JP2022526408A - 細胞免疫療法を増強するための方法 - Google Patents

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キャシー ケー． チョウ，
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Abstract

提供されるのは、（ｉ）ＣＡＲ Ｔ細胞を含む養子細胞免疫療法組成物を個人に投与することと、（ｉｉ）例えば長時間作用型インターロイキン－１５受容体作動薬などのインターロイキン－１５受容体作動薬を個人に投与することによる、癌を有する個人の治療を対象とする方法及び組成物である。

Description

関連出願の相互参照
本願は、米国特許法第１１９条（ｅ）のもと、２０１９年４月５日に出願された米国仮特許出願第６２／８３０，２１２号明細書、２０１９年６月１４日に出願された米国仮特許出願第６２／８６１，８５８号明細書、２０１９年９月１０日に出願された米国仮特許出願第６２／８９８，４７３号明細書、及び２０１９年１２月６日に出願された米国仮特許出願第６２／９４４，９５５号明細書の優先権の利益を主張するものであり、これらの仮特許出願の内容は参照により本明細書にそれぞれ援用される。
本願は、（特に）免疫療法の分野に関し、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）改変Ｔ細胞とインターロイキン－１５受容体作動薬とを個人に投与することによる、癌などの状態を有する個人の治療を含む。
新規治療法は、癌治療改善のために継続的に開発されている。癌治療の最も有望な領域の１つは、癌免疫学（即ち癌免疫療法）である。癌免疫療法は、癌と戦うための患者自身の免疫系を誘導するために免疫反応を調整するように設計された多様な一連の治療ストラテジーを指す。現在の免疫療法的アプローチの中でも、（ＡＣＴとも呼ばれる）養子細胞移植療法は、ある種のタイプの癌患者を治療することにおいて有望であることが示されてきた。養子細胞療法は、単純なワクチン接種により達成され得るよりも多数の腫瘍反応性エフェクターＴ細胞を得るための腫瘍特異的なリンパ球の単離及びエクスビボ増殖を含む。患者の免疫系に腫瘍細胞の殺傷を開始させるために癌患者に腫瘍特異的なＴ細胞を点滴する。養子細胞移植は、特に転移性黒色腫において有効な臨床転帰を示している（Ｄｕｄｌｅｙ，Ｍ．Ｅ．，Ｊ．Ｒ．Ｗｕｎｄｅｒｌｉｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２３（１０）：２３４６－２３５７（２００５）；Ｄｕｄｌｅｙ，Ｍ．Ｅ．，Ｊ．Ｃ．Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２６（３２）：５２３３－５２３９（２００８））。養子細胞移植は、養子Ｔ細胞療法で一般的であるように自家性であってもよいし、又は同種異系であってもよい。
養子Ｔ細胞療法の一形態は、ＣＡＲ Ｔ細胞療法（キメラ抗原受容体改変Ｔ細胞療法）である。ＣＡＲは、リンパ球の特異性及び機能を再プログラムすることができる種類の合成受容体である（Ｓａｄｅｌａｉｎ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，５４５，２５ Ｍａｙ ２０１７，ｐ．４２３－４３１）。ＣＡＲ Ｔ細胞療法は、Ｔ細胞の特異性を、腫瘍細胞表面上に発現される標的腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に対して方向付け直す、人工受容体を発現するように形質導入された、エクスビボで遺伝子操作されたＴ細胞を使用する（Ｊｕｎｅ，Ｃ．Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ ２０１５；７（２８０）：２８０ ｐｓ７）。特異的な主要組織適合複合体（ＭＨＣ）という観点からその同族の抗原を認識する、天然に存在するＴ細胞及びＴ細胞受容体操作されたＴ細胞とは異なり、ＣＡＲ Ｔ細胞による抗原認識は、ＭＨＣ非依存性であり、それによって、この免疫療法の細胞ベースの様式の適応性を拡大させる。第一世代のＣＡＲ Ｔ細胞は、モノクローナル抗体の単鎖可変領域（ｓｃＦｖ）、Ｔ細胞受容体膜貫通ドメイン、及びＣＤ３ゼータ（ＣＤ３ζ）鎖の細胞内シグナル伝達ドメインを含んでいた。後の反復は、１つ以上の共刺激ドメイン、及び／又は制御可能なオン－オフスイッチも利用していた。ＣＡＲ Ｔ細胞療法は、改良された特異性及び安全性プロフィールを有する遺伝子操作されたＴ細胞を提供するために、時間と共に進歩してきた。
ＣＡＲ Ｔ細胞に基づく治療法は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫を治療するために米国において承認されているが、すべての患者がＣＡＲ Ｔ細胞に応答するとは限らず、また、応答の持続性は、限られたままである。ＣＡＲ Ｔ細胞療法についてのさらなる課題は、移植された細胞の不十分な生存である。再発又は難治性の大細胞型Ｂ細胞リンパ腫では、ほぼ６０％の患者が、再発する又は失敗して進行し、失敗後の予後は悪い（Ｎａｉｒ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｅｓｔ Ｐｒａｃｔｉｃｅ＆Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ ３１（２０１８）２９３－２９８）。成功裏のＣＡＲ Ｔ細胞療法の転帰、すなわち、６か月での完全寛解率を伴う好都合な持続性の応答は、ＣＡＲ Ｔ細胞の長期の残存性に、少なくともある程度依存する。リンパ腫を有する患者を治療することにおけるＣＡＲ Ｔ細胞療法の第ＩＩ相試験についての臨床転帰は、治療に最初に応答した多くの患者について、顕著な有効性を報告しているが、応答の持続性は、限られたままである（Ｓｈａｈ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，９（Ｍａｒｃｈ ２０１９）Ａｒｔ．１４６）。さらに、ＣＡＲ Ｔ細胞療法後に報告されている急性毒性には、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）及び神経毒性（ＣＡＲ関連の脳症症候群と称される）が含まれる（Ｎｅｅｌａｐｕ，Ｓ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２０１８；１５（１０：４７－６２）。他のそれほど頻度は高くないが観察される有害副作用には、血球貪食性リンパ組織球症（ＨＬＨ）／マクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ）、アナフィラキシー及び腫瘍崩壊症候群が含まれる。
有効なＣＡＲ Ｔ細胞に基づく治療法を開発するのに、今までかなりの努力を費やしてきたが、現在の治療法の欠点の１つ以上に対処する、新規の且つより有効な免疫療法ＣＡＲ Ｔ細胞戦略及び関連する治療レジメンを提供する必要性が、依然として存在する。
Ｄｕｄｌｅｙ，Ｍ．Ｅ．，Ｊ．Ｒ．Ｗｕｎｄｅｒｌｉｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２３（１０）：２３４６－２３５７（２００５） Ｄｕｄｌｅｙ，Ｍ．Ｅ．，Ｊ．Ｃ．Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２６（３２）：５２３３－５２３９（２００８） Ｓａｄｅｌａｉｎ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，５４５，２５ Ｍａｙ ２０１７，ｐ．４２３－４３１ Ｊｕｎｅ，Ｃ．Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ ２０１５；７（２８０）：２８０ ｐｓ７ Ｓｈａｈ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，９（Ｍａｒｃｈ ２０１９）Ａｒｔ．１４６ Ｎｅｅｌａｐｕ，Ｓ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２０１８；１５（１０：４７－６２）
したがって、本開示は、他の利点も有するが、中でも特に、より優れた残存性及び改良された有効性（以下により詳細に説明されることとなる）を有する、新規の且つ効率的なＣＡＲ Ｔ細胞に基づく免疫療法、例えばＣＡＲ Ｔ細胞集団を腫瘍を殺す形質に誘導する免疫療法を提供することによって、これらの欠点及び他の必要性に対処することに努める。
第１の態様では、本明細書で提供されるのは、本明細書により詳細に記載されることとなる、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬の投与と組み合わせた、癌を有する対象への養子細胞移植を含む方法である。本開示は、いずれかの順序で逐次的に投与される、又は実質的に同時に投与される、養子細胞療法の１つ以上のサイクル（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞の注入によるもの）と、本明細書に記載した通りの長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬の投与とを含む組み合わせ治療レジメンが、いずれかの単一の免疫療法手法単独よりも増強される、好ましくは著しく増強される程度に、ある種の対象における癌を治療することにおいて特に有効であり得る、及び／又は移植された細胞の活性及び／又は数を増大、増強、又は延長する、又は癌細胞に対する測定可能な有益な応答（例えば、該当する場合、安定化、退縮、縮小、壊死など）をもたらすことができるという認識に、少なくともある程度起因する。
第２の態様では、本明細書で提供されるのは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ Ｔ細胞）を発現するように改変されているＴ細胞を含む養子細胞免疫療法組成物を対象に投与することと；長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬を対象に投与することとを含む、癌を有する対象の治療のための組み合わせ免疫療法である。
第３の態様では、提供されるのは、癌を有する対象を治療するための、養子細胞療法、例えばＣＡＲ Ｔ細胞療法の治療有効性を向上させる方法であって、キメラ抗原受容体を発現するように改変されているＴ細胞を含む養子細胞免疫療法組成物を癌を有する対象に提供することと；長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬を対象に投与する（ここでは、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬の投与が、養子細胞療法に対する対象の応答を向上させるのに有効である）こととを含む方法である。
以下の実施形態は、上に記載した態様のそれぞれに等しく適用されることが意図され、また、該当する場合、他に指示されない限り、単独と組み合わせの両方を考慮するべきである。
いくつかの実施形態では、養子細胞移植は、ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体を発現するように改変されているＴ細胞を含む養子細胞免疫療法組成物を投与することを含む。
１つ以上のさらなる実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を優先的に刺激する及び増殖させるのに有効である。さらに１つ以上の追加の実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、例えば抑制性の制御性Ｔ細胞（Ｔ ｒｅｇ）を実質的に誘発せずに、ＣＤ８＋Ｔ細胞生存及びメモリー形成を補助する。さらにいくつかのさらなる実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、ＩＬ－１５受容体アルファ特異性を有する。いくつかのさらなる実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、前述の特徴、すなわち、（ｉ）ＮＫ細胞を優先的に刺激する及び増殖させるのに有効である、（ｉｉ）例えば抑制性の制御性Ｔ細胞（Ｔ ｒｅｇ）を実質的に誘発せずに、ＣＤ８＋Ｔ細胞生存及びメモリー形成を補助する、並びに（ｉｉｉ）ＩＬ－１５受容体アルファ特異性を有することのうちの１つ以上を有する。
いくつかのさらなる実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、構造：
Figure 2022526408000001
 （式中、ＩＬ－１５は、インターロイキン－１５部分であり、（ｎ）は、約１５０～約３，０００の整数であり、～ＮＨ～は、ＩＬ－１５部分のアミノ基を表す）
を有する。
式（Ｉ）の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬に関連する１つ以上の実施形態では、（ｎ）は、約７９５～約１０６８の範囲である。いくつかの追加の実施形態では、（ｎ）は、約８４０～約１０２３の範囲である。１つ以上の特定の実施形態では、（ｎ）は、平均すると、約９０７又は約９０９の値を有する。
明確性の目的で、投与すること（ここでは、用語「投与すること」は、養子細胞免疫療法組成物又は長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬の送達を指す場合に使用される）の順序に関して、養子細胞と長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、同時に又は連続的に、また、いかなる順序でも投与することができる。さらに、組み合わせのいずれかの構成要素の治療は、単一サイクルの治療法を含むこともできるし、複数サイクルを含むこともできる。すなわち、例えばＣＤ１９指向性ＣＡＲ Ｔ細胞などのキメラ抗原受容体を発現するように改変されているＴ細胞を含む養子細胞免疫療法組成物の投与と、長時間作用型ＩＬ－１５作動薬の投与とを含む治療法の最初のサイクルの後、追加のラウンドの治療法は、養子細胞移植、例えば、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬の投与と組み合わせたＣＡＲ Ｔ細胞の投与、又は養子細胞療法、例えば、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬の投与を伴わないＣＡＲ Ｔ細胞療法、若しくは養子細胞移植（例えば、ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞などのＣＡＲ Ｔ細胞の投与）を伴わない長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬の投与を含むことができる。
１つ以上の実施形態では、対象は、ヒト対象である。
１つ以上の非限定的な実施形態では、癌は、血液癌などの液状癌、例えば再発又は難治性の悪性腫瘍である。
１つ以上の関連する非限定的な実施形態では、癌は、リンパ腫又は白血病である。１つ以上の関連する実施形態では、癌は、ホジキン及び非ホジキンリンパ腫から選択される。
いくつかの追加の非限定的な実施形態では、癌は、Ｂ細胞悪性腫瘍である。いくつかのさらなる実施形態では、癌は、Ｂ細胞リンパ腫である。
さらにいくつかのさらなる実施形態では、癌は、多発性骨髄腫である。
１つ以上の代替実施形態では、癌は、固形癌である。
本明細書で提供される方法のいくつかのさらなる実施形態では、この方法は、養子細胞免疫療法組成物の投与又は長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬単独の投与に従って投与が実施される場合に認められる治療に対する応答よりも増強される、治療に対する有益な応答をもたらす。
前述のものに関連するいくつかの実施形態では、治療に対する有益な応答は、好適な動物モデル、例えばインビボ異種移植（ｘｅｎｏｇｅｎｅｔｉｃ）Ｂ細胞リンパ腫モデルなどに基づくものである。
追加の態様及び実施形態を、以下の説明及び特許請求の範囲において説明する。
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）からの例示的な組換え型ヒトＩＬ－１５のアミノ酸配列（配列番号１）；大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）内での翻訳の開始のために、配列の最初にメチオニンを含む、例示的な組換え型ヒトＩＬ－１５（配列番号２）、すなわち、１２．９ｋＤａの分子量を有する、１１５個のアミノ酸を含有する単一の非グリコシル化ポリペプチド鎖；及び例示的な前駆体型のＩＬ－１５（配列番号３）を提供する。 実施例に記載した通りに、健康なドナーから単離されたＣＤ４及びＣＤ８ Ｔ細胞を形質導入するために使用される、好適なＣＤ１９ ＣＡＲレンチウイルスコンストラクトの例示である。 フローサイトメトリーによって測定される場合の、実施例２にさらに記載される、ヒトＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞によるＩＬ－１５Ｒαの発現を示す。ＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞による発現を、図３Ａ（実線）に示し；ＣＤ４ ＣＡＲ Ｔ細胞によるＩＬ－１５Ｒα発現を、図３Ｂ（実線）に示す。どちらの図も、ＦＭＯ対照（灰色塗りつぶし）、及びアイソタイプ対照（破線）を含む。 フローサイトメトリーによって決定される場合の、実施例２にさらに記載される通りの、異なる濃度のＭＰＢＡ－ＩＬ１５（●）又はＩＬ－１５（■）での２０分間の刺激後の、濃度（ｎｇ／ｍＬ）の対数に対する、ＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞（図３Ｃ）又はＣＤ４ ＣＡＲ Ｔ細胞（図３Ｄ）についてのＳＴＡＴ５のリン酸化（パーセント）を示すグラフである。 フローサイトメトリーによって決定される場合の、実施例２にさらに記載される通りの、ＣＦＳＥで標識し、種々の濃度のＭＰＢＡ－ＩＬ１５（●）又はＩＬ－１５（■）と共に２０分間インキュベートしたＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞（図３Ｅ）及びＣＤ４ ＣＡＲ Ｔ細胞（図３Ｆ）の増殖（分裂（％））を示すグラフである。 （図４Ａ）ＣＡＲ Ｔ細胞単独（■）で、並びに異なる投薬量のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（ＭＰＢＡ－ＩＬ１５）：０．０３０ｍｇ／ｋｇ（緑色◇）、０．１０ｍｇ／ｋｇ（紫色◇）、及び０．３０ｍｇ／ｋｇ（▼）と組み合わせて治療される腫瘍を有するマウスについての、実施例３に記載される通りの、インビボ異種移植（ｘｅｎｏｇｅｎｅｉｃ）Ｂ細胞リンパ腫モデルにおいて評価される場合の、時間（ＣＡＲ Ｔ細胞注入後の日数）に対する平均腫瘍輝度（ｐ／ｓ／ｃｍ２／ｓｒ）のグラフである。ＰＢＳ対照は、円（●）として示される。 （図４Ｂ）実施例３（研究Ａ）に記載される通りの、前臨床マウスリンパ腫モデルにおけるＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞組み合わせ免疫療法の有効性を評価するための、実例となる治療プロトコルを示す。 ＣＡＲ Ｔ細胞（Ｄ０）を注入され、それに続いてＭＰＢＡ－ＩＬ１５（０．３ｍｇ／ｋｇ）の投与（－１日目、７日目、又は１４日目に開始し、その後毎週）を受けた、リンパ腫細胞を有するマウスの血液中の、ＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞（図５Ａ）又はＣＤ４ ＣＡＲ Ｔ細胞（図５Ｂ）の数を示すグラフである。マウスを、毎週採血し、ＣＤ８及びＣＤ４ ＣＡＲ Ｔ細胞を、フローサイトメトリーによって特定した。プロットは、ＣＡＲ Ｔ細胞投与後の日数に対する細胞数／μｌ（血液）を提供する。研究群には、以下が含まれた：ＭＰＢＡ－ＩＬ１５のみを注入された腫瘍を有するマウス（●）、ＣＡＲ Ｔ細胞のみを注射された腫瘍を有するマウス（■）、－１日目（▲）、７日目（▼）、又は１４日目（◇）に開始するＭＰＢＡ－ＩＬ１５と組み合わせてＣＡＲ Ｔ細胞で治療された腫瘍を有するマウス（実施例３に記載された通り、ＣＡＲ Ｔ細胞注入後最大２８日間）。 実施例３に記載される通りの、ＭＰＢＡ－ＩＬ１５のみ（●）、ＣＡＲ Ｔ細胞のみ（■）、又は－１日目（▲）、７日目（▼）、又は１４日目（◇）に開始し、その後毎週のＭＰＢＡ－ＩＬ１５と組み合わせたＣＡＲ Ｔ細胞の注入の後の、腫瘍を有するマウスにおけるインビボ異種移植Ｂ細胞リンパ腫モデルにおいて評価される場合の、時間（ＣＡＲ Ｔ細胞注入後の日数）に対する平均腫瘍輝度（ｐ／ｓ／ｃｍ２／ｓｒ）を提供することによって腫瘍量（ｔｕｍｏｒ ｂｕｒｄｅｎ）を評価するグラフである。 実施例３に記載される通りの、インビボ異種移植Ｂ細胞リンパ腫モデルにおいて評価される場合の、ＣＡＲ Ｔ細胞のみ（青色線）、ＭＰＢＡ－ＩＬ１５のみ（黒色線）、又はＣＡＲ Ｔ細胞の注入（０日目）の後の－１日目（紫色線）、７日目（赤色線）、又は１４日目（緑色線）に開始するＭＰＢＡ－ＩＬ１５（０．３ｍｇ／ｋｇ）と組み合わせたＣＡＲ Ｔ細胞で治療された、腫瘍を有するマウスの生存率（パーセント）を示すグラフである。 実施例３（研究Ｂ）に記載される通りの、前臨床マウスリンパ腫モデルにおけるＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞組み合わせ免疫療法の有効性を評価するための、実例となる治療プロトコルを示す。 実施例３に記載される通りの、Ｄ０にＣＡＲ Ｔ細胞を注入された（ＣＡＲ Ｔ細胞単独療法）、又はＣＡＲ Ｔ細胞の注入に加えてＤ７に開始するＭＰＢＡ－ＩＬ１５の毎週の注射を受けている、Ｒａｊｉリンパ腫細胞を有するＮＳＧマウスの骨髄からのＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞の、それぞれ、ＣＡＲ Ｔ細胞の総数、Ｋｉ６７発現、並びにＰＤ１及びＴＩＭ３発現のプロットである。図８Ａは、ＣＡＲ Ｔ細胞のみ（●）の注入後の腫瘍を有するマウスの骨髄における、及びＭＰＢＡ－ＩＬ１５と組み合わせて（■）ＣＡＲ Ｔ細胞療法を受けた腫瘍を有するマウスにおける、ＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞の総数を示すグラフである。図８Ｂは、ＣＡＲ Ｔ細胞単独療法（●）後の腫瘍を有するマウスの骨髄からの、及びＭＰＢＡ－ＩＬ１５と組み合わせて（■）ＣＡＲ Ｔ細胞を受けた腫瘍を有するマウスからの、ＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞におけるＫｉ６７発現（Ｋｉ６７＋（％））を示すグラフである。図８Ｃは、ＣＡＲ Ｔ細胞の注入のみ（●）（単独療法）後の腫瘍を有するマウスの骨髄からの、及びＭＰＢＡ－ＩＬ１５と組み合わせて（■）ＣＡＲ Ｔ細胞療法を受けた腫瘍を有するマウスからの、ＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞におけるＰＤ１及びＴＩＭ３発現（ＰＤ１＋ＴＩＭ３＋（％））を示すグラフである。 同上。 実施例３に記載される通りの、Ｄ０にＣＡＲ Ｔ細胞を注入された（ＣＡＲ Ｔ細胞単独療法）、又はＤ７に開始するＭＰＢＡ－ＩＬ１５の毎週の注射をさらに受けている、Ｒａｊｉリンパ腫細胞を有するＮＳＧマウスの骨髄からのＣＤ４ ＣＡＲ Ｔ細胞の、それぞれ、ＣＡＲ Ｔ細胞の総数、Ｋｉ６７発現、並びにＰＤ１及びＴＭ３発現のプロットである。図９Ａは、ＣＡＲ Ｔ細胞のみ（●）の注入後の腫瘍を有するマウスの骨髄における、及びＭＰＢＡ－ＩＬ１５と組み合わせて（■）ＣＡＲ Ｔ細胞療法を受けた腫瘍を有するマウスにおける、ＣＤ４ ＣＡＲ Ｔ細胞の総数を示すグラフである。図９Ｂは、ＣＡＲ Ｔ細胞単独療法（●）後の腫瘍を有するマウスの骨髄からの、及びＭＰＢＡ－ＩＬ１５と組み合わせて（■）ＣＡＲ Ｔ細胞を受けた腫瘍を有するマウスからの、ＣＤ４ ＣＡＲ Ｔ細胞におけるＫｉ６７発現（Ｋｉ６７＋（％））を示すグラフである。図９Ｃは、ＣＡＲ Ｔ細胞の注入のみ（●）（単独療法）後の腫瘍を有するマウスの骨髄からの、及びＭＰＢＡ－ＩＬ１５と組み合わせて（■）ＣＡＲ Ｔ細胞療法を受けた腫瘍を有するマウスからの、ＣＤ４ ＣＡＲ Ｔ細胞におけるＰＤ１及びＴＩＭ３発現（ＰＤ１＋ＴＩＭ３＋（％））を示すグラフである。 同上。 ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５及びＣＡＲ Ｔ細胞で以前に治療され、Ｄ３８にＲａｊｉ腫瘍細胞を再負荷され、それに続いて腫瘍量を評価するために毎週のイメージングを行った、腫瘍のないマウスについての、代表的な時点についてのバイオルミネセンス画像を提供する。この図は、マウスリンパ腫モデルにおいて評価された場合、例示的な長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬、すなわちＭＰＢＡ－ＩＬ－１５と、ＣＡＲ Ｔ細胞とで以前に治療されたマウスが、Ｒａｊｉ腫瘍再負荷を拒絶することができることを示す。 