JP2022535553A - 抗ｃｅａｃａｍ５モノクローナル抗体、その作製方法およびその使用 - Google Patents

Abstract

ヒト癌胎児性抗原関連細胞接着分子５（ＣＥＡＣＡＭ５）に特異的に結合し得るモノクローナル抗体およびその抗原結合フラグメントが提供される。さらに、前記抗体およびその抗原結合フラグメントの作製方法および使用も提供される。

Description

技術分野
本願は、生物学的免疫技術の分野に属し、具体的には、ヒト癌胎児性抗原関連細胞接着分子５（ＣＥＡＣＡＭ５）と特異的に結合し得るモノクローナル抗体およびその抗原結合フラグメントに関する。本願はまた、抗体およびその抗原結合フラグメントの作製方法および使用に関する。

背景
ヒト癌胎児性抗原関連細胞接着分子（ＣＥＡＣＡＭ）遺伝子ファミリーは、１９６０年代といった早期に発見され、１９番染色体上（ｑ１３．１と１３．３の間）に位置する３５の遺伝子／偽遺伝子を含み、そのうちタンパク質をコードするものは２１ある。ＣＥＡＣＡＭは、接着分子の免疫グロブリンスーパーファミリーに属し、そのドメインは高度にグリコシル化され、通常、１～２の免疫グロブリン可変領域様ドメイン（Ｎドメイン）と０～６の免疫グロブリン定常領域様ドメインを含む。ＣＥＡＣＡＭタンパク質は細胞膜外に位置し、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＥＡＣＡＭ３およびＣＥＡＣＡＭ４は疎水性の膜貫通ドメインによって細胞膜に接続し；ＣＥＡＣＡＭ５－８はグリコシル－ホスファチジル－イノシトールによって細胞膜に接続している。これらの細胞外ドメインは通常、細胞（例えば、上皮、内皮、樹状突起、および白血球）間の接着分子として働く。

ＣＥＡＣＡＭは、様々な細胞機能を含み、細胞間の接着機能に基づくシグナル伝達を介して細胞生長および分化を調節し、インスリンホメオスタシス、血管新生および免疫調節に重要な役割を果たす。ＣＥＡＣＡＭ遺伝子ファミリーのメンバーは、微生物病原体に対する受容体を含む様々な病態生理学的役割に関与している。それらは発癌、特に癌の検出、進行および転移に重要な役割を果たす。ＣＥＡＣＡＭ５（ＣＥＡと呼ばれ、ＣＤ６６ｅとしても知られる）は、約１８０ｋＤａの分子量を有する糖タンパク質である。ＣＥＡＣＡＭ５は、グリコシル－ホスファチジル－イノシトール（ＧＰＩ）アンカーを介して細胞膜に接続される７つドメインを含む。これらの７つのドメインには、１つのＮ末端Ｉｇ可変ドメインとＩｇ定常ドメインと相同な６つのドメイン（Ａ１－Ｂ１－Ａ２－Ｂ２－Ａ３－Ｂ３）が含まれる。ＣＥＡＣＡＭ５は、当初は胎児組織で発現されるタンパク質であると考えられており、現在では、いくつかの正常成体組織で確認されている。多くのタイプの癌でＣＥＡＣＡＭ５の過剰発現が見られている。例えば、ＣＥＡＣＡＭ５は、結腸癌患者の血液に検出することができる。さらに、さらなる研究で、その過剰発現が通常予後が不良な多くの悪性腫瘍に関連していることが判明している。前立腺癌および結腸直腸癌では、ＣＥＡＣＡＭ５の過剰発現が腫瘍バイオマーカーであることが示されている。

加えて、ＣＥＡＣＡＭ５／ＣＥＡＣＡＭ６は、乳癌、膵臓癌、卵巣癌、結腸癌、肺癌および胃腺腫瘍などの様々な悪性腫瘍で過剰発現され、腫瘍の浸潤および転移に関連していることも見出されている。肝臓転移の開始の際に、ＣＥＡＣＡＭ５はその受容体ＣＥＡｒに結合し、それらの相互作用が炎症誘発性サイトカイン、主としてＩＬ－１、ＩＬ－６、ＩＬ－１０およびＴＮＦ－αの活性化および生産をもたらす。簡単に述べると、これらのサイトカインは、肝細胞およびクッパー細胞の微小環境、ならびにそれらの肝類洞細胞との相互作用を変化させる。これらの相互作用は腫瘍細胞または他の肝臓細胞に影響を及ぼすだけでなく、脳脊髄液中のＣＳＣおよびその他の循環腫瘍細胞の活力を促進すると思われる。

これに基づき、臨床的予後および癌の制御のための、癌患者の血液におけるＣＥＡＣＡＭ５の上昇を測定する免疫学的アッセイにおける腫瘍マーカーとしてのＣＥＡＣＡＭ５の既知の使用に加え、ＣＥＡＣＡＭ５は標的化療法の潜在的に有用な腫瘍関連抗原となったことがより重要である。癌の標的免疫療法のためのＣＥＡＣＡＭ５の使用が報告された方法は主に２つある。１つの方法は、特に抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）によって免疫細胞の溶解活性を誘発して、ＣＥＡＣＡＭ５を発現する腫瘍細胞を排除するために抗ＣＥＡＣＡＭ５抗体を使用し；もう１つの方法は、ＣＥＡＣＡＭ５を発現する腫瘍細胞を特異的に標的とし、それによりエフェクター分子の治療効果を行使するために、抗ＣＥＡＣＡＭ５抗体またはその抗体フラグメントと薬物、毒素、放射性ヌクレオチド、免疫調節剤またはサイトカインなどのエフェクター分子をコンジュゲートすることを含んでなる。ＣＥＡＣＡＭ５は結腸直腸癌、膵臓癌、肺癌、胃癌、肝細胞性腫瘍、乳癌および甲状腺癌などの数種の固形腫瘍でより高く過剰発現するということを鑑みて、現研究は抗ＣＥＡＣＡＭ５抗体の抗原認識力に焦点を当てている。

結論として、現研究は、ＣＥＡＣＡＭ５を標的とする治療が腫瘍転移の阻害を助けることを示す。特に、ＣＥＡＣＡＭ５に対して強い特異性を有する抗体は、抗体の標的外により引き起こされる副作用をより良く避けることができる。例えば、ＣＥＡＣＡＭ１およびＣＥＡＣＡＭ３は、ヒト免疫系および骨髄、例えば好中球などに広く分布しており、特異的なＣＥＡＣＡＭ５抗体は、薬物の潜在的副作用を軽減し、治療域を拡大することができる。

このことに基づけば、より高い親和性およびより強い特異性を有する抗ＣＥＡＣＡＭ抗体の需要がある。

発明の内容
本願において、特に断りのない限り、本明細書で使用する科学用語および技術用語は、当業者によって一般に理解されている意味を有する。加えて、本明細書で使用する細胞培養、分子遺伝学、核酸化学、および免疫学の研究手順は総て、対応する分野で広く使用されている常法である。同時に、本願をより良く理解するために、以下に関連用語の定義および説明を示す。

発明の具体的説明

用語の定義
用語「抗体」は、本願において、特定の抗原に結合し得るいずれの免疫グロブリン、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体または二重特異性（二価）抗体も含む。天然の無傷抗体は、２本の重鎖と２本の軽鎖を含む。各重鎖は、１つの可変領域と第１、第２および第３の定常領域から構成され；各軽鎖は、１つの可変領域と１つの定常領域から構成される。哺乳動物重鎖はα、δ、ε、γおよびμに分けることができ、哺乳動物軽鎖はλまたはκに分けることができる。抗体は、「Ｙ」型を示し、このＹ型構造の頚部は、ジスルフィド結合によって連結された２本の重鎖の第２および第３の定常領域から構成される。「Ｙ」型構造の各腕は、１本の軽鎖の可変領域および定常領域と連結された重鎖の１つの可変領域および第１の定常領域を含む。軽鎖および重鎖の可変領域は、抗原結合を決定する。各鎖の可変領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる３つの超可変領域を含む。軽鎖（Ｌ）のＣＤＲには、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３が含まれ、重鎖（Ｈ）のＣＤＲには、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３が含まれる。本願に開示される抗体とその抗原結合フラグメントのＣＤＲ境界は、Ｋａｂａｔ、ＣｈｏｃｈｉａまたはＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉナンバリングシステムによって命名または特定することができる(Al-Lazikani, B., Chothia, C., Lesk, AM, J. Mol. Biol., 273(4): 927 (1997); Chothia, C., etc., J. Mol. Biol., 186(3 ): 651-63 (1985); Chothia, C. and Lesk, AM, J. Mol. Biol., 196: 901 (1987); Chothia, C. et al., Nature, 342(6252): 877-83 (1989 ); Kabat, EA, etc., National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991))。ここで、３つのＣＤＲは、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる連続した側部によって分離されている。このフレームワーク領域は、ＣＤＲよりも保存性が高く、超可変ループを支えるための足場を形成している。重鎖および軽鎖の定常
領域は抗原結合に関係しないが、複数のエフェクター機能を有する。抗体は、重鎖の定常領域のアミノ酸配列に基づいていくつかのカテゴリーに分けることができる。α、δ、ε、γおよびμ重鎖を含むかどうかによって、抗体は５つの主要なカテゴリーまたは異性体に分けることができる：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭ。いくつかの主要な抗体カテゴリーは、ＩｇＧ１（γ１重鎖）、ＩｇＧ２（γ２重鎖）、ＩｇＧ３（γ３重鎖）、ＩｇＧ４（γ４重鎖）、ＩｇＡ１（α１重鎖）またはＩｇＡ２（α２重鎖）などのようにサブクラスにさらに分けることができる。

用語「抗原結合フラグメント」は、本願において、１以上のＣＤＲを含む抗体部分、または抗原と結合するが完全な抗体構造を持たない他のいずれかの抗体フラグメントによって形成される抗体フラグメントを指す。抗原結合フラグメントの例としては、限定するものではないが、例えば、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖフラグメント、ジスルフィド結合安定化Ｆｖフラグメント（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）_２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド結合安定化二機能性抗体（ｄｓダイアボディ）、一本鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ二量体（二価二機能性抗体）、二価一本鎖抗体（ＢｓＦｖ）、多重特異性抗体、ラクダ化シングルドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体および二価ドメイン抗体が挙げられる。抗原結合フラグメントは、親抗体と同じ抗原に結合することができる。いくつかの実施形態において、抗原結合フラグメントは、特定のヒト抗体に由来する１以上のＣＤＲを、１以上の異なるヒト抗体に由来するフレームワーク領域にグラフトしたものを含み得る。

抗体の「Ｆａｂ」フラグメントは、軽鎖（可変領域と定常領域を含む）、およびジスルフィド結合により連結された重鎖の可変領域と定常領域の一部から構成される抗体分子の一部を指す。

「Ｆａｂ’」フラグメントは、ヒンジ領域の一部を含むＦａｂフラグメントを指す。

「Ｆ（ａｂ’）_２」は、Ｆａｂの二量体を指す。

抗体のＦｃセグメントは、ＡＤＣＣおよびＣＤＣなどの様々な異なるエフェクター機能を担うが、抗原結合には関与しない。

抗体「Ｆｖ」セグメントは、完全な抗原結合部位を含む最小の抗体フラグメントを指す。Ｆｖフラグメントは、軽鎖の可変領域と重鎖の可変領域から構成される。

「一本鎖Ｆｖ抗体」または「ｓｃＦｖ」は、軽鎖の可変領域と重鎖の可変領域が直接連結されているか、またはペプチド鎖を介して連結されている操作抗体を指す(Huston JS et al., Proc Natl Acad Sci USA, 85: 5879 (1988))。

「一本鎖抗体Ｆｖ－Ｆｃ」または「ｓｃＦｖ－Ｆｃ」は、特定の抗体のＦｃセグメントに連結されているｓｃＦｖから構成される操作抗体を指す。

「ラクダ化シングルドメイン抗体」、「重鎖抗体」または「ＨＣＡｂ（重鎖単独抗体、ＨＣＡｂ）」は総て、２つのＶＨドメインを軽鎖無しで有する抗体を指す(Riechmann L. and Muyldermans S., J Immunol Methods. 231(1-2): 25-38 (1999); Muyldermans S., J Biotechnol. 74(4): 277-302 (2001);Ｗ０９４／０４６７８；Ｗ０９４／２５５９１；米国特許第６，００５，０７９号)。重鎖抗体は、元はラクダ科動物（ラクダ、ヒトコブラクダ、およびラマ）に由来する。軽鎖は無いものの、ラクダ化抗体は確実な抗原結合機能を有する(Hamers Casterman C. et al., Nature 363 (6428): 446-8 (1993); Nguyen VK. et al., "Heavy-chain antibodies in Camelidae: a case of evolutionary innovation, Immunogenetics. 54 (1): 39-47 (2002); Nguyen VK. et al., Immunology. 109 (1): 93-101 (2003))。重鎖抗体の可変領域（ＶＨドメイン）は、獲得免疫によって産生される最小の既知の抗原結合ユニットである(Koch-Nolte F. et al., FASEB J.21 (13): 3490-8. Epub (2007))。

「ナノボディ」は、重鎖抗体に由来するＶＨドメインと２つの定常領域ＣＨ２およびＣＨ３から構成される抗体フラグメントを指す。

「ダイアボディ」は、フラグメントが、同じポリペプチド鎖に連結されたＶＨドメインとＶＬドメインを含む２つの抗原結合部位を有する小さな抗体フラグメントを含有する（Holliger P. et al., Proc Natl. Acad Sci US A. 90(14): 6444-8 (1993);ＥＰ４０４０９７；Ｗ０９３／１１１６１参照）。これらの２つのドメイン間のリンカーは、同じ鎖上のこれらの２つのドメインが互いと対合できないほど短く、これによりこれらの２つのドメインは他鎖の相補的ドメインと対合することを余儀なくされ、２つの抗体結合部位を形成する。これらの２つの抗体結合部位は、同じまたは異なる抗原（またはエピトープ）を標的とすることができる。

「ドメイン抗体」は、１つの重鎖可変領域または１つの軽鎖可変領域のみを含む抗体フラグメントを指す。いくつかの場合、２つ以上のＶＨドメインがポリペプチドリンカーによって共有結合的に連結されて二価ドメイン抗体を形成する。二価ドメイン抗体の２つのＶＨドメインは、同じまたは異なる抗原を標的とすることができる。

いくつかの実施形態において、「（ｄｓＦｖ）_２」は、３つのペプチド鎖を含有し、２つのＶＨ遺伝子がポリペプチドリンカーにより連結され、それらが２つのＶＬ群にジスルフィド結合により連結されている。

いくつかの実施形態において、「二重特異性ｄｓ二機能性抗体」は、ＶＬ１－ＶＨ２（ポリペプチドリンカーにより連結）およびＶＨ１－ＶＬ２（これもポリペプチドリンカーにより連結）を含み、これら２つがジスルフィド結合を介してＶＨ１とＶＬ１の間に連結されている。

「二重特異性ｄｓＦｖ」または「ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ」は、３つのポリペプチド鎖：ＶＨ１－ＶＨ２群を含有し、これらの２つの重鎖はポリペプチドリンカー（例えば、長い弾性リンカー）によって連結され、それらはジスルフィド結合を介してそれぞれＶＬ１群およびＶＬ２群に連結され、ジスルフィド結合によって対合した重鎖および軽鎖の各ペアは異なる抗原特異性を有する。

特定の実施形態において、「ｓｃＦｖ二量体」は、２つの二量体化ＶＨ－ＶＬ（ポリペプチドリンカーにより連結）群を含む二価二機能性抗体または二価一本鎖抗体（ＢｓＦｖ）であり、一方の群のＶＨと他方の群のＶＬが協働して２つの結合部位を形成し、これらの２つの結合部位は同じ抗原（またはエピトープ）または異なる抗原（またはエピトープ）を標的とすることができる。他の実施形態において、「ｓｃＦｖ二量体」は、ＶＬ１－ＶＨ２（ポリペプチドリンカーにより連結）とＶＨ１－ＶＬ２（ポリペプチドリンカーにより連結）を含む二重特異性二機能性抗体であり、ＶＨ１とＶＬ１が協働し、ＶＨ２とＶＬ２が協働し、各協働ペアは異なる抗原特異性を有する。

本願において使用される「完全ヒト」という用語に関して、抗体または抗原結合フラグメントに対して適用される場合には、抗体または抗原結合フラグメントがある特定のアミノ酸配列を有するか、またはそのアミノ酸配列からなり、そのアミノ酸配列が、ヒトもしくはヒト免疫細胞によって産生されるか、またはヒト抗体ライブラリーを用い、トランスジェニック非ヒト動物などの非ヒト供給源に由来する抗体のアミノ酸配列、あるいはヒト抗体をコードする他の配列に相当することを指す。いくつかの実施形態において、完全ヒト抗体は、非ヒト抗体に由来するアミノ酸残基（特に、抗原結合残基）を含まない。

本願において使用される「ヒト化」という用語に関して、抗体または抗原結合フラグメントに対して適用される場合には、抗体または抗原結合フラグメントが非ヒト動物に由来するＣＤＲ、ヒトに由来するＦＲ領域、およびヒトに由来する定常領域（該当する場合）を含むことを指す。ヒト化抗体または抗原結合フラグメントは免疫原性が低いことから特定の実施形態において、ヒト治療薬として使用することができる。いくつかの実施形態において、非ヒト動物は、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、モルモット、またはハムスターなどの哺乳動物である。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体または抗原結合フラグメントは、ＣＤＲ配列が非ヒトであること以外は、本質的にヒト配列からなる。いくつかの実施形態において、ヒトに由来するＦＲ領域は、それが由来するヒト抗体と同じアミノ酸配列を含み得るか、またはいくつかのアミノ酸変化、例えば、１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１個以下のアミノ酸変化を含み得る。いくつかの実施形態において、アミノ酸変化は、重鎖のＦＲ領域のみ、軽鎖のＦＲ領域のみ、または両鎖に存在し得る。いくつかの好ましい実施形態において、ヒト化抗体は、ヒトＦＲ１－３およびヒトＪＨおよびＪＫを含んでなる。

用語「キメラ」、本願において使用する場合、重鎖および／または軽鎖の一部がある種に由来し、重鎖および／または軽鎖の残りの部分が異なる種に由来する抗体または抗原結合フラグメントを指す。１つの具体例において、キメラ抗体は、ヒトに由来する定常領域とマウスなどの非ヒト動物に由来する可変領域を含み得る。

用語「癌胎児性抗原関連細胞接着分子５」（ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＥＡと略される、ＣＤ６６ｅとしても知られる；例えば、ＡＡＡ５１９６７．１／ＧＩ：１８０２２３、７０２アミノ酸参照）は、約１８０ｋＤａの分子量を有する糖タンパク質を指す。ＣＥＡＣＡＭ５は、７つのＩｇ様ドメインを含み、これら７つのドメインは、１つのＮ末端Ｉｇ可変ドメインとＩｇ定常ドメインと相同な６つのドメイン（Ａ１－Ｂ１－Ａ２－Ｂ２－Ａ３－Ｂ３）を含んでなる。ＣＥＡＣＡＭは、カルボキシ末端グリコシル－ホスファチジル－イノシトール（ＧＰＩ）アンカーを介して細胞膜に連結されている。

本願において「特異的に結合する」または「特異的結合」とは、抗体と抗原の間の反応などの、２分子間の非ランダムな結合反応を指す。いくつかの実施形態において、本願の抗体またはその抗原結合フラグメントはヒトおよび／またはサル癌胎児性抗原関連細胞接着分子５と特異的に結合し、その結合親和性（ＫＤ）は≦１０^－６Ｍである。本願において、ＫＤは、解離速度と結合相度（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）の比を指し、これは例えばＢｉａｃｏｒｅなどの機器を用いて表面プラズモン共鳴により測定することができる。

本願において「選択的結合」とは、本願の抗体またはその抗原結合フラグメントがＣＥＡＣＡＭ５タンパク質と特異的に結合するが、ＣＥＡＣＡＭ１タンパク質、ＣＥＡＣＡＭ３タンパク質、ＣＥＡＣＡＭ７タンパク質などの別のＣＥＡＣＡＭタンパク質とは実質的に結合しないか、または有意に低いレベルでしか結合しないことを指す。

いくつかの実施形態において、本願に記載される抗体の重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ１型である。いくつかの実施形態において、本願に記載される抗体の軽鎖定常領域は、κ鎖である。いくつかの実施形態において、本願に記載される抗体の重鎖および軽鎖定常領域は、それぞれヒトＩｇＧ１およびκ鎖である。

本願において、アミノ酸配列に対して「保存的置換」という場合には、あるアミノ酸残基が別のアミノ酸残基で置換されていることを指し、それらは類似の物理的および化学的特性を有する側鎖を有する。例えば、保存的置換は、疎水性側鎖を有するアミノ酸残基（例えば、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＬｅｕおよびＩｌｅ）間、中性親水性側鎖を有する残基（例えば、Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎ）間、酸性側鎖を有する残基（例えば、Ａｓｐ、Ｇｌｕ）間、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、およびＡｒｇ）間、または芳香族側鎖を有する残基（例えば、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、およびＰｈｅ）間で行われてよい。保存的置換は通常、タンパク質の立体配座構造に有意な変化を生じず、従って、タンパク質の生物活性が保持され得るということが当技術分野で知られている。

アミノ酸配列（または核酸配列）に対して「配列同一性パーセント」という場合には、配列アラインメントが行われ、同一のアミノ酸（または核酸）の数を最大にするために必要であれば間隔が導入された後に、参照配列のアミノ酸（または核酸）残基と同一の、候補配列のアミノ酸（または核酸）残基のパーセンテージを指す。保存的置換のアミノ酸残基は、同一の残基と見なされる場合も見なされない場合もある。配列アラインメントは、アミノ酸（または核酸）配列の配列同一性パーセントを決定するために当技術分野で開示されているツールによって行うことができる。当業者は、これらのツールのデフォルトパラメーターを使用するか、または例えば、好適なアルゴリズムを選択することにより、アラインメントの必要に適宜応じてパラメーターを調節することができる。

本願において使用される「Ｔ細胞」には、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、Ｔヘルパー１型Ｔ細胞、Ｔヘルパー２型Ｔ細胞、Ｔヘルパー１７型Ｔ細胞、およびサプレッサーＴ細胞が含まれる。

「エフェクター機能」は、本願において使用する場合、Ｃ１複合体およびＦｃ受容体などのそのエフェクターと結合する抗体のＦｃ領域の生物活性を指す。例示的エフェクター機能としては、抗体とＣ１複合体上のＣ１ｑとの相互作用によって誘導される補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）、抗体のＦｃ領域とエフェクター細胞上のＦｃ受容体との結合によって誘導される抗体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、および貪食作用が挙げられる。

本願において「癌」または「癌症状」は、腫瘍または悪性細胞成長、増殖または転移によって媒介され、固形腫瘍および白血病などの非固形腫瘍を生じる医学的状態を指す。本願において「腫瘍」は、腫瘍および／または悪性細胞の固形物を指す。

特定の病態の「治療」または「療法」は、特定の病態の予防または緩和、特定の病態の発現または発生率の低減、特定の病態の発症リスクの低減、および特定の病態に関連する症状の発生の予防または遅延、特定の病態に関連する症状の軽減または終息、特定の病態の完全または部分的逆転の形成、特定の病態の治癒、またはそれらの任意の組合せを含んでなる。癌の場合、「治療」または「療法」は、腫瘍もしくは悪性細胞の成長、生殖もしくは転移の阻害もしくは緩徐化、または上記のいくつかの任意の組合せを指し得る。腫瘍の場合、「治療」または「療法」は、腫瘍の総てもしくは一部の除去、腫瘍の成長および転移の阻害もしくは遅延、腫瘍発生の予防もしくは遅延、または上記のいくつかの組合せを含んでなる。

「単離された」材料とは、それがその天然状態から人為的に変化されたことを指す。ある特定の「単離された」物質または成分が天然状態にあると思われる場合、それはその元の状態から変化されているか、またはその元の状態から逸脱しているか、またはその両方である。例えば、生きている動物中に天然に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは単離されていないが、これらのポリヌクレオチドまたはポリペプチドが、それらの天然状態で共存する物質から十分に分離され、十分に純粋な状態で存在する場合には、それらは「単離された」と見なすことができる。いくつかの実施形態において、抗体およびその抗原結合フラグメントの純度は、少なくとも９０％、９３％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％であり、これは電気泳動法（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等電点電気泳動、キャピラリー電気泳動）、またはクロマトグラフィー（例えば、イオン交換クロマトグラフィーまたは逆相ＨＰＬＣ）によって決定することができる。

本願において「ベクター」は、特定のタンパク質をコードするポリヌクレオチドがそのタンパク質の発現を可能とするように作動可能に挿入され得る伝達体を指す。ベクターは、それが運ぶ遺伝物質要素を宿主細胞内で発現させ得るように宿主細胞を形質転換、形質導入またはトランスフェクトするために使用することができる。例えば、ベクターとしては、プラスミド、ファージミド、コスミド、人工染色体（例えば、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ））、バクテリオファージ（例えば、λファージまたはＭ１３バクテリオファージ）、および動物ウイルスなどが挙げられる。ベクターとして使用される動物ウイルスのタイプとしては、レトロウイルス（レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルスを含む）、ポックスウイルス、バキュロウイルス、乳頭腫ウイルス、乳頭腫バキュロウイルス（例えば、ＳＶ４０）が挙げられる。ベクターは、プロモーター配列、転写開始配列、エンハンサー配列、選択要素およびリポーター遺伝子を含む、発現を制御する様々な要素を含み得る。加えて、ベクターはまた、複製開始点も含み得る。ベクターはまた、限定するものではないが、ウイルス粒子、リポソーム、またはタンパクシェルを含む、それが細胞に侵入する助けをする細分も含み得る。

本願において、「宿主細胞」は、外因性ポリヌクレオチドおよび／またはベクターが導入される細胞を指す。本願に記載される宿主細胞としては、限定するものではないが、大腸菌(E. coli)もしくは枯草菌(Bacillus subtilis)などの原核細胞、酵母細胞もしくはアスペルギルス属(Aspergillus)などの真菌細胞、Ｓ２ショウジョウバエ(Drosophila)細胞またはＳｆ９などの昆虫細胞、または線維芽細胞、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ＮＳＯ細胞、ＨｅＬａ細胞、ＢＨＫ細胞、ＨＥＫ２９３細胞もしくはヒト細胞などの動物細胞が挙げられる。

本願において、「キメラ抗原受容体」はＣＡＲと呼ばれ、特定の抗原を認識するための細胞外ドメイン（例えば、特定の抗原を認識してそれを結合することができる抗原結合フラグメント）と細胞外シグナルを細胞の内部に伝達するための細胞内ドメイン（細胞内シグナル伝達領域とも呼ばれる、例えば、ＣＤ３のδ鎖またはＦｃεＲＩγの細胞内部分）を含んでなり、特定の抗原（例えば、腫瘍抗原）を認識することができる細胞表面受容体を指す。このようなキメラ抗原受容体を保有し、発現するＴ細胞はＣＡＲ－Ｔ細胞と呼ばれ、これは、細胞外ドメインを介して、特定の抗原および特定の抗原を発現する細胞（例えば、腫瘍細胞）を認識してそれと結合することができ、細胞内シグナル伝達機能によって、免疫応答を活性化し、多数の様々なエフェクターを放出し、特定の抗原（例えば、腫瘍細胞）を発現する細胞を効率的に死滅させ、それにより、治療効果（例えば、腫瘍の治療）を示し得る。

従来技術の欠点に基づけば、本願の主要な目的の１つは、より強い特異性およびより良い選択性を有する抗ＣＥＡＣＡＭ５抗体を提供することである。本願はまた、この抗体の作製方法および使用も提供し、本願の抗ＣＥＡＣＡＭ５抗体は、腫瘍の検出および／または治療のために使用され得る。

本願の抗体
１つの側面において、本願は、
（ａ）以下の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）：
（ｉ）以下の配列：配列番号１、またはそれと比較した場合に１もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ１、
（ｉｉ）以下の配列：配列番号２、またはそれと比較した場合に１もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ２、および
（ｉｉｉ）以下の配列：配列番号３、またはそれと比較した場合に１もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ３
を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）；
ならびに／または
（ｂ）以下の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）：
（ｉｖ）以下の配列：配列番号４、またはそれと比較した場合に１もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ１、
（ｖ）以下の配列：配列番号５、またはそれと比較した場合に１もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ２、ならびに
（ｖｉ）以下の配列：配列番号６、またはそれと比較した場合に１もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ３
を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含んでなる、ＣＥＡＣＡＭ５タンパク質と特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

特定の実施形態において、（ｉ）～（ｖｉ）のいずれか１つに記載される置換は保存的置換である。

特定の実施形態において、（ｉ）～（ｖｉ）のいずれか１つに記載されるＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従って定義される。

特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下の３つの重鎖ＣＤＲ：配列番号１に示されるような配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２に示されるような配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号３に示されるような配列を有するＶＨ ＣＤＲ３；ならびに／または以下の３つの軽鎖ＣＤＲ：配列番号４に示されるような配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５に示されるような配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号６に示されるような配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含んでなる。特定の実施形態において、重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従って定義される。

１つの側面において、本願は、配列番号７に示されるような重鎖可変領域（ＶＨ）に含まれる３つのＣＤＲ；および／または配列番号８に示されるような軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる３つのＣＤＲを含んでなる、ＣＥＡＣＡＭ５タンパク質と特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。好ましくは、ＶＨに含まれる３つのＣＤＲおよび／またはＶＬに含まれる３つのＣＤＲはＫａｂａｔ、ＩＭＧＴまたはＣｈｏｃｈｉａナンバリングシステムにより定義される。

特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）以下から選択されるアミノ酸配列：
（ｉ）配列番号７に示されるような配列；
（ｉｉ）配列番号７に示される配列と比較した場合に１もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列；または
（ｉｉｉ）配列番号７に示される配列と比較した場合に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する配列
を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに／または
（ｂ）以下から選択されるアミノ酸配列：
（ｉｖ）配列番号８に示されるような配列；
（ｖ）配列番号８に示される配列と比較した場合に１もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列；または
（ｖｉ）配列番号８に示される配列と比較した場合に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する配列
を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含んでなる。

特定の実施形態において、（ｉｉ）または（ｖ）に記載される置換は保存的置換である。

特定の例示的実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７に示される配列を含んでなるＶＨおよび配列番号８に示される配列を含んでなるＶＬを含んでなる。

本願の抗体またはその抗原結合フラグメントは、哺乳動物（例えば、マウスまたはヒト）免疫グロブリンに由来する定常領域配列またはその変異体を含んでなってよく、この変異体は、それが由来する配列と比較した場合に、１または複数のアミノ酸の置換、欠失または付加またはそれらの任意の組合せ（例えば、多くとも２０、多くとも１５、多くとも１０、または多くとも５個のアミノ酸の置換、欠失または付加、またはそれらの任意の組合せ；例えば、１、２、３、４または５個のアミノ酸の置換、欠失または付加、またはそれらの任意の組合せ）を有する。

