JP2022512617A - ラクトバチルス・カゼイ由来の二種類のプロモーターを用いた二種の目的タンパク質の同時表面発現ベクター、およびこれを用いたタンパク質の微生物表面発現方法 - Google Patents
ラクトバチルス・カゼイ由来の二種類のプロモーターを用いた二種の目的タンパク質の同時表面発現ベクター、およびこれを用いたタンパク質の微生物表面発現方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2022512617A JP2022512617A JP2021518746A JP2021518746A JP2022512617A JP 2022512617 A JP2022512617 A JP 2022512617A JP 2021518746 A JP2021518746 A JP 2021518746A JP 2021518746 A JP2021518746 A JP 2021518746A JP 2022512617 A JP2022512617 A JP 2022512617A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protein
- surface expression
- target protein
- expression vector
- pgsa
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 0 CC(*CC*)C(*)*(C(*)*)C1C(*)(*)C(C)CC1 Chemical compound CC(*CC*)C(*)*(C(*)*)C1C(*)(*)C(C)CC1 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/67—General methods for enhancing the expression
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/93—Ligases (6)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
- C12N15/746—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora for lactic acid bacteria (Streptococcus; Lactococcus; Lactobacillus; Pediococcus; Enterococcus; Leuconostoc; Propionibacterium; Bifidobacterium; Sporolactobacillus)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/13—Transferases (2.) transferring sulfur containing groups (2.8)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/88—Lyases (4.)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/90—Isomerases (5.)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
- C12Y207/08—Transferases for other substituted phosphate groups (2.7.8)
- C12Y207/08005—CDP-diacylglycerol-glycerol-3-phosphate 3-phosphatidyltransferase (2.7.8.5)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y401/00—Carbon-carbon lyases (4.1)
- C12Y401/02—Aldehyde-lyases (4.1.2)
- C12Y401/02013—Fructose-bisphosphate aldolase (4.1.2.13)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y501/00—Racemaces and epimerases (5.1)
- C12Y501/03—Racemaces and epimerases (5.1) acting on carbohydrates and derivatives (5.1.3)
- C12Y501/03003—Aldose 1-epimerase (5.1.3.3)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y603/00—Ligases forming carbon-nitrogen bonds (6.3)
- C12Y603/02—Acid—amino-acid ligases (peptide synthases)(6.3.2)
- C12Y603/02017—Tetrahydrofolate synthase (6.3.2.17)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
- A61K2039/523—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells expressing foreign proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/035—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal for targeting to the external surface of a cell, e.g. to the outer membrane of Gram negative bacteria, GPI- anchored eukaryote proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/60—Fusion polypeptide containing spectroscopic/fluorescent detection, e.g. green fluorescent protein [GFP]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/20011—Papillomaviridae
- C12N2710/20022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
Description
前記二重抗原同時表面発現ベクターを製造するために、pKV-Pald-PgsA-E7(pKV-Pald-pgsA380L-HPV16E7、大韓民国登録特許第10-1471043号参照)から製造された表面発現ベクターを用いて、Pald-pgsA-HPV16E7のC-端末にPgm-pgsA-EGFPをコードする遺伝子を挿入して乳酸菌において二種の目的タンパク質を同時表面発現できるベクターpKV-Pald-pgsA-HPV16E7_Pgm-pgsA-EGFPを確保した。
5’-TGGTGGATCCGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTG-3’
5’-TGACTCTAGAACTAGTGTCGACGGTACCTTACTTGTACAGCTCGTCC-3’
5’-TACGGCATGCTTGAATTGGTTTCTTACGAT-3’
5’-TACGCTCGAGGTTGAATTACCTCCTAATAG-3’
5’-GCGCGAATTCTTGAATTGGTTTCTTACGA-3’
5’-GCGCTGCGCATTACTTGTACAGCTCGTC-3’
前記二重抗原同時表面発現ベクターを製造するために、pKV-Pald-pgsA-E7(pKV-Pald-pgsA380L-HPV16E7、大韓民国登録特許第10-1471043号参照)から製造された表面発現ベクターを用いて、Pald-pgsA-HPV16E7のC-端末にPgm-pgsA-EGFPをコードする遺伝子を挿入して乳酸菌において二種の目的タンパク質を同時表面発現できるベクターpKV-Pald-pgsA-HPV16E7_Pgm-pgsA-EGFPを確保した。
5’-TGGTGGATCCGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTG-3’
5’-TGACTCTAGAACTAGTGTCGACGGTACCTTACTTGTACAGCTCGTCC-3’
5’-TACGGCATGCTTGAATTGGTTTCTTACGAT-3’
5’-TACGCTCGAGGTTGAATTACCTCCTAATAG-3’
5’-GCGCGAATTCTTGAATTGGTTTCTTACGA-3’
5’-GCGCTGCGCATTACTTGTACAGCTCGTC-3’
この実施例においては、実施例1において製作されたpKV-Pald-pgsA-HPV16E7_Pgm-pgsA-EGFP表面発現ベクターでラクトバチルス・カゼイを形質転換し、前記形質転換された組換えラクトバチルス・カゼイを培養してHPV16E7及びEGFPタンパク質の発現を確認した。前記形質転換された組換えラクトバチルス・カゼイにおけるHPV16E7及びEGFPタンパク質の発現有無を、ウェスタンブロッティングを用いて調べた。
本発明の表面発現ベクターの発現の度合いを確認するために蛍光イメージを共焦点顕微鏡(Confocal microscopy,Carl Zeiss LSM800)を用いて観察した。
前記EGFP発現ベクターを製造するために、pKV-Pald-PgsA-E7(大韓民国登録特許第10-1471043号参照)から製造された表面発現ベクターを用いて、PgsAのC-末端にEGFPタンパク質をコードする遺伝子を挿入して乳酸菌において表面発現できるベクターpKV-Pald-PgsA-EGFPを確保した。
5’-TGGTGGATCCGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTG-3’
5’-TGACTCTAGAACTAGTGTCGACGGTACCTTACTTGTACAGCTCGTCC-3’
この実施例においては、実施例4において製造された表面発現ベクター(pKV-Pald-PgsA-EGFP)を用いて乳酸菌宿主においてさらに安定的に高い発現率を示し得るようにPgsAの遺伝子を断片とする改良を行った。
5’-TCGAGCATGCAATACCCACTTATTGCGATTTGCT-3’
5’-TACGGGATCCACCAGAACCACCAGAACCACCAGAACCACCAGAACCACCTGAGAGTACGTCGTCAGAATACGTT-3’
5’-TCGAGCATGCAATACCCACTTATTGCGATTTGCT-3’
5’-TACGGGATCCACCAGAACCACCAGAACCACCAGAACCACCAGAACCACCTCCCATCATAATATCGCCTACAAAT-3’
5’-TCGAGCATGCAATACCCACTTATTGCGATTTGCT-3’
5’-TACGGGATCCACCAGAACCACCAGAACCACCAGAACCACCAGAACCACCTTTTTGCTCCGTTACTTTTTCAACA-3’
5’-TCGAGCATGCAATACCCACTTATTGCGATTTGCT-3’
5’-TACGGGATCCACCAGAACCACCAGAACCACCAGAACCACCAGAACCACCTGCTACATAATCCGAGGCTCTAAAG-3’
5’-TCGAGCATGCAATACCCACTTATTGCGATTTGCT 3’
5’-TACGGGATCCACCAGAACCACCAGAACCACCAGAACCACCAGAACCACCGACTTTCTGGTACGAAATTTTCTTT-3’
5’-ATGAAAAAAGAACTGAGCTTTCATGAAAAGCTGCTAAAGCTGACAAAACAGCAAAAAAAGAAAACCAATAAGCACGTATTTATTGCCATTCCGATCGTTTTTGTCCTTATGTTCGCTTTCATGTGGGCGGGAAAAGCGGAAACGCCGAAGGTCAAAACGTATTCTGACGACGTACTCTCA-3’
5’-ATGAAAAAAGAACTGAGCTTTCATGAAAAGCTGCTAAAGCTGACAAAACAGCAAAAAAAGAAAACCAATAAGCACGTATTTATTGCCATTCCGATCGTTTTTGTCCTTATGTTCGCTTTCATGTGGGCGGGAAAAGCGGAAACGCCGAAGGTCAAAACGTATTCTGACGACGTACTCTCAGCCTCATTTGTAGGCGATATTATGATGGGA-3’
5’-ATGAAAAAAGAACTGAGCTTTCATGAAAAGCTGCTAAAGCTGACAAAACAGCAAAAAAAGAAAACCAATAAGCACGTATTTATTGCCATTCCGATCGTTTTTGTCCTTATGTTCGCTTTCATGTGGGCGGGAAAAGCGGAAACGCCGAAGGTCAAAACGTATTCTGACGACGTACTCTCAGCCTCATTTGTAGGCGATATTATGATGGGACGCTATGTTGAAAAAGTAACGGAGCAAAAA-3’
5’-ATGAAAAAAGAACTGAGCTTTCATGAAAAGCTGCTAAAGCTGACAAAACAGCAAAAAAAGAAAACCAATAAGCACGTATTTATTGCCATTCCGATCGTTTTTGTCCTTATGTTCGCTTTCATGTGGGCGGGAAAAGCGGAAACGCCGAAGGTCAAAACGTATTCTGACGACGTACTCTCAGCCTCATTTGTAGGCGATATTATGATGGGACGCTATGTTGAAAAAGTAACGGAGCAAAAAGGGGCAGACAGTATTTTTCAATATGTTGAACCGATCTTTAGAGCCTCGGATTATGTAGCA-3’
5’-ATGAAAAAAGAACTGAGCTTTCATGAAAAGCTGCTAAAGCTGACAAAACAGCAAAAAAAGAAAACCAATAAGCACGTATTTATTGCCATTCCGATCGTTTTTGTCCTTATGTTCGCTTTCATGTGGGCGGGAAAAGCGGAAACGCCGAAGGTCAAAACGTATTCTGACGACGTACTCTCAGCCTCATTTGTAGGCGATATTATGATGGGACGCTATGTTGAAAAAGTAACGGAGCAAAAAGGGGCAGACAGTATTTTTCAATATGTTGAACCGATCTTTAGAGCCTCGGATTATGTAGCAGGAAACTTTGAAAACCCGGTAACCTATCAAAAGAATTATAAACAAGCAGATAAAGAGATTCATCTGCAGACGAATAAGGAATCAGTGAAAGTCTTGAAGGATATGAATTTCACGGTTCTCAACAGCGCCAACAACCACGCAATGGATTACGGCGTTCAGGGCATGAAAGATACGCTTGGAGAATTTGCGAAGCAAAACCTTGATATCGTTGGAGCGGGATACAGCTTAAGTGATGCGAAAAAGAAAATTTCGTACCAGAAAGTC-3’
5’-CGCTGGATATCTACATGCACGTATTTATTGCCATTCCG-3’
5’-TACGGGATCCACCAGAACCACCAGAACCACCAGAACCACCAGAACCACCTGAGAGTACGTCGTCAGAATACGTT-3’
5’-CGCTGGATATCTACATGCACGTATTTATTGCCATTCCG-3’
5’-TACGGGATCCACCAGAACCACCAGAACCACCAGAACCACCAGAACCACCTCCCATCATAATATCGCCTACAAAT-3’
5’-CGCTGGATATCTACATGCACGTATTTATTGCCATTCCG-3’
5’-TACGGGATCCACCAGAACCACCAGAACCACCAGAACCACCAGAACCACCTGCTACATAATCCGAGGCTCTAAAG-3’
5’-CACGTATTTATTGCCATTCCGATCGTTTTTGTCCTTATGTTCGCTTTCATGTGGGCGGGAAAAGCGGAAACGCCGAAGGTCAAAACGTATTCTGACGACGTACTCTCA-3’
5’-CACGTATTTATTGCCATTCCGATCGTTTTTGTCCTTATGTTCGCTTTCATGTGGGCGGGAAAAGCGGAAACGCCGAAGGTCAAAACGTATTCTGACGACGTACTCTCAGCCTCATTTGTAGGCGATATTATGATGGGA-3’
5’-CACGTATTTATTGCCATTCCGATCGTTTTTGTCCTTATGTTCGCTTTCATGTGGGCGGGAAAAGCGGAAACGCCGAAGGTCAAAACGTATTCTGACGACGTACTCTCAGCCTCATTTGTAGGCGATATTATGATGGGACGCTATGTTGAAAAAGTAACGGAGCAAAAAGGGGCAGACAGTATTTTTCAATATGTTGAACCGATCTTTAGAGCCTCGGATTATGTAGCA-3’
この実施例においては、実施例2において製作されたPgsA motif改良表面発現ベクターにラクトバチルス・カゼイを形質転換し、前記形質転換された組換えラクトバチルス・カゼイを培養してEGFPタンパク質の発現を確認した。形質転換された組換えラクトバチルス・カゼイで改良された断片pgsA1~A8のうちのいずれか一つと融合されたEGFPタンパク質の発現するかどうかを調査した。
実施例6:PgsA motif改良表面発現ベクター形質転換体の発現の確認
この実施例においては、実施例2において製作されたPgsA motif改良表面発現ベクターでラクトバチルス・カゼイを形質転換し、前記形質転換された組換えラクトバチルス・カゼイを培養してEGFPタンパク質の発現を確認した。形質転換された組換えラクトバチルス・カゼイにおいて改良された断片pgsA1~A8のうちのいずれか一つと融合されたEGFPタンパク質の発現有無を調べた。
[配列目録フリーテキスト]
配列番号1
5’-ccatgcaata cccacttatt gcgatttgct tttctattag ttagcatttt aaattgtgaa acgtgccact tataaacaaa tttccgtctt ctttttatga gagtaatctc atttaatctt gactaaatat ccgattgcgg tcacacaact accagtttca aacaaatttc aatttgatgg tcatttttta ttttgtcggc aaaaagtgag caaatcagta gcattttccc tgattacggg gtacattcaa agtgactttg cgtacacaca gacatatgta tgacgggtgt tataaaaagc cgtcacgctg ctcgagtagc tctcatcatt ttctcgccct tttctcccgc aacatatgat aaaatacaac ggttgtgaat tgtttatttc ctaggaggat atctac-3’
配列番号2
5’-aattcagcaa gccgcaatac aatgtttctg ttttgaagct tgaagttcca gttgatcaaa agtttgttga aggctacacc gatgacggcg ttacccctgt ttacagcaag gaagaagccg ctaagtatta caaggaacag tcagatgcaa cggatctccc attcatcttc ctgtccgctg gtgtcaccaa cgaattgttc cttgaagaac tcaagtttgc taagcaagca ggttcagcct ttaatggtgt tctctgtggc cgtgcaactt ggaagccggg tgttaagcca tatgctgctg aaggcgaagc tgctggtaag aagtggctgc agaccgaagg caaggctaac attgatcgtt tgaacaaggt gcttgcagaa actgcaaccc cttggactga caaagttgaa ggttaatctt taaccatagt tgcaagaaag gaccgattat gatgatcggt tcttttttta tgactgcgga catgtttttg tgaccactgc aaacatcaaa atgaagttcg aaaaacttgc taacaatcat tacaggtcag tgatccagtg gtagactggt attgaatgcg ttttcgtcta ttaggaggta attcaac-3’
配列番号3
5’-tggtggatcc gtgagcaagg gcgaggagct g-3’
配列番号4
5’-tgactctaga actagtgtcg acggtacctt acttgtacag ctcgtcc-3’
配列番号5
5’-tacggcatgc ttgaattggt ttcttacgat-3’
配列番号6
5’-tacgctcgag gttgaattac ctcctaatag-3’
配列番号7
5’-gcgcgaattc ttgaattggt ttcttacga-3’
配列番号8
5’-gcgctgcgca ttacttgtac agctcgtc-3’
配列番号9
5’-tggtggatcc gtgagcaagg gcgaggagct g-3’
配列番号10
5’-tgactctaga actagtgtcg acggtacctt acttgtacag ctcgtcc-3’
配列番号11
5’-tcgagcatgc aatacccact tattgcgatt tgct-3’
配列番号12
5’-tacgggatcc accagaacca ccagaaccac cagaaccacc agaaccacct gagagtacgt cgtcagaata cgtt-3’
配列番号13
5’-tcgagcatgc aatacccact tattgcgatt tgct-3’
配列番号14
5’-tacgggatcc accagaacca ccagaaccac cagaaccacc agaaccacct cccatcataa tatcgcctac aaat-3’
配列番号15
5’-tcgagcatgc aatacccact tattgcgatt tgct-3’
配列番号16
5’-tacgggatcc accagaacca ccagaaccac cagaaccacc agaaccacct ttttgctccg ttactttttc aaca-3’
配列番号17
5’-tcgagcatgc aatacccact tattgcgatt tgct-3’
配列番号18
5’-tacgggatcc accagaacca ccagaaccac cagaaccacc agaaccacct gctacataat ccgaggctct aaag-3’
配列番号19
5’-tcgagcatgc aatacccact tattgcgatt tgct-3’
配列番号20
5’-tacgggatcc accagaacca ccagaaccac cagaaccacc agaaccaccg actttctggt acgaaatttt cttt-3’
配列番号21
5’-atgaaaaaag aactgagctt tcatgaaaag ctgctaaagc tgacaaaaca gcaaaaaaag aaaaccaata agcacgtatt tattgccatt ccgatcgttt ttgtccttat gttcgctttc atgtgggcgg gaaaagcgga aacgccgaag gtcaaaacgt attctgacga cgtactctca-3’
配列番号22
5’-atgaaaaaag aactgagctt tcatgaaaag ctgctaaagc tgacaaaaca gcaaaaaaag aaaaccaata agcacgtatt tattgccatt ccgatcgttt ttgtccttat gttcgctttc atgtgggcgg gaaaagcgga aacgccgaag gtcaaaacgt attctgacga cgtactctca gcctcatttg taggcgatat tatgatggga-3’
配列番号23
5’-atgaaaaaag aactgagctt tcatgaaaag ctgctaaagc tgacaaaaca gcaaaaaaag aaaaccaata agcacgtatt tattgccatt ccgatcgttt ttgtccttat gttcgctttc atgtgggcgg gaaaagcgga aacgccgaag gtcaaaacgt attctgacga cgtactctca gcctcatttg taggcgatat tatgatggga cgctatgttg aaaaagtaac ggagcaaaaa-3’
配列番号24
5’-atgaaaaaag aactgagctt tcatgaaaag ctgctaaagc tgacaaaaca gcaaaaaaag aaaaccaata agcacgtatt tattgccatt ccgatcgttt ttgtccttat gttcgctttc atgtgggcgg gaaaagcgga aacgccgaag gtcaaaacgt attctgacga cgtactctca gcctcatttg taggcgatat tatgatggga cgctatgttg aaaaagtaac ggagcaaaaa ggggcagaca gtatttttca atatgttgaa ccgatcttta gagcctcgga ttatgtagca-3’
配列番号25
5’-atgaaaaaag aactgagctt tcatgaaaag ctgctaaagc tgacaaaaca gcaaaaaaag aaaaccaata agcacgtatt tattgccatt ccgatcgttt ttgtccttat gttcgctttc atgtgggcgg gaaaagcgga aacgccgaag gtcaaaacgt attctgacga cgtactctca gcctcatttg taggcgatat tatgatggga cgctatgttg aaaaagtaac ggagcaaaaa ggggcagaca gtatttttca atatgttgaa ccgatcttta gagcctcgga ttatgtagca ggaaactttg aaaacccggt aacctatcaa aagaattata aacaagcaga taaagagatt catctgcaga cgaataagga atcagtgaaa gtcttgaagg atatgaattt cacggttctc aacagcgcca acaaccacgc aatggattac ggcgttcagg gcatgaaaga tacgcttgga gaatttgcga agcaaaacct tgatatcgtt ggagcgggat acagcttaag tgatgcgaaa aagaaaattt cgtaccagaa agtc-3’
配列番号26
5’-cgctggatat ctacatgcac gtatttattg ccattccg-3’
配列番号27
5’-tacgggatcc accagaacca ccagaaccac cagaaccacc agaaccacct gagagtacgt cgtcagaata cgtt-3’
配列番号28
5’-cgctggatat ctacatgcac gtatttattg ccattccg-3’
配列番号29
5’-tacgggatcc accagaacca ccagaaccac cagaaccacc agaaccacct cccatcataa tatcgcctac aaat-3’
配列番号30
5’-cgctggatat ctacatgcac gtatttattg ccattccg-3’
配列番号31
5’-tacgggatcc accagaacca ccagaaccac cagaaccacc agaaccacct gctacataat ccgaggctct aaag-3’
配列番号32
5’-cacgtattta ttgccattcc gatcgttttt gtccttatgt tcgctttcat gtgggcggga aaagcggaaa cgccgaaggt caaaacgtat tctgacgacg tactctca-3’
配列番号33
5’-cacgtattta ttgccattcc gatcgttttt gtccttatgt tcgctttcat gtgggcggga aaagcggaaa cgccgaaggt caaaacgtat tctgacgacg tactctcagc ctcatttgta ggcgatatta tgatggga-3’
配列番号34
5’-cacgtattta ttgccattcc gatcgttttt gtccttatgt tcgctttcat gtgggcggga aaagcggaaa cgccgaaggt caaaacgtat tctgacgacg tactctcagc ctcatttgta ggcgatatta tgatgggacg ctatgttgaa aaagtaacgg agcaaaaagg ggcagacagt atttttcaat atgttgaacc gatctttaga gcctcggatt atgtagca-3’
Claims (27)
- 第1プロモーター、表面発現のためのポリガンマグルタミン酸合成酵素複合体をコードする遺伝子、及び目的タンパク質をコードする遺伝子;及び、第2プロモーター、表面発現のためのポリガンマグルタミン酸合成酵素複合体をコードする遺伝子、及び目的タンパク質をコードする遺伝子;を含む目的タンパク質の表面発現ベクター。
- 第1プロモーターは、配列番号1で示されることを特徴とする請求項1に記載の目的タンパク質の表面発現ベクター。
- 第2プロモーターは、配列番号2で示されることを特徴とする請求項1に記載の目的タンパク質の表面発現ベクター。
- 前記ポリガンマグルタミン酸合成酵素複合体をコードする遺伝子は、ポリガンマグルタミン酸を産生するバチルス属菌株に由来したことを特徴とする請求項1に記載の目的タンパク質の面発現ベクター。
- 前記ポリガンマグルタミン酸合成酵素複合体をコードする遺伝子の末端部位にリンカーが挿入されており、前記挿入されたリンカーに目的タンパク質をコードする遺伝子が挿入されていることを特徴とする請求項1に記載の目的タンパク質の表面発現ベクター。
- 前記目的タンパク質は、表面発現に有利であるように目的タンパク質のアミノ酸配列のうちの一部分が除去されたり位置特異的に突然変異されたりしたものであることを特徴とする請求項1に記載の目的タンパク質の表面発現ベクター。
- 前記第1プロモーターは、乳酸菌由来のアルドラーゼ・プロモーター(Pald)であることを特徴とする請求項1に記載の目的タンパク質の表面発現ベクター。
- 前記第2プロモーターは、乳酸菌由来のガラクトース・ムタロターゼ・プロモーター(Pgm)であることを特徴とする請求項1に記載の目的タンパク質の表面発現ベクター。
- 前記ベクターは、グラム陰性菌またはグラム陽性菌に適用されることを特徴とする請求項1乃至請求項8のいずれか一に記載の目的タンパク質の表面発現ベクター。
- 請求項1乃至請求項8のいずれか一項に記載の表面発現ベクターで形質転換された微生物。
- 形質転換に用いられた微生物は、目的タンパク質の細胞表面発現に有利であるように、発現された目的タンパク質を分解することに関わる細胞内または細胞外のタンパク質分解酵素を産生できないように変形されたものであることを特徴とする請求項10に記載の形質転換された微生物。
- 微生物は、乳酸菌であることを特徴とする請求項10に記載の形質転換された微生物。
- 前記ポリガンマグルタミン酸合成酵素複合体をコードする遺伝子は、pgsAであり、配列番号21~24および32~34のうちのいずれか一つの塩基配列を有することを特徴とする請求項1に記載の目的タンパク質の表面発現ベクター。
- 前記遺伝子pgsAは、ポリガンマグルタミン酸を産生するバチルス属菌株に由来したことを特徴とする請求項13に記載の目的タンパク質の表面発現ベクター。
- 前記ポリガンマグルタミン酸合成酵素複合体をコードする遺伝子pgsAは、配列番号25の塩基配列を有することを特徴とする請求項13に記載の目的タンパク質の表面発現ベクター。
- 前記遺伝子pgsAの末端部位にリンカーが挿入されており、前記挿入されたリンカーに目的タンパク質をコードする遺伝子が挿入されていることを特徴とする請求項13に記載の目的タンパク質の表面発現ベクター。
- 前記目的タンパク質は、表面発現に有利であるように目的タンパク質のアミノ酸配列のうちの一部分が除去されたり位置特異的に突然変異されたりしたものであることを特徴とする請求項13に記載の目的タンパク質の表面発現ベクター。
- 前記ベクターは、グラム陰性菌またはグラム陽性菌に適用されることを特徴とする請求項13乃至請求項17のいずれか一項に記載の目的タンパク質の表面発現ベクター。
- 請求項13乃至請求項17のいずれか一項に記載の表面発現ベクターで形質転換された微生物。
- 形質転換に用いられた微生物は、目的タンパク質の細胞表面発現に有利であるように、発現された目的タンパク質を分解することに関わる細胞内または細胞外のタンパク質分解酵素を産生できないように変形されたものであることを特徴とする請求項19に記載の形質転換された微生物。
- 微生物は、乳酸菌であることを特徴とする請求項19に記載の形質転換された微生物。
- 請求項10に記載の形質転換された微生物を培養して目的タンパク質を細胞の表面に発現するステップおよび目的タンパク質が表面に発現された細胞を回収するステップを含む目的タンパク質の細胞表面発現方法。
- 下記のステップを含むことを特徴とするグラム陰性またはグラム陽性宿主細胞の表面に目的タンパク質を発現する方法:
(a)請求項9に記載の微生物表面発現用ベクターに目的タンパク質をコードする遺伝子を挿入して組換えベクターを製造するステップ;
(b)前記組換えベクターでグラム陰性またはグラム陽性宿主細胞を形質転換するステップ;及び
(c)前記形質転換された宿主細胞を培養して目的タンパク質を宿主細胞の表面に発現するステップ - 請求項19に記載の形質転換された微生物を培養して目的タンパク質を細胞の表面に発現するステップおよび目的タンパク質が表面に発現された細胞を回収するステップを含む目的タンパク質の細胞表面発現方法。
- 目的タンパク質は、ホルモン、ホルモン類似体、酵素、酵素阻害剤、シグナル伝達タンパク質もしくはその一部分、抗体もしくはその一部分、一本鎖抗体、結合タンパク質、結合ドメイン、ペプチド、抗原、付着タンパク質、構造タンパク質、調節タンパク質、毒素タンパク質、サイトカイン、転写調節因子、血液凝固因子および植物生体防御誘導タンパク質よりなる群から選ばれるいずれか一種であることを特徴とする請求項24に記載の方法。
- 請求項25に記載の方法により製造され、抗原が表面に発現された細胞をヒト以外の脊椎動物に投与して体液性免疫または細胞性免疫を誘導することを特徴とする方法。
- 下記のステップを含むことを特徴とするグラム陰性またはグラム陽性宿主細胞の表面に目的タンパク質を発現する方法:
(a)請求項18に記載の目的タンパク質の表面発現ベクターに目的タンパク質をコードする遺伝子を挿入して組換えベクターを製造するステップ;
(b)前記組換えベクターでグラム陰性またはグラム陽性宿主細胞を形質転換するステップ;及び
(c)前記形質転換された宿主細胞を培養して目的タンパク質を宿主細胞の表面に発現するステップ。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR20180120547 | 2018-10-10 | ||
KR10-2018-0120547 | 2018-10-10 | ||
PCT/KR2019/013261 WO2020076079A2 (ko) | 2018-10-10 | 2019-10-10 | 락토바실러스 카제이 유래의 두 종류 프로모터를 이용한 두 가지 목적단백질의 동시 표면발현벡터 및 이를 이용한 단백질의 미생물표면 발현 방법 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2022512617A true JP2022512617A (ja) | 2022-02-07 |
JP7170129B2 JP7170129B2 (ja) | 2022-11-11 |
Family
ID=70165054
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021518746A Active JP7170129B2 (ja) | 2018-10-10 | 2019-10-10 | ラクトバチルス・カゼイ由来の二種類のプロモーターを用いた二種の目的タンパク質の同時表面発現ベクター、およびこれを用いたタンパク質の微生物表面発現方法 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20230295644A1 (ja) |
EP (1) | EP3940077A4 (ja) |
JP (1) | JP7170129B2 (ja) |
KR (1) | KR102604524B1 (ja) |
CN (1) | CN113330120A (ja) |
WO (1) | WO2020076079A2 (ja) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2020076078A1 (ko) * | 2018-10-10 | 2020-04-16 | 주식회사 바이오리더스 | 락토바실러스 카제이 유래 갈락토오스 뮤타로테이즈 유전자의 프로모터를 이용한 항시적 고발현 표면발현벡터 및 그 이용 |
CN110066758A (zh) * | 2019-06-06 | 2019-07-30 | 武汉骏安生物科技有限公司 | 一种高产聚-γ-谷氨酸的芽胞杆菌及其构建方法和应用 |
KR102401860B1 (ko) * | 2021-10-21 | 2022-05-24 | 을지대학교 산학협력단 | 신규 항암 백신 조성물 및 그를 이용한 백신화 방법 |
KR102421307B1 (ko) * | 2021-11-19 | 2022-07-14 | 을지대학교 산학협력단 | 암 발생 및 성장 억제를 위한 신규 항암 백신 조성물 및 그를 이용한 백신화 방법 |
CN114702559A (zh) * | 2022-04-02 | 2022-07-05 | 江西师范大学 | 枯草芽孢杆菌蛋白PgsA及其在表面展示系统中的应用 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2010088332A (ja) * | 2008-10-07 | 2010-04-22 | Japan Health Science Foundation | 複数の遺伝子発現を行うための発現ベクター |
JP2010521984A (ja) * | 2007-03-22 | 2010-07-01 | バイオリーダーズ コーポレーション | 新規構成的強力プロモーター及びその用途 |
JP2011501668A (ja) * | 2007-10-15 | 2011-01-13 | バイオリーダーズ コーポレーション | Myo−2ペプチド重合体及びミオスタチン融合蛋白質の表面発現ベクター、及びそのベクターによって形質転換された微生物 |
JP2012514469A (ja) * | 2009-01-08 | 2012-06-28 | バイオリーダーズ コーポレーション | 安定的な構成的高発現子宮頸癌治療ワクチン用ベクター及びそれによって形質転換された組換え乳酸菌 |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5990091A (en) * | 1997-03-12 | 1999-11-23 | Virogenetics Corporation | Vectors having enhanced expression, and methods of making and uses thereof |
US6846481B1 (en) * | 1999-02-04 | 2005-01-25 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Recombinant expression of heterologous nucleic acids in protozoa |
CN1311082C (zh) * | 2001-08-10 | 2007-04-18 | 生物领先公司 | 具有编码多聚-γ-谷氨酸合成酶的基因pgsBCA的表面表达载体以及利用该载体在微生物表面表达目的蛋白的方法 |
KR100525759B1 (ko) * | 2002-10-17 | 2005-11-03 | 한국생명공학연구원 | 바실러스 속 균주 유래의 폴리 감마 글루탐산합성유전자를 이용한 펩타이드 항생물질 P5와Anal3의 표면 발현 방법 및 그의 용도 |
WO2004108937A1 (en) * | 2003-06-04 | 2004-12-16 | Bioleaders Corporation | Cell surface expression vector of sars virus antigen and microorganisms transformed thereby |
US7255855B2 (en) * | 2004-02-27 | 2007-08-14 | Bioleaders Corporation | Surface expression method of peptides P5 and Anal3 using the gene encoding poly-gamma-glutamate synthetase |
KR100690948B1 (ko) * | 2004-06-17 | 2007-03-09 | 한국과학기술원 | 대장균의 외막 단백질을 이용한 목적 단백질의 미생물표면발현 방법 |
KR100784261B1 (ko) * | 2006-01-02 | 2007-12-11 | 한국과학기술원 | 탄저균의 포자외막 단백질을 이용한 목적단백질의 미생물표면발현방법 |
US20110091493A1 (en) * | 2009-10-16 | 2011-04-21 | Northwestern University | Vaccine compositions and uses thereof |
US20140045235A1 (en) * | 2012-08-12 | 2014-02-13 | Wisconsin Alumi Research Foundation | Construction of a lactobacillus casei ethanologen |
CN107446872A (zh) * | 2017-08-29 | 2017-12-08 | 东北农业大学 | 一种组成型表达兔病毒性出血症病毒vp60蛋白的重组乳酸菌疫苗株及其制备方法和用途 |
KR20200000972A (ko) * | 2018-06-26 | 2020-01-06 | 주식회사 바이오리더스 | 바실러스 속 균주 유래의 폴리감마글루탐산 합성유전자를 이용한 표면발현벡터 및 이를 이용한 단백질의 미생물표면 발현 방법 |
WO2020076078A1 (ko) * | 2018-10-10 | 2020-04-16 | 주식회사 바이오리더스 | 락토바실러스 카제이 유래 갈락토오스 뮤타로테이즈 유전자의 프로모터를 이용한 항시적 고발현 표면발현벡터 및 그 이용 |
-
2019
- 2019-10-10 WO PCT/KR2019/013261 patent/WO2020076079A2/ko unknown
- 2019-10-10 CN CN201980076721.1A patent/CN113330120A/zh active Pending
- 2019-10-10 JP JP2021518746A patent/JP7170129B2/ja active Active
- 2019-10-10 US US17/281,756 patent/US20230295644A1/en active Pending
- 2019-10-10 EP EP19870792.9A patent/EP3940077A4/en active Pending
- 2019-10-10 KR KR1020217010524A patent/KR102604524B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2010521984A (ja) * | 2007-03-22 | 2010-07-01 | バイオリーダーズ コーポレーション | 新規構成的強力プロモーター及びその用途 |
JP2011501668A (ja) * | 2007-10-15 | 2011-01-13 | バイオリーダーズ コーポレーション | Myo−2ペプチド重合体及びミオスタチン融合蛋白質の表面発現ベクター、及びそのベクターによって形質転換された微生物 |
JP2010088332A (ja) * | 2008-10-07 | 2010-04-22 | Japan Health Science Foundation | 複数の遺伝子発現を行うための発現ベクター |
JP2012514469A (ja) * | 2009-01-08 | 2012-06-28 | バイオリーダーズ コーポレーション | 安定的な構成的高発現子宮頸癌治療ワクチン用ベクター及びそれによって形質転換された組換え乳酸菌 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
MOL. BIOTECHNOL. (2013) VOL.53, PP.129-138, JPN6022012133, ISSN: 0004741222 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2020076079A3 (ko) | 2020-10-15 |
JP7170129B2 (ja) | 2022-11-11 |
US20230295644A1 (en) | 2023-09-21 |
CN113330120A (zh) | 2021-08-31 |
EP3940077A2 (en) | 2022-01-19 |
WO2020076079A2 (ko) | 2020-04-16 |
KR102604524B1 (ko) | 2023-11-22 |
EP3940077A4 (en) | 2022-08-10 |
KR20210046811A (ko) | 2021-04-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7170129B2 (ja) | ラクトバチルス・カゼイ由来の二種類のプロモーターを用いた二種の目的タンパク質の同時表面発現ベクター、およびこれを用いたタンパク質の微生物表面発現方法 | |
Guoyan et al. | Bacillus subtilis spore surface display technology: a review of its development and applications | |
US7553636B2 (en) | Surface expression vectors having pgsBCA the gene coding poly-gamma-glutamate synthetase, and a method for expression of target protein at the surface of microorganism using the vector | |
US8236940B2 (en) | Constitutive strong promoter and use thereof | |
US20160136294A1 (en) | Bifunctional protein anchors | |
UA94974C2 (uk) | Мікроорганізми як носії нуклеотидних послідовностей, що кодують антигени та білкові токсини, спосіб їх одержання та застосування | |
AU2004245859B2 (en) | Cell surface expression vector of SARS virus antigen and microorganisms transformed thereby | |
US7425438B2 (en) | Vector for anti-HPV vaccine and transformed microorganism by the vector | |
JP7116809B2 (ja) | バチルス属菌株由来のポリ-γ-グルタミン酸合成遺伝子を用いた表面発現ベクター、及びそれを用いたタンパク質の微生物表面発現方法 | |
KR102594583B1 (ko) | 락토바실러스 카제이 유래 갈락토오스 뮤타로테이즈 유전자의 프로모터를 이용한 항시적 고발현 표면발현벡터 및 그 이용 | |
US9228190B2 (en) | Vector for constitutive high-level expression containing REPe mutant gene | |
KR20210081196A (ko) | 락토바실러스 카제이 유래의 두 종류 프로모터를 이용한 두 가지 목적단백질의 동시 표면발현벡터 및 이를 이용한 단백질의 미생물표면 발현 방법 | |
KR102077703B1 (ko) | 바실러스 속 균주 유래의 폴리감마글루탐산 합성유전자를 이용한 표면발현벡터 및 이를 이용한 단백질의 미생물표면 발현 방법 | |
KR20210081195A (ko) | 락토바실러스 카제이 유래 갈락토오스 뮤타로테이즈 유전자의 프로모터를 이용한 항시적 고발현 표면발현벡터 및 그 이용 | |
KR20200001036A (ko) | 바실러스 속 균주 유래의 폴리감마글루탐산 합성유전자를 이용한 표면발현벡터 및 이를 이용한 단백질의 미생물표면 발현 방법 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210405 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220404 |
|
RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422 Effective date: 20220414 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20220414 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20220426 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220616 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20221011 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20221031 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7170129 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |