JP2022524859A - キトサン-核酸ナノ粒子の可逆的コーティング及びその使用方法 - Google Patents
キトサン-核酸ナノ粒子の可逆的コーティング及びその使用方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2022524859A JP2022524859A JP2021555307A JP2021555307A JP2022524859A JP 2022524859 A JP2022524859 A JP 2022524859A JP 2021555307 A JP2021555307 A JP 2021555307A JP 2021555307 A JP2021555307 A JP 2021555307A JP 2022524859 A JP2022524859 A JP 2022524859A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- chitosan
- peg
- composition
- pegylated
- polyplex
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 title claims description 92
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 title description 12
- 238000000576 coating method Methods 0.000 title description 8
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 title description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 330
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 160
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 122
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims description 296
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 156
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 154
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 154
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 93
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 claims description 84
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 claims description 81
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 63
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 55
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 53
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 53
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 52
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 50
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 50
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 43
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 42
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 39
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 38
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims description 33
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 33
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 claims description 30
- 229920000805 Polyaspartic acid Polymers 0.000 claims description 29
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 claims description 29
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 24
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 24
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 claims description 21
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 21
- 229920002643 polyglutamic acid Polymers 0.000 claims description 21
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 17
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 17
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 17
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 17
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 16
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 15
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 15
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 claims description 15
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 claims description 15
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 15
- 238000010257 thawing Methods 0.000 claims description 15
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 14
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 claims description 14
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 12
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 12
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 11
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 11
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 11
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 11
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 claims description 9
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 9
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 9
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 8
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 claims description 8
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 8
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 7
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 7
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 6
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 6
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 claims description 6
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 claims description 6
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 5
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 claims description 5
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 claims description 5
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 claims description 5
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims description 5
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 claims description 5
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 claims description 4
- 230000005611 electricity Effects 0.000 claims description 4
- 229960000502 poloxamer Drugs 0.000 claims description 4
- 239000008213 purified water Substances 0.000 claims description 4
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 4
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 3
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims description 3
- 229920001992 poloxamer 407 Polymers 0.000 claims description 3
- 229940044476 poloxamer 407 Drugs 0.000 claims description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 3
- 238000000935 solvent evaporation Methods 0.000 claims description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 210000005068 bladder tissue Anatomy 0.000 claims description 2
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical group 0.000 claims description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 claims 1
- 210000001842 enterocyte Anatomy 0.000 claims 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 claims 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims 1
- 238000000859 sublimation Methods 0.000 claims 1
- 230000008022 sublimation Effects 0.000 claims 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid group Chemical group S(O)(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000000352 supercritical drying Methods 0.000 claims 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 abstract description 32
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 abstract description 27
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 abstract description 14
- 238000010586 diagram Methods 0.000 abstract description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 150
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 141
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 69
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 68
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 65
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 description 64
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 60
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 58
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 56
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N D-gluconic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N 0.000 description 54
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 54
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 54
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 53
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 51
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 51
- 102000015728 Mucins Human genes 0.000 description 44
- 108010063954 Mucins Proteins 0.000 description 44
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 44
- 150000001768 cations Chemical group 0.000 description 37
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 37
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 35
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 35
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 description 35
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 33
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 32
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 30
- -1 polypropylene Polymers 0.000 description 29
- RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N D-gluconic acid Natural products OCC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 27
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 27
- 239000000174 gluconic acid Substances 0.000 description 27
- 235000012208 gluconic acid Nutrition 0.000 description 27
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 26
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 26
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 26
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 25
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 24
- 108010064470 polyaspartate Proteins 0.000 description 24
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 20
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 17
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 17
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 17
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 17
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 17
- 108010020346 Polyglutamic Acid Proteins 0.000 description 16
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 16
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 15
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 15
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 15
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 15
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 15
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 15
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 15
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 14
- 235000013350 formula milk Nutrition 0.000 description 14
- 230000003345 hyperglycaemic effect Effects 0.000 description 14
- 239000000463 material Substances 0.000 description 14
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 13
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 13
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 13
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 13
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 13
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 13
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 13
- YVSWPCCVTYEEHG-UHFFFAOYSA-N rhodamine B 5-isothiocyanate Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=C(N=C=S)C=C1C(O)=O YVSWPCCVTYEEHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 12
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 12
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 12
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 12
- 102000051325 Glucagon Human genes 0.000 description 11
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 description 11
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 11
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 11
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 description 11
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 description 11
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 description 11
- 230000003463 hyperproliferative effect Effects 0.000 description 11
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 11
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 11
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 11
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 11
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 10
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 10
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 10
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 10
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 10
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 10
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 10
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 10
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 10
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 10
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 10
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N Glucagon-like peptide 1 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N 0.000 description 9
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 9
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 9
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 9
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 9
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 9
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 9
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 9
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 9
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 9
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 9
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 8
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 8
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 8
- 229920006318 anionic polymer Polymers 0.000 description 8
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 8
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 8
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 8
- 230000006870 function Effects 0.000 description 8
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 8
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 8
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 8
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 8
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 8
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 7
- 101800001982 Cholecystokinin Proteins 0.000 description 7
- 102100025841 Cholecystokinin Human genes 0.000 description 7
- 229910016860 FaSSIF Inorganic materials 0.000 description 7
- 101800000224 Glucagon-like peptide 1 Proteins 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- ZYFVNVRFVHJEIU-UHFFFAOYSA-N PicoGreen Chemical compound CN(C)CCCN(CCCN(C)C)C1=CC(=CC2=[N+](C3=CC=CC=C3S2)C)C2=CC=CC=C2N1C1=CC=CC=C1 ZYFVNVRFVHJEIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 102100040918 Pro-glucagon Human genes 0.000 description 7
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 7
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 7
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 7
- 230000003399 chemotactic effect Effects 0.000 description 7
- 229940107137 cholecystokinin Drugs 0.000 description 7
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 7
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 7
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 7
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 7
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 7
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 7
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 7
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 7
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 7
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 7
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 7
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 7
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 7
- 238000004513 sizing Methods 0.000 description 7
- 102000016267 Leptin Human genes 0.000 description 6
- 108010092277 Leptin Proteins 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 6
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 6
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 6
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 6
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 6
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 6
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 6
- NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N leptin Chemical compound O=C([C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CCSC)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N 0.000 description 6
- 229940039781 leptin Drugs 0.000 description 6
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 description 6
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 6
- 238000000733 zeta-potential measurement Methods 0.000 description 6
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 5
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 5
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 5
- 102000007156 Resistin Human genes 0.000 description 5
- 108010047909 Resistin Proteins 0.000 description 5
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 5
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 5
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 5
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 5
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 5
- 230000006196 deacetylation Effects 0.000 description 5
- 238000003381 deacetylation reaction Methods 0.000 description 5
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 5
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 5
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 5
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 5
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 5
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 5
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 5
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 5
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 5
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- YNXLOPYTAAFMTN-SBUIBGKBSA-N C([C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(N)=O)C1=CC=C(O)C=C1 Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(N)=O)C1=CC=C(O)C=C1 YNXLOPYTAAFMTN-SBUIBGKBSA-N 0.000 description 4
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 101800001586 Ghrelin Proteins 0.000 description 4
- 102400000442 Ghrelin-28 Human genes 0.000 description 4
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 4
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 4
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- 108010088847 Peptide YY Proteins 0.000 description 4
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 4
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 4
- 101100408471 Rhodocybe pseudopiperita ple5 gene Proteins 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 4
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 4
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 4
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 4
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 4
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 4
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 4
- 229910001873 dinitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 239000010408 film Substances 0.000 description 4
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 4
- BGHSOEHUOOAYMY-JTZMCQEISA-N ghrelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN)C1=CC=CC=C1 BGHSOEHUOOAYMY-JTZMCQEISA-N 0.000 description 4
- 230000004153 glucose metabolism Effects 0.000 description 4
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 4
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 4
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 4
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 4
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 4
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 4
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 4
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 4
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 4
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 4
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 4
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 4
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 description 4
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 description 4
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 4
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 4
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 4
- 229940032147 starch Drugs 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 4
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 4
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 4
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 4
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 4
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 1-monostearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 3
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 3
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 3
- 102100025012 Dipeptidyl peptidase 4 Human genes 0.000 description 3
- 208000001860 Eye Infections Diseases 0.000 description 3
- 208000002705 Glucose Intolerance Diseases 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 3
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N Guanidine Chemical group NC(N)=N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 3
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 3
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 3
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 3
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 3
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 3
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 3
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 3
- 239000012124 Opti-MEM Substances 0.000 description 3
- 102100029909 Peptide YY Human genes 0.000 description 3
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 3
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 3
- 102100038803 Somatotropin Human genes 0.000 description 3
- 206010051379 Systemic Inflammatory Response Syndrome Diseases 0.000 description 3
- 201000005485 Toxoplasmosis Diseases 0.000 description 3
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 3
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 3
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 3
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 3
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 3
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 208000015294 blood coagulation disease Diseases 0.000 description 3
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 3
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 3
- 150000007942 carboxylates Chemical group 0.000 description 3
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 230000035605 chemotaxis Effects 0.000 description 3
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 3
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 3
- 230000002338 cryopreservative effect Effects 0.000 description 3
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 3
- 208000011323 eye infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 229920000370 gamma-poly(glutamate) polymer Polymers 0.000 description 3
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 3
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 description 3
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 3
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 3
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 3
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 3
- 210000003041 ligament Anatomy 0.000 description 3
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 3
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 3
- 239000004584 polyacrylic acid Substances 0.000 description 3
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 3
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 3
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 3
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 3
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 3
- 201000009104 prediabetes syndrome Diseases 0.000 description 3
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 3
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 3
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 3
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 3
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L sulfate group Chemical group S(=O)(=O)([O-])[O-] QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 3
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000002537 thrombolytic effect Effects 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 3
- YPZMPEPLWKRVLD-UHFFFAOYSA-N 2,3,4,5,6,7-hexahydroxyheptanal Chemical compound OCC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)C=O YPZMPEPLWKRVLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XQCZBXHVTFVIFE-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4-hydroxypyrimidine Chemical compound NC1=NC=CC(O)=N1 XQCZBXHVTFVIFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-2-(trifluoromethoxy)pyridine Chemical compound FC(F)(F)OC1=CC=C(Br)C=N1 SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 2
- 210000002237 B-cell of pancreatic islet Anatomy 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 102100023995 Beta-nerve growth factor Human genes 0.000 description 2
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 2
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 2
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 2
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 2
