JP2022513749A - 勾配によるタンパク質濃度定量を伴う使用のためのシステム適合性方法 - Google Patents

Abstract

パテントブルー色素又はＡＭＧブルー色素を使用して可変長分光光度計の適合性を決定する方法が開示される。本明細書では、タンパク質試料のタンパク質濃度を決定するための固定経路長分光光度計の適合性を決定する方法も開示される。ＡＭＧブルー色素はまた、固定経路長分光光度計の適合性を決定するために使用され得る。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、参照により本明細書に組み込まれる、２０１８年１２月１４日に出願された米国特許出願第６２／７８０，１８４号に対する優先権を主張する。

配列表
本出願は、電子フォーマットの配列表とともに出願されている。「Ａ＿２３３５＿ＷＯ＿ＰＣＴ＿ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」という名称のファイルとして提出された配列表は、２０１９年１２月１１日に作成され、サイズはおよそ２６４，０１４バイトである。電子フォーマットの配列表における情報は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

提示される主題は、タンパク質分析の分野に関する。具体的には、提示される主題は、タンパク質濃度を定量する機器の適合性を決定することに関する。

タンパク質濃度は、それが患者の投薬に直接的に関係があるため、非常に重要な品質属性である。タンパク質濃度定量のための確立された方法は、分光法のランベルト・ベールの法則に従う公定書収載の方法に基づき、且つ従来の固定経路長又は可変経路長技術のいずれかの使用を考慮している。

１．第１の態様において、本明細書では、タンパク質試料のタンパク質濃度を定量するための可変長分光光度計の適合性を決定する方法であって、パテントブルー色素（ＰＢＤ）又はＡＭＧブルー色素（ＡＢＤ）の吸光度を、２８０ｎｍの第１の波長並びにそれに続く３１０ｎｍ、４１２ｎｍ、５１０ｎｍ及び６１５ｎｍからなる群から選択される波長である少なくとも２つの波長で測定することを含む方法が開示される。第２の態様において、本明細書では、タンパク質試料のタンパク質濃度を定量するための固定経路長分光光度計の適合性を決定する方法であって、ＡＭＧブルー色素（ＡＢＤ）の吸光度を、２８０ｎｍの第１の波長並びにそれに続く３１０ｎｍ、４１２ｎｍ、５１０ｎｍ及び６１５ｎｍからなる群から選択される波長である少なくとも２つの波長で測定することを含む方法が開示される。いくつかの下位の態様又はこれらの最初の２つの態様において、第３の波長が使用され、第３の波長は、第２の波長とは異なり、且つ３１０ｎｍ、４１２ｎｍ、５１０ｎｍ及び６１５ｎｍからなる群から選択される。また、下位の態様におけるこれらの最初の２つの態様において、ＰＢＤ又はＡＢＤは、タンパク質試料のタンパク質濃度を測定する前に２つの波長で各波長に関して３回測定され、且つＰＢＤは、タンパク質試料のタンパク質濃度を測定した後に２つの波長で各波長に関して３回測定される。下位の態様において、第１の波長は２８０ｎｍであり、且つ第２の波長は３１０ｎｍである。いくつかの下位の態様において、可変長分光光度計又は固定経路長分光光度計は、ＰＢＤ又はＡＢＤの吸光度測定値が、ＰＢＤ又はＡＢＤとともに提供される分析証明書において提供されるそれらの値と等しいか又はその１０％未満である場合、好適であると考えられる。他の下位の態様において、可変長分光光度計又は固定経路長分光光度計は、ＰＢＤ又はＡＢＤの吸光度測定値が、ＰＢＤ又はＡＢＤとともに提供される分析証明書において提供されるものと少なくとも等しいか又はその５％未満である場合、好適であると考えられる。他の下位の態様において、測定値は、≦５％の相対標準偏差（ＲＳＤ）パーセンテージを有する。

これらの態様及び下位の態様のいずれかにおいて、タンパク質試料は、抗原結合タンパク質、抗体、二重特異性抗体、三重特異性抗体、ＢｉＴＥ分子、又はそのフラグメント若しくは誘導体などの治療用タンパク質を含む。

可変長分光光度計に向けられる態様及び下位の態様において、可変長分光光度計は、ＳｏｌｏＶＰＥ分光光度計（Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．；Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ，ＮＪ）である。

これらの態様のいずれかにおいて、ＡＭＧブルー色素は、ＰＢＤより好ましい。

パテントブルー色素（ＰＢＤ）に関するＵＶ吸光度スペクトルを示す。 ＰＢＤの測定値において得られる未加工のデータを示す。 ３つのタンパク質試料（ｍＡｂ１及びｍＡｂ２、ｍＡｂ２は２つの異なる濃度）の測定値において得られる未加工のデータを示す。 指定の波長でのＰＢＤに関する保証値（供給業者によって提供される）からの測定値の差のプロットのグラフを示す。 ２８０ｎｍでのＰＢＤ測定値の正規分布のグラフを示す。 ３１０ｎｍでのＰＢＤ測定値の正規分布のグラフを示す。 機器に関連する変動値又は誤差、及びＰＢＤ測定値の保証値の信頼度を考慮した、データセットの正規二変量等高線を示す（２８０ｎｍ）。 機器に関連する変動値又は誤差、及びＰＢＤ測定値の保証値の信頼度を考慮した、データセットの正規二変量等高線を示す（３１０ｎｍ）。 低濃度（左パネル；ｍＡｂ２）及び中程度の濃度（右パネル；ｍＡｂ２）でのタンパク質濃度定量の比較のグラフを示す。 タンパク質濃度定量値（ｍＡｂ１；右パネル）と３１０ｎｍでのＰＢＤ（左パネル）の比較のグラフを示す。 ２８０ｎｍ（左）、３１０ｎｍ（中央）及びｍＡｂ１でＰＢＤに影響を与えるＣａｒｙ ６０分光光度計の推定波長シフトのグラフを示す。 実施例において分析された３つのタンパク質濃度の変動係数ｏのブートストラップ分析のグラフを示す。 Ｓｏｌｏ ＶＰＥデバイスの固定勾配モードに関するスクリーン表示を示す。 ＡＭＧブルー色素のＵＶ／可視スペクトルのグラフを示す。 タンパク質濃度定量に必要となる機器経路長を示す。

ランベルト・ベールの法則は、Ａ＝αｌｃとして表される（式中、Ａは測定された吸光度であり、αはモル吸光係数であり、ｌは経路長であり、且つｃは試料濃度である）。この式は、勾配分光法との使用のために再編成され得る。Ａ／ｌ＝αｃ。勾配及び経路長を比較する測定に関して、線形回帰式は、Ａ＝ｍｌ＋ｂと書くことができる（式中、ｍは回帰線の勾配であり、且つｂはｙ切片である）。次に、次元等式は、上の第２の式の左辺を第３の式の勾配の項で置き換えることを可能にし、次の式をもたらす：ｍ＝αｃ。その得られた式は、勾配分光法の式である。これは、モル吸光係数が知られている場合、勾配をそれで割ることによって試料の濃度を計算するために使用され得る：ｃ＝ｍ／α。試料濃度が知られている場合、モル吸光係数は、勾配を濃度で割ることによって計算され得る：α＝ｍ／ｃ（Ｈｕｆｆｍａｎ ｅｔ ａｌ ２０１４）。

可変長分光光度計において、経路長の選択はコンピューターにより制御され、得られる吸光度に基づいて最適化される。例えば、Ｓｏｌｏ ＶＰＥ分光法システム（Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．；Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ、ＮＪ）は、機器の直線範囲内で試料の吸光度を決定できるコンピューター制御された直線ステージを備える。次に、その直線範囲内で、連続的に大きい又は小さい経路長で５～１０回の吸光度測定を行うことになる。次に、提供されるソフトウェアが、結果として得られる吸光度及び経路長データのための線形回帰式を計算し、プロットして、勾配、切片、及びＲ２値を生成する。次に、勾配値を、目的の化合物に関するユーザーにより与えられた吸光係数とともに使用して、ランベルト・ベールの法則を使用して試料中の実際の分析物濃度を逆算する（Ｈｕｆｆｍａｎ ｅｔ ａｌ ２０１４）。

システムの性能を保証するための未知の分析の前又はその間にシステムを点検するために使用されるシステム適合性アッセイにおいて、標準物質が使用される。

定義
「パテントブルー色素」又はＰＢＤは、ＣＨＥＭ０１３測定標準物質（ＳＫＵ ＣＨＥＭ０１３－ＫＩＴ；Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．；Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ、ＮＪ）又は均等物を意味する。この色素は、ＧＦＳ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｃｏｌｕｍｂｕｓ Ｏｈｉｏの仕様に基づいて作製され、品目：８４１６（「Ｉｎ－Ｓｐｅｃ（登録商標）Ｐａｔｅｎｔ Ｂｌｕｅ Ｃｏｌｏｒ Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｃｕｓｔｏｍ ＵＶ－Ｖｉｓｉｂｌｅ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｍａｔｅｒｉａｌ」と呼ばれる）である。組成は、９０～１００％水、１～＜３％メチルアルコール、及び＜０．１％パテントブルーバイオレット（アシッドブルー１及びＣＩ ４２０４５（ＣＡＳ １２９－１７－９）としても知られる）である。指定される波長は３１０ｎｍである。本開示に関して、経路長は、５μｍ～５０μｍの経路長である。

「ＡＭＧブルー色素」は、１×リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中の０．１５％パテントブルーＶＦ、５％グリセロール緩衝液を意味し、ＰＢＳは、塩化カルシウム及び塩化マグネシウムを含まないダルベッコＰＢＳであり、パテントブルーＶＦは、アシッドブルー１、スルファンブルーとしても知られ、Ｃ２７Ｈ３１Ｎ２ＮａＯ６Ｓ２の実験式（ヒル表示法）；ＣＡＳ番号１２９－１７－９を有する。

ＡＭＧブルー色素は、開示され且つ特許請求される方法において好ましい。

「タンパク質」、「ペプチド」及び「ポリペプチド」は、互換的に使用されて、各アミノ酸がペプチド結合によって隣と接続されているアミノ酸の鎖を意味する。

「抗体」（Ａｂ）及び同義語「免疫グロブリン」（Ｉｇ）は、同じ構造特性を有する糖ポリペプチドである。抗体は特異的抗原に対し結合特異性を示すが、免疫グロブリンは抗体及び抗原特異性を欠く他の抗体様分子の両方を含む。後者の種類のポリペプチドは、例えば、リンパ系によっては低いレベルで、また骨髄腫によっては高いレベルで産生される。したがって、用語「抗体」又は「抗体ペプチド」は無傷の抗体、抗体誘導体、抗体類似体、遺伝子改変抗体、検出可能な標識を有する抗体、指定の抗体と特異的結合について競合する抗体、又は無傷の抗体と特異的結合について競合するその抗原結合フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、単一ドメイン抗体）を指し、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、及び二重特異性抗体を含む。いくつかの場合において、抗原結合フラグメントは、例えば、組換えＤＮＡ技術によって作製される。他の場合において、抗原結合フラグメントは、無傷の抗体の酵素的又は化学的切断によって作製される。抗原結合フラグメントとしては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）２、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及び一本鎖抗体が挙げられる。

モノクローナル抗体及び抗体コンストラクトとしては、重鎖及び／若しくは軽鎖の一部が特定の種に由来するか又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一若しくは相同である一方、鎖の残部は、所望の生物活性を示す限り、別の種に由来するか又は別の抗体のクラス若しくはサブクラスに属する抗体並びにそのような抗体の断片中の対応する配列と同一若しくは相同である「キメラ」抗体が挙げられる。キメラ抗体としては、非ヒト霊長類（例えば、旧世界ザル、類人猿など）に由来する可変ドメイン抗原結合配列及びヒト定常領域配列を含む「霊長類化」抗体が挙げられる。

