JP2022513691A

JP2022513691A - Ｂ細胞成熟抗原を標的とするキメラ抗原受容体およびその使用方法

Info

Publication number: JP2022513691A
Application number: JP2021531294A
Authority: JP
Inventors: デヴィッドチャン; アルンバラクマラン; シリルアルキスコント
Original assignee: アロジーンセラピューティクス，インコーポレイテッド
Priority date: 2018-12-01
Filing date: 2019-11-26
Publication date: 2022-02-09
Also published as: MX2021006395A; BR112021010279A2; TW202039544A; WO2020112796A1; EP3886989A1; PH12021550909A1; IL283144A; CO2021005004A2; SG11202105353PA; AU2019386063A1; PE20211915A1; CA3116720A1; CN113498353A; KR20210099574A; US20200261503A1

Abstract

本明細書では、ＢＣＭＡＣＡＲおよびＣＡＲ－Ｔ細胞、それらを作製および使用する方法が提供される。いくつかの実施形態では、特定の投与レジメン、再投与レジメン、およびリンパ球枯渇との併用レジメンが、多発性骨髄腫の治療および臨床管理を必要とする対象における多発性骨髄腫の治療および臨床管理のために提供される。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年１２月１日に出願された米国仮出願第６２／７７４，２０９号、２０１９年３月１０日に提出された米国仮出願第６２／８１６，１８７号、および２０１９年１１月６日に出願された米国仮出願第６２／９３１，４８７号に対する優先権の利益を主張するものであり、これらすべての内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、配列表を含む。２０１９年１１月７日に作成された上記のＡＳＣＩＩコピーは、ＡＴ－０２２－０４ＷＯ＿ＳＬという名前であり、サイズは４１２，１６１バイトである。

多発性骨髄腫（ＭＭ）は、クローン形質細胞の蓄積を特徴とする悪性腫瘍である。ＭＭは大部分が不治のままであり、ほとんどの患者は時間の経過とともに耐性を生じる。

Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ、ＣＤ２６９、またはＴＮＦＲＳＦ１７）は、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリーのメンバーであり、生存促進シグナル伝達に関与している。ＢＣＭＡは、ｔ（４；１６）転座を含む悪性ヒトＴ細胞リンパ腫で同定された。ＢＣＭＡは、ＭＭのすべての段階の正常および悪性形質細胞およびその他のいくつかの形質細胞悪性腫瘍（例えば、ＤＬＢＣＬ）で高レベルで発現している。ＢＣＭＡはほとんどまたはすべての骨髄腫細胞でも発現し、非Ｂ細胞系統では発現しない。

悪性腫瘍関連抗原を認識するように遺伝子改変されたＴ細胞の養子移入は、癌治療への新しいアプローチとして有望であることが示されている。Ｔ細胞は、抗原認識部分とＴ細胞活性化ドメインで構成される融合タンパク質であるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝子改変することができる。

再発／難治性のＭＭを含むＭＭを効果的に治療することができる介入については、満たされていない医学的ニーズがある。本明細書で提供されるのは、この必要性に対処する方法および組成物である。

ＢＣＭＡに結合するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、ならびに再発性および／または難治性のＭＭを含む多発性（ＭＭ）の治療に使用するための投与パラダイムが、本明細書で提供される。

より具体的には、一態様では、本明細書では、対象においてＭＭを治療する方法であって、対象に、少なくとも１回の用量の抗ヒトＢＣＭＡＣＡＲを含む同種異系キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）－Ｔ細胞（ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞）を投与することを含み、少なくとも１回の用量が、約７×１０＾６細胞／用量～約４８０×１０＾６細胞／用量である、方法が、提供される。

いくつかの実施形態では、対象の体重が、５０ｋｇ以上であり、方法が、少なくとも１回の用量のＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞を投与することを含み、用量は、約２０×１０＾６細胞／用量～約４８０×１０＾６細胞／用量の範囲である。いくつかの実施形態では、少なくとも１回の用量は、約２０×１０＾６細胞／用量、約４０×１０＾６細胞／用量、約１２０×１０＾６細胞／用量、約３６０×１０＾６細胞／用量、または約４８０×１０＾６細胞／用量である。いくつかの実施形態では、少なくとも１回の用量は、約２０×１０＾６細胞／用量～約４０×１０＾６細胞／用量、約４０×１０＾６細胞／用量～約１２０×１０＾６細胞／用量、約１２０×１０＾６細胞／用量～約３６０×１０＾６細胞／用量、または約３６０×１０＾６細胞／用量～約４８０×１０＾６細胞／用量である。

いくつかの実施形態では、対象の体重が、５０ｋｇ超であり、方法が、少なくとも１回の用量のＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞を投与することを含み、用量は、約２０×１０＾６細胞／用量～約４８０×１０＾６細胞／用量の範囲である。いくつかの実施形態では、少なくとも１回の用量は、約２０×１０＾６細胞／用量、約４０×１０＾６細胞／用量、約１６０×１０＾６細胞／用量、約２４０×１０＾６細胞／用量、約３２０×１０＾６細胞／用量、または約４８０×１０＾６細胞／用量である。いくつかの実施形態では、少なくとも１回の用量は、約２０×１０＾６細胞／用量～約４０×１０＾６細胞／用量、約４０×１０＾６細胞／用量～約１６０×１０＾６細胞／用量、約１６０×１０＾６細胞／用量～約２４０×１０＾６細胞／用量、約２４０×１０＾６細胞／用量～約３２０×１０＾６細胞／用量、約１６０×１０＾６細胞／用量～約３２０×１０＾６細胞／用量、または約３２０×１０＾６細胞／用量～約４８０×１０＾６細胞／用量である。

いくつかの実施形態では、対象の体重が、５０ｋｇ未満であり、方法が、少なくとも１回の用量のＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞を投与することを含み、用量は、約７×１０＾６細胞／用量～約３６０×１０＾６細胞／用量の範囲である。いくつかの実施形態では、少なくとも１回の用量は、約７×１０＾６細胞／用量、約１４×１０＾６細胞／用量、約２０×１０＾６細胞／用量、約８０×１０＾６細胞／用量、約２４０×１０＾６細胞／用量、または約３６０×１０＾６細胞／用量である。いくつかの実施形態では、少なくとも１回の用量は、約７×１０＾６もしくは１４×１０＾６細胞／用量～約２０×１０＾６細胞／用量、約２０×１０＾６細胞／用量～約８０×１０＾６細胞／用量、約８０×１０＾６細胞／用量～約２４０×１０＾６細胞／用量、または約２４０×１０＾６細胞／用量～約３６０×１０＾６細胞／用量である。

いくつかの実施形態では、対象の体重が、５０ｋｇ以下であり、方法が、少なくとも１回の用量のＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞を投与することを含み、用量は、約１４×１０＾６細胞／用量～約３２０×１０＾６細胞／用量の範囲である。いくつかの実施形態では、少なくとも１回の用量は、約１４×１０＾６細胞／用量、約２０×１０＾６細胞／用量、約８０×１０＾６細胞／用量、約１６０×１０＾６細胞／用量、約２００×１０＾６細胞／用量、または約３２０×１０＾６細胞／用量である。いくつかの実施形態では、少なくとも１回の用量は、約１４×１０＾６細胞／用量～約２０×１０＾６細胞／用量、約２０×１０＾６細胞／用量～約８０×１０＾６細胞／用量、約８０×１０＾６細胞／用量～約２００×１０＾６細胞／用量、約８０×１０＾６細胞／用量～約１６０×１０＾６細胞／用量、約１６０×１０＾６細胞／用量～約２００×１０＾６細胞／用量、または約２００×１０＾６細胞／用量～約３２０×１０＾６細胞／用量である。

いくつかの実施形態では、対象は、多発性骨髄腫について、いずれの事前治療も受けていない。いくつかの実施形態では、対象は、多発性骨髄腫について、少なくとも１つ、２つ、または３つの事前治療を受けている。いくつかの実施形態では、投薬レジメンは、第一選択治療である。いくつかの実施形態では、投薬レジメンは、第二選択治療である。いくつかの実施形態では、投薬レジメンは、第三選択治療である。いくつかの実施形態では、投薬レジメンは、第四選択治療である。

いくつかの実施形態では、対象は、事前の化学療法レジメン、事前の生物学的製剤に基づくレジメン、および／または事前の自家細胞療法に基づくレジメン（例えば、幹細胞療法）を受けている。

いくつかの実施形態では、対象は、再発性のＭＭを有する。いくつかの実施形態では、対象は、難治性のＭＭを有する。いくつかの実施形態では、対象は、難治性および再発性のＭＭを有する。

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）を含む細胞外結合ドメインを含むＣＡＲを含み、ここで、ｓｃＦｖは、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ここで、ＶＨ領域は、ＶＨ相補性決定領域１（ＶＨＣＤＲ１）、ＶＨ相補性決定領域２（ＶＨＣＤＲ２）、およびＶＨ相補性決定領域３（ＶＨＣＤＲ３）を含み、ＶＬ領域は、ＶＬ相補性決定領域１（ＶＬＣＤＲ１）、ＶＬ相補性決定領域２（ＶＬＣＤＲ２）、およびＶＬ相補性決定領域３（ＶＬＣＤＲ３）を含み、ここで、（ａ）ＶＨＣＤＲ１は、配列番号１５０、１５１、または１５２のアミノ酸配列を含み、ＶＨＣＤＲ２は、配列番号１５３または１５４のアミノ酸配列を含み、ＶＨＣＤＲ３は、配列番号１５５のアミノ酸配列を含み、ＶＬＣＤＲ１は、配列番号２０９のアミノ酸配列を含み、ＶＬＣＤＲ２は、配列番号２２１のアミノ酸配列を含み、ＶＬＣＤＲ３は、配列番号２２２のアミノ酸配列を含み、（ｂ）ＶＨＣＤＲ１は、配列番号１５０、１５１、または１５２のアミノ酸配列を含み、ＶＨＣＤＲ２は、配列番号１８７または１８８のアミノ酸配列を含み、ＶＨＣＤＲ３は、配列番号１５５のアミノ酸配列を含み、ＶＬＣＤＲ１は、配列番号２４９のアミノ酸配列を含み、ＶＬＣＤＲ２は、配列番号２２１のアミノ酸配列を含み、ＶＬＣＤＲ３は、配列番号２２５のアミノ酸配列を含み、（ｃ）ＶＨＣＤＲ１は、配列番号１５０、１５１、または１５２のアミノ酸配列を含み、ＶＨＣＤＲ２は、配列番号１６５または１６６のアミノ酸配列を含み、ＶＨＣＤＲ３は、配列番号１５５のアミノ酸配列を含み、ＶＬＣＤＲ１は、配列番号２２６のアミノ酸配列を含み、ＶＬＣＤＲ２は、配列番号２２１のアミノ酸配列を含み、ＶＬＣＤＲ３は、配列番号２２７のアミノ酸配列を含み、（ｄ）ＶＨＣＤＲ１は、配列番号１５１、１５６、または１５７のアミノ酸配列を含み、ＶＨＣＤＲ２は、配列番号１５９または１６２のアミノ酸配列を含み、ＶＨＣＤＲ３は、配列番号１６１のアミノ酸配列を含み、ＶＬＣＤＲ１は、配列番号２５１のアミノ酸配列を含み、ＶＬＣＤＲ２は、配列番号２５２のアミノ酸配列を含み、ＶＬＣＤＲ３は、配列番号２５３のアミノ酸配列を含み、（ｅ）ＶＨＣＤＲ１は、配列番号１５１、１５６、または１５７のアミノ酸配列を含み、ＶＨＣＤＲ２は、配列番号１９０または１９１のアミノ酸配列を含み、ＶＨＣＤＲ３は、配列番号１６１のアミノ酸配列を含み、ＶＬＣＤＲ１は、配列番号２６２のアミノ酸配列を含み、ＶＬＣＤＲ２は、配列番号２５２のアミノ酸配列を含み、ＶＬＣＤＲ３は、配列番号２６３のアミノ酸配列を含み、（ｆ）ＶＨＣＤＲ１は、配列番号１５０、１５１、または１５２のアミノ酸配列を含み、ＶＨＣＤＲ２は、配列番号１５４または１６９のアミノ酸配列を含み、ＶＨＣＤＲ３は、配列番号１５５のアミノ酸配列を含み、ＶＬＣＤＲ１は、配列番号２７１のアミノ酸配列を含み、ＶＬＣＤＲ２は、配列番号２２１のアミノ酸配列を含み、ＶＬＣＤＲ３は、配列番号２７２のアミノ酸配列を含み、（ｇ）ＶＨＣＤＲ１は、配列番号１２９、１３０、または１３１のアミノ酸配列を含み、ＶＨＣＤＲ２は、配列番号１３９または１４０のアミノ酸配列を含み、ＶＨＣＤＲ３は、配列番号１３４のアミノ酸配列を含み、ＶＬＣＤＲ１は、配列番号２１７のアミノ酸配列を含み、ＶＬＣＤＲ２は、配列番号２１０のアミノ酸配列を含み、ＶＬＣＤＲ３は、配列番号２１６のアミノ酸配列を含み、（ｈ）ＶＨＣＤＲ１は、配列番号１５１、１５６、または１５７のアミノ酸配列を含み、ＶＨＣＤＲ２は、配列番号１５８または１５９のアミノ酸配列を含み、ＶＨＣＤＲ３は、配列番号１５５のアミノ酸配列を含み、ＶＬＣＤＲ１は、配列番号２０９のアミノ酸配列を含み、ＶＬＣＤＲ２は、配列番号２２１のアミノ酸配列を含み、ＶＬＣＤＲ３は、配列番号２２５のアミノ酸配列を含み、または（ｉ）ＶＨＣＤＲ１は、配列番号１２９、１３０、または１３１のアミノ酸配列を含み、ＶＨＣＤＲ２は、配列番号１３２または１３３のアミノ酸配列を含み、ＶＨＣＤＲ３は、配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、ＶＬＣＤＲ１は、配列番号３７７のアミノ酸配列を含み、ＶＬＣＤＲ２は、配列番号２１０のアミノ酸配列を含み、ＶＬＣＤＲ３は、配列番号２１４のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲのｓｃＦｖのＶＨ領域は、配列番号１５０、１５１、または１５２のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ１、配列番号１５３または１５４のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ２、および配列番号１５５のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ３を含み、ｓｃＦｖのＶＬ領域は、配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ１、配列番号２２１のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ２、および配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ３を含む。

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲのｓｃＦｖのＶＨ領域は、配列番号１５１、１５６、または１５７のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ１、配列番号１５８または１５９のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ２、および配列番号１５５のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ３を含み、ｓｃＦｖのＶＬ領域は、配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ１、配列番号２２１のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ２、および配列番号２２５のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ３を含む。

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、配列番号３４４に示されるアミノ酸配列を含むＣＡＲを含む。これらの実施形態のいくつかでは、ＣＡＲは、ＣＤ２０エピトープをさらに含む。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＣＤ２０エピトープは、配列番号３９７または配列番号３９８に示されるアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、配列番号３１８の配列を有するＣＤ８αシグナルペプチドと、配列番号１１２の配列を有するＶＨ領域と、配列番号３３３の配列を有するＧＳリンカーと、配列番号３８の配列を有するＶＬ領域と、配列番号３２０の配列を有するＣＤ８αヒンジと、配列番号３２２の配列を有するＣＤ８α膜貫通ドメインと、配列番号３２３の配列を有する４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメインと、配列番号３２４の配列を有するＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインと、を含むＣＡＲを含む。

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、配列番号３１８の配列を有するＣＤ８αシグナルペプチドと、配列番号１１２の配列を有するＶＨ領域と、配列番号３３３の配列を有するＧＳリンカーと、配列番号３８の配列を有するＶＬ領域と、配列番号３９８の配列を有するＣＤ２０エピトープと、配列番号３２０の配列を有するＣＤ８αヒンジと、配列番号３２２の配列を有するＣＤ８α膜貫通ドメインと、配列番号３２３の配列を有する４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメインと、配列番号３２４の配列を有するＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインと、を含むＣＡＲを含む。

