JP2022530823A - がん治療のためのペプチド誘導体とそのコンジュゲート - Google Patents

がん治療のためのペプチド誘導体とそのコンジュゲート Download PDF

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Abstract

本明細書に提供されるのは、ＬＨＲＨ受容体を標的とする黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）ペプチド誘導体である。ＬＨＲＨペプチド誘導体、ＬＨＲＨペプチド－薬物コンジュゲート（ＬＨＲＨ－ＰＤＣ）、およびその誘導体および／またはコンジュゲートを用いてＬＨＲＨ受容体発現がんを治療する方法について記載する。

Description

本発明は、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）受容体を標的とするＬＨＲＨペ
プチド誘導体に関する。特に、ＬＨＲＨペプチド誘導体、ＬＨＲＨペプチド－薬物コン
ジュゲート（ＬＨＲＨ－ＰＤＣ）、およびその誘導体および／またはコンジュゲートを
用いてＬＨＲＨ受容体発現がんを治療する方法を記載する。
明細書全体にわたる先行技術のいかなる議論も、そのような先行技術が広く知られてい
るか、又は当該分野における技術常識の一部を形成しているという自認として、決して
考慮されるべきではない。
トリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）は、全乳がんの１５％～２０％を構成し、エス
トロゲン受容体（ＥＲ）、プロゲステロン受容体（ＰＲ）およびヒト上皮増殖因子受容
体２（ＨＥＲ２）発現の欠如によって免疫組織化学的に定義される（Ａ．Ｄｉａｎａら
、Ｃｕｒｒ．Ｏｎｃｏｌ．Ｒｅｐ．，２００８，２０；ＡＣ．Ｇａｒｒｉｄｏ－Ｃａｓ
ｔｒｏら、ＣａｎｃｅｒＤｉｓｃｏｖ．，２０１９，９）。ＴＮＢＣは他の種類の乳が
んよりも化学療法感受性が高いことが多い一方で、より若い女性での有病率が高く、補
助化学療法終了後最初の３～５年以内に再燃するリスクがあるより侵攻性の高い形態で
ある。過去数十年間、ＴＮＢＣを治療するための治療進歩は限られており、化学療法は
依然として標準治療である。よって、増加した選択性と効力を有する、この患者集団に
対する毒性が減少した標的治療薬の開発に対する緊急の満たされていないニーズが存在
する。
標的療法は、抗体‐薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）およびペプチド薬物コンジュゲート
（ＰＤＣ）を中心とする標的送達系を介して達成することができる（ＪＭ．Ｒｅｉｃｈ
ｅｒｔ，ＭＡｂｓ，２０１１，３）。ＡＤＣは一般に、高い生産コスト、構造的異質性
、細胞毒性薬に対する抗体の低いカップリング比、および限定された腫瘍浸透を含む多
くの欠点と関連している（ＭＡ．Ｆｉｒｅｒ＆Ｇ．Ｇｅｌｌａｒｍａｎ，ＪＨｅｍａｔ
ｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．，２０１２，５）。ＬＨＲＨ受容体は、乳がん、卵巣がん、子宮内
膜がん、前立腺がん、膀胱がんおよび膵臓がんを含む様々な腫瘍上に発現される。例え
ば、ＴＮＢＣの約７４％はＬＨＲＨに対する受容体を発現し、この受容体潜在的担体に
対するリガンドが、これらのがん性細胞に直接、細胞傷害剤を送達するようにする（Ｃ
．Ｆｏｓｔ，Ｏｎｃｏｌ．Ｒｅｐ．，２０１１，２５）。ＬＨＲＨ結合ドキソルビシン
が前立腺がんの臨床試験に達したが、このＰＤＣは第３相臨床試験で失敗した。現在の
ところ、ＴＮＢＣ患者に利用できる標的療法はまだない。このように、がん患者、特に
ＴＮＢＣ患者を治療するための標的化送達系が必要とされている。
本発明の目的は、先行技術の欠点の少なくとも１つを克服または改善すること、または
有用な代替物を提供することである。
本発明は、ＬＨＲＨペプチド誘導体および／またはＬＨＲＨペプチド－薬物コンジュゲ
ート（ＬＨＲＨ－ＰＤＣ）に関する。本明細書に記載のＬＨＲＨペプチド誘導体は、そ
れらの受容体に対して高親和性を示す。本明細書に記載されるＬＨＲＨペプチド誘導体
は、ネイティブのＬＨＲＨペプチドおよびトリプトレリン（［ｗ6］ＬＨＲＨ）および［
ｋ6］ＬＨＲＨなどの既知のＬＨＲＨアゴニストと比較して、半減期が改善されている。
いくつかの実施形態では、ＬＨＲＨペプチド誘導体は酵素活性が高かった。特定の実施
形態では、ＬＨＲＨペプチド誘導体は有効性が高かった。
本明細書に記載されるＬＨＲＨペプチド誘導体は、直接的な抗増殖活性を示す。特定の
実施形態では、ＬＨＲＨペプチド誘導体は、ＴＮＢＣ細胞モデルを含む乳がん細胞株に
おいて、ネイティブＬＨＲＨおよびアゴニスト［ｗ6］ＬＨＲＨの両方と比較して、より
高い抗増殖活性を示す。本明細書に記載されるように、本発明のＬＨＲＨペプチド誘導
体は、ＬＨＲＨ受容体アゴニストである。
提供されるのは、リンカーを介して細胞傷害剤に結合されているか、または細胞傷害剤
に結合されたＬＨＲＨペプチド誘導体である。
提供されるのは、ＬＨＲＨペプチド誘導体および／またはＬＨＲＨペプチド－薬物コン
ジュゲート（ＬＨＲＨ－ＰＤＣ）を投与することを含む、ＬＨＲＨ受容体発現がんを治
療するための方法である。特に、ＬＨＲＨペプチド誘導体および／またはＬＨＲＨ－Ｐ
ＤＣを投与することを含むＴＮＢＣを治療する方法が提供される。
提供されるのは、ＬＨＲＨペプチド誘導体および／またはＬＨＲＨ－ＰＤＣを投与する
ことを含むがんの治療法である。治療され得る例示的ながんは、限定されるわけではな
いが、ＬＨＲＨ受容体発現がんを標的とする、例えば、乳がん、前立腺がん、大腸がん
、卵巣がん、子宮内膜がんなどを含む。特に、ＴＮＢＣ中のＬＨＲＨ受容体発現がんを
標的化する方法が提供される。
第一の態様において、本発明は、以下の配列を含むＬＨＲＨペプチド－薬物コンジュゲ
ート（ＬＨＲＨ－ＰＤＣ）又はその薬学的に許容可能な塩を提供する。
Ｘ1－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｘ2－Ｘ3（Ｌ－Ｄ）－Ｘ4－Ｘ5－Ｐｒｏ－ＮＨＲ
（式中、
Ｘ1はｐＧｌｕまたはＧｌｎであり；
Ｘ2はＴｙｒ、ＰｈｅまたはＨｉｓであり；
Ｘ3はＤ－ＬｙｓまたはＤ－Ｌｙｓ（Ａｈｘ）であり；
Ｘ4はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、またはＭｅｔであり；
Ｘ5はＡｒｇ、Ｇｌｎ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｐｈｅ、ＴｙｒまたはＬｙｓ
であり；
ＲはＣＨ2ＣＨ3またはＣＨ3であり；
式中、
Ｌはリンカーであり；
Ｄは細胞傷害剤である）
特定の実施形態では、Ｘ1はＧｌｎであり、Ｘ3はＤ－Ｌｙｓであり、ＲはＣＨ2ＣＨ3で
ある。いくつかの実施形態では、Ｘ1はｐＧｌｕであり、Ｘ3はＤ－Ｌｙｓであり、Ｒは
ＣＨ2ＣＨ3である。いくつかの実施形態では、Ｘ1はｐＧｌｕであり、Ｘ3はＤ－Ｌｙｓ
（Ａｈｘ）であり、ＲはＣＨ2ＣＨ3である。特定の実施形態では、Ｘ1はＧｌｎであり、
Ｘ2はＴｙｒであり、Ｘ3はＤ－Ｌｙｓであり、Ｘ4はＬｅｕであり、Ｘ5はＡｒｇであり
、ＲはＣＨ2ＣＨ3である。特定の実施形態では、Ｘ1はｐＧｌｕであり、Ｘ2はＴｙｒで
あり、Ｘ3はＤ－Ｌｙｓであり、Ｘ4はＬｅｕであり、Ｘ5はＡｒｇであり、ＲはＣＨ2Ｃ
Ｈ3である。特定の実施形態では、Ｘ1はｐＧｌｕであり、Ｘ2はＴｙｒであり、Ｘ3はＤ
－Ｌｙｓ（Ａｈｘ）であり、Ｘ4はＬｅｕであり、Ｘ5はＡｒｇであり、ＲはＣＨ2ＣＨ3
である。特定の実施形態では、リンカーは、切断性リンカー、例えば、ＰＡＢ（ｐ－ア
ミノベンジルアルコール）を含む／含まないジペプチドベースのリンカー、またはｂ－
グルクロニダーゼによって切断される親水性糖基を組み込むグルクロニドリンカーなど
の非ペプチド切断性リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは非切断性リ
ンカーである。いくつかの実施形態では、切断性リンカーは自己崩壊リンカーである。
関連実施形態では、マレイミドカプロイルバリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルカ
ルバモイル（ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ）が自己崩壊リンカーとなっている。特定の実施形
態では、細胞傷害剤は、抗有糸分裂剤、アルキル化剤、抗代謝剤、トポイソメラーゼ阻
害剤またはタンパク質キナーゼ阻害剤である。いくつかの実施形態では、細胞傷害剤は
モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）である。
特定の実施形態では、ＬＨＲＨペプチド誘導体を細胞傷害剤と融合させることができる
。関連する実施形態において、ＬＨＲＨペプチド誘導体は、非切断性リンカーを介して
細胞傷害剤と融合される。
第２の態様において、本発明は、以下の配列を含む抗増殖ＬＨＲＨペプチド誘導体又は
その薬学的に許容可能な塩を提供する。
Ｘ1－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｘ2－Ｘ3－Ｘ4－Ｘ5－Ｐｒｏ－ＮＨＲ
（式中、
Ｘ1はｐＧｌｕまたはＧｌｎであり；
Ｘ2はＴｙｒ、ＰｈｅまたはＨｉｓであり；
Ｘ3はＤ－ＬｙｓまたはＤ－Ｌｙｓ（Ａｈｘ）であり；
Ｘ4はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、またはＭｅｔであり；
Ｘ5はＡｒｇ、Ｇｌｎ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｐｈｅ、ＴｙｒまたはＬｙｓ
であり、
ＲはＣＨ2ＣＨ3またはＣＨ3である）。
特定の実施形態では、Ｘ1はＧｌｎであり、Ｘ3はＤ－Ｌｙｓであり、ＲはＣＨ2ＣＨ3で
ある。いくつかの実施形態では、Ｘ1はｐＧｌｕであり、Ｘ3はＤ－Ｌｙｓであり、Ｒは
ＣＨ2ＣＨ3である。いくつかの実施形態では、Ｘ1はｐＧｌｕであり、Ｘ3はＤ－Ｌｙｓ
（Ａｈｘ）であり、ＲはＣＨ2ＣＨ3である。特定の実施形態では、Ｘ1はＧｌｎであり、
Ｘ2はＴｙｒであり、Ｘ3はＤ－Ｌｙｓであり、Ｘ4はＬｅｕであり、Ｘ5はＡｒｇであり
、ＲはＣＨ2ＣＨ3である。特定の実施形態では、Ｘ1はｐＧｌｕであり、Ｘ2はＴｙｒで
あり、Ｘ3はＤ－Ｌｙｓであり、Ｘ4はＬｅｕであり、Ｘ5はＡｒｇであり、ＲはＣＨ2Ｃ
Ｈ3である。特定の実施形態では、Ｘ1はｐＧｌｕであり、Ｘ2はＴｙｒであり、Ｘ3はＤ
－Ｌｙｓ（Ａｈｘ）であり、Ｘ4はＬｅｕであり、Ｘ5はＡｒｇであり、ＲはＣＨ2ＣＨ3
である。
第３の態様において、本発明は、配列：Ｇｌｎ－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｄ
－Ｌｙｓ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－ＮＨＣＨ2ＣＨ3を含むＬＨＲＨペプチド誘導体ま
たはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
第４の態様において、本発明は、配列：ｐＧｌｕ－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－
Ｄ－Ｌｙｓ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－ＮＨＣＨ2ＣＨ3を含むＬＨＲＨペプチド誘導体
またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
第５の態様において、本発明は、配列：ｐＧｌｕ－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－
Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｈｘ）－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－ＮＨＣＨ2ＣＨ3を含むＬＨＲＨペプ
チド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
いくつかの実施形態では、ＬＨＲＨペプチド誘導体の半減期は少なくとも約２００分で
ある。特定の実施形態では、ＬＨＲＨペプチド誘導体は、約２００分～約２５０分の半
減期を有する。いくつかの実施形態では、ＬＨＲＨペプチド誘導体は約２５０分から約
３００分の半減期を有する。いくつかの実施形態では、ＬＨＲＨペプチド誘導体は約３
００分から約３５０分の半減期を有する。特定の実施形態では、ＬＨＲＨペプチド誘導
体は約３６５分の半減期を有する。
いくつかの実施形態において、ＬＨＲＨ－ＰＤＣは、自己崩壊リンカーを介して細胞傷
害剤に結合されたＬＨＲＨペプチド誘導体を含む。特定の実施形態では、ＬＨＲＨ－Ｐ
ＤＣは、自己崩壊リンカーを介してＭＭＡＥに結合されたＬＨＲＨペプチド誘導体を含
む。特定の実施形態では、ＬＨＲＨ－ＰＤＣは、ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣを介してＭＭＡ
Ｅに結合されたＬＨＲＨペプチド誘導体を含む。
第６の態様において、本発明は、配列：Ｇｌｎ－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｄ
－Ｌｙｓ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－ＮＨＣＨ2ＣＨ3を含むＬＨＲＨペプチド誘導体ま
たはその薬学的に許容可能な塩を含み、ここでＬＨＲＨペプチド誘導体はｍｃ－ｖｃ－
ＰＡＢＣを介してＭＭＡＥに結合されるＬＨＲＨ－ＰＤＣを提供する。
第７の態様において、本発明は、配列：ｐＧｌｕ－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－
Ｄ－Ｌｙｓ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－ＮＨＣＨ2ＣＨ3を含むＬＨＲＨペプチド誘導体
またはその薬学的に許容可能な塩を含み、ここでＬＨＲＨペプチド誘導体はｍｃ－ｖｃ
－ＰＡＢＣを介してＭＭＡＥに結合されるＬＨＲＨ－ＰＤＣを提供する。
第８の態様において、本発明は、配列：ｐＧｌｕ－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－
Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｈｘ）－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－ＮＨＣＨ2ＣＨ3を含むＬＨＲＨペプ
チド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩を含むＬＨＲＨ－ＰＤＣを提供し、ここで
、ＬＨＲＨペプチド誘導体はｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣを介してＭＭＡＥに結合される。
第９の態様において、本発明は、ＬＨＲＨ－ＰＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩、
および任意に少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物を提供する
。
第１０の態様において、本発明は、本発明のＬＨＲＨペプチド誘導体またはその薬学的
に許容可能な塩、および任意に少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬
組成物を提供する。
第１１の態様において、本発明は、その必要な対象においてがんを治療する方法を提供
し、その方法は、対象に治療的有効量の本発明のＬＨＲＨ－ＰＤＣまたはその薬学的に
許容可能な塩、ＬＨＲＨペプチド誘導体もしくはその薬学的に許容可能な塩、または医
薬組成物を投与することを含み、対象がＬＨＲＨ受容体発現がんを有する。いくつかの
実施形態では、ＬＨＲＨ受容体発現がんは、乳がん、前立腺がん、大腸がん、卵巣がん
、膵臓がんまたは子宮内膜がんである。いくつかの実施形態では、ＬＨＲＨ受容体発現
がんはＴＮＢＣである。特定の実施形態では、がんを治療する方法は、ＬＨＲＨ－ＰＤ
Ｃを投与することを含み、がんがＴＮＢＣである。
第１２の態様において、本発明は、その必要がある対象においてがんを治療する方法を
提供し、その方法は、ＬＨＲＨ－ＰＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩の治療的有効
量、および任意に１つ以上の追加の細胞傷害剤を有する少なくとも１つの薬学的に許容
可能な賦形剤を対象に投与することを含み、対象がＬＨＲＨ受容体発現がんを有する。
いくつかの実施形態では、ＬＨＲＨ受容体発現がんは、乳がん、前立腺がん、大腸がん
、卵巣がん、膵臓がんまたは子宮内膜がんである。いくつかの実施形態では、ＬＨＲＨ
受容体発現がんはＴＮＢＣである。
第１３の態様において、本発明は、それを必要とする対象において腫瘍を発現するＬＨ
ＲＨ受容体の細胞増殖および／または増殖を停止または遅延させる方法を提供し、その
方法は治療的有効量の本発明のＬＨＲＨ－ＰＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩、Ｌ
ＨＲＨペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩、または医薬組成物を対象に投
与することを含む。
第１４の態様において、本発明は、それを必要とする対象において腫瘍を発現するＬＨ
ＲＨ受容体の細胞増殖および／または増殖を停止または遅延させる方法を提供し、その
方法は治療的有効量のＬＨＲＨ－ＰＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩、および任意
に少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤および１つ以上の追加の細胞傷害剤を対
象に投与することを含む。
第１５の態様において、本発明は、それを必要とする対象においてホルモン感受性およ
び／または難治性乳がんを治療する方法を提供し、その方法は治療的有効量の本発明の
ペプチドコンジュゲート、ＬＨＲＨペプチド誘導体または本発明の医薬組成物を対象に
投与することを含む。
第１６の態様において、本発明は、それを必要とする対象においてホルモン感受性およ
び／または難治性乳がんを治療する方法を提供し、その方法はＬＨＲＨ－ＰＤＣまたは
薬学的に許容可能な塩、および任意に少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤およ
び１つ以上の追加の細胞傷害剤の治療的有効量を対象に投与することを含む。
第１７の態様において、本発明は、がんを治療するための医薬の製造における、本発明
のＬＨＲＨ－ＰＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩、ＬＨＲＨペプチド誘導体もしく
はその薬学的に許容可能な塩、または医薬組成物の使用を提供し、がんがＬＨＲＨ受容
体発現がんである。
第１８の態様において、本発明は、腫瘍を発現するＬＨＲＨ受容体の細胞成長および／
または増殖を停止または遅延させるための医薬の製造における、本発明のＬＨＲＨ－Ｐ
ＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩、ＬＨＲＨペプチド誘導体またはその薬学的に許
容可能な塩、または医薬組成物の使用を提供する。
第１９の態様において、本発明は、ホルモン感受性および／または難治性乳がんを治療
するための医薬の製造における、本発明のＬＨＲＨ－ＰＤＣまたはその薬学的に許容可
能な塩、ＬＨＲＨペプチド誘導体もしくはその薬学的に許容可能な塩、または医薬組成
物の使用を提供する。
第２０の態様において、本発明は、ＴＮＢＣを治療するための医薬の製造における、本
発明のＬＨＲＨ－ＰＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩、ＬＨＲＨペプチド誘導体も
しくはその薬学的に許容可能な塩、または医薬組成物の使用を提供する。
本明細書に開示されているＬＨＲＨペプチド誘導体および／またはＬＨＲＨ－ＰＤＣを
合成および／または産生する方法は特に限定されず、任意の適切な方法が使用され得る
。
＜定義＞
文脈がそうでないことを明らかに必要とする場合を除き、説明及びクレーム全体を通し
て、「含む」、「含まれる」等の言葉は、排他的又は網羅的な意味ではなく包括的な意
味で構成されること；すなわち、「含むが、これに限定されない」という意味で構成さ
れる。
本明細書中で使用される場合、単数形は「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、本願に
おいて使用される場合、「１以上」を意味するので、例えば「試料」の言及は、複数の
このような試料などを含む。
本明細書中で用いられる「約」という用語は、当該技術分野における実施当たり１以上
の標準偏差の範囲内にあることができる。あるいは、「約」は、その特定の値に対して
許容可能な誤差範囲内にあると仮定すべきである。例えば、半減期の値との関連におい
て、「約」という用語は、最大１０％の範囲を意味することができる。
用語「黄体形成ホルモン放出ホルモン」または「ＬＨＲＨ」は、当技術分野においては
、「性腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）」または「黄体形成ホルモン放出因子
（ＬＲＦ）」としても知られている。ＬＨＲＨはプロホルモンとしてｍＲＮＡから翻訳
され、ネイティブ配列ｐＧｌｕ－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－
Ａｒｇ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－ＮＨ2をもつ成熟デカペプチドに変換される。ネイティブのＬ
ＨＲＨペプチドのアミノ酸はすべてＬ型である。
本明細書で使用する用語「ペプチド」は、２つ以上のアミノ酸、またはアミド結合また
は同等物によって共有結合した残基を含むが、これらに限定されない。特定の実施形態
では、アミノ酸は、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｐｒｏ－ＥｔまたはＡｈｘを含むがこれらに限定され
ない非天然および非アミド化学結合によって結合され得る。
用語「アミノ酸」は、周知のアミノ酸、例えばアラニン（ＡｌａまたはＡ）；アルギニ
ン（ＡｒｇまたはＲ）；アスパラギン（ＡｓｎまたはＮ）；アスパラギン酸（Ａｓｐま
たはＤ）；システイン（ＣｙｓまたはＣ）；またはグルタミン（ＧｌｎまたはＱ）；グ
ルタミン酸（ＧｌｕまたはＥ）；グリシン（ＧｌｙまたはＧ）；ヒスチジン（Ｈｉｓま
たはＨ）；イソロイシン（ＩｌｅまたはＩ）：ロイシン（ＬｅｕまたはＬ）；リジン（
ＬｙｓまたはＫ）；メチオニン（ＭｅｔまたはＭ）；フェニルアラニン（Ｐｈｅまたは
Ｆ）；プロリン（ＰｒｏまたはＰ）；セリン（ＳｅｒまたはＳ）またはスレオニン（Ｔ
ｈｒまたはＴ）；またはトリプトファン（ＴｒｐまたはＷ）；チロシン（Ｔｙｒまたは
Ｙ）；およびバリン（ＶａｌまたはＶ）を含む。上記のアミノ酸３文字の略称または１
文字の略称が公知であり、当該技術分野において標準的である。ここに記載するアミノ
酸は、Ｇｌｙを除いて「Ｌ」または「Ｄ」立体異性体型であってよい。立体異性体型は
「Ｄ」または「Ｌ」を標準的な３文字略号または１文字略号、例えばＤ－Ｌｙｓおよび
Ｌ－Ｌｙｓを含むことによって指定することができる。上の場合の１文字コードのアミ
ノ酸はそのＬ型であるが、下の場合の１文字コードのアミノ酸はそのＤ型であることを
示す。「Ｄ」または「Ｌ」の指定がない場合、３文字略号のアミノ酸は「Ｌ」型である
。非伝統的アミノ酸も本発明の範囲内にあり、ノルロイシン、オルニチン、ノルバリン
、ホモセリン、および他のアミノ酸類似体を含む。好ましくは、非伝統的アミノ酸はＤ
－Ｌｙｓの代わりに使用される。用語アミノ酸残基とは、ペプチドに含まれるアミノ酸
を意味する。アミノ酸残基がペプチドのＮ末端またはＣ末端にあることが理解されるで
あろう。
用語「ｐＧｌｕ」または「ピロＧｌｕ」は当該技術分野で公知であり、Ｌ－ピログルタ
ミン酸を意味する。
用語「ＮＨＥｔ」は当該技術分野で公知であり、Ｎ－エチルアミドを指す。エチルマレ
イミドまたはＮＥＭとしても知られている。
用語「Ａｈｘ」は当該技術分野で公知であり、６－アミノヘキサン酸を指す。
用語「ＬＨＲＨペプチド誘導体」または「ペプチド誘導体」は、本明細書中で互換的に
使用され、少なくとも２つの改変を含むネイティブのＬＨＲＨペプチドをいい、ここで
、少なくとも２つの改変は、第６のアミノ酸残基ＧｌｙのＤ－ＬｙｓまたはＤ－Ｌｙｓ
（Ａｈｘ）への置換および第１０のアミノ酸残基ＧｌｙのＮＨＲへの置換を含み、ここ
で、Ｒは本明細書中で定義される。ＬＨＲＨペプチド誘導体は、少なくとも２つ以上の
改変を含み得、ここで、少なくとも２つの改変は、第６アミノ酸残基ＧｌｙのＤ－Ｌｙ
ｓまたはＤ－Ｌｙｓ（Ａｈｘ）への置換、および第１０アミノ酸残基ＧｌｙのＮＨＲへ
の置換を含み、ここでＲが定義され、かつさらなる改変は、第１アミノ酸残基ｐＧｌｕ
のＧｌｎへの置換を含む。いくつかの実施形態において、ＬＨＲＨペプチド誘導体は、
アミノ酸残基位置５、７、および／または８における付加的改変を含み得る。
本明細書中で使用される場合、用語「コンジュゲート」、「ペプチドコンジュゲート」
または「ＬＨＲＨペプチド－薬物－コンジュゲート（ＬＨＲＨ－ＰＤＣ）」は互換的に
使用され、リンカーを介して細胞傷害剤に複合したＬＨＲＨペプチド誘導体を含む分子
を意味する。
用語「リンカー」は、細胞ターゲティング増強部分、例えばＬＨＲＨペプチド誘導体お
よび細胞傷害剤を共有結合または結合することを目的とする部分を意味する。本明細書
中で使用されるリンカーは、切断性リンカーであっても非切断性リンカーであってもよ
い。本明細書に記載のＬＨＲＨペプチド誘導体との関連において、リンカーは、第６の
アミノ酸残基（Ｄ－ＬｙｓまたはＤ－Ｌｙｓ（Ａｈｘ））またはＣ－またはＮ－末端を
介してＬＨＲＨペプチド誘導体に共有結合される。
本明細書中で使用される用語「細胞傷害剤」は、抗有糸分裂剤、アルキル化剤、抗代謝
産物、トポイソメラーゼ阻害剤またはタンパク質キナーゼ阻害剤を含むが、これらに限
定されない。細胞傷害剤は、ビンカアルカロイド、クリプトフィシン、ボルテゾミブ、
チオボルテゾミブ、ツブリシン、アミノプテリン、ラパマイシン、パクリタキセル、ド
セタキセル、ダウノルビシン、エベロリムス、ａ－アマナチン、ベムカリン、ジデムニ
ンＢ、ゲルダノマイシン、プルバラノールＡ、イスピネシブ、ブデソニド、ダサチニブ
、エポチロン、メイタンシン、ドキソルビシン、カンプトテシン、メトトレキサート（
ＭＴＸ）またはモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）であり得る。特定の実施形態
では、細胞傷害剤はＭＭＡＥである。
ＬＨＲＨペプチド誘導体および／またはＬＨＲＨ－ＰＤＣを調製する方法は特に限定的
ではない。例示的な方法は、Ｆｍｏｃ固相化学およびクリック化学を含む。ＬＨＲＨペ
プチド誘導体が商業的に供給され得ることは認識されるであろう。さらに、市販のキッ
トが、細胞傷害剤、例えばＭＭＡＥを、本明細書中に記載されるＬＨＲＨペプチド誘導
体に結合させるために入手可能であり得ることが理解される。
また、ＬＨＲＨペプチド誘導体および／またはＬＨＲＨ－ＰＤＣの薬学的に許容可能な
塩も考えられる。「薬学的に許容可能な塩」という用語は、酸および塩基付加塩の両方
を含み、遊離塩基または酸の生物学的有効性および特性を保持し、かつ生物学的または
他の点で望ましくない塩を意味する。薬学的に許容可能な塩は、無機または有機の酸ま
たは塩基と形成され、化合物の最終的な単離および精製の間、またはその遊離塩基また
は酸形態の精製された化合物を適切な有機または無機の酸または塩基と別々に反応させ
、このように形成された塩を単離することによって、調製することができる。
本明細書中で使用される「医薬組成物」または「組成物」とは、少なくとも１つのＬＨ
ＲＨペプチド誘導体またはＬＨＲＨ－ＰＤＣ、または薬学的に許容可能な塩、溶媒和物
、その水和物と、薬学的に許容可能な賦形剤などの他の化学成分との混合物を意味する
。本明細書に記載されるペプチド誘導体またはコンジュゲートの送達に適した医薬組成
物およびその調製方法は、当業者に明らかであろう。
また、少なくとも１つのＬＨＲＨペプチド誘導体および／またはＬＨＲＨ－ＰＤＣ、お
よび任意に少なくとも１つの薬学的賦形剤を含む医薬組成物が考えられる。用語「薬学
的に許容可能な賦形剤」とは、組成物の任意の薬学的に許容可能な不活性成分を意味す
る。当該技術分野で公知であるように、賦形剤は、希釈剤、緩衝剤、バインダー、潤滑
剤、崩壊剤、着色剤、抗酸化剤／保存剤、ｐＨ調整剤などを含む。賦形剤は、最終形態
の所望の物理的態様に基づいて選択される：例えば、注射用の非経口配合物、所望の硬
さおよびもろさを有し、急速に分散し、飲み込みやすくなる錠剤などである。医薬組成
物の適切な形態は、錠剤、カプセル、エリキシル、液体配合物、徐放性剤または持続的
放出性剤などを含むが、これらに限定されない。意図される医薬組成物の物理的形態お
よび／または含有物は、医薬製剤分野の当業者によって処方され得る従来の製剤である
。
ＬＨＲＨ受容体を発現する本明細書に記載されるがんは、良性腫瘍および悪性腫瘍を含
む腫瘍形成性であるがん細胞集団、または非腫瘍形成性であるがん細胞集団を含む。が
んにおけるＬＨＲＨ受容体発現を決定する方法は、特に制限的ではない。例示的な方法
には、ウエスタンブロット法、免疫細胞化学、フローサイトメトリー、およびＰＣＲ（
ポリメラーゼ連鎖反応）が含まれる。例示的ながんは、がん腫、肉腫、リンパ腫、メラ
ノーマ、中皮腫、鼻咽頭がん、白血病、腺がん、および骨髄腫を含むが、これらに限定
されない。特定の実施形態では、がんは、肺がん、骨がん、膵臓がん、皮膚がん、頭部
がん、頸部がん、皮膚メラノーマ、眼内メラノーマ子宮がん、卵巣がん、子宮内膜がん
、平滑筋肉腫、直腸がん、胃がん、結腸がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、卵
管がん、子宮内膜がん、子宮頚がん、膣がん、外陰がん、ホジキン病、食道がん、小腸
がん、内分泌系がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、副
腎がん、軟部肉腫、尿道がん、陰茎がん、前立腺がん、慢性白血病、急性白血病、リン
パ球性リンパ腫、胸膜中皮腫、膀胱がん、バーキットリンパ腫、尿管がん、腎臓がん、
腎細胞がん、腎盂がん、中枢神経系（ＣＮＳ）新生物、原発ＣＮＳリンパ腫、脊髄軸腫
瘍、脳幹グリオーマ、下垂体腺がん、胆管がん、ヒュルトレ細胞甲状腺がん、または胃
食道接合部腺がんであってもよい。
また、ＬＨＲＨペプチド誘導体および／またはＬＨＲＨ－ＰＤＣを、ｉｎ－ｖｉｔｒｏ
またはｉｎ－ｖｉｖｏでがん細胞に送達し得ることが企図される。いくつかの実施形態
では、ＬＨＲＨ－ＰＤＣを、ｉｎ－ｖｉｔｒｏまたはｉｎ－ｖｉｖｏでがん細胞に投与
する。特定の実施形態では、ＬＨＲＨペプチド誘導体は、ｉｎ－ｖｉｔｒｏまたはｉｎ
－ｖｉｖｏでがん細胞に投与され、抗増殖活性を示す。ＬＨＲＨペプチド誘導体および
／またはＬＨＲＨ－ＰＤＣは、本明細書に記載されるように、組成物内の薬学的に許容
される担体と共に細胞に投与することができる。
本明細書中で使用される「腫瘍」という用語は、悪性または良性を問わず、新生物細胞
成長および増殖、ならびに前がん性およびがん性細胞および組織を意味する。例えば、
特定のがんは、固形塊の腫瘍によって特徴づけられ得る。「腫瘍」という用語は、固形
腫瘍および非固形腫瘍を含む。本明細書に記載されているＬＨＲＨペプチド誘導体、Ｌ
ＨＲＨ－ＰＤＣ、または組成物を、腫瘍の部位で局所的に（例えば、直接注入によって
）、または遠隔的に（例えば、全身投与によって）対象に投与することができる。いく
つかの実施形態では、ＬＨＲＨペプチド誘導体、ＬＨＲＨ－ＰＤＣ、または本明細書に
記載されている組成物を、対象に全身的に、例えば静脈内投与のような血管内に投与す
ることができる。
「抗増殖活性」という用語は、化合物が細胞の増殖を止めることができることを意味す
る。
本明細書に記載される方法によって治療される「対象」は、ヒト（「患者」）または非
ヒト対象（例えば、ネコ、イヌなど）を含む哺乳動物を含む。本明細書に記載されるＬ
ＨＲＨペプチド誘導体、ＬＨＲＨ－ＰＤＣ、または組成物を、ヒトまたは非ヒト対象に
投与することができる。本明細書に記載されるＬＨＲＨペプチド誘導体、ＬＨＲＨ－Ｐ
ＤＣ、または組成物を、ヒトがん細胞または非ヒトがん細胞ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉ
ｎ ｖｉｖｏに投与することができる。ある実施形態では、細胞は哺乳動物細胞である
。
本明細書中で使用されるように、ＬＨＲＨペプチド誘導体、ＬＨＲＨ－ＰＤＣ、または
組成物の「治療的有効量」は、投与された場合（単回投与として、または多重治療の時
間経過として）、疾患症状の重症度の減少、疾患症状のない期間の頻度および期間の増
加、または疾患の苦痛による障害または障害の予防によって証明される疾患退縮を促進
する量を含む。本明細書中に記載されるＬＨＲＨペプチド誘導体、ＬＨＲＨ－ＰＤＣま
たは組成物の治療的有効量は、疾患を発症するリスクがあるか、または疾患の再発を患
うリスクがある対象に投与された場合、疾患の発症または再発を阻害する、ＬＨＲＨペ
プチド誘導体、ＬＨＲＨ－ＰＤＣまたは組成物の任意の量である「予防的な有効量」を
含む。疾患の退縮を促進する、または疾患の発生または再発を阻害する治療薬の能力は
、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイで薬剤の活性をアッセイすることによって、当業者に公知
の様々な方法、例えばヒトにおける効力を予測する動物モデル系を用いて評価され得る
。がんの治療のための例として、治療的有効量のＬＨＲＨペプチド誘導体、ＬＨＲＨ－
ＰＤＣまたは本明細書に記載される組成物は、がん細胞の増殖を、未治療のがん細胞に
対して少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％、または少なく
とも約８０％阻害することができる。一部の実施形態では、がんの治療のために、本明
細書に記載されるようなＬＨＲＨペプチド誘導体の治療的有効量が、約６０％までがん
細胞の増殖を阻害し得る。いくつかの実施形態では、がんの治療のために、本明細書に
記載されるような治療的有効量のＬＨＲＨ－ＰＤＣが、約８０％までがん細胞の増殖を
阻害し得る。治療的有効量のＬＨＲＨペプチド誘導体、ＬＨＲＨ－ＰＤＣ、または本明
細書に記載される組成物は、細胞増殖または腫瘍増殖を完全に阻害し得る。治療的有効
量のＬＨＲＨペプチド誘導体、ＬＨＲＨ－ＰＤＣ、または本明細書に記載されている組
成物は、対照と比較して、細胞増殖または腫瘍増殖を統計的に有意な程度まで阻害また
は減少させることができる。「統計的有意性」とは、ｐ＜０．０５レベルでの有意性、
または特定の種類の治療または予防との関連において生物医学統計学の当業者によって
用いられるような統計的有意性の他の尺度を意味する。
本明細書に記載されるがん種に応じて、投与経路および／または本明細書に記載される
ＬＨＲＨペプチド誘導体、ＬＨＲＨ－ＰＤＣ、または組成物が局所的または全身的に投
与されるか否かに応じて、広範囲の許容可能な用量が考えられる。適当な投与量は、約
０．５ｍｇ／ｋｇから約５ｍｇ／ｋｇの範囲に入る用量を含む。用量は単回または分割
され、ｑ．ｄ．、ｂ．ｉ．ｄ．、ｔ．ｉ．ｄ．、または隔日、隔週（ｂ．ｉ．ｗ．）、
週１回、月１回、四半期１回などを含む多種多様なプロトコルに従って投与され得る。
これらの場合のそれぞれにおいて、本明細書に記載される治療的有効量は、投与プロト
コールによって決定されるように、投与の例に対応するか、またはその代わりに、一日
あたりの総用量、週当たりの総用量、月当たりの総用量、または四半期あたりの総用量
に対応することが理解される。
また、本明細書に記載するＬＨＲＨペプチド誘導体、ＬＨＲＨ－ＰＤＣ、または組成物
を、１つまたは複数の細胞傷害剤とともに投与してもよいと考えられる。ＬＨＲＨペプ
チド誘導体としての投与、ＬＨＲＨ－ＰＤＣ、または本明細書中で１つ以上の追加の細
胞傷害剤で記載される組成物としての投与には、同時投与、または連続投与が含まれ得
る。連続投与は、本明細書に記載されているＬＨＲＨペプチド誘導体、ＬＨＲＨ－ＰＤ
Ｃ、または組成物の投与と、１つまたは複数の細胞傷害剤とを、１時間以上、または１
日以上、分離する投与計画を含む。
本明細書に記述するように、血漿中のｉｎ ｖｉｔｒｏ代謝安定性は、血漿中の生体内
変換に対する化合物の感受性と定義され、ｉｎ ｖｉｔｒｏ半減期（Ｔ1/2）として表さ
れる。
本発明の実施形態は、ここでは、以下のような添付図面を参考にして、例としてのみ、
記述される。
（Ａ）例示的ＬＨＲＨペプチド誘導体Ｇｌｎ－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－ＮＨＣＨ2ＣＨ3（ＬＤ４）、ｐＧｌｕ－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－ＮＨＣＨ2ＣＨ3（ＬＤ５）およびｐＧｌｕ－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｈｘ）－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－ＮＨＣＨ2ＣＨ3（ＬＤ６）の構造。６番目の位置のＤ－Ｌｙｓを除いて、図１ＡのＬＨＲＨペプチド誘導体のすべてのアミノ酸はＬ型で存在する。（Ｂ）ＬＨＲＨペプチド誘導体の代謝安定性をヒト血漿で調べ、時間依存的に液体クロマトグラフィー‐質量分析（ＬＣ‐ＭＳ）で定量した。本発明のＬＨＲＨペプチド誘導体は、ネイティブのＬＨＲＨペプチド（約１０分のＴ1/2）およびＬＨＲＨアゴニストのトリプトレリン（［ｗ6］ＬＨＲＨ）および［ｋ6］ＬＨＲＨ（それぞれ約１９分および３９分のＴ1/2）と比較して、半減期が大幅に改善される（ＬＤ４、ＬＤ５およびＬＤ６についてそれぞれ約２５７分、３６５分および３０９分のＴ1/2）。統計解析には一元配置ＡＮＯＶＡ後にＤｕｎｎｅｔｔのｐｏｓｔ－ｈｏｃ検定を用いた。エラーバーは標準偏差（ＳＴＤＶ），ｐ＜０．０５，ｎ＝９（各３回実施した３回の独立した実験）である。
ウエスタンブロット分析を用いて決定した対照としてのβ－アクチンに対する３つの乳がん細胞株（ＭＣＦ－７、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１およびＳＫ－ＢＲ－３）におけるＬＨＲＨ受容体（ＬＨＲＨ－Ｒ）発現レベル。乳がん細胞株は、異なる特性を有する：ＭＤＡ－ＭＢ－２３１：ＥＲ－、ＨＥＲ－２－、ＰＲ－；ＭＣＦ－７：ＥＲ＋、ＨＥＲ－２＋、ＰＲ＋；およびＳＫ－ＢＲ－３：ＥＲ－、ＨＥＲ－２＋、ＰＲ－。ヒト下垂体ＬＨＲＨ受容体について知られている約６４ｋＤａ分子量の主要なタンパク質バンドが、ＭＣＦ－７、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１およびＳＫ－ＢＲ－３（それぞれレーン１、２、および３）において同定された。ＭＣＦ－７、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１およびＳＫ－ＢＲ－３におけるβ－アクチンに対するＬＨＲＨ－Ｒ発現のレベルは、これらの乳がん細胞がＬＨＲＨ受容体を介して能動的に標的化され得ることを示した。ウエスタンブロット分析は、ＬＨＲＨ－Ｒに対して特異的に作製した抗体を用いて行った。
（Ａ）ＬＨＲＨ－Ｒの発現は、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（ＴＮＢＣ細胞モデル）、ＳＫＯＶ－３（ＬＨＲＨ－Ｒ低発現細胞モデル）、正常乳房細胞としてＨＭＥＣおよびＭＣＦ－１０Ａにおける免疫組織化学によってさらに確認された。図３Ａは、ローダミン結合二次抗体によって標識された一次抗体の特異的受容体結合を示す。（Ｂ）ＬＨＲＨ－Ｒシグナル強度は、正常乳房細胞（ＨＭＥＣおよびＭＣＦ－１０Ａ）、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１およびＳＫＯＶ－３においてＦｉｊｉＪソフトウェアにより定量した。これらの細胞株におけるシグナル強度を一元配置ＡＮＯＶＡ後、テューキーの多重比較検定により評価した（＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。ＬＨＲＨ－Ｒ発現シグナル強度は、ＳＫＯＶ－３、ＨＭＥＣおよびＭＣＦ－１０Ａと比較して、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１において有意に高い。エラーバーは標準偏差（ＳＴＤＶ）、ｎ＝９（各３回実施した３回の独立した実験）である。