特定の実施形態において、本願の抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、ヒト免疫グロブリンの重鎖定常領域（ＣＨ）もしくはその変異体を含んでなる重鎖を有し、この変異体は、それが由来する配列と比較した場合に、１もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加もしくはそれらの任意の組合せ（例えば、多くとも２０、多くとも１５、多くとも１０、もしくは多くとも５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加、もしくはまたはそれらの任意の組合せ；例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加、もしくはそれらの任意の組合せ）を有し；かつ／または
特定の実施形態において、本願の抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、ヒト免疫グロブリンの軽鎖定常領域（ＣＬ）もしくはその変異体を含んでなる軽鎖を有し、この変異体は、それが由来する配列と比較した場合に、１もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加もしくはそれらの任意の組合せ（例えば、多くとも２０、多くとも１５、多くとも１０、もしくは多くとも５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加、もしくはそれらの任意の組合せ；例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加、もしくはそれらの任意の組合せ）を有する。

いくつかの実施形態において、重鎖定常領域（ＣＨ）の変異体は、それが由来する配列と比較した場合に、１または複数のアミノ酸の保存的置換（例えば、１、２、３、４または５個のアミノ酸の保存的置換）を有し得る。

いくつかの実施形態において、軽鎖定常領域（ＣＬ）の変異体はそれが由来する配列と比較した場合に、１または複数のアミノ酸の保存的置換（例えば、１、２、３、４または５個のアミノ酸の保存的置換）を有し得る。

特定の実施形態において、重鎖定常領域は、ＩｇＧ重鎖定常領域、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４重鎖定常領域である。特定の実施形態において、重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４重鎖定常領域である。

特定の実施形態において、軽鎖定常領域はκ軽鎖定常領域である。特定の実施形態において、軽鎖定常領域はヒトκ軽鎖定常領域である。

特定の例示的実施形態において、本願の抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９に示される重鎖定常領域（ＣＨ）；および／または配列番号１１に示される軽鎖定常領域（ＣＬ）を含んでなる。

特定の実施形態において、抗原結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）_２、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、およびシングルドメイン抗体（ｓｄＡｂ）からなる群から選択される。

特定の実施形態において、抗体は、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、または多重特異性抗体である。

本願の抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下から選択される１以上の活性を有する：
（１）ＣＥＡＣＡＭ５タンパク質またはＣＥＡＣＡＭ５タンパク質を発現する細胞と特異的に結合する；
（２）ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＥＡＣＡＭ３、ＣＥＡＣＡＭ６、ＣＥＡＣＡＭ７タンパク質またはＣＥＡＣＡＭ１、ＣＥＡＣＡＭ３、ＣＥＡＣＡＭ６、ＣＥＡＣＡＭ７タンパク質を発現する細胞とは基本的に結合しない；
（３）ＣＥＡＣＡＭ８タンパク質またはＣＥＡＣＡＭ８タンパク質を発現する細胞には弱く結合するだけである、結合親和性はＣＥＡＣＡＭ５タンパク質またはＣＥＡＣＡＭ５タンパク質を発現する細胞に対する結合親和性よりも有意に低い；
（４）ＡＤＣＣ活性を有する；
（５）ＣＥＡＣＡＭ５タンパク質を発現する腫瘍細胞（例えば、結腸癌細胞、胃癌細胞）を阻害するまたは死滅させるこができ、それにより、腫瘍治療活性を有する。

特定の実施形態において、本願の抗体またはその抗原結合フラグメントは、標識を含んでなる。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、酵素（例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼ）、放射性核種、蛍光色素、発光物質（例えば、化学発光物質）またはビオチンなどの検出可能な標識を含んでなる。

特定の実施形態において、本願は、例示的抗ＣＥＡＣＡＭ５抗体ＵＭ０５－６Ｌを提供する。

当業者は、前述のＣＤＲ配列は１以上のアミノ酸の置換を含むように改変し、それにより、ヒト癌胎児性抗原関連細胞接着分子５に対する結合親和性の向上などの生物活性の向上を得ることができることを理解すべきである。例えば、ファージディスプレー技術を用いて、抗体変異体ライブラリー（例えば、ＦａｂまたはＦｃＦｖ変異体）を産生および発現させ、次に、ＣＥＡＣＡＭ５と親和性を有する抗体に関してスクリーニングすることができる。別の例において、コンピューターソフトウエアを用いてＣＥＡＣＡＭ５に対する抗体の結合のシミュレーションを行い、その結合界面を形成する抗体のアミノ酸残基を同定することができる。結合親和性の低下を防ぐためにはこれらの残基の置換を避ければよく、またはより強い結合を形成するためにこれらの残基を置換の標的とすることもできる。特定の実施形態において、ＣＤＲ配列における少なくとも１つの（または総ての）置換は保存的置換である。

特定の実施形態において、抗体または抗原結合フラグメントは、１または複数のＣＤＲ配列を含んでなり、これらのＣＤＲ配列は、配列番号１～６と比較した場合に、少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有し、同時に、ＣＥＡＣＡＭ５に対して、それらの親抗体と比較した場合に同等またはより高い結合親和性を保持する。親抗体は実質的に同じ配列を有するが、その対応するＣＤＲ配列は、配列番号１～６に示される配列に比べて１００％の配列同一性を有する。

いくつかの実施形態において、本願に記載される抗体または抗原結合フラグメントは、ＣＥＡＣＡＭ５と、≦１０^－７Ｍの結合親和性（ＫＤ）で特異的に結合し、これは表面プラズモン共鳴により測定することができる。結合親和性の値はＫＤ値により表すことができ、これは抗原と抗原結合分子の結合が平衡に達した際の解離速度と結合速度の比（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）の算出によって得ることができる。抗原結合親和性（例えば、ＫＤ）は、当技術分野で公知の好適な方法、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅなどの機器の使用を含んでなるプラズモン共鳴結合法によって適宜決定することができる。

いくつかの実施形態において、本願に記載される抗体または抗原結合フラグメントは、ＥＣ５０（すなわち、５０％結合濃度）１ｎｇ／ｍＬ～１０μｇ／ｍＬでＣＥＡＣＡＭ５と結合する。抗体または抗原結合フラグメントとＣＥＡＣＡＭ５との結合は、ＥＬＩＳＡなどのサンドイッチ法、ウエスタンブロット、ＦＡＣＳまたはその他の結合アッセイといった当技術分野で公知の方法によって決定することができる。具体例において、試験される抗体（すなわち、一次抗体）を、ＣＥＡＣＡＭ５またはＣＥＡＣＡＭ５を発現する細胞を固定化するために結合させ、次に、非結合抗体を洗い流し、一次抗体に結合することができる標識二次抗体を導入し、従って、結合した二次抗体が検出される。固定化した癌胎児性抗原関連細胞接着分子５を使用する場合、検出はマイクロプレートリーダーで行うことができ、またはＣＥＡＣＡＭ５を発現する細胞を使用する場合には、検出にＦＡＣＳ分析を使用することができる。

いくつかの実施形態において、本願に記載される抗体または抗原結合フラグメントは、ＥＣ５０（すなわち、５０％有効濃度）１０ｎｇ／ｍＬ～１０μｇ／ｍＬ（ＦＡＣＳ分析により決定）でＣＥＡＣＡＭ５と結合する。

この抗体はＣＥＡＣＡＭ５に特異的である。特定の実施形態において、抗体は場合により、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＥＡＣＡＭ３、ＣＥＡＣＡＭ６、ＣＥＡＣＡＭ７とは結合せず、ＣＥＡＣＡＭ５の結合親和性より有意に低い結合親和性でＣＥＡＣＡＭ８と結合する。

いくつかの実施形態において、本願に記載される抗体は、腫瘍細胞、精製した腫瘍抗原、コード免疫刺激因子でトランスフェクトされた細胞、および腫瘍ワクチンなど免疫原性物質と組み合わせて使用することができる。加えて、抗ＣＥＡＣＡＭ５抗体およびその抗原結合フラグメントは、標準化学療法および放射線療法、標的に基づく小分子療法、およびその他の新たに出現した免疫チェックポイントモジュレーター療法を含む併用療法に含めることもできる。いくつかの実施形態において、抗体およびその抗原結合フラグメントは、抗体薬物複合体、二重特異性または多価抗体の基本分子として使用することができる。

いくつかの実施形態において、本願に記載される抗体およびその抗原結合フラグメントは、ラクダ化一本鎖ドメイン抗体、ダイアボディ、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ二量体、ＢｓＦｖ、ｄｓＦｖ、（ｄｓＦｖ）_２、ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’、Ｆｖフラグメント、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、ｄｓダイアボディ、ナノボディ、ドメイン抗体または二価ドメイン抗体である。

いくつかの実施形態において、本願に記載される抗体は、免疫グロブリン定常領域を含んでなる。いくつかの実施形態において、免疫グロブリン定常領域は、重鎖および／または軽鎖定常領域を含んでなる。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ１－ＣＨ２またはＣＨ１－ＣＨ３領域を含んでなる。いくつかの実施形態において、免疫グロブリン定常領域は、所望の特定を得るために１以上の改変をさらに含んでなってもよい。例えば、定常領域は、１または複数のエフェクター機能を低下もしくは排除するため、ＦｃＲｎ受容体結合を高めるため、または１もしくは複数のシステイン残基を導入するために改変することができる。

いくつかの実施形態において、抗体およびその抗原結合フラグメントは、複合体をさらに含んでなる。本願の抗体またはその抗原結合フラグメントは様々な複合体に連結させることができると考えられる（例えば、"Conjugate Vaccines", Contributions to Microbiology and Immunology, JM Cruse and RE Lewis, Jr. (編), Carger Press, New York (1989)参照）。これらの複合体は、共有結合、親和性結合、包理、配位結合、錯化、結合、混合または付加などの他の手段によって抗体または抗原結合フラグメントに連結させることができる。いくつかの実施形態において、本願に開示される抗体および抗原結合フラグメントは、エピトープ結合部分以外の特定の部位を含むように操作することができ、これらの部位を１または複数の複合体と結合させるために使用することができる。例えば、このような部位は、複合体との共有結合を補助するためにシステイン残基およびヒスチジン残基などの１または複数の反応性アミノ酸残基を含んでなってもよい。特定の実施形態において、抗体は、複合体と間接的に結合させてもよいし、または別の複合体を介して複合体と結合させてもよい。例えば、抗体またはその抗原結合フラグメントをビオチンに結合させ、次に、アビジンに連結された第２の複合体に間接的に結合させることができる。この複合体は、検出可能な標識、薬物動態改良部分、精製部分または細胞傷害性部分であり得る。検出可能な標識の例としては、蛍光標識（例えば、フルオレセイン、ローダミン、ダンシル、フィコエリトリンまたはテキサスレッド）、酵素基質標識（例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、アルカリ性ホスファターゼ）、ルシフェラーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、グルコースオキシダーゼまたはβ－Ｄガラクトシダーゼ）、安定な同位体または放射性同位元素、発色団部分、ジゴキシン、ビオチン／アビジン、ＤＮＡ分子または検査用の金が挙げられる。特定の実施形態において、この複合体は、抗体の半減期を延長する助けをするＰＥＧなどの薬物動態改良部分であり得る。他の好適なポリマーとしては、例えば、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、エチレングリコール／プロピレングリコールコポリマーなどが挙げられる。いくつかの実施形態において、この複合体は磁性ビーズなどの精製部分であってもよい。「細胞傷害性部分」は、細胞に有害であるか、または細胞を障害し得もしくは死滅させ得るいずれの薬剤であってもよい。細胞傷害性部分の例としては、限定するものではないが、パクリタキセル、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシ－アントラシン－ジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、ｌ－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシンおよびその類似体、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート、６－メルカプトプリン、６－メルカプトグアニン、シタラビン、５－フルオロウラシル、ダカルバジン）、アルキル化剤（例えば、クロルメチン、チオテパ クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、およびシス－ジクロロジアミン白金（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン系抗生剤（例えば、ダウノルビシン（旧称ダウノマイシン）およびアドリアマイシン）、抗生剤（例えば、ダクチノマイシン（旧称アクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、およびアンピシリン（ＡＭＣ））、および細胞分裂抑制薬（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）が挙げられる。

核酸分子および組換え法
本願の抗体は、当技術分野で公知の種々の方法によって調整することができ、例えば、遺伝子工学組換え技術によって得られる。例えば、本願の抗体またはその抗原結合フラグメントをコードするＤＮＡ分子は、化学合成またはＰＣＲ増幅によって得ることができる。得られたＤＮＡ分子を発現ベクターに挿入し、次に、宿主細胞にトランスフェクトする。その後、トランスフェクトされた宿主細胞を特定の条件下で培養し、本願の抗体またはその抗原結合フラグメントを発現させる。

本願の抗原結合フラグメントは、無傷の抗体分子を加水分解することによって得ることができる（Morimoto et al., J. Biochem. Biophys. Methods 24:107-117 (1992);およびBrennan et al., Science 229:81 (1985)参照）。加えて、これらの抗原結合フラグメントはまた、組換え宿主細胞によって直接生産することもできる（Hudson, Curr. Opin. Immunol. 11: 548-557 (1999); Little et al., Immunol. Today, 21: 364-370 (2000)ｎ総説される)。例えば、Ｆａｂ’フラグメントは、宿主細胞から直接得ることができ；Ｆａｂ’フラグメントを化学的に結合させてＦ（ａｂ’）_２フラグメントを形成することができる(Carter et al., Bio/Technology, 10: 163-167 (1992))。加えて、Ｆｖ、ＦａｂまたはＦ（ａｂ’）_２フラグメントはまた、組換え宿主細胞培養培地から直接単離することもできる。当業者ならばこれらの抗原結合フラグメントを作製するための他の技術に十分気づく。

いくつかの特定の実施形態において、本願において提供される抗ＣＥＡＣＡＭ５抗体またはその抗原結合フラグメントの作製方法は、以下の工程を含んでなる：
１）癌胎児性抗原関連細胞接着分子５を過剰発現するＣＨＯ細胞株で免疫したＢａｌｂ／ｃマウスを材料として用い、脾臓細胞を抽出し、それをマウス骨髄腫細胞株ＳＰ２／０－ＡＧ１４と融合させて、抗ＣＥＡＣＡＭ５抗体またはその抗原結合フラグメントを発現し得るハイブリドーマ細胞株を得る工程；
２）工程１）で得られたハイブリドーマ細胞株に抗ＣＥＡＣＡＭ５抗体またはその抗原結合フラグメントの遺伝子をクローニングし、発現させる工程；
３）工程２）でクローニングされた遺伝子とその遺伝子に作動可能に連結された発現制御配列を含んでなる発現ベクターを提供する工程；
４）宿主細胞を工程３）に記載された発現ベクターで形質転換する工程；
５）工程４）で得られた宿主細胞を培養する工程；
６）モノクローナル抗体を得るために分離および精製を行う工程。

別の態様において、本願は、上記の作製方法において使用されるハイブリドーマ細胞株を提供する。

本願において、特定の抗ＣＥＡＣＡＭ５抗体を分泌するヒト－マウスハイブリドーマが作製され、この抗体の重鎖および軽鎖配列（１００％ヒト遺伝子）が、分子生物学的技術を使用することによってクローニングされ、抗ヒト癌胎児性抗原関連細胞接着分子５ヒトモノクローナル抗体が構築され、この抗体が発現され、ＣＨＯ細胞によって生産される。既存の抗体に比べ、薬物としてのこれらの抗体は、より強い結合能および特異性を有する。

別の態様において、本願は、本願の抗体またはその抗原結合フラグメント、またはその重鎖可変領域および／もしくは軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含んでなる単離された核酸分子を提供する。特定の実施形態において、核酸分子は、配列番号１４および／または配列番号１５に示されるようなヌクレオチドコード配列を含んでなる。

別の側面において、本願は、上記のような単離された核酸分子を含んでなるベクター（例えば、クローニングベクターまたは発現ベクター）を提供する。特定の実施形態において、本願のベクターは、プラスミド、コスミド、バクテリオファージなどである。

特定の実施形態において、ベクターは、本願の抗体もしくはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする第１のヌクレオチド配列、および／または本願の抗体もしくはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする第２のヌクレオチド配列を含んでなる。いくつかの実施形態において、第１のヌクレオチド配列と第２のヌクレオチド配列は同じまたは異なるベクターに提供される。

別の側面において、本願は、上記のような単離された核酸分子またはベクターを含んでなる宿主細胞を提供する。特定の実施形態において、宿主細胞は、哺乳動物細胞である。特定の実施形態において、宿主細胞は、ヒト、マウス、ヒツジ、ウマ、イヌ、またはネコ細胞である。特定の実施形態において、宿主細胞は、チャイニーズハムスター卵巣細胞である。

別の側面において、本願の抗体またはその抗原結合フラグメントを作製するための方法が提供され、その方法は、上記のような宿主細胞を抗体またはその抗原結合フラグメントの発現を可能とする条件下で培養すること、および宿主細胞の培養物から抗体またはその抗原結合フラグメントを回収することを含んでなる。

別の側面において、本願はまた、抗体またはその抗原結合フラグメントを含んでなる二重特異性または多重特異性分子を提供する。特定の実施形態において、二重特異性または多重特異性分子は、ＣＥＡＣＡＭ５と特異的に結合し、さらに１または複数の他の標的と特異的に結合する。特定の実施形態において、二重特異性または多重特異性分子は、第２の標的に対する第２の結合特異性を有する少なくとも１つの分子（例えば、第２の抗体）をさらに含んでなる。

別の側面において、本願はまた、抗体またはその抗原結合フラグメントと、抗体またはその抗原結合フラグメントに結合された治療薬とを含んでなる免疫複合体も提供する。特定の実施形態において、治療薬は、細胞傷害性薬剤から選択される。特定の実施形態において、治療薬は、アルキル化剤、有糸分裂阻害剤、抗腫瘍抗生物質、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼ阻害剤、チロシン－キナーゼ阻害剤、放射性核種剤、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される。特定の実施形態において、免疫複合体は、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）である。

当技術分野で周知の遺伝子工学的技術を用い、本願に記載される抗体およびその抗原結合フラグメントのアミノ酸配列は、対応するＤＮＡコード配列に変換することができる。遺伝コードの縮重のために、この変換によって得られるＤＮＡ配列は完全に一致しない場合があるが、コードされるタンパク質配列は不変のままである。

当技術分野で周知の組換え技術を用い、抗体およびその抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターをクローニング（ＤＮＡの増幅）または遺伝子発現のために宿主細胞に導入することができる。別の実施形態では、抗体およびその抗原結合フラグメントは、当技術分野で公知の相同組換え法によって作製することができる。様々なベクターが利用可能である。ベクター成分は通常、限定するものではないが、以下の２つ以上を含む：シグナル配列、複製開始点、１または複数のマーカー遺伝子、エンハンサー配列、プロモーター（例えば、ＳＶ４０、ＣＭＶ、ＥＦ－１ａ）および転写終結配列。

いくつかの実施形態において、ベクター系としては、哺乳動物、細菌、酵母系などを含み、限定するものではないが、ｐＡＬＴＥＲ、ｐＢＡＤ、ｐｃＤＮＡ、ｐＣａｌ、ｐＬ、ｐＥＬｐＧＥＭＥＸ、ｐＧＥＸ、ｐＣＬｐＣＭＶ、ｐＥＧＦＰ、ｐＥＧＦＴ、ｐＳＶ２、ｐＦＵＳＥ、ｐＶＩＴＲＯ、ｐＶＩＶＯ、ｐＭＡＬ、ｐＭＯＮＯ、ｐＳＥＬＥＣＴ、ｐＵＮＯ、ｐＤＵＯ、Ｐｓｇ５Ｌ、ｐＢＡＢＥ、ｐＷＰＸＬ、ｐＢＩ、ｐ１５ＴＶ－Ｌ、ｐＰｒｏ１８、ｐＴＤ、ｐＲＳ４２０、ｐＬｅｘＡ、ｐＡＣＴ２を含むプラスミドなどのベクターおよび研究室から入手可能であるかまたは市販されておるその他のベクターを含んでなる。好適なベクターとしては、プラスミドまたはウイルスベクター（例えば、複製欠陥レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルス）を含み得る。

抗体およびその抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターは、クローニングまたは遺伝子発現のために宿主細胞に導入することができる。本願におけるベクターにおいてＤＮＡをクローニングするまたは発現させるために好適な宿主細胞は、原核細胞、酵母または上述の高等真核細胞である。本願における使用のために好適な原核細胞としては、真正細菌、例えば、グラム陰性菌またはグラム陽性細菌、例えば、腸内細菌科(Enterobacteriaceae)（例えば、大腸菌(Escherichia coli)）、エンテロバクター属(Enterobacter)種、エルウィニア属(Erwinia)種、クレブシェラ属(Klebsiella)種、プロテウス属(Proteus)種、サルモネラ菌属(Salmonella)種、例えば、マウスチフス菌(Salmonella typhimurium)、セラチア属(Serratia)種、例えば、セラチア菌(Serratia marcescens)、および赤痢菌属(Shigella)種、およびバチルス属(Bacillus)種、例えば、枯草菌(Bacillus subtilis)およびバチルス・リケニフォルミス(Bacillus licheniformis)、シュードモナス属(Pseudomonas)種、例えば、緑膿菌(Pseudomonas aeruginosa)および放線菌属(Streptomyces)が挙げられる。

原核細胞に加え、糸状真菌または酵母などの真核生物微生物も、抗体をコードするベクターをクローニングするまたは発現させるための宿主細胞として使用可能である。サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)、またはパン酵母は最も慣用される下等な真核生物宿主微生物である。しかしながら、本願においては、シゾサッカロミセス・ポンベ(Schizosaccharomyces)；クルイベロミセス・ラクチス(Kluyveromyces lactis)、クルイベロミセス・フラジリス(Kluyveromyces fragilis)（ＡＴＣＣ１２４２４）、クルイベロミセス・ブルガリカス(Kluyveromyces bulgaricus)（ＡＴＣＣ１６０４５）、クルイベロミセス・ウェイチー(Kluyveromyces weichii)（ＡＴＣＣ２４１７８）、クルイベロミセス（ＡＴＣＣ５６５００）、クルイベロミセス・ドロソフィラ(Kluyveromyces drosophila)（ＡＴＣＣ３６９０６）、クルイベロミセス・サーモトレランス(Kluyveromyces thermotolerans)およびクルイベロミセス・マルキシアヌス(Kluyveromyces marxianus)などのクルイベロミセス宿主：ヤルロウィア・リポリチカ(Yarrowia lipolytica)（ＥＰ４０２２２６）；ピキア・パストリス(Pichia pastoris)（ＥＰ１８３０７０）；カンジダ属(Candida)：トリコデルマ・リーゼイ(Trichoderma reesei)（ＥＰ２４４２３４）；ニューロスポラ属(Neurospora)；シュワニオミセス・オクシデンタリス(Schwanniomyces occidentalis)などのシュワン酵母；ならびにニューロスポラ属(Neurospora)、ペニシリウム属(Penicillium)、カーブラリア属(Curvularia)、およびアスペルギルス属(Aspergillus)（例えば、アスペルギルス・ニデュランス(Aspergillus nidulans)およびアスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)）などの糸状真菌といった多くの他の属、種および株がより慣用され、利用可能である。

本願において提供されるグリコシル化抗体またはその抗原結合フラグメントを発現するために好適な宿主細胞は、多細胞生物に由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物および昆虫細胞が挙げられる。様々なバキュロウイルス株およびそれらの変異体、ならびに対応する許容昆虫宿主細胞は、以下のもの：ヨトウガ(Spodoptera frugiperda)（毛虫）、ネッタイシマカ(Aedes aegypti)（蚊）、ヒトスジシマカ(Aedes albopictus)（蚊）、キイロショウジョウバエ(Drosophila melanogaster)（ショウジョウバエ）およびカイコ(Bombyx mori)（蚕）などの宿主から発見されている。オーログラファ・カリフォルニカ(Autographa californica)核多核体病ウイルスおよびカイコガ(Bombyx mori)核多核体病ウイルスのＢｍ－５変異体など、トランスフェクションに使用される様々なウイルス株が公表されている。これらのウイルスは、本願において使用可能であり、特に、ヨトウガ(Spodoptera frugiperda)細胞をトランスフェクトするために使用可能である。ワタ、トウモロコシ、バレイショ、ダイズ、ペチュニア、トマトおよびタバコの植物培養物も宿主として使用可能である。

しかしながら、最も興味深いのは脊髄細胞であり、脊髄細胞の培養（組織培養）は慣例操作となっている。利用可能な哺乳動物宿主細胞の例としては、ＳＶ４０形質転換サル腎臓細胞株ＣＶ１（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）；ヒト胎児腎臓細胞株（２９３または懸濁培養２９３細胞サブクローン、Graham et al.,]. Gen Virol. 36:59 (1977)）；幼ハムスター腎細胞（Ｂ型血液、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）；チャイニーズハムスター卵巣細胞／－ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77 : 4216 (1980))；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Mather JP, Biol. Reprod. 23:243-252 (1980)）；サル腎細胞（ＣＶ１ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）；アフリカミドリザル腎細胞（ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８７）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）；イヌ腎細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ７５）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞(Mather et al., Annals NY Acad. Sci. 383: 44-68 (1982))；ＭＲＣ５細胞；ＦＳ４細胞；およびヒト肝臓癌細胞株（ＨｅｐＧ２）が挙げられる。ある特定の好ましい実施形態において、宿主細胞は２９３Ｆ細胞である。

宿主細胞に抗体およびその抗原結合フラグメントを生産することができる上述の発現またはクローニングベクターを導入し、それを従来の栄養培地で培養し、ここで、この栄養培地はプロモーター誘導および細胞の選択的形質転換または標的配列をコードする遺伝子の増幅に好適となるように改変される。

抗体およびその抗原結合フラグメントを生産するために本願において使用される宿主細胞は、当技術分野で周知の様々な培地で培養することができる。培地はさらに、他のいずれの必要な添加物も当技術分野で公知の適当な濃度で含有してよい。温度、ｐＨなどの培地の条件は、発現のための宿主を選択するために従前に使用され、当業者に周知である。

組換え技術を用いる場合、抗体は、細胞内に、原形質周辺空間で産生され得るか、または培養培地に直接分泌され得る。抗体が細胞内に産生される場合、宿主細胞または溶解フラグメントの粒状残留物がまず、例えば、遠心分離または超音波によって除去される。Carter et al., Bio/Technology 10:163-167 (1992)は、大腸菌の原形質周辺空間に分泌された抗体を分離するための方法を記載している。簡単に述べれば、細胞ペーストを酢酸ウラニル（ｐＨ３．５）、ＥＤＴＡおよびＰＭＳＦの存在下で３０分より長く融解する。遠心分離を行って細胞残渣を除去する。抗体が培養培地に分泌される場合、ＩａｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過装置などの市販のタンパク質濃縮フィルターが通常まず、発現系の上清を濃縮するために使用される。以上に工程のいずれにおいても、タンパク質分解を阻害するためのＰＭＳＦなどのプロテアーゼ阻害剤、および偶発的混入物の成長を防ぐための抗生物質を添加することができる。

細胞から産生される抗体は、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、ＤＥＡＥ－セルロースイオン交換クロマトグラフィーカラム、硫酸アンモニウム沈澱、塩析、およびアフィニティークロマトグラフィーなどの精製方法によって精製することができ、アフィニティークロマトグラフィーが好ましい精製技術である。抗体のタイプおよび抗体中の免疫グロブリンＦｃドメインの存在が、プロテインＡが親和性リガンドとして好適であるかどうかを決定する。プロテインＡは、ヒトγ１、γ２、またはγ４重鎖に基づく抗体を精製するために使用することができる(Lindmark et al., J. Immunol. Meth. 62:13 (1983))。プロテインＧは総てのマウスアイソフォームおよびヒトγ３に好適である(Guss et al., EMBO J. 5:1567 1575 (1986))。アガロースは、最も慣用される親和性リガンド結合マトリックスであるが、他のマトリックスも使用可能である。ＣＰＧ(controlled pore glass)またはポリスチレンなどの機械的に安定な基質は、アガロースに比べて、より早い流速およびより短い処理時間を達成することができる。抗体がＣＨ３ドメインを含む場合、それはＢａｋｅｒｂｏｎｄ ＡＢＸ．ＴＭ樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、フィリップスバーグ、Ｎ．Ｊ．）で精製することができる。得る必要のある抗体に応じて、イオン交換カラム、エタノール沈殿法、逆相ＨＰＬＣ、シリカゲルクロマトグラフィー、陰イオンまたは陽イオン交換樹脂（例えば、ポリアスパラギン酸カラム）に基づくヘパリンセファロースクロマトグラフィー、クロマトグラフィー電気泳動、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、および硫酸アンモニウム沈澱における分画などの他のタンパク質精製技術も決定可能である。

任意の予備精製工程の後、対象とする抗体と不純物を含有する混合物を、ｐＨ約２．５～４．５の、好ましくは低塩濃度（例えば、約０～０．２５Ｍの塩濃度）の溶出バッファーを用いる低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーによって処理することができる。

医薬組成物および治療的使用
別の側面において、本願は、本願の抗体またはその抗原結合フラグメント、本願の二重特異性もしくは多重特異性分子または本願の免疫複合体と、薬学上許容可能な担体および／または賦形剤とを含んでなる医薬組成物を提供する。

特定の実施形態において、医薬組成物はまた、付加的な薬学的に活性な薬剤も含んでなり得る。

特定の実施形態において、付加的な薬学的に活性な薬剤は、アルキル化剤、有糸分裂阻害剤、抗腫瘍抗生物質、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、放射性核種剤、放射線増感剤、抗血管新生剤、サイトカイン、分子標的薬、免疫チェックポイント阻害剤または腫瘍溶解性ウイルスなどの、抗腫瘍活性を有する薬物である。

特定の実施形態において、抗体もしくはその抗原結合フラグメント、二重特異性もしくは多重特異性分子または免疫複合体と付加的な薬学的に活性な薬剤は、別個の成分としてまたは同じ組成物の成分として提供される。本願の抗体またはその抗原結合フラグメントと付加的な薬学的に活性な薬剤は、同時に、別個に、または逐次に投与することができる。

本願はさらに、抗体と１または複数の薬学上許容可能な担体とを含んでなる医薬組成物も提供する。

本願において開示される医薬組成物において使用される薬学上許容可能な担体としては、例えば、薬学上許容可能な液体、ゲルまたは固体担体、水相媒体、非水相媒体、抗微生物物質、等張性物質、バッファー、酸化防止剤、麻酔薬、沈殿防止剤／分散剤、組み込み剤、希釈剤、アジュバント、賦形剤または非毒性補助物質、当技術分野で公知の他の成分、または上記の任意の組合せを含み得る。

好適な成分としては、例えば、酸化防止剤、増量剤、結合剤、崩壊剤、バッファー、保存剤、滑沢剤、香味剤、増粘剤、着色剤、乳化剤または安定剤、例えば、砂糖およびシクロデキストリンを含み得る。好適な酸化防止剤としては、例えば、メチオニン、アスコルビン酸、ＥＤＴＡ、チオ硫酸ナトリウム、白金、カタラーゼ、クエン酸、システイン、メルカプトグリセロール、チオグリコール酸、メルカプトソルビトール、ブチルメチルアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエンおよび／または没食子酸プロピルを含み得る。メチオニンなどの１または複数の酸化防止剤が、本願において開示される抗体を含有する組成物中に存在する場合、抗体の酸化が低減され得る。酸化の低減は、結合親和性の低下を防止または低減し、それにより、抗体の安定性を向上させ、保存期間を延長することができる。