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 2
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 description 2
- 229920001287 Chondroitin sulfate Polymers 0.000 description 2
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 2
- 206010010741 Conjunctivitis Diseases 0.000 description 2
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- 108091027757 Deoxyribozyme Proteins 0.000 description 2
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 2
- 206010012504 Dermatophytosis Diseases 0.000 description 2
- 208000008960 Diabetic foot Diseases 0.000 description 2
- 108010067722 Dipeptidyl Peptidase 4 Proteins 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 208000032928 Dyslipidaemia Diseases 0.000 description 2
- 241000792859 Enema Species 0.000 description 2
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 2
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 2
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 2
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 2
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 2
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 208000019758 Hypergammaglobulinemia Diseases 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 2
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000017170 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 description 2
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M Methacrylate Chemical compound CC(=C)C([O-])=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241001460074 Microsporum distortum Species 0.000 description 2
- 229920000881 Modified starch Polymers 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 2
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 208000001388 Opportunistic Infections Diseases 0.000 description 2
- 240000007019 Oxalis corniculata Species 0.000 description 2
- 241000606860 Pasteurella Species 0.000 description 2
- 208000018262 Peripheral vascular disease Diseases 0.000 description 2
- 206010037549 Purpura Diseases 0.000 description 2
- 241001672981 Purpura Species 0.000 description 2
- 108091030071 RNAI Proteins 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 208000033464 Reiter syndrome Diseases 0.000 description 2
- 206010063837 Reperfusion injury Diseases 0.000 description 2
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 2
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 2
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 102000036693 Thrombopoietin Human genes 0.000 description 2
- 108010041111 Thrombopoietin Proteins 0.000 description 2
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 2
- 208000002474 Tinea Diseases 0.000 description 2
- 102000003978 Tissue Plasminogen Activator Human genes 0.000 description 2
- 108090000373 Tissue Plasminogen Activator Proteins 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 2
- 125000000218 acetic acid group Chemical group C(C)(=O)* 0.000 description 2
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 2
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 2
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- XMQFTWRPUQYINF-UHFFFAOYSA-N bensulfuron-methyl Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC=C1CS(=O)(=O)NC(=O)NC1=NC(OC)=CC(OC)=N1 XMQFTWRPUQYINF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MSWZFWKMSRAUBD-QZABAPFNSA-N beta-D-glucosamine Chemical compound N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-QZABAPFNSA-N 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 2
- CREMABGTGYGIQB-UHFFFAOYSA-N carbon carbon Chemical compound C.C CREMABGTGYGIQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011203 carbon fibre reinforced carbon Substances 0.000 description 2
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000034196 cell chemotaxis Effects 0.000 description 2
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 208000015114 central nervous system disease Diseases 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- 229940059329 chondroitin sulfate Drugs 0.000 description 2
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 2
- 229940075614 colloidal silicon dioxide Drugs 0.000 description 2
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 2
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 2
- 230000037011 constitutive activity Effects 0.000 description 2
- 239000011258 core-shell material Substances 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 2
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 2
- ANCLJVISBRWUTR-UHFFFAOYSA-N diaminophosphinic acid Chemical compound NP(N)(O)=O ANCLJVISBRWUTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 2
- 239000007920 enema Substances 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 2
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 2
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 2
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 2
- 231100000040 eye damage Toxicity 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 2
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 2
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 2
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 2
- 238000012637 gene transfection Methods 0.000 description 2
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 2
- RBNPOMFGQQGHHO-UHFFFAOYSA-N glyceric acid Chemical compound OCC(O)C(O)=O RBNPOMFGQQGHHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-O guanidinium Chemical compound NC(N)=[NH2+] ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 2
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 2
- 235000003642 hunger Nutrition 0.000 description 2
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 2
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 235000010977 hydroxypropyl cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 239000001863 hydroxypropyl cellulose Substances 0.000 description 2
- 239000012729 immediate-release (IR) formulation Substances 0.000 description 2
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 2
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- DRAVOWXCEBXPTN-UHFFFAOYSA-N isoguanine Chemical compound NC1=NC(=O)NC2=C1NC=N2 DRAVOWXCEBXPTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 2
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- OSWPMRLSEDHDFF-UHFFFAOYSA-N methyl salicylate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC=C1O OSWPMRLSEDHDFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 150000004682 monohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 230000004682 mucosal barrier function Effects 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 2
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 2
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 2
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 description 2
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 description 2
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 201000001245 periodontitis Diseases 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 125000004437 phosphorous atom Chemical group 0.000 description 2
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 229920001606 poly(lactic acid-co-glycolic acid) Polymers 0.000 description 2
- 229920001281 polyalkylene Polymers 0.000 description 2
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 229920001343 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 description 2
- 239000004810 polytetrafluoroethylene Substances 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 description 2
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 2
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 2
- 208000002574 reactive arthritis Diseases 0.000 description 2
- 238000006268 reductive amination reaction Methods 0.000 description 2
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 2
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 2
- 230000037390 scarring Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 2
- 206010043554 thrombocytopenia Diseases 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000187 tissue plasminogen activator Drugs 0.000 description 2
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 2
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 2
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 2
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 2
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 2
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 2
- YPZMPEPLWKRVLD-MLKOFDEISA-N (2r,3r,4s,5s,6r)-2,3,4,5,6,7-hexahydroxyheptanal Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O YPZMPEPLWKRVLD-MLKOFDEISA-N 0.000 description 1
- PSBDWGZCVUAZQS-UHFFFAOYSA-N (dimethylsulfonio)acetate Chemical compound C[S+](C)CC([O-])=O PSBDWGZCVUAZQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BQCIDUSAKPWEOX-UHFFFAOYSA-N 1,1-Difluoroethene Chemical compound FC(F)=C BQCIDUSAKPWEOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100025573 1-alkyl-2-acetylglycerophosphocholine esterase Human genes 0.000 description 1
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- GZCGUPFRVQAUEE-UHFFFAOYSA-N 2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal Chemical compound OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O GZCGUPFRVQAUEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010543 22q11.2 deletion syndrome Diseases 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710169336 5'-deoxyadenosine deaminase Proteins 0.000 description 1
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 1
- 241000589291 Acinetobacter Species 0.000 description 1
- 208000026872 Addison Disease Diseases 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000055025 Adenosine deaminases Human genes 0.000 description 1
- 208000002004 Afibrinogenemia Diseases 0.000 description 1
- 208000008190 Agammaglobulinemia Diseases 0.000 description 1
- 206010027654 Allergic conditions Diseases 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 241000224489 Amoeba Species 0.000 description 1
- 206010002198 Anaphylactic reaction Diseases 0.000 description 1
- 208000003343 Antiphospholipid Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108010024976 Asparaginase Proteins 0.000 description 1
- 206010003591 Ataxia Diseases 0.000 description 1
- 208000032116 Autoimmune Experimental Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 241000606125 Bacteroides Species 0.000 description 1
- 208000023328 Basedow disease Diseases 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 206010005098 Blastomycosis Diseases 0.000 description 1
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000588807 Bordetella Species 0.000 description 1
- 241000589968 Borrelia Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000589562 Brucella Species 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- 102400000113 Calcitonin Human genes 0.000 description 1
- 108060001064 Calcitonin Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282832 Camelidae Species 0.000 description 1
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 1
- 206010007134 Candida infections Diseases 0.000 description 1
- 241001631457 Cannula Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 108010006303 Carboxypeptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000005367 Carboxypeptidases Human genes 0.000 description 1
- 208000003732 Cat-scratch disease Diseases 0.000 description 1
- 102100035882 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 208000002177 Cataract Diseases 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- PTHCMJGKKRQCBF-UHFFFAOYSA-N Cellulose, microcrystalline Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 PTHCMJGKKRQCBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 229940105129 Chemotaxis inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 201000006082 Chickenpox Diseases 0.000 description 1
- GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N Chlorhexidine Chemical compound C=1C=C(Cl)C=CC=1NC(N)=NC(N)=NCCCCCCN=C(N)N=C(N)NC1=CC=C(Cl)C=C1 GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010008874 Chronic Fatigue Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 235000008733 Citrus aurantifolia Nutrition 0.000 description 1
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 1
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 description 1
- 241000223203 Coccidioides Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 206010010099 Combined immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000032170 Congenital Abnormalities Diseases 0.000 description 1
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 229920002785 Croscarmellose sodium Polymers 0.000 description 1
- 241001337994 Cryptococcus <scale insect> Species 0.000 description 1
- 208000008953 Cryptosporidiosis Diseases 0.000 description 1
- 206010011502 Cryptosporidiosis infection Diseases 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-SVZMEOIVSA-N D-fucopyranose Chemical compound C[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 1
- BGWQRWREUZVRGI-OLLRPPRZSA-N D-glucoheptopyranose Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O BGWQRWREUZVRGI-OLLRPPRZSA-N 0.000 description 1
- MNQZXJOMYWMBOU-VKHMYHEASA-N D-glyceraldehyde Chemical compound OC[C@@H](O)C=O MNQZXJOMYWMBOU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- RBNPOMFGQQGHHO-UWTATZPHSA-N D-glyceric acid Chemical compound OC[C@@H](O)C(O)=O RBNPOMFGQQGHHO-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- BGWQRWREUZVRGI-IEMWZLDZSA-N D-glycero-L-manno-Heptose Natural products OC[C@H](O)[C@@H]1O[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O BGWQRWREUZVRGI-IEMWZLDZSA-N 0.000 description 1
- JPIJQSOTBSSVTP-GBXIJSLDSA-N D-threonic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H](O)C(O)=O JPIJQSOTBSSVTP-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- YTBSYETUWUMLBZ-QWWZWVQMSA-N D-threose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H](O)C=O YTBSYETUWUMLBZ-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 206010011985 Decubitus ulcer Diseases 0.000 description 1
- 206010012335 Dependence Diseases 0.000 description 1
- 229920000045 Dermatan sulfate Polymers 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 208000000398 DiGeorge Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000032131 Diabetic Neuropathies Diseases 0.000 description 1
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 description 1
- 208000010772 Dog disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 239000004097 EU approved flavor enhancer Substances 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 229920003134 Eudragit® polymer Polymers 0.000 description 1
- 206010016075 Factor I deficiency Diseases 0.000 description 1
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 description 1
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 108010014173 Factor X Proteins 0.000 description 1
- 206010016207 Familial Mediterranean fever Diseases 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 108010029961 Filgrastim Proteins 0.000 description 1
- 206010016952 Food poisoning Diseases 0.000 description 1
- 208000019331 Foodborne disease Diseases 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 101000930822 Giardia intestinalis Dipeptidyl-peptidase 4 Proteins 0.000 description 1
- 206010018364 Glomerulonephritis Diseases 0.000 description 1
- 102400000326 Glucagon-like peptide 2 Human genes 0.000 description 1
- 101800000221 Glucagon-like peptide 2 Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 208000024869 Goodpasture syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 208000015023 Graves' disease Diseases 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 206010061192 Haemorrhagic fever Diseases 0.000 description 1
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 description 1
- 206010019196 Head injury Diseases 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 241000589989 Helicobacter Species 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 208000031220 Hemophilia Diseases 0.000 description 1
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 description 1
- 206010019663 Hepatic failure Diseases 0.000 description 1
- 208000007514 Herpes zoster Diseases 0.000 description 1
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 1
- 101001122938 Homo sapiens Lysosomal protective protein Proteins 0.000 description 1
- 241000598436 Human T-cell lymphotropic virus Species 0.000 description 1
- 241000714259 Human T-lymphotropic virus 2 Species 0.000 description 1
- 208000023105 Huntington disease Diseases 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020983 Hypogammaglobulinaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 206010021460 Immunodeficiency syndromes Diseases 0.000 description 1
- 206010061216 Infarction Diseases 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 1
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 1
- 102100025306 Integrin alpha-IIb Human genes 0.000 description 1
- 101710149643 Integrin alpha-IIb Proteins 0.000 description 1
- 102000005755 Intercellular Signaling Peptides and Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010070716 Intercellular Signaling Peptides and Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010079944 Interferon-alpha2b Proteins 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 208000005615 Interstitial Cystitis Diseases 0.000 description 1
- 229920000288 Keratan sulfate Polymers 0.000 description 1
- MNQZXJOMYWMBOU-GSVOUGTGSA-N L-(-)-glyceraldehyde Chemical compound OC[C@H](O)C=O MNQZXJOMYWMBOU-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-PQMKYFCFSA-N L-Fucose Natural products C[C@H]1O[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-PQMKYFCFSA-N 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-ZZWDRFIYSA-N L-glucose Chemical compound OC[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-ZZWDRFIYSA-N 0.000 description 1
- RBNPOMFGQQGHHO-REOHCLBHSA-N L-glyceric acid Chemical compound OC[C@H](O)C(O)=O RBNPOMFGQQGHHO-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 108010059881 Lactase Proteins 0.000 description 1
- 206010024229 Leprosy Diseases 0.000 description 1
- 206010024238 Leptospirosis Diseases 0.000 description 1
- 208000000706 Leukocyte-Adhesion Deficiency Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000186781 Listeria Species 0.000 description 1
- 208000004852 Lung Injury Diseases 0.000 description 1
- 102000004317 Lyases Human genes 0.000 description 1
- 108090000856 Lyases Proteins 0.000 description 1
- 208000016604 Lyme disease Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 206010025327 Lymphopenia Diseases 0.000 description 1
- 102100033342 Lysosomal acid glucosylceramidase Human genes 0.000 description 1
- 102100028524 Lysosomal protective protein Human genes 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 description 1
- 244000246386 Mentha pulegium Species 0.000 description 1
- 235000016257 Mentha pulegium Nutrition 0.000 description 1
- 235000004357 Mentha x piperita Nutrition 0.000 description 1
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N Methacrylic acid Chemical compound CC(=C)C(O)=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012901 Milli-Q water Substances 0.000 description 1
- 239000004909 Moisturizer Substances 0.000 description 1
- 208000001089 Multiple system atrophy Diseases 0.000 description 1
- 208000005647 Mumps Diseases 0.000 description 1
- 206010028372 Muscular weakness Diseases 0.000 description 1
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 206010028570 Myelopathy Diseases 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 208000028389 Nerve injury Diseases 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 206010029240 Neuritis Diseases 0.000 description 1
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 1
- 241000187654 Nocardia Species 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241001420836 Ophthalmitis Species 0.000 description 1
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 229920002201 Oxidized cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 1
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 1
- 206010033645 Pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- 241000282320 Panthera leo Species 0.000 description 1
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 102000015731 Peptide Hormones Human genes 0.000 description 1
- 108010038988 Peptide Hormones Proteins 0.000 description 1
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 description 1
- 241000709664 Picornaviridae Species 0.000 description 1
- 208000013544 Platelet disease Diseases 0.000 description 1
- 208000000474 Poliomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 208000026378 Polyglandular endocrine disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- 208000002787 Pregnancy Complications Diseases 0.000 description 1
- 208000004210 Pressure Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 208000031482 Prosthesis-Related Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 206010061926 Purulence Diseases 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 208000017442 Retinal disease Diseases 0.000 description 1
- 206010038923 Retinopathy Diseases 0.000 description 1
- 241000220010 Rhode Species 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- 241000710801 Rubivirus Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 206010039509 Scab Diseases 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- 206010053879 Sepsis syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000019802 Sexually transmitted disease Diseases 0.000 description 1
- 206010040576 Shock hypoglycaemic Diseases 0.000 description 1
- 208000009106 Shy-Drager Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010072148 Stiff-Person syndrome Diseases 0.000 description 1
- ZSJLQEPLLKMAKR-UHFFFAOYSA-N Streptozotocin Natural products O=NN(C)C(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O ZSJLQEPLLKMAKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000000491 Tendinopathy Diseases 0.000 description 1
- 206010043255 Tendonitis Diseases 0.000 description 1
- 235000011941 Tilia x europaea Nutrition 0.000 description 1
- 206010069363 Traumatic lung injury Diseases 0.000 description 1
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 208000037386 Typhoid Diseases 0.000 description 1
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 1
- 108010092464 Urate Oxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000003990 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 description 1
- 108090000435 Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 1
- 206010046980 Varicella Diseases 0.000 description 1
- 206010054880 Vascular insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000033559 Waldenström macroglobulinemia Diseases 0.000 description 1
- 208000010399 Wasting Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010048038 Wound infection Diseases 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- IPBVNPXQWQGGJP-UHFFFAOYSA-N acetic acid phenyl ester Natural products CC(=O)OC1=CC=CC=C1 IPBVNPXQWQGGJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000002730 additional effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000012382 advanced drug delivery Methods 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical class 0.000 description 1
- 150000001336 alkenes Chemical class 0.000 description 1
- 150000001345 alkine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 201000009961 allergic asthma Diseases 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000036783 anaphylactic response Effects 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 230000002528 anti-freeze Effects 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002141 anti-parasite Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000007798 antifreeze agent Substances 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003096 antiparasitic agent Substances 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 229920006187 aquazol Polymers 0.000 description 1
- 239000012861 aquazol Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 201000008680 babesiosis Diseases 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- 229960004217 benzyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 229920000249 biocompatible polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 1
- 201000001383 blood group incompatibility Diseases 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- 208000016363 blood protein disease Diseases 0.000 description 1
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 1
- 150000001642 boronic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 206010006451 bronchitis Diseases 0.000 description 1
- 230000005587 bubbling Effects 0.000 description 1
- 239000004067 bulking agent Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 230000002308 calcification Effects 0.000 description 1
- BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N calcitonin Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(N)=O)C(C)C)C(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1 BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N 0.000 description 1