モノクローナル抗体及び抗体コンストラクトとしては、「ヒト」又は「完全ヒト」と呼ばれる抗体が挙げられる。用語「ヒト抗体」及び「完全ヒト抗体」はそれぞれ、ヒト免疫グロブリンライブラリーから又は１つ以上のヒト免疫グロブリン遺伝子を導入した動物から単離された抗体を含む、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有し、内因性免疫グロブリンを発現しない抗体、例えば、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ（登録商標）抗体、及びＫｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ ｅｔ ａｌ．によって米国特許第５，９３９，５９８号明細書に記載されるとおりの抗体を指す。

「遺伝子改変抗体」は、アミノ酸配列が天然抗体の配列から変更された抗体を意味する。抗体の生成における組換えＤＮＡ技術の関連性のために、天然の抗体に見出されるアミノ酸の配列に限定される必要はなく、抗体は、所望の特性を得るために再設計することができる。多くの可能な変動値があり、その範囲は、たった１個又は数個のアミノ酸への変化から、例えば可変領域及び／又は定常領域の完全な再設計にまで及ぶ。定常領域の変化は、一般に、補体の結合、膜との相互作用、及び他のエフェクター機能、並びに製造性及び粘度などの特徴を改善又は変更するためになされる。可変領域における変化は、抗原結合特性を改善するためになされ得る。

「Ｆａｂフラグメント」は、１つの軽鎖及び１つの重鎖のＣＨ１及び可変領域で構成される。Ｆａｂ分子の重鎖は、別の重鎖分子とジスルフィド結合を形成することができない。

「Ｆａｂ’フラグメント」は、１つの軽鎖及びＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインの間の定常領域を多く含有する１つの重鎖を含有し、その結果、２つの重鎖間に鎖間ジスルフィド結合が形成されて、Ｆ（ａｂ’）２分子を形成し得る。

「Ｆ（ａｂ’）２フラグメント」は、２つの軽鎖並びにＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインの間の定常領域の一部を含有する２つの重鎖を含有し、その結果、鎖間ジスルフィド結合が２つの重鎖の間に形成される。

「Ｆｖフラグメント」及び「一本鎖抗体」は、重鎖及び軽鎖の両方の抗体可変領域を含有するが、定常領域を欠くポリペプチドを指す。無傷の抗体のように、Ｆｖフラグメント又は一本鎖抗体は、特定の抗原に選択的に結合することができる。わずか約２５ｋＤａの分子量を有するＦｖフラグメントは、通常の抗体（１５０～１６０ｋＤ）よりもはるかに小さく、Ｆａｂフラグメント（約５０ｋＤａ、１つの軽鎖及び半分の重鎖）よりもさらに小さい。

「単一ドメイン抗体」は、単一ドメインＦｖ単位、例えば、ＶＨ又はＶＬからなる抗体フラグメントである。無傷の抗体のように、単一ドメイン抗体は、特定の抗原に選択的に結合することができる。わずか１２～１５ｋＤａの分子量を有する単一ドメイン抗体は、２つの重ポリペプチド鎖及び２つの軽鎖で構成される通常の抗体（１５０～１６０ｋＤａ）よりもはるかに小さく、Ｆａｂフラグメント（約５０ｋＤａ、１つの軽鎖及び半分の重鎖）及び一本鎖可変フラグメント（約２５ｋＤａ、２つの可変ドメイン、軽鎖由来の１つ及び重鎖由来の１つ）よりもさらに小さい。軽鎖に由来するナノボディはまた、標的エピトープに特異的に結合することが示されている。

導入及び実施例からの知見の概要
システム適合性、アッセイ及び試料許容基準は、可変経路長機器、ＳｏｌｏＶＰＥ（Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．；Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ，ＮＪ；米国特許第７，８０８，６４１号明細書も参照のこと）を要するタンパク質濃度の定量のために確立された。これらの基準の確立のためのデータは、３つのタンパク質濃度でＳｏｌｏＶＰＥを使用して得られ、且つＰＢＤの測定値と一括された。これらのデータの統計分析は、２８０ｎｍ及び３１０ｎｍで分析証明書（ＣｏＡ）値の±５％が、システム適合性基準としての使用のために許容できることを明らかにした。システム適合性測定値の正確度は、ＰＢＤ及びＡＭＧブルー色素測定値の初めと終わりの両方について≦５％の相対標準偏差（ＲＳＤ）パーセンテージを有しなければならない。アッセイ許容基準に関して、ＳｏｌｏＶＰＥソフトウェアを使用するこの試験は、３６個の個々のタンパク質測定値が試料間で一貫した結果とともに作成できることを示した。タンパク質試料は、≦５％ ＲＳＤ基準が適用された三つ組で読まれるべきである。

パテントブルーＶＦの濃度、ＡＭＧブルー色素溶液のｐＨ（好適な緩衝液に関する実施例を参照のこと）及び有機組成は、ＡＭＧブルー溶液の非常に重要な属性である。試験のためのＳｏｌｏＶＰＥデバイスにおけるＭｕｌｔｉ－モードの実行により、機器性能の効果的な評価に必要な感度を維持しながら、システムの適合性手順が大幅に簡略化される。

治療用ポリペプチド
以下の１つ以上に結合するものを含むタンパク質は、開示される方法に有用であり得る。これらには、受容体結合を妨害するものを含む、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０及びＣＤ３４を含むＣＤタンパク質が含まれる。ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４及びＥＧＦ受容体を含むＨＥＲ受容体ファミリータンパク質。細胞接着分子、例えば、ＬＦＡ－Ｉ、ＭｏＩ、ｐｌ５０、９５、ＶＬＡ－４、ＩＣＡＭ－Ｉ、ＶＣＡＭ、及びアルファ ｖ／ベータ ３インテグリン。増殖因子、例えば、血管内皮増殖因子（「ＶＥＧＦ」）、成長ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、卵胞刺激ホルモン、黄体形成ホルモン、成長ホルモン放出因子、副甲状腺ホルモン、ミュラー管阻害物質、ヒトマクロファージ炎症タンパク質（ＭＩＰ－Ｉ－アルファ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、ＮＧＦ－ベータなどの神経成長因子、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、例えば、ａＦＧＦ及びｂＦＧＦなどを含む線維芽細胞増殖因子、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、特に、ＴＧＦ－α及びＴＧＦ－βを含む、例えば、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、ＴＧＦ－β３、ＴＧＦ－β４又はＴＧＦ－β５を含むトランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、インスリン様増殖因子Ｉ及びインスリン様増殖因子ＩＩ（ＩＧＦ－Ｉ及びＩＧＦ－ＩＩ）、ｄｅｓ（ｌ－３）－ＩＧＦ－Ｉ（脳ＩＧＦ－Ｉ）、及び骨誘導因子。インスリン並びにインスリン、インスリンＡ鎖、インスリンＢ鎖、プロインスリン、及びインスリン様増殖因子結合タンパク質を含むインスリン関連タンパク質。とりわけ第ＶＩＩＩ因子、組織因子、フォン・ヴィレブランド因子、プロテインＣ、α－１－アンチトリプシンなどの凝固及び凝固関連タンパク質、例えば、ウロキナーゼ及び組織プラスミノーゲン活性化因子（「ｔ－ＰＡ」）などのプラスミノーゲン活性化因子、ボンバジン（ｂｏｍｂａｚｉｎｅ）、トロンビン及びトロンボポエチン；（ｖｉｉ）アルブミン、ＩｇＥ及び血液型抗原を含むがそれらに限定されない他の血液タンパク質及び血清タンパク質。以下の、特に、Ｍ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ及びＧ－ＣＳＦ並びに例えばＣＳＦ－１受容体（ｃ－ｆｍｓ）などのそれらの受容体を含む、コロニー刺激因子及びそれらの受容体。例えば、ｆｌｋ２／ｆｌｔ３受容体、肥満（ＯＢ）受容体、ＬＤＬ受容体、成長ホルモン受容体、トロンボポエチン受容体（「ＴＰＯ－Ｒ」、「ｃ－ｍｐｌ」）、グルカゴン受容体、インターロイキン受容体、インターフェロン受容体、Ｔ細胞受容体、ｃ－Ｋｉｔなどの幹細胞因子受容体及び他の受容体を含む、受容体及び受容体関連タンパク質。例えば、ＯＸ４０受容体のリガンドであるＯＸ４０Ｌを含む、受容体リガンド。骨由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）及びニューロトロフィン－３、－４、－５又は－６（ＮＴ－３、ＮＴ－４、ＮＴ－５又はＮＴ－６）を含む、神経栄養因子。リラキシンＡ鎖、リラキシンＢ鎖、及びプロリラキシン；例えば、インターフェロン－α、－β、及び－γ、並びにそれらの受容体を含むインターフェロン及びインターフェロン受容体。ＩＬ－Ｉ～ＩＬ－３３及びＩＬ－Ｉ～ＩＬ－３３受容体、例えば、とりわけＩＬ－８受容体を含む、インターロイキン及びインターロイキン受容体。ＡＩＤＳエンベロープウイルス抗原を含む、ウイルス抗原。リポタンパク質、カルシトニン、グルカゴン、心房性ナトリウム利尿因子、肺界面活性物質、腫瘍壊死因子アルファ及びベータ、エンケファリナーゼ、ランテス（ＲＡＮＴＥＳ；ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｏｎ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｎｏｒｍａｌｌｙ Ｔ－ｃｅｌｌ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ａｎｄ ｓｅｃｒｅｔｅｄ）、マウスゴナドトロピン関連ペプチド、ＤＮＡｓｅ、インヒビン及びアクチビン。インテグリン、プロテインＡ又はＤ、リウマチ因子、免疫毒素、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、スーパーオキシド・ジスムターゼ、表面膜タンパク質、崩壊促進因子（ＤＡＦ）、ＡＩＤＳエンベロープ、輸送タンパク質、ホーミング受容体、アドレシン、調節タンパク質、イムノアドヘシン、抗体。ミオスタチン、ＴＡＬＬ－Ｉを含むＴＡＬＬタンパク質、限定されずにアミロイドβタンパク質を含むアミロイドタンパク質、胸腺間質性リンパ球新生因子（「ＴＳＬＰ」）、ＲＡＮＫリガンド（「ＯＰＧＬ」）、ｃ－ｋｉｔ、ＴＮＦ受容体１型を含むＴＮＦ受容体、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２、アンジオポエチン並びに前述のいずれかの生物活性断片又は類似体又は変異体。

