JP2022505080A - ４－ピラジン－２－イルメチル－モルホリン誘導体および医薬としてのその使用 - Google Patents

Abstract

本発明は、一般式Ａの新規の４－ピラジン－２－イルメチル－モルホリン、
それらの調製のための方法、それらを含有する医薬組成物、および治療における、特にＮＲ２Ｂネガティブアロステリック調節特性に関連のある状態の処置または予防における、それらの使用に関する。

Description

本発明は、一般式Ａの新規の４－ピラジン－２－イルメチル－モルホリン、

A
それらの調製のための方法、それらを含有する医薬組成物、および治療における、特にＮＲ２Ｂネガティブアロステリック調節特性に関連のある状態の処置または予防における、それらの使用に関する。
一般式Ａによる本発明の化合物は、ＮＲ２Ｂネガティブアロステリック調節特性を示す。

過去２０年を超える鋭意研究により、Ｎ－メチル－Ｄ－アスパラギン酸受容体（ＮＭＤＡ）は、アルツハイマー病、パーキンソン病、ジスキネジア、脳卒中、運動ニューロン病、精神病、てんかん、不安、統合失調症および疼痛に関係する役割を果たすことが示されている。

非選択的ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストであるケタミン（ラセミ体ならびにＳエナンチオマー）は、主に麻酔の開始と維持に使用される医薬であり、過去数年にわたり、大うつ病性障害（ＭＤＤ）の処置において麻酔域下用量で臨床的有効性を実証している（Murrough et al. 2013, Am J Psychiatry. 170：1134; Singh et al. 2016, Biol Psychiatry. 80：424）。より正確には、ケタミンは、標準薬物療法への奏効が不十分であるＭＤＤ患者において、数日間持続する有効性のすみやかな発現を誘発する（Berman et al. 2000. Biol Psychiatry 47:351, Serafini et al. 2014. Curr. Neuropharmacol.12:444）。しかし、非選択的ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストは、それらの適用を制限する様々な望ましくない効果を有する。特に、解離および心因性の副作用は、非選択的ＮＭＤＡ受容体アンタゴニスト、例えばケタミンについて顕著である（Krystal et al. 1994. Arch. Gen. Psychiatry 51:199）。１９９０年代初頭には、異なるＮＲ２（Ａ～Ｄ）サブユニットを含有する複数のＮＭＤＡ受容体サブタイプが存在することが発見された（Paoletti et al., 2013 Nat Rev. Neurosci 14:383）。より近年には、ＮＲ２Ｂサブタイプ選択的ＮＭＤＡ受容体ネガティブアロステリック調節剤（ＮＲ２Ｂ ＮＡＭ）への関心が高まり、広範な臨床的適応、例えば注意、情動、気分、および疼痛、ならびに多数の異なるヒトの障害に関与しているものへの可能性が示されている（Mony et. al. 2009. Br. J. Pharmacol. 157:1301; Chaffey et al., Current Anaesthesia & Critical Care 19, 183）。特に、ＮＲ２Ｂ ＮＡＭは、臨床試験の早期の段階において抗うつ効果も実証している（Preskorn et al. 2008. J Clin Psychopharmacol 70:58）。ＮＲ２Ｂ ＮＡＭを使用し、様々なトランスジェニックマウス株を適用した前臨床試験は、ＮＭＤＡ受容体を含有するＮＲ２Ｂが、例えば強制水泳試験においてケタミンの好ましい効果を媒介することを示している（Miller et al. 2014 eLife 3:e03581; Kiselycznyk et al. 2015, Behav Brain Res, 287:89）。さらに、選択的ＮＲ２Ｂ ＮＡＭは、解離および精神異常発現性の副作用が大いに減少するため、非選択的ＮＭＤＡ受容体アンタゴニスト、例えばケタミンに対する利点を有する（Jimenez-Sanchez et al. 2014. Neuropsychopharmacology 39:2673）。現在までに説明されているＮＲ２Ｂ ＮＡＭは、ヒトの薬物療法における使用可能性を制限するそれらの受容体の薬理学および／または他の薬物特性に関して欠点を呈する（Taylor, et al., 2006, Clin Pharmacokinet.45：989;Addy et al. 2009 J of Clinical Pharmacology 49:856））。

ＷＯ２０１５／１３０９０５は、多発性硬化症、多発性神経炎（ｐｏｌｙｎｅｕｒｉｔｉｓ）、多発性神経炎（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｎｅｕｒｉｔｉｓ）、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病またはパーキンソン病の処置に有用なＮａｖ１．６の阻害剤である、式（Ｉ）

の化合物を開示している。ＷＯ２０１５／１３０９０５は、特定の実施例１００、１０５、１０６および１０７を開示しており、ここで環Ｂはメタ二置換されたフェニル環に対応する。

ＷＯ２０１５／１３０９０５は、特定の実施例１００、１０５、１０６および１０７が弱いＮａｖ１．６阻害剤であると報告している（実施例１００、１０５および１０７の１～５μＭでのＮａｖ１．６遮断、および実施例１０６の＞５μＭでのＮａｖ１．６遮断）。

本発明の化合物は、ＷＯ２０１５／１３０９０５の式（Ｉ）により一般的に包含される。本発明の化合物は、これらがパラ二置換されたピラジニル部分構造をメタ二置換されたフェニル環の代わりに含有するという点で、ＷＯ２０１５／１３０９０５に明白に開示されている実施例１００、１０５、１０６および１０７と構造的に異なる。

該構造的差異は、意外なことに強力なＮＲ２Ｂネガティブアロステリック調節剤をもたらし（表１を参照のこと）、一方でＷＯ２０１５／１３０９０５の特定の実施例１００、１０５、１０６、および１０７は、ＮＲ１－ＮＲ２Ｂイオンチャネルに対していかなる活性も示さない（表２を参照のこと）。さらに、本発明の化合物は、ＷＯ２０１５／１３０９０５の特定の実施例１００および１０５がＮａｖ １．６を阻害する濃度でＮａｖ １．６を阻害しない（５μＭ；表３および表４を参照のこと）。
さらに、本発明の化合物は、良好な膜透過性を示し、インビトロの排出を示さない（ＭＤＣＫアッセイＭＤＲ１（Ｐ－ｇｐ）について表５を参照のこと）。したがって、本発明の化合物は、有効なＣＮＳ医薬に必要とされる好都合な脳透過性を示すと予測される。

ＭＤＣＫアッセイは、化合物が血液脳関門を通過する可能性についての情報を提供する。透過性のフィルター支持体上で成長した、分極したコンフルエントなＭＤＣＫ－ＭＤＲ１細胞単層にわたる透過性測定は、インビトロの吸収モデルとして使用され、ＭＤＣＫ－ＭＤＲ１細胞単層にわたる化合物の見かけの透過係数（ＰＥ）は、頂端面から基底面への（ａｐｉｃａｌ－ｔｏ－ｂａｓａｌ）（ＡＢ）および基底面から頂端面への（ＢＡ）輸送方向で測定される（ｐＨ７．４、３７℃）。ＡＢ透過性（ＰＥＡＢ）は、血液から脳への薬物の吸収を表し、ＢＡ透過性（ＰＥＢＡ）は、脳から血液へと戻る薬物の排出を表し、これらは受動的透過性、ならびにＭＤＣＫ－ＭＤＲ１細胞上に発現した排出および取り込み輸送体により、主に過剰発現したヒトＭＤＲ１により媒介される能動輸送機序の両方を介するものである。両方の輸送方向における同一のまたは類似の透過性は、受動的透過（ＰＥＢＡ／ＰＥＡＢ≦１）、さらなる能動輸送機序に対するベクトル透過点（ｖｅｃｔｏｒｉａｌ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｐｏｉｎｔ）を示す。ＰＥＡＢよりも高いＰＥＢＡ（ＰＥＢＡ／ＰＥＡＢ＞５）は、十分な脳への曝露を達成するという目的を損なうであろう、ＭＤＲ１により媒介される能動排出の関与を示す。したがって、このアッセイは、さらなるインビボの試験に適用可能な化合物の選択のための貴重な支持を提供する。血液脳関門での排出により限定されない高い透過性は、主にＣＮＳにおいて作用する薬物のために使用される化合物についての好都合な特徴である。
さらに、本発明の化合物は、ヒト肝ミクロソームにおいて代謝安定性である（表６、代謝安定性を参照のこと）。したがって、本発明の化合物は、ヒトにおいて好都合なインビボのクリアランスを有し、よって、所望の作用持続時間を有すると予測される。