実施例４に記載される通りの、前臨床マウスリンパ腫モデルにおける、例示的な長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬、すなわちＭＰＢＡ－ＩＬ１５とのＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞組み合わせ免疫療法の有効性を評価するための、実例となる治療プロトコルを示す。 図１２Ａは、実施例４に記載されるマウスリンパ腫モデルにおける、種々の治療群のマウスについての腫瘍体積の変化（パーセント）のグラフである：対照Ｔ細胞（長方形）、対照Ｔ細胞とＭＰＢＡ－ＩＬ１５（▲）、ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞（▼）、及びＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＰＢＡ－ＩＬ１５（◇））；図１２Ｂは、ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞単独療法で治療された個々のマウスについての感染後の週数に対する腫瘍体積の変化（パーセント）（群について１８．５％退縮）のグラフである。図１２Ｃは、ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＰＢＡ－ＩＬ－１５の二重併用療法で治療された個々のマウスについての感染後の週数に対する腫瘍体積の変化（パーセント）（群について４４．４％退縮）のグラフである。 同上。 図１３Ａは、それぞれ、実施例４に記載される治療群についての、脾臓及び腫瘍における生細胞の割合として表されるＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞頻度のプロットである：対照Ｔ細胞（黒色）、ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞（赤色）、及びＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＰＢＡ－ＩＬ１５（青色）；図１３Ｂは、それぞれ、実施例４に記載される種々の治療群についての、脾臓及び腫瘍における生細胞の割合として表される総ＣＤ８細胞頻度のプロットである。 ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５、すなわち実例となる長時間作用型ＩＬ－１５作動薬が、ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞の輸送及び肺における残存性を増強することを示す、ＲＯＲ１肺モデルにおける種々の治療群のマウスからの肺組織の画像である。 実施例５に記載される通りの、インビトロでのＭＰＢＡ－ＩＬ１５での治療後のＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞におけるタンパク質発現を示す。図１５Ａは、照射済みＫ５６２－ＣＤ１９＋若しくはＫ５６２－ＣＤ１９－細胞と共に同時培養され、且つ、ＭＰＢＡ－ＩＬ１５で処理されていない、又は１ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、若しくは３０ｎｇ／ｍｌの濃度のＭＰＢＡ－ＩＬ１５で処理された、ＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞におけるｐｇ／ｍｌでのＩＦＮγの発現を提供する。図１５Ｂは、照射済みＫ５６２－ＣＤ１９＋若しくはＫ５６２－ＣＤ１９－細胞と共に同時培養され、且つ、ＭＰＢＡ－ＩＬ１５で処理されていない、又は１ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、若しくは３０ｎｇ／ｍｌの濃度のＭＰＢＡ－ＩＬ１５で処理された、ＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞におけるｐｇ／ｍｌでのＴＮＦαの発現を提供する。 実施例５に記載される通りの、照射済みＫ５６２－ＣＤ１９＋若しくはＫ５６２－ＣＤ１９－細胞と共に同時培養され、且つ、ＭＰＢＡ－ＩＬ１５で処理されていない、又は１ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、若しくは３０ｎｇ／ｍｌの濃度のＭＰＢＡ－ＩＬ１５で処理された、ＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞についてのＣＡＲ Ｔ細胞増殖（増殖（倍）として）を示す。 実施例５に記載される通りの、照射済みＫ５６２－ＣＤ１９＋若しくはＫ５６２－ＣＤ１９－細胞と共に同時培養され、且つ、ＭＰＢＡ－ＩＬ１５で処理されていない、又は１ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、若しくは３０ｎｇ／ｍｌの濃度のＭＰＢＡ－ＩＬ１５で処理された、ＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞における、（ｂｃｌ－２ ＭＦＩでの）ｂｃｌ－２及び活性化された（カスパーゼ３＋（％）としての）カスパーゼ３の発現をそれぞれ提供する。 実施例６に詳細に記載される通りの、ＣＡＲ Ｔ細胞単独で又はＭＰＢＡ－ＩＬ１５と組み合わせて治療されたリンパ腫を有するマウスからのＣＡＲ Ｔ細胞におけるｂｃｌ－２発現を示す。ＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞（図１７Ａ）とＣＤ４ ＣＡＲ Ｔ細胞（図１７Ｂ）との両方について、注入後Ｄ８に決定される、ＣＡＲ Ｔ細胞におけるＢｃｌ－２発現を、ヒストグラムに示す（灰色＝ＣＡＲ Ｔ細胞のみ で治療されたマウス；赤色及び青色＝ＣＡＲ Ｔ細胞とモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（ＭＰＢＡ－ＩＬ１５）とを投与されたマウス）。 また、実施例６に詳細に記載される通りの、ＣＡＲ Ｔ細胞単独で又はＭＰＢＡ－ＩＬ１５と組み合わせて治療されたリンパ腫を有するマウスからのＣＡＲ Ｔ細胞におけるｂｃｌ－２発現を示す。ＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞（図１８Ａ）とＣＤ４ ＣＡＲ Ｔ細胞（図１８Ｂ）との両方について、注入後Ｄ８に決定される、ＣＡＲ Ｔ細胞におけるＢｃｌ－２発現を、棒グラフに示す（黒色＝ＣＡＲ Ｔ細胞のみのマウス、赤色＝ＣＡＲ Ｔ細胞とモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（ＭＰＢＡ－ＩＬ１５）とを投与されたマウス）。 実施例６に記載される通りの、ＣＡＲ Ｔ細胞におけるメモリーマーカーＣＤ４５ＲＡ及びＣＣＲ７の発現を示す。図１９Ａは、ＣＡＲ Ｔ細胞のみを投与されたマウスのＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞におけるタンパク質発現を示し；図１９Ｂは、ＣＡＲ Ｔ細胞とモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（ＭＰＢＡ－ＩＬ１５）を投与されたマウスのＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞におけるタンパク質発現を示し；図１９Ｃは、ＣＡＲ Ｔ細胞のみを投与されたマウスのＣＤ４ ＣＡＲ Ｔ細胞におけるタンパク質発現を示し；図１９Ｄは、ＣＡＲ Ｔ細胞とモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（ＭＰＢＡ－ＩＬ１５）を投与されたマウスのＣＤ４ ＣＡＲ Ｔ細胞におけるタンパク質発現に関し、ここでは、発現データは、ＣＤ５ＲＡ－ＣＣＲ７－（橙色）、ＣＤ５ＲＡ＋ＣＣＲ７－（緑色）、及びＣＤ５ＲＡ－ＣＣＲ７＋（赤色）について提供される。グラフは、平均値±ＳＥＭを示す。
本明細書で使用されるとき、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」には、文脈上特に明確に指示されない限り複数の指示対象が含まれる。
本開示のある特徴を記載し、及び特許請求するにあたり、特に記載のない限り以下に記載する定義に従い以下の用語を使用する。
「ＰＥＧ」又は「ポリエチレングリコール」は、本明細書で使用されるとき、任意の水溶性ポリ（エチレンオキシド）を包含することが意図される。特に指示されない限り、「ＰＥＧポリマー」又はポリエチレングリコールは、実質的に全ての（好ましくは全ての）単量体サブユニットがエチレンオキシドサブユニットであるものであり、しかしながらポリマーは、例えばコンジュゲーション用に、個別のエンドキャッピング部分又は官能基を含有してもよい。本開示で使用されるＰＥＧポリマーは、１つ以上の末端酸素が例えば合成変換中に置換されたか否かに応じて、以下の２つの構造のうちの一方を含み得る：「－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－」又は「－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－１ＣＨ２ＣＨ２－」。ＰＥＧポリマーについては、変量（ｎ）は典型的に約３～４０００の範囲であり、末端基及びＰＥＧ全体の構造は様々であり得る。ＰＥＧを含む例示的な又は好ましい分子は、１つ以上の特定のＰＥＧ構造及び／又はリンカー、及び／又は分子量範囲を含むことができる。
ＰＥＧなどの水溶性ポリマーの文脈における分子量は、数平均分子量又は重量平均分子量として表すことができる。他に指示されない限り、本明細書での分子量に対するすべての言及は、重量平均分子量を指す。数平均と重量平均、どちらの分子量決定も、ゲル浸透クロマトグラフィー又は他の液体クロマトグラフィー技術（例えばゲル濾過クロマトグラフィー）を使用して測定することができる。最も一般的に用いられるものは、ゲル浸透クロマトグラフィー及びゲル濾過クロマトグラフィーである。分子量を決定するための他の方法には、数平均分子量を決定するための束一的な特性（例えば、凝固点降下、沸点上昇、若しくは浸透圧）の末端基分析若しくは測定、又は重量平均分子量を決定するための光散乱技術、超遠心分離、ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ、若しくは粘度計の使用が含まれる。ＰＥＧポリマーは、典型的には、多分散系である（すなわち、ポリマーの数平均分子量と重量平均分子量が等しくない）。ＩＬ－１５などの標的分子への共有結合のために使用され、且つ本明細書に記載した通りのＰＥＧポリマーは、一般に、好ましくは約１．２未満、より好ましくは約１．１５未満、さらに好ましくは約１．１０未満、例えば約１．０５未満、又は約１．０３未満という低い多分散値を有する。
「生理学的に切断可能な」又は「加水分解可能な」又は「分解可能な」結合は、生理学的条件下で、及び加水分解の何らかの適切な方法下で、一般的には水と反応する（即ち加水分解される）比較的不安定な結合である。水中で結合が加水分解する傾向は、所与の分子内の２個の原子を連結する一般的なタイプの連結だけでなく、これらの原子及び全体的な分子構造に連結される置換基にも依存し得る。加水分解に不安定な又は弱い結合としては、典型的に、限定はされないが、カルボン酸エステル、リン酸エステル、無水物、アセタール、ケタール、アシルオキシアルキルエーテル、イミン、オルトエステル、ペプチド、オリゴヌクレオチド、チオエステル、及びカーボネートが挙げられる。
「酵素分解性の結合」は、１つ以上の酵素により分解を受ける結合を意味する。
「安定な」結合（ｌｉｎｋａｇｅ）又は結合（ｂｏｎｄ）は、水中で実質的に安定な化学結合、即ち、長期間にわたり生理学的条件下でいかなる認め得る程度の加水分解も受けない結合を指す。加水分解に安定な結合の例としては、限定はされないが、一般的に以下が挙げられる：炭素－炭素結合（例えば脂肪族鎖中の）、エーテル類、アミド類、アミン類など。概して、安定な結合は、生理学的条件下で１日約１～２％未満の加水分解速度を呈するものである。代表的な化学結合の加水分解速度は、多くの標準的な化学テキストブックを参照することができる。
用語「ＩＬ－１５部分」は、本明細書で使用する場合、ヒトＩＬ－１５活性を有するペプチド又はタンパク質部分を指す。さらに、用語「ＩＬ－１５部分」は、ＰＥＧ部分とのコンジュゲート形成前のＩＬ－１５部分と、例えばｍＰＥＧ－ブタン酸スクシンイミジルなどの反応性のＰＥＧ部分とのコンジュゲート形成（すなわち、共有結合）（例えば、反応）後のＩＬ－１５部分との両方を包含する。以下でさらに詳細に説明する通り、当業者は、所与の部分がＩＬ－１５活性を有するかどうかを決定することができる。配列番号１から３のいずれか１つに相当するアミノ酸配列を含むタンパク質、及び同様に、それと実質的に相同のいずれかのタンパク質又はポリペプチドは、例示的なＩＬ－１５部分である。本明細書で使用する場合、用語「ＩＬ－１５部分」には、例えば部位特異的変異誘発によって計画的に又は突然変異を介して偶発的に改変されたペプチド及びタンパク質が含まれる。これらと共に含まれるのは、１から６個の追加のグリコシル化部位を有するＩＬ－１５配列、ペプチド又はタンパク質のカルボキシ末端に少なくとも１つの追加のアミノ酸を有する配列（ここでは、追加のアミノ酸は、少なくとも１つのグリコシル化部位を含む）、及び少なくとも１つのグリコシル化部位を含むアミノ酸配列を有する配列である。この用語には、自然に、組換えによって、及び合成によって生成されるＩＬ－１５部分が含まれることが意図される。長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬に対する言及は、その薬学的に許容し得る塩形態を包含することが意図される。
用語「実質的に相同の」又は「実質的に同一の」は、ある特定の対象配列、例えば変異配列が、基準配列と、（その正味の影響が、基準配列と対象配列との間の不都合な機能的相違点をもたらさない）１つ以上の置換、欠失、又は付加だけ異なることを意味する。本発明の目的では、ストリンジェント条件下での９５パーセントを超える相同性（同一性）、等価な生物活性（必ずしも生物活性の強さが等価であるとは限らないが）、及び所与の配列に対する等価な発現特性を有する配列が、実質的に相同（同一）であるとみなされる。相同性を決定する目的では、成熟配列のトランケーションは無視されるべきである。本明細書での使用のための例示的なＩＬ－１５ポリペプチドには、配列番号１と実質的に相同である配列が含まれる。配列番号２は、配列番号２が、配列の最初に、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）内での翻訳に必要とされるメチオニンを有することを除いて、配列番号１とほとんど同一である。
用語「断片」は、タンパク質又はポリペプチドの部分又は断片、例えばＩＬ－１５部分のアミノ酸配列を有し、且つタンパク質又はポリペプチド、例えばＩＬ－１５の生物活性、又は実質的に生物活性を有する、あらゆるタンパク質又はポリペプチドを意味する。断片には、タンパク質分解によって生成されるタンパク質又はポリペプチド、並びに当技術分野で慣例的な方法による化学合成によって生成されるタンパク質又はポリペプチドが含まれる。
本明細書で使用されるとき、用語「癌を治療すること」は、絶対的な用語であることを意図するものではなく、例えば腫瘍サイズを縮小するか又は癌細胞数を減少させるか、癌を寛解状態にするか、又は癌細胞のサイズもしくは数の成長を防ぐことなどを含み得る。いくつかの状況において、本開示による治療は、予後の改善につながる。
癌を有する対象を治療するための方法において、本明細書で使用する場合、表現「治療を必要とする対象」は、癌と診断されている個人又は対象を指す。
本明細書で使用されるとき、用語「促進する」は、例えば応答促進の文脈では、ある一定のベースライン又は参照療法と比較した場合の、例えば本明細書中で開示されるような、対象の、又は腫瘍細胞の、治療への応答能の改善を指す。例えば、応答促進は、治療に対する応答性の何らかの１つ以上の指標に基づいた、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は９８％又はそれを超える応答性の向上を含み得る。本明細書で使用されるとき、「促進する」は、例えばこのような比較に対するある種の基礎と比較した場合、治療に対して有利に応答する対象の数を促進することも指し得る。
本明細書で使用される「難治性の」は、治療に応答しない疾患、例えば癌などを指す。難治性の癌は、治療の前又は治療の開始時に、治療に対して抵抗性であり得る、又は、難治性の癌は、治療中に抵抗性となる可能性もある。難治性の癌はまた、抵抗性の癌とも呼ばれる。
本明細書で使用される「再発した」又は「再発する」は、改善又は応答性の期間の後の、例えば、治療法（例えば癌治療）の前治療後の、疾患（例えば、癌）、又は癌などの疾患の徴候及び症状の再出現を指す。
本明細書で使用する場合、用語「ＣＤ１９」は、白血病前駆細胞上で検出可能な抗原決定基である表面抗原分類１９タンパク質を指す。ヒト及びマウスのアミノ酸及び核酸配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ、及びＳｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔなどの公開データベースにおいて参照することができる。本明細書で使用する場合、「ＣＤ１９」には、変異、例えば、点変異、断片化、挿入、欠失、及び完全長野生型ＣＤ１９のスプライスバリアントを含むタンパク質が含まれる。ＣＤ１９は、例えば、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球白血病、及び非ホジキンリンパ腫を含めた、大抵のＢ系列の癌上に発現される。
表現「治療有効の」、「治療有効量」、「有効量」、又は「有効な量の」は、例えば長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬の投与の場合などに、所望される生理反応を促進するのに十分な量又は投薬量、すなわち、例えばＣＡＲ Ｔ細胞を含む養子細胞免疫療法組成物の投与に対する増強された応答を促進するのに十分である量を指す。詳細な量は、例えば、治療されている特定の状態、患者集団、それぞれの患者の考慮事項、投与されることとなる治療用組成物及び特定の組み合わせの構成成分及び物質的特性、施されている特定の養子細胞移植療法（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞組成物中に含まれる細胞の特定の組成物、及び／又はＣＡＲ Ｔ細胞によって発現されるキメラ抗原受容体）などの多数の因子に依存することとなり、また、当業者によって決定することができる。
「実質的に」又は「本質的に」は、ほとんど完全に、又は完全に、例えば、所与の量の９５％以上を意味する。
同様に、「約」又は「およそ」は、本明細書で使用する場合、所与の量のプラス又はマイナス５％以内を意味する。
「任意の」又は「任意に」は、その後に記載される状況が、必ずしも生じなくてもよく、その結果、その説明には、状況が生じる場合と生じない場合が含まれることを意味する。
「薬学的に許容可能な賦形剤」又は「薬学的に許容可能な担体」は、本明細書に記載される組成物中に含まれ得る成分であって、対象に重大な有害毒性効果を引き起こさない成分を指す。
用語「患者」、又は「対象」は、本明細書で使用されるとき、本明細書に提供されるとおりの化合物又は組成物又は併用の投与により予防又は治療することのできる病態、例えば癌に罹患している又はそれに罹り易い生物を指し、ヒト及び動物の両方が含まれる。対象には、限定されるものではないが、哺乳動物（例えばマウス、サル、ウマ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコなど）が含まれ、好ましくはヒト（小児及び成人の対象を含む）である。
概要
例えば血液系腫瘍における、有効な抗腫瘍応答を誘発するための有望な治療法ではあるが、ＣＡＲ Ｔ細胞を用いる養子細胞療法後、患者はしばしば、治療に対する最初の好都合な応答後に再発する。例えば、残存性を改善すること、応答の持続性を改善すること、抵抗性に打ち勝つ又は対処すること、安全性を改善すること、及び／又は患者転帰（有効性）を改善することによって、現在のＣＡＲ Ｔ細胞戦略に伴う欠点の少なくともいくつかに対処する試みにおいて、本明細書で提供されるのは、ＣＤ１９指向性 ＣＡＲ Ｔ細胞などのキメラ抗原受容体を発現するように改変されているＴ細胞を含む養子細胞免疫療法組成物と、本明細書に記載した通りの特徴を有する長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬とを、癌を有する対象に投与することを含む方法である。現在のＣＡＲ Ｔ細胞免疫療法に伴う欠点を踏まえると、治療に対する持続性且つ有効な応答を提供するための、さらなる強化が必要とされる。したがって、本開示は、本開示から明らかとなるであろう、また、実施例を裏付ける、例示的なインビボモデルに示される通りの、ＣＡＲ Ｔ細胞療法と、長時間作用型ＩＬ－１５作動薬、より具体的には、ＩＬ－１５受容体αへの受容体結合を好ましくは保持するものの投与を含む、特に有益な治療用癌免疫組み合わせの発見に、少なくともある程度基づいている。
養子キメラ抗原受容体細胞移植療法及び組成物
本明細書で提供される治療方法は、人工の標的腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）結合ドメインを発現するように形質導入された、すなわち、癌特異的な免疫応答を刺激するための、エクスビボで増殖された、遺伝子操作されたＴ細胞を投与することを含む。本明細書中で提供される組成物及び方法は、特に、臨床及び研究の両方の適用で利用される。理論により縛られるものではないが、養子細胞移植、例えばＣＡＲ Ｔ細胞移植及び本明細書中で提供されるような長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬の免疫活性化の相補的機序ゆえに、所望のＴ細胞反応を刺激するためにＩＬ－１５経路を介して（即ち、養子細胞移植と共に、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬を投与することを介して）抗腫瘍薬の転帰の改善が達成され得ると考える。
あらゆる好適なキメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ Ｔ細胞）療法を、本明細書で提供される方法に使用することができ、この点に関しては開示は限定されない。例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｄｏｐｔｉｖｅ Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｆｅｒ：Ａ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｐａｔｈ ｔｏ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ．２００８ Ａｐｒ；８（４）：２９９－３０８及びＳａｄｅｌａｉｎ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ ２１（２），２１５－２２３（２００９）を参照のこと；また、Ｋａｌｏｓ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ ２０１１；３：９５ｒａ７３；及びＧｒｕｐｐ ＳＡ，ｅｔ ａｌ，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１３；３６８：１５０９－１５１８を参照のこと。当技術分野で公知のあらゆる好適なＣＡＲ Ｔ細胞を、本明細書に記載した方法及び治療法において使用することができるということを理解されたい。本明細書での使用のための好適なＣＡＲ Ｔ細胞及び治療法の非限定的な例は、例えば米国特許出願公開第２０１７／０２０９４９２号明細書、及び同第２０１９／０９１３０８号明細書に、また、米国特許第８，９１１，９９３号明細書；同第８，９７５，０７１号明細書；同第９，３２８，１５６号明細書；同第９，９８７，３０８号明細書、及び同第１０，２５３，０８６号明細書に記載するものに含まれる。
１つ以上の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、腫瘍抗原と結合する抗原結合ドメインを含む。さらにいくつかのさらなる実施形態では、腫瘍抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、及びＲＯＲ１、並びに前述のものの組み合わせからなる群から選択される。さらにいくつかのさらなる実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＣＤ１９と結合する抗原結合ドメインを含むＣＤ１９標的化Ｔ細胞である。例えば、Ｔｕｒｔｌｅ，Ｃ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ＆Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１２ Ｍａｙ ２０１６（オンライン）を参照のこと。先行する段落で提供される例示的な刊行物に加えて、さらなる実例となるＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞、例えば、定義されたＣＤ４＋：ＣＤ８＋組成物のＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞が、例えばＴｕｒｔｌｅ，Ｃ．Ｊ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．２０１６；１２６（６）：２１３３－２１３８に記載される。本明細書に記載される方法及び治療法に使用するのに適したさらなるＣＡＲ Ｔ細胞には、Ｂ細胞悪性腫瘍を治療するのに使用するための、例えば、ＣＤ１９指向性チサゲンレクルユーセル（ＫＹＭＲＩＡＨ（登録商標））及びＣＤ１９指向性アキシカブタゲンシロロイセル（ＹＥＳＣＡＲＴＡ（登録商標））（これらはどちらもＵ．Ｓ．ＦＤＡによって承認されている）が含まれる。さらにいくつかの他の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）、すなわち、例えば、優勢なＢリンパ球及び上皮癌において、また非小細胞肺癌及びトリプルネガティブ乳癌の亜群において発現されるが、正常なＢ細胞では発現されない腫瘍関連分子を発現する。本明細書に記載した方法及び治療法に有用なＲＯＲ１－特異的ＣＡＲ Ｔ細胞は、例えばＨｕｄｅｃｅｋ，Ｍ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｊｕｎｅ ２０１３，１９（１２），３１５３－３１６４；Ｈｕｄｅｃｅｋ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ２０１０，１１６：４５３２－４５４１；及びＳｐｒｅｃｈｔ，Ｊ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，７８（１３ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）：ＣＴ１３１，Ｊｕｌｙ ２０１８に記載されている。いくつかの実施形態では、細胞コンストラクトが、ＲＯＲ１の細胞外ドメインのＩｇ／Ｆｚ部分を標的にし、また、４－１ＢＢ／ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインを含有する。いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ作製プロセスは、自家末梢血液リンパ球を利用し、ＣＤ４及びＣＤ８亜群に分離し、これらを抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズ及びＩＬ－２と共に独立に培養し、次いで、ＲＯＲ１ ＣＡＲをコードするレンチウイルスベクターを用いて形質導入する。さらにいくつかのさらなる実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞生成物は、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋ＣＡＲ Ｔ細胞の１：１比で配合される。
ＣＡＲ Ｔ細胞療法は一般に、癌、特にその腫瘍細胞が主題の腫瘍抗原を発現する癌を患う患者を治療するための、ＣＡＲ Ｔ細胞の投与を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、本明細書に記載した通りの又は当技術分野で公知の方法によって調製される。例えば、単離後に、宿主Ｔ細胞を、標的腫瘍関連抗原認識ドメインを発現するように形質導入し、増殖させ、対象に再注入する。点滴前に、例えば、内因性制御性Ｔ細胞を抑制し、点滴されたＣＡＲＴ細胞にとって最適化された環境を提供するために、リンパ球を枯渇させる骨髄非破壊的化学療法（ＮＭＣ）を使用して、患者のプレコンディショニングも行い得；或いは、シクロホスファミド又は何らかの他の適切なコンディショニング剤を使用し得る。このようなプレコンディショニングは、ホメオスタシス性のサイトカインに対して移植細胞と競合するＴｒｅｇ（制御性Ｔ細胞）及びリンプトサイト（ｌｙｍｐｔｏｃｙｔｅ）を排除するか又は実質的に数を減少させるために有用である。宿主細胞は、リンパ節、例えば鼠径部、腸間膜、浅遠位腋窩（ｓｕｐｅｒｆｉｃｉａｌ ｄｉｓｔａｌ ａｕｘｉｌｉａｒｙ）など；骨髄；脾臓；又は末梢血などの種々の供給源から、並びに腫瘍、例えば腫瘍浸潤リンパ球から単離され得る。細胞は、同種異系であってもよいし、又は好ましくは自家であってもよい。エクスビボ刺激について、宿主細胞は、当技術分野で公知のように、無菌的に取り出され、何らかの適切な培地中で懸濁される。形質導入後、細胞を刺激し、種々のプロトコルを使用して、特に抗ＣＤ３、Ｂ７、抗ＣＤ２８などの組み合わせのいずれかを使用して増殖させる。宿主Ｔ細胞のエクスビボ増殖のための適切なプロトコルは、“Ｆｏｃｕｓ ｏｎ Ａｄｏｐｔｉｖｅ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｔｒｉａｌｓ ｉｎ Ｍｅｌａｎｏｍａ”，Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ ２０１０，Ａｒｔ．ＩＤ ２６０２６７に記載されている。
例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞の養子細胞移植は、（ｉ）ヒトなどの哺乳類対象から自家リンパ球を得ること、（ｉｉ）自家リンパ球を、標的腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）認識又は結合ドメインを発現するように遺伝子操作すること、（ｉｉｉ）遺伝子操作されたリンパ球を培養して、増殖されたＣＡＲ Ｔ細胞を産生すること、及び（ｉｖ）増殖されたＣＡＲ Ｔ細胞を対象（すなわち、患者）に投与することによって実施することができる。自家養子細胞療法はまた、（ｉ）自家リンパ球を、ＴＡＡ結合ドメインを発現するように遺伝子操作すること、（ｉｉ）遺伝子操作されたリンパ球を培養して、増殖されたＣＡＲ Ｔ細胞を産生すること；（ｉｉｉ）骨髄非破壊的リンパ球除去化学療法（ＮＭＣ）を対象に施すこと；及び（ｉｖ）ＮＭＣを施した後に、増殖されたＣＡＲ Ｔ細胞を投与することによって実施することができる。自家細胞は、血液から得ることもできるし、自家抗原提示細胞及び腫瘍由来ペプチドを使用してクローニングすることもできる。
ＣＡＲ Ｔ細胞は、本明細書に記載した通りの又は当技術分野で公知のあらゆる手段によって調製することができる。ＣＡＲ及び／又はＣＡＲ Ｔ細胞を生成するための方法は、本明細書に記載されており、また、その方法が参照によって本明細書に組み込まれる、米国特許第６，３１９，４９４号明細書；同第６，４１０，３１９号明細書；同第７，４４６，１７９号明細書；同第７，４４６，１９１号明細書；同第７，５１４，５３７号明細書；同第７，７４１，４６５号明細書；及び同第９，９８７，３０８号明細書；米国特許出願公開第２０１６／０１８５８６１号明細書、同第２０１７／０１３７７８３号明細書、及び同第２０１９／００９１３０８号明細書、並びにＰＣＴ出願／国際公開第２０１０／０６５８１８号パンフレット、同第２０１０／０２５１７７号パンフレット、及び同第２００７／０５９２９８号パンフレットにも記載されている。ＣＡＲ Ｔ細胞を生成するためのさらなる方法は、参照によって本明細書に組み込まれる、Ｂｅｒｇｅｒ Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，１１８：１ ２９４－３０８（２００８）及びＷａｎｇ ｅｔ ａｌ．（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ－Ｏｎｃｏｌｙｔｉｃｓ（２０１６）３，１６０１５）によって記載されている。
ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＣＡＲの結合特異性に基づいて、抗原認識の方向を変えることができる。ＣＡＲは、ＣＡＲ Ｔ細胞が腫瘍細胞表面上のその同族の抗原に結合された場合に、腫瘍細胞が影響を受けて、その結果患者における腫瘍量が低下、漸減、又は除去されるように、あらゆるＴＡＡを標的にすることを提供することができる。Ｔ細胞は、本明細書に記載した通りの又は当技術分野で公知のあらゆる方法を使用して、１つ以上のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作することができる。一実施形態では、単離されたＴ細胞は、ＣＡＲコンストラクトをコードする発現ベクターを用いてＴ細胞を導入することによって、ＣＡＲコンストラクトを発現するように遺伝子操作される。選択されたＣＡＲコンストラクトを発現するＴ細胞集団を形質導入するための方法は、当技術分野で公知であり、参照によって本明細書に組み込まれるＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ”，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（２０１２）に記載されている。
一般に、ＣＡＲは、腫瘍細胞上のＴＡＡと結合する細胞外認識又は結合領域／ドメイン又は細胞外ドメイン（例えば、抗体の単鎖断片可変領域（ｓｃＦＶ））、膜貫通ドメイン、及び腫瘍細胞を攻撃するためのＴ細胞活性化のためのシグナルを提供することができる任意の細胞内ドメインを含む。
一般に、本明細書に記載されるＣＡＲは、癌又は腫瘍細胞の細胞表面上に発現される分子（例えばタンパク質）に誘導される。いくつかのＴＡＡは、当技術分野で公知であり、非限定的な例としては、リン酸化タンパク質、膜貫通タンパク質、糖タンパク質、糖脂質、及び成長因子が挙げられる。所与の化合物が、本明細書に記載される抗原又は標的のいずれかに対するＣＡＲ認識領域としての使用に適しているかどうかを決定するためのアッセイは、当業者による慣例的な実験を介して決定することができる。本明細書に記載した通りの又は当技術分野で公知のあらゆるＣＡＲを、本明細書で使用される方法及び細胞及び養子細胞免疫療法組成物において使用することができる。例示的なＣＡＲとしては、米国特許第７，４４６，１９０号明細書；同第７，７４１，４６５号明細書；同第９，４９９，６２９号明細書；同第９，９８７，３０８号明細書；及び同第１０，２５３，０８６号明細書に記載されているものが挙げられる。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ認識ドメインは、Ｂ細胞の細胞表面上に発現される抗原を標的にする。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、抗ＣＤ１９認識又は結合ドメインを含む。実例となるＣＤ１９－ＣＡＲコンストラクトとしては、次のものが挙げられる：（ｉ）ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体（ＣＴＬ０１９）レンチウイルスベクター（ＳＣＦｖ：ＦＭＣ６３に由来するＣＡＲ抗原認識部分；共刺激ドメイン：４－１ＢＢ）、Ｍａｕｄｅ，ＳＬ．，ｅｔ ａｌ． Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１４；３７１（１６）：１５０７－１５１７；（ｉｉ）抗ＣＤ－１９単鎖可変断片＋ＴＣＲゼータ及びＣＤ２８シグナル伝達ドメインを組み込んだＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体、γ－レトロウイルスベクター（ＳＣＦｖ：ＦＭＣ６３に由来するＣＡＲ抗原認識部分：ＦＭＣ６３；共刺激ドメイン：ＣＤ２８）、Ｌｅｅ，ＤＷ ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ ２０１５；３８５（９９６７）５１７－５２８；マウスステップ細胞（ｓｔｅｐ ｃｅｌｌ）ウイルスベースのスプライス－ｇａｇベクター、（ｉｉｉ）Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ ＪＮ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ２００９；３２（７）：６８９－７０２に記載されている通りの、抗ＣＤ１９ ＣＡＲをコードするＭＳＧＶ－ＦＭＣ６３－２８Ｚ；（ｉｖ）ＣＤ－１９特異的ＣＤ２８／ＣＤ３ζ二重シグナリングＣＡＲ、１９－２８ｚ（Ｐａｒｋ，ＪＨ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，３０ Ｊｕｎｅ ２０１６，１２７（２６），ｐ．３３１２－３３２０，Ｔａｂｌｅ １に記載されているものに加えて、Ｂｒｅｎｔｊｅｎｓ，ＲＪ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓ Ｍｅｄ，２０ Ｍａｒ ２０１３：５（１７７）：１７７）。
ヒトＣＤ１９抗原は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する９５ｋＤａ糖タンパク質である。ＣＤ１９は、正常及び腫瘍性Ｂ細胞に対する、また濾胞樹状細胞に対するバイオマーカーとして使用される。ＣＤ１９は、プレＢ細胞発生の初期段階から、最終分化まで発現され、Ｂリンパ球の発生及び機能を調節する。ＣＤ１９の発現は、非ホジキンリンパ腫などのＢ細胞リンパ腫を含めた大抵のＢ細胞腫瘍上で高度に保存される。ＣＤ１９はまた、Ｂ細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、及びワルデンシュトレームマクログロブリン血症（ＷＭ）を含めた大抵の型の白血病において発現される。Ｂ細胞悪性腫瘍（リンパ腫及び白血病）の大部分は、通常～高いレベルでＣＤ１９を発現する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、抗ＣＤ１９結合部分を含む。いっそうさらなる実施形態では、限定はされないが、非ホジキンリンパ腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、及びワルデンシュトレームマクログロブリン血症（ＷＭ）を含めたＢ細胞悪性腫瘍の治療において、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬とＣＤ１９指向性ＣＡＲ Ｔ細胞との組み合わせが使用される。いくつかの好ましい実施形態では、ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞療法は、ＣＤ－１９指向性の遺伝子改変された自家Ｔ細胞を含む。
ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞療法の応答の持続性に対する障害は、腫瘍細胞表面からの標的抗原ＣＤ１９の下方調節と特定されている（Ｓｈａｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（２０１９）Ｖｏｌ．９，Ａｒｔｉｃｌｅ １４６）。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞療法は、ＣＤ１９及び１つ以上の追加のＴＡＡへのターゲティングを含む、マルチターゲットのＣＡＲ Ｔ細胞療法である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞療法は、ＣＤ１９認識又は結合ドメイン、並びに１つ以上の追加のＴＡＡを発現する細胞集団の少なくとも一部を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞療法は、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ７０、又はＣＤ３０から選択されるＴＡＡへのターゲティングを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞療法は、各集団が異なるＣＡＲを発現する、２つ以上の細胞集団を含む。細胞集団は、混合物として投与することもできるし、逐次的に同時投与することもできる。好ましくは、マルチターゲットのＣＡＲ Ｔ細胞療法は、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞、及び、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ７０、又はＣＤ３０から選択される１つ以上の追加のＴＡＡに誘導されるＣＡＲ Ｔ細胞の投与を含む。いくつかの他の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞療法は、ＲＯＲ１であるＴＡＡへのターゲティングを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、１つ以上の細胞内共刺激シグナル伝達ドメインを含む。例示的な共刺激ドメインとしては、限定はされないが、ＣＤ３ζを伴うＣＤ２８、ＣＤ１２３、又は４－１ＢＢが挙げられる。
Ｔ細胞などのリンパ球の増殖は、当技術分野で公知の多くの方法のいずれかにより遂行され得る。例えば、Ｔ細胞は、フィーダーリンパ球及びインターロイキン－２（ＩＬ－２）、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１又はそれらの組み合わせの存在下で非特異的なＴ細胞受容体刺激を使用して増殖させ得る。非特異的なＴ細胞受容体刺激物は、例えばマウスモノクローナル抗ＣＤ３抗体（例えばＬＳ Ｂｉｏ，Ｓｅａｔｔｌｅ ＷＡから入手可能）の刺激量を含み得る。或いは、Ｔ細胞は、（エピトープなどのその抗原部分を含む）１つ以上の抗原によるインビトロでの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の刺激により迅速に増殖させ得、これは、場合により、Ｔ細胞増殖因子、例えばインターロイキン－２又はインターロイキン－１５などの存在下でヒト白血球抗原Ａ２（ＨＬＡ－Ａ２）結合ペプチドなど、任意選択によりベクターから発現され得、インターロイキン－２が好ましい。インビトロ誘導性Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ａ２発現抗原提示細胞上に対してパルス処理される癌の同じ抗原での再刺激により迅速に増殖する。或いは、Ｔ細胞は、照射済み自家リンパ球で、又は照射済みＨＬＡ－Ａ２＋同種異系リンパ球及びインターロイキン－２で再刺激され得る。
増殖させたＴ細胞の特異的な腫瘍反応性は、当技術分野で公知のいずれかの方法によって、例えば腫瘍細胞との同時培養後にサイトカイン（例えばインターフェロン－ガンマ）放出を測定することによって、試験され得る。例えば、養子細胞移植は、細胞の迅速な増殖前にＣＤ８＋Ｔ細胞に対して培養Ｔ細胞を濃縮することを含み得る。インターロイキン－２を含有する培地中でのＴ細胞の培養後、Ｔ細胞では、ＣＤ４＋細胞を枯渇させ、例えばＣＤ８マイクロビーズ分離を使用してＣＤ８＋細胞について濃縮する。一部の実施形態において、自家Ｔ細胞の増殖及び活性化を促進するＴ細胞増殖因子は、自家Ｔ細胞と同時に、又は自家Ｔ細胞に続いてのいずれかで対象に投与される。Ｔ細胞増殖因子は、自家Ｔ細胞の増殖及び活性化を促進する何らかの適切な増殖因子であり得る。適切なＴ細胞増殖因子の例としては、インターロイキン（ＩＬ）－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－１２及びＩＬ－２１が挙げられ、これらは、単独で使用してもよいし、又はＩＬ－２及びＩＬ－７、ＩＬ－２及びＩＬ－１５、ＩＬ－７及びＩＬ－１５、ＩＬ－２、ＩＬ－７及びＩＬ－１５、ＩＬ－１２及びＩＬ－７、ＩＬ－１２及びＩＬ－１５又はＩＬ－１２及びＩＬ２など、種々の組み合わせで使用してもよい。
蛍光活性化細胞分類分析によって、及びＨＬＡ－Ａ２－８８８黒色腫株ではなくＨＬＡ－Ａ２＋５２６黒色腫株のインビトロでの認識によって、ＣＡＲ Ｔ細胞中のキメラ抗原受容体の発現を非形質導入（ＵｎＴｄ）及び形質導入（Ｔｄ）細胞において比較する（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ，２００８ Ａｐｒ；８４（４）：２９９－３０８）。Ｑａｓｉｍ，Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．９，ｅａａｊ２０１３（２０１７）に記載のものなど、ユニバーサルタイプのＴ細胞も使用され得る。例えば、レンチウイルス形質導入と組み合わせてＴＡＬＥＮ介在性細胞操作を使用してユニバーサルＣＡＲ１９ Ｔ細胞を作製し、養子細胞療法で使用し得る。この細胞は、非ヒト白血球抗原適合ドナー細胞のレンチウイルス形質導入及びＴ細胞受容体α鎖及びＣＤ５２遺伝子座の同時転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）介在性遺伝子編入により作製される。
ＣＡＲ Ｔ細胞を投与する前に、治療法の有効性を向上させるために、患者の状態を、化学療法（例えば、例えば米国特許第９，８５５，２９８号明細書に記載されている、シクロホスファミド及びフルダラビン）であらかじめ整えることができる。理論に関して制限されないが、化学療法であらかじめ状態を整えることにより、通常のリンパ球の除去によってＣＡＲ Ｔ細胞の増殖のための空間を作り出すことができる、及び／又はサイトカインシンク（ｓｉｎｋ）を排除して、ＣＡＲ Ｔ細胞増殖を促進する恒常性維持サイトカインの利用能を増大させることができる、及び／又は制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）及び骨髄系由来サプレッサー細胞などの免疫抑制性細胞の数を減少させることができる（Ｎａｉｒ ｅｔ ａｌ．）。あらゆる好適な化学療法的方法を、当技術分野で公知の通りに使用することができるということを理解されたい。
次に、点滴により、例えば静脈内もしくは動脈内点滴又は他の適切な送達形態により、増殖させた細胞を宿主に投与し、これは、一般的には約３０～約６０分間続くが、より短いか又はより長い持続時間が利用され得る。投与の他の経路としては、腹腔内、くも膜下腔内及びリンパ内注射が挙げられる。場合により種々の薬学的に許容可能な添加物、結合剤、充填剤、担体、保存剤、安定化剤、乳化剤、緩衝液などのいずれかを含み得る適切な培地中で増殖させた細胞を提供する。希釈剤及び賦形剤としては、水、食塩水及びグルコースが挙げられる。代表的な培地としては、例えば約５．５～８．０の正常ｐＨ範囲を有するＭｕｌｔｉｐｌｅ Ｅｌｅｃｔｒｏｌｙｔｅｓ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，Ｔｙｐｅ １，ＵＳＰ；ヒト血清又は胎児ウシ血清を含有する組織培養培地；又は異種成分不含及び血清不含培地、例えばＰＲＩＭＥ－ＸＶ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＸＳＦＭ（Ｉｒｖｉｎｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）などが挙げられるが限定されない。市販培地としては、例えば、ＲＰＭＩ １６４０（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）、ＡＩＭ Ｖ細胞培養培地（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ ＭＡ）及びＸ－ＶＩＶＯ １５（Ｌｏｎｚａ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）が挙げられる。
ＩＬ－１５受容体作動薬
本明細書に記載される方法は、１つ以上の実施形態において、長時間作用型のＩＬ－１５受容体作動薬の投与を含む。化合物は、対象への投与後に、作動薬が、非改変形態の同じインターロイキン－１５受容体作動薬部分の投与の場合よりも長い時間、インビボでのＩＬ－１５アゴニズムを呈する限り、本開示による長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬であるとみなされる。化合物を放射標識し、その化合物をインビボで投与し、そのクリアランスを決定することを含むものなどの従来の手法を使用して、化合物が長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬である（すなわち、同じインビボ系で投与された非改変ＩＬ－１５よりも長いクリアランスを有する）かどうかを評価することができる。例えば、ＩＬ－１５受容体作動薬の長時間作用性は、マウスにおける作動薬の投与後の様々な時点でのリンパ球におけるＳＴＡＴ５リン酸化を測定するためのフローサイトメトリーを使用して決定することができる。参考として、シグナルは、ＩＬ－１５ではおよそ２４時間で消失するが、本明細書に記載される長時間作用型ＩＬ－１５作動薬については、それよりも長い期間持続する。
長時間作用型のＩＬ－１５受容体作動薬は、薬学的に許容し得る塩の形態であり得、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬に対する言及は、薬学的に許容し得るその塩を包含することが意図される。典型的には、かかる塩は薬学的に許容可能な酸又は酸等価物との反応によって形成される。これに関連して用語「薬学的に許容可能な塩」は、概して、比較的非毒性の無機酸及び有機酸付加塩を指し得る。これらの塩は、投与媒体又は剤形製造過程においてインサイチューで、又は別途本明細書に記載されるとおりの長時間作用型インターロイキン－１５受容体を好適な有機酸又は無機酸と反応させて、そのようにして形成された塩を単離することにより調製し得る。代表的な塩としては、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシル酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチル酸塩（ｎａｐｔｈｙｌａｔｅ）、シュウ酸塩、メシル酸塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸塩、及びラウリルスルホン酸塩などが挙げられる。（例えば、Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．（１９７７）「薬学的塩（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ）」，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１－１９を参照のこと）。従って、記載されるとおりの塩は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸などの無機酸に由来してもよく；又は酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パルミチン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸（ｓａｌｉｃｙｃｌｉｃ）、スルファニル酸、２－アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸（ｉｓｏｔｈｉｏｎｉｃ）などの有機酸から調製されてもよい。
例示的な長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、構造：
Figure 2022526408000002
 （式中、ＩＬ－１５は、インターロイキン－１５部分であり、（ｎ）は、約１５０～約３，０００の整数であり、～ＮＨ～は、ＩＬ－１５部分のアミノ基を表す）
によって包含される。上述のＩＬ－１５受容体作動薬は、本明細書ではモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（すなわち、ＭＰＢＡ－ＩＬ１５）と称される。モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５の実例となる調製を、実施例１に示す。
式（Ｉ）の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬に関連する１つ以上の実施形態では、（ｎ）は、約７９５～約１０６８の範囲である。いくつかの追加の実施形態では、（ｎ）は、約８４０～約１０２３の範囲である。１つ以上の特定の実施形態では、（ｎ）は、平均すると、約９０７又は約９０９の値を有し、その結果、ポリエチレングリコール鎖の平均分子量は、約４０，０００ダルトンである。
モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（ＭＰＢＡ－ＩＬ１５）は、典型的には、主にモノＰＥＧ化ＩＬ－１５（すなわち、ＩＬ－１５のアミノ基に、すなわちＩＬ－１５のリジンに又はＮ末端アルファアミンに共有結合的に付着された単一のメトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド部分を有する）の分類として調製され、微量のジペグ化及びそれ以上のペグ化ＩＬ－１５種を伴う。モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５のさらなる特徴は、例えば、国際公開第２０１８／２１３３４１号パンフレットに記載されている。
ＭＰＢＡ－ＩＬ１５の実例となる組成物は、主としてモノＰＥＧ化種を含み、約１０モル％未満のＰＥＧ二量体（すなわち、ＩＬ－１５に付着した２つのメトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド部分を有するもの）、及びさらに少ない量のＩＬ－１５に付着したそれ以上のＰＥＧ化種（すなわち、ＩＬ－１５に付着した３つ以上のメトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド部分を有するもの）を伴う。モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５の組成物は、一般に、（非改変ＩＬ－１５（存在するならば）及び他のＩＬ－１５含有種、例えば、ジＰＥＧ化ＩＬ－１５及びより大きいものを含めた、組成物中のすべてのインターロイキン－１５種に基づいて）少なくとも約８０モル％のモノＰＥＧ化ＩＬ－１５種を有することとなる。ＭＰＢＡ－ＩＬ１５の組成物は、好ましくは、約１０モル％未満の他のＩＬ－１５種と共に、少なくとも約９０モル％のモノＰＥＧ化ＩＬ－１５種を有し得る。いくつかの実施形態では、ＭＰＢＡ－ＩＬ１５組成物は、約５モル％未満のＰＥＧ二量体（ＩＬ－１５に共有結合的に付着された２つのメトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド部分を有するジＰＥＧ化ＩＬ－１５）と、約５モル％未満の他のすべてのそれ以上のＰＥＧ化種を含む。１つ以上の実施形態では、ＭＰＢＡ－ＩＬ１５組成物は、少なくとも約８５モル％、９０モル％、９５モル％、９８モル％、又は９９モル％の式（Ｉ）のモノＰＥＧ化種を含む。
例えば、いくつかの好ましい実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬組成物は、集合的に考えられる場合、式：
Figure 2022526408000003
 （式中、ｎの値は、すべての実施形態について先に記載された通りである）によって包含される、（組成物中のＩＬ－１５含有分子の）多くとも約２０モルパーセント（モル％）の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬を含む、又は式（ＩＩ）に従って集合的に考えられる場合、（組成物中のＩＬ－１５含有分子の）多くとも約１５モルパーセント（モル％）の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬を含む、又は式（ＩＩ）に従って集合的に考えられる場合、（組成物中のＩＬ－１５含有分子の）多くとも約１０モルパーセントの長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬を含有する。
いくつかの実施形態では、ＭＰＢＡ－ＩＬ１５組成物は、約０．１～１５、０．１～１０、０．１～５、０．１～１、１～２０、１～１５、１～１０、１～５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～２０、１０～１５、又は約１５～２０モル％の式（ＩＩ）の化合物を含む。
いくつかの追加の実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬組成物は、集合的に考えられる場合、（組成物中のＩＬ－１５含有分子の）多くとも約１～５モル％の遊離のＩＬ－１５タンパク質を含む。
上の式に関して、「ｎ」は、（ＯＣＨ２ＣＨ２）単量体サブユニットの平均数に相当する。ＭＰＢＡ－ＩＬ１５は、例えば約６６００ダルトン～約１３２，０００ダルトンの平均分子量を有する適切に活性化されたｍＰＥＧ－ブタン酸エステル試薬を使用して、調製することができる。例えば、ＭＰＢＡ－ＩＬ１５は、例えば、１０ｋＤ、１５ｋＤ、２０ｋＤ、２５ｋＤ、３０ｋＤ、４５ｋＤ、５０ｋＤ、又は６０ｋＤから選択される平均分子量を有する適切に活性化されたｍＰＥＧ－ブタン酸エステル試薬を使用して調製することができる。活性化されたポリマー試薬は、ＩＬ－１５のアミノ基（例えば、リジン又はＮ末端）と反応した場合、ＩＬ－１５部分とポリエチレングリコール部分との間の安定なアミド結合を形成するのに有効である。
１つ以上の実施形態では、ｎは、約１０，０００ダルトン（ここではｎは約２２７である）、又は約１５，０００ダルトン（ここではｎは約３４０である）、又は約２０，０００ダルトン（ここではｎは約４５４である）、又は約２５，０００ダルトン（ここではｎは約５６８である）、又は約３０，０００ダルトン（ここではｎは約６８１である）、又は約４０，０００ダルトン（ここではｎは約９０９である）、又は約５０，０００ダルトン（ここではｎは約１１３６である）、又は約６０，０００ダルトン（ここではｎは、約１３６４である）以上からなる群から選択される重量平均分子量を有するポリエチレングリコール部分に相当する値を有する整数である。
ＭＰＢＡ－ＩＬ１５を調製するために使用される、実例となるＰＥＧ試薬は、典型的には、約１．１未満、例えば、約１．０５の多分散値を有することとなる。したがって、約４０，０００ダルトンの名目上の平均重量を有するｍＰＥＧ－ブタン酸スクシンイミジルなどのＰＥＧ試薬の場合、ＰＥＧ試薬（及び得られるＩＬ－１５コンジュゲート）は、約３５キロダルトン～約４７キロダルトン、又は約３７キロダルトン～約４５キロダルトン（４１ｋＤ±４ｋＤａ）の分子量範囲の、共有結合的に付着されたＰＥＧ部分を有することとなる。いくつかの好ましい実施形態では、ｍＰＥＧブタン酸活性化するエステル試薬は、約４０キロダルトンの名目上の平均分子量を有する、すなわち、ここでは、平均すると、ｎは約９０７～９０９である。
ＩＬ－１５部分を考慮する場合、用語「ＩＬ－１５部分」は、コンジュゲート形成前のＩＬ－１５部分と、コンジュゲート形成後のＩＬ－１５部分を指す。しかし、元々のＩＬ－１５部分が、ポリエチレングリコール部分に付着される時に、ポリマーに対する結合と関連する１つ以上の共有結合の存在に起因して（例えばＭＰＢＡ－ＩＬ１５の調製中に形成されるアミド結合の場合に）、ＩＬ－１５部分がわずかに変化することが理解されよう。
ＩＬ－１５部分は、非組換え方法及び組換え方法から得ることができ、本開示は、この点に関して限定されない。さらに、ＩＬ－１５部分は、ヒト起源、動物起源（昆虫を含めて）、真菌起源（酵母を含めて）、及び植物起源から得ることができる。
ＩＬ－１５部分は、例えばＧｒａｂｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．（Ｇｒａｂｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６４：９６５－９６８）によって記載されている手順に従って得ることができる。ＩＬ－１５部分はまた、例えばＩｍｍｕｎｅｘ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎに対する欧州特許第０７７２６２４ Ｂ２号明細書に記載されているものなどの組換え方法を使用して調製することもできる。或いは、ＩＬ－１５部分は、例えばＧｅｎＳｃｒｉｐｔ ＵＳＡ Ｉｎｃ．（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ ＮＪ）及びＰｅｐｒｏｔｅｃｈ（Ｒｏｃｋｙｈｉｌｌ，ＮＪ）から市販品として購入することができる。
より具体的には、ＩＬ－１５部分は、細菌［例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、例えば、Ｆｉｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１（３）：２９５－３１１を参照のこと］、哺乳類［例えば、Ｋｒｏｎｍａｎ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｇｅｎｅ １２１：２９５－３０４を参照のこと］、酵母［例えば、ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）、例えば、Ｍｏｒｅｌ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３２８（１）：１２１－１２９を参照のこと］、及び植物［例えば、Ｍｏｒ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．７５（３）：２５９－２６６を参照のこと］発現系において発現させることができる。発現は、外来性の発現を介して（宿主細胞が、所望される遺伝暗号を天然に含有する場合）、又は内在性の発現を介して起こり得る。
ＩＬ－１５部分の調製及び／又は精製のさらなる方法は、ＰＣＴ出願／米国特許出願公開第２０１８／０３２８１７号明細書に記載されている。
ＩＬ－１５活性を有するタンパク質を発現させるために使用される系に依存して、ＩＬ－１５部分は、非グリコシル化又はグリコシル化であり得、いずれかを使用することができる。すなわち、ＩＬ－１５部分を非グリコシル化することもできるし、ＩＬ－１５部分をグリコシル化することもできる。１つ以上の実施形態では、ＩＬ－１５部分は、非グリコシル化である。
ＩＬ－１５部分は、アミノ酸の側鎖内の原子へのポリマーの容易な付着を提供するために、好都合なことに、例えば、リジン、システイン及び／又はアルギニンなどの１つ以上のアミノ酸残基を含む及び／又は置換するように改変することができる。ＩＬ－１５部分の置換の例は、米国特許第６，１７７，０７９号に記載されている。さらに、ＩＬ－１５部分は、天然に存在しないアミノ酸残基を含むように改変することができる。アミノ酸残基及び天然に存在しないアミノ酸残基を付加するための技術は、当業者に周知である。
例示的なＩＬ－１５部分は、本明細書に、並びに文献に、例えば、米国特許出願公開第２００６／０１０４９４５号明細書、Ｐｅｔｔｉｔ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（４）：２３１２－２３１８、Ｗｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，（２０１３）ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２（１１），ｅ２６４４２：１－３、及びＰＣＴ出願／国際公開第２０１８／２１３３４１号パンフレットに記載されている。好ましいＩＬ－１５部分には、配列番号１から３及びそれと実質的に相同の配列からなる群から選択される配列を含むアミノ酸配列を有するものが含まれる。好ましいＩＬ－１５部分は、配列番号１に相当するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５部分は、配列番号１～３のいずれか１つとの少なくとも約８５％又は少なくとも約９０％の同一性を有する機能相同体である。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５部分は、配列番号１～３のいずれか１つとの少なくとも約９５％、９８％、又は９９％の同一性を有する機能相同体である。
ある種の場合には、ＩＬ－１５部分は、該当するペプチドの単一の発現が、別の単位に組織化される、「単量体」形態となる。他の場合には、ＩＬ－１５部分は、２つの単量体形態のタンパク質が、互いに会合される、「二量体」（例えば、組換え型ＩＬ－１５の二量体）の形態となる。
さらに、を、ＩＬ－１５部分として使用することができる。例示的な前駆形態のＩＬ－１５は、配列番号３の配列を有する。
前述の配列のいずれかの切断型、ハイブリッドバリアント、及びペプチドミメティックも、ＩＬ－１５部分として働くことができる。少なくともある程度のＩＬ－１５活性を維持する前述のもののいずれかの生物学的に活性な断片、欠失バリアント、置換バリアント、又は付加バリアントも、ＩＬ－１５部分として働くことができる。
あらゆる所与のペプチド、タンパク質部分、又はコンジュゲートについて、そのペプチド、タンパク質部分、又はコンジュゲートが、ある程度のＩＬ－１５活性を有するかどうかを決定することが可能である。インビトロでのＩＬ－１５活性を決定するための様々な方法が、当技術分野で記載されている。例示的な手法は、ｐＳＴＡＴアッセイに基づいている。簡単に言うと、ＩＬ－１５依存性ＣＴＬＬ－２細胞が、ＩＬ－１５活性を有する被験物質に曝露されるならば、チロシン残基６９４（Ｔｙｒ６９４）でのＳＴＡＴ５のリン酸化を含むシグナルカスケードの開始が起こり、これを、定量的に測定することができる。アッセイプロトコル及びキットは公知であり、例えば、ＭＳＤ Ｐｈｏｓｐｈｏ（Ｔｙｒ６９４）／Ｔｏｔａｌ ＳＴＡＴａ，ｂ Ｗｈｏｌｅ Ｃｅｌｌ Ｌｙｓａｔｅ Ｋｉｔ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，ＬＬＣ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）が挙げられる。例えば、この手法を使用して、５分又は１０分の少なくとも１つで、多くとも約３００ｎｇ／ｍＬ（より好ましくは多くとも約１５０ｎｇ／ｍＬ）のｐＳＴＡＴ５ ＥＣ５０値を呈する、提案されるＩＬ－１５部分が、典型的には、本開示に関する「ＩＬ－１５部分」であるとみなされる。しかし、使用されるＩＬ－１５部分は、より強力である（例えば、５分又は１０分の少なくとも１つで１５０ｎｇ／ｍＬ未満の、例えば、５分又は１０分の少なくとも１つで、約１ｎｇ／ｍＬ未満、いっそう好ましくは０．５ｎｇ／ｍＬ未満のｐＳＴＡＴ５ ＥＣ５０ 値を有する）ことが好ましい。
ＩＬ－１５機能を評価するために、電位測定法、分光光度法、クロマトグラフィー、及び放射測定方法論を含めた、当技術分野で公知の他の方法論も使用することができる。例えば、そのようなさらなる型のアッセイについては、Ｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３（１２）：１１８７－１１９５を参照のこと。
先に記載した通り、ＩＬ－１５部分上のアミノ基は、式（Ｉ）によって包含されるＩＬ－１５受容体作動薬を提供するための、ｍＰＥＧ－ブタン酸スクシンイミジル試薬との反応のための付着の部位を提供する。本明細書に提供される例示的なＩＬ－１５アミノ酸配列を考慮すれば、それぞれがコンジュゲート形成のために利用可能であり得るε－アミノ酸を有する７つのリジン残基が存在することは明らかである。さらに、メチオニンのＮ末端アミンも、ＰＥＧ部分に対する付着点として働くことができる。ポリエチレングリコール部分は、リジン又はＮ末端アミン位置のいずれか１つ以上に付着することができるということを理解されたい。いくつかの実施形態では、ポリエチレングリコール部分付着部位は、Ｌｙｓ１０及びＬｙｓ１１（例として配列番号２に示す通りのナンバリングを使用する）又は配列番号１を使用してＬｙｓ１１及びＬｙｓ１２の１つ以上にある。いくつかの実施形態では、ポリエチレングリコール部分は、Ｎ末端アミンに付着される。リジン部位のいずれか（例えば配列番号１のＬｙｓ３７又はＬｙｓ４２）が、ＰＥＧ部分のための付着部位として適切であり得るということを理解されたい。いくつかの実施形態では、ＭＰＢＡ－ＩＬ１５は、位置異性体の混合物を含み、ここでは、ポリエチレングリコール部分の共有結合は、主にＮ末端にある（すなわち、位置異性体を集めたものの中で、Ｎ末端に付着したＰＥＧ部分を有する異性体は、他の位置異性体と比較した場合に、最も多い量で存在する。
ＭＰＢＡ－ＩＬ１５は、すべてのＩＬ－１５受容体サブユニット（ＩＬ－１５α、β、及びγサブユニット）への結合を介する、毎日の投薬の必要なしに、持続されるＩＬ－１５生物活性を提供する免疫療法薬である。より具体的には、ＭＰＢＡ－ＩＬ１５は、ＩＬ－１５受容体αとインターロイキン－２（ＩＬ－２）／ＩＬ－１５ βγサブユニットに結合し、ＮＫ細胞とＣＤ８＋メモリーＴ細胞との両方に対する薬力学的（ＰＤ）効果を含めた、ＩＬ－１５生物学の全範囲を維持し、その一方で、ポリエチレングリコール部分が分子の流体力学的体積を拡大し、これが、非改変ｒｈＩＬ－１５と比較して有効な半減期を延長する働きをする。
げっ歯類及び非ヒト霊長類における前臨床研究では、ＭＰＢＡ－ＩＬ１５は、ＣＡＲ Ｔ細胞療法と組み合わせた場合に、本発明者らによって特に好都合であるとみなされる特徴を有することが示されている。例えば、ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５は、（ｉ）ＮＫ細胞増殖を刺激及び拡大する、（ｉｉ）抑制性の制御性Ｔ細胞を実質的に誘発せずに、ＣＤ８ Ｔ細胞生存及びメモリー形成を補助する、（ｉｉｉ）長期の免疫記憶の形成を増強し、さらに、ＩＬ－Ｒへの受容体結合を保持するが、非改変ＩＬ－１５よりも低い親和性を有することが示されている。
本明細書で提供される方法に使用するのに適している可能性がある追加のＩＬ－１５受容体作動薬としては、例えば、Ｎ－８０３（以前はＡＬＴ－８０３、変異ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα融合タンパク質、例えば、Ｈａｎ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，２０１１；５６（３）：８０４－８１０；Ｚｈｕ，Ｘ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００９；１８３（６）：３５９８－３６０７、及びＸｕ，Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１３；７３（１０）：３０７５－３０８６を参照のこと）、ＮＩＺ９８５（ヘテロ二量体ＩＬ－１５、ＩＬ－１５／可溶性ＩＬ－１５Ｒα二量体、例えば、ＡＡＣＲ；Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０１９；７９（１３ Ｓｕｐｐｌ）を参照のこと）、ＡＭ００１５（ポリエチレングリコール修飾ＩＬ－１５、例えば、国際公開第２０１７／１１２５２８号パンフレットを参照のこと）、及びＯＸＳ－３５５０（単鎖、抗ＣＤ１６及び抗ＣＤ３３抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域と改変形態のＩＬ－１５からなる三重特異性ｓｃＦｖ組換え融合タンパク質コンジュゲート、ＣＡＳ Ｒｅｇｉｓｔｒｙ Ｎｏ．２０９４０８６－３０－１，ＵＮＩ：Ｅ５ＧＥ９１Ｑ５ＦＸ）などの分子が挙げられる。
方法
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬、ＭＰＢＡ－ＩＬ１５の少なくとも１つ以上の特徴に基づいて、一態様では、本明細書で提供されるのは、腫瘍細胞を標的にするキメラ抗原受容体を発現するように遺伝的に形質転換されている自家又は同種間の（好ましくは自家の）抗腫瘍Ｔ細胞、例えば先に記載した通りの及び抗腫瘍活性を有するＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞、を含む養子細胞免疫療法組成物を投与することによって、ＭＰＢＡ－ＩＬ１５の投与前に癌患者における免疫応答を誘導し、それと共に／それに続いて長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬、すなわちＭＰＢＡ－ＩＬ１５の投与を行い、それによって治療効果の増強を達成するのに有効な方法である。好ましい実施形態では、Ｔ細胞免疫療法は、ＣＤ１９指向性の遺伝子改変された自家Ｔ細胞を含む。実例となる養子細胞免疫療法組成物は、癌に関連する抗原（例えばＣＤ１９）に誘導される抗体の細胞外可変ドメイン、ヒンジ及び膜貫通ドメイン、及びＴ細胞又は他の受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン（共刺激ドメインなど）を含むキメラ抗原受容体を発現するように改変された腫瘍反応性のＴ細胞を含む。例えば、腫瘍反応性のＴ細胞は、ＣＤ１９分子に誘導される単鎖抗体に由来するキメラ抗原受容体で改変することができる。いくつかの実施形態では、細胞組成物は、ＣＡＲで改変された細胞傷害性腫瘍細胞、例えば、ＣＤ１９ ＣＡＲで改変されたＣＤ８＋Ｔリンパ球を含み、さらに、他の種類のＴリンパ球（例えば、ヘルパーＴリンパ球）、例えば、癌に関連する抗原（例えばＣＤ１９）に誘導されるキメラ抗原受容体を有するように遺伝子改変されているＣＤ４＋又は他のＴ細胞を含むことができ、本開示は、この点に関して（すなわち、ＣＡＲ Ｔ細胞、例えばＣＤ１９指向性ＣＡＲ Ｔ細胞を含む養子細胞免疫療法組成物の特定の構成に）限定されない。本明細書で提供される方法に使用するのに適した代表的なＣＡＲ Ｔ細胞組成物は、先行するセクションに記載されている。
いくつかの実施形態では、養子細胞免疫療法組成物中に含まれる細胞は、最初にその培養培地から回収し、続いて洗浄し、治療有効量での投与に適した媒体及び容器系に細胞を濃縮することによって配合される。好適な注入媒体は、例えば、特に、通常の生理食塩水、ＲＰＭＩ １６４０（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）、ＡＩＭ Ｖ無血清培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）、及びＸ－ＶＩＶＯ（商標）培地（Ｌｏｎｚａ Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ）、５％デキストロース水溶液、又は乳酸リンゲル液などの、あらゆる等張性の媒体調合物であり得る。
ＣＡＲ Ｔ細胞、例えばＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む養子細胞免疫療法組成物は、典型的には、治療有効量で、すなわち、対象に免疫を与えるのに有効な量で投与される。免疫は、リンパ球応答が誘導される腫瘍又は癌に伴う１つ以上の身体症状を和らげることを意味する。養子細胞免疫療法組成物は、典型的には、注入によって投与され、各注入は、少なくとも２個の細胞から少なくとも１０６～１０１０個の細胞／ｋｇ、好ましくは少なくとも１０７～約１０９個の範囲の細胞／ｋｇ、又は好ましくは少なくとも１０６～約１０８個の範囲の細胞／ｋｇを含む。いくつかの具体的な、ただし非限定的な実施形態では、各注入は、少なくとも約０．２×１０６細胞／ｋｇ～約６．０×１０８細胞／ｋｇ、少なくとも約２．０×１０６細胞／ｋｇ～約２．０×１０８細胞／ｋｇ、少なくとも約０．２×１０６細胞／ｋｇ～約５．０×１０６細胞／ｋｇ、少なくとも約０．１×１０８細胞／ｋｇ～約２．５×１０８細胞／ｋｇ、又は少なくとも約０．６×１０８細胞／ｋｇ～約６．０×１０８細胞／ｋｇを含む。細胞は、単回注入によって、又は複数回注入によって投与することができる。いくつかの特定の実施形態では、細胞は、単回投与注入として投与される。別の個体は応答性が異なるので、注入される細胞の数、並びに注入の回数、及び複数回注入が施される時間範囲は、慣例的な調査によって決定される場合に、医療従事者によって決定することができる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞免疫療法の施与に、リンパ球除去化学療法レジメンの施与、例えば、（典型的には静脈内への）シクロホスファミド及び（典型的には静脈内への）フルダラビンの投与が先行する。
本明細書に記載される方法によれば、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、ＣＡＲ Ｔ細胞免疫療法の結果を増強するのに有効な量で投与される。確認のために、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬、ＭＰＢＡ－ＩＬ１５に関して、活性化の量及び程度は広く変動する可能性があり、養子細胞免疫療法組成物の投与と組み合わせた場合にやはり有効であり得る。すなわち、十分に長い期間、最小限のＩＬ－１５受容体作動薬活性のみを呈する量のＭＰＢＡ－ＩＬ１５は、ＣＡＲ Ｔ細胞療法と組み合わせて投与される場合に限り、やはり長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬であり得、本明細書に記載した方法は、臨床的に意味のある応答を可能にする。ある種の場合には、（例えば）相乗的相互作用及び応答のおかげで、ＣＡＲ Ｔ細胞療法、例えば、ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞療法を伴う場合、最小限のＩＬ－１５受容体作動薬活性のみが必要とされる可能性がある。投与される長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬の片方又は両方の治療量及びＣＡＲ Ｔ細胞の数は、単独で投与される場合のいずれかの構成成分の治療有効量よりも低い可能性があるということを理解されたい。
本明細書に記載する通り、本開示の一態様は、（特に）養子細胞免疫療法組成物と長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬のいずれか又は両方での治療に応答性である状態（癌など）を患う患者を治療するのに有用である方法を提供する。例えば、患者は、個々の薬剤単独、並びに組み合わせに応答性であり得るが、組み合わせに対して、より応答性である。さらなる例としては、患者は、個々の免疫療法薬の１つに対して非応答性であり得るが、組み合わせに対して応答性である。いっそうさらなる例としては、患者は、個々の薬剤単独のいずれかに対して非応答性であり得るが、組み合わせに対して応答性である。
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬、ＭＰＢＡ－ＩＬ１５は、当技術分野で公知のあらゆる好適な手段によって投与することができる。いくつかの実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、非経口的に投与される。本明細書で使用する場合、用語「非経口」には、皮下、静脈内、動脈内、腫瘍内、リンパ内、腹腔内、心臓内、髄腔内、及び筋肉内注射、並びに注入が含まれる。
ＭＰＢＡ－ＩＬ１５は、投与又はさらなる使用に適した組成物を形成するために、１つ以上の好適な賦形剤又は希釈剤と組み合わせることができる。長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、１種以上の薬学的に許容し得る賦形剤を任意に伴う単回投与組成物中に含まれ得る。好適な薬学的に許容し得る賦形剤としては、例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，７ｔｈ ｅｄ．，Ｒｏｗｅ，Ｒ．Ｃ．，Ｅｄ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，２０１２に記載されているものが挙げられる。そのような例示的な製剤は、ＭＰＧＡ－ＩＬ１５を、リン酸緩衝液及びトレハロース（６．８のｐＨ）を含む溶液に入れたものを含む。例えば、例示的な製剤は、ＭＰＢＡ－ＩＬ１５を、リン酸カリウム緩衝液、トレハロース、及びポリソルベート２０（約６のｐＨ）の溶液中に配合したものを含む。
非経口投与のための好適な製剤型としては、特に、すぐに注射可能な液剤、使用前に溶媒と組み合わせるための乾燥粉末、すぐに注射可能な懸濁液、使用前にビヒクルと組み合わせるための乾燥不溶性組成物、及び投与前に希釈するための乳濁液及び液体濃縮物が挙げられる。いくつかの特定の実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、静脈内投与に適した製剤で提供され、静脈内投与される。いくつかの他の実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、皮下投与に適した製剤で提供され、皮下投与される。いくつかの追加の実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、腫瘍内に投与される。肺内、鼻腔、頬側、直腸内、舌下、及び経皮などの、他の投与様式も企図される。
一般に、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬の治療有効量は、投与されるタンパク質（ＩＬ－１５等価物）の用量に基づいて、約５ｍｃｇ（μｇ）～約１０ｍｇの範囲となる。所与の用量を、例えば、臨床医が、適切なエンドポイント（例えば、治癒、退縮、部分退縮、その他）が達成されたと決定するまで周期的に投与することができる。
いくつかの実施形態では、治療有効用量の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬、ＭＰＢＡ－ＩＬ１５は、約０．１０～７０ｍｃｇ／ｋｇ（マイクログラム／キログラム、μｇ／ｋｇ（ＩＬ－１５等価物））の範囲である。他の実施形態では、治療有効用量は、約０．１０ｍｃｇ／ｋｇ～約５０ｍｃｇ／ｋｇ、又は約０．３０～約４５ｍｃｇ／ｋｇ、又は約０．２５ｍｃｇ／ｋｇ～約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約０．１ｍｇ／ｋｇ／日、又は約０．０３ｍｇ／ｋｇ～約０．１ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。他の実施形態では、治療有効用量は、約１～１０ｍｃｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ～約０．１ｍｇ／ｋｇの範囲である。いくつかの具体的な、ただし非限定的な実施形態では、治療有効用量は、約０．２５ｍｃｇ／ｋｇ、０．３ｍｃｇ／ｋｇ、０．５ｍｃｇ／ｋｇ、１ｍｃｇ／ｋｇ、２ｍｃｇ／ｋｇ、３ｍｃｇ／ｋｇ、５ｍｃｇ／ｋｇ、６ｍｃｇ／ｋｇ、７ｍｃｇ／ｋｇ、１０ｍｃｇ／ｋｇ、１５ｍｃｇ／ｋｇ、２０ｍｃｇ／ｋｇ、２５ｍｃｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、又は０．１ｍｇ／ｋｇである。
さらにいくつかのさらなる実施形態では、治療有効用量の長時間作用型ＩＬ－１５Ｒ作動薬は、約０．２５～２５μｇ／ｋｇの範囲である。他の実施形態では、治療有効用量は、（例えば１日あたり）約０．２５μｇ／ｋｇ～約０．１ｍｇ／ｋｇ、約１．０μｇ／ｋｇ～約２０μｇ／ｋｇ、約１．０μｇ／ｋｇ～約１５μｇ／ｋｇ、約１．０μｇ／ｋｇ～約１０μｇ／ｋｇ、約１．０μｇ／ｋｇ～約５．０μｇ／ｋｇ、約１μｇ／ｋｇ～約１．５μｇ／ｋｇ、約１．５μｇ／ｋｇ～約２０μｇ／ｋｇ、約１．５μｇ／ｋｇ～約１５μｇ／ｋｇ、約１．５μｇ／ｋｇ～約１０μｇ／ｋｇ、約１．５μｇ／ｋｇ～約５．０μｇ／ｋｇ、約５．０μｇ／ｋｇ～約２０μｇ／ｋｇ、約５．０μｇ／ｋｇ～約１５μｇ／ｋｇ、約５．０μｇ／ｋｇ～約１０μｇ／ｋｇ、約１０約１．５μｇ／ｋｇ～約２０μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ～約２０μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ～約１５μｇ／ｋｇ、約１５μｇ／ｋｇ～約２０μｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約０．１ｍｇ／ｋｇ／日、又は約０．０３ｍｇ／ｋｇ～約０．１ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。他の実施形態では、治療有効用量は、約１～１０μｃｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ～約０．１ｍｇ／ｋｇの範囲である。いくつかの具体的な、ただし非限定的な実施形態では、治療有効用量は、約０．２５μｇ／ｋｇ、０．３μｇ／ｋｇ、０．５μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ、１．５μｇ／ｋｇ、２μｇ／ｋｇ、３μｇ／ｋｇ、５μｇ／ｋｇ、６μｇ／ｋｇ、７μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ、１５μｇ／ｋｇ、２０μｇ／ｋｇ、２５μｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、又は０．１ｍｇ／ｋｇ／日である。
養子細胞免疫療法組成物の投与の場合のように、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬の用量は、例えば、対象の年齢、体重、及び全身状態、並びに治療される状態の重症度、個別の養子細胞免疫療法組成物、及び医療従事者の判断に応じて変わることとなる。
１つ以上の実施形態において、養子細胞移植は、長時間作用型のＩＬ－１５受容体作動薬の投与前に行われる。例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞の養子細胞移植に基づく細胞点滴は、ＭＰＢＡ－ＩＬ１５の投与前、１時間まで、２時間まで、３時間まで、４時間まで、５時間まで、６時間まで、７時間まで、８時間まで、９時間まで、１０時間まで、１１時間まで、１２時間まで、１日まで、２日まで、３日まで、４日まで、５日まで、６日まで、７日まで、８日まで、９日まで、１０日まで、１１日まで、１２日まで、１３日まで、１４日まで、１５日まで、１６日まで、１７日まで、１８日まで、１９日まで、２０日まで、２１日まで、２２日まで、２３日まで、２４日まで、２５日まで、２６日まで、２７日まで、２８日まで、２９日まで、１か月まで、３か月まで、６か月まで、又は何らかのそれらの組み合わせですぐに行われ得る。
或いは、いくつかの実施形態では、養子細胞移植は、長時間作用型のＩＬ－１５受容体作動薬の投与後に実施される。例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞の養子細胞移植に基づく細胞注入は、ＭＰＢＡ－ＩＬ１５の投与後、すぐに、１時間までに、２時間までに、３時間までに、４時間までに、５時間までに、６時間までに、７時間までに、８時間までに、９時間までに、１０時間までに、１１時間までに、１２時間までに、１日までに、２日までに、３日までに、４日までに、５日までに、６日までに、７日までに、８日までに、９日までに、１０日までに、１１日までに、１２日までに、１３日までに、１４日までに、１５日までに、１６日までに、１７日までに、１８日までに、１９日までに、２０日までに、２１日までに、２２日までに、２３日までに、２４日までに、２５日までに、２６日までに、２７日までに、２８日までに、２９日までに、１か月までに、３か月までに、６か月までに、又はそのいずれかの組み合わせで行うことができる。
癌を有する対象の治療に関して本明細書で使用する場合、用語「治療」、「治療する」、及び「治療すること」は、たとえ癌が実際に除去されないとしても、癌の１つ以上の症状を軽減させる、減速させる、停止させる、若しくは逆行させるための、又は癌の進行を遅延させるための組み合わせの投与などの、対象が患っている癌に対する全範囲の介入を含むことが意図される。治療には、例えば、症状の重症度、症状の数、又は再発の頻度の低下、例えば、腫瘍成長の抑制、腫瘍成長の阻止、又は既存の腫瘍の退縮が含まれ得る。
例えば、癌又は癌関連疾患の改善は、完全奏功又は部分奏効と特徴付けることができる。「完全奏功」は、以前のあらゆるＸ線検査、骨髄、及び脳脊髄液（ＣＳＦ）の異常、又はモノクローナルタンパク質測定値の異常の正常化を伴い、臨床的に検出可能な疾患がないことを指す。「部分奏効」は、新たな病変の非存在下での、すべての測定可能な腫瘍量（すなわち、対象に存在する悪性Ｔ細胞の数、又は腫瘍塊の測定される容積、又は異常なモノクローナルタンパク質の量）の少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％低下を指す。用語「治療」は、完全奏功と部分奏効の両方を企図する。
養子細胞免疫療法組成物の注入及び長時間作用型のＩＬ－１５受容体作動薬の投与の頻度及びスケジュールに関しては、当業者が、適切な頻度を決定することができるであろう。例えば臨床医は、治療サイクルにおいて、ＣＡＲ Ｔ細胞の養子細胞移植と同時に又は好ましくは養子細胞移植後のいずれかでの長時間作用型のＩＬ－１５受容体作動薬の投与と併用して養子細胞移植を行い得る。例えば一部の治療モダリティにおいて、長時間作用型のＩＬ－１５受容体作動薬をＣＡＲ Ｔ細胞の養子細胞移植の約７日以内に（例えば１、２、３、４、５、６又は７日目のいずれか１日に）投与する。一部の例において、長時間作用型のＩＬ－１５受容体作動薬、すなわちＭＰＢＡ－ＩＬ１５を養子細胞移植の４日以内、例えば１、２、３又は４日目のいずれか１日に投与する。ＭＰＢＡ－ＩＬ１５の長時間作用性質に基づき、ＩＬ－１５受容体は、典型的には、比較的低頻度で（例えば３週間に１回、２週間に１回、８～１０日に１回、週に１回など）投与する。
治療過程に関連する例示的な時間の長さには、約１週間；約２週間；約３週間；約４週間；約５週間；約６週間；約７週間；約８週間；約９週間；約１０週間；約１１週間；約１２週間；約１３週間；約１４週間；約１５週間；約１６週間；約１７週間；約１８週間；約１９週間；約２０週間；約２１週間；約２２週間；約２３週間；約２４週間；約７ヵ月；約８ヵ月；約９ヵ月；約１０ヵ月；約１１ヵ月；約１２ヵ月；約１３ヵ月；約１４ヵ月；約１５ヵ月；約１６ヵ月；約１７ヵ月；約１８ヵ月；約１９ヵ月；約２０ヵ月；約２１ヵ月；約２２ヵ月；約２３ヵ月；約２４ヵ月；約３０ヵ月；約３年；約４年；約５年が含まれる。一般的には、患者に１ラウンドの養子細胞移植、例えば、ＣＤ１９ ＣＡＴ Ｔ細胞が提供され、続いて１回以上、長時間作用型のＩＬ－１５受容体作動薬、ＭＰＢＡ－ＩＬ１５が投与されるが、一部の例においては、養子細胞移植の１回以上のさらなるサイクルが行われ得る。
本明細書に記載される治療方法は、典型的には、患者ケアを監督する臨床医がその治療方法を有効である、即ち患者が治療に応答していると見なす限り継続される。治療方法が有効であることの指標となる非限定的なパラメータには、以下の１つ以上が含まれ得る：腫瘍縮小（重量及び／又は容積及び／又は外観の点で）；個別の腫瘍コロニーの数の減少；癌細胞の数の減少；腫瘍消失；無進行生存；好適な腫瘍マーカーによる適切な応答（該当する場合）、ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞数の増加、Ｔ細胞数の増加、メモリーＴ細胞数の増加、セントラルメモリーＴ細胞数の増加、制御性Ｔ細胞、例えばＣＤ４＋Ｔｒｅｇ、ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ、及びＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇの数の低下。
先に記載した通り、養子細胞組成物（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞を含む）と長時間作用型のＩＬ－１５受容体作動薬は、別々に投与することができる。或いは、初回用量として、又は治療過程全体にわたり、又は投与レジメンの様々な段階において、養子細胞移植及び長時間作用型のＩＬ－１５受容体作動薬の投与の提供が同時であることが所望される場合（及びＣＡＴ Ｔ細胞及び長時間作用型のＩＬ－１５受容体作動薬が、一緒に、及びある所与の製剤中で適合する）、単回剤形／製剤の点滴（例えば両方の免疫学的成分を含有する静脈内製剤の静脈内投与）により同時投与を達成し得る。
本明細書に記載した方法及び組成物を、癌などの、本明細書に提供される方法によって治療（ｒｅｍｅｄｙ）又は予防することができるあらゆる状態を患う患者を治療するために使用することができる。例えば、これらの方法は、例えば、その他の状態の中でも特に、固形腫瘍、血液系腫瘍（液状癌）、又は黒色腫の治療に有用である。例示的な状態は、癌、例えば、黒色腫、腎臓癌、非小細胞肺乳癌（ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ）（例えばトリプルネガティブ乳癌）、膀胱癌、頭頸部癌、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵癌、脳癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胚性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、精巣癌、肺癌、小細胞肺癌、脳癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、多発性骨髄腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫及び白血病などである。
一部の特定の実施形態において、癌は固形癌である。
また一部のさらなる実施形態において、癌は、例えば、乳癌、卵巣癌、結腸癌、前立腺癌、骨癌、結直腸癌、胃癌、リンパ腫、悪性黒色腫、肝臓癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膵臓癌、甲状腺癌、腎臓癌、胆管癌、脳癌、子宮頸癌、上顎洞癌、膀胱癌、食道癌及び副腎皮質癌から選択される。
また１つ以上のさらなる実施形態において、癌は、黒色腫、腎臓癌、非小細胞肺癌、乳癌、膀胱癌、頭頸部癌及び結腸癌から選択される。
１つ以上の特定の実施形態において、乳癌はトリプルネガティブ乳癌である。トリプルネガティブ乳癌は、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体及びＥＲＢＢ２（ＨＥＲ２）遺伝子増幅を欠く非常に悪性度の高い腫瘍である。
いくつかの他の実施形態では、癌は、リンパ腫又は白血病である。
いくつかのさらなる実施形態では、癌は、限定はされないが、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、及びワルデンシュトレームマクログロブリン血症（ＷＭ）から選択されるＢ細胞悪性腫瘍であり、患者集団は、小児患者と成人患者の両方を包含する。
本方法は、例えば長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬、ＭＰＢＡ－ＩＬ１５の投与によって対象の応答を向上させることによって、ＣＡＲ Ｔ細胞、例えばＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞の養子細胞移植の治療有効性を増強するのに有用である。応答の増強は、治療中、単一ラウンドの治療後、２～３サイクルの治療後など、あらゆる好適な時点で、また、例えば、いくつかの好適な方法（腫瘍の縮小（部分奏効）を含む）、すなわち、腫瘍サイズ又は体積、腫瘍の消失、癌細胞の数の減少、疾患進行の低下（癌が進行していないこと）の評価、及び適切な場合、１つ以上の腫瘍検査マーカーの分析のいずれかによって、評価することができる。比較は、ヒト患者において、又は癌の好適なマウスモデルなどの好適な動物モデルにおいて行うことができる。
さらに一部の別の実施形態において、本明細書に提供される方法、キット、組成物、及び組み合わせは、対象におけるＴ細胞及び／又はＮＫ細胞活性及び／又は増殖を刺激するために有効である。一部の実施形態において、本方法は、例えば対応する癌の癌マウスモデルにおいて評価する場合、対象におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の数の増加に有効である。さらに一部の他の実施形態において、本方法は、例えば対応する癌のマウスモデルにおいて評価する場合、対象におけるＮＫ細胞数を増加させるために有効である。
ＣＡＲ－Ｔ細胞を特徴付ける及びモニタリングし、限定はされないがＮＫ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及びＣＤ８＋メモリー細胞を含めた免疫細胞集団の数及び活性化に対する、治療法の効果を評価するために、血液試料を、治療前と治療中の両方で、対象から収集することができる。遺伝子改変されたＣＤ１９指向性ＣＡＲ－Ｔ細胞の特徴付け及び持続的モニタリングは、治療前及び治療中に定量ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）によって、末梢血液において実施することができ、ＣＡＲ－Ｔ細胞の形質も、フローサイトメトリーによって評価することができる。血液試料はまた、治療法に応答するサイトカインレベルの変化を決定するために及び遺伝子発現の変化をプロファイルするために、治療前及び治療中に収集することができる。さらに、全血試料又はＰＢＭＣを収集し、他の免疫機能の評価のために使用することができる。
可能な場合、腫瘍細胞及び免疫系活性化の特徴付けのために、治療前、治療中、及び治療後に、新鮮な骨髄生検材料を収集することができる。評価には、腫瘍微小環境における腫瘍特異的なタンパク質マーカー及び免疫細胞集団の変化の評価が含まれ得る。骨髄における遺伝子改変されたＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞の特徴付け及びモニタリングは、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬、例えばＭＰＢＡ－ＩＬ１５の投与での治療前及び治療後に、定量ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）によって実施され得る。
腫瘍生検材料収集も行うことができる。生検は、好ましくは、以前に放射線に曝露されていない病変に実施するべきである。生検材料は、生検に適した他の病変が存在しないのでなければ、非標的病変から得ることができる。治療前と治療後の腫瘍組織生検材料は、好ましくは、可能であれば同じ病変から採取されるべきである。さらに、生検材料は、対照生検としての役割を果たすために、遠く離れた非注射病変から採取することができる。腫瘍組織生検を使用して、マーカーのパネル（限定はされないが、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ５６が含まれる）を使用する免疫組織化学（ＩＨＣ）及び／又はフローサイトメトリーを用いて、浸潤している免疫細胞集団を特徴付けることができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組み合わせ免疫療法は、多くのＡＣＴに基づく治療法とは対照的に、腫瘍部位での又は血液内の、外因的に送達されるＣＡＲ Ｔ細胞の程度及び残存性（すなわち維持）を増大し、それによって抗腫瘍有効性の増大を提供するのに有効である。
本明細書において参照される全ての論文、書籍、特許、特許公報及び他の刊行物は、全体として参照により援用される。本明細書の教示と参照によって援用される技術との間に不一致が生じた場合、その教示の意味及び本明細書の定義が（特に本明細書に添付される特許請求の範囲で用いられる用語に関して）優先するものとする。例えば、本願及び参照によって援用される刊行物が同じ用語を別様に定義する場合、定義が載せられている文書の教示の範囲内でその用語の定義が維持されるものとする。
前述の説明並びに以下の例は例示を意図するもので、本開示の範囲を限定する意図はないことが理解されるべきである。本開示が関係する技術分野の当業者には、本発明の範囲内の他の態様、利点及び変形例が明らかであろう。
材料及び方法
ＣＡＲ Ｔ細胞：ＣＤ１９／４－１ＢＢ／ＣＤ３ζ ＣＡＲを発現するヒトＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞を、以前に記載されている通りに、健康なドナーから産生した。例えば、Ｔｕｒｔｌｅ，Ｃ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．２０１６；１２６（６）：２１２３－２１３８及び米国特許第９，９８７，３０８号明細書を参照のこと。簡単に言うと、ＣＤ４ Ｔ細胞及びＣＤ８ Ｔ細胞を単離し、ＣＤ１９ ＣＡＲレンチウイルスベクター（図２）を用いて別々に形質導入し、形質導入された細胞を選別し、次いで、ＬＣＬ（リンパ芽球様Ｂ細胞株細胞を用いて１４～１６日間増殖させた；細胞を、１５日目に分析した。
従来の技術を使用して調製された、組換え型ＩＬ－１５（「ｒＩＬ－１５」）配列番号１（図１に提供した通り）を、以下の実施例で使用したが、あらゆる好適なＩＬ－１５部分を同様に用いることができる。配列番号１、すなわち大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）封入体から発現及び精製される非グリコシル化組換え型ヒトＩＬ－１５は、１１５個のアミノ酸を含有し、２つのジスルフィド架橋を有し、約１２．９ｋＤａの分子量を有する。ｒＩＬ－１５配列には、天然の分泌されるヒトＩＬ－１５には存在しないＮ末端に追加されたメチオニンが含まれる。
反応性の線状ポリマー試薬、ｍＰＥＧ－ブタン酸スクシンイミジル、４０ｋＤａ（「ｍＰＥＧ－ＳＢＡ」）、ＣＡＳ Ｎｏ．１８７８４８－５１－７は、次の構造
Figure 2022526408000004
 （式中、ｎは、約４０キロダルトンの名目上の平均分子量を有するポリマーを提供するためのモノマーサブユニットの平均数に相当する、すなわち、ここでは、平均すると、ｎは約９０７～９０９である）
を有する。ＰＥＧ試薬は、約１．１未満、例えば、約１．０５の多分散値を有し、その結果、名目上の平均分子量は、約３７キロダルトン～約４５キロダルトン（４１ｋＤ±４ｋＤａ）の範囲である。ｍＰＥＧＳＢＡは、典型的には、白色ないしオフホワイトの粉末の形状である。使用に適した追加のｍＰＥＧ－ブタン酸スクシンイミジル試薬としては、例えば、約１０ｋＤ、１５ｋＤ、２０ｋＤ、２５ｋＤ、３０ｋＤ、４５ｋＤ、５０ｋＤ、又は６０ｋＤの重量平均分子量を有するものが挙げられる。この活性化型のポリマー試薬は、ＩＬ－１５のアミノ基（例えば、リジン又はＮ末端）と反応した場合に、ＩＬ－１５部分とポリエチレングリコール部分との間の安定なアミド結合を形成するのに有効である。
モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５は、例えば、下の実施例１に記載されている通りに調製することができる。モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（本明細書ではＭＰＢＡ－ＩＬ１５と称され得る）は、ＩＬ－１５のリジンに又はＮ末端アルファアミンに共有結合的に付着された単一のｍＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド部分を有する、主にモノＰＥＧ化されたＩＬ－１５の分類であり、微量のジペグ化及びそれ以上のペグ化ＩＬ－１５種を伴う（ＣＡＳ Ｒｅｇｉｓｔｒｙ Ｎｏ．２３６１３１７－０９－９）。モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５の追加の特徴は、例えば、国際公開第２０１８／２１３３４１号パンフレット（その内容が参照によって本明細書に組み込まれる）に記載されている。
効力バイオアッセイ：ＭＰＢＡ－ＩＬ１５の効力を、ｐＳＴＡＴ５／全ＳＴＡＴ５マルチプレックスアッセイ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，ＭＤ）を使用して、ＣＴＬＬ－２細胞、すなわちＩＬ－１５αサブユニットを発現するマウスＴリンパ球細胞株における、ＳＴＡＴ５のリン酸化によって決定した。ＣＴＬＬ－２細胞上の受容体結合後、下流の細胞シグナル伝達が、リン酸化を介してＳＴＡＴ５を活性化して、遺伝子発現を促進して細胞増殖を誘発する。効力アッセイについては、リガンド結合時の受容体の下流のＳＴＡＴ５シグナル伝達分子のリン酸化を評価して、短時間での生物学的反応を測定した。
参照材料、アッセイ対照、及び試験試料を、アッセイ培地を使用して１０倍の最終濃度に段階希釈し、次いで、３７℃／５％ ＣＯ２での１０分のインキュベーションのために、一定数の細胞に適用した。リン酸化ＳＴＡＴ５／全ＳＴＡＴ５マルチプレックスアッセイ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，ＭＤ）を使用して、リン酸化及び全ＳＴＡＴ５を測定した。４パラメータモデルを使用する非線形回帰分析によって、用量依存性のリン酸化タンパク質反応曲線（％）を作成した。平行線検定（ＰＬＡ）ソフトウェアを使用して、回帰の平行性、有意性を評価し、同じプレート内の参照材料に対する試料の相対効力を算出した。
逆相ＨＰＬＣを使用して、２１４ｎｍでの紫外線（ＵＶ）検出を使用する、ＨＡＬＯ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃ４分析用カラム、２５℃の温度、１．０ｍＬ／分の流速を使用する且つ水／アセトニトリル／トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）のリニアグラジエントを用いる逆相ＨＰＬＣによってＭＰＢＡ－ＩＬ１５の純度を評価した。
サイズ排除ＨＰＬＣを使用して、０．５ｍＬ／分の流速で２５℃で動作させるＳｈｏｄｅｘ Ｐｒｏｔｅｉｎ ＫＷ－８０３カラムを使用して、ＭＰＢＡ－ＩＬ１５の相対純度を評価した。２１４ｎｍでのＵＶ検出を用いて、１５ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．２（アセトニトリル中）を使用して、クロマトグラフィー溶離を実施した。
イオン交換ＨＰＬＣも使用して、１．０ｍＬ／分の流速で４０℃で動作させるＡｇｉｌｅｎｔ ＰＬ－ＳＡＸカラムを使用して酸性及び塩基性であるチャージバリアントを分離することによって、ＭＰＢＡ－ＩＬ１５の相対純度を評価した。溶離は、ビス－トリスプロパン（ｐＨ６．８）：イソプロピルアルコール及びビス－トリスプロパン（ｐＨ６．８）（ＮａＣｌの溶液を含む）：イソプロピルアルコールのリニアグラジエント、及び２１４ｎｍでのＵＶ検出を使用して実施した。
実施例１
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ＫＤインターロイキン－１５の調製
Figure 2022526408000005
 調製１：ｒＩＬ－１５の２．７ｍｌ溶液（１．２３ｍｇ／ｍｌ、ＰＢＳ緩衝液中、ｐＨ７．４）を、小さい反応バイアルに移した。３００μｌのｐＨ８の０．６Ｍホウ酸緩衝液を添加して、ｐＨをｐＨ８に調整した。窒素中で－２０℃で保管されたｍＰＥＧ－ＳＢＡ、４０ｋＤａ（名目上の平均分子量）を、周囲温度に温めた。（ＩＬ－１５のモル量に対して）１０倍過剰のｍＰＥＧ－ＳＢＡ－４０Ｋを、２ｍＭ ＨＣｌに溶解して、１０％ ＰＥＧ試薬液を形成した。この１０％ ＰＥＧ試薬液を、ＩＬ－１５溶液に迅速に添加し、十分に混合した。ｍＰＥＧ－ＳＢＡ－４０Ｋの添加後、反応混合物のｐＨを決定し、従来の技術を使用してｐＨ８に調整した。ｍＰＥＧ－ＳＢＡ－４０ＫのＩＬ－１５への（すなわち、安定なアミド結合の形成を介する）カップリングを可能にするために、反応溶液を、Ｓｌｏｗ Ｓｐｅｅｄ Ｌａｂ Ｒｏｔａｔｏｒに１．５時間乗せて、室温でのコンジュゲート形成を促進させた。反応は、グリシンの溶液の添加によって停止させた。
この反応は、４０％モノ－コンジュゲート（すなわち、ＩＬ－１５に付着した単一のＰＥＧ部分を有する）、２４％ジ－コンジュゲート（ＩＬ－１５に付着した２つのＰＥＧを有する）、及び６％トリ－コンジュゲート（ＩＬ－１５に付着した３つのＰＥＧを有する）種をもたらした。およそ３０％未反応のＩＬ－１５が、反応混合物中に残存していたが、反応条件は最適化されなかった。
モノ－コンジュゲートを、Ｑ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅカラム、及び溶出相としてのリン酸ナトリウム緩衝液を使用するアニオン交換クロマトグラフィーによって分離／単離した。精製されたモノ－ｍＰＥＧ－ＳＢＡ４０Ｋ－ＩＬ－１５コンジュゲート（本明細書では、モノ－ｍＰＥＧ－ブタンアミド－４０Ｋ－ＩＬ－１５又はモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５、又はモノ－ｍＰＥＧ４０Ｋ－Ｃ４－アミド－ＩＬ－１５とも称される）を、ＨＰＬＣ及びＳＤＳ－ＰＡＧＥによって特徴付けた。残りの実施例については、精製されたモノ－ｍＰＥＧ－ＳＢＡ４０Ｋ－ＩＬ－１５を、コンジュゲート１と称する。
ＳＤＳゲルによって示される通り、精製されたコンジュゲートが、高レベルの純度を有することが決定され、検出可能な量の未反応のＩＬ－１５は存在しなかった。ＨＰＬＣプロットに基づくと、精製されたモノ－ｍＰＥＧ－ＳＢＡ－４０Ｋ－ＩＬ－１５組成物は、約１０％（モル量）未満のジ－又はより高いレベルのコンジュゲートを含有していた。
この合成手法を使用して、異なる名目上の平均分子量を有する（例えば、それぞれ、約１０キロダルトン、１５キロダルトン、２０キロダルトン、２５キロダルトン、３０キロダルトン、４５キロダルトン、５０キロダルトン、６０キロダルトンなどの名目上の平均分子量を有する）ｍＰＥＧ－ＳＢＡを使用して、モノ－ｍＰＥＧ－ＳＢＡ－１０Ｋ－ＩＬ－１５、モノ－ｍＰＥＧ－ＳＢＡ－１５Ｋ－ＩＬ－１５、モノ－ｍＰＥＧ－ＳＢＡ－２０Ｋ－ＩＬ－１５、モノ－ｍＰＥＧ－ＳＢＡ－２５Ｋ－ＩＬ－１５、モノ－ｍＰＥＧ－ＳＢＡ－３０Ｋ－ＩＬ－１５；モノ－ｍＰＥＧ－ＳＢＡ－４５Ｋ－ＩＬ－１５；モノ－ｍＰＥＧ－ＳＢＡ－５０Ｋ－ＩＬ－１５；及びモノ－ｍＰＥＧ－ＳＢＡ－６０Ｋ－ＩＬ－１５などのコンジュゲートを調製する。
調製２：ｒＩＬ－１５を緩衝液（５０ｍＭリン酸ナトリウム、１００ｍＭ塩化ナトリウム、１０％スクロース、ｐＨ７．４）に入れたおよそ２ｍｇ／ｍｌの溶液を、２つの異なる反応容器のそれぞれに移した（本明細書では、組成物１及び組成物２と称される）。ｐＨを８．０に調整するために、ｐＨ８のホウ酸緩衝液（０．４Ｍ又は０．６Ｍ）を添加した。２ｍＭ ＨＣｌで希釈された、（ＩＬ－１５のモル量に対して）１０倍過剰のｍＰＥＧ－ＳＢＡ－４０Ｋ（ｍＰＥＧ－ＳＢＡ、４０ｋＤａ）を、ＩＬ－１５溶液のそれぞれに添加し、十分に混合した。ｍＰＥＧ－ＳＢＡ－４０Ｋの添加後、反応混合物のｐＨは、ｐＨ８であると決定された、又は必要であれば追加のホウ酸緩衝液の使用によって調整された。反応物中のｒＩＬ－１５の最終濃度は、必要であれば追加の希釈剤（組成物１については５０ｍＭリン酸ナトリウム、１００ｍＭ塩化ナトリウム、１０％スクロース（ｐＨ７．４）を含有する緩衝液が使用され、組成物２については水が使用された）を使用して、１ｇ／Ｌを目標とした。ｍＰＥＧ－ＳＢＡ－４０ＫのＩＬ－１５への（すなわち、主として安定なアミド結合の形成を介する）カップリングを可能にするために、反応溶液を、組成物１又は組成物２について、それぞれ４５又は６０分間混合して、室温でのコンジュゲート形成を促進させた。反応は、３０分間の、ｐＨ８．０の、（反応物に最初に添加されたＰＥＧのモル量に対して）７１倍過剰のグリシンの溶液の添加によって停止させた。組成物１については、ｐＨを、０．２Ｍリン酸を使用して、滴定によってｐＨ７．０に調整した。
得られた組成物を、逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ－ＨＰＬＣ）、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、及びイオン交換ＨＰＬＣ（ＩＥＸ－ＨＰＬＣ）によって特徴付けた。ＲＰ－ＨＰＬＣ分析の結果を、下の表１Ａに提供する。
Figure 2022526408000006
ＳＥＣ－ＨＰＬＣ分析の結果を、下の表１Ｂに提供する。
Figure 2022526408000007
ＩＥＸ－ＨＰＬＣ分析の結果を、下の表１Ｂに提供する。
Figure 2022526408000008
調製された組成物は、主としてｍＰＥＧ－ＳＢＡ－４０ＫモノＰＥＧ化種を含んでおり、約１０モル％未満のＰＥＧ二量体（すなわち、ＩＬ－１５に付着した２つのＰＥＧ部分を有するもの）、及びさらに少ない量のＩＬ－１５に付着したそれ以上のＰＥＧ種（すなわち、３つ以上のＰＥＧ部分を有するもの）を伴っていた。他に記述される、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５の組成物は、一般に、（非改変ＩＬ－１５及び他のＩＬ－１５含有種、例えば、ジＰＥＧ化ＩＬ－１５及びより大きいものを含めた、得られる組成物中のすべてのインターロイキン－１５種に基づいて）少なくとも約８０モル％のモノＰＥＧ化ＩＬ－１５種を有することとなり、好ましくは、約１０モル％未満の他のＩＬ－１５種と共に、少なくとも約９０モル％のモノＰＥＧ化ＩＬ－１５種を有し得る。いくつかの実施形態では、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５組成物は、約５モル％未満のＰＥＧ二量体（ＩＬ－１５に付着した２つのメトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド部分を有するジＰＥＧ化ＩＬ－１５）と、約５モル％未満の他のすべてのそれ以上のＰＥＧ化種を含む。
モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５の２つのさらなる合成物を、調製及び分析した。分析結果の概要を、下で表１Ｄに提供する。
ＭＰＢＡ－ＩＬ１５を、（タンパク質ベースで）１ｍｇ／ｍＬの濃度のＭＰＢＡ－ＩＬ１５（１０ｍＭリン酸カリウム中）、２６０ｍＭのトレハロース、及び０．０２ｗ／ｖ％ポリソルベート２０（６．８のｐＨ）を含有する溶液として、さらなる使用のために配合することができる。
Figure 2022526408000009
実施例２
ＣＡＲ Ｔ細胞のリン酸化及び増殖に関するモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５のインビトロ研究
モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５のヒトＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞に対するインビトロでの効果を、下に記載した通りに調査した。
インビトロ研究のために、ＣＡＲ Ｔ細胞を、ＣＤ１９抗原と共に又は伴わずに、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（０～１００ｎｇ／ｍＬ）と共にインキュベートした。ＳＴＡＴ５リン酸化及びＣＦＳＥ希釈を、フローサイトメトリーによって評価した。
ＩＬ１５Ｒα発現を、ＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞については図３Ａ（ＣＤ８、緑色実線、右端）に示す通り、またＣＤ４ ＣＡＲ Ｔ細胞については図３Ｂ（ＣＤ４、青色実線、右端）に示す通り、フローサイトメトリーによって測定した。各図において示されるのはまた、ＦＭＯ（灰色－塗りつぶし）及びアイソタイプ（破線）対照である。ＣＤ８及びＣＤ４ ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＩＬ－１５Ｒαを発現する。
ＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞と ＣＤ４ ＣＡＲ Ｔ細胞の両方についての、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（ＭＰＢＡ－ＩＬ１５）に反応するＳＴＡＴ５の用量依存性のリン酸化を、それぞれ図３Ｃ及び３Ｄに示す。ＣＡＲ Ｔ細胞は、種々の濃度のＭＰＢＡ－ＩＬ１５又はＩＬ－１５で２０分間刺激した。ＳＴＡＴ－５リン酸化アッセイにおける、ＩＬ－１５又はモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５に反応する、ＣＤ８及びＣＤ４ ＣＡＲ Ｔ細胞についてのＥＣ５０値（ｎｇ／ｍｌ）を、下にまとめて示す：
Figure 2022526408000010
ＣＦＳＥで標識し、種々の濃度のＭＰＢＡ－ＩＬ１５又はＩＬ－１５と共に４日間インキュベートしたＣＡＲ Ｔ細胞の増殖をまた、フローサイトメトリーによって分析した。結果を、図３Ｅ（ＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞）及び３Ｆ（ＣＤ４ ＣＡＲ Ｔ細胞）に示す。ＥＣ５０値を、下にまとめて示す。
Figure 2022526408000011
図３Ｃ、Ｄ、Ｅ、及びＦについては、四角はＩＬ－１５に相当し、円はＭＰＢＡ－ＩＬ１５に相当する。
上に記載した通り、インビトロで、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５は、ＳＴＡＴ５リン酸化、及びＣＤ８ ＣＤ １９ ＣＡＲ Ｔ細胞とＣＤ４ ＣＤ １９ ＣＡＲ Ｔ細胞との両方の抗原依存性の増殖を、用量依存的に誘発する。
実施例３
前臨床マウスリンパ腫モデルにおけるＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞免疫療法の有効性に関するモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５の研究
モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（例えば、上の実施例１に記載されているもの）は、ＩＬ－１５Ｒαに対する結合親和性を保持し、クリアランス低下を呈し、薬力学的反応の持続を提供する。インビボ異種移植Ｂ細胞リンパ腫モデルにおける、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５のヒトＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞に対する効果を、下に記載した通りの実験で調査した。
一般的方法：インビボ研究のために、ＮＳＧマウスは、－７日目（Ｄ－７）に静脈内に、ホタルルシフェラーゼを発現するように安定に形質導入された５×１０５個のＲａｊｉリンパ腫細胞を、それに続いて、Ｄ０に、単独の又はＤ－１、７、若しくは１４に開始して毎週投与されるモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（０．０３、０．１０、若しくは０．３０ｍｇ／ｋｇ、静脈内注入）と組み合わせた、治療量以下の用量の（０．８×１０６）のＣＡＲ Ｔ細胞（１：１ ＣＤ４：ＣＤ８）の注入を受けた。腫瘍のないマウスは、Ｄ３８に、Ｒａｊｉ細胞を再負荷した。腫瘍を、マウスのバイオルミネセンスイメージングによって、毎週評価した。結果を、図１０に示す。
図４Ａ（種々の治療群についての、ＣＡＲ Ｔ細胞投与後の日数に対する平均腫瘍輝度）に示す通り、ＣＡＲ Ｔ細胞と組み合わせた０．１０ｍｇ／ｋｇ及び０．３０ｍｇ／ｋｇのモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５での治療は、ＣＡＲ Ｔ細胞療法単独と比較した場合の、ＮＳＧマウスにおける腫瘍量の低下及びＲａｊｉリンパ腫の根絶をもたらす。この研究（研究Ａ）では、Ｒａｊｉを有するＮＳＧマウスは、Ｄ０に治療量以下の用量のＣＡＲ Ｔ細胞、それに続いて、Ｄ６に開始してその後毎週（Ｄ１３、Ｄ２０、Ｄ２７、Ｄ３３、など）の０．０３０、０．１０、又は０．３０ｍｇ／ｋｇのモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５を受けた。治療レジメンを、図４Ｂに示す。
さらなる研究（研究Ｂ）では、Ｒａｊｉを有するＮＳＧマウスは、Ｄ０にＣＡＲ Ｔ細胞 注入を受け；０．３０ｍｇ／ｋｇのモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５を、Ｄ－１、Ｄ７、又はＤ１４に、また、その後毎週投与した（５マウス／群）。図７Ｂを参照のこと。マウスを、毎週採血し、ＣＤ８及びＣＤ４ ＣＡＲ Ｔ細胞を、フローサイトメトリーによって特定した（それぞれ図５Ａ及び５Ｂ）。腫瘍量は、図６に示す通りの毎週の生物発光イメージング（ＣＡＲ Ｔ細胞投与後の日数に対する平均腫瘍輝度）及び生存率（図７Ａ）によって評価した。
この前臨床研究の結果は、ＣＡＲ Ｔ細胞と組み合わせたモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５が、血液中のＣＡＲ Ｔ細胞増加をもたらし、腫瘍量を低下させ、Ｒａｊｉリンパ腫を有するＮＳＧマウスの生存率を増大させたことをさらに示した。
研究Ａの０．３０ｍｇ／ｋｇモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５投薬群のマウスについては、ＣＡＲ Ｔ細胞注入後、Ｄ８、１１、１４、２１、及び２８に、マウスを安楽死させた。骨髄及びＣＡＲ Ｔ細胞から単細胞懸濁液を作製し；ＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞及びＣＤ４ ＣＡＲ Ｔ細胞懸濁液について、それぞれ、総細胞数（図８Ａ、９Ａ）、Ｋｉ６７発現（図８Ｂ、９Ｂ）、ＰＤ１及びＴＩＭ３発現（図８Ｃ、９Ｃ）を、フローサイトメトリーによって評価した。グラフは、平均値±ＳＥＭを示す。
図８Ａ及び９Ａに示す通り、例示的な組み合わせ免疫療法で治療したマウスは、骨髄におけるＣＡＲ Ｔ細胞の絶対数が増大した。ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５と組み合わせたＣＡＲ Ｔ細胞療法は、Ｒａｊｉを有するマウスの骨髄におけるＣＡＲ Ｔ細胞の蓄積増大及び増殖、並びにＰＤ１及びＴＩＭ３の延長される二重発現の減少をもたらした（図８Ｃ、９Ｃ）。
Ｄ－１、７、又は１４に開始するモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５のインビボの注入は、血液中のピークＣＡＲ Ｔ細胞数を増大させた。Ｒａｊｉ細胞は、ＣＡＲ Ｔ細胞とＤ７のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５を受けているマウスでは、Ｄ１４までに骨髄から排除された（特に、０．３０ｍｇ／ｋｇ投薬群を参照のこと）が、ＣＡＲ Ｔ細胞のみを受けているマウスでは排除されなかった。モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５と共にＣＡＲ Ｔ細胞を受けているマウスでは、ＣＡＲ Ｔ細胞又はモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５のみと比較して、優れたモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５用量依存性の腫瘍制御及び生存が認められた。決して制限的であることが意図されないが、この実験設定に基づく、この前臨床モデルにおける組み合わせ療法の利益は、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５の投与がおよそＤ７までに開始された場合に、より大きいように思われた。モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５で治療されたマウスにおける残留ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＣＡＲ Ｔ細胞注入の５週後よりも後に投与されたＲａｊｉ腫瘍細胞の再負荷を拒絶した。
このリンパ腫モデルでは、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５投与は、投与されたＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞の抗腫瘍有効性及び動態を向上させることが判明した。より具体的には、ＣＡＲ Ｔ細胞単独と比較して優れた有効性を示し、ＣＡＲ Ｔ細胞とモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５との組み合わせは、腫瘍量を有意に低下させ、また、腫瘍制御の持続を発揮し、またある種の場合には、ＮＳＧマウスにおけるＲａｊｉリンパ腫を根絶した。対照的に、ＣＡＲ Ｔ細胞単独療法群では、腫瘍進行が観察された。図４Ａを参照のこと。
より具体的には、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（０．０３ｍｇ／ｋｇ）／ＣＡＲ Ｔ細胞で治療されたマウスの１００％は、腫瘍注射の７０日後に生存していたが、それと比較して、ビヒクル対照を受けているマウスは一匹も、１４日目まで生存しておらず、ＣＡＲ Ｔ細胞単独で治療されたマウスは一匹も、５９日目まで生存していなかった。結果を、図４Ａ（バイオルミネセンスイメージングの結果）に、また、０．３０ｍｇ／ｋｇ用量のＭＰＢＡ－ＩＬ１５で治療されたマウスについて図７Ａ（生存）に示す。さらに、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５とＣＡＲ Ｔ細胞で以前に治療されたマウスは、Ｒａｊｉ腫瘍再負荷を拒絶することができ、これは、ＣＡＲ Ｔ細胞残存及び潜在的に長期のメモリーＣＡＲ Ｔ形成を裏付けていた；際立った結果を、図１０に示し、これは、ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５などの長時間作用型インターロイキン－１５作動薬が、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法と組み合わせて投与された場合に、腫瘍量を有意に低下させるだけでなく、Ｒａｊｉ－リンパ腫も根絶能力を示す。
実施例４
前臨床マウスＲＯＲ１肺腫瘍モデルにおけるＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞 免疫療法の有効性に関するモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５の研究
ＫｒａｓＬＳＬ－Ｇ１２Ｄ／＋ｐ５３ｆ／ｆマウス（ｎ＝５～６／群）のコホートに、３×１０４ｐｆｕのＣｒｅ－ｆｆｌｕｃ－ｈＲＯＲ１レンチウイルスを気管内感染させて、ＲＯＲ１＋肺腫瘍の発生を誘発した。感染の１２週及び１５週後に、マウスを、リンパ球除去（ｌｙｍｐｈｏｄｅｐｌｅｔｉｏｎ）のために１００ｍｇ／ｋｇシクロホスファミドで治療し、６×１０６個のＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞又は対照Ｔ細胞（１：１比のＣＤ８：ＣＤ４）を静脈内に養子移植した。ＲＯＲ１（受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１）は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）及びトリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）の亜群を含めた多数の悪性腫瘍において発現される。マウスは、移植されたＴ細胞の生着を補助するために、８日間、１日おきに、５×１０４ＩＵのＩＬ－２を腹腔内に受けた。Ｔ細胞移植の日に開始して、マウスの亜群を、７日ごとに静脈内への０．３３ｍｇ／ｋｇ ＭＰＢＡ－ＩＬ１５で治療した。前臨床治療プロトコルを、図１１に示す。
腫瘍量は、肺全体にわたる連続する１ｍｍ画像を取得し、すべての画像にわたって腫瘍面積を合計して腫瘍体積を定量化することによって、数量化した。感染の１７週後に、すべてのマウスを安楽死させ、肺全体を、フローサイトメトリー及び免疫組織化学によって分析した。循環血液中の肺腫瘍浸潤細胞を混入細胞と区別するために、マウスには、安楽死の５分前に、ＰＥを結合させた抗ＣＤ４５抗体を静脈内注射して、循環血液中のすべての免疫細胞を標識し、ＰＥ－細胞を非血管性の肺実質細胞と決定することを可能にした。肺を、腫瘍へのＣＤ８ａ及びＣＤ８浸潤について、ＩＨＣ染色によって分析した；染色は、ＨＡＬＯソフトウェアを使用して数量化した
結果を、図１２Ａ（種々の治療群のマウスについての腫瘍体積の変化（％）：対照Ｔ細胞（長方形）、対照Ｔ細胞とＭＰＢＡ－ＩＬ１５（▲）、ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞（▼）、及びＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＰＢＡ－ＩＬ１５（◇））；図１２Ｂ（ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞単独療法で治療された個々のマウスについての感染後の週数に対する腫瘍体積の変化（パーセント）（群について１８．５％退縮）；図１２Ｃ（ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＰＢＡ－ＩＬ－１５の二重併用療法で治療された個々のマウスについての感染後の週数に対する腫瘍体積の変化（パーセント）（群について４４．４％退縮）；図１３Ａ（それぞれ、種々の治療群についての、脾臓及び腫瘍における生細胞の割合として表されるＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞頻度）、図１３Ｂ（それぞれ、種々の治療群についての、脾臓及び腫瘍における生細胞の割合として表されるＣＤ８細胞頻度）、及び図１４Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤ（この前臨床ＲＯＲ１肺癌モデルにおける肺において、ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５、すなわち実例となる長時間作用型ＩＬ－１５作動薬が、ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞輸送を増強することを示す、ＩＨＣ染色）に示す。
前述の実施例は、ＭＰＢＡ－ＩＬ１５の投与が、癌を有する対象の治療におけるＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞の抗腫瘍有効性及び動態を有意に向上させる、また、ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞の輸送及び癌性肺組織における残存性を増強することを示す；したがって、本開示は、ＭＰＢＡ－ＩＬ１５などの長時間作用型ＩＬ－１５作動薬と組み合わせてＣＡＲ Ｔ細胞療法を施すことによって、癌を有する患者を治療するための、新規の且つ比類なく好都合な免疫療法手法を提供する。
実施例５
モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５でインビトロで治療されたＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞における、ＣＡＲ－Ｔ細胞数及び細胞内タンパク質発現
ＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞は、健康なドナーから産生した。１５日目に、ＣＡＲ Ｔ細胞を、照射済みＫ５６２－ＣＤ１９＋又はＫ５６２－ＣＤ１９－細胞と共に同時培養した。細胞は、処理しなかった、又は、（１ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、若しくは３０ｎｇ／ｍｌの濃度の）モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５で処理した。ＩＦＮγ及びＴＮＦα産生は、同時培養の２４時間後にＬｕｍｉｎｅｘによって分析した。ＣＡＲ Ｔ細胞数、並びにｂｃｌ－２及び活性化されたカスパーゼ３の細胞内発現を、５日の同時培養後に決定した。ｂｃｌ－２及び活性化されたカスパーゼ３の発現を、フローサイトメトリーによって決定した。結果を、図１５Ａ、１５Ｂ、及び図１６Ａ～Ｃに示す。
図１５Ａは、照射済みＫ５６２－ＣＤ１９＋若しくはＫ５６２－ＣＤ１９－細胞と共に同時培養され、且つ、ＭＰＢＡ－ＩＬ１５で処理されていない、又は１ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、若しくは３０ｎｇ／ｍｌの濃度のＭＰＢＡ－ＩＬ１５で処理された、ＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞におけるｐｇ／ｍｌでのＩＦＮγの発現を提供する。
図１５Ｂは、照射済みＫ５６２－ＣＤ１９＋若しくはＫ５６２－ＣＤ１９－細胞と共に同時培養され、且つ、ＭＰＢＡ－ＩＬ１５で処理されていない、又は１ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、若しくは３０ｎｇ／ｍｌの濃度のＭＰＢＡ－ＩＬ１５で処理された、ＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞におけるｐｇ／ｍｌでのＴＮＦαの発現を提供する。
図１６Ａは、照射済みＫ５６２－ＣＤ１９＋若しくはＫ５６２－ＣＤ１９－細胞と共に同時培養され、且つ、ＭＰＢＡ－ＩＬ１５で処理されていない、又は１ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、若しくは３０ｎｇ／ｍｌの濃度のＭＰＢＡ－ＩＬ１５で処理された、ＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞についてのＣＡＲ Ｔ細胞増殖（増殖（倍）として）を示す。
図１６Ｂ及び１６Ｃは、照射済みＫ５６２－ＣＤ１９＋若しくはＫ５６２－ＣＤ１９－細胞と共に同時培養され、且つ、ＭＰＢＡ－ＩＬ１５で処理されていない、又は１ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、若しくは３０ｎｇ／ｍｌの濃度のＭＰＢＡ－ＩＬ１５で処理された、ＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞における、（ｂｃｌ－２ ＭＦＩでの）ｂｃｌ－２及び活性化された（カスパーゼ３＋（％）としての）カスパーゼ３の発現をそれぞれ提供する。
これらの結果から、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５でのインビトロでのＣＡＲ Ｔ細胞の処理が、抗原特異的ＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞産生及び増殖を増大させ、また、生存を増強することがわかる。
実施例６
前臨床マウスリンパ腫モデルにおける、ＣＡＲ Ｔ細胞とモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５との組み合わせの投与後のＣＡＲ Ｔ細胞におけるタンパク質発現
ＮＳＧマウスは、Ｄ－７にＲａｊｉリンパ腫細胞を、Ｄ０にＣＡＲ－Ｔ細胞を、また、Ｄ７に開始する上の実施例３により詳細に記載された通りのモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（０．３ｍｇ／ｋｇ）の毎週の注射を受けた。マウスを、ＣＡＲ Ｔ細胞注入後、Ｄ８、１１、１４、２１、及び２８に安楽死させた。単細胞懸濁液を、骨髄（マウスあたり２本の大腿骨及び２本の脛骨）から作製した。タンパク質発現（ｂｃｌ－２、ＣＤ４５ＲＡ、及びＣＣＲ７）を、フローサイトメトリーによって分析した。
ＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞（図１７Ａ）とＣＤ４ ＣＡＲ Ｔ細胞（図１７Ｂ）との両方について、注入後Ｄ８に決定される、ＣＡＲ Ｔ細胞におけるＢｃｌ－２発現を、ヒストグラムに示す（灰色＝ＣＡＲ Ｔ細胞のみのマウス、赤色及び青色＝ＣＡＲ Ｔ細胞とモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（ＭＰＢＡ－ＩＬ１５）とを投与されたマウス）。
ＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞（図１８Ａ）とＣＤ４ ＣＡＲ Ｔ細胞（図１８Ｂ）との両方について、注入後Ｄ８に決定される、ＣＡＲ Ｔ細胞におけるＢｃｌ－２発現をまた、棒グラフに示す（黒色＝ＣＡＲ Ｔ細胞のみのマウス、赤色＝ＣＡＲ Ｔ細胞とモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（ＭＰＢＡ－ＩＬ１５）とを投与されたマウス）。
ＣＡＲ Ｔ細胞におけるメモリーマーカーＣＤ４５ＲＡ及びＣＣＲ７の発現を、図１９Ａ～１９Ｄに示し、ここでは、図１９Ａは、ＣＡＲ Ｔ細胞のみを投与されたマウスのＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞におけるタンパク質発現に関し；図１９Ｂは、ＣＡＲ Ｔ細胞とモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（ＭＰＢＡ－ＩＬ１５）を投与されたマウスのＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞におけるタンパク質発現に関し、図１９Ｃは、ＣＡＲ Ｔ細胞のみを投与されたマウスのＣＤ４ ＣＡＲ Ｔ細胞におけるタンパク質発現に関し；図１９Ｄは、ＣＡＲ Ｔ細胞とモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（ＭＰＢＡ－ＩＬ１５）を投与されたマウスのＣＤ４ ＣＡＲ Ｔ細胞におけるタンパク質発現に関し、ここでは、発現データは、ＣＤ５ＲＡ－ＣＣＲ７－（橙色）、ＣＤ５ＲＡ＋ＣＣＲ７－（緑色）、及びＣＤ５ＲＡ－ＣＣＲ７＋（赤色）について提供される。グラフは、平均値±ＳＥＭを示す。
モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５ （ＭＰＢＡ－ＩＬ１５）で処理されたＣＡＲ－Ｔ細胞、及びＣＡＲ－Ｔ細胞療法とＭＰＢＡ－ＩＬ１５との組み合わせで治療されたマウスから回収されたＣＡＲ－Ｔ細胞は、ｂｃｌ－２の発現の増大にある程度起因する可能性があるインビトロとインビボの両方での増殖及び生存率の増大を示す。
実施例７
臨床研究
Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫を有する患者における、ＣＤ１９指向性 ＣＡＲ－Ｔ療法と組み合わせたモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５の、第１ｂ／２相の非盲検の多施設の用量漸増及び用量拡大研究
これは、びまん性リンパ球性Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）を有する患者における、ＣＤ１９＋ＣＡＲ－Ｔと組み合わせたモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（ＭＰＢＡ－ＩＬ１５）の、第１ｂ／２相の非盲検の多施設の用量漸増及び用量拡大研究である。この研究は、スクリーニング期間、治療期間、治療終了（ｅｏｔ）期間、及び長期の追跡調査機関に分割される。
投与群１のＭＰＢＡ－ＩＬ－１５開始用量は、１．５μｇ／ｋｇとなる。患者は、サイクル１の第１日に開始する２１日サイクルにおいて、ＩＶ ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５を受けることとなる。
ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５薬物生成物は、無菌の白色ないしオフホワイトの凍結乾燥粉末として提供される。ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５薬物生成物は、およそ１．０ｍｇ／ｍＬの組換え型ヒトＩＬ－１５（ｒｈＩＬ－１５）と共に、１０ｍＭリン酸カリウム、２６０ｍＭトレハロース、０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０（ｐＨ６．８）中で製剤化される。ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５薬物生成物の各バイアルは、１．１ｍｇのｒｈＩＬ－１５等価物を含有する。これには、再構成後の１．０ｍｇという量を主張するラベルの一定の抜き取り（ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ）を保証するための０．１ｍｇの超過分が含まれる。
治療の期間
用量漸増（第１ｂ相）：安全性選択基準を満たす、市販品として入手可能な２種のＣＤ１９指向性のキメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ、Ｋｙｍｒｉａｈ（商標）（チサゲンレクルユーセル）又はＹｅｓｃａｒｔａ（登録商標）（アキシカブタゲンシロロイセル））療法のうちの１つを受けている患者は、静脈内（ＩＶ）ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５を受けることとなる。用量漸増中、ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５は、ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ注入の単回投与のおよそ１４日又は７日後（割り当てられたコホートに応じて）、患者に与えられることとなる。ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５での治療は、２１日ごとに（すなわち、３週ごとに［ｑ３ｗ］）最大８サイクル（６か月）、又は、疾患進行のエビデンス、許容し難い毒性、患者の撤回、研究者の裁量、若しくは治験依頼者（Ｓｐｏｎｓｏｒ）の研究を停止する決定までとなる。研究者の判断に基づいて臨床的利益を示している患者は、メディカルモニター（Ｍｅｄｉｃａｌ Ｍｏｎｉｔｏｒ）の承認を得て治療を継続することができる。
用量拡大（第２相）：ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ生成物のいずれかを伴うＭＰＢＡ－ＩＬ－１５の第２相推奨用量（ＲＰ２Ｄ）の決定後、ＲＰ２Ｄ用量を、第２相中の拡大コホートにおいて、さらに検討することとなる。ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５での治療は、２１日ごとに（すなわち、３週ごとに）最大８サイクル（６か月）、又は、疾患進行のエビデンス、許容し難い毒性、患者の撤回、研究者の裁量、若しくは治験依頼者の研究を停止する決定までとなる。研究者の判断に基づいて臨床的利益を示している患者は、メディカルモニターの承認を得て治療を継続することができる。
主要目的：
第１ｂ相：
（ｉ）ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ療法後のＭＰＢＡ－ＩＬ－１５の安全性及び忍容性を評価すること。
（ｉｉ）ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ 投与後のＭＰＢＡ－ＩＬ－１５の最大耐用量（ＭＴＤ）又はＲＰ２Ｄ及び最適な投薬期間を規定すること。
第２相：
Ｌｕｇａｎｏ分類（Ｃｈｅｓｏｎ ＢＤ，Ｆｉｓｈｅｒ ＲＩ，Ｂａｒｒｉｎｇｔｏｎ ＳＦ，ｅｔ ａｌ．Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｉｎｉｔｉａｌ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ｓｔａｇｉｎｇ，ａｎｄ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｏｄｇｋｉｎ ａｎｄ ｎｏｎ－Ｈｏｄｇｋｉｎ ｌｙｍｐｈｏｍａ：ｔｈｅ Ｌｕｇａｎｏ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．２０１４；３２（２７）：３０５９．）に基づいて、６か月での完全奏効率（ＣＲＲ）を評価することによって、ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ療法後のＭＰＢＡ－ＩＬ－１５の有効性を評価すること。
副次的目的：
第１ｂ相及び第２相：
（ｉ）ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ療法と組み合わせたＭＰＢＡ－ＩＬ－１５の全奏効率（ＯＲＲ）を評価すること
（ｉｉ）ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ療法と組み合わせたＭＰＢＡ－ＩＬ－１５の無増悪生存期間（ＰＦＳ）を評価すること
（ｉｉｉ）ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ療法と組み合わせたＭＰＢＡ－ＩＬ－１５の全生存（ＯＳ）を評価すること（第２相のみ）
（ｉｖ）ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ療法と組み合わせたＭＰＢＡ－ＩＬ－１５の奏効期間（ＤＯＲ）を評価すること
（ｖ）ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ療法と組み合わせたＮＫＴＲ－２５５の薬物動態（ＰＫ）を特徴付けること
（ｖｉ）ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ療法と組み合わせたＮＫＴＲ ２５５の薬力学的（ＰＤ）効果を特徴付けること
（ｖｉｉ）養子移植されたＴ細胞のインビボでの残存の期間及び残存しているＴ細胞の形質を含めた、ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞のＰＤ効果を評価すること
（ｖｉｉｉ）ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５の免疫原性を評価すること
探索的目的：
（ｉ）ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ療法と組み合わせたＭＰＢＡ－ＩＬ－１５の無イベント生存（ＥＦＳ）を評価すること
（ｉｉ）腫瘍及び血液における抗腫瘍活性と免疫細胞との関連を評価すること
（ｉｉｉ）養子移植されたＴ細胞の骨髄又は他の腫瘍部位への輸送、及びインビボでの機能を評価すること
（ｉｖ）サイトカインレベル及び免疫細胞集団の ベースラインからの変化を特徴付けること
研究集団：びまん性リンパ球性Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）（非特異型）、縦隔原発Ｂ細胞性大細胞型リンパ腫（ＰＭＢＣＬ；Ｙｅｓｃａｒｔａのみ）、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、及び濾胞性リンパ腫から生じるＤＬＢＣＬを含めた２系列以上の全身療法後の、再発／難治性（Ｒ／Ｒ）Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（Ｂ－ＮＨＬ）を治療するためにＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞を受けている１８歳以上の年齢の成人。
患者の人数（計画）：
第１ｂ相：およそ５５人の患者が登録されることとなる
第２相：およそ６０人の患者が登録されることとなる
研究施設の数：
第１ｂ相：およそ５つの北米施設
第２相：およそ５つの北米施設
研究デザイン：
この研究は、用量漸増（第１ｂ相）及び用量拡大（第２相）部分からなる、第１ｂ／２相の非盲検の多施設研究である。
第１ｂ相（用量漸増）
安全性選択基準を満たす、ＵＳ ＦＤＡによって承認されたＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞（Ｙｅｓｃａｒｔａ又はＫｙｍｒｉａｈ）を受けている患者は、ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ 注入の単独治療のおよそ１４日又は７日後（割り当てられたコホートに応じて）に開始するＩＶ ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５ ｑ３ｗを受けることとなる。用量漸増（第１ｂ相）中、最大５コホートの少なくとも３人の患者がそれぞれ、ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞注入後に、漸増用量のＭＰＢＡ－ＩＬ－１５を与えられることとなる。ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔを伴うＭＰＢＡ－ＩＬ－１５についての試料用量漸増計画を、下の表に提供する。それぞれの漸増ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５用量コホートの最初の患者（前哨の（ｓｅｎｔｉｎｅｌ）患者）が、ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５の最初の投与の後２１日間、安全性及び忍容性についてモニタリングされた後に、同じコホート内のその他の患者が投与されることとなる。