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、配列番号３１８の配列を有するＣＤ８αシグナルペプチドと、配列番号３３の配列を有するＶＨ領域と、配列番号３３３の配列を有するＧＳリンカーと、配列番号３４の配列を有するＶＬ領域と、配列番号３２０の配列を有するＣＤ８αヒンジと、配列番号３２２の配列を有するＣＤ８α膜貫通ドメインと、配列番号３２３の配列を有する４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメインと、配列番号３２４の配列を有するＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインと、を含むＣＡＲを含む。

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、配列番号３１８の配列を有するＣＤ８αシグナルペプチドと、配列番号３３の配列を有するＶＨ領域と、配列番号３３３の配列を有するＧＳリンカーと、配列番号３４の配列を有するＶＬ領域と、配列番号３９８の配列を有するＣＤ２０エピトープと、配列番号３２０の配列を有するＣＤ８αヒンジと、配列番号３２２の配列を有するＣＤ８α膜貫通ドメインと、配列番号３２３の配列を有する４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメインと、配列番号３２４の配列を有するＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインと、を含むＣＡＲを含む。

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）を含む細胞外結合ドメインを含むＣＡＲを含み、ｓｃＦｖは、ＶＨ領域およびＶＬ領域を含み、ＶＨ領域とＶＬ領域の組み合わせは、表１に示されている組み合わせから選択される。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、細胞外リガンド結合ドメイン、第１の膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを含み、細胞外ドメインは、表１の配列番号３３、７２、３９、７６、８３、９２、２５、１１２、または８に示される配列を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、表１の配列番号３４、７３、４０、７７、８４、９３、１８、３８、または８０に示される配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含むｓｃＦｖを含み、第１の膜貫通ドメインは、ＣＤ８α鎖膜貫通ドメインを含み、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインおよび／または４－１ＢＢシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは配列番号３３を含み、ＶＬは配列番号３４を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは配列番号１１２を含み、ＶＬは配列番号３８を含む。

いくつかの実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＣＤ５２が欠損している。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＴＣＲαおよび／またはＴＣＲβが欠損している。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、安全スイッチを発現しない。いくつかの実施形態では、細胞の遺伝子型は、ＴＣＲαβ^-およびＣＤ５２^+/-である。

いくつかの実施形態では、対象は、少なくとも１回の用量の投与の前に、第１のリンパ球枯渇レジメンを受ける。いくつかの実施形態では、第１のリンパ球枯渇レジメンは、フルダラビンおよびシクロホスファミドを投与することを含む。いくつかの実施形態では、第１のリンパ球枯渇レジメンは、フルダラビン、シクロホスファミド、および抗ＣＤ５２抗体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、第１のリンパ球枯渇レジメンは、抗ＣＤ５２抗体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、第１のリンパ球枯渇レジメンは、抗ＣＤ５２抗体のみを投与することを含む。いくつかの実施形態では、フルダラビンは、約３０ｍｇ／ｍ２／日の投与量で投与され、シクロホスファミドは、約３００ｍｇ／ｍ２／日の投与量で投与され、ＣＤ５２抗体は、約１０～約１３ｍｇ／日、約１３～２０ｍｇ／日、約１３～３０ｍｇ／日、または約２０～３０ｍｇ／日の投与量で投与される。いくつかの実施形態では、第１のリンパ球枯渇レジメンは、少なくとも１回の用量の投与の約１日～１５日前に開始される。いくつかの実施形態では、第１のリンパ球枯渇レジメンは、１、２、３、４、または５日間の過程にわたって実施される。いくつかの実施形態では、第１のリンパ球枯渇レジメンは、３日間の過程で、少なくとも１回の用量の投与の５日前に実施される。いくつかの実施形態では、第１のリンパ球枯渇レジメンは、３日間の過程で、少なくとも１回の用量の投与の７日前に実施される。

いくつかの実施形態では、対象は、後続の用量のＣＡＲ－Ｔ細胞を受け取る。

別の態様では、本明細書では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞を含む製剤が提供される一実施形態では、製剤は、約５％のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）および１４×１０＾６細胞／ｍＬを含む溶液を含む。別の実施形態では、細胞は、５％の最終濃度のジメチルスルホキシドを生じる、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）基礎溶液およびＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０の１対１の混合液中で製剤化され、製剤の有効性成分含量（ｄｏｓａｇｅｓｔｒｅｎｇｔｈ）が、１４×１０＾６細胞／ｍＬであり、細胞の遺伝子型が、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ＋＿ＴＣＲαβ－＿ＣＤ５２＋／－であり、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞が、細胞外リガンド結合ドメイン、２つのリツキシマブ結合ドメイン、第１の膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを含み、細胞外ドメインが、表１の配列番号３３、７２、３９、７６、８３、９２、２５、１１２、または８に示される配列を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、表１の配列番号３４、７３、４０、７７、８４、９３、１８、３８、または８０に示される配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含むｓｃＦｖを含み、第１の膜貫通ドメインが、ＣＤ８α鎖膜貫通ドメインを含み、細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインおよび／または４－１ＢＢシグナル伝達ドメインを含む。

本開示のＢＣＭＡ含有ＣＡＲ－Ｔ細胞を示す。ＣＡＲは、リツキシマブおよび抗ＢＣＭＡｓｃＦｖによって活性化される機能的なオフスイッチを有する。改変されたＴ細胞はさらに、ＣＤ５２（拒絶反応を最小限に抑えるため）およびＴ細胞受容体遺伝子（ＴＣＲαおよび／またはＴＣＲβ）（ＧｖＨＤ、移植片対宿主病を回避するため）の発現を低減させた。リツキシマブを介したオフスイッチが、本開示のＢＣＭＡ含有ＣＡＲ－Ｔ細胞の検出および枯渇（リツキシマブ抗体による）を可能にすることを示している。内因性ＣＤ５２遺伝子がノックダウン／ノックアウトされた本開示のＢＣＭＡｓｃＦＶ含有ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＢＣＭＡ－１）は、ＣＤ５２抗体治療に耐性があることを示している。標的細胞におけるＢＣＭＡの発現を示している。本開示のＢＣＭＡｓｃＦＶ含有ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＢＣＭＡ－１）は、標的依存性の増殖を示し、反復刺激後も活性を維持することを示している。本開示のＢＣＭＡｓｃＦＶ含有ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＢＣＭＡ－１）が特異的な細胞傷害性活性を示すことを示す。遺伝子編集されていないＢＣＭＡ－１は、ＣＤ５２および／またはＴＣＲαおよび／またはＴＣＲβのノックダウン／ノックアウトを含まないＣＡＲ－Ｔ細胞を指す。本開示のＢＣＭＡｓｃＦＶ含有ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＢＣＭＡ－１）が、可溶性ＢＣＭＡによって阻害されない用量依存的な細胞傷害性活性を有することを示す。本開示のＢＣＭＡｓｃＦＶ含有ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＢＣＭＡ－１）は、同所性腫瘍モデルにおいて抗腫瘍効果を示し、リツキシマブで枯渇させることができる。図８は、ＭＭ．１Ｓモデルにおける本開示のＢＣＭＡｓｃＦＶ含有ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＢＣＭＡ－１）の活性を示す。図９は、本開示のＢＣＭＡｓｃＦＶ含有ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＢＣＭＡ－１）が２回目の投与後の腫瘍根絶に及ぼす影響を示している。図１０は、ＩＬ－７／ＩＬ－１５を補足した、本開示のＢＣＭＡｓｃＦＶ含有ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＢＣＭＡ－１）のマウスにおける長期抗腫瘍効果を示す。ＭＯＬＰ－８動物モデルを使用した。ＮＳＧマウス（Ｎ＝１０）には、５×１０⁶ＭＭ．１Ｓ細胞または２×１０⁶のＭＯＬＰ－８細胞を投与した。サイトカインは、ＡＡＶを介した遺伝子送達を介して提供された。結果は平均±ＳＥＭとして示された。図１１Ａ～１１Ｂは、リツキシマブが、モデルにおいて本開示のＢＣＭＡｓｃＦＶ含有ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＢＣＭＡ－１）を枯渇させ（図１１Ｂ）、抗腫瘍活性を無効にする（図１１Ａ）ことを示す。本開示のＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞の製造プロセスを示す。具体的には、本開示のＢＣＭＡｓｃＦＶ含有ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＢＣＭＡ－１）は、ＧＭＰ様条件下で、抗腫瘍活性を保ちながら、製造することができる。図１２は、本開示のＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞のための例示的な同種異系ＣＡＲ－Ｔ製造プロセスを示す。図１３は、本開示のＢＣＭＡｓｃＦＶ含有ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＢＣＭＡ－１）の高い生存率および増殖を示す。図１４は、ＴＣＲαβ陰性細胞の効率的な富化を示している。ＭＡＣＳ：磁気活性化細胞選別システム（ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ）。図１５は、ＭＭ．１Ｓ同所性腫瘍モデルにおける、本開示のＢＣＭＡｓｃＦＶ含有ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＢＣＭＡ－１）の異なる用量の高い抗腫瘍効果を示す。ＢＣＭＡ－１ｓｃＦｖが組織交差反応性研究でオフターゲット結合を示さないことを示しており、これは、臨床設定でのオフターゲット結合のリスクが低いか存在しないことを示している。自家ＣＡＲ－Ｔ療法の限界を説明している。同種異系ＣＡＲ－Ｔ療法の利点を説明している。第一相（デザインＡまたはＢ）試験の概要を示している。第一相、デザインＢ試験の概要を示している。本開示の例示的なベクトル要素／構成の概略図を示す。

本開示は、ＢＣＭＡに特異的に結合するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）およびＣＡＲを含む免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）（ＣＡＲ－Ｔ細胞）、ならびに難治性／再発ＭＭを含むＭＭの治療に使用するための投薬レジメンを提供する。本開示はまた、これらのＣＡＲをコードするポリヌクレオチド、これらのＣＡＲ－Ｔ細胞を含む組成物、およびこれらのＣＡＲおよびＣＡＲ－Ｔ細胞を作製および使用する方法を提供する。

本開示は、ＢＣＭＡに結合するＣＡＲを提供する（例えば、ヒトＢＣＭＡ、Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号：Ｑ０２２２３－２）。本明細書で提供されるＢＣＭＡ特異的なＣＡＲには、一本鎖ＣＡＲＳおよび多重鎖（ｍｕｌｔｉｃｈａｉｎ）ＣＡＲが含まれる。ＣＡＲは、モノクローナル抗体の抗原結合特性を利用して、ＭＨＣに制限されない方法で、Ｔ細胞の特異性および反応性をＢＣＭＡにリダイレクトする能力を有する。ＭＨＣに制限されていない抗原認識により、ＣＡＲを発現するＴ細胞は、抗原プロセシングとは無関係に抗原を認識することができるため、腫瘍エスケープの主要なメカニズムを回避することができる。

Ｉ．ＢＣＭＡ特異的なＣＡＲＳ
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＣＡＲは、細胞外リガンド結合ドメイン（例えば、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ））、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインは、１つのポリペプチド、すなわち、一本鎖にある。多重鎖ＣＡＲおよびポリペプチドも、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、多重鎖ＣＡＲは、膜貫通ドメインおよび少なくとも１つの細胞外リガンド結合ドメインを含む第１のポリペプチドと、膜貫通ドメインおよび少なくとも１つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む第２のポリペプチドと、を含み、これらのポリペプチドは一緒になって、多重鎖ＣＡＲを形成する。

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ特異的多重鎖ＣＡＲは、ＩｇＥに対する高親和性受容体（ＦｃεＲＩ）に基づく。肥満細胞および好塩基球で発現するＦｃεＲＩは、アレルギー反応を引き起こす。ＦｃεＲＩは、単一のαサブユニット、単一のβサブユニット、および２つのジスルフィド結合γサブユニットで構成される四量体複合体である。αサブユニットには、ＩｇＥ結合ドメインが含まれている。βおよびγサブユニットには、シグナル伝達を仲介するＩＴＡＭが含まれている。いくつかの実施形態では、ＦｃＲα鎖の細胞外ドメインが削除され、ＢＣＭＡ特異的細胞外リガンド結合ドメインによって置き換えられる。いくつかの実施形態では、多重鎖ＢＣＭＡ特異的ＣＡＲは、ＢＣＭＡ、ＣＤ８αヒンジ、およびＦｃＲβ鎖のＩＴＡＭに特異的に結合するｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＦｃＲγ鎖を含んでもよく、または含まなくてもよい。いくつかの実施形態では、リツキシマブミモトープの２つのコピー（例えば、ＣＰＹＳＮＰＳＬＣ（配列番号３９７）；参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＷＯ２０１６／１２０２１６も参照のこと）が存在する。例示的な構築物が図２１に示されている。

本明細書で提供されるように、ＢＣＭＡＣＡＲの細胞外リガンド結合ドメインは、可撓性リンカーによって結合された標的抗原特異的モノクローナル抗体の軽鎖可変（ＶＬ）領域および重鎖可変（ＶＨ）領域を含むｓｃＦｖを含む。一本鎖可変領域フラグメントは、短い連結ペプチドを使用することによって軽鎖および／または重鎖可変領域を連結することにより作製される（Ｂｉｒｄｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：４２３－４２６，１９８８）。連結ペプチドの例は、１つの可変領域のカルボキシ末端と他の可変領域のアミノ末端との間の約３．５ｎｍを架橋する、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）３（配列番号３３３）を有するＧＳリンカーである。他の配列のリンカーが、設計および使用されている（Ｂｉｒｄｅｔａｌ．，１９８８、上記）。一般に、リンカーは、短い、可撓性ポリペプチドであり、好ましくは約２０以下のアミノ酸残基から構成され得る。次に、リンカーは、薬物の付着または固体支持物への付着のような、追加的機能のために修飾され得る。一本鎖バリアントは、組換えまたは合成的のいずれかで生み出され得る。ｓｃＦｖの合成産生のために、自動合成装置が使用され得る。ＳｃＦｖの組換え産生のために、ｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドを含む好適なプラスミドは、酵母、植物、昆虫もしくは哺乳動物細胞のような真核生物、またはＥ．ｃｏｌｉのような原核生物のいずれかの好適な宿主細胞中に導入され得る。目的のｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドのライゲーションのような日常的な操作によって作製され得る。生じたｓｃＦｖは、当該技術分野で既知の標準的なタンパク質精製技法を使用して単離され得る。

いくつかの実施形態では、本明細書では、ＢＣＭＡＣＡＲが提供され、このＣＡＲは、一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）を含む細胞外結合ドメインを含み、ここで、ｓｃＦｖは、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ここで、ＶＨ領域は、ＶＨ相補性決定領域１（ＶＨＣＤＲ１）、ＶＨ相補性決定領域２（ＶＨＣＤＲ２）、およびＶＨ相補性決定領域３（ＶＨＣＤＲ３）を含み、ＶＬ領域は、ＶＬ相補性決定領域１（ＶＬＣＤＲ１）、ＶＬ相補性決定領域２（ＶＬＣＤＲ２）、およびＶＬ相補性決定領域３（ＶＬＣＤＲ３）を含み、ここで、（ａ）ＶＨＣＤＲ１は、配列番号１２９、１３０、１３１、１５０、１５１、１５２、１５６、１５７、３０１、３０２、３０３、３８１、３８２、３８６、３８７、および３８８からなる群から選択される配列を含み、（ｂ）ＶＨＣＤＲ２は、配列番号１３２、１３３、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１５３、１５４、１５８、１５９、１６０、１６２、１６３、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７１、１７２、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０６、２０７、２０８、３０４、３０５、３０６、３８３、３８４、３８９、および３９０からなる群から選択される配列を含み、（ｃ）ＶＨＣＤＲ３は、配列番号１３４、１３５、１３６、１３７、１４８、１４９、１５５、１６１、１６４、１７０、１７３、１８２、１８９、１９７、２０５、３０７、３０８、３８５、および３９１からなる群から選択される配列を含み、（ｄ）ＶＬＣＤＲ１は、配列番号２０９、２１２、２１５、２１７、２１８、２１９、２２３、２２６、２２８、２３０、２３２、２３５、２３８、２３９、２４１、２４３、２４５、２４６、２４７、２４９、２５０、２５１、２５４、２５７、２６０、２６２、２６５、２６６、２６７、２６９、２７０、２７１、２７３、２７５、２７７、２７９、２８３、２８５、２８７、２９０、２９２、２９５、２９７、２９９、３０９、３７７、４１５、および４１７からなる群から選択される配列を含み、（ｅ）ＶＬＣＤＲ２は、配列番号２１０、２２１、２５２、３１０、３９２、および３９５からなる群から選択される配列を含み、（ｆ）ＶＬＣＤＲ３は、配列番号２１１、２１３、２１４、２１６、２２０、２２２、２２４、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３４、２３６、２３７、２４０、２４２、２４４、２４８、２５３、２５５、２５６、２５８、２５９、２６１、２６３、２６４、２６８、２７２、２７４、２７６、２７８、２８０、２８１、２８２、２８４、２８６、２８８、２８９、２９１、２９３、２９４、２９６、２９８、３００、３１１、３１２、３９３、および４１６からなる群から選択される配列を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書では、ＢＣＭＡＣＡＲが提供され、ここで、ＣＡＲは、配列番号２、３、７、８、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３５、３７、３９、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８３、８７、９２、９５、９７、９９、１０１、１０４、１０６、１１０、１１２、１１４、７６、１１８、１２０、１２２、１２５、１２７、３１３、３１４もしくは４１３に示されるＶＨ配列のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ領域、ならびに／または配列番号１、４、５、６、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、３４、３６、３８、４０、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、３１７、８１、８２、８４、８５、８６、８８、８９、９０、９１、９３、９４、９６、９８、１００、１０２、１０３、１０５、１０７、１０８、１０９、１１１、１１３、１１５、１１６、１１７、１１９、１２１、１２３、１２４、１２６、１２８、３１５、３１６もしくは４１４に示されるＶＬ配列のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む、細胞外リガンド結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、可撓性リンカーによって一緒に連結されている。いくつかの実施形態では、可撓性リンカーは、配列番号３３３に示されるアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、表１に列挙される部分的な軽鎖配列のいずれか１つおよび／または表１に列挙される部分的な重鎖配列のいずれか１つを有する細胞外リガンド結合ドメインを含む。表１では、下線が引かれた配列は、ＫａｂａｔによるＣＤＲ配列であり、太字は、Ｃｈｏｔｈｉａによる配列であるが、ただし、ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ配列に下線が引かれ、ＫａｂａｔＣＤＲ配列が太字で示されている次の重鎖ＣＤＲ２配列は例外である：Ｐ５Ａ２＿ＶＨＶＬ、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０６、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１６、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０１、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２６、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２５、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２２、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１９、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０７、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１８、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０５、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１０、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０４、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２６、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１３、Ａ０２＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０１、Ａ０２＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０８、Ｐ５Ｃ１＿ＶＨＶＬ、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２４、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２７、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２０、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１２、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０９、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０３、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０６、Ｃ０１＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０４、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０４、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２５、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１１、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０８、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２３、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ２９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０９、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ１２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ３０、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１４、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０７、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ０２、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ０５、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１７、ＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿６ｎＭ＿Ｃ２２、およびＣＯＭＢＯ＿Ｒｄ４＿０．６ｎＭ＿Ｃ１１。

本明細書では、ＢＣＭＡに対するＣＡＲの細胞外リガンド結合ドメインのＣＤＲ部分（Ｃｈｏｔｈｉａ、ＫａｂａｔＣＤＲ、およびＣＤＲ接触領域を含む）も提供される。ＣＤＲ領域の決定は、十分に当技術分野の技術の範囲内である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａＣＤＲの組み合わせ（「複合ＣＲ」または「拡張ＣＤＲ」とも呼ばれる）であり得ることが理解される。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＫａｂａｔＣＤＲである。他の実施形態では、ＣＤＲは、ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲである。言い換えれば、２つ以上のＣＤＲを有する実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、複合ＣＤＲ、またはそれらの組み合わせのいずれかであり得る。表２Ａおよび表２Ｂは、本明細書で提供されるＣＤＲ配列の例を提供する。

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲは、細胞外リガンド結合ドメイン、第１の膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含み、細胞外ドメインは、表１の配列番号３３、７２、３９、７６、８３、９２、２５、１１２、または８に示される配列を含む３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、表１の配列番号３４、７３、４０、７７、８４、９３、１８、３８、または８０に示される配列を含む３つのＣＤＲを含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）を含み、第１の膜貫通ドメインは、ＣＤ８α鎖膜貫通ドメインを含み、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインおよび／または４－１ＢＢシグナル伝達ドメインを含む。

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲの細胞外結合領域は、配列番号１１２に示されるアミノ酸配列を含むＶＨ領域を含み、ＶＬ領域は、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲの細胞外結合領域は、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含むＶＨ領域を含み、ＶＬ領域は、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲの細胞外結合領域は、配列番号１５０、１５１、または１５２に示されるアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ１と、配列番号１５３または１５４に示されるアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ２と、配列番号１５５に示されるアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ３と、を含むＶＨ領域を含み、かつ配列番号２０９に示されるアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ１と、配列番号２２１に示されるアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ２と、配列番号２２２に示されるアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ３と、を含むＶＬ領域を含む。

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲの細胞外結合領域は、配列番号１５１、１５６、または１５７に示されるアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ１と、配列番号１５８または１５９に示されるアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ２と、配列番号１５５に示されるアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ３と、を含むＶＨ領域を含み、かつ配列番号２０９に示されるアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ１と、配列番号２２１に示されるアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ２と、配列番号２２５に示されるアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ３と、を含むＶＬ領域を含む。

本明細書に記載のＢＣＭＡ特異的ＣＡＲのＢＣＭＡ（例えば、ヒトＢＣＭＡ（例えば、配列番号３５４））に対する結合親和性（Ｋ_D）は、約０．００２～約６５００ｎＭであり得る。いくつかの実施形態では、結合親和性は、約６５００ｎｍ、６０００ｎｍ、５９８６ｎｍ、５５６７ｎｍ、５５００ｎｍ、４５００ｎｍ、４０００ｎｍ、３５００ｎｍ、３０００ｎｍ、２５００ｎｍ、２１３４ｎｍ、２０００ｎｍ、１５００ｎｍ、１０００ｎｍ、７５０ｎｍ、５００ｎｍ、４００ｎｍ、３００ｎｍ、２５０ｎｍ、２００ｎＭ、１９３ｎＭ、１００ｎＭ、９０ｎＭ、５０ｎＭ、４５ｎＭ、４０ｎＭ、３５ｎＭ、３０ｎＭ、２５ｎＭ、２０ｎＭ、１９ｎｍ、１８ｎｍ、１７ｎｍ、１６ｎｍ、１５ｎＭ、１０ｎＭ、８ｎＭ、７．５ｎＭ、７ｎＭ、６．５ｎＭ、６ｎＭ、５．５ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、０．５ｎＭ、０．３ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０１ｎＭ、または０．００２ｎＭのいずれかである。いくつかの実施形態では、結合親和性は、約６５００ｎｍ、６０００ｎｍ、５５００ｎｍ、５０００ｎｍ、４０００ｎｍ、３０００ｎｍ、２０００ｎｍ、１０００ｎｍ、９００ｎｍ、８００ｎｍ、２５０ｎＭ、２００ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭ、７．５ｎＭ、７ｎＭ、６．５ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、４．５ｎＭ、４ｎＭ、３．５ｎＭ、３ｎＭ、２．５ｎＭ、２ｎＭ、１．５ｎＭ、１ｎＭ、または０．５ｎＭのいずれか未満である。

本開示に従うＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞の活性化および免疫応答を生じる標的への細胞外リガンド結合ドメインの結合に続く細胞内シグナル伝達に関与する。細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲが発現する免疫細胞の通常のエフェクター機能のうちの少なくとも１つを活性化する能力を有する。例えば、Ｔ細胞のエフェクター機能は、サイトカインの分泌を含む細胞溶解活性またはヘルパー活性であり得る。

いくつかの実施形態では、ＣＡＲにおける使用のための細胞内シグナル伝達ドメインは、これらの配列の任意の類似体またはバリアント、および同じ機能的能力を有する任意の合成配列と同様に、例えば、限定なく、抗原受容体の会合に続くシグナル形質導入を開始することと協調して作用するＴ細胞受容体および共受容体の細胞質配列であり得る。細胞内シグナル伝達ドメインは、細胞質シグナル伝達配列の２つの異なるクラス、抗原依存性の一次活性化を開始するものと、抗原独立様式で作用して二次的または共刺激シグナルを提供するものと、を含む。一次細胞質シグナル伝達配列は、ＩＴＡＭの免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフとして知られているシグナル伝達モチーフを含み得る。ＩＴＡＭは、ｓｙｋ／ｚａｐ７０クラスのチロシンキナーゼに対する結合部位として機能するさまざまな受容体の細胞質内尾部において見出される明確に定義されたシグナル伝達モチーフである。本開示において使用されるＩＴＡＭの例は、非限定的な例として、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＦｃＲε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄに由来するものを含み得る。いくつかの実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３２４で示されるアミノ酸配列と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、９５％、９７％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含み得る。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激分子のドメインを含む。

いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、４１ＢＢ（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＡ５３１３３．）およびＣＤ２８（ＮＰ＿００６１３０．１）のフラグメントからなる群から選択される共刺激分子の一部を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３２３および配列番号３２７で示されるアミノ酸配列と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、９５％、９７％、または９９％の配列同一性を含むアミノ酸配列を含む。

ＣＡＲは、細胞の表面膜上に発現される。したがって、ＣＡＲは、膜貫通ドメインを含み得る。本明細書に開示されるＣＡＲに好適な膜貫通ドメインは、（ａ）細胞、好ましくは、例えば、限定なく、リンパ球細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞のような免疫細胞の表面上で発現される能力と、（ｂ）事前定義された標的細胞に対して免疫細胞の細胞応答を方向付けるために、リガンド結合ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインと相互作用する能力と、を有する。膜貫通ドメインは、天然または合成供給源のいずれかに由来し得る。膜貫通ドメインは、任意の膜結合または膜貫通タンパク質に由来し得る。非限定的な例として、膜貫通ポリペプチドは、ＣＤ３複合体、ＩＬ－２受容体ｐ５５（鎖）、ｐ７５（β鎖）もしくはγ鎖、Ｆｃ受容体のサブユニット鎖、特にＦｃγ受容体ＩＩＩもしくはＣＤタンパク質を構成するα、β、γまたはδポリペプチドのようなＴ細胞受容体のサブユニットであり得る。代替的には、膜貫通ドメインは、合成的であり得、ロイシンおよびバリンのような主に疎水性残基を含み得る。いくつかの実施形態では、該膜貫通ドメインは、ヒトＣＤ８α鎖（例えば、ＮＰ＿００１１３９３４５．１）に由来する。膜貫通ドメインは、細胞外リガンド結合ドメインと該膜貫通ドメインとの間にストークドメインをさらに含み得る。ストークドメインは、最大３００アミノ酸、好ましくは１０～１００アミノ酸、最も好ましくは２５～５０アミノ酸を含み得る。ストーク領域は、ＣＤ８、ＣＤ４、またはＣＤ２８の細胞外領域のすべてもしくは一部から、または抗体定常領域のすべてもしくは一部からのような、天然に発生する分子のすべてまたは一部に由来し得る。代替的には、ストークドメインは、天然に発生するストーク配列に対応する合成配列であり得るか、または完全に合成ストーク配列であり得る。いくつかの実施形態では、該ストークドメインは、ヒトＣＤ８α鎖（例えば、ＮＰ＿００１１３９３４５．１）の一部である。別の特定の実施形態では、該膜貫通ドメインおよびヒンジドメインは、ヒトＣＤ８α鎖の一部を含み、好ましくは、配列番号３１８からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは、少なくとも９０％、９５％、９７％、または９９％の配列同一性を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＡＲは、ＢＣＭＡ、ＣＤ８αヒトヒンジおよび膜貫通ドメイン、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、ならびに４－１ＢＢシグナル伝達ドメインに特異的に結合する細胞外リガンド結合ドメインを含み得る。

表３は、本明細書に開示されるＣＡＲにおいて使用され得るドメインの例示的な配列を提供する。

別の態様では、本開示は、本明細書に記載のＣＡＲおよびポリペプチドのいずれかをコードするポリヌクレオチドを提供する。ポリヌクレオチドは、当技術分野で知られている手順によって作製および発現させることができる。

別の態様では、本発明は、本開示の細胞のうちのいずれかを含む組成物（例えば、医薬組成物）を提供する。

ＩＩ．操作された免疫細胞
本開示は、本明細書に記載のＢＣＭＡＣＡＲポリヌクレオチドのいずれかを含む操作された免疫細胞を提供する。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲは、レンチウイルスベクターを用いて免疫細胞に導入される。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、レシピエント免疫細胞に組み込まれる自己不活化レンチウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲは、プラスミドベクターを介して導入遺伝子として免疫細胞に導入される。いくつかの実施形態では、プラスミドベクターはまた、例えば、ベクターを受けた細胞の同定および／または選択を提供する選択マーカーを含むことができる。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、非ウイルス法を使用して免疫細胞に導入することができる。

例示的なベクター構築物を図２１に示す。

本明細書で提供されるＢＣＭＡＣＡＲのいずれかを発現する操作された免疫細胞を生成する方法は、参照によりその全体が組み込まれるＷＯ／２０１６／１６６６３０に記載されている。

本明細書で提供されるのは、上記の方法のいずれか１つに従って得られた単離された免疫細胞である。異種ＤＮＡを発現することができる任意の免疫細胞は、目的のＣＡＲを発現する目的のために使用され得る。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、例えば、限定なく、幹細胞に由来し得る。幹細胞は、成人幹細胞、非ヒト胚性幹細胞、より具体的には非ヒト幹細胞、臍帯血幹細胞、前駆細胞、骨髄幹細胞、人工多能性幹細胞、全能性幹細胞または造血幹細胞であり得る。代表的なヒト細胞は、ＣＤ３４＋細胞である。単離された細胞はまた、樹状細胞、キラー樹状細胞、肥満細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、または炎症性Ｔリンパ球、細胞傷害性Ｔリンパ球、調節性Ｔリンパ球、もしくはヘルパーＴリンパ球からなる群から選択されるＴ細胞であり得る。いくつかの実施形態では、細胞は、ＣＤ４＋Ｔリンパ球およびＣＤ８＋Ｔリンパ球からなる群に由来し得る。

いくつかの実施形態では、本開示による単離された細胞は、ＣＤ５２、ＧＲ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、Ｔｉｍ３、ＢＴＬＡ、ＢＹ５５、ＴＩＧＩＴ、Ｂ７Ｈ５、ＬＡＩＲ１、ＳＩＧＬＥＣ１０、２Ｂ４、ＨＬＡ、ＴＣＲαおよびＴＣＲβからなる群から選択される１つの不活化遺伝子を含み、かつ／またはＣＡＲ、多重鎖ＣＡＲおよび／またはｐＴα導入遺伝子を発現する。いくつかの実施形態では、単離された細胞は、多重鎖ＣＡＲを含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、本開示による単離された細胞は、ＣＤ５２およびＧＲ、ＣＤ５２およびＴＣＲα、ＣＤＲ５２およびＴＣＲβ、ＧＲおよびＴＣＲα、ＧＲおよびＴＣＲβ、ＴＣＲαおよびＴＣＲβ、ＰＤ－１およびＴＣＲα、ＰＤ－１およびＴＣＲβ、ＣＴＬＡ－４およびＴＣＲα、ＣＴＬＡ－４およびＴＣＲβ、ＬＡＧ３およびＴＣＲα、ＬＡＧ３およびＴＣＲβ、Ｔｉｍ３およびＴＣＲα、Ｔｉｍ３およびＴＣＲβ、ＢＴＬＡおよびＴＣＲα、ＢＴＬＡおよびＴＣＲβ、ＢＹ５５およびＴＣＲα、ＢＹ５５およびＴＣＲβ、ＴＩＧＩＴおよびＴＣＲα、ＴＩＧＩＴおよびＴＣＲβ、Ｂ７Ｈ５およびＴＣＲα、Ｂ７Ｈ５およびＴＣＲβ、ＬＡＩＲ１およびＴＣＲα、ＬＡＩＲ１およびＴＣＲβ、ＳＩＧＬＥＣ１０およびＴＣＲα、ＳＩＧＬＥＣ１０およびＴＣＲβ、２Ｂ４およびＴＣＲα、２Ｂ４およびＴＣＲβからなる群から選択される２つの不活化遺伝子を含み、かつ／またはＣＡＲ、多重鎖ＣＡＲおよびｐＴα導入遺伝子を発現する。

遺伝子の不活化は、当業者によって実施される方法によって実施することができる。この方法には、ジンクフィンガー、ＴＡＬＥＮ（登録商標）、およびＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓに基づくシステムを使用した遺伝子の不活化が含まれるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、免疫細胞を含むＢＣＭＡＣＡＲは、不活化されたＣＤ５２遺伝子を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ５２遺伝子の１つのコピーのみが不活化される。

いくつかの実施形態では、免疫細胞を含むＢＣＭＡＣＡＲは、不活化されたＴＣＲα遺伝子を有する。

いくつかの実施形態では、免疫細胞を含むＢＣＭＡＣＡＲは、不活化されたＴＣＲβ遺伝子を有する。

いくつかの実施形態では、ＴＡＬＥＮ（登録商標）は、遺伝子不活化のために使用される。そのような実施形態では、ＴＡＬＥＮ（登録商標）による遺伝子不活化の効率は１００％ではなく、結果として生じるＴＣＲαβ陰性Ｔ細胞は、凍結保存の前に残留ＴＣＲαβ陽性Ｔ細胞を枯渇させることによって濃縮される。しかしながら、ＣＤ５２陰性細胞は精製されていないため、ＣＤ５２陰性細胞の頻度が異なり、通常は６０～８０％の細胞産物が生成される。したがって、いくつかの実施形態では、本開示のＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞の遺伝子型は、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ＋＿ＴＣＲαβ－＿ＣＤ５２＋／－Ｔ細胞である。

いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、ＴＣＲα遺伝子および／またはＴＣＲβ遺伝子（複数可）を不活化することにより、本開示に従って、細胞において機能的ではなくなる。いくつかの実施形態では、個体に由来する改変細胞を得る方法が提供され、細胞は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）シグナル伝達経路とは独立して増殖することができる。ＭＨＣシグナル伝達経路とは独立して増殖することができ、この方法によって得られやすい改変細胞は、本開示の範囲に含まれる。本明細書に開示される改変細胞は、宿主対移植片（ＨｖＧ）拒絶および移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）に対して治療を必要とする対象を治療するために使用することができる。したがって、宿主対移植片（ＨｖＧ）拒絶および移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）に対して治療を必要とする対象を治療する方法であって、該対象に不活化ＴＣＲαおよび／またはＴＣＲβ遺伝子を含む有効量の改変細胞を投与することによって該対象を治療することを含む方法は、本開示の範囲内である。

いくつかの実施形態では、免疫細胞は、１つ以上の化学療法薬に耐性があるように操作される。化学療法薬は、例えば、プリンヌクレオチド類似体（ＰＮＡ）であり得、したがって、免疫細胞を、養子免疫療法と化学療法を組み合わせた癌治療に適したものにする。例示的なＰＮＡには、例えば、クロファラビン、フルダラビン、およびシタラビンが、単独でまたは組み合わせて含まれる。ＰＮＡは、デオキシシチジンキナーゼ（ｄＣＫ）によって一リン酸、二リン酸、および三リン酸のＰＮＡに代謝される。それらの三リン酸型は、ＤＮＡ合成についてＡＴＰと競合し、アポトーシス促進剤として作用し、トリヌクレオチド産生に関与するリボヌクレオチドレダクターゼ（ＲＮＲ）の強力な阻害剤である。本明細書で提供されるのは、不活化されたｄＣＫ遺伝子を含むＢＣＭＡ特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ｄＣＫノックアウト細胞は、例えば、ｍＲＮＡのエレクトロポレーションによる、ｄＣＫ遺伝子に指向した特定のＴＡＬヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチドを使用するＴ細胞のトランスフェクションによって作製される。ｄＣＫノックアウトＢＣＭＡ特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞は、例えば、クロロファラビンおよび／またはフルダラビンを含むＰＮＡに耐性があり、ＢＣＭＡ発現細胞に対するＴ細胞の細胞傷害性活性を維持する。

いくつかの実施形態では、本開示の単離された細胞または細胞株は、ｐＴαまたはその機能的バリアントを含み得る。いくつかの実施形態では、単離された細胞または細胞株は、ＴＣＲα遺伝子を不活化することによってさらに遺伝子改変され得る。

いくつかの実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、例えば、ＲＱＲ８などの安全スイッチをコードするポリヌクレオチドを含む。例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１３１５３３９１Ａを参照されたい。ポリヌクレオチドを含むＣＡＲ－Ｔ細胞では、安全スイッチポリペプチドは、ＣＡＲ－Ｔ細胞の表面に発現している。いくつかの実施形態では、安全スイッチポリペプチドは、配列番号３４２に示されるアミノ酸配列を含む。

ＣＰＹＳＮＰＳＬＣＳＧＧＧＧＳＥＬＰＴＱＧＴＦＳＮＶＳＴＮＶＳＰＡＫＰＴＴＴＡＣＰＹＳＮＰＳＬＣＳＧＧＧＧＳＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＨＲＮＲＲＲＶＣＫＣＰＲＰＶＶ（配列番号３４２）

安全スイッチポリペプチドはまた、アミノ末端にシグナルペプチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、安全スイッチポリペプチドは、配列番号４００に示されるアミノ酸配列を含む。

ＭＧＴＳＬＬＣＷＭＡＬＣＬＬＧＡＤＨＡＤＡＣＰＹＳＮＰＳＬＣＳＧＧＧＧＳＥＬＰＴＱＧＴＦＳＮＶＳＴＮＶＳＰＡＫＰＴＴＴＡＣＰＹＳＮＰＳＬＣＳＧＧＧＧＳＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＨＲＮＲＲＲＶＣＫＣＰＲＰＶＶ（配列番号４００）

安全スイッチポリペプチドがＣＡＲ－Ｔ細胞の表面で発現される場合、リツキシマブがポリペプチドのＲエピトープに結合すると、細胞の溶解を引き起こす。リツキシマブの２つ以上の分子は、細胞表面で発現されるポリペプチドごとに結合する可能性がある。ポリペプチドの各Ｒエピトープは、リツキシマブの別々の分子に結合する可能性がある。ＢＣＭＡ特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞の欠失は、例えば、対象にリツキシマブを投与することによって、インビボで起こり得る。移入された細胞を削除する決定は、例えば、許容できないレベルの毒性が検出された場合など、移入された細胞に起因する、対象において検出された望ましくない影響から生じ得る。

いくつかの実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、特定の抗体によって認識される特異性を有するｓｃＦｖ内の選択されたエピトープを含む。例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、２０１６年１月２５日に出願されたＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１６／０５１４６７号、ＷＯ２０１６／１２０２１６、「ｍＡｂ－ＤＲＩＶＥＮＣＨＩＭＥＲＩＣＡＮＴＩＧＥＮＲＥＣＥＰＴＯＲＳＹＳＴＥＭＳＦＯＲＳＯＲＴＩＮＧ／ＤＥＰＬＥＴＩＮＧＥＮＧＩＮＥＥＲＥＤＩＭＭＵＮＥＣＥＬＬＳ」を参照されたい。そのようなエピトープは、ＣＡＲ－Ｔ細胞の選別および／または枯渇を容易にする。エピトープは、当技術分野で知られている任意の数のエピトープから選択することができる。いくつかの実施形態では、エピトープは、例えば、限定されないが、リツキシマブによって認識されるＣＤ２０エピトープなどの、医学的使用のために承認されたモノクローナル抗体の標的であり得る。いくつかの実施形態では、エピトープは、配列番号３９７に示されるアミノ酸配列を含む。

ＣＰＹＳＮＰＳＬＣ（配列番号３９７）
いくつかの実施形態では、エピトープは、ＣＡＲ内に位置する。例えば、限定されることなく、エピトープは、ｓｃＦｖとＣＡＲのヒンジとの間に位置することができる。いくつかの実施形態では、リンカーによって分離された同じエピトープの２つの例が、ＣＡＲで使用され得る。例えば、配列番号３９８に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドは、軽鎖可変領域とヒンジとの間に位置するＣＡＲ内で使用することができる。

ＧＳＧＧＧＧＳＣＰＹＳＮＰＳＬＣＳＧＧＧＧＳＣＰＹＳＮＰＳＬＣＳＧＧＧＧＳ（配列番号３９８）
いくつかの実施形態では、エピトープ特異的抗体は、細胞傷害性薬とコンジュゲートされ得る。補体系の構成要素（複数可）が移植された操作された抗体を使用することにより、ＣＤＣ細胞傷害性を促進することも可能である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞の活性化は、エピトープを認識する抗体を使用して細胞を枯渇させることによって調節することができる。

ＩＩＩ．治療適用
上記の方法によって得られた単離された細胞、またはそのような単離された細胞に由来する細胞株は、薬剤として使用することができる。いくつかの実施形態では、そのような薬剤は、ＭＭを治療するために使用することができる。いくつかの実施形態では、ＭＭは、難治性のＭＭである。いくつかの実施形態では、ＭＭは、再発性のＭＭである。いくつかの実施形態では、ＭＭは、難治性／再発性のＭＭである。

いくつかの実施形態では、対象は、多発性骨髄腫について、いずれの事前治療も受けていない。いくつかの実施形態では、対象は、多発性骨髄腫について、少なくとも１つ、２つ、または３つの事前治療を受けている。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される投薬レジメンは、第一選択治療である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される投薬レジメンは、第二選択治療である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される投薬レジメンは、第三選択治療である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される投薬レジメンは、第四選択治療である。いくつかの実施形態では、対象は、再発性のＭＭを有する。いくつかの実施形態では、対象は、難治性のＭＭを有する。いくつかの実施形態では、対象は、難治性および再発性のＭＭを有する。

いくつかの実施形態では、本開示に従う単離された細胞、または単離された細胞に由来する細胞株は、癌の治療を必要とする対象における癌の治療のための薬剤の製造に使用することができる。

また、本明細書では、対象を治療するための方法も、提供される。いくつかの実施形態では、この方法は、本開示の免疫細胞を、それを必要とする対象に提供することを含む。いくつかの実施形態では、この方法は、本開示の形質転換された免疫細胞を、それを必要とする対象に投与する工程を含む。対象は、男性または女性、成人、青年、または小児であり得る。いくつかの実施形態では、対象は、ヒト対象である。

いくつかの実施形態では、本開示のＴ細胞は、インビボでのＴ細胞増殖を受けることができ、かつ長期間存続することができる。

本開示の治療方法は、改善的、治癒的または予防的であり得る。本開示の方法は、自己免疫療法の一部または同種異系免疫療法治療の一部のいずれかであり得る。本発明は、同種異系免疫療法に特に好適である。ドナーからのＴ細胞は、標準プロトコルを使用して非アロ反応性細胞中に形質転換され、必要に応じて複製され、それにより１名または数名の対象に投与され得るＣＡＲ－Ｔ細胞を産生することができる。かかるＣＡＲ－Ｔ細胞療法は、「在庫を有する」治療用製品として利用可能にされ得る。図１７および１８は、自家ＣＡＲ－Ｔ療法の限界、および同種異系療法の利点を説明している。

開示された方法で使用できる細胞は、前の章で説明されている。治療は、ＭＭと診断された対象を治療するために使用することができる。成人の腫瘍／癌および小児の腫瘍／癌も含まれる。いくつかの実施形態では、治療は、抗体療法、化学療法、サイトカイン療法、樹状細胞療法、遺伝子療法、ホルモン療法、レーザー光療法および放射線療法の群から選択されるＭＭに対する１つ以上の療法と組み合わせることができる。

いくつかの実施形態では、治療は、免疫抑制治療を受けている対象中に投与され得る。実際、本開示は、好ましくは、かかる免疫抑制剤の受容体をコードする遺伝子の不活化に起因して、少なくとも１つの免疫抑制剤に対して耐性を付与された細胞または細胞の集団に依存する。この態様では、免疫抑制治療は、対象内での本開示に従う免疫細胞の選択および増殖を助けるはずである。

本開示に従う細胞または細胞集団の投与は、エアロゾル吸入、注射、摂取、輸血、移植（ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）または移植（ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）によるものを含む、任意の簡便な様式で実施され得る。本明細書に記載される組成物は、皮下、皮内、腫瘍内、結節内、髄内、筋肉内、静脈内もしくはリンパ内注射、または腹腔内で対象に投与され得る。一実施形態では、本開示の細胞組成物は、好ましくは、静脈内注射によって投与される。

いくつかの実施形態では、本開示の操作されたＢＣＭＡＣＡＲ発現免疫細胞は、注入のために製剤化される。いくつかの実施形態では、細胞は、約５％のＤＭＳＯを含む溶液中で製剤化される。一実施形態では、１４×１０＾６のＢＣＭＡ－ＣＡＲ－Ｔ細胞／ｍＬは、約５％のＤＭＳＯを含む溶液中で製剤化される。さらなる実施形態では、製剤は、５％の最終濃度のジメチルスルホキシドを生じる、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）基礎溶液およびＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０の１：１混合物を含む。いくつかの実施形態では、製剤の有効性成分含量は、１４×１０＾６のＢＣＭＡ－ＣＡＲ－Ｔ細胞／ｍＬである。いくつかの実施形態では、この製剤化された薬品は、公称容量１ｍＬの一体型ストッパーを備えた２ｍＬの閉鎖系バイアルで供給される。

いくつかの実施形態では、本開示のＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ＋＿ＴＣＲαβ－＿ＣＤ５２＋／－Ｔ細胞であり、注入のための懸濁液として製剤化される。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ＋＿ＴＣＲαβ－＿ＣＤ５２＋／－Ｔ細胞は、５％の最終濃度のジメチルスルホキシドを生じる、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）基礎溶液およびＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０の１：１混合液中で製剤化される。いくつかの実施形態では、製剤の有効性成分含量は、１４×１０＾６のＢＣＭＡ－ＣＡＲ＋＿ＴＣＲαβ－＿ＣＤ５２＋／－Ｔ細胞／ｍＬである。

ＩＶ．リンパ球枯渇
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇（ＬＤ）レジメンは、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞の初回のおよび／または後続の投与の前に対象に実施される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇レジメンは、ＣＡＲ－Ｔ細胞の初回のおよび／または後続の投与と同時に対象に実施される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇レジメンは、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞の初回のおよび／または後続の投与の前、最中、および／または後に実施される。

好適なＬＤレジメンは、本明細書に記載されている、および／または当技術分野で知られている。いくつかの実施形態では、ＬＤは、ＣＡＲ－Ｔ注入の前、ＣＡＲ－Ｔ注入と同時、またはＣＡＲ－Ｔ注入の後に開始する。ＬＤ投与の用量およびタイミングは、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔの最初の投与またはその後の投与に関して適合させることができる。いくつかの実施形態では、ＬＤの期間は約３～５日である。いくつかの実施形態では、ＬＤの終了とＣＡＲ－Ｔ投与の開始との間の時間枠は、約２日～約２週間である。いくつかの実施形態では、ＬＤは、ある用量のＣＡＲ－Ｔ細胞の投与の約１５～７日前に開始される。いくつかの実施形態では、ＬＤは、ある用量のＣＡＲ－Ｔ細胞の投与の約１９～５日前に開始される。いくつかの実施形態では、ＬＤは、ある用量のＣＡＲ－Ｔ細胞の投与の約３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０日前に開始される。いくつかの実施形態では、ＬＤレジメンの期間は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、または１４日である。いくつかの実施形態では、ある用量のＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＬＤの終了の約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、または１４日後に投与される。

いくつかの実施形態では、ＬＤレジメンは、１つ以上の化学療法薬の投与を含む。

いくつかの実施形態では、ＬＤレジメンは、ほとんどのリンパ球細胞で発現される細胞表面糖タンパク質であるヒト分化群（ＣＤ）５２抗原を認識する抗体などの抗ＣＤ５２抗体の投与を含む。本明細書で使用される場合、ＣＤ５２モノクローナル抗体は、２１～２８ｋＤの細胞表面糖タンパク質ＣＤ５２に対して指向したものである。ＣＤ５２は、すべてのヒト末梢血リンパ球および単球／マクロファージの少なくとも９５％に存在する豊富な分子（細胞あたり約５×１０⁵の抗体結合部位）である。本明細書に記載の方法および組成物で使用するための例示的なＣＤ５２抗体には、例えば、アレムツズマブが含まれる。いくつかの実施形態では、ＣＤ５２抗体は、以下の表４に示されるように、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列を含む。

いくつかの実施形態では、ＣＤ５２抗体は、以下の表５に示される配列を含むＶＨおよび／またはＶＬを含む。

いくつかの実施形態では、ＣＤ５２抗体は、配列番号８の配列を有するＶＨ、または配列番号４０８に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ５２抗体は、配列番号４１０の配列を有するＶＬ、または配列番号４１０に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ５２抗体は、配列番号４０８の配列を有するＶＨ、および配列番号４１０の配列を有するＶＬを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ５２抗体は、配列番号４０９のＤＮＡ配列によってコードされるＶＨ、および配列番号４１１のＤＮＡ配列によってコードされるＶＬを含む。

いくつかの実施形態では、抗ＣＤ５２抗体は、組換えヒト化ＩｇＧ１カッパモノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ５２抗体はアレムツズマブである。アレムツズマブは、２１～２８ｋＤの細胞表面糖タンパク質であるＣＤ５２に対する組換えＤＮＡ由来のヒト化モノクローナル抗体である。例えば、Ｓａｉｆら、ＰｅｄｉａｔｒＴｒａｎｓｐｌａｎｔ２０１５Ｍａｒ；１９（２）：２１１－８を参照されたい。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ５２抗体は、アレムツズマブのＣＤＲから単離または誘導された１つ以上のＣＤＲ配列を含む。いくつかの実施形態では抗ＣＤ５２抗体は、配列番号４０８の配列、または配列番号４０８に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では抗ＣＤ５２抗体は、配列番号４１０の配列、または配列番号４１０に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ５２抗体は、配列番号４０２の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４０３の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号４０４の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４０５の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４０６の配列を含むＬＣＤＲ１、および／または配列番号４０７の配列を含むＬＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ５２抗体は、配列番号４０２の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４０３の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号４０４の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４０５の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４０６の配列を含むＬＣＤＲ１、および配列番号４０７の配列を含むＬＣＤＲ３を含み、ここで、抗ＣＤ５２抗体は、配列番号４０８および／または配列番号４１０の配列、あるいは配列番号４０８および／または配列番号４１０に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。

いくつかの実施形態では、ＬＤは、ＣＤ５２抗体のみを投与することを含む。

いくつかの実施形態では、ＬＤは、療法の組み合わせの投与を含む。いくつかの実施形態では、組み合わせは、抗ＣＤ５２薬（例えば、配列番号４０８および／または配列番号４１０の配列を含む抗体などの抗ＣＤ５２抗体（総用量は約０．３～約１ｍｇ／ｋｇ、または均一用量は約３０ｍｇ～約４０ｍｇ、約２５～約６０ｍｇ、約６０ｍｇ～約９０ｍｇ、または約１００ｍｇ～約１２０ｍｇ））を伴う、または伴うことなく、フルダラビン（約９０～１５０ｍｇ／ｍ²の範囲の総用量）およびシクロホスファミド（約１０００～４０００ｍｇ／ｍ²の範囲の総用量）を含む。いくつかの実施形態では、組み合わせは、抗ＣＤ５２薬（例えば、ＣＤ５２抗体（総用量は約０．３～約１ｍｇ／ｋｇ、または均一用量は約３０ｍｇ～約４０ｍｇ、約２５～約６０ｍｇ、約６０ｍｇ～約９０ｍｇ、または約１００ｍｇ～約１２０ｍｇ））を伴う、または伴うことなく、フルダラビン（約３０ｍｇ／ｍ²）およびシクロホスファミド（約５００～６００ｍｇ／ｍ²の範囲の総用量）を含む。いくつかの実施形態では、組み合わせは、抗ＣＤ５２薬（例えば、ＣＤ５２抗体（総用量は約０．３～約１ｍｇ／ｋｇ、または均一用量は約３０ｍｇ～約４０ｍｇ、約２０ｍｇ～約３０ｍｇ、約２５ｍｇ～約６０ｍｇ、約６０ｍｇ～約９０ｍｇ、または約１００ｍｇ～約１２０ｍｇ））を伴う、または伴うことなく、フルダラビン（約３０ｍｇ／ｍ²）およびシクロホスファミド（約３００ｍｇ／ｍ²）を含む。いくつかの実施形態では、組み合わせは、抗ＣＤ５２薬（例えば、ＣＤ５２抗体（総用量は約０．３～約１ｍｇ／ｋｇ、または均一用量は約３０ｍｇ～約４０ｍｇ、約２０ｍｇ～約３０ｍｇ、約２５ｍｇ～約６０ｍｇ、約６０ｍｇ～約９０ｍｇ、または約１００ｍｇ～約１２０ｍｇ））を伴う、または伴うことなく、フルダラビン（約９０ｍｇ／ｍ²）およびシクロホスファミド（約９００ｍｇ／ｍ²）を含む。いくつかの実施形態では、組み合わせは、抗ＣＤ５２薬（例えば、抗ＣＤ５２抗体、約１ｍｇ／ｋｇ）を伴う、または伴うことなく、フルダラビン（約９０ｍｇ／ｍ²）、シクロホスファミド（約１５００ｍｇ／ｍ²）を含む。いくつかの実施形態では、組み合わせは、抗ＣＤ５２薬（例えば、抗ＣＤ５２抗体、総用量は約０．３～約１ｍｇ／ｋｇ、または均一用量は約３０ｍｇ～約４０ｍｇ、約２５～約６０ｍｇ、約６０ｍｇ～約９０ｍｇ、または約１００ｍｇ～約１２０ｍｇ）を伴う、または伴うことなく、フルダラビン（約１５０ｍｇ／ｍ²）およびシクロホスファミド（約１３０ｍｇ／ｋｇ）を含む。いくつかの実施形態では、組み合わせは、抗ＣＤ５２薬（例えば、抗ＣＤ５２抗体（総用量は約０．３～約１ｍｇ／ｋｇ、または均一用量は約３０ｍｇ～約４０ｍｇ、約２５～約６０ｍｇ、または約１００ｍｇ～約１２０ｍｇ））を伴う、または伴うことなく、フルダラビン（約１５０ｇ／ｍ²）およびシクロホスファミド（約１２０ｍｇ／ｋｇまたは１３０ｍｇ／ｋｇ）を含む。いくつかの実施形態では、組み合わせは、抗ＣＤ５２薬（例えば、抗ＣＤ５２抗体、約１３ｍｇ／日）を伴う、または伴うことなく、フルダラビン（約３０ｍｇ／ｍ²／日）、およびシクロホスファミド（約３００ｍｇ／ｍ²／日）を含む。いくつかの実施形態では、組み合わせは、抗ＣＤ５２薬（例えば、抗ＣＤ５２抗体、約１０ｍｇ／日）を伴う、または伴うことなく、フルダラビン（約３０ｍｇ／ｍ²／日）、およびシクロホスファミド（約３００ｍｇ／ｍ²／日）を含む。いくつかの実施形態では、組み合わせは、シクロホスファミドおよび抗ＣＤ５２薬（例えば、抗ＣＤ５２抗体）を含む。いくつかの実施形態では、これらの上記の用量は、１日の間に投与される。いくつかの実施形態では、これらの上記の用量は、複数の日数にわたって投与される。

いくつかの実施形態では、フルダラビンおよびシクロホスファミドは１日目に投与され、抗ＣＤ５２抗体（例えば、配列番号４０８および／または配列番号４１０の配列を含む抗体）は２日目に投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビンおよびシクロホスファミドは、ＣＡＲ－Ｔ細胞の投与の前に１日目に投与され、抗ＣＤ５２抗体（例えば、配列番号４０８および／または配列番号４１０の配列を含む抗体）は、２日目に投与される。ここで、２日目は、ＣＡＲ－Ｔ細胞が投与されるのと同じ日であるか、または２日目は、ＣＡＲ－Ｔ細胞が投与された後である。いくつかの実施形態では、フルダラビンおよびシクロホスファミドは１日目に投与され、ＣＡＲ－Ｔ細胞は２日目に投与され、抗ＣＤ５２抗体（例えば、配列番号４０８および／または配列番号４１０の配列を含む抗体）は、２日目から少なくとも約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、または約１２週間後に投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビンおよびシクロホスファミドは、ＣＡＲ－Ｔ細胞の投与前に投与され、抗ＣＤ５２抗体（例えば、配列番号４０８および／または配列番号４１０の配列を含む抗体）は、ＣＡＲ－Ｔ細胞の投与から少なくとも約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、または約１２週間後に投与される。

いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇レジメンは、フルダラビンおよびシクロホスファミド（ＦＣ）の投与を含む。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇レジメンは、フルダラビンおよび抗ＣＤ５２抗体（例えば、配列番号４０８および／または配列番号４１０の配列を含む抗体）（ＦＡ）の投与を含む。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇レジメンは、シクロホスファミドおよび抗ＣＤ５２抗体（例えば、配列番号４０８および／または配列番号４１０の配列を含む抗体）（ＣＡ）の投与を含む。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇レジメンは、フルダラビン、シクロホスファミド、および抗ＣＤ５２抗体（例えば、配列番号４０８および／または配列番号４１０の配列を含む抗体）（ＦＣＡ）の投与を含む。

ＣＡＲ－Ｔ細胞の初回または２回目／後続の投与前の特定のリンパ球枯渇レジメン薬および用量の選択は、患者の血液学的分析および血液学的回復に基づいて決定することができる。再投与の場合、第２のリンパ球枯渇レジメンは、第１のリンパ球枯渇レジメンと比較して多かれ少なかれ強烈であり得る（例えば、リンパ球、好中球の回復、および１回目の投与後のウイルスの再活性化に基づく）。例えば、再投与時に、リンパ球および好中球のレベルが高い場合、強力または積極的な（ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ）リンパ球枯渇レジメンを使用することができる。あるいは、再投与時に、リンパ球レベルが低い場合は、より弱いまたはより攻撃的でない（ｌｅｓｓａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ）リンパ球枯渇レジメンを使用することができる。いくつかの実施形態では、再投与時の芽球の数が多い場合、強力なまたは積極的なリンパ球枯渇レジメンが使用される。いくつかの実施形態では、再投与時の芽球の数が少ない場合、より弱いまたはより攻撃的でないリンパ球枯渇レジメンが使用される。

いくつかの実施形態では、ＬＤレジメンの強度の増加は、再投与時に適用され得る（抗ＣＤ５２薬の有無にかかわらず）。いくつかの実施形態では、例えば、再投与時にグレード３～４のリンパ球減少症の場合（抗ＣＤ５２薬の有無にかかわらず）、ＬＤレジメンの強度の低減が適用され得る。

いくつかの実施形態では、フルダラビン／シクロホスファミド（ＦＣ）またはフルダラビン／シクロホスファミド／抗ＣＤ５２抗体（ＦＣＡ）のリンパ球枯渇レジメンの成分が同時に投与される。他の実施形態では、成分は連続的に投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビン／シクロホスファミド（ＦＣ）またはフルダラビン／シクロホスファミド／抗ＣＤ５２抗体（ＦＣＡ）のリンパ球枯渇レジメンの成分は、－５日目、－４日目および－３日目に同時に投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビン／シクロホスファミド（ＦＣ）のリンパ球枯渇レジメンの成分は、抗ＣＤ５２抗体の投与の前に投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビン／シクロホスファミド（ＦＣ）は、－７日目、－６日目および－５日目に投与され、続いて、－４日目および－３日目に抗ＣＤ５２抗体（Ａ）の投与が行われる。いくつかの実施形態では、フルダラビン／シクロホスファミド（ＦＣ）は、－７日目、－６日目および－５日目に投与され、続いて、－５日目、－４日目および－３日目に抗ＣＤ５２抗体（Ａ）の投与が行われる。いくつかの実施形態では、対象は、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法の最初の投与の前にＦＣレジメンを受け、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法の再投与の前にＦＣＡレジメンを受ける。いくつかの実施形態では、対象は、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法の最初の投与の前にＦＣＡレジメンを受け、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法の再投与の前に第２のＦＣＡレジメンを受ける。

例示的なＬＤレジメンは、表６Ａ、６Ｂ、６Ｃ、６Ｄ、６Ｅ、６Ｆおよび６Ｇに提供されている。表６Ａ～６Ｇにおいて、スケジュールの下に示されるタイミングは、日単位での、ある用量のＣＡＲ－Ｔ細胞（Ｄ０）の投与のタイミングに関連している。負の数は、ＣＡＲ－Ｔ細胞の投与（Ｄ０）の前の日を示す。

Ｖ．投与レジメン
いくつかの実施形態では、本開示の同種異系ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、均一用量を使用して投与される。他の実施形態では、同種異系ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、用量バンディングを使用して投与される。例えば、広範囲のＣＡＲ－Ｔ細胞曝露のリスクを回避するために用量バンディングを使用してもよい。いくつかの実施形態では、重量バンドを使用することができる。例えば、限定されないが、６６ｋｇ未満の対象はＸ用量で投与されてもよく、６６ｋｇ以上の対象は約１．３３Ｘの用量で投与されてもよい。いくつかの実施形態では、５０ｋｇ以上である対象に１回の用量を投与することができ、５０ｋｇ以下の対象は異なる用量で投与されてもよい。

再発性／難治性のＭＭを有する対象で使用するための、同種異系ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞の初回用量についての例示的な用量レベルを、表７Ａに提供する。「－１」として指定された用量レベルは、必要な場合にのみ投与される。

いくつかの実施形態では、体重が５０ｋｇ以上である対象は、本開示の同種異系ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞の１回の用量を投与され、用量は、約２０×１０＾６細胞／用量～約４８０×１０＾６細胞／用量の範囲である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ⁺＿ＴＣＲαβ^-＿ＣＤ５２^+/-Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－１ＣＡＲ－Ｔ細胞（実施例１に記載されている）である。

いくつかの実施形態では、体重が５０ｋｇ以上である対象は、本開示の同種異系ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞の１回の用量を投与され、用量は、約２０×１０＾６細胞／用量～約４０×１０＾６細胞／用量、約４０×１０＾６細胞／用量～約１２０×１０＾６細胞／用量、約１２０×１０＾６細胞／用量～約３６０×１０＾６細胞／用量、または約３６０×１０＾６細胞／用量～約４８０×１０＾６細胞／用量の範囲である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ⁺＿ＴＣＲαβ^-＿ＣＤ５２^+/-Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－１ＣＡＲ－Ｔ細胞である。

いくつかの実施形態では、体重が５０ｋｇ未満である対象は、本開示の同種異系ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞の１回の用量を投与され、用量は、約７×１０＾６細胞／用量～約３６０×１０＾６細胞／用量の範囲である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ⁺＿ＴＣＲαβ^-＿ＣＤ５２^+/-Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－１ＣＡＲ－Ｔ細胞である。

いくつかの実施形態では、体重が５０ｋｇ未満である対象は、本開示の同種異系ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞の１回の用量を投与され、用量は、約７×１０＾６もしくは約１４×１０＾６細胞／用量～約２０×１０＾６細胞／用量、約２０×１０＾６細胞／用量～約８０×１０＾６細胞／用量、約８０×１０＾６細胞／用量～約２４０×１０＾６細胞／用量、または約２４０×１０＾６細胞／用量～約３６０×１０＾６細胞／用量の範囲である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ⁺＿ＴＣＲαβ^-＿ＣＤ５２^+/-Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－１ＣＡＲ－Ｔ細胞である。

再発性／難治性のＭＭを有する対象で使用するための、同種異系ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞の初回用量についての別の例示的な用量レベルを、表７Ｂに提供する。中間用量レベル、ならびに「４」および「－１」として指定された用量レベルは、必要な場合にのみ投与される。

いくつかの実施形態では、体重が５０ｋｇ超である対象は、本開示の同種異系ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞の１回の用量を投与され、用量は、約２０×１０＾６細胞／用量～約４８０×１０＾６細胞／用量の範囲である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ⁺＿ＴＣＲαβ^-＿ＣＤ５２^+/-Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－１ＣＡＲ－Ｔ細胞（実施例１に記載されている）である。

いくつかの実施形態では、体重が５０ｋｇ超である対象は、本開示の同種異系ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞の用量を投与され、用量は、約２０×１０＾６細胞／用量～約４０×１０＾６細胞／用量、約４０×１０＾６細胞／用量～約１６０×１０＾６細胞／用量、約１６０×１０＾６細胞／用量～約３２０×１０＾６細胞／用量、約１６０×１０＾６細胞／用量～約２４０×１０＾６細胞／用量、約２４０×１０＾６細胞／用量～約３２０×１０＾６細胞／用量、約２４０×１０＾６細胞／用量～約４８０×１０＾６細胞／用量、または約３２０×１０＾６細胞／用量～約４８０×１０＾６細胞／用量の範囲である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－１ＣＡＲ－Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ⁺＿ＴＣＲαβ^-＿ＣＤ５２^+/-Ｔ細胞である。

いくつかの実施形態では、体重が５０ｋｇ以下である対象は、本開示の同種異系ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞の１回の用量を投与され、用量は、約１４×１０＾６細胞／用量～約３２０×１０＾６細胞／用量の範囲である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ⁺＿ＴＣＲαβ^-＿ＣＤ５２^+/-Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－１ＣＡＲ－Ｔ細胞である。

いくつかの実施形態では、体重が５０ｋｇ以下である対象は、本開示の同種異系ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞の１回の用量を投与され、用量は、約１４×１０＾６細胞／用量～約２０×１０＾６細胞／用量、約２０×１０＾６細胞／用量～約８０×１０＾６細胞／用量、約８０×１０＾６細胞／用量～約１６０×１０＾６細胞／用量、約８０×１０＾６細胞／用量～約２００×１０＾６細胞／用量、約１６０×１０＾６細胞／用量～約２００×１０＾６細胞／用量、約２００×１０＾６細胞／用量～約３２０×１０＾６細胞／用量、約１６０×１０＾６細胞／用量～約３２０×１０＾６細胞／用量、または約２００×１０＾６細胞／用量～約３２０×１０＾６細胞／用量の範囲である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ⁺＿ＴＣＲαβ^-＿ＣＤ５２^+/-Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－１ＣＡＲ－Ｔ細胞である。

いくつかの実施形態では、体重が５０ｋｇ超である対象は、本開示の同種異系ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞の１回の用量を投与され、ここで、用量は、約４０×１０＾６細胞／用量、１６０×１０＾６細胞／用量、または３２０×１０＾６細胞／用量である。いくつかの実施形態では、毒性が用量レベル３で観察される場合、またはより低い用量で有効であるかを決定する場合、約２４０×１０＾６細胞／用量の中間用量が投与される（または用量レベル１～用量レベル３の間の別の用量レベル）。いくつかの実施形態では、不十分な効力パラメータが用量レベル３で見られる場合、４８０×１０＾６細胞／用量の用量レベルが投与される（用量レベル４）。（図２０）。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ⁺＿ＴＣＲαβ^-＿ＣＤ５２^+/-Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－１ＣＡＲ－Ｔ細胞である。

細胞または細胞の集団は、１回以上の用量で投与され得る。いくつかの実施形態では、該有効量の細胞は、単回用量として投与され得る。いくつかの実施形態では、該有効量の細胞は、期間にわたって２回以上の用量として投与され得る。投与のタイミングは、主治医の判断の範囲内であり、対象の臨床状態に依存する。細胞または細胞の集団は、血液バンクまたはドナーのような任意の供給源から得られることができる。個々の必要性は変化するが、一方で、当該分野の範囲内の特定の疾患または状態に対する所与の細胞型の有効量の最適範囲の決定。有効量は、治療的または予防的利益を提供する量を意味する。投与される投薬量は、一般的に、レシピエントの年齢、健康状態および体重、同時治療の種類、もしあるなら、治療の頻度ならびに所望の効果の性質に依存するであろう。いくつかの実施形態では、有効量の細胞またはそれらの細胞を含む組成物は、非経口投与される。いくつかの実施形態では、投与は、静脈内投与であり得る。いくつかの実施形態では、投与は、腫瘍内の注射によって直接行われ得る。

本開示のいくつかの実施形態では、細胞は、モノクローナル抗体療法、ＣＣＲ２アンタゴニスト（例えば、ＩＮＣ－８７６１）、抗ウイルス療法、シドフォビルおよびインターロイキン－２、シタラビン（ＡＲＡ－Ｃとしても知られる）、またはＭＳ対象に対するナタリジイマブ治療、または乾癬対象に対するエファリズチマブ治療、またはＰＭＬ対象に対する他の治療などの薬剤を用いた治療を含むがこれらに限定されない、任意の数の関連治療モダリティと組み合わせて（例えば、その前に、それと同時に、またはそれの後に）、対象に投与されてもよい。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞は、以下：抗ＰＤ－１抗体（例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、またはＰＦ－０６８０１５９１）、抗ＰＤ－Ｌ１抗体（例えば、アベルマブ、アテゾリズマブ、またはデュルバルマブ）、抗ＯＸ４０抗体（例えば、ＰＦ－０４５１８６００）、抗４－１ＢＢ抗体（例えば、ＰＦ－０５０８２５６６）、抗ＭＣＳＦ抗体（例えば、ＰＤ－０３６０３２４）、抗ＧＩＴＲ抗体、および／または抗ＴＩＧＩＴ抗体、のうちの１つ以上と組み合わせて対象に投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＢＣＭＡ特異的ＣＡＲは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体アベルマブと組み合わせて対象に投与される。さらなる実施形態では、本開示のＴ細胞は、化学療法、放射線；シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸、およびＦＫ５０６などの免疫抑制剤、ＣＡＭＰＡＴＨ、抗ＣＤ３抗体、または他の抗体療法などの他の免疫除去剤、サイトキシン、フルダリビン、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８、サイトカイン、および／または照射と組み合わせて使用され得る。これらの薬剤は、カルシウム依存性ホスファターゼカルシニューリンを阻害するか（シクロスポリンおよびＦＫ５０６）、成長因子誘導シグナル伝達に重要なｐ７０Ｓ６キナーゼを阻害する（ラパマイシン）（Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ、Ｎａｙａら、１９９１；Ｌｉｕ、Ａｌｂｅｒｓら、１９９２；Ｂｉｅｒｅｒ、Ｈｏｌｌａｎｄｅｒら、１９９３）。さらなる実施形態では、本開示の細胞組成物は、骨髄移植、フルダラビンなどの化学療法剤のいずれかを使用するＴ細胞除去療法、外部ビーム放射線療法（ＸＲＴ）、シクロホスファミド、またはＯＫＴ３もしくはＣＡＭＰＡＴＨなどの抗体と併せて（例えば、前に、同時にまたは後に）対象に投与される。いくつかの実施形態では、本開示の細胞組成物は、リツキサンなどのＣＤ２０と反応する薬剤などの、Ｂ細胞除去療法の後に投与される。例えば、一実施形態では、対象は、高用量化学療法とそれに続く末梢血幹細胞移植による標準的な治療を受けることができる。特定の実施形態では、移植後、対象は、本開示の増殖した免疫細胞の注入を受ける。いくつかの実施形態では、増殖した細胞は、手術の前または後に投与される。

ＶＩ．ＣＡＲ－Ｔ細胞による再治療の方法
ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞による再治療（再投与）のための方法も本明細書に提供される。特に、この方法は、初回用量を受けた対象に細胞の１回以上の後続の用量を投与すること、および／または初回および１回以上の後続の用量を投与することを含む。用量は、一般に、特定の量で、特定のタイミングパラメータに従って投与される。いくつかの実施形態では、方法は、一般に、細胞の初回用量を投与することを含み、それにより、疾患負荷を低減し、その後、細胞の後続の用量が、初回用量に関して特定の時間枠の間に投与されるか、またはそのような初回用量を受けた対象に後続の用量の投与を続ける。いくつかの実施形態では、その後、追加の後続の用量が、例えば、後続の用量に関して同じまたは同様の時間枠内で投与される。いくつかの実施形態では、投与される細胞の数および複数回投与のタイミングは、対象に対する毒性の可能性または程度を低減したり、投与された細胞に対する対象の曝露および／もしくは投与された細胞の持続性を改善したり、かつ／または治療効果を改善するなど、１つ以上の結果を改善するように設計される。細胞を含み、そのような投与レジメンに従った投与用に設計された製品も提供される。

いくつかの再治療（再投与）の実施形態では、体重が５０ｋｇ超である対象は、１回の用量の、本開示の同種異系ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞の再投与を実施され、用量は、約２０×１０＾６細胞／用量～約４８０×１０＾６細胞／用量の範囲である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ⁺＿ＴＣＲαβ^-＿ＣＤ５２^+/-Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－１ＣＡＲ－Ｔ細胞（実施例１に記載されている）である。

いくつかの再治療（再投与）の実施形態では、体重が５０ｋｇ超である対象は、本開示の同種異系ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞の再投与を実施され、用量は、約２０×１０＾６細胞／投与～約４０×１０＾６細胞／用量、約４０×１０＾６細胞／用量～約１６０×１０＾６細胞／用量、約１６０×１０＾６細胞／用量～約３２０×１０＾６細胞／用量、約１６０×１０＾６細胞／用量～約２４０×１０＾６細胞／用量、約２４０×１０＾６細胞／用量～約３２０×１０＾６細胞／用量、約２４０×１０＾６細胞／用量～約４８０×１０＾６細胞／用量、または約３２０×１０＾６細胞／用量～約４８０×１０＾６細胞／用量の範囲である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－１ＣＡＲ－Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ⁺＿ＴＣＲαβ^-＿ＣＤ５２^+/-Ｔ細胞である。

いくつかの再治療（再投与）の実施形態では、体重が５０ｋｇ超である対象は、本開示の同種異系ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞の再投与を実施され、用量は、約４０×１０＾６細胞／用量、１６０×１０＾６細胞／用量、または３２０×１０＾６細胞／用量である。いくつかの実施形態では、毒性が用量レベル３で観察される場合、またはより低い用量で有効であるかを決定する場合、約２４０×１０＾６細胞／用量の中間用量が投与される（または用量レベル１～用量レベル３の間の別の用量レベル）。いくつかの実施形態では、不十分な効力パラメータが用量レベル３で見られる場合、４８０×１０＾６細胞／用量の用量レベルが投与される（用量レベル４）。（図２０）。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ⁺＿ＴＣＲαβ^-＿ＣＤ５２^+/-Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－１ＣＡＲ－Ｔ細胞である。

いくつかの再治療（再投与）の実施形態では、体重が５０ｋｇ以上である対象は、１回の用量の、本開示の同種異系ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞の再投与を実施され、用量は、約２０×１０＾６細胞／用量～約４８０×１０＾６細胞／用量の範囲である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ⁺＿ＴＣＲαβ^-＿ＣＤ５２^+/-Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－１ＣＡＲ－Ｔ細胞（実施例１に記載されている）である。

いくつかの再治療（再投与）の実施形態では、体重が５０ｋｇ以上である対象は、本開示の同種異系ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞の再投与を実施され、用量は、約２０×１０＾６細胞／用量～約４０×１０＾６細胞／用量、約４０×１０＾６細胞／用量～約１２０×１０＾６細胞／用量、約１２０×１０＾６細胞／用量～約３６０×１０＾６細胞／用量、または約３６０×１０＾６細胞／用量～約４８０×１０＾６細胞／用量の範囲である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ⁺＿ＴＣＲαβ^-＿ＣＤ５２^+/-Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－１ＣＡＲ－Ｔ細胞である。

いくつかの再治療（再投与）の実施形態では、体重が５０ｋｇ以下である対象は、本開示の同種異系ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞の再投与を実施され、用量は、約１４×１０＾６細胞／用量～約３２０×１０＾６細胞／用量の範囲である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ⁺＿ＴＣＲαβ^-＿ＣＤ５２^+/-Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－１ＣＡＲ－Ｔ細胞である。

いくつかの再治療（再投与）の実施形態では、体重が５０ｋｇ以下である対象は、本開示の同種異系ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞の再投与を実施され、用量は、約１４×１０＾６細胞／用量～約２０×１０＾６細胞／用量、約２０×１０＾６細胞／用量～約８０×１０＾６細胞／用量、約８０×１０＾６細胞／用量～約１６０×１０＾６細胞／用量、約８０×１０＾６細胞／用量～約２００×１０＾６細胞／用量、約１６０×１０＾６細胞／用量～約２００×１０＾６細胞／用量、約２００×１０＾６細胞／用量～約３２０×１０＾６細胞／用量、約１６０×１０＾６細胞／用量～約３２０×１０＾６細胞／用量、または約２００×１０＾６細胞／用量～約３２０×１０＾６細胞／用量の範囲である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ⁺＿ＴＣＲαβ^-＿ＣＤ５２^+/-Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－１ＣＡＲ－Ｔ細胞である。

いくつかの再治療（再投与）の実施形態では、体重が５０ｋｇ未満である対象は、本開示の同種異系ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞の再投与を実施され、用量は、約７×１０＾６細胞／用量～約３６０×１０＾６細胞／用量の範囲である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ⁺＿ＴＣＲαβ^-＿ＣＤ５２^+/-Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－１ＣＡＲ－Ｔ細胞である。

いくつかの再治療（再投与）の実施形態では、体重が５０ｋｇ未満である対象は、本開示の同種異系ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞の再投与を実施され、用量は、約７×１０＾６もしくは約１４×１０＾６細胞／用量～約２０×１０＾６細胞／用量、約２０×１０＾６細胞／用量～約８０×１０＾６細胞／用量、約８０×１０＾６細胞／用量～約２４０×１０＾６細胞／用量、または約２４０×１０＾６細胞／用量～約３６０×１０＾６細胞／用量の範囲である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ⁺＿ＴＣＲαβ^-＿ＣＤ５２^+/-Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ－１ＣＡＲ－Ｔ細胞である。

ＶＩＩ．キットおよび製造品
本開示はまた、開示された方法で使用するためのキットおよび製品を提供する。本開示のキットは、ＢＣＭＡ特異的ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド、または本明細書に記載のＢＣＭＡ特異的ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む操作された免疫細胞（例えば、ＢＣＭＡ－１ＣＡＲ－Ｔ細胞、例えば、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ⁺＿ＴＣＲαβ^-＿ＣＤ５２^+/-Ｔ細胞）を含む１つ以上の容器（例えば、ガラスバイアル）、および本明細書に記載の開示の方法のいずれかに従って使用するための指示書を含む。いくつかの実施形態では、操作された免疫細胞は、約５％のＤＭＳＯを含む溶液中に処方される。さらに、操作された免疫細胞は、凍結状態で提供することができる。

いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、単位用量のＣＤ５２抗体（凍結状態で、または緩衝培地を含む室温溶液として提供され得る）、フルダラビン、および／またはシクロホスファミドを含む追加のバイアルである。

一般に、これらの指示書は、上記の治療的処置（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ）のための操作された免疫細胞の投与についての記載を含む。本明細書に記載される操作された免疫細胞の使用に関する指示書は、一般に、意図される治療のための投薬量、投薬スケジュール、および投与経路に関する情報を含む。容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、複数回用量パッケージ）またはサブユニット用量であり得る。本発明のキットに供給される指示は、典型的には、標識またはパッケージ挿入物（例えば、キットに含まれる紙シート）上に書かれた指示であるが、機械可読指示（例えば、磁気または光学記憶ディスク上に担持される指示）も許容される。

本開示のキットは、好適なパッケージング中にある。好適なパッケージングは、バイアル、ボトル、ジャー、可撓性パッケージング（例えば、密封されたＭｙｌａｒまたはプラスチックバッグ）などを含むが、これらに限定されない。また、ミニポンプのような注入デバイスのような特定のデバイスと組み合わされた使用のための包装も、企図される。キットは、無菌のアクセスポートを有することができる（例えば、容器は、静脈内溶液バッグまたは皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有するバイアルであり得る）。容器は、無菌のアクセスポートも有することができる（例えば、容器は、静脈内溶液バッグまたは皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有するバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、ＢＣＭＡ抗体である。容器は、第２の薬学的活性剤をさらに含み得る。

キットは、任意選択で、緩衝液および解釈情報のような追加的構成成分を提供する。通常、キットは、容器と、容器上または容器に関連する標識またはパッケージ挿入物（複数可）を含む。

以下の実施例は、例示目的のみのために提供され、決して本発明の範囲を限定するように意図されるものではない。実際、本明細書に示され、かつ記載されたものに加えて、本開示のさまざまな修正は、前述の記載から当業者に明らかになり、添付の特許請求の範囲内に含まれるであろう。

実施例１：ＢＣＭＡ－１の産生および試験
図１～１６は、ＢＣＭＡ－１の生成および試験を示す。ＢＣＭＡ－１は、ＢＣＭＡＣＡＲを発現する、統合された自己不活化第３世代の組換えレンチウイルスベクターを含む同種異系Ｔ細胞である。ＢＣＭＡＣＡＲは、ｓｃＦｖを含み、ＣＡＲのｓｃＦＶは、表１のＰ５Ａ２である。ｓｃＦＶは、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。ＣＡＲの細胞外領域はまた、リツキシマブによる認識を付与する２つのミモトープを含む。

ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞の遺伝子型は、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ⁺＿ＴＣＲαβ^-＿ＣＤ５２^+/-である。細胞は、５％のＤＭＳＯを含む溶液中で製剤化することができる。一実施形態では、細胞は、５％の最終濃度のジメチルスルホキシドを生じる、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）基礎溶液とＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０の１：１混合液中の注入用の懸濁液として製剤化され、得られた製剤の有効性成分含量は１４×１０＾６のＢＣＭＡ－ＣＡＲ＋＿ＴＣＲαβ－＿ＣＤ５２＋／－Ｔ細胞／ｍＬである。

図２は、リツキシマブを介した安全スイッチが、本開示のＢＣＭＡ含有ＣＡＲ－Ｔ細胞の検出および枯渇（リツキシマブ抗体による）を可能にすることを示している。ＢＣＭＡ－１細胞をウサギ補体およびリツキシマブとともにインキュベートした。３時間後、細胞をＣＡＲ発現のために染色した。グラフは、生存ＣＡＲ＋細胞のパーセンテージを示している（平均＋／－ＳＥＭ）。（図２）

ＢＣＭＡ－１の細胞傷害性をＢＣＭＡ発現細胞株に対して試験し、ＢＣＭＡ－１エフェクター細胞をＥ：Ｔ比の増加でルシフェラーゼを安定して発現する標的細胞と共培養し、２４時間後の残留ルシフェラーゼ活性を測定することにより評価した。ＢＣＭＡ陰性ＲＥＨ細胞は対照細胞株として機能した。形質導入していない対照Ｔ細胞（三角形）と比較して、ＢＣＭＡ－１（円）は、ＢＣＭＡ発現細胞に対して用量依存的な細胞傷害性を示したが、対照細胞（ＲＥＨ）の明らかな死滅は見られなかった。ＢＣＭＡ－１および遺伝子編集されていないＢＣＭＡ－１（白丸）の殺傷活性は同等であった。グラフは、単独で培養された標的細胞に対する細胞溶解のパーセンテージを表す（図６）。示されている結果は、３人のドナーの平均＋／－ＳＥＭである。負の細胞傷害性値（アッセイ中の標的細胞の増殖またはルシフェラーゼシグナルの増強に起因する）は、０％溶解としてプロットされた。

図１６は、ＢＣＭＡ－１のｓｃＦＶが組織交差反応性研究でオフターゲット結合を示さないことを示しており、これは、臨床設定でのオフターゲット結合のリスクが低いか存在しないことを示している。試験は１３人のヒト組織で行われた。ＣＡＲの細胞外ドメインをヒトＩｇＧ２ｄＡＤ２６５Ａ（Ｆｃ結合を防ぐための変異）に融合させた。この方法は、ＢＣＭＡを過剰発現している細胞株を最適に染色するために開発された。ヒト組織では染色は観察されない。

９つのヒト組織における免疫組織化学染色の結果－シグナルを増加させるためにトリプルシグナル増幅を実施した。扁桃腺、リンパ節、脾臓組織で予想されるシグナルが検出された。乳房、膵臓、卵管、前立腺、膀胱組織には上皮結合はなかった。したがって、予期しない結合の危険性は低いか、存在しないとみなされる。

実施例２：第一相試験、デザインＡ
図１９は、難治性／再発性ＭＭの治療のための第一相試験（デザインＡ）の概要を示す。デザインＡの設計には、フルダラビン（ｆｌｕ）、３０ｍｇ／ｍ２／日のＩＶ；シクロホスファミド（ｃｙ）、３００ｍｇ／ｍ２／日のＩＶ；およびＣＤ５２抗体、治療の３～５日前に１３ｍｇ／日のＩＶ、であるリンパ球枯渇段階と、２０～８０×１０＾６細胞ＩＶ（５０ｋｇ以上の対象の場合）または７～３６０×１０＾６細胞ＩＶ（５０ｋｇ未満の対象の場合）の漸増用量を含む治療段階（０日目）と、が含まれる。

含める基準には、次の１つ以上が含まれ得る。
・３回以上の事前のＭＭレジメンの後の、測定可能なＭＭ
○誘導＋／－ＡＳＣＴ＋／－維持は、１レジメンである
○ＰＤが最良の応答でない限り、各レジメンの少なくとも２回の連続サイクルで、事前にＰＩ、ＩＭｉＤ、およびＣＤ３８の阻害を受けた（禁忌でない限り）
○最新の事前のレジメンに難治性である
・ＥＣＯＧＰＳ０－１
・十分な臓器機能
・ＬＤ前に５つの排出半減期が消失している
○ｍＡｂの場合は４週間
・ＢＣＭＡ発現は患者の選択に使用できる。

第一相デザインＡにおけるＢＣＭＡ－１漸増の用量バンドレベルを表８に示す。

用量漸増は、通常、３＋３設計によって管理される。各用量レベルは、少なくとも２人の異なるドナーから細胞を受け取ることができる。最大５つの用量レベルを試験できる。開始用量は、表８に用量レベル１として記載されており、いくつかの実施形態では、対象は、示された場合、用量レベル－１を受けることができる。

再投与は、異なるドナーからのＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞を使用して、再発した患者において、例えば、２０ｍｇのＣＤ５２抗体コンディショニングによるコンディショニングを使用して、実施することができる。

実施例３：第一相試験、デザインＢ
図１９は、難治性／再発性ＭＭの治療のための第一相試験、デザインＢの概要を示す。デザインＢの設計には、フルダラビン（ｆｌｕ）、３０ｍｇ／ｍ２／日のＩＶ；シクロホスファミド（ｃｙ）、３００ｍｇ／ｍ２／日のＩＶ；およびＣＤ５２抗体、治療の３～５日前に１３ｍｇ／日のＩＶ、であるリンパ球枯渇段階と、２０～８０×１０＾６細胞ＩＶ（５０ｋｇ以上の対象の場合）または７～３６０×１０＾６細胞ＩＶ（５０ｋｇ未満の対象の場合）の漸増用量を含む治療段階（０日目）と、が含まれる。

含める基準には、次の１つ以上が含まれ得る。

１．多発性骨髄腫における応答および微小残存病変評価のためのＩＭＷＧコンセンサス基準によって定義された再発性／難治性の多発性骨髄腫（Ｒ／ＲＭＭ）の文書化された診断。

２．対象は、以下の基準の１つ以上を含む測定可能な疾患を有する。
ａ．血清Ｍタンパク質≧０．５ｇ／ｄＬ
ｂ．尿中Ｍタンパク質≧２００ｍｇ／２４時間、
ｃ．関与する無血清軽鎖（ＦＬＣ）レベル≧１０ｍｇ／ｄＬ（１００ｍｇ／Ｌ）、血清ＦＬＣ比が異常である場合。

３．患者は少なくとも３回以上の事前のＭＭレジメンを受けている：
ａ．造血幹細胞移植の有無にかかわらず、および維持療法の有無にかかわらず、誘導は単一のレジメンとみなされる。
ｂ．進行性疾患がレジメンに対する最良の応答でない限り、各レジメンの少なくとも２つの連続したサイクルで、事前のプロテアソーム阻害剤、免疫調節剤、および抗ＣＤ３８抗体（禁忌でない限り）を受けた。
ｃ．最後の治療レジメンに対して難治性である。

４．米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥａｓｔｅｒｎＣｏｏｐｅｒａｔｉｖｅＯｎｃｏｌｏｇｙＧｒｏｕｐ）（ＥＣＯＧ）のパフォーマンスステータスが０または１である。

治療のサイクルは、１回のリンパ球枯渇と１回の治療期間の組み合わせとみなされる。

この研究の１つの目標は、ＢＣＭＡ－１のＭＴＤを評価すること、および／またはそのＲＰ２Ｄを確立することである。

いくつかの実施形態では、研究は、用量漸増および用量拡大という２つの部分を含む。

用量漸増部分では、患者の連続するコホートは、３＋３設計でＢＣＭＡ－１の漸増用量を受け取ることができる。各用量レベルで、最初の患者を治療し、２８日間観察してから、後続の患者をＢＣＭＡ－１で治療することができる。すべての患者は通常、ＢＣＭＡ－１注入後の最初の２８日間、用量制限毒性（ＤＬＴ）について綿密に監視される。ＢＣＭＡ－１の目標ＤＬＴ率は３３％未満である。ＤＬ１とＤＬ３の間で中間用量レベルを調べることができる（表９）。一般集団で観察された体重の変動に基づいて、２つの異なる体重バンドを使用する投薬戦略を実施することができる。５０ｋｇ以下の体重の患者は、体重が５０ｋｇ超である患者に投与される用量よりも３３％～５０％少ない用量を受け取ることができる。第一相デザインＢのＢＣＭＡ－１漸増の暫定的な用量レベルを表９に示す。必要に応じて、中間用量レベル、用量レベル４、および用量レベル－１を投与することができる。

用量漸増は、通常、３＋３設計によって管理される。各用量レベルは、少なくとも２人の異なるドナーから細胞を受け取ることができる。最大５つの用量レベルを試験できる。開始用量は、表９に用量レベル１として記載されており、いくつかの実施形態では、対象は、示された場合、用量レベル－１、用量レベル４、または中間用量レベル（表９に示されているように）を受けることができる。

したがって、デザインＢでは、ＢＣＭＡ－１は、約５分間の静脈内（ＩＶ）注入によって０日目に投与することができる。体重が５０ｋｇ超である患者について、４０×１０＾６、１６０×１０＾６、および３２０×１０＾６の漸増用量の同種異系ＣＡＲＴ細胞を研究することができる。体重が５０ｋｇ以下である患者についての対応する用量は、２０×１０＾６、８０×１０＾６、および２００×１０＾６である。

ヒトＣＤ５２抗原を認識し、リンパ球枯渇レジメンの一部として使用できる抗ＣＤ５２ヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体。

抗ＣＤ５２抗体は、フルダラビン（３０ｍｇ／ｍ２／日）および／またはシクロホスファミド（３００ｍｇ／ｍ２／日）と併用して、または抗体のみで、１３ｍｇ／日の用量で４時間にわたるＩＶ注入によって、－５日目、－４日目、および－３日目に投与することができる。毒性の場合には、１０ｍｇ／日でのより低い用量が計画される。フルダラビン（３０ｍｇ／ｍ２／日）は３日間投与することができる。

この第一相試験の全体的な期間は、最初の患者が登録されてから最後の患者が完了するまで約４８か月である。

用量拡大部分には、プロトコルに追加された追加のコホートを含めることができ、ＢＣＭＡ－１の適切なコンディショニングレジメンでＲ２ＰＤを特徴付けることができる。各コホートにおいて１２人の患者からなる最大３つのコホートを、用量漸増の結果に基づいて選択した用量レベルおよびコンディショニングレジメンで評価することができる。

研究がスポンサーによって早期に終了されない限り、ＢＣＭＡ－１で治療されたすべての患者が、最初のＢＣＭＡ－１注入から少なくとも２４か月間追跡されたとき、さらなる連絡についての同意を撤回したとき、フォローアップができなくなったとき、または死亡したときに、研究を終了することができる。

実施例４：第二相研究
第二相は、第一相デザインＡまたはデザインＢからの許容可能な毒性を伴う最も高い用量（ＲＰ２Ｄ－第一相からの用量制限毒性の約２０％を生じる用量レベル、またはＲＰ２Ｄ用量を超える用量レベルのいずれか）を用いて、６～１２人の対象からなるさらなるコホートを試験することを含むことができる。対象は、ｆｌｕ／ｃｙなしでＣＤ５２抗体を受けることができる。ＣＤ５２抗体は、ＣＡＲ－Ｔ細胞治療の前に、約４０ｍｇ（１３ｍｇ／日×３日）の用量で投与することができ、ＣＡＲ－Ｔ細胞治療後７、１４、および２１日目に１３ｍｇ／日で繰り返すことができる。

開示された教示は、さまざまな用途、方法、および組成物を参照して説明されているが、本明細書の教示および以下の特許請求の範囲から逸脱することなく、さまざまな変更および修正がなされ得ることが、理解されるであろう。前述の例は、開示された教示をよりよく例示するために提供され、本明細書に提示された教示の範囲を限定するよう意図されていない。本教示はこれらの例示的な実施形態の点で説明されてきたが、当業者は、これらの例示的な実施形態の多数の変形および修正が過度の実験を伴わずに可能であることを、容易に理解するであろう。すべてのかかる変形および修正は、現在の教示の範囲内である。

特許、特許出願、論文、教科書などを含む、本明細書で引用されたすべての参考文献、およびそれらにまだ引用されていない範囲で引用された参考文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。組み込まれた文献および類似の材料のうちの１つ以上が、定義された用語、用語の使用法、記載された技法などを含むがこれらに限定されない、本出願と異なるまたはそれに矛盾する場合、本出願は制御する。

前述の記載および実施例は、本発明のある特定の実施形態を詳述し、発明者によって企図された最良の形態を記載する。しかしながら、前述のものが文章でどれほど詳細に見えることができても、本発明は多くの方法で実施され得、本発明は添付の特許請求の範囲およびその任意の均等物に従って解釈されるべきであることが、理解されるであろう。

Claims

対象において多発性骨髄腫を治療する方法であって、前記対象に、少なくとも１回の用量の抗ヒトＢＣＭＡＣＡＲを含む同種異系キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）－Ｔ細胞（ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞）を投与することを含み、前記少なくとも１回の用量が、約７×１０＾６細胞／用量～約４８０×１０＾６細胞／用量である、方法。
前記対象の体重が、５０ｋｇ以上であり、前記方法が、少なくとも１回の用量のＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞を投与することを含み、前記用量が、約２０×１０＾６細胞／用量～約４８０×１０＾６細胞／用量の範囲である、請求項１に記載の方法。
前記少なくとも１回の用量が、約２０×１０＾６細胞／用量、約４０×１０＾６細胞／用量、約１２０×１０＾６細胞／用量、約３６０×１０＾６細胞／用量、または約４８０×１０＾６細胞／用量である、請求項２に記載の方法。
前記少なくとも１回の用量が、約２０×１０＾６細胞／用量～約４０×１０＾６細胞／用量、約４０×１０＾６細胞／用量～約１２０×１０＾６細胞／用量、約１２０×１０＾６細胞／用量～約３６０×１０＾６細胞／用量、または約３６０×１０＾６細胞／用量～約４８０×１０＾６細胞／用量である、請求項２に記載の方法。
前記対象の体重が、５０ｋｇ未満であり、前記方法が、少なくとも１回の用量のＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞を投与することを含み、前記用量が、約７×１０＾６細胞／用量～約３６０×１０＾６細胞／用量の範囲である、請求項１に記載の方法。
前記少なくとも１回の用量が、約７×１０＾６細胞／用量、約１４×１０＾６細胞／用量、約２０×１０＾６細胞／用量、約８０×１０＾６細胞／用量、約２４０×１０＾６細胞／用量、または約３６０×１０＾６細胞／用量である、請求項５に記載の方法。
前記少なくとも１回の用量が、約７×１０＾６もしくは１４×１０＾６細胞／用量～約２０×１０＾６細胞／用量、約２０×１０＾６細胞／用量～約８０×１０＾６細胞／用量、約８０×１０＾６細胞／用量～約２４０×１０＾６細胞／用量、または約２４０×１０＾６細胞／用量～約３６０×１０＾６細胞／用量である、請求項５に記載の方法。
前記対象の体重が、５０ｋｇ超であり、前記方法が、少なくとも１回の用量のＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞を投与することを含み、前記用量が、約２０×１０＾６細胞／用量～約４８０×１０＾６細胞／用量の範囲である、請求項１に記載の方法。
前記少なくとも１回の用量が、約２０×１０＾６細胞／用量、約４０×１０＾６細胞／用量、約１６０×１０＾６細胞／用量、約２４０×１０＾６細胞／用量、約３２０×１０＾６細胞／用量、または約４８０×１０＾６細胞／用量である、請求項８に記載の方法。
前記少なくとも１回の用量が、約２０×１０＾６細胞／用量～約４０×１０＾６細胞／用量、約４０×１０＾６細胞／用量～約１６０×１０＾６細胞／用量、約１６０×１０＾６細胞／用量～約２４０×１０＾６細胞／用量、約２４０×１０＾６細胞／用量～約３２０×１０＾６細胞／用量、約１６０×１０＾６細胞／用量～約３２０×１０＾６細胞／用量、または約３２０×１０＾６細胞／用量～約４８０×１０＾６細胞／用量である、請求項８に記載の方法。
前記対象の体重が、５０ｋｇ以下であり、前記方法が、少なくとも１回の用量のＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞を投与することを含み、前記用量が、約１４×１０＾６細胞／用量～約３２０×１０＾６細胞／用量の範囲である、請求項１に記載の方法。
前記少なくとも１回の用量が、約１４×１０＾６細胞／用量、約２０×１０＾６細胞／用量、約８０×１０＾６細胞／用量、約１６０×１０＾６細胞／用量、約２００×１０＾６細胞／用量、または約３２０×１０＾６細胞／用量である、請求項１１に記載の方法。
前記少なくとも１回の用量が、約１４×１０＾６細胞／用量～約２０×１０＾６細胞／用量、約２０×１０＾６細胞／用量～約８０×１０＾６細胞／用量、約８０×１０＾６細胞／用量～約２００×１０＾６細胞／用量、約８０×１０＾６細胞／用量～約１６０×１０＾６細胞／用量、約１６０×１０＾６細胞／用量～約２００×１０＾６細胞／用量、または約２００×１０＾６細胞／用量～約３２０×１０＾６細胞／用量である、請求項１２に記載の方法。
前記多発性骨髄腫が難治性の多発性骨髄腫である、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
前記多発性骨髄腫が再発性の多発性骨髄腫である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。
前記多発性骨髄腫が難治性かつ再発性の多発性骨髄腫である、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
前記対象が、多発性骨髄腫について、いずれの事前治療も受けていない、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
前記対象が、多発性骨髄腫について、少なくとも１つ、２つ、または３つの事前治療を受けている、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
前記ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞が、一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）を含む細胞外結合ドメインを含むＣＡＲを含み、前記ｓｃＦｖが、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、前記ＶＨ領域が、ＶＨ相補性決定領域１（ＶＨＣＤＲ１）、ＶＨ相補性決定領域２（ＶＨＣＤＲ２）、およびＶＨ相補性決定領域３（ＶＨＣＤＲ３）を含み、前記ＶＬ領域が、ＶＬ相補性決定領域１（ＶＬＣＤＲ１）、ＶＬ相補性決定領域２（ＶＬＣＤＲ２）、およびＶＬ相補性決定領域３（ＶＬＣＤＲ３）を含み、
（ａ）前記ＶＨＣＤＲ１が、配列番号１５０、１５１、または１５２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨＣＤＲ２が、配列番号１５３または１５４のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨＣＤＲ３が、配列番号１５５のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬＣＤＲ１が、配列番号２０９のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬＣＤＲ２が、配列番号２２１のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬＣＤＲ３が、配列番号２２２のアミノ酸配列を含むか、
（ｂ）前記ＶＨＣＤＲ１が、配列番号１５０、１５１、または１５２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨＣＤＲ２が、配列番号１８７または１８８のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨＣＤＲ３が、配列番号１５５のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬＣＤＲ１が、配列番号２４９のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬＣＤＲ２が、配列番号２２１のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬＣＤＲ３が、配列番号２２５のアミノ酸配列を含むか、
（ｃ）前記ＶＨＣＤＲ１が、配列番号１５０、１５１、または１５２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨＣＤＲ２が、配列番号１６５または１６６のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨＣＤＲ３が、配列番号１５５のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬＣＤＲ１が、配列番号２２６のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬＣＤＲ２が、配列番号２２１のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬＣＤＲ３が、配列番号２２７のアミノ酸配列を含むか、
（ｄ）前記ＶＨＣＤＲ１が、配列番号１５１、１５６、または１５７のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨＣＤＲ２が、配列番号１５９または１６２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨＣＤＲ３が、配列番号１６１のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬＣＤＲ１が、配列番号２５１のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬＣＤＲ２が、配列番号２５２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬＣＤＲ３が、配列番号２５３のアミノ酸配列を含むか、
（ｅ）前記ＶＨＣＤＲ１が、配列番号１５１、１５６、または１５７のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨＣＤＲ２が、配列番号１９０または１９１のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨＣＤＲ３が、配列番号１６１のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬＣＤＲ１が、配列番号２６２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬＣＤＲ２が、配列番号２５２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬＣＤＲ３が、配列番号２６３のアミノ酸配列を含むか、
（ｆ）前記ＶＨＣＤＲ１が、配列番号１５０、１５１、または１５２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨＣＤＲ２が、配列番号１５４または１６９のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨＣＤＲ３が、配列番号１５５のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬＣＤＲ１が、配列番号２７１のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬＣＤＲ２が、配列番号２２１のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬＣＤＲ３が、配列番号２７２のアミノ酸配列を含むか、
（ｇ）前記ＶＨＣＤＲ１が、配列番号１２９、１３０、または１３１のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨＣＤＲ２が、配列番号１３９または１４０のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨＣＤＲ３が、配列番号１３４のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬＣＤＲ１が、配列番号２１７のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬＣＤＲ２が、配列番号２１０のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬＣＤＲ３が、配列番号２１６のアミノ酸配列を含むか、
（ｈ）前記ＶＨＣＤＲ１が、配列番号１５１、１５６、または１５７のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨＣＤＲ２が、配列番号１５８または１５９のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨＣＤＲ３が、配列番号１５５のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬＣＤＲ１が、配列番号２０９のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬＣＤＲ２が、配列番号２２１のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬＣＤＲ３が、配列番号２２５のアミノ酸配列を含むか、あるいは
（ｉ）前記ＶＨＣＤＲ１が、配列番号１２９、１３０、または１３１のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨＣＤＲ２が、配列番号１３２または１３３のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨＣＤＲ３が、配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬＣＤＲ１が、配列番号３７７のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬＣＤＲ２が、配列番号２１０のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬＣＤＲ３が、配列番号２１４のアミノ酸配列を含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
前記ＶＨ領域が、配列番号１５０、１５１、または１５２のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ１と、配列番号１５３または１５４のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ２と、配列番号１５５のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ３とを含み、前記ＶＬ領域が、配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ１と、配列番号２２１のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ２と、配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ３とを含む、請求項１９に記載の方法。
前記ＶＨ領域が、配列番号１５１、１５６、または１５７のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ１と、配列番号１５８または１５９のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ２と、配列番号１５５のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ３とを含み、前記ＶＬ領域が、配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ１と、配列番号２２１のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ２と、配列番号２２５のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ３とを含む、請求項１９に記載の方法。
前記ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞が、一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）を含む細胞外結合ドメインを含むＣＡＲを含み、前記ｓｃＦｖが、ＶＨ領域およびＶＬ領域を含み、ＶＨ領域とＶＬ領域の組み合わせが、表１に示されている組み合わせから選択される、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
前記ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞が、細胞外リガンド結合ドメイン、第１の膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを含み、前記細胞外ドメインが、表１の配列番号３３、７２、３９、７６、８３、９２、２５、１１２、または８に示される配列を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、表１の配列番号３４、７３、４０、７７、８４、９３、１８、３８、または８０に示される配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含むｓｃＦｖを含み、前記第１の膜貫通ドメインが、ＣＤ８α鎖膜貫通ドメインを含み、前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインおよび／または４－１ＢＢシグナル伝達ドメインを含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
前記ＶＨが、配列番号３３を含み、前記ＶＬが、配列番号３４を含む、請求項２３に記載の方法。
前記ＶＨが、配列番号１１２を含み、前記ＶＬが、配列番号３８を含む、請求項２３に記載の方法。
前記ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞が、配列番号３４４に示されるアミノ酸配列を含むＣＡＲを含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
前記ＣＡＲが、ＣＤ２０エピトープをさらに含む、請求項２６に記載の方法。
前記ＣＤ２０エピトープが、配列番号３９７または配列番号３９８に示されるアミノ酸配列を含む、請求項２７に記載の方法。
前記ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞が、配列番号３１８の配列を有するＣＤ８αシグナルペプチドと、配列番号１１２の配列を有するＶＨ領域と、配列番号３３３の配列を有するＧＳリンカーと、配列番号３８の配列を有するＶＬ領域と、配列番号３２０の配列を有するＣＤ８αヒンジと、配列番号３２２の配列を有するＣＤ８α膜貫通ドメインと、配列番号３２３の配列を有する４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメインと、配列番号３２４の配列を有するＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインと、を含むＣＡＲを含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
前記ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞が、配列番号３１８の配列を有するＣＤ８αシグナルペプチドと、配列番号１１２の配列を有するＶＨ領域と、配列番号３３３の配列を有するＧＳリンカーと、配列番号３８の配列を有するＶＬ領域と、配列番号３９８の配列を有するＣＤ２０エピトープと、配列番号３２０の配列を有するＣＤ８αヒンジと、配列番号３２２の配列を有するＣＤ８α膜貫通ドメインと、配列番号３２３の配列を有する４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメインと、配列番号３２４の配列を有するＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインと、を含むＣＡＲを含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
前記ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞が、配列番号３１８の配列を有するＣＤ８αシグナルペプチドと、配列番号３３の配列を有するＶＨ領域と、配列番号３３３の配列を有するＧＳリンカーと、配列番号３４の配列を有するＶＬ領域と、配列番号３２０の配列を有するＣＤ８αヒンジと、配列番号３２２の配列を有するＣＤ８α膜貫通ドメインと、配列番号３２３の配列を有する４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメインと、配列番号３２４の配列を有するＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインと、を含むＣＡＲを含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
前記ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞が、配列番号３１８の配列を有するＣＤ８αシグナルペプチドと、配列番号３３の配列を有するＶＨ領域と、配列番号３３３の配列を有するＧＳリンカーと、配列番号３４の配列を有するＶＬ領域と、配列番号３９８の配列を有するＣＤ２０エピトープと、配列番号３２０の配列を有するＣＤ８αヒンジと、配列番号３２２の配列を有するＣＤ８α膜貫通ドメインと、配列番号３２３の配列を有する４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメインと、配列番号３２４の配列を有するＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインと、を含むＣＡＲを含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
前記ＣＡＲ－Ｔ細胞が、ＣＤ５２を欠損している、請求項１～３２のいずれか一項に記載の方法。
前記ＣＡＲ－Ｔ細胞が、ＴＣＲαおよび／またはＴＣＲβを欠損している、請求項１～３２のいずれか一項に記載の方法。
前記細胞の遺伝子型が、ＴＣＲαβ^-およびＣＤ５２^+/-である、請求項１～３４のいずれか一項に記載の方法。
前記ＣＡＲ－Ｔ細胞が、安全スイッチを発現しない、請求項１～３２のいずれか一項に記載の方法。
前記ＣＡＲ－Ｔ細胞が、リツキシマブエピトープを発現する、請求項１～３２のいずれか一項に記載の方法。
前記対象が、前記少なくとも１回の用量の投与の前に第１のリンパ球枯渇レジメンを受ける、請求項１～３７のいずれか一項に記載の方法。
前記第１のリンパ球枯渇レジメンが、フルダラビンおよびシクロホスファミドを投与することを含む、請求項３８に記載の方法。
前記第１のリンパ球枯渇レジメンが、フルダラビン、シクロホスファミド、および抗ＣＤ５２抗体を投与することを含む、請求項３８に記載の方法。
前記第１のリンパ球枯渇レジメンが、抗ＣＤ５２抗体を投与することを含む、請求項３８に記載の方法。
前記第１のリンパ球枯渇レジメンが、抗ＣＤ５２抗体のみを投与することを含む、請求項３８に記載の方法。
フルダラビンが約３０ｍｇ／ｍ²／日の投与量で投与され、シクロホスファミドが、約３００ｍｇ／ｍ²／日の投与量で投与され、前記ＣＤ５２抗体が、約１０～約１３ｍｇ／日の投与量で投与される、請求項３８に記載の方法。
フルダラビンが約３０ｍｇ／ｍ²／日の投与量で投与され、シクロホスファミドが、約３００ｍｇ／ｍ²／日の投与量で投与され、前記ＣＤ５２抗体が、約１３～約３０ｍｇ／日、１３～２０ｍｇ／日、約１３～３０ｍｇ／日、または約２０～３０ｍｇ／日の投与量で投与される、請求項４０に記載の方法。
前記ＣＤ５２抗体が、約１３ｍｇ／日、約２０ｍｇ／日、または約３０ｍｇ／日の投与量で投与される、請求項４４に記載の方法。
前記第１のリンパ球枯渇レジメンが、前記少なくとも１回の用量の投与の約１～１５日前に開始される、請求項３６～４５のいずれか一項に記載の方法。
前記第１のリンパ球枯渇レジメンが、１、２、３、４、または５日間の過程にわたって実施される、請求項３６～４６のいずれか一項に記載の方法。
前記第１のリンパ球枯渇レジメンが、３日間の過程で、前記少なくとも１回の用量の投与の５日前に実施される、請求項３６～４７のいずれか一項に記載の方法。
前記対象が、前記ＣＡＲ－Ｔ細胞の後続の用量を受ける、請求項１～４８のいずれか一項に記載の方法。
ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞を含む製剤であって、前記細胞が、約５％のジメチルスルホキシドを含む溶液中で製剤化され、前記製剤の有効性成分含量（ｄｏｓａｇｅｓｔｒｅｎｇｔｈ）が、１４×１０＾６細胞／ｍＬであり、前記細胞の遺伝子型が、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ＋＿ＴＣＲαβ－＿ＣＤ５２＋／－であり、前記ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞が、細胞外リガンド結合ドメイン、２つのリツキシマブ結合ドメイン、第１の膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを含み、前記細胞外ドメインが、表１の配列番号３３、７２、３９、７６、８３、９２、２５、１１２、または８に示される配列を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、表１の配列番号３４、７３、４０、７７、８４、９３、１８、３８、または８０に示される配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含むｓｃＦｖを含み、前記第１の膜貫通ドメインが、ＣＤ８α鎖膜貫通ドメインを含み、前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインおよび／または４－１ＢＢシグナル伝達ドメインを含む、製剤。
ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞を含む製剤であって、前記細胞が、５％の最終濃度のジメチルスルホキシドを生じる、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）基礎溶液およびＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０の１対１の混合液中で製剤化され、前記製剤の前記有効性成分含量が、１４×１０＾６細胞／ｍＬであり、前記細胞の遺伝子型が、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ＋＿ＴＣＲαβ－＿ＣＤ５２＋／－であり、前記ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞が、細胞外リガンド結合ドメイン、２つのリツキシマブ結合ドメイン、第１の膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを含み、前記細胞外ドメインが、表１の配列番号３３、７２、３９、７６、８３、９２、２５、１１２、または８に示される配列を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、表１の配列番号３４、７３、４０、７７、８４、９３、１８、３８、または８０に示される配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含むｓｃＦｖを含み、前記第１の膜貫通ドメインが、ＣＤ８α鎖膜貫通ドメインを含み、前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインおよび／または４－１ＢＢシグナル伝達ドメインを含む、製剤。