JP2022513597A - 筋萎縮性側索硬化症を治療及び予防するための組成物及び方法 - Google Patents

Abstract

本開示において、ＳＯＤ１を標的化するアンチセンスオリゴヌクレオチド及びその塩のための投薬レジメンが提供される。これらの投薬レジメンは、筋萎縮性側索硬化症を有するかまたはそれを発症するリスクがある対象の治療に使用される。第１の態様において、本開示は、ヒトスーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）遺伝子中の突然変異と関連する筋萎縮性側索硬化症の治療または予防を、それを必要とするヒト対象において行う方法を特色とする。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年１２月１４日に出願された米国仮出願第６２／７７９，９１６号；２０１９年２月１９日に出願された同第６２／８０７，６０３号；及び２０１９年４月３０日に出願された同第６２／８４０，８７９号の利益を主張し、そのすべての内容はその全体が参照によって本明細書に援用される。

本出願は、概して、スーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）の発現の低減を、それを必要とするヒト対象（例えばヒトＳＯＤ１遺伝子の確定された突然変異を有する、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）に罹患した成人）において行う、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩の臨床使用のための投薬レジメンに関する。かかる方法は、ＳＯＤ１の発現を阻害することによって、ＡＬＳを治療、予防、または改善するのに有用である。

可溶性ＳＯＤ１酵素（Ｃｕ／Ｚｎスーパーオキシドジスムターゼとしても公知である）は、スーパーオキシドの過酸化水素（Ｈ_２Ｏ_２）への不均化を触媒することによって、生体分子の酸化的損傷に対する防御を提供するスーパーオキシドジスムターゼの１つである（Ｆｒｉｄｏｖｉｃｈ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，６４：９７－１１２（１９９５））。スーパーオキシドアニオン（Ｏ^２－）は、主としてミトコンドリアにおける酸化的リン酸化のエラーによって産生される、有害な可能性のある細胞副産物である（Ｔｕｒｒｅｎｓ，Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，５５２：３３５－３４４（２００３））。

筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ、ルー・ゲーリッグ病としても公知である）は、いかなるときでも３０，０００人のアメリカ人に影響を与える破壊的な進行性神経変性疾患である。ＳＯＤ１遺伝子中の突然変異は、上位及び下位の運動ニューロンの選択的変性によって特徴づけられる障害である、ＡＬＳの優性遺伝型と関連する（Ｒｏｗｌａｎｄ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，２００１，３４４：１６８８－１７００（２００１））。家族性ＡＬＳとＳＯＤ１遺伝子中のミスセンス突然変異との間に密接な遺伝的連鎖がある（Ｒｏｓｅｎ，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：５９－６２（１９９３））。

突然変異ＳＯＤ１の毒性は、ＡＬＳ病因に関与し得るプロセスである、活性酵素からの核保護を低減させる（核における機能喪失）初期の誤った折り畳み（機能獲得）から生じると考えられる（Ｓａｕ，Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．，１６：１６０４－１６１８（２００７））。ＡＬＳにおける運動ニューロンの進行性の変性は、最終的にはそれらの死を導く。運動ニューロンが死ぬと、筋肉の動きを開始し制御する脳の能力が失われる。随意筋活動が次第に影響を受けて、当該疾患の後期ステージにおける患者は、完全に麻痺する場合がある。

現在のところ、かかる神経変性疾患を治療するための許容可能な選択肢が欠如している。したがって、かかる疾患の治療のための方法を提供することが本明細書における目的である。

Ｆｒｉｄｏｖｉｃｈ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，６４：９７－１１２（１９９５） Ｔｕｒｒｅｎｓ，Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，５５２：３３５－３４４（２００３） Ｒｏｗｌａｎｄ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，２００１，３４４：１６８８－１７００（２００１） Ｒｏｓｅｎ，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：５９－６２（１９９３） Ｓａｕ，Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．，１６：１６０４－１６１８（２００７）

本開示は、スーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）の発現を低減させるアンチセンスオリゴヌクレオチドの投薬レジメン、ならびにＳＯＤ１遺伝子中の突然変異が有るヒト対象において、ＳＯＤ１の発現を阻害するための、及びＡＬＳを治療、予防または寛解するためのかかるアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩の使用に部分的に関する。

第１の態様において、本開示は、ヒトスーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）遺伝子中の突然変異と関連する筋萎縮性側索硬化症の治療または予防を、それを必要とするヒト対象において行う方法を特色とする。方法は、約１００ｍｇまたは１００ｍｇの固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量で、医薬組成物をヒト対象へ（例えば髄腔内投与によって）投与することを含み、アンチセンスオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、ＣＡＧＧＡＴＡＣＡＴＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴ（配列番号：１）からなり、ヌクレオシド１～５及び１６～２０の各々は、２’－Ｏ－メトキシエチルリボース修飾ヌクレオシドであり、ヌクレオシド６～１５の各々は、２’－デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド２～３、４～５、１６～１７、及び１８～１９の間のヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル結合であり、ヌクレオシド１～２、３～４、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、１１～１２、１２～１３、１３～１４、１４～１５、１５～１６、１７～１８、及び１９～２０の間のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各々のシトシンは、５－メチルシトシンである。

第２の態様において、本開示は、ヒトＳＯＤ１遺伝子中の突然変異と関連する筋萎縮性側索硬化症の治療または予防を、それを必要とするヒト対象において行う方法を特色とする。方法は、約６０ｍｇまたは６０ｍｇの固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量で、医薬組成物をヒト対象へ（例えば髄腔内投与によって）投与することを含み、アンチセンスオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、ＣＡＧＧＡＴＡＣＡＴＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴ（配列番号：１）からなり、ヌクレオシド１～５及び１６～２０の各々は、２’－Ｏ－メトキシエチルリボース修飾ヌクレオシドであり、ヌクレオシド６～１５の各々は、２’－デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド２～３、４～５、１６～１７、及び１８～１９の間のヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル結合であり、ヌクレオシド１～２、３～４、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、１１～１２、１２～１３、１３～１４、１４～１５、１５～１６、１７～１８、及び１９～２０の間のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各々のシトシンは、５－メチルシトシンである。

第３の態様において、本開示は、ヒトＳＯＤ１遺伝子中の突然変異と関連する筋萎縮性側索硬化症の治療または予防を、それを必要とするヒト対象において行う方法を特色とする。方法は、約４０ｍｇまたは４０ｍｇの固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量で、医薬組成物をヒト対象へ（例えば髄腔内投与によって）投与することを含み、アンチセンスオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、ＣＡＧＧＡＴＡＣＡＴＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴ（配列番号：１）からなり、ヌクレオシド１～５及び１６～２０の各々は、２’－Ｏ－メトキシエチルリボース修飾ヌクレオシドであり、ヌクレオシド６～１５の各々は、２’－デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド２～３、４～５、１６～１７、及び１８～１９の間のヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル結合であり、ヌクレオシド１～２、３～４、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、１１～１２、１２～１３、１３～１４、１４～１５、１５～１６、１７～１８、及び１９～２０の間のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各々のシトシンは、５－メチルシトシンである。

第４の態様において、本開示は、ヒトＳＯＤ１遺伝子中の突然変異と関連する筋萎縮性側索硬化症の治療または予防を、それを必要とするヒト対象において行う方法を特色とする。方法は、約２０ｍｇまたは２０ｍｇの固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量で、医薬組成物をヒト対象へ（例えば髄腔内投与によって）投与することを含み、アンチセンスオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、ＣＡＧＧＡＴＡＣＡＴＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴ（配列番号：１）からなり、ヌクレオシド１～５及び１６～２０の各々は、２’－Ｏ－メトキシエチルリボース修飾ヌクレオシドであり、ヌクレオシド６～１５の各々は、２’－デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド２～３、４～５、１６～１７、及び１８～１９の間のヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル結合であり、ヌクレオシド１～２、３～４、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、１１～１２、１２～１３、１３～１４、１４～１５、１５～１６、１７～１８、及び１９～２０の間のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各々のシトシンは、５－メチルシトシンである。

第５の態様において、本開示は、筋萎縮性側索硬化症と関連するヒトＳＯＤ１遺伝子中の突然変異を有するヒト対象において、ヒトＳＯＤ１タンパク質合成またはヒトＳＯＤ１ ｍＲＮＡレベルを低減させる方法を提供する。方法は、約１００ｍｇまたは１００ｍｇの固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量で、医薬組成物をヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを含み、アンチセンスオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、ＣＡＧＧＡＴＡＣＡＴＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴ（配列番号：１）からなり、ヌクレオシド１～５及び１６～２０の各々は、２’－Ｏ－メトキシエチルリボース修飾ヌクレオシドであり、ヌクレオシド６～１５の各々は、２’－デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド２～３、４～５、１６～１７、及び１８～１９の間のヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル結合であり、ヌクレオシド１～２、３～４、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、１１～１２、１２～１３、１３～１４、１４～１５、１５～１６、１７～１８、及び１９～２０の間のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各々のシトシンは、５－メチルシトシンである。

第６の態様において、本開示は、筋萎縮性側索硬化症と関連するヒトＳＯＤ１遺伝子中の突然変異を有するヒト対象において、ヒトＳＯＤ１タンパク質合成またはヒトＳＯＤ１ ｍＲＮＡレベルを低減させる方法を提供する。方法は、約６０ｍｇまたは６０ｍｇの固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量で、医薬組成物をヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを含み、アンチセンスオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、ＣＡＧＧＡＴＡＣＡＴＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴ（配列番号：１）からなり、ヌクレオシド１～５及び１６～２０の各々は、２’－Ｏ－メトキシエチルリボース修飾ヌクレオシドであり、ヌクレオシド６～１５の各々は、２’－デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド２～３、４～５、１６～１７、及び１８～１９の間のヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル結合であり、ヌクレオシド１～２、３～４、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、１１～１２、１２～１３、１３～１４、１４～１５、１５～１６、１７～１８、及び１９～２０の間のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各々のシトシンは、５－メチルシトシンである。

第７の態様において、本開示は、筋萎縮性側索硬化症と関連するヒトＳＯＤ１遺伝子中の突然変異を有するヒト対象において、ヒトＳＯＤ１タンパク質合成またはヒトＳＯＤ１ ｍＲＮＡレベルを低減させる方法を提供する。方法は、約４０ｍｇまたは４０ｍｇの固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量で、医薬組成物をヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを含み、アンチセンスオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、ＣＡＧＧＡＴＡＣＡＴＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴ（配列番号：１）からなり、ヌクレオシド１～５及び１６～２０の各々は、２’－Ｏ－メトキシエチルリボース修飾ヌクレオシドであり、ヌクレオシド６～１５の各々は、２’－デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド２～３、４～５、１６～１７、及び１８～１９の間のヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル結合であり、ヌクレオシド１～２、３～４、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、１１～１２、１２～１３、１３～１４、１４～１５、１５～１６、１７～１８、及び１９～２０の間のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各々のシトシンは、５－メチルシトシンである。

第８の態様において、本開示は、筋萎縮性側索硬化症と関連するヒトＳＯＤ１遺伝子中の突然変異を有するヒト対象において、ヒトＳＯＤ１タンパク質合成またはヒトＳＯＤ１ ｍＲＮＡレベルを低減させる方法を提供する。方法は、約２０ｍｇまたは２０ｍｇの固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量で、医薬組成物をヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを含み、アンチセンスオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、ＣＡＧＧＡＴＡＣＡＴＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴ（配列番号：１）からなり、ヌクレオシド１～５及び１６～２０の各々は、２’－Ｏ－メトキシエチルリボース修飾ヌクレオシドであり、ヌクレオシド６～１５の各々は、２’－デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド２～３、４～５、１６～１７、及び１８～１９の間のヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル結合であり、ヌクレオシド１～２、３～４、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、１１～１２、１２～１３、１３～１４、１４～１５、１５～１６、１７～１８、及び１９～２０の間のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各々のシトシンは、５－メチルシトシンである。

上記の態様のうちのいくつかの実施形態において、ＳＯＤ１遺伝子中の突然変異は、Ａ４Ｖ、Ｈ４６Ｒ、Ｇ９３Ｓ、Ａ４Ｔ、Ｇ１４１Ｘ、Ｄ１３３Ａ、Ｖ１４８Ｇ、Ｎ１３９Ｋ、Ｇ８５Ｒ、Ｇ９３Ａ、Ｖ１４Ｇ、Ｃ６Ｓ、Ｉ１１３Ｔ、Ｄ４９Ｋ、Ｇ３７Ｒ、Ａ８９Ｖ、Ｅ１００Ｇ、Ｄ９０Ａ、Ｔ１３７Ａ、Ｅ１００Ｋ、Ｇ４１Ａ、Ｇ４１Ｄ、Ｇ４１Ｓ、Ｇ１３Ｒ、Ｇ７２Ｓ、Ｌ８Ｖ、Ｆ２０Ｃ、Ｑ２２Ｌ、Ｈ４８Ｒ、Ｔ５４Ｒ、Ｓ５９１、Ｖ８７Ａ、Ｔ８８デルタＴＡＤ、Ａ８９Ｔ、Ｖ９７Ｍ、Ｓ１０５デルタＳＬ、Ｖ１１８Ｌ、Ｄ１２４Ｇ、Ｌ１１４Ｆ、Ｄ９０Ａ、Ｇ１２Ｒ、またはＧ１４７Ｒである。一実施形態において、ＳＯＤ１遺伝子中の突然変異はＡ４Ｖである。別の実施形態において、ＳＯＤ１遺伝子中の突然変異はＨ４６Ｒである。さらに別の実施形態において、ＳＯＤ１遺伝子中の突然変異はＧ９３Ｓである。

いくつかの実施形態において、ヒトＳＯＤ１遺伝子中の突然変異は、遺伝子検査によって同定される。

ある特定の実施形態において、上記の方法は、遺伝子検査によってヒトＳＯＤ１遺伝子中の突然変異を同定することをさらに含む。

いくつかの実施形態において、医薬組成物は、４か月の経過にわたってヒト対象へ少なくとも５回（例えば５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４回）投与される。

ある特定の実施形態において、ヒト対象は、負荷用量（複数可）に続いて、維持用量（複数可）の医薬組成物を投与される。いくつかの事例において、３回の負荷用量が投与され、第２の負荷用量は、第１の負荷用量の約２週間後または２週間後に投与され、第３の負荷用量は、第２の負荷用量の約２週間後または２週間後に投与される（例えば負荷用量は１日目、１５日目、及び２９日目に投与される）。いくつかの事例において、維持用量は、第３の負荷用量の４週間後に開始して、約４週間毎にまたは４週間投与される（例えば１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、７か月、８か月、９か月、１０か月間）。

ある特定の実施形態において、ヒト対象は、医薬組成物の３回の負荷用量に続いて、少なくとも１回の（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２回の）維持用量を投与される。いくつかの事例において、３回の負荷用量は、約２週間または２週間の間隔で投与される。いくつかの事例において、３回の負荷用量は、約１４日間または１４日間の間隔で投与される。いくつかの事例において、維持用量（複数可）は、第３の負荷用量の約４週間または４週間後に開始して、投与される。いくつかの事例において、維持用量（複数可）は、第３の負荷用量の１か月後に開始して、１か月毎に投与される。いくつかの事例において、維持用量（複数可）は、第３の負荷用量の２８日後に開始して、２８日毎に投与される。

ある特定の実施形態において、医薬組成物の負荷用量及び維持用量は、以下の：
（ｉ）第１の負荷用量の医薬組成物；
（ｉｉ）第１の負荷用量の１４日後に投与される、第２の負荷用量の医薬組成物；
（ｉｉｉ）第１の負荷用量の２８日後に投与される、第３の負荷用量の医薬組成物；及び
（ｉｖ）第３の負荷用量の２８日または１か月後に投与される、第１の維持用量の医薬組成物
の通りに、ヒト対象へ投与される。

ある特定の実施形態において、医薬組成物の負荷用量及び維持用量は、以下の：
（ｉ）１００ｍｇの固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量の、第１の負荷用量；
（ｉｉ）１００ｍｇの固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量で第１の負荷用量の１４日後に投与される、第２の負荷用量；
（ｉｉｉ）１００ｍｇの固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量で第１の負荷用量の２８日後に投与される、第３の負荷用量；及び
（ｉｖ）１００ｍｇの固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量で第３の負荷用量の２８日後に投与される、第１の維持用量
の通りに、ヒト対象へ投与される。

ある特定の実施形態において、医薬組成物の負荷用量及び維持用量は、以下の：
（ｉ）１００ｍｇの固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量の、第１の負荷用量；
（ｉｉ）１００ｍｇの固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量で第１の負荷用量の１４日後に投与される、第２の負荷用量；
（ｉｉｉ）１００ｍｇの固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量で第１の負荷用量の２８日後に投与される、第３の負荷用量；及び
（ｉｖ）１００ｍｇの固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量で第３の負荷用量の１か月後に投与される、第１の維持用量
の通りに、ヒト対象へ投与される。

第９の態様において、本開示は、ＳＯＤ１遺伝子中の突然変異と関連する筋萎縮性側索硬化症の治療または予防を、それを必要とするヒト対象において行う方法を提供する。方法は、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩を含む医薬組成物を、ヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを含み、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下の構造：

を有し、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩は、１００ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等な用量で投与される。１０５．９ｍｇの化合物Ａ（すなわちＩＳＩＳ ６６６８５３のノナデカナトリウム塩）は、１００ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等である。投与される医薬組成物は、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチドの１つもしくは複数の塩、またはそれらの混合物を含み得る。

第１０の態様において、本開示は、ＳＯＤ１遺伝子中の突然変異と関連する筋萎縮性側索硬化症の治療または予防を、それを必要とするヒト対象において行う方法を提供する。方法は、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩を含む医薬組成物を、ヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを含み、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下の構造：

を有し、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩は、６０ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等な用量で投与される。６３．５ｍｇの化合物Ａは、６０ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等である。投与される医薬組成物は、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチドの１つもしくは複数の塩、またはそれらの混合物を含み得る。

第１１の態様において、本開示は、ＳＯＤ１遺伝子中の突然変異と関連する筋萎縮性側索硬化症の治療または予防を、それを必要とするヒト対象において行う方法を提供する。方法は、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩を含む医薬組成物を、ヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを含み、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下の構造：

を有し、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩は、４０ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等な用量で投与される。４２．３ｍｇの化合物Ａは、４０ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等である。投与される医薬組成物は、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチドの１つもしくは複数の塩、またはそれらの混合物を含み得る。

第１２の態様において、本開示は、ＳＯＤ１遺伝子中の突然変異と関連する筋萎縮性側索硬化症の治療または予防を、それを必要とするヒト対象において行う方法を提供する。方法は、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩を含む医薬組成物を、ヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを含み、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下の構造：

を有し、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩は、２０ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等な用量で投与される。２１．２ｍｇの化合物Ａは、２０ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等である。投与される医薬組成物は、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチドの１つもしくは複数の塩、またはそれらの混合物を含み得る。

第１３の態様において、本開示は、筋萎縮性側索硬化症と関連するヒトＳＯＤ１遺伝子中の突然変異を有するヒト対象において、ヒトＳＯＤ１タンパク質合成またはヒトＳＯＤ１ ｍＲＮＡレベルを低減させる方法を提供する。方法は、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩を含む医薬組成物を、ヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを含み、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下の構造：

を有し、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩は、１００ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等な用量で投与される。１０５．９ｍｇの化合物Ａは、１００ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等である。投与される医薬組成物は、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチドの１つもしくは複数の塩、またはそれらの混合物を含み得る。

第１４の態様において、本開示は、筋萎縮性側索硬化症と関連するヒトＳＯＤ１遺伝子中の突然変異を有するヒト対象において、ヒトＳＯＤ１タンパク質合成またはヒトＳＯＤ１ ｍＲＮＡレベルを低減させる方法を提供する。方法は、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩を含む医薬組成物を、ヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを含み、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下の構造：

を有し、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩は、６０ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等な用量で投与される。６３．５ｍｇの化合物Ａは、６０ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等である。投与される医薬組成物は、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチドの１つもしくは複数の塩、またはそれらの混合物を含み得る。

第１５の態様において、本開示は、筋萎縮性側索硬化症と関連するヒトＳＯＤ１遺伝子中の突然変異を有するヒト対象において、ヒトＳＯＤ１タンパク質合成またはヒトＳＯＤ１ ｍＲＮＡレベルを低減させる方法を提供する。方法は、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩を含む医薬組成物を、ヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを含み、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下の構造：

を有し、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩は、４０ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等な用量で投与される。４２．３ｍｇの化合物Ａは、４０ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等である。投与される医薬組成物は、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチドの１つもしくは複数の塩、またはそれらの混合物を含み得る。

第１６の態様において、本開示は、筋萎縮性側索硬化症と関連するヒトＳＯＤ１遺伝子中の突然変異を有するヒト対象において、ヒトＳＯＤ１タンパク質合成またはヒトＳＯＤ１ ｍＲＮＡレベルを低減させる方法を提供する。方法は、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩を含む医薬組成物を、ヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを含み、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下の構造：

を有し、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩は、２０ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等な用量で投与される。２１．２ｍｇの化合物Ａは、２０ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等である。投与される医薬組成物は、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチドの１つもしくは複数の塩、またはそれらの混合物を含み得る。

いくつかの実施形態において、ヒト対象は、アンチセンスオリゴヌクレオチドの塩を投与される。いくつかの実施形態において、塩はナトリウム塩である。いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドの塩は、以下の構造：

を有する。

上記の態様のうちのいくつかの実施形態において、ＳＯＤ１遺伝子中の突然変異は、Ａ４Ｖ、Ｈ４６Ｒ、Ｇ９３Ｓ、Ａ４Ｔ、Ｇ１４１Ｘ、Ｄ１３３Ａ、Ｖ１４８Ｇ、Ｎ１３９Ｋ、Ｇ８５Ｒ、Ｇ９３Ａ、Ｖ１４Ｇ、Ｃ６Ｓ、Ｉ１１３Ｔ、Ｄ４９Ｋ、Ｇ３７Ｒ、Ａ８９Ｖ、Ｅ１００Ｇ、Ｄ９０Ａ、Ｔ１３７Ａ、Ｅ１００Ｋ、Ｇ４１Ａ、Ｇ４１Ｄ、Ｇ４１Ｓ、Ｇ１３Ｒ、Ｇ７２Ｓ、Ｌ８Ｖ、Ｆ２０Ｃ、Ｑ２２Ｌ、Ｈ４８Ｒ、Ｔ５４Ｒ、Ｓ５９１、Ｖ８７Ａ、Ｔ８８デルタＴＡＤ、Ａ８９Ｔ、Ｖ９７Ｍ、Ｓ１０５デルタＳＬ、Ｖ１１８Ｌ、Ｄ１２４Ｇ、Ｌ１１４Ｆ、Ｄ９０Ａ、Ｇ１２Ｒ、またはＧ１４７Ｒである。一実施形態において、ＳＯＤ１遺伝子中の突然変異はＡ４Ｖである。別の実施形態において、ＳＯＤ１遺伝子中の突然変異はＨ４６Ｒである。さらに別の実施形態において、ＳＯＤ１遺伝子中の突然変異はＧ９３Ｓである。

いくつかの実施形態において、ヒトＳＯＤ１遺伝子中の突然変異は、遺伝子検査によって同定される。

ある特定の実施形態において、上記の方法は、遺伝子検査によってヒトＳＯＤ１遺伝子中の突然変異を同定することをさらに含む。

いくつかの実施形態において、医薬組成物は、４か月の経過にわたってヒト対象へ少なくとも５回投与される。

ある特定の実施形態において、ヒト対象は、負荷用量（複数可）に続いて、維持用量（複数可）の医薬組成物を投与される。いくつかの事例において、３回の負荷用量が投与され、負荷用量は２週間離され、例えば１日目、１５日目、及び２９日目である。いくつかの事例において、維持用量は、第３の負荷用量の４週間後に開始して、４週間毎に投与される（例えば１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、７か月、８か月、９か月、１０か月間）。

ある特定の実施形態において、ヒト対象は、医薬組成物の３回の負荷用量に続いて、少なくとも１回の（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２回の）維持用量を投与される。いくつかの事例において、３回の負荷用量は、２週間の間隔で投与される。いくつかの事例において、３回の負荷用量は、１４日間の間隔で投与される。いくつかの事例において、維持用量（複数可）は、第３の負荷用量の４週間後に開始して、４週間毎に投与される。いくつかの事例において、維持用量（複数可）は、第３の負荷用量の１か月後に開始して、１か月毎に投与される。いくつかの事例において、維持用量（複数可）は、第３の負荷用量の２８日後に開始して、２８日毎に投与される。

ある特定の実施形態において、医薬組成物の負荷用量及び維持用量は、以下の：
（ｉ）第１の負荷用量の医薬組成物；
（ｉｉ）第１の負荷用量の１４日後に投与される、第２の負荷用量の医薬組成物；
（ｉｉｉ）第１の負荷用量の２８日後に投与される、第３の負荷用量の医薬組成物；及び
（ｉｖ）第３の負荷用量の２８日または１か月後に投与される、第１の維持用量の医薬組成物
の通りに、ヒト対象へ投与される。

ある特定の実施形態において、医薬組成物の負荷用量及び維持用量は、以下の：
（ｉ）１００ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等な、第１の負荷用量；
（ｉｉ）１００ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等で、第１の負荷用量の１４日後に投与される、第２の負荷用量；
（ｉｉｉ）１００ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等で、第１の負荷用量の２８日後に投与される、第３の負荷用量；
及び
（ｉｖ）１００ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等で、第３の負荷用量の２８日後に投与される、第１の維持用量
の通りに、ヒト対象へ投与される。

ある特定の実施形態において、医薬組成物の負荷用量及び維持用量は、以下の：
（ｉ）１００ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等な、第１の負荷用量；
（ｉｉ）１００ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等で、第１の負荷用量の１４日後に投与される、第２の負荷用量；
（ｉｉｉ）１００ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等で、第１の負荷用量の２８日後に投与される、第３の負荷用量；
及び
（ｉｖ）１００ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等で、第３の負荷用量の１か月後に投与される、第１の維持用量
の通りに、ヒト対象へ投与される。

別の態様において、本開示は、アンチセンスオリゴヌクレオチドの滅菌調製物を含むシリンジまたはポンプを特色とする。シリンジまたはポンプは、２０ｍｇ、４０ｍｇ、６０ｍｇ、または１００ｍｇの固定用量でのアンチセンスオリゴヌクレオチドの髄腔内投与のために適合される。アンチセンスオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、ＣＡＧＧＡＴＡＣＡＴＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴ（配列番号：１）からなり、ヌクレオシド１～５及び１６～２０の各々は、２’－Ｏ－メトキシエチルリボース修飾ヌクレオシドであり、ヌクレオシド６～１５の各々は、２’－デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド２～３、４～５、１６～１７、及び１８～１９の間のヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル結合であり、ヌクレオシド１～２、３～４、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、１１～１２、１２～１３、１３～１４、１４～１５、１５～１６、１７～１８、及び１９～２０の間のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各々のシトシンは、５－メチルシトシンである。

別段定義されない限り、本明細書において使用されるすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって共通して理解されるものと同じ意味を有する。本発明の実践または試験において、本明細書において記載されるものに類似するかまたは等価である方法及び材料を使用することができるが、例示的な方法及び材料が以下に記載される。本明細書において言及されるすべての出版物、特許出願、特許、及び他の参照文献は、それらの全体が参照によって援用される。矛盾する事例において、定義を含めて本出願が優先されるだろう。材料、方法、及び実施例は、単に説明的なものであり、限定を意図したものではない。

本発明の他の特色及び利点は、以下の発明を実施するための形態及び特許請求の範囲から明らかである。

異なるヒトＳＯＤ１突然変異の有る患者についての平均罹患期間（症状開始からの年数）のグラフ図である。 反復投与用量漸増（ＭＡＤ）コホートにおいて観察された化合物Ａの脳脊髄液（ＣＳＦ）濃度の用量依存的増加を図示する。一番上の破線は１００ｍｇの用量、次の２つの破線は６０及び４０ｍｇの用量を示し、最も下の破線は２０ｍｇの用量を示す。 ＭＡＤコホートにおいて観察されたＣＳＦのＳＯＤ１濃度の用量依存的減少を示す。試験８５日目で、一番上の円は２０ｍｇ、次の下の円はプラセボ、次の下の円は６０ｍｇ、次の下の円は４０ｍｇ、及び最も下の円は１００ｍｇの化合物Ａに対応する。 ＭＡＤコホート中の患者の筋萎縮性側索硬化症機能評価スケール改訂版（ＡＬＦＳＦＲＳ－Ｒ）における、ベースラインからのＬＳ平均変化のプロットである。試験８５日目で、一番上の円は４０ｍｇの化合物Ａ、次の下の円は１００ｍｇの化合物Ａ、次の下の円は６０ｍｇの化合物Ａ、次の下の円は２０ｍｇの化合物Ａ、及び最も下の円はプラセボに対応する。 ＭＡＤコホート中の患者のパーセントで予測された静的肺活量（ＳＶＣ）における、ベースラインからのＬＳ平均変化のプロット（９０％信頼区間）である。試験８５日目で、一番上の円は６０ｍｇの化合物Ａ、次の下の円は４０ｍｇの化合物Ａ、次の下の円は１００ｍｇの化合物Ａ、次の下の円は２０ｍｇの化合物Ａ、及び最も下の円はプラセボに対応する。 ＭＡＤコホート中の患者のハンドヘルドダイナモメトリー（ＨＨＤ）の全体のメガスコアにおける、ベースラインからのＬＳ平均変化のプロット（９０％信頼区間）である。試験９２日目で、一番上の円は４０ｍｇの化合物Ａ、次の下の円は１００ｍｇの化合物Ａ、次の下の円は６０ｍｇの化合物Ａ、次の下の円は２０ｍｇの化合物Ａ、及び最も下の円はプラセボに対応する。 プラセボまたは１００ｍｇの化合物Ａのいずれかを投与された進行の速い突然変異の有る患者における、８５日目までの、ＡＬＳＦＲＳ－Ｒ、ＳＶＣ、ＨＨＤメガスコア、及びＣＳＦのＳＯＤ１レベルのベースラインからの変化を示す。 プラセボまたは１００ｍｇの化合物Ａのいずれかを投与された進行の遅い突然変異の有る患者における、８５日目までの、ＡＬＳＦＲＳ－Ｒ、ＳＶＣ、ＨＨＤメガスコア、及びＣＳＦのＳＯＤ１レベルのベースラインからの変化を示す。 進行の速いＳＯＤ１突然変異の有る患者における、８５日目までの、ベースラインからのｐＮＦＨレベルに対する１００ｍｇの化合物Ａによる治療効果を示す。 進行の遅いＳＯＤ１突然変異の有る患者における、８５日目までの、ベースラインからのｐＮＦＨレベルに対する１００ｍｇの化合物Ａによる治療効果を示す。

本開示は、スーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）の発現を低減させるアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩の投薬レジメン、及びヒトＳＯＤ１遺伝子の突然変異を有する成人において、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を治療、予防または寛解するためのかかるアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩の使用を特色とする。

定義
「２’－Ｏ－メトキシエチル」（２’－ＭＯＥ及び２’－ＯＣＨ_２ＣＨ_２－ＯＣＨ_３及びＭＯＥでもある）は、フラノース環の２’位のＯ－メトキシ－エチル修飾を指す。２’－Ｏ－メトキシエチル修飾糖は、修飾糖である。

「２’－ＭＯＥヌクレオシド」（２’－Ｏ－メトキシエチルヌクレオシドでもある）は、ＭＯＥ修飾糖部分を含むヌクレオシドを意味する。

「５－メチルシトシン」は、５’位へ結合されたメチル基により修飾されたシトシンを意味する。５－メチルシトシンは、修飾核酸塩基である。

「ホスホロチオエート結合」は、ホスホジエステル結合が非架橋酸素原子のうちの１つを硫黄原子により置き換えることによって修飾されるヌクレオシド間の結合を意味する。ホスホロチオエート結合は修飾ヌクレオシド間結合である。

物質の量の文脈における「約」は、指示値の±１０％を意味する。したがって、約１００ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、９０ｍｇ～１１０ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドを包含する。時間的な単位（例えば約１０日または約１週間）の文脈において、「約」は±３日を意味する。

「髄腔内またはＩＴ」は、脳及び脊髄を覆うクモ膜下の脳脊髄液の中への投与を意味する。

「負荷用量」は、投与が開始され、薬物（例えばアンチセンスオリゴヌクレオチド）の定常状態濃度が達成される投薬相の間に投与される用量を意味する。

「維持用量」は、薬物（例えばアンチセンスオリゴヌクレオチド）の定常状態濃度が達成された後の投薬相の間に投与される用量を意味する。

「固定用量」は、対象において所望される治療濃度（例えば定常状態濃度）または効果を達成することが意図される、アンチセンスオリゴヌクレオチドのあらかじめ決定された量（例えば２０ｍｇ、４０ｍｇ、６０ｍｇ、１００ｍｇ）を指す。

筋萎縮性側索硬化症
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）は、皮質、脳幹、及び脊髄内で運動性ニューロンの損失をもたらす稀な神経変性疾患である。患者は、延髄筋、呼吸筋、及び随意筋における、筋肉の質量、体力、及び機能の進行性喪失に悩まされる。低下は避けられず、診断後に平均で２～５年で典型的には呼吸不全から死亡する。大多数の患者は散発性ＡＬＳを患うが、患者のわずかな割合（およそ２％）は、スーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）における様々な突然変異によって引き起こされる遺伝型または家族型のＡＬＳを有する。１９９３年に最初に見出されて以来、１８０を上回るＳＯＤ１突然変異が、ＡＬＳのこの形態（ＳＯＤ１ ＡＬＳと称される）を引き起こすことが報告されている。Ｔｈｅ Ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ Ｌａｔｅｒａｌ Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ Ｏｎｌｉｎｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｄａｔａｂａｓｅ（ＡＬＳｏＤ）．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，Ｐｓｙｃｈｏｌｏｇｙ ＆ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ．Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ２０１５；Ｒｏｓｅｎ，Ｎａｔｕｒｅ，３６４（６４３５）：３６２（１９９３）。個別の突然変異についての疾患の進行は変動し、最も深刻な突然変異は１５か月未満の生存である。突然変異がＳＯＤ１ ＡＬＳを引き起こすメカニズムは知られていないが、説得力のあるデーターから、ＳＯＤ１活性の喪失ではなく、毒性の機能獲得が運動性ニューロン死をもたらす事象のカスケードを開始する引き金であることが示唆される（Ｂｒｕｉｊｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２８１（５３８４）：１８５１－４（１９９８））。

ＡＬＳのために認可された治療は、リルゾール（Ｒｉｌｕｔｅｋ（登録商標））及びエダラボン（Ｒａｄｉｃａｖａ（商標））である。リルゾールは、体力または障害における明らかな改善無しに、生存のわずかな増加（２～３か月）を提供する。エダラボンは、筋萎縮性側索硬化症機能評価スケール改訂版（ＡＬＳＦＲＳ－Ｒ）によって測定される機能低下を軽減する。エダラボンの生存に対する効果は、不明である。ＳＯＤ１に特異的なＡＬＳ治療は、利用可能ではない。

スーパーオキシドジスムターゼ１
スーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）としても既知のスーパーオキシドジスムターゼ［Ｃｕ－Ｚｎ］は、染色体２１に所在し、ヒトにおいてＳＯＤ１遺伝子によってコードされる酵素である。

ＳＯＤ１は、β－バレルを形成し、各々のサブユニット中に分子内ジスルフィド結合及び二核のＣｕ／Ｚｎ部位を含有する３２ｋＤａのホモ二量体である。このＣｕ／Ｚｎ部位は銅イオン及び亜鉛イオンを保持し、スーパーオキシドを過酸化水素及び二酸素へ不均化させることを触媒する役割を担う。

ＳＯＤ１は、身体中の遊離スーパーオキシドラジカルの破壊のための役割を担う３つのスーパーオキシドジスムターゼのうちの１つである。コードされるアイソザイムは可溶性の細胞質及びミトコンドリア膜間腔のタンパク質であり、ホモ二量体として作用して、天然に存在するが有害なスーパーオキシドラジカルを分子酸素及び過酸化水素へ変換する。次いで過酸化水素は、カタラーゼと呼ばれる別の酵素によって分解され得る。

ＳＯＤ１遺伝子中の少なくとも１８０の突然変異が、家族性ＡＬＳに関連していた（Ｃｏｎｗｉｔ ＲＡ，Ｊ Ｎｅｕｒｏｌ Ｓｃｉ．，．２５１（１－２）：１－２（２００６）；Ａｌ－Ｃｈａｌａｂｉ Ａ，Ｌｅｉｇｈ ＰＮ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．ｉｎ Ｎｅｕｒｏｌ．，１３（４）：３９７－４０５（２０００）；Ｒｅｄｌｅｒ ＲＬ，Ｄｏｋｈｏｌｙａｎ ＮＶ，Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１０７：２１５－６２（２０１２））。しかしながら、野生型ＳＯＤ１も、細胞ストレスの条件下で、散発性ＡＬＳ事例の有意な割合（ＡＬＳ患者の９０％に相当する）に関与していた。ヒトＳＯＤ１中の最も頻繁な突然変異は、米国でＡ４Ｖ；日本でＨ４６Ｒ；及びアイスランドでＧ９３Ｓである。他の周知のヒトＳＯＤ１突然変異としては、Ａ４Ｔ、Ｇ１４１Ｘ、Ｄ１３３Ａ、Ｖ１４８Ｇ、Ｎ１３９Ｋ、Ｇ８５Ｒ、Ｇ９３Ａ、Ｖ１４Ｇ、Ｃ６Ｓ、Ｉ１１３Ｔ、Ｄ４９Ｋ、Ｇ３７Ｒ、Ａ８９Ｖ、Ｅ１００Ｇ、Ｄ９０Ａ、Ｔ１３７Ａ、Ｅ１００Ｋ、Ｇ４１Ａ、Ｇ４１Ｄ、Ｇ４１Ｓ、Ｇ１３Ｒ、Ｇ７２Ｓ、Ｌ８Ｖ、Ｆ２０Ｃ、Ｑ２２Ｌ、Ｈ４８Ｒ、Ｔ５４Ｒ、Ｓ５９１、Ｖ８７Ａ、Ｔ８８デルタＴＡＤ、Ａ８９Ｔ、Ｖ９７Ｍ、Ｓ１０５デルタＳＬ、Ｖ１１８Ｌ、Ｄ１２４Ｇ、Ｌ１１４Ｆ、Ｄ９０Ａ、Ｇ１２Ｒ、及びＧ１４７Ｒが挙げられる。ＳＯＤ１突然変異に基づく罹患期間には有意な不均一性がある（図１を参照）。実質的には、すべての公知のＡＬＳを引き起こすＳＯＤ１突然変異は、優性様式で作用し、ＳＯＤ１遺伝子の単一の突然変異コピーは、当該疾患を引き起こすのに十分である。

ヒトＳＯＤ１のアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ００４４１及びＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＰ＿０００４４５で見出され、以下に提供される。
ＭＡＴＫＡＶＣＶＬＫ ＧＤＧＰＶＱＧＩＩＮ ＦＥＱＫＥＳＮＧＰＶ ＫＶＷＧＳＩＫＧＬＴ ＥＧＬＨＧＦＨＶＨＥ ＦＧＤＮＴＡＧＣＴＳ ＡＧＰＨＦＮＰＬＳＲ ＫＨＧＧＰＫＤＥＥＲ ＨＶＧＤＬＧＮＶＴＡ ＤＫＤＧＶＡＤＶＳＩ ＥＤＳＶＩＳＬＳＧＤ ＨＣＩＩＧＲＴＬＶＶ ＨＥＫＡＤＤＬＧＫＧ ＧＮＥＥＳＴＫＴＧＮ ＡＧＳＲＬＡＣＧＶＩ ＧＩＡＱ（配列番号：２）

ヒトＳＯＤ１をコードするヌクレオチド配列は、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿０００４５４．４で提供され、同様に以下に提供される（本開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドによって認識される領域に下線が引かれる）。

（配列番号：３）

ＩＳＩＳ ６６６８５３
ＩＳＩＳ ６６６８５３は、ＣＡＧＧＡＴＡＣＡＴＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴ（配列番号：１）の（５’から３’の）配列を有する５－１０－５のＭＯＥギャップマーであり、ヌクレオシド１～５及び１６～２０の各々は、２’－Ｏ－メトキシエチルリボース修飾ヌクレオシドであり、ヌクレオシド６～１５の各々は、２’－デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド２～３、４～５、１６～１７、及び１８～１９の間のヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル結合であり、ヌクレオシド１～２、３～４、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、１１～１２、１２～１３、１３～１４、１４～１５、１５～１６、１７～１８、及び１９～２０の間のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各々のシトシンは、５－メチルシトシンである。ＩＳＩＳ ６６６８５３は、以下の化学的表記法：ｍＣｅｓ Ａｅｏ Ｇｅｓ Ｇｅｏ Ａｅｓ Ｔｄｓ Ａｄｓ ｍＣｄｓ Ａｄｓ Ｔｄｓ Ｔｄｓ Ｔｄｓ ｍＣｄｓ Ｔｄｓ Ａｄｓ ｍＣｅｏ Ａｅｓ Ｇｅｏ ｍＣｅｓ Ｔｅによって記載され；式中、
Ａ＝アデニン、
ｍＣ＝５－メチルシトシン、
Ｇ＝グアニン、
Ｔ＝チミン、
ｅ＝２’－Ｏ－メトキシエチルリボース修飾糖、
ｄ＝２’－デオキシリボース糖、
ｓ＝ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及び
ｏ＝ホスホジエステルヌクレオシド間結合である。ＩＳＩＳ ６６６８５３配列は、以下のように省略でも記述され得る。

下線が引かれた残基は、２’－ＭＯＥヌクレオシドである。Ｐ＝Ｏの注釈は、リン酸ジエステル結合の所在位置を反映する。

ＩＳＩＳ ６６６８５３は、以下の化学構造：

によって図示される。

アンチセンスオリゴヌクレオチドは、溶液中で、遊離酸形態、塩形態、またはそれらの混合物で存在し得ることが理解されよう。

ＩＳＩＳ ６６６８５３のノナデカナトリウム塩（「化合物Ａ」）
化合物Ａは、ＩＳＩＳ ６６６８５３のノナデカナトリウム塩であり、ＳＯＤ１ ＡＬＳに罹患した対象におけるＳＯＤ１タンパク質のレベルを低減する、ＳＯＤ１メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）のアンチセンスオリゴヌクレオチド阻害物質である。ＳＯＤ１ ｍＲＮＡ及び後続して毒性のＳＯＤ１タンパク質を低減させることは、ＳＯＤ１ ＡＬＳに罹患した対象に治療利益を提供し得る。

化合物Ａの構造は、以下に提供される。

化合物Ａの分子式は、Ｃ_２３０Ｈ_２９８Ｎ_７２Ｎａ_１９Ｏ_１２３Ｐ_１９Ｓ_１５であり、分子量＝７５４５．５９ａｍｕを有する。

化合物Ａは、ヒトＳＯＤ１のｍＲＮＡの３’非翻訳領域（３’ＵＴＲ）の一部に相補的であり、ワトソン・クリック塩基対によって結合する。同族ｍＲＮＡへの化合物Ａのハイブリダイゼーション（結合）は、ＳＯＤ１のｍＲＮＡのＲＮａｓｅ－Ｈ１媒介性分解をもたらし、したがってＳＯＤ１タンパク質合成の量を低減する。ＲＮａｓｅ Ｈは、デオキシリボ核酸－リボ核酸（ＤＮＡ－ＲＮＡ）ヘテロ二重らせんを認識して二重らせんのＲＮＡ鎖を切断する、普遍的に発現される酵素（ヌクレアーゼ）である。ＳＯＤ１ ｍＲＮＡの３’－ＵＴＲ領域へ結合することによって、化合物Ａは、ＲＮａｓｅ Ｈ１をＳＯＤ１ ｍＲＮＡへ選択的に標的化し、その切断を増進し、このことはＳＯＤ１の野生型及び突然変異体の両方の発現減少を導く。

化合物Ａは、ＳＯＤ１ Ｇ９３Ａトランスジェニックマウスにおける生存期間中央値を有意に増加させた（マンテル・コックス、ｐ＜０．０１）。ＳＯＤ１ Ｇ９３Ａトランスジェニックマウスにおいて複合筋活動電位によって測定されるように、神経筋機能の用量依存的保護も引き起こした。

コンジュゲートされたアンチセンスオリゴヌクレオチド
本開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、もたらされたアンチセンスオリゴヌクレオチドの活性、細胞分布、または細胞取り込みを促進する、１つまたは複数の部分またはコンジュゲートへ共有結合され得る。典型的なコンジュゲート基としては、コレステロール部分及び脂質部分が挙げられる。追加のコンジュゲート基としては、炭水化物、リン脂質、ビオチン、フェナジン、フォレート、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、クマリン、及び色素が挙げられる。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドの１つまたは両方の末端へ概して結合されている１つまたは複数の安定化基を有して、特性（例えばヌクレアーゼ安定性等）を促進するように修飾もされ得る。安定化基には、キャップ構造が含まれる。これらの末端修飾は、末端核酸を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドをエキソヌクレアーゼ分解から保護し、細胞内の送達及び／または局在化を支援することができる。キャップは、５’末端（５’キャップ）もしくは３’末端（３’キャップ）で存在し得るか、または両方の末端上に存在し得る。キャップ構造は当技術分野において周知であり、例えば反転デオキシ脱塩基キャップが挙げられる。アンチセンスオリゴヌクレオチドの１つまたは両方の末端をキャッピングしてヌクレアーゼ安定性を付与するのに使用され得る、さらなる３’安定化基及び５’安定化基としては、ＷＯ０３／００４６０２中で開示されるものが挙げられる。

医薬組成物の製剤化のための組成物及び方法
本開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩は、医薬組成物または製剤の調製のために、薬学的に許容される活性のある物質または不活性な物質と混合され得る。医薬組成物の製剤化のための組成物及び方法は、投与経路、疾患の程度、または投与される用量が挙げられるがこれらに限定されない、多数の基準に依存する。

ＳＯＤ１核酸へ標的化されたアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩は、好適な薬学的に許容される希釈物質または担体とアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩を組み合わせることによって、医薬組成物中で使用され得る。薬学的に許容される希釈物質はとしては、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。ＰＢＳは、非経口で送達される組成物中での使用に好適な希釈物質である。したがって、一実施形態において、ＳＯＤ１核酸へ標的化されたアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩、及び薬学的に許容される希釈物質を含む医薬組成物が、本明細書において記載される方法において用いられる。

本明細書において記載されるアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩は、対象への髄腔内投与のために医薬組成物として製剤化され得る。

本開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、任意の薬学的に許容される塩、エステルもしくはかかるエステルの塩、またはヒトを含む動物への投与に際してその生物学的に活性のある代謝物質もしくは残渣を提供することが可能な（直接または間接的）任意の他のオリゴヌクレオチドを網羅する。したがって例えば、本開示は、アンチセンスオリゴヌクレオチドの薬学的に許容される塩及び他の生物学的同等物にも関する。好適な薬学的に許容される塩としては、ナトリウム塩及びカリウム塩が挙げられるがこれらに限定されない。

治療の方法
本開示は、ヒトＳＯＤ１遺伝子中の突然変異と関連する筋萎縮性側索硬化症の治療または予防を、それを必要とするヒト対象において行う方法を特色とする。方法は、固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドをヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを含み、アンチセンスオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、ＣＡＧＧＡＴＡＣＡＴＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴ（配列番号：１）からなり、ヌクレオシド１～５及び１６～２０の各々は、２’－Ｏ－メトキシエチルリボース修飾ヌクレオシドであり、ヌクレオシド６～１５の各々は、２’－デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド２～３、４～５、１６～１７、及び１８～１９の間のヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル結合であり、ヌクレオシド１～２、３～４、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、１１～１２、１２～１３、１３～１４、１４～１５、１５～１６、１７～１８、及び１９～２０の間のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各々のシトシンは、５－メチルシトシンである。ある特定の実例において、アンチセンスオリゴヌクレオチドの固定用量は、約１００ｍｇまたは１００ｍｇである。他の実例において、アンチセンスオリゴヌクレオチドの固定用量は、約６０ｍｇまたは６０ｍｇである。さらに他の実例において、アンチセンスオリゴヌクレオチドの固定用量は、約４０ｍｇまたは４０ｍｇである。他のいくつかの実例において、アンチセンスオリゴヌクレオチドの固定用量は、約２０ｍｇまたは２０ｍｇである。ある特定の実例において、アンチセンスオリゴヌクレオチドのナトリウム塩の固定用量は、約１０５．９ｍｇまたは１０５．９ｍｇである。他の実例において、アンチセンスオリゴヌクレオチドのナトリウム塩の固定用量は、約６３．５ｍｇ、または６３．５ｍｇである。さらに他の実例において、アンチセンスオリゴヌクレオチドのナトリウム塩の固定用量は、約４２．３ｍｇまたは４２．３ｍｇである。他のいくつかの実例において、アンチセンスオリゴヌクレオチドのナトリウム塩の固定用量は、約２１．２ｍｇまたは２１．２ｍｇである。

筋萎縮性側索硬化症と関連するヒトＳＯＤ１遺伝子中の突然変異を有するヒト対象において、ヒトＳＯＤ１タンパク質合成を低減させる方法も提供される。方法は、固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドをヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを含み、アンチセンスオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、ＣＡＧＧＡＴＡＣＡＴＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴ（配列番号：１）からなり、ヌクレオシド１～５及び１６～２０の各々は、２’－Ｏ－メトキシエチルリボース修飾ヌクレオシドであり、ヌクレオシド６～１５の各々は、２’－デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド２～３、４～５、１６～１７、及び１８～１９の間のヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル結合であり、ヌクレオシド１～２、３～４、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、１１～１２、１２～１３、１３～１４、１４～１５、１５～１６、１７～１８、及び１９～２０の間のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各々のシトシンは、５－メチルシトシンである。ある特定の実例において、アンチセンスオリゴヌクレオチドの固定用量は、約１００ｍｇまたは１００ｍｇである。他の実例において、アンチセンスオリゴヌクレオチドの固定用量は、約６０ｍｇまたは６０ｍｇである。さらに他の実例において、アンチセンスオリゴヌクレオチドの固定用量は、約４０ｍｇまたは４０ｍｇである。他のいくつかの実例において、アンチセンスオリゴヌクレオチドの固定用量は、約２０ｍｇまたは２０ｍｇである。

筋萎縮性側索硬化症と関連するヒトＳＯＤ１遺伝子中の突然変異を有するヒト対象において、ヒトＳＯＤ１ ｍＲＮＡレベルを低減させる方法も提供される。方法は、固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドをヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを含み、アンチセンスオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、ＣＡＧＧＡＴＡＣＡＴＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴ（配列番号：１）からなり、ヌクレオシド１～５及び１６～２０の各々は、２’－Ｏ－メトキシエチルリボース修飾ヌクレオシドであり、ヌクレオシド６～１５の各々は、２’－デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド２～３、４～５、１６～１７、及び１８～１９の間のヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル結合であり、ヌクレオシド１～２、３～４、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、１１～１２、１２～１３、１３～１４、１４～１５、１５～１６、１７～１８、及び１９～２０の間のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各々のシトシンは、５－メチルシトシンである。ある特定の実例において、アンチセンスオリゴヌクレオチドの固定用量は、約１００ｍｇまたは１００ｍｇである。他の実例において、アンチセンスオリゴヌクレオチドの固定用量は、約６０ｍｇまたは６０ｍｇである。さらに他の実例において、アンチセンスオリゴヌクレオチドの固定用量は、約４０ｍｇまたは４０ｍｇである。他のいくつかの実例において、アンチセンスオリゴヌクレオチドの固定用量は、約２０ｍｇまたは２０ｍｇである。

ＳＯＤ１遺伝子中の突然変異と関連する筋萎縮性側索硬化症の治療または予防を、それを必要とするヒト対象において行う方法も提供され、方法は、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩を含む医薬組成物を、ヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを伴い、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下の構造：

を有する。

ある特定の実例において、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩は、約１００ｍｇまたは１００ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等な用量で投与される。他の実例において、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩は、約６０ｍｇまたは６０ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等な用量で投与される。他の実例において、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩は、約４０ｍｇまたは４０ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等な用量で投与される。他の実例において、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩は、約２０ｍｇまたは２０ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等な用量で投与される。

筋萎縮性側索硬化症と関連するヒトＳＯＤ１遺伝子中の突然変異を有するヒト対象において、ヒトＳＯＤ１タンパク質合成を低減させる方法も提供され、方法は、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩を含む医薬組成物を、ヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを伴い、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下の構造：

を有する。

ある特定の実例において、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩は、約１００ｍｇまたは１００ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等な用量で投与される。他の実例において、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩は、約６０ｍｇまたは６０ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等な用量で投与される。他の実例において、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩は、約４０ｍｇまたは４０ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等な用量で投与される。他の実例において、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩は、約２０ｍｇまたは２０ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等な用量で投与される。

筋萎縮性側索硬化症と関連するヒトＳＯＤ１遺伝子中の突然変異を有するヒト対象において、ヒトＳＯＤ１ ｍＲＮＡレベルを低減させる方法も提供され、方法は、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩を含む医薬組成物を、ヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを伴い、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下の構造：

を有する。

ある特定の実例において、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩は、約１００ｍｇまたは１００ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等な用量で投与される。他の実例において、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩は、約６０ｍｇまたは６０ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等な用量で投与される。他の実例において、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩は、約４０ｍｇまたは４０ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等な用量で投与される。他の実例において、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩は、約２０ｍｇまたは２０ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドに同等な用量で投与される。

いくつかの事例において、上記の固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩は、１週間毎に１回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、または４週間毎に１回ヒト対象へ投与される。

いくつかの事例において、本明細書において記載されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、医薬組成物の一部分としてヒト対象へ投与される。ある特定の実施形態において、医薬組成物は、約２０ｍｇの固定用量の（すなわち同等量の）アンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量でヒト対象へ投与される。ある特定の実施形態において、医薬組成物は、約４０ｍｇの固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量でヒト対象へ投与される。ある特定の実施形態において、医薬組成物は、約６０ｍｇの固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量でヒト対象へ投与される。ある特定の実施形態において、医薬組成物は、約１００ｍｇの固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量でヒト対象へ投与される。

ある特定の実施形態において、上記の固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩は、負荷用量（複数可）として投与される。いくつかの実施形態において、上記の固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、維持用量（複数可）として投与される。ある特定の実例において、上記の固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、負荷用量（複数可）、続いて維持用量（複数可）として投与される。負荷用量（複数可）は、例えば１週間毎に、２週間毎に、３週間毎に、または４週間毎に投与され得る。維持用量（複数可）は、最後の負荷用量後に、例えば１週間毎に、２週間毎に、３週間毎に、または４週間毎に投与され得る。いくつかの事例において、維持用量（複数可）は、１か月毎に投与される。

ある特定の実施形態において、ヒト対象は、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩の３回の負荷用量に続いて、少なくとも１回の（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２回またはそれ以上の）維持用量を投与される。いくつかの事例において、３回の負荷用量は、２週間の間隔で投与される。いくつかの事例において、３回の負荷用量は、１４日間の間隔で投与される。いくつかの事例において、維持用量（複数可）は、第３の負荷用量の４週間後に開始して、投与される。いくつかの事例において、維持用量（複数可）は、第３の負荷用量後に開始して、１か月毎に投与される。いくつかの事例において、維持用量（複数可）は、第３の負荷用量後に開始して、２８日毎に投与される。

ＳＯＤ１中の突然変異は、ＡＬＳに関連しているヒトＳＯＤ１遺伝子中の任意の突然変異であり得る。いくつかの事例において、突然変異は、進行の遅いＡＬＳ疾患突然変異である。他の実例において、突然変異は、進行の速いＡＬＳ疾患突然変異である。ある特定の実例において、ヒトＳＯＤ１遺伝子中の突然変異は、Ａ４Ｖ、Ｈ４６Ｒ、Ｇ９３Ｓ、Ａ４Ｔ、Ｇ１４１Ｘ、Ｄ１３３Ａ、Ｖ１４８Ｇ、Ｎ１３９Ｋ、Ｇ８５Ｒ、Ｇ９３Ａ、Ｖ１４Ｇ、Ｃ６Ｓ、Ｉ１１３Ｔ、Ｄ４９Ｋ、Ｇ３７Ｒ、Ａ８９Ｖ、Ｅ１００Ｇ、Ｄ９０Ａ、Ｔ１３７Ａ、Ｅ１００Ｋ、Ｇ４１Ａ、Ｇ４１Ｄ、Ｇ４１Ｓ、Ｇ１３Ｒ、Ｇ７２Ｓ、Ｌ８Ｖ、Ｆ２０Ｃ、Ｑ２２Ｌ、Ｈ４８Ｒ、Ｔ５４Ｒ、Ｓ５９１、Ｖ８７Ａ、Ｔ８８デルタＴＡＤ、Ａ８９Ｔ、Ｖ９７Ｍ、Ｓ１０５デルタＳＬ、Ｖ１１８Ｌ、Ｄ１２４Ｇ、Ｌ１１４Ｆ、Ｄ９０Ａ、Ｇ１２Ｒ、またはＧ１４７Ｒのうちの１つまたは複数である。１つの特定の実施形態において、ヒト対象は、ヒトＳＯＤ１遺伝子中のＡ４Ｖ突然変異を有する。別の特定の実施形態において、ヒト対象は、ヒトＳＯＤ１遺伝子中のＨ４６Ｒ突然変異を有する。さらに別の特定の実施形態において、ヒト対象は、ヒトＳＯＤ１遺伝子中のＧ９３Ｓ突然変異を有する。

ある特定の実例において、ＳＯＤ１遺伝子中の突然変異は、遺伝子検査によって同定される。

いくつかの事例において、上で記載される方法は、遺伝子検査によってＳＯＤ１遺伝子中の突然変異を同定することを含む。

ある特定の実施形態において、治療有効量のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩（例えば化合物Ａ）のヒト対象への投与には、ヒト対象におけるＳＯＤ１レベルのモニタリングが付随して、ヒト対象のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩の投与への応答を決定する。アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩の投与へのヒト対象の応答は、治療介入の量及び継続期間を決定するために医師によって使用され得る。ある特定の実施形態において、ヒトＳＯＤ１レベルは、ＣＳＦ中でモニターされる。ある特定の実施形態において、ヒトＳＯＤ１レベルは、血漿中でモニターされる。

ある特定の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩（例えば化合物Ａ）の投与は、ＳＯＤ１タンパク質発現の低減をもたらす。ある特定の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩（例えば化合物Ａ）の投与は、少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５もしくは９９％、またはこれらの値の任意の２つによって定義される範囲でＳＯＤ１タンパク質発現の低減をもたらす。ある特定の実施形態において、ＳＯＤ１タンパク質発現の低減は、ＣＳＦ中での低減である。ある特定の実施形態において、ＳＯＤ１タンパク質発現の低減は、血漿中での低減である。

ある特定の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩（例えば化合物Ａ）の投与は、ヒト対象における運動機能及び呼吸の改善をもたらす。ある特定の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩の投与は、少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５もしくは９９％、またはこれらの値の任意の２つによって定義された範囲で運動機能及び呼吸を改善する。

ある特定の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩（例えば化合物Ａ）を含む医薬組成物は、ＡＬＳに罹患するかまたはそれに感受性のあるヒト対象（例えばＡＬＳに関連しているＳＯＤ１中の突然変異を有するヒト対象）の治療のための医薬品の調製のために使用される。

送達デバイス
ある特定の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩（例えば化合物Ａ）は、髄腔内の送達のためのシリンジによりヒト対象へ投与される。別の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩（例えば化合物Ａ）は、髄腔内の送達のためのポンプによりヒト対象へ投与される。したがって、本開示は、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩（例えば化合物Ａ）の滅菌調製物を含むポンプまたはシリンジも提供する。シリンジまたはポンプは、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩の髄腔内投与のために適合させることができる。いくつかの事例において、シリンジまたはポンプは、固定用量（複数可）（例えば約２０ｍｇもしくは２０ｍｇ、約４０ｍｇもしくは４０ｍｇ、約６０ｍｇもしくは６０ｍｇ、または約１００ｍｇもしくは１００ｍｇ）のアンチセンスオリゴヌクレオチドを送達する。本開示は、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩（例えば化合物Ａ）を含む医薬組成物の滅菌調製物を含むポンプまたはシリンジも提供する。シリンジまたはポンプは、医薬組成物の髄腔内投与のために適合させることができる。いくつかの事例において、シリンジまたはポンプは、固定用量（複数可）（例えば約２０ｍｇもしくは２０ｍｇ、約４０ｍｇもしくは４０ｍｇ、約６０ｍｇもしくは６０ｍｇ、または約１００ｍｇもしくは１００ｍｇ）の医薬組成物のアンチセンスオリゴヌクレオチドを送達する。特定の実施形態において、ポンプまたはシリンジは、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩の滅菌調製物を含み、シリンジまたはポンプは、２０ｍｇ、４０ｍｇ、６０ｍｇ、または１００ｍｇの固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドでのアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩（例えば化合物Ａ）の髄腔内投与のために適合される。

アッセイ
ＲＮＡ単離
ＲＮＡ分析は、全細胞ＲＮＡまたはポリ（Ａ）＋ ｍＲＮＡに対して遂行され得る。ＲＮＡは、当技術分野において周知の方法を使用して（例えば製造者の推奨プロトコルに従ってＴＲＩＺＯＬ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を使用して）調製される。

標的レベルまたは発現の阻害の分析
ＳＯＤ１核酸のレベルまたは発現の阻害は当技術分野において公知の様々な手法でアッセイされ得る。例えば、標的核酸レベルは、例えばノーザンブロット分析、競合ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、または定量的リアルタイムＰＣＲによって定量され得る。ＲＮＡ分析は、全細胞ＲＮＡまたはポリ（Ａ）＋ ｍＲＮＡに対して遂行され得る。ＲＮＡ単離の方法は、当技術分野において周知である。ノーザンブロット分析も、当技術分野において常用される。定量的リアルタイムＰＣＲは、商業的に入手可能なＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ７６００、７７００、または７９００ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（ＰＥ－Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ、ＣＡから利用可能であり、製造者の指示に従って使用される）を使用して、好都合に達成され得る。

標的ＲＮＡレベルの定量的リアルタイムＰＣＲ分析
ＳＯＤ１ ＲＮＡレベルの定量は、ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ７６００、７７００、または７９００ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（ＰＥ－Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ、ＣＡ）を製造者の指示に従って使用する定量的リアルタイムＰＣＲによって達成され得る。定量的リアルタイムＰＣＲの方法は、当技術分野において周知である。

リアルタイムＰＣＲの前に、単離ＲＮＡに逆転写酵素（ＲＴ）反応を行い、相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を生成し、次いでそれはリアルタイムＰＣＲ増幅のための基質として使用される。ＲＴ及びリアルタイムＰＣＲの反応は、同じサンプルウェル中で連続して遂行される。ＲＴ及びリアルタイムＰＣＲの試薬は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）から得られる。ＲＴリアルタイムＰＣＲ反応は、当業者に周知の方法によって実行される。

リアルタイムＰＣＲによって得られた遺伝子（またはＲＮＡ）標的量は、その発現が一定の遺伝子（シクロフィリンＡ等）の発現レベルを使用して、またはＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ．、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を使用して全ＲＮＡを定量することによってのいずれかで、正規化される。シクロフィリンＡ発現は、標的と同時に（マルチプレックス化）または分離して実行されることによるリアルタイムＰＣＲによって定量される。全ＲＮＡは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ ＲＮＡ定量試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ．、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）を使用して定量される。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮによるＲＮＡ定量の方法は、Ｊｏｎｅｓ，Ｌ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９８，２６５，３６８－３７４）中で教示される。ＣＹＴＯＦＬＵＯＲ ４０００機器（ＰＥ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）が、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ蛍光の測定に使用される。プローブ及びプライマーは、ＳＯＤ１核酸にハイブリダイズするようにデザインされる。リアルタイムＰＣＲプローブ及びプライマーをデザインする方法は、当技術分野において周知であり、ソフトウェア（ＰＲＩＭＥＲ ＥＸＰＲＥＳＳ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ、ＣＡ）等）の使用が挙げられ得る。

タンパク質レベルの分析
ＳＯＤ１核酸のアンチセンス阻害は、ＳＯＤ１タンパク質レベルを測定することによって査定され得る。ＳＯＤ１のタンパク質レベルは、免疫沈降、ウエスタンブロット分析（イムノブロット）、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、定量的タンパク質アッセイ、タンパク質活性アッセイ（例えばカスパーゼ活性アッセイ）、免疫組織化学、免疫細胞化学、または蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）等の当技術分野において周知の様々な手法において評価または定量され得る。標的に向けられた抗体は同定され、様々な供給源（抗体のＭＳＲＳカタログ（Ａｅｒｉｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＭＩ）等）から得られ得るか、または当技術分野において周知の従来のモノクローナル抗体もしくはポリクローナル抗体の生成方法により調製され得る。ヒトＳＯＤ１の検出に有用な抗体は、商業的に入手可能である。

ＳＯＤ１突然変異についての試験
ＡＬＳについての１つの根本にある遺伝的原因は、ヒトＳＯＤ１遺伝子中の突然変異（複数可）である。したがって、ＡＬＳに罹患するかまたはそれに感受性のある対象の同定は、当技術分野において公知のアッセイを使用する、対象のＳＯＤ１遺伝子の遺伝子試験（例えば遺伝子シーケンス等）によって遂行され得る。ヒトＳＯＤ１中の少なくとも１８０の突然変異が、ＡＬＳに関連していることが当技術分野において公知である。

対象のＡＬＳ疾患への感受性の分析は、ＡＬＳについての対象の家族歴の分析によっても遂行され得る。家族歴の分析としては、ＡＬＳが報告されている３世代系図、家族メンバーの医療記録及び検死研究の精査、ならびに常染色体優性パターンのＳＯＤ１突然変異の同定が挙げられ得る。

以下の実施例は、いかなる手法でも本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。

実施例１：試験デザイン
化合物Ａは、実施されている臨床試験において調査中である。試験は、ＳＯＤ１ ＡＬＳ患者における無作為化・プラセボ対照・単回投与用量漸増（ＳＡＤ）及び反復投与用量漸増（ＭＡＤ）研究を含む。ＭＡＤ部分において、参加者に、およそ３か月にわたって５用量の試験薬を投与した。５０名の参加者を無作為化して（１コホートあたり３：１）、２０ｍｇ、４０ｍｇ、６０ｍｇもしくは１００ｍｇの化合物Ａ、またはプラセボを投与した。１コホートあたり化合物Ａにより治療された１～４名の間の参加者は、報告されたＳＯＤ１突然変異を有しており、これは進行の速いもの（主としてＡ４Ｖ）と演繹的に判断された。

実施例２：安全性プロファイル
試験において、７０名の患者のうちの６６名（９４％）は、少なくとも１つの有害事象（ＡＥ）を経験し、その大部分は軽度または中程度のグレードであった。化合物Ａを投与した３名以上の参加者において起こる最も一般的なＡＥは、頭痛（ｎ＝１６）、処置痛（ｎ＝１４）、及び腰椎穿刺後症候群（ｎ＝１３）であった。７名の患者が重篤有害事象（ＳＡＥ）を経験し、そのうちの３例は致死的事象であった。最も高い用量群（１００ｍｇの化合物Ａ）においてＳＡＥは報告されなかった。６名の対象には、化合物Ａに関連しないと査定され、且つＡＬＳまたは併発症に関連すると思われるＳＡＥがあった。すべての致死的事象は、関連しないと査定された。１名の患者には、ＣＳＦ白血球増加のＳＡＥ、及び化合物Ａに関連すると査定されたＣＳＦタンパク質増加があった。検査所見の異常は化合物Ａによる継続的な投薬にもかかわらず解消し、患者は試験を完了した。重篤有害事象は、試験された最高用量の１００ｍｇにおいて報告されなかった。

実施例３：薬物動態学及び薬力学
化合物Ａの血漿（図示せず）及びＣＳＦ濃度中の用量依存的増加は、ＳＡＤ（図示せず）及びＭＡＤコホート（図２）において観察された。１及び８５日目の測定で、化合物Ａの血漿中濃度は用量比例的であったが、ＣＳＦ中の化合物Ａの曝露は用量比例的な応答よりも低いものを示した。ＣＳＦのＳＯＤ１濃度のベースラインから低減は、４０ｍｇの複数用量レベル及びその上（すなわち６０ｍｇ及び１００ｍｇ）で観察され、それは投薬量とともに増加し、１００ｍｇの複数用量群において最大で３６％の平均低減であった（図３）。ＣＳＦのＳＯＤ１のベースラインからの低減は、１００ｍｇの用量群中のすべての参加者において観察された。最大のＳＯＤ１低減は最後の用量でまたはその直後に観察され、５用量を超える連続的な投薬がさらなる低減をもたらし得ることが指摘された。前臨床データーに基づくモデルは、１００ｍｇの化合物ＡがＳＯＤ１レベルを脊髄において＞９９％及び皮質において約２５～３０％有効に低減することを示唆する。

実施例４：臨床観察
有効性を、筋萎縮性側索硬化症機能評価スケール改訂版（ＡＬＦＳＦＲＳ－Ｒ）、静的肺活量（ＳＶＣ）、及びハンドヘルドダイナモメトリー（ＨＨＤ）スケールを含む複数のスケールに対して、複数のタイムポイントで査定した。すべてのコホートにおいて、化合物Ａ治療群は、プラセボ治療群に比較して、より高い（すなわちより良好な）スコアを有していた（図４Ａ～４Ｃ）。８５日目までの、１００ｍｇの用量群（Ｎ＝１０）での化合物Ａにより治療された参加者のＡＬＳＦＲＳ－Ｒスコアのベースラインからの平均変化は、－１．１であり、プラセボにより治療された参加者（Ｎ＝１２）は－５．６であり、４．４ポイントの差であった。速く進行することが公知のＳＯＤ１突然変異（例えばＡ４Ｖ）の有る参加者において、１００ｍｇの用量群での化合物Ａにより治療された参加者とプラセボにより治療された参加者との間で著しい差が観察された。これらの進行の速い参加者において、８５日目までの、ＡＬＳＦＲＳ－Ｒのベースラインからの変化の平均差は１０ポイント近づいた（図５）。治療効果は、進行の速い参加者（図５）及び進行の遅い参加者（図６）の両方における複数の臨床スケール及びＣＳＦのＳＯＤ１低減にわたって一貫していると思われる。参照フレームとして、６か月でのＡＬＳＦＲＳ－Ｒの差は、ＡＬＳにおける中心的な試験であるエダラボンにおいて２．５ポイントであった。

総合すると、本試験は、化合物ＡがＳＯＤ１ ＡＬＳに罹患した対象にとって安全且つ有効な治療であることを実証した。このことは、特に１００ｍｇの用量群において、化合物Ａにより治療された、進行の速い突然変異サブタイプ（主としてＡ４Ｖ）の有る対象（有効な治療の非存在下において、急速な低下が予想される）の転帰によって最も強く補強される。上で指摘されるように、有効性を、筋萎縮性側索硬化症機能評価スケール改訂版（ＡＬＳＦＲＳ－Ｒ）、静的肺活量（ＳＶＣ）、及びハンドヘルドダイナモメトリー（ＨＨＤ）を含む複数のスケールに対して、複数のタイムポイントで査定した。これらの結果から、１００ｍｇの化合物Ａの用量群における３つの臨床的機能エンドポイントの各々について、プラセボ群に比較して、はるかに少ない低下が示される。

実施例５：ＣＳＦのリン酸化ニューロフィラメント重鎖（ｐＮＦＨ）レベル
進行の速いＳＯＤ１突然変異の有る患者において、化合物Ａによる治療は、プラセボに比較して、ＣＳＦのｐＮＦＨレベルの低減、及び臨床的低下の減速をもたらした。１００ｍｇの化合物Ａ群とプラセボ群との間の８５日目のｐＮＦＨレベルのより大きな差が、他のＳＯＤ１突然変異の有る患者（図８）に比較して、進行の速いＳＯＤ１突然変異の有る患者（図７）において観察された。

他の実施形態
本発明はその詳細な記載と併用して記載されてきたが、先の記載は、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を例証し限定しないことを意図するものである。他の態様、利点、及び修飾は、以下の特許請求の範囲内である。

Claims (41)

1. スーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）遺伝子中の突然変異と関連する筋萎縮性側索硬化症の治療または予防を、それを必要とするヒト対象において行う方法であって、前記方法が、約１００ｍｇの固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量で、医薬組成物を前記ヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを含み、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、ＣＡＧＧＡＴＡＣＡＴＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴ（配列番号：１）からなり、ヌクレオシド１～５及び１６～２０の各々が、２’－Ｏ－メトキシエチルリボース修飾ヌクレオシドであり、ヌクレオシド６～１５の各々が、２’－デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド２～３、４～５、１６～１７、及び１８～１９の間のヌクレオシド間結合が、ホスホジエステル結合であり、ヌクレオシド１～２、３～４、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、１１～１２、１２～１３、１３～１４、１４～１５、１５～１６、１７～１８、及び１９～２０の間のヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエート結合であり、各々のシトシンが、５－メチルシトシンである、前記方法。
2. スーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）遺伝子中の突然変異と関連する筋萎縮性側索硬化症の治療または予防を、それを必要とするヒト対象において行う方法であって、前記方法が、約６０ｍｇの固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量で、医薬組成物を前記ヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを含み、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、ＣＡＧＧＡＴＡＣＡＴＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴ（配列番号：１）からなり、ヌクレオシド１～５及び１６～２０の各々が、２’－Ｏ－メトキシエチルリボース修飾ヌクレオシドであり、ヌクレオシド６～１５の各々が、２’－デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド２～３、４～５、１６～１７、及び１８～１９の間のヌクレオシド間結合が、ホスホジエステル結合であり、ヌクレオシド１～２、３～４、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、１１～１２、１２～１３、１３～１４、１４～１５、１５～１６、１７～１８、及び１９～２０の間のヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエート結合であり、各々のシトシンが、５－メチルシトシンである、前記方法。
3. スーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）遺伝子中の突然変異と関連する筋萎縮性側索硬化症の治療または予防を、それを必要とするヒト対象において行う方法であって、前記方法が、約４０ｍｇの固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量で、医薬組成物を前記ヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを含み、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、ＣＡＧＧＡＴＡＣＡＴＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴ（配列番号：１）からなり、ヌクレオシド１～５及び１６～２０の各々が、２’－Ｏ－メトキシエチルリボース修飾ヌクレオシドであり、ヌクレオシド６～１５の各々が、２’－デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド２～３、４～５、１６～１７、及び１８～１９の間のヌクレオシド間結合が、ホスホジエステル結合であり、ヌクレオシド１～２、３～４、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、１１～１２、１２～１３、１３～１４、１４～１５、１５～１６、１７～１８、及び１９～２０の間のヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエート結合であり、各々のシトシンが、５－メチルシトシンである、前記方法。
4. スーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）遺伝子中の突然変異と関連する筋萎縮性側索硬化症の治療または予防を、それを必要とするヒト対象において行う方法であって、前記方法が、約２０ｍｇの固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量で、医薬組成物を前記ヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを含み、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、ＣＡＧＧＡＴＡＣＡＴＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴ（配列番号：１）からなり、ヌクレオシド１～５及び１６～２０の各々が、２’－Ｏ－メトキシエチルリボース修飾ヌクレオシドであり、ヌクレオシド６～１５の各々が、２’－デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド２～３、４～５、１６～１７、及び１８～１９の間のヌクレオシド間結合が、ホスホジエステル結合であり、ヌクレオシド１～２、３～４、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、１１～１２、１２～１３、１３～１４、１４～１５、１５～１６、１７～１８、及び１９～２０の間のヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエート結合であり、各々のシトシンが、５－メチルシトシンである、前記方法。
5. 筋萎縮性側索硬化症と関連するスーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）遺伝子中の突然変異を有するヒト対象において、ＳＯＤ１タンパク質合成を低減させる方法であって、前記方法が、約１００ｍｇの固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量で、医薬組成物を前記ヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを含み、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、ＣＡＧＧＡＴＡＣＡＴＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴ（配列番号：１）からなり、ヌクレオシド１～５及び１６～２０の各々が、２’－Ｏ－メトキシエチルリボース修飾ヌクレオシドであり、ヌクレオシド６～１５の各々が、２’－デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド２～３、４～５、１６～１７、及び１８～１９の間のヌクレオシド間結合が、ホスホジエステル結合であり、ヌクレオシド１～２、３～４、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、１１～１２、１２～１３、１３～１４、１４～１５、１５～１６、１７～１８、及び１９～２０の間のヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエート結合であり、各々のシトシンが、５－メチルシトシンである、前記方法。
6. 筋萎縮性側索硬化症と関連するスーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）遺伝子中の突然変異を有するヒト対象において、ＳＯＤ１タンパク質合成を低減させる方法であって、前記方法が、約６０ｍｇの固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量で、医薬組成物を前記ヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを含み、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、ＣＡＧＧＡＴＡＣＡＴＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴ（配列番号：１）からなり、ヌクレオシド１～５及び１６～２０の各々が、２’－Ｏ－メトキシエチルリボース修飾ヌクレオシドであり、ヌクレオシド６～１５の各々が、２’－デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド２～３、４～５、１６～１７、及び１８～１９の間のヌクレオシド間結合が、ホスホジエステル結合であり、ヌクレオシド１～２、３～４、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、１１～１２、１２～１３、１３～１４、１４～１５、１５～１６、１７～１８、及び１９～２０の間のヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエート結合であり、各々のシトシンが、５－メチルシトシンである、前記方法。
7. 筋萎縮性側索硬化症と関連するスーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）遺伝子中の突然変異を有するヒト対象において、ＳＯＤ１タンパク質合成を低減させる方法であって、前記方法が、約４０ｍｇの固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量で、医薬組成物を前記ヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを含み、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、ＣＡＧＧＡＴＡＣＡＴＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴ（配列番号：１）からなり、ヌクレオシド１～５及び１６～２０の各々が、２’－Ｏ－メトキシエチルリボース修飾ヌクレオシドであり、ヌクレオシド６～１５の各々が、２’－デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド２～３、４～５、１６～１７、及び１８～１９の間のヌクレオシド間結合が、ホスホジエステル結合であり、ヌクレオシド１～２、３～４、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、１１～１２、１２～１３、１３～１４、１４～１５、１５～１６、１７～１８、及び１９～２０の間のヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエート結合であり、各々のシトシンが、５－メチルシトシンである、前記方法。
8. 筋萎縮性側索硬化症と関連するスーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）遺伝子中の突然変異を有するヒト対象において、ＳＯＤ１タンパク質合成を低減させる方法であって、前記方法が、約２０ｍｇの固定用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量で、医薬組成物を前記ヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを含み、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、ＣＡＧＧＡＴＡＣＡＴＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴ（配列番号：１）からなり、ヌクレオシド１～５及び１６～２０の各々が、２’－Ｏ－メトキシエチルリボース修飾ヌクレオシドであり、ヌクレオシド６～１５の各々が、２’－デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド２～３、４～５、１６～１７、及び１８～１９の間のヌクレオシド間結合が、ホスホジエステル結合であり、ヌクレオシド１～２、３～４、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、１１～１２、１２～１３、１３～１４、１４～１５、１５～１６、１７～１８、及び１９～２０の間のヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエート結合であり、各々のシトシンが、５－メチルシトシンである、前記方法。
9. 前記ＳＯＤ１遺伝子中の前記突然変異がＡ４Ｖである、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。
10. 前記ＳＯＤ１遺伝子中の前記突然変異が、Ａ４Ｖ、Ｈ４６Ｒ、Ｇ９３Ｓ、Ａ４Ｔ、Ｇ１４１Ｘ、Ｄ１３３Ａ、Ｖ１４８Ｇ、Ｎ１３９Ｋ、Ｇ８５Ｒ、Ｇ９３Ａ、Ｖ１４Ｇ、Ｃ６Ｓ、Ｉ１１３Ｔ、Ｄ４９Ｋ、Ｇ３７Ｒ、Ａ８９Ｖ、Ｅ１００Ｇ、Ｄ９０Ａ、Ｔ１３７Ａ、Ｅ１００Ｋ、Ｇ４１Ａ、Ｇ４１Ｄ、Ｇ４１Ｓ、Ｇ１３Ｒ、Ｇ７２Ｓ、Ｌ８Ｖ、Ｆ２０Ｃ、Ｑ２２Ｌ、Ｈ４８Ｒ、Ｔ５４Ｒ、Ｓ５９１、Ｖ８７Ａ、Ｔ８８デルタＴＡＤ、Ａ８９Ｔ、Ｖ９７Ｍ、Ｓ１０５デルタＳＬ、Ｖ１１８Ｌ、Ｄ１２４Ｇ、Ｌ１１４Ｆ、Ｄ９０Ａ、Ｇ１２Ｒ、またはＧ１４７Ｒである、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。
11. 前記ＳＯＤ１遺伝子中の前記突然変異が遺伝子検査によって同定される、請求項１～１０のいずれか１項に記載の方法。
12. 遺伝子検査によって前記ＳＯＤ１遺伝子中の前記突然変異を同定することを含む、請求項１～１０のいずれか１項に記載の方法。
13. 前記医薬組成物が、４か月の経過にわたって前記ヒト対象へ少なくとも５回投与される、請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法。
14. 前記ヒト対象が、前記医薬組成物の負荷用量に続いて、前記医薬組成物の維持用量を投与される、請求項１～１３のいずれか１項に記載の方法。
15. 前記ヒト対象が３回の負荷用量を投与され、前記負荷用量が２週間の間隔で投与される、請求項１４に記載の方法。
16. 前記維持用量が、前記第３の負荷用量の４週間後に開始して、４週間毎に投与される、請求項１４に記載の方法。
17. 前記医薬組成物の前記負荷用量及び前記維持用量が、以下の：
    （ｉ）第１の負荷用量の前記医薬組成物；
    （ｉｉ）前記第１の負荷用量の１４日後に投与される、第２の負荷用量の前記医薬組成物；
    （ｉｉｉ）前記第１の負荷用量の２８日後に投与される、第３の負荷用量の前記医薬組成物；及び
    （ｉｖ）前記第３の負荷用量の２８日または１か月後に投与される、第１の維持用量の前記医薬組成物
    の通りに、前記ヒト対象へ投与される、請求項１４に記載の方法。
18. 前記医薬組成物の前記負荷用量及び前記維持用量が、以下の：
    （ｉ）約１００ｍｇの固定用量の前記アンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量の、第１の負荷用量；
    （ｉｉ）約１００ｍｇの固定用量の前記アンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量で前記第１の負荷用量の１４日後に投与される、第２の負荷用量；
    （ｉｉｉ）約１００ｍｇの固定用量の前記アンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量で前記第１の負荷用量の２８日後に投与される、第３の負荷用量；及び
    （ｉｖ）約１００ｍｇの固定用量の前記アンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量で前記第３の負荷用量の２８日後に投与される、第１の維持用量
    の通りに、前記ヒト対象へ投与される、請求項１４に記載の方法。
19. 前記医薬組成物の前記負荷用量及び前記維持用量が、以下の：
    （ｉ）約１００ｍｇの固定用量の前記アンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量の、第１の負荷用量；
    （ｉｉ）約１００ｍｇの固定用量の前記アンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量で前記第１の負荷用量の１４日後に投与される、第２の負荷用量；
    （ｉｉｉ）約１００ｍｇの固定用量の前記アンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量で前記第１の負荷用量の２８日後に投与される、第３の負荷用量；及び
    （ｉｖ）約１００ｍｇの固定用量の前記アンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するのに十分な量で前記第３の負荷用量の１か月後に投与される、第１の維持用量
    の通りに、前記ヒト対象へ投与される、請求項１４に記載の方法。
20. アンチセンスオリゴヌクレオチドの滅菌調製物を含むシリンジまたはポンプであって、前記シリンジまたは前記ポンプが、約２０ｍｇ、約４０ｍｇ、約６０ｍｇ、または約１００ｍｇの固定用量での前記アンチセンスオリゴヌクレオチドの髄腔内投与のために適合され、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、ＣＡＧＧＡＴＡＣＡＴＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴ（配列番号：１）からなり、ヌクレオシド１～５及び１６～２０の各々が、２’－Ｏ－メトキシエチルリボース修飾ヌクレオシドであり、ヌクレオシド６～１５の各々が、２’－デオキシヌクレオシドであり、ヌクレオシド２～３、４～５、１６～１７、及び１８～１９の間のヌクレオシド間結合が、ホスホジエステル結合であり、ヌクレオシド１～２、３～４、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、１１～１２、１２～１３、１３～１４、１４～１５、１５～１６、１７～１８、及び１９～２０の間のヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエート結合であり、各々のシトシンが、５－メチルシトシンである、前記シリンジまたは前記ポンプ。
21. スーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）遺伝子中の突然変異と関連する筋萎縮性側索硬化症の治療または予防を、それを必要とするヒト対象において行う方法であって、前記方法が、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩を含む医薬組成物を、前記ヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを含み、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、以下の構造：
    

    

    
    を有し、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドまたは前記その塩が、約１００ｍｇの前記アンチセンスオリゴヌクレオチドに同等な用量で投与される、前記方法。
22. スーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）遺伝子中の突然変異と関連する筋萎縮性側索硬化症の治療または予防を、それを必要とするヒト対象において行う方法であって、前記方法が、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩を含む医薬組成物を、前記ヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを含み、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、以下の構造：
    

    

    
    を有し、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドまたは前記その塩が、約６０ｍｇの前記アンチセンスオリゴヌクレオチドに同等な用量で投与される、前記方法。
23. スーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）遺伝子中の突然変異と関連する筋萎縮性側索硬化症の治療または予防を、それを必要とするヒト対象において行う方法であって、前記方法が、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩を含む医薬組成物を、前記ヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを含み、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、以下の構造：
    

    

    
    を有し、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドまたは前記その塩が、約４０ｍｇの前記アンチセンスオリゴヌクレオチドに同等な用量で投与される、前記方法。
24. スーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）遺伝子中の突然変異と関連する筋萎縮性側索硬化症の治療または予防を、それを必要とするヒト対象において行う方法であって、前記方法が、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩を含む医薬組成物を、前記ヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを含み、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、以下の構造：
    

    

    
    を有し、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドまたは前記その塩が、約２０ｍｇの前記アンチセンスオリゴヌクレオチドに同等な用量で投与される、前記方法。
25. 筋萎縮性側索硬化症と関連するスーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）遺伝子中の突然変異を有するヒト対象において、ＳＯＤ１タンパク質合成を低減させる方法であって、前記方法が、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩を含む医薬組成物を、前記ヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを含み、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、以下の構造：
    

    

    
    を有し、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドまたは前記その塩が、約１００ｍｇの前記アンチセンスオリゴヌクレオチドに同等な用量で投与される、前記方法。
26. 筋萎縮性側索硬化症と関連するスーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）遺伝子中の突然変異を有するヒト対象において、ＳＯＤ１タンパク質合成を低減させる方法であって、前記方法が、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩を含む医薬組成物を、前記ヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを含み、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、以下の構造：
    

    

    
    を有し、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドまたは前記その塩が、約６０ｍｇの前記アンチセンスオリゴヌクレオチドに同等な用量で投与される、前記方法。
27. 筋萎縮性側索硬化症と関連するスーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）遺伝子中の突然変異を有するヒト対象において、ＳＯＤ１タンパク質合成を低減させる方法であって、前記方法が、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩を含む医薬組成物を、前記ヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを含み、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、以下の構造：
    

    

    
    を有し、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドまたは前記その塩が、約４０ｍｇの前記アンチセンスオリゴヌクレオチドに同等な用量で投与される、前記方法。
28. 筋萎縮性側索硬化症と関連するスーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）遺伝子中の突然変異を有するヒト対象において、ＳＯＤ１タンパク質合成を低減させる方法であって、前記方法が、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその塩を含む医薬組成物を、前記ヒト対象へ髄腔内投与によって投与することを含み、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、以下の構造：
    

    

    
    を有し、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドまたは前記その塩が、約２０ｍｇの前記アンチセンスオリゴヌクレオチドに同等な用量で投与される、前記方法。
29. 前記ＳＯＤ１遺伝子中の前記突然変異がＡ４Ｖである、請求項２１～２８のいずれか１項に記載の方法。
30. 前記ＳＯＤ１遺伝子中の前記突然変異が、Ａ４Ｖ、Ｈ４６Ｒ、Ｇ９３Ｓ、Ａ４Ｔ、Ｇ１４１Ｘ、Ｄ１３３Ａ、Ｖ１４８Ｇ、Ｎ１３９Ｋ、Ｇ８５Ｒ、Ｇ９３Ａ、Ｖ１４Ｇ、Ｃ６Ｓ、Ｉ１１３Ｔ、Ｄ４９Ｋ、Ｇ３７Ｒ、Ａ８９Ｖ、Ｅ１００Ｇ、Ｄ９０Ａ、Ｔ１３７Ａ、Ｅ１００Ｋ、Ｇ４１Ａ、Ｇ４１Ｄ、Ｇ４１Ｓ、Ｇ１３Ｒ、Ｇ７２Ｓ、Ｌ８Ｖ、Ｆ２０Ｃ、Ｑ２２Ｌ、Ｈ４８Ｒ、Ｔ５４Ｒ、Ｓ５９１、Ｖ８７Ａ、Ｔ８８デルタＴＡＤ、Ａ８９Ｔ、Ｖ９７Ｍ、Ｓ１０５デルタＳＬ、Ｖ１１８Ｌ、Ｄ１２４Ｇ、Ｌ１１４Ｆ、Ｄ９０Ａ、Ｇ１２Ｒ、またはＧ１４７Ｒである、請求項２１～２８のいずれか１項に記載の方法。
31. 前記ＳＯＤ１遺伝子中の前記突然変異が遺伝子検査によって同定される、請求項２１～３０のいずれか１項に記載の方法。
32. 遺伝子検査によって前記ＳＯＤ１遺伝子中の前記突然変異を同定することを含む、請求項２１～３０のいずれか１項に記載の方法。
33. 前記ヒト対象が、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドの塩を投与される、請求項２１～３２のいずれか１項に記載の方法。
34. 前記塩がナトリウム塩である、請求項３３に記載の方法。
35. 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドの前記塩が、以下の構造：
    

    

    
    を有する、請求項３３に記載の方法。
36. 前記ヒト対象が、前記医薬組成物の負荷用量に続いて、前記医薬組成物の維持用量を投与される、請求項２１～３５のいずれか１項に記載の方法。
37. 前記ヒト対象が３回の負荷用量を投与され、前記負荷用量が２週間の間隔で投与される、請求項３６に記載の方法。
38. 前記維持用量が、前記第３の負荷用量の４週間後に開始して、４週間毎に投与される、請求項３６に記載の方法。
39. 前記医薬組成物の前記負荷用量及び前記維持用量が、以下の：
    （ｉ）第１の負荷用量の前記医薬組成物；
    （ｉｉ）前記第１の負荷用量の１４日後に投与される、第２の負荷用量の前記医薬組成物；
    （ｉｉｉ）前記第１の負荷用量の２８日後に投与される、第３の負荷用量の前記医薬組成物；及び
    （ｉｖ）前記第３の負荷用量の２８日または１か月後に投与される、第１の維持用量の前記医薬組成物
    の通りに、前記ヒト対象へ投与される、請求項３６に記載の方法。
40. 前記医薬組成物の前記負荷用量及び前記維持用量が、以下の：
    （ｉ）約１００ｍｇの前記アンチセンスオリゴヌクレオチドに同等な、第１の負荷用量；
    （ｉｉ）約１００ｍｇの前記アンチセンスオリゴヌクレオチドに同等で、前記第１の負荷用量の１４日後に投与される、第２の負荷用量；
    （ｉｉｉ）約１００ｍｇの前記アンチセンスオリゴヌクレオチドに同等で、前記第１の負荷用量の２８日後に投与される、第３の負荷用量；
    及び
    （ｉｖ）約１００ｍｇの前記アンチセンスオリゴヌクレオチドに同等で、前記第３の負荷用量の２８日後に投与される、第１の維持用量
    の通りに、前記ヒト対象へ投与される、請求項３６に記載の方法。
41. 前記医薬組成物の前記負荷用量及び前記維持用量が、以下の：
    （ｉ）約１００ｍｇの前記アンチセンスオリゴヌクレオチドに同等な、第１の負荷用量；
    （ｉｉ）約１００ｍｇの前記アンチセンスオリゴヌクレオチドに同等で、前記第１の負荷用量の１４日後に投与される、第２の負荷用量；
    （ｉｉｉ）約１００ｍｇの前記アンチセンスオリゴヌクレオチドに同等で、前記第１の負荷用量の２８日後に投与される、第３の負荷用量；及び
    （ｉｖ）約１００ｍｇの前記アンチセンスオリゴヌクレオチドに同等で、前記第３の負荷用量の１か月後に投与される、第１の維持用量
    の通りに、前記ヒト対象へ投与される、請求項３６に記載の方法。

Images