例示的なポリペプチド及び抗体は、Ａｃｔｉｖａｓｅ（登録商標）（アルテプラーゼ）；アリロクマブ、Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標）（ダルベポエチン－アルファ）、Ｅｐｏｇｅｎ（登録商標）（エポエチンアルファ、又はエリスロポエチン）；Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）（インターフェロンβ－Ｉａ）；Ｂｅｘｘａｒ（登録商標）（トシツモマブ）；Ｂｅｔａｓｅｒｏｎ（登録商標）（インターフェロン－β）；ボコシズマブ（Ｌ１Ｌ３と呼ばれる抗ＰＣＳＫ９モノクローナル抗体、米国特許第８，０８０，２４３号明細書を参照のこと）；Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標）（アレムツズマブ）；Ｄｙｎｅｐｏ（登録商標）（エポエチンデルタ）；Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標）（ボルテゾミブ）；ＭＬＮ０００２（抗α４β７ Ａｂ）；ＭＬＮ１２０２（抗ＣＣＲ２ケモカイン受容体Ａｂ）；Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標）（エタネルセプト）；Ｅｐｒｅｘ（登録商標）（エポエチンアルファ）；Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）（セツキシマブ）；エボロクマブ；Ｇｅｎｏｔｒｏｐｉｎ（登録商標）（ソマトロピン）；Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブ）；Ｈｕｍａｔｒｏｐｅ（登録商標）（ソマトロピン［ｒＤＮＡ起源］注射用）；Ｈｕｍｉｒａ（登録商標）（アダリムマブ）；Ｉｎｆｅｒｇｅｎ（登録商標）（インターフェロンアルファコン－１）；Ｎａｔｒｅｃｏｒ（登録商標）（ネシリチド）；Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標）（アナキンラ）；Ｌｅｕｋｉｎｅ（登録商標）（サルグラモスチム）；ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ（登録商標）（エプラツズマブ）；Ｂｅｎｌｙｓｔａ（商標）（ベリムマブ）；Ｍｅｔａｌｙｓｅ（登録商標）（テネクテプラーゼ）；Ｍｉｒｃｅｒａ（登録商標）（メトキシポリエチレングリコール－エポエチンベータ）；Ｍｙｌｏｔａｒｇ（登録商標）（ゲムツズマブオゾガマイシン）；Ｒａｐｔｉｖａ（登録商標）（エファリズマブ）；Ｃｉｍｚｉａ（登録商標）（セルトリズマブペゴル）；Ｓｏｌｉｒｉｓ（商標）（エクリズマブ）；パキセリズマブ（抗Ｃ５補体）；ＭＥＤＩ－５２４（Ｎｕｍａｘ（登録商標））；Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標）（ラニビズマブ）；エドレコロマブ（Ｐａｎｏｒｅｘ（登録商標））；Ｔｒａｂｉｏ（登録商標）（レルデリムマブ）；ＴｈｅｒａＣｉｍ ｈＲ３（ニモツズマブ）；Ｏｍｎｉｔａｒｇ（ペルツズマブ、２Ｃ４）；Ｏｓｉｄｅｍ（登録商標）（ＩＤＭ－Ｉ）；ＯｖａＲｅｘ（登録商標）（Ｂ４３．１３）；Ｎｕｖｉｏｎ（登録商標）（ビシリズマブ）；カンツズマブメルタンシン（ｈｕＣ２４２－ＤＭｌ）；ＮｅｏＲｅｃｏｒｍｏｎ（登録商標）（エポエチンベータ）；Ｎｅｕｍｅｇａ（登録商標）（オプレルベキン）；Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標）（ペグ化フィルグラスチム、ペグ化Ｇ－ＣＳＦ、ペグ化ｈｕ－Ｍｅｔ－Ｇ－ＣＳＦ）；Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（登録商標）（フィルグラスチム）；Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ ＯＫＴ３（登録商標）（ムロモナブ－ＣＤ３）、Ｐｒｏｃｒｉｔ（登録商標）（エポエチンアルファ）、Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）（インフリキシマブ）、Ｒｅｏｐｒｏ（登録商標）（アブシキマブ）、Ａｃｔｅｍｒａ（登録商標）（抗ＩＬ６受容体Ａｂ）、Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）（ベバシズマブ）、ＨｕＭａｘ－ＣＤ４（ザノリムマブ）、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）（リツキシマブ）、Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標）（エルロチニブ）、Ｒｏｆｅｒｏｎ－Ａ（登録商標）－（インターフェロンアルファ－２ａ）、Ｓｉｍｕｌｅｃｔ（登録商標）（バシリキシマブ）、Ｓｔｅｌａｒａ（商標）（ウステキヌマブ）、Ｐｒｅｘｉｇｅ（登録商標）（ルミラコキシブ）、Ｓｙｎａｇｉｓ（登録商標）（パリビズマブ）；１４６Ｂ７－ＣＨＯ（抗ＩＬ１５抗体、米国特許第７，１５３，５０７号明細書を参照のこと）、Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標）（ナタリズマブ）；Ｖａｌｏｒｔｉｍ（登録商標）（ＭＤＸ－１３０３、抗炭疽菌（Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓ）防御抗原Ａｂ）；ＡＢｔｈｒａｘ（商標）；Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標）（パニツムマブ）；Ｘｏｌａｉｒ（登録商標）（オマリズマブ）、ＥＴＩ２１１（抗ＭＲＳＡ Ａｂ）、ＩＬ－Ｉ Ｔｒａｐ（ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分及びＩＬ－Ｉ受容体成分の両方の細胞外ドメイン（Ｉ型受容体及び受容体アクセサリータンパク質））、ＶＥＧＦ Ｔｒａｐ（ＩｇＧｌ Ｆｃに融合されたＶＥＧＦＲｌのＩｇドメイン）、Ｚｅｎａｐａｘ（登録商標）（ダクリズマブ）；Ｚｅｎａｐａｘ（登録商標）（ダクリズマブ）、Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標）（イブリツモマブチウキセタン）、Ｚｅｔｉａ（エゼチミブ）、Ａｔａｃｉｃｅｐｔ（ＴＡＣＩ－Ｉｇ）、抗α４β７ Ａｂ（ベドリズマブ）；ガリキシマブ（抗ＣＤ８０モノクローナル抗体）、抗ＣＤ２３ Ａｂ（ルミリキシマブ）；ＢＲ２－Ｆｃ（ｈｕＢＲ３／ｈｕＦｃ融合タンパク質、可溶性ＢＡＦＦアンタゴニスト）；Ｓｉｍｐｏｎｉ（商標）（ゴリムマブ）；マパツズマブ（ヒト抗ＴＲＡＩＬ受容体－１ Ａｂ）；オクレリズマブ（抗ＣＤ２０ヒトＡｂ）；ＨｕＭａｘ－ＥＧＦＲ（ザルツムマブ）；Ｍ２００（ボロシキシマブ、抗α５β１インテグリンＡｂ）；ＭＤＸ－０１０（イピリムマブ、抗ＣＴＬＡ－４ Ａｂ及びＶＥＧＦＲ－Ｉ（ＩＭＣ－１８Ｆ１）；抗ＢＲ３ Ａｂ；抗Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ａ及び毒素Ｂ Ｃ Ａｂｓ ＭＤＸ－０６６（ＣＤＡ－Ｉ）及びＭＤＸ－１３８８）；抗ＣＤ２２ ｄｓＦｖ－ＰＥ３８コンジュゲート（ＣＡＴ－３８８８及びＣＡＴ－８０１５）；抗ＣＤ２５ Ａｂ（ＨｕＭａｘ－ＴＡＣ）；抗ＴＳＬＰ抗体；抗ＴＳＬＰ受容体抗体（米国特許第８，１０１，１８２号明細書を参照のこと）；Ａ５と呼ばれる抗ＴＳＬＰ抗体（米国特許第７，９８２，０１６号明細書を参照のこと）；（抗ＣＤ３ Ａｂ（ＮＩ－０４０１）を参照のこと；アデカツムマブ（ＭＴ２０１、抗ＥｐＣＡＭ－ＣＤ３２６ Ａｂ）；ＭＤＸ－０６０、ＳＧＮ－３０、ＳＧＮ－３５（抗ＣＤ３０ Ａｂ）；ＭＤＸ－１３３３（抗ＩＦＮＡＲ）；ＨｕＭａｘ ＣＤ３８（抗ＣＤ３８ Ａｂ）；抗ＣＤ４０Ｌ Ａｂ；抗Ｃｒｉｐｔｏ Ａｂ；抗ＣＴＧＦ特発性肺線維症Ｉ期フィブロジェン（ＦＧ－３０１９）；抗ＣＴＬＡ４ Ａｂ；抗ｅｏｔａｘｉｎｌ Ａｂ（ＣＡＴ－２１３）；抗ＦＧＦ８ Ａｂ；抗ガングリオシドＧＤ２ Ａｂ；抗スクレロスチン抗体（米国特許第８，７１５，６６３号明細書又は米国特許第７，５９２，４２９号明細書を参照のこと）、Ａｂ－５と呼ばれる抗スクレロスチン抗体（米国特許第８，７１５，６６３号明細書又は米国特許第７，５９２，４２９号明細書を参照のこと）；抗ガングリオシドＧＭ２ Ａｂ；抗ＧＤＦ－８ヒトＡｂ（ＭＹＯ－０２９）；抗ＧＭ－ＣＳＦ受容体Ａｂ（ＣＡＭ－３００１）；抗ＨｅｐＣ Ａｂ（ＨｕＭａｘ ＨｅｐＣ）；ＭＥＤＩ－５４５、ＭＤＸ－１１０３（抗ＩＦＮα Ａｂ）；抗ＩＧＦＩＲ Ａｂ；抗ＩＧＦ－ＩＲ Ａｂ（ＨｕＭａｘ－Ｉｎｆｌａｍ）；抗ＩＬ１２／ＩＬ２３ｐ４０ Ａｂ（ブリアキヌマブ）；抗ＩＬ－２３ｐ１９ Ａｂ（ＬＹ２５２５６２３）；抗ＩＬ１３ Ａｂ（ＣＡＴ－３５４）；抗ＩＬ－１７ Ａｂ（ＡＩＮ４５７）；抗ＩＬ２Ｒａ Ａｂ（ＨｕＭａｘ－ＴＡＣ）；抗ＩＬ５ 受容体Ａｂ；抗インテグリン受容体Ａｂ（ＭＤＸ－Ｏｌ８、ＣＮＴＯ ９５）；抗ＩＰＩＯ潰瘍性大腸炎Ａｂ（ＭＤＸ－ １１００）；抗ＬＬＹ抗体；ＢＭＳ－６６５１３；抗マンノース受容体／ｈＣＧβ Ａｂ（ＭＤＸ－１３０７）；抗メソセリンｄｓＦｖ－ＰＥ３８コンジュゲート（ＣＡＴ－５００１）；抗ＰＤｌＡｂ（ＭＤＸ－１ １０６（ＯＮＯ－４５３８））；抗ＰＤＧＦＲα抗体（ＩＭＣ－３Ｇ３）；抗ＴＧＦβ Ａｂ（ＧＣ－１００８）；抗ＴＲＡＩＬ受容体－２ヒトＡｂ（ＨＧＳ－ＥＴＲ２）；抗ＴＷＥＡＫ Ａｂ；抗ＶＥＧＦＲ／Ｆｌｔ－１ Ａｂ；抗ＺＰ３ Ａｂ（ＨｕＭａｘ－ＺＰ３）；ＮＶＳ抗体＃１；ＮＶＳ抗体＃２；並びに配列、配列番号８及び配列番号６を含むアミロイド－ベータモノクローナル抗体（米国特許第７，９０６，６２５号明細書を参照のこと）を含む。

開示される方法に好適な抗体の例としては、表１に示される抗体が挙げられる。好適な抗体のその他の例としては、インフリキシマブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、ラニビズマブ、パリビズマブ、アバゴボマブ、アブシキシマブ、アクトクスマブ、アダリムマブ、アフェリモマブ、アフツズマブ、アラシズマブ、アラシズマブペゴル、ａｌｄ５１８、アレムツズマブ、アリロクマブ、アレムツズマブ、アルツモマブ、アマツキシマブ、アナツモマブマフェナトクス、アンルキンズマブ、アポリズマブ、アルシツモマブ、アセリズマブ、アルチヌマブ、アトリズマブ、アトロリムマブ、トシリズマブ、バピヌズマブ、バシリキシマブ、バビツキシマブ、ベクツモマブ、ベリムマブ、ベンラリズマブ、ベルチリムマブ、ベシレソマブ、ベバシズマブ、ベズロトクスマブ、ビシロマブ、ビバツズマブ、ビバツズマブメルタンシン、ブリナツモマブ、ブロソズマブ、ブレンツキシマブベドチン、ブリアキヌマブ、ブロダルマブ、カナキヌマブ、カンツズマブメルタンシン、カプラシズマブ、カプロマブペンデチド、カルルマブ、カツマキソマブ、ｃｃ４９、セデリズマブ、セルトリズマブペゴル、セツキシマブ、シタツズマブボガトクス、シクスツムマブ、クラザキズマブ、クレノリキシマブ、クリバツズマブテトラキセタン、コナツムマブ、クレネズマブ、ｃｒ６２６１、ダセツズマブ、ダクリズマブ、ダロツズマブ、ダラツムマブ、デミシズマブ、デノスマブ、デツモマブ、ドルリモマブアリトクス、ドロジツマブ、デュリゴツマブ、デュピルマブ、エクロメキシマブ、エクリズマブ、エドバコマブ、エドレコロマブ、エファリズマブ、エフングマブ、エロツズマブ、エルシリモマブ、エナバツズマブ、エンリモマブペゴル、エノキズマブ、エノキズマブ、エノチクマブ、エノチクマブ、エンシツキシマブ、エピツモマブシツキセタン、エプラツズマブ、エルリズマブ、エルツマキソマブ、エタラシズマブ、エトロリズマブ、エクスビビルマブ、エクスビビルマブ、ファノレソマブ、ファラリモマブ、ファルレツズマブ、ファシヌマブ、ｆｂｔａ０５、フェルビズマブ、フェザキヌマブ、フィクラツズマブ、フィギツムマブ、フランボツマブ、フォントリズマブ、フォラルマブ、フォラビルマブ、フレソリムマブ、フルラヌマブ、フツキシマブ、ガリキシマブ、ガニツマブ、ガンテネルマブ、ガビリモマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、ゲボキズマブ、ギレンツキシマブ、グレムバツムマブベドチン、ゴリムマブ、ゴミリキシマブ、ｇｓ６６２４、イバリズマブ、イブリツモマブチウキセタン、イクルクマブ、イゴボマブ、イムシロマブ、イムガツズマブ、インクラクマブ、インダツキシマブラブタンシン、インフリキシマブ、インテツムマブ、イノリモマブ、イノツズマブオゾガマイシン、イピリムマブ、イラツムマブ、イトリズマブ、イキセキズマブ、ケリキシマブ、ラベツズマブ、レブリキズマブ、レマレソマブ、レルデリムマブ、レキサツムマブ、リビビルマブ、リゲリズマブ、リンツズマブ、リリルマブ、ロルボツズマブメルタンシン、ルカツムマブ、ルミリキシマブ、マパツズマブ、マスリモマブ、マブリリムマブ、マツズマブ、メポリズマブ、メテリムマブ、ミラツズマブ、ミンレツモマブ、ミツモマブ、モガムリズマブ、モロリムマブ、モタビズマブ、モキセツモマブパスドトクス、ムロモナブ－ｃｄ３、ナコロマブタフェナトクス、ナミルマブ、ナプツモマブエスタフェナトクス、ナルナツマブ、ナタリズマブ、ネバクマブ、ネシツムマブ、ネレリモマブ、ネスバクマブ、ニモツズマブ、ニボルマブ、ノフェツモマブメルペンタン、オカラツズマブ、オクレリズマブ、オデュリモマブ、オファツムマブ、オララツマブ、オロキズマブ、オマリズマブ、オナルツズマブ、オポルツズマブモナトクス、オレゴボマブ、オルチクマブ、オテリキシズマブ、オキセルマブ、オザネズマブ、オゾラリズマブ、パジバキシマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、パノバクマブ、パルサツズマブ、パスコリズマブ、パテクリズマブ、パトリツマブ、ペムツモマブ、ペラキズマブ、ペルツズマブ、ペキセリズマブ、ピジリズマブ、ピンツモマブ、プラクルマブ、ポネズマブ、プリリキシマブ、プリツムマブ、ＰＲＯ １４０、クイリズマブ、ラコツモマブ、ラドレツマブ、ラフィビルマブ、ラムシルマブ、ラニビズマブ、ラキシバクマブ、レガビルマブ、レスリズマブ、リロツムマブ、リツキシマブ、ロバツムマブ、ロレデュマブ、ロモソズマブ、ロンタリズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、サマリズマブ、サリルマブ、サツモマブペンデチド、セクキヌマブ、セビルマブ、シブロツズマブ、シファリムマブ、シルツキシマブ、シムツズマブ、シプリズマブ、シルクマブ、ソラネズマブ、ソリトマブ、ソネプシズマブ、ソンツズマブ、スタムルマブ、スレソマブ、スビズマブ、タバルマブ、タカツズマブテトラキセタン、タドシズマブ、タリズマブ、タネズマブ、タプリツモマブパプトクス、テフィバズマブ、テリモマブアリトクス、テナツモマブ、テネリキシマブ、テプリズマブ、テプロツムマブ、ＴＧＮ１４１２、トレメリムマブ、チシリムマブ、チルドラキズマブ、チガツズマブ、ＴＮＸ－６５０、トシリズマブ、トラリズマブ、トシツモマブ、トラロキヌマブ、トラスツズマブ、ＴＲＢＳ０７、トレガリズマブ、トレメリムマブ、ツコツズマブセルモロイキン、ツビルマブ、ウブリツキシマブ、ウレルマブ、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ、バパリキシマブ、バテリズマブ、ベドリズマブ、ベルツズマブ、ベパリモマブ、ベセンクマブ、ビジリズマブ、ボロシキシマブ、ボルセツズマブマフォドチン、ボツムマブ、ザルツムマブ、ザノリムマブ、ザツキシマブ、ジラリムマブ、及びゾリモマブアリトクスが挙げられる。開示される製剤及び方法における使用のための最も好ましい抗体は、アダリムマブ、ベバシズマブ、ブリナツモマブ、セツキシマブ、コナツムマブ、デノスマブ、エクリズマブ、エレヌマブ、エボロクマブ、インフリキシマブ、ナタリズマブ、パニツムマブ、リロツムマブ、リツキシマブ、ロモソズマブ、及びトラスツズマブ、並びに表１から選択される抗体である。

いくつかの実施形態では、治療用ポリペプチドは、ＢｉＴＥ（登録商標）分子である。ＢｉＴＥ（登録商標）分子は、癌細胞に対してＴ細胞の細胞傷害活性を指示する遺伝子組換え二重特異性モノクローナル抗体である。それらは、約５５キロダルトンの単一ペプチド鎖上の様々な抗体の２つの一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）又は４個の異なる遺伝子由来のアミノ酸配列の融合である。ｓｃＦｖの一方はＣＤ３受容体を介してＴ細胞に結合し、他方は腫瘍特異的分子を介して腫瘍細胞に結合する。ブリナツモマブ（ＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標））は、ＣＤ１９に対して特異的であるＢｉＴＥ（登録商標）分子の１つの例である。それらの半減期を延長させるように修飾された分子などの修飾されているＢｉＴＥ（登録商標）分子も又、本明細書に開示した方法において使用できる。

実施例１－概観
これらの試験において使用される機器の全ては、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｃａｒｙ ６０紫外線（ＵＶ）分光光度計システム（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ、ＣＡ）に接続されたＳｏｌｏＶＰＥを含む。濃度定量を行うために、ＳｏｌｏＶＰＥは、試料の吸光度に応じて０．００５ｍｍ～１５ｍｍの光路長に自動的に調整する。各試料に関して、経路長に対する吸光度の線形回帰プロットは、１０種の経路長の最大値を使用して作成される（５つの点が最小限必要とされる）。試料許容基準は、この試料分析プロットの回帰線に基づき、Ｒ２は、妥当な結果をもたらすためにＳｏｌｏＶＰＥに関して≧０．９９９であるべきである。ＳｏｌｏＶＰＥシステムの勾配測定能力及び経路長範囲に基づいて、製造業者が主張するタンパク質試料濃度定量能力の範囲は、希釈を必要としない０．０１～３００ｍｇ／ｍＬ（ウシ血清アルブミン）である（米国特許第７，８０８，６４１号明細書 実施例４）。

この試験の目的は、ＳｏｌｏＶＰＥソフトウェアのバージョン３を用いてシステム適合性標準物質としてＰＢＤを使用してシステム適合性基準、アッセイ及び試料許容基準の科学的根拠を確立することであった。

実施例２－材料及び方法、実験、並びにデータ分析
０．１２％ ＰＢＤの調製（０．１２％～０．５％が、当業者によって使用され、且つ最適化され得る）
１．１２０±５ｍｇのＰＢＤを適切な大きさのビーカーに加える。
２．９９ｍＬのＨＰＬＣグレード水をビーカーに加える。
３．１ｍＬのメタノールをビーカーに加える。
４．撹拌子と十分に混合する。
５．ＨＰＬＣボトルに移す。
６．暗所において室温で保管する。

ＰＢＤ ＵＶ／可視スペクトル
ＰＢＤのＵＶ／可視スペクトルは、図１に示される。２８０ｎｍ、３１０ｎｍ、及び６３９ｎｍの３つの波長は、図において強調される。ＰＢＤは、２８０ｎｍ及び３１０ｎｍの勾配（吸光度値）の正確度について保証されており、米国国立標準技術研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）（ＮＩＳＴ）を通じて追跡可能な分析証明書（ＣｏＡ）とともに出荷される。６３９ｎｍでの勾配（吸光度）は、ＰＢＤ製造業者又はＮＩＳＴによって保証されない。２８０ｎｍ及び３１０ｎｍでの保証されたＰＢＤ測定値は、機器に関する正確度の評価に関する根拠を提供し、各アッセイの前に評価された。

実施例において、「機器」が引用されるとき、その参照は、ＳｏｌｏＶＰＥ機器に接続されたＣａｒｙ ６０分光光度計を含む。タンパク質は、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）であった。

表２．１は、分析されたタンパク質及びそれらの濃度を示す。

実験の実行
各試験順序又は行程は、３種の異なる濃度で３６回のタンパク質定量からなり（各濃度レベルで１２回の測定：９．７（ｍＡｂ２）、４８．７（ｍＡｂ２）、及び１３５．８ｍｇ／ｍＬ（ｍＡｂ１））、一括され（試料試験の初めと終わり）、システム適合性を評価し、且つアッセイ許容基準を確立するために２８０ｎｍ及び３１０ｎｍの両方でＰＢＤの三つ組の測定値を有した。試験の戦略は、通例の試験を模倣し、且つＰＢＤによるシステム適合性の使用を評価するために設計された。

システム適合性を評価するために使用される試験順序：
ＰＢＤの３回の標準的な測定（２８０ｎｍ）
ＰＢＤの３回の標準的な測定（３１０ｎｍ）
１２回の低いタンパク質濃度での実施（９．７ｍｇ／ｍＬ）
１２回の中程度のタンパク質濃度での実施（４８．７ｍｇ／ｍＬ）
１２回の高いタンパク質濃度での実施（１３５．８ｍｇ／ｍＬ）
ＰＢＤの３回の標準的な測定（２８０ｎｍ） ＰＢＤの３回の標準的な測定（３１０ｎｍ）

全体として、１４個のデータセットが得られた。

２つの波長でのＰＢＤ測定値を評価する戦略を使用して、機器に要求される広い範囲のタンパク質濃度を包含した。比較的高いタンパク質濃度（実施例において試験されたものなど、１３５．８ｍｇ／ｍＬ）は、５μｍ～５０μｍの最も狭い範囲の経路長を必要とした。３１０ｎｍでのＰＢＤ測定値は、５０μｍ未満の経路長での機器性能を評価した。中程度の範囲の濃度の定量に関して（４８．７ｍｇ／ｍＬ（ｍＡｂ２）試料など）、機器は、２０μｍ～６５μｍに及ぶ経路長を使用した。タンパク質濃度の残りの範囲（すなわち、これらの実施例において試験される≦４８．７ｍｇ／ｍＬ）を包含するために、２８０ｎｍでの測定値は、５０μｍを超える経路長での機器性能を評価した。

使用される全ての機器は、Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＩｎｃからのＱｕｉｃｋ Ｓｌｏｐｅソフトウェアのバージョン３を起動していた。２つの機器モードが使用され、要求されるシステム適合性基準を有する試料を試験するために要求された：
１）Ｑｕｉｃｋ Ｓｌｏｐｅモード（Ｑｕｉｃｋ－Ｍ）：目的の吸光度のために実施される閾値経路長検索、所望の数のデータポイントに基づく適応アルゴリズムを使用して収集されるセクションデータ。
２）Ｆｉｘｅｄ Ｓｌｏｐｅモード（Ｆｉｘｅｄ－Ｍ）：最初の経路長検索はない。データは、ユーザーにより指定された初期経路長、経路長段階サイズ及び収集されることになるデータポイントの数に基づいて収集される。

ＰＢＤに特異的なＦｉｘｅｄ Ｓｌｏｐｅモードのサブルーチンが作成され、３１０ｎｍ波長でのデータを得るために使用された。このサブルーチンは、機器に５μｍ～５０μｍの経路長を使用させて、比較的高いタンパク質濃度に関する機器性能を評価する。ＳｏｌｏＶＰＥによる試料セットの吸光度の測定が、３名の分析者によって実施されて、生じる可能性のある結果において任意の関連する差を観察した。タンパク質濃度の定量値及びＰＢＤ測定値は、測定時にＳｏｌｏＶＰＥ分光光度計によって分析された。

データ分析
この報告における全ての統計分析は、ＳＡＳ９．４（登録商標）（ＴＳ１Ｍ３；Ｃａｒｙ、ＮＣ）を使用して実施された。４種の統計分析が、この試験において実施された：
１）１０回の異なる実施にわたるＰＢＤ測定値の分布を比較するために、箱ひげ図を２８０ｎｍ及び３１０ｎｍに関して作成した。箱ひげ図は、データの中心及びその広がりの簡単な図示を提供し、実施全体にわたる比較を容易にする。
２）最悪の場合の影響を評価するために、ＰＢＤの２８０ｎｍ及び３８０ｎｍについて、試験・再試験誤差並びに±４％及び±５％の仕様の正規密度曲線を作成した。曲線は、特定の試験・再試験誤差がある場合の測定値の分布を示す。最悪の場合の試験・再試験誤差は、試験・再試験に対する９５％信頼上限として定義された。
３）ＳｏｌｏＶＰＥ測定値に対するＰＢＤ入力の影響を評価するために、ＰＢＤとＳｏｌｏＶＰＥ測定値の間の相関を考慮して、二変量正規等高線プロットを作成した。等高線は、誤判別確率を評価するための仕様に対して比較された。
４）置換によるランダムサンプリングを用いるブートストラップサンプリングを使用して、変動係数の分布、及び上限に対するその近似を評価した。タンパク質試料に関する変動係数（％ＲＳＤ）の定量値は、目的の限度の５％未満であった。

さらなる情報：測定値
図２及び３において示される表は、それぞれＰＢＤ測定値及びタンパク質定量値に関する未加工のデータを示す。各波長（２８０ｎｍ及び３１０ｎｍ）でのタンパク質濃度レベル当たり１６８個の測定値のうちの１２０個及び８４個のＰＢＤ測定値のうちの６０個を使用して、システム適合性、アッセイ許容及び試料許容基準を実証した。これらのデータは３台の機器に由来し、測定値が保証された吸光度値の±５％以内にあり、且つ三つ組の測定値の≦５％ ＲＳＤを満たしたため、システム適合性基準を示すために使用された。このデータセットにおける無効な測定値は、２８０ｎｍ又は３１０ｎｍでのＰＢＤの６０個の測定値のうちの０個の測定値であった（１０個の実施のうちの０個の実施が無効であった）。

試験において使用される第４の機器は、「準最適に」機能することが知られており、ＰＢＤを使用して開発されたシステム適合性の有用性を実証するために使用された。この機器の使用は、生じる可能性のある誤差の種類に対して価値のある見識を与えた。この機器からの全てのデータは、実用的なシステム適合性基準の決定において考慮されなかったが、代わりにＰＢＤに基づく基準がどのように不十分に機能している機器を明らかにできたかを示すために使用された。

この機器は、３回の試験日のうち２回は動作が不十分であり、３回目のデータセットは、その日に関しては基準を満たしていたにもかかわらず、機器が不安定であったため計算に入れられなかった。図２及び３における表の影付きのデータは、実用的なシステム適合性基準を満たさなかった試験実施である。これらの定量値及び測定値は、妥当であると考えられなかったため、システム適合性基準の判断における考慮事項から除外された。

加えて、１１３４機器を使用する実施１２（図２）、３１０ｎｍでのＰＢＤ測定値の三つ組のセットのうちの１つの測定値は、システム適合性を不合格にし、この実施からのデータは、システム適合性の判断から除外された。この不合格は、ＰＢＤの用法の誤りではなかったが、ＰＢＤシステム適合性が、機器による１つの変則的な測定値を現実化したことを実証し、それは、その三つ組のセットの後続の測定値が、期待される値の範囲内であったためである。これが無効なものに含まれる場合、その無効なものは、単一の変則的な測定値に起因する１１個の実施のうちの１個又は３１０ｎｍでのＰＢＤの７２個の測定値のうちの１個の測定値及び２８０ｎｍでの７２個の測定値のうちの０個の測定値であろう。

実施例３－システム適合性標準物質としてのＰＢＤの評価
この節は、システム適合性標準物質としてのＰＢＤの使用について、４台の機器の測定値の正確度及び精度の点から論じる。正確度は、ＣｏＡ上で参照されるとおりの保証値に対して個々の測定値をプロットすることによって評価された。保証値からの測定値の差は、図４に示されるとおりにプロットされた。箱ひげ図は、ＰＢＤ ＣｏＡの目標値から５％の差にある全ての境界線が許容できることを示す。４％の差の同様のプロットは、４％の境界線上に属するデータポイントを示し、それによりＰＢＤ測定値に関する目標からの％差に関する基準が５％であるべきであることを示している。

これらのデータプロットに関して、２つの観察がなされ得る。第一に、試験の最初の数日において（Ｒ０１－Ｒ０４）、３１０ｎｍ波長で吸光度測定値が増加する傾向（４日間にわたって＋３％）が観察された。この傾向は、４％の境界線の上限に近づいているが、５％の境界線の範囲内に収まる。測定値（すなわち、各日の６個のＰＢＤ測定値）は、同じ機器上で同じ試料ロットを使用して同じ分析者によって得られた。このことは、この傾向が無秩序ではなく、且つ機器の日間変動を示すことを示唆している。

次に、２８０ｎｍでの７日目（Ｒ０７）及び９日目（Ｒ０９）において不整合な測定値が存在し（図４）、１つのデータポイントが箱の範囲の外部にあった。３１０ｎｍ波長を使用して得られたデータ（図４）は、測定値が目標の中央に寄っている一方で、平均値からの逸脱がより顕著である（６、７、及び９日目（Ｒ０６、Ｒ０７、及びＲ０９））ことを示した。

機器による予測不可能なこれらの測定値は、目標値又は保証値からの変動値の主要な例であるが、これらの逸脱は水平方向の破線によって示されるとおり５％の範囲内のままである。

ＰＢＤを使用して機器の正確度に対する基準を確実に設定するために、試験・再試験が計算された。試験・再試験は、機器及び分析者の同じ群に対して一定期間かけて複数回同じ試験を施すことによって得られる再現性の尺度として定義される。表３．１は、波長及び９５％信頼上限又は「最悪の場合」（ＣｏＡ値から計算される）の両方に関する試験・再試験結果（測定されたＰＢＤ測定値から得られる）を列挙する。

試験・再試験及び未加工のデータセットから確立された最悪の場合の値（表３．１）により、機器の正確度に関する基準が計算され得る。提案された４％又は５％の機器の目標の変動は、真の値から３標準偏差と考えられた。合格基準のために、保証値の１標準偏差が計算されるべきである（保証値の４％又は５％を３で割った値）。これらの計算の商は、最悪の場合を表す。提案された基準（目標の４％又は５％）が最悪の場合を超える場合、不合格の確率が高い。

図５は、４％の目標曲線（真ん中の線、破線の曲線と重複している部分、５％の目標曲線（最も低いピークの曲線）、及び最悪の場合（破線）に基づいて１標準偏差を使用して測定値の正規分布を示す。ｘ軸は、グラフの中心線を目標として目標からの測定値の偏差を示す一方で、ｙ軸は、測定値が目標に達する確率を示す。４％及び５％の曲線を使用して、提案された基準を評価し、いずれかの許容性が、ＣｏＡ値から導き出されるとおりの最悪の場合の曲線から評価された。４％又は５％の目標基準が最適であったかどうかを評価するために、ＰＢＤ測定値の値は、最悪の場合の上限未満でなければならない。

２８０ｎｍでの４％目標値の密度プロット（図５）は、最悪の場合が、ＣｏＡ値の１標準偏差以内であることを示す（真ん中の線の曲線は、赤色の破線の曲線より下にある）。したがって、目標の４％でのシステム適合性は、２８０ｎｍで合格するであろう。しかしながら、３１０ｎｍ（図６）では、４％の目標曲線（最も高いピークを有する曲線）は、最悪の場合のはるか上にあり、したがって、システム適合性基準は、目標から４％で設定される場合に不合格になるであろう。

或いは、０．０２９１２５の商（０．５８２５の５％）である目標の５％で設定される基準により、１標準偏差は、標準偏差を３で割ることによって０．００９７０８になることが見出される。

この値は、ＰＢＤ測定値に関して最悪の場合である。２８０ｎｍでの試験・再試験は０．００６２であり、これは、最悪の場合（０．００７６）未満であり、そのため５％の目標が許容される。

３１０ｎｍでＰＢＤに関して同様の計算を実施するとき、ＣｏＡ目標が１．２８４９であり、そのため目標の５％は０．０６４２４５である。目標の５％の１標準偏差は０．０２１４１５である。３１０ｎｍでの試験・再試験の最悪の場合の値（０．０２０２）と標準偏差の比較は、５％目標が許容されることを証明する。

試験・再試験分析は、機器の正確度における変動値のみを考慮したが、保証されたＰＢＤの吸光度に関連する変動も考慮されるべきである。ＣｏＡに記述されるとおり、各波長でのＰＢＤの保証値測定値と関連する誤差は、±５％である。この誤差の評価は、下の式に基づく二変量正規分布を使用して記載され得る測定値と真の値の間の関係を通してなされ得る：
測定値＝（ＰＢＤ目標＋ＰＢＤ誤差）＋Ｓｏｌｏ ＶＰＥ測定誤差（式１）

図７及び８は、機器に関連する変動値又は誤差、及びＰＢＤ測定値の保証値の信頼度を考慮した、データセットの正規二変量等高線を示す。ＣｏＡ範囲（垂直線）の外部の全てのＰＢＤ測定値が棄却される。同様に、水平線の外部の機器測定値が棄却される。まとめると、これらの境界は、測定値の全体的な変動に基づいて、ＳｏｌｏＶＰＥ及びＰＢＤ試料並びに試験許容に関する許容される範囲を設定する。下の図において示されるとおりの影付きの輪郭は、許容範囲（すなわち、中心の箱）内への包含に関して評価される。図７及び８に示されるとおり、２８０ｎｍ及び３１０ｎｍでのＰＢＤ測定値は、±４％の目標仕様の境界と重複する。両方の波長でのＰＢＤ測定値は、等高線の全てが中心の箱内にあるため、±５％の目標仕様を許容する。したがって、ＳｏｌｏＶＰＥ機器に関する変動値及びＰＢＤ結果の変動を考慮した二変量統計分析に基づいて、５％の差の基準が支持される。

実施例４－機器性能：タンパク質定量値とＰＢＤ測定値の相関
この節は、タンパク質濃度定量に関する機器性能を予測するためのＰＢＤ測定値の有用性を論じる。全体として、システム適合性基準は、不十分な機器性能を識別することができた。表３．１における％ＲＳＤによって示されるとおり、２．２％未満のレベルの％ＲＳＤによって証明されるとおり３台の機器（１１３４、１１７４及び１７１１）に関する２８０ｎｍ波長でのＰＢＤ測定値において例外的な変動値はなかった。この波長でのＰＢＤ測定値はまた、保証値と比較して５％の基準内であった（図７）。さらに、低及び中程度の濃度レベルでの全ての及び後続のタンパク質定量値は、不十分に機能する機器を除いて保証値から±５％の範囲内であった（図９）。高濃度のタンパク質試料（例えば、１３５．８ｍｇ／ｍＬ；ｍＡｂ１）に関して、３１０ｎｍ波長でのＰＢＤ測定値は、評価される経路長に基づく機器性能の予測因子としての使用に最も適用できるものであろう。直接的な比較のプロットは、図１０において示される。

図１０における円によって強調されるデータポイントは、不十分に機能する機器により得られた変則的な測定値に焦点を当てている。３１０ｎｍでのＰＢＤ測定値及びｍＡｂ１定量値に関する図２及び３における表からの個々の測定値は、パターンの識別のために図で比較された。全体として、プロットは、４種全ての機器（１７１１、１１３４、１１７４、ＰＰ）にわたるタンパク質定量値と比較して同様のパターンのＰＢＤ測定値を示す。この類似性は、ＰＢＤが機器性能の良好な予測因子であることを示した。ＰＢＤ測定値及びタンパク質定量値は、主として目標値（青色の線）の５％以内であったが、下で論じられるとおり注目すべき例外が存在した。

円＃１の焦点は、３１０ｎｍでの試験実施からの２つのＰＢＤ測定値である。％ＲＳＤが≦５％ＲＳＤの基準を満たさない原因となったのはこれらのデータポイントであった（１０．５％ＲＳＤが観察された）。これらの２つの測定値がブラケットの端で発生し（図３）、試験順序全体にわたって機器が不安定であったことを示唆したことは注目に値する。翌日、ＰＰ機器は、ｍＡｂ１に関してＣｏＡ値の±５％範囲の外部にあった（青色及び緑色の菱形）低いタンパク質濃度の定量値を提供した（円＃２）。これらの変則的な低い結果は、この節において後で論じられる。

円３及び４におけるデータは、タンパク質濃度定量値に対するＰＢＤ測定値の予測的な有用性を明らかに実証している。３１０ｎｍでの目標値からの逸脱が大きかったため、変則的なデータの原因をさらに調査することが正当化された。しかし、要約すると、ＰＢＤに基づくシステム適合性基準は、この不十分な機器性能を識別することができた。

この調査は、ＰＰ機器の測定値が中心となった。図２中の表に示されるデータから、３１０ｎｍでのより低いＰＢＤ測定値とは対照的に、２８０ｎｍでのＰＢＤに関する測定値は、保証値より有意に高かった。これらの所見は、Ｃａｒｙ ６０分光光度計のモノクロメーターによる比較的長い波長へのシフトにより説明され得る。ＰＢＤのスペクトルは、２８０ｎｍにおいて吸光度ピークが依然として上昇しているが、３１０ｎｍにおいて最大値が存在することを示す。さらに、モノクロメーターの波長誤差もまた、タンパク質が２８０ｎｍで最大値を有し、２８０ｎｍよりも長い波長でのタンパク質測定値が最大値から逸脱することになり、したがって、吸光度を減少させるため、タンパク質濃度測定値が低いと認識されることを説明するであろう。図１１は、スペクトルを図で提示し、２８０ｎｍ、３１０ｎｍのＰＢＤ測定値、及びｍＡｂ１タンパク質定量値の吸光度に対する波長シフトの影響を示す。Ｃａｒｙ ６０が波長をシフトさせるならば、ＳｏｌｏＶＰＥによって使用される吸光係数はシフトした波長に対して不適切であるため、濃度が不正確に計算されるであろう。

この実施に関するＳｏｌｏＶＰＥ又はＣａｒｙ ６０のいずれかの調査が測定時に実施されなかったため、変則的な測定値の正確な根本原因を指定することができない。しかしながら、この試験実施におけるＰＢＤの測定値及びタンパク質定量値に関して観察されたオフセットの差の割合は、この試験における他の機器の平均合格値と比較され得る。次に、その差は、全ての測定値に適用され得る。例えば、この実施のデータセットにおける２８０ｎｍでの変則的なＰＢＤ測定値の平均は、０．７８９２であったか又は２８０ｎｍでの合格結果の平均より１３７．７％高かった（０．５７３８、図２中の表において列挙される実施１～６、１０～１１、及び１３～１４の平均）。２８０ｎｍでの固定経路長スペクトルデータからの吸光度は、０．３０２９ＡＵであった。観察された吸光度測定値は、１３７．７％の差について調整すると、０．４１５０ＡＵの吸光度となり、これをスペクトル曲線上にプロットした場合、２９０．９ｎｍの波長に相当するか又は公称波長より１０．８ｎｍ高いであろう（図１１）。同じ計算が、他の波長及びタンパク質資料で実施された。

測定値におけるこれらの差は、吸光度値が、公称からおよそ８．８ｎｍ～１０．８ｎｍ離れた不適切な波長で得られた可能性があることを示す。ＰＢＤ及びタンパク質試料に関するデータの一貫性は、Ｃａｒｙ ６０のモノクロメーターが、この実施における異常なデータの原因に対する寄与因子であった可能性があることを示す。Ａｇｉｌｅｎｔは、Ｃａｒｙ ６０分光光度計が起動時に波長を較正するため、月単位で機器の電源を落とすべきであると推奨している。機器が翌日により良好に機能したことは留意されるべきである（図５）。全体として、システム適合性基準は、この不十分な機器性能を識別することができた。

実施例５－試料許容基準の決定
この節は、タンパク質濃度に関する１つの定量値の代わりに反復実験の測定値の使用を検討する。固定経路長機器を使用する反復実験の測定値に関する許容基準は、二つ組及び三つ組の測定値の≦５％ＲＳＤで設定された。

先に述べたとおり、このデータは、変則的な１つの測定値の発生の予測不可能性が、データセット全体の妥当性に影響を及ぼし得ることを示す。３つのＰＢＤ測定値は、５％のＲＳＤ基準を満たさなかった（図２における表）。別の試験実施において、３つの測定値のうちの２つは、保証値より高く、％ＲＳＤが＞５％になることによって（１０．５％ ＲＳＤ）、基準を満たさなかった。同様に、さらに別の試験実施において、％ＲＳＤ基準を満たさなかった（９．０％ ＲＳＤ）保証値を超える１つの測定値が記録された。実例実施の初めと終わりの両方の波長でＰＢＤの使用を必要とすることによって、システム適合性は、機器のずれを識別することができた。これらの変則的な測定値が試料データセットにおいて観察されるならば、タンパク質定量値は無効になるであろう。１つの変則的な測定値が不合格の原因となった場合、反復実験の試料試験は、根本原因が試料に関連するものか又は機器の単なる偶発的な事象であるかを指定するためのリアルタイムのデータ（三つ組のセットの他の測定値を意味する）を調査者に提供するであろう。

実施例５－概要
要約すると、データの統計分析を使用するこの試験におけるデータに基づいて、分析値のＰＢＤ基準から±５％の機器の正確度の基準が確立される。第二に、この試験で使用され且つこの報告に要約された実用的なシステム適合性基準は、不十分に機能している機器を識別することができた。適切に機能している機器が、１７１１、１１３４、及び１１７４機器に関して使用されたとき、無効の測定値は本質的にない。ＰＢＤに基づくシステム適合性は、機器による変則的な１つの測定値がデータの妥当性に影響を及ぼし得るという証拠を提供することによってその有用性を実証した。アッセイ許容基準に関して、限定的な予備試験は、３６個の個々のタンパク質測定値が試料間で一貫した結果とともに作成できることを示した。最後に、各タンパク質試料は、ブートストラップ分析に基づいて三つ組で試験されるべきである。この試験は２つのｍＡｂを使用したが、第一原理に基づいて、全てのタンパク質は同様に振る舞うはずである。

実施例６－ＳｏｌｏＶＰＥのプログラミング
Ｑｕｉｃｋ Ｓｌｏｐｅ
Ｑｕｉｃｋ Ｓｌｏｐｅツールの下で、表６．１及び６．２からパラメーターを選択する：

Ｆｉｘｅｄ Ｓｌｏｐｅ
Ｑｕｉｃｋ Ｓｌｏｐｅツールの下で、表６．３及び６．４からパラメーターを選択する：

Ｆｉｘｅｄ Ｓｌｏｐｅモードに関するスクリーンショットは、図１３に示される。

実施例７－概観
システム適合性、アッセイ及び試料許容基準は、実施例７及び８における可変経路長機器、ＳｏｌｏＶＰＥを要するタンパク質濃度の定量に関して再評価された。中間精度データは、機器の変動に関してＡＭＧブルー（下を参照のこと）を使用して得られた。これらの基準の修正のためのデータは、６台の機器でＳｏｌｏＶＰＥを使用して得られた。ＡＭＧブルーは、５％（ｖ／ｖ）グリセロール水混合物中において０．１５％（ｗ／ｖ）で緩衝されたパテントブルー色素溶液（ｐＨ６．８）である。このデータの分析により、２８０、３１０、５１０、及び６１５ｎｍでの固定経路長値の≦４％は許容できることが明らかになった。システム適合性測定値の精度は、全ての波長で≦５％の相対標準偏差（ＲＳＤ）パーセンテージを有しなければならない。ＣｏｎｆｉＲＭ（登録商標）標準物質は、使用される経路長及び段階吸光度に基づいてシステム適合性標準物質としての使用に適さない。

この試験において使用される機器の全ては、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｃａｒｙ ６０紫外線（ＵＶ）分光光度計システムに接続されたＳｏｌｏＶＰＥを含んだ。濃度定量を行うために、ＳｏｌｏＶＰＥは、試料の吸光度に応じて０．００５ｍｍ～１５ｍｍの光路長に自動的に調整した。各試料に関して、経路長に対する吸光度の線形回帰プロットは、１０種の経路長の最大値を使用して作成された（５つの点が最小限必要とされる）。試料許容基準は、この試料分析プロットの回帰線に基づいたが、Ｒ２は、妥当な結果をもたらすためにＳｏｌｏＶＰＥに関して≧０．９９９であるべきである。ＳｏｌｏＶＰＥシステムの勾配測定能力及び経路長範囲に基づいて、製造業者が主張するタンパク質試料濃度定量能力の範囲は、希釈を必要としない０．０１～３００ｍｇ／ｍＬ（ウシ血清アルブミン）である。結果として、Ｃａｒｙ分光光度計に結合されたＳｏｌｏＶＰＥは、品質管理及び製造現場での試験速度の向上による効率化に十分に適した。

この試験の目的は、システム適合性標準物質としてのＡＭＧブルーの使用のための科学的根拠を確立し、システム適合性の手順を簡略化することであった。

実施例８－材料及び方法、実験、並びにデータ分析
ＡＭＧブルー色素の調製
ＡＭＧブルー色素のＵＶ／可視スペクトルは、図１４に示される。２８０ｎｍ、３１０ｎｍ、５１０ｎｍ及び６１５ｎｍの４つの波長は、図において強調される。現在使用されている色素溶液ＣＨＥＭ０１３（ＰＢＤ）は、機器の資格証明のためにＣ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．によって提供されているが、低濃度であり且つ異なる配合を有する。

ＡＭＧブルー色素（１×ＰＢＳ中の０．１５％パテントブルーＶＦ、５％グリセロール緩衝液）を調製するために、次の手順を行った：
１．１０ｍＬの１０×ダルベッコリン酸緩衝食塩水＊（ＤＰＢＳ；ＣａＣｌ２なし、ＭｇＣｌ２なし；Ｇｉｂｃｏ、ｐ／ｎ １４２００－０７５；Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を、１００ｍＬのメスシリンダー又はメスフラスコに加える。
２．１０ｍＬの無菌５０％グリセロール（Ｔｅｋｎｏｖａ、ｐ／ｎ Ｇ１７９９；Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ、ＣＡ）をメスシリンダー又はフラスコに加える。
３．精製水によりメスシリンダー又はフラスコ中の体積を１００ｍＬにする。
４．シリンダー／フラスコに蓋をするか又は密封し、複数回反転させて溶液を十分に混合する。
５．別々のビーカーにおいて、１５０±２ｍｇのパテントブルーＶＦ（アシッドブルー１、スルファンブルーとしても知られる、式（ヒル表示法）、Ｃ２７Ｈ３１Ｎ２ＮａＯ６Ｓ２；ＣＡＳ番号１２９－１７－９；Ｓｉｇｍａ、ｐ／ｎ １９８２１８；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）を秤量する。
６．はねないように注意しながらＤＰＢＳ／グリセロール溶液をビーカーにゆっくりと加える。
７．磁性撹拌子をビーカーに加え、１０分間撹拌する。
８．ｐＨが７．０±０．２になっていることを確認する。
９．保管ボトルに移す。
１０．暗所において室温で保管する。

＊ＤＰＢＳに加えて、６．８～９．０のｐＨで緩衝する任意の緩衝系が好適である。例示的な緩衝液は、表Ａにおいて示される。

実験デザイン
中間精度試験では、異なる所在地での複数の機器にわたるＡＭＧブルーの再現性を検討した。

６台の機器がこの試験において使用された。使用された全ての機器は、Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＩｎｃからのＱｕｉｃｋ Ｓｌｏｐｅソフトウェアのバージョン３に製造業者によって更新された。機器のモードは、Ｍｕｌｔｉ－モードであった。機器のソフトウェアは、３つのモードを有した：
１）Ｑｕｉｃｋ Ｓｌｏｐｅモード（Ｑｕｉｃｋ－Ｍ）：目的の吸光度のために実施される閾値経路長検索、所望の数のデータポイントに基づく適応アルゴリズムを使用して収集されるセクションデータ。
２）Ｍｕｌｔｉ－モード（Ｍｕｌｔｉ－Ｍ）：複数の波長が、Ｑｕｉｃｋ Ｓｌｏｐｅモードアルゴリズムを使用して試験される。
３）Ｆｉｘｅｄ Ｓｌｏｐｅモード（Ｆｉｘｅｄ－Ｍ）：最初の経路長検索はない。データは、ユーザーにより指定された初期経路長、経路長段階サイズ及び収集されることになるデータポイントの数に基づいて収集される。

この試験に関して、以下の設定が使用された：
Ｍｕｌｔｉ－モードの波長：２８０．００、３１０．００、５１０．００、６１５．００
平均化時間：０．５秒；機器当たり１２回の実施（６回の反復実験の２セット）
ブルー色素に特異的なＦｉｘｅｄ Ｓｌｏｐｅモードサブルーチンが作成され、３１０ｎｍ波長でのデータを得るために使用された。このサブルーチンは、機器に５μｍ～５０μｍの経路長を使用させて、高タンパク質濃度に関する機器性能を評価し、記載される。このサブルーチンは、システム適合性実施のためにバージョン３のソフトウェアを必要とする。

実験の実行
実験は、二つ組及び三つ組の測定値の≦５％ＲＳＤで設定された固定経路長機器を使用する反復実験の測定値に関する許容基準を使用して実行された。このＲＳＤ基準が使用され、この試験において評価された。

各試験順序は、システムの適合性基準を評価するために、２８０、３１０、５１０、６１５ｎｍの各波長で１台の機器当たり１２回のＡＭＧブルーの定量からなった。試験戦略は、全体的な操作者の時間及び労力を減少させるように設計された。８個のデータセットが得られた。試験戦略は、ＡＭＧブルー溶液で機器間の差を評価するために設計された。成功への重要な属性は、５０μｍの経路長での機器の吸光度が一貫して１吸光単位（ＡＵ）以上であることであった。既存のＰＢＤ溶液は、５０μｍで１ＡＵを測定することはできないが、代わりにアルゴリズムが１ＡＵの測定に対して経路長を移動させる。ＳｏｌｏＶＰＥによって測定されるときのＡＭＧブルー溶液は、一貫して５０μｍで１ＡＵをもたらす。

複数の波長でＡＭＧブルー色素測定値を評価する戦略を利用して、機器に要求される広い範囲のタンパク質濃度を包含した。比較的高いタンパク質濃度（すなわち、＞４５ｍｇ／ｍＬのモノクローナル抗体（ｍＡｂ））は、５μｍ～５０μｍの最も狭い範囲の経路長を必要とした。６１５ｎｍでのブルー色素測定値は、５０μｍ未満の経路長での機器性能を評価した。タンパク質濃度の残りの範囲（すなわち、≦４８ｍｇ／ｍＬ）を包含するために、５１０ｎｍでの測定値は、非常に低い濃度の試料のために使用される経路長５０μｍでの機器性能を評価した。２８０ｎｍ及び３１０ｎｍでの定量値は、先行する実施の間での比較のために加えられた。タンパク質濃度は通常、２８０ｎｍで定量された。

ＡＭＧブルー色素は、複数の波長でＱｕｉｃｋ ＳｌｏｐｅモードであるＭｕｌｔｉ－モードを使用する手順を可能にした。機器のアルゴリズムが最適な試験戦略（すなわち、閾値経路長及び段階吸光度）を決定したため、定量前に指定された経路長は必要とされなかった。ＳｏｌｏＶＰＥによる吸光度の測定が、６台の機器で実施されて、生じる可能性のある結果において任意の関連する差を観察した。勾配及びＲＳＤ％に関するＡＭＧブルー色素測定値の計算は、測定時にＳｏｌｏＶＰＥソフトウェアによって実施された。

データ分析
全ての統計分析は、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ（登録商標）Ｅｘｃｅｌソフトウェアを使用して実施された。中間精度試験は、ＡＭＧブルー色素を使用して実行された。

この節は、システム適合性標準物質としてのＡＭＧブルー色素の使用について、６台の機器の測定値の正確度及び精度の点から論じる。表８．１において示されるとおり、６台の機器からのデータは、固定経路長の≦５％以内であり、反復実験の測定値の％ＲＳＤ基準に基づいて三つ組の測定値の≦５％ＲＳＤを満たした。表８．２は、それぞれＡＭＧブルー色素の測定値及びタンパク質定量値に関する未加工のデータを提示する。この試験において、波長当たり９５個の測定値を使用して、システム適合性基準を実証した。正確度は、固定経路長機器（Ｃａｒｙ ６０）に対して個々の測定値をプロットすることによって評価された。これらのデータは、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ（登録商標）Ｅｘｃｅｌ形式において利用可能であった。

先行する実験において、６３９ｎｍでの吸光度は、高濃度モデルとして使用された。目的は、６３９ｎｍでの勾配（ａｂｓ／ｍｍ）を決定し、固定経路長機器の測定値を比較することであった。機器検出器の制約及びベールの法則の逸脱に起因して、固定経路長とＳｏｌｏＶＰＥ定量値の間の勾配決定において一致はなかった。低い相関の可能性が高い原因は、ＳｏｌｏＶＰＥの検出器の飽和のためであると考えられる。この差を克服するために、波長設定の６１５ｎｍへの変更によって、固定光路長（希釈され、１ｍｍのセルで測定される）とＳｏｌｏＶＰＥの間の勾配の直接的な相関を許容した。技術プラットフォーム間の勾配の直接的な相関は、ＳｏｌｏＶＰＥから勾配の検定を可能にした。

システム適合性標準物質としてのＡＭＧブルー色素の評価
この節は、システム適合性標準物質としてのＡＭＧブルー色素の使用について、機器の経路長の点から論じる。図１５は、定量に必要とされる経路長が、４８ｍｇ／ｍＬのタンパク質Ｂ（タンパク質Ｂ－４８）のための０．００５ｍｍの最小値から最も薄められたもの（１ｍｇ／ｍＬ；タンパク質Ａ）のための最大の経路長としての約２．３ｍｍの範囲であったことを示す。表８．３において、図１５のタンパク質及びＳｏｌｏＶＰＥで使用される標準溶液に関する段階吸光度が報告される。大きい経路長は、低濃度のタンパク質（１．０ｍｇ／ｍＬ）に起因するタンパク質Ａのために必要となる。利用される経路長の範囲は、ＡＭＧブルー色素の適合性において使用される経路長の範囲に相関した。

Ｓｌｏｐｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ（商標）（ＳｏｌｏＶＰＥ）において、線の勾配は、吸光係数を介して濃度に正比例する。勾配の重要な属性は、各光スロットを通過することが許容される光の量であり、したがって、感度はＳｏｌｏＶＰＥ分析の個々の段階の吸光度に基づく。経路長（ＰＬ）段階が大きいほど、吸光度が大きくなると考えられる。有効なシステム適合性のための吸光度は、ＳｏｌｏＶＰＥ検出器の性能の範囲内でなければならない。光の量が少なすぎる場合、検出器は、各試験で故障の危機に瀕するであろう。タンパク質の濃度と比較して光の量が多すぎる場合、システムの適合性は感度を欠いて、光路及び機器の光学系の若干の変動（すなわち、ミラーの誤整列及び直線性のゆらぎ）を検出する。好ましくは、段階吸光度は、ＳｏｌｏＶＰＥアルゴリズムによって決定されるとおりにタンパク質濃度全体にわたって維持されなければならない。

実施例９－ＡＭＧブルー色素標準物質の重要な属性
ＡＭＧブルー色素溶液の望ましい属性は、段階吸光度によって制御されるとおりのＡＭＧブルー色素スペクトル全体にわたる測定値を介して全ての濃度で機器性能を評価するために設計された。既存のデータは、ＳｏｌｏＶＰＥをＭｕｌｔｉ－モードで使用することによって、ＳｏｌｏＶＰＥアルゴリズムが試料測定のための閾値経路長を決定できることを示す。

色素濃度
ＳｏｌｏＶＰＥをＱｕｉｃｋ Ｓｌｏｐｅモードで使用してＰＢＤを分析するとき、経路長は、高濃度に適用できない。さらに濃縮された溶液が要求される。実験は、色素の最適な濃度を見出すために実行された。０．１％、０．１２％、０．１５％、０．２％及び０．５％（ｗ／ｖ）を含有するパテントブルーＶＦ溶液が調製され、試験された。最適なスペクトル特性（５０μｍで約１ＡＵ）は、０．１５％ ｗ／ｖで見出された。

配合物のｐＨ
パテントブルーＶＦ色素は、トリフェニルメタンファミリーの色素である。結果的に、分子はｐＨ変化に対して感受性である。スキーム１に示されるとおりの環化は、π電子雲を変え、したがって色を変えることになる。
スキーム１：パテントブルーＶＦの環化

溶液が不適切に作製される場合、０．１５％ ｗ／ｖの濃縮形態における溶液のｐＨ及びその結果としての色は、溶液が緑がかった青に見えることになる酸性（すなわち、ｐＨ３．２）になる可能性がある。不適切なｐＨでのＡＭＧブルー色素溶液は、固定経路長の測定値（１３．５ａｂｓ／ｍｍ）と一致しなかったが、代わりにＳｏｌｏＶＰＥを使用して１０．５の勾配を示した。しかしながら、溶液がｐＨ６．８に緩衝されるとき、溶液は、その青色及び固定経路長機器との相関を維持した。

有機組成
グリセロールは、ＰＢＤ溶液中のメタノールの揮発性のために使用された。５％（ｖ／ｖ）の濃度が、ＡＭＧブルー色素において実装された。

したがって、要約すると、以下が観察された：
・ＡＭＧブルー色素は、６台の機器にわたって≦５％の精度を示した。
・ＡＭＧブルー色素は、２８０ｎｍ、３１０ｎｍ、５１０ｎｍ、及び６１５ｎｍで固定経路長分光光度計を使用する値から≦５％であった。
・０．１５％（ｗ／ｖ）ＡＭＧブルー色素を使用する６１５ｎｍでの測定値は、固定勾配を使用する３１０ｎｍでの測定値と置き換えることができる。
・段階吸光度の測定値に基づいて、ＣｏｎｆｉＲＭ（登録商標）標準物質は、タンパク質を模倣するのに不適切である。

要約すると、データの分析は、６台の機器を使用するＡＭＧブルー色素溶液の測定値における変動が、固定経路長測定値から±５％の正確度を維持することを実証した。パテントブルーＶＦの濃度、ＡＭＧブルー色素溶液のｐＨ及び有機組成は、ＡＭＧブルー溶液の非常に重要な属性である。試験のためのＭｕｌｔｉ－モードの実行により、機器性能の効果的な評価に必要な感度を維持しながら、システムの適合性手順が大幅に簡略化される。

参考文献一覧
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上述の一般的説明及び以下の詳細な説明はどちらも、例示的且つ説明的に過ぎず、限定するものではない。単数形の使用は、特に他に明記しない限り、複数形を含む。「又は」の使用は、他に明記しない限り「及び／又は」を意味する。用語「含んでいる」並びに「含む」及び「含まれる」などの他の形態の使用は、限定的ではない。「要素」又は「構成要素」などの用語は、特に他に明記しない限り、１つのユニットを含む要素及び構成要素並びに２つ以上のサブユニットを含む要素及び構成要素の両方を包含する。用語「部分」の使用は、部分の一部又は部分全体を含むことができる。例えば１～５などの数値範囲が言及される場合、１、２、３、４及び５並びに１．５、２．２、３．４及び４．１などのそれらの分数などの全ての介在値は明示的に含まれる。

「約」又は「～」は、量を修飾する場合（例えば「約」３ｍＭ）、修飾された量の前後で変動が発生し得ることを意味する。これらの変動は、典型的な測定手順及び処理手順、不注意による誤り、成分の純度などの様々な手段によって発生し得る。

「含んでいる」及び「含む」は、方法が列挙された要素を含むが、その他の列挙されていない要素を除外しないことを意味することが意図されている。用語「～から本質的になっている」及び「～から本質的になる」は、本明細書に開示した方法において使用される場合、列挙された要素を含み、本方法の基本的性質を変更させる列挙されていない要素は除外するが、その他の列挙されていない要素は除外しない。用語「～からなっている」及び「～からなる」は、方法を規定するために使用される場合、実質的な方法ステップを除外する。これらの移行語の各々によって定義される実施形態は、本開示の範囲内に含まれる。

「結合（した）」は、直接的並びに間接的に関連していることを意味する。例えば、デバイス若しくはプロセスは別のデバイス若しくはプロセスと直接的に関連し得るか、又はこれらのデバイス及び／若しくはプロセスは、例えば、別のデバイス若しくはプロセスを介して相互に間接的に関連し得る。

Claims (12)

1. タンパク質試料のタンパク質濃度を定量するための可変長分光光度計の適合性を決定する方法であって、パテントブルー色素（ＰＢＤ）又はＡＭＧブルー色素（ＡＢＤ）の吸光度を、２８０ｎｍの第１の波長、並びにそれに続く３１０ｎｍ、４１２ｎｍ、５１０ｎｍ及び６１５ｎｍからなる群から選択される波長の少なくとも２つの波長で測定することを含む方法。
2. タンパク質試料のタンパク質濃度を定量するための固定経路長分光光度計の適合性を決定する方法であって、ＡＢＤの吸光度を、２８０ｎｍの第１の波長、並びにそれに続く３１０ｎｍ、４１２ｎｍ、５１０ｎｍ及び６１５ｎｍからなる群から選択される波長の少なくとも２つの波長で測定することを含む方法。
3. 少なくとも第３の波長が使用され、前記第３の波長が、第２の波長とは異なり、３１０ｎｍ、４１２ｎｍ、５１０ｎｍ及び６１５ｎｍからなる群から選択される、請求項１又は２に記載の方法。
4. 前記ＰＢＤ又はＡＢＤが、前記タンパク質試料の前記タンパク質濃度を測定する前に各波長に関して３回測定され、前記ＰＢＤ又はＡＢＤが、前記タンパク質試料の前記タンパク質濃度を測定した後に各波長に関して３回測定される、請求項１～３のいずれかに記載の方法。
5. 前記第１の波長が２８０ｎｍであり、前記第２の波長が３１０ｎｍである、請求項１～３のいずれかに記載の方法。
6. 前記可変長分光光度計が、前記ＰＢＤ又はＡＢＤの吸光度測定値が、前記ＰＢＤ又はＡＢＤとともに提供される分析証明書において提供されるそれらの値と等しいか又はその１０％未満である場合、好適であると考えられる、請求項３に記載の方法。
7. 前記可変長分光光度計又は固定経路長分光光度計が、前記ＰＢＤ又はＡＢＤの吸光度測定値が、前記ＰＢＤ又はＡＢＤとともに提供される分析証明書において提供されるものと少なくとも等しいか又はその５％未満である場合、好適であると考えられる、請求項１又は２に記載の方法。
8. 前記測定値が、≦５％の相対標準偏差（ＲＳＤ）パーセンテージを有する、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
9. 前記タンパク質試料が、治療用タンパク質を含む、請求項１～８のいずれかに記載の方法。
10. 前記タンパク質試料が、抗原結合タンパク質、抗体、二重特異性抗体、三重特異性抗体、ＢｉＴＥ分子、又はそのフラグメント若しくは誘導体を含む、請求項１～９のいずれかに記載の方法。
11. 前記可変長分光光度計が、ＳｏｌｏＶＰＥ分光光度計（Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．；ニュージャージー州ブリッジウォーター）である、請求項１に記載の方法。
12. 前記治療用ポリペプチドが、インフリキシマブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、ラニビズマブ、パリビズマブ、アバゴボマブ、アブシキシマブ、アクトクスマブ、アダリムマブ、アフェリモマブ、アフツズマブ、アラシズマブ、アラシズマブペゴル、ａｌｄ５１８、アレムツズマブ、アリロクマブ、アルツモマブ、アマツキシマブ、アナツモマブマフェナトクス、アンルキンズマブ、アポリズマブ、アルシツモマブ、アセリズマブ、アルチヌマブ、アトリズマブ、アトロリムマブ、トシリズマブ、バピネウズマブ、バシリキシマブ、バビツキシマブ、ベクツモマブ、ベリムマブ、ベンラリズマブ、ベルチリムマブ、ベシレソマブ、ベバシズマブ、ベズロトクスマブ、ビシロマブ、ビバツズマブ、ビバツズマブメルタンシン、ブリナツモマブ、ブロソズマブ、ブレンツキシマブベドチン、ブリアキヌマブ、ブロダルマブ、カナキヌマブ、カンツズマブメルタンシン、カプラシズマブ、カプロマブペンデチド、カルルマブ、カツマキソマブ、ｃｃ４９、セデリズマブ、セルトリズマブペゴル、セツキシマブ、シタツズマブボガトクス、シクスツムマブ、クラザキズマブ、クレノリキシマブ、クリバツズマブテトラキセタン、コナツムマブ、クレネズマブ、ｃｒ６２６１、ダセツズマブ、ダクリズマブ、ダロツズマブ、ダラツムマブ、デムシズマブ、デノスマブ、デツモマブ、ドルリモマブアリトクス、ドロジツマブ、デュリゴツマブ、デュピルマブ、エクロメキシマブ、エクリズマブ、エドバコマブ、エドレコロマブ、エファリズマブ、エフングマブ、エロツズマブ、エルシリモマブ、エナバツズマブ、エンリモマブペゴル、エノキズマブ、エノチクマブ、エンシツキシマブ、エピツモマブシツキセタン、エプラツズマブ、エレヌマブ、エルリズマブ、エルツマキソマブ、エタラシズマブ、エトロリズマブ、エボロクマブ、エキシビビルマブ、ファノレソマブ、ファラリモマブ、ファルレツズマブ、ファシヌマブ、ｆｂｔａ０５、フェルビズマブ、フェザキヌマブ、フィクラツズマブ、フィギツムマブ、フランボツマブ、フォントリズマブ、フォラルマブ、フォラビルマブ、フレソリムマブ、フルラヌマブ、フツキシマブ、ガリキシマブ、ガニツマブ、ガンテネルマブ、ガビリモマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、ゲボキズマブ、ギレンツキシマブ、グレムバツムマブベドチン、ゴリムマブ、ゴミリキシマブ、ｇｓ６６２４、イバリズマブ、イブリツモマブチウキセタン、イクルクマブ、イゴボマブ、イムシロマブ、イムガツズマブ、インクラクマブ、インダツキシマブラブタンシン、インフリキシマブ、インテツムマブ、イノリモマブ、イノツズマブオゾガマイシン、イピリムマブ、イラツムマブ、イトリズマブ、イキセキズマブ、ケリキシマブ、ラベツズマブ、レブリキズマブ、レマレソマブ、レルデリムマブ、レキサツムマブ、リビビルマブ、リゲリズマブ、リンツズマブ、リリルマブ、ロルボツズマブメルタンシン、ルカツムマブ、ルミリキシマブ、マパツズマブ、マスリモマブ、マブリリムマブ、マツズマブ、メポリズマブ、メテリムマブ、ミラツズマブ、ミンレツモマブ、ミツモマブ、モガムリズマブ、モロリムマブ、モタビズマブ、モキセツモマブパスドトクス、ムロモナブ－ｃｄ３、ナコロマブタフェナトクス、ナミルマブ、ナプツモマブエスタフェナトクス、ナルナツマブ、ナタリズマブ、ネバクマブ、ネシツムマブ、ネレリモマブ、ネスバクマブ、ニモツズマブ、ニボルマブ、ノフェツモマブメルペンタン、オカラツズマブ、オクレリズマブ、オデュリモマブ、オファツムマブ、オララツマブ、オロキズマブ、オマリズマブ、オナルツズマブ、オポルツズマブモナトクス、オレゴボマブ、オルチクマブ、オテリキシズマブ、オキセルマブ、オザネズマブ、オゾラリズマブ、パジバキシマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、パノバクマブ、パルサツズマブ、パスコリズマブ、パテクリズマブ、パトリツマブ、ペムツモマブ、ペラキズマブ、ペルツズマブ、ペキセリズマブ、ピジリズマブ、ピンツモマブ、プラクルマブ、ポネズマブ、プリリキシマブ、プリツムマブ、ＰＲＯ １４０、クイリズマブ、ラコツモマブ、ラドレツマブ、ラフィビルマブ、ラムシルマブ、ラニビズマブ、ラキシバクマブ、レガビルマブ、レスリズマブ、リロツムマブ、リツキシマブ、ロバツムマブ、ロレデュマブ、ロモソズマブ、ロンタリズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、サマリズマブ、サリルマブ、サツモマブペンデチド、セクキヌマブ、セビルマブ、シブロツズマブ、シファリムマブ、シルツキシマブ、シムツズマブ、シプリズマブ、シルクマブ、ソラネズマブ、ソリトマブ、ソネプシズマブ、ソンツズマブ、スタムルマブ、スレソマブ、スビズマブ、タバルマブ、タカツズマブテトラキセタン、タドシズマブ、タリズマブ、タネズマブ、タプリツモマブパプトクス、テフィバズマブ、テリモマブアリトクス、テナツモマブ、テネリキシマブ、テプリズマブ、テプロツムマブ、テゼペルマブ、ＴＧＮ１４１２、トレメリムマブ、チシリムマブ、チルドラキズマブ、チガツズマブ、ＴＮＸ－６５０、トシリズマブ、トラリズマブ、トシツモマブ、トラロキヌマブ、トラスツズマブ、ＴＲＢＳ０７、トレガリズマブ、ツコツズマブセルモロイキン、ツビルマブ、ウブリツキシマブ、ウレルマブ、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ、バパリキシマブ、バテリズマブ、ベドリズマブ、ベルツズマブ、ベパリモマブ、ベセンクマブ、ビジリズマブ、ボロシキシマブ、ボルセツズマブマフォドチン、ボツムマブ、ザルツムマブ、ザノリムマブ、ザツキシマブ、ジラリムマブ、ゾリモマブアリトクス、糖タンパク質、ＣＤポリペプチド、ＨＥＲ受容体ポリペプチド、細胞接着ポリペプチド、成長因子ポリペプチド、インスリンポリペプチド、インスリン関連ポリペプチド、凝固ポリペプチド、凝固関連ポリペプチド、アルブミン、ＩｇＥ、血液型抗原、コロニー刺激因子、受容体、神経栄養因子、インターフェロン、インターロイキン、ウイルス抗原、リポタンパク質、カルシトニン、グルカゴン、心房性ナトリウム利尿因子、肺界面活性剤、腫瘍壊死因子α及びβ、エンケファリナーゼ、マウスゴナドトロピン関連ペプチド、ＤＮＡｓｅ、インヒビン、アクチビン（ａｃｔｉｖｉｎｇ）、インテグリン、プロテインＡ、プロテインＤ、リウマチ因子、イムノトキシン、骨形成タンパク質、スーパーオキシド・ジスムターゼ、表面膜ポリペプチド、崩壊促進因子、ＡＩＤＳエンベロープ、輸送ポリペプチド、ホーミング受容体、アドレシン、調節ポリペプチド、イムノアドヘシン、ミオスタチン、ＴＡＬＬポリペプチド、アミロイドポリペプチド、胸腺間質リンホポエチン、ＲＡＮＫリガンド、ｃ－ｋｉｔポリペプチド、ＴＮＦ受容体及びアンギオポエチン、表１に示される抗体並びにそれらの生物活性断片、類似体又は変異体からなる群から選択される、請求項１～１１のいずれかに記載の方法。

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