- 229960004015 calcitonin Drugs 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- CJZGTCYPCWQAJB-UHFFFAOYSA-L calcium stearate Chemical compound [Ca+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O CJZGTCYPCWQAJB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000013539 calcium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008116 calcium stearate Substances 0.000 description 1
- 201000003984 candidiasis Diseases 0.000 description 1
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229940105329 carboxymethylcellulose Drugs 0.000 description 1
- 208000003295 carpal tunnel syndrome Diseases 0.000 description 1
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 description 1
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 description 1
- 239000000679 carrageenan Substances 0.000 description 1
- 229940113118 carrageenan Drugs 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 229920006317 cationic polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003610 charcoal Substances 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- ZAEWNVLHJIPMOU-IXNLUFIJSA-N chembl268636 Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@@H](C(=O)N[C@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]([C@H](C)O)C(N)=O)C(C)C)NC(=O)[C@@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](CO)NC(=O)[C@@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](CO)NC(=O)[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CO)NC(=O)[C@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)CNC(=O)[C@@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](N)CO)[C@H](C)O)[C@H](C)O)C1=CC=CC=C1 ZAEWNVLHJIPMOU-IXNLUFIJSA-N 0.000 description 1
- 239000002819 chemotaxis inhibitor Substances 0.000 description 1
- 235000015111 chews Nutrition 0.000 description 1
- 229960003260 chlorhexidine Drugs 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- 208000025302 chronic primary adrenal insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 150000001860 citric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 230000009852 coagulant defect Effects 0.000 description 1
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 1
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 210000004953 colonic tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000002826 coolant Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 238000002316 cosmetic surgery Methods 0.000 description 1
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 229960001681 croscarmellose sodium Drugs 0.000 description 1
- 229960000913 crospovidone Drugs 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 235000010947 crosslinked sodium carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- AVJBPWGFOQAPRH-FWMKGIEWSA-L dermatan sulfate Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H](OS([O-])(=O)=O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](C([O-])=O)O1 AVJBPWGFOQAPRH-FWMKGIEWSA-L 0.000 description 1
- 229940051593 dermatan sulfate Drugs 0.000 description 1
- 238000000586 desensitisation Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 229960002086 dextran Drugs 0.000 description 1
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- RBLGLDWTCZMLRW-UHFFFAOYSA-K dicalcium;phosphate;dihydrate Chemical compound O.O.[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O RBLGLDWTCZMLRW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 235000001434 dietary modification Nutrition 0.000 description 1
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 1
- 208000016097 disease of metabolism Diseases 0.000 description 1
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229940112141 dry powder inhaler Drugs 0.000 description 1
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 244000078703 ectoparasite Species 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003974 emollient agent Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 206010014665 endocarditis Diseases 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 210000003890 endocrine cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003372 endocrine gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 210000003989 endothelium vascular Anatomy 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 229940095399 enema Drugs 0.000 description 1
- 229940079360 enema for constipation Drugs 0.000 description 1
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 1
- 239000002702 enteric coating Substances 0.000 description 1
- 238000009505 enteric coating Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008472 epithelial growth Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MVPICKVDHDWCJQ-UHFFFAOYSA-N ethyl 3-pyrrolidin-1-ylpropanoate Chemical compound CCOC(=O)CCN1CCCC1 MVPICKVDHDWCJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940093476 ethylene glycol Drugs 0.000 description 1
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 208000030533 eye disease Diseases 0.000 description 1
- 229960004222 factor ix Drugs 0.000 description 1
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 1
- 229940012426 factor x Drugs 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 235000019264 food flavour enhancer Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000003626 gastrointestinal polypeptide Substances 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 201000006592 giardiasis Diseases 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- TWSALRJGPBVBQU-PKQQPRCHSA-N glucagon-like peptide 2 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O)[C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)C1=CC=CC=C1 TWSALRJGPBVBQU-PKQQPRCHSA-N 0.000 description 1
- 230000014101 glucose homeostasis Effects 0.000 description 1
- MNQZXJOMYWMBOU-UHFFFAOYSA-N glyceraldehyde Chemical compound OCC(O)C=O MNQZXJOMYWMBOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940075507 glyceryl monostearate Drugs 0.000 description 1
- 229940075529 glyceryl stearate Drugs 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000037824 growth disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 150000002373 hemiacetals Chemical class 0.000 description 1
- 201000001505 hemoglobinuria Diseases 0.000 description 1
- 208000007475 hemolytic anemia Diseases 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 235000001050 hortel pimenta Nutrition 0.000 description 1
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 229960002127 imiglucerase Drugs 0.000 description 1
- 108010039650 imiglucerase Proteins 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 230000007574 infarction Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 208000028774 intestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 208000012947 ischemia reperfusion injury Diseases 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- KXCLCNHUUKTANI-RBIYJLQWSA-N keratan Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@@H](O[C@H]3[C@H]([C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H](O)[C@@H]3O)O)[C@H](NC(C)=O)[C@H]2O)COS(O)(=O)=O)O[C@H](COS(O)(=O)=O)[C@@H]1O KXCLCNHUUKTANI-RBIYJLQWSA-N 0.000 description 1
- 206010023332 keratitis Diseases 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 229940116108 lactase Drugs 0.000 description 1
- 201000010901 lateral sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000004571 lime Substances 0.000 description 1
- 102000019758 lipid binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091016323 lipid binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000037356 lipid metabolism Effects 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 208000007903 liver failure Diseases 0.000 description 1
- 231100000835 liver failure Toxicity 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 231100000515 lung injury Toxicity 0.000 description 1
- 210000004324 lymphatic system Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 231100001023 lymphopenia Toxicity 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001427 mPEG Polymers 0.000 description 1
- 206010025482 malaise Diseases 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960001855 mannitol Drugs 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 229920003145 methacrylic acid copolymer Polymers 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 108010087449 methoxypoly(ethylene glycol)5K-block-poly(aspartic acid)10 Proteins 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229960001047 methyl salicylate Drugs 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 230000001483 mobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 230000001333 moisturizer Effects 0.000 description 1
- 239000001788 mono and diglycerides of fatty acids Substances 0.000 description 1
- 208000005264 motor neuron disease Diseases 0.000 description 1
- 229940051875 mucins Drugs 0.000 description 1
- 230000003232 mucoadhesive effect Effects 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 208000010805 mumps infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 208000029766 myalgic encephalomeyelitis/chronic fatigue syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000036473 myasthenia Effects 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 1
- 201000008383 nephritis Diseases 0.000 description 1
- 230000008764 nerve damage Effects 0.000 description 1
- 210000000944 nerve tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229940029345 neupogen Drugs 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 238000010534 nucleophilic substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 235000015816 nutrient absorption Nutrition 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 238000013116 obese mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000000414 obstructive effect Effects 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 229940126701 oral medication Drugs 0.000 description 1
- 210000004789 organ system Anatomy 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 1
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 238000012261 overproduction Methods 0.000 description 1
- 229940107304 oxidized cellulose Drugs 0.000 description 1
- 125000005430 oxychloro group Chemical group 0.000 description 1
- 208000010403 panophthalmitis Diseases 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000849 parathyroid Effects 0.000 description 1
- 210000002990 parathyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000000199 parathyroid hormone Substances 0.000 description 1
- 239000013618 particulate matter Substances 0.000 description 1
- 239000011049 pearl Substances 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 210000004197 pelvis Anatomy 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004303 peritoneum Anatomy 0.000 description 1
- 206010034674 peritonitis Diseases 0.000 description 1
- 238000013148 permeation assay Methods 0.000 description 1
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 229940049953 phenylacetate Drugs 0.000 description 1
- WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N phenylacetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004713 phosphodiesters Chemical class 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000007505 plaque formation Effects 0.000 description 1
- 239000004014 plasticizer Substances 0.000 description 1
- 229920000765 poly(2-oxazolines) Polymers 0.000 description 1
- 229920000191 poly(N-vinyl pyrrolidone) Polymers 0.000 description 1
- 229920001308 poly(aminoacid) Polymers 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920002946 poly[2-(methacryloxy)ethyl phosphorylcholine] polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 229920000223 polyglycerol Polymers 0.000 description 1
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 1
- 230000000379 polymerizing effect Effects 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 108010082974 polysarcosine Proteins 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 229920000523 polyvinylpolypyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013809 polyvinylpolypyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 231100000683 possible toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000000291 postprandial effect Effects 0.000 description 1
- 235000020610 powder formula Nutrition 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 208000012113 pregnancy disease Diseases 0.000 description 1
- GCYXWQUSHADNBF-AAEALURTSA-N preproglucagon 78-108 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 GCYXWQUSHADNBF-AAEALURTSA-N 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000003380 propellant Substances 0.000 description 1
- 208000011354 prosthesis-related infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 108010043277 recombinant soluble CD4 Proteins 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- 239000004627 regenerated cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000003488 releasing hormone Substances 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 201000003068 rheumatic fever Diseases 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000548 ribosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940081974 saccharin Drugs 0.000 description 1
- 235000019204 saccharin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000901 saccharin and its Na,K and Ca salt Substances 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 201000000306 sarcoidosis Diseases 0.000 description 1
- 230000036186 satiety Effects 0.000 description 1
- 235000019627 satiety Nutrition 0.000 description 1
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 1
- 208000013223 septicemia Diseases 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 239000002924 silencing RNA Substances 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 206010040872 skin infection Diseases 0.000 description 1
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 1
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000008109 sodium starch glycolate Substances 0.000 description 1
- 229920003109 sodium starch glycolate Polymers 0.000 description 1
- 229940079832 sodium starch glycolate Drugs 0.000 description 1
- 229940045902 sodium stearyl fumarate Drugs 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000012265 solid product Substances 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N streptozocin Chemical compound O=NN(C)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N 0.000 description 1
- 229960001052 streptozocin Drugs 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 229940117986 sulfobetaine Drugs 0.000 description 1
- 150000003457 sulfones Chemical class 0.000 description 1
- 239000002511 suppository base Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000009747 swallowing Effects 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 208000006379 syphilis Diseases 0.000 description 1
- 230000001839 systemic circulation Effects 0.000 description 1
- 239000007916 tablet composition Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000004415 tendinitis Diseases 0.000 description 1
- 229920006027 ternary co-polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 239000004753 textile Substances 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000002627 tracheal intubation Methods 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 125000000647 trehalose group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 201000002311 trypanosomiasis Diseases 0.000 description 1
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 201000008297 typhoid fever Diseases 0.000 description 1
- 239000013026 undiluted sample Substances 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- 208000019206 urinary tract infection Diseases 0.000 description 1
- 229960005356 urokinase Drugs 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
- 208000023577 vascular insufficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 239000004034 viscosity adjusting agent Substances 0.000 description 1
- 235000012431 wafers Nutrition 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- XOOUIPVCVHRTMJ-UHFFFAOYSA-L zinc stearate Chemical compound [Zn+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O XOOUIPVCVHRTMJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L zinc;1-(5-cyanopyridin-2-yl)-3-[(1s,2s)-2-(6-fluoro-2-hydroxy-3-propanoylphenyl)cyclopropyl]urea;diacetate Chemical compound [Zn+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O.CCC(=O)C1=CC=C(F)C([C@H]2[C@H](C2)NC(=O)NC=2N=CC(=CC=2)C#N)=C1O UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
- A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
- A61K47/6927—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores
- A61K47/6929—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle
- A61K47/6931—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer
- A61K47/6939—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer the polymer being a polysaccharide, e.g. starch, chitosan, chitin, cellulose or pectin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/711—Natural deoxyribonucleic acids, i.e. containing only 2'-deoxyriboses attached to adenine, guanine, cytosine or thymine and having 3'-5' phosphodiester links
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/20—Interleukins [IL]
- A61K38/208—IL-12
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
- A61K47/645—Polycationic or polyanionic oligopeptides, polypeptides or polyamino acids, e.g. polylysine, polyarginine, polyglutamic acid or peptide TAT
- A61K47/6455—Polycationic oligopeptides, polypeptides or polyamino acids, e.g. for complexing nucleic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/0008—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition
- A61K48/0025—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/0008—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition
- A61K48/0025—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid
- A61K48/0041—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid the non-active part being polymeric
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/0075—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the delivery route, e.g. oral, subcutaneous
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/0091—Purification or manufacturing processes for gene therapy compositions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
- A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
- A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
- A61K9/5146—Organic macromolecular compounds; Dendrimers obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, polyamines, polyanhydrides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Manufacturing & Machinery (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
可逆的に結合しているポリマーコートを含有するポリプレックス組成物が本明細書に記載されている。いくつかの場合では、組成物は、コーティングされていない粒子と比較して、驚くほど改善された安定性及び/または粘膜拡散を示す。いくつかの場合では、可逆的に結合したポリマーコートは、コーティングされていない粒子と比較して、標的細胞または組織のトランスフェクションを妨害しないか、または増強する。【選択図】図1
Description
関連出願との相互参照
本出願は、2019年3月14日に出願された米国仮出願第62/818,425号、2019年10月18日に出願された同第62/923,403号、及び2019年10月21日に出願された同第62/924,131号の優先権の利益を主張し、全体が参照により及びあらゆる目的のために本明細書に組み込まれる。
本出願は、2019年3月14日に出願された米国仮出願第62/818,425号、2019年10月18日に出願された同第62/923,403号、及び2019年10月21日に出願された同第62/924,131号の優先権の利益を主張し、全体が参照により及びあらゆる目的のために本明細書に組み込まれる。
キトサンは、キチンの脱アセチル化された形態である。キトサンは、N-アセチル-D-グルコサミン及びD-グルコサミンの非毒性カチオンポリマーである。キトサンは核酸と複合体を形成し得、生体適合性のある非毒性多糖類として、細胞をトランスフェクトするためのDNA送達媒体として使用されている。ウイルスベクターの複雑さ及び潜在的な毒性のために、核酸の非ウイルス性送達におけるキトサンの使用に多くの関心が集中している。
遺伝子トランスフェクションによく適する組成物を特定するために、修飾キトサンと核酸の複合体を含む多数のキトサン/DNA複合体が検討されている。例えば、WO2010/088565;WO2008/082282を参照のこと。これらの複合体は、他の特性、溶解性、凝集傾向、複合体の安定性、粒径、DNAを放出する能力、及びトランスフェクション効率と共に、重要な物理化学的及び生物学的特性が異なることがわかっている。
トランスフェクション効率が改善されたキトサン-核酸ポリプレックスは、キトサン骨格をアルギニン及び親水性ポリオールで官能基化することにより開発されている。例えば、米国特許第10,046,066号及び同第9,623,112号を参照のこと。特に、これらのポリプレックスは、腸の微小環境で顕著な安定性を示しており、これは、大幅なpH変化、酵素活性、及び複雑な粘膜相互作用のために、体循環と比較して独特の課題を提示する。
粘着性及び立体相互作用を介して異物粒子を効率的にトラップし、続いて、急速にクリアランスする、ムチン繊維の密なネットワークのために、粘膜バリアは、ナノ粒子送達システムに対する特定の課題を表す。実に、特に、経口薬物送達の場合、腸粘膜は、わずか50分でターンオーバーし得、これは、投与された粒子の非常に効率的なクリアランスをもたらす。例えば、Lehr et al.,Int’l J.Pharm.70:235-40(1991)を参照のこと。ムチン繊維は、正荷電粒子に対して高い親和性を有する高度にグリコシル化されたセグメント、及び、ポリ-(乳酸-コ-グリコール酸)(PLGA)などの多くの一般に使用される薬物送達材料を含む、疎水性材料を高い結合力で結合し得る周期的な疎水性ドメインを含有する。立体障害と組み合わされたこれらの複雑な電荷相互作用は、ナノ粒子薬物送達形態が何らかの形態の遮蔽なしに克服することは困難であることが証明されている。しかし、逆に、従来の遮蔽アプローチでは、多くの場合、トランスフェクション能力が大幅に低下したナノ粒子が得られる。
ポリエチレングリコール(PEG)は、少なくとも最初は相互侵入ネットワーク効果を介して粘膜付着を増加させ、それにより、薬物送達を延長するその実証された能力に基づく、幅広い遮蔽方策の主な要素として出現している。例えば、Huckaby and Lai,Advanced Drug Delivery Reviews 124:125-39(2018)を参照のこと。しかし、残念ながら、これらの粘膜付着方策は、核酸などの細胞内送達を必要とする治療には機能しない。その理由は、粘膜付着の強化により、粒子が下にある上皮または他の関連する標的組織に到達するのを妨げるためである。逆説的に、おそらく、PEGコーティングは、また、粒子拡散を増強しようとする粘膜不活性なアプローチにおける使用が見出されている。しかし、特に、これらのタイプのシステムに関する最近の知見及び結論は、ムチン親和性を最小限に抑え、粘液浸透を増強するよりも、高いPEGグラフト密度の重要性を強調している。Id.,Wang and Lai,Angew Chem 47:9726-9729(2008)。これらの例外的に高密度で共有結合しているPEG化方策は、効率的な遺伝子トランスフェクションにとって問題がある。
従って、粘膜浸透特性が改善されたin vivoでの遺伝子導入のための新しい組成物及び方法の必要性が残っている。
負荷電アンカー領域及び少なくとも1つの(例えば、親水性)非荷電尾部領域を有する、複数の線状ブロックコポリマーを含む可逆的(すなわち、非共有結合的に結合している)ポリマーコーティングを用いる粘膜付着を減少させ、キトサン-核酸ナノ粒子の粘液浸透を増強するための組成物及び方法が本明細書で提供される。好ましい実施形態では、線状ブロックコポリマーは、少なくとも1つのポリアニオンアンカー領域及び少なくとも1つのPEG尾部領域を含む二元ブロックまたは三元ブロックコポリマーである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物は、驚くべきことに、以前に企図されたよりも低い表面コーティング密度で、粘膜付着の低減及び粘液浸透の増強を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、驚くべきことに、ポリアニオンの存在にもかかわらず、一貫した物理的及び/または化学的安定性を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、驚くべきことに、可逆的ポリマーコーティングを含むにもかかわらず、一貫した及び/または同等のトランスフェクション効率を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、驚くべきことに、バルク形態及び/またはコーティングまたはカプセル化された形態での長期(例えば、数ヶ月)の貯蔵中に安定している。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、驚くべきことに、粘膜バリア及び/または粘液関連液(例えば、尿、または胃液もしくは腸液)と接触した時に安定している。
一態様では、本発明は、複数のポリアニオン含有ブロックコポリマー、例えば、線状二元ブロック及び/または三元ブロックコポリマーと複合体化したキトサン誘導体核酸ナノ粒子(ポリプレックス)を含むキトサン組成物を提供し、各コポリマーは、少なくとも1つのポリアニオンアンカー領域及び少なくとも1つの親水性(例えば、非荷電)尾部領域を含む。通常は、ポリプレックスは、コアを形成し、ポリアニオン親水性ポリマーは、例えば、少なくとも部分的な外膜を形成する。ポリプレックス及びポリアニオン含有ブロックコポリマー間の複合体は、通常、ポリマーのポリアニオンアンカー領域及びコーティングされていないポリプレックスの正味の正電荷間の可逆的且つ非共有結合的な静電相互作用により形成される。いくつかの場合では、ポリプレックス及びポリマーのポリアニオンアンカー領域間の静電相互作用の強度を低減させるためのイオン強度の増加、ならびに/またはポリマーのポリアニオン領域のアニオン部分をプロトン化するためのpHの減少により、ポリアニオン親水性ポリマーの全部または一部を複合体から放出させることができるという点で、複合体は可逆的である。
本発明の方法及び組成物に有用な例示的な二元ブロックコポリマー分子は、ポリエチレングリコール(PEG)尾部領域及びポリアニオン(PA)アンカー領域を含む「PEG-PA」コポリマー分子である。本発明の方法及び組成物に有用な例示的な三元ブロックコポリマー分子は、2つのPEG尾部領域に隣接する中央のPAアンカー領域[PEG-PA-PEG]、または中央のPEG尾部領域の側方にある2つのPAアンカー領域[PA-PEG-PA]を含む「PEG-PA」コポリマー分子である。
いくつかの実施形態では、本発明は、アミノ官能基化キトサン及び少なくとも1つの核酸分子を含むキトサン誘導体ナノ粒子を含む複合体を提供し、少なくとも1つの核酸分子は、3:1より大きいアミノ対リン(N:P)モル比でキトサン誘導体ナノ粒子に非共有結合的に結合しており、それにより、正電荷を有する誘導体化キトサン核酸複合体を形成し;複数の線状ブロックコポリマーは、キトサン誘導体ナノ粒子に非共有結合的に結合しており、ブロックコポリマーは、少なくとも1つのポリアニオン(PA)アンカー領域及び少なくとも1つのポリエチレングリコール(PEG)尾部領域を有し、組成物は、約1:100超且つ約10:1未満である、アミノ対アニオンの(N:A)モル比を含む。
いくつかの実施形態では、線状ブロックコポリマーは、PAアンカー領域及びPEG尾部領域を含む二元ブロックコポリマーである。いくつかの実施形態では、線状ブロックコポリマーは、2つのPEG尾部領域に隣接する中央のPAアンカー領域、または、代わりに、2つのPAアンカー領域に隣接する中央のPEG尾部領域を含む三元ブロックコポリマーである。
いくつかの実施形態では、PAアンカー領域は、ポリペプチドを含み、ポリペプチドは、負荷電である。いくつかの実施形態では、PEG-PA分子のPAアンカー領域は、炭水化物を含み、炭水化物は、負荷電である。いくつかの実施形態では、炭水化物は、複数のリン酸塩及び/または硫酸塩部分を含む。いくつかの実施形態では、炭水化物は、複数のカルボキシラート部分を含む。いくつかの実施形態では、炭水化物は、複数のカルボキシラート部分ならびに複数のリン酸塩及び/または硫酸塩部分を含む。いくつかの実施形態では、炭水化物は、リン酸塩及び/または硫酸塩部分よりも高い割合または数のカルボン酸塩部分を含む。例示的な実施形態では、炭水化物は、グリコサミノグリカンである。
特定の実施形態では、PEG-PA分子は、PEG-ポリグルタミン酸(PEG-PGA)分子;PEG-ポリアスパラギン酸(PEG-PAA)分子;またはPEG-ヒアルロン酸(PEG-HA)分子、またはそれらの組み合わせを含む。
いくつかの実施形態では、PEG-PA分子のPEG尾部領域は、約500Da~約50,000Da、好ましくは、約1,000Da~約10,000Da、より好ましくは、約1,500Da~約7,500Da、さらにより好ましくは、約3,000Da~約5,000Da、最も好ましくは、約5,000Daの重量平均分子量(Mw)を含む。いくつかの実施形態では、PEG-PA分子のPA尾部領域は、約500Da~約3,000Da、より好ましくは、約1,000Da~約2,500Da、より好ましくは、約1,500Daの重量平均分子量(Mw)を含む。
いくつかの実施形態では、N:Pモル比は、約3:1超且つ約100:1未満、より好ましくは、約5:1超且つ約50:1未満、さらにより好ましくは、約5:1超且つ約30:1未満、さらにより好ましくは、約5:1超且つ約20:1未満、さらにより好ましくは約5:1且つ約10:1未満である。いくつかの場合では、N:Pモル比は、約3:1~約30:1である。いくつかの場合では、N:Pモル比は、約3:1~約20:1である。いくつかの場合では、N:Pモル比は、約3:1~約10:1である。いくつかの場合では、N:Pモル比は、約7:1である。
いくつかの実施形態では、N:Aモル比は、約1:75超及び約8:1未満、より好ましくは、約1:50超及び約6:1未満、さらにより好ましくは、約1:25超及び約6:1未満、さらにより好ましくは、約1:10超及び約6:1未満、さらにより好ましくは、約1:5超及び約6:1未満である。
いくつかの実施形態では、N:Pモル比は、約1:8~約8:1であり、P:Aモル比は、約0.02~約0.2であり、より好ましくは、N:Aモル比は、約0.1~約5、より好ましくは、約0.2~約2、より好ましくは、約0.3~約1.5、より好ましくは、約0.4~約1であり、さらにより好ましくは、N:P:A比は、約7:1:7、約7:1:12、または約7:1:17である。
いくつかの実施形態では、N:Pモル比は、約1:8~約30:1であり、P:Aモル比は、約1:50~約1:5であり、より好ましくは、N:Aモル比は、約1:10~約5、より好ましくは、約1:5~約2、より好ましくは、約1:3~約1.5、さらにより好ましくは、約1:2.5~約1である。いくつかの実施形態では、N:Pモル比は、約1:5~約20:1であり、P:Aモル比は、約1:50~約1:5であり、より好ましくは、N:Aモル比は、約1:10~約5、より好ましくは、約1:5~約2、より好ましくは、約1:3~約1.5、さらにより好ましくは、約1:2.5~約1である。いくつかの実施形態では、N:Pモル比は、約1:2~約10:1であり、P:Aモル比は、約1:50~約1:5であり、より好ましくは、N:Aモル比は、約1:10~約5、より好ましくは、約1:5~約2、より好ましくは、約1:3~約1.5、さらにより好ましくは、約1:2.5~約1である。
いくつかの実施形態では、N:Pモル比は、約1:1~約30:1であり、P:Aモル比は、約1:50~約1:5であり、より好ましくは、N:Aモル比は、約1:10~約5、より好ましくは、約1:5~約2、より好ましくは、約1:3~約1.5、さらにより好ましくは、約1:2.5~約1である。いくつかの実施形態では、N:Pモル比は、約1:1~約20:1であり、P:Aモル比は、約1:50~約1:5であり、より好ましくは、N:Aモル比は、約1:10~約5、より好ましくは、約1:5~約2、より好ましくは、約1:3~約1.5、さらにより好ましくは、約1:2.5~約1である。いくつかの実施形態では、N:Pモル比は、約1:1~約15:1であり、P:Aモル比は、約1:50~約1:5であり、より好ましくは、N:Aモル比は、約1:10~約5、より好ましくは、約1:5~約2、より好ましくは、約1:3~約1.5、さらにより好ましくは、約1:2.5~約1である。いくつかの実施形態では、N:Pモル比は、約1:1~約10:1であり、P:Aモル比は、約1:50~約1:5であり、より好ましくは、N:Aモル比は、約1:10~約5、より好ましくは、約1:5~約2、より好ましくは、約1:3~約1.5、さらにより好ましくは、約1:2.5~約1である。
いくつかの実施形態では、N:Pモル比は、約2:1~約30:1であり、P:Aモル比は、約1:50~約1:5であり、より好ましくは、N:Aモル比は、約1:10~約5、より好ましくは、約1:5~約2、より好ましくは、約1:3~約1.5、さらにより好ましくは、約1:2.5~約1である。いくつかの実施形態では、N:Pモル比は、約2:1~約20:1であり、P:Aモル比は、約1:50~約1:5であり、より好ましくは、N:Aモル比は、約1:10~約5、より好ましくは、約1:5~約2、より好ましくは、約1:3~約1.5、さらにより好ましくは、約1:2.5~約1である。いくつかの実施形態では、N:Pモル比は、約2:1~約15:1であり、P:Aモル比は、約1:50~約1:5であり、より好ましくは、N:Aモル比は、約1:10~約5、より好ましくは、約1:5~約2、より好ましくは、約1:3~約1.5、さらにより好ましくは、約1:2.5~約1である。いくつかの実施形態では、N:Pモル比は、約2:1~約10:1であり、P:Aモル比は、約1:50~約1:5であり、より好ましくは、N:Aモル比は、約1:10~約5、より好ましくは、約1:5~約2、より好ましくは、約1:3~約1.5、さらにより好ましくは、約1:2.5~約1である。
いくつかの実施形態では、アミノ官能基化キトサンは、アルギニン、リジン、またはオルニチン官能基化され、好ましくは、アルギニン官能基化される。いくつかの実施形態では、アミノ官能基化キトサン誘導体ナノ粒子は、さらに、ポリオールを含む。いくつかの実施形態では、アミノ官能基化キトサンは、さらに、ポリオールを含む。いくつかの実施形態では、アミノ官能基化キトサン誘導体ナノ粒子は、また、ポリオールで官能基化される。いくつかの実施形態では、アミノ官能基化キトサンは、また、ポリオールで官能基化される。
いくつかの実施形態では、組成物は、空腹時人工腸液中で、1時間、24時間、48時間、1週間、または1ヶ月間もしくは2ヶ月間、あるいは、少なくとも1時間、24時間、48時間、1週間、または1ヶ月間もしくは2ヶ月間、安定である。いくつかの実施形態では、組成物は、精製水中の組成物の分散液などの水性分散液中、4℃で、1時間、24時間、48時間、1週間、または1ヶ月間もしくは2ヶ月間、あるいは、少なくとも1時間、24時間、48時間、1週間、または1ヶ月間もしくは2ヶ月間、安定である。いくつかの実施形態では、組成物は、精製水中、4℃で、1時間、24時間、48時間、1週間、または1ヶ月もしくは2ヶ月間、あるいは、少なくとも1時間、24時間、48時間、1週間、または1ヶ月もしくは2ヶ月間、安定である。いくつかの実施形態では、組成物は、尿中、4℃で、1時間、24時間、48時間、1週間、または1ヶ月間もしくは2ヶ月間、あるいは、少なくとも1時間、24時間、48時間、1週間、または1ヶ月間もしくは2ヶ月間、安定である。いくつかの実施形態では、組成物は、所定の時間の後、例えば、24時間後、48時間後、1週間後、または1ヶ月後もしくは2ヶ月後に、人工腸液及び/または水性分散液及び/または尿及び/または精製水中で、沈殿凝集物が実質的にない(10%未満)という点で安定である。
いくつかの実施形態では、組成物は、凍結/解凍及び/または凍結乾燥/再水和後に水性分散液中で安定である。いくつかの実施形態では、組成物は、水溶液中4℃で、48時間、1週間、または1ヶ月もしくは2ヶ月後に、あるいは少なくとも48時間、1週間、または1ヶ月もしくは2ヶ月後に、0.2未満の多分散指数を示す。いくつかの実施形態では、組成物は、乾燥(例えば、凍結乾燥、噴霧乾燥、蒸発、超臨界乾燥、噴霧凍結乾燥など)させ、次に、再水和させた後に水性分散液中で安定である。
いくつかの実施形態では、組成物は、哺乳動物の尿中で少なくとも1時間安定である。いくつかの実施形態では、組成物は、室温または37℃で哺乳動物の尿中で少なくとも1時間安定である。いくつかの実施形態では、組成物は、哺乳動物の尿中で(例えば、37℃で)少なくとも1時間後に、0.2未満の多分散指数を示す。
いくつかの実施形態では、組成物は、治療用核酸で細胞をトランスフェクトする。いくつかの実施形態では、治療用核酸は、治療用タンパク質に転写される。いくつかの実施形態では、治療用核酸は、内因性タンパク質をコードする遺伝子の発現を抑制する。いくつかの実施形態では、治療用核酸は、内因性遺伝子の発現を抑制する。
いくつかの実施形態では、組成物は、さらに、界面活性剤、賦形剤、及び/または貯蔵安定剤を含む。いくつかの実施形態では、貯蔵安定剤は、単糖、二糖、多糖、またはそれらの還元アルコールであり、さらにより好ましくは、貯蔵安定剤は、トレハロース及びマンニトールから選択される。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ポロキサマーを含み、より好ましくは、ポロキサマーは、ポロキサマー407である。
いくつかの実施形態では、少なくとも1つの核酸は、RNAを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも1つの核酸は、DNAを含む。
1.定義
別途定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語、表記法、及び他の科学用語は、本発明が関係する当業者らにより一般に理解される意味を有することを意図する。いくつかの場合では、一般に理解される意味を有する用語は、明確にするために及び/またはすぐに参照できるように本明細書中で定義され、本明細書にそのような定義の包含は、必ずしも、当該技術分野において一般に理解されているものを超える差を表すように解釈されるべきではない。本明細書に記載または参照される手法及び手順は、一般によく理解され、当業者らにより、従来の方法論、例えば、Sambrook et al.,Molecular Cloning:A Laboratory Manual 2nd ed.(1989)Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NYに記載の広く利用される分子クローニング方法論、を使用して一般に用いられる。必要に応じて、市販のキット及び試薬の使用を含む手順は、別途記載のない限り、一般に、製造者が定義したプロトコール及び/またはパラメーターに従って実施される。
別途定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語、表記法、及び他の科学用語は、本発明が関係する当業者らにより一般に理解される意味を有することを意図する。いくつかの場合では、一般に理解される意味を有する用語は、明確にするために及び/またはすぐに参照できるように本明細書中で定義され、本明細書にそのような定義の包含は、必ずしも、当該技術分野において一般に理解されているものを超える差を表すように解釈されるべきではない。本明細書に記載または参照される手法及び手順は、一般によく理解され、当業者らにより、従来の方法論、例えば、Sambrook et al.,Molecular Cloning:A Laboratory Manual 2nd ed.(1989)Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NYに記載の広く利用される分子クローニング方法論、を使用して一般に用いられる。必要に応じて、市販のキット及び試薬の使用を含む手順は、別途記載のない限り、一般に、製造者が定義したプロトコール及び/またはパラメーターに従って実施される。
本明細書で使用される場合、単数形「a」、「an」、及び「the」は、文脈が別途明示しない限り、複数の指示対象を含む。
「約」という用語は、示された値及びその値の上下範囲を示し、包含する。特定の実施形態では、「約」という用語は、指定された値±10%、±5%、または±1%を示す。特定の実施形態では、示されている場合、「約」という用語は、指定された値±その値の1標準偏差を示す。
「それらの組み合わせ」という用語は、その用語が参照する要素の全ての可能な組み合わせを含む。
任意の疾患または障害の「処置すること」または「処置」は、特定の実施形態では、対象に存在する疾患または障害を改善することを指す。別の実施形態では、「処置すること」または「処置」は、対象により識別できない可能性がある少なくとも1つの物理的パラメーターを改善することを含む。さらに別の実施形態では、「処置すること」または「処置」は、物理的(例えば、識別可能な症状の安定化)または生理学的(例えば、物理的パラメーターの安定化)あるいはその両方のいずれかで、疾患または障害を和らげることを含む。さらに別の実施形態では、「処置すること」または「処置」は、疾患または障害の発症を遅延または予防することを含む。
本明細書で使用される場合、「治療的有効量」または「有効量」という用語は、対象に投与される場合に、疾患または障害を処置するのに有効である抗体または組成物の量を指す。
本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、哺乳動物対象を意味する。例示的な対象としては、ヒト、サル、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウシ、ウマ、ラクダ、トリ、ヤギ、及びヒツジが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、対象は、ヒトである。いくつかの実施形態では、対象は、がん、自己免疫疾患もしくは状態、及び/または本明細書で提供される抗体で処置することができる感染症を有する。いくつかの実施形態では、対象は、がん、自己免疫疾患もしくは状態、及び/または感染症を有することが疑われるヒトである。
「キトサン」は、N-アセチルグルコサミンのポリマーである、キチンの部分的または完全に脱アセチル化された形態である。脱アセチル化度が50%を超えるキトサンが本発明では使用される。
キトサンは、脱アセチル化部位の遊離アミノ基を官能基化することにより誘導体化されてもよい。本明細書に記載の誘導体化キトサンは、以下を含む、核酸送達ビヒクルに有利な多数の特性を有する:負荷電核酸に効果的に結合及び複合体化すること、制御可能なサイズのナノ粒子に形成することができること、細胞により取り込まれ得ること、ならびに、細胞内に適切な時間で核酸を放出し得ること。1%~50%の任意の最終官能基化度を有するキトサン。(官能基化前のまたは官能基化がないキトサンポリマー上の遊離アミノ部分の数に対して、パーセント官能基化を決定する。)脱アセチル化度及び最終官能基化度は、官能基化キトサン誘導体に特定の電荷密度を与える。
本発明によるポリオールは、3、4、5、6、または7つの炭素骨格を有してもよく、少なくとも2つのヒドロキシル基を有してもよい。そのようなポリオール、またはそれらの組み合わせは、カチオン部分(例えば、リジン、オルニチンなどのアミノ基を含む分子、グアニジニウム基、アルギニンを含む分子、またはそれらの組み合わせ)で官能基化されているキトサンなどのキトサン骨格へのコンジュゲートに有用であり得る。
本明細書で使用される「C2-C6アルキレン」という用語は、任意に1つ以上の炭素-炭素多重結合を含有する線状または分枝状の二価炭化水素ラジカルを指す。誤解を避けるために、本明細書で使用される「C2-C6アルキレン」という用語は、アルカン、アルケン、及びアルキンの二価ラジカルを包含する。
本明細書で使用される場合、別途指示のない限り、「ペプチド」及び「ポリペプチド」という用語は、交換可能に使用される。
「ポリペプチド」という用語は、従来のポリペプチド(すなわち、LまたはD-アミノ酸を含有する短いポリペプチド)、ならびに所望の機能的活性を保持するペプチド同等物、ペプチドアナログ、及びペプチド模倣物を指すように最も広い意味で使用される。ペプチド同等物は、1つ以上のアミノ酸を関連有機酸、アミノ酸などで置き換えること、または側鎖もしくは官能基を置換または修飾することにより、従来のペプチドとは異なり得る。
「酸性アミノ酸」という用語は、pH7の水性緩衝液中で負電荷を持つ側鎖を有する天然に存在するかまたは天然に存在しないアミノ酸を指す。酸性アミノ酸の非限定例は、アスパラギン酸及びグルタミン酸である。
ペプチド模倣物は、当該技術分野で知られているように、代替の結合により置き換えられた1つ以上のペプチド結合を有してもよい。当該技術分野で知られているように、ペプチド骨格の一部または全部は、機能的アミノ酸側鎖の可動性を制限するために、立体配座的に拘束された環状アルキルまたはアリール置換基で置き換えることもできる。
本発明のポリペプチドは、当該技術分野で周知である組み換え及び合成方法などの認識された方法により生成されてもよい。ペプチド合成の手法は周知であり、Merrifield,J.Amer.Chem.Soc.85:2149-2456(1963),Atherton,et al.,Solid Phase Peptide Synthesis:A Practical Approach,IRL Press(1989),and Merrifield,Science 232:341-347(1986)に記載されるものが挙げられる。
本明細書で使用される場合、「線状ポリペプチド」は、構成アミノ酸側鎖に共有結合している分岐基を欠くポリペプチドを指す。本明細書で使用される場合、「分岐ポリペプチド」は、構成アミノ酸側鎖に共有結合している分岐基を含むポリペプチドを指す。
本明細書で使用されるカチオンまたはポリオールの「最終的官能基化度」は、それぞれ、カチオン(例えば、アミノ)基またはポリオールで官能基化されたキトサン骨格上のカチオン(例えば、アミノ)基のパーセンテージを指す。従って、「α:β比」、「最終官能基化度比」(例えば、Argの最終官能基化度:ポリオールの最終官能基化度の比)などは、「モル比」または「数比」という用語と互換的に使用され得る。
分散系は、連続媒体全体に分布した分散相として知られる粒子物質で構成される。キトサン核酸ポリプレックスの「分散液」は、水和キトサン核酸ポリプレックスを含む組成物であり、ポリプレックスは媒体全体に分布している。
本明細書で使用される場合、「予備濃縮された」分散液は、濃縮された分散液を形成するための濃縮プロセスを受けていないものである。
本明細書で使用される場合、ポリプレックス沈殿物を「実質的に含まない」は、組成物が、目視検査で観察することができる粒子を本質的に含まないことを意味する。
本明細書で使用される場合、生理学的pHは、6~8のpHを指す。
「キトサン核酸ポリプレックス」またはその文法上の同等物は、複数のキトサン分子及び複数の核酸分子を含む複合体を意味する。好ましい実施形態では、(例えば、二重)誘導体化キトサンは、該核酸と複合体化される。
本明細書で使用される「ポリエチレングリコール」(「PEG」)という用語は、-(CH2CH2-O)-の繰り返し単位及びHO-(CH2CH2-O)n-Hの一般式を有するエチレンオキシドのポリマーを意味することが意図される。
本明細書で使用される「モノメトキシポリエチレングリコール」(「mPEG」)という用語は、-(CH2CH2-O)-の繰り返し単位及びCH3O-(CH2CH2-O)n-Hの一般式を有するエチレンオキシド、例えば、一端がメトキシ基でキャップされたPEG、のポリマーを意味することが意図される。
2.組成物
二元ブロック及び/または三元ブロックコポリマーコーティングと複合体化されたキトサン誘導体核酸ナノ粒子(ポリプレックス)を含むキトサン組成物が本明細書で提供され、個々のポリマー分子は、負荷電アンカー領域及び1つ以上の非荷電親水性尾部領域を含む。例示的な負荷電アンカー領域としては、繰り返し単位を含むポリアニオンアンカー領域が挙げられ、繰り返し単位は、1つ以上の負荷電サブユニット、例えば、1つ以上の酸性アミノ酸を含む。例示的な親水性尾部領域としては、PEG尾部領域及びその誘導体、ポリビニルアルコール尾部領域及びその誘導体、ポリオキサゾリン尾部領域及びその誘導体、ポリサルコシン尾部領域及びその誘導体、ポリ(N-(2-ヒドロキシプロピル)メタクリルアミド)(pHPMA)尾部領域及びその誘導体、ならびにそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
二元ブロック及び/または三元ブロックコポリマーコーティングと複合体化されたキトサン誘導体核酸ナノ粒子(ポリプレックス)を含むキトサン組成物が本明細書で提供され、個々のポリマー分子は、負荷電アンカー領域及び1つ以上の非荷電親水性尾部領域を含む。例示的な負荷電アンカー領域としては、繰り返し単位を含むポリアニオンアンカー領域が挙げられ、繰り返し単位は、1つ以上の負荷電サブユニット、例えば、1つ以上の酸性アミノ酸を含む。例示的な親水性尾部領域としては、PEG尾部領域及びその誘導体、ポリビニルアルコール尾部領域及びその誘導体、ポリオキサゾリン尾部領域及びその誘導体、ポリサルコシン尾部領域及びその誘導体、ポリ(N-(2-ヒドロキシプロピル)メタクリルアミド)(pHPMA)尾部領域及びその誘導体、ならびにそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
本発明の方法及び組成物において有用な例示的なポリマー分子は、ポリエチレングリコール(PEG)部分及びポリアニオン(PA)部分を含む「PEG-PA」ポリマー分子である。
2.1.キトサン
キトサン誘導体核酸ナノ粒子のキトサン構成成分は、カチオン官能基及び/または親水性部分で官能基化することができる。2つの異なる官能基で官能基化されたキトサンは、二重誘導体化キトサン(DD-キトサン)と呼ばれる。例示的なDD-キトサンは、親水性部分(例えば、ポリオール)及びカチオン官能基(例えば、アミノ基)の両方で官能基化される。例示的なキトサン誘導体は、例えば、米国特許第2007/0281904号、及び米国特許第2012/0235863号(それぞれ、参照により本明細書に組み込まれる)にも記載される。
キトサン誘導体核酸ナノ粒子のキトサン構成成分は、カチオン官能基及び/または親水性部分で官能基化することができる。2つの異なる官能基で官能基化されたキトサンは、二重誘導体化キトサン(DD-キトサン)と呼ばれる。例示的なDD-キトサンは、親水性部分(例えば、ポリオール)及びカチオン官能基(例えば、アミノ基)の両方で官能基化される。例示的なキトサン誘導体は、例えば、米国特許第2007/0281904号、及び米国特許第2012/0235863号(それぞれ、参照により本明細書に組み込まれる)にも記載される。
一実施形態では、本明細書に記載の二重誘導体化キトサンは、脱アセチル化度が少なくとも50%であるキトサンを含む。一実施形態では、脱アセチル化度は、少なくとも60%、より好ましくは、少なくとも70%、より好ましくは、少なくとも80%、より好ましくは、少なくとも90%、最も好ましくは、少なくとも95%である。好ましい実施形態では、本明細書に記載の二重誘導体化キトサンは、脱アセチル化度が少なくとも98%であるキトサンを含む。
本明細書に記載のキトサン誘導体は、中性及び生理学的pHで可溶性である幅広い平均分子量を有し、本発明の目的のために、3~110kDaの範囲の分子量を含む。本明細書に記載の実施形態は、誘導体化キトサンのより低い平均分子量(25kDa未満、例えば、約5kDa~約25kDa)を特徴とし、これは、望ましい送達及びトランスフェクション特性を有し得、サイズが小さく、良好な溶解性を有する。低平均分子量の誘導体化キトサンは、一般に、ポリマー量のものよりも溶解性が高く、前者は、核酸をより容易に放出し、細胞のトランスフェクションを増加させる核酸/キトサン複合体を生成する。多くの文献が、キトサンベースのデリバリーシステムのためのこれらパラメーターの全ての最適化に専念している。
キトサンが、式Iの構造(式中、nは、任意の整数であり、各R1は、独立して、アセチルまたは水素から選択され、水素から選択されるR1の程度は、50%~100%である)を有する複数の分子を指すことを、通常の当業者は、理解するであろう。また、例えば、3kD~110kDの平均分子量を有するものと呼ばれるキトサンは、一般に、例えば、それぞれ、3kD~110kDの重量平均分子量を有する複数のキトサン分子を指し、キトサン分子のそれぞれは、異なる鎖長であってよい(n+2)。「n-merキトサン」と呼ばれるキトサンは、必ずしも、式Iのキトサン分子(式中、各キトサン分子は、n+2の鎖長を有する)を含むとは限らないこともよく認識される。むしろ、本明細書で使用される「n-merキトサン」は、複数のキトサン分子を指し、これらのそれぞれは、異なる鎖長を有してもよく、多くは、鎖長がnであるキトサン分子と実質的に同等または等しい平均分子量を有する。例えば、24-merのキトサンは、複数のキトサン分子を含んでもよく、それぞれは、例えば、7~50、の範囲に及ぶ異なる鎖長を有するが、これは、鎖長が24のキトサン分子と実質的な同等または等しい重量平均分子量を有する。
本発明の二重誘導体化キトサンは、また、ポリオール、またはポリオールなどの親水性官能基で官能基化されてもよい。理論に拘束されることを望むものではないが、ポリオールなどの親水性基による官能基化が、キトサン(Arg-キトサンを含む)の親水性を増加させるのに役立ち得、及び/またはヒドロキシル基を供与し得ると仮定される。いくつかの実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子の親水性官能基は、グルコン酸であるか、またはそれを含む。例えば、WO2013/138930を参照のこと。いくつかの実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子の親水性官能基は、グルコースであるか、またはそれを含む。追加的または代替的に、親水性官能基は、ポリオールを含むことができる。例えば、US2016/0235863を参照のこと。キトサンの官能基化のための例示的なポリオールは、さらに、以下に記載される。
本明細書に記載の官能基化キトサン誘導体は、二重誘導体化キトサン化合物、例えば、カチオン-キトサン-ポリオール化合物、を含む。一般に、カチオン-キトサン-ポリオール化合物は、アミノ含有部分、例えば、アルギニン、リジン、オルニチン、もしくはグアニジニウムを含む分子、またはそれらの組み合わせ、で官能基化される。特定の実施形態では、カチオン-キトサン-ポリオール化合物は、式Iの以下の構造を有する:
式中、nは、1~650の整数であり、
αは、カチオン部分(例えば、リジン、オルニチン、グアニジニウム基を含む分子、アルギニン、またはそれらの組み合わせなどのアミノ基を含む分子)の最終官能基化度であり、
βは、ポリオールの最終官能基化度であり、
各R1は、独立して、水素、アセチル、カチオン(例えば、アルギニン)、及びポリオールから独立して選択される。
αは、カチオン部分(例えば、リジン、オルニチン、グアニジニウム基を含む分子、アルギニン、またはそれらの組み合わせなどのアミノ基を含む分子)の最終官能基化度であり、
βは、ポリオールの最終官能基化度であり、
各R1は、独立して、水素、アセチル、カチオン(例えば、アルギニン)、及びポリオールから独立して選択される。
好ましくは、本発明の二重誘導体化キトサンは、カチオンアミノ酸であるアルギニンで官能基化されてもよい。
一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、1%、2%、4%、7%、8%、10%、15%、20%、25%、30%、またはそれ以上の最終官能基化度でグルコン酸と結合したキトサンを含む。一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、1%、2%、4%、7%、8%、10%、15%、20%、25%、30%、またはそれ以上の最終官能基化度でグルコースと結合したキトサンを含む。一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約1%~約25%の最終官能基化度でカチオン部分(例えば、アルギニン)と結合したキトサンを含む。一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約10%~約40%の最終官能基化度でカチオン部分(例えば、アルギニン)と結合したキトサンを含む。
一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約10%~約35%の最終官能基化度でカチオン部分(例えば、アルギニン)と結合したキトサンを含む。一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約20%~約35%の最終官能基化度でカチオン部分(例えば、アルギニン)と結合したキトサンを含む。一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約25%~約35%の最終官能基化度でカチオン部分(例えば、アルギニン)と結合したキトサンを含む。一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約25%~約30%、好ましくは、28%、の最終官能基化度でカチオン部分(例えば、アルギニン)と結合したキトサンを含む。
一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約15%~約40%の最終官能基化度でカチオン部分(例えば、アルギニン)と結合したキトサンを含む。一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約15%~約35%の最終官能基化度でカチオン部分(例えば、アルギニン)と結合したキトサンを含む。一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約15%~約30%の最終官能基化度でカチオン部分(例えば、アルギニン)と結合したキトサンを含む。一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約15%~約28%の最終官能基化度でカチオン部分(例えば、アルギニン)と結合したキトサンを含む。
一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約10%~約35%の最終官能基化度でカチオン部分(例えば、アルギニン)と結合したキトサンを含む。一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約10%~約30%の最終官能基化度でカチオン部分(例えば、アルギニン)と結合したキトサンを含む。一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約10%~約28%の最終官能基化度でカチオン部分(例えば、アルギニン)と結合したキトサンを含む。一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約28%の最終官能基化度でカチオン部分(例えば、アルギニン)と結合したキトサンを含む。
一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約2%~約30%、約5%~約30%、約7.5%~約30%、約5%~約25%、約5%~約22%、約5%~約20%、約5%~約15%、または約5%~約10%の最終官能基化度でグルコン酸と結合したキトサンを含む。一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約7.5%~約25%、約7.5%~約20%、約7.5%~約15%、または約7.5%~約12%の最終官能基化度でグルコン酸と結合したキトサンを含む。一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約10%の最終官能基化度でグルコン酸と結合したキトサンを含む。
一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約2%~約30%、約5%~約30%、約7.5%~約30%、約5%~約25%、約5%~約22%、約5%~約20%、約5%~約15%、または約5%~約10%の最終官能基化度で親水性ポリオールと結合したキトサンを含む。一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約7.5%~約25%、約7.5%~約20%、約7.5%~約15%、または約7.5%~約12%の最終官能基化度で親水性ポリオールと結合したキトサンを含む。一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約10%の最終官能基化度で親水性ポリオールと結合したキトサンを含む。
一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約2%~約30%、約5%~約30%、約7.5%~約30%、約5%~約25%、約5%~約22%、約5%~約20%、約5%~約15%、または約5%~約10%の最終官能基化度でグルコースと結合したキトサンを含む。一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約7.5%~約25%、約7.5%~約20%、約7.5%~約15%、または約7.5%~約12%の最終官能基化度でグルコースと結合したキトサンを含む。一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約10%の最終官能基化度でグルコースと結合したキトサンを含む。
一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約2%~約40%の最終官能基化度でカチオン(例えば、アルギニン)と結合したキトサン及び約2%~約30%の最終官能度で親水性ポリオール(例えば、グルコースまたはグルコン酸)と結合したキトサンを含む。一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約5%~約40%の最終官能基化度でカチオン(例えば、アルギニン)と結合したキトサン及び約5%~約25%の最終官能度で親水性ポリオール(例えば、グルコースまたはグルコン酸)と結合したキトサンを含む。一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約7.5%~約40%の最終官能基化度でカチオン(例えば、アルギニン)と結合したキトサン及び約7.5%~約20%の最終官能度で親水性ポリオール(例えば、グルコースまたはグルコン酸)と結合したキトサンを含む。一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約10%~約40%の最終官能基化度でカチオン(例えば、アルギニン)と結合したキトサン及び約7.5%~約15%、または約10%の最終官能度で親水性ポリオール(例えば、グルコースまたはグルコン酸)と結合したキトサンを含む。
一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約2%~約35%の最終官能基化度でカチオン(例えば、アルギニン)と結合したキトサン及び約2%~約30%の最終官能度で親水性ポリオール(例えば、グルコースまたはグルコン酸)と結合したキトサンを含む。一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約5%~約35%の最終官能基化度でカチオン(例えば、アルギニン)と結合したキトサン及び約5%~約25%の最終官能度で親水性ポリオール(例えば、グルコースまたはグルコン酸)と結合したキトサンを含む。一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約7.5%~約35%の最終官能基化度でカチオン(例えば、アルギニン)と結合したキトサン及び約7.5%~約20%の最終官能度で親水性ポリオール(例えば、グルコースまたはグルコン酸)と結合したキトサンを含む。一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約10%~約35%の最終官能基化度でカチオン(例えば、アルギニン)と結合したキトサン及び約7.5%~約15%、または約10%の最終官能度で親水性ポリオール(例えば、グルコースまたはグルコン酸)と結合したキトサンを含む。
一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約10%~約30%の最終官能基化度でカチオン(例えば、アルギニン)と結合したキトサン及び約2%~約30%の最終官能度で親水性ポリオール(例えば、グルコースまたはグルコン酸)と結合したキトサンを含む。一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約12%~約30%の最終官能基化度でカチオン(例えば、アルギニン)と結合したキトサン及び約5%~約25%の最終官能度で親水性ポリオール(例えば、グルコースまたはグルコン酸)と結合したキトサンを含む。一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約14%~約30%の最終官能基化度でカチオン(例えば、アルギニン)と結合したキトサン及び約7.5%~約20%の最終官能度で親水性ポリオール(例えば、グルコースまたはグルコン酸)と結合したキトサンを含む。一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約15%~約30%の最終官能基化度でカチオン(例えば、アルギニン)と結合したキトサン及び約7.5%~約15%、または約10%の最終官能度で親水性ポリオール(例えば、グルコースまたはグルコン酸)と結合したキトサンを含む。
一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約25%の最終官能基化度でカチオン(例えば、アルギニン)と結合したキトサン及び約7.5%~約15%の最終官能度で親水性ポリオール(例えば、グルコースまたはグルコン酸)と結合したキトサンを含む。一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約28%の最終官能基化度でカチオン(例えば、アルギニン)と結合したキトサン及び約7.5%~約15%の最終官能度で親水性ポリオール(例えば、グルコースまたはグルコン酸)と結合したキトサンを含む。一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約25%の最終官能基化度でカチオン(例えば、アルギニン)と結合したキトサン及び約5%~約20%の最終官能度で親水性ポリオール(例えば、グルコースまたはグルコン酸)と結合したキトサンを含む。一実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約28%の最終官能基化度でカチオン(例えば、アルギニン)と結合したキトサン及び約5%~約20%の最終官能度で親水性ポリオール(例えば、グルコースまたはグルコン酸)と結合したキトサンを含む。
好ましい実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約14%の最終官能基化度でカチオン(例えば、アルギニン)と結合したキトサン及び約10%の最終官能度で親水性ポリオール(例えば、グルコースまたはグルコン酸)と結合したキトサンを含む。好ましい実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約15%の最終官能基化度でカチオン(例えば、アルギニン)と結合したキトサン及び約12%の最終官能度で親水性ポリオール(例えば、グルコースまたはグルコン酸)と結合したキトサンを含む。別の好ましい実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約14%の最終官能基化度でアルギニンと結合したキトサン及び約10%の最終官能度でグルコースと結合したキトサンを含む。別の好ましい実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約15%の最終官能基化度でアルギニンと結合したキトサン及び約12%の最終官能度でグルコースと結合したキトサンを含む。
好ましい実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約28%の最終官能基化度でカチオン(例えば、アルギニン)と結合したキトサン及び約10%の最終官能度で親水性ポリオール(例えば、グルコースまたはグルコン酸)と結合したキトサンを含む。別の好ましい実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、約28%の最終官能基化度でアルギニンと結合したキトサン及び約10%の最終官能度でグルコースと結合したキトサンを含む。
いくつかの実施形態では、必要に応じて、DD-キトサンは、DD-キトサン誘導体、例えば、追加の官能基化を組み込んだDDキトサン、例えば、結合したリガンドを有するDD-キトサン、を含む。「誘導体」は、共有結合的に修飾されたN-アセチル-D-グルコサミン及び/またはD-グルコサミンユニットを含むキトサン系ポリマー、ならびに他のユニットを組み込むかまたは他の部分に結合したキトサン系ポリマー、の幅広い分類を含むと理解されるであろう。誘導体は、多くの場合、アルギニン官能基化キトサンで行われるように、グルコサミンのヒドロキシル基またはアミン基の修飾に基づく。キトサン誘導体の例としては、トリメチル化キトサン、PEG化キトサン、チオール化キトサン、ガラクトシル化キトサン、アルキル化キトサン、PEI組み込みキトサン、ウロン酸修飾キトサン、グリコールキトサンなどが挙げられるが、これらに限定されない。キトサン誘導体に関するさらなる教示について、例えば、pp.63-74 of “Non-viral Gene Therapy”,K.Taira,K.Kataoka,T.Niidome(editors),Springer-Verlag Tokyo,2005,ISBN 4-431-25122-7;Zhu et al.,Chinese Science Bulletin,December 2007,vol.52(23),pp.3207-3215;及びVarma et al.,Carbohydrate Polymers 55(2004)77-93を参照のこと。
2.2.キトサン核酸ポリプレックス
キトサン誘導体ナノ粒子組成物は、一般に、少なくとも1つの核酸分子、好ましくは、複数のそのような核酸分子を含む。代表的な核酸分子は、例えば、複数のホスホジエステルまたはその誘導体(例えば、ホスホロチオアート)の形態で、核酸骨格の構成成分としてリンを含む。カチオン官能基化キトサン誘導体対核酸の比は、カチオン(+)対リン(P)モル比を特徴とすることができ、(+)は、カチオン官能基化キトサン誘導体のカチオンを指し、(P)は、核酸骨格のリンを指す。通常、(+):(P)モル比は、キトサン-誘導体-核酸複合体が、PEG-PAポリマー分子の不存在下で正電荷を有するように選択される。従って、(+):(P)モル比は、一般に、1より大きい。好ましい実施形態では、(+):(P)モル比は、1.5超、少なくとも2、または2超である。特定の好ましい実施形態では、(+):(P)モル比は、2より大きい。
キトサン誘導体ナノ粒子組成物は、一般に、少なくとも1つの核酸分子、好ましくは、複数のそのような核酸分子を含む。代表的な核酸分子は、例えば、複数のホスホジエステルまたはその誘導体(例えば、ホスホロチオアート)の形態で、核酸骨格の構成成分としてリンを含む。カチオン官能基化キトサン誘導体対核酸の比は、カチオン(+)対リン(P)モル比を特徴とすることができ、(+)は、カチオン官能基化キトサン誘導体のカチオンを指し、(P)は、核酸骨格のリンを指す。通常、(+):(P)モル比は、キトサン-誘導体-核酸複合体が、PEG-PAポリマー分子の不存在下で正電荷を有するように選択される。従って、(+):(P)モル比は、一般に、1より大きい。好ましい実施形態では、(+):(P)モル比は、1.5超、少なくとも2、または2超である。特定の好ましい実施形態では、(+):(P)モル比は、2より大きい。
一部の場合では、(+):(P)モル比は、3:1であるか、または約3:1である。一部の場合では、(+):(P)モル比は、4:1であるか、または約4:1である。一部の場合では、(+):(P)モル比は、5:1であるか、または約5:1である。一部の場合では、(+):(P)モル比は、6:1であるか、または約6:1である。一部の場合では、(+):(P)モル比は、7:1であるか、または約7:1である。一部の場合では、(+):(P)モル比は、8:1であるか、または約8:1である。一部の場合では、(+):(P)モル比は、9:1であるか、または約9:1である。一部の場合では、(+):(P)モル比は、10:1であるか、または約10:1である。
一部の場合では、(+):(P)モル比は、1超~約20:1以下、約2~約20:1以下、または約2~約10:1以下である。一部の場合では、(+):(P)モル比は、約2超~約20:1以下、または約2超~約10:1以下である。一部の場合では、(+):(P)モル比は、約3~約20:1以下、約3~約10:1以下、約3~約8:1以下、または約3~約7:1以下である。一部の場合では、(+):(P)モル比は、約3~20:1以下、約3~10:1以下、約3~8:1以下、または約3~7:1以下である。
特定の実施形態では、(+):(P)モル比は、100:1、好ましくは、100:1未満である。例えば、特定の実施形態では、(+):(P)モル比は、1超~100:1以下であり得る。一部の場合では、(+):(P)モル比は、2超~100:1以下であり得る。一部の場合では、(+):(P)モル比は、3以上~100:1以下であり得る。一部の場合では、(+):(P)モル比は、5以上~100:1以下であり得る。一部の場合では、(+):(P)モル比は、7以上~100:1以下であり得る。一部の場合では、(+):(P)モル比は、2超~50:1以下であり得る。一部の場合では、(+):(P)モル比は、3以上~50:1以下であり得る。一部の場合では、(+):(P)モル比は、5以上~50:1以下であり得る。一部の場合では、(+):(P)モル比は、7以上~50:1以下であり得る。一部の場合では、(+):(P)モル比は、2超~25:1以下であり得る。一部の場合では、(+):(P)モル比は、3以上~25:1以下であり得る。一部の場合では、(+):(P)モル比は、5以上~25:1以下であり得る。一部の場合では、(+):(P)モル比は、7以上~25:1以下であり得る。
いくつかの実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子のカチオン官能基は、アミノ基であるか、またはアミノ基を含む。そのようなアミノ官能基化キトサン誘導体ナノ粒子の例としては、グアニジニウムもしくはグアニジニウム基を含む分子、リジン、オルニチン、アルギニン、またはそれらの組み合わせで官能基化されるキトサンを含有するものが挙げられるが、これらに限定されない。好ましい実施形態では、カチオン官能基は、アルギニンである。アミノ官能基化キトサン誘導体対核酸の比は、アミノ(N)対リン(P)モル比を特徴とすることができ、(N)は、アミノ官能基化キトサン誘導体中のアミノ基の窒素原子を指し、(P)は、アミノ酸骨格のリンを指す。通常は、N:Pモル比は、キトサン誘導体-核酸複合体が、PEG-PAポリマー分子の不存在下で、生理学的に関連するpHで正電荷を有するように選択される。従って、N:Pモル比は、一般に、1より大きくなる。好ましい実施形態では、N:Pモル比は、1.5超、少なくとも2、または2超である。特定の好ましい実施形態では、N:Pモル比は、2より大きい。
一部の場合では、N:Pモル比は、3:1であるか、または約3:1である。一部の場合では、N:Pモル比は、4:1であるか、または約4:1である。一部の場合では、N:Pモル比は、5:1であるか、または約5:1である。一部の場合では、N:Pモル比は、6:1であるか、または約6:1である。一部の場合では、N:Pモル比は、7:1であるか、または約7:1である。一部の場合では、N:Pモル比は、8:1であるか、または約8:1である。一部の場合では、N:Pモル比は、9:1であるか、または約9:1である。一部の場合では、N:Pモル比は、10:1であるか、または約10:1である。
一部の場合では、N:Pモル比は、1超~約20:1以下、約2~約20:1以下、または約2~約10:1以下である。一部の場合では、N:Pモル比は、約2超~約20:1以下、または約2超~約10:1以下である。一部の場合では、N:Pモル比は、約3~約20:1以下、約3~約10:1以下、約3~約8:1以下、または約3~約7:1以下である。一部の場合では、N:Pモル比は、約3~20:1以下、約3~10:1以下、約3~8:1以下、または約3~7:1以下である。
特定の実施形態では、N:Pモル比は、100:1、好ましくは、100:1未満である。例えば、特定の実施形態では、N:Pモル比は、1超~100:1以下であり得る。一部の場合では、N:Pモル比は、2超~100:1以下であり得る。一部の場合では、N:Pモル比は、3以上~100:1以下であり得る。一部の場合では、N:Pモル比は、5以上~100:1以下であり得る。一部の場合では、N:Pモル比は、7以上~100:1以下であり得る。一部の場合では、N:Pモル比は、2超~50:1以下であり得る。一部の場合では、N:Pモル比は、3以上~50:1以下であり得る。一部の場合では、N:Pモル比は、5以上~50:1以下であり得る。一部の場合では、N:Pモル比は、7以上~50:1以下であり得る。一部の場合では、N:Pモル比は、2超~25:1以下であり得る。一部の場合では、N:Pモル比は、3以上~25:1以下であり得る。一部の場合では、N:Pモル比は、5以上~25:1以下であり得る。一部の場合では、N:Pモル比は、7以上~25:1以下であり得る。
好ましい実施形態では、本ポリプレックスは、2~100、例えば、2~50、例えば、2~40、例えば、2~30、例えば、2~20、例えば、2~5、のアミン対リン酸塩(N/P)比を有する。好ましくは、N/P比は、キトサンの分子量に反比例し、すなわち、小さい分子量の(例えば、二重)誘導体化キトサンは、より高いN/P比を必要とし、逆もまた同様である。
本発明の核酸は、一般に、ホスホジエステル結合を含有することになるが、いくつかの場合では、様々な目的、例えば、安定性及び保護、のいずれかのために組み込まれる代替の骨格または他の修飾または部分を有し得る核酸アナログが含まれる。企図される他のアナログ核酸は、非リボース骨格を有するものを含む。加えて、天然に存在する核酸、アナログ、及びその両方の混合物を作成することができる。核酸は、一本鎖または二本鎖であっても、二本鎖または一本鎖配列の両方の部分を含有してもよい。核酸としては、DNA、RNA、及びハイブリッドが挙げられるが、これらに限定されず、核酸は、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドの任意の組み合わせ、ならびにウラシル、アデニン、チミン、シトシン、グアニン、イノシン、キサンタニン、ヒポキサンタニン、イソシトシン、イソグアニンなどを含む塩基の任意の組み合わせを含有する。核酸は、任意の形態のDNA、三重鎖、二本鎖、または一本鎖、アンチセンス、siRNA、リボザイム、デオキシリボザイム、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、キメラ、マイクロRNA、及びそれらの誘導体を含む任意の形態のRNAを含む。核酸は、限定されないが、ペプチド核酸(PNA)、ホスホロジアミダートモルホリノオリゴ(PMO)、ロックされた核酸(LNA)、グリコール核酸(GNA)、及びトレオース核酸(TNA)を含む人工核酸を含む。リンを含まない人工核酸の場合、(+):PまたはN:P比の同等の測定値は、ヌクレオチド(またはヌクレオチドアナログ)塩基の数により近似することができることが理解されるであろう。
好ましい実施形態では、組成物のポリプレックスは、官能基化前の110kDa未満、より好ましくは、65kDa未満、より好ましくは、50kDa未満、より好ましくは、40kDa未満、最も好ましくは、30kDa未満の平均分子量を有するキトサン分子を含む。いくつかの実施形態では、組成物のポリプレックスは、官能基化前の15kDa未満、10kDa未満、7kDa未満、または5kDa未満の平均分子量を有するキトサンを含む。
好ましい実施形態では、ポリプレックスは、平均して、680グルコサミンモノマー単位未満、より好ましくは、400グルコサミンモノマー単位未満、より好ましくは、310グルコサミンモノマー単位未満、より好ましくは、250グルコサミンモノマー単位未満、最も好ましくは、190グルコサミンモノマー単位未満を有するキトサン分子を含む。いくつかの実施形態では、ポリプレックスは、平均して、95グルコサミンモノマー単位未満、65グルコサミンモノマー単位未満、45グルコサミンモノマー単位未満、または35グルコサミンモノマー単位未満を有するキトサン分子を含む。
キトサン、及び(例えば、二重)誘導体化キトサン核酸ポリプレックスは、限定されないが、本明細書に記載のものを含む、当該技術分野で既知の任意の方法で調製されてもよい。
2.2.1.核酸
上記のように、キトサンポリプレックスは、複数の核酸を含有し得る。一実施形態では、核酸構成成分は、治療用核酸を含む。本(例えば、二重に)誘導体化キトサン核酸ポリプレックスは、当該技術分野で既知の任意の治療用核酸の使用に適する。治療用核酸は、哺乳動物細胞において治療効果を発揮することが可能なRNA分子である治療用RNAを含む。治療用RNAは、メッセンジャーRNA、アンチセンスRNA、siRNA、ショートヘアピンRNA、マイクロRNA、及び酵素RNAを含むが、これらに限定されない。治療用核酸は、三重分子を形成するように意図される核酸、タンパク質結合核酸、リボザイム、デオキシリボザイム、及び小さいヌクレオチド分子を含むが、これらに限定されない。
上記のように、キトサンポリプレックスは、複数の核酸を含有し得る。一実施形態では、核酸構成成分は、治療用核酸を含む。本(例えば、二重に)誘導体化キトサン核酸ポリプレックスは、当該技術分野で既知の任意の治療用核酸の使用に適する。治療用核酸は、哺乳動物細胞において治療効果を発揮することが可能なRNA分子である治療用RNAを含む。治療用RNAは、メッセンジャーRNA、アンチセンスRNA、siRNA、ショートヘアピンRNA、マイクロRNA、及び酵素RNAを含むが、これらに限定されない。治療用核酸は、三重分子を形成するように意図される核酸、タンパク質結合核酸、リボザイム、デオキシリボザイム、及び小さいヌクレオチド分子を含むが、これらに限定されない。
多くのタイプの治療用RNAが、当該技術分野で既知である。例えば、Meng et al.,A new developing class of gene delivery:messenger RNA-based therapeutics,Biomater.Sci.,5,2381-2392,2017;Grimm et al.,Therapeutic application of RNAi is mRNA targeting finally ready for prime time ? J.Clin.Invest.,117:3633-3641,2007;Aagaard et al.,RNAi therapeutics:Principles,prospects and challenges,Adv.Drug Deliv.Rev.,59:75-86,2007;Dorsett et al.,siRNAs:Applications in functional genomics and potential as therapeutics,Nat.Rev.Drug Discov.,3:318-329,2004を参照のこと。これらは、二本鎖低分子干渉RNA(siRNA)を含む。
治療用核酸は、細胞毒性タンパク質及びプロドラッグを含む治療用タンパク質をコードする核酸も含む。
好ましい実施形態では、核酸構成成分は、治療用核酸構築物を含む。治療用核酸構築物は、治療効果を発揮することが可能な核酸構築物である。治療用核酸構築物は、治療用タンパク質をコードする核酸、ならびに治療用RNAである転写物を産生する核酸を含んでもよい。治療用核酸は、欠損遺伝子の置き換えもしくは増強として役立つことによる遺伝子治療を行うために、または、治療用産物をコードすることにより、特定の遺伝子産物の欠如を補償するために、使用されてもよい。治療用核酸は、また、内因性遺伝子の発現を阻害してもよい。治療用核酸は、翻訳産物の全てまたは一部をコードしてもよく、細胞中にすでに存在するDNAと再結合して、それにより、遺伝子の欠陥部分を置換することにより機能してもよい。それは、また、タンパク質の一部をコードし、遺伝子産物の共抑制によりその効果を発揮してもよい。好ましい実施形態では、治療用核酸は、US2011/0171314(参照により本明細書に明示的に組み込まれる)に開示されているものから選択される。
好ましい実施形態では、治療用核酸は、ホルモン、酵素、サイトカイン、ケモカイン、抗体、マイトジェン因子、成長因子、分化因子、血管新生に影響を与える因子、血餅形成に影響を与える因子、血中グルコースレベルに影響を与える要因、グルコース代謝に影響を与える要因、脂質代謝に影響を与える要因、血中コレステロールレベルに影響を与える要因、血中LDLまたはHDLレベルに影響を与える要因、細胞アポトーシスに影響を与える要因、食物摂取に影響を与える要因、エネルギー消費に影響を与える要因、食欲に影響を与える要因、栄養素の吸収に影響を与える要因、炎症に影響を与える要因、及び骨形成に影響を与える要因からなる群より選択される治療タンパク質をコードする。インスリン、レプチン、グルカゴンアンタゴニスト、GLP-1、GLP-2、グレリン、コレシストキニン、成長ホルモン、凝固因子、PYY、エリスロポイエチン、炎症阻害剤、IL-10、IL-12、IL-17アンタゴニスト、TNFαアンタゴニスト、成長ホルモン放出ホルモン、または副甲状腺ホルモンをコードする治療用核酸が特に好ましい。
2.2.1.1.発現制御領域
好ましい実施形態では、本発明のポリプレックスは、コード領域に作動可能に連結された発現制御領域を含む治療構築物である治療用核酸を含む。治療用構築物は、治療用核酸を生成し、これは、それ自体で治療的であっても、治療用タンパク質をコードしてもよい。
好ましい実施形態では、本発明のポリプレックスは、コード領域に作動可能に連結された発現制御領域を含む治療構築物である治療用核酸を含む。治療用構築物は、治療用核酸を生成し、これは、それ自体で治療的であっても、治療用タンパク質をコードしてもよい。
いくつかの実施形態では、治療構築物の発現制御領域は、構成的活性を有する。多くの好ましい実施形態では、治療構築物の発現制御領域は、構成的活性を有さない。これは、治療用核酸の動的発現を提供する。「動的」発現とは、経時的に変化する発現を意味する。動的発現は、検出可能な発現の期間で隔てられた発現が低いまたは存在しない、いくつかのそのような期間を含んでもよい。多くの好ましい実施形態では、治療用核酸は、調節可能なプロモーターに作動可能に連結される。これは、治療用核酸の調節可能な発現を提供する。
発現制御領域は、プロモーター及びエンハンサーなどの調節ポリヌクレオチド(場合により、本明細書ではエレメントと呼ばれる)を含み、これらは、作動可能に連結された治療用核酸の発現に影響を及ぼす。
本明細書に含まれる発現制御エレメントは、細菌、酵母、植物、または動物(哺乳動物もしくは非哺乳動物)由来であり得る。発現制御領域は、全長プロモーター配列、例えば、ネイティブプロモーター及びエンハンサーエレメント、ならびに完全なまたは非変異体機能の全部または一部を保持する(例えば、ある程度の栄養調節または細胞/組織特異的発現を保持する)部分配列またはポリヌクレオチド変異体を含む。本明細書で使用される場合、「機能的」及びその文法的変形という用語は、核酸配列、部分配列、またはフラグメントに関して使用される場合、その配列が、天然の核酸配列の1つ以上の機能(例えば、非変異体または非修飾配列)を有することを意味する。本明細書で使用される場合、「変異体」という用語は、配列の置換、欠失、もしくは付加、または他の修飾(例えば、ヌクレアーゼに耐性のある修飾形態などの化学誘導体)を意味する。
本明細書で使用される場合、「作動可能な連結」という用語は、それらが意図された方法で機能することを可能にするように記載された構成要素の物理的並置を指す。核酸と作動可能に連結された発現制御エレメントの例では、関係は、制御エレメントが核酸の発現を調節するようなものである。通常、転写を調節する発現制御領域は、転写された核酸の5’末端付近(すなわち、「上流」)に並置される。発現制御領域は、また、転写された配列の3’末端(すなわち、「下流」)または転写物内(例えば、イントロン内)に位置することができる。発現制御エレメントは、転写された配列から離れた距離に位置することができる(例えば、核酸から100~500、500~1000、2000~5000以上のヌクレオチド)。発現制御エレメントの具体例は、プロモーターであり、これは、通常、転写された配列の5’に位置する。発現制御エレメントの別の例は、転写された配列の5’もしくは3’、または転写された配列内に位置することができるエンハンサーである。
