JP2022533151A - キナゾリノン化合物、結晶形及びその製造方法 - Google Patents

キナゾリノン化合物、結晶形及びその製造方法 Download PDF

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Abstract

本発明は、ＰＩ３Ｋα阻害剤としての式（Ｉ）で表される化合物の結晶形及びその製造方法に関し、固形腫瘍を治療する医薬の製造における使用に関する。【化１】JPEG2022533151000031.jpg45169

Description

本出願は出願日が２０１９年５月１３日である中国特許出願ＣＮ２０１９１０３９４６５３．５、出願日が２０１９年５月２１である中国特許出願ＣＮ２０１９１０４２３７１１．２の優先権を主張する。本出願は上記の中国特許出願の全文を引用する。
本発明は、ＰＩ３Ｋα阻害剤としての化合物、結晶形及びその製造方法に関し、さらに、固形腫瘍を治療するための医薬の製造における使用に関する。
ホスファチジルイノシトール－３－キナーゼ（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ－３－ｋｉｎａｓｅ、ＰＩ３Ｋ）は、調節サブユニットｐ８５あるいはｐ１０１及び触媒サブユニットｐ１１０（又は４つのサブタイプｐ１１０α、ｐ１１０β、ｐ１１０δ、ｐ１１０γに分けられる）から構成される脂質キナーゼで、ホスファチジルイノシトール４，５－ビスホスフェート（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ４，５－ｂｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅ、ＰＩＰ２）のイノシトール環の３’－ＯＨのホスファチジルイノシトール３，４，５－トリホスフェート（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ３，４，５－ｔｒｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅ、ＰＩＰ３）へのリン酸化を触媒し、下流のＡｋｔなどを活性化し、細胞増殖、生存及び代謝などに重要な役割を果たしている。腫瘍細胞の中では、ＰＩ３Ｋが過剰発現し、腫瘍細胞の急速な増殖と成長を引き起こす。
腫瘍抑制遺伝子ＰＴＥＮ（Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ａｎｄ ＴＥＮｓｉｎ ｈｏｍｏｌｏｇ ｄｅｌｅｔｅｄ ｏｎ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ １０）がＰＩＰ３を脱リン酸化してＰＩＰ２を生成することで、ＰＩ３Ｋシグナル伝達経路が負のフィードバックの調節され、細胞増殖を阻害し、アポトーシスを促進する。ＰＩ３Ｋ遺伝子の突然変異や増幅が癌では頻繁に起こることであり、また癌におけるＰＴＥＮ遺伝子の欠失などもＰＩ３Ｋの過剰発現が腫瘍形成と密接に関連していることを示している。
Ｚｈａｎｇ ｈａｏ（Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１５（２３）：７７６５～７７７６．）らは、化合物Ａ２及びＡ１０（比較例Ｒ０１１及びＲ０１２）などが、ＰＩ３Ｋに対して良好な阻害効果を有することを発見した。ノバルティス社が開発したＰＩ３Ｋαの選択的阻害剤であるＢＹＬ－７１９（ＷＯ２０１０／０２９０８２）は現在予備登録中の段階であり、世界で同様な種類の標的阻害剤で最も高い研究状態を有する化合物である。
Figure 2022533151000002
本発明は、粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：４．８±０．２０°、１２．６±０．２０°、１７．３±０．２０°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａを提供する。
Figure 2022533151000003
本発明の幾つかの実施の態様において、前記結晶形Ａは、粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：４．８±０．２°、５．７±０．２°、６．３±０．２°、１１．５±０．２°、１２．６±０．２°、１３．５±０．２°、１７．３±０．２°、２１．５±０．２°において特徴的な回折ピークを有する。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記結晶形Ａは、粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：４．８±０．２°、５．７±０．２°、６．３±０．２°、１０．１±０．２°、１１．５±０．２°、１２．６±０．２°、１３．５±０．２°、１５．８±０．２°、１７．３±０．２°、１９．２±０．２°、２１．５±０．２°において特徴的な回折ピークを有する。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記結晶形ＡのＸＲＰＤスペクトルが図１に示された通りである。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記結晶形ＡのＸＲＰＤスペクトル解析データは表１に示された通りである。
Figure 2022533151000004
本発明の幾つかの実施の態様において、前記結晶形Ａの示差走査熱量曲線は１９５．５±３．０℃において吸熱ピークの開始点を有する。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記結晶形ＡのＤＳＣスペクトルは図２に示された通りである。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記結晶形Ａの熱重量分析曲線は１５１．６±３．０℃の際に重量が０．１６％減少する。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ａ結晶形のＴＧＡスペクトルは図３に示された通りである。
本発明は、粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：５．０±０．２°、９．９±０．２°、１２．３±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ｂを提供する。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記結晶形Ｂは、粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：５．０±０．２°、９．９±０．２°、１２．３±０．２°、１４．９±０．２°、２０．２±０．２°、２４．４±０．２°、２７．１±０．２°、３０．１±０．２°において特徴的な回折ピークを有する。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記結晶形ＢのＸＲＰＤスペクトルが図５に示された通りである。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記結晶形ＢのＸＲＰＤスペクトル解析データは表２に示された通りである。
Figure 2022533151000005
本発明の幾つかの実施の態様において、前記結晶形Ｂの示差走査熱量曲線は１７８．７±３．０℃において吸熱ピークの開始点を有する。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記結晶形ＢのＤＳＣスペクトルは図６に示された通りである。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記結晶形Ｂの熱重量分析曲線は６３．４±３．０℃の際に重量が１．０３％減少する。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記結晶形ＢのＴＧＡスペクトルは図７に示された通りである。
本発明は、粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：４．９±０．２°、５．８±０．２°、６．８±０．２°、８．４±０．２°、１２．４±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ｃを提供する。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記結晶形Ｃは、粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：４．９±０．２°、５．８±０．２°、６．８±０．２°、８．４±０．２°、１０．８±０．２°、１１．７±０．２°、１２．４±０．２°、１４．３±０．２°、１７．０±０．２°、１７．７±０．２°、１８．７±０．２°において特徴的な回折ピークを有する。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記結晶形ＣのＸＲＰＤスペクトルは図８に示された通りである。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記結晶形ＣのＸＲＰＤスペクトル解析データは表３に示された通りである。
Figure 2022533151000006
