヌクレオチド配列を含むベクターを提供する。一態様において、本開示は、そのベクターを発現する単離された細胞を提供する。

一態様において、本開示は、ＭＡＧＥ－Ａ４関連疾患または障害を有する対象を治療する方法を提供し、対象に、治療有効量の本明細書に記載のＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ、または単離された細胞で発現されるＴＣＲ）、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の単離された細胞を投与することを含み、それによって対象を治療する。いくつかの実施形態において、ＭＡＧＥ－Ａ４関連疾患または障害は、ＭＡＧＥ－Ａ４関連がんである。いくつかの実施形態において、ＭＡＧＥ－Ａ４関連がんは、脂肪肉腫、神経芽細胞腫、骨髄腫、黒色腫、転移性黒色腫、滑膜肉腫、膀胱がん、食道がん、食道扁平上皮がん、肝細胞がん、頭頸部がん、非小細胞肺がん、卵巣がん、卵巣上皮がん、前立腺がん、乳がん、星状細胞腫瘍、多形性膠芽腫、未分化星状細胞腫、脳腫瘍、卵管がん、原発性腹腔がん、進行性固形腫瘍、軟組織肉腫、肉腫、骨髄異形成症候群、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、転移性固形腫瘍、結腸がん、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈｃａｎｃｅｒ）、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ）、横紋筋肉腫、粘液様円形細胞脂肪肉腫、または再発性非小細胞肺がんである。いくつかの実施形態において、ＴＣＲ、医薬組成物、または細胞は、対象に、第２の治療剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、投与は、非経口的である。

一態様において、本開示は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする単離された核酸分子を提供し、ＴＣＲは、ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ（配列番号６１２）（ＭＡＧＥ－Ａ４２３０～２３９）のアミノ酸配列を含むＨＬＡ－Ａ２提示がん精巣抗原黒色腫関連抗原４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチドに特異的に結合し、ＴＣＲは、（ａ）発光アッセイによって決定されるときに、予測されるオフターゲットペプチドを発現する細胞に結合しない特性と、（ｂ）フローサイトメトリーアッセイによって決定されるときに、予測されるオフターゲットペプチドを発現する細胞に結合しない特性と、（ｃ）ＴＣＲ媒介性Ｔ細胞シグナル伝達発光バイオアッセイによって決定されるときに、Ｔ細胞応答を、患者由来ＭＡＧＥ－Ａ４特異的ＴＣＲよりも約２倍大きく活性化する特性と、（ｄ）ＴＣＲ媒介性Ｔ細胞シグナル伝達発光バイオアッセイによって決定されるときに、Ｔ細胞応答を、親和性成熟した（例えば、ファージディスプレイによる）ＭＡＧＥ－Ａ４特異的ＴＣＲよりも約２倍大きく活性化する特性と、からなる群から選択される特性を有する。いくつかの実施形態において、単離された核酸分子は、少なくとも１つのＴＣＲアルファ鎖可変ドメインおよび／または少なくとも１つのベータ鎖可変ドメインをコードする。

いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、表８に列挙されるアルファ鎖可変ドメイン配列のうちのいずれか１つ内に含まれるアルファ鎖可変ドメイン相補的決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、表８に列挙されるベータ鎖可変ドメイン配列のうちのいずれか１つ内に含まれるベータ鎖可変ドメインＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、を含む。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、表８に列挙されるアルファ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、表８に列挙されるベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインを含む。

いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、（ａ）表８に列挙されるアルファ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインと、（ｂ）表８に列挙されるベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインと、を含む。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、（ａ）配列番号６１４、６３０、６４６、６６２、６７８、６９４、７１０、７２６、７４２、７５８、７７４、７９０、８０６、８２２、８３８、および８５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ１ドメインと、（ｂ）配列番号６１５、６３１、６４７、６６３、６７９、６９５、７１１、７２７、７４３、７５９、７７５、７９１、８０７、８２３、８３９、および８５５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ２ドメインと、（ｃ）配列番号６１６、６３２、６４８、６６４、６８０、６９６、７１２、７２８、７４４、７６０、７７６、７９２、８０８、８２４、８４０、および８５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ３ドメインと、（ｄ）配列番号６２２、６３８、６５４、６７０、６８６、７０２、７１８、７３４、７５０、７６６、７８２、７９８、８１４、８３０、８４６、および８６２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインＣＤＲ１と、（ｅ）配列番号６２３、６３９、６５５、６７１、６８７、７０３、７１９、７３５、７５１、７６７、７８３、７９９、８１５、８３１、８４７、および８６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインＣＤＲ２と、（ｆ）配列番号６２４、６４０、６５６、６７２、６８８、７０４、７２０、７３６、７５２、７６８、７８４、８００、８１６、８３２、８４８、および８６４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインＣＤＲ３と、を含む。

いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、（ａ）配列番号６１７、６３３、６４９、６６５、６８１、６９７、７１３、７２９、７４５、７６１、７７７、７９３、８０９、８２５、８４１、および８５７からなる群から選択される核酸配列によってコードされるアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ１と、（ｂ）配列番号６１８、６３４、６５０、６６６、６８２、６９８、７１４、７３０、７４６、７６２、７７８、７９４、８１０、８２６、８４２、および８５８からなる群から選択される核酸配列によってコードされるアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ２と、（ｃ）配列番号６１９、６３５、６５１、６６７、６８３、６９９、７１５、７３１、７４７、７６３、７７９、７９５、８１１、８２７、８４３、および８５９からなる群から選択される核酸配列によってコードされるアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ３と、（ｄ）配列番号６２５、６４１、６５７、６７３、６８９、７０５、７２１、７３７、７５３、７６９、７８５、８０１、８１７、８３３、８４９、および８６５からなる群から選択される核酸配列によってコードされるベータ鎖可変ドメインＣＤＲ１と、（ｅ）配列番号６２６、６４２、６５８、６７４、６９０、７０６、７２２、７３８、７５４、７７０、７８６、８０２、８１８、８３４、８５０、および８６６からなる群から選択される核酸配列によってコードされるベータ鎖可変ドメインＣＤＲ２と、（ｆ）配列番号６２７、６４３、６５９、６７５、６９１、７０７、７２３、７３９、７５５、７７１、７８７、８０３、８１９、８３５、８５１、および８６７からなる群から選択される核酸配列によってコードされるベータ鎖可変ドメインＣＤＲ３と、を含む。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、配列番号６２１／６２９、６３７／６４５、６５３／６６１、６６９／６７７、６８５／６９３、７０１／７０９、７１７／７２５、７３３／７４１、７４９／７５７、７６５／７７３、７８１／７８９、７９７／８０５、８１３／８２１、８２９／８３７、８４５／８５３、および８６１／８６９からなる群から選択されるアルファ鎖可変ドメイン／ベータ鎖可変ドメイン核酸配列対を含む。

一態様において、本開示は、本明細書に記載の単離された核酸分子のポリヌクレオチド配列を含む、ベクターを提供する。一態様において、本開示は、そのベクターを含む単離された細胞を提供する。一態様において、本開示は、ＭＡＧＥ－Ａ４関連疾患または障害を有する対象を治療する方法を提供し、対象にその細胞を投与することを含み、それによって対象を治療する。いくつかの実施形態において、ＭＡＧＥ－Ａ４関連疾患または障害は、ＭＡＧＥ－Ａ４関連がんである。いくつかの実施形態において、ＭＡＧＥ－Ａ４関連がんは、脂肪肉腫、神経芽細胞腫、骨髄腫、黒色腫、転移性黒色腫、滑膜肉腫、膀胱がん、食道がん、食道扁平上皮がん、肝細胞がん、頭頸部がん、非小細胞肺がん、卵巣がん、卵巣上皮がん、前立腺がん、乳がん、星状細胞腫瘍、多形性膠芽腫、未分化星状細胞腫、脳腫瘍、卵管がん、原発性腹腔がん、進行性固形腫瘍、軟組織肉腫、肉腫、骨髄異形成症候群、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、転移性固形腫瘍、結腸がん、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈｃａｎｃｅｒ）、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ）、横紋筋肉腫、粘液様円形細胞脂肪肉腫、または再発性非小細胞肺がんである。いくつかの実施形態において、細胞は、対象に、第２の治療剤と組み合わせて投与される。

本発明は、以下の詳細な記載および図面によってさらに説明される。

初代ヒトＴ細胞におけるＴＲＡＣ標的化ＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲの発現を、活性化後１４日目のｐＭＨＣ四量体によって定量化して表すＦＡＣＳ分析を示す。これらのＴＣＲにおけるＭＡＧＥ－Ａ４標的は、ＭＡＧＥ－Ａ４（２８６～２９４）ペプチド（ＫＶＬＥＨＶＶＲＶ、配列番号６０９、「ＫＶＬＥ」）またはＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９）ペプチド（ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ、配列番号６１２、「ＧＶＹ」）のいずれかであり、トランスジェニックＴＣＲ配列は、ヒトＴＲＡＣ遺伝子座でアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター挿入の部位特異的標的化によって、初代ヒトＴ細胞に導入された。細胞を、示されるペプチドＭＨＣ四量体試薬（ｙ軸）および表面抗原マーカーに対する抗体で染色し、フローサイトメトリーによって分析した。プロットを生きた単一のＣＤ８＋Ｔ細胞でゲーティングした。ＭＡＧＥ－Ａ４発現性Ａ３７５黒色腫細胞に対するＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲの細胞傷害活性を示す（ドナー１、２時間アッセイ）。２つの異なるＨＬＡ－Ａ２制限ＭＡＧＥ－Ａ４由来ペプチド抗原に対してＴＣＲを発現する初代ヒトＴ細胞を、カルセインＡＭ色素放出アッセイにおいて、ＨＬＡ－Ａ２＊０１ＭＡＧＥ－Ａ４発現性Ａ３７５黒色腫細胞に対する細胞傷害活性について試験した。これらのＴＣＲにおけるＭＡＧＥ－Ａ４標的は、ＭＡＧＥ－Ａ４（２８６～２９４）ペプチド（ＫＶＬＥＨＶＶＲＶ、配列番号６０９、「ＫＶＬＥ」）（図２Ａ）またはＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９）ペプチド（ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ、配列番号６１２、「ＧＶＹ」）（図２Ｂ）のいずれかであった。無関連な抗原に対するＴＣＲで形質導入された対照細胞を、ＴＣＲ標的特異性のための対照として含めた。ＭＡＧＥ－Ａ４発現性Ａ３７５黒色腫細胞に対するＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲの細胞傷害活性を示す（ドナー２、２．５時間アッセイ）。これらのＴＣＲにおけるＭＡＧＥ－Ａ４標的は、ＭＡＧＥ－Ａ４（２８６～２９４）ペプチド（ＫＶＬＥＨＶＶＲＶ、配列番号６０９、「ＫＶＬＥ」）（図３Ａ）またはＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９）ペプチド（ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ、配列番号６１２、「ＧＶＹ」）（図３Ｂ）のいずれかであった。２つの異なるＨＬＡ－Ａ２制限ＭＡＧＥ－Ａ４由来ペプチド抗原に対してＴＣＲを発現する初代ヒトＴ細胞を、カルセインＡＭ色素放出アッセイにおいて、ＨＬＡ－Ａ２＊０１ＭＡＧＥ－Ａ４発現性Ａ３７５黒色腫細胞に対する細胞傷害活性について試験した。非形質導入（ＵＴＤ）Ｔ細胞を、ＴＣＲ標的特異性の対照として含めた。ＡＰ１－ＲＥ－ルシフェラーゼレポーター活性の活性化によって測定されたＴＣＲシグナル伝達を示す。ドナー（ｎ＝３）のインターフェロンγシグナルの平均＋／－標準誤差（ＳＥＭ）を示し、本開示のＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９）特異的ＴＣＲが、ＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９）ペプチドでパルス化されたＴ２細胞に対して特異的活性を表すことを示す。ドナー（ｎ＝３）のインターフェロンγシグナルの平均＋／－標準誤差（ＳＥＭ）を示し、本開示のＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９）特異的ＴＣＲが、ＨＬＡ－Ａ２およびＭＡＧＥ－Ａ４を発現する腫瘍細胞に対して特異的活性を表すことを示す。ドナー（ｎ＝３）のインターフェロンγシグナルの平均＋／－標準誤差（ＳＥＭ）を示し、本開示のＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９）特異的ＴＣＲが、ＨＬＡ－Ａ２およびＭＡＧＥ－Ａ４を発現する腫瘍細胞に対して特異的活性を表すことを示す。ドナー（ｎ＝３）のインターフェロンγシグナルの平均＋／－標準誤差（ＳＥＭ）を示し、本開示のＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９）特異的ＴＣＲが、低度または中度の内因性レベルのＭＡＧＥ－Ａ４だけ発現するＨＬＡ－Ａ２発現腫瘍細胞に対してさえ特異的活性を表すことを示す。

Ｉ．定義
本発明がより容易に理解され得るようにするため、特定の用語が最初に定義される。さらに、パラメータの値または値の範囲が列挙されるときはいつでも、列挙された値の中間の値および範囲も本発明の一部であることが意図されることに留意されたい。

以下の記載では、説明の目的のため、特定の番号、材料、および構成が、本発明の完全な理解を提供するために示される。しかしながら、本発明がこれらの特定の詳細なしで実施され得ることは当業者には明らかであろう。場合によっては、周知の特性が、本発明を曖昧にしないようにして、省略または簡略化され得る。さらに、本明細書における「一実施形態」または「実施形態」などの語句への言及は、実施形態に関連して説明される特定の特性、構造、または特徴が、本発明の少なくとも１つの実施形態に含まれることを意味する。本明細書の様々な箇所における「一実施形態において」などの語句の出現は、必ずしもすべてが同じ実施形態を指すものではない。

冠詞「ａ」および「ａｎ」は、本明細書では、冠詞の文法的目的語の１つまたは２つ以上（すなわち、少なくとも１つ）を指すために使用される。例として、「要素（ａｎｅｌｅｍｅｎｔ）」は、１つの要素または２つ以上の要素を意味する。

「含んでいる」または「含む」という用語は、本明細書では、本開示に不可欠である組成物、方法、およびそれらのそれぞれの構成要素を指して使用されるが、不可欠であるかが特定されていない要素を含めることができる。

「からなる」という用語は、本明細書に記載される組成物、方法、およびそれらのそれぞれの構成要素を指し、これらは、実施形態のその説明に列挙されていない任意の要素を除外する。

「Ｔ細胞受容体」（ＴＣＲ）という用語は、本明細書で使用される場合、可変結合ドメイン、定常ドメイン、膜貫通領域、および短い細胞質尾部を有する免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーを指し、例えば、Ｊａｎｅｗａｙｅｔａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ：ＴｈｅＩｍｍｕｎｅＳｙｓｔｅｍｉｎＨｅａｌｔｈａｎｄＤｉｓｅａｓｅ，３ｒｄＥｄ．，ＣｕｒｒｅｎｔＢｉｏｌｏｇｙＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐ．４：３３，１９９７を参照する）、ＭＨＣ受容体に結合した抗原ペプチドに特異的に結合することができる。ＴＣＲは細胞の表面上に認められ、概して、α鎖およびβ鎖（それぞれＴＣＲαおよびＴＣＲβとしても知られている）、またはγ鎖およびδ鎖（それぞれＴＣＲγおよびＴＣＲδとしても知られている）を有するヘテロ二量体から構成される。免疫グロブリンと同様に、ＴＣＲ鎖（例えば、α鎖、β鎖）の細胞外部分は、細胞膜に隣接する２つの免疫グロブリン領域である、可変領域（例えば、ＴＣＲ可変α領域またはＶαおよびＴＣＲ可変β領域またはＶβで、典型的にはＮ末端でのＫａｂａｔ番号付けに基づくアミノ酸１～１１６）、および１つの定常領域（例えば、ＴＣＲ定常ドメインαまたはＣαで、典型的にはＫａｂａｔに基づくアミノ酸１１７～２５９、ＴＣＲ定常ドメインβまたはＣβで、典型的にはＫａｂａｔに基づくアミノ酸１１７～２９５）を含む。また、免疫グロブリンと同様に、可変ドメインは、フレームワーク領域（ＦＲ）によって分離される相補的決定領域（ＣＤＲ）を含む。特定の実施形態において、ＴＣＲはＴ細胞（またはＴリンパ球）の表面に認められ、ＣＤ３複合体と会合する。本開示のＴＣＲの供給源は、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、または他の哺乳動物などの様々な動物種に由来し得る。好ましい実施形態において、本発明のＴＣＲの供給源は、ヒトアルファ鎖およびベータ鎖を含むＴＣＲを産生するように遺伝子操作されたマウスである（例えば、参照によりその全内容が本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１６／１６４４９２号を参照されたい）。

本明細書で使用される「可変領域」（アルファ鎖（Ｖα）の可変領域、ベータ鎖（Ｖβ）の可変領域）という用語は、ＴＣＲの抗原との結合に直接関与するアルファ鎖およびベータ鎖の各々を意味する。

アルファ鎖およびベータ鎖の「定常領域」は、ＴＣＲの抗原との結合に直接関与しないが、様々なエフェクター機能を示す。

本明細書で使用される「抗原」という用語は、免疫系にそれに対する抗体または特定細胞媒介性免疫応答を生じさせる任意の物質を意味する。疾患関連抗原は、免疫系にそれに対する抗体または特定細胞媒介性応答を生じさせる、任意の疾患に関連する任意の物質である。

「ＭＡＧＥ－Ａ４」、「ＭＡＧＥＡ４」、または「黒色腫関連抗原Ａ４」という用語は、多数のがんタイプで再発現される周知のがん精巣抗原（ＣＴＡ）を指す。

全長ＭＡＧＥ－Ａ４のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋで登録番号ＮＭ＿００１０１１５４８（ＤＮＡ配列：配列番号８７０、ＲＮＡ配列：配列番号６１０、アミノ酸配列：配列番号６１１）として提供される。「ＭＡＧＥ－Ａ４」という用語は、組換えＭＡＧＥ－Ａ４またはその断片を含む。本用語はまた、例えば、ヒスチジンタグ、マウスもしくはヒトＦｃ、またはＲＯＲ１などのシグナル配列に結合したＭＡＧＥ－Ａ４またはその断片も包含する。特定の実施形態において、本用語は、ＨＬＡ－Ａ２に関連するか、ＨＬＡ－Ａ２に連結されるか、またはＨＬＡ－Ａ２によって提示される、ＭＡＧＥ－Ａ４またはその断片を含む。本明細書で使用される場合、全長ＭＡＧＥ－Ａ４配列内の特定のＭＡＧＥ－Ａ４アミノ酸残基の番号付けは、配列番号６１１に関連する。

「ＨＬＡ」という用語は、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）系または複合体を指し、ヒトにおける主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）タンパク質をコードする遺伝子複合体である。これらの細胞表面タンパク質は、ヒトにおける免疫系の調節に関与している。ＭＨＣクラスＩ（Ａ、Ｂ、およびＣ）に対応するＨＬＡは、細胞の内部からペプチドを提示する。

「ＨＬＡ－Ａ」という用語は、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座によってコードされるヒト白血球抗原（ＨＬＡ）の群を指す。ＨＬＡ－Ａは、ヒトＭＨＣクラスＩ細胞表面受容体の３つの主要なタイプのうちの１つである。受容体はヘテロ二量体であり、重α鎖およびより小さいβ鎖から構成される。α鎖は、バリアントＨＬＡ－Ａ遺伝子によってコードされ、β鎖（β２－マイクログロブリン）は、インバリアントβ２マイクログロブリン分子である。

「ＨＬＡ－Ａ２」（「ＨＬＡ－Ａ２＊０１」とも呼ばれる）という用語は、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座における特定のクラスＩ主要組織適合複合体（ＭＨＣ）対立遺伝子群の１つであり、α鎖は、ＨＬＡ－Ａ＊０２遺伝子によってコードされ、β鎖は、β２－マイクログロブリンまたはＢ２Ｍ遺伝子座によってコードされる。

「と特異的に結合する」または「に特異的に結合する」などの用語は、ＴＣＲが、生理学的条件下で比較的安定である抗原と複合体を形成することを意味する。特異的結合は、少なくとも約１×１０^－８Ｍ以下の平衡解離定数を特徴とすることができる（例えば、より小さいＫＤは、より強い結合を意味する）。２つの分子が特異的に結合するかを決定するための方法は、当技術分野で周知であり、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴などが含まれる。本明細書に記載されるように、本発明のＴＣＲは、提示されるＨＬＡ－Ａ２提示がん精巣抗原黒色腫関連抗原Ａ４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチド、例えば、ＭＡＧＥ－Ａ４（例えば、配列番号６１１の全長ＭＡＧＥ－Ａ４配列）のアミノ酸残基２３０～２３９または２８６～２９４を含むペプチドに特異的に結合する。

「オフターゲットペプチド」という用語は、標的ペプチド（例えば、ＭＡＧＥ－Ａ４２３０～２３９ペプチドまたはＭＡＧＥ－Ａ４２８６～２９４ペプチド）と、１、２、３、４、５個、またはそれより多くのアミノ酸が異なるペプチドを指す。特定の実施形態において、本用語は、標的ペプチドよりも３個以下のアミノ酸で異なるペプチドを含む。例えば、９マーペプチドでは、１、２、または３個のアミノ酸が標的ペプチドと同一でない場合、それは「オフターゲット」ペプチドとみなされる。特定の実施形態において、アミノ酸同一性は、「類似度」（ＤｏＳ）の用語で表される。９マーペプチド内の６個以上のアミノ酸が同一である場合、ＤｏＳは６である。特定の実施形態において、ＤｏＳ≦６を有するペプチドは、「オフターゲット」ペプチドとみなされる。「オフターゲット」ペプチドという用語はまた、配列相同性に基づいて標的ペプチドに類似しており、ＨＬＡ－Ａ２に結合することが予測され、必須な正常組織で発現されるタンパク質に含まれるペプチドを指す。

「単離された」という用語は、自然の状態から人間の手によって変更された組成物、化合物、物質、または分子を指す。例えば、自然界に存在する組成物または物質は、元の環境から変化または取り出されている場合、あるいはそれらの両方の場合に単離される。例えば、生きている動物に天然に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは単離されないが、その天然状態の共存材料から分離された同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、本明細書で用いられる用語のように単離される。より具体的には、単離されたＴＣＲは、細胞から取り出されているＴＣＲ、例えば、精製されているＴＣＲを指すことができる。ＴＣＲはまた、単離された細胞、例えば、動物から単離されている細胞、または細胞培養物からの細胞によって発現され得る。この文脈において、単離された細胞は、その表面にＴＣＲを発現することができる（すなわち、細胞は、ＴＣＲを「提示する」ことができる）。

「組換え」という用語は、本明細書で使用されるとき、例えば、ＤＮＡスプライシングおよび遺伝子導入発現を含む、組換えＤＮＡ技術として当該技術分野で既知の技術もしくは方法によって作製されるか、発現されるか、単離されるか、または得られる、本発明のＴＣＲを指す。本用語は、非ヒト哺乳動物（遺伝子導入非ヒト哺乳動物、例えば、遺伝子導入マウスを含む）もしくは細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）発現系において発現されるＴＣＲ、または組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離されるＴＣＲを指す。

本明細書で使用される場合、「ポリヌクレオチド」および「核酸分子」という用語は、任意の長さのポリマー形態のヌクレオチドを指すために互換的に使用される。ポリヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、および／またはそれらの類似体を含み得る。ヌクレオチドは、任意の三次元構造を有し得、既知または未知である任意の機能を果たし得る。「ポリヌクレオチド」という用語は、例えば、一本鎖、二本鎖、および三重らせん分子、遺伝子または遺伝子断片、エクソン、イントロン、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、リボザイム、アンチセンス分子、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分岐ポリヌクレオチド、アプタマー、プラスミド、ベクター、任意の配列の単離されたＤＮＡ、任意の配列の単離されたＲＮＡ、核酸プローブ、ならびにプライマーを含む。核酸分子はまた、修飾核酸分子（例えば、修飾塩基、糖、および／またはヌクレオチド間リンカーを含む）も含み得る。