いくつかの発現制御領域は、動作可能に連結された治療用核酸に調節可能な発現を与える。シグナル(場合により、刺激と呼ばれる)は、そのような発現制御領域に作動可能に連結された治療用核酸の発現を増加または減少させ得る。シグナルに応答して発現を増加させるそのような発現制御領域は、多くの場合、誘導性と呼ばれる。シグナルに応答して発現を減少させるそのような発現制御領域は、多くの場合、抑制性と呼ばれる。通常、そのようなエレメントにより与えられる増加または減少の量は、存在するシグナルの量に比例し、シグナルの量が多い程、発現の増加または減少が大きくなる。
多数の調節可能なプロモーターが、当該技術分野で既知である。好ましい誘導性発現制御領域には、小分子化学化合物で刺激される誘導性プロモーターを含むものを含む。一実施形態では、発現制御領域は、経口的に送達可能であるが、通常は、食品には見られない化学物質に応答する。特定例は、例えば、米国特許第5,989,910号;同第5,935,934号;同第6,015,709号;及び同第6,004,941号に見出すことができる。
一実施形態では、治療構築物は、さらに、組み込み配列を含む。一実施形態では、治療構築物は、単一の組み込み配列を含む。別の実施形態では、治療用構築物は、標的細胞のゲノムに治療用核酸またはその一部を組み込む第1及び第2の組み込み配列を含む。好ましい実施形態では、組み込み配列(複数可)は、マリナー、スリーピング・ビューティー、FLP、Cre、ФC31、R、ラムダからなる群より選択される組み込み手段、ならびに、AAV、レトロウイルス、及びレンチウイルスなどの組み込みウイルス由来の組み込み手段と組み合わせて機能的である。
一実施形態では、本組成物は、さらに、治療構築物に加えて非治療構築物を含み、非治療構築物は、第2の発現制御領域に作動可能に連結された組み込み手段をコードする核酸配列を含む。この第2の発現制御領域及び治療用核酸に作動可能に連結された発現制御領域は、同じであっても、異なっていてもよい。組み込みのためにコード化される手段は、好ましくは、マリナー、スリーピング・ビューティー、FLP、Cre、ФC31、R、ラムダ、ならびに、AAV、レトロウイルス、及びレンチウイルスなどの組み込みウイルス由来の組み込み手段からなる群より選択される。
さらなる教示については、WO2008/020318(全体が参照により本明細書に明示的に組み込まれる)を参照のこと。一実施形態では、(例えば、二重)誘導体化キトサン核酸ポリプレックスの核酸は、人工核酸である。
好ましい人工核酸としては、ペプチド核酸(PNA)、ホスホロジアミダートモルホリノオリゴ(PMO)、ロックされた核酸(LNA)、グリコール核酸(GNA)、及びトレオース核酸(TNA)が挙げられるが、これらに限定されない。
一実施形態では、DD-キトサン核酸ポリプレックスの核酸は、治療用核酸である。一実施形態では、治療用核酸は、治療用RNAである。好ましい治療用RNAとしては、アンチセンスRNA、siRNA、ショートヘアピンRNA、マイクロRNA、及び酵素RNAが挙げられるが、これらに限定されない。
一実施形態では、治療用核酸は、DNAである。
一実施形態では、治療用核酸は、治療用タンパク質をコードする核酸配列を含む。
2.3.ポリオール
キトサン誘導体ナノ粒子は、ポリオールで官能基化することができる。一般に、本発明で有用なポリオールは、通常、親水性である。いくつかの場合では、キトサン誘導体ナノ粒子は、アミノ基などのカチオン構成成分及びポリオールで官能基化される。アミノ基及びポリオールなどのカチオン部分で官能基化されたそのようなキトサン誘導体ナノ粒子は、「二重誘導体化キトサンナノ粒子」と呼ばれる。
キトサン誘導体ナノ粒子は、ポリオールで官能基化することができる。一般に、本発明で有用なポリオールは、通常、親水性である。いくつかの場合では、キトサン誘導体ナノ粒子は、アミノ基などのカチオン構成成分及びポリオールで官能基化される。アミノ基及びポリオールなどのカチオン部分で官能基化されたそのようなキトサン誘導体ナノ粒子は、「二重誘導体化キトサンナノ粒子」と呼ばれる。
いくつかの実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、式IIのポリオールを含む:
(式中、
R2は、H及びヒドロキシルから選択され、
R3は、H及びヒドロキシルから選択され、
Xは、1つ以上のヒドロキシル置換基で任意に置換されたC2-C6アルキレンから選択される)。
R2は、H及びヒドロキシルから選択され、
R3は、H及びヒドロキシルから選択され、
Xは、1つ以上のヒドロキシル置換基で任意に置換されたC2-C6アルキレンから選択される)。
いくつかの実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、式IIのポリオール(式中、R2は、H及びヒドロキシルから選択され;R3は、H及びヒドロキシルから選択され;Xは、1つ以上のヒドロキシル置換基で任意に置換されたC2-C6アルキレンから選択される)で官能基化される。
いくつかの実施形態では、キトサン誘導体ナノ粒子は、式IIIのポリオールを含む:
(式中、
-----Yは、=Oまたは-H2であり、
R2は、H及びヒドロキシルから選択され、
R3は、H及びヒドロキシルから選択され、
Xは、1つ以上のヒドロキシル置換基で任意に置換されたC2-C6アルキレンから選択され、
は、ポリオール及び誘導体化キトサン間の結合を示す)。
-----Yは、=Oまたは-H2であり、
R2は、H及びヒドロキシルから選択され、
R3は、H及びヒドロキシルから選択され、
Xは、1つ以上のヒドロキシル置換基で任意に置換されたC2-C6アルキレンから選択され、
一実施形態では、3~7つの炭素を有する本発明によるポリオールは、1つ以上の炭素-炭素多重結合を有し得る。好ましい実施形態では、本発明によるポリオールは、カルボキシル基を含む。さらに好ましい実施形態では、本発明によるポリオールは、アルデヒド基を含む。本発明によるポリオールがアルデヒド基を含む場合、そのようなポリオールが、開鎖コンフォメーション(アルデヒド)及び環状コンフォメーション(ヘミアセタール)の両方を包含することを、当業者は認識するであろう。
ポリオールの非限定例としては、グルコン酸、トレオン酸、グルコース、及びスレオースが挙げられる。カルボキシル基及び/またはアルデヒド基を有し得るか、または糖類もしくはその酸形態であり得るそのような他のポリオールの例は、米国特許第10,046,066号でさらに詳細に記載されており、その開示は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。ポリオールが特定の立体化学に限定されないことを、当業者は認識するであろう。
好ましい実施形態では、ポリオールは、2,3-ジヒドロキシルプロパン酸、2,3,4,5,6,7-ヘキサヒドロキシルヘプタナール;2,3,4,5,6-ペンタヒドロキシルヘキサナール;2,3,4,5-テトラヒドロキシルヘキサナール;及び2,3-ジヒドロキシルプロパナールからなる群より選択されてもよい。
好ましい実施形態では、ポリオールは、D-グリセリン酸、L-グリセリン酸、L-グリセロ-D-マンノヘプトース、D-グリセロ-L-マンノヘプトース、D-グルコース、L-グルコース、D-フコース、L-フコース、D-グリセルアルデヒド、及びL-グリセルアルデヒドからなる群より選択され得る。
好ましい実施形態では、ポリオールは、式IVの化合物である。いくつかの場合では、式IVのポリオールは、還元的アミノ化によりキトサンに結合されている。
カルボキシル基を有する親水性ポリオールは、キトサンまたはアミン官能基化キトサンなどのカチオン官能基化キトサン(例えば、Arg結合キトサン(Arg-キトサン))に結合されてもよい。いくつかの実施形態では、ポリオールは、6.0±0.3の反応pHで結合される。このpHでは、求核置換反応機構に従って、親水性ポリオールのカルボン酸基が、キトサン骨格上の非結合アミンにより攻撃され得る。
天然糖である親水性ポリオールは、還元的アミノ化とそれに続くNaCBH3またはNaBHによる還元を使用して、キトサン、例えば、カチオン官能基化キトサン、例えば、アミン官能基化キトサン(例えば、Arg結合キトサン(Arg-キトサン))に結合されてもよい。
2.4.ポリマー:ポリプレックス組成物
キトサンポリプレックスは、複数のポリマーと混合することができ、ポリマーは、親水性非荷電部分、及び負荷電(アニオン)部分を含む。上記のように、キトサンポリプレックスは、アニオン部分含有ポリマーとの複合体化がない、または複合体化前に正電荷を有するように製剤化される。従って、好適な条件下で、ポリマー構成成分は、キトサン誘導体核酸ポリプレックスと可逆的な電荷:電荷複合体を形成するであろう。いくつかの実施形態では、ポリマー構成成分のポリマーは、非分岐状である。いくつかの実施形態では、ポリマーは、分岐状である。一部の場合では、ポリマー構成成分は、分岐ポリマー及び非分岐ポリマーの混合物を含む。
キトサンポリプレックスは、複数のポリマーと混合することができ、ポリマーは、親水性非荷電部分、及び負荷電(アニオン)部分を含む。上記のように、キトサンポリプレックスは、アニオン部分含有ポリマーとの複合体化がない、または複合体化前に正電荷を有するように製剤化される。従って、好適な条件下で、ポリマー構成成分は、キトサン誘導体核酸ポリプレックスと可逆的な電荷:電荷複合体を形成するであろう。いくつかの実施形態では、ポリマー構成成分のポリマーは、非分岐状である。いくつかの実施形態では、ポリマーは、分岐状である。一部の場合では、ポリマー構成成分は、分岐ポリマー及び非分岐ポリマーの混合物を含む。
いくつかの実施形態では、ポリマー構成成分は、投与後、細胞に入った後、及び/またはエンドサイトーシス後に、キトサンポリプレックスから放出される。理論に拘束されることを望むものではないが、ポリプレックス及びアニオン部分含有ポリマーの複合体化することにより、このように形成されたポリプレックス:ポリマー組成物は、トランスフェクション効率を実質的に妨げることなく、in vitro、溶液中、及び/またはin vivo安定性の改善を提供し得ると仮定される。いくつかの実施形態では、このように形成されたポリプレックス:ポリマー組成物は、例えば、別途、ポリマー構成成分のない同一のポリプレックスと比較して、粘膜接着特性の低減を提供し得る。
好ましい実施形態では、ポリプレックス:ポリマー組成物は、生理学的pHで、低い正味の正のゼータ電位、正味の中性のゼータ電位、または正味の負のゼータ電位を有する(約+10mV~約-20mV)。そのような組成物は、生理学的条件での凝集の減少、及びin vivoでの遍在するアニオン構成成分への非特異的結合の低減を示し得る。該特性は、細胞と接触して核酸の細胞内放出の増強をもたらすように、そのような組成物の移動を増強(例えば、粘液で拡散の増強)させ得る。
好ましい実施形態では、ポリプレックス:ポリマー粒子組成物は、1000nm未満、より好ましくは、500nm未満、最も好ましくは、200nm未満の平均流体力学的直径を有する。特定の実施形態では、ポリプレックス:ポリマー粒子組成物は、50nm~1000nm以下、好ましくは、50nm~500nm以下、最も好ましくは、50nm~200nm以下の平均流体力学的直径を有する。特定の実施形態では、ポリプレックス:ポリマー粒子組成物は、50nm~175nm以下、好ましくは、50nm~150nm以下の平均流体力学的直径を有する。特定の実施形態では、ポリプレックス:ポリマー粒子組成物は、75nm~1000nm以下、好ましくは、75nm~500nm以下、最も好ましくは、75nm~200nm以下の平均流体力学的直径を有する。特定の実施形態では、ポリプレックス:ポリマー粒子組成物は、75nm~175nm以下、好ましくは、75nm~150nm以下の平均流体力学的直径を有する。特定の実施形態では、ポリプレックス:ポリマー粒子組成物は、100nm超且つ175nm未満の平均流体力学的直径を有する。
一実施形態では、ポリプレックス:ポリマー組成物は、80%、少なくとも80%、または好ましくは90%、より好ましくは、少なくとも90%のスーパーコイルDNA含有量を有する。
一実施形態では、ポリプレックス:ポリマー組成物は、生理学的pHで+10mV~-10mV、最も好ましくは、生理学的pHで+5mV~-5mVの平均ゼータ電位を有する。
ポリプレックス:ポリマー組成物は、好ましくは、粒径に関して均質である。従って、好ましい実施形態では、組成物は、低い平均多分散度指数(「PDI」)を有する。特に好ましい実施形態では、ポリプレックス:ポリマー組成物の分散液は、0.5未満、より好ましくは、0.4未満、より好ましくは、0.3未満、さらにより好ましくは、0.25未満、最も好ましくは、0.2未満のPDIを有する。
いくつかの場合では、ポリプレックス:ポリマー組成物の分散液は、1回以上の凍結融解サイクル後の上述のPDI、平均ゼータ電位、%スーパーコイルDNA、または平均粒径(nm)もしくはサイズ範囲のうちの1つ以上を示す。いくつかの場合では、ポリプレックス:ポリマー組成物の分散液は、溶液中4℃少なくとも48時間保存した後の上述のPDI、平均ゼータ電位、%スーパーコイルDNA、または平均粒径(nm)もしくはサイズ範囲のうちの1つ以上を示す。いくつかの場合では、ポリプレックス:ポリマー組成物の分散液は、溶液中、4℃で少なくとも1または2週間以上保存した後の上述のPDI、平均ゼータ電位、%スーパーコイルDNA、または平均粒径(nm)もしくはサイズ範囲のうちの1つ以上を示す。
いくつかの場合では、ポリプレックス:ポリマー組成物の分散液は、凍結乾燥及び再水和後の上述のPDI、平均ゼータ電位、%スーパーコイルDNA、または平均粒径(nm)もしくはサイズ範囲のうちの1つ以上を示す。いくつかの場合では、ポリプレックス:ポリマー組成物の分散液は、噴霧乾燥及び再水和後の上述のPDI、平均ゼータ電位、%スーパーコイルDNA、または平均粒径(nm)もしくはサイズ範囲のうちの1つ以上を示す。いくつかの場合では、ポリプレックス:ポリマー組成物の分散液は、少なくとも250μg/mLの核酸濃度に(例えば、タンジェンシャルフロー濾過などの限外濾過で)濃縮された場合の上述のPDI、平均ゼータ電位、%スーパーコイルDNA、または平均粒径(nm)もしくはサイズ範囲のうちの1つ以上を示す。いくつかの場合では、ポリプレックス:ポリマー組成物の分散液は、125μg/mL~約1,000μg/mLの核酸濃度に濃縮された場合の上述のPDI、平均ゼータ電位、%スーパーコイルDNA、または平均粒径(nm)もしくはサイズ範囲のうちの1つ以上を示す。いくつかの場合では、ポリプレックス:ポリマー組成物の分散液は、125μg/mL~約25,000μg/mLの核酸濃度に濃縮された場合の上述のPDI、平均ゼータ電位、%スーパーコイルDNA、または平均粒径(nm)もしくはサイズ範囲のうちの1つ以上を示す。いくつかの場合では、ポリプレックス:ポリマー組成物の分散液は、125μg/mL~約2,000μg/mLの核酸濃度に濃縮された場合の上述のPDI、平均ゼータ電位、%スーパーコイルDNA、または平均粒径(nm)もしくはサイズ範囲のうちの1つ以上を示す。いくつかの場合では、ポリプレックス:ポリマー組成物の分散液は、125μg/mL~約5,000μg/mLの核酸濃度に濃縮された場合の上述のPDI、平均ゼータ電位、%スーパーコイルDNA、または平均粒径(nm)もしくはサイズ範囲のうちの1つ以上を示す。いくつかの場合では、ポリプレックス:ポリマー組成物の分散液は、125μg/mL~約10,000μg/mLの核酸濃度に濃縮された場合の上述のPDI、平均ゼータ電位、%スーパーコイルDNA、または平均粒径(nm)もしくはサイズ範囲のうちの1つ以上を示す。
一般に、本明細書に記載のポリプレックス:ポリマー組成物は、まさに、賦形剤、例えば、凍結保護剤、抗凍結剤、界面活性剤、再水和または湿潤剤などがない状態での、良好な溶液の挙動(例えば、安定性及び/または非凝集)(PDIまたは平均粒径で測定)を示す。いくつかの場合では、本明細書に記載のポリプレックス:ポリマー組成物は、生理液または人工生理液中で、好ましい溶液挙動(例えば、安定性及び/または非凝集(PDIまたは平均粒径で測定)を示す。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリプレックス:ポリマー組成物は、哺乳動物膀胱内で(例えば、尿と接触して)インキュベートされた場合、及び/または、腸(例えば、結腸、小腸、または大腸、好ましくは、結腸)内でインキュベートされた場合、人工腸液、腸液、人工尿、哺乳動物尿中で安定である。いくつかの実施形態では、ポリプレックス:ポリマー組成物は、本明細書に記載の条件のうちの1つ以上で(例えば、人工腸液中で)、少なくとも約10分間、または約10分~約1時間、または少なくとも約1時間、または1時間~約2時間安定である。
上記のように、本明細書に記載のポリプレックス:ポリマー組成物は、好ましくは、組成物において実質的にサイズ安定である。好ましい実施形態では、本発明の組成物は、平均直径が、6時間、より好ましくは、12時間、より好ましくは、24時間、最も好ましくは、48時間室温で、100%未満、より好ましくは、50%未満、最も好ましくは、25%未満増加するポリプレックス:ポリマー粒子を含む。特に好ましい実施形態では、本発明の組成物は、平均直径が少なくとも24時間または少なくとも48時間室温で、25%未満増加するポリプレックス:ポリマー粒子を含む。
本組成物のポリプレックス:ポリマー粒子は、好ましくは、冷却条件下で実質的にサイズ安定である。好ましい実施形態では、本発明の組成物は、平均直径が、6時間、より好ましくは、12時間、より好ましくは、24時間、最も好ましくは、48時間、2~8℃で、100%未満、より好ましくは、50%未満、最も好ましくは、25%未満増加するポリプレックス:ポリマー粒子を含む。
本組成物のポリプレックス:ポリマー粒子は、好ましくは、凍結融解条件下で実質的にサイズ安定である。好ましい実施形態では、本発明の組成物は、平均直径が、-20~-80℃で解凍後6時間、より好ましくは、12時間、より好ましくは、24時間、最も好ましくは、48時間室温で、100%未満、より好ましくは、50%未満、最も好ましくは、25%未満増加するポリプレックスを含む。
好ましい実施形態では、組成物は、0.5mg/mlを超える核酸濃度を有し、沈殿ポリプレックスを実質的に含まない。より好ましくは、組成物は、少なくとも0.6mg/ml、より好ましくは、少なくとも0.75mg/ml、より好ましくは、少なくとも1.0mg/ml、より好ましくは、少なくとも1.2mg/ml、最も好ましくは、少なくとも1.5mg/mlの核酸濃度を有し、沈殿ポリプレックスを実質的に含まない。別の好ましい実施形態では、組成物は、2mg/mlを超える核酸濃度を有し、沈殿ポリプレックスを実質的に含まない。より好ましくは、組成物は、少なくとも2.5mg/ml、より好ましくは、少なくとも5mg/ml、より好ましくは、少なくとも10mg/ml、より好ましくは、少なくとも15mg/ml、最も好ましくは、約25mg/mlの核酸濃度を有し、沈殿ポリプレックスを実質的に含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、0.5mg/mL~約25mg/mLの核酸濃度を有し、沈殿ポリプレックスを実質的に含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、約25mg/mL以下の核酸濃度を有し、沈殿ポリプレックスを実質的に含まない。組成物を水和させることができる。好ましい実施形態では、組成物は、複合体を形成していない核酸を実質的に含まない。
好ましい実施形態では、ポリプレックス:ポリマー粒子の組成物は、等張である。ポリプレックスの安定性を維持しながら等張性を達成することは、医薬組成物を製剤化するのに非常に望ましく、これらの好ましい組成物は、医薬製剤及び治療用途に十分に適する。
特定の実施形態では、ポリプレックス:ポリマー粒子組成物は、pHを低下させることにより、例えば、PEGの全部または一部を放出させるためにポリマーコートを脱コートすることが可能である。特定の実施形態では、ポリマーコートは、ポリマーのポリアニオンアンカー領域のpKaよりも低いpH条件下で粒子をインキュベートすることにより放出される。例えば、ポリマーコートがポリグルタマートである場合、ポリマーコートは、粒子をポリグルタマートのpKaより低いpH、例えば、約4.25未満のpH、でインキュベートすることにより放出することができる。特定の実施形態では、ポリマーコートは、ポリマーコートのポリアニオンアンカー領域のpKaより低い、少なくとも0.25pH単位または少なくとも0.5pH単位下であるpH条件下で粒子をインキュベートすることにより放出することができる。
特定の実施形態では、ポリプレックス:ポリマー粒子組成物は、粒子を高いイオン強度にかけることにより、例えば、PEGの全部または一部を放出させるためにポリマーコートを脱コートすることが可能である。
理論に拘束されることを望むものでないが、特定の生理学的条件が、本明細書に記載の可逆的にPEG化されているキトサンDNAポリプレックスの部分的な(例えば、5%超)、実質的な(50%超)、広範囲の(例えば、90%超)、または完全な脱コートを促進し得ると仮定される。例えば、特定の細胞内区画(例えば、エンドソーム、初期エンドソーム、後期エンドソーム、またはリソソーム)の低pH条件は、ポリマーコートの放出を促進し得る。別の例として、特定の細胞外条件は、本明細書に記載の可逆的にPEG化されているキトサンDNAポリプレックスの部分的な(例えば、5%超)、実質的な(50%超)、広範囲の(例えば、90%超)、または完全な(100%)脱コートを促進し得る。いくつかの場合では、消化管の特定の位置で通常生じる高いイオン強度及び/または酸性pH条件は、本明細書に記載の可逆的にPEG化されているキトサンDNAポリプレックスの部分的な(例えば、5%超)、実質的な(50%超)、広範囲の(例えば、90%超)、または完全な(100%)脱コートを促進し得る。
特定の実施形態では、本明細書に記載のPEG化ポリプレックスは、細胞、組織、または身体区画(例えば、腸、小腸、大腸、結腸、肺、または膀胱)への送達のために製剤化され、その結果、ポリプレックスがPEG化されているままであり、それにより、標的細胞へのトランスフェクションを容易にする。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のPEG化ポリプレックスは、細胞内環境への侵入後または侵入中に、部分的に(例えば、5%超)、実質的に(50%超)、広範囲に(例えば、90%超)、または完全に(100%)ポリマーコートを放出する。特定の実施形態では、本明細書に記載のPEG化ポリプレックスは、細胞、組織、または身体区画(例えば、腸、小腸、大腸、結腸、肺、または膀胱)への送達のために製剤化され、その結果、本明細書に記載のPEG化ポリプレックスは、細胞、組織、または身体区画(例えば、腸、小腸、大腸、結腸、肺、または膀胱)への送達時に、ポリマーコートを、部分的に(例えば、5%超)、実質的に(50%超)、広範囲に(例えば、90%超)、または完全に(100%)放出する。
ポリマーのアニオンアンカー領域のアニオン電荷密度及び/またはpKaは、意図された条件下で放出を促進または阻害するように調整することができることができることが理解されるであろう。同様に、pH、容積、及びイオン強度、ならびに製剤の他の条件は、意図された条件下での放出を促進または抑制するように調整することができると理解されるであろう。例えば、低pHの胃の環境を介して腸に送達するために、ペグ化ポリプレックス製剤は、胃の環境のpHを増強させるために、緩衝剤中で腸溶コーティング及び/または送達することができる。最適化された可逆的にPEG化されている粒子の組成物及び製剤は、本明細書に記載のアッセイを使用して安定性及びトランスフェクション効率をアッセイすることにより同定することができる。
アニオン部分含有ポリマーと複合体化されたキトサンポリプレックスを含む組成物は、「(+):(-)モル比」と称される、(例えば、二重)誘導体化キトサンポリプレックス(+)のカチオン官能基 対 ポリマー(-)のアニオン部分の比を特徴とすることができる。この(+):(-)モル比は、約1:100~約10:1未満で変化し得る。
特定の実施形態では、(+):(-)モル比は、約1:75超~約8:1未満であり得る。いくつかの場合では、(+):(-)モル比は、1:10超~10:1未満であり得る。いくつかのケースでは、(+):(-)モル比は、1:10または約1:10~10:1または約10:1であり得る。いくつかのケースでは、(+):(-)モル比は、1:8または約1:8~8:1または約8:1であり得る。特定の実施形態では、(+):(-)モル比は、1:50超~約10:1未満であり得る。いくつかの場合では、(+):(-)モル比は、1:25超~約10:1未満であり得る。いくつかの場合では、(+):(-)モル比は、1:10超~約7:1未満であり得る。いくつかの場合では、(+):(-)モル比は、1:8超~約7:1未満であり得る。いくつかの場合では、(+):(-)モル比は、1:8超~約6:1未満であり得る。
カチオン官能基(例えば、二重)誘導体化キトサンポリプレックスがアミノ部分である特定の実施形態では、アニオン部分含有ポリマーと複合体化されたキトサンポリプレックスを含む組成物は、「N:Aモル比」と呼ばれる、(例えば、二重)誘導体化キトサンポリプレックスのアミノ基(N) 対 ポリマーのアニオン(A)部分の比を特徴とすることができる。このN:Aモル比は、約1:100超~約10:1未満で変化し得る。
特定の実施形態では、N:Aモル比は、約1:75超~約8:1未満であり得る。いくつかの場合では、N:Aモル比は、1:10超~10:1未満であり得る。いくつかのケースでは、N:Aモル比は、1:10または約1:10~10:1または約10:1であり得る。いくつかのケースでは、N:Aモル比は、1:8または約1:8~8:1または約8:1であり得る。特定の実施形態では、N:Aモル比は、1:50超~約10:1未満であり得る。いくつかの場合では、N:Aモル比は、1:25超~約10:1未満であり得る。いくつかの場合では、N:Aモル比は、1:10超~約7:1未満であり得る。いくつかの場合では、N:Aモル比は、1:8超~約7:1未満であり得る。いくつかの場合では、N:Aモル比は、1:8超~約6:1未満であり得る。
追加的または代替的に、アニオン部分含有ポリマーと複合体化されたキトサンポリプレックスを含む組成物は、「(+):P:(-)モル比」と呼ばれる、(例えば、二重)誘導体化キトサンポリプレックスのカチオン官能基(+) 対 核酸のリン原子(P) 対 ポリマーのアニオン部分(-)の3構成成分比を特徴とすることができる。
(+):Pが少なくとも2:1~20:1以下である特定の実施形態では、(+):(-)のモル比は、少なくとも1:40~約40:1で変化し得る。(+):Pが少なくとも2:1~20:1以下である特定の実施形態では、(+):(-)のモル比は、少なくとも1:40~約1:10で変化し得る。(+):Pが少なくとも2:1~20:1以下であるいくつかの実施形態では、(+):(-)のモル比は、少なくとも1:25~約25:1で変化し得る。(+):Pが少なくとも2:1~20:1以下であるいくつかの実施形態では、(+):(-)のモル比は、少なくとも1:25~約1:10で変化し得る。(+):Pが少なくとも2:1~20:1以下であるいくつかの場合では、(+):(-)のモル比は、少なくとも1:20~約20:1で変化し得る。(+):Pが少なくとも2:1~20:1以下であるいくつかの場合では、(+):(-)のモル比は、少なくとも1:20~約1:10で変化し得る。(+):Pが少なくとも2:1~20:1以下であるいくつかの場合では、(+):(-)のモル比は、少なくとも1:10~約10:1で変化し得る。(+):Pが少なくとも2:1~20:1以下であるいくつかの場合では、(+):(-)のモル比は、少なくとも1:25~約2:1で変化し得る。(+):Pが少なくとも2:1~20:1以下であるいくつかの場合では、(+):(-)のモル比は、少なくとも1:20~約1:1で変化し得る。
特定の好ましい実施形態では、(+):P:(-)は、3:1:3.5~3:1:17.5である。特定の好ましい実施形態では、(+):P:(-)は、5:1:3.5~5:1:17.5である。特定の好ましい実施形態では、(+):P:(-)は、7:1:3.5~7:1:17.5である。特定の好ましい実施形態では、(+):P:(-)は、約3:1:3.5、3:1:7、3:1:10、3:1:15、3:1:17.5、または3:1:20である。特定の好ましい実施形態では、(+):P:(-)は、約5:1:3.5、5:1:7、5:1:10、5:1:15、5:1:17.5、または5:1:20である。特定の好ましい実施形態では、(+):P:(-)は、約7:1:3.5、7:1:7、7:1:10、7:1:15、7:1:17.5、または7:1:20である。特定の好ましい実施形態では、(+):P:(-)は、約10:1:10、10:1:15、10:1:20、10:1:25、10:1:30、または10:1:40である。
アニオン部分含有ポリマーと複合体化したアミノ官能基化キトサンポリプレックス粒子が、「N:P:Aモル比」と称される、(例えば、二重)誘導体化キトサンポリプレックス(N)のアミノ官能基 対 核酸(P)のリン原子 対 ポリマー(A)のアニオン部分の3構成成分比を特徴とすることができることを、当業者は理解するであろう。N:Pが少なくとも2:1~20:1以下である特定の実施形態では、P:Aのモル比は、少なくとも1:40~約40:1で変化し得る。
N:Pが少なくとも2:1~20:1以下である特定の実施形態では、P:Aのモル比は、少なくとも1:40~約1:10で変化し得る。N:Pが少なくとも2:1~20:1以下である特定の実施形態では、P:Aのモル比は、少なくとも1:25~約25:1で変化し得る。N:Pが少なくとも2:1~20:1以下である特定の実施形態では、P:Aのモル比は、少なくとも1:25~約1:10で変化し得る。N:Pが少なくとも2:1~20:1以下であるいくつかの場合では、P:Aのモル比は、少なくとも1:20~約20:1で変化し得る。N:Pが少なくとも2:1~20:1以下であるいくつかの場合では、P:Aのモル比は、少なくとも1:20~約1:10で変化し得る。N:Pが少なくとも2:1~20:1以下であるいくつかの場合では、P:Aのモル比は、少なくとも1:10~約10:1で変化し得る。N:Pが少なくとも2:1~20:1以下であるいくつかの場合では、P:Aのモル比は、少なくとも1:25~約2:1で変化し得る。N:Pが少なくとも2:1~20:1以下であるいくつかの場合では、P:Aのモル比は、少なくとも1:20~約1:1で変化し得る。
特定の好ましい実施形態では、N:P:Aは、3:1:3.5~3:1:17.5である。特定の好ましい実施形態では、N:P:Aは、5:1:3.5~5:1:17.5である。特定の好ましい実施形態では、N:P:Aは、7:1:3.5~7:1:17.5である。特定の好ましい実施形態では、N:P:Aは、10:1:10~10:1:40である。特定の好ましい実施形態では、N:P:Aは、約3:1:3.5、3:1:7、3:1:10、3:1:15、3:1:17.5、または3:1:20である。特定の好ましい実施形態では、N:P:Aは、約5:1:3.5、5:1:7、5:1:10、5:1:15、5:1:17.5、または5:1:20である。特定の好ましい実施形態では、N:P:Aは、約7:1:3.5、7:1:7、7:1:10、7:1:15、7:1:17.5、または7:1:20である。特定の実施形態では、N:P:Aは、約10:1:10、10:1:15、10:1:20、10:1:25、10:1:30、または10:1:40である。
2.4.1.親水性非荷電部分
ポリマーの親水性非荷電部分は、ポリアルキレンポリオールもしくはポリアルキレンオキシポリオール部分、またはそれらの組み合わせであり得るか、またはそれらを含み得る。ポリマーの親水性非荷電部分は、ポリアルキレングリコールまたはポリアルキレンオキシグリコール部分であり得るか、またはそれらを含み得る。特定の実施形態では、ポリアルキレングリコール部分は、ポリエチレングリコール部分及び/またはモノメトキシポリエチレングリコール部分であるか、またはそれらを含む。特定の好ましい実施形態では、ポリマーの非荷電部分は、ポリエチレングリコールであるか、またはそれを含む。ポリマーの親水性非荷電部分は、ポリ乳酸などの他の生物学的に適合性のあるポリマー(複数可)であり得るか、またはそれを含み得る。
ポリマーの親水性非荷電部分は、ポリアルキレンポリオールもしくはポリアルキレンオキシポリオール部分、またはそれらの組み合わせであり得るか、またはそれらを含み得る。ポリマーの親水性非荷電部分は、ポリアルキレングリコールまたはポリアルキレンオキシグリコール部分であり得るか、またはそれらを含み得る。特定の実施形態では、ポリアルキレングリコール部分は、ポリエチレングリコール部分及び/またはモノメトキシポリエチレングリコール部分であるか、またはそれらを含む。特定の好ましい実施形態では、ポリマーの非荷電部分は、ポリエチレングリコールであるか、またはそれを含む。ポリマーの親水性非荷電部分は、ポリ乳酸などの他の生物学的に適合性のあるポリマー(複数可)であり得るか、またはそれを含み得る。
PEGに加えて、いくつかの親水性の非荷電実体が当該技術分野で既知である。例えば、Lowe et.al.,Antibiofouling polymer interfaces:poly(ethyleneglycol)and other promising candidates,Polym.Chem.,6,198-212,2015、及びKnop et.al.,Poly(ethylene glycol)in Drug Delivery:Pros and Cons as Well as Potential Alternatives.Angewandte Chemie International Edition,49(36),6288-6308,2010を参照のこと。ポリマーの親水性非荷電部分の例は、ポリ(グリセロール)、ポリ(2-メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン)、ポリ(スルホベタインメタクリラート)、及びポリ(カルボキシベタインメタクリラート)、ポリ(2-メチル-2-オキサゾリン)、ポリ(2-エチル-2-オキサゾリン)、及びポリ(ビニルピロリドン)であるが、これらに限定されない。
親水性部分は、約500Da~約50,000Daの重量平均分子量を有し得る。いくつかの実施形態では、親水性部分は、約1,000Da~約10,000Daの重量平均分子量を有する。特定の実施形態では、親水性部分は、約1,500Da~約7,500Daの重量平均分子量を有する。特定の実施形態では、親水性部分は、約3,000Da~約5,000Daの重量平均分子量を有する。いくつかの場合では、親水性部分は、5,000Daまたは約5,000Daの重量平均分子量を有する。
2.4.2.アニオンポリマー部分
ポリマーのアニオンポリマー部分は、生理学的pHで負電荷を有する複数の官能基を含み得る。多種多様なアニオンポリマーは、本明細書に記載の方法及び組成物での使用に適する。但し、そのようなアニオンポリマーは、親水性非荷電ポリマー部分を有するポリマーの構成成分として提供することができ、正荷電(例えば、二重)誘導体化キトサン-核酸ナノ粒子との(例えば、可逆的)電荷:電荷複合体を形成可能である。
ポリマーのアニオンポリマー部分は、生理学的pHで負電荷を有する複数の官能基を含み得る。多種多様なアニオンポリマーは、本明細書に記載の方法及び組成物での使用に適する。但し、そのようなアニオンポリマーは、親水性非荷電ポリマー部分を有するポリマーの構成成分として提供することができ、正荷電(例えば、二重)誘導体化キトサン-核酸ナノ粒子との(例えば、可逆的)電荷:電荷複合体を形成可能である。
例示的なアニオンポリマーとしては、生理学的pHで正味の負電荷を有するポリペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの場合では、ポリペプチドまたはその一部は、生理学的pHで負荷電側鎖を有するアミノ酸からなる。例えば、ポリマーのアニオンポリマー部分は、ポリグルタマートポリペプチド、ポリアスパラタートポリペプチド、またはそれらの混合物であり得る。追加のアミノ酸またはその模倣物は、ポリアニオンポリペプチドに組み込むことができる。例えば、グリシン及び/またはセリンアミノ酸は、柔軟性を増加させるか、または2次構造を低減させるために組み込むことができる。
いくつかの場合では、アニオンポリマーは、アニオン炭水化物ポリマーであるか、またはそれを含み得る。例示的なアニオン炭水化物ポリマーとしては、生理学的pHで負電荷を有するグリコサミノグリカンが挙げられるが、これらに限定されない。例示的なアニオングリコサミノグリカンとしては、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、ヘパリン、ヘパリン硫酸、ヒアルロン酸、またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、ポリマーのアニオンポリマー部分は、ヒアルロン酸であるか、またはヒアルロン酸を含む。
追加または代替のアニオン炭水化物ポリマーは、デキストラン硫酸を含むポリマーを含み得る。
いくつかの場合では、ポリアニオン部分は、ポリメタクリル酸及びその塩、ポリアクリル酸及びその塩、メタクリル酸のコポリマー及びその塩、ならびにアクリル酸及び/またはメタクリル酸のコポリマー及びその塩、例えば、ポリアルキレンオキシド、ポリアクリル酸コポリマーからなる群より選択されるポリアニオンであるか、またはそれを含む。
いくつかの場合では、ポリアニオン部分は、アルギナート、カラギーナン、ファーセレラン、ペクチン、キサンタン、ヒアルロン酸、ヘパリン、ヘパラン硫酸、コンドロイチン硫酸、セルロース、酸化セルロース、カルボキシメチルセルロース、クロスマルメロース、ペンダントカルボキシル基を含有する合成ポリマー及びコポリマー、リン酸基または硫酸基、主に負電荷のポリアミノ酸、ならびに生体適合性ポリフェノール材料からなる群より選択されるポリアニオンであるか、またはそれらを含む。
ポリマーのアニオン部分は、約500Da~約5,000Daの重量平均分子量を有し得る。いくつかの実施形態では、アニオン部分は、約500Da~約3,000Daの重量平均分子量を有する。特定の実施形態では、アニオン部分は、約500Da~約2,500Daの重量平均分子量を有する。特定の実施形態では、アニオン部分は、約500Da~約2,000Daの重量平均分子量を有する。特定の実施形態では、アニオン部分は、約500Da~約1,500Daの重量平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、アニオン部分は、約1,000Da~約5,000Daの重量平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、アニオン部分は、約1,000Da~約3,000Daの重量平均分子量を有する。特定の実施形態では、アニオン部分は、約1,000Da~約2,500Daの重量平均分子量を有する。特定の実施形態では、アニオン部分は、約1,000Da~約2,000Daの重量平均分子量を有する。いくつかの場合では、アニオン部分は、1,500Daまたは約1,500Daの重量平均分子量を有する。
本明細書で使用される場合、「ブロックコポリマー」、「ブロックコ-ポリマー」などは、別個のホモポリマー領域を含有するコポリマーを指す。二元ブロックコポリマーは、2つの異なるホモポリマー領域を含有する。三元コポリマーは、3つの異なるホモポリマー領域を含有する。3つの異なる領域が、それぞれ、異なり(例えば、AAAA-BBBB-CCCC)得るか、または2つの領域が、同じ(例えば、AAAA-BBBB-AAAA)、類似(例えば、AAAA-BBBB-AAA)であり得、「A」、「B」、及び「C」は、コポリマーを形成する異なるモノマーサブユニットが含まれることを表す。例えば、「A」は、ポリエチレングリコールのホモポリマーのエチレングリコールモノマーサブユニットを表し得、Bは、ポリグルタミン酸ホモポリマーのグルタミン酸サブユニットを表し得る。ブロックコポリマーは、線状(例えば、二元または三元)ブロックコポリマーであり得る。本発明で使用される線状二元ブロック及び三元ブロックコポリマーの例示的な実施形態としては、以下の限定的なリストに列挙されているものが挙げられる。
2.5.作成方法
上記のように、本発明のポリプレックス:ポリマー粒子が、様々な方法で生成され得ることを、当業者は理解するであろう。例えば、ポリプレックス粒子を生成し、その後、ポリマーと接触させることができる。例示的な非限定的な実施形態では、ポリプレックス粒子は、官能基化キトサン及びヌクレオチド原料を提供及び組み合わせることにより調製される。原料濃度は、様々なアミノ対リン酸塩(N/P)比、混合比、及び標的ヌクレオチド濃度に適応するように調整されてもよい。いくつかの実施形態、特に小さなバッチ、例えば、2mL未満のバッチでは、官能基化キトサン、及びヌクレオチド原料は、容器をボルテックスしながら、官能基化キトサン原料にヌクレオチド原料を徐々に滴下することにより混合されてもよい。他の実施形態では、官能基化キトサン及びヌクレオチド原料は、2つの流体流をインライン混合することにより混合されてもよい。他の実施形態では、得られるポリプレックス分散液は、限外濾過(例えば、タンジェンシャルフロー濾過(TFF))または溶媒蒸発(例えば、凍結乾燥または噴霧乾燥)などの当該技術分野で既知の手段で濃縮されてもよい。ポリプレックス形成のための好ましい方法は、WO2009/039657(全体が参照により本明細書に明示的に組み込まれる)に開示される。
上記のように、本発明のポリプレックス:ポリマー粒子が、様々な方法で生成され得ることを、当業者は理解するであろう。例えば、ポリプレックス粒子を生成し、その後、ポリマーと接触させることができる。例示的な非限定的な実施形態では、ポリプレックス粒子は、官能基化キトサン及びヌクレオチド原料を提供及び組み合わせることにより調製される。原料濃度は、様々なアミノ対リン酸塩(N/P)比、混合比、及び標的ヌクレオチド濃度に適応するように調整されてもよい。いくつかの実施形態、特に小さなバッチ、例えば、2mL未満のバッチでは、官能基化キトサン、及びヌクレオチド原料は、容器をボルテックスしながら、官能基化キトサン原料にヌクレオチド原料を徐々に滴下することにより混合されてもよい。他の実施形態では、官能基化キトサン及びヌクレオチド原料は、2つの流体流をインライン混合することにより混合されてもよい。他の実施形態では、得られるポリプレックス分散液は、限外濾過(例えば、タンジェンシャルフロー濾過(TFF))または溶媒蒸発(例えば、凍結乾燥または噴霧乾燥)などの当該技術分野で既知の手段で濃縮されてもよい。ポリプレックス形成のための好ましい方法は、WO2009/039657(全体が参照により本明細書に明示的に組み込まれる)に開示される。
同様に、ポリプレックス粒子原料(例えば、ポリプレックス組成物を含む水溶液)は、提供し(例えば、上記の反応混合物から単離し)、ポリマー原料(例えば、ポリマーを含む水溶液)と混合することができる。原料濃度は、様々なアミノ対アニオン比(N/A)、アミノ対リン比(N:P)、N:P:A比、混合比、及び標的ヌクレオチド濃度に適応するように調整されてもよい。いくつかの実施形態、特に小さなバッチ、例えば、2mL未満のバッチでは、原料は、容器をボルテックスしながら、第2の原料(例えば、ポリマー)に第1の原料(例えば、ポリプレックス)を徐々に滴下することにより、混合されてもよい。他の実施形態では、原料は、2つの流体流をインライン混合することにより混合されてもよい。他の実施形態では、得られるポリプレックス:ポリマー複合体分散液は、限外濾過(例えば、タンジェンシャルフロー濾過(TFF))または溶媒蒸発(例えば、凍結乾燥または噴霧乾燥)などの当該技術分野で既知の手段により濃縮されてもよい。
いくつかの実施形態では、ポリプレックス:ポリマー組成物は、コアシェルタイプの粒子組成物を含み、粒子は、ポリプレックスコア及び非共有結合的に結合している(例えば、放出可能な)ポリマーシェルを含む。理解されるように、そのようなコアシェルタイプの組成物を作製するための1つの方法は、ポリプレックスを形成し、その後、上記のようにポリマー原料と組み合わせることを含む。
あるいは、ポリプレックス:ポリマー組成物は、核酸、誘導体化キトサン、及び少なくとも1つのポリアニオン(PA)アンカー領域及び少なくとも1つの親水性ポリマー(例えば、PEG)尾部領域を含む複数の線状ブロックコポリマーが、ポリプレックス:ポリマー組成物を形成するために適切な比で混合される1段階法で行うことができる。理論に拘束されることを望むものではないが、本発明者らは、そのような1段階法が、in vivo粘膜拡散が制限される特定の適応症において有利であり得るより小さな粒径を生成し得る。
3.粉末製剤
本発明のポリプレックス:ポリマー組成物は、粉末を含む。好ましい実施形態では、本発明は、乾燥粉末ポリプレックス:ポリマー組成物を提供する。好ましい実施形態では、乾燥粉末ポリプレックス:ポリマー組成物は、本発明のキトサン-核酸ポリプレックス分散液の脱水(例えば、噴霧乾燥または凍結乾燥)により生成される。
本発明のポリプレックス:ポリマー組成物は、粉末を含む。好ましい実施形態では、本発明は、乾燥粉末ポリプレックス:ポリマー組成物を提供する。好ましい実施形態では、乾燥粉末ポリプレックス:ポリマー組成物は、本発明のキトサン-核酸ポリプレックス分散液の脱水(例えば、噴霧乾燥または凍結乾燥)により生成される。
4.医薬製剤
本発明は、また、本発明のポリプレックス:ポリマー組成物を含む「薬学的に許容される」または「生理学的に許容される」製剤を提供する。そのような製剤は、処置方法を実施するために、対象にin vivoで投与することができる。
本発明は、また、本発明のポリプレックス:ポリマー組成物を含む「薬学的に許容される」または「生理学的に許容される」製剤を提供する。そのような製剤は、処置方法を実施するために、対象にin vivoで投与することができる。
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」及び「生理学的に許容される」という用語は、好ましくは、過度の有害な副作用(例えば、悪心、腹痛、頭痛など)を生じさせることなく、対象に投与することができる担体、希釈剤、賦形剤などを指す。投与のためのそのような調製物は、滅菌水溶液または非水溶液、懸濁液、及び乳濁液を含む。液体製剤は、懸濁剤、溶剤、シロップ剤、及びエリキシル剤を含む。液体製剤は、固体の再構成により調製されてもよい。
医薬製剤は、対象への投与と適合性のある担体、希釈剤、賦形剤、溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などから作製することができる。そのような製剤は、錠剤(コーティングされたまたはコーティングされていない)、カプセル剤(ハードまたはソフト)、マイクロビーズ、エマルション剤、散剤、顆粒剤、結晶剤、懸濁剤、シロップ剤、またはエリキシル剤に含有することができる。他の添加剤の中で、補助的な活性化合物及び防腐剤もまた、例えば、抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤、及び不活性ガスなどが存在し得る。
賦形剤は、塩、等張剤、血清タンパク質、緩衝剤もしくは他のpH調整剤、酸化防止剤、増粘剤、非荷電ポリマー、防腐剤、または抗凍結剤を含み得る。本発明の組成物に使用される賦形剤は、さらに、等張剤及び緩衝液または他のpH制御剤を含んでもよい。これらの賦形剤は、好ましい範囲のpH(約6.0~8.0)及び浸透圧(約50~400mmol/L)を得るために添加されてもよい。好適な緩衝液の例は、酢酸塩、ホウ酸塩、炭酸塩、クエン酸塩、リン酸塩、及びスルホン化有機分子緩衝液である。そのような緩衝液は、0.01~1.0%(w/v)の濃度で組成物中に存在し得る。等張剤は、当該技術分野で既知のもの、例えば、マンニトール、デキストロース、グルコース、及び塩化ナトリウム、または他の電解質のいずれかから選択されてもよい。好ましくは、等張剤は、グルコースまたは塩化ナトリウムである。等張剤は、それが導入される生物学的環境の浸透圧と同じまたは同様の浸透圧を組成物に与える量で使用されてもよい。組成物中の等張剤の濃度は、使用される特定の等張剤の性質に依存し、約0.1~10%の範囲であってよい。グルコースが使用される場合、それは、好ましくは、1~5%w/v、より詳細には、5%w/v、の濃度で使用される。等張剤が塩化ナトリウムである場合、それは、好ましくは、最大1%w/v、特に、0.9%w/vの量で用いられる。本発明の組成物は、さらに、防腐剤を含有してもよい。防腐剤の例としては、ポリヘキサメチレン-ビグアニジン、塩化ベンザルコニウム、安定したオキシクロロ錯体(Purite(登録商標)として知られているもの)、フェニル酢酸塩、クロロブタノール、ソルビン酸、クロルヘキシジン、ベンジルアルコール、パラベン、及びチメロサールである。通常は、そのような防腐剤は、約0.001~1.0%の濃度で存在する。さらに、本発明の組成物は、凍結保存剤も含んでもよい。好ましい凍結保存剤は、100,000g/モル未満の好ましい分子量のデキストラン、グルコース、スクロース、マンニトール、ラクトース、トレハロース、ソルビトール、コロイド状二酸化ケイ素、100,000g/モル未満の分子量のグリセロール及びポリエチレングリコール、またはそれらの混合物である。最も好ましいのは、グルコース、トレハロース、及びポリエチレングリコールである。通常は、そのような凍結保存剤は、約0.01~10%の濃度で存在する。
医薬製剤は、意図された投与経路と適合性のあるように製剤化することができる。例えば、経口投与のために、組成物は、賦形剤とともに組み込まれ、錠剤、トローチ剤、カプセル剤、例えば、ゼラチンカプセル剤、またはコーティング、例えば、腸溶性コーティング(Eudragit(登録商標)またはSureteric(登録商標))の形態で使用される。医薬的に適合性のある結合剤、及び/または補助材料は、経口製剤に含まれ得る。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤などは、以下の成分のいずれか、もしくは同様の性質の化合物を含有し得る:結合剤、例えば、微結晶性セルロース、トラガカントガム、もしくはゼラチン;賦形剤、例えば、デンプンもしくはラクトース;崩壊剤、例えば、アルギン酸、プリモゲル、もしくはコーンスターチ;潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウムもしくは他のステアリン酸塩;滑剤、例えば、コロイド状二酸化ケイ素;甘味料、例えば、スクロースもしくはサッカリン;または、着香剤、例えば、ペパーミント、サリチル酸メチル、もしくは香味料。
製剤は、インプラント及びマイクロカプセル化送達システムを含む制御放出製剤など、身体からの急速な分解または排除から組成物を保護するための担体も含み得る。例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはステアリン酸グリセリルなどの時間遅延材料を単独で、またはワックスと組み合わせて用いられてもよい。
坐剤及び他の直腸投与可能な製剤(例えば、浣腸により投与可能なもの)もまた企図される。さらに、直腸送達に関して、例えば、Song et al.,Mucosal drug delivery:membranes,methodologies,and applications,Crit.Rev.Ther.Drug.Carrier Syst.,21:195-256,2004;Wearley,Recent progress in protein and peptide delivery by noninvasive routes,Crit.Rev.Ther.Drug.Carrier Syst.,8:331-394,1991を参照のこと。
投与のための適切な追加の医薬製剤は、当該技術分野で既知のであり、本発明の方法及び組成物に適用可能である(例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences(1990)18th ed.,Mack Publishing Co.,Easton,Pa.;The Merck Index(1996)12th ed.,Merck Publishing Group,Whitehouse,N.J.;及びPharmaceutical Principles of Solid Dosage Forms,Technonic Publishing Co.,Inc.,Lancaster,Pa.,(1993))。
5.投与
一実施形態では、ポリプレックス:ポリマー組成物の使用は、生理学的pHでのポリプレックスの長期安定性を提供する。これは、有効な粘膜投与を提供する。
一実施形態では、ポリプレックス:ポリマー組成物の使用は、生理学的pHでのポリプレックスの長期安定性を提供する。これは、有効な粘膜投与を提供する。
粘膜細胞または組織に接触させる多数の投与経路のうちのいずれかが可能であり、特定の経路の選択は、部分的に標的粘膜細胞または組織に依存するであろう。注射器、内視鏡、カニューレ、挿管チューブ、カテーテル、及び他の物品は、投与に使用されてもよい。
対象を処置するための用量または「有効量」は、好ましくは、測定可能または検出可能な範囲に状態の症状のうちの1つ、いくつか、または全てを改善させるのに十分である。但し、障害もしくは状態または症状の進行または悪化の予防または抑制は、申し分のない転帰である。従って、標的組織において治療用核酸を発現することにより処置可能な状態または障害の場合、本発明の方法により治療可能な状態を改善するための治療用RNAまたは産生される治療用タンパク質の量は、状態及び所望の転帰に依存することになり、当業者により容易に確認することができる。適切量は、処置される状態、望まれる治療効果、及び個々の対象(例えば、対象内の生物学的利用能、性別、年齢など)に依存するであろう。有効量は、関連する生理学的効果を測定することで確認することができる。
獣医の用途もまた、本発明により企図される。従って、一実施形態では、本発明は、処置を必要とする非ヒト哺乳動物に本発明のポリプレックス:ポリマー組成物を投与することを含む、非ヒト哺乳動物を処置する方法を提供する。
5.1.経口投与
本組成物は、経口投与されてもよい。経口投与は、化合物が胃腸管に入るような嚥下を伴ってもよい。本発明の組成物は、また、胃腸管に直接投与されてもよい。
本組成物は、経口投与されてもよい。経口投与は、化合物が胃腸管に入るような嚥下を伴ってもよい。本発明の組成物は、また、胃腸管に直接投与されてもよい。
経口投与に適する製剤としては、固体製剤、例えば、錠剤、カプセル剤、粒子またはコーティングされた粒子を含有するコーティングされたカプセル剤、液剤、または散剤、甜剤(液剤充填を含む)、チュー、多粒子及びナノ粒子、ゲル剤、フィルム剤、胚珠、ならびに噴霧剤が挙げられる。
錠剤剤形は、一般に、崩壊剤を含有する。崩壊剤の例としては、デンプングリコール酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルシウムカルボキシメチルセルロース、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、微結晶性セルロース、低級アルキル置換ヒドロキシプロピルセルロース、デンプン、アルファ化デンプン、及びアルギン酸ナトリウムが挙げられる。一般に、崩壊剤は、剤形の1重量%~25重量%、好ましくは、5重量%~20重量%を含むであろう。
結合剤は、一般に、錠剤製剤に凝集性を与えるために使用される。好適な結合剤としては、微結晶性セルロース、ゼラチン、糖、ポリエチレングリコール、天然及び合成ガム、ポリビニルピロリドン、アルファ化デンプン、ヒドロキシプロピルセルロース、及びヒドロキシプロピルメチルセルロースが挙げられる。錠剤は、希釈剤、例えば、ラクトース(一水和物、噴霧乾燥一水和物、無水物など)、マンニトール、キシリトール、デキストロース、スクロース、ソルビトール、微結晶性セルロース、デンプン、及び第二リン酸カルシウム二水和物も含有してもよい。
錠剤は、任意に、ラウリル硫酸ナトリウム及びポリソルベート80などの界面活性剤、ならびに二酸化ケイ素及びタルクなどの流動促進剤も含んでもよい。存在する場合、界面活性剤は、錠剤の0.2重量%~5重量%を含んでもよく、流動促進剤は、錠剤の0.2重量%~1重量%を含んでもよい。
錠剤は、一般に、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、フマル酸ステアリルナトリウム、及びラウリル硫酸ナトリウムとのステアリン酸マグネシウムの混合物などの潤滑剤も含有する。潤滑剤は、一般に、錠剤の0.25重量%~10重量%、好ましくは、0.5重量%~3重量%を含む。
他の可能な成分としては、酸化防止剤、着色剤、着香剤、防腐剤、及び矯味剤が挙げられる。
錠剤ブレンドは、錠剤を形成するために直接またはローラーにより圧縮されてもよい。錠剤ブレンドまたはブレンドの一部は、打錠前に、代替的に、湿式、乾式、もしくは溶融造粒、溶融凝固、または押し出されてもよい。最終製剤は、1つ以上の層を含んでもよく、コーティングされてもコーティングされていなくてもよく、さらに、カプセル化されてもよい。
錠剤の製剤化は、Pharmaceutical Dosage Forms:Tablets,Vol.1,by H.Lieberman and L.Lachman(Marcel Dekker,New York,1980)に考察される。
ヒトまたは獣医用の使用のための消費可能な経口フィルムは、通常、柔軟な水溶性または水膨潤性の薄膜剤形であり、これは、迅速な溶解または粘膜付着性であってよく、通常、フィルム形成ポリマー、結合剤、溶剤、保湿剤、可塑剤、安定剤または乳化剤、粘度改質剤、及び溶剤を含む。製剤のいくつかの構成成分は、複数の機能を実施し得る。
また、本発明の組成物を含む多粒子ビーズも本発明に含まれる。
他の可能な成分としては、酸化防止剤、着色剤、香味剤及び風味増強剤、防腐剤、唾液刺激剤、冷却剤、共溶媒(油を含む)、皮膚軟化剤、増量剤、消泡剤、界面活性剤、及び矯味剤を含む。
本発明によるフィルムは、通常、剥離可能なバッキング支持体または紙上にコーティングされた水性薄膜の蒸発乾燥により調製される。これは、乾燥オーブンもしくはトンネル、通常は、複合コータードライヤーで、または凍結乾燥もしくは真空化で行われてもよい。
経口投与用の固体製剤は、即時放出及び/または調節放出になるように製剤化されてもよい。放出調節製剤は、遅延放出、徐放性、パルス放出、制御放出、標的放出、及びプログラム放出を含む。
高エネルギー分散液及び浸透圧及びコーティングされた粒子などの他の好適な放出技術が既知である。
5.2.粘膜投与
本発明の組成物は、また、粘膜に投与されてもよい。例えば、組成物は、限定されないが、小腸及び/または大腸及び/または結腸の粘膜細胞または組織を含む胃腸管の粘膜細胞または組織に投与することができる。他の標的粘膜細胞または組織としては、眼、気道上皮、肺、膣、及び膀胱の細胞または組織が挙げられるが、これらに限定されない。
本発明の組成物は、また、粘膜に投与されてもよい。例えば、組成物は、限定されないが、小腸及び/または大腸及び/または結腸の粘膜細胞または組織を含む胃腸管の粘膜細胞または組織に投与することができる。他の標的粘膜細胞または組織としては、眼、気道上皮、肺、膣、及び膀胱の細胞または組織が挙げられるが、これらに限定されない。
この目的のための代表的な製剤としては、液剤、ゲル剤、ヒドロゲル剤、溶剤、クリーム剤、フォーム剤、フィルム剤、インプラント、スポンジ、繊維剤、散剤、及びマイクロエマルション剤を含む。
本発明の化合物は、鼻腔内または吸入により、通常は、好適な噴射剤の使用に関係なく、ドライパウダー吸入器からの乾燥粉末の形態で(単独で、混合物として、例えば、ラクトースとの乾燥ブレンドで、もしくは混合構成成分粒子として)、または加圧容器、ポンプ、スプレー、アトマイザー、もしくはネブライザーからのエアロゾルスプレー噴霧として、粘膜に投与することができる。
吸入器または通気器で使用されるカプセル剤、発泡剤、及びカートリッジは、本発明の化合物、ラクトースまたはデンプンなどの好適な粉末ベース、及びI-ロイシン、マンニトール、またはステアリン酸マグネシウムなどの性能修飾剤の粉末混合物を含有するように製剤化されてもよい。
吸入/鼻腔内投与用の製剤は、即時放出及び/または調節放出になるように製剤化されてもよい。放出調節製剤は、遅延放出、徐放性、パルス放出、制御放出、標的放出、及びプログラム放出を含む。
本発明の化合物は、例えば、坐剤、ペッサリー、または浣腸の形態で、直腸または膣に投与されてもよい。ココアバターは、従来の坐剤ベースであるが、様々な代替品が必要に応じて使用されてもよい。
直腸/膣内投与用の製剤は、即時放出及び/または調節放出になるように製剤化されてもよい。放出調節製剤は、遅延放出、徐放性、パルス放出、制御放出、標的放出、及びプログラム放出を含む。
本発明の化合物は、また、通常は、滴の形態で、眼または耳に直接投与されてもよい。眼及び耳投与に適する他の製剤としては、軟膏剤、生分解性(例えば、吸収性ゲルスポンジ、コラーゲン)及び非生分解性(例えば、シリコーン)インプラント、ウェーハ、レンズ、及び粒子系が挙げられる。製剤は、また、イオントフォレーゼで送達されてもよい。
眼/耳投与用の製剤は、即時放出及び/または調節放出になるように製剤化されてもよい。放出調節製剤は、遅延放出、徐放性、パルス放出、制御放出、標的放出、またはプログラム放出を含む。
6.治療用途
一実施形態では、本発明のポリプレックス:ポリマー組成物は、治療的処置に使用されてもよい。そのような組成物は、本明細書では、場合により、治療用組成物と呼ばれる。
一実施形態では、本発明のポリプレックス:ポリマー組成物は、治療的処置に使用されてもよい。そのような組成物は、本明細書では、場合により、治療用組成物と呼ばれる。
以下で考察されるように、本発明の治療用タンパク質は、治療用核酸を含む本発明のポリプレックス:ポリマー組成物により生成される。以下に記載される本タンパク質の使用は、そのようなタンパク質の使用に影響を与える本ポリプレックス:ポリマー組成物の使用を指す。
本発明での使用が企図される治療用タンパク質は、多種多様な活性を有し、多種多様な障害の処置での使用を見出す。本発明の治療用タンパク質の活性化の以下の記載、及び治療用タンパク質で治療可能な適応は、例示的であり、網羅的であることが意図されない。「対象」という用語は、哺乳動物が好ましく、ヒトが特に好ましい、動物を指す。
別の実施形態では、本発明の治療用組成物は、治療用タンパク質をコードしない治療用核酸、例えば、治療用RNAを含む。例えば、疾患及び/または望ましくない細胞または生理学的状態の機序に関与する遺伝子を標的とする治療用RNAを選択することにより、本組成物は、幅広い疾患及び状態の処置に使用されてもよい。本組成物は、使用される治療用RNAが標的選択の範囲に関して限定されないような特徴のものである。従って、本組成物は、好適な標的粘膜組織が関与する任意の疾患または状態での使用を見出す。
治療用の実施形態の特定の非限定例が以下に記載される。いくつかの場合では、治療的実施形態は、非粘膜標的組織、細胞、または器官に作用することが意図される。治療効果が非粘膜である場合、本明細書に記載のポリプレックス:ポリマー組成物が接触する細胞または組織は粘膜であり、治療作用は、粘膜標的の遠位にあることが理解される。例えば、粘膜細胞は、ホルモンまたは他の治療薬を産生及び分泌するためにトランスフェクトすることができる。
6.1.高血糖症及び体重
治療用タンパク質は、インスリン及びインスリンアナログを含む。真性糖尿病は、膵臓β細胞からのインスリン産生の欠如(1型)または不十分(2型)により引き起こされる衰弱性代謝性疾患である(Unger,R.H.et al.,Williams Textbook of Endocrinology Saunders,Philadelphia(1998))。ベータ細胞は、食事後の放出のためにインスリンを製造及び貯蔵する特殊な内分泌細胞であり(Rhodes,et.al.J.Cell Biol.105:145(1987))、インスリンは、血液から必要とされる組織へのグルコースの移動を促進するホルモンである。糖尿病患者は、頻繁に血糖レベルを監視しなければならず、多くは、存続するために毎日複数回のインスリン注射を必要とする。しかし、そのような患者がインスリン注射により理想的な血糖値に達することはめったにない(Turner,R.C.et al.JAMA 281:2005(1999))。さらに、インスリンレベルの長期上昇は、低血糖ショック及びインスリンに対する身体の応答の脱感作などの有害な副作用をもたらし得る。従って、糖尿病患者は、依然として、心血管疾患、腎疾患、失明、神経損傷、及び創傷治癒障害などの長期合併症を発症する(UK Prospective Diabetes Study(UKPDS)Group,Lancet 352,837(1998))。
治療用タンパク質は、インスリン及びインスリンアナログを含む。真性糖尿病は、膵臓β細胞からのインスリン産生の欠如(1型)または不十分(2型)により引き起こされる衰弱性代謝性疾患である(Unger,R.H.et al.,Williams Textbook of Endocrinology Saunders,Philadelphia(1998))。ベータ細胞は、食事後の放出のためにインスリンを製造及び貯蔵する特殊な内分泌細胞であり(Rhodes,et.al.J.Cell Biol.105:145(1987))、インスリンは、血液から必要とされる組織へのグルコースの移動を促進するホルモンである。糖尿病患者は、頻繁に血糖レベルを監視しなければならず、多くは、存続するために毎日複数回のインスリン注射を必要とする。しかし、そのような患者がインスリン注射により理想的な血糖値に達することはめったにない(Turner,R.C.et al.JAMA 281:2005(1999))。さらに、インスリンレベルの長期上昇は、低血糖ショック及びインスリンに対する身体の応答の脱感作などの有害な副作用をもたらし得る。従って、糖尿病患者は、依然として、心血管疾患、腎疾患、失明、神経損傷、及び創傷治癒障害などの長期合併症を発症する(UK Prospective Diabetes Study(UKPDS)Group,Lancet 352,837(1998))。
本発明の方法により治療可能な障害は、インスリン依存性(1型)または非依存性(2型)糖尿病などの高血糖状態、及び高血糖状態と関連するか、またはそれに起因する生理学的状態または障害を含む。従って、本発明の方法により治療可能な高血糖状態は、また、慢性または急性高血糖症(例えば、糖尿病)と関連する組織病理学的変化を含む。特定例としては、膵臓の変性(β細胞破壊)、腎尿細管石灰化、肝臓の変性、眼の損傷(糖尿病性網膜症)、糖尿病足、口及び歯茎などの粘膜の潰瘍、過剰な出血、血液凝固または創傷治癒の遅延、ならびに冠状動脈性心臓病、脳卒中、末梢血管疾患、脂質異常症、高血圧、及び肥満症のリスクの増加が挙げられる。
本組成物は、グルコースの減少、耐糖能を改善、高血糖状態の処置(例えば、糖尿病)、または高血糖状態と関連するか、もしくはそれに起因する生理学的障害の処置に有用である。そのような障害としては、例えば、糖尿病性ニューロパシー(自律性)、腎症(腎障害)、皮膚感染症及び他の皮膚障害、(例えば、糖尿病性カルブンケルにつながる)傷害または創傷の治癒の減速または遅延、失明につながる可能性がある眼の損傷(網膜症、白内障)、糖尿病足、及び加速性歯周炎が挙げられる。そのような障害としては、冠状動脈性心臓病、脳卒中、末梢血管疾患、脂質異常症、高血圧、及び肥満症を発症するリスクの増加も挙げられる。
本明細書で使用される場合、「高血糖性」または「高血糖症」という用語は、対象の状態に関して使用される場合、対象の血液中に存在する一過性または慢性の異常に高いレベルのグルコースを意味する。状態は、対象が、正常な対象に通常見出されない耐糖能異常または上昇したグルコースの状態(例えば、糖尿病を発症するリスクのある耐糖能異常の亜糖尿病対象、または糖尿病対象)を示すように、グルコース代謝または吸収の遅延により引き起こされる可能性がある。空腹時血漿中グルコース(FPG)レベルは、正常血糖の場合、約110mg/dl未満、グルコース代謝の悪化の場合、110~126mg/dl、糖尿病患者の場合、約126mg/dl超である。
腸粘膜組織でタンパク質を産生することで治療可能な障害は、肥満症または望ましくない体重も含む。レプチン、コレシストキニン、PYY、及びGLP-1は、空腹感を低減させるか、エネルギー消費を増加させるか、体重減少を誘導するか、または正常なグルコース恒常性を提供する。従って、様々な実施形態では、肥満症または望ましくない体重、または高血糖症を処置する本発明の方法は、レプチン、コレシストキニン、PYY、またはGLP-1をコードする治療用核酸の使用を含む。別の実施形態では、グレリンを標的とする治療用RNAが使用される。グレリンは、食欲及び空腹感を増加させる。従って、様々な実施形態では、肥満症または望ましくない体重、または高血糖症を処置するための本発明の方法は、グレリンを標的としてその発現を減少させる、治療用RNAの使用を含む。処置可能な障害は、通常は、肥満症と関連するもの、例えば、血清中/血漿中LDL、VLDL、トリグリセリド、コレステロールの異常な上昇、血管の狭窄または閉塞につながるプラーク形成、高血圧症/脳卒中、冠状動脈性心臓病などのリスクの増加、も含む。
本明細書で使用される場合、「肥満」または「肥満症」という用語は、年齢及び性別が一致する正常な対象と比較して、体重が少なくとも30%増加する対象を指す。「望ましくない体重」は、一致する正常な対象よりも体重が1%~29%多い対象、及び体重を減少させるか、または体重の増加を予防することを望む体重に関して正常である対象を指す。
一実施形態では、本発明の治療用タンパク質は、グルカゴンアンタゴニストである。グルカゴンは、膵島におけるβ細胞により産生されるペプチドホルモンであり、グルコース代謝の主要調節因子である(Unger R.H.& Orci L.N.Eng.J.Med.304:1518(1981);Unger R.H.Diabetes 25:136(1976))。インスリンと同様に、血糖濃度は、グルカゴン分泌を媒介する。しかし、インスリンとは対照的に、グルカゴンは、血糖値の低下に応答して分泌される。それ故、グルカゴンの循環濃度は、空腹時に最も高く、食事中に最も低い。グルカゴンレベルが上昇して、インスリンがグルコース貯蔵を促進するのを抑制し、血中にグルコースを放出するように肝臓を刺激する。グルカゴンアンタゴニストの具体例は、[des-His1、des-Phe6、Glu9]グルカゴン-NH2である。ストレプトゾトシン糖尿病ラットは、このグルカゴン拮抗薬の静脈内ボーラス(0.75μg/g体重)から15分以内に血糖レベルが37%低下した(Van Tine B.A.et.al.Endocrinology 137:3316(1996))。別の実施形態では、本発明は、膵臓からのグルカゴン産生のレベルを減少させる治療用RNAの使用を含む、糖尿病または高血糖症を処置するための方法を提供する。
別の実施形態では、高血糖状態または望ましくない体重(例えば、肥満)を処置するために有用な本発明の治療用タンパク質は、グルカゴン様ペプチド-1(GLP-1)である。GLP-1は、食事中に腸内のL細胞から放出されるホルモンであり、これは、インスリン分泌を増加させるために膵臓のβ細胞を刺激する。GLP-1は、肥満症及び糖尿病を処置するための魅力的な治療薬となる追加の活性を有する。例えば、GLP-1は、胃内容物排出を低減させ、食欲を抑制し、グルカゴン濃度を低減し、β細胞量を増加させ、グルコース依存的にインスリン生合成及び分泌を刺激し、組織のインスリンに対する感受性を増加させる可能性がある(Kieffer T.J.,Habener J.F.Endocrin.Rev.20:876(2000))。それ故、食事と一致するように腸内のGLP-1の調節された放出は、高血糖状態または望ましくない体重に対して治療上の利益を提供し得る。ジペプチジルペプチダーゼIV(DPP IV)に耐性のあるGLP-1アナログは、より長い作用期間及び改善された治療効果を提供する。従って、GLP-1アナログは、好ましい治療用ポリペプチドである。別の実施形態では、本発明は、DPP IVのレベルを減少させる治療用RNAの使用を含む、糖尿病または高血糖症を処置するための方法を提供する。
別の実施形態では、高血糖状態を処置するのに有用な本発明の治療用タンパク質は、ホルモンレジスチンに対するアンタゴニストである。レジスチンは、食事誘導性及び遺伝的形態の肥満症において発現が上昇する脂肪細胞由来因子である。循環レジスチンの中和は、肥満マウスの血糖値及びインスリン作用を改善する。逆に、正常なマウスにレジスチンを投与すると、耐糖能及びインスリン作用が損なわれる(Steppan CM et.al.Nature 409:307(2001))。それ故、腸内のレジスチンの生物学的効果に拮抗するタンパク質の産生は、肥満症に関連するインスリン抵抗性及び高血糖状態の効果的な治療法を提供し得る。別の実施形態では、本発明は、脂肪組織におけるレジスチン発現のレベルを減少させる、治療用RNAの使用を含む、糖尿病または高血糖症を処置するための方法を提供する。
別の実施形態では、高血糖状態または望ましくない体重(例えば、肥満症)を処置するのに有用な本発明の治療用ポリペプチドは、レプチンである。レプチンは、主に脂肪細胞により産生されるが、胃の中で食事に応じて少量も産生される。レプチンは、脂肪細胞の代謝及び体重に関する情報を脳内の食欲センターに伝え、食物摂取量の低減をシグナル伝達し(満腹感を促進し)、身体のエネルギー消費量を増加させる。
別の実施形態では、高血糖状態または望ましくない体重(例えば、肥満症)を処置するのに有用な本発明の治療用ポリペプチドは、脂肪細胞補体関連タンパク質(Acrp30)のC末端球状頭部ドメインである。Acrp30は、分化した脂肪細胞により産生されるタンパク質である。球状頭部ドメインからなるAcrp30のタンパク質分解切断産物をマウスに投与すると、大幅な体重減少につながる(Fruebis J.et al.Proc.Natl Acad.Sci USA 98:2005(2001))。
別の実施形態では、高血糖状態または望ましくない体重(例えば、肥満症)を処置するのに有用な本発明の治療用ポリペプチドは、コレシストキニン(CCK)である。CCKは、腸内の特定の栄養素に応答して腸から分泌される胃腸ペプチドである。CCK放出は、消費された食物量に比例し、食事を終了することを脳にシグナル伝達をすると考えられる(Schwartz M.W.et.al.Nature 404:661-71(2000))。従って、CCKの上昇は、食事のサイズを低減し、体重減少または体重安定化を促進し得る(すなわち、体重増加の増加を防止または抑制する)。
PYYに関しては、例えば、le Roux et al.,Proc Nutr Soc.2005 May;64(2):213-6。
6.2.免疫障害
一実施形態では、本発明の治療用組成物は、免疫調節活性を有する。例えば、本発明の治療用ポリペプチドは、免疫細胞の増殖、分化、もしくは動員(走化性)を活性化または抑制することにより、免疫系の欠損または障害を処置するのに有用であり得る。免疫細胞は、造血のプロセスを通して発達し、これは、多能性幹細胞から骨髄性(血小板、赤血球、好中球、及びマクロファージ)ならびにリンパ系(B及びTリンパ球)細胞を産生する。これらの免疫不全または障害の病因は、遺伝性、体細胞性、例えば、がんもしくはいくつかの自己免疫障害、(化学療法または毒素による)後天性、または感染性であってよい。
一実施形態では、本発明の治療用組成物は、免疫調節活性を有する。例えば、本発明の治療用ポリペプチドは、免疫細胞の増殖、分化、もしくは動員(走化性)を活性化または抑制することにより、免疫系の欠損または障害を処置するのに有用であり得る。免疫細胞は、造血のプロセスを通して発達し、これは、多能性幹細胞から骨髄性(血小板、赤血球、好中球、及びマクロファージ)ならびにリンパ系(B及びTリンパ球)細胞を産生する。これらの免疫不全または障害の病因は、遺伝性、体細胞性、例えば、がんもしくはいくつかの自己免疫障害、(化学療法または毒素による)後天性、または感染性であってよい。
本発明の治療用組成物は、造血細胞の欠損または障害を処置するのに有用であり得る。例えば、本発明の治療用ポリペプチドは、特定の(または多くの)タイプの造血細胞の減少と関連する疾患を処置する目的で、多能性幹細胞を含む造血細胞の分化または増殖を増加させるために使用することができる。免疫不全症候群の例としては、血液タンパク質障害(例えば、無ガンマグロブリン血症、異常ガンマグロブリン血症)、毛細血管拡張性運動失調症、分類不能型免疫不全、ディジョージ症候群、HIV感染症、HTLV-BLV感染症、白血球接着不全症候群、リンパ球減少症、食細胞の殺菌機能障害、重症複合免疫不全症(SCID)、ウィスコット-アルドリッチ障害、貧血、血小板減少症、またはヘモグロビン尿症が挙げられるが、これらに限定されない。
本発明の治療用組成物は、また、自己免疫障害を処置するのに有用であり得る。多くの自己免疫疾患は、免疫細胞による異物としての自己の不適切な認識に起因する。この不適切な認識は、宿主組織の破壊につながる免疫応答をもたらす。従って、免疫応答、特に、T細胞の増殖、分化、または走化性を阻害する本発明の治療用組成物の投与は、自己免疫障害を予防するのに効果的な治療法であってよい。
本発明で処置することができる自己免疫障害の例としては、アディソン病、溶血性貧血、抗リン脂質症候群、関節リウマチ、皮膚炎、アレルギー性脳脊髄炎、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、多発性硬化症、重症筋無力症、神経炎、眼炎、水疱性類天疱瘡、天疱瘡、多腺性内分泌障害、紫斑病、ライター病、スチィッフマン症候群、自己免疫性甲状腺炎、全身性エリテマトーデス、自己免疫性肺炎症、ギランバール症候群、インスリン依存性糖尿病、クローン病、潰瘍性大腸炎、及び自己免疫性炎症性眼疾患が挙げられるが、これらに限定されない。
同様に、喘息(特にアレルギー性喘息)または他の呼吸器系の問題などのアレルギー反応及び状態もまた、本発明の治療用組成物により処置され得る。さらに、これらの分子は、アナフィラキシー、抗原分子に対する過敏症、または血液型の不適合性を処置するために使用することができる。
本発明の治療用組成物は、また、臓器拒絶反応または移植片対宿主病(GVHD)を処置及び/または予防するために使用さてもよい。臓器拒絶反応は、免疫応答を介した移植組織の宿主免疫細胞破壊により生じる。同様に、免疫応答もGVHDに関与するが、この場合、外来移植された免疫細胞は、宿主組織を破壊する。免疫応答、特にT細胞の増殖、分化、または走化性を阻害する本発明の治療用組成物の投与は、臓器拒絶またはGVHDを予防するのに効果的な治療法であってよい。
同様に、本発明の治療用組成物は、また、炎症を調節するために使用されてもよい。例えば、治療用ポリペプチドは、炎症応答に関与する細胞の増殖及び分化を抑制し得る。これらの分子は、感染症と関連する炎症(例えば、敗血症性ショック、敗血症、または全身性炎症応答症候群(SIRS))、虚血再潅流障害、エンドトキシン致死性、関節炎、膵炎、補体媒介性超急性拒絶反応、腎炎、サイトカインもしくはケモカイン誘発性肺損傷、炎症性腸疾患(IBD)、クローン病を含む、または、サイトカイン(例えば、TNFもしくはIL-1)の過剰産生に起因する、慢性及び急性状態の両方の炎症状態を処置するために使用することができる。一実施形態では、TNFαを標的とする治療的RNAは、炎症を処置するために、本組成物中で使用される。別の好ましい実施形態では、IL-1を標的とする治療用RNAは、炎症を処置するために本組成物において使用される。siRNA治療用RNAが特に好ましい。本発明における処置のための目的の炎症性障害としては、慢性閉塞性肺障害(COPD)、間質性膀胱炎、及び炎症性腸疾患が挙げられるが、これらに限定されない。
6.3.凝固障害
いくつかの実施形態では、本発明の治療用組成物は、また、止血(出血の停止)または血栓溶解活性(血栓形成)を調節するために使用されてもよい。例えば、止血または血栓溶解活性を増大させることにより、本発明の治療用組成物は、血液凝固障害(例えば、無フィブリノゲン血症、因子欠損)、血小板障害(例えば、血小板減少症)、または外傷、手術、あるいはその他の原因から生じる創傷を処置するために使用することができる。あるいは、止血または血栓溶解活性を減少させ得る本発明の治療用組成物は、凝固を抑制または溶解するために使用することができる。これらの治療用組成物は、心臓発作(梗塞)、脳卒中、または瘢痕の処置に重要であり得る。一実施形態では、本発明の治療用ポリペプチドは、血友病または他の凝固/凝固障害(例えば、第VIII因子、第IX因子、または第X因子)の処置に有用な血栓形成因子である。
いくつかの実施形態では、本発明の治療用組成物は、また、止血(出血の停止)または血栓溶解活性(血栓形成)を調節するために使用されてもよい。例えば、止血または血栓溶解活性を増大させることにより、本発明の治療用組成物は、血液凝固障害(例えば、無フィブリノゲン血症、因子欠損)、血小板障害(例えば、血小板減少症)、または外傷、手術、あるいはその他の原因から生じる創傷を処置するために使用することができる。あるいは、止血または血栓溶解活性を減少させ得る本発明の治療用組成物は、凝固を抑制または溶解するために使用することができる。これらの治療用組成物は、心臓発作(梗塞)、脳卒中、または瘢痕の処置に重要であり得る。一実施形態では、本発明の治療用ポリペプチドは、血友病または他の凝固/凝固障害(例えば、第VIII因子、第IX因子、または第X因子)の処置に有用な血栓形成因子である。
6.4.過剰増殖性障害
一実施形態では、本発明の治療用組成物は、細胞増殖を調節することが可能である。そのような治療用ポリペプチドは、新生物を含む過剰増殖性障害を処置するために使用することができる。
一実施形態では、本発明の治療用組成物は、細胞増殖を調節することが可能である。そのような治療用ポリペプチドは、新生物を含む過剰増殖性障害を処置するために使用することができる。
本発明の治療組成物により処置することができる過剰増殖性障害の例としては、腹部、骨、乳房、消化器系、肝臓、膵臓、腹膜、内分泌腺(副腎、副甲状腺、下垂体、精巣、卵巣、胸腺、甲状腺)、眼、頭頸部)、神経(中枢及び末梢系)、リンパ系、骨盤、皮膚、軟組織、脾臓、胸郭、及び泌尿生殖器が挙げられるが、これらに限定されない。
同様に、他の過剰増殖性障害は、本発明の治療用組成物で処置することもできる。そのような過剰増殖性障害の例としては、上記の臓器系に位置する新生物に加えて、高ガンマグロブリン血症、リンパ球増殖性障害、異常蛋白血症、紫斑病、サルコイドーシス、セザリー症候群、ワルデンストレームマクログロブリン血症、ゴーチャー病、組織球症、及び他の任意の過剰増殖性疾患が挙げられるが、これらに限定されない。
循環器系への送達は、多種多様な組織への治療用タンパク質のアクセスを提供する。あるいは、本発明の治療用組成物は、過剰増殖性障害を抑制し得る他の細胞の増殖を刺激してもよい。
例えば、免疫応答を増加させることにより、特に、過剰増殖性障害の抗原特性を増加させることにより、またはT細胞を増殖、分化、もしくは動員させることにより、過剰増殖性障害を処置することができる。この免疫応答は、既存の免疫応答を増強するか、または新しい免疫応答を開始することにより、増加し得る。あるいは、免疫応答を減少させることは、また、例えば、化学療法剤を用いて、過剰増殖性障害を処置する方法であってよい。
6.5.感染症
一実施形態では、本発明の治療用組成物は、感染症を処置するために使用することができる。例えば、免疫応答を増加させることにより、特に、B細胞及び/またはT細胞の増殖及び分化を増加させることにより、感染症が処置されてもよい。免疫応答は、既存の免疫応答を増強させることにより、または新しい免疫応答を開始することにより、増加し得る。あるいは、本発明の治療用組成物は、また、直接、必ずしも免疫応答を誘発することなく、感染因子を阻害してもよい。
一実施形態では、本発明の治療用組成物は、感染症を処置するために使用することができる。例えば、免疫応答を増加させることにより、特に、B細胞及び/またはT細胞の増殖及び分化を増加させることにより、感染症が処置されてもよい。免疫応答は、既存の免疫応答を増強させることにより、または新しい免疫応答を開始することにより、増加し得る。あるいは、本発明の治療用組成物は、また、直接、必ずしも免疫応答を誘発することなく、感染因子を阻害してもよい。
ウイルスは、本発明の治療用組成物により処置することができる疾患または症状を引き起こす可能性がある感染性因子の一例である。ウイルスの例としては、以下のDNA及びRNAウイルス科:アルボウイルス科、アデノウイルス科、アルテリウイルス科、ビルナウイルス科、ブニヤウイルス科、カリシウイルス科、サーコウイルス科、コロナウイルス科、フラビウイルス科、ヘパドナウイルス科(肝炎)、ヘルペスウイルス科(例えば、サイトメガロウイルス科、単純ヘルペス、帯状疱疹)、モノネガウイルス科(例えば、パラミクソウイルス科、麻疹ウイルス属、ラブドウイルス科)、オルトミクソウイルス科(例えば、インフルエンザ)、パポバウイルス科、パルボウイルス科、ピコルナウイルス科、ポックスウイルス科(例えば、天然痘または痘疹)、レオウイルス科(例えば、ロタウイルス)、レトロウイルス科(例えば、HTLV-I、HTLV-II、レンチウイルス)、及びトガウイルス科(例えば、ルビウイルス)が挙げられるが、これらに限定されない。これらのファミリー内に入るウイルスは、限定されないが、関節炎、細気管支炎脳炎、脳炎、眼感染症(例えば、結膜炎、角膜炎)、慢性疲労症候群、肝炎(A、B、C、E、慢性活動性、デルタ)、髄膜炎、日和見感染症(例えば、AIDS)、肺炎、バーキットリンパ腫、水痘、出血熱、麻疹、おたふく風邪、パラインフルエンザ、狂犬病、感冒、ポリオ、白血病、風疹、性感染症、皮膚病(例えば、カポジ、疣)、及びウイルス血症を含む、様々な疾患または症状を引き起こし得る。本発明の治療用組成物は、これらの症状または疾患のいずれかを処置するために使用することができる。
同様に、疾患または症状を引き起こす可能性があり、本発明の治療組成物で処置することができる細菌または真菌病原微生物としては、以下のグラム陰性及びグラム陽性細菌科ならびに真菌が挙げられるが、これらに限定されない:放線菌目(例えば、コリネバクテリウム属、マイコバクテリウム属、ノカルディア属)、バシラス科(例えば、炭疽菌、クロストリジウム属)、バクテロイデス科、ブラストマイコーシス、ボルデテラ属、ボレリア属、ブルセラ菌、カンジダ症、カンピロバクター、コクシジオイデス症、クリプトコッカス症、皮膚真菌症、腸内細菌科(クレブシエラ菌、サルモネラ菌、セラシア属、エルシニア属)、エリジペロスリックス属、ヘリコバクター属、レジオネラ症、レプトスピラ症、リステリア菌、マイコプラズマ目、ナイセリア科、(例えば、アシネトバクター、淋病、髄膜炎菌)、パスツレラ症(例えば、アクチノバシラス属、ヘモフィルス属、パスツレラ属)、シュードモナス属、リケッチア科、クラミジア科、梅毒、及びブドウ球菌。これらの細菌または真菌科は、以下の疾患または症状を引き起こす可能性がある:限定されないが、菌血症、心内膜炎、眼感染症(結膜炎、結核、ブドウ膜炎)、歯肉炎、日和見感染症(例えば、AIDS関連感染症)、爪甲周囲炎、プロテーゼ関連感染症、ライター病、気道感染症、例えば、百日咳または蓄膿、敗血症、ライム病、猫引っかき病、赤痢、パラチフス、食中毒、腸チフス、肺炎、淋病、髄膜炎、クラミジア、梅毒、ジフテリア、ハンセン病、ヨーネ病、結核、狼瘡、ボツリヌス中毒症、壊疽、破傷風、膿痂疹、リウマチ熱、猩紅熱、性感染症、皮膚疾患(例えば、蜂巣炎、皮膚真菌症)、毒血症、尿路感染症、創傷感染症など。本発明の治療用組成物は、これらの症状または疾患のいずれかを処置するために使用することができる。
さらに、本発明の治療組成物で処置することができる疾患または症状を引き起こす寄生性病原体としては、以下の科が挙げられるが、これらに限定されない:アメーバ症、バベシア症、コクシジウム症、クリプトスポリジウム症、ジエンタモエビア症、媾疫、外部寄生虫、ジアルジア症、蠕虫症、リーシュマニア症、タイレリア症、トキソプラズマ症、トリパノソーマ症、及びトリコモナス属。これらの寄生虫は、限定されないが、疥癬、トキソプラズマ症、眼感染症、腸疾患(例えば、赤痢、ランブル鞭毛虫症)、肝臓病、肺疾患、日和見感染症(例えば、AIDS関連)、マラリア、妊娠合併症、及びトキソプラズマ症を含む様々な病気または症状を引き起こす可能性がある。本発明の治療用組成物は、これらの症状または疾患のいずれかを処置するために使用することができる。
6.6.再生
本発明の治療用組成物は、細胞を分化、増殖、及び誘引して、粘膜組織または標的粘膜細胞もしくは組織に隣接する組織の再生を促進するために使用することができる。(Science 276:59-87(1997)を参照のこと。)組織の再生は、先天性の欠陥、外傷(創傷、火傷、切開、または潰瘍)、年齢、疾患(例えば、骨粗鬆症、変形性関節症、歯周病、肝不全)、美容整形手術を含む手術、線維化、再潅流障害、または全身性サイトカイン損傷により損傷した組織を修復、置換、または保護するために使用することができる。
本発明の治療用組成物は、細胞を分化、増殖、及び誘引して、粘膜組織または標的粘膜細胞もしくは組織に隣接する組織の再生を促進するために使用することができる。(Science 276:59-87(1997)を参照のこと。)組織の再生は、先天性の欠陥、外傷(創傷、火傷、切開、または潰瘍)、年齢、疾患(例えば、骨粗鬆症、変形性関節症、歯周病、肝不全)、美容整形手術を含む手術、線維化、再潅流障害、または全身性サイトカイン損傷により損傷した組織を修復、置換、または保護するために使用することができる。
本発明の治療用組成物は、限定されないが、臓器(例えば、膵臓、肝臓、腸、腎臓、皮膚、内皮)、筋肉(平滑筋、骨格筋、または心筋)、血管(血管内皮を含む)、神経、造血、及び骨格(骨、軟骨、腱、及び靭帯)組織を含む、様々な組織の再生を促進し得る。好ましくは、再生は、少量の瘢痕を生じるか、または瘢痕なしで起こる。再生は、血管新生も含み得る。
さらに、本発明の治療用組成物は、治癒が困難な組織の再生を増加させ得る。例えば、腱/靭帯の再生が増えると、損傷後の回復時間が短縮されるであろう。本発明の治療用組成物は、損傷を回避するために予防的に使用することもできる。処置することができる特定の疾患としては、腱炎、手根管症候群、及び他の腱または靭帯の欠陥が挙げられる。非治癒性創傷の組織再生のさらなる例としては、褥瘡潰瘍、血管不全と関連する潰瘍、外科的及び外傷性創傷が挙げられる。
同様に、神経及び脳組織は、また、本発明の治療用組成物を使用して神経細胞を増殖及び分化させることにより再生することができる。本方法を使用して処置することができる疾患としては、中枢及び末梢神経系疾患、神経障害、または機械的及び外傷性障害(例えば、脊髄障害、頭部外傷、脳血管疾患、及び発作)が挙げられる。具体的には、末梢神経損傷、末梢神経障害(例えば、化学療法または他の医学的治療に起因)、限局性神経障害、及び中枢神経系疾患(例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、及びシャイドレーガー症候群)と関連する疾患は、全て、本発明の治療用組成物を使用して処置することができる。CNS障害に関して、血液脳関門を破壊する方法、及びCNSへの輸送を提供する部分に治療薬を結合させる方法を含む、脳組織への治療的アクセスを容易にするための多くの手段が当該技術分野で既知である。一実施形態では、治療用核酸は、融合タンパク質をコードするように操作され、この融合タンパク質は、輸送部分及び治療用タンパク質を含む。
6.7.走化性
一実施形態では、本発明の治療用組成物は、走化性を調節し得る。例えば、一実施形態では、本発明の治療用ポリペプチドは、走化性活性を有する。走化性分子は、体内の特定の部位に、例えば、炎症、感染症、または過剰増殖部位に、細胞(例えば、単球、線維芽細胞、好中球、T細胞、肥満細胞、好酸球、上皮細胞、及び/または内皮細胞)を誘引または動員する。次に、動員された細胞は、特定の外傷または異常を撃退及び/または治癒することができる。
一実施形態では、本発明の治療用組成物は、走化性を調節し得る。例えば、一実施形態では、本発明の治療用ポリペプチドは、走化性活性を有する。走化性分子は、体内の特定の部位に、例えば、炎症、感染症、または過剰増殖部位に、細胞(例えば、単球、線維芽細胞、好中球、T細胞、肥満細胞、好酸球、上皮細胞、及び/または内皮細胞)を誘引または動員する。次に、動員された細胞は、特定の外傷または異常を撃退及び/または治癒することができる。
例えば、本発明の治療用ポリペプチドは、特定の細胞の走化性活性を増加させ得る。次に、これらの走化性分子は、体内の特定の場所を標的とする細胞数を増加させることにより、炎症、感染症、過剰増殖性障害、または任意の免疫系障害を処置するために使用することができる。例えば、走化性分子は、損傷した場所に免疫細胞を誘引することにより、組織への創傷及び他の外傷を処置するために使用することができる。本発明の走化性分子は、創傷を処置するために使用することができる線維芽細胞も誘引し得る。
本発明の治療用組成物が走化性活性を阻害し得ることもまた企図される。これらの治療用組成物は、また、障害を処置するために使用することができる。従って、本発明の治療用組成物は、走化性の阻害剤として使用することができる。
標的組織の付近で活性化されるプロ(pro-)治療用タンパク質が、特に、使用に好ましい。
使用が企図される追加の治療用ポリペプチドとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない:成長障害または消耗症候群を処置する成長因子(例えば、成長ホルモン、インスリン様成長因子-1、血小板由来成長因子、上皮成長因子、酸性及び塩基性線維芽細胞成長因子、形質転換成長因子-βなど);ならびに外来抗原もしくは病原体(例えば、H.Pylori)に対して対象の受動免疫もしくは保護を提供するか、またはがん、関節炎、もしくは心血管疾患の処置を提供する抗体(例えば、ヒトもしくはヒト化);サイトカイン、インターフェロン(例えば、インターフェロン(IFN)、IFN-α2b及び2α、IFN-αN1、IFN-β1b、IFN-ガンマ)、インターロイキン(例えば、IL-1~IL-10)、腫瘍壊死因子(TNF-αTNF-β)、ケモカイン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(GM-CSF)、ポリペプチドホルモン、抗菌性ポリペプチド(例えば、抗菌性、抗真菌性、抗ウイルス性、及び/または抗寄生虫ポリペプチド)、酵素(例えば、アデノシンデアミナーゼ)、ゴナドトロフィン、ケモタクチン、脂質結合タンパク質、フィルガスチム(Neupogen)、ヘモグロビン、エリスロポイエチン、インスリントロピン、イミグルセラーゼ、サルブラモスティム、組織プラスミノーゲンアクチベーター(tPA)、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、フェニルアラニンホルモンリアーゼ、脳由来神経栄養因子(BDNF)、神経成長因子(NGF)、トロンボポイエチン(TPO)、スーパーオキシドジスムターゼ(SOD)、アデノシンデアミダーゼ、カタラーゼ、カルシトニン、エンドセリン、L-アスパラギナーゼペプシン、ウリカーゼ、トリプシン、キモトリプシン、エラスターゼ、カルボキシペプチダーゼ、ラクターゼ、スクラーゼ、内因性因子、副甲状腺ホルモン(PTH)様ホルモン、可溶性CD4、ならびに抗体及び/またはその抗原結合フラグメント(例えば、FAb)(例えば、オルソクローンOKT-e(抗CD3)、GPIIb/IIaモノクローナル抗体)。さらに、そのような因子をコードする核酸を標的とする治療用RNAが企図される。
6.8.ワクチン
一実施形態では、本発明は、患者にワクチン接種するための方法を提供する。方法は、所望のエピトープを生成することが可能な本発明の組成物を投与することを含む。好ましい実施形態では、組成物は、エピトープを含むタンパク質を発現することが可能な治療用核酸構築物を含む。
一実施形態では、本発明は、患者にワクチン接種するための方法を提供する。方法は、所望のエピトープを生成することが可能な本発明の組成物を投与することを含む。好ましい実施形態では、組成物は、エピトープを含むタンパク質を発現することが可能な治療用核酸構築物を含む。
6.9.化粧品用途
一実施形態では、本発明は、美容用途のためのDD-キトサン核酸ポリプレックスを提供する。本化粧品は、美容用途に適する製剤中にDD-キトサン核酸ポリプレックスを含む。
一実施形態では、本発明は、美容用途のためのDD-キトサン核酸ポリプレックスを提供する。本化粧品は、美容用途に適する製剤中にDD-キトサン核酸ポリプレックスを含む。
2.一般的な手順
2.1 二重誘導体化キトサンの調製
US9623112B2に従って、アルギニン及びグルコン酸で、キトサンを二重誘導体化(DD-キトサン、DD-X)した。
2.1 二重誘導体化キトサンの調製
US9623112B2に従って、アルギニン及びグルコン酸で、キトサンを二重誘導体化(DD-キトサン、DD-X)した。
2.2 二重誘導体化キトサン及びDNAポリプレックスの調製
US9623112B2及びUS8722646B2に従って、必要に応じて、様々なアミン対リン酸(N:P)モル比でプラスミドDNAベクターとともに、DD-キトサンをポリプレックス化した。必要に応じて、スクロース、トレハロース、またはマンニトールなどの追加の賦形剤が含まれていた。本明細書に示されるように、様々なプラスミドDNAベクターを試験した。
US9623112B2及びUS8722646B2に従って、必要に応じて、様々なアミン対リン酸(N:P)モル比でプラスミドDNAベクターとともに、DD-キトサンをポリプレックス化した。必要に応じて、スクロース、トレハロース、またはマンニトールなどの追加の賦形剤が含まれていた。本明細書に示されるように、様々なプラスミドDNAベクターを試験した。
2.3 PEG-ポリグルタミン酸(PEG-PGA)溶液の調製
一般に、必要に応じて最大40mg/mLの濃度で水または賦形剤溶液に、PEG-PGAを溶解した。得られたPEG-PGA溶液を、後続の製剤化のためのアミン対リン酸塩対アニオンのモル比(N:P:A)の望ましい最終比を得るために、必要なアニオン種(A、すなわち、グルタミン酸)の必要なモル濃度に希釈した。
一般に、必要に応じて最大40mg/mLの濃度で水または賦形剤溶液に、PEG-PGAを溶解した。得られたPEG-PGA溶液を、後続の製剤化のためのアミン対リン酸塩対アニオンのモル比(N:P:A)の望ましい最終比を得るために、必要なアニオン種(A、すなわち、グルタミン酸)の必要なモル濃度に希釈した。
2.4 PEG-ヒアルロン酸(PEG-HA)溶液の調製
一般に、PEG-HAを、40~100mg/mLの濃度で水に分配し、10分間超音波処理した。後続の製剤化のために、アミン対リン酸塩対アニオンモル比(N:P:A)の望ましい最終比を得るために、及びトレハロースの最終濃度が5%になるように、得られたPEG-HA溶液を、必要な10%のトレハロース中のアニオン種(A、すなわち、ヒアルロン酸)の必要濃度に希釈した。
一般に、PEG-HAを、40~100mg/mLの濃度で水に分配し、10分間超音波処理した。後続の製剤化のために、アミン対リン酸塩対アニオンモル比(N:P:A)の望ましい最終比を得るために、及びトレハロースの最終濃度が5%になるように、得られたPEG-HA溶液を、必要な10%のトレハロース中のアニオン種(A、すなわち、ヒアルロン酸)の必要濃度に希釈した。
2.5 PEG-ポリアスパラギン酸(PEG-PAA)溶液の調製
一般に、PEG-PAAを、40~100mg/mLの濃度で5%のトレハロースに分注し、10~15分間超音波処理した。必要に応じて、後続の製剤化のために、アミン対リン酸塩対アニオンモル比(N:P:A)の望ましい最終比を得るために、及びトレハロースの最終濃度が5%になるように、得られたPEG-PAA溶液を、必要な5%のトレハロース中のアニオン種(A、すなわち、アスパラギン酸)の必要濃度に希釈した。
一般に、PEG-PAAを、40~100mg/mLの濃度で5%のトレハロースに分注し、10~15分間超音波処理した。必要に応じて、後続の製剤化のために、アミン対リン酸塩対アニオンモル比(N:P:A)の望ましい最終比を得るために、及びトレハロースの最終濃度が5%になるように、得られたPEG-PAA溶液を、必要な5%のトレハロース中のアニオン種(A、すなわち、アスパラギン酸)の必要濃度に希釈した。
2.6 トレハロース溶液の調製
一般に、必要に応じて、トレハロースを、最大0.2g/mLの濃度で水に溶解させた。0.2umのフィルターを使用して、得られたトレハロースを濾過した。必要に応じて、トレハロース溶液を、後続の製剤化に必要な濃度に希釈した。
一般に、必要に応じて、トレハロースを、最大0.2g/mLの濃度で水に溶解させた。0.2umのフィルターを使用して、得られたトレハロースを濾過した。必要に応じて、トレハロース溶液を、後続の製剤化に必要な濃度に希釈した。
2.7 50mMのトリス(pH8)中のPAA溶液の調製
一般に、必要に応じて、PAAを、100mg/mLまたは20mg/mLの濃度で50mMのトリス(pH8)に溶解させた。必要に応じて、PAA溶液を50mMのトリス(pH8)で、その後の必要に応じた必要濃度に希釈した。
一般に、必要に応じて、PAAを、100mg/mLまたは20mg/mLの濃度で50mMのトリス(pH8)に溶解させた。必要に応じて、PAA溶液を50mMのトリス(pH8)で、その後の必要に応じた必要濃度に希釈した。
2.8 20mMのNaClの調製
46.75mgのNaClを40mLの水に溶解させる。0.2umのフィルターで溶液を濾過する。
46.75mgのNaClを40mLの水に溶解させる。0.2umのフィルターで溶液を濾過する。
2.9 模擬腸液(SIF)の調製
2.24mg/mLの濃度で水にFaSSIF V1粉末を溶解させることにより、FaSSIF V1溶液を調製した。pHが約6.6であることを確認した。1.79mg/mLの濃度で水にFaSSIFV2粉末を溶解させることにより、FaSSIFV2溶液を調製した。pHが約6.6であることを確認した。
2.24mg/mLの濃度で水にFaSSIF V1粉末を溶解させることにより、FaSSIF V1溶液を調製した。pHが約6.6であることを確認した。1.79mg/mLの濃度で水にFaSSIFV2粉末を溶解させることにより、FaSSIFV2溶液を調製した。pHが約6.6であることを確認した。
2.10 PEG-ポリアニオン(PEG-PA)
PEG-PAは、PEG-ポリグルタミン酸、PEG-ヒアルロン酸、またはPEG-ポリアスパラギン酸などのポリアニオンにコンジュゲートされたPEGの一般用語である。
PEG-PAは、PEG-ポリグルタミン酸、PEG-ヒアルロン酸、またはPEG-ポリアスパラギン酸などのポリアニオンにコンジュゲートされたPEGの一般用語である。
2.11 滴下によるPEG化ポリプレックスの調製
等量のポリプレックス溶液(0.1mL)を希釈PEG-PA溶液(0.1mL)に滴下することにより、PEG化ポリプレックスを調製する。
等量のポリプレックス溶液(0.1mL)を希釈PEG-PA溶液(0.1mL)に滴下することにより、PEG化ポリプレックスを調製する。
2.12 インライン混合によるPEG化ポリプレックスの調製
US9623112B2及びUS8722646B2に記載されているようなインライン混合装置を使用して、等量の希釈PEG-PA溶液をポリプレックス溶液と混合することにより、PEG化ポリプレックスを調製する。
US9623112B2及びUS8722646B2に記載されているようなインライン混合装置を使用して、等量の希釈PEG-PA溶液をポリプレックス溶液と混合することにより、PEG化ポリプレックスを調製する。
2.13 150mmolのPBS中のPEG化ポリプレックスの安定性
150mmolのPBS 300uLに、100uLのPEG化ポリプレックスを混合する。混合の0時間及び2時間で、粒径の直径を測定する。PEG化されていないポリプレックス対照と比較する。
150mmolのPBS 300uLに、100uLのPEG化ポリプレックスを混合する。混合の0時間及び2時間で、粒径の直径を測定する。PEG化されていないポリプレックス対照と比較する。
2.14 パーセントスーパーコイルDNA
スーパーコイルDNAの割合を測定する前に、過剰なPAAにさらすことにより、全DNAは、ポリプレックスまたはPEG化ポリプレックスから放出されなければならない。1μLの試料アリコート(0.1mg/mLのDNAの標的)を、10μLのPAA(50mMのトリス中100mg/mL)と混合し、37℃で30分間インキュベートした。放出後、DNAをアガロースゲル電気泳動にかける。
スーパーコイルDNAの割合を測定する前に、過剰なPAAにさらすことにより、全DNAは、ポリプレックスまたはPEG化ポリプレックスから放出されなければならない。1μLの試料アリコート(0.1mg/mLのDNAの標的)を、10μLのPAA(50mMのトリス中100mg/mL)と混合し、37℃で30分間インキュベートした。放出後、DNAをアガロースゲル電気泳動にかける。
2.15 PicoGreenによる製剤中の全DNA
PicoGreenアッセイを使用してDNAを測定する前に、全DNAは、過剰なPAAを使用してポリプレックスまたはPEG化ポリプレックスから放出されなければならない。10μLの試料アリコート(2ug/mLのDNAの標的)を、10μLのPAA(50mMのトリス中20mg/mL)と混合し、37℃で30分間インキュベートした。放出後、スーパーコイル状のDNAプラスミドを線状にするために、好適な制限酵素(RE)を使用して、DNAを消化する。PicoGreenアッセイでは、RE消化試料の10μLのアリコートは、190μLのPicoGreenワーキング溶液(Qubit ds DNA緩衝液:Qubit ds DNA PicoGreen試薬 199:1)と混合され、2分間インキュベートされ、蛍光について測定される(励起:485、発光カットオフ:515nm、発光:535nm)。結果は、参照DNA標準曲線に対して定量化される。
PicoGreenアッセイを使用してDNAを測定する前に、全DNAは、過剰なPAAを使用してポリプレックスまたはPEG化ポリプレックスから放出されなければならない。10μLの試料アリコート(2ug/mLのDNAの標的)を、10μLのPAA(50mMのトリス中20mg/mL)と混合し、37℃で30分間インキュベートした。放出後、スーパーコイル状のDNAプラスミドを線状にするために、好適な制限酵素(RE)を使用して、DNAを消化する。PicoGreenアッセイでは、RE消化試料の10μLのアリコートは、190μLのPicoGreenワーキング溶液(Qubit ds DNA緩衝液:Qubit ds DNA PicoGreen試薬 199:1)と混合され、2分間インキュベートされ、蛍光について測定される(励起:485、発光カットオフ:515nm、発光:535nm)。結果は、参照DNA標準曲線に対して定量化される。
2.16 遊離DNA
ポリプレックスへのDNA捕捉を検証するために、10μLの試料アリコート(1000ngのDNAの標的)を、2μLの6Xのローディングバッファーと混合し、ゲル電気泳動にかけた。
ポリプレックスへのDNA捕捉を検証するために、10μLの試料アリコート(1000ngのDNAの標的)を、2μLの6Xのローディングバッファーと混合し、ゲル電気泳動にかけた。
2.17 ゲル電気泳動
試料レーンに、記載の準備試料を入れた。標準レーンに、スーパーコイルDNAラダーを入れた。参照レーンに、2μLの参照DNA(200ngのDNA)+8μLの水+2μの6Xのローディングバッファーを入れた。1XのSYBRSafe DNA Stainを含有する0.8%のアガロースゲル上、100Vで75分間、試料を分離させた。ゲルをGelDocイメージングシステムでイメージングした。
試料レーンに、記載の準備試料を入れた。標準レーンに、スーパーコイルDNAラダーを入れた。参照レーンに、2μLの参照DNA(200ngのDNA)+8μLの水+2μの6Xのローディングバッファーを入れた。1XのSYBRSafe DNA Stainを含有する0.8%のアガロースゲル上、100Vで75分間、試料を分離させた。ゲルをGelDocイメージングシステムでイメージングした。
2.18 ポリプレックス及びPEG化ポリプレックスのナノ粒子サイジング
Zetasizer Nano光散乱装置を使用して、粒径の測定を行った。一般に、試料を希釈しないか、または10mMのNaClで最大20倍希釈し、使い捨てキュベットまたはZetasizerフォールドキャピラリーセル(最小値0.8mL)に入れた。3分間の測定を3回行う前に、試料を25℃で最大3分間インキュベートするように、Zetasizerをプログラムした。Z平均直径及び多分散度(PDI)を、標準偏差(n=3)で報告した。また、粘度及び屈折率に関する試料の組成物を考慮するように、Zetasizerをプログラムした。
Zetasizer Nano光散乱装置を使用して、粒径の測定を行った。一般に、試料を希釈しないか、または10mMのNaClで最大20倍希釈し、使い捨てキュベットまたはZetasizerフォールドキャピラリーセル(最小値0.8mL)に入れた。3分間の測定を3回行う前に、試料を25℃で最大3分間インキュベートするように、Zetasizerをプログラムした。Z平均直径及び多分散度(PDI)を、標準偏差(n=3)で報告した。また、粘度及び屈折率に関する試料の組成物を考慮するように、Zetasizerをプログラムした。
2.19 ポリプレックス及びPEG化ポリプレックスのゼータ電位
Zetasizer Nano光散乱装置を使用して、ゼータ電位測定を行った。一般に、10mMのNaClで希釈したPEG化ポリプレックスを除いて、希釈されていない試料を、Zetasizerフォールドキャピラリーセル(最小0.8mL)に入れた。測定を反復する前に、試料を25℃で最大3分間インキュベートするように、Zetasizerをプログラムした(反復数をZetasizerソフトウェアで自動的に決定した)。ゼータ電位値を標準偏差(n=3)で報告した。また、粘度及び誘電率に関する試料の最終組成物を考慮するように、Zetasizerをプログラムした。
Zetasizer Nano光散乱装置を使用して、ゼータ電位測定を行った。一般に、10mMのNaClで希釈したPEG化ポリプレックスを除いて、希釈されていない試料を、Zetasizerフォールドキャピラリーセル(最小0.8mL)に入れた。測定を反復する前に、試料を25℃で最大3分間インキュベートするように、Zetasizerをプログラムした(反復数をZetasizerソフトウェアで自動的に決定した)。ゼータ電位値を標準偏差(n=3)で報告した。また、粘度及び誘電率に関する試料の最終組成物を考慮するように、Zetasizerをプログラムした。
2.20 短期安定性
短期安定性研究のために、製剤を記載の通り凍結乾燥、適切な温度(-20℃、4℃、または室温)で保存した。適切な時に、試料を再水和させ、記載の通り分析した。
短期安定性研究のために、製剤を記載の通り凍結乾燥、適切な温度(-20℃、4℃、または室温)で保存した。適切な時に、試料を再水和させ、記載の通り分析した。
3.PEG-PGA(mPEG1K-b-PLE10)を使用したポリプレックスのPEG化
3.1 手順
以下に示されるN:P比及び上述の5%のトレハロースを有するDNAのDNA濃度0.1mg/mLのDD-X-DNA(pVAX)ポリプレックスを作製した。
3.1 手順
以下に示されるN:P比及び上述の5%のトレハロースを有するDNAのDNA濃度0.1mg/mLのDD-X-DNA(pVAX)ポリプレックスを作製した。
次に、滴下混合を用いて、PEG-PGA溶液をDD-X-DNAポリプレックスと1:1の体積比で混合し、以下に示されるように0.05mg/mLのDNAのPEG化ポリプレックスを得た。試料を粒径、PDI、及びゼータ電位について試験した(試験された製剤は、凍結されていなかった)。
4.PEG-PGA(mPEG1K-b-PLE10及びmPEG5K-b-PLE10)ならびにPEG-HA(HA-202)を使用したポリプレックスのPEG化
4.1 手順
以下に示されるN:P比及び上述の5%のトレハロースを有するDNAのDNA濃度0.25mg/mLのDD-X-DNA(pVax-opt-hIL10)ポリプレックスを作製した。
4.1 手順
以下に示されるN:P比及び上述の5%のトレハロースを有するDNAのDNA濃度0.25mg/mLのDD-X-DNA(pVax-opt-hIL10)ポリプレックスを作製した。
次に、滴下混合を用いて、PEG-PGA溶液またはPEG-HA溶液をDD-X-DNAポリプレックスと1:1の体積比で混合し、以下に示されるように0.125mg/mLのDNAのPEG化ポリプレックスを得た。試料を凍結及び解凍し、粒径、PDI、及びゼータ電位について試験した。
4.2 結果
凍結融解した試料の物理化学的結果が以下の表に提供される。mPEG1K-b-PLE10またはHA-202で作成されたPEG化ポリプレックスでは、凍結融解に対して安定な製剤が得られなかった。mPEG5K-b-PLE10で作成されたPEG化ポリプレックスは、凍結融解に対して安定であった。
凍結融解した試料の物理化学的結果が以下の表に提供される。mPEG1K-b-PLE10またはHA-202で作成されたPEG化ポリプレックスでは、凍結融解に対して安定な製剤が得られなかった。mPEG5K-b-PLE10で作成されたPEG化ポリプレックスは、凍結融解に対して安定であった。