本発明は、粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：５．１±０．２°、７．８±０．２°、１１．８±０．２°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ｄを提供する。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記結晶形Ｄは、粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：５．１±０．２°、６．５±０．２°、７．８±０．２°、１１．８±０．２°、１５．４±０．２°、１６．５±０．２°、１７．４±０．２°、２３．８±０．２°において特徴的な回折ピークを有する。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記結晶形ＤのＸＲＰＤスペクトルが図９に示された通りである。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記結晶形ＤのＸＲＰＤスペクトル解析データは表４に示された通りである。
Figure 2022533151000007
本発明は、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａの製造方法を提供し、それは以下の方法を含み：
（１）式（Ｉ）で表される化合物を溶媒に添加し、懸濁液又は溶液とする；
（２）前記懸濁液又は溶液を恒温ミキサーに入れ、振とうした後、遠心分離し、乾燥させ、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａを得る。
本発明の幾つかの実施の態様において、上記製造方法で、前記溶媒はアルコール溶媒及びエステル溶媒から選択される。
本発明の幾つかの実施の態様において、上記の製造方法で、前記溶媒は、エタノール、ｎ－ブタノール、ｔｅｒｔ－ブタノール、イソプロパノール、ギ酸エチル及び酢酸エチルから選択される。
本発明は、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ｂの製造方法を提供し、それは以下の方法を含み：
（１）式（Ｉ）で表される化合物を溶媒に添加し、懸濁液又は溶液とする；
（２）前記懸濁液又は溶液を恒温ミキサーに入れ、振とうした後、遠心分離し、乾燥させ、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ｂを得る。
本発明は、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａの製造方法を提供し、それは以下の方法を含み：
（１）式（Ｉ）で表される化合物を溶媒に添加し、加熱して溶解させ；
（２）前記溶液を固体が析出するまで冷却させ、撹拌し、濾過して、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａを得る。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記製造方法で、前記溶媒は、メタノール－水、エタノール－水及びアセトン－水から選択される。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記製造方法で、前記溶媒は、メタノール－水（２：１）、エタノール－水（２：１）、アセトン－水（２：１）、エタノール－水（１：３）から選択される。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記製造方法で、攪拌温度は２５℃～６０℃である。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記製造方法で、攪拌時間は１２時間～２４時間である。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記製造方法で、化合物と溶媒の重量－体積比率は１ｇ：７～１０ｍｌである。
本発明は、さらにＰＩ３Ｋα阻害剤関連疾患を治療するための医薬の製造における前記結晶形の使用を提供する。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記使用は、ＰＩ３Ｋα阻害剤関連医薬は腫瘍に用いられる医薬であることを特徴とする。
本発明は、さらに前記の結晶形及び薬学的に許容される助剤を含む医薬組成物を提供する。前記結晶形は、治療上有効な量であり得る。
本発明は、さらにＰＩ３Ｋ阻害剤の製造における前記結晶形又は医薬組成物の使用を提供する。前記ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３Ｋβ、ＰＩ３Ｋδ及びＰＩ３Ｋγのうちの１つ又は複数、好ましくはＰＩ３Ｋα阻害剤であり得る。
本発明は、さらに医薬の製造における前記結晶形又は医薬組成物の使用を提供する。前記医薬は、腫瘍又はＰＩ３Ｋ関連疾患を治療するために使用される。前記ＰＩ３Ｋ関連疾患は腫瘍であり得る。前記ＰＩ３Ｋは、ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３Ｋβ、ＰＩ３Ｋδ及びＰＩ３Ｋγのうちの１つ又は複数であり、好ましくはＰＩ３Ｋαであり得る。
本発明は、さらに治療有効量の前記結晶形又は前記医薬組成物を患者に投与することを含む、腫瘍又はＰＩ３Ｋ関連疾患の治療方法を提供する。前記ＰＩ３Ｋ関連疾患は腫瘍であり得る。前記ＰＩ３Ｋは、ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３Ｋβ、ＰＩ３Ｋδ及びＰＩ３Ｋγのうちの１つ又は複数であり、好ましくはＰＩ３Ｋαであり得る。
本発明において、前記腫瘍は、乳癌、卵巣癌、頭頸部癌、食道癌、肺癌、子宮頸部癌、神経内分泌前立腺癌、子宮内膜癌、膀胱癌及び結腸直腸癌のうちの１つ又は複数であり、好ましくは、乳癌及び／又は卵巣癌であり得る。
〔定義と説明〕
別途に説明しない限り、本明細書で用いられる以下の用語及び連語は以下の意味を含む。一つの特定の連語又は用語は、特別に定義されない場合、不確定又は不明瞭ではなく、普通の定義として理解されるべきである。本明細書で商品名が出た場合、相応の商品又はその活性成分を指す。
本発明の中間体化合物は当業者に熟知の様々な合成方法によって製造することができ、以下に挙げられた具体的な実施形態、他の化学合成方法と合わせた実施形態及び当業者に熟知の同等の代替方法を含み、好適な実施形態は本発明の実施例を含むが、これらに限定されない。
本発明の具体的な実施形態の化学反応は適切な溶媒で完了され、前記の溶媒は本発明の化学変化及びそれに必要な試薬と材料に適するべきである。本発明の化合物を得るため、当業者が既存の実施形態に基づいて合成工程又は反応スキームを変更又は選択することが必要であることもある。
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、これらの実施例は本発明の何らの制限にもならない。
本発明に使用されたすべての溶媒は市販品で、さらに精製せずにそのままで使用してもよい。
本発明に使用されたすべての溶媒は市販品から得ることができる。発明は下記略語を使用する：ＤＣＭはジクロロメタンを表し；ＤＭＦはＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを表し；ＤＭＳＯはジメチルスルホキシドを表し；ＥｔＯＨはエタノールを表し；ＭｅＯＨはメタノールを表し；ＴＦＡはトリエチルアミンを表し；ＡＴＰはアデノシン三リン酸を表し；ＨＥＰＥＳは４－ヒドロキシエチルピペラジンエタンスルホン酸を表し；ＭｇＣｌ２は塩化マグネシウムを表す。
本発明の化合物の結晶形は、良好な安定性を有し、薬になりやすい；本発明の化合物は、ＰＩ３Ｋキナーゼの活性を十分に阻害することができ、同時に、ＰＩ３Ｋβ／γ／δに対して比較的に高いサブタイプ選択性を有する；細胞内でも十分にＰＩ３Ｋの下流のＡｋｔのリン酸化レベルを阻害することができ、細胞レベルで高いサブタイプ選択性を示した。本発明の化合物は、体内での腫瘍増殖に対して顕著に阻害する効果を有し、また、ＰＩ３Ｋの下流のＡｋｔのリン酸化レベルに対して有意な時間依存性及び用量依存性の阻害効果を示した。本発明の化合物は、ｈＥＲＧ及びＣＹＰ酵素に対して明らかな阻害効果がなく、またヒト、ラット、マウス、イヌ及びサルの肝細胞において代謝が安定的である。
〔１．１粉末Ｘ線回折（Ｘ－ｒａｙ ｐｏｗｄｅｒ ｄｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｅｒ、 ＸＲＰＤ）〕
計器モデル：Ｂｒｕｋｅｒ Ｄ８ ａｄｖａｎｃｅ Ｘ－線回折計
測定方法：約１０～２０ｍｇの試料をＸＲＰＤの検出に用いる。
詳細なＸＲＰＤパラメータは以下通りである：
Ｘ線発生機：Ｃｕ、ｋα、（λ＝１．５４０５６Å）。
管電圧：４０ｋＶ、管電流：４０ｍＡ。
発散スリット：０．６０ｍｍ
センサスリット：１０．５０ｍｍ
散乱防止スリット：７．１０ｍｍ
走査範囲（２θ角）：４～４０ｄｅｇ．
ステップ角：０．０２ｄｅｇ
ステップ幅：０．１秒
サンプルパン回転数：１５ｒｐｍ
〔１．２差熱分析（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ Ｓｃａｎｎｉｎｇ Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｅｒ、ＤＳＣ）〕
計器モデル：ＤＳＣ Ｑ２０００示差走査熱量計
測定方法：試料（０．５～１ｍｇ）をＤＳＣアルミニウム製坩堝に取って測定を行い、５０ｍＬ／ｍｉｎ Ｎ２の条件で、１０℃／ｍｉｎの昇温速度で、試料を室温から３００℃まで加熱する。
〔１．３熱重量分析（Ｔｈｅｒｍａｌ Ｇｒａｖｉｍｅｔｒｉｃ Ａｎａｌｙｚｅｒ、ＴＧＡ）〕
計器モデル：ＴＡ Ｑ５０００ ＩＲ熱重量分析計
測定方法：試料（２～５ｍｇ）をＴＧＡ白金坩堝に取って測定を行い、２５ｍＬ／ｍｉｎ Ｎ２の条件で、１０℃／ｍｉｎの昇温速度で、試料を室温から３５０℃まで、又は重量が２０％減少するまで加熱する。
〔１．４本発明に係る動的蒸気吸着分析（Ｄｙｎａｍｉｃ Ｖａｐｏｒ Ｓｏｒｐｔｉｏｎ、ＤＶＳ）法〕
計器モデル：ＳＭＳ ＤＶＳ Ａｄｖａｎｔａｇｅ動的蒸気収着装置
測定条件：試料（１０～２０ｍｇ）をＤＶＳ試料パンで測定を行う。
詳細なＤＶＳパラメータは以下通りである：
温度：２５℃
バランス：ｄｍ／ｄｔ＝０．０１％／分（最短：１０分、最長：１８０分）
乾燥：０％ＲＨで１２０分間乾燥する
ＲＨ（％）テストステップ：１０％
ＲＨ（％）テストステップ範囲：０％～９０％～０％
吸湿性評価の分類は以下の通りである：
Figure 2022533151000008
〔１．５高速液体クロマトグラフィー分析法〕
サンプル濃度：０．５ｍｇ／ｍＬ
固体安定性試験のＨＰＬＣ法のクロマトグラフィー条件は以下の表５を参照：
Figure 2022533151000009
式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＡのＣｕ－Ｋα放射のＸＲＰＤスペクトルである。 式（Ｉ）で表される化合物のＡ結晶形のＤＳＣスペクトルである。 式（Ｉ）で表される化合物のＡ結晶形のＴＧＡスペクトルである。 式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＡのＤＶＳ等温線である。 式（Ｉ）で表される化合物のＢ結晶形のＣｕ－Ｋα線のＸＲＰＤスペクトルである。 式（Ｉ）で表される化合物のＢ結晶形のＤＳＣスペクトルである。 式（Ｉ）で表される化合物のＢ結晶形のＴＧＡスペクトルである。 式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＣのＣｕ－Ｋα放射のＸＲＰＤスペクトルである。 式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＤのＣｕ－Ｋα放射のＸＲＰＤスペクトルである。 式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａの０．５時間、４時間、２４時間の投与後のＢＴ４７４腫瘍組織におけるｐ－ＡＫＴのタンパク質発現状態であり； ここで、Ｐ－ＡＫＴはリン酸化Ａｋｔタンパク質を表し、β－ａｃｔｉｎはβ－アクチンを表す。 式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＢのＤＶＳ等温線である。
本発明の内容がよりよく分かるように、以下に具体的な実施の形態を参照しながらさらに説明するが、具体的な実施の態様は本発明の内容を制限するものではない。
〔実施例１：式（Ｉ）で表される化合物の製造〕
Figure 2022533151000010
工程１：化合物１－２の合成。
ＤＭＦ（１００ｍＬ）に化合物１－１（２０．００ｇ、１７６．８２ｍｍｏｌ、１８．８７ｍＬ）、ヨウ化メチル（３７．６５ｇ、２６５．２３ｍｍｏｌ、１６．５１ｍＬ）、炭酸カリウム（４８．８８ｇ、３５３．６４ｍｍｏｌ）を添加し、反応系を２５℃で４８時間撹拌した。反応完了後、溶媒を減圧除去し、水（２００ｍＬ）を添加して希釈し、ジクロロメタン（２００ｍＬ）で抽出し、有機層を減圧濃縮し、残留物をクロマトグラフィーカラムで分離して（酢酸エチル：石油エーテル＝０％～１５％）、化合物１－２を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：４．２３－４．３４（ｍ，２Ｈ），３．５６（ｑ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），１．６１（ｄｄ，Ｊ＝７．５，１．５Ｈｚ，３Ｈ），１．３１－１．３７（ｍ，３Ｈ）。
工程２：化合物１－３の合成。
化合物１－２（２．３０ｇ、１８．０９ｍｍｏｌ）をエタノール（２０．００ｍＬ）に溶解し、窒素気流でラネーニッケル（１．５５ｇ、１８．０９ｍｍｏｌ）を添加し、反応系を５０Ｐａの水素ガス圧力下で２５℃で２４時間撹拌した。反応完了後、反応系を濾過し、濾液を減圧濃縮し、残留物をクロマトグラフィーカラムで分離して（メタノール：ジクロロメタン＝０～６％）、化合物１－３を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ：４．０１－４．０９（ｍ，２Ｈ），２．７２（ｄｄ，Ｊ＝１２．５，７．０Ｈｚ，１Ｈ），２．５５－２．６２（ｍ，１Ｈ），２．３５－２．４５（ｍ，１Ｈ），１．１８（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ），１．０４ （ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）。
工程３：化合物１－５の合成。
ジクロロメタン（１２０ｍＬ）に化合物１－４（１．２０ｇ、５．５５ｍｍｏｌ）、化合物１－３（８００ｍｇ、６．１１ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（１．０９ｇ、５．６６ｍｍｏｌ）、２－ヒドロキシピリジン－Ｎ－オキシド（７２２ｍｇ、６．４９ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（２．２５ｇ、２２．２０ｍｍｏｌ、３．０８ｍＬ）を添加し、反応系を５０℃で１６時間撹拌した。反応完了後、反応溶液を水（２００ｍＬ）で希釈し、ジクロロメタン（２００ｍＬ）で抽出し、有機層を減圧濃縮し、残留物をクロマトグラフィーカラムで分離して（メタノール：ジクロロメタン＝０％～２％）、化合物１－５を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ：８．４６（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．３Ｈｚ，１Ｈ），６．６７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．５２（ｂｒｓ，２Ｈ），４．０６（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），３．３７－３．４５（ｍ，１Ｈ），３．２１－３．２９（ｍ，１Ｈ），２．６７－２．８０（ｍ，１Ｈ），１．１７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．０８（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）。
工程４：化合物１－６の合成
ギ酸（２４．４０ｇ、５３０．０９ｍｍｏｌ、２０．００ｍＬ）に化合物１－５（１．００ｇ、２．８６ｍｍｏｌ、）を添加し、反応系を１００℃で１６時間撹拌した。反応完了後、反応溶液を減圧濃縮し、残留物をクロマトグラフィーカラムで分離して（酢酸エチル：石油エーテル＝０％～４０％）、化合物１－６を得た。ＭＳ－ＥＳＩｍ／ｚ：３４０．８［Ｍ＋Ｈ］＋。
工程５：化合物１－８の合成
化合物１－６（２ｇ、５．９０ｍｍｏｌ）をジオキサン（２０ｍＬ）と水（４ｍＬ）に溶解し、それに化合物１－７（１．７７ｇ、７．０８ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（９６３．０６ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ）及び酢酸カリウム（２．３１ｇ、２３．５９ｍｍｏｌ）を添加し、反応溶液を窒素ガスの保護条件下で、１００℃で３時間撹拌した。反応完了後、反応溶液をスピン乾燥させた。得られた残留物をクロマトグラフィーカラムで分離し（溶離液：メタノール／ジクロロメタン＝５～１０％）、目的化合物１－８を得た。ＭＳ－ＥＳＩｍ／ｚ：３８３．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
工程６：化合物１－９の合成
化合物１－８（２．３ｇ、６．０１ｍｍｏｌ）をメチルアミンエタノール溶液（２Ｍ、５０ｍＬ）に溶解し、反応液を８０℃で１０時間撹拌した。反応完了後、反応溶液をスピン乾燥させ、目的化合物１－９を得た。ＭＳ－ＥＳＩｍ／ｚ：３６８．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
工程７：化合物１－１１の合成
化合物１－９（０．３ｇ、８１６．５５μｍｏｌ）をピリジン（５ｍＬ）に溶解し、それに化合物１－１０（１５７．８２ｍｇ、７４２．３２μｍｏｌ、９９．８８μＬ）を添加し、反応溶液を２５℃の条件で１０時間撹拌した。反応完了後、反応溶液をスピン乾燥させた。ＨＰＬＣ分離を製造することにより分離（ＴＦＡ）を行い、目的化合物１－１１を得た。ＭＳ－ＥＳＩｍ／ｚ：５４４．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
工程８：式（Ｉ）で表される化合物の合成
化合物１－１１は、超臨界流体クロマトグラフィー（分離条件：カラム：ＡＤ（２５０ｍｍ＊３０ｍｍ、１０μｍ）；移動相：［０．１％のＮＨ３Ｈ２Ｏ ＥｔＯＨ］；Ｂ（アセトニトリル）％：５５％～５５％）で分離し、式（Ｉ）で表される化合物を得た（維持時間０．７１１分）、１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ＝８．２２－８．３６（ｍ，２Ｈ），８．１８（ｓ，１Ｈ），８．０６（ｄｄ，Ｊ＝８．４，２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．８２－７．９３（ｍ，２Ｈ），７．７２－７．８１（ｍ，２Ｈ），７．５０（ｂｒ ｔ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１６－７．２２（ｍ，１Ｈ），４．０３－４．１７（ｍ，１Ｈ），３．８７－４．０２（ｍ，１Ｈ），３．７０（ｓ，３Ｈ），２．８７（ｄｑ，Ｊ＝１４．５，７．１Ｈｚ，１Ｈ），２．４８（ｂｒｓ，３Ｈ），１．０８（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）。ＭＳ－ＥＳＩｍ／ｚ：５４４．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
〔実施例２：〕
〔式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａ、Ｂ、ＣとＤの製造〕
約５０ｍｇの式（Ｉ）で表される化合物をサンプルバイアルに量り取り、下記表における所定量の溶媒を添加し、異なる単一溶媒及び混合溶媒の懸濁液又は溶液を製造した。
懸濁液を４０℃で３日間連続的に振とうした後、遠心分離し、残留した固体を真空乾燥オーブンでに入れ、４０℃の条件で一晩真空乾燥させ残留溶媒を除去し、式（Ｉ）で表される化合物のそれぞれの結晶形を得た。
溶液を室温に置いて揮発させ、また３０℃の条件で１日真空乾燥させて残留溶媒を除去し、式（Ｉ）で表される化合物のそれぞれの結晶形を得た。
実験結果は表６に示した通りである。
Figure 2022533151000011
〔式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａの製造〕
酢酸エチル（７０００ｍＬ）を含む式（Ｉ）で表される化合物の粗生成物１ｋｇを反応ケトルに移し、６０℃に加熱し、完全に溶解するまで撹拌し、さらに多量の固体が析出するまで溶液を４０℃に冷却させた後、持続的に４０℃の温度で一晩撹拌し、濾過して、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａを得た。
〔実施例３：式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａの固体安定性試験〕
『原薬と製剤の安定性試験の指導原則』（中国薬典２０１５版四部通則９００１）に基づき、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａの安定性を調査した。
乾燥した清潔なガラス瓶に、５ｍｇの式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａを秤量し、一式二部にし、薄く広げ、正式のサンプルとし、影響因子試験条件（６０℃、９２．５％相対湿度）及び加速条件（３０℃／６５％相対湿度、４０℃／７５％相対湿度及び６０℃／７５％相対湿度）で、サンプルを完全に露出させ、アルミニウムホイルで覆い、小さな穴を開けた。５日、１０日、１ヶ月にサンプリングして分析した。光照射（総照度１２０００００Ｌｕｘ・ｈｒ、近紫外線２００ｗ・ｈｒ／ｍ２）の条件に置いたサンプルは室温で完全に暴露されるようにした。実験結果は表７に示した通りである：
Figure 2022533151000012
結論：式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａは良好な安定性を有する。
〔実施例４：式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａの吸湿性研究〕
実験材料：
ＳＭＳ ＤＶＳ Ａｄｖａｎｔａｇｅ動的蒸気吸着装置
実験方法：
式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＡをＤＶＳ試料パンに２０ｍｇを取り、測定した。
実験結果：
式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＡのＤＶＳスペクトルは図４に示された通り、△Ｗ＝０．８８５％であった。
実験結論：
式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａが２５℃及び８０％ＲＨでの吸湿重量増加は０．８８５％であり、やや吸湿性があった。
〔実施例５：式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ｂの吸湿性研究〕
実験材料：
ＳＭＳ ＤＶＳ Ａｄｖａｎｔａｇｅ動的蒸気吸着装置
実験方法：
式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＢをＤＶＳ試料パンに２０ｍｇを取り、測定した。
実験結果：
式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＢのＤＶＳスペクトルは図１１に示された通り、△Ｗ＝２．３３２％であった。
実験結論：
式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ｂが２５℃及び８０％ＲＨでの吸湿重量増加は２．３３２％であり、吸湿性があった。
〔実験例１．式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＡのＰＩ３Ｋα／β／γ／δキナーゼ及び細胞体外活性及び選択性に対する研究〕
式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａは、野生型及び突然変異型ＰＩ３Ｋαキナーゼ両方に対して比較的に強い阻害効果を有した。式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａは野生型ＰＩ３Ｋα及び突然変異型ＰＩ３Ｋα（Ｅ５４５Ｋ）、ＰＩ３Ｋα（Ｈ１０４７Ｒ）に対する阻害作用のＩＣ５０はそれぞれ１．８０、１．１３及び０．６９ｎＭであった。式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａは、ＰＩ３Ｋの他の３つのサブタイプに対して優れた選択性を有し、ＰＩ３Ｋαに対する阻害活性は、それぞれＰＩ３Ｋβ／δ／γの１４９／７．４４／６．６１倍であった。具体的な実験方法は、実験例８と同様である。同様な測定条件下で、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａは、それぞれＰＩ３Ｋβ／δ／γの高発現特異的細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－４６８／Ｊｅｋｏ－１／ＲＡＷ２６４．７のＡｋｔリン酸化阻害活性に対して優れた選択性を示し、ＰＩ３Ｋαに対する阻害活性はそれぞれＰＩ３Ｋβ／δ／γの１９５／２３．０／＞６９４倍であり、具体的には表８、表９に示した通りである。具体的な実験方法は、実験例９と同様である。
Figure 2022533151000013
Figure 2022533151000014
〔実験例２．ＨＲ＋／ＨＥＲ２＋のＢＴ－４７４（ＰＩＫ３ＣＡ増幅）ヌードマウスヒト乳癌皮下異種移植腫瘍モデルにおける式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａの生体内薬効研究〕
ヒトＢＴ－４７４乳癌細胞の表現型はＨＲ＋／ＨＥＲ２＋であり、また、独自にＰＩＫ３ＣＡ増幅を持っている。本実験では、ヒト乳癌異種移植腫モデルにおける式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａの薬効を評価し、ＢＹＬ－７１９を参考にした。
細胞培養：ヒト乳癌ＢＴ４７４細胞体外単層培養し、培養条件はＨｙｂｒｉ－Ｃａｒｅ培地に１０％のウシ胎児血清を添加し、３７℃５％ＣＯ２のインキュベーターで培養した。週に２回、トリプシン－ＥＤＴＡを使用して通常のな消化処理をし、継代培養した。細胞の飽和度が８０％～９０％であり、細胞の数が要求に達する場合、細胞を収集してカウントし接種した。
動物：ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス、雌、６～８週齢、体重１８～２０ｇ。計８５匹が必要であり、Ｓｈａｎｇｈａｉ－Ｂｋ Ｌａｂ Ａｎｉｍａｌ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から提供された。
腫瘍接種：各マウスの左背部にエストロゲン錠（０．３６ｍｇ／錠）を皮下接種し、３日後、ＢＴ４７４細胞０．２ｍＬ（１０×１０６細胞）（マトリゲルを添加、体積比１：１）を各マウスの右背部に皮下接種し、平均腫瘍体積が１５０ｍｍ３～２００ｍｍ３に達した時点で群を分け投与した。