「ポリペプチド」という用語は、そのサイズに関係なく、好ましくは、２０種の天然アミノ酸のいずれかから本質的になる任意のポリマーを指すことを意味する。「タンパク質」という用語は、比較的大きなタンパク質に関連して多くの場合に使用され、「ペプチド」は、小さなポリペプチドに関連して多くの場合に使用されるが、これらの用語の使用は、本分野においてしばしば重複する。「ポリペプチド」という用語は、特に記載のない限り、一般にはタンパク質、ポリペプチド、およびペプチドを指す。一般に、本開示による有用なペプチドは、一般には、遠心分離またはＳＤＳ－ポリアクリルアミドゲル電気泳動などの標準的な分子サイズ分類技術によって判断されるとき、約０．１～１００ＫＤ以上または最大約１０００ＫＤ、好ましくは約０．１、０．２、０．５、１、２、５、１０、２０、３０、および５０ＫＤの間である。

「ベクター」という用語は、宿主細胞内で自律的に複製することができ、外来ＤＮＡを受け入れることができる核酸分子である。ベクターは、それ自体の複製起点と、外来ＤＮＡおよび抗生物質耐性をコードする遺伝子などの通常選択可能なマーカーの挿入のために使用することができる制限エンドヌクレアーゼのための１つ以上の独自の認識部位と、多くの場合、挿入されたＤＮＡの発現のための認識配列（例えば、プロモーター）と、を担持する。一般的なベクターには、プラスミドベクターおよびファージベクターが含まれる。

いくつかの実施形態において、本発明のＴＣＲは、リガンド、検出可能部分、あるいは治療用部分（「免疫コンジュゲート」）、例えば、細胞毒素、抗がん剤、またはＭＡＧＥ－Ａ４関連がんなどのＭＡＧＥ－Ａ４関連疾患もしくは障害を含む疾患もしくは状態を治療するために有用である任意の他の治療用部分と、コンジュゲートされ得る。

「表面プラズモン共鳴」という用語は、本明細書で使用される場合、例えばＢＩＡＣＯＲＥ（商標）システム（ＰｈａｒｍａｃｉａＢｉｏｓｅｎｓｏｒＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ，ＳｗｅｄｅｎおよびＰｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）を使用した、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度における変化の検出によって、リアルタイムの生体分子相互作用の分析を可能にする光学現象を指す。

「ＫＤ」という用語は、Ｋ_ＤまたはＫ_ｄとしても知られ、特定の生体分子とその結合パートナーとの平衡解離定数を指すことが意図される。ＫＤ測定は、例えば、抗原結合タンパク質－抗原相互作用におけるような、タンパク質－タンパク質相互作用を評価するために特に有用である。ＫＤの値が小さいほど、抗原結合タンパク質と抗原（例えば標的）との間の結合相互作用または親和性が大きい（または強い）。ＫＤの値が大きいほど、抗原結合タンパク質と抗原との間の結合相互作用または親和性が弱い。

「実質的な同一性」または「実質的に同一な」という用語は、核酸またはその断片を指す場合、別の核酸（またはその相補鎖）と、適切なヌクレオチド挿入または欠失で最適に整列されるとき、以下に考察されるように、配列同一性の任意の周知のアルゴリズムによって測定される場合に、ヌクレオチド塩基の少なくとも約９０％、より好ましくは少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％でヌクレオチド配列同一性があることを示す。参照核酸分子と実質的な同一性を有する核酸分子は、特定の場合では、参照核酸分子によってコードされるポリペプチドと同じまたは実質的に同じアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードすることができる。

配列同一性は、アルゴリズム、例えば、大域的アラインメントについてＮｅｅｄｌｅｍａｎＷｕｎｓｃｈアルゴリズム（ＮｅｅｄｌｅｍａｎａｎｄＷｕｎｓｃｈ１９７０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３－４５３）、または局所的アラインメントについてＳｍｉｔｈＷａｔｅｒｍａｎアルゴリズム（ＳｍｉｔｈａｎｄＷａｔｅｒｍａｎ１９８１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１４７：１９５－１９７）を使用して計算することができる。別の好ましいアルゴリズムは、２００２年にＤｕｆｒｅｓｎｅらによってＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ｖｏｌ．２０，ｐｐ．１２６９－７１）で報告され、ソフトウェアＧｅｎｅＰＡＳＴ（ＧＱＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）で使用されている。

ポリペプチドに適用される場合、「実質的な類似性」または「実質的に類似した」という用語は、２つのペプチド配列が、初期設定のギャップウェイト付けを使用したプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴなどによって最適に整列されるとき、少なくとも９０％の配列同一性、さらにより好ましくは少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を共有する。好ましくは、同一ではない残基位置は、保存的アミノ酸置換によって異なる。「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が、類似の化学的特性（例えば、電荷または疎水性）を備えた側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基によって置換されるものである。概して、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能的特性を実質的に変化させない。２つ以上のアミノ酸配列が保存的置換によって互いに異なる場合、類似性の割合または程度は、置換の保存的性質を補正するために上向きに調整され得る。この調整を行うための手段は、当業者に周知である。例えば、本明細書に参照により組み込まれる、Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９４）ＭｅｔｈｏｄｓＭｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４：３０７－３３１を参照されたい。類似の化学的特性を備えた側鎖を有するアミノ酸グループの例としては、１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシン、２）脂肪族－ヒドロキシル側鎖：セリンおよびトレオニン、３）アミド含有側鎖：アスパラギンおよびグルタミン、４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファン、５）塩基性側鎖：リジン、アルギニン、およびヒスチジン、６）酸性側鎖：アスパラギン酸およびグルタミン酸、ならびに７）含硫黄側鎖：システインおよびメチオニンが挙げられる。好ましい保存的アミノ酸置換グループは、バリン－ロイシン－イソロイシン、フェニルアラニン－チロシン、リジン－アルギニン、アラニン－バリン、グルタミン酸－アスパラギン酸、およびアスパラギン－グルタミンである。あるいは、保存的な置換は、本明細書に参照により組み込まれるＧｏｎｎｅｔら（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ２５６：１４４３４５で公表されているＰＡＭ２５０対数尤度マトリックスにおいて正の値を有する任意の変化である。「適度に保存的な」置換は、ＰＡＭ２５０対数尤度マトリックスにおいて負以外の値を有する任意の変化である。

ポリペプチドにおける配列類似性は、典型的には、配列分析ソフトウェアを使用して測定される。タンパク質解析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含む種々の置換、欠失、および他の改変に割り当てられた類似の測定値を使用して類似配列と一致させる。例えば、ＧＣＧソフトウェアでは、初期設定パラメータを使用して、異なる種の生物に由来する相同的ポリペプチド、または野生型タンパク質とその変異タンパク質との間の相同的ポリペプチドなどの、密接に関連するポリペプチド間の配列相同性または配列同一性を決定することができる。ＧＡＰおよびＢＥＳＴＦＩＴなどのプログラムが含まれる。例えば、ＧＣＧバージョン６．１を参照されたい。ポリペプチド配列はまた、ＧＣＧバージョン６．１におけるプログラムである、初期設定または推奨パラメータを用いたＦＡＳＴＡを使用して比較することもできる。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３）は、問い合わせ配列と検索配列との間の最善な重複の領域の整列およびパーセント配列同一性を提供する（Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００）上記）。配列はまた、ＢＬＯＳＵＭ６２マトリックスで、ギャップ開始ペナルティ１２およびギャップ伸長ペナルティ２を用いてアフィンギャップ検索を使用した、スミス－ウォーターマン相同性検索アルゴリズムを使用して比較することもできる。本発明の配列を、異なる生物に由来する多数の配列を含むデータベースと比較する場合の別の好ましいアルゴリズムは、初期設定パラメータを使用するコンピュータプログラムＢＬＡＳＴ、特にＢＬＡＳＴＰまたはＴＢＬＡＳＴＮである。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌｅｔａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０および（１９９７）ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．２５：３３８９－３４０２を参照されたく、それらの各々は、参照により本明細書に組み込まれる。

「患者由来ＴＣＲ」は、ＭＡＧＥ－Ａ４関連がんを有する対象における腫瘍のインビボでの退縮を媒介するＴリンパ球から単離された、ＭＡＧＥ－Ａ４反応性ＴＣＲのアルファ鎖およびベータ鎖を単離することによって生成されるＴＣＲである。

「親和性成熟したＴＣＲ」は、インビトロでの変異誘発および選択によって生成されるＴＣＲである。例えば、非標的化または標的化（例えば、オリゴヌクレオチド指向性）突然変異誘発を実施して、ＴＣＲ配列に変異を導入することができ、次いで、その後のＴＣＲを、例えば、ファージディスプレイの使用によって、標的に対する親和性についてスクリーニングすることができる。

「患者由来のＭＡＧＥ－Ａ４特異的ＴＣＲよりも強いかまたはそれに等しいシグナル対ノイズ比を有するＴ細胞応答を活性化する」または「親和性成熟したＭＡＧＥ－Ａ４特異的ＴＣＲよりも強いかまたはそれに等しいシグナル対ノイズ比を有するＴ細胞応答を活性化する」という用語は、例えば、発光バイオアッセイによって測定されるときに、すなわち、Ｔ細胞シグナル伝達の、増加、すなわち、約２倍以上か、増幅、すなわち、約２倍か、増強、すなわち、約２倍か、または生理学的活性のブースト、すなわち、約２倍を指すことを意味する。より大きなＴ細胞応答、またはより強いＴ細胞応答もしくは活性化シグナルへの言及が、交換可能に使用され得る。Ｔ細胞応答またはＴ細胞活性化の様々な測定およびアッセイは、当業者に周知である。

「治療有効量」という語句によって、投与されて所望の効果を生じる量が意味される。正確な量は、治療の目的に依存し、既知の技術を使用して当業者によって確認可能であろう（例えば、Ｌｌｏｙｄ（１９９９）ＴｈｅＡｒｔ，ＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＣｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇを参照されたい）。「有効量」という用語は、薬学的に有効な量または治療有効量などの文脈を包含することが意図される。例えば、特定の実施形態において、有効量は、有益な状態、有益な転帰、スクリーニングアッセイにおける機能的な活性、または臨床状態の改善を達成することができる。

本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、ＭＡＧＥ－Ａ４関連がん（例えば、ＭＡＧＥ－Ａ４陽性がん）などのＭＡＧＥ－Ａ４関連疾患または障害の改善、予防、および／または治療を必要とする動物、好ましくは哺乳動物を指す。本用語は、ＭＡＧＥ－Ａ４関連がんなどのＭＡＧＥ－Ａ４関連疾患または障害を有するか、または有するリスクがあるヒト対象を含む。

本発明で使用する場合、「抗がん剤」は、がんを治療または改善または阻害するために有用である任意の薬剤を意味し、細胞毒素、ならびに代謝拮抗剤、アルキル化剤、アントラサイクリン、抗生物質、有糸分裂阻害剤、プロカルバジン、ヒドロキシ尿素、アスパラギナーゼ、コルチコステロイド、シクロホスファミド、ミトタン（Ｏ，Ｐ’－（ＤＤＤ））、生物製剤（例えば、抗体およびインターフェロン）、および放射性薬剤などの薬剤が含まれるが、これらに限定されない。本発明で使用する場合、「細胞毒素または細胞傷害剤」は、化学療法剤も指し、細胞に有害である任意の薬剤を意味する。例としては、Ｔａｘｏｌ（登録商標）（パクリタキセル）、テモゾラミド、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、シスプラチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンビアスチン、コイチシン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシン、ならびにそれらの類似体または相同体が挙げられる。

「予防する」、「予防している」、「予防」、「予防的治療」などという用語は、障害または状態を有さないが、障害または状態を発症するリスクがあるか、または発症し易い対象において、障害または状態を発症する可能性を低下させることを意味する。予防などは、対象が特定の疾患または障害に今までに罹患していることから防止することを意味するものではない。予防は、複数回用量の投与を必要とし得る。予防は、すべての疾患症状が排除された対象における疾患の再発の予防、または再発寛解型疾患における再発の予防を含むことができる。

ＩＩ．ＭＡＧＥ－Ａ４Ｔ細胞（ＴＣＲ）およびＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲを含む組成物
Ｔ細胞は、他の免疫細胞型（多形核、好酸球、好塩基球、肥満細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞）とともに、免疫系の細胞成分を構成する細胞のサブグループである。生理的条件下では、Ｔ細胞は、免疫監視および外来抗原の排除において機能する。しかし、病理学的条件下では、Ｔ細胞が疾患の原因および伝播に大きな役割を果たすという説得力のある証拠がある。これらの障害では、中枢性または末梢性のいずれかのＴ細胞免疫寛容の破壊が、自己免疫疾患の原因における基本的なプロセスである。

Ｔ細胞は、主要組織適合複合体（ＭＨＣ、マウス）またはヒト白血球抗原（ＨＬＡ、ヒト）複合体に関連する抗原提示細胞の表面上の小さな抗原決定基でエピトープに結合する。Ｔ細胞は、Ｔ細胞の表面上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体を通してこれらのエピトープに結合する。Ｔ細胞受容体は、α（アルファ）およびβ（ベータ）鎖、またはγ（ガンマ）およびδ（デルタ）鎖の２種類の鎖からなるヘテロ二量体構造である。α鎖は、α遺伝子座内（ヒトまたはマウス染色体１４上）に位置する核酸配列によってコードされ、これはまた、δ遺伝子座全体も包含し、β鎖は、β遺伝子座内（マウス染色体６またはヒト染色体７上）に位置する核酸配列によってコードされる。Ｔ細胞の大部分はαβＴＣＲを有し、一方、わずかなＴ細胞がγδＴＣＲを有する。

Ｔ細胞受容体αおよびβポリペプチド（同様に、γおよびδポリペプチド）は、ジスルフィド結合を介して互いに連結される。ＴＣＲを構成する２つのポリペプチドの各々は、定常領域および可変領域、膜貫通ドメイン、ならびに細胞質尾部（膜貫通ドメインおよび細胞質尾部も定常領域の一部である）を含む細胞外ドメインを含む。ＴＣＲの可変領域は、その抗原特異性を決定し、免疫グロブリンと同様に、３つの相補的決定領域（ＣＤＲ）を含む。ＴＣＲは、体内のほとんどのＴ細胞で発現され、ＭＨＣ制限抗原の認識に関与することが知られている。ＴＣＲα鎖は、共有結合で連結されたＶαおよびＣα領域を含み、一方、β鎖は、Ｃβ領域に共有結合で連結されたＶβ領域を含む。ＶαおよびＶβ領域は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）（またはヒトにおけるＨＬＡ）との関連で抗原に結合することができるポケットまたは裂開を形成する。ＴＣＲは、絶妙な特異性を有する検出分子であり、抗体のように、非常に高い多様性を示す。

ＴＣＲ分子の一般構造、ならびに作製および使用の方法が、ペプチド：主要組織適合性複合体への結合を含めて開示されている。例えば、ＰＣＴ／ＵＳ９８／０４２７４、ＰＣＴ／ＵＳ９８／２０２６３、ＷＯ９９／６０１２０を参照されたい。

非ヒト動物（例えば、げっ歯類、例えば、マウスまたはラット）は、少なくとも１つのヒトＴＣＲ可変領域遺伝子セグメントによってコードされる可変ドメインを含むヒトまたはヒト化Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するように遺伝子操作することができ、例えば、全内容が参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ公開ＷＯ２０１６／１６４４９２に記載される。例えば、腫瘍および／またはウイルス抗原に対する完全にヒトの治療用ＴＣＲの産生を可能にする遺伝子改変マウスであるＶｅｌｏｃｉ－Ｔ（登録商標）マウス技術（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）を使用して、本発明のＴＣＲを産生することができる。当業者は、本明細書に記載のアッセイと併せて、標準的な突然変異誘発技術を通じて、変異したＴＣＲ配列を得て、特定の結合親和性および／または特異性についてそれらを試験することができる。当該技術分野において既知の有用な変異誘発技術には、限定されないが、デノボ遺伝子合成、オリゴヌクレオチド指定変異誘発、領域特異的変異誘発、リンカー走査変異誘発、およびＰＣＲによる部位指定変異誘発が含まれる（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）およびＡｕｓｕｂｅｌら（１９９９）を参照されたい）。

簡単に説明すると、一実施形態において、ＭＡＧＥ－Ａ４２３０～２３９ペプチドまたはＭＡＧＥ－Ａ４２８６～２９４ペプチドに対するＴＣＲを作成するための方法は、そのゲノム中に非再編成ヒトＴＣＲ可変遺伝子座を含む遺伝子操作された非ヒト動物などの非ヒト動物（例えば、げっ歯類、例えば、マウスまたはラット）を、ＭＡＧＥ－Ａ４２３０～２３９ペプチドまたはＭＡＧＥ－Ａ４２８６～２９４ペプチドで免疫することと、その動物にペプチドに対する免疫応答を開始させることと、その動物からペプチドに反応するＴ細胞を単離することと、Ｔ細胞によって発現されるヒトＴＣＲ可変領域の核酸配列を決定することと、ヒトＴＣＲ可変領域がヒトＴＣＲ定常領域に操作可能に連結されるように、ヒトＴＣＲ定常領域の核酸配列を含むヌクレオチド構築物にヒトＴＣＲ可変領域をクローニングすることと、ＭＡＧＥ－Ａ４２３０～２３９ペプチドまたはＭＡＧＥ－Ａ４２８６～２９４ペプチドにそれぞれ特異的なヒトＴ細胞受容体を構築物から発現させることと、を含み得る。一実施形態において、Ｔ細胞を単離するステップと、Ｔ細胞によって発現されるヒトＴＣＲ可変領域の核酸配列を決定するステップと、ヒトＴＣＲ定常領域の核酸配列を含むヌクレオチド構築物にヒトＴＣＲ可変領域をクローニングするステップと、ヒトＴ細胞受容体を発現させるステップと、は当業者に既知の標準技術を使用して実施される。

一実施形態において、関心対象の抗原に特異的なＴ細胞受容体をコードするヌクレオチド配列は、細胞で発現される。一実施形態において、ＴＣＲを発現する細胞は、ＣＨＯ、ＣＯＳ、２９３、ＨｅＬａ、ＰＥＲＣ．６（商標）細胞などから選択される。

バリアントＴＣＲコード配列の取得において、当業者は、ＴＣＲ由来タンパク質が、生物学的活性の損失または減少を伴わずに、特定のアミノ酸置換、付加、欠失、および翻訳後改変によって改変され得ることを認識するであろう。特に、保存的アミノ酸置換、すなわち、類似のサイズ、電荷、極性、および立体構造の別のアミノ酸での１つのアミノ酸の置換は、タンパク質機能を有意に変化させる可能性が低いことは周知である。タンパク質の構成要素である２０種の標準的アミノ酸は、４群の保存アミノ酸に大別することができ、非極性（疎水性）群は、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、およびバリンを含み、極性（非荷電、中性）群は、アスパラギン、システイン、グルタミン、グリシン、セリン、トレオニン、およびチロシンを含み、正に荷電した（塩基性）群は、アルギニン、ヒスチジン、およびリジンを含み、負に荷電した（酸性）群は、アスパラギン酸およびグルタミン酸を含む。タンパク質における同じ群内の１つのアミノ酸の別のアミノ酸での置換は、タンパク質の生物学的活性に悪影響を有する可能性が低い。

いくつかの実施形態において、本開示のＴＣＲは、表６のＣＤＲ配列（例えば、ＶαＣＤＲ３またはＶβＣＤＲ３などのＣＤＲ３配列）と比較して、１個以上の置換を有するＣＤＲ配列（例えば、ＶαＣＤＲ３またはＶβＣＤＲ３などのＣＤＲ３配列）を含むことができる。例えば、本開示のＴＣＲは、表６のＣＤＲ配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれより多くの置換を有するＣＤＲ配列を含むことができる。一般に、本発明のＴＣＲは、ＨＬＡ－Ａ２提示ＭＡＧＥ－Ａ４２３０～２３９ペプチドまたはＨＬＡ－Ａ２提示ＭＡＧＥ－Ａ４２８６～２９４ペプチドに結合することによって機能する。本明細書で使用される場合、ＨＬＡ提示ペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ａ２提示ペプチド）は、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）タンパク質、例えば、細胞の表面で発現されるＨＬＡタンパク質に結合されるペプチドを指すことができる。したがって、ＨＬＡ提示ペプチドに結合するＴＣＲは、ＨＬＡによって結合されるペプチドに結合し、任意選択的に、ＨＬＡ自体にも結合する。ＨＬＡとの相互作用は、特定のＨＬＡによって提示されるペプチドとの結合に対する特異性を付与することができる。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、単離されたＨＬＡ提示ペプチドに結合する。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、細胞の表面で提示されるＨＬＡペプチドに結合する。

本発明は、ＨＬＡ－Ａ２との関連で、ＭＡＧＥ－Ａ４２３０～２３９ペプチドまたはＭＡＧＥ－Ａ４２８６～２９４ペプチドと高い特異性で結合するＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲを含む。いくつかの実施形態において、ＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲは、ＨＬＡ－Ａ２の不存在下では、ＭＡＧＥ－Ａ４２３０～２３９ペプチドもしくはＭＡＧＥ－Ａ４２８６～２９４ペプチドに結合しないか、またはかかる結合は最小限である。さらに、いくつかの実施形態において、ＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲは、ＨＬＡ－Ａ２との関連でオフターゲットペプチドに結合しないか、またはかかる結合は最小限である。本明細書で使用されるとき、オフターゲットペプチドは、標的ペプチドと、１、２、３、４、５個、またはそれより多くのアミノ酸によって異なるペプチドを指すことができる。いくつかの実施形態において、結合特異性は、ａ）オンターゲット結合（例えば、ＨＬＡ－Ａ２提示ＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９）ペプチドまたはＨＬＡ－Ａ２提示ＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９）ペプチドに結合すること）を測定することと、ｂ）オフターゲット結合を測定することと、ｃ）その２つの間の差を、例えば、比率を計算することによって定量化することと、によって決定することができる。この比率は、例えば、ａ）およびｂ）で得られた値を除することによって計算することができる。オンターゲット結合およびオフターゲット結合の測定は、例えば、ペプチド／ＨＬＡ四量体試薬（例えば、ＭＡＧＥ－Ａ４／ＨＬＡ四量体試薬またはＭＡＧＥ－Ａ８／ＨＬＡ四量体試薬）への結合％を測定することによって、または当該技術分野で知られている他の技術によって達成することができる。いくつかの実施形態において、本開示のＴＣＲのオンターゲット結合／オフターゲット結合値（例えば、上記のａ）およびｂ）で得られる値を除することによって得られる値）は、５超、６超、７超、８超、９超、１０超、１１超、１２超、１３超、１４超、１５超、１６超、１７超、１８超、１９超、２０超、２１超、２２超、２３超、２４超、２５超、２６超、２７超、２８超、２９超、３０超、３５超、４０超、４５超、５０超、５５超、６０超、６５超、７０超、７５超、８０超、８５超、９０超、９５超、１００超、１１０超、１２０超、１３０超、１４０超、１５０超、１６０超、１７０超、１８０超、１９０超、２００超、２２５超、２５０超、２７５超、３００超、３２５超、３５０超、３７５超、４００超、４２５超、４５０超、４７５超、５００超、５５０超、６００超、６５０超、７００超、７５０超、８００超、８５０超、９００超、９５０超、１０００超、１１００超、１２００超、１３００超、１４００超、１５００超、１６００超、１７００超、１８００超、１９００超、または２０００超であることができる。いくつかの実施形態において、オンターゲット結合／オフターゲット結合値（例えば、上記のａ）およびｂ）で得られる値を除することによって得られる値）は、約５～約２０、約１０～約３０、約２０～約８０、約３０～約７０、約４０～約６０、約５０～約２５０、約１００～約２００、約１００～約１０００、約３００～約７００、約５００～約１５００、約８００～約１２００、約９００～約１１００、約８００～約１５００、約１０００～約１４００、または約１１００～約１３００であることができる。