さらに、薬学上許容可能な担体としては、例えば、水性媒体（例えば、塩化ナトリウム注射剤、リンゲル液注射剤、等張性デキストロース注射剤）、無菌水注射剤、またはグルコースおよび乳酸リンゲル注射剤、非水性媒体（例えば、植物由来硬化油、綿実油、コーン油、ゴマ油、または落花生油）、細菌または真菌阻害濃度の抗菌物質、等張剤（例えば、塩化ナトリウムまたはグルコース）、バッファー（例えば、リン酸またはクエン酸バッファー）、酸化防止剤（例えば、重硫酸ナトリウム）、局所麻酔薬（例えば、塩酸プロカイン）、懸濁補助剤および分散剤（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロースまたはポリビニルピロリドン）、乳化剤（例えば、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ－８０））、組み込み試薬（例えば、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）またはＥＧＴＡ（エチレングリコール－ビス（２－アミノエチルエーテル）四酢酸））、エタノール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、水酸化ナトリウム、塩酸、クエン酸または乳酸を含み得る。担体としての抗菌剤を、多回用量容器中の医薬組成物に加えることができ、これにはフェノールまたはクレゾール、水銀製剤、ベンジルアルコール、クロロブタノール、メチルおよびプロピルパラベン、メルチオレート、塩化ベンザルコニウム、および塩化トリエチルベンゾニウムが含まれる。好適な賦形剤としては、例えば、水、塩、グルコース、グリセロールまたはエタノールを含み得る。好適な非毒性補助物質としては、例えば、乳化剤、ｐＨ緩衝剤、安定剤、可溶化剤、または酢酸ナトリウム、ラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミンまたはシクロデキストリンを含み得る。

医薬組成物は、液剤、懸濁剤、乳剤、丸剤、カプセル剤、錠剤、徐放性処方物または散剤であり得る。経口製剤は、製薬等級マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの標準的担体を含んでなり得る。

特定の実施形態において、医薬組成物は、注射用組成物として処方される。注射用医薬組成物は、例えば、液剤、懸濁剤、乳剤、または液剤、懸濁剤、もしくは乳剤を作製するために好適な任意の固体形態などの従来のいずれの形態で作製することもできる。注射製剤は、現行使用されている無菌および／または発熱性物質除去溶液、使用前に溶媒と合わせる無菌ドライソルベンド(dry solvend)、例えば、凍結乾燥粉末（皮下錠剤を含む）、注射用無菌懸濁剤、使用前に媒体と合わせる無菌乾燥不溶性製品、および無菌および／または発熱性物質除去乳剤を含んでなり得る。溶媒は水相または非水相であり得る。

いくつかの実施形態において、単位用量注射製剤は、アンプル、チューブ、または針付きシリンジに封入される。注射投与用の製剤は総て無菌かつ発熱性物質不含であるべきことは当技術分野で公知である。

いくつかの実施形態において、無菌凍結乾燥粉末は、本願において開示される抗体またはその抗原結合フラグメントを好適な溶媒に溶解させることによって調製することができる。溶媒は、粉末もしくは粉末から調製される再構成溶液の安定性を改善し得る、または粉末もしくは再構成溶液を改良し得る、ある種の他の薬理成分を含有してよい。好適な賦形剤としては、限定するものではないが、水、グルコース、ソルビトール、フルクトース、コーンシロップ、キシリトール、グリセロール、グルコース、ブラウンシュガーまたはその他の適用可能な物質が挙げられる。溶媒は、バッファー、例えば、クエン酸バッファー、リン酸ナトリウムまたはリン酸カリウムバッファー、または当業者に公知の他のバッファーなどを含んでなり得る。１つの実施形態において、バッファーのｐＨは中性である。続いて、溶液に当技術分野で公知の標準的な条件下で濾過および滅菌を施した後、凍結乾燥させて理想的な処方物を得る。１つの実施形態において、得られた溶媒を小バイアルに分け、凍結乾燥させる。各バイアルは抗ＣＥＡＣＡＭ５抗体またはその抗原結合フラグメントまたはそれらの組合せの単回用量または高い用量を含有してよい。正確な採取と正確な投与を確保するために、各バイアルの充填量は、各用量または多回用量に必要とされる量よりもやや高くてよい（例えば、１０％過量）。凍結乾燥粉末は、約４℃～室温の範囲などの適当な条件下で保存することができる。

注射投与のための製剤を得るには、凍結乾燥粉末を注射水で再溶解させる。１つの実施形態において、凍結乾燥粉末は、無菌発熱性物質除去水またはその他の好適な液体担体で再構成することができる。その厳密な量は選択された療法によって決まり、経験的値に基づいて決定することができる。

抗体の誘導体化および免疫複合体
本願の抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば別の分子（例えば、別のポリペプチドまたはタンパク質）に連結するなど、誘導体化することができる。一般に、抗体またはその抗原結合フラグメントの誘導体化（例えば、標識）は、ＣＥＡＣＡＭ５に対するその結合に悪影響は及ぼさない。よって、本願の抗体またはその抗原結合フラグメントはまた、このような誘導体化形態を含んでなることも意図される。例えば、本願の抗体またはその抗原結合フラグメントは、別の抗体（例えば、二重特異性抗体を形成するため）、検出試薬、製剤試薬、および／または抗体またはその抗原結合フラグメントと別の分子との結合を媒介し得るタンパク質もしくはポリペプチド（例えば、アビジンまたはポリヒスチジンタグ）などの１または複数の他の分子群に機能的に連結することができる（化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合的結合またはその他の手段による）。加えて、本願の抗体またはその抗原結合フラグメントはまた、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、メチルまたはエチル、またはグリコシルなどの化学基を用いて誘導体化することもできる。これらの基は、血清半減期を延長するなど、抗体の生物学的特性を改良するために使用することができる。

よって、１つの側面において、本願は、本願に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントと、その抗体またはその抗原結合フラグメントに結合された治療薬とを含んでなる免疫複合体を提供する。

特定の実施形態において、治療薬は、細胞傷害性薬剤から選択される。

特定の実施形態において、治療薬は、アルキル化剤、有糸分裂阻害剤、抗腫瘍抗生物質、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、放射性核種剤、およびそれらの任意の組合せから選択される。

特定の実施形態において、免疫複合体は、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）である。

キットおよび検出使用
本願の抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＣＥＡＣＡＭ５タンパク質と特異的に結合することができ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＥＡＣＡＭ３、ＣＥＡＣＡＭ６、ＣＥＡＣＡＭ７タンパク質とは基本的に結合せず、ＣＥＡＣＡＭ８タンパク質とは弱く結合するだけある。よって、本願の抗体またはその抗原結合フラグメントは、高い特異性および検出精度を有する。

よって、別の側面において、本願は、本願の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または本願の複合体を含んでなるキットを提供する。

いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、酵素（例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼ）、放射性核種、蛍光色素、発光物質（例えば、化学発光物質）、またはビオチンなどの検出可能な標識を含んでなる。

いくつかの実施形態において、キットは、抗体またはその抗原結合フラグメントを特異的に認識する第２の抗体をさらに含んでなる。

いくつかの実施形態において、第２の抗体は、酵素（例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼ）、放射性核種、蛍光色素、発光物質（例えば、化学発光物質）、またはビオチンなどの検出可能な標識をさらに含んでなる。

いくつかの実施形態において、本願のキットは、対応する検出可能な標識を検出可能とするための試薬をさらに含んでなり得る。例えば、検出可能な標識が酵素である場合、キットはまた、対応する酵素に対する発色基質、例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼに対するｏ－フェニレンジアミン（ＯＰＤ）、およびテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）、ＡＢＴＳもしくはルミノール化合物、またはアルカリ性ホスファターゼに対するリン酸ｐ－ニトロフェニル（ｐ－ＮＰＰ）もしくはＡＭＰＰＤも含んでなり得る。例えば、検出可能な標識が化学発光試薬（例えば、アクリジンエステル化合物）である場合には、キットは、化学発光のための予備励起溶液および／または励起溶液をさらに含んでなり得る。

別の側面において、本願はまた、キットの製造における抗体またはその抗原結合フラグメントの使用を提供し、このキットは、腫瘍がＣＥＡＣＡＭ５を標的とする抗腫瘍療法によって治療可能であるかどうかを決定するために使用される。

特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、検出可能な標識を含んでなる。

特定の実施形態において、ＣＥＡＣＡＭ５は、ヒトＣＥＡＣＡＭ５である。

特定の実施形態において、腫瘍は、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、腎細胞癌、結腸直腸癌、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、胃癌、膀胱癌、食道癌、中皮腫、黒色腫、頭頸部癌、甲状腺癌、肉腫、前立腺癌、膠芽腫、子宮頸癌、胸腺癌、白血病、リンパ腫、骨髄腫、菌状息肉症、メルケル細胞癌およびその他の血液悪性腫瘍、例えば、典型的ホジキンリンパ腫（ＣＨＬ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞／組織球Ｂ細胞豊富型リンパ腫(T-cell/histiocytic B-cell-rich lymphoma)、ＥＢＶ陽性および陰性ＰＴＬＤおよびＥＢＶ関連びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、形質芽球性リンパ腫、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、鼻咽頭癌およびＨＨＶ８関連原発性滲出性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍、例えば、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫からなる群から選択される。

本願は、抗体またはその抗原結合フラグメントを含んでなるキットを提供する。いくつかの実施形態において、キットは、生物学的サンプルにおいてＣＥＡＣＡＭ５の存在またはレベルを検出するために使用される。生物学的サンプルは、細胞または組織を含んでなり得る。

いくつかの実施形態において、キットは、検出可能な標識に結合された抗体またはその抗原結合フラグメントを含んでなる。いくつかの実施形態において、キットは非標識抗体を含んでなり、非標識抗体に結合し得る標識された二次抗体をさらに含んでなる。キットは、使用説明書およびキット中の各成分を分離する包装紙をさらに含んでなり得る。

いくつかの実施形態において、抗体は、基質またはＥＬＩＳＡなどのサンドイッチアッセイもしくはイムノクロマトグラフィーアッセイ用の器具に結合される。好適な基質または器具は、例えば、マイクロプレートおよび試験紙であり得る。

キメラ抗原受容体
別の側面において、本願はまた、抗体またはその抗原結合フラグメントの抗原結合ドメインを含んでなるキメラ抗原受容体も提供する。

特定の実施形態において、抗原結合ドメインは、抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含んでなる。

特定の実施形態において、抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。

特定の実施形態において、キメラ抗原受容体は、抗体の抗原結合フラグメントを含んでなる。

特定の実施形態において、キメラ抗原受容体は、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）により発現される。

別の側面において、本願はまた、キメラ抗原受容体をコードする単離された核酸分子も提供する。

別の側面において、本願はまた、単離された核酸分子を含んでなるベクターも提供し；いくつかの実施形態において、それはキメラ抗原受容体Ｔ細胞を作製するために使用される。

別の側面において、本願はまた、単離された核酸分子またはベクターを含んでなる宿主細胞も提供する。

特定の実施形態において、宿主細胞は、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）である。

特定の実施形態において、宿主細胞は、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）である。

検出方法および治療方法
多くの悪性腫瘍において、ＣＥＡＣＡＭ５の過剰発現は、腫瘍バイオマーカーとして使用することができる。よって、患者の血液中のＣＥＡＣＡＭ５の測定は、予後および癌の管理に使用することができ、ＣＥＡＣＡＭ５の標的化療法も可能性のある癌治療法となっている。本願の抗体（例えば、ＵＭ０５－６Ｌ）は、高い親和性および高い特異性でＣＥＡＣＡＭ５タンパク質と結合することができ、ＡＤＣＣ活性を有し、これが腫瘍成長を阻害し、腫瘍細胞を死滅させることができる。

よって、別の側面において、本願はまた、ＣＥＡＣＡＭ５を発現する腫瘍細胞の成長を阻害するおよび／または腫瘍細胞を死滅させるための方法も提供し、その方法は、腫瘍細胞を有効量の、抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または二重特異性もしくは多重特異性分子、または免疫複合体、または医薬組成物、またはキメラ抗原受容体、または宿主細胞と接触させることを含んでなる。

別の側面において、本願はまた、細胞の表面でのＣＥＡＣＡＭ５の発現レベルを低減するための方法も提供し、その方法は、前記細胞を有効量の、抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または二重特異性もしくは多重特異性分子、または免疫複合体、または請医薬組成物、またはキメラ抗原受容体、または宿主細胞と、細胞の表面でのＣＥＡＣＡＭ５の発現を低減するように接触させることを含んでなり；前記細胞は、その表面にＣＥＡＣＡＭ５を発現する。

特定の実施形態において、細胞は、ＣＥＡＣＡＭ５を発現する腫瘍細胞である。

別の側面において、本願はまた、対象（例えば、ヒト）において腫瘍を予防および／または治療するための方法も提供し、その方法は、それを必要とする対象に有効量の、抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または二重特異性もしくは多重特異性分子、または免疫複合体、または医薬組成物、またはキメラ抗原受容体、または宿主細胞を投与することを含んでなる。

特定の実施形態において、腫瘍は、ＣＥＡＣＡＭ５を発現する。

特定の実施形態において、腫瘍は、ＣＥＡＣＡＭ５を発現する腫瘍細胞を含む。特定の実施形態において、ＣＥＡＣＡＭ５は、腫瘍細胞の表面に発現される。

特定の実施形態において、腫瘍は、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、腎細胞癌、結腸直腸癌、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、胃癌、膀胱癌、食道癌、中皮腫、黒色腫、頭頸部癌、甲状腺癌、肉腫、前立腺癌、膠芽腫、子宮頸癌、胸腺癌、白血病、リンパ腫、骨髄腫、菌状息肉症、メルケル細胞癌およびその他の血液悪性腫瘍、例えば、典型的ホジキンリンパ腫（ＣＨＬ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞／組織球豊富型Ｂ細胞リンパ腫、ＥＢＶ陽性および陰性ＰＴＬＤおよびＥＢＶ関連びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、形質芽球性リンパ腫、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、鼻咽頭癌、およびＨＨＶ８関連原発性滲出性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍、例えば、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫からなる群から選択される。

特定の実施形態において、対象は、ヒトなどの哺乳動物である。

特定の実施形態において、この方法は、アルキル化剤、有糸分裂阻害剤、抗腫瘍抗生物質、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、放射性核種剤、放射線増感剤、抗血管新生剤、サイトカイン、分子標的薬、免疫チェックポイント阻害剤または腫瘍溶解性ウイルスなどの抗腫瘍活性を有する付加的薬物を投与することをさらに含んでなる。

特定の実施形態において、この方法は、手術、化学療法、放射線療法、標的化療法、免疫療法、ホルモン療法、遺伝子療法、または緩和療法などの付加的抗腫瘍療法を投与することをさらに含んでなる。

別の側面において、本願はまた、対象（例えば、ヒト）における腫瘍の予防／治療のための薬剤の製造における、抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または二重特異性もしくは多重特異性分子、または免疫複合体、または医薬組成物、またはキメラ抗原受容体、または宿主細胞の使用も提供する。

特定の実施形態において、薬剤は、付加的薬学的に活性な薬剤をさらに含んでなる。

特定の実施形態において、付加的薬学的に活性な薬剤は、アルキル化剤、有糸分裂阻害剤、抗腫瘍抗生物質、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、放射性核種剤、放射線増感剤、抗血管新生剤、サイトカイン、分子標的薬、免疫チェックポイント阻害剤または腫瘍溶解性ウイルスなどの抗腫瘍活性を有する薬物である。

特定の実施形態において、腫瘍は、ＣＥＡＣＡＭ５を発現する。

特定の実施形態において、腫瘍は、ＣＥＡＣＡＭ５を発現する腫瘍細胞を含み；好ましくは、ＣＥＡＣＡＭ５は、腫瘍細胞の表面に発現される。

特定の実施形態において、腫瘍は、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、腎細胞癌、結腸直腸癌、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、胃癌、膀胱癌、食道癌、中皮腫、黒色腫、頭頸部癌、甲状腺癌、肉腫、前立腺癌、膠芽腫、子宮頸癌、胸腺癌、白血病、リンパ腫、骨髄腫、菌状息肉症、メルケル細胞癌およびその他の血液悪性腫瘍、例えば、典型的ホジキンリンパ腫（ＣＨＬ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞／組織球Ｂ細胞豊富型リンパ腫(T-cell/histiocytic B-cell-rich lymphoma)、ＥＢＶ陽性および陰性ＰＴＬＤおよびＥＢＶ関連びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、形質芽球性リンパ腫、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、鼻咽頭癌およびＨＨＶ８関連原発性滲出性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍、例えば、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫からなる群から選択される。

特定の実施形態において、対象は、ヒトなどの哺乳動物である。

別の側面において、本願はまた、サンプル中のＣＥＡＣＡＭ５（例えば、ヒトＣＥＡＣＡＭ５）の存在または量を検出するための方法も提供し、その方法は、以下の工程：
（１）前記サンプルを抗体またはその抗原結合フラグメントと接触させる工程；
（２）抗体もしくはその抗原結合フラグメントおよびＣＥＡＣＡＭ５を含んでなる複合体の形成を検出するか、またはその複合体の量を検出する工程
を含んでなる。

特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、検出可能な標識を含んでなる。

特定の実施形態において、ＣＥＡＣＡＭ５は、ヒトＣＥＡＣＡＭ５である。

別の側面において、本願はまた、
腫瘍がＣＥＡＣＡＭ５を標的とする抗腫瘍療法によって治療可能であるかどうかを決定するための方法も提供し、その方法は、以下の工程：
（１）腫瘍の細胞を含有するサンプルを抗体またはその抗原結合フラグメントと接触させる工程；
（２）抗体またはその抗原結合フラグメントおよびＣＥＡＣＡＭ５を含んでなる複合体の形成を検出する工程
を含んでなる。

特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、検出可能な標識を含んでなる。

特定の実施形態において、ＣＥＡＣＡＭ５は、ヒトＣＥＡＣＡＭ５である。

特定の実施形態において、腫瘍は、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、腎細胞癌、結腸直腸癌、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、胃癌、膀胱癌、食道癌、中皮腫、黒色腫、頭頸部癌、甲状腺癌、肉腫、前立腺癌、膠芽腫、子宮頸癌、胸腺癌、白血病、リンパ腫、骨髄腫、菌状息肉症、メルケル細胞癌およびその他の血液悪性腫瘍、例えば、典型的ホジキンリンパ腫（ＣＨＬ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞／組織球Ｂ細胞豊富型リンパ腫(T-cell/histiocytic B-cell-rich lymphoma)、ＥＢＶ陽性および陰性ＰＴＬＤおよびＥＢＶ関連びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、形質芽球性リンパ腫、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、鼻咽頭癌およびＨＨＶ８関連原発性滲出性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍、例えば、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫からなる群から選択される。

本願はまた、治療上有効な量の本願に記載される抗体を、それを必要とする対象に投与することを含んでなる治療方法も提供する。

本願において提供される抗体の治療上有効な量は、体重、年齢、過去の病歴、現行治療、対象の健康現状および交差感染の可能性、アレルギー、過敏性および副作用、および投与経路および腫瘍発達程度などの当技術分野で公知の様々な因子によって決まる。当業者（例えば、医師または獣医）は、これらのまたは他の条件若しくは要件に従って相応に量の増減を行うことができる。

特定の実施形態において、本願において提供される抗体は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇの治療上有効な用量で投与することができる。いくつかの実施形態において、抗体は、約５０ｍｇ／ｋｇ以下の用量で投与される。いくつかの実施形態において、投与用量は、１０ｍｇ／ｋｇ以下、５ｍｇ／ｋｇ以下、１ｍｇ／ｋｇ以下、０．５ｍｇ／ｋｇ以下、または０．１ｍｇ／ｋｇ以下である。特定の用量は、１日１回、１日２回以上、月２回以上、週１回、２週毎に１回、３週毎に１回、月１回、または２か月以上毎に１回など、複数の間隔で投与することができる。特定の実施形態において、投与用量は、治療経過によって変更可能である。例えば、特定の実施形態において、初期投与用量は、後続の投与用量よりも高くてよい。いくつかの実施形態において、投与用量は、治療経過中の投与に対する対象の応答に従って調節される。

投与計画は、最適応答（例えば、治療応答）を達成するために調節することができる。例えば、投与は、単回用量で行うこともできるし、またはある治療期間にわたって複数回の分割用量で行うこともできる。

本願において開示される抗体は、注射投与（例えば、皮下注射、腹腔内注射、静脈内注射（静脈点滴を含む）、筋肉内注射もしくは皮内注射）または非注射投与（例えば、経口投与、鼻腔投与、舌下投与、直腸投与、もしくは局所投与）などの当技術分野で公知の方法によって投与することができる。

特定の実施形態において、本抗体は、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、腎細胞癌、結腸直腸癌、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、胃癌、膀胱癌、食道癌、中皮腫、黒色腫、頭頸部癌、甲状腺癌、肉腫、前立腺癌、膠芽腫、子宮頸癌、胸腺癌、白血病、リンパ腫、骨髄腫、菌状息肉症、メルケル細胞癌およびその他の血液悪性腫瘍、例えば、典型的ホジキンリンパ腫（ＣＨＬ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞／組織球性Ｂ細胞リンパ腫、ＥＢＶ陽性および陰性ＰＴＬＤおよびＥＢＶ関連びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、形質芽球性リンパ腫、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、鼻咽頭癌およびＨＨＶ８関連原発性滲出性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍、例えば、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫などの腫瘍および癌を含む、その分子機構に関連する疾患の治療に使用することができる。

使用
本願はさらに、本抗体を使用するための方法も提供する。

いくつかの実施形態において、本願は、個体において本抗体の機構に関連する病態または疾患を治療する方法であって、治療上有効な量の本明細書に記載の抗体を投与することを含んでなる方法を提供する。

本願において開示される抗体は、単独でまたは１もしくは複数の他の治療手段または治療物質と組み合わせて投与することができる。例えば、本願において開示される抗体は、化学療法、放射線療法、癌処置手術（例えば、腫瘍切除）、抗ウイルス薬、１もしくは複数の制吐薬または化学療法誘発合併症に対する他の療法、または癌もしくはウイルスに対する他の任意の治療物質と組み合わせて使用することができる。いくつかのこのような実施形態において、本願において開示される抗体が１または複数の治療物質と組み合わせて使用される場合、それはその１または複数の治療物質と同時に投与することができる。いくつかのこのような実施形態において、抗体は同じ医薬組成物の一部として同時に投与することができる。しかしながら、別の治療物質と「組み合わせて使用される」抗体は、治療物質と同時にまたは同じ組成物で投与する必要はない。本願において「組み合わせて使用される」という意味にはまた、別の治療物質の前または後に投与される抗体もまた、抗体と第２の物質が異なる方法で投与されるとしても、治療物質と「組み合わせて使用される」と見なされる。可能であれば、本願において開示される抗体と組み合わせて使用される他の治療物質は、他の治療物質の製品説明書を参照して投与することができ、または医師用添付文書集２００３(Physicians' Desk Reference, 第57版; Medical Economics Company; ISBN: 1563634457; 第57版 (2002年11月))を参照するか、もしくは当技術分野で公知の他の方法を参照することができる。

いくつかの実施形態において、治療物質は、癌に対する免疫応答を誘導または増強することができる。例えば、腫瘍ワクチンは、特定の腫瘍または癌に対する免疫応答を誘導するために使用することができる。サイトカイン療法は、免疫系への腫瘍抗原の提示を増強するために使用することができる。サイトカイン療法の例としては、限定するものではないが、インターフェロンα、βおよびγなどのインターフェロン、マクロファージＣＳＦ、顆粒球マクロファージＣＳＦおよび顆粒球ＣＳＦなどのコロニー刺激因子、ならびにＩＬ－１、ＩＬ－１ａ、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１およびＩＬ－１２などのインターロイキン、ＴＮＦ－αおよびＴＮＦ－βなどの腫瘍壊死因子が挙げられる。免疫抑制標的を活性化する試薬もまた使用可能であり、例としては、ＰＤ－１抗体、ＴＧＦ－β阻害剤、ＩＬ－１０阻害剤、およびＦａｓリガンド阻害剤が挙げられる。別の試薬群としては、腫瘍または癌細胞に対する免疫応答を活性化するもの、例えば、Ｔ細胞の活性化（例えば、Ｔ細胞共刺激シグナル経路、例えば、ＣＴＬＡ－４、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０、４－１ＢＢなどの経路など）を増強するもの、ならびに樹状細胞機能および抗原提示を改善するものが挙げられる。

以下の実施例は本願をより良く説明することを意図するものであって、本願の範囲を限定すると解釈されるべきではない。以下の特定の組成物、材料および方法は総て、全体としてまたは部分的に本願の範囲内にある。これらの特定の組成物、材料および方法は本願を限定することを意図するものではなく、本願の範囲内の特定の実施形態を説明するに過ぎない。当業者は創造性を加えることなく、また、本願の範囲から逸脱することなく、等価の組成物、材料および方法を開発することができる。本願の方法に対してなされる様々な変化はなお本願の範囲に入り得るものと理解されるべきである。本発明者らは、本願の範囲内のこのような変化を含むことを意図する。

配列情報
本願に含まれるいくつかの配列の情報を以下の表１に示す。

有益な効果
本願のモノクローナル抗体（例えば、ＵＭ０５－６Ｌ抗体）は、ＣＥＡＣＡＭ５タンパク質またはＣＥＡＣＡＭ５タンパク質を発現する細胞と高い特異性および選択性で結合することができ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＥＡＣＡＭ３、ＣＥＡＣＡＭ６、ＣＥＡＣＡＭ７タンパク質とは実質的に結合せず、ＣＥＡＣＡＭ８タンパク質とは弱く結合するだけである。同時に、抗体ＵＭ０５－６ＬはまたＡＤＣＣ活性も有する。抗体ＵＭ０５－６Ｌに基づいて構築されたＵＭ０５－６Ｌ－ＣＡＲは、ヒトＴ細胞の表面に発現可能であり、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて腫瘍細胞を認識することができ、サイトカインを分泌し、強い腫瘍阻害効果を有する。よって、本願のモノクローナル抗体（例えば、ＵＭ０５－６Ｌ抗体）は、高い臨床応用価値を有する。

図１は、本願において構築されたＣＨＯ細胞株におけるＣＥＡＣＡＭ５の過剰発現レベルを示し；従来のＣＨＯ細胞と比較した場合、本願において構築されたＣＨＯ細胞株におけるＣＥＡＣＡＭ５の過剰発現レベルは最大９０４倍である。 図２は、ＣＥＡＣＡＭ５タンパク質に対する抗体ＵＭ０５－６Ｌの結合のＥＬＩＳＡ実験の結果を示す。 図３は、ＬＯＶＯ細胞に対する抗体ＵＭ０５－６Ｌの結合力の検出結果を示す。 図４ａは、抗体ＵＭ０５－６ＬのＡＤＣＣリポーター遺伝子活性を示し；図４ａは、陽性対照（エルビタックス抗体）および陰性対照のＡＤＣＣリポーター遺伝子活性を示す。 図４ｂは、抗体ＵＭ０５－６ＬのＡＤＣＣリポーター遺伝子活性を示し；図４ｂは、ＵＭ０５－６ＬのＡＤＣＣリポーター遺伝子活性を示す。 図５ａは、フローサイトメトリーの結果を示し；図５ａは、対照Ｔ細胞（Ｍｏｃｋ Ｔ）の発現効率を示す。 図５ｂは、フローサイトメトリーの結果を示し；図５ｂは、ＵＭ０５－６Ｌ－ＣＡＲの発現効率を示す。 図６は、ＵＭ０５－６Ｌ－ＣＡＲ－Ｔを腫瘍細胞と混合した後の、サイトカインＩＦＮγ（左）およびＩＬ－２（右）の分泌の結果を示す。 図７は、腫瘍細胞ＫＡＴＯ３に対するＵＭ０５－６Ｌ－ＣＡＲ－Ｔ細胞の死滅化結果を示す。 図８は、腫瘍細胞ＬＳ１７４Ｔにより刺激されたＵＭ０５－６Ｌ－ＣＡＲ－Ｔ細胞の拡大増殖結果を示す。 図９は、マウスにおけるＵＭ０５－６Ｌ－ＣＡＲ－Ｔの腫瘍阻害結果を示す。 図１０は、ＵＭ０５－６Ｌ－ＣＡＲ－Ｔを受容したマウスにおけるＩＦＮγの放出を示す。

本発明を実施するための特定のモデル
以下、本願を、本願を説明することを意図した（本願を限定するものではない）以下の実施例を参照して説明する。

特に断りのない限り、本願において使用される分子生物学的実験法およびイムノアッセイ法は、J. Sambrook et al., Molecular Cloning: Laboratory Manual, 第2版, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989、およびFM Ausubel et al., Compiled Molecular Biology Experiment Guide, 第3版, John Wiley & Sons, Inc., 1995を参照し、制限酵素は製品製造者によって推奨されている条件に従って使用した。具体的な条件が実施例に示されていなかった場合には、従来の条件または製造者によって推奨されている条件に従った実施すべきである。製造の指示なく使用した試薬または器具は総て、商業的に購入した従来の製品であった。当業者は、これらの実施例が例として本願を記載するものであり、本願により特許請求される保護の範囲を限定することを意図しない。

実施例１：ヒトＣＥＡＣＡＭ５タンパク質に対するモノクローナル抗体の獲得
本願において、ＣＥＡＣＡＭ５タンパク質を過剰発現するＣＨＯ細胞株を構築した。簡単に述べると、ＣＥＡＣＡＭ５プラスミド（Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｙｉｑｉａｏ Ｓｈｅｎｚｈｏｕ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，ＨＧ１１０７７－ＵＴ）をＣＨＯ細胞株（ＡＴＣＣ）にトランスフェクトし、発現させた。このプラスミドはハイグロマイシン（Hygromycin）耐性であり、従って、このプラスミドで安定トランスフェクトされた細胞は、ハイグロマイシンを含有する培地で安定して継代培養できた。細胞を採取し、ＣＥＡＣＡＭ５の発現を測定した。図１に示されるように、ＦＡＣＳにより検出されたＣＨＯ－ＣＥＡＣＡＭ５細胞のＣＥＡＣＡＭ５過剰発現倍率は９０４倍であった。

ＣＨＯ－ＣＥＡＣＡＭ５細胞および腫瘍患者から精製したＣＥＡＣＡＭ５タンパク質（Ｌ２Ｃ０１００１）を用いて、表２の免疫計画に従い、５～８週齢の６個体のＢａｌｂ／ｃマウス（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｓｌａｃｋ）を免疫した。

免疫後２日目に、免疫マウスの脾細胞を採取し、ＳＰ２／０－ＡＧ１４細胞（ＡＴＣＣ）と融合してハイブリドーマ細胞を作製し、適当な量の融合細胞を９６ウェルプレートに播種した。融合の約１０日後に、各ウェルの上清を採取し、ハイブリドーマ細胞により分泌されたマウス抗体の、ヒトＣＥＡＣＡＭ５に対する結合活性をＥＬＩＳＡにより検出した。

さらに、ＥＬＩＳＡにより検出された強い陽性を示すウェルの上清を採取し、ＬＯＶＯ細胞（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）に対するその結合活性をフローサイトメトリーにより検出し、ＬＯＶＯ細胞に対して高い結合活性を有するハイブリドーマ細胞が得られた。これらの細胞をサブクローニングしてモノクローナル細胞を得た。表３にいくつかのハイブリドーマ細胞の検出データを示した。

より良好な結合活性を有するハイブリドーマ細胞３－８Ｇ８を配列決定のために選択した。配列決定後、抗体を取得し、ＵＭ０５－６と命名し、ＵＭ０５－６抗体のＣＤＲ配列を、Ｋａｂａｔナンバリングシステム(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Maryland (1991), 647-669頁)を用いて決定し、表４に示す。

