TW202040117A - 與依照斜率的蛋白質濃度確定一起使用之系統適用性方法 - Google Patents

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Abstract

揭露了使用專利藍染料或AMG藍染料確定可變長度分光光度計的適用性之方法。AMG藍染料也可用於確定固定路徑長度分光光度計的適用性。

Description

與依照斜率的蛋白質濃度確定一起使用之系統適用性方法
提出的主題關於一個或多個蛋白質分析領域。具體地，提出的主題關於確定可確定蛋白質濃度的儀器之適用性。
蛋白質濃度係關鍵的品質屬性，因為它直接關係到患者的給藥。已建立的蛋白質濃度確定方法係基於根據比爾-朗伯（Beer-Lambert）光譜定律的藥典法，並允許使用常規的固定路徑長度或可變路徑長度技術。
1.     在第一方面，本文揭露了確定可變長度分光光度計用於確定蛋白質樣本的蛋白質濃度的適用性的方法，包括測量專利藍染料（PBD）或AMG藍染料（ABD）在至少兩個波長處的吸光度，第一波長為280 nm並且隨後的一個或多個波長選自由310 nm、412 nm、510 nm和615 nm組成之群組。在第二方面，本文揭露了確定固定路徑長度分光光度計用於確定蛋白質樣本的蛋白質濃度的適用性的方法，包括測量AMG藍染料（ABD）在至少兩個波長處的吸光度，第一波長為280 nm並且隨後的一個或多個波長選自由310 nm、412 nm、510 nm和615 nm組成之群組。在一些子方面或這前兩個方面中，使用第三波長，其中該第三波長不同於該第二波長並且選自由310 nm、412 nm、510 nm和615 nm組成之群組。同樣，在這前兩個方面在子方面中，在測量該蛋白質樣本的蛋白質濃度之前在該兩個波長處測量PBD或ABD，每個波長測量三次，並且其中在測量該蛋白質樣本的蛋白質濃度之後在該兩個波長處測量PBD，每個波長測量三次。在子方面中，該第一波長係280 nm，並且該第二波長係310 nm。在一些子方面中，如果PBD或ABD的吸光度讀數等於或小於隨PBD或ABD提供的分析證明書中所提供的那些值的10%，則認為可變長度分光光度計或固定路徑長度分光光度計係合適的。在其他子方面，如果PBD或ABD的吸光度讀數至少等於或小於隨PBD或ABD提供的分析證明書中所提供的那些的5%，則認為可變長度分光光度計或固定路徑長度分光光度計係合適的。在其他子方面，該等讀數的相對標準差（RSD）百分比 ≤ 5%。
在該等方面和子方面的任一個中，蛋白質樣本包含治療性蛋白質，如抗原結合蛋白、抗體、雙特異性抗體、三特異性抗體、BiTE分子或其片段或衍生物。
在關於可變長度分光光度計的方面和子方面中，可變長度分光光度計係SoloVPE分光光度計（新澤西州布裡奇沃特的C技術公司（C Technologies, Inc.；Bridgewater, NJ））。
在該等方面中的任何一個中，AMG藍染料優於PBD。
相關申請的交叉引用
本申請要求在2018年12月14日提交的美國專利申請案序號62/780,184之優先權，其藉由引用併入本文。序列表
本申請連同電子格式的序列表一起提交。該序列表以創建於2018年12月14日、標題為「A-2335-US-PSP_sequence listing_ST25.txt」的文件的形式提供，並且大小係258 KB。電子格式的序列表的資訊藉由引用以其全文併入本文。
將比爾-朗伯定律表示為A = αlc，其中A為測量的吸光度，α為莫耳吸收係數，l為路徑長度，並且c為樣本濃度。可以重新排列該方程式以與斜率光譜法一起使用：A/l = αc。對於比較斜率和路徑長度的測量，可以將線性回歸方程式寫成A = ml + b，其中m係回歸線的斜率，並且b係y截距。那麼尺寸相等允許用第三個方程式的斜率項替換上面第二個方程式的左側，從而得到下式：m = αc。該所得的方程式係斜率光譜方程式。如果已知莫耳吸收係數，則可以藉由用莫耳吸收係數除該斜率用該方程式來計算樣本的濃度：c = m/α。如果已知樣本濃度，則可以藉由將斜率除以濃度來計算莫耳吸收係數：α = m/c（Huffman等人 2014）。
在可變長度分光光度計中，路徑長度選擇係基於獲得的吸光度由電腦控制並優化。例如，Solo VPE光譜儀系統（新澤西州布裡奇沃特的C技術公司）配備有電腦控制的線性模組，該電腦控制的線性模組可以確定儀器的線性範圍內的樣本的吸光度。它隨後將在該線性範圍內生成連續更大或更小的路徑長度下的5-10個吸光度測量值。提供的軟體隨後為所得的吸光度和路徑長度數據計算並繪製線性回歸方程式，以生成斜率、截距和R2 值。然後，使用斜率值與使用者提供的感興趣的化合物的消光係數，利用比爾-郎伯定律反算樣本中的實際分析物濃度（Huffman等人 2014）。
在系統適用性測定中，使用標準品，該等系統適用性測定係用於在未知事件分析之前或期間檢查系統以確保系統性能。定義
「專利藍染料」或PBD意指CHEM013測量標準品（SKU CHEM013-KIT；新澤西州布裡奇沃特的C技術公司）或等同物。該染料係由俄亥俄州哥倫布市的GFS化學公司（GFS Chemicals, Columbus Ohio）按照規範製造的，項目：8416，其稱為「In-Spec® 專利藍顏料標準定制的UV-可見參考材料」。該組成物係90%-100%水、1- ＜ 3%甲醇和 ＜ 0.1%專利藍紫色（又稱酸性藍1和CI 42045（CAS 129-17-9））。指定的波長係310 nm。對於本揭露內容，路徑長度為5 µm至50 µm路徑長度。
「AMG藍染料」意指在1 x 磷酸鹽緩衝鹽水（PBS）、5%甘油緩衝液中的0.15%專利藍VF，其中PBS係不含氯化鈣並且不含氯化鎂的杜氏（Dulbecco's）PBS，並且專利藍VF也稱為酸性藍1、舒泛藍，並且具有C27 H31 N2 NaO6 S2 的經驗式（希爾（Hill）符號）；CAS號129-17-9。
在所揭露和要求保護的方法中，AMG藍染料係較佳的。
「蛋白質」、「肽」和「多肽」可互換使用，意指胺基酸鏈，其中每個胺基酸藉由肽鍵與下一個胺基酸連接。
「抗體」（Ab）和同義詞「免疫球蛋白」（Ig）係具有相同結構特徵的糖多肽。抗體表現出對特定抗原的結合特異性，而免疫球蛋白既包括抗體也包括缺乏抗原特異性的其他抗體樣分子。後一種多肽例如由淋巴系統以低水平產生並由骨髓瘤以增加的水平產生。因此，術語「抗體」或「一種或多種抗體肽」係指完整的抗體、抗體衍生物、抗體類似物、遺傳改變的抗體、具有可檢測標記的抗體、與指定抗體競爭特異性結合的抗體或其抗原結合片段（例如，Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、單結構域抗體），該抗原結合片段與完整抗體競爭特異性結合並且包括嵌合抗體、人源化抗體、完全人抗體和雙特異性抗體。在一些情況下，抗原結合片段例如藉由重組DNA技術產生。在其他情況下，抗原結合片段藉由完整抗體的酶促或化學裂解產生。抗原結合片段包括Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、Fv和單鏈抗體。
單株抗體和抗體構建體包括「嵌合」抗體，其中重鏈和/或輕鏈的一部分與衍生自特定物種或屬於特定抗體類別或亞類的抗體中的相應序列相同或同源，而一個或多個鏈的其餘部分與衍生自另一物種或屬於另一抗體類別或亞類的抗體中的相應序列相同或同源，以及此類抗體的片段，只要它們展現出所希望的生物活性即可。嵌合抗體包括「靈長類化」抗體，該等抗體包含衍生自非人靈長類動物(例如，舊大陸猴、猿等)的可變結構域抗原結合序列和人恒定區序列。
單株抗體和抗體構建體包括被稱為「人」或「完全人」的抗體。術語「人抗體」和「完全人抗體」各自係指具有人免疫球蛋白的胺基酸序列的抗體，包括從人免疫球蛋白文庫分離的抗體或從對一種或多種人免疫球蛋白而言為轉基因的並且不表現內源性免疫球蛋白的動物分離的抗體；例如，Xenomouse® 抗體以及如Kucherlapati等人在美國專利號5,939,598中描述的抗體。
「遺傳改變的抗體」意指其中胺基酸序列已從天然抗體的胺基酸序列發生變化的抗體。由於重組DNA技術在抗體產生中的相關性，不必局限於天然抗體中發現的胺基酸序列；可以重新設計抗體以獲得所需的特性。可能的變化很多，範圍從僅變化一個或幾個胺基酸，到完全重新設計例如可變區和/或恒定區。通常，進行恒定區的改變係為了改善或改變特性，諸如補體固定、與膜的相互作用和其他效應子功能，以及可製造性和黏度。可以進行可變區的改變以改善抗原結合特性。
「Fab片段」由一個輕鏈以及一個重鏈的CH1及可變區構成。Fab分子的重鏈不能與另一重鏈分子形成二硫鍵。
「Fab'片段」包含一條輕鏈和一條重鏈，該重鏈在CH1與CH2結構域之間包含更多的恒定區，使得可以在兩條重鏈之間形成鏈間二硫鍵以形成F(ab')2分子。
「F(ab')2片段」含有兩個輕鏈及含有介於CH1與CH2結構域之間的恒定區部分的兩個重鏈，使得這兩個重鏈之間形成鏈間二硫鍵。
「Fv片段」和「單鏈抗體」係指含有來自重鏈和輕鏈兩者的抗體可變區但缺乏恒定區的多肽。像完整抗體一樣，Fv片段或單鏈抗體能夠與特定抗原選擇性地結合。分子量僅為約25 kDa，Fv片段比普通抗體（150-160 kD）小得多，甚至比Fab片段（約50 kDa，一條輕鏈和半條重鏈）還小。
「單結構域抗體」係由單結構域Fv單元例如VH或VL組成的抗體片段。像完整抗體一樣，單結構域抗體能夠與特定抗原選擇性地結合。分子量僅為12-15 kDa，單域抗體比由兩條重多肽鏈和兩條輕鏈構成的普通抗體（150-160 kDa）小得多，甚至比Fab片段（約50 kDa，一條輕鏈和半條重鏈）和單鏈可變片段（約25 kDa，兩個可變域，一個來自輕鏈，一個來自重鏈）還小。還顯示衍生自輕鏈的奈米抗體與靶表位特異性地結合。來自實例的發現的介紹和總結
建立了用於蛋白質濃度確定的系統適用性、測定和樣本接受標準，其涉及可變路徑長度儀器SoloVPE（新澤西州布裡奇沃特的C技術公司；還參見US7,808,641）。使用SoloVPE在三種蛋白質濃度下獲得建立該等標準的數據，並與PBD的讀數一起歸為一類。對該等數據的統計分析揭示，對於用作系統適用性標準，在280 nm和310 nm處分析證明書（CoA）值 ± 5%係可以接受的。對於PBD和AMG藍染料讀數的開始和結束二者，系統適用性讀數的精度必須具有 ≤ 5%的相對標準差（RSD）百分比。對於測定接受標準，使用SoloVPE軟體進行的這項研究顯示，可以得到具有一致的樣本間結果的36個單獨的蛋白質讀數。應使用 ≤ 5% RSD標準一式三份地讀取蛋白質樣本。
專利藍VF的濃度、AMG藍染料溶液的pH（對於合適緩衝液，參見實例）和有機組成係AMG藍溶液的關鍵屬性。用於測試的SoloVPE設備中多模式的執行極大地簡化系統適用性程序，同時保持有效評價儀器性能所需的靈敏度。治療性多肽
