JP2022535150A - 抗ｈＫ２キメラ抗原受容体（ＣＡＲ） - Google Patents

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Abstract

本開示は、癌の治療のための、ヒトカリクレイン－２（ｈＫ２）に特異的結合する、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）及びこのようなＣＡＲを含む免疫応答性細胞を提供する。

Description

（配列表）
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出済みである、その全体が参照により本明細書に組み込まれる配列表を含む。上記ＡＳＣＩＩコピーは、２０２０年６月３０日に作成され、名称はＪＢＩ６１２４ＷＯＰＣＴ１＿ＳＬ．ｔｘｔであり、サイズは５６２，１６０バイトである。
（発明の分野）
本発明は、ｈＫ２を標的とする一本鎖可変断片を含むｈＫ２を標的とするキメラ抗原受容体（chimeric antigen receptors、ＣＡＲ）、及びＣＡＲを発現する遺伝子操作されたｈＫ２を標的とする免疫細胞に関する。また、ＣＡＲをコードしている核酸及び発現ベクター、当該ベクターを含有する組み換え細胞、並びにｈＫ２を標的とするＣＡＲを発現する遺伝子操作された免疫細胞を含む組成物も提供される。ＣＡＲ及び遺伝子操作された免疫細胞を作製する方法、並びに癌を含む状態を治療するために遺伝子操作された免疫細胞を使用する方法も提供される。
（背景）
前立腺癌は、診断頻度が２番目に高い癌であり、男性における癌の死因の６位であり、世界中の男性の全ての新たな癌症例の１４％（９０３，５００）及び全ての癌死亡の６％（２５８，４００）を占める。前立腺癌の診断から死亡までの過程は、疾患の程度、ホルモン状態、及び検出可能な転移の有無：限局性疾患、放射線療法又は手術後に検出可能な転移なく前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）のレベルが上昇していること、並びに非去勢病期又は去勢病期における臨床的転移に基づいて、一連の臨床段階として最善に分類される。手術、放射線照射、又はこれら両方の併用は、限局性疾患の患者にとって治癒的なものになり得るが、これらの患者のうちのかなりの割合は、ＰＳＡレベルの上昇をエビデンスとする再発性疾患を有し、これは、特に高リスク群における転移の発生、すなわち、疾患の終末期への移行につながる場合がある。
アンドロゲン枯渇療法（ＡＤＴ）が標準的治療であり、全般的に予測可能な転帰は、ＰＳＡの低下、腫瘍が増殖しない安定期、続いて、ＰＳＡの上昇、及び去勢抵抗性疾患としての再成長である。長年にわたり、ＡＤＴは、転移性前立腺癌の患者のための標準治療であった。
カリクレイン関連ペプチダーゼ２（ｈＫ２、ＨＫ２）は、アンドロゲン受容体（ＡＲ）に駆動されて前立腺組織及び前立腺癌に特異的に発現するトリプシン様酵素である。ｈＫ２は、膜貫通プロテアーゼ、セリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）によって活性化され、前立腺の管に分泌され、そこで、射精液中の細胞外マトリクスであるセメノゲリンを切断して精子の運動性を増強するカスケードを開始させる。ｈＫ２発現は、前立腺及び前立腺癌組織に限定されるが、最近、ステロイドホルモンによりＡＲ経路が適切に活性化された後の乳癌株及び一次患者サンプルでｈＫ２が検出可能であることが証明された（米国特許出願公開第２０１８／０３２６１０２号）。ＰＳＡと同様に、肥大又は悪性形質転換時に前立腺の高度に構造化された組織化が損なわれた場合に、触媒的に不活性なｈＫ２の血液への逆行性放出が生じる。
Ｔ細胞療法では、特定の腫瘍関連抗原に対する特異性を増強するために遺伝子改変された単離Ｔ細胞を利用する。遺伝子改変は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又は外因性Ｔ細胞受容体の発現を伴い、Ｔ細胞上に新たな抗原特異性を提供し得る。キメラ抗原受容体を発現するＴ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）は、腫瘍免疫反応性を誘導することができる。ＣＡＲ－Ｔ細胞を利用したより良好な癌療法が必要とされている。
（概要）
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、例えばヒトカリクレイン－２（ｈＫ２）を標的とするＣＡＲ、当該ＣＡＲを含む細胞、当該ＣＡＲをコードしているベクター、例えば組み換え発現ベクター、及び当該ＣＡＲをコードしている核酸分子、当該ＣＡＲを作製する方法、組成物、ポリペプチド、タンパク質、核酸、宿主細胞、細胞集団、並びに開示されたＣＡＲを使用して障害、例えば癌を治療する方法が本明細書に開示される。
一態様では、以下を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が提供される：
（ａ）ヒトカリクレイン－２（ｈＫ２）抗原に特異的に結合するｓｃＦｖを含む細胞外ドメインと、
（ｂ）膜貫通ドメインと、
（ｃ）少なくとも１つの共刺激ドメインを任意選択で含む細胞内シグナル伝達ドメイン。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、
（ｄ）ＣＤ８ａ－ヒンジ領域
を更に含み、
当該膜貫通ドメインは、ＣＤ８ａ膜貫通領域（ＣＤ８Ａ－ＴＭ）ポリペプチドを含み、
当該細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（ＣＤ１３７）成分を含む共刺激ドメイン及びＴ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ｚ）成分を含む一次シグナル伝達ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８ａ－ヒンジ領域は、配列番号２５、２６９、２７０、２７１、若しくは２７２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
膜貫通ドメインは、配列番号２６と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、並びに／又は
細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号２７と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する共刺激ドメイン、及び配列番号２８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する一次シグナル伝達ドメインを含む。
別の態様では、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、当該細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号３１４のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３１５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３１１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号３０９のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３１０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３１１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号７２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号８６のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号８７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号９２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号１０２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１０３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号１０５のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１０６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号１０７のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１０８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号１１０のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号１０２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号１０５のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号１１５のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号１１８のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号１２０のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１２２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；又は
配列番号１２３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１２２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
を含み、
当該細胞外抗原結合ドメインが、ｈＫ２抗原に結合する、ＣＡＲが提供される。
別の態様では、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、当該細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号６８のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号８９のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号９５のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号３１２のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３１３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号８９のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１３６のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；又は
配列番号９７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３、
を含み、
当該細胞外抗原結合ドメインが、ｈＫ２抗原に結合する、ＣＡＲが提供される。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；又は
配列番号６８のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号８９のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号９５のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号３１２のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３１３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号８９のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１３６のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；又は
配列番号９７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３、
を更に含む。
別の態様では、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、当該細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号１、２、３、７４、７５、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、及び３１８から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、並びに／又は
配列番号４、５、６、７６、７７、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、及び３１７から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、
を含み、
当該細胞外抗原結合ドメインが、ヒトカリクレイン－２（ｈＫ２）抗原に結合する、ＣＡＲが提供される。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号７４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号７５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号７７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号７５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号７５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１４８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１４９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１５１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号３１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号３１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、
を含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、軽鎖可変領域（ＶＬ）と重鎖可変領域（ＶＨ）との間にリンカーポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーポリぺプチドは、配列番号７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号８～２３、１６９～１８４、及び３４０～３４３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、シグナルポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、シグナルポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（ＣＤ１３７）成分、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ｚ）成分、表面抗原分類（ＣＤ２７）成分、表面抗原分類スーパーファミリーメンバー成分、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチド成分を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１３７成分は、配列番号２７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ｚ成分は、配列番号２８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号４５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８ａ膜貫通領域（ＣＤ８Ａ－ＴＭ）ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ａ－ＴＭポリペプチドは、配列番号２６のアミノ酸配列を含む。
様々な実施形態では、ＣＡＲは、膜貫通ドメインを細胞外抗原結合ドメインに連結するヒンジ領域を更に含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、ＣＤ８ａヒンジ領域である。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ａ－ヒンジ領域は、配列番号２５、２６９、２７０、２７１、又は２７２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２９～４４、７８～８１、２２１～２３６、及び２７３～３０８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号４６～６１、８２～８５、及び２０５～２２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
別の態様では、上記ＣＡＲのいずれかを発現する単離リンパ球が提供される。いくつかの実施形態では、リンパ球は、Ｔリンパ球である。いくつかの実施形態では、リンパ球は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。
また、上記ＣＡＲのいずれかをコードしている単離核酸分子も提供される。核酸分子を含むベクターも提供される。更に、核酸分子を発現する細胞も提供される。
更に、有効量の上記リンパ球のいずれかと、医薬的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物も提供される。
一態様では、本開示は、治療方法で使用するための本開示によるＣＡＲを提供する。
一態様では、本開示は、治療方法で使用するための本開示によるリンパ球を提供する。
一態様では、本開示は、治療方法で使用するための本開示による組成物、例えば、医薬組成物を提供する。
一態様では、本開示は、癌を治療する方法で使用するための本開示によるＣＡＲを提供する。
一態様では、本開示は、癌を治療する方法で使用するための本開示によるリンパ球を提供する。
一態様では、本開示は、癌を治療する方法で使用するための本開示による組成物、例えば、医薬組成物を提供する。
一実施形態では、癌は、前立腺癌である。
一実施形態では、癌は、アンドロゲン受容体（ＡＲ）発現乳癌である。
別の態様では、癌を有する対象を治療する方法が提供される。方法は、治療有効量の上記リンパ球のいずれかを、それを必要としている対象に投与し、それにより、当該リンパ球が、当該対象における癌細胞の殺傷を誘導することを含む。いくつかの実施形態では、癌は、前立腺癌である。いくつかの実施形態では、癌は、アンドロゲン受容体（ＡＲ）発現乳癌である。
別の態様では、癌細胞の標的化殺傷の方法であって、当該癌細胞を上記リンパ球のいずれかと接触させ、それにより、当該リンパ球が、当該癌細胞の殺傷を誘導することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、癌細胞は、前立腺癌細胞である。いくつかの実施形態では、癌は、アンドロゲン受容体（ＡＲ）発現乳癌である。
別の態様では、対象における癌の存在を検出する方法であって、
（ａ）当該対象から得られた細胞サンプルを上記ＣＡＲのいずれかと接触させ、それにより、ＣＡＲ－細胞複合体を形成することと、
（ｂ）当該複合体を検出することと、ここで、当該複合体の検出が、当該対象における癌の存在を示す、
を含む、方法が提供される。
前述は、以下の付属の図面に示される例示的実施形態のより詳細な説明から明らかとなるであろう。
本特許出願書類は、少なくとも１つのカラーで作成した図面を含む。カラー図面を含む本特許出願のコピーは、要請すれば、必要な手数料を支払うことにより、特許庁によって提供される。
ヒトＴ細胞におけるｈＫ２ ＣＡＲの構築及び発現を示す。図１Ａは、ｈＫ２ ＣＡＲ用のコンストラクトの概略図を示す。ＴＭ：膜貫通。 ヒトＴ細胞におけるｈＫ２ ＣＡＲの構築及び発現を示す。図１Ｂは、Ｔ細胞表面におけるｈＫ２ ＣＡＲ発現を示す。初代ヒトＴ細胞に、ｍＲＮＡなし（モック（ＭＯＣＫ））で、又はｈＫ２ ｓｃＦｖ ＣＡＲ若しくは無関係の対照ＣＡＲのいずれかを発現するｍＲＮＡ１０μｇをエレクトロポレーションした。エレクトロポレーションの２４時間後、２μｇ／ｍＬのビオチン化Ｌタンパク質及びストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥ（図１Ｂ）で染色した後に、フローサイトメトリーによってＣＡＲ表面発現を測定した。 ヒトＴ細胞におけるｈＫ２ ＣＡＲの構築及び発現を示す。図１Ｃは、Ｔ細胞表面におけるｈＫ２ ＣＡＲ発現を示す。初代ヒトＴ細胞に、ｍＲＮＡなし（モック（ＭＯＣＫ））で、又はｈＫ２ ｓｃＦｖ ＣＡＲ若しくは無関係の対照ＣＡＲのいずれかを発現するｍＲＮＡ１０μｇをエレクトロポレーションした。エレクトロポレーションの２４時間後、ビオチン化ｈＫ２（１μｇ／ｍＬ）及びストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥ（図１Ｃ）で染色した後に、フローサイトメトリーによってＣＡＲ表面発現を測定した。 指定のエフェクター対標的細胞（Ｅ／Ｔ）比での２０時間のフローベースアッセイにおける、ＣＡＲ－Ｔ細胞によるｈＫ２発現腫瘍細胞の細胞傷害性を示す。一過性トランスフェクションの２４時間後、標的細胞（Ｖｃａｐ及びＤＵ１４５）をＣｅｌｌ Ｔｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）蛍光色素で標識し、次いで、ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞と共培養した。モックＴ細胞が、陰性エフェクター対照として機能した。死滅（殺傷）パーセントは、ＣＡＲ－Ｔ細胞なしで培養された生存標的の数に対する共培養物中に残存する生存（生存性色素陰性）標的（ＣＴＶ陽性）細胞の絶対数の比率である。 リアルタイムｈＫ２特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞媒介細胞傷害性を示す。異なるＥ／Ｔ比でおよそ７２時間、モック、１０μｇのｍＲＮＡエレクトロポレーション（トランスフェクションの２４時間後）されたｈＫ２ １１Ｂ６ ＣＡＲ ＬＨ、又は対照ＣＡＲ－Ｔ細胞と共にインキュベートした、標的細胞（図３Ａ）ＶＣａｐ（５Ｅ４）の正規化された細胞指数（ＣＩ）プロット。単独で播種された場合、標的細胞はプレートに接着し、増殖して、ＣＩの読み出しを増加させる。Ｔ細胞を標的細胞に添加すると、ｈＫ２ ＣＡＲ－及び対照ＣＡＲ－Ｔ細胞は、５：１～０．１５６：１のＥ／Ｔ比において、ｈＫ２（＋）ＶＣａｐ細胞の細胞溶解、及びその後のＣＩの進行的減少を引き起こした。エフェクター細胞の添加後のＣＩ値の低下は、標的細胞の生存能の喪失を反映している。（図３Ｂ）に示すとおり、ｈＫ２（－）ＤＵ１４５標的細胞を使用した並行実験も実施した；この実験で試験したＥ：Ｔ比では、ｈＫ２及び対照ＣＡＲ Ｔ細胞は、添加後にＣＩを低下させず、細胞溶解活性を示さなかった。Ｙ軸は、ＲＴＣＡソフトウェアによって作成され、リアルタイムで表示された、正規化されたＣＩである。Ｘ軸は、細胞培養の時間及び処理時間（時）である。ＣＩの平均値を±標準偏差でプロットした。 リアルタイムｈＫ２特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞媒介細胞傷害性を示す。異なるＥ／Ｔ比でおよそ７２時間、モック、１０μｇのｍＲＮＡエレクトロポレーション（トランスフェクションの２４時間後）されたｈＫ２ １１Ｂ６ ＣＡＲ ＬＨ、又は対照ＣＡＲ－Ｔ細胞と共にインキュベートした、標的細胞（図３Ｂ）ＤＵ１４５（５Ｅ３）の正規化された細胞指数（ＣＩ）プロット。単独で播種された場合、標的細胞はプレートに接着し、増殖して、ＣＩの読み出しを増加させる。Ｔ細胞を標的細胞に添加すると、ｈＫ２ ＣＡＲ－及び対照ＣＡＲ－Ｔ細胞は、５：１～０．１５６：１のＥ／Ｔ比において、ｈＫ２（＋）ＶＣａｐ細胞の細胞溶解、及びその後のＣＩの進行的減少を引き起こした。エフェクター細胞の添加後のＣＩ値の低下は、標的細胞の生存能の喪失を反映している。（図３Ｂ）に示すとおり、ｈＫ２（－）ＤＵ１４５標的細胞を使用した並行実験も実施した；この実験で試験したＥ：Ｔ比では、ｈＫ２及び対照ＣＡＲ Ｔ細胞は、添加後にＣＩを低下させず、細胞溶解活性を示さなかった。Ｙ軸は、ＲＴＣＡソフトウェアによって作成され、リアルタイムで表示された、正規化されたＣＩである。Ｘ軸は、細胞培養の時間及び処理時間（時）である。ＣＩの平均値を±標準偏差でプロットした。 抗原で刺激されたＣＡＲ－Ｔ細胞のＴｈ１サイトカインインターフェロンγ（ＩＦＮ－γ）産生を示す。およそ７０時間共培養（ＶＣａｐ＃５Ｅ４、ＤＵ１４５＃５Ｅ３）したｘＣＥＬｌｉｇｅｎｃｅベースの殺傷アッセイ（図３Ａ～３Ｂを参照されたい）から上清を回収した。ｈＫ２ ＣＡＲ ＬＨ及び対照ＣＡＲ改変Ｔ細胞は、ｈＫ２発現ＶＣａｐ細胞との共培養中にＩＦＮ－γを分泌するが、ｈＫ２陰性ＤＵ１４５細胞との共培養中には分泌しない。デュープリケートの培養物からの平均ＩＦＮ－γ濃度±標準偏差（ｐｇ／ｍＬ）を示す。 １１Ｂ６熱安定化ｓｃＦｖ ＣＡＲクローンを、抗原依存性活性についてＪＮＬレポーターアッセイにおいて評価したことを示す。図５Ａは、シグナル伝達応答性ＮＦＡＴプロモーターによって駆動されるルシフェラーゼ遺伝子を含有するＪｕｒｋａｔ細胞（ＪＮＬ細胞と呼ばれる）に、様々なｈＫ２ＣＡＲコンストラクトを形質導入したことを示す。ビオチン化ｈＫ２、続いてストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥによって、発現を判定した。 １１Ｂ６熱安定化ｓｃＦｖ ＣＡＲクローンを、抗原依存性活性についてＪＮＬレポーターアッセイにおいて評価したことを示す。図５Ｂは、ＣＡＲコンストラクトとその同種細胞抗原（標的細胞上のｈＫ２）との間の結合によって、ＪＮＬ細胞においてルシフェラーゼが発現したことを示す。指定のＣＡＲクローンを含有するＪＮＬ細胞及び非形質導入ＪＮＬ細胞（ＵＴＤ）を標的細胞株（ＶＣａｐ又はＤＵ１４５細胞）と共培養し、発光強度としてルシフェラーゼ活性を測定した。発光強度が抗原発現細胞の存在下でＵＴＤ細胞のレベルを１．５倍上回った場合、クローンは活性であるとみなした。 Ｔ細胞表面におけるｈＫ２ ＣＡＲ発現を示す。初代ヒトＴ細胞に１１Ｂ６熱安定化及び親ｓｃＦｖベースのＣＡＲレンチウイルスを形質導入し（感染多重度（ＭＯＩ）：３）、形質導入の１４日後に、ビオチン化ｈＫ２（１μｇ／ｍＬ）、続いて、ストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥによってＣＡＲ発現を判定した。 １１Ｂ６熱安定化ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞を、抗原依存性細胞傷害性についてリアルタイムＩｎｃｕＣｙｔｅ殺傷アッセイで評価したことを示す。熱安定化ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞及び親１１Ｂ６ ＣＡＲ－Ｔを、ＶＣａＰ細胞（図７Ａ）と８８時間コインキュベートした。エフェクター対標的（Ｅ／Ｔ）比は、ＣＡＲ発現データに基づいて計算した（図６を参照されたい）。標的細胞は、リアルタイムでＩｎｃｕＣｙｔｅイメージングシステムによって測定された赤色核色素を安定的に発現していた。腫瘍細胞成長阻害（％）＝（初期生存標的細胞数－現時点の生存標的細胞数）／初期生存細胞数×１００（％）。 １１Ｂ６熱安定化ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞を、抗原依存性細胞傷害性についてリアルタイムＩｎｃｕＣｙｔｅ殺傷アッセイで評価したことを示す。熱安定化ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞及び親１１Ｂ６ ＣＡＲ－Ｔを、ＰＣ３細胞（図７Ｂ）と８８時間コインキュベートした。エフェクター対標的（Ｅ／Ｔ）比は、ＣＡＲ発現データに基づいて計算した（図６を参照されたい）。標的細胞は、リアルタイムでＩｎｃｕＣｙｔｅイメージングシステムによって測定された赤色核色素を安定的に発現していた。腫瘍細胞成長阻害（％）＝（初期生存標的細胞数－現時点の生存標的細胞数）／初期生存細胞数×１００（％）。 抗原依存性細胞傷害性を評価するリアルタイムＩｎｃｕｃｙｔｅ殺傷アッセイにおける、ＣＡＲ１～１０又は親１１Ｂ６＿ＨＬ若しくは１１Ｂ６＿ＬＨが形質導入されたＴ細胞による、エフェクター：標的比１：１又は０．５：１におけるｈＫ２陽性ＶＣａＰ細胞の腫瘍細胞成長阻害パーセントを示す。腫瘍細胞成長阻害（％）＝（初期生存標的細胞数－現時点の生存標的細胞数）／初期生存細胞数×１００（％）。 抗原依存性細胞傷害性を評価するリアルタイムＩｎｃｕｃｙｔｅ殺傷アッセイにおける、ＣＡＲ１～１０又は親１１Ｂ６＿ＨＬ若しくは１１Ｂ６＿ＬＨが形質導入されたＴ細胞による、エフェクター：標的比１：１におけるＰＣ３細胞の腫瘍細胞成長阻害パーセントを示す。腫瘍細胞成長阻害（％）＝（初期生存標的細胞数－現時点の生存標的細胞数）／初期生存細胞数×１００（％）。 抗原依存性細胞傷害性を評価するリアルタイムＩｎｃｕｃｙｔｅ殺傷アッセイにおける、ＣＡＲ１７（図中Ｂ４１３ＨＬ）、ＣＡＲ１８（図中Ｂ４１３ＬＨ）、ＣＡＲ１９（図中Ｂ３５９ＨＬ）、及びＣＡＲ２０（図中Ｂ３５９ＬＨ）が形質導入されたＣＡＲ－Ｔ細胞によるｈＫ２陽性ＶＣａＰ細胞の腫瘍細胞成長阻害パーセントを示す。腫瘍細胞成長阻害（％）＝（初期生存標的細胞数－現時点の生存標的細胞数）／初期生存細胞数×１００（％）。 抗原依存性細胞傷害性を評価するリアルタイムＩｎｃｕｃｙｔｅ殺傷アッセイにおける、ＣＡＲ１７（図中Ｂ４１３ＨＬ）、ＣＡＲ１８（図中Ｂ４１３ＬＨ）、ＣＡＲ１９（図中Ｂ３５９ＨＬ）、及びＣＡＲ２０（図中Ｂ３５９ＬＨ）が形質導入されたＣＡＲ－Ｔ細胞によるｈＫ２陰性ＤＵ１４５細胞の腫瘍細胞成長阻害パーセントを示す。腫瘍細胞成長阻害（％）＝（初期生存標的細胞数－現時点の生存標的細胞数）／初期生存細胞数×１００（％）。 ｈＫ２ ｌｅｎｔｉ－ＣＡＲ－Ｔ細胞によるサイトカイン放出を示す。１：１のＥ／Ｔ比でＶＣａｐ細胞と共にｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞を一晩（およそ２０時間）共培養したものから回収した上清を、１３－ｐｌｅｘ Ｍｉｌｌｉｐｌｅｘヒト高感度Ｔ細胞キット（ＨＳＴＣＭＡＧ２８ＳＰＭＸ１３）を使用して分析した。ｈＫ２ ＣＡＲ改変Ｔ細胞は、ｈＫ２発現ＶＣａｐ細胞との共培養中にサイトカインを分泌するが、非形質導入Ｔ細胞（ＵＴＤ）では最少である。デュープリケートの培養物からの平均サイトカイン濃度±標準偏差（ｐｇ／ｍＬ）を示す。 ｈＫ２ ｌｅｎｔｉ－ＣＡＲ－Ｔ細胞によるＩＦＮ－γ放出を示す。１：１のＥ／Ｔ比でＶＣａＰ、ＤＵ１４５（５Ｅ４個の細胞）細胞と共にｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞を一晩（およそ２０時間）共培養したものから上清を回収した。ｈＫ２ ＣＡＲ改変Ｔ細胞は、ｈＫ２発現ＶＣａｐ細胞との共培養中にＩＦＮ－γを分泌するが、ｈＫ２－陰性ＤＵ１４５細胞との共培養中には分泌しない。デュープリケートの培養物からの平均ＩＦＮ－γ濃度±標準偏差（ｐｇ／ｍＬ）を示す。ＣＤ３／２８ビーズで刺激したＴ細胞及びＴ細胞のみをそれぞれ陽性対照及び陰性対照として使用した。 ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞増殖アッセイから得られた結果を示す。（図１０Ａ、１０Ｃ）ｈＫ２ ＣＡＲ及び非形質導入（ＵＴＤ）Ｔ細胞を、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ、５μＭ）で標識し、ｈＫ２（＋）ＶＣａｐ及びｈＫ２（－）ＤＵ１４５細胞と共培養した。共培養の５日後、細胞を収集し、ＣＤ３、ＣＤ２５、ＮｅａｒＩＲ ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ Ｄｙｅ、及びｈＫ２ＣＡＲで染色した。Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアを備えるＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターでフローサイトメトリー分析を行った。リンパ球を生ＣＤ３によって同定し、ＣＴＶ色素希釈及び活性化マーカーＣＤ２５を有するＣＡＲ＋Ｔ細胞の頻度を求めた。（図１０Ｂ、１０Ｄ）ＣＤ３／２８ビーズで刺激したＴ細胞及びＴ細胞のみを、それぞれ陽性対照及び陰性対照として使用した。図１０Ｅのデータは、ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞が、ＶＣａｐ細胞と５日間共培養した後に、ＣＤ３／２８ビーズ陽性対照よりもロバストに増殖することを示す。異なるＣＡＲコンストラクトで遺伝子操作されたＴ細胞は、異なる増殖活性を有し、異なるＣＡＲ＋Ｔ細胞数を示した。ＣＡＲ＋Ｔ細胞数は、３つの技術的複製物からの平均絶対細胞数＋／－ＳＥＭに基づいていた。 ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞増殖アッセイから得られた結果を示す。（図１０Ａ、１０Ｃ）ｈＫ２ ＣＡＲ及び非形質導入（ＵＴＤ）Ｔ細胞を、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ、５μＭ）で標識し、ｈＫ２（＋）ＶＣａｐ及びｈＫ２（－）ＤＵ１４５細胞と共培養した。共培養の５日後、細胞を収集し、ＣＤ３、ＣＤ２５、ＮｅａｒＩＲ ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ Ｄｙｅ、及びｈＫ２ＣＡＲで染色した。Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアを備えるＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターでフローサイトメトリー分析を行った。リンパ球を生ＣＤ３によって同定し、ＣＴＶ色素希釈及び活性化マーカーＣＤ２５を有するＣＡＲ＋Ｔ細胞の頻度を求めた。（図１０Ｂ、１０Ｄ）ＣＤ３／２８ビーズで刺激したＴ細胞及びＴ細胞のみを、それぞれ陽性対照及び陰性対照として使用した。図１０Ｅのデータは、ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞が、ＶＣａｐ細胞と５日間共培養した後に、ＣＤ３／２８ビーズ陽性対照よりもロバストに増殖することを示す。異なるＣＡＲコンストラクトで遺伝子操作されたＴ細胞は、異なる増殖活性を有し、異なるＣＡＲ＋Ｔ細胞数を示した。ＣＡＲ＋Ｔ細胞数は、３つの技術的複製物からの平均絶対細胞数＋／－ＳＥＭに基づいていた。 ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞増殖アッセイから得られた結果を示す。（図１０Ａ、１０Ｃ）ｈＫ２ ＣＡＲ及び非形質導入（ＵＴＤ）Ｔ細胞を、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ、５μＭ）で標識し、ｈＫ２（＋）ＶＣａｐ及びｈＫ２（－）ＤＵ１４５細胞と共培養した。共培養の５日後、細胞を収集し、ＣＤ３、ＣＤ２５、ＮｅａｒＩＲ ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ Ｄｙｅ、及びｈＫ２ＣＡＲで染色した。Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアを備えるＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターでフローサイトメトリー分析を行った。リンパ球を生ＣＤ３によって同定し、ＣＴＶ色素希釈及び活性化マーカーＣＤ２５を有するＣＡＲ＋Ｔ細胞の頻度を求めた。（図１０Ｂ、１０Ｄ）ＣＤ３／２８ビーズで刺激したＴ細胞及びＴ細胞のみを、それぞれ陽性対照及び陰性対照として使用した。図１０Ｅのデータは、ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞が、ＶＣａｐ細胞と５日間共培養した後に、ＣＤ３／２８ビーズ陽性対照よりもロバストに増殖することを示す。異なるＣＡＲコンストラクトで遺伝子操作されたＴ細胞は、異なる増殖活性を有し、異なるＣＡＲ＋Ｔ細胞数を示した。ＣＡＲ＋Ｔ細胞数は、３つの技術的複製物からの平均絶対細胞数＋／－ＳＥＭに基づいていた。 ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞増殖アッセイから得られた結果を示す。（図１０Ａ、１０Ｃ）ｈＫ２ ＣＡＲ及び非形質導入（ＵＴＤ）Ｔ細胞を、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ、５μＭ）で標識し、ｈＫ２（＋）ＶＣａｐ及びｈＫ２（－）ＤＵ１４５細胞と共培養した。共培養の５日後、細胞を収集し、ＣＤ３、ＣＤ２５、ＮｅａｒＩＲ ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ Ｄｙｅ、及びｈＫ２ＣＡＲで染色した。Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアを備えるＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターでフローサイトメトリー分析を行った。リンパ球を生ＣＤ３によって同定し、ＣＴＶ色素希釈及び活性化マーカーＣＤ２５を有するＣＡＲ＋Ｔ細胞の頻度を求めた。（図１０Ｂ、１０Ｄ）ＣＤ３／２８ビーズで刺激したＴ細胞及びＴ細胞のみを、それぞれ陽性対照及び陰性対照として使用した。図１０Ｅのデータは、ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞が、ＶＣａｐ細胞と５日間共培養した後に、ＣＤ３／２８ビーズ陽性対照よりもロバストに増殖することを示す。異なるＣＡＲコンストラクトで遺伝子操作されたＴ細胞は、異なる増殖活性を有し、異なるＣＡＲ＋Ｔ細胞数を示した。ＣＡＲ＋Ｔ細胞数は、３つの技術的複製物からの平均絶対細胞数＋／－ＳＥＭに基づいていた。 ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞増殖アッセイから得られた結果を示す。（図１０Ａ、１０Ｃ）ｈＫ２ ＣＡＲ及び非形質導入（ＵＴＤ）Ｔ細胞を、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ、５μＭ）で標識し、ｈＫ２（＋）ＶＣａｐ及びｈＫ２（－）ＤＵ１４５細胞と共培養した。共培養の５日後、細胞を収集し、ＣＤ３、ＣＤ２５、ＮｅａｒＩＲ ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ Ｄｙｅ、及びｈＫ２ＣＡＲで染色した。Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアを備えるＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターでフローサイトメトリー分析を行った。リンパ球を生ＣＤ３によって同定し、ＣＴＶ色素希釈及び活性化マーカーＣＤ２５を有するＣＡＲ＋Ｔ細胞の頻度を求めた。（図１０Ｂ、１０Ｄ）ＣＤ３／２８ビーズで刺激したＴ細胞及びＴ細胞のみを、それぞれ陽性対照及び陰性対照として使用した。図１０Ｅのデータは、ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞が、ＶＣａｐ細胞と５日間共培養した後に、ＣＤ３／２８ビーズ陽性対照よりもロバストに増殖することを示す。異なるＣＡＲコンストラクトで遺伝子操作されたＴ細胞は、異なる増殖活性を有し、異なるＣＡＲ＋Ｔ細胞数を示した。ＣＡＲ＋Ｔ細胞数は、３つの技術的複製物からの平均絶対細胞数＋／－ＳＥＭに基づいていた。 ビオチン標識ｈＫ２タンパク質を使用した初代Ｔ細胞におけるｈＫ２ ＣＡＲの発現レベルを求めるためのアッセイの結果を示す。図１１Ａは、ｈＫ２ ＣＡＲ用のコンストラクトの概略図である。ＴＭ：膜貫通。 ビオチン標識ｈＫ２タンパク質を使用した初代Ｔ細胞におけるｈＫ２ ＣＡＲの発現レベルを求めるためのアッセイの結果を示す。図１１Ｂでは、初代ヒトＴ細胞に新規ｈＫ２ ｓｃＦｖベースのＫＬ２Ｂ４１３ ＨＬ及びＬＨ、並びに再ヒト化１１Ｂ６ ＫＬ２Ｂ３５９ ＨＬ及びＬＨ ＣＡＲＳレンチウイルス（ＭＯＩ ３）を形質導入し、形質導入の１４日後に、ビオチン化ｈＫ２（１μｇ／ｍＬ）、続いて、ストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥによってＣＡＲ発現を判定した。図１１Ｂは、分析した新規ＫＬ２Ｂ４１３ ＨＬ及びＬＨ、並びに再ヒト化１１Ｂ６ ＫＬ２Ｂ３５９ ＨＬ及びＬＨ ＣＡＲＳによって検出されたｈＫ２ ＣＡＲ＋Ｔ細胞の百分率（陽性％）の概要を提供する。図示されるように、異なるクローンは、４５．１％～５９．９％の範囲の異なるＣＡＲ発現レベルを有する。全てのＣＡＲ Ｔ＋細胞を、後続の機能アッセイのために等しいＣＡＲ＋Ｔ細胞に対して正規化した。 抗原依存性活性についてのＪＮＬレポーターアッセイにおける、新規ｈＫ２ ＫＬ２Ｂ４１３及び再ヒト化１１Ｂ６ ＣＡＲクローンの評価の結果を示す。図１２Ａでは、シグナル伝達応答性ＮＦＡＴプロモーターによって駆動されるルシフェラーゼ遺伝子を含有するＪｕｒｋａｔ細胞（ＪＮＬ細胞と呼ばれる）に、様々なｈＫ２ＣＡＲコンストラクトを形質導入した。ビオチン化ｈＫ２、続いてストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥによって、発現を判定した。形質導入されたＪＮＬ細胞におけるＣＡＲ発現は、選択されたクローンについて確認され、細胞の４６～５０％で再ヒト化１１Ｂ６ ＫＬ２Ｂ３５９ ＣＡＲが発現し、細胞の７３．７％～９６％でＫＬ２Ｂ４１３ ＣＡＲが発現した。 抗原依存性活性についてのＪＮＬレポーターアッセイにおける、新規ｈＫ２ ＫＬ２Ｂ４１３及び再ヒト化１１Ｂ６ ＣＡＲクローンの評価の結果を示す。図１２Ｂに示すデータは、ｈＫ２ ＣＡＲコンストラクトとその同種細胞抗原（標的細胞上のｈＫ２）との間の結合によって、ＪＮＬ細胞においてルシフェラーゼが発現することを示す。指定のＣＡＲクローンを含有するＪＮＬ細胞及びＪＮＬ細胞（ＵＴＤ）を標的細胞株（ＶＣａｐ、ＬＮＣａｐ／Ｈｋ２、ＬＮＣａｐ、Ｃ４－２Ｂ、２２Ｒｖ１、又はＤＵ１４５細胞）と共培養し、ルシフェラーゼ活性を発光強度として測定した。発光強度が抗原発現細胞の存在下でＵＴＤ細胞のレベルを１．５倍上回った場合、クローンは活性であるとみなした。新規ＫＬ２Ｂ４１３並びに再ヒト化１１Ｂ６ ＨＬ及びＬＨ ＣＡＲについて、抗原依存性活性化はみられなかった。 抗原依存性細胞傷害性についてのリアルタイムＩｎｃｕＣｙｔｅ殺傷アッセイにおけるＨＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞の評価の結果を示す。ＨＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞を、ＨＫ２＋ＶＣａＰ細胞（図１３Ａ）と９６時間コインキュベートした。エフェクター対標的（ＥＴ）比は、ＣＡＲ発現データに基づいて計算した（図１１Ｂ）。標的細胞は、リアルタイムでＩｎｃｕＣｙｔｅイメージングシステムによって測定された赤色核色素を安定的に発現していた。腫瘍細胞成長阻害（％）＝（初期生存標的細胞数－現時点の生存標的細胞数）／初期生存細胞数×１００（％）。 抗原依存性細胞傷害性についてのリアルタイムＩｎｃｕＣｙｔｅ殺傷アッセイにおけるＨＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞の評価の結果を示す。ＨＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞を、ＨＫ２－ＤＵ１４５細胞（図１３Ｂ）と９６時間コインキュベートした。エフェクター対標的（ＥＴ）比は、ＣＡＲ発現データに基づいて計算した（図１１Ｂ）。標的細胞は、リアルタイムでＩｎｃｕＣｙｔｅイメージングシステムによって測定された赤色核色素を安定的に発現していた。腫瘍細胞成長阻害（％）＝（初期生存標的細胞数－現時点の生存標的細胞数）／初期生存細胞数×１００（％）。 抗原で刺激したＣＡＲ－Ｔ細胞のＴｈ１サイトカインＩＦＮ－ガンマ産生を示すデータを示す。細胞傷害性Ｔ細胞によって産生されたＩＦＮ－γは、腫瘍の免疫監視作用を発揮させるのに非常に重要であり、これにより、増殖を直接阻害し、インビボ及びインビトロにおいて一部の悪性腫瘍のアポトーシスを誘導することができる。ｈＫ２ ＣＡＲ改変ヒトＴ細胞がｈＫ２（＋）腫瘍細胞によって認識及び活性化され得るかどうかを判定するために、指定のＣＡＲクローンを含有する初代Ｔ細胞及び対照非形質導入Ｔ細胞（ＵＴＤ）を標的細胞株（ＬＮＣａｐ／Ｈｋ２、ＬＮＣａｐ、Ｃ４－２Ｂ、２２Ｒｖ１、又はＤＵ１４５細胞）と共培養し、ＩＦＮ－ｇ濃度測定のために上清を回収した。図示されているように、ｈＫ２ ＣＡＲ改変Ｔ細胞は、Ｈｋ２発現が非常に少ないＣ４－２Ｂ及びＬＮＣａｐ細胞であっても、ｈＫ２発現ＬＮＣａｐ／ｈＫ２細胞との共培養中にＩＦＮ－ガンマを分泌するが、ｈＫ２－陰性ＤＵ１４５細胞では分泌しない。未開示の対照ＣＡＲは、抗原発現レベルがｈＫ２よりもはるかに高いことから、はるかに多量のＩＦＮ－γを分泌した。デュープリケートの培養からの平均ＩＦＮ－γ濃度±ＳＤ（ｐｇ／ｍＬ）を示す。 ｈＫ２ ＣＡＲ Ｔ細胞の抗腫瘍活性を評価するためのＣＤ１０７ａ脱顆粒アッセイの結果を示す。標的細胞（５×１０４個）を、９６ウェルプレートにおいて０．１ｍＬ／ウェルで等数のエフェクター細胞と共培養した。対照ウェルは、Ｔ細胞のみを含有していた。１μＬ／サンプルのモネンシン（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に加えて抗ＣＤ１０７ａ（５μＬ／ウェル）を添加し、３７℃で４時間インキュベートした。細胞をＰＢＳで２回洗浄し、ｈＫ２ ＣＡＲ、ＣＤ３、及びＣＤ８の発現について染色し、フローサイトメーターＢＤ Ｆｏｒｔｅｓｓａで分析した。図示されているように、Ｖｃａｐ細胞上にｈＫ２抗原が存在すると、フローサイトメトリーによって測定されるＣＤ１０７Ａ＋ｈＫ２ ＣＡＲ（＋）Ｔ細胞では増加するが、ｈＫ２ ＣＡＲ（－）及びＵＴＤ Ｔ細胞では増加せず、一方、腫瘍細胞刺激なしのＣＡＲ Ｔ細胞のみでは、バックグラウンド染色（＜２％）しかみられなかった。イオノマイシン（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（商標）細胞刺激カクテル；５００×）と組み合わせたフォルボール１２－ミリステート１３－アセテート（ＰＭＡ）は、この４時間細胞培養モデルにおけるＣＤ１０７ａ細胞表面発現の一貫した誘導因子であり、これを陽性対照として使用した。結果を代表的なドナーＴ細胞について示し、この結果は、複数のドナーで再現可能である。 ｈＫ２ ＣＡＲ Ｔ細胞増殖アッセイの結果を示す。ｈＫ２ ＣＡＲ及び非形質導入（ＵＴＤ）Ｔ細胞を、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ、５μＭ）で標識し、ＨＫ２（＋）ＶＣａｐ及びＨＫ２（－）ＤＵ１４５細胞と共培養した。共培養の５日後、細胞を収集し、ＣＤ３、ＣＤ２５、ＮｅａｒＩＲ ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ Ｄｙｅ、及びｈＫ２ＣＡＲで染色した。Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアを備えるＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターでフローサイトメトリー分析を行った。リンパ球を生ＣＤ３によって同定し、ＣＴＶ色素希釈及び活性化マーカーＣＤ２５を有するＣＡＲ＋Ｔ細胞の頻度を求めた。ＣＤ３＋Ｔ細胞でゲーティングすることにより、ｈＫ２（＋）Ｖｃａｐ細胞は、図１６Ａ～１６Ｂに示されているように、全てのＣＡＲコンストラクトで遺伝子操作されたＴ細胞の増殖、そして、図１６Ｃ～１６Ｄに示されるように、活性化マーカーＣＤ２５のアップレギュレーションを促進したが、ｈＫ２（－）ＤＵ１４５細胞は促進しなかった。ＣＤ３／２８ビーズで刺激したＴ細胞及びＴ細胞のみをそれぞれ陽性対照及び陰性対照として使用した。任意の刺激なしのＴ細胞のみは増殖せず、ＣＤ３／２８ビーズで刺激されたＴ細胞は等価な増殖パターンを示す。図示されているように、ｈＫ２ ＣＡＲ＋Ｔ細胞は、ＶＣａｐ細胞と５日間共培養した後に、ＣＤ３／２８ビーズ陽性対照よりもロバストに増殖する。異なるＣＡＲコンストラクトで遺伝子操作されたＴ細胞は、異なる増殖活性を有し、異なるＣＡＲ＋Ｔ細胞数を示した。デュープリケートからの平均絶対細胞数＋／－ＳＥＭに基づく、増殖しているＴ細胞及びＣＤ２５を発現しているＴ細胞の百分率の要約を、図１６Ｂ及び１６Ｄに示す。 ｈＫ２ ＣＡＲ Ｔ細胞増殖アッセイの結果を示す。ｈＫ２ ＣＡＲ及び非形質導入（ＵＴＤ）Ｔ細胞を、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ、５μＭ）で標識し、ＨＫ２（＋）ＶＣａｐ及びＨＫ２（－）ＤＵ１４５細胞と共培養した。共培養の５日後、細胞を収集し、ＣＤ３、ＣＤ２５、ＮｅａｒＩＲ ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ Ｄｙｅ、及びｈＫ２ＣＡＲで染色した。Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアを備えるＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターでフローサイトメトリー分析を行った。リンパ球を生ＣＤ３によって同定し、ＣＴＶ色素希釈及び活性化マーカーＣＤ２５を有するＣＡＲ＋Ｔ細胞の頻度を求めた。ＣＤ３＋Ｔ細胞でゲーティングすることにより、ｈＫ２（＋）Ｖｃａｐ細胞は、図１６Ａ～１６Ｂに示されているように、全てのＣＡＲコンストラクトで遺伝子操作されたＴ細胞の増殖、そして、図１６Ｃ～１６Ｄに示されるように、活性化マーカーＣＤ２５のアップレギュレーションを促進したが、ｈＫ２（－）ＤＵ１４５細胞は促進しなかった。ＣＤ３／２８ビーズで刺激したＴ細胞及びＴ細胞のみをそれぞれ陽性対照及び陰性対照として使用した。任意の刺激なしのＴ細胞のみは増殖せず、ＣＤ３／２８ビーズで刺激されたＴ細胞は等価な増殖パターンを示す。図示されているように、ｈＫ２ ＣＡＲ＋Ｔ細胞は、ＶＣａｐ細胞と５日間共培養した後に、ＣＤ３／２８ビーズ陽性対照よりもロバストに増殖する。異なるＣＡＲコンストラクトで遺伝子操作されたＴ細胞は、異なる増殖活性を有し、異なるＣＡＲ＋Ｔ細胞数を示した。デュープリケートからの平均絶対細胞数＋／－ＳＥＭに基づく、増殖しているＴ細胞及びＣＤ２５を発現しているＴ細胞の百分率の要約を、図１６Ｂ及び１６Ｄに示す。 ｈＫ２ ＣＡＲ Ｔ細胞増殖アッセイの結果を示す。ｈＫ２ ＣＡＲ及び非形質導入（ＵＴＤ）Ｔ細胞を、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ、５μＭ）で標識し、ＨＫ２（＋）ＶＣａｐ及びＨＫ２（－）ＤＵ１４５細胞と共培養した。共培養の５日後、細胞を収集し、ＣＤ３、ＣＤ２５、ＮｅａｒＩＲ ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ Ｄｙｅ、及びｈＫ２ＣＡＲで染色した。Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアを備えるＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターでフローサイトメトリー分析を行った。リンパ球を生ＣＤ３によって同定し、ＣＴＶ色素希釈及び活性化マーカーＣＤ２５を有するＣＡＲ＋Ｔ細胞の頻度を求めた。ＣＤ３＋Ｔ細胞でゲーティングすることにより、ｈＫ２（＋）Ｖｃａｐ細胞は、図１６Ａ～１６Ｂに示されているように、全てのＣＡＲコンストラクトで遺伝子操作されたＴ細胞の増殖、そして、図１６Ｃ～１６Ｄに示されるように、活性化マーカーＣＤ２５のアップレギュレーションを促進したが、ｈＫ２（－）ＤＵ１４５細胞は促進しなかった。ＣＤ３／２８ビーズで刺激したＴ細胞及びＴ細胞のみをそれぞれ陽性対照及び陰性対照として使用した。任意の刺激なしのＴ細胞のみは増殖せず、ＣＤ３／２８ビーズで刺激されたＴ細胞は等価な増殖パターンを示す。図示されているように、ｈＫ２ ＣＡＲ＋Ｔ細胞は、ＶＣａｐ細胞と５日間共培養した後に、ＣＤ３／２８ビーズ陽性対照よりもロバストに増殖する。異なるＣＡＲコンストラクトで遺伝子操作されたＴ細胞は、異なる増殖活性を有し、異なるＣＡＲ＋Ｔ細胞数を示した。デュープリケートからの平均絶対細胞数＋／－ＳＥＭに基づく、増殖しているＴ細胞及びＣＤ２５を発現しているＴ細胞の百分率の要約を、図１６Ｂ及び１６Ｄに示す。 ｈＫ２ ＣＡＲ Ｔ細胞増殖アッセイの結果を示す。ｈＫ２ ＣＡＲ及び非形質導入（ＵＴＤ）Ｔ細胞を、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ、５μＭ）で標識し、ＨＫ２（＋）ＶＣａｐ及びＨＫ２（－）ＤＵ１４５細胞と共培養した。共培養の５日後、細胞を収集し、ＣＤ３、ＣＤ２５、ＮｅａｒＩＲ ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ Ｄｙｅ、及びｈＫ２ＣＡＲで染色した。Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアを備えるＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターでフローサイトメトリー分析を行った。リンパ球を生ＣＤ３によって同定し、ＣＴＶ色素希釈及び活性化マーカーＣＤ２５を有するＣＡＲ＋Ｔ細胞の頻度を求めた。ＣＤ３＋Ｔ細胞でゲーティングすることにより、ｈＫ２（＋）Ｖｃａｐ細胞は、図１６Ａ～１６Ｂに示されているように、全てのＣＡＲコンストラクトで遺伝子操作されたＴ細胞の増殖、そして、図１６Ｃ～１６Ｄに示されるように、活性化マーカーＣＤ２５のアップレギュレーションを促進したが、ｈＫ２（－）ＤＵ１４５細胞は促進しなかった。ＣＤ３／２８ビーズで刺激したＴ細胞及びＴ細胞のみをそれぞれ陽性対照及び陰性対照として使用した。任意の刺激なしのＴ細胞のみは増殖せず、ＣＤ３／２８ビーズで刺激されたＴ細胞は等価な増殖パターンを示す。図示されているように、ｈＫ２ ＣＡＲ＋Ｔ細胞は、ＶＣａｐ細胞と５日間共培養した後に、ＣＤ３／２８ビーズ陽性対照よりもロバストに増殖する。異なるＣＡＲコンストラクトで遺伝子操作されたＴ細胞は、異なる増殖活性を有し、異なるＣＡＲ＋Ｔ細胞数を示した。デュープリケートからの平均絶対細胞数＋／－ＳＥＭに基づく、増殖しているＴ細胞及びＣＤ２５を発現しているＴ細胞の百分率の要約を、図１６Ｂ及び１６Ｄに示す。 ｍｕ１１Ｂ６、ｈｕ１１Ｂ６、ＫＬ２Ｂ３５７、ＫＬ２Ｂ３５８、ＫＬ２Ｂ３５９、ＫＬ２Ｂ３６０、ＨＣＦ３、及びＨＣＧ５のＶＨドメインの配列アラインメントを示す。図１７Ａは、出現順に、それぞれ、配列番号３１７、５、１４０、１４１、７７、１４０、６、４、及び３４５を開示する。 ＨＤＸ－ＭＳを通して同定されたｈＫ２抗体の結合エピトープを可視化するためにｈＫ２抗原の配列上にマッピングされた、保護されたセグメントを示す。図１７Ｂは、出現順に、それぞれ、配列番号３５１、３５１、３５１、３５１、３５１、及び３５１を開示する。
（詳細な記述）
例示的実施形態の記述が以下に続く。
本開示は、ヒトカリクレイン－２（ｈＫ２）を標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、このようなＣＡＲを含む細胞、及び本明細書に記載のＣＡＲを使用して癌（例えば、前立腺癌又はＡＲ発現乳癌）を治療する方法を提供する。
本発明のＣＡＲは、ｈＫ２に対する抗原特異性を有する。「抗原特異性を有する」及び「抗原特異的応答を誘発する」という句は、本明細書で使用するとき、ＣＡＲが抗原に特異的に結合し、免疫学的に認識することができ、その結果、ＣＡＲのｈＫ２抗原への結合により免疫応答が誘発されることを意味する。抗原特異性及び標的細胞を認識する能力についてＣＡＲを試験する方法は、当技術分野で知られている。
本開示はまた、関連する核酸、組み換え発現ベクター、宿主細胞、細胞集団、抗体、又はその抗原結合部分、及び本発明のＣＡＲに関する医薬組成物も提供する。
本発明のいくつかの態様は、例示のみを目的とした例を参照して、以下に記載される。本発明の完全な理解を提供するために、多数の具体的な詳細、関係、及び方法が記載されていることを理解されたい。しかしながら、当業者であれば、本発明は、具体的な詳細のうちの１つ以上を伴わずに実施することができること、又は他の方法、プロトコル、試薬、細胞株、及び動物で実施することができることを容易に認識するであろう。いくつかの行為は、異なる順序で、及び／又は他の行為若しくは事象と同時に生じ得るため、本発明は、例示される行為又は事象の順序によって限定されない。更に、本発明による手法を実施するために、例示された全ての行為、ステップ、又は事象が必要とされるわけではない。本明細書に記載される又は参照される技術及び手順のうちの多くは、当業者によって十分に理解されており、従来の手法を使用して一般的に用いられている。
別途定義のない限り、本明細書で使用される全ての技術用語、表記、及び他の科学用語、又は専門用語は、本発明が関係する当業者によって通常理解される意味を有することを意図している。場合によっては、通常理解される意味を有する用語は、明確にするため及び／又は即座に参照できるように本明細書に定義され、本明細書におけるかかる定義を含めることは、当該技術分野において概ね理解されているものと実質的な違いを表すと必ずしも解釈されるべきではない。通常使用される辞書で定義されているものなどの用語は、関連技術の文脈におけるそれらの意味と一致する意味を有するものとして、及び／又は本明細書において別様に定義されているものとして解釈する必要があることが更に理解されるであろう。
リストが提示される場合、特に指定しない限り、そのリストの各個々の要素及びそのリストの全ての組み合わせは別個の実施形態であることを、理解されたい。例えば、「Ａ、Ｂ、又はＣ」として提示される実施形態のリストは、実施形態「Ａ」、「Ｂ」、「Ｃ」、「Ａ又はＢ」、「Ａ又はＣ」、「Ｂ又はＣ」、又は「Ａ、Ｂ、又はＣ」を含むと解釈されるべきである。
定義
本明細書及び添付の「特許請求の範囲」において使用されるとき、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」という単数形は、その内容について別段の明確な指示がない限り、複数の指示対象を包含する。したがって、例えば、「細胞（a cell）」という言及には、２つ又は３つ以上の細胞の組み合わせ、及びこれに類するものなどが含まれる。
移行句「備える／含む（comprising）」、「から本質的になる（consisting essentially of）」、及び「からなる（consisting）」は、特許用語において全般的に受け入れられている意味を含意することを意図しており、すなわち、（ｉ）「備える／含む（comprising）」は、「含む」、「含有する」、又は「特徴とする」と同義であり、包括的又は非制限的なものであり、その他の列挙されていない要素又は方法工程を除外するものではなく、（ｉｉ）「からなる（consisting of）」は、特許請求の範囲において特定されていない、あらゆる要素、工程、又は成分を除外し、並びに（ｉｉｉ）「から本質的になる」は、特定される材料又は工程、並びに、特許請求される発明の「基本的かつ新しい特徴（複数可）に実質的に影響しないもの」に、特許請求の範囲の範囲を制限する。句「備える／含む（comprising）」（又はその同等語）に関して記載される実施形態はまた、実施形態として、「からなる」及び「から本質的になる」に関して独立して記載されるものを提供する。
「活性化」又は「刺激」又は「活性化された」又は「刺激された」とは、活性化マーカーの発現、サイトカイン産生、又は標的細胞の増殖若しくは細胞傷害性の媒介をもたらす、細胞の生物学的状態の変化の誘導を指す。細胞は、一次刺激シグナルによって活性化され得る。共刺激シグナルは、一次シグナルの大きさを増幅し、初期刺激後の細胞死を抑制することができ、その結果、より耐久性のある活性化状態、ひいてはより高い細胞傷害能をもたらす。「共刺激シグナル」は、ＴＣＲ／ＣＤ３ライゲーションなどの一次シグナルと組み合わせて、Ｔ細胞及び／若しくはＮＫ細胞の増殖並びに／又は鍵となる分子のアップレギュレーション若しくはダウンレギュレーションを引き起こすシグナルを指す。
「抗原結合断片」又は「抗原結合ドメイン」とは、抗原に結合するタンパク質の一部を指す。抗原結合断片は、合成ポリペプチド、酵素的に入手可能なポリペプチド、又は遺伝的に操作されたポリペプチドであってよく、これには、抗原に結合する免疫グロブリンの一部、例えば、ＶＨ、ＶＬ、ＶＨ及びＶＬ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ及びＦｖ断片、１つのＶＨドメイン又は１つのＶＬドメインからなるドメイン抗体（ｄＡｂ）、サメ可変ＩｇＮＡＲドメイン、ラクダ化ＶＨドメイン、ＶＨＨドメイン、ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４部分などの抗体のＣＤＲを模倣するアミノ酸残基からなる最小認識ユニット、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及び／又はＨＣＤＲ３、並びにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及び／又はＬＣＤＲ３、抗原に結合するオルタナティブスカフォールド、並びに抗原結合断片を含む多重特異性タンパク質が挙げられる。抗原結合断片（ＶＨ及びＶＬなど）は、合成リンカーを介して互いに連結して、ＶＨ及びＶＬドメインが別々の一本鎖により発現された場合にＶＨ／ＶＬドメインが分子内又は分子間で対合して一価の抗原結合ドメイン、例えば一本鎖Ｆｖ（single chain Fv、ｓｃＦｖ）又はダイアボディを形成することができる、様々な種類の一本鎖抗体設計を形成することができる。抗原結合断片はまた、二重特異性及び多重特異性タンパク質を遺伝子操作するために、単一特異性又は多重特異性であり得る他の抗体、タンパク質、抗原結合断片、又はオルタナティブスカフォールドにコンジュゲートされてもよい。
「癌」は、身体における異常細胞の制御されていない成長を特徴とする様々な疾患の広範な群を指す。制御されていない細胞分裂及び成長は、隣接組織を浸潤する悪性腫瘍の形成をもたらし、リンパ系又は血流を介して身体の遠位部分にも転移し得る。「癌」又は「癌組織」は、腫瘍を含み得る。
「完全長抗体」は、ジスルフィド結合によって相互に接続された、２本の重鎖（ＨＣ）及び２本の軽鎖（ＬＣ）、並びにこれらの多量体（例えば、ＩｇＭ）で構成される。各重鎖は、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び重鎖定常ドメインで構成され、該重鎖定常ドメインは、サブドメインＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３で構成される。各軽鎖は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）で構成される。ＶＨ及びＶＬは、フレームワーク領域（framework region、ＦＲ）に散在している相補性決定領域（complementarity determining region、ＣＤＲ）と称される超可変性の領域に更に区分され得る。各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４で配置された、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲセグメントで構成される。
「ヒト抗体」は、ヒト対象に投与されるときに、最小の免疫応答を有するように最適化された抗体を意味する。ヒト抗体の可変領域は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する。ヒト抗体が定常領域又は定常領域の一部を含む場合、当該定常領域もヒト免疫グロブリン配列に由来する。ヒト抗体は、ヒト抗体の可変領域がヒト生殖系列免疫グロブリン又は再編成された免疫グロブリン遺伝子を使用する系から得られた場合、ヒト起源の配列に「由来する」重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。このような例示的な系は、ファージにディスプレイされたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリ、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座を保有するトランスジェニック非ヒト動物、例えばマウス又はラットを含む。「ヒト抗体」は、典型的には、ヒト抗体及びヒト免疫グロブリン遺伝子座を得るために使用した系の違い、フレームワーク若しくはＣＤＲへの体細胞変異の導入若しくは置換の意図的な導入、又はこれらの両方により、ヒトで発現した免疫グロブリンと比較したときにアミノ酸の違いを含有する。典型的には、「ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン又は再編成された免疫グロブリン遺伝子によってコードされているアミノ酸配列に対して、アミノ酸配列が少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一である。場合によっては、「ヒト抗体」は、例えばＫｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２９６：５７－８６に記載されるヒトフレームワーク配列分析から得られたコンセンサスフレームワーク配列、又は例えばＳｈｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１０）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３９７：３８５－９６及び国際公開第ＷＯ２００９／０８５４６２号に記載される、ファージ上に提示されたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリに組み込まれた合成ＨＣＤＲ３を含有し得る。少なくとも１つのＣＤＲが非ヒト種に由来する抗体は、「ヒト抗体」の定義には含まれない。
「ヒト化抗体」は、少なくとも１つのＣＤＲが非ヒト種に由来し、少なくとも１つのフレームワークがヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体を意味する。ヒト化抗体は、フレームワークに置換を含むことができるため、フレームワークは、発現したヒト免疫グロブリン又はヒト免疫グロブリン生殖細胞系列遺伝子配列の厳密なコピーではない場合がある。
「単離／単離された」とは、組み換え細胞などにおける分子が産生される系の他の成分から離して実質的に分離及び／又は精製された分子の均質な集団（例えば、合成ポリヌクレオチド又はポリペプチド）に加えて、少なくとも１つの精製又は単離工程に供されたタンパク質を指す。「単離／単離された」とは、他の細胞材料及び／又は化学物質を実質的に含まない分子を指し、より高い純度、例えば８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の純度まで単離された分子を包含する。
「調節する」は、対照又はビヒクルによって媒介される応答と比較したときに、より多い又はより少ない応答を媒介する（すなわち、下流効果）試験分子の増強された又は減少した能力のいずれかを指す。
「ナチュラルキラー細胞」及び「ＮＫ細胞」は、本明細書では互換的かつ同義的に使用される。ＮＫ細胞は、ＣＤ１６＋ＣＤ５６＋及び／又はＣＤ５７＋ＴＣＲ－表現型を有する分化リンパ球を指す。ＮＫ細胞は、特定の細胞溶解性酵素の活性化によって「自己」ＭＨＣ／ＨＬＡ抗原を発現できない細胞に結合し、殺傷する能力、腫瘍細胞又はＮＫ活性化受容体のリガンドを発現する他の疾患細胞を殺傷する能力、及び免疫応答を刺激又は阻害するサイトカインと呼ばれるタンパク質分子を放出する能力を特徴とする。
「特異的に結合する」、「特異的結合」、「特異的に結合している」、又は「結合する」とは、タンパク質性分子が、抗原又は当該抗原内のエピトープに、他の抗原に対する親和性よりも高い親和性で結合することを指す。典型的には、タンパク質性分子は、約１×１０－７Ｍ以下、例えば約５×１０－８Ｍ以下、約１×１０－８Ｍ以下、約１×１０－９Ｍ以下、約１×１０－１０Ｍ以下、約１×１０－１１Ｍ以下、又は約１×１０－１２Ｍ以下の平衡解離定数（ＫＤ）で抗原又は当該抗原内のエピトープに結合し、典型的には、当該ＫＤは、非特異的抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）への結合についてのＫＤよりも少なくとも１００倍小さい。本明細書に記載の前立腺ネオ抗原の文脈において、「特異的結合」とは、タンパク質性分子が、前立腺ネオ抗原がそのバリアントである野生型タンパク質に検出可能には結合することなく、前立腺ネオ抗原に結合することを指す。
「腫瘍細胞」又は「癌細胞」は、インビボ、エクスビボ、又は組織培養のいずれかにおいて、自然発生的な又は導入された表現型の変化を有する癌性、前癌性、又は形質転換細胞を指す。これらの変化は、必ずしも新たな遺伝物質の取り込みを伴うものではない。形質転換は、形質転換ウイルスの感染及び新たなゲノム核酸の組み込み、外因性核酸の取り込みにより発生させることもでき、自然発生的に又は発癌物質に曝露した後に発生し、それによって内因性の遺伝子が変異する場合もある。形質転換／癌は、インビトロ、インビボ、及びエクスビボにおける、形態学的変化、細胞の不死化、異常な増殖制御、病巣の形成、増殖、悪性病変、腫瘍特異的マーカーレベルの調節、浸潤性、ヌードマウスなどの好適な動物宿主における腫瘍の増殖などによって例示される。
用語「キメラ抗原受容体」又は「ＣＡＲ」は、本明細書で使用するとき、全て天然では単一のタンパク質において一緒にみられることのない組み合わせで、細胞外標的結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞表面受容体として定義される。これには、特に、細胞外ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインが天然では単一の受容体タンパク質において一緒にみられることのない受容体が含まれる。本発明のキメラ抗原受容体は、主に、Ｔ細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などのリンパ球での使用が意図される。
用語「Ｔ細胞」及び「Ｔリンパ球」は、互換的であり、本明細書において同義的に使用される。本明細書で使用するとき、Ｔ細胞は、胸腺細胞、ナイーブＴリンパ球、未成熟Ｔリンパ球、成熟Ｔリンパ球、休止Ｔリンパ球、又は活性化Ｔリンパ球を含む。Ｔ細胞は、Ｔヘルパー（Ｔｈ）細胞、例えば、Ｔヘルパー１（Ｔｈ１）又はＴヘルパー２（Ｔｈ２）細胞であってよい。Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞（ＨＴＬ；ＣＤ４＋Ｔ細胞）、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ；ＣＤ８＋Ｔ細胞）、腫瘍浸潤細胞傷害性Ｔ細胞（ＴＩＬ；ＣＤ８＋Ｔ細胞）、ＣＤ４＋ＣＤ８＋Ｔ細胞、又はＴ細胞の任意の他のサブセットであってもよい。特定の実施形態で使用するのに好適なＴ細胞の他の例示的な集団としては、ナイーブＴ細胞及びメモリＴ細胞が挙げられる。また、「ＮＫＴ細胞」も含まれ、これは、半不変αβＴ細胞受容体を発現するだけでなく、ＮＫ１．１などの通常ＮＫ細胞に関連する様々な分子マーカーも発現するＴ細胞の特殊な集団を指す。ＮＫＴ細胞としては、ＮＫ１．１＋及びＮＫ１．１－、並びにＣＤ４＋、ＣＤ４－、ＣＤ８＋、及びＣＤ８細胞が挙げられる。ＮＫＴ細胞のＴＣＲは、ＭＨＣ Ｉ様分子ＣＤ Ｉｄによって提示される糖脂質抗原を認識するという点で独特である。ＮＫＴ細胞は、炎症又は免疫寛容のいずれかを促進するサイトカインを産生する能力により、保護効果又は有害効果のいずれかを有し得る。また、「ガンマデルタＴ細胞（γδＴ細胞）」も含まれる。ガンマデルタＴ細胞は、それらの表面に異なるＴＣＲを有するＴ細胞の小さなサブセットの特殊な集団を指し、ＴＣＲがα及びβ－ＴＣＲ鎖と表記される２つの糖タンパク質鎖から構成されるＴ細胞の大部分とは異なる。γδＴ細胞におけるＴＣＲは、γ鎖及びδ鎖から構成される。γδＴ細胞は、免疫監視及び免疫調節において役割を果たすことができ、ＩＬ－１７の重要な供給源であること、及び活発なＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞応答を誘導することが見出された。また、異常又は過剰な免疫応答を抑制し、免疫寛容において役割を果たすＴ細胞を指す「制御性Ｔ細胞」又は「Ｔｒｅｇ」も含まれる。Ｔｒｅｇは、典型的には、転写因子Ｆｏｘｐ３陽性ＣＤ４＋Ｔ細胞であり、また、ＩＬ－１０産生ＣＤ４＋Ｔ細胞である転写因子Ｆｏｘｐ３陰性制御性Ｔ細胞も含み得る。
用語「ナチュラルキラー細胞」及び「ＮＫ細胞」は、互換的であり、本明細書において同義的に使用される。本明細書で使用するとき、ＮＫ細胞とは、ＣＤ１６＋ＣＤ５６＋及び／又はＣＤ５７＋ＴＣＲ－表現型を有する分化リンパ球を指す。ＮＫ細胞は、特定の細胞溶解性酵素の活性化によって「自己」ＭＨＣ／ＨＬＡ抗原を発現できない細胞に結合し、殺傷する能力、腫瘍細胞又はＮＫ活性化受容体のリガンドを発現する他の疾患細胞を殺傷する能力、及び免疫応答を刺激又は阻害するサイトカインと呼ばれるタンパク質分子を放出する能力を特徴とする。
本明細書で使用するとき、用語「抗原」とは、Ｔ細胞受容体が結合することができる任意の剤（例えば、タンパク質、ペプチド、多糖類、糖タンパク質、糖脂質、核酸、これらの一部、又はこれらの組み合わせ）分子を指す。抗原は、免疫応答を惹起することもできる。免疫応答の例は、限定するものではないが、抗体産生、若しくは特定の免疫学的コンピテント細胞の活性化、又はその両方を伴い得る。当業者は、抗原が決して「遺伝子」によってコードされている必要はないことを理解するであろう。抗原は、合成で作製されてもよく、又は生物学的サンプルに由来していてもよく、又はポリペプチド以外の巨大分子であってもよいことは容易に明らかである。このような生物学的サンプルとしては、組織サンプル、腫瘍サンプル、細胞、又は他の生物学的成分、生物、タンパク質／抗原のサブユニット、殺傷若しくは不活性化された全細胞若しくは溶解物を含む流体を挙げることができるが、これらに限定されない。
用語「抗体」とは、モノクローナル抗体、多重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、ジスルフィド連結Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、イントラボディ、ミニボディ、ダイアボディ、及び抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、抗原特異的ＴＣＲに対する抗Ｉｄ抗体を含む）、及び上記のいずれかのエピトープ結合断片を指す。用語「抗体」はまた、米国特許出願公開第２００７／０００４９０９号に開示されているものなどの共有結合性ダイアボディ、及び米国特許出願公開第２００９／００６０９１０号に開示されているものなどのＩｇ－ＤＡＲＴＳも指す。ＴＣＲ結合分子として有用な抗体としては、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な断片、すなわち、抗原結合部位を含有する分子が挙げられる。免疫グロブリン分子は、任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ１、ＩｇＭ２、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、又はサブクラスであってよい。
用語「宿主細胞」は、異種核酸を含有する任意の細胞を意味する。異種核酸は、ベクター（例えば、発現ベクター）であってよい。例えば、宿主細胞は、細胞による物質の産生、例えば、遺伝子、ＤＮＡ若しくはＲＮＡ配列、タンパク質、又は酵素の細胞による発現のための、任意の方法で選択、改変、形質転換、成長、使用、又は操作される任意の生物由来の細胞であってよい。適切な宿主を決定することができる。例えば、宿主細胞は、ベクター骨格及び所望の結果に基づいて選択され得る。例として、プラスミド又はコスミドは、いくつかのタイプのベクターを複製するために原核生物宿主細胞に導入され得る。ＤＨ５α、ＪＭ１０９、及びＫＣＢなどであるが、これらに限定されない細菌細胞、ＳＵＲＥ（登録商標）コンピテント細胞、並びにＳＯＬＯＰＡＣＫ Ｇｏｌｄ細胞を、ベクター複製及び／又は発現のための宿主細胞として使用することができる。更に、大腸菌ＬＥ３９２などの細菌細胞を、ファージウイルスの宿主細胞として使用することができる。宿主細胞として使用することができる真核細胞としては、酵母（例えば、ＹＰＨ４９９、ＹＰＨ５００、及びＹＰＨ５０１）、昆虫、及び哺乳類が挙げられるが、これらに限定されない。ベクターの複製及び／又は発現のための哺乳類真核宿主細胞の例としては、ＨｅＬａ、ＮＩＨ３Ｔ３、Ｊｕｒｋａｔ、２９３、ＣＯＳ、ＣＨＯ、Ｓａｏｓ、及びＰＣ１２が挙げられるが、これらに限定されない。
本開示の宿主細胞としては、ＣＡＲをコードしているＤＮＡ又はＲＮＡ配列を含有し、ＣＡＲを細胞表面上で発現するＴ細胞及びナチュラルキラー細胞が挙げられる。宿主細胞は、Ｔ細胞活性、ナチュラルキラー細胞活性、癌の治療、及び自己免疫疾患の治療を増強するために使用され得る。
「活性化」又は「刺激」は、それによって細胞（例えば、Ｔ細胞及びＮＫ細胞）が、活性化マーカーを発現する、サイトカインを産生する、増殖する、及び／又は標的細胞に対して細胞傷害性になる、細胞の生物学的状態の変化の誘導を意味する。これらの変化は全て、一次刺激シグナルによって生じ得る。共刺激シグナルは、一次シグナルの大きさを増幅し、初期刺激後の細胞死を抑制することができ、その結果、より耐久性のある活性化状態、ひいてはより高い細胞傷害能をもたらす。「共刺激シグナル」は、ＴＣＲ／ＣＤ３ライゲーションなどの一次シグナルと組み合わせて、Ｔ細胞及び／若しくはＮＫ細胞の増殖並びに／又は鍵となる分子のアップレギュレーション若しくはダウンレギュレーションを引き起こすシグナルを指す。
用語「増殖」は、細胞の対称的又は非対称的な分裂のいずれかの、細胞分裂の増加を指す。用語「拡大」は、細胞分裂及び細胞死の結果を指す。
用語「分化」は、細胞の能力若しくは増殖を減少させるか、又は細胞をより発生的に限定された状態に移行させる方法を指す。
用語「発現する」及び「発現」は、遺伝子又はＤＮＡ配列の情報が生成されることを可能にするか又は生成させること、例えば、対応する遺伝子又はＤＮＡ配列の転写及び翻訳に関与する細胞機能を活性化することによってタンパク質を生成することを意味する。ＤＮＡ配列は、細胞内に又は細胞によって発現して、タンパク質などの「発現産物」を形成する。発現産物自体、例えば、得られたタンパク質は、細胞によって「発現された」と言うこともできる。発現産物は、細胞内、細胞外、又は膜貫通として特徴付けることができる。
用語「トランスフェクション」とは、組み換えＤＮＡ技術を使用して細胞に「外来」（すなわち、外因性又は細胞外）核酸を導入することを意味する。用語「遺伝子改変」は、宿主細胞に対して「外来」（すなわち、外因性又は細胞外）の遺伝子、ＤＮＡ又はＲＮＡ配列を導入し、その結果、宿主細胞が、導入された遺伝子又は配列を発現して、所望の物質、典型的には、導入された遺伝子又は配列によってコードされているタンパク質又は酵素を生成することを意味する。導入された遺伝子又は配列はまた、「クローニングされた」又は「外来」遺伝子又は配列と呼ばれる場合もあり、開始、終止、プロモーター、シグナル、分泌、又は細胞の遺伝機構によって使用される他の配列などのキメラ抗原受容体をコードしているポリヌクレオチドに動作可能に連結された調節配列又は制御配列を含んでいてよい。遺伝子又は配列は、既知の機能を有さない非機能的配列を含んでいてよい。導入されたＤＮＡ又はＲＮＡを受け取って発現する宿主細胞は、「遺伝的に操作されている」。宿主細胞に導入されたＤＮＡ又はＲＮＡは、宿主細胞と同じ属若しくは種の細胞を含む任意の起源、又は異なる属若しくは種に由来し得る。
用語「形質導入」とは、ウイルスベクターを使用する外来核酸の細胞への導入を意味する。
用語「制御エレメント」は、核酸配列の発現のいくつかの態様を制御する任意のシス作用性遺伝要素を指す。いくつかの実施形態では、用語「プロモーター」は、本質的に、転写を開始するために必要な最小配列を含む。いくつかの実施形態では、用語「プロモーター」は、転写を開始させるための配列を含み、加えて、それぞれ一般的に「エンハンサーエレメント」及び「リプレッサーエレメント」と呼ばれる転写をアップレギュレート又はダウンレギュレートすることができる配列も含む。
本明細書で使用するとき、「動作可能に連結された」及び類似の語句は、核酸又はアミノ酸に関して使用される場合、それぞれ、互いに機能的な関係で配置された核酸配列又はアミノ酸配列の動作可能な連結を指す。例えば、動作可能に連結されたプロモーター、エンハンサーエレメント、オープンリーディングフレーム、５’及び３’ＵＴＲ、並びにターミネーター配列は、核酸分子（例えば、ＲＮＡ）の正確な産生をもたらす。いくつかの実施形態では、動作可能に連結された核酸エレメントは、オープンリーディングフレームの転写及び最終的にはポリペプチドの生成（すなわち、オープンリーディングフレームの発現）をもたらす。別の例として、動作可能に連結されたペプチドは、機能ドメインが互いに適切な距離で配置されて、各ドメインの意図された機能を付与するものを指す。
「増強」又は「促進」又は「増加」又は「拡大」又は「改善」は、全般的に、ビヒクル又は対照分子／組成物のいずれかによって引き起こされる応答と比較して、より大きな生理学的応答を生じさせるか、誘発するか、又は引き起こす（すなわち、下流効果）、本明細書で企図される組成物の能力を指す。測定可能な生理学的応答は、特に当該技術分野及び本明細書の記載の理解から明らかなように、Ｔ細胞の拡大、活性化、エフェクター機能、持続性の増加、及び／又は癌細胞死殺傷能力の増加を含み得る。特定の実施形態では、「増加した」又は「増強された」量は、「統計的に有意な」量であり得、ビヒクル又は対照組成物によって生じる応答の１．１、１．２、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０倍、又はそれ以上（例えば、５００、１０００倍）（１を上回る全ての整数及びその間の小数点、例えば、１．５、１．６、１．７、１．８などを含む）である増加を含み得る。
「減少」又は「低下」又は「減弱」又は「低減」又は「軽減」は、全般的に、ビヒクル又は対照分子／組成物のいずれかによって引き起こされる応答と比較して、より小さな生理学的応答を生じさせるか、誘発するか、又は引き起こす（すなわち、下流効果）、本明細書で企図される組成物の能力を指す。特定の実施形態では、「減少した」又は「低減された」量は、「統計的に有意な」量であり得、ビヒクル若しくは対照組成物によって生じる応答（参照応答）又は特定の細胞系列における応答の１．１、１．２、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０倍、又はそれ以上（例えば、５００、１０００倍）（１を上回る全ての整数及びその間の小数点、例えば、１．５、１．６、１．７、１．８などを含む）である減少を含み得る。
用量又は量に適用される用語「有効な」は、それを必要としている対象への投与時に所望の活性をもたらすのに十分な化合物又は医薬組成物の量を指す。活性成分の組み合わせを投与するとき、当該組み合わせの有効量は、個々に投与された場合に有効であろう各成分の量を含んでいる場合もあり、含んでいない場合もあることに留意されたい。正確な必要量は、対象の種、年齢、及び全身状態、治療される病態の重症度、用いられる具体的な薬物、投与の様式などに応じて、対象によって異なる。
本明細書に記載の組成物に関連して使用するとき、語句「医薬的に許容される」とは、生理学的に許容され、典型的には哺乳類（例えば、ヒト）に投与されたときに有害反応を生じさせない、このような組成物の分子実体及び他の成分を指す。好ましくは、用語「医薬的に許容される」とは、哺乳類、より具体的にはヒトにおける使用について、連邦政府若しくは州政府の規制機関によって認可されているか、又は米国薬局方若しくは他の全般的に認められている薬局方に記載されていることを意味する。
用語「タンパク質」は、本明細書で使用するとき、全ての長さのタンパク質断片を含む天然及び合成のタンパク質、融合タンパク質、並びに糖タンパク質に加えて、全ての他の種類の修飾タンパク質（例えば、リン酸化、アセチル化、ミリストイル化、パルミトイル化、グリコシル化、酸化、ホルミル化、アミド化、ポリグルタミル化、ＡＤＰ－リボシル化、ペグ化、ビオチン化などから得られるタンパク質）を含むがこれに限定されない修飾タンパク質の全ての種類を包含する。
用語「核酸」、「ヌクレオチド」、及び「ポリヌクレオチド」は、特に明記しない限り、ＤＮＡ及びＲＮＡの両方を包含する。「核酸配列」又は「ヌクレオチド配列」とは、アミノ酸をコードしている核酸配列を意味し、これらの用語はまた、リンカーによってコードされている任意のアミノ酸を含む、クローニングのアーチファクトとして付加される任意のアミノ酸をコードしている部分を含む核酸配列を指す場合もある。
用語「担体」は、化合物が一緒に投与される希釈剤、補助剤、賦形剤、又はビヒクルを指す。このような医薬担体は、落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油などの、石油、動物、植物、又は合成起源のものを含む、水及び油などの滅菌液体であってよい。水又は水溶液、生理食塩水、並びにデキストロース及びグリセリン水溶液が、特に注射溶液用の担体として好ましく用いられる。あるいは、担体は、バインダー（圧縮丸剤用）、流動促進剤、封入剤、風味剤、及び着色剤のうちの１つ以上を含むがこれらに限定されない固体剤形担体であってもよい。好適な医薬担体は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載されている。
用語「約」又は「およそ」は、値の統計的に意味のある範囲内にあることを含む。このような範囲は、所与の値又は範囲の１桁以内、好ましくは５０％以内、より好ましくは２０％以内、更により好ましくは１０％以内、更により好ましくは５％以内であり得る。用語「約」又は「およそ」によって包含される許容可能な変動は、研究中の具体的なシステムに依存し、当業者によって容易に理解され得る。
「カリクレイン関連ペプチダーゼ２」、「ｈＫ２」、又は「ｋｌｋ２」とは、カリクレイン－２、顆粒状カリクレイン２、又はＨＫ２とも呼ばれる既知のタンパク質を指す。ｈＫ２は、プレプロタンパク質として生成され、タンパク質分解中に切断されて活性プロテアーゼを生成する。全てのｈＫ２アイソフォーム及びバリアントが、「ｈＫ２」に包含される。様々なアイソフォームのアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００５５４２．１、ＮＰ＿００１００２２３１．１、及びＮＰ＿００１２４３００９から検索可能である。配列番号６２における完全長ヒトｈＫ２のアミノ酸配列を示す。配列は、シグナルペプチド（残基１～１８）及びプロペプチド領域（残基１９～２４）を含む。
本明細書で使用される用語は、あくまで特定の実施形態を説明する目的のものに過ぎず、限定を目的としたものではない。本明細書で使用するとき、文脈により別途明確に示されない限り、不定冠詞「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、複数の指示物を含むものと理解されるべきである。
キメラ抗原受容体
本発明は、概して、所望のキメラ抗原受容体を安定して発現するように遺伝子改変されたＴ細胞の使用に関する。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、Ｔ細胞シグナル伝達ドメインに連結された抗体（ｓｃＦｖ）の抗原結合ドメインを含有する人工的に構築されたハイブリッドタンパク質又はポリペプチドである。ＣＡＲの特性としては、非ＭＨＣ制限的に選択された標的に向かってＴ細胞特異性及び反応性をリダイレクトし、モノクローナル抗体の抗原結合特性を利用する能力を挙げることができる。非ＭＨＣ制限抗原認識により、ＣＡＲを発現するＴ細胞は、抗原プロセシングとは無関係に抗原を認識することができるため、腫瘍逃避の主要なメカニズムを迂回する。更に、Ｔ細胞において発現される場合、ＣＡＲは、内因性Ｔ細胞受容体（T cell receptor、ＴＣＲ）アルファ及びベータ鎖と有利には二量体化しない。
本明細書に記載のＣＡＲは、少なくとも細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、以下に定義された刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン（本明細書では「細胞質シグナル伝達ドメイン」とも称される）と、を含む組み換えポリペプチドコンストラクトを提供する。ＣＡＲを発現するＴ細胞は、本明細書では、ＣＡＲ Ｔ細胞、ＣＡＲ－Ｔ細胞、又はＣＡＲ修飾Ｔ細胞と称され、これらの用語は、本明細書において互換的に使用される。細胞は、その表面上に抗体結合ドメインを安定して発現するように遺伝的に改変することができ、ＭＨＣ非依存性の新規抗原特異性を付与する。
場合によっては、Ｔ細胞は、特定の抗体の抗原認識ドメインがＣＤ３－ゼータ鎖又はＦｃγＲＩタンパク質の細胞内ドメインと組み合わされて単一のキメラタンパク質になるＣＡＲを安定して発現するように、遺伝的に改変される。一実施形態では、刺激分子は、Ｔ細胞受容体複合体に関連するゼータ鎖である。
「細胞内シグナル伝達ドメイン」又は「細胞質シグナル伝達ドメイン」は、本明細書で使用するとき、分子の細胞内部分を指す。これは、二次情報伝達物質を生成することにより規定のシグナル伝達経路を介して細胞活動を制御するために細胞内で情報を伝達することによって作用する、又はこのような情報伝達物質に応答することによりエフェクターとして機能することによって作用するタンパク質の機能的部分である。細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲ含有細胞（例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞）の免疫エフェクター機能を促進するシグナルを生成する。例えばＣＡＲ－Ｔ細胞における免疫エフェクター機能の例としては、細胞溶解活性及びヘルパー活性（サイトカインの分泌を含む）が挙げられる。
一実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメインを含み得る。一次細胞内シグナル伝達ドメインの例としては、一次刺激又は抗原依存性シミュレーションに関与する分子に由来するものが挙げられる。一実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激細胞内ドメインを含み得る。共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの例としては、共刺激シグナル又は抗原非依存性刺激に関与する分子に由来するものが挙げられる。例えば、ＣＡＲ－Ｔの場合、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞受容体の細胞質配列を含み得、共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、共受容体又は共刺激分子からの細胞質配列を含み得る。
一次細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ又はＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含み得る。一次細胞質シグナル伝達配列を含有するＩＴＡＭの例としては、ＣＤ３－ゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、並びにＣＤ６６ｄ ＤＡＰ１０及びＤＡＰ１２に由来するものが挙げられるが、これらに限定されない。
「ゼータ」又は代替的に「ゼータ鎖」、「ＣＤ３－ゼータ」又は「ＴＣＲ－ゼータ」という用語は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＢＡＧ３６６６４．１として提供されるタンパク質、又は非ヒト種、例えば、ネズミ、ウサギ、霊長類、マウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの等価な残基として定義され、「ゼータ刺激ドメイン」又は代替的に「ＣＤ３－ゼータ刺激ドメイン」又は「ＴＣＲ－ゼータ刺激ドメイン」は、Ｔ細胞活性化に必要な初期シグナルを機能的に伝達するために十分なゼータ鎖の細胞質ドメインからのアミノ酸残基として定義される。時には、例えば、本開示の又は態様及び／又は実施形態では、「ゼータ刺激ドメイン」又は「ＣＤ３－ゼータ刺激ドメイン」は、「一次シグナル伝達ドメイン」とも呼ばれる。一態様では、ＣＤ３ゼータ刺激ドメインの細胞質ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＢＡＧ３６６６４．１の残基５２～１６４、又はその機能的オルソログである、非ヒト種、例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿などに由来する等価な残基を含む。好ましい実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ刺激ドメインを含む。一態様では、「ゼータ刺激ドメイン」又は「ＣＤ３－ゼータ刺激ドメイン」は、配列番号２８として提供される配列、又は配列番号２８と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列である。
用語「共刺激分子」とは、共刺激リガンドと特異的に結合し、それによって、Ｔ細胞による共刺激応答（例えば、限定するものではないが、増殖）を媒介するＴ細胞上の同種結合パートナーを指す。共刺激分子は、効率的な免疫応答に必要な抗原受容体又はそのリガンド以外の細胞表面分子である。共刺激分子としては、ＭＨＣクラス１分子、ＢＴＬＡ、及びＴｏｌｌリガンド受容体、並びにＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、及び４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）が挙げられるが、これらに限定されない。
共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内部分であり得る。共刺激分子は、以下のタンパク質ファミリー：ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、及び活性化ＮＫ細胞受容体で表すことができる。このような分子の例としては、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＭｙＤ８８、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７－Ｈ３、及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどが挙げられる。
細胞内シグナル伝達ドメインは、それが由来する分子の細胞内部分全体、又は天然の細胞内シグナル伝達ドメイン全体、又はそれらの機能的断片を含み得る。
用語「４－１ＢＢ」又は代替的に「ＣＤ１３７」とは、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＡ６２４７８．２として提供されるアミノ酸配列、又は非ヒト種、例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの等価な残基を有するＴＮＦＲスーパーファミリーのメンバーを指し、「４－１ＢＢ共刺激ドメイン」は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＡ６２４７８．２のアミノ酸残基２１４～２５５、又は非ヒト種、例えば、マウス、げっ歯類、サル、及び類人猿などからの等価な残基として定義される。時には、例えば、本開示の態様及び／又は実施形態では、「４－１ＢＢ共刺激ドメイン」は、「共刺激ドメイン」とも呼ばれる。
好ましい実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢ共刺激ドメイン又は「ＣＤ１３７共刺激ドメイン」である共刺激細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一態様では、「４－１ＢＢ共刺激ドメイン」又は「ＣＤ１３７共刺激ドメイン」は、配列番号２７として提供される配列、又は非ヒト種、例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの等価な残基、又は配列番号２７と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列である。好ましい実施形態では、４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号２７として提供される配列である。
一実施形態では、ＣＡＲ内のドメインの１つに自然に関連する膜貫通ドメインが使用される。別の実施形態では、膜貫通ドメインを、アミノ酸置換によって選択又は修飾し、同じ又は異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインへのかかるドメインの結合を回避して、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小限に抑えることができる。一例の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８αヒンジドメインを含む。一実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ８αヒンジドメイン及びＣＤ８α膜貫通ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、細胞質シグナル伝達ドメインは、本明細書で定義される少なくとも１つの共刺激分子に由来する１つ以上の機能的シグナル伝達ドメインを更に含む。一実施形態では、共刺激分子は、４－１ＢＢ（すなわち、ＣＤ１３７）、ＣＤ２７、ＣＤ３－ゼータ、及び／又はＣＤ２８から選択される。ＣＤ２８は、Ｔ細胞共刺激において重要なＴ細胞マーカーである。ＣＤ２７は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーのメンバーであり、共刺激免疫チェックポイント分子として機能する。４－１ＢＢは、Ｔ細胞に強力な共刺激シグナルを伝達し、分化を促進し、Ｔリンパ球の長期生存を増強する。ＣＤ３－ゼータは、ＴＣＲと会合してシグナルを生成し、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（immunoreceptor tyrosine-based activation motifs、ＩＴＡＭ）を含有する。別の実施形態では、共刺激分子は、ＭｙＤ８８又はＣＤ４０である。
一実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ８を含む細胞内ヒンジドメインと、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、及びＣＤ３－ゼータを含む細胞内Ｔ細胞受容体シグナル伝達ドメインと、を含む。別の実施形態では、ＣＡＲは、細胞内ヒンジドメインと、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、及びＣＤ３－ゼータを含む細胞内Ｔ細胞受容体シグナル伝達ドメインとを含み、当該ヒンジドメインは、ＣＤ８、ＣＤ４、又はＣＤ２８の細胞外領域の全て又は一部、抗体定常領域の全て又は一部、ＦｃＲＩＩＩＡ受容体、ＩｇＧヒンジ、ＩｇＭヒンジ、ＩｇＡヒンジ、ＩｇＤヒンジ、ＩｇＥヒンジ、又はＩｇヒンジの全て又は一部を含む。ＩｇＧヒンジは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ１、ＩｇＭ２、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、又はこれらのキメラ由来であってよい。
本明細書に記載のＣＡＲは、少なくとも細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、例えば以下に定義された刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン（本明細書では「細胞質シグナル伝達ドメイン」とも称される）と、を含む組み換えポリペプチドコンストラクトを提供する。
一実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメインと、膜貫通ドメインと、刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと、を含むキメラ融合タンパク質を含む。一実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメインと、膜貫通ドメインと、共刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメイン及び刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと、を含むキメラ融合タンパク質を含む。一実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメインと、膜貫通ドメインと、１つ以上の共刺激分子に由来する少なくとも２つの機能的シグナル伝達ドメイン及び刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと、を含むキメラ融合タンパク質を含む。
本発明のＣＡＲは、ＣＤ２８及び／若しくは４－１ＢＢシグナル伝達ドメインのみを含むように、又は本発明のＣＡＲの状況において有用な任意の他の所望の細胞質ドメインと組み合わされるように設計してよい。一実施形態では、ＣＡＲの細胞質ドメインは、ＣＤ３－ゼータのシグナル伝達ドメインを更に含み得る。例えば、ＣＡＲの細胞質ドメインとしては、ＣＤ３－ゼータ、４－１ＢＢ、及びＣＤ２８シグナル伝達モジュール、並びにこれらの組み合わせが挙げられ得るが、これらに限定されない。
一実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ８αヒンジドメインを含むヒンジドメインと、ＣＤ８α膜貫通ドメインと、４－１ＢＢ及びＣＤ３－ゼータを含む細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む。一実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ８αヒンジドメインを含むヒンジドメインと、ＣＤ８α膜貫通ドメインと、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、及びＣＤ３－ゼータを含む細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む。
別の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ８αヒンジドメインと、ＣＤ８α膜貫通ドメインと、ＣＤ３－ゼータのシグナル伝達ドメイン及び４－１ＢＢ共刺激ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む。
別の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤ８ａ－ヒンジ領域と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む膜貫通ドメインと、配列番号２７のアミノ酸配列を含む共刺激ドメイン及び配列番号２８のアミノ酸配列を含む一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む。
したがって、本発明は、ＣＡＲ Ｔ細胞、及び養子療法のためのそれらの使用方法を提供する。
本開示は、本明細書に記載のＣＡＲ、核酸、ポリペプチド、及びタンパク質のバリアント（例えば機能的バリアント）を更に提供する。「バリアント」は、例えば、置換、挿入、又は欠失といった１つ以上の改変によって参照ポリペプチド又は参照ポリヌクレオチドと異なるポリペプチド又はポリヌクレオチドを指す。本明細書で使用するとき、「機能的バリアント」という用語は、親ＣＡＲ、ポリペプチド、又はタンパク質と実質的又は著しい配列同一性又は類似性を有するＣＡＲ、ポリペプチド、又はタンパク質を指し、これらの機能的バリアントは、バリアントであるＣＡＲ、ポリペプチド、又はタンパク質の生物活性を保持する。機能的バリアントは、例えば、本明細書に記載のＣＡＲ、ポリペプチド、又はタンパク質（親ＣＡＲ、ポリペプチド、又はタンパク質）のバリアントを包含し、親ＣＡＲ、ポリペプチド、又はタンパク質と同様の程度、同程度、又はより高い程度で標的細胞を認識する能力を保持する。親ＣＡＲ、ポリペプチド、又はタンパク質に関して、機能的バリアントは、例えば、親ＣＡＲ、ポリペプチド、又はタンパク質に対して、アミノ酸配列が少なくとも約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％又はそれ以上同一であり得る。
ｆ）本明細書では、ポリペプチドの構造は、列挙された参照配列（所与の配列番号を有する）との配列同一性％に基づいて適切に定義される。これに関連して、２つのアミノ酸配列間の％配列同一性は、最適な方法でアラインメントされたこれらの２つの配列を比較することによって判定することができ、比較されるアミノ酸配列は、これらの２つの配列間における最適なアラインメントのために参照配列に対して付加又は欠失を含み得る。同一性の百分率は、２つの配列間のアミノ酸残基が同一である同一位置の数を判定し、この同一の位置の数を比較ウィンドウ内の位置の総数で除算し、得られた結果に１００を乗算し、これら２つの配列間における同一性の百分率を得るようにすることにより計算される。典型的には、比較ウィンドウは、比較される配列の全長に対応する。例えば、ＢＬＡＳＴプログラム、「ＢＬＡＳＴ ２配列」（Ｔａｔｕｓｏｖａ ｅｔ ａｌ、「Ｂｌａｓｔ ２配列－タンパク質及びヌクレオチド配列を比較するための新しいツール」、ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｌｅｔｔ．１７４：２４７－２５０）を使用することが可能であり、サイトｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｇｏｒｆ／ｂｌ２．ｈｔｍｌで入手可能であり、使用されるパラメータは、デフォルト（具体的には、パラメータ「オープンギャップペナルティ」：５、及び「エクステンションギャップペナルティ」：２；選択されたマトリックスは、例えば、プログラムによって提案されるマトリックス「ＢＬＯＳＵＭ ６２」）で指定されているパラメータであり、比較される２つの配列間における同一性の百分率は、プログラムによって直接計算される。クエリ配列の参照配列に対する配列同一性の判定は、当業者の能力の範囲内であり、ＢＬＡＳＴ（商標）などの市販の分析ソフトウェアを使用して実行することができる。
機能的バリアントは、例えば、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有する親ＣＡＲ、ポリペプチド、又はタンパク質のアミノ酸配列を含み得る。別の実施形態では、機能的バリアントは、少なくとも１つの非保存的アミノ酸置換を有する親ＣＡＲ、ポリペプチド、又はタンパク質のアミノ酸配列を含み得る。この場合、非保存的アミノ酸置換は、機能的バリアントの生物活性を抑制又は阻害することができない。非保存的アミノ酸置換により、機能的バリアントの生物活性を向上させることができ、その結果、機能的バリアントの生物活性は、親ＣＡＲ、ポリペプチド、又はタンパク質と比較して増加する。
本発明のＣＡＲのアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換であり得る。保存的アミノ酸置換は、当該技術分野において既知であり、特定の物理的及び／又は化学的特性を有する１つのアミノ酸を、同じ又は類似の化学的又は物理的特性を有する別のアミノ酸と交換するアミノ酸置換を含む。例えば、保存的アミノ酸置換は、別の酸性アミノ酸で置換された酸性アミノ酸（例えば、Ａｓｐ又はＧｌｕ）、非極性側鎖を有する別のアミノ酸で置換された非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｔｒｐ、Ｖａｌなど）、別の塩基性アミノ酸で置換された塩基性アミノ酸（Ｌｙｓ、Ａｒｇなど）、極性側鎖を有する別のアミノ酸で置換された極性側鎖を有するアミノ酸（Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒなど）等であり得る。
ＣＡＲ、ポリペプチド、又はタンパク質は、特定のアミノ酸配列又は本明細書に記載の配列から本質的になり得、その結果、他の構成成分、例えば、他のアミノ酸は、機能的バリアントの生物活性を実質的に変化させない。
本開示の実施形態のＣＡＲ、ポリペプチド、及びタンパク質（機能的部分及び機能的バリアントを含む）は、任意の長さであり得る、すなわち、任意の数のアミノ酸を含み得、但し、ＣＡＲ、ポリペプチド、又はタンパク質（又は機能的部分若しくはその機能的バリアント）は、それらの生物活性、例えば、抗原に特異的に結合する能力、宿主内の疾患細胞（例えば、癌細胞）を検出する能力、又は宿主内の疾患を治療若しくは予防する能力などを保持する。例えば、ポリペプチドは、約５０～約５０００個のアミノ酸長、例えば、約５０、約７０、約７５、約１００、約１２５、約１５０、約１７５、約２００、約２２５、約２５０、約２７５、約３００、約３２５、約３５０、約３７５、約４００、約４２５、約４５０、約４７５、約５００、約５２５、約５５０、約５７５、約６００、約６２５、約６５０、約６７５、約７００、約７２５、約７５０、約７７５、約８００、約８２５、約８５０、約８７５、約９００、約９２５、約９５０、約９７５、約１０００又はそれ以上のアミノ酸長であり得る。本発明のポリペプチドはまた、オリゴペプチドも含む。
本発明の実施形態のＣＡＲ、ポリペプチド、及びタンパク質（本発明の機能的部分及び機能的バリアントを含む）は、１つ以上の天然に存在するアミノ酸の代わりに合成アミノ酸を含むことができる。かかる合成アミノ酸は、当該技術分野において既知であり、例としては、アミノシクロヘキサンカルボン酸、ノルロイシン、α－アミノｎ－デカン酸、ホモセリン、Ｓ－アセチルアミノメチル－システイン、トランス－３－及びトランス－４－ヒドロキシプロリン、４－アミノフェニルアラニン、４－ニトロフェニルアラニン、α－（２－アミノ－２－ノルボルナン）－カルボン酸、α，γ－ジアミノ酪酸、α，β－ジアミノプロピオン酸、ホモフェニルアラニン、４－クロロフェニルアラニン、４－カルボキシフェニルアラニン、β－フェニルセリンβ－ヒドロキシフェニルアラニン、フェニルグリシン、α－ナフチルアラニン、シクロヘキシルアラニン、シクロヘキシルグリシン、Ｎ’－ベンジル－Ｎ’－メチル－リジン、Ｎ’，Ｎ’－ジベンジル－リジン、６－ヒドロキシリジン、オルニチン、α－アミノシクロペンタンカルボン酸、α－アミノシクロヘキサンカルボン酸、α－アミノシクロヘプタンカルボン酸、インドリン－２－カルボン酸、１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－３－カルボン酸、アミノマロン酸、アミノマロン酸モノアミド、及びα－ｔｅｒｔ－ブチルグリシンが挙げられる。
本発明の実施形態のＣＡＲ、ポリペプチド、及びタンパク質（機能的部分及び機能的バリアントを含む）は、翻訳後修飾を受けることができる。これらは、グリコシル化、エステル化、Ｎ－アシル化、アミド化、カルボキシル化、リン酸化、エステル化、例えば、ジスルフィド架橋を介して環化することができ、又は酸付加塩に変換することができる。いくつかの実施形態では、これらは、二量体化若しくはポリマー化、又はコンジュゲートされている。
本発明の実施形態のＣＡＲ、ポリペプチド、及び／又はタンパク質（機能的部分及びその機能的バリアントを含む）は、当該技術分野において既知の方法によって得ることができる。ポリペプチド及びタンパク質をデノボ合成する好適な方法は、参考文献、例えばＣｈａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｆｍｏｃ Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ，２０００；Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ａｎａｌｙｓｉｓ，ｅｄ．Ｒｅｉｄ，Ｒ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，２０００；ａｎｄ Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ，ｅｄ．Ｗｅｓｔｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ，２００１に記載されている。また、ポリペプチド及びタンパク質は、標準的な組み換え方法を使用して本明細書に記載の核酸を使用して、組み換えにより産生され得る。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．２００１；及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ，１９９４．を参照されたい。更に、本発明のＣＡＲ、ポリペプチド、及びタンパク質（機能的部分及びその機能的バリアントを含む）の一部は、植物、細菌、昆虫、哺乳動物などの供給源から単離及び／又は精製することができる。単離及び精製の方法は、当該技術分野において既知である。代替的に、本明細書に記載のＣＡＲ、ポリペプチド、及び／又はタンパク質（機能的部分及びその機能的バリアントを含む）は、商業的に合成することができる。この点において、ＣＡＲ、ポリペプチド、及びタンパク質は、合成、組み換え、単離、及び／又は精製することができる。
本明細書に記載のポリペプチドを生成するために利用される組み換え核酸を作製するために使用することができる修飾ヌクレオチドの例としては、５－フルオロウラシル、５－ブロモウラシル、５－クロロウラシル、５－ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４－アセチルシトシン、５－（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシル、カルボキシメチルアミノメチル－２－チオウリジン、５－カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、Ｎ６－置換アデニン、７－メチルグアニン、５－メチルアミノメチルウラシル、５－メトキシアミノメチル－２－チオウラシル、ベータ－Ｄ－マンノシルキューオシン、５”－メトキシカルボキシメチルウラシル、５－メトキシウラシル、２－メチルチオ－Ｎ６－イソペンテニルアデニン、ウラシル－５－オキシ酢酸（ｖ）、ウィブトキソシン（wybutoxosine）、シュードウラシル、キューオシン、ベータ－Ｄ－ガラクトシルキューオシン、イノシン、Ｎ６－イソペンテニルアデニン、１－メチルグアニン、１－メチルイノシン、２，２－ジメチルグアニン、２－メチルアデニン、２－メチルグアニン、３－メチルシトシン、５－メチルシトシン、２－チオシトシン、５－メチル－２－チオウラシル、２－チオウラシル、４－チオウラシル、５－メチルウラシル、ウラシル－５－オキシ酢酸メチルエステル、３－（３－アミノ－３－Ｎ－２－カルボキシプロピル）ウラシル、及び２，６－ジアミノプリンが挙げられるが、これらに限定されない。
核酸は、ＣＡＲ、ポリペプチド若しくはタンパク質、又は機能的部分若しくはその機能的バリアントのいずれかをコードする、任意の単離又は精製されたヌクレオチド配列を含み得る。代替的に、ヌクレオチド配列は、配列のいずれかに縮重したヌクレオチド配列、又は縮重配列の組み合わせを含み得る。
本発明のいくつかの実施形態はまた、単離又は精製された核酸を提供し、本核酸は、本明細書に記載される核酸のいずれかのヌクレオチド配列に相補的であるヌクレオチド配列、又は本明細書に記載される核酸のいずれかのヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む。
ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列は、高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズし得る。「高ストリンジェンシー条件」は、ヌクレオチド配列が、非特異的ハイブリダイゼーションよりも強い検出可能な量で標的配列（本明細書に記載される核酸のいずれかのヌクレオチド配列）に特異的にハイブリダイズすることを意味する。高ストリンジェンシー条件としては、正確に相補的な配列を有するポリヌクレオチド、又は散らばったミスマッチをほんのわずか含むポリヌクレオチドを、ヌクレオチド配列とマッチしたいくつかの小領域（例えば、３～１２塩基）を有することとなったランダム配列から識別する条件が挙げられる。かかる相補的な小領域は、１４～１７又はそれ以上の塩基の完全長相補体よりも容易に融解され、高ストリンジェンシーのハイブリダイゼーションにより、それらが容易に識別可能となる。比較的高いストリンジェンシー条件としては、例えば、低塩及び／又は高温条件（約５０～７０℃の温度の約０．０２～０．１ＭのＮａＣｌ又は同等のものによって提供される等）が挙げられる。かかる高ストリンジェンシー条件は、ヌクレオチド配列とテンプレート鎖又は標的鎖との間のミスマッチがあったとしてもほとんど許容されず、本明細書に記載のＣＡＲのいずれかの発現を検出するために特に好適である。条件は、漸増量のホルムアミドの添加によって、よりストリンジェントになり得ることが、概ね理解される。
一実施形態では、本発明の核酸は、組み換え発現ベクターに組み込むことができる。本開示は、本発明の核酸のいずれかを含む、組み換え発現ベクターを提供する。本明細書で使用するとき、「組み換え発現ベクター」という用語は、宿主細胞によるｍＲＮＡ、タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドの発現を可能にする、遺伝的に改変されたオリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドコンストラクトを意味し、この場合、コンストラクトは、ｍＲＮＡ、タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、ベクターは、細胞内でｍＲＮＡ、タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドを発現させるのに十分な条件下で、細胞と接触させられる。本明細書に記載のベクターは、全体として天然には存在しない。しかしながら、ベクターの一部は、天然に存在し得る。記載される組み換え発現ベクターは、ＤＮＡ及びＲＮＡ（一本鎖又は二本鎖であり得、合成されるか、又は一部が天然のソースから得られ得、天然、非天然又は改変されたヌクレオチドを含有し得る）を含むがこれらに限定されない、任意のタイプのヌクレオチドを含み得る。組み換え発現ベクターは、天然に存在するヌクレオチド間連結、若しくは天然に存在しないヌクレオチド間連結、又は両方のタイプの連結を含み得る。天然に存在しない又は改変されたヌクレオチド又はヌクレオチド間連結は、ベクターの転写又は複製を阻害しない。
一実施形態では、本発明の組み換え発現ベクターは、任意の好適な組み換え発現ベクターであり得、任意の好適な宿主を形質転換又はトランスフェクションするために使用され得る。好適なベクターとしては、プラスミド及びウイルスなどの繁殖及び増殖のため、若しくは発現のため、又は両方のために設計されたベクターが挙げられる。ベクターは、ｐＵＣシリーズ（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｇｌｅｎ Ｂｕｒｎｉｅ，Ｍｄ．）、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔシリーズ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，ＬａＪｏｌｌａ、Ｃａｌｉｆ．）、ｐＥＴシリーズ（Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）、ｐＧＥＸシリーズ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）、及びｐＥＸシリーズ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆ．）からなる群から選択され得る。λＧＴ１０、λＧＴ１１、λＥＭＢＬ４、及びλＮＭ１１４９、λＺａｐＩＩ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）などのバクテリオファージベクターを使用することができる。植物発現ベクターの例としては、ｐＢＩ０１、ｐＢＩ０１．２、ｐＢＩ１２１、ｐＢＩ１０１．３、及びｐＢＩＮ１９（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）が挙げられる。動物発現ベクターの例としては、ｐＥＵＫ－Ｃｌ、ｐＭＡＭ、及びｐＭＡＭｎｅｏ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）が挙げられる。組み換え発現ベクターは、ウイルスベクター、例えば、レトロウイルスベクター、例えば、ガンマレトロウイルスベクターであり得る。
一実施形態では、本発明の組み換え発現ベクターは、例えば、上記のＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（上記）及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（上記）に記載の標準的な組み換えＤＮＡ技術を使用して調製される。環状又は線状である発現ベクターのコンストラクトは、原核又は真核の宿主細胞において機能する複製系を含有するように調製され得る。複製系は、例えば、ＣｏｌＥ１、ＳＶ４０、２μプラスミド、λ、ウシパピローマウイルスなどに由来していてよい。
組み換え発現ベクターは、適宜、ベクターがＤＮＡベースであるかＲＮＡベースであるかを考慮して、ベクターが導入される宿主のタイプ（例えば、細菌、植物、真菌、又は動物）に特異的な、転写及び翻訳の開始及び終止コドンなどの調節配列を含み得る。
組み換え発現ベクターは、形質転換又はトランスフェクションされた宿主の選択を可能にする１つ以上のマーカー遺伝子を含み得る。マーカー遺伝子は、殺生物剤耐性（例えば、抗生物質、重金属などに対する耐性）、栄養要求性宿主における原栄養を提供するための補完などを含む。記載される発現ベクターに好適なマーカー遺伝子としては、例えば、ネオマイシン／Ｇ４１８耐性遺伝子、ヒスチジノールｘ耐性遺伝子、ヒスチジノール耐性遺伝子、テトラサイクリン耐性遺伝子、及びアンピシリン耐性遺伝子が挙げられる。
組み換え発現ベクターは、ＣＡＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質（機能的部分及びその機能的バリアントを含む）をコードするヌクレオチド配列に、又はＣＡＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質をコードするヌクレオチド配列に相補的であるか若しくはそれにハイブリダイズするヌクレオチド配列に、作動可能に連結された天然の又は規範のプロモーターを含み得る。プロモーターの選択（例えば、強い、弱い、組織特異的、誘導性、及び発生特異的）は、当業者の技術範囲内である。同様に、ヌクレオチド配列をプロモーターと組み合わせることも当業者の技術の範囲内である。プロモーターは、非ウイルスプロモーター又はウイルスプロモーター、例えば、サイトメガロウイルス（cytomegalovirus、ＣＭＶ）プロモーター、ＲＳＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、又はネズミ幹細胞ウイルスの長い末端反復に見出されるプロモーターであり得る。
組み換え発現ベクターは、一過性の発現のため、安定な発現のためのいずれか、又はその両方のために設計され得る。また、組み換え発現ベクターは、構成的発現又は誘導性発現のために作製され得る。
更に、組み換え発現ベクターは、自殺遺伝子を含むように作製され得る。本明細書で使用するとき、「自殺遺伝子」という用語は、自殺遺伝子を発現する細胞を死に至らしめる遺伝子を指す。自殺遺伝子は、遺伝子を発現する細胞に対し薬剤（例えば、薬物）に対する感受性を付与し、細胞が薬剤と接触したとき又は薬剤に曝露されたときに細胞を死に至らしめる遺伝子であり得る。自殺遺伝子は、当該技術分野において既知であり、例えば、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）チミジンキナーゼ（ＴＫ）遺伝子、シトシンデアミナーゼ、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、及びニトロレダクターゼが挙げられる。
ＣＡＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質（その機能的部分又はバリアントのいずれかを含む）、宿主細胞、核酸、組み換え発現ベクター、宿主細胞集団、又は抗体、若しくはその抗原結合部分のいずれかを含むコンジュゲート、例えば、バイオコンジュゲートは、本発明の範囲内に含まれる。コンジュゲート、並びにコンジュゲートの合成方法は、概ね、当該技術分野において既知である（例えば、Ｈｕｄｅｃｚ，Ｆ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９８：２０９－２２３（２００５）ａｎｄ Ｋｉｒｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｏｒｇ Ｃｈｅｍ．４４（１５）：５４０５－５４１５（２００５）を参照されたい）。
本発明の一実施形態は、本発明のＣＡＲのエピトープに結合する、例えば特異的に結合する、抗体又はその抗原結合部分を更に提供する。
抗体は、当該技術分野において既知の任意のタイプの免疫グロブリンであり得る。免疫グロブリンは、５つの主要クラス、すなわちＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭに割り当てられ得る。ＩｇＡ及びＩｇＧは、アイソタイプＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４として更に細分類される。脊椎動物種の抗体軽鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいてカッパ（κ）及びラムダ（λ）の２つのタイプの一方に割り当てられ得る。抗体は、任意のクラス又はアイソタイプのものであり得る。
抗体は、ネズミ、ヒト、ヒト化及びキメラモノクローナル抗体を含むモノクローナル抗体、ポリクローナル、抗原結合断片、二重特異性又は多重特異性抗体、単量体、二量体、四量体又は多量体抗体、一本鎖抗体、ドメイン抗体、並びに必要とされる特異性の抗原結合部位を含む任意の他の修飾された立体配置の免疫グロブリン分子を含む、免疫グロブリン分子を含む。抗体は、天然に存在する抗体、例えば、哺乳動物（例えば、ネズミ、霊長類、マウス、ウサギ、ヤギ、ウマ、ニワトリ、ハムスター、ヒトなど）から単離及び／又は精製された抗体であり得る。代替的に、抗体は、遺伝子操作された（例えば、遺伝的に操作された）抗体であり得る。
ヒト化抗体は、非ヒト種に由来する抗原結合部位を有し、可変領域フレームワークは、ヒト免疫グロブリン配列に由来する。ヒト抗体は、フレームワーク及び抗原結合部位の両方がヒト起源の配列に由来する重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を有する。
また、抗体は、ＣＡＲの機能的部分に対して任意のレベルの親和性又は結合活性を有し得る。いくつかの実施形態では、抗体は、ある範囲の親和性（ＫＤ）でｈＫ２抗原に結合し得る。本発明による一実施形態では、そして、以下に列挙する番号付きの実施形態の各実施形態及び全ての実施形態のうちのいくつかの実施形態では、当業者により実施された表面プラズモン共鳴又Ｋｉｎｅｘａ法によって求めたとき、抗体は、高い親和性、例えば、約１０－７Ｍ以下のＫＤで、例えば、限定するものではないが、１～９．９（又は１、２、３、４、５、６、７、８、若しくは９などの、その中の任意の若しくは値）×１０－８Ｍ、１０－９Ｍ、１０－１０Ｍ、１０－１１Ｍ、１０－１２Ｍ、１０－１３Ｍ、１０－１４Ｍ、１０－１５Ｍ、又はその中の任意の範囲若しくは値のＫＤでｈＫ２抗原に結合する。親和性の一例は、１×１０－８Ｍ以下である。親和性の別の例は、１×１０－９Ｍ以下である。
ＣＡＲの任意の機能的部分に結合する能力について抗体を試験する方法は、当該技術分野において既知であり、任意の抗体－抗原結合アッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ（radioimmunoassay、ＲＩＡ）、ウエスタンブロット、酵素連結免疫吸着アッセイ（enzyme-linked immunosorbent assay、ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降、及び競合阻害アッセイなどが挙げられる。
抗体を作製する好適な方法は、当該技術分野において既知である。例えば、標準的なハイブリドーマ法は、例えば、Ｋｏｅｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５，５１１－５１９（１９７６），Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（ｅｄｓ．），Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ（１９８８）、及びＣ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（２００１））に記載されている。代替的に、他の方法、例えば、ＥＢＶ－ハイブリドーマ法（Ｈａｓｋａｒｄ ａｎｄ Ａｒｃｈｅｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，７４（２），３６１－６７（１９８４），ａｎｄ Ｒｏｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１２１，１４０－６７（１９８６））、及びバクテリオファージベクター発現系（例えば、Ｈｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４６，１２７５－８１（１９８９）を参照されたい）が当該技術分野において既知である。更に、非ヒト動物において抗体を産生する方法は、例えば、米国特許第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号、及び同第５，７１４，３５２号、並びに米国特許出願公開第２００２／０１９７２６６（Ａ１）号に記載されている。
ファージディスプレイを使用して、抗体を生成することもできる。これに関して、抗体の抗原結合可変（Ｖ）ドメインをコードするファージライブラリーは、標準的な分子生物学及び組み換えＤＮＡ技術を使用して生成することができる（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（上記）、及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（上記）を参照されたい）。所望の特異性を有する可変領域をコードしているファージは、所望の抗原（すなわち、ｈＫ２）への特異的結合について選択され、選択された可変ドメインを含む完全又は部分的な抗体が再構成される。再構成された抗体をコードする核酸配列は、ハイブリドーマ産生に使用される骨髄腫細胞などの好適な細胞株に導入され、その結果、モノクローナル抗体の特性を有する抗体が細胞によって分泌される（例えば、Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．（上記）、Ｈｕｓｅ ｅｔ ａｌ．（上記）、及び米国特許第６，２６５，１５０号を参照されたい）。
抗体は、特定の重鎖及び軽鎖免疫グロブリン遺伝子のトランスジェニックであるトランスジェニックマウスによって産生され得る。このような方法は、当該技術分野において既知であり、例えば、米国特許第５，５４５，８０６号及び同第５，５６９，８２５号、並びにＪａｎｅｗａｙら、上掲に記載されている。
ヒト化抗体を生成する方法は、当該技術分野において既知であり、例えば、Ｊａｎｅｗａｙら、上掲、米国特許第５，２２５，５３９号、同第５，５８５，０８９号、及び同第５，６９３，７６１号、欧州特許第０２３９４００（Ｂ１）号、並びに英国特許第２１８８６３８号に記載されている。ヒト化抗体はまた、米国特許第５，６３９，６４１号及びＰｅｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２３５，９５９－９７３（１９９４）に記載の抗体リサーフェシング技術を使用して生成することもできる。
抗体は、本明細書で利用されるとき、複数若しくは一本の鎖、又はインタクトな免疫グロブリンであってよく、天然源又は組み換え源に由来していてよい。抗体は、免疫グロブリン分子の四量体であり得る。
「抗体断片」という用語は、親の完全長抗体の抗原結合特性を保持する、無傷の抗体又はその組み換えバリアントの少なくとも１つの部分を指す。これは、例えば、認識及び結合（例えば、抗原などの標的に対する抗体断片の特異的結合）を付与するために十分である、抗原結合ドメイン（例えば、無傷の（インタクトな）抗体の抗原決定可変領域）を指す。「抗原結合断片」とは、免疫グロブリン分子の一部を指す。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、線状抗体、ｓｄＡｂなどの単一ドメイン抗体（ＶＬ又はＶＨのいずれか）、ラクダＶＨＨドメイン、並びに抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
「ｓｃＦｖ」という用語は、軽鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体断片と、重鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体断片と、を含むタンパク質を指す。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、短い柔軟なポリペプチドリンカーを介して連続的に連結され、単鎖ポリペプチドとして発現することができ、ｓｃＦｖは、その元となった無傷の抗体の特異性を保持する。指定されない限り、本明細書で使用するとき、ｓｃＦｖは、ＶＬ及びＶＨ可変領域をいずれかの順序で有してもよく、例えば、ポリペプチドのＮ末端及びＣ末端の終端に関して、ｓｃＦｖは、ＶＬ－リンカー－ＶＨを含んでもよく、又はＶＨ－リンカー－ＶＬを含んでもよい。
本発明の一実施形態はまた、本明細書に記載の抗体のいずれかの抗原結合部分を提供する。抗原結合部分は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｄｓＦｖ、ｓＦｖ、ダイアボディ、及びトリアボディなどの少なくとも１つの抗原結合部位を有する任意の部分であり得る。
いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、重鎖相補性決定領域（heavy chain complementarity determining regions、ＨＣＤＲ）１、２、及び／若しくは３、軽鎖相補性決定領域（light chain complementarity determining regions、ＬＣＤＲ）１、２、及び／若しくは３、重鎖可変領域（ＶＨ）、又は軽鎖可変領域（ＶＬ）、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、及びＦｖ断片、並びに１つのＶＨドメイン又は１つのＶＬドメインのいずれかを含む（例えば、からなる）ドメイン抗体（ｄＡｂ）である。ＶＨドメイン及びＶＬドメインは、リンカー、例えば、合成リンカーを介して一緒に連結され得る。
「相補性決定領域（Complementarity determining regions、ＣＤＲ）」は、抗体における抗原結合部位である。ＣＤＲは、様々な用語を使用して定義され得る：（ｉ）ＶＨ内に３つ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）及びＶＬ内に３つ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）は、配列多様性に基づいている（Ｗｕ ａｎｄ Ｋａｂａｔ，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １３２：２１１－５０，１９７０；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１）。（ｉｉ）ＶＨ内に３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）及びＶＬ内に３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）の「超可変性領域」、「ＨＶＲ」、又は「ＨＶ」は、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９６：９０１－１７，１９８７）により定義されるとおり、構造において超可変性である、抗体可変ドメインの領域を指す。Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）データベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ＿ｉｍｇｔ＿ｏｒｇ）は、抗原結合部位についての標準的番号及び定義を提供する。ＣＤＲ、ＨＶ、及びＩＭＧＴ概要説明の対応が、Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ Ｃｏｍｐａｒａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２７：５５－７７，２００３に記載されている。本明細書で使用されている「ＣＤＲ」、「ＨＣＤＲ１」、「ＨＣＤＲ２」、「ＨＣＤＲ３」、「ＬＣＤＲ１」、「ＬＣＤＲ２」、及び「ＬＣＤＲ３」という用語は、本明細書において別途記載のない限り、上掲のＫａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、又はＩＭＧＴにより記載されている方法のいずれかにより定義されるＣＤＲを含む。
また、抗体又はその抗原結合部分は、例えば、放射性同位体、フルオロフォア（例えば、フルオレセインイソチオシアネート（fluorescein isothiocyanate、ＦＩＴＣ）、フィコエリトリン（phycoerythrin、ＰＥ））、酵素（例えば、アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ）、及び元素粒子（例えば、金粒子）などの検出可能な標識を含むように修飾され得る。
本明細書に記載のＣＡＲ、ポリペプチド、又はタンパク質（機能的部分及びその機能的バリアントを含む）のいずれかをコードするヌクレオチド配列を含む核酸が、本開示によって提供される。
抗体又はその抗体断片を含むＣＡＲの一部は、様々な形態で存在してもよく、その場合、抗原結合ドメインは、例えば、単一ドメイン抗体断片（ｓｄＡｂ）、ｓｃＦｖ及びヒトキメラ抗体又はヒト化抗体などの連続するポリペプチド鎖の一部として発現される（Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，１９９９、Ｉｎ：Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．；Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，１９８９、Ｉｎ：Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．；Ｈｏｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３；Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６）。一態様では、本発明のＣＡＲ組成物の抗原結合ドメインは、抗体断片を含む。一態様では、ＣＡＲは、ｓｃＦｖを含む抗体断片を含む。
「組み換え抗体」という用語は、例えば、バクテリオファージ又は酵母発現系によって発現される抗体などの組み換えＤＮＡ技術を使用して生成される抗体を指す。用語は、抗体をコードするＤＮＡ分子の合成によって生成されている、このＤＮＡ分子が抗体タンパク質、又は抗体を特定するアミノ酸配列を発現する抗体を意味すると解釈されるべきであり、その場合、ＤＮＡ又はアミノ酸配列は、利用可能であり当該技術分野において既知である組み換えＤＮＡ又はアミノ酸配列技術を使用して得られる。
「抗原」という用語は、免疫応答を引き起こす分子を指す。この免疫応答は、抗体産生、若しくは特定の免疫学的コンピテント細胞の活性化、又はその両方を伴い得る。当業者は、実質的に全てのタンパク質又はペプチドを含む任意の巨大分子が抗原として機能し得ることを理解するであろう。更に、抗原は、組み換え又はゲノムＤＮＡに由来し得る。当業者であれば、任意のＤＮＡが、免疫応答を誘発するタンパク質をコードするヌクレオチド配列又は部分ヌクレオチド配列を含むことにより、本明細書中でその用語が使用されるとおりの「抗原」をコードすることを理解するであろう。更に、当業者であれば、抗原は、遺伝子の完全長ヌクレオチド配列によってのみでコードされる必要はないことを理解するであろう。本開示が、２つ以上の遺伝子の部分的ヌクレオチド配列の使用を含むがこれに限定されないこと、及びこれらのヌクレオチド配列が、様々な組み合わせで配置されて、所望の免疫応答を誘発するポリペプチドをコードすることは明らかである。
一態様では、本開示は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲを提供し、当該細胞外抗原結合ドメインは、ｈＫ２抗原に結合する。
一態様では、本開示は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲを提供し、本細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号１のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号４のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３；
配列番号２のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号４のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３；
配列番号３のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号６のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３；
配列番号３のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号４のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３；
配列番号２のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号６のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３；
配列番号１のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号６のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３；
配列番号３のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号５のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３；
配列番号１のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号５のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３；
配列番号２のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号５のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３；
配列番号７４のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号７６のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３；
配列番号７５のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号７７のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３；
配列番号１４７のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号１４０のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３；
配列番号７５のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号１４１のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３；
配列番号７５のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号１４０のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３；
配列番号１４８のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号１４２のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３；
配列番号１４９のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号１４３のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３；
配列番号１５０のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号１４４のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３；
配列番号１５１のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号１４５のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３；
配列番号１５２のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号１４６のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３；
配列番号３１８のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号３１７のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３
を含み、
当該細胞外抗原結合ドメインは、ｈＫ２抗原に結合する。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号４のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号４のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号６のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号４のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号６のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号６のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号５のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号５のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号５のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号７４のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号７６のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号７５のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号７７のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１４７のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号１４０のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号７５のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号１４１のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号７５のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号１４０のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１４８のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号１４２のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１４９のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号１４３のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１５０のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号１４４のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１５１のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号１４５のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１５２のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号１４６のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３１８のアミノ酸配列を含む可変領域からの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに配列番号３１７のアミノ酸配列を含む可変領域からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。
一態様では、本開示は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲを提供し、本細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号６３、配列番号７２、配列番号８６、配列番号９２、配列番号１０２、配列番号１０５、配列番号１０７、配列番号１１０、配列番号１１５、配列番号１１８、配列番号１２０、配列番号１２３、配列番号３０９、及び配列番号３１４、並びにこれらの保存的修飾からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１を含み、当該細胞外抗原結合ドメインは、ｈＫ２抗原に結合する。
一態様では、本開示は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲを提供し、本細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号６４、配列番号６５、配列番号７３、配列番号８７、配列番号９３、配列番号１０３、配列番号１０６、配列番号１０８、配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１４、配列番号１１６、配列番号１１９、配列番号１２１、配列番号１２４、配列番号３１０、及び配列番号３１５、並びにこれらの保存的修飾からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２を含み、当該細胞外抗原結合ドメインは、ｈＫ２抗原に結合する。
一態様では、本開示は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲを提供し、本細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号６６、配列番号８８、配列番号９４、配列番号１０４、配列番号１０９、配列番号１１３、配列番号１１７、配列番号１２２、及び配列番号３１１、並びにこれらの保存的修飾からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含み、当該細胞外抗原結合ドメインは、ｈＫ２抗原に結合する。
一態様では、本開示は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲを提供し、本細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号３１４のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３１５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３１１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号３０９のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３１０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３１１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号７２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；又は
配列番号８６のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号８７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号９２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号１０２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１０３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号１０５のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１０６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号１０７のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１０８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号１１０のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号１０２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号１０５のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号１１５のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号１１８のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号１２０のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１２２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；又は
配列番号１２３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１２２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
を含み、
当該細胞外抗原結合ドメインは、ｈＫ２抗原に結合する。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３１４のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３１５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３１１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３０９のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３１０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３１１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号７２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号８６のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号８７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１０２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１０３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１０５のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１０６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１０７のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１０８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１１０のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１０２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１０５のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１１５のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１１８のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１２０のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１２２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１２３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１２２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む。
一態様では、本開示は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲを提供し、本細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号６７、配列番号６８、配列番号８９、配列番号９５、配列番号９７、配列番号１２５、配列番号１２８、配列番号１３３、配列番号１３６、及び配列番号３１２、並びにこれらの保存的修飾からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１を含み、当該細胞外抗原結合ドメインは、ｈＫ２抗原に結合する。
一態様では、本開示は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲを提供し、本細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号６９、配列番号７０、配列番号９０、配列番号９６、配列番号１２６、配列番号１３７、配列番号１２９、配列番号１３１、配列番号１３４、配列番号１３７、及び配列番号３１３、並びにこれらの保存的修飾からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２を含み、当該細胞外抗原結合ドメインは、ｈＫ２抗原に結合する。
一態様では、本開示は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲを提供し、本細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号７１、配列番号９１、配列番号１３０、配列番号１３２、配列番号１３５、配列番号１３８、及び配列番号１３９、並びにこれらの保存的修飾からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含み、当該細胞外抗原結合ドメインは、ｈＫ２抗原に結合する。
一態様では、本開示は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲを提供し、本細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号６８のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号８９のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号９５のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号３１２のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３１３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号８９のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１３６のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；又は
配列番号９７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３、
を含み、
当該細胞外抗原結合ドメインは、ｈＫ２抗原に結合する。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６８のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号８９のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９５のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３１２のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３１３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号８９のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１３６のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一態様では、本開示は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲを提供し、本細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６８のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号３１４のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３１５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号３１１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号３１２のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３１３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１０２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１０３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１０４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１０７のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１０８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１０９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１０２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１１３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１１５のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１１７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号１３６のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；又は
配列番号１２０のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１２２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号９７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３、
を含み、
当該細胞外抗原結合ドメインは、ｈＫ２抗原に結合する。
一態様では、本開示は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲを提供し、本細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６８のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号３１４のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３１５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号３１１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号３１２のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３１３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１０２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１０３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１０４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１０７のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１０８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１０９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１０２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１１３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１１５のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１１７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号１３６のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１２０のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１２２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号９７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号７２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号７２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６８のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号７２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号７２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号７２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号３０９のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３１０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号３１１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号３１２のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３１３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１０５のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１０６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１０４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１１０のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１０９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１０５のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１１３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１１８のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１１７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号１３６のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１２３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１２２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号９７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１２０のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１２２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号９７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；又は
配列番号８６のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号８７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号８８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号８９のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３、
を含み、
当該細胞外抗原結合ドメインは、ｈＫ２抗原に結合する。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６８のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号３１４のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３１５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号３１１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号３１２のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３１３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号１０２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１０３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１０４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号１０７のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１０８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１０９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号１０２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１１３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号１１５のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１１７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号１３６のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号１２０のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１２２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号９７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号７２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号７２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６８のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号７２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号７２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号７２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号３０９のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３１０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号３１１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号３１２のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３１３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号１０５のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１０６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１０４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号１１０のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１０９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号１０５のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１１３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号１１８のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１１７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号１３６のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号１２３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１２２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号９７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号１２０のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１２２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号９７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号８６のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号８７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号８８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号８９のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一態様では、本開示は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲを提供し、本細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号１～３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、又は配列番号４～６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、又は配列番号１～３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣＶＲと配列番号４～６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣＶＲとの組み合わせを含み、当該細胞外抗原結合ドメインは、ｈＫ２抗原に結合する。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号７４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；配列番号７５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号７７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号７５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号７５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１４８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１４９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１５１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号３１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号３１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、
を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号７４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号７５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号７７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号７５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号７５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１４８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１４９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１５１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号３１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、
配列番号１と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号４と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号２と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号４と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号３と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号６と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号３と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号４と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号２と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号６と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号３と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号４と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号６と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号３と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号５と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号５と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号２と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号５と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号７４と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号７６と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号７５と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号７７と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１４７と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号１４０と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号７５と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号１４１と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号７５と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号１４０と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１４８と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号１４２と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１４９と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号１４３と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１５０と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号１４４と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１５１と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号１４５と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１５２と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号１４６と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号３１８と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号３１７と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域
を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号４と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号４と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号６と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号４と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号６と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号４と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号６と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号５と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号５と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号５と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号７４と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号７６と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号７５と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号７７と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１４７と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号１４０と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号７５と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号１４１と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号７５と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号１４０と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１４８と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号１４２と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１４９と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号１４３と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１５０と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号１４４と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１５１と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号１４５と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１５２と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号１４６と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３１８と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号３１７と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、軽鎖可変領域と重鎖可変領域との間にリンカーポリペプチドを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号８～２３、１６９～１８４、及び３４０～３４３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、ｈＫ２ポリペプチド（例えば、配列番号６２のアミノ酸配列を有するヒトｈＫ２ポリペプチド又はその断片）に特異的に結合するｓｃＦｖである。
組み換え発現系において、リンカーはペプチドリンカーであり、任意の天然に存在するアミノ酸を含み得る。リンカーに含まれ得る例示的なアミノ酸は、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ Ｐｒｏ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ及びＴｈｅである。リンカーは、ｈＫ２への結合などの所望の活性を保持するように、互いに対して正確な高次構造を形成するような方法でＶＨ及びＶＬを連結させるのに適切な長さを有している必要がある。
リンカーは、約５～５０個のアミノ酸長であり得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、約１０～４０個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、約１０～３５個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、約１０～３０個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、約１０～２５個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、約１０～２０個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、約１５～２０個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは６個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは７個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは８個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは９個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは１０個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは１１個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは１２個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは１３個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは１４個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは１５個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは１６個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは１７個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは１８個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは１９個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは２０個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは２１個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは２２個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは２３個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは２４個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは２５個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは２６個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは２７個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは２８個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは２９個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは３０個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは３１個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは３２個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは３３個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは３４個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは３５個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは３６個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは３７個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは３８個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは３９個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは４０個のアミノ酸長である。使用され得る例示的なリンカーは、Ｇｌｙリッチリンカー、Ｇｌｙ及びＳｅｒ含有リンカー、Ｇｌｙ及びＡｌａ含有リンカー、Ａｌａ及びＳｅｒ含有リンカー、並びに他の柔軟なリンカーである。
一実施形態では、リンカーポリペプチドは、配列番号７のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、リンカーポリペプチドは、配列番号７と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、リンカーポリペプチドは、配列番号２３７～２６８のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一実施形態では、リンカーポリペプチドは、配列番号２３７～２６８のいずれか１つと少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号８～２３、１６９～１８４、及び３４０～３４３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号８と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号８の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号９と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号９の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１０と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号１０の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１１と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号１１の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１２と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号１２の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１３と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号１３の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１４と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号１４の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１５と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号１５の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１６と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号１６の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１７と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号１７の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１８と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号１８の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１９と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号１９の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２０と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２０の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２１と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２１の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２２と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２２の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２３と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２３の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１６９と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号１６９の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１７０と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号１７０の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１７１と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号１７１の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１７２と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号１７２の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１７３と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号１７３の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１７４と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号１７４の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１７５と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号１７５の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１７６と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号１７６の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１７７と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号１７７の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１

７８と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号１７８の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１７９と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号１７９の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１８０と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号１８０の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１８１と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号１８１の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１８２と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号１８２の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１８３と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号１８３の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１８４と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号１８４の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３４０と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号３４０の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３４１と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号３４１の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３４２と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号３４２の配列を含む。一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３４３と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号３４３の配列を含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、シグナルポリペプチドを含む。シグナルポリペプチドは、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインのＮ末端に位置付けられ得る。シグナルポリペプチドは、細胞プロセシング及びＣＡＲの細胞膜への局在化中に細胞外抗原結合ドメインから任意選択で切断され得る。当業者に既知の様々なシグナルポリペプチドのいずれをシグナルポリペプチドとして使用してもよい。シグナルポリペプチドが由来し得るペプチドの非限定的な例としては、ＦｃεＲ、ヒト免疫グロブリン（ＩｇＧ）重鎖（ＨＣ）可変領域、ＣＤ８α、又はＴ細胞によって分泌される様々な他のタンパク質のいずれかが挙げられる。様々な実施形態では、シグナルポリペプチドは、Ｔ細胞の分泌経路と適合性である。いくつかの実施形態では、シグナルポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、シグナルポリペプチドは、配列番号２４と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一態様では、本開示は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲを提供し、当該細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２９～４４、７８～８１、２２１～２３６、及び２７３～３０８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。配列番号２９～４４、７８～８１、２２１～２３６、及び２７３～３０８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを有するＣＡＲの別の特徴は、細胞外抗原結合ドメインがｈＫ２抗原に結合することである。
一実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（ＣＤ１３７）成分、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ｚ）成分、表面抗原分類（ＣＤ２７）成分、表面抗原分類スーパーファミリーメンバー（例えば、ＣＤ２８又は誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）など）成分、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチド成分を含む。
一実施形態では、ＣＤ１３７成分は、配列番号２７のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＣＤ１３７成分は、配列番号２７と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、ＣＤ３ｚ成分は、配列番号２８のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＣＤ３ｚ成分は、配列番号２８と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号４５のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号４５と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８ａ膜貫通領域（ＣＤ８Ａ－ＴＭ）ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ａ－ＴＭポリペプチドは、配列番号２６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ａ－ＴＭポリペプチドは、配列番号２６と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のα、β、又はζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４の膜貫通領域を少なくとも含む。別の実施形態では、膜貫通ドメインは、ζ、η、又はＦｃεＲ１γ及び－β、ＭＢ１（Ｉｇα）、Ｂ２９又はＣＤ３－γ、ζ、若しくはηの膜貫通ドメインを少なくとも含む。別の実施形態では、膜貫通ドメインは、合成であり、例えば、ロイシン及びバリン、フェニルアラニンのトリプレット、又はトリプトファンなどの主に疎水性の残基を含む。
一実施形態では、ＣＡＲは、膜貫通ドメインを細胞外抗原結合ドメインに連結するヒンジ領域を更に含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、ＣＤ８ａヒンジ領域である。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ａ－ヒンジ領域は、配列番号２５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ａ－ヒンジ領域は、配列番号２５と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号２６９）を含むか、又はＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号２６９）と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、配列ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号２７０）を含むか、又はＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号２７０）と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、配列ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＣＰＲＣＰ（ＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰ）３（配列番号２７１）を含むか、又はＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＣＰＲＣＰ（ＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰ）３（配列番号２７１）と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰ（配列番号２７２）を含むか、又はＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰ（配列番号２７２）と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
ｇ）一実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメイン、ヒンジ領域、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む。このような一実施形態では、ヒンジ領域は、ＣＤ８αヒンジ領域であり、膜貫通ドメインは、ＣＤ８α－ＴＭドメインであり、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３－ゼータドメイン及び４－１ＢＢ／ＣＤ１３７ドメインを含む。
ｈ）このような一実施形態では、ヒンジ領域は、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤ８αヒンジ領域であり、膜貫通ドメインは、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤ８α－ＴＭドメインであり、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３－ゼータドメイン及び配列番号４５のアミノ酸配列を含む４－１ＢＢ／ＣＤ１３７ドメインを含む。
ｉ）別の実施形態では、ヒンジ領域は、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤ８αヒンジ領域であり、膜貫通ドメインは、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤ８α－ＴＭドメインであり、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号２７のアミノ酸配列を含む４－１ＢＢ／ＣＤ１３７ドメイン及び配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤ３－ゼータドメインを含む。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２９～４４、７８～８１、２２１～２３６、及び２７３～３０８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２９と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２９の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３０と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号３０の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３１と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号３１の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３２と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号３２の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３３と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号３３の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３４と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号３４の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３５と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号３５の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３６と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号３６の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３７と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号３７の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３８と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号３８の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３９と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号３９の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４０と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号４０の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４１と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号４１の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４２と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号４２の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４３と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号４３の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４４と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号４４の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号７８と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号７８の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号７９と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号７９の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号８０と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号８０の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号８１と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号８１の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２２１と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２２１の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２２２と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２２２の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２２３と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２２３の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２２４と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２２４の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２２５と少なくとも５０、少なくとも５５

、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２２５の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２２６と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２２６の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２２７と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２２７の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２２８と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２２８の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２２９と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２２９の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２３０と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２３０の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２３１と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２３１の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２３２と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２３２の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２３３と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２３３の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２３４と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２３４の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２３５と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２３５の配列を含む。一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２３６と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２３６の配列を含む。
ＣＡＲコンストラクト及びＣＡＲを発現する免疫応答性細胞
「コード（すること）」という用語は、ヌクレオチドの定義された配列（例えば、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ及びｍＲＮＡ）又はアミノ酸の定義された配列のいずれかを有する、生物学的プロセスにおける他のポリマー及び巨大分子の合成のためのテンプレートとして機能する、遺伝子、ｃＤＮＡ、又はｍＲＮＡなどのポリヌクレオチド中のヌクレオチドの特定の配列の固有の特性、並びにそれから生じる生物学的特性を指す。したがって、細胞又は他の生物系において、遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写及び翻訳がタンパク質を生成する場合、その遺伝子、ｃＤＮＡ、又はＲＮＡは、タンパク質をコードする。ヌクレオチド配列がｍＲＮＡ配列と同一であるコード鎖と、遺伝子又はｃＤＮＡの転写のテンプレートとして使用される非コード鎖はいずれも、その遺伝子又はｃＤＮＡのタンパク質又は他の産物をコードするとして言及され得る。
別途記載のない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いの縮重型であるヌクレオチド配列、及び同じアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列全てを包含する。タンパク質又はＲＮＡをコードするヌクレオチド配列という句はまた、いくつかの場合においてそのタンパク質をコードするヌクレオチド配列がイントロンを含有し得る程度にイントロンを包含し得る。
「発現ベクター」という用語は、発現させるヌクレオチド配列に作動可能に連結された発現制御配列を含む組み換えポリヌクレオチドを含む、ベクターを指す。発現ベクターは、発現に十分なシス作用エレメントを含み、発現のための他のエレメントは、宿主細胞によって、又はインビトロ発現系において供給され得る。発現ベクターとしては、組み換えポリヌクレオチドを組み込んだコスミド、プラスミド（例えば、裸の、又はリポソームに含有されるもの）、及びウイルス（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルス）を含む、当該技術分野において既知の全てのベクターが挙げられる。
一実施形態では、本開示は、ＣＡＲをコードしている核酸分子を発現する、細胞を提供する。一実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号４６～６１、８２～８５、及び２０５～２２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号４６と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号４６の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号４７と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号４７の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号４８と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号４８の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号４９と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号４９の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号５０と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号５０の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号５１と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号５１の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号５２と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号５２の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号５３と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号５３の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号５４と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号５４の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号５５と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号５５の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号５６と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号５６の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号５７と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号５７の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号５８と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号５８の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号５９と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号５９の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号６０と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号６０の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号６１と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号６１の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号８２と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号８２の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号８３と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号８３の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号８４と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号８４の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号８５と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号８５の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号２０５と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２０５の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号２０６と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２０６の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号２０７と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２０７の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号２０８と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２０８の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開

示のＣＡＲは、配列番号２０９と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２０９の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号２１０と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２１０の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号２１１と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２１１の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号２１２と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２１２の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号２１３と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２１３の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号２１４と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２１４の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号２１５と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２１５の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号２１６と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２１６の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号２１７と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２１７の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号２１８と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２１８の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号２１９と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２１９の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号２２０と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２２０の配列を含む。
ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、シグナルポリペプチドを含み得る。ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは、ＣＡＲ配列のＮ末端にある。ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは、ＣＡＲ配列のＣ末端にある。ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含むか又はからなる。
本明細書では、核酸分子の構造は、列挙された参照配列（所与の配列番号を有する）との配列同一性％に基づいて適切に定義される。これに関連して、核酸分子に関する％配列同一性は、少なくとも２つの異なる核酸配列間の類似性を指す。２つの比較された配列の両方の位置が同じ塩基によって占められている場合、例えば、２つのＤＮＡ分子のそれぞれの位置がアデニンによって占められている場合、分子はその位置で同一であり、２つの配列間における同一性の百分率は、２つの配列によって共有される位置での一致又は相同である数の関数であり、比較された位置の数で除算し、１００を乗算したものである。例えば、２つの配列の１０個の位置のうち６個が一致又は相同である場合、２つの配列は６０％同一（又は相同）である。例として、ＤＮＡ配列ＡＴＴＧＣＣ及びＴＡＴＧＧＣは、５０％の同一性（又は相同性）を共有する。概ね、２つの配列がアライメントされて最大相同性を与える場合の比較が行われる。それぞれの同一性パーセントは、標準的なアラインメントアルゴリズム、例えば、Ａｌｔｓｈｕｌ ｅｔ ａｌ．によって記載されるＢａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌ（ＢＬＡＳＴ）（（１９９０）Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－１０）；Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．のアルゴリズム（（１９７０）Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４－５３）；又はＭｅｙｅｒｓ ｅｔ ａｌ．のアルゴリズム（（１９８８）Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．４：１１－１７）によって判定することができる。パラメータのセットは、ギャップペナルティが１２、ギャップ伸長ペナルティが４、フレームシフトギャップペナルティが５のＢｌｏｓｕｍ６２スコアリングマトリックスであり得る。２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているＭｅｙｅｒｓ ａｎｄ Ｍｉｌｌｅｒ（（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ ４：１１－１７）のアルゴリズムを使用して、ＰＡＭ１２０重み付き残基表を使用してギャップ長ペナルティ１２及びギャップペナルティ４で、判定することができる。同一性パーセントは、通常、同様の長さの配列を比較することによって計算される。
様々な実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号１５３～１６０のいずれか１つの核酸配列を含む。様々な実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号１５３～１６０のいずれか１つと少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む核酸配列を含む。
様々な実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号１６１～１６８のいずれか１つの核酸配列を含む。様々な実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号１６１～１６８のいずれか１つと少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む核酸配列を含む。
様々な実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号１９５～２０４のいずれか１つの核酸配列を含む。様々な実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号１９５～２０４のいずれか１つと少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む核酸配列を含む。
様々な実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号３２０～３２５のいずれか１つの核酸配列を含む。様々な実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号３２０～３２５のいずれか１つと少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む核酸配列を含む。
様々な実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号３２６～３３１のいずれか１つの核酸配列を含む。様々な実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号３２６～３３１のいずれか１つと少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む核酸配列を含む。
様々な実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号３３６～３３９のいずれか１つの核酸配列を含む。様々な実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号３３６～３３９のいずれか１つと少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む核酸配列を含む。
一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号１５３と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号１５３の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号１５４と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号１５４の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号１５５と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号１５５の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号１５６と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号１５６の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号１５７と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号１５７の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号１５８と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号１５８の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号１５９と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号１５９の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号１６０と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号１６０の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号１６１と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号１６１の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号１６２と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号１６２の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号１６３と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号１６３の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号１６４と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号１６４の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号１６５と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号１６５の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号１６６と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号１６６の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号１６７と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号１６７の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号１６８と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号１６８の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号１９５と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号１９５の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号１９６と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号１９６の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号１９７と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号１９７の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号１９８と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号１９８の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号１９９と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号１９９の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号２００と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号２００の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号２０１と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号２０１の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号２０２と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、

少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号２０２の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号２０３と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号２０３の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号２０４と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号２０４の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号３２０と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号３２０の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号３２１と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号３２１の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号３２２と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号３２２の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号３２３と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号３２３の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号３２４と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号３２４の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号３２５と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号３２５の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号３２６と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号３２６の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号３２７と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号３２７の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号３２８と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号３２８の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号３２９と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号３２９の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号３３０と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号３３０の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号３３１と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号３３１の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号３３６と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号３３６の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号３３７と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号３３７の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号３３８と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号３３８の配列を含む核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＡＲをコードしている核酸分子は、配列番号３３９と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、又は配列番号３３９の配列を含む核酸配列を含む。
一態様では、本開示は、本明細書に記載のＣＡＲを含む、単離免疫応答性細胞を提供する。いくつかの実施形態では、単離免疫応答性細胞は、ＣＡＲで形質導入される、例えば、ＣＡＲは、免疫応答性細胞の表面上に構成的に発現される。ある特定の実施形態では、単離免疫応答性細胞は、少なくとも１つの共刺激リガンドで更に形質導入され、免疫応答性細胞が少なくとも１つの共刺激リガンドを発現するようにする。ある特定の実施形態では、少なくとも１つの共刺激リガンドは、４－１ＢＢＬ、ＣＤ４８、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、ＴＮＦＲＳＦ１４、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、単離免疫応答性細胞は、少なくとも１つのサイトカインで更に形質導入され、免疫応答性細胞が少なくとも１つのサイトカインを分泌するようにする。ある特定の実施形態では、少なくともサイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－２１、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、単離免疫応答性細胞は、Ｔリンパ球（Ｔ細胞）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、調節性Ｔ細胞、ヒト胚性幹細胞、リンパ系前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、及びリンパ系細胞が分化する可能性のある多能性幹細胞からなる群から選択される。
一実施形態では、本開示のＣＡＲ Ｔ細胞は、所望のＣＡＲ、例えば、抗ｈＫ２、ＣＤ８αヒンジ、及び膜貫通ドメイン、並びにヒト４－１ＢＢ及びＣＤ３－ゼータシグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを含むレンチウイルスベクターを細胞に導入することによって生成され得る。本発明のＣＡＲ Ｔ細胞は、インビボで複製することができ、その結果、持続的な腫瘍制御につながり得る長期持続性が得られる。
本発明の実施形態は、本明細書に記載の組み換え発現ベクターのいずれかを含む、宿主細胞を更に提供する。本明細書で使用するとき、「宿主細胞」という用語は、組み換え発現ベクターを含有し得る任意のタイプの細胞を指す。宿主細胞は、真核細胞、例えば、植物、動物、若しくは藻類、真菌であり得るか、又は、原核細胞、例えば、細菌若しくは原生動物であり得る。宿主細胞は、培養細胞又は初代細胞であり得、すなわち、生物、例えば、ヒトから直接単離され得る。宿主細胞は、接着細胞又は浮遊細胞、すなわち、懸濁物中で増殖する細胞であり得る。好適な宿主細胞は、当該技術分野において既知であり、例えば、ＤＨ５α大腸菌細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞、サルＶＥＲＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ＨＥＫ２９３細胞などが挙げられる。組み換え発現ベクターを増幅又は複製する目的で、宿主細胞は、原核細胞、例えば、ＤＨ５α細胞であり得る。組み換えＣＡＲ、ポリペプチド、又はタンパク質を産生する目的で、宿主細胞は、哺乳動物細胞であり得る。宿主細胞はヒト細胞であり得る。宿主細胞は、任意の細胞タイプのものであり得る、任意の組織タイプに由来し得、任意の発達段階のものであり得るが、宿主細胞は末梢血リンパ球（peripheral blood lymphocyte、ＰＢＬ）であり得る。宿主細胞はＴ細胞であり得る。
本明細書の目的のために、Ｔ細胞は、培養Ｔ細胞（例えば、初代Ｔ細胞）、又は培養Ｔ細胞株（例えば、Ｊｕｒｋａｔ、ＳｕｐＴ１など）からのＴ細胞、又は哺乳動物から得られたＴ細胞など、任意のＴ細胞であり得る。哺乳動物から得られる場合、Ｔ細胞は、多数の供給源（骨髄、血液、リンパ節、胸腺、又は他の組織若しくは体液を含むが、これらに限定されない）から得ることができる。Ｔ細胞はまた、濃縮又は精製され得る。Ｔ細胞は、ヒトＴ細胞であり得る。Ｔ細胞は、ヒトから単離されたＴ細胞であり得る。Ｔ細胞は、任意の種類のＴ細胞であり得、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋二重陽性Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞）、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞、例えば、Ｔｈ１及びＴｈ２細胞、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、末梢血白血球（ＰＢＬ）、腫瘍浸潤細胞、メモリＴ細胞、ナイーブＴ細胞などを含むがこれらに限定されない、任意の発生段階のものであり得る。Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞又はＣＤ４＋Ｔ細胞であってよい。
本明細書に記載の少なくとも１つの宿主細胞を含む、細胞集団も提供される。細胞集団は、少なくとも１つの他の細胞、例えば、組み換え発現ベクターのいずれも含まない宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）、又はＴ細胞以外の細胞（例えば、Ｂ細胞、マクロファージ、赤血球、好中球、肝細胞、内皮細胞、上皮細胞、筋細胞、脳細胞など）に加えて、記載される組み換え発現ベクターのいずれかを含む宿主細胞を含む不均質な集団であり得る。代替的に、細胞集団は、実質的に均質な集団であり得、この場合、その集団は、組み換え発現ベクターを含む宿主細胞を主に含む（例えば、本質的にそれらからなる）。集団はまた、細胞のクローン集団であり得、この場合、集団の全ての細胞が組み換え発現ベクターを含む単一の宿主細胞のクローンであり、そのため、集団の全ての細胞は組み換え発現ベクターを含む。一実施形態では、細胞集団は、本明細書に記載の組み換え発現ベクターを含む宿主細胞を含むクローン集団である。
医薬組成物／投与
本開示の実施形態では、ＣＡＲ発現細胞は、組成物、例えば、ＣＡＲ発現細胞及び医薬的に許容される担体を含む好適な医薬組成物で提供され得る。一態様では、本開示は、記載される１つ以上のＣＡＲを発現する有効量のリンパ球及び医薬的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物を提供する。本開示の医薬組成物は、ＣＡＲ発現細胞、例えば、本明細書に記載の複数のＣＡＲ発現細胞を、１つ以上の医薬的又は生理学的に許容される担体、賦形剤、又は希釈剤と組み合わせて含み得る。本明細書で使用するとき、用語「と組み合わせて」は、２つ以上の治療剤を、混合物で一緒に、単剤として同時に、又は単剤として任意の順序で逐次、対象に投与することを意味する。
医薬的に許容される担体は、有効成分以外の、対象に対して無毒性である医薬組成物中の成分であり得る。
医薬的に許容される担体としては、緩衝液、賦形剤、安定剤、又は防腐剤が挙げられ得るが、これらに限定されない。医薬的に許容される担体の例は、生理学的に適合性の溶剤、分散媒体、コーティング剤、抗菌及び抗真菌剤、等張及び吸収遅延剤などであり、例えば、塩、緩衝液、抗酸化剤、糖類、水性若しくは非水性担体、防腐剤、湿潤剤、界面活性剤、若しくは乳化剤、又はこれらの組み合わせである。医薬組成物中の医薬的に許容される担体（単数又は複数）の量は、担体（単数又は複数）の活性及び製剤の所望の特性、例えば安定性及び／又は最小酸化に基づいて実験的に決定することができる。
かかる組成物は、酢酸、クエン酸、ギ酸、コハク酸、リン酸、炭酸、リンゴ酸、アスパラギン酸、ヒスチジン、ホウ酸、トリス緩衝液、ＨＥＰＰＳＯ、ＨＥＰＥＳ、中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などの緩衝液；グルコース、マンノース、スクロース又はデキストラン、マンニトールなどの炭水化物；タンパク質；グリシンなどのポリペプチド又はアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡ又はグルタチオンなどのキレート剤；補助剤（例えば水酸化アルミニウム）；抗菌剤及び抗真菌剤；並びに防腐剤を含み得る。
本開示の組成物は、非経口投与又は非経腸（non-parenteral）投与の様々な手段のために製剤化され得る。一実施形態では、組成物は、注入又は静脈内投与向けに製剤化され得る。本明細書に開示される組成物は、例えば、無菌液体調製物（例えば、等張水溶液、乳剤、懸濁液、分散液、又は粘性組成物）として提供することができ、これらは、望ましいｐＨに緩衝され得る。経口投与に好適な製剤としては、液体溶液、カプセル剤、サッシェ剤、タブレット剤、ドロップ剤、及びトローチ剤、適切な液体及び乳剤中の粉末液体懸濁液を挙げることができる。
医薬組成物に関して本明細書で使用するとき、「医薬的に許容される」という用語は、動物及び／又はヒトにおける使用について、連邦政府若しくは州政府の規制機関によって承認されているか、又は米国薬局方若しくは他の全般的に認められている薬局方に列挙されていることを意味する。
一態様では、本開示は、癌を有するか又は癌を有するリスクがある対象の治療のために、リンパ球注入を使用して、ＣＡＲを発現する遺伝子改変Ｔ細胞を投与することに関する。少なくとも１つの実施形態では、自己リンパ球注入が治療に使用される。自己ＰＢＭＣは、治療を必要とする対象から収集され、本明細書に記載され当該技術分野において既知の方法を使用して、Ｔ細胞を活性化及び増殖して、次いで対象に注入して戻される。
一態様では、本開示は、概して、癌を発症するリスクのある対象の治療に関する。本発明はまた、対象における化学療法及び／又は免疫療法により著しい免疫抑制がもたらされ、それによって癌を発症する対象のリスクを増加させる、悪性腫瘍又は自己免疫疾患を治療することも含む。一態様では、本開示は、癌を予防する方法を提供し、本方法は、記載される１つ以上のＣＡＲを発現するリンパ球の量を、それを必要とする対象に投与することを含む。
一態様では、本開示は、癌を有する対象を治療する方法を提供し、本方法は、記載される１つ以上のＣＡＲを発現する治療有効量のリンパ球を、それを必要とする対象に投与することを含み、それにより、リンパ球は対象における癌細胞の死滅を誘導又は調節する。
別の態様では、本開示は、癌を有する対象における腫瘍量を低減する方法を提供し、本方法は、記載される１つ以上のＣＡＲを発現する治療有効量のリンパ球を、それを必要とする対象に投与し、それにより、リンパ球は対象における癌細胞の殺傷を誘導することを含む。別の態様では、本開示は、癌を有する対象の生存期間を増加させる方法を提供し、本方法は、記載される１つ以上のＣＡＲを発現する治療有効量のリンパ球を、それを必要とする対象に投与することを含み、それにより、対象の生存期間が長くなる。概ね、ＣＡＲを発現するリンパ球により、対象における癌細胞の死滅が誘導され、対象における腫瘍／癌細胞の低減又は根絶がもたらされる。標的とすることができる転移性病変を含む癌の非限定的なリストは、前立腺癌及び前立腺由来癌を含む。一実施形態では、対象において治療される癌は、前立腺癌である。いくつかの実施形態では、癌は、アンドロゲン受容体（ＡＲ）発現乳癌である。
一態様では、本明細書に記載の方法は、例えば、前立腺肥大、良性前立腺過形成（ＢＰＨ）、及び診断された前立腺癌の非存在下での高ＰＳＡレベルなどの癌性状態に発達するリスクのある非癌性状態の治療に適用可能である。
一態様では、癌を有する対象を治療する方法であって、治療有効量のｈＫ２抗原に結合する細胞外抗原結合ドメインを有するＣＡＲを発現するリンパ球を、それを必要としている対象に投与し、それにより、当該リンパ球が当該対象における癌細胞の殺傷を誘導することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲのうちの少なくとも１つは、配列番号４６～６１、８２～８５、及び２０５～２２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号４６と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号４６の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号４７と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号４７の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号４８と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号４８の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号４９と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号４９の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号５０と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号５０の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号５１と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号５１の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号５２と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号５２の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号５３と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号５３の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号５４と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号５４の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号５５と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号５５の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号５６と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号５６の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号５７と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号５７の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号５８と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号５８の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号５９と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号５９の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号６０と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号６０の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号６１と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号６１の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号８２と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号８２の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号８３と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号８３の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号８４と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号８４の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号８５と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号８５の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号２０５と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２０５の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号２０６と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２０６の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号２０７と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２０７の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号２０８と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２０８の配列を含む。いくつかの実施

形態では、ＣＡＲは、配列番号２０９と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２０９の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号２１０と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２１０の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号２１１と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２１１の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号２１２と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２１２の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号２１３と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２１３の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号２１４と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２１４の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号２１５と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２１５の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号２１６と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２１６の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号２１７と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２１７の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号２１８と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２１８の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号２１９と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２１９の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号２２０と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号２２０の配列を含む。
一態様では、癌細胞の標的化殺傷の方法が開示される。該方法は、癌細胞を、記載される１つ以上のＣＡＲを発現するリンパ球と接触させ、それにより、リンパ球は癌細胞の殺傷を誘導するこることを含む。標的とすることができる転移性癌細胞を含む癌細胞の非限定的なリストは、前立腺癌及びその組み合わせを含む。一実施形態では、癌細胞は、前立腺癌細胞である。
本開示の医薬組成物は、治療される（又は予防される）疾患に適切な方法で投与され得る。投与の量及び頻度は、対象の状態、対象の疾患のタイプと重症度などの要因によって判定されるが、適切な投与量は臨床試験によって判定され得る。
「治療する」又は「治療」という用語は、望まない生理的変化若しくは疾患を遅延する（減らす）こと、又は治療中に有益な若しくは所望の臨床転帰をもたらすことが目的である、療法的治療を指す。有益な若しくは所望の臨床転帰としては、検出可能又は検出不可能であるかどうかにかかわらず、症状の緩和、疾患の程度の軽減、安定した（すなわち、悪化しない）疾患状態、疾患の進行の遅延又は鈍化、疾患状態の改善又は緩和、及び／又は寛解（部分的又は全体的であるかどうかにかかわらず）が挙げられる。「治療」はまた、対象が治療を受けていない場合に予想される生存期間と比較して、生存期間を延長させることを意味し得る。治療を必要とする対象には、望まない生理的変化又は疾患をすでに有している対象、並びに生理的変化又は疾患を有しやすい傾向がある対象が含まれる。
疾患又は障害を「予防する」、「予防している」、「予防」、又は「予防処置」は、対象における障害の発生を防ぐことを意味する。本明細書において互換的に使用される「治療有効量」又は「有効量」は、必要な投薬量及び期間で、所望の治療結果を得るのに有効な量を指す。治療的に有効な量は、個体の病態、年齢、性別、及び体重などの要因、並びに個体において所望の応答を引き出す治療薬又は治療薬の組み合わせの能力によって様々であってよい。有効な治療剤又は治療剤の組み合わせの例示的な指標としては、例えば、患者の健康状態の改善、腫瘍量の低減、腫瘍の増殖の停止若しくは鈍化、及び／又は体内の他の場所への癌細胞の転移の不在（非存在）が含まれる。
本明細書で使用するとき、用語「被験体／対象」は、動物を指す。用語「対象」及び「患者」は、対象に関して本明細書で互換的に使用してよい。したがって、「対象」は、患者として、疾患、又は疾患の予防のために治療されるヒトを含む。本明細書に記載の方法は、任意の分類に属する動物対象を治療するために使用され得る。かかる動物の例としては、哺乳動物が挙げられる。哺乳動物としては、ネズミ目（マウス及びハムスターなど）の哺乳動物、及びウサギ目（ウサギなど）の哺乳動物が挙げられるが、これらに限定されない。哺乳動物は、ネコ科動物（ネコ）及びイヌ科動物（イヌ）を含む食肉目からのものであり得る。哺乳動物は、ウシ亜科動物（ウシ）及びイノシシ科動物（ブタ）を含む偶蹄目、又はウマ科動物（ウマ）を含む奇蹄目からのものであり得る。哺乳動物は、サル目、セボイド（Ceboid）目、若しくはシモイド（Simoid）目（サル）、又は真猿亜目（ヒト及び類人猿）であり得る。一実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。
治療有効量が示される場合、投与される本開示の組成物の正確な量は、対象の年齢、体重、腫瘍サイズ、感染又は転移の程度、及び状態における個々の差異を考慮して、医師によって判定され得る。概ね、本明細書に記載のＴ細胞を含む医薬組成物は、約１０４～約１０１０細胞／ｋｇ（体重）、場合によっては約１０５～約１０６細胞／ｋｇ（体重）の投与量（これらの範囲内の全ての整数値を含む）で投与してよいと述べることができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴ細胞を含む医薬組成物は、約１０６細胞／ｋｇ（体重）の投与量で投与され得る。Ｔ細胞組成物はまた、これらの投与量で複数回投与され得る。細胞は、免疫療法において一般的に知られている注入技術を使用することによって投与することができる（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｗ Ｅｎｇ．Ｊ．ｏｆ Ｍｅｄ．３１９：１６７６，１９８８を参照）。
本発明の実施形態の文脈において有用な送達システムは、徐放性、遅延放出、及び持続性放出送達システムを含み得、Ｔ細胞組成物の送達が、治療される部位の感作の前に、そしてそれを引き起こすために十分な時間で行われるようにする。組成物は、他の療法薬又は療法と併用することができる。かかるシステムは、組成物の反復投与を回避することにより、対象及び医師に対する利便性を高めることができ、本発明における特定の組成物の実施形態に対して特に好適であり得る。
多くの種類の放出送達系が利用可能であり、当業者に既知である。これらには、ポリ（ラクチド－グリコリド）、コポリオキサレート、ポリエステルアミド、ポリオルトエステル、ポリカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、及びポリ無水物などのポリマー基本成分系が含まれる。前述の薬物含有ポリマーのマイクロカプセルは、例えば、米国特許第５，０７５，１０９号に記載されている。送達系としてはまた、コレステロール、コレステロールエステルなどのステロール、及び脂肪酸又はモノ－ジ－及びトリ－グリセリドなどの中性脂肪を含む脂質である非ポリマー系、シラスティック系、ペプチド基本成分系、ヒドロゲル放出系、ワックスコーティング、従来のバインダー及び賦形剤を使用した圧縮錠剤、部分的に融合したインプラントなども挙げられる。具体例としては、（ａ）米国特許第４，４５２，７７５号、同第４，６６７，０１４号、同第４，７４８，０３４号、及び同第５，２３９，６６０号に記載されているものなど、活性組成物がマトリックス内の形態で含有される浸食系、並びに（ｂ）米国特許第３，８５４，４８０号及び同第３，８３２，２５３号に記載されているような活性成分が制御された速度でポリマーから浸透する拡散系が挙げられるが、これらに限定されない。加えて、ポンプベースのハードウェア送達システムが使用され得、そのうちのいくつかは埋め込み用に適合されている。
特定の態様では、活性化Ｔ細胞を対象に投与し、その後、血液を再採取し（又はアフェレーシスを実施し）、本開示によるＴ細胞を活性化し、これらの活性化及び増殖したＴ細胞を対象に再注入することが望ましい場合がある。このプロセスは、数週間ごとに複数回実行することができる。特定の態様では、Ｔ細胞は、１０ｃｃ～４００ｃｃの採血から活性化され得る。特定の態様では、Ｔ細胞は、２０ｃｃ、３０ｃｃ、４０ｃｃ、５０ｃｃ、６０ｃｃ、７０ｃｃ、８０ｃｃ、９０ｃｃ、又は１００ｃｃの採血から活性化される。
ＣＡＲ－Ｔ細胞及び組成物の投与は、任意の方法、例えば、非経口投与又は非経腸投与（エアロゾル吸入、注射、注入、経口摂取、輸血、埋め込み、又は移植を含む）によって実施することができる。例えば、本明細書に記載されるＣＡＲ－Ｔ細胞及び組成物は、経動脈、皮内、皮下、腫瘍内、髄内、節内、筋肉内経路で、静脈内（ｉ．ｖ．）注射によって、又は腹腔内経路で患者に投与され得る。一態様では、本開示の組成物は、ｉ．ｖ．注射によって投与される。一態様では、本開示の組成物は、皮内注射又は皮下注射によって対象に投与される。Ｔ細胞の組成物は、例えば、腫瘍、リンパ節、組織、器官、又は感染部位に直接注射することができる。
投与は、自己投与又は非自己投与であり得る。例えば、ヒトカリクレイン－２（例えば、ｈＫ２）特異的ＣＡＲを発現する免疫応答性細胞は、１人の対象から得ることができ、同じ対象又は異なる適合性対象に投与することができる。本開示の末梢血由来Ｔ細胞、又は拡大Ｔ細胞（例えば、インビボ、エクスビボ、又はインビトロ由来）は、例えば、静脈内注射、局所注射、全身注射、カテーテル投与、又は非経口投与を介して投与することができる。
特定の実施形態では、対象は、対象となる細胞、例えば、Ｔ細胞を選択及び／又は単離するために、白血球をエクスビボで回収、濃縮、又は枯渇させる白血球搬出法を受けることができる。これらの単離Ｔ細胞は、当該技術分野において既知の方法によって増殖させることができ、本開示の１つ以上のＣＡＲコンストラクトが導入され得るように処理され、それによってＣＡＲ－Ｔ細胞を作製することができる。それを必要とする対象は、その後、高用量化学療法による標準的な治療と、それに続く末梢血幹細胞移植を受ける場合がある。特定の態様では、移植後又は移植と同時に、対象は、増殖したＣＡＲ－Ｔ細胞の注入を受ける。一態様では、増殖した細胞は、手術の前又は後に投与される。
悪性腫瘍を有する患者に投与される投与量は、治療される疾患を緩和するか、又は少なくとも部分的に阻止するために十分な量である（「治療有効量」）。対象に投与される上記治療の投与量は、治療される状態の正確な性質及び治療のレシピエントによって変化する。ヒト投与のための投与量の増減は、当該技術分野において概ね受け入れられている慣行に従って実行することができる。
本発明のＣＡＲ Ｔ細胞は、インビボにおけるＴ細胞拡大を受けることができ、血中及び骨髄中で長期間にわたって高レベルで持続するｈＫ２特異的記憶細胞を得ることができる。いくつかの例では、対象に注入された本発明のＣＡＲ Ｔ細胞は、進行した化学療法抵抗性癌を有する対象において、インビボで癌細胞、例えば、前立腺癌細胞又はＡＲ発現乳癌を排除することができる。
一実施形態では、例えばインビトロ転写を使用して本開示のＣＡＲをＴ細胞に導入し、対象（例えば、ヒト）に、本開示のＣＡＲ－Ｔ細胞を初回投与し、ＣＡＲ－Ｔ細胞を１回以上後続投与し、当該１回以上の後続投与は、前回の投与後の１５日未満後、例えば、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、又は２日後に投与される。一実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞を対象（例えば、ヒト）に１週間に２回以上投与する、例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞を１週間に２、３、又は４回投与する。一実施形態では、対象に、ＣＡＲ－Ｔ細胞を１週間に２回以上投与し（例えば、１週間に２、３又は４回投与）（本明細書ではサイクルとも称される）、その後、ＣＡＲ－Ｔ細胞投与がない週が続き、続いて、ＣＡＲ－Ｔ細胞を１回以上の追加投与する（例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞を１週間に２回以上投与）。別の実施形態では、対象に、ＣＡＲ－Ｔ細胞を２サイクル以上で投与し、各サイクル間の時間は、１０、９、８、７、６、５、４、又は３日未満である。一実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、１週間に３回の投与のために、１日おきに投与される。一実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、少なくとも２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、又はそれ以上の週にわたって投与される。
一実施形態では、投与は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、１ヶ月、５週間、６週間、７週間、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、又はそれ以上後に繰り返され得る。また、治療過程を繰り返すことも、長期にわたる投与として可能である。繰り返し投与は、同一用量であっても異なる用量であってもよい。
ＣＡＲ－Ｔ細胞は、例えば、１週間に１回、６ヶ月又はそれ以上の期間などの維持療法によって、本発明の方法で投与することができる。
一実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、レンチウイルスなどのレンチウイルスウイルスベクターを使用して生成される。かかるウイルスベクターで生成されたＣＡＲ－Ｔ細胞は、安定したＣＡＲ発現を概ね有する。
一実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、形質導入後４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５日間、ＣＡＲベクターを一過性に発現する。ＣＡＲの一過性発現は、ＲＮＡ ＣＡＲベクターの送達によって行われ得る。一実施形態では、ＣＡＲ ＲＮＡは、エレクトロポレーションによってＴ細胞に形質導入される。
一過性のＣＡＲ療法（ＲＮＡ形質導入によって生成されるものなど）の過程で患者が抗ＣＡＲ抗体応答を生成するリスクが高い場合、ＣＡＲ Ｔ注入の中断は、１０～１４日を超えて続けないことが必要である。
本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、他の既知の薬剤及び療法と組み合わせて使用することができる。本明細書で使用するとき、「組み合わせて」投与されるとは、対象の治療の過程中に、２つ（又はそれ以上）の異なる治療が対象に送達されること、例えば、対象が癌と診断された後、その癌が治癒される若しくは排除される前、又は他の理由で治療が中止される前に、２つ以上の治療が送達されることを意味する。いくつかの実施形態では、１つの治療の送達は、第２の開始の送達が開始されるときにも依然として起こるため、投与に関して重複がある。これは、本明細書において「同時」又は「同時送達」と称されることがある。他の実施形態では、１つの治療の送達は、もう１つの治療の送達が開始される前に終了する。いずれの場合もいくつかの実施形態では、併用投与することにより、治療がより効果的になる。例えば、第２の治療はより効果的であり、例えば、同等の効果が、第２の治療を少なくして見られ、又は第２の治療が、第１の治療なく第２の治療が施される場合に見られるよりも、症状を大幅に軽減し、又は第１の治療と同様の状況が見られる。いくつかの実施形態では、送達は、障害に関連する症状又は他のパラメータの軽減が、他の治療なしで送達される１つの治療で観察される軽減よりも大きくなるようなものである。２つの治療の効果は、部分的に相加的であるか、全体的に相加的であるか、又は相加的を超えるものであり得る。送達は、送達された第１の治療の効果が、第２の送達時に依然として検出可能であるようなものであり得る。
一実施形態では、インターロイキン、並びにＧ－、Ｍ－及びＧＭ－ＣＳＦなどのコロニー刺激因子、並びにインターフェロンを含むがこれらに限定されない、因子などの他の治療剤は、ＣＡＲ－Ｔ細胞の前、後、又は同時に（一斉に）投与してよい。
本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞及び少なくとも１つの追加の治療剤は、同時に、同じ若しくは別個の組成物で、又は逐次投与してよい。連続投与の場合、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を最初に投与し、次に追加の薬剤を投与するか、又は投与の順序を逆にすることができる。
更なる実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、治療レジメンにおいて手術、放射線、化学療法、免疫抑制剤、抗体、又は他の免疫破壊剤と組み合わせて使用してよい。別の実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、抗アンドロゲン治療と組み合わせて使用してもよい。一実施形態では、対象に、ＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤を投与することができる。例えば、一実施形態では、薬剤は、阻害分子を阻害する薬剤であり得る。
例示的実施形態の記述が以下に続く。
１． キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、
（ａ）ヒトカリクレイン－２（ｈＫ２）抗原に特異的に結合するｓｃＦｖを含む細胞外ドメインと、
（ｂ）膜貫通ドメインと、
（ｃ）少なくとも１つの共刺激ドメインを任意選択で含む細胞内シグナル伝達ドメインと、
を含む、ＣＡＲ。
２． 実施形態１に記載のＣＡＲであって、
（ｄ）ＣＤ８ａ－ヒンジ領域
を更に含み、
当該膜貫通ドメインが、ＣＤ８ａ膜貫通領域（ＣＤ８Ａ－ＴＭ）ポリペプチドを含み；
当該細胞内シグナル伝達ドメインが、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（ＣＤ１３７）成分を含む共刺激ドメイン及びＴ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ｚ）成分を含む一次シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲ。
３． 実施形態２に記載のＣＡＲであって、
（ｂ）当該ＣＤ８ａ－ヒンジ領域が、配列番号２５、２６９、２７０、２７１、若しくは２７２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
（ｃ）当該膜貫通ドメインが、配列番号２６と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、並びに／又は
（ｄ）当該細胞内シグナル伝達ドメインが、配列番号２７と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する共刺激ドメイン、及び配列番号２８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する一次シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲ。
４． 細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、当該細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号３１４のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３１５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３１１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号３０９のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３１０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３１１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；又は
配列番号７２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号８６のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号８７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号９２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号１０２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１０３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号１０５のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１０６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号１０７のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１０８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号１１０のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号１０２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号１０５のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号１１５のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号１１８のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
配列番号１２０のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１２２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；又は
配列番号１２３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１２２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
を含み、
当該細胞外抗原結合ドメインが、ｈＫ２抗原に結合する、ＣＡＲ。
５． 細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、当該細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号６８のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号８９のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号９５のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号３１２のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３１３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号８９のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１３６のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；又は
配列番号９７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３、
を含み、
当該細胞外抗原結合ドメインが、ｈＫ２抗原に結合する、ＣＡＲ。
６． 実施形態４に記載のＣＡＲであって、当該細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号６８のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号８９のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号９５のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号３１２のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３１３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号８９のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１３６のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；又は
配列番号９７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３、
を更に含む、ＣＡＲ。
７． 実施形態６に記載のＣＡＲであって、当該細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６８のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号３１４のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３１５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号３１１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号３１２のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３１３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１０２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１０３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１０４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１０７のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１０８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１０９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１０２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１１３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
配列番号１１５のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１１７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号１３６のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；又は
配列番号１２０のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１２２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号９７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む、ＣＡＲ。
８． 当該細胞外抗原結合ドメインが、配列番号８６のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号８７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号８８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号８９のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む、実施形態６に記載のＣＡＲ。
９． 細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、当該細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号１、２、３、７４、７５、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、及び３１８から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、並びに／又は
配列番号４、５、６、７６、７７、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、及び３１７から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、
を含み、
当該細胞外抗原結合ドメインが、ヒトカリクレイン－２（ｈＫ２）抗原に結合する、ＣＡＲ。
１０． 実施形態９に記載のＣＡＲであって、当該細胞外抗原結合ドメインが、
配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号７４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号７５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号７７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号７５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号７５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１４８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１４９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１５１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号３１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号３１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、
を含む、ＣＡＲ。
１１． 当該細胞外抗原結合ドメインが、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む、実施形態１～１０のいずれかに記載のＣＡＲ。
１２． 当該ｓｃＦｖが、当該軽鎖可変領域（ＶＬ）と当該重鎖可変領域（ＶＨ）との間にリンカーポリペプチドを含む、実施形態１１に記載のＣＡＲ。
１３． 当該リンカーポリペプチドが、配列番号７のアミノ酸配列を含む、実施形態１２に記載のＣＡＲ。
１４． 当該ｓｃＦｖが、配列番号８～２３、１６９～１８４、及び３４０～３４３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態１１又は１２に記載のＣＡＲ。
１５． 当該細胞外抗原結合ドメインが、シグナルポリペプチドを含む、実施形態１～１４に記載のいずれかに記載のＣＡＲ。
１６． 当該シグナルポリペプチドが、配列番号２４のアミノ酸配列を含む、実施形態１５に記載のＣＡＲ。
１７． 当該細胞内シグナル伝達ドメインが、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（ＣＤ１３７）成分、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ｚ）成分、表面抗原分類（ＣＤ２７）成分、表面抗原分類スーパーファミリーメンバー成分、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチド成分を含む、実施形態４～１６のいずれかに記載のＣＡＲ。
１８． 当該ＣＤ１３７成分が、配列番号２７のアミノ酸配列を含む、実施形態１７に記載のＣＡＲ。
１９． 当該ＣＤ３ｚ成分が、配列番号２８のアミノ酸配列を含む、実施形態１７又は実施形態１８に記載のＣＡＲ。
２０． 当該細胞内シグナル伝達ドメインが、配列番号４５のアミノ酸配列を含む、請求項１７～１９のいずれか１つに記載のＣＡＲ。
２１． 当該膜貫通ドメインが、ＣＤ８ａ膜貫通領域（ＣＤ８ａ－ＴＭ）ポリペプチドを含む、実施形態２～２０に記載のいずれかに記載のＣＡＲ。
２２． 当該ＣＤ８ａ－ＴＭポリペプチドが、配列番号２６のアミノ酸配列を含む、実施形態２１に記載のＣＡＲ。
２３． 当該膜貫通ドメインを当該細胞外抗原結合ドメインに連結するヒンジ領域を更に含む、実施形態４～２２に記載のいずれかに記載のＣＡＲ。
２４． 当該ヒンジ領域が、ＣＤ８ａ－ヒンジ領域である、実施形態２３に記載のＣＡＲ。
２５． 当該ＣＤ８ａ－ヒンジ領域が、配列番号２５、２７９、２８０、２８１、又は２８２のアミノ酸配列を含む、実施形態２４に記載のＣＡＲ。
２６． 当該細胞外抗原結合ドメインが、配列番号２９～４４、７８～８１、２２１～２３６、及び２７３～３０８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態１～２５に記載のいずれかに記載のＣＡＲ。
２７． 配列番号４６～６１、８２～８５、及び２０５～２２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態１～２６のいずれかに記載のＣＡＲ。
２８． 請求項１～２７のいずれかに記載のＣＡＲを発現する、単離リンパ球。
２９． Ｔリンパ球である、実施形態２８に記載の単離リンパ球。
３０． ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、実施形態２８に記載の単離リンパ球。
３１． 実施形態１～３０のいずれかに記載のＣＡＲをコードしている、単離核酸分子。
３２． 実施形態３１に記載の核酸分子を含む、ベクター。
３３． 実施形態３１に記載の核酸分子を発現する、細胞。
３４． 有効量の実施形態２８～３０のいずれかに記載のリンパ球を含む、医薬組成物。
３５． 有効量の実施形態２８～３０のいずれかに記載のリンパ球と、医薬的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
３６． 治療において使用するための、実施形態１～２７のいずれかに記載のＣＡＲ、又は実施形態３４若しくは３５に記載の医薬組成物。
３７． 癌を有する対象を治療する方法で使用するための、実施形態１～２７のいずれかに記載のＣＡＲ、又は実施形態３４若しくは３５に記載の医薬組成物。
３８． 癌を有する対象を治療する方法であって、
治療有効量の実施形態２８～３０のいずれかに記載のリンパ球を、それを必要としている対象に投与し、それにより、当該リンパ球が当該対象における癌細胞の殺傷を誘導することを含む、方法。
３９． 当該癌が、前立腺癌又はアンドロゲン受容体発現乳癌である、実施形態３８に記載の方法、又は実施形態３７に記載の方法で使用するためのＣＡＲ若しくは医薬組成物。
４０． 当該癌が、前立腺癌である、実施形態３８に記載の方法、又は実施形態３７に記載の方法で使用するためのＣＡＲ若しくは医薬組成物。
４１． 当該癌が、アンドロゲン受容体発現乳癌である、実施形態３８に記載の方法、又は実施形態３７に記載の方法で使用するためのＣＡＲ若しくは医薬組成物。
４２． 癌細胞の標的化殺傷の方法であって、
当該癌細胞を実施形態２８～３０のいずれかに記載のリンパ球と接触させ、それにより、
当該リンパ球が、当該癌細胞の殺傷を誘導することを含む、方法。
４３． 当該癌細胞が、前立腺癌細胞又はアンドロゲン受容体発現乳癌細胞である、実施形態４２に記載の方法。
４４． 対象における癌の存在を検出する方法であって、
（ｃ）当該対象から得られた細胞サンプルを実施形態１～２７のいずれか１つに記載のＣＡＲと接触させ、それにより、ＣＡＲ－細胞複合体を形成することと、
（ｄ）当該複合体を検出することと、ここで、当該複合体の検出が、当該対象における癌の存在を示す、
を含む、方法。
好ましくは、実施形態は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで実施される。
４５． 当該膜貫通ドメインが、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤ８ａ－ＴＭポリペプチドを含む、実施形態１に記載のＣＡＲ。
４６． 当該膜貫通ドメインが、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤ８ａ－ＴＭポリペプチドを含む、実施形態２に記載のＣＡＲ。
４７． 当該ＣＤ８ａヒンジ領域が、配列番号２５のアミノ酸配列を含む、実施形態２又は４６に記載のＣＡＲ。
４８． 当該ＣＤ１３７成分が、配列番号２７のアミノ酸配列を含む、実施形態２又は４７に記載のＣＡＲ。
４９． 当該ＣＤ３ｚ成分が、配列番号２８のアミノ酸配列を含む、実施形態２、４７、又は４８に記載のＣＡＲ。
５０． 実施形態３に記載のＣＡＲであって、
（ｂ）ＣＤ８ａ－ヒンジ領域が、配列番号２５、２６９、２７０、２７１、若しくは２７２と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、好ましくは、当該ＣＤ８ａ－ヒンジ領域が、配列番号２５と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｃ）当該膜貫通ドメインが、配列番号２６と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む；並びに／又は
（ｄ）当該細胞内シグナル伝達ドメインが、配列番号２７と少なくともと少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を有する共刺激ドメイン、及び配列番号２８と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を有する一次シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲ。
５１． 当該ＣＤ８ａヒンジ領域が、配列番号２５のアミノ酸配列を含む、実施形態３に記載のＣＡＲ。
５２． 当該ＣＤ８ａ－ＴＭポリペプチドが、配列番号２６のアミノ酸配列を含む、実施形態３に記載のＣＡＲ。
５３． 当該ＣＤ１３７成分が、配列番号２７のアミノ酸配列を含む、実施形態３に記載のＣＡＲ。
５４． 当該ＣＤ３ｚ成分が、配列番号２８のアミノ酸配列を含む、実施形態３に記載のＣＡＲ。
５５． 実施形態３に記載のＣＡＲであって、
（ｂ）当該ＣＤ８ａヒンジ領域が、配列番号２５のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）当該膜貫通ドメインが、配列番号２６のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）当該細胞内シグナル伝達ドメインが、配列番号２７のアミノ酸配列を有する共刺激ドメイン及び配列番号２８のアミノ酸配列を有する一次シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲ。
５６． 当該細胞外抗原結合ドメインが、配列番号２９～４４、７８～８１、２２１～２３６、及び２７３～３０８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態４５～５５に記載に記載のＣＡＲ。
５７． 配列番号４６～６１、８２～８５、及び２０５～２２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態４５～５５のいずれかに記載のＣＡＲ。
５８． 請求項４５～５５のいずれかに記載のＣＡＲを発現する、単離リンパ球。
５９． Ｔリンパ球である、実施形態５８に記載の単離リンパ球。
６０． ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、実施形態５８に記載の単離リンパ球。
６１． 実施形態４５～５５のいずれかに記載のＣＡＲをコードしている、単離核酸分子。
６２． 実施形態６１に記載の核酸分子を含む、ベクター。
６３． 実施形態６１に記載の核酸分子を発現する、細胞。
６４． 有効量の実施形態５８～６０のいずれかに記載のリンパ球を含む、医薬組成物。
６５． 有効量の実施形態５８～６０のいずれかに記載のリンパ球と、医薬的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
６６． 治療において使用するための、実施形態４５～５５のいずれかに記載のＣＡＲ、又は実施形態６４若しくは６５に記載の医薬組成物。
６７． 癌を有する対象を治療する方法で使用するための、実施形態４５～５５のいずれかに記載のＣＡＲ、又は実施形態６４若しくは６５に記載の医薬組成物。
６８． 癌を有する対象を治療する方法であって、
治療有効量の実施形態５８～６０のいずれかに記載のリンパ球を、それを必要としている対象に投与し、それにより、当該リンパ球が当該対象における癌細胞の殺傷を誘導することを含む、方法。
６９． 当該癌が、前立腺癌又はアンドロゲン受容体発現乳癌である、実施形態６８に記載の方法、又は実施形態６７に記載の方法で使用するためのＣＡＲ若しくは医薬組成物。
７０． 当該癌が、前立腺癌である、実施形態６８に記載の方法、又は実施形態６７に記載の方法で使用するためのＣＡＲ若しくは医薬組成物。
７１． 当該癌が、アンドロゲン受容体発現乳癌である、実施形態６８に記載の方法、又は実施形態６７に記載の方法で使用するためのＣＡＲ若しくは医薬組成物。
７２． 癌細胞の標的化殺傷の方法であって、
当該癌細胞を実施形態５８～６０のいずれかに記載のリンパ球と接触させ、それにより、
当該リンパ球が、当該癌細胞の殺傷を誘導することを含む、方法。
７３． 当該癌細胞が、前立腺癌細胞又はアンドロゲン受容体発現乳癌細胞である、実施形態７２に記載の方法。
７４． 対象における癌の存在を検出する方法であって、
（ａ）当該対象から得られた細胞サンプルを実施形態４５～５５のいずれか１つに記載のＣＡＲと接触させ、それにより、ＣＡＲ－細胞複合体を形成することと、
（ｂ）当該複合体を検出することと、ここで、当該複合体の検出が、当該対象における癌の存在を示す、
を含む、方法。
好ましくは、実施形態は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで実施される。
本明細書にて開示した実施形態のいくつかを更に説明するために、以下の実施例を提供する。これらの実施例は、例示を目的とするものであって、本開示の実施形態を限定するものではない。
実施例１：１１Ｂ６ ｓｃＦｖを有するｈＫ２ ｓｃＦｖ ＣＡＲの構築及び発現
ｈＫ２標的化抗体１１Ｂ６に由来するｓｃＦｖを含むｈＫ２ ＣＡＲコンストラクトを、図１Ａに示すように構築した。Ｄｙｎａｂｅａｄｓ Ｈｕｍａｎ Ｔ－Ｅｘｐａｎｄｅｒ ＣＤ３／ＣＤ２８で刺激したＴ細胞をエレクトロポレーションに供し、次いで、ＯＰＴＩ－ＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で３回洗浄し、５０Ｅ６／ｍＬの最終濃度でＯＰＴＩ－ＭＥＭに再懸濁させた。続いて、０．１ｍＬの細胞（５Ｅ６）を、ＲＮＡをコードしているＩＶＴ ＣＡＲ１０ｕｇと混合し、「パルス」ボタンを１回押すことによって、ＢＴＸ ＥＣＭ８３０（Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ ＢＴＸ，Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）を使用して２ｍｍギャップキュベット（Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ ＢＴＸ，Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）内でエレクトロポレーションした。（設定：５００ボルト、７５０μｓｅｃパルス長及び単一（１）パルス、１００ｍＳｅｃ間隔）エレクトロポレーション後、Ｔ細胞を６ウェルプレートに移し、直ちに３７℃のインキュベーターに戻した。初代ヒトＴ細胞に、ｍＲＮＡなし（モック）で、又はｈＫ２ ｓｃＦｖ ＣＡＲ若しくは無関係の対照ＣＡＲのいずれかを発現するｍＲＮＡ１０μｇをエレクトロポレーションした。エレクトロポレーションの２４時間後、２μｇ／ｍＬのビオチン化Ｌタンパク質及びストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥ（図１Ｂ）、又はビオチン化ｈＫ２（１μｇ／ｍＬ）及びストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥ（図１Ｃ）で染色した後に、フローサイトメトリーによってＣＡＲ表面発現を測定した。
エレクトロポレーションの２４時間後、Ｔ細胞をカウントした。１Ｅ５Ｔ個の細胞を各々収集した。２００μＬ／ウェルのマイクロタイタープレート用ＦＡＣＳバッファを使用して、細胞をＦＡＣＳバッファで２回洗浄し、上清を廃棄した。全てのウェルを、タンパク質Ｌを含有する染色バッファ（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、カタログ番号Ｍ０００９７１：５００；２ｕｇ／ｍＬ）１００μＬで染色し、光から保護しながら、４℃で少なくとも３０分間インキュベートした。１５０μＬ／ウェルのマイクロタイタープレート用ＦＡＣＳバッファを使用して、ＦＡＣＳバッファを２回添加することによって細胞を洗浄した。室温で４分間、４００×ｇで遠心分離を行った。次いで、上清を廃棄した。全てのウェルを１００μＬのストレプトアビジン－Ｒ－フィコエリトリン（ＳＡ－ＰＥ、１：２５０）及びＬｉｖｅ／ｄｅａｄ Ｆｉｘａｂｌｅ Ｎｅａｒ－ＩＲ Ｄｅａｄ Ｃｅｌｌ Ｓｔａｉｎ色素（１：１０００）で染色し、光から保護しながら４℃で少なくとも３０分間インキュベートした。次いで、細胞のフローサイトメトリー分析の準備を整えた。
図１Ｂに示されるように、タンパク質Ｌ染色は、ＨＫ２ ＨＬ及びＬＨ ＣＡＲの両方で観察されたが（それぞれ４１．４％及び６６．３％）、ｍＲＮＡエレクトロポレーションを伴わないＴ細胞である対照Ｔ細胞ではバックグラウンド染色（約５．５％）しかみられなかった。図１Ｃに示されるように、初代ヒトＴ細胞におけるＣＡＲ発現は、Ｊ＆Ｊ内部ビオチン標識組換えＨＫ２タンパク質（ビオチン－Ｈｋ２タンパク質、ロット：２０１８８０１０、ＣＢＩＳ ＩＤ：ＫＬ２Ｗ１２．ＣＢ．００３、２．４ｍｇ／ｍＬ、１ｍＭベンズアミジン）、続いてＳＡ－ＰＥを介しても検出することができた。図示されるように、Ｔ細胞は、フローサイトメトリーによって測定したとき、ＨＫ２ ＬＨ ＣＡＲ（８２．７％）を効率的に発現することができるが、ｍＲＮＡエレクトロポレーションを伴わないＴ細胞である対照Ｔ細胞又は未開示の対照ＣＡＲ（非ＨＫ２特異的）ではバックグラウンド染色（約１．７３％又は１．１９％）しかみられなかった。結果は、代表的なドナーＴ細胞について示されており、複数のドナーで再現可能であった（少なくともｎ＝３）。＋ビオチン標識（ＥＺ－Ｌｉｎｋ（商標）Ｓｕｌｆｏ－ＮＨＳ－ＬＣ－Ｂｉｏｔｉｎ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号：２１３２７）。
実施例２：ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞による腫瘍細胞の殺傷
フローサイトメーターを使用したＣｅｌｌ Ｔｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号：Ｃ３４５５７）ベースの細胞傷害性アッセイのための共培養を以下のように行った。
Ｔ細胞を以下のように調製した。ＥＰの２４時間後、Ｔ細胞をカウントし、最も濃縮された／所望のＥ：Ｔに必要な濃度で再懸濁させた。Ｔ細胞を１００μＬ／ウェルのアッセイで添加した（２×１０６細胞／ｍＬ、１００μＬを１０：１のＥ：Ｔ比、すなわち２Ｅ４個の標的細胞あたり２Ｅ５Ｔ個の細胞でプレーティング）。１０：１のＥ：Ｔ濃度のストック（原液）を作製し、完全Ｔ細胞培地（Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒｗ／ＣＴＳ、５％ヒト血清、１％ ＧｌｕｔａＭａｘ）で０．３１２５：１になるように２倍連続希釈を行った。９６ウェルの丸底組織培養処理プレートを使用して、Ｔ細胞をトリプリケートでプレーティングした（１００ｕＬ／ウェル）。
ＣＴＶ標識標的細胞を以下のように調製した。２０μＬのＤＭＳＯをＣＴＶ染色溶液のバイアルに添加した。この原液を、５μＭの染色溶液にするために２０ｍＬのＰＢＳ（３７℃に加温）に希釈した。１０Ｅ６個の腫瘍細胞を収集し、ＰＢＳで２回洗浄し、４Ｅ６／ｍＬ（２．５ｍＬ）に再懸濁させた。等体積（２．５ｍＬ）のＣＴＶ染色溶液を添加した。細胞を３７℃のインキュベーター内で２０分間インキュベートした。４０ｍＬのＰＲＭＩ＋２０％ＦＢＳを細胞に添加して、任意の非結合色素を吸収させた。細胞を５分時間インキュベートした。細胞を４００×ｇで５分間遠心分離した。細胞ペレットを、予熱しておいたＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ培地に再懸濁させた。その間に、Ｔ細胞を上記の所望のＥ／Ｔ比で播種した。腫瘍細胞株Ｖｃａｐ（ＨＫ２＋）及びＤＵ１４５（ＨＫ２－）を再度カウントし、次いで、細胞をデュープリケートで２Ｅ５／ｍＬ及び１００ｕＬに再懸濁させた。平底９６ウェルプレートにおいて、細胞を、標識された腫瘍細胞株とコインキュベートした。
フローサイトメーターを使用して以下の通り細胞傷害性アッセイを行った。２０時間の共培養後、全ての細胞をＵ底９６ウェルプレートに移し、洗浄した。２０時間の共培養後、全ての細胞を平底９６ウェルプレートから回収し、Ｕ底９６ウェルプレートに移し、次いで、洗浄した。３０μＬの０．２５％トリプシンを全てのウェルに添加し、３７℃のインキュベーターで５分間インキュベートした。５分後、全ての腫瘍細胞をＵ底９６ウェルプレートに回収した。細胞を、４００×ｇで５分間、２回遠心分離及び洗浄した。次いで、細胞ペレットを、希釈した（１：１０００）ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（商標）Ｆｉｘａｂｌｅ Ｎｅａｒ－ＩＲ染色色素（１００μＬ）に再懸濁させた。細胞を４℃で３０分間インキュベートし、４００×ｇで５分間細胞を遠心分離することによって、ＦＡＣＳバッファで２回洗浄した。洗浄後、１００μＬのＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘ（商標）固定バッファ（５０ｕＬのＦＡＣＳバッファ＋５０ｕＬの固定バッファ）を使用して、全ての細胞を１０分間固定した。細胞を、４００×ｇで５分間、１回遠心分離及び洗浄した。細胞ペレットをＦＡＣＳバッファに再懸濁させた。染色されたサンプルを、インキュベーション期間の終了後にマルチカラーフローサイトメトリーによって分析した。
以下の式を使用して、細胞傷害活性百分率を計算した：
特異的死％＝Ｎｅａｒ ＩＲ％＋ＣＴＶ＋（死）細胞－自然Ｎｅａｒ ＩＲ％＋ＣＴＶ＋／（１００％－自然Ｎｅａｒ ＩＲ％＋ＣＴＶ＋（死）細胞）×１００％。
一過性トランスフェクションの２４時間後、標的細胞（Ｖｃａｐ及びＤＵ１４５）をＣｅｌｌ Ｔｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）蛍光色素で標識し、次いで、ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞と共培養した。モックＴ細胞が、陰性エフェクター対照として機能した。細胞を、図２に示すように、指定のエフェクター対標的細胞（Ｅ／Ｔ）比で２０時間共培養した。死滅パーセントは、ＣＡＲ－Ｔ細胞なしで培養された生存標的の数に対する共培養物中に残存する生存（生存性色素陰性）標的（ＣＴＶ陽性）細胞の絶対数の比率である。図示されるように、１０：１～０．３１２５：１のＥ／Ｔ比で、ｈＫ２ ＣＡＲ ＬＨ Ｔ細胞は、ｈＫ２（＋）ヒト前立腺癌細胞株ＶＣａｐ細胞を特異的かつ効率的に溶解したが、Ｋ２（－）ＤＵ１４５細胞は溶解せず、一方、モック又はｈＫ２ ＨＬ ＣＡＲであるＴ細胞ではバックグラウンド細胞傷害性しかみられなかった。
標的細胞の免疫細胞媒介細胞溶解の効力アッセイとして、リアルタイム細胞分析システムとしてのｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅを用いて、ｈＫ２特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞をリアルタイム細胞傷害性についても試験した。
５０μＬの標的癌細胞培養培地を９６ウェルＥ－プレート（ＡＣＥＡ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の各ウェルに添加し、バックグラウンドインピーダンスを測定し、細胞指数として表した。次いで、接着標的細胞ＶＣａｐ及びＤＵ１４５を解離させ、１００μＬの体積で、５Ｅ４（ＶＣａｐ）、５Ｅ３（ＤＵ１４５）細胞／Ｅプレートのウェルの密度で播種し、電極表面上に受動的に接着させた。播種後、Ｅプレートを層流フード内において周囲温度で３０分間保持し、次いで、細胞培養インキュベーター内のＲＴＣＡ ＭＰ機器に移した。実験期間（９６時間）全体にわたって１５分間隔でデータ記録を直ちに開始した。
処理を適用した時（癌細胞播種の２４時間後）に、データ取得を一時停止し、各ウェルから５０μＬの培地を除去し、エフェクターＣＡＲＴ細胞を５０μＬの体積において異なるエフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）比で添加した。ＨＫ２ ＣＡＲ＋及び未開示の対照ＣＡＲ（非ＨＫ２特異的）Ｔ細胞を再懸濁させた。次いで、９６ウェルプレートにおいてデュープリケートで２倍希釈を行った（５：１～０．１５６：１のＥ／Ｔ比）。標的＋モックエフェクター対照（ＲＮＡエレクトロポレーションＴ細胞なし）も標的細胞に添加した。
標的細胞ＶＣａｐ（５Ｅ４）及びＤＵ１４５（５Ｅ３）を、異なるＥ／Ｔ比でおよそ７２時間、モック、１０μｇのｍＲＮＡエレクトロポレーション（トランスフェクションの２４時間後）ｈＫ２ １１Ｂ６ ＣＡＲ ＬＨ、又は対照ＣＡＲ－Ｔ細胞と共にインキュベートした。ＶＣａｐ及びＤＵ１４５についての正規化された細胞指数（ＣＩ）プロットを、それぞれ図３Ａ及び図３Ｂに示す。単独で播種された場合、標的細胞はプレートに接着し、増殖して、ＣＩの読み出しを増加させる。Ｔ細胞を標的細胞に添加すると、ｈＫ２ ＣＡＲ及び対照ＣＡＲ－Ｔ細胞は、細胞溶解、及びその後のＣＩの進行的減少を引き起こす。
実施例３：ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔのサイトカイン産生
理論に束縛されるものではないが、細胞傷害性Ｔ細胞によって産生されたＩＦＮ－γは、腫瘍の免疫監視作用を発揮させることができ、これにより、増殖を直接阻害し、インビボ及びインビトロにおいて一部の悪性腫瘍のアポトーシスを誘導することができる。ｈＫ２ ＣＡＲ改変ヒトＴ細胞がｈＫ２（＋）腫瘍細胞によって認識され、活性化され得るかどうかを判定するために、実施例２及び図３Ａ～３Ｂに記載の通り、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅベースの殺傷アッセイから上清を回収した。約７０時間の共培養後、上清を回収し、ＥＬＩＳＡキット（ヒトＩＦＮ－γＥＬＩＳＡ ＭＡＸ（商標）Ｄｅｌｕｘｅ、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、カタログ番号４３０１０６）と共に提供された指示書に従って、ＥＬＩＳＡによってアッセイした。
抗原刺激されたＣＡＲ－Ｔ細胞のＴｈ１サイトカインインターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）産生を、図４に示す。ｈＫ２ ＣＡＲ ＬＨ及び対照ＣＡＲ改変Ｔ細胞は、ｈＫ２発現ＶＣａｐ細胞との共培養中にＥ：Ｔ比依存的にＩＦＮ－γを分泌するが、ｈＫ２－陰性ＤＵ１４５細胞では分泌しない。未開示の対照ＣＡＲは、抗原発現レベルがｈＫ２よりもはるかに高いことから、はるかに多量のＩＦＮ－γを分泌した。デュープリケートの培養からの平均ＩＦＮ－γ濃度±ＳＤ（ｐｇ／ｍＬ）を示す。
実施例４：熱安定化ｓｃＦｖ ＣＡＲコンストラクトの作製及び特性評価
Ｖａｅｉｓａｅｎｅｎ ｅｔ ａｌ（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ５０：９，１６０７－１６１７（２００４）により、組換えＨＫ２でＢＡＬＢ／ｃマウスを免疫することによって抗ＨＫ２抗体クローン１１Ｂ６を同定した。Ｓｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ．２０１５；７（４）：７７８－９１に記載の方法によって、マウス由来クローン１１Ｂ６のヒト化を実施した。ｓｃＦｖとしての野生型１１Ｂ６の外部ドメインは、高温（５５℃）で結合を保持しなかったので、ｓｃＦｖとしてヒト化を実施し、ヒト化バリアントからの大腸菌で発現した上清を６０℃で１５分間インキュベートし、続いて、ＥＬＩＳＡを使用して組み換えＨＫ２への結合についてスクリーニングした。
抗体１１Ｂ６に由来する熱安定化ｓｃＦＶを含有する１０個のｈＫ２標的化するＣＡＲを作製した。
熱安定化ｓｃＦｖを含有する１０個のＣＡＲコンストラクトの説明及び配列番号を表１に提供する。
Figure 2022535150000001
Ｊｕｒｋａｔ－Ｌｕｃｉａ（商標）ＮＦＡＴ細胞（ＪＮＬ）を介して抗原非依存的に活性化する異なるｓｃＦｖをベースとするＣＡＲを同定するため。活性化Ｔ細胞の核因子（ＮＦＡＴ）は、最初に免疫細胞の調節因子として同定された転写因子のファミリーである。Ｔ細胞が活性化されると、カルシウムが流入し、ＮＦＡＴのＮ末端でセリンリッチな核局在化シグナルを脱リン酸化するカルシニューリンが活性化され、ＮＦＡＴが核内移行する。理論に束縛されることを望むものではないが、ｓｃＦｖクラスタリングによるトニックシグナル伝達は、ＪＮＬレポーター細胞株においてＮＦＡＴプロモーターによって駆動されるホタルルシフェラーゼによって後で検出することができた。
ＪＮＬ細胞、すなわち、シグナル伝達応答性ＮＦＡＴプロモーターによって駆動されるルシフェラーゼ遺伝子を含有するＪｕｒｋａｔ細胞に、様々なＣＡＲコンストラクトを形質導入した。ＣＡＲコンストラクトとその同種細胞抗原（標的細胞上のｈＫ２）との間の結合によって、ＪＮＬ細胞においてルシフェラーゼが発現する。
レンチウイルスの形質導入を以下のように行った。ＪＮＬ細胞を収集し、１Ｅ６／ｍＬになるように再懸濁させた。５００μＬのＪＮＬ細胞及びレンチウイルスウイルスをＭＯＩ３で添加し、上下にピペッティングすることによって混合した。混合物を３７℃のインキュベーターで２４時間インキュベートした。５００μＬのＪＮＬ培地を各ウェルに添加し、３７℃のインキュベーターで培養を続けた。４日目に細胞をＴ２５フラスコに移した。５～６日目に、形質導入の検証を行った。１５０μＬの細胞を収集して、使用している特定のＣＡＲに適切な検出試薬（例えば、ｈｋ２ ＣＡＲを検出するためにはビオチン－ｈｋ２タンパク質を使用）を介してＣＡＲ発現を調べた。凍結又はアッセイにおいて使用するのに十分な細胞が得られるまで、ＪＮＬ細胞を５×１０５／ｍＬで維持した。
熱安定化ｓｃＦｖ ＣＡＲを、抗原依存性活性についてＪＮＬレポーターアッセイにおいて評価した。シグナル伝達応答性ＮＦＡＴプロモーターによって駆動されるルシフェラーゼ遺伝子を含有するＪｕｒｋａｔ細胞（ＪＮＬ細胞と呼ばれる）に、様々なｈＫ２ ＣＡＲコンストラクトを形質導入した。このアッセイは、以下のように行った。２：１のエフェクター対標的比で、標的細胞株との共培養を実施した。ＪＮＬ細胞をスピンダウンして、培地中の任意の分泌されたルシフェラーゼを除去し、次いで、ＪＮＬ細胞を４×１０５／ｍＬで新鮮培地に再懸濁させた。細胞を収集した。次いで、抗原陽性及び抗原陰性の標的細胞株の両方を２Ｅ５／ｍＬで調製した。１００μＬのＪＮＬを１００μＬの標的細胞に添加した。ＪＮＬのみの対照については、標的細胞の代わりに１００μＬの培地を添加した。陽性対照の場合、ＪＮＬ細胞のみ又はＣＡＲ ＪＮＬ細胞を１×細胞刺激カクテルに添加し、３７℃のインキュベーター内で２４時間インキュベートした。１５０μＬの上清を９６ウェルプレートに収集し、遠心分離して細胞を除去した。１００μＬの上清をプレートからソリッドボトム黒色プレートに移した。次いで、１００μＬのＱＵＡＮＴＩ－ｌｕｃ ｌｕｃｉａ検出試薬を添加した。Ｅｎｖｉｓｉｏｎマルチプレートリーダーで読み取る前に、混合物を室温で５分間インキュベートした。
ビオチン化ｈＫ２、続いて、ストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥによってＣＡＲ発現を判定し、結果を図５Ａに示す。形質導入されたＪＮＬ細胞におけるＣＡＲ発現は、選択されたクローンの全てについて確認され、細胞の６０～７５％が異なるクローン及び親１１Ｂ６ ＣＡＲにわたって検出可能な発現を示した。指定のＣＡＲクローンを含有するＪＮＬ細胞及び非形質導入ＪＮＬ細胞（ＵＴＤ）を標的細胞株（ＶＣａｐ又はＤＵ１４５細胞）と共培養し、発光強度としてルシフェラーゼ活性を測定した。発光強度が抗原発現細胞の存在下でＵＴＤ細胞のレベルを１．５倍上回った場合、クローンは活性であるとみなした。
ＣＡＲコンストラクトとその同種細胞抗原（標的細胞上のｈＫ２）との間の結合によって、ＪＮＬ細胞においてルシフェラーゼが発現する（図５Ｂ）。指定のＣＡＲクローンを含有するＪＮＬ細胞及びＪＮＬ細胞（非形質導入、以後「ＵＴＤ」）を標的細胞株（ＶＣａｐ又はＤＵ１４５細胞）と共培養し、発光強度としてルシフェラーゼ活性を測定した。発光強度が抗原発現細胞の存在下でＵＴＤ細胞のレベルを１．５倍上回った場合、クローンは活性であるとみなした。１０個のクローン全て並びに親１１Ｂ６ ＣＡＲ ＨＬ及びＬＨについて、抗原依存性活性化はみられなかった。
実施例５：Ｔ細胞上の熱安定化ｓｃＦｖ ＣＡＲの発現
熱安定化１１Ｂ６ ＣＡＲ Ｔ細胞の機能を評価し、最高位の候補コンストラクトを選定するために、レンチウイルス形質導入を使用して、熱安定化１１Ｂ６及び親ｓｃＦｖをベースとするＣＡＲ－Ｔ細胞を作製した。感染多重度（ＭＯＩ）３で、初代ヒトＴ細胞に熱安定化１１Ｂ６及び親ｓｃＦｖベースのＣＡＲレンチウイルスを形質導入した。形質導入の１４日後に、ビオチン化ｈＫ２（１μｇ／ｍＬ）、続いて、ストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥによってＣＡＲ発現を判定した。
実験プロトコルは以下の通りである。
レンチウイルスパッケージングを行った。１５０ｍｍ２あたり１４Ｅ６個のＬｅｎｔｉ－Ｘ（商標）２９３Ｔ細胞を、丸底のＣｏｒｎｉｎｇ（商標）ＢｉｏＣｏａｔ（商標）コラーゲンＩでコーティングされた培養皿に播種し、ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ培地を使用して３７℃で一晩インキュベートした。
８０～８５％の理想的な培養密度のＬｅｎｔｉ－Ｘ（商標）２９３Ｔ細胞を用いて、以下を調製した。培養培地を２１ｍＬの２９３Ｔ成長培地で置き換えた。リポフェクタミン２０００を室温で希釈し、ＯｐｔｉＭＥＭを平衡化した。希釈したリポフェクタミン２０００を、混合プラスミドに滴下して添加し、十分に混合した。混合物を室温で２５分間インキュベートした。トランスフェクション混合物をＬｅｎｔｉ－Ｘ２９３Ｔ細胞に滴下し、プレートを穏やかに旋回させて混合した。混合物を３７℃のインキュベーター内でインキュベートした。トランスフェクションの２４時間後及び４８時間後にレンチウイルスを収集した。上記試薬を表２にまとめる。
Figure 2022535150000002
レンチウイルスの濃縮を以下のように行った。レンチウイルス含有上清を収集し、０．４５μｍの酢酸セルロースフィルターを通して濾過する前に過剰な２９３Ｔ細胞が辺りを浮遊している場合、５００×ｇで１０分間遠心分離した。上清を滅菌容器に移し、１／３の体積のＬｅｎｔｉ－Ｘ濃縮物（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、カタログ番号６３１２３２）と合わせ、穏やかに反転させることによって混合した。混合物を４℃で一晩インキュベートした。サンプルを、１，５００×ｇで４５分間、４℃で遠心分離したところ、遠心分離後に白色ペレットが見えた。ペレットを乱すことなく上清を慎重に除去した。１，５００×ｇで短時間遠心分離した後、残留上清をピペットで除去した。冷Ｔ細胞成長を使用して、ペレットを元の体積の１／１０に穏やかに再懸濁させた。ウイルスを２００μＬに分注し、直ちに－８０℃で保存した。
ウイルス力価測定は、以下のように行った。対数期のＳｕｐＴ１を完全ＲＰＭＩで成長させた。１ウェルあたり１００μＬ、２０，０００個／ｍＬのＳｕｐＴ１細胞を、平坦な９６ウェルプレートに播種した。次いで、ウイルス力価測定を９６ウェル丸底プレートで行った）。１００μＬの培地をプレートの全てのウェルに添加した。ウイルスのアリコートを、手で－８０℃の冷凍庫から解凍した。アリコートを上下にピペッティングして十分に混合し、５０μＬのウイルスを最初のウェルに添加し、続いて、十分に混合した。５０μＬのウイルスを次のウェルにピペッティングして入れることによって、連続１：３希釈を行った。次いで、５０μＬの培地を、一次Ａｂのみ、二次Ａｂのみ、及び非形質導入対照に添加した。各５０μＬを力価測定プレートからアッセイプレート内の１００μＬのＳｕｐＴ１細胞にマルチチャネルピペットで移し、３７℃で一晩インキュベートした。１００μＬの予熱した培地を各サンプルに添加し、更に２日間インキュベートした。フローサイトメトリーによって形質導入効率を求めた。サンプルを丸底９６ウェルプレートに移し、１４００ＲＰＭで３分間回転させた。上清を素早く廃棄し、続いてブロッティングして、フード内の過剰な培地を除去した。１５０μＬのＦＡＣＳバッファで洗浄を繰り返した。次いで、ＣＡＲコンストラクトに適した染色プロトコルを行った。フローサイトメトリー分析の前に、１５０μＬのＦＡＣＳバッファにサンプルを再懸濁させた。
ウイルス力価の計算：力価＝（ＣＡＲ陽性％／１００）×２×１０４×２０×希釈倍数
複数コピーの統合を除外するために、２０％に最も近い形質導入の力価が使用される。
Ｔ細胞活性化、形質導入、及び増殖を以下のように行った。ナイーブＴ細胞のバイアルを水浴中で解凍し、９ｍＬの予熱されたＴ細胞培地（ＴＣＭ ＣＴＳ ＯｐＴｍｉｚｅｒ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭ＋５％ヒト血清＋ＩＬ－２ １００ＩＵ／ｍＬ）を含有する１５ｍＬのコニカルチューブに滴下した。クライオバイアルを１ｍＬの培地で洗浄して最大数を回収し、室温で８分間、３００×ｇで回転させた。ペレットを新鮮な１０ｍＬのＴＣＭに再懸濁させ、カウントし、１ｍＬあたり１Ｅ６個の細胞になるように再懸濁させた。２４ウェルプレートに、１ウェル当たり５Ｅ５個の細胞を添加した。総体積が１ウェルあたり１ｍＬになるように、１ウェルあたり１．５×１０６個のＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを５００μＬの体積に添加した。活性化の２４時間後、ウイルスを室温で解凍した。ウイルスを感染多重度（ＭＯＩ）３で添加し、穏やかに旋回させて混合し、インキュベーターでプレートに戻した。（レンチウイルス機能力価は、ＳｕｐＴ１力価アッセイで以前に求めた。）ウイルスが添加されていない非形質導入（ＵＴＤ）のために１つのウェルを確保した。
形質導入の２４時間後、１ｍＬのＴＣＭを各ウェルに添加した。この時点（２日目）以降にペニシリン－ストレプトマイシンを添加した。３～５日目に、２ｍＬの細胞につき４ｍＬのＴＣＭを添加し、Ｔ２５組織培養処理フラスコに移した。フラスコをインキュベーター内に水平に配置した（３日目）。Ｔ細胞培養のために等体積のＴＣＭを添加した（４日目）。５～１４日目に、細胞を１日おきに確認し、生存率、サイズ、及び総細胞数を記録した。１ｍＬあたり１００万個の細胞になるように細胞密度を調整した。理想的な収集時間はドナー依存性であり、細胞サイズ及び拡大の倍率によって決定される。概ね、１００～２００倍の拡大で、ＭＯＸＩフローセルカウンターに基づいて、細胞サイズが８μｍ未満であったときに細胞を冷凍した。
レンチウイルス形質導入効率を、以下のように収集日に確認した。培養物を十分に混合した。１００μＬのＴ細胞を、１００μＬのＦＡＣＳバッファの入った９６ウェルプレートの対応するウェルに収集し、混合し、室温で３分間、１３００ＲＰＭで回転させた。細胞を２００μＬのＦＡＣＳバッファに再懸濁させ、４℃で遠心分離を繰り返した。
細胞を１００μＬのビオチン標識ｈＫ２（１μｇ／ｍＬ、ＦＡＣＳバッファで希釈）に再懸濁させ、氷上で３０分間インキュベートした。１００μＬのＦＡＣＳバッファを添加し、４℃でスピン洗浄した。更に２００μＬのＦＡＣＳバッファを添加した後、スピン洗浄を繰り返した。二次抗体ＳＡ－ＰＥ（１：２５０）、ｌｉｖｅ ｄｅａｄ ｆｉｘａｂｌｅ ｓｔａｉｎ（１：５００）、αＣＤ３、αＣＤ４、及びαＣＤ８抗体を含有するマスター溶液１００μＬでの染色を、氷上で３０分間行った。１００μＬのＦＡＣＳバッファを添加し、４℃でスピン洗浄し、廃棄し、４℃でスピン洗浄する前に２００μＬのＦＡＣＳバッファに再懸濁させた。フローサイトメトリーによって分析する前に、サンプルを１００μＬのＦＡＣＳバッファに再懸濁させた。
細胞の収集及び冷凍は以下のように行った。最終細胞数を求めた。培養物を収集し、３００ｘｇで１０分間、室温で遠心分離した。５０ｍＬのコニカルチューブに適合するように、培養物をより少ない体積の培地に再懸濁させた。チューブを４℃で１０分間マグネットに入れ、「脱ビーズ」した。細胞をチューブから穏やかに移してビーズ／マグネットの摂動を最小化し、正確な体積を記録した。カウントを繰り返した。遠心分離を３００×ｇで１０分間行い、上清を廃棄した。冷却容器内のＣＳ－１０ ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）細胞冷凍保存培地中で細胞を冷凍した。直ちに容器を－８０℃に２４～４８時間移した後、液体窒素中で永続的に保存した。結果を図６に示し、形質導入Ｔ細胞の表面上のｈＫ２ ＣＡＲ発現を確認する。分析した１０個の熱安定化クローン及び親１１Ｂ６ ＨＬ及びＬＨの各々によって検出されたｈＫ２ ＣＡＲ＋Ｔ細胞の百分率（陽性％）の要約を提供する。図示されるように、異なるクローンは、１７．９％～４２．７％の範囲の異なるＣＡＲ発現レベルを有する。全てのＣＡＲ Ｔ＋細胞を、後続の機能アッセイのために等しいＣＡＲ＋Ｔ細胞に対して正規化した。
実施例６：１１Ｂ６熱安定化ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞による腫瘍細胞の殺傷
１１Ｂ６熱安定化ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞を、抗原依存性細胞傷害性についてリアルタイムＩｎｃｕＣｙｔｅ殺傷アッセイで評価した。熱安定化ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞及び親１１Ｂ６ ＣＡＲ－Ｔ細胞を、ＶＣａＰ細胞（図７Ａ）及びＰＣ３細胞（図７Ｂ）と８８時間コインキュベートした。エフェクター対標的（Ｅ／Ｔ）比は、ＣＡＲ発現データに基づいて計算した（図６）。標的細胞は、リアルタイムでＩｎｃｕＣｙｔｅイメージングシステムによって測定された赤色核色素を安定的に発現していた。腫瘍細胞成長阻害（％）＝（初期生存標的細胞数－現時点の生存標的細胞数）／初期生存細胞数×１００（％）。
また、ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞を、抗原依存性細胞傷害性についてリアルタイムＩｎｃｕＣｙｔｅ腫瘍殺傷アッセイで評価した。熱安定化ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞及び親１１Ｂ６ ＣＡＲ－Ｔ細胞を、ＣＡＲ発現データに基づいて計算した１：１又は０．５：１のエフェクター：標的比で８８時間、ＶＣａＰ細胞（図７Ｃ）又はＰＣ３細胞（図７Ｄ）とコインキュベートした。ＣＡＲ１７、ＣＡＲ１８、ＣＡＲ１９、及びＣＡＲ２０を形質導入したＣＡＲ－Ｔ細胞を、Ｔ細胞上のＣＡＲ発現に基づいて計算した１：１又は０．５：１のエフェクター対標的（ＥＴ）比で９６時間、ＨＫ２陽性ＶＣａＰ細胞及びｈＫ２陰性ＤＵ１４５細胞とコインキュベートした。ＣＡＲ１７、ＣＡＲ１８、ＣＡＲ１９、及びＣＡＲ２０を形質導入したＣＡＲ－Ｔ細胞の経時的な腫瘍細胞成長阻害パーセントを、ＶＣａｐ細胞については図７Ｅに、ＤＵ１４５細胞については図７Ｆに示す。標的細胞は、リアルタイムでＩｎｃｕＣｙｔｅイメージングシステムによって測定された赤色核色素を安定的に発現していた。腫瘍細胞成長阻害（％）＝（初期生存標的細胞数－現時点の生存標的細胞数）／初期生存細胞数×１００（％）。試験したＣＡＲ－Ｔ細胞は、およそ１００％のＴＧＩを達成したが、非形質導入対照は、いかなるＴＧＩも示さなかった。ｈＫ２陰性ＤＵ１４５細胞中の試験したＣＡＲ－Ｔ細胞では、ＴＧＩは観察されなかった。
実施例７：１１Ｂ６熱安定化ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞によるサイトカイン産生
１：１のＥ／Ｔ比でＶＣａｐ細胞と共にｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞を一晩（およそ２０時間）共培養したものから上清を回収し、１３－ｐｌｅｘ Ｍｉｌｌｉｐｌｅｘヒト高感度Ｔ細胞キット（ＨＳＴＣＭＡＧ２８ＳＰＭＸ１３）を使用して分析した。ｈＫ２ ＣＡＲ改変Ｔ細胞は、ｈＫ２発現ＶＣａｐ細胞との共培養中にサイトカインを分泌するが、非形質導入Ｔ細胞（ＵＴＤ）では最少である。ｈＫ２ ｌｅｎｔｉ－ＣＡＲ－Ｔ細胞によるサイトカイン放出の結果を図８に示す。
１：１のＥ／Ｔ比でＶＣａｐ、ＤＵ１４５（５Ｅ４個の細胞）細胞と共にｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞を一晩（およそ２０時間）共培養したものから上清を回収した。ｈＫ２ ＣＡＲ改変Ｔ細胞は、ｈＫ２発現ＶＣａｐ細胞との共培養中にＩＦＮ－γを分泌するが、ｈＫ２－陰性ＤＵ１４５細胞との共培養中には分泌しない。ＣＤ３／２８ビーズで刺激したＴ細胞及びＴ細胞のみをそれぞれ陽性対照及び陰性対照として使用した。ｈＫ２ ｌｅｎｔｉ－ＣＡＲ－Ｔ細胞によるＩＦＮ－γ放出を図９に示す。（実施例３のプロトコルを使用した。）デュープリケートの培養からの平均ＩＦＮ－γ濃度±ＳＤ（ｐｇ／ｍＬ）を示す。ＣＤ３／２８ビーズで刺激したＴ細胞及びＴ細胞のみをそれぞれ陽性対照及び陰性対照として使用した。図示されるように、異なる熱的安定化ＣＡＲ Ｔ細胞は、ｈＫ２（＋）ＶＣａｐ細胞と共培養すると異なる量のＩＦＮ－ガンマを産生し、これは、細胞媒介免疫応答中の細胞傷害性活性に関連している。
実施例８：ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞の増殖
ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞を増殖アッセイで評価した。Ｔ細胞増殖は、インビボ免疫機能の重要なインビトロパラメータである。熱安定化１１Ｂ６ ＣＡＲ Ｔ細胞の機能を更に評価し、最高位の候補コンストラクトを選定するために、熱安定化１１Ｂ６及び親ｓｃＦｖベースのＣＡＲ－Ｔ細胞をＣＴＶで標識して、Ｔ細胞増殖を評価した。
ｈＫ２ ＣＡＲ及び非形質導入（ＵＴＤ）Ｔ細胞を、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ、５μＭ）で標識し、ｈＫ２（＋）ＶＣａｐ及びｈＫ２（－）ＤＵ１４５細胞と共培養した。共培養の５日後、細胞を収集し、ＣＤ３、ＣＤ２５、ＮｅａｒＩＲ ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ Ｄｙｅ、及びｈＫ２ＣＡＲで染色した。Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアを備えるＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターでフローサイトメトリー分析を行った。リンパ球を生ＣＤ３によって同定し、ＣＴＶ色素希釈及び活性化マーカーＣＤ２５を有するＣＡＲ－Ｔ細胞の頻度を求めた。図示されるように、ｈＫ２ ＣＡＲ＋Ｔ細胞でゲーティングすることにより、ｈＫ２（＋）Ｖｃａｐ細胞は、全てのＣＡＲコンストラクトで遺伝子操作されたＴ細胞の増殖及び活性化マーカーＣＤ２５のアップレギュレーションを促進したが、ｈＫ２（－）ＤＵ１４５細胞は促進しなかった（図１０Ａ、１０Ｃ）。ＣＤ３／２８ビーズで刺激したＴ細胞及びＴ細胞のみをそれぞれ陽性対照及び陰性対照として使用した。任意の刺激なしのＴ細胞のみは増殖せず、ＣＤ３／２８ビーズで刺激されたＴ細胞は等価な増殖パターンを示した（図１０Ｂ、１０Ｄ）。図１０Ｅに示されるように、ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＶＣａｐ細胞と５日間共培養した後に、ＣＤ３／２８ビーズ陽性対照よりもロバストに増殖する。異なるＣＡＲコンストラクトで遺伝子操作されたＴ細胞は、異なる増殖活性を有し、異なるＣＡＲ＋Ｔ細胞数を示した。ＣＡＲ＋Ｔ細胞数は、３つの技術的複製物からの平均絶対細胞数＋／－ＳＥＭに基づいていた。
プロトコルは以下の通りである。腫瘍細胞Ｖｃａｐ及びＤＵ１４５を収集し、ＰＢＳで２回洗浄し、腫瘍細胞の増殖をブロックするために、３７℃のインキュベーターにおいて１．５時間、１００ｕｇ／ｍＬのマイトマイシンＣ（ＭＭＣ）を含有するＰＢＳ中１０Ｅ６／ｍＬで再懸濁させた。２０μＬのＤＭＳＯをＣＴＶ染色溶液のバイアルに添加した。５μＬの溶液を、５ｍＬ（１：１０００）のＰＢＳ（３７℃に加温）に希釈して、５μＭの染色溶液を提供した。２Ｅ６個のＴ細胞をカウントし、回収し、ＰＢＳで２回洗浄し、４Ｅ６／ｍＬ（０．５ｍＬ）で再懸濁させた。等体積（０．５ｍＬ）のＣＴＶ染色溶液を添加した。細胞を３７℃で２０分間インキュベートした。次いで、４ｍＬのＰＲＭＩ＋２０％ＦＢＳを細胞に添加して、任意の非結合色素を吸収させた。細胞を５分間インキュベートし、４００×ｇで５分間遠心分離した。細胞ペレットを、予熱しておいたＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ培地に再懸濁させた。Ｔ細胞をカウントし、１Ｅ５個の細胞（１００ｕＬ）を９６ウェル平底プレートに播種した。
その間に、ＭＭＣ処理した腫瘍細胞ｈＫ２（＋）ＶＣａｐ及びＨＫ２（－）ＤＵ１４５を回収し、１．５時間後にカウントし、次いで、１Ｅ６／ｍＬで再懸濁させた。１Ｅ５個の細胞（１００μＬ）を９６ウェルプレート内でＴ細胞と共培養した。Ｔ細胞のみ、及び３：１の比のＣＤ３／２８ビーズ対細胞を添加したＴ細胞を、それぞれ陰性対照及び陽性対照として使用した。
５日間共培養した後、全ての細胞を各ウェルから回収した。細胞を遠心分離し、４００×ｇで５分間２回洗浄し、次いで、９６ウェルＵ底プレートにおいてｈＫ２ＣＡＲ、ＣＤ３、ＣＤ８、及びＣＤ２５、ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ（Ｎｅａｒ－ＩＲ）に染色した。洗浄後、全ての細胞を１００μＬのＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘ（商標）固定バッファ（５０ｕＬのＦＡＣＳバッファ＋５０ｕＬの固定バッファ）を使用して１０分間固定した。染色されたサンプルを、インキュベーション期間の終了後にマルチカラーフローサイトメトリーによって分析した。
データ分析は、以下のように行った。ＣＴＶヒストグラムを調製した。単独で培養されたＴ細胞の右端ピーク（ＣＴＶ明）、及び集団の残りを捕捉するためのＣＴＶ希釈ゲートを包含するように、ＣＴＶ未希釈ゲートを設定した。これを全てのサンプルに適用した。
実施例９：抗ＨＫ２ ｓｃＦｖを有するｈＫ２ ｓｃＦｖ ＣＡＲの構築及び発現
新規抗ＨＫ２ ｓｃＦｖに由来するｓｃＦｖを含むｈＫ２ ＣＡＲコンストラクトを、図１１Ａに示すように構築した。
これら新規抗ＨＫ２ ｓｃＦＶ ＣＡＲ Ｔ細胞の機能を評価し、最高位の候補コンストラクトを選定するために、レンチウイルス形質導入を使用して、ｈＫ２ ＨＬ及び￥ ＬＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞を作製した。感染多重度（ＭＯＩ）３で、初代ヒトＴ細胞にｈＫ２ ＣＡＲ ＨＬ及びＬＨ、新規ｓｃＦｖベースのＣＡＲレンチウイルスを形質導入した。形質導入の１４日後に、ビオチン化ｈＫ２（１μｇ／ｍＬ）、続いて、ストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥによってＣＡＲ発現を判定した。
実験プロトコルは以下の通りである。
レンチウイルスパッケージングを行った。１５０ｍｍ２あたり１４Ｅ６個のＬｅｎｔｉ－Ｘ（商標）２９３Ｔ細胞を、丸底のＣｏｒｎｉｎｇ（商標）ＢｉｏＣｏａｔ（商標）コラーゲンＩでコーティングされた培養皿に播種し、ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ培地を使用して３７℃で一晩インキュベートした。
８０～８５％の理想的な培養密度のＬｅｎｔｉ－Ｘ（商標）２９３Ｔ細胞を用いて、以下を調製した。培養培地を２１ｍＬの２９３Ｔ成長培地で置き換えた。リポフェクタミン２０００を室温で希釈し、ＯｐｔｉＭＥＭを平衡化した。希釈したリポフェクタミン２０００を、混合プラスミドに滴下して添加し、十分に混合した。混合物を室温で２５分間インキュベートした。トランスフェクション混合物をＬｅｎｔｉ－Ｘ２９３Ｔ細胞に滴下し、プレートを穏やかに旋回させて混合した。混合物を３７℃のインキュベーター内でインキュベートした。トランスフェクションの２４時間後及び４８時間後にレンチウイルスを収集した。上記試薬を表３にまとめる。
Figure 2022535150000003
レンチウイルスの濃縮を以下のように行った。レンチウイルス含有上清を収集し、０．４５μｍの酢酸セルロースフィルターを通して濾過する前に過剰な２９３Ｔ細胞が辺りを浮遊している場合、５００×ｇで１０分間遠心分離した。上清を滅菌容器に移し、１／３の体積のＬｅｎｔｉ－Ｘ濃縮物（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、カタログ番号６３１２３２）と合わせ、穏やかに反転させることによって混合した。混合物を４℃で一晩インキュベートした。サンプルを、１，５００×ｇで４５分間、４℃で遠心分離したところ、遠心分離後に白色ペレットが見えた。ペレットを乱すことなく上清を慎重に除去した。１，５００×ｇで短時間遠心分離した後、残留上清をピペットで除去した。冷Ｔ細胞成長を使用して、ペレットを元の体積の１／１０に穏やかに再懸濁させた。ウイルスを２００μＬに分注し、直ちに－８０℃で保存した。
ウイルス力価測定は、以下のように行った。対数期のＳｕｐＴ１を完全ＲＰＭＩで成長させた。１ウェルあたり１００μＬ、２０，０００個／ｍＬのＳｕｐＴ１細胞を、平坦な９６ウェルプレートに播種した。次いで、ウイルス力価測定を９６ウェル丸底プレートで行った）。１００μＬの培地をプレートの全てのウェルに添加した。ウイルスのアリコートを、手で－８０℃の冷凍庫から解凍した。アリコートを上下にピペッティングして十分に混合し、５０μＬのウイルスを最初のウェルに添加し、続いて、十分に混合した。５０μＬのウイルスを次のウェルにピペッティングして入れることによって、連続１：３希釈を行った。次いで、５０μＬの培地を、一次Ａｂのみ、二次Ａｂのみ、及び非形質導入対照に添加した。各５０μＬを力価測定プレートからアッセイプレート内の１００μＬのＳｕｐＴ１細胞にマルチチャネルピペットで移し、３７℃で一晩インキュベートした。１００μＬの予熱した培地を各サンプルに添加し、更に２日間インキュベートした。フローサイトメトリーによって形質導入効率を求めた。サンプルを丸底９６ウェルプレートに移し、１４００ＲＰＭで３分間回転させた。上清を素早く廃棄し、続いてブロッティングして、フード内の過剰な培地を除去した。１５０μＬのＦＡＣＳバッファで洗浄を繰り返した。次いで、ＣＡＲコンストラクトに適した染色プロトコルを行った。フローサイトメトリー分析の前に、１５０μＬのＦＡＣＳバッファにサンプルを再懸濁させた。
ウイルス力価の計算：力価＝（ＣＡＲ陽性％／１００）×２×１０４×２０×希釈倍数
複数コピーの統合を除外するために、２０％に最も近い形質導入の力価が使用される。
Ｔ細胞活性化、形質導入、及び増殖を以下のように行った。ナイーブＴ細胞のバイアルを水浴中で解凍し、９ｍＬの予熱されたＴ細胞培地（ＴＣＭ ＣＴＳ ＯｐＴｍｉｚｅｒ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭ＋５％ヒト血清＋ＩＬ－２ １００ＩＵ／ｍＬ）を含有する１５ｍＬのコニカルチューブに滴下した。クライオバイアルを１ｍＬの培地で洗浄して最大数を回収し、室温で８分間、３００×ｇで回転させた。ペレットを新鮮な１０ｍＬのＴＣＭに再懸濁させ、カウントし、１ｍＬあたり１Ｅ６個の細胞になるように再懸濁させた。２４ウェルプレートに、１ウェル当たり５Ｅ５個の細胞を添加した。総体積が１ウェルあたり１ｍＬになるように、１ウェルあたり１．５×１０６個のＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを５００μＬの体積に添加した。活性化の２４時間後、ウイルスを室温で解凍した。ウイルスを感染多重度（ＭＯＩ）３で添加し、穏やかに旋回させて混合し、インキュベーターでプレートに戻した。（レンチウイルス機能力価は、ＳｕｐＴ１力価アッセイで以前に求めた。）ウイルスが添加されていない非形質導入（ＵＴＤ）のために１つのウェルを確保した。
形質導入の２４時間後、１ｍＬのＴＣＭを各ウェルに添加した。この時点（２日目）以降にペニシリン－ストレプトマイシンを添加した。３～５日目に、２ｍＬの細胞につき４ｍＬのＴＣＭを添加し、Ｔ２５組織培養処理フラスコに移した。フラスコをインキュベーター内に水平に配置した（３日目）。Ｔ細胞培養のために等体積のＴＣＭを添加した（４日目）。５～１４日目に、細胞を１日おきに確認し、生存率、サイズ、及び総細胞数を記録した。１ｍＬあたり１００万個の細胞になるように細胞密度を調整した。理想的な収集時間はドナー依存性であり、細胞サイズ及び拡大の倍率によって決定される。概ね、１００～２００倍の拡大で、ＭＯＸＩフローセルカウンターに基づいて、細胞サイズが８μｍ未満であったときに細胞を冷凍した。
レンチウイルスの形質導入効率を、以下のように収集日に確認した。培養物を十分に混合した。１００μＬのＴ細胞を、１００μＬのＦＡＣＳバッファの入った９６ウェルプレートの対応するウェルに収集し、混合し、室温で３分間、１３００ＲＰＭで回転させた。細胞を２００μＬのＦＡＣＳバッファに再懸濁させ、４℃で遠心分離を繰り返した。
細胞を１００μＬのビオチン標識ｈＫ２（１μｇ／ｍＬ、ＦＡＣＳバッファで希釈）に再懸濁させ、氷上で３０分間インキュベートした。１００μＬのＦＡＣＳバッファを添加し、４℃でスピン洗浄した。更に２００μＬのＦＡＣＳバッファを添加した後、スピン洗浄を繰り返した。二次抗体ＳＡ－ＰＥ（１：２５０）、ｌｉｖｅ ｄｅａｄ ｆｉｘａｂｌｅ ｓｔａｉｎ（１：５００）、αＣＤ３、αＣＤ４、及びαＣＤ８抗体を含有するマスター溶液１００μＬでの染色を、氷上で３０分間行った。１００μＬのＦＡＣＳバッファを添加し、４℃でスピン洗浄し、廃棄し、４℃でスピン洗浄する前に２００μＬのＦＡＣＳバッファに再懸濁させた。フローサイトメトリーによって分析する前に、サンプルを１００μＬのＦＡＣＳバッファに再懸濁させた。
細胞の収集及び冷凍は以下のように行った。最終細胞数を求めた。培養物を収集し、３００ｘｇで１０分間、室温で遠心分離した。５０ｍＬのコニカルチューブに適合するように、培養物をより少ない体積の培地に再懸濁させた。チューブを４℃で１０分間マグネットに入れ、「脱ビーズ」した。細胞をチューブから穏やかに移してビーズ／マグネットの摂動を最小化し、正確な体積を記録した。カウントを繰り返した。遠心分離を３００×ｇで１０分間行い、上清を廃棄した。冷却容器内のＣＳ－１０ ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）細胞冷凍保存培地中で細胞を冷凍した。直ちに容器を－８０℃に２４～４８時間移した後、液体窒素中で永続的に保存した。結果を図１１Ｂに示し、形質導入Ｔ細胞の表面上のｈＫ２ ＣＡＲ発現を確認する。分析した新規ＫＬ２Ｂ４１３ ＨＬ及びＬＨ、並びに再ヒト化１１Ｂ６ ＫＬ２Ｂ３５９ ＨＬ及びＬＨ ＣＡＲＳによって検出されたｈＫ２ ＣＡＲ＋Ｔ細胞（％陽性）の百分率の概要を提供する。図示されるように、異なるクローンは、４５．１％～５９．９％の範囲の異なるＣＡＲ発現レベルを有する。全てのＣＡＲ Ｔ＋細胞を、後続の機能アッセイのために等しいＣＡＲ＋Ｔ細胞に対して正規化した。
実施例１０：抗ｈＫ２抗体及びｓｃＦｖの作製
親ｍ１１Ｂ６抗体のヒト化からの抗体作製。
親マウス抗ＨＫ２抗体、ｍ１１Ｂ６は、Ｖａｅｉｓａｅｎｅｎら（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ５０：９，１６０７－１６１７（２００４））に記載されている。ヒト化１１Ｂ６（本明細書ではｈｕ１１Ｂ６と称する）は、米国特許第９，３４５，７８２号及び同第１０，１００，１２５号において作製及び記載されている。
ｈｕ１１Ｂ６の遺伝子操作を開始して、改善された熱安定性などの改善された特性を有する追加の抗ＨＫ２抗体を作製した。モデリングを使用してｈｕ１１Ｂ６の熱安定性を改善するために場合により変更させることができるｈｕ１１Ｂ６フレームワークにおける残基の位置を同定した。同定された位置は、ＶＨにおける残基Ｐ４１、Ｉ４９、Ｍ７０、及びＡ８８、並びにＶＬにおけるＳ８０、Ｌ８２、Ａ８８、及びＹ９１であった（残基付番は、配列番号５のｈｕ１１Ｂ６＿ＶＨ及び配列番号２のｈｕ１１Ｂ６＿ＶＬのアミノ酸配列に従った）。
可変領域のうちの１つがコンビナトリアルライブラリを表し、第２のものが親ｈｕ１１Ｂ６ＶＨ又はＶＬである、ＶＨ－リンカー－ＶＬ配向で、バイナリコンビナトリアルｓｃＦｖライブラリを作製した。ＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳ（配列番号７）のリンカー配列を使用して、ＶＨ／ＶＬ領域をコンジュゲートさせた。遺伝子操作されたｓｃＦｖを大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）で発現させ、上清中の生成されたｓｃＦｖを、ＥＬＩＳＡによってヒトｈＫ２への結合について試験し、ｈｕ１１Ｂ６の結合と比較した。ｈｕ１１Ｂ６と同等の結合を示す任意の新たなバリアントを集約し、５５℃、６０℃、及び６５℃で１０分間、上清をインキュベートした後にヒトｈＫ２への結合について更に試験した。５５℃、６０℃、及び６５℃でインキュベートした後にｈｕ１１Ｂ６と同等の結合を保持しており、熱安定性が改善していた分子を、両配向（ＶＨ－リンカー－ＶＬ；ＶＬ－リンカー－ＶＨ）でマトリクス化し、更なる特性評価のために哺乳類ｓｃＦｖに変換した。マトリックス化したｓｃＦｖもＣＡＲコンストラクトに組み込み、実施例１１に更に記載する通り更に特性評価した。
加えて、親マウス１１Ｂ６の別のヒト化を、Ｓｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ（ＭＡｂｓ．２０１５；７（４）：７７８－９１）によって概説されているアプローチに従って、広範囲に及ぶ生殖系列の多様性で実施し、増強された熱安定性についてバリアントを慎重にスクリーニングした。配列保存に基づいて、ヒト重鎖生殖系列ＩＧＨＶ４－３０及び軽鎖生殖系列ＩＧＫＶ３Ｄ－１１を、フレームワーク適合について選択した。体細胞超変異部位及びマウス／ヒト生殖細胞系列の多様性の選択セットを含む残基を用いて、バイナリｓｃＦｖライブラリを構築した。バリアントをクローニングし、上記の通り大腸菌で発現させた。増強された熱安定性について、シングルポイントＥＬＩＳＡにおいて異なる温度で上清をスクリーニングした。マウス／ヒトキメラ１１Ｂ６ ｓｃＦＶを親対照として使用した。マウス１１Ｂ６と同様の結合活性及び６７℃のＴｍ値を維持していたクローンＫＬ２Ｂ３５９を、追加のプロファイリングのためにｓｃＦｖ－Ｆｃ及びＣＡＲ－Ｔに変換した。ＳＰＲによって測定されたＫＬ２Ｂ３５９のｈＫ２への親和性（ＫＤ）は、約０．７～１ｎＭであった。このキャンペーンからＨＣＦ３－ＬＣＤ６、ＨＣＧ５－ＬＣＢ７、ＫＬ２Ｂ３５７、ＫＬ２Ｂ３５８、及びＫＬ２Ｂ３６０も得られ、機能性について更に特性評価した。
ヒト免疫グロブリン遺伝子座を発現するトランスジェニックマウス（Ａｂｌｅｘｉｓ（登録商標））及びトランスジェニックラット（ＯｍｎｉＲａｔ（登録商標））を使用した抗体作製。
ＯｍｎｉＲａｔ（登録商標）は、キメラヒト／ラットＩｇＨ遺伝子座（ラットＣＨ遺伝子座に連結された天然立体配置の２２のヒトＶＨ、全てのヒトＤ及びＪＨセグメントを含む）を完全なヒトＩｇＬ遺伝子座（Ｊκ－Ｃκに連結された１２のＶκ及びＪλ－Ｃλに連結された１６のＶλ）と共に含有する。（例えば、Ｏｓｂｏｒｎ，ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９０（４）：１４８１－１４９０を参照されたい）。したがって、ラットは、ラット免疫グロブリンの低減した発現を呈し、導入されたヒト重鎖及び軽鎖の導入遺伝子は、免疫化に応答して、クラススイッチ及び体細胞変異を受けて、完全ヒト可変領域を有する高親和性キメラヒト／ラットＩｇＧモノクローナル抗体を生成した。ＯｍｎｉＲａｔ（登録商標）の調製及び使用、並びにこのようなラットが有しているゲノム改変は、国際公開第１４／０９３９０８号に記載されている。
Ａｂｌｅｘｉｓ（登録商標）マウスは、ヒトＣＨ１及びＣＬドメインに連結されたヒト可変ドメイン、キメラヒト／マウスヒンジ領域、及びマウスＦｃ領域を有する抗体を生成する。Ａｂｌｅｘｉｓカッパマウス及びラムダマウス系統は、以下に記載されるように、その重鎖がヒト又はマウスのいずれであるかによって区別される。カッパマウスによって生成される抗体は、マウスＶＨ、ＤＨ及びＪＨエキソン及びマウスＶκ、Ｊκ、及びＣκエキソンに由来する配列を欠いている。内因性マウスＩｇλは、カッパマウスにおいて活性である。ヒトＩｇκ鎖は、およそ９０～９５％のナイーブレパートリーを含み、マウスＩｇλ鎖は、この系統においておよそ５～１０％のナイーブレパートリーを含む。ラムダマウスによって生成される抗体は、マウスＶＨ、ＤＨ及びＪＨエキソン及びマウスＶλ、Ｊλ、及びＣλエキソンに由来する配列を欠いている。内因性マウスＩｇλは、ラムダマウスにおいて活性である。ヒトＩｇλ鎖は、およそ４０％のナイーブレパートリーを含み、マウスＩｇκ鎖は、およそ６０％のナイーブレパートリーを含む。Ａｂｌｅｘｉｓ（登録商標）の調製及び使用、並びにこのようなマウスが保有しているゲノム改変は、国際公開第１１／１２３７０８号に記載されている。
Ａｂｌｅｘｉｓマウス及びＯｍｎｉＲａｔラットを可溶性完全長ＫＬＫ２タンパク質（ヒトカリクレイン－２ ６－Ｈｉｓタンパク質）で免疫した。
ヒトカリクレイン－２ ６－Ｈｉｓタンパク質
ＶＰＬＩＥＧＲＩＶＧＧＷＥＣＥＫＨＳＱＰＷＱＶＡＶＹＳＨＧＷＡＨＣＧＧＶＬＶＨＰＱＷＶＬＴＡＡＨＣＬＫＫＮＳＱＶＷＬＧＲＨＮＬＦＥＰＥＤＴＧＱＲＶＰＶＳＨＳＦＰＨＰＬＹＮＭＳＬＬＫＨＱＳＬＲＰＤＥＤＳＳＨＤＬＭＬＬＲＬＳＥＰＡＫＩＴＤＶＶＫＶＬＧＬＰＴＱＥＰＡＬＧＴＴＣＹＡＳＧＷＧＳＩＥＰＥＥＦＬＲＰＲＳＬＱＣＶＳＬＨＹＳＥＫＶＴＥＦＭＬＣＡＧＬＷＴＧＧＫＤＴＣＧＧＤＳＧＧＰＬＶＣＮＧＶＬＱＧＩＴＳＷＧＰＥＰＣＡＬＰＥＫＰＡＶＹＴＫＶＶＨＹＲＫＷＩＫＤＴＩＡＡＮＰＨＨＨＨＨＨ（配列番号３１９）
Ａｂｌｅｘｉｓマウス及びＯｎｉＲａｔラット由来のリンパ球をリンパ節から抽出し、コホートごとに融合を行った。細胞を合わせ、ＣＤ１３８発現について選別した。可溶性ｈＫ２抗原を使用してハイスループット小型化ＭＳＤフォーマットで、ハイブリドーマスクリーニングを実施した。およそ＞３００個のサンプルがｈＫ２バインダーであると同定された。Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ ＳＰＲによる単一サイクル速度論法によって、＞３００個の抗ｈＫＬＫ２上清サンプルのヒトＫＬＫ２タンパク質への結合を測定した。更に、上清サンプルをヒトＫＬＫ３タンパク質への結合についても同様に試験した。並行して、上清を、フローサイトメトリーによって、ＫＬＫ２発現細胞株ＶＣａｐ及び陰性細胞株ＤＵ１４５への結合についても試験した。選択された細胞バインダーを、上記の通り、ＶＨ－ＶＬ及びＶＬ／ＶＨの両配向におけるｓｃＦｖ変換及び熱安定性試験に進めた。Ａｂｌｅｘｉｓマウス免疫キャンペーンから、ＫＬ２Ｂ４１３、ＫＬ２Ｂ３０、ＫＬ２Ｂ５３、及びＫＬ２Ｂ２４２が得られた。ＯｍｎｉＲａｔ免疫キャンペーンから、ＫＬ２Ｂ４６７及びＫＬ２Ｂ４９４が得られた。
上記の様々な免疫化及びヒト化キャンペーンを通して生成された抗体を、ｆａｂフォーマット、ｍＡｂフォーマット、ＶＨ－リンカーＶＬ配向のｓｃＦｖフォーマット、又はＶＬ－リンカー－ＶＨ配向のｓｃＦｖフォーマットで発現させ、以下に記載の通り更に分析した。上記配列番号７のリンカー配列を使用して、ＶＨ／ＶＬ領域をコンジュゲートさせた。
実施例１１．抗ＫＬＫ２抗体の構造的特性評価
細胞内アッセイにおいて最も高い性能を示した抗体可変ドメイン及びｓｃＦｖ抗体断片の配列を本明細書に提供する。可変ドメインは、Ｆａｂフォーマット、ＶＨ－リンカーＶＬ配向のｓｃＦｖフォーマット、又はＶＬ－リンカー－ＶＨ配向のｓｃＦｖフォーマットで発現させた。
可変ドメインＶＨ、ＶＬ、及びＣＤＲ
表４は、選択された抗ｈＫ２抗体のＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列を示す。表５は、選択された抗ｈＫ２選択抗体のＫａｂａｔ ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を示す。表６は、選択された抗ｈＫ２抗体のＫａｂａｔ ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を示す。表７は、選択された抗ｈＫ２抗体のＡｂＭ ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を示す。表８は、抗ｈＫ２のＡｂＭ ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を示す。表９は、選択されたｈＫ２抗体の可変ドメイン配列及び配列番号をまとめる。表１０は、ＶＨ及びＶＬ領域のタンパク質及びＤＮＡの配列番号を示す。
Figure 2022535150000004
Figure 2022535150000005
Figure 2022535150000006
Figure 2022535150000007
Figure 2022535150000008
Figure 2022535150000009
Figure 2022535150000010
Figure 2022535150000011
Figure 2022535150000012
Figure 2022535150000013
Figure 2022535150000014
Figure 2022535150000015
Figure 2022535150000016
コンセンサスＶＨ及びＶＬ配列
図１７Ａは、ｍｕ１１Ｂ６、ｈｕ１１Ｂ６、ＫＬ２Ｂ３５７、ＫＬ２Ｂ３５８、ＫＬ２Ｂ３５９、ＫＬ２Ｂ３６０、ＨＣＦ３、及びＨＣＧ５のＶＨドメインの配列アラインメントを示す。図２は、ｍｕ１１Ｂ６、ｈｕ１１Ｂ６、ＫＬ２Ｂ３５７、ＫＬ２Ｂ３５８、ＫＬ２Ｂ３５９、ＫＬ２Ｂ３６０、ＬＤＣ６、及びＬＣＢ７のＶＬドメインの配列アラインメントを示す。配列番号３４４及び配列番号３４５のコンセンサスアミノ酸配列を、それぞれＶＨ及びＶＬドメインについて決定した。ＨＣＤＲ及びＬＣＤＲ残基には下線を付す。
配列番号３４４
Figure 2022535150000017
式中、
Ｘ１は、Ｄ若しくはＱである；
Ｘ２は、Ａ若しくはＴである；
Ｘ３は、Ｐ若しくはＦである；
Ｘ４は、Ｉ若しくはＭである；
Ｘ５は、Ａ若しくはＰである；又は
Ｘ６は、Ｖ若しくはＡである。
配列番号３４５
Figure 2022535150000018
Ｘ１は、Ｄ又はＥであり；
Ｘ２は、Ｄ又はＡであり；
Ｘ３は、Ｓ又はＴであり；
Ｘ４は、Ａ又はＳであり；
Ｘ５は、Ｖ又はＬであり；
Ｘ６は、Ｌ又はＰであり；
Ｘ７は、Ｉ又はＬであり；
Ｘ８は、Ｎ又はＳであり；
Ｘ９は、Ｒ又はＫであり；
Ｘ１０は、Ｋ又はＲであり；
Ｘ１１は、Ｖ又はＲであり；
Ｘ１２は、Ｖ又はＩであり；
Ｘ１３は、Ａ又はＤであり；
Ｘ１４は、Ｑ又はＳである。
Ｘ１５は、Ｐ又はＡであり；
Ｘ１６は、Ｆ又はＶであり；
Ｘ１７は、Ｙ又はＦであり；
Ｘ１８は、Ｑ又はＧであり；
Ｘ１９は、Ｌ又はＶである。
Ｆａｂ－Ｆｃ及びｓｃＦｖ
ｈＫ２特異的ＶＨ／ＶＬ領域を、ＶＨ－ＣＨ１－リンカーＣＨ２－ＣＨ３及びＶＬ－ＣＬとして遺伝子操作し、ＩｇＧ２若しくはＩｇＧ４として発現させたか、又はＶＨ－リンカー－ＶＬ若しくはＶＬ－リンカー－ＶＨ配向のいずれかのｓｃＦｖとして遺伝子操作した。ｓｃＦｖに使用したリンカーは、上記配列番号７のリンカーであった。ｓｃＦＶを使用して、実施例７に記載の通り二重特異性抗体を作製した、又は実施例１１に記載の通りＣＡＲを作製した。
表１１は、ｍＡｂフォーマットの選択された抗ｈＫ２抗体のＨＣアミノ酸配列を示す。表１２は、ｍＡｂにおける選択された抗ｈＫ２抗体のＬＣのアミノ酸配列を示す。表１３は、ｍＡｂフォーマットの選択された抗ｈＫ２抗体のＨＣ及びＬＣのＤＮＡ配列番号をまとめる。表１４は、ＶＨ－リンカー－ＶＬ又はＶＬ－リンカー－ＶＨ配向の選択されたｓｃＦｖのアミノ酸配列を示す。
Figure 2022535150000019
Figure 2022535150000020
Figure 2022535150000021
Figure 2022535150000022
Figure 2022535150000023
Figure 2022535150000024
Figure 2022535150000025
Figure 2022535150000026
Figure 2022535150000027
実施例１２．抗ｈＫ２抗体の生物物理学的特性評価
抗ｈＫ２抗体の親和性及び熱安定性。
可溶性ｈＫ２に対する選択されたｈＫ２抗体の親和性を、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定した。ＳＰＲは、複合体の形成及び解離時の質量の変化を測定することによって、２つの結合パートナー間の相互作用の強度を試験するための無標識技術である。抗体を、抗Ｆｃ抗体でコーティングされたセンサチップ上に捕捉し、続いて、様々な濃度並びに指定の会合及び解離時間で可溶性ｈＫ２を注入した。解離後、表面を適切な溶液で再生して、次の相互作用の準備を行った。センサグラムを１：１ラングミュアモデルに適合させることによって、速度情報（オンレート及びオフレート定数）を抽出した。結合親和性（ＫＤ）を、速度定数（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）の比として報告する。選択されたｈＫ２抗体のＫＤ値を、表１５に列挙する。
自動プロメテウス機器を使用して示差走査蛍光測定（ＮａｎｏＤＳＦ）によって熱安定性を求めた。ＮａｎｏＤＳＦを使用して、リン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．４中０．５ｍｇ／ｍＬの濃度の分子のＴｍを測定した。サンプルを３８４ウェルサンプルプレートから２４ウェルキャピラリーにロードすることによって、測定を行った。各サンプルにつき、デュープリケートで測定を行った。熱走査は、１．０℃／分の速度で２０°Ｃから９５°Ｃまでに及ぶ。固有のトリプトファン及びチロシンの蛍光を３３０ｎｍ及び３５０ｎｍの発光波長でモニタリングし、Ｆ３５０／Ｆ３３０ｎｍ比を温度に対してプロットして、アンフォールディング曲線を作成した。測定されたＴｍ値を、表１５に列挙する。
Figure 2022535150000028
Ａｂｌｅｘｉｓ免疫キャンペーンから生成されたＫＬ２Ｂ４１３ ｓｃＦｖは、ＮａｎｏＤＳＦによって測定したとき６７°Ｃの熱安定性（Ｔｍ）を有しており、約３４ｎＭのヒトｈＫ２に対する結合親和性（ＫＤ）を有していた。再ヒト化キャンペーンについて得られ、そして、マウス１１Ｂ６と同様の結合親和性を維持していたクローンＫＬ２Ｂ３５９を、追加のプロファイリングのためにｓｃＦｖ－Ｆｃ及びＣＡＲ－Ｔに変換した。ＫＬ２Ｂ３５９ ｓｃＦｖは、６７℃のＴｍ及び約０．７～１ｎＭのｈＫ２に対する結合親和性（ＫＤ）を示す。ＫＬ２Ｂ３０、ＫＬ２Ｂ２４２、ＫＬ２Ｂ５３、ＫＬ２Ｂ４６７、及びＫＬ２Ｂ４９４ Ｆａｂは、０．５ｎＭ未満の結合親和性及び７０℃を超えるＴｍ値を示した。
エピトープのマッピング
水素－重水素交換質量分析（ＨＤＸ－ＭＳ）によって、選択されたＫＬ２Ｂ抗体上のエピトープを決定した。ヒトＫＬＫ２抗原を、エピトープマッピング実験に使用した。
簡潔に述べると、精製されたＫＬＫ２抗原を、重水標識バッファ中において抗ＫＬＫ２抗体有り及び無しでインキュベートした。水素－重水素交換（ＨＤＸ）混合物を、８Ｍ尿素、１Ｍ ＴＣＥＰ、ｐＨ３．０の添加によって異なる時点でクエンチした。クエンチしたサンプルを、室温で、バッファＡ（Ｈ２Ｏ中１％アセトニトリル、０．１％ＦＡ）にて平衡化した固定化ペプシン／ＦｐＸＩＩＩカラムに６００μＬ／分で通した。消化性断片を、バッファＡを用いて６００μＬ／分で逆相トラップカラムにロードし、１分間脱塩した（６００μＬのバッファＡ）。脱塩された断片を、２０分かけて１００μＬ／分で８％→３５％バッファＢ（９５％アセトニトリル、５％Ｈ２Ｏ、０．００２５％ＴＦＡ）の線形勾配を有するＣ１８カラムによって分離し、質量分析によって分析した。２７５℃のキャピラリー温度、分解能１５０，０００、及び質量範囲（ｍ／ｚ）３００～１，８００で、ＬＴＱ（商標）Ｏｒｂｉｔｒａｐ Ｆｕｓｉｏｎ Ｌｕｍｏｓ質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して質量分析を実行した。ＢｉｏＰｈａｒｍａ Ｆｉｎｄｅｒ３．０（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、ＨＤＸ実験の前に非重水素化サンプルのペプチド同定に使用した。ＨＤＥｘａｍｉｎｅｒバージョン２．５（Ｓｉｅｒｒａ Ａｎａｌｙｔｉｃｓ，Ｍｏｄｅｓｔｏ，ＣＡ）を使用して、ＨＤＸ実験についてのＭＳ生データファイルから質量中心値を抽出した。
ｈＫ２抗体、ｈｕ１１Ｂ６、ＫＬ２Ｂ４９４、ＫＬ２Ｂ４６７、ＫＬ２Ｂ３０、ＫＬ２Ｂ４１３、及びＫＬ２Ｂ５３を溶解性ｈＫ２タンパク質と共にインキュベートした結果、異なるパターンの水素交換及び全体的な保護が得られた。保護されたセグメントをｈＫ２抗原の配列にマッピングして、結合エピトープを可視化した（図１７Ｂ）。ＫＬ２Ｂ４９４、ＫＬ２Ｂ４６７、及びＫＬ２Ｂ３０は、残基１７３～１７８（配列番号３４６、ＫＶＴＥＦ）及び残基２３０～２３４（配列番号３４７、ＨＹＲＫＷ）からなる共通配列に結合した。ＫＬ２Ｂ５３は、異なる保護パターンを示し、残基２７～３２（配列番号３４８、ＳＨＧＷＡＨ）、６０～７５（配列番号３４９、ＲＨＮＬＦＥＰＥＤＴＧＱＲＶＰ）、及び１３８～１４７（配列番号３５０、ＧＷＧＳＩＥＰＥＥ）からなる配列に結合した。
実施例１３．追加のｓｃＦｖ ＣＡＲコンストラクトの作製及び特性評価
ｓｃＦｖとしてクローニングされた１１Ｂ６の細胞外部ドメインは、高温（５５℃）で結合を保持しなかったので、追加のキャンペーンを開始して、親１１Ｂ６から新たなヒト化抗体を生成させた。
抗体１１Ｂ６に由来する熱安定化ｓｃＦＶを含有するｈＫ２ ＣＡＲを作製した。熱安定化ｓｃＦｖを含有するＣＡＲコンストラクトの説明及び配列番号を表１６に提供する。説明における名称は、上記で同定されたＶＨ鎖又はＶＬ鎖を再び指し、２０ＡＡは、ｓｃＦｖ中のＶＨ／ＶＬ対間の２０アミノ酸長のリンカーを指す。ＣＡＲにおけるｓｃＦｖをＶＨ－Ｌ－ＶＬ又はＶＬ－Ｌ－ＶＨ配向のいずれかでクローニングした。
生成されたｓｃＦｖであるＫＬ２Ｂ４１３＿ＨＬ、ＫＬ２Ｂ４１３＿ＬＨ、ＫＬ２Ｂ３５９＿ＨＬ、及びＫＬ２Ｂ３５９＿ＬＨもＣＡＲコンストラクトに組み込み、更に特性評価した。表１６は、作製されたＣＡＲコンストラクト及びその配列番号を示す。使用したシグナル配列は、ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡ（配列番号２４）であった。
Figure 2022535150000029
実施例１４：Ｊｕｒｋａｔ－Ｌｕｃｉａ（商標）ＮＦＡＴ細胞を介した抗原非依存性活性化を用いた異なるｓｃＦｖベースのＣＡＲの同定。
活性化Ｔ細胞の核因子（ＮＦＡＴ）は、最初に免疫細胞の調節因子として同定された転写因子のファミリーである。理論に束縛されるものではないが、Ｔ細胞が活性化されると、カルシウムが流入し、ＮＦＡＴのＮ末端でセリンリッチな核局在化シグナルを脱リン酸化するカルシニューリンが活性化され、ＮＦＡＴが核内移行する。ｓｃＦｖクラスタリングによるトニックシグナル伝達は、ＪＮＬレポーター細胞株においてＮＦＡＴプロモーターによって駆動されるホタルルシフェラーゼによって後で検出することができた。
シグナル伝達応答性ＮＦＡＴプロモーターによって駆動されるルシフェラーゼ遺伝子を含有するＪｕｒｋａｔ細胞（ＪＮＬ細胞と呼ばれる）に、様々なＣＡＲコンストラクトを形質導入した。ＣＡＲコンストラクトとその同種細胞抗原（標的細胞上のｈＫ２）との間の結合によって、ＪＮＬ細胞においてルシフェラーゼが発現する。新規ｈＫ２ ＫＬ２Ｂ４１３及び再ヒト化１１Ｂ６ ＣＡＲクローンを、以下のプロトコルに従って抗原依存性活性についてＪＮＬレポーターアッセイで評価した。
レンチウイルスの形質導入を以下のように行った。ＪＮＬ細胞を収集し、１Ｅ６／ｍＬになるように再懸濁させた。５００μＬのＪＮＬ細胞及びレンチウイルスウイルスをＭＯＩ３で添加し、上下にピペッティングすることによって混合した。混合物を３７℃のインキュベーターに２４時間入れた。次いで、５００μＬのＪＮＬ培地を各ウェルに添加した。３７℃のインキュベーターで培養を続けた。４日目に細胞をＴ２５フラスコに移した。５～６日目に、形質導入の検証を行った。１５０μＬの細胞を収集して、目的の特定のＣＡＲに適切な検出試薬（例えば、ｈＫ２ ＣＡＲを検出するためにはビオチン－ｈＫ２タンパク質を使用）を介してＣＡＲ発現を調べた。凍結又は下記ＪＮＬアッセイにおいて使用するのに十分な細胞が得られるまで、ＪＮＬ細胞を５×１０５／ｍＬで維持した。
ＪＮＬアッセイは、以下のように行った。２：１のエフェクター対標的比で、標的細胞株との共培養を行った。ＪＮＬ細胞をスピンダウンして、培地中の任意の分泌されたルシフェラーゼを除去し、４×１０５／ｍＬで新鮮培地に再懸濁させた。ＪＮＬ細胞を収集した。抗原陽性及び抗原陰性の標的細胞株の両方を２Ｅ５／ｍＬで調製した。次いで、１００μＬのＪＮＬを１００μＬの標的細胞に添加した。ＪＮＬのみの対照については、標的細胞の代わりに１００μＬの培地を添加した。陽性対照の場合、ＪＮＬ細胞のみ又はＣＡＲ ＪＮＬ細胞を１×細胞刺激カクテルに添加し、３７℃のインキュベーター内で２４時間インキュベートした。１５０μＬの上清を９６ウェルプレートに収集し、遠心分離して細胞を除去した。１００μＬの上清をプレートからソリッドボトム黒色プレートに移し、続いて、１００μＬのＱＵＡＮＴＩ－ｌｕｃ ｌｕｃｉａ検出試薬を添加し、Ｅｎｖｉｓｉｏｎマルチプレートリーダーで読み取る前に室温で５分間インキュベートした。
シグナル伝達応答性ＮＦＡＴプロモーターによって駆動されるルシフェラーゼ遺伝子を含有するＪｕｒｋａｔ細胞（ＪＮＬ細胞と呼ばれる）に、様々なｈＫ２ ＣＡＲコンストラクトを形質導入した。ビオチン化ｈＫ２、続いてストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥによって、発現を判定した。データを図１２Ａに示す。形質導入されたＪＮＬ細胞におけるＣＡＲ発現は、選択されたクローンについて確認され、細胞の４６～５０％で再ヒト化１１Ｂ６ ＫＬ２Ｂ３５９ ＣＡＲが発現し、細胞の７３．７％～９６％でＫＬ２Ｂ４１３ ＣＡＲが発現した。
図１２Ｂ中のデータは、ｈＫ２ ＣＡＲコンストラクトとその同種細胞抗原（標的細胞上のｈＫ２）との間の結合によって、ＪＮＬ細胞においてルシフェラーゼが発現することを示す。指定のＣＡＲクローンを含有するＪＮＬ細胞及びＪＮＬ細胞（ＵＴＤ）を標的細胞株（ＶＣａｐ、ＬＮＣａｐ／Ｈｋ２、ＬＮＣａｐ、Ｃ４－２Ｂ、２２Ｒｖ１、又はＤＵ１４５細胞）と共培養し、ルシフェラーゼ活性を発光強度として測定した。発光強度が抗原発現細胞の存在下でＵＴＤ細胞のレベルを１．５倍上回った場合、クローンは活性であるとみなした。新規ＫＬ２Ｂ４１３並びに再ヒト化１１Ｂ６ ＨＬ及びＬＨ ＣＡＲについて、抗原依存性活性化はみられなかった。
実施例１５：ＨＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞を、抗原依存性細胞傷害性についてリアルタイムＩｎｃｕＣｙｔｅ殺傷アッセイで評価した。
ＨＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞を、ＨＫ２＋ＶＣａＰ細胞及びＨＫ２－ＤＵ１４５細胞と９６時間コインキュベートした。図１１Ａ～図１１Ｂに示すＣＡＲ発現データに基づいて、エフェクター対標的（ＥＴ）比を計算した。標的細胞は、リアルタイムでＩｎｃｕＣｙｔｅイメージングシステムによって測定された赤色核色素を安定的に発現していた。ＨＫ２＋ ＶＣａＰ細胞とコインキュベートしたＨＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞については図１３Ａに、そして、ＨＫ２－ＤＵ１４５細胞とコインキュベートしたＨＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞については図１３Ｂにデータを示す。これら図中、腫瘍細胞成長阻害（％）＝（初期生存標的細胞数－現時点の生存標的細胞数）／初期生存細胞数×１００（％）。
実施例１６．ＫＬ２Ｂ４１３＿ＨＬ、ＫＬ２Ｂ４１３＿ＬＨ、ＫＬ２Ｂ３５９＿ＨＬ又はＫＬ２Ｂ３５９＿ＬＨを形質導入したＣＡＲ－Ｔ細胞の特性評価。
ＣＡＲ－Ｔ細胞の活性化は、抗原依存性である
生成されたＣＡＲ－Ｔ細胞を、実施例４に記載の通り、抗原依存性活性についてＪＮＬレポーターアッセイにおいて評価した。簡潔に述べると、シグナル伝達応答性ＮＦＡＴプロモーターによって駆動されるルシフェラーゼ遺伝子を含有するＪｕｒｋａｔ細胞（ＪＮＬ細胞と呼ばれる）に、ＣＡＲ１７（ＫＬ２Ｂ４１３＿ＨＬ）、ＣＡＲ１８（ＫＬ２Ｂ４１３＿ＬＨ）、ＣＡＲ１９（ＫＬ２Ｂ３５９＿ＨＬ）、又はＣＡＲ２０（ＫＬ２Ｂ３５９＿ＬＨ）コンストラクトを形質導入した。ビオチン化ｈＫ２、続いて、ストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥによって、各ＣＡＲの発現を判定した。選択されたクローンについて、形質導入されたＪＮＬ細胞におけるＣＡＲ発現が確認され、図６に示す通り、細胞の４６～５０％がＫＬ２Ｂ３５９ベースのＣＡＲを発現し、細胞の７３．７～９６％がＫＬ２Ｂ４１３ベースのＣＡＲを発現していた。各ＣＡＲを発現するＪＮＬ細胞のパーセントは以下の通りであった：ＫＬ２Ｂ４１３＿ＨＬ：７３．７％、ＫＬ２Ｂ４１３＿ＬＨ：９３．６％、ＫＬ２Ｂ３５９＿ＨＬ：４６％、ＫＬ２Ｂ３５９＿ＬＨ：５０．８％。
ｈＫ２ ＣＡＲコンストラクトとその同種細胞抗原（標的細胞上のｈＫ２）との間の結合によって、ＪＮＬ細胞においてルシフェラーゼが発現する。その目的のために、試験ＣＡＲコンストラクトを形質導入したＪＮＬ細胞又は非形質導入ＪＮＬ細胞（ＵＴＤ）を、標的細胞株（ＶＣａｐ、ＬＮＣａＰ／ｈＫ２（ｈＫ２を組換え発現するＬＮＣａＰ細胞）、ＬＮＣａＰ、Ｃ４－２Ｂ、２２Ｒｖ１、又はＤＵ１４５細胞）と共培養し、ルシフェラーゼ活性を発光強度として測定した。発光強度が抗原発現細胞の存在下でＵＴＤ細胞のレベルを１．５倍上回った場合、コンストラクトは活性であるとみなした。試験したＣＡＲコンストラクトについては、抗原依存性活性化はみられなかった。図１３Ａは、図に示されるＣＡＲ－Ｔ細胞の試験標的細胞への結合から生じたＲＬＵ（相対光単位）を示す。
ＣＡＲ－Ｔ細胞は、抗原刺激時にサイトカインを産生する
細胞傷害性Ｔ細胞によって産生されたＩＦＮ－γは、腫瘍の免疫監視作用を発揮させるのに非常に重要であり、これにより、増殖を直接阻害し、インビボ及びインビトロにおいて一部の悪性腫瘍のアポトーシスを誘導することができる。ｈＫ２ ＣＡＲ改変ヒトＴ細胞がｈＫ２陽性腫瘍細胞によって認識及び活性化され得るかどうかを判定するために、指定のＣＡＲクローンを形質導入した初代Ｔ細胞及び対照非形質導入Ｔ細胞（ＵＴＤ）を標的細胞株（ＬＮＣａＰ／ｈＫ２、ＬＮＣａＰ、Ｃ４－２Ｂ、２２Ｒｖ１、又はＤＵ１４５細胞）と共培養し、ＩＦＮ－γ濃度測定のために上清を回収した。図１４に示されるように、ｈＫ２ ＣＡＲ細胞を形質導入したＣＡＲ－Ｔ細胞は、ｈＫ２を組換え発現するＬＮＣａｐ細胞（ＬＮＣａｐ／ｈＫ２）細胞との共培養中にＩＦＮ－γを分泌し、また、ｈＫ２発現が非常に少ないＣ４－２Ｂ及びＬＮＣａｐ細胞との共培養中にも分泌したが、ｈＫ２－陰性ＤＵ１４５細胞では分泌しなかった。デュープリケートの培養からの平均ＩＦＮ－γ濃度±ＳＤ（ｐｇ／ｍＬ）を図１４に示す。
ＣＡＲ－Ｔ細胞は、抗原依存的に増殖する
ＣＡＲ－Ｔ細胞を、実施例４に記載のＴ細胞増殖アッセイプロトコルを使用してその増殖について評価した。ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ及び非形質導入（ＵＴＤ）Ｔ細胞をＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ；５μＭ）で標識し、ｈＫ２陽性ＶＣａｐ及びｈＫ２陰性ＤＵ１４５細胞と共培養した。共培養の５日後、細胞を収集し、ＣＤ３、ＣＤ２５、ＮｅａｒＩＲ ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ Ｄｙｅ、及びｈＫ２ＣＡＲで染色した。Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアを備えるＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターでフローサイトメトリー分析を行った。リンパ球を生ＣＤ３によって同定し、ＣＴＶ色素希釈及び活性化マーカーＣＤ２５を有するＣＡＲ－Ｔ細胞の頻度を求めた。ＣＤ３＋Ｔ細胞でゲーティングすることにより、ｈＫ２陽性Ｖｃａｐ細胞は、図１０Ｃ、１０Ｄ、及び１０Ｅに示すように各試験したＣＡＲ－Ｔ細胞の増殖を、そして、図１１Ｂ及び図１２Ａに示すように活性化マーカーＣＤ２５のアップレギュレーションを促進したが、ｈＫ２陰性ＤＵ１４５細胞は促進しなかった。任意の刺激なしのＴ細胞のみは増殖せず、ＣＤ３／２８ビーズで刺激されたＴ細胞は等価な増殖パターンを示した。ｈＫ２ ＣＡＲ＋Ｔ細胞は、ＶＣａｐ細胞と５日間共培養した後に、ＣＤ３／２８ビーズ陽性対照よりもロバストに増殖した。異なる試験したＣＡＲ－Ｔ細胞は、異なる増殖活性を有し、異なるＣＡＲ－Ｔ細胞数を示した。増殖しているＴ細胞及びＣＤ２５を発現しているＴ細胞の百分率は、デュープリケートからの平均絶対細胞数＋／－ＳＥＭに基づいていた。
実施例１７：抗原で刺激したＣＡＲ－Ｔ細胞のＴｈ１サイトカインＩＦＮ－ガンマ産生。
理論に束縛されるものではないが、細胞傷害性Ｔ細胞によって産生されたＩＦＮ－γは、腫瘍の免疫監視作用を発揮させるのに非常に重要であり、これにより、増殖を直接阻害し、インビボ及びインビトロにおいて一部の悪性腫瘍のアポトーシスを誘導することができる。
ｈＫ２ ＣＡＲ改変ヒトＴ細胞がｈＫ２（＋）腫瘍細胞によって認識及び活性化され得るかどうかを判定するために、指定のＣＡＲクローンを含有する初代Ｔ細胞及び対照非形質導入Ｔ細胞（ＵＴＤ）を標的細胞株（ＬＮＣａｐ／ｈＫ２、ＬＮＣａｐ、Ｃ４－２Ｂ、２２Ｒｖ１、又はＤＵ１４５細胞）と共培養し、ＩＦＮ－ｇ濃度測定のために上清を回収した。デュープリケートの培養からの平均ＩＦＮ－γ濃度±ＳＤ（ｐｇ／ｍＬ）として、データを図１４に示す。図示されているように、ｈＫ２ ＣＡＲ改変Ｔ細胞は、Ｈｋ２発現が非常に少ないＣ４－２Ｂ及びＬＮＣａｐ細胞であっても、ｈＫ２発現ＬＮＣａｐ／ｈＫ２細胞との共培養中にＩＦＮ－ガンマを分泌するが、ｈＫ２－陰性ＤＵ１４５細胞では分泌しない。未開示の対照ＣＡＲは、抗原発現レベルがｈＫ２よりもはるかに高いことから、はるかに多量のＩＦＮ－γを分泌した。
実施例１８：ｈＫ２ ＣＡＲ Ｔ細胞の抗腫瘍活性を評価するためのＣＤ１０７ａ脱顆粒アッセイ。
理論に束縛されるものではないが、主に、標的細胞を殺傷する溶解顆粒の免疫分泌を通して、ＣＤ８＋Ｔリンパ球及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などの細胞傷害性リンパ球によって、腫瘍細胞を認識及び殺傷することができる。このプロセスは、顆粒膜と免疫エフェクター細胞の細胞質膜との融合を伴い、その結果、典型的にはＣＤ１０７ａなどの溶解顆粒を取り囲む脂質二重層に存在するリソソーム関連タンパク質の表面曝露が生じる。したがって、ＣＤ１０７ａの膜発現は、免疫細胞活性化及び細胞傷害性脱顆粒のマーカーを構成する。
この脱顆粒アッセイは、以下のように行った。標的細胞（５×１０４個）を、９６ウェルプレートにおいて１ウェルあたり０．１ｍＬで等数のエフェクター細胞と共培養した。対照ウェルは、Ｔ細胞のみを含有していた。１μＬ／サンプルのモネンシン（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に加えて抗ＣＤ１０７ａ（１ウェルあたり５μＬ）を添加し、続いて、３７℃で４時間インキュベートした。細胞をＰＢＳで２回洗浄し、ｈＫ２ ＣＡＲ、ＣＤ３、及びＣＤ８の発現について染色し、フローサイトメーターＢＤ Ｆｏｒｔｅｓｓａで分析した。データを図１５に示す。
図示されているように、Ｖｃａｐ細胞上にｈＫ２抗原が存在すると、フローサイトメトリーによって測定されるＣＤ１０７Ａ＋ｈＫ２ ＣＡＲ（＋）Ｔ細胞が増加するが、ｈＫ２ ＣＡＲ（－）及びＵＴＤ Ｔ細胞では増加しない。腫瘍細胞刺激なしのＣＡＲ Ｔ細胞では、バックグラウンド染色（＜２％）しかみられなかった。イオノマイシン（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（商標）細胞刺激カクテル；５００×）と組み合わせたフォルボール１２－ミリステート１３－アセテート（ＰＭＡ）は、この４時間細胞培養モデルにおけるＣＤ１０７ａ細胞表面発現の一貫した誘導因子であり、これを陽性対照として使用した。図１５に示す結果は代表的なドナーＴ細胞についてのものであり、この結果は、複数のドナーで再現可能である。
実施例１９：Ｔ細胞増殖は、インビボ免疫機能の重要なインビトロパラメータである。
新規ＫＬ２Ｂ４１３及び再ヒト化１１Ｂ６（ＫＬ２Ｂ３５９）ＣＡＲ Ｔ細胞の機能を更に評価するため及び最高位の候補コンストラクトの選定を支援するために、Ｔ細胞増殖アッセイ用にＣＡＲ Ｔ細胞をＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔで標識した（ＣＴＶ；５ｕＭ）。以下のプロトコルに従い、結果を図１６Ａ～１６Ｄに示す。
腫瘍細胞Ｖｃａｐ及びＤＵ１４５を収集し、ＰＢＳで２回洗浄した。細胞を、３７℃のインキュベーター内で１．５時間かけて１００ｕｇ／ｍＬのマイトマイシンＣ（ＭＭＣ）を含有するＰＢＳ中に１０Ｅ６／ｍＬで再懸濁させて、腫瘍細胞の増殖をブロックした。２０μＬのＤＭＳＯをＣＴＶ染色溶液のバイアルに添加した。次いで、５μＬの溶液を、５ｍＬ（１：１０００）のＰＢＳ（３７℃に加温）に希釈して、５μＭの染色溶液を得た。２Ｅ６個のＴ細胞をカウントし、回収し、ＰＢＳで２回洗浄し、次いで、４Ｅ６／ｍＬ（０．５ｍＬ）で再懸濁させた。等体積（０．５ｍＬ）のＣＴＶ染色溶液を添加した。細胞を３７℃で２０分間インキュベートした。２０分後、４ｍＬのＰＲＭＩ＋２０％ＦＢＳを細胞に添加して、任意の非結合色素を吸収させ、細胞を５分間インキュベートした。細胞を４００×ｇで５分間遠心分離し、続いて、予熱しておいたＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ培地に細胞ペレットを再懸濁させた。Ｔ細胞をカウントし、１Ｅ５個の細胞（１００ｕＬ）を９６ウェル平底プレートに播種した。
その間に、ＭＭＣ処理した腫瘍細胞ｈＫ２（＋）ＶＣａｐ及びＨＫ２（－）ＤＵ１４５を回収し、１．５時間後にカウントし、次いで、１Ｅ６／ｍＬで再懸濁させた。１Ｅ５個の細胞（１００μＬ）を９６ウェルプレート内でＴ細胞と共培養した。Ｔ細胞のみ、及び３：１の比のＣＤ３／２８ビーズ対細胞で添加したＴ細胞を、それぞれ陰性対照及び陽性対照として使用した。
５日間共培養した後、全ての細胞を各ウェルから回収した。細胞を遠心分離し、４００×ｇで５分間２回洗浄し、９６ウェルＵ底プレートにおいてｈＫ２ＣＡＲ、ＣＤ３、ＣＤ８、及びＣＤ２５、ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ（Ｎｅａｒ－ＩＲ）で染色した。洗浄後、全ての細胞を１００μＬのＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘ（商標）固定バッファ（５０ｕＬのＦＡＣＳバッファ＋５０ｕＬの固定バッファ）を使用して１０分間固定した。染色されたサンプルを、インキュベーション期間の終了後にマルチカラーフローサイトメトリーによって分析した。
Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアを備えるＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターでフローサイトメトリー分析を行った。リンパ球を生ＣＤ３によって同定し、ＣＴＶ色素希釈及び活性化マーカーＣＤ２５を有するＣＡＲ＋Ｔ細胞の頻度を求めた。
ＣＴＶのヒストグラムを調製するために、単独で培養されたＴ細胞の右端ピーク（ＣＴＶ明）、及び集団の残りを捕捉するためのＣＴＶ希釈ゲートを包含するように、ＣＴＶ未希釈ゲートを設定した。この設定を全てのサンプルに適用した。ＣＴＶ希釈集団中の細胞の絶対数を含むように統計を追加した。この統計を用いて表を作成し、続いて、Ｐｒｉｓｍに転送する前に再フォーマット化のためにデータ（細胞数）をＥｘｃｅｌにエクスポートした。
図１６Ａ～１６Ｄは、ｈＫ２ ＣＡＲ Ｔ細胞増殖アッセイの結果を示す。ＣＤ３＋Ｔ細胞でゲーティングすることにより、ｈＫ２（＋）Ｖｃａｐ細胞は、図１６Ａ～１６Ｂに示されているように、全てのＣＡＲコンストラクトで遺伝子操作されたＴ細胞の増殖、そして、図１６Ｃ～１６Ｄに示されているように、活性化マーカーＣＤ２５のアップレギュレーションを促進したが、ｈＫ２（－）ＤＵ１４５細胞は促進しなかった。ＣＤ３／２８ビーズで刺激したＴ細胞を陽性対照として使用し、Ｔ細胞のみを陰性対照として使用した。任意の刺激なしのＴ細胞のみは増殖せず、ＣＤ３／２８ビーズで刺激されたＴ細胞は等価な増殖パターンを示す。図示されているように、ｈＫ２ ＣＡＲ＋Ｔ細胞は、ＶＣａｐ細胞と５日間共培養した後に、ＣＤ３／２８ビーズ陽性対照よりもロバストに増殖した。異なるＣＡＲコンストラクトで遺伝子操作されたＴ細胞は、異なる増殖活性を有し、異なるＣＡＲ＋Ｔ細胞数を示した。デュープリケートからの平均絶対細胞数＋／－ＳＥＭに基づく、増殖しているＴ細胞及びＣＤ２５を発現しているＴ細胞の百分率の要約を、図１６Ｂ及び１６Ｄに示す。
実施例２０：ｈＫ２ ｓｃＦｖ ＣＡＲの構築及び発現
以下のｓｃＦｖ配列を含むｈＫ２ ＣＡＲコンストラクトを構築する。
Figure 2022535150000030
Figure 2022535150000031
Figure 2022535150000032
ｈＫ２ ＣＡＲコンストラクトは、以下の配列を含んでいた。
Figure 2022535150000033
Figure 2022535150000034
Figure 2022535150000035
Figure 2022535150000036
Ｄｙｎａｂｅａｄｓ Ｈｕｍａｎ Ｔ－Ｅｘｐａｎｄｅｒ ＣＤ３／ＣＤ２８で刺激したＴ細胞をエレクトロポレーションに供し、次いで、ＯＰＴＩ－ＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で３回洗浄し、５０Ｅ６／ｍＬの最終濃度でＯＰＴＩ－ＭＥＭに再懸濁させる。続いて、０．１ｍＬの細胞（５Ｅ６）を、ＲＮＡをコードしているＩＶＴ ＣＡＲ１０ｕｇと混合し、「パルス」ボタンを１回押すことによって、ＢＴＸ ＥＣＭ８３０（Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ ＢＴＸ，Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）を使用して２ｍｍギャップキュベット（Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ ＢＴＸ，Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）内でエレクトロポレーションする。（設定：５００ボルト、７５０μｓｅｃパルス長及び単一（１）パルス、１００ｍＳｅｃ間隔）エレクトロポレーション後、Ｔ細胞を６ウェルプレートに移し、直ちに３７℃のインキュベーターに戻す。初代ヒトＴ細胞に、ｍＲＮＡなし（モック）で、又はｈＫ２ ｓｃＦｖ ＣＡＲ若しくは無関係の対照ＣＡＲのいずれかを発現するｍＲＮＡ１０μｇをエレクトロポレーションする。エレクトロポレーションの２４時間後、２μｇ／ｍＬのビオチン化Ｌタンパク質及びストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥ、又はビオチン化ｈＫ２（１μｇ／ｍＬ）及びストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥで染色した後に、フローサイトメトリーによってＣＡＲ表面発現を測定する。
エレクトロポレーションの２４時間後、Ｔ細胞をカウントする。各々１Ｅ５個のＴ細胞を収集する。２００μＬ／ウェルのマイクロタイタープレート用ＦＡＣＳバッファを使用して、細胞をＦＡＣＳバッファで２回洗浄し、上清を廃棄する。全てのウェルを、タンパク質Ｌを含有する染色バッファ（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、カタログ番号Ｍ０００９７１：５００；２ｕｇ／ｍＬ）１００μＬで染色し、光から保護しながら、４℃で少なくとも３０分間インキュベートする。１５０μＬ／ウェルのマイクロタイタープレート用ＦＡＣＳバッファを使用して、ＦＡＣＳバッファを添加することによって細胞を２回洗浄する。室温で４分間、４００×ｇで遠心分離を行う。次いで、上清を廃棄する。全てのウェルを１００μＬのストレプトアビジン－Ｒ－フィコエリトリン（ＳＡ－ＰＥ、１：２５０）及びＬｉｖｅ／ｄｅａｄ Ｆｉｘａｂｌｅ Ｎｅａｒ－ＩＲ Ｄｅａｄ Ｃｅｌｌ Ｓｔａｉｎ色素（１：１０００）で染色し、光から保護しながら４℃で少なくとも３０分間インキュベートする。次いで、細胞のフローサイトメトリー分析の準備を整える。
ｈＫ２ ＣＡＲではタンパク質Ｌ染色の所見がみられるが、ｍＲＮＡエレクトロポレーションを伴わないＴ細胞である対照Ｔ細胞ではバックグラウンド染色（約５．５％）しかみられない。初代ヒトＴ細胞におけるＣＡＲ発現は、Ｊ＆Ｊ内部ビオチン標識組換えＫＬＫ２タンパク質、続いて、ＳＡ－ＰＥを介しても検出することができる。図示されるように、Ｔ細胞は、フローサイトメトリーによって測定したとき、ｈＫ２ ＣＡＲを効率的に発現するが、ｍＲＮＡエレクトロポレーションを伴わないＴ細胞である対照Ｔ細胞又は未開示の対照ＣＡＲ（非ｈＫ２特異的）ではバックグラウンド染色しかみられない。
実施例２１：ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞による腫瘍細胞の殺傷
フローサイトメーターを使用した、Ｃｅｌｌ Ｔｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号：Ｃ３４５５７）ベースの細胞傷害性アッセイのための共培養を以下のように行う。
Ｔ細胞を以下のように調製する。ＥＰの２４時間後、Ｔ細胞をカウントし、最も濃縮された／所望のＥ：Ｔに必要な濃度で再懸濁させる。Ｔ細胞を１００μＬ／ウェルのアッセイで添加する（２×１０６細胞／ｍＬ、１００μＬを１０：１のＥ：Ｔ比、すなわち２Ｅ４個の標的細胞あたり２Ｅ５Ｔ個の細胞でプレーティング）。１０：１のＥ：Ｔ濃度のストックを作製し、完全Ｔ細胞培地（Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒｗ／ＣＴＳ、５％ヒト血清、１％ ＧｌｕｔａＭａｘ）で０．３１２５：１になるように２倍連続希釈を行う。９６ウェル丸底組織培養処理プレートを使用して、Ｔ細胞をトリプリケートでプレーティングする（１００ｕＬ／ウェル）。
ＣＴＶ標識標的細胞を以下のように調製する。２０μＬのＤＭＳＯをＣＴＶ染色溶液のバイアルに添加する。この原液を、５μＭの染色溶液にするために２０ｍＬのＰＢＳ（３７℃に加温）に希釈する。１０Ｅ６個の腫瘍細胞を収集し、ＰＢＳで２回洗浄し、４Ｅ６／ｍＬ（２．５ｍＬ）に再懸濁させる。等体積（２．５ｍＬ）のＣＴＶ染色溶液を添加する。細胞を３７℃のインキュベーター内で２０分間インキュベートする。４０ｍＬのＰＲＭＩ＋２０％ＦＢＳを細胞に添加して、任意の非結合色素を吸収させる。細胞を５分時間インキュベートする。細胞を４００×ｇで５分間遠心分離する。細胞ペレットを、予熱しておいたＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ培地に再懸濁させる。その間に、Ｔ細胞を上記の所望のＥ／Ｔ比で播種する。ｈＫ２＋腫瘍細胞株及びｈＫ２－腫瘍細胞株を再度カウントし、次いで、細胞をデュープリケートで２Ｅ５／ｍＬ及び１００ｕＬに再懸濁させる。平底９６ウェルプレートにおいて、細胞を、標識された腫瘍細胞株とコインキュベートする。
フローサイトメーターを使用して、以下の通り細胞傷害性アッセイを行う。２０時間の共培養後、全ての細胞をＵ底９６ウェルプレートに移し、洗浄する。２０時間の共培養後、全ての細胞を平底９６ウェルプレートから回収し、Ｕ底９６ウェルプレートに移し、次いで、洗浄する。３０μＬの０．２５％トリプシンを全てのウェルに添加し、３７℃のインキュベーターで５分間インキュベートする。５分後、全ての腫瘍細胞をＵ底９６ウェルプレートに回収する。細胞を、４００×ｇで５分間、２回遠心分離及び洗浄する。次いで、細胞ペレットを、希釈した（１：１０００）ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（商標）Ｆｉｘａｂｌｅ Ｎｅａｒ－ＩＲ染色色素（１００μＬ）に再懸濁させる。細胞を４℃で３０分間インキュベートし、４００×ｇで５分間細胞を遠心分離することによって、２回ＦＡＣＳバッファで洗浄する。洗浄後、１００μＬのＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘ（商標）固定バッファ（５０ｕＬのＦＡＣＳバッファ＋５０ｕＬの固定バッファ）を使用して、全ての細胞を１０分間固定する。細胞を、４００×ｇで５分間、１回遠心分離及び洗浄する。細胞ペレットをＦＡＣＳバッファに再懸濁させる。染色されたサンプルを、インキュベーション期間の終了後にマルチカラーフローサイトメトリーによって分析する。以下の式を使用して、細胞傷害活性百分率を計算する：
特異的死％＝Ｎｅａｒ ＩＲ％＋ＣＴＶ＋（死）細胞－自然Ｎｅａｒ ＩＲ％＋ＣＴＶ＋／（１００％－自然Ｎｅａｒ ＩＲ％＋ＣＴＶ＋（死）細胞）×１００％。
一過性トランスフェクションの２４時間後、標的細胞（ｈＫ２陽性Ｖｃａｐ及びｈＫ２陰性ＤＵ１４５細胞）をＣｅｌｌ Ｔｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）蛍光色素で標識し、次いで、ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞と共培養する。モックＴ細胞が、陰性エフェクター対照として機能する。細胞を、０．３１２５：１～１０：１の範囲のエフェクター対標的細胞（Ｅ／Ｔ）比で２０時間共培養する。殺傷パーセントは、ＣＡＲ－Ｔ細胞なしで培養された生存標的細胞の数に対する、共培養物中に残存する生存（生存能色素陰性）標的（ＣＴＶ陽性）細胞の絶対数の比として測定する。図示されるように、１０：１～０．３１２５：１のＥ／Ｔ比で、ｈＫ２ ＣＡＲ Ｔ細胞は、ｈＫ２（＋）ヒト前立腺癌細胞株を特異的かつ効率的に溶解するが、ｈＫ２（－）細胞は溶解せず、一方、モック又はｈＫ２ ＣＡＲであるＴ細胞ではバックグラウンド細胞傷害性しかみられない。
ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、標的細胞の免疫細胞媒介細胞溶解の効力アッセイとして、リアルタイム細胞分析システムとしてのｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅを用いて、リアルタイム細胞傷害性についても試験する。
５０μＬの標的癌細胞培養培地を９６ウェルＥ－プレート（ＡＣＥＡ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の各ウェルに添加し、バックグラウンドインピーダンスを測定し、細胞指数として表す。次いで、接着標的細胞ｈＫ２（＋）及びｈＫ２（－）を解離させ、１００μＬの体積で、５Ｅ４（ＶＣａｐ）、５Ｅ３細胞／Ｅプレートのウェルの密度で播種し、電極表面上に受動的に接着させる。播種後、Ｅプレートを層流フード内において周囲温度で３０分間保持し、次いで、細胞培養インキュベーター内のＲＴＣＡ ＭＰ機器に移す。実験期間（９６時間）全体にわたって１５分間隔でデータ記録を直ちに開始する。
処理を適用した時（癌細胞播種の２４時間後）に、データ取得を一時停止し、各ウェルから５０μＬの培地を除去し、エフェクターＣＡＲ－Ｔ細胞を５０μＬの体積で、異なるエフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）比で添加する。ｈＫ２（＋）ＣＡＲ－Ｔ及び未開示の対照ＣＡＲ（非ｈＫ２特異的）Ｔ細胞を再懸濁させる。次いで、９６ウェルプレートにおいてデュープリケートで２倍希釈を行う（５：１～０．１５６：１のＥ／Ｔ比）。標的＋モックエフェクター対照（ＲＮＡエレクトロポレーションＴ細胞なし）も標的細胞に添加する。
標的細胞ｈＫ２（＋）及びｈＫ２（－）を、モックと共にインキュベートし、異なるＥ／Ｔ比でおよそ７２時間、１０μｇのｍＲＮＡをｈＫ２（＋）及びｈＫ２（－）ＣＡＲ－Ｔ細胞にエレクトロポレーションする（トランスフェクションの２４時間後）。ｈＫ２（＋）及びｈＫ２（－）の正規化された細胞指数（ＣＩ）プロットを作成する。単独で播種された場合、標的細胞はプレートに接着し、増殖して、ＣＩの読み出しを増加させる。
実施例２２：ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞によるサイトカイン産生
細胞傷害性Ｔ細胞によって産生されたＩＦＮ－γは、腫瘍の免疫監視作用を発揮させ、これにより、増殖を直接阻害し、インビボ及びインビトロにおいて一部の悪性腫瘍のアポトーシスを誘導することができる。ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞がｈＫ２（＋）腫瘍細胞によって認識され、活性化され得るかどうかを判定するために、実施例２１に記載の通り、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅベースの殺傷アッセイから上清を回収した。約７０時間の共培養後、上清を回収し、ＥＬＩＳＡキット（ヒトＩＦＮ－γＥＬＩＳＡ ＭＡＸ（商標）Ｄｅｌｕｘｅ、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、カタログ番号４３０１０６）と共に提供された指示書に従って、ＥＬＩＳＡによってアッセイした。
抗原刺激されたＣＡＲ－Ｔ細胞のＩＦＮ－γ産生が生じる。ｈＫ２ ＣＡＲ及び対照ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ｈＫ２発現細胞との共培養中にＥ：Ｔ比依存的にＩＦＮ－γを分泌したが、ｈＫ２－陰性細胞との共培養中には分泌しなかった。未開示の対照ＣＡＲは、抗原発現レベルがｈＫ２よりもはるかに高いことから、はるかに多量のＩＦＮ－γを分泌した。
実施例２１：ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞による腫瘍細胞の殺傷
ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞を、抗原依存性細胞傷害性についてリアルタイムＩｎｃｕＣｙｔｅ腫瘍殺傷アッセイで評価する。ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞を、ＣＡＲ発現データに基づいて計算した１：１又は０．５：１のエフェクター：標的比で８８時間、標的細胞とコインキュベートする。リアルタイムでＩｎｃｕＣｙｔｅイメージングシステムによって測定したときに赤色核色素を安定的に発現している標的細胞を同定する。以下の計算を実施する：腫瘍細胞成長阻害（％）＝（初期生存標的細胞数－現時点の生存標的細胞数）／初期生存細胞数×１００（％）。
実施例２２：ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞によるサイトカイン産生
１：１のＥ／Ｔ比で細胞と共にｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞を一晩（およそ２０時間）共培養したものから上清を回収し、１３－ｐｌｅｘ Ｍｉｌｌｉｐｌｅｘヒト高感度Ｔ細胞キット（ＨＳＴＣＭＡＧ２８ＳＰＭＸ１３）を使用して分析した。ｈＫ２ ＣＡＲ改変Ｔ細胞は、ｈＫ２発現細胞との共培養中にサイトカインを分泌したが、非形質導入Ｔ細胞（ＵＴＤ）では最少であった。ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞によるサイトカイン放出の結果。
１：１のＥ／Ｔ比で細胞と共にｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞を一晩（およそ２０時間）共培養したものから上清を回収した。ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ｈＫ２発現細胞との共培養中にはＩＦＮ－γを分泌したが、ｈＫ２－陰性細胞との共培養中には分泌しなかった。ＣＤ３／２８ビーズで刺激したＴ細胞及びＴ細胞のみをそれぞれ陽性対照及び陰性対照として使用した。ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞によるＩＦＮ－γ放出。デュープリケートの培養からの平均ＩＦＮ－γ濃度±ＳＤ（ｐｇ／ｍＬ）を示す。異なる熱安定化ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ｈＫ２（＋）細胞と共培養したとき、異なる量のＩＦＮ－γを生成した。
実施例２３：ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞の増殖
ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞を増殖アッセイで評価する。Ｔ細胞増殖は、インビボ免疫機能の重要なインビトロパラメータである。ｈＫ２ ＣＡＲ Ｔ細胞の機能を更に評価するために、ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞をＣＴＶで標識して、Ｔ細胞増殖を評価する。
ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ及び非形質導入（ＵＴＤ）Ｔ細胞を、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ、５μＭ）で標識し、ｈＫ２（＋）及びｈＫ２（－）細胞と共培養した。共培養の５日後、細胞を収集し、ＣＤ３、ＣＤ２５、ＮｅａｒＩＲ ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ Ｄｙｅ、及びｈＫ２ＣＡＲで染色する。Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアを備えるＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターでフローサイトメトリー分析を行う。リンパ球を生ＣＤ３によって同定し、ＣＴＶ色素希釈及び活性化マーカーＣＤ２５を有するＣＡＲ－Ｔ細胞の頻度を求める。ｈＫ２ ＣＡＲＴ細胞でゲーティングすることにより、図示されているように、ｈＫ２（＋）細胞は全てのＣＡＲコンストラクトを促進するが、ｈＫ２（－）は促進しない。ＣＤ３／２８ビーズで刺激したＴ細胞及びＴ細胞のみをそれぞれ陽性対照及び陰性対照として使用する。任意の刺激なしのＴ細胞のみは増殖せず、ＣＤ３／２８ビーズで刺激されたＴ細胞は等価な増殖パターンを示す。ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、細胞と５日間共培養した後に、ＣＤ３／２８ビーズ陽性対照よりもロバストに増殖した。異なるＣＡＲコンストラクトで遺伝子操作されたＴ細胞は、異なる増殖活性を有し、異なるＣＡＲ－Ｔ細胞数を示した。ＣＡＲ－Ｔ細胞数は、３つの技術的複製物からの平均絶対細胞数＋／－ＳＥＭに基づいている。
このプロトコルは、以下のように行う。腫瘍細胞を収集し、ＰＢＳで２回洗浄し、腫瘍細胞の増殖をブロックするために、３７℃のインキュベーターにおいて１．５時間、１００ｕｇ／ｍＬのマイトマイシンＣ（ＭＭＣ）を含有するＰＢＳ中１０Ｅ６／ｍＬで再懸濁させる。２０μＬのＤＭＳＯをＣＴＶ染色溶液のバイアルに添加する。５μＬの溶液を、５ｍＬ（１：１０００）のＰＢＳ（３７℃に加温）に希釈して、５μＭの染色溶液を提供する。２Ｅ６個のＴ細胞をカウントし、回収し、ＰＢＳで２回洗浄し、４Ｅ６／ｍＬ（０．５ｍＬ）で再懸濁させる。等体積（０．５ｍＬ）のＣＴＶ染色溶液を添加する。細胞を３７℃で２０分間インキュベートする。次いで、４ｍＬのＰＲＭＩ＋２０％ＦＢＳを細胞に添加して、任意の非結合色素を吸収させる。細胞を５分間インキュベートし、４００×ｇで５分間遠心分離する。細胞ペレットを、予熱しておいたＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ培地に再懸濁させる。Ｔ細胞をカウントし、１Ｅ５個の細胞（１００ｕＬ）を９６ウェル平底プレートに播種する。
その間に、ＭＭＣ処理した腫瘍細胞を回収し、１．５時間後にカウントし、次いで、１Ｅ６／ｍＬで再懸濁させる。１Ｅ５個の細胞（１００μＬ）を９６ウェルプレート内でＴ細胞と共培養する。Ｔ細胞のみ、及び３：１の比のＣＤ３／２８ビーズ対細胞を添加したＴ細胞を、それぞれ陰性対照及び陽性対照として使用する。
５日間共培養した後、全ての細胞を各ウェルから回収する。細胞を遠心分離し、４００×ｇで５分間２回洗浄し、次いで、９６ウェルＵ底プレートにおいてｈＫ２ ＣＡＲ、ＣＤ３、ＣＤ８、及びＣＤ２５、ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ（Ｎｅａｒ－ＩＲ）に染色する。洗浄後、全ての細胞を１００μＬのＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘ（商標）固定バッファ（５０ｕＬのＦＡＣＳバッファ＋５０ｕＬの固定バッファ）を使用して１０分間固定する。染色されたサンプルを、インキュベーション期間の終了後にマルチカラーフローサイトメトリーによって分析する。
データ分析は、以下のように行う。ＣＴＶヒストグラムを調製する。単独で培養されたＴ細胞の右端ピーク（ＣＴＶ明）、及び集団の残りを捕捉するためのＣＴＶ希釈ゲートを包含するように、ＣＴＶ未希釈ゲートを設定する。これを全てのサンプルに適用する。
実施例２４：本明細書に記載の様々なコンストラクトで形質導入されたＣＡＲ－Ｔ細胞の特性評価。
生成されたＣＡＲ－Ｔ細胞を、抗原依存性活性についてＪＮＬレポーターアッセイにおいて評価する。簡潔に述べると、シグナル伝達応答性ＮＦＡＴプロモーターによって駆動されるルシフェラーゼ遺伝子を含むＪｕｒｋａｔ細胞（ＪＮＬ細胞と呼ばれる）に、配列番号１５３～１６０、１６１～１６８、１９５～２０４、３２０～３２５、３２６～３３１、及び３３６～３３９の１つ以上の核酸配列を含む任意のコンストラクトを形質導入する。
あるいは、コンストラクトは、以下をコードしている核酸配列を含み得る：
配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号７４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号７５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号７７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号７５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号７５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１４８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１４９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１５１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号１５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
配列番号３１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号３１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域。
ビオチン化ｈＫ２、続いて、ストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥによって、各ＣＡＲの発現を判定する。
ｈＫ２ ＣＡＲコンストラクトとその同種細胞抗原（標的細胞上のｈＫ２）との間の結合によって、ＪＮＬ細胞においてルシフェラーゼが発現する。その目的のために、試験ＣＡＲコンストラクトを形質導入したＪＮＬ細胞又は非形質導入ＪＮＬ細胞（ＵＴＤ）を、標的腫瘍細胞株と共培養し、ルシフェラーゼ活性を発光強度として測定した。発光強度が抗原発現細胞の存在下でＵＴＤ細胞のレベルを１．５倍上回った場合、コンストラクトは活性であるとみなす。
ＣＡＲ－Ｔ細胞は、抗原依存的に腫瘍細胞の殺傷を媒介する
ＣＡＲ１７、ＣＡＲ１８、ＣＡＲ１９、及びＣＡＲ２０を形質導入したＣＡＲ－Ｔ細胞を、Ｔ細胞上のＣＡＲ発現に基づいて計算した１：１又は０．５：１のエフェクター対標的（ＥＴ）比で９６時間、ｈＫ２陽性細胞及びｈＫ２陰性細胞とコインキュベートする。標的細胞は、リアルタイムでＩｎｃｕＣｙｔｅイメージングシステムによって測定された赤色核色素を安定的に発現する。腫瘍細胞成長阻害（％）＝（初期生存標的細胞数－現時点の生存標的細胞数）／初期生存細胞数×１００（％）。試験したＣＡＲ－Ｔ細胞は、およそ１００％のＴＧＩを達成し得るが、非形質導入対照は、いかなるＴＧＩも示し得ない。ｈＫ２陰性細胞中の試験したＣＡＲ－Ｔ細胞では、ＴＧＩは観察され得ない。
ＣＡＲ－Ｔ細胞は、抗原刺激時にサイトカインを産生する
細胞傷害性Ｔ細胞によって産生されたＩＦＮ－γは、腫瘍の免疫監視作用を発揮させるのに非常に重要であり、これにより、増殖を直接阻害し、インビボ及びインビトロにおいて一部の悪性腫瘍のアポトーシスを誘導することができる。ｈＫ２ ＣＡＲ改変ヒトＴ細胞がｈＫ２陽性腫瘍細胞によって認識及び活性化され得るかどうかを判定するために、指定のＣＡＲクローンを形質導入した初代Ｔ細胞及び対照非形質導入Ｔ細胞（ＵＴＤ）を標的細胞株と共培養し、ＩＦＮ－γ濃度測定のために上清を回収した。ｈＫ２ ＣＡＲ細胞を形質導入したＣＡＲ－Ｔ細胞は、ｈＫ２細胞を組換え発現するＬＮＣａｐ細胞との共培養中にＩＦＮ－γを分泌し、また、ｈＫ２発現が非常に少ない細胞との共培養中にも分泌したが、ｈＫ２－陰性細胞では分泌しなかった。
ＣＡＲ－Ｔ細胞は、抗原依存的に活性化され、脱顆粒のマーカーをアップレギュレートする
主に、標的腫瘍細胞を殺傷する溶解顆粒の免疫分泌を通して、ＣＤ８＋Ｔリンパ球及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などの細胞傷害性リンパ球によって、腫瘍細胞を認識及び殺傷することができる。このプロセスは、顆粒膜と免疫エフェクター細胞の細胞質膜との融合を伴い、その結果、典型的にはＣＤ１０７ａなどの溶解顆粒を取り囲む脂質二重層に存在するリソソーム関連タンパク質の表面曝露が生じる。したがって、ＣＤ１０７ａの膜発現は、免疫細胞活性化及び細胞傷害性脱顆粒のマーカーを構成する。
脱顆粒アッセイは、下記のように行う。標的細胞（５×１０４個）を、９６ウェルプレートにおいて０．１ｍＬ／ウェルで等数のエフェクター細胞と共培養する。対照ウェルは、Ｔ細胞のみを含有していた。１μＬ／サンプルのモネンシン（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に加えて抗ＣＤ１０７ａ（５μＬ／ウェル）を添加し、３７℃で４時間インキュベートする。細胞をＰＢＳで２回洗浄し、ｈＫ２ ＣＡＲ、ＣＤ３、及びＣＤ８の発現について染色し、フローサイトメーターＢＤ Ｆｏｒｔｅｓｓａで分析する。
ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、抗原依存的に増殖する
ＣＡＲ－Ｔ細胞を、実施例２３に記載のＴ細胞増殖アッセイプロトコルを使用してその増殖について評価する。ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ及び非形質導入（ＵＴＤ）Ｔ細胞をＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ；５μＭ）で標識し、ｈＫ２陽性及びｈＫ２陰性細胞と共培養する。共培養の５日後、細胞を収集し、ＣＤ３、ＣＤ２５、ＮｅａｒＩＲ ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ Ｄｙｅ、及びｈＫ２ＣＡＲで染色する。Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアを備えるＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターでフローサイトメトリー分析を行う。リンパ球を生ＣＤ３によって同定し、ＣＴＶ色素希釈及び活性化マーカーＣＤ２５を有するＣＡＲ－Ｔ細胞の頻度を求めた。増殖しているＴ細胞及びＣＤ２５を発現しているＴ細胞の百分率は、デュープリケートからの平均絶対細胞数＋／－ＳＥＭに基づいている。
本明細書で引用する全ての特許、公開特許、及び引用文献による教示はその全体が参照により組み込まれる。
例示的実施形態について具体的に示し、記載してきたが、当業者らは、添付の特許請求の範囲に包含される実施形態の範囲から逸脱することなく、形態及び詳細における様々な変更を行い得ることを理解する。
配列表
配列番号１－ＶＬ １（ＬＣＤ６）
ＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＱＳＶＱＡＥＤＶＳＶＹＦＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号２－ＶＬ ２（ＬＣヒト化）
ＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号３－ＶＬ ３（ＬＣＢ７）
ＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号４－ＶＨ １（ＨＣＧ５）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＧＬＥＷＭＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＰＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号５－ＶＨ ２（ＨＣヒト化）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号６－ＶＨ ３（ＨＣＦ３）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＰＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号７－リンカー配列
ＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳ
配列番号８－ｓｃＦＶ １（ＨＬ＿ＨＣＧ５＿ＬＣＤ６＿２０ＡＡ）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＧＬＥＷＭＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＰＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＱＳＶＱＡＥＤＶＳＶＹＦＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号９－ｓｃＦＶ ２（ＨＬ＿ＨＣＧ５＿ＬＣヒト化＿２０ＡＡ）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＧＬＥＷＭＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＰＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１０－ｓｃＦＶ ３（ＨＬ＿ＨＣＦ３＿ＬＣＢ７＿２０ＡＡ）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＰＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１１－ｓｃＦＶ ４（ＨＬ＿ＨＣＧ５＿ＬＣＢ７＿２０ＡＡ）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＧＬＥＷＭＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＰＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１２－ｓｃＦＶ ５（ＬＨ＿ＬＣＤ６＿ＨＣＧ５＿２０ＡＡ）
ＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＱＳＶＱＡＥＤＶＳＶＹＦＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＧＬＥＷＭＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＰＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１３－ｓｃＦＶ ６（ＬＨ＿ＬＣヒト化＿ＨＣＦ３＿２０ＡＡ）
ＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＰＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１４－ｓｃＦＶ ７（ＬＨ＿ＬＣヒト化＿ＨＣＧ５＿２０ＡＡ）
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配列番号１５－ｓｃＦＶ ８（ＬＨ＿ＬＣＢ７＿ＨＣＦ３＿２０ＡＡ）
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配列番号１６－ｓｃＦＶ ９（ＬＨ＿ＬＣＢ７＿ＨＣＧ５＿２０ＡＡ）
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配列番号１７－ｓｃＦＶ １０（ＬＨ＿ＬＣＤ６＿ＨＣＦ３＿２０ＡＡ）
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配列番号１８－ｓｃＦＶ １１（ＨＬ＿ＨＣヒト化＿ＬＣＢ７＿２０ＡＡ）
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配列番号１９－ｓｃＦＶ １２（ＨＬ＿ＨＣヒト化＿ＬＣＤ６＿２０ＡＡ）
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配列番号２０－ｓｃＦＶ １３（ＨＬ＿ＨＣヒト化＿ＬＣヒト化＿２０ＡＡ）
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配列番号２１－ｓｃＦＶ １４（ＬＨ＿ＬＣＤ６＿ＨＣヒト化＿２０ＡＡ）
ＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＱＳＶＱＡＥＤＶＳＶＹＦＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２２－ｓｃＦＶ １５（ＬＨ＿ＬＣヒト化＿ＨＣヒト化＿２０ＡＡ）
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配列番号２３－ｓｃＦＶ １６（ＬＨ＿ＬＣＢ７＿ＨＣヒト化＿２０ＡＡ）
ＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２４－シグナル配列
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配列番号２５－ＣＤ８ａ－ヒンジ
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配列番号２６－ＣＤ８ａ－ＴＭ
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配列番号２７－ＣＤ１３７
ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ
配列番号２８－ＣＤ３ゼータ
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配列番号２９－細胞外抗原結合ドメイン１（ＨＬ＿ＨＣＧ５＿ＬＣＤ６＿２０ＡＡ）
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配列番号３０－細胞外抗原結合ドメイン２（ＨＬ＿ＨＣＧ５＿ＬＣヒト化＿２０ＡＡ）
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配列番号３１－細胞外抗原結合ドメイン３（ＨＬ＿ＨＣＦ３＿ＬＣＢ７＿２０ＡＡ）
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配列番号３２－細胞外抗原結合ドメイン４（ＨＬ＿ＨＣＧ５＿ＬＣＢ７＿２０ＡＡ）
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配列番号３３－細胞外抗原結合ドメイン５（ＬＨ＿ＬＣＤ６＿ＨＣＧ５＿２０ＡＡ）
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配列番号３４－細胞外抗原結合ドメイン６（ＬＨ＿ＬＣヒト化＿ＨＣＦ３＿２０ＡＡ）
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配列番号３５－細胞外抗原結合ドメイン７（ＬＨ＿ＬＣヒト化＿ＨＣＧ５＿２０ＡＡ）
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配列番号３６－細胞外抗原結合ドメイン８（ＬＨ＿ＬＣＢ７＿ＨＣＦ３＿２０ＡＡ）
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配列番号３７－細胞外抗原結合ドメイン９（ＬＨ＿ＬＣＢ７＿ＨＣＧ５＿２０ＡＡ）
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配列番号３８－細胞外抗原結合ドメイン１０（ＬＨ＿ＬＣＤ６＿ＨＣＦ３＿２０ＡＡ）
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配列番号３９－細胞外抗原結合ドメイン１１（ＨＬ＿ＨＣヒト化＿ＬＣＢ７＿２０ＡＡ）
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配列番号４０－細胞外抗原結合ドメイン１２（ＨＬ＿ＨＣヒト化＿ＬＣＤ６＿２０ＡＡ）
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配列番号４１－細胞外抗原結合ドメイン１３（ＨＬ＿ＨＣヒト化＿ＬＣヒト化＿２０ＡＡ）
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配列番号４２－細胞外抗原結合ドメイン１４（ＬＨ＿ＬＣＤ６＿ＨＣヒト化＿２０ＡＡ）
ＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＱＳＶＱＡＥＤＶＳＶＹＦＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号４３－細胞外抗原結合ドメイン１５（ＬＨ＿ＬＣヒト化＿ＨＣヒト化＿２０ＡＡ）
ＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号４４－細胞外抗原結合ドメイン１６（ＬＨ＿ＬＣＢ７＿ＨＣヒト化＿２０ＡＡ）
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配列番号４５－細胞内シグナル伝達ドメイン
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配列番号４６－ＣＡＲ １（ＨＬ＿ＨＣＧ５＿ＬＣＤ６＿２０ＡＡ；ｐＤＲ００００８３４３１）
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配列番号４７－ＣＡＲ ２（ＨＬ＿ＨＣＧ５＿ＬＣヒト化＿２０ＡＡ；ｐＤＲ００００８３４３２）
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配列番号４８－ＣＡＲ ３（ＨＬ＿ＨＣＦ３＿ＬＣＢ７＿２０ＡＡ；ｐＤＲ００００８３４３６）
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配列番号４９－ＣＡＲ ４（ＨＬ＿ＨＣＧ５＿ＬＣＢ７＿２０ＡＡ；ｐＤＲ００００８３４３７）
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配列番号５０－ＣＡＲ ５（ＬＨ＿ＬＣＤ６＿ＨＣＧ５＿２０ＡＡ；ｐＤＲ００００８３４３８）
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配列番号５１－ＣＡＲ ６（ＬＨ＿ＬＣヒト化＿ＨＣＦ３＿２０ＡＡ；ｐＤＲ００００８３４４０）
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配列番号５２－ＣＡＲ ７（ＬＨ＿ＬＣヒト化＿ＨＣＧ５＿２０ＡＡ；ｐＤＲ００００８３４４１）
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配列番号５３－ＣＡＲ ８（ＬＨ＿ＬＣＢ７＿ＨＣＦ３＿２０ＡＡ；ｐＤＲ００００８３４４３）
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配列番号５４－ＣＡＲ ９（ＬＨ＿ＬＣＢ７＿ＨＣＧ５＿２０ＡＡ；ｐＤＲ００００８３４４４）
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配列番号５５－ＣＡＲ １０（ＬＨ＿ＬＣＤ６＿ＨＣＦ３＿２０ＡＡ；ｐＤＲ００００８３４４６）
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配列番号５６－ＣＡＲ １１（ＨＬ＿ＨＣヒト化＿ＬＣＢ７＿２０ＡＡ；ｐＤＲ００００８３４３３）
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配列番号５７－ＣＡＲ １２（ＨＬ＿ＨＣヒト化＿ＬＣＤ６＿２０ＡＡ；ｐＤＲ００００８３４３４）
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配列番号５８－ＣＡＲ １３（ＨＬ＿ＨＣヒト化＿ＬＣヒト化＿２０ＡＡ；ｐＤＲ００００８３４３５）
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配列番号５９－ＣＡＲ １４（ＬＨ＿ＬＣＤ６＿ＨＣヒト化＿２０ＡＡ；ｐＤＲ００００８３４３９）
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配列番号６０－ＣＡＲ １５（ＬＨ＿ＬＣヒト化＿ＨＣヒト化＿２０ＡＡ；ｐＤＲ００００８３４４２）
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配列番号６１－ＣＡＲ １６（ＬＨ＿ＬＣＢ７＿ＨＣヒト化＿２０ＡＡ；ｐＤＲ００００８３４４５）
ＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＴＳＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＫＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
配列番号６２－ヒトカリクレイン－２配列（シグナル配列：アミノ酸１～１８）
ＭＷＤＬＶＬＳＩＡＬＳＶＧＣＴＧＡＶＰＬＩＱＳＲＩＶＧＧＷＥＣＥＫＨＳＱＰＷＱＶＡＶＹＳＨＧＷＡＨＣＧＧＶＬＶＨＰＱＷＶＬＴＡＡＨＣＬＫＫＮＳＱＶＷＬＧＲＨＮＬＦＥＰＥＤＴＧＱＲＶＰＶＳＨＳＦＰＨＰＬＹＮＭＳＬＬＫＨＱＳＬＲＰＤＥＤＳＳＨＤＬＭＬＬＲＬＳＥＰＡＫＩＴＤＶＶＫＶＬＧＬＰＴＱＥＰＡＬＧＴＴＣＹＡＳＧＷＧＳＩＥＰＥＥＦＬＲＰＲＳＬＱＣＶＳＬＨＬＬＳＮＤＭＣＡＲＡＹＳＥＫＶＴＥＦＭＬＣＡＧＬＷＴＧＧＫＤＴＣＧＧＤＳＧＧＰＬＶＣＮＧＶＬＱＧＩＴＳＷＧＰＥＰＣＡＬＰＥＫＰＡＶＹＴＫＶＶＨＹＲＫＷＩＫＤＴＩＡＡＮＰ
配列番号６３－重鎖ＣＤＲ１配列
ＳＤＹＡＷＮ
配列番号６４－重鎖ＣＤＲ２配列
ＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＳＰＳＬＫＳ
配列番号６５－重鎖ＣＤＲ２配列
ＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳ
配列番号６６－重鎖ＣＤＲ３配列
ＧＹＹＹＧＳＧＦ
配列番号６７－軽鎖ＣＤＲ１配列
ＲＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨ
配列番号６８－軽鎖ＣＤＲ１配列
ＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨ
配列番号６９－軽鎖ＣＤＲ２配列
ＡＡＳＮＶＥＳ
配列番号７０－軽鎖ＣＤＲ２配列
ＡＡＳＮＲＥＳ
配列番号７１－軽鎖ＣＤＲ３配列
ＱＱＴＲＫＶＰＹＴ
配列番号７２－重鎖ＣＤＲ１配列
ＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮ
配列番号７３－重鎖ＣＤＲ１配列
ＹＩＳＹＳＧＳＴＴ
配列番号７４－ＶＬ ４（ＫＬ２Ｂ４１３）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＴＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＮＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号７５－ＶＬ ５（ＫＬ２Ｂ３５９）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＡＡＳＮＶＥＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＥＰＥＤＦＡＶＹＦＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号７６－ＶＨ ４（ＫＬ２Ｂ４１３）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＧＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＮＹＤＩＬＴＧＨＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号７７－ＶＨ ５（ＫＬ２Ｂ３５９）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＲＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号７８－細胞外抗原結合ドメイン１７（ＫＬ２Ｂ４１３＿ＨＬ）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＧＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＮＹＤＩＬＴＧＨＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＥＩＶＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＴＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＮＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号７９－細胞外抗原結合ドメイン１８（ＫＬ２Ｂ４１３＿ＬＨ）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＴＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＮＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＧＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＮＹＤＩＬＴＧＨＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号８０－細胞外抗原結合ドメイン１９（ＫＬ２Ｂ３５９－ＨＬ）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＲＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＡＡＳＮＶＥＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＥＰＥＤＦＡＶＹＦＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号８１－細胞外抗原結合ドメイン２０（ＫＬ２Ｂ３５９－ＬＨ）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＡＡＳＮＶＥＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＥＰＥＤＦＡＶＹＦＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＲＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号８２－ＣＡＲ １７（ＫＬ２Ｂ４１３＿ＨＬ；ｐＢＤ００００９１６２８）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＧＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＮＹＤＩＬＴＧＨＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＥＩＶＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＴＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＮＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＴＳＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＫＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
配列番号８３－ＣＡＲ １８（ＫＬ２Ｂ４１３＿ＬＨ；ｐＢＤ００００９１６２３）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＴＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＮＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＧＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＮＹＤＩＬＴＧＨＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＴＳＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＫＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
配列番号８４－ＣＡＲ １９（ＫＬ２Ｂ３５９－ＨＬ；ｐＢＤ００００９１５７６）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＲＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＡＡＳＮＶＥＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＥＰＥＤＦＡＶＹＦＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＴＳＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＫＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
配列番号８５－ＣＡＲ ２０（ＫＬ２Ｂ３５９－ＬＨ；ｐＢＤ００００９１５７７）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＡＡＳＮＶＥＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＥＰＥＤＦＡＶＹＦＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＲＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＴＳＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＫＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
配列番号８６－重鎖ＣＤＲ１配列
ＧＦＴＦＳＳＹＷ
配列番号８７－重鎖ＣＤＲ２配列
ＩＫＱＤＧＳＥＲ
配列番号８８－重鎖ＣＤＲ３配列
ＡＲＤＱＮＹＤＩＬＴＧＨＹＧＭＤＶ
配列番号８９－軽鎖ＣＤＲ１配列
ＱＧＩＳＳＹ
配列番号９０－軽鎖ＣＤＲ２配列
ＡＴＳ
配列番号９１－軽鎖ＣＤＲ３配列
ＱＱＬＮＳＹＰＲＴ
配列番号９２－重鎖ＣＤＲ１配列
ＧＮＳＩＴＳＤＹＡ
配列番号９３－重鎖ＣＤＲ２配列
ＩＳＹＳＧＳＴ
配列番号９４－重鎖ＣＤＲ３配列
ＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦ
配列番号９５－軽鎖ＣＤＲ１配列
ＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬ
配列番号９６－軽鎖ＣＤＲ２配列
ＡＡＳ
配列番号９７－軽鎖ＣＤＲ３配列
ＧＧＮＮＩＧＳＫＳＶＨ
配列番号９８－リンカー配列
ＧＴＳＧＳＳＧＳＧＳＧＧＳＧＳＧＧＧＧ
配列番号９９－リンカー配列
ＧＫＰＧＳＧＫＰＧＳＧＫＰＧＳＧＫＰＧＳ
配列番号１００－重鎖ＣＤＲ２配列
ＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳ
配列番号１０１－重鎖ＣＤＲ１配列
ＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮ
配列番号１０２－重鎖ＣＤＲ１配列
ＳＹＹＷＳ
配列番号１０３－重鎖ＣＤＲ２配列
ＹＩＹＹＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ
配列番号１０４－重鎖ＣＤＲ３配列
ＴＴＩＦＧＶＶＴＰＮＦＹＹＧＭＤＶ
配列番号１０５－重鎖ＣＤＲ１配列
ＧＧＳＩＳＳＹＹＷＳ
配列番号１０６－重鎖ＣＤＲ２配列
ＹＩＹＹＳＧＳＴＮ
配列番号１０７－重鎖ＣＤＲ１配列
ＳＹＤＩＨ
配列番号１０８－重鎖ＣＤＲ２配列
ＩＩＳＹＤＧＳＫＫＤＹＴＤＳＶＫＧ
配列番号１０９－重鎖ＣＤＲ３配列
ＥＳＧＷＳＨＹＹＹＹＧＭＤＶ
配列番号１１０－重鎖ＣＤＲ１配列
ＧＦＴＦＳＳＹＤＩＨ
配列番号１１１－重鎖ＣＤＲ２配列
ＩＩＳＹＤＧＳＫＫＤ
配列番号１１２－重鎖ＣＤＲ２配列
ＲＬＹＶＳＧＦＴＮＹＮＰＳＬＫＳ
配列番号１１３－重鎖ＣＤＲ３配列
ＤＳＧＮＹＷＧＷＦＤＰ
配列番号１１４－重鎖ＣＤＲ２配列
ＲＬＹＶＳＧＦＴＮ
配列番号１１５－重鎖ＣＤＲ１配列
ＹＹＧＭＨ
配列番号１１６－重鎖ＣＤＲ２配列
ＦＩＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ
配列番号１１７－重鎖ＣＤＲ３配列
ＬＰＹＳＧＳＹＷＡＦＤＹ
配列番号１１８－重鎖ＣＤＲ１配列
ＧＦＴＦＳＹＹ
配列番号１１９－重鎖ＣＤＲ２配列
ＦＩＳＹＤＧＳＮＫＹ
配列番号１２０－重鎖ＣＤＲ１配列
ＨＹＡＭＳ
配列番号１２１－重鎖ＣＤＲ２配列
ＴＩＧＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ
配列番号１２２－重鎖ＣＤＲ３配列
ＰＨＩＶＭＶＴＡＬＬＹＤＧＭＤＶ
配列番号１２３－重鎖ＣＤＲ１配列
ＧＦＴＦＳＨＹＡＭＳ
配列番号１２４－重鎖ＣＤＲ３配列
ＴＩＧＧＳＧＧＳＴＹＹ
配列番号１２５－軽鎖ＣＤＲ１配列
ＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＡ
配列番号１２６－軽鎖ＣＤＲ２配列
ＡＡＳＮＶＥＳ
配列番号１２７－軽鎖ＣＤＲ３配列
ＤＤＳＤＲＰＳ
配列番号１２８－軽鎖ＣＤＲ１配列
ＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡ
配列番号１２９－軽鎖ＣＤＲ２配列
ＡＡＳＴＬＱＳ
配列番号１３０－軽鎖ＣＤＲ３配列
ＱＱＬＮＳＹＰＬＴ
配列番号１３１－軽鎖ＣＤＲ２配列
ＡＡＳＴＬＨＳ
配列番号１３２－軽鎖ＣＤＲ３配列
ＱＫＹＮＳＡＰＹＴ
配列番号１３３－軽鎖ＣＤＲ１配列
ＳＧＤＱＬＧＥＮＹＡＣ
配列番号１３４－軽鎖ＣＤＲ２配列
ＱＤＳＫＲＰＳ
配列番号１３５－軽鎖ＣＤＲ３配列
ＱＡＷＤＮＳＩＶＶ
配列番号１３６－軽鎖ＣＤＲ１配列
ＧＧＤＮＩＧＳＫＳＶＨ
配列番号１３７－軽鎖ＣＤＲ２配列
ＤＮＳＤＲＰＳ
配列番号１３８－軽鎖ＣＤＲ３配列
ＱＶＷＤＳＳＳＤＨＰＶＶ
配列番号１３９－軽鎖ＣＤＲ３配列
ＱＶＷＤＳＳＳＤＨＶＶ
配列番号１４０－ＶＨ（ＫＬ２Ｂ３５７、ＫＬ２Ｂ３５７、及びＫＬ２Ｂ３６０））
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１４２－ＶＨ（ＫＬ２Ｂ３０）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＹＹＷＳＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＹＹＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＧＴＴＩＦＧＶＶＴＰＮＦＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号１４３－ＶＨ（ＫＬ２Ｂ５３）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＳＹＤＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＩＩＳＹＤＧＳＫＫＤＹＴＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＤＳＬＲＶＥＤＳＡＶＹＳＣＡＲＥＳＧＷＳＨＹＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ
配列番号１４４－ＶＨ（ＫＬ２Ｂ２４２）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＹＹＷＳＷＬＲＱＰＡＧＳＧＬＥＷＩＧＲＬＹＶＳＧＦＴＮＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＬＳＬＤＰＳＲＮＱＬＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＧＤＳＧＮＹＷＧＷＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１４５－ＶＨ（ＫＬ２Ｂ４６７）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＹＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＦＩＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＨＬＰＹＳＧＳＹＷＡＦＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号１４６－ＶＨ（ＫＬ２Ｂ４９４）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＨＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＴＩＧＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＰＨＩＶＭＶＴＡＬＬＹＤＧＭＤＶＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ
配列番号１４７－ＶＬ（ＫＬ２Ｂ３５７）
ＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＶＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＦＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号１４８－ＶＬ（ＫＬ２Ｂ３０）
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配列番号１４９－ＶＬ（ＫＬ２Ｂ５３）
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配列番号１５０－ＶＬ（ＫＬ２Ｂ２４２）
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配列番号１５１－ＶＬ（ＫＬ２Ｂ４６７）
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配列番号１５２－ＶＬ（ＫＬ２Ｂ４９４）
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配列番号１５３－ＶＨ（ＫＬ２Ｂ３５７）
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配列番号１５４－ＶＨ（ＫＬ２Ｂ３５８）
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配列番号１５５－ＶＨ（ＫＬ２Ｂ３６０）
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配列番号１５６－ＶＨ（ＫＬ２Ｂ３０）
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配列番号１５７－ＶＨ（ＫＬ２Ｂ５３）
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配列番号１５８－ＶＨ（ＫＬ２Ｂ２４２）
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配列番号１５９－ＶＨ（ＫＬ２Ｂ４６７）
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配列番号１６０－ＶＨ（ＫＬ２Ｂ４９４）
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配列番号１６１－ＶＬ（ＫＬ２Ｂ３５７）
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配列番号１６２－ＶＬ（ＫＬ２Ｂ３５８）
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配列番号１６３－ＶＬ（ＫＬ２Ｂ３６０）
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配列番号１６４－ＶＬ（ＫＬ２Ｂ３０）
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配列番号１６６－ＶＬ（ＫＬ２Ｂ２４２）
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配列番号１６７－ＶＬ（ＫＬ２Ｂ４６７）
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配列番号１６９－ＫＬ２Ｂ３５７ ＳｃＦｖ－ＨＬ
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配列番号１７０－ＫＬ２Ｂ３５７ ＳｃＦｖ－ＬＨ
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配列番号１７２－ＫＬ２Ｂ３５８ ＳｃＦｖ－ＬＨ
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配列番号１７３－ＫＬ２Ｂ３６０ ＳｃＦｖ－ＨＬ
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配列番号１７４－ＫＬ２Ｂ３６０ ＳｃＦｖ－ＬＨ
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配列番号１７５－ＫＬ２Ｂ３０ ＳｃＦｖ－ＨＬ
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配列番号１９６－ＫＬ２Ｂ３０ ＬＣ ＤＮＡ
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配列番号２０３－ＫＬ２Ｂ４９４ ＨＣ ＤＮＡ
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配列番号２０４－ＫＬ２Ｂ４９４ ＬＣ ＤＮＡ
ＴＣＴＴＣＴＧＡＧＣＴＧＡＣＴＣＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＧＧＴＧＴＣＡＧＴＧＧＣＣＣＣＡＧＧＡＣＡＧＡＣＧＧＣＣＡＧＧＡＴＴＡＣＣＴＧＴＧＧＧＧＧＡＡＡＣＡＡＣＡＴＴＧＧＡＡＧＴＡＡＡＡＧＴＧＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＴＧＣＴＧＧＴＣＧＴＣＴＡＴＧＡＴＧＡＴＡＧＣＧＡＣＣＧＧＣＣＣＴＣＡＧＧＧＡＴＣＣＣＴＧＡＧＣＧＡＴＴＣＴＣＴＧＧＣＴＣＣＡＡＣＴＣＴＧＧＧＡＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＧＧＴＣＧＡＡＧＣＣＧＧＧＧＡＴＧＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＧＴＧＴＧＧＧＡＴＡＧＴＡＧＴＡＧＴＧＡＴＣＡＴＧＴＧＧＴＡＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＡＣＣＧＴＣＣＴＡＧＧＴＣＡＧＣＣＣＡＡＧＧＣＴＧＣＡＣＣＣＡＧＴＧＴＣＡＣＴＣＴＧＴＴＣＣＣＧＣＣＣＴＣＣＴＣＴＧＡＧＧＡＧＣＴＴＣＡＡＧＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＣＴＧＧＴＧＴＧＴＣＴＣＡＴＡＡＧＴＧＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＧＧＧＡＧＣＣＧＴＧＡＣＡＧＴＧＧＣＣＴＧＧＡＡＧＧＣＣＧＡＴＡＧＣＡＧＣＣＣＣＧＴＣＡＡＧＧＣＧＧＧＡＧＴＧＧＡＧＡＣＣＡＣＣＡＣＡＣＣＣＴＣＣＡＡＡＣＡＡＡＧＣＡＡＣＡＡＣＡＡＧＴＡＣＧＣＧＧＣＣＡＧＣＡＧＣＴＡＴＣＴＧＡＧＣＣＴＧＡＣＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＴＧＧＡＡＧＴＣＣＣＡＣＡＧＡＡＧＣＴＡＣＡＧＣＴＧＣＣＡＧＧＴＣＡＣＧＣＡＴＧＡＡＧＧＧＡＧＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＧＡＣＡＧＴＧＧＣＣＣＣＴＡＣＡＧＡＡＴＧＴＴＣＡ
配列番号２０５－ＣＡＲ（ＫＬ２Ｂ３５７ ＨＬ及びＫＬ２Ｂ３５７ ＬＨ）
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配列番号２０７－ＣＡＲ（ＫＬ２Ｂ３５８ ＨＬ）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＡＡＳＮＶＥＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＥＰＥＤＦＡＶＹＦＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＴＳＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＫＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
配列番号２０８－ＣＡＲ（ＫＬ２Ｂ３５８ ＬＨ）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＡＡＳＮＶＥＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＥＰＥＤＦＡＶＹＦＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＴＳＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＫＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
配列番号２０９－ＣＡＲ（ＫＬ２Ｂ３６０ ＨＬ）
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配列番号２１０－ＣＡＲ（ＫＬ２Ｂ３６０ ＬＨ）
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配列番号２１１－ＣＡＲ（ＫＬ２Ｂ３０ ＨＬ）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＹＹＷＳＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＹＹＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＧＴＴＩＦＧＶＶＴＰＮＦＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＦＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＮＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＴＳＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＫＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
配列番号２１２－ＣＡＲ（ＫＬ２Ｂ３０ ＬＨ）
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配列番号２１３－ＣＡＲ（ＫＬ２Ｂ５３ ＨＬ）
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配列番号２１４－ＣＡＲ（ＫＬ２Ｂ５３ ＬＨ）
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＦＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＫＹＮＳＡＰＹＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＳＹＤＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＩＩＳＹＤＧＳＫＫＤＹＴＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＤＳＬＲＶＥＤＳＡＶＹＳＣＡＲＥＳＧＷＳＨＹＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳＴＳＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＫＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
配列番号２１５－ＣＡＲ（ＫＬ２Ｂ２４２ ＨＬ）
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配列番号２１６－ＣＡＲ（ＫＬ２Ｂ２４２ ＬＨ）
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配列番号２１７－ＣＡＲ（ＫＬ２Ｂ４６７ ＨＬ）
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配列番号２１８－ＣＡＲ（ＫＬ２Ｂ４６７ ＬＨ）
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配列番号２１９－ＣＡＲ（ＫＬ２Ｂ４９４ ＨＬ）
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配列番号２２０－ＣＡＲ（ＫＬ２Ｂ４９４ ＬＨ）
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配列番号２２１－細胞外抗原結合ドメイン（ＫＬ２Ｂ３５７ ＨＬ）
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配列番号２２２－細胞外抗原結合ドメイン（ＫＬ２Ｂ３５７ ＬＨ）
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配列番号２２３－細胞外抗原結合ドメイン（ＫＬ２Ｂ３５８ ＨＬ）
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配列番号２２６－細胞外抗原結合ドメイン（ＫＬ２Ｂ３６０ ＬＨ）
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配列番号２２８－細胞外抗原結合ドメイン（ＫＬ２Ｂ３０ ＬＨ）
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配列番号２３０－細胞外抗原結合ドメイン（ＫＬ２Ｂ５３ ＬＨ）
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配列番号２３１－細胞外抗原結合ドメイン（ＫＬ２Ｂ２４２ ＨＬ）
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配列番号２３２－細胞外抗原結合ドメイン（ＫＬ２Ｂ２４２ ＬＨ）
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配列番号２３４－細胞外抗原結合ドメイン（ＫＬ２Ｂ４６７ ＬＨ）
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配列番号２３６－細胞外抗原結合ドメイン（ＫＬ２Ｂ４９４ ＬＨ）
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配列番号２３７－リンカー配列
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配列番号２３９－リンカー配列
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配列番号２４８－リンカー配列
ＧＧＧＫＳＧＧＧＫＳＧＧＧＫＳ
配列番号２４９－リンカー配列
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配列番号２５０－リンカー配列
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配列番号２５２－リンカー配列
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配列番号２５３－リンカー配列
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配列番号２５４－リンカー配列
ＳＴＡＧＤＴＨＬＧＧＥＤＦＤ
配列番号２５５－リンカー配列
ＧＥＧＧＳＧＥＧＧＳＧＥＧＧＳ
配列番号２５６－リンカー配列
ＧＧＥＧＳＧＧＥＧＳＧＧＥＧＳ
配列番号２５７－リンカー配列
ＧＥＧＥＳＧＥＧＥＳＧＥＧＥＳ
配列番号２５８－リンカー配列
ＧＧＧＥＳＧＧＥＧＳＧＥＧＧＳ
配列番号２５９－リンカー配列
ＧＥＧＥＳＧＥＧＥＳＧＥＧＥＳＧＥＧＥＳ
配列番号２６０－リンカー配列
ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ
配列番号２６１－リンカー配列
ＰＲＧＡＳＫＳＧＳＡＳＱＴＧＳＡＰＧＳ
配列番号２６２－リンカー配列
ＧＴＡＡＡＧＡＧＡＡＧＧＡＡＡＧＡＡＧ
配列番号２６３－リンカー配列
ＧＴＳＧＳＳＧＳＧＳＧＧＳＧＳＧＧＧＧ
配列番号２６４－リンカー配列
ＧＫＰＧＳＧＫＰＧＳＧＫＰＧＳＧＫＰＧＳ
配列番号２６５－リンカー配列
ＧＳＧＳ
配列番号２６６－リンカー配列
ＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰ
配列番号２６７－リンカー配列
ＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰ
配列番号２６８－リンカー配列
ＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＡＫＥＡＡＡＡＫＥＡＡＡＡＫＡＡＡ
配列番号２６９－ＣＡＲヒンジ配列
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ
配列番号２７０－ＣＡＲヒンジ配列
ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ
配列番号２７１－ＣＡＲヒンジ配列
ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＣＰＲＣＰ（ＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰ）３
配列番号２７２－ＣＡＲヒンジ配列
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰ
配列番号２７３－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン１（ＨＬ＿ＨＣＧ５＿ＬＣＤ６＿２０ＡＡ）
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＧＬＥＷＭＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＰＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＱＳＶＱＡＥＤＶＳＶＹＦＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号２７４－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン２（ＨＬ＿ＨＣＧ５＿ＬＣヒト化＿２０ＡＡ）
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＧＬＥＷＭＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＰＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号２７５－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン３（ＨＬ＿ＨＣＦ３＿ＬＣＢ７＿２０ＡＡ）
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＰＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号２７６－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン４（ＨＬ＿ＨＣＧ５＿ＬＣＢ７＿２０ＡＡ）
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＧＬＥＷＭＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＰＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号２７７－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン５（ＬＨ＿ＬＣＤ６＿ＨＣＧ５＿２０ＡＡ）
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＱＳＶＱＡＥＤＶＳＶＹＦＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＧＬＥＷＭＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＰＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２７８－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン６（ＬＨ＿ＬＣヒト化＿ＨＣＦ３＿２０ＡＡ）
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＰＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２７９－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン７（ＬＨ＿ＬＣヒト化＿ＨＣＧ５＿２０ＡＡ）
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＧＬＥＷＭＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＰＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２８０－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン８（ＬＨ＿ＬＣＢ７＿ＨＣＦ３＿２０ＡＡ）
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＰＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２８１－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン９（ＬＨ＿ＬＣＢ７＿ＨＣＧ５＿２０ＡＡ）
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＧＬＥＷＭＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＰＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２８２－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン１０（ＬＨ＿ＬＣＤ６＿ＨＣＦ３＿２０ＡＡ）
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＱＳＶＱＡＥＤＶＳＶＹＦＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＰＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２８３－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン１１（ＨＬ＿ＨＣヒト化＿ＬＣＢ７＿２０ＡＡ）
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号２８４－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン１２（ＨＬ＿ＨＣヒト化＿ＬＣＤ６＿２０ＡＡ）
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＱＳＶＱＡＥＤＶＳＶＹＦＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号２８５－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン１３（ＨＬ＿ＨＣヒト化＿ＬＣヒト化＿２０ＡＡ）
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号２８６－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン１４（ＬＨ＿ＬＣＤ６＿ＨＣヒト化＿２０ＡＡ）
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＱＳＶＱＡＥＤＶＳＶＹＦＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２８７－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン１５（ＬＨ＿ＬＣヒト化＿ＨＣヒト化＿２０ＡＡ）
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２８８－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン１６（ＬＨ＿ＬＣＢ７＿ＨＣヒト化＿２０ＡＡ）
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２８９－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン１７（ＫＬ２Ｂ４１３＿ＨＬ）
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＧＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＮＹＤＩＬＴＧＨＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＥＩＶＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＴＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＮＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号２９０－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン１８（ＫＬ２Ｂ４１３＿ＬＨ）
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＥＩＶＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＴＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＮＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＧＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＮＹＤＩＬＴＧＨＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号２９１－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン１９（ＫＬ２Ｂ３５９－ＨＬ）
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＲＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＡＡＳＮＶＥＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＥＰＥＤＦＡＶＹＦＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号２９２－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン２０（ＫＬ２Ｂ３５９－ＬＨ）
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＡＡＳＮＶＥＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＥＰＥＤＦＡＶＹＦＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＲＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２９３－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン（ＫＬ２Ｂ３５７ ＨＬ）
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＶＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＦＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号２９４－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン（ＫＬ２Ｂ３５７ ＬＨ）
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＶＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＦＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２９５－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン（ＫＬ２Ｂ３５８ ＨＬ）
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＡＡＳＮＶＥＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＥＰＥＤＦＡＶＹＦＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号２９６－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン（ＫＬ２Ｂ３５８ ＬＨ）
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＡＡＳＮＶＥＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＥＰＥＤＦＡＶＹＦＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２９７－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン（ＫＬ２Ｂ３６０ ＨＬ）
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配列番号２９８－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン（ＫＬ２Ｂ３６０ ＬＨ）
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配列番号２９９－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン（ＫＬ２Ｂ３０ ＨＬ）
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配列番号３００－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン（ＫＬ２Ｂ３０ ＬＨ）
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配列番号３０１－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン（ＫＬ２Ｂ５３ ＨＬ）
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配列番号３０２－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン（ＫＬ２Ｂ５３ ＬＨ）
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＦＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＫＹＮＳＡＰＹＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＳＹＤＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＩＩＳＹＤＧＳＫＫＤＹＴＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＤＳＬＲＶＥＤＳＡＶＹＳＣＡＲＥＳＧＷＳＨＹＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ
配列番号３０３－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン（ＫＬ２Ｂ２４２ ＨＬ）
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配列番号３０４－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン（ＫＬ２Ｂ２４２ ＬＨ）
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配列番号３０５－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン（ＫＬ２Ｂ４６７ ＨＬ）
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配列番号３０６－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン（ＫＬ２Ｂ４６７ ＬＨ）
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配列番号３０７－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン（ＫＬ２Ｂ４９４ ＨＬ）
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配列番号３０８－シグナルペプチドを有する細胞外抗原結合ドメイン（ＫＬ２Ｂ４９４ ＬＨ）
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＳＳＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＱＴＡＲＩＴＣＧＧＮＮＩＧＳＫＳＶＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＶＹＤＤＳＤＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧＤＥＡＤＹＹＣＱＶＷＤＳＳＳＤＨＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＨＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＴＩＧＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＰＨＩＶＭＶＴＡＬＬＹＤＧＭＤＶＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ
配列番号３０９－重鎖ＣＤＲ１配列
ＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴ
配列番号３１０－重鎖ＣＤＲ２配列
ＮＩＫＱＤＧＳＥＲＹ
配列番号３１１－重鎖ＣＤＲ３配列
ＤＱＮＹＤＩＬＴＧＨＹＧＭＤＶ
配列番号３１２－軽鎖ＣＤＲ１配列
ＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＳ
配列番号３１３－軽鎖ＣＤＲ２配列
ＡＴＳＴＬＱＳ
配列番号３１４－重鎖ＣＤＲ１配列
ＳＹＷＭＴ
配列番号３１５－重鎖ＣＤＲ２配列
ＮＩＫＱＤＧＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧ
配列番号３１６－重鎖ＣＤＲ２配列
ＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＳＰＳＬＫＳ
配列番号３１７－ＶＨ（ｍ１１Ｂ６）
ＤＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＳＬＳＬＴＣＴＶＴＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＮＲＬＥＷＭＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＳＰＳＬＫＳＲＦＳＩＴＲＤＴＳＫＮＱＦＦＬＱＬＮＳＶＴＰＥＤＴＡＴＹＦＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３１８－ＶＬ（ｍ１１Ｂ６）
ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＲＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＲＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＶＥＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＮＩＱＰＶＥＥＤＤＦＳＭＹＦＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号３１９－ヒトカリクレイン－２ ６－Ｈｉｓタンパク質
ＶＰＬＩＥＧＲＩＶＧＧＷＥＣＥＫＨＳＱＰＷＱＶＡＶＹＳＨＧＷＡＨＣＧＧＶＬＶＨＰＱＷＶＬＴＡＡＨＣＬＫＫＮＳＱＶＷＬＧＲＨＮＬＦＥＰＥＤＴＧＱＲＶＰＶＳＨＳＦＰＨＰＬＹＮＭＳＬＬＫＨＱＳＬＲＰＤＥＤＳＳＨＤＬＭＬＬＲＬＳＥＰＡＫＩＴＤＶＶＫＶＬＧＬＰＴＱＥＰＡＬＧＴＴＣＹＡＳＧＷＧＳＩＥＰＥＥＦＬＲＰＲＳＬＱＣＶＳＬＨＹＳＥＫＶＴＥＦＭＬＣＡＧＬＷＴＧＧＫＤＴＣＧＧＤＳＧＧＰＬＶＣＮＧＶＬＱＧＩＴＳＷＧＰＥＰＣＡＬＰＥＫＰＡＶＹＴＫＶＶＨＹＲＫＷＩＫＤＴＩＡＡＮＰＨＨＨＨＨＨ
配列番号３２０－ＶＨ ｃＤＮＡ（ｍ１１Ｂ６）
ＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣＴＴＣＡＧＧＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＣＧＧＡＣＴＴＧＴＴＡＡＡＣＣＡＡＧＴＣＡＧＴＣＴＣＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＴＡＣＣＧＴＣＡＣＣＧＧＣＡＡＣＡＧＣＡＴＣＡＣＡＡＧＣＧＡＴＴＡＣＧＣＡＴＧＧＡＡＣＴＧＧＡＴＣＡＧＧＣＡＧＴＴＣＣＣＴＧＧＡＡＡＴＣＧＡＣＴＣＧＡＡＴＧＧＡＴＧＧＧＣＴＡＣＡＴＴＴＣＡＴＡＣＴＣＣＧＧＴＴＣＡＡＣＣＡＣＴＴＡＣＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＴＧＡＡＡＴＣＴＡＧＧＴＴＣＡＧＣＡＴＣＡＣＣＣＧＴＧＡＴＡＣＣＴＣＡＡＡＧＡＡＣＣＡＡＴＴＴＴＴＴＣＴＧＣＡＡＣＴＧＡＡＴＡＧＣＧＴＡＡＣＴＣＣＡＧＡＧＧＡＣＡＣＡＧＣＣＡＣＡＴＡＴＴＴＣＴＧＣＧＣＣＡＣＴＧＧＧＴＡＴＴＡＣＴＡＴＧＧＣＴＣＡＧＧＴＴＴＣＴＧＧＧＧＴＣＡＧＧＧＣＡＣＴＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＡＧＣＡＧＣ
配列番号３２１－ＶＨ ｃＤＮＡ（ｈｕ１１Ｂ６）
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配列番号３２２－ＶＨ ｃＤＮＡ（ＨＣＦ３－ＬＣＤ６）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＡＧＣＧＧＣＣＣＡＧＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＡＡＧＣＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＧＣＣＧＴＧＡＧＣＧＧＣＡＡＣＡＧＣＡＴＣＡＣＣＡＧＣＧＡＣＴＡＣＧＣＣＴＧＧＡＡＣＴＧＧＡＴＣＣＧＣＣＡＧＴＴＣＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＣＴＡＣＡＴＣＡＧＣＴＡＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＡＣＣＡＣＣＴＡＣＡＡＣＣＣＡＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＧＣＣＧＣＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＣＧＣＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＴＴＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＣＣＴＧＴＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＣＣＧＧＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＴＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＡＧＣＡＧＣ
配列番号３２３－ＶＨ ｃＤＮＡ（ＨＣＧ５－ＬＣＢ７）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＡＧＣＧＧＣＣＣＡＧＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＡＡＧＣＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＧＣＣＧＴＧＡＧＣＧＧＣＡＡＣＡＧＣＡＴＣＡＣＣＡＧＣＧＡＣＴＡＣＧＣＣＴＧＧＡＡＣＴＧＧＡＴＣＣＧＣＣＡＧＴＴＣＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＣＴＡＣＡＴＣＡＧＣＴＡＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＡＣＣＡＣＣＴＡＣＡＡＣＣＣＡＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＧＣＣＧＣＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＣＧＣＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＴＴＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＣＣＴＧＴＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＣＣＧＧＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＴＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＡＧＣＡＧＣ
配列番号３２４－ＶＨ ｃＤＮＡ（ＫＬ２Ｂ３５９）
ＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣＡＡＧＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＡＧＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＣＣＣＴＣＴＣＡＧＡＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＡＣＣＴＧＴＡＣＣＧＴＧＴＣＣＧＧＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＣＴＣＴＧＡＣＴＡＣＧＣＣＴＧＧＡＡＣＴＧＧＡＴＴＣＧＧＣＡＧＴＴＣＣＣＴＧＧＣＡＡＧＣＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＣＴＡＣＡＴＣＴＣＣＴＡＣＴＣＣＧＧＴＴＣＣＡＣＣＡＣＣＴＡＣＡＡＣＣＣＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＴＣＣＣＧＧＧＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＣＧＣＧＡＣＡＣＣＴＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＴＴＣＴＣＣＣＴＧＡＡＧＣＴＧＴＣＣＴＣＣＧＴＧＡＣＣＧＣＴＧＣＴＧＡＴＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＣＡＣＣＧＧＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＴＣＣＧＧＣＴＴＴＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＣＡＣＴＧＧＴＴＡＣＣＧＴＧＴＣＴＡＧＴ
配列番号３２５－ＶＨ ｃＤＮＡ（ＫＬ２Ｂ４１３）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＡＣＴＴＧＴＧＧＡＧＡＧＣＧＧＣＧＧＡＧＧＴＣＴＧＧＴＣＣＡＡＣＣＣＧＧＡＧＧＡＡＧＴＣＴＣＣＧＴＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＴＧＣＴＡＧＴＧＧＣＴＴＣＡＣＴＴＴＣＡＧＣＴＣＡＴＡＴＴＧＧＡＴＧＡＣＡＴＧＧＧＴＧＡＧＡＣＡＡＧＣＣＣＣＡＧＧＡＡＡＧＧＧＧＣＴＣＧＡＧＴＧＧＧＴＡＧＣＴＡＡＣＡＴＴＡＡＡＣＡＧＧＡＣＧＧＣＴＣＣＧＡＡＣＧＧＴＡＣＴＡＴＧＴＴＧＡＴＴＣＴＧＴＧＡＡＧＧＧＡＣＧＧＴＴＣＡＣＴＡＴＡＴＣＣＡＧＧＧＡＴＡＡＴＧＣＡＡＡＡＡＡＴＴＣＡＣＴＣＴＡＴＣＴＴＣＡＡＡＴＧＡＡＣＴＣＡＣＴＣＡＧＡＧＣＡＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＴＴＧＣＧＣＣＡＧＧＧＡＴＣＡＡＡＡＴＴＡＴＧＡＣＡＴＡＣＴＧＡＣＣＧＧＴＣＡＴＴＡＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＧＴＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＡＡＣＣＧＴＴＡＣＣＧＴＣＴＣＡＡＧＴ
配列番号３２６－ＶＬ ｃＤＮＡ（ｍ１１Ｂ６）
ＧＡＣＡＴＴＧＴＧＣＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＴＣＣＡＧＣＡＴＣＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＴＣＴＴＴＧＧＧＧＣＡＧＣＧＧＧＣＡＡＣＡＡＴＴＴＣＡＴＧＣＣＧＴＧＣＡＴＣＴＧＡＡＡＧＴＧＴＧＧＡＧＴＡＴＴＴＴＧＧＡＡＣＴＴＣＴＣＴＴＡＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＴＣＧＣＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＣＡＡＡＣＴＣＣＴＴＡＴＡＴＡＴＧＣＣＧＣＴＴＣＣＡＡＣＧＴＧＧＡＧＴＣＣＧＧＡＧＴＡＣＣＡＧＣＡＣＧＣＴＴＴＴＣＣＧＧＣＴＣＴＧＧＧＴＣＣＧＧＣＡＣＡＧＡＣＴＴＴＴＣＣＣＴＣＡＡＴＡＴＣＣＡＡＣＣＴＧＴＴＧＡＡＧＡＡＧＡＣＧＡＴＴＴＴＴＣＣＡＴＧＴＡＴＴＴＴＴＧＣＣＡＡＣＡＧＡＣＡＣＧＣＡＡＧＧＴＴＣＣＡＴＡＴＡＣＡＴＴＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＡＣＴＡＡＡＣＴＴＧＡＧＡＴＣＡＡＡ
配列番号３２７－ＶＬ ｃＤＮＡ（ｈｕ１１Ｂ６）
ＧＡＣＡＴＡＧＴＣＴＴＧＡＣＴＣＡＧＡＧＣＣＣＧＧＡＴＴＣＣＣＴＴＧＣＴＧＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＡＧＡＡＣＧＡＧＣＴＡＣＧＡＴＣＡＡＣＴＧＣＡＡＧＧＣＡＡＧＴＧＡＡＴＣＣＧＴＡＧＡＡＴＡＣＴＴＣＧＧＧＡＣＡＴＣＡＴＴＧＡＴＧＣＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＧＧＧＧＣＡＡＣＣＧＣＣＣＡＡＡＴＴＧＣＴＧＡＴＡＴＡＴＧＣＧＧＣＴＡＧＴＡＡＴＡＧＡＧＡＡＴＣＡＧＧＡＧＴＡＣＣＧＧＡＴＡＧＧＴＴＴＡＧＴＧＧＴＴＣＡＧＧＡＴＣＡＧＧＴＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＡＴＡＡＧＴＡＧＣＴＴＧＣＡＡＧＣＣＧＡＡＧＡＣＧＴＡＧＣＡＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＣＣＡＡＣＡＡＡＣＣＣＧＡＡＡＧＧＴＧＣＣＡＴＡＴＡＣＧＴＴＴＧＧＡＣＡＧＧＧＴＡＣＡＡＡＧＴＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡ
配列番号３２８－ＶＬ ｃＤＮＡ（ＨＣＦ３－ＬＣＤ６）
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配列番号３２９－ＶＬ ｃＤＮＡ（ＨＣＧ５－ＬＣＢ７）
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配列番号３３０－ＶＬ ｃＤＮＡ（ＫＬ２Ｂ３５９）
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配列番号３３１－ＶＬ ｃＤＮＡ（ＫＬ２Ｂ４１３）
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配列番号３３２－ｍ１１Ｂ６ ＨＣ ＩｇＧ４
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配列番号３３３－ｍ１１Ｂ６ ＬＣ ＩｇＧ４
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配列番号３３４－ｈ１１Ｂ６ ＨＣ ＩｇＧ４
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配列番号３３５－ｈ１１Ｂ６ ＬＣ ＩｇＧ４
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配列番号３３６－ｍ１１Ｂ６ ＨＣ ＤＮＡ
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配列番号３３７－ｍｕ１１Ｂ６ ＬＣ ＤＮＡ
ＧＡＣＡＴＴＧＴＧＣＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＴＣＣＡＧＣＡＴＣＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＴＣＴＴＴＧＧＧＧＣＡＧＣＧＧＧＣＡＡＣＡＡＴＴＴＣＡＴＧＣＣＧＴＧＣＡＴＣＴＧＡＡＡＧＴＧＴＧＧＡＧＴＡＴＴＴＴＧＧＡＡＣＴＴＣＴＣＴＴＡＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＴＣＧＣＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＣＡＡＡＣＴＣＣＴＴＡＴＡＴＡＴＧＣＣＧＣＴＴＣＣＡＡＣＧＴＧＧＡＧＴＣＣＧＧＡＧＴＡＣＣＡＧＣＡＣＧＣＴＴＴＴＣＣＧＧＣＴＣＴＧＧＧＴＣＣＧＧＣＡＣＡＧＡＣＴＴＴＴＣＣＣＴＣＡＡＴＡＴＣＣＡＡＣＣＴＧＴＴＧＡＡＧＡＡＧＡＣＧＡＴＴＴＴＴＣＣＡＴＧＴＡＴＴＴＴＴＧＣＣＡＡＣＡＧＡＣＡＣＧＣＡＡＧＧＴＴＣＣＡＴＡＴＡＣＡＴＴＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＡＣＴＡＡＡＣＴＴＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＧＧＣＴＧＡＴＧＣＴＧＣＡＣＣＧＡＣＴＧＴＧＴＣＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＡＴＣＣＡＧＴＧＡＧＣＡＧＴＴＡＡＣＡＴＣＴＧＧＡＧＧＴＧＣＣＴＣＡＧＴＣＧＴＧＴＧＣＴＴＣＴＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＡＡＧＡＣＡＴＣＡＡＴＧＴＣＡＡＧＴＧＧＡＡＧＡＴＴＧＡＴＧＧＣＡＧＴＧＡＡＣＧＡＣＡＡＡＡＴＧＧＣＧＴＣＣＴＧＡＡＣＡＧＴＴＧＧＡＣＴＧＡＴＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＡＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＡＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＣＡＣＧＴＴＧＡＣＣＡＡＧＧＡＣＧＡＧＴＡＴＧＡＡＣＧＡＣＡＴＡＡＣＡＧＣＴＡＴＡＣＣＴＧＴＧＡＧＧＣＣＡＣＴＣＡＣＡＡＧＡＣＡＴＣＡＡＣＴＴＣＡＣＣＣＡＴＴＧＴＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＡＡＴＧＡＧＴＧＴ
配列番号３３８－ｈｕ１１Ｂ６ ＨＣ ＤＮＡ
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配列番号３３９－ｈｕ１１Ｂ６ ＬＣ ＤＮＡ
ＧＡＣＡＴＡＧＴＣＴＴＧＡＣＴＣＡＧＡＧＣＣＣＧＧＡＴＴＣＣＣＴＴＧＣＴＧＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＡＧＡＡＣＧＡＧＣＴＡＣＧＡＴＣＡＡＣＴＧＣＡＡＧＧＣＡＡＧＴＧＡＡＴＣＣＧＴＡＧＡＡＴＡＣＴＴＣＧＧＧＡＣＡＴＣＡＴＴＧＡＴＧＣＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＧＧＧＧＣＡＡＣＣＧＣＣＣＡＡＡＴＴＧＣＴＧＡＴＡＴＡＴＧＣＧＧＣＴＡＧＴＡＡＴＡＧＡＧＡＡＴＣＡＧＧＡＧＴＡＣＣＧＧＡＴＡＧＧＴＴＴＡＧＴＧＧＴＴＣＡＧＧＡＴＣＡＧＧＴＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＡＴＡＡＧＴＡＧＣＴＴＧＣＡＡＧＣＣＧＡＡＧＡＣＧＴＡＧＣＡＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＣＣＡＡＣＡＡＡＣＣＣＧＡＡＡＧＧＴＧＣＣＡＴＡＴＡＣＧＴＴＴＧＧＡＣＡＧＧＧＴＡＣＡＡＡＧＴＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴ
配列番号３４０－ｓｃＦｖ １７（ＫＬ２Ｂ４１３ ＨＬ）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＧＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＮＹＤＩＬＴＧＨＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＥＩＶＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＴＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＮＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号３４１－ｓｃＦｖ １８（ＫＬ２Ｂ４１３ ＬＨ）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＴＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＮＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＧＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＮＹＤＩＬＴＧＨＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号３４２－ｓｃＦｖ １９（ＫＬ２Ｂ３５９ ＨＬ）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＲＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＡＡＳＮＶＥＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＥＰＥＤＦＡＶＹＦＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号３４３－ｓｃＦｖ ２０（ＫＬ２Ｂ３５９ ＬＨ）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＡＡＳＮＶＥＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＥＰＥＤＦＡＶＹＦＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＲＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３４４（ＶＨコンセンサス配列）
Figure 2022535150000037
Ｘ１は、Ｄ若しくはＱである；Ｘ２は、Ａ若しくはＴである；Ｘ３は、Ｐ若しくはＦである；Ｘ４は、Ｉ若しくはＭである；Ｘ５は、Ａ若しくはＰである；又はＸ６は、Ｖ又はＡである。ＨＣＤＲ残基には下線が引かれている。
配列番号３４５（ＶＬコンセンサス配列）
Figure 2022535150000038
Ｘ１は、Ｄ又はＥであり；Ｘ２は、Ｄ又はＡであり；Ｘ３は、Ｓ又はＴであり；Ｘ４は、Ａ又はＳであり；Ｘ５は、Ｖ又はＬであり；Ｘ６は、Ｌ又はＰであり；Ｘ７は、Ｉ又はＬであり；Ｘ８は、Ｎ又はＳであり；Ｘ９は、Ｒ又はＫであり；Ｘ１０は、Ｋ又はＲであり；Ｘ１１は、Ｖ又はＲであり；Ｘ１２は、Ｖ又はＩであり；Ｘ１３は、Ａ又はＤであり；Ｘ１４は、Ｑ又はＳである。Ｘ１５は、Ｐ又はＡであり；Ｘ１６は、Ｆ又はＶであり；Ｘ１７は、Ｙ又はＦであり；Ｘ１８は、Ｑ又はＧであり；Ｘ１９は、Ｌ又はＶである。ＬＣＤＲ残基には下線が引かれている。
配列番号３４６－エピトープ
ＫＶＴＥＦ
配列番号３４７－エピトープ
ＨＹＲＫＷ
配列番号３４８－エピトープ
ＳＨＧＷＡＨ
配列番号３４９－エピトープ
ＲＨＮＬＦＥＰＥＤＴＧＱＲＶＰ
配列番号３５０－エピトープ
ＧＷＧＳＩＥＰＥＥ

Claims (42)

  1. キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、
    （ａ）ヒトカリクレイン－２（ｈＫ２）抗原に特異的に結合する細胞外ドメインと、
    （ｂ）膜貫通ドメインと、
    （ｃ）少なくとも１つの共刺激ドメインを任意選択で含む細胞内シグナル伝達ドメインと、
    を含む、ＣＡＲ。
  2. 請求項１に記載のＣＡＲであって、
    （ｄ）ＣＤ８ａ－ヒンジ領域
    を更に含み、
    前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８ａ膜貫通領域（ＣＤ８ａ－ＴＭ）ポリペプチドを含み；
    前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（ＣＤ１３７）成分を含む共刺激ドメイン及びＴ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ｚ）成分を含む一次シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲ。
  3. 請求項２に記載のＣＡＲであって、
    前記ＣＤ８ａ－ヒンジ領域が、配列番号２５、２６９、２７０、２７１、若しくは２７２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    前記膜貫通ドメインが、配列番号２６と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、並びに／又は
    前記細胞内シグナル伝達ドメインが、配列番号２７と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する共刺激ドメイン、及び配列番号２８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する一次シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲ。
  4. 細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、前記細胞外抗原結合ドメインが、
    配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；配列番号３１４のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３１５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３１１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
    配列番号３０９のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３１０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３１１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
    配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
    配列番号７２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
    配列番号８６のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号８７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
    配列番号９２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
    配列番号１０２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１０３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
    配列番号１０５のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１０６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
    配列番号１０７のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１０８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
    配列番号１１０のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
    配列番号１０２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
    配列番号１０５のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
    配列番号１１５のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
    配列番号１１８のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
    配列番号１２０のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１２２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；又は
    配列番号１２３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１２２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
    を含み、
    前記細胞外抗原結合ドメインは、ｈＫ２抗原に結合する、ＣＡＲ。
  5. 細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、前記細胞外抗原結合ドメインが、
    配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    配列番号６８のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    配列番号８９のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    配列番号９５のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    配列番号３１２のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３１３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    配列番号８９のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    配列番号１３６のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；又は
    配列番号９７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３、
    を含み、
    前記細胞外抗原結合ドメインが、ｈＫ２抗原に結合する、ＣＡＲ。
  6. 請求項４に記載のＣＡＲであって、前記細胞外抗原結合ドメインが、
    配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    配列番号６８のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    配列番号８９のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    配列番号９５のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    配列番号８９のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    配列番号１３６のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；又は
    配列番号９７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３、
    を更に含む、ＣＡＲ。
  7. 請求項６に記載のＣＡＲであって、前記細胞外抗原結合ドメインが、
    配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６８のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号７０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号７１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    配列番号３１４のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３１５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号３１１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号３１２のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３１３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    配列番号１０２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１０３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１０４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    配列番号１０７のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１０８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１０９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    配列番号１０２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１１３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    配列番号１１５のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１１６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１１７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号１３６のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１３７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；又は
    配列番号１２０のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号１２２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号９７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む、ＣＡＲ。
  8. 前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号８６のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号８７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、配列番号８８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、及び配列番号８９のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む、請求項６に記載のＣＡＲ。
  9. 細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、前記細胞外抗原結合ドメインが、
    配列番号１、２、３、７４、７５、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、及び３１８から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、並びに／又は
    配列番号４、５、６、７６、７７、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、及び３１７から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、
    を含み、
    前記細胞外抗原結合ドメインが、ヒトカリクレイン－２（ｈＫ２）抗原に結合する、ＣＡＲ。
  10. 請求項９に記載のＣＡＲであって、前記細胞外抗原結合ドメインが、
    配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
    配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
    配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
    配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
    配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
    配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
    配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
    配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
    配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
    配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
    配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
    配列番号７４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
    配列番号７５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号７７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
    配列番号１４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
    配列番号７５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
    配列番号７５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
    配列番号１４８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
    配列番号１４９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
    配列番号１５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
    配列番号１５１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
    配列番号１５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号１４６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
    配列番号３１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号３１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、
    を含む、ＣＡＲ。
  11. 前記細胞外抗原結合ドメインが、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含み、前記ｓｃＦｖが、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、請求項１～１０のいずれかに記載のＣＡＲ。
  12. 前記ｓｃＦｖが、前記軽鎖可変領域（ＶＬ）と前記重鎖可変領域（ＶＨ）との間にリンカーポリペプチドを含む、請求項１１に記載のＣＡＲ。
  13. 前記リンカーポリペプチドが、配列番号７のアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載のＣＡＲ。
  14. 前記ｓｃＦｖが、配列番号８～２３、１６９～１８４、及び３４０～３４３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１１～１３のいずれかに記載のＣＡＲ。
  15. 前記細胞外抗原結合ドメインが、シグナルポリペプチドを含む、請求項１～１４のいずれかに記載のＣＡＲ。
  16. 前記シグナルポリペプチドが、配列番号２４のアミノ酸配列を含む、請求項１５に記載のＣＡＲ。
  17. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（ＣＤ１３７）成分、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ｚ）成分、表面抗原分類（ＣＤ２７）成分、表面抗原分類スーパーファミリーメンバー成分、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチド成分を含む、請求項４～１６のいずれかに記載のＣＡＲ。
  18. 前記ＣＤ１３７成分が、配列番号２７のアミノ酸配列を含む、請求項１７に記載のＣＡＲ。
  19. 前記ＣＤ３ｚ成分が、配列番号２８のアミノ酸配列を含む、請求項１７又は１８に記載のＣＡＲ。
  20. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、配列番号４５のアミノ酸配列を含み、又は、任意選択で、前記細胞内シグナル伝達ドメインが、配列番号２７のアミノ酸配列を含む共刺激ドメイン及び配列番号２８のアミノ酸配列を含む一次シグナル伝達ドメインを含む、請求項１７～１９のいずれかに記載のＣＡＲ。
  21. 前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８ａ膜貫通領域（ＣＤ８ａ－ＴＭ）ポリペプチドを含む、請求項４～２０のいずれかに記載のＣＡＲ。
  22. 前記ＣＤ８ａ－ＴＭポリペプチドが、配列番号２６のアミノ酸配列を含む、請求項２１に記載のＣＡＲ。
  23. 前記膜貫通ドメインを前記細胞外抗原結合ドメインに連結するヒンジ領域を更に含む、請求項４～２２のいずれかに記載のＣＡＲ。
  24. 前記ヒンジ領域が、ＣＤ８ａ－ヒンジ領域である、請求項２３に記載のＣＡＲ。
  25. 前記ＣＤ８ａ－ヒンジ領域が、配列番号２５、２６９、２７０、２７１、又は２７２のアミノ酸配列を含む、請求項２４に記載のＣＡＲ。
  26. 前記細胞外抗原結合ドメインが、配列番号２９～４４、７８～８１、２２１～２３６、及び２７３～３０８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１～２５に記載のいずれかに記載のＣＡＲ。
  27. 配列番号４６～６１、８２～８５、及び２０５～２２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１～２６のいずれかに記載のＣＡＲ。
  28. 請求項１～２７のいずれかに記載のＣＡＲを発現する、単離リンパ球。
  29. Ｔリンパ球である、請求項２８に記載の単離リンパ球。
  30. ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、請求項２８に記載の単離リンパ球。
  31. 請求項１～２７のいずれかに記載のＣＡＲをコードしている、単離核酸分子。
  32. 請求項３１に記載の核酸分子を含む、ベクター。
  33. 請求項３１に記載の核酸分子を発現する、細胞。
  34. 有効量の請求項２８～３０のいずれかに記載のリンパ球を含む、医薬組成物。
  35. 有効量の請求項２８～３０のいずれかに記載のリンパ球と、医薬的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
  36. 治療において使用するための、請求項１～２７のいずれかに記載のＣＡＲ、又は請求項３４若しくは３５に記載の医薬組成物。
  37. 癌を有する対象を治療する方法で使用するための、請求項１～２７のいずれかに記載のＣＡＲ、又は請求項３４若しくは３５に記載の医薬組成物。
  38. 癌を有する対象を治療する方法であって、
    治療有効量の請求項２８～３０のいずれかに記載のリンパ球を、それを必要としている対象に投与し、それにより、前記リンパ球が前記対象における癌細胞の殺傷を誘導することを含む、方法。
  39. 前記癌が、前立腺癌又はアンドロゲン受容体発現乳癌である、請求項３８に記載の方法、又は請求項３７に記載の方法で使用するためのＣＡＲ若しくは医薬組成物。
  40. 癌細胞の標的化殺傷の方法であって、
    前記癌細胞を請求項２８～３０のいずれかに記載のリンパ球と接触させ、それにより、
    前記リンパ球が、前記癌細胞の殺傷を誘導することを含む、方法。
  41. 前記癌細胞が、前立腺癌細胞又はアンドロゲン受容体発現乳癌細胞である、請求項４０に記載の方法。
  42. 対象における癌の存在を検出する方法であって、
    前記対象から得られた細胞サンプルを請求項１～２７のいずれかに記載のＣＡＲと接触させ、それにより、ＣＡＲ－細胞複合体を形成することと、
    前記複合体を検出することと、ここで、前記複合体の検出が、前記対象における癌の存在を示す、
    を含む、方法。
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