実施例２：ヒト－マウスキメラ抗体の作製
表４のＵＭ０５－６の配列に従い、ヒト－マウスキメラ抗体を設計し、発現させ、ＵＭ０５－６Ｌと命名した。簡単に述べると、マウス抗体ＶＨおよびＶＬをコードする配列を、それぞれヒトＩｇＧ１重鎖定常領域をコードする配列（そのアミノ酸配列を配列番号９に示し、そのヌクレオチド配列を配列番号１０に示した）およびκ鎖定常領域配列（そのアミノ酸配列を配列番号１１に示し、そのヌクレオチド配列を配列番号１２に示した）に連結し、ヒト－マウスキメラ抗体ＵＭ０５－６Ｌを得た。

抗体の重鎖および軽鎖をコードするヌクレオチド配列をそれぞれ哺乳動物細胞発現ベクターｐｃＤＮＡ３．４にクローニングした。リポフェクタミン２０００トランスフェクション試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用い、この重鎖発現ベクターおよび軽鎖発現ベクターを２：１のモル比でＨＥＫ２９３細胞にトランスフェクトし、３７℃および５％二酸化炭素で７日間培養した。培養培地上清を回収し、上清中の抗体をプロテインＡアフィニティークロマトグラフィーにより精製した。精製の後に、抗体をＰＢＳ溶液で透析し、凍結乾燥させ、濃縮し、－２０℃で保存した。

実施例３：ＣＥＡＣＡＭ５タンパク質に対する抗体の結合
９６ウェルの高親和性プレートを、４℃にて１μｇ／ｍＬの濃度のヒトＣＥＡＣＡＭ５タンパク質溶液１００μＬ／ウェルでコーティングし、一晩振盪した。翌日、それをまず３００μＬのＰＢＳＴ（Ｔｗｅｅｎ２０：０．５‰）で３回洗浄し、次に、１００μＬ／ウェルの５％ＢＳＡ／ＰＢＳで１時間ブロッキングし、室温で振盪した。３００μＬのＰＢＳＴで３回洗浄を行った。抗体サンプルの連続希釈液をＰＢＳで作製し、９６ウェルプレートに１００μＬ／ウェルで加え、室温で１時間振盪した。洗浄を３００μＬのＰＢＳＴで３回行った。二次抗体ヤギ抗ヒトＩｇＧ ＨＲＰ溶液を作製し、９６ウェルプレート１００μＬ／ウェルで加え、室温で３０分間振盪した。洗浄を３００μＬのＰＢＳＴで４回行った。１００μＬ／ウェルのＴＭＢを加えて２０分間発色させた。１００μＬ／ウェルの０．６Ｎ Ｈ_２ＳＯ_４を加えて発色を停止させ、ＯＤ４５０ｎｍを検出した。検出後、結果を図２に示した。ＣＥＡＣＡＭ５タンパク質に対するキメラ抗体ＵＭ０５－６Ｌの結合のＥＣ５０は４７．４７ｎｇ／ｍＬであった。

実施例４：ＣＥＡＣＡＭ５を発現する細胞に対する抗体の結合
天然にヒトＣＥＡＣＡＭ５タンパク質を発現したＬＯＶＯ腫瘍細胞または種々のＣＥＡＣＡＭタンパク質を過剰発現した細胞に対する抗体の結合を検出するためにフローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）を用いた。簡単に述べると、細胞をまず回収し、ＰＢＳで洗浄し、計数し、希釈して２^＊１０^６／ｍｌ細胞の懸濁液を得；１０μｌの抗体検量線用溶液を１００μｌの細胞懸濁液に加え、暗所、４℃で３０分間インキュベートし；ＰＢＳで２回洗浄した後、対応する蛍光標識二次抗体ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を加え、暗所、４℃で３０分間インキュベートし、ＰＢＳで２回洗浄した後、それを４００μｌのＦＡＣＳバッファーに懸濁させ、細胞に対する抗体の結合状態をＦＡＣＳにより検出した。

３μｇ／ｍＬ濃度での種々の細胞に対する、キメラ抗体ＵＭ０５－６Ｌおよび対照抗体ＵＭ０５－８（抗ＣＥＡＣＡＭ５抗体、本発明者らの研究室でハイブリドーマ法により作製）の上清の結合状態を検出し、ここで、ＳＷ６２０－ＣＥＡＣＡＭ１はＣＥＡＣＡＭ１タンパク質を過剰発現する細胞であり、ＳＷ６２０－ＣＥＡＣＡＭ３はＣＥＡＣＡＭ３タンパク質を過剰発現する細胞であり、ＣＨＯ－ＣＥＡＣＡＭ６はＣＥＡＣＡＭ６タンパク質を過剰発現する細胞であり、ＣＨＯ－ＣＥＡＣＡＭ７はＣＥＡＣＡＭ７タンパク質を過剰発現する細胞であり、ＣＨＯ－ＣＥＡＣＡＭ８はＣＥＡＣＡＭ８タンパク質を過剰発現する細胞であった。ＬＯＶＯ細胞（ＣＥＡＣＥＭ５を発現）に対する抗体の結合活性（すなわち、ＦＡＣＳの検出値）を１００％として、種々の細胞（種々のＣＥＡＣＡＭタンパク質を発現）に対する抗体の相対的結合活性を算出し、検出結果を表５に示した。

表５から、キメラ抗体ＵＭ０５－６Ｌが特に顕著な選択性を有したことを見て取ることができ、それはＣＥＡＣＡＭ５と高い親和性で結合したが、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＥＡＣＡＭ３、ＣＥＡＣＡＭ６、ＣＥＡＣＡＭ７とは明らかに結合せず、ＣＥＡＣＡＭ８とは弱く結合しただけであった。通常の抗体（例えば、対照抗体ＵＭ０５－８）はＣＥＡＣＡＭ５に結合することができ、同時にＣＥＡＣＡＭ１、ＣＥＡＣＡＭ３、ＣＥＡＣＡＭ６、ＣＥＡＣＡＭ７およびＣＥＡＣＡＭ８にも高レベルで結合し、選択性を示さなかった。

さらに、本発明者らは、天然にヒトＣＥＡＣＡＭ５を発現したＬＯＶＯ腫瘍細胞に結合するキメラ抗体ＵＭ０５－６ＬのＥＣ５０を検出するためにＦＡＣＳを用いた。これらの結果を図３に示し、ＬＯＶＯ細胞に結合するキメラ抗体ＵＭ０５－６ＬのＥＣ５０は２７６．１ｎｇ／ｍＬであった。上記の結果に基づけば、キメラ抗体ＵＭ０５－６Ｌは、ＣＥＡＣＡＭ５に対して優れた結合親和性、特異性および選択性を有していた。

実施例５：抗体のＡＤＣＣ活性
ＬＯＶＯ細胞を標的細胞として用い、ＬＯＶＯ細胞を９６ウェル細胞培養プレートに２０，０００細胞／ウェルの密度で播種し、３７℃および５％ＣＯ_２で一晩インキュベートした。２日目に、抗体ＵＭ０５－６Ｌおよび陽性対照抗体エルビタックスを培養培地中２０μｇ／ｍｌで作製し、３回希釈して８濃度を得た。ＬＯＶＯ細胞の上清培地をピペットで取り出し、特定の濃度に希釈した抗体（陽性対照抗体エルビタックス、キメラ抗体ＵＭ０５－６Ｌまたは陰性対照の無関連抗体）をＬＯＶＯ細胞に３０μＬ／ウェルで加えた。次に、エフェクター細胞Ｊｕｒｋａｔ／ＡＤＣ（Ｎａｎｊｉｎｇ Ｎｕｏａｉｘｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）をＬＯＶＯ細胞ウェルに１２０，０００細胞／３０μＬ／ウェルで播種し、３７℃および５％ＣＯ_２で１６～２０時間インキュベートした。インキュベーション後、Ｂｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏキット（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログＥ２６２０）を用いて、エフェクター細胞内のルシフェラーゼの発現レベルを検出した。ルシフェラーゼレベルは、エフェクター細胞のＡＤＣＣ活性化の程度を表した。図４ａは、陽性対照エルビタックス抗体および陰性対照のＡＤＣＣリポーター遺伝子活性を示し、図４ｂは、ＵＭ０５－６ＬのＡＤＣＣリポーター遺伝子活性を示した。上記の結果に基づけば、ＵＭ０５－６ＬはＥＣ５０ ０．５７μｇ／ｍＬで強いＡＤＣＣ活性を有したことが見て取れた。

実施例６：ＣＥＡＣＡＭ５を標的とするＣＡＲ－Ｔ細胞の構築
第２世代および第３世代のｈＣＡＲ－Ｔ構造に基づき、本発明者らは抗ＣＥＡＣＡＭ５一本鎖抗体をＣＡＲ－Ｔ認識抗体として用い、４１ＢＢ、ＣＤ２８、ＯＸ４０その他などの１または複数の共刺激成分を用いて種々のＣＥＡ－ＣＡＲ構造の設計を行い、対応するレンチウイルスプラスミドを構築して、対応するＣＡＲに感染し、それを発現できるレンチウイルスを作製した。このレンチウイルスは、腫瘍患者の末梢血から単離されたＴ細胞に感染し、細胞膜表面に対応するＣＡＲ受容体を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞を産生するために使用可能であった。この種のＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＣＥＡＣＡＭ５を発現する腫瘍細胞を効果的に認識し、死滅させることができた。ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏの両実験で、この細胞免疫療法は極めて良好な安全性および有効性を有したことが分かった。

配列番号１３に示されるような一本鎖抗体ＵＭ０５－６Ｌ ｓｃＦｖ（ＶＨ－Ｇ４Ｓ３－ＶＬの順）を配列ＣＤ８α－ＣＤ１３７－ＣＤ３ζ－ｐ２Ａ－ｔＥＧＦＲに連結してキメラ抗原受容体ＣＡＲを構築した後、ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列をレンチウイルスベクター（Ｇｅｎｅｃｈｅｍ、ＧＶ４０１）にクローニングし、このベクターをＵＭ０５－６Ｌ－ＣＡＲと命名した。発現カセットは、ＥＦ１ａプロモーター－ＣＡＲ－２Ａ－ｔＥＧＦＲ－ＷＰＲＥであった。

ＵＭ０５－６Ｌ－ＣＡＲレンチウイルスベクターおよびパッケージングプラスミドを１６時間、２９３Ｔ細胞に一過性にトランスフェクトし、培地を交換し、２４～４８時間培養を続けた。培地上清（レンチウイルスを含有する）を回収し、－８０℃で保存した。

健常者由来のＰＢＭＣ細胞をＣＤ３／２８抗体で２４時間活性化合物し、レンチウイルスとＴ細胞をＭＯＩ＝３：１となるように混合し、９６時間培養し、ＵＭ０５－６Ｌ－ＣＡＲの発現をＰＥ蛍光標識セツキシマブで検出した。結果を図５に示した。対照（図５ａ）と比較した場合に、ＵＭ０５－６Ｌ－ＣＡＲ（図５ｂ）はヒトＴ細胞の表面に十分に発現させることができた。

実施例７：ＣＥＡＣＡＭ５を標的とするＣＡＲ－Ｔ細胞の機能検出
１．サイトカイン放出の検出
ＵＭ０５－６Ｌ－ＣＡＲ－Ｔ細胞とＣＥＡＣＡＭ５発現腫瘍細胞（例えば、ＫＡＴＯ３およびＬＳ１７４Ｔ）を混合し、培地対照（すなわち、ＵＭ０５－６Ｌ－ＣＡＲ－Ｔ細胞単独を使用した）およびＣＥＡＣＡＭ５陰性細胞対照（すなわち、ＵＭ０５－６Ｌ－ＣＡＲ－Ｔ細胞およびＲＫＯ細胞などのＣＥＡＣＡＭ５を発現しない細胞を使用した）を設定し、これら２種類の細胞を１：１の比率で混合し、１６時間培養し、上清中に放出されたＩＦＮγおよびＩＬ２を検出した。結果を図６に示し、ＵＭ０５－６Ｌ－ＣＡＲ－Ｔは、ＣＥＡＣＡＭ５を発現する細胞株を認識し、サイトカインＩＦＮγおよびＩＬ－２の放出を引き起こすことができた。

２．腫瘍細胞の死滅の検出
ＵＭ０５－６Ｌ－ＣＡＲ－ＴおよびＣＥＡＣＡＭ５発現腫瘍細胞（例えば、ＫＡＴＯ３）を混合し、９６ウェル培養プレートにて特定のＥ：Ｔ比（３０：１、１０：１、３：１、１：１、０．３：１）で培養した。培養上清中の乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の放出記録データを検出するためにＰｒｏｍｅｇａ ＬＤＨ検出キットを用いた。腫瘍細胞死滅の計算結果を図７に示した。この図から、ＵＭ０５－６Ｌ－ＣＡＲ－Ｔは腫瘍細胞を効率的かつ用量依存的に死滅させ得ることを見て取ることができた。

３．腫瘍細胞により刺激された増殖実験
ＵＭ０５－６Ｌ－ＣＡＲ－Ｔ細胞およびＣＥＡＣＡＭ５発現腫瘍細胞（例えば、ＬＳ１７４Ｔ）を混合し、Ｅ：Ｔ＝１：１となるように７２時間培養し（ＩＬ２補充無し）、それらの増殖を細胞計数により検出した。結果を図８に示した。ＵＭ０５－６Ｌ－ＣＡＲ－Ｔは、ＣＥＡＣＡＭ５を発現する腫瘍細胞により刺激された場合に効率的に増殖することができた。

実施例８：ＬＳ１７４Ｔ腫瘍モデルのｉｎ ｖｉｖｏ医薬有効性試験
ＬＳ１７４Ｔ細胞（ＡＴＣＣ ＣＬ－１８７）をＮＳＧマウス（Ｂｉｏｃｙｔｏｍｅｔｅｒ）の皮下に１×１０^７／マウスで接種した。腫瘍体積が２００～４００ｍｍ^３に達した際に、ＰＢＳ対照、非改変Ｔ細胞対照（Ｍｏｃｋ Ｔ）またはＵＭ０５－６Ｌ ＣＡＲ－Ｔを尾静脈からそれぞれ１００μｌ、１×１０^７細胞、および１×１０^７ ｔＥＧＦＲ＋細胞の用量で投与した。腫瘍体積の変化を記録し、末梢血中のＩＦＮγ放出を分析した。結果を図９および図１０に示した。ＵＭ０５－６Ｌはマウス内でＬＳ１７４Ｔ腫瘍細胞を認識し、多量のＩＦＮγを放出し、強い腫瘍抑制効果をもたらした。

Claims (25)

1. （ａ）以下の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）：
   （ｉ）以下の配列：配列番号１、またはそれと比較した場合に１もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ１、
   （ｉｉ）以下の配列：配列番号２、またはそれと比較した場合に１もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ２、および
   （ｉｉｉ）以下の配列：配列番号３、またはそれと比較した場合に１もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨ ＣＤＲ３
   を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）；
   ならびに／または
   （ｂ）以下の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）：
   （ｉｖ）以下の配列：配列番号４、またはそれと比較した場合に１もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ１、
   （ｖ）以下の配列：配列番号５、またはそれと比較した場合に１もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ２、および
   （ｖｉ）以下の配列：配列番号６、またはそれと比較した場合に１もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬ ＣＤＲ３
   を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）
   を含んでなり；
   好ましくは、（ｉ）～（ｖｉ）のいずれか１つに記載される置換は、保存的置換であり；
   好ましくは、（ｉ）～（ｖｉ）のいずれか１つに記載されるＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムによって定義され；
   好ましくは、以下の３つの重鎖ＣＤＲ：配列番号１に示されるような配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２に示されるような配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号３に示されるような配列を有するＶＨ ＣＤＲ３；ならびに／または以下の３つの軽鎖ＣＤＲ：配列番号４に示されるような配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５に示されるような配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号６に示されるような配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含んでなる、ＣＥＡＣＡＭ５タンパク質と特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
2. 配列番号７に示されるような重鎖可変領域（ＶＨ）に含まれる３つのＣＤＲ；および／または配列番号８に示されるような軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる３つのＣＤＲを含んでなり；好ましくは、ＶＨに含まれる３つのＣＤＲおよび／またはＶＬに含まれる３つのＣＤＲはＫａｂａｔ、ＩＭＧＴまたはＣｈｏｔｈｉａナンバリングシステムにより定義される、ＣＥＡＣＡＭ５タンパク質と特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
3. （ａ）以下から選択されるアミノ酸配列：
   （ｉ）配列番号７に示されるような配列；
   （ｉｉ）配列番号７に示される配列と比較した場合に１もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列；または
   （ｉｉｉ）配列番号７に示される配列と比較した場合に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する配列
   を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに／または
   （ｂ）以下から選択されるアミノ酸配列：
   （ｉｖ）配列番号８に示されるような配列；
   （ｖ）配列番号８に示される配列と比較した場合に１もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列；または
   （ｖｉ）配列番号８に示される配列と比較した場合に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する配列
   を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）
   を含んでなり；
   好ましくは、（ｉｉ）または（ｖ）に記載される置換は保存的置換であり；
   好ましくは、配列番号７に示される配列を有するＶＨおよび配列番号８に示される配列を有するＶＬを含んでなる、
   請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
4. ヒト免疫グロブリンに由来する定常領域またはその変異体を含んでなり；
   好ましくは、
   （ａ）ヒト免疫グロブリンの重鎖定常領域（ＣＨ）もしくはその変異体、ここで、この変異体は、それが由来する配列と比較した場合に、１もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加もしくはそれらの任意の組合せ（例えば、多くとも２０、多くとも１５、多くとも１０、もしくは多くとも５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加、もしくはそれらの任意の組合せ；例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加、もしくはそれらの任意の組合せ）を有する；および／または
   （ｂ）ヒト免疫グロブリンの軽鎖定常領域（ＣＬ）もしくはその変異体、ここで、この変異体は、それが由来する配列と比較した場合に、１もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加もしくはそれらの任意の組合せ（例えば、多くとも２０、多くとも１５、多くとも１０、もしくは多くとも５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加、もしくはそれらの任意の組合せ；例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加、もしくはそれらの任意の組合せ）を有する；
   を含んでなり；
   好ましくは、重鎖定常領域は、ＩｇＧ重鎖定常領域、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４重鎖定常領域であり；
   好ましくは、配列番号９に示されるような重鎖定常領域（ＣＨ）を含んでなり；
   好ましくは、軽鎖定常領域は、κ軽鎖定常領域であり；
   好ましくは、配列番号１１に示されるような軽鎖定常領域（ＣＬ）を含んでなる、
   請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
5. 前記抗原結合フラグメントがＦａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）_２、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、ＢｓＦｖ、ＤｓＦｖ、（ｄｓＦｖ）_２、ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ二量体、ラクダ化一本鎖ドメイン抗体、ダイアボディ、ｄｓダイアボディ、ナノボディ、シングルドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、二価ドメイン抗体からなる群から選択され；かつ／または、前記抗体がマウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体もしくは多重特異性抗体である、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
6. 標識を含んでなり；好ましくは、酵素（例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼ）、放射性核種、蛍光色素、発光物質（例えば、化学発光物質）またはビオチンなどの検出可能な標識を含んでなる、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
7. 請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントまたはその重鎖可変領域および／もしくは軽鎖可変領域をコードする単離された核酸分子、好ましくは配列番号１４または配列番号１５に示されるようなヌクレオチド配列を含んでなる核酸分子。
8. 請求項７に記載の核酸分子を含んでなるベクターであって；好ましくは、クローニングベクターまたは発現ベクターである、ベクタ－。
9. 請求項７に記載の核酸分子または請求項８に記載のベクターを含んでなる、宿主細胞。
10. 請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを作製するための方法であって、請求項９に記載の宿主細胞を前記抗体またはその抗原結合フラグメントの発現を可能とする条件下で培養すること、および前記宿主細胞の培養物から前記抗体またはその抗原結合フラグメントを回収することを含んでなり；
    好ましくは、前記宿主細胞は哺乳動物細胞であり；好ましくは、前記宿主細胞は、ヒト、マウス、ヒツジ、ウマ、イヌ、またはネコ細胞であり；好ましくは、前記宿主細胞は、チャイニーズハムスター卵巣細胞である、方法。
11. 請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを含んでなる二重特異性または多重特異性分子であって、
    好ましくは、ＣＥＡＣＡＭ５と特異的に結合し、加えていくつかの他の標的と特異的に結合し；
    好ましくは、第２の標的に対する第２の結合特異性を有する少なくとも１つの分子（例えば、第２の抗体）をさらに含んでなる、
    二重特異性または多重特異性分子。
12. 請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントおよび前記抗体またはその抗原結合フラグメントに連結された治療薬を含んでなり、
    好ましくは、前記治療薬は細胞傷害性薬剤から選択され；
    好ましくは、前記治療薬は、アルキル化剤、有糸分裂阻害剤、抗腫瘍抗生物質、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、放射性核種剤、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択され；
    好ましくは、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）である、
    免疫複合体。
13. 請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、請求項１１に記載の二重特異性もしくは多重特異性分子、または請求項１２に記載の免疫複合体と、薬学上許容可能な担体および／または賦形剤を含んでなり；
    好ましくは、付加的な薬学的に活性な薬剤をさらに含んでなり；
    好ましくは、付加的な薬学的に活性な薬剤が、抗腫瘍活性を有する薬物、例えば、アルキル化剤、有糸分裂阻害剤、抗腫瘍抗生物質、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、放射性核種、放射線増感剤、抗血管新生剤、サイトカイン、分子標的薬、免疫チェックポイント阻害剤または腫瘍溶解性ウイルスなどであり；
    好ましくは、前記抗体もしくはその抗原結合フラグメント、二重特異性もしくは多重特異性分子または免疫複合体および付加的な薬学的に活性な薬剤が別個の成分としてまたは同じ組成物の成分として提供される、
    医薬組成物。
14. 請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを含んでなるキットであって；
    好ましくは、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、酵素（例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼ）、放射性核種、蛍光色素、発光物質（例えば、化学発光物質）またはビオチンなどの検出可能な標識を含んでなり；
    好ましくは、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを特異的に認識する第２の抗体をさらに含んでなり；
    好ましくは、前記第２の抗体は、酵素（例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼ）、放射性核種、蛍光色素、発光物質（例えば、化学発光物質）またはビオチンなどの検出可能な標識をさらに含んでなる、
    キット。
15. 請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントの抗原結合ドメインを含んでなるキメラ抗原受容体であって；
    好ましくは、前記抗原結合ドメインは、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含んでなり；
    好ましくは、前記抗原結合ドメインはｓｃＦｖであり；
    好ましくは、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体の抗原結合フラグメントを含んでなり；
    好ましくは、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）により発現される、
    キメラ抗原受容体。
16. 請求項１５に記載のキメラ抗原受容体をコードする、単離された核酸分子。
17. 請求項１６に記載の単離された核酸分子を含んでなり；好ましくは、キメラ抗原受容体Ｔ細胞を作製するために使用される、ベクター。
18. 請求項１６に記載の単離された核酸分子または請求項１７に記載のベクターを含んでなる宿主細胞であって；
    好ましくは、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）であり；
    好ましくは、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）である、
    宿主細胞。
19. 細胞の表面でのＣＥＡＣＡＭ５の発現レベルを低減するための方法であって、
    前記細胞を請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または請求項１１に記載の二重特異性もしくは多重特異性分子、または請求項１２に記載の免疫複合体、または請求項１３に記載の医薬組成物、または請求項１５に記載のキメラ抗原受容体、または請求項１８に記載の宿主細胞と、細胞の表面でのＣＥＡＣＡＭ５の発現を低減するように接触させることを含んでなり；前記細胞は細胞の表面でＣＥＡＣＡＭ５を発現し；
    好ましくは、前記細胞は、ＣＥＡＣＡＭ５を発現する腫瘍細胞である、
    方法。
20. ＣＥＡＣＡＭ５を発現する腫瘍細胞の生長を阻害するおよび／または腫瘍細胞を死滅させるための方法であって、前記腫瘍細胞を有効量の、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または請求項１１に記載の二重特異性もしくは多重特異性分子、または請求項１２に記載の免疫複合体、または請求項１３に記載の医薬組成物、または請求項１５に記載のキメラ抗原受容体、または請求項１８に記載の宿主細胞と接触させることを含んでなる、方法。
21. 対象（例えば、ヒト）において腫瘍を予防および／または治療するための方法であって、それを必要とする対象に有効量の、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体もしくその抗原結合フラグメント、または請求項１１に記載の二重特異性もしくは多重特異性分子、または請求項１２に記載の免疫複合体、または請求項１３に記載の医薬組成物、または請求項１５に記載のキメラ抗原受容体、または請求項１８に記載の宿主細胞を投与することを含んでなり；
    好ましくは、前記腫瘍はＣＥＡＣＡＭ５を発現し；
    好ましくは、前記腫瘍はＣＥＡＣＡＭ５を発現する腫瘍細胞を含み；
    好ましくは、前記ＣＥＡＣＡＭ５は、腫瘍細胞の表面で発現され；
    好ましくは、前記腫瘍は、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、腎細胞癌、結腸直腸癌、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、胃癌、膀胱癌、食道癌、中皮腫、黒色腫、頭頸部癌、甲状腺癌、肉腫、前立腺癌、膠芽腫、子宮頸癌、胸腺癌、白血病、リンパ腫、骨髄腫、菌状息肉症、メルケル細胞癌およびその他の血液悪性腫瘍、例えば、典型的ホジキンリンパ腫（ＣＨＬ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞／組織球Ｂ細胞豊富型リンパ腫、ＥＢＶ陽性および陰性ＰＴＬＤ、およびＥＢＶ関連びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、形質芽球性リンパ腫、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、鼻咽頭癌およびＨＨＶ８関連原発性滲出性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍、例えば、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫からなる群から選択され；
    好ましくは、対象は、ヒトなどの哺乳動物であり；
    好ましくは、アルキル化剤、有糸分裂阻害剤、抗腫瘍抗生物質、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、放射性核種、放射線増感剤、抗血管新生剤、サイトカイン、分子標的薬、免疫チェックポイント阻害剤または腫瘍溶解性ウイルスなどの抗腫瘍活性を有する付加的薬物を投与することをさらに含んでなり；
    好ましくは、手術、化学療法、放射線療法、標的化療法、免疫療法、ホルモン療法、遺伝子療法または緩和療法などの付加的抗腫瘍療法を投与することをさらに含んでなる、
    方法。
22. 対象（例えば、ヒト）における腫瘍の予防および／治療のための薬剤の製造における、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または請求項１１に記載の二重特異性もしくは多重特異性分子、または請求項１２に記載の免疫複合体、または請求項１３に記載の医薬組成物、または請求項１５に記載のキメラ抗原受容体、または請求項１６に記載の宿主細胞の使用であって、
    好ましくは、前記薬剤は付加的な薬学的に活性な薬剤をさらに含んでなり；
    好ましくは、付加的な薬学的に活性な薬剤は、アルキル化剤、有糸分裂阻害剤、抗腫瘍抗生物質、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、放射性核種、放射線増感剤、抗血管新生剤、サイトカイン、分子標的薬、免疫チェックポイント阻害剤または腫瘍溶解性ウイルスなどの、抗腫瘍活性を有する薬物であり；
    好ましくは、前記腫瘍は、ＣＥＡＣＡＭ５を発現し；
    好ましくは、前記腫瘍は、ＣＥＡＣＡＭ５を発現する腫瘍細胞を含み；好ましくは、前記ＣＥＡＣＡＭ５は、腫瘍細胞の表面で発現され；
    好ましくは、前記腫瘍は、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、腎細胞癌、結腸直腸癌、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、胃癌、膀胱癌、食道癌、中皮腫、黒色腫、頭頸部癌、甲状腺癌、肉腫、前立腺癌、膠芽腫、子宮頸癌、胸腺癌、白血病、リンパ腫、骨髄腫、菌状息肉症、メルケル細胞癌およびその他の血液悪性腫瘍、例えば、典型的ホジキンリンパ腫（ＣＨＬ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞／組織球Ｂ細胞豊富型リンパ腫、ＥＢＶ陽性および陰性ＰＴＬＤ、およびＥＢＶ関連びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、形質芽球性リンパ腫、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、鼻咽頭癌およびＨＨＶ８関連原発性滲出性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍、例えば、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫からなる群から選択され；
    好ましくは、前記対象は、ヒトなどの哺乳動物である、使用。
23. サンプル中のＣＥＡＣＡＭ５（例えば、ヒトＣＥＡＣＡＭ５）の存在または量を検出するための方法であって、以下の工程：
    （１）前記サンプルを請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントと接触させる工程；
    （２）抗体もしくはその抗原結合フラグメントおよびＣＥＡＣＡＭ５を含んでなる複合体の形成を検出するか、またはその複合体の量を検出する工程
    を含んでなり；
    好ましくは、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、検出可能な標識を含んでなり；
    好ましくは、前記ＣＥＡＣＡＭ５は、ヒトＣＥＡＣＡＭ５である、
    方法。
24. 腫瘍がＣＥＡＣＡＭ５を標的とする抗腫瘍療法によって治療可能であるかどうかを決定するための方法であって、以下の工程：
    （１）腫瘍の細胞を含有するサンプルを請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントと接触させる工程；
    （２）抗体またはその抗原結合フラグメントおよびＣＥＡＣＡＭ５を含んでなる複合体の形成を検出する工程
    を含んでなり；
    好ましくは、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、検出可能な標識を含んでなり；
    好ましくは、前記ＣＥＡＣＡＭ５は、ヒトＣＥＡＣＡＭ５であり；
    好ましくは、前記腫瘍は、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、腎細胞癌、結腸直腸癌、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、胃癌、膀胱癌、食道癌、中皮腫、黒色腫、頭頸部癌、甲状腺癌、肉腫、前立腺癌、膠芽腫、子宮頸癌、胸腺癌、白血病、リンパ腫、骨髄腫、菌状息肉症、メルケル細胞癌およびその他の血液悪性腫瘍、例えば、典型的ホジキンリンパ腫（ＣＨＬ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞／組織球Ｂ細胞豊富型リンパ腫、ＥＢＶ陽性および陰性ＰＴＬＤ、およびＥＢＶ関連びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、形質芽球性リンパ腫、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、鼻咽頭癌およびＨＨＶ８関連原発性滲出性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍、例えば、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫からなる群から選択される、
    方法。
25. 腫瘍がＣＥＡＣＡＭ５を標的とする抗腫瘍療法によって治療可能であるかどうかを決定するためのキットの製造における請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントの使用であって；
    好ましくは、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、検出可能な標識を含んでなり；
    好ましくは、前記ＣＥＡＣＡＭ５は、ヒトＣＥＡＣＡＭ５であり；
    好ましくは、前記腫瘍は、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、腎細胞癌、結腸直腸癌、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、胃癌、膀胱癌、食道癌、中皮腫、黒色腫、頭頸部癌、甲状腺癌、肉腫、前立腺癌、膠芽腫、子宮頸癌、胸腺癌、白血病、リンパ腫、骨髄腫、菌状息肉症、メルケル細胞癌およびその他の血液悪性腫瘍、例えば、典型的ホジキンリンパ腫（ＣＨＬ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞／組織球Ｂ細胞豊富型リンパ腫、ＥＢＶ陽性および陰性ＰＴＬＤ、およびＥＢＶ関連びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、形質芽球性リンパ腫、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、鼻咽頭癌およびＨＨＶ８関連原発性滲出性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍、例えば、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫からなる群から選択される、使用。

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