5.PEG-HAを用いるポリプレックスのPEG化
5.1 手順
以下に示されるN:P比及び上述の5%のトレハロースを有するDNAのDNA濃度0.25mg/mLのDD-X-DNA(pVax-opt-hIL10)ポリプレックスを作製した。
5.1 手順
以下に示されるN:P比及び上述の5%のトレハロースを有するDNAのDNA濃度0.25mg/mLのDD-X-DNA(pVax-opt-hIL10)ポリプレックスを作製した。
次に、滴下混合を用いて、5%のトレハロース中のPEG-HA溶液を、DD-X-DNAポリプレックスと1:1の体積比で混合し、以下に示されるように0.125mg/mLのDNAのPEG化ポリプレックスを得た。試料を粒径、PDI、及びゼータ電位について試験した。
5.2 結果
HA-201(HA 10k-PEG2k)は、水に溶けなかった。それはヒドロゲルを形成し、さらには使用されなかった。HA-202(HA 50k-PEG 2k)により、水中で粘稠溶液が形成された。ポリプレックスは、PEG化後に目に見える凝集を示し、さらなる試験は、実施されなかった。
HA-201(HA 10k-PEG2k)は、水に溶けなかった。それはヒドロゲルを形成し、さらには使用されなかった。HA-202(HA 50k-PEG 2k)により、水中で粘稠溶液が形成された。ポリプレックスは、PEG化後に目に見える凝集を示し、さらなる試験は、実施されなかった。
6.PEG-PGAポリプレックスの調製
6.1 手順
PEG化ポリプレックスの調製
本明細書に記載されるように、PEG-PGAを使用して、N:P 7ポリプレックス(CMC-INT06-098A)のアリコートをPEG化した。得られたPEG化ポリプレックスを、物理化学的特性及びDNA捕捉について試験した。N:P 7ポリプレックスに加えて得られた製剤を生成した。
6.1 手順
PEG化ポリプレックスの調製
本明細書に記載されるように、PEG-PGAを使用して、N:P 7ポリプレックス(CMC-INT06-098A)のアリコートをPEG化した。得られたPEG化ポリプレックスを、物理化学的特性及びDNA捕捉について試験した。N:P 7ポリプレックスに加えて得られた製剤を生成した。
7.PEG-PGAとのインライン混合とそれに続くTFF濃縮による濃縮PEG化ポリプレックス
7.1 手順
PEG-PGAとのインライン混合とそれに続くTFF濃縮による濃縮PEG化ポリプレックス
N:P比7:1及び上述の5%のトレハロースを有するDNAのDNA濃度0.25mg/mLのDD-X-DNA(pVax-PD-L1-Fc)ポリプレックスを作製した。次に、5%のトレハロース中のPEG-PGA溶液をDD-X-DNAポリプレックスと1:1の体積比でインライン混合し(各流体の流れは7mL/分である)、0.125mg/mLのDNA及び7:1:17.5のN:P:A比のPEG化ポリプレックスを得た。室温で60分間インキュベートした後、PEG化ポリプレックスを、US8722646B2に以前に記載されたプロセスを使用して、TFF(再生セルロースメンブレン、MWCO 10kDa、入口圧力15psig)により濃縮した。TFF中に、アリコートを0.25mg/mL、0.5mg/mLの公称DNA濃度で採取した。最終生成物は、約1mg/mLの公称DNA濃度まで収集した。試料を等分し、-80℃で保存した。解凍後、試料を粒径、PDI、ゼータ電位、遊離DNA、及び%スーパーコイルDNAについて試験した。概略図は図11に提示される。
7.1 手順
PEG-PGAとのインライン混合とそれに続くTFF濃縮による濃縮PEG化ポリプレックス
N:P比7:1及び上述の5%のトレハロースを有するDNAのDNA濃度0.25mg/mLのDD-X-DNA(pVax-PD-L1-Fc)ポリプレックスを作製した。次に、5%のトレハロース中のPEG-PGA溶液をDD-X-DNAポリプレックスと1:1の体積比でインライン混合し(各流体の流れは7mL/分である)、0.125mg/mLのDNA及び7:1:17.5のN:P:A比のPEG化ポリプレックスを得た。室温で60分間インキュベートした後、PEG化ポリプレックスを、US8722646B2に以前に記載されたプロセスを使用して、TFF(再生セルロースメンブレン、MWCO 10kDa、入口圧力15psig)により濃縮した。TFF中に、アリコートを0.25mg/mL、0.5mg/mLの公称DNA濃度で採取した。最終生成物は、約1mg/mLの公称DNA濃度まで収集した。試料を等分し、-80℃で保存した。解凍後、試料を粒径、PDI、ゼータ電位、遊離DNA、及び%スーパーコイルDNAについて試験した。概略図は図11に提示される。
7.3 結論
PEG化ポリプレックスは、TFF濃縮プロセスにより0.125mg/mLDNA~1mg/mLDNAに濃縮することが可能であり、コロイド的に安定したナノ粒子を維持する。
PEG化ポリプレックスは、TFF濃縮プロセスにより0.125mg/mLDNA~1mg/mLDNAに濃縮することが可能であり、コロイド的に安定したナノ粒子を維持する。
8.事前に濃縮されたポリプレックスのPEG化によるPEG化ポリプレックスの濃縮
8.1 手順
以前にUS8722646B2に記載されているように、N:P比7:1及び9%のスクロースを有するDNAのDNA濃度1mg/mLの濃縮DD-X-DNA(pVax-PD-L1-Fc)ポリプレックスを作製した。次に、水中のPEG-PGA溶液をDD-X-DNAポリプレックスと1:1の体積比でインライン混合し(各流体の流れは7mL/分である)、0.5mg/mLのDNA及び7:1:7のN:P:A比または7:1:17.5のN:P:A比のPEG化ポリプレックスを得た。室温で60分間インキュベートした後、PEG化ポリプレックスを等分し、-80℃で保存した。
8.1 手順
以前にUS8722646B2に記載されているように、N:P比7:1及び9%のスクロースを有するDNAのDNA濃度1mg/mLの濃縮DD-X-DNA(pVax-PD-L1-Fc)ポリプレックスを作製した。次に、水中のPEG-PGA溶液をDD-X-DNAポリプレックスと1:1の体積比でインライン混合し(各流体の流れは7mL/分である)、0.5mg/mLのDNA及び7:1:7のN:P:A比または7:1:17.5のN:P:A比のPEG化ポリプレックスを得た。室温で60分間インキュベートした後、PEG化ポリプレックスを等分し、-80℃で保存した。
8.3 結論
1mg/mLのDNAでDD-X-DNAポリプレックスを、7:1:7及び7:1:17.5のN:P:A比でPEG化して、最終DNA濃度を0.5mg/mLにし、目に見える凝集はなかった。
1mg/mLのDNAでDD-X-DNAポリプレックスを、7:1:7及び7:1:17.5のN:P:A比でPEG化して、最終DNA濃度を0.5mg/mLにし、目に見える凝集はなかった。
9.PEG-PGAまたはPEG-PAAを用いるポリプレックスのPEG化
9.1 手順
本明細書に記載されるように、PEG-PGAまたはPEG-PAAを使用して、N:P 7ポリプレックス(CMC-INT06-24C)のアリコートをPEG化した。得られたPEG化ポリプレックスを、物理化学的特性及びDNA捕捉について試験した。N:P 7ポリプレックスに加えて、得られた製剤を生成した。
9.1 手順
本明細書に記載されるように、PEG-PGAまたはPEG-PAAを使用して、N:P 7ポリプレックス(CMC-INT06-24C)のアリコートをPEG化した。得られたPEG化ポリプレックスを、物理化学的特性及びDNA捕捉について試験した。N:P 7ポリプレックスに加えて、得られた製剤を生成した。
9.3 結論
PEG-PGA(mPEG5K-b-PLE10)またはPEG-PAA(mPEG5K-b-PLD10)のいずれかを用いたPEG化ポリプレックスにより、遊離DNAのない安定したナノ粒子が形成された。
PEG-PGA(mPEG5K-b-PLE10)またはPEG-PAA(mPEG5K-b-PLD10)のいずれかを用いたPEG化ポリプレックスにより、遊離DNAのない安定したナノ粒子が形成された。
10.人工腸液中のPEG化ポリプレックスの安定性
10.1 手順
試験物品
本明細書に記載されるように、PEG-PGAを使用して、N:P 7ポリプレックス(CMC-INT06-24C)のアリコートをPEG化した。得られたPEG化ポリプレックスをFaSSIF緩衝液中の安定性について試験した。
10.1 手順
試験物品
本明細書に記載されるように、PEG-PGAを使用して、N:P 7ポリプレックス(CMC-INT06-24C)のアリコートをPEG化した。得られたPEG化ポリプレックスをFaSSIF緩衝液中の安定性について試験した。
SIF1:3、v/vでのPEG化ポリプレックスの安定性の試験
150uLの人工腸液に、50uLのポリプレックスを添加する。十分に混合する。直ちに、懸濁液のアリコート50uLをDLSキュベットに分注し、350uLの水を加え、記載されているようにDLSで粒径を測定する。残りの試料溶液を3本のチューブに分ける。適切な時点で、350uLの水をチューブに添加し、完全に混合して、DLSで粒径を測定する。
150uLの人工腸液に、50uLのポリプレックスを添加する。十分に混合する。直ちに、懸濁液のアリコート50uLをDLSキュベットに分注し、350uLの水を加え、記載されているようにDLSで粒径を測定する。残りの試料溶液を3本のチューブに分ける。適切な時点で、350uLの水をチューブに添加し、完全に混合して、DLSで粒径を測定する。
SIF3:1、v/vでのPEG化ポリプレックスの安定性の試験
25uLの人工腸液に、75uLのポリプレックスを添加する。十分に混合する。直ちに、懸濁液のアリコート50uLをDLSキュベットに分注し、350uLの水を添加し、記載のように粒径をDLSで測定する。残りの試料溶液を3本のチューブに分ける。適切な時点で、350uLの水をチューブに添加し、完全に混合して、DLSで粒径を測定する。
25uLの人工腸液に、75uLのポリプレックスを添加する。十分に混合する。直ちに、懸濁液のアリコート50uLをDLSキュベットに分注し、350uLの水を添加し、記載のように粒径をDLSで測定する。残りの試料溶液を3本のチューブに分ける。適切な時点で、350uLの水をチューブに添加し、完全に混合して、DLSで粒径を測定する。
10.2 結果
PEG化されていないポリプレックス(7-1-0として表される)は、緩衝液と混合するとすぐに凝集した(スケールで最大)。PEG化ポリプレックス(PEG-PGA、mPEG5K-b-PLE10を用いる)は、1:3(FaSSIF:PEG化ポリプレックス、v/v)比で24時間にわたって安定したままであった。PEG化ポリプレックス(PEG-PGA、mPEG5K-b-PLE10を用いる)は、3:1(FaSSIF:PEG化ポリプレックス、v/v)比で1時間にわたって安定したままであった。
PEG化されていないポリプレックス(7-1-0として表される)は、緩衝液と混合するとすぐに凝集した(スケールで最大)。PEG化ポリプレックス(PEG-PGA、mPEG5K-b-PLE10を用いる)は、1:3(FaSSIF:PEG化ポリプレックス、v/v)比で24時間にわたって安定したままであった。PEG化ポリプレックス(PEG-PGA、mPEG5K-b-PLE10を用いる)は、3:1(FaSSIF:PEG化ポリプレックス、v/v)比で1時間にわたって安定したままであった。
11.FaSSIF緩衝液不含DNAにおけるPEG化ポリプレックスの安定性
参照:CMC-INT06-EXP-072
11.1 手順
以下の表の目標N:P:A比を得るために、本明細書に記載されるように、PEG-PGA(5%のトレハロース中)を使用して、N:P 7ポリプレックス(CMC-INT06-024C、DD-X-DNA(pVax-opt-hIL10)ポリプレックス、5%のトレハロース、0.25mg/mL)のアリコートをPEG化した。得られたPEG化ポリプレックスを、以下の表の比に従って、FaSSIF緩衝液での安定性について試験した。2時間後、以下の物理化学的特性を決定した:遊離DNA、pH、直径、及びPDI。
参照:CMC-INT06-EXP-072
11.1 手順
以下の表の目標N:P:A比を得るために、本明細書に記載されるように、PEG-PGA(5%のトレハロース中)を使用して、N:P 7ポリプレックス(CMC-INT06-024C、DD-X-DNA(pVax-opt-hIL10)ポリプレックス、5%のトレハロース、0.25mg/mL)のアリコートをPEG化した。得られたPEG化ポリプレックスを、以下の表の比に従って、FaSSIF緩衝液での安定性について試験した。2時間後、以下の物理化学的特性を決定した:遊離DNA、pH、直径、及びPDI。
12.4 手順
試験物品
以下の表の目標N:P:A比を得るために、本明細書に記載されるように、PEG-PGA(mPEG5K-b-PLE10、5%のトレハロース中)を使用して、N:P 7ポリプレックス(CMC-INT06-024C、DD-X-DNA(pVax-opt-hIL10)ポリプレックス、5%のトレハロース、0.25mg/mL)のアリコートをPEG化した。得られたPEG化ポリプレックスを、凍結/解凍の前後で、粒径、PDI、ゼータ電位について試験した。解凍した試料を、in vitroトランスフェクションについて試験した。
試験物品
以下の表の目標N:P:A比を得るために、本明細書に記載されるように、PEG-PGA(mPEG5K-b-PLE10、5%のトレハロース中)を使用して、N:P 7ポリプレックス(CMC-INT06-024C、DD-X-DNA(pVax-opt-hIL10)ポリプレックス、5%のトレハロース、0.25mg/mL)のアリコートをPEG化した。得られたPEG化ポリプレックスを、凍結/解凍の前後で、粒径、PDI、ゼータ電位について試験した。解凍した試料を、in vitroトランスフェクションについて試験した。
12.5 in vitroトランスフェクション手順
細胞の調製
19継代のHEK293T細胞(ATCC)を通過させ、遠心分離してトリプシンを除去し、その後、10%のFBSが補充されたDMEMに2回再懸濁させた。Vi-Cell生死細胞オートアナライザーで、細胞生存率及び計数を実行し、細胞数及び生存率を検証した。10%のFBSが補充されたDMEM中で1.25X105細胞/mLの濃度まで細胞を希釈し、96ウェル透明底TCプレート(200uL、1ウェル当たり25,000細胞)に分注した。37℃/5%のCO2で一晩インキュベートする前に、プレートを室温で15~20分間インキュベートし、その後、トランスフェクションのために使用した。
細胞の調製
19継代のHEK293T細胞(ATCC)を通過させ、遠心分離してトリプシンを除去し、その後、10%のFBSが補充されたDMEMに2回再懸濁させた。Vi-Cell生死細胞オートアナライザーで、細胞生存率及び計数を実行し、細胞数及び生存率を検証した。10%のFBSが補充されたDMEM中で1.25X105細胞/mLの濃度まで細胞を希釈し、96ウェル透明底TCプレート(200uL、1ウェル当たり25,000細胞)に分注した。37℃/5%のCO2で一晩インキュベートする前に、プレートを室温で15~20分間インキュベートし、その後、トランスフェクションのために使用した。
ポリプレックスの希釈
目標濃度で別段の提供されない限り、試験試料を0.125mg/mLのDNAに希釈した。対照試料(CMC-INT06-024及びCMC-JAN01-010)により、水で0.14mg/mLに希釈された0.25mg/mLのDNAが提供された。次に、全ての試験及び対照試料を水で連続希釈し、1/1.35で合計10倍に希釈した。これらの連続希釈液を、さらに、Opti-MEM中で17.7倍希釈し、この希釈されたポリプレックス35.6uLを、2回ずつ各ウェルに添加した(対照資料の場合、282ngのポリプレックス~19ngのポリプレックス、試験資料の場合、251ngのポリプレックス~17ngのポリプレックスの最終用量範囲を与える)。
目標濃度で別段の提供されない限り、試験試料を0.125mg/mLのDNAに希釈した。対照試料(CMC-INT06-024及びCMC-JAN01-010)により、水で0.14mg/mLに希釈された0.25mg/mLのDNAが提供された。次に、全ての試験及び対照試料を水で連続希釈し、1/1.35で合計10倍に希釈した。これらの連続希釈液を、さらに、Opti-MEM中で17.7倍希釈し、この希釈されたポリプレックス35.6uLを、2回ずつ各ウェルに添加した(対照資料の場合、282ngのポリプレックス~19ngのポリプレックス、試験資料の場合、251ngのポリプレックス~17ngのポリプレックスの最終用量範囲を与える)。
細胞のトランスフェクション
トランスフェクションを以下のように実施した。最初に、培地を各HEK293Tウェルから除去し、続いて、0.1mLのOpti-MEM(pH7.4)を添加して、その後、除去した。Opti-MEM(前のセクションを参照)で希釈されたポリプレックス試料を各ウェルに添加し、37℃で3時間インキュベートした。インキュベーション後、培地を除去し、0.2mLの完全培地と交換し、37℃で再インキュベートした。48時間後、上清を除去し、直ちに、MSDアッセイに使用した。残りの細胞を溶解させて総タンパク質を測定した。
トランスフェクションを以下のように実施した。最初に、培地を各HEK293Tウェルから除去し、続いて、0.1mLのOpti-MEM(pH7.4)を添加して、その後、除去した。Opti-MEM(前のセクションを参照)で希釈されたポリプレックス試料を各ウェルに添加し、37℃で3時間インキュベートした。インキュベーション後、培地を除去し、0.2mLの完全培地と交換し、37℃で再インキュベートした。48時間後、上清を除去し、直ちに、MSDアッセイに使用した。残りの細胞を溶解させて総タンパク質を測定した。
総タンパク質の定量化
標準曲線のためにBSAを使用するDC(商標)タンパク質アッセイを使用して、各ウェルの総タンパク質を決定した。ELISAのために上清を除去すると、残りの細胞層を溶解緩衝液中4℃で10分間溶解させた。(気泡の形成を最小限に抑えながら)溶解物を数回ピペッティングした後、V底96ウェルプレートに移した。次に、溶解物を、4℃、1000gで5分間遠心分離することにより清澄化させた。
標準曲線のためにBSAを使用するDC(商標)タンパク質アッセイを使用して、各ウェルの総タンパク質を決定した。ELISAのために上清を除去すると、残りの細胞層を溶解緩衝液中4℃で10分間溶解させた。(気泡の形成を最小限に抑えながら)溶解物を数回ピペッティングした後、V底96ウェルプレートに移した。次に、溶解物を、4℃、1000gで5分間遠心分離することにより清澄化させた。
タンパク質標準曲線の調製
タンパク質アッセイ標準II(ウシ血清アルブミン)ストックを、milli-Q水中5mg/mlで調製し、4℃で保存した。溶解緩衝液(試料が調製されるのと同じ緩衝液)でタンパク質標準の1:2段階希釈を実施することにより、標準曲線を調製した。
タンパク質アッセイ標準II(ウシ血清アルブミン)ストックを、milli-Q水中5mg/mlで調製し、4℃で保存した。溶解緩衝液(試料が調製されるのと同じ緩衝液)でタンパク質標準の1:2段階希釈を実施することにより、標準曲線を調製した。
Lowry/DCTMタンパク質アッセイ
各1mlの試薬Aに20μlの試薬Sを添加することにより、ワーキング試薬A’を調製した。96ウェルプレートの1ウェル当たり25μlのワーキング試薬A’を移した。1ウェル当たり5μlの細胞溶解物または標準液を添加した。次に、200μlの試薬Bを各ウェルに添加した。プレートを5秒間振とうし、室温で15分間インキュベートして、発色させた。SpectraMAXプレートリーダーで750nmにおける吸光度を測定した。標準の吸光度を標準濃度に対してプロットした。SpectraMaxソフトウェアカーブフィッティング分析を使用して、4つのパラメーターアルゴリズムにより、標準曲線に最適なカーブフィットが提供された。また、ソフトウェアにより、タンパク質標準曲線の試料のタンパク質濃度が補間された。
各1mlの試薬Aに20μlの試薬Sを添加することにより、ワーキング試薬A’を調製した。96ウェルプレートの1ウェル当たり25μlのワーキング試薬A’を移した。1ウェル当たり5μlの細胞溶解物または標準液を添加した。次に、200μlの試薬Bを各ウェルに添加した。プレートを5秒間振とうし、室温で15分間インキュベートして、発色させた。SpectraMAXプレートリーダーで750nmにおける吸光度を測定した。標準の吸光度を標準濃度に対してプロットした。SpectraMaxソフトウェアカーブフィッティング分析を使用して、4つのパラメーターアルゴリズムにより、標準曲線に最適なカーブフィットが提供された。また、ソフトウェアにより、タンパク質標準曲線の試料のタンパク質濃度が補間された。
MSDアッセイによるhIL-10タンパク質の定量
上清を10分間1000xgで遠心分離し、その後、適切に希釈した。使用前に、アッセイ用の全ての試薬を室温に平衡化させた。特定の濃度に希釈液2中でhIL-10を再構成することにより、アッセイのための標準液を調製し、室温で15分間インキュベートし、その後、希釈液2で4倍連続希釈して、標準曲線の7用量を調製した。50μLの標準液を、MSDプレートの2列に2回ずつ添加する。25μLの希釈液2及び25μLの試料を残りのウェルに添加する。プレートを覆い、300rpmで2時間振とうしながら室温でインキュベートする。プレートを洗浄し、その後、25μLの希釈された検出抗体を添加した。300rpmで2時間振とうしながら、室温でインキュベートする。プレートを洗浄し、その後、150μLの2XのRead Buffer Tを添加する。バーコードを使用するMeso Scaleを使用して読み取る(VPLEXシングルスポットは自動的に割り当てられる)。標準の吸光度を標準の濃度に対してプロットし、4パラメーターアルゴリズムを備えるPrism GraphPadソフトウェアを使用して、試料のhIL-10の量を補間した。各ウェルでhIL-10の量を決定すると、DC(商標)タンパク質アッセイ(すなわち、総タンパク質1mg当たりng hIL-10)から決定された総タンパク質に対して、それを正規化した。総タンパク質1mg当たりのng hIL-10 対 トランスフェクトされたDNA量(ng)をプロットすることにより、GraphPad Prismにおいて用量反応曲線を作成した。EC50及び総タンパク質1mg当たりのhIL-10の予測最大量を決定した。
上清を10分間1000xgで遠心分離し、その後、適切に希釈した。使用前に、アッセイ用の全ての試薬を室温に平衡化させた。特定の濃度に希釈液2中でhIL-10を再構成することにより、アッセイのための標準液を調製し、室温で15分間インキュベートし、その後、希釈液2で4倍連続希釈して、標準曲線の7用量を調製した。50μLの標準液を、MSDプレートの2列に2回ずつ添加する。25μLの希釈液2及び25μLの試料を残りのウェルに添加する。プレートを覆い、300rpmで2時間振とうしながら室温でインキュベートする。プレートを洗浄し、その後、25μLの希釈された検出抗体を添加した。300rpmで2時間振とうしながら、室温でインキュベートする。プレートを洗浄し、その後、150μLの2XのRead Buffer Tを添加する。バーコードを使用するMeso Scaleを使用して読み取る(VPLEXシングルスポットは自動的に割り当てられる)。標準の吸光度を標準の濃度に対してプロットし、4パラメーターアルゴリズムを備えるPrism GraphPadソフトウェアを使用して、試料のhIL-10の量を補間した。各ウェルでhIL-10の量を決定すると、DC(商標)タンパク質アッセイ(すなわち、総タンパク質1mg当たりng hIL-10)から決定された総タンパク質に対して、それを正規化した。総タンパク質1mg当たりのng hIL-10 対 トランスフェクトされたDNA量(ng)をプロットすることにより、GraphPad Prismにおいて用量反応曲線を作成した。EC50及び総タンパク質1mg当たりのhIL-10の予測最大量を決定した。
12.6 結果
全ての粒子は、安定しており、凝集はなかった。PEG化後の全試料のゼータ電位は、-3mVに低減した。凍結融解後、ポリプレックスは、同じ特性を示した。in vitroトランスフェクションの結果は、PEG化されていない試料及びPEG化試料で同様であった(図6)。
全ての粒子は、安定しており、凝集はなかった。PEG化後の全試料のゼータ電位は、-3mVに低減した。凍結融解後、ポリプレックスは、同じ特性を示した。in vitroトランスフェクションの結果は、PEG化されていない試料及びPEG化試料で同様であった(図6)。
13.ポリスチレンビーズのPEG化
参照:CMC-INT06-EXP-039及びCMC-INT06-EXP-055
13.1 手順
橙色のポリスチレンビーズのPEG化
一般に:電磁撹拌棒を含む7mLのガラス瓶に、1mLのアミン修飾ポリスチレンビーズを移す。1MのHCl 5uLを添加する。1.5mLのエッペンドルフチューブ中、透明な溶液を形成するまで、70mgのPEG NHS及び8mgのEDC-HClを1mLの水に溶解させた。この溶液0.7mLをポリスチレンの懸濁液に徐々に添加する。光から保護しながら、溶液を室温で一晩撹拌する。以下に記載されるように、PEG化されている橙色の粒子を精製及び濃縮した。粒子サイジング及びゼータ電位測定を使用して、PS粒子のPEG化を確認した。
参照:CMC-INT06-EXP-039及びCMC-INT06-EXP-055
13.1 手順
橙色のポリスチレンビーズのPEG化
一般に:電磁撹拌棒を含む7mLのガラス瓶に、1mLのアミン修飾ポリスチレンビーズを移す。1MのHCl 5uLを添加する。1.5mLのエッペンドルフチューブ中、透明な溶液を形成するまで、70mgのPEG NHS及び8mgのEDC-HClを1mLの水に溶解させた。この溶液0.7mLをポリスチレンの懸濁液に徐々に添加する。光から保護しながら、溶液を室温で一晩撹拌する。以下に記載されるように、PEG化されている橙色の粒子を精製及び濃縮した。粒子サイジング及びゼータ電位測定を使用して、PS粒子のPEG化を確認した。
緑色ポリスチレンビーズのPEG化
一般に:電磁撹拌棒を含む7mLのガラス瓶に、2mLの緑色アミン修飾ポリスチレンビーズを移す。1MのHCl 10uLを添加する。1.5mLのエッペンドルフチューブ中、透明な溶液を形成するまで、100mgのPEG NHS及び5mgのEDC-HClを1mLの水に溶解させた。この溶液0.9mLをポリスチレンの懸濁液に徐々に添加する。光から保護しながら、溶液を室温で一晩撹拌する。以下に記載されるように、PEG化されている緑色粒子を精製及び濃縮した。粒子サイジング及びゼータ電位測定を使用して、PS粒子のPEG化を確認した。
一般に:電磁撹拌棒を含む7mLのガラス瓶に、2mLの緑色アミン修飾ポリスチレンビーズを移す。1MのHCl 10uLを添加する。1.5mLのエッペンドルフチューブ中、透明な溶液を形成するまで、100mgのPEG NHS及び5mgのEDC-HClを1mLの水に溶解させた。この溶液0.9mLをポリスチレンの懸濁液に徐々に添加する。光から保護しながら、溶液を室温で一晩撹拌する。以下に記載されるように、PEG化されている緑色粒子を精製及び濃縮した。粒子サイジング及びゼータ電位測定を使用して、PS粒子のPEG化を確認した。
青色ポリスチレンビーズのPEG化
一般に:電磁撹拌棒を含む7mLのガラス瓶に、1mLの青色アミン修飾ポリスチレンビーズを移す。2mLの水を添加する。1.5mLのエッペンドルフチューブ中、透明な溶液を形成するまで、270mgのPEG NHS及び10.34mgのEDC-HClを1mLの水に溶解させた。この溶液0.9mLをポリスチレンの懸濁液に徐々に添加する。光から保護しながら、溶液を室温で一晩撹拌する。以下に記載されるように、PEG化されている青色粒子を精製及び濃縮した。粒子サイジング及びゼータ電位測定を使用して、PS粒子のPEG化を確認した。
一般に:電磁撹拌棒を含む7mLのガラス瓶に、1mLの青色アミン修飾ポリスチレンビーズを移す。2mLの水を添加する。1.5mLのエッペンドルフチューブ中、透明な溶液を形成するまで、270mgのPEG NHS及び10.34mgのEDC-HClを1mLの水に溶解させた。この溶液0.9mLをポリスチレンの懸濁液に徐々に添加する。光から保護しながら、溶液を室温で一晩撹拌する。以下に記載されるように、PEG化されている青色粒子を精製及び濃縮した。粒子サイジング及びゼータ電位測定を使用して、PS粒子のPEG化を確認した。
PEG化ポリスチレンの精製及び濃縮
以下のように、PEG化されているPS粒子を精製及び濃縮した。300uLの反応混合物をAmicon Ultraフィルターに等分する。5000rpmで10分間遠心分離する。底部から液体を除去し、フィルターの上部に300μLの水を追加する(ビーズがフィルター上に保持される)。遠心分離及び洗浄を4回繰り返して、ビーズを洗浄する。ビーズを異なるフィルターから単一フィルター上にプールする。300uLの水を添加し、再度遠心分離する。緑色ビーズ及び橙色ビーズを約1.5mLまで水に懸濁させた。
以下のように、PEG化されているPS粒子を精製及び濃縮した。300uLの反応混合物をAmicon Ultraフィルターに等分する。5000rpmで10分間遠心分離する。底部から液体を除去し、フィルターの上部に300μLの水を追加する(ビーズがフィルター上に保持される)。遠心分離及び洗浄を4回繰り返して、ビーズを洗浄する。ビーズを異なるフィルターから単一フィルター上にプールする。300uLの水を添加し、再度遠心分離する。緑色ビーズ及び橙色ビーズを約1.5mLまで水に懸濁させた。
10uLの懸濁液を390uLの水に混合することにより、ポリスチレン粒子の流体力学的直径を測定する。20uLの粒子懸濁液を10mMのNaCl 780uLに混合することにより、ポリスチレン粒子のゼータ電位を測定する。
14.3 手順
RITC標識DD-X
Carbohydrate Polymers 72(2008)616-624から派生した方法に基づいて、RITCをDD-Xにコンジュゲートした。要約すると、DD-Xストック(ロットJAN03-009)を水に溶解させて、40mMの濃度及びpH5.8を得た。DD-X溶液を等量のDMSOと混合させ、室温で1時間撹拌し、続いて、窒素ガスで15分間バブリングした。別の容器において、RITCをDMSOに溶解させ(目標3.7mg/mL)、DD-X/DMSO混合物に滴下した(RITC/DMSO:DD-X/DMSO 1:8、v/v)。得られた混合物を室温で65時間撹拌し、光から保護した。水に対する透析により、RITC標識DD-Xを精製し、その後、凍結乾燥した。未反応のRITCをメタノールで抽出し、濾液が無色になるまで、メタノールを用いてブフナー漏斗上で洗浄した。洗浄された粉末を回収し、室温で一晩真空乾燥させた。最終的に収集された粉末は、外観が桃色であった。RITCのDD-XへのコンジュゲーションをH-NMR分光法で確認した:RITC-DD-XをD2O+DCl/D2Oに溶解させて(8mg/mL)、pH約2.5を得た。
RITC標識DD-X
Carbohydrate Polymers 72(2008)616-624から派生した方法に基づいて、RITCをDD-Xにコンジュゲートした。要約すると、DD-Xストック(ロットJAN03-009)を水に溶解させて、40mMの濃度及びpH5.8を得た。DD-X溶液を等量のDMSOと混合させ、室温で1時間撹拌し、続いて、窒素ガスで15分間バブリングした。別の容器において、RITCをDMSOに溶解させ(目標3.7mg/mL)、DD-X/DMSO混合物に滴下した(RITC/DMSO:DD-X/DMSO 1:8、v/v)。得られた混合物を室温で65時間撹拌し、光から保護した。水に対する透析により、RITC標識DD-Xを精製し、その後、凍結乾燥した。未反応のRITCをメタノールで抽出し、濾液が無色になるまで、メタノールを用いてブフナー漏斗上で洗浄した。洗浄された粉末を回収し、室温で一晩真空乾燥させた。最終的に収集された粉末は、外観が桃色であった。RITCのDD-XへのコンジュゲーションをH-NMR分光法で確認した:RITC-DD-XをD2O+DCl/D2Oに溶解させて(8mg/mL)、pH約2.5を得た。
RITC-DD-X+DNAポリプレックス
RITC-DD-X(上記)及び非標識DD-Xの50/50ブレンドを調製し、その後、本明細書に記載のドリップ法の手順に従い、GWiz-GFPプラスミドDNAを含む5%のトレハロースでN:P 20ポリプレックス(0.1mg/mLのDNA)を作成するために使用した。
RITC-DD-X(上記)及び非標識DD-Xの50/50ブレンドを調製し、その後、本明細書に記載のドリップ法の手順に従い、GWiz-GFPプラスミドDNAを含む5%のトレハロースでN:P 20ポリプレックス(0.1mg/mLのDNA)を作成するために使用した。
RITC-DD-X+DNAポリプレックス
RITC-DD-X(上記)及び非標識DD-Xの33/67ブレンドを調製し、その後、本明細書に記載のインライン混合の手順に従い、pVax-opt-hIL10プラスミドDNAを含む5%のトレハロースでN:P 7ポリプレックス(0.25mg/mLのDNA)を作成するために使用した。
RITC-DD-X(上記)及び非標識DD-Xの33/67ブレンドを調製し、その後、本明細書に記載のインライン混合の手順に従い、pVax-opt-hIL10プラスミドDNAを含む5%のトレハロースでN:P 7ポリプレックス(0.25mg/mLのDNA)を作成するために使用した。
PEG化RITC-DD-X+DNAポリプレックス
本明細書に記載されるように、PEG-PGAを使用して、N:P 7ポリプレックスのアリコートをPEG化した。得られたPEG化ポリプレックスを、粒径、PDI、及びゼータ電位について試験した。N:P 7ポリプレックスに加えて得られた製剤を生成した。
本明細書に記載されるように、PEG-PGAを使用して、N:P 7ポリプレックスのアリコートをPEG化した。得られたPEG化ポリプレックスを、粒径、PDI、及びゼータ電位について試験した。N:P 7ポリプレックスに加えて得られた製剤を生成した。
15.タイプIIIムチン内の様々なPSビーズの凝集の評価、ならびに、1及び3μmのTranswellを通した拡散の定量化
参照:CMC-INT06-EXP-042
参照:CMC-INT06-EXP-042
15.3 手順
タイプIIIムチン懸濁液の調製
必要に応じて、タイプIIIムチンを5%w/w~0.1%w/wの目標濃度まで水中に分注することにより、タイプIIIムチン懸濁液を調製した。
タイプIIIムチン懸濁液の調製
必要に応じて、タイプIIIムチンを5%w/w~0.1%w/wの目標濃度まで水中に分注することにより、タイプIIIムチン懸濁液を調製した。
ムチン中の凝集試験
試験試料(RITC標識ポリプレックス、アミン修飾PSビーズ、またはPEG化PSビーズ)をマイクロチューブ中でタイプIIIムチン懸濁液と様々な濃度で混合して、試験試料及びムチンの最終目標濃度を得た。試料-ムチン試料を光から保護し、室温、30rpmで混合した。30及び60分で、混合物をIbidiマイクロスライドに等分し、目に見える凝集についてEVOS顕微鏡下で観察した。
試験試料(RITC標識ポリプレックス、アミン修飾PSビーズ、またはPEG化PSビーズ)をマイクロチューブ中でタイプIIIムチン懸濁液と様々な濃度で混合して、試験試料及びムチンの最終目標濃度を得た。試料-ムチン試料を光から保護し、室温、30rpmで混合した。30及び60分で、混合物をIbidiマイクロスライドに等分し、目に見える凝集についてEVOS顕微鏡下で観察した。
ムチンを入れたTranswellを通した拡散の評価
試料調製。
試験試料(RITC標識ポリプレックス、アミン変性PSビーズ、またはPEG化PSビーズ)をタイプIIIムチン懸濁液とマイクロチューブ中で混合して、試験試料の最終目標濃度及び0.4%の最終ムチン濃度を得た。Transwellインサートに入れる前に、試料を光から保護し、40rpmで1時間混合した。
試料調製。
試験試料(RITC標識ポリプレックス、アミン変性PSビーズ、またはPEG化PSビーズ)をタイプIIIムチン懸濁液とマイクロチューブ中で混合して、試験試料の最終目標濃度及び0.4%の最終ムチン濃度を得た。Transwellインサートに入れる前に、試料を光から保護し、40rpmで1時間混合した。
Transwellの調製及び試料の拡散
Transwellの底に、0.6mLの0.4%のタイプIIIムチンを充填した。HTS Transwellインサート(1umまたは3umのPETメンブレンを備える)に、0.1mLの事前混合試料+ムチンを入れた。0.4%のムチンのみがない状態で、対照を入れた。参照(100%の拡散を模倣する)は、Transwellインサート(0.7mL)なしで事前に混合された試料+ムチンであった。37℃で20時間インキュベートした後、下部ウェルへの試験試料の拡散を蛍光プレートリーダー(Envision)で評価した。
Transwellの底に、0.6mLの0.4%のタイプIIIムチンを充填した。HTS Transwellインサート(1umまたは3umのPETメンブレンを備える)に、0.1mLの事前混合試料+ムチンを入れた。0.4%のムチンのみがない状態で、対照を入れた。参照(100%の拡散を模倣する)は、Transwellインサート(0.7mL)なしで事前に混合された試料+ムチンであった。37℃で20時間インキュベートした後、下部ウェルへの試験試料の拡散を蛍光プレートリーダー(Envision)で評価した。
15.4 結果
ムチン中の凝集試験
図7に示されるように、RITC標識ポリプレックス及びアミン修飾PSビーズの両方が、1時間のインキュベーション後にムチン中で凝集を示した。PEG化されているPSビーズには、目に見える凝集はなかった。
ムチン中の凝集試験
図7に示されるように、RITC標識ポリプレックス及びアミン修飾PSビーズの両方が、1時間のインキュベーション後にムチン中で凝集を示した。PEG化されているPSビーズには、目に見える凝集はなかった。
ムチンを入れたTranswellを通した拡散の評価
図8に示されるように、0.4%のムチンでは、PEG化PSビーズには、アミン修飾PSビーズ及びRITC標識ポリプレックスと比較して、3umまたは1umのPETメンブレンのいずれかを通して、20時間のインキュベーション後に最高レベルの拡散があった。これは、ムチン中のPEG化PSビーズの凝集が少ないことに起因する。
図8に示されるように、0.4%のムチンでは、PEG化PSビーズには、アミン修飾PSビーズ及びRITC標識ポリプレックスと比較して、3umまたは1umのPETメンブレンのいずれかを通して、20時間のインキュベーション後に最高レベルの拡散があった。これは、ムチン中のPEG化PSビーズの凝集が少ないことに起因する。
16.3 手順
4%のPluronics F127溶液の調製
Pluronics F127を水に溶解させて、4%w/wを得、0.22umで濾過した。
4%のPluronics F127溶液の調製
Pluronics F127を水に溶解させて、4%w/wを得、0.22umで濾過した。
タイプIIIムチン懸濁液の調製
本明細書に記載されるように、タイプIIIムチン懸濁液を調製した。
本明細書に記載されるように、タイプIIIムチン懸濁液を調製した。
ムチン中の凝集試験
試験試料(PEG化RITC-DD-X+DNAポリプレックス、RITC標識ポリプレックス、アミン修飾PSビーズ、またはPEG化PSビーズ)をマイクロチューブ中でタイプIIIムチン懸濁液と様々な濃度で混合して、試験試料及びムチンの最終目標濃度を得た。試料-ムチン試料を光から保護し、室温、30rpmで混合した。30及び60分で、混合物をIbidiマイクロスライドに等分し、目に見える凝集についてEVOS顕微鏡下で観察した。
試験試料(PEG化RITC-DD-X+DNAポリプレックス、RITC標識ポリプレックス、アミン修飾PSビーズ、またはPEG化PSビーズ)をマイクロチューブ中でタイプIIIムチン懸濁液と様々な濃度で混合して、試験試料及びムチンの最終目標濃度を得た。試料-ムチン試料を光から保護し、室温、30rpmで混合した。30及び60分で、混合物をIbidiマイクロスライドに等分し、目に見える凝集についてEVOS顕微鏡下で観察した。
ムチンを入れたTranswellを通した拡散の評価
試料調製。
試験試料(PEG化RITC-DD-X+DNAポリプレックス、RITC標識ポリプレックス)を、マイクロチューブ中で、Pluronics F127溶液を含むかまたは含まないタイプIIIムチン懸濁液と混合して、試験試料の最終目標濃度及び0.5%の最終ムチン濃度を得た。対照(アミン修飾PSビーズ、PEG化PSビーズ)をムチンのみと混合して、最終ムチン濃度を0.5%にした。Transwellインサートに入れる前に、試料を光から保護し、40rpmで1時間混合した。
試料調製。
試験試料(PEG化RITC-DD-X+DNAポリプレックス、RITC標識ポリプレックス)を、マイクロチューブ中で、Pluronics F127溶液を含むかまたは含まないタイプIIIムチン懸濁液と混合して、試験試料の最終目標濃度及び0.5%の最終ムチン濃度を得た。対照(アミン修飾PSビーズ、PEG化PSビーズ)をムチンのみと混合して、最終ムチン濃度を0.5%にした。Transwellインサートに入れる前に、試料を光から保護し、40rpmで1時間混合した。
Transwellの調製及び試料の拡散
Transwellの底に、0.6mLの0.5%のタイプIIIムチンを充填した。3umのPETメンブレンを備えたHTS Transwellインサートに、0.1mLの事前混合試料+ムチンを入れた。参照(100%の拡散を模倣する)は、Transwellインサート(0.7mL)なしで事前に混合された試料+ムチンであった。37℃で20時間インキュベートした後、下部ウェルへの試験試料の拡散を蛍光プレートリーダー(Envision)で評価した。
Transwellの底に、0.6mLの0.5%のタイプIIIムチンを充填した。3umのPETメンブレンを備えたHTS Transwellインサートに、0.1mLの事前混合試料+ムチンを入れた。参照(100%の拡散を模倣する)は、Transwellインサート(0.7mL)なしで事前に混合された試料+ムチンであった。37℃で20時間インキュベートした後、下部ウェルへの試験試料の拡散を蛍光プレートリーダー(Envision)で評価した。
16.4 結果
PSビーズのPEG化
アミン修飾PSビーズのPEG化により、ムチン拡散がほぼ10倍改善された(図9)。蛍光顕微鏡は、PEG化PSビーズがムチンで凝集しなかったが、PEG化されていないPSビーズが同じ条件下で大幅に凝集したことを示した。
PSビーズのPEG化
アミン修飾PSビーズのPEG化により、ムチン拡散がほぼ10倍改善された(図9)。蛍光顕微鏡は、PEG化PSビーズがムチンで凝集しなかったが、PEG化されていないPSビーズが同じ条件下で大幅に凝集したことを示した。
ムチンにおけるPEG化ポリプレックス拡散
ポリプレックス(N:P 7)のPEG化により、ムチン拡散が、32%から50~52%に増加し、これにより、PEG化されていないポリプレックスよりも拡散が約60%向上する(図9)。試験されたN:P:A比を、ムチン拡散に対して同様に実施した。蛍光顕微鏡は、PEG化ポリプレックス及びPEG化されていないポリプレックス間に有意な形態学的差異を示さなかった。
ポリプレックス(N:P 7)のPEG化により、ムチン拡散が、32%から50~52%に増加し、これにより、PEG化されていないポリプレックスよりも拡散が約60%向上する(図9)。試験されたN:P:A比を、ムチン拡散に対して同様に実施した。蛍光顕微鏡は、PEG化ポリプレックス及びPEG化されていないポリプレックス間に有意な形態学的差異を示さなかった。
ムチン拡散に対するPluronics F127の効果
Pluronics F127の存在により、PEG化されていないポリプレックス及びPEG化ポリプレックスのムチン拡散が(10~15%)改善された(図10)。
Pluronics F127の存在により、PEG化されていないポリプレックス及びPEG化ポリプレックスのムチン拡散が(10~15%)改善された(図10)。
17.c125、様々なNPA比で、2.5または5%トレハロース中で調製されたPEG化ポリプレックスの凍結乾燥
参照:CMC-INT06-EXP-103
参照:CMC-INT06-EXP-103
17.3 手順
N:P比7:1及び上述の5%のトレハロースを有するDNAのDNA濃度0.25mg/mLのDD-X-DNA(pVax-PD-L1-Fc)ポリプレックスを作製した。次に、ポリプレックスのアリコートを上述のようにPEG化した(mPEG5K-b-PLE10)。N:P 7ポリプレックスに加えて、得られた製剤を生成し、2mLのガラスバイアルに充填した(1mL及び0.1mLの充填量を試験した)。
以下の制御された凍結乾燥サイクルを使用して、試料を凍結乾燥した。
凍結:+20~-40℃(1℃/分)、次に、-40℃で120分。
1次乾燥:-32℃及び63mTorrで3800分
2次乾燥:P=63mTorr、シェルフT -32~30℃(0.2℃/分)、次に、30℃で360分。
凍結:+20~-40℃(1℃/分)、次に、-40℃で120分。
1次乾燥:-32℃及び63mTorrで3800分
2次乾燥:P=63mTorr、シェルフT -32~30℃(0.2℃/分)、次に、30℃で360分。
2次乾燥の終了時に、バイアルを、窒素ガスでパージし、栓をし、室温に平衡化させた。短期間の安定性を、室温(周囲湿度)、デシケーター内の室温、及び4℃で実施した。選択された時点で、1mLの試料を水で再水和させ、分析前に15分間インキュベートした。試料を本明細書に記載されているように、粒径、PDI、ゼータ電位、及び遊離DNAについて分析した。
17.4 結果
フリーズドライ固形物には、崩壊または亀裂の兆候はなかった。固形物を形成するには容量が不十分なため、0.1mLの試料をリングのように成形した。再水和試料では、遊離DNAは、観察されなかった。
フリーズドライ固形物には、崩壊または亀裂の兆候はなかった。固形物を形成するには容量が不十分なため、0.1mLの試料をリングのように成形した。再水和試料では、遊離DNAは、観察されなかった。
図13は、室温及び4℃で4週間までの、凍結乾燥されたPEG化ポリプレックスの安定性を示す。試料を再水和させて、凍結乾燥前の容量にした。
18.2 手順
マンニトール溶液の調製
一般に、マンニトールを水に0.125g/mLの濃度で溶解させた。0.2μmフィルターを使用して、得られた溶液を濾過した。必要に応じて、マンニトール溶液を、後続の製剤化に必要な濃度に希釈した。
マンニトール溶液の調製
一般に、マンニトールを水に0.125g/mLの濃度で溶解させた。0.2μmフィルターを使用して、得られた溶液を濾過した。必要に応じて、マンニトール溶液を、後続の製剤化に必要な濃度に希釈した。
Kollidon 12(PVP2)溶液の調製
一般に、PVP2を水に0.05g/mLの濃度で溶解させた。0.2μmフィルターを使用して、得られた溶液を濾過した。必要に応じて、PVP2溶液を、後続の製剤化に必要な濃度に希釈した。
一般に、PVP2を水に0.05g/mLの濃度で溶解させた。0.2μmフィルターを使用して、得られた溶液を濾過した。必要に応じて、PVP2溶液を、後続の製剤化に必要な濃度に希釈した。
PEG 4kDa溶液の調製
一般に、PEG 4kDaを、水に0.05g/mLの濃度で溶解させた。0.2μmフィルターを使用して、得られた溶液を濾過した。必要に応じて、PEG 4kDa溶液を、後続の製剤化に必要な濃度に希釈した。
一般に、PEG 4kDaを、水に0.05g/mLの濃度で溶解させた。0.2μmフィルターを使用して、得られた溶液を濾過した。必要に応じて、PEG 4kDa溶液を、後続の製剤化に必要な濃度に希釈した。
製剤の調製
N:P比7:1及び上述の他の賦形剤を全く含まないDNAのDNA濃度0.25mg/mLのDD-X-DNA(pVax-PD-L1-Fc)ポリプレックスを作製した。次に、ポリプレックスのアリコートを、本明細書に記載されるようにPEG化した(mPEG5K-b-PLE10)。
N:P比7:1及び上述の他の賦形剤を全く含まないDNAのDNA濃度0.25mg/mLのDD-X-DNA(pVax-PD-L1-Fc)ポリプレックスを作製した。次に、ポリプレックスのアリコートを、本明細書に記載されるようにPEG化した(mPEG5K-b-PLE10)。
PEG化されていないポリプレックス(CMC-INT06-112A)またはPEG化ポリプレックス(CMC-INT06-112B)のアリコートを、様々な濃度で水または様々な賦形剤のいずれかと混合して、以下に記載の最終目標賦形剤濃度及び最終DNA濃度0.1mg/mLを得た。
得られた製剤を等分し、クライオバイアルに充填して-80℃で凍結するか、または本明細書に記載されるように凍結乾燥した。解凍された試料を、本明細書に記載されているように、粒径、PDI、ゼータ電位、pH、%スーパーコイルDNA、及び遊離DNAについて分析した。以下に提示されるように、凍結乾燥試料を、別々の試料IDを割り当てた。
凍結乾燥試料を水で乾燥前の初期濃度に再水和させ、本明細書に記載されるように、粒径、PDI、ゼータ電位、pH、%スーパーコイルDNA、及び遊離DNAについて分析した。
18.3 結果
水単独中でのPEG化されていないポリプレックス(CMC-INT06-112 A1)は、凍結融解後に大幅に凝集した。従って、この試料において、さらなる試験を実施しなかった。
水単独中でのPEG化されていないポリプレックス(CMC-INT06-112 A1)は、凍結融解後に大幅に凝集した。従って、この試料において、さらなる試験を実施しなかった。
凍結乾燥固形物の外観。
水単独中でのPEG化されていないポリプレックスの凍結乾燥固形物(CMC-INT06-116A1)は、外観に一貫性がなく、崩壊していた。水または賦形剤のうちのいずれかまたは試験された濃度中のPEG化ポリプレックス製剤(CMC-INT06-116 B1~CMC-INT06-116 B11)の凍結乾燥固形物は、均一であり、収縮がわずかで亀裂がなかった。
水単独中でのPEG化されていないポリプレックスの凍結乾燥固形物(CMC-INT06-116A1)は、外観に一貫性がなく、崩壊していた。水または賦形剤のうちのいずれかまたは試験された濃度中のPEG化ポリプレックス製剤(CMC-INT06-116 B1~CMC-INT06-116 B11)の凍結乾燥固形物は、均一であり、収縮がわずかで亀裂がなかった。
再水和後の凍結乾燥試料の物理化学的性質
水単独中でのPEG化されていないポリプレックス(CMC-INT06-116 A1)は、再水和後に大幅に凝集した。従って、この試料において、さらなる試験を実施しなかった。水もしくは賦形剤のうちのいずれかまたは試験された濃度中のPEG化ポリプレックス製剤は、半透明であり、他の物理化学的特性は、凍結乾燥前から不変であった。
水単独中でのPEG化されていないポリプレックス(CMC-INT06-116 A1)は、再水和後に大幅に凝集した。従って、この試料において、さらなる試験を実施しなかった。水もしくは賦形剤のうちのいずれかまたは試験された濃度中のPEG化ポリプレックス製剤は、半透明であり、他の物理化学的特性は、凍結乾燥前から不変であった。
18.4 結論
PGA(1.3k)-PEG(5k)を使用したN:P:A比=7:1:17.5のPEG化ポリプレックスは、賦形剤の不存在下での凍結融解または凍結乾燥後のポリプレックスの凝集を防いだ。トレハロース、マンニトール、PEG 4kDaまたはPVP 2kDaは、凍結融解または凍結乾燥時にPEG化ポリプレックス凝集を防ぐために必要ではなく、それらは、試験された濃度で凝集を引き起こさない。
PGA(1.3k)-PEG(5k)を使用したN:P:A比=7:1:17.5のPEG化ポリプレックスは、賦形剤の不存在下での凍結融解または凍結乾燥後のポリプレックスの凝集を防いだ。トレハロース、マンニトール、PEG 4kDaまたはPVP 2kDaは、凍結融解または凍結乾燥時にPEG化ポリプレックス凝集を防ぐために必要ではなく、それらは、試験された濃度で凝集を引き起こさない。
19. 5%のトレハロース中での濃縮及び希釈PEG化ポリプレックスの凍結乾燥
参照:CMC-INT06-EXP-110及びCMC-INT06-128
19.1 手順
N:P比7:1及び上述の5%のトレハロースを有するかまたは有さないDNAのDNA濃度0.25mg/mLのDD-X-DNA(pVax-PD-L1-Fc)ポリプレックスを作製した。次に、ポリプレックスのアリコートをPEG化(mPEG5K-b-PLE10)し、上述のようにTFFプロセスを使用して濃縮した。N:P 7ポリプレックスに加えて、得られた製剤を生成し、2または10mLのガラスバイアルに充填した(0.3mL、1mL、及び2mLの充填量を試験した)。
参照:CMC-INT06-EXP-110及びCMC-INT06-128
19.1 手順
N:P比7:1及び上述の5%のトレハロースを有するかまたは有さないDNAのDNA濃度0.25mg/mLのDD-X-DNA(pVax-PD-L1-Fc)ポリプレックスを作製した。次に、ポリプレックスのアリコートをPEG化(mPEG5K-b-PLE10)し、上述のようにTFFプロセスを使用して濃縮した。N:P 7ポリプレックスに加えて、得られた製剤を生成し、2または10mLのガラスバイアルに充填した(0.3mL、1mL、及び2mLの充填量を試験した)。
以下の制御された凍結乾燥サイクルを使用して、試料を凍結乾燥した。
凍結:+20~-40℃(1℃/分)、次に、-40℃で120分。
1次乾燥:-32℃及び63mTorrで3800分
2次乾燥:P=63mTorr、シェルフT -30~30℃(0.2℃/分)、その後30℃で6時間。
凍結:+20~-40℃(1℃/分)、次に、-40℃で120分。
1次乾燥:-32℃及び63mTorrで3800分
2次乾燥:P=63mTorr、シェルフT -30~30℃(0.2℃/分)、その後30℃で6時間。
2次乾燥の終了時に、バイアルを、窒素ガスでパージし、栓をし、室温に平衡化させた。試料を水で再水和させて、様々な倍濃度(1倍または10倍)を得た。本明細書に記載されるように、試料を、粒径、PDIについて分析した。
19.2 結果
凍結乾燥試料は、1mLの充填量で、堅固な外観、軽い収縮、及び亀裂がある固形物であった。1mg/mL及び10mg/mLに再水和させた凍結乾燥試料は、外観が半透明で、目に見える凝集物はなかった。25mg/mLに再水和させた凍結乾燥試料は、懸濁液を形成するのに十分な量の水がないので、粘性のあるゲルを形成した(図12)。50mg/mLに再水和させた凍結乾燥試料は、懸濁液を形成するのに十分な量の水がないので、ペーストを形成した。
凍結乾燥試料は、1mLの充填量で、堅固な外観、軽い収縮、及び亀裂がある固形物であった。1mg/mL及び10mg/mLに再水和させた凍結乾燥試料は、外観が半透明で、目に見える凝集物はなかった。25mg/mLに再水和させた凍結乾燥試料は、懸濁液を形成するのに十分な量の水がないので、粘性のあるゲルを形成した(図12)。50mg/mLに再水和させた凍結乾燥試料は、懸濁液を形成するのに十分な量の水がないので、ペーストを形成した。
10mg/mL及び25mg/mLに再水和された凍結乾燥試料を、ナノ粒径、PDI、及びゼータ電位について試験し、4℃で少なくとも48時間は、いずれかの条件でも明らかな凝集は見られなかった(図12)。
20.4.5%のスクロースまたは水中で調製されたPEG-PP(様々なNPA比)の凍結乾燥
参照:CMC-INT06-129
20.1 手順
N:P比7:1及び上述の他の賦形剤を全く含まないDNAのDNA濃度0.125mg/mLのDD-X-DNA(pVax-PD-L1-Fc)ポリプレックスを作製した。次に、ポリプレックスのアリコートを、本明細書に記載されるようにPEG化した(mPEG5K-b-PLE10)。追加の試験試料CMC-INT06-124A及びCMC-INT06-124Bは、すでに本明細書に記載されている。
参照:CMC-INT06-129
20.1 手順
N:P比7:1及び上述の他の賦形剤を全く含まないDNAのDNA濃度0.125mg/mLのDD-X-DNA(pVax-PD-L1-Fc)ポリプレックスを作製した。次に、ポリプレックスのアリコートを、本明細書に記載されるようにPEG化した(mPEG5K-b-PLE10)。追加の試験試料CMC-INT06-124A及びCMC-INT06-124Bは、すでに本明細書に記載されている。
得られた製剤を、2mLのガラスバイアルに充填し(0.3mL及び1mLの充填量で試験し)、以下の制御された凍結乾燥サイクルを使用して凍結乾燥した。
凍結:20~-40℃(1℃/分)、次に、-40℃で120分。
1次乾燥:-35℃及び63mTorrで3660分
2次乾燥:P=63mTorr、シェルフT -35~30℃(0.2℃/分)、次に、30℃で360分。
凍結:20~-40℃(1℃/分)、次に、-40℃で120分。
1次乾燥:-35℃及び63mTorrで3660分
2次乾燥:P=63mTorr、シェルフT -35~30℃(0.2℃/分)、次に、30℃で360分。
2次乾燥の終了時に、バイアルを、窒素ガスでパージし、栓をし、室温に平衡化させ、使用するまで4℃で保存した。
短期間の安定性を、賦形剤を含まない試料(CMC-INT06-129A、CMC-INT06-129B、CMC-INT06-129C)に対して4℃で実施した。4.5%のスクロース試料(CMC-INT06-129D及びCMC-INT06-129E)を時間0で試験した。選択された時点で、試料を水で再水和させて、凍結乾燥前の濃度を得た。本明細書に記載されているように、再水和試料を、粒径、PDI、及びゼータ電位について分析した。
20.2 結果
全ての製剤を効率よく凍結乾燥させた。凍結保護剤を含まない製剤は、収縮/径方向収縮を示した:NPA比が低く(すなわち、NPA=7:1:7)、充填量が少ない(0.3mL)ものは、静電気の影響をより受けやすかった(固形物が上、横に移動する、壊れるなど)。4.5%のスクロースを含有する製剤は、限られた収縮のみを示し、光沢のある表面を有していた。
全ての製剤を効率よく凍結乾燥させた。凍結保護剤を含まない製剤は、収縮/径方向収縮を示した:NPA比が低く(すなわち、NPA=7:1:7)、充填量が少ない(0.3mL)ものは、静電気の影響をより受けやすかった(固形物が上、横に移動する、壊れるなど)。4.5%のスクロースを含有する製剤は、限られた収縮のみを示し、光沢のある表面を有していた。
賦形剤の不存在下での4℃で最大4週間の凍結乾燥試料の安定性(再水和試料の粒径、PDI、及びゼータ電位)が図14に示される。結果は、粒径及びゼータ電位の変化を全く示さず、PDIの乏しい増加を示すかまたは増加を全く示さなかった。
実施例2:
一般的な方法、組成物、及び手順は、別途記載のない限り、上記の実施例1に記載されている通りである。
一般的な方法、組成物、及び手順は、別途記載のない限り、上記の実施例1に記載されている通りである。
PEGがポリグルタミン酸尾部を含み且つポリプレックスが7:1:7(中PEG化)または7:1:17.5(高PEG化)のNPA比を含む、80μLの可逆的にPEG化されている二重誘導体化キトサンポリプレックス(DDX)を250μg/mLのマウス膀胱に投与した。対照として、7:1のNP比のPEG化されていないポリプレックス80μLをマウス膀胱に投与した。投与された製剤を、1時間膀胱中でインキュベートし、その後、膀胱の内容物を分析のために収集した。図15に示されるように、膀胱内でのインキュベーションは、PEG化されていないポリプレックスの高度な凝集を引き起こした。対照的に、高及び中PEG化ポリプレックスはともに、膀胱内でのインキュベーション後に検出可能な凝集を示さなかった。
実施例3:
可逆的PEG化及びPEG化されていないDDX粒子のin vivo遺伝子導入効率を比較した。NP7、NP15、及びNP20のPEG化されていないDDX粒子、ならびに、NPA 7:1:3.5(低PEG化)及びNPA 7:1:17.5(高PEG化)のPEG化DDXを試験した。実施例1及び2に記載されるように、可逆的PEG化DDX粒子を、PEG-ポリグルタミン酸でコーティングした。DDX製剤のそれぞれを、2つの異なる濃度(125μg/mL及び1,000μg/mL)で試験した。製剤を、結腸内点滴注入(ICI)により3x150μLの用量として注射した。24時間後、結腸試料を収集し、導入遺伝子のmRNA発現を分析した。図16に示されるように、PEG化DDX粒子は、コピー数の発現の増加(10x超)により検出されるように、著しく改善された遺伝子送達を達成した。PEG化DDX製剤中の検出可能な遺伝子発現を伴う%試料も大幅に改善した。
可逆的PEG化及びPEG化されていないDDX粒子のin vivo遺伝子導入効率を比較した。NP7、NP15、及びNP20のPEG化されていないDDX粒子、ならびに、NPA 7:1:3.5(低PEG化)及びNPA 7:1:17.5(高PEG化)のPEG化DDXを試験した。実施例1及び2に記載されるように、可逆的PEG化DDX粒子を、PEG-ポリグルタミン酸でコーティングした。DDX製剤のそれぞれを、2つの異なる濃度(125μg/mL及び1,000μg/mL)で試験した。製剤を、結腸内点滴注入(ICI)により3x150μLの用量として注射した。24時間後、結腸試料を収集し、導入遺伝子のmRNA発現を分析した。図16に示されるように、PEG化DDX粒子は、コピー数の発現の増加(10x超)により検出されるように、著しく改善された遺伝子送達を達成した。PEG化DDX製剤中の検出可能な遺伝子発現を伴う%試料も大幅に改善した。
mRNAの発現に加えて、導入遺伝子がコードしたタンパク質の発現も評価した。NP15(Gr.2)及びNP20(Gr.3)のPEG化されていないDDX粒子、ならびにNPA 7:1:3.5(Gr.7)及びNPA 7:1:17.5(Gr.5及び6)のPEG化DDXを試験した。実施例1及び2に記載されるように、可逆的PEG化DDX粒子を、PEG-ポリグルタミン酸でコーティングした。DDX製剤のそれぞれを125μg/mLで試験した。製剤を、結腸内点滴注入(ICI)により3x150μLの用量として注射した。24時間後、細胞試料を収集し、Meso Scale Discoveryイムノアッセイを使用して、導入遺伝子のタンパク質発現について分析した。図17に示されるように、PEG化されていないDDX粒子と比較して、PEG化DDX粒子で処置されたマウス結腸で、導入遺伝子がコードしたタンパク質発現を大幅に増加させた。
それぞれを1000μg/mLで製剤化した、7:1のNP比を有するPEG化されていないDDX粒子及び7:1:17.5のNPA比を有するPEG化DDX粒子を用いて、タンパク質発現実験を繰り返した。3x150μLのICI手順を使用して製剤を投与した、結腸切片を投与の24時間後に採取し、Meso Scale Discoveryイムノアッセイを用いて、タンパク質溶解物を使用して、ヒトPD-L1-Fcタンパク質を定量化した。図18に示されるように、PEG化されていないDDX粒子と比較して、PEG化DDX粒子で処置されたマウス結腸で、導入遺伝子がコードしたタンパク質発現を大幅に増加させた。
実施例4:
上述の実施例で概説した一般的な方法及びアッセイされた物理化学的パラメーターを使用して、PEG化DDXナノ粒子を生成した。25%のカチオン(アルギニン(R))の最終官能基化度及び10%のポリオール(グルコース(G))の最終官能基化度を有する二重誘導体化ポリプレックスをNP 20:1(PEG化されていない)及びNPA 10:1:5(PEG化)比で調製した。それぞれのPEG化されていない及びPEG化ポリプレックスに提供される凍結保護の改善に基づいて、凍結保護剤(5%のトレハロースまたは1%のマンノース)を選択した。製剤を凍結または凍結乾燥し、その後、必要に応じて解凍または再水和させた。試料を、%スーパーコイルDNA、外観、粒径、PDI、ゼータ電位、及びpHについて試験した。
上述の実施例で概説した一般的な方法及びアッセイされた物理化学的パラメーターを使用して、PEG化DDXナノ粒子を生成した。25%のカチオン(アルギニン(R))の最終官能基化度及び10%のポリオール(グルコース(G))の最終官能基化度を有する二重誘導体化ポリプレックスをNP 20:1(PEG化されていない)及びNPA 10:1:5(PEG化)比で調製した。それぞれのPEG化されていない及びPEG化ポリプレックスに提供される凍結保護の改善に基づいて、凍結保護剤(5%のトレハロースまたは1%のマンノース)を選択した。製剤を凍結または凍結乾燥し、その後、必要に応じて解凍または再水和させた。試料を、%スーパーコイルDNA、外観、粒径、PDI、ゼータ電位、及びpHについて試験した。
図19に示されるように、非PEG凍結乾燥の場合、t=0、%スーパーコイルDNAは、同等のPEG化製剤よりも有意に低かった。%スーパーコイルDNAは、核酸送達材料の品質を示し、好ましくは、80%超、より好ましくは、90%超であるべきである。
ポリプレックスを、10:1:5のNPA(PEG化)比で調製した。これらのポリプレックスでは、カチオン/ポリオールの最終官能基化度は、28%のR及び10%のGであり、DNA濃度は、125μg/mLであった。凍結保護剤は、1%のマンニトールであった。製剤を凍結乾燥させ、4℃及び室温で最大12週間保存した。t=0(初期)、2週、4週、8週、及び12週に、試料を元のDNA濃度に再水和させ、%スーパーコイルDNA、粒径、及びPDIについて試験した。図20に示されるように、凍結乾燥PEG化DDX製剤は、4℃または室温(RT)で保存された場合、最大12週間安定であった。
ポリプレックスを、10:1:5のNPA(PEG化)比及び20:1のNP(PEG化されていない)比で調製した。これらのポリプレックスでは、カチオン/ポリオールの最終官能基化度は、28%のR及び10%のGであり、DNA濃度は、1000μg/mLであった。それぞれのPEG化されていない及びPEG化ポリプレックスに提供される凍結保護の改善に基づいて、凍結保護剤(5%のトレハロースまたは1%のマンニトール)を選択した。製剤を凍結乾燥し、その後、示された目標DNA濃度(c1000=1mg/mL、c2000=2mg/mL、c5000=5mg/mL、c10,000=10mg/mL)に再水和させた。試料を粒径及びPDIについて試験した。図21に示されるように、凍結乾燥PEG化製剤は、最大10mg/mLの濃度に安定的に再水和させたが、PEG化されていない製剤は、2mg/mLに安定して再水和させることが可能であった。2mg/mLの再水和濃度は有用な遺伝子送達製剤を提供したが、PEG化製剤の達成可能に安定したDNA濃度(10mg/mL)が予想外に大幅に増加することより、治療または臨床的に関連する効果を達成するのに必要とされる投与量の観点で大きな利益が提供される。
ポリプレックスを、10:1:5のNPA(PEG化)比及び10:1のNP(PEG化されていない)比で調製した。これらのポリプレックスの場合、カチオン/ポリオールの最終官能基化度は、28%のR及び10%のGであった。1%のマンニトール(PEG化ポリプレックス)または5%のトレハロース(PEG化されていないポリプレックス)を含有する製剤を125/mlのDNA濃度でマウスの膀胱に投与し、1時間インキュベートし、膀胱の内容物を分析のために収集した。外観及び動的光散乱によるナノ粒子のサイジングについて試料を試験した。図22に示されるように、PEG化ポリプレックスは、検出可能な凝集を示さないが、PEG化されていないポリプレックスは、サイズ及び多分散指数(PDI)の増加(左に示される)により、ならびに、収集される尿試料の画像の白色塊の出現(右に示される)により、高度な凝集を示した。
ポリプレックスを、10:1:5のNPA(PEG化)比及び20:1のNP(PEG化されていない)比で調製した。これらのポリプレックスの場合、カチオン/ポリオールの最終官能基化度は、28%のR及び10%のGであった。1%のマンニトール(PEG化ポリプレックス)または5%のトレハロース(PEG化されていないポリプレックス)を含有する製剤を、滅菌濾過の適合性についてアッセイした。1mgのDNA/mLでの、0.5mLのPEG化されていない(NPA 20:1)及びPEG化(NPA 10:1:5)DDXポリプレックス製剤を、様々なメンブレンタイプ:PES(ポリエーテルスルホン)、PVDF(ポリフッ化ビニリデン)、PTFE(ポリテトラフルオロエチレン)、及びナイロンからなる0.2μmの細孔フィルター(13mmの直径、1cm2の表面積)に通して濾過した。ナノ粒子のサイジング、ゼータ電位、導電率、pH、カチオン(アルギニン)、ポリオール(グルコース)含有量、及びDNA含有量について、試料を試験した。図23に示されるように、DNA濃度は、PEG化ポリプレックス製剤(10%未満)と比較して、PEG化されていないポリプレックス製剤の濾過後に、有意に大きな減少(15~32%)を示した。これらの結果は、PEG化されていないポリプレックスがアッセイ条件下で凝集することを示唆する。
図23に示される結果を確認するために、PEG化及びPEG化されていないDDXキトサン-DNAポリプレックスの生成をスケールアップし、製剤を大量の濾過性について試験した。これらのポリプレックスの場合、カチオン/ポリオールの最終官能基化度は、28%のR及び10%のGであった。1%のマンニトール(PEG化ポリプレックス)または5%のトレハロース(PEG化されていないポリプレックス)を含有する製剤を、滅菌濾過の適合性についてアッセイした。1mgのDNA/mLのDNA濃度の5~15mLのPEG化されていない(NPA 20:1:0)及びPEG化(NPA10:1:5)DDX DNAポリプレックス製剤を、0.8/0.2μmの細孔PESフィルタースタック(直径25mm、表面積2.8cm2、各フィルター)に通して濾過した。濾過は、30psigの定圧Vmax濾過セットアップによるものであった(図24に示される概略図)。表面積当たりの収集された濾液の質量として、濾過性を決定した。ナノ粒子のサイジング、ゼータ電位、導電率、pH、カチオン/ポリオール含有量、及びDNA含有量について、濾過前及び濾過後の試料を試験した。
図24に示されるように、DNA濃度は、PEG化ポリプレックス製剤(10%未満)と比較して、PEG化されていないポリプレックス製剤の濾過後に、有意に大きな減少(19%)を示した。さらに、PEG化されていないポリプレックス製剤は、1.375gのポリプレックス/cm2(メンブレン表面積)の最大濃度で供給される場合に、濾過装置を目詰まりさせた。対照的に、PEG化ポリプレックスは、試験された全てのポリプレックス濃度(最大5.35gのポリプレックス/cm2(表面積))でフィルターを目詰まりさせなかった。これは、5.35g/cm2を超えるPEG化ポリプレックス製剤が、濾過可能のままであることを示唆する。
図25に示されるNPA(PEG化)またはNP(PEG化されていない)比及び0.125mg/mLのDNA濃度(c125)でポリプレックスを調製した。カチオン/ポリオール数比は、25%のR及び10%のGであった。凍結保護剤は、1%のマンニトール(1%のMan)であった。製剤を、凍結融解(FT)または凍結乾燥及び再水和(FD)させた。試料を%スーパーコイルDNAナノ粒径及びゼータ電位について試験した。図25に示されるように、PEG化されていないDDX製剤は、凍結/解凍及び凍結乾燥/再水和後に沈殿した。沈殿試料において、%スーパーコイルDNAを測定することができなかった。対照的に、PEG化DDX製剤(NPA 10:1:5及び10:1:2.5)は、凍結/解凍後に凝集しなかったが、10:1:1製剤は、凍結/解凍後に若干の凝集を示したが、PEG化されていない材料よりも著しく少ない。凍結乾燥/再水和後、試験された全てのPEG化DDX製剤(NPA 10:1:5~10:1:1)は、検出可能な凝集を示さなかった。
PEG化DDXポリプレックスを調製し、直接点滴注入によりイヌ小腸に送達した。図26に示されるように、イヌにおける遺伝子送達を示すmRNAコピー数を、送達の24時間後に検出した。
PEG化ポリプレックスを、様々な比の酢酸塩緩衝液と混合して、低pH環境をシミュレートし、得られた溶液のpHを測定した。粒子のゼータ電位も監視した。pHがポリマーコートのアニオンアンカー領域のpKa未満に低下すると(約4.25)、ゼータ電位が劇的に増加し、ポリマーコートの放出を示す。図27を参照のこと。
実施例5:
異なるサイズのポリグルタミン酸アンカー領域を有する、二重誘導体化キトサン(Arg:グルコン酸)を含有する可逆的にPEG化されているポリプレックスを、7:1:XのN:P:A比(式中、Xは3.5、9、または14.5である)で調製した。PLE5は、PEG-ポリグルタミン酸(PEG-PLE)ポリマーを含むポリプレックスを指し、ポリグルタミン酸アンカー領域は、長さが5グルタミン酸アミノ酸である。PLE10は、10グルタミン酸アミノ酸の長さを指し、PLE25は、25グルタミン酸アミノ酸長を指す。得られたPEG化ポリプレックスの物理化学的パラメーターは、以下の表に示される。
異なるサイズのポリグルタミン酸アンカー領域を有する、二重誘導体化キトサン(Arg:グルコン酸)を含有する可逆的にPEG化されているポリプレックスを、7:1:XのN:P:A比(式中、Xは3.5、9、または14.5である)で調製した。PLE5は、PEG-ポリグルタミン酸(PEG-PLE)ポリマーを含むポリプレックスを指し、ポリグルタミン酸アンカー領域は、長さが5グルタミン酸アミノ酸である。PLE10は、10グルタミン酸アミノ酸の長さを指し、PLE25は、25グルタミン酸アミノ酸長を指す。得られたPEG化ポリプレックスの物理化学的パラメーターは、以下の表に示される。
得られたPEG化ポリプレックスを粒径についてアッセイし、調製されたポリプレックス間に、サイズの有意な変化は確認されなかった。図28。ポリプレックスを水に分散させ、pHを測定した。これにより、より大きなPLE長及び漸減するN:A比はともに、水性分散液の高いpHに寄与することが示された。図29。同様に、ゼータ電位測定により、より長いPLEアンカー領域及び漸減するN:A比はともに、ゼータ電位を減少させることが示された。図30(左)。さらに、本発明者らは、N:P:A(7:1:X(X=9)~7:1:X(X=14.5)に調整される)としてのPLE25ポリプレックスのゼータ電位を減少させるこの傾向の安定状態を観察し、これにより、最大のPEG化は、より少ない量のポリマーで達成される。図30(右)。
PEG化ポリプレックスをポリアスパラギン酸(PAA)競合アッセイでアッセイし、PAAを様々な濃度で、PEG化ポリプレックスを含有する水性緩衝液中で混合し、核酸の接近可能性を観察した。核酸の接近可能性は、PicoGreenアッセイで測定される。接近可能な核酸が、PicoGreenに結合し、結合することにより引き起こされる蛍光シグナルの増加が検出される。完全に放出された及び/または完全に接近可能な核酸は、最大の蛍光シグナルを提供する。最大半分のシグナルを達成するために必要とされるPAA濃度のEC50は、いかに容易に粒子組成物がPAA接触により破壊されるか、つまり、試験されたポリプレックスの安定性の尺度である。結果は、PLE25 PEG化ポリプレックスが他のポリプレックスよりもいくらか安定性が低いことを示す。図31~32。
PEG化されているポリプレックスをc125(125μg/mLのDNA)反応混合物として調製し、その後、1:2の体積比(過剰FaSSIF)でFaSSIF-V2と混合した。FaSSIF-V2と混合された後、DLS測定を、37℃、時間ゼロ(T0)及び30分(T=30)で行って、粒径及び多分散度を測定し(図33)、試料をゼータ電位及びpHについてもアッセイした(図34)。試験された条件下で、ポリアニオン鎖長がより長い(例えば、PLE25が最も安定性が高く、PLE5が最も安定性が低い)及びキトサンのアミノ官能基化がより高い(例えば、N:P:A 14.5が最も安定性が高く、N:P:A 3.5が最も安定性が低い)ポリプレックスは、より安定性が高い。
実施例6:
PEG化ポリプレックスに対するポリアニオン種及び分子量(MW)の影響を試験した。PLE(ポリグルタミン酸)、PLD(ポリアスパラギン酸、すなわち、PAA)、及びHA(ヒアルロン酸)を研究した。4.51%のトレハロース溶液を、貯蔵安定剤として使用した。PEGポリアニオンワーキング溶液を調製した。
PEG化ポリプレックスに対するポリアニオン種及び分子量(MW)の影響を試験した。PLE(ポリグルタミン酸)、PLD(ポリアスパラギン酸、すなわち、PAA)、及びHA(ヒアルロン酸)を研究した。4.51%のトレハロース溶液を、貯蔵安定剤として使用した。PEGポリアニオンワーキング溶液を調製した。
PEG-HA25は、トレハロース希釈液に溶解せずに、ゲル状種になった。100xに希釈すると、ゲルは、溶解しなかった。PEG-HA25は、さらなる分析から除外された。得られたc250溶液を、ボルテックスしながら、PEGポリアニオン溶液をc250溶液に添加することにより、1:1v/v比でPEGポリアニオンと混合した。PEGポリアニオンを添加した後、ボルテックスを10秒間続けた。以下のPEG化ポリプレックスを生成した。
上記の組成物を周囲温度で1時間インキュベートした後、さらに分析した。
別々に、二重誘導体化キトサン核酸ポリプレックスの溶液を、4.51%のトレハロース溶液中で1000μg/mL(c1000)の核酸濃度から125μg/mL(c125)の核酸濃度に希釈した。凍結融解(F/T)後、外観、pH、サイズ、ゼータ電位、及び遊離DNA含有量について全ての試料を試験した。結果は、以下の表及び図35~36に示される。
ポリプレックス試料をアガロースゲル電気泳動で分析して、複合体を形成していない核酸を検出した。図37。PEG-PLD50を用いてPEG化されている7:1:30 N:P:Aポリプレックス(図37、下段の6~8)を除いて、試験された全ての試料は、検出可能な複合体を形成していない核酸を示さなかった。
結果は、以下を示唆する。PEG-PLE10、PEG-PLD10、及びPEG-PLD50は、PEG化の7:1のNP比でDDXポリプレックスと相溶性がある。F/T後、c125 PEG化ポリプレックス溶液のいずれにも、沈殿物が観察されなかった。PEG-PLE10及びPEG-PLD10は、ポリプレックスと混合した場合は同様に挙動する。ポリプレックスのサイズは、PEG化後に140nmから160nmに増加した。サイズは、7:1:3.5、7:1:5、7:1:9、7:1:15、及び7:1:30のNPA比で、160nmの安定水準に達した。ゼータ電位は、PEGポリアニオン比が増加するにつれて減少するが、減少は、7:1:9を超えると遅くなり、PEG化が飽和に達し得ることが示唆される。PEG-PLD50の場合、PEG化後に、NPA比が7:1:15まで、ポリプレックスのサイズは、PEG化前のポリプレックス(7:1:0)と同等である。7:1:30のNPAで、ポリプレックスサイズは、PEG化後に440nmに増加した。PEG-PLD50PEG化ポリプレックスのゼータ電位は、PEG-PLD50比が増加するにつれて減少する。7:1:30のPEG-PLD50で、遊離DNAは観察されたが、他の製剤では、遊離DNAは見られなかった。これは、7:1:30のPEG-PLD50のポリプレックス内の核酸が、緩く包まれ、及び/またはPLD-50が誘導体化キトサンの核酸への結合を破壊することを示唆する。
実施例6:
非共有結合的な可逆的PEG化の効果を共有結合的なPEG化と比較した。図38に示すように、滴定可能なポリアニオンアンカー領域を有する非共有結合的にPEG化されているポリプレックス及び共有結合的にPEG化されているポリプレックスはともに、ポリアニオンアンカー領域の負電荷を維持するpH条件下で中性に近いゼータ電位を有すると予想される。ポリアニオンアンカー領域を低pH(例えば、pH2)で中性または正電荷に滴定すると、非共有結合的にPEG化されているポリプレックスのゼータ電位が検出可能に増加するはずである。対照的に、共有結合しているPEGは、放出することができず、ゼータ電位は、それほど変化しないはずである。
非共有結合的な可逆的PEG化の効果を共有結合的なPEG化と比較した。図38に示すように、滴定可能なポリアニオンアンカー領域を有する非共有結合的にPEG化されているポリプレックス及び共有結合的にPEG化されているポリプレックスはともに、ポリアニオンアンカー領域の負電荷を維持するpH条件下で中性に近いゼータ電位を有すると予想される。ポリアニオンアンカー領域を低pH(例えば、pH2)で中性または正電荷に滴定すると、非共有結合的にPEG化されているポリプレックスのゼータ電位が検出可能に増加するはずである。対照的に、共有結合しているPEGは、放出することができず、ゼータ電位は、それほど変化しないはずである。
図39に示されるように、2つの異なる共有結合的なPEG化方策を研究した。最初に、PEG-PLEを二重誘導体化(DDX)キトサンに架橋して、架橋PEG-キトサン原料を形成し、DNAを添加してポリプレックス(キトサンに架橋されたPEG)を形成した。(図39、中段)。次に、可逆的にPEG化されているポリプレックスを形成し、EDC/NHSを添加して、PEG-PAポリマーをポリプレックスと共有結合的に架橋した(ポリプレックスに架橋されたPEG)。(図39、下)。共有結合的にPEG化されているポリプレックスはともに、pHを6~2に調整した後、ゼータ電位において微小変化を示した。対照的に、可逆的にPEG化されているポリプレックスのゼータ電位は、大幅に増加した。遊離ポリアスパラギン酸(PAA)で誘発することにより、安定性についてもポリプレックスを試験した。PAA誘発により、ポリプレックス中の核酸を、可逆的にPEG化されているポリプレックス及びキトサンポリプレックスに架橋したPEGから放出させた。対照的に、ポリプレックス形成後の架橋は、試験された条件下でPAA誘発後に核酸を放出しないポリプレックスを提供した。
7:1:X(Xは、9、3、または1である)のN:P:Aで可逆的にPEG化されているポリプレックスについて、トランスフェクション効率をアッセイし、PEG化されていないポリプレックス(7:1:0)と比較した。結果は、トランスフェクション効率が可逆的PEG化により低下しなかったことを示した。図40。
可逆的にPEG化されているポリプレックス及び共有結合的にPEG化されているポリプレックスのトランスフェクション効率を比較した。図41に示されるように、可逆的にPEG化されているポリプレックスは、高いトランスフェクション効率を維持したが、両方のタイプの共有結合的にPEG化されているポリプレックスは、低いトランスフェクション効率を示した。
実施例7:
核酸、キトサン、及びPEG-ポリアニオンポリマーの1段階混合により形成された可逆的にPEG化されているポリプレックス(1段階)のトランスフェクション効率を、予め形成されたキトサンDNAポリプレックスをPEG-ポリアニオンポリマーと混合することにより形成された可逆的にPEG化されているポリプレックス(2段階)と比較した。1段階または2段階のPEG化ポリプレックスの結腸内送達の24時間後に結腸組織で、mRNA発現を検出した。1段階または2段階のPEG化ポリプレックスの膀胱内送達の24時間後に膀胱組織で、mRNA及びタンパク質を検出した。図42~43に示される結果は、1段階ポリプレックス及び2段階ポリプレックスの両方が、試験された条件下で同様のトランスフェクション効率を示すことを示す。理論に拘束されることを望むものではないが、通常は、サイズが小さい1段階ポリプレックスは、高粘度の粘膜において優れた拡散特性を示し得ると仮定される。
核酸、キトサン、及びPEG-ポリアニオンポリマーの1段階混合により形成された可逆的にPEG化されているポリプレックス(1段階)のトランスフェクション効率を、予め形成されたキトサンDNAポリプレックスをPEG-ポリアニオンポリマーと混合することにより形成された可逆的にPEG化されているポリプレックス(2段階)と比較した。1段階または2段階のPEG化ポリプレックスの結腸内送達の24時間後に結腸組織で、mRNA発現を検出した。1段階または2段階のPEG化ポリプレックスの膀胱内送達の24時間後に膀胱組織で、mRNA及びタンパク質を検出した。図42~43に示される結果は、1段階ポリプレックス及び2段階ポリプレックスの両方が、試験された条件下で同様のトランスフェクション効率を示すことを示す。理論に拘束されることを望むものではないが、通常は、サイズが小さい1段階ポリプレックスは、高粘度の粘膜において優れた拡散特性を示し得ると仮定される。
均等物
本明細書に記載の全ての刊行物、特許、及び特許出願は、全体が、あらゆる目的のために、それぞれ個々の刊行物、特許、または特許出願が参照により組み込まれることが具体的且つ個別に示されるのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。上記の開示は、独立した有用性を有する複数の別個の発明を包含し得る。これらの発明のそれぞれが、好ましい形態(複数可)で開示されているが、本明細書に開示及び例示されたその特定の実施形態は、多数の変形が可能であるので、限定的な意味で考慮されるべきではない。本発明の主題は、本明細書に開示の様々な要素、特徴、機能、及び/または特性の全ての新規且つ非自明な組み合わせ及び副組み合わせを含む。以下の特許請求の範囲は、特に、新規且つ非自明であるとみなされる特定の組み合わせ及び副組み合わせを指摘する。特徴、機能、要素、及び/または特性の他の組み合わせ及び副組み合わせで実行される発明は、本出願で、本出願の優先権を主張する出願で、または関連出願で特許請求されてもよい。そのような特許請求の範囲もまた、異なる発明に関するものであれ、同じ発明に関するものであれ、元の特許請求の範囲と比較して範囲が広くとも、狭くとも、等しくとも、または異なっていてようとも、本開示の発明の主題内に含まれるものとみなされる。
本明細書に記載の全ての刊行物、特許、及び特許出願は、全体が、あらゆる目的のために、それぞれ個々の刊行物、特許、または特許出願が参照により組み込まれることが具体的且つ個別に示されるのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。上記の開示は、独立した有用性を有する複数の別個の発明を包含し得る。これらの発明のそれぞれが、好ましい形態(複数可)で開示されているが、本明細書に開示及び例示されたその特定の実施形態は、多数の変形が可能であるので、限定的な意味で考慮されるべきではない。本発明の主題は、本明細書に開示の様々な要素、特徴、機能、及び/または特性の全ての新規且つ非自明な組み合わせ及び副組み合わせを含む。以下の特許請求の範囲は、特に、新規且つ非自明であるとみなされる特定の組み合わせ及び副組み合わせを指摘する。特徴、機能、要素、及び/または特性の他の組み合わせ及び副組み合わせで実行される発明は、本出願で、本出願の優先権を主張する出願で、または関連出願で特許請求されてもよい。そのような特許請求の範囲もまた、異なる発明に関するものであれ、同じ発明に関するものであれ、元の特許請求の範囲と比較して範囲が広くとも、狭くとも、等しくとも、または異なっていてようとも、本開示の発明の主題内に含まれるものとみなされる。
Claims (39)
- 組成物であって、
(a)アミノ官能基化キトサン及び少なくとも1つの核酸分子を含むキトサン誘導体ナノ粒子を含む複合体を含み、前記少なくとも1つの核酸分子が、前記キトサン誘導体ナノ粒子に、3:1を超えるアミノ酸対リン(N:P)モル比で、非共有結合的に結合しており、それにより、正電荷を有する誘導体化キトサン核酸複合体を形成し、さらに、前記組成物が、
(b)前記キトサン誘導体ナノ粒子に非共有結合的に結合している複数の線状ブロックコポリマーを含み、前記線状ブロックコポリマーが、少なくとも1つのポリアニオン(PA)アンカー領域及び少なくとも1つのポリエチレングリコール(PEG)尾部領域を含み、前記PEG-PA分子が、前記キトサン誘導体ナノ粒子に非共有結合的に結合しており、
前記組成物が、約1:100超且つ約10:1未満であるアミノ酸対アニオン(N:A)モル比を含む、前記組成物。 - 前記線状ブロックコポリマーが、PAアンカー領域及びPEG尾部領域を含む二元ブロックコポリマーである、請求項1に記載の組成物。
- 前記線状ブロックコポリマーが、2つのPEG尾部領域に隣接する中央のPAアンカー領域、または、代わりに、2つのPAアンカー領域に隣接する中央のPEG尾部領域を含む三元ブロックコポリマーである、請求項1に記載の組成物。
- 前記PA尾部領域が、ポリペプチドを含み、前記ポリペプチドが、負荷電である、請求項1に記載の組成物。
- 前記PA尾部領域が、炭水化物を含み、前記炭水化物が、負荷電である、請求項1に記載の組成物。
- 前記炭水化物は、複数のカルボン酸、リン酸、及び/または硫酸部分を含む、請求項5に記載の組成物。
- 前記炭水化物が、グリコサミノグリカンである、請求項6に記載の組成物。
- PEG-PA分子が、
(a)PEG-ポリグルタミン酸(PEG-PGA)分子、
(b)PEG-ポリアスパラギン酸(PEG-PAA)分子、もしくは
(c)PEG-ヒアルロン酸(PEG-HA)分子、
または(a)~(c)のうちの1つ、もしくは2つ、もしくは全ての組み合わせ
を含む、請求項1に記載の組成物。 - 前記PEG-PA分子の前記PEG部分が、約500Da~約50,000Da、好ましくは、約1,000Da~約10,000Da、好ましくは、約1,500Da~約7,500Da、さらにより好ましくは、約3,000Da~約5,000Da、最も好ましくは、約5,000Daの重量平均分子量(Mw)を含む、請求項1~6のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記PEG-PA分子の前記PA部分が、約500Da~約3,000Da、より好ましくは、約1,000Da~約2,500Da、より好ましくは、1,500Daの重量平均分子量(Mw)を含む、請求項1~9のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記PEG-PA分子の前記PA部分が、例えば、約5~約25の酸性アミノ酸を含む線状ポリペプチドを含む、請求項1~9のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記N:Pモル比が、約3:1超且つ約100:1未満、より好ましくは、約5:1超且つ約50:1未満、さらにより好ましくは、約5:1超且つ約30:1未満、さらにより好ましくは、約5:1超且つ約20:1未満、さらにより好ましくは、約5:1且つ約10:1未満、最も好ましくは、約7:1である、請求項1~11のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記N:Aモル比が、約1:75超及び約8:1未満、より好ましくは、約1:50超及び約6:1未満、さらにより好ましくは、約1:25超及び約6:1未満、さらにより好ましくは、約1:10超及び約6:1未満、さらにより好ましくは、約1:5超及び約6:1未満である、請求項1~12のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記N:Pモル比が、約1:8~約30:1(例えば、~約20:1、15:1、10:1、8:1、または7:1)であり、前記P:Aモル比が、約1:50~約1:5であり、より好ましくは、前記N:Aモル比が、約1:10~約5、より好ましくは、約1:5~約2、より好ましくは、約1:3~約1.5、より好ましくは、約1:2.5~約1であり、さらにより好ましくは、前記N:P:A比が、約7:1:7、約7:1:12、または約7:1:17である、請求項1~11のいずれか1項に記載の組成物。
- アミノ官能基化キトサンが、アルギニン、リジン、またはオルニチンで官能基化され、好ましくは、アルギニンで官能基化される、請求項1~16のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記組成物が、
(a)空腹時人工腸液中で少なくとも24時間、または
(b)37℃で哺乳動物の尿中に分散させて、少なくとも1時間、
安定である、請求項1~17のいずれか1項に記載の組成物。 - 前記組成物が、さらに、界面活性剤、賦形剤、及び/または貯蔵安定剤を含む、請求項1~18のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記組成物が、前記貯蔵安定剤を含み、好ましくは、前記貯蔵安定剤が、単糖、二糖、多糖、またはその還元アルコールであり、さらにより好ましくは、前記貯蔵安定剤が、トレハロース及びマンニトールから選択される、請求項19に記載の組成物。
- 前記組成物が、前記界面活性剤を含み、好ましくは、前記界面活性剤が、ポロキサマーを含み、より好ましくは、前記ポロキサマーが、ポロキサマー407である、請求項19または20に記載の組成物。
- 前記少なくとも1つの核酸が、RNAを含む、請求項1~21のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記少なくとも1つの核酸が、DNAを含む、請求項1~21のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記組成物が、精製水中に分散させた前記組成物を含む水性分散液中、4℃で、48時間、もしくは少なくとも48時間、または1週間安定である、請求項1~23のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記組成物が、凍結/解凍及び/または乾燥/再水和後に前記水性分散液中で安定であり、好ましくは、前記乾燥が、噴霧乾燥、凍結乾燥、噴霧凍結乾燥、蒸発、または超臨界乾燥を含み、より好ましくは、前記乾燥が、凍結乾燥または噴霧乾燥を含む、請求項24に記載の組成物。
- 前記組成物が、例えば、前記水性分散液中、4℃で、少なくとも48時間、または1週間後に、0.2未満の多分散指数を示す、請求項24または25に記載の組成物。
- 請求項1~26に記載の組成物のいずれか1つを作成するための方法であって、前記方法が、
(a)アミノ官能基化キトサン及び前記少なくとも1つの核酸を含む前記キトサン誘導体ナノ粒子を含む複合体を提供すること、ならびに
(b)前記複合体を、PEG-PA分子を含む溶液と混合し、それにより、前記組成物を含む反応混合物を形成すること、
を含む、前記方法。 - (a)の前記複合体が、0.01mg/mL~25mg/mL、より好ましくは、0.05~10mg/mL、より好ましくは、0.10~5mg/mL、より好ましくは、0.10~2mg/mLのヌクレオチドの濃度で提供される、請求項27に記載の方法。
- (a)及び(b)が、1:10~10:1、好ましくは、1:5~5:1、より好ましくは、1:2~2:1の(v/v)比で、さらにより好ましくは、約1:1の比で混合される、請求項27または28に記載の方法。
- 前記方法が、さらに、前記反応混合物を濃縮することを含み、好ましくは、前記濃縮が、限外濾過、溶媒昇華、及び/または溶媒蒸発を含み、より好ましくは、前記限外濾過が、タンジェンシャルフロー濾過を含む、請求項27、28、または29に記載の方法。
- 前記アミノ官能基化キトサンが、親水性ポリオールを含むか、またはそれで官能基化される、請求項27に記載の方法。
- 前記方法が、アミノ官能基化キトサン、少なくとも1つの核酸、及びPEG-PA分子を同時または逐次的に混合し、それにより、前記組成物を含む反応混合物を形成すること、を含む、請求項1~26の組成物のいずれか1つを作製するための方法。
- 前記方法が、同時に、前記アミノ官能基化キトサン、少なくとも1つの核酸、及び前記PEG-PA分子を組み合わせ、それにより、前記組成物を含む反応混合物を形成することを含む、請求項32に記載の方法。
- 核酸を細胞にトランスフェクトする方法であって、前記細胞を、請求項1~22のいずれか1項による組成物、または、請求項23~33に記載の方法のいずれかにより生成された組成物と接触させることを含む、前記方法。
- 前記細胞が、粘膜組織を含むか、またはそれに由来する細胞である、請求項34に記載の方法。
- 前記粘膜組織が、肺組織、鼻組織、眼組織、膣組織、膀胱組織、または胃腸管組織である、請求項35に記載の方法。
- 前記細胞が、対象の腸細胞であり、前記接触が、前記対象に前記組成物を経口または直腸内投与することを含む、請求項35に記載の方法。
- 前記細胞が、前記膀胱の細胞であり、前記接触が、前記対象への前記組成物の膀胱内投与を含む、請求項35に記載の方法。
- 前記方法が、PEG-PAを含む前記ポリマー構成成分を含まない粒子と比較して、粘膜付着の減少を提供する、請求項27~33のいずれか1項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (7)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201962818425P | 2019-03-14 | 2019-03-14 | |
US62/818,425 | 2019-03-14 | ||
US201962923403P | 2019-10-18 | 2019-10-18 | |
US62/923,403 | 2019-10-18 | ||
US201962924131P | 2019-10-21 | 2019-10-21 | |
US62/924,131 | 2019-10-21 | ||
PCT/IB2020/000175 WO2020183238A1 (en) | 2019-03-14 | 2020-03-13 | Reversible coating of chitosan-nucleic acid nanoparticles and methods of their use |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2022524859A true JP2022524859A (ja) | 2022-05-10 |
JPWO2020183238A5 JPWO2020183238A5 (ja) | 2023-03-22 |
Family
ID=72426073
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021555295A Pending JP2022525866A (ja) | 2019-03-14 | 2020-03-13 | 粘膜癌の処置のための、単独の、またはi型ifnインデューサーと組み合わせた、キトサンポリプレックスベースのil-12の局部発現 |
JP2021555307A Pending JP2022524859A (ja) | 2019-03-14 | 2020-03-13 | キトサン-核酸ナノ粒子の可逆的コーティング及びその使用方法 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021555295A Pending JP2022525866A (ja) | 2019-03-14 | 2020-03-13 | 粘膜癌の処置のための、単独の、またはi型ifnインデューサーと組み合わせた、キトサンポリプレックスベースのil-12の局部発現 |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20220395584A1 (ja) |
EP (2) | EP3937981A4 (ja) |
JP (2) | JP2022525866A (ja) |
KR (2) | KR20210151822A (ja) |
CN (2) | CN113874049A (ja) |
AU (2) | AU2020234067A1 (ja) |
BR (2) | BR112021018186A2 (ja) |
CA (2) | CA3133177A1 (ja) |
IL (2) | IL286320A (ja) |
MX (2) | MX2021010993A (ja) |
SG (2) | SG11202110008TA (ja) |
WO (2) | WO2020183238A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2021150997A2 (en) * | 2020-01-22 | 2021-07-29 | Engene, Inc. | Localized expression of therapeutic nucleic acids in lung epithelial cells |
CN117881426A (zh) * | 2021-02-18 | 2024-04-12 | 恩根尼公司 | 用于治疗转移性癌症的组合基因疗法 |
NL2031209B1 (en) | 2022-03-09 | 2023-09-18 | 20Med Therapeutics B V | Polymer-coated nanoparticles |
Family Cites Families (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7595303B1 (en) * | 2002-09-05 | 2009-09-29 | University Of South Florida | Genetic adjuvants for immunotherapy |
US20080102114A1 (en) * | 2004-04-23 | 2008-05-01 | Panduranga Rao Koritala | Microparticles and Nanoparticles for the Transmucosal Delivery of Therapeutic and Diagnostic Agents |
US8461316B1 (en) * | 2005-01-04 | 2013-06-11 | Gp Medical, Inc. | Nanoparticles for delivery of bioactive agents |
JP2008530206A (ja) * | 2005-02-17 | 2008-08-07 | メディバス エルエルシー | ポリマー粒子送達組成物および使用法 |
US9144546B2 (en) * | 2007-08-06 | 2015-09-29 | Clsn Laboratories, Inc. | Nucleic acid-lipopolymer compositions |
ES2635990T3 (es) * | 2012-03-21 | 2017-10-05 | Engene, Inc. | Nanopartículas de quitosano derivado dualmente y los métodos para fabricar y usar las mismas para la transferencia génica in vivo |
US20160289674A1 (en) * | 2012-04-02 | 2016-10-06 | Moderna Therapeutics, Inc. | Modified polynucleotides for the production of membrane proteins |
JP6606490B2 (ja) * | 2013-09-25 | 2019-11-13 | エンジーン,インコーポレイティド | 二重誘導体化キトサンナノ粒子、並びに生体内での遺伝子導入のためのその製造、及び使用方法 |
KR20160096206A (ko) * | 2013-12-23 | 2016-08-12 | 알크-아벨로 에이/에스 | 먼지 진드기 알레르기를 치료하기 위한 펩타이드 조합 및 그의 용도 |
WO2016127251A1 (en) * | 2015-02-09 | 2016-08-18 | Polyvalor, Société En Commandite (S.E.C.) | Coated chitosan-based polyplex for delivery of nucleic acids |
CN114835923A (zh) * | 2015-08-13 | 2022-08-02 | 约翰霍普金斯大学 | 制备聚电解质络合物纳米颗粒的方法 |
AU2017217426B2 (en) * | 2016-02-08 | 2022-12-01 | Beyondspring Pharmaceuticals, Inc. | Compositions containing tucaresol or its analogs |
RS63912B1 (sr) * | 2016-05-18 | 2023-02-28 | Modernatx Inc | Polinukleotidi koji kodiraju interleukin-12 (il12) i njihove upotrebe |
KR101870025B1 (ko) * | 2016-06-27 | 2018-06-21 | 영남대학교 산학협력단 | 알부민 접합체의 층상 자가조립체 및 이를 이용한 약제학적 조성물 |
CA3051136A1 (en) * | 2017-01-27 | 2018-08-02 | The Methodist Hospital | Core/shell structure platform for immunotherapy |
US10736957B2 (en) * | 2017-12-19 | 2020-08-11 | President And Fellows Of Harvard College | Enhanced immunogenicity of mRNA with co-encoded adjuvant sequences |
EP3796891A4 (en) * | 2018-04-11 | 2022-04-20 | Precision Molecular Inc. | THERAPEUTIC CONSTRUCTIONS FOR THE TREATMENT OF CANCER |
EP3781130A4 (en) * | 2018-04-11 | 2022-01-26 | Precision Molecular Inc. | THERAPEUTIC CONSTRUCTS FOR TREATMENT OF CANCER |
WO2020131656A1 (en) * | 2018-12-17 | 2020-06-25 | Immune Design Corp. | Pathogen-associated molecular pattern molecules and rna immunogenic compositions and methods of using the compositions for treating cancer |
CN110011092B (zh) * | 2019-03-22 | 2021-08-20 | 富士康(昆山)电脑接插件有限公司 | 电连接器 |
-
2020
- 2020-03-13 MX MX2021010993A patent/MX2021010993A/es unknown
- 2020-03-13 SG SG11202110008TA patent/SG11202110008TA/en unknown
- 2020-03-13 CN CN202080036433.6A patent/CN113874049A/zh active Pending
- 2020-03-13 US US17/438,921 patent/US20220395584A1/en active Pending
- 2020-03-13 SG SG11202110007VA patent/SG11202110007VA/en unknown
- 2020-03-13 JP JP2021555295A patent/JP2022525866A/ja active Pending
- 2020-03-13 KR KR1020217032958A patent/KR20210151822A/ko active Search and Examination
- 2020-03-13 KR KR1020217033002A patent/KR20210152480A/ko active Search and Examination
- 2020-03-13 AU AU2020234067A patent/AU2020234067A1/en active Pending
- 2020-03-13 US US17/438,922 patent/US20220370637A1/en active Pending
- 2020-03-13 WO PCT/IB2020/000175 patent/WO2020183238A1/en active Application Filing
- 2020-03-13 WO PCT/IB2020/000178 patent/WO2020183239A1/en active Application Filing
- 2020-03-13 CA CA3133177A patent/CA3133177A1/en active Pending
- 2020-03-13 AU AU2020235503A patent/AU2020235503A1/en active Pending
- 2020-03-13 JP JP2021555307A patent/JP2022524859A/ja active Pending
- 2020-03-13 EP EP20770465.1A patent/EP3937981A4/en active Pending
- 2020-03-13 BR BR112021018186A patent/BR112021018186A2/pt unknown
- 2020-03-13 CA CA3133175A patent/CA3133175A1/en active Pending
- 2020-03-13 EP EP20770620.1A patent/EP3937982A4/en active Pending
- 2020-03-13 BR BR112021018211A patent/BR112021018211A2/pt unknown
- 2020-03-13 CN CN202080035434.9A patent/CN114173769A/zh active Pending
- 2020-03-13 MX MX2021010995A patent/MX2021010995A/es unknown
-
2021
- 2021-09-12 IL IL286320A patent/IL286320A/en unknown
- 2021-09-12 IL IL286319A patent/IL286319A/en unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU2020234067A1 (en) | 2021-10-07 |
SG11202110008TA (en) | 2021-10-28 |
BR112021018186A2 (pt) | 2021-11-30 |
US20220395584A1 (en) | 2022-12-15 |
KR20210152480A (ko) | 2021-12-15 |
IL286320A (en) | 2021-10-31 |
CN114173769A (zh) | 2022-03-11 |
AU2020235503A1 (en) | 2021-10-07 |
EP3937982A4 (en) | 2024-02-21 |
MX2021010995A (es) | 2021-12-10 |
EP3937981A4 (en) | 2023-03-15 |
WO2020183239A1 (en) | 2020-09-17 |
BR112021018211A2 (pt) | 2021-11-23 |
CA3133175A1 (en) | 2020-09-17 |
SG11202110007VA (en) | 2021-10-28 |
US20220370637A1 (en) | 2022-11-24 |
KR20210151822A (ko) | 2021-12-14 |
WO2020183238A1 (en) | 2020-09-17 |
IL286319A (en) | 2021-10-31 |
MX2021010993A (es) | 2021-12-10 |
JP2022525866A (ja) | 2022-05-20 |
EP3937982A1 (en) | 2022-01-19 |
CN113874049A (zh) | 2021-12-31 |
EP3937981A1 (en) | 2022-01-19 |
CA3133177A1 (en) | 2020-09-17 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11623011B2 (en) | Dually derivatized chitosan nanoparticles and methods of making and using the same for gene transfer in vivo | |
JP6913144B2 (ja) | 二重誘導体化キトサンナノ粒子、並びに生体内での遺伝子導入のためのその製造、及び使用方法 | |
JP2022524859A (ja) | キトサン-核酸ナノ粒子の可逆的コーティング及びその使用方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230313 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20230313 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20240409 |