ヒト肝ミクロソームにおける安定性は、好都合な薬物動態特性を有する薬物の選択および／または設計の文脈における、化合物の生体内変化に対する感受性を表す。多数の薬物に対する主要な代謝部位は、肝臓である。ヒト肝ミクロソームはシトクロムＰ４５０（ＣＹＰ）を含有し、よって、インビトロでの薬物の代謝を試験するためのモデル系を表す。ヒト肝ミクロソームにおける強化された安定性は、増大したバイオアベイラビリティおよび十分な半減期を含む幾らかの利点に関連し、患者へのより低くより頻度の少ない投薬を可能とする。よって、ヒト肝ミクロソームにおける強化された安定性は、薬物に使用される化合物についての好都合な特徴である。
結果として、本発明の化合物は、ヒトへの使用に対してより実行可能なものでなければならない。
目的である技術的課題は、よって、強力かつ選択的なＮＲ２Ｂネガティブアロステリック調節剤を提供することである。

本発明は、式Ａの新規の４－ピラジン－２－イルメチル－モルホリン

A
（式中、
Ｒ¹は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、Ｈ₃Ｃ－ＣＨ₂－ＣＨ₂－ＣＨ₂－、シクロブチルを表し；
Ｒ²は、フルオロ、クロロ、メチル、エチル、シクロプロピルからなる群から選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよいフェニルを表す）
またはその塩、特にその薬学的に許容される塩を提供する。
別の実施形態では、一般式Ａ中、Ｒ²は先行する実施形態のいずれかにおいて定義されるものと同じ意味を有し、
Ｒ¹は、メチル、エチルを表す。

別の実施形態では、一般式Ａ中、Ｒ¹は先行する実施形態のいずれかにおいて定義されるものと同じ意味を有し、
Ｒ²は、

を表す。
本発明は、意外なことに強力かつ選択的なＮＲ２Ｂのネガティブアロステリック調節剤である、一般式Ａの新規の４－ピラジン－２－イルメチル－モルホリンを提供する。
本発明の別の態様は、高い膜透過性を有しインビトロの排出を有しない、強力かつ選択的なＮＲ２Ｂネガティブアロステリック調節剤としての、式Ａによる化合物を表す。
本発明の別の態様は、ヒト肝ミクロソームにおける高い代謝安定性を有する、強力かつ選択的なＮＲ２Ｂネガティブアロステリック調節剤としての、式Ａによる化合物を表す。

本発明の別の態様は、高い膜透過性を有し、インビトロの排出を有さず、ヒト肝ミクロソームにおける高い代謝安定性を有する、強力かつ選択的なＮＲ２Ｂネガティブアロステリック調節剤としての、式Ａによる化合物を表す。
本発明の別の態様は、１つまたは複数の不活性な担体および／または希釈剤を共に有してもよい、少なくとも１つの式Ａによる化合物を含有する医薬組成物を表す。
本発明のさらなる一態様は、ＮＲ２Ｂネガティブアロステリック調節剤に関連する障害の予防および／または処置において使用するための、式Ａによる化合物を表す。
本発明の別の態様は、本発明の化合物の製造の方法を表す。

調製
以下のスキームは、例として、一般式Ａによる化合物および対応する中間体化合物の一般的な製造方法を例示するであろう。省略された置換基は、該スキームの文脈内で他に定義されない限り、上記で定義されたとおりであり得る。

スキーム１

スキーム１は、一般式Ａのピラジン誘導体の合成を例示している。最初のステップは、置換されたフェノール誘導体Ｒ２－ＯＨおよび５－クロロ－ピラジン－２－カルボン酸メチルエステルの求核置換であり、エステル基はＮａＢＨ₄を有する対応するアルコールに還元され、ヒドロキシ基は、次いで脱離基へと変換される（例えばメシレート）。
最後のステップは、メシレート、および（Ｓ）－モルホリン－２－カルボン酸メチルエステルと対応するアミンＲ１－ＮＨ₂とを反応させることにより得られた僅かに過剰の（Ｓ）－モルホリン－２－カルボン酸のアミド誘導体を利用した求核置換により表される。
記載された合成手法は、異なる精製技術、例えば結晶化またはカラムクロマトグラフィーを適用する、グラムスケールでの合成にも使用することができる。

一般的な定義
本明細書において具体的に定義されていない用語は、当業者により本開示および本文脈に照らしてそれらに与えられるであろう意味を与えられるべきである。
ＮＲ２Ｂイオンチャネルは、ＮＲ２Ｂタンバク質を含有するＮＭＤＡ受容体として理解されるべきである。
本発明の化合物が化学名および式の形態で描写される場合、何らかの不一致がある場合には式が優先する。
アスタリスクは、コア分子またはそれが定義されているように結合している置換基と連結している結合を示すために、部分式において使用され得る。

「置換されている」という用語は、本明細書において使用される場合、指定された原子の実行可能な価数を超えないこと、および置換が安定な化合物をもたらすことを条件として、指定された原子上の任意の１個または複数個の水素が、示された群から選択されたものと置換されていることを意味する。

立体化学：
具体的に示されない限り、本明細書および添付の特許請求の範囲を通して、示された化学式または化学名は、回転異性体、互変異性体およびすべての立体、光学および幾何異性体（例えばエナンチオマー、ジアステレオアイソマー、Ｅ／Ｚ異性体等）およびそれらのラセミ体、ならびに異なる割合の分離したエナンチオマーの混合物、ジアステレオマーの混合物、またはそのような異性体およびエナンチオマーが存在する先行する形態のいずれかの混合物を包含するであろう。

塩：
「薬学的に許容される」という句は、公正な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応または他の問題もしくは合併症を伴わず、合理的なベネフィット／リスク比に見合う、ヒトの組織との接触における使用に好適であるこれらの化合物、材料、組成物および／または剤形を表すために、本明細書で使用される。
本明細書において使用される場合、「薬学的に許容される塩」は、親化合物が酸または塩基との塩または複合体を形成している、開示されている化合物の誘導体を表す。
塩基性部分を含有する親化合物とともに薬学的に許容される塩を形成する酸の例としては、無機酸または有機酸、例えばベンゼンスルホン酸、安息香酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、ゲンチジン酸、臭化水素酸、塩酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、４－メチル－ベンゼンスルホン酸、リン酸、サリチル酸、コハク酸、硫酸および酒石酸が挙げられる。
酸性部分を含有する親化合物とともに薬学的に許容される塩を形成するカチオンおよび塩基の例としては、Ｎａ⁺、Ｋ⁺、Ｃａ²⁺、Ｍｇ²⁺、ＮＨ₄ ⁺、Ｌ－アルギニン、２，２’－イミノビスエタノール、Ｌ－リシン、Ｎ－メチル－Ｄ－グルカミンまたはトリス（ヒドロキシメチル）－アミノメタンが挙げられる。

本発明の薬学的に許容される塩は、従来の化学的方法により、塩基性または酸性部分を含有する親化合物から合成することができる。一般的に、そのような塩は、それらの化合物の遊離酸または塩形態を、十分な量の適切な塩基または酸と水中またはエーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、もしくはアセトニトリル、またはそれらの混合物のような有機希釈材中で反応させることにより調製することができる。例えば本発明の化合物を精製または単離するのに有用な上述のもの以外の酸の塩（例えばトリフルオロ酢酸塩）も、本発明の一部を構成する。

生物学的アッセイおよびデータ
略語の一覧表
ＤＭＥＭ ダルベッコ変法イーグル培地
ＦＢＳ ウシ胎児血清
ＦＬＩＰＲ 蛍光イメージングプレートリーダー
ＨＥＫ２９３ ヒト胎児性腎臓細胞に由来する細胞株
ＨＥＰＥＳ ヒドロキシエチル－ピペラジンエタン－スルホン酸緩衝液
ＩＣ５０ ５０阻害％濃度（ｈａｌｆ ｍａｘｉｍａｌ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）
ＭＤＣＫ メイディン－ダービーイヌ腎臓
ＭＤＲ１ 多剤耐性タンパク質１
Ｐ－ｇｐ ｐ－糖タンパク質
ＳＥＭ 平均値の標準誤差
ＥＧＴＡ（エチレングリコール－ビス（β－アミノエチルエーテル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸）、エグタズ酸としても周知
インビトロの効果
インビトロの薬理学活性の決定
本発明の化合物の活性は、以下のインビトロのＮＭＤＡ ＮＲ１／ＮＲ２Ｂ細胞アッセイを使用して実証することができる：

方法：
ＮＭＤＡ ＮＲ１／ＮＲ２Ｂ受容体のテトラサイクリン誘導性発現を有するヒトＨＥＫ２９３細胞株を、化合物の有効性および効力についての試験系として使用した。細胞株を、ＣｈａｎＴｅｓｔ、カタログ番号ＣＴ６１２１から購入した。化合物の活性を、ＦＬＩＰＲｔｅｔｒａシステム（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）において、グリシン／グルタメートアゴニズムにより誘導された細胞内のカルシウム濃度に対する化合物の効果を測定することにより決定した。
細胞培養：
細胞を、冷結保存バイアル中の凍結細胞として得て、使用まで－１５０℃で保管した。

細胞を培養培地（ＤＭＥＭ／Ｆ１２、１０％ ＦＢＳ、５μｇ／ｍＬブラストサイジン、１５０μｇ／ｍＬゼオジン（Ｚｅｏｚｉｎ）、５００μｇ／ｍＬジェネティシン）で成長させた。密度が８０％コンフルエンスを超えないことが重要である。継代培養のために、細胞をバーゼン液によりフラスコから剥離した。アッセイのために細胞を剥離し、誘導用培地（グルタミンを有しないＤＭＥＭ／Ｆ１２、１０％ ＦＢＳ、２μｇ／ｍＬテトラサイクリン、２ｍＭケタミン）で２回洗浄し、アッセイの４８時間前に、誘導用培地中、３８４ウェルのピュアコートアミンプレートに播種する（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、５０μｌ中、１ウェルあたり５００００個の細胞）。

化合物の調製：
試験化合物を１００％ ＤＭＳＯ中に１０ｍＭの濃度で溶解し、最初のステップにおいて、ＤＭＳＯ中で５ｍＭの濃度に希釈し、１００％ ＤＭＳＯ中で段階希釈ステップを続けた。希釈係数および希釈ステップの数は、必要により変動させてもよい。典型的に、水性アッセイ緩衝液（１３７ｍＭ ＮａＣｌ、４ｍＭ ＫＣｌ、１．８ｍＭ ＣａＣｌ₂、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１０ｍＭグルコース、ｐＨ７．４）で、１：５希釈による８つの異なる濃度を二重に調製し、物質のさらなる中間希釈（１：３７．５）を実施し、結果として最終試験濃度の３倍の化合物濃度となり、２．７％のＤＭＳＯはアッセイ中０．９％最終ＤＭＳＯ濃度となった。

ＦＬＩＰＲアッセイ：
アッセイの日に、細胞をアッセイ緩衝液（上記のもののような）で３回洗浄し、洗浄後にウェル内に１０μＬの緩衝液を残した。１０μＬ Ｃａキットローディング緩衝液（ＡＡＴ Ｂｉｏｑｕｅｓｔ；以下の構成成分を含有するキットから調製する：構成成分Ａ：２００μＬ ＤＭＳＯ中に溶解したＦｌｕｏ－８ ＮＷおよび２０μｌのこの溶液を、構成成分ＢおよびＣから調製した１０ｍｌの緩衝液と混合する、構成成分Ｂ：構成成分Ｃ中１：１０で希釈した１０Ｘ Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ１２７ Ｐｌｕｓ、構成成分Ｃ：ＨＨＢＳ（２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓを伴うＨａｎｋｓ）を細胞に添加し、プレートを６０分、室温で蓋をしてインキュベートした。６０μＭのグリシンを含有する２０μｌのアッセイ緩衝液（最終２０μＭ）および３μＭのグルタメート（最終１μＭ）を、カラム１～２３に添加し、カラム２４にはグリシン／グルタメートの不在下でアッセイ緩衝液を加え、陰性非刺激対照とした。蛍光（ＮＲ１／ＮＲ２Ｂイオンチャネル活性化の結果としてのカルシウム流入を示す）をＦＬＩＰＲｔｅｔｒａ装置で６０秒間読み取り、グルタメート誘導効果をモニタリングした。２分後、上記のように調製した２０μＬの化合物希釈液またはアッセイ緩衝液中の対照（列１～２２）を、ウェルに慎重に添加した。蛍光をＦＬＩＰＲ ｔｅｔｒａ装置でさらなる６分読み取り、アゴニストによる活性化後の化合物誘導効果をモニタリングした。化合物添加後に５分および５分１０秒での平均２回の測定を算出し、ＩＣ５０算出のためにさらに使用する。各アッセイマイクロタイター化合物希釈プレートは、グリシン／グルタメート誘導蛍光（高対照（ｈｉｇｈ ｃｏｎｔｒｏｌ））についての対照として化合物の代わりにＤＭＳＯ対照を有するウェル（カラム２３または２４中）、および低対照（ｌｏｗ ｃｏｎｔｒｏｌ）として１μＭの参照ＮＲ２Ｂ ＮＡＭ（化合物２２；参照：Layton, Mark E et al, ACS Chemical Neuroscience 2011, 2(7), 352-362）を有するウェルを含有した。

データ評価および算出：
読み取り機の出力ファイルは、ウェルの数および測定された平均蛍光ユニットを含有する。データ評価および算出のために、低対照の測定を０％対照として設定し、高対照の測定を１００％対照として設定した。ＩＣ５０値を、標準の４パラメータロジスティック回帰式を使用して算出した。算出：［ｙ＝（ａ－ｄ）／（１＋（ｘ／ｃ）＾ｂ）＋ｄ］、ａ＝低値、ｄ＝高値；ｘ＝濃度 Ｍ；ｃ＝ＩＣ５０ Ｍ；ｂ＝傾斜。

一般構造Ａにより包摂され、低いＩＣ₅₀値を呈するＮＲ２Ｂネガティブアロステリック調節剤が好ましい。

Ｎａｖ １．６．阻害の決定
器具
ＩｏｎＷｏｒｋｓ Ｑｕａｔｔｒｏ電気生理プラットフォーム
化合物プレート調製
化合物をＤＭＳＯ中３００ｘで調製し、最終アッセイ濃度を１および５μＭとした。
３００ｘ ＤＭＳＯストック溶液をアッセイプレートに移し、１ウェルあたり２μｌの各３００ｘのストック溶液を配置した。すべてのアッセイプレートを、アッセイの日まで－８０℃で保管した。
アッセイの日に、適切なアッセイプレートを室温で解凍し、遠心分離にかけ、１９８μｌの外部記録溶液を添加し、充分混合した。
これにより、１：１００希釈を得た。さらなる１：３希釈を、細胞のＩｏｎＷｏｒｋｓ Ｑｕａｔｔｒｏ電気生理プラットフォーム中への添加で生じさせ、合計で１：３００希釈を得た。

各アッセイプレート上で、少なくとも８つのウェルをビヒクル対照（０．３％ ＤＭＳＯ）のために残しておき、各細胞株特異的な陽性対照についての少なくとも８つのウェルを試験した。陽性対照を、最大遮断および概算のＩＣ５０濃度で試験した。陽性対照として、３０および１０００μＭの濃度のリドカインを使用した。

電気生理学的記録溶液
Ｎａｖ１．６電流を記録するための溶液は、以下の通りである：
外部記録溶液
ＮａＣｌ １３７ｍＭ
ＫＣｌ ４ｍＭ
ＭｇＣｌ₂ １ｍＭ
ＣａＣｌ₂ １．８ｍＭ
ＨＥＰＥＳ １０ｍＭ
グルコース １０ｍＭ
ｐＨ７．３（１０Ｍ ＮａＯＨで用量設定）
内部記録溶液
ＣｓＦ ９０ｍＭ
ＣｓＣｌ ４５ｍＭ
ＨＥＰＥＳ １０ｍＭ
ＥＧＴＡ １０ｍＭ
ｐＨ７．３（１Ｍ ＣｓＯＨで用量設定）
アムホテリシンＢを使用して、内部記録溶液中２００μｇ／ｍｌの最終濃度で、細胞内部への電気的アクセスを得た。

実験プロトコールおよびデータ分析
Ｎａｖ１．６実験プロトコール
状態に依存した阻害：ナトリウムチャネルは、脱分極性電位または長い試験パルスに保たれる場合、チャネルが開口し不活化し、次いで膜電位が過分極電位に下がり、このときに不活化されたチャネルが不活性から閉塞状態へと回復するまで、不活化のままとなる。一例としてテトラカイン阻害が挙げられ、これは過分極電位よりも脱分極性電位ではるかに強い。

Ｎａｖ１．６データ分析
細胞を－１２０ｍＶに保った。ナトリウムチャネルを完全に不活化するために（パルス１）、２０ミリ秒間＋０ｍＶ（パルス２）に進む前に、細胞を２５００ミリ秒間＋０ｍＶにパルスし、１０ミリ秒間－１２０ｍＶに下げた（不活化から完全に回復させるため、しかしそれらに結合している薬物を有するチャネルは不活化から回復しない）。

アッセイ対照結果
アッセイされた各細胞株に関連する陽性およびビヒクル対照データの両方を、一例として以降に示す。平均を、各陽性および陰性対照について中実の記号として示し、個別のウェル複製物（ｗｅｌｌ ｒｅｐｌｉｃａｔｅ）の合計数を中実の記号の隣に示す。加えて、平均値についての変動が容易に評価できるように、各ウェルの個別のデータをグラフ上に中空の記号として示す。これらのデータは、化合物が対照のデータと比較してイオンチャネルに対する活性を有するかどうかを決定する助力とするために提供され、アッセイの変動性の表示を提供し、したがって、検出することができる化合物特異的な効果の効果量を判断するのに使用される。