一実施形態において、本発明は、ＨＬＡ－Ａ２提示ヒトＭＡＧＥ－Ａ４（２８６～２９４）ペプチドの立体構造エピトープまたはＨＬＡ－Ａ２提示ヒトＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９）ペプチドの立体構造エピトープに、特異的に結合する組換え抗原結合タンパク質（例えば、単離された抗原結合タンパク質）を提供し、抗原結合タンパク質は、（ａ）単量体ＨＬＡ－Ａ２：ＭＡＧＥ－Ａ４（２８６～２９４）ペプチドまたは単量体ＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９）ペプチドに、２５℃での表面プラズモン共鳴アッセイで測定されるときに、約２０ｎＭ未満の結合解離平衡定数（Ｋ_Ｄ）で結合する特性と、（ｂ）単量体ＨＬＡ－Ａ２：ＭＡＧＥ－Ａ４（２８６～２９４）ペプチドまたは単量体ＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９）ペプチドに、２５℃での表面プラズモン共鳴アッセイで測定されるときに、約２５ｎＭ未満の結合解離平衡定数（Ｋ_Ｄ）で結合する特性と、（ｃ）ＨＬＡ－Ａ２：ＭＡＧＥ－Ａ４（２８６～２９４）ペプチド発現細胞またはＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９）ペプチド発現細胞に、発光アッセイによって決定されるときに、約６ｎＭ未満のＥＣ_５０で結合し、予測されるオフターゲットペプチドを発現する細胞に結合しない特性と、（ｄ）ＨＬＡ－Ａ２：ＭＡＧＥ－Ａ４（２８６～２９４）ペプチド発現細胞またはＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９）ペプチド発現細胞に、発光アッセイによって決定されるときに、約１ｎＭ未満のＥＣ_５０で結合し、予測されるオフターゲットペプチドを発現する細胞に実質的に結合しない特性と、（ｅ）ＨＬＡ－Ａ２：ＭＡＧＥ－Ａ４（２８６～２９４）ペプチド発現細胞またはＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９）ペプチド発現細胞と、フローサイトメトリーアッセイによって決定されるときに、約３０ｎＭ未満のＥＣ_５０で結合する特性と、（ｆ）ＨＬＡ－Ａ２：ＭＡＧＥ－Ａ４（２８６～２９４）ペプチド発現細胞またはＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９）ペプチド発現細胞に、フローサイトメトリーアッセイによって決定されるときに、約７５ｎＭ未満のＥＣ_５０で結合する特性と、（ｇ）カルセインＡＭ色素放出アッセイによって決定されるときに、用量依存的な手段でがん細胞（例えば、黒色腫細胞）の死滅を媒介する特性と、（ｈ）立体構造エピトープが配列番号６１１または配列番号６１２のうちの１つ以上のアミノ酸を含む特性と、からなる群から選択される特性を有する。

いくつかの実施形態において、本開示のＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲは、インビトロアッセイによって測定されるときに、ＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９）またはＭＡＧＥ－Ａ４（２８６～２９４）に対する特異的活性または親和性を有する。例えば、ＨＬＡを発現する細胞（Ｔ２細胞など）は、ＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９）もしくはＭＡＧＥ－Ａ４（２８６～２９４）ポリペプチド、またはオフターゲットポリペプチドでパルス化することができ、それによって、ＨＬＡに結合するポリペプチドを提示するように細胞を誘導する。代替的に、または対照としてオフターゲットポリペプチドを使用することに加えて、オフターゲットＨＬＡ（関心対象のＴＣＲによって認識されるＨＬＡ以外のＨＬＡ）を使用することができる。例えば、オフターゲットＨＬＡを使用して、ＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドを提示し、ＨＬＡ－Ａ２提示ＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドとの結合の特異性を試験することができる。加えて、対照は、ＭＡＧＥ－Ａ４も標的ＨＬＡ（例えば、ＨＬＡ－Ａ２）も発現しない細胞株であることができる。細胞は、関心対象のＴＣＲを発現するＴ細胞集団と共培養することができ、活性は、細胞によって産生されるサイトカイン（インターフェロンγなど）の量の関数として測定される。特定の実施形態において、アッセイは、エフェクター細胞：標的細胞比が１：１（１×１０^５個のエフェクター細胞／９６ウェル）でのＴＣＲ発現Ｔ細胞集団と１０^－１０Ｍのペプチド負荷Ｔ２細胞とのインビトロでの共培養、および共培養の２４時間後のインターフェロンγ測定（例えば、ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ（登録商標）ＳｅｃｔｏｒＩｍａｇｅｒによる）を含むことができる。特定の実施形態において、アッセイは、エフェクター細胞：標的細胞比が５：１（２．５×１０^５個のエフェクター細胞：５×１０^４個の標的細胞）のでＴＣＲ発現Ｔ細胞集団とエフェクター細胞とのインビトロでの共培養、および共培養の２４時間後のインターフェロンγ測定（例えば、ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ（登録商標）ＳｅｃｔｏｒＩｍａｇｅｒによる）を含むことができる。特定の実施形態において、ＴＣＲは、内因性遺伝子座、例えば、内因性ＴＲＡＣ遺伝子座（ＫＯ／ＫＩ）を置き換え、内因性遺伝子座、例えば、ＴＲＢＣ遺伝子座（ＫＯ）を、例えば、ＣＲＩＳＰＲ、ＴＡＬＥＮ、ジンクフィンガー、または他の標的化破壊系を使用して破壊することによって、初代Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、またはそれらの任意の組み合わせ）で発現される。かかる細胞を含むインビトロアッセイは、カルセインＡＭ色素放出アッセイにおいて、ＨＬＡ－Ａ２＊０１ＭＡＧＥ－Ａ４発現性Ａ３７５黒色腫細胞に対する細胞傷害性活性を含むことができる。

検出されるサイトカインの増加量は、活性の指標として用いることができる。関心対象のＴＣＲのその標的ペプチドに対する活性もしくは特異性は、対照（オフターゲット）と比較して、または関心対象のＴＣＲのそのオンターゲットＨＬＡ結合標的ペプチドに対する活性もしくは特異性は、オフターゲットＨＬＡ結合標的ペプチドと比較して、２倍以上、３倍以上、４倍以上、５倍以上、６倍以上、７倍以上、８倍以上、９倍以上、１０倍以上、１５倍以上、２０倍以上、３０倍以上、４０倍以上、５０倍以上、１００倍以上、２００倍以上、３００倍以上、４００倍以上、５００倍以上、６００倍以上、７００倍以上、８００倍以上、９００倍以上、１，０００倍以上、１，５００倍以上、２，０００倍以上、２，５００倍以上、３，０００倍以上、４，０００倍以上、５，０００倍以上、１０，０００倍以上、２０，０００倍以上、３０，０００倍以上、４０，０００倍以上、５０，０００倍以上、６０，０００倍以上、７０，０００倍以上、８０，０００倍以上、９０，０００倍以上、もしくは１００，０００倍以上であることができる。

特定の実施形態において、本開示のＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲは、それを必要とする対象に予防的に投与されるとき、腫瘍の増殖を阻害するか、またはがんの進行を遅延させるのに有用であり、対象の生存を増加させ得る。例えば、本発明のＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲの投与は、原発性腫瘍の縮小をもたらし得、転移または二次腫瘍の発生を防止し得る。特定の実施形態において、本発明のＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲは、それを必要とする対象に治療的に投与されるとき、腫瘍の増殖を阻害するのに有用であり、対象の生存を増加させ得る。例えば、治療有効量の本発明のＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲの対象への投与は、対象における確立された腫瘍の縮小および消失をもたらし得る。

一実施形態において、本発明は、ＨＬＡ－Ａ２提示ＭＡＧＥ－Ａ４２８６～２９４ペプチドに特異的に結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ、または単離された細胞で発現されるＴＣＲ）を提供し、抗原結合タンパク質は、（ｉ）相補的決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むアルファ鎖可変ドメインを含み、ＣＤＲ３領域が、式Ｉ：Ｎ_１－Ｎ_２－Ｎ_３－Ｎ_４－Ｎ_５－Ｎ_６－Ｎ_７－Ｎ_８－Ｎ_９－Ｎ_１０－Ｎ_１１－Ｎ_１２－Ｎ_１３－Ｎ_１４－Ｎ_１５（式Ｉ）のアミノ酸配列を含み、式中、Ｎ_１は、Ａｌａ、Ｉｌｅ、またはＧｌｙであり、Ｎ_２は、Ｖａｌであるが、存在しても存在しなくてもよく、Ｎ_３は、Ｔｙｒ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｇｌｕ、Ｍｅｔ、Ａｌａ、またはＰｈｅであり、Ｎ_４は、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、またはＭｅｔであり、Ｎ_５は、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、Ｍｅｔ、Ｇｌｙ、またはＬｙｓであるが、存在しても存在しなくてもよく、Ｎ_６は、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｐｒｏ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、またはＴｈｒであるが、存在しても存在しなくてもよく、Ｎ_７は、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｔｒｐ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｉｌｅ、Ｇｌｎ、またはＬｅｕであるが、存在しても存在しなくてもよく、Ｎ_８は、Ｇｌｙ、Ｔｒｐ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ｔｙｒ、またはＡｌａであり、Ｎ_９は、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｌｙｓ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、またはＡｒｇであり、Ｎ_１０は、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、Ａｓｐ、またはＳｅｒであるが、存在しても存在しなくてもよく、Ｎ_１１は、Ｐｈｅ、Ａｓｎ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、またはＧｌｕであるが、存在しても存在しなくてもよく、Ｎ_１２は、Ｌｙｓ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、またはＡｓｐであるが、存在しても存在しなくてもよく、Ｎ_１３は、ＬｙｓまたはＧｌｙであるが、存在しても存在しなくてもよく、Ｎ_１４は、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、またはＴｙｒであるが、存在しても存在しなくてもよく、Ｎ_１５は、Ｔｙｒ、Ｇｌｎ、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、またはＡｒｇである特徴、（ｉｉ）相補的決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むベータ鎖可変ドメインを含むベータ鎖可変ドメインを含み、ＣＤＲ３領域が、式ＩＩ：Ｎ_１－Ｎ_２－Ｎ_３－Ｎ_４－Ｎ_５－Ｎ_６－Ｎ_７－Ｎ_８－Ｎ_９－Ｎ_１０－Ｎ_１１－Ｎ_１２－Ｎ_１３－Ｎ_１４－Ｎ_１５－Ｎ_１６－Ｎ_１７－Ｎ_１８（式ＩＩ）のアミノ酸配列を含み、式中、Ｎ_１は、ＡｌａまたはＳｅｒであり、Ｎ_２は、Ａｌａ、Ｓｅｒ、またはＴｈｒであり、Ｎ_３は、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、またはＴｒｐであり、Ｎ_４は、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ａｓｐ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓであり、Ｎ_５は、ＧｌｙまたはＡｓｐであるが、存在しても存在しなくてもよく、Ｎ_６は、ＰｈｅまたはＡｒｇであるが、存在しても存在しなくてもよく、Ｎ_７は、Ｔｒｐ、Ｐｈｅ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、またはＶａｌであるが、存在しても存在しなくてもよく、Ｎ_８は、Ｐｒｏ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｔｙｒ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、またはＧｌｙであるが、存在しても存在しなくてもよく、Ｎ_９は、Ａｓｐであるが、存在しても存在しなくてもよく、Ｎ_１０は、Ａｒｇであるが、存在しても存在しなくてもよく、Ｎ_１１は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、またはＴｈｒであるが、存在しても存在しなくてもよく、Ｎ_１２は、Ｓｅｒ、Ｔｒｐ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ａｒｇ、Ｍｅｔ、Ｔｙｒ、またはＧｌｎであり、Ｎ_１３は、Ｇｌｙであるが、存在しても存在しなくてもよく、Ｎ_１４は、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、またはＨｉｓであるが、存在しても存在しなくてもよく、Ｎ_１５は、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｔｙｒ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、またはＰｒｏであるが、存在しても存在しなくてもよく、Ｎ_１６は、Ｇｌｕ、Ｐｒｏ、Ｌｙｓ、Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、またはＧｌｎであるが、存在しても存在しなくてもよく、Ｎ_１７は、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｔｙｒ、またはＧｌｎであるが、存在しても存在しなくてもよく、Ｎ_１８は、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ、Ｔｙｒ、またはＴｈｒである特徴、（ｉｉｉ）表２に示されるＣＤＲ１アミノ酸配列のうちのいずれか１つを含むアルファ鎖可変ドメインのＣＤＲ１、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、表２に示されるＣＤＲ２アミノ酸配列のうちのいずれか１つを独立して含むアルファ鎖可変ドメインのＣＤＲ２、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、を含む特徴、（ｉｖ）表２に示されるＣＤＲ１アミノ酸配列のうちのいずれか１つを含むベータ鎖可変ドメインのＣＤＲ１、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、表２に示されるＣＤＲ２アミノ酸配列のうちのいずれか１つを独立して含むベータ鎖可変ドメインのＣＤＲ２、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に類似の配列と、を含む特徴、（ｖ）表４に列挙されるアルファ鎖可変ドメイン配列のうちのいずれか１つ内に含まれるアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、表４に列挙されるベータ鎖可変ドメイン配列のうちのいずれか１つ内に含まれるベータ鎖可変ドメインＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、を含む特徴、（ｖｉ）表４に列挙されるアルファ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または約１００％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインを含む特徴、（ｖｉｉ）表４に列挙されるベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つのアミノ酸配列の全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または約１００％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインを含む特徴、（ｖｉｉｉ）（ａ）表４に列挙されるアルファ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または約１００％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインと、（ｂ）表４に列挙されるベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または約１００％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインと、を含む特徴、（ｉｘ）（ａ）配列番号１、１７、３３、４９、６５、８１、９７、１１３、１２９、１４５、１６１、１７７、１９３、２０９、２２５、２４１、２５７、２７３、２８９、３０５、３２１、３３７、３５３、３６９、３８５、４０１、４１７、４３３、４４９、４６５、４８１、４９７、５１３、５２９、５４５、５６１、５７７、および５９３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ１ドメイン、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、（ｂ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、３８６、４０２、４１８、４３４、４５０、４６６、４８２、４９８、５１４、５３０、５４６、５６２、５７８、および５９４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ２ドメイン、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、（ｃ）配列番号３、１９、３５、５１、６７、８３、９９、１１５、１３１、１４７、１６３、１７９、１９５、２１１、２２７、２４３、２５９、２７５、２９１、３０７、３２３、３３９、３５５、３７１、３８７、４０３、４１９、４３５、４５１、４６７、４８３、４９９、５１５、５３１、５４７、５６３、５７９、および５９５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ３ドメイン、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、（ｄ）配列番号９、２５、４１、５７、７３、８９、１０５、１２１、１３７、１５３、１６９、１８５、２０１、２１７、２３３、２４９、２６５、２８１、２９７、３１３、３２９、３４５、３６１、３７７、３９３、４０９、４２５、４４１、４５７、４７３、４８９、５０５、５２１、５３７、５５３、５６９、５８５、および６０１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインＣＤＲ１、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、（ｅ）配列番号１０、２６、４２、５８，７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、３９４、４１０、４２６、４４２、４５８、４７４、４９０、５０６、５２２、５３８、５５４、５７０、５８６、および６０２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインＣＤＲ２、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、（ｆ）配列番号１１、２７、４３、５９、７５、９１、１０７、１２３、１３９、１５５、１７１、１８７、２０３、２１９、２３５、２５１、２６７、２８３、２９９、３１

５、３３１、３４７、３６３、３７９、３９５、４１１、４２７、４４３、４５９、４７５、４９１、５０７、５２３、５３９、５５５、５７１、５８７、および６０３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインＣＤＲ３、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、を含む特徴、（ｘ）配列番号７／１５、２３／３１、３９／４７、５５／６３、７１／７９、８７／９５、１０３／１１１、１１９／１２７、１３５／１４３、１５１／１５９、１６７／１７５、１８３／１９１、１９９／２０７、２１５／２２３、２３１／２３９、２４７／２５５、２６３／２７１、２７９／２８７、２９５／３０３、３１１／３１９、３２７／３３５、３４３／３５１、３５９／３６７、３７５／３８３、３９１／３９９、４０７／４１５、４２３／４３１、４３９／４４７、４５５／４６３、４７１／４７９、４８７／４９５、５０３／５１１、５１９／５２７、５３５／５４３、５５１／５５９、５６７／５７５、５８３／５９１、５９９／６０７からなる群から選択されるアルファ鎖可変ドメイン／ベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列対、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む特徴、（ｘｉ）配列番号８７／３１、２３／９５、２３１／６０７、２３１／２２３、２３１／５９１、２３１／２５５、２３１／２７１、２３１／７９、２３１／４７、２３１／３９９、５９９／２３９、５９９／２２３、５９９／５９１、５９９／２５５、５９９／２７１、５９９／７９、５９９／４７、５９９／３９９、２１５／２３９、２１５／６０７、２１５／５９１、２１５／２５５、２１５／２７１、２１５／７９、２１５／４７、２１５／３９９、５８３／２３９、５８３／６０７、５８３／２２３、５８３／２５５、５８３／２７１、５８３／７９、５８３／４７、５８３／３９９、２４７／２３９、２４７／６０７、２４７／２２３、２４７／５９１、２４７／２７１、２４７／７９、２４７／４７、２４７／３９９、２６３／２３９、２６３／６０７、２６３／２２３、２６３／５９１、２６３／２５５、２６３／７９、２６３／４７、２６３／３９９、７１／２３９、７１／６０７、７１／２２３、７１／５９１、７１／２５５、７１／２７１、７１／４７、７１／３９９、３９／２３９、３９／６０７、３９／２２３、３９／５９１、３９／２５５、３９／２７１、３９／７９、３９／３９９、３９１／２３９、３９１／６０７、３９１／２２３、３９１／５９１、３９１／２５５、３９１／２７１、３９１／７９、３９１／４７、４３９／１２７、４３９／３１９、４３９／２８７、４３９／１５、４３９／１１１、４３９／３８３、４３９／１９１、４３９／５１１、４３９／５２７、４３９／５５９、４３９／２０７、１１９／４４７、１１９／３１９、１１９／２８７、１１９／１５、１１９／１１１、１１９／３８３、１１９／１９１、１１９／５１１、１１９／５２７、１１９／５５９、１１９／２０７、３１１／４４７、３１１／１２７、３１１／２８７、３１１／１５、３１１／１１１、３１１／３８３、３１１／１９１、３１１／５１１、３１１／５２７、３１１／５５９、３１１／２０７、２７９／４４７、２７９／１２７、２７９／３１９、２７９／１５、２７９／１１１、２７９／３８３、２７９／１９１、２７９／５１１、２７９／５２７、２７９／５５９、２７９／２０７、７／４４７、７／１２７、７／３１９、７／２８７、７／１１１、７／３８３、７／１９１、７／５１１、７／５２７、７／５５９、７／２０７、１０３／４４７、１０３／１２７、１０３／３１９、１０３／２８７、１０３／１５、１０３／３８３、１０３／１９１、１０３／５１１、１０３／５２７、１０３／５５９、１０３／２０７、３７５／４４７、３７５／１２７、３７５／３１９、３７５／２８７、３７５／１５、３７５／１１１、３７５／１９１、３７５／５１１、３７５／５２７、３７５／５５９、３７５／２０７、１８３／４４７、１８３／１２７、１８３／３１９、１８３／２８７、１８３／１５、１８３／１１１、１８３／３８３、１８３／５１１、１８３／５２７、１８３／５５９、１８３／２０７、５０３／４４７、５０３／１２７、５０３／３１９、５０３／２８７、５０３／１５、５０３／１１１、５０３／３８３、５０３／１９１、５０３／５２７、５０３／５５９、５０３／２０７、５１９／４４７、５１９／１２７、５１９／３１９、５１９／２８７、５１９／１５、５１９／１１１、５１９／３８３、５１９／１９１、５１９／５１１、５１０／５５９、５１９／２０７、５５１／４４７、５５１／１２７、５５１／３１９、５５１／２８７、５５１／１５、５５１／１１１、５５１／３８３、５５１／１９１、５５１／５１１、５５１／５２７、５５１／２０７、１９９／４４７、１９９／１２７、１９９／３１９、１９９／２８７、１９９／１５、１９９／１１１、１９９／３８３、１９９／１９１、１９９／５１１、１９９／５２７、および１９９／５５９からなる群から選択されるアルファ鎖可変ドメイン／ベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列対、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む特徴、ならびに／あるいは（ｘｉｉ）予測されるオフターゲットペプチドを発現する細胞に結合しない特徴、のうちの１つ以上を示す。

一実施形態において、本発明は、ＨＬＡ－Ａ２提示ＭＡＧＥ－Ａ４２３０～２３９ペプチドに特異的に結合するＴＣＲ（例えば、単離されたＴＣＲ、または単離された細胞で発現されるＴＣＲ）を提供し、抗原結合タンパク質は、（ｉ）表６に示されるＣＤＲ１アミノ酸配列のうちのいずれか１つを含むアルファ鎖可変ドメインのＣＤＲ１、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、表６に示されるＣＤＲ２アミノ酸配列のうちのいずれか１つを独立して含むアルファ鎖可変ドメインのＣＤＲ２、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、を含む特徴、（ｉｖ）表６に示されるＣＤＲ１アミノ酸配列のうちのいずれか１つを含むベータ鎖可変ドメインのＣＤＲ１、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、表６に示されるＣＤＲ２アミノ酸配列のうちのいずれか１つを独立して含むベータ鎖可変ドメインのＣＤＲ２、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、を含む特徴、（ｖ）表８に列挙されるアルファ鎖可変ドメイン配列のうちのいずれか１つ内に含まれるアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性；を有するその実質的に類似の配列と、表８に列挙されるベータ鎖可変ドメイン配列のうちのいずれか１つ内に含まれるベータ鎖可変ドメインＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、を含む特徴、（ｖｉ）表８に列挙されるアルファ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または約１００％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインを含む特徴、（ｖｉｉ）表８に列挙されるベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または約１００％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインを含む特徴、（ｖｉｉｉ）（ａ）表８に列挙されるアルファ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または約１００％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインと、（ｂ）表８に列挙されるベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または約１００％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインと、を含む特徴、（ｉｘ）（ａ）配列番号６１４、６３０、６４６、６６２、６７８、６９４、７１０、７２６、７４２、７５８、７７４、７９０、８０６、８２２、８３８、および８５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ１ドメイン、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、（ｂ）配列番号６１５、６３１、６４７、６６３、６７９、６９５、７１１、７２７、７４３、７５９、７７５、７９１、８０７、８２３、８３９、および８５５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ２ドメイン、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、（ｃ）配列番号６１６、６３２、６４８、６６４、６８０、６９６、７１２、７２８、７４４、７６０、７７６、７９２、８０８、８２４、８４０、および８５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ３ドメイン、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、（ｄ）配列番号６２２、６３８、６５４、６７０、６８６、７０２、７１８、７３４、７５０、７６６、７８２、７９８、８１４、８３０、８４６、および８６２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインＣＤＲ１、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、（ｅ）配列番号６２３、６３９、６５５、６７１、６８７、７０３、７１９、７３５、７５１、７６７、７８３、７９９、８１５、８３１、８４７、および８６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインＣＤＲ２、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、（ｆ）配列番号６２４、６４０、６５６、６７２、６８８、７０４、７２０、７３６、７５２、７６８、７８４、８００、８１６、８３２、８４８、および８６４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインＣＤＲ３、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、を含む特徴、（ｘ）配列番号６２０／６２８、６３６／６４４、６５２／６６０、６６８／６７６、６８４／６９２、７００／７０８、７１６／７２４、７３２／７４０、７４８／７５６、７６４／７７２、７８０／７８８、７９６／８０４、８１２／８２０、８２８／８３６、８４４／８５２、および８６０／８６８からなる群から選択されるアルファ鎖可変ドメイン／ベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列対、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む特徴、（ｘｉ）配列番号６２０／６２８、６２０／６４４、６２０／６６０、６２０／６７６、６２０／６９２、６２０／７０８、６２０／７２４、６２０／７４０、６２０／７５６、６２０／７７２、６２０／７８８、６２０／８０４、６２０／８２０、６２０／８３６、６２０／８５２、６２０／８６８、６３６／６２８、６３６／６４４、６３６／６６０、６３６／６７６、６３６／６９２、６３６／７０８、６３６／７２４、６３６／７４０、６３６／７５６、６３６／７７２、６３６／７８８、６３６／８０４、６３６／８２０、６３６／８３６、６３６／８５２、６３６／８６８、６５２／６２８、６５２／６４４、６５２／６６０、６５２／６７６、６５２／６９２、６５２／７０８、６５２／７２４、６５２／７４０、６５２／７５６、６５２／７７２、６５２／７８８、６５２／８０４、６５２／８２０、６５２／８３６、６５２／８５２、６５２／８６８、６６８／６２８、６６８／６４４、６６８／６６０、６６８／６７６、６６８／６９２、６６８／７０８、６６８／７２４、６６８／７４０、６６８／７５６、６６８／７７２、６６８／７８８、６６８／８０４、６６８／８２０、６６８／８３６、６６８／８５２、６６８／８６８、６８４／６２８、６８４／６４４、６８４／６６０、６８４／６７６、６８４／６９２、６８４／７０８、６８４／７２４、６８４／７４０、６８４／７５６、６８４／７７２、６８４／７８８、６８４／８０４、６８４／８２０、６８４／８３６、６８４／８５２、６８４／８６８、７００／６２８、７００／６４４、７００／６６０、７００／６７６、７００／６９２、７００／７０８、７００／７２４、７００／７４０、７００／７５６、７００／７７２、７００／７８８、７００／８０４、７００／８２０、７００／８３６、７００／８５２、７００／８６８、７１６／６２８、７１６／６４４、７１６／６６０、７１６／／６７６、７１６／６９２、７１６／７０８、７１６／７２４、７１６／７４０、７１６／７５６、７１６／７７２、７１６／７８８、７１６／８０４、７１６／８２０、７１６／８３６、７１６／８５２、７１６／８６８、７３２／６２８、７３２／６４４、７３２／６６０、７３２／６７６、７３２／６９２、７３２／７０８、７３２／７２４、７３２／７４０、７３２／７５６、７３２／７７２、７３２／７８８、７３２／８０４、７３２／８２０、７３２／８３６、７３２／８５２、７３２／８６８、７４８／６２８、７４８／６４４、７４８／６６０、７４８／６７６、７４８／６９２、７４８／７０８、７４８／７２４、７４８／７４０、７４８／７５６、７４８／７７２、７４８／７８８、７４８／８０４、７４８／８２０、７４８／８３６、７４８／８５２、７４８／８６８、７６４／６２８、７６４／６４４、７６４／６６０、７６４／６７６、７６４／６９２、７６４／７０８、７６４／７２４、７６４／７４０、７６４／７５６、７６４／７７２、７６４／７８８、７６４／８０４、７６４／８２０、７６４／８３６、７６４／８５２、７６４／８６８、７８０／６２８、７８０／６４４、７８０／６６０、７８０／６７６、７８０／６９２、７８０／７０８、７８０／７２４、７８０／７４０、７８０／７５６、７８０／７７２、７８０／７８８、７８０／８０４、７８０／８２０、７８０／８３６、７８０／８５２、７８０／８６８、７９６／６２８、７９６／６４４、７９６／６６０、７９６／６７６、７９６／６９２、７９６／７０８、７９６／７２４、７９６／７４０、７９６／７５６、７９６／７７２、７９６／７８８、７９６／８０４、７９６／８２０、７９６／８３６、７９６／８５２、７９６／８６８、８１２／６２８、８１２／６４４、８１２／６６０、８１２／６７６、８１２／６９２、８１２／７０８、８１２／７２４、８１２／７４０、８１２／７５６、８１２／７７２、８１２／７８８、８１２／８０４、８１２／８２０、８１２／８３６、８１２／８５２、８１２／８６８、８２８／６２８、８２８／６４４、８２８／６６０、８２８／６７６、８２８／６９２、８２８／７０８、８２８／７２４、８２８／７４０、８２８／７５６、８２８／７７２、８２８／７８８、８２８／８０４、８２８／８２０、８２８／８３６、８２８／８５２、８２８／８６８、８４４／６２８、８４４／６４４、８４４／６６０、８４４／６７６、８４４／６９２、８４４／７０８、８４４／７２４、８４４／７４０、８４４／７５６、８４４／７７２、８４４／７８８、８４４／８０４、８４４／８２０、８４４／８３６、８４４／８５２、８４４／８６８、８６０／６２８、８６０／６４４、８６０／６６０、８６０／６７６、８６０／６９２、８６０／７０８、８６０／７２４、８６０／７４０、８６０／７５６、８６０／７７２、８６０／７８８、８６０／８０４、８６０／８２０、８６０／

８３６、８６０／８５２、および８６０／８６８からなる群から選択されるアルファ鎖可変ドメイン／ベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列対、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む特徴、ならびに／あるいは（ｘｉｉ）予測されるオフターゲットペプチドを発現する細胞に結合しない特徴、のうちの１つ以上を示す。

本発明のＴＣＲは、上記の生物学的特徴のうちの１つ以上、またはそれらの任意の組み合わせを有し得る。本発明の抗原結合タンパク質の他の生物学的特徴は、本明細書の実用的な実施例を含む本開示の概説から当業者に明らかであろう。

特定の実施形態において、本明細書に記載のＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲをコードするポリヌクレオチドは、ベクターに挿入される。本明細書で使用される「ベクター」という用語は、タンパク質をコードするポリヌクレオチドが、そのタンパク質の発現および／またはポリヌクレオチドのクローニングをもたらすように、共有結合によって挿入され得るビヒクルを指す。かかるベクターは、「発現ベクター」とも称され得る。単離されたポリヌクレオチドは、当技術分野で知られている任意の好適な方法を使用してベクターに挿入され得、例えば、限定されないが、ベクターは、適切な制限酵素を使用して消化され得、次いで、マッチング制限末端を有する単離されたポリヌクレオチドと連結され得る。発現ベクターは、細胞内で転写することができる遺伝子生成物の少なくとも一部をコードする異種または改変核酸配列を組み込んで発現する能力を有する。ほとんどの場合、ＲＮＡ分子は次いでタンパク質に翻訳される。発現ベクターは、様々な制御配列を含むことができ、これらは、特定の宿主生物における操作可能に連結されたコード配列の転写あるいは翻訳に必要な核酸配列を指す。転写および翻訳を統御する制御配列に加えて、ベクターおよび発現ベクターは、さらに他の機能も果たす核酸配列を含み得、それらは以下で考察される。発現ベクターは、追加の要素を含み得、例えば、発現ベクターは、２つの複製システムを有し得、したがって、２つの生物、例えば、発現のためのヒト細胞、ならびにクローニングおよび増幅のための原核宿主に、それが維持されることを可能にする。

発現ベクターは、そのそれぞれの宿主細胞における効率的な遺伝子転写および翻訳のために、ＣＭＶ、ＰＧＫ、およびＥＦ１αプロモーターなどのプロモーター配列、リボソーム認識および結合ＴＡＴＡボックス、ならびに３’ＵＴＲＡＡＵＡＡＡ転写終結配列などの必要な５’上流および３’下流調節エレメントを有し得る。他の好適なプロモーターには、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）早期プロモーター、マウス乳房腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）、ＨＩＶＬＴＲプロモーター、ＭｏＭｕＬＶプロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、ＥＢＶ前早期プロモーター、およびラウス肉腫ウイルスプロモーターの構成的プロモーターが含まれる。ヒト遺伝子プロモーターも使用することができ、アクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、ヘモグロビンプロモーター、およびクレアチンキナーゼプロモーターが含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、誘導性プロモーターは、キメラ抗原受容体を発現するベクターの一部としても企図される。これは、関心対象のポリヌクレオチド配列の発現をオンにするか、または発現をオフにすることができる分子スイッチを提供する。誘導性プロモーターの例には、メタロチオニンプロモーター、グルココルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーター、またはテトラサイクリンプロモーターが含まれるが、これらに限定されない。

発現ベクターは、発現されるＴＣＲに組み込まれる６×ヒスチジン（配列番号８７１）、ｃ－Ｍｙｃ、およびＦＬＡＧタグなどの追加の配列を有し得る。したがって、発現ベクターは、５’および３’非翻訳調節配列を含むように操作され得、これらは時に、発現ベクターに担持される関心対象の核酸の効率的な転写を促進または増強することができるエンハンサー配列、プロモーター領域、および／またはターミネーター配列として機能することができる。発現ベクターはまた、特定の細胞型、細胞位置、もしくは組織型における複製および／または発現機能性（例えば、転写および翻訳）のために操作され得る。発現ベクターは、宿主または受容細胞におけるベクターの維持のために選択可能マーカーを含み得る。

ベクターの例は、プラスミド、自律的複製配列、および転位因子である。追加の例示的なベクターには、限定されないが、プラスミド、ファージミド、コスミド、人工染色体である酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）など、ラムダファージまたはＭ１３ファージなどのバクテリオファージ、および動物ウイルスが含まれる。ベクターとして有用な動物ウイルスのカテゴリーの例には、限定されないが、レトロウイルス（レンチウイルスを含む）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス）、ポックスウイルス、バキュロウイルス、パピローマウイルス、およびパポバウイルス（例えば、ＳＶ４０）が含まれる。発現ベクターの例は、哺乳動物細胞における発現のためのＬｅｎｔｉ－Ｘ（商標）バイシストロニック発現系（Ｎｅｏ）ベクター（Ｃｌｏｎｔｒｃｈ）、ｐＣｌｎｅｏベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ）、哺乳動物細胞におけるレンチウイルス媒介性遺伝子導入および発現のためのｐＬｅｎｔｉ４／Ｖ５－ＤＥＳＴ（商標）、ｐＬｅｎｔｉ６／Ｖ５－ＤＥＳＴ（商標）、およびｐＬｅｎｔｉ６．２Ｎ５－ＧＷ／ｌａｃＺ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）である。本明細書に開示されるＴＣＲのコード配列は、哺乳動物細胞におけるキメラタンパク質の発現のために、かかる発現ベクターに連結することができる。

特定の実施形態において、本発明のＴＣＲをコードする核酸は、ウイルスベクターで提供される。ウイルスベクターは、レトロウイルス、レンチウイルス、または泡沫状ウイルスに由来するものであることができる。本明細書で使用される場合、「ウイルスベクター」という用語は、ウイルス起源の少なくとも１つの要素を含み、ウイルスベクター粒子にパッケージ化される能力を有する核酸ベクター構築物を指す。ウイルスベクターは、非必須ウイルス遺伝子の代わりに、本明細書に記載される様々なタンパク質のコード配列を含むことができる。ベクターおよび／または粒子は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、もしくは他の核酸を、インビトロもしくはインビボのいずれかで細胞に移入する目的のために利用することができる。ウイルスベクターの多数の形態が当技術分野で知られている。

特定の実施形態において、本明細書に記載のＴＣＲのコード配列を含むウイルスベクターは、レトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターである。「レトロウイルスベクター」という用語は、主にレトロウイルスに由来する構造的および機能的遺伝子要素を含むベクターを指す。「レンチウイルスベクター」という用語は、主にレンチウイルスに由来する、ＬＴＲの外側の構造的および機能的遺伝子要素を含むベクターを指す。

本明細書で使用するためのレトロウイルスベクターは、任意の既知のレトロウイルス（例えば、モロニーマウス肉腫ウイルス（ＭｏＭＳＶ）、ハーベイマウス肉腫ウイルス（ＨａＭｕＳＶ）、マウス乳房腫瘍ウイルス（ＭｕＭＴＶ）、テナガザル白血病ウイルス（ＧａＬＶ）、ネコ白血病ウイルス（ＦＬＶ）、スプマウイルス、フレンド、マウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）、およびラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）などのｃ型レトロウイルス）に由来し得る。本発明の「レトロウイルス」にはまた、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、ＨＴＬＶ－１およびＨＴＬＶ－２、ならびにヒト免疫不全ウイルス、ＨＩＶ－１、ＨＩＶ－２、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、ウマ免疫不全ウイルス（ＥＩＶ）、および他のクラスのレトロウイルスなどのレトロウイルス科のレンチウイルスも含まれる。

本明細書で使用するためのレンチウイルスベクターは、徐々に発症する疾患を引き起こすレトロウイルスのグループ（または属）であるレンチウイルスに由来するベクターを指す。このグループに含まれるウイルスには、ＨＩＶ（ＨＩＶ１型およびＨＩＶ２型を含むヒト免疫不全ウイルス）、ビスナ・マエディ、ヤギ関節炎－脳炎ウイルス、ウマ伝染性貧血ウイルス、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）、およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）が含まれる。組換えレンチウイルスの調製は、ＤｕｌｌらおよびＺｕｆｆｅｒｅｙら（Ｄｕｌｌｅｔａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，１９９８；７２：８４６３－８４７１およびＺｕｆｆｅｒｅｙｅｔａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．１９９８；７２：９８７３－９８８０）による方法を使用して達成することができる。

本発明における使用のためのレトロウイルスベクター（すなわち、レンチウイルスおよび非レンチウイルスの両方）は、本明細書に記載の指示および適応で所望のＤＮＡ配列を組み合わせることによって、標準的なクローニング技術を使用して生成することができる（ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ｅｔａｌ．（ｅｄｓ．）ＧｒｅｅｎｅＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＡｓｓｏｃｉａｔｅｓ，（１９８９），Ｓｅｃｔｉｏｎｓ９．１０－９．１４および他の標準的な検査室マニュアル、Ｅｇｌｉｔｉｓ，ｅｔａｌ．（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ２３０：１３９５－１３９８、ＤａｎｏｓａｎｄＭｕｌｌｉｇａｎ（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：６４６０－６４６４、Ｗｉｌｓｏｎｅｔａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：３０１４－３０１８、Ａｒｍｅｎｔａｎｏｅｔａｌ．（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８７：６１４１－６１４５、Ｈｕｂｅｒｅｔａｌ．（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８８：８０３９－８０４３、Ｆｅｒｒｙｅｔａｌ．（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８８：８３７７－８３８１、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙｅｔａｌ．（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ２５４：１８０２－１８０５、ｖａｎＢｅｕｓｅｃｈｅｍｅｔａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９：７６４０－７６４４、Ｋａｙｅｔａｌ．（１９９２）ＨｕｍａｎＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ３：６４１－６４７、Ｄａｉｅｔａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９：１０８９２－１０８９５、Ｈｗｕｅｔａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ１５０：４１０４－４１１５、米国特許第４，８６８，１１６号、米国特許第４，９８０，２８６号、ＰＣＴ出願ＷＯ８９／０７１３６、ＰＣＴ出願ＷＯ８９／０２４６８、ＰＣＴ出願ＷＯ８９／０５３４５、およびＰＣＴ出願ＷＯ９２／０７５７３）。

ベクターを生成する際に使用するためのレトロウイルス（すなわち、レンチウイルスおよび非レンチウイルスの両方）配列を得るために好適な供給源には、例えば、ＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍｄを含む市販の供給源から入手可能なゲノムＲＮＡおよびｃＤＮＡが含まれる。配列はまた、化学的に合成することもできる。

ＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲの発現では、ベクターを宿主細胞に導入して、宿主細胞内でポリペプチドの発現を可能にし得る。発現ベクターは、発現を制御するための様々な要素を含み得、限定されないが、プロモーター配列、転写開始配列、エンハンサー配列、選択可能マーカー、およびシグナル配列が含まれる。これらの要素は、上記のように、当業者によって適切に選択され得る。例えば、プロモーター配列は、ベクターにおけるポリヌクレオチドの転写を促進するために選択され得る。好適なプロモーター配列には、限定されないが、Ｔ７プロモーター、Ｔ３プロモーター、ＳＰ６プロモーター、βアクチンプロモーター、ＥＦ１ａプロモーター、ＣＭＶプロモーター、およびＳＶ４０プロモーターが含まれる。エンハンサー配列は、ポリヌクレオチドの転写を増強するために選択され得る。選択可能マーカーは、ベクターが挿入された宿主細胞を、挿入されていないものから選択することを可能にし得、例えば、選択可能マーカーは、抗生物質耐性を付与する遺伝子であり得る。シグナル配列は、発現されたポリペプチドが、宿主細胞の外側に輸送されることを可能するために選択され得る。

ポリヌクレオチドのクローニングでは、ベクターが宿主細胞（単離された宿主細胞）に導入されて、ベクター自体の複製を可能にし、それによって、そこに含まれるポリヌクレオチドのコピーを増幅し得る。クローニングベクターは、一般に、限定されないが、複製起点、プロモーター配列、転写開始配列、エンハンサー配列、および選択可能マーカーを含み得る。これらの要素は、当業者によって適切に選択され得る。例えば、複製起点は、宿主細胞におけるベクターの自律的複製を促進するように選択され得る。

特定の実施形態において、本開示は、本明細書に提供されるベクターを含む単離された宿主細胞を提供する。ベクターを含む宿主細胞は、ベクターに含まれるポリヌクレオチドの発現またはクローニングにおいて有用であり得る。好適な宿主細胞には、限定されないが、原核細胞、真菌細胞、酵母細胞、または哺乳類細胞などの高等真核細胞が含まれ得る。この目的のために好適な原核細胞には、限定されないが、グラム陰性またはグラム陽性生物、例えば、大腸菌属、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、エンテロバクター、エルウィニア、クレブシエラ、プロテウス、サルモネラ、例えばＳａｌｍｏｎｅｌｌａｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、セラチア、例えばＳｅｒｒａｔｉａｍａｒｃｅｓｃａｎｓ、およびシゲラなどの腸内細菌、ならびにＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓおよびＢ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓなどの桿菌、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａなどの緑膿菌、およびストレプトマイシスが含まれる。

本発明のＴＣＲは、当該技術分野で知られているトランスフェクションおよび／または形質導入技術を使用して宿主細胞に導入される。本明細書で使用される場合、「トランスフェクション」および「形質導入」という用語は、外因性核酸配列が宿主細胞に導入されるプロセスを指す。核酸は、宿主細胞ＤＮＡに組み込まれ得るか、または染色体外で維持され得る。核酸は、一時的に維持され得るか、または、安定的な導入であり得る。トランスフェクションは、当該技術分野で既知の様々な手段によって達成され得、リン酸カルシウム－ＤＮＡ共沈殿、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介トランスフェクション、ポリブレン媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、リポソーム融合、リポフェクション、プロトプラスト融合、レトロウイルス感染、および遺伝子銃が含まれるが、これらに限定されない。形質導入は、トランスフェクションよりもむしろウイルス感染の手段によって、ウイルスベクターまたはレトロウイルスベクターを使用した遺伝子の送達を指す。特定の実施形態において、レトロウイルスベクターは、細胞と接触する前に、ベクターをビリオンにパッケージングすることによって形質導入される。例えば、レトロウイルスベクターによって担持される本発明のＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲをコードする核酸は、感染およびプロウイルス組み込みを通じて細胞に形質導入することができる。

本明細書で使用される場合、「遺伝子操作された」または「遺伝子改変された」という用語は、細胞内の全遺伝子材料へのＤＮＡまたはＲＮＡの形態での余分な遺伝子材料の付加を指す。「遺伝子改変細胞」、「改変細胞」、および「再指示細胞」という用語は、互換的に使用される。

特に、本発明のＴＣＲは、免疫エフェクター細胞に導入されて発現され、それによってそれらの特異性を、関心対象の標的抗原、例えば、ＨＬＡ－Ａ２提示ＭＡＧＥ－Ａ４ペプチド、例えば、ＭＡＧＥ－Ａ４のアミノ酸残基２３０～２３９または２８６～２９４に対して再指示させる。

本発明は、本明細書に記載のＴＣＲを発現する免疫エフェクター細胞を作成するための方法を提供する。一実施形態において、本方法は、免疫エフェクター細胞、例えば、ＭＡＧＥ－Ａ４関連疾患または障害を有する対象などの対象から単離された免疫エフェクター細胞を、トランスフェクトまたは形質導入することを含み、それによって免疫エフェクター細胞は、本明細書に記載の１つ以上のＴＣＲを発現する。特定の実施形態において、免疫エフェクター細胞は、個体から単離され、さらにインビトロでの操作を伴わずに遺伝子改変される。次いで、かかる細胞は、個体に直接再投与することができる。さらなる実施形態において、免疫エフェクター細胞は、最初にインビトロで増殖するように活性化および刺激され、その後にＴＣＲを発現するように遺伝子改変される。この点に関して、免疫エフェクター細胞は、遺伝子改変される（すなわち、本明細書に記載のＴＣＲを発現するように形質導入またはトランスフェクションされる）前または後に培養され得る。

本明細書に記載の免疫エフェクター細胞のインビトロでの操作または遺伝子改変の前に、細胞源は対象から得ることができる。特に、本明細書に記載のＴＣＲで使用するための免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞を含む。

Ｔ細胞は、多数の供給源から得ることができ、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺流出物、感染部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織、および腫瘍が含まれる。特定の実施形態において、Ｔ細胞は、ＦＩＣＯＬＬ分離などの当業者に知られている任意の数の技法を使用して、対象から収集される血液の単位から得ることができる。一実施形態において、個体の循環血液からの細胞は、アフェレーシスによって得られる。アフェレーシス生成物は、典型的には、Ｔ細胞を含むリンパ球、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球、赤血球、および血小板を含有する。一実施形態において、アフェレーシスによって収集された細胞は、洗浄して血漿画分を除去し、その後の処理のために細胞を適切な緩衝液または培地中に配置し得る。本発明の一実施形態において、細胞は、ＰＢＳで洗浄される。代替の実施形態において、洗浄溶液は、カルシウムを欠き、マグネシウムを欠き得、またはすべてではないが多くの二価カチオンを欠き得る。当業者によって理解されるように、洗浄ステップは、半自動フロースルー遠心分離機を使用するなど、当業者に既知の方法によって達成され得る。洗浄後、細胞は、緩衝液の有無にかかわらず、様々な生体適合性緩衝液または他の生理食塩溶液に再懸濁され得る。特定の実施形態において、アフェレーシス試料の望ましくない成分は、細胞を直接再懸濁した培地中で除去され得る。

特定の実施形態において、Ｔ細胞は、赤血球を溶解し、単球を枯渇させることによって、例えば、ＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配を通した遠心分離によって、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から単離される。ＣＤ２８＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、およびＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞などのＴ細胞の特定の亜集団は、陽性または陰性選択技術によってさらに単離することができる。例えば、陰性選択によるＴ細胞集団の豊富化は、陰性選択された細胞に固有の表面マーカーに対する抗体の組み合わせによって達成することができる。本明細書で使用するための１つの方法は、陰性磁気免疫付着またはフローサイトメトリーを介した細胞選別および／または選択であり、陰性選択された細胞に存在する細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体のカクテルを使用する。例えば、陰性選択によってＣＤ４＋細胞を豊富化するために、モノクローナル抗体カクテルは、典型的には、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ－ＤＲ、およびＣＤ８に対する抗体を含む。フローサイトメトリーおよび細胞選別もまた、本発明で使用する関心対象の細胞集団を単離するために使用され得る。

ＰＢＭＣは、本明細書に記載される方法を使用して、ＴＣＲによる遺伝子改変のために直接使用され得る。特定の実施形態において、ＰＢＭＣの単離後、Ｔリンパ球はさらに単離され、特定の実施形態において、細胞傷害性およびヘルパーＴリンパ球の両方を、遺伝子改変および／または増殖の前もしくは後のいずれかで、ナイーブ、メモリー、およびエフェクターＴ細胞亜集団に選別することができる。

Ｔ細胞などの免疫エフェクター細胞は、既知の方法を使用した単離後に遺伝子改変することができるか、または免疫エフェクター細胞は、遺伝子改変される前にインビトロで活性化および増殖（または前駆細胞の場合に分化）することができる。別の実施形態において、Ｔ細胞などの免疫エフェクター細胞は、本明細書に記載のキメラ抗原受容体で遺伝子改変され（例えば、ＴＣＲをコードする核酸を含むウイルスベクターで形質導入される）、次いで、インビトロで活性化されて増殖される。Ｔ細胞を活性化および増殖するための方法は、当該技術分野で知られており、例えば、米国特許第６，９０５，８７４号、米国特許第６，８６７，０４１号、米国特許第６，７９７，５１４号、ＷＯ２０１２／０７９０００、米国特許出願公開第２０１６／０１７５３５８号に記載されている。

本発明は、ＭＡＧＥ－Ａ４関連疾患または障害、例えば、がんの治療のために改変免疫エフェクター細胞の集団を提供し、改変免疫エフェクター細胞は、本明細書に開示されるＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲを含む。

本明細書に記載されるように調製されるＴＣＲ発現免疫エフェクター細胞は、本開示に基づいて当業者には明らかであろう既知の技術またはその変形に従って、養子免疫療法のための方法および組成物において利用することができる。例えば、Ｇｒｕｅｎｂｅｒｇらによる米国特許出願公開第２００３／０１７０２３８号を参照し、またＲｏｓｅｎｂｅｒｇによる米国特許第４，６９０，９１５号も参照されたい。

ＩＩＩ．医薬組成物
本発明は、本発明のＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲ、または本発明のＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲを含む免疫エフェクター細胞を含む、治療用組成物を提供する。本発明による治療用組成物は、好適な担体と、賦形剤と、改善された移送、送達、耐性などをもたらすために製剤に組み込まれる他の薬剤と、ともに投与される。多くの適切な製剤は、すべての製薬化学者に知られている処方集であるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡに認めることができる。これらの製剤には、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、ベシクル含有脂質（カチオン性またはアニオン性）（ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）など）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油および油中水エマルション、エマルションカーボワックス（種々の分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、ならびにカーボワックス含有半固体混合物が含まれる。Ｐｏｗｅｌｌｅｔａｌ．”Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍｏｆｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓｆｏｒｐａｒｅｎｔｅｒａｌｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ”ＰＤＡ（１９９８）ＪＰｈａｒｍＳｃｉＴｅｃｈｎｏｌ５２：２３８－３１１も参照されたい。

状態の重症度に応じて、治療の頻度および期間を調整することができる。

特定の実施形態において、初回用量の後に、初回用量とほぼ同じかまたは少ない量で、本発明のＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲまたは本発明のＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲを含む免疫エフェクター細胞の２回目または複数回のその後の用量の投与が続き得る。

特定の状況において、医薬組成物は、徐放システムで送達することができる。一実施形態において、ポンプが使用され得る。

注入可能な調製物は、静脈内、皮下、皮内、頭蓋内、腹腔内、および筋肉内の注射、点滴注入などのための投与形態を含み得る。本明細書に記載のＴＣＲ、医薬組成物、および細胞は、非経口投与を介して投与することができる。本開示の調製物は、公然と知られている方法によって調製され得る。例えば、調製物は、例えば、注射用に従来使用されている滅菌水性媒体または油性媒体中に上記の抗原結合タンパク質またはその塩を溶解、懸濁、または乳化させることによって調製され得る。注入のための水性媒体として、例えば、生理食塩水、グルコース含有等張液、および他の補助剤などがあり、これらは、アルコール（例えば、エタノール）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ－５０（水素化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加物）］などの適切な可溶化剤と組み合わせて使用され得る。油性媒体として、例えば、ゴマ油、ダイズ油などが使用され、ベンジル安息香酸、ベンジルアルコールなどの可溶化剤と組み合わせて使用され得る。このように調製される注射液は、好ましくは適切なアンプルに充填される。

いくつかの実施形態において、ＴＣＲ発現免疫エフェクター細胞は、最初にそれらをその培地から採取し、次いで細胞を、治療有効量で、投与に適した培地および容器システム（「薬学的に許容される」担体）中で洗浄および濃縮することによって製剤化される。好適な注入媒体は、任意の等張媒体製剤、典型的には生理食塩水、ＮｏｒｍｏｓｏｌＲ（Ａｂｂｏｔｔ）、またはＰｌａｓｍａ－ＬｙｔｅＡ（Ｂａｘｔｅｒ）であり得るが、水中の５％デキストロースまたは乳酸リンゲル液も利用することができる。注入媒体は、ヒト血清アルブミンを補充することができる。

組成物中の治療有効細胞数は、典型的には、細胞１０^２個超で最大１０^６個であり、細胞１０^８個または１０^９個を含み、細胞１０^１０個超であり得る。細胞数は、組成物が意図される最終的な使用、およびそこに含まれる細胞型に依存する。

細胞は、療法を受ける患者に対して自己または異種であり得る。所望される場合、治療はまた、免疫応答の誘導を増強するために、本明細書に記載されるマイトジェン（例えば、ＰＨＡ）もしくはリンホカイン、サイトカイン、および／またはケモカイン（例えば、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１８、およびＴＮＦ－β、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－４、ＩＬ－１３、Ｆｌｔ３－Ｌ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ１αなど）の投与を含み得る。

本発明のＴＣＲ発現免疫エフェクター細胞集団は、単独で、あるいは希釈剤および／またはＩＬ－２もしくは他のサイトカインまたは細胞集団などの他の成分と組み合わせた医薬組成物として投与され得る。簡単に説明すると、本発明の医薬組成物は、本明細書に記載のＴ細胞などのＴＣＲ発現免疫エフェクター細胞集団を、１つ以上の薬学的または生理学的に許容される担体、希釈剤、もしくは賦形剤と組み合わせて含み得る。かかる組成物は、中性緩衝化生理食塩水、リン酸緩衝化生理食塩水などの緩衝液、グルコース、マンノース、スクロースもしくはデキストラン、マンニトールなどの炭水化物、タンパク質、ポリペプチドまたはグリシンなどのアミノ酸、抗酸化剤、ＥＤＴＡまたはグルタチオンなどのキレート剤、アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）、および保存剤を含み得る。本発明の組成物は、好ましくは、静脈内投与のために製剤化される。

ＩＶ．ＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲまたはＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲを含む免疫エフェクター細胞の治療的使用
本明細書に記載の方法、または当該技術分野で既知の他の方法を使用して、本明細書に記載のＴ細胞を発現するＴＣＲを投与することによって対象で誘導される抗腫瘍免疫応答は、感染細胞を殺傷することができる細胞傷害性Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、およびヘルパーＴ細胞応答によって媒介される細胞免疫応答を含み得る。Ｂ細胞を活性化し、したがって抗体産生をもたらすことができるヘルパーＴ細胞によって主に媒介される体液性免疫応答も誘導され得る。様々な技術が本発明の組成物によって誘導される免疫応答のタイプを分析するために使用され得、それらは当該技術分野において十分に説明されており、例えば、ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｅｄｉｔｅｄｂｙ：ＪｏｈｎＥ．Ｃｏｌｉｇａｎ，ＡｄａＭ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，ＤａｖｉｄＨ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，ＥｔｈａｎＭ．Ｓｈｅｖａｃｈ，ＷａｒｒｅｎＳｔｒｏｂｅｒ（２００１）ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ，Ｎ．Ｙ．が挙げられる。

そのため、本発明のＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲは、とりわけ、ＭＡＧＥ－Ａ４に関連するかまたはそれによって媒介される任意の疾患または障害の治療、予防、および／または改善のために有用である。例えば、本発明は、ＭＡＧＥ－Ａ４関連がん（例えば、ＭＡＧＥ－Ａ４陽性がん）などのＭＡＧＥ－Ａ４関連疾患または障害を治療するための方法（腫瘍成長阻害）であって、かかる治療を必要とする患者に、本明細書に記載されるＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲ（またはＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲもしくはＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲを含む複数の細胞を含む医薬組成物）を投与することによって治療する方法、およびＭＡＧＥ－Ａ４関連がんの治療に使用するためのＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲ（またはＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲを含む医薬組成物）を提供する。本発明の抗原結合タンパク質は、ＭＡＧＥ－Ａ４関連がんなどの疾患または障害もしくは状態の治療、予防、および／または改善のため、ならびに／あるいはかかる疾患、障害、または状態に関連する少なくとも１つの症状の改善するために有用である。本明細書に記載される治療方法の文脈において、ＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲ（または医薬組成物もしくは複数の細胞）は、単剤療法として（すなわち、唯一の治療剤として）または１つ以上の追加の治療剤（それらの例は本明細書の他の場所に記載される）と組み合わせて投与され得る。

したがって、本発明は、ＭＡＧＥ－Ａ４関連疾患または障害、例えば、ＭＡＧＥ－Ａ４関連がんを有すると診断されたか、もしくは有することが疑われるか、またはそれらを発症するリスクがある個体を治療するための方法を提供し、本方法は、個体に、治療有効量の本明細書に記載のＴＣＲ発現免疫エフェクター細胞を投与することを含む。

一実施形態において、本発明は、ＭＡＧＥ－Ａ４陽性がんを有すると診断された対象を治療する方法を提供し、本方法は、ＭＡＧＥ－Ａ４陽性がんを有すると診断された対象から免疫エフェクター細胞を取り出すことと、本発明のＴＣＲをコードする核酸を含むベクターを用いて当該免疫エフェクター細胞を遺伝子改変することと、それによって改変免疫エフェクター細胞集団を産生することと、改変免疫エフェクター細胞集団を同じ対象に投与することと、を含む。一実施形態において、免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞を含む。

本明細書に記載の細胞組成物を投与する方法は、生体外遺伝子改変免疫エフェクター細胞の再導入をもたらすのに有効である任意の方法を含み、それらの細胞は、対象において本発明のＴＣＲを直接発現するか、または対象への導入時に成熟免疫エフェクター細胞に分化する免疫エフェクター細胞の遺伝子改変前駆細胞の再導入でＴＣＲを発現するか、のいずれかである。１つの方法は、本発明による核酸構築物で末梢血Ｔ細胞を生体外で形質導入し、形質導入された細胞を対象に戻すことを含む。

本発明のいくつかの実施形態において、本明細書に記載の組成物は、原発性または再発性がんに罹患する対象を治療するために有用であり、限定されないが、ＭＡＧＥ－Ａ４関連がんを含み、例えば、ＭＡＧＥ－Ａ４関連がんは、脂肪肉腫、神経芽細胞腫、骨髄腫、黒色腫、転移性黒色腫、滑膜肉腫、膀胱がん、食道がん、食道扁平上皮がん、肝細胞がん、頭頸部がん、非小細胞肺がん、卵巣がん、卵巣上皮がん、前立腺がん、乳がん、星状細胞腫瘍、多形性膠芽腫、未分化星状細胞腫、脳腫瘍、卵管がん、原発性腹腔がん、進行性固形腫瘍、軟組織肉腫、肉腫、骨髄異形成症候群、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、転移性固形腫瘍、結腸がん、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈｃａｎｃｅｒ）、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ）、横紋筋肉腫、粘液様円形細胞脂肪肉腫、または再発性非小細胞肺がんである。一実施形態において、ＭＡＧＥ－Ａ４関連がんは、卵巣がん、黒色腫、非小細胞肺がん、肝細胞がん、結腸直腸がん、食道扁平上皮がん、食道腺がん、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈｃａｎｃｅｒ）、膀胱がん、頭頸部がん、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ）、滑膜肉腫、または粘液様円形細胞脂肪肉腫である。

ＴＣＲは、ＭＡＧＥ－Ａ４関連がんの早期段階または後期段階症状を治療するために使用され得る。一実施形態において、本発明のＴＣＲは、進行性または転移性がんを治療するために使用され得る。ＴＣＲは、腫瘍増殖を低減するか、または阻害するか、または縮小するのに有用である。特定の実施形態において、本発明のＴＣＲによる治療は、対象における腫瘍の４０％超の退縮、５０％超の退縮、６０％超の退縮、７０％超の退縮、８０％超の退縮、または９０％超の退縮をもたらす。特定の実施形態において、ＴＣＲは、腫瘍の再発を予防するために使用され得る。特定の実施形態において、ＴＣＲは、ＭＡＧＥ－Ａ４関連がんを有する対象における無増悪生存期間または全生存期間を延長するのに有用である。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、ＭＡＧＥ－Ａ４関連がんに罹患している患者における長期生存を維持しながら、化学療法または放射線療法に起因する毒性を低減するのに有用である。

本発明の１つ以上のＴＣＲは、疾患または障害のうちの１つ以上の症状もしくは状態の重症度を緩和もしくは予防もしくは低減するために投与され得る。

本発明の１つ以上のＴＣＲを、ＭＡＧＥ－Ａ４関連がんなど、ＭＡＧＥ－Ａ４関連疾患または障害などの疾患または障害を発症するリスクがある患者に予防的に使用することもまた、本明細書で企図される。

本発明のさらなる実施形態において、本ＴＣＲは、ＭＡＧＥ－Ａ４関連がんなど、ＭＡＧＥ－Ａ４関連疾患または障害に罹患している患者を治療するための医薬組成物の調製のために使用される。本発明の別の実施形態において、本ＴＣＲは、ＭＡＧＥ－Ａ４関連がんの治療のために有用な当業者に既知の任意の他の薬剤または任意の他の療法との補助療法として使用される。

併用療法は、本発明のＴＣＲを含む免疫エフェクター細胞などの本発明のＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲ、または本発明の医薬組成物、および本発明のＴＣＲと有利に組み合わされ得る任意の追加の治療剤を含み得る。本発明のＴＣＲは、ＭＡＧＥ－Ａ４陽性がん、例えば、脂肪肉腫、神経芽細胞腫、骨髄腫、黒色腫、転移性黒色腫、滑膜肉腫、膀胱がん、食道がん、食道扁平上皮がん、肝細胞がん、頭頸部がん、非小細胞肺がん、卵巣がん、卵巣上皮がん、前立腺がん、乳がん、星状細胞腫瘍、多形性膠芽腫、未分化星状細胞腫、脳腫瘍、卵管がん、原発性腹腔がん、進行性固形腫瘍、軟組織肉腫、肉腫、骨髄異形成症候群、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、転移性固形腫瘍、結腸がん、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈｃａｎｃｅｒ）、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ）、横紋筋肉腫、粘液様円形細胞脂肪肉腫、または再発性非小細胞肺がんなどのＭＡＧＥ－Ａ４関連疾患または障害を治療もしくは阻害するために使用される１つ以上の抗がん剤または療法と相乗的に組み合わされ得る。

本明細書では、本発明のＴＣＲを、免疫刺激療法および／または免疫支持療法と組み合わせて使用して、腫瘍増殖を阻害し、かつ／またはがん患者の生存を高めることが企図される。免疫刺激療法は、抑制された免疫細胞で「ブレーキを外す」か、または「アクセルを踏む」かのいずれかによって免疫細胞活性を増強して免疫応答を活性化する、直接免疫刺激療法を含む。例には、他のチェックポイント受容体、ワクチン接種、およびアジュバントを標的とすることが含まれる。免疫支持モダリティは、免疫原性細胞死、炎症を促進することによって腫瘍の抗原性を増加させ得るか、または抗腫瘍免疫応答を促進する他の間接的な効果を有し得る。例には、放射線、化学療法、抗血管新生剤、および手術が含まれる。

様々な実施形態において、本発明の１つ以上のＴＣＲは、ＰＤ－１阻害剤（例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、ＢＧＢ－Ａ３１７、またはＲＥＧＮ２８１０などの抗ＰＤ－１抗体）、ＰＤ－Ｌ１阻害剤（例えば、アベルマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、ＭＤＸ－１１０５、またはＲＥＧＮ３５０４などの抗ＰＤ－Ｌ１抗体）、ＣＴＬＡ－４阻害剤（例えば、イピリムマブ）、ＴＩＭ３阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、ＧＩＴＲ阻害剤、別のＴ細胞共阻害剤またはリガンドのアンタゴニスト（例えば、ＣＤ－２８、２Ｂ４、ＬＹ１０８、ＬＡＩＲ１、ＩＣＯＳ、ＣＤ１６０、またはＶＩＳＴＡに対する抗体）、インドールアミン－２，３，ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト［例えば、米国特許第７，０８７，４１１号に示されるアフリベルセプトもしくは他のＶＥＧＦ阻害融合タンパク質などの「ＶＥＧＦ－Ｔｒａｐ」、または抗ＶＥＧＦ抗体もしくはその抗原結合断片（例えば、ベバシズマブ、もしくはラニビズマブ）、またはＶＥＧＦ受容体の小分子キナーゼ阻害剤（例えば、スニチニブ、ソラフェニブ、もしくはパゾパニブ）］、Ａｎｇ２阻害剤（例えば、ネスバクマブ）、形質転換成長因子β（ＴＧＦβ）阻害剤、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤（例えば、エルロチニブ、セツキシマブ）、ＣＤ２０阻害剤（例えば、リツキシマブなどの抗ＣＤ２０抗体）、腫瘍特異的抗原に対する抗体［例えば、ＣＡ９、ＣＡ１２５、黒色腫関連抗原３（ＭＡＧＥ３）、がん胎児抗原（ＣＥＡ）、ビメンチン、腫瘍－Ｍ２－ＰＫ、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、ムチン－１、ＭＡＲＴ－１、およびＣＡ１９－９］、ワクチン（例えば、無菌化ウシ型結核菌、がんワクチン）、抗原提示を増加させるアジュバント（例えば、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子）、二重特異性抗体（例えば、ＣＤ３×ＣＤ２０二重特異性抗体、またはＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体）、サイトトキシン、化学療法剤（例えば、ダカルバジン、テモゾロミド、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、メトトレキサート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、およびビンクリスチン）、シクロホスファミド、放射線療法、手術、ＩＬ－６Ｒ阻害剤（例えば、サリルマブ）、ＩＬ－４Ｒ阻害剤（例えば、デュピルマブ）、ＩＬ－１０阻害剤、サイトカインであるＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、およびＩＬ－１５など、抗体－薬物コンジュゲート（例えば、抗ＣＤ１９－ＤＭ４ＡＤＣ、および抗ＤＳ６－ＤＭ４ＡＤＣ）、抗炎症剤（例えば、コルチコステロイド、非ステロイド性抗炎症剤）、抗酸化剤などの栄養補助食品、またはがんを治療する任意の他の療法と組み合わせて使用され得る。特定の実施形態において、本発明のＴＣＲは、抗腫瘍応答を増強するために、樹状細胞ワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、腫瘍細胞ワクチンなどを含むがんワクチンと組み合わせて使用され得る。

本発明のＴＣＲと組み合わせて使用することができるがんワクチンの例には、黒色腫および膀胱がんに対するＭＡＧＥ３ワクチン、乳がんに対するＭＵＣ１ワクチン、脳腫瘍（多形性膠芽腫を含む）に対するＥＧＦＲｖ３（例えば、リンドペピムト）、またはＡＬＶＡＣ－ＣＥＡ（ＣＥＡ＋がんに対する）が含まれる。

特定の実施形態において、本発明のＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲは、長期持続性の抗腫瘍応答を生じ、かつ／またはがんを有する患者の生存を高める方法において、放射線療法と組み合わせて投与され得る。いくつかの実施形態において、本発明のＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲは、がん患者に放射線療法を投与する前に、同時に、または後に投与され得る。例えば、放射線療法は、腫瘍病変に１回以上の用量で投与され得、その後に本発明のＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲの１回以上の用量を投与が続けられる。いくつかの実施形態において、放射線療法は、患者の腫瘍の局所免疫原性を増強（作用性放射線）し、かつ／または腫瘍細胞を死滅（切除性放射線）させるために、腫瘍病変に局所投与され得、その後に本発明のＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲの全身投与が続けられる。

追加の治療活性剤／成分は、本発明のＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲの投与の前に、同時に、または後に投与され得る。本開示の目的のために、かかる投与計画は、第２の治療活性成分と「組み合わせた」ＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲの投与とみなされる。

追加の治療活性成分は、対象に、本発明のＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲの投与前に投与され得る。他の実施形態において、追加の治療活性成分は、対象に、本発明のＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲの投与後に投与され得る。さらに他の実施形態において、追加の治療活性成分は、対象に、本発明のＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲの投与と同時に投与され得る。「同時」投与は、本発明の目的のために、例えば、ＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲおよび追加の治療活性成分を、対象に、単一投与形態（例えば、共製剤化）で、または対象に互いに約３０分以内に投与される別個の投与形態で投与することを含む。別個の投与形態で投与される場合、各投与形態は、同じ経路を介して投与され得、あるいは、各投与形態は、異なる経路を介して投与され得る。いずれにせよ、成分を単一投与形態で、同じ経路によって別個の投与形態で、または異なる経路によって別個の投与形態で投与することは、本開示の目的において、すべて、「同時投与」とみなされる。本開示の目的のために、追加の治療活性成分の「前」、「同時」、または「後」（これらの用語は、上記で定義される通り）のＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲの投与は、追加の治療活性成分と「組み合わせた」ＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲの投与とみなされる。

本発明は、以下の実施例によってさらに例示されるが、これは、決して限定することを意図するものではない。本出願全体を通して引用されるすべての参考文献、特許、および公開された特許出願の全内容、ならびに図は、参照により本明細書に組み込まれる。

実施例１．ＭＡＧＥ－Ａ４特異的Ｔ細胞受容体の特定
細胞免疫系構成要素についてヒト化されたマウスであるＶｅｌｏｃｉ－Ｔ（登録商標）マウス（例えば、参照によりその全内容が本明細書に組み込まれるＰＣＴ公開ＷＯ２０１６／１６４４９２を参照）を、ＰＢＳで希釈し、アジュバント、例えば、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ、Ｃｈｏｎｄｒｅｘ，Ｉｎｃ．）と等体積で混合した、ヒトＨＬＡ－Ａ２によって特異的に提示されるＭＡＧＥ－Ａ４（２８６～２９４）ペプチド（ＫＶＬＥＨＶＶＲＶ、配列番号６０９）で免疫した。免疫したマウスから脾臓懸濁液を得て、解離させた。赤血球をＡＣＫ溶解緩衝液（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に溶解し、脾細胞をＲＰＭＩ完全培地に懸濁させた。単離された脾細胞を選別し、ＭＨＣとの関連でＭＡＧＥ－Ａ４（２８６～２９４）ペプチドに結合する単一Ｔ細胞を、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）によって単離した。単離されたＴ細胞を単一ウェルプレートに播種し、ＴＣＲアルファおよびベータ可変領域特異的ＰＣＲプライマーと混合した。各単一Ｔ細胞におけるｃＤＮＡを、逆転写酵素（ＲＴ）反応を介して合成した。次いで、得られた各ＲＴ生成物を分割し、その後のＴＣＲベータおよびアルファＰＣＲのために２つの対応するウェルに移した。得られたＲＴ生成物の１つのセットを、最初に、ＴＣＲベータ可変領域リーダー配列に特異的な５’縮重プライマー、またはＴＣＲアルファ鎖可変領域リーダー配列に特異的な５’縮重プライマー、およびＴＣＲ定常領域に特異的な３’プライマーを使用してＰＣＲによって増幅し、アンプリコンを生成した。次に、ＴＣＲベータ可変領域フレームワーク１に特異的な５’縮重プライマー、またはＴＣＲアルファ鎖可変領域フレームワーク１に特異的な５’縮重プライマー、およびＴＣＲ定常領域に特異的な３’プライマーを使用してＰＣＲによって再度増幅し、クローニングのためのアンプリコンを生成した。ＴＣＲベータおよびアルファ由来のＰＣＲ産物を、それぞれベータ定常領域およびアルファ定常領域を含む発現ベクターにクローニングした。全長ベータおよびアルファ鎖対を発現する発現ベクターをＣＨＯ細胞にトランスフェクトし、市販のＭＡＧＥ－Ａ４／ＨＬＡ四量体試薬（ＨＬＡ－Ａ０２：０１ＭＡＧＥ－Ａ４四量体、ＭＢＬＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）との結合について試験した。ＣＨＯ細胞を、可溶性ＨＬＡ－Ａ２（ＫＶＬＥＨＶＶＲＶ）（配列番号６０９）四量体およびマウスＴＣＲ定常領域に特異的な抗体（クローンＨ５７－５９７）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ）とともにインキュベートした。次いで、試料をＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａＸ－２０（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＳａｎＪｏｓｅ，ＣＡ）で分析した。四量体陽性細胞の割合を計算するために、抗原陽性（Ａｇ＋）ゲーティングを、ＦｌｏｗＪｏ（ＬＬＣ、Ａｓｈｌａｎｄ，ＯＲ）を使用して、ＨＬＡ－Ａ２（ＫＶＬＥＨＶＶＲＶ）（配列番号６０９）四量体に結合しない陰性対照ＴＣＲに基づいて設定した。すべてのＡｇ＋ＴＣＲは、平均蛍光強度（ＭＦＩ）＞２５０によるＡｇ＋ゲーティングで、細胞の≧１％のＦｌｏｗＪｏ基準を有した。Ａｇ＋ＴＣＲを、次世代配列決定によって決定し、同一のＴＣＲアルファおよびベータヌクレオチド配列を発現するＴＣＲの全数を、以下の表１に示す。

上記のように決定されたＴＣＲのベータ鎖可変ドメインＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３アミノ酸配列、ならびにアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３アミノ酸配列の詳細なリストを表２に提供する。上記のように決定されたＴＣＲのベータ鎖可変ドメインＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ポリ核酸配列、ならびにアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ポリ核酸配列の詳細なリストを表３に提供する。表４は、ＴＣＲのベータ鎖可変領域およびアルファ鎖可変領域のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列を提供する。

実施例２．ＭＡＧＥ－Ａ４特異的Ｔ細胞受容体の特定
細胞免疫系構成要素についてヒト化されたマウスであるＶｅｌｏｃｉ－Ｔ（登録商標）マウス（例えば、参照によりその全内容が本明細書に組み込まれるＰＣＴ公開ＷＯ２０１６／１６４４９２を参照）を、ＰＢＳで希釈し、アジュバント、例えば、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ、Ｃｈｏｎｄｒｅｘ，Ｉｎｃ．）と等体積で混合した、ヒトＨＬＡ－Ａ２によって特異的に提示されるＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９）ペプチド（ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ、配列番号６１２）で免疫した。免疫したマウスから脾臓懸濁液を得て、解離させた。赤血球をＡＣＫ溶解緩衝液（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に溶解し、脾細胞をＲＰＭＩ完全培地に懸濁させた。単離された脾細胞を選別し、ＭＨＣとの関連でＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９）ペプチドに結合する単一Ｔ細胞を、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）によって単離した。単離されたＴ細胞を単一ウェルプレートに播種し、ＴＣＲアルファおよびベータ可変領域特異的ＰＣＲプライマーと混合した。各単一Ｔ細胞におけるｃＤＮＡを、逆転写酵素（ＲＴ）反応を介して合成した。次いで、得られた各ＲＴ生成物を分割し、その後のＴＣＲベータおよびアルファＰＣＲのために２つの対応するウェルに移した。得られたＲＴ生成物の１つのセットを、最初に、ＴＣＲベータ可変領域リーダー配列に特異的な５’縮重プライマー、またはＴＣＲアルファ鎖可変領域リーダー配列に特異的な５’縮重プライマー、およびＴＣＲ定常領域に特異的な３’プライマーを使用してＰＣＲによって増幅し、アンプリコンを生成した。次に、ＴＣＲベータ可変領域フレームワーク１に特異的な５’縮重プライマー、またはＴＣＲアルファ鎖可変領域フレームワーク１に特異的な５’縮重プライマー、およびＴＣＲ定常領域に特異的な３’プライマーを使用してＰＣＲによって再度増幅し、クローニングのためのアンプリコンを生成した。ＴＣＲベータおよびアルファ由来のＰＣＲ産物を、それぞれベータ定常領域およびアルファ定常領域を含む発現ベクターにクローニングした。全長ベータおよびアルファ鎖対を発現する発現ベクターをＣＨＯ細胞にトランスフェクトし、市販のＭＡＧＥ－Ａ４／ＨＬＡ四量体試薬（ＨＬＡ－Ａ０２：０１ＭＡＧＥ－Ａ４四量体、ＭＢＬＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）または市販のＭＡＧＥ－Ａ８／ＨＬＡ四量体試薬（ＨＬＡ－Ａ０２：０１ＭＡＧＥ－Ａ８四量体、ＭＢＬＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）との結合について試験した。ＣＨＯ細胞を、マウスＴＣＲ定常領域に特異的な抗体（クローンＨ５７－５９７）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ）、および可溶性ＨＬＡ－Ａ２ＭＡＧＥ－Ａ４（ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ）（配列番号６１２）四量体または可溶性ＨＬＡ－Ａ２ＭＡＧＥ－Ａ８（ＧＬＹＤＧＲＥＨＳＶ）（配列番号６１３）のいずれかとともにインキュベートした。次いで、試料をＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａＸ－２０（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＳａｎＪｏｓｅ，ＣＡ）で分析した。ＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９）について四量体陽性細胞の割合を計算するために、抗原陽性（Ａｇ＋）ゲーティングを、ＨＬＡ－Ａ２（ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ）（配列番号６１２）四量体に結合しない陰性対照ＴＣＲに基づいて設定した。ＭＡＧＥ－Ａ８について四量体陽性細胞の割合を計算するために、ＦｌｏｗＪｏ（ＬＬＣ、Ａｓｈｌａｎｄ，ＯＲ）を使用して、抗原陽性（Ａｇ＋）ゲーティングを、ＨＬＡ－Ａ２（ＧＬＹＤＧＲＥＨＳＶ）（配列番号６１３）四量体に結合しない陰性対照ＴＣＲに基づいて設定した。すべてのＡｇ＋ＴＣＲは、平均蛍光強度（ＭＦＩ）＞２５０によるＡｇ＋ゲーティングで細胞の≧１％のＦｌｏｗＪｏ基準を有した。しかし、３％などのより厳密なカットオフを使用して、結合アッセイにおいてより優れた挙動を示すＡｇ＋ＴＣＲを分離することができた。Ａｇ＋ＴＣＲは、次世代配列決定によって決定された。表５は、同一のＴＣＲアルファおよびベータヌクレオチド配列を発現するＴＣＲの全数、Ａｇ＋ゲーティングにおける四量体％（ＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９））、Ａｇ＋ゲーティングにおける四量体％（ＭＡＧＥ－Ａ８（２３２～２４１））、ならびに後者２つの数値の比（Ａｇ＋ゲーティングにおける四量体％（ＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９））をＡｇ＋ゲーティングにおける四量体％（ＭＡＧＥ－Ａ８（２３２～２４１））によって除した）である。この比は、ＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９）結合の特異性の指標である。

上記のように決定されたＴＣＲのベータ鎖可変ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３アミノ酸配列、ならびにアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３アミノ酸配列の詳細なリストを表６に提供し、対応する核酸配列を表７に提供する。表８は、ＴＣＲのベータ鎖可変領域およびアルファ鎖可変領域のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列を提供する。

表９は、単離されたＴＣＲのアルファおよびベータ可変領域ならびに結合領域のＴＣＲ遺伝子ファミリーを提供し、表１０は、アルファおよびベータ可変鎖およびＣＤＲのアミノ酸およびポリ核酸配列識別子を提供する。

実施例３．Ａ３７５黒色腫細胞に対するＭＡＧＥ－Ａ４ＴＣＲの細胞傷害性
本実施例は、本発明の特定のＭａｇｅ－Ａ４ＴＣＲが、Ａ３７５黒色腫細胞を選択的に死滅させる能力を説明する。

方法
Ｔ細胞操作
ＰａｎＴ細胞を、ＥａｓｙＳｅｐヒトＴ細胞単離キット（ＳｔｅｍＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ１７９５１）を使用して、ヒト末梢血単球細胞（ＰＢＭＣ）から陰性選択によって精製し、次いで凍結保存した。実験０日目に、Ｔ細胞を解凍し、２００Ｕ／ｍｌヒトＩＬ－２および抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８活性化ビーズを、１：１のビーズ：細胞比（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ１１１．３２Ｄ）で含有する培地（１０ｍｇ／ｍｌゲンタマイシン、４ｍＭのＬ－グルタミンを補充したＣＴＳＯｐＴｍｉｚｅｒ培地［ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＡ１０４８５０１］）中に、細胞１×１０^６個／ｍｌで播種した。３日目に、活性化ビーズを除去し、ＮｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒＩＩｂデバイスおよびヒトＴ細胞ヌクレオフェクションキット（ＬｏｎｚａＶＶＰＡ－１００２）を使用して、ＴＲＡＣおよびＴＲＢＣ遺伝子座を標的とするｓｇＲＮＡと複合体化した２０ｍｇのＣａｓ９タンパク質（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＡ３６４９９）によって細胞５×１０^６個をトランスフェクトした。ヌクレオフェクション後、細胞を、ＴＣＲａおよびＴＣＲｂ発現カセットがヒトＴＲＡＣ遺伝子座を標的にするように操作されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターによって形質導入した。２～３日毎に、細胞を、約１×１０^６個／ｍｌに新鮮な補充培地中に再播種した。ＴＣＲ構築物の形質導入後の様々な時点で、細胞を表面マーカーおよびペプチド－ＭＨＣ四量体試薬に対する抗体で染色し、次いでフローサイトメトリーによって分析して形質導入効率を定量化した。

細胞傷害性アッセイ
抗原特異的な細胞傷害性Ｔ細胞機能を、カルセイン放出アッセイによって評価した。標的腫瘍細胞を、８ｍＭカルセインＡＭ色素（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＣ１４３０）の存在下で、３７℃で３０分間標識し、次いで培地で洗浄した。１×１０^４個の標的細胞を、９６ウェルプレート中のアッセイウェル毎に、形質導入Ｔ細胞または非形質導入（ＵＴＤ）対照の様々な希釈を用いて一緒に播種した。２時間後、放出された蛍光色素を培養上清中で測定した。自発放出（ＳＲ）が、標識された標的細胞を含むがＴ細胞を含まないウェルで測定され、最大放出（ＭＲ）が、０．５％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００の存在下で、標識された標的細胞を有するウェルで測定された。特異的細胞傷害性のパーセントは、１００Ｘ（試験放出－ＳＲ）／（ＭＲ－ＳＲ）として決定された。

結果
初代ヒトＴ細胞を操作して、２つのＨＬＡ－Ａ２制限ペプチド（ＭＡＧＥ－Ａ４２８６～２９４（ＫＶＬＥＨＶＶＲＶ、配列番号６０９）およびＭＡＧＥ－Ａ４２３０～２３９（ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ、配列番号２９４））、またはウイルスタンパク質に由来する無関連なＨＬＡ－Ａ２制限ペプチド（ＨＰＶ）に対するＭＡＧＥ－Ａ４特異的ＴＣＲを発現させた。図１に示すように、ペプチドＭＨＣ四量体試薬を使用したフローサイトメトリー分析によって、形質導入されたＴＣＲの発現および予測される抗原特異性が確証された。

ＴＣＲの細胞傷害性活性を検証するために、操作したＴ細胞を、カルセインＡＭ色素放出アッセイにおいて、ＭＡＧＥ－Ａ４発現腫瘍細胞に対する細胞溶解機能を指向する能力について試験し、二重測定で実施した（図２Ａ、図２Ｂ、図３Ａ、図３Ｂ）。これらのアッセイによって、ＭＡＧＥ－Ａ４特異的ＴＣＲ（ＭＡＧＥ－Ａ４２８６～２９４およびＭＡＧＥ－Ａ４２３０～２３９ペプチドの両方に対して）は、Ａ３７５黒色腫細胞の死滅を用量依存的様式で媒介するが、無関連なＨＬＡ－Ａ２制限ペプチドに対するＴＣＲは、媒介しないことが確証された。

実施例４．ジャーカット細胞ＴＣＲシグナル伝達バイオアッセイにおけるＭＡＧＥ－Ａ４（２８６～２９４）ＴＣＲ
本実施例は、ジャーカット細胞におけるＴＣＲシグナル伝達を活性化する本発明の選択されたＭａｇｅ－Ａ４ＴＣＲの能力を説明する。

方法
ジャーカット細胞株生成
内因性ＴＣＲαおよびＴＣＲβ発現を欠くジャーカット細胞株を、それらの遺伝子のノックアウトによって生成し、次いで、トランスジェニックＴＣＲ構築物の単一コピーＣｒｅリコンビナーゼ媒介性挿入を可能にするように操作した。次いで、ＡＰ１応答エレメント駆動型ルシフェラーゼレポーターをこの親バイオアッセイ株に組み込んだ。カスタマイズされたＴＣＲα／β発現構築物のＣｒｅ媒介性挿入によって、ＴＣＲバイオアッセイ株を生成した。

ＴＣＲ活性化バイオアッセイ
ＴＣＲ構築物を発現するジャーカットバイオアッセイ株を、均一性のためにＦＡＣＳ選別し、次いでペプチド－ＭＨＣ刺激アッセイで試験した。２９３Ｔ細胞（ＨＬＡ－Ａ２＊０１）を、抗原（ＭＡＧＥ－Ａ４２８６～２９４（ＫＶＬＥ））または無関連なペプチド（ＭＡＧＥ－Ａ４２３０～２３９（ＧＶＹ））の様々な希釈とともにアッセイウェルに播種した。２時間のインキュベーション後、操作されたジャーカット細胞を、３：１のジャーカット細胞：２９３Ｔ細胞比でウェルに添加し、さらに５時間インキュベーションした。ルシフェラーゼレポーター活性は、アッセイ細胞における発光出力を測定することによって決定した。

結果
ＡＰ１応答エレメント駆動型ルシフェラーゼ導入遺伝子を有し、ＭＡＧＥ－Ａ４特異的ＴＣＲ、または無関連な抗原に対するＴＣＲ（ＮＹ－ＥＳＯ－１）を発現するように操作されたジャーカットバイオアッセイ株を、ペプチド刺激アッセイで試験した。図４Ａおよび図４Ｂに示すように、ＨＬＡ－Ａ２＊０１制限ＭＡＧＥ－Ａ４（２８６～２９４（ＫＶＬＥ））に特異的なＴＣＲは、同族（ＫＶＬＥ）ペプチドに対してのみ反応性であったが、無関連なＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９（ＧＶＹ））ペプチドに対して反応性ではなかった。親ＴＣＲ陰性（ＴＣＲ－）細胞および無関連なＴＣＲ（ＮＹＥＳＯに対する）を発現する細胞は、反応性を示さなかった。加えて、図４Ａおよび図４Ｂは、ＭＡＧＥ－Ａ４特異的ＴＣＲによって誘導されるＡＰ１レポーター活性化が用量依存的であったことを示す。

実施例５．Ｔ細胞におけるＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９）ＴＣＲの特異的活性
本実施例は、Ｔ細胞におけるＴＣＲシグナル伝達を活性化する本発明の選択されたＭａｇｅ－Ａ４ＴＣＲの能力を説明する。

ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）（ｎ＝３ドナー）を活性化し、ＨＬＡ－Ａ２制限ＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９（ＧＶＹ））に結合するＴＣＲをコードするレンチウイルスベクターによって形質導入し、インビトロで１０日間増殖してから凍結した。解凍後、上記のＴＣＲを含有するＴ細胞を、ＭＡＧＥ－Ａ４２３０～２３９ペプチドでパルス化したＴ２細胞と１：１の比率で培養した。反応性は、共培養の２４時間後にインターフェロンγ放出として測定した。Ｔ細胞単独を、抗原非依存性インターフェロンγ放出の対照として使用した。パルス化されていないＴ２細胞または無関連なペプチドでパルス化されたＴ２細胞とともに培養されたＴ細胞を、特異性の対照として使用した。図５は、ｎ＝３ドナーのインターフェロンγシグナルの平均＋／－平均標準誤差（ＳＥＭ）を示し、本開示のＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９）特異的ＴＣＲが、ＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９）ペプチドでパルス化されたＴ２細胞に対して特異的活性を表すことを示す。

ＭＡＧＥ－Ａ４を発現する腫瘍細胞に対する活性を試験するために、ヒトＰＢＭＣ（ｎ＝３ドナー）を活性化し、ＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９）ＴＣＲをコードするレンチウイルスベクターによって形質導入し、インビトロで１０日間増殖してから凍結した。解凍後、ＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９）ＴＣＲＴ細胞を、操作されたレベルのＨＬＡ－Ａ２およびＭＡＧＥ－Ａ４を発現する腫瘍細胞（Ａ５４９．Ａ２．ＭＡＧＥＡ４細胞）または内在性レベルのＨＬＡ－Ａ２およびＭＡＧＥ－Ａ４を発現する腫瘍細胞（Ａ３７５細胞）と５：１の比率で培養した。反応性は、共培養の２４時間後にインターフェロンγ放出として測定した。Ｔ細胞単独を、抗原非依存性インターフェロンγ放出の対照として使用した。非改変Ａ５４９細胞（ＭＡＧＥ－Ａ４陰性およびＨＬＡ－Ａ２陰性である）またはＨＬＡ－Ａ２を発現するように改変されたＡ５４９細胞（Ａ５４９．Ａ２）とともに培養されたＴ細胞を、特異性の対照として使用した。図６は、ｎ＝３ドナーのインターフェロンγシグナルの平均＋／－平均標準誤差（ＳＥＭ）を示し、本開示のＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９）特異的ＴＣＲが、ＨＬＡ－Ａ２およびＭＡＧＥ－Ａ４を発現する腫瘍細胞に対して特異的活性を表すことを示す。別のアッセイでは、Ｔ細胞を、Ａ５４９細胞、Ａ５４９．Ａ２細胞、ＮＣＩ－Ｈ５２０（ＨＬＡ－Ａ２陰性／ＭＡＧＥ－Ａ４陽性）細胞、およびＭＣＦ－７（ＨＬＡ－Ａ２陽性／ＭＡＧＥ－Ａ４陰性）細胞と共培養して、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４複合体に対する特異性のためのさらなる対照を提供した。図７は、ｎ＝３ドナーのインターフェロンγシグナルの平均＋／－平均標準誤差（ＳＥＭ）を示し、本開示のＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９）特異的ＴＣＲが、ＨＬＡ－Ａ２およびＭＡＧＥ－Ａ４を発現する腫瘍細胞に対して特異的活性を表すことを示す。さらなるアッセイにおいて、ＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９）ＴＣＲ発現Ｔ細胞を、低度または中度の内在性レベルのＭＡＧＥ－Ａ４を発現する腫瘍細胞（それぞれ、Ｕ２－ＯＳおよびＮＣＩ－Ｈ１７０３）とともに５：１の比率で培養した。反応性は、共培養の２４時間後にＩＦＮｇ放出として測定した。図８は、ｎ＝３ドナーのインターフェロンγシグナルの平均＋／－平均標準誤差（ＳＥＭ）を示し、本開示のＭＡＧＥ－Ａ４（２３０～２３９）特異的ＴＣＲが、わずか低度だけ、または中度の内因性レベルのＭＡＧＥ－Ａ４を発現するＨＬＡ－Ａ２発現腫瘍細胞に対して特異的活性を表すことを示す。

均等物
当業者は、日常的な実験のみを使用して、本明細書に記載の本発明の特定の実施形態との多くの均等物を認識するか、または確認することができ、かかる均等物は、以下の特許請求の範囲に包含されることが意図される。本出願全体を通して引用されるすべての参考文献、特許、および公開された特許出願の内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

Claims

ＫＶＬＥＨＶＶＲＶ（配列番号６０９）（ＭＡＧＥ－Ａ４２８６～２９４）のアミノ酸配列を含む、ＨＬＡ－Ａ２提示がん精巣抗原黒色腫関連抗原４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチドに特異的に結合するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）であって、前記ＴＣＲが、相補的決定領域（ＣＤＲ）３を含むアルファ鎖可変ドメインを含み、前記ＣＤＲ３が、式Ｉ：
Ｎ_１－Ｎ_２－Ｎ_３－Ｎ_４－Ｎ_５－Ｎ_６－Ｎ_７－Ｎ_８－Ｎ_９－Ｎ_１０－Ｎ_１１－Ｎ_１２－Ｎ_１３－Ｎ_１４－Ｎ_１５（式Ｉ）
のアミノ酸配列を含み、
式中、Ｎ_１は、非極性アミノ酸であり、
Ｎ_２は、Ｖａｌであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_３は、Ｔｙｒ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｇｌｕ、Ｍｅｔ、Ａｌａ、またはＰｈｅであり、
Ｎ_４は、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、またはＭｅｔであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_５は、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、Ｍｅｔ、Ｇｌｙ、またはＬｙｓであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_６は、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｐｒｏ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、またはＴｈｒであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_７は、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｔｒｐ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｉｌｅ、Ｇｌｎ、またはＬｅｕであり、
Ｎ_８は、Ｈｉｓ、Ｔｒｐ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ｔｙｒ、またはＡｌａであり、
Ｎ_９は、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｌｙｓ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、またはＡｒｇであり、
Ｎ_１０は、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、Ａｓｐ、またはＳｅｒであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_１１は、Ｐｈｅ、Ａｓｎ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、またはＧｌｕであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_１２は、Ｌｙｓ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、またはＡｓｐであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_１３は、ＬｙｓまたはＧｌｙであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_１４は、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、またはＴｙｒであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_１５は、Ｔｙｒ、Ｇｌｎ、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、またはＡｒｇである、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）。
Ｎ_１が、Ａｌａ、Ｉｌｅ、またはＧｌｙである、請求項１に記載のＴＣＲ。
ＫＶＬＥＨＶＶＲＶ（配列番号６０９）（ＭＡＧＥ－Ａ４２８６～２９４）のアミノ酸配列を含む、ＨＬＡ－Ａ２提示がん精巣抗原黒色腫関連抗原４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチドに特異的に結合するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）であって、前記ＴＣＲが、相補的決定領域（ＣＤＲ）３を含むベータ鎖可変ドメインを含み、前記ＣＤＲ３が、式ＩＩ：
Ｎ_１－Ｎ_２－Ｎ_３－Ｎ_４－Ｎ_５－Ｎ_６－Ｎ_７－Ｎ_８－Ｎ_９－Ｎ_１０－Ｎ_１１－Ｎ_１２－Ｎ_１３－Ｎ_１４－Ｎ_１５－Ｎ_１６－Ｎ_１７－Ｎ_１８（式ＩＩ）
のアミノ酸配列を含み、
式中、Ｎ_１は、ＡｌａまたはＳｅｒであり、
Ｎ_２は、Ａｌａ、Ｓｅｒ、またはＴｈｒであり、
Ｎ_３は、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、またはＴｒｐであり、
Ｎ_４は、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ａｓｐ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓであり、
Ｎ_５は、ＧｌｙまたはＡｓｐであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_６は、ＰｈｅまたはＡｒｇであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_７は、Ｔｒｐ、Ｐｈｅ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、またはＶａｌであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_８は、Ｐｒｏ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｔｙｒ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、またはＧｌｙであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_９は、Ａｓｐであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_１０は、Ａｒｇであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_１１は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、またはＴｈｒであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_１２は、Ｓｅｒ、Ｔｒｐ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ａｒｇ、Ｍｅｔ、Ｔｙｒ、またはＧｌｎであり、
Ｎ_１３は、Ｇｌｙであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_１４は、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、またはＨｉｓであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_１５は、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｔｙｒ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、またはＰｒｏであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_１６は、Ｇｌｕ、Ｐｒｏ、Ｌｙｓ、Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、またはＧｌｎであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_１７は、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｔｙｒ、またはＧｌｎであるが、存在しても存在しなくてもよく、
Ｎ_１８は、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ、Ｔｙｒ、またはＴｈｒである、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）。
前記アルファ鎖可変ドメインが、ＣＤＲ１およびＣＤＲ２をさらに含み、前記ＣＤＲ１が、表２に示されるアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ１アミノ酸配列のうちのいずれか１つを含み、前記ＣＤＲ２が、独立して、表２に示されるアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ２アミノ酸配列のうちのいずれか１つを含む、請求項１または２に記載のＴＣＲ。
前記ベータ鎖可変ドメインが、ＣＤＲ１およびＣＤＲ２をさらに含み、前記ＣＤＲ１が、表２に示されるベータ鎖可変ＣＤＲ１アミノ酸配列のうちのいずれか１つを含み、前記ＣＤＲ２が、独立して、表２に示されるベータ鎖可変ドメインＣＤＲ２アミノ酸配列のうちのいずれか１つを含む、請求項３に記載のＴＣＲ。
前記ＴＣＲが、少なくとも１つのＴＣＲアルファ鎖可変ドメインおよび／または少なくとも１つのベータ鎖可変ドメインを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
前記ＴＣＲが、ＴＣＲアルファ鎖可変ドメインおよびＴＣＲベータ鎖可変ドメインを含む、請求項６に記載のＴＣＲ。
表４に列挙されるアルファ鎖可変ドメイン配列のうちのいずれか１つ内に含まれるアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、表４に列挙されるベータ鎖可変ドメイン配列のうちのいずれか１つ内に含まれるベータ鎖可変ドメインＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、を含む、請求項３～７のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
表４に列挙されるアルファ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインを含む、請求項１～８のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
表４に列挙されるベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
（ａ）表４に列挙されるアルファ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインと、（ｂ）表４に列挙されるベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインと、を含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
（ａ）配列番号１、１７、３３、４９、６５、８１、９７、１１３、１２９、１４５、１６１、１７７、１９３、２０９、２２５、２４１、２５７、２７３、２８９、３０５、３２１、３３７、３５３、３６９、３８５、４０１、４１７、４３３、４４９、４６５、４８１、４９７、５１３、５２９、５４５、５６１、５７７、および５９３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ１ドメインと、
（ｂ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、３８６、４０２、４１８、４３４、４５０、４６６、４８２、４９８、５１４、５３０、５４６、５６２、５７８、および５９４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ２ドメインと、
（ｃ）配列番号３、１９、３５、５１、６７、８３、９９、１１５、１３１、１４７、１６３、１７９、１９５、２１１、２２７、２４３、２５９、２７５、２９１、３０７、３２３、３３９、３５５、３７１、３８７、４０３、４１９、４３５、４５１、４６７、４８３、４９９、５１５、５３１、５４７、５６３、５７９、および５９５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ３ドメインと、
（ｄ）配列番号９、２５、４１、５７、７３、８９、１０５、１２１、１３７、１５３、１６９、１８５、２０１、２１７、２３３、２４９、２６５、２８１、２９７、３１３、３２９、３４５、３６１、３７７、３９３、４０９、４２５、４４１、４５７、４７３、４８９、５０５、５２１、５３７、５５３、５６９、５８５、および６０１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインＣＤＲ１と、
（ｅ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、３９４、４１０、４２６、４４２、４５８、４７４、４９０、５０６、５２２、５３８、５５４、５７０、５８６、および６０２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインＣＤＲ２と、
（ｆ）配列番号１１、２７、４３、５９、７５、９１、１０７、１２３、１３９、１５５、１７１、１８７、２０３、２１９、２３５、２５１、２６７、２８３、２９９、３１５、３３１、３４７、３６３、３７９、３９５、４１１、４２７、４４３、４５９、４７５、４９１、５０７、５２３、５３９、５５５、５７１、５８７、および６０３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインＣＤＲ３と、を含む、請求項３～１１のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
配列番号７／１５、２３／３１、３９／４７、５５／６３、７１／７９、８７／９５、１０３／１１１、１１９／１２７、１３５／１４３、１５１／１５９、１６７／１７５、１８３／１９１、１９９／２０７、２１５／２２３、２３１／２３９、２４７／２５５、２６３／２７１、２７９／２８７、２９５／３０３、３１１／３１９、３２７／３３５、３４３／３５１、３５９／３６７、３７５／３８３、３９１／３９９、４０７／４１５、４２３／４３１、４３９／４４７、４５５／４６３、４７１／４７９、４８７／４９５、５０３／５１１、５１９／５２７、５３５／５４３、５５１／５５９、５６７／５７５、５８３／５９１、および５９９／６０７からなる群から選択されるアルファ鎖可変ドメイン／ベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列対を含む、請求項１２に記載のＴＣＲ。
配列番号８７／３１、２３／９５、２３１／６０７、２３１／２２３、２３１／５９１、２３１／２５５、２３１／２７１、２３１／７９、２３１／４７、２３１／３９９、５９９／２３９、５９９／２２３、５９９／５９１、５９９／２５５、５９９／２７１、５９９／７９、５９９／４７、５９９／３９９、２１５／２３９、２１５／６０７、２１５／５９１、２１５／２５５、２１５／２７１、２１５／７９、２１５／４７、２１５／３９９、５８３／２３９、５８３／６０７、５８３／２２３、５８３／２５５、５８３／２７１、５８３／７９、５８３／４７、５８３／３９９、２４７／２３９、２４７／６０７、２４７／２２３、２４７／５９１、２４７／２７１、２４７／７９、２４７／４７、２４７／３９９、２６３／２３９、２６３／６０７、２６３／２２３、２６３／５９１、２６３／２５５、２６３／７９、２６３／４７、２６３／３９９、７１／２３９、７１／６０７、７１／２２３、７１／５９１、７１／２５５、７１／２７１、７１／４７、７１／３９９、３９／２３９、３９／６０７、３９／２２３、３９／５９１、３９／２５５、３９／２７１、３９／７９、３９／３９９、３９１／２３９、３９１／６０７、３９１／２２３、３９１／５９１、３９１／２５５、３９１／２７１、３９１／７９、３９１／４７、４３９／１２７、４３９／３１９、４３９／２８７、４３９／１５、４３９／１１１、４３９／３８３、４３９／１９１、４３９／５１１、４３９／５２７、４３９／５５９、４３９／２０７、１１９／４４７、１１９／３１９、１１９／２８７、１１９／１５、１１９／１１１、１１９／３８３、１１９／１９１、１１９／５１１、１１９／５２７、１１９／５５９、１１９／２０７、３１１／４４７、３１１／１２７、３１１／２８７、３１１／１５、３１１／１１１、３１１／３８３、３１１／１９１、３１１／５１１、３１１／５２７、３１１／５５９、３１１／２０７、２７９／４４７、２７９／１２７、２７９／３１９、２７９／１５、２７９／１１１、２７９／３８３、２７９／１９１、２７９／５１１、２７９／５２７、２７９／５５９、２７９／２０７、７／４４７、７／１２７、７／３１９、７／２８７、７／１１１、７／３８３、７／１９１、７／５１１、７／５２７、７／５５９、７／２０７、１０３／４４７、１０３／１２７、１０３／３１９、１０３／２８７、１０３／１５、１０３／３８３、１０３／１９１、１０３／５１１、１０３／５２７、１０３／５５９、１０３／２０７、３７５／４４７、３７５／１２７、３７５／３１９、３７５／２８７、３７５／１５、３７５／１１１、３７５／１９１、３７５／５１１、３７５／５２７、３７５／５５９、３７５／２０７、１８３／４４７、１８３／１２７、１８３／３１９、１８３／２８７、１８３／１５、１８３／１１１、１８３／３８３、１８３／５１１、１８３／５２７、１８３／５５９、１８３／２０７、５０３／４４７、５０３／１２７、５０３／３１９、５０３／２８７、５０３／１５、５０３／１１１、５０３／３８３、５０３／１９１、５０３／５２７、５０３／５５９、５０３／２０７、５１９／４４７、５１９／１２７、５１９／３１９、５１９／２８７、５１９／１５、５１９／１１１、５１９／３８３、５１９／１９１、５１９／５１１、５１９／５５９、５１９／２０７、５５１／４４７、５５１／１２７、５５１／３１９、５５１／２８７、５５１／１５、５５１／１１１、５５１／３８３、５５１／１９１、５５１／５１１、５５１／５２７、５５１／２０７、１９９／４４７、１９９／１２７、１９９／３１９、１９９／２８７、１９９／１５、１９９／１１１、１９９／３８３、１９９／１９１、１９９／５１１、１９９／５２７、および１９９／５５９からなる群から選択されるアルファ鎖可変ドメイン／ベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列対を含む、請求項１２に記載のＴＣＲ。
請求項１～１４のいずれか一項に記載のＴＣＲに対して結合において競合する、ＴＣＲ。
検出可能部分をさらに含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
請求項１～１６のいずれか一項に記載のＴＣＲと、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む、医薬組成物。
請求項１～１６のいずれか一項に記載のＴＣＲを提示する、単離された細胞。
請求項１～１６のいずれか一項に記載のＴＣＲのアルファ鎖可変ドメインをコードするポリヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド分子。
請求項１～１６のいずれか一項に記載のＴＣＲのベータ鎖可変ドメインをコードするポリヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド分子。
請求項１９または２０に記載のポリヌクレオチド分子を含む、ベクター。
請求項２１に記載のベクターを発現する、単離された細胞。
ＭＡＧＥ－Ａ４関連疾患または障害を有する対象を治療する方法であって、前記対象に、治療有効量の請求項１～１６のいずれか一項に記載のＴＣＲ、請求項１７に記載の医薬組成物、または請求項１８に記載の複数の単離された細胞を投与することを含み、それによって前記対象を治療する、方法。
前記ＭＡＧＥ－Ａ４関連疾患または障害が、ＭＡＧＥ－Ａ４関連がんである、請求項２３に記載の方法。
前記ＭＡＧＥ－Ａ４関連がんが、脂肪肉腫、神経芽細胞腫、骨髄腫、黒色腫、転移性黒色腫、滑膜肉腫、膀胱がん、食道がん、食道扁平上皮がん、肝細胞がん、頭頸部がん、非小細胞肺がん、卵巣がん、卵巣上皮がん、前立腺がん、乳がん、星状細胞腫瘍、多形性膠芽腫、未分化星状細胞腫、脳腫瘍、卵管がん、原発性腹腔がん、進行性固形腫瘍、軟組織肉腫、肉腫、骨髄異形成症候群、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、転移性固形腫瘍、結腸がん、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈｃａｎｃｅｒ）、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ）、横紋筋肉腫、粘液様円形細胞脂肪肉腫、または再発性非小細胞肺がんである、請求項２４に記載の方法。
前記ＴＣＲ、前記医薬組成物、または前記複数の細胞が、前記対象に、第２の治療剤と組み合わせて投与される、請求項２３～２５のいずれか一項に記載の方法。
前記ＴＣＲ、前記医薬組成物、または前記複数の細胞が、前記対象に皮下、静脈内、皮内、腹腔内、経口、筋肉内、または頭蓋内投与される、請求項２３～２６のいずれか一項に記載の方法。
Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードするポリヌクレオチド分子であって、前記ＴＣＲが、ＫＶＬＥＨＶＶＲＶ（配列番号６０９）（ＭＡＧＥ－Ａ４２８６～２９４）のアミノ酸配列を含むＨＬＡ－Ａ２提示がん精巣抗原黒色腫関連抗原４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチドに特異的に結合し、前記ＴＣＲが、（ａ）発光アッセイによって決定されるときに、予測されるオフターゲットペプチドを発現する細胞に結合しない特性と、（ｂ）ＴＣＲ媒介性Ｔ細胞シグナル伝達発光バイオアッセイによって決定されるときに、Ｔ細胞応答を、患者由来ＭＡＧＥ－Ａ４特異的ＴＣＲよりも約２倍大きく活性化する特性と、（ｃ）ＴＣＲ媒介性Ｔ細胞シグナル伝達発光バイオアッセイによって決定されるときに、Ｔ細胞応答を、親和性成熟した（例えば、ファージディスプレイによる）ＭＡＧＥ－Ａ４特異的ＴＣＲよりも約２倍大きく活性化する特性と、からなる群から選択される特性を有する、ポリヌクレオチド分子。
少なくとも１つのＴＣＲアルファ鎖可変ドメインおよび／または少なくとも１つのベータ鎖可変ドメインをコードする、請求項２８に記載のポリヌクレオチド分子。
前記ＴＣＲが、表４に列挙されるアルファ鎖可変ドメイン配列のうちのいずれか１つ内に含まれるアルファ鎖可変ドメイン相補的決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、表４に列挙されるベータ鎖可変ドメイン配列のうちのいずれか１つ内に含まれるベータ鎖可変ドメインＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、を含む、請求項２８に記載のポリヌクレオチド分子。
前記ＴＣＲが、表４に列挙されるアルファ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインを含む、請求項２９または３０に記載のポリヌクレオチド分子。
前記ＴＣＲが、表４に列挙されるベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインを含む、請求項２８～３１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド分子。
前記ＴＣＲが、（ａ）表４に列挙されるアルファ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインと、（ｂ）表４に列挙されるベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインと、を含む、請求項２８～３２のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド分子。
前記ＴＣＲが、
（ａ）配列番号１、１７、３３、４９、６５、８１、９７、１１３、１２９、１４５、１６１、１７７、１９３、２０９、２２５、２４１、２５７、２７３、２８９、３０５、３２１、３３７、３５３、３６９、３８５、４０１、４１７、４３３、４４９、４６５、４８１、４９７、５１３、５２９、５４５、５６１、５７７、および５９３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ１ドメインと、
（ｂ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、３８６、４０２、４１８、４３４、４５０、４６６、４８２、４９８、５１４、５３０、５４６、５６２、５７８、および５９４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、アルファ鎖可変ドメインＣＤＲ２ドメインと、
（ｃ）配列番号３、１９、３５、５１、６７、８３、９９、１１５、１３１、１４７、１６３、１７９、１９５、２１１、２２７、２４３、２５９、２７５、２９１、３０７、３２３、３３９、３５５、３７１、３８７、４０３、４１９、４３５、４５１、４６７、４８３、４９９、５１５、５３１、５４７、５６３、５７９、および５９５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ３ドメインと、
（ｄ）配列番号９、２５、４１、５７、７３、８９、１０５、１２１、１３７、１５３、１６９、１８５、２０１、２１７、２３３、２４９、２６５、２８１、２９７、３１３、３２９、３４５、３６１、３７７、３９３、４０９、４２５、４４１、４５７、４７３、４８９、５０５、５２１、５３７、５５３、５６９、５８５、および６０１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインＣＤＲ１と、
（ｅ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、３９４、４１０、４２６、４４２、４５８、４７４、４９０、５０６、５２２、５３８、５５４、５７０、５８６、および６０２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインＣＤＲ２と、
（ｆ）配列番号１１、２７、４３、５９、７５、９１、１０７、１２３、１３９、１５５、１７１、１８７、２０３、２１９、２３５、２５１、２６７、２８３、２９９、３１５、３３１、３４７、３６３、３７９、３９５、４１１、４２７、４４３、４５９、４７５、４９１、５０７、５２３、５３９、５５５、５７１、５８７、および６０３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインＣＤＲ３と、を含む、請求項２８～３３のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド分子。
前記ＴＣＲが、配列番号７／１５、２３／３１、３９／４７、５５／６３、７１／７９、８７／９５、１０３／１１１、１１９／１２７、１３５／１４３、１５１／１５９、１６７／１７５、１８３／１９１、１９９／２０７、２１５／２２３、２３１／２３９、２４７／２５５、２６３／２７１、２７９／２８７、２９５／３０３、３１１／３１９、３２７／３３５、３４３／３５１、３５９／３６７、３７５／３８３、３９１／３９９、４０７／４１５、４２３／４３１、４３９／４４７、４５５／４６３、４７１／４７９、４８７／４９５、５０３／５１１、５１９／５２７、５３５／５４３、５５１／５５９、５６７／５７５、５８３／５９１、および５９９／６０７からなる群から選択されるアルファ鎖可変ドメイン／ベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列対を含む、請求項３４に記載のポリヌクレオチド分子。
前記ＴＣＲが、配列番号８７／３１、２３／９５、２３１／６０７、２３１／２２３、２３１／５９１、２３１／２５５、２３１／２７１、２３１／７９、２３１／４７、２３１／３９９、５９９／２３９、５９９／２２３、５９９／５９１、５９９／２５５、５９９／２７１、５９９／７９、５９９／４７、５９９／３９９、２１５／２３９、２１５／６０７、２１５／５９１、２１５／２５５、２１５／２７１、２１５／７９、２１５／４７、２１５／３９９、５８３／２３９、５８３／６０７、５８３／２２３、５８３／２５５、５８３／２７１、５８３／７９、５８３／４７、５８３／３９９、２４７／２３９、２４７／６０７、２４７／２２３、２４７／５９１、２４７／２７１、２４７／７９、２４７／４７、２４７／３９９、２６３／２３９、２６３／６０７、２６３／２２３、２６３／５９１、２６３／２５５、２６３／７９、２６３／４７、２６３／３９９、７１／２３９、７１／６０７、７１／２２３、７１／５９１、７１／２５５、７１／２７１、７１／４７、７１／３９９、３９／２３９、３９／６０７、３９／２２３、３９／５９１、３９／２５５、３９／２７１、３９／７９、３９／３９９、３９１／２３９、３９１／６０７、３９１／２２３、３９１／５９１、３９１／２５５、３９１／２７１、３９１／７９、３９１／４７、４３９／１２７、４３９／３１９、４３９／２８７、４３９／１５、４３９／１１１、４３９／３８３、４３９／１９１、４３９／５１１、４３９／５２７、４３９／５５９、４３９／２０７、１１９／４４７、１１９／３１９、１１９／２８７、１１９／１５、１１９／１１１、１１９／３８３、１１９／１９１、１１９／５１１、１１９／５２７、１１９／５５９、１１９／２０７、３１１／４４７、３１１／１２７、３１１／２８７、３１１／１５、３１１／１１１、３１１／３８３、３１１／１９１、３１１／５１１、３１１／５２７、３１１／５５９、３１１／２０７、２７９／４４７、２７９／１２７、２７９／３１９、２７９／１５、２７９／１１１、２７９／３８３、２７９／１９１、２７９／５１１、２７９／５２７、２７９／５５９、２７９／２０７、７／４４７、７／１２７、７／３１９、７／２８７、７／１１１、７／３８３、７／１９１、７／５１１、７／５２７、７／５５９、７／２０７、１０３／４４７、１０３／１２７、１０３／３１９、１０３／２８７、１０３／１５、１０３／３８３、１０３／１９１、１０３／５１１、１０３／５２７、１０３／５５９、１０３／２０７、３７５／４４７、３７５／１２７、３７５／３１９、３７５／２８７、３７５／１５、３７５／１１１、３７５／１９１、３７５／５１１、３７５／５２７、３７５／５５９、３７５／２０７、１８３／４４７、１８３／１２７、１８３／３１９、１８３／２８７、１８３／１５、１８３／１１１、１８３／３８３、１８３／５１１、１８３／５２７、１８３／５５９、１８３／２０７、５０３／４４７、５０３／１２７、５０３／３１９、５０３／２８７、５０３／１５、５０３／１１１、５０３／３８３、５０３／１９１、５０３／５２７、５０３／５５９、５０３／２０７、５１９／４４７、５１９／１２７、５１９／３１９、５１９／２８７、５１９／１５、５１９／１１１、５１９／３８３、５１９／１９１、５１９／５１１、５１０／５５９、５１９／２０７、５５１／４４７、５５１／１２７、５５１／３１９、５５１／２８７、５５１／１５、５５１／１１１、５５１／３８３、５５１／１９１、５５１／５１１、５５１／５２７、５５１／２０７、１９９／４４７、１９９／１２７、１９９／３１９、１９９／２８７、１９９／１５、１９９／１１１、１９９／３８３、１９９／１９１、１９９／５１１、１９９／５２７、および１９９／５５９からなる群から選択されるアルファ鎖可変ドメイン／ベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列対を含む、請求項３４に記載のポリヌクレオチド分子。
前記ＴＣＲが、
（ａ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、３２４、３４０、３５６、３７２、３８８、４０４、４２０、４３６、４５２、４６８、４８４、５００、５１６、５３２、５４８、５６４、５８０、および５９６からなる群から選択される核酸配列によってコードされるアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ１と、
（ｂ）配列番号５、２１、３７、５３、６９、８５、１０１、１１７、１３３、１４９、１６５、１８１、１９７、２１３、２２９、２４５、２６１、２７７、２９３、３０９、３２５、３４１、３５７、３７３、３８９、４０５、４２１、４３７、４５３、４６９、４８５、５０１、５１７、５３３、５４９、５６５、５８１、および５９７からなる群から選択される核酸配列によってコードされるアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ２と、
（ｃ）配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、３２６、３４２、３５８、３７４、３９０、４０６、４２２、４３８、４５４、４７０、４８６、５０２、５１８、５３４、５５０、５６６、５８２、および５９８からなる群から選択される核酸配列によってコードされるアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ３と、
（ｄ）配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３３２、３４８、３６４、３８０、３９６、４１２、４２８、４４４、４６０、４７６、４９２、５０８、５２４、５４０、５５６、５７２、５８８、および６０４からなる群から選択される核酸配列によってコードされるベータ鎖可変ドメインＣＤＲ１と、
（ｅ）配列番号１３、２９、４５、６１、７７、９３、１０９、１２５、１４１、１５７、１７３、１８９、２０５、２２１、２３７、２５３、２６９、２８５、３０１、３１７、３３３、３４９、３６５、３８１、３９７、４１３、４２９、４４５、４６１、４７７、４９３、５０９、５２５、５４１、５５７、５７３、５８９、および６０５からなる群から選択される核酸配列によってコードされるベータ鎖可変ドメインＣＤＲ２と、
（ｆ）配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３３４、３５０、３６６、３８２、３９８、４１４、４３０、４４６、４６２、４７８、４９４、５１０、５２６、５４２、５５８、５７４、５９０、および６０６からなる群から選択される核酸配列によってコードされるベータ鎖可変ドメインＣＤＲ３と、を含む、請求項３３に記載のポリヌクレオチド分子。
前記ＴＣＲが、配列番号８／１６、２４／３２、４０／４８、５６／６４、７２／８０、８８／９６、１０４／１１２、１２０／１２８、１３６／１４４、１５２／１６０、１６８／１７６、１８４／１９２、２００／２０８、２１６／２２４、２３２／２４０、２４８／２５６、２６４／２７２、２８０／２８８、２９６／３０４、３１２／３２０、３２８／３３６、３４４／３５２、３６０／３６８、３７６／３８４、３９２／４００、４０８／４１６、４２４／４３２、４４０／４４８、４５６／４６４、４７２／４８０、４８８／４９６、５０４／５１２、５２０／５２８、５３６／５４４、５５２／５６０、５６８／５７６、５８４／５９２、６００／６０８からなる群から選択されるアルファ鎖可変ドメイン／ベータ鎖可変ドメイン核酸配列対を含む、請求項３７に記載のポリヌクレオチド分子。
請求項２８～３８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド分子を含む、ベクター。
請求項３９に記載のベクターを含む、単離された細胞。
ＭＡＧＥ－Ａ４関連疾患または障害を有する対象を治療する方法であって、前記対象に、請求項４０に記載の複数の細胞を投与することを含み、それによって前記対象を治療する、方法。
前記ＭＡＧＥ－Ａ４関連疾患または障害が、ＭＡＧＥ－Ａ４関連がんである、請求項４１に記載の方法。
前記ＭＡＧＥ－Ａ４関連がんが、脂肪肉腫、神経芽細胞腫、骨髄腫、黒色腫、転移性黒色腫、滑膜肉腫、膀胱がん、食道がん、食道扁平上皮がん、肝細胞がん、頭頸部がん、非小細胞肺がん、卵巣がん、卵巣上皮がん、前立腺がん、乳がん、星状細胞腫瘍、多形性膠芽腫、未分化星状細胞腫、脳腫瘍、卵管がん、原発性腹腔がん、進行性固形腫瘍、軟組織肉腫、肉腫、骨髄異形成症候群、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、転移性固形腫瘍、結腸がん、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈｃａｎｃｅｒ）、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ）、横紋筋肉腫、粘液様円形細胞脂肪肉腫、または再発性非小細胞肺がんである、請求項４３に記載の方法。
前記複数の細胞が、前記対象に、第２の治療剤と組み合わせて投与される、請求項４１～４３のいずれか一項に記載の方法。
ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ（配列番号６１２）（ＭＡＧＥ－Ａ４２３０～２３９）のアミノ酸配列を含む、ＨＬＡ－Ａ２提示がん精巣抗原黒色腫関連抗原４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチドに特異的に結合するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）であって、前記ＴＣＲが、配列番号６２０、６３６、６５２、６６８、６８４、７００、７１６、７３２、７４８、７６４、７８０、７９６、８１２、８２８、８４４、および８６０のうちのいずれか１つのアルファ鎖可変ドメインとともに含まれる相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）。
ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ（配列番号６１２）（ＭＡＧＥ－Ａ４２３０～２３９）のアミノ酸配列を含む、ＨＬＡ－Ａ２提示がん精巣抗原黒色腫関連抗原４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチドに特異的に結合するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）であって、配列番号６２８、６４４、６６０、６７６、６９２、７０８、７２４、７４０、７５６、７７２、７８８、８０４、８２０、８３６、８５２、および８６８のうちのいずれか１つのベータ鎖可変ドメイン内に含まれる相補的決定領域３（ＣＤＲ３）を含む、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）。
前記アルファ鎖可変ドメインが、ＣＤＲ１およびＣＤＲ２をさらに含み、前記ＣＤＲ１が、表６に示されるアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ１アミノ酸配列のうちのいずれか１つを含み、前記ＣＤＲ２が、独立して、表６に示されるアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ２アミノ酸配列のうちのいずれか１つを含む、請求項４５に記載のＴＣＲ。
前記ベータ鎖可変ドメインが、ＣＤＲ１およびＣＤＲ２をさらに含み、前記ＣＤＲ１が、表６に示されるベータ鎖可変ＣＤＲ１アミノ酸配列のうちのいずれか１つを含み、前記ＣＤＲ２が、独立して、表６に示されるベータ鎖可変ドメインＣＤＲ２アミノ酸配列のうちのいずれか１つを含む、請求項４６に記載のＴＣＲ。
前記ＴＣＲが、少なくとも１つのＴＣＲアルファ鎖可変ドメインおよび／または少なくとも１つのベータ鎖可変ドメインを含む、請求項４５～４８のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
前記ＴＣＲが、ＴＣＲアルファ鎖可変ドメインおよびＴＣＲベータ鎖可変ドメインを含む、請求項４９に記載のＴＣＲ。
表８に列挙されるアルファ鎖可変ドメイン配列のうちのいずれか１つ内に含まれるアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、表８に列挙されるベータ鎖可変ドメイン配列のうちのいずれか１つ内に含まれるベータ鎖可変ドメインＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、を含む、請求項４６～５０のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
表８に列挙されるアルファ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインを含む、請求項４５～５１のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
表８に列挙されるベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインを含む、請求項４５～５２のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
（ａ）表８に列挙されるアルファ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインと、（ｂ）表８に列挙されるベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインと、を含む、請求項４５～５３のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
（ａ）配列番号６１４、６３０、６４６、６６２、６７８、６９４、７１０、７２６、７４２、７５８、７７４、７９０、８０６、８２２、８３８、および８５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ１ドメインと、
（ｂ）配列番号６１５、６３１、６４７、６６３、６７９、６９５、７１１、７２７、７４３、７５９、７７５、７９１、８０７、８２３、８３９、および８５５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ２ドメインと、
（ｃ）配列番号６１６、６３２、６４８、６６４、６８０、６９６、７１２、７２８、７４４、７６０、７７６、７９２、８０８、８２４、８４０、および８５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ３ドメインと、
（ｄ）配列番号６２２、６３８、６５４、６７０、６８６、７０２、７１８、７３４、７５０、７６６、７８２、７９８、８１４、８３０、８４６、および８６２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインＣＤＲ１と、
（ｅ）配列番号６２３、６３９、６５５、６７１、６８７、７０３、７１９、７３５、７５１、７６７、７８３、７９９、８１５、８３１、８４７、および８６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインＣＤＲ２と、
（ｆ）配列番号６２４、６４０、６５６、６７２、６８８、７０４、７２０、７３６、７５２、７６８、７８４、８００、８１６、８３２、８４８、および８６４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインＣＤＲ３と、を含む、請求項４６～５４のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
配列番号６２０／６２８、６３６／６４４、６５２／６６０、６６８／６７６、６８４／６９２、７００／７０８、７１６／７２４、７３２／７４０、７４８／７５６、７６４／７７２、７８０／７８８、７９６／８０４、８１２／８２０、８２８／８３６、８４４／８５２、および８６０／８６８からなる群から選択されるアルファ鎖可変ドメイン／ベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列対を含む、請求項５５に記載のＴＣＲ。
配列番号６２０／６２８、６２０／６４４、６２０／６６０、６２０／６７６、６２０／６９２、６２０／７０８、６２０／７２４、６２０／７４０、６２０／７５６、６２０／７７２、６２０／７８８、６２０／８０４、６２０／８２０、６２０／８３６、６２０／８５２、６２０／８６８、６３６／６２８、６３６／６４４、６３６／６６０、６３６／６７６、６３６／６９２、６３６／７０８、６３６／７２４、６３６／７４０、６３６／７５６、６３６／７７２、６３６／７８８、６３６／８０４、６３６／８２０、６３６／８３６、６３６／８５２、６３６／８６８、６５２／６２８、６５２／６４４、６５２／６６０、６５２／６７６、６５２／６９２、６５２／７０８、６５２／７２４、６５２／７４０、６５２／７５６、６５２／７７２、６５２／７８８、６５２／８０４、６５２／８２０、６５２／８３６、６５２／８５２、６５２／８６８、６６８／６２８、６６８／６４４、６６８／６６０、６６８／６７６、６６８／６９２、６６８／７０８、６６８／７２４、６６８／７４０、６６８／７５６、６６８／７７２、６６８／７８８、６６８／８０４、６６８／８２０、６６８／８３６、６６８／８５２、６６８／８６８、６８４／６２８、６８４／６４４、６８４／６６０、６８４／６７６、６８４／６９２、６８４／７０８、６８４／７２４、６８４／７４０、６８４／７５６、６８４／７７２、６８４／７８８、６８４／８０４、６８４／８２０、６８４／８３６、６８４／８５２、６８４／８６８、７００／６２８、７００／６４４、７００／６６０、７００／６７６、７００／６９２、７００／７０８、７００／７２４、７００／７４０、７００／７５６、７００／７７２、７００／７８８、７００／８０４、７００／８２０、７００／８３６、７００／８５２、７００／８６８、７１６／６２８、７１６／６４４、７１６／６６０、７１６／６７６、７１６／６９２、７１６／７０８、７１６／７２４、７１６／７４０、７１６／７５６、７１６／７７２、７１６／７８８、７１６／８０４、７１６／８２０、７１６／８３６、７１６／８５２、７１６／８６８、７３２／６２８、７３２／６４４、７３２／６６０、７３２／６７６、７３２／６９２、７３２／７０８、７３２／７２４、７３２／７４０、７３２／７５６、７３２／７７２、７３２／７８８、７３２／８０４、７３２／８２０、７３２／８３６、７３２／８５２、７３２／８６８、７４８／６２８、７４８／６４４、７４８／６６０、７４８／６７６、７４８／６９２、７４８／７０８、７４８／７２４、７４８／７４０、７４８／７５６、７４８／７７２、７４８／７８８、７４８／８０４、７４８／８２０、７４８／８３６、７４８／８５２、７４８／８６８、７６４／６２８、７６４／６４４、７６４／６６０、７６４／６７６、７６４／６９２、７６４／７０８、７６４／７２４、７６４／７４０、７６４／７５６、７６４／７７２、７６４／７８８、７６４／８０４、７６４／８２０、７６４／８３６、７６４／８５２、７６４／８６８、７８０／６２８、７８０／６４４、７８０／６６０、７８０／６７６、７８０／６９２、７８０／７０８、７８０／７２４、７８０／７４０、７８０／７５６、７８０／７７２、７８０／７８８、７８０／８０４、７８０／８２０、７８０／８３６、７８０／８５２、７８０／８６８、７９６／６２８、７９６／６４４、７９６／６６０、７９６／６７６、７９６／６９２、７９６／７０８、７９６／７２４、７９６／７４０、７９６／７５６、７９６／７７２、７９６／７８８、７９６／８０４、７９６／８２０、７９６／８３６、７９６／８５２、７９６／８６８、８１２／６２８、８１２／６４４、８１２／６６０、８１２／６７６、８１２／６９２、８１２／７０８、８１２／７２４、８１２／７４０、８１２／７５６、８１２／７７２、８１２／７８８、８１２／８０４、８１２／８２０、８１２／８３６、８１２／８５２、８１２／８６８、８２８／６２８、８２８／６４４、８２８／６６０、８２８／６７６、８２８／６９２、８２８／７０８、８２８／７２４、８２８／７４０、８２８／７５６、８２８／７７２、８２８／７８８、８２８／８０４、８２８／８２０、８２８／８３６、８２８／８５２、８２８／８６８、８４４／６２８、８４４／６４４、８４４／６６０、８４４／６７６、８４４／６９２、８４４／７０８、８４４／７２４、８４４／７４０、８４４／７５６、８４４／７７２、８４４／７８８、８４４／８０４、８４４／８２０、８４４／８３６、８４４／８５２、８４４／８６８、８６０／６２８、８６０／６４４、８６０／６６０、８６０／６７６、８６０／６９２、８６０／７０８、８６０／７２４、８６０／７４０、８６０／７５６、８６０／７７２、８６０／７８８、８６０／８０４、８６０／８２０、８６０／８３６、８６０／８５２、および８６０／８６８からなる群から選択されるアルファ鎖可変ドメイン／ベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列対を含む、請求項５５に記載のＴＣＲ。
検出可能部分をさらに含む、請求項４５～５７のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
前記単離されたＴＣＲが、５超、１０超、１５超、２０超、５０超、１００超、２００超、３００超、４００超、５００超、６００超、７００超、８００超、９００超、または１０００超のオンターゲット結合／オフターゲット結合値を有する、請求項４５～５７のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
前記単離されたＴＣＲが、１０超のオンターゲット結合／オフターゲット結合値を有する、請求項６１に記載のＴＣＲ。
前記単離されたＴＣＲが、５００超のオンターゲット結合／オフターゲット結合値を有する、請求項６１に記載のＴＣＲ。
請求項４５～６１のいずれか一項に記載の単離されたＴＣＲに対して結合において競合する、ＴＣＲ。
請求項４５～６１のいずれか一項に記載のＴＣＲと、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む、医薬組成物。
請求項４５～６１のいずれか一項に記載のＴＣＲを提示する、単離された細胞。
請求項４５、４７、および４９～６１のいずれか一項に記載のＴＣＲのアルファ鎖可変ドメインをコードするポリヌクレオチド配列を含む、ポリヌクレオチド分子。
請求項４６、４８、および４９～６１のいずれか一項に記載のＴＣＲのベータ鎖可変ドメインをコードするポリヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド分子。
請求項６５または６６に記載のポリヌクレオチド配列を含む、ベクター。
請求項６７に記載のベクターを発現する、単離された細胞。
ＭＡＧＥ－Ａ４関連疾患または障害を有する対象を治療する方法であって、前記対象に、治療有効量の請求項４５～６１のいずれか一項に記載のＴＣＲ、請求項６３に記載の医薬組成物、または請求項６４に記載の単離された細胞を投与することを含み、それによって前記対象を治療する、方法。
前記ＭＡＧＥ－Ａ４関連疾患または障害が、ＭＡＧＥ－Ａ４関連がんである、請求項６９に記載の方法。
前記ＭＡＧＥ－Ａ４関連がんが、脂肪肉腫、神経芽細胞腫、骨髄腫、黒色腫、転移性黒色腫、滑膜肉腫、膀胱がん、食道がん、食道扁平上皮がん、肝細胞がん、頭頸部がん、非小細胞肺がん、卵巣がん、卵巣上皮がん、前立腺がん、乳がん、星状細胞腫瘍、多形性膠芽腫、未分化星状細胞腫、脳腫瘍、卵管がん、原発性腹腔がん、進行性固形腫瘍、軟組織肉腫、肉腫、骨髄異形成症候群、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、転移性固形腫瘍、結腸がん、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈｃａｎｃｅｒ）、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ）、横紋筋肉腫、粘液様円形細胞脂肪肉腫、または再発性非小細胞肺がんである、請求項７０に記載の方法。
前記ＴＣＲ、前記医薬組成物、または前記細胞が、前記対象に、第２の治療剤と組み合わせて投与される、請求項６９～７１のいずれか一項に記載の方法。
前記投与することが、非経口的である、請求項６９～７１のいずれか一項に記載の方法。
Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードするポリヌクレオチド分子であって、前記ＴＣＲが、ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ（配列番号６１２）（ＭＡＧＥ－Ａ４２３０～２３９）のアミノ酸配列を含むＨＬＡ－Ａ２提示がん精巣抗原黒色腫関連抗原４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチドに特異的に結合し、前記ＴＣＲが、（ａ）発光アッセイによって決定されるときに、予測されるオフターゲットペプチドを発現する細胞に結合しない特性と、（ｂ）フローサイトメトリーアッセイによって決定されるときに、予測されるオフターゲットペプチドを発現する細胞に結合しない特性と、（ｃ）ＴＣＲ媒介性Ｔ細胞シグナル伝達発光バイオアッセイによって決定されるときに、Ｔ細胞応答を、患者由来ＭＡＧＥ－Ａ４特異的ＴＣＲよりも約２倍大きく活性化する特性と、（ｄ）ＴＣＲ媒介性Ｔ細胞シグナル伝達発光バイオアッセイによって決定されるときに、Ｔ細胞応答を、親和性成熟した（例えば、ファージディスプレイによる）ＭＡＧＥ－Ａ４特異的ＴＣＲよりも約２倍大きく活性化する特性と、からなる群から選択される特性を有する、ポリヌクレオチド分子。
少なくとも１つのＴＣＲアルファ鎖可変ドメインおよび／または少なくとも１つのベータ鎖可変ドメインをコードする、請求項７４に記載のポリヌクレオチド分子。
前記ＴＣＲが、表８に列挙されるアルファ鎖可変ドメイン配列のうちのいずれか１つ内に含まれるアルファ鎖可変ドメイン相補的決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、表８に列挙されるベータ鎖可変ドメイン配列のうちのいずれか１つ内に含まれるベータ鎖可変ドメインＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、を含む、請求項７４に記載のポリヌクレオチド分子。
前記ＴＣＲが、表８に列挙されるアルファ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインを含む、請求項７５または７６に記載のポリヌクレオチド分子。
前記ＴＣＲが、表８に列挙されるベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインを含む、請求項７４～７７のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド分子。
前記ＴＣＲが、（ａ）表８に列挙されるアルファ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインと、（ｂ）表８に列挙される前記ベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列のアミノ酸配列のうちのいずれか１つの全アミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインと、を含む、請求項７４～７８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド分子。
前記ＴＣＲが、
（ａ）配列番号６１４、６３０、６４６、６６２、６７８、６９４、７１０、７２６、７４２、７５８、７７４、７９０、８０６、８２２、８３８、および８５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ１ドメインと、
（ｂ）配列番号６１５、６３１、６４７、６６３、６７９、６９５、７１１、７２７、７４３、７５９、７７５、７９１、８０７、８２３、８３９、および８５５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ２ドメインと、
（ｃ）配列番号６１６、６３２、６４８、６６４、６８０、６９６、７１２、７２８、７４４、７６０、７７６、７９２、８０８、８２４、８４０、および８５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ３ドメインと、
（ｄ）配列番号６２２、６３８、６５４、６７０、６８６、７０２、７１８、７３４、７５０、７６６、７８２、７９８、８１４、８３０、８４６、および８６２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインＣＤＲ１と、
（ｅ）配列番号６２３、６３９、６５５、６７１、６８７、７０３、７１９、７３５、７５１、７６７、７８３、７９９、８１５、８３１、８４７、および８６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインＣＤＲ２と、
（ｆ）配列番号６２４、６４０、６５６、６７２、６８８、７０４、７２０、７３６、７５２、７６８、７８４、８００、８１６、８３２、８４８、および８６４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するベータ鎖可変ドメインＣＤＲ３と、を含む、請求項７４～７９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド分子。
前記ＴＣＲが、配列番号６２０／６２８、６３６／６４４、６５２／６６０、６６８／６７６、６８４／６９２、７００／７０８、７１６／７２４、７３２／７４０、７４８／７５６、７６４／７７２、７８０／７８８、７９６／８０４、８１２／８２０、８２８／８３６、８４４／８５２、および８６０／８６８からなる群から選択されるアルファ鎖可変ドメイン／ベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列対を含む、請求項８０に記載のポリヌクレオチド分子。
前記ＴＣＲが、配列番号６２０／６２８、６２０／６４４、６２０／６６０、６２０／６７６、６２０／６９２、６２０／７０８、６２０／７２４、６２０／７４０、６２０／７５６、６２０／７７２、６２０／７８８、６２０／８０４、６２０／８２０、６２０／８３６、６２０／８５２、６２０／８６８、６３６／６２８、６３６／６４４、６３６／６６０、６３６／６７６、６３６／６９２、６３６／７０８、６３６／７２４、６３６／７４０、６３６／７５６、６３６／７７２、６３６／７８８、６３６／８０４、６３６／８２０、６３６／８３６、６３６／８５２、６３６／８６８、６５２／６２８、６５２／６４４、６５２／６６０、６５２／６７６、６５２／６９２、６５２／７０８、６５２／７２４、６５２／７４０、６５２／７５６、６５２／７７２、６５２／７８８、６５２／８０４、６５２／８２０、６５２／８３６、６５２／８５２、６５２／８６８、６６８／６２８、６６８／６４４、６６８／６６０、６６８／６７６、６６８／６９２、６６８／７０８、６６８／７２４、６６８／７４０、６６８／７５６、６６８／７７２、６６８／７８８、６６８／８０４、６６８／８２０、６６８／８３６、６６８／８５２、６６８／８６８、６８４／６２８、６８４／６４４、６８４／６６０、６８４／６７６、６８４／６９２、６８４／７０８、６８４／７２４、６８４／７４０、６８４／７５６、６８４／７７２、６８４／７８８、６８４／８０４、６８４／８２０、６８４／８３６、６８４／８５２、６８４／８６８、７００／６２８、７００／６４４、７００／６６０、７００／６７６、７００／６９２、７００／７０８、７００／７２４、７００／７４０、７００／７５６、７００／７７２、７００／７８８、７００／８０４、７００／８２０、７００／８３６、７００／８５２、７００／８６８、７１６／６２８、７１６／６４４、７１６／６６０、７１６／６７６、７１６／６９２、７１６／７０８、７１６／７２４、７１６／７４０、７１６／７５６、７１６／７７２、７１６／７８８、７１６／８０４、７１６／８２０、７１６／８３６、７１６／８５２、７１６／８６８、７３２／６２８、７３２／６４４、７３２／６６０、７３２／６７６、７３２／６９２、７３２／７０８、７３２／７２４、７３２／７４０、７３２／７５６、７３２／７７２、７３２／７８８、７３２／８０４、７３２／８２０、７３２／８３６、７３２／８５２、７３２／８６８、７４８／６２８、７４８／６４４、７４８／６６０、７４８／６７６、７４８／６９２、７４８／７０８、７４８／７２４、７４８／７４０、７４８／７５６、７４８／７７２、７４８／７８８、７４８／８０４、７４８／８２０、７４８／８３６、７４８／８５２、７４８／８６８、７６４／６２８、７６４／６４４、７６４／６６０、７６４／６７６、７６４／６９２、７６４／７０８、７６４／７２４、７６４／７４０、７６４／７５６、７６４／７７２、７６４／７８８、７６４／８０４、７６４／８２０、７６４／８３６、７６４／８５２、７６４／８６８、７８０／６２８、７８０／６４４、７８０／６６０、７８０／６７６、７８０／６９２、７８０／７０８、７８０／７２４、７８０／７４０、７８０／７５６、７８０／７７２、７８０／７８８、７８０／８０４、７８０／８２０、７８０／８３６、７８０／８５２、７８０／８６８、７９６／６２８、７９６／６４４、７９６／６６０、７９６／６７６、７９６／６９２、７９６／７０８、７９６／７２４、７９６／７４０、７９６／７５６、７９６／７７２、７９６／７８８、７９６／８０４、７９６／８２０、７９６／８３６、７９６／８５２、７９６／８６８、８１２／６２８、８１２／６４４、８１２／６６０、８１２／６７６、８１２／６９２、８１２／７０８、８１２／７２４、８１２／７４０、８１２／７５６、８１２／７７２、８１２／７８８、８１２／８０４、８１２／８２０、８１２／８３６、８１２／８５２、８１２／８６８、８２８／６２８、８２８／６４４、８２８／６６０、８２８／６７６、８２８／６９２、８２８／７０８、８２８／７２４、８２８／７４０、８２８／７５６、８２８／７７２、８２８／７８８、８２８／８０４、８２８／８２０、８２８／８３６、８２８／８５２、８２８／８６８、８４４／６２８、８４４／６４４、８４４／６６０、８４４／６７６、８４４／６９２、８４４／７０８、８４４／７２４、８４４／７４０、８４４／７５６、８４４／７７２、８４４／７８８、８４４／８０４、８４４／８２０、８４４／８３６、８４４／８５２、８４４／８６８、８６０／６２８、８６０／６４４、８６０／６６０、８６０／６７６、８６０／６９２、８６０／７０８、８６０／７２４、８６０／７４０、８６０／７５６、８６０／７７２、８６０／７８８、８６０／８０４、８６０／８２０、８６０／８３６、８６０／８５２、および８６０／８６８からなる群から選択されるアルファ鎖可変ドメイン／ベータ鎖可変ドメインアミノ酸配列対を含む、請求項８０に記載のポリヌクレオチド分子。
前記ＴＣＲが、
（ａ）配列番号６１７、６３３、６４９、６６５、６８１、６９７、７１３、７２９、７４５、７６１、７７７、７９３、８０９、８２５、８４１、および８５７からなる群から選択される核酸配列によってコードされるアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ１と、
（ｂ）配列番号６１８、６３４、６５０、６６６、６８２、６９８、７１４、７３０、７４６、７６２、７７８、７９４、８１０、８２６、８４２、および８５８からなる群から選択される核酸配列によってコードされるアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ２と、
（ｃ）配列番号６１９、６３５、６５１、６６７、６８３、６９９、７１５、７３１、７４７、７６３、７７９、７９５、８１１、８２７、８４３、および８５９からなる群から選択される核酸配列によってコードされるアルファ鎖可変ドメインＣＤＲ３と、
（ｄ）配列番号６２５、６４１、６５７、６７３、６８９、７０５、７２１、７３７、７５３、７６９、７８５、８０１、８１７、８３３、８４９、および８６５からなる群から選択される核酸配列によってコードされるベータ鎖可変ドメインＣＤＲ１と、
（ｅ）配列番号６２６、６４２、６５８、６７４、６９０、７０６、７２２、７３８、７５４、７７０、７８６、８０２、８１８、８３４、８５０、および８６６からなる群から選択される核酸配列によってコードされるベータ鎖可変ドメインＣＤＲ２と、
（ｆ）配列番号６２７、６４３、６５９、６７５、６９１、７０７、７２３、７３９、７５５、７７１、７８７、８０３、８１９、８３５、８５１、および８６７からなる群から選択される核酸配列によってコードされるベータ鎖可変ドメインＣＤＲ３と、を含む、請求項３３に記載のポリヌクレオチド分子。
前記ＴＣＲが、配列番号６２１／６２９、６３７／６４５、６５３／６６１、６６９／６７７、６８５／６９３、７０１／７０９、７１７／７２５、７３３／７４１、７４９／７５７、７６５／７７３、７８１／７８９、７９７／８０５、８１３／８２１、８２９／８３７、８４５／８５３、および８６１／８６９からなる群から選択されるアルファ鎖可変ドメイン／ベータ鎖可変ドメイン核酸配列対を含む、請求項８３に記載の単離された核酸分子。
請求項７４～８４のいずれか一項に記載の単離された核酸分子のポリヌクレオチド配列を含む、ベクター。
請求項８５に記載のベクターを含む、単離された細胞。
ＭＡＧＥ－Ａ４関連疾患または障害を有する対象を治療する方法であって、前記対象に、請求項８６に記載の細胞を投与することを含み、それによって前記対象を治療する、方法。
前記ＭＡＧＥ－Ａ４関連疾患または障害が、ＭＡＧＥ－Ａ４関連がんである、請求項８７に記載の方法。
前記ＭＡＧＥ－Ａ４関連がんが、脂肪肉腫、神経芽細胞腫、骨髄腫、黒色腫、転移性黒色腫、滑膜肉腫、膀胱がん、食道がん、食道扁平上皮がん、肝細胞がん、頭頸部がん、非小細胞肺がん、卵巣がん、卵巣上皮がん、前立腺がん、乳がん、星状細胞腫瘍、多形性膠芽腫、未分化星状細胞腫、脳腫瘍、卵管がん、原発性腹腔がん、進行性固形腫瘍、軟組織肉腫、肉腫、骨髄異形成症候群、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、転移性固形腫瘍、結腸がん、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈｃａｎｃｅｒ）、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ）、横紋筋肉腫、粘液様円形細胞脂肪肉腫、または再発性非小細胞肺がんである、請求項８８に記載の方法。
前記細胞が、前記対象に、第２の治療剤と組み合わせて投与される、請求項８７～８９のいずれか一項に記載の方法。