JP2022533983A

JP2022533983A - 網膜細胞を標的とした最適化された遺伝子治療

Info

Publication number: JP2022533983A
Application number: JP2021568813A
Authority: JP
Inventors: キャスリンクリスティーンメイヤー，; シビリキッテ，; ブライアンケー．カスパー，; ジルエム．ワイマー，
Original assignee: リサーチインスティチュートアットネイションワイドチルドレンズホスピタル; サンフォードリサーチ
Priority date: 2019-05-17
Filing date: 2020-04-15
Publication date: 2022-07-27
Also published as: WO2020236351A1; KR20220009427A; AU2020278960A1; AU2020278499A1; CA3141017A1; EP3969060A1; TW202110486A; US20220233655A1; CN114126667A; US20220226507A1; EP3969059A1; AR118696A1; JP2022533645A; WO2020236352A1; CA3141020A1

Abstract

本開示は、最適化された遺伝子治療ベクターを使用して網膜内の特定の細胞型を標的とする方法に関する。特に、本開示は、網膜細胞を特異的に標的とする遺伝子治療ベクター、ならびに視覚機能障害、網膜変性症、およびＣＬＮ病などの視力関連障害を治療する方法を提供する。バッテン病などの視力関連障害を治療するために眼を標的とするためのＡＡＶ遺伝子治療の最適化には、さまざまな細胞型の特定の標的化が必要である。本開示は、マウスおよび非ヒト霊長類の網膜における特定の細胞型への導入遺伝子の送達を標的とするための最適な遺伝子治療ベクターを決定するために、異なる遺伝子治療ベクター、プロモーターおよび投与経路を比較する実験データを提供する。

Description

本出願は、２０１７年５月１７日に出願された米国仮特許出願第６２／８４９，７９４号の優先権を主張し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

電子的に提出された資料の参照による組み込み
本開示の一部である配列表を明細書と同時にテキストファイルとして提出する。配列表を含むテキストファイルの名称は、「５３９５３＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」であり、これは２０２０年４月１４日に作成され、サイズは１５．４２９バイトである。配列表の内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

本開示は、最適化された遺伝子治療ベクターを使用して網膜内の特定の細胞型を標的とする方法に関する。特に、本開示は、網膜細胞を特異的に標的とする遺伝子治療ベクター、ならびに視覚機能障害、網膜変性症、およびＣＬＮ病などの視力関連障害を治療する方法を提供する。

遺伝子治療ベクターの眼への投与は、眼の解剖学的構造が明確であるため、多くの利点がある。特に、目の容易なアクセスは、迅速で進歩的な検査を可能にする。眼の比較的密閉された構造および小さなサイズは、送達のために低用量のベクターを必要とする。血液網膜関門は、体循環へのベクターの漏出を防ぎ、比較的免疫特権のある環境を維持する。特定の眼障害に主にまたは部分的に関与する個々のまたは複数の遺伝子が同定されている。

遺伝子治療ベクターの眼への投与は、いくつかの有望な結果を示している。現在、視力喪失関連疾患を対象とした臨床遺伝子治療試験が数多くあり、これらの試験は主に遺伝性網膜疾患を対象としている。例えば、臨床試験では、レーバー先天性黒内障（ＬＣＡ）、レーバー遺伝性視神経症、および網膜色素変性症が試験されている。今日まで、ＡＡＶベクター、特にＡＡＶ２血清型は、眼の遺伝子治療で最も一般的に使用されてきた。Ｌｅｅｅｔａｌ．，Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｎｒｅｔｉｎａｌａｎｄｅｙｅｒｅｓｅａｒｃｈ６８：３１－５３，２０１９を参照。

神経セロイドリポフスチン症（ＮＣＬ）は、まとめてバッテン病と称される一群の重度の神経変性障害である。これらの障害は神経系に影響を及ぼし、典型的には、例えば、移動、視力および思考能力に関する問題を悪化させる。異なるＮＣＬは、それらの遺伝学的原因によって区別される。バッテン病の小児期の患者では、部分的または完全な視力の喪失がしばしば発症する。特にバッテン病を患っている人では、リポフスチンは脳および網膜などの細胞内に蓄積する。リポフスチンの蓄積は、網膜、視神経、および視力を処理する脳の領域の光受容体に損傷を与える。
現在、網膜の特定の細胞型を標的とする改善された遺伝子治療法が必要とされている。さらに、バッテン病の症状を改善することができる治療はない。したがって、バッテン病の治療に対する当該技術分野における必要性が残っている。

Ｌｅｅｅｔａｌ．，Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｎｒｅｔｉｎａｌａｎｄｅｙｅｒｅｓｅａｒｃｈ６８：３１－５３，２０１９

本開示は、網膜の特定の細胞型を標的とする最適化された遺伝子治療ベクターを提供する。これらの最適化された遺伝子治療ベクターは、特定の網膜細胞に導入遺伝子を送達するのに有用である。本開示は、局所静脈内（ＩＶ）送達、網膜下送達、硝子体内送達、脳室内送達、実質内送達または髄腔内送達を使用して最適化された遺伝子治療ベクターを投与することを含む、視力関連障害を治療する方法を提供する。特定の細胞型を標的とする遺伝子治療法は、視力喪失関連疾患の治療に利点がある。

本開示は、対象の網膜細胞に導入遺伝子を送達する方法であって、導入遺伝子をコードする遺伝子治療ベクターを対象に投与することを含み、遺伝子治療ベクターが、局所静脈内（ＩＶ）送達、網膜下送達、硝子体内送達、脳室内送達、実質内送達または髄腔内送達を使用して対象に投与される、方法を提供する。例えば、開示された方法は、双極細胞、桿体視細胞、錐体視細胞、神経節細胞、ミュラーグリア細胞、ミクログリア細胞、水平細胞および／またはアマクリン細胞を含むがこれらに限定されないすべての網膜細胞に導入遺伝子を送達することをもたらす。

本開示はまた、導入遺伝子を対象の網膜細胞に送達するための組成物であって、組成物が、導入遺伝子をコードする遺伝子治療ベクターを含み、組成物が、局所静脈内送達、網膜下送達、硝子体内送達または髄腔内送達を使用して遺伝子治療ベクターを投与するために配合される、組成物を提供する。

別の実施形態では、本開示は、導入遺伝子を対象の網膜細胞に送達するための薬剤の調製のための遺伝子治療ベクターの使用であって、薬剤が、導入遺伝子をコードする遺伝子治療ベクターを含み、薬剤が、局所静脈内送達、網膜下送達、硝子体内送達または髄腔内送達を使用して遺伝子治療ベクターを投与するために配合される、使用を提供する。

本開示はまた、対象の視覚機能障害、網膜変性症または視力関連障害を治療する方法であって、導入遺伝子をコードする遺伝子治療ベクターを対象に投与することを含み、遺伝子治療ベクターが、局所静脈内（ＩＶ）送達、網膜下送達、硝子体内送達、脳室内送達、実質内送達または髄腔内送達を使用して投与される、方法を提供する。

本開示はまた、対象の視覚機能障害または視力関連障害を治療するための組成物であって、組成物が対象への導入遺伝子をコードする遺伝子治療ベクターを含み、組成物が、局所静脈内送達、網膜下送達、硝子体内送達または髄腔内送達を使用して遺伝子治療ベクターを投与するために配合される、組成物を提供する。

追加の実施形態では、本開示は、対象の視覚機能障害または視力関連障害を治療するための薬剤の調製のための遺伝子治療ベクターの使用であって、薬剤が導入遺伝子をコードする遺伝子治療ベクターを含み、薬剤が、局所静脈内送達、網膜下送達、硝子体内送達または髄腔内送達を使用して遺伝子治療ベクターを投与するために配合される、使用を提供する。

例えば、視力関連障害は、バッテン病、先天性白内障、先天性緑内障、網膜変性症、視神経萎縮、眼の奇形、斜視、眼球のずれ、緑内障、湿性加齢性黄斑変性症、乾性加齢性黄斑変性症、網膜色素変性症、全脈絡膜萎縮、レーバー先天性黒内障、レーバー遺伝性視神経症、早期発症網膜ジストロフィー、色覚異常、ｘ連鎖網膜分離症、アッシャー症候群１Ｂ、新生血管の加齢性黄斑変性症、シュタルガルト病の黄斑変性症、糖尿病性黄斑変性症、または糖尿病性黄斑浮腫である。特定の実施形態では、視力関連障害は、ＣＬＮ１病、ＣＬＮ２病、ＣＬＮ３病、ＣＬＮ４病、ＣＬＮ５病、ＣＬＮ６病またはＣＬＮ８病などのＣＬＮバッテン病である。

目的の任意の導入遺伝子を網膜細胞に送達するための、開示された方法、組成物および使用。導入遺伝子は、目的のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列であるか、あるいはｓｉＲＮＡもしくはｍｉＲＮＡなどの目的の遺伝子の発現を阻害、妨害、または沈静化する核酸である。例示的な導入遺伝子は、ＲＰＥ６５、ＲＰＧＲ、ＯＲＦ１５、ＣＮＧＡ３、ＣＭＨ、ＮＤ４、ＰＤＥ６Ｂ、ＣｈＲ２、ＭＥＲＴＫ、ｈＲＳ１、ｈＭＹＯＪＡ、ｈＡＢＣＡ４、ＣＤ５９、抗ｈＶＥＧＦ抗体、エンドスタチン－アンギオスタチン、ｓＦＬＴ０１、またはｓＦＬＴ－１をコードするポリヌクレオチドである。追加の例示的な導入遺伝子には、ＲＴＰ８０１に対するｓｉＲＮＡ、ＶＥＧＦＲ－１に対するｓｉＲＮＡ、ＶＥＧＦに対するｓｉＲＮＡ、またはＡＤＲＢ２に対するｓｉＲＮＡが含まれる。一実施形態では、導入遺伝子は、ＣＬＮ１、ＣＬＮ２、ＣＬＮ３、ＣＬＮ４、ＣＬＮ５、ＣＬＮ６またはＣＬＮ８などのＣＬＮポリペプチドをコードする。

本開示はまた、対象のバッテン病を治療する方法であって、ＣＬＮポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む遺伝子治療ベクターを対象に投与することを含み、遺伝子治療ベクターが、局所静脈内（ＩＶ）送達、網膜下送達、硝子体内送達、脳室内送達、実質内送達または髄腔内送達を使用して投与される、方法を提供する。

他の実施形態では、本開示は、対象のバッテン病を治療するための組成物であって、組成物が、ＣＬＮポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む遺伝子治療ベクターを含み、組成物が、網膜下送達、硝子体内送達または髄腔内送達を使用して遺伝子治療ベクターを投与するために配合される、組成物を提供する。

追加の実施形態では、本開示は、対象のバッテン病を治療するための薬剤の調製のための遺伝子治療ベクターの使用であって、薬剤がＣＬＮポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む遺伝子治療ベクターを含み、薬剤が、網膜下送達、硝子体内送達または髄腔内送達を使用して遺伝子治療ベクターを投与するために配合される、使用を提供する。

本開示の方法、組成物または使用のいずれかによって治療されるバッテン病は、ＣＬＮ１病、ＣＬＮ２病、ＣＬＮ３病、ＣＬＮ４病、ＣＬＮ５病、ＣＬＮ６病またはＣＬＮ８病である。

開示された方法、組成物または使用のいずれかにおいて、導入遺伝子は、ＣＬＮ１、ＣＬＮ２、ＣＬＮ３、ＣＬＮ４、ＣＬＮ５、ＣＬＮ６またはＣＬＮ８などのＣＬＮポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。バッテン病を治療するための方法、組成物または使用のいずれかにおいて、未治療のバッテン病患者と比較して、効果的な治療は、（ａ）視力の喪失、（ｂ）脳容積の損失、（ｃ）認知機能の喪失、および（ｄ）言語発達遅滞、から選択されるバッテン病の１つ以上の症状を減少させるかまたは遅延させる。症状は、統一バッテン病評価尺度（ＵＢＤＳ）またはハンブルク運動言語尺度を使用して評価することができる。

開示された方法、組成物または使用のいずれかにおいて、遺伝子治療ベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶＲＨ１０、ＡＡＶＲＨ７４、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶＴＴまたはＡｎｃ８０、ＡＡＶ７ｍ８、およびそれらの誘導体である。

開示された方法、組成物または使用のいずれかにおいて、遺伝子治療ベクターは、ＣＭＶプロモーター、ｐ５４６、またはＣＢプロモーターを含む。

さらに、開示された方法、組成物または使用のいずれかにおいて、遺伝子治療ベクターは、髄腔内送達を使用して投与され、方法は、遺伝子治療ベクターの投与後に対象をトレンデレンブルグ体位に置くことをさらに含む。

本開示で試験されたベクターの概略図を提供する。髄腔内投与後のＧＦＰ導入遺伝子の網膜送達を示す。髄腔内投与後のＧＦＰ導入遺伝子の網膜送達を示す。髄腔内投与後のＧＦＰ導入遺伝子の網膜送達を示す。髄腔内投与後のＧＦＰ導入遺伝子の網膜送達を示す。髄腔内投与後のＧＦＰ導入遺伝子の網膜送達を示す。髄腔内投与後のＧＦＰ導入遺伝子の網膜送達を示す。髄腔内投与後のＧＦＰ導入遺伝子の網膜送達を示す。髄腔内投与後のＧＦＰ導入遺伝子の網膜送達を示す。髄腔内投与後のＧＦＰ導入遺伝子の網膜送達を示す。髄腔内投与後のＧＦＰ導入遺伝子の網膜送達を示す。網膜下注射後のＧＦＰ導入遺伝子の網膜送達を示す。網膜下注射後のＧＦＰ導入遺伝子の網膜送達を示す。網膜下注射後のＧＦＰ導入遺伝子の網膜送達を示す。網膜下送達後のＧＦＰ導入遺伝子の網膜送達を示す。網膜下送達後のＧＦＰ導入遺伝子の網膜送達を示す。網膜下送達後のＧＦＰ導入遺伝子の網膜送達を示す。網膜下送達後のＧＦＰ導入遺伝子の網膜送達を示す。２つの異なる共染色を使用して試験された４つのベクターすべてについて、網膜下送達後のすべての組織の合成を低倍率で提供する。２つの異なる共染色を使用して試験された４つのベクターすべてについて、網膜下送達後のすべての組織の合成を低倍率で提供する。ＡＡＶ９．ＣＢ．ＧＦＰの１．２ｅ^１４ｖｇを髄腔内注射した１０歳の非ヒト霊長類からのデータを提供する。網膜を、ミュラーグリア細胞マーカーであるＳｏｘ２で対比染色した。注射された霊長類では、ＧＦＰおよびＳｏｘ２の顕著な共局在が観察された。硝子体内注射後の網膜におけるミュラーグリア細胞の形質導入を示す。ＧＣは神経節細胞層、ＩＮＬは内神経層、ＯＮＬは外神経層である。Ｓｏｘ２はミュラー細胞特異的マーカーである。硝子体内注射後の網膜におけるミュラーグリア細胞の形質導入を示す。ＧＣは神経節細胞層、ＩＮＬは内神経層、ＯＮＬは外神経層である。Ｓｏｘ２はミュラー細胞特異的マーカーである。硝子体内注射後の網膜における双極細胞の形質導入を示す。Ｏｔｘ２は双極細胞特異的マーカーである。硝子体内注射後の網膜における双極細胞の形質導入を示す。Ｏｔｘ２は双極細胞特異的マーカーである。

バッテン病などの視力関連障害を治療するために眼を標的とするためのＡＡＶ遺伝子治療の最適化には、さまざまな細胞型の特定の標的化が必要である。本開示は、マウスおよび非ヒト霊長類の網膜における特定の細胞型への導入遺伝子の送達を標的とするための最適な遺伝子治療ベクターを決定するために、異なる遺伝子治療ベクター、プロモーターおよび投与経路を比較する実験データを提供する。

データはＡＡＶ９およびＡｎｃ８０ベクターの投与に焦点を当てているが、本開示は、網膜細胞を特異的に標的とするプロモーターを含む任意の遺伝子治療ベクターの使用を企図しており、これらの最適化されたベクターは、局所静脈内（ＩＶ）送達、網膜下送達、硝子体内送達、脳室内送達、実質内送達または髄腔内送達を使用して投与される。例えば、データは、脳室内注射を介して脳脊髄液に直接注射されたＡＡＶ９が、網膜の双極細胞における導入遺伝子発現を標的とするのに効果的であることを示した。したがって、髄腔内注射は、遺伝子治療ベクターを眼に送達するために、そして特に遺伝子治療ベクターを双極細胞に送達するために使用することができる。

遺伝子治療ベクター
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）は、複製欠損パルボウイルスであり、その一本鎖ＤＮＡゲノムは、２つの１４５個のヌクレオチドの逆方向末端反復（ＩＴＲ）を含む約４．７ｋｂの長さであり、ウイルス自体またはその誘導体を指すように使用することができる。この用語は、他に特定されない限り、すべてのサブタイプ、ならびに天然に存在する形態および組換え形態の両方を包含する。ＡＡＶの複数の血清型がある。ＡＡＶの血清型は、各々特定のクレードと関連しており、そのメンバーは血清学的および機能的類似性を共有している。したがって、ＡＡＶはまた、クレードによって称され得る。例えば、ＡＡＶ９配列は、「クレードＦ」配列と称される（Ｇａｏｅｔａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７８：６３８１－６３８８（２００４））。本開示は、特定のクレード、例えばクレードＦ内の任意の配列の使用を企図する。ＡＡＶ血清型のゲノムのヌクレオチド配列は既知である。例えば、ＡＡＶ－１の完全なゲノムは、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＣ＿００２０７７に提供されており、ＡＡＶ－２の完全なゲノムは、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＣ＿００１４０１およびＳｒｉｖａｓｔａｖａｅｔａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，４５：５５５－５６４（１９８３）に提供されており、ＡＡＶ－３の完全なゲノムは、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＣ＿１８２９に提供されており、ＡＡＶ－４の完全なゲノムは、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＣ＿００１８２９に提供されており、ＡＡＶ－５ゲノムは、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＦ０８５７１６に提供されており、ＡＡＶ－６の完全なゲノムは、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＣ＿００１８６２に提供されており、ＡＡＶ－７およびＡＡＶ－８ゲノムの少なくとも部分は、それぞれ、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＸ７５３２４６およびＡＸ７５３２４９に提供されており、ＡＡＶ－９ゲノムは、Ｇａｏｅｔａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７８：６３８１－６３８８（２００４）に提供されており、ＡＡＶ－１０ゲノムは、Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．，１３（１）：６７－７６（２００６）に提供されており、ＡＡＶ－１１ゲノムは、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，３３０（２）：３７５－３８３（２００４）に提供されており、ＡＡＶ－１２ゲノムの部分は、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＤＱ８１３６４７に提供されており、ＡＡＶ－１３ゲノムの部分は、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＥＵ２８５５６２に提供されている。ＡＡＶｒｈ．７４ゲノムの配列は、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，４３４，９２８号に提供されている。ＡＡＶ－Ｂ１ゲノムの配列は、Ｃｈｏｕｄｈｕｒｙｅｔａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅ．，２４（７）：１２４７－１２５７（２０１６）に提供されている。Ａｎｃ８０は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ８、およびＡＡＶ９のＡＡＶベクターである。Ａｎｃ８０の配列は、両方とも参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｚｉｎｎｅｔａｌ．，ＣｅｌｌＲｅｐｏｒｔｓ１２：１０５６－１０６８，２０１５、Ｖａｎｄｅｎｂｅｒｇｈｅｅｔａｌ、ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０６０１６３、およびＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＫＴ２３５８０４－ＫＴ２３５８１２に提供されている。

ウイルスＤＮＡ複製（ｒｅｐ）、キャプシド形成／パッケージング、および宿主細胞染色体組み込みを指示するＣｉｓ作用配列は、ＩＴＲ内に含有される。３つのＡＡＶプロモーター（それらの相対マップ位置に対してｐ５、ｐ１９、およびｐ４０と名付けられる）は、ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子をコードする２つのＡＡＶ内部オープンリーディングフレームの発現を駆動する。単一のＡＡＶイントロンの差異的スプライシング（ヌクレオチド２１０７および２２２７における）と相まって、２つのｒｅｐプロモーター（ｐ５およびｐ１９）により、ｒｅｐ遺伝子から４つのｒｅｐタンパク質（ｒｅｐ７８、ｒｅｐ６８、ｒｅｐ５２、およびｒｅｐ４０）が産生される。ｒｅｐタンパク質は、最終的にウイルスゲノムの複製に関与する複数の酵素特性を有する。ｃａｐ遺伝子は、ｐ４０プロモーターから発現され、３つのキャプシドタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３をコードする。選択的スプライシングおよび非コンセンサス翻訳開始部位は、３つの関連キャプシドタンパク質の産生に関与する。単一コンセンサスポリアデニル化部位は、ＡＡＶゲノムのマップ位置９５に位置する。ＡＡＶのライフサイクルおよび遺伝学は、Ｍｕｚｙｃｚｋａ，ＣｕｒｒｅｎｔＴｏｐｉｃｓｉｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙａｎｄＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１５８：９７－１２９（１９９２）に概説されている。

ＡＡＶは、例えば、遺伝子治療において、外来ＤＮＡを細胞に送達するためのベクターとしてそれを魅力的にする固有の特徴を有する。培養中の細胞のＡＡＶ感染は非細胞変性であり、ヒトおよび他の動物の自然感染はサイレントかつ無症候性である。さらに、ＡＡＶは、多くの哺乳動物細胞を感染させ、インビボで多くの異なる組織を標的とする可能性を可能にする。さらに、ＡＡＶは、緩徐に分裂する細胞および非分裂細胞を形質導入し、転写的に活性な核エピソーム（染色体外要素）として本質的にそれらの細胞の寿命にわたって存続し得る。天然のＡＡＶプロウイルスゲノムは、組換えゲノムの構築を実現可能にするプラスミド中のクローン化ＤＮＡとして感染性である。さらに、ＡＡＶ複製、ゲノムキャプシド形成および組み込みを指示するシグナルがＡＡＶゲノムのＩＴＲ内に含有されるので、ゲノムの内部約４．３ｋｂ（複製および構造キャプシドタンパク質、ｒｅｐ－ｃａｐをコードする）のいくつかまたはすべては、プロモーター、目的のＤＮＡおよびポリアデニル化シグナルを含有する遺伝子カセットのような外来ＤＮＡと置き換えられ得る。場合によっては、ｒｅｐおよびｃａｐタンパク質は、トランスで提供される。ＡＡＶの別の重要な特徴は、それが極めて安定かつ頑健なウイルスであることである。これは、アデノウイルスを不活性化するために使用される条件（５６℃～６５℃で数時間）に容易に耐え、ＡＡＶの低温保存の重要性を低くする。ＡＡＶは、凍結乾燥され得る。最後に、ＡＡＶ感染細胞は、重複感染に耐性を示さない。

本明細書で使用される「ＡＡＶ」という用語は、野生型ＡＡＶウイルスまたはウイルス粒子を指す。「ＡＡＶ」、「ＡＡＶウイルス」、および「ＡＡＶウイルス粒子」という用語は、本明細書では交換的に使用される。「ｒＡＡＶ」という用語は、組換えＡＡＶウイルス、または組換え感染性のカプセル化ウイルス粒子を指す。「ｒＡＡＶ」、「ｒＡＡＶウイルス」、および「ｒＡＡＶウイルス粒子」という用語は、本明細書では交換的に使用される。

「ｒＡＡＶゲノム」という用語は、修飾されている天然のＡＡＶゲノムに由来するポリヌクレオチド配列を指す。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、天然のｃａｐおよびｒｅｐ遺伝子を除去するために修飾されている。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは内因性５’および３’逆方向末端反復（ＩＴＲ）を含む。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、ＡＡＶゲノムが由来するＡＡＶ血清型とは異なるＡＡＶ血清型からのＩＴＲを含む。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、逆方向末端反復（ＩＴＲ）によって５’末端および３’末端に隣接した目的の導入遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、「遺伝子カセット」を含む。

「ｓｃＡＡＶ」という用語は、自己相補的ゲノムを含むｒＡＡＶウイルスまたはｒＡＡＶウイルス粒子を指す。「ｓｓＡＡＶ」という用語は、一本鎖ゲノムを含むｒＡＡＶウイルスまたはｒＡＡＶウイルス粒子を指す。

本明細書に提供されるｒＡＡＶゲノムは、いくつかの実施形態では、導入遺伝子ポリヌクレオチド配列に隣接する１つ以上のＡＡＶＩＴＲを含む。導入遺伝子ポリヌクレオチド配列は、遺伝子カセットを形成するために標的細胞内で機能的である転写制御要素（プロモーター、エンハンサーおよび／またはポリアデニル化シグナル配列を含むが、これらに限定されない）に作動可能に連結されている。プロモーターの例は、ＣＭＶプロモーター、ニワトリβアクチンプロモーター（ＣＢ）およびＰ５４６プロモーターである。シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）長い末端反復（ＬＴＲ）プロモーター、ＭｏＭｕＬＶプロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタインバールウイルス最初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、ならびにヒト遺伝子プロモーター（例えば、限定されないが、アクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、伸長因子－１ａプロモーター、ヘモグロビンプロモーター、クレアチンキナーゼプロモーターなど）を含むが、これらに限定されない追加のプロモーターが、本明細書で企図される。

本明細書では、配列番号８の核酸配列、および配列番号３のヌクレオチド配列と少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるプロモーター配列であって、転写促進活性を有するプロモーター配列を含む、ＣＭＶプロモーター配列がさらに提供される。本明細書では、配列番号７の核酸配列、および転写促進活性を有する、配列番号７のヌクレオチド配列と少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるプロモーター配列を含む、ＣＢプロモーター配列がさらに提供される。本明細書では、配列番号９の核酸配列、および転写促進活性を有する、配列番号９のヌクレオチド配列と少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるプロモーター配列を含むＰ５４６プロモーター配列がさらに提供される。転写制御要素の他の例は、組織特異的制御要素、例えば、ニューロン内での特異的発現を可能にするか、または星状細胞内での特異的発現を可能にするプロモーターである。例としては、ニューロン特異的エノラーゼおよびグリア線維性酸性タンパク質プロモーターが挙げられる。誘導性プロモーターもまた、企図される。誘導性プロモーターの非限定的な例としては、メタロチオネインプロモーター、グルココルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーター、およびテトラサイクリン調節プロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。遺伝子カセットはまた、哺乳動物細胞中で発現されたときに導入遺伝子ＲＮＡ転写物のプロセシングを容易にするためのイントロン配列を含んでもよい。このようなイントロンの一例は、ＳＶ４０イントロンである。

「パッケージング」とは、ＡＡＶ粒子の組み立ておよびキャプシド形成をもたらす一連の細胞内事象を指す。「産生」という用語は、パッケージング細胞によるｒＡＡＶ（感染性のカプセル化されたｒＡＡＶ粒子）を産生するプロセスを指す。

ＡＡＶ「ｒｅｐ」および「ｃａｐ」遺伝子は、それぞれアデノ随伴ウイルスの複製タンパク質およびキャプシド形成タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を指す。ＡＡＶｒｅｐおよびｃａｐは、本明細書においてＡＡＶ「パッケージング遺伝子」と称される。

ＡＡＶについての「ヘルパーウイルス」は、ＡＡＶ（例えば、野生型ＡＡＶ）が哺乳動物細胞によって複製およびパッケージングされることを可能にするウイルスを指す。アデノウイルス、ヘルペスウイルス、およびワクシニアなどのポックスウイルスを含む、ＡＡＶに対する様々なこのようなヘルパーウイルスは、当該技術分野において既知である。アデノウイルスは、多数の異なるサブグループを包含し得るが、サブグループＣのアデノウイルス５型が最も一般的に使用される。ヒト、非ヒト哺乳動物、およびトリ起源の多数のアデノウイルスが既知であり、ＡＴＣＣなどの寄託機関から入手可能である。ヘルペス科のウイルスには、例えば、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）およびエプスタイン－バールウイルス（ＥＢＶ）、ならびにサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）および偽狂犬病ウイルス（ＰＲＶ）が含まれ、これらはＡＴＣＣなどの寄託機関からも入手可能である。

「ヘルパーウイルス機能」とは、（本明細書に記載の複製およびパッケージングのための他の要件と併せて）ＡＡＶ複製およびパッケージングを可能にするヘルパーウイルスゲノムにコードされている機能を指す。本明細書中に記載されるように、「ヘルパーウイルス機能」は、ヘルパーウイルスを提供すること、または例えば必要な機能をコードするポリヌクレオチド配列をトランスでプロデューサー細胞に提供することによることを含む多数の方法で提供され得る。

本明細書で提供されるｒＡＡＶゲノムは、ＡＡＶｒｅｐおよびｃａｐＤＮＡを欠く。本明細書に企図されるｒＡＡＶゲノム（例えば、ＩＴＲ）内のＡＡＶＤＮＡは、ＡＡＶ血清型Ａｎｃ８０、ＡＡＶ－１、ＡＡＶ－２、ＡＡＶ－３、ＡＡＶ－４、ＡＡＶ－５、ＡＡＶ－６、ＡＡＶ－７、ＡＡＶ－８、ＡＡＶ－９、ＡＡＶ－１０、ＡＡＶ－１１、ＡＡＶ－１２、ＡＡＶ－１３、ＡＡＶｒｈ．７４、およびＡＡＶ－Ｂ１を含むが、これらに限定されない、組換えウイルスを導出するのに好適な任意のＡＡＶ血清型からであり得る。上記されるように、様々なＡＡＶ血清型のゲノムのヌクレオチド配列が、当該技術分野において既知である。キャプシド変異を有するｒＡＡＶもまた企図される。例えば、Ｍａｒｓｉｃｅｔａｌ．，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＴｈｅｒａｐｙ，２２（１１）：１９００－１９０９（２０１４）を参照されたい。本明細書中の修飾キャプシドもまた企図され、グリコシル化および脱アミド化などの種々の翻訳後修飾を有するキャプシドを含む。アスパラギンまたはグルタミン側鎖を脱アミド化してアスパラギン残基をアスパラギン酸残基またはイソアスパラギン酸残基に変換すること、およびグルタミンをグルタミン酸またはイソグルタミン酸に変換することは、本明細書に提供されるｒＡＡＶキャプシドにおいて企図される。例えば、Ｇｉｌｅｓｅｔａｌ．ＭｏｌｅｃｕｌａｒＴｈｅｒａｐｙ，２６（１２）：２８４８－２８６２（２０１８）を参照されたい。本明細書中の修飾キャプシドもまた、治療を必要とする罹患組織および臓器にｒＡＡＶを指向させる標的化配列を含むと企図される。

本明細書で提供されるＤＮＡプラスミドは、本明細書に記載されるｒＡＡＶゲノムを含む。ＤＮＡプラスミドは、ＡＡＶ９キャプシドタンパク質を用いて感染性ウイルス粒子中にｒＡＡＶゲノムを組み立てるために、ＡＡＶのヘルパーウイルス（例えば、アデノウイルス、Ｅ１欠損アデノウイルス、またはヘルペスウイルス）による感染を許容することができる細胞に導入され得る。パッケージングされるべきｒＡＡＶゲノム、ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子、およびヘルパーウイルス機能が細胞に提供されるｒＡＡＶを産生する技術は、当該技術分野において標準的である。ｒＡＡＶ粒子の産生は、以下の成分、ｒＡＡＶゲノム、ｒＡＡＶゲノムから分離した（すなわち、その中に存在しない）ＡＡＶｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子、ならびにヘルパーウイルス機能が、単一細胞（本明細書でパッケージング細胞と表される）内に存在することを必要とする。ＡＡＶｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子は、組換えウイルスが由来し得る任意のＡＡＶ血清型に由来してもよく、ｒＡＡＶゲノムＩＴＲとは異なるＡＡＶ血清型に由来してもよい。偽型ｒＡＡＶの産生は、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＷＯ０１／８３６９２に開示される。様々な実施形態では、ＡＡＶキャプシドタンパク質は、組換えｒＡＡＶの送達を増強するために修飾され得る。キャプシドタンパク質に対する修飾は、一般的に当該技術分野において既知である。例えば、その開示全体が参照により本明細書に組み入れられる、ＵＳ２００５／００５３９２２およびＵＳ２００９／０２０２４９０を参照されたい。

パッケージング細胞を生成する方法は、ｒＡＡＶの産生に必要な成分をすべて安定して発現する細胞株を作製することである。例えば、ＡＡＶｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子を欠くｒＡＡＶゲノム、ｒＡＡＶゲノムから分離したＡＡＶｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子、およびネオマイシン耐性遺伝子などの選択可能なマーカーを含むプラスミド（または複数のプラスミド）は、細胞のゲノムに組み込まれてもよい。ｒＡＡＶゲノムは、ＧＣテーリング（Ｓａｍｕｌｓｋｉｅｔａｌ．，１９８２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ６．ＵＳＡ，７９：２０７７－２０８１）、制限エンドヌクレアーゼ切断部位を含有する合成リンカーの付加（Ｌａｕｇｈｌｉｎｅｔａｌ．，１９８３，Ｇｅｎｅ，２３：６５－７３）、または直接平滑末端ライゲーション（Ｓｅｎａｐａｔｈｙ＆Ｃａｒｔｅｒ，１９８４，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５９：４６６１－４６６６）などの手順により細菌プラスミドに導入されてもよい。その後、パッケージング細胞株は、アデノウイルスなどのヘルパーウイルスで感染させられ得る。この方法の利点は、細胞が選択可能であり、ｒＡＡＶの大規模産生に好適であることである。好適な方法の他の非限定的な例は、ｒＡＡＶゲノムならびに／またはｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子をパッケージング細胞に導入するためにプラスミドではなくアデノウイルスまたはバキュロウイルスを用いる。

ｒＡＡＶ粒子産生の一般的原理は、例えば、Ｃａｒｔｅｒ，１９９２，ＣｕｒｒｅｎｔＯｐｉｎｉｏｎｓｉｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１５３３－５３９、およびＭｕｚｙｃｚｋａ，１９９２，Ｃｕｒｒ．ＴｏｐｉｃｓｉｎＭｉｃｒｏｂｉａｌ．ａｎｄＩｍｍｕｎｏｌ．，１５８：９７－１２９）に概説されている。様々なアプローチは、Ｒａｔｓｃｈｉｎｅｔａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．４：２０７２（１９８４）、Ｈｅｒｍｏｎａｔｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６４６６（１９８４）、Ｔｒａｔｓｃｈｉｎｅｔａｌ．，Ｍｏ１．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：３２５１（１９８５）、ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎｅｔａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，６２：１９６３（１９８８）、およびＬｅｂｋｏｗｓｋｉｅｔａｌ．，１９８８Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，７：３４９（１９８８）に記載されている。Ｓａｍｕｌｓｋｉｅｔａｌ．（１９８９，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，６３：３８２２－３８２８）、米国特許第５，１７３，４１４号、ＷＯ９５／１３３６５および対応する米国特許第５，６５８，７７６号、ＷＯ９５／１３３９２、ＷＯ９６／１７９４７、ＰＣＴ／ＵＳ９８／１８６００、ＷＯ９７／０９４４１（ＰＣＴ／ＵＳ９６／１４４２３）、ＷＯ９７／０８２９８（ＰＣＴ／ＵＳ９６／１３８７２）、ＷＯ９７／２１８２５（ＰＣＴ／ＵＳ９６／２０７７７）、ＷＯ９７／０６２４３（ＰＣＴ／ＦＲ９６／０１０６４）、ＷＯ９９／１１７６４、Ｐｅｒｒｉｎｅｔａｌ．（１９９５）Ｖａｃｃｉｎｅ１３：１２４４－１２５０、Ｐａｕｌｅｔａｌ．（１９９３）ＨｕｍａｎＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ４：６０９－６１５、Ｃｌａｒｋｅｔａｌ．（１９９６）ＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ３：１１２４－１１３２、米国特許第５，７８６，２１１号、米国特許第５，８７１，９８２号、および米国特許第６，２５８，５９５号に記載されている。前述の文書は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれ、ｒＡＡＶ粒子産生に関する文書の部分を特に強調する。

感染性ｒＡＡＶ粒子を産生するパッケージング細胞が、本明細書でさらに提供される。一実施形態では、パッケージング細胞は、ＨｅＬａ細胞、２９３細胞、およびＰｅｒＣ．６細胞（同種２９３株）などの安定して形質転換されたがん細胞であり得る。別の実施形態では、パッケージング細胞は、形質転換されたがん細胞ではない細胞、例えば、低継代２９３細胞（アデノウイルスのＥ１で形質転換されたヒト胎児腎細胞）、ＭＲＣ－５細胞（ヒト胎児線維芽細胞）、ＷＩ－３８細胞（ヒト胎児線維芽細胞）、Ｖｅｒｏ細胞（サル腎細胞）、およびＦＲｈＬ－２細胞（アカゲザル胎児肺細胞）であり得る。

本開示のｒＡＡＶゲノムを含むｒＡＡＶ（例えば、感染性キャプシド形成したｒＡＡＶ粒子）も本明細書で提供される。ｒＡＡＶのゲノムは、ＡＡＶのｒｅｐおよびｃａｐＤＮＡを欠いており、すなわち、ｒＡＡＶのゲノムのＩＴＲ間にＡＡＶのｒｅｐまたはｃａｐＤＮＡが存在しない。ｒＡＡＶゲノムは自己相補的（ｓｃ）ゲノムであり得る。ｓｃゲノムを有するｒＡＡＶは、本明細書中でｓｃＡＡＶと称される。ｒＡＡＶゲノムは一本鎖（ｓｓ）ゲノムであり得る。一本鎖ゲノムを有するｒＡＡＶは、本明細書中でｓｓＡＡＶと称される。

ｒＡＡＶは、当該技術分野で標準的な方法によって、例えば、カラムクロマトグラフィーまたは塩化セシウム勾配によって精製され得る。ヘルパーウイルスからｒＡＡＶベクターを精製するための方法は、当該技術分野で既知であり、例えば、Ｃｌａｒｋｅｔａｌ．，Ｈｕｍ．ＧｅｎｅＴｈｅｒ．，１０（６）：１０３１－１０３９（１９９９）、ＳｃｈｅｎｐｐａｎｄＣｌａｒｋ，ＭｅｔｈｏｄｓＭｏｌ．Ｍｅｄ．，６９４２７－４４３（２００２）、米国特許第６，５６６，１１８号、およびＷＯ９８／０９６５７に開示される方法を含み得る。

ｒＡＡＶを含む組成物もまた提供される。組成物は、ＣＬＮ６ポリペプチドをコードするｒＡＡＶを含む。組成物は、目的とする異なったポリペプチドをコードする２つ以上のｒＡＡＶを含み得る。いくつかの態様では、ｒＡＡＶはｓｃＡＡＶまたはｓｓＡＡＶである。

本明細書で提供される組成物は、ｒＡＡＶおよび薬学的に許容される１つ以上の賦形剤を含む。許容される賦形剤は、レシピエントにとって非毒性であり、好ましくは、用いられる投薬量および濃度で不活性であり、リン酸塩［例えば、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）］、クエン酸塩、もしくは他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸などの抗酸化剤；低分子量ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンもしくはリジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；マンニトールもしくはソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの塩形成対イオン；および／またはＴｗｅｅｎ（登録商標）などの非イオン性界面活性剤、ポロキサマー１８８、プルロニック（登録商標）（例えば、プルロニック（登録商標）Ｆ６８）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などのコポリマーが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で提供される組成物は、イオビトリドール、イオヘキソール、イオメプロール、イオパミドール、イオペントール、イオプロミド、イオベルソール、またはイオキシランなどの非イオン性低浸透圧性化合物を含有する薬学的に許容される水性賦形剤を含むことができ、非イオン性低浸透圧性化合物を含有する水性賦形剤は、以下の特性、約１８０ｍｇＩ／ｍＬ、約３２２ｍＯｓｍ／ｋｇ水の蒸気圧浸透圧法によるオスモル濃度、約２７３ｍＯｓｍ／Ｌのオスモル濃度、２０℃で約２．３ｃｐおよび３７℃で約１．５ｃｐの絶対粘度、ならびに３７℃で約１．１６４の比重、のうちの１つ以上を有することができる。例示的な組成物は、約２０～４０％の非イオン性低浸透圧性化合物、または約２５％～約３５％の非イオン性低浸透圧性化合物を含む。例示的な組成物は、２０ｍＭのトリス（ｐＨ８．０）、１ｍＭのＭｇＣｌ_２、２００ｍＭのＮａＣｌ、０．００１％のポロキサマー１８８、および約２５％～約３５％の非イオン性の低浸透圧性化合物中に配合されたｓｃＡＡＶまたはｒＡＡＶウイルス粒子を含む。別の例示的組成物は、１×ＰＢＳおよび０．００１％プルロニック（登録商標）Ｆ６８中に配合されたｓｃＡＡＶを含む。

本開示の方法で投与されるｒＡＡＶの投薬量は、例えば、特定のｒＡＡＶ、投与モード、投与の時間、治療目標、個体、および標的とされる細胞型によって変動することになり、当該技術分野における標準の方法によって決定され得る。投薬量は、ウイルスゲノム（ｖｇ）の単位で表されてもよい。本明細書で企図される投薬量は、１×１０^７、１×１０^８、１×１０^９、５×１０^９、６×１０^９、７×１０^９、８×１０^９、９×１０^９、１×１０^１０、２×１０^１０、３×１０^１０、４×１０^１０、５×１０^１０、１×１０^１１、約１×１０^１２、約１×１０^１３、約１．１×１０^１３、約１．２×１０^１３、約１．３×１０^１３、約１．５×１０^１３、約２×１０^１３、約２．５×１０^１３、約３×１０^１３、約３．５×１０^１３、約４×１０^１３、約４．５×１０^１３、約５×１０^１３、約６×１０^１３、約１×１０^１４、約２×１０^１４、約３×１０^１４、約４×１０^１４、約５×１０^１４、約１×１０^１５、約１×１０^１６まで、またはそれ以上の総ウイルスゲノムを含む。約１×１０^９～約１×１０^１０ｖｇ、約５×１０^９～約５×１０^１０ｖｇ、約１×１０_１０～約１×１０^１１ｖｇ、約１×１０^１１～約１×１０^１５ｖｇ、約１×１０^１２～約１×１０^１５ｖｇ、約１×１０^１２～約１×１０^１４ｖｇ、約１×１０^１３～約６×１０^１４ｖｇ、および約６×１０^１３～約１．０×１０^１４ｖｇの投薬量も企図される。本明細書中に例示される１用量は、６×１０^１３ｖｇである。本明細書に例示される他の用量は、１．５×１０^１３ｖｇである。

ｒＡＡＶによって標的網膜細胞に形質導入する方法が提供されている。網膜細胞には、双極細胞、桿体視細胞、錐体視細胞、神経節細胞、ミュラーグリア細胞、ミクログリア細胞、水平細胞またはアマクリン細胞が含まれる。

「形質導入」という用語は、レシピエント細胞による機能性ポリペプチドの発現をもたらす、本開示の複製欠損ｒＡＡＶを介した、インビボまたはインビトロのいずれかでの、標的細胞へのＣＬＮ６ポリヌクレオチドの投与／送達を指すように使用される。本開示のｒＡＡＶによる細胞の形質導入は、ｒＡＡＶによってコードされるポリペプチドまたはＲＮＡの持続的発現をもたらす。したがって、本開示は、髄腔内、局所ＩＶ送達、脳室内、網膜下注射、硝子体内送達もしくは実質内送達、またはそれらの任意の組み合わせによって、導入遺伝子によってコードされるポリペプチドをコードする対象ｒＡＡＶを投与／送達する方法を提供する。髄腔内送達は、脳または脊髄のくも膜の下の空間への送達を指す。いくつかの実施形態では、髄腔内投与は槽内投与による。

導入遺伝子
目的の任意の導入遺伝子を網膜細胞に送達する開示された方法。導入遺伝子は、目的のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列であるか、あるいはｓｉＲＮＡもしくはｍｉＲＮＡなどの目的の遺伝子の発現を阻害、妨害、または沈静化する核酸である。

例示的な導入遺伝子は、ＲＰＥ６５、ＲＰＧＲ、ＯＲＦ１５、ＣＮＧＡ３、ＣＭＨ、ＮＤ４、ＰＤＥ６Ｂ、ＣｈＲ２、ＭＥＲＴＫ、ｈＲＳ１、ｈＭＹＯＪＡ、ｈＡＢＣＡ４、ＣＤ５９、抗ｈＶＥＧＦ抗体、エンドスタチン－アンギオスタチン、ｓＦＬＴ０１、またはｓＦＬＴ－１をコードするポリヌクレオチドである。一実施形態では、導入遺伝子は、ＣＬＮ１、ＣＬＮ２、ＣＬＮ３、ＣＬＮ４、ＣＬＮ５、ＣＬＮ６またはＣＬＮ８などのＣＬＮポリペプチドをコードする。追加の例示的な導入遺伝子には、ＲＴＰ８０１に対するｓｉＲＮＡ、ＶＥＧＦＲ－１に対するｓｉＲＮＡ、ＶＥＧＦに対するｓｉＲＮＡ、またはＡＤＲＢ２に対するｓｉＲＮＡが含まれる。

網膜で発現されるｍｉＲＮＡは、開示された最適化された遺伝子治療ベクターに含まれる導入遺伝子として企図されている。ｍｉＲＮＡの例は、Ｋａｒａｌｉｅｔａｌ．，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．２０１６Ｆｅｂ２９；４４（４）：１５２５－１５４０に記載され、これは参照により本明細書に組み込まれる。

本明細書で提供されるｒＡＡＶゲノムは、ＲＰＥ６５、ＲＰＧＲ、ＯＲＦ１５、ＣＮＧＡ３、ＣＭＨ、ＮＤ４、ＰＤＥ６Ｂ、ＣｈＲ２、ＭＥＲＴＫ、ｈＲＳ１、ｈＭＹＯＪＡ、ｈＡＢＣＡ４、ＣＤ５９、ＰＥＤＦ、エンドスタチン－アンギオスタチン遺伝子、ｓＦＬＴ－１、抗ｈＶＥＧＦ抗体をコードする遺伝子のうちのいずれか１つをコードするポリヌクレオチド配列を含む導入遺伝子をコードするポリヌクレオチドを含み得る。例えば、導入遺伝子によってコードされるポリペプチドには、導入遺伝子配列によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドが含まれる。

本明細書で提供されるｒＡＡＶゲノムは、ＣＬＮ１、ＣＬＮ２、ＣＬＮ３、ＣＬＮ４、ＣＬＮ５、ＣＬＮ６およびＣＬＮ８などのＣＬＮポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。ポリペプチドは、ＣＬＮポリペプチドアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドを含み、ＣＬＮ活性（例えば、リソソーム自己蛍光貯蔵物質のクリアランスの増加、ＡＴＰシンターゼサブユニットＣのリソソーム蓄積の減少、ならびに例えば治療前の患者と比較して治療した場合の患者における星状細胞およびミクログリアの活性化の減少、のうちの少なくとも１つ）を有するポリペプチドをコードする。

本明細書で提供されるｒＡＡＶゲノムは、場合によっては、ＣＬＮポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、またはＣＬＮ活性（例えば、リソソーム自己蛍光貯蔵物質のクリアランスの増加、ＡＴＰシンターゼサブユニットＣのリソソーム蓄積の減少、ならびに例えば治療前の患者と比較して治療した場合の患者における星状細胞およびミクログリアの活性化の減少、のうちの少なくとも１つ）を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であるポリヌクレオチドを含む。

本明細書に提供されるｒＡＡＶゲノムは、いくつかの実施形態では、所望の活性を有するポリペプチドをコードし、かつストリンジェントな条件下で目的の既知の導入遺伝子の核酸配列のいずれか１つまたはその相補体にハイブリダイズする、ポリヌクレオチド配列を含む導入遺伝子を含む。他の実施形態では、本明細書で提供されるｒＡＡＶゲノムは、ＣＬＮ活性を有するポリペプチドをコードし、かつストリンジェントな条件下でＣＬＮポリペプチドをコードする核酸配列のいずれか１つまたはその相補体にハイブリダイズする、ポリヌクレオチド配列を含む。

以下は、視覚的要素に重点を置いて、各バッテン病サブタイプの疾患特性の概要を示している。「主要疾患網膜細胞」カラムに含まれるデータは、マウス網膜から編集された単一細胞ＲＮＡデータに基づいて決定された。このデータの調査はまだ進行中である。

「ストリンジェントな」という用語は、ストリンジェントとして当該技術分野において一般に理解される条件を指すために使用される。ハイブリダイゼーションストリンジェシーは、主に、温度、イオン強度、およびホルムアミドなどの変性剤の濃度によって決定される。ハイブリダイゼーションおよび洗浄のためのストリンジェントな条件の例は、６５～６８℃での０．０１５Ｍの塩化ナトリウム、０．００１５Ｍのクエン酸ナトリウム、または４２℃での０．０１５Ｍの塩化ナトリウム、０．００１５Ｍのクエン酸ナトリウム、および５０％ホルムアミドである。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，２ｎｄＥｄ．，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．１９８９）を参照されたい。

投与方法
髄腔内投与が本明細書に例示される。これらの方法は、本明細書に記載の１つ以上のｒＡＡＶで標的細胞を形質導入することを含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子を含むｒＡＡＶウイルス粒子は、患者の眼、脳および／または脊髄に投与もしくは送達される。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、脳に送達される。送達が企図される脳の領域としては、運動皮質、視覚野、小脳、および脳幹が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、脊髄に送達される。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、下位運動ニューロンに送達される。ポリヌクレオチドは、双極細胞、桿体視細胞、錐体視細胞、神経節細胞、ミュラーグリア細胞、ミクログリア細胞、水平細胞またはアマクリン細胞などの網膜細胞に送達され得る。

本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、患者は、ｒＡＡＶの投与後（例えば、約５分間、約１０分間、約１５分間または約２０分間）、トレンデレンベルク体位（頭低位）に保持される。例えば、患者は、頭低位で、約１度～約３０度、約１５～約３０度、約３０～約６０度、約６０～約９０度、または約９０～約１８０度）傾けられてもよい。

網膜下投与の場合、眼の赤道またはその後方に、３０Ｇ針などの針で小さな強膜切開を行う。ウイルスまたはビヒクルは、切開部、例えば、ハミルトン注射器にチューブで取り付けられた細いガラスピペットを介して、または３０Ｇ針およびハミルトン注射器を介して、網膜下に送達される。例えば、網膜下投与は、当技術分野で知られている方法を使用して、臨床的に訓練された外科医によって実施される。

脳室内注射の場合、針が頭蓋骨に挿入され、液体が脳脊髄液を含有する空洞に注射される。例えば、脳室内注射は、当技術分野で知られている方法を使用して、臨床的に訓練された外科医によって実施される。

本明細書で提供される方法は、本明細書で提供されるｒＡＡＶを含む組成物の有効用量または有効複数用量を、それを必要とする対象（例えば、ヒト患者を含むが、これに限定されない動物）に投与するステップを含む。用量が視力関連障害の症状の発症前に投与される場合、投与は予防的である。用量が視力関連障害の症状の発症後に投与される場合、投与は治療的である。有効用量は、視力関連障害に関連する少なくとも１つの症状を緩和（排除または低減）する用量であり、障害の進行を遅延させるかまたは予防する用量であり、障害の範囲を縮小する用量であり、障害の寛解（部分的または完全な）をもたらす用量であり、かつ／または生存および／もしくは視力を長引かせる用量である。治療前の対象と比較して、または未治療の対象と比較して、本明細書で提供される方法は、安定化、視力の喪失もしくは網膜変性症の進行の減少、または視力もしくは黄斑変性症の改善をもたらす。

視力関連障害がＣＬＮバッテン病である場合、治療前の対象と比較して、または未治療の対象と比較して、本明細書で提供される方法は、ＣＬＮバッテン病の進行および／または改善を評価するために使用される尺度、例えば、統一バッテン病評価システム（ＵＢＤＲＳ）、またはハンブルク運動言語尺度、のうちの１つ以上の安定化、進行の減少、または改善をもたらす。ＵＢＤＲＳ評価尺度（Ｍａｒｓｈａｌｌｅｔａｌ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ．２００５６５（２）：２７５－２７９に記載される）［ＣＬＮバッテン病の進行および／または改善を評価するために使用されるＵＢＤＲＳ身体の１つ以上の尺度、例えば、統一バッテン病評価システム（ＵＢＤＲＳ）、またはハンブルク運動言語尺度を含む］。ＵＢＤＲＳ評価尺度（Ｍａｒｓｈａｌｌｅｔａｌ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ．２００５６５（２）：２７５－２７９に記載される）［ＵＢＤＲＳ身体評価尺度、ＵＢＤＲＳ発作評価尺度、ＵＢＤＲＳ行動評価尺度、ＵＢＤＲＳ能力評価尺度、ＵＢＤＲＳ症状発症の順序、およびＵＢＤＲＳ臨床全般印象（ＣＧＩ）を含む］、小児のＱＯＬ尺度（ＰｅｄｉａｔｒｉｃＱｕａｌｉｔｙｏｆＬｉｆｅＳｃａｌｅ）（ＰＥＤＳＱＯＬ）尺度、運動機能、言語機能、認知機能、および生存。治療前の対象と比較して、または未治療の対象と比較して、本明細書で提供される方法は、以下、自己蛍光貯蔵物質のリソソーム蓄積の減少または遅延、ＡＴＰシンターゼサブユニットＣのリソソーム蓄積の減少または遅延、グリア活性化（星状細胞および／またはミクログリア）活性化の減少または遅延、星状細胞増加症の減少または遅延、およびＭＲＩによって測定された脳容積損失の減少または遅れ、のうちの１つ以上をもたらし得る。

以下の実施例により特定の実施形態を説明するが、当業者には変形および修飾が発生するであろうことが理解される。したがって、請求項に見られるそのような制限のみが、本発明に課せられるべきである。

実施例１．ｓｃＡＡＶ９．ＧＦＰおよびＡｎｃ８０．ＧＦＰの産生
ヒトＧＦＰｃＤＮＡクローンは、Ｏｒｉｇｅｎｅ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤから入手した。ＧＦＰｃＤＮＡを、ハイブリッドニワトリβ－アクチンプロモーター（ＣＢ）、ＣＭＶエンハンサープロモーター、またはＰ５４６プロモーターの下で自己相補的ＡＡＶ９ゲノムまたはＡｎｃ８０ゲノムにさらにサブクローニングし、インビトロおよびインビボで試験した。ＡＡＶ２ＩＴＲ間に挿入されたＧＦＰｃＤＮＡを示すプラスミド構築物の概略図を図１に提供する。プラスミド構築物はまた、ＣＢプロモーター、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）キメライントロンなどのイントロン、およびウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）ポリアデニル化シグナル（ＢＧＨＰｏｌｙＡ）のうちの１つ以上を含んでいた。図１の構築物は、ＡＡＶ９ゲノムまたはＡｎｃ８０ゲノム（総称して「ＡＡＶ」と呼ばれる）のいずれかにパッケージングされた。

実施例２．ＩＣＶ送達後のマウス網膜の形質導入
ｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＧＦＰは、生後０日目～２日目に１回の脳室内（ＩＣＶ）注射によりマウスに投与され、２ケ月にわたってさまざまな時点で発現がモニターされた。マウスに５ｅ１０ｖｇのｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＧＦＰを注射した。ｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＧＦＰを、１×ＰＢＳおよび０．００１％プルロニック（登録商標）Ｆ６８（ＰＢＳ／Ｆ６８と示す）中に配合した。

導入遺伝子の網膜発現を調べるために、免疫組織化学分析を行ってＧＦＰタンパク質を視覚化した。ｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＧＦＰを注射したマウスを使用した。網膜組織は、ＧＦＰ（上段）、桿体双極細胞のマーカーであるＰＫＣα（中段）、および核対比染色を提供するＤｒａｑ５（下段）で染色された。図２Ａに示すように、桿体双極細胞は、ｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＧＦＰのＩＣＶ投与後に導入遺伝子ＧＦＰを発現した。

Ｐａｘ６はアマクリン／前駆細胞のマーカーである。図２Ｂに示すように、５ｅ１０ｖｇの用量でｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＧＦＰをＩＣＶ投与すると、桿体双極細胞（中央の列を参照）およびアマクリン／前駆細胞（左および右の列を参照）でＧＦＰが発現した。図２Ｃに示すように、５ｅ１０ｖｇの用量でｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＧＦＰをＩＣＶ投与した後、桿体双極細胞（中央および右の列）およびアマクリン／前駆細胞（右の列）の形質導入も観察された。図２Ｄは、ｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＧＦＰのＩＣＶ投与後のすべての組織の合成を示している。

カルレチニン（Ｃｙ３）は網膜の水平細胞のマーカー（赤い染色）であり、Ｉｂａ１（紫色の染色）は網膜のミクログリア細胞のマーカーである。図３Ａに示すように、ＡＡＶ９．ＣＢ．ＧＦＰ、ｓｃＡｎｃ８０．ＣＢ．ＧＦＰ、ｓｃＡｎｃ８０．ＣＢ．ＧＦＰ、およびｓｃＡｎｃ８０．ＣＭＶのＩＣＶ投与により、導入遺伝子がミクログリア細胞および水平細胞に送達された。Ｐ５４６プロモーターを含む遺伝子治療ベクターは、ＣＭＶおよびＣＢプロモーターよりも遅い速度で導入遺伝子を送達した。

Ｏｔｘ２はすべての双極細胞の核マーカー（緑色の染色）であり、Ｉｂａ１（赤色の染色）は網膜のミクログリア細胞のマーカーである。図３Ｂに示すように、ｓｃＡｎｃ８０．Ｐ５４６．ＧＦＰ、ＡＡＶ９．ＣＢ．ＧＦＰ、ｓｃＡｎｃ８０．ＣＢ．ＧＦＰ、ｓｃＡｎｃ８０．ＣＭＶ、およびＡＡＶ９．Ｐ５４６．ＧＦＰのＩＣＶ投与により、導入遺伝子が双極細胞およびミクログリア細胞に送達された。Ｏｔｘ２（赤色の双極核）およびＩｂａ１（紫色）染色の合成を図３Ｃに示す。

Ｓｏｘ２は、網膜のミュラーグリア細胞のメーカー（緑色の染色）である。これらの細胞はＣＬＮ３病に関与している。図３Ｄに示すように、ＡＡＶ９．ＣＢ．ＧＦＰ、ｓｃＡｎｃ８０．ＣＢ．ＧＦＰ、ｓｃＡｎｃ８０．ＣＭＶ．ＧＦＰ、およびＡＡＶ９．Ｐ５４６．ＧＦＰのＩＣＶ投与により、導入遺伝子がミュラーグリア細胞に送達された。Ａｎｃ８０ベクターを含む遺伝子治療ベクターは、ＡＡＶ９ベクターよりも遅い速度で導入遺伝子を送達した。Ｓｏｘ２染色の合成を図３Ｅに示す。

この実験は、ＡＡＶのＩＣＶ投与が、網膜内の桿体双極細胞およびアマクリン／前駆細胞へのＧＦＰ導入遺伝子の送達をもたらしたことを示している。ＩＣＶ送達が導入遺伝子を網膜細胞に送達するのに非常に効率的であったことは驚くべきことである。

実施例３．網膜下および髄腔内送達後のマウス網膜の形質導入
標準的な手順に従って、マウスをイソフルランまたはキシラゼン／ケタミン混合物で麻酔した。トロピカミドを一滴垂らして瞳孔を拡張させた。４．０縫合糸を使用して、目の周りに繊細に巻き付けられた小さなループを形成することにより、目を前方に保持し、切開および注射方法の動きを減らした。網膜下注射の場合、３０Ｇ針で赤道またはその後方に小さな強膜切開を行った。ウイルスまたはビヒクルは、ハミルトン注射器にチューブで取り付けられた細いガラスピペットを使用して切開するか、または３０Ｇ針およびハミルトン注射器を介して網膜下に送達された。必要に応じて、１０．０本の縫合糸を使用して縫合を行った。注射の前後に、オプテインおよびベトロポリシンを局所的に適用し、マウスを標準治療（回復のための加熱ケージ、ケージの底の食物、長いシッパーチューブ）を介して回復させ、安定するまでモニターした。

ｓｃＡＡＶ９．ＣＭＶ．ＧＦＰまたはｓｃＡｎｃ８０．ＣＭＶ．ＧＦＰを１回の網膜下注射によりマウス（１～５ケ月齢）に投与し、２ケ月にわたってさまざまな時点で発現をモニターした。ＡＡＶおよびＡｎｃ８０を、９×１０^９および３．２×１０^１０ｖｇを配合したＰＢＳ／Ｆ６８の範囲の用量で投与した。

導入遺伝子の網膜発現を調べるために、免疫組織化学分析を使用してＧＦＰタンパク質を視覚化した。ｓｃＡＡＶ９．ＣＭＶ．ＧＦＰまたはｓｃＡｎｃ８０．ＣＭＶ．ＧＦＰを注射したマウスを使用した。網膜組織は、ＧＦＰ（上段）、マーカーまたはアマクリン／前駆細胞であるＰａｘ６（中段）、および核対比染色を提供するＤＡＰＩ（下段）で染色された。図４Ａに示すように、アマクリン／前駆細胞は、注射の約１週間後にｓｃＡＡＶ９．ＣＭＶ．ＧＦＰまたはｓｃＡｎｃ８０．ＣＭＶ．ＧＦＰの網膜下注射後に導入遺伝子ＧＦＰを発現した。

Ｏｔｘ２は、すべての網膜双極細胞の核マーカーである。網膜組織は、ＧＦＰ（上段）、Ｏｔｘ２（中段）、および核対比染色を提供するＤＡＰＩ（下段）でも染色された。図４Ｂに示すように、双極細胞は、注射の約１週間後にｓｃＡＡＶ９．ＣＭＶ．ＧＦＰまたはｓｃＡｎｃ８０．ＣＭＶ．ＧＦＰの網膜下注射後に導入遺伝子ＧＦＰを発現した。

網膜組織は、ＧＦＰ（上段）、桿体双極細胞のマーカーであるＰＫＣα（中段）、および核対比染色を提供するＤＡＰＩ（下段）でも染色された。図４Ｃに示すように、桿体双極細胞は、注射の約１週間後に、網膜下注射またはｓｃＡＡＶ９．ＣＭＶ．ＧＦＰもしくはｓｃＡｎｃ８０．ＣＭＶ．ＧＦＰの後に導入遺伝子ＧＦＰを発現した。図５Ａ～Ｃは、ｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＧＦＰ、ｓｃＡＡＶ９．ＣＭＶ．ＧＦＰ、ｓｃＡｎｃ８０．ＣＢ．ＧＦＰ、またはｓｃＡｎｃ８０．ＣＭＶ．ＧＦＰの網膜下送達後のすべての組織の合成を提供する。図５Ａは、試験した４つのベクターすべての低倍率での染色を示している。図５Ｂは高倍率での染色を示し、図５Ｃは高倍率での染色を示しているが、共染色は異なっている。双極細胞における導入遺伝子の発現（ＯｔｘおよびＰＫＣα染色）は、以下のベクター、ｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＧＦＰ、ｓｃＡｎｃ８０ＣＭＶ．ＧＦＰ、ｓｃＡｎｃ８０．ＣＢ．ＧＦＰまたはｓｃＡｎｃ８０．ＣＭＶ．ＧＦＰの網膜下注射の４週間後に検出可能であった。図６は、２つの異なる共染色を使用して試験された４つのベクターすべてについて、低倍率で網膜下送達した後のすべての組織の合成を示している。

１０歳の非ヒト霊長類に１ｅ１４ｖｇのＡＡＶ９．ＣＢ．ＧＦＰを髄腔内注射した。網膜は、ミュラーグリア細胞マーカーであるＳｏｘ２で対比染色された。図７は、ＡＡＶ９．ＣＢ．ＧＦＰを注射した霊長類におけるＧＦＰおよびＳｏｘ２の顕著な共局在を示している。

実施例４．硝子体内送達後のマウス網膜の形質導入
マウスは、上記のように硝子体内注射のために麻酔された。３０Ｇの針で輪部と強膜との間に小さな切開を行った。ウイルスまたはビヒクルは、ハミルトン注射器にチューブで取り付けられた細いガラスピペットを使用して切開するか、または３０Ｇ針およびハミルトン注射器を介して硝子体腔に送達される。注射の前後に、オプテインおよびベトロポリシンを局所的に適用し、マウスを標準治療（回復のための加熱ケージ、ケージの底の食物、長いシッパーチューブ）を介して回復させ、安定するまでモニターする。

ＣＢ（プロモーター１）またはＰ５４６（プロモーター２）の制御下にあるｓｃＡＡＶ９．ＧＦＰまたはｓｃＡＮＣ８０．ＧＦＰを１回の硝子体内注射でマウス（１～５ケ月齢）に投与し、２月のコースにわたってさまざまな時点で発現をモニターした。ＡＡＶおよびＡｎｃ８０を、２×１０^１０ｖｐを配合したＰＢＳ／Ｆ６８の用量で投与した。次の表は、この研究で使用された細胞マーカーの指針を提供する。

図８に示すように、試験したベクターのうちのいずれかの硝子体内注射により、内顆粒層（ＩＮＬ）を標的とするＧＦＰ発現をもたらした。網膜組織は、ＧＦＰ、およびＩＮＬ内のミュラー細胞に特異的なマーカーであるＳｏｘ２で染色された。図８Ａに示すように、ＡＡＶ９およびＡｎｃ８０は、網膜の内層および外層を標的とするための候補ベクターである。図８Ｂは、ＧＰＦ陽性ミュラーグリアの定量的測定を提供する（Ｓｏｘ２染色）。この測定は、試験されたすべてのベクターが、ＣＢＡプロモーターよりもＰ５４６プロモーターで得られたＧＦＰ陽性細胞の数が多いミュラーグリアを形質導入したことを示している。この違いは、ミュラーグリア細胞内のこれらのプロモーターの発現の違いに起因し得る。それでもなお、ＡＡＶ９ベクターとＡｎｃ８０ベクターとの間で同等の数の細胞が形質導入されているため、ＡＡＶ９には、網膜発現だけでなくＣＮＳ発現にも利用できるという追加の利点がある。ただし、Ａｎｃ８０ベクターは、ＡＡＶ９と比較してより多くのミュラーグリアを形質導入した。

網膜組織は、双極細胞特異的マーカーであるＯｔｘ２でも染色された。図９Ａに示すように、硝子体内注射によって送達された場合、ＣＢまたはＰ５４６のいずれかの制御下にあるＡＡＶ９．ＧＦＰおよびＡｎｃ８０．ＧＦＰは双極細胞を形質導入した。定量的測定では、すべてのベクターを試験した場合、ＧＦＰ陽性双極細胞の割合が低いことが示されている（図９Ｂ）。ＡＡＶ９およびＡｎｃ８０ベクターは、双極細胞で同様の形質導入率を示し、一方、Ｐ５４６プロモーターは、ＣＢプロモーターと比較して双極細胞でより良いＧＦＰ発現を可能にした。

本明細書では本発明の好ましい実施形態を示し、記載してきたが、そのような実施形態が例としてのみ提供されていることは当業者には明らかであろう。当業者であれば、本発明から逸脱することなく、多数の変形、変更、および置換を思い付くであろう。本明細書に記載の実施形態に対する様々な代替形態を採用してもよいことを理解されたい。以下の特許請求の範囲が本発明の範囲を定義し、これらの特許請求の範囲内の方法および構造ならびにそれらの同等物がそれによって包含されることが意図される。

本出願で参照されるすべての文書は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。

参考文献
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Ｍｏｅｎ，Ｍ．Ｎ．，Ｆｊａｅｒ，Ｒ．，Ｈａｍｄａｎｉ，Ｅ．Ｈ．，Ｌａｅｒｄａｈｌ，Ｊ．Ｋ．，Ｍｅｎｃｈｉｎｉ，Ｒ．Ｊ．，Ｖｉｇｅｌａｎｄ，Ｍ．Ｄ．，…Ｃｈａｕｄｈｒｙ，Ｆ．Ａ．（２０１６）．ＰａｔｈｏｇｅｎｉｃｖａｒｉａｎｔｓｉｎＫＣＴＤ７ｐｅｒｔｕｒｂｎｅｕｒｏｎａｌＫ ^＋ｆｌｕｘｅｓａｎｄｇｌｕｔａｍｉｎｅｔｒａｎｓｐｏｒｔ．Ｂｒａｉｎ，１３９（１２），３１０９－３１２０．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０９３／ｂｒａｉｎ／ａｗｗ２４４

Ｍｏｌｅ，Ｓ．Ｅ．，＆Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｒ．Ｅ．（１９９３）．ＮｅｕｒｏｎａｌＣｅｒｏｉｄ－Ｌｉｐｏｆｕｓｃｉｎｏｓｅｓ．ＧｅｎｅＲｅｖｉｅｗｓ登録商標．ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＷａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｓｅａｔｔｌｅ．Ｒｅｔｒｉｅｖｅｄｆｒｏｍｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｕｂｍｅｄ／２０３０１６０１

Ｎｏｓｋｏｖａ，Ｌ．，Ｓｔｒａｎｅｃｋｙ，Ｖ．，Ｈａｒｔｍａｎｎｏｖａ，Ｈ．，Ｐｒｉｓｔｏｕｐｉｌｏｖａ，Ａ．，Ｂａｒｅｓｏｖａ，Ｖ．，Ｉｖａｎｅｋ，Ｒ．，…Ｋｍｏｃｈ，Ｓ．（２０１１）．ＭｕｔａｔｉｏｎｓｉｎＤＮＡＪＣ５，ｅｎｃｏｄｉｎｇｃｙｓｔｅｉｎｅ－ｓｔｒｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎａｌｐｈａ，ｃａｕｓｅａｕｔｏｓｏｍａｌ－ｄｏｍｉｎａｎｔａｄｕｌｔ－ｏｎｓｅｔｎｅｕｒｏｎａｌｃｅｒｏｉｄｌｉｐｏｆｕｓｃｉｎｏｓｉｓ．ＡｍｅｒｉｃａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｕｍａｎＧｅｎｅｔｉｃｓ，８９（２），２４１－２５２．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ａｊｈｇ．２０１１．０７．００３

Ｒｏｏｓｉｎｇ，Ｓ．，ｖａｎｄｅｎＢｏｒｎ，Ｌ．Ｉ．，Ｓａｎｇｅｒｍａｎｏ，Ｒ．，Ｂａｎｆｉ，Ｓ．，Ｋｏｅｎｅｋｏｏｐ，Ｒ．Ｋ．，Ｚｏｎｎｅｖｅｌｄ－Ｖｒｉｅｌｉｎｇ，Ｍ．Ｎ．，…Ｈｏｙｎｇ，Ｃ．Ｂ．（２０１５）．ＭｕｔａｔｉｏｎｓｉｎＭＦＳＤ８，ＥｎｃｏｄｉｎｇａＬｙｓｏｓｏｍａｌＭｅｍｂｒａｎｅＰｒｏｔｅｉｎ，ＡｒｅＡｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈＮｏｎｓｙｎｄｒｏｍｉｃＡｕｔｏｓｏｍａｌＲｅｃｅｓｓｉｖｅＭａｃｕｌａｒＤｙｓｔｒｏｐｈｙ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，１２２（１），１７０－１７９．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｏｐｈｔｈａ．２０１４．０７．０４０

Ｓｔａｒｏｐｏｌｉ，Ｊ．Ｆ．，Ｋａｒａａ，Ａ．，Ｌｉｍ，Ｅ．Ｔ．，Ｋｉｒｂｙ，Ａ．，Ｅｌｂａｌａｌｅｓｙ，Ｎ．，Ｒｏｍａｎｓｋｙ，Ｓ．Ｇ．，…Ｃｏｔｍａｎ，Ｓ．Ｌ．（２０１２）．ＡｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓｍｕｔａｔｉｏｎｉｎＫＣＴＤ７ｌｉｎｋｓｎｅｕｒｏｎａｌｃｅｒｏｉｄｌｉｐｏｆｕｓｃｉｎｏｓｉｓｔｏｔｈｅｕｂｉｑｕｉｔｉｎ－ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅｓｙｓｔｅｍ．ＡｍｅｒｉｃａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｕｍａｎＧｅｎｅｔｉｃｓ，９１（１），２０２－２０８．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ａｊｈｇ．２０１２．０５．０２３

ＷｅｉｚｍａｎｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＳｃｉｅｎｃｅ．（２０１９）．ＣｅｒｏｉｄＬｉｐｏｆｕｓｃｉｎｏｓｉｓ，Ｎｅｕｒｏｎａｌ，１０ｄｉｓｅａｓｅ：Ｍａｌａｃａｒｄｓ－ＲｅｓｅａｒｃｈＡｒｔｉｃｌｅｓ，Ｄｒｕｇｓ，Ｇｅｎｅｓ，ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ＲｅｔｒｉｅｖｅｄＭａｒｃｈ１９，２０１９，ｆｒｏｍｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｍａｌａｃａｒｄｓ．ｏｒｇ／ｃａｒｄ／ｃｅｒｏｉｄ＿ｌｉｐｏｆｕｓｃｉｎｏｓｉｓ＿ｎｅｕｒｏｎａｌ＿１０＿２

Ｘｉｎ，Ｗ．，Ｍｕｌｌｅｎ，Ｔ．Ｅ．，Ｋｉｅｌｙ，Ｒ．，Ｍｉｎ，Ｊ．，Ｆｅｎｇ，Ｘ．，Ｃａｏ，Ｙ．，…Ｓｉｍｓ，Ｋ．（２０１０）．ＣＬＮ５ｍｕｔａｔｉｏｎｓａｒｅｆｒｅｑｕｅｎｔｉｎｊｕｖｅｎｉｌｅａｎｄｌａｔｅ－ｏｎｓｅｔｎｏｎ－ＦｉｎｎｉｓｈｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＮＣＬ．Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，７４（７），５６５－５７１．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１２１２／ＷＮＬ．０ｂ０１３ｅ３１８１ｃｆｆ７０ｄ
ＣＬＮ３ヌクレオチド配列（配列番号１）
ａｔｇｇｇａｇｇｃｔｇｔｇｃａｇｇｃｔｃｇｃｇｇｃｇｇｃｇｃｔｔｔｔｃｇｇａｔｔｃｃｇａｇｇｇｇｇａｇｇａｇａｃｃｇｔｃ６０
ｃｃｇｇａｇｃｃｃｃｇｇｃｔｃｃｃｔｃｔｇｔｔｇｇａｃｃａｔｃａｇｇｇｃｇｃｇｃａｔｔｇｇａａｇａａｃｇｃｇｇｔｇｇｇｃ１２０
ｔｔｃｔｇｇｃｔｇｃｔｇｇｇｃｃｔｔｔｇｃａａｃａａｃｔｔｃｔｃｔｔａｔｇｔｇｇｔｇａｔｇｃｔｇａｇｔｇｃｃｇｃｃｃａｃ１８０
ｇａｃａｔｃｃｔｔａｇｃｃａｃａａｇａｇｇａｃａｔｃｇｇｇａａａｃｃａｇａｇｃｃａｔｇｔｇｇａｃｃｃａｇｇｃｃｃａａｃｇ２４０
ｃｃｇａｔｃｃｃｃｃａｃａａｃａｇｃｔｃａｔｃａｃｇａｔｔｔｇａｃｔｇｃａａｃｔｃｔｇｔｃｔｃｔａｃｇｇｃｔｇｃｔｇｔｇ３００
ｃｔｃｃｔｇｇｃｇｇａｃａｔｃｃｔｃｃｃｃａｃａｃｔｃｇｔｃａｔｃａａａｔｔｇｔｔｇｇｃｔｃｃｔｃｔｔｇｇｃｃｔｔｃａｃ３６０
ｃｔｇｃｔｇｃｃｃｔａｃａｇｃｃｃｃｃｇｇｇｔｔｃｔｃｇｔｃａｇｔｇｇｇａｔｔｔｇｔｇｃｔｇｃｔｇｇａａｇｃｔｔｃｇｔｃ４２０
ｃｔｇｇｔｔｇｃｃｔｔｔｔｃｔｃａｔｔｃｔｇｔｇｇｇｇａｃｃａｇｃｃｔｇｔｇｔｇｇｔｇｔｇｇｔｃｔｔｃｇｃｔａｇｃａｔｃ４８０
ｔｃａｔｃａｇｇｃｃｔｔｇｇｇｇａｇｇｔｃａｃｃｔｔｃｃｔｃｔｃｃｃｔｃａｃｔｇｃｃｔｔｃｔａｃｃｃｃａｇｇｇｃｃｇｔｇ５４０
ａｔｃｔｃｃｔｇｇｔｇｇｔｃｃｔｃａｇｇｇａｃｔｇｇｇｇｇａｇｃｔｇｇｇｃｔｇｃｔｇｇｇｇｇｃｃｃｔｇｔｃｃｔａｃｃｔｇ６００
ｇｇｃｃｔｃａｃｃｃａｇｇｃｃｇｇｃｃｔｃｔｃｃｃｃｔｃａｇｃａｇａｃｃｃｔｇｃｔｇｔｃｃａｔｇｃｔｇｇｇｔａｔｃｃｃｔ６６０
ｇｃｃｃｔｇｃｔｇｃｔｇｇｃｃａｇｃｔａｔｔｔｃｔｔｇｔｔｇｃｔｃａｃａｔｃｔｃｃｔｇａｇｇｃｃｃａｇｇａｃｃｃｔｇｇａ７２０
ｇｇｇｇａａｇａａｇａａｇｃａｇａｇａｇｃｇｃａｇｃｃｃｇｇｃａｇｃｃｃｃｔｃａｔａａｇａａｃｃｇａｇｇｃｃｃｃｇｇａｇ７８０
ｔｃｇａａｇｃｃａｇｇｃｔｃｃａｇｃｔｃｃａｇｃｃｔｃｔｃｃｃｔｔｃｇｇｇａａａｇｇｔｇｇａｃａｇｔｇｔｔｃａａｇｇｇｔ８４０
ｃｔｇｃｔｇｔｇｇｔａｃａｔｔｇｔｔｃｃｃｔｔｇｇｔｃｇｔａｇｔｔｔａｃｔｔｔｇｃｃｇａｇｔａｔｔｔｃａｔｔａａｃｃａｇ９００
ｇｇａｃｔｔｔｔｔｇａａｃｔｃｃｔｃｔｔｔｔｔｃｔｇｇａａｃａｃｔｔｃｃｃｔｇａｇｔｃａｃｇｃｔｃａｇｃａａｔａｃｃｇｃ９６０
ｔｇｇｔａｃｃａｇａｔｇｃｔｇｔａｃｃａｇｇｃｔｇｇｃｇｔｃｔｔｔｇｃｃｔｃｃｃｇｃｔｃｔｔｃｔｃｔｃｃｇｃｔｇｃｔｇｔ１０２０
ｃｇｃａｔｃｃｇｔｔｔｃａｃｃｔｇｇｇｃｃｃｔｇｇｃｃｃｔｇｃｔｇｃａｇｔｇｃｃｔｃａａｃｃｔｇｇｔｇｔｔｃｃｔｇｃｔｇ１０８０
ｇｃａｇａｃｇｔｇｔｇｇｔｔｃｇｇｃｔｔｔｃｔｇｃｃａａｇｃａｔｃｔａｃｃｔｃｇｔｃｔｔｃｃｔｇａｔｃａｔｔｃｔｇｔａｔ１１４０
ｇａｇｇｇｇｃｔｃｃｔｇｇｇａｇｇｃｇｃａｇｃｃｔａｃｇｔｇａａｃａｃｃｔｔｃｃａｃａａｃａｔｃｇｃｃｃｔｇｇａｇａｃｃ１２００
ａｇｔｇａｔｇａｇｃａｃｃｇｇｇａｇｔｔｔｇｃａａｔｇｇｃｇｇｃｃａｃｃｔｇｃａｔｃｔｃｔｇａｃａｃａｃｔｇｇｇｇａｔｃ１２６０
ｔｃｃｃｔｇｔｃｇｇｇｇｃｔｃｃｔｇｇｃｔｔｔｇｃｃｔｃｔｇｃａｔｇａｃｔｔｃｃｔｃｔｇｃｃａｇｃｔｃｔｃｃｔｇａ１３１７
ＣＬＮ３アミノ酸配列（配列番号２）
ＭｅｔＧｌｙＧｌｙＣｙｓＡｌａＧｌｙＳｅｒＡｒｇＡｒｇＡｒｇＰｈｅＳｅｒＡｓｐＳｅｒＧｌｕＧｌｙ
１５１０１５
ＧｌｕＧｌｕＴｈｒＶａｌＰｒｏＧｌｕＰｒｏＡｒｇＬｅｕＰｒｏＬｅｕＬｅｕＡｓｐＨｉｓＧｌｎＧｌｙ
２０２５３０
ＡｌａＨｉｓＴｒｐＬｙｓＡｓｎＡｌａＶａｌＧｌｙＰｈｅＴｒｐＬｅｕＬｅｕＧｌｙＬｅｕＣｙｓＡｓｎ
３５４０４５
ＡｓｎＰｈｅＳｅｒＴｙｒＶａｌＶａｌＭｅｔＬｅｕＳｅｒＡｌａＡｌａＨｉｓＡｓｐＩｌｅＬｅｕＳｅｒ
５０５５６０
ＨｉｓＬｙｓＡｒｇＴｈｒＳｅｒＧｌｙＡｓｎＧｌｎＳｅｒＨｉｓＶａｌＡｓｐＰｒｏＧｌｙＰｒｏＴｈｒ
６５７０７５８０
ＰｒｏＩｌｅＰｒｏＨｉｓＡｓｎＳｅｒＳｅｒＳｅｒＡｒｇＰｈｅＡｓｐＣｙｓＡｓｎＳｅｒＶａｌＳｅｒ
８５９０９５
ＴｈｒＡｌａＡｌａＶａｌＬｅｕＬｅｕＡｌａＡｓｐＩｌｅＬｅｕＰｒｏＴｈｒＬｅｕＶａｌＩｌｅＬｙｓ
１００１０５１１０
ＬｅｕＬｅｕＡｌａＰｒｏＬｅｕＧｌｙＬｅｕＨｉｓＬｅｕＬｅｕＰｒｏＴｙｒＳｅｒＰｒｏＡｒｇＶａｌ
１１５１２０１２５
ＬｅｕＶａｌＳｅｒＧｌｙＩｌｅＣｙｓＡｌａＡｌａＧｌｙＳｅｒＰｈｅＶａｌＬｅｕＶａｌＡｌａＰｈｅ
１３０１３５１４０
ＳｅｒＨｉｓＳｅｒＶａｌＧｌｙＴｈｒＳｅｒＬｅｕＣｙｓＧｌｙＶａｌＶａｌＰｈｅＡｌａＳｅｒＩｌｅ
１４５１５０１５５１６０
ＳｅｒＳｅｒＧｌｙＬｅｕＧｌｙＧｌｕＶａｌＴｈｒＰｈｅＬｅｕＳｅｒＬｅｕＴｈｒＡｌａＰｈｅＴｙｒ
１６５１７０１７５
ＰｒｏＡｒｇＡｌａＶａｌＩｌｅＳｅｒＴｒｐＴｒｐＳｅｒＳｅｒＧｌｙＴｈｒＧｌｙＧｌｙＡｌａＧｌｙ
１８０１８５１９０
ＬｅｕＬｅｕＧｌｙＡｌａＬｅｕＳｅｒＴｙｒＬｅｕＧｌｙＬｅｕＴｈｒＧｌｎＡｌａＧｌｙＬｅｕＳｅｒ
１９５２００２０５
ＰｒｏＧｌｎＧｌｎＴｈｒＬｅｕＬｅｕＳｅｒＭｅｔＬｅｕＧｌｙＩｌｅＰｒｏＡｌａＬｅｕＬｅｕＬｅｕ
２１０２１５２２０
ＡｌａＳｅｒＴｙｒＰｈｅＬｅｕＬｅｕＬｅｕＴｈｒＳｅｒＰｒｏＧｌｕＡｌａＧｌｎＡｓｐＰｒｏＧｌｙ
２２５２３０２３５２４０
ＧｌｙＧｌｕＧｌｕＧｌｕＡｌａＧｌｕＳｅｒＡｌａＡｌａＡｒｇＧｌｎＰｒｏＬｅｕＩｌｅＡｒｇＴｈｒ
２４５２５０２５５
ＧｌｕＡｌａＰｒｏＧｌｕＳｅｒＬｙｓＰｒｏＧｌｙＳｅｒＳｅｒＳｅｒＳｅｒＬｅｕＳｅｒＬｅｕＡｒｇ
２６０２６５２７０
ＧｌｕＡｒｇＴｒｐＴｈｒＶａｌＰｈｅＬｙｓＧｌｙＬｅｕＬｅｕＴｒｐＴｙｒＩｌｅＶａｌＰｒｏＬｅｕ
２７５２８０２８５
ＶａｌＶａｌＶａｌＴｙｒＰｈｅＡｌａＧｌｕＴｙｒＰｈｅＩｌｅＡｓｎＧｌｎＧｌｙＬｅｕＰｈｅＧｌｕ
２９０２９５３００
ＬｅｕＬｅｕＰｈｅＰｈｅＴｒｐＡｓｎＴｈｒＳｅｒＬｅｕＳｅｒＨｉｓＡｌａＧｌｎＧｌｎＴｙｒＡｒｇ
３０５３１０３１５３２０
ＴｒｐＴｙｒＧｌｎＭｅｔＬｅｕＴｙｒＧｌｎＡｌａＧｌｙＶａｌＰｈｅＡｌａＳｅｒＡｒｇＳｅｒＳｅｒ
３２５３３０３３５
ＬｅｕＡｒｇＣｙｓＣｙｓＡｒｇＩｌｅＡｒｇＰｈｅＴｈｒＴｒｐＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕＬｅｕＧｌｎ
３４０３４５３５０
ＣｙｓＬｅｕＡｓｎＬｅｕＶａｌＰｈｅＬｅｕＬｅｕＡｌａＡｓｐＶａｌＴｒｐＰｈｅＧｌｙＰｈｅＬｅｕ
３５５３６０３６５
ＰｒｏＳｅｒＩｌｅＴｙｒＬｅｕＶａｌＰｈｅＬｅｕＩｌｅＩｌｅＬｅｕＴｙｒＧｌｕＧｌｙＬｅｕＬｅｕ
３７０３７５３８０
ＧｌｙＧｌｙＡｌａＡｌａＴｙｒＶａｌＡｓｎＴｈｒＰｈｅＨｉｓＡｓｎＩｌｅＡｌａＬｅｕＧｌｕＴｈｒ
３８５３９０３９５４００
ＳｅｒＡｓｐＧｌｕＨｉｓＡｒｇＧｌｕＰｈｅＡｌａＭｅｔＡｌａＡｌａＴｈｒＣｙｓＩｌｅＳｅｒＡｓｐ
４０５４１０４１５
ＴｈｒＬｅｕＧｌｙＩｌｅＳｅｒＬｅｕＳｅｒＧｌｙＬｅｕＬｅｕＡｌａＬｅｕＰｒｏＬｅｕＨｉｓＡｓｐ
４２０４２５４３０
ＰｈｅＬｅｕＣｙｓＧｌｎＬｅｕＳｅｒ
４３５
ＣＬＮ６ヌクレオチド配列（配列番号３）
ａｔｇｇａｇｇｃｇａｃｇｃｇｇａｇｇｃｇｇｃａｇｃａｃｃｔｇｇｇａｇｃｇａｃｇｇｇｃｇｇｃｃｃａｇｇｃｇｃｇｃａｇｃｔｇ６０
ｇｇｃｇｃｃｔｃｃｔｔｃｃｔｇｃａｇｇｃｃａｇｇｃａｔｇｇｃｔｃｔｇｔｇａｇｃｇｃｔｇａｔｇａｇｇｃｔｇｃｃｃｇｃａｃｇ１２０
ｇｃｔｃｃｃｔｔｃｃａｃｃｔｃｇａｃｃｔｃｔｇｇｔｔｃｔａｃｔｔｃａｃａｃｔｇｃａｇａａｃｔｇｇｇｔｔｃｔｇｇａｃｔｔｔ１８０
ｇｇｇｃｇｔｃｃｃａｔｔｇｃｃａｔｇｃｔｇｇｔａｔｔｃｃｃｔｃｔｃｇａｇｔｇｇｔｔｔｃｃａｃｔｃａａｃａａｇｃｃｃａｇｔ２４０
ｇｔｔｇｇｇｇａｃｔａｃｔｔｃｃａｃａｔｇｇｃｃｔａｃａａｃｇｔｃａｔｃａｃｇｃｃｃｔｔｔｃｔｃｔｔｇｃｔｃａａｇｃｔｃ３００
ａｔｃｇａｇｃｇｇｔｃｃｃｃｃｃｇｃａｃｃｃｔｇｃｃａｃｇｃｔｃｃａｔｃａｃｇｔａｃｇｔｇａｇｃａｔｃａｔｃａｔｃｔｔｃ３６０
ａｔｃａｔｇｇｇｔｇｃｃａｇｃａｔｃｃａｃｃｔｇｇｔｇｇｇｔｇａｃｔｃｔｇｔｃａａｃｃａｃｃｇｃｃｔｇｃｔｃｔｔｃａｇｔ４２０
ｇｇｃｔａｃｃａｇｃａｃｃａｃｃｔｇｔｃｔｇｔｃｃｇｔｇａｇａａｃｃｃｃａｔｃａｔｃａａｇａａｔｃｔｃａａｇｃｃｇｇａｇ４８０
ａｃｇｃｔｇａｔｃｇａｃｔｃｃｔｔｔｇａｇｃｔｇｃｔｃｔａｃｔａｔｔａｔｇａｔｇａｇｔａｃｃｔｇｇｇｔｃａｃｔｇｃａｔｇ５４０
ｔｇｇｔａｃａｔｃｃｃｃｔｔｃｔｔｃｃｔｃａｔｃｃｔｃｔｔｃａｔｇｔａｃｔｔｃａｇｃｇｇｃｔｇｃｔｔｔａｃｔｇｃｃｔｃｔ６００
ａａａｇｃｔｇａｇａｇｃｔｔｇａｔｔｃｃａｇｇｇｃｃｔｇｃｃｃｔｇｃｔｃｃｔｇｇｔｇｇｃａｃｃｃａｇｔｇｇｃｃｔｇｔａｃ６６０
ｔａｃｔｇｇｔａｃｃｔｇｇｔｃａｃｃｇａｇｇｇｃｃａｇａｔｃｔｔｃａｔｃｃｔｃｔｔｃａｔｃｔｔｃａｃｃｔｔｃｔｔｃｇｃｃ７２０
ａｔｇｃｔｇｇｃｃｃｔｃｇｔｃｃｔｇｃａｃｃａｇａａｇｃｇｃａａｇｃｇｃｃｔｃｔｔｃｃｔｇｇａｃａｇｃａａｃｇｇｃｃｔｃ７８０
ｔｔｃｃｔｃｔｔｃｔｃｃｔｃｃｔｔｃｇｃａｃｔｇａｃｃｃｔｃｔｔｇｃｔｔｇｔｇｇｃｇｃｔｃｔｇｇｇｔｃｇｃｃｔｇｇｃｔｇ８４０
ｔｇｇａａｔｇａｃｃｃｔｇｔｔｃｔｃａｇｇａａｇａａｇｔａｃｃｃｇｇｇｔｇｔｃａｔｃｔａｃｇｔｃｃｃｔｇａｇｃｃｃｔｇｇ９００
ｇｃｔｔｔｃｔａｃａｃｃｃｔｔｃａｃｇｔｃａｇｃａｇｔｃｇｇｃａｃｔｇａ９３６
ＣＬＮ６アミノ酸配列（配列番号４）：
ＭｅｔＧｌｕＡｌａＴｈｒＡｒｇＡｒｇＡｒｇＧｌｎＨｉｓＬｅｕＧｌｙＡｌａＴｈｒＧｌｙＧｌｙＰｒｏ
１５１０１５
ＧｌｙＡｌａＧｌｎＬｅｕＧｌｙＡｌａＳｅｒＰｈｅＬｅｕＧｌｎＡｌａＡｒｇＨｉｓＧｌｙＳｅｒＶａｌ
２０２５３０
ＳｅｒＡｌａＡｓｐＧｌｕＡｌａＡｌａＡｒｇＴｈｒＡｌａＰｒｏＰｈｅＨｉｓＬｅｕＡｓｐＬｅｕＴｒｐ
３５４０４５
ＰｈｅＴｙｒＰｈｅＴｈｒＬｅｕＧｌｎＡｓｎＴｒｐＶａｌＬｅｕＡｓｐＰｈｅＧｌｙＡｒｇＰｒｏＩｌｅ
５０５５６０
ＡｌａＭｅｔＬｅｕＶａｌＰｈｅＰｒｏＬｅｕＧｌｕＴｒｐＰｈｅＰｒｏＬｅｕＡｓｎＬｙｓＰｒｏＳｅｒ
６５７０７５８０
ＶａｌＧｌｙＡｓｐＴｙｒＰｈｅＨｉｓＭｅｔＡｌａＴｙｒＡｓｎＶａｌＩｌｅＴｈｒＰｒｏＰｈｅＬｅｕ
８５９０９５
ＬｅｕＬｅｕＬｙｓＬｅｕＩｌｅＧｌｕＡｒｇＳｅｒＰｒｏＡｒｇＴｈｒＬｅｕＰｒｏＡｒｇＳｅｒＩｌｅ
１００１０５１１０
ＴｈｒＴｙｒＶａｌＳｅｒＩｌｅＩｌｅＩｌｅＰｈｅＩｌｅＭｅｔＧｌｙＡｌａＳｅｒＩｌｅＨｉｓＬｅｕ
１１５１２０１２５
ＶａｌＧｌｙＡｓｐＳｅｒＶａｌＡｓｎＨｉｓＡｒｇＬｅｕＬｅｕＰｈｅＳｅｒＧｌｙＴｙｒＧｌｎＨｉｓ
１３０１３５１４０
ＨｉｓＬｅｕＳｅｒＶａｌＡｒｇＧｌｕＡｓｎＰｒｏＩｌｅＩｌｅＬｙｓＡｓｎＬｅｕＬｙｓＰｒｏＧｌｕ
１４５１５０１５５１６０
ＴｈｒＬｅｕＩｌｅＡｓｐＳｅｒＰｈｅＧｌｕＬｅｕＬｅｕＴｙｒＴｙｒＴｙｒＡｓｐＧｌｕＴｙｒＬｅｕ
１６５１７０１７５
ＧｌｙＨｉｓＣｙｓＭｅｔＴｒｐＴｙｒＩｌｅＰｒｏＰｈｅＰｈｅＬｅｕＩｌｅＬｅｕＰｈｅＭｅｔＴｙｒ
１８０１８５１９０
ＰｈｅＳｅｒＧｌｙＣｙｓＰｈｅＴｈｒＡｌａＳｅｒＬｙｓＡｌａＧｌｕＳｅｒＬｅｕＩｌｅＰｒｏＧｌｙ
１９５２００２０５
ＰｒｏＡｌａＬｅｕＬｅｕＬｅｕＶａｌＡｌａＰｒｏＳｅｒＧｌｙＬｅｕＴｙｒＴｙｒＴｒｐＴｙｒＬｅｕ
２１０２１５２２０
ＶａｌＴｈｒＧｌｕＧｌｙＧｌｎＩｌｅＰｈｅＩｌｅＬｅｕＰｈｅＩｌｅＰｈｅＴｈｒＰｈｅＰｈｅＡｌａ
２２５２３０２３５２４０
ＭｅｔＬｅｕＡｌａＬｅｕＶａｌＬｅｕＨｉｓＧｌｎＬｙｓＡｒｇＬｙｓＡｒｇＬｅｕＰｈｅＬｅｕＡｓｐ
２４５２５０２５５
ＳｅｒＡｓｎＧｌｙＬｅｕＰｈｅＬｅｕＰｈｅＳｅｒＳｅｒＰｈｅＡｌａＬｅｕＴｈｒＬｅｕＬｅｕＬｅｕ
２６０２６５２７０
ＶａｌＡｌａＬｅｕＴｒｐＶａｌＡｌａＴｒｐＬｅｕＴｒｐＡｓｎＡｓｐＰｒｏＶａｌＬｅｕＡｒｇＬｙｓ
２７５２８０２８５
ＬｙｓＴｙｒＰｒｏＧｌｙＶａｌＩｌｅＴｙｒＶａｌＰｒｏＧｌｕＰｒｏＴｒｐＡｌａＰｈｅＴｙｒＴｈｒ
２９０２９５３００
ＬｅｕＨｉｓＶａｌＳｅｒＳｅｒＡｒｇＨｉｓ
３０５３１０
ＣＬＮ８ヌクレオチド配列（配列番号５）
ａｔｇａａｔｃｃｔｇｃｇａｇｃｇａｔｇｇｇｇｇｃａｃａｔｃａｇａｇａｇｃａｔｔｔｔｔｇａｃｃｔｇｇａｃｔａｔｇｃａｔｃｃ６０
ｔｇｇｇｇｇａｔｃｃｇｃｔｃｃａｃｇｃｔｇａｔｇｇｔｃｇｃｔｇｇｃｔｔｔｇｔｃｔｔｃｔａｃｔｔｇｇｇｃｇｔｃｔｔｔｇｔｇ１２０
ｇｔｃｔｇｃｃａｃｃａｇｃｔｇｔｃｃｔｃｔｔｃｃｃｔｇａａｔｇｃｃａｃｔｔａｃｃｇｔｔｃｔｔｔｇｇｔｇｇｃｃａｇａｇａｇ１８０
ａａｇｇｔｃｔｔｃｔｇｇｇａｃｃｔｇｇｃｇｇｃｃａｃｇｃｇｔｇｃａｇｔｃｔｔｔｇｇｔｇｔｔｃａｇａｇｃａｃａｇｃｃｇｃａ２４０
ｇｇｃｃｔｇｔｇｇｇｃｔｃｔｇｃｔｇｇｇｇｇａｃｃｃｔｇｔｇｃｔｇｃａｔｇｃｃｇａｃａａｇｇｃｇｃｇｔｇｇｃｃａｇｃａｇ３００
ａａｃｔｇｇｔｇｃｔｇｇｔｔｔｃａｃａｔｃａｃｇａｃａｇｃａａｃｇｇｇａｔｔｃｔｔｔｔｇｃｔｔｔｇａａａａｔｇｔｔｇｃａ３６０
ｇｔｃｃａｃｃｔｇｔｃｃａａｃｔｔｇａｔｃｔｔｃｃｇｇａｃａｔｔｔｇａｃｔｔｇｔｔｔｃｔｇｇｔｔａｔｃｃａｃｃａｔｃｔｃ４２０
ｔｔｔｇｃｃｔｔｔｃｔｔｇｇｇｔｔｔｃｔｔｇｇｃｔｇｃｔｔｇｇｔｃａａｔｃｔｃｃａａｇｃｔｇｇｃｃａｃｔａｔｃｔａｇｃｔ４８０
ａｔｇａｃｃａｃｇｔｔｇｃｔｃｃｔｇｇａｇａｔｇａｇｃａｃｇｃｃｃｔｔｔａｃｃｔｇｃｇｔｔｔｃｃｔｇｇａｔｇｃｔｃｔｔａ５４０
ａａｇｇｃｇｇｇｃｔｇｇｔｃｃｇａｇｔｃｔｃｔｇｔｔｔｔｇｇａａｇｃｔｃａａｃｃａｇｔｇｇｃｔｇａｔｇａｔｔｃａｃａｔｇ６００
ｔｔｔｃａｃｔｇｃｃｇｃａｔｇｇｔｔｃｔａａｃｃｔａｃｃａｃａｔｇｔｇｇｔｇｇｇｔｇｔｇｔｔｔｃｔｇｇｃａｃｔｇｇｇａｃ６６０
ｇｇｃｃｔｇｇｔｃａｇｃａｇｃｃｔｇｔａｔｃｔｇｃｃｔｃａｔｔｔｇａｃａｃｔｇｔｔｃｃｔｔｇｔｃｇｇａｃｔｇｇｃｔｃｔｇ７２０
ｃｔｔａｃｇｃｔａａｔｃａｔｔａａｔｃｃａｔａｔｔｇｇａｃｃｃａｔａａｇａａｇａｃｔｃａｇｃａｇｃｔｔｃｔｃａａｔｃｃｇ７８０
ｇｔｇｇａｃｔｇｇａａｃｔｔｃｇｃａｃａｇｃｃａｇａａｇｃｃａａｇａｇｃａｇｇｃｃａｇａａｇｇｃａａｃｇｇｇｃａｇｃｔｇ８４０
ｃｔｇｃｇｇａａｇａａｇａｇｇｃｃａｔａｇ８６１
ＣＬＮ８アミノ酸配列（配列番号６）
ＭｅｔＡｓｎＰｒｏＡｌａＳｅｒＡｓｐＧｌｙＧｌｙＴｈｒＳｅｒＧｌｕＳｅｒＩｌｅＰｈｅＡｓｐＬｅｕ
１５１０１５
ＡｓｐＴｙｒＡｌａＳｅｒＴｒｐＧｌｙＩｌｅＡｒｇＳｅｒＴｈｒＬｅｕＭｅｔＶａｌＡｌａＧｌｙＰｈｅ
２０２５３０
ＶａｌＰｈｅＴｙｒＬｅｕＧｌｙＶａｌＰｈｅＶａｌＶａｌＣｙｓＨｉｓＧｌｎＬｅｕＳｅｒＳｅｒＳｅｒ
３５４０４５
ＬｅｕＡｓｎＡｌａＴｈｒＴｙｒＡｒｇＳｅｒＬｅｕＶａｌＡｌａＡｒｇＧｌｕＬｙｓＶａｌＰｈｅＴｒｐ
５０５５６０
ＡｓｐＬｅｕＡｌａＡｌａＴｈｒＡｒｇＡｌａＶａｌＰｈｅＧｌｙＶａｌＧｌｎＳｅｒＴｈｒＡｌａＡｌａ
６５７０７５８０
ＧｌｙＬｅｕＴｒｐＡｌａＬｅｕＬｅｕＧｌｙＡｓｐＰｒｏＶａｌＬｅｕＨｉｓＡｌａＡｓｐＬｙｓＡｌａ
８５９０９５
ＡｒｇＧｌｙＧｌｎＧｌｎＡｓｎＴｒｐＣｙｓＴｒｐＰｈｅＨｉｓＩｌｅＴｈｒＴｈｒＡｌａＴｈｒＧｌｙ
１００１０５１１０
ＰｈｅＰｈｅＣｙｓＰｈｅＧｌｕＡｓｎＶａｌＡｌａＶａｌＨｉｓＬｅｕＳｅｒＡｓｎＬｅｕＩｌｅＰｈｅ
１１５１２０１２５
ＡｒｇＴｈｒＰｈｅＡｓｐＬｅｕＰｈｅＬｅｕＶａｌＩｌｅＨｉｓＨｉｓＬｅｕＰｈｅＡｌａＰｈｅＬｅｕ
１３０１３５１４０
ＧｌｙＰｈｅＬｅｕＧｌｙＣｙｓＬｅｕＶａｌＡｓｎＬｅｕＧｌｎＡｌａＧｌｙＨｉｓＴｙｒＬｅｕＡｌａ
１４５１５０１５５１６０
ＭｅｔＴｈｒＴｈｒＬｅｕＬｅｕＬｅｕＧｌｕＭｅｔＳｅｒＴｈｒＰｒｏＰｈｅＴｈｒＣｙｓＶａｌＳｅｒ
１６５１７０１７５
ＴｒｐＭｅｔＬｅｕＬｅｕＬｙｓＡｌａＧｌｙＴｒｐＳｅｒＧｌｕＳｅｒＬｅｕＰｈｅＴｒｐＬｙｓＬｅｕ
１８０１８５１９０
ＡｓｎＧｌｎＴｒｐＬｅｕＭｅｔＩｌｅＨｉｓＭｅｔＰｈｅＨｉｓＣｙｓＡｒｇＭｅｔＶａｌＬｅｕＴｈｒ
１９５２００２０５
ＴｙｒＨｉｓＭｅｔＴｒｐＴｒｐＶａｌＣｙｓＰｈｅＴｒｐＨｉｓＴｒｐＡｓｐＧｌｙＬｅｕＶａｌＳｅｒ
２１０２１５２２０
ＳｅｒＬｅｕＴｙｒＬｅｕＰｒｏＨｉｓＬｅｕＴｈｒＬｅｕＰｈｅＬｅｕＶａｌＧｌｙＬｅｕＡｌａＬｅｕ
２２５２３０２３５２４０
ＬｅｕＴｈｒＬｅｕＩｌｅＩｌｅＡｓｎＰｒｏＴｙｒＴｒｐＴｈｒＨｉｓＬｙｓＬｙｓＴｈｒＧｌｎＧｌｎ
２４５２５０２５５
ＬｅｕＬｅｕＡｓｎＰｒｏＶａｌＡｓｐＴｒｐＡｓｎＰｈｅＡｌａＧｌｎＰｒｏＧｌｕＡｌａＬｙｓＳｅｒ
２６０２６５２７０
ＡｒｇＰｒｏＧｌｕＧｌｙＡｓｎＧｌｙＧｌｎＬｅｕＬｅｕＡｒｇＬｙｓＬｙｓＡｒｇＰｒｏ
２７５２８０２８５
ＣＢプロモーター（配列番号７）
ｃｃａｃｇｔｔｃｔｇｃｔｔｃａｃｔｃｔｃｃｃｃａｔｃｔｃｃｃｃｃｃｃｃｔｃｃｃｃａｃｃｃｃｃａａｔｔｔｔｇｔａｔｔｔａｔ
ｔｔａｔｔｔｔｔｔａａｔｔａｔｔｔｔｇｔｇｃａｇｃｇａｔｇｇｇｇｇｃｇｇｇｇｇｇｇｇｇｇｇｇｇｇｇｇｃｇｃｇｃｇｃｃａｇ
ｇｃｇｇｇｇｃｇｇｇｇｃｇｇｇｇｃｇａｇｇｇｇｃｇｇｇｇｃｇｇｇｇｃｇａｇｇｃｇｇａｇａｇｇｔｇｃｇｇｃｇｇｃａｇｃｃａ
ａｔｃａｇａｇｃｇｇｃｇｃｇｃｔｃｃｇａａａｇｔｔｔｃｃｔｔｔｔａｔｇｇｃｇａｇｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃｃｃｔ
ａｔａａａａａｇｃｇａａｇｃｇｃｇｃｇｇｃｇｇｇｃｇｇｇａｇ
ＣＭＶプロモーター（配列番号８）
ｃｇｔｔａｃａｔａａｃｔｔａｃｇｇｔａａａｔｇｇｃｃｃｇｃｃｔｇｇｃｔｇａｃｃｇｃｃｃａａｃｇａｃｃｃｃｃｇｃｃｃａｔｔ
ｇａｃｇｔｃａａｔａａｔｇａｃｇｔａｔｇｔｔｃｃｃａｔａｇｔａａｃｇｃｃａａｔａｇｇｇａｃｔｔｔｃｃａｔｔｇａｃｇｔｃａ
ａｔｇｇｇｔｇｇａｇｔａｔｔｔａｃｇｇｔａａａｃｔｇｃｃｃａｃｔｔｇｇｃａｇｔａｃａｔｃａａｇｔｇｔａｔｃａｔａｔｇｃｃ
ａａｇｔａｃｇｃｃｃｃｃｔａｔｔｇａｃｇｔｃａａｔｇａｃｇｇｔａａａｔｇｇｃｃｃｇｃｃｔｇｇｃａｔｔａｔｇｃｃｃａｇｔａ
ｃａｔｇａｃｃｔｔａｔｇｇｇａｃｔｔｔｃｃｔａｃｔｔｇｇｃａｇｔａｃａｔｃｔａｃ
Ｐ５４６プロモーター（配列番号９）
ｇａａｃａａｃｇｃｃａｇｇｃｔｃｃｔｃａａｃａｇｇｃａａｃｔｔｔｇｃｔａｃｔｔｃｔａｃａｇａａａａｔｇａｔａａｔａａａｇ
ａａａｔｇｃｔｇｇｔｇａａｇｔｃａａａｔｇｃｔｔａｔｃａｃａａｔｇｇｔｇａａｃｔａｃｔｃａｇｃａｇｇｇａｇｇｃｔｃｔａａ
ｔａｇｇｃｇｃｃａａｇａｇｃｃｔａｇａｃｔｔｃｃｔｔａａｇｃｇｃｃａｇａｇｔｃｃａｃａａｇｇｇｃｃｃａｇｔｔａａｔｃｃｔ
ｃａａｃａｔｔｃａａａｔｇｃｔｇｃｃｃａｃａａａａｃｃａｇｃｃｃｃｔｃｔｇｔｇｃｃｃｔａｇｃｃｇｃｃｔｃｔｔｔｔｔｔｃｃ
ａａｇｔｇａｃａｇｔａｇａａｃｔｃｃａｃｃａａｔｃｃｇｃａｇｃｔｇａａｔｇｇｇｇｔｃｃｇｃｃｔｃｔｔｔｔｃｃｃｔｇｃｃｔ
ａａａｃａｇａｃａｇｇａａｃｔｃｃｔｇｃｃａａｔｔｇａｇｇｇｃｇｔｃａｃｃｇｃｔａａｇｇｃｔｃｃｇｃｃｃｃａｇｃｃｔｇｇ
ｇｃｔｃｃａｃａａｃｃａａｔｇａａｇｇｇｔａａｔｃｔｃｇａｃａａａｇａｇｃａａｇｇｇｇｔｇｇｇｇｃｇｃｇｇｇｃｇｃｇｃａ
ｇｇｔｇｃａｇｃａｇｃａｃａｃａｇｇｃｔｇｇｔｃｇｇｇａｇｇｇｃｇｇｇｇｃｇｃｇａｃｇｔｃｔｇｃｃｇｔｇｃｇｇｇｇｔｃｃ
ｃｇｇｃａｔｃｇｇｔｔｇｃｇｃｇｃｇｃｇｃｔｃｃｃｔｃｃｔｃｔｃｇｇａｇａｇａｇｇｇｃｔｇｔｇｇｔａａａａｃｃｃｇｔｃｃ
ｇｇａａａａ

Claims

対象の網膜細胞に導入遺伝子を送達する方法であって、前記導入遺伝子をコードする遺伝子治療ベクターを投与することを含み、前記遺伝子治療ベクターが、局所静脈内送達、網膜下送達、硝子体内送達または髄腔内送達を使用して前記対象に投与される、方法。
前記網膜細胞が、双極細胞、桿体視細胞、錐体視細胞、神経節細胞、ミュラーグリア細胞、ミクログリア細胞、水平細胞またはアマクリン細胞である、請求項１に記載の方法。
対象の視覚機能障害または視力関連障害を治療する方法であって、導入遺伝子をコードする遺伝子治療ベクターを前記対象に投与することを含み、前記遺伝子治療ベクターが、局所静脈内送達、網膜下送達、硝子体内送達または髄腔内送達を使用して投与される、方法。
前記視力関連障害が、バッテン病、先天性白内障、先天性緑内障、網膜変性症、視神経萎縮、眼奇形、斜視、眼球のずれ、緑内障、湿性加齢性黄斑変性症、乾性加齢性黄斑変性症、網膜色素変性症、全脈絡膜萎縮、レーバー先天性黒内障、レーバー遺伝性視神経症、早期発症網膜ジストロフィー、色覚異常、ｘ連鎖網膜分離症、アッシャー症候群１Ｂ、新生血管の加齢性黄斑変性症、シュタルガルト病の黄斑変性症、糖尿病性黄斑変性症、または糖尿病性黄斑浮腫である、請求項３に記載の方法。
前記視力関連障害がバッテン病であるか、または前記視覚機能障害がバッテン病の症状である、請求項３または４に記載の方法。
前記バッテン病が、ＣＬＮ１病、ＣＬＮ２病、ＣＬＮ３病、ＣＬＮ４病、ＣＬＮ５病、ＣＬＮ６病またはＣＬＮ８病である、請求項５に記載の方法。
前記導入遺伝子が、ＲＰＥ６５、ＲＰＧＲ、ＯＲＦ１５、ＣＮＧＡ３、ＣＭＨ、ＮＤ４、ＰＤＥ６Ｂ、ＣｈＲ２、ＭＥＲＴＫ、ｈＲＳ１、ｈＭＹＯＪＡ、ｈＡＢＣＡ４、ＣＤ５９、抗ｈＶＥＧＦ抗体、エンドスタチン－アンギオスタチン、ｓＦＬＴ０１、またはｓＦＬＴ－１をコードする、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
前記導入遺伝子が、ｍｉＲＮＡ、ＲＴＰ８０１に対するｓｉＲＮＡ、ＶＥＧＦＲ－１に対するｓｉＲＮＡ、ＶＥＧＦに対するｓｉＲＮＡ、またはＡＤＲＢ２に対するｓｉＲＮＡである、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
前記導入遺伝子がＣＬＮポリペプチドをコードする、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
前記ＣＬＮポリペプチドが、ＣＬＮ１、ＣＬＮ２、ＣＬＮ３、ＣＬＮ４、ＣＬＮ５、ＣＬＮ６またはＣＬＮ８である、請求項９に記載の方法。
対象のバッテン病を治療する方法であって、ＣＬＮポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む遺伝子治療ベクターを前記対象に投与することを含み、前記遺伝子治療ベクターが、網膜下送達、硝子体内送達または髄腔内送達を使用して投与される、方法。
前記バッテン病が、ＣＬＮ１病、ＣＬＮ２病、ＣＬＮ３病、ＣＬＮ４病、ＣＬＮ５病、ＣＬＮ６病またはＣＬＮ８病である、請求項１１に記載の方法。
前記導入遺伝子がＣＬＮポリペプチドをコードする、請求項１１または１２に記載の方法。
前記ＣＬＮポリペプチドが、ＣＬＮ１、ＣＬＮ２、ＣＬＮ３、ＣＬＮ４、ＣＬＮ５、ＣＬＮ６またはＣＬＮ８である、請求項１３に記載の方法。
前記治療が、未治療のバッテン病患者と比較して、
（ａ）視力の喪失、
（ｂ）脳容積の損失、
（ｃ）認知機能の喪失、および
（ｄ）言語発達遅滞
から選択されるバッテン病の１つ以上の症状を減少させるかまたは遅延させる、請求項１１～１４のいずれか一項に記載の方法。
前記遺伝子治療ベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶＲＨ１０、ＡＡＶＲＨ７４、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶＴＴ、もしくはＡｎｃ８０、またはＡＡＶ７ｍ８である、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法。
前記ＡＡＶ９またはＡｎｃ８０が髄腔内送達を使用して投与され、前記方法が、前記遺伝子治療ベクターの投与後に前記対象をトレンデレンブルグ体位に置くことをさらに含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法。
導入遺伝子を対象の網膜細胞に送達するための組成物であって、前記組成物が前記導入遺伝子をコードする遺伝子治療ベクターを含み、前記組成物が、局所静脈内送達、網膜下送達、硝子体内送達または髄腔内送達を使用して前記遺伝子治療ベクターを投与するために配合される、組成物。
前記網膜細胞が、双極細胞、桿体視細胞、錐体視細胞、神経節細胞、ミュラーグリア細胞、ミクログリア細胞、水平細胞またはアマクリン細胞である、請求項１８に記載の組成物。
対象の視覚機能障害または視力関連障害を治療するための組成物であって、前記組成物が、前記対象への導入遺伝子をコードする遺伝子治療ベクターを含み、前記組成物が、局所静脈内送達、網膜下送達、硝子体内送達または髄腔内送達を使用して前記遺伝子治療ベクターを投与するために配合される、組成物。
前記視力関連障害が、バッテン病、先天性白内障、先天性緑内障、網膜変性症、視神経萎縮、眼奇形、斜視、眼球のずれ、緑内障、湿性加齢性黄斑変性症、乾性加齢性黄斑変性症、網膜色素変性症、全脈絡膜萎縮、レーバー先天性黒内障、レーバー遺伝性視神経症、早期発症網膜ジストロフィー、色覚異常、ｘ連鎖網膜分離症、アッシャー症候群１Ｂ、新生血管の加齢性黄斑変性症、シュタルガルト病の黄斑変性症、糖尿病性黄斑変性症、または糖尿病性黄斑浮腫である、請求項２０に記載の組成物。
前記視力関連障害がバッテン病であるか、または前記視覚機能障害がバッテン病の症状である、請求項２０または２１に記載の組成物。
前記バッテン病が、ＣＬＮ１病、ＣＬＮ２病、ＣＬＮ３病、ＣＬＮ４病、ＣＬＮ５病、ＣＬＮ６病またはＣＬＮ８病である、請求項２２に記載の組成物。
前記導入遺伝子が、ＲＰＥ６５、ＲＰＧＲ、ＯＲＦ１５、ＣＮＧＡ３、ＣＭＨ、ＮＤ４、ＰＤＥ６Ｂ、ＣｈＲ２、ＭＥＲＴＫ、ｈＲＳ１、ｈＭＹＯＪＡ、ｈＡＢＣＡ４、ＣＤ５９、抗ｈＶＥＧＦ抗体、エンドスタチン－アンギオスタチン、ｓＦＬＴ０１、またはｓＦＬＴ－１をコードする、請求項１８～２１のいずれか一項に記載の組成物。
前記導入遺伝子が、ｍｉＲＮＡ、ＲＴＰ８０１に対するｓｉＲＮＡ、ＶＥＧＦＲ－１に対するｓｉＲＮＡ、ＶＥＧＦに対するｓｉＲＮＡ、またはＡＤＲＢ２に対するｓｉＲＮＡである、請求項１８～２１のいずれか一項に記載の組成物。
前記導入遺伝子がＣＬＮポリペプチドをコードする、請求項１８～２３のいずれか一項に記載の組成物。
前記ＣＬＮポリペプチドが、ＣＬＮ１、ＣＬＮ２、ＣＬＮ３、ＣＬＮ４、ＣＬＮ５、ＣＬＮ６またはＣＬＮ８である、請求項２６に記載の組成物。
対象のバッテン病を治療するための組成物であって、前記組成物が、ＣＬＮポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む遺伝子治療ベクターを含み、前記組成物が、網膜下送達、硝子体内送達または髄腔内送達を使用して前記遺伝子治療ベクターを投与するために配合される、組成物。
前記バッテン病が、ＣＬＮ１病、ＣＬＮ２病、ＣＬＮ３病、ＣＬＮ４病、ＣＬＮ５病、ＣＬＮ６病またはＣＬＮ８病である、請求項２８に記載の組成物。
前記導入遺伝子がＣＬＮポリペプチドをコードする、請求項２８または２９に記載の組成物。
前記ＣＬＮポリペプチドが、ＣＬＮ１、ＣＬＮ２、ＣＬＮ３、ＣＬＮ４、ＣＬＮ５、ＣＬＮ６またはＣＬＮ８である、請求項３０に記載の組成物。
前記治療が、未治療のバッテン病患者と比較して、
（ａ）視力の喪失、
（ｂ）脳容積の損失、
（ｃ）認知機能の喪失、および
（ｄ）言語発達遅滞
から選択されるバッテン病の１つ以上の症状を減少させるかまたは遅延させる、請求項２８～３１のいずれか一項に記載の組成物。
前記遺伝子治療ベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶＲＨ１０、ＡＡＶＲＨ７４、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶＴＴ、もしくはＡｎｃ８０、またはＡＡＶ７ｍ８である、請求項１８～３２のいずれか一項に記載の組成物。
前記遺伝子治療ベクターがＡＡＶ９またはＡｎｃ８０であり、前記組成物が髄腔内送達を使用して前記遺伝子治療を投与するために配合され、前記対象が前記遺伝子治療ベクターの投与後にトレンデレンブルグ体位に置かれる、請求項１８～３２のいずれか一項に記載の組成物。
対象の網膜細胞に導入遺伝子を送達するための薬剤の調製のための遺伝子治療の使用であって、前記薬剤が前記導入遺伝子をコードする遺伝子治療ベクターを含み、前記薬剤が、局所静脈内送達、網膜下送達、硝子体内送達または髄腔内送達を使用して前記遺伝子治療ベクターを投与するために配合される、使用。
前記網膜細胞が、双極細胞、桿体視細胞、錐体視細胞、神経節細胞、ミュラーグリア細胞、ミクログリア細胞、水平細胞またはアマクリン細胞である、請求項３５に記載の使用。
対象の視覚機能障害または視力関連障害を治療するための薬剤の調製のための遺伝子治療ベクターの使用であって、前記薬剤が導入遺伝子をコードする遺伝子治療ベクターを含み、前記薬剤が、局所静脈内送達、網膜下送達、硝子体内送達または髄腔内送達を使用して前記遺伝子治療ベクターを投与するために配合される、使用。
前記視力関連障害が、バッテン病、先天性白内障、先天性緑内障、網膜変性症、視神経萎縮、眼奇形、斜視、眼球のずれ、緑内障、湿性加齢性黄斑変性症、乾性加齢性黄斑変性症、網膜色素変性症、全脈絡膜萎縮、レーバー先天性黒内障、レーバー遺伝性視神経症、早期発症網膜ジストロフィー、色覚異常、ｘ連鎖網膜分離症、アッシャー症候群１Ｂ、新生血管の加齢性黄斑変性症、シュタルガルト病の黄斑変性症、糖尿病性黄斑変性症、または糖尿病性黄斑浮腫である、請求項３７に記載の使用。
前記視力関連障害がバッテン病であるか、または前記視覚機能障害がバッテン病の症状である、請求項３７または３８に記載の使用。
前記バッテン病が、ＣＬＮ１病、ＣＬＮ２病、ＣＬＮ３病、ＣＬＮ４病、ＣＬＮ５病、ＣＬＮ６病またはＣＬＮ８病である、請求項３９に記載の使用。
前記導入遺伝子が、ＲＰＥ６５、ＲＰＧＲ、ＯＲＦ１５、ＣＮＧＡ３、ＣＭＨ、ＮＤ４、ＰＤＥ６Ｂ、ＣｈＲ２、ＭＥＲＴＫ、ｈＲＳ１、ｈＭＹＯＪＡ、ｈＡＢＣＡ４、ＣＤ５９、抗ｈＶＥＧＦ抗体、エンドスタチン－アンギオスタチン、ｓＦＬＴ０１、またはｓＦＬＴ－１をコードする、請求項３５～４０のいずれか一項に記載の使用。
前記導入遺伝子が、ｍｉＲＮＡ、ＲＴＰ８０１に対するｓｉＲＮＡ、ＶＥＧＦＲ－１に対するｓｉＲＮＡ、ＶＥＧＦに対するｓｉＲＮＡ、またはＡＤＲＢ２に対するｓｉＲＮＡである、請求項３５～４０のいずれか一項に記載の使用。
前記導入遺伝子がＣＬＮポリペプチドをコードする、請求項３５～４０のいずれか一項に記載の使用。
前記ＣＬＮポリペプチドが、ＣＬＮ１、ＣＬＮ２、ＣＬＮ３、ＣＬＮ４、ＣＬＮ５、ＣＬＮ６またはＣＬＮ８である、請求項４３に記載の使用。
対象のバッテン病を治療するための薬剤の調製のための遺伝子治療ベクターの使用であって、前記薬剤が、ＣＬＮポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む遺伝子治療ベクターを含み、前記薬剤が、網膜下送達、硝子体内送達または髄腔内送達を使用して前記遺伝子治療ベクターを投与するために配合される、使用。
前記バッテン病が、ＣＬＮ１病、ＣＬＮ２病、ＣＬＮ３病、ＣＬＮ４病、ＣＬＮ５病、ＣＬＮ６病またはＣＬＮ８病である、請求項４５に記載の使用。
前記導入遺伝子がＣＬＮポリペプチドをコードする、請求項４５または４６に記載の使用。
前記ＣＬＮポリペプチドが、ＣＬＮ１、ＣＬＮ２、ＣＬＮ３、ＣＬＮ４、ＣＬＮ５、ＣＬＮ６またはＣＬＮ８である、請求項４７に記載の使用。
前記治療が、未治療のバッテン病患者と比較して、
（ａ）視力の喪失、
（ｂ）脳容積の損失、
（ｃ）認知機能の喪失、および
（ｄ）言語発達遅滞
から選択されるバッテン病の１つ以上の症状を減少させるかまたは遅延させる、請求項３５～４８のいずれか一項に記載の使用。
前記遺伝子治療ベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶＲＨ１０、ＡＡＶＲＨ７４、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶＴＴ、またはＡｎｃ８０、またはＡＡＶ７ｍ８である、請求項３５～４９のいずれか一項に記載の使用。
前記遺伝子治療ベクターがＡＡＶ９またはＡｎｃ８０であり、前記薬剤が髄腔内送達を使用して前記遺伝子治療を投与するために配合され、前記対象が前記遺伝子治療ベクターの投与後にトレンデレンブルグ体位に置かれる、請求項３５～４９のいずれか一項に記載の使用。