JP2022511591A - 緑膿菌ｏ１１血清型ｏ抗原オリゴ糖の化学合成方法 - Google Patents
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Abstract
Ｄ－グルコースビルディングブロック、Ｌ－フコサミンビルディングブロック、及びＤ－フコサミンビルディングブロックを使用して緑膿菌Ｏ１１血清型Ｏ抗原オリゴ糖を構築する方法であって、Ｄ－グルコースビルディングブロックまたはＬ－フコサミンビルディングブロックは、１，２－α－シス－グリコシド結合を介してＤ－フコサミンビルディングブロックと接続し、Ｄ－グルコースビルディングブロックは、１，２－β－トランス－グリコシド結合を介してＬ－フコサミンビルディングブロックと接続し、１，２－α－シス－グリコシド結合の構築は、混合溶媒で行われ、混合溶媒は、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、及びチオフェンのうちの２つ以上を含む、方法が提供される。【選択図】図７
Description
本発明は、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）Ｏ１１血清型Ｏ抗原オリゴ糖の化学合成方法に関し、化学分野に属す。
緑膿菌は好気性の棒状のグラム陰性菌の一種であり、一般的に土壌や水環境に生息する。特に、緑膿菌は、病院環境に広く存在する日和見性の病原体の一種でもあり、細菌血症、尿路感染症、肺炎などの疾患を引き起こす。緑膿菌の感受性の高い集団には、火傷患者、ＩＣＵの患者、術後患者、および癌、糖尿病、先天性嚢胞性線維症などの免疫系欠陥のある患者が含まれる。中国大陸の人工呼吸器関連肺炎（ＶＡＰ）および院内肺炎（ＨＡＰ）における緑膿菌の有病率に関する研究により、ＶＡＰでは緑膿菌がすべての分離株の１９．４％を占め（（９５％信頼区間（ＣＩ）の１７．６～２１．２％））、ＨＡＰでの割合は比較的類似しており、１７．８％（９５％ＣＩの１４．６～２１．６％）であることが分かった。さらに、この研究では、ＶＡＰから分離された緑膿菌がゲンタマイシン（５１．１％、９５％ＣＩの３７．７～６４．４％）およびアミカシン（２２．５％、９５％ＣＩの１４．３～３３．６％）に対して高い耐性を持っており、ＨＡＰから分離された緑膿菌は、アミカシン（２２．２％、（９５％ＣＩの１３．８～３３．６％））およびセフォペラゾン（５０．０％（９５％ＣＩの３０．２～６９．８％））に対して高い耐性を持っていることが分かった。
世界的に、緑膿菌は、ポリミキシン、フルオロキノロン系、カルバペネム系などの抗生物質に対して一定の耐性を有することが臨床的に見出された。２０１６年、世界保健機関は、緑膿菌を、新規抗生物質またはワクチンの研究開発が最も緊急で必要である病原菌の１つとして挙げた。現在まで、市場にはこの病原菌に対するワクチンはない。緑膿菌のワクチン研究は１９８０年代に始まり、研究分野は、この病原菌のリポ多糖、糖-タンパク質複合体、べん毛、不活化または弱毒化された全細菌、およびこの病原菌のＤＮＡ配列に焦点を当てている。緑膿菌のリポ多糖は、人体においてあまり見られないいくつかの単糖とグリコシド結合との連結で構成されており、重要な病原性因子である。単糖の種類及びグリコシド結合の連結方法によって、緑膿菌には、合計２０の異なる血清型抗原がある。その中で、具体的な構造が[－３）－α－Ｌ－Ｎ－アセチルフコサミン－（１－３）－α－Ｄ－Ｎ－アセチルフコサミン－（１－２）－β－Ｄ－グルコース－（１－]ｎであるＯ１１血清型抗原は、三糖リピートフラグメントをエンドバイエンドで連結することによって形成される長鎖抗原であり、リピートユニットの特定の数ｎは、この病原菌の遺伝子によって調節される。
現在、そのような構造の化合物はすべてリポ多糖構造を含む野生の病原菌またはその構造をコードする遺伝子を含む遺伝子工学細菌から抽出され、ＬＰＳ高発現株の構築と培養、プロテアーゼＫの分解、フェノール熱抽出、トリシン－ＳＤＳ－ポリアクリルアミドゲルエレクトロノフォレシス（Ｔｒｉｃｉｎｅ－ＳＤＳ－ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ、ＰＡＧＥ）分析、およびウエスタンイムノブロット検出を含む一連のステップを含む。また、生物学的抽出法によって得られたリポ多糖は、化学構造が不均一であるという問題もあり、さらに、細菌から直接抽出されたリポ多糖は、他の細菌の病原性因子が混入される可能性があるため、安全性の問題もある。それは人体に免疫保護を提供できないだけではなく、人体が細菌の病原性因子によって直接感染され、病気を引き起こし、深刻な副作用を引き起こす。このような問題を回避するために、化学合成法を用いてリポ多糖を直接合成することを決定した。これにより、不均一な化学構造や他の未知の病原性因子の混入の問題が回避され、合成されたリポ多糖は明確な化学構造を持ち、他の物質が混入されずに、この種の莢膜多糖類のみがワクチンの組成に関与することが保証できる。
しかしながら、複雑なオリゴ糖の合成過程において、グリコシド結合の構築は、オリゴ糖の合成において最も基本的であるが、最も困難で重要な問題でもある。糖類化合物の構造の多様性および立体化学の複雑さのため、他の構造を有する有機化合物と違って、オリゴ糖合成の方法論はまだ未成熟で不完全であり、有機化学の分野で多くの方法（数十の方法）があるが、全員に公認される普遍的な方法がない唯一の分野であると考えられている。糖類モジュールの構造が複雑であり、シス-グリコシド結合の選択性が低いため、その構造を合成して構築することは困難であり、現在、化学合成法を使用してその化合物を構築することに関する報告はなく、その構造の化合物の化学合成法の研究を制限している。
上記の問題を解決するために、本発明は、主にグルコースビルディングブロック、Ｌ－フコサミンビルディングブロック、Ｄ－フコサミンビルディングブロック、及び１，２－α－シス－グリコシド結合、１，２－β－トランスグリコシド結合を含む、３つの糖ビルディングブロック化学法によって、緑膿菌Ｏ１１血清型Ｏ抗原三糖フラグメントを合成する。その中で、Ｄ－フコサミンの合成と１，２－α－シス－グリコシドの構築は、標的三糖の重要なステップである。本発明は、Ｄ－グルコースからＤ－フコサミンを合成するための方法を開発し、溶媒効果、温度効果および添加剤効果の相乗効果を通じて、１，２－α－シス－グリコシド結合を構築する立体選択性の問題を首尾よく解決する。合成された３つのグリコシルビルディングブロックを使用して、保護された標的三糖を合成し、最終的に脱保護によって得られた標的三糖は、式1に示されるとおりである。また、三糖の還元末端は、次のステップの複合タンパク質の準備のために、アミノ基を持つ連結アームが組み立てられる。
本発明の第一の目的は、Ｄ－グルコースビルディングブロック、Ｌ－フコサミンビルディングブロック、及びＤ－フコサミンビルディングブロックを使用してＯ抗原三糖を構築することを含む、緑膿菌Ｏ１１血清型Ｏ抗原三糖を合成する方法であって、Ｄ－グルコースビルディングブロックまたはＬ－フコサミンビルディングブロックは、１，２－α－シス－グリコシド結合を介してＤ－フコサミンビルディングブロックと接続し、Ｄ－グルコースビルディングブロックは、１，２－β－トランス－グリコシド結合を介してＬ－フコサミンビルディングブロックと接続し、前記１，２－α－シス－グリコシド結合の構築は、混合溶媒で行われ、前記混合溶媒は、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、及びチオフェンのうちの２つ以上を含む、方法を提供することである。
本発明の一実施形態では、前記Ｄ－グルコースビルディングブロックの化学構造は式ＩＩに示され、Ｌ－フコサミンビルディングブロックの化学構造は式ＩＩＩに示され、Ｄ－フコサミンビルディングブロックの化学構造は式ＩＶに示され、
式中、リンカーは、－（ＣＨ２）ｎ－Ｎ－Ｙ１Ｙ２、またはＯ－（ＣＨ２）ｎ－ＳＹ１（Ｙ２）、またはＯ－（ＣＨ２）ｎ－Ｎ３を含み、ｎ＝１～１０であり、Ｙ１は水素（Ｈ）またはベンジル（Ｂｎ）であり、Ｙ２は水素（Ｈ）またはベンジルオキシカルボニル（ベンジルメトキシカルボニル）（Ｃｂｚ）である；Ｒ１は、水素（Ｈ）、エステル、アセチル（Ａｃ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、ピバロイル（Ｐｉｖ）、クロルアセチル（ＣｌＡｃ）、レブリニル（Ｌｅｖ、Ｌｅｖｕｌｉｎｙｌ）、及びアリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）を含むが、これらに限られていない；Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、水素（Ｈ）またはエステル、エーテルであり、アセチル（Ａｃ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、ピバロイル（Ｐｉｖ）、クロルアセチル（ＣｌＡｃ）、レブリニル（Ｌｅｖ）、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）およびベンジル（Ｂｎ）、ｐ－メトキシベンジル（ｐＭＢｎ）、アリル（Ａｌｌ）、トリチル（Ｔｒ）、モノメトキシトリチル（Ｍｍｔ）、及びシリルエーテル基を含むが、これらに限られていない；Ｒ５およびＲ６は、水素（Ｈ）、エーテル基、ベンジル（Ｂｎ）、ｐ－メトキシベンジル（ｐＭＢｎ）、アリル（Ａｌｌ）、トリチル（Ｔｒ）、モノメトキシトリチル（Ｍｍｔ）、及びシリルエーテル基を含むが、これらに限られていない；Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、およびＲ１０は、水素（Ｈ）、窒素（Ｎ）またはアセチル（Ａｃ）を含む。
本発明の一実施形態では、その方法は、Ｄ－グルコースビルディングブロックおよびＬ－フコサミンビルディングブロックを使用して、式Ｖに示される化学構造を有する二糖フラグメントを合成することを含む。
本発明の一実施形態では、前記Ｄ－グルコースビルディングブロックとＬ－フコサミンビルディングブロックとの間の１，２－β－トランス－グリコシド結合による連結は、ＴＭＳＯＴｆの促進作用下で、溶媒としてのジクロロメタン中で行われる。
本発明の一実施形態では、その方法は、二糖フラグメントおよびＤ－フコサミンビルディングブロックを使用して、式Ｉに示される化学構造を有する三糖フラグメントを合成することを含む。
式中、Ｒは－（ＣＨ２）ｎ－ＮＨ２、またはＯ－（ＣＨ２）ｎ－ＳＨであり、ｎ＝１～１０である。
本発明の一実施形態では、その方法は、下記一般式
（式中、Ｒは－（ＣＨ２）ｎ－ＮＨ２、またはＯ－（ＣＨ２）ｎ－ＳＨであり、ｎ＝１～１０である）
に示される化学構造を有するＯ抗原三糖前駆体を予め合成し、還元によりＯ抗原三糖を得ることを含む。
に示される化学構造を有するＯ抗原三糖前駆体を予め合成し、還元によりＯ抗原三糖を得ることを含む。
本発明の一実施形態では、前記Ｏ抗原三糖化合物は構造は下記通りである：
本発明の一実施形態では、前記Ｄ－グルコースビルディングブロック（式ＩＩ）の末端基は脱離基であるトリクロロアセトイミデートであり、残りの置換基Ｒｎは式ＩＩに示される。
本発明の一実施形態では、前記Ｄ－グルコースビルディングブロックの合成方法は、１，２，３，４，６－ペンタ－Ｏ－アセチルグルコースを出発原料として、乾燥したＮ、Ｎ－ジメチルホルムアミドおよび酢酸ヒドラジンを使用して、１位のアセチルを除去して－ＯＨを露出させ、露出した－ＯＨをトリクロロアセトニトリル（Ｃｌ３ＣＮ）と反応させて化合物Ｄ－グルコースビルディングブロックを得ることを含む。
本発明の一実施形態では、前記Ｌ－フコサミンビルディングブロック（式ＩＩＩ）の末端基はアリル（ＯＡｌｌ）で保護されており、残りの位置の置換基Ｒｎは式ＩＩＩに示される。
本発明の一実施形態では、前記Ｌ－フコサミンビルディングブロックは、アリル２－デオキシ－２アジド－Ｌ－フコシドを出発原料とし、ジブチルスズオキシド（Ｂｕ２ＳｎＯ）と２－ブロモメチルナフタレンの作用下で４位のヒドロキシルを選択的に保護することにより４－Ｎａｐフコースを取得し、次に、残りの３位のヒドロキシルをベンジルで保護し、ジクロロジシアノベンゾキノンの作用下で４位のＮａｐ基を除去して、最終的な糖ビルディングブロックＢを取得する。
本発明の一実施形態では、前記Ｄ－フコサミンビルディングブロックの末端基はリンカーであり、式ＩＶに示される。
本発明の一実施形態では、前記Ｄ－フコサミンの合成方法は、グルコースを使用してＤ－フコサミンを構築して取得し、その方法は、３，４，６－トリ－Ｏ－アセチル－マンノセン（3,4,6-O-Triacetyl Mannosene、３，４，６－Ｏ－トリアセチル マンノセン）を原料として、アジドおよびセレン試薬を介して１－セレノフェニル－２アジドグルコースを取得し、アセチル基を除去し、６－Ｃをメチル化し、最後にＤ－フコサミン類化合物を取得することを含む。
本発明の一実施形態では、その方法は具体的には、３，４，６－トリ－Ｏ－アセチル－マンノセンを原料として、ヨードベンゼンジアセテート（ＰｈＩ（ＯＡｃ）２）の作用下で、アジドトリメチルシラン（ＴＭＳ－Ｎ３）とジフェニルジセネニド（Ｐｈ２Ｓｅ２）と一緒に１－セレノフェニル－２アジドグルコースを生成し、次にアルカリ性条件下でアセチルを除去し、４－トルエンスルホニルクロリドを添加して６－Ｃのメチル化を達成し、Ｄ－フコサミン化合物を得ることを含む。
本発明の一実施形態では、その方法はさらに、Ｄ－フコサミン化合物の３、４－Ｃを保護し、次に４－ＣのＮａｐ基を除去し、アセチルで保護し、Ｄ－フコースの１位のセレノフェニルを臭化テトラブチルアンモニウム（ＮＢＳ）で加水分解し、Ｃｌ３ＣＮとＤＢＵでフコースをグリコシルトリクロロアセトイミデートにし、ルイス酸の促進下でアミノ連結アームを組み立て、最後にＤ－フコースの３位のアセチルを除去してＤ－フコサミンビルディングブロックを得ることを含む。
本発明の一実施形態では、前記３－Ｃの保護試薬は、メトキシベンジルクロリド（ＰＭＢＣｌ）とジブチルスズオキシド（Ｂｕ２ＳｎＯ）を含む。
本発明の一実施形態では、前記４－Ｃの保護試薬は、ベンジルを含む。
本発明の一実施形態では、前記４－ＣのＮａｐ基の除去は、ＤＤＱによって実現される。
本発明の一実施形態では、前記ルイス酸は、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリルを含む。
本発明の第二の目的は、アミノ連結アームが組み立てられた、緑膿菌のＯ１１血清型Ｏ抗原三糖を提供することであり、この抗原三糖は、上記の方法によって調製される；
アミノ連結アームが組み立てられた、緑膿菌のＯ１１血清型Ｏ抗原三糖の構造は下記通りである：
式中、Ｒは－（ＣＨ２）ｎ－ＮＨ２であり、ｎ＝１～１０である。
アミノ連結アームが組み立てられた、緑膿菌のＯ１１血清型Ｏ抗原三糖の構造は下記通りである：
本発明の第三の目的は、上記の、アミノ連結アームが組み立てられた、緑膿菌のＯ１１血清型Ｏ抗原三糖を使用した、糖－タンパク質複合体の調製方法を提供することである。
本発明の第四の目的は、緑膿菌Ｏ１１血清型Ｏ抗原三糖を含む、糖－タンパク質複合体の調製方法であって、緑膿菌Ｏ１１血清型Ｏ抗原三糖の調製方法は、上記の方法である、糖－タンパク質複合体の調製方法を提供することである。
本発明の第五の目的は、緑膿菌ワクチンまたは緑膿菌感染によって引き起こされる疾患のための薬品の開発または調製に、上記のアミノ連結アームが組み立てられた緑膿菌のＯ１１血清型Ｏ抗原三糖を使用することである。
１、本発明は、化学的方法により、緑膿菌Ｏ１１血清型のＯ抗原三糖フラグメントを合成する。本発明において、Ｄ－マンノースをＤ－フコースに変換するための方法が開発され、この方法は、単純で便利で、効率的であり、６－Ｃのメチル化が約５０％であることを除いて、残りが８０％を超えることができる。そして、得られたグリコシルビルディングブロックを使用して、緑膿菌Ｏ１１血清型のＯ抗原三糖フラグメントを合成する。
２、一般的に使用されるグリコシド結合の構築は、糖の環のＣ－２位のアシルによる隣接基関与効果を使用し、高効率で１，２－トランスグリコシド結合を構築する。２位のアセチルは、本発明におけるトランスグリコシド結合の構築などの糖化学保護戦略において最も簡単に入手でき、最も効果的な保護剤である。ただし、１，２－シス反応の場合、反応方法が普遍的ではないため、各反応条件が反応に大きな影響を与え、糖ビルディングブロックを設計する際に、Ｃ－６に大きな空間立体障害の保護基で選択的に保護し、特にガラクトースに対して、長距離隣接基補助効果に類似したメカニズムを形成するためにＣ－４位にアシル基を導入することが報告されている。本発明の方法は、シスグリコシド結合の均一な構築を実現するために適切な混合溶媒を採用し、立体選択性１００％に達することができる。
３、本発明は、保護基の選択および最適化ならびにグリコシド化反応の戦略を通じて、Ｏ１１三糖リピートユニットの調製を首尾よく完了する。本発明の方法によって合成される緑膿菌Ｏ１１血清型のＯ－抗原三糖フラグメントには、アミノ連結アームが組み立てられ、抗原タンパク質と連結して複合糖質を調製することができ、これは、緑膿菌の治療および予防のためのワクチンの開発に対して重要な役割を果たす。
本発明の実施形態は、実施例と併せて以下で詳細に説明されるが、当業者は、以下の実施例が本発明を説明するためだけのものであり、本発明の範囲を限定するものと見なされるべきではないことを理解するであろう。実施例に特定の条件が指定されていない場合は、従来の条件またはメーカーが推奨する条件に従って実施し、使用する試薬または機器にはメーカーが指定されていない場合は、すべて市販されている従来の製品である。
本発明の収率の計算方法は、「生成物（モル）／反応基質（モル）＊ １００％」である。本発明における化合物の構造を同定するための方法は、核磁気共鳴分光法（４００Ｍ）による測定、高分解能質量分析法、および旋光度測定法であり、その結果は、各化合物の具体的な合成例に記載されている。
実施例１
糖ビルディングブロック３（Ｄ－グルコースビルディングブロック）の合成（図１参照）
図１に示されるように、ペルアセチル化グルコース１を出発原料として使用し、乾燥したＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド中で酢酸ヒドラジン（ＮＨ２－ＮＨ２－ＡｃＯＨ）によって選択的に加水分解したことにより１位のアセチルを除去した。得られた１－ＯＨグルコース２を使用して、トリクロロアセトニトリル（Ｃｌ３ＣＮ）と１，８－ジアザビシクロウンデク－７－エン（ＤＢＵ）を使用して、無水ジクロロメタン中でグルコシルトリクロロアセトイミデート３を生成した。
具体的な試験操作とステップ：
化合物２：ペルアセチル化グルコース１（５．０ｇ、１２．８ｍｍоｌ）を無水ＤＭＦ（６５ｍｌ）に溶解し、酢酸ヒドラジン（１．４５ｇ、１５．６ｍｍоｌ）を加えた。反応物を４０℃で６時間撹拌し、反応物の消失をＴＬＣによってモニタリングした。反応液を室温まで冷却し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、有機相を分離し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮後、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、２：１）で精製して、化合物２（３．９ｇ、１１．２ｍｍоｌ）を得た。この化合物の同定データは、関連文献で報告されている。
化合物３：化合物２（１．１ｇ、３．１６ｍｍоｌ）を無水ＤＣＭ（３０ｍｌ）に溶解し、０℃に冷却した。Ｃｌ３ＣＮ（３．２ｍｌ、３１．６ｍｍоｌ）およびＤＢＵ（０．４５ｍｌ、０．３ｍｍоｌ）を反応液に順次加え、反応物を氷浴中で４時間撹拌し、反応原料の消失をＴＬＣでモニタリングした。反応液を室温に戻し、飽和ＮａＨＣＯ３で抽出し、有機相を分離し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮後、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、４：１）で精製して、化合物３（１．３ｇ、２．８ｍｍоｌ）を得た。この化合物の同定データは、関連文献で報告されている。
糖ビルディングブロック３（Ｄ－グルコースビルディングブロック）の合成（図１参照）
図１に示されるように、ペルアセチル化グルコース１を出発原料として使用し、乾燥したＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド中で酢酸ヒドラジン（ＮＨ２－ＮＨ２－ＡｃＯＨ）によって選択的に加水分解したことにより１位のアセチルを除去した。得られた１－ＯＨグルコース２を使用して、トリクロロアセトニトリル（Ｃｌ３ＣＮ）と１，８－ジアザビシクロウンデク－７－エン（ＤＢＵ）を使用して、無水ジクロロメタン中でグルコシルトリクロロアセトイミデート３を生成した。
具体的な試験操作とステップ：
化合物２：ペルアセチル化グルコース１（５．０ｇ、１２．８ｍｍоｌ）を無水ＤＭＦ（６５ｍｌ）に溶解し、酢酸ヒドラジン（１．４５ｇ、１５．６ｍｍоｌ）を加えた。反応物を４０℃で６時間撹拌し、反応物の消失をＴＬＣによってモニタリングした。反応液を室温まで冷却し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、有機相を分離し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮後、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、２：１）で精製して、化合物２（３．９ｇ、１１．２ｍｍоｌ）を得た。この化合物の同定データは、関連文献で報告されている。
化合物３：化合物２（１．１ｇ、３．１６ｍｍоｌ）を無水ＤＣＭ（３０ｍｌ）に溶解し、０℃に冷却した。Ｃｌ３ＣＮ（３．２ｍｌ、３１．６ｍｍоｌ）およびＤＢＵ（０．４５ｍｌ、０．３ｍｍоｌ）を反応液に順次加え、反応物を氷浴中で４時間撹拌し、反応原料の消失をＴＬＣでモニタリングした。反応液を室温に戻し、飽和ＮａＨＣＯ３で抽出し、有機相を分離し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮後、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、４：１）で精製して、化合物３（１．３ｇ、２．８ｍｍоｌ）を得た。この化合物の同定データは、関連文献で報告されている。
実施例２
糖ビルディングブロック７（Ｌ－フコースビルディングブロック）の合成ルート（図２参照）
図２に示されるように、アリル－２－デオキシ－２－アジド－Ｌ－フコシド４を出発原料として使用し、３位と４位のアセチルをメトキシドナトリウムを含むアルカリ性環境下で除去し、得られたジヒドロキシ化合物を、ジブチルスズオキシドとブロモメチルナフタレンの作用下で４位でＮａｐ基で選択的に保護することにより化合物５を取得し、３－Ｎａｐ化合物５のヒドロキシルをベンジルで保護して化合物６を生成した。最後に、化合物６のＮａｐ基をＤＤＱで除去して３－ＯＨ化合物７を得た。
具体的な試験操作とステップ：
化合物５：アリル－２－デオキシ－２－アジド－Ｌ－フコシド４（５００ｍｇ、２．２ｍｍоｌ）を無水トルエン（２２ｍｌ）に溶解し、次にジブチルスズオキシド（８１４ｍｇ、３．３ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を１１０℃に加熱し、１時間撹拌した後、反応液を４０℃に冷却し、ブロモメチルナフタレン（８１４ｍｇ、３．３ｍｍｏｌ）および臭化テトラブチルアンモニウム（１．０５ｍｇ、３．３ｍｍｏｌ）を加えて反応を２０時間継続した。反応が完了した後、酢酸エチル（３０ｍｌ）を加えて希釈し、飽和食塩水で洗浄した。有機相を分離し、濃縮後、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、５：１）で精製して化合物５（５２７ｍｇ、１．７ｍｍоｌ、７９％）を得た。[α]D 20= 34.0°( c = 1.00, CHCl3); 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d ) δ 7.85 (dt, J = 10.5, 7.7 Hz, 4H, Ar-H), 7.59 - 7.45 (m, 3H, Ar-H), 5.94 (ddt, J = 16.8, 10.9, 5.6 Hz, 1H, Ally-H), 5.33 (dd, J = 17.2, 1.7 Hz, 1H, Ally-CH2a), 5.21 (dd, J = 10.5, 1.5 Hz, 1H, Ally-CH2b), 4.88 (s, 2H, 2Nap-H), 4.12 (dd, J = 12.9, 6.2 Hz, 1H, Ally-H), 4.23 (d, J = 8.1 Hz, 1H, 1-H), 4.12 (dd, J= 12.9, 6.2 Hz, 1H, Ally-OCH2b), 3.74 (d, J = 3.3 Hz, 1H, 4-H), 3.66 (dd, J= 10.0, 8.0 Hz, 1H, 2-H), 3.47 (q, J = 6.5 Hz, 1H, 5-H), 3.35 (dd, J = 10.0, 3.3 Hz, 1H, 3-H), 2.32 (s, 1H, 4-OH), 1.34 (d, J = 6.4 Hz, 6-CH3). 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 134.65, 133.65, 133.20, 128.55, 127.93, 127.77, 126.98, 126.33, 126.22, 125.75, 117.61, 100.75, 79.41, 77.33, 77.22, 77.01, 76.70, 72.19, 70.19, 69.97, 68.34, 62.57, 16.33. HRMS(ESI)m/z calcd for C20H23N3O4Na[M+Na]+ 391.1581, found 391.1564。
化合物６：化合物５（５２７ｍｇ、１．７ｍｍоｌ）を無水ＤＭＦ（１７ｍｌ）に溶解し、０℃に冷却し、３０分間氷浴した。ＮａＨ（１４０ｍｇ、３．４ｍｍоｌ）を反応フラスコに加え、０℃で３０分間撹拌し続け、臭化ベンジル（０．５ｍｌ、３．４ｍｍоｌ）を加えた。反応液を室温に戻し、３時間撹拌を続け、反応原料がすべて消失した後、ＤＣＭ（２０ｍｌ）を加えて希釈し、氷水で反応をクエンチした。飽和ＮａＨＣＯ３で３回洗浄し、有機相を合わせ、濃縮後、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、２５：１）で精製し、化合物６（５３１ｍｇ、１．２ｍｍоｌ、６８％）を得た。[α]D 20 = 50.3°( c = 1.00, CHCl3)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.90 - 7.77 (m, 4H, Ar-H), 7.57 - 7.45 (m, 3H, Ar-H), 7.38 - 7.21 (m, 6H, Ar-H), 5.94 (dddd, J = 16.9, 10.8, 6.1, 5.0 Hz, 1H, Ally-H), 5.32 (dt, J= 17.2, 1.7 Hz, 1H, Ally-H), 5.19 (dq, J= 10.5, 1.5 Hz, 1H, Ally-H), 4.97 (d, J= 11.7 Hz, 1H, PhCH), 4.87 (s, 2H, 2Nap-H) 4.71 (d, J = 11.7 Hz, 1H, PhCH-H), 4.39 (ddt, J = 12.9, 5.0, 1.6 Hz, 1H, Ally-H), 4.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H, 1-H), 4.10 (ddt, J = 12.9, 6.1, 1.4 Hz, 1H, Ally-H), 3.87 (dd, J = 10.4, 8.0 Hz, 1H, 2-H ), 3.55 (d, J = 2.8 Hz, 1H, 4-H), 3.42 - 3.38 (m, 1H, 5-H ), 3.36 (dd, J = 10.4, 2.8 Hz, 1H, 3-H), 1.20 (d, J = 6.4 Hz, 3H, 6-CH3)
13C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 138.38 , 135.34 , 133.93 , 133.38 , 133.23 , 128.55 , 128.48 , 128.36 , 128.07 , 127.89 , 127.83 , 126.79 , 126.38 , 126.21 , 125.90 , 117.58 , 101.11 , 81.07(C-1) , 75.17 , 74.85 , 72.87 , 70.74 , 70.07 , 63.31 , 17.02 . HRMS(ESI)m/z calcd for C27H29N3O4Na[M+Na]+ 482.2050, found 482.2041。
化合物７：化合物６（５３１ｍｇ、１．１６ｍｍоｌ）をジクロロメタン（５０ｍｌ）と水（５ｍｌ）の混合溶媒に溶解し、反応液を０℃に冷却し、ＤＤＱ（５４０ｍｇ、２．３２ｍｍоｌ）を加えた。反応液を室温で２時間撹拌し、すべての原料が完全に反応したことをＴＬＣでモニタリングした後、反応液を１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３で洗浄し、有機相を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させて濃縮し、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、３：１）で精製して化合物７（３２５ｍｇ、０．９６ｍｍоｌ、８５％）を得た。[α]D 20 = -3.6°( c = 1.00, CHCl3)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.42 - 7.28 (m, 5H, Ar-H), 5.94 (dddd, J= 16.7, 10.4, 6.1, 5.1 Hz, 1H, Ally-H), 5.33 (dq, J = 17.2, 1.6 Hz, 1H, Ally-H), 5.21 (dq, J = 10.5, 1.4 Hz, 1H, Ally-H), 4.81 (d, J = 11.6 Hz, 1H, Bn-H), 4.72 (d, J = 11.6 Hz, 1H, Bn-H), 4.41 (ddt, J = 12.9, 5.1, 1.6 Hz, 1H, Ally-H), 4.26 (d, J = 7.7 Hz, 1H, 1-H), 4.11 (ddt, J = 12.9, 6.1, 1.4 Hz, 1H, Ally-H), 3.58 - 3.49 (m, 3H, 2-H,4-H, 5-H), 3.45 (dd, J = 10.4, 3.3 Hz, 1H, 3-H), 2.14 (s, 1H, -OH), 1.31 (d, J = 6.5 Hz, 3H, 6-Me)。13C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 138.02 , 133.75 , 128.68 , 128.30 , 128.18 , 117.63 , 101.11 , 78.60 , 76.04 , 73.12 , 70.95 , 70.17 , 64.73 , 17.01 。HRMS(ESI)m/z calcd for C16H21N3O4Na[M+Na]+ 342.1424, found 342.1430。
糖ビルディングブロック７（Ｌ－フコースビルディングブロック）の合成ルート（図２参照）
図２に示されるように、アリル－２－デオキシ－２－アジド－Ｌ－フコシド４を出発原料として使用し、３位と４位のアセチルをメトキシドナトリウムを含むアルカリ性環境下で除去し、得られたジヒドロキシ化合物を、ジブチルスズオキシドとブロモメチルナフタレンの作用下で４位でＮａｐ基で選択的に保護することにより化合物５を取得し、３－Ｎａｐ化合物５のヒドロキシルをベンジルで保護して化合物６を生成した。最後に、化合物６のＮａｐ基をＤＤＱで除去して３－ＯＨ化合物７を得た。
具体的な試験操作とステップ：
化合物５：アリル－２－デオキシ－２－アジド－Ｌ－フコシド４（５００ｍｇ、２．２ｍｍоｌ）を無水トルエン（２２ｍｌ）に溶解し、次にジブチルスズオキシド（８１４ｍｇ、３．３ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を１１０℃に加熱し、１時間撹拌した後、反応液を４０℃に冷却し、ブロモメチルナフタレン（８１４ｍｇ、３．３ｍｍｏｌ）および臭化テトラブチルアンモニウム（１．０５ｍｇ、３．３ｍｍｏｌ）を加えて反応を２０時間継続した。反応が完了した後、酢酸エチル（３０ｍｌ）を加えて希釈し、飽和食塩水で洗浄した。有機相を分離し、濃縮後、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、５：１）で精製して化合物５（５２７ｍｇ、１．７ｍｍоｌ、７９％）を得た。[α]D 20= 34.0°( c = 1.00, CHCl3); 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d ) δ 7.85 (dt, J = 10.5, 7.7 Hz, 4H, Ar-H), 7.59 - 7.45 (m, 3H, Ar-H), 5.94 (ddt, J = 16.8, 10.9, 5.6 Hz, 1H, Ally-H), 5.33 (dd, J = 17.2, 1.7 Hz, 1H, Ally-CH2a), 5.21 (dd, J = 10.5, 1.5 Hz, 1H, Ally-CH2b), 4.88 (s, 2H, 2Nap-H), 4.12 (dd, J = 12.9, 6.2 Hz, 1H, Ally-H), 4.23 (d, J = 8.1 Hz, 1H, 1-H), 4.12 (dd, J= 12.9, 6.2 Hz, 1H, Ally-OCH2b), 3.74 (d, J = 3.3 Hz, 1H, 4-H), 3.66 (dd, J= 10.0, 8.0 Hz, 1H, 2-H), 3.47 (q, J = 6.5 Hz, 1H, 5-H), 3.35 (dd, J = 10.0, 3.3 Hz, 1H, 3-H), 2.32 (s, 1H, 4-OH), 1.34 (d, J = 6.4 Hz, 6-CH3). 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 134.65, 133.65, 133.20, 128.55, 127.93, 127.77, 126.98, 126.33, 126.22, 125.75, 117.61, 100.75, 79.41, 77.33, 77.22, 77.01, 76.70, 72.19, 70.19, 69.97, 68.34, 62.57, 16.33. HRMS(ESI)m/z calcd for C20H23N3O4Na[M+Na]+ 391.1581, found 391.1564。
化合物６：化合物５（５２７ｍｇ、１．７ｍｍоｌ）を無水ＤＭＦ（１７ｍｌ）に溶解し、０℃に冷却し、３０分間氷浴した。ＮａＨ（１４０ｍｇ、３．４ｍｍоｌ）を反応フラスコに加え、０℃で３０分間撹拌し続け、臭化ベンジル（０．５ｍｌ、３．４ｍｍоｌ）を加えた。反応液を室温に戻し、３時間撹拌を続け、反応原料がすべて消失した後、ＤＣＭ（２０ｍｌ）を加えて希釈し、氷水で反応をクエンチした。飽和ＮａＨＣＯ３で３回洗浄し、有機相を合わせ、濃縮後、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、２５：１）で精製し、化合物６（５３１ｍｇ、１．２ｍｍоｌ、６８％）を得た。[α]D 20 = 50.3°( c = 1.00, CHCl3)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.90 - 7.77 (m, 4H, Ar-H), 7.57 - 7.45 (m, 3H, Ar-H), 7.38 - 7.21 (m, 6H, Ar-H), 5.94 (dddd, J = 16.9, 10.8, 6.1, 5.0 Hz, 1H, Ally-H), 5.32 (dt, J= 17.2, 1.7 Hz, 1H, Ally-H), 5.19 (dq, J= 10.5, 1.5 Hz, 1H, Ally-H), 4.97 (d, J= 11.7 Hz, 1H, PhCH), 4.87 (s, 2H, 2Nap-H) 4.71 (d, J = 11.7 Hz, 1H, PhCH-H), 4.39 (ddt, J = 12.9, 5.0, 1.6 Hz, 1H, Ally-H), 4.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H, 1-H), 4.10 (ddt, J = 12.9, 6.1, 1.4 Hz, 1H, Ally-H), 3.87 (dd, J = 10.4, 8.0 Hz, 1H, 2-H ), 3.55 (d, J = 2.8 Hz, 1H, 4-H), 3.42 - 3.38 (m, 1H, 5-H ), 3.36 (dd, J = 10.4, 2.8 Hz, 1H, 3-H), 1.20 (d, J = 6.4 Hz, 3H, 6-CH3)
13C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 138.38 , 135.34 , 133.93 , 133.38 , 133.23 , 128.55 , 128.48 , 128.36 , 128.07 , 127.89 , 127.83 , 126.79 , 126.38 , 126.21 , 125.90 , 117.58 , 101.11 , 81.07(C-1) , 75.17 , 74.85 , 72.87 , 70.74 , 70.07 , 63.31 , 17.02 . HRMS(ESI)m/z calcd for C27H29N3O4Na[M+Na]+ 482.2050, found 482.2041。
化合物７：化合物６（５３１ｍｇ、１．１６ｍｍоｌ）をジクロロメタン（５０ｍｌ）と水（５ｍｌ）の混合溶媒に溶解し、反応液を０℃に冷却し、ＤＤＱ（５４０ｍｇ、２．３２ｍｍоｌ）を加えた。反応液を室温で２時間撹拌し、すべての原料が完全に反応したことをＴＬＣでモニタリングした後、反応液を１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３で洗浄し、有機相を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させて濃縮し、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、３：１）で精製して化合物７（３２５ｍｇ、０．９６ｍｍоｌ、８５％）を得た。[α]D 20 = -3.6°( c = 1.00, CHCl3)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.42 - 7.28 (m, 5H, Ar-H), 5.94 (dddd, J= 16.7, 10.4, 6.1, 5.1 Hz, 1H, Ally-H), 5.33 (dq, J = 17.2, 1.6 Hz, 1H, Ally-H), 5.21 (dq, J = 10.5, 1.4 Hz, 1H, Ally-H), 4.81 (d, J = 11.6 Hz, 1H, Bn-H), 4.72 (d, J = 11.6 Hz, 1H, Bn-H), 4.41 (ddt, J = 12.9, 5.1, 1.6 Hz, 1H, Ally-H), 4.26 (d, J = 7.7 Hz, 1H, 1-H), 4.11 (ddt, J = 12.9, 6.1, 1.4 Hz, 1H, Ally-H), 3.58 - 3.49 (m, 3H, 2-H,4-H, 5-H), 3.45 (dd, J = 10.4, 3.3 Hz, 1H, 3-H), 2.14 (s, 1H, -OH), 1.31 (d, J = 6.5 Hz, 3H, 6-Me)。13C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 138.02 , 133.75 , 128.68 , 128.30 , 128.18 , 117.63 , 101.11 , 78.60 , 76.04 , 73.12 , 70.95 , 70.17 , 64.73 , 17.01 。HRMS(ESI)m/z calcd for C16H21N3O4Na[M+Na]+ 342.1424, found 342.1430。
実施例３
糖ビルディングブロック１７の合成ルート（図３参照）
図３に示されるように、３，４，６－トリ－Ｏ－アセチル－マンノセン８を出発原料として、ヨードベンゼンジアセテート（ＰｈＩ（ＯＡｃ）２）、アジドトリメチルシラン（ＴＭＳ－Ｎ３）、およびジフェニルジセレニド（Ｐｈ２Ｓｅ２）と付加反応して、１－セレノフェニル－２－アジド化合物９を取得した。化合物９の３つのアセチルをメタノールとメトキシドナトリウムで除去し、６位のヒドロキシルを４－トルエンスルホニルクロリド（ＴｓＣｌ）で選択的に保護し化合物１０を得た。次に、６－Ｔｓグルコース１０のＴｓ基をヨウ化ナトリウムによってヨウ素化し、そして６位をシアノ水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＣＮＢＨ３）でメチルに還元してＤ－フコース化合物１１を得た。Ｄ－フコース化合物の３位をｐ－メトキシベンジルクロリド（ＰＭＢＣＩ）とジブチルスズオキシド（Ｂｕ２ＳｎＯ）で選択的に保護して化合物１２を得てから、４位のヒドロキシルをベンジルで保護して化合物１３を得た。化合物１３の４位ＮａｐをＤＤＱで除去し、アセチルで保護して化合物１４を得た。化合物１４の１位のセレノフェニルを臭化テトラブチルアンモニウム（ＮＢＳ）によって加水分解し、そして１－ＯＨフコースをＣｌ３ＣＮとＤＢＵによってグリコシルトリクロロアセトイミデートドナー１５にした。次に、化合物１５を、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリルの促進下で３炭素連結アームと反応させて、結合アームが組み立てられたフコース化合物１６を得た。最後に、化合物１６のアセチルをメタノールおよびナトリウムメトキシドのアルカリ性環境で除去して、糖ビルディングブロック１７を得た。
具体的な試験操作とステップ：
化合物９：ガラクタール化合物８（２．０ｇ、７．３５ｍｍоｌ）を無水ジクロロメタン（３５ｍｌ）に溶解し、次に－３０℃に冷却した。アルゴンガスの保護下で、ヨードベンゼンジアセテート（２．４ｇ、７．３５ｍｍоｌ）とアジドトリメチルシラン（１．８ｍｌ、１４．７ｍｍоｌ）を加え、－３０℃で０．５時間撹拌し続け、その後ゆっくりと室温に戻し、３時間撹拌を続けた後、原料が完全に反応したことをＴＬＣでモニタリングした。反応液を飽和ＮａＨＣＯ３（２０ｍｌ）で３回洗浄し、有機相を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させてろ過し、濾液をスピン乾燥した後、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、６：１）で精製して化合物９（２．４ｇ、５．１５ｍｍоｌ、７０％）を得た。[α]D 20= 931.7°( c = 1.00, CHCl3)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.78 - 7.11 (m, 5H, Ar-H), 6.01 (d, J = 5.4 Hz, 1H, H-1), 5.47 (dd, J = 3.4, 1.4 Hz, 1H, 4-H), 5.12 (dd, J = 10.9, 3.3 Hz, 1H, 3-H), 4.67 (ddd, J = 7.1, 5.8, 1.3 Hz, 1H, 5-H), 4.26 (dd, J = 10.9, 5.4 Hz, 1H, 2-H), 4.08 (dd, J = 11.5, 5.9 Hz, 1H, 6a-H), 4.02 (dd, J = 11.4, 7.1 Hz, 1H, 6b-H), 2.15 (s, 3H, COCH3), 2.07 (s, 3H, COCH3), 1.98 (s, 3H, COCH3).13C NMR (101 MHz, Chloroform-d): δ 169.93 , 137.08 , 135.12 , 129.91 , 129.19 , 128.56 , 128.23 , 128.04 , 127.97 , 84.44 , 77.22 , 75.34 , 73.68 , 73.44 , 70.09 , 67.05 , 58.99 , 21.67 , 20.83。HRMS(ESI)m/z calcd for C18H21N3NaO7Se[M+Na]+494.0442。
化合物１０：化合物９（０．５ｇ、１．１ｍｍоｌ）をメタノール（２．２ｍｌ）に溶解し、ナトリウムメトキシド（２９ｍｇ、０．５ｍｍоｌ）を加えた。反応液を室温で２時間撹拌し、ＴＬＣ検出により、原料が完全に反応したことが示された。反応液を水素型Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲ１２０樹脂で約７に中和した。樹脂をろ過し、溶剤をスピン乾燥した。
前のステップの粗生成物を無水ピリジン（８ｍｌ）に溶解し、アルゴンガスの保護下でＴｓＣｌ（２５３ｍｇ、１．３ｍｍоｌ）を加えた。反応液を室温で１２時間撹拌し、原料の完全な反応をＴＬＣにより検出した。反応液をＤＣＭで希釈し、１Ｍ塩酸で洗浄した後、飽和重炭酸ナトリウムで抽出した。有機相を合わせ、無水ナトリウムで乾燥して濃縮した後、シリカゲルカラム（ジクロロメタン／メタノール、２００：１）で精製して化合物１０（３８４ｍｇ、０７７ｍｍоｌ、７０％）を得た。[α]D 20 = 133.6°( c = 1.00, CHCl3)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.72 (d, J = 8.3 Hz, 2H, Ar-H), 7.58 (dt, J = 6.7, 1.6 Hz, 2H, Ar-H), 7.36 - 7.23 (m, 6H, Ar-H), 5.86 (d, J = 5.3 Hz, 1H, H-1), 4.57 - 4.50 (m, 1H, 5-H), 4.29 (dd, J= 10.6, 6.0 Hz, 1H, 6a ), 4.10 - 3.93 (m, 3H, H-2, H-4, 6b-H), 3.78 (ddd, J = 9.8, 6.0, 3.3 Hz, 1H, H-3), 2.68 (dd, J = 6.5, 4.8 Hz, 2H, 3-OH, 4-OH), 2.44 (s, 3H, PhCH3)。13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 145.20, 135.04, 132.36, 132.11, 132.01, 129.94, 129.24, 128.78, 128.66, 128.24, 128.00, 127.67, 84.62, 77.34, 77.22, 77.02, 76.70, 70.62, 69.97, 67.87, 67.55, 61.57, 21.68。HRMS(ESI)m/z calcd for C19H21N3NaO5SSe[M+Na]+506.0265。
化合物１１：アルゴンガスの保護下で、化合物１０（３８０ｍｇ、０．７６ｍｍоｌ）を２－ブタノン（９．６ｍｌ）に溶解し、ヨウ化ナトリウム（５６８ｍｇ、３．８ｍｍоｌ）を加えた。反応液を８０℃で１２時間撹拌し、原料が完全に反応したことをＴＬＣで検出した。反応液を室温に戻し、酢酸エチル（１０ｍｌ）を加えて希釈し、１０％チオ硫酸ナトリウムで２回洗浄し、水で２回洗浄し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮後、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、４：１）で精製して新しい化合物（２５９ｍｇ、０．５７ｍｍоｌ、７５％）を得た。[α]D 20 = 317.6°( c = 1.00, CHCl3)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.61 - 7.43 (m, 4H, Ar-H), 7.39 - 7.12 (m, 6H, Ar-H), 5.96 (d, J = 5.3 Hz, 1H, 1-H), 4.44 - 4.33 (m, 1H, 5-H), 4.22 (d, J = 3.7 Hz, 1H, 4-H), 4.09 (dd, J = 10.2, 5.3 Hz, 1H, 2-H), 3.79 (ddd, J = 9.9, 6.1, 3.3 Hz, 1H, 3-H), 3.17 (dd, J= 12.7, 8.2 Hz, 1H, 6-Ha), 3.06 (dd, J = 12.7, 6.0 Hz, 1H, 6-Hb), 2.75 (d, J = 6.2 Hz, 1H, 3-OH), 2.45 (d, J = 3.9 Hz, 1H, 4-OH)。13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 134.58, 132.92, 132.87, 132.81, 129.49, 129.32, 129.28, 129.18, 128.19, 127.97, 127.46, 85.04, 84.62, 77.36, 77.25, 77.04, 76.73, 72.32, 71.32, 68.93, 61.71, 26.94。HRMS(ESI)m/z calcd for C12H14IN3NaO3Se [M+Na]+ 477.9143。
アルゴンガスの保護下で、新しい化合物をＤＭＦ（２ｍｌ）に溶解し、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（４８ｍｇ、０．７５ｍｍоｌ）を加えた。反応液を９５℃で１２時間撹拌し、原料が完全に反応したことをＴＬＣで検出した。反応液を室温に戻し、反応液を水と酢酸エチルで洗浄し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮後、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、２：１）で精製して化合物１１（３５ｍｇ、０．１ｍｍоｌ、７０％）を得た。[α]D 20 =259.4°( c = 1.00, CHCl3)。1HNMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.73 - 7.45 (m, 2H, Ar-H), 7.40 - 6.93 (m, 3H, Ar-H), 5.92 (d, J = 5.3 Hz, 1H, H-1), 4.39 (dt, J = 7.4, 6.0 Hz, 1H, 5-H), 4.05 (dd, J = 10.0, 5.3 Hz, 1H, 2-H), 3.91 - 3.74 (m, 2H, H-3. 4-H), 2.60 (d, J = 6.3 Hz, 1H, 3-OH), 2.26 (d, J = 4.0 Hz, 1H, 4-OH), 1.27 (d, J = 6.6 Hz, 3H, 6-CH3). 13C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 134.48 , 129.15 , 127.90 , 85.00 , 77.22 , 71.46 , 71.29 , 68.69 , 61.88 , 15.98。HRMS(ESI)m/z calcd for C12H15N3NaO3Se [M+Na]+346.0230, found 346.0226。
化合物１２：化合物１１（３．０ｇ、９．１ｍｍоｌ）を無水トルエン（５４ｍｌ）に溶解し、アルゴンガスの保護下で、Ｂｕ２ＳｎＯ（３．５ｇ、１３．７ｍｍоｌ）を加えた。反応液を１１８℃に加熱し、撹拌しながら１．５時間還流した。そして、反応液を６０℃に冷却し、ＰＭＢＣｌ（１．９ｍｌ、１３．７ｍｍоｌ）とＴＢＡＩ（５．１ｇ、１３．７ｍｍоｌ）を加え、２時間撹拌し続けた。反応液を室温に冷却して、酢酸エチル（８０ｍｌ）を加えて希釈し、水（１００ｍｌ）で２回洗浄し、有機相を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濾液を濃縮した後、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、６：１）で精製して化合物１２（２．７ｇ、６ｍｍоｌ、６６％）を得た。[α]D 20= 137.9°( c = 1.00, CHCl3)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.26 (s, 11H,Ar-H), 5.88 (d, J = 5.4 Hz, 1H,H-1), 4.70 (d, J = 11.0 Hz, 1H, Bn-H),4.63 (d, J = 11.0 Hz, 1H, Bn-H), 4.36 - 4.24 (m, 1H, 5-H), 4.15 (dd, J = 10.2, 5.3Hz, 1H, 2-H), 3.86 (dt, J = 3.2, 1.5 Hz, 1H, 4-H), 3.82 (s, 3H, Me-H), 3.69 (dd, J = 10.2, 3.2 Hz, 1H, 3-H), 2.35 (t, J = 1.6 Hz, 1H, 4-OH), 1.26 (d, J = 6.6 Hz, 3H, 6-Me). 13C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 159.74 , 134.40 , 129.75 , 129.10 , 129.08 , 127.75 , 114.14 , 85.28 , 78.85 , 71.84 , 68.61 , 68.55 , 60.18 , 55.31 , 16.05 。HRMS(ESI)m/z calcd for C20H23N3O4SeNa[M+Na]+472.0751, found 472.0725。
化合物１３：化合物１２（２．２ｇ、４．９ｍｍоｌ）をＤＭＦ（３０ｍｌ）に溶解し、０℃で３０分間撹拌し、水素化ナトリウム（３９６ｍｇ、９．８ｍｍоｌ）をアルゴンガスの保護下でゆっくりと加えた。氷浴中で３０分間撹拌を続け、臭化ベンジル（１．２ｍｌ、９．８ｍｍоｌ）を反応液に滴加した。２時間撹拌して反応させ、すべての原料が完全に反応したことをＴＬＣで検出した後、氷水を加えることによって反応をクエンチし、反応液をＤＣＭで希釈し、抽出後に無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮液をシリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、３０：１）で精製して化合物１３（１．９ｇ、３．６ｍｍоｌ、７４％）を得た。[α]D 20 = 71.5°( c = 1.00, CHCl3)。1HNMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.57 - 7.55 (m , 2H, Ar-H), 7.36 - 7.25 (m , 10H, Ar-H), 6.94 - 6.91 (m , 2H, Ar-H), 5.92 (d, J = 5.3 Hz, 1H, H-1), 4.94 (d, J = 11.4 Hz, 1H , PhCH), 4.77 - 4.66 (m, 2H, PhCH2), 4.60 (d, J = 11.5 Hz, 1H, PhCH ), 4.33 (dd, J = 10.2, 5.3 Hz, 1H, H-2), 4.21 (q, J = 6.5 Hz, 1H, H-5), 3.83 (s, 3H, OCH3), 3.71 (dd, J = 10.3, 2.7 Hz, 1H, H-3), 3.68 (dd, J = 2.8, 1.1 Hz, 1H, H-4), 1.12 (d, J = 6.4 Hz, 3H, 6-CH3)。13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 159.63, 138.33, 134.48, 129.72, 129.16, 128.90, 128.44, 128.32, 127.90, 127.77, 114.14, 85.79, 80.47, 77.16, 76.01, 75.13, 72.40, 69.56, 61.03, 55.46, 16.69。HRMS(ESI)m/z calcd for C27H29N3NaO4Se [M+Na]+562.1221, found 562.1209。
化合物１４：化合物１３（９００ｍｇ、１．６７ｍｍоｌ）をＤＣＭ（８４ｍｌ）に溶解し、２，３－ジクロロ－５,６－ジシアノ－１,４－ベンゾキノン（５６４ｍｇ、２．５ｍｍоｌ）および水（４．２ｍｌ）をアルゴンガスの保護下で加えた。室温で７時間撹拌して反応させ、完全に反応したことをＴＬＣで検出した。ＤＣＭ（５０ｍｌ）を加えて希釈し、反応液を１０％チオ硫酸ナトリウム（１００ｍｌ）で２回洗浄した。有機相を分離し、無水硫酸ナトリウムで濃縮した後、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、１０：１）で精製して新しい生成物（５７３ｍｇ、１．４ｍｍоｌ、８２％）を得た。新しい生成物を乾燥したピリジン（３．２ｍｌ）に溶解し、０℃に冷却し、３０分間後に無水酢酸（０．５ｍｌ、５．１２ｍｍоｌ）をゆっくりと加え、反応液を室温に戻して５時間撹拌し続け、原料が完全に反応したことをＴＬＣで検出した。反応液を１Ｍ塩酸で洗浄した後、飽和重炭酸ナトリウムと飽和食塩水で抽出した。有機相を分離して濃縮した後、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、２０：１）で精製して化合物１４（５９８ｍｇ、１．３ｍｍоｌ、ｑｕａｎｔ）を得た。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.68 - 7.21 (m, 9H, Ar - H), 5.91 (d, J = 5.3 Hz, 1H,H-1), 5.46 (dd, J = 3.3, 1.2 Hz, 1H, H-4), 4.75 (d, J = 10.7 Hz, 1H,PhCH2), 4.53 (d, J = 10.7 Hz, 1H, PhCH), 4.48 - 4.37 (m, 1H, H-5), 4.12 (dd, J = 10.3, 5.4 Hz, 1H, H-2), 3.78 (dd, J = 10.4, 3.3 Hz, 1H, H-3), 2.15 (s, 3H,COCH3), 1.12 (d, J = 6.5 Hz, 3H,6-CH3)。13C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 170.52 , 136.90 , 134.53 , 129.12 , 128.50 , 128.34 , 128.07 , 127.88 , 85.08 , 71.68 , 68.89 , 67.77 , 60.36 , 20.76 , 16.07 。HRMS(ESI)m/z calcd for C21H23N3NaO4Se [M+Na]+ 484.0751, found 484.0749。
化合物１５：化合物１４（５８０ｍｇ／１．３ｍｍоｌ）をテトラヒドロフラン（６ｍｌ）と水（６ｍｌ）の混合溶液に溶解し、０℃に冷却した。臭化テトラブチルアンモニウム（３ｍｍоｌ）を加え、反応液を室温に戻し、５時間撹拌を続け、原料が完全に反応したことをＴＬＣで検出した。反応液を１０％チオ硫酸ナトリウムで洗浄し、ＤＣＭと水で抽出し、有機相を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して濃縮した後、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、４：１）で精製して新しい化合物（４１７ｍｇ、１．３ｍｍоｌ、ｑｕａｎｔ）を得た。[α]D 20 = 54.9°( c = 1.00, CHCl3)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.43 - 7.30 (m, 8H, Ar-H), 5.47 (dd, J = 3.3, 1.3 Hz, 1H, 1a-H), 5.34 (dd, J = 3.4, 1.1 Hz, 0.8H, 4b-H), 5.32 (d, J = 3.6 Hz, 1H, 4a-H), 4.77 (d, J = 10.8 Hz, 1H, PhCH), 4.75 (d, J = 11.1 Hz, 0.8H, PhCH), 4.54 (d, J = 7.9 Hz, 1H, 1b-H), 4.53 (d, J = 10.8 Hz, 1H, PhCH), 4.53 (d, J = 11.1 Hz, 0.8H, PhCH), 4.32 (qd, J = 6.6, 1.3 Hz, 1H, 5-H ), 4.03 (dd, J = 10.5, 3.2 Hz, 1H, 2a-H), 3.74 (dd, J = 10.5, 3.5 Hz, 1H, 3a-H), 3.69 (td, J = 6.4, 1.1 Hz, 0.8H, 5b-H), 3.58 (dd, J = 10.2, 7.9 Hz, 0.8H, 2b-H), 3.45 (dd, J = 10.3, 3.4 Hz, 0.8H, 3b-H), 2.19 (s, 2.4H, COCH3), 2.18 (s, 3H, COCH3), 1.25 (d, J = 6.5 Hz, 2.4H, 6b-CH3), 1.19 (d, J = 6.5 Hz, 3H, 6a-CH3).。13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 170.90, 170.88, 137.15, 137.04, 128.63, 128.52, 128.40, 128.22, 128.17, 96.20, 92.46, 77.91, 77.48, 77.36, 77.16, 77.16, 76.84, 74.36, 71.91, 71.67, 69.69, 69.46, 68.39, 65.21, 64.03, 59.82, 20.95, 20.93, 16.55, 16.42。HRMS(ESI)m/z calcd for C15H19N3O5Na[M+Na]+344.1217, found 344.1208。
新しい化合物（４１７ｍｍоｌ、１．３ｍｍоｌ）を無水ジクロロメタン（１４ｍｌ）に溶解し、０℃に冷却した。トリクロロアセトニトリル（０．４ｍｌ、３．７８ｍｍоｌ）およびＤＢＵ（２３μＬ、０．１３ｍｍоｌ）を順次に加え、反応液を５時間撹拌し続け、原料が完全に反応したことをＴＬＣで検出した。反応液を室温で直接濃縮し、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、１０：１）で精製して化合物１５（５１８ｍｇ、１．１ｍｍоｌ、８８％）を得た。
化合物１６：グリコシルトリクロロアセトイミデート１５（５１８ｍｇ、１．１ｍｍоｌ）および窒素－ベンジル－窒素－ベンジルホルメート－プロパノール（５００ｍｇ、１．７ｍｍоｌ）を無水ＤＣＭに溶解し、４Åモレキュラーシーブを加え、室温で３０分間撹拌した。そして、反応液を－４０℃に冷却し、アルゴンガスの保護下で、ＴＭＳＯＴｆ（０．３ｍｌ、１．３ｍｍоｌ）をゆっくりと加えた。反応液を－４０℃で４時間撹拌し続け、原料が完全に反応したことをＴＬＣで検出し、トリエチルアミン（１ｍｌ）で反応をクエンチした。反応液を飽和ＮａＨＣＯ３で抽出し、有機相を分離し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した後、シリカゲルカラムで精製して化合物１６（３９６ｍｇ、０．４４ｍｍоｌ、６０％）を得た。[α]D 20 = -10.8°( c = 1.00, CHCl3)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.45 - 7.16 (m, 15H, Ar-H), 5.23 - 5.12 (m, 2H, PhCH), 4.74 - 4.59 (m, 3H, 3-H, 2PhCH), 4.61 - 4.38 (m, 2H, 2NPhCH), 4.21 (dd, J = 33.3, 8.0 Hz, 1H, 1-H), 4.02 - 3.87 (m, 1H, linker-OCH), 3.79 (t, J = 9.5 Hz, 1H 2-H), 3.67 (d, J = 3.0 Hz, 1H, 4-H), 3.63 - 3.27 (m, 4H, 5-H linker-OCH, linker-NCH2), 2.07 (s,3H, COCH3), 2.01 - 1.76 (m, 2H, linker-CH2), 1.24 (d, J = 6.4 Hz, 3H, 6-CH3).13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 170.38, 137.95, 137.70, 128.52, 128.46, 128.40, 128.32, 127.97, 127.92, 127.87, 127.27, 101.99, 77.37, 77.25, 77.05, 76.74, 76.19, 75.59, 74.23, 70.48, 67.40, 67.19, 61.11, 50.90, 44.67, 43.62, 28.48, 28.03, 20.89, 16.57. HRMS(ESI)m/z calcd for C33H38N4O7Na[M+Na]+625.2633, found 625.2650。
化合物１７：化合物１６（２６２ｍｇ、０．４２ｍｍоｌ）をメタノール（４ｍｌ）に溶解し、ナトリウムメトキシド（４０ｍｇ）を加えた。反応液を室温で２時間撹拌し、すべての原料が完全に反応した後、反応液をメタノールで希釈し、水素型Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲ１２０樹脂で反応液を約ｐＨ７に中和した。樹脂をろ過し、濾液を濃縮した後、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、３：１）で精製して化合物１７（２４４ｍｇ、０．４２ｍｍоｌ、ｑｕａｎｔ）を得た。[α]D 20 = -24.1°( c = 1.00, CHCl3)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.76 - 6.87 (m, 15H, Ar-H), 5.22 (d, J= 9.4 Hz, 2H, PhCH), 4.83 (d, J = 11.6 Hz, 1H, PhCH), 4.78 (d, J = 11.6 Hz, 1H, PhCH), 4.58 (d, J = 14.0 Hz, 2H, PhCH), 4.25 - 4.08 (m, 1H, 1-H), 4.05 - 3.86 (m, 1H, linker-OCH), 3.62 - 3.34 (m, 7H, 2-H, 3-H, 4-H, 5-H, linker-OCH, linker-NCH2), 2.46 (s, 1H, -OH), 2.02 - 1.80 (m, 2H, linker-CH2), 1.31 (d, J = 6.4 Hz, 3H, 6-CH3).13C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 138.00 , 128.58 , 128.56 , 128.50 , 128.26 , 128.08 , 127.95 , 127.89 , 102.12 (1-C) , 78.48 , 77.36 , 75.94 , 72.96 , 70.84 , 67.24 , 64.70 , 50.94 , 43.74 , 28.58 , 16.91。HRMS(ESI)m/z calcd for C31H36N4NaO6[M+Na]+ 583.2527, found 583.2531。
糖ビルディングブロック１７の合成ルート（図３参照）
図３に示されるように、３，４，６－トリ－Ｏ－アセチル－マンノセン８を出発原料として、ヨードベンゼンジアセテート（ＰｈＩ（ＯＡｃ）２）、アジドトリメチルシラン（ＴＭＳ－Ｎ３）、およびジフェニルジセレニド（Ｐｈ２Ｓｅ２）と付加反応して、１－セレノフェニル－２－アジド化合物９を取得した。化合物９の３つのアセチルをメタノールとメトキシドナトリウムで除去し、６位のヒドロキシルを４－トルエンスルホニルクロリド（ＴｓＣｌ）で選択的に保護し化合物１０を得た。次に、６－Ｔｓグルコース１０のＴｓ基をヨウ化ナトリウムによってヨウ素化し、そして６位をシアノ水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＣＮＢＨ３）でメチルに還元してＤ－フコース化合物１１を得た。Ｄ－フコース化合物の３位をｐ－メトキシベンジルクロリド（ＰＭＢＣＩ）とジブチルスズオキシド（Ｂｕ２ＳｎＯ）で選択的に保護して化合物１２を得てから、４位のヒドロキシルをベンジルで保護して化合物１３を得た。化合物１３の４位ＮａｐをＤＤＱで除去し、アセチルで保護して化合物１４を得た。化合物１４の１位のセレノフェニルを臭化テトラブチルアンモニウム（ＮＢＳ）によって加水分解し、そして１－ＯＨフコースをＣｌ３ＣＮとＤＢＵによってグリコシルトリクロロアセトイミデートドナー１５にした。次に、化合物１５を、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリルの促進下で３炭素連結アームと反応させて、結合アームが組み立てられたフコース化合物１６を得た。最後に、化合物１６のアセチルをメタノールおよびナトリウムメトキシドのアルカリ性環境で除去して、糖ビルディングブロック１７を得た。
具体的な試験操作とステップ：
化合物９：ガラクタール化合物８（２．０ｇ、７．３５ｍｍоｌ）を無水ジクロロメタン（３５ｍｌ）に溶解し、次に－３０℃に冷却した。アルゴンガスの保護下で、ヨードベンゼンジアセテート（２．４ｇ、７．３５ｍｍоｌ）とアジドトリメチルシラン（１．８ｍｌ、１４．７ｍｍоｌ）を加え、－３０℃で０．５時間撹拌し続け、その後ゆっくりと室温に戻し、３時間撹拌を続けた後、原料が完全に反応したことをＴＬＣでモニタリングした。反応液を飽和ＮａＨＣＯ３（２０ｍｌ）で３回洗浄し、有機相を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させてろ過し、濾液をスピン乾燥した後、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、６：１）で精製して化合物９（２．４ｇ、５．１５ｍｍоｌ、７０％）を得た。[α]D 20= 931.7°( c = 1.00, CHCl3)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.78 - 7.11 (m, 5H, Ar-H), 6.01 (d, J = 5.4 Hz, 1H, H-1), 5.47 (dd, J = 3.4, 1.4 Hz, 1H, 4-H), 5.12 (dd, J = 10.9, 3.3 Hz, 1H, 3-H), 4.67 (ddd, J = 7.1, 5.8, 1.3 Hz, 1H, 5-H), 4.26 (dd, J = 10.9, 5.4 Hz, 1H, 2-H), 4.08 (dd, J = 11.5, 5.9 Hz, 1H, 6a-H), 4.02 (dd, J = 11.4, 7.1 Hz, 1H, 6b-H), 2.15 (s, 3H, COCH3), 2.07 (s, 3H, COCH3), 1.98 (s, 3H, COCH3).13C NMR (101 MHz, Chloroform-d): δ 169.93 , 137.08 , 135.12 , 129.91 , 129.19 , 128.56 , 128.23 , 128.04 , 127.97 , 84.44 , 77.22 , 75.34 , 73.68 , 73.44 , 70.09 , 67.05 , 58.99 , 21.67 , 20.83。HRMS(ESI)m/z calcd for C18H21N3NaO7Se[M+Na]+494.0442。
化合物１０：化合物９（０．５ｇ、１．１ｍｍоｌ）をメタノール（２．２ｍｌ）に溶解し、ナトリウムメトキシド（２９ｍｇ、０．５ｍｍоｌ）を加えた。反応液を室温で２時間撹拌し、ＴＬＣ検出により、原料が完全に反応したことが示された。反応液を水素型Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲ１２０樹脂で約７に中和した。樹脂をろ過し、溶剤をスピン乾燥した。
前のステップの粗生成物を無水ピリジン（８ｍｌ）に溶解し、アルゴンガスの保護下でＴｓＣｌ（２５３ｍｇ、１．３ｍｍоｌ）を加えた。反応液を室温で１２時間撹拌し、原料の完全な反応をＴＬＣにより検出した。反応液をＤＣＭで希釈し、１Ｍ塩酸で洗浄した後、飽和重炭酸ナトリウムで抽出した。有機相を合わせ、無水ナトリウムで乾燥して濃縮した後、シリカゲルカラム（ジクロロメタン／メタノール、２００：１）で精製して化合物１０（３８４ｍｇ、０７７ｍｍоｌ、７０％）を得た。[α]D 20 = 133.6°( c = 1.00, CHCl3)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.72 (d, J = 8.3 Hz, 2H, Ar-H), 7.58 (dt, J = 6.7, 1.6 Hz, 2H, Ar-H), 7.36 - 7.23 (m, 6H, Ar-H), 5.86 (d, J = 5.3 Hz, 1H, H-1), 4.57 - 4.50 (m, 1H, 5-H), 4.29 (dd, J= 10.6, 6.0 Hz, 1H, 6a ), 4.10 - 3.93 (m, 3H, H-2, H-4, 6b-H), 3.78 (ddd, J = 9.8, 6.0, 3.3 Hz, 1H, H-3), 2.68 (dd, J = 6.5, 4.8 Hz, 2H, 3-OH, 4-OH), 2.44 (s, 3H, PhCH3)。13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 145.20, 135.04, 132.36, 132.11, 132.01, 129.94, 129.24, 128.78, 128.66, 128.24, 128.00, 127.67, 84.62, 77.34, 77.22, 77.02, 76.70, 70.62, 69.97, 67.87, 67.55, 61.57, 21.68。HRMS(ESI)m/z calcd for C19H21N3NaO5SSe[M+Na]+506.0265。
化合物１１：アルゴンガスの保護下で、化合物１０（３８０ｍｇ、０．７６ｍｍоｌ）を２－ブタノン（９．６ｍｌ）に溶解し、ヨウ化ナトリウム（５６８ｍｇ、３．８ｍｍоｌ）を加えた。反応液を８０℃で１２時間撹拌し、原料が完全に反応したことをＴＬＣで検出した。反応液を室温に戻し、酢酸エチル（１０ｍｌ）を加えて希釈し、１０％チオ硫酸ナトリウムで２回洗浄し、水で２回洗浄し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮後、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、４：１）で精製して新しい化合物（２５９ｍｇ、０．５７ｍｍоｌ、７５％）を得た。[α]D 20 = 317.6°( c = 1.00, CHCl3)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.61 - 7.43 (m, 4H, Ar-H), 7.39 - 7.12 (m, 6H, Ar-H), 5.96 (d, J = 5.3 Hz, 1H, 1-H), 4.44 - 4.33 (m, 1H, 5-H), 4.22 (d, J = 3.7 Hz, 1H, 4-H), 4.09 (dd, J = 10.2, 5.3 Hz, 1H, 2-H), 3.79 (ddd, J = 9.9, 6.1, 3.3 Hz, 1H, 3-H), 3.17 (dd, J= 12.7, 8.2 Hz, 1H, 6-Ha), 3.06 (dd, J = 12.7, 6.0 Hz, 1H, 6-Hb), 2.75 (d, J = 6.2 Hz, 1H, 3-OH), 2.45 (d, J = 3.9 Hz, 1H, 4-OH)。13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 134.58, 132.92, 132.87, 132.81, 129.49, 129.32, 129.28, 129.18, 128.19, 127.97, 127.46, 85.04, 84.62, 77.36, 77.25, 77.04, 76.73, 72.32, 71.32, 68.93, 61.71, 26.94。HRMS(ESI)m/z calcd for C12H14IN3NaO3Se [M+Na]+ 477.9143。
アルゴンガスの保護下で、新しい化合物をＤＭＦ（２ｍｌ）に溶解し、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（４８ｍｇ、０．７５ｍｍоｌ）を加えた。反応液を９５℃で１２時間撹拌し、原料が完全に反応したことをＴＬＣで検出した。反応液を室温に戻し、反応液を水と酢酸エチルで洗浄し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮後、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、２：１）で精製して化合物１１（３５ｍｇ、０．１ｍｍоｌ、７０％）を得た。[α]D 20 =259.4°( c = 1.00, CHCl3)。1HNMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.73 - 7.45 (m, 2H, Ar-H), 7.40 - 6.93 (m, 3H, Ar-H), 5.92 (d, J = 5.3 Hz, 1H, H-1), 4.39 (dt, J = 7.4, 6.0 Hz, 1H, 5-H), 4.05 (dd, J = 10.0, 5.3 Hz, 1H, 2-H), 3.91 - 3.74 (m, 2H, H-3. 4-H), 2.60 (d, J = 6.3 Hz, 1H, 3-OH), 2.26 (d, J = 4.0 Hz, 1H, 4-OH), 1.27 (d, J = 6.6 Hz, 3H, 6-CH3). 13C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 134.48 , 129.15 , 127.90 , 85.00 , 77.22 , 71.46 , 71.29 , 68.69 , 61.88 , 15.98。HRMS(ESI)m/z calcd for C12H15N3NaO3Se [M+Na]+346.0230, found 346.0226。
化合物１２：化合物１１（３．０ｇ、９．１ｍｍоｌ）を無水トルエン（５４ｍｌ）に溶解し、アルゴンガスの保護下で、Ｂｕ２ＳｎＯ（３．５ｇ、１３．７ｍｍоｌ）を加えた。反応液を１１８℃に加熱し、撹拌しながら１．５時間還流した。そして、反応液を６０℃に冷却し、ＰＭＢＣｌ（１．９ｍｌ、１３．７ｍｍоｌ）とＴＢＡＩ（５．１ｇ、１３．７ｍｍоｌ）を加え、２時間撹拌し続けた。反応液を室温に冷却して、酢酸エチル（８０ｍｌ）を加えて希釈し、水（１００ｍｌ）で２回洗浄し、有機相を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濾液を濃縮した後、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、６：１）で精製して化合物１２（２．７ｇ、６ｍｍоｌ、６６％）を得た。[α]D 20= 137.9°( c = 1.00, CHCl3)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.26 (s, 11H,Ar-H), 5.88 (d, J = 5.4 Hz, 1H,H-1), 4.70 (d, J = 11.0 Hz, 1H, Bn-H),4.63 (d, J = 11.0 Hz, 1H, Bn-H), 4.36 - 4.24 (m, 1H, 5-H), 4.15 (dd, J = 10.2, 5.3Hz, 1H, 2-H), 3.86 (dt, J = 3.2, 1.5 Hz, 1H, 4-H), 3.82 (s, 3H, Me-H), 3.69 (dd, J = 10.2, 3.2 Hz, 1H, 3-H), 2.35 (t, J = 1.6 Hz, 1H, 4-OH), 1.26 (d, J = 6.6 Hz, 3H, 6-Me). 13C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 159.74 , 134.40 , 129.75 , 129.10 , 129.08 , 127.75 , 114.14 , 85.28 , 78.85 , 71.84 , 68.61 , 68.55 , 60.18 , 55.31 , 16.05 。HRMS(ESI)m/z calcd for C20H23N3O4SeNa[M+Na]+472.0751, found 472.0725。
化合物１３：化合物１２（２．２ｇ、４．９ｍｍоｌ）をＤＭＦ（３０ｍｌ）に溶解し、０℃で３０分間撹拌し、水素化ナトリウム（３９６ｍｇ、９．８ｍｍоｌ）をアルゴンガスの保護下でゆっくりと加えた。氷浴中で３０分間撹拌を続け、臭化ベンジル（１．２ｍｌ、９．８ｍｍоｌ）を反応液に滴加した。２時間撹拌して反応させ、すべての原料が完全に反応したことをＴＬＣで検出した後、氷水を加えることによって反応をクエンチし、反応液をＤＣＭで希釈し、抽出後に無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濃縮液をシリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、３０：１）で精製して化合物１３（１．９ｇ、３．６ｍｍоｌ、７４％）を得た。[α]D 20 = 71.5°( c = 1.00, CHCl3)。1HNMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.57 - 7.55 (m , 2H, Ar-H), 7.36 - 7.25 (m , 10H, Ar-H), 6.94 - 6.91 (m , 2H, Ar-H), 5.92 (d, J = 5.3 Hz, 1H, H-1), 4.94 (d, J = 11.4 Hz, 1H , PhCH), 4.77 - 4.66 (m, 2H, PhCH2), 4.60 (d, J = 11.5 Hz, 1H, PhCH ), 4.33 (dd, J = 10.2, 5.3 Hz, 1H, H-2), 4.21 (q, J = 6.5 Hz, 1H, H-5), 3.83 (s, 3H, OCH3), 3.71 (dd, J = 10.3, 2.7 Hz, 1H, H-3), 3.68 (dd, J = 2.8, 1.1 Hz, 1H, H-4), 1.12 (d, J = 6.4 Hz, 3H, 6-CH3)。13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 159.63, 138.33, 134.48, 129.72, 129.16, 128.90, 128.44, 128.32, 127.90, 127.77, 114.14, 85.79, 80.47, 77.16, 76.01, 75.13, 72.40, 69.56, 61.03, 55.46, 16.69。HRMS(ESI)m/z calcd for C27H29N3NaO4Se [M+Na]+562.1221, found 562.1209。
化合物１４：化合物１３（９００ｍｇ、１．６７ｍｍоｌ）をＤＣＭ（８４ｍｌ）に溶解し、２，３－ジクロロ－５,６－ジシアノ－１,４－ベンゾキノン（５６４ｍｇ、２．５ｍｍоｌ）および水（４．２ｍｌ）をアルゴンガスの保護下で加えた。室温で７時間撹拌して反応させ、完全に反応したことをＴＬＣで検出した。ＤＣＭ（５０ｍｌ）を加えて希釈し、反応液を１０％チオ硫酸ナトリウム（１００ｍｌ）で２回洗浄した。有機相を分離し、無水硫酸ナトリウムで濃縮した後、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、１０：１）で精製して新しい生成物（５７３ｍｇ、１．４ｍｍоｌ、８２％）を得た。新しい生成物を乾燥したピリジン（３．２ｍｌ）に溶解し、０℃に冷却し、３０分間後に無水酢酸（０．５ｍｌ、５．１２ｍｍоｌ）をゆっくりと加え、反応液を室温に戻して５時間撹拌し続け、原料が完全に反応したことをＴＬＣで検出した。反応液を１Ｍ塩酸で洗浄した後、飽和重炭酸ナトリウムと飽和食塩水で抽出した。有機相を分離して濃縮した後、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、２０：１）で精製して化合物１４（５９８ｍｇ、１．３ｍｍоｌ、ｑｕａｎｔ）を得た。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.68 - 7.21 (m, 9H, Ar - H), 5.91 (d, J = 5.3 Hz, 1H,H-1), 5.46 (dd, J = 3.3, 1.2 Hz, 1H, H-4), 4.75 (d, J = 10.7 Hz, 1H,PhCH2), 4.53 (d, J = 10.7 Hz, 1H, PhCH), 4.48 - 4.37 (m, 1H, H-5), 4.12 (dd, J = 10.3, 5.4 Hz, 1H, H-2), 3.78 (dd, J = 10.4, 3.3 Hz, 1H, H-3), 2.15 (s, 3H,COCH3), 1.12 (d, J = 6.5 Hz, 3H,6-CH3)。13C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 170.52 , 136.90 , 134.53 , 129.12 , 128.50 , 128.34 , 128.07 , 127.88 , 85.08 , 71.68 , 68.89 , 67.77 , 60.36 , 20.76 , 16.07 。HRMS(ESI)m/z calcd for C21H23N3NaO4Se [M+Na]+ 484.0751, found 484.0749。
化合物１５：化合物１４（５８０ｍｇ／１．３ｍｍоｌ）をテトラヒドロフラン（６ｍｌ）と水（６ｍｌ）の混合溶液に溶解し、０℃に冷却した。臭化テトラブチルアンモニウム（３ｍｍоｌ）を加え、反応液を室温に戻し、５時間撹拌を続け、原料が完全に反応したことをＴＬＣで検出した。反応液を１０％チオ硫酸ナトリウムで洗浄し、ＤＣＭと水で抽出し、有機相を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して濃縮した後、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、４：１）で精製して新しい化合物（４１７ｍｇ、１．３ｍｍоｌ、ｑｕａｎｔ）を得た。[α]D 20 = 54.9°( c = 1.00, CHCl3)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.43 - 7.30 (m, 8H, Ar-H), 5.47 (dd, J = 3.3, 1.3 Hz, 1H, 1a-H), 5.34 (dd, J = 3.4, 1.1 Hz, 0.8H, 4b-H), 5.32 (d, J = 3.6 Hz, 1H, 4a-H), 4.77 (d, J = 10.8 Hz, 1H, PhCH), 4.75 (d, J = 11.1 Hz, 0.8H, PhCH), 4.54 (d, J = 7.9 Hz, 1H, 1b-H), 4.53 (d, J = 10.8 Hz, 1H, PhCH), 4.53 (d, J = 11.1 Hz, 0.8H, PhCH), 4.32 (qd, J = 6.6, 1.3 Hz, 1H, 5-H ), 4.03 (dd, J = 10.5, 3.2 Hz, 1H, 2a-H), 3.74 (dd, J = 10.5, 3.5 Hz, 1H, 3a-H), 3.69 (td, J = 6.4, 1.1 Hz, 0.8H, 5b-H), 3.58 (dd, J = 10.2, 7.9 Hz, 0.8H, 2b-H), 3.45 (dd, J = 10.3, 3.4 Hz, 0.8H, 3b-H), 2.19 (s, 2.4H, COCH3), 2.18 (s, 3H, COCH3), 1.25 (d, J = 6.5 Hz, 2.4H, 6b-CH3), 1.19 (d, J = 6.5 Hz, 3H, 6a-CH3).。13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 170.90, 170.88, 137.15, 137.04, 128.63, 128.52, 128.40, 128.22, 128.17, 96.20, 92.46, 77.91, 77.48, 77.36, 77.16, 77.16, 76.84, 74.36, 71.91, 71.67, 69.69, 69.46, 68.39, 65.21, 64.03, 59.82, 20.95, 20.93, 16.55, 16.42。HRMS(ESI)m/z calcd for C15H19N3O5Na[M+Na]+344.1217, found 344.1208。
新しい化合物（４１７ｍｍоｌ、１．３ｍｍоｌ）を無水ジクロロメタン（１４ｍｌ）に溶解し、０℃に冷却した。トリクロロアセトニトリル（０．４ｍｌ、３．７８ｍｍоｌ）およびＤＢＵ（２３μＬ、０．１３ｍｍоｌ）を順次に加え、反応液を５時間撹拌し続け、原料が完全に反応したことをＴＬＣで検出した。反応液を室温で直接濃縮し、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、１０：１）で精製して化合物１５（５１８ｍｇ、１．１ｍｍоｌ、８８％）を得た。
化合物１６：グリコシルトリクロロアセトイミデート１５（５１８ｍｇ、１．１ｍｍоｌ）および窒素－ベンジル－窒素－ベンジルホルメート－プロパノール（５００ｍｇ、１．７ｍｍоｌ）を無水ＤＣＭに溶解し、４Åモレキュラーシーブを加え、室温で３０分間撹拌した。そして、反応液を－４０℃に冷却し、アルゴンガスの保護下で、ＴＭＳＯＴｆ（０．３ｍｌ、１．３ｍｍоｌ）をゆっくりと加えた。反応液を－４０℃で４時間撹拌し続け、原料が完全に反応したことをＴＬＣで検出し、トリエチルアミン（１ｍｌ）で反応をクエンチした。反応液を飽和ＮａＨＣＯ３で抽出し、有機相を分離し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した後、シリカゲルカラムで精製して化合物１６（３９６ｍｇ、０．４４ｍｍоｌ、６０％）を得た。[α]D 20 = -10.8°( c = 1.00, CHCl3)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.45 - 7.16 (m, 15H, Ar-H), 5.23 - 5.12 (m, 2H, PhCH), 4.74 - 4.59 (m, 3H, 3-H, 2PhCH), 4.61 - 4.38 (m, 2H, 2NPhCH), 4.21 (dd, J = 33.3, 8.0 Hz, 1H, 1-H), 4.02 - 3.87 (m, 1H, linker-OCH), 3.79 (t, J = 9.5 Hz, 1H 2-H), 3.67 (d, J = 3.0 Hz, 1H, 4-H), 3.63 - 3.27 (m, 4H, 5-H linker-OCH, linker-NCH2), 2.07 (s,3H, COCH3), 2.01 - 1.76 (m, 2H, linker-CH2), 1.24 (d, J = 6.4 Hz, 3H, 6-CH3).13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 170.38, 137.95, 137.70, 128.52, 128.46, 128.40, 128.32, 127.97, 127.92, 127.87, 127.27, 101.99, 77.37, 77.25, 77.05, 76.74, 76.19, 75.59, 74.23, 70.48, 67.40, 67.19, 61.11, 50.90, 44.67, 43.62, 28.48, 28.03, 20.89, 16.57. HRMS(ESI)m/z calcd for C33H38N4O7Na[M+Na]+625.2633, found 625.2650。
化合物１７：化合物１６（２６２ｍｇ、０．４２ｍｍоｌ）をメタノール（４ｍｌ）に溶解し、ナトリウムメトキシド（４０ｍｇ）を加えた。反応液を室温で２時間撹拌し、すべての原料が完全に反応した後、反応液をメタノールで希釈し、水素型Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲ１２０樹脂で反応液を約ｐＨ７に中和した。樹脂をろ過し、濾液を濃縮した後、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、３：１）で精製して化合物１７（２４４ｍｇ、０．４２ｍｍоｌ、ｑｕａｎｔ）を得た。[α]D 20 = -24.1°( c = 1.00, CHCl3)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.76 - 6.87 (m, 15H, Ar-H), 5.22 (d, J= 9.4 Hz, 2H, PhCH), 4.83 (d, J = 11.6 Hz, 1H, PhCH), 4.78 (d, J = 11.6 Hz, 1H, PhCH), 4.58 (d, J = 14.0 Hz, 2H, PhCH), 4.25 - 4.08 (m, 1H, 1-H), 4.05 - 3.86 (m, 1H, linker-OCH), 3.62 - 3.34 (m, 7H, 2-H, 3-H, 4-H, 5-H, linker-OCH, linker-NCH2), 2.46 (s, 1H, -OH), 2.02 - 1.80 (m, 2H, linker-CH2), 1.31 (d, J = 6.4 Hz, 3H, 6-CH3).13C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 138.00 , 128.58 , 128.56 , 128.50 , 128.26 , 128.08 , 127.95 , 127.89 , 102.12 (1-C) , 78.48 , 77.36 , 75.94 , 72.96 , 70.84 , 67.24 , 64.70 , 50.94 , 43.74 , 28.58 , 16.91。HRMS(ESI)m/z calcd for C31H36N4NaO6[M+Na]+ 583.2527, found 583.2531。
実施例４：Ｄ－フコースビルディングブロックの合成方法についての考察
方法一：
従来の文献に報告されている類似した化合物の合成方法から、Ｄ－フコースビルディングブロックを合成する方法１をまとめたものを、図４に示す。ガラクタールＳ１を出発原料として使用し、ジフェニルジセレニド、トリメチルシリルアジドおよびジアセチルヨードベンゼンの共同作用下で、セレノフェニルおよびアジドをそれぞれ１位および２位に導入し、重要な中間体Ｓ２を得た。メタノール、ナトリウムメトキシドの作用下で、３、４、６位のアセチルを除去して化合物Ｓ３を得、次にベンジリデン基を４位と６位に導入して化合物Ｓ４を得、そして３位をアセチルで一時的に保護して化合物Ｓ５を得、トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホン酸とボランの共同作用下で、ベンジリデン基を選択的に開き、ベンジルを４位に導入して化合物Ｓ６を得た。次に、ｐ－トルエンスルホニルクロリドとピリジンの作用下でｐ－トルエンスルホニルを、露出した６位に導入して化合物Ｓ７を得たが、６位のｐ－トルエンスルホニルをヨウ素原子で置換すると、反応がスムーズに進まなかった。
発明者は、アセトニトリルおよびＴＢＡＩをそれぞれ１００℃および８０℃で反応し、及び、ブタノンおよびヨウ化ナトリウムを８０℃で反応することを含む、異なる条件を試したが、対応する生成物Ｓ８を得るために６位にヨウ素を導入することができなかったため、さらに目標のＤ－フコースビルディングブロックをルートに沿って合成することができなかった。
方法二：
方法一を改善し、改善した合成ルートを図５に示す。ペルアセチルグルカールＳ９を出発原料とし、フリーラジカル付加反応を用い、セレノフェニルとアジドをそれぞれ１位と２位に導入して化合物Ｓ１０を得てから、アセチルを除去して化合物Ｓ１１を得、次に４、６位をベンジリデン基で同時に保護して化合物Ｓ１２を得、そして３位をアセチルで一時的に保護して化合物Ｓ１３を得、ベンジリデン基を８０％酢酸溶液で開いて化合物Ｓ１４を得、ｐ－トルエンスルホン酸とピリジンの条件下でｐ－トルエンスルホニルを６位に導入して化合物Ｓ１５を得た。そして、２－ブタノンの還流溶液中で、ヨウ化ナトリウムと反応し、ヨウ素を６位に導入して化合物Ｓ１６を得た。化合物Ｓ１６の６位のヒドロキシルをシアノボロヒドリドナトリウムによる還元法によりメチルに還元して化合物Ｓ１７を得、次にトリフルオロメチルスルホニルをまず４位に導入して化合物Ｓ１８を得、次に亜硝酸カリウムによって還元して４位に垂直なヒドロキシルを有する化合物Ｓ１９を得、すなわち、４位に水平なヒドロキシルを垂直に結合したヒドロキシルに首尾よく変換し、これによって、Ｄ－フコース構造に変換し、そして酸化銀の中性条件下で、ベンジルを４位のヒドロキシルに導入して化合物Ｓ２０を得た。
この方法では、必要な化合物Ｓ２０を得ることができるが、実用性は高くない。これは主にルートステップが長すぎて、合計１１の反応モジュールがあり、特に４－ＯＨ転位、およびＡｇ２Ｏを使用してＯＢｎ基を作る最後のステップの二つのステップの反応収率の両方とも５０％未満であるため、このルートの合計収率は２％未満である。
方法一：
従来の文献に報告されている類似した化合物の合成方法から、Ｄ－フコースビルディングブロックを合成する方法１をまとめたものを、図４に示す。ガラクタールＳ１を出発原料として使用し、ジフェニルジセレニド、トリメチルシリルアジドおよびジアセチルヨードベンゼンの共同作用下で、セレノフェニルおよびアジドをそれぞれ１位および２位に導入し、重要な中間体Ｓ２を得た。メタノール、ナトリウムメトキシドの作用下で、３、４、６位のアセチルを除去して化合物Ｓ３を得、次にベンジリデン基を４位と６位に導入して化合物Ｓ４を得、そして３位をアセチルで一時的に保護して化合物Ｓ５を得、トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホン酸とボランの共同作用下で、ベンジリデン基を選択的に開き、ベンジルを４位に導入して化合物Ｓ６を得た。次に、ｐ－トルエンスルホニルクロリドとピリジンの作用下でｐ－トルエンスルホニルを、露出した６位に導入して化合物Ｓ７を得たが、６位のｐ－トルエンスルホニルをヨウ素原子で置換すると、反応がスムーズに進まなかった。
発明者は、アセトニトリルおよびＴＢＡＩをそれぞれ１００℃および８０℃で反応し、及び、ブタノンおよびヨウ化ナトリウムを８０℃で反応することを含む、異なる条件を試したが、対応する生成物Ｓ８を得るために６位にヨウ素を導入することができなかったため、さらに目標のＤ－フコースビルディングブロックをルートに沿って合成することができなかった。
方法二：
方法一を改善し、改善した合成ルートを図５に示す。ペルアセチルグルカールＳ９を出発原料とし、フリーラジカル付加反応を用い、セレノフェニルとアジドをそれぞれ１位と２位に導入して化合物Ｓ１０を得てから、アセチルを除去して化合物Ｓ１１を得、次に４、６位をベンジリデン基で同時に保護して化合物Ｓ１２を得、そして３位をアセチルで一時的に保護して化合物Ｓ１３を得、ベンジリデン基を８０％酢酸溶液で開いて化合物Ｓ１４を得、ｐ－トルエンスルホン酸とピリジンの条件下でｐ－トルエンスルホニルを６位に導入して化合物Ｓ１５を得た。そして、２－ブタノンの還流溶液中で、ヨウ化ナトリウムと反応し、ヨウ素を６位に導入して化合物Ｓ１６を得た。化合物Ｓ１６の６位のヒドロキシルをシアノボロヒドリドナトリウムによる還元法によりメチルに還元して化合物Ｓ１７を得、次にトリフルオロメチルスルホニルをまず４位に導入して化合物Ｓ１８を得、次に亜硝酸カリウムによって還元して４位に垂直なヒドロキシルを有する化合物Ｓ１９を得、すなわち、４位に水平なヒドロキシルを垂直に結合したヒドロキシルに首尾よく変換し、これによって、Ｄ－フコース構造に変換し、そして酸化銀の中性条件下で、ベンジルを４位のヒドロキシルに導入して化合物Ｓ２０を得た。
この方法では、必要な化合物Ｓ２０を得ることができるが、実用性は高くない。これは主にルートステップが長すぎて、合計１１の反応モジュールがあり、特に４－ＯＨ転位、およびＡｇ２Ｏを使用してＯＢｎ基を作る最後のステップの二つのステップの反応収率の両方とも５０％未満であるため、このルートの合計収率は２％未満である。
実施例５
二糖２０の合成ルート（図６参照） 図６に示されるように、二糖１８の合成は、図１に示されるルートによって前に合成されたグルコース化合物３および図２に示されるルートによって合成されたＬ－フコース化合物７を使用してルイス酸ＴＭＳＯＴｆの触媒作用下で完成された。次に、二糖１８還元末端のアリルをメタノール溶液中で塩化パラジウムによって加水分解して除去したことにより１－ＯＨ二糖化合物１９を得た。最後に、化合物１９を、２，２，２－トリフルオロ－Ｎ－フェニルアセトイミドイルクロリドを使用してＮ－フェニル－トリフルオロアセトイミデートを含む二糖供与体２０にした。
具体的な試験操作とステップ：
化合物１８：単糖供与体３（５００ｍｇ、１．０ｍｍоｌ）およびグリコシル受容体７（１６５ｍｇ、０．５２ｍｍоｌ）を窒素ガスの保護下で無水ＤＣＭ（１０ｍｌ）に溶解し、４Åモレキュラーシーブを加えた。反応液を室温で３０分間撹拌した後、０℃に冷却し、ＴＭＳＯＴｆ（３６μＬ、０．２ｍｍоｌ）を加えた。反応液をゆっくりと室温に戻し、５時間撹拌を続け、原料が完全に反応したことをＴＬＣで検出した。反応液をトリエチルアミンでクエンチし、飽和重炭酸ナトリウムで抽出し、濃縮液をシリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、２：１）で精製して化合物１８（３００ｍｇ、０．４６ｍｍоｌ、８８％）を得た。[α]D 20= 2.3°( c = 1.00, CHCl3)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.52 - 6.73 (m, 6H，Ar-H), 5.84 (ddt, J = 16.4, 10.8, 5.6 Hz, 1H，Ally-H), 5.23 (d, J = 17.3 Hz, 1H, Ally-H), 5.17 - 5.05 (m, 3H, Ally-H, 3’-H, 4’-H), 5.03 (t, J = 8.2 Hz, 1H, 2’-H), 4.80 (d, J = 11.3 Hz, 1H, Bn-H), 4.77 (d, J = 7.7 Hz, 1H, 1’-H), 4.46 (d, J = 11.4 Hz, 1H, Bn-H), 4.29 (dd, J = 13.0, 5.0 Hz, 1H, Ally-H), 4.20 (dd, J = 12.3, 4.4 Hz, 1H, 6’-Ha), 4.17 - 4.08 (m, 2H, 6’-Hb, 1-H), 4.00 (dd, J = 13.0, 6.2 Hz, 1H, Ally-H), 3.66 (qd, J = 10.3, 4.9 Hz, 3H, 5’-H, 2-H, 3-H), 3.43 (d, J = 2.5 Hz, 1H, 4-H), 3.35 (d, J = 6.4 Hz, 1H, 5-H), 1.99 (s, 3H, CH3CO), 1.95 (s, 3H, CH3CO), 1.92 (s, 3H, CH3CO), 1.79 (s, 3H, CH3CO), 1.10 (d, J = 6.3 Hz, 3H, 6-CH3)。13C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 170.38 , 170.08 , 169.04 , 168.88 , 137.76 , 133.47 , 128.04 , 127.91 , 127.52 , 117.24 , 100.54 , 98.46 , 79.37 , 77.03 , 75.44 , 74.68 , 72.99 , 71.87 , 71.34 , 70.06 , 69.76 , 68.00 , 61.87 , 61.62 , 20.46 , 20.32 , 16.50。HRMS(ESI)m/z calcd for C30H39N3NaO13 [M+Na]+672.2375, found 672.2377。
化合物１９：化合物１８（３００ｍｇ、０．４６ｍｍоｌ）を無水メタノール（２３ｍｌ）に溶解し、次に反応液を４０℃に加熱した。塩化パラジウム（１６ｍｇ）を加え、１時間撹拌し続け、原料が完全に反応したことをＴＬＣで検出した。反応液をＤＣＭで希釈して飽和重炭酸ナトリウムで抽出し、有機相を分離して濃縮した後、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、１：１）で精製して化合物１９（２５６ｍｇ、０．４０ｍｍоｌ、８８％）を得た。[α]D 20= -7.1°( c = 1.00, CHCl3)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d)。 -anomer δ 7.35 - 7.22 (m, 5H, Ar-H), 5.23 (d, J = 3.5 Hz, 1H, 1-H), 5.22 - 5.00 (m, 3H, 2’-H, 3’-H, 4’-H), 4.86 - 4.72 (m, 2H, 1’-H, Bn-H), 4.43 (d, J = 11.0 Hz, 1H, Bn-H), 4.38 (d, J = 7.8 Hz, 1H, 1’-H), 4.28 (dd, J = 10.6, 2.7 Hz, 1H, 3-H), 4.25 - 4.11 (m, 2H, 6’-Hab), 4.11 - 4.02 (m, 1H, 5-H), 3.75 - 3.65 (m, 2H, 2-H, 5’-H), 3.61 (d, J = 2.8 Hz, 1H, 4-H), 2.01 (s, 3H, OAc-Me), 1.97 (s, 3H, OAc-Me), 1.93 (s, 3H, OAc-Me), 1.72 (s, 3H, OAc-Me), 1.10 (d, J = 6.4 Hz, 3H, 6-Me)。 -anomer δ 7.35 - 7.22 (m, 5H, Ar-H), 5.22 - 5.00 (m, 3H, 2’-H, 3’-H, 4’-H), 4.80 ( d, J= 11.5 Hz, 1H, Bn-H), 4.47 (d, J = 11.3 Hz, 1H, Bn-H), 4.38 (d, J= 7.8 Hz, 1H, 1’-H), 4.22 - 4.03 (m, 4H, 6ab -H, 1’-H, 3-H), 3.74 - 3.58 (m, 3H, 2-H, 4-H, 5’-H), 3.51 - 3.41 (m, 1H, 5-H), 2.01 (s, 3H, OAc-Me), 1.97 ( s, 3H, OAc-Me), 1.94 (s, 3H, OAc-Me), 1.72 (s, 3H, OAc-Me), 1.10 (d, J = 6.4 Hz, 3H, 6-Me)。13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 170.79, 170.69, 170.43, 170.38, 169.33, 169.29, 169.15, 169.05, 137.87, 128.44, 128.39, 128.36, 128.32, 128.24, 128.14, 128.12, 128.00, 127.93, 102.18, 101.52, 98.74, 98.67, 98.65, 96.22, 92.72, 79.54, 79.42, 79.37, 77.37, 77.25, 77.14, 77.05, 76.87, 76.73, 76.48, 75.73, 75.52, 75.17, 75.03, 75.00, 74.96, 74.06, 73.33, 73.23, 73.20, 72.13, 72.10, 71.97, 71.82, 71.56, 70.69, 70.62, 70.40, 68.25, 68.20, 66.62, 63.71, 63.53, 62.05, 61.99, 61.78, 58.93, 43.75, 29.68, 20.71, 20.69, 20.66, 20.58, 20.56, 20.54, 16.78, 16.67, 16.61, 16.57。HRMS(ESI)m/z calcd for C27H35N3NaO13 [M+Na]+632.2062, found 632.2039。
化合物２０：化合物１９（８６ｍｇ、０．１４ｍｍоｌ）を無水ＤＣＭに溶解して０℃に冷却した。アルゴンガスの保護下で２，２，２－トリフルオロ－Ｎ－フェニルアセトイミドイルクロリド（０．１ｍｌ）およびＤＢＵ（３０μＬ）を加えた。反応液を室温に戻して２０時間撹拌し続けた。室温で濃縮した後、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、２．５：１）で精製して化合物２０（６７ｍｇ）を得た。
二糖２０の合成ルート（図６参照） 図６に示されるように、二糖１８の合成は、図１に示されるルートによって前に合成されたグルコース化合物３および図２に示されるルートによって合成されたＬ－フコース化合物７を使用してルイス酸ＴＭＳＯＴｆの触媒作用下で完成された。次に、二糖１８還元末端のアリルをメタノール溶液中で塩化パラジウムによって加水分解して除去したことにより１－ＯＨ二糖化合物１９を得た。最後に、化合物１９を、２，２，２－トリフルオロ－Ｎ－フェニルアセトイミドイルクロリドを使用してＮ－フェニル－トリフルオロアセトイミデートを含む二糖供与体２０にした。
具体的な試験操作とステップ：
化合物１８：単糖供与体３（５００ｍｇ、１．０ｍｍоｌ）およびグリコシル受容体７（１６５ｍｇ、０．５２ｍｍоｌ）を窒素ガスの保護下で無水ＤＣＭ（１０ｍｌ）に溶解し、４Åモレキュラーシーブを加えた。反応液を室温で３０分間撹拌した後、０℃に冷却し、ＴＭＳＯＴｆ（３６μＬ、０．２ｍｍоｌ）を加えた。反応液をゆっくりと室温に戻し、５時間撹拌を続け、原料が完全に反応したことをＴＬＣで検出した。反応液をトリエチルアミンでクエンチし、飽和重炭酸ナトリウムで抽出し、濃縮液をシリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、２：１）で精製して化合物１８（３００ｍｇ、０．４６ｍｍоｌ、８８％）を得た。[α]D 20= 2.3°( c = 1.00, CHCl3)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.52 - 6.73 (m, 6H，Ar-H), 5.84 (ddt, J = 16.4, 10.8, 5.6 Hz, 1H，Ally-H), 5.23 (d, J = 17.3 Hz, 1H, Ally-H), 5.17 - 5.05 (m, 3H, Ally-H, 3’-H, 4’-H), 5.03 (t, J = 8.2 Hz, 1H, 2’-H), 4.80 (d, J = 11.3 Hz, 1H, Bn-H), 4.77 (d, J = 7.7 Hz, 1H, 1’-H), 4.46 (d, J = 11.4 Hz, 1H, Bn-H), 4.29 (dd, J = 13.0, 5.0 Hz, 1H, Ally-H), 4.20 (dd, J = 12.3, 4.4 Hz, 1H, 6’-Ha), 4.17 - 4.08 (m, 2H, 6’-Hb, 1-H), 4.00 (dd, J = 13.0, 6.2 Hz, 1H, Ally-H), 3.66 (qd, J = 10.3, 4.9 Hz, 3H, 5’-H, 2-H, 3-H), 3.43 (d, J = 2.5 Hz, 1H, 4-H), 3.35 (d, J = 6.4 Hz, 1H, 5-H), 1.99 (s, 3H, CH3CO), 1.95 (s, 3H, CH3CO), 1.92 (s, 3H, CH3CO), 1.79 (s, 3H, CH3CO), 1.10 (d, J = 6.3 Hz, 3H, 6-CH3)。13C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 170.38 , 170.08 , 169.04 , 168.88 , 137.76 , 133.47 , 128.04 , 127.91 , 127.52 , 117.24 , 100.54 , 98.46 , 79.37 , 77.03 , 75.44 , 74.68 , 72.99 , 71.87 , 71.34 , 70.06 , 69.76 , 68.00 , 61.87 , 61.62 , 20.46 , 20.32 , 16.50。HRMS(ESI)m/z calcd for C30H39N3NaO13 [M+Na]+672.2375, found 672.2377。
化合物１９：化合物１８（３００ｍｇ、０．４６ｍｍоｌ）を無水メタノール（２３ｍｌ）に溶解し、次に反応液を４０℃に加熱した。塩化パラジウム（１６ｍｇ）を加え、１時間撹拌し続け、原料が完全に反応したことをＴＬＣで検出した。反応液をＤＣＭで希釈して飽和重炭酸ナトリウムで抽出し、有機相を分離して濃縮した後、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、１：１）で精製して化合物１９（２５６ｍｇ、０．４０ｍｍоｌ、８８％）を得た。[α]D 20= -7.1°( c = 1.00, CHCl3)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d)。 -anomer δ 7.35 - 7.22 (m, 5H, Ar-H), 5.23 (d, J = 3.5 Hz, 1H, 1-H), 5.22 - 5.00 (m, 3H, 2’-H, 3’-H, 4’-H), 4.86 - 4.72 (m, 2H, 1’-H, Bn-H), 4.43 (d, J = 11.0 Hz, 1H, Bn-H), 4.38 (d, J = 7.8 Hz, 1H, 1’-H), 4.28 (dd, J = 10.6, 2.7 Hz, 1H, 3-H), 4.25 - 4.11 (m, 2H, 6’-Hab), 4.11 - 4.02 (m, 1H, 5-H), 3.75 - 3.65 (m, 2H, 2-H, 5’-H), 3.61 (d, J = 2.8 Hz, 1H, 4-H), 2.01 (s, 3H, OAc-Me), 1.97 (s, 3H, OAc-Me), 1.93 (s, 3H, OAc-Me), 1.72 (s, 3H, OAc-Me), 1.10 (d, J = 6.4 Hz, 3H, 6-Me)。 -anomer δ 7.35 - 7.22 (m, 5H, Ar-H), 5.22 - 5.00 (m, 3H, 2’-H, 3’-H, 4’-H), 4.80 ( d, J= 11.5 Hz, 1H, Bn-H), 4.47 (d, J = 11.3 Hz, 1H, Bn-H), 4.38 (d, J= 7.8 Hz, 1H, 1’-H), 4.22 - 4.03 (m, 4H, 6ab -H, 1’-H, 3-H), 3.74 - 3.58 (m, 3H, 2-H, 4-H, 5’-H), 3.51 - 3.41 (m, 1H, 5-H), 2.01 (s, 3H, OAc-Me), 1.97 ( s, 3H, OAc-Me), 1.94 (s, 3H, OAc-Me), 1.72 (s, 3H, OAc-Me), 1.10 (d, J = 6.4 Hz, 3H, 6-Me)。13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 170.79, 170.69, 170.43, 170.38, 169.33, 169.29, 169.15, 169.05, 137.87, 128.44, 128.39, 128.36, 128.32, 128.24, 128.14, 128.12, 128.00, 127.93, 102.18, 101.52, 98.74, 98.67, 98.65, 96.22, 92.72, 79.54, 79.42, 79.37, 77.37, 77.25, 77.14, 77.05, 76.87, 76.73, 76.48, 75.73, 75.52, 75.17, 75.03, 75.00, 74.96, 74.06, 73.33, 73.23, 73.20, 72.13, 72.10, 71.97, 71.82, 71.56, 70.69, 70.62, 70.40, 68.25, 68.20, 66.62, 63.71, 63.53, 62.05, 61.99, 61.78, 58.93, 43.75, 29.68, 20.71, 20.69, 20.66, 20.58, 20.56, 20.54, 16.78, 16.67, 16.61, 16.57。HRMS(ESI)m/z calcd for C27H35N3NaO13 [M+Na]+632.2062, found 632.2039。
化合物２０：化合物１９（８６ｍｇ、０．１４ｍｍоｌ）を無水ＤＣＭに溶解して０℃に冷却した。アルゴンガスの保護下で２，２，２－トリフルオロ－Ｎ－フェニルアセトイミドイルクロリド（０．１ｍｌ）およびＤＢＵ（３０μＬ）を加えた。反応液を室温に戻して２０時間撹拌し続けた。室温で濃縮した後、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、２．５：１）で精製して化合物２０（６７ｍｇ）を得た。
実施例６
三糖２４の合成ルート（図７参照）
図７に示されるように、二糖供与体２０と単糖受容体１７を、ジクロロメタン、ジエチルエーテルおよびチオフェンなどの溶媒の共同作用下で、ルイス酸ＴＭＳＯＴｆによって触媒して１，２－シス結合三糖２１を得た。三糖２１のアジドを、チオ酢酸およびピリジンによって０℃でアセチルアミノ化合物２２に還元した。化合物２２のグルコース基の４つのアセチルをアルカリ性条件下で除去して化合物２３を得た。最後に、すべての芳香族基をパラジウム炭素および水素によって除去して、アミノ連結アームが組み立てられた緑膿菌Ｏ１１血清型Ｏ抗原三糖を得た。
具体的な試験操作とステップ：
化合物２１：二糖供与体２０（３５ｍｇ）および単糖受容体１７（４５ｍｇ）を、アルゴンガスの保護下で無水ＤＣＭ（０．９ｍｌ）、ジエチルエーテル（０．９ｍｌ）、及びチオフェン（０．９ｍｌ）の混合溶媒に溶解し、４Åモレキュラーシーブを加え、室温で３０分間撹拌してから０℃に冷却した。ＴＭＳＯＴｆを加えて８時間撹拌し続け、グリコシル供与体が完全に反応したことをＴＬＣで検出した。反応をトリエチルアミンでクエンチし、飽和重炭酸ナトリウムで抽出し、有機相を濃縮した後、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、３：１）およびＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０ゲルカラム（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１：１）で精製して化合物２１（３７ｍｇ）を得た。[α]D 20= -44.5°( c = 1.00, CHCl3)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.41 - 7.19 (m, 20H, Ar-H), 5.30 - 5.04 (m, 6H, 2PhCH, 1’-H, 2”-H, 3”-H, 4”-H ), 4.83 (d, J = 11.1 Hz, 1H, PhCH), 4.77- 4.75 (m, 3H, 2PhCH, 1”-H), 4.55 - 4.50 (m, 2H, NPhCH), 4.42 (d, J = 11.0 Hz, 1H, PhCH), 4.33 - 4.21 (m, 1H, 6”-H), 4.18 (d, J= 7.0 Hz, 1H, 1-H), 4.07 (m, 2H, 3’-H, 6”-H), 4.00 - 3.88 (m, 1H, linker-OCH), 3.81 (t, J = 9.0 Hz, 1H, 2-H), 3.79 - 3.67 (m, 2H, 5’-H, 5”-H), 3.62 (dd, J= 10.7, 3.7 Hz, 1H, 2’-H), 3.53 - 3.26 (m ,6H, linker-OCH, linker-NCH2, 3-H, 4H, 4’-H), 2.04 (s, 1H, COCH3), 2.00 (s, 1H, COCH3), 1.96 - 1.81 (m, 2H, linker-CH2), 1.80 (s, 1H, COCH3), 1.30 (d, J = 6.7, 3H, 6-CH3), 1.10 (d, J = 6.4 Hz, 3H, 6’-CH3)。13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 170.70, 170.41, 169.22, 168.95, 138.47, 137.94, 137.78, 128.50, 128.44, 128.38, 127.99, 127.96, 127.89, 127.86, 127.77, 127.62, 127.25, 102.44, 100.52, 99.60, 79.20, 79.11, 77.34, 77.22, 77.02, 76.70, 75.31, 75.26, 73.29, 72.29, 71.96, 70.71, 68.03, 67.50, 67.18, 63.61, 61.76, 58.26, 50.90, 49.78, 44.76, 43.68, 29.69, 28.52, 28.09, 23.42, 20.66, 20.59, 16.95, 16.54。HRMS(ESI)m/z calcd for C58H69N7NaO18[M+Na]+1174.4591, found 1174.4626。
化合物２２：化合物２１（３０ｍｇ）を乾燥ピリジン（０．５ｍｌ）およびチオ酢酸（０．５ｍｌ）に溶解し、０℃で１２時間撹拌し、原料が完全に反応したことをＴＬＣで検出した後、トルエンを使用して反応液と３回共沸し、シリカゲルカラム（ジクロロメタン／メタノール、５０：１）で精製して化合物２１（３０ｍｇ）を得た。[α]D 20= 49.5°( c = 1.00, CHCl3). 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.80 - 6.90 (m, 20H, Ar-H), 6.83 (d, J = 8.1 Hz, 1H, NHAc-H), 6.18 (d, J = 9.2 Hz, 1H, NHAc-H), 5.27 - 5.13 (m, 3H, 3’’-H, 2Cbz-H), 5.10 - 4.99 (m, 2H, 1’-H, 4’’-H ), 4.96 (t, J = 8.7 Hz, 1H, 2’’-H), 4.88 (d, J = 11.1 Hz, 1H, Bn-H), 4.84 - 4.79 (m, 1H, Bn-H), 4.74 (d, J = 15.5 Hz, 2H, Bn-H), 4.63 (d, J = 8.0 Hz, 3H, 1’’-H, 3-H, 2’-H), 4.41 (d, J = 10.9 Hz, 1H, Bn-H), 4.34 - 4.25 (m, 2H, 6’’-H, 1-H), 4.25 - 4.13 (m, 1H,2-H), 4.09 (t, J = 9.0 Hz, 1H, 6’’-H), 3.86 (dtt, J = 34.7, 10.8, 6.0 Hz, 3H, 5’-H, 4-H, 3’-H), 3.66 (dd, J = 9.7, 6.0 Hz, 1H, 5’’-H), 3.60 - 3.52 (m, 1H, 3-H), 3.44 (d, J = 7.3 Hz, 2H, 5-H, 4’-H), 3.34 - 3.08 (m, 1H, linker-OCH2-H), 2.87 (dt, J = 14.3, 5.0 Hz, 1H, linker-NH2-H), 2.14 (s, 3H, OAc-Me), 2.09 (s, 3H, NHAc-Me), 2.06 (s, 3H, OAc-Me), 2.00 (s, 3H, OAc-Me), 1.89 (s, 3H, NHAc-Me), 1.80 (s, 3H, OAc-Me), 1.68 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 1.32 (d, J = 6.3 Hz, 3H, 6’-Me), 1.17 (d, J = 6.5 Hz, 3H, 6-Me).13C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 171.62, 171.05, 170.77, 170.42, 169.28, 168.83, 156.56, 138.81, 138.17, 137.98, 137.35, 136.86, 128.66, 128.55, 128.51, 128.47, 128.36, 128.17, 128.09, 127.96, 127.91, 127.80, 127.76, 127.71, 127.65, 127.50, 127.28, 127.19, 126.35, 101.24, 100.77, 99.67, 80.00, 79.66, 78.94, 77.83, 77.23, 75.05 (d, J = 13.2 Hz), 73.18, 72.20, 72.07, 70.73, 68.21, 67.52, 67.33, 65.76, 61.95, 52.22, 49.70, 47.60, 42.47, 31.92, 29.69, 26.87, 23.33, 20.84, 20.58, 20.56, 17.24, 16.73。
化合物２３：化合物２２（２２ｍｇ）をメタノール（５ｍｌ）に溶解し、ナトリウムメトキシド（１０ｍｇ）を加えた。反応液を室温で２時間撹拌し、原料が完全に反応したことをＴＬＣで検出した後、水素型Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲ１２０樹脂で反応液を約７に中和した。樹脂をろ過し、反応液を濃縮した後、シリカゲルカラム（ジクロロメタン／メタノール、１０：１）で精製して化合物２３（１８ｍｇ）を得た。[α]D 20 = -16.3°。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.60 - 7.13 (m, 20H), 7.12 (d, J = 7.3 Hz, 1H, NHAc-H), 6.69 (d, J = 9.8 Hz, 1H, NHAc-H), 5.23 (d, J = 12.6 Hz, 1H, Cbz-H), 5.15 (d, J = 12.4 Hz, 1H, Bn-H), 5.05 (d, J = 12.3 Hz, 1H, Cbz-H), 4.96 - 4.83 (m, 2H, 1’-H, Bn-H), 4.79 (d, J = 15.7 Hz, 1H, Bn-H), 4.72 (d, J = 12.2 Hz, 1H, Bn-H), 4.66 - 4.49 (m, 2H, Bn-H, 2’-H), 4.36 (s, 1H,OH-H),4.28 (d, J = 9.5 Hz, 1H, 2A-H), 4.22 (d, J = 16.0 Hz, 1H, Bn-H), 4.03 (d, J = 7.3 Hz, 2H,1’’-H, NCH2-H), 4.00 - 3.84 (m, 4H, 3’-H, 1-H, 6’’-H, OCH2-H), 3.72 (dd, J = 12.5, 6.1 Hz, 1H, 6’’-H), 3.64 (q, J = 6.7 Hz, 1H, 5-H), 3.42 (ddd, J = 26.0, 12.9, 5.7 Hz, 4H, 5-H, 2’’-H,3’’-H,4’’-C), 3.33 (d, J = 4.6 Hz, 1H, 3-H), 3.31 - 3.19 (m, 2H, 4’-H, 5’’-C), 3.15 (td, J = 9.7, 4.0 Hz, 1H, OCH2-H), 2.88 - 2.74 (m, 2H, NH2-H), 2.09 (s, 3 H, NHAc-Me), 1.96 (s, 3H, NHAc-Me), 1.72 - 1.57 (m, 2H, linker-CH2)，1.32 (s, J = 6.4, 3H, 6-Me), 1.03 (s, J = 6.3, 3H, 6-Me)。13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 172.97, 172.65, 156.77, 138.85, 138.64, 137.11, 136.82, 128.75, 128.60, 128.38, 128.14, 128.05, 127.64, 127.50, 127.34, 127.26, 127.07, 101.41, 99.87, 82.13, 79.54, 77.36, 77.04, 76.72, 76.31, 75.31, 74.62, 74.34, 74.14, 72.82, 71.70, 70.92, 67.67, 67.56, 65.55, 62.61, 52.00, 49.50, 48.11, 42.01, 29.72, 26.65, 23.53, 17.50, 16.75。HRMS(ESI)m/z calcd for C62H77N3NaO20 [M+Na]+1038.4570, found 1038.4538。
化合物２４：化合物２３（１２ｍｇ）をメタノール（３ｍｌ）、ジクロロメタン（１ｍｌ）および水（１ｍｌ）の混合溶媒に溶解し、氷酢酸を２滴加えてから、パラジウム炭素（１０ｍｇ）を加えた。反応は、水素圧０．４ＭＰａ、反応時間１２時間で、ＢＬＴ－２０００中圧水素化装置で行われた。反応後、反応液を珪藻土でろ過し、濃縮後、ＣＨＲＯＭＡＦＩＸ Ｃ１８ ｅｃで精製して化合物２４（７ｍｇ）を得た。1H NMR (400 MHz, Deuterium Oxide) δ 5.03 (s, 1H, 1’-H), 4.51 (d, J = 7.9 Hz, 1H, 1’’-H), 4.37 (d, J = 8.4 Hz, 1H, 1-H), 4.17 (s, 1H, 2’-H), 4.07 (q, J = 6.6 Hz, 1H, 5’-H ), 4.02 (s, 1H, 3’-H), 3.99 - 3.86 (m, 4H, 2-H,4’-H, 6”-H, OCH2-H), 3.80 - 3.75 (m, 1H, 5-H), 3.67 (ddt, J = 16.6, 10.9, 6.0 Hz, 3H, 3-H, 6”-H, OCH2-H), 3.46 (m, 2H, 3”-H, 5”-H), 3.34 (t, J = 9.3 Hz, 1H, 4”-H), 3.26 (t, J = 8.6 Hz, 1H, 2”-H), 3.05 (t, J = 6.9 Hz, 2H, NCH2-H), 2.00 (s, 3H, NHAc-Me), 1.98 (s, 3H, NHAc-Me), 1.91 (t, J = 6.4 Hz, 2H, CH2-H), 1.23 (d, J =6.9 Hz, 3H, 6-Me), 1.21 (d, J =6.8 Hz, 3H, 6’-Me)。13C NMR (101 MHz, Deuterium Oxide) δ 174.35 , 101.49 , 100.22 , 98.89 , 76.54 , 76.00 , 75.46 , 74.78 , 72.81 , 71.31 , 70.63 , 70.33 , 69.63 , 69.60 , 68.39 , 67.88 , 66.88 , 60.84 , 51.31 , 47.88 , 37.60 , 26.64 , , 22.20 , 22.17 , 15.39 , 15.29 。HRMS(ESI)m/z calcd for C25H45N3NaO14[M+Na]+ 634.2794, found 634.2789。
三糖２４の合成ルート（図７参照）
図７に示されるように、二糖供与体２０と単糖受容体１７を、ジクロロメタン、ジエチルエーテルおよびチオフェンなどの溶媒の共同作用下で、ルイス酸ＴＭＳＯＴｆによって触媒して１，２－シス結合三糖２１を得た。三糖２１のアジドを、チオ酢酸およびピリジンによって０℃でアセチルアミノ化合物２２に還元した。化合物２２のグルコース基の４つのアセチルをアルカリ性条件下で除去して化合物２３を得た。最後に、すべての芳香族基をパラジウム炭素および水素によって除去して、アミノ連結アームが組み立てられた緑膿菌Ｏ１１血清型Ｏ抗原三糖を得た。
具体的な試験操作とステップ：
化合物２１：二糖供与体２０（３５ｍｇ）および単糖受容体１７（４５ｍｇ）を、アルゴンガスの保護下で無水ＤＣＭ（０．９ｍｌ）、ジエチルエーテル（０．９ｍｌ）、及びチオフェン（０．９ｍｌ）の混合溶媒に溶解し、４Åモレキュラーシーブを加え、室温で３０分間撹拌してから０℃に冷却した。ＴＭＳＯＴｆを加えて８時間撹拌し続け、グリコシル供与体が完全に反応したことをＴＬＣで検出した。反応をトリエチルアミンでクエンチし、飽和重炭酸ナトリウムで抽出し、有機相を濃縮した後、シリカゲルカラム（石油エーテル／酢酸エチル、３：１）およびＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０ゲルカラム（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１：１）で精製して化合物２１（３７ｍｇ）を得た。[α]D 20= -44.5°( c = 1.00, CHCl3)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.41 - 7.19 (m, 20H, Ar-H), 5.30 - 5.04 (m, 6H, 2PhCH, 1’-H, 2”-H, 3”-H, 4”-H ), 4.83 (d, J = 11.1 Hz, 1H, PhCH), 4.77- 4.75 (m, 3H, 2PhCH, 1”-H), 4.55 - 4.50 (m, 2H, NPhCH), 4.42 (d, J = 11.0 Hz, 1H, PhCH), 4.33 - 4.21 (m, 1H, 6”-H), 4.18 (d, J= 7.0 Hz, 1H, 1-H), 4.07 (m, 2H, 3’-H, 6”-H), 4.00 - 3.88 (m, 1H, linker-OCH), 3.81 (t, J = 9.0 Hz, 1H, 2-H), 3.79 - 3.67 (m, 2H, 5’-H, 5”-H), 3.62 (dd, J= 10.7, 3.7 Hz, 1H, 2’-H), 3.53 - 3.26 (m ,6H, linker-OCH, linker-NCH2, 3-H, 4H, 4’-H), 2.04 (s, 1H, COCH3), 2.00 (s, 1H, COCH3), 1.96 - 1.81 (m, 2H, linker-CH2), 1.80 (s, 1H, COCH3), 1.30 (d, J = 6.7, 3H, 6-CH3), 1.10 (d, J = 6.4 Hz, 3H, 6’-CH3)。13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 170.70, 170.41, 169.22, 168.95, 138.47, 137.94, 137.78, 128.50, 128.44, 128.38, 127.99, 127.96, 127.89, 127.86, 127.77, 127.62, 127.25, 102.44, 100.52, 99.60, 79.20, 79.11, 77.34, 77.22, 77.02, 76.70, 75.31, 75.26, 73.29, 72.29, 71.96, 70.71, 68.03, 67.50, 67.18, 63.61, 61.76, 58.26, 50.90, 49.78, 44.76, 43.68, 29.69, 28.52, 28.09, 23.42, 20.66, 20.59, 16.95, 16.54。HRMS(ESI)m/z calcd for C58H69N7NaO18[M+Na]+1174.4591, found 1174.4626。
化合物２２：化合物２１（３０ｍｇ）を乾燥ピリジン（０．５ｍｌ）およびチオ酢酸（０．５ｍｌ）に溶解し、０℃で１２時間撹拌し、原料が完全に反応したことをＴＬＣで検出した後、トルエンを使用して反応液と３回共沸し、シリカゲルカラム（ジクロロメタン／メタノール、５０：１）で精製して化合物２１（３０ｍｇ）を得た。[α]D 20= 49.5°( c = 1.00, CHCl3). 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.80 - 6.90 (m, 20H, Ar-H), 6.83 (d, J = 8.1 Hz, 1H, NHAc-H), 6.18 (d, J = 9.2 Hz, 1H, NHAc-H), 5.27 - 5.13 (m, 3H, 3’’-H, 2Cbz-H), 5.10 - 4.99 (m, 2H, 1’-H, 4’’-H ), 4.96 (t, J = 8.7 Hz, 1H, 2’’-H), 4.88 (d, J = 11.1 Hz, 1H, Bn-H), 4.84 - 4.79 (m, 1H, Bn-H), 4.74 (d, J = 15.5 Hz, 2H, Bn-H), 4.63 (d, J = 8.0 Hz, 3H, 1’’-H, 3-H, 2’-H), 4.41 (d, J = 10.9 Hz, 1H, Bn-H), 4.34 - 4.25 (m, 2H, 6’’-H, 1-H), 4.25 - 4.13 (m, 1H,2-H), 4.09 (t, J = 9.0 Hz, 1H, 6’’-H), 3.86 (dtt, J = 34.7, 10.8, 6.0 Hz, 3H, 5’-H, 4-H, 3’-H), 3.66 (dd, J = 9.7, 6.0 Hz, 1H, 5’’-H), 3.60 - 3.52 (m, 1H, 3-H), 3.44 (d, J = 7.3 Hz, 2H, 5-H, 4’-H), 3.34 - 3.08 (m, 1H, linker-OCH2-H), 2.87 (dt, J = 14.3, 5.0 Hz, 1H, linker-NH2-H), 2.14 (s, 3H, OAc-Me), 2.09 (s, 3H, NHAc-Me), 2.06 (s, 3H, OAc-Me), 2.00 (s, 3H, OAc-Me), 1.89 (s, 3H, NHAc-Me), 1.80 (s, 3H, OAc-Me), 1.68 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 1.32 (d, J = 6.3 Hz, 3H, 6’-Me), 1.17 (d, J = 6.5 Hz, 3H, 6-Me).13C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 171.62, 171.05, 170.77, 170.42, 169.28, 168.83, 156.56, 138.81, 138.17, 137.98, 137.35, 136.86, 128.66, 128.55, 128.51, 128.47, 128.36, 128.17, 128.09, 127.96, 127.91, 127.80, 127.76, 127.71, 127.65, 127.50, 127.28, 127.19, 126.35, 101.24, 100.77, 99.67, 80.00, 79.66, 78.94, 77.83, 77.23, 75.05 (d, J = 13.2 Hz), 73.18, 72.20, 72.07, 70.73, 68.21, 67.52, 67.33, 65.76, 61.95, 52.22, 49.70, 47.60, 42.47, 31.92, 29.69, 26.87, 23.33, 20.84, 20.58, 20.56, 17.24, 16.73。
化合物２３：化合物２２（２２ｍｇ）をメタノール（５ｍｌ）に溶解し、ナトリウムメトキシド（１０ｍｇ）を加えた。反応液を室温で２時間撹拌し、原料が完全に反応したことをＴＬＣで検出した後、水素型Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲ１２０樹脂で反応液を約７に中和した。樹脂をろ過し、反応液を濃縮した後、シリカゲルカラム（ジクロロメタン／メタノール、１０：１）で精製して化合物２３（１８ｍｇ）を得た。[α]D 20 = -16.3°。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.60 - 7.13 (m, 20H), 7.12 (d, J = 7.3 Hz, 1H, NHAc-H), 6.69 (d, J = 9.8 Hz, 1H, NHAc-H), 5.23 (d, J = 12.6 Hz, 1H, Cbz-H), 5.15 (d, J = 12.4 Hz, 1H, Bn-H), 5.05 (d, J = 12.3 Hz, 1H, Cbz-H), 4.96 - 4.83 (m, 2H, 1’-H, Bn-H), 4.79 (d, J = 15.7 Hz, 1H, Bn-H), 4.72 (d, J = 12.2 Hz, 1H, Bn-H), 4.66 - 4.49 (m, 2H, Bn-H, 2’-H), 4.36 (s, 1H,OH-H),4.28 (d, J = 9.5 Hz, 1H, 2A-H), 4.22 (d, J = 16.0 Hz, 1H, Bn-H), 4.03 (d, J = 7.3 Hz, 2H,1’’-H, NCH2-H), 4.00 - 3.84 (m, 4H, 3’-H, 1-H, 6’’-H, OCH2-H), 3.72 (dd, J = 12.5, 6.1 Hz, 1H, 6’’-H), 3.64 (q, J = 6.7 Hz, 1H, 5-H), 3.42 (ddd, J = 26.0, 12.9, 5.7 Hz, 4H, 5-H, 2’’-H,3’’-H,4’’-C), 3.33 (d, J = 4.6 Hz, 1H, 3-H), 3.31 - 3.19 (m, 2H, 4’-H, 5’’-C), 3.15 (td, J = 9.7, 4.0 Hz, 1H, OCH2-H), 2.88 - 2.74 (m, 2H, NH2-H), 2.09 (s, 3 H, NHAc-Me), 1.96 (s, 3H, NHAc-Me), 1.72 - 1.57 (m, 2H, linker-CH2)，1.32 (s, J = 6.4, 3H, 6-Me), 1.03 (s, J = 6.3, 3H, 6-Me)。13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 172.97, 172.65, 156.77, 138.85, 138.64, 137.11, 136.82, 128.75, 128.60, 128.38, 128.14, 128.05, 127.64, 127.50, 127.34, 127.26, 127.07, 101.41, 99.87, 82.13, 79.54, 77.36, 77.04, 76.72, 76.31, 75.31, 74.62, 74.34, 74.14, 72.82, 71.70, 70.92, 67.67, 67.56, 65.55, 62.61, 52.00, 49.50, 48.11, 42.01, 29.72, 26.65, 23.53, 17.50, 16.75。HRMS(ESI)m/z calcd for C62H77N3NaO20 [M+Na]+1038.4570, found 1038.4538。
化合物２４：化合物２３（１２ｍｇ）をメタノール（３ｍｌ）、ジクロロメタン（１ｍｌ）および水（１ｍｌ）の混合溶媒に溶解し、氷酢酸を２滴加えてから、パラジウム炭素（１０ｍｇ）を加えた。反応は、水素圧０．４ＭＰａ、反応時間１２時間で、ＢＬＴ－２０００中圧水素化装置で行われた。反応後、反応液を珪藻土でろ過し、濃縮後、ＣＨＲＯＭＡＦＩＸ Ｃ１８ ｅｃで精製して化合物２４（７ｍｇ）を得た。1H NMR (400 MHz, Deuterium Oxide) δ 5.03 (s, 1H, 1’-H), 4.51 (d, J = 7.9 Hz, 1H, 1’’-H), 4.37 (d, J = 8.4 Hz, 1H, 1-H), 4.17 (s, 1H, 2’-H), 4.07 (q, J = 6.6 Hz, 1H, 5’-H ), 4.02 (s, 1H, 3’-H), 3.99 - 3.86 (m, 4H, 2-H,4’-H, 6”-H, OCH2-H), 3.80 - 3.75 (m, 1H, 5-H), 3.67 (ddt, J = 16.6, 10.9, 6.0 Hz, 3H, 3-H, 6”-H, OCH2-H), 3.46 (m, 2H, 3”-H, 5”-H), 3.34 (t, J = 9.3 Hz, 1H, 4”-H), 3.26 (t, J = 8.6 Hz, 1H, 2”-H), 3.05 (t, J = 6.9 Hz, 2H, NCH2-H), 2.00 (s, 3H, NHAc-Me), 1.98 (s, 3H, NHAc-Me), 1.91 (t, J = 6.4 Hz, 2H, CH2-H), 1.23 (d, J =6.9 Hz, 3H, 6-Me), 1.21 (d, J =6.8 Hz, 3H, 6’-Me)。13C NMR (101 MHz, Deuterium Oxide) δ 174.35 , 101.49 , 100.22 , 98.89 , 76.54 , 76.00 , 75.46 , 74.78 , 72.81 , 71.31 , 70.63 , 70.33 , 69.63 , 69.60 , 68.39 , 67.88 , 66.88 , 60.84 , 51.31 , 47.88 , 37.60 , 26.64 , , 22.20 , 22.17 , 15.39 , 15.29 。HRMS(ESI)m/z calcd for C25H45N3NaO14[M+Na]+ 634.2794, found 634.2789。
実施例７：三糖２４中のシスグリコシド結合の構築に対する溶媒の影響についての考察
糖環のＣ－２位のアシルの補助下での隣接基関与効果を利用して１，２－トランスグリコシド結合を効率よく構築することは、糖化学において比較的に成熟した方法となっている。２位のアセチルは、糖化学保護戦略において最も簡単に入手でき、最も効果的な保護剤として、例えば、本特許の化合物１８の合成など、一般的に優先的に考慮される。しかしながら、１，２－シス反応については、成熟した方法はまだない。実施例６を参照すると、他の条件を変えずに溶媒成分を変え、生成物の構造の結果を表１に示す。
表１から分かるように、１，２－シスグリコシド結合の構築は溶媒の影響を大きく受け、中でも、無水ジクロロメタン／ジエチルエーテル／チオフェンの混合溶媒が最も効果的であり、均一なα型生成物を実現でき、反応の立体選択性は１００％に達することができる。
糖環のＣ－２位のアシルの補助下での隣接基関与効果を利用して１，２－トランスグリコシド結合を効率よく構築することは、糖化学において比較的に成熟した方法となっている。２位のアセチルは、糖化学保護戦略において最も簡単に入手でき、最も効果的な保護剤として、例えば、本特許の化合物１８の合成など、一般的に優先的に考慮される。しかしながら、１，２－シス反応については、成熟した方法はまだない。実施例６を参照すると、他の条件を変えずに溶媒成分を変え、生成物の構造の結果を表１に示す。
実施例８：糖鎖合成に対するアセチル基の組立のタイミングの影響
アセチルアミノを単糖段階でそれぞれ組み立て、アセチルアミノ二糖供与体Ｓ２１とアセチルアミノ受容体Ｓ２２を得た。これに基づいて、グリコシル化反応では成功しなかった目標の三糖Ｓ２３の合成を行い、その理由を分析した結果、供与体二糖の還元末端の２位のアセチルアミノが活性化されて安定なオキサゾリン環中間体を形成したため、グリコシル化反応を制限した。上記の結果は、アセチルアミノの前駆体として非関与アジドを使用すると、目標のオリゴ糖合成の反応性および立体選択性を改善するのに役立つことを示している。
アセチルアミノを単糖段階でそれぞれ組み立て、アセチルアミノ二糖供与体Ｓ２１とアセチルアミノ受容体Ｓ２２を得た。これに基づいて、グリコシル化反応では成功しなかった目標の三糖Ｓ２３の合成を行い、その理由を分析した結果、供与体二糖の還元末端の２位のアセチルアミノが活性化されて安定なオキサゾリン環中間体を形成したため、グリコシル化反応を制限した。上記の結果は、アセチルアミノの前駆体として非関与アジドを使用すると、目標のオリゴ糖合成の反応性および立体選択性を改善するのに役立つことを示している。
以上、本発明を好ましい実施形態により開示したが、これらは本発明を限定するものではなく、この技術に精通した者であれば、本発明の趣旨およびその範囲から逸脱することなく、さまざまな変更と修飾をすることが可能であるため、本発明の保護範囲は、特許請求の範囲によって画定されたものに準ずる。
Claims (10)
- Ｄ－グルコースビルディングブロック、Ｌ－フコサミンビルディングブロック、及びＤ－フコサミンビルディングブロックを使用してＯ抗原三糖を構築することを含む、緑膿菌Ｏ１１血清型Ｏ抗原三糖を合成する方法であって、Ｄ－グルコースビルディングブロックまたはＬ－フコサミンビルディングブロックは、１，２－α－シス－グリコシド結合を介してＤ－フコサミンビルディングブロックと接続し、Ｄ－グルコースビルディングブロックは、１，２－β－トランス－グリコシド結合を介してＬ－フコサミンビルディングブロックと接続し、前記１，２－α－シス－グリコシド結合の構築は、混合溶媒で行われ、前記混合溶媒は、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、及びチオフェンのうちの２つ以上を含むことを特徴とする、方法。
- Ｄ－グルコースビルディングブロックの化学構造は式ＩＩに示され、Ｌ－フコサミンビルディングブロックの化学構造は式ＩＩＩに示され、Ｄ－フコサミンビルディングブロックの化学構造は式ＩＶに示され、
式中、リンカーは、－（ＣＨ２）ｎ－Ｎ－Ｙ１Ｙ２、またはＯ－（ＣＨ２）ｎ－ＳＹ１（Ｙ２）、またはＯ－（ＣＨ２）ｎ－Ｎ３を含み、ｎ＝１～１０であり、Ｙ１は水素（Ｈ）またはベンジル（Ｂｎ）であり、Ｙ２は水素（Ｈ）またはベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）である；
Ｒ１は、水素（Ｈ）、エステル、アセチル（Ａｃ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、ピバロイル（Ｐｉｖ）、クロルアセチル（ＣｌＡｃ）、レブリニル（Ｌｅｖ）、及びアリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）を含むが、これらに限られていない；
Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、水素（Ｈ）またはエステル、エーテルであり、アセチル（Ａｃ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、ピバロイル（Ｐｉｖ）、クロルアセチル（ＣｌＡｃ）、レブリニル（Ｌｅｖ）、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）およびベンジル（Ｂｎ）、ｐ－メトキシベンジル（ｐＭＢｎ）、アリル（Ａｌｌ）、トリチル（Ｔｒ）、モノメトキシトリチル（Ｍｍｔ）、及びシリルエーテル基を含むが、これらに限られていない；
Ｒ５およびＲ６は、水素（Ｈ）、エーテル基、ベンジル（Ｂｎ）、ｐ－メトキシベンジル（ｐＭＢｎ）、アリル（Ａｌｌ）、トリチル（Ｔｒ）、モノメトキシトリチル（Ｍｍｔ）、及びシリルエーテル基を含むが、これらに限られていない；
Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、およびＲ１０は、水素（Ｈ）、窒素（Ｎ）またはアセチル（Ａｃ）を含むことを特徴とする、請求項１に記載の方法。 - Ｄ－グルコースビルディングブロックおよびＬ－フコサミンビルディングブロックを使用して、式Ｖに示される化学構造を有する二糖フラグメントを合成することを含むことを特徴とする、請求項１または２に記載の方法。
- 二糖フラグメントおよびＤ－フコサミンビルディングブロックを使用して、式Ｉに示される化学構造を有する三糖フラグメントを合成することを含むことを特徴とする、請求項３に記載の方法。
- 式ＶＩ
［式中、Ｒは－（ＣＨ２）ｎ－ＮＨ２、またはＯ－（ＣＨ２）ｎ－ＳＨであり、ｎ＝１～１０である］
に示される化学構造を有するＯ抗原三糖前駆体を予め合成し、還元によりＯ抗原三糖を得ることを含むことを特徴とする、請求項１に記載の方法。 - Ｄ－フコサミンは、グルコースを使用して合成され、前記方法は、３，４，６－トリ－Ｏ－アセチル－マンノセンを原料として、アジドおよびセレン試薬を介して１－セレノフェニル－２－アジドグルコースを取得し、アセチル基を除去し、６－Ｃをメチル化し、最後にＤ－フコサミン化合物を取得することを含むことを特徴とする、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項１に記載の方法によって調製された、アミノ連結アームが組み立てられた緑膿菌Ｏ１１血清型Ｏ抗原三糖化合物であって、前記化合物の構造は、
に示され、式中、Ｒは－（ＣＨ２）ｎ－ＮＨ２であり、ｎ＝１～１０である、化合物。
- 緑膿菌Ｏ１１血清型Ｏ抗原三糖を含む、糖－タンパク質複合体の調製方法であって、前記緑膿菌Ｏ１１血清型Ｏ抗原三糖の調製方法は、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法であることを特徴とする、糖－タンパク質複合体の調製方法。
- 緑膿菌ワクチンまたは緑膿菌感染によって引き起こされる疾患のための薬品の開発または調製における、請求項１～６のいずれか一項に記載の合成方法の使用。
- 緑膿菌ワクチンまたは緑膿菌感染によって引き起こされる疾患のための薬品の開発または調製における、請求項７に記載の化合物または請求項８に記載の糖－タンパク質複合体の調製方法の使用。
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2020
- 2020-09-11 US US17/017,896 patent/US20200405840A1/en active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019144508A1 (zh) * | 2018-01-29 | 2019-08-01 | 江南大学 | 类志贺邻单胞菌o51血清型o抗原寡糖化学合成方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| CARBOHYDR. RES., vol. 251, JPN6022022924, 1994, pages 127 - 144, ISSN: 0004948196 * |
| J. AM. CHEM. SOC., vol. 140, JPN6022022926, 2018, pages 3120 - 3127, ISSN: 0004948197 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2020125307A1 (zh) | 2020-06-25 |
| US20200405840A1 (en) | 2020-12-31 |
| CN109627270B (zh) | 2020-12-29 |
| CN109627270A (zh) | 2019-04-16 |
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