Figure 2022526408000012
ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５は、最初はＹｅｓｃａｒｔａ療法で開始する、逐次的組み合わせで試験されることとなる。この研究は、Ｙｅｓｃａｒｔａ注入の１４日後に投与される、１．５μｇ／ｋｇ ＩＶのＭＰＢＡ－ＩＬ－１５開始用量で開始することとなる（コホートＡ）。Ｙｅｓｃａｒｔａの１４日（±３日）後に投与されるＭＰＢＡ－ＩＬ－１５の３つの用量レベル（コホートＡ）において安全性及び忍容性を確立した後、次のコホート、Ｋｙｍｒｉａｈ（１４日後ＣＡＲ－Ｔ注入；コホートＢ）及びＹｅｓｃａｒｔａ（７日後ＣＡＲ－Ｔ注入、コホートＣ）が、確認された安全な用量レベルで、並行して開始されることとなる。試験される用量は、７日レジメンが、開始用量レベルで認められる安全性又は忍容性の問題点を有する場合、直前に試験された用量に漸減させることができる。７日レジメンは、１４日レジメンでのそれぞれ個々の生成物の認められる安全性及び忍容性に基づくこととなる。用量漸増は、ＭＴＤ又はＲＰ２Ｄが確立されるまで、もっぱら７日レジメンでＭＰＢＡ－ＩＬ－１５のみを継続することとなる。７日レジメンが耐容性を示さないことが判明する場合、１４日レジメンにおけるＭＰＢＡ－ＩＬ－１５用量漸増を再び始めることができる。
用量レベル選択に関する及びＭＴＤの決定に関する研究の漸増期の間、過剰投与制御を伴う漸増（ｅｓｃａｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｏｖｅｒｄｏｓｅ ｃｏｎｔｒｏｌ）（ＥＷＯＣ）原理（Ｎｅｕｅｎｓｃｈｗａｎｄｅｒ Ｂ，Ｂｒａｎｓｏｎ Ｍ，Ｇｓｐｏｎｅｒ Ｔ． Ｃｒｉｔｉｃａｌ ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｂａｙｅｓｉａｎ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ｐｈａｓｅ Ｉ ｃａｎｃｅｒ ｔｒｉａｌｓ．Ｓｔａｔ Ｍｅｄ．２００８ Ｊｕｎ １５；２７（１３）：２４２０－３９）を用いる２パラメータのベイズロジスティック回帰モデル（ＢＬＲＭ）が使用されることとなる。ＭＴＤは、少なくとも６人の患者が、ある用量で評価され、且つその用量について、標的とされる毒性の事後確率が少なくとも７０％である場合に断定されることとなる。ＭＴＤは、セクション５．８に概要を示す基準に基づいて決定されることとなる。ＭＴＤをさらに調査するために、追加のコホートを開設することもできる。
ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔと組み合わせたＭＰＢＡ－ＩＬ－１５のＲＰ２Ｄは、用量漸増からの最終の推奨を超えない用量で選択されることとなり、また、ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５の安全性、ＰＫ、ＰＤ、及び最適な生物学的反応についてのすべての利用可能なデータの再検討に基づくこととなる。ＲＰ２Ｄを精緻化するために、追加のＲＰ２Ｄ患者を登録することができ、また、ＲＰ２Ｄを決定するために、選択されたＲＰ２Ｄで投与される最低６人の患者（用量漸増からのあらゆる患者を含めて）が必要とされることとなる。
第１ｂ相中の用量漸増に関する追加の規則は、以下である：
－患者内の用量漸増は許可されないこととなる。
－漸増用量のＭＰＢＡ－ＩＬ－１５を用いる新しいコホートへの登録は、以前のコホートにおける最後の患者の最初のＭＰＢＡ－ＩＬ－１５投与以降、用量制限毒性（ＤＬＴ）時間枠が経過するまで開始できない。ＤＬＴ時間枠は、ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５投与後２１日である。
－より高い用量への漸増は、その用量でのＦＩＨ研究における経験が存在する場合にのみ行われることとなる（ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５－００２）。
－用量漸増コホートについては、次のコホートへの用量漸増を開設（ｏｐｅｎ）する前に、治験依頼者メディカルモニター及び安全性審査委員会（Ｓａｆｅｔｙ Ｒｅｖｉｅｗ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）（ＳＲＣ）が、安全性を共同で評価することとなる。
－所与のコホートについてのＭＰＢＡ－ＩＬ－１５の用量レベルは、試験された以前の用量レベルで認められた毒性の重症度、期間、及び頻度に応じて低下させることができる。
ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ注入の後にＭＰＢＡ－ＩＬ－１５のＲＰ２Ｄを断定する決定は、安全性、ＰＫ、ＰＤ、又は最適な生体反応に基づいて、ＭＴＤに到達させることのない、あらゆる所与の用量レベル又は開始日で行うことができる。
第２相（用量拡大）
この研究の第２相では、それぞれ個々のＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ生成物についてＲＰ２Ｄが確立されてから、用量拡大コホートへの登録が開始されることとなる。具体的なＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ生成物の選択及び第２相についてのスケジュールについての決定は、第１ｂ相におけるＣＡＲ－Ｔ注入後のＭＰＢＡ－ＩＬ－１５の安全性、ＰＫ、ＰＤ、及び最適な生物学的反応に関するすべての利用可能なデータの再検討に基づくこととなる。患者は、ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ注入の１４又は７日後に、第１ｂ相で決定されたＲＰ２Ｄ及びスケジュールで、ＩＶ ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５を受けることとなる。ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５での治療は、最大８サイクル（６か月）の間、２１日ごとに（すなわち、３週ごとに）繰り返されることとなる。
主要な適格基準
適格性は、ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞作製のための白血球除去前１か月以内に決定されることとなる。集中的なブリッジング化学療法又は放射線療法が施される場合、適格基準は、リンパ球除去の前に再評価されるべきである。
・男性又は女性の患者、インフォームドコンセント・フォーム（ＩＣＦ）に署名する日に≧１８歳
・商品としてのＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞療法に対して適格である
・ＤＬＢＣＬ（非特異型）、ＰＭＢＣＬ（Ｙｅｓｃａｒｔａのみ）、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫；及び濾胞性リンパ腫から生じるＤＬＢＣＬを含めた、Ｂ－ＮＨＬの確定診断
・アントラサイクリンを含めた２系列以上の療法後に、検出可能な疾患と定義される、且つ自家造血幹細胞移植（ＡＳＣＴ）の失敗を有する又はＡＳＣＴに不適格である若しくはＡＳＣＴに同意していない、再発／難治性（Ｒ／Ｒ）疾患
・少なくとも１方向において≧１．５ｃｍと正確に測定することができる、Ｌｕｇａｎｏ分類（Ｃｈｅｓｏｎ，２０１４、同上）による、測定可能なフルオロデオキシグルコース（ＦＤＧ）親和性の結節性及び／又は節外性疾患
・平均余命＞３０日
・以下と定義される、許容し得る臓器機能：
〇グレード≦１の呼吸困難及び酸素飽和度≧９２％（室内気にて）と定義される、適切な肺機能。これらのパラメータが満たされない場合、治療する医師の裁量で、肺機能検査（ＰＦＴ）でのＦＥＶ１≧予測値の５０％及び予測値の≧４０％の一酸化炭素肺拡散能（ＤＬＣＯ；補正済み）を有する患者が、適格となる。
〇心臓病専門医によって左室駆出率（ＬＶＥＦ）≧４５％、又はＬＶＥＦ ４０～４４％、及びクリアランス（ｃｌｅａｒａｎｃｅ）と定義される、適切な心機能
〇以下と定義される、適切な腎機能：
－≦１．５×正常値上限（ＵＬＮ）の血清クレアチニン、又はｅＧＦＲ≧６０ｍＬ／分／１．７３ｍ２
〇以下と定義される適切な肝機能
－アスパラギン酸アミノ基転移酵素（ＡＳＴ）及びアラニンアミノ基転移酵素（ＡＬＴ）≦３×ＵＬＮ
－ビリルビン≦２．０ｍｇ／ｄＬ（ジルベール・モイレングラハト症候群を有する患者を除く）；その総ビリルビンが≦３．０×ＵＬＮであり、且つ直接ビリルビン≦１．５×ＵＬＮであるならば、ジルベール・モイレングラハト症候群を有する患者を含めることができる
〇以下と定義される適切な骨髄貯蔵（輸血を伴わない）：
－絶対好中球数（ＡＮＣ）＞１０００／ｍｍ３
－絶対リンパ球数（ＡＬＣ）≧３００／ｍｍ３
－血小板≧５０，０００／ｍｍ３
ヘモグロビン＞８．０ｇ／ｄＬ
初回及び後続のＭＰＢＡ－ＩＬ－１５投与前に評価される安全性適格性
患者は、次の基準を満たす場合、ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５注入について適格となる：
１．ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ注入を受けた
２．ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５注入の日にグレード≧１サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）（体温≧３８．０℃）が持続していない
３．ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５ 注入の前９６時間以内にグレード４ ＣＲＳがない
４．ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５注入の日にグレード≧２の神経毒性が持続していない
５．ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５注入の前のあらゆる時点での＞４８時間の期間の以前のグレード≧３の神経毒性がない
６．ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５注入の前４８時間以内のトシリズマブ及び／又はデキサメタゾンでの介入がない
７．活動性の、重篤な、及びコントロールされていない感染症がない
８．研究者の評価による禁忌がない
９．患者が、ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５のすべての投与の前に、適切な臓器機能を有する：
ａ）ＡＳＴ及びＡＬＴレベル≦３×ＵＬＮ；
ｂ）総ビリルビンレベル≦３×ＵＬＮ
ｃ）ｅＧＦＲ＞３０ｍＬ／分
ｄ）ＤＬＣＯ＞４０％
ｅ）ＬＶＥＦ＞４５％
試験生成物、用量、及び投与様式
再構成されたＭＰＢＡ－ＩＬ－１５は、２１日ごとに（すなわちｑ３ｗ）、ＩＶ投与されることとなる。再構成されたＭＰＢＡ－ＩＬ－１５は、注射用の市販品として入手可能な又は０．９％の通常の生理食塩水で、さらに希釈されるべきである。最終の希釈された溶液は、３０±５分かけて注入されることとなる。
ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５開始用量は、１．５μｇ／ｋｇ（２１日ごと）となる。
安全性
安全性の評価は、次のものの継続的な再検討によって行われることとなる：
・重篤ＡＥ（ＳＡＥ）及び免疫介在性ＡＥ（ｉｍＡＥ）を含めた有害事象（ＡＥ）の発生率
・臨床検査（血液及び尿採取）
・バイタルサイン
・心電図（ＥＣＧ）
・理学的検査
・併用薬物療法
ＤＬＴ－第１ｂ相のみ
薬物動態
ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５ ＰＫ分析のための血液試料は、すべての患者から収集されることとなる。連続的なＰＫ試料は、ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５の各サイクル後の複数の計画された採取時点で収集されることとなる。ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５の血漿中濃度は、確証された方法を使用して、各ＰＫ試料について測定されることとなる。最高血中濃度（Ｃｍａｘ）、濃度時間曲線下面積（ＡＵＣ）、クリアランス（ＣＬ）、分布容積（Ｖｄ）、及び半減期（ｔ１／２）などの薬物動態パラメータは、可能であれば、血漿中濃度－時間データから推定されることとなる。
バイオマーカー
ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔと組み合わせたＭＰＢＡ－ＩＬ－１５の、全身及び腫瘍組織に基づく（血液及び骨髄）ＰＤ効果が検討されることとなる。
遺伝子改変されたＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞の特徴付け並びにモニタリングは、ＮＫＴＲ ２５５での治療前及び治療中に定量ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）及びフローサイトメトリーによって、末梢血液並びに骨髄試料において実施されることとなる。限定はされないが、ＮＫ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及びＣＤ８＋メモリー細胞を含めた免疫細胞集団の数及び活性化に対するＭＰＢＡ－ＩＬ－１５の効果を評価するために、全身ＰＤ分析のための血液試料が、すべての患者から、治療前及び治療中に収集されることとなる。血液試料はまた、ＭＰＢＡ－ＩＬ－１５に応答する、サイトカインレベルの変化を決定するために及び遺伝子発現の変化をプロファイリングするために、治療前及び治療中に収集されることとなる。
可能な場合、腫瘍細胞及び免疫系活性化の特徴付けのために、イベントのスケジュール（Ｓｃｈｅｄｕｌｅ ｏｆ Ｅｖｅｎｔｓ）に従って、治療前、治療中、及び治療後に、新鮮な骨髄生検材料が収集されることとなる。評価には、腫瘍微小環境における腫瘍特異的なタンパク質マーカー及び免疫細胞集団の変化の評価が含まれることとなる。入手可能ならば、保存された腫瘍組織試料が収集されることとなり、同様に分析することができる。
有効性：
ベースライン評価のためのスクリーニング中に、また、測定可能な疾患の適格性を確立するために、全身（頭蓋底から大腿中央）の１８Ｆ－ＦＤＧ－陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）／コンピュータ断層撮影（ＣＴ）が行われることとなる（ＳＵＶｍａｘ）。Ｌｕｇａｎｏ分類（Ｃｈｅｓｏｎ，２０１４、同上）による有効性評価のためのその後のＦＤＧ－ＰＥＴ／ＣＴは、第４週、第３か月（サイクル５の直前）に、その後、対象が研究を中断するまで１２週ごとに、また、可能であれば疾患進行時に、実施されることとなる。腫瘍生検材料は、可能であれば、ほぼベースライン時点で、ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ注入後最初の４週中に、及び第１４週に；また、治療終了（ＥＯＴ）時に研究者の裁量で、得られることとなる。
統計的方法：
安全性：
安全性評価には、ＡＥ、臨床検査、バイタルサイン、理学的検査、及びＥＣＧ（中央判定）が含まれることとなる。ＤＬＴの発生率は、各用量漸増コホートについて評価されることとなる。すべてのグレード≧３の治療下で発現した有害事象（ＴＥＡＥ）は、研究の第１ｂ相及び第２相において、各用量コホートについて、別々に、器官別大分類及び基本語によって概要を示されることとなる。ＴＥＡＥは、発生率、重症度、及び研究薬物との関連性によって概要を示されることとなる。免疫介在性ＡＥ（ｉｍＡＥ）は、別に概要を示されることとなる。
グレード≧３の臨床検査及びバイタルサイン異常は、研究の第１ｂ相及び第２相において、各用量コホートについて、記述によって概要を示されることとなる。
有効性：
６か月でのＣＲＲ、及びＯＲＲの有効性評価は、厳密な方法に基づいて、９５％信頼区間（ＣＩ）を伴って算出されることとなる。ＰＦＳ、ＤＯＲ、及びＯＳの分析のために、カプラン・マイヤー法が使用されることとなる。独立審査委員会（ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｒｅｖｉｅｗ ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）（ＩＲＣ）評価に基づく６か月でのＣＲＲは、主要有効性評価項目となり、改変された治療企図解析対象集団を使用して概要を示されることとなる。研究者の評価に基づく６か月でのＣＲＲも評価されることとなる。
すべての有効性評価項目についての一次解析は、この研究の用量拡大パートからの患者、並びにこの研究の用量漸増パートからのＲＰ２Ｄで治療される患者に基づくこととなる。
薬物動態及びバイオマーカー：
薬物動態パラメータは、記述統計を用いて、表にする及び概要を示されることとなる。バイオマーカーについての記述的概要は、各観察時に推測されることとなる。投与前から各観察時までのバイオマーカーの変化も、記述的概要を使用して評価されることとなる。

Claims (32)

  1. 癌を有する対象を治療するための方法であって、
    （ｉ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ－Ｔ細胞）を発現するように改変されているＴ細胞を含む養子細胞免疫療法組成物を、対象に投与することと、
    （ｉｉ）構造：
    Figure 2022526408000013
     （式中、ＩＬ－１５は、インターロイキン－１５部分であり、（ｎ）は、約１５０～約３，０００の整数であり、～ＮＨ～は、ＩＬ－１５部分のアミノ基を表す）
    を有するＩＬ－１５受容体作動薬を対象に投与することと
    を含む方法。
  2. 前記養子細胞免疫療法組成物が、ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体を発現するように改変されているＣＡＲ Ｔ細胞を含む、請求項１に記載の方法。
  3. ステップ（ｉ）及びステップ（ｉｉ）が、連続的にいずれかの順序で、又は実質的に同時に行われる、請求項１又は請求項２に記載の方法。
  4. ステップ（ｉ）がステップ（ｉｉ）の前に行われる、請求項１又は請求項２に記載の方法。
  5. ステップ（ｉｉ）がステップ（ｉ）の前に行われる、請求項１又は請求項２に記載の方法。
  6. ステップ（ｉ）及び（ｉｉ）の両方が実質的に同時に行われる、請求項１又は請求項２に記載の方法。
  7. ステップ（ｉ）及び（ｉｉ）が両方とも同日に行われる、請求項１又は請求項２に記載の方法。
  8. ステップ（ｉｉ）が、
    （ａ）ステップ（ｉ）の後、１～７日目のいずれか１日（例えば、ステップ（ｉ）の後、１日目、２日目、３日目、４日目、５日目、６日目、７日目）に実施される、又は
    （ｂ）ステップ（ｉ）の後、８～１４日目のいずれか１日（例えば、ステップ（ｉ）の後、８日目、９日目、１０日目、１１日目、１２日目、１３日目、１４日目）に実施される、又は
    （ｃ）ステップ（ｉ）の後、７日目又は１４日目に実施される、
    請求項４に記載の方法。
  9. 治療過程中の、キメラ抗原受容体を発現するように改変されているＴ細胞を含む養子細胞免疫療法組成物の、対象への単回投与を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
  10. 治療過程中の、ＩＬ－１５受容体作動薬の対象への複数回投与を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
  11. 前記養子細胞免疫療法組成物が注入によって投与される、及び／又は前記ＩＬ－１５受容体作動薬が注入によって投与される、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
  12. 前記対象が、ヒトである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。
  13. 前記癌が、血液癌である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
  14. 前記癌が、固形腫瘍である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
  15. 前記癌が、リンパ腫又は白血病である、請求項１３に記載の方法。
  16. 前記癌が、Ｂ細胞リンパ腫である、請求項１５に記載の方法。
  17. 前記ＩＬ－１５受容体作動薬が、式（Ｉ）の構造（式中、（ｎ）は、約７９５～約１０６８の範囲である）を有する、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法。
  18. （ｎ）が、約８４０～約１０２３の範囲である、請求項１７に記載の方法。
  19. 平均すると、（ｎ）が、約９０７の値を有する（例えば、前記分子のポリ（エチレン）グリコール部分が、約４０，０００ダルトンの重量平均分子量を有する）、請求項１７に記載の方法。
  20. 結果として、ステップ（ｉ）又はステップ（ｉｉ）のいずれかのみに従い投与が行われる場合に観察される治療に対する応答を超えて促進される有益な応答治療が得られる、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。
  21. 治療に対する前記有益な応答が適切な動物モデルに基づく、請求項２０に記載の方法。
  22. 前記モデルが、インビボ異種移植Ｂ細胞リンパ腫モデルである、請求項２１に記載の方法。
  23. 前記治療に対する有益な応答が、腫瘍細胞注射後、４５日目に評価される場合の、骨髄又は腫瘍組織における腫瘍体積（すなわち、腫瘍負荷の低下）及びＣＡＲ－Ｔ細胞の総数の変化（パーセント）から選択される、請求項２１又は２２のいずれか一項に記載の方法。
  24. 前記養子細胞免疫療法組成物が、ＣＤ－１９指向性の遺伝子改変された自家Ｔ細胞を含む、請求項１～２３のいずれか一項に記載の方法。
  25. ステップ（ｉ）において約１０７～約１０９細胞／ｋｇのＣＡＲ－Ｔ細胞を対象に投与することを含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。
  26. 約０．２×１０６細胞／ｋｇ～約６．０×１０８細胞／ｋｇ、少なくとも約２．０×１０６細胞／ｋｇ～約２．０×１０８細胞／ｋｇ、少なくとも約０．２×１０６細胞／ｋｇ～約５．０×１０６細胞／ｋｇ、少なくとも約０．１×１０８細胞／ｋｇ～約２．５×１０８細胞／ｋｇ、又は少なくとも約０．６×１０８細胞／ｋｇ～約６．０×１０８細胞／ｋｇから選択される量のＣＡＲ－Ｔ細胞を前記対象に投与することを含む、請求項２５に記載の方法。
  27. 約０．１０～５０μｇ／ｋｇの前記ＩＬ－１５受容体作動薬を前記対象に投与することを含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
  28. 約０．２５～２５μｇ／ｋｇの前記ＩＬ－１５受容体作動薬を前記対象に投与することを含む、請求項２７に記載の方法。
  29. 約０．２５～１５μｇ／ｋｇの前記ＩＬ－１５受容体作動薬を前記対象に投与することを含む、請求項２８に記載の方法。
  30. ステップ（ｉ）において、養子細胞免疫療法組成物の単回投与、及びステップ（ｉｉ）において、ステップ（ｉ）の後の１～１４日目のいずれか１日のＩＬ－１５受容体作動薬の初回投与、それに続く、治療過程を通した２１日ごとのＩＬ－１５受容体作動薬の投与を含む、請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法。
  31. 治療過程が、１～２４サイクルのＩＬ－１５受容体作動薬の投与、又は３～２０サイクルのＩＬ－１５受容体作動薬の投与、又は４～１５サイクルのＩＬ－１５受容体作動薬の投与を含む、請求項３０に記載の方法。
  32. キメラ抗原受容体（ＣＡＲ－Ｔ細胞）を発現するように改変されているＴ細胞を含む養子細胞免疫療法組成物であって、請求項１～３１のいずれか一項において提供される組成物及び方法を包含する養子細胞免疫療法組成物を対象に投与することによって、及び／又は請求項１～３１のいずれか一項において挙げられる方法によって、癌を有する対象を治療する方法であって、その改良は、請求項１～３１のいずれか一項において記述されるＩＬ－１５受容体作動薬を対象に投与し、それによって、養子細胞免疫療法組成物単独の（すなわち、ＩＬ－１５受容体作動薬の非存在下での）投与を含む対象の治療よりも増強される、治療に対する応答を提供することをさらに含む、方法。
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