Ｎａｖ１．６ ＩｏｎＷｏｒｋｓ Ｑｕａｔｔｒｏアッセイについてのアッセイ対照を以降に示す。Ｎａｖ１．６参照化合物のリドカインは、予測されるような濃度および使用依存性様式において電流の誘起を阻害する。

１．０のＰｏｓｔ／Ｐｒｅ値は０阻害％に対応し、０．０のＰｏｓｔ／Ｐｒｅ値は１００阻害％に対応する。アッセイの変動を例示するために、５μＭでＮａｖ １．６の１４阻害％を示すＷＯ２０１５／１３０９０５の実施例１０６（正規化、表３を参照のこと）および５μＭでＮａｖ １．６の－１５阻害％を示す本発明の実施例７（正規化、表４を参照のこと）の両方は、それぞれアッセイ対照データと比較した場合にアッセイの変動内であり、したがって５μＭでＮａｖ １．６チャネルのいかなる有意な阻害も示さない。

表３および４は、Ｎａｖ１．６チャネルの正規化された阻害パーセンテージを示す。正規化されたデータは、ビヒクル対照（０阻害％）および最大阻害対照（１００阻害％）に対して正規化された化合物データを示し、１０００μＭ リドカインによるＰ１での最大阻害（正規化されていない）は、実験を通して４６．４％～４７．２％の範囲であった。（上記のアッセイ対照結果の図も参照のこと）。

一般構造Ａにより包摂され、いかなる有意なＮａｖ１．６阻害も示さない、ＮＲ２Ｂネガティブアロステリック調節剤が好ましい。

本発明の化合物は、１および５μＭでそれぞれいかなる有意なＮａｖ １．６チャネルの阻害も示さず（表４およびアッセイ対照結果を参照のこと）、一方でＷＯ２０１５／１３０９０５の実施例１００および１０５は、５μＭでそれぞれ３７．８％および６８％のＮａｖ １．６の阻害を示す（表３を参照のこと）。ＷＯ２０１５／１３０９０５の実施例１０６および１０７は、１および５μＭでそれぞれいかなる有意なＮａｖ １．６チャネルの阻害も示さない（すなわち、阻害はアッセイの変動性内である、表３およびアッセイ対照結果を参照のこと）。

ＭＤＣＫアッセイＰ－ｇｐ
ＭＤＣＫ－ＭＤＲ１単層（ヒトＭＤＲ１ ｃＤＮＡ発現プラスミドをトランスフェクトされたＭＤＣＫＩＩ細胞）にわたる化合物の見かけの透過係数（Ｐａｐｐ）を、頂端面から基底面（ＡＢ）および基底面から頂端面（ＢＡ）方向で測定する。

ＭＤＣＫ－ＭＤＲ１細胞（６ｘ１０⁵細胞／ｃｍ²）をフィルター挿入体（Ｃｏｒｎｉｎｇ、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ、ポリカーボネート、孔径０．４μｍ）上に播種し、９～１０日間培養する。ＤＭＳＯストック溶液中に溶解した化合物（１～２０ｍＭ）を、０．２５％ＢＳＡを補充したＨＴＰ－４水性緩衝液（１２８．１３ｍＭ ＮａＣｌ、５．３６ｍＭ ＫＣｌ、１ｍＭ ＭｇＳＯ₄、１．８ｍＭ ＣａＣｌ₂、４．１７ｍＭ ＮａＨＣＯ₃、１．１９ｍＭ Ｎａ₂ＨＰＯ₄、０．４１ｍＭ ＮａＨ₂ＰＯ₄、１５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、２０ｍＭグルコース、ｐＨ７．４）で希釈し、輸送溶液を調製する（最終濃度：１または１０μＭ、最終ＤＭＳＯ＜＝０．５％）。Ａ－ＢまたはＢ－Ａ透過性をそれぞれ測定するために、輸送溶液を頂端または側底ドナー側に適用する。レシーバー側には、０．２５％ＢＳＡを補充したＨＴＰ－４緩衝液を含有させる。ＨＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ（ＱＴｒａｐ ６５００（ＡＢ Ｓｃｉｅｘ）またはＴＳＱ Ｖａｎｔａｇｅ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）と連結したＲａｐｉｄＦｉｒｅハイスループットＭＳシステム（Ａｇｉｌｅｎｔ））による濃度測定のために、試料を、実験の開始および終了時ならびに様々な時間間隔で最大２時間ドナーから回収し、レシーバー側からも回収する。試料採取されたレシーバー容量を、新鮮なレシーバー溶液で置き換える。排出比を、Ｐａｐｐ（ｂ－ａ）値をＰａｐｐ（ａ－ｂ）値で割ることにより算出する。結果を表５に示す。

上記の実験結果は、本発明の化合物が、高い膜透過性を有し、インビトロの排出を有さず、血液脳関門を通過する優秀な能力が予測される、強力なＮＲ２Ｂ ＮＡＭであることを示す。

代謝安定性
試験化合物の代謝分解を、３７℃で貯蔵されたヒト肝ミクロソームでアッセイした。時点ごとに６０μｌの最終インキュベーション容量は、室温でｐＨ７．６のＴＲＩＳ緩衝液（０．１Ｍ）、塩化マグネシウム（５ｍＭ水溶液）、ミクロソームタンパク質（ヒトについて１ｍｇ／ｍＬ）および最終濃度１μＭの試験化合物を含有する。３７℃での短いプレインキュベーション期間に続き、反応をベータニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸、還元型（ＮＡＤＰＨ、１ｍＭ）の添加により開始させ、異なる時点後に、アリコートをアセトニトリル中に移すことにより終了させた。親化合物の量についてのＭＤＣＫアッセイＰ－ｇｐのために、遠心分離（１００００ｇ、５分）後、上清のアリコートを上記のようにＨＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳによりアッセイした。半減期を、濃度－時間プロファイルの片対数プロットの傾斜により決定した。結果を表６に示す。

上記の実験結果は、本発明の化合物が、ヒト肝ミクロソームにおいて高い安定性を有する強力なＮＲ２Ｂ ＮＡＭであることを示す。

本発明は、意外なことに以下の主要なパラメーターの好都合な組合せをもたらす、式Ａによる化合物を提供する：
１）ＮＲ２Ｂの強力かつ選択的なネガティブアロステリック調節、
２）ヒト肝ミクロソームにおける高い安定性、および
３）ＭＤＣＫ－ＭＤＲ１細胞トランスポーターで高い透過性がありインビトロの排出がないこと。

医薬組成物
本発明の化合物を投与するための好適な調製は、当業者に明らかであり、例えば錠剤、丸剤、カプセル剤、坐剤、ロゼンジ、トローチ剤、溶液、シロップ剤、エリキシル剤、サシェ、注射剤、吸入剤および散剤等が挙げられる。薬学的に活性な化合物の含有量は、全体としての組成物の０．１～９５質量％、好ましくは５．０～９０質量％の範囲で変動してもよい。
好適な錠剤は、例えば、本発明の化合物と周知の賦形剤、例えば不活性な希釈剤、担体、崩壊剤、アジュバント、界面活性剤、結合剤および／または潤沢剤とを混合し、結果として生じた混合物をプレスして錠剤を形成することにより得ることができる。
処置における使用／使用の方法
ＮＲ２Ｂ ＮＡＭのヒトへの治療用途は、Traynelis et al.（Traynelis et al., Pharmacology Reviews, 2010, 62:405）、Beinat et al.（Beinat et al., Current Medicinal Chemistry, 2010, 17:4166）およびMony et al.（Mony et al., British J. Pharmacology, 2009, 157:1301）らによるレビュー内で要約されている。

本発明は、ＮＲ２Ｂのネガティブアロステリック調節が以下を含む治療的利益をもつ、精神障害、疾患および状態の処置に有用である化合物に関する：（１）気分障害および気分情動障害；（２）統合失調症スペクトラム障害；（３）不安障害を含む神経症性障害、ストレス関連障害および身体表現性障害；（４）精神発達の障害；（５）生理学的機能異常および身体的要因に関連する行動症候群；（６）物質関連および嗜癖障害；（７）不快および快の感情価（ｎｅｇａｔｉｖｅ ａｎｄ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｖａｌｅｎｃｅ）の症状に関連する疾患；（８）疼痛；（９）脳血管疾患；（１０）エピソード性および発作性障害；（１１）神経変性疾患。
これらの薬理学的効果の観点において、本発明の化合物は以下からなる一覧表から選択される障害、疾患または状態の処置における使用に好適である。

（１）双極Ｉ型障害うつ病状態、軽躁状態、躁状態、および混合状態；双極ＩＩ型障害；抑うつ病性障害、例えば単一抑うつエピソードまたは反復性大うつ病性障害、小うつ病性障害、産後発症の抑うつ病性障害、精神病症状を伴う抑うつ病性障害；不安性の苦痛、混合性の特徴、メランコリアの特徴、非定型の特徴、気分に一致する精神病性の特徴、気分に一致しない精神病性の特徴、緊張病を同時に伴うまたは伴わない大うつ病性障害を含む気分障害および気分情動障害の処置。
（２）統合失調症、ならびに関連する陰性症状および認知症状を伴う統合失調感情障害を含む、統合失調症スペクトラム障害および他の精神病性障害に属する気分障害の処置。
（３）不安障害を含む神経症性障害、ストレス関連障害、および身体表現性障害、全般性不安障害、広場恐怖症を伴うまたは伴わないパニック障害、特定恐怖症、社会恐怖症、慢性不安障害；強迫性障害；重度のストレスに対する反応、および適応障害、例えば心的外傷後ストレス障害；その他の神経症性障害、例えば離人感・現実感消失症候群に属する障害の処置。
（４）アスペルガー症候群およびレット症候群を含む広汎性発達障害、自閉性障害、精神遅滞および常同運動に関連した小児自閉症および過動性障害、運動機能の特異的発達障害、学力の特異的発達障害、注意欠陥／多動性障害などの精神発達の障害の処置。
（５）産後および分娩後うつ病を含む産褥に関連した精神障害および行動障害；神経性食欲不振症および神経性過食症を含む摂食障害、ならびにその他の衝動制御障害を含む、生理学的機能異常および身体的要因に関連した行動症候群の処置。
（６）アルコール、大麻、幻覚剤、興奮剤、睡眠薬、タバコにより誘発される物質使用障害である物質関連障害および嗜癖障害の処置。
（７）アンヘドニア、持続的な脅威および喪失感、希死念慮などの不快および快の感情価の症状を伴う疾患の処置。

（８）ニューロパチー、例えば糖尿病性ニューロパチーまたは多発性ニューロパチー、例えば腰痛、関節痛を含む生理的過程および身体障害、筋骨格系および結合組織の疾患、例えばリウマチ、筋肉痛、神経障害、神経根障害および神経叢疾患、例えば疼痛を伴う幻肢症候群、手根管症候群に関連する、急性疼痛および慢性疼痛の処置。
（９）脳血管疾患、例えば脳内出血またはくも膜下出血、脳梗塞、脳卒中、閉塞および狭窄、脳動脈硬化症、脳アミロイド血管症の処置。
（１０）エピソード性および発作性障害、例えばてんかんの処置。
（１１）神経変性型、例えば脳卒中、アルツハイマー病およびハンチントン病を含む疾患の処置。

本明細書において使用される場合、特に断りのない限り、「処置する」「処置」という用語は、疾患、状態または障害と闘う目的のためのヒト対象またはヒト患者の管理およびケアを含み、症状もしくは合併症の発症を予防するため、症状もしくは合併症を緩和するため、または疾患、状態もしくは障害を取り除くための本発明の化合物の投与を含むであろう。

本明細書において使用される場合、特に断りのない限り、「予防」という用語は、（ａ）１つもしくは複数の症状の頻度の減少；（ｂ）１つもしくは複数の症状の重症度の減少；（ｃ）さらなる症状の発現の遅延もしくは回避；および／または（ｄ）障害もしくは状態の発現の遅延または回避を含むであろう。
別の態様によると、本発明は、上述の状態の処置および／または予防において使用するための、式Ａの化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
別の態様によると、本発明は、式Ａの化合物が行動療法、ＴＭＳ（経頭蓋磁気刺激）、ＥＣＴ（電気痙攣療法）および他の治療に加えて使用されることを特徴とする、先行する態様のいずれか１つによる式Ａの化合物を提供する。
併用療法
本発明による化合物は、当該技術分野において適応症のいずれかの処置に関して使用されることが周知であり本発明の主眼にある、他の処置選択肢と合わせることができる。

別の態様によると、本発明は、式Ａの化合物が、デュロキセチン、エスシタロプラム、ブプロピオン、ベンラファキシン、デスベンラファキシン、セルトラリン、パロキセチン、フルオキセチン、ボルチオキセチン、ミルタザピン、シタロプラム、ビラゾドン、トラゾドン、アミトリプチリン、クロミプラミン、アゴメラチン、レボミルナシプラン、リチウム、ドキセピン、ノルトリプチリンからなる列挙から選択される１つまたは複数の抗うつ剤を用いた処置に加えて投与されることを特徴とする、先行する態様のいずれか１つによる式Ａの化合物を提供する。「抗うつ剤」という用語は、うつ病または抑うつ症状に関連する疾患を処置するために使用することができる、任意の薬剤または薬物を意味するであろう。

別の態様によると、本発明は、式Ａの化合物が、アリピプラゾール、パルミチン酸パリペリドン、ルラシドン、クエチアピン、リスペリドン、オランザピン、パリペリドン、ブレクスピプラゾール、クロザピン、アセナピン、クロルプロマジン、ハロペリドール、カリプラジン、ジプラシドン、アミスルプリド、イロペリドン、フルフェナジン、ブロナンセリン、アリピプラゾールラウロキシルからなる列挙から選択される１つまたは複数の抗精神病薬を用いた処置に加えて投与されることを特徴とする、先行する態様のいずれか１つによる式Ａの化合物を提供する。「抗精神病薬」という用語は、精神病または抑うつ症状に関連する疾患を処置するために使用することができる、任意の薬剤または薬物を意味するであろう。

別の態様によると、本発明は、式Ａの化合物が、リスデキサンフェタミン、メチルフェニデート、アンフェタミン、デキサンフェタミン、デクスメチルフェニデート、アルモダフィニル、モダフィニルからなる列挙から選択される１つまたは複数の精神刺激薬を用いた処置に加えて投与されることを特徴とする、先行する態様のいずれか１つによる式Ａの化合物を提供する。「精神刺激薬」という用語は、気分障害または衝動制御障害のような疾患を処置するために使用することができる、任意の薬剤または薬物を意味するであろう。
別の態様によると、本発明は、式Ａの化合物が、オキシラセタム、ピラセタム、または天然物であるセイヨウオトギリソウからなる列挙から選択される向知性薬を用いた処置に加えて投与されることを特徴とする、先行する態様のいずれか１つによる式Ａの化合物を提供する。

別の態様によると、本発明は、式Ａの化合物と１つまたは複数の抗うつ剤、抗精神病薬、精神刺激薬、向知性薬または天然物との組合せが、行動療法、ＴＭＳ（経頭蓋磁気刺激）、ＥＣＴ（電気痙攣療法）または他の治療に加えて使用されることを特徴とする、先行する態様のいずれか１つによる１つまたは複数の抗うつ剤、抗精神病薬、精神刺激薬、向知性薬または天然物を用いた処置に加えて投与される、式Ａの化合物を提供する。

実験のセクション
略語：
ＡＣＮ アセトニトリル
ＡＰＣＩ 大気圧化学イオン化
Ｂｏｃ ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル
ＣＤＩ １，１’－カルボニルジイミダゾール
ＣＯ₂ 二酸化炭素
Ｄ 日
ＤＡ ダイオードアレイ
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＩＰＥ ジイソプロピルエーテル
ＤＩＰＥＡ ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ ジメチルホルムアミド
ｅ．ｅ． 鏡像異性体過剰率
ＥＳＩ エレクトロスプレーイオン化（ＭＳ中）
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
ＥｔＯＨ エタノール
Ｅｘ． 実施例
ｈ 時間
ＨＡＴＵ Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウム－ ヘキサフルオロリン酸塩
ＨＰＬＣ 高速液体クロマトグラフィー
ＨＰＬＣ－ＭＳ 結合型高速液体クロマトグラフィー質量分析法
Ｍ モル（ｍｏｌ／Ｌ）
ＭｅＯＨ メタノール
ｍｉｎ 分
ＭＳ 質量分析法
ＭＷ 分子量
ＮＨ３ アンモニア
ＰＳＩ ポンド毎平方インチ
ｒｔ 室温
Ｒ_t 保持時間
ｓｃＣＯ２ 超臨界ＣＯ２
ｓｏｌｖ 溶媒
ＴＢＴＵ Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩
ＴＥＡ トリエチルアミン
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＴＬＣ 薄層クロマトグラフィー
ＳＦＣ 超臨界流体クロマトグラフィー

スペクトルデータ中の略語：
１Ｈ－ＮＭＲ プロトン核磁気共鳴
ｂｒ 幅広線
δ 化学シフト
ｄ 二重線
ｄｄ 二重の二重線
ｄｔ 二重の三重線
ＤＭＳＯ－ｄ₆ ヘキサ－ジューテロ－ジメチルスルホキシド
Ｈ プロトン
Ｈｚ ヘルツ（＝１／秒）
Ｊ 結合定数
ｍ 多重線
ｐｐｍ 百万分の一
ｑ 四重線
ｓ 一重線
ｔ 三重線
ｔｄ 三重の二重線

一般的解析。
すべての反応を、商業用等級の試薬および溶媒を使用して実行した。ＮＭＲスペクトルを、ＴｏｐＳｐｉｎ ３．２ ｐｌ６ソフトウェアを使用して、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＶＡＮＣＥ ＩＩＩ ＨＤ ４００ ＭＨｚ機器上で記録した。化学シフトを、内部標準であるトリメチルシランから百万分の一（ｐｐｍ）ダウンフィールドでδ単位で得る。選択されたデータを、以下の様式で報告する：化学シフト、多重度、結合定数（Ｊ）、積分。分析的薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を、Ｍｅｒｃｋシリカゲル６０ Ｆ２５４プレートを使用して実行した。すべての化合物を、短波長ＵＶ光を使用して単一のスポットとして可視化した。低分解能質量スペクトルを、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ｓｅｒｉｅｓ ＬＣ とＡｇｉｌｅｎｔ ６１３０四重極型質量分析計（エレクトロスプレー正イオン化）を組み合わせてなる液体クロマトグラフィー質量分析法（ＬＣＭＳ）を使用して得た。

方法：
ＨＰＬＣ－ＭＳ方法：

キラルＳＦＣ分析方法：

精製のための分取ＨＰＬＣ条件：
機器：（Ａｇｉｌｅｎｔ １１００）。溶離液：水 － ＮＨ₄ＯＨ ５％ 水中溶液 － ＣＨ₃ＣＮ；流速：５０ｍｌ／分；温度 ６０℃；カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８。

中間体の精製：
（実施例１ａ）

（Ｓ）－モルホリン－２－カルボン酸メチルエステル塩酸塩（３５ｇ；１９２．７ｍｍｏｌ）を、４００ｍｌ ８ＭのメチルアミンのＥｔＯＨ中溶液とともに混合した。反応混合物を、室温で６０時間にわたり撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、ＴＨＦ（５００ｍｌ）およびＴＥＡ（５０ｍｌ）を添加し、反応混合物を室温で１２時間の間撹拌した。沈殿を形成させ、懸濁液をガラスフィルターでろ過し、濾液を減圧下で蒸発させた。２３．５ｇの所望の生成物を固体として得た。

（実施例１ｂ）

（Ｓ）－モルホリン－２－カルボン酸メチルエステル塩酸塩（５ｇ；２７．５ｍｍｏｌ）を、１３８ｍｌ ２ＭのエチルアミンのＴＨＦ中溶液とともに混合した。反応混合物を、室温で６０時間にわたり撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、ＴＨＦ（５００ｍｌ）およびＴＥＡ（５０ｍｌ）を添加し、反応混合物を室温で１２時間の間撹拌した。沈殿を形成させ、懸濁液をガラスフィルターで濾過し、濾液を減圧下で蒸発させた。４．３ｇの所望の生成物を固体として得た。

（実施例２ａ）

５－クロロ－ピラジン－２－カルボン酸メチルエステル（１ｇ；５．７９ｍｍｏｌ）および４－フルオロ－フェノール（０．７８ｇ；６．９５ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（１０ｍｌ）に溶解し、Ｋ₂ＣＯ₃（１．２ｇ；８．６９ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を４５分６０℃で撹拌した。反応混合物を水（５０ｍｌ）中へと注ぎ１５分撹拌した。得られた沈殿を、水、１０％のＫ₂ＣＯ₃水溶液で洗浄し、乾燥させた。１．４ｇの固体を得た。

（実施例２ｂ）

実施例２ｂを、実施例２ａと同様に合成した。

出発材料：５－クロロ－ピラジン－２－カルボン酸メチルエステル（１ｇ；５．７９ｍｍｏｌ）、２－フルオロ－４－メチルフェノール（０．７５ｍｌ；６．９５ｍｍｏｌ）。１．５ｇの所望の化合物を固体として得た。

（実施例２ｃ）

実施例２ｃを、実施例２ａと同様に合成した。

出発材料：５－クロロ－ピラジン－２－カルボン酸メチルエステル（１ｇ；５．７９ｍｍｏｌ）、４－メチルフェノール（０．７３ｍｌ；６．９５ｍｍｏｌ）。１．３５ｇの所望の化合物を固体として得た。

（実施例２ｄ）

実施例２ｄを、実施例２ａと同様に合成した。
出発材料：５－クロロ－ピラジン－２－カルボン酸メチルエステル（１ｇ；５．７９ｍｍｏｌ）、２，４－ジメチルフェノール（０．８３ｍｌ；６．９５ｍｍｏｌ）。１．４５ｇの所望の化合物を固体として得た。

（実施例２ｅ）

実施例２ｅを、実施例２ａと同様に合成した。

出発材料：５－クロロ－ピラジン－２－カルボン酸メチルエステル（１ｇ；５．７９ｍｍｏｌ）、４－クロロ－２－フルオロ－フェノール（０．７４ｍｌ；６．９５ｍｍｏｌ）。１．５５ｇの所望の化合物を固体として得た。

（実施例２ｆ）

実施例２ｆを、実施例２ａと同様に合成した。

出発材料：５－クロロ－ピラジン－２－カルボン酸メチルエステル（１ｇ；５．７９ｍｍｏｌ）、２，４－ジフルオロフェノール（０．６７ｍｌ；６．９５ｍｍｏｌ）。１．５０ｇの所望の化合物を固体として得た。

（実施例２ｇ）

実施例２ｇを、実施例２ａと同様に合成した。

出発材料：５－クロロ－ピラジン－２－カルボン酸メチルエステル（１ｇ；５．７９ｍｍｏｌ）、４－クロロ－フェノール（０．８９ｇ；６．９５ｍｍｏｌ）。１．５ｇの所望の化合物を固体として得た。

（実施例２ｈ）

実施例２ｈを、実施例２ａと同様に合成した。

出発材料：５－クロロ－ピラジン－２－カルボン酸メチルエステル（１ｇ；５．７９ｍｍｏｌ）、４－フルオロ－２－メチルフェノール（０．８８ｇ；６．９５ｍｍｏｌ）。１．５ｇの所望の化合物を固体として得た。

（実施例２ｉ）

実施例２ｉを、実施例２ａと同様に合成した。

出発材料：５－クロロ－ピラジン－２－カルボン酸メチルエステル（１ｇ；５．７９ｍｍｏｌ）、２－フルオロフェノール（０．６２ｍｌ；６．９５ｍｍｏｌ）。１．２２ｇの所望の化合物を固体として得た。

（実施例２ｋ）

実施例２ｋを、実施例２ａと同様に合成した。
出発材料：５－クロロ－ピラジン－２－カルボン酸メチルエステル（１ｇ；５．７９ｍｍｏｌ）、２－クロロフェノール（０．７１ｍｌ；６．９５ｍｍｏｌ）。１．５１ｇの所望の化合物を固体として得た。

（実施例２ｊ）

実施例２ｊを、実施例２ａと同様に合成した。

出発材料：５－クロロ－ピラジン－２－カルボン酸メチルエステル（１．００ｇ；５．８０ｍｍｏｌ）、フェノール（０．６５ｇ；６．９５ｍｍｏｌ）。１．３０ｇの所望の化合物を固体として得た。

（実施例２ｌ）

実施例２ｌを、実施例２ａと同様に合成した。

出発材料：５－クロロ－ピラジン－２－カルボン酸メチルエステル（１．００ｇ；５．８０ｍｍｏｌ）、２．６－ジフルオロフェノール（０．９０ｇ；６．９５ｍｍｏｌ）。１．５２ｇの所望の化合物を固体として得た。

（実施例２ｍ）

実施例２ｍを、実施例２ａと同様に合成した。

出発材料：５－クロロ－ピラジン－２－カルボン酸メチルエステル（３２０ｍｇ；１．８５ｍｍｏｌ）、２－フルオロ－６－メチル－フェノール（２５７ｍｇ；２．０４ｍｍｏｌ）。４８０ｍｇの所望の化合物を固体として得た。

（実施例３ａ）

実施例２ａ（１．４ｇ；５．６４ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１５ｍｌ）中に溶解し；ＮａＢＨ₄（０．６４ｇ；１６．９ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を３時間室温で撹拌した。水を添加して反応をクエンチし、反応混合物を次いで減圧下で蒸発させ、残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）とＫ₂ＣＯ₃の１０％水溶液（３０ｍｌ）との間で分配した。有機相をＮａ₂ＳＯ₄上で乾燥させ、溶媒の蒸発後に得られた残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製した（溶離液：石油エーテル／ＥｔＯＡｃ ３／１で開始し、石油エーテル／ＥｔＯＡｃ ２／１までの勾配）。０．８ｇの所望の化合物（油状物）を得た。