１日１回、２０日間経口投与した後、ＢＹＬ－７１９（４０ｍｇ／ｋｇ）、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａ（４０ｍｇ／ｋｇ）群は溶媒対照群と比較して統計学的に有意な差があり（ｐ値はそれぞれ０．００３、０．００１である）、そのＴ／Ｃは（相対腫瘍増殖率Ｔ／Ｃ（％）＝ＴＲＴＶ／ＣＲＴＶ×１００％（ＴＲＴＶ：治療群の相対腫瘍体積平均；ＣＲＴＶ：陰性対照群の相対腫瘍体積平均））それぞれ２９．３９％及び２１．１６％であり、ＴＧＩ（腫瘍増殖阻害率、ＴＧＩ（％）＝［１－（特定の処理群の投与終了時の平均腫瘍体積－処理群の投与開始時の平均腫瘍体積）／（溶媒対照群の治療終了時の平均腫瘍体積－溶媒対照群の治療開始時の平均腫瘍体積）］×１００％）は、それぞれ９５．３１％と１０５．６５％であった。式（Ｉ）で現れる化合物の結晶形Ａ（１０ｍｇ／ｋｇ）及び式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａ（２０ｍｇ／ｋｇ）群は溶媒対照群と比べ、統計的に有意な差があり（ｐ値はそれぞれ０．０３４、０．００７である）、そのＴ／Ｃの合計はそれぞれ５０．１８％、３７．９２％であり、ＴＧＩはそれぞれ６５．３４％、８０．２１％であった。各投与群の担癌マウスは、試験化合物に対して良好な耐性を示した。ＢＹＬ－７１９（４０ｍｇ／ｋｇ）及び式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａ（４０ｍｇ／ｋｇ）群は、両群とも有意な抗腫瘍効果があり、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａ（１０ｍｇ／ｋｇ）及び式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａ（２０ｍｇ／ｋｇ）は強力な抗腫瘍効果があった。式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａの抗腫瘍効果は、本実験で設定された用量において一定の用量依存性を示し、有効用量は１０ｍｇ／ｋｇであった。具体的な結果は表１０に示した通りである。
投与最終日に動物の血漿及び腫瘍組織をＰＫ検査した結果、投与量が増加するにつれ、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａの血漿曝露量が線形増加することを示した。投与後０．５～１時間で血中濃度がピークに達した。有効量における血漿曝露量は６９３００ｎＭ＊ｈである。
Figure 2022533151000015
〔実験例３．ＨＲ＋／ＨＥＲ２－のＴ４７Ｄ（ＰＩＫ３ＣＡ Ｈ１０４７Ｒ突然変異）ヌードマウスヒト乳癌皮下異種移植腫瘍モデルにおける式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａの生体内薬効研究〕
ヒトＴ４７Ｄ乳癌細胞の表現型はＨＲ＋／ＨＥＲ２－であり、また、独自にＰＩＫ３ＣＡ Ｈ１０４７Ｒ突然変異を持っている。本実験では、ヒト乳癌異種移植腫モデルにおける式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａの薬効を評価した。
細胞培養：ヒト乳癌Ｔ４７Ｄ細胞体外単層培養し、培養条件はＲＰＭＩ－１６４０培地に０．２Ｕ／ｍＬ牛インスリン及び１０％のウシ胎児血清を添加し、３７℃５％ＣＯ２のインキュベーターで培養した。週に２回、トリプシン－ＥＤＴＡを使用して通常のな消化処理をし、継代培養した。細胞の飽和度が８０％～９０％であり、細胞の数が要求に達する場合、細胞を収集してカウントし接種した。
動物：ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス、雌、６～８週齢、体重１８～２０ｇ。計７５匹が必要であり、Ｓｈａｎｇｈａｉ－Ｂｋ Ｌａｂ Ａｎｉｍａｌ Ｃｏ．、Ｌｔｄ．又は、その他の資格のあるサプライヤーから提供された。
腫瘍接種：各マウスの左背部にエストロゲン錠（０．１８ｍｇ／錠）を皮下接種し、３日後、０．２ｍＬ（１０×１０６細胞）のＴ４７Ｄ細胞（マトリゲルを添加、体積比１：１）を各マウスの右背部に皮下接種し、平均腫瘍体積が１５０ｍｍ３～２００ｍｍ３に達した時点で群を分け投与した。
１日１回、４２日間経口投与した後、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａ（４０ｍｇ／ｋｇ）群は溶媒対照群と比較して統計学的に有意な差があり（ｐ値は＜０．００１）、Ｔ／Ｃは３７．９１％、ＴＧＩは８４．７１％であった。式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａ（１０ｍｇ／ｋｇ）及び式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａ（２０ｍｇ／ｋｇ）群は溶媒対照群と比べ、統計的に有意な差があり（ｐ値はそれぞれ０．００５、０．００２である）、そのＴ／Ｃはそれぞれ５０．４０％、４４．７０％、ＴＧＩはそれぞれ６７．５８％、７２．５６％であった。各投与群の担癌マウスは、試験化合物に対して良好な耐性を示した。式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａ（４０ｍｇ／ｋｇ）組は有意な抗腫瘍効果があり、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａ（１０ｍｇ／ｋｇ）及び式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａ（２０ｍｇ／ｋｇ）は強力な抗腫瘍効果があった。式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａの抗腫瘍効果は、本実験で設定された用量において一定の用量依存性を示し、有効用量は１０ｍｇ／ｋｇであった。具体的な結果は表１１に示した通りである。
Figure 2022533151000016
〔実験例４．ＳＫＯＶ－３（ＰＩＫ３ＣＡ Ｈ１０４７Ｒ突然変異）ヌードマウスヒト卵巣癌皮下異種移植腫瘍モデルにおける式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａの生体内薬効研究〕
ヒトＳＫＯＶ－３卵巣癌細胞は独自にＰＩＫ３ＣＡ Ｈ１０４７Ｒ突然変異を持っている。本実験では、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａがヒト卵巣癌異種移植腫瘍モデルにおける薬効を評価した。
細胞培養：ヒト卵巣癌ＳＫＯＶ－３細胞体外単層培養し、培養条件はＲＰＭＩ－１６４０培地に１０％のウシ胎児血清を添加し、３７℃５％ＣＯ２のインキュベーターで培養した。週に２回、トリプシン－ＥＤＴＡを使用して通常のな消化処理をし、継代培養した。細胞の飽和度が８０％～９０％であり、細胞の数が要求に達する場合、細胞を収集してカウントし接種した。
動物：ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス、雌、６～８週齢、体重１８～２０ｇ。計６７匹が必要であり、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ ＴｅｃＨ Ｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．、Ｌｔｄ．から提供された。
腫瘍接種：各マウスの右背部に０．２ｍＬ（１０×１０６細胞）のＳＫＯＶ－３細胞（マトリゲルを添加、体積比１：１）を皮下接種し、平均腫瘍体積が１５０ｍｍ３～２００ｍｍ３に達した時点で群を分け投与した。
１日１回、２８日間経口投与した後、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａ（４０ｍｇ／ｋｇ）群は溶媒対照群と比較して統計学的に有意な差があり（ｐ値は＜０．００１）、Ｔ／Ｃは３７．７９％、ＴＧＩは６９．１６％であった。式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａ（１０ｍｇ／ｋｇ）及び式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａ（２０ｍｇ／ｋｇ）群は溶媒対照群と比べ、統計的に有意な差があり（ｐ値はそれぞれ０．０４１、０．００５である）、そのＴ／Ｃの合計はそれぞれ６９．１７％、６０．６１％であり、ＴＧＩはそれぞれ３０．４５％、４１．４２％であった。各投与群の担癌マウスは、試験化合物に対して良好な耐性を示した。式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａ（４０ｍｇ／ｋｇ）組は有意な抗腫瘍効果があり、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａ（１０ｍｇ／ｋｇ）及び式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａ（２０ｍｇ／ｋｇ）は強力な抗腫瘍効果があった。式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａの抗腫瘍効果は、本実験で設定された用量において一定の用量依存性を示した。具体的な結果は表１２に示した通りである。
Figure 2022533151000017
〔実験例５．式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＡのＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラット吸収試験。〕
