JP2022153421A - 細胞培養方法 - Google Patents
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Abstract
Description
過去30年にわたって、多くの努力が細胞培養と組換えポリペプチド発現の基本パラメータを確立するために捧げられ、細胞培養培地の組成の変化を通して最適な細胞増殖への到達(Hecklau C.、et al.J Biotech 218(2016)53-63;Zang Li.et al.Anal.Chem 83(2011)5422-5430参照)及び操作条件、及び大型バイオリアクターの開発に多くの研究の焦点が絞られてきた。
以下の特定の実施態様は、以下に番号付けされるように説明される:
a.培地で組換えタンパク質を産生できる宿主細胞を培養する;
b.産生段階を通じて培養を進行させる、ここで組換えタンパク質が前記細胞によって産生され、前記産生段階中に、培養物が
・産生される組換えタンパク質の予想される総量の10重量%~30重量%の総量までのシステイン又はシスチン;及び/又は
・産生される組換えタンパク質の予想される総量の8重量%~35重量%の総量までのトリプトファン、
で補充される;及び
c.任意に、細胞培養培地から組換えタンパク質を回収する。
a.培地で組換えタンパク質を産生できる宿主細胞を培養する;
b.産生段階を通じて培養を進行させる、ここで組換えタンパク質が前記細胞によって産生され、前記産生段階中に、培養物が
・産生される組換えタンパク質の総量の10重量%~30重量%の総量までのシステイン又はシスチン;及び/又は
・産生される組換えタンパク質の総量の8重量%~35重量%の総量までのトリプトファン、で補充される;及び
c.任意に、細胞培養培地から組換えタンパク質を回収する。
a.産生段階の開始時に、
b.産生段階中の任意の時点で1回又は複数回、
c.産生段階中の継続的な添加を通して、又は
d.a.、b.及びc.の任意の組み合わせで
添加することにより達成される、先行する実施態様のいずれか一項に記載の方法。
実施態様8:システイン又はシスチン及び/又はトリプトファンが、産生段階中の毎日の添加により提供される、先行する実施態様のいずれか一項に記載の方法。
・培養物中のシステイン又はシスチンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の10重量%~30%である;及び/又は
・培養物中のトリプトファンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の8重量%~35%である、先行する実施態様のいずれか一項に記載の方法。
・培養物中のシステイン又はシスチンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の10重量%~30%である;及び/又は
・培養物中のトリプトファンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の8重量%~35%である、先行する実施態様のいずれか一項に記載の方法。
・培養物中のシステイン又はシスチンの量が、産生される組換えタンパク質の量の10重量%~30%である;及び/又は
・培養物中のトリプトファンの量が、産生される組換えタンパク質の量の8重量%~35%である、先行する実施態様のいずれか一項に記載の方法。
・培養物中のシステイン又はシスチンの量が、産生される組換えタンパク質の量の10重量%~30%である;及び/又は
・培養物中のトリプトファンの量が、産生される組換えタンパク質の量の8重量%~35%である、先行する実施態様のいずれか一項に記載の方法。
1)a.配列番号1で定義される配列を有するCDR-H1;配列番号2で定義される配列を有するCDR-H2;配列番号3で定義される配列を有するCDR-H3;配列番号4で定義される配列を有するCDR-L1;配列番号5で定義される配列を有するCDR-L2及び配列番号6で定義される配列を有するCDR-L3を含む抗体又はその抗原結合断片;又は
b.配列番号7で定義される配列を有する軽可変領域と、配列番号8で定義される配列を有する重可変領域とを含む抗体又はその抗原結合断片;又は
c.配列番号7で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する軽可変領域と、配列番号8で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する重可変領域とを含む抗体又はその抗原結合断片;
d.配列番号7で定義される配列を有する軽可変領域と、配列番号11で定義される配列を有する重鎖とを含む抗体又はその抗原結合断片;又は
e.配列番号7で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する軽可変領域と、配列番号11で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する重鎖とを含む抗体又はその抗原結合断片;又は
2)配列番号9で定義される配列を有する軽鎖と配列番号10で定義される配列を有する重鎖とを含む抗体;又は
3)配列番号9で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する軽鎖と、配列番号10で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する重鎖とを含む抗体。
a.電荷の不均質、好ましくは酸性ピーク群(APG)を減少させること;及び/又は
b.アミノ酸酸化、異性化、断片化、他の共有結合付加物糖化、脱アミド、システイニル化を減少させること;及び/又は
c.例えば組換えタンパク質の異なるバッチ間で、色又は色の強度を減少させること;及び/又は
d.高分子量種(HMWS)を減少させること;及び/又は
e.組換えタンパク質不安定性を減少させること、
を含む、先行する実施態様のいずれか一項に記載の方法。
a.培地中に組換えタンパク質を産生できる宿主細胞を培養する;
b.産生段階を通じて培養を進行させる、ここで組換えタンパク質は細胞によって産生され、細胞培養培地はシステイン又はシスチン及び/又はトリプトファンで補充されており、ここで
・方法中に提供されたシステイン又はシスチンの総量は、2.9~7g/(1012細胞)、例えば、5.6~7g/(1012細胞)である、ここで細胞は、産生段階の終了時に予想される積分生細胞数を指す、及び/又は
・方法中に提供されたトリプトファンの総量は、2.5~3.5g/(1012細胞)である、ここで、細胞は、産生段階の終了時に予想される積分生細胞数を指す、及び
c.任意に、細胞培養培地から組換えタンパク質を回収する、
を含む、上記方法。
a.培地中に組換えタンパク質を産生できる宿主細胞を培養するステップ;
b.産生段階を通じて培養を進行させるステップ、ここで組換えタンパク質は細胞によって産生され、細胞培養培地はシステイン又はシスチン及び/又はトリプトファンで補充されており、ここで
・方法中に提供されたシステイン又はシスチンの総量は、2.9~7g/(1012細胞)、例えば、5.6~7g/(1012細胞)である、ここで細胞は、産生段階の終了時での積分生細胞数である、及び/又は
・方法中に提供されたトリプトファンの総量は、2.5~3.5g/(10個の12細胞)である、ここで、細胞は、産生段階の終了時での積分生細胞数である、及び
c.任意に、細胞培養培地から組換えタンパク質を回収するステップ、
を含む、上記方法。
a.システイン又はシスチン及び/又は
b.トリプトファン
の総量を制限することを含む、組換え宿主細胞により産生段階において産生されるバッチ中の組換えタンパク質の集団の不均質を減少させる方法。
本発明は、組換えタンパク質製造方法における産生段階中の細胞培養培地中で使用されるシステイン又はシスチン及び/又はトリプトファンの総量使用を制限することにより、産生される組み換えタンパク質の不均質を減少させるという知見に基づいている。従って、本発明は培地中で発現される抗体又はその抗原結合断片の不均質を減少させるための細胞培養培地における限られた量のシステイン又はシスチン及び/又はトリプトファンの使用を開示する。
a.電荷、好ましくは酸性ピーク群(APG)不均質;及び/又は
b.アミノ酸酸化、異性化、断片化、他の共有結合付加物糖化、脱アミド、システイニル化;及び/又は
c.色又は色の強度(40mg/mLに正規化されたb*値);及び/又は
d.高分子量種(HMWS)の形成;及び/又は
e.組換えタンパク質での安定性,及び/又は
f.それらの組み合わせ。
a.培地で組換えタンパク質を産生できる宿主細胞を培養する;
b.前記産生段階を通じて培養を進行させる、ここで組換えタンパク質が前記細胞によって産生され、前記産生段階中に、培養物が
a.産生される組換えタンパク質の予想される総量の10重量%~30重量%の総量までのシステイン又はシスチン;及び/又は
b.産生される組換えタンパク質の予想される総量の8重量%~35重量%の総量までのトリプトファン、
で補充される;及び
c.任意に、細胞培養培地から組換えタンパク質を回収する。
1.システイン;又は
2.シスチン;又は
3.システイン及びシスチン;又は
4.システイン及びトリプトファン;又は
5.シスチン及びトリプトファン;又は
6.システイン、シスチン、及びトリプトファン;又は
7.トリプトファン。
a.産生段階の開始時に、
b.産生段階中の任意の時点で1回又は複数回、
c.産生段階中の継続的な添加を通して、又は
d.a.、b.及びc.の任意の組み合わせで
添加することにより達成される。
・培養物中のシステイン又はシスチンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の10重量%~30%である;及び/又は
・培養物中のトリプトファンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の8重量%~35%である。
・培養物中のシステイン又はシスチンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の10重量%~30%である;及び/又は
・培養物中のトリプトファンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の8重量%~35%である。
a.培地で組換えタンパク質を産生できる宿主細胞を培養する;
b.産生段階を通じて培養を進行させる、ここで組換えタンパク質が前記細胞によって産生され、前記細胞培養培地がシステイン又はシスチン及び/又はトリプトファンで補充され、ここで
・方法中に提供されるシステイン又はシスチンの総量が2.9~7g/(1012細胞)、例えば5.6~7g/(1012細胞)であり、ここで細胞は、産生段階の終了時に予想される積分生細胞数を指す、及び/又は
・方法中に提供されるトリプトファンの総量が2.5~3.5g/(1012細胞)であり、ここで細胞は、産生段階の終了時に予想される積分生細胞数を指す、及び
c.任意に、細胞培養培地から組換えタンパク質を回収する。
a.産生段階の開始時に、
b.産生段階中の任意の時点で1回又は複数回、
c.産生段階中の継続的な添加を通して、又は
d.a.、b.及びc.の任意の組み合わせで
添加することにより達成される。
a.細胞培養培地中のシステイン又はシスチンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の10重量%~30%である;及び/又は
b.細胞培養培地中のトリプトファンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の8重量%~35%である。
a.システイン又はシスチンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の10重量%~30%である;及び/又は
b.トリプトファンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の8重量%~35%である。
a.電荷の不均質、好ましくは酸性ピーク群(APG)を減少させること;及び/又は
b.アミノ酸酸化、異性化、断片化、他の共有結合付加物糖化、脱アミド、システイニル化を減少させること;及び/又は
c.例えば組換えタンパク質の異なるバッチ間で、色又は色の強度を減少させること;及び/又は
d.高分子量種(HMWS)を減少させること;及び/又は
e.組換えタンパク質不安定性を減少させること、
を含む。
a.システイン又はシスチン及び/又は
b.トリプトファン
の総量を制限することを含む、組換え宿主細胞により産生段階において産生されるバッチ中の組換えタンパク質の集団の不均質を減少させる方法に関する。
a.培地で組換えタンパク質を産生できる宿主細胞を培養する;
b.産生段階を通じて培養を進行させる、ここで組換えタンパク質が前記細胞によって産生され、前記産生段階中に、培養物が
・産生される組換えタンパク質の予想される総量の10重量%~30重量%の総量までのシステイン又はシスチン;及び/又は
・産生される組換えタンパク質の予想される総量の8重量%~35重量%の総量までのトリプトファン、
で補充される;及び
c.任意に、細胞培養培地から組換えタンパク質を回収する。
a.産生段階の開始時に、
b.産生段階中の任意の時点で1回又は複数回、
c.産生段階中の継続的な添加を通して、又は
d.a.、b.及びc.の任意の組み合わせで
添加することにより達成される。
・培養物中のシステイン又はシスチンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の10重量%~30%である;及び/又は
・培養物中のトリプトファンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の8重量%~35%である。
・培養物中のシステイン又はシスチンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の10重量%~30%である;及び/又は
・培養物中のトリプトファンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の8重量%~35%である。
a.電荷の不均質、好ましくは酸性ピーク群(APG);及び/又は
b.アミノ酸酸化、異性化、断片化、他の共有結合付加物糖化、脱アミド、システイニル化;及び/又は
c.例えば組換えタンパク質の異なるバッチ間の、色又は色の強度;及び/又は
d.高分子量種(HMWS);及び/又は
e.組換えタンパク質不安定性、
を減少させることを含む。
1)a.配列番号1で定義される配列を有するCDR-H1;配列番号2で定義される配列を有するCDR-H2;配列番号3で定義される配列を有するCDR-H3;配列番号4で定義される配列を有するCDR-L1;配列番号5で定義される配列を有するCDR-L2及び配列番号6で定義される配列を有するCDR-L3を含む抗体又はその抗原結合断片;又は
b.配列番号7で定義される配列を有する軽可変領域と、配列番号8で定義される配列を有する重可変領域とを含む抗体又はその抗原結合断片;又は
c.配列番号7で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する軽可変領域と、配列番号8で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する重可変領域とを含む抗体又はその抗原結合断片;
d.配列番号7で定義される配列を有する軽可変領域と、配列番号11で定義される配列を有する重鎖とを含む抗体又はその抗原結合断片;又は
e.配列番号7で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する軽可変領域と、配列番号11で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する重鎖を含む抗体又はその抗原結合断片;又は
2)配列番号9で定義される配列を有する軽鎖と配列番号10で定義される配列を有する重鎖とを含む抗体;又は
3)配列番号9で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する軽鎖と、配列番号10で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する重鎖とを含む抗体。
組換えタンパク質、抗体又はその抗原結合断片は、好ましくは哺乳動物宿主細胞、最も好ましくはチャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞を培養することにより産生され得る。
本発明の方法は、例えば、糖タンパク質及び多量体タンパク質だけでなく、重要な三次構造を有するペプチド又はより大きなタンパク質を例えば含む、あらゆる種類の組換えポリペプチド又はタンパク質を産生するために使用できる。しかし、好ましくは、本発明の方法で産生される組換えタンパク質は、抗体又はその抗原結合断片である。本明細書で使用される「抗体」(単数又は複数)という用語は、例えば、モノクローナル抗体及びポリクローナル抗体の両方、並びに単一特異性抗体、及び二重特異性抗体などの多重特異性抗体の両方を含む。
1)a.配列番号1で定義される配列を有するCDR-H1;配列番号2で定義される配列を有するCDR-H2;配列番号3で定義される配列を有するCDR-H3;配列番号4で定義される配列を有するCDR-L1;配列番号5で定義される配列を有するCDR-L2及び配列番号6で定義される配列を有するCDR-L3を含む抗体又はその抗原結合断片;又は
b.配列番号7で定義される配列を有する軽可変領域と、配列番号8で定義される配列を有する重可変領域とを含む抗体又はその抗原結合断片;又は
c.配列番号7で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する軽可変領域と、配列番号8で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する重可変領域とを含む抗体又はその抗原結合断片;
d.配列番号7で定義される配列を有する軽可変領域と、配列番号11で定義される配列を有する重鎖とを含む抗体又はその抗原結合断片;又は
e.配列番号7で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する軽可変領域と、配列番号11で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する重鎖を含む抗体又はその抗原結合断片;又は
2)配列番号9で定義される配列を有する軽鎖と配列番号10で定義される配列を有する重鎖とを含む抗体;又は
3)配列番号9で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する軽鎖と、配列番号10で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する重鎖とを含む抗体。
a.培地で抗体又はその抗原結合断片を産生できるCHO細胞を培養する;
b.抗体又はその抗原結合断片が細胞によって産生される産生段階を通じて培養を進行させる、ここで、前記産生段階の間に、培養物は、産生される抗体又はその抗体結合断片の予想される総量の10重量%~30重量%の総量までシステイン又はシスチンで補充される、及び
c.任意に、細胞培養培地から抗体又はその抗原結合断片を回収する、
ここで、方法中に提供されるシステイン又はシスチンの総量は、2.9~12g/(1012細胞)、例えば2.9~7g/(1012細胞)、例えば5.6~7g/(1012細胞)である、ここで細胞は産生段階の終了時に予想される積分生細胞数を意味する、
ここで、システイン又はシスチンは、産生段階で毎日添加することにより提供される、
ここで、細胞培養培地中のシステイン又はシスチン濃度は、産生段階のいずれの時点でも0.9g/Lを超えず、好ましくは、細胞培養培地中のシステイン又はシスチン濃度は、産生段階のいずれの時点でも0.3g/Lを超えない、
ここで、前記抗体又はその抗原結合断片は、好ましくは:
1)配列番号1で定義される配列を有するCDR-H1;配列番号2で定義される配列を有するCDR-H2;配列番号3で定義される配列を有するCDR-H3;配列番号4で定義される配列を有するCDR-L1;配列番号5で定義される配列を有するCDR-L2及び配列番号6で定義される配列を有するCDR-L3を含む;又は
2)配列番号7で定義される配列を有する軽可変領域と、配列番号8で定義される配列を有する重可変領域とを含む。
a.培地で抗体又はその抗原結合断片を産生できるCHO細胞を培養する;
b.抗体又はその抗原結合断片が細胞によって産生される産生段階を通じて培養を進行させる、ここで、前記産生段階の間に、細胞培養培地が
・産生される抗体又はその抗原結合断片の予想される総量の10重量%~30重量%の総量までのシステイン又はシスチン;及び/又は
・産生される抗体又はその抗原結合断片の予想される総量の8重量%~35重量%の総量までのトリプトファン
で補充される、及び
c.任意に、細胞培養培地から抗体又はその抗原結合断片を回収する、
ここで、方法中に提供されるシステイン又はシスチンの総量は、2.9~12g/(1012細胞)、例えば2.9~7g/(1012細胞)、例えば5.6~7g/(1012細胞)であり、細胞は産生段階の終了時に予想される積分生細胞数を意味し、
ここで、方法中に提供されるトリプトファンの総量は、2.5~7g/(1012細胞)、例えば2.5~3.5g/(1012個/L)であり、ここで、細胞は産生段階の終了で予想される積分生細胞数を意味し、
ここで、システイン又はシスチン及び/又はトリプトファンは、産生段階での毎日の添加により提供され、
ここで、細胞培養培地中のシステイン又はシスチン濃度は、産生段階中のいずれの時点でも0.9g/Lを超えず、好ましくは、細胞培養培地中のシステイン又はシスチン濃度は、産生段階中のいずれの時点でも0.3g/Lを超えない、
ここで、細胞培養中のトリプトファン濃度は、産生段階のどの時点でも0.6g/L 培地を超えない、好ましくは、細胞培養培地のトリプトファン濃度は、産生中の任意の時点で0.3g/Lを超えない段階、及び
ここで、前記抗体又はその抗原結合断片は、好ましくは:
1)配列番号1で定義される配列を有するCDR-H1;配列番号2で定義される配列を有するCDR-H2;配列番号3で定義される配列を有するCDR-H3;配列番号4で定義される配列を有するCDR-L1;配列番号5で定義される配列を有するCDR-L2及び配列番号6で定義される配列を有するCDR-L3;又は
2)配列番号7で定義される配列を有する軽可変領域と、配列番号8で定義される配列を有する重可変領域とを含む。
mAb:モノクローナル抗体;MFCS:マルチ発酵制御システム;Cys:システイン又はシスチン;Trp:トリプトファン
細胞株、細胞培養及び実験手順
CHO-DG44細胞株を使用した。マルチ発酵制御システム(Sartorius Stedim Biotech)によって制御される供給塔(C‐DCUII、Sartorius Stedim Biotech)を備えた2L攪拌タンクガラス製バイオリアクター中で、シスチン(0.05g/L)及びトリプトファン(0.2g/L)を含有する化学的に定義される動物フリーの接種培地で、標準的な操作条件(pH7、温度36.8°C)の下、細胞を培養した。それぞれがmAb1、mAb2、mAb3及びmAb4と呼ばれるモノクローナル抗体(mAb)を産生する4つの異なる産生細胞株を使用した。mAb1は、配列番号9で定義される配列を有する軽鎖と配列番号10で定義される配列を有する重鎖を含む抗FcRn抗体である。
細胞は、トリパンブルー排除に基づいて作動するVI‐CELL(登録商標)XR(Beckman‐Coulter,Inc.,Brea,CA)自動細胞計数装置を使用して計数した。
NOVA400BioProfile自動分析装置(Nova Biomedical,Waltham,MA)を使用して、培養培地中のグルコース及び乳酸レベルを測定した。
製品力価分析は、ForteBio Octetモデルアナライザー(ForteBio,Inc.,Menlo Park、CA)又はプロテインA高圧液体クロマトグラフィー(HPLC)を使用して、分析前に-80°Cで保存した細胞培養上清サンプルで行った。
2リットルのバイオリアクターに、0.35×106細胞/mLの播種密度でmAb1を産生するCHO細胞を接種した。細胞培養を通して到達されたシステイン又はシスチン及びトリプトファンのさまざまな最大濃度、及び産生された総mAb1重量のシステイン又はシスチン(Cys)及びトリプトファン(Trp)重量%のさまざまな総量で、材料と方法のセクションに記載されているように8つの実験条件を流加プロセスでテストした(表2a)。第一の目的は、システイン又はシスチン及びトリプトファンの組換えmAb1の不均質への影響を評価することであった。第二の目的は、細胞培養を通じて到達された高濃度のシステイン又はシスチン及び/又はトリプトファンによる、及び/又は産生された総mAb重量の総添加量重量%による影響があったかどうかを識別することであった。
mAb1の色強度に対して、mAb1色強度(40mg/mLに正規化されたb*値)の増加と産生された総mAb1あたり添加されたトリプトファンの総量重量%(g/g)の増加との間に相関があった(図2a)。
産生された総組み換えmAb1のCys及びTrpの添加総量重量%(g/g)は、mAb1電荷変異体との色強度に影響を与える。これに反して、細胞培養培地中のシステイン又はシスチン及びトリプトファンの最大濃度は、mAb1の質に影響しなかった。
細胞培養中の、産生される総mAbのシステイン又はシスチン及びトリプトファンの総量重量%(g/g)の影響をさらに調べるために、2Lバイオリアクター実行で48の実験条件(表3)を方法のセクションで記載するように準備した。mAb1電荷変異体、凝集体(HMWS)、色強度、力価、及び生細胞増殖を分析した。
組換えモノクローナル抗体は、材料及び方法で説明されているように、産生された総組換えmAb1のさまざまなシステイン又はシスチン及びトリプトファンの総添加量重量%での3回の流加実験条件で特徴付けられる(表4)。
mAb1を発現するDG44 CHO細胞株の増殖に対するシステイン又はシスチン及びトリプトファンの阻害濃度を識別するために、3日目にシステイン又はシスチン及びトリプトファンの種々のボーラス添加を、これらのアミノ酸の高濃度に到達する目的で試験した(表2b)。産生される総mAb1重量の同じ添加量重量%のシステイン又はシスチン及びトリプトファンを得るために、フィード戦略を適合させた。図12は、それぞれ0.3g/Lから0.9g/Lまで及び0.6g/Lの高濃度のシステイン又はシスチン及びトリプトファンが著しく細胞増殖を減少させることを示す(CSVにより正規化された14日の産生段階を通しての累積IVCC)。
システイン又はシスチンの枯渇は、mAb1を発現するCHO細胞株の増殖と産生性に影響を与える可能性があるという仮説が立てた。2Lバイオリアクター中の9の実験条件を分析した(表6a):産生段階プロセスを通じてシステイン又はシスチンの枯渇のない3つの対照条件、6日目に毎日の枯渇を開始し、流加産生プロセスの終了まで6.87g/Lのフィードでシステイン又はシスチン濃度を継続する2つの実験条件、及び6日目にシステイン又はシスチンを枯渇させ、フィード中17.17g/Lのシステイン又はシスチン濃度を有する4つの実験条件である。システイン又はシスチンが毎日添加されるため、枯渇は周期的である。フィード戦略は表6bに記載されている。システイン又はシステインの添加総量及びIVCCごとのシステイン又はシステインの添加総量図13に示す。フィード添加前のCys濃度を図14cに示す。図14aに示すように、フィード中のシステイン又はシスチン濃度が約17.17g/Lである場合、6日目のシステイン又はシスチンの枯渇は細胞増殖に影響を与えない。理論に縛られることを望まないが、システイン又はシスチン関連の代謝物は細胞内に蓄積及び保存され、システイン又はシスチンが枯渇すると利用可能になると考えられる。ただし、mAb1の細胞株の産生性は、システイン又はシステインの枯渇の影響を受ける(図14b)。
総組換えmAbの産生段階を通して添加されたシステイン又はシスチン及びトリプトファンの総量重量%を制御することによって引き起こされる不均質の減少の影響は、mAb1を排除するものではない。システイン又はシスチン及びトリプトファンの総量についての実験は、組換え抗体も産生する他の三つのCHO細胞株でテストした(表7)。図15aに示すように、APG電荷変異体と色強度の増加は、総mAb2の添加されたシステイン又はシスチン及びトリプトファンの総量重量%の増加と相関している。mAb3のAPG電荷変異体を分析すると、同様の結果が得られた(15b)。最後に、APG及びBPG電荷変異体の増加とメインピークの減少は、総mAb4のシステイン又はシスチン及びトリプトファンの総量重量%の増加と相関した(15c)。これらの結果はmAb1について得られた結果を確認するものである。
産生された総組換えmAb重量の14日の産生を通して添加されたシステイン又はシスチン及びトリプトファンの総量重量%の影響を、ここでテストした4つの異なるモノクローナル抗体のデータに基づいて分析した(表3及び7)。図16(a及びb)に示すように、APG電荷変異体増加は、分析したすべての4つの抗体について、産生された組換え抗体総重量の添加されたシステイン又はシスチン及びトリプトファン総量重量%の増加に相関している。この結果は、産生された組換え抗体総重量の添加されたシステイン又はシスチン及びトリプトファン総量重量%と抗体の不均質との間の関係が、特異的な抗体に限定されず、任意の抗体に適用されることを確認するものである。
液体医薬製剤
モノクローナル抗体mAb1の医薬製剤を流加モードで大規模に、すなわち2000Lステンレススチールのバイオリアクター中で、材料及び方法に記載の標準操作条件下で、表9で特定されているように添加した、種々のシステイン又はシスチン及びトリプトファン総量を用いて製造した。抗体サンプルの緩衝液を透析濾過緩衝液(33mM His及び250mM Pro、pH5.6)と少なくとも7回(7透析体積)交換し、続いて、30kDaの分子量カットオフ(MWCO)を有する膜を使用して限外濾過を行った。抗体の濃度(140mg/ml+/-14mg/ml)が達成されたら、必要な濃度(最終濃度に基づいて0.03%w/v)でポリソルベート80を添加した。UVA280を使用して、抗体の濃度を測定した。
酸性ピーク群(APG)レベルを予測するモデルは、mAb1抗体を発現するDG44CHO細胞株のデータ(表3)に基づいて開発された(図17)。APGは、Michealis Menten速度論を用いて産生された総組換えmAb重量の14日の産生を通して重量%に添加されたシステイン又はシスチン及びトリプトファンの総量重量%の関数として表される。
Claims (35)
- 組換えタンパク質の製造方法であって、以下を含む方法:
a.培地で組換えタンパク質を産生できる宿主細胞を培養する;
b.産生段階を通じて培養を進行させる、ここで組換えタンパク質が前記細胞によって産生され、前記産生段階中に、培養物が
・産生される組換えタンパク質の予想される総量の10重量%~30重量%の総量までのシステイン又はシスチン;及び/又は
・産生される組換えタンパク質の予想される総量の8重量%~35重量%の総量までのトリプトファン、
で補充される;及び
c.任意に、細胞培養培地から組換えタンパク質を回収する。 - 培養物が産生される組換えタンパク質の予想される総量の12重量%~28重量%の総量まで、例えば産生される組換えタンパク質の予想される総量の、12重量%~25重量%、例えば12重量%~20重量%の総量までのシステイン又はシスチンで補充される、請求項1に記載の方法。
- 培養物が産生される組換えタンパク質の予想される総量の8重量%~30重量%の総量まで、例えば産生される組換えタンパク質の予想される総量の、8重量%~25重量%、例えば8重量%~20重量%の総量までのトリプトファンで補充される、請求項1又は2に記載の方法。
- 方法中に提供されるシステイン又はシスチンの総量が2.9~12g/(1012細胞)、例えば2.9~7g/(1012細胞)、例えば5.6~7g/(1012細胞)であり、ここで細胞は産生段階の終了時に予想される積分生細胞数を指す、請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。
- 方法中に提供されるトリプトファンの総量が2.5~7g/(1012細胞)、例えば2.5~3.5g/(1012細胞/L)であり、ここで細胞は産生段階の終了時に予想される積分生細胞数を指す、請求項1~4のいずれか一項に記載の方法。
- 培養物中のシステイン又はシスチン及び/又はトリプトファンの総量が、細胞培養培地にシステイン又はシスチン及び/又はトリプトファンを:
a.産生段階の開始時に、
b.産生段階中の任意の時点で1回又は複数回、
c.産生段階中の継続的な添加を通して、又は
d.a.、b.及びc.の任意の組み合わせで
添加することにより達成される、請求項1~5のいずれか一項に記載の方法。 - 前記方法が、流加プロセスなどのバッチプロセスである、請求項1~6のいずれか一項に記載の方法。
- システイン又はシスチン及び/又はトリプトファンが、産生段階中の毎日の添加により提供される、請求項1~7のいずれか一項に記載の方法。
- システイン又はシスチンを翌日に添加する前に、例えば、システイン又はシスチンの添加を5.6~7g/(1012細胞)のレベルに減少させることによって、培養物中のシステイン又はシスチンを枯渇させ、ここで前記細胞は産生段階の終了時に予想される積分生細胞数を指す、請求項8に記載の方法。
- 産生の後期段階中に、すなわち、細胞が既に最大生存細胞密度に達したとき、トリプトファンが翌日添加される前に、培養物中のトリプトファンを枯渇させる、請求項8又は9に記載の方法。
- 細胞培養培地中のシステイン又はシスチン濃度が産生段階中の任意の時点で0.9g/Lを超えない、好ましくは、細胞培養培地中のシステイン又はシスチン濃度が産生段階中の任意の時点で0.3g/Lを超えない、請求項1~10のいずれか一項に記載の方法。
- 細胞培養培地中のトリプトファン濃度が産生段階中の任意の時点で0.6g/Lを超えない、好ましくは、細胞培養培地中のトリプトファン濃度が産生段階中の任意の時点で0.3g/Lを超えない、請求項1~11のいずれか一項に記載の方法。
- 産生段階が少なくとも7日間、好ましくは少なくとも14日間、実施される方法。
- 産生段階の後半の任意の時点で:
・培養物中のシステイン又はシスチンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の10重量%~30%である;及び/又は
・培養物中のトリプトファンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の8重量%~35%である、請求項1~13のいずれか一項に記載の方法。 - 産生段階中の任意の時点で:
・培養物中のシステイン又はシスチンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の10重量%~30%である;及び/又は
・培養物中のトリプトファンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の8重量%~35%である、請求項1~14のいずれか一項に記載の方法。 - 前記宿主細胞は、哺乳動物細胞、好ましくはCHO細胞である、請求項1~15のいずれか一項に記載の方法。
- 組換えタンパク質は、抗体又はその抗原結合断片である、請求項1~16のいずれか一項に記載の方法。
- 抗体又はその抗原結合断片が以下である、請求項17に記載の方法:
1)a.配列番号1で定義される配列を有するCDR-H1;配列番号2で定義される配列を有するCDR-H2;配列番号3で定義される配列を有するCDR-H3;配列番号4で定義される配列を有するCDR-L1;配列番号5で定義される配列を有するCDR-L2及び配列番号6で定義される配列を有するCDR-L3を含む抗体又はその抗原結合断片;又は
b.配列番号7で定義される配列を有する軽可変領域と、配列番号8で定義される配列を有する重可変領域とを含む抗体又はその抗原結合断片;又は
c.配列番号7で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する軽可変領域と、配列番号8で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する重可変領域とを含む抗体又はその抗原結合断片;
d.配列番号7で定義される配列を有する軽可変領域と、配列番号11で定義される配列を有する重鎖とを含む抗体又はその抗原結合断片;又は
e.配列番号7で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する軽可変領域と、配列番号11で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する重鎖とを含む抗体又はその抗原結合断片;又は
2)配列番号9で定義される配列を有する軽鎖と配列番号10で定義される配列を有する重鎖とを含む抗体;又は
3)配列番号9で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する軽鎖と、配列番号10で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する重鎖とを含む抗体。 - 産生段階が、好ましくは50L以上、100L以上、500L以上、1000L以上、2000L以上、5000L以上、10000L以上、又は20,000L以上の容量のバイオリアクター中で行われる、クレーム1~18のいずれか一項に記載の方法。
- 方法は、組換えタンパク質を細胞培養培地から回収するステップ、及び組換えタンパク質を精製するさらなるステップを含む、請求項1~19のいずれか一項に記載の方法。
- 精製がプロテインAクロマトグラフィーを含む、請求項20に記載の方法。
- 精製された組換えタンパク質を製剤化するステップをさらに含む、請求項20又は21に記載の方法。
- 組換えタンパク質が、1つ以上のアミノ酸及び界面活性剤を含む液体製剤に製剤化される、請求項22に記載の方法。
- 製剤がヒスチジン及び/又はプロリンを含む、請求項23に記載の方法。
- 製剤が5mM~100mMの濃度で、例えば10mM~50mMの濃度でヒスチジンを、及び/又は100mM~500mMの濃度でプロリンを、5~7.4、例えば5~6.5、例えば5~6のpHで含む、請求項24に記載の方法。
- 製剤は、5.2~6.0のpHで、30mMの濃度でヒスチジンを、及び250mMの濃度でプロリンを含む、請求項25に記載の方法。
- 界面活性剤は、好ましくは、0.001%~0.1%(w/v)、例えば、0.005%~0.1%、例えば、0.01%~0.1%、たとえば0.01%~0.05%、例えば0.03%の濃度の、ポリソルベート80である、請求項23~26のいずれか一項に記載の方法。
- 組換えタンパク質が抗体であり、抗体が10mg/ml~250mg/ml、例えば20mg/ml~250mg/ml、例えば50mg/ml~250mg/ml、例えば、120mg/ml~160mg/ml、例えば140mg/mlの濃度で製剤化される、請求項23~27のいずれか一項に記載の方法。
- 前記方法は産生される組換えタンパク質の不均質を減少させるものであり、ここで前記不均質の減少とは
a.電荷の不均質、好ましくは酸性ピーク群(APG);及び/又は
b.アミノ酸酸化、異性化、断片化、他の共有結合付加物糖化、脱アミド、システイニル化;及び/又は
c.例えば組換えタンパク質の異なるバッチ間の、色又は色の強度;及び/又は
d.高分子量種(HMWS);及び/又は
e.組換えタンパク質不安定性、
を減少させることを含む、請求項1~28のいずれか一項に記載の方法。 - 組換えタンパク質を製造する方法であって、
a.培地中に組換えタンパク質を産生できる宿主細胞を培養する;
b.産生段階を通じて培養を進行させる、ここで組換えