JP2022535150A - 抗hK2キメラ抗原受容体(CAR) - Google Patents

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Abstract

本開示は、癌の治療のための、ヒトカリクレイン-2(hK2)に特異的結合する、キメラ抗原受容体(CAR)及びこのようなCARを含む免疫応答性細胞を提供する。

Description

(配列表)
本出願は、ASCIIフォーマットで電子的に提出済みである、その全体が参照により本明細書に組み込まれる配列表を含む。上記ASCIIコピーは、2020年6月30日に作成され、名称はJBI6124WOPCT1_SL.txtであり、サイズは562,160バイトである。
(発明の分野)
本発明は、hK2を標的とする一本鎖可変断片を含むhK2を標的とするキメラ抗原受容体(chimeric antigen receptors、CAR)、及びCARを発現する遺伝子操作されたhK2を標的とする免疫細胞に関する。また、CARをコードしている核酸及び発現ベクター、当該ベクターを含有する組み換え細胞、並びにhK2を標的とするCARを発現する遺伝子操作された免疫細胞を含む組成物も提供される。CAR及び遺伝子操作された免疫細胞を作製する方法、並びに癌を含む状態を治療するために遺伝子操作された免疫細胞を使用する方法も提供される。
(背景)
前立腺癌は、診断頻度が2番目に高い癌であり、男性における癌の死因の6位であり、世界中の男性の全ての新たな癌症例の14%(903,500)及び全ての癌死亡の6%(258,400)を占める。前立腺癌の診断から死亡までの過程は、疾患の程度、ホルモン状態、及び検出可能な転移の有無:限局性疾患、放射線療法又は手術後に検出可能な転移なく前立腺特異的抗原(PSA)のレベルが上昇していること、並びに非去勢病期又は去勢病期における臨床的転移に基づいて、一連の臨床段階として最善に分類される。手術、放射線照射、又はこれら両方の併用は、限局性疾患の患者にとって治癒的なものになり得るが、これらの患者のうちのかなりの割合は、PSAレベルの上昇をエビデンスとする再発性疾患を有し、これは、特に高リスク群における転移の発生、すなわち、疾患の終末期への移行につながる場合がある。
アンドロゲン枯渇療法(ADT)が標準的治療であり、全般的に予測可能な転帰は、PSAの低下、腫瘍が増殖しない安定期、続いて、PSAの上昇、及び去勢抵抗性疾患としての再成長である。長年にわたり、ADTは、転移性前立腺癌の患者のための標準治療であった。
カリクレイン関連ペプチダーゼ2(hK2、HK2)は、アンドロゲン受容体(AR)に駆動されて前立腺組織及び前立腺癌に特異的に発現するトリプシン様酵素である。hK2は、膜貫通プロテアーゼ、セリン2(TMPRSS2)によって活性化され、前立腺の管に分泌され、そこで、射精液中の細胞外マトリクスであるセメノゲリンを切断して精子の運動性を増強するカスケードを開始させる。hK2発現は、前立腺及び前立腺癌組織に限定されるが、最近、ステロイドホルモンによりAR経路が適切に活性化された後の乳癌株及び一次患者サンプルでhK2が検出可能であることが証明された(米国特許出願公開第2018/0326102号)。PSAと同様に、肥大又は悪性形質転換時に前立腺の高度に構造化された組織化が損なわれた場合に、触媒的に不活性なhK2の血液への逆行性放出が生じる。
T細胞療法では、特定の腫瘍関連抗原に対する特異性を増強するために遺伝子改変された単離T細胞を利用する。遺伝子改変は、キメラ抗原受容体(CAR)又は外因性T細胞受容体の発現を伴い、T細胞上に新たな抗原特異性を提供し得る。キメラ抗原受容体を発現するT細胞(CAR-T細胞)は、腫瘍免疫反応性を誘導することができる。CAR-T細胞を利用したより良好な癌療法が必要とされている。
(概要)
キメラ抗原受容体(CAR)、例えばヒトカリクレイン-2(hK2)を標的とするCAR、当該CARを含む細胞、当該CARをコードしているベクター、例えば組み換え発現ベクター、及び当該CARをコードしている核酸分子、当該CARを作製する方法、組成物、ポリペプチド、タンパク質、核酸、宿主細胞、細胞集団、並びに開示されたCARを使用して障害、例えば癌を治療する方法が本明細書に開示される。
一態様では、以下を含む、キメラ抗原受容体(CAR)が提供される:
(a)ヒトカリクレイン-2(hK2)抗原に特異的に結合するscFvを含む細胞外ドメインと、
(b)膜貫通ドメインと、
(c)少なくとも1つの共刺激ドメインを任意選択で含む細胞内シグナル伝達ドメイン。
いくつかの実施形態では、CARは、
(d)CD8a-ヒンジ領域
を更に含み、
当該膜貫通ドメインは、CD8a膜貫通領域(CD8A-TM)ポリペプチドを含み、
当該細胞内シグナル伝達ドメインは、TNF受容体スーパーファミリーメンバー9(CD137)成分を含む共刺激ドメイン及びT細胞表面糖タンパク質CD3ゼータ鎖(CD3z)成分を含む一次シグナル伝達ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、CD8a-ヒンジ領域は、配列番号25、269、270、271、若しくは272と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を含む、
膜貫通ドメインは、配列番号26と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を含む、並びに/又は
細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号27と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する共刺激ドメイン、及び配列番号28と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する一次シグナル伝達ドメインを含む。
別の態様では、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラ抗原受容体(CAR)であって、当該細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号64のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号314のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号315のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号311のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号309のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号310のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号311のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号65のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号72のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号73のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号86のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号87のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号88のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号92のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号93のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号94のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号102のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号103のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号104のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号105のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号106のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号104のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号107のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号108のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号109のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号110のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号111のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号109のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号102のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号112のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号113のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号105のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号114のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号113のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号115のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号116のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号117のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号118のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号119のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号117のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号120のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号121のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号122のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;又は
配列番号123のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号124のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号122のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、
を含み、
当該細胞外抗原結合ドメインが、hK2抗原に結合する、CARが提供される。
別の態様では、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラ抗原受容体(CAR)であって、当該細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号69のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号68のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号70のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号89のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号90のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号95のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号96のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号312のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号313のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号89のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号90のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号126のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号128のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号129のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号130のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号125のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号131のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号132のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号133のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号134のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号135のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号136のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号137のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号138のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;又は
配列番号97のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号127のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号139のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3、
を含み、
当該細胞外抗原結合ドメインが、hK2抗原に結合する、CARが提供される。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号69のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;又は
配列番号68のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号70のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号89のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号90のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号95のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号96のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号312のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号313のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号89のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号90のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号126のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号128のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号129のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号130のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号125のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号131のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号132のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号133のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号134のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号135のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号136のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号137のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号138のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;又は
配列番号97のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号127のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号139のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3、
を更に含む。
別の態様では、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラ抗原受容体(CAR)であって、当該細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号1、2、3、74、75、147、148、149、150、151、152、及び318から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン(VL)、並びに/又は
配列番号4、5、6、76、77、140、141、142、143、144、145、146、及び317から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン(VH)、
を含み、
当該細胞外抗原結合ドメインが、ヒトカリクレイン-2(hK2)抗原に結合する、CARが提供される。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号1のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号4のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号2のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号4のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号3のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号6のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号3のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号4のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号2のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号6のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号3のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号4のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号1のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号6のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号3のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号1のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号2のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号3のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号74のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号76のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号75のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号77のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号147のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号140のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号75のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号141のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号75のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号140のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号148のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号142のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号149のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号143のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号150のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号144のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号151のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号145のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号152のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号146のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号318のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号317のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、
を含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、一本鎖可変断片(scFv)を含む。いくつかの実施形態では、scFvは、軽鎖可変領域(VL)と重鎖可変領域(VH)との間にリンカーポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーポリぺプチドは、配列番号7のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、scFvは、配列番号8~23、169~184、及び340~343からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、シグナルポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、シグナルポリペプチドは、配列番号24のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、TNF受容体スーパーファミリーメンバー9(CD137)成分、T細胞表面糖タンパク質CD3ゼータ鎖(CD3z)成分、表面抗原分類(CD27)成分、表面抗原分類スーパーファミリーメンバー成分、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチド成分を含む。いくつかの実施形態では、CD137成分は、配列番号27のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、CD3z成分は、配列番号28のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号45のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、CD8a膜貫通領域(CD8A-TM)ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、CD8a-TMポリペプチドは、配列番号26のアミノ酸配列を含む。
様々な実施形態では、CARは、膜貫通ドメインを細胞外抗原結合ドメインに連結するヒンジ領域を更に含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、CD8aヒンジ領域である。いくつかの実施形態では、CD8a-ヒンジ領域は、配列番号25、269、270、271、又は272のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号29~44、78~81、221~236、及び273~308からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号46~61、82~85、及び205~220からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
別の態様では、上記CARのいずれかを発現する単離リンパ球が提供される。いくつかの実施形態では、リンパ球は、Tリンパ球である。いくつかの実施形態では、リンパ球は、ナチュラルキラー(NK)細胞である。
また、上記CARのいずれかをコードしている単離核酸分子も提供される。核酸分子を含むベクターも提供される。更に、核酸分子を発現する細胞も提供される。
更に、有効量の上記リンパ球のいずれかと、医薬的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物も提供される。
一態様では、本開示は、治療方法で使用するための本開示によるCARを提供する。
一態様では、本開示は、治療方法で使用するための本開示によるリンパ球を提供する。
一態様では、本開示は、治療方法で使用するための本開示による組成物、例えば、医薬組成物を提供する。
一態様では、本開示は、癌を治療する方法で使用するための本開示によるCARを提供する。
一態様では、本開示は、癌を治療する方法で使用するための本開示によるリンパ球を提供する。
一態様では、本開示は、癌を治療する方法で使用するための本開示による組成物、例えば、医薬組成物を提供する。
一実施形態では、癌は、前立腺癌である。
一実施形態では、癌は、アンドロゲン受容体(AR)発現乳癌である。
別の態様では、癌を有する対象を治療する方法が提供される。方法は、治療有効量の上記リンパ球のいずれかを、それを必要としている対象に投与し、それにより、当該リンパ球が、当該対象における癌細胞の殺傷を誘導することを含む。いくつかの実施形態では、癌は、前立腺癌である。いくつかの実施形態では、癌は、アンドロゲン受容体(AR)発現乳癌である。
別の態様では、癌細胞の標的化殺傷の方法であって、当該癌細胞を上記リンパ球のいずれかと接触させ、それにより、当該リンパ球が、当該癌細胞の殺傷を誘導することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、癌細胞は、前立腺癌細胞である。いくつかの実施形態では、癌は、アンドロゲン受容体(AR)発現乳癌である。
別の態様では、対象における癌の存在を検出する方法であって、
(a)当該対象から得られた細胞サンプルを上記CARのいずれかと接触させ、それにより、CAR-細胞複合体を形成することと、
(b)当該複合体を検出することと、ここで、当該複合体の検出が、当該対象における癌の存在を示す、
を含む、方法が提供される。
前述は、以下の付属の図面に示される例示的実施形態のより詳細な説明から明らかとなるであろう。
本特許出願書類は、少なくとも1つのカラーで作成した図面を含む。カラー図面を含む本特許出願のコピーは、要請すれば、必要な手数料を支払うことにより、特許庁によって提供される。
ヒトT細胞におけるhK2 CARの構築及び発現を示す。図1Aは、hK2 CAR用のコンストラクトの概略図を示す。TM:膜貫通。 ヒトT細胞におけるhK2 CARの構築及び発現を示す。図1Bは、T細胞表面におけるhK2 CAR発現を示す。初代ヒトT細胞に、mRNAなし(モック(MOCK))で、又はhK2 scFv CAR若しくは無関係の対照CARのいずれかを発現するmRNA10μgをエレクトロポレーションした。エレクトロポレーションの24時間後、2μg/mLのビオチン化Lタンパク質及びストレプトアビジンコンジュゲートしたPE(図1B)で染色した後に、フローサイトメトリーによってCAR表面発現を測定した。 ヒトT細胞におけるhK2 CARの構築及び発現を示す。図1Cは、T細胞表面におけるhK2 CAR発現を示す。初代ヒトT細胞に、mRNAなし(モック(MOCK))で、又はhK2 scFv CAR若しくは無関係の対照CARのいずれかを発現するmRNA10μgをエレクトロポレーションした。エレクトロポレーションの24時間後、ビオチン化hK2(1μg/mL)及びストレプトアビジンコンジュゲートしたPE(図1C)で染色した後に、フローサイトメトリーによってCAR表面発現を測定した。 指定のエフェクター対標的細胞(E/T)比での20時間のフローベースアッセイにおける、CAR-T細胞によるhK2発現腫瘍細胞の細胞傷害性を示す。一過性トランスフェクションの24時間後、標的細胞(Vcap及びDU145)をCell Trace Violet(CTV)蛍光色素で標識し、次いで、hK2 CAR-T細胞と共培養した。モックT細胞が、陰性エフェクター対照として機能した。死滅(殺傷)パーセントは、CAR-T細胞なしで培養された生存標的の数に対する共培養物中に残存する生存(生存性色素陰性)標的(CTV陽性)細胞の絶対数の比率である。 リアルタイムhK2特異的CAR-T細胞媒介細胞傷害性を示す。異なるE/T比でおよそ72時間、モック、10μgのmRNAエレクトロポレーション(トランスフェクションの24時間後)されたhK2 11B6 CAR LH、又は対照CAR-T細胞と共にインキュベートした、標的細胞(図3A)VCap(5E4)の正規化された細胞指数(CI)プロット。単独で播種された場合、標的細胞はプレートに接着し、増殖して、CIの読み出しを増加させる。T細胞を標的細胞に添加すると、hK2 CAR-及び対照CAR-T細胞は、5:1~0.156:1のE/T比において、hK2(+)VCap細胞の細胞溶解、及びその後のCIの進行的減少を引き起こした。エフェクター細胞の添加後のCI値の低下は、標的細胞の生存能の喪失を反映している。(図3B)に示すとおり、hK2(-)DU145標的細胞を使用した並行実験も実施した;この実験で試験したE:T比では、hK2及び対照CAR T細胞は、添加後にCIを低下させず、細胞溶解活性を示さなかった。Y軸は、RTCAソフトウェアによって作成され、リアルタイムで表示された、正規化されたCIである。X軸は、細胞培養の時間及び処理時間(時)である。CIの平均値を±標準偏差でプロットした。 リアルタイムhK2特異的CAR-T細胞媒介細胞傷害性を示す。異なるE/T比でおよそ72時間、モック、10μgのmRNAエレクトロポレーション(トランスフェクションの24時間後)されたhK2 11B6 CAR LH、又は対照CAR-T細胞と共にインキュベートした、標的細胞(図3B)DU145(5E3)の正規化された細胞指数(CI)プロット。単独で播種された場合、標的細胞はプレートに接着し、増殖して、CIの読み出しを増加させる。T細胞を標的細胞に添加すると、hK2 CAR-及び対照CAR-T細胞は、5:1~0.156:1のE/T比において、hK2(+)VCap細胞の細胞溶解、及びその後のCIの進行的減少を引き起こした。エフェクター細胞の添加後のCI値の低下は、標的細胞の生存能の喪失を反映している。(図3B)に示すとおり、hK2(-)DU145標的細胞を使用した並行実験も実施した;この実験で試験したE:T比では、hK2及び対照CAR T細胞は、添加後にCIを低下させず、細胞溶解活性を示さなかった。Y軸は、RTCAソフトウェアによって作成され、リアルタイムで表示された、正規化されたCIである。X軸は、細胞培養の時間及び処理時間(時)である。CIの平均値を±標準偏差でプロットした。 抗原で刺激されたCAR-T細胞のTh1サイトカインインターフェロンγ(IFN-γ)産生を示す。およそ70時間共培養(VCap#5E4、DU145#5E3)したxCELligenceベースの殺傷アッセイ(図3A~3Bを参照されたい)から上清を回収した。hK2 CAR LH及び対照CAR改変T細胞は、hK2発現VCap細胞との共培養中にIFN-γを分泌するが、hK2陰性DU145細胞との共培養中には分泌しない。デュープリケートの培養物からの平均IFN-γ濃度±標準偏差(pg/mL)を示す。 11B6熱安定化scFv CARクローンを、抗原依存性活性についてJNLレポーターアッセイにおいて評価したことを示す。図5Aは、シグナル伝達応答性NFATプロモーターによって駆動されるルシフェラーゼ遺伝子を含有するJurkat細胞(JNL細胞と呼ばれる)に、様々なhK2CARコンストラクトを形質導入したことを示す。ビオチン化hK2、続いてストレプトアビジンコンジュゲートしたPEによって、発現を判定した。 11B6熱安定化scFv CARクローンを、抗原依存性活性についてJNLレポーターアッセイにおいて評価したことを示す。図5Bは、CARコンストラクトとその同種細胞抗原(標的細胞上のhK2)との間の結合によって、JNL細胞においてルシフェラーゼが発現したことを示す。指定のCARクローンを含有するJNL細胞及び非形質導入JNL細胞(UTD)を標的細胞株(VCap又はDU145細胞)と共培養し、発光強度としてルシフェラーゼ活性を測定した。発光強度が抗原発現細胞の存在下でUTD細胞のレベルを1.5倍上回った場合、クローンは活性であるとみなした。 T細胞表面におけるhK2 CAR発現を示す。初代ヒトT細胞に11B6熱安定化及び親scFvベースのCARレンチウイルスを形質導入し(感染多重度(MOI):3)、形質導入の14日後に、ビオチン化hK2(1μg/mL)、続いて、ストレプトアビジンコンジュゲートしたPEによってCAR発現を判定した。 11B6熱安定化scFv CAR-T細胞を、抗原依存性細胞傷害性についてリアルタイムIncuCyte殺傷アッセイで評価したことを示す。熱安定化hK2 CAR-T細胞及び親11B6 CAR-Tを、VCaP細胞(図7A)と88時間コインキュベートした。エフェクター対標的(E/T)比は、CAR発現データに基づいて計算した(図6を参照されたい)。標的細胞は、リアルタイムでIncuCyteイメージングシステムによって測定された赤色核色素を安定的に発現していた。腫瘍細胞成長阻害(%)=(初期生存標的細胞数-現時点の生存標的細胞数)/初期生存細胞数×100(%)。 11B6熱安定化scFv CAR-T細胞を、抗原依存性細胞傷害性についてリアルタイムIncuCyte殺傷アッセイで評価したことを示す。熱安定化hK2 CAR-T細胞及び親11B6 CAR-Tを、PC3細胞(図7B)と88時間コインキュベートした。エフェクター対標的(E/T)比は、CAR発現データに基づいて計算した(図6を参照されたい)。標的細胞は、リアルタイムでIncuCyteイメージングシステムによって測定された赤色核色素を安定的に発現していた。腫瘍細胞成長阻害(%)=(初期生存標的細胞数-現時点の生存標的細胞数)/初期生存細胞数×100(%)。 抗原依存性細胞傷害性を評価するリアルタイムIncucyte殺傷アッセイにおける、CAR1~10又は親11B6_HL若しくは11B6_LHが形質導入されたT細胞による、エフェクター:標的比1:1又は0.5:1におけるhK2陽性VCaP細胞の腫瘍細胞成長阻害パーセントを示す。腫瘍細胞成長阻害(%)=(初期生存標的細胞数-現時点の生存標的細胞数)/初期生存細胞数×100(%)。 抗原依存性細胞傷害性を評価するリアルタイムIncucyte殺傷アッセイにおける、CAR1~10又は親11B6_HL若しくは11B6_LHが形質導入されたT細胞による、エフェクター:標的比1:1におけるPC3細胞の腫瘍細胞成長阻害パーセントを示す。腫瘍細胞成長阻害(%)=(初期生存標的細胞数-現時点の生存標的細胞数)/初期生存細胞数×100(%)。 抗原依存性細胞傷害性を評価するリアルタイムIncucyte殺傷アッセイにおける、CAR17(図中B413HL)、CAR18(図中B413LH)、CAR19(図中B359HL)、及びCAR20(図中B359LH)が形質導入されたCAR-T細胞によるhK2陽性VCaP細胞の腫瘍細胞成長阻害パーセントを示す。腫瘍細胞成長阻害(%)=(初期生存標的細胞数-現時点の生存標的細胞数)/初期生存細胞数×100(%)。 抗原依存性細胞傷害性を評価するリアルタイムIncucyte殺傷アッセイにおける、CAR17(図中B413HL)、CAR18(図中B413LH)、CAR19(図中B359HL)、及びCAR20(図中B359LH)が形質導入されたCAR-T細胞によるhK2陰性DU145細胞の腫瘍細胞成長阻害パーセントを示す。腫瘍細胞成長阻害(%)=(初期生存標的細胞数-現時点の生存標的細胞数)/初期生存細胞数×100(%)。 hK2 lenti-CAR-T細胞によるサイトカイン放出を示す。1:1のE/T比でVCap細胞と共にhK2 CAR-T細胞を一晩(およそ20時間)共培養したものから回収した上清を、13-plex Milliplexヒト高感度T細胞キット(HSTCMAG28SPMX13)を使用して分析した。hK2 CAR改変T細胞は、hK2発現VCap細胞との共培養中にサイトカインを分泌するが、非形質導入T細胞(UTD)では最少である。デュープリケートの培養物からの平均サイトカイン濃度±標準偏差(pg/mL)を示す。 hK2 lenti-CAR-T細胞によるIFN-γ放出を示す。1:1のE/T比でVCaP、DU145(5E4個の細胞)細胞と共にhK2 CAR-T細胞を一晩(およそ20時間)共培養したものから上清を回収した。hK2 CAR改変T細胞は、hK2発現VCap細胞との共培養中にIFN-γを分泌するが、hK2-陰性DU145細胞との共培養中には分泌しない。デュープリケートの培養物からの平均IFN-γ濃度±標準偏差(pg/mL)を示す。CD3/28ビーズで刺激したT細胞及びT細胞のみをそれぞれ陽性対照及び陰性対照として使用した。 hK2 CAR-T細胞増殖アッセイから得られた結果を示す。(図10A、10C)hK2 CAR及び非形質導入(UTD)T細胞を、CellTrace Violet(CTV、5μM)で標識し、hK2(+)VCap及びhK2(-)DU145細胞と共培養した。共培養の5日後、細胞を収集し、CD3、CD25、NearIR live/dead Dye、及びhK2CARで染色した。Flowjoソフトウェアを備えるFortessaフローサイトメーターでフローサイトメトリー分析を行った。リンパ球を生CD3によって同定し、CTV色素希釈及び活性化マーカーCD25を有するCAR+T細胞の頻度を求めた。(図10B、10D)CD3/28ビーズで刺激したT細胞及びT細胞のみを、それぞれ陽性対照及び陰性対照として使用した。図10Eのデータは、hK2 CAR-T細胞が、VCap細胞と5日間共培養した後に、CD3/28ビーズ陽性対照よりもロバストに増殖することを示す。異なるCARコンストラクトで遺伝子操作されたT細胞は、異なる増殖活性を有し、異なるCAR+T細胞数を示した。CAR+T細胞数は、3つの技術的複製物からの平均絶対細胞数+/-SEMに基づいていた。 hK2 CAR-T細胞増殖アッセイから得られた結果を示す。(図10A、10C)hK2 CAR及び非形質導入(UTD)T細胞を、CellTrace Violet(CTV、5μM)で標識し、hK2(+)VCap及びhK2(-)DU145細胞と共培養した。共培養の5日後、細胞を収集し、CD3、CD25、NearIR live/dead Dye、及びhK2CARで染色した。Flowjoソフトウェアを備えるFortessaフローサイトメーターでフローサイトメトリー分析を行った。リンパ球を生CD3によって同定し、CTV色素希釈及び活性化マーカーCD25を有するCAR+T細胞の頻度を求めた。(図10B、10D)CD3/28ビーズで刺激したT細胞及びT細胞のみを、それぞれ陽性対照及び陰性対照として使用した。図10Eのデータは、hK2 CAR-T細胞が、VCap細胞と5日間共培養した後に、CD3/28ビーズ陽性対照よりもロバストに増殖することを示す。異なるCARコンストラクトで遺伝子操作されたT細胞は、異なる増殖活性を有し、異なるCAR+T細胞数を示した。CAR+T細胞数は、3つの技術的複製物からの平均絶対細胞数+/-SEMに基づいていた。 hK2 CAR-T細胞増殖アッセイから得られた結果を示す。(図10A、10C)hK2 CAR及び非形質導入(UTD)T細胞を、CellTrace Violet(CTV、5μM)で標識し、hK2(+)VCap及びhK2(-)DU145細胞と共培養した。共培養の5日後、細胞を収集し、CD3、CD25、NearIR live/dead Dye、及びhK2CARで染色した。Flowjoソフトウェアを備えるFortessaフローサイトメーターでフローサイトメトリー分析を行った。リンパ球を生CD3によって同定し、CTV色素希釈及び活性化マーカーCD25を有するCAR+T細胞の頻度を求めた。(図10B、10D)CD3/28ビーズで刺激したT細胞及びT細胞のみを、それぞれ陽性対照及び陰性対照として使用した。図10Eのデータは、hK2 CAR-T細胞が、VCap細胞と5日間共培養した後に、CD3/28ビーズ陽性対照よりもロバストに増殖することを示す。異なるCARコンストラクトで遺伝子操作されたT細胞は、異なる増殖活性を有し、異なるCAR+T細胞数を示した。CAR+T細胞数は、3つの技術的複製物からの平均絶対細胞数+/-SEMに基づいていた。 hK2 CAR-T細胞増殖アッセイから得られた結果を示す。(図10A、10C)hK2 CAR及び非形質導入(UTD)T細胞を、CellTrace Violet(CTV、5μM)で標識し、hK2(+)VCap及びhK2(-)DU145細胞と共培養した。共培養の5日後、細胞を収集し、CD3、CD25、NearIR live/dead Dye、及びhK2CARで染色した。Flowjoソフトウェアを備えるFortessaフローサイトメーターでフローサイトメトリー分析を行った。リンパ球を生CD3によって同定し、CTV色素希釈及び活性化マーカーCD25を有するCAR+T細胞の頻度を求めた。(図10B、10D)CD3/28ビーズで刺激したT細胞及びT細胞のみを、それぞれ陽性対照及び陰性対照として使用した。図10Eのデータは、hK2 CAR-T細胞が、VCap細胞と5日間共培養した後に、CD3/28ビーズ陽性対照よりもロバストに増殖することを示す。異なるCARコンストラクトで遺伝子操作されたT細胞は、異なる増殖活性を有し、異なるCAR+T細胞数を示した。CAR+T細胞数は、3つの技術的複製物からの平均絶対細胞数+/-SEMに基づいていた。 hK2 CAR-T細胞増殖アッセイから得られた結果を示す。(図10A、10C)hK2 CAR及び非形質導入(UTD)T細胞を、CellTrace Violet(CTV、5μM)で標識し、hK2(+)VCap及びhK2(-)DU145細胞と共培養した。共培養の5日後、細胞を収集し、CD3、CD25、NearIR live/dead Dye、及びhK2CARで染色した。Flowjoソフトウェアを備えるFortessaフローサイトメーターでフローサイトメトリー分析を行った。リンパ球を生CD3によって同定し、CTV色素希釈及び活性化マーカーCD25を有するCAR+T細胞の頻度を求めた。(図10B、10D)CD3/28ビーズで刺激したT細胞及びT細胞のみを、それぞれ陽性対照及び陰性対照として使用した。図10Eのデータは、hK2 CAR-T細胞が、VCap細胞と5日間共培養した後に、CD3/28ビーズ陽性対照よりもロバストに増殖することを示す。異なるCARコンストラクトで遺伝子操作されたT細胞は、異なる増殖活性を有し、異なるCAR+T細胞数を示した。CAR+T細胞数は、3つの技術的複製物からの平均絶対細胞数+/-SEMに基づいていた。 ビオチン標識hK2タンパク質を使用した初代T細胞におけるhK2 CARの発現レベルを求めるためのアッセイの結果を示す。図11Aは、hK2 CAR用のコンストラクトの概略図である。TM:膜貫通。 ビオチン標識hK2タンパク質を使用した初代T細胞におけるhK2 CARの発現レベルを求めるためのアッセイの結果を示す。図11Bでは、初代ヒトT細胞に新規hK2 scFvベースのKL2B413 HL及びLH、並びに再ヒト化11B6 KL2B359 HL及びLH CARSレンチウイルス(MOI 3)を形質導入し、形質導入の14日後に、ビオチン化hK2(1μg/mL)、続いて、ストレプトアビジンコンジュゲートしたPEによってCAR発現を判定した。図11Bは、分析した新規KL2B413 HL及びLH、並びに再ヒト化11B6 KL2B359 HL及びLH CARSによって検出されたhK2 CAR+T細胞の百分率(陽性%)の概要を提供する。図示されるように、異なるクローンは、45.1%~59.9%の範囲の異なるCAR発現レベルを有する。全てのCAR T+細胞を、後続の機能アッセイのために等しいCAR+T細胞に対して正規化した。 抗原依存性活性についてのJNLレポーターアッセイにおける、新規hK2 KL2B413及び再ヒト化11B6 CARクローンの評価の結果を示す。図12Aでは、シグナル伝達応答性NFATプロモーターによって駆動されるルシフェラーゼ遺伝子を含有するJurkat細胞(JNL細胞と呼ばれる)に、様々なhK2CARコンストラクトを形質導入した。ビオチン化hK2、続いてストレプトアビジンコンジュゲートしたPEによって、発現を判定した。形質導入されたJNL細胞におけるCAR発現は、選択されたクローンについて確認され、細胞の46~50%で再ヒト化11B6 KL2B359 CARが発現し、細胞の73.7%~96%でKL2B413 CARが発現した。 抗原依存性活性についてのJNLレポーターアッセイにおける、新規hK2 KL2B413及び再ヒト化11B6 CARクローンの評価の結果を示す。図12Bに示すデータは、hK2 CARコンストラクトとその同種細胞抗原(標的細胞上のhK2)との間の結合によって、JNL細胞においてルシフェラーゼが発現することを示す。指定のCARクローンを含有するJNL細胞及びJNL細胞(UTD)を標的細胞株(VCap、LNCap/Hk2、LNCap、C4-2B、22Rv1、又はDU145細胞)と共培養し、ルシフェラーゼ活性を発光強度として測定した。発光強度が抗原発現細胞の存在下でUTD細胞のレベルを1.5倍上回った場合、クローンは活性であるとみなした。新規KL2B413並びに再ヒト化11B6 HL及びLH CARについて、抗原依存性活性化はみられなかった。 抗原依存性細胞傷害性についてのリアルタイムIncuCyte殺傷アッセイにおけるHK2 CAR-T細胞の評価の結果を示す。HK2 CAR-T細胞を、HK2+VCaP細胞(図13A)と96時間コインキュベートした。エフェクター対標的(ET)比は、CAR発現データに基づいて計算した(図11B)。標的細胞は、リアルタイムでIncuCyteイメージングシステムによって測定された赤色核色素を安定的に発現していた。腫瘍細胞成長阻害(%)=(初期生存標的細胞数-現時点の生存標的細胞数)/初期生存細胞数×100(%)。 抗原依存性細胞傷害性についてのリアルタイムIncuCyte殺傷アッセイにおけるHK2 CAR-T細胞の評価の結果を示す。HK2 CAR-T細胞を、HK2-DU145細胞(図13B)と96時間コインキュベートした。エフェクター対標的(ET)比は、CAR発現データに基づいて計算した(図11B)。標的細胞は、リアルタイムでIncuCyteイメージングシステムによって測定された赤色核色素を安定的に発現していた。腫瘍細胞成長阻害(%)=(初期生存標的細胞数-現時点の生存標的細胞数)/初期生存細胞数×100(%)。 抗原で刺激したCAR-T細胞のTh1サイトカインIFN-ガンマ産生を示すデータを示す。細胞傷害性T細胞によって産生されたIFN-γは、腫瘍の免疫監視作用を発揮させるのに非常に重要であり、これにより、増殖を直接阻害し、インビボ及びインビトロにおいて一部の悪性腫瘍のアポトーシスを誘導することができる。hK2 CAR改変ヒトT細胞がhK2(+)腫瘍細胞によって認識及び活性化され得るかどうかを判定するために、指定のCARクローンを含有する初代T細胞及び対照非形質導入T細胞(UTD)を標的細胞株(LNCap/Hk2、LNCap、C4-2B、22Rv1、又はDU145細胞)と共培養し、IFN-g濃度測定のために上清を回収した。図示されているように、hK2 CAR改変T細胞は、Hk2発現が非常に少ないC4-2B及びLNCap細胞であっても、hK2発現LNCap/hK2細胞との共培養中にIFN-ガンマを分泌するが、hK2-陰性DU145細胞では分泌しない。未開示の対照CARは、抗原発現レベルがhK2よりもはるかに高いことから、はるかに多量のIFN-γを分泌した。デュープリケートの培養からの平均IFN-γ濃度±SD(pg/mL)を示す。 hK2 CAR T細胞の抗腫瘍活性を評価するためのCD107a脱顆粒アッセイの結果を示す。標的細胞(5×10個)を、96ウェルプレートにおいて0.1mL/ウェルで等数のエフェクター細胞と共培養した。対照ウェルは、T細胞のみを含有していた。1μL/サンプルのモネンシン(BD Biosciences)に加えて抗CD107a(5μL/ウェル)を添加し、37℃で4時間インキュベートした。細胞をPBSで2回洗浄し、hK2 CAR、CD3、及びCD8の発現について染色し、フローサイトメーターBD Fortessaで分析した。図示されているように、Vcap細胞上にhK2抗原が存在すると、フローサイトメトリーによって測定されるCD107A+hK2 CAR(+)T細胞では増加するが、hK2 CAR(-)及びUTD T細胞では増加せず、一方、腫瘍細胞刺激なしのCAR T細胞のみでは、バックグラウンド染色(<2%)しかみられなかった。イオノマイシン(eBioscience(商標)細胞刺激カクテル;500×)と組み合わせたフォルボール12-ミリステート13-アセテート(PMA)は、この4時間細胞培養モデルにおけるCD107a細胞表面発現の一貫した誘導因子であり、これを陽性対照として使用した。結果を代表的なドナーT細胞について示し、この結果は、複数のドナーで再現可能である。 hK2 CAR T細胞増殖アッセイの結果を示す。hK2 CAR及び非形質導入(UTD)T細胞を、CellTrace Violet(CTV、5μM)で標識し、HK2(+)VCap及びHK2(-)DU145細胞と共培養した。共培養の5日後、細胞を収集し、CD3、CD25、NearIR live/dead Dye、及びhK2CARで染色した。Flowjoソフトウェアを備えるFortessaフローサイトメーターでフローサイトメトリー分析を行った。リンパ球を生CD3によって同定し、CTV色素希釈及び活性化マーカーCD25を有するCAR+T細胞の頻度を求めた。CD3+T細胞でゲーティングすることにより、hK2(+)Vcap細胞は、図16A~16Bに示されているように、全てのCARコンストラクトで遺伝子操作されたT細胞の増殖、そして、図16C~16Dに示されるように、活性化マーカーCD25のアップレギュレーションを促進したが、hK2(-)DU145細胞は促進しなかった。CD3/28ビーズで刺激したT細胞及びT細胞のみをそれぞれ陽性対照及び陰性対照として使用した。任意の刺激なしのT細胞のみは増殖せず、CD3/28ビーズで刺激されたT細胞は等価な増殖パターンを示す。図示されているように、hK2 CAR+T細胞は、VCap細胞と5日間共培養した後に、CD3/28ビーズ陽性対照よりもロバストに増殖する。異なるCARコンストラクトで遺伝子操作されたT細胞は、異なる増殖活性を有し、異なるCAR+T細胞数を示した。デュープリケートからの平均絶対細胞数+/-SEMに基づく、増殖しているT細胞及びCD25を発現しているT細胞の百分率の要約を、図16B及び16Dに示す。 hK2 CAR T細胞増殖アッセイの結果を示す。hK2 CAR及び非形質導入(UTD)T細胞を、CellTrace Violet(CTV、5μM)で標識し、HK2(+)VCap及びHK2(-)DU145細胞と共培養した。共培養の5日後、細胞を収集し、CD3、CD25、NearIR live/dead Dye、及びhK2CARで染色した。Flowjoソフトウェアを備えるFortessaフローサイトメーターでフローサイトメトリー分析を行った。リンパ球を生CD3によって同定し、CTV色素希釈及び活性化マーカーCD25を有するCAR+T細胞の頻度を求めた。CD3+T細胞でゲーティングすることにより、hK2(+)Vcap細胞は、図16A~16Bに示されているように、全てのCARコンストラクトで遺伝子操作されたT細胞の増殖、そして、図16C~16Dに示されるように、活性化マーカーCD25のアップレギュレーションを促進したが、hK2(-)DU145細胞は促進しなかった。CD3/28ビーズで刺激したT細胞及びT細胞のみをそれぞれ陽性対照及び陰性対照として使用した。任意の刺激なしのT細胞のみは増殖せず、CD3/28ビーズで刺激されたT細胞は等価な増殖パターンを示す。図示されているように、hK2 CAR+T細胞は、VCap細胞と5日間共培養した後に、CD3/28ビーズ陽性対照よりもロバストに増殖する。異なるCARコンストラクトで遺伝子操作されたT細胞は、異なる増殖活性を有し、異なるCAR+T細胞数を示した。デュープリケートからの平均絶対細胞数+/-SEMに基づく、増殖しているT細胞及びCD25を発現しているT細胞の百分率の要約を、図16B及び16Dに示す。 hK2 CAR T細胞増殖アッセイの結果を示す。hK2 CAR及び非形質導入(UTD)T細胞を、CellTrace Violet(CTV、5μM)で標識し、HK2(+)VCap及びHK2(-)DU145細胞と共培養した。共培養の5日後、細胞を収集し、CD3、CD25、NearIR live/dead Dye、及びhK2CARで染色した。Flowjoソフトウェアを備えるFortessaフローサイトメーターでフローサイトメトリー分析を行った。リンパ球を生CD3によって同定し、CTV色素希釈及び活性化マーカーCD25を有するCAR+T細胞の頻度を求めた。CD3+T細胞でゲーティングすることにより、hK2(+)Vcap細胞は、図16A~16Bに示されているように、全てのCARコンストラクトで遺伝子操作されたT細胞の増殖、そして、図16C~16Dに示されるように、活性化マーカーCD25のアップレギュレーションを促進したが、hK2(-)DU145細胞は促進しなかった。CD3/28ビーズで刺激したT細胞及びT細胞のみをそれぞれ陽性対照及び陰性対照として使用した。任意の刺激なしのT細胞のみは増殖せず、CD3/28ビーズで刺激されたT細胞は等価な増殖パターンを示す。図示されているように、hK2 CAR+T細胞は、VCap細胞と5日間共培養した後に、CD3/28ビーズ陽性対照よりもロバストに増殖する。異なるCARコンストラクトで遺伝子操作されたT細胞は、異なる増殖活性を有し、異なるCAR+T細胞数を示した。デュープリケートからの平均絶対細胞数+/-SEMに基づく、増殖しているT細胞及びCD25を発現しているT細胞の百分率の要約を、図16B及び16Dに示す。 hK2 CAR T細胞増殖アッセイの結果を示す。hK2 CAR及び非形質導入(UTD)T細胞を、CellTrace Violet(CTV、5μM)で標識し、HK2(+)VCap及びHK2(-)DU145細胞と共培養した。共培養の5日後、細胞を収集し、CD3、CD25、NearIR live/dead Dye、及びhK2CARで染色した。Flowjoソフトウェアを備えるFortessaフローサイトメーターでフローサイトメトリー分析を行った。リンパ球を生CD3によって同定し、CTV色素希釈及び活性化マーカーCD25を有するCAR+T細胞の頻度を求めた。CD3+T細胞でゲーティングすることにより、hK2(+)Vcap細胞は、図16A~16Bに示されているように、全てのCARコンストラクトで遺伝子操作されたT細胞の増殖、そして、図16C~16Dに示されるように、活性化マーカーCD25のアップレギュレーションを促進したが、hK2(-)DU145細胞は促進しなかった。CD3/28ビーズで刺激したT細胞及びT細胞のみをそれぞれ陽性対照及び陰性対照として使用した。任意の刺激なしのT細胞のみは増殖せず、CD3/28ビーズで刺激されたT細胞は等価な増殖パターンを示す。図示されているように、hK2 CAR+T細胞は、VCap細胞と5日間共培養した後に、CD3/28ビーズ陽性対照よりもロバストに増殖する。異なるCARコンストラクトで遺伝子操作されたT細胞は、異なる増殖活性を有し、異なるCAR+T細胞数を示した。デュープリケートからの平均絶対細胞数+/-SEMに基づく、増殖しているT細胞及びCD25を発現しているT細胞の百分率の要約を、図16B及び16Dに示す。 mu11B6、hu11B6、KL2B357、KL2B358、KL2B359、KL2B360、HCF3、及びHCG5のVHドメインの配列アラインメントを示す。図17Aは、出現順に、それぞれ、配列番号317、5、140、141、77、140、6、4、及び345を開示する。 HDX-MSを通して同定されたhK2抗体の結合エピトープを可視化するためにhK2抗原の配列上にマッピングされた、保護されたセグメントを示す。図17Bは、出現順に、それぞれ、配列番号351、351、351、351、351、及び351を開示する。
(詳細な記述)
例示的実施形態の記述が以下に続く。
本開示は、ヒトカリクレイン-2(hK2)を標的とするキメラ抗原受容体(CAR)、このようなCARを含む細胞、及び本明細書に記載のCARを使用して癌(例えば、前立腺癌又はAR発現乳癌)を治療する方法を提供する。
本発明のCARは、hK2に対する抗原特異性を有する。「抗原特異性を有する」及び「抗原特異的応答を誘発する」という句は、本明細書で使用するとき、CARが抗原に特異的に結合し、免疫学的に認識することができ、その結果、CARのhK2抗原への結合により免疫応答が誘発されることを意味する。抗原特異性及び標的細胞を認識する能力についてCARを試験する方法は、当技術分野で知られている。
本開示はまた、関連する核酸、組み換え発現ベクター、宿主細胞、細胞集団、抗体、又はその抗原結合部分、及び本発明のCARに関する医薬組成物も提供する。
本発明のいくつかの態様は、例示のみを目的とした例を参照して、以下に記載される。本発明の完全な理解を提供するために、多数の具体的な詳細、関係、及び方法が記載されていることを理解されたい。しかしながら、当業者であれば、本発明は、具体的な詳細のうちの1つ以上を伴わずに実施することができること、又は他の方法、プロトコル、試薬、細胞株、及び動物で実施することができることを容易に認識するであろう。いくつかの行為は、異なる順序で、及び/又は他の行為若しくは事象と同時に生じ得るため、本発明は、例示される行為又は事象の順序によって限定されない。更に、本発明による手法を実施するために、例示された全ての行為、ステップ、又は事象が必要とされるわけではない。本明細書に記載される又は参照される技術及び手順のうちの多くは、当業者によって十分に理解されており、従来の手法を使用して一般的に用いられている。
別途定義のない限り、本明細書で使用される全ての技術用語、表記、及び他の科学用語、又は専門用語は、本発明が関係する当業者によって通常理解される意味を有することを意図している。場合によっては、通常理解される意味を有する用語は、明確にするため及び/又は即座に参照できるように本明細書に定義され、本明細書におけるかかる定義を含めることは、当該技術分野において概ね理解されているものと実質的な違いを表すと必ずしも解釈されるべきではない。通常使用される辞書で定義されているものなどの用語は、関連技術の文脈におけるそれらの意味と一致する意味を有するものとして、及び/又は本明細書において別様に定義されているものとして解釈する必要があることが更に理解されるであろう。
リストが提示される場合、特に指定しない限り、そのリストの各個々の要素及びそのリストの全ての組み合わせは別個の実施形態であることを、理解されたい。例えば、「A、B、又はC」として提示される実施形態のリストは、実施形態「A」、「B」、「C」、「A又はB」、「A又はC」、「B又はC」、又は「A、B、又はC」を含むと解釈されるべきである。
定義
本明細書及び添付の「特許請求の範囲」において使用されるとき、「a」、「an」、及び「the」という単数形は、その内容について別段の明確な指示がない限り、複数の指示対象を包含する。したがって、例えば、「細胞(a cell)」という言及には、2つ又は3つ以上の細胞の組み合わせ、及びこれに類するものなどが含まれる。
移行句「備える/含む(comprising)」、「から本質的になる(consisting essentially of)」、及び「からなる(consisting)」は、特許用語において全般的に受け入れられている意味を含意することを意図しており、すなわち、(i)「備える/含む(comprising)」は、「含む」、「含有する」、又は「特徴とする」と同義であり、包括的又は非制限的なものであり、その他の列挙されていない要素又は方法工程を除外するものではなく、(ii)「からなる(consisting of)」は、特許請求の範囲において特定されていない、あらゆる要素、工程、又は成分を除外し、並びに(iii)「から本質的になる」は、特定される材料又は工程、並びに、特許請求される発明の「基本的かつ新しい特徴(複数可)に実質的に影響しないもの」に、特許請求の範囲の範囲を制限する。句「備える/含む(comprising)」(又はその同等語)に関して記載される実施形態はまた、実施形態として、「からなる」及び「から本質的になる」に関して独立して記載されるものを提供する。
「活性化」又は「刺激」又は「活性化された」又は「刺激された」とは、活性化マーカーの発現、サイトカイン産生、又は標的細胞の増殖若しくは細胞傷害性の媒介をもたらす、細胞の生物学的状態の変化の誘導を指す。細胞は、一次刺激シグナルによって活性化され得る。共刺激シグナルは、一次シグナルの大きさを増幅し、初期刺激後の細胞死を抑制することができ、その結果、より耐久性のある活性化状態、ひいてはより高い細胞傷害能をもたらす。「共刺激シグナル」は、TCR/CD3ライゲーションなどの一次シグナルと組み合わせて、T細胞及び/若しくはNK細胞の増殖並びに/又は鍵となる分子のアップレギュレーション若しくはダウンレギュレーションを引き起こすシグナルを指す。
「抗原結合断片」又は「抗原結合ドメイン」とは、抗原に結合するタンパク質の一部を指す。抗原結合断片は、合成ポリペプチド、酵素的に入手可能なポリペプチド、又は遺伝的に操作されたポリペプチドであってよく、これには、抗原に結合する免疫グロブリンの一部、例えば、VH、VL、VH及びVL、Fab、Fab’、F(ab’)、Fd及びFv断片、1つのVHドメイン又は1つのVLドメインからなるドメイン抗体(dAb)、サメ可変IgNARドメイン、ラクダ化VHドメイン、VHHドメイン、FR3-CDR3-FR4部分などの抗体のCDRを模倣するアミノ酸残基からなる最小認識ユニット、HCDR1、HCDR2、及び/又はHCDR3、並びにLCDR1、LCDR2、及び/又はLCDR3、抗原に結合するオルタナティブスカフォールド、並びに抗原結合断片を含む多重特異性タンパク質が挙げられる。抗原結合断片(VH及びVLなど)は、合成リンカーを介して互いに連結して、VH及びVLドメインが別々の一本鎖により発現された場合にVH/VLドメインが分子内又は分子間で対合して一価の抗原結合ドメイン、例えば一本鎖Fv(single chain Fv、scFv)又はダイアボディを形成することができる、様々な種類の一本鎖抗体設計を形成することができる。抗原結合断片はまた、二重特異性及び多重特異性タンパク質を遺伝子操作するために、単一特異性又は多重特異性であり得る他の抗体、タンパク質、抗原結合断片、又はオルタナティブスカフォールドにコンジュゲートされてもよい。
「癌」は、身体における異常細胞の制御されていない成長を特徴とする様々な疾患の広範な群を指す。制御されていない細胞分裂及び成長は、隣接組織を浸潤する悪性腫瘍の形成をもたらし、リンパ系又は血流を介して身体の遠位部分にも転移し得る。「癌」又は「癌組織」は、腫瘍を含み得る。
「完全長抗体」は、ジスルフィド結合によって相互に接続された、2本の重鎖(HC)及び2本の軽鎖(LC)、並びにこれらの多量体(例えば、IgM)で構成される。各重鎖は、重鎖可変ドメイン(VH)及び重鎖定常ドメインで構成され、該重鎖定常ドメインは、サブドメインCH1、ヒンジ、CH2及びCH3で構成される。各軽鎖は、軽鎖可変ドメイン(VL)及び軽鎖定常ドメイン(CL)で構成される。VH及びVLは、フレームワーク領域(framework region、FR)に散在している相補性決定領域(complementarity determining region、CDR)と称される超可変性の領域に更に区分され得る。各VH及びVLは、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって以下の順序:FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、及びFR4で配置された、3つのCDR及び4つのFRセグメントで構成される。
「ヒト抗体」は、ヒト対象に投与されるときに、最小の免疫応答を有するように最適化された抗体を意味する。ヒト抗体の可変領域は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する。ヒト抗体が定常領域又は定常領域の一部を含む場合、当該定常領域もヒト免疫グロブリン配列に由来する。ヒト抗体は、ヒト抗体の可変領域がヒト生殖系列免疫グロブリン又は再編成された免疫グロブリン遺伝子を使用する系から得られた場合、ヒト起源の配列に「由来する」重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。このような例示的な系は、ファージにディスプレイされたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリ、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座を保有するトランスジェニック非ヒト動物、例えばマウス又はラットを含む。「ヒト抗体」は、典型的には、ヒト抗体及びヒト免疫グロブリン遺伝子座を得るために使用した系の違い、フレームワーク若しくはCDRへの体細胞変異の導入若しくは置換の意図的な導入、又はこれらの両方により、ヒトで発現した免疫グロブリンと比較したときにアミノ酸の違いを含有する。典型的には、「ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン又は再編成された免疫グロブリン遺伝子によってコードされているアミノ酸配列に対して、アミノ酸配列が少なくとも約80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%又は99%同一である。場合によっては、「ヒト抗体」は、例えばKnappik et al.,(2000)J Mol Biol 296:57-86に記載されるヒトフレームワーク配列分析から得られたコンセンサスフレームワーク配列、又は例えばShi et al.,(2010)J Mol Biol 397:385-96及び国際公開第WO2009/085462号に記載される、ファージ上に提示されたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリに組み込まれた合成HCDR3を含有し得る。少なくとも1つのCDRが非ヒト種に由来する抗体は、「ヒト抗体」の定義には含まれない。
「ヒト化抗体」は、少なくとも1つのCDRが非ヒト種に由来し、少なくとも1つのフレームワークがヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体を意味する。ヒト化抗体は、フレームワークに置換を含むことができるため、フレームワークは、発現したヒト免疫グロブリン又はヒト免疫グロブリン生殖細胞系列遺伝子配列の厳密なコピーではない場合がある。
「単離/単離された」とは、組み換え細胞などにおける分子が産生される系の他の成分から離して実質的に分離及び/又は精製された分子の均質な集団(例えば、合成ポリヌクレオチド又はポリペプチド)に加えて、少なくとも1つの精製又は単離工程に供されたタンパク質を指す。「単離/単離された」とは、他の細胞材料及び/又は化学物質を実質的に含まない分子を指し、より高い純度、例えば80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、又は100%の純度まで単離された分子を包含する。
「調節する」は、対照又はビヒクルによって媒介される応答と比較したときに、より多い又はより少ない応答を媒介する(すなわち、下流効果)試験分子の増強された又は減少した能力のいずれかを指す。
「ナチュラルキラー細胞」及び「NK細胞」は、本明細書では互換的かつ同義的に使用される。NK細胞は、CD16CD56及び/又はCD57TCR表現型を有する分化リンパ球を指す。NK細胞は、特定の細胞溶解性酵素の活性化によって「自己」MHC/HLA抗原を発現できない細胞に結合し、殺傷する能力、腫瘍細胞又はNK活性化受容体のリガンドを発現する他の疾患細胞を殺傷する能力、及び免疫応答を刺激又は阻害するサイトカインと呼ばれるタンパク質分子を放出する能力を特徴とする。
「特異的に結合する」、「特異的結合」、「特異的に結合している」、又は「結合する」とは、タンパク質性分子が、抗原又は当該抗原内のエピトープに、他の抗原に対する親和性よりも高い親和性で結合することを指す。典型的には、タンパク質性分子は、約1×10-7M以下、例えば約5×10-8M以下、約1×10-8M以下、約1×10-9M以下、約1×10-10M以下、約1×10-11M以下、又は約1×10-12M以下の平衡解離定数(K)で抗原又は当該抗原内のエピトープに結合し、典型的には、当該Kは、非特異的抗原(例えば、BSA、カゼイン)への結合についてのKよりも少なくとも100倍小さい。本明細書に記載の前立腺ネオ抗原の文脈において、「特異的結合」とは、タンパク質性分子が、前立腺ネオ抗原がそのバリアントである野生型タンパク質に検出可能には結合することなく、前立腺ネオ抗原に結合することを指す。
「腫瘍細胞」又は「癌細胞」は、インビボ、エクスビボ、又は組織培養のいずれかにおいて、自然発生的な又は導入された表現型の変化を有する癌性、前癌性、又は形質転換細胞を指す。これらの変化は、必ずしも新たな遺伝物質の取り込みを伴うものではない。形質転換は、形質転換ウイルスの感染及び新たなゲノム核酸の組み込み、外因性核酸の取り込みにより発生させることもでき、自然発生的に又は発癌物質に曝露した後に発生し、それによって内因性の遺伝子が変異する場合もある。形質転換/癌は、インビトロ、インビボ、及びエクスビボにおける、形態学的変化、細胞の不死化、異常な増殖制御、病巣の形成、増殖、悪性病変、腫瘍特異的マーカーレベルの調節、浸潤性、ヌードマウスなどの好適な動物宿主における腫瘍の増殖などによって例示される。
用語「キメラ抗原受容体」又は「CAR」は、本明細書で使用するとき、全て天然では単一のタンパク質において一緒にみられることのない組み合わせで、細胞外標的結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞表面受容体として定義される。これには、特に、細胞外ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインが天然では単一の受容体タンパク質において一緒にみられることのない受容体が含まれる。本発明のキメラ抗原受容体は、主に、T細胞及びナチュラルキラー(NK)細胞などのリンパ球での使用が意図される。
用語「T細胞」及び「Tリンパ球」は、互換的であり、本明細書において同義的に使用される。本明細書で使用するとき、T細胞は、胸腺細胞、ナイーブTリンパ球、未成熟Tリンパ球、成熟Tリンパ球、休止Tリンパ球、又は活性化Tリンパ球を含む。T細胞は、Tヘルパー(Th)細胞、例えば、Tヘルパー1(Th1)又はTヘルパー2(Th2)細胞であってよい。T細胞は、ヘルパーT細胞(HTL;CD4+T細胞)、CD4+T細胞、細胞傷害性T細胞(CTL;CD8+T細胞)、腫瘍浸潤細胞傷害性T細胞(TIL;CD8+T細胞)、CD4+CD8+T細胞、又はT細胞の任意の他のサブセットであってもよい。特定の実施形態で使用するのに好適なT細胞の他の例示的な集団としては、ナイーブT細胞及びメモリT細胞が挙げられる。また、「NKT細胞」も含まれ、これは、半不変αβT細胞受容体を発現するだけでなく、NK1.1などの通常NK細胞に関連する様々な分子マーカーも発現するT細胞の特殊な集団を指す。NKT細胞としては、NK1.1+及びNK1.1-、並びにCD4+、CD4-、CD8+、及びCD8細胞が挙げられる。NKT細胞のTCRは、MHC I様分子CD Idによって提示される糖脂質抗原を認識するという点で独特である。NKT細胞は、炎症又は免疫寛容のいずれかを促進するサイトカインを産生する能力により、保護効果又は有害効果のいずれかを有し得る。また、「ガンマデルタT細胞(γδT細胞)」も含まれる。ガンマデルタT細胞は、それらの表面に異なるTCRを有するT細胞の小さなサブセットの特殊な集団を指し、TCRがα及びβ-TCR鎖と表記される2つの糖タンパク質鎖から構成されるT細胞の大部分とは異なる。γδT細胞におけるTCRは、γ鎖及びδ鎖から構成される。γδT細胞は、免疫監視及び免疫調節において役割を果たすことができ、IL-17の重要な供給源であること、及び活発なCD8+細胞傷害性T細胞応答を誘導することが見出された。また、異常又は過剰な免疫応答を抑制し、免疫寛容において役割を果たすT細胞を指す「制御性T細胞」又は「Treg」も含まれる。Tregは、典型的には、転写因子Foxp3陽性CD4+T細胞であり、また、IL-10産生CD4+T細胞である転写因子Foxp3陰性制御性T細胞も含み得る。
用語「ナチュラルキラー細胞」及び「NK細胞」は、互換的であり、本明細書において同義的に使用される。本明細書で使用するとき、NK細胞とは、CD16+CD56+及び/又はCD57+TCR-表現型を有する分化リンパ球を指す。NK細胞は、特定の細胞溶解性酵素の活性化によって「自己」MHC/HLA抗原を発現できない細胞に結合し、殺傷する能力、腫瘍細胞又はNK活性化受容体のリガンドを発現する他の疾患細胞を殺傷する能力、及び免疫応答を刺激又は阻害するサイトカインと呼ばれるタンパク質分子を放出する能力を特徴とする。
本明細書で使用するとき、用語「抗原」とは、T細胞受容体が結合することができる任意の剤(例えば、タンパク質、ペプチド、多糖類、糖タンパク質、糖脂質、核酸、これらの一部、又はこれらの組み合わせ)分子を指す。抗原は、免疫応答を惹起することもできる。免疫応答の例は、限定するものではないが、抗体産生、若しくは特定の免疫学的コンピテント細胞の活性化、又はその両方を伴い得る。当業者は、抗原が決して「遺伝子」によってコードされている必要はないことを理解するであろう。抗原は、合成で作製されてもよく、又は生物学的サンプルに由来していてもよく、又はポリペプチド以外の巨大分子であってもよいことは容易に明らかである。このような生物学的サンプルとしては、組織サンプル、腫瘍サンプル、細胞、又は他の生物学的成分、生物、タンパク質/抗原のサブユニット、殺傷若しくは不活性化された全細胞若しくは溶解物を含む流体を挙げることができるが、これらに限定されない。
用語「抗体」とは、モノクローナル抗体、多重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、一本鎖Fv(scFv)、一本鎖抗体、Fab断片、F(ab’)断片、ジスルフィド連結Fv(sdFv)、イントラボディ、ミニボディ、ダイアボディ、及び抗イディオタイプ(抗Id)抗体(例えば、抗原特異的TCRに対する抗Id抗体を含む)、及び上記のいずれかのエピトープ結合断片を指す。用語「抗体」はまた、米国特許出願公開第2007/0004909号に開示されているものなどの共有結合性ダイアボディ、及び米国特許出願公開第2009/0060910号に開示されているものなどのIg-DARTSも指す。TCR結合分子として有用な抗体としては、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な断片、すなわち、抗原結合部位を含有する分子が挙げられる。免疫グロブリン分子は、任意の種類(例えば、IgG、IgE、IgM、IgD、IgA、及びIgY)、クラス(例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM1、IgM2、IgA1、及びIgA2)、又はサブクラスであってよい。
用語「宿主細胞」は、異種核酸を含有する任意の細胞を意味する。異種核酸は、ベクター(例えば、発現ベクター)であってよい。例えば、宿主細胞は、細胞による物質の産生、例えば、遺伝子、DNA若しくはRNA配列、タンパク質、又は酵素の細胞による発現のための、任意の方法で選択、改変、形質転換、成長、使用、又は操作される任意の生物由来の細胞であってよい。適切な宿主を決定することができる。例えば、宿主細胞は、ベクター骨格及び所望の結果に基づいて選択され得る。例として、プラスミド又はコスミドは、いくつかのタイプのベクターを複製するために原核生物宿主細胞に導入され得る。DH5α、JM109、及びKCBなどであるが、これらに限定されない細菌細胞、SURE(登録商標)コンピテント細胞、並びにSOLOPACK Gold細胞を、ベクター複製及び/又は発現のための宿主細胞として使用することができる。更に、大腸菌LE392などの細菌細胞を、ファージウイルスの宿主細胞として使用することができる。宿主細胞として使用することができる真核細胞としては、酵母(例えば、YPH499、YPH500、及びYPH501)、昆虫、及び哺乳類が挙げられるが、これらに限定されない。ベクターの複製及び/又は発現のための哺乳類真核宿主細胞の例としては、HeLa、NIH3T3、Jurkat、293、COS、CHO、Saos、及びPC12が挙げられるが、これらに限定されない。
本開示の宿主細胞としては、CARをコードしているDNA又はRNA配列を含有し、CARを細胞表面上で発現するT細胞及びナチュラルキラー細胞が挙げられる。宿主細胞は、T細胞活性、ナチュラルキラー細胞活性、癌の治療、及び自己免疫疾患の治療を増強するために使用され得る。
「活性化」又は「刺激」は、それによって細胞(例えば、T細胞及びNK細胞)が、活性化マーカーを発現する、サイトカインを産生する、増殖する、及び/又は標的細胞に対して細胞傷害性になる、細胞の生物学的状態の変化の誘導を意味する。これらの変化は全て、一次刺激シグナルによって生じ得る。共刺激シグナルは、一次シグナルの大きさを増幅し、初期刺激後の細胞死を抑制することができ、その結果、より耐久性のある活性化状態、ひいてはより高い細胞傷害能をもたらす。「共刺激シグナル」は、TCR/CD3ライゲーションなどの一次シグナルと組み合わせて、T細胞及び/若しくはNK細胞の増殖並びに/又は鍵となる分子のアップレギュレーション若しくはダウンレギュレーションを引き起こすシグナルを指す。
用語「増殖」は、細胞の対称的又は非対称的な分裂のいずれかの、細胞分裂の増加を指す。用語「拡大」は、細胞分裂及び細胞死の結果を指す。
用語「分化」は、細胞の能力若しくは増殖を減少させるか、又は細胞をより発生的に限定された状態に移行させる方法を指す。
用語「発現する」及び「発現」は、遺伝子又はDNA配列の情報が生成されることを可能にするか又は生成させること、例えば、対応する遺伝子又はDNA配列の転写及び翻訳に関与する細胞機能を活性化することによってタンパク質を生成することを意味する。DNA配列は、細胞内に又は細胞によって発現して、タンパク質などの「発現産物」を形成する。発現産物自体、例えば、得られたタンパク質は、細胞によって「発現された」と言うこともできる。発現産物は、細胞内、細胞外、又は膜貫通として特徴付けることができる。
用語「トランスフェクション」とは、組み換えDNA技術を使用して細胞に「外来」(すなわち、外因性又は細胞外)核酸を導入することを意味する。用語「遺伝子改変」は、宿主細胞に対して「外来」(すなわち、外因性又は細胞外)の遺伝子、DNA又はRNA配列を導入し、その結果、宿主細胞が、導入された遺伝子又は配列を発現して、所望の物質、典型的には、導入された遺伝子又は配列によってコードされているタンパク質又は酵素を生成することを意味する。導入された遺伝子又は配列はまた、「クローニングされた」又は「外来」遺伝子又は配列と呼ばれる場合もあり、開始、終止、プロモーター、シグナル、分泌、又は細胞の遺伝機構によって使用される他の配列などのキメラ抗原受容体をコードしているポリヌクレオチドに動作可能に連結された調節配列又は制御配列を含んでいてよい。遺伝子又は配列は、既知の機能を有さない非機能的配列を含んでいてよい。導入されたDNA又はRNAを受け取って発現する宿主細胞は、「遺伝的に操作されている」。宿主細胞に導入されたDNA又はRNAは、宿主細胞と同じ属若しくは種の細胞を含む任意の起源、又は異なる属若しくは種に由来し得る。
用語「形質導入」とは、ウイルスベクターを使用する外来核酸の細胞への導入を意味する。
用語「制御エレメント」は、核酸配列の発現のいくつかの態様を制御する任意のシス作用性遺伝要素を指す。いくつかの実施形態では、用語「プロモーター」は、本質的に、転写を開始するために必要な最小配列を含む。いくつかの実施形態では、用語「プロモーター」は、転写を開始させるための配列を含み、加えて、それぞれ一般的に「エンハンサーエレメント」及び「リプレッサーエレメント」と呼ばれる転写をアップレギュレート又はダウンレギュレートすることができる配列も含む。
本明細書で使用するとき、「動作可能に連結された」及び類似の語句は、核酸又はアミノ酸に関して使用される場合、それぞれ、互いに機能的な関係で配置された核酸配列又はアミノ酸配列の動作可能な連結を指す。例えば、動作可能に連結されたプロモーター、エンハンサーエレメント、オープンリーディングフレーム、5’及び3’UTR、並びにターミネーター配列は、核酸分子(例えば、RNA)の正確な産生をもたらす。いくつかの実施形態では、動作可能に連結された核酸エレメントは、オープンリーディングフレームの転写及び最終的にはポリペプチドの生成(すなわち、オープンリーディングフレームの発現)をもたらす。別の例として、動作可能に連結されたペプチドは、機能ドメインが互いに適切な距離で配置されて、各ドメインの意図された機能を付与するものを指す。
「増強」又は「促進」又は「増加」又は「拡大」又は「改善」は、全般的に、ビヒクル又は対照分子/組成物のいずれかによって引き起こされる応答と比較して、より大きな生理学的応答を生じさせるか、誘発するか、又は引き起こす(すなわち、下流効果)、本明細書で企図される組成物の能力を指す。測定可能な生理学的応答は、特に当該技術分野及び本明細書の記載の理解から明らかなように、T細胞の拡大、活性化、エフェクター機能、持続性の増加、及び/又は癌細胞死殺傷能力の増加を含み得る。特定の実施形態では、「増加した」又は「増強された」量は、「統計的に有意な」量であり得、ビヒクル又は対照組成物によって生じる応答の1.1、1.2、1.5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30倍、又はそれ以上(例えば、500、1000倍)(1を上回る全ての整数及びその間の小数点、例えば、1.5、1.6、1.7、1.8などを含む)である増加を含み得る。
「減少」又は「低下」又は「減弱」又は「低減」又は「軽減」は、全般的に、ビヒクル又は対照分子/組成物のいずれかによって引き起こされる応答と比較して、より小さな生理学的応答を生じさせるか、誘発するか、又は引き起こす(すなわち、下流効果)、本明細書で企図される組成物の能力を指す。特定の実施形態では、「減少した」又は「低減された」量は、「統計的に有意な」量であり得、ビヒクル若しくは対照組成物によって生じる応答(参照応答)又は特定の細胞系列における応答の1.1、1.2、1.5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30倍、又はそれ以上(例えば、500、1000倍)(1を上回る全ての整数及びその間の小数点、例えば、1.5、1.6、1.7、1.8などを含む)である減少を含み得る。
用量又は量に適用される用語「有効な」は、それを必要としている対象への投与時に所望の活性をもたらすのに十分な化合物又は医薬組成物の量を指す。活性成分の組み合わせを投与するとき、当該組み合わせの有効量は、個々に投与された場合に有効であろう各成分の量を含んでいる場合もあり、含んでいない場合もあることに留意されたい。正確な必要量は、対象の種、年齢、及び全身状態、治療される病態の重症度、用いられる具体的な薬物、投与の様式などに応じて、対象によって異なる。
本明細書に記載の組成物に関連して使用するとき、語句「医薬的に許容される」とは、生理学的に許容され、典型的には哺乳類(例えば、ヒト)に投与されたときに有害反応を生じさせない、このような組成物の分子実体及び他の成分を指す。好ましくは、用語「医薬的に許容される」とは、哺乳類、より具体的にはヒトにおける使用について、連邦政府若しくは州政府の規制機関によって認可されているか、又は米国薬局方若しくは他の全般的に認められている薬局方に記載されていることを意味する。
用語「タンパク質」は、本明細書で使用するとき、全ての長さのタンパク質断片を含む天然及び合成のタンパク質、融合タンパク質、並びに糖タンパク質に加えて、全ての他の種類の修飾タンパク質(例えば、リン酸化、アセチル化、ミリストイル化、パルミトイル化、グリコシル化、酸化、ホルミル化、アミド化、ポリグルタミル化、ADP-リボシル化、ペグ化、ビオチン化などから得られるタンパク質)を含むがこれに限定されない修飾タンパク質の全ての種類を包含する。
用語「核酸」、「ヌクレオチド」、及び「ポリヌクレオチド」は、特に明記しない限り、DNA及びRNAの両方を包含する。「核酸配列」又は「ヌクレオチド配列」とは、アミノ酸をコードしている核酸配列を意味し、これらの用語はまた、リンカーによってコードされている任意のアミノ酸を含む、クローニングのアーチファクトとして付加される任意のアミノ酸をコードしている部分を含む核酸配列を指す場合もある。
用語「担体」は、化合物が一緒に投与される希釈剤、補助剤、賦形剤、又はビヒクルを指す。このような医薬担体は、落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油などの、石油、動物、植物、又は合成起源のものを含む、水及び油などの滅菌液体であってよい。水又は水溶液、生理食塩水、並びにデキストロース及びグリセリン水溶液が、特に注射溶液用の担体として好ましく用いられる。あるいは、担体は、バインダー(圧縮丸剤用)、流動促進剤、封入剤、風味剤、及び着色剤のうちの1つ以上を含むがこれらに限定されない固体剤形担体であってもよい。好適な医薬担体は、E.W.Martinによる「Remington’s Pharmaceutical Sciences」に記載されている。
用語「約」又は「およそ」は、値の統計的に意味のある範囲内にあることを含む。このような範囲は、所与の値又は範囲の1桁以内、好ましくは50%以内、より好ましくは20%以内、更により好ましくは10%以内、更により好ましくは5%以内であり得る。用語「約」又は「およそ」によって包含される許容可能な変動は、研究中の具体的なシステムに依存し、当業者によって容易に理解され得る。
「カリクレイン関連ペプチダーゼ2」、「hK2」、又は「klk2」とは、カリクレイン-2、顆粒状カリクレイン2、又はHK2とも呼ばれる既知のタンパク質を指す。hK2は、プレプロタンパク質として生成され、タンパク質分解中に切断されて活性プロテアーゼを生成する。全てのhK2アイソフォーム及びバリアントが、「hK2」に包含される。様々なアイソフォームのアミノ酸配列は、GenBankアクセッション番号NP_005542.1、NP_001002231.1、及びNP_001243009から検索可能である。配列番号62における完全長ヒトhK2のアミノ酸配列を示す。配列は、シグナルペプチド(残基1~18)及びプロペプチド領域(残基19~24)を含む。
本明細書で使用される用語は、あくまで特定の実施形態を説明する目的のものに過ぎず、限定を目的としたものではない。本明細書で使用するとき、文脈により別途明確に示されない限り、不定冠詞「a」、「an」及び「the」は、複数の指示物を含むものと理解されるべきである。
キメラ抗原受容体
本発明は、概して、所望のキメラ抗原受容体を安定して発現するように遺伝子改変されたT細胞の使用に関する。キメラ抗原受容体(CAR)は、T細胞シグナル伝達ドメインに連結された抗体(scFv)の抗原結合ドメインを含有する人工的に構築されたハイブリッドタンパク質又はポリペプチドである。CARの特性としては、非MHC制限的に選択された標的に向かってT細胞特異性及び反応性をリダイレクトし、モノクローナル抗体の抗原結合特性を利用する能力を挙げることができる。非MHC制限抗原認識により、CARを発現するT細胞は、抗原プロセシングとは無関係に抗原を認識することができるため、腫瘍逃避の主要なメカニズムを迂回する。更に、T細胞において発現される場合、CARは、内因性T細胞受容体(T cell receptor、TCR)アルファ及びベータ鎖と有利には二量体化しない。
本明細書に記載のCARは、少なくとも細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、以下に定義された刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン(本明細書では「細胞質シグナル伝達ドメイン」とも称される)と、を含む組み換えポリペプチドコンストラクトを提供する。CARを発現するT細胞は、本明細書では、CAR T細胞、CAR-T細胞、又はCAR修飾T細胞と称され、これらの用語は、本明細書において互換的に使用される。細胞は、その表面上に抗体結合ドメインを安定して発現するように遺伝的に改変することができ、MHC非依存性の新規抗原特異性を付与する。
場合によっては、T細胞は、特定の抗体の抗原認識ドメインがCD3-ゼータ鎖又はFcγRIタンパク質の細胞内ドメインと組み合わされて単一のキメラタンパク質になるCARを安定して発現するように、遺伝的に改変される。一実施形態では、刺激分子は、T細胞受容体複合体に関連するゼータ鎖である。
「細胞内シグナル伝達ドメイン」又は「細胞質シグナル伝達ドメイン」は、本明細書で使用するとき、分子の細胞内部分を指す。これは、二次情報伝達物質を生成することにより規定のシグナル伝達経路を介して細胞活動を制御するために細胞内で情報を伝達することによって作用する、又はこのような情報伝達物質に応答することによりエフェクターとして機能することによって作用するタンパク質の機能的部分である。細胞内シグナル伝達ドメインは、CAR含有細胞(例えば、CAR-T細胞)の免疫エフェクター機能を促進するシグナルを生成する。例えばCAR-T細胞における免疫エフェクター機能の例としては、細胞溶解活性及びヘルパー活性(サイトカインの分泌を含む)が挙げられる。
一実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメインを含み得る。一次細胞内シグナル伝達ドメインの例としては、一次刺激又は抗原依存性シミュレーションに関与する分子に由来するものが挙げられる。一実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激細胞内ドメインを含み得る。共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの例としては、共刺激シグナル又は抗原非依存性刺激に関与する分子に由来するものが挙げられる。例えば、CAR-Tの場合、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、T細胞受容体の細胞質配列を含み得、共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、共受容体又は共刺激分子からの細胞質配列を含み得る。
一次細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ又はITAMとして知られるシグナル伝達モチーフを含み得る。一次細胞質シグナル伝達配列を含有するITAMの例としては、CD3-ゼータ、FcRガンマ、FcRベータ、CD3ガンマ、CD3デルタ、CD3イプシロン、CD5、CD22、CD79a、CD79b、並びにCD66d DAP10及びDAP12に由来するものが挙げられるが、これらに限定されない。
「ゼータ」又は代替的に「ゼータ鎖」、「CD3-ゼータ」又は「TCR-ゼータ」という用語は、GenBankアクセッション番号BAG36664.1として提供されるタンパク質、又は非ヒト種、例えば、ネズミ、ウサギ、霊長類、マウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの等価な残基として定義され、「ゼータ刺激ドメイン」又は代替的に「CD3-ゼータ刺激ドメイン」又は「TCR-ゼータ刺激ドメイン」は、T細胞活性化に必要な初期シグナルを機能的に伝達するために十分なゼータ鎖の細胞質ドメインからのアミノ酸残基として定義される。時には、例えば、本開示の又は態様及び/又は実施形態では、「ゼータ刺激ドメイン」又は「CD3-ゼータ刺激ドメイン」は、「一次シグナル伝達ドメイン」とも呼ばれる。一態様では、CD3ゼータ刺激ドメインの細胞質ドメインは、GenBankアクセッション番号BAG36664.1の残基52~164、又はその機能的オルソログである、非ヒト種、例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿などに由来する等価な残基を含む。好ましい実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、CD3ゼータ刺激ドメインを含む。一態様では、「ゼータ刺激ドメイン」又は「CD3-ゼータ刺激ドメイン」は、配列番号28として提供される配列、又は配列番号28と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列である。
用語「共刺激分子」とは、共刺激リガンドと特異的に結合し、それによって、T細胞による共刺激応答(例えば、限定するものではないが、増殖)を媒介するT細胞上の同種結合パートナーを指す。共刺激分子は、効率的な免疫応答に必要な抗原受容体又はそのリガンド以外の細胞表面分子である。共刺激分子としては、MHCクラス1分子、BTLA、及びTollリガンド受容体、並びにOX40、CD2、CD27、CD28、CDS、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、及び4-1BB(CD137)が挙げられるが、これらに限定されない。
共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内部分であり得る。共刺激分子は、以下のタンパク質ファミリー:TNF受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子(SLAMタンパク質)、及び活性化NK細胞受容体で表すことができる。このような分子の例としては、CD27、CD28、4-1BB(CD137)、OX40、GITR、CD30、MyD88、CD40、ICOS、BAFFR、HVEM、リンパ球機能関連抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、SLAMF7、NKp80、CD160、B7-H3、及びCD83と特異的に結合するリガンドなどが挙げられる。
細胞内シグナル伝達ドメインは、それが由来する分子の細胞内部分全体、又は天然の細胞内シグナル伝達ドメイン全体、又はそれらの機能的断片を含み得る。
用語「4-1BB」又は代替的に「CD137」とは、GenBankアクセッション番号AAA62478.2として提供されるアミノ酸配列、又は非ヒト種、例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの等価な残基を有するTNFRスーパーファミリーのメンバーを指し、「4-1BB共刺激ドメイン」は、GenBankアクセッション番号AAA62478.2のアミノ酸残基214~255、又は非ヒト種、例えば、マウス、げっ歯類、サル、及び類人猿などからの等価な残基として定義される。時には、例えば、本開示の態様及び/又は実施形態では、「4-1BB共刺激ドメイン」は、「共刺激ドメイン」とも呼ばれる。
好ましい実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、4-1BB共刺激ドメイン又は「CD137共刺激ドメイン」である共刺激細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一態様では、「4-1BB共刺激ドメイン」又は「CD137共刺激ドメイン」は、配列番号27として提供される配列、又は非ヒト種、例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの等価な残基、又は配列番号27と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列である。好ましい実施形態では、4-1BB共刺激ドメインは、配列番号27として提供される配列である。
一実施形態では、CAR内のドメインの1つに自然に関連する膜貫通ドメインが使用される。別の実施形態では、膜貫通ドメインを、アミノ酸置換によって選択又は修飾し、同じ又は異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインへのかかるドメインの結合を回避して、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小限に抑えることができる。一例の実施形態では、膜貫通ドメインは、CD8αヒンジドメインを含む。一実施形態では、CARは、CD8αヒンジドメイン及びCD8α膜貫通ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、細胞質シグナル伝達ドメインは、本明細書で定義される少なくとも1つの共刺激分子に由来する1つ以上の機能的シグナル伝達ドメインを更に含む。一実施形態では、共刺激分子は、4-1BB(すなわち、CD137)、CD27、CD3-ゼータ、及び/又はCD28から選択される。CD28は、T細胞共刺激において重要なT細胞マーカーである。CD27は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーのメンバーであり、共刺激免疫チェックポイント分子として機能する。4-1BBは、T細胞に強力な共刺激シグナルを伝達し、分化を促進し、Tリンパ球の長期生存を増強する。CD3-ゼータは、TCRと会合してシグナルを生成し、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ(immunoreceptor tyrosine-based activation motifs、ITAM)を含有する。別の実施形態では、共刺激分子は、MyD88又はCD40である。
一実施形態では、CARは、CD8を含む細胞内ヒンジドメインと、CD28、4-1BB、及びCD3-ゼータを含む細胞内T細胞受容体シグナル伝達ドメインと、を含む。別の実施形態では、CARは、細胞内ヒンジドメインと、CD28、4-1BB、及びCD3-ゼータを含む細胞内T細胞受容体シグナル伝達ドメインとを含み、当該ヒンジドメインは、CD8、CD4、又はCD28の細胞外領域の全て又は一部、抗体定常領域の全て又は一部、FcRIIIA受容体、IgGヒンジ、IgMヒンジ、IgAヒンジ、IgDヒンジ、IgEヒンジ、又はIgヒンジの全て又は一部を含む。IgGヒンジは、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM1、IgM2、IgA1、IgA2、IgD、IgE、又はこれらのキメラ由来であってよい。
本明細書に記載のCARは、少なくとも細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、例えば以下に定義された刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン(本明細書では「細胞質シグナル伝達ドメイン」とも称される)と、を含む組み換えポリペプチドコンストラクトを提供する。
一実施形態では、CARは、細胞外抗原認識ドメインと、膜貫通ドメインと、刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと、を含むキメラ融合タンパク質を含む。一実施形態では、CARは、細胞外抗原認識ドメインと、膜貫通ドメインと、共刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメイン及び刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと、を含むキメラ融合タンパク質を含む。一実施形態では、CARは、細胞外抗原認識ドメインと、膜貫通ドメインと、1つ以上の共刺激分子に由来する少なくとも2つの機能的シグナル伝達ドメイン及び刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと、を含むキメラ融合タンパク質を含む。
本発明のCARは、CD28及び/若しくは4-1BBシグナル伝達ドメインのみを含むように、又は本発明のCARの状況において有用な任意の他の所望の細胞質ドメインと組み合わされるように設計してよい。一実施形態では、CARの細胞質ドメインは、CD3-ゼータのシグナル伝達ドメインを更に含み得る。例えば、CARの細胞質ドメインとしては、CD3-ゼータ、4-1BB、及びCD28シグナル伝達モジュール、並びにこれらの組み合わせが挙げられ得るが、これらに限定されない。
一実施形態では、CARは、CD8αヒンジドメインを含むヒンジドメインと、CD8α膜貫通ドメインと、4-1BB及びCD3-ゼータを含む細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む。一実施形態では、CARは、CD8αヒンジドメインを含むヒンジドメインと、CD8α膜貫通ドメインと、CD28、4-1BB、及びCD3-ゼータを含む細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む。
別の実施形態では、CARは、CD8αヒンジドメインと、CD8α膜貫通ドメインと、CD3-ゼータのシグナル伝達ドメイン及び4-1BB共刺激ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む。
別の実施形態では、CARは、配列番号25のアミノ酸配列を含むCD8a-ヒンジ領域と、配列番号26のアミノ酸配列を含む膜貫通ドメインと、配列番号27のアミノ酸配列を含む共刺激ドメイン及び配列番号28のアミノ酸配列を含む一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む。
したがって、本発明は、CAR T細胞、及び養子療法のためのそれらの使用方法を提供する。
本開示は、本明細書に記載のCAR、核酸、ポリペプチド、及びタンパク質のバリアント(例えば機能的バリアント)を更に提供する。「バリアント」は、例えば、置換、挿入、又は欠失といった1つ以上の改変によって参照ポリペプチド又は参照ポリヌクレオチドと異なるポリペプチド又はポリヌクレオチドを指す。本明細書で使用するとき、「機能的バリアント」という用語は、親CAR、ポリペプチド、又はタンパク質と実質的又は著しい配列同一性又は類似性を有するCAR、ポリペプチド、又はタンパク質を指し、これらの機能的バリアントは、バリアントであるCAR、ポリペプチド、又はタンパク質の生物活性を保持する。機能的バリアントは、例えば、本明細書に記載のCAR、ポリペプチド、又はタンパク質(親CAR、ポリペプチド、又はタンパク質)のバリアントを包含し、親CAR、ポリペプチド、又はタンパク質と同様の程度、同程度、又はより高い程度で標的細胞を認識する能力を保持する。親CAR、ポリペプチド、又はタンパク質に関して、機能的バリアントは、例えば、親CAR、ポリペプチド、又はタンパク質に対して、アミノ酸配列が少なくとも約30%、約40%、約50%、約60%、約75%、約80%、約85%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%又はそれ以上同一であり得る。
f)本明細書では、ポリペプチドの構造は、列挙された参照配列(所与の配列番号を有する)との配列同一性%に基づいて適切に定義される。これに関連して、2つのアミノ酸配列間の%配列同一性は、最適な方法でアラインメントされたこれらの2つの配列を比較することによって判定することができ、比較されるアミノ酸配列は、これらの2つの配列間における最適なアラインメントのために参照配列に対して付加又は欠失を含み得る。同一性の百分率は、2つの配列間のアミノ酸残基が同一である同一位置の数を判定し、この同一の位置の数を比較ウィンドウ内の位置の総数で除算し、得られた結果に100を乗算し、これら2つの配列間における同一性の百分率を得るようにすることにより計算される。典型的には、比較ウィンドウは、比較される配列の全長に対応する。例えば、BLASTプログラム、「BLAST 2配列」(Tatusova et al、「Blast 2配列-タンパク質及びヌクレオチド配列を比較するための新しいツール」、FEMS Microbiol Lett.174:247-250)を使用することが可能であり、サイトhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/gorf/bl2.htmlで入手可能であり、使用されるパラメータは、デフォルト(具体的には、パラメータ「オープンギャップペナルティ」:5、及び「エクステンションギャップペナルティ」:2;選択されたマトリックスは、例えば、プログラムによって提案されるマトリックス「BLOSUM 62」)で指定されているパラメータであり、比較される2つの配列間における同一性の百分率は、プログラムによって直接計算される。クエリ配列の参照配列に対する配列同一性の判定は、当業者の能力の範囲内であり、BLAST(商標)などの市販の分析ソフトウェアを使用して実行することができる。
機能的バリアントは、例えば、少なくとも1つの保存的アミノ酸置換を有する親CAR、ポリペプチド、又はタンパク質のアミノ酸配列を含み得る。別の実施形態では、機能的バリアントは、少なくとも1つの非保存的アミノ酸置換を有する親CAR、ポリペプチド、又はタンパク質のアミノ酸配列を含み得る。この場合、非保存的アミノ酸置換は、機能的バリアントの生物活性を抑制又は阻害することができない。非保存的アミノ酸置換により、機能的バリアントの生物活性を向上させることができ、その結果、機能的バリアントの生物活性は、親CAR、ポリペプチド、又はタンパク質と比較して増加する。
本発明のCARのアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換であり得る。保存的アミノ酸置換は、当該技術分野において既知であり、特定の物理的及び/又は化学的特性を有する1つのアミノ酸を、同じ又は類似の化学的又は物理的特性を有する別のアミノ酸と交換するアミノ酸置換を含む。例えば、保存的アミノ酸置換は、別の酸性アミノ酸で置換された酸性アミノ酸(例えば、Asp又はGlu)、非極性側鎖を有する別のアミノ酸で置換された非極性側鎖を有するアミノ酸(例えば、Ala、Gly、Val、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Trp、Valなど)、別の塩基性アミノ酸で置換された塩基性アミノ酸(Lys、Argなど)、極性側鎖を有する別のアミノ酸で置換された極性側鎖を有するアミノ酸(Asn、Cys、Gln、Ser、Thr、Tyrなど)等であり得る。
CAR、ポリペプチド、又はタンパク質は、特定のアミノ酸配列又は本明細書に記載の配列から本質的になり得、その結果、他の構成成分、例えば、他のアミノ酸は、機能的バリアントの生物活性を実質的に変化させない。
本開示の実施形態のCAR、ポリペプチド、及びタンパク質(機能的部分及び機能的バリアントを含む)は、任意の長さであり得る、すなわち、任意の数のアミノ酸を含み得、但し、CAR、ポリペプチド、又はタンパク質(又は機能的部分若しくはその機能的バリアント)は、それらの生物活性、例えば、抗原に特異的に結合する能力、宿主内の疾患細胞(例えば、癌細胞)を検出する能力、又は宿主内の疾患を治療若しくは予防する能力などを保持する。例えば、ポリペプチドは、約50~約5000個のアミノ酸長、例えば、約50、約70、約75、約100、約125、約150、約175、約200、約225、約250、約275、約300、約325、約350、約375、約400、約425、約450、約475、約500、約525、約550、約575、約600、約625、約650、約675、約700、約725、約750、約775、約800、約825、約850、約875、約900、約925、約950、約975、約1000又はそれ以上のアミノ酸長であり得る。本発明のポリペプチドはまた、オリゴペプチドも含む。
本発明の実施形態のCAR、ポリペプチド、及びタンパク質(本発明の機能的部分及び機能的バリアントを含む)は、1つ以上の天然に存在するアミノ酸の代わりに合成アミノ酸を含むことができる。かかる合成アミノ酸は、当該技術分野において既知であり、例としては、アミノシクロヘキサンカルボン酸、ノルロイシン、α-アミノn-デカン酸、ホモセリン、S-アセチルアミノメチル-システイン、トランス-3-及びトランス-4-ヒドロキシプロリン、4-アミノフェニルアラニン、4-ニトロフェニルアラニン、α-(2-アミノ-2-ノルボルナン)-カルボン酸、α,γ-ジアミノ酪酸、α,β-ジアミノプロピオン酸、ホモフェニルアラニン、4-クロロフェニルアラニン、4-カルボキシフェニルアラニン、β-フェニルセリンβ-ヒドロキシフェニルアラニン、フェニルグリシン、α-ナフチルアラニン、シクロヘキシルアラニン、シクロヘキシルグリシン、N’-ベンジル-N’-メチル-リジン、N’,N’-ジベンジル-リジン、6-ヒドロキシリジン、オルニチン、α-アミノシクロペンタンカルボン酸、α-アミノシクロヘキサンカルボン酸、α-アミノシクロヘプタンカルボン酸、インドリン-2-カルボン酸、1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン-3-カルボン酸、アミノマロン酸、アミノマロン酸モノアミド、及びα-tert-ブチルグリシンが挙げられる。
本発明の実施形態のCAR、ポリペプチド、及びタンパク質(機能的部分及び機能的バリアントを含む)は、翻訳後修飾を受けることができる。これらは、グリコシル化、エステル化、N-アシル化、アミド化、カルボキシル化、リン酸化、エステル化、例えば、ジスルフィド架橋を介して環化することができ、又は酸付加塩に変換することができる。いくつかの実施形態では、これらは、二量体化若しくはポリマー化、又はコンジュゲートされている。
本発明の実施形態のCAR、ポリペプチド、及び/又はタンパク質(機能的部分及びその機能的バリアントを含む)は、当該技術分野において既知の方法によって得ることができる。ポリペプチド及びタンパク質をデノボ合成する好適な方法は、参考文献、例えばChan et al.,Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis,Oxford University Press,Oxford,United Kingdom,2000;Peptide and Protein Drug Analysis,ed.Reid,R.,Marcel Dekker,Inc.,2000;and Epitope Mapping,ed.Westwood et al.,Oxford University Press,Oxford,United Kingdom,2001に記載されている。また、ポリペプチド及びタンパク質は、標準的な組み換え方法を使用して本明細書に記載の核酸を使用して、組み換えにより産生され得る。例えば、Sambrook et al.,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,3rd ed.,Cold Spring Harbor Press,Cold Spring Harbor,N.Y.2001;及びAusubel et al.,Current Protocols in Molecular Biology,Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons,NY,1994.を参照されたい。更に、本発明のCAR、ポリペプチド、及びタンパク質(機能的部分及びその機能的バリアントを含む)の一部は、植物、細菌、昆虫、哺乳動物などの供給源から単離及び/又は精製することができる。単離及び精製の方法は、当該技術分野において既知である。代替的に、本明細書に記載のCAR、ポリペプチド、及び/又はタンパク質(機能的部分及びその機能的バリアントを含む)は、商業的に合成することができる。この点において、CAR、ポリペプチド、及びタンパク質は、合成、組み換え、単離、及び/又は精製することができる。
本明細書に記載のポリペプチドを生成するために利用される組み換え核酸を作製するために使用することができる修飾ヌクレオチドの例としては、5-フルオロウラシル、5-ブロモウラシル、5-クロロウラシル、5-ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、4-アセチルシトシン、5-(カルボキシヒドロキシメチル)ウラシル、カルボキシメチルアミノメチル-2-チオウリジン、5-カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、N-置換アデニン、7-メチルグアニン、5-メチルアミノメチルウラシル、5-メトキシアミノメチル-2-チオウラシル、ベータ-D-マンノシルキューオシン、5”-メトキシカルボキシメチルウラシル、5-メトキシウラシル、2-メチルチオ-N-イソペンテニルアデニン、ウラシル-5-オキシ酢酸(v)、ウィブトキソシン(wybutoxosine)、シュードウラシル、キューオシン、ベータ-D-ガラクトシルキューオシン、イノシン、N-イソペンテニルアデニン、1-メチルグアニン、1-メチルイノシン、2,2-ジメチルグアニン、2-メチルアデニン、2-メチルグアニン、3-メチルシトシン、5-メチルシトシン、2-チオシトシン、5-メチル-2-チオウラシル、2-チオウラシル、4-チオウラシル、5-メチルウラシル、ウラシル-5-オキシ酢酸メチルエステル、3-(3-アミノ-3-N-2-カルボキシプロピル)ウラシル、及び2,6-ジアミノプリンが挙げられるが、これらに限定されない。
核酸は、CAR、ポリペプチド若しくはタンパク質、又は機能的部分若しくはその機能的バリアントのいずれかをコードする、任意の単離又は精製されたヌクレオチド配列を含み得る。代替的に、ヌクレオチド配列は、配列のいずれかに縮重したヌクレオチド配列、又は縮重配列の組み合わせを含み得る。
本発明のいくつかの実施形態はまた、単離又は精製された核酸を提供し、本核酸は、本明細書に記載される核酸のいずれかのヌクレオチド配列に相補的であるヌクレオチド配列、又は本明細書に記載される核酸のいずれかのヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む。
ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列は、高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズし得る。「高ストリンジェンシー条件」は、ヌクレオチド配列が、非特異的ハイブリダイゼーションよりも強い検出可能な量で標的配列(本明細書に記載される核酸のいずれかのヌクレオチド配列)に特異的にハイブリダイズすることを意味する。高ストリンジェンシー条件としては、正確に相補的な配列を有するポリヌクレオチド、又は散らばったミスマッチをほんのわずか含むポリヌクレオチドを、ヌクレオチド配列とマッチしたいくつかの小領域(例えば、3~12塩基)を有することとなったランダム配列から識別する条件が挙げられる。かかる相補的な小領域は、14~17又はそれ以上の塩基の完全長相補体よりも容易に融解され、高ストリンジェンシーのハイブリダイゼーションにより、それらが容易に識別可能となる。比較的高いストリンジェンシー条件としては、例えば、低塩及び/又は高温条件(約50~70℃の温度の約0.02~0.1MのNaCl又は同等のものによって提供される等)が挙げられる。かかる高ストリンジェンシー条件は、ヌクレオチド配列とテンプレート鎖又は標的鎖との間のミスマッチがあったとしてもほとんど許容されず、本明細書に記載のCARのいずれかの発現を検出するために特に好適である。条件は、漸増量のホルムアミドの添加によって、よりストリンジェントになり得ることが、概ね理解される。
一実施形態では、本発明の核酸は、組み換え発現ベクターに組み込むことができる。本開示は、本発明の核酸のいずれかを含む、組み換え発現ベクターを提供する。本明細書で使用するとき、「組み換え発現ベクター」という用語は、宿主細胞によるmRNA、タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドの発現を可能にする、遺伝的に改変されたオリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドコンストラクトを意味し、この場合、コンストラクトは、mRNA、タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、ベクターは、細胞内でmRNA、タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドを発現させるのに十分な条件下で、細胞と接触させられる。本明細書に記載のベクターは、全体として天然には存在しない。しかしながら、ベクターの一部は、天然に存在し得る。記載される組み換え発現ベクターは、DNA及びRNA(一本鎖又は二本鎖であり得、合成されるか、又は一部が天然のソースから得られ得、天然、非天然又は改変されたヌクレオチドを含有し得る)を含むがこれらに限定されない、任意のタイプのヌクレオチドを含み得る。組み換え発現ベクターは、天然に存在するヌクレオチド間連結、若しくは天然に存在しないヌクレオチド間連結、又は両方のタイプの連結を含み得る。天然に存在しない又は改変されたヌクレオチド又はヌクレオチド間連結は、ベクターの転写又は複製を阻害しない。
一実施形態では、本発明の組み換え発現ベクターは、任意の好適な組み換え発現ベクターであり得、任意の好適な宿主を形質転換又はトランスフェクションするために使用され得る。好適なベクターとしては、プラスミド及びウイルスなどの繁殖及び増殖のため、若しくは発現のため、又は両方のために設計されたベクターが挙げられる。ベクターは、pUCシリーズ(Fermentas Life Sciences,Glen Burnie,Md.)、pBluescriptシリーズ(Stratagene,LaJolla、Calif.)、pETシリーズ(Novagen,Madison,Wis.)、pGEXシリーズ(Pharmacia Biotech,Uppsala,Sweden)、及びpEXシリーズ(Clontech,Palo Alto,Calif.)からなる群から選択され得る。λGT10、λGT11、λEMBL4、及びλNM1149、λZapII(Stratagene)などのバクテリオファージベクターを使用することができる。植物発現ベクターの例としては、pBI01、pBI01.2、pBI121、pBI101.3、及びpBIN19(Clontech)が挙げられる。動物発現ベクターの例としては、pEUK-Cl、pMAM、及びpMAMneo(Clontech)が挙げられる。組み換え発現ベクターは、ウイルスベクター、例えば、レトロウイルスベクター、例えば、ガンマレトロウイルスベクターであり得る。
一実施形態では、本発明の組み換え発現ベクターは、例えば、上記のSambrook et al.(上記)及びAusubel et al.(上記)に記載の標準的な組み換えDNA技術を使用して調製される。環状又は線状である発現ベクターのコンストラクトは、原核又は真核の宿主細胞において機能する複製系を含有するように調製され得る。複製系は、例えば、ColE1、SV40、2μプラスミド、λ、ウシパピローマウイルスなどに由来していてよい。
組み換え発現ベクターは、適宜、ベクターがDNAベースであるかRNAベースであるかを考慮して、ベクターが導入される宿主のタイプ(例えば、細菌、植物、真菌、又は動物)に特異的な、転写及び翻訳の開始及び終止コドンなどの調節配列を含み得る。
組み換え発現ベクターは、形質転換又はトランスフェクションされた宿主の選択を可能にする1つ以上のマーカー遺伝子を含み得る。マーカー遺伝子は、殺生物剤耐性(例えば、抗生物質、重金属などに対する耐性)、栄養要求性宿主における原栄養を提供するための補完などを含む。記載される発現ベクターに好適なマーカー遺伝子としては、例えば、ネオマイシン/G418耐性遺伝子、ヒスチジノールx耐性遺伝子、ヒスチジノール耐性遺伝子、テトラサイクリン耐性遺伝子、及びアンピシリン耐性遺伝子が挙げられる。
組み換え発現ベクターは、CAR、ポリペプチド、若しくはタンパク質(機能的部分及びその機能的バリアントを含む)をコードするヌクレオチド配列に、又はCAR、ポリペプチド、若しくはタンパク質をコードするヌクレオチド配列に相補的であるか若しくはそれにハイブリダイズするヌクレオチド配列に、作動可能に連結された天然の又は規範のプロモーターを含み得る。プロモーターの選択(例えば、強い、弱い、組織特異的、誘導性、及び発生特異的)は、当業者の技術範囲内である。同様に、ヌクレオチド配列をプロモーターと組み合わせることも当業者の技術の範囲内である。プロモーターは、非ウイルスプロモーター又はウイルスプロモーター、例えば、サイトメガロウイルス(cytomegalovirus、CMV)プロモーター、RSVプロモーター、SV40プロモーター、又はネズミ幹細胞ウイルスの長い末端反復に見出されるプロモーターであり得る。
組み換え発現ベクターは、一過性の発現のため、安定な発現のためのいずれか、又はその両方のために設計され得る。また、組み換え発現ベクターは、構成的発現又は誘導性発現のために作製され得る。
更に、組み換え発現ベクターは、自殺遺伝子を含むように作製され得る。本明細書で使用するとき、「自殺遺伝子」という用語は、自殺遺伝子を発現する細胞を死に至らしめる遺伝子を指す。自殺遺伝子は、遺伝子を発現する細胞に対し薬剤(例えば、薬物)に対する感受性を付与し、細胞が薬剤と接触したとき又は薬剤に曝露されたときに細胞を死に至らしめる遺伝子であり得る。自殺遺伝子は、当該技術分野において既知であり、例えば、単純ヘルペスウイルス(HSV)チミジンキナーゼ(TK)遺伝子、シトシンデアミナーゼ、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、及びニトロレダクターゼが挙げられる。
CAR、ポリペプチド、若しくはタンパク質(その機能的部分又はバリアントのいずれかを含む)、宿主細胞、核酸、組み換え発現ベクター、宿主細胞集団、又は抗体、若しくはその抗原結合部分のいずれかを含むコンジュゲート、例えば、バイオコンジュゲートは、本発明の範囲内に含まれる。コンジュゲート、並びにコンジュゲートの合成方法は、概ね、当該技術分野において既知である(例えば、Hudecz,F.,Methods Mol.Biol.298:209-223(2005)and Kirin et al.,Inorg Chem.44(15):5405-5415(2005)を参照されたい)。
本発明の一実施形態は、本発明のCARのエピトープに結合する、例えば特異的に結合する、抗体又はその抗原結合部分を更に提供する。
抗体は、当該技術分野において既知の任意のタイプの免疫グロブリンであり得る。免疫グロブリンは、5つの主要クラス、すなわちIgA、IgD、IgE、IgG、及びIgMに割り当てられ得る。IgA及びIgGは、アイソタイプIgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4として更に細分類される。脊椎動物種の抗体軽鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいてカッパ(κ)及びラムダ(λ)の2つのタイプの一方に割り当てられ得る。抗体は、任意のクラス又はアイソタイプのものであり得る。
抗体は、ネズミ、ヒト、ヒト化及びキメラモノクローナル抗体を含むモノクローナル抗体、ポリクローナル、抗原結合断片、二重特異性又は多重特異性抗体、単量体、二量体、四量体又は多量体抗体、一本鎖抗体、ドメイン抗体、並びに必要とされる特異性の抗原結合部位を含む任意の他の修飾された立体配置の免疫グロブリン分子を含む、免疫グロブリン分子を含む。抗体は、天然に存在する抗体、例えば、哺乳動物(例えば、ネズミ、霊長類、マウス、ウサギ、ヤギ、ウマ、ニワトリ、ハムスター、ヒトなど)から単離及び/又は精製された抗体であり得る。代替的に、抗体は、遺伝子操作された(例えば、遺伝的に操作された)抗体であり得る。
ヒト化抗体は、非ヒト種に由来する抗原結合部位を有し、可変領域フレームワークは、ヒト免疫グロブリン配列に由来する。ヒト抗体は、フレームワーク及び抗原結合部位の両方がヒト起源の配列に由来する重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を有する。
また、抗体は、CARの機能的部分に対して任意のレベルの親和性又は結合活性を有し得る。いくつかの実施形態では、抗体は、ある範囲の親和性(K)でhK2抗原に結合し得る。本発明による一実施形態では、そして、以下に列挙する番号付きの実施形態の各実施形態及び全ての実施形態のうちのいくつかの実施形態では、当業者により実施された表面プラズモン共鳴又Kinexa法によって求めたとき、抗体は、高い親和性、例えば、約10-7M以下のKDで、例えば、限定するものではないが、1~9.9(又は1、2、3、4、5、6、7、8、若しくは9などの、その中の任意の若しくは値)×10-8M、10-9M、10-10M、10-11M、10-12M、10-13M、10-14M、10-15M、又はその中の任意の範囲若しくは値のKでhK2抗原に結合する。親和性の一例は、1×10-8M以下である。親和性の別の例は、1×10-9M以下である。
CARの任意の機能的部分に結合する能力について抗体を試験する方法は、当該技術分野において既知であり、任意の抗体-抗原結合アッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ(radioimmunoassay、RIA)、ウエスタンブロット、酵素連結免疫吸着アッセイ(enzyme-linked immunosorbent assay、ELISA)、免疫沈降、及び競合阻害アッセイなどが挙げられる。
抗体を作製する好適な方法は、当該技術分野において既知である。例えば、標準的なハイブリドーマ法は、例えば、Koehler and Milstein,Eur.J.Immunol.,5,511-519(1976),Harlow and Lane(eds.),Antibodies:A Laboratory Manual,CSH Press(1988)、及びC.A.Janeway et al.(eds.),Immunobiology,5th Ed.,Garland Publishing,New York,N.Y.(2001))に記載されている。代替的に、他の方法、例えば、EBV-ハイブリドーマ法(Haskard and Archer,J.Immunol.Methods,74(2),361-67(1984),and Roder et al.,Methods Enzymol.,121,140-67(1986))、及びバクテリオファージベクター発現系(例えば、Huse et al.,Science,246,1275-81(1989)を参照されたい)が当該技術分野において既知である。更に、非ヒト動物において抗体を産生する方法は、例えば、米国特許第5,545,806号、同第5,569,825号、及び同第5,714,352号、並びに米国特許出願公開第2002/0197266(A1)号に記載されている。
ファージディスプレイを使用して、抗体を生成することもできる。これに関して、抗体の抗原結合可変(V)ドメインをコードするファージライブラリーは、標準的な分子生物学及び組み換えDNA技術を使用して生成することができる(例えば、Sambrook et al.(上記)、及びAusubel et al.(上記)を参照されたい)。所望の特異性を有する可変領域をコードしているファージは、所望の抗原(すなわち、hK2)への特異的結合について選択され、選択された可変ドメインを含む完全又は部分的な抗体が再構成される。再構成された抗体をコードする核酸配列は、ハイブリドーマ産生に使用される骨髄腫細胞などの好適な細胞株に導入され、その結果、モノクローナル抗体の特性を有する抗体が細胞によって分泌される(例えば、Janeway et al.(上記)、Huse et al.(上記)、及び米国特許第6,265,150号を参照されたい)。
抗体は、特定の重鎖及び軽鎖免疫グロブリン遺伝子のトランスジェニックであるトランスジェニックマウスによって産生され得る。このような方法は、当該技術分野において既知であり、例えば、米国特許第5,545,806号及び同第5,569,825号、並びにJanewayら、上掲に記載されている。
ヒト化抗体を生成する方法は、当該技術分野において既知であり、例えば、Janewayら、上掲、米国特許第5,225,539号、同第5,585,089号、及び同第5,693,761号、欧州特許第0239400(B1)号、並びに英国特許第2188638号に記載されている。ヒト化抗体はまた、米国特許第5,639,641号及びPedersen et al.,J.Mol.Biol.,235,959-973(1994)に記載の抗体リサーフェシング技術を使用して生成することもできる。
抗体は、本明細書で利用されるとき、複数若しくは一本の鎖、又はインタクトな免疫グロブリンであってよく、天然源又は組み換え源に由来していてよい。抗体は、免疫グロブリン分子の四量体であり得る。
「抗体断片」という用語は、親の完全長抗体の抗原結合特性を保持する、無傷の抗体又はその組み換えバリアントの少なくとも1つの部分を指す。これは、例えば、認識及び結合(例えば、抗原などの標的に対する抗体断片の特異的結合)を付与するために十分である、抗原結合ドメイン(例えば、無傷の(インタクトな)抗体の抗原決定可変領域)を指す。「抗原結合断片」とは、免疫グロブリン分子の一部を指す。抗体断片の例としては、Fab、Fab’、F(ab’)2、及びFv断片、一本鎖抗体(scFv)、線状抗体、sdAbなどの単一ドメイン抗体(VL又はVHのいずれか)、ラクダVHHドメイン、並びに抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
「scFv」という用語は、軽鎖の可変領域を含む少なくとも1つの抗体断片と、重鎖の可変領域を含む少なくとも1つの抗体断片と、を含むタンパク質を指す。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、短い柔軟なポリペプチドリンカーを介して連続的に連結され、単鎖ポリペプチドとして発現することができ、scFvは、その元となった無傷の抗体の特異性を保持する。指定されない限り、本明細書で使用するとき、scFvは、VL及びVH可変領域をいずれかの順序で有してもよく、例えば、ポリペプチドのN末端及びC末端の終端に関して、scFvは、VL-リンカー-VHを含んでもよく、又はVH-リンカー-VLを含んでもよい。
本発明の一実施形態はまた、本明細書に記載の抗体のいずれかの抗原結合部分を提供する。抗原結合部分は、Fab、F(ab’)2、dsFv、sFv、ダイアボディ、及びトリアボディなどの少なくとも1つの抗原結合部位を有する任意の部分であり得る。
いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、重鎖相補性決定領域(heavy chain complementarity determining regions、HCDR)1、2、及び/若しくは3、軽鎖相補性決定領域(light chain complementarity determining regions、LCDR)1、2、及び/若しくは3、重鎖可変領域(VH)、又は軽鎖可変領域(VL)、Fab、F(ab’)2、Fd、及びFv断片、並びに1つのVHドメイン又は1つのVLドメインのいずれかを含む(例えば、からなる)ドメイン抗体(dAb)である。VHドメイン及びVLドメインは、リンカー、例えば、合成リンカーを介して一緒に連結され得る。
「相補性決定領域(Complementarity determining regions、CDR)」は、抗体における抗原結合部位である。CDRは、様々な用語を使用して定義され得る:(i)VH内に3つ(HCDR1、HCDR2、HCDR3)及びVL内に3つ(LCDR1、LCDR2、LCDR3)の相補性決定領域(CDR)は、配列多様性に基づいている(Wu and Kabat,J Exp Med 132:211-50,1970;Kabat et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.,1991)。(ii)VH内に3つ(H1、H2、H3)及びVL内に3つ(L1、L2、L3)の「超可変性領域」、「HVR」、又は「HV」は、Chothia及びLesk(Chothia and Lesk Mol Biol 196:901-17,1987)により定義されるとおり、構造において超可変性である、抗体可変ドメインの領域を指す。International ImMunoGeneTics(IMGT)データベース(http://www_imgt_org)は、抗原結合部位についての標準的番号及び定義を提供する。CDR、HV、及びIMGT概要説明の対応が、Lefranc et al.,Dev Comparat Immunol 27:55-77,2003に記載されている。本明細書で使用されている「CDR」、「HCDR1」、「HCDR2」、「HCDR3」、「LCDR1」、「LCDR2」、及び「LCDR3」という用語は、本明細書において別途記載のない限り、上掲のKabat、Chothia、又はIMGTにより記載されている方法のいずれかにより定義されるCDRを含む。
また、抗体又はその抗原結合部分は、例えば、放射性同位体、フルオロフォア(例えば、フルオレセインイソチオシアネート(fluorescein isothiocyanate、FITC)、フィコエリトリン(phycoerythrin、PE))、酵素(例えば、アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ)、及び元素粒子(例えば、金粒子)などの検出可能な標識を含むように修飾され得る。
本明細書に記載のCAR、ポリペプチド、又はタンパク質(機能的部分及びその機能的バリアントを含む)のいずれかをコードするヌクレオチド配列を含む核酸が、本開示によって提供される。
抗体又はその抗体断片を含むCARの一部は、様々な形態で存在してもよく、その場合、抗原結合ドメインは、例えば、単一ドメイン抗体断片(sdAb)、scFv及びヒトキメラ抗体又はヒト化抗体などの連続するポリペプチド鎖の一部として発現される(Harlow et al.,1999、In:Using Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,N.Y.;Harlow et al.,1989、In:Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor,N.Y.;Houston et al.,1988、Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883;Bird et al.,1988,Science 242:423-426)。一態様では、本発明のCAR組成物の抗原結合ドメインは、抗体断片を含む。一態様では、CARは、scFvを含む抗体断片を含む。
「組み換え抗体」という用語は、例えば、バクテリオファージ又は酵母発現系によって発現される抗体などの組み換えDNA技術を使用して生成される抗体を指す。用語は、抗体をコードするDNA分子の合成によって生成されている、このDNA分子が抗体タンパク質、又は抗体を特定するアミノ酸配列を発現する抗体を意味すると解釈されるべきであり、その場合、DNA又はアミノ酸配列は、利用可能であり当該技術分野において既知である組み換えDNA又はアミノ酸配列技術を使用して得られる。
「抗原」という用語は、免疫応答を引き起こす分子を指す。この免疫応答は、抗体産生、若しくは特定の免疫学的コンピテント細胞の活性化、又はその両方を伴い得る。当業者は、実質的に全てのタンパク質又はペプチドを含む任意の巨大分子が抗原として機能し得ることを理解するであろう。更に、抗原は、組み換え又はゲノムDNAに由来し得る。当業者であれば、任意のDNAが、免疫応答を誘発するタンパク質をコードするヌクレオチド配列又は部分ヌクレオチド配列を含むことにより、本明細書中でその用語が使用されるとおりの「抗原」をコードすることを理解するであろう。更に、当業者であれば、抗原は、遺伝子の完全長ヌクレオチド配列によってのみでコードされる必要はないことを理解するであろう。本開示が、2つ以上の遺伝子の部分的ヌクレオチド配列の使用を含むがこれに限定されないこと、及びこれらのヌクレオチド配列が、様々な組み合わせで配置されて、所望の免疫応答を誘発するポリペプチドをコードすることは明らかである。
一態様では、本開示は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、CARを提供し、当該細胞外抗原結合ドメインは、hK2抗原に結合する。
一態様では、本開示は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、CARを提供し、本細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号1のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号4のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3;
配列番号2のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号4のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3;
配列番号3のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号6のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3;
配列番号3のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号4のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3;
配列番号2のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号6のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3;
配列番号1のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号6のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3;
配列番号3のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号5のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3;
配列番号1のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号5のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3;
配列番号2のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号5のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3;
配列番号74のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号76のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3;
配列番号75のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号77のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3;
配列番号147のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号140のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3;
配列番号75のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号141のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3;
配列番号75のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号140のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3;
配列番号148のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号142のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3;
配列番号149のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号143のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3;
配列番号150のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号144のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3;
配列番号151のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号145のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3;
配列番号152のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号146のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3;
配列番号318のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号317のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3
を含み、
当該細胞外抗原結合ドメインは、hK2抗原に結合する。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号1のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号4のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号2のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号4のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号3のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号6のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号3のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号4のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号2のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号6のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号1のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号6のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号3のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号5のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号1のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号5のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号2のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号5のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号74のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号76のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号75のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号77のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号147のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号140のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号75のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号141のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号75のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号140のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号148のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号142のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号149のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号143のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号150のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号144のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号151のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号145のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号152のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号146のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号318のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3、並びに配列番号317のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3を含む。
一態様では、本開示は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、CARを提供し、本細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号63、配列番号72、配列番号86、配列番号92、配列番号102、配列番号105、配列番号107、配列番号110、配列番号115、配列番号118、配列番号120、配列番号123、配列番号309、及び配列番号314、並びにこれらの保存的修飾からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖CDR1を含み、当該細胞外抗原結合ドメインは、hK2抗原に結合する。
一態様では、本開示は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、CARを提供し、本細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号64、配列番号65、配列番号73、配列番号87、配列番号93、配列番号103、配列番号106、配列番号108、配列番号111、配列番号112、配列番号114、配列番号116、配列番号119、配列番号121、配列番号124、配列番号310、及び配列番号315、並びにこれらの保存的修飾からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖CDR2を含み、当該細胞外抗原結合ドメインは、hK2抗原に結合する。
一態様では、本開示は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、CARを提供し、本細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号66、配列番号88、配列番号94、配列番号104、配列番号109、配列番号113、配列番号117、配列番号122、及び配列番号311、並びにこれらの保存的修飾からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖CDR3を含み、当該細胞外抗原結合ドメインは、hK2抗原に結合する。
一態様では、本開示は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、CARを提供し、本細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号64のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号314のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号315のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号311のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号309のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号310のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号311のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号65のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号72のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号73のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;又は
配列番号86のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号87のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号88のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号92のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号93のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号94のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号102のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号103のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号104のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号105のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号106のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号104のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号107のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号108のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号109のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号110のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号111のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号109のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号102のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号112のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号113のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号105のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号114のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号113のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号115のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号116のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号117のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号118のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号119のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号117のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号120のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号121のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号122のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;又は
配列番号123のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号124のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号122のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、
を含み、
当該細胞外抗原結合ドメインは、hK2抗原に結合する。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号64のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号314のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号315のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号311のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号309のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号310のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号311のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号65のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号72のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号73のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号86のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号87のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号88のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号92のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号93のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号94のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号102のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号103のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号104のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号105のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号106のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号104のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号107のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号108のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号109のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号110のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号111のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号109のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号102のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号112のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号113のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号105のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号114のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号113のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号115のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号116のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号117のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号118のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号119のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号117のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号120のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号121のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号122のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号123のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号124のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号122のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3を含む。
一態様では、本開示は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、CARを提供し、本細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号67、配列番号68、配列番号89、配列番号95、配列番号97、配列番号125、配列番号128、配列番号133、配列番号136、及び配列番号312、並びにこれらの保存的修飾からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1を含み、当該細胞外抗原結合ドメインは、hK2抗原に結合する。
一態様では、本開示は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、CARを提供し、本細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号69、配列番号70、配列番号90、配列番号96、配列番号126、配列番号137、配列番号129、配列番号131、配列番号134、配列番号137、及び配列番号313、並びにこれらの保存的修飾からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2を含み、当該細胞外抗原結合ドメインは、hK2抗原に結合する。
一態様では、本開示は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、CARを提供し、本細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号71、配列番号91、配列番号130、配列番号132、配列番号135、配列番号138、及び配列番号139、並びにこれらの保存的修飾からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含み、当該細胞外抗原結合ドメインは、hK2抗原に結合する。
一態様では、本開示は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、CARを提供し、本細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号69のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号68のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号70のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号89のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号90のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号95のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号96のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号312のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号313のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号89のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号90のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号126のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号128のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号129のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号130のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号125のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号131のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号132のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号133のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号134のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号135のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号136のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号137のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号138のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;又は
配列番号97のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号127のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号139のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3、
を含み、
当該細胞外抗原結合ドメインは、hK2抗原に結合する。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号69のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号68のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号70のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号89のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号90のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号95のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号96のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号312のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号313のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号89のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号90のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号126のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号128のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号129のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号130のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号125のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号131のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号132のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号133のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号134のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号135のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号136のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号137のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号138のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号97のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号127のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号139のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一態様では、本開示は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、CARを提供し、本細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号64のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号69のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号65のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号68のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号70のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号65のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号126のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号65のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号69のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号65のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号126のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号314のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号315のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号311のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号312のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号313のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号102のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号103のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号104のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号128のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号129のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号130のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号107のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号108のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号109のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号125のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号131のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号132のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号102のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号112のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号113のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号133のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号134のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号135のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号115のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号116のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号117のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号136のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号137のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号138のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;又は
配列番号120のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号121のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号122のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号97のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号127のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号138のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3、
を含み、
当該細胞外抗原結合ドメインは、hK2抗原に結合する。
一態様では、本開示は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、CARを提供し、本細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号64のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号69のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号65のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号68のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号70のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号65のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号126のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号65のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号69のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号65のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号126のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号314のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号315のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号311のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号312のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号313のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号102のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号103のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号104のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号128のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号129のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号130のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号107のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号108のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号109のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号125のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号131のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号132のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号102のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号112のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号113のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号133のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号134のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号135のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号115のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号116のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号117のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号136のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号137のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号138のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号120のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号121のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号122のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号97のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号127のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号138のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号72のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号73のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号69のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号72のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号73のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号68のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号70のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号72のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号73のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号126のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号72のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号73のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号69のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号72のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号73のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号126のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号309のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号310のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号311のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号312のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号313のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号105のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号106のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号104のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号128のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号129のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号130のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号110のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号111のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号109のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号125のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号131のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号132のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号105のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号114のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号113のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号133のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号134のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号135のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号118のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号119のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号117のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号136のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号137のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号138のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号123のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号124のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号122のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号97のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号127のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号139のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号120のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号121のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号122のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号97のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号127のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号139のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;又は
配列番号86のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号87のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号88のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号89のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号90のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3、
を含み、
当該細胞外抗原結合ドメインは、hK2抗原に結合する。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号64のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号69のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号65のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号68のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号70のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号65のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号126のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号65のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号69のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号65のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号126のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号314のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号315のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号311のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号312のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号313のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号102のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号103のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号104のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号128のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号129のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号130のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号107のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号108のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号109のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号125のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号131のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号132のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号102のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号112のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号113のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号133のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号134のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号135のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号115のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号116のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号117のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号136のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号137のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号138のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号120のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号121のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号122のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号97のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号127のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号138のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号72のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号73のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号69のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号72のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号73のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号68のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号70のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号72のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号73のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号126のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号72のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号73のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号69のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号72のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号73のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号126のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号309のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号310のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号311のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号312のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号313のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号105のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号106のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号104のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号128のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号129のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号130のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号110のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号111のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号109のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号125のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号131のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号132のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号105のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号114のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号113のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号133のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号134のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号135のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号118のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号119のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号117のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号136のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号137のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号138のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号123のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号124のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号122のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号97のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号127のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号139のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号120のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号121のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号122のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号97のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号127のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号139のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号86のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号87のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号88のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号89のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号90のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む。
一態様では、本開示は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、CARを提供し、本細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号1~3からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(LCVR)、又は配列番号4~6からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(HCVR)、又は配列番号1~3からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むLCVRと配列番号4~6からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHCVRとの組み合わせを含み、当該細胞外抗原結合ドメインは、hK2抗原に結合する。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号1のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号4のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号2のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号4のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号3のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号6のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号3のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号4のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号2のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号6のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号1のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号6のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号1のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号2のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号3のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号74のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号76のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;配列番号75のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号77のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号147のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号140のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号75のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号141のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号75のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号140のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号148のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号142のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号149のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号143のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号150のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号144のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号151のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号145のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号152のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号146のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号318のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号317のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、
を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号1のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号4のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号2のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号4のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号3のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号6のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号3のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号4のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号2のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号6のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号1のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号6のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号1のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号2のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号3のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号74のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号76のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号75のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号77のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号147のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号140のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号75のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号141のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号75のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号140のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号148のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号142のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号149のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号143のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号150のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号144のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号151のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号145のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号152のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号146のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号318のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号317のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号1と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号4と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号2と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号4と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号3と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号6と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号3と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号4と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号2と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号6と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号3と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号4と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号1と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号6と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号3と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号5と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号1と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号5と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号2と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号5と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号74と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号76と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号75と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号77と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号147と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号140と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号75と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号141と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号75と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号140と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号148と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号142と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号149と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号143と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号150と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号144と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号151と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号145と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号152と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号146と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号318と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号317と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域
を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号1と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号4と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号2と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号4と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号3と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号6と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号3と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号4と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号2と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号6と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号3と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号4と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号1と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号6と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号3と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号5と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号1と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号5と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号2と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号5と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号74と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号76と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号75と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号77と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号147と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号140と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号75と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号141と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号75と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号140と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号148と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号142と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号149と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号143と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号150と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号144と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号151と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号145と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号152と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号146と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号318と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号317と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、scFvを含む。いくつかの実施形態では、scFvは、軽鎖可変領域と重鎖可変領域との間にリンカーポリペプチドを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号8~23、169~184、及び340~343からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、hK2ポリペプチド(例えば、配列番号62のアミノ酸配列を有するヒトhK2ポリペプチド又はその断片)に特異的に結合するscFvである。
組み換え発現系において、リンカーはペプチドリンカーであり、任意の天然に存在するアミノ酸を含み得る。リンカーに含まれ得る例示的なアミノ酸は、Gly、Ser Pro、Thr、Glu、Lys、Arg、Ile、Leu、His及びTheである。リンカーは、hK2への結合などの所望の活性を保持するように、互いに対して正確な高次構造を形成するような方法でVH及びVLを連結させるのに適切な長さを有している必要がある。
リンカーは、約5~50個のアミノ酸長であり得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、約10~40個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、約10~35個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、約10~30個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、約10~25個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、約10~20個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、約15~20個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは6個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは7個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは8個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは9個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは10個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは11個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは12個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは13個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは14個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは15個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは16個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは17個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは18個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは19個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは20個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは21個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは22個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは23個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは24個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは25個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは26個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは27個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは28個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは29個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは30個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは31個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは32個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは33個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは34個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは35個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは36個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは37個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは38個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは39個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは40個のアミノ酸長である。使用され得る例示的なリンカーは、Glyリッチリンカー、Gly及びSer含有リンカー、Gly及びAla含有リンカー、Ala及びSer含有リンカー、並びに他の柔軟なリンカーである。
一実施形態では、リンカーポリペプチドは、配列番号7のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、リンカーポリペプチドは、配列番号7と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、リンカーポリペプチドは、配列番号237~268のいずれか1つのアミノ酸配列を含む。一実施形態では、リンカーポリペプチドは、配列番号237~268のいずれか1つと少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、scFvは、配列番号8~23、169~184、及び340~343からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号8と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号8の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号9と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号9の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号10と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号10の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号11と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号11の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号12と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号12の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号13と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号13の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号14と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号14の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号15と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号15の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号16と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号16の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号17と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号17の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号18と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号18の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号19と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号19の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号20と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号20の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号21と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号21の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号22と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号22の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号23と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号23の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号169と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号169の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号170と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号170の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号171と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号171の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号172と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号172の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号173と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号173の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号174と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号174の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号175と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号175の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号176と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号176の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号177と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号177の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号1

78と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号178の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号179と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号179の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号180と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号180の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号181と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号181の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号182と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号182の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号183と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号183の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号184と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号184の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号340と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号340の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号341と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号341の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号342と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号342の配列を含む。一実施形態では、scFvは、配列番号343と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号343の配列を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、シグナルポリペプチドを含む。シグナルポリペプチドは、hK2に結合する細胞外抗原結合ドメインのN末端に位置付けられ得る。シグナルポリペプチドは、細胞プロセシング及びCARの細胞膜への局在化中に細胞外抗原結合ドメインから任意選択で切断され得る。当業者に既知の様々なシグナルポリペプチドのいずれをシグナルポリペプチドとして使用してもよい。シグナルポリペプチドが由来し得るペプチドの非限定的な例としては、FcεR、ヒト免疫グロブリン(IgG)重鎖(HC)可変領域、CD8α、又はT細胞によって分泌される様々な他のタンパク質のいずれかが挙げられる。様々な実施形態では、シグナルポリペプチドは、T細胞の分泌経路と適合性である。いくつかの実施形態では、シグナルポリペプチドは、配列番号24のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、シグナルポリペプチドは、配列番号24と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一態様では、本開示は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、CARを提供し、当該細胞外抗原結合ドメインは、配列番号29~44、78~81、221~236、及び273~308からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。配列番号29~44、78~81、221~236、及び273~308からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを有するCARの別の特徴は、細胞外抗原結合ドメインがhK2抗原に結合することである。
一実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、TNF受容体スーパーファミリーメンバー9(CD137)成分、T細胞表面糖タンパク質CD3ゼータ鎖(CD3z)成分、表面抗原分類(CD27)成分、表面抗原分類スーパーファミリーメンバー(例えば、CD28又は誘導性T細胞共刺激因子(ICOS)など)成分、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチド成分を含む。
一実施形態では、CD137成分は、配列番号27のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、CD137成分は、配列番号27と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、CD3z成分は、配列番号28のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、CD3z成分は、配列番号28と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号45のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号45と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、膜貫通ドメインは、CD8a膜貫通領域(CD8A-TM)ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、CD8a-TMポリペプチドは、配列番号26のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、CD8a-TMポリペプチドは、配列番号26と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、膜貫通ドメインは、T細胞受容体のα、β、又はζ鎖、CD28、CD3イプシロン、CD45、CD4、CD5、CD8、CD8α、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD40、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154の膜貫通領域を少なくとも含む。別の実施形態では、膜貫通ドメインは、ζ、η、又はFcεR1γ及び-β、MB1(Igα)、B29又はCD3-γ、ζ、若しくはηの膜貫通ドメインを少なくとも含む。別の実施形態では、膜貫通ドメインは、合成であり、例えば、ロイシン及びバリン、フェニルアラニンのトリプレット、又はトリプトファンなどの主に疎水性の残基を含む。
一実施形態では、CARは、膜貫通ドメインを細胞外抗原結合ドメインに連結するヒンジ領域を更に含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、CD8aヒンジ領域である。いくつかの実施形態では、CD8a-ヒンジ領域は、配列番号25のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、CD8a-ヒンジ領域は、配列番号25と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、配列EPKSCDKTHTCPPCP(配列番号269)を含むか、又はEPKSCDKTHTCPPCP(配列番号269)と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、配列ERKCCVECPPCP(配列番号270)を含むか、又はERKCCVECPPCP(配列番号270)と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、配列ELKTPLGDTTHTCPRCP(EPKSCDTPPPCPRCP)(配列番号271)を含むか、又はELKTPLGDTTHTCPRCP(EPKSCDTPPPCPRCP)(配列番号271)と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、配列ESKYGPPCPSCP(配列番号272)を含むか、又はESKYGPPCPSCP(配列番号272)と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
g)一実施形態では、CARは、細胞外抗原結合ドメイン、ヒンジ領域、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む。このような一実施形態では、ヒンジ領域は、CD8αヒンジ領域であり、膜貫通ドメインは、CD8α-TMドメインであり、細胞内シグナル伝達ドメインは、CD3-ゼータドメイン及び4-1BB/CD137ドメインを含む。
h)このような一実施形態では、ヒンジ領域は、配列番号25のアミノ酸配列を含むCD8αヒンジ領域であり、膜貫通ドメインは、配列番号26のアミノ酸配列を含むCD8α-TMドメインであり、細胞内シグナル伝達ドメインは、CD3-ゼータドメイン及び配列番号45のアミノ酸配列を含む4-1BB/CD137ドメインを含む。
i)別の実施形態では、ヒンジ領域は、配列番号25のアミノ酸配列を含むCD8αヒンジ領域であり、膜貫通ドメインは、配列番号26のアミノ酸配列を含むCD8α-TMドメインであり、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号27のアミノ酸配列を含む4-1BB/CD137ドメイン及び配列番号28のアミノ酸配列を含むCD3-ゼータドメインを含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号29~44、78~81、221~236、及び273~308からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号29と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号29の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号30と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号30の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号31と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号31の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号32と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号32の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号33と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号33の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号34と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号34の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号35と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号35の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号36と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号36の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号37と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号37の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号38と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号38の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号39と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号39の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号40と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号40の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号41と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号41の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号42と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号42の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号43と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号43の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号44と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号44の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号78と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号78の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号79と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号79の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号80と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号80の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号81と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号81の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号221と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号221の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号222と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号222の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号223と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号223の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号224と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号224の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号225と少なくとも50、少なくとも55

、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号225の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号226と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号226の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号227と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号227の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号228と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号228の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号229と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号229の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号230と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号230の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号231と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号231の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号232と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号232の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号233と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号233の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号234と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号234の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号235と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号235の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号236と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号236の配列を含む。
CARコンストラクト及びCARを発現する免疫応答性細胞
「コード(すること)」という用語は、ヌクレオチドの定義された配列(例えば、rRNA、tRNA及びmRNA)又はアミノ酸の定義された配列のいずれかを有する、生物学的プロセスにおける他のポリマー及び巨大分子の合成のためのテンプレートとして機能する、遺伝子、cDNA、又はmRNAなどのポリヌクレオチド中のヌクレオチドの特定の配列の固有の特性、並びにそれから生じる生物学的特性を指す。したがって、細胞又は他の生物系において、遺伝子に対応するmRNAの転写及び翻訳がタンパク質を生成する場合、その遺伝子、cDNA、又はRNAは、タンパク質をコードする。ヌクレオチド配列がmRNA配列と同一であるコード鎖と、遺伝子又はcDNAの転写のテンプレートとして使用される非コード鎖はいずれも、その遺伝子又はcDNAのタンパク質又は他の産物をコードするとして言及され得る。
別途記載のない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いの縮重型であるヌクレオチド配列、及び同じアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列全てを包含する。タンパク質又はRNAをコードするヌクレオチド配列という句はまた、いくつかの場合においてそのタンパク質をコードするヌクレオチド配列がイントロンを含有し得る程度にイントロンを包含し得る。
「発現ベクター」という用語は、発現させるヌクレオチド配列に作動可能に連結された発現制御配列を含む組み換えポリヌクレオチドを含む、ベクターを指す。発現ベクターは、発現に十分なシス作用エレメントを含み、発現のための他のエレメントは、宿主細胞によって、又はインビトロ発現系において供給され得る。発現ベクターとしては、組み換えポリヌクレオチドを組み込んだコスミド、プラスミド(例えば、裸の、又はリポソームに含有されるもの)、及びウイルス(例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルス)を含む、当該技術分野において既知の全てのベクターが挙げられる。
一実施形態では、本開示は、CARをコードしている核酸分子を発現する、細胞を提供する。一実施形態では、本開示のCARは、配列番号46~61、82~85、及び205~220からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号46と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号46の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号47と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号47の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号48と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号48の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号49と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号49の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号50と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号50の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号51と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号51の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号52と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号52の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号53と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号53の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号54と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号54の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号55と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号55の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号56と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号56の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号57と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号57の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号58と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号58の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号59と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号59の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号60と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号60の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号61と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号61の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号82と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号82の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号83と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号83の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号84と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号84の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号85と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号85の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号205と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号205の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号206と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号206の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号207と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号207の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号208と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号208の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開

示のCARは、配列番号209と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号209の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号210と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号210の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号211と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号211の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号212と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号212の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号213と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号213の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号214と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号214の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号215と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号215の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号216と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号216の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号217と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号217の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号218と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号218の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号219と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号219の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のCARは、配列番号220と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号220の配列を含む。
ある特定の実施形態では、CARは、シグナルポリペプチドを含み得る。ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは、CAR配列のN末端にある。ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは、CAR配列のC末端にある。ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは、配列番号24のアミノ酸配列を含むか又はからなる。
本明細書では、核酸分子の構造は、列挙された参照配列(所与の配列番号を有する)との配列同一性%に基づいて適切に定義される。これに関連して、核酸分子に関する%配列同一性は、少なくとも2つの異なる核酸配列間の類似性を指す。2つの比較された配列の両方の位置が同じ塩基によって占められている場合、例えば、2つのDNA分子のそれぞれの位置がアデニンによって占められている場合、分子はその位置で同一であり、2つの配列間における同一性の百分率は、2つの配列によって共有される位置での一致又は相同である数の関数であり、比較された位置の数で除算し、100を乗算したものである。例えば、2つの配列の10個の位置のうち6個が一致又は相同である場合、2つの配列は60%同一(又は相同)である。例として、DNA配列ATTGCC及びTATGGCは、50%の同一性(又は相同性)を共有する。概ね、2つの配列がアライメントされて最大相同性を与える場合の比較が行われる。それぞれの同一性パーセントは、標準的なアラインメントアルゴリズム、例えば、Altshul et al.によって記載されるBasic Local Alignment Search Tool(BLAST)((1990)J.MoI.Biol.215:403-10);Needleman et al.のアルゴリズム((1970)J.MoI.Biol.48:444-53);又はMeyers et al.のアルゴリズム((1988)Comput.Appl.Biosci.4:11-17)によって判定することができる。パラメータのセットは、ギャップペナルティが12、ギャップ伸長ペナルティが4、フレームシフトギャップペナルティが5のBlosum62スコアリングマトリックスであり得る。2つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ALIGNプログラム(バージョン2.0)に組み込まれているMeyers and Miller((1989)CABIOS 4:11-17)のアルゴリズムを使用して、PAM120重み付き残基表を使用してギャップ長ペナルティ12及びギャップペナルティ4で、判定することができる。同一性パーセントは、通常、同様の長さの配列を比較することによって計算される。
様々な実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号153~160のいずれか1つの核酸配列を含む。様々な実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号153~160のいずれか1つと少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有する配列を含む核酸配列を含む。
様々な実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号161~168のいずれか1つの核酸配列を含む。様々な実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号161~168のいずれか1つと少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有する配列を含む核酸配列を含む。
様々な実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号195~204のいずれか1つの核酸配列を含む。様々な実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号195~204のいずれか1つと少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有する配列を含む核酸配列を含む。
様々な実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号320~325のいずれか1つの核酸配列を含む。様々な実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号320~325のいずれか1つと少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有する配列を含む核酸配列を含む。
様々な実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号326~331のいずれか1つの核酸配列を含む。様々な実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号326~331のいずれか1つと少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有する配列を含む核酸配列を含む。
様々な実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号336~339のいずれか1つの核酸配列を含む。様々な実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号336~339のいずれか1つと少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、又は少なくとも99%の配列同一性を有する配列を含む核酸配列を含む。
一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号153と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号153の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号154と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号154の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号155と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号155の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号156と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号156の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号157と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号157の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号158と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号158の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号159と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号159の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号160と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号160の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号161と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号161の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号162と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号162の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号163と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号163の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号164と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号164の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号165と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号165の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号166と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号166の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号167と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号167の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号168と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号168の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号195と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号195の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号196と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号196の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号197と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号197の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号198と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号198の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号199と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号199の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号200と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号200の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号201と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号201の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号202と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、

少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号202の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号203と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号203の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号204と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号204の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号320と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号320の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号321と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号321の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号322と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号322の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号323と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号323の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号324と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号324の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号325と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号325の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号326と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号326の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号327と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号327の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号328と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号328の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号329と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号329の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号330と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号330の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号331と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号331の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号336と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号336の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号337と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号337の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号338と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号338の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、CARをコードしている核酸分子は、配列番号339と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、又は配列番号339の配列を含む核酸配列を含む。
一態様では、本開示は、本明細書に記載のCARを含む、単離免疫応答性細胞を提供する。いくつかの実施形態では、単離免疫応答性細胞は、CARで形質導入される、例えば、CARは、免疫応答性細胞の表面上に構成的に発現される。ある特定の実施形態では、単離免疫応答性細胞は、少なくとも1つの共刺激リガンドで更に形質導入され、免疫応答性細胞が少なくとも1つの共刺激リガンドを発現するようにする。ある特定の実施形態では、少なくとも1つの共刺激リガンドは、4-1BBL、CD48、CD70、CD80、CD86、OX40L、TNFRSF14、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、単離免疫応答性細胞は、少なくとも1つのサイトカインで更に形質導入され、免疫応答性細胞が少なくとも1つのサイトカインを分泌するようにする。ある特定の実施形態では、少なくともサイトカインは、IL-2、IL-3、IL-6、IL-7、IL-11、IL-12、IL-15、IL-17、IL-21、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、単離免疫応答性細胞は、Tリンパ球(T細胞)、ナチュラルキラー(NK)細胞、細胞傷害性Tリンパ球(CTL)、調節性T細胞、ヒト胚性幹細胞、リンパ系前駆細胞、T細胞前駆細胞、及びリンパ系細胞が分化する可能性のある多能性幹細胞からなる群から選択される。
一実施形態では、本開示のCAR T細胞は、所望のCAR、例えば、抗hK2、CD8αヒンジ、及び膜貫通ドメイン、並びにヒト4-1BB及びCD3-ゼータシグナル伝達ドメインを含むCARを含むレンチウイルスベクターを細胞に導入することによって生成され得る。本発明のCAR T細胞は、インビボで複製することができ、その結果、持続的な腫瘍制御につながり得る長期持続性が得られる。
本発明の実施形態は、本明細書に記載の組み換え発現ベクターのいずれかを含む、宿主細胞を更に提供する。本明細書で使用するとき、「宿主細胞」という用語は、組み換え発現ベクターを含有し得る任意のタイプの細胞を指す。宿主細胞は、真核細胞、例えば、植物、動物、若しくは藻類、真菌であり得るか、又は、原核細胞、例えば、細菌若しくは原生動物であり得る。宿主細胞は、培養細胞又は初代細胞であり得、すなわち、生物、例えば、ヒトから直接単離され得る。宿主細胞は、接着細胞又は浮遊細胞、すなわち、懸濁物中で増殖する細胞であり得る。好適な宿主細胞は、当該技術分野において既知であり、例えば、DH5α大腸菌細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞、サルVERO細胞、COS細胞、HEK293細胞などが挙げられる。組み換え発現ベクターを増幅又は複製する目的で、宿主細胞は、原核細胞、例えば、DH5α細胞であり得る。組み換えCAR、ポリペプチド、又はタンパク質を産生する目的で、宿主細胞は、哺乳動物細胞であり得る。宿主細胞はヒト細胞であり得る。宿主細胞は、任意の細胞タイプのものであり得る、任意の組織タイプに由来し得、任意の発達段階のものであり得るが、宿主細胞は末梢血リンパ球(peripheral blood lymphocyte、PBL)であり得る。宿主細胞はT細胞であり得る。
本明細書の目的のために、T細胞は、培養T細胞(例えば、初代T細胞)、又は培養T細胞株(例えば、Jurkat、SupT1など)からのT細胞、又は哺乳動物から得られたT細胞など、任意のT細胞であり得る。哺乳動物から得られる場合、T細胞は、多数の供給源(骨髄、血液、リンパ節、胸腺、又は他の組織若しくは体液を含むが、これらに限定されない)から得ることができる。T細胞はまた、濃縮又は精製され得る。T細胞は、ヒトT細胞であり得る。T細胞は、ヒトから単離されたT細胞であり得る。T細胞は、任意の種類のT細胞であり得、CD4/CD8二重陽性T細胞、CD8T細胞(例えば、細胞傷害性T細胞)、CD4ヘルパーT細胞、例えば、Th1及びTh2細胞、末梢血単核細胞(PBMC)、末梢血白血球(PBL)、腫瘍浸潤細胞、メモリT細胞、ナイーブT細胞などを含むがこれらに限定されない、任意の発生段階のものであり得る。T細胞は、CD8T細胞又はCD4T細胞であってよい。
本明細書に記載の少なくとも1つの宿主細胞を含む、細胞集団も提供される。細胞集団は、少なくとも1つの他の細胞、例えば、組み換え発現ベクターのいずれも含まない宿主細胞(例えば、T細胞)、又はT細胞以外の細胞(例えば、B細胞、マクロファージ、赤血球、好中球、肝細胞、内皮細胞、上皮細胞、筋細胞、脳細胞など)に加えて、記載される組み換え発現ベクターのいずれかを含む宿主細胞を含む不均質な集団であり得る。代替的に、細胞集団は、実質的に均質な集団であり得、この場合、その集団は、組み換え発現ベクターを含む宿主細胞を主に含む(例えば、本質的にそれらからなる)。集団はまた、細胞のクローン集団であり得、この場合、集団の全ての細胞が組み換え発現ベクターを含む単一の宿主細胞のクローンであり、そのため、集団の全ての細胞は組み換え発現ベクターを含む。一実施形態では、細胞集団は、本明細書に記載の組み換え発現ベクターを含む宿主細胞を含むクローン集団である。
医薬組成物/投与
本開示の実施形態では、CAR発現細胞は、組成物、例えば、CAR発現細胞及び医薬的に許容される担体を含む好適な医薬組成物で提供され得る。一態様では、本開示は、記載される1つ以上のCARを発現する有効量のリンパ球及び医薬的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物を提供する。本開示の医薬組成物は、CAR発現細胞、例えば、本明細書に記載の複数のCAR発現細胞を、1つ以上の医薬的又は生理学的に許容される担体、賦形剤、又は希釈剤と組み合わせて含み得る。本明細書で使用するとき、用語「と組み合わせて」は、2つ以上の治療剤を、混合物で一緒に、単剤として同時に、又は単剤として任意の順序で逐次、対象に投与することを意味する。
医薬的に許容される担体は、有効成分以外の、対象に対して無毒性である医薬組成物中の成分であり得る。
医薬的に許容される担体としては、緩衝液、賦形剤、安定剤、又は防腐剤が挙げられ得るが、これらに限定されない。医薬的に許容される担体の例は、生理学的に適合性の溶剤、分散媒体、コーティング剤、抗菌及び抗真菌剤、等張及び吸収遅延剤などであり、例えば、塩、緩衝液、抗酸化剤、糖類、水性若しくは非水性担体、防腐剤、湿潤剤、界面活性剤、若しくは乳化剤、又はこれらの組み合わせである。医薬組成物中の医薬的に許容される担体(単数又は複数)の量は、担体(単数又は複数)の活性及び製剤の所望の特性、例えば安定性及び/又は最小酸化に基づいて実験的に決定することができる。
かかる組成物は、酢酸、クエン酸、ギ酸、コハク酸、リン酸、炭酸、リンゴ酸、アスパラギン酸、ヒスチジン、ホウ酸、トリス緩衝液、HEPPSO、HEPES、中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などの緩衝液;グルコース、マンノース、スクロース又はデキストラン、マンニトールなどの炭水化物;タンパク質;グリシンなどのポリペプチド又はアミノ酸;抗酸化剤;EDTA又はグルタチオンなどのキレート剤;補助剤(例えば水酸化アルミニウム);抗菌剤及び抗真菌剤;並びに防腐剤を含み得る。
本開示の組成物は、非経口投与又は非経腸(non-parenteral)投与の様々な手段のために製剤化され得る。一実施形態では、組成物は、注入又は静脈内投与向けに製剤化され得る。本明細書に開示される組成物は、例えば、無菌液体調製物(例えば、等張水溶液、乳剤、懸濁液、分散液、又は粘性組成物)として提供することができ、これらは、望ましいpHに緩衝され得る。経口投与に好適な製剤としては、液体溶液、カプセル剤、サッシェ剤、タブレット剤、ドロップ剤、及びトローチ剤、適切な液体及び乳剤中の粉末液体懸濁液を挙げることができる。
医薬組成物に関して本明細書で使用するとき、「医薬的に許容される」という用語は、動物及び/又はヒトにおける使用について、連邦政府若しくは州政府の規制機関によって承認されているか、又は米国薬局方若しくは他の全般的に認められている薬局方に列挙されていることを意味する。
一態様では、本開示は、癌を有するか又は癌を有するリスクがある対象の治療のために、リンパ球注入を使用して、CARを発現する遺伝子改変T細胞を投与することに関する。少なくとも1つの実施形態では、自己リンパ球注入が治療に使用される。自己PBMCは、治療を必要とする対象から収集され、本明細書に記載され当該技術分野において既知の方法を使用して、T細胞を活性化及び増殖して、次いで対象に注入して戻される。
一態様では、本開示は、概して、癌を発症するリスクのある対象の治療に関する。本発明はまた、対象における化学療法及び/又は免疫療法により著しい免疫抑制がもたらされ、それによって癌を発症する対象のリスクを増加させる、悪性腫瘍又は自己免疫疾患を治療することも含む。一態様では、本開示は、癌を予防する方法を提供し、本方法は、記載される1つ以上のCARを発現するリンパ球の量を、それを必要とする対象に投与することを含む。
一態様では、本開示は、癌を有する対象を治療する方法を提供し、本方法は、記載される1つ以上のCARを発現する治療有効量のリンパ球を、それを必要とする対象に投与することを含み、それにより、リンパ球は対象における癌細胞の死滅を誘導又は調節する。
別の態様では、本開示は、癌を有する対象における腫瘍量を低減する方法を提供し、本方法は、記載される1つ以上のCARを発現する治療有効量のリンパ球を、それを必要とする対象に投与し、それにより、リンパ球は対象における癌細胞の殺傷を誘導することを含む。別の態様では、本開示は、癌を有する対象の生存期間を増加させる方法を提供し、本方法は、記載される1つ以上のCARを発現する治療有効量のリンパ球を、それを必要とする対象に投与することを含み、それにより、対象の生存期間が長くなる。概ね、CARを発現するリンパ球により、対象における癌細胞の死滅が誘導され、対象における腫瘍/癌細胞の低減又は根絶がもたらされる。標的とすることができる転移性病変を含む癌の非限定的なリストは、前立腺癌及び前立腺由来癌を含む。一実施形態では、対象において治療される癌は、前立腺癌である。いくつかの実施形態では、癌は、アンドロゲン受容体(AR)発現乳癌である。
一態様では、本明細書に記載の方法は、例えば、前立腺肥大、良性前立腺過形成(BPH)、及び診断された前立腺癌の非存在下での高PSAレベルなどの癌性状態に発達するリスクのある非癌性状態の治療に適用可能である。
一態様では、癌を有する対象を治療する方法であって、治療有効量のhK2抗原に結合する細胞外抗原結合ドメインを有するCARを発現するリンパ球を、それを必要としている対象に投与し、それにより、当該リンパ球が当該対象における癌細胞の殺傷を誘導することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、CARのうちの少なくとも1つは、配列番号46~61、82~85、及び205~220からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号46と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号46の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号47と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号47の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号48と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号48の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号49と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号49の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号50と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号50の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号51と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号51の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号52と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号52の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号53と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号53の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号54と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号54の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号55と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号55の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号56と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号56の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号57と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号57の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号58と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号58の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号59と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号59の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号60と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号60の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号61と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号61の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号82と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号82の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号83と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号83の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号84と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号84の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号85と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号85の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号205と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号205の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号206と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号206の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号207と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号207の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号208と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号208の配列を含む。いくつかの実施

形態では、CARは、配列番号209と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号209の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号210と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号210の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号211と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号211の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号212と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号212の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号213と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号213の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号214と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号214の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号215と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号215の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号216と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号216の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号217と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号217の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号218と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号218の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号219と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号219の配列を含む。いくつかの実施形態では、CARは、配列番号220と少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号220の配列を含む。
一態様では、癌細胞の標的化殺傷の方法が開示される。該方法は、癌細胞を、記載される1つ以上のCARを発現するリンパ球と接触させ、それにより、リンパ球は癌細胞の殺傷を誘導するこることを含む。標的とすることができる転移性癌細胞を含む癌細胞の非限定的なリストは、前立腺癌及びその組み合わせを含む。一実施形態では、癌細胞は、前立腺癌細胞である。
本開示の医薬組成物は、治療される(又は予防される)疾患に適切な方法で投与され得る。投与の量及び頻度は、対象の状態、対象の疾患のタイプと重症度などの要因によって判定されるが、適切な投与量は臨床試験によって判定され得る。
「治療する」又は「治療」という用語は、望まない生理的変化若しくは疾患を遅延する(減らす)こと、又は治療中に有益な若しくは所望の臨床転帰をもたらすことが目的である、療法的治療を指す。有益な若しくは所望の臨床転帰としては、検出可能又は検出不可能であるかどうかにかかわらず、症状の緩和、疾患の程度の軽減、安定した(すなわち、悪化しない)疾患状態、疾患の進行の遅延又は鈍化、疾患状態の改善又は緩和、及び/又は寛解(部分的又は全体的であるかどうかにかかわらず)が挙げられる。「治療」はまた、対象が治療を受けていない場合に予想される生存期間と比較して、生存期間を延長させることを意味し得る。治療を必要とする対象には、望まない生理的変化又は疾患をすでに有している対象、並びに生理的変化又は疾患を有しやすい傾向がある対象が含まれる。
疾患又は障害を「予防する」、「予防している」、「予防」、又は「予防処置」は、対象における障害の発生を防ぐことを意味する。本明細書において互換的に使用される「治療有効量」又は「有効量」は、必要な投薬量及び期間で、所望の治療結果を得るのに有効な量を指す。治療的に有効な量は、個体の病態、年齢、性別、及び体重などの要因、並びに個体において所望の応答を引き出す治療薬又は治療薬の組み合わせの能力によって様々であってよい。有効な治療剤又は治療剤の組み合わせの例示的な指標としては、例えば、患者の健康状態の改善、腫瘍量の低減、腫瘍の増殖の停止若しくは鈍化、及び/又は体内の他の場所への癌細胞の転移の不在(非存在)が含まれる。
本明細書で使用するとき、用語「被験体/対象」は、動物を指す。用語「対象」及び「患者」は、対象に関して本明細書で互換的に使用してよい。したがって、「対象」は、患者として、疾患、又は疾患の予防のために治療されるヒトを含む。本明細書に記載の方法は、任意の分類に属する動物対象を治療するために使用され得る。かかる動物の例としては、哺乳動物が挙げられる。哺乳動物としては、ネズミ目(マウス及びハムスターなど)の哺乳動物、及びウサギ目(ウサギなど)の哺乳動物が挙げられるが、これらに限定されない。哺乳動物は、ネコ科動物(ネコ)及びイヌ科動物(イヌ)を含む食肉目からのものであり得る。哺乳動物は、ウシ亜科動物(ウシ)及びイノシシ科動物(ブタ)を含む偶蹄目、又はウマ科動物(ウマ)を含む奇蹄目からのものであり得る。哺乳動物は、サル目、セボイド(Ceboid)目、若しくはシモイド(Simoid)目(サル)、又は真猿亜目(ヒト及び類人猿)であり得る。一実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。
治療有効量が示される場合、投与される本開示の組成物の正確な量は、対象の年齢、体重、腫瘍サイズ、感染又は転移の程度、及び状態における個々の差異を考慮して、医師によって判定され得る。概ね、本明細書に記載のT細胞を含む医薬組成物は、約10~約1010細胞/kg(体重)、場合によっては約10~約10細胞/kg(体重)の投与量(これらの範囲内の全ての整数値を含む)で投与してよいと述べることができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のT細胞を含む医薬組成物は、約10細胞/kg(体重)の投与量で投与され得る。T細胞組成物はまた、これらの投与量で複数回投与され得る。細胞は、免疫療法において一般的に知られている注入技術を使用することによって投与することができる(例えば、Rosenberg et al.,New Eng.J.of Med.319:1676,1988を参照)。
本発明の実施形態の文脈において有用な送達システムは、徐放性、遅延放出、及び持続性放出送達システムを含み得、T細胞組成物の送達が、治療される部位の感作の前に、そしてそれを引き起こすために十分な時間で行われるようにする。組成物は、他の療法薬又は療法と併用することができる。かかるシステムは、組成物の反復投与を回避することにより、対象及び医師に対する利便性を高めることができ、本発明における特定の組成物の実施形態に対して特に好適であり得る。
多くの種類の放出送達系が利用可能であり、当業者に既知である。これらには、ポリ(ラクチド-グリコリド)、コポリオキサレート、ポリエステルアミド、ポリオルトエステル、ポリカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、及びポリ無水物などのポリマー基本成分系が含まれる。前述の薬物含有ポリマーのマイクロカプセルは、例えば、米国特許第5,075,109号に記載されている。送達系としてはまた、コレステロール、コレステロールエステルなどのステロール、及び脂肪酸又はモノ-ジ-及びトリ-グリセリドなどの中性脂肪を含む脂質である非ポリマー系、シラスティック系、ペプチド基本成分系、ヒドロゲル放出系、ワックスコーティング、従来のバインダー及び賦形剤を使用した圧縮錠剤、部分的に融合したインプラントなども挙げられる。具体例としては、(a)米国特許第4,452,775号、同第4,667,014号、同第4,748,034号、及び同第5,239,660号に記載されているものなど、活性組成物がマトリックス内の形態で含有される浸食系、並びに(b)米国特許第3,854,480号及び同第3,832,253号に記載されているような活性成分が制御された速度でポリマーから浸透する拡散系が挙げられるが、これらに限定されない。加えて、ポンプベースのハードウェア送達システムが使用され得、そのうちのいくつかは埋め込み用に適合されている。
特定の態様では、活性化T細胞を対象に投与し、その後、血液を再採取し(又はアフェレーシスを実施し)、本開示によるT細胞を活性化し、これらの活性化及び増殖したT細胞を対象に再注入することが望ましい場合がある。このプロセスは、数週間ごとに複数回実行することができる。特定の態様では、T細胞は、10cc~400ccの採血から活性化され得る。特定の態様では、T細胞は、20cc、30cc、40cc、50cc、60cc、70cc、80cc、90cc、又は100ccの採血から活性化される。
CAR-T細胞及び組成物の投与は、任意の方法、例えば、非経口投与又は非経腸投与(エアロゾル吸入、注射、注入、経口摂取、輸血、埋め込み、又は移植を含む)によって実施することができる。例えば、本明細書に記載されるCAR-T細胞及び組成物は、経動脈、皮内、皮下、腫瘍内、髄内、節内、筋肉内経路で、静脈内(i.v.)注射によって、又は腹腔内経路で患者に投与され得る。一態様では、本開示の組成物は、i.v.注射によって投与される。一態様では、本開示の組成物は、皮内注射又は皮下注射によって対象に投与される。T細胞の組成物は、例えば、腫瘍、リンパ節、組織、器官、又は感染部位に直接注射することができる。
投与は、自己投与又は非自己投与であり得る。例えば、ヒトカリクレイン-2(例えば、hK2)特異的CARを発現する免疫応答性細胞は、1人の対象から得ることができ、同じ対象又は異なる適合性対象に投与することができる。本開示の末梢血由来T細胞、又は拡大T細胞(例えば、インビボ、エクスビボ、又はインビトロ由来)は、例えば、静脈内注射、局所注射、全身注射、カテーテル投与、又は非経口投与を介して投与することができる。
特定の実施形態では、対象は、対象となる細胞、例えば、T細胞を選択及び/又は単離するために、白血球をエクスビボで回収、濃縮、又は枯渇させる白血球搬出法を受けることができる。これらの単離T細胞は、当該技術分野において既知の方法によって増殖させることができ、本開示の1つ以上のCARコンストラクトが導入され得るように処理され、それによってCAR-T細胞を作製することができる。それを必要とする対象は、その後、高用量化学療法による標準的な治療と、それに続く末梢血幹細胞移植を受ける場合がある。特定の態様では、移植後又は移植と同時に、対象は、増殖したCAR-T細胞の注入を受ける。一態様では、増殖した細胞は、手術の前又は後に投与される。
悪性腫瘍を有する患者に投与される投与量は、治療される疾患を緩和するか、又は少なくとも部分的に阻止するために十分な量である(「治療有効量」)。対象に投与される上記治療の投与量は、治療される状態の正確な性質及び治療のレシピエントによって変化する。ヒト投与のための投与量の増減は、当該技術分野において概ね受け入れられている慣行に従って実行することができる。
本発明のCAR T細胞は、インビボにおけるT細胞拡大を受けることができ、血中及び骨髄中で長期間にわたって高レベルで持続するhK2特異的記憶細胞を得ることができる。いくつかの例では、対象に注入された本発明のCAR T細胞は、進行した化学療法抵抗性癌を有する対象において、インビボで癌細胞、例えば、前立腺癌細胞又はAR発現乳癌を排除することができる。
一実施形態では、例えばインビトロ転写を使用して本開示のCARをT細胞に導入し、対象(例えば、ヒト)に、本開示のCAR-T細胞を初回投与し、CAR-T細胞を1回以上後続投与し、当該1回以上の後続投与は、前回の投与後の15日未満後、例えば、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、又は2日後に投与される。一実施形態では、CAR-T細胞を対象(例えば、ヒト)に1週間に2回以上投与する、例えば、CAR-T細胞を1週間に2、3、又は4回投与する。一実施形態では、対象に、CAR-T細胞を1週間に2回以上投与し(例えば、1週間に2、3又は4回投与)(本明細書ではサイクルとも称される)、その後、CAR-T細胞投与がない週が続き、続いて、CAR-T細胞を1回以上の追加投与する(例えば、CAR-T細胞を1週間に2回以上投与)。別の実施形態では、対象に、CAR-T細胞を2サイクル以上で投与し、各サイクル間の時間は、10、9、8、7、6、5、4、又は3日未満である。一実施形態では、CAR-T細胞は、1週間に3回の投与のために、1日おきに投与される。一実施形態では、CAR-T細胞は、少なくとも2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、又はそれ以上の週にわたって投与される。
一実施形態では、投与は、1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、1ヶ月、5週間、6週間、7週間、2ヶ月、3ヶ月、4ヶ月、5ヶ月、6ヶ月、又はそれ以上後に繰り返され得る。また、治療過程を繰り返すことも、長期にわたる投与として可能である。繰り返し投与は、同一用量であっても異なる用量であってもよい。
CAR-T細胞は、例えば、1週間に1回、6ヶ月又はそれ以上の期間などの維持療法によって、本発明の方法で投与することができる。
一実施形態では、CAR-T細胞は、レンチウイルスなどのレンチウイルスウイルスベクターを使用して生成される。かかるウイルスベクターで生成されたCAR-T細胞は、安定したCAR発現を概ね有する。
一実施形態では、CAR-T細胞は、形質導入後4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15日間、CARベクターを一過性に発現する。CARの一過性発現は、RNA CARベクターの送達によって行われ得る。一実施形態では、CAR RNAは、エレクトロポレーションによってT細胞に形質導入される。
一過性のCAR療法(RNA形質導入によって生成されるものなど)の過程で患者が抗CAR抗体応答を生成するリスクが高い場合、CAR T注入の中断は、10~14日を超えて続けないことが必要である。
本明細書に記載のCAR発現細胞は、他の既知の薬剤及び療法と組み合わせて使用することができる。本明細書で使用するとき、「組み合わせて」投与されるとは、対象の治療の過程中に、2つ(又はそれ以上)の異なる治療が対象に送達されること、例えば、対象が癌と診断された後、その癌が治癒される若しくは排除される前、又は他の理由で治療が中止される前に、2つ以上の治療が送達されることを意味する。いくつかの実施形態では、1つの治療の送達は、第2の開始の送達が開始されるときにも依然として起こるため、投与に関して重複がある。これは、本明細書において「同時」又は「同時送達」と称されることがある。他の実施形態では、1つの治療の送達は、もう1つの治療の送達が開始される前に終了する。いずれの場合もいくつかの実施形態では、併用投与することにより、治療がより効果的になる。例えば、第2の治療はより効果的であり、例えば、同等の効果が、第2の治療を少なくして見られ、又は第2の治療が、第1の治療なく第2の治療が施される場合に見られるよりも、症状を大幅に軽減し、又は第1の治療と同様の状況が見られる。いくつかの実施形態では、送達は、障害に関連する症状又は他のパラメータの軽減が、他の治療なしで送達される1つの治療で観察される軽減よりも大きくなるようなものである。2つの治療の効果は、部分的に相加的であるか、全体的に相加的であるか、又は相加的を超えるものであり得る。送達は、送達された第1の治療の効果が、第2の送達時に依然として検出可能であるようなものであり得る。
一実施形態では、インターロイキン、並びにG-、M-及びGM-CSFなどのコロニー刺激因子、並びにインターフェロンを含むがこれらに限定されない、因子などの他の治療剤は、CAR-T細胞の前、後、又は同時に(一斉に)投与してよい。
本明細書に記載のCAR発現細胞及び少なくとも1つの追加の治療剤は、同時に、同じ若しくは別個の組成物で、又は逐次投与してよい。連続投与の場合、本明細書に記載のCAR発現細胞を最初に投与し、次に追加の薬剤を投与するか、又は投与の順序を逆にすることができる。
更なる実施形態では、本明細書に記載のCAR発現細胞は、治療レジメンにおいて手術、放射線、化学療法、免疫抑制剤、抗体、又は他の免疫破壊剤と組み合わせて使用してよい。別の実施形態では、本明細書に記載のCAR発現細胞は、抗アンドロゲン治療と組み合わせて使用してもよい。一実施形態では、対象に、CAR発現細胞の活性を増強する薬剤を投与することができる。例えば、一実施形態では、薬剤は、阻害分子を阻害する薬剤であり得る。
例示的実施形態の記述が以下に続く。
1. キメラ抗原受容体(CAR)であって、
(a)ヒトカリクレイン-2(hK2)抗原に特異的に結合するscFvを含む細胞外ドメインと、
(b)膜貫通ドメインと、
(c)少なくとも1つの共刺激ドメインを任意選択で含む細胞内シグナル伝達ドメインと、
を含む、CAR。
2. 実施形態1に記載のCARであって、
(d)CD8a-ヒンジ領域
を更に含み、
当該膜貫通ドメインが、CD8a膜貫通領域(CD8A-TM)ポリペプチドを含み;
当該細胞内シグナル伝達ドメインが、TNF受容体スーパーファミリーメンバー9(CD137)成分を含む共刺激ドメイン及びT細胞表面糖タンパク質CD3ゼータ鎖(CD3z)成分を含む一次シグナル伝達ドメインを含む、CAR。
3. 実施形態2に記載のCARであって、
(b)当該CD8a-ヒンジ領域が、配列番号25、269、270、271、若しくは272と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を含む、
(c)当該膜貫通ドメインが、配列番号26と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を含む、並びに/又は
(d)当該細胞内シグナル伝達ドメインが、配列番号27と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する共刺激ドメイン、及び配列番号28と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する一次シグナル伝達ドメインを含む、CAR。
4. 細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラ抗原受容体(CAR)であって、当該細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号64のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号314のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号315のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号311のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号309のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号310のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号311のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号65のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;又は
配列番号72のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号73のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号86のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号87のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号88のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号92のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号93のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号94のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号102のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号103のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号104のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号105のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号106のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号104のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号107のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号108のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号109のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号110のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号111のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号109のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号102のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号112のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号113のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号105のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号114のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号113のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号115のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号116のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号117のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号118のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号119のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号117のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
配列番号120のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号121のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号122のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;又は
配列番号123のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号124のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号122のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、
を含み、
当該細胞外抗原結合ドメインが、hK2抗原に結合する、CAR。
5. 細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラ抗原受容体(CAR)であって、当該細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号69のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号68のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号70のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号89のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号90のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号95のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号96のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号312のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号313のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号89のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号90のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号126のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号128のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号129のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号130のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号125のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号131のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号132のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号133のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号134のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号135のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号136のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号137のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号138のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;又は
配列番号97のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号127のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号139のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3、
を含み、
当該細胞外抗原結合ドメインが、hK2抗原に結合する、CAR。
6. 実施形態4に記載のCARであって、当該細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号69のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号68のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号70のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号89のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号90のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号95のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号96のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号312のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号313のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号89のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号90のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号126のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号128のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号129のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号130のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号125のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号131のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号132のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号133のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号134のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号135のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号136のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号137のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号138のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;又は
配列番号97のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号127のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号139のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3、
を更に含む、CAR。
7. 実施形態6に記載のCARであって、当該細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号64のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号69のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号65のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号68のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号70のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号65のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号126のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号65のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号69のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号65のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号126のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号314のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号315のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号311のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号312のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号313のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号102のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号103のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号104のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号128のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号129のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号130のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号107のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号108のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号109のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号125のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号131のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号132のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号102のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号112のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号113のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号133のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号134のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号135のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
配列番号115のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号116のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号117のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号136のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号137のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号138のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;又は
配列番号120のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号121のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号122のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号97のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号127のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号138のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む、CAR。
8. 当該細胞外抗原結合ドメインが、配列番号86のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号87のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号88のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号89のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号90のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む、実施形態6に記載のCAR。
9. 細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラ抗原受容体(CAR)であって、当該細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号1、2、3、74、75、147、148、149、150、151、152、及び318から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン(VL)、並びに/又は
配列番号4、5、6、76、77、140、141、142、143、144、145、146、及び317から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン(VH)、
を含み、
当該細胞外抗原結合ドメインが、ヒトカリクレイン-2(hK2)抗原に結合する、CAR。
10. 実施形態9に記載のCARであって、当該細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号1のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号4のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号2のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号4のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号3のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号6のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号3のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号4のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号2のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号6のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号1のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号6のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号3のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号2のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;又は
配列番号1のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号74のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号76のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号75のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号77のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号147のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号140のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号75のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号141のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号75のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号140のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号148のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号142のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号149のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号143のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号150のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号144のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号151のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号145のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号152のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号146のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号318のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号317のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、
を含む、CAR。
11. 当該細胞外抗原結合ドメインが、一本鎖可変断片(scFv)を含む、実施形態1~10のいずれかに記載のCAR。
12. 当該scFvが、当該軽鎖可変領域(VL)と当該重鎖可変領域(VH)との間にリンカーポリペプチドを含む、実施形態11に記載のCAR。
13. 当該リンカーポリペプチドが、配列番号7のアミノ酸配列を含む、実施形態12に記載のCAR。
14. 当該scFvが、配列番号8~23、169~184、及び340~343からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態11又は12に記載のCAR。
15. 当該細胞外抗原結合ドメインが、シグナルポリペプチドを含む、実施形態1~14に記載のいずれかに記載のCAR。
16. 当該シグナルポリペプチドが、配列番号24のアミノ酸配列を含む、実施形態15に記載のCAR。
17. 当該細胞内シグナル伝達ドメインが、TNF受容体スーパーファミリーメンバー9(CD137)成分、T細胞表面糖タンパク質CD3ゼータ鎖(CD3z)成分、表面抗原分類(CD27)成分、表面抗原分類スーパーファミリーメンバー成分、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチド成分を含む、実施形態4~16のいずれかに記載のCAR。
18. 当該CD137成分が、配列番号27のアミノ酸配列を含む、実施形態17に記載のCAR。
19. 当該CD3z成分が、配列番号28のアミノ酸配列を含む、実施形態17又は実施形態18に記載のCAR。
20. 当該細胞内シグナル伝達ドメインが、配列番号45のアミノ酸配列を含む、請求項17~19のいずれか1つに記載のCAR。
21. 当該膜貫通ドメインが、CD8a膜貫通領域(CD8a-TM)ポリペプチドを含む、実施形態2~20に記載のいずれかに記載のCAR。
22. 当該CD8a-TMポリペプチドが、配列番号26のアミノ酸配列を含む、実施形態21に記載のCAR。
23. 当該膜貫通ドメインを当該細胞外抗原結合ドメインに連結するヒンジ領域を更に含む、実施形態4~22に記載のいずれかに記載のCAR。
24. 当該ヒンジ領域が、CD8a-ヒンジ領域である、実施形態23に記載のCAR。
25. 当該CD8a-ヒンジ領域が、配列番号25、279、280、281、又は282のアミノ酸配列を含む、実施形態24に記載のCAR。
26. 当該細胞外抗原結合ドメインが、配列番号29~44、78~81、221~236、及び273~308からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態1~25に記載のいずれかに記載のCAR。
27. 配列番号46~61、82~85、及び205~220からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態1~26のいずれかに記載のCAR。
28. 請求項1~27のいずれかに記載のCARを発現する、単離リンパ球。
29. Tリンパ球である、実施形態28に記載の単離リンパ球。
30. ナチュラルキラー(NK)細胞である、実施形態28に記載の単離リンパ球。
31. 実施形態1~30のいずれかに記載のCARをコードしている、単離核酸分子。
32. 実施形態31に記載の核酸分子を含む、ベクター。
33. 実施形態31に記載の核酸分子を発現する、細胞。
34. 有効量の実施形態28~30のいずれかに記載のリンパ球を含む、医薬組成物。
35. 有効量の実施形態28~30のいずれかに記載のリンパ球と、医薬的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
36. 治療において使用するための、実施形態1~27のいずれかに記載のCAR、又は実施形態34若しくは35に記載の医薬組成物。
37. 癌を有する対象を治療する方法で使用するための、実施形態1~27のいずれかに記載のCAR、又は実施形態34若しくは35に記載の医薬組成物。
38. 癌を有する対象を治療する方法であって、
治療有効量の実施形態28~30のいずれかに記載のリンパ球を、それを必要としている対象に投与し、それにより、当該リンパ球が当該対象における癌細胞の殺傷を誘導することを含む、方法。
39. 当該癌が、前立腺癌又はアンドロゲン受容体発現乳癌である、実施形態38に記載の方法、又は実施形態37に記載の方法で使用するためのCAR若しくは医薬組成物。
40. 当該癌が、前立腺癌である、実施形態38に記載の方法、又は実施形態37に記載の方法で使用するためのCAR若しくは医薬組成物。
41. 当該癌が、アンドロゲン受容体発現乳癌である、実施形態38に記載の方法、又は実施形態37に記載の方法で使用するためのCAR若しくは医薬組成物。
42. 癌細胞の標的化殺傷の方法であって、
当該癌細胞を実施形態28~30のいずれかに記載のリンパ球と接触させ、それにより、
当該リンパ球が、当該癌細胞の殺傷を誘導することを含む、方法。
43. 当該癌細胞が、前立腺癌細胞又はアンドロゲン受容体発現乳癌細胞である、実施形態42に記載の方法。
44. 対象における癌の存在を検出する方法であって、
(c)当該対象から得られた細胞サンプルを実施形態1~27のいずれか1つに記載のCARと接触させ、それにより、CAR-細胞複合体を形成することと、
(d)当該複合体を検出することと、ここで、当該複合体の検出が、当該対象における癌の存在を示す、
を含む、方法。
好ましくは、実施形態は、in vitroで実施される。
45. 当該膜貫通ドメインが、配列番号26のアミノ酸配列を含むCD8a-TMポリペプチドを含む、実施形態1に記載のCAR。
46. 当該膜貫通ドメインが、配列番号26のアミノ酸配列を含むCD8a-TMポリペプチドを含む、実施形態2に記載のCAR。
47. 当該CD8aヒンジ領域が、配列番号25のアミノ酸配列を含む、実施形態2又は46に記載のCAR。
48. 当該CD137成分が、配列番号27のアミノ酸配列を含む、実施形態2又は47に記載のCAR。
49. 当該CD3z成分が、配列番号28のアミノ酸配列を含む、実施形態2、47、又は48に記載のCAR。
50. 実施形態3に記載のCARであって、
(b)CD8a-ヒンジ領域が、配列番号25、269、270、271、若しくは272と少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、若しくは99%同一であるアミノ酸配列を含み、好ましくは、当該CD8a-ヒンジ領域が、配列番号25と少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、若しくは99%同一であるアミノ酸配列を含む;
(c)当該膜貫通ドメインが、配列番号26と少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、若しくは99%同一であるアミノ酸配列を含む;並びに/又は
(d)当該細胞内シグナル伝達ドメインが、配列番号27と少なくともと少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、若しくは99%同一であるアミノ酸配列を有する共刺激ドメイン、及び配列番号28と少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、若しくは99%同一であるアミノ酸配列を有する一次シグナル伝達ドメインを含む、CAR。
51. 当該CD8aヒンジ領域が、配列番号25のアミノ酸配列を含む、実施形態3に記載のCAR。
52. 当該CD8a-TMポリペプチドが、配列番号26のアミノ酸配列を含む、実施形態3に記載のCAR。
53. 当該CD137成分が、配列番号27のアミノ酸配列を含む、実施形態3に記載のCAR。
54. 当該CD3z成分が、配列番号28のアミノ酸配列を含む、実施形態3に記載のCAR。
55. 実施形態3に記載のCARであって、
(b)当該CD8aヒンジ領域が、配列番号25のアミノ酸配列を含み、
(c)当該膜貫通ドメインが、配列番号26のアミノ酸配列を含み、
(d)当該細胞内シグナル伝達ドメインが、配列番号27のアミノ酸配列を有する共刺激ドメイン及び配列番号28のアミノ酸配列を有する一次シグナル伝達ドメインを含む、CAR。
56. 当該細胞外抗原結合ドメインが、配列番号29~44、78~81、221~236、及び273~308からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態45~55に記載に記載のCAR。
57. 配列番号46~61、82~85、及び205~220からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態45~55のいずれかに記載のCAR。
58. 請求項45~55のいずれかに記載のCARを発現する、単離リンパ球。
59. Tリンパ球である、実施形態58に記載の単離リンパ球。
60. ナチュラルキラー(NK)細胞である、実施形態58に記載の単離リンパ球。
61. 実施形態45~55のいずれかに記載のCARをコードしている、単離核酸分子。
62. 実施形態61に記載の核酸分子を含む、ベクター。
63. 実施形態61に記載の核酸分子を発現する、細胞。
64. 有効量の実施形態58~60のいずれかに記載のリンパ球を含む、医薬組成物。
65. 有効量の実施形態58~60のいずれかに記載のリンパ球と、医薬的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
66. 治療において使用するための、実施形態45~55のいずれかに記載のCAR、又は実施形態64若しくは65に記載の医薬組成物。
67. 癌を有する対象を治療する方法で使用するための、実施形態45~55のいずれかに記載のCAR、又は実施形態64若しくは65に記載の医薬組成物。
68. 癌を有する対象を治療する方法であって、
治療有効量の実施形態58~60のいずれかに記載のリンパ球を、それを必要としている対象に投与し、それにより、当該リンパ球が当該対象における癌細胞の殺傷を誘導することを含む、方法。
69. 当該癌が、前立腺癌又はアンドロゲン受容体発現乳癌である、実施形態68に記載の方法、又は実施形態67に記載の方法で使用するためのCAR若しくは医薬組成物。
70. 当該癌が、前立腺癌である、実施形態68に記載の方法、又は実施形態67に記載の方法で使用するためのCAR若しくは医薬組成物。
71. 当該癌が、アンドロゲン受容体発現乳癌である、実施形態68に記載の方法、又は実施形態67に記載の方法で使用するためのCAR若しくは医薬組成物。
72. 癌細胞の標的化殺傷の方法であって、
当該癌細胞を実施形態58~60のいずれかに記載のリンパ球と接触させ、それにより、
当該リンパ球が、当該癌細胞の殺傷を誘導することを含む、方法。
73. 当該癌細胞が、前立腺癌細胞又はアンドロゲン受容体発現乳癌細胞である、実施形態72に記載の方法。
74. 対象における癌の存在を検出する方法であって、
(a)当該対象から得られた細胞サンプルを実施形態45~55のいずれか1つに記載のCARと接触させ、それにより、CAR-細胞複合体を形成することと、
(b)当該複合体を検出することと、ここで、当該複合体の検出が、当該対象における癌の存在を示す、
を含む、方法。
好ましくは、実施形態は、in vitroで実施される。
本明細書にて開示した実施形態のいくつかを更に説明するために、以下の実施例を提供する。これらの実施例は、例示を目的とするものであって、本開示の実施形態を限定するものではない。
実施例1:11B6 scFvを有するhK2 scFv CARの構築及び発現
hK2標的化抗体11B6に由来するscFvを含むhK2 CARコンストラクトを、図1Aに示すように構築した。Dynabeads Human T-Expander CD3/CD28で刺激したT細胞をエレクトロポレーションに供し、次いで、OPTI-MEM(Invitrogen)で3回洗浄し、50E6/mLの最終濃度でOPTI-MEMに再懸濁させた。続いて、0.1mLの細胞(5E6)を、RNAをコードしているIVT CAR10ugと混合し、「パルス」ボタンを1回押すことによって、BTX ECM830(Harvard Apparatus BTX,Holliston,MA,USA)を使用して2mmギャップキュベット(Harvard Apparatus BTX,Holliston,MA,USA)内でエレクトロポレーションした。(設定:500ボルト、750μsecパルス長及び単一(1)パルス、100mSec間隔)エレクトロポレーション後、T細胞を6ウェルプレートに移し、直ちに37℃のインキュベーターに戻した。初代ヒトT細胞に、mRNAなし(モック)で、又はhK2 scFv CAR若しくは無関係の対照CARのいずれかを発現するmRNA10μgをエレクトロポレーションした。エレクトロポレーションの24時間後、2μg/mLのビオチン化Lタンパク質及びストレプトアビジンコンジュゲートしたPE(図1B)、又はビオチン化hK2(1μg/mL)及びストレプトアビジンコンジュゲートしたPE(図1C)で染色した後に、フローサイトメトリーによってCAR表面発現を測定した。
エレクトロポレーションの24時間後、T細胞をカウントした。1E5T個の細胞を各々収集した。200μL/ウェルのマイクロタイタープレート用FACSバッファを使用して、細胞をFACSバッファで2回洗浄し、上清を廃棄した。全てのウェルを、タンパク質Lを含有する染色バッファ(Genscript、カタログ番号M000971:500;2ug/mL)100μLで染色し、光から保護しながら、4℃で少なくとも30分間インキュベートした。150μL/ウェルのマイクロタイタープレート用FACSバッファを使用して、FACSバッファを2回添加することによって細胞を洗浄した。室温で4分間、400×gで遠心分離を行った。次いで、上清を廃棄した。全てのウェルを100μLのストレプトアビジン-R-フィコエリトリン(SA-PE、1:250)及びLive/dead Fixable Near-IR Dead Cell Stain色素(1:1000)で染色し、光から保護しながら4℃で少なくとも30分間インキュベートした。次いで、細胞のフローサイトメトリー分析の準備を整えた。
図1Bに示されるように、タンパク質L染色は、HK2 HL及びLH CARの両方で観察されたが(それぞれ41.4%及び66.3%)、mRNAエレクトロポレーションを伴わないT細胞である対照T細胞ではバックグラウンド染色(約5.5%)しかみられなかった。図1Cに示されるように、初代ヒトT細胞におけるCAR発現は、J&J内部ビオチン標識組換えHK2タンパク質(ビオチン-Hk2タンパク質、ロット:20188010、CBIS ID:KL2W12.CB.003、2.4mg/mL、1mMベンズアミジン)、続いてSA-PEを介しても検出することができた。図示されるように、T細胞は、フローサイトメトリーによって測定したとき、HK2 LH CAR(82.7%)を効率的に発現することができるが、mRNAエレクトロポレーションを伴わないT細胞である対照T細胞又は未開示の対照CAR(非HK2特異的)ではバックグラウンド染色(約1.73%又は1.19%)しかみられなかった。結果は、代表的なドナーT細胞について示されており、複数のドナーで再現可能であった(少なくともn=3)。+ビオチン標識(EZ-Link(商標)Sulfo-NHS-LC-Biotin,Thermo Fisher Scientificカタログ番号:21327)。
実施例2:hK2 CAR-T細胞による腫瘍細胞の殺傷
フローサイトメーターを使用したCell Trace Violet(CTV、Thermo Fisher Scientificカタログ番号:C34557)ベースの細胞傷害性アッセイのための共培養を以下のように行った。
T細胞を以下のように調製した。EPの24時間後、T細胞をカウントし、最も濃縮された/所望のE:Tに必要な濃度で再懸濁させた。T細胞を100μL/ウェルのアッセイで添加した(2×10細胞/mL、100μLを10:1のE:T比、すなわち2E4個の標的細胞あたり2E5T個の細胞でプレーティング)。10:1のE:T濃度のストック(原液)を作製し、完全T細胞培地(Optimizerw/CTS、5%ヒト血清、1% GlutaMax)で0.3125:1になるように2倍連続希釈を行った。96ウェルの丸底組織培養処理プレートを使用して、T細胞をトリプリケートでプレーティングした(100uL/ウェル)。
CTV標識標的細胞を以下のように調製した。20μLのDMSOをCTV染色溶液のバイアルに添加した。この原液を、5μMの染色溶液にするために20mLのPBS(37℃に加温)に希釈した。10E6個の腫瘍細胞を収集し、PBSで2回洗浄し、4E6/mL(2.5mL)に再懸濁させた。等体積(2.5mL)のCTV染色溶液を添加した。細胞を37℃のインキュベーター内で20分間インキュベートした。40mLのPRMI+20%FBSを細胞に添加して、任意の非結合色素を吸収させた。細胞を5分時間インキュベートした。細胞を400×gで5分間遠心分離した。細胞ペレットを、予熱しておいたRPMI+10%FBS培地に再懸濁させた。その間に、T細胞を上記の所望のE/T比で播種した。腫瘍細胞株Vcap(HK2+)及びDU145(HK2-)を再度カウントし、次いで、細胞をデュープリケートで2E5/mL及び100uLに再懸濁させた。平底96ウェルプレートにおいて、細胞を、標識された腫瘍細胞株とコインキュベートした。
フローサイトメーターを使用して以下の通り細胞傷害性アッセイを行った。20時間の共培養後、全ての細胞をU底96ウェルプレートに移し、洗浄した。20時間の共培養後、全ての細胞を平底96ウェルプレートから回収し、U底96ウェルプレートに移し、次いで、洗浄した。30μLの0.25%トリプシンを全てのウェルに添加し、37℃のインキュベーターで5分間インキュベートした。5分後、全ての腫瘍細胞をU底96ウェルプレートに回収した。細胞を、400×gで5分間、2回遠心分離及び洗浄した。次いで、細胞ペレットを、希釈した(1:1000)LIVE/DEAD(商標)Fixable Near-IR染色色素(100μL)に再懸濁させた。細胞を4℃で30分間インキュベートし、400×gで5分間細胞を遠心分離することによって、FACSバッファで2回洗浄した。洗浄後、100μLのBD Cytofix(商標)固定バッファ(50uLのFACSバッファ+50uLの固定バッファ)を使用して、全ての細胞を10分間固定した。細胞を、400×gで5分間、1回遠心分離及び洗浄した。細胞ペレットをFACSバッファに再懸濁させた。染色されたサンプルを、インキュベーション期間の終了後にマルチカラーフローサイトメトリーによって分析した。
以下の式を使用して、細胞傷害活性百分率を計算した:
特異的死%=Near IR%+CTV+(死)細胞-自然Near IR%+CTV+/(100%-自然Near IR%+CTV+(死)細胞)×100%。
一過性トランスフェクションの24時間後、標的細胞(Vcap及びDU145)をCell Trace Violet(CTV)蛍光色素で標識し、次いで、hK2 CAR-T細胞と共培養した。モックT細胞が、陰性エフェクター対照として機能した。細胞を、図2に示すように、指定のエフェクター対標的細胞(E/T)比で20時間共培養した。死滅パーセントは、CAR-T細胞なしで培養された生存標的の数に対する共培養物中に残存する生存(生存性色素陰性)標的(CTV陽性)細胞の絶対数の比率である。図示されるように、10:1~0.3125:1のE/T比で、hK2 CAR LH T細胞は、hK2(+)ヒト前立腺癌細胞株VCap細胞を特異的かつ効率的に溶解したが、K2(-)DU145細胞は溶解せず、一方、モック又はhK2 HL CARであるT細胞ではバックグラウンド細胞傷害性しかみられなかった。
標的細胞の免疫細胞媒介細胞溶解の効力アッセイとして、リアルタイム細胞分析システムとしてのxCELLigenceを用いて、hK2特異的CAR-T細胞をリアルタイム細胞傷害性についても試験した。
50μLの標的癌細胞培養培地を96ウェルE-プレート(ACEA Biosciences)の各ウェルに添加し、バックグラウンドインピーダンスを測定し、細胞指数として表した。次いで、接着標的細胞VCap及びDU145を解離させ、100μLの体積で、5E4(VCap)、5E3(DU145)細胞/Eプレートのウェルの密度で播種し、電極表面上に受動的に接着させた。播種後、Eプレートを層流フード内において周囲温度で30分間保持し、次いで、細胞培養インキュベーター内のRTCA MP機器に移した。実験期間(96時間)全体にわたって15分間隔でデータ記録を直ちに開始した。
処理を適用した時(癌細胞播種の24時間後)に、データ取得を一時停止し、各ウェルから50μLの培地を除去し、エフェクターCART細胞を50μLの体積において異なるエフェクター対標的(E:T)比で添加した。HK2 CAR+及び未開示の対照CAR(非HK2特異的)T細胞を再懸濁させた。次いで、96ウェルプレートにおいてデュープリケートで2倍希釈を行った(5:1~0.156:1のE/T比)。標的+モックエフェクター対照(RNAエレクトロポレーションT細胞なし)も標的細胞に添加した。
標的細胞VCap(5E4)及びDU145(5E3)を、異なるE/T比でおよそ72時間、モック、10μgのmRNAエレクトロポレーション(トランスフェクションの24時間後)hK2 11B6 CAR LH、又は対照CAR-T細胞と共にインキュベートした。VCap及びDU145についての正規化された細胞指数(CI)プロットを、それぞれ図3A及び図3Bに示す。単独で播種された場合、標的細胞はプレートに接着し、増殖して、CIの読み出しを増加させる。T細胞を標的細胞に添加すると、hK2 CAR及び対照CAR-T細胞は、細胞溶解、及びその後のCIの進行的減少を引き起こす。
実施例3:hK2 CAR-Tのサイトカイン産生
理論に束縛されるものではないが、細胞傷害性T細胞によって産生されたIFN-γは、腫瘍の免疫監視作用を発揮させることができ、これにより、増殖を直接阻害し、インビボ及びインビトロにおいて一部の悪性腫瘍のアポトーシスを誘導することができる。hK2 CAR改変ヒトT細胞がhK2(+)腫瘍細胞によって認識され、活性化され得るかどうかを判定するために、実施例2及び図3A~3Bに記載の通り、xCELLigenceベースの殺傷アッセイから上清を回収した。約70時間の共培養後、上清を回収し、ELISAキット(ヒトIFN-γELISA MAX(商標)Deluxe、BioLegend、カタログ番号430106)と共に提供された指示書に従って、ELISAによってアッセイした。
抗原刺激されたCAR-T細胞のTh1サイトカインインターフェロン-γ(IFN-γ)産生を、図4に示す。hK2 CAR LH及び対照CAR改変T細胞は、hK2発現VCap細胞との共培養中にE:T比依存的にIFN-γを分泌するが、hK2-陰性DU145細胞では分泌しない。未開示の対照CARは、抗原発現レベルがhK2よりもはるかに高いことから、はるかに多量のIFN-γを分泌した。デュープリケートの培養からの平均IFN-γ濃度±SD(pg/mL)を示す。
実施例4:熱安定化scFv CARコンストラクトの作製及び特性評価
Vaeisaenen et al(Clinical Chemistry 50:9,1607-1617(2004)により、組換えHK2でBALB/cマウスを免疫することによって抗HK2抗体クローン11B6を同定した。Singh et al.,MAbs.2015;7(4):778-91に記載の方法によって、マウス由来クローン11B6のヒト化を実施した。scFvとしての野生型11B6の外部ドメインは、高温(55℃)で結合を保持しなかったので、scFvとしてヒト化を実施し、ヒト化バリアントからの大腸菌で発現した上清を60℃で15分間インキュベートし、続いて、ELISAを使用して組み換えHK2への結合についてスクリーニングした。
抗体11B6に由来する熱安定化scFVを含有する10個のhK2標的化するCARを作製した。
熱安定化scFvを含有する10個のCARコンストラクトの説明及び配列番号を表1に提供する。
Figure 2022535150000001
Jurkat-Lucia(商標)NFAT細胞(JNL)を介して抗原非依存的に活性化する異なるscFvをベースとするCARを同定するため。活性化T細胞の核因子(NFAT)は、最初に免疫細胞の調節因子として同定された転写因子のファミリーである。T細胞が活性化されると、カルシウムが流入し、NFATのN末端でセリンリッチな核局在化シグナルを脱リン酸化するカルシニューリンが活性化され、NFATが核内移行する。理論に束縛されることを望むものではないが、scFvクラスタリングによるトニックシグナル伝達は、JNLレポーター細胞株においてNFATプロモーターによって駆動されるホタルルシフェラーゼによって後で検出することができた。
JNL細胞、すなわち、シグナル伝達応答性NFATプロモーターによって駆動されるルシフェラーゼ遺伝子を含有するJurkat細胞に、様々なCARコンストラクトを形質導入した。CARコンストラクトとその同種細胞抗原(標的細胞上のhK2)との間の結合によって、JNL細胞においてルシフェラーゼが発現する。
レンチウイルスの形質導入を以下のように行った。JNL細胞を収集し、1E6/mLになるように再懸濁させた。500μLのJNL細胞及びレンチウイルスウイルスをMOI3で添加し、上下にピペッティングすることによって混合した。混合物を37℃のインキュベーターで24時間インキュベートした。500μLのJNL培地を各ウェルに添加し、37℃のインキュベーターで培養を続けた。4日目に細胞をT25フラスコに移した。5~6日目に、形質導入の検証を行った。150μLの細胞を収集して、使用している特定のCARに適切な検出試薬(例えば、hk2 CARを検出するためにはビオチン-hk2タンパク質を使用)を介してCAR発現を調べた。凍結又はアッセイにおいて使用するのに十分な細胞が得られるまで、JNL細胞を5×10/mLで維持した。
熱安定化scFv CARを、抗原依存性活性についてJNLレポーターアッセイにおいて評価した。シグナル伝達応答性NFATプロモーターによって駆動されるルシフェラーゼ遺伝子を含有するJurkat細胞(JNL細胞と呼ばれる)に、様々なhK2 CARコンストラクトを形質導入した。このアッセイは、以下のように行った。2:1のエフェクター対標的比で、標的細胞株との共培養を実施した。JNL細胞をスピンダウンして、培地中の任意の分泌されたルシフェラーゼを除去し、次いで、JNL細胞を4×10/mLで新鮮培地に再懸濁させた。細胞を収集した。次いで、抗原陽性及び抗原陰性の標的細胞株の両方を2E5/mLで調製した。100μLのJNLを100μLの標的細胞に添加した。JNLのみの対照については、標的細胞の代わりに100μLの培地を添加した。陽性対照の場合、JNL細胞のみ又はCAR JNL細胞を1×細胞刺激カクテルに添加し、37℃のインキュベーター内で24時間インキュベートした。150μLの上清を96ウェルプレートに収集し、遠心分離して細胞を除去した。100μLの上清をプレートからソリッドボトム黒色プレートに移した。次いで、100μLのQUANTI-luc lucia検出試薬を添加した。Envisionマルチプレートリーダーで読み取る前に、混合物を室温で5分間インキュベートした。
ビオチン化hK2、続いて、ストレプトアビジンコンジュゲートしたPEによってCAR発現を判定し、結果を図5Aに示す。形質導入されたJNL細胞におけるCAR発現は、選択されたクローンの全てについて確認され、細胞の60~75%が異なるクローン及び親11B6 CARにわたって検出可能な発現を示した。指定のCARクローンを含有するJNL細胞及び非形質導入JNL細胞(UTD)を標的細胞株(VCap又はDU145細胞)と共培養し、発光強度としてルシフェラーゼ活性を測定した。発光強度が抗原発現細胞の存在下でUTD細胞のレベルを1.5倍上回った場合、クローンは活性であるとみなした。
CARコンストラクトとその同種細胞抗原(標的細胞上のhK2)との間の結合によって、JNL細胞においてルシフェラーゼが発現する(図5B)。指定のCARクローンを含有するJNL細胞及びJNL細胞(非形質導入、以後「UTD」)を標的細胞株(VCap又はDU145細胞)と共培養し、発光強度としてルシフェラーゼ活性を測定した。発光強度が抗原発現細胞の存在下でUTD細胞のレベルを1.5倍上回った場合、クローンは活性であるとみなした。10個のクローン全て並びに親11B6 CAR HL及びLHについて、抗原依存性活性化はみられなかった。
実施例5:T細胞上の熱安定化scFv CARの発現
熱安定化11B6 CAR T細胞の機能を評価し、最高位の候補コンストラクトを選定するために、レンチウイルス形質導入を使用して、熱安定化11B6及び親scFvをベースとするCAR-T細胞を作製した。感染多重度(MOI)3で、初代ヒトT細胞に熱安定化11B6及び親scFvベースのCARレンチウイルスを形質導入した。形質導入の14日後に、ビオチン化hK2(1μg/mL)、続いて、ストレプトアビジンコンジュゲートしたPEによってCAR発現を判定した。
実験プロトコルは以下の通りである。
レンチウイルスパッケージングを行った。150mmあたり14E6個のLenti-X(商標)293T細胞を、丸底のCorning(商標)BioCoat(商標)コラーゲンIでコーティングされた培養皿に播種し、DMEM+10%FBS培地を使用して37℃で一晩インキュベートした。
80~85%の理想的な培養密度のLenti-X(商標)293T細胞を用いて、以下を調製した。培養培地を21mLの293T成長培地で置き換えた。リポフェクタミン2000を室温で希釈し、OptiMEMを平衡化した。希釈したリポフェクタミン2000を、混合プラスミドに滴下して添加し、十分に混合した。混合物を室温で25分間インキュベートした。トランスフェクション混合物をLenti-X293T細胞に滴下し、プレートを穏やかに旋回させて混合した。混合物を37℃のインキュベーター内でインキュベートした。トランスフェクションの24時間後及び48時間後にレンチウイルスを収集した。上記試薬を表2にまとめる。
Figure 2022535150000002
レンチウイルスの濃縮を以下のように行った。レンチウイルス含有上清を収集し、0.45μmの酢酸セルロースフィルターを通して濾過する前に過剰な293T細胞が辺りを浮遊している場合、500×gで10分間遠心分離した。上清を滅菌容器に移し、1/3の体積のLenti-X濃縮物(Clontech、カタログ番号631232)と合わせ、穏やかに反転させることによって混合した。混合物を4℃で一晩インキュベートした。サンプルを、1,500×gで45分間、4℃で遠心分離したところ、遠心分離後に白色ペレットが見えた。ペレットを乱すことなく上清を慎重に除去した。1,500×gで短時間遠心分離した後、残留上清をピペットで除去した。冷T細胞成長を使用して、ペレットを元の体積の1/10に穏やかに再懸濁させた。ウイルスを200μLに分注し、直ちに-80℃で保存した。
ウイルス力価測定は、以下のように行った。対数期のSupT1を完全RPMIで成長させた。1ウェルあたり100μL、20,000個/mLのSupT1細胞を、平坦な96ウェルプレートに播種した。次いで、ウイルス力価測定を96ウェル丸底プレートで行った)。100μLの培地をプレートの全てのウェルに添加した。ウイルスのアリコートを、手で-80℃の冷凍庫から解凍した。アリコートを上下にピペッティングして十分に混合し、50μLのウイルスを最初のウェルに添加し、続いて、十分に混合した。50μLのウイルスを次のウェルにピペッティングして入れることによって、連続1:3希釈を行った。次いで、50μLの培地を、一次Abのみ、二次Abのみ、及び非形質導入対照に添加した。各50μLを力価測定プレートからアッセイプレート内の100μLのSupT1細胞にマルチチャネルピペットで移し、37℃で一晩インキュベートした。100μLの予熱した培地を各サンプルに添加し、更に2日間インキュベートした。フローサイトメトリーによって形質導入効率を求めた。サンプルを丸底96ウェルプレートに移し、1400RPMで3分間回転させた。上清を素早く廃棄し、続いてブロッティングして、フード内の過剰な培地を除去した。150μLのFACSバッファで洗浄を繰り返した。次いで、CARコンストラクトに適した染色プロトコルを行った。フローサイトメトリー分析の前に、150μLのFACSバッファにサンプルを再懸濁させた。
ウイルス力価の計算:力価=(CAR陽性%/100)×2×10×20×希釈倍数
複数コピーの統合を除外するために、20%に最も近い形質導入の力価が使用される。
T細胞活性化、形質導入、及び増殖を以下のように行った。ナイーブT細胞のバイアルを水浴中で解凍し、9mLの予熱されたT細胞培地(TCM CTS OpTmizer T Cell Expansion SFM+5%ヒト血清+IL-2 100IU/mL)を含有する15mLのコニカルチューブに滴下した。クライオバイアルを1mLの培地で洗浄して最大数を回収し、室温で8分間、300×gで回転させた。ペレットを新鮮な10mLのTCMに再懸濁させ、カウントし、1mLあたり1E6個の細胞になるように再懸濁させた。24ウェルプレートに、1ウェル当たり5E5個の細胞を添加した。総体積が1ウェルあたり1mLになるように、1ウェルあたり1.5×10個のCD3/CD28ビーズを500μLの体積に添加した。活性化の24時間後、ウイルスを室温で解凍した。ウイルスを感染多重度(MOI)3で添加し、穏やかに旋回させて混合し、インキュベーターでプレートに戻した。(レンチウイルス機能力価は、SupT1力価アッセイで以前に求めた。)ウイルスが添加されていない非形質導入(UTD)のために1つのウェルを確保した。
形質導入の24時間後、1mLのTCMを各ウェルに添加した。この時点(2日目)以降にペニシリン-ストレプトマイシンを添加した。3~5日目に、2mLの細胞につき4mLのTCMを添加し、T25組織培養処理フラスコに移した。フラスコをインキュベーター内に水平に配置した(3日目)。T細胞培養のために等体積のTCMを添加した(4日目)。5~14日目に、細胞を1日おきに確認し、生存率、サイズ、及び総細胞数を記録した。1mLあたり100万個の細胞になるように細胞密度を調整した。理想的な収集時間はドナー依存性であり、細胞サイズ及び拡大の倍率によって決定される。概ね、100~200倍の拡大で、MOXIフローセルカウンターに基づいて、細胞サイズが8μm未満であったときに細胞を冷凍した。
レンチウイルス形質導入効率を、以下のように収集日に確認した。培養物を十分に混合した。100μLのT細胞を、100μLのFACSバッファの入った96ウェルプレートの対応するウェルに収集し、混合し、室温で3分間、1300RPMで回転させた。細胞を200μLのFACSバッファに再懸濁させ、4℃で遠心分離を繰り返した。
細胞を100μLのビオチン標識hK2(1μg/mL、FACSバッファで希釈)に再懸濁させ、氷上で30分間インキュベートした。100μLのFACSバッファを添加し、4℃でスピン洗浄した。更に200μLのFACSバッファを添加した後、スピン洗浄を繰り返した。二次抗体SA-PE(1:250)、live dead fixable stain(1:500)、αCD3、αCD4、及びαCD8抗体を含有するマスター溶液100μLでの染色を、氷上で30分間行った。100μLのFACSバッファを添加し、4℃でスピン洗浄し、廃棄し、4℃でスピン洗浄する前に200μLのFACSバッファに再懸濁させた。フローサイトメトリーによって分析する前に、サンプルを100μLのFACSバッファに再懸濁させた。
細胞の収集及び冷凍は以下のように行った。最終細胞数を求めた。培養物を収集し、300xgで10分間、室温で遠心分離した。50mLのコニカルチューブに適合するように、培養物をより少ない体積の培地に再懸濁させた。チューブを4℃で10分間マグネットに入れ、「脱ビーズ」した。細胞をチューブから穏やかに移してビーズ/マグネットの摂動を最小化し、正確な体積を記録した。カウントを繰り返した。遠心分離を300×gで10分間行い、上清を廃棄した。冷却容器内のCS-10 CryoStor(登録商標)細胞冷凍保存培地中で細胞を冷凍した。直ちに容器を-80℃に24~48時間移した後、液体窒素中で永続的に保存した。結果を図6に示し、形質導入T細胞の表面上のhK2 CAR発現を確認する。分析した10個の熱安定化クローン及び親11B6 HL及びLHの各々によって検出されたhK2 CAR+T細胞の百分率(陽性%)の要約を提供する。図示されるように、異なるクローンは、17.9%~42.7%の範囲の異なるCAR発現レベルを有する。全てのCAR T+細胞を、後続の機能アッセイのために等しいCAR+T細胞に対して正規化した。
実施例6:11B6熱安定化scFv CAR-T細胞による腫瘍細胞の殺傷
11B6熱安定化scFv CAR-T細胞を、抗原依存性細胞傷害性についてリアルタイムIncuCyte殺傷アッセイで評価した。熱安定化hK2 CAR-T細胞及び親11B6 CAR-T細胞を、VCaP細胞(図7A)及びPC3細胞(図7B)と88時間コインキュベートした。エフェクター対標的(E/T)比は、CAR発現データに基づいて計算した(図6)。標的細胞は、リアルタイムでIncuCyteイメージングシステムによって測定された赤色核色素を安定的に発現していた。腫瘍細胞成長阻害(%)=(初期生存標的細胞数-現時点の生存標的細胞数)/初期生存細胞数×100(%)。
また、scFv CAR-T細胞を、抗原依存性細胞傷害性についてリアルタイムIncuCyte腫瘍殺傷アッセイで評価した。熱安定化hK2 CAR-T細胞及び親11B6 CAR-T細胞を、CAR発現データに基づいて計算した1:1又は0.5:1のエフェクター:標的比で88時間、VCaP細胞(図7C)又はPC3細胞(図7D)とコインキュベートした。CAR17、CAR18、CAR19、及びCAR20を形質導入したCAR-T細胞を、T細胞上のCAR発現に基づいて計算した1:1又は0.5:1のエフェクター対標的(ET)比で96時間、HK2陽性VCaP細胞及びhK2陰性DU145細胞とコインキュベートした。CAR17、CAR18、CAR19、及びCAR20を形質導入したCAR-T細胞の経時的な腫瘍細胞成長阻害パーセントを、VCap細胞については図7Eに、DU145細胞については図7Fに示す。標的細胞は、リアルタイムでIncuCyteイメージングシステムによって測定された赤色核色素を安定的に発現していた。腫瘍細胞成長阻害(%)=(初期生存標的細胞数-現時点の生存標的細胞数)/初期生存細胞数×100(%)。試験したCAR-T細胞は、およそ100%のTGIを達成したが、非形質導入対照は、いかなるTGIも示さなかった。hK2陰性DU145細胞中の試験したCAR-T細胞では、TGIは観察されなかった。
実施例7:11B6熱安定化scFv CAR-T細胞によるサイトカイン産生
1:1のE/T比でVCap細胞と共にhK2 CAR-T細胞を一晩(およそ20時間)共培養したものから上清を回収し、13-plex Milliplexヒト高感度T細胞キット(HSTCMAG28SPMX13)を使用して分析した。hK2 CAR改変T細胞は、hK2発現VCap細胞との共培養中にサイトカインを分泌するが、非形質導入T細胞(UTD)では最少である。hK2 lenti-CAR-T細胞によるサイトカイン放出の結果を図8に示す。
1:1のE/T比でVCap、DU145(5E4個の細胞)細胞と共にhK2 CAR-T細胞を一晩(およそ20時間)共培養したものから上清を回収した。hK2 CAR改変T細胞は、hK2発現VCap細胞との共培養中にIFN-γを分泌するが、hK2-陰性DU145細胞との共培養中には分泌しない。CD3/28ビーズで刺激したT細胞及びT細胞のみをそれぞれ陽性対照及び陰性対照として使用した。hK2 lenti-CAR-T細胞によるIFN-γ放出を図9に示す。(実施例3のプロトコルを使用した。)デュープリケートの培養からの平均IFN-γ濃度±SD(pg/mL)を示す。CD3/28ビーズで刺激したT細胞及びT細胞のみをそれぞれ陽性対照及び陰性対照として使用した。図示されるように、異なる熱的安定化CAR T細胞は、hK2(+)VCap細胞と共培養すると異なる量のIFN-ガンマを産生し、これは、細胞媒介免疫応答中の細胞傷害性活性に関連している。
実施例8:hK2 CAR-T細胞の増殖
hK2 CAR-T細胞を増殖アッセイで評価した。T細胞増殖は、インビボ免疫機能の重要なインビトロパラメータである。熱安定化11B6 CAR T細胞の機能を更に評価し、最高位の候補コンストラクトを選定するために、熱安定化11B6及び親scFvベースのCAR-T細胞をCTVで標識して、T細胞増殖を評価した。
hK2 CAR及び非形質導入(UTD)T細胞を、CellTrace Violet(CTV、5μM)で標識し、hK2(+)VCap及びhK2(-)DU145細胞と共培養した。共培養の5日後、細胞を収集し、CD3、CD25、NearIR live/dead Dye、及びhK2CARで染色した。Flowjoソフトウェアを備えるFortessaフローサイトメーターでフローサイトメトリー分析を行った。リンパ球を生CD3によって同定し、CTV色素希釈及び活性化マーカーCD25を有するCAR-T細胞の頻度を求めた。図示されるように、hK2 CAR+T細胞でゲーティングすることにより、hK2(+)Vcap細胞は、全てのCARコンストラクトで遺伝子操作されたT細胞の増殖及び活性化マーカーCD25のアップレギュレーションを促進したが、hK2(-)DU145細胞は促進しなかった(図10A、10C)。CD3/28ビーズで刺激したT細胞及びT細胞のみをそれぞれ陽性対照及び陰性対照として使用した。任意の刺激なしのT細胞のみは増殖せず、CD3/28ビーズで刺激されたT細胞は等価な増殖パターンを示した(図10B、10D)。図10Eに示されるように、hK2 CAR-T細胞は、VCap細胞と5日間共培養した後に、CD3/28ビーズ陽性対照よりもロバストに増殖する。異なるCARコンストラクトで遺伝子操作されたT細胞は、異なる増殖活性を有し、異なるCAR+T細胞数を示した。CAR+T細胞数は、3つの技術的複製物からの平均絶対細胞数+/-SEMに基づいていた。
プロトコルは以下の通りである。腫瘍細胞Vcap及びDU145を収集し、PBSで2回洗浄し、腫瘍細胞の増殖をブロックするために、37℃のインキュベーターにおいて1.5時間、100ug/mLのマイトマイシンC(MMC)を含有するPBS中10E6/mLで再懸濁させた。20μLのDMSOをCTV染色溶液のバイアルに添加した。5μLの溶液を、5mL(1:1000)のPBS(37℃に加温)に希釈して、5μMの染色溶液を提供した。2E6個のT細胞をカウントし、回収し、PBSで2回洗浄し、4E6/mL(0.5mL)で再懸濁させた。等体積(0.5mL)のCTV染色溶液を添加した。細胞を37℃で20分間インキュベートした。次いで、4mLのPRMI+20%FBSを細胞に添加して、任意の非結合色素を吸収させた。細胞を5分間インキュベートし、400×gで5分間遠心分離した。細胞ペレットを、予熱しておいたRPMI+10%FBS培地に再懸濁させた。T細胞をカウントし、1E5個の細胞(100uL)を96ウェル平底プレートに播種した。
その間に、MMC処理した腫瘍細胞hK2(+)VCap及びHK2(-)DU145を回収し、1.5時間後にカウントし、次いで、1E6/mLで再懸濁させた。1E5個の細胞(100μL)を96ウェルプレート内でT細胞と共培養した。T細胞のみ、及び3:1の比のCD3/28ビーズ対細胞を添加したT細胞を、それぞれ陰性対照及び陽性対照として使用した。
5日間共培養した後、全ての細胞を各ウェルから回収した。細胞を遠心分離し、400×gで5分間2回洗浄し、次いで、96ウェルU底プレートにおいてhK2CAR、CD3、CD8、及びCD25、live/dead(Near-IR)に染色した。洗浄後、全ての細胞を100μLのBD Cytofix(商標)固定バッファ(50uLのFACSバッファ+50uLの固定バッファ)を使用して10分間固定した。染色されたサンプルを、インキュベーション期間の終了後にマルチカラーフローサイトメトリーによって分析した。
データ分析は、以下のように行った。CTVヒストグラムを調製した。単独で培養されたT細胞の右端ピーク(CTV明)、及び集団の残りを捕捉するためのCTV希釈ゲートを包含するように、CTV未希釈ゲートを設定した。これを全てのサンプルに適用した。
実施例9:抗HK2 scFvを有するhK2 scFv CARの構築及び発現
新規抗HK2 scFvに由来するscFvを含むhK2 CARコンストラクトを、図11Aに示すように構築した。
これら新規抗HK2 scFV CAR T細胞の機能を評価し、最高位の候補コンストラクトを選定するために、レンチウイルス形質導入を使用して、hK2 HL及び¥ LH CAR-T細胞を作製した。感染多重度(MOI)3で、初代ヒトT細胞にhK2 CAR HL及びLH、新規scFvベースのCARレンチウイルスを形質導入した。形質導入の14日後に、ビオチン化hK2(1μg/mL)、続いて、ストレプトアビジンコンジュゲートしたPEによってCAR発現を判定した。
実験プロトコルは以下の通りである。
レンチウイルスパッケージングを行った。150mmあたり14E6個のLenti-X(商標)293T細胞を、丸底のCorning(商標)BioCoat(商標)コラーゲンIでコーティングされた培養皿に播種し、DMEM+10%FBS培地を使用して37℃で一晩インキュベートした。
80~85%の理想的な培養密度のLenti-X(商標)293T細胞を用いて、以下を調製した。培養培地を21mLの293T成長培地で置き換えた。リポフェクタミン2000を室温で希釈し、OptiMEMを平衡化した。希釈したリポフェクタミン2000を、混合プラスミドに滴下して添加し、十分に混合した。混合物を室温で25分間インキュベートした。トランスフェクション混合物をLenti-X293T細胞に滴下し、プレートを穏やかに旋回させて混合した。混合物を37℃のインキュベーター内でインキュベートした。トランスフェクションの24時間後及び48時間後にレンチウイルスを収集した。上記試薬を表3にまとめる。
Figure 2022535150000003
レンチウイルスの濃縮を以下のように行った。レンチウイルス含有上清を収集し、0.45μmの酢酸セルロースフィルターを通して濾過する前に過剰な293T細胞が辺りを浮遊している場合、500×gで10分間遠心分離した。上清を滅菌容器に移し、1/3の体積のLenti-X濃縮物(Clontech、カタログ番号631232)と合わせ、穏やかに反転させることによって混合した。混合物を4℃で一晩インキュベートした。サンプルを、1,500×gで45分間、4℃で遠心分離したところ、遠心分離後に白色ペレットが見えた。ペレットを乱すことなく上清を慎重に除去した。1,500×gで短時間遠心分離した後、残留上清をピペットで除去した。冷T細胞成長を使用して、ペレットを元の体積の1/10に穏やかに再懸濁させた。ウイルスを200μLに分注し、直ちに-80℃で保存した。
ウイルス力価測定は、以下のように行った。対数期のSupT1を完全RPMIで成長させた。1ウェルあたり100μL、20,000個/mLのSupT1細胞を、平坦な96ウェルプレートに播種した。次いで、ウイルス力価測定を96ウェル丸底プレートで行った)。100μLの培地をプレートの全てのウェルに添加した。ウイルスのアリコートを、手で-80℃の冷凍庫から解凍した。アリコートを上下にピペッティングして十分に混合し、50μLのウイルスを最初のウェルに添加し、続いて、十分に混合した。50μLのウイルスを次のウェルにピペッティングして入れることによって、連続1:3希釈を行った。次いで、50μLの培地を、一次Abのみ、二次Abのみ、及び非形質導入対照に添加した。各50μLを力価測定プレートからアッセイプレート内の100μLのSupT1細胞にマルチチャネルピペットで移し、37℃で一晩インキュベートした。100μLの予熱した培地を各サンプルに添加し、更に2日間インキュベートした。フローサイトメトリーによって形質導入効率を求めた。サンプルを丸底96ウェルプレートに移し、1400RPMで3分間回転させた。上清を素早く廃棄し、続いてブロッティングして、フード内の過剰な培地を除去した。150μLのFACSバッファで洗浄を繰り返した。次いで、CARコンストラクトに適した染色プロトコルを行った。フローサイトメトリー分析の前に、150μLのFACSバッファにサンプルを再懸濁させた。
ウイルス力価の計算:力価=(CAR陽性%/100)×2×10×20×希釈倍数
複数コピーの統合を除外するために、20%に最も近い形質導入の力価が使用される。
T細胞活性化、形質導入、及び増殖を以下のように行った。ナイーブT細胞のバイアルを水浴中で解凍し、9mLの予熱されたT細胞培地(TCM CTS OpTmizer T Cell Expansion SFM+5%ヒト血清+IL-2 100IU/mL)を含有する15mLのコニカルチューブに滴下した。クライオバイアルを1mLの培地で洗浄して最大数を回収し、室温で8分間、300×gで回転させた。ペレットを新鮮な10mLのTCMに再懸濁させ、カウントし、1mLあたり1E6個の細胞になるように再懸濁させた。24ウェルプレートに、1ウェル当たり5E5個の細胞を添加した。総体積が1ウェルあたり1mLになるように、1ウェルあたり1.5×10個のCD3/CD28ビーズを500μLの体積に添加した。活性化の24時間後、ウイルスを室温で解凍した。ウイルスを感染多重度(MOI)3で添加し、穏やかに旋回させて混合し、インキュベーターでプレートに戻した。(レンチウイルス機能力価は、SupT1力価アッセイで以前に求めた。)ウイルスが添加されていない非形質導入(UTD)のために1つのウェルを確保した。
形質導入の24時間後、1mLのTCMを各ウェルに添加した。この時点(2日目)以降にペニシリン-ストレプトマイシンを添加した。3~5日目に、2mLの細胞につき4mLのTCMを添加し、T25組織培養処理フラスコに移した。フラスコをインキュベーター内に水平に配置した(3日目)。T細胞培養のために等体積のTCMを添加した(4日目)。5~14日目に、細胞を1日おきに確認し、生存率、サイズ、及び総細胞数を記録した。1mLあたり100万個の細胞になるように細胞密度を調整した。理想的な収集時間はドナー依存性であり、細胞サイズ及び拡大の倍率によって決定される。概ね、100~200倍の拡大で、MOXIフローセルカウンターに基づいて、細胞サイズが8μm未満であったときに細胞を冷凍した。
レンチウイルスの形質導入効率を、以下のように収集日に確認した。培養物を十分に混合した。100μLのT細胞を、100μLのFACSバッファの入った96ウェルプレートの対応するウェルに収集し、混合し、室温で3分間、1300RPMで回転させた。細胞を200μLのFACSバッファに再懸濁させ、4℃で遠心分離を繰り返した。
細胞を100μLのビオチン標識hK2(1μg/mL、FACSバッファで希釈)に再懸濁させ、氷上で30分間インキュベートした。100μLのFACSバッファを添加し、4℃でスピン洗浄した。更に200μLのFACSバッファを添加した後、スピン洗浄を繰り返した。二次抗体SA-PE(1:250)、live dead fixable stain(1:500)、αCD3、αCD4、及びαCD8抗体を含有するマスター溶液100μLでの染色を、氷上で30分間行った。100μLのFACSバッファを添加し、4℃でスピン洗浄し、廃棄し、4℃でスピン洗浄する前に200μLのFACSバッファに再懸濁させた。フローサイトメトリーによって分析する前に、サンプルを100μLのFACSバッファに再懸濁させた。
細胞の収集及び冷凍は以下のように行った。最終細胞数を求めた。培養物を収集し、300xgで10分間、室温で遠心分離した。50mLのコニカルチューブに適合するように、培養物をより少ない体積の培地に再懸濁させた。チューブを4℃で10分間マグネットに入れ、「脱ビーズ」した。細胞をチューブから穏やかに移してビーズ/マグネットの摂動を最小化し、正確な体積を記録した。カウントを繰り返した。遠心分離を300×gで10分間行い、上清を廃棄した。冷却容器内のCS-10 CryoStor(登録商標)細胞冷凍保存培地中で細胞を冷凍した。直ちに容器を-80℃に24~48時間移した後、液体窒素中で永続的に保存した。結果を図11Bに示し、形質導入T細胞の表面上のhK2 CAR発現を確認する。分析した新規KL2B413 HL及びLH、並びに再ヒト化11B6 KL2B359 HL及びLH CARSによって検出されたhK2 CAR+T細胞(%陽性)の百分率の概要を提供する。図示されるように、異なるクローンは、45.1%~59.9%の範囲の異なるCAR発現レベルを有する。全てのCAR T+細胞を、後続の機能アッセイのために等しいCAR+T細胞に対して正規化した。
実施例10:抗hK2抗体及びscFvの作製
親m11B6抗体のヒト化からの抗体作製。
親マウス抗HK2抗体、m11B6は、Vaeisaenenら(Clinical Chemistry 50:9,1607-1617(2004))に記載されている。ヒト化11B6(本明細書ではhu11B6と称する)は、米国特許第9,345,782号及び同第10,100,125号において作製及び記載されている。
hu11B6の遺伝子操作を開始して、改善された熱安定性などの改善された特性を有する追加の抗HK2抗体を作製した。モデリングを使用してhu11B6の熱安定性を改善するために場合により変更させることができるhu11B6フレームワークにおける残基の位置を同定した。同定された位置は、VHにおける残基P41、I49、M70、及びA88、並びにVLにおけるS80、L82、A88、及びY91であった(残基付番は、配列番号5のhu11B6_VH及び配列番号2のhu11B6_VLのアミノ酸配列に従った)。
可変領域のうちの1つがコンビナトリアルライブラリを表し、第2のものが親hu11B6VH又はVLである、VH-リンカー-VL配向で、バイナリコンビナトリアルscFvライブラリを作製した。GGSEGKSSGSGSESKSTGGS(配列番号7)のリンカー配列を使用して、VH/VL領域をコンジュゲートさせた。遺伝子操作されたscFvを大腸菌(E.coli)で発現させ、上清中の生成されたscFvを、ELISAによってヒトhK2への結合について試験し、hu11B6の結合と比較した。hu11B6と同等の結合を示す任意の新たなバリアントを集約し、55℃、60℃、及び65℃で10分間、上清をインキュベートした後にヒトhK2への結合について更に試験した。55℃、60℃、及び65℃でインキュベートした後にhu11B6と同等の結合を保持しており、熱安定性が改善していた分子を、両配向(VH-リンカー-VL;VL-リンカー-VH)でマトリクス化し、更なる特性評価のために哺乳類scFvに変換した。マトリックス化したscFvもCARコンストラクトに組み込み、実施例11に更に記載する通り更に特性評価した。
加えて、親マウス11B6の別のヒト化を、Singh et al(MAbs.2015;7(4):778-91)によって概説されているアプローチに従って、広範囲に及ぶ生殖系列の多様性で実施し、増強された熱安定性についてバリアントを慎重にスクリーニングした。配列保存に基づいて、ヒト重鎖生殖系列IGHV4-30及び軽鎖生殖系列IGKV3D-11を、フレームワーク適合について選択した。体細胞超変異部位及びマウス/ヒト生殖細胞系列の多様性の選択セットを含む残基を用いて、バイナリscFvライブラリを構築した。バリアントをクローニングし、上記の通り大腸菌で発現させた。増強された熱安定性について、シングルポイントELISAにおいて異なる温度で上清をスクリーニングした。マウス/ヒトキメラ11B6 scFVを親対照として使用した。マウス11B6と同様の結合活性及び67℃のTm値を維持していたクローンKL2B359を、追加のプロファイリングのためにscFv-Fc及びCAR-Tに変換した。SPRによって測定されたKL2B359のhK2への親和性(K)は、約0.7~1nMであった。このキャンペーンからHCF3-LCD6、HCG5-LCB7、KL2B357、KL2B358、及びKL2B360も得られ、機能性について更に特性評価した。
ヒト免疫グロブリン遺伝子座を発現するトランスジェニックマウス(Ablexis(登録商標))及びトランスジェニックラット(OmniRat(登録商標))を使用した抗体作製。
OmniRat(登録商標)は、キメラヒト/ラットIgH遺伝子座(ラットC遺伝子座に連結された天然立体配置の22のヒトV、全てのヒトD及びJセグメントを含む)を完全なヒトIgL遺伝子座(Jκ-Cκに連結された12のVκ及びJλ-Cλに連結された16のVλ)と共に含有する。(例えば、Osborn,et al.(2013)J Immunol 190(4):1481-1490を参照されたい)。したがって、ラットは、ラット免疫グロブリンの低減した発現を呈し、導入されたヒト重鎖及び軽鎖の導入遺伝子は、免疫化に応答して、クラススイッチ及び体細胞変異を受けて、完全ヒト可変領域を有する高親和性キメラヒト/ラットIgGモノクローナル抗体を生成した。OmniRat(登録商標)の調製及び使用、並びにこのようなラットが有しているゲノム改変は、国際公開第14/093908号に記載されている。
Ablexis(登録商標)マウスは、ヒトCH1及びCLドメインに連結されたヒト可変ドメイン、キメラヒト/マウスヒンジ領域、及びマウスFc領域を有する抗体を生成する。Ablexisカッパマウス及びラムダマウス系統は、以下に記載されるように、その重鎖がヒト又はマウスのいずれであるかによって区別される。カッパマウスによって生成される抗体は、マウスV、D及びJエキソン及びマウスVκ、Jκ、及びCκエキソンに由来する配列を欠いている。内因性マウスIgλは、カッパマウスにおいて活性である。ヒトIgκ鎖は、およそ90~95%のナイーブレパートリーを含み、マウスIgλ鎖は、この系統においておよそ5~10%のナイーブレパートリーを含む。ラムダマウスによって生成される抗体は、マウスV、D及びJエキソン及びマウスVλ、Jλ、及びCλエキソンに由来する配列を欠いている。内因性マウスIgλは、ラムダマウスにおいて活性である。ヒトIgλ鎖は、およそ40%のナイーブレパートリーを含み、マウスIgκ鎖は、およそ60%のナイーブレパートリーを含む。Ablexis(登録商標)の調製及び使用、並びにこのようなマウスが保有しているゲノム改変は、国際公開第11/123708号に記載されている。
Ablexisマウス及びOmniRatラットを可溶性完全長KLK2タンパク質(ヒトカリクレイン-2 6-Hisタンパク質)で免疫した。
ヒトカリクレイン-2 6-Hisタンパク質
VPLIEGRIVGGWECEKHSQPWQVAVYSHGWAHCGGVLVHPQWVLTAAHCLKKNSQVWLGRHNLFEPEDTGQRVPVSHSFPHPLYNMSLLKHQSLRPDEDSSHDLMLLRLSEPAKITDVVKVLGLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLRPRSLQCVSLHYSEKVTEFMLCAGLWTGGKDTCGGDSGGPLVCNGVLQGITSWGPEPCALPEKPAVYTKVVHYRKWIKDTIAANPHHHHHH(配列番号319)
Ablexisマウス及びOniRatラット由来のリンパ球をリンパ節から抽出し、コホートごとに融合を行った。細胞を合わせ、CD138発現について選別した。可溶性hK2抗原を使用してハイスループット小型化MSDフォーマットで、ハイブリドーマスクリーニングを実施した。およそ>300個のサンプルがhK2バインダーであると同定された。Biacore 8K SPRによる単一サイクル速度論法によって、>300個の抗hKLK2上清サンプルのヒトKLK2タンパク質への結合を測定した。更に、上清サンプルをヒトKLK3タンパク質への結合についても同様に試験した。並行して、上清を、フローサイトメトリーによって、KLK2発現細胞株VCap及び陰性細胞株DU145への結合についても試験した。選択された細胞バインダーを、上記の通り、VH-VL及びVL/VHの両配向におけるscFv変換及び熱安定性試験に進めた。Ablexisマウス免疫キャンペーンから、KL2B413、KL2B30、KL2B53、及びKL2B242が得られた。OmniRat免疫キャンペーンから、KL2B467及びKL2B494が得られた。
上記の様々な免疫化及びヒト化キャンペーンを通して生成された抗体を、fabフォーマット、mAbフォーマット、VH-リンカーVL配向のscFvフォーマット、又はVL-リンカー-VH配向のscFvフォーマットで発現させ、以下に記載の通り更に分析した。上記配列番号7のリンカー配列を使用して、VH/VL領域をコンジュゲートさせた。
実施例11.抗KLK2抗体の構造的特性評価
細胞内アッセイにおいて最も高い性能を示した抗体可変ドメイン及びscFv抗体断片の配列を本明細書に提供する。可変ドメインは、Fabフォーマット、VH-リンカーVL配向のscFvフォーマット、又はVL-リンカー-VH配向のscFvフォーマットで発現させた。
可変ドメインVH、VL、及びCDR
表4は、選択された抗hK2抗体のVH及びVLのアミノ酸配列を示す。表5は、選択された抗hK2選択抗体のKabat HCDR1、HCDR2、及びHCDR3を示す。表6は、選択された抗hK2抗体のKabat LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を示す。表7は、選択された抗hK2抗体のAbM HCDR1、HCDR2、及びHCDR3を示す。表8は、抗hK2のAbM LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を示す。表9は、選択されたhK2抗体の可変ドメイン配列及び配列番号をまとめる。表10は、VH及びVL領域のタンパク質及びDNAの配列番号を示す。
Figure 2022535150000004
Figure 2022535150000005
Figure 2022535150000006
Figure 2022535150000007
Figure 2022535150000008
Figure 2022535150000009
Figure 2022535150000010
Figure 2022535150000011
Figure 2022535150000012
Figure 2022535150000013
Figure 2022535150000014
Figure 2022535150000015
Figure 2022535150000016
コンセンサスVH及びVL配列
図17Aは、mu11B6、hu11B6、KL2B357、KL2B358、KL2B359、KL2B360、HCF3、及びHCG5のVHドメインの配列アラインメントを示す。図2は、mu11B6、hu11B6、KL2B357、KL2B358、KL2B359、KL2B360、LDC6、及びLCB7のVLドメインの配列アラインメントを示す。配列番号344及び配列番号345のコンセンサスアミノ酸配列を、それぞれVH及びVLドメインについて決定した。HCDR及びLCDR残基には下線を付す。
配列番号344
Figure 2022535150000017
式中、
X1は、D若しくはQである;
X2は、A若しくはTである;
X3は、P若しくはFである;
X4は、I若しくはMである;
X5は、A若しくはPである;又は
X6は、V若しくはAである。
配列番号345
Figure 2022535150000018
X1は、D又はEであり;
X2は、D又はAであり;
X3は、S又はTであり;
X4は、A又はSであり;
X5は、V又はLであり;
X6は、L又はPであり;
X7は、I又はLであり;
X8は、N又はSであり;
X9は、R又はKであり;
X10は、K又はRであり;
X11は、V又はRであり;
X12は、V又はIであり;
X13は、A又はDであり;
X14は、Q又はSである。
X15は、P又はAであり;
X16は、F又はVであり;
X17は、Y又はFであり;
X18は、Q又はGであり;
X19は、L又はVである。
Fab-Fc及びscFv
hK2特異的VH/VL領域を、VH-CH1-リンカーCH2-CH3及びVL-CLとして遺伝子操作し、IgG2若しくはIgG4として発現させたか、又はVH-リンカー-VL若しくはVL-リンカー-VH配向のいずれかのscFvとして遺伝子操作した。scFvに使用したリンカーは、上記配列番号7のリンカーであった。scFVを使用して、実施例7に記載の通り二重特異性抗体を作製した、又は実施例11に記載の通りCARを作製した。
表11は、mAbフォーマットの選択された抗hK2抗体のHCアミノ酸配列を示す。表12は、mAbにおける選択された抗hK2抗体のLCのアミノ酸配列を示す。表13は、mAbフォーマットの選択された抗hK2抗体のHC及びLCのDNA配列番号をまとめる。表14は、VH-リンカー-VL又はVL-リンカー-VH配向の選択されたscFvのアミノ酸配列を示す。
Figure 2022535150000019
Figure 2022535150000020
Figure 2022535150000021
Figure 2022535150000022
Figure 2022535150000023
Figure 2022535150000024
Figure 2022535150000025
Figure 2022535150000026
Figure 2022535150000027
実施例12.抗hK2抗体の生物物理学的特性評価
抗hK2抗体の親和性及び熱安定性。
可溶性hK2に対する選択されたhK2抗体の親和性を、表面プラズモン共鳴(SPR)によって測定した。SPRは、複合体の形成及び解離時の質量の変化を測定することによって、2つの結合パートナー間の相互作用の強度を試験するための無標識技術である。抗体を、抗Fc抗体でコーティングされたセンサチップ上に捕捉し、続いて、様々な濃度並びに指定の会合及び解離時間で可溶性hK2を注入した。解離後、表面を適切な溶液で再生して、次の相互作用の準備を行った。センサグラムを1:1ラングミュアモデルに適合させることによって、速度情報(オンレート及びオフレート定数)を抽出した。結合親和性(K)を、速度定数(koff/kon)の比として報告する。選択されたhK2抗体のK値を、表15に列挙する。
自動プロメテウス機器を使用して示差走査蛍光測定(NanoDSF)によって熱安定性を求めた。NanoDSFを使用して、リン酸緩衝生理食塩水、pH7.4中0.5mg/mLの濃度の分子のTを測定した。サンプルを384ウェルサンプルプレートから24ウェルキャピラリーにロードすることによって、測定を行った。各サンプルにつき、デュープリケートで測定を行った。熱走査は、1.0℃/分の速度で20°Cから95°Cまでに及ぶ。固有のトリプトファン及びチロシンの蛍光を330nm及び350nmの発光波長でモニタリングし、F350/F330nm比を温度に対してプロットして、アンフォールディング曲線を作成した。測定されたTm値を、表15に列挙する。
Figure 2022535150000028
Ablexis免疫キャンペーンから生成されたKL2B413 scFvは、NanoDSFによって測定したとき67°Cの熱安定性(Tm)を有しており、約34nMのヒトhK2に対する結合親和性(K)を有していた。再ヒト化キャンペーンについて得られ、そして、マウス11B6と同様の結合親和性を維持していたクローンKL2B359を、追加のプロファイリングのためにscFv-Fc及びCAR-Tに変換した。KL2B359 scFvは、67℃のTm及び約0.7~1nMのhK2に対する結合親和性(K)を示す。KL2B30、KL2B242、KL2B53、KL2B467、及びKL2B494 Fabは、0.5nM未満の結合親和性及び70℃を超えるTm値を示した。
エピトープのマッピング
水素-重水素交換質量分析(HDX-MS)によって、選択されたKL2B抗体上のエピトープを決定した。ヒトKLK2抗原を、エピトープマッピング実験に使用した。
簡潔に述べると、精製されたKLK2抗原を、重水標識バッファ中において抗KLK2抗体有り及び無しでインキュベートした。水素-重水素交換(HDX)混合物を、8M尿素、1M TCEP、pH3.0の添加によって異なる時点でクエンチした。クエンチしたサンプルを、室温で、バッファA(H2O中1%アセトニトリル、0.1%FA)にて平衡化した固定化ペプシン/FpXIIIカラムに600μL/分で通した。消化性断片を、バッファAを用いて600μL/分で逆相トラップカラムにロードし、1分間脱塩した(600μLのバッファA)。脱塩された断片を、20分かけて100μL/分で8%→35%バッファB(95%アセトニトリル、5%H2O、0.0025%TFA)の線形勾配を有するC18カラムによって分離し、質量分析によって分析した。275℃のキャピラリー温度、分解能150,000、及び質量範囲(m/z)300~1,800で、LTQ(商標)Orbitrap Fusion Lumos質量分析計(Thermo Fisher Scientific)を使用して質量分析を実行した。BioPharma Finder3.0(Thermo Fisher Scientific)を、HDX実験の前に非重水素化サンプルのペプチド同定に使用した。HDExaminerバージョン2.5(Sierra Analytics,Modesto,CA)を使用して、HDX実験についてのMS生データファイルから質量中心値を抽出した。
hK2抗体、hu11B6、KL2B494、KL2B467、KL2B30、KL2B413、及びKL2B53を溶解性hK2タンパク質と共にインキュベートした結果、異なるパターンの水素交換及び全体的な保護が得られた。保護されたセグメントをhK2抗原の配列にマッピングして、結合エピトープを可視化した(図17B)。KL2B494、KL2B467、及びKL2B30は、残基173~178(配列番号346、KVTEF)及び残基230~234(配列番号347、HYRKW)からなる共通配列に結合した。KL2B53は、異なる保護パターンを示し、残基27~32(配列番号348、SHGWAH)、60~75(配列番号349、RHNLFEPEDTGQRVP)、及び138~147(配列番号350、GWGSIEPEE)からなる配列に結合した。
実施例13.追加のscFv CARコンストラクトの作製及び特性評価
scFvとしてクローニングされた11B6の細胞外部ドメインは、高温(55℃)で結合を保持しなかったので、追加のキャンペーンを開始して、親11B6から新たなヒト化抗体を生成させた。
抗体11B6に由来する熱安定化scFVを含有するhK2 CARを作製した。熱安定化scFvを含有するCARコンストラクトの説明及び配列番号を表16に提供する。説明における名称は、上記で同定されたVH鎖又はVL鎖を再び指し、20AAは、scFv中のVH/VL対間の20アミノ酸長のリンカーを指す。CARにおけるscFvをVH-L-VL又はVL-L-VH配向のいずれかでクローニングした。
生成されたscFvであるKL2B413_HL、KL2B413_LH、KL2B359_HL、及びKL2B359_LHもCARコンストラクトに組み込み、更に特性評価した。表16は、作製されたCARコンストラクト及びその配列番号を示す。使用したシグナル配列は、MAWVWTLLFLMAAAQSIQA(配列番号24)であった。
Figure 2022535150000029
実施例14:Jurkat-Lucia(商標)NFAT細胞を介した抗原非依存性活性化を用いた異なるscFvベースのCARの同定。
活性化T細胞の核因子(NFAT)は、最初に免疫細胞の調節因子として同定された転写因子のファミリーである。理論に束縛されるものではないが、T細胞が活性化されると、カルシウムが流入し、NFATのN末端でセリンリッチな核局在化シグナルを脱リン酸化するカルシニューリンが活性化され、NFATが核内移行する。scFvクラスタリングによるトニックシグナル伝達は、JNLレポーター細胞株においてNFATプロモーターによって駆動されるホタルルシフェラーゼによって後で検出することができた。
シグナル伝達応答性NFATプロモーターによって駆動されるルシフェラーゼ遺伝子を含有するJurkat細胞(JNL細胞と呼ばれる)に、様々なCARコンストラクトを形質導入した。CARコンストラクトとその同種細胞抗原(標的細胞上のhK2)との間の結合によって、JNL細胞においてルシフェラーゼが発現する。新規hK2 KL2B413及び再ヒト化11B6 CARクローンを、以下のプロトコルに従って抗原依存性活性についてJNLレポーターアッセイで評価した。
レンチウイルスの形質導入を以下のように行った。JNL細胞を収集し、1E6/mLになるように再懸濁させた。500μLのJNL細胞及びレンチウイルスウイルスをMOI3で添加し、上下にピペッティングすることによって混合した。混合物を37℃のインキュベーターに24時間入れた。次いで、500μLのJNL培地を各ウェルに添加した。37℃のインキュベーターで培養を続けた。4日目に細胞をT25フラスコに移した。5~6日目に、形質導入の検証を行った。150μLの細胞を収集して、目的の特定のCARに適切な検出試薬(例えば、hK2 CARを検出するためにはビオチン-hK2タンパク質を使用)を介してCAR発現を調べた。凍結又は下記JNLアッセイにおいて使用するのに十分な細胞が得られるまで、JNL細胞を5×10/mLで維持した。
JNLアッセイは、以下のように行った。2:1のエフェクター対標的比で、標的細胞株との共培養を行った。JNL細胞をスピンダウンして、培地中の任意の分泌されたルシフェラーゼを除去し、4×10/mLで新鮮培地に再懸濁させた。JNL細胞を収集した。抗原陽性及び抗原陰性の標的細胞株の両方を2E5/mLで調製した。次いで、100μLのJNLを100μLの標的細胞に添加した。JNLのみの対照については、標的細胞の代わりに100μLの培地を添加した。陽性対照の場合、JNL細胞のみ又はCAR JNL細胞を1×細胞刺激カクテルに添加し、37℃のインキュベーター内で24時間インキュベートした。150μLの上清を96ウェルプレートに収集し、遠心分離して細胞を除去した。100μLの上清をプレートからソリッドボトム黒色プレートに移し、続いて、100μLのQUANTI-luc lucia検出試薬を添加し、Envisionマルチプレートリーダーで読み取る前に室温で5分間インキュベートした。
シグナル伝達応答性NFATプロモーターによって駆動されるルシフェラーゼ遺伝子を含有するJurkat細胞(JNL細胞と呼ばれる)に、様々なhK2 CARコンストラクトを形質導入した。ビオチン化hK2、続いてストレプトアビジンコンジュゲートしたPEによって、発現を判定した。データを図12Aに示す。形質導入されたJNL細胞におけるCAR発現は、選択されたクローンについて確認され、細胞の46~50%で再ヒト化11B6 KL2B359 CARが発現し、細胞の73.7%~96%でKL2B413 CARが発現した。
図12B中のデータは、hK2 CARコンストラクトとその同種細胞抗原(標的細胞上のhK2)との間の結合によって、JNL細胞においてルシフェラーゼが発現することを示す。指定のCARクローンを含有するJNL細胞及びJNL細胞(UTD)を標的細胞株(VCap、LNCap/Hk2、LNCap、C4-2B、22Rv1、又はDU145細胞)と共培養し、ルシフェラーゼ活性を発光強度として測定した。発光強度が抗原発現細胞の存在下でUTD細胞のレベルを1.5倍上回った場合、クローンは活性であるとみなした。新規KL2B413並びに再ヒト化11B6 HL及びLH CARについて、抗原依存性活性化はみられなかった。
実施例15:HK2 CAR-T細胞を、抗原依存性細胞傷害性についてリアルタイムIncuCyte殺傷アッセイで評価した。
HK2 CAR-T細胞を、HK2+VCaP細胞及びHK2-DU145細胞と96時間コインキュベートした。図11A~図11Bに示すCAR発現データに基づいて、エフェクター対標的(ET)比を計算した。標的細胞は、リアルタイムでIncuCyteイメージングシステムによって測定された赤色核色素を安定的に発現していた。HK2+ VCaP細胞とコインキュベートしたHK2 CAR-T細胞については図13Aに、そして、HK2-DU145細胞とコインキュベートしたHK2 CAR-T細胞については図13Bにデータを示す。これら図中、腫瘍細胞成長阻害(%)=(初期生存標的細胞数-現時点の生存標的細胞数)/初期生存細胞数×100(%)。
実施例16.KL2B413_HL、KL2B413_LH、KL2B359_HL又はKL2B359_LHを形質導入したCAR-T細胞の特性評価。
CAR-T細胞の活性化は、抗原依存性である
生成されたCAR-T細胞を、実施例4に記載の通り、抗原依存性活性についてJNLレポーターアッセイにおいて評価した。簡潔に述べると、シグナル伝達応答性NFATプロモーターによって駆動されるルシフェラーゼ遺伝子を含有するJurkat細胞(JNL細胞と呼ばれる)に、CAR17(KL2B413_HL)、CAR18(KL2B413_LH)、CAR19(KL2B359_HL)、又はCAR20(KL2B359_LH)コンストラクトを形質導入した。ビオチン化hK2、続いて、ストレプトアビジンコンジュゲートしたPEによって、各CARの発現を判定した。選択されたクローンについて、形質導入されたJNL細胞におけるCAR発現が確認され、図6に示す通り、細胞の46~50%がKL2B359ベースのCARを発現し、細胞の73.7~96%がKL2B413ベースのCARを発現していた。各CARを発現するJNL細胞のパーセントは以下の通りであった:KL2B413_HL:73.7%、KL2B413_LH:93.6%、KL2B359_HL:46%、KL2B359_LH:50.8%。
hK2 CARコンストラクトとその同種細胞抗原(標的細胞上のhK2)との間の結合によって、JNL細胞においてルシフェラーゼが発現する。その目的のために、試験CARコンストラクトを形質導入したJNL細胞又は非形質導入JNL細胞(UTD)を、標的細胞株(VCap、LNCaP/hK2(hK2を組換え発現するLNCaP細胞)、LNCaP、C4-2B、22Rv1、又はDU145細胞)と共培養し、ルシフェラーゼ活性を発光強度として測定した。発光強度が抗原発現細胞の存在下でUTD細胞のレベルを1.5倍上回った場合、コンストラクトは活性であるとみなした。試験したCARコンストラクトについては、抗原依存性活性化はみられなかった。図13Aは、図に示されるCAR-T細胞の試験標的細胞への結合から生じたRLU(相対光単位)を示す。
CAR-T細胞は、抗原刺激時にサイトカインを産生する
細胞傷害性T細胞によって産生されたIFN-γは、腫瘍の免疫監視作用を発揮させるのに非常に重要であり、これにより、増殖を直接阻害し、インビボ及びインビトロにおいて一部の悪性腫瘍のアポトーシスを誘導することができる。hK2 CAR改変ヒトT細胞がhK2陽性腫瘍細胞によって認識及び活性化され得るかどうかを判定するために、指定のCARクローンを形質導入した初代T細胞及び対照非形質導入T細胞(UTD)を標的細胞株(LNCaP/hK2、LNCaP、C4-2B、22Rv1、又はDU145細胞)と共培養し、IFN-γ濃度測定のために上清を回収した。図14に示されるように、hK2 CAR細胞を形質導入したCAR-T細胞は、hK2を組換え発現するLNCap細胞(LNCap/hK2)細胞との共培養中にIFN-γを分泌し、また、hK2発現が非常に少ないC4-2B及びLNCap細胞との共培養中にも分泌したが、hK2-陰性DU145細胞では分泌しなかった。デュープリケートの培養からの平均IFN-γ濃度±SD(pg/mL)を図14に示す。
CAR-T細胞は、抗原依存的に増殖する
CAR-T細胞を、実施例4に記載のT細胞増殖アッセイプロトコルを使用してその増殖について評価した。hK2 CAR-T及び非形質導入(UTD)T細胞をCellTrace Violet(CTV;5μM)で標識し、hK2陽性VCap及びhK2陰性DU145細胞と共培養した。共培養の5日後、細胞を収集し、CD3、CD25、NearIR live/dead Dye、及びhK2CARで染色した。Flowjoソフトウェアを備えるFortessaフローサイトメーターでフローサイトメトリー分析を行った。リンパ球を生CD3によって同定し、CTV色素希釈及び活性化マーカーCD25を有するCAR-T細胞の頻度を求めた。CD3+T細胞でゲーティングすることにより、hK2陽性Vcap細胞は、図10C、10D、及び10Eに示すように各試験したCAR-T細胞の増殖を、そして、図11B及び図12Aに示すように活性化マーカーCD25のアップレギュレーションを促進したが、hK2陰性DU145細胞は促進しなかった。任意の刺激なしのT細胞のみは増殖せず、CD3/28ビーズで刺激されたT細胞は等価な増殖パターンを示した。hK2 CAR+T細胞は、VCap細胞と5日間共培養した後に、CD3/28ビーズ陽性対照よりもロバストに増殖した。異なる試験したCAR-T細胞は、異なる増殖活性を有し、異なるCAR-T細胞数を示した。増殖しているT細胞及びCD25を発現しているT細胞の百分率は、デュープリケートからの平均絶対細胞数+/-SEMに基づいていた。
実施例17:抗原で刺激したCAR-T細胞のTh1サイトカインIFN-ガンマ産生。
理論に束縛されるものではないが、細胞傷害性T細胞によって産生されたIFN-γは、腫瘍の免疫監視作用を発揮させるのに非常に重要であり、これにより、増殖を直接阻害し、インビボ及びインビトロにおいて一部の悪性腫瘍のアポトーシスを誘導することができる。
hK2 CAR改変ヒトT細胞がhK2(+)腫瘍細胞によって認識及び活性化され得るかどうかを判定するために、指定のCARクローンを含有する初代T細胞及び対照非形質導入T細胞(UTD)を標的細胞株(LNCap/hK2、LNCap、C4-2B、22Rv1、又はDU145細胞)と共培養し、IFN-g濃度測定のために上清を回収した。デュープリケートの培養からの平均IFN-γ濃度±SD(pg/mL)として、データを図14に示す。図示されているように、hK2 CAR改変T細胞は、Hk2発現が非常に少ないC4-2B及びLNCap細胞であっても、hK2発現LNCap/hK2細胞との共培養中にIFN-ガンマを分泌するが、hK2-陰性DU145細胞では分泌しない。未開示の対照CARは、抗原発現レベルがhK2よりもはるかに高いことから、はるかに多量のIFN-γを分泌した。
実施例18:hK2 CAR T細胞の抗腫瘍活性を評価するためのCD107a脱顆粒アッセイ。
理論に束縛されるものではないが、主に、標的細胞を殺傷する溶解顆粒の免疫分泌を通して、CD8+Tリンパ球及びナチュラルキラー(NK)細胞などの細胞傷害性リンパ球によって、腫瘍細胞を認識及び殺傷することができる。このプロセスは、顆粒膜と免疫エフェクター細胞の細胞質膜との融合を伴い、その結果、典型的にはCD107aなどの溶解顆粒を取り囲む脂質二重層に存在するリソソーム関連タンパク質の表面曝露が生じる。したがって、CD107aの膜発現は、免疫細胞活性化及び細胞傷害性脱顆粒のマーカーを構成する。
この脱顆粒アッセイは、以下のように行った。標的細胞(5×10個)を、96ウェルプレートにおいて1ウェルあたり0.1mLで等数のエフェクター細胞と共培養した。対照ウェルは、T細胞のみを含有していた。1μL/サンプルのモネンシン(BD Biosciences)に加えて抗CD107a(1ウェルあたり5μL)を添加し、続いて、37℃で4時間インキュベートした。細胞をPBSで2回洗浄し、hK2 CAR、CD3、及びCD8の発現について染色し、フローサイトメーターBD Fortessaで分析した。データを図15に示す。
図示されているように、Vcap細胞上にhK2抗原が存在すると、フローサイトメトリーによって測定されるCD107A+hK2 CAR(+)T細胞が増加するが、hK2 CAR(-)及びUTD T細胞では増加しない。腫瘍細胞刺激なしのCAR T細胞では、バックグラウンド染色(<2%)しかみられなかった。イオノマイシン(eBioscience(商標)細胞刺激カクテル;500×)と組み合わせたフォルボール12-ミリステート13-アセテート(PMA)は、この4時間細胞培養モデルにおけるCD107a細胞表面発現の一貫した誘導因子であり、これを陽性対照として使用した。図15に示す結果は代表的なドナーT細胞についてのものであり、この結果は、複数のドナーで再現可能である。
実施例19:T細胞増殖は、インビボ免疫機能の重要なインビトロパラメータである。
新規KL2B413及び再ヒト化11B6(KL2B359)CAR T細胞の機能を更に評価するため及び最高位の候補コンストラクトの選定を支援するために、T細胞増殖アッセイ用にCAR T細胞をCellTrace(商標)Violetで標識した(CTV;5uM)。以下のプロトコルに従い、結果を図16A~16Dに示す。
腫瘍細胞Vcap及びDU145を収集し、PBSで2回洗浄した。細胞を、37℃のインキュベーター内で1.5時間かけて100ug/mLのマイトマイシンC(MMC)を含有するPBS中に10E6/mLで再懸濁させて、腫瘍細胞の増殖をブロックした。20μLのDMSOをCTV染色溶液のバイアルに添加した。次いで、5μLの溶液を、5mL(1:1000)のPBS(37℃に加温)に希釈して、5μMの染色溶液を得た。2E6個のT細胞をカウントし、回収し、PBSで2回洗浄し、次いで、4E6/mL(0.5mL)で再懸濁させた。等体積(0.5mL)のCTV染色溶液を添加した。細胞を37℃で20分間インキュベートした。20分後、4mLのPRMI+20%FBSを細胞に添加して、任意の非結合色素を吸収させ、細胞を5分間インキュベートした。細胞を400×gで5分間遠心分離し、続いて、予熱しておいたRPMI+10%FBS培地に細胞ペレットを再懸濁させた。T細胞をカウントし、1E5個の細胞(100uL)を96ウェル平底プレートに播種した。
その間に、MMC処理した腫瘍細胞hK2(+)VCap及びHK2(-)DU145を回収し、1.5時間後にカウントし、次いで、1E6/mLで再懸濁させた。1E5個の細胞(100μL)を96ウェルプレート内でT細胞と共培養した。T細胞のみ、及び3:1の比のCD3/28ビーズ対細胞で添加したT細胞を、それぞれ陰性対照及び陽性対照として使用した。
5日間共培養した後、全ての細胞を各ウェルから回収した。細胞を遠心分離し、400×gで5分間2回洗浄し、96ウェルU底プレートにおいてhK2CAR、CD3、CD8、及びCD25、live/dead(Near-IR)で染色した。洗浄後、全ての細胞を100μLのBD Cytofix(商標)固定バッファ(50uLのFACSバッファ+50uLの固定バッファ)を使用して10分間固定した。染色されたサンプルを、インキュベーション期間の終了後にマルチカラーフローサイトメトリーによって分析した。
Flowjoソフトウェアを備えるFortessaフローサイトメーターでフローサイトメトリー分析を行った。リンパ球を生CD3によって同定し、CTV色素希釈及び活性化マーカーCD25を有するCAR+T細胞の頻度を求めた。
CTVのヒストグラムを調製するために、単独で培養されたT細胞の右端ピーク(CTV明)、及び集団の残りを捕捉するためのCTV希釈ゲートを包含するように、CTV未希釈ゲートを設定した。この設定を全てのサンプルに適用した。CTV希釈集団中の細胞の絶対数を含むように統計を追加した。この統計を用いて表を作成し、続いて、Prismに転送する前に再フォーマット化のためにデータ(細胞数)をExcelにエクスポートした。
図16A~16Dは、hK2 CAR T細胞増殖アッセイの結果を示す。CD3+T細胞でゲーティングすることにより、hK2(+)Vcap細胞は、図16A~16Bに示されているように、全てのCARコンストラクトで遺伝子操作されたT細胞の増殖、そして、図16C~16Dに示されているように、活性化マーカーCD25のアップレギュレーションを促進したが、hK2(-)DU145細胞は促進しなかった。CD3/28ビーズで刺激したT細胞を陽性対照として使用し、T細胞のみを陰性対照として使用した。任意の刺激なしのT細胞のみは増殖せず、CD3/28ビーズで刺激されたT細胞は等価な増殖パターンを示す。図示されているように、hK2 CAR+T細胞は、VCap細胞と5日間共培養した後に、CD3/28ビーズ陽性対照よりもロバストに増殖した。異なるCARコンストラクトで遺伝子操作されたT細胞は、異なる増殖活性を有し、異なるCAR+T細胞数を示した。デュープリケートからの平均絶対細胞数+/-SEMに基づく、増殖しているT細胞及びCD25を発現しているT細胞の百分率の要約を、図16B及び16Dに示す。
実施例20:hK2 scFv CARの構築及び発現
以下のscFv配列を含むhK2 CARコンストラクトを構築する。
Figure 2022535150000030
Figure 2022535150000031
Figure 2022535150000032
hK2 CARコンストラクトは、以下の配列を含んでいた。
Figure 2022535150000033
Figure 2022535150000034
Figure 2022535150000035
Figure 2022535150000036
Dynabeads Human T-Expander CD3/CD28で刺激したT細胞をエレクトロポレーションに供し、次いで、OPTI-MEM(Invitrogen)で3回洗浄し、50E6/mLの最終濃度でOPTI-MEMに再懸濁させる。続いて、0.1mLの細胞(5E6)を、RNAをコードしているIVT CAR10ugと混合し、「パルス」ボタンを1回押すことによって、BTX ECM830(Harvard Apparatus BTX,Holliston,MA,USA)を使用して2mmギャップキュベット(Harvard Apparatus BTX,Holliston,MA,USA)内でエレクトロポレーションする。(設定:500ボルト、750μsecパルス長及び単一(1)パルス、100mSec間隔)エレクトロポレーション後、T細胞を6ウェルプレートに移し、直ちに37℃のインキュベーターに戻す。初代ヒトT細胞に、mRNAなし(モック)で、又はhK2 scFv CAR若しくは無関係の対照CARのいずれかを発現するmRNA10μgをエレクトロポレーションする。エレクトロポレーションの24時間後、2μg/mLのビオチン化Lタンパク質及びストレプトアビジンコンジュゲートしたPE、又はビオチン化hK2(1μg/mL)及びストレプトアビジンコンジュゲートしたPEで染色した後に、フローサイトメトリーによってCAR表面発現を測定する。
エレクトロポレーションの24時間後、T細胞をカウントする。各々1E5個のT細胞を収集する。200μL/ウェルのマイクロタイタープレート用FACSバッファを使用して、細胞をFACSバッファで2回洗浄し、上清を廃棄する。全てのウェルを、タンパク質Lを含有する染色バッファ(Genscript、カタログ番号M000971:500;2ug/mL)100μLで染色し、光から保護しながら、4℃で少なくとも30分間インキュベートする。150μL/ウェルのマイクロタイタープレート用FACSバッファを使用して、FACSバッファを添加することによって細胞を2回洗浄する。室温で4分間、400×gで遠心分離を行う。次いで、上清を廃棄する。全てのウェルを100μLのストレプトアビジン-R-フィコエリトリン(SA-PE、1:250)及びLive/dead Fixable Near-IR Dead Cell Stain色素(1:1000)で染色し、光から保護しながら4℃で少なくとも30分間インキュベートする。次いで、細胞のフローサイトメトリー分析の準備を整える。
hK2 CARではタンパク質L染色の所見がみられるが、mRNAエレクトロポレーションを伴わないT細胞である対照T細胞ではバックグラウンド染色(約5.5%)しかみられない。初代ヒトT細胞におけるCAR発現は、J&J内部ビオチン標識組換えKLK2タンパク質、続いて、SA-PEを介しても検出することができる。図示されるように、T細胞は、フローサイトメトリーによって測定したとき、hK2 CARを効率的に発現するが、mRNAエレクトロポレーションを伴わないT細胞である対照T細胞又は未開示の対照CAR(非hK2特異的)ではバックグラウンド染色しかみられない。
実施例21:hK2 CAR-T細胞による腫瘍細胞の殺傷
フローサイトメーターを使用した、Cell Trace Violet(CTV、Thermo Fisher Scientificカタログ番号:C34557)ベースの細胞傷害性アッセイのための共培養を以下のように行う。
T細胞を以下のように調製する。EPの24時間後、T細胞をカウントし、最も濃縮された/所望のE:Tに必要な濃度で再懸濁させる。T細胞を100μL/ウェルのアッセイで添加する(2×10細胞/mL、100μLを10:1のE:T比、すなわち2E4個の標的細胞あたり2E5T個の細胞でプレーティング)。10:1のE:T濃度のストックを作製し、完全T細胞培地(Optimizerw/CTS、5%ヒト血清、1% GlutaMax)で0.3125:1になるように2倍連続希釈を行う。96ウェル丸底組織培養処理プレートを使用して、T細胞をトリプリケートでプレーティングする(100uL/ウェル)。
CTV標識標的細胞を以下のように調製する。20μLのDMSOをCTV染色溶液のバイアルに添加する。この原液を、5μMの染色溶液にするために20mLのPBS(37℃に加温)に希釈する。10E6個の腫瘍細胞を収集し、PBSで2回洗浄し、4E6/mL(2.5mL)に再懸濁させる。等体積(2.5mL)のCTV染色溶液を添加する。細胞を37℃のインキュベーター内で20分間インキュベートする。40mLのPRMI+20%FBSを細胞に添加して、任意の非結合色素を吸収させる。細胞を5分時間インキュベートする。細胞を400×gで5分間遠心分離する。細胞ペレットを、予熱しておいたRPMI+10%FBS培地に再懸濁させる。その間に、T細胞を上記の所望のE/T比で播種する。hK2+腫瘍細胞株及びhK2-腫瘍細胞株を再度カウントし、次いで、細胞をデュープリケートで2E5/mL及び100uLに再懸濁させる。平底96ウェルプレートにおいて、細胞を、標識された腫瘍細胞株とコインキュベートする。
フローサイトメーターを使用して、以下の通り細胞傷害性アッセイを行う。20時間の共培養後、全ての細胞をU底96ウェルプレートに移し、洗浄する。20時間の共培養後、全ての細胞を平底96ウェルプレートから回収し、U底96ウェルプレートに移し、次いで、洗浄する。30μLの0.25%トリプシンを全てのウェルに添加し、37℃のインキュベーターで5分間インキュベートする。5分後、全ての腫瘍細胞をU底96ウェルプレートに回収する。細胞を、400×gで5分間、2回遠心分離及び洗浄する。次いで、細胞ペレットを、希釈した(1:1000)LIVE/DEAD(商標)Fixable Near-IR染色色素(100μL)に再懸濁させる。細胞を4℃で30分間インキュベートし、400×gで5分間細胞を遠心分離することによって、2回FACSバッファで洗浄する。洗浄後、100μLのBD Cytofix(商標)固定バッファ(50uLのFACSバッファ+50uLの固定バッファ)を使用して、全ての細胞を10分間固定する。細胞を、400×gで5分間、1回遠心分離及び洗浄する。細胞ペレットをFACSバッファに再懸濁させる。染色されたサンプルを、インキュベーション期間の終了後にマルチカラーフローサイトメトリーによって分析する。以下の式を使用して、細胞傷害活性百分率を計算する:
特異的死%=Near IR%+CTV+(死)細胞-自然Near IR%+CTV+/(100%-自然Near IR%+CTV+(死)細胞)×100%。
一過性トランスフェクションの24時間後、標的細胞(hK2陽性Vcap及びhK2陰性DU145細胞)をCell Trace Violet(CTV)蛍光色素で標識し、次いで、hK2 CAR-T細胞と共培養する。モックT細胞が、陰性エフェクター対照として機能する。細胞を、0.3125:1~10:1の範囲のエフェクター対標的細胞(E/T)比で20時間共培養する。殺傷パーセントは、CAR-T細胞なしで培養された生存標的細胞の数に対する、共培養物中に残存する生存(生存能色素陰性)標的(CTV陽性)細胞の絶対数の比として測定する。図示されるように、10:1~0.3125:1のE/T比で、hK2 CAR T細胞は、hK2(+)ヒト前立腺癌細胞株を特異的かつ効率的に溶解するが、hK2(-)細胞は溶解せず、一方、モック又はhK2 CARであるT細胞ではバックグラウンド細胞傷害性しかみられない。
hK2 CAR-T細胞は、標的細胞の免疫細胞媒介細胞溶解の効力アッセイとして、リアルタイム細胞分析システムとしてのxCELLigenceを用いて、リアルタイム細胞傷害性についても試験する。
50μLの標的癌細胞培養培地を96ウェルE-プレート(ACEA Biosciences)の各ウェルに添加し、バックグラウンドインピーダンスを測定し、細胞指数として表す。次いで、接着標的細胞hK2(+)及びhK2(-)を解離させ、100μLの体積で、5E4(VCap)、5E3細胞/Eプレートのウェルの密度で播種し、電極表面上に受動的に接着させる。播種後、Eプレートを層流フード内において周囲温度で30分間保持し、次いで、細胞培養インキュベーター内のRTCA MP機器に移す。実験期間(96時間)全体にわたって15分間隔でデータ記録を直ちに開始する。
処理を適用した時(癌細胞播種の24時間後)に、データ取得を一時停止し、各ウェルから50μLの培地を除去し、エフェクターCAR-T細胞を50μLの体積で、異なるエフェクター対標的(E:T)比で添加する。hK2(+)CAR-T及び未開示の対照CAR(非hK2特異的)T細胞を再懸濁させる。次いで、96ウェルプレートにおいてデュープリケートで2倍希釈を行う(5:1~0.156:1のE/T比)。標的+モックエフェクター対照(RNAエレクトロポレーションT細胞なし)も標的細胞に添加する。
標的細胞hK2(+)及びhK2(-)を、モックと共にインキュベートし、異なるE/T比でおよそ72時間、10μgのmRNAをhK2(+)及びhK2(-)CAR-T細胞にエレクトロポレーションする(トランスフェクションの24時間後)。hK2(+)及びhK2(-)の正規化された細胞指数(CI)プロットを作成する。単独で播種された場合、標的細胞はプレートに接着し、増殖して、CIの読み出しを増加させる。
実施例22:hK2 CAR-T細胞によるサイトカイン産生
細胞傷害性T細胞によって産生されたIFN-γは、腫瘍の免疫監視作用を発揮させ、これにより、増殖を直接阻害し、インビボ及びインビトロにおいて一部の悪性腫瘍のアポトーシスを誘導することができる。hK2 CAR-T細胞がhK2(+)腫瘍細胞によって認識され、活性化され得るかどうかを判定するために、実施例21に記載の通り、xCELLigenceベースの殺傷アッセイから上清を回収した。約70時間の共培養後、上清を回収し、ELISAキット(ヒトIFN-γELISA MAX(商標)Deluxe、BioLegend、カタログ番号430106)と共に提供された指示書に従って、ELISAによってアッセイした。
抗原刺激されたCAR-T細胞のIFN-γ産生が生じる。hK2 CAR及び対照CAR-T細胞は、hK2発現細胞との共培養中にE:T比依存的にIFN-γを分泌したが、hK2-陰性細胞との共培養中には分泌しなかった。未開示の対照CARは、抗原発現レベルがhK2よりもはるかに高いことから、はるかに多量のIFN-γを分泌した。
実施例21:hK2 CAR-T細胞による腫瘍細胞の殺傷
hK2 CAR-T細胞を、抗原依存性細胞傷害性についてリアルタイムIncuCyte腫瘍殺傷アッセイで評価する。hK2 CAR-T細胞を、CAR発現データに基づいて計算した1:1又は0.5:1のエフェクター:標的比で88時間、標的細胞とコインキュベートする。リアルタイムでIncuCyteイメージングシステムによって測定したときに赤色核色素を安定的に発現している標的細胞を同定する。以下の計算を実施する:腫瘍細胞成長阻害(%)=(初期生存標的細胞数-現時点の生存標的細胞数)/初期生存細胞数×100(%)。
実施例22:hK2 CAR-T細胞によるサイトカイン産生
1:1のE/T比で細胞と共にhK2 CAR-T細胞を一晩(およそ20時間)共培養したものから上清を回収し、13-plex Milliplexヒト高感度T細胞キット(HSTCMAG28SPMX13)を使用して分析した。hK2 CAR改変T細胞は、hK2発現細胞との共培養中にサイトカインを分泌したが、非形質導入T細胞(UTD)では最少であった。hK2 CAR-T細胞によるサイトカイン放出の結果。
1:1のE/T比で細胞と共にhK2 CAR-T細胞を一晩(およそ20時間)共培養したものから上清を回収した。hK2 CAR-T細胞は、hK2発現細胞との共培養中にはIFN-γを分泌したが、hK2-陰性細胞との共培養中には分泌しなかった。CD3/28ビーズで刺激したT細胞及びT細胞のみをそれぞれ陽性対照及び陰性対照として使用した。hK2 CAR-T細胞によるIFN-γ放出。デュープリケートの培養からの平均IFN-γ濃度±SD(pg/mL)を示す。異なる熱安定化CAR-T細胞は、hK2(+)細胞と共培養したとき、異なる量のIFN-γを生成した。
実施例23:hK2 CAR-T細胞の増殖
hK2 CAR-T細胞を増殖アッセイで評価する。T細胞増殖は、インビボ免疫機能の重要なインビトロパラメータである。hK2 CAR T細胞の機能を更に評価するために、hK2 CAR-T細胞をCTVで標識して、T細胞増殖を評価する。
hK2 CAR-T及び非形質導入(UTD)T細胞を、CellTrace Violet(CTV、5μM)で標識し、hK2(+)及びhK2(-)細胞と共培養した。共培養の5日後、細胞を収集し、CD3、CD25、NearIR live/dead Dye、及びhK2CARで染色する。Flowjoソフトウェアを備えるFortessaフローサイトメーターでフローサイトメトリー分析を行う。リンパ球を生CD3によって同定し、CTV色素希釈及び活性化マーカーCD25を有するCAR-T細胞の頻度を求める。hK2 CART細胞でゲーティングすることにより、図示されているように、hK2(+)細胞は全てのCARコンストラクトを促進するが、hK2(-)は促進しない。CD3/28ビーズで刺激したT細胞及びT細胞のみをそれぞれ陽性対照及び陰性対照として使用する。任意の刺激なしのT細胞のみは増殖せず、CD3/28ビーズで刺激されたT細胞は等価な増殖パターンを示す。hK2 CAR-T細胞は、細胞と5日間共培養した後に、CD3/28ビーズ陽性対照よりもロバストに増殖した。異なるCARコンストラクトで遺伝子操作されたT細胞は、異なる増殖活性を有し、異なるCAR-T細胞数を示した。CAR-T細胞数は、3つの技術的複製物からの平均絶対細胞数+/-SEMに基づいている。
このプロトコルは、以下のように行う。腫瘍細胞を収集し、PBSで2回洗浄し、腫瘍細胞の増殖をブロックするために、37℃のインキュベーターにおいて1.5時間、100ug/mLのマイトマイシンC(MMC)を含有するPBS中10E6/mLで再懸濁させる。20μLのDMSOをCTV染色溶液のバイアルに添加する。5μLの溶液を、5mL(1:1000)のPBS(37℃に加温)に希釈して、5μMの染色溶液を提供する。2E6個のT細胞をカウントし、回収し、PBSで2回洗浄し、4E6/mL(0.5mL)で再懸濁させる。等体積(0.5mL)のCTV染色溶液を添加する。細胞を37℃で20分間インキュベートする。次いで、4mLのPRMI+20%FBSを細胞に添加して、任意の非結合色素を吸収させる。細胞を5分間インキュベートし、400×gで5分間遠心分離する。細胞ペレットを、予熱しておいたRPMI+10%FBS培地に再懸濁させる。T細胞をカウントし、1E5個の細胞(100uL)を96ウェル平底プレートに播種する。
その間に、MMC処理した腫瘍細胞を回収し、1.5時間後にカウントし、次いで、1E6/mLで再懸濁させる。1E5個の細胞(100μL)を96ウェルプレート内でT細胞と共培養する。T細胞のみ、及び3:1の比のCD3/28ビーズ対細胞を添加したT細胞を、それぞれ陰性対照及び陽性対照として使用する。
5日間共培養した後、全ての細胞を各ウェルから回収する。細胞を遠心分離し、400×gで5分間2回洗浄し、次いで、96ウェルU底プレートにおいてhK2 CAR、CD3、CD8、及びCD25、live/dead(Near-IR)に染色する。洗浄後、全ての細胞を100μLのBD Cytofix(商標)固定バッファ(50uLのFACSバッファ+50uLの固定バッファ)を使用して10分間固定する。染色されたサンプルを、インキュベーション期間の終了後にマルチカラーフローサイトメトリーによって分析する。
データ分析は、以下のように行う。CTVヒストグラムを調製する。単独で培養されたT細胞の右端ピーク(CTV明)、及び集団の残りを捕捉するためのCTV希釈ゲートを包含するように、CTV未希釈ゲートを設定する。これを全てのサンプルに適用する。
実施例24:本明細書に記載の様々なコンストラクトで形質導入されたCAR-T細胞の特性評価。
生成されたCAR-T細胞を、抗原依存性活性についてJNLレポーターアッセイにおいて評価する。簡潔に述べると、シグナル伝達応答性NFATプロモーターによって駆動されるルシフェラーゼ遺伝子を含むJurkat細胞(JNL細胞と呼ばれる)に、配列番号153~160、161~168、195~204、320~325、326~331、及び336~339の1つ以上の核酸配列を含む任意のコンストラクトを形質導入する。
あるいは、コンストラクトは、以下をコードしている核酸配列を含み得る:
配列番号1のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号4のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号2のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号4のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号3のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号6のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号3のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号4のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号2のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号6のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号3のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号4のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号1のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号6のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号3のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号1のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号2のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号3のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号74のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号76のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号75のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号77のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号147のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号140のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号75のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号141のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号75のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号140のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号148のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号142のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号149のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号143のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号150のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号144のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号151のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号145のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号152のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号146のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
配列番号318のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号317のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域。
ビオチン化hK2、続いて、ストレプトアビジンコンジュゲートしたPEによって、各CARの発現を判定する。
hK2 CARコンストラクトとその同種細胞抗原(標的細胞上のhK2)との間の結合によって、JNL細胞においてルシフェラーゼが発現する。その目的のために、試験CARコンストラクトを形質導入したJNL細胞又は非形質導入JNL細胞(UTD)を、標的腫瘍細胞株と共培養し、ルシフェラーゼ活性を発光強度として測定した。発光強度が抗原発現細胞の存在下でUTD細胞のレベルを1.5倍上回った場合、コンストラクトは活性であるとみなす。
CAR-T細胞は、抗原依存的に腫瘍細胞の殺傷を媒介する
CAR17、CAR18、CAR19、及びCAR20を形質導入したCAR-T細胞を、T細胞上のCAR発現に基づいて計算した1:1又は0.5:1のエフェクター対標的(ET)比で96時間、hK2陽性細胞及びhK2陰性細胞とコインキュベートする。標的細胞は、リアルタイムでIncuCyteイメージングシステムによって測定された赤色核色素を安定的に発現する。腫瘍細胞成長阻害(%)=(初期生存標的細胞数-現時点の生存標的細胞数)/初期生存細胞数×100(%)。試験したCAR-T細胞は、およそ100%のTGIを達成し得るが、非形質導入対照は、いかなるTGIも示し得ない。hK2陰性細胞中の試験したCAR-T細胞では、TGIは観察され得ない。
CAR-T細胞は、抗原刺激時にサイトカインを産生する
細胞傷害性T細胞によって産生されたIFN-γは、腫瘍の免疫監視作用を発揮させるのに非常に重要であり、これにより、増殖を直接阻害し、インビボ及びインビトロにおいて一部の悪性腫瘍のアポトーシスを誘導することができる。hK2 CAR改変ヒトT細胞がhK2陽性腫瘍細胞によって認識及び活性化され得るかどうかを判定するために、指定のCARクローンを形質導入した初代T細胞及び対照非形質導入T細胞(UTD)を標的細胞株と共培養し、IFN-γ濃度測定のために上清を回収した。hK2 CAR細胞を形質導入したCAR-T細胞は、hK2細胞を組換え発現するLNCap細胞との共培養中にIFN-γを分泌し、また、hK2発現が非常に少ない細胞との共培養中にも分泌したが、hK2-陰性細胞では分泌しなかった。
CAR-T細胞は、抗原依存的に活性化され、脱顆粒のマーカーをアップレギュレートする
主に、標的腫瘍細胞を殺傷する溶解顆粒の免疫分泌を通して、CD8+Tリンパ球及びナチュラルキラー(NK)細胞などの細胞傷害性リンパ球によって、腫瘍細胞を認識及び殺傷することができる。このプロセスは、顆粒膜と免疫エフェクター細胞の細胞質膜との融合を伴い、その結果、典型的にはCD107aなどの溶解顆粒を取り囲む脂質二重層に存在するリソソーム関連タンパク質の表面曝露が生じる。したがって、CD107aの膜発現は、免疫細胞活性化及び細胞傷害性脱顆粒のマーカーを構成する。
脱顆粒アッセイは、下記のように行う。標的細胞(5×10個)を、96ウェルプレートにおいて0.1mL/ウェルで等数のエフェクター細胞と共培養する。対照ウェルは、T細胞のみを含有していた。1μL/サンプルのモネンシン(BD Biosciences)に加えて抗CD107a(5μL/ウェル)を添加し、37℃で4時間インキュベートする。細胞をPBSで2回洗浄し、hK2 CAR、CD3、及びCD8の発現について染色し、フローサイトメーターBD Fortessaで分析する。
hK2 CAR-T細胞は、抗原依存的に増殖する
CAR-T細胞を、実施例23に記載のT細胞増殖アッセイプロトコルを使用してその増殖について評価する。hK2 CAR-T及び非形質導入(UTD)T細胞をCellTrace Violet(CTV;5μM)で標識し、hK2陽性及びhK2陰性細胞と共培養する。共培養の5日後、細胞を収集し、CD3、CD25、NearIR live/dead Dye、及びhK2CARで染色する。Flowjoソフトウェアを備えるFortessaフローサイトメーターでフローサイトメトリー分析を行う。リンパ球を生CD3によって同定し、CTV色素希釈及び活性化マーカーCD25を有するCAR-T細胞の頻度を求めた。増殖しているT細胞及びCD25を発現しているT細胞の百分率は、デュープリケートからの平均絶対細胞数+/-SEMに基づいている。
本明細書で引用する全ての特許、公開特許、及び引用文献による教示はその全体が参照により組み込まれる。
例示的実施形態について具体的に示し、記載してきたが、当業者らは、添付の特許請求の範囲に包含される実施形態の範囲から逸脱することなく、形態及び詳細における様々な変更を行い得ることを理解する。
配列表
配列番号1-VL 1(LCD6)
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配列番号2-VL 2(LCヒト化)
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配列番号3-VL 3(LCB7)
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配列番号4-VH 1(HCG5)
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配列番号5-VH 2(HCヒト化)
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配列番号6-VH 3(HCF3)
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配列番号7-リンカー配列
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配列番号8-scFV 1(HL_HCG5_LCD6_20AA)
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配列番号9-scFV 2(HL_HCG5_LCヒト化_20AA)
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配列番号10-scFV 3(HL_HCF3_LCB7_20AA)
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配列番号11-scFV 4(HL_HCG5_LCB7_20AA)
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配列番号12-scFV 5(LH_LCD6_HCG5_20AA)
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIQSVQAEDVSVYFCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号13-scFV 6(LH_LCヒト化_HCF3_20AA)
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号14-scFV 7(LH_LCヒト化_HCG5_20AA)
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号15-scFV 8(LH_LCB7_HCF3_20AA)
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号16-scFV 9(LH_LCB7_HCG5_20AA)
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号17-scFV 10(LH_LCD6_HCF3_20AA)
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIQSVQAEDVSVYFCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号18-scFV 11(HL_HCヒト化_LCB7_20AA)
QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK
配列番号19-scFV 12(HL_HCヒト化_LCD6_20AA)
QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIQSVQAEDVSVYFCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK
配列番号20-scFV 13(HL_HCヒト化_LCヒト化_20AA)
QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK
配列番号21-scFV 14(LH_LCD6_HCヒト化_20AA)
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIQSVQAEDVSVYFCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号22-scFV 15(LH_LCヒト化_HCヒト化_20AA)
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号23-scFV 16(LH_LCB7_HCヒト化_20AA)
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号24-シグナル配列
MAWVWTLLFLMAAAQSIQA
配列番号25-CD8a-ヒンジ
TSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD
配列番号26-CD8a-TM
IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC
配列番号27-CD137
KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL
配列番号28-CD3ゼータ
RVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号29-細胞外抗原結合ドメイン1(HL_HCG5_LCD6_20AA)
QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIQSVQAEDVSVYFCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK
配列番号30-細胞外抗原結合ドメイン2(HL_HCG5_LCヒト化_20AA)
QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK
配列番号31-細胞外抗原結合ドメイン3(HL_HCF3_LCB7_20AA)
QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK
配列番号32-細胞外抗原結合ドメイン4(HL_HCG5_LCB7_20AA)
QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK
配列番号33-細胞外抗原結合ドメイン5(LH_LCD6_HCG5_20AA)
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIQSVQAEDVSVYFCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号34-細胞外抗原結合ドメイン6(LH_LCヒト化_HCF3_20AA)
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号35-細胞外抗原結合ドメイン7(LH_LCヒト化_HCG5_20AA)
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号36-細胞外抗原結合ドメイン8(LH_LCB7_HCF3_20AA)
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号37-細胞外抗原結合ドメイン9(LH_LCB7_HCG5_20AA)
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号38-細胞外抗原結合ドメイン10(LH_LCD6_HCF3_20AA)
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIQSVQAEDVSVYFCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号39-細胞外抗原結合ドメイン11(HL_HCヒト化_LCB7_20AA)
QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK
配列番号40-細胞外抗原結合ドメイン12(HL_HCヒト化_LCD6_20AA)
QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIQSVQAEDVSVYFCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK
配列番号41-細胞外抗原結合ドメイン13(HL_HCヒト化_LCヒト化_20AA)
QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK
配列番号42-細胞外抗原結合ドメイン14(LH_LCD6_HCヒト化_20AA)
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIQSVQAEDVSVYFCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号43-細胞外抗原結合ドメイン15(LH_LCヒト化_HCヒト化_20AA)
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号44-細胞外抗原結合ドメイン16(LH_LCB7_HCヒト化_20AA)
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号45-細胞内シグナル伝達ドメイン
KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号46-CAR 1(HL_HCG5_LCD6_20AA;pDR000083431)
QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIQSVQAEDVSVYFCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号47-CAR 2(HL_HCG5_LCヒト化_20AA;pDR000083432)
QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号48-CAR 3(HL_HCF3_LCB7_20AA;pDR000083436)
QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号49-CAR 4(HL_HCG5_LCB7_20AA;pDR000083437)
QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号50-CAR 5(LH_LCD6_HCG5_20AA;pDR000083438)
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIQSVQAEDVSVYFCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号51-CAR 6(LH_LCヒト化_HCF3_20AA;pDR000083440)
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号52-CAR 7(LH_LCヒト化_HCG5_20AA;pDR000083441)
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号53-CAR 8(LH_LCB7_HCF3_20AA;pDR000083443)
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号54-CAR 9(LH_LCB7_HCG5_20AA;pDR000083444)
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号55-CAR 10(LH_LCD6_HCF3_20AA;pDR000083446)
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIQSVQAEDVSVYFCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号56-CAR 11(HL_HCヒト化_LCB7_20AA;pDR000083433)
QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号57-CAR 12(HL_HCヒト化_LCD6_20AA;pDR000083434)
QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIQSVQAEDVSVYFCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号58-CAR 13(HL_HCヒト化_LCヒト化_20AA;pDR000083435)
QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号59-CAR 14(LH_LCD6_HCヒト化_20AA;pDR000083439)
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIQSVQAEDVSVYFCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号60-CAR 15(LH_LCヒト化_HCヒト化_20AA;pDR000083442)
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号61-CAR 16(LH_LCB7_HCヒト化_20AA;pDR000083445)
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号62-ヒトカリクレイン-2配列(シグナル配列:アミノ酸1~18)
MWDLVLSIALSVGCTGAVPLIQSRIVGGWECEKHSQPWQVAVYSHGWAHCGGVLVHPQWVLTAAHCLKKNSQVWLGRHNLFEPEDTGQRVPVSHSFPHPLYNMSLLKHQSLRPDEDSSHDLMLLRLSEPAKITDVVKVLGLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLRPRSLQCVSLHLLSNDMCARAYSEKVTEFMLCAGLWTGGKDTCGGDSGGPLVCNGVLQGITSWGPEPCALPEKPAVYTKVVHYRKWIKDTIAANP
配列番号63-重鎖CDR1配列
SDYAWN
配列番号64-重鎖CDR2配列
YISYSGSTTYSPSLKS
配列番号65-重鎖CDR2配列
YISYSGSTTYNPSLKS
配列番号66-重鎖CDR3配列
GYYYGSGF
配列番号67-軽鎖CDR1配列
RASESVEYFGTSLMH
配列番号68-軽鎖CDR1配列
KASESVEYFGTSLMH
配列番号69-軽鎖CDR2配列
AASNVES
配列番号70-軽鎖CDR2配列
AASNRES
配列番号71-軽鎖CDR3配列
QQTRKVPYT
配列番号72-重鎖CDR1配列
GNSITSDYAWN
配列番号73-重鎖CDR1配列
YISYSGSTT
配列番号74-VL 4(KL2B413)
EIVLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYATSTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPRTFGQGTKVEIK
配列番号75-VL 5(KL2B359)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIK
配列番号76-VH 4(KL2B413)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSERYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDQNYDILTGHYGMDVWGQGTTVTVSS
配列番号77-VH 5(KL2B359)
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKRLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号78-細胞外抗原結合ドメイン17(KL2B413_HL)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSERYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDQNYDILTGHYGMDVWGQGTTVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEIVLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYATSTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPRTFGQGTKVEIK
配列番号79-細胞外抗原結合ドメイン18(KL2B413_LH)
EIVLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYATSTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPRTFGQGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSERYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDQNYDILTGHYGMDVWGQGTTVTVSS
配列番号80-細胞外抗原結合ドメイン19(KL2B359-HL)
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKRLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIK
配列番号81-細胞外抗原結合ドメイン20(KL2B359-LH)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKRLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号82-CAR 17(KL2B413_HL;pBD000091628)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSERYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDQNYDILTGHYGMDVWGQGTTVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEIVLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYATSTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPRTFGQGTKVEIKTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号83-CAR 18(KL2B413_LH;pBD000091623)
EIVLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYATSTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPRTFGQGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSERYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDQNYDILTGHYGMDVWGQGTTVTVSSTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号84-CAR 19(KL2B359-HL;pBD000091576)
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKRLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIKTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号85-CAR 20(KL2B359-LH;pBD000091577)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKRLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号86-重鎖CDR1配列
GFTFSSYW
配列番号87-重鎖CDR2配列
IKQDGSER
配列番号88-重鎖CDR3配列
ARDQNYDILTGHYGMDV
配列番号89-軽鎖CDR1配列
QGISSY
配列番号90-軽鎖CDR2配列
ATS
配列番号91-軽鎖CDR3配列
QQLNSYPRT
配列番号92-重鎖CDR1配列
GNSITSDYA
配列番号93-重鎖CDR2配列
ISYSGST
配列番号94-重鎖CDR3配列
ATGYYYGSGF
配列番号95-軽鎖CDR1配列
ESVEYFGTSL
配列番号96-軽鎖CDR2配列
AAS
配列番号97-軽鎖CDR3配列
GGNNIGSKSVH
配列番号98-リンカー配列
GTSGSSGSGSGGSGSGGGG
配列番号99-リンカー配列
GKPGSGKPGSGKPGSGKPGS
配列番号100-重鎖CDR2配列
YISYSGSTTYNPSLKS
配列番号101-重鎖CDR1配列
GNSITSDYAWN
配列番号102-重鎖CDR1配列
SYYWS
配列番号103-重鎖CDR2配列
YIYYSGSTNYNPSLKS
配列番号104-重鎖CDR3配列
TTIFGVVTPNFYYGMDV
配列番号105-重鎖CDR1配列
GGSISSYYWS
配列番号106-重鎖CDR2配列
YIYYSGSTN
配列番号107-重鎖CDR1配列
SYDIH
配列番号108-重鎖CDR2配列
IISYDGSKKDYTDSVKG
配列番号109-重鎖CDR3配列
ESGWSHYYYYGMDV
配列番号110-重鎖CDR1配列
GFTFSSYDIH
配列番号111-重鎖CDR2配列
IISYDGSKKD
配列番号112-重鎖CDR2配列
RLYVSGFTNYNPSLKS
配列番号113-重鎖CDR3配列
DSGNYWGWFDP
配列番号114-重鎖CDR2配列
RLYVSGFTN
配列番号115-重鎖CDR1配列
YYGMH
配列番号116-重鎖CDR2配列
FISYDGSNKYYADSVKG
配列番号117-重鎖CDR3配列
LPYSGSYWAFDY
配列番号118-重鎖CDR1配列
GFTFSYY
配列番号119-重鎖CDR2配列
FISYDGSNKY
配列番号120-重鎖CDR1配列
HYAMS
配列番号121-重鎖CDR2配列
TIGGSGGSTYYADSVKG
配列番号122-重鎖CDR3配列
PHIVMVTALLYDGMDV
配列番号123-重鎖CDR1配列
GFTFSHYAMS
配列番号124-重鎖CDR3配列
TIGGSGGSTYY
配列番号125-軽鎖CDR1配列
RASQDISNYLA
配列番号126-軽鎖CDR2配列
AASNVES
配列番号127-軽鎖CDR3配列
DDSDRPS
配列番号128-軽鎖CDR1配列
RASQGISSYLA
配列番号129-軽鎖CDR2配列
AASTLQS
配列番号130-軽鎖CDR3配列
QQLNSYPLT
配列番号131-軽鎖CDR2配列
AASTLHS
配列番号132-軽鎖CDR3配列
QKYNSAPYT
配列番号133-軽鎖CDR1配列
SGDQLGENYAC
配列番号134-軽鎖CDR2配列
QDSKRPS
配列番号135-軽鎖CDR3配列
QAWDNSIVV
配列番号136-軽鎖CDR1配列
GGDNIGSKSVH
配列番号137-軽鎖CDR2配列
DNSDRPS
配列番号138-軽鎖CDR3配列
QVWDSSSDHPVV
配列番号139-軽鎖CDR3配列
QVWDSSSDHVV
配列番号140-VH(KL2B357、KL2B357、及びKL2B360))
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号142-VH(KL2B30)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAGTTIFGVVTPNFYYGMDVWGQGTTVTVSS
配列番号143-VH(KL2B53)
EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCVASGFTFSSYDIHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSKKDYTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMDSLRVEDSAVYSCARESGWSHYYYYGMDVWGQGTMVTVSS
配列番号144-VH(KL2B242)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWLRQPAGSGLEWIGRLYVSGFTNYNPSLKSRVTLSLDPSRNQLSLKLSSVTAADTAVYYCAGDSGNYWGWFDPWGQGTLVTVSS
配列番号145-VH(KL2B467)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSYYGMHWVRQAPGKGLEWVAFISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAHLPYSGSYWAFDYWGQGTQVTVSS
配列番号146-VH(KL2B494)
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYAMSWVRQAPGKGLEWVSTIGGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPHIVMVTALLYDGMDVWGQGTMVTVSS
配列番号147-VL(KL2B357)
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNVESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIK
配列番号148-VL(KL2B30)
DIQMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKFLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPLTFGGGTKVEIK
配列番号149-VL(KL2B53)
DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLAWYQQKPGKVPKFLIYAASTLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQKYNSAPYTFGQGTRLEIK
配列番号150-VL(KL2B242)
SYELTQPPSVSVSPGETASITCSGDQLGENYACWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQALDEADYYCQAWDNSIVVFGGGTKLTVL
配列番号151-VL(KL2B467)
QSVLTQPPSVSVAPGQTASITCGGDNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDNSDRPSGIPERFSGSNSGTTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHPVVFGGGTKVTV
配列番号152-VL(KL2B494)
SSELTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHVVFGGGTKLTVL
配列番号153-VH(KL2B357)
CAGGTTCAGCTGCAAGAGTCTGGACCAGGCCTGGTCAAGCCCTCTCAGACCCTGTCTCTGACCTGTACCGTGTCCGGCAACTCCATCACCTCTGACTACGCCTGGAACTGGATTCGGCAGTTCCCTGGCAAGGGCCTTGAGTGGATCGGCTACATCTCCTACTCCGGTTCCACCACCTACAACCCCAGCCTGAAGTCCCGGGTCACCATCTCCCGCGACACCTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGTCCTCCGTGACCGCTGCTGATACCGCCGTGTACTACTGTGCCACCGGCTACTACTACGGCTCCGGCTTTTGGGGACAGGGCACACTGGTTACCGTGTCTAGT
配列番号154-VH(KL2B358)
CAGGTTCAGCTGCAAGAGTCTGGACCAGGCCTGGTCAAGCCCTCTCAGACCCTGTCTCTGACCTGTACCGTGTCCGGCAACTCCATCACCTCTGACTACGCCTGGAACTGGATTCGGCAGCCACCTGGCAAGGGCCTTGAGTGGATCGGCTACATCTCCTACTCCGGTTCCACCACCTACAACCCCAGCCTGAAGTCCCGGGTCACCATCTCCCGCGACACCTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGTCCTCCGTGACCGCTGCTGATACCGCCGTGTACTACTGTGCCACCGGCTACTACTACGGCTCCGGCTTTTGGGGACAGGGCACACTGGTTACCGTGTCTAGT
配列番号155-VH(KL2B360)
CAGGTTCAGCTGCAAGAGTCTGGACCAGGCCTGGTCAAGCCCTCTCAGACCCTGTCTCTGACCTGTACCGTGTCCGGCAACTCCATCACCTCTGACTACGCCTGGAACTGGATTCGGCAGTTCCCTGGCAAGGGCCTTGAGTGGATCGGCTACATCTCCTACTCCGGTTCCACCACCTACAACCCCAGCCTGAAGTCCCGGGTCACCATCTCCCGCGACACCTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGTCCTCCGTGACCGCTGCTGATACCGCCGTGTACTACTGTGCCACCGGCTACTACTACGGCTCCGGCTTTTGGGGACAGGGCACACTGGTTACCGTGTCTAGT
配列番号156-VH(KL2B30)
CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTTACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGATATATCTATTACAGTGGGAGCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGGGGACTACGATTTTTGGAGTGGTTACCCCCAACTTCTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA
配列番号157-VH(KL2B53)
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGTAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGTTATGACATACACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAATTATTTCATATGATGGAAGTAAAAAAGACTATACAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGGACAGCCTGAGAGTTGAGGACTCGGCTGTGTATTCCTGTGCGAGAGAAAGTGGCTGGTCCCACTACTACTATTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
配列番号158-VH(KL2B242)
CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTTACTATTGGAGCTGGCTCCGGCAGCCCGCCGGGTCGGGACTGGAGTGGATTGGGCGTTTATATGTCAGTGGGTTCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCTTGTCACTAGACCCGTCCAGGAACCAGTTGTCCCTGAAACTGAGTTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCCGTATATTATTGTGCGGGAGATAGTGGGAACTACTGGGGTTGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
配列番号159-VH(KL2B467)
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTTACTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCATTTATATCATATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCCCACCTCCCTTATAGTGGGAGCTACTGGGCCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCAGGTCACCGTCTCTTCA
配列番号160-VH(KL2B494)
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTCATTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAACTATTGGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAACCTCATATTGTAATGGTGACTGCTCTTCTCTACGACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCCTCA
配列番号161-VL(KL2B357)
GACATCGTGCTGACCCAGTCTCCAGACTCTCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGAGCCACCATCAACTGCAGAGCCTCCGAGTCCGTGGAATACTTCGGCACCTCTCTGATGCACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGCCTCCTAAGCTGCTGATCTACGCCGCCTCCAACGTGGAATCTGGCGTGCCCGATAGATTTTCCGGCTCTGGCTCTGGCACCGACTTTACCCTGACCATCAGCTCTCTGCAGGCCGAGGATGTGGCCGTGTACTTCTGTCAGCAGACCCGGAAGGTGCCCTACACATTTGGCGGCGGAACAAAGGTGGAAATCAAG
配列番号162-VL(KL2B358)
GAGATCGTGCTGACCCAGTCTCCTGCCACACTGTCACTGTCTCCAGGCGAGAGAGCCACCCTCTCTTGTAGAGCCTCCGAGTCCGTGGAATACTTCGGCACCTCTCTGATGCACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGCCTCCTAGACTGCTGATCTACGCCGCCTCCAACGTCGAATCTGGCATCCCCGCTAGATTCTCCGGCTCTGGCTCTGGCACAGACTTTACCCTGACCATCTCCTCCGTGGAACCCGAGGATTTCGCTGTGTACTTTTGCCAGCAGACCCGGAAGGTGCCCTACACATTTGGCGGCGGAACAAAGGTGGAAATCAAG
配列番号163-VL(KL2B360)
GAGATCGTGCTGACCCAGTCTCCTGCCACACTGTCACTGTCTCCAGGCGAGAGAGCCACCCTCTCTTGTAGAGCCTCCGAGTCCGTGGAATACTTCGGCACCTCTCTGATGCACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGCCTCCTAGACTGCTGATCTACGCCGCCTCCAACGTCGAATCTGGCATCCCCGCTAGATTCTCCGGCTCTGGCTCTGGCACAGACTTTACCCTGACCATCTCCTCCGTGGAACCCGAGGATTTCGCTGTGTACTTTTGCCAGCAGACCCGGAAGGTGCCCTATACATTTGGCGGCGGAACAAAGGTGGAAATCAAG
配列番号164-VL(KL2B30)
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTTCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCCAGTCAGGGCATTAGCAGTTATTTAGCCTGGTATCAGCAAAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGTTCCTGATCTATGCTGCATCCACTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACAATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAGCTTAATAGTTACCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
配列番号165-VL(KL2B53)
GACATCGTGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCGAGTCAGGACATTAGCAATTATTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGTTCCTGATCTATGCTGCATCCACTTTGCACTCTGGGGTCCCATCTCGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCAAAAGTATAACAGTGCCCCGTACACTTTTGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAA
配列番号166-VL(KL2B242)
TCCTATGAGCTGACTCAGCCACCCTCAGTGTCCGTGTCCCCAGGAGAGACAGCCAGCATCACCTGCTCTGGAGATCAATTGGGGGAAAATTATGCTTGCTGGTATCAGCAGAAGCCAGGCCAGTCCCCTGTGTTGGTCATCTATCAAGATAGTAAGCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACAGCCACTCTGACCATCAGCGGGACCCAGGCTCTGGATGAGGCTGACTATTACTGTCAGGCGTGGGACAACAGTATTGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
配列番号167-VL(KL2B467)
CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCGGTGTCAGTGGCCCCCGGGCAGACGGCCAGTATTACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTGTGCTGGTCGTCTATGATAATAGCGACCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGACCACGGCCACCCTGACCATCAGCAGGGTCGAAGCCGGGGATGAGGCCGACTATTACTGTCAGGTGTGGGATAGTAGTAGTGATCATCCTGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGGTCACCGTCCTA
配列番号168-VL(KL2B494)
TCTTCTGAGCTGACTCAGCCACCCTCGGTGTCAGTGGCCCCAGGACAGACGGCCAGGATTACCTGTGGGGGAAACAACATTGGAAGTAAAAGTGTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTGTGCTGGTCGTCTATGATGATAGCGACCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCAGGGTCGAAGCCGGGGATGAGGCCGACTATTACTGTCAGGTGTGGGATAGTAGTAGTGATCATGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
配列番号169-KL2B357 ScFv-HL
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNVESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIK
配列番号170-KL2B357 ScFv-LH
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNVESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号171-KL2B358 ScFv-HL
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIK
配列番号172-KL2B358 ScFv-LH
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号173-KL2B360 ScFv-HL
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIK
配列番号174-KL2B360 ScFv-LH
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号175-KL2B30 ScFv-HL
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAGTTIFGVVTPNFYYGMDVWGQGTTVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIQMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKFLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPLTFGGGTKVEIK
配列番号176-KL2B30 ScFv-LH
DIQMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKFLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPLTFGGGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAGTTIFGVVTPNFYYGMDVWGQGTTVTVSS
配列番号177-KL2B53 ScFv-HL
EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCVASGFTFSSYDIHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSKKDYTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMDSLRVEDSAVYSCARESGWSHYYYYGMDVWGQGTMVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLAWYQQKPGKVPKFLIYAASTLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQKYNSAPYTFGQGTRLEIK
配列番号178-KL2B53 ScFv-LH
DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLAWYQQKPGKVPKFLIYAASTLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQKYNSAPYTFGQGTRLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCVASGFTFSSYDIHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSKKDYTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMDSLRVEDSAVYSCARESGWSHYYYYGMDVWGQGTMVTVSS
配列番号179-KL2B242 ScFv-HL
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWLRQPAGSGLEWIGRLYVSGFTNYNPSLKSRVTLSLDPSRNQLSLKLSSVTAADTAVYYCAGDSGNYWGWFDPWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSSYELTQPPSVSVSPGETASITCSGDQLGENYACWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQALDEADYYCQAWDNSIVVFGGGTKLTVL
配列番号180-KL2B242 ScFv-LH
SYELTQPPSVSVSPGETASITCSGDQLGENYACWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQALDEADYYCQAWDNSIVVFGGGTKLTVLGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWLRQPAGSGLEWIGRLYVSGFTNYNPSLKSRVTLSLDPSRNQLSLKLSSVTAADTAVYYCAGDSGNYWGWFDPWGQGTLVTVSS
配列番号181-KL2B467 ScFv-HL
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSYYGMHWVRQAPGKGLEWVAFISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAHLPYSGSYWAFDYWGQGTQVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQSVLTQPPSVSVAPGQTASITCGGDNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDNSDRPSGIPERFSGSNSGTTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHPVVFGGGTKVTV
配列番号182-KL2B467 ScFv-LH
QSVLTQPPSVSVAPGQTASITCGGDNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDNSDRPSGIPERFSGSNSGTTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHPVVFGGGTKVTVGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSYYGMHWVRQAPGKGLEWVAFISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAHLPYSGSYWAFDYWGQGTQVTVSS
配列番号183-KL2B494 ScFv-HL
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYAMSWVRQAPGKGLEWVSTIGGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPHIVMVTALLYDGMDVWGQGTMVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSSSELTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHVVFGGGTKLTVL
配列番号184-KL2B494 ScFv-LH
SSELTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHVVFGGGTKLTVLGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYAMSWVRQAPGKGLEWVSTIGGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPHIVMVTALLYDGMDVWGQGTMVTVSS
配列番号185-KL2B30 HC IgG4
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAGTTIFGVVTPNFYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
配列番号186-KL2B30 LC IgG4
DIQMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKFLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号187-KL2B53 HC IgG4
EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCVASGFTFSSYDIHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSKKDYTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMDSLRVEDSAVYSCARESGWSHYYYYGMDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
配列番号188-KL2B53 LC IgG4
DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLAWYQQKPGKVPKFLIYAASTLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQKYNSAPYTFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号189-KL2B242 HC IgG4
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWLRQPAGSGLEWIGRLYVSGFTNYNPSLKSRVTLSLDPSRNQLSLKLSSVTAADTAVYYCAGDSGNYWGWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
配列番号190-KL2B242 LC IgG4
SYELTQPPSVSVSPGETASITCSGDQLGENYACWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQALDEADYYCQAWDNSIVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
配列番号191-KL2B467 HC IgG4
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSYYGMHWVRQAPGKGLEWVAFISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAHLPYSGSYWAFDYWGQGTQVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号192-KL2B467 LC IgG4
QSVLTQPPSVSVAPGQTASITCGGDNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDNSDRPSGIPERFSGSNSGTTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHPVVFGGGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
配列番号193-KL2B494 HC IgG4
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYAMSWVRQAPGKGLEWVSTIGGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPHIVMVTALLYDGMDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号194-KL2B494 LC IgG4
SSELTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
配列番号195-KL2B30 HC DNA
CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTTACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGATATATCTATTACAGTGGGAGCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGGGGACTACGATTTTTGGAGTGGTTACCCCCAACTTCTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCTTCCACCAAGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAAACCTACACTTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCATGCCCAGCACCTGAGGCCGCCGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAA
配列番号196-KL2B30 LC DNA
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTTCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCCAGTCAGGGCATTAGCAGTTATTTAGCCTGGTATCAGCAAAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGTTCCTGATCTATGCTGCATCCACTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACAATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAGCTTAATAGTTACCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
配列番号197-KL2B53 HC DNA
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGTAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGTTATGACATACACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAATTATTTCATATGATGGAAGTAAAAAAGACTATACAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGGACAGCCTGAGAGTTGAGGACTCGGCTGTGTATTCCTGTGCGAGAGAAAGTGGCTGGTCCCACTACTACTATTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCAGCTTCCACCAAGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAAACCTACACTTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCATGCCCAGCACCTGAGGCCGCCGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAA
配列番号198-KL2B53 LC DNA
GACATCGTGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCGAGTCAGGACATTAGCAATTATTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGTTCCTGATCTATGCTGCATCCACTTTGCACTCTGGGGTCCCATCTCGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCAAAAGTATAACAGTGCCCCGTACACTTTTGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
配列番号199-KL2B242 HC DNA
CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTTACTATTGGAGCTGGCTCCGGCAGCCCGCCGGGTCGGGACTGGAGTGGATTGGGCGTTTATATGTCAGTGGGTTCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCTTGTCACTAGACCCGTCCAGGAACCAGTTGTCCCTGAAACTGAGTTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCCGTATATTATTGTGCGGGAGATAGTGGGAACTACTGGGGTTGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCTTCCACCAAGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAAACCTACACTTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCATGCCCAGCACCTGAGGCCGCCGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAA
配列番号200-KL2B242 LC DNA
TCCTATGAGCTGACTCAGCCACCCTCAGTGTCCGTGTCCCCAGGAGAGACAGCCAGCATCACCTGCTCTGGAGATCAATTGGGGGAAAATTATGCTTGCTGGTATCAGCAGAAGCCAGGCCAGTCCCCTGTGTTGGTCATCTATCAAGATAGTAAGCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACAGCCACTCTGACCATCAGCGGGACCCAGGCTCTGGATGAGGCTGACTATTACTGTCAGGCGTGGGACAACAGTATTGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCACCCAGTGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCCGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCA
配列番号201-KL2B467 HC DNA
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTTACTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCATTTATATCATATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCCCACCTCCCTTATAGTGGGAGCTACTGGGCCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCAGGTCACCGTCTCTTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGCCGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
配列番号202-KL2B467 LC DNA
CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCGGTGTCAGTGGCCCCCGGGCAGACGGCCAGTATTACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTGTGCTGGTCGTCTATGATAATAGCGACCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGACCACGGCCACCCTGACCATCAGCAGGGTCGAAGCCGGGGATGAGGCCGACTATTACTGTCAGGTGTGGGATAGTAGTAGTGATCATCCTGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGGTCACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCACCCAGTGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCCGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCA
配列番号203-KL2B494 HC DNA
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTCATTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAACTATTGGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAACCTCATATTGTAATGGTGACTGCTCTTCTCTACGACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGCCGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
配列番号204-KL2B494 LC DNA
TCTTCTGAGCTGACTCAGCCACCCTCGGTGTCAGTGGCCCCAGGACAGACGGCCAGGATTACCTGTGGGGGAAACAACATTGGAAGTAAAAGTGTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTGTGCTGGTCGTCTATGATGATAGCGACCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCAGGGTCGAAGCCGGGGATGAGGCCGACTATTACTGTCAGGTGTGGGATAGTAGTAGTGATCATGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCACCCAGTGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCCGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCA
配列番号205-CAR(KL2B357 HL及びKL2B357 LH)
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNVESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIKTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号207-CAR(KL2B358 HL)
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIKTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号208-CAR(KL2B358 LH)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号209-CAR(KL2B360 HL)
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIKTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号210-CAR(KL2B360 LH)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号211-CAR(KL2B30 HL)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAGTTIFGVVTPNFYYGMDVWGQGTTVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIQMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKFLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPLTFGGGTKVEIKTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号212-CAR(KL2B30 LH)
DIQMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKFLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPLTFGGGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAGTTIFGVVTPNFYYGMDVWGQGTTVTVSSTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号213-CAR(KL2B53 HL)
EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCVASGFTFSSYDIHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSKKDYTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMDSLRVEDSAVYSCARESGWSHYYYYGMDVWGQGTMVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLAWYQQKPGKVPKFLIYAASTLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQKYNSAPYTFGQGTRLEIKTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号214-CAR(KL2B53 LH)
DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLAWYQQKPGKVPKFLIYAASTLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQKYNSAPYTFGQGTRLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCVASGFTFSSYDIHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSKKDYTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMDSLRVEDSAVYSCARESGWSHYYYYGMDVWGQGTMVTVSSTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号215-CAR(KL2B242 HL)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWLRQPAGSGLEWIGRLYVSGFTNYNPSLKSRVTLSLDPSRNQLSLKLSSVTAADTAVYYCAGDSGNYWGWFDPWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSSYELTQPPSVSVSPGETASITCSGDQLGENYACWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQALDEADYYCQAWDNSIVVFGGGTKLTVLTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号216-CAR(KL2B242 LH)
SYELTQPPSVSVSPGETASITCSGDQLGENYACWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQALDEADYYCQAWDNSIVVFGGGTKLTVLGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWLRQPAGSGLEWIGRLYVSGFTNYNPSLKSRVTLSLDPSRNQLSLKLSSVTAADTAVYYCAGDSGNYWGWFDPWGQGTLVTVSSTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号217-CAR(KL2B467 HL)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSYYGMHWVRQAPGKGLEWVAFISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAHLPYSGSYWAFDYWGQGTQVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQSVLTQPPSVSVAPGQTASITCGGDNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDNSDRPSGIPERFSGSNSGTTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHPVVFGGGTKVTVTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号218-CAR(KL2B467 LH)
QSVLTQPPSVSVAPGQTASITCGGDNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDNSDRPSGIPERFSGSNSGTTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHPVVFGGGTKVTVGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSYYGMHWVRQAPGKGLEWVAFISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAHLPYSGSYWAFDYWGQGTQVTVSSTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号219-CAR(KL2B494 HL)
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYAMSWVRQAPGKGLEWVSTIGGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPHIVMVTALLYDGMDVWGQGTMVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSSSELTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHVVFGGGTKLTVLTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号220-CAR(KL2B494 LH)
SSELTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHVVFGGGTKLTVLGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYAMSWVRQAPGKGLEWVSTIGGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPHIVMVTALLYDGMDVWGQGTMVTVSSTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
配列番号221-細胞外抗原結合ドメイン(KL2B357 HL)
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNVESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIK
配列番号222-細胞外抗原結合ドメイン(KL2B357 LH)
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNVESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号223-細胞外抗原結合ドメイン(KL2B358 HL)
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIK
配列番号224-細胞外抗原結合ドメイン(KL2B358 LH)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号225-細胞外抗原結合ドメイン(KL2B360 HL)
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIK
配列番号226-細胞外抗原結合ドメイン(KL2B360 LH)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号227-細胞外抗原結合ドメイン(KL2B30 HL)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAGTTIFGVVTPNFYYGMDVWGQGTTVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIQMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKFLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPLTFGGGTKVEIK
配列番号228-細胞外抗原結合ドメイン(KL2B30 LH)
DIQMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKFLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPLTFGGGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAGTTIFGVVTPNFYYGMDVWGQGTTVTVSS
配列番号229-細胞外抗原結合ドメイン(KL2B53 HL)
EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCVASGFTFSSYDIHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSKKDYTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMDSLRVEDSAVYSCARESGWSHYYYYGMDVWGQGTMVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLAWYQQKPGKVPKFLIYAASTLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQKYNSAPYTFGQGTRLEIK
配列番号230-細胞外抗原結合ドメイン(KL2B53 LH)
DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLAWYQQKPGKVPKFLIYAASTLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQKYNSAPYTFGQGTRLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCVASGFTFSSYDIHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSKKDYTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMDSLRVEDSAVYSCARESGWSHYYYYGMDVWGQGTMVTVSS
配列番号231-細胞外抗原結合ドメイン(KL2B242 HL)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWLRQPAGSGLEWIGRLYVSGFTNYNPSLKSRVTLSLDPSRNQLSLKLSSVTAADTAVYYCAGDSGNYWGWFDPWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSSYELTQPPSVSVSPGETASITCSGDQLGENYACWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQALDEADYYCQAWDNSIVVFGGGTKLTVL
配列番号232-細胞外抗原結合ドメイン(KL2B242 LH)
SYELTQPPSVSVSPGETASITCSGDQLGENYACWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQALDEADYYCQAWDNSIVVFGGGTKLTVLGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWLRQPAGSGLEWIGRLYVSGFTNYNPSLKSRVTLSLDPSRNQLSLKLSSVTAADTAVYYCAGDSGNYWGWFDPWGQGTLVTVSS
配列番号233-細胞外抗原結合ドメイン(KL2B467 HL)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSYYGMHWVRQAPGKGLEWVAFISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAHLPYSGSYWAFDYWGQGTQVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQSVLTQPPSVSVAPGQTASITCGGDNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDNSDRPSGIPERFSGSNSGTTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHPVVFGGGTKVTV
配列番号234-細胞外抗原結合ドメイン(KL2B467 LH)
QSVLTQPPSVSVAPGQTASITCGGDNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDNSDRPSGIPERFSGSNSGTTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHPVVFGGGTKVTVGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSYYGMHWVRQAPGKGLEWVAFISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAHLPYSGSYWAFDYWGQGTQVTVSS
配列番号235-細胞外抗原結合ドメイン(KL2B494 HL)
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYAMSWVRQAPGKGLEWVSTIGGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPHIVMVTALLYDGMDVWGQGTMVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSSSELTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHVVFGGGTKLTVL
配列番号236-細胞外抗原結合ドメイン(KL2B494 LH)
SSELTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHVVFGGGTKLTVLGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYAMSWVRQAPGKGLEWVSTIGGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPHIVMVTALLYDGMDVWGQGTMVTVSS
配列番号237-リンカー配列
GGGSGGGS
配列番号238-リンカー配列
GGGSGGGSGGGS
配列番号239-リンカー配列
GGGSGGGSGGGSGGGS
配列番号240-リンカー配列
GGGSGGGSGGGSGGGSGGGS
配列番号241-リンカー配列
GGGGSGGGGSGGGGS
配列番号242-リンカー配列
GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
配列番号243-リンカー配列
GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
配列番号244-リンカー配列
GSTSGSGKPGSGEGSTKG
配列番号245-リンカー配列
IRPRAIGGSKPRVA
配列番号246-リンカー配列
GKGGSGKGGSGKGGS
配列番号247-リンカー配列
GGKGSGGKGSGGKGS
配列番号248-リンカー配列
GGGKSGGGKSGGGKS
配列番号249-リンカー配列
GKGKSGKGKSGKGKS
配列番号250-リンカー配列
GGGKSGGKGSGKGGS
配列番号251-リンカー配列
GKPGSGKPGSGKPGS
配列番号252-リンカー配列
GKPGSGKPGSGKPGSGKPGS
配列番号253-リンカー配列
GKGKSGKGKSGKGKSGKGKS
配列番号254-リンカー配列
STAGDTHLGGEDFD
配列番号255-リンカー配列
GEGGSGEGGSGEGGS
配列番号256-リンカー配列
GGEGSGGEGSGGEGS
配列番号257-リンカー配列
GEGESGEGESGEGES
配列番号258-リンカー配列
GGGESGGEGSGEGGS
配列番号259-リンカー配列
GEGESGEGESGEGESGEGES
配列番号260-リンカー配列
GSTSGSGKPGSGEGSTKG
配列番号261-リンカー配列
PRGASKSGSASQTGSAPGS
配列番号262-リンカー配列
GTAAAGAGAAGGAAAGAAG
配列番号263-リンカー配列
GTSGSSGSGSGGSGSGGGG
配列番号264-リンカー配列
GKPGSGKPGSGKPGSGKPGS
配列番号265-リンカー配列
GSGS
配列番号266-リンカー配列
APAPAPAPAP
配列番号267-リンカー配列
APAPAPAPAPAPAPAPAPAP
配列番号268-リンカー配列
AEAAAKEAAAKEAAAAKEAAAAKEAAAAKAAA
配列番号269-CARヒンジ配列
EPKSCDKTHTCPPCP
配列番号270-CARヒンジ配列
ERKCCVECPPCP
配列番号271-CARヒンジ配列
ELKTPLGDTTHTCPRCP(EPKSCDTPPPCPRCP)3
配列番号272-CARヒンジ配列
ESKYGPPCPSCP
配列番号273-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン1(HL_HCG5_LCD6_20AA)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIQSVQAEDVSVYFCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK
配列番号274-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン2(HL_HCG5_LCヒト化_20AA)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK
配列番号275-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン3(HL_HCF3_LCB7_20AA)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK
配列番号276-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン4(HL_HCG5_LCB7_20AA)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK
配列番号277-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン5(LH_LCD6_HCG5_20AA)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQADIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIQSVQAEDVSVYFCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号278-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン6(LH_LCヒト化_HCF3_20AA)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQADIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号279-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン7(LH_LCヒト化_HCG5_20AA)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQADIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号280-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン8(LH_LCB7_HCF3_20AA)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQADIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号281-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン9(LH_LCB7_HCG5_20AA)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQADIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号282-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン10(LH_LCD6_HCF3_20AA)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQADIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIQSVQAEDVSVYFCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号283-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン11(HL_HCヒト化_LCB7_20AA)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK
配列番号284-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン12(HL_HCヒト化_LCD6_20AA)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIQSVQAEDVSVYFCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK
配列番号285-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン13(HL_HCヒト化_LCヒト化_20AA)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK
配列番号286-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン14(LH_LCD6_HCヒト化_20AA)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQADIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIQSVQAEDVSVYFCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号287-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン15(LH_LCヒト化_HCヒト化_20AA)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQADIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号288-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン16(LH_LCB7_HCヒト化_20AA)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQADIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号289-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン17(KL2B413_HL)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSERYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDQNYDILTGHYGMDVWGQGTTVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEIVLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYATSTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPRTFGQGTKVEIK
配列番号290-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン18(KL2B413_LH)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAEIVLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYATSTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPRTFGQGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSERYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDQNYDILTGHYGMDVWGQGTTVTVSS
配列番号291-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン19(KL2B359-HL)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAQVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKRLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIK
配列番号292-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン20(KL2B359-LH)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKRLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号293-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン(KL2B357 HL)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAQVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNVESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIK
配列番号294-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン(KL2B357 LH)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQADIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNVESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号295-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン(KL2B358 HL)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAQVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIK
配列番号296-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン(KL2B358 LH)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号297-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン(KL2B360 HL)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAQVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIK
配列番号298-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン(KL2B360 LH)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号299-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン(KL2B30 HL)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAGTTIFGVVTPNFYYGMDVWGQGTTVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIQMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKFLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPLTFGGGTKVEIK
配列番号300-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン(KL2B30 LH)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQADIQMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKFLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPLTFGGGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAGTTIFGVVTPNFYYGMDVWGQGTTVTVSS
配列番号301-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン(KL2B53 HL)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAEVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCVASGFTFSSYDIHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSKKDYTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMDSLRVEDSAVYSCARESGWSHYYYYGMDVWGQGTMVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLAWYQQKPGKVPKFLIYAASTLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQKYNSAPYTFGQGTRLEIK
配列番号302-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン(KL2B53 LH)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQADIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLAWYQQKPGKVPKFLIYAASTLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQKYNSAPYTFGQGTRLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCVASGFTFSSYDIHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSKKDYTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMDSLRVEDSAVYSCARESGWSHYYYYGMDVWGQGTMVTVSS
配列番号303-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン(KL2B242 HL)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWLRQPAGSGLEWIGRLYVSGFTNYNPSLKSRVTLSLDPSRNQLSLKLSSVTAADTAVYYCAGDSGNYWGWFDPWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSSYELTQPPSVSVSPGETASITCSGDQLGENYACWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQALDEADYYCQAWDNSIVVFGGGTKLTVL
配列番号304-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン(KL2B242 LH)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQASYELTQPPSVSVSPGETASITCSGDQLGENYACWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQALDEADYYCQAWDNSIVVFGGGTKLTVLGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWLRQPAGSGLEWIGRLYVSGFTNYNPSLKSRVTLSLDPSRNQLSLKLSSVTAADTAVYYCAGDSGNYWGWFDPWGQGTLVTVSS
配列番号305-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン(KL2B467 HL)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSYYGMHWVRQAPGKGLEWVAFISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAHLPYSGSYWAFDYWGQGTQVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQSVLTQPPSVSVAPGQTASITCGGDNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDNSDRPSGIPERFSGSNSGTTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHPVVFGGGTKVTV
配列番号306-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン(KL2B467 LH)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAQSVLTQPPSVSVAPGQTASITCGGDNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDNSDRPSGIPERFSGSNSGTTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHPVVFGGGTKVTVGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSYYGMHWVRQAPGKGLEWVAFISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAHLPYSGSYWAFDYWGQGTQVTVSS
配列番号307-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン(KL2B494 HL)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAQVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYAMSWVRQAPGKGLEWVSTIGGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPHIVMVTALLYDGMDVWGQGTMVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSSSELTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHVVFGGGTKLTVL
配列番号308-シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン(KL2B494 LH)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQASSELTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHVVFGGGTKLTVLGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYAMSWVRQAPGKGLEWVSTIGGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPHIVMVTALLYDGMDVWGQGTMVTVSS
配列番号309-重鎖CDR1配列
GFTFSSYWMT
配列番号310-重鎖CDR2配列
NIKQDGSERY
配列番号311-重鎖CDR3配列
DQNYDILTGHYGMDV
配列番号312-軽鎖CDR1配列
RASQGISSYLS
配列番号313-軽鎖CDR2配列
ATSTLQS
配列番号314-重鎖CDR1配列
SYWMT
配列番号315-重鎖CDR2配列
NIKQDGSERYYVDSVKG
配列番号316-重鎖CDR2配列
YISYSGSTTYSPSLKS
配列番号317-VH(m11B6)
DVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGNSITSDYAWNWIRQFPGNRLEWMGYISYSGSTTYSPSLKSRFSITRDTSKNQFFLQLNSVTPEDTATYFCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号318-VL(m11B6)
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVEYFGTSLMHWYRQKPGQPPKLLIYAASNVESGVPARFSGSGSGTDFSLNIQPVEEDDFSMYFCQQTRKVPYTFGGGTKLEIK
配列番号319-ヒトカリクレイン-2 6-Hisタンパク質
VPLIEGRIVGGWECEKHSQPWQVAVYSHGWAHCGGVLVHPQWVLTAAHCLKKNSQVWLGRHNLFEPEDTGQRVPVSHSFPHPLYNMSLLKHQSLRPDEDSSHDLMLLRLSEPAKITDVVKVLGLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLRPRSLQCVSLHYSEKVTEFMLCAGLWTGGKDTCGGDSGGPLVCNGVLQGITSWGPEPCALPEKPAVYTKVVHYRKWIKDTIAANPHHHHHH
配列番号320-VH cDNA(m11B6)
GATGTGCAGCTTCAGGAGTCTGGACCCGGACTTGTTAAACCAAGTCAGTCTCTGTCCCTGACCTGTACCGTCACCGGCAACAGCATCACAAGCGATTACGCATGGAACTGGATCAGGCAGTTCCCTGGAAATCGACTCGAATGGATGGGCTACATTTCATACTCCGGTTCAACCACTTACTCTCCATCCTTGAAATCTAGGTTCAGCATCACCCGTGATACCTCAAAGAACCAATTTTTTCTGCAACTGAATAGCGTAACTCCAGAGGACACAGCCACATATTTCTGCGCCACTGGGTATTACTATGGCTCAGGTTTCTGGGGTCAGGGCACTCTCGTCACCGTCAGCAGC
配列番号321-VH cDNA(hu11B6)
CAGGTCCAACTGCAAGAGAGCGGACCGGGCCTGGTAAAGCCATCCGACACATTGTCCCTGACGTGTGCGGTAAGTGGAAACTCTATCACTAGCGACTATGCGTGGAATTGGATAAGACAACCGCCGGGCAAGGGGCTGGAATGGATAGGATATATCAGCTATTCCGGTTCTACGACATACAATCCTTCCCTGAAAAGCAGAGTCACTATGTCACGCGACACGTCCAAGAATCAGTTCTCATTGAAATTGTCATCCGTAACGGCCGTTGACACTGCGGTTTATTATTGCGCAACCGGATATTACTACGGCTCTGGTTTTTGGGGACAGGGAACACTTGTTACTGTTAGTTCA
配列番号322-VH cDNA(HCF3-LCD6)
CAGGTGCAGCTGCAGGAGAGCGGCCCAGGCCTGGTGAAGCCAAGCGACACCCTGAGCCTGACCTGCGCCGTGAGCGGCAACAGCATCACCAGCGACTACGCCTGGAACTGGATCCGCCAGTTCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGATCGGCTACATCAGCTACAGCGGCAGCACCACCTACAACCCAAGCCTGAAGAGCCGCGTCACCATCAGCCGCGACACCAGCAAGAACCAGTTCAGCCTGAAGCTGAGCAGCGTGACCCCTGTGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCACCGGCTACTACTACGGCAGCGGCTTCTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC
配列番号323-VH cDNA(HCG5-LCB7)
CAGGTGCAGCTGCAGGAGAGCGGCCCAGGCCTGGTGAAGCCAAGCGACACCCTGAGCCTGACCTGCGCCGTGAGCGGCAACAGCATCACCAGCGACTACGCCTGGAACTGGATCCGCCAGTTCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGATGGGCTACATCAGCTACAGCGGCAGCACCACCTACAACCCAAGCCTGAAGAGCCGCGTCACCATCAGCCGCGACACCAGCAAGAACCAGTTCAGCCTGAAGCTGAGCAGCGTGACCCCTGTGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCACCGGCTACTACTACGGCAGCGGCTTCTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC
配列番号324-VH cDNA(KL2B359)
CAGGTTCAGCTGCAAGAGTCTGGACCAGGCCTGGTCAAGCCCTCTCAGACCCTGTCTCTGACCTGTACCGTGTCCGGCAACTCCATCACCTCTGACTACGCCTGGAACTGGATTCGGCAGTTCCCTGGCAAGCGCCTTGAGTGGATCGGCTACATCTCCTACTCCGGTTCCACCACCTACAACCCCAGCCTGAAGTCCCGGGTCACCATCTCCCGCGACACCTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGTCCTCCGTGACCGCTGCTGATACCGCCGTGTACTACTGTGCCACCGGCTACTACTACGGCTCCGGCTTTTGGGGACAGGGCACACTGGTTACCGTGTCTAGT
配列番号325-VH cDNA(KL2B413)
GAGGTGCAACTTGTGGAGAGCGGCGGAGGTCTGGTCCAACCCGGAGGAAGTCTCCGTCTCTCCTGTGCTGCTAGTGGCTTCACTTTCAGCTCATATTGGATGACATGGGTGAGACAAGCCCCAGGAAAGGGGCTCGAGTGGGTAGCTAACATTAAACAGGACGGCTCCGAACGGTACTATGTTGATTCTGTGAAGGGACGGTTCACTATATCCAGGGATAATGCAAAAAATTCACTCTATCTTCAAATGAACTCACTCAGAGCAGAGGACACTGCCGTGTATTATTGCGCCAGGGATCAAAATTATGACATACTGACCGGTCATTATGGAATGGATGTTTGGGGCCAGGGAACAACCGTTACCGTCTCAAGT
配列番号326-VL cDNA(m11B6)
GACATTGTGCTGACACAGAGTCCAGCATCCTTGGCAGTATCTTTGGGGCAGCGGGCAACAATTTCATGCCGTGCATCTGAAAGTGTGGAGTATTTTGGAACTTCTCTTATGCACTGGTATCGCCAGAAGCCTGGGCAGCCTCCCAAACTCCTTATATATGCCGCTTCCAACGTGGAGTCCGGAGTACCAGCACGCTTTTCCGGCTCTGGGTCCGGCACAGACTTTTCCCTCAATATCCAACCTGTTGAAGAAGACGATTTTTCCATGTATTTTTGCCAACAGACACGCAAGGTTCCATATACATTCGGCGGCGGCACTAAACTTGAGATCAAA
配列番号327-VL cDNA(hu11B6)
GACATAGTCTTGACTCAGAGCCCGGATTCCCTTGCTGTGTCTCTGGGAGAACGAGCTACGATCAACTGCAAGGCAAGTGAATCCGTAGAATACTTCGGGACATCATTGATGCATTGGTATCAACAGAAACCGGGGCAACCGCCCAAATTGCTGATATATGCGGCTAGTAATAGAGAATCAGGAGTACCGGATAGGTTTAGTGGTTCAGGATCAGGTACAGATTTCACCCTGACAATAAGTAGCTTGCAAGCCGAAGACGTAGCAGTGTATTACTGCCAACAAACCCGAAAGGTGCCATATACGTTTGGACAGGGTACAAAGTTGGAAATCAAA
配列番号328-VL cDNA(HCF3-LCD6)
GACATCGTGCTGACCCAGAGCCCAGACAGCCTGGCCGTGAGCCTGGGCGAGCGCGCCACCATCAACTGCAAGGCCAGCGAGAGCGTGGAGTACTTCGGCACCAGCCTGATGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGCCACCAAAGCTGCTGATCTACGCTGCCAGCAACCGCGAGAGCGGCGTGCCAGACCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCCAGAGCGTGCAGGCCGAGGACGTCTCCGTGTACTTCTGCCAGCAGACCCGCAAGGTGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAG
配列番号329-VL cDNA(HCG5-LCB7)
GACATCGTGCTGACCCAGAGCCCAGACAGCCTGGCCGTGAGCCTGGGCGAGCGCGCCACCATCAACTGCAAGGCCAGCGAGAGCGTGGAGTACTTCGGCACCAGCCTGATGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGCCACCAAAGCTGCTGATCTACGCTGCCAGCAACCGCGAGAGCGGCGTGCCAGACCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCGTGCAGGCCGAGGACGTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAGACCCGCAAGGTGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAG
配列番号330-VL cDNA(KL2B359)
GAGATCGTGCTGACCCAGTCTCCTGCCACACTGTCACTGTCTCCAGGCGAGAGAGCCACCCTCTCTTGTAGAGCCTCCGAGTCCGTGGAATACTTCGGCACCTCTCTGATGCACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGCCTCCTAGACTGCTGATCTACGCCGCCTCCAACGTCGAATCTGGCATCCCCGCTAGATTCTCCGGCTCTGGCTCTGGCACAGACTTTACCCTGACCATCTCCTCCGTGGAACCCGAGGATTTCGCTGTGTACTTTTGCCAGCAGACCCGGAAGGTGCCCTACACATTTGGCGGCGGAACAAAGGTGGAAATCAAG
配列番号331-VL cDNA(KL2B413)
GAAATCGTACTGACCCAGTCCCCTTCTTTCTTGAGTGCATCAGTTGGGGATAGAGTGACCATTACTTGTAGAGCATCTCAAGGTATTTCTTCATACTTGTCTTGGTATCAACAAAAACCTGGCAAGGCACCCAAACTCTTGATCTACGCCACCTCTACATTGCAAAGTGGGGTTCCTTCTAGGTTTTCAGGCTCCGGCTCTGGTACCGAGTTCACCCTCACTATAAGCAGTCTCCAACCTGAAGATTTCGCTACTTATTATTGTCAGCAGCTTAATTCTTATCCCCGAACCTTTGGTCAAGGAACTAAGGTCGAGATCAAA
配列番号332-m11B6 HC IgG4
DVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGNSITSDYAWNWIRQFPGNRLEWMGYISYSGSTTYSPSLKSRFSITRDTSKNQFFLQLNSVTPEDTATYFCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
配列番号333-m11B6 LC IgG4
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVEYFGTSLMHWYRQKPGQPPKLLIYAASNVESGVPARFSGSGSGTDFSLNIQPVEEDDFSMYFCQQTRKVPYTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
配列番号334-h11B6 HC IgG4
QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号335-h11B6 LC IgG4
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号336-m11B6 HC DNA
GATGTGCAGCTTCAGGAGTCTGGACCCGGACTTGTTAAACCAAGTCAGTCTCTGTCCCTGACCTGTACCGTCACCGGCAACAGCATCACAAGCGATTACGCATGGAACTGGATCAGGCAGTTCCCTGGAAATCGACTCGAATGGATGGGCTACATTTCATACTCCGGTTCAACCACTTACTCTCCATCCTTGAAATCTAGGTTCAGCATCACCCGTGATACCTCAAAGAACCAATTTTTTCTGCAACTGAATAGCGTAACTCCAGAGGACACAGCCACATATTTCTGCGCCACTGGGTATTACTATGGCTCAGGTTTCTGGGGTCAGGGCACTCTCGTCACCGTCAGCAGCGCCAAAACAACAGCACCAAGTGTCTATCCACTGGCCCCTGTGTGTGGAGATACAACTGGCTCCTCGGTGACTCTAGGATGCCTGGTCAAGGGTTATTTCCCTGAGCCAGTGACCTTGACCTGGAACTCTGGATCCCTGTCCAGTGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGACCTCTACACCCTCAGCAGCTCAGTGACTGTAACCTCGAGCACCTGGCCCAGCCAGTCCATCACCTGCAATGTGGCCCACCCGGCAAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAAAATTGAGCCCAGAGGGCCCACAATCAAGCCCTGTCCTCCATGCAAATGCCCAGCACCTAACCTCTTGGGTGGACCATCCGTCTTCATCTTCCCTCCAAAGATCAAGGATGTACTCATGATCTCCCTGAGCCCCATAGTCACATGTGTGGTGGTGGATGTGAGCGAGGATGACCCAGATGTCCAGATCAGCTGGTTTGTGAACAACGTGGAAGTACACACAGCTCAGACACAAACCCATAGAGAGGATTACAACAGTACTCTCCGGGTGGTCAGTGCCCTCCCCATCCAGCACCAGGACTGGATGAGTGGCAAGGAGTTCAAATGCAAGGTCAACAACAAAGACCTCCCAGCGCCCATCGAGAGAACCATCTCAAAACCCAAAGGGTCAGTAAGAGCTCCACAGGTATATGTCTTGCCTCCACCAGAAGAAGAGATGACTAAGAAACAGGTCACTCTGACCTGCATGGTCACCGACTTCATGCCTGAAGACATTTACGTGGAGTGGACCAACAACGGGAAAACAGAGCTAAACTACAAGAACACTGAACCAGTCCTGGACTCTGATGGTTCTTACTTCATGTACAGCAAGCTGAGAGTGGAAAAGAAGAACTGGGTGGAAAGAAATAGCTACTCCTGTTCAGTGGTCCACGAGGGTCTGCACAATCACCACACGACTAAGAGCTTCTCCCGGACTCCGGGTAAA
配列番号337-mu11B6 LC DNA
GACATTGTGCTGACACAGAGTCCAGCATCCTTGGCAGTATCTTTGGGGCAGCGGGCAACAATTTCATGCCGTGCATCTGAAAGTGTGGAGTATTTTGGAACTTCTCTTATGCACTGGTATCGCCAGAAGCCTGGGCAGCCTCCCAAACTCCTTATATATGCCGCTTCCAACGTGGAGTCCGGAGTACCAGCACGCTTTTCCGGCTCTGGGTCCGGCACAGACTTTTCCCTCAATATCCAACCTGTTGAAGAAGACGATTTTTCCATGTATTTTTGCCAACAGACACGCAAGGTTCCATATACATTCGGCGGCGGCACTAAACTTGAGATCAAACGGGCTGATGCTGCACCGACTGTGTCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGT
配列番号338-hu11B6 HC DNA
CAGGTCCAACTGCAAGAGAGCGGACCGGGCCTGGTAAAGCCATCCGACACATTGTCCCTGACGTGTGCGGTAAGTGGAAACTCTATCACTAGCGACTATGCGTGGAATTGGATAAGACAACCGCCGGGCAAGGGGCTGGAATGGATAGGATATATCAGCTATTCCGGTTCTACGACATACAATCCTTCCCTGAAAAGCAGAGTCACTATGTCACGCGACACGTCCAAGAATCAGTTCTCATTGAAATTGTCATCCGTAACGGCCGTTGACACTGCGGTTTATTATTGCGCAACCGGATATTACTACGGCTCTGGTTTTTGGGGACAGGGAACACTTGTTACTGTTAGTTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
配列番号339-hu11B6 LC DNA
GACATAGTCTTGACTCAGAGCCCGGATTCCCTTGCTGTGTCTCTGGGAGAACGAGCTACGATCAACTGCAAGGCAAGTGAATCCGTAGAATACTTCGGGACATCATTGATGCATTGGTATCAACAGAAACCGGGGCAACCGCCCAAATTGCTGATATATGCGGCTAGTAATAGAGAATCAGGAGTACCGGATAGGTTTAGTGGTTCAGGATCAGGTACAGATTTCACCCTGACAATAAGTAGCTTGCAAGCCGAAGACGTAGCAGTGTATTACTGCCAACAAACCCGAAAGGTGCCATATACGTTTGGACAGGGTACAAAGTTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
配列番号340-scFv 17(KL2B413 HL)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSERYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDQNYDILTGHYGMDVWGQGTTVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEIVLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYATSTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPRTFGQGTKVEIK
配列番号341-scFv 18(KL2B413 LH)
EIVLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYATSTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPRTFGQGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSERYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDQNYDILTGHYGMDVWGQGTTVTVSS
配列番号342-scFv 19(KL2B359 HL)
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKRLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIK
配列番号343-scFv 20(KL2B359 LH)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKRLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
配列番号344(VHコンセンサス配列)
Figure 2022535150000037
X1は、D若しくはQである;X2は、A若しくはTである;X3は、P若しくはFである;X4は、I若しくはMである;X5は、A若しくはPである;又はX6は、V又はAである。HCDR残基には下線が引かれている。
配列番号345(VLコンセンサス配列)
Figure 2022535150000038
X1は、D又はEであり;X2は、D又はAであり;X3は、S又はTであり;X4は、A又はSであり;X5は、V又はLであり;X6は、L又はPであり;X7は、I又はLであり;X8は、N又はSであり;X9は、R又はKであり;X10は、K又はRであり;X11は、V又はRであり;X12は、V又はIであり;X13は、A又はDであり;X14は、Q又はSである。X15は、P又はAであり;X16は、F又はVであり;X17は、Y又はFであり;X18は、Q又はGであり;X19は、L又はVである。LCDR残基には下線が引かれている。
配列番号346-エピトープ
KVTEF
配列番号347-エピトープ
HYRKW
配列番号348-エピトープ
SHGWAH
配列番号349-エピトープ
RHNLFEPEDTGQRVP
配列番号350-エピトープ
GWGSIEPEE

Claims (42)

  1. キメラ抗原受容体(CAR)であって、
    (a)ヒトカリクレイン-2(hK2)抗原に特異的に結合する細胞外ドメインと、
    (b)膜貫通ドメインと、
    (c)少なくとも1つの共刺激ドメインを任意選択で含む細胞内シグナル伝達ドメインと、
    を含む、CAR。
  2. 請求項1に記載のCARであって、
    (d)CD8a-ヒンジ領域
    を更に含み、
    前記膜貫通ドメインが、CD8a膜貫通領域(CD8a-TM)ポリペプチドを含み;
    前記細胞内シグナル伝達ドメインが、TNF受容体スーパーファミリーメンバー9(CD137)成分を含む共刺激ドメイン及びT細胞表面糖タンパク質CD3ゼータ鎖(CD3z)成分を含む一次シグナル伝達ドメインを含む、CAR。
  3. 請求項2に記載のCARであって、
    前記CD8a-ヒンジ領域が、配列番号25、269、270、271、若しくは272と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を含む、
    前記膜貫通ドメインが、配列番号26と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を含む、並びに/又は
    前記細胞内シグナル伝達ドメインが、配列番号27と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する共刺激ドメイン、及び配列番号28と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する一次シグナル伝達ドメインを含む、CAR。
  4. 細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラ抗原受容体(CAR)であって、前記細胞外抗原結合ドメインが、
    配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号64のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;配列番号314のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号315のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号311のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
    配列番号309のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号310のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号311のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
    配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号65のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
    配列番号72のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号73のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
    配列番号86のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号87のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号88のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
    配列番号92のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号93のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号94のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
    配列番号102のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号103のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号104のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
    配列番号105のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号106のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号104のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
    配列番号107のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号108のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号109のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
    配列番号110のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号111のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号109のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
    配列番号102のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号112のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号113のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
    配列番号105のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号114のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号113のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
    配列番号115のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号116のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号117のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
    配列番号118のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号119のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号117のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;
    配列番号120のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号121のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号122のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;又は
    配列番号123のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号124のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、及び配列番号122のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、
    を含み、
    前記細胞外抗原結合ドメインは、hK2抗原に結合する、CAR。
  5. 細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラ抗原受容体(CAR)であって、前記細胞外抗原結合ドメインが、
    配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号69のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
    配列番号68のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号70のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
    配列番号89のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号90のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
    配列番号95のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号96のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
    配列番号312のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号313のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
    配列番号89のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号90のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
    配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号126のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
    配列番号128のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号129のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号130のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
    配列番号125のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号131のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号132のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
    配列番号133のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号134のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号135のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
    配列番号136のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号137のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号138のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;又は
    配列番号97のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号127のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号139のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3、
    を含み、
    前記細胞外抗原結合ドメインが、hK2抗原に結合する、CAR。
  6. 請求項4に記載のCARであって、前記細胞外抗原結合ドメインが、
    配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号69のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
    配列番号68のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号70のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
    配列番号89のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号90のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
    配列番号95のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号96のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
    配列番号89のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号90のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
    配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号126のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
    配列番号128のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号129のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号130のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
    配列番号125のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号131のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号132のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
    配列番号133のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号134のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号135のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
    配列番号136のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号137のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号138のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;又は
    配列番号97のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号127のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、及び配列番号139のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3、
    を更に含む、CAR。
  7. 請求項6に記載のCARであって、前記細胞外抗原結合ドメインが、
    配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号64のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号69のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
    配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号65のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号68のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号70のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
    配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号65のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号126のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
    配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号65のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号69のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
    配列番号63のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号65のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号66のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号67のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号126のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号71のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
    配列番号314のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号315のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号311のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号312のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号313のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
    配列番号102のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号103のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号104のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号128のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号129のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号130のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
    配列番号107のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号108のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号109のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号125のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号131のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号132のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
    配列番号102のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号112のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号113のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号133のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号134のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号135のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
    配列番号115のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号116のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号117のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号136のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号137のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号138のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;又は
    配列番号120のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号121のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号122のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号97のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号127のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号138のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む、CAR。
  8. 前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号86のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号87のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号88のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3、及び配列番号89のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域1(CDR1)、配列番号90のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2、配列番号91のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む、請求項6に記載のCAR。
  9. 細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラ抗原受容体(CAR)であって、前記細胞外抗原結合ドメインが、
    配列番号1、2、3、74、75、147、148、149、150、151、152、及び318から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン(VL)、並びに/又は
    配列番号4、5、6、76、77、140、141、142、143、144、145、146、及び317から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン(VH)、
    を含み、
    前記細胞外抗原結合ドメインが、ヒトカリクレイン-2(hK2)抗原に結合する、CAR。
  10. 請求項9に記載のCARであって、前記細胞外抗原結合ドメインが、
    配列番号1のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号4のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
    配列番号2のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号4のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
    配列番号3のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号6のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
    配列番号3のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号4のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
    配列番号2のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号6のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
    配列番号3のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号4のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
    配列番号1のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号6のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
    配列番号3のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
    配列番号1のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
    配列番号2のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
    配列番号3のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
    配列番号74のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号76のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
    配列番号75のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号77のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
    配列番号147のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号140のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
    配列番号75のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号141のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
    配列番号75のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号140のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
    配列番号148のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号142のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
    配列番号149のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号143のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
    配列番号150のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号144のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
    配列番号151のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号145のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
    配列番号152のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号146のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
    配列番号318のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号317のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、
    を含む、CAR。
  11. 前記細胞外抗原結合ドメインが、一本鎖可変断片(scFv)を含み、前記scFvが、軽鎖可変領域(VL)及び重鎖可変領域(VH)を含む、請求項1~10のいずれかに記載のCAR。
  12. 前記scFvが、前記軽鎖可変領域(VL)と前記重鎖可変領域(VH)との間にリンカーポリペプチドを含む、請求項11に記載のCAR。
  13. 前記リンカーポリペプチドが、配列番号7のアミノ酸配列を含む、請求項12に記載のCAR。
  14. 前記scFvが、配列番号8~23、169~184、及び340~343からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項11~13のいずれかに記載のCAR。
  15. 前記細胞外抗原結合ドメインが、シグナルポリペプチドを含む、請求項1~14のいずれかに記載のCAR。
  16. 前記シグナルポリペプチドが、配列番号24のアミノ酸配列を含む、請求項15に記載のCAR。
  17. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、TNF受容体スーパーファミリーメンバー9(CD137)成分、T細胞表面糖タンパク質CD3ゼータ鎖(CD3z)成分、表面抗原分類(CD27)成分、表面抗原分類スーパーファミリーメンバー成分、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチド成分を含む、請求項4~16のいずれかに記載のCAR。
  18. 前記CD137成分が、配列番号27のアミノ酸配列を含む、請求項17に記載のCAR。
  19. 前記CD3z成分が、配列番号28のアミノ酸配列を含む、請求項17又は18に記載のCAR。
  20. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、配列番号45のアミノ酸配列を含み、又は、任意選択で、前記細胞内シグナル伝達ドメインが、配列番号27のアミノ酸配列を含む共刺激ドメイン及び配列番号28のアミノ酸配列を含む一次シグナル伝達ドメインを含む、請求項17~19のいずれかに記載のCAR。
  21. 前記膜貫通ドメインが、CD8a膜貫通領域(CD8a-TM)ポリペプチドを含む、請求項4~20のいずれかに記載のCAR。
  22. 前記CD8a-TMポリペプチドが、配列番号26のアミノ酸配列を含む、請求項21に記載のCAR。
  23. 前記膜貫通ドメインを前記細胞外抗原結合ドメインに連結するヒンジ領域を更に含む、請求項4~22のいずれかに記載のCAR。
  24. 前記ヒンジ領域が、CD8a-ヒンジ領域である、請求項23に記載のCAR。
  25. 前記CD8a-ヒンジ領域が、配列番号25、269、270、271、又は272のアミノ酸配列を含む、請求項24に記載のCAR。
  26. 前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号29~44、78~81、221~236、及び273~308からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1~25に記載のいずれかに記載のCAR。
  27. 配列番号46~61、82~85、及び205~220からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1~26のいずれかに記載のCAR。
  28. 請求項1~27のいずれかに記載のCARを発現する、単離リンパ球。
  29. Tリンパ球である、請求項28に記載の単離リンパ球。
  30. ナチュラルキラー(NK)細胞である、請求項28に記載の単離リンパ球。
  31. 請求項1~27のいずれかに記載のCARをコードしている、単離核酸分子。
  32. 請求項31に記載の核酸分子を含む、ベクター。
  33. 請求項31に記載の核酸分子を発現する、細胞。
  34. 有効量の請求項28~30のいずれかに記載のリンパ球を含む、医薬組成物。
  35. 有効量の請求項28~30のいずれかに記載のリンパ球と、医薬的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
  36. 治療において使用するための、請求項1~27のいずれかに記載のCAR、又は請求項34若しくは35に記載の医薬組成物。
  37. 癌を有する対象を治療する方法で使用するための、請求項1~27のいずれかに記載のCAR、又は請求項34若しくは35に記載の医薬組成物。
  38. 癌を有する対象を治療する方法であって、
    治療有効量の請求項28~30のいずれかに記載のリンパ球を、それを必要としている対象に投与し、それにより、前記リンパ球が前記対象における癌細胞の殺傷を誘導することを含む、方法。
  39. 前記癌が、前立腺癌又はアンドロゲン受容体発現乳癌である、請求項38に記載の方法、又は請求項37に記載の方法で使用するためのCAR若しくは医薬組成物。
  40. 癌細胞の標的化殺傷の方法であって、
    前記癌細胞を請求項28~30のいずれかに記載のリンパ球と接触させ、それにより、
    前記リンパ球が、前記癌細胞の殺傷を誘導することを含む、方法。
  41. 前記癌細胞が、前立腺癌細胞又はアンドロゲン受容体発現乳癌細胞である、請求項40に記載の方法。
  42. 対象における癌の存在を検出する方法であって、
    前記対象から得られた細胞サンプルを請求項1~27のいずれかに記載のCARと接触させ、それにより、CAR-細胞複合体を形成することと、
    前記複合体を検出することと、ここで、前記複合体の検出が、前記対象における癌の存在を示す、
    を含む、方法。
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CR20220025A (es) 2019-07-26 2022-05-04 Janssen Biotech Inc Proteínas que comprenden dominios de unión al antígeno de la peptidasa 2 relacionada con la calicreína y sus usos
UY38800A (es) 2019-07-26 2021-01-29 Janssen Biotech Inc Receptor de antígeno quimérico (car) anti-hk2
CA3211114A1 (en) 2021-02-16 2022-08-25 Janssen Biotech, Inc. Materials and methods for enhanced linker targeting
US11766457B2 (en) * 2021-05-14 2023-09-26 The University Of Toledo Immunosuppressive antigen-specific chimeric antigen receptor Treg cells for prevention and/or treatment of autoimmune and alloimmune disorders

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2016540503A (ja) * 2013-11-19 2016-12-28 フレダックス・アクチエボラーグ ヒト化抗カリクレイン−2抗体
WO2018052828A1 (en) * 2016-09-14 2018-03-22 Janssen Biotech, Inc. Chimeric antigen receptors comprising bcma-specific fibronectin type iii domains and uses thereof
WO2019018402A2 (en) * 2017-07-17 2019-01-24 Janssen Biotech, Inc. ANTIGEN-BINDING REGIONS DIRECTED AGAINST FIBRONECTIN TYPE III DOMAINS AND METHODS OF USING THE SAME
WO2019118475A1 (en) * 2017-12-13 2019-06-20 Janssen Biotech, Inc. Immortalized car-t cells genetically modified to eliminate t-cell receptor and beta 2-microglobulin expression
JP2019520089A (ja) * 2016-06-27 2019-07-18 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド ペプチドエピトープを同定する方法、そのようなエピトープに結合する分子および関連用途
JP2019520591A (ja) * 2016-06-27 2019-07-18 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド Mhc−e拘束性エピトープ、結合分子ならびに関連する方法および使用
WO2019138354A1 (en) * 2018-01-12 2019-07-18 Curocell Inc. Enhanced immune cells using dual shrna and composition including the same

Family Cites Families (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3854480A (en) 1969-04-01 1974-12-17 Alza Corp Drug-delivery system
US3832253A (en) 1973-03-21 1974-08-27 Baxter Laboratories Inc Method of making an inflatable balloon catheter
US4452774A (en) 1982-04-30 1984-06-05 President And Fellows Of Harvard College Isonitrile radionuclide complexes for labelling and imaging agents
US4667014A (en) 1983-03-07 1987-05-19 Syntex (U.S.A.) Inc. Nonapeptide and decapeptide analogs of LHRH, useful as LHRH antagonists
US4452775A (en) 1982-12-03 1984-06-05 Syntex (U.S.A.) Inc. Cholesterol matrix delivery system for sustained release of macromolecules
CA1200416A (en) 1983-05-13 1986-02-11 Societe Des Produits Nestle S.A. Food process
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US5075109A (en) 1986-10-24 1991-12-24 Southern Research Institute Method of potentiating an immune response
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
ATE158021T1 (de) 1990-08-29 1997-09-15 Genpharm Int Produktion und nützung nicht-menschliche transgentiere zur produktion heterologe antikörper
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
JPH04167172A (ja) 1990-10-31 1992-06-15 Nec Corp ベクトルプロセッサ
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
US6265150B1 (en) 1995-06-07 2001-07-24 Becton Dickinson & Company Phage antibodies
US5714352A (en) 1996-03-20 1998-02-03 Xenotech Incorporated Directed switch-mediated DNA recombination
WO2001058479A1 (en) 2000-02-08 2001-08-16 The Penn State Research Foundation Immunotherapy using interleukin 13 receptor subunit alpha 2
WO2003076610A2 (fr) 2002-03-14 2003-09-18 Exonhit Therapeutics Sa Variants de kallikrein-2 et kallikrein-3 humaines et leurs utilisations
US9963510B2 (en) 2005-04-15 2018-05-08 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
ES2707152T3 (es) 2005-04-15 2019-04-02 Macrogenics Inc Diacuerpos covalentes y usos de los mismos
AU2008343589A1 (en) 2007-12-19 2009-07-09 Centocor Ortho Biotech Inc. Design and generation of human de novo pIX phage display libraries via fusion to pIX or pVII, vectors, antibodies and methods
US9580491B2 (en) 2010-03-31 2017-02-28 Ablexis, Llc Genetic engineering of non-human animals for the production of chimeric antibodies
EP2771037B1 (en) 2011-10-28 2016-08-03 Fredax AB Therapeutic agents and uses thereof
PT2931030T (pt) 2012-12-14 2020-08-03 Open Monoclonal Tech Inc Polinucleótidos que codificam anticorpos de roedores com idiótipos humanos e animais que os compreendem
GB2520353A (en) 2013-11-19 2015-05-20 Fredax Ab Antibody polypeptides and uses thereof
WO2017087826A1 (en) 2015-11-18 2017-05-26 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Systems, methods, and compositions for imaging androgen receptor axis activity in carcinoma, and related therapeutic compositions and methods
UY38800A (es) 2019-07-26 2021-01-29 Janssen Biotech Inc Receptor de antígeno quimérico (car) anti-hk2

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2016540503A (ja) * 2013-11-19 2016-12-28 フレダックス・アクチエボラーグ ヒト化抗カリクレイン−2抗体
JP2019520089A (ja) * 2016-06-27 2019-07-18 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド ペプチドエピトープを同定する方法、そのようなエピトープに結合する分子および関連用途
JP2019520591A (ja) * 2016-06-27 2019-07-18 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド Mhc−e拘束性エピトープ、結合分子ならびに関連する方法および使用
WO2018052828A1 (en) * 2016-09-14 2018-03-22 Janssen Biotech, Inc. Chimeric antigen receptors comprising bcma-specific fibronectin type iii domains and uses thereof
WO2019018402A2 (en) * 2017-07-17 2019-01-24 Janssen Biotech, Inc. ANTIGEN-BINDING REGIONS DIRECTED AGAINST FIBRONECTIN TYPE III DOMAINS AND METHODS OF USING THE SAME
WO2019118475A1 (en) * 2017-12-13 2019-06-20 Janssen Biotech, Inc. Immortalized car-t cells genetically modified to eliminate t-cell receptor and beta 2-microglobulin expression
WO2019138354A1 (en) * 2018-01-12 2019-07-18 Curocell Inc. Enhanced immune cells using dual shrna and composition including the same

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