（実施例３ｂ）

実施例３ｂを、実施例３ａと同様に調製した。出発材料：実施例２ｂ（１．５ｇ；５．７２ｍｍｏｌ）。１ｇの所望の化合物を得た。

（実施例３ｃ）

実施例３ｃを、実施例３ａと同様に調製した。出発材料：実施例２ｃ（１．３５ｇ；５．５３ｍｍｏｌ）。０．９５ｇの所望の化合物を得た。

（実施例３ｄ）

実施例３ｄを、実施例３ａと同様に調製した。出発材料：実施例２ｄ（１．４５ｇ；５．６１ｍｍｏｌ）。０．８３ｇの所望の化合物を得た。

（実施例３ｅ）

実施例３ｅを、実施例３ａと同様に調製した。出発材料：実施例２ｅ（１．５５ｇ；５．４８ｍｍｏｌ）。１．０２ｇの所望の化合物を得た。

（実施例３ｆ）

実施例３ｆを、実施例３ａと同様に調製した。出発材料：実施例２ｆ（１．５０ｇ；５．６４ｍｍｏｌ）。１．０４ｇの所望の化合物を得た。

（実施例３ｇ）

実施例３ｇを、実施例３ａと同様に調製した。出発材料：実施例２ｇ（１．５ｇ；５．６７ｍｍｏｌ）。０．８３ｇの所望の化合物を得た。

（実施例３ｈ）

実施例３ｈを、実施例３ａと同様に調製した。出発材料：実施例２ｈ（１．５ｇ；５．７２ｍｍｏｌ）。０．８６ｇの所望の化合物を得た。

（実施例３ｉ）

実施例３ｉを、実施例３ａと同様に調製した。出発材料：実施例２ｉ（１．２２ｇ；４．９２ｍｍｏｌ）。０．７５ｇの所望の化合物を得た。

（実施例３ｋ）

実施例３ｋを、実施例３ａと同様に調製した。出発材料：実施例２ｋ（１．５１ｇ；５．７１ｍｍｏｌ）。０．８５ｇの所望の化合物を得た。

（実施例３ｊ）

実施例３ｊを、実施例３ａと同様に調製した。出発材料：実施例２ｋ（１．３０ｇ；５．６５ｍｍｏｌ）。有機溶媒の蒸発後に得られた粗製物を、次のステップにおいてそのまま使用した。０．９８ｇの所望の化合物（含有量７０％）を得た。

（実施例３ｌ）

実施例３ｌを、実施例３ａと同様に調製した。出発材料：実施例２ｌ（１．５２ｇ；５．７１ｍｍｏｌ）。有機溶媒の蒸発後に得られた粗製物を、次のステップにおいてそのまま使用した。１．３０ｇの所望の化合物（含有量８５％）を得た。

（実施例３ｍ）

実施例３ｍを、実施例３ａと同様に調製した。出発材料：実施例２ｍ（４８０ｍｇ；１．８３ｍｍｏｌ）。有機溶媒の蒸発後に得られた粗製生成物を、次のステップにおいてそのまま使用した。４２０ｍｇの所望の化合物（含有量８５％）を得た。

（実施例４ａ）

実施例３ａ（０．８ｇ；３．６３ｍｍｏｌ）を２－メチル－ＴＨＦ（Ａｌｄｒｉｃｈ）（４０ｍｌ）中に溶解し、ＴＥＡ（０．７６ｍｌ；５．４５ｍｍｏｌ）を滴下添加し、続けてメタンスルホニルクロリド（０．３ｍｌ；４ｍｍｏｌ）を滴下添加した。混合物を１．５時間室温で撹拌し、その後後処理した。５％のＮａＨＣＯ₃水溶液を反応混合物に添加し、相を分離し、Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥させた。有機溶媒の蒸発後に得られた粗製物を、次のステップにおいてそのまま使用した。１．０５ｇの所望の生成物を得た。

（実施例４ｂ）

実施例４ｂを、実施例４ａと同様に調製した。出発材料：実施例３ｂ（１ｇ；４．２７ｍｍｏｌ）。１．３ｇを得た。生成物を、次のステップにおいてそのまま使用した。

（実施例４ｃ）

実施例４ｃを、実施例４ａと同様に調製した。出発材料：実施例３ｃ（０．９５ｇ；４．３９ｍｍｏｌ）。１．２５ｇを得た。後処理後に得られた生成物を、次のステップにおいてそのまま使用した。

（実施例４ｄ）

実施例４ｄを、実施例４ａと同様に調製した。出発材料：実施例３ｄ（０．８３ｇ；３．６１ｍｍｏｌ）。１．１ｇを得た。処理後に得られた生成物を、次のステップにおいてそのまま使用した。

（実施例４ｅ）

実施例４ｅを、実施例４ａと同様に調製した。出発材料：実施例３ｅ（１．０２ｇ；４．０ｍｍｏｌ）。１．３２ｇを得た。処理後に得られた生成物を、次のステップにおいてそのまま使用した。

（実施例４ｆ）

実施例４ｆを、実施例４ａと同様に調製した。出発材料：実施例３ｆ（１．０４ｇ；４．３７ｍｍｏｌ）。１．３５ｇを得た。処理後に得られた生成物を、次のステップにおいてそのまま使用した。

（実施例４ｇ）

実施例４ｇを、実施例４ａと同様に調製した。出発材料：実施例３ｇ（０．８３ｇ；３．５１ｍｍｏｌ）。１．１ｇを得た。処理後に得られた生成物を、次のステップにおいてそのまま使用した。

（実施例４ｈ）

実施例４ｈを、実施例４ａと同様に調製した。出発材料：実施例３ｈ（０．８６ｇ；３．６７ｍｍｏｌ）。１．１２ｇを得た。処理後に得られた生成物を、次のステップにおいてそのまま使用した。

（実施例４ｉ）

実施例４ｉを、実施例４ａと同様に調製した。出発材料：実施例３ｉ（０．７５ｇ；３．４１ｍｍｏｌ）。１．０ｇを得た。処理後に得られた生成物を、次のステップにおいてそのまま使用した。

（実施例４ｋ）

実施例４ｋを、実施例４ａと同様に調製した。出発材料：実施例３ｋ（０．８５ｇ；３．５９ｍｍｏｌ）。１．１ｇを得た。処理後に得られた生成物を、次のステップにおいてそのまま使用した。

（実施例４ｊ）

実施例４ｊを、実施例４ａと同様に調製した。出発材料：実施例３ｋ（０．９８ｇ；含有量７０％；３．３９ｍｍｏｌ）。後処理後に得られた生成物を、次のステップにおいてそのまま使用した。１．３５ｇの所望の生成物（含有量７０％）を得た。

（実施例４ｌ）

実施例４ｌを、実施例４ａと同様に調製した。出発材料：実施例３ｌ（１．３０ｇ；含有量８５％；４．６４ｍｍｏｌ）。後処理後に得られた生成物を、次のステップにおいてそのまま使用した。１．７０ｇを得た（含有量８５％）。

（実施例４ｍ）

実施例４ｍを、実施例４ａと同様に調製した。出発材料：実施例３ｍ（０．４２ｇ；含有量８５％；１．５２ｍｍｏｌ）。０．５５ｇを得た。後処理後に得られた生成物を、次のステップにおいてそのまま使用した。

例示的実施形態
（実施例１）

実施例４ａ（１００ｍｇ；０．３４ｍｍｏｌ）および実施例１ａ（５３．１７ｍｇ；０．３７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５ｍｌ）に溶解し、；ピリジン（０．０８ｍｌ；１ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を５０℃で５時間の間加熱した。反応混合物を室温で冷却し、ＭｅＯＨ（３ｍｌ）で希釈し、シリンジフィルターで濾過した。得られた溶液を分取ＨＰＬＣにより精製した。５３ｍｇの所望の化合物を得た。

（実施例２）

実施例２を、実施例１と同様に合成した。

出発材料：実施例４ｂ（１００ｍｇ；０．３２ｍｍｏｌ）＋実施例１ａ（５０．７８ｍｇ；０．３５ｍｍｏｌ）。粗製物を分取ＨＰＬＣにより精製した。１０５ｍｇの所望の化合物を得た。

（実施例３）

実施例３を、実施例１と同様に合成した。

出発材料：実施例４ｃ（１００ｍｇ；０．３４ｍｍｏｌ）＋実施例１ａ（５３．９ｍｇ；０．３７ｍｍｏｌ）。粗製物を分取ＨＰＬＣにより精製した。８０ｍｇの所望の化合物を得た。

（実施例４）

実施例４を、実施例１と同様に合成した。

出発材料：実施例４ｄ（１００ｍｇ；０．３２ｍｍｏｌ）＋実施例１ａ（５１．４ｍｇ；０．３６ｍｍｏｌ）。粗製物を分取ＨＰＬＣにより精製した。５５ｍｇの所望の化合物を得た。