式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＡをＳＤラットに、それぞれ１回及び複数回胃内経口投与及び１回静脈内注射し、各群に６匹、オスとメスを各半分にした。有効性及び毒性試験の結果に基づき、１回胃内経口投与量はそれぞれ、３、１０、３０ｍｇ／ｋｇとし；複数回投与量は１０ｍｇ／ｋｇ、１日１回、連続７日間とし、１回静脈投与量は１ｍｇ／ｋｇとした。薬物の血中濃度－時間曲線に基づいて薬物動態パラメータを計算し、雄ラットの結果は表１３に、雌ラットの結果は表１４に示された。本実験で使用したＳＤラットは、ＢｅｉｊｉｎｇＶｉｔｏｎＬｅｖａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ａｎｉｍａｌ ＴｅｃＨ Ｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ、Ｌｔｄ．から提供され、近接な体重により４つの群（３／性別／群）に分けた。静脈内投与群溶媒は、５％ＨＰ－ｂｅｔａＣＤ／５％Ｓｏｌｕｔｏｌ水溶液（ｐＨ＝８）であり；経口投与群溶媒は、０．５％ＭＣ／０．２％Ｔｗ８０水溶液であった。血漿サンプルは、ラットの頸静脈穿刺により採取した。
１ｍｇ／ｋｇを１回静脈内注射投与後、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形ＡのＳＤ雄性ラット及び雌性ラットにおける血漿クリアランス（ＣＬ）は、それぞれ１．７９±０．４５７及び３．１２±０．４３１ｍＬ／ｍｉｎ／ｋｇであり、定常状態の見かけの分布容積（Ｖｄｓｓ）はそれぞれ０．２６５±０．０５００及び０．２５７±０．０２２７Ｌ／ｋｇであり、消失半減期（ｔ１／２）は３．２６±１．１３ｈ及び１．６３±０．８０９ｈであり、システム曝露量（ＡＵＣ０－ｌａｓｔ）は１７４００±４７９０ｎＭ＊ｈ及び９８９０±１４１０ｎＭ＊ｈであった。
雄性ＳＤラットに３ｍｇ／ｋｇの式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａを１回経口投与した後、バイオアベイラビリティは３４．７％であった。雄性ＳＤラットに式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａを３、１０又は３０ｍｇ／ｋｇを１回経口投与した後のＡＵＣ０－ｌａｓｔは、それぞれ１０３００±４６００、２３７００±７２１及び４５３００±１０９００ｎＭ＊ｈであり、ピークに達する濃度（Ｃｍａｘ）はそれぞれ４７７０±１０１０、６８００±５８３及び１４５００±４７３０ｎＭであり、ピークに達する時間は、投与後それぞれ０．４１７±０．１４４ｈ、０．５００±０．０００ｈ及び０．６６７±０．２８９ｈ後であった。雌性ＳＤラットに３ｍｇ／ｋｇの式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａを１回経口投与した後、バイオアベイラビリティは５３．１％であった。雌性ＳＤラットに式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａを３、１０又は３０ｍｇ／ｋｇを１回経口投与した後のＡＵＣ０－ｌａｓｔは、それぞれ２７７００±８７２０、６０９００±１０９００及び１７７０００±４８０００ｎＭ＊ｈであり、ピークに達する濃度（Ｃｍａｘ）はそれぞれ６３９０±１７１０、１２１００±３６９０及び３９１００±７３１０ｎＭであり、ピークに達する時間は、０．５００±０．０００ｈ、０．６６７±０．２８９ｈ及び０．５００±０．０００ｈであった。
ＳＤラットに一日一回、毎回１０ｍｇ／ｋｇ、連続７日胃内投与後、雄性ラットは１日目と７日目のＣｍａｘがそれぞれ６８００±５８３及び１３９００±１６１０ｎＭであり、ＡＵＣ０－ｌａｓｔが２３７００±７２１及び４８５００±４６４０ｎＭ＊ｈであった。雌性ラットは１日目と７日目のＣｍａｘがそれぞれ１２１００±３６９０及び２０５００±４６００ｎＭであり、ＡＵＣ０－ｌａｓｔが６０９００±１０９００及び８６０００±１９９００ｎＭ＊ｈであった。
Figure 2022533151000018
Figure 2022533151000019
〔実施例６．式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａのビーグル犬による吸収試験〕
式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａをビーグル犬に、それぞれ１回及び複数回経口投与及び１回静脈内注射し、各群に６匹、オスとメスを各半分にした。１回経口投与量はそれぞれ、０．３、１、３ｍｇ／ｋｇとし；複数回投与量は１ｍｇ／ｋｇ、１日１回、連続７日間とし、１回静脈投与量は０．３ｍｇ／ｋｇとした。血漿薬物濃度－時間曲線に基づき薬物動態パラメータを計算し、結果は表１５に示された。第１群の医薬を製造する溶媒は、５％ＨＰ－ｂｅｔａ－Ｃ、５％ｓｏｌｕｔｏｌ、ｐＨ＝８水溶液であり、第２、３及び４群の溶媒は、０．５％ＭＣ、０．２％Ｔｗｅｅｎ８０水溶液であった。
Figure 2022533151000020
メス及びオスビーグル犬に０．３ｍｇ／ｋｇの式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａを１回静脈内注射投与後、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａの血漿クリアランス（ＣＬ）は、６．１８±１．４９ｍＬ／ｍｉｎ／ｋｇであり、定常状態の見かけの分布容積（Ｖｄｓｓ）は２．４７±０．３９１Ｌ／ｋｇであり、消失半減期（ｔ１／２）及び０から最後の定量化可能な時点の時間－血漿濃度曲線下の面積（ＡＵＣ０－ｌａｓｔ）はそれぞれ６．３２±１．６２ｈ及び１４７０±３５３ｎＭ＊ｈであった。
メスビーグル犬に０．３ｍｇ／ｋｇの式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａを１回経口投与した後、バイオアベイラビリティは８７．８％であった。メスビーグル犬に式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａを０．３、１及び３ｍｇ／ｋｇを１回経口投与した後のＡＵＣ０－ｌａｓｔは、それぞれ１２９０±７１５、４９８０±９４６及び１４８００±２５１０ｎＭ＊ｈであり、ピークに達する濃度（Ｃｍａｘ）はそれぞれ１５８±６８．４、６５６±３０．７及び１８８０±２７４ｎＭであり、ピークに達する時間（Ｔｍａｘ）は、投与後それぞれ２．００±１．１０ｈ、１．６７±０．５１６ｈ、及び３．０８±１．５０ｈ後であった。ｔ１／２は、それぞれ６．９２±３．１６、５．００±１．４４及び６．５５±１．７６ｈであった。
メスとオスのビーグル犬に、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａを１ｍｇ／ｋｇ、７日間連続で経口投与したところ、投与１日後のＡＵＣ０－ｌａｓｔが４９８０±９４６ｎＭ＊ｈ、Ｃｍａｘが６５６±３０．７ｎＭ、Ｔ１／２が５．００±１．４４ｈであった。７日間投与した後、ＡＵＣ０－ｌａｓｔが５８８０±６９７ｎＭ＊ｈ、Ｃｍａｘが８５０±１０６ｎＭ、Ｔ１／２が５．１８±０．４８７ｈであった。
前記投与方法及び計算方法を参考し、メス及びオスのビーグル犬に０．３ｍｇ／ｋｇの式（Ｉ）のアモルファス化合物を１回経口投与した後、バイオアベイラビリティは７１．２％であった。
結論：式（Ｉ）で表される化合物のＡ結晶形は、いずれの動物種においても、良好な経口バイオアベイラビリティ、低いクリアランス率、高いシステム曝露量、優れた薬物動態特性を示した。
〔実施例７．ＢＴ４７４腫瘍組織サンプルにおけるｐ－ＡＫＴタンパク質発現レベルのウエスタンブロット分析〕
実験方法
７．１タンパク質の抽出と定量
１）－８０℃の冷蔵庫で急速凍結した組織サンプルを取り出した。
２）ドライアイスでの操作、組織の一部（約３０ｍｇ）を切り取り、鋼球を入れた２ｍＬの遠心チューブに入れ、５００μＬの細胞溶解物ＲＩＰＡを添加した（１％プロテアーゼ阻害剤及びホスファターゼ阻害剤を新たに添加した）。
３）Ｔｉｓｓｕｅｌｙｓｅｒ ＬＴは、最高周波数を使用して５分間組織を破壊した。
４）組織溶解液を氷の上に置き、３０分間溶解した。
５）１２０００ｒｐｍ、４℃で１０分間遠心分離し、上清を取り、新しい１．５ｍＬ遠心チューブに入れた。
６）ＢＣＡ定量キットを使用し、タンパク質を定量した。
７）定量結果に基き、ローディング用タンパク質サンプルを製造し、サンプルのタンパク質濃度を２μｇ／μＬに統一し、ＬＤＳサンプリング緩衝液（４Ｘ）とサンプル還元剤（１０Ｘ）を添加し、１００℃でサンプルを１０分間恒温加熱した。
８）ウエスタンブロット、又は変性サンプルを－８０℃の冷蔵庫に保存した。
７．２ウエスタンブロット
１）ローディングサンプルを解凍した。
２）サンプルローディング：ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルにウェルあたり１０μＬをロードした（（サンプルローディングの量は個々のニーズに応じる）。
３）電気泳動：８０ボルト、３０分、その後、１２０ボルト、９０分。
４）転写：ｉＢｌｏｔ２転写セットと転写装置を使用し、Ｐ３プログラムを７分間実行した。
５）転写終了後、検出しようとするタンパク質の分子量の大きさに合わせてメンブレンをカットし、１ｘＴＢＳＴで３回、各回５分間、室温で、振とうしながら洗浄した。
６）シーリング：メンブレンをシール溶液（１ｘＴＢＳＴで製造した５％の脱脂乳）でシーリングし、室温で１時間振とうした。
７）１ｘＴＢＳＴでメンブレンを３回洗浄し、毎回５分であり、室温で、振とうした。
８）一次抗体をインキュベーション：適切に希釈した一次抗体（１ｘＴＢＳＴで５％の脱脂乳又はウシ血清アルブミンで希釈）を添加し、４℃で一晩、ゆっくりと振とうした。
９）１ｘＴＢＳＴでメンブレンを３回洗浄し、毎回１０分であり、室温で、振とうした。
１０）二次抗体のインキュベーション：適切に希釈した二次抗体を添加し、室温で、１時間ゆっくりと振とうした。
１１）１ｘＴＢＳＴでメンブレンを３回洗浄し、毎回１０分であり、室温で、振とうした。
１２）化学発光：Ｗｅｓｔ Ｆｅｍｔｏ超高感度化学発光キットのＨＲＰ基質をメンブレンに添加した。
１３）Ｔａｎｏｎ ５２００ ｍｕｌｔｉ計器で化学発光を検出し、写真を撮った。
実験結果は図１０に示された。ＰＤ（生体内薬力学的バイオマーカー検出）の結果は、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａが、ＢＴ－４７４ヌードマウス異種移植腫瘍モデルにおいてＰＩ３Ｋの下流のＡｋｔのリン酸化レベルを有意に阻害できることを示し、また所定の時間と用量の依存性を示した。
〔実施例８．式（Ｉ）で表される化合物の体外酵素活性試験〕
脂質キナーゼ反応は、適切な基質とＡＴＰの条件で行い、その後２つの工程によりＡＤＰ－ＧｌｏＴＭキットを用いてキナーゼ活性を測定した。工程１：キナーゼ反応を終了させ、残存するＡＴＰを完全に除去し、ＡＤＰのみを残し；工程２：キナーゼ検出試薬を添加して、ＡＤＰをＡＴＰに変換し、ルシフェリン／ルシフェラーゼ反応を伴った。最後に、蛍光値の出力によりキナーゼ活性に変換した。ＰＩ３Ｋ酵素活性を試験する条件は表１６に示された通りである。
Figure 2022533151000021
実験材料及び計器：
１）酵素：ＰＩ３Ｋα Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ ＃１４－６０２－Ｋ
ＰＩ３Ｋβ Ｐｒｏｍｅｇａ ＃Ｖ１７５１
ＰＩ３Ｋδ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ ＃１４－６０４－Ｋ
ＰＩ３Ｋγ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ ＃１４－５５８－Ｋ
２）キット：ＡＤＰ－ＧｌｏＴＭ脂質キナーゼ及びＰＩＰ２：３ＰＳキット（Ｐｒｏｍｅｇａ＃Ｖ１７９２）
キットには：１ｍＭのＰＩＰ２：３ＰＳ、１０×脂質希釈緩衝液、１Ｍの塩化マグネシウム、１０ｍＭのＡＴＰ、１０ｍＭのＡＤＰ、ＡＤＰ－Ｇｌｏ試薬、検出緩衝液、及び検出基質が含まれている。
３）反応ウェルプレート：ＯｐｔｉＰｌａｔｅ－３８４、透明な白（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ＃６００７２９９）
試薬の準備：
１）１０×反応緩衝液：５００ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、５００ｍＭのＮａＣｌ、９ｍＭのＭｇＣｌ２；ＢＳＡ：１０％ストック溶液、自分で製造
２）最終試験系の条件：１×反応系：５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１％ＢＳＡ（実験当日で新たに製造）、１％のＤＭＳＯ（ｖ／ｖ）＋／－化合物
３）反応系：３μＬの酵素と基質の混合物（１：１）＋２μＬのＡＴＰ／ＭｇＣｌ２混合物＋５μＬのＡＤＰ－Ｇｌｏ試薬＋１０μＬの検出試薬。
具体的な実験操作は以下の通りである：
１）化合物の希釈：Ｅｃｈｏを使用して５０ｎＬの１００×化合物／ＤＭＳＯを試験ウェルプレートに移した。
－ＰＩ３Ｋαの場合、化合物を最高濃度の０．１１１ｍＭから３倍に希釈し、合計１０の濃度にした。
－ＰＩ３Ｋβ／ＰＩ３Ｋδ／ＰＩ３Ｋβの場合、化合物を最高濃度の１．１１ｍＭから３倍に希釈し、合計１０の濃度にした。
２）キナーゼ反応：
（１）試験化合物を準備し、５０ｎＬの１００×化合物溶液又はＤＭＳＯを対応するウェルプレートに添加した。
（２）３．３３×反応緩衝液を準備した。
（３）３．３３×ＰＩＰ２：３ＰＳを準備し、使用する前にＰＩＰ２：３ＰＳをボルテックスで少なくとも１分間解凍した。
（４）５．２５ｍＭのＭｇＣｌ２を含む２．５ｍＭを準備した。
（５）３．３３×ＰＩ３Ｋα／ＰＩ３Ｋβ／ＰＩ３Ｋδ／ＰＩ３Ｋγ溶液を準備した。
（６）脂質キナーゼ溶液とＰＩＰ２：３ＰＳ溶液を１：１の体積比で混合した。
（７）３．３３×脂質キナーゼ緩衝液とＰＩＰ２：３ＰＳ溶液を１：１の体積比で混合した。
（８）ウェルプレートの１列目と２列目に３μＬの緩衝液とＰＩＰ２：３ＰＳを混合溶液を添加した。
（９）ウェルプレートの１列目と２列目以外のウェルに３μＬの酵素とＰＩＰ２：３ＰＳの混合液を添加し、１０秒間遠心分離した（１０００ｒｐｍ）。２３℃で２０分間インキュベーションした。
（１０）２μＬの２．５ｎ１０００ｒｐｍ２を添加し、均一に振とうした。
（１１）ウェルプレートを覆い、約３０秒間均一に振とうし、２３℃で２時間インキュベーションした。
（１２）５μＬの１０ｍＭのＭｇＣｌ２を含有するＡＤＰ－Ｇｌｏ試薬を添加した。
（１３）１０００ｒｐｍで１０秒間遠心分離し、ウェルプレートを覆い、約３０秒間均一に振とうし、２３℃で６０分間インキュベーションした。
（１４）１０μＬのキナーゼ検出試薬を添加した。
（１５）１０００ｒｐｍで１０秒間遠心分離した後、２３℃で６０分間インキュベーションした。
（１６）Ｅｎｖｉｓｉｏｎ機器で蛍光値を検出した、
〔実施例９．式（Ｉ）で表される化合物の体外酵素活性試験〕
ＥＬＩＳＡ法により、ＭＣＦ７細胞株で試験化合物がシグナル伝達経路におけるＰＩ３Ｋ下流タンパク質Ａｋｔのリン酸化を試験し、化合物の細胞活性を反映した。
細胞培養培地：細胞完全培地（ＲＰＭＩ１６４０＋１０％の血清＋１％のＬ－グルタミン＋１％の二重抗体）
無血清培地（無血清、ＲＰＭＩ１６４０＋１％Ｌ－グルタミン＋１％二重抗体）
具体的な操作手順は以下の通りである：
（１）ＭＣＦ７細胞（ＡＴＣＣ(登録商標)ＨＴＢ－２２ＴＭ）を９６ウェルプレートに接種し、ウェルあたり１００μＬ（ウェルあたり２．５ １０４個細胞）の細胞完全培地、３７℃、５％のＣＯ２で２４時間インキュベーションした。
（２）細胞完全培地を１００μＬの無血清培地で置き換え、一晩飢餓培養した。
（３）化合物を準備し（化合物の初期濃度は１ｍＭであり、１０濃度の３倍希釈後、各濃度の化合物を無血清培地で１００倍に希釈した）、また希釈した化合物２５μＬを細胞を含むウェルプレートに添加した。
（４）３７℃、５％のＣＯ２で２時間インキュベーションした。
（５）ウェルプレート内の細胞を１０μｇ／ｍＬインスリン（Ｓｉｇｍａ＃Ｉ９２７８－５ｍＬ）で刺激し、３０分間インキュベーションした後、１０００ｒｐｍで５分間室温で遠心分離した。
（６）各ウェルに２５０μＬの１×バランス塩溶液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃１４０６５－０５６、４℃、１ｍＭ／ＬのＮａ３ＶＯ４を含む）を添加し、細胞を１回洗浄した。
（７）各ウェルに１００μＬの溶解緩衝液（トリメチルアミノメタン塩酸塩、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、＃１５５６７－１０００ｍｌ）を添加し、４℃で６０分間振とうした後、４℃の４０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。
（８）後続の工程は、ＥＬＩＳＡキット（ＴＧＲ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ＃ＥＫＴ００２）の明細書に従って実行した。
実験結果は表１７に示された。
Figure 2022533151000022
結論：式（Ｉ）で表される化合物は、ＰＩ３Ｋキナーゼの活性を十分に阻害することができ、同時に、ＰＩ３Ｋβ／γ／δに対して高いサブタイプの選択性を示した。さらに、細胞内のＰＩ３Ｋの下流にあるＡｋｔのリン酸化レベルも十分に阻害することができた。

Claims (19)

  1. 式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａであって、
    Figure 2022533151000023
    その粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：４．８±０．２°、１２．６±０．２°、１７．３±０．２°において特徴的な回折ピークを有し；
    或いは、その粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：４．８±０．２°、５．７±０．２°、６．３±０．２°、１１．５±０．２°、１２．６±０．２°、１３．５±０．２°、１７．３±０．２°、２１．５±０．２°において特徴的な回折ピークを有し；
    或いは、その粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：４．８±０．２°、５．７±０．２°、６．３±０．２°、１０．１±０．２°、１１．５±０．２°、１２．６±０．２°、１３．５±０．２°、１５．８±０．２°、１７．３±０．２°、１９．２±０．２°、２１．５±０．２°において特徴的な回折ピークを有し；
    或いは、その粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、２θ角は以下の表に示された通りである、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａ。
    Figure 2022533151000024
  2. ＸＲＰＤスペクトルは図１に示された通りであリ；
    及び／又は、示差走査熱量曲線は１９５．５±３．０℃において吸熱ピークの開始点を有し；
    及び／又は、ＤＳＣスペクトルは図２に示された通りであり；
    及び／又は、熱重量分析曲線は１５１．６±３．０℃の際に重量が０．１６％減少し；
    及び／又は、ＴＧＡスペクトルは図３に示された通りである、請求項１に記載の結晶形Ａ。
  3. 式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ｂであって、
    Figure 2022533151000025
    その粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：５．０±０．２°、９．９±０．２°、１２．３±０．２°において特徴的な回折ピークを有し；
    或いは、その粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：５．０±０．２°、９．９±０．２°、１２．３±０．２°、１４．９±０．２°、２０．２±０．２°、２４．４±０．２°、２７．１±０．２°、３０．１±０．２°において特徴的な回折ピークを有し；
    或いは、その粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、２θ角は以下の表に示された通りである、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ｂ。
    Figure 2022533151000026
  4. ＸＲＰＤスペクトルは図５に示された通りであリ；
    及び／又は、示差走査熱量曲線は１７８．７±３．０℃において吸熱ピークの開始点を有し；
    及び／又は、ＤＳＣスペクトルは図６に示された通りであり；
    及び／又は、熱重量分析曲線は６３．４±３．０℃の際に重量が１．０３％減少し；
    及び／又は、ＴＧＡスペクトルは図７に示された通りである、請求項３に記載の結晶形Ｂ。
  5. 式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ｃであって、
    Figure 2022533151000027
    その粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：４．９±０．２°、５．８±０．２°、６．８±０．２°、８．４±０．２°、１２．４±０．２°において特徴的な回折ピークを有し；
    或いは、その粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：４．９±０．２°、５．８±０．２°、６．８±０．２°、８．４±０．２°、１０．８±０．２°、１１．７±０．２°、１２．４±０．２°、１４．３±０．２°、１７．０±０．２°、１７．７±０．２°、１８．７±０．２°において特徴的な回折ピークを有し；
    或いは、その粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、２θ角は以下の表に示された通りである、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ｃ。
    Figure 2022533151000028
  6. ＸＲＰＤスペクトルは図８に示された通りである、請求項５に記載の結晶形Ｃ。
  7. 式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ｄであって、
    Figure 2022533151000029
    その粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：５．１±０．２°、７．８±０．２°、１１．８±０．２°において特徴的な回折ピークを有し；
    或いは、その粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：５．１±０．２°、６．５±０．２°、７．８±０．２°、１１．８±０．２°、１５．４±０．２°、１６．５±０．２°、１７．４±０．２°、２３．８±０．２°において特徴的な回折ピークを有し；
    或いは、その粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：５．１±０．２°、６．５±０．２°、７．８±０．２°、１１．８±０．２°、１２．０±０．２°、１５．４±０．２°、１６．５±０．２°、１７．４±０．２°、１９．５±０．２°、２３．８±０．２°において特徴的な回折ピークを有し；
    或いは、その粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、２θ角は以下の表に示された通りである、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ｄ。
    Figure 2022533151000030
  8. ＸＲＰＤスペクトルは図９に示された通りである、請求項７に記載の結晶形Ｄ。
  9. 式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａの製造方法であって、当該方法は方法１又は方法２であり、
    方法１は：
    （１）式（Ｉ）で表される化合物を溶媒に添加して、懸濁液又は溶液とする工程；
    （２）前記懸濁液又は溶液を恒温ミキサーに入れ、振とうした後、遠心分離し、乾燥させ、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａを得る工程；
    を含み
    方法２は：
    （１）式（Ｉ）で表される化合物を溶媒に添加して溶解させる工程；
    （２）前記溶液を固体が析出するまで冷却させ、撹拌し、濾過して、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａを得る；
    を含む式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ａの製造方法。
  10. 前記溶媒は、アルコール系溶媒及びエステル系溶媒から選択され；
    及び／又は、前記溶媒は、エタノール、ｎ－ブタノール、ｔｅｒｔ－ブタノール、イソプロパノール、ギ酸エチル、及び酢酸エチルから選択される、請求項９に記載の製造方法。
  11. 式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ｂの製造方法であって、
    （１）式（Ｉ）で表される化合物を溶媒に添加して、懸濁液又は溶液とする工程；
    （２）前記懸濁液又は溶液を恒温ミキサーに入れ、振とうした後、遠心分離し、乾燥させ、式（Ｉ）で表される化合物の結晶形Ｂを得る工程を含む。
  12. 前記溶媒は、メタノール－水、エタノール－水、及びアセトン－水から選択され；
    及び／又は、前記溶媒は、メタノール－水（２：１）、エタノール－水（２：１）、アセトン－水（２：１）、エタノール－水（１：３）から選択される、請求項１１に記載の製造方法。
  13. 撹拌温度は２５℃～６０℃であり；
    及び／又は、撹拌時間は１２時間～２４時間であり；
    及び／又は、化合物と溶媒の重量－体積比は１ｇ：７～１０ｍｌである、請求項９～１２のいずれか１項に記載の製造方法。
  14. ＰＩ３Ｋα阻害剤に関連する疾患を治療する医薬の製造における、請求項１～８のいずれか１項に記載の結晶形の使用。
  15. 前記ＰＩ３Ｋα阻害剤に関連する医薬は腫瘍に用いられる医薬である、請求項１４に記載の使用。
  16. 請求項１～８のいずれか１項に記載の結晶形と薬学的に許容される助剤を含む医薬組成物。
  17. ＰＩ３Ｋα阻害剤の製造における、請求項１～８のいずれか１項に記載の結晶形又は請求項１６に記載の医薬組成物の使用であって；
    前記ＰＩ３Ｋα阻害剤は、好ましくは、ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３Ｋβ、ＰＩ３Ｋδ及びＰＩ３Ｋγのうちの１つ又は複数の阻害剤であり、より好ましくは、ＰＩ３Ｋα阻害剤である使用。
  18. 医薬の製造における、請求項１～８のいずれか１項に記載の結晶形又は請求項１６に記載の医薬組成物の使用であって；
    前記医薬は好ましくは、腫瘍又はＰＩ３Ｋ関連疾患を治療する医薬であり；
    前記ＰＩ３Ｋ関連疾患は好ましくは腫瘍であり；
    前記ＰＩ３Ｋは、好ましくは、ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３Ｋβ、ＰＩ３Ｋδ及びＰＩ３Ｋγのうちの１つ又は複数であり、より好ましくは、ＰＩ３Ｋαである使用。
  19. 患者に治療有効量の請求項１～８のいずれか１項に記載の結晶形又は請求項１６に記載の医薬組成物を投与する段階を含む、腫瘍又はＰＩ３Ｋ関連疾患の治療方法であって；
    前記ＰＩ３Ｋ関連疾患は、好ましくは、腫瘍であり；
    前記ＰＩ３Ｋは、好ましくは、ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３Ｋβ、ＰＩ３Ｋδ及びＩ３Ｋγのうちの１つ又は複数であり、より好ましくは、ＰＩ３Ｋαである腫瘍又はＰＩ３Ｋ関連疾患の治療方法。
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