ＭＭＡＥと比較したペプチドコンジュゲートＬＤ５－ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥ（ＬＭ）の細胞毒性活性を、化合物と共に細胞を７２時間連続希釈でインキュベートした後、ＭＴＴアッセイにより、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（ＴＮＢＣ細胞モデル）対ＨＭＥＣおよびＭＣＦ－１０Ａ（正常乳房細胞）およびＳＫＯＶ－３（ＬＨＲＨ－Ｒ低発現細胞モデル）において評価した。（Ａ）相対的細胞生存率をＰＢＳ処理陰性対照群と比較して評価し、ＩＣ50値（ｎＭ）をＨＭＥＣおよびＭＣＦ‐１０Ａ（正常乳房細胞）およびＭＤＡ‐ＭＢ‐２３１（ＬＨＲＨ‐Ｒ陽性、ＴＮＢＣ細胞モデル）およびＳＫＯＶ‐３（ＬＨＲＨ‐Ｒ低発現細胞）について非線形回帰（曲線適合）により算出した。（Ｂ）ＬＤ５‐ｍｃ‐ｖｃ‐ＰＡＢＣ‐ＭＭＡＥ（ＬＭ）における細胞生存率を、ＭＭＡＥと比較して正常乳房細胞株としてＨＭＥＣにおいて、二元配置ＡＮＯＶＡとそれに続くシダックの多重比較検定により評価した（＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。（Ｃ）ＬＤ５‐ｍｃ‐ｖｃ‐ＰＡＢＣ‐ＭＭＡＥ（ＬＭ）における細胞生存率を、ＭＭＡＥと比較して正常乳房細胞株としてＭＣＦ‐１０Ａにおいて、二元配置ＡＮＯＶＡとそれに続くシダックの多重比較検定（＊＊＊ｐ＜０．００１，＊＊ｐ＜０．０１，＊ｐ＜０．０５）により評価した。（Ｄ）ＬＤ５‐ｍｃ‐ｖｃ‐ＰＡＢＣ‐ＭＭＡＥ（ＬＭ）における細胞生存率を、ＭＭＡＥと比較してＭＤＡ‐ＭＢ‐２３１（ＴＮＢＣ細胞モデル）において、二元配置ＡＮＯＶＡとそれに続くシダックの多重比較検定により評価した（＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。（Ｅ）ＬＤ５‐ｍｃ‐ｖｃ‐ＰＡＢＣ‐ＭＭＡＥ（ＬＭ）における細胞生存率を、ＭＭＡＥと比較してＳＫＯＶ‐３（ＬＨＲＨ‐Ｒ低発現細胞）において、二元配置ＡＮＯＶＡとそれに続くシダックの多重比較検定により評価した（＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。ＬＤ５‐ｍｃ‐ｖｃ‐ＰＡＢＣ‐ＭＭＡＥ（ＬＭ）コンジュゲートは、細胞株における遊離ＭＭＡＥの単なる拡散ではなく、受容体を介したＬＨＲＨ取り込みの選択性によるＭＭＡＥと比較して細胞傷害性の減少を示す。エラーバーは標準偏差（ＳＴＤＶ）、ｎ＝９（各３回実施した３回の独立した実験）である。
受容体結合競合アッセイ。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１をトリプトレリン（ＴＲＮ）およびＬＭ（ＬＤ５－ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥ）で前処理した後、ＭＴＴアッセイを実施した。（Ａ）ＩＣ50（ｎＭ）は、トリプトレリンによる前処理のあり又はなしで、ＰＣ‐３とＭＤＡ‐ＭＢ‐２３１に対する非線形回帰（曲線適合）により算出した。（Ｂ）ＴＲＮ－ＬＭにおける細胞生存性を、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（ＴＮＢＣ細胞株）におけるＬＭと比較して評価した。ＬＭの細胞傷害効果は、トリプトレリンによる前処理後に逆転し、ＬＭの作用機序におけるＬＨＲＨ‐Ｒの重要な役割を示している。二元配置ＡＮＯＶＡを行った後、シダックの多重比較検定を行った（＊＊＊ｐ＜０．００００１）。エラーバーは標準偏差（ＳＴＤＶ），ｎ＝８（３回独立反復）である。
近接ライゲーションアッセイを用いて、陰性対照（ＰＢＳ）と比較して、ＬＤ５－ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥ（１μＭ）で処理したＭＤＡ－ＭＢ－２３１（ＴＮＢＣ細胞モデル）におけるＬＨＲＨ－ＲとＬＨＲＨとのタンパク質－タンパク質相互作用を示した。染色した核（ＤＡＰＩ青色）とＰＬＡシグナル（テキサスレッド）をＬＥＩＣＡ ＳＰＥ２共焦点ＬＳＭにより検出した。
ＴＮＢＣ細胞株および正常乳房細胞におけるＬＤ５－ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥのｉｎ ｖｉｔｒｏ取り込み研究。（Ａ）ＴＮＢＣ細胞モデルとしてのＭＤＡ‐ＭＢ‐２３１、正常乳房細胞としてのＭＣＦ‐１０ＡおよびＨＭＥＣを１μＭのＬＤ５‐ｍｃ‐ｖｃ‐ＰＡＢＣ‐ＭＭＡＥ（ＬＭ）で１８時間処理した。ＬＨＲＨに特異的なモノクローナル一次抗体およびローダミンと結合した二次抗体を用いてＬＭを染色し、ＬＥＩＣＡ ＳＰＥ２共焦点ＬＳＭにより検出した。（Ｂ）ＬＭシグナル強度は、正常乳房細胞（ＨＭＥＣおよびＭＣＦ‐１０Ａ）およびＴＮＢＣ細胞モデル（ＭＤＡ‐ＭＢ‐２３１）においてＦｉｊｉＪソフトウェアにより測定した。ＬＨＲＨ‐Ｒ陽性細胞（ＭＤＡ‐ＭＢ‐２３１）では、正常乳房細胞と比較してＬＭの取り込みが有意に高かった。これらの細胞株におけるシグナル強度一元配置ＡＮＯＶＡ後、テューキーの多重比較検定により評価した（＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。エラーバーは標準偏差（ＳＴＤＶ），ｎ＝８（３回独立反復）である。
α－チューブリン重合に対するＭＭＡＥおよびＬＤ５－ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥ（ＬＭ）の効果。（Ａ）ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（ＴＮＢＣ細胞モデル）と正常乳房細胞（ＨＭＥＣとＭＣＦ‐１０Ａ）を遊離ＭＭＡＥとＬＭで１μＭとＰＢＳ（対照）処理した後、α‐チューブリンを一次抗体と二次抗体で免疫染色した。α‐チューブリンシグナルはＬＥＩＣＡ ＳＰＥ２共焦点ＬＳＭにより検出した。（Ｂ）α‐チューブリンシグナル強度は、正常乳房細胞（ＨＭＥＣおよびＭＣＦ‐１０Ａ）およびＭＤＡ‐ＭＢ‐２３１においてＦｉｊｉＪソフトウェアにより測定した。＊＊＊＊ｐ＜０．０００１は、ＭＭＡＥ処理細胞と比較して、ＰＢＳおよびＬＭで処理した各々の細胞株におけるシグナル強度における有意性である。＃＃＃＃ｐ＜０．０００１は、ＭＣＦ－１０ＡおよびＨＭＥＣ細胞と比較して、ＬＭで処理したＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞におけるα－チューブリンシグナル強度における有意性である。ＰＢＳとＬＭで処理した正常乳房細胞中のα‐チューブリンシグナルは、ＭＭＡＥ処理した対応物より有意に高く、細胞生存の要因としてα‐チューブリン重合に対する標的薬剤の影響が低いことを示した。統計解析はＰｒｉｓｍにて二元配置ＡＮＯＶＡ後にテューキーの多重比較検定を行った。エラーバーは標準偏差（ＳＴＤＶ），ｎ＝８（３回独立反復）である。
（Ａ）細胞に、ＬＨＲＨ－ＲｓｉＲＮＡおよび蛍光標識ｓｉＲＮＡ陰性対照をトランスフェクション効率シグナル（ＦＡＭ－トランスフェクション対照）として同時トランスフェクションした。陰性対照とは、ＬＨＲＨ－ＲｓｉＲＮＡおよびＦＡＭトランスフェクション対照でトランスフェクトされなかったＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を意味する。ＬＨＲＨ‐Ｒ発現は、ローダミン結合二次抗体により標識した一次抗体の特異的受容体結合を伴う免疫細胞化学法により検出した。免疫細胞化学画像はＬＥＩＣＡＳＰＥ２共焦点ＬＳＭにより捕捉した。（Ｂ）サイレンシングされたＬＨＲＨ－Ｒと陰性対照の両方におけるＬＨＲＨ－Ｒシグナル強度を、ＦｉｊｉＪソフトウェアによって測定した。ＬＨＲＨ－Ｒのサイレンシングは、陰性対照と比較して、トランスフェクトされたＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞において有意に減少したＬＨＲＨ－Ｒ発現をもたらす。データは、サイレンシングされたＬＨＲＨ－Ｒと陰性対照との間で、ウェルチの修正データを用いて片側ｔ検定により解析した（＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。エラーバーは標準偏差（ＳＴＤＶ），ｎ＝８（３回独立反復）である。
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞においてＬＨＲＨ－Ｒをサイレンシングした後のＬＤ５－ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥ（ＬＭ）の取り込み。細胞をＬＨＲＨ‐ＲｓｉＲＮＡで処理し、トランスフェクション効率シグナル（ＦＡＭ‐トランスフェクション対照）として蛍光標識ｓｉＲＮＡ陰性対照で同時トランスフェクトした。ＬＨＲＨ－Ｒ陰性対照は、ＬＨＲＨ－ＲｓｉＲＮＡおよびＦＡＭ－トランスフェクション対照でトランスフェクトされなかったＭＤＡＭＢ－２３１細胞を意味する。（Ａ）サイレンシングされたＬＨＲＨ‐Ｒ細胞と陰性対照細胞をＬＭ（１μＭ）で１８時間処理し、ローダミン結合二次抗体により標識された一次抗体の特異的ＬＨＲＨ結合による免疫細胞化学によりＬＭシグナルを検出した。免疫細胞化学画像はＬＥＩＣＡ ＳＰＥ２共焦点ＬＳＭにより捕捉した。（Ｂ）サイレンシングされたＬＨＲＨ－Ｒと陰性対照の両方におけるＬＭシグナル強度を、ＦｉｊｉＪソフトウェアによって測定した。ＬＤ５－ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥの取り込みは、ＬＨＲＨ－Ｒ遺伝子をサイレンシングした後に有意に低下し、この構築物が過剰発現されたＬＨＲＨ－Ｒを介してがん細胞に積極的に標的化され、取り込まれることを示した。データ解析は、ウェルチの補正による片側ｔ検定を行った（＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。エラーバーは標準偏差（ＳＴＤＶ），ｎ＝８（３回独立反復）である。
ＬＨＲＨＤ－（ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ）－ＭＭＡＥ（ＬＤ５－ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥ）のヒト血漿、マウス血漿及び培地（ｃ－培地）における安定性は、０時点に対する各時点でＬＣ－ＭＳにより試料中に検出された遊離ＭＭＡＥの存在に基づいて測定した。エラーバーは標準偏差（ＳＴＤＶ）、ｐ＞０．０５およびｎ＝９である（手段は３回の独立した実験で試料から３回算出）。好ましい実施形態の詳細な説明
１つの実施形態において、以下の配列を含むＬＨＲＨ－ＰＤＣ又はその薬学的に許容可
能な塩が提供される。
Ｘ1－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｘ2－Ｘ3（Ｌ－Ｄ）－Ｘ4－Ｘ5－Ｐｒｏ－ＮＨＲ
式中、
Ｘ1はｐＧｌｕまたはＧｌｎであり；
Ｘ2はＴｙｒ、ＰｈｅまたはＨｉｓであり；
Ｘ3はＤ－ＬｙｓまたはＤ－Ｌｙｓ（Ａｈｘ）であり；
Ｘ4はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、またはＭｅｔであり；
Ｘ5はＡｒｇ、Ｇｌｎ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｐｈｅ、ＴｙｒまたはＬｙｓ
であり；
ＲはＣＨ2ＣＨ3またはＣＨ3であり；
式中、
Ｌはリンカーであり；
Ｄは細胞傷害剤である。
特定の実施形態では、Ｘ1はＧｌｎであり、Ｘ3はＤ－Ｌｙｓであり、ＲはＣＨ2ＣＨ3で
ある。いくつかの実施形態では、Ｘ1はｐＧｌｕであり、Ｘ3はＤ－Ｌｙｓであり、Ｒは
ＣＨ2ＣＨ3である。いくつかの実施形態では、Ｘ1はｐＧｌｕであり、Ｘ3はＤ－Ｌｙｓ
（Ａｈｘ）であり、ＲはＣＨ2ＣＨ3である。特定の実施形態では、Ｘ1はＧｌｎであり、
Ｘ2はＴｙｒであり、Ｘ3はＤ－Ｌｙｓであり、Ｘ4はＬｅｕであり、Ｘ5はＡｒｇであり
、ＲはＣＨ2ＣＨ3である。特定の実施形態では、Ｘ1はｐＧｌｕであり、Ｘ2はＴｙｒで
あり、Ｘ3はＤ－Ｌｙｓであり、Ｘ4はＬｅｕであり、Ｘ5はＡｒｇであり、ＲはＣＨ2Ｃ
Ｈ3である。特定の実施形態では、Ｘ1はｐＧｌｕであり、Ｘ2はＴｙｒであり、Ｘ3はＤ
－Ｌｙｓ（Ａｈｘ）であり、Ｘ4はＬｅｕであり、Ｘ5はＡｒｇであり、ＲはＣＨ2ＣＨ3
である。特定の実施形態では、リンカーは切断性リンカーである。いくつかの実施形態
では、リンカーは非切断性リンカーである。いくつかの実施形態では、切断性リンカー
は自己崩壊リンカーである。関連実施形態では、マレイミドカプロイルバリン－シトル
リン－ｐ－アミノベンジルカルバモイル（ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ）が自己崩壊リンカー
となっている。特定の実施形態では、細胞傷害剤は、抗有糸分裂剤、アルキル化剤、抗
代謝剤、トポイソメラーゼ阻害剤またはタンパク質キナーゼ阻害剤である。いくつかの
実施形態では、細胞傷害剤は、ビンカアルカロイド、クリプトフィシン、ボルテゾミブ
、チオボルテゾミブ、ツブリシン、アミノプテリン、ラパマイシン、パクリタキセル、
ドセタキセル、ダウノルビシン、エベロリムス、ａ－アマナチン、ベムカリン、ジデム
ニンＢ、ゲルダノマイシン、プルバラノールＡ、イスピネシブ、ブデソニド、ダサチニ
ブ、エポチロン、メイタンシン、ドキソルビシン、カンプトテシン、メトトレキサート
（ＭＴＸ）またはモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）からなる群より選択される
。特定の実施形態では、細胞傷害剤はＭＭＡＥである。
いくつかの実施形態では、リンカーは少なくとも１つのアミノ酸を含む。特定の実施形
態では、リンカーは、アミノ酸がＬｙｓ、Ａｓｎ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｈｅ、Ｍｅｔ、Ｐ
ｒｏ、Ｈｉｓ、Ｇｉｎ、Ａｒｇ、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｌａ、Ｖａｉ、Ｐｈｅ、
Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｃｙｓ、および／またはＴｒｐの１つ以上のアミノ酸残基を含む。い
くつかの実施形態では、リンカーは炭素鎖、アミド結合またはエーテル結合を含む。い
くつかの実施形態では、リンカーは、ヒドラゾン結合、ビニルエーテル結合、アセター
ル結合、ケタール結合またはジスルフィド結合を含む。特定の実施形態では、リンカー
はＧｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙを含む。いくつかの実施形態では、リンカーはＶａ
ｌ－Ｃｉｔ（Ｃｉｔ＝シトルリン）からなる。いくつかの実施形態では、リンカーはＰ
ｈｅ－Ｌｙｓを含む。いくつかの実施形態では、リンカーはポリエチレングリコール（
ＰＥＧ）鎖、酢酸リンカー、エステルリンカー、レクチン、ｂｕＳＳ（ジスルフィルブ
チレート）またはマレイミドである。
さらなる実施形態において、以下の配列を含むＬＨＲＨ－ＰＤＣ又はその薬学的に許容
可能な塩が提供される。
Ｘ1－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｘ2－Ｘ3（Ｌ－Ｄ）－Ｘ4－Ｘ5－Ｐｒｏ－ＮＨＲ
式中、
Ｘ1はｐＧｌｕまたはＧｌｎであり；
Ｘ2はＴｙｒ、ＰｈｅまたはＨｉｓであり；
Ｘ3はＤ－ＬｙｓまたはＤ－Ｌｙｓ（Ａｈｘ）であり；
Ｘ4はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、またはＭｅｔであり；
Ｘ5はＡｒｇ、Ｇｌｎ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｐｈｅ、ＴｙｒまたはＬｙｓ
であり；
ＲはＣＨ2ＣＨ3またはＣＨ3であり；
式中、
Ｌはリンカーであり；
Ｄは細胞傷害剤である。
いくつかの実施形態では、Ｘ1はＧｌｎである。いくつかの実施形態では、Ｘ1はｐＧｌ
ｕである。いくつかの実施形態では、Ｘ1はＧｌｎであり、Ｘ2はＴｙｒである。いくつ
かの実施形態では、Ｘ1はＧｌｎであり、Ｘ2はＰｈｅである。いくつかの実施形態では
、Ｘ1はＧｌｎであり、Ｘ2はＨｉｓである。いくつかの実施形態では、Ｘ3はＤ－Ｌｙｓ
である。いくつかの実施形態では、Ｘ3はＤ－Ｌｙｓ（Ａｈｘ）である。いくつかの実施
形態では、Ｘ1はＧｌｎであり、Ｘ4はＬｅｕである。いくつかの実施形態では、Ｘ1はＧ
ｌｎであり、Ｘ4はＶａｌである。いくつかの実施形態では、Ｘ1はＧｌｎであり、Ｘ4は
Ｔｒｐである。いくつかの実施形態では、Ｘ1はＧｌｎであり、Ｘ4はＭｅｔである。い
くつかの実施形態では、Ｘ1はＧｌｎであり、Ｘ5はＡｒｇである。いくつかの実施形態
では、Ｘ1はＧｌｎであり、Ｘ5はＧｌｎである。いくつかの実施形態では、Ｘ1はＧｌｎ
であり、Ｘ5はＴｒｐである。いくつかの実施形態では、Ｘ1はＧｌｎであり、Ｘ5はＳｅ
ｒである。いくつかの実施形態では、Ｘ1はＧｌｎであり、Ｘ5はＬｅｕである。いくつ
かの実施形態では、Ｘ1はＧｌｎであり、Ｘ5はＡｓｎである。いくつかの実施形態では
、Ｘ1はＧｌｎであり、Ｘ5はＰｈｅである。いくつかの実施形態では、Ｘ1はＧｌｎであ
り、Ｘ5はＴｙｒである。いくつかの実施形態では、Ｘ1はＧｌｎであり、Ｘ5はＬｙｓで
ある。特定の実施形態では、ＲはＣＨ2ＣＨ3である。特定の実施形態では、ＲはＣＨ3で
ある。
特定の実施形態では、ＬＨＲＨペプチド誘導体を細胞傷害剤と融合させることができる
。関連する実施形態において、ＬＨＲＨペプチド誘導体は、非切断性リンカーを介して
細胞傷害剤と融合される。
さらなる実施形態において、以下の配列を含む抗増殖性ＬＨＲＨペプチド誘導体又はそ
の薬学的に許容可能な塩が提供される：
Ｘ1－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｘ2－Ｘ3－Ｘ4－Ｘ5－Ｐｒｏ－ＮＨＲ
式中、
Ｘ1はｐＧｌｕまたはＧｌｎであり；
Ｘ2はＴｙｒ、ＰｈｅまたはＨｉｓであり；
Ｘ3はＤ－ＬｙｓまたはＤ－Ｌｙｓ（Ａｈｘ）であり；
Ｘ4はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、またはＭｅｔであり；
Ｘ5はＡｒｇ、Ｇｌｎ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｐｈｅ、ＴｙｒまたはＬｙｓ
である
ＲはＣＨ2ＣＨ3またはＣＨ3である。
特定の実施形態では、Ｘ1はＧｌｎであり、Ｘ3はＤ－Ｌｙｓであり、ＲはＣＨ2ＣＨ3で
ある。いくつかの実施形態では、Ｘ1はｐＧｌｕであり、Ｘ3はＤ－Ｌｙｓであり、Ｒは
ＣＨ2ＣＨ3である。いくつかの実施形態では、Ｘ1はｐＧｌｕであり、Ｘ3はＤ－Ｌｙｓ
（Ａｈｘ）であり、ＲはＣＨ2ＣＨ3である。特定の実施形態では、Ｘ1はＧｌｎであり、
Ｘ2はＴｙｒであり、Ｘ3はＤ－Ｌｙｓであり、Ｘ4はＬｅｕであり、Ｘ5はＡｒｇであり
、ＲはＣＨ2ＣＨ3である。特定の実施形態では、Ｘ1はｐＧｌｕであり、Ｘ2はＴｙｒで
あり、Ｘ3はＤ－Ｌｙｓであり、Ｘ4はＬｅｕであり、Ｘ5はＡｒｇであり、ＲはＣＨ2Ｃ
Ｈ3である。特定の実施形態では、Ｘ1はｐＧｌｕであり、Ｘ2はＴｙｒであり、Ｘ3はＤ
－Ｌｙｓ（Ａｈｘ）であり、Ｘ4はＬｅｕであり、Ｘ5はＡｒｇであり、ＲはＣＨ2ＣＨ3
である。
さらなる実施形態において、以下の配列を含むＬＨＲＨペプチド誘導体又はその薬学的
に許容可能な塩が提供される：
Ｘ1－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｘ2－Ｘ3－Ｘ4－Ｘ5－Ｐｒｏ－ＮＨＲ
式中、
Ｘ1はＧｌｎであり；
Ｘ2はＴｙｒ、ＰｈｅまたはＨｉｓであり；
Ｘ3はＤ－ＬｙｓまたはＤ－Ｌｙｓ（Ａｈｘ）であり；
Ｘ4はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、またはＭｅｔであり；
Ｘ5はＡｒｇ、Ｇｌｎ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｐｈｅ、ＴｙｒまたはＬｙｓ
である
ＲはＣＨ2ＣＨ3またはＣＨ3である。
特定の実施形態では、Ｘ3はＤ－Ｌｙｓで、ＲはＣＨ2ＣＨ3である。特定の実施形態では
、Ｘ2はＴｙｒ、Ｘ3はＤ－Ｌｙｓ、Ｘ4はＬｅｕ、Ｘ5はＡｒｇ、ＲはＣＨ2ＣＨ3である
。特定の実施形態では、Ｘ2はＴｙｒ、Ｘ3はＤ－Ｌｙｓ（Ａｈｘ）、Ｘ4はＬｅｕ、Ｘ5
はＡｒｇ、ＲはＣＨ2ＣＨ3である。特定の実施形態では、ＲはＣＨ2ＣＨ3である。特定
の実施形態では、ＲはＣＨ3である。いくつかの実施形態において、本発明は、配列：Ｇ
ｌｎ－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－ＮＨ
ＣＨ2ＣＨ3を含むＬＨＲＨペプチド誘導体を含み、ＬＨＲＨペプチド誘導体は、自己崩
壊リンカーを介して細胞傷害剤に結合されるＬＨＲＨペプチドコンジュゲートを提供す
る。
いくつかの実施形態では、本発明は、配列：ｐＧｌｕ－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｔｙ
ｒ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－ＮＨＣＨ2ＣＨ3を含むＬＨＲＨペプチド誘
導体を含み、ここでＬＨＲＨペプチド誘導体は、自己崩壊リンカーを介して細胞傷害剤
に結合されるＬＨＲＨペプチドコンジュゲートを提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、配列：ｐＧｌｕ－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｔｙ
ｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｈｘ）－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－ＮＨＣＨ2ＣＨ3を含むＬＨＲＨ
ペプチド誘導体を含み、ＬＨＲＨペプチド誘導体は、自己崩壊リンカーを介して細胞傷
害剤に結合される、ＬＨＲＨペプチドコンジュゲートを提供する。
本発明のさらなる好ましい実施形態は、ここでは、添付図面を参考にして、例としての
み、記載される。
(実施例)
実施例１：様々なＬＨＲＨペプチド誘導体の合成
本発明のＬＨＲＨペプチド誘導体は、Ｆｍｏｃ固相化学（ＬＨＲＨペプチド誘導体の構
造を図１Ａに示す）のために、ｉｎ ｓｉｔｕ中和プロトコル（Ｐ．Ｖａｒａｍｉｎｉ
ｅｔａｌ．，ＪＭｅｄＣｈｅｍ．，２０１７，６０；Ｐ．Ｖａｒａｍｉｎｉｅｔａｌ．
，ＩｎｔＪＰｈａｒｍ，２０１７，５２１）に従い、Ｒｉｎｋアミド樹脂上で設計され
、合成された。ペプチド（ＬＤ４，ＬＤ５およびＬＤ６）の各々の純度は９８％以上で
あった。ペプチドは、Ａ：Ｈ２Ｏ、０．１％ＴＦＡ、およびＢ：アセトニトリル／Ｈ２
Ｏ９：１、０．１％ＴＦＡの２つの溶媒の勾配を走るＶｙｄａｃＣ１８カラム（５ｍｍ
、２２２５０ｍｍ）を用いて、島津システム上でリバース相高速液体クロマトグラフィ
ー（ＲＰ‐ＨＰＬＣ）により精製した。６０分間にわたる２０％～６０％Ｂの勾配（ペ
プチド１－３、７および９－１０）または７０分間にわたる１０％～６０％Ｂの勾配（
ペプチド４－６および８）のいずれかを、１０ｍＬ／分の流速で用いた。採取した分画
は、ＶｙｄａｃＣ４およびＣ１８カラム（５ｍｍ、４．６２５０ｍｍ）を用い、流速１
ｍＬ／ｍｉｎで３０分間にわたり０％～１００％Ｂの勾配をつけて、高分解能ＭＳおよ
びＥＳＩ－ＭＳと分析的ＲＰＨＰＬＣにより分析した。純粋な画分を合わせて凍結乾燥
した
実施例２：ＬＤ５－ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥコンジュゲートの合成
ＬＤ５－ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥコンジュゲートは、Ｆｍｏｃ固相化学技術に
より合成された（Ｐ．Ｖａｒａｍｉｎｉら、ＪＭｅｄＣｈｅｍ．，２０１７，６０；Ｐ
．Ｖａｒａｍｉｎｉら、ＩｎｔＪＰｈａｒｍ，２０１７，５２１）。
実施例３：ＬＨＲＨペプチド誘導体の代謝安定性
本発明者らは驚くべきことに、ＬＨＲＨペプチド誘導体が代謝安定性を改善することを
見出した。ネイティブのＬＨＲＨペプチド、ＬＨＲＨペプチド誘導体ＬＤ４、ＬＤ５お
よびＬＤ６、ならびに既知のＬＨＲＨアゴニストであるトリプトレリン（［ｗ６］ＬＨ
ＲＨ）および［ｋ６］ＬＨＲＨの代謝安定性を、ヒト血漿において調べた（図１Ｂ）。
ＬＨＲＨペプチド誘導体ＬＤ４、ＬＤ５およびＬＤ６は、当技術分野で知られているネ
イティブＬＨＲＨペプチド（約１０分のＴ1/2）およびＬＨＲＨアゴニスト、すなわちト
リプトレリン（［ｗ6］ＬＨＲＨ）および［ｋ6］ＬＨＲＨ（それぞれ約１９分および３
９分のＴ1/2）と比較して、半減期が大幅に改善される（ＬＤ－４、ＬＤ－５およびＬＤ
－６についてそれぞれ約２５７分、３６５分および３０９分のＴ1/2）。
ＬＤ４，ＬＤ５およびＬＤ６は独特の高安定性を示すが、全ての中で、ＬＤ５は３６５
分の最も高い半減期を有し、自己崩壊リンカー、ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣを介してＭＭＡ
Ｅへの結合のために選択された。ＬＤ５－ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥコンジュゲ
ートのＬＨＲＨ受容体への結合親和性をＤｕｏＬｉｎｋアッセイにより検討した。図６
に示すように、このアッセイにより、ＬＨＲＨ受容体に対するペプチドリガンドの高結
合親和性が確認された。
実施例４：抗増殖活性
本発明者らはさらに、ＬＤ４、ＬＤ５およびＬＤ６が、ホルモン依存性婦人科がんの臨
床で使用されているネイティブのＬＨＲＨおよびアゴニスト［ｗ６］ＬＨＲＨの両方と
比較して、３つの異なった乳がん細胞株において有意に高い抗増殖活性を有することを
発見した（表１参照）。
実施例５：ＬＨＲＨ受容体（ＬＨＲＨ－Ｒ）はヒト乳がん細胞株において発現される
乳がん細胞ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＳＫ－ＢＲ－３及びＭＣＦ－７由来の培養液を採取
し、溶解緩衝液（１５０ｍＭＮａＣｌ、１％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００、０．１％ＳＤＳ
、５０ｍＭＴｒｉｓＨＣｌ、ｐＨ８．０及びプロテアーゼ阻害剤混合物）中で溶解し、
氷上で１秒間１５回超音波処理した後、１６，１００×ｇで４℃で３０分間遠心分離し
た。５０マイクログラムの全タンパク質抽出物を８％ＳＤＳ／ＰＡＧＥゲルにかけた。
４℃で一晩移送した後、ポリフッ化ビニリデン（ＰＤＶＦ）膜を５％ウシ血清アルブミ
ン（ＢＳＡ）中で１時間ブロックし、抗ＬＨＲＨ受容体一次抗体（ＳｏｌａｒＢｉｏＬ
ｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）と４℃で一夜インキュベートした。トリス緩衝生理食塩水中
でＴｗｅｅｎ（ＴＢＳ－Ｔ）で洗浄した後、膜をホースラディッシュペルオキシダーゼ
結合（ＨＲＰ結合）二次抗体と１時間インキュベートした。洗浄後、ＥＣＬ－Ｐｌｕｓ
化学発光検知システム（ＧＥヘルスケア）を用いてタンパク質を検出した。密度はＩｍ
ａｇｅＪプログラムを用いて測定した。ウェスタンブロットにおける対照としてβ－ア
クチンを用いて、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＳＫ－ＢＲ－３およびＭＣＦ－７がん細胞株
におけるＬＨＲＨ－Ｒ発現を測定した。ウエスタンブロット分析は、異なった特性を有
する３種類の乳がん細胞株（ＭＤＡ‐ＭＢ‐２３１：ＥＲ‐、ＨＥＲ‐２‐、ＰＲ‐；
ＭＣＦ‐７、ＥＲ＋、ＨＥＲ‐２＋、ＰＲ＋；およびＳＫ‐ＢＲ‐３、ＥＲ‐、ＨＥＲ
‐２＋、ＰＲ‐）におけるＬＨＲＨ受容体の発現を示した。これらの細胞株を、ＬＨＲ
Ｈペプチド誘導体の抗増殖試験に使用した。本研究は、ＬＨＲＨ－Ｒに対して特異的に
産生された抗体を用いて実施した。ＭＣＦ－７、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１およびＳＫ－Ｂ
Ｒ－３において、ヒト下垂体ＬＨＲＨ受容体について知られている約６４ｋＤａ分子量
の主要なタンパク質バンドが同定された（それぞれ、図２レーン１、２および３）。Ｍ
ＣＦ－７、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１およびＳＫ－ＢＲ－３におけるβ－アクチンに対する
ＬＨＲＨ－Ｒ発現のレベルは、これらの乳がん細胞がＬＨＲＨ受容体を介して能動的に
標的化され得ることを示した。
免疫細胞化学法を用いて、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（ＴＮＢＣ細胞モデル）、ＳＫＯＶ－
３（ＬＨＲＨ－Ｒ低発現がん細胞モデル）、並びにＨＭＥＣ及びＭＣＦ－１０Ａ（すな
わち正常乳房細胞）におけるＬＨＲＨ－Ｒの発現を確認した（図３Ａ）。定量解析（図
３Ｂ）の結果、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（ＴＮＢＣ細胞モデル）では、ＳＫＯＶ－３（Ｌ
ＨＲＨ－Ｒ低発現がん細胞モデル）や正常の乳房細胞（ｐ＜０．０５）と比較して、Ｌ
ＨＲＨ－Ｒシグナル強度が有意に高かった。
Figure 2022530823000001
 ＩＣ50値（μＭ）は、濃度‐反応曲線から、細胞増殖の抑制について非線形回帰を用い
て推定した。データは、それぞれ３回ずつの少なくとも３回の独立した実験から得られ
た平均値±ＳＤで記載する。統計解析には二元配置ＡＮＯＶＡを用いた（＊ｐ＜０．０
５、同一細胞株に対する対応する親ペプチドのＩＣ50と比較）。
実施例６：ＬＤ５－ｍｖ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥの細胞傷害性
自己崩壊リンカー、ｍｖ‐ｖｃ‐ＰＡＢＣ（すなわちＬＤ５‐ｍｖ‐ｖｃ‐ＰＡＢＣ‐
ＭＭＡＥ）によるＭＭＡＥと結合したＬＨＲＨペプチド誘導体ｐＧｌｕ‐Ｈｉｓ‐Ｔｒ
ｐ‐Ｓｅｒ‐Ｔｙｒ‐Ｄ‐Ｌｙｓ‐Ｌｅｕ‐Ａｒｇ‐Ｐｒｏ－ＮＨＣＨ2ＣＨ3（ＬＤ５
）の細胞傷害性をＭＭＴアッセイで測定した。このアッセイを用いて、ＬＤ５－ｍｖ－
ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥがＬＨＲＨ－Ｒを発現するＴＮＢＣ細胞の増殖に影響するか
どうかを調べた。ＴＮＢＣ細胞モデル、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１を用いて、ＭＭＡＥと比
較したＬＤ５－ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥの相対的細胞傷害性、およびＳＫＯＶ
－３（ＬＨＲＨ－Ｒ陰性対照）と同様に正常乳房細胞、ＨＭＥＣおよびＭＣＦ－１０Ａ
をスクリーニングした。細胞を各化合物と共に７２時間インキュベートし、比色ＭＴＴ
アッセイを用いて相対細胞生存率を測定した。ＬＤ５－ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡ
ＥおよびＭＭＡＥの増殖抑制作用は、正常乳房細胞、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１およびＳＫ
ＯＶ－３のＩＣ50（ｎＭ）として報告された（図４Ａ）。
正常乳房細胞（ＨＭＥＣおよびＭＣＦ‐１０Ａ）は、それぞれ０．１１ｎＭおよび０．
８３ｎＭでＭＭＡＥに感応した。しかし、ＬＤ５－ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥは
、正常の母乳細胞に対して有意な細胞傷害効果を示さなかった（ＩＣ50値＞１０００ｎ
Ｍ）。対照的に、ＴＮＢＣ細胞株（ＭＤＡ‐ＭＢ‐２３１）は、１．２６ｎＭのＩＣ50
値でＬＤ５‐ｍｃ‐ｖｃ‐ＰＡＢＣ‐ＭＭＡＥに対して有意な感度を示した。ＳＫＯＶ
－３細胞株はＩＣ50値０．０３ｎＭのＭＭＡＥに対する感度が高かったが、この細胞株
は、ＩＣ50値＞１０００ｎＭのＬＤ５－ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥに対して耐性
があった。
ＬＤ５－ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥの細胞傷害性を、全ての細胞についてＭＭＡ
Ｅと比較して評価した。ＬＤ５－ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥの効力は、正常乳房
細胞（ＨＭＥＣおよびＭＣＦ－１０Ａ）、ＴＮＢＣ細胞（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）およ
びＬＨＲＨ－Ｒ陰性対照（ＳＫＯＶ－３）の特定の濃度においてＭＭＡＥよりも有意に
低かった（図４Ｂ、４Ｃ、４Ｄおよび４Ｅ）。ＬＤ５と結合させた場合のＭＭＡＥの細
胞傷害性のこの低下は、細胞株における遊離ＭＭＡＥの単なる拡散と比較して、ＬＨＲ
Ｈ受容体を介したＬＨＲＨ取り込み経路の選択性を示す。
実施例７：ＬＤ５－ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥの細胞傷害性におけるＬＨＲＨ受
容体の役割
受容体結合競合アッセイを行い、細胞傷害性とＬＨＲＨ‐Ｒへの結合との関連を調べた
。ＴＮＢＣ細胞（ＭＤＡ‐ＭＢ‐２３１）を１００μＭのトリプトレリン（ＴＲＮ）で
２時間前処理してＬＨＲＨ‐Ｒをブロックした。ＬＤ５－ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭ
ＡＥ（ＬＭ）の有意な細胞傷害効果は、ＴＲＮによる前処置後に逆転した（図５Ａおよ
び５Ｂ）。ＭＴＴアッセイは、ＴＲＮによる前処理を通してＬＨＲＨ‐Ｒをブロックす
ることが、ＬＤ５‐ｍｃ‐ｖｃ‐ＰＡＢＣ‐ＭＭＡＥ処理細胞の細胞生存率を有意に増
加させることを示した。これは、ＬＨＲＨ－ＲがＬＤ５－ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭ
ＡＥの抗がん活性に重要な役割をしていることを示している（図５）。
実施例８：ＬＤ５－ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥ処理環境におけるＬＨＲＨ－Ｒと
ＬＨＲＨの相互作用
近接ライゲーションアッセイ（ＰＬＡ）を用いて、ＬＤ５‐ｍｃ‐ｖｃ‐ＰＡＢＣ‐Ｍ
ＭＡＥ処理細胞におけるＬＨＲＨ‐ＲとＬＨＲＨの相互作用を測定した。Ｄｕｏｌｉｎ
ｋ（登録商標）近接ライゲーションアッセイ（ＰＬＡ）は、内因性タンパク質、タンパ
ク質改変、およびタンパク質相互作用をその場で高い特異性および高い感度で検出する
ことを可能にする。タンパク質の標的は、改変されていない細胞および組織において単
一分子の分解能で容易に検出され、局在化することができる。典型的には、異なる種で
作製された２つの一次抗体を用いて、２つの独特なタンパク質標的を検出する。ＰＬＡ
試薬を、これらの細胞をＬＨＲＨ－ＲおよびＬＨＲＨに特異的な一次抗体とインキュベ
ートした後に、固定されたＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞に添加した。ＬＤ５－ｍｃ－ｖｃ
－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥで処理した細胞では、シグナルの局在から、タンパク質の相互作
用は細胞膜と同様に細胞内部位にあることが明らかになる（図６）。この定性的結果は
、ＭＤＡ‐ＭＢ‐２３１細胞によるＬＤ５‐ｍｃ‐ｖｃ‐ＰＡＢＣ‐ＭＭＡＥ取り込み
中のＬＨＲＨ‐Ｒとそのリガンドとの相互作用を確認した。
実施例９：ＴＮＢＣ細胞におけるＬＤ５－ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥのｉｎ ｖ
ｉｔｒｏ取り込み
ＬＨＲＨ‐Ｒを過剰発現するＴＮＢＣ細胞株（ＭＤＡ‐ＭＢ‐２３１）を用いて、ＴＮ
ＢＣ細胞によるＬＤ５‐ｍｃ‐ｖｃ‐ＰＡＢＣ‐ＭＭＡＥの取り込みを検討した。取り
込みを正常乳房細胞（ＬＨＲＨ‐Ｒ陰性対照）と比較した。ＬＤ５－ｍｃ－ｖｃ－ＰＡ
ＢＣ－ＭＭＡＥをＭＤＡ－ＭＤ－２３１正常乳房細胞と１８時間インキュベートし、共
焦点ＬＳＭを用いてコンジュゲートの細胞内取り込みをモニターした（図７Ａ）。
図７Ａに示すように、正常乳房細胞（ＭＣＦ－１０ＡおよびＨＭＥＣ）と比較して、Ｌ
ＨＲＨ－Ｒ陽性細胞（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）においてＬＤ５－ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ
－ＭＭＡＥの有意に高い取り込みが認められた。これは、ＬＨＲＨ－Ｒ陽性細胞と陰性
細胞におけるＬＤ５－ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥの細胞内取り込みの定量的比較
によって裏付けられた（図７Ｂ）。これらのデータは、ＴＮＢＣ細胞におけるＬＨＲＨ
‐Ｒを介した化合物の活性標的送達を支持する（ｐ＜０．０５）。
実施例１０：正常およびがん細胞のα－チューブリン重合に対するＬＤ５－ｍｃ－ｖｃ
－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥの影響
α‐チューブリン重合に対するＭＭＡＥの細胞内作用を、ＬＤ５（ＬＤ５‐ｍｃ‐ｖｃ
‐ＰＡＢＣ‐ＭＭＡＥ）と結合したＭＭＡＥで処理したＴＮＢＣ細胞（ＭＤＡ‐ＭＢ‐
２３１）と正常乳房細胞（ＭＣＦ‐１０ＡとＨＭＥＣ）におけるα‐チューブリン免疫
染色を用いて調べた。ＴＮＢＣ細胞および正常乳房細胞を、対照としてＰＢＳとともに
１μＭのＭＭＡＥおよびＬＤ５‐ｍｃ‐ｖｃ‐ＰＡＢＣ‐ＭＭＡＥと１８時間インキュ
ベートした後に固定した。α‐チューブリンは免疫染色で染色し、共焦点ＬＳＭで観察
した。図８Ａに示すように、ＭＭＡＥで処理されたＴＮＢＣ細胞および正常乳房細胞は
、ＰＢＳ対照と比較して、α－チューブリン形成の劇的な低下を示し、正常乳房細胞お
よびがん細胞（すなわち、ＴＮＢＣ細胞モデル）に対するその非選択的活性を示す。Ｐ
ＢＳおよびＬＤ５－ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥ（ＬＭ）で処理した正常乳房細胞
のα－チューブリンシグナルは、ＭＭＡＥ治療対応群よりも有意に高く（図８Ｂ）、細
胞生存の要因としてα－チューブリン重合に対する分子標的薬の影響が低いことが示さ
れた（図４）。
実施例１１：ＴＮＢＣ細胞によるＬＤ５－ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥの取り込み
に対するＬＨＲＨ－Ｒ遺伝子のサイレンシングの影響
ＬＤ５‐ｍｃ‐ｖｃ‐ＰＡＢＣ‐ＭＭＡＥの取り込みにおけるＬＨＲＨ‐Ｒの役割をさ
らに調べるために、ＬＨＲＨ‐Ｒ発現をＭＤＡ‐ＭＢ‐２３１（ＴＮＢＣ細胞モデル）
におけるそれらの遺伝子のサイレンシングによってブロックした。本研究はｓｉＲＮＡ
（ＲＮＡｉ－Ｍａｔｅトランスフェクション試薬とｓｉＲＮＡ、ＧＮＲＨＲ－ｈｏｍｏ
－２２４２、ＧＮＲＨＲ－ｈｏｍｏ－２７０１、スクランブルＲＮＡ、ＧｅｎｅＰｈａ
ｒｍａ社製）と蛍光標識陰性対照ｓｉＲＮＡ（ＦＡＭトランスフェクション効率対照は
ＧｅｎｅＰｈａｒｍａ社製）の同時トランスフェクションにより実施した。図９に示す
ように、サイレンシングは、陰性対照と比較して、トランスフェクトされたＭＤＡ－Ｍ
Ｂ－２３１細胞におけるＬＨＲＨ－Ｒ発現の８３％を超える減少をもたらす（図９、ｐ
＜０．０５）。ＬＤ５－ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥの取り込みは、ＬＨＲＨ－Ｒ
遺伝子発現をサイレンシングした後に有意に低下したことから、この構築物が過剰発現
されたＬＨＲＨ－Ｒを介してがん細胞に取り込まれるように積極的に標的化されている
ことが示された（図１０、ｐ＜０．０５）。
実施例１２：ＬＤ５－（ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ）－ＭＭＡＥのｉｎ ｖｉｔｒｏ代謝安
定性
ＬＤ５‐（ｍｃ‐ｖｃ‐ＰＡＢＣ）‐ＭＭＡＥの代謝安定性を、細胞培養培地（ｃ‐培
地）、ヒト及びマウス血しょうで調べた。遊離ＭＭＡＥと全体構築物、ＬＤ５‐（ｍｃ
‐ｖｃ‐ＰＡＢＣ）‐ＭＭＡＥから任意の分解種の存在の両方を検出するＬＣ／ＭＳ方
法を開発した。バリン‐シトルリン結合の安定性を評価するために、ＬＤ５‐（ｍｃ‐
ｖｃ‐ＰＡＢＣ）‐ＭＭＡＥを１μＭで３７℃で１０日間ｃ‐培地、ヒト及びマウス血
しょう中でインキュベートした。アリコートをあらかじめ決定した時間間隔（ｔ＝０、
１、２、４、７、１０日間）で採取し、遊離ＭＭＡＥの放出についてＬＣ／ＭＳにより
分析した。
ＬＤ５－（ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ）－ＭＭＡＥは試験期間中安定して推移し、１０日間
であったことが示された（図１１）。本研究により、１０日後にヒト血漿およびｃ‐培
地中でＭＭＡＥとして放出された薬物は全薬物の３％未満であることが明らかになった
。マウス血しょう中では１０日間後に全薬物の５％以下が放出された。さらに、同じ試
料の紫外線検知を含む定性的フルスキャンＬＣ／ＭＳ解析では、薬物または薬物－リン
カー分解産物として同定可能な他の分子種の存在は明らかにならなかった。
ＬＨＲＨＤ－（ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ）－ＭＭＡＥ（すなわち、ＬＤ－５－（ｍｃ－ｖ
ｃ－ＰＡＢＣ）－ＭＭＡＥ）上のデザインにおける高度に安定なペプチド誘導体および
細胞内リンカーの使用は、ヒトおよびマウスの血漿ならびに細胞培養培地において安定
したコンジュゲートをもたらした（実施例１２）。本薬はペプチドに安定に付着し、ヒ
ト血漿中で１０日間インキュベーションした後のＭＭＡＥの放出は３％程度に過ぎなか
ったが、ｉｎ ｖｉｔｒｏではＬＨＲＨ受容体を介して一旦細胞内に取り込まれたリソ
ソームプロテアーゼにより切断されたことが示された。これらの安定性データは、ブレ
ンツキシマブ・ベドチン（ｃＡＣ１０－ｖｃＭＭＡＥ）又はトラスツズマブ・エムタン
シン（Ｔ－ＤＭ１）等のＭＭＡＥを含む臨床におけるＡＤＣのデータに匹敵する（ＪＡ
．Ｆｒａｎｃｉｓｃｏｅｔａｌ．、Ｂｌｏｏｄ，２００３，１０２；Ｂ．Ｂｅｎｄｅｒ
ｅｔａｌ．、ＴｈｅＡＡＰＳＪｏｕｒｎａｌ，２０１４，１６）。これらの安定性デー
タに関するこれらのコンジュゲートは臨床試験で成功しており、現在市販されているが
、ゾプタレリンドキソルビシン（ＬＨＲＨ受容体を標的としたＰＤＣで臨床試験に到達
したＡＥＺＳ１０８）のｉｎ ｖｉｔｒｏ安定性に関する報告はない。このコンジュゲ
ートが第３相臨床試験で失敗した理由は、腫瘍部位に到達する以前の血漿中のドキソル
ビシンの安定性および放出の欠如であった。このことから、ＰＤＣは遊離ドキソルビシ
ンと同様の安全性プロファイルを有することになった。遊離型ドキソルビシンを上回る
毒性、効力ともに優越性は認められなかった。
実施例１３：ｉｎ ｖｉｖｏ最小耐容用量及び毒性試験
Ａ．第Ｉ相：ＭＴＤ単一用量
ＬＤ５‐（ｍｃ‐ｖｃ‐ＰＡＢＣ）‐ＭＭＡＥを３匹の雌ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス（２
３±３ｇ）の基に静注投与した。動物には３ｍｇ／ｋｇの初期用量を投与した。動物が
７２時間生存した場合は、次のコホートの用量を増量した。１匹以上の動物が死亡した
場合は、次のコホートの投与を減量した。試験は、全個体が上限値で生存した場合、ま
たは２～３回の投与レベルを試験した場合、もしくは上限値もしくは下限値に達した場
合に中止した。各用量レベルにおいて、最初の１５分間は急性毒性症状（死亡率、けい
れん、振戦、筋弛緩、鎮静等）の存在及び自律神経系への影響（下痢、流涎、流涙、血
管拡張、立毛等）が観察され、その後１及び２時間後に再度観察された。投与前と投与
後７２時間に体重を記録した。３日間の化合物投与後、動物を観察し、死亡率が毎日記
載された。肉眼的剖検は、組織採取を行わずに全動物について実施した。すべてのモニ
タリング時点（１５分、１および２時間）において、３および１０ｍｇ／ｋｇの静脈内
注射による重大な有害作用は認められなかった。死亡率および体重変化は認められず、
投与レベルの忍容性が示された（表２および３）。その後、以下のＭＴＤ反復投与試験
（第ＩＩ相）について、本薬１０ｍｇ／ｋｇの投与量が決定された。
［表２］マウスにおける最大耐容用量、自律神経徴候（第Ｉ相：死亡率）
Figure 2022530823000002

［表３］マウスにおける最大耐容用量、自律神経徴候（第Ｉ相：体重）
Figure 2022530823000003
Ｂ．第ＩＩ相：ＭＴＤ反復投与
ＬＤ－５－（ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ）－ＭＭＡＥ（１０ｍｇ／ｋｇ；第Ｉ相試験の成績
により決定）を、雌ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス３匹（２３±３ｇ）からなる基に１日目と
８日目に週１回静脈内投与した。１日目及び８日目の各投与後１及び２時間に、最初の
１５分間は急性中毒症状（死亡率、けいれん、振戦、筋弛緩、鎮静等）及び自律神経作
用（下痢、流涎、流涙、血管拡張、立毛等）の存在を観察した。体重を投与前、１、４
、８、１２および１５日目に記録した。動物を観察し、最初の化合物を１５日間投与し
た後、死亡率が毎日記載された。肉眼的剖検は、組織採取を行わずに全動物について実
施した。ＬＤ－５（ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ）－ＭＭＡＥを１日目と８日目（１５分、１
時間と２時間）に初回と２回目に投与した後、１０ｍｇ／ｋｇＩＶで著明な有害作用は
認められなかった。さらに、試験期間終了時にはすべての被験動物が生存していたこと
から、１日目と８日目の反復投与後に投与レベルが忍容されたことが示唆された（表３
と４）。両相とも肉眼剖検後に異常は認められなかった。
［表４］マウスにおける最大耐容用量、自律神経徴候－第２相死亡率
Figure 2022530823000004
［表５］マウスにおける最大耐容用量、自律神経徴候－第２相体重
Figure 2022530823000005
ＬＨＲＨＤ－（ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ）－ＭＭＡＥ（すなわちＬＤ－５－（ｍｃ－ｖｃ
－ＰＡＢＣ）－ＭＭＡＥ）のＭＴＤおよび毒性試験が雌ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスで実施
され、１０ｍｇ／ｋｇの投与を受けたマウスのいずれにも毒性は観察されなかった。し
たがって、この投与ではＭＴＤに達しなかった。ＭＭＡＥを有する対応するＡＤＣでは
、ＭＴＤはかなり低かった。例えば、マウスにおけるブレンツキシマブベドチンのＭＴ
Ｄは、ＬＨＲＨＤ－（ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ）－ＭＭＡＥの約７０ｍｇ／ｋｇに相当す
る３０～４０ｍｇ／ｋｇで達成された。ＬＨＲＨＤ‐（ｍｃ‐ｖｃ‐ＰＡＢＣ）‐ＭＭ
ＡＥの対応するＡＤＣと同等の選択性と安定性、および著しく低いＭＴＤを考慮すると
、このＰＤＣに対して優れた安全性プロファイルが予測される。現行ＡＤＣを上回るこ
のＰＤＣの他の利点は、生産コストが著しく低く、製造工程が単純であることである。

Claims (73)

  1. 以下の配列を含むＬＨＲＨペプチド－薬物コンジュゲート（ＬＨＲＨ－ＰＤＣ）または
    薬学的に許容可能な塩。
    Ｘ1－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｘ2－Ｘ3（Ｌ－Ｄ）－Ｘ4－Ｘ5－Ｐｒｏ－ＮＨＲ
    式中、
    Ｘ1はｐＧｌｕまたはＧｌｎであり；
    Ｘ2はＴｙｒ、ＰｈｅまたはＨｉｓであり；
    Ｘ3はＤ－ＬｙｓまたはＤ－Ｌｙｓ（Ａｈｘ）であり；
    Ｘ4はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、またはＭｅｔであり；
    Ｘ5はＡｒｇ、Ｇｌｎ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｐｈｅ、ＴｙｒまたはＬｙｓ
    であり；
    ＲはＣＨ2ＣＨ3またはＣＨ3であり；
    式中、
    Ｌはリンカーであり；
    Ｄは細胞傷害剤である。
  2. Ｘ1がＧｌｎであり、Ｘ3がＤ－Ｌｙｓであり、ＲがＣＨ2ＣＨ3である請求項１に記載の
    ＬＨＲＨ－ＰＤＣ。
  3. Ｘ1がｐＧｌｕであり、Ｘ3がＤ－Ｌｙｓであり、ＲがＣＨ2ＣＨ3である請求項１に記載
    のＬＨＲＨ－ＰＤＣ。
  4. Ｘ1がｐＧｌｕであり、Ｘ3がＤ－Ｌｙｓ（Ａｈｘ）であり、ＲがＣＨ2ＣＨ3である請求
    項１に記載のＬＨＲＨ－ＰＤＣ。
  5. Ｘ1がＧｌｎであり、Ｘ2がＴｙｒであり、Ｘ3がＤ－Ｌｙｓであり、Ｘ4がＬｅｕであり
    、Ｘ5がＡｒｇであり、ＲがＣＨ2ＣＨ3である請求項１に記載のＬＨＲＨ－ＰＤＣ。
  6. Ｘ1がｐＧｌｕであり、Ｘ2がＴｙｒであり、Ｘ3がＤ－Ｌｙｓであり、Ｘ4がＬｅｕであ
    り、Ｘ5がＡｒｇであり、ＲがＣＨ2ＣＨ3である請求項１に記載のＬＨＲＨ－ＰＤＣ。
  7. Ｘ1がｐＧｌｕであり、Ｘ2がＴｙｒであり、Ｘ3がＤ－Ｌｙｓ（Ａｈｘ）であり、Ｘ4が
    Ｌｅｕであり、Ｘ5がＡｒｇであり、ＲがＣＨ2ＣＨ3である請求項１に記載のＬＨＲＨ－
    ＰＤＣ。
  8. Ｘ1がＧｌｎである、請求項１に記載のＬＨＲＨ－ＰＤＣ。
  9. Ｘ1がｐＧｌｕである、請求項１に記載のＬＨＲＨ－ＰＤＣ。
  10. Ｘ2がＴｙｒである、請求項８または請求項９に記載のＬＨＲＨ－ＰＤＣ。
  11. Ｘ2がＰｈｅである、請求項８または請求項９に記載のＬＨＲＨ－ＰＤＣ。
  12. Ｘ2がＨｉｓである、請求項８または請求項９に記載のＬＨＲＨ－ＰＤＣ。
  13. Ｘ3がＤ－Ｌｙｓである、請求項８から１２のいずれか１項に記載のＬＨＲＨ－ＰＤＣ。
  14. Ｘ3がＤ－Ｌｙｓ（Ａｈｘ）である、請求項８から１２のいずれか１項に記載のＬＨＲＨ
    －ＰＤＣ。
  15. Ｘ4がＬｅｕである、請求項８から１４のいずれか１項に記載のＬＨＲＨ－ＰＤＣ。
  16. Ｘ4がＶａｌ、ＴｒｐまたはＭｅｔである、請求項８から１４のいずれか１項に記載のＬ
    ＨＲＨ－ＰＤＣ。
  17. Ｘ5がＡｒｇである、請求項８から１６のいずれか１項に記載のＬＨＲＨ－ＰＤＣ。
  18. Ｘ5がＧｌｎ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｐｈｅ、ＴｙｒまたはＬｙｓである、
    請求項８～１６のいずれか一項記載のＬＨＲＨ－ＰＤＣ。
  19. ＲがＣＨ2ＣＨ3である、請求項８から１８のいずれか１項に記載のＬＨＲＨ－ＰＤＣ。
  20. ＲがＣＨ3である、請求項８から１８のいずれか１項に記載のＬＨＲＨ－ＰＤＣ。
  21. リンカーが自己崩壊リンカーである、先の請求項のいずれか一項に記載のＬＨＲＨ－Ｐ
    ＤＣ。
  22. 自己崩壊リンカーがマレイミドカプロイルバリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルカ
    ルバモイル（ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ）である、請求項２１に記載のＬＨＲＨ－ＰＤＣ。
  23. 前記細胞傷害剤が、抗有糸分裂剤、アルキル化剤、抗代謝剤、トポイソメラーゼ阻害剤
    またはタンパク質キナーゼ阻害剤である、先の請求項のいずれか一項に記載のＬＨＲＨ
    －ＰＤＣ。
  24. 細胞傷害剤が、ビンカアルカロイド、クリプトフィシン、ボルテゾミブ、チオボルテゾ
    ミブ、ツブリシン、アミノプテリン、ラパマイシン、パクリタキセル、ドセタキセル、
    ダウノルビシン、エベロリムス、ａ－アマナチン、ベムカリン、ジデムニンＢ、ゲルダ
    ノマイシン、プルバラノールＡ、イスピネシブ、ブデソニド、ダサチニブ、エポチロン
    、メイタンシン、ドキソルビシン、カンプトテシン、メトトレキサート（ＭＴＸ）また
    はモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）である、前記請求項のいずれか一項に記載
    のＬＨＲＨ－ＰＤＣ。
  25. 細胞傷害剤がＭＭＡＥである、請求項１～２４のいずれか一項記載のＬＨＲＨ－ＰＤＣ
    。
  26. 以下の配列を含む抗増殖性ＬＨＲＨペプチド誘導体又はその薬学的に許容可能な塩。
    Ｘ1－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｘ2－Ｘ3－Ｘ4－Ｘ5－Ｐｒｏ－ＮＨＲ
    式中、
    Ｘ1はｐＧｌｕまたはＧｌｎであり；
    Ｘ2はＴｙｒ、ＰｈｅまたはＨｉｓであり；
    Ｘ3はＤ－ＬｙｓまたはＤ－Ｌｙｓ（Ａｈｘ）であり；
    Ｘ4はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、またはＭｅｔであり；
    Ｘ5はＡｒｇ、Ｇｌｎ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｐｈｅ、ＴｙｒまたはＬｙｓ
    である
    ＲはＣＨ2ＣＨ3またはＣＨ3である。
  27. Ｘ1がＧｌｎであり、Ｘ3がＤ－Ｌｙｓであり、ＲがＣＨ2ＣＨ3である、請求項２６に記
    載のＬＨＲＨペプチド誘導体。
  28. Ｘ1がｐＧｌｕであり、Ｘ3がＤ－Ｌｙｓであり、ＲがＣＨ2ＣＨ3である、請求項２６に
    記載のＬＨＲＨペプチド誘導体。
  29. Ｘ1がｐＧｌｕであり、Ｘ3がＤ－Ｌｙｓ（Ａｈｘ）であり、ＲがＣＨ2ＣＨ3である、請
    求項２６に記載のＬＨＲＨペプチド誘導体。
  30. Ｘ1がＧｌｎであり、Ｘ2がＴｙｒであり、Ｘ3がＤ－Ｌｙｓであり、Ｘ4がＬｅｕであり
    、Ｘ5がＡｒｇであり、ＲがＣＨ2ＣＨ3である、請求項２６に記載のＬＨＲＨペプチド誘
    導体。
  31. Ｘ1がｐＧｌｕであり、Ｘ2がＴｙｒであり、Ｘ3がＤ－Ｌｙｓであり、Ｘ4がＬｅｕであ
    り、Ｘ5がＡｒｇであり、ＲがＣＨ2ＣＨ3である、請求項２６に記載のＬＨＲＨペプチド
    誘導体。
  32. Ｘ1がｐＧｌｕであり、Ｘ2がＴｙｒであり、Ｘ3がＤ－Ｌｙｓ（Ａｈｘ）であり、Ｘ4が
    Ｌｅｕであり、Ｘ5がＡｒｇであり、ＲがＣＨ2ＣＨ3である、請求項２６に記載のＬＨＲ
    Ｈペプチド誘導体。
  33. Ｘ1がＧｌｎである、請求項２６記載のＬＨＲＨペプチド誘導体。
  34. Ｘ1がｐＧｌｕである、請求項２６記載のＬＨＲＨペプチド誘導体。
  35. Ｘ2がＴｙｒである、請求項３３または請求項３４に記載のＬＨＲＨペプチド誘導体。
  36. Ｘ2がＰｈｅである、請求項３３または請求項３４に記載のＬＨＲＨペプチド誘導体。
  37. Ｘ2がＨｉｓである、請求項３３または請求項３４に記載のＬＨＲＨペプチド誘導体。
  38. Ｘ3がＤ－Ｌｙｓである、請求項３３～３７のいずれか一項記載のＬＨＲＨペプチド誘導
    体。
  39. Ｘ3がＤ－Ｌｙｓ（Ａｈｘ）である、請求項３３から３７のいずれか一項記載のＬＨＲＨ
    ペプチド誘導体。
  40. Ｘ4がＬｅｕである、請求項３３～３９のいずれか一項に記載のＬＨＲＨペプチド誘導体
    。
  41. Ｘ4がＶａｌ、ＴｒｐまたはＭｅｔである、請求項３３から３９のいずれか一項に記載の
    ＬＨＲＨペプチド誘導体。
  42. Ｘ5がＡｒｇである、請求項３３～４１のいずれか一項に記載のＬＨＲＨペプチド誘導体
    。
  43. Ｘ5が、Ｇｌｎ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｐｈｅ、ＴｙｒまたはＬｙｓからな
    る群より選択される、請求項３３から４１のいずれか一項に記載のＬＨＲＨペプチド誘
    導体。
  44. ＲがＣＨ2ＣＨ3である、請求項３３～４３のいずれか一項に記載のＬＨＲＨペプチド誘
    導体。
  45. ＲがＣＨ3である、請求項３３～４３のいずれか一項に記載のＬＨＲＨペプチド誘導体。
  46. 配列を含むＬＨＲＨペプチド誘導体：Ｇｌｎ－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｄ－
    Ｌｙｓ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－ＮＨＣＨ2ＣＨ3又はそれらの薬学的に許容可能な塩
    。
  47. 配列を含むＬＨＲＨペプチド誘導体：ｐＧｌｕ－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｄ
    －Ｌｙｓ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－ＮＨＣＨ2ＣＨ3又はそれらの薬学的に許容可能な
    塩。
  48. 配列を含むＬＨＲＨペプチド誘導体：ｐＧｌｕ－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｄ
    －Ｌｙｓ（Ａｈｘ）－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－ＮＨＣＨ2ＣＨ3又はそれらの薬学的に
    許容可能な塩。
  49. 以下の配列を含むＬＨＲＨペプチド誘導体又はその薬学的に許容可能な塩。
    Ｘ1－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｘ2－Ｘ3－Ｘ4－Ｘ5－Ｐｒｏ－ＮＨＲ
    式中、
    Ｘ1はＧｌｎであり；
    Ｘ2はＴｙｒ、ＰｈｅまたはＨｉｓであり；
    Ｘ3はＤ－ＬｙｓまたはＤ－Ｌｙｓ（Ａｈｘ）であり；
    Ｘ4はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、またはＭｅｔであり；
    Ｘ5はＡｒｇ、Ｇｌｎ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｐｈｅ、ＴｙｒまたはＬｙｓ
    であり；および
    ＲはＣＨ2ＣＨ3またはＣＨ3である。
  50. 以下の配列を含むＬＨＲＨペプチド誘導体又はその薬学的に許容可能な塩。
    Ｘ1－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｘ2－Ｘ3－Ｘ4－Ｘ5－Ｐｒｏ－ＮＨＲ
    式中、
    Ｘ1はｐＧｌｕであり；
    Ｘ2はＴｙｒ、ＰｈｅまたはＨｉｓであり；
    Ｘ3はＤ－ＬｙｓまたはＤ－Ｌｙｓ（Ａｈｘ）であり；
    Ｘ4はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、またはＭｅｔであり；
    Ｘ5はＡｒｇ、Ｇｌｎ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｐｈｅ、ＴｙｒまたはＬｙｓ
    であり；および
    ＲはＣＨ2ＣＨ3またはＣＨ3である。
  51. Ｄ－ＬｙｓおよびＲがＣＨ2ＣＨ3である、請求項４９または請求項５０に記載のＬＨＲ
    Ｈペプチド誘導体。
  52. Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｈｘ）およびＲがＣＨ2ＣＨ3である、請求項４９または請求項５０に記
    載のＬＨＲＨペプチド誘導体。
  53. Ｘ2がＴｙｒであり、Ｘ3がＤ－Ｌｙｓであり、Ｘ4がＬｅｕであり、Ｘ5がＡｒｇであり
    、ＲがＣＨ2ＣＨ3である、請求項４９または請求項５０に記載のＬＨＲＨペプチド誘導
    体。
  54. Ｘ2がＴｙｒであり、Ｘ3がＤ－Ｌｙｓ（Ａｈｘ）であり、Ｘ4がＬｅｕであり、Ｘ5がＡ
    ｒｇであり、ＲがＣＨ2ＣＨ3である、請求項４９または請求項５０に記載のＬＨＲＨペ
    プチド誘導体。
  55. ＬＨＲＨペプチド誘導体が自己崩壊リンカーを介して細胞傷害剤に結合される、請求項
    ２６～５４のいずれか一項に記載のＬＨＲＨペプチド誘導体を含むＬＨＲＨ－ＰＤＣ。
  56. 前記細胞傷害剤がＭＭＡＥである、請求項５５に記載のＬＨＲＨ－ＰＤＣ。
  57. 自己崩壊リンカーがｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣである、請求項５５または請求項６６に記載
    のＬＨＲＨ－ＰＤＣ。
  58. 配列：Ｇｌｎ－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｐｒ
    ｏ－ＮＨＣＨ2ＣＨ3を含むＬＨＲＨペプチド誘導体を含むＬＨＲＨ－ＰＤＣまたはその
    薬学的に許容可能な塩であって、ＬＨＲＨペプチド誘導体はｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣを介
    してＭＭＡＥに結合される、ＬＨＲＨ－ＰＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩。
  59. 配列：ｐＧｌｕ－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｐ
    ｒｏ－ＮＨＣＨ2ＣＨ3を含むＬＨＲＨペプチド誘導体を含むＬＨＲＨ－ＰＤＣまたはそ
    の薬学的に許容可能な塩であって、ここで、ＬＨＲＨペプチド誘導体はｍｃ－ｖｃ－Ｐ
    ＡＢＣを介してＭＭＡＥに結合される、ＬＨＲＨ－ＰＤＣまたはその薬学的に許容可能
    な塩。
  60. 配列：ｐＧｌｕ－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（Ａｈｘ）－Ｌｅｕ－
    Ａｒｇ－Ｐｒｏ－ＮＨＣＨ2ＣＨ3を含むＬＨＲＨペプチド誘導体を含むＬＨＲＨ－ＰＤ
    Ｃまたはその薬学的に許容可能な塩であって、ここで、ＬＨＲＨペプチド誘導体はｍｃ
    －ｖｃ－ＰＡＢＣを介してＭＭＡＥに結合される、ＬＨＲＨ－ＰＤＣまたはその薬学的
    に許容可能な塩。
  61. 請求項１～２５または請求項５５～６０のいずれか１つのＬＨＲＨ－ＰＤＣ、またはそ
    の薬学的に許容可能な塩、または請求項２６～５４のいずれか１つのＬＨＲＨペプチド
    、またはその薬学的に許容可能な塩、および任意に少なくとも１つの薬学的に許容可能
    な賦形剤を含む医薬組成物。
  62. 対象に、請求項１～２５または請求項５５～６０のいずれか一項に記載のＬＨＲＨ－Ｐ
    ＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩、請求項２６～５４のいずれか一項に記載のＬＨ
    ＲＨペプチド誘導体もしくはその薬学的に許容可能な塩、または請求項６１に記載の医
    薬組成物を投与することを含み、対象がＬＨＲＨ受容体発現がんを有する、がんを治療
    する方法。
  63. 前記ＬＨＲＨ受容体発現がんが、乳がん、前立腺がん、大腸がん、卵巣がん、膵臓がん
    または子宮内膜がんである、請求項６２記載の方法。
  64. ＬＨＲＨ受容体発現がんがトリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）である、請求項６２
    または請求項６３記載の方法。
  65. 対象において腫瘍を発現するＬＨＲＨ受容体の細胞増殖および／または増殖を停止また
    は遅延させる方法であって、対象に請求項１～２５または請求項５５～６０のいずれか
    一項のＬＨＲＨ－ＰＤＣまたはその薬学的に許容可能な塩、請求項２６～５４のいずれ
    か一項に記載のＬＨＲＨペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩、または請求
    項６１に記載の医薬組成物に投与することを含む方法。
  66. 対象においてホルモン感受性および／または難治性乳がんを治療する方法であって、対
    象に請求項１～２５または請求項５５～６０のいずれか一項のＬＨＲＨ－ＰＤＣまたは
    その薬学的に許容可能な塩、請求項２６～５４のいずれか一項に記載のＬＨＲＨペプチ
    ド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩、または請求項６１に記載の医薬組成物を投
    与することを含む方法。
  67. がんがＬＨＲＨ受容体発現がんである、がんを治療するための医薬の製造における、請
    求項１～２５または請求項５５～６０のいずれか一項に記載のＬＨＲＨ－ＰＤＣまたは
    その薬学的に許容可能な塩、請求項２６～５４のいずれか一項に記載のＬＨＲＨペプチ
    ド誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩、または請求項６１に記載の医薬組成物の
    使用。
  68. 腫瘍を発現するＬＨＲＨ受容体の細胞増殖および／または増殖を停止または遅延させる
    ための医薬の製造における、請求項１～２５または請求項５５～６０のいずれか一項に
    記載のＬＨＲＨ－ＰＤＣ、またはその薬学的に許容可能な塩、または請求項２６～５４
    のいずれか一項に記載のＬＨＲＨペプチド誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩、
    または請求項６１に記載の医薬組成物の使用。
  69. ホルモン感受性および／または難治性乳がんを治療するための医薬の製造における、請
    求項１～２５または請求項５５～６０のいずれか一項に記載のＬＨＲＨ－ＰＤＣ、また
    はその薬学的に許容可能な塩、または請求項２６～５４のいずれか一項に記載のＬＨＲ
    Ｈペプチド誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩、または請求項６１に記載の医薬
    組成物の使用。
  70. トリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）を治療するための医薬の製造における、請求項
    １～２５または請求項５５～６０のいずれか一項に記載のＬＨＲＨ－ＰＤＣ、またはそ
    の薬学的に許容可能な塩、または請求項２６～５４のいずれか一項に記載のＬＨＲＨペ
    プチド誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩、または請求項６１に記載の医薬組成
    物の使用。
  71. ＬＨＲＨ発現がんを治療する方法に用いるための、請求項１～２５または請求項５５～
    ６０のいずれか一項に記載のＬＨＲＨ－ＰＤＣ、またはその薬学的に許容可能な塩、請
    求項２６～５４のいずれか一項に記載のＬＨＲＨペプチド誘導体、またはその薬学的に
    許容可能な塩、または請求項６１に記載の医薬組成物。
  72. がんがトリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）である、ＬＨＲＨ発現がんの治療法に使
    用するための、請求項１～２５または請求項５５～６０のいずれか一項に記載のＬＨＲ
    Ｈ－ＰＤＣもしくはその薬学的に許容可能な塩、請求項２６～５４のいずれか一項に記
    載のＬＨＲＨペプチド誘導体もしくはその薬学的に許容可能な塩、または請求項６１に
    記載の医薬組成物。
  73. 請求項７２もしくは請求項７３に記載の方法に使用するための、ＬＨＲＨ－ＰＤＣもし
    くはその薬学的に許容可能な塩、ＬＨＲＨペプチド誘導体もしくはその薬学的に許容可
    能な塩、またはその医薬組成物であって、１以上の追加の細胞傷害剤とともに投与され
    る、ＬＨＲＨ－ＰＤＣもしくはその薬学的に許容可能な塩、ＬＨＲＨペプチド誘導体も
    しくはその薬学的に許容可能な塩、または医薬組成物。
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