（実施例５）

実施例５を、実施例１と同様に合成した。

出発材料：実施例４ｅ（１００ｍｇ；０．３０ｍｍｏｌ）＋実施例１ａ（４７．６６ｍｇ；０．３３ｍｍｏｌ）。粗製物を分取ＨＰＬＣにより精製した。７０ｍｇの所望の化合物を得た。

（実施例６）

実施例６を、実施例１と同様に合成した。

出発材料：実施例４ｆ（１００ｍｇ；０．３２ｍｍｏｌ）＋実施例１ａ（５０．１４ｍｇ；０．３５ｍｍｏｌ）。粗製物を分取ＨＰＬＣにより精製した。８１ｍｇの所望の化合物を得た。

（実施例７）

実施例７を、実施例１と同様に合成した。

出発材料：実施例４ｇ（１００ｍｇ；０．３２ｍｍｏｌ）＋実施例１ａ（５０．３９ｍｇ；０．３５ｍｍｏｌ）。粗製物を分取ＨＰＬＣにより精製した。９７ｍｇの所望の化合物を得た。

（実施例８）

実施例８を、実施例１と同様に合成した。

出発材料：実施例４ｈ（１００ｍｇ；０．３２ｍｍｏｌ）＋実施例１ａ（５０．７８ｍｇ；０．３５ｍｍｏｌ）。粗製物を分取ＨＰＬＣにより精製した。６０ｍｇの所望の化合物を得た。

（実施例９）

実施例９を、実施例１と同様に合成した。
出発材料：実施例４ｉ（１００ｍｇ；０．３４ｍｍｏｌ）＋実施例１ａ（５３．１７ｍｇ；０．３７ｍｍｏｌ）。粗製物を分取ＨＰＬＣにより精製した。４９ｍｇの所望の化合物を得た。

（実施例１８）

実施例１８を、実施例１と同様に合成した。

出発材料：実施例４ｋ（１００ｍｇ；０．３２ｍｍｏｌ）＋実施例１ａ（５０．７８ｍｇ；０．３５ｍｍｏｌ）。粗製物を分取ＨＰＬＣにより精製した。６４ｍｇの所望の化合物を得た。

（実施例３０）

実施例３０を、実施例１と同様に合成した。

出発材料：実施例４ｆ（１００ｍｇ；０．３２ｍｍｏｌ）および実施例１ｂ（６０ｍｇ；０．３８ｍｍｏｌ）。粗製物を分取ＨＰＬＣを介して精製した。５８ｍｇを得た。

（実施例３１）

実施例３１を、実施例１と同様に合成した。

出発材料：実施例４ｂ（１００ｍｇ；０．３２ｍｍｏｌ）および実施例１ｂ（６０ｍｇ；０．３８ｍｍｏｌ）。粗製物を分取ＨＰＬＣを介して精製した。５７ｍｇを得た。

（実施例３３）

実施例３３を、実施例１と同様に合成した。

出発材料：実施例４ｋ（１００ｍｇ；０．３２ｍｍｏｌ）および実施例１ｂ（６０ｍｇ；０．３８ｍｍｏｌ）。粗製物を分取ＨＰＬＣを介して精製した。３７ｍｇを得た。

（実施例３４）

実施例３４を、実施例１と同様に合成した。

出発材料：実施例４ｊ（１００ｍｇ；含有量７０％；０．２５ｍｍｏｌ）および実施例１ａ（３９．６ｍｇ；０．２８ｍｍｏｌ）。粗製物を分取ＨＰＬＣを介して精製した。７１．０ｍｇの所望の生成物を得た。

（実施例３５）

実施例３５を、実施例１と同様に合成した。

出発材料：実施例４ｌ（１３０ｍｇ；０．３５ｍｍｏｌ）および実施例１ａ（５５．４ｍｇ；０．３８ｍｍｏｌ）。粗製物を分取ＨＰＬＣを介して精製した。７１．０ｍｇの所望の生成物を得た。

（実施例３６）

実施例３６を、実施例１と同様に合成した。

出発材料：実施例４ｍ（１３０ｍｇ；０．４２ｍｍｏｌ）および実施例１ａ（６６．０ｍｇ；０．４６ｍｍｏｌ）。粗製物を分取ＨＰＬＣを介して精製した。８７．０ｍｇの所望の生成物を得た。

別の態様によると、本発明は、式Ａの化合物と１つまたは複数の抗うつ剤、抗精神病薬、精神刺激薬、向知性薬または天然物との組合せが、行動療法、ＴＭＳ（経頭蓋磁気刺激）、ＥＣＴ（電気痙攣療法）または他の治療に加えて使用されることを特徴とする、先行する態様のいずれか１つによる１つまたは複数の抗うつ剤、抗精神病薬、精神刺激薬、向知性薬または天然物を用いた処置に加えて投与される、式Ａの化合物を提供する。
本発明のまた別の態様は、以下のとおりであってもよい。
〔１〕式Ａの化合物。

A
（式中、
Ｒ ¹ は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、Ｈ ₃ Ｃ－ＣＨ ₂ －ＣＨ ₂ －ＣＨ ₂ －、シクロブチルを表し；
Ｒ ² は、フルオロ、クロロ、メチル、エチル、シクロプロピルからなる群から選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよいフェニルを表す）
〔２〕Ｒ ¹ が、メチル、エチルを表し；
Ｒ ² が、

を表す、前記〔１〕に記載の化合物。
〔３〕 下記：

からなる群から選択される化合物である、前記〔１〕または〔２〕のいずれか１項に記載の（Ｓ）－エナンチオマー。
〔４〕前記〔１〕～〔３〕のいずれか１項に記載の化合物の、薬学的に許容される塩。
〔５〕医薬として使用するための、前記〔１〕～〔４〕のいずれか１項に記載の化合物。
〔６〕双極Ｉ型障害うつ病状態、軽躁状態、躁状態、および混合状態；双極ＩＩ型障害；抑うつ病性障害；不安性の苦痛、混合性の特徴、メランコリアの特徴、非定型の特徴、気分に一致する精神病性の特徴、気分に一致しない精神病性の特徴、緊張病を同時に伴うまたは伴わない大うつ病性障害の処置および／または予防において使用するための、前記〔１〕～〔４〕のいずれか１項に記載の化合物。
〔７〕単一抑うつエピソードまたは反復性大うつ病性障害、小うつ病性障害、産後発症の抑うつ病性障害、精神病症状を伴う抑うつ病性障害の処置および／または予防において使用するための、前記〔１〕～〔４〕のいずれか１項に記載の化合物。
〔８〕別の抗うつ剤を用いた処置に加えて投与されることを特徴とする、前記〔５〕～〔７〕のいずれか１項に記載の使用するための化合物。
〔９〕行動療法に加えて投与されることを特徴とする、前記〔５〕～〔７〕のいずれか１項に記載の使用するための化合物。
〔１０〕薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤および／または担体と混合された、前記〔１〕～〔４〕のいずれか１項に記載の化合物を含む医薬組成物。

Claims (10)

1. 式Ａの化合物。
   

   

   A
   （式中、
   Ｒ¹は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、Ｈ₃Ｃ－ＣＨ₂－ＣＨ₂－ＣＨ₂－、シクロブチルを表し；
   Ｒ²は、フルオロ、クロロ、メチル、エチル、シクロプロピルからなる群から選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよいフェニルを表す）
2. Ｒ¹が、メチル、エチルを表し；
   Ｒ²が、
   

   

   を表す、請求項１に記載の化合物。
3. 

   

   

   からなる群から選択される化合物である、請求項１または２のいずれか１項に記載の（Ｓ）－エナンチオマー。
4. 請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物の、薬学的に許容される塩。
5. 医薬として使用するための、請求項１～４のいずれか１項に記載の化合物。
6. 双極Ｉ型障害うつ病状態、軽躁状態、躁状態、および混合状態；双極ＩＩ型障害；抑うつ病性障害；不安性の苦痛、混合性の特徴、メランコリアの特徴、非定型の特徴、気分に一致する精神病性の特徴、気分に一致しない精神病性の特徴、緊張病を同時に伴うまたは伴わない大うつ病性障害の処置および／または予防において使用するための、請求項１～４のいずれか１項に記載の化合物。
7. 単一抑うつエピソードまたは反復性大うつ病性障害、小うつ病性障害、産後発症の抑うつ病性障害、精神病症状を伴う抑うつ病性障害の処置および／または予防において使用するための、請求項１～４のいずれか１項に記載の化合物。
8. 別の抗うつ剤を用いた処置に加えて投与されることを特徴とする、請求項５～７のいずれか１項に記載の使用するための化合物。
9. 行動療法に加えて投与されることを特徴とする、請求項５～７のいずれか１項に記載の使用するための化合物。
10. 薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤および／または担体と混合された、請求項１～４のいずれか１項に記載の化合物を含む医薬組成物。