包括與以下中的一種或多種結合的那些蛋白質在內的蛋白質可用於所揭露的方法。該等蛋白質包括CD蛋白，包括CD3、CD4、CD8、CD19、CD20、CD22、CD30和CD34；包括干擾受體結合的那些。HER受體家族蛋白，包括HER2、HER3、HER4和EGF受體。細胞黏附分子，例如LFA-I、MoI、pl50、95、VLA-4、ICAM-I、VCAM和αv/β3整合素。生長因子，如血管內皮生長因子（「VEGF」）、生長激素、甲狀腺刺激素、卵泡刺激素、黃體生成激素、生長激素釋放因子、甲狀旁腺激素、米勒管抑制物質（mullerian-inhibiting substance）、人類巨噬細胞炎性蛋白（MIP-I-α）、促紅血球生成素（EPO）、神經生長因子（諸如NGF-β）、血小板源性生長因子（PDGF）、成纖維細胞生長因子（包括例如aFGF和bFGF）、表皮生長因子（EGF）、轉化生長因子（TGF）（尤其包括TGF-α和TGF-β，包括TGF-βl、TGF-β2、TGF-β3、TGF-β4或TGF-β5）、胰島素樣生長因子-I和胰島素樣生長因子-II（IGF-I和IGF-II）、des(l-3)-IGF-I（腦IGF-I）和骨誘導因子。胰島素和胰島素相關蛋白，包括胰島素、胰島素A鏈、胰島素B鏈、胰島素原和胰島素樣生長因子結合蛋白。凝血蛋白和凝血相關蛋白，尤其如因子VIII、組織因子、von Willebrands因子、蛋白C、α-1-抗胰蛋白酶、纖溶酶原激活劑（如尿激酶）和組織纖溶酶原激活劑（「t-PA」）、bombazine、凝血酶和血小板生成素；(vii) 其他血液和血清蛋白，包括但不限於白蛋白、IgE和血型抗原。菌落刺激因子及其受體，尤其包括以下：M-CSF、GM-CSF和G-CSF及其受體，如CSF-1受體（c-fms）。受體和受體相關蛋白，包括例如flk2/flt3受體、肥胖（OB）受體、LDL受體、生長激素受體、血小板生成素受體（「TPO-R」、「c-mpl」）、升糖素受體、白細胞介素受體、干擾素受體、T細胞受體、幹細胞因子受體（如c-Kit）和其他受體。受體配位基，包括例如OX40L，它係OX40受體的配位基。神經營養因子，包括骨源性神經營養因子（BDNF）和神經營養蛋白-3、神經營養蛋白-4、神經營養蛋白-5或神經營養蛋白-6（NT-3、NT-4、NT-5或NT-6）。鬆弛素A鏈、鬆弛素B鏈和鬆弛素原；干擾素和干擾素受體，包括例如干擾素-α、干擾素-β和干擾素-γ及其受體。白細胞介素和白細胞介素受體，尤其包括IL-I至IL-33和IL-I至IL-33受體，如IL-8受體等等。病毒抗原，包括AIDS包膜病毒抗原。脂蛋白、降鈣素、升糖素、心房利尿鈉因子、肺表面活性劑、腫瘤壞死因子-α和腫瘤壞死因子-β、腦啡肽酶、RANTES（正常T細胞表現和分泌的激活調節蛋白）、小鼠促性腺激素相關肽、DNA酶、抑制素和激活素。整合素、蛋白A或D、類風濕因子、免疫毒素、骨成形性蛋白質（BMP）、超氧化物歧化酶、表面膜蛋白、衰退加速因子（DAF）、AIDS包膜、轉運蛋白、歸巢受體、位址素、調節蛋白、免疫黏附素、抗體。肌肉生長抑制素（Myostatins）、TALL蛋白（包括TALL-I）、類澱粉蛋白（包括但不限於類澱粉蛋白-β蛋白）、胸腺基質淋巴細胞生成素（「TSLP」）、RANK配位基（「OPGL」）、c-kit、TNF受體（包括TNF受體1型）、TRAIL-R2、血管生成素和任何前述項的生物活性片段或類似物或變體。
示例性的多肽和抗體包括Activase® （阿替普酶）；阿利庫單抗、Aranesp® （達依泊汀（Darbepoetin）-α）、Epogen® （依泊汀（Epoetin）α或紅血球生成素）；Avonex® （干擾素β-Ia）；Bexxar® （托西莫單抗）；Betaseron® （干擾素-β）；bococizumab（抗PCSK9單株抗體，命名為L1L3，參見U.S.P.N. 8,080,243）；Campath® （阿侖單抗）；Dynepo® （依泊汀δ）；Velcade® （硼替佐米）；MLN0002（抗α4β7 Ab）；MLN1202（抗CCR2趨化因子受體Ab）；Enbrel® （依那西普）；Eprex® （依泊汀α）；Erbitux® （西妥昔單抗）；依伏庫單抗；Genotropin® （生長激素）；Herceptin® （曲妥珠單抗）；Humatrope® （注射用生長激素[rDNA起源]）；Humira® （阿達木單抗）；Infergen® （干擾素Alfacon-1）；Natrecor® （奈西立肽（nesiritide））；Kineret® （阿那白滯素（Anakinra））、Leukine® （沙格司亭（Sargamostim））；LymphoCide® （依帕珠單抗）；BenlystaTM（貝利單抗）；Metalyse® （替奈普酶）；Mircera® （甲氧基聚乙二醇-依泊汀β）；MyIotarg® （吉妥珠單抗奧佐米星）；Raptiva® （依法利珠單抗）；Cimzia® （賽妥珠單抗）；SolirisTM（依庫麗單抗）；培克珠單抗（抗C5補體）；MEDI-524（Numax® ）；Lucentis® （蘭尼單抗）；依決洛單抗（Panorex® ）；Trabio® （樂迪利木單抗）；TheraCim hR3（尼妥珠單抗）；奧密塔克（帕妥珠單抗，2C4）；Osidem® （IDM-I）；OvaRex® （B43.13）；Nuvion® （威司利珠單抗）；莫星-坎妥珠單抗（huC242-DMl）；NeoRecormon® （依泊汀β）；Neumega® （奧普瑞白介素（Oprelvekin））；Neulasta® （聚乙二醇化非格司亭、聚乙二醇化G-CSF、聚乙二醇化hu-Met-G-CSF）；Neupogen® （非格司亭）；Orthoclone OKT3® （鼠源單株抗體-CD3）、Procrit® （依泊汀α）；Remicade® （英利昔單抗）, Reopro® （阿昔單抗）, Actemra® （抗IL6受體Ab）, Avastin® （貝伐單抗）, HuMax-CD4（紮諾利木單抗）, Rituxan® （利妥昔單抗）；Tarceva® （埃羅替尼）；Roferon-A® -（干擾素α-2a）；Simulect® （巴厘昔單抗）；StelaraTM（優特克單抗）；Prexige® （羅美昔布）；Synagis® （帕利珠單抗）；146B7-CHO（抗IL15抗體，參見U.S.P.N.7.153,507）、Tysabri® （那他珠單抗）；Valortim® （MDX-1303、抗炭疽桿菌保護性抗原Ab）；ABthraxTM；Vectibix® （帕尼單抗）；Xolair® （奧馬珠單抗）、ETI211（抗MRSA Ab）、IL-I Trap（人IgGl的Fc部分和兩個IL-I受體組分（I型受體和受體輔助蛋白）的胞外結構域）、VEGF Trap（與IgGl Fc融合的VEGFRl的Ig結構域）、Zenapax® （達克珠單抗）；Zenapax® （達克珠單抗）、Zevalin® （替伊莫單抗）、依澤替米貝（依澤替麥）、阿塞西普（TACI-Ig）、抗α4β7 Ab（維多珠單抗）；加利昔單抗（抗CD80單株抗體）、抗CD23 Ab（魯昔單抗）；BR2-Fc（huBR3/huFc融合蛋白，可溶性BAFF拮抗劑）；SimponiTM（戈利木單抗）；瑪帕妥木單抗（人抗TRAIL受體-1 Ab）；奧瑞利珠單抗（抗CD20人Ab）；HuMax-EGFR（紮魯妥木單抗）；M200（沃洛賽昔單抗、抗α5β1整合素Ab）；MDX-010（伊匹單抗、抗CTLA-4 Ab和VEGFR-I（IMC-18F1）；抗BR3 Ab；抗艱難梭菌毒素A和毒素B C Ab MDX-066（CDA-I）和MDX-1388）；抗CD22 dsFv-PE38軛合物（conjugate）（CAT-3888和CAT-8015）；抗CD25 Ab（HuMax-TAC）；抗TSLP抗體；抗TSLP受體抗體（參見U.S.P.N.8,101,182）；命名為A5的抗TSLP抗體（參見U.S.P.N.7,982,016）；（參見抗CD3 Ab（NI-0401）；阿迪妥木單抗（MT201、抗EpCAM-CD326 Ab）；MDX-060、SGN-30、SGN-35（抗CD30 Ab）；MDX-1333（抗IFNAR）；HuMax CD38（抗CD38 Ab）；抗CD40L Ab；抗Cripto Ab；抗CTGF特發性肺纖維化I期纖維蛋白原（FG-3019）；抗CTLA4 Ab；抗eotaxinl Ab（CAT-213）；抗FGF8 Ab；抗神經節苷脂GD2 Ab；抗骨硬化蛋白抗體（參見U.S.P.N.8,715,663或U.S.P.N.7,592,429），命名為Ab-5的抗骨硬化蛋白（參見U.S.P.N.8,715,663或U.S.P.N.7,592,429）；抗神經節苷脂GM2 Ab；抗GDF-8人Ab（MYO-029）；抗GM-CSF受體Ab（CAM-3001）；抗HepC Ab（HuMax HepC）；MEDI-545、MDX-1103（抗IFNα Ab）；抗IGFIR Ab；抗IGF-IR Ab（HuMax-Inflam）；抗IL12/IL23p40 Ab（布瑞吉努單抗）；抗IL-23p19 Ab（LY2525623）；抗IL13 Ab（CAT-354）；抗IL-17 Ab（AIN457）；抗IL2Ra Ab（HuMax-TAC）；抗IL5受體Ab；抗整合素受體Ab（MDX-Ol8、CNTO 95）；抗IPIO潰瘍性結腸炎Ab（MDX-1100）；抗LLY抗體；BMS-66513；抗甘露糖受體/hCGβ Ab（MDX-1307）；抗間皮素dsFv-PE38軛合物（CAT-5001）；抗PDlAb（MDX-1 106（ONO-4538））；抗PDGFRα抗體（IMC-3G3）；抗TGFβ Ab（GC-1008）；抗TRAIL受體-2人Ab（HGS-ETR2）；抗TWEAK Ab；抗VEGFR/Flt-1 Ab；抗ZP3 Ab（HuMax-ZP3）；1號NVS抗體；2號NVS抗體；以及包含序列SEQ ID NO: 8和SEQ ID NO: 6的類澱粉蛋白-β單株抗體（參見U.S.P.N.7,906,625）。
適用於所揭露方法的抗體的實例包括表1所示的抗體。合適的抗體的其他實例包括英利昔單抗（infliximab）、貝伐單抗（bevacizumab）、蘭尼單抗（ranibizumab）、西妥昔單抗（cetuximab）、蘭尼單抗、帕利珠單抗（palivizumab）、阿巴伏單抗（abagovomab）、阿昔單抗（abciximab）、阿克托克單抗（actoxumab）、阿達木單抗（adalimumab）、阿非莫單抗（afelimomab）、阿托珠單抗（afutuzumab）、阿珠單抗（alacizumab）、培化阿珠單抗（alacizumab pegol）、ald518、阿侖單抗（alemtuzumab）、阿利庫單抗（alirocumab）、阿侖單抗（alemtuzumab）、阿妥莫單抗（altumomab）、阿麥妥昔單抗（amatuximab）、馬安那莫單抗（anatumomab mafenatox）、安蘆珠單抗（anrukinzumab）、阿泊珠單抗（apolizumab）、阿西莫單抗（arcitumomab）、阿塞珠單抗（aselizumab）、阿替奴單抗（altinumab）、阿替珠單抗（atlizumab）、阿托立木單抗（atorolimiumab）、托珠單抗（tocilizumab）、巴匹珠單抗（bapineuzumab）、巴厘昔單抗（basiliximab）、巴韋妥昔單抗（bavituximab）、貝妥莫單抗（bectumomab）、貝利木單抗（belimumab）、苯拉利珠單抗（benralizumab）、柏替木單抗（bertilimumab）、貝索單抗（besilesomab）、貝伐珠單抗（bevacizumab）、貝洛托單抗（bezlotoxumab）、比西單抗（biciromab）、比伐珠單抗（bivatuzumab）、莫-比伐珠單抗（bivatuzumab mertansine）、博納吐單抗（blinatumomab）、布索珠單抗（blosozumab）、維汀-本妥昔單抗（brentuximab vedotin）、巴列津單抗（briakinumab）、布洛魯單抗（brodalumab）、康納單抗（canakinumab）、莫坎妥珠單抗（cantuzumab mertansine）、莫坎妥珠單抗（cantuzumab mertansine）、卡普賽珠單抗（caplacizumab）、卡羅單抗噴地肽（capromab pendetide）、卡魯單抗（carlumab）、卡妥索單抗（catumaxomab）、cc49、西利珠單抗（cedelizumab）、賽妥珠單抗（certolizumab pegol）、西妥昔單抗（cetuximab）、泊西他珠單抗（citatuzumab bogatox）、西妥木單抗（cixutumumab）、克拉紮珠單抗（clazakizumab）、克立昔單抗（clenoliximab）、克伐珠單抗（clivatuzumab tetraxetan）、可那木單抗（conatumumab）、克雷內治單抗（crenezumab）、cr6261、達西珠單抗（dacetuzumab）、達克珠單抗（daclizumab）、達羅土珠單抗（dalotuzumab）、達雷木單抗（daratumumab）、地莫米佐單抗（demcizumab）、地諾單抗（denosumab）、地莫單抗（detumomab）、阿托度單抗（dorlimomab aritox）、德羅圖單抗（drozitumab）、杜力戈圖單抗（duligotumab）、杜匹魯單抗（dupilumab）、依美昔單抗（ecromeximab）、依庫麗單抗（eculizumab）、埃巴單抗（edobacomab）、依決洛單抗（edrecolomab）、依法利珠單抗（efalizumab）、依芬古單抗（efungumab）、埃羅妥珠單抗（elotuzumab）、艾西莫單抗（elsilimomab）、埃文單抗（enavatuzumab）、培化恩莫單抗（enlimomab pegol）、恩諾珠單抗（enokizumab）、恩諾珠單抗（enokizumab）、依諾替庫單抗（enoticumab）、依諾替庫單抗（enoticumab）、埃斯托西單抗（ensituximab）、西依匹莫單抗（epitumomab cituxetan）、依帕珠單抗（epratuzumab）、厄利珠單抗（erlizumab）、厄馬索單抗（ertumaxomab）、艾達珠單抗（etaracizumab）、依卓利珠單抗（etrolizumab）、艾韋單抗（exbivirumab）、艾韋單抗（exbivirumab）、法索單抗（fanolesomab）、法拉莫單抗（faralimomab）、法拉圖珠單抗（farletuzumab）、法希奴單抗（fasinumab）、fbta05、非維珠單抗（felvizumab）、非紮奴單抗（fezakinumab）、費希臘妥單抗（ficlatuzumab）、芬妥木單抗（figitumumab）、弗蘭托單抗（flanvotumab）、芳妥珠單抗（fontolizumab）、弗羅魯單抗（foralumab）、福拉韋單抗（foravirumab）、夫蘇木單抗（fresolimumab）、弗蘭單抗（fulranumab）、弗圖希單抗（futuximab）、加利昔單抗（galiximab）、蓋尼塔單抗（ganitumab）、蓋坦德單抗（gantenerumab）、加維莫單抗（gavilimomab）、吉妥珠單抗奧佐米星（gemtuzumab ozogamicin）、吉伏珠單抗（gevokizumab）、吉仁土昔單抗（girentuximab）、維汀-格侖妥木單抗（glembatumumab vedotin）、戈利木單抗（golimumab）、戈利昔單抗（gomiliximab）、gs6624、替伊立珠單抗（ibalizumab）、替伊莫單抗（ibritumomab tiuxetan）、依庫單抗（icrucumab）、伊戈伏單抗（igovomab）、英西單抗（imciromab）、英戈土珠單抗（imgatuzumab）、英克拉庫單抗（inclacumab）、依坦希單抗（indatuximab ravtansine）、英夫利西單抗（infliximab）、英妥木單抗（intetumumab）、伊諾莫單抗（inolimomab）、奧星-艾諾妥珠單抗（inotuzumab ozogamicin）、伊匹單抗（ipilimumab）、艾雷妥木單抗（iratumumab）、依拓珠單抗（itolizumab）、希凱珠單抗（ixekizumab）、凱利昔單抗（keliximab）、拉貝珠單抗（labetuzumab）、來金珠單抗（lebrikizumab）、來馬索單抗（lemalesomab）、樂地單抗（lerdelimumab）、來沙木單抗（lexatumumab）、利韋單抗（libivirumab）、利格珠單抗（ligelizumab）、林妥珠單抗（lintuzumab）、立魯單抗（lirilumab）、莫-洛伏珠單抗（lorvotuzumab mertansine）、魯卡木單抗（lucatumumab）、魯昔單抗（lumiliximab）、馬帕木單抗（mapatumumab）、馬司莫單抗（maslimomab）、美力姆單抗（mavrilimumab）、馬妥珠單抗（matuzumab）、美泊利單抗（mepolizumab）、美替木單抗（metelimumab）、米拉珠單抗（milatuzumab）、明瑞莫單抗（minretumomab）、米妥莫單抗（mitumomab）、莫格穆裡單抗（mogamulizumab）、莫羅木單抗（morolimumab）、莫他珠單抗（motavizumab）、莫希土姆單抗（moxetumomab pasudotox）、莫羅單抗-cd3（muromonab-cd3）、他那可單抗（nacolomab tafenatox）、奈米魯單抗（namilumab）、他那莫單抗（naptumomab estafenatox）、納瑞特單抗（narnatumab）、那他珠單抗（natalizumab）、奈巴庫單抗（nebacumab）、奈昔木單抗（necitumumab）、奈瑞莫單抗（nerelimomab）、耐西維單抗（nesvacumab）、尼妥珠單抗（nimotuzumab）、納武單抗（nivolumab）、巰諾莫單抗（nofetumomab merpentan）、奧卡土珠單抗（ocaratuzumab）、奧瑞利珠單抗（ocrelizumab）、奧度莫單抗（odulimomab）、奧法木單抗（ofatumumab）、奧拉圖單抗（olaratumab）、奧魯凱珠單抗（olokizumab）、奧馬珠單抗（omalizumab）、歐那土珠單抗（onartuzumab）、莫奧珠單抗（oportuzumab monatox）、奧戈伏單抗（oregovomab）、奧泰單抗（orticumab）、奧昔珠單抗（otelixizumab）、歐西魯單抗（oxelumab）、歐贊尼珠單抗（ozanezumab）、歐拉麗珠單抗（ozoralizumab）、帕吉昔單抗（pagibaximab）、帕利珠單抗（palivizumab）、帕尼單抗（panitumumab）、帕諾庫單抗（panobacumab）、帕薩土珠單抗（parsatuzumab）、帕考珠單抗（pascolizumab）、派特立珠單抗（pateclizumab）、帕圖單抗（patritumab）、帕尼單抗（pemtumomab）、培拉凱珠單抗（perakizumab）、帕妥珠單抗（pertuzumab）、培克珠單抗（pexelizumab）、皮地利珠單抗（pidilizumab）、平妥莫單抗（pintumomab）、普拉庫魯單抗（placulumab）、拍珠單抗（ponezumab）、普立昔單抗（priliximab）、普托木單抗（pritumumab）、PRO 140、坤立珠單抗（Quilizumab）、雷庫圖單抗（racotumomab）、雷德圖單抗（radretumab）、雷韋單抗（rafivirumab）、雷莫蘆單抗（ramucirumab）、雷珠單抗（ranibizumab）、雷昔庫單抗（raxibacumab）、瑞加韋單抗（regavirumab）、瑞利珠單抗（reslizumab）、利妥木單抗（rilotumumab）、利妥昔單抗（rituximab）、羅妥木單抗（robatumumab）、羅勒杜單抗（roledumab）、羅姆蘇珠單抗（romosozumab）、隆他利珠單抗（rontalizumab）、羅利珠單抗（rovelizumab）、魯利珠單抗（ruplizumab）、沙瑪立珠單抗（samalizumab）、沙魯單抗（sarilumab）、沙妥莫單抗噴地肽（satumomab pendetide）、蘇金單抗（secukinumab）、司韋單抗（sevirumab）、西羅珠單抗（sibrotuzumab）、西法木單抗（sifalimumab）、司妥昔單抗（siltuximab）、西姆土珠單抗（simtuzumab）、西利珠單抗（siplizumab）、希瑞庫單抗（sirukumab）、蘇蘭珠單抗（solanezumab）、蘇力圖單抗（solitomab）、松普希珠單抗（sonepcizumab）、松妥珠單抗（sontuzumab）、司他蘆單抗（stamulumab）、硫索單抗（sulesomab）、索維單抗（suvizumab）、他貝魯單抗（tabalumab）、他珠單抗（tacatuzumab tetraxetan）、他度珠單抗（tadocizumab）、他利珠單抗（talizumab）、他尼珠單抗（tanezumab）、帕他莫單抗（taplitumomab paptox）、替非珠單抗（tefibazumab）、阿替莫單抗（telimomab aritox）、替妥莫單抗（tenatumomab）、替非珠單抗（tefibazumab）、阿替莫單抗（telimomab aritox）、替妥莫單抗（tenatumomab）、替奈昔單抗（teneliximab）、替利珠單抗（teplizumab）、替普單抗（teprotumumab）、TGN1412、曲美木單抗（tremelimumab）、替西木單抗（ticilimumab）、替拉珠單抗（tildrakizumab）、替加珠單抗（tigatuzumab）、TNX-650、托珠單抗（tocilizumab）、托利珠單抗（toralizumab）、托西莫單抗（tositumomab）、曲洛青木單抗（tralokinumab）、曲妥珠單抗（trastuzumab）、TRBS07、曲加立珠單抗（tregalizumab）、曲美木單抗（tremelimumab）、西莫白介素單抗（tucotuzumab celmoleukin）、妥韋單抗（tuvirumab）、烏波利土西單抗（ublituximab）、烏瑞魯單抗（urelumab）、烏珠單抗（urtoxazumab）、優特克單抗（ustekinumab）、伐利昔單抗（vapaliximab）、維特立珠單抗（vatelizumab）、維多珠單抗（vedolizumab）、維妥珠單抗（veltuzumab）、維帕莫單抗（vepalimomab）、維西庫單抗（vesencumab）、維西珠單抗（visilizumab）、伏洛昔單抗（volociximab）、伏妥土珠單抗（vorsetuzumab mafodotin）、伏妥莫單抗（votumumab）、紮蘆木單抗（zalutumumab）、紮木單抗（zanolimumab）、紮土希單抗（zatuximab）、齊拉木單抗（ziralimumab）和阿佐莫單抗（zolimomab aritox）。
用於在揭露的製劑和方法中使用的最較佳的抗體係阿達木單抗、貝伐單抗、博納吐單抗、西妥昔單抗、考那妥木單抗、地諾單抗、依庫麗單抗、厄瑞奴單抗、依伏庫單抗、英利昔單抗、那他珠單抗、帕尼單抗、利妥木單抗、利妥昔單抗、羅姆蘇珠單抗和曲妥珠單抗以及選自表1的抗體。 [表1] 治療性抗體的實例
靶標（非正式名稱） 濃度 （ mg/ml ） 黏度 （ cP ） HC 類型（包括同種異型） LC 類型 pI LC SEQ ID NO HC SEQ ID NO
抗類澱粉蛋白 142.2 5.0 IgG1（f）（R；EM） κ 9.0 1 2
GMCSF（247） 139.7 5.6 IgG2 κ 8.7 3 4
CGRPR 136.6 6.3 IgG2 λ 8.6 5 6
RANKL 152.7 6.6 IgG2 κ 8.6 7 8
骨硬化蛋白（27H6） 145.0 6.7 IgG2 κ 6.6 9 10
IL-1R1 153.9 6.7 IgG2 κ 7.4 11 12
肌肉生長抑制素 141.0 6.8 IgG1（z）（K；EM） κ 8.7 13 14
B7RP1 137.5 7.7 IgG2 κ 7.7 15 16
類澱粉蛋白 140.6 8.2 IgG1（za）（K；DL） κ 8.7 17 18
GMCSF（3.112） 156.0 8.2 IgG2 κ 8.8 19 20
CGRP（32H7） 159.5 8.3 IgG2 κ 8.7 21 22
CGRP（3B6.2） 161.1 8.4 IgG2 λ 8.6 23 24
PCSK9（8A3.1） 150.0 9.1 IgG2 κ 6.7 25 26
PCSK9（492） 150.0 9.2 IgG2 κ 6.9 27 28
CGRP 155.2 9.6 IgG2 λ 8.8 29 30
鐵調素 147.1 9.9 IgG2 λ 7.3 31 32
TNFR p55） 157.0 10.0 IgG2 κ 8.2 33 34
OX40L 144.5 10.0 IgG2 κ 8.7 35 36
HGF 155.8 10.6 IgG2 κ 8.1 37 38
GMCSF 162.5 11.0 IgG2 κ 8.1 39 40
升糖素R 146.0 12.1 IgG2 κ 8.4 41 42
GMCSF（4.381） 144.5 12.1 IgG2 κ 8.4 43 44
骨硬化蛋白（13F3） 155.0 12.1 IgG2 κ 7.8 45 46
CD-22 143.7 12.2 IgG1（f）（R；EM） κ 8.8 47 48
INFgR 154.2 12.2 IgG1（za）（K；DL） κ 8.8 49 50
Ang2 151.5 12.4 IgG2 κ 7.4 51 52
TRAILR2 158.3 12.5 IgG1（f）（R；EM） κ 8.7 53 54
EGFR 141.7 14.0 IgG2 κ 6.8 55 56
IL-4R 145.8 15.2 IgG2 κ 8.6 57 58
IL-15 149.0 16.3 IgG1（f）（R；EM） κ 8.8 59 60
IGF1R 159.2 17.3 IgG1（za）（K；DL） κ 8.6 61 62
IL-17R 150.9 19.1 IgG2 κ 8.6 63 64
Dkk1（6.37.5） 159.4 19.6 IgG2 κ 8.2 65 66
骨硬化蛋白 134.8 20.9 IgG2 κ 7.4 67 68
TSLP 134.2 21.4 IgG2 λ 7.2 69 70
Dkk1（11H10） 145.3 22.5 IgG2 κ 8.2 71 72
PCSK9 145.2 22.8 IgG2 λ 8.1 73 74
GIPR（2G10.006） 150.0 23.0 IgG1（z）（K；EM） κ 8.1 75 76
活化素 133.9 29.4 IgG2 λ 7.0 77 78
骨硬化蛋白（2B8） 150.0 30.0 IgG2 λ 6.7 79 80
骨硬化蛋白 141.4 30.4 IgG2 κ 6.8 81 82
c-fms 146.9 32.1 IgG2 κ 6.6 83 84
α4β7 154.9 32.7 IgG2 κ 6.5 85 86
* 適用於患者投與的示例性濃度；^HC - 抗體重鏈；LC - 抗體輕鏈。
在一些實施方式中，治療性多肽係BiTE® 分子。BiTE® 分子係工程化雙特異性單株抗體，其引導T細胞對癌細胞的細胞毒活性。它們係不同抗體的兩個單鏈可變片段（scFv）或來自四個不同基因的胺基酸序列在約55千道耳頓的單條肽鏈上的融合物。scFv中的一個經由CD3受體與T細胞結合，而另一個經由腫瘤特異性分子與腫瘤細胞結合。博納吐單抗（BLINCYTO® ）係對CD19特異的BiTE® 分子的實例。經修飾的BiTE® 分子（如經修飾以延長其半衰期的那些）也可以用於所揭露的方法中。實例 實例 1 - 概述
該等研究中使用的所有儀器包括與Agilent Cary 60紫外線（UV）分光光度計系統（安捷倫科技公司（Agilent Technologies）；聖克拉拉，加利福尼亞州）連接的SoloVPE。為了進行濃度確定，SoloVPE根據樣本的吸光度從0.005 mm至15 mm自動調整光程長度。對於每個樣本，使用最多10個不同的路徑長度（最少需要5個點）來生成吸光度對路徑長度的線性回歸圖。樣本接受標準基於該樣本分析圖的回歸線，SoloVPE的R2 必須 ≥ 0.999，才能提供有效的結果。根據SoloVPE系統的斜率測量能力和路徑長度範圍，製造商要求的蛋白質樣本濃度確定能力範圍在無需稀釋的情況下為0.01至300 mg/mL（牛血清白蛋白）（US 7,808,641，實例4）。
這項研究的目的是將PBD用作系統適用性標準品，使用SoloVPE軟體的第3版為系統適用性標準、測定和樣本接受標準建立科學基礎。實例 2 - 材料和方法、實驗以及數據分析 0.12% PBD的製備（熟悉該項技術者可以使用0.12%至0.5%並進行優化）
1.     向適當大小的燒杯中添加120 ± 5 mg的PBD。
2.     向燒杯中添加99 mL HPLC級水。
3.     向燒杯中添加1 mL甲醇。
4.     用攪拌棒充分混合。
5.     轉移到HPLC瓶中。
6.     在室溫下黑暗中儲存。 PBD UV/可見光譜
PBD的UV/可見光譜顯示在圖1中。圖中突出顯示了三個波長：280 nm、310 nm和639 nm。PBD在280 nm和310 nm處斜率（吸光度值）的準確度得到了認證，並隨附可藉由美國國家標準技術研究院（National Institute of Standards and Technology，NIST）追溯的分析證明書（CoA）。639 nm處的斜率（吸光度）未得到PBD製造商或NIST認證。經認證的280 nm和310 nm處的PBD讀數為評估儀器的準確度提供了基礎，並在每次測定前進行了評價。
在實例中，當引用「儀器」時，該提及包括與SoloVPE儀器連接的Cary 60分光光度計。該等蛋白質係單株抗體（mAb）。
表2.1顯示了所分析的蛋白質及其濃度。 [表 2.1 ] 分析的樣本
蛋白質 認證的值 *
mAb1 135.8 mg/mL
mAb2 48.7 mg/mL
mAb2 9.7 mg/mL
PBD（C技術公司） 280 nm處0.5825斜率（abs/mm）） 310 處1.2849斜率（abs/mm））
執行實驗
每個測試順序或運行由三種不同濃度下的36個蛋白質確定值組成（每種濃度水平下12個讀數：9.7 mg/mL（mAb2）、48.7 mg/mL（mAb2）和135.8 mg/mL（mAb1）），將（樣本測試的開始和結束）與在280 nm和310 nm處PBD的一式三份讀數歸為一類，用於評估系統適用性並建立測定接受標準。測試策略設計為模擬常規測試和評價與PBD的系統適用性的使用。 評估系統適用性的測試順序： PBD的3個標準讀數（280 nm） PBD的3個標準讀數（310 nm） 12次低蛋白質濃度運行（9.7 mg/mL） 12次中等蛋白質濃度運行（48.7 mg/mL） 12次高蛋白質濃度運行（135.8 mg/mL） PBD的3個標準讀數（280 nm） PBD的3個標準讀數（310 nm） 總體而言，獲得了14個數據集。
評價兩個波長處的PBD讀數的策略用於覆蓋儀器所需的廣泛的蛋白質濃度範圍。較高的蛋白質濃度（如在實例中測試的，135.8 mg/mL）要求5 µm至50 µm的路徑長度的最低範圍。在310 nm處的PBD讀數評價在路徑長度小於50 µm時的儀器性能。對於中等範圍濃度確定（如48.7 mg/mL（mAb2）樣本），儀器使用範圍為20 µm至65 µm的路徑長度。為了覆蓋蛋白質濃度的其餘範圍（即在該等實例中測試的 ≤ 48.7 mg/mL），在280 nm處的讀數評估在路徑長度大於50 µm時的儀器性能。
使用的所有儀器均運行C技術公司的Quick Slope軟體的第3版。使用了兩種儀器模式，並且需要它們以所需系統適用性標準測試樣本： 1) 快速斜率模式（Quick-M）：針對靶標吸光度執行閾值路徑長度搜索，根據所需的數據點數使用自我調整演算法收集截面數據。 2) 固定斜率模式（固定-M）：無初始路徑長度搜索。根據使用者指定的起始路徑長度、路徑長度步長和要收集的數據點數收集數據。
創建了PBD特異性固定斜率模式副程序，該副程序用於獲得310 nm波長處的數據。該副程序迫使儀器使用5 µm至50 µm的路徑長度來評估對於較高蛋白質濃度的儀器性能。三名分析員藉由SoloVPE對樣本組吸光度進行了測量，以觀察可能發生的結果中的任何相關差異。在測量時，用SoloVPE分光光度計分析蛋白質濃度的確定值和PBD讀數。 數據分析
本報告中的所有統計分析均使用SAS® 9.4（TS1M3；北卡羅來納州凱裡市（Cary, NC））進行。在這項研究中進行了四個統計分析： 1) 為了比較10次不同運行中PBD讀數的分佈，生成了280 nm和310 nm的箱形圖。箱形圖提供了數據中心及其跨距的快速直觀表示，從而使運行之間的比較更加容易。 2) 為了評估最壞情況的影響，對於PBD的280 nm和380 nm生成了重測誤差以及 ± 4%和 ± 5%規範的正規密度曲線。該等曲線描繪了給定的特定重測誤差的量度分佈。將最壞情況下的重測誤差定義為重測的上限95%置信度。 3) 為了評價PBD輸入對SoloVPE讀數的影響，生成了雙變數標準等值線圖，其中考慮了PBD與SoloVPE測量之間的相關性。將該等等值線與規範進行比較，以評估誤分類率。 4) 使用隨機放回取樣的自展取樣（bootstrap sampling）用於評價變異係數的分佈及其接近上限的情況。蛋白質樣本的變異係數的確定值（RSD%）低於5%靶標限值。 更多資訊：讀數
圖2和圖3中顯示的表格分別顯示了PBD讀數和蛋白質確定值的原始數據。每個蛋白質濃度水平的168個讀數中的一百二十個以及每個波長（280 nm和310 nm）處的84個PBD讀數中的60個用於顯示系統適用性、測定接受和樣本接受標準。該等數據來自三個儀器並且用於顯示系統適用性標準，因為讀數在認證的吸光度值的 ± 5%內，並且符合一式三份讀數的 ≤ 5% RSD。該數據集的無效讀數係在280 nm或310 nm處的PBD的60個讀數中的0個讀數（10次運行中有0次運行無效）。
已知研究中使用的第四個儀器具有「次最優」功能，並且用於顯示使用PBD的已開發系統適用性的實用性。該儀器的使用為可能發生的誤差類型提供了有價值的見解。該儀器的所有數據在確定有效的系統適用性標準時都不作考慮，而是用於顯示基於PBD的標準可如何揭示功能不佳的儀器。
該儀器在三個測試日中有兩天表現不佳，並且第三個數據集雖然通過了當天的標準，但由於儀器的不穩定性而不能全信。圖2和圖3中表格的陰影數據係未藉由有效的系統適用性標準的測試運行。該等確定值和讀數被認為無效，因此不在系統適用性標準確定中考慮。
此外，使用1134儀器進行的運行12（圖2），即在310 nm處的PBD讀數的一式三份組的單個讀數導致系統適用性失效，並且將該運行的數據從系統適用性確定中排除。該失效不是PBD使用的錯誤，而是顯示PBD系統適用性實現該儀器的異常單個讀數，因為該一式三份組中的後續讀數均在預期值內。如果這被包括在無效讀數中，那麼無效讀數將是11次運行中的1次，因為單個異常讀數，或者在310 nm處的PBD的72個讀數中的1個讀數，和在280 nm處的72個讀數中的0個讀數。實例 3 - 將 PBD 評價為系統適用性標準品
本節從四個儀器上讀數的準確度和精度方面討論了PBD作為系統適用性標準品的用途。藉由繪製與CoA上提及的認證值相關的單獨讀數來評估準確度。如圖4中所示繪製讀數與認證值的差異。箱形圖顯示與PBD CoA靶標值相距5%差異的所有邊界線都是可接受的。類似的4%差異的圖顯示數據點位於4%邊界線上，因此表明與PBD讀數的靶標的差異%的標準應為5%。
關於該等數據圖可以得出兩個觀察結果。首先，在研究的最初幾天（R01-R04），在310 nm波長處觀察到吸光度讀數增加的趨勢（在4天內增加 + 3%）。該趨勢接近4%邊界線的上限，但完全在5%邊界線內。該等讀數（即每天6個PBD讀數）係由同一分析員在同一個儀器上使用同一樣本批次獲得的。這表明該趨勢不是隨機的，並且顯示了工具的日間變化。
接下來，在第7天（R07）和第9天（R09）在280 nm處的讀數不一致（圖4），其中單個數據點超出了框內範圍。使用310 nm波長獲得的數據（圖4）顯示，雖然讀數更集中在靶標上，但與平均值的偏差更加明顯（第6、7和9天（R06、R07和R09））。
儘管該儀器對該等讀數的不可預測性係相對於靶標或相對於認證值的差異的首要實例，但該等偏差仍保持在5%範圍內，如水平虛線所示。
為了使用PBD可靠地設定儀器準確度的標準，計算了重測信度。將重測信度定義為藉由在一段時間內對同一組儀器和分析員多次執行同一測試而獲得的可重複性量度。表3.1列出了對於兩種波長和95%置信度上限或「最壞情況」（由CoA值計算）的重測信度結果（從測量的PBD讀數獲得）。 [表 3.1 ] 重測信度結果
樣本 重測信度 95% 置信度上限「最壞情況」
280 nm處的PBD 0.0062 0.0076
310 nm處的PBD 0.0165 0.0202
藉由使用原始數據集（表3.1）建立的重測信度和最壞情況值，可以計算出儀器準確度的標準。提出的儀器的4%或5%的靶標可變性被認為係相對於真實值的3個標準差。對於要通過的標準，應計算認證值的一個標準差（認證值的4%或5%除以三）。該等計算的商代表最壞情況。如果提出的標準（靶標的4%或5%）超過了最壞情況，則失效的概率係可能的。
圖5顯示使用單個標準差的讀數的正態分佈，其基於靶標曲線的4%（中間線，與虛曲線的重疊部分）、靶標曲線的5%（最低峰曲線）和最壞情況（虛線）。x軸顯示讀數與靶標的偏差，其中圖的中心線為靶標，而y軸展示讀數中靶的概率。將4%和5%曲線用於評價提出的標準，並根據從CoA值得出的最壞情況曲線來評估任一條曲線的可接受性。為了評價靶標標準的4%或5%是否最合適，PBD讀數的值必須低於最壞情況上限。
在280 nm處4%靶標值的密度圖（圖5）顯示，最壞情況在CoA值的單個標準差內（中間線曲線在紅色虛曲線下方）。因此，在靶標的4%時的系統適用性將在280 nm處通過。然而，在310 nm處（圖6），4%靶標曲線（具有最高峰的曲線）顯著高於最壞情況，因此，如果將系統適用性標準設定為相對於靶標的4%處，則系統適用性標準將失效。
可替代地，在將標準設定為靶標的5%處的情況下，商為0.029125（0.5825的5%），然後藉由將標準差除以3等於0.009708來找到一個標準差。
該值係PBD讀數的最壞情況。在280 nm處的重測信度為0.0062，其小於最壞情況（0.0076），因此5%靶標係可接受的。
對310 nm處的PBD執行類似的計算，CoA靶標為1.2849，因此靶標的5%為0.064245。靶標的5%的一個標準差為0.021415。標準差與310 nm處的重測信度的最壞情況值（0.0202）的比較證明5%靶標係可接受的。
雖然重測分析僅考慮了儀器準確度的變化，但也應考慮與認證的PBD吸光度相關的可變性。如CoA上所述，與每個波長的PBD認證值讀數相關的誤差為 ± 5%。對該誤差的評估可以藉由測量值與真實值之間的關係來進行，可以使用基於以下方程式的雙變數正態分佈來描述： 測量值 =（PBD靶標 + PBD誤差）+ Solo VPE測量誤差（方程式 1)
圖7和圖8顯示了數據集的標準雙變數等值線，其中考慮了與儀器相關的變化或誤差以及PBD讀數的認證值的可靠性。捨棄所有超出CoA範圍（豎直線）的PBD讀數。同樣，捨棄超出水平線的儀器讀數。總之，該等邊界為SoloVPE以及PBD樣本和測試接受設定了可接受的窗口，如基於測量值的整體可變性。針對在接受窗口（即中心框）內的包含評價如下圖所示的陰影等值線。如圖7和圖8所示，在280 nm和310 nm處的PBD讀數與 ± 4%靶標規範的邊界重疊。兩種波長處的PBD讀數均允許 ± 5%靶標規範，因為所有等值線均位於中心框內。因此，如基於雙變數統計分析，考慮到對於SoloVPE儀器的變化和PBD結果的可變性，支持 ± 5%差異標準。實例 4 - 儀器性能： PBD 讀數與蛋白質確定值的相關性
本節討論了PBD讀數用於預測有關蛋白質濃度確定值的儀器性能的實用性。總體而言，系統適用性標準能夠識別出不良的儀器性能。如表3.1中的RSD%所示，對於3種儀器（1134、1174和1711），在280 nm波長處的PBD讀數沒有異常變化，如水平低於2.2%的RSD%所示。與認證值相比，該波長處的PBD讀數也位於5%標準內（圖7）。此外，除性能不佳的儀器外，在低濃度和中等濃度水平下的所有和隨後的蛋白質確定值均在相對於認證值的 ± 5%範圍內（圖9）。對於高濃度蛋白質樣本（例如，135.8 mg/mL；mAb1），在310 nm波長處的PBD讀數最適合用作如基於評估的路徑長度的儀器性能的預測指標。直接比較圖呈現在圖10中。
圖10中用圓圈突出顯示的數據點使用性能不佳的儀器獲得的異常讀數變得突出。將圖2和圖3的表格中對於310 nm處PBD讀數的單獨讀數和mAb1確定值以圖形方式進行了比較以鑒定模式。總體而言，與所有四個儀器（1711、1134、1174、PP）的蛋白質確定值相比，該圖顯示了相似的PBD讀數模式。這種相似性表明PBD係儀器性能的良好預測指標。PBD讀數和蛋白質確定值大多數在靶標值的5%（藍線）內，但有如下所述之明顯例外。
1號圓圈的焦點係來自310 nm處的測試運行的2個PBD讀數。正係該等數據點導致RSD%未藉由 ≤ 5% RSD標準（觀察到10.5% RSD）。值得注意的是，這兩個讀數出現在末端類別中（圖3），這表明該儀器在整個測試順序中都不穩定。第二天，該PP儀器提供了超出mAb1的CoA值（藍色和綠色菱形）的 ± 5%範圍的低蛋白質濃度確定值（2號圓圈）。該等異常的低結果將在本節後面討論。
圓圈3和4中的數據清楚地顯示了PBD讀數用於蛋白質濃度確定值的預測實用性。由於相對於310 nm處靶標的偏差很大，因此有必要進一步研究異常數據的原因。但總而言之，基於PBD的系統適用性標準能夠識別出該不良儀器性能。
這項調查的重點係PP儀器獲取的讀數。根據圖2的表中顯示的數據，與310 nm處較低的PBD讀數相比，280 nm處的PBD讀數明顯高於認證值。該等觀察結果可以藉由Cary 60分光光度計的單色儀移至更長的波長來解釋。PBD的光譜顯示，在280 nm處，吸收峰仍在上升，但是在310 nm處有最大值。此外，單色儀波長誤差也將解釋所感知到的較低的蛋白質濃度讀數，因為蛋白質在280 nm處具有最大值，而在比280 nm長的波長處的蛋白質讀數將偏離最大值，因此會降低吸光度。圖11以圖形方式呈現了光譜，並顯示了波長位移對280 nm、310 nm處PBD讀數的吸光度和mAb1蛋白質確定值的影響。如果Cary 60使波長位移，那麼SoloVPE使用的消光係數對於位移的波長將是不正確的，從而錯誤地計算了濃度。
由於在測量時未研究係SoloVPE還是Cary 60用於該運行，因此無法指定異常讀數的確切根本原因。然而，可以將本次測試運行中觀察到的PBD讀數和蛋白質確定值的偏移差異百分比與研究中其他儀器的平均通過值進行比較。然後可以將該等差異應用於所有測量。例如，此運行的數據集中280 nm處異常PBD讀數的平均值比280 nm處的通過結果平均值（0.5738，運行1-6、10-11和13-14的平均值，如圖2的表中列出的）高0.7892或137.7%。來自280 nm處的固定路徑長度光譜數據的吸光度為0.3029 AU。針對137.7%差異調整的所觀察到的吸光度讀數得出的吸光度為0.4150 AU，當在光譜曲線上繪製時，其對應於290.9 nm或比標稱波長高10.8 nm的波長（圖11）。在其他波長處和蛋白質樣本上進行了相同的計算。
該等讀數差異表明，可能已經使用偏離標稱波長約8.8 nm至10.8 nm的不正確波長獲得了吸光度值。PBD和蛋白質樣本的數據的一致性表明，Cary 60的單色儀可能是此運行中異常數據的原因的貢獻者。安捷倫公司（Agilent）建議每月關閉一次儀器，因為Cary 60分光光度計會在啟動時校準波長。應該注意的是，第二天該儀器的性能更好（圖5）。總體而言，系統適用性標準能夠識別出該不良儀器性能。實例 5 - 樣本接受標準的確定
本節檢查了使用重複讀數代替蛋白質濃度的單個確定值。將使用固定路徑長度儀器的重複讀數的接受標準設定為一式兩份和一式三份讀數的 ≤ 5% RSD。
如前所述，數據顯示異常的單個讀數發生的不可預測性可影響整個數據集的有效性。三個PBD讀數未藉由5%的RSD標準（圖2中的表）。在另一次測試運行中，三個讀數中的兩個高於認證值，並且導致RSD% ＞ 5%（10.5% RSD），從而未藉由標準。類似地，在又另一次測試運行中，記錄了單個讀數高於認證值，這導致RSD%標準失效（9.0% RSD）。藉由要求使用在樣本運行的開始和結束時的兩個波長處的PBD，該系統適用性能夠識別出儀器漂移。如果在樣本數據集中觀察到該等異常讀數，則蛋白質確定值將無效。如果單個異常讀數由此導致失效，則重複樣本測試將為研究人員提供即時數據（如意味著一式三份組中的其他讀數），以將根本原因指定為與樣本相關或只是儀器的隨機事件。實例 5 - 總結
總之，根據本研究中的數據使用數據的統計分析，建立了相對於PBD分析證明書值 ± 5%的儀器準確度標準。其次，本研究中使用並在本報告中總結的有效系統適用性標準能夠識別出功能不佳的儀器。當關於1711、1134和1174儀器使用功能正常的儀器時，無效讀數基本上為零。基於PBD的系統適用性藉由提供儀器的異常單個讀數可影響數據有效性的證據來證明其實用性。對於測定接受標準，這項有限的初步研究顯示，可以得到具有一致的樣本間結果的36個單獨的蛋白質讀數。最後，應根據自展分析對每種蛋白質樣本進行一式三份測試。儘管這項研究使用了兩種mAb，但基於第一個原理，所有蛋白質的行為都應相似。實例 6 - SoloVPE 的程式設計 快速斜率 在快速斜率工具下，從表6.1和6.2中選擇參數： [表 6.1 ] 快速斜率參數
功能表項目 選擇（或輸入）
快速方法 無
斜率模式 「…」 快速-M 參見以下表6.2
樣本容器 PV-OC0009-1
波長（nm） 280.00
消光係數 使用者
EC值 1.00000 mL/(mg*cm)
基線校正 關
散射校正 關
重複 重複（3次）
[表 6.2 ] 快速斜率配置
功能表項目 輸入
數據點 10
靶標Ab 1.00000
搜索PL1（mm） 0.005
搜索PL2（mm） 0.025
搜索PL3（mm） 0.050
平均時間（s） 0.5000
固定斜率 在快速斜率工具下，從表6.3和6.4中選擇參數： [表 6.3 ] 固定斜率參數
功能表項目 選擇（或輸入）
快速方法 無
斜率模式 「…」 固定-M 參見以下表6.4
樣本容器 PV-OC0009-1
一個或多個固定斜率波長（nm） 310.00
消光係數 「…」 使用者 EC值：1.00000 ml/(mg*cm)
基線校正 關
散射校正 關
重複 重複（3次）
[表 6.4 ] 固定斜率配置
功能表項目 輸入
數據點 10
起始PL（mm） 0.050
步長PL（mm） 0.005
平均時間（s） 0.5000
固定斜率模式的螢幕截圖顯示在圖13中。實例 7 - 概述
重新評價了系統適用性、測定和樣本接受標準，以用於實例7和8中涉及可變路徑長度儀器SoloVPE的蛋白質濃度確定。針對儀器可變性，使用AMG藍（參見下文）獲得中間精度數據。該等標準的修訂數據係使用SoloVPE在六個儀器上獲得的。AMG藍係在5%（v/v）甘油水混合物中的0.15%（w/v）緩衝專利藍染料溶液（pH 6.8）。對該等數據的分析揭示，在280、310、510和615 nm處，≤ 固定路徑長度值的4%係可接受的。在所有波長處，系統適用性讀數的精度的相對標準差（RSD）百分比必須 ≤ 5%。如根據使用的路徑長度和步長吸光度，ConfiRM® 標準品不適合用作系統適用性標準品。
本研究中使用的所有儀器都包括與Agilent Cary 60紫外線（UV）分光光度計系統連接的SoloVPE。為了進行濃度確定，SoloVPE根據樣本的吸光度從0.005 mm至15 mm自動調整光程長度。對於每個樣本，使用最多10個不同的路徑長度（最少需要5個點）來生成吸光度與路徑長度的線性回歸圖。樣本接受標準基於該樣本分析圖的回歸線，SoloVPE的R2 必須 ≥ 0.999，才能提供有效的結果。根據SoloVPE系統的斜率測量能力和路徑長度範圍，製造商要求的蛋白質樣本濃度確定能力範圍在無需稀釋的情況下為0.01至300 mg/mL（牛血清白蛋白）。因此，與Cary分光光度計耦連的SoloVPE非常適合用於品質控制和在生產車間藉由提高測試速度來提高效率。
這項研究的目的是為將AMG藍用作系統適用性標準品建立科學依據，從而簡化系統適用性程序。實例 8 - 材料和方法、實驗以及數據分析 AMG藍染料的製備
AMG藍染料的UV/可見光譜顯示在圖 14 中。圖中突出顯示了四個波長：280 nm、310 nm、510 nm和615 nm。目前使用的染料溶液CHEM013（PBD）由C技術公司提供用於儀器鑒定，但濃度較低且配方不同。
為了製備AMG藍染料（1x PBS、5%甘油緩衝液中的0.15%專利藍VF），遵循以下程序： 1.  將10 mL的10 X 杜氏磷酸鹽緩衝鹽水*（DPBS；不含CaCl2 ，不含MgCl2 ；Gibco，p/n 14200-075；賽默飛世爾科技公司（Thermo Fisher Scientific）；沃爾瑟姆，麻塞諸塞州）添加至100 mL量筒或容量瓶中。 2.  將10 mL的無菌50%甘油（Teknova，p/n G1799；霍利斯特，加利福尼亞州）添加至量筒或燒瓶中。 3.  用純水將量筒或燒瓶中的體積調至100 mL。 4.  蓋上或密封量筒/燒瓶，並翻轉幾次以充分混合溶液。 5.  在另一個燒杯中，稱量150 ± 2 mg的專利藍VF（又稱酸性藍1，舒泛藍，式（希爾符號）C27 H31 N2 NaO6 S2 ；CAS號129-17-9；Sigma，p/n 198218；密理博西格瑪公司（Millipore Sigma），聖路易斯，密蘇里州）。 6.  將DPBS/甘油溶液緩慢添加至燒杯中，注意不要引起飛濺。 7.  將磁力攪拌棒添加至燒杯中並攪拌10分鐘。 8.  檢查pH至7.0 ± 0.2 9.  轉移到儲存瓶中。 10.      在室溫下黑暗中儲存。 *除DPBS外，任何在6.8-9.0的pH下緩衝的緩衝系統均適用。示例性的緩衝液顯示在表A中。 [表 A ] 示例性緩衝液
緩衝液 有用的 pH 範圍
MES 5.5-6.7
Bis-Tris 5.8-7.2
ADA 6.0-7.2
ACES 6.1-7.5
PIPES 6.1-7.5
MOPSO 6.2-7.6
Bis-Tris丙烷 6.3-9.5
BES 6.4-7.8
MOPS 6.5-7.9
TES 6.8-8.2
HEPES 6.8-8.2
DIPSO 7.0-8.2
MOBS 6.9-8.3
TAPSO 7.0-8.2
Tris或Trizma® 7.0-9.0
HEPPSO 7.1-8.5
POPSO 7.2-8.5
TEA 7.3-8.3
EPPS 7.3-8.7
Tricine 7.4-8.8
Gly-Gly 7.5-8.9
Bicine 7.6-9.0
HEPBS 7.6-9.0
TAPS 7.7-9.1
AMPD 7.8-9.7
TABS 8.2-9.6
AMPSO 8.3-9.7
CHES 8.6-10.0
CAPSO 8.9-10.3
AMP 9.0-10.5
CAPS 9.7-11.1
CABS 10.0-11.4
磷酸鹽（無水磷酸二氫鉀 : 磷酸氫二鈉七水合物） 5.7-8.0
檸檬酸一水合物 : Na2HPO4 2.6-7.6
Na2HPO4: NaH2PO4 5.8-8.0
咪唑-HCl 6.2-7.8
實驗設計
中間精度研究在不同地點檢查了AMG藍在多個儀器之間的再現性。
在這項研究中使用了六個儀器。製造商將使用的所有儀器都升級為C技術公司的Quick Slope軟體的第3版。儀器模式為多模式。儀器的軟體具有三種模式： 1) 快速斜率模式（Quick-M）：針對靶標吸光度執行閾值路徑長度搜索，根據所需的數據點數使用自我調整演算法收集截面數據。 2) 多模式（多-M）：使用「快速斜率模式」演算法測試多個波長。 3) 固定斜率模式（固定-M）：無初始路徑長度搜索。根據使用者指定的起始路徑長度、路徑長度步長和要收集的數據點數收集數據。 對於本研究，使用了以下設置： 在以下波長處的多模式：280.00、310.00、510.00、615.00 平均時間：0.5 sec；每個儀器12次運行（2組，每組6次重複）
創建了藍色染料特異性固定斜率模式副程序，該副程序用於獲得310 nm波長處的數據。該副程序迫使儀器使用5 µm至50 µm的路徑長度來評估對於高蛋白質濃度的儀器性能並描述該副程序。該副程序需要第3版軟體進行系統適用性運行。 執行實驗
使用固定路徑長度儀器，使用重複讀數的接受標準執行實驗，該接受標準被設置為一式兩份和一式三份讀數的 ≤ 5% RSD。本研究使用並評價該RSD標準。
每個測試順序由每個儀器在280、310、510和615 nm處的12個AMG藍確定組成，以評估系統適用性標準。該測試策略設計為在減少總體操作員時間和精力。獲得了八個數據集。測試策略設計為用AMG藍溶液來評價儀器間差異。成功的關鍵屬性係儀器在50 µm路徑長度處的吸光度始終等於或大於1個吸光度單位（AU）。當前的PBD溶液無法在50 µm處讀取1 AU，但是該演算法將路徑長度移至1 AU的讀數。藉由SoloVPE測量時，AMG藍溶液在50 µm處始終提供1 AU。
採用在多個波長處評價AMG藍染料讀數的策略來覆蓋該儀器所需的廣泛的蛋白質濃度範圍。較高的蛋白質濃度（即 ＞ 45 mg/mL單株抗體（mAb））要求5 µm至50 µm的最低路徑長度範圍。在615 nm處的藍染料讀數評價在路徑長度小於50 µm時的儀器性能。為了覆蓋蛋白質濃度的其餘範圍（即 ≤ 48 mg/mL），在510 nm處的讀數評估了在用於極低濃度樣本的路徑長度50 µm處的儀器性能。添加了在280 nm和310 nm處的確定值，用於進行先前運行之間的比較。蛋白濃度通常在280 nm處確定。
AMG藍染料啟用了使用多模式的程序，該模式係在多個波長處的快速斜率模式。在確定之前，無需指定路徑長度，因為儀器的演算法決定了最佳測試策略（即閾值路徑長度和步長吸光度）。藉由SoloVPE在六個儀器上進行吸光度的測量，以觀察可能發生的結果中的任何相關差異。在測量時，用SoloVPE軟體針對斜率和RSD%進行AMG藍染料讀數的計算。 數據分析
所有統計分析均使用Microsoft® Excel軟體進行。使用AMG藍染料進行中間精度研究。
本節從六個儀器上讀數的準確度和精度方面討論了AMG藍染料作為系統適用性標準品的用途。如表8.1所示，六個儀器的數據在固定路徑長度的 ≤ 5%內，並且符合一式三份讀數的 ≤ 5% RSD，如基於重複讀數的RSD%標準。表8.2分別呈現了AMG藍染料讀數和蛋白質確定值的原始數據。在這項研究中，每個波長的95個讀數用於顯示系統適用性標準。藉由繪製與固定路徑長度儀器（Cary 60）有關的單獨讀數的圖來評估準確度。該等數據可以Microsoft® Excel格式提供。 [表 8.1 ] AMG藍染料用於系統適用性評價的中間精度的總結
波長 280 nm 310 nm 510 nm 615 nm
總平均值 1.4172 3.9080 0.4805 13.3339
總標準差 0.03 0.05 0.01 0.24
總RSD% 2.21 1.30 1.63 1.81
相對於 FPL 的總差異 % 3.24 0.24 1.29 0.80
在先前的實驗中，將639 nm處的吸光度用作高濃度模型。目的是確定639 nm處的斜率（abs/mm），並與固定路徑長度儀器讀數進行比較。由於儀器檢測器的局限性和比爾定律的偏差，固定路徑長度與SoloVPE確定值之間的斜率確定值沒有匹配。相關性不佳的可能原因可能是由於SoloVPE檢測器飽和。為了克服這種差異，將波長設置更改為615 nm允許固定路徑長度（用1 mm池稀釋並測量）與SoloVPE之間的斜率直接相關。技術平台之間的斜率的直接相關使得能夠對SoloVPE的斜率進行認證。 [表 8.2 ] AMG藍染料用於系統適用性評價的中間精度
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對作為系統適用性標準品的AMG藍染料的評價
本節從儀器路徑長度方面討論了AMG藍色染料作為系統適用性標準品的用途。圖 15 顯示了確定所需的路徑長度的範圍為對於48 mg/mL的蛋白B（蛋白B-48）0.005 mm的最小值到對於最大稀釋度（1 mg/mL；蛋白A）作為最大路徑長度的約2.3 mm。在表8.3中，報告了圖 15 的蛋白質和SoloVPE所用標準溶液的步長吸光度。由於蛋白A的濃度低（1.0 mg/mL），因此對於該蛋白質需要大的路徑長度。所採用的路徑長度範圍與AMG藍染料適用性中所使用的路徑長度範圍相關。
在Slope Spectroscopy™（SoloVPE）中，線條的斜率藉由消光係數與濃度成正比。該斜率的關鍵屬性係允許通過每個光槽的光量，因此靈敏度基於SoloVPE分析中單個步長的吸光度。路徑長度（PL）步長越大，吸光度會越大。對於有效的系統適用性，該吸光度必須在SoloVPE檢測器的能力範圍內。如果光量太小，則每次測試都會使檢測器處於失效邊緣。如果與蛋白質濃度相比光量太大，則系統適用性缺乏靈敏度，無法檢測儀器的光路和光學器件中的細微變化（即鏡面未對準和線性擺動）。較佳的是在蛋白質濃度之間必須保持步長吸光度，如藉由SoloVPE演算法所確定的。實例 9 - AMG 藍染料標準品的關鍵屬性
AMG藍染料溶液的所需屬性設計為藉由如由步長吸光度所控制的橫跨AMG藍染料光譜的讀數，評價在所有濃度下的儀器性能。當前數據顯示，在多模式下使用SoloVPE，從而允許SoloVPE演算法確定樣本讀數的閾值路徑長度。 染料濃度
在快速斜率模式下使用SoloVPE分析PBD時，路徑長度不適合高濃度。需要更濃縮的溶液。進行實驗以找到染料的最佳濃度。製備並測試了含有0.1%、0.12%、0.15%、0.2%和0.5%（w/v）的專利藍VF溶液。在0.15% w/v處發現最佳光譜特徵（在50 µm處為約1 AU）。 製劑的pH
專利藍VF染料係三苯甲烷族染料。因此，該分子對pH變化敏感。如方案1中所示的環化會改變π電子雲，因此會改變顏色。方案 1 ：專利藍 VF 的環化
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如果溶液配製不正確，則呈0.15% w/v濃縮形式的溶液的pH以及因此溶液顏色可能是酸性的（即pH 3.2），此時該溶液會呈藍綠色。pH不正確的AMG藍染料溶液與使用SoloVPE的固定路徑長度讀數（13.5 abs/mm）不匹配，而是顯示出10.5的斜率。然而，當溶液緩衝至pH 6.8時，溶液保持其藍色以及與固定路徑長度儀器的相關性。 有機組成
由於甲醇在PBD溶液中的揮發性，因此使用了甘油。在AMG藍染料中實現了5%（v/v）的濃度。 因此，總的來說，觀察到以下內容： ●  AMG藍染料在6個儀器之間顯示 ≤ 5%的精度 ●  在280 nm、310 nm、510 nm和615 nm處，AMG藍染料相對於使用固定路徑長度分光光度計的值 ≤ 5%。 ●  使用0.15%（w/v）AMG藍染料在615 nm處的讀數可以取代使用固定斜率在310 nm處的讀數。 ●  基於步長吸光度測量結果，ConfiRM® 標準品不適用於模擬蛋白質。
總之，數據分析顯示，使用六個儀器，AMG藍染料溶液的測量結果的可變性保持相對於固定路徑長度確定值 ± 5%的準確度。專利藍VF的濃度、AMG藍染料溶液的pH和有機組成係AMG藍溶液的關鍵屬性。用於測試的多模式的執行極大地簡化系統適用性程序，同時保持有效評價儀器性能所需的靈敏度。文獻目錄 US7,808,641 (優先權日期2007) INTERACTIVE VARIABLE PATHLENGTH DEVICE Huffman S, Soni K, Ferraiolo J. 2014.UV-Vis based determination of protein concentration.BioProcess International 12: 2-8 Sekar, N., 2011.Acid dyes. InHandbook of Textile and Industrial Dyeing (pp. 486-514).Woodhead Publishing.
前述一般描述和以下詳細描述均僅為示例性和解釋性的且不具限制性。除非另外特定地規定，否則單數的使用包括複數。除非另外規定，否則「或」的使用意指「和/或」。術語「包括（including）」以及其他形式（如「包括（includes）」和「包括（included）」）的使用不具限制性。除非另外特定地規定，否則例如「元素」或「組分」的術語涵蓋包含一個單元的元素和組分與包含超過一個子單元的元素和組分。術語「部分（portion）」的使用可包括一種部分（moiety）的部分或整個部分。當提及數值範圍（例如，1-5）時，明確地包括所有介於中間的值，例如1、2、3、4和5，以及其分數，例如1.5、2.2、3.4和4.1。
「約（About）」或「約（~）」意指當修飾一個量時（例如，「約」3 mM），圍繞該經修飾的量的變化可發生。該等變化可藉由多種方式，例如典型測量和處置程序、因疏忽所致的錯誤、成分純度及其類似方式而發生。
「包含（Comprising）」和「包含（comprises）」旨在意指方法包括列出的要素但不排除其他未列出的要素。當在所揭露的方法中使用時，術語「基本上由……組成（consisting essentially of）」和「基本上由……組成（consists essentially of）」包括列出的要素，排除改變方法的基本性質的未列出的要素，但是不排除其他未列出的要素。當用於定義方法時，術語「由……組成（consisting of）」和「由……組成（consists of）」排除實質性的方法步驟。該等過渡術語中的每一個定義的實施方式都在本揭露內容的範圍內。
「耦連」意指直接以及間接相連。例如，設備或過程可以直接與另一設備或過程相連，或者該等設備和/或過程可以例如經由另一設備或過程彼此間接相連。
無
[圖 1 ]顯示了專利藍染料（PBD）之UV吸光度光譜。
[圖 2 ]顯示了從PBD讀數中獲得之原始數據。
[圖 3 ]顯示了在三種蛋白質樣本（mAb1和mAb2，mAb2為兩種不同的濃度）的讀數中獲得之原始數據。
[圖 4 ]顯示了讀數與PBD在指定波長處的認證值（如由供應商提供）的差異之曲線圖。
[圖 5 ]顯示了280 nm處PBD讀數之正態分佈圖。
[圖 6 ]顯示了310 nm處PBD讀數之正態分佈圖。
[圖 7 ]（280 nm）和圖 8 （310 nm）顯示了數據集的標準雙變數等值線，其中考慮了與儀器相關的變化或誤差以及PBD讀數的認證值的可靠性。
[圖 9 ]顯示了在低濃度（左圖；mAb2）和中濃度（右圖；mAb2）下的蛋白質濃度確定值之比較圖。
[圖 10 ]顯示了在310 nm處的PBD（左圖）與蛋白質濃度確定值（mAb1；右圖）之比較圖。
[圖 11 ]顯示了Cary 60分光光度計的假定波長偏移之圖，該波長位移影響280 nm（左）、310 nm（中）處的PBD和mAb1。
[圖 12 ]顯示了對於在實例中分析的三種蛋白質濃度的變異係數的自展分析（bootstrap analysis）之圖。
[圖 13 ]顯示了Solo VPE設備的固定斜率模式之螢幕顯示。
[圖 14 ]顯示了AMG藍染料的UV/可見光譜之圖。
[圖 1 5 ]顯示了蛋白質濃度確定所需的儀器路徑長度。
無
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Claims (12)

  1. 一種確定可變長度分光光度計用於確定蛋白質樣本的蛋白質濃度的適用性之方法，該方法包括測量專利藍染料（PBD）或AMG藍染料（ABD）在至少兩個波長處的吸光度，第一波長為280 nm並且隨後的一個或多個波長選自由310 nm、412 nm、510 nm和615 nm組成之群組。
  2. 一種確定固定路徑長度分光光度計用於確定蛋白質樣本的蛋白質濃度的適用性之方法，該方法包括測量ABD在至少兩個波長處的吸光度，第一波長為280 nm並且隨後的一個或多個波長選自由310 nm、412 nm、510 nm和615 nm組成之群組。
  3. 如申請專利範圍第1或2項所述之方法，其中至少使用第三波長，其中該第三波長不同於第二波長並且選自由310 nm、412 nm、510 nm和615 nm組成之群組。
  4. 如申請專利範圍第1或2項所述之方法，其中在測量該蛋白質樣本的蛋白質濃度之前將該PBD或ABD對於每個波長測量三次，並且其中在測量該蛋白質樣本的蛋白質濃度之後將該PBD或ABD對於每個波長測量三次。
  5. 如申請專利範圍第1或2項所述之方法，其中該第一波長係280 nm，並且該第二波長係310 nm。
  6. 如申請專利範圍第3項所述之方法，其中如果該PBD或ABD的吸光度讀數等於或小於隨該PBD或ABD提供的分析證明書中所提供的那些值的10%，則認為該可變長度分光光度計係合適的。
  7. 如申請專利範圍第1或2項所述之方法，其中如果該PBD或ABD的吸光度讀數至少等於或小於隨該PBD或ABD提供的分析證明書中所提供的那些的5%，則認為該可變長度分光光度計或固定路徑長度分光光度計係合適的。
  8. 如申請專利範圍第1或2項所述之方法，其中該等讀數的相對標準差（RSD）百分比 ≤ 5%。
  9. 如申請專利範圍第1或2項所述之方法，其中該蛋白質樣本包含治療性蛋白質。
  10. 如申請專利範圍第1或2項所述之方法，其中該蛋白質樣本包含抗原結合蛋白、抗體、雙特異性抗體、三特異性抗體、BiTE分子或其片段或衍生物。
  11. 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中該可變長度分光光度計係SoloVPE分光光度計（新澤西州布裡奇沃特的C技術公司）。
  12. 如申請專利範圍第9項所述之方法，其中該治療性多肽選自由以下組成之群組：英利昔單抗、貝伐單抗、西妥昔單抗、蘭尼單抗、帕利珠單抗、阿巴伏單抗、阿昔單抗、阿克托克單抗、阿達木單抗、阿非莫單抗、阿托珠單抗、阿珠單抗、培化阿珠單抗、ald518、阿侖單抗、阿利庫單抗、阿妥莫單抗、阿麥妥昔單抗、馬安那莫單抗、安蘆珠單抗、阿泊珠單抗、阿西莫單抗、阿塞珠單抗、阿替奴單抗、阿替珠單抗、阿托立木單抗、托珠單抗、巴匹珠單抗、巴厘昔單抗、巴韋妥昔單抗、貝妥莫單抗、貝利木單抗、苯拉利珠單抗、柏替木單抗、貝索單抗、貝伐珠單抗、貝洛托單抗、比西單抗、比伐珠單抗、莫-比伐珠單抗、博納吐單抗、布索珠單抗、維汀-本妥昔單抗、巴列津單抗、布洛魯單抗、康納單抗、莫坎妥珠單抗、莫坎妥珠單抗、卡普賽珠單抗、卡羅單抗噴地肽、卡魯單抗、卡妥索單抗、cc49、西利珠單抗、賽妥珠單抗、西妥昔單抗、泊西他珠單抗、西妥木單抗、克拉紮珠單抗、克立昔單抗、克伐珠單抗、可那木單抗、克雷內治單抗、cr6261、達西珠單抗、達克珠單抗、達羅土珠單抗、達雷木單抗、地莫米佐單抗、地諾單抗、地莫單抗、阿托度單抗、德羅圖單抗、杜力戈圖單抗、杜匹魯單抗、依美昔單抗、依庫麗單抗、埃巴單抗、依決洛單抗、依法利珠單抗、依芬古單抗、埃羅妥珠單抗、艾西莫單抗、埃文單抗、培化恩莫單抗、恩諾珠單抗、依諾替庫單抗、埃斯托西單抗、西依匹莫單抗、依帕珠單抗、厄瑞奴單抗、厄利珠單抗、厄馬索單抗、艾達珠單抗、依卓利珠單抗、依伏庫單抗、艾韋單抗、法索單抗、法拉莫單抗、法拉圖珠單抗、法希奴單抗、fbta05、非維珠單抗、非紮奴單抗、費希臘妥單抗、芬妥木單抗、弗蘭托單抗、芳妥珠單抗、弗羅魯單抗、福拉韋單抗、夫蘇木單抗、弗蘭單抗、弗圖希單抗、加利昔單抗、蓋尼塔單抗、蓋坦德單抗、加維莫單抗、吉妥珠單抗奧佐米星、吉伏珠單抗、吉仁土昔單抗、維汀-格侖妥木單抗、戈利木單抗、戈利昔單抗、gs6624、替伊立珠單抗、替伊莫單抗、依庫單抗、伊戈伏單抗、英西單抗、英戈土珠單抗、英克拉庫單抗、依坦希單抗、英夫利西單抗、英妥木單抗、伊諾莫單抗、奧星-艾諾妥珠單抗、伊匹單抗、艾雷妥木單抗、依拓珠單抗、希凱珠單抗、凱利昔單抗、拉貝珠單抗、來金珠單抗、來馬索單抗、樂地單抗、來沙木單抗、利韋單抗、利格珠單抗、林妥珠單抗、立魯單抗、莫-洛伏珠單抗、魯卡木單抗、魯昔單抗、馬帕木單抗、馬司莫單抗、美力姆單抗、馬妥珠單抗、美泊利單抗、美替木單抗、米拉珠單抗、明瑞莫單抗、米妥莫單抗、莫格穆裡單抗、莫羅木單抗、莫他珠單抗、莫希土姆單抗、莫羅單抗-cd3、他那可單抗、奈米魯單抗、他那莫單抗、納瑞特單抗、那他珠單抗、奈巴庫單抗、奈昔木單抗、奈瑞莫單抗、耐西維單抗、尼妥珠單抗、納武單抗、巰諾莫單抗、奧卡土珠單抗、奧瑞利珠單抗、奧度莫單抗、奧法木單抗、奧拉圖單抗、奧魯凱珠單抗、奧馬珠單抗、歐那土珠單抗、莫奧珠單抗、奧戈伏單抗、奧泰單抗、奧昔珠單抗、歐西魯單抗、歐贊尼珠單抗、歐拉麗珠單抗、帕吉昔單抗、帕利珠單抗、帕尼單抗、帕諾庫單抗、帕薩土珠單抗、帕考珠單抗、派特立珠單抗、帕圖單抗、帕尼單抗、培拉凱珠單抗、帕妥珠單抗、培克珠單抗、皮地利珠單抗、平妥莫單抗、普拉庫魯單抗、拍珠單抗、普立昔單抗、普托木單抗、PRO 140、坤立珠單抗、雷庫圖單抗、雷德圖單抗、雷韋單抗、雷莫蘆單抗、雷珠單抗、雷昔庫單抗、瑞加韋單抗、瑞利珠單抗、利妥木單抗、利妥昔單抗、羅妥木單抗、羅勒杜單抗、羅姆蘇珠單抗、隆他利珠單抗、羅利珠單抗、魯利珠單抗、沙瑪立珠單抗、沙魯單抗、沙妥莫單抗噴地肽、蘇金單抗、司韋單抗、西羅珠單抗、西法木單抗、司妥昔單抗、西姆土珠單抗、西利珠單抗、希瑞庫單抗、蘇蘭珠單抗、蘇力圖單抗、松普希珠單抗、松妥珠單抗、司他蘆單抗、硫索單抗、索維單抗、他貝魯單抗、他珠單抗、他度珠單抗、他利珠單抗、他尼珠單抗、帕他莫單抗、替非珠單抗、阿替莫單抗、替妥莫單抗、替非珠單抗、替奈昔單抗、替利珠單抗、替普單抗、替紮貝魯單抗、TGN1412、曲美木單抗、替西木單抗、替拉珠單抗、替加珠單抗、TNX-650、托珠單抗、托利珠單抗、托西莫單抗、曲洛青木單抗、曲妥珠單抗、TRBS07、曲加立珠單抗、西莫白介素單抗、妥韋單抗、烏波利土西單抗、烏瑞魯單抗、烏珠單抗、優特克單抗、伐利昔單抗、維特立珠單抗、維多珠單抗、維妥珠單抗、維帕莫單抗、維西庫單抗、維西珠單抗、伏洛昔單抗、伏妥土珠單抗、伏妥莫單抗、紮蘆木單抗、紮木單抗、紮土希單抗、齊拉木單抗、阿佐莫單抗、糖蛋白、CD多肽、HER受體多肽、細胞黏附多肽、生長因子多肽、胰島素多肽、胰島素相關多肽、凝血多肽、凝血相關多肽、白蛋白、IgE、血型抗原、群落刺激因子、受體、神經營養因子、干擾素、白細胞介素、病毒抗原、脂蛋白、降鈣素、升糖素、心房利尿鈉因子、肺表面活性劑、腫瘤壞死因子-α和腫瘤壞死因子-β、腦啡肽酶、小鼠促性腺激素相關肽、DNA酶、抑制素、激活素、整合素、蛋白A、蛋白D、類風濕因子、免疫毒素、骨成形性蛋白質、超氧化物歧化酶、表面膜多肽、衰退加速因子、AIDS包膜、轉運多肽、歸巢受體、位址素、調節多肽、免疫黏附素、肌肉生長抑制素、TALL多肽、類澱粉多肽、胸腺基質淋巴細胞生成素、RANK配位基、c-kit多肽、TNF受體和血管生成素、表1中所示的抗體及其生物學活性片段、類似物或變體。
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SG48759A1 (en) 1990-01-12 2002-07-23 Abgenix Inc Generation of xenogenic antibodies
WO2003017935A2 (en) 2001-08-23 2003-03-06 Genmab A/S Human antibodies specific for interleukin 15 (il-15)
EP1841455A1 (en) 2005-01-24 2007-10-10 Amgen Inc. Humanized anti-amyloid antibody
US8003108B2 (en) 2005-05-03 2011-08-23 Amgen Inc. Sclerostin epitopes
US7592429B2 (en) 2005-05-03 2009-09-22 Ucb Sa Sclerostin-binding antibody
WO2008132611A2 (en) 2007-04-13 2008-11-06 C Technologies, Inc. Interactive variable pathleingth device
EP2170957A1 (en) 2007-06-20 2010-04-07 Irm, Llc Methods and compositions for treating allergic diseases
US7982016B2 (en) 2007-09-10 2011-07-19 Amgen Inc. Antigen binding proteins capable of binding thymic stromal lymphopoietin
TWI516501B (zh) 2008-09-12 2016-01-11 禮納特神經系統科學公司 Ｐｃｓｋ９拮抗劑類
US8148515B1 (en) 2009-06-02 2012-04-03 Biotium, Inc. Detection using a dye and a dye modifier
US9404851B2 (en) 2014-07-09 2016-08-02 C Technologies Inc Method for quantitatively measuring the concentration of a compound of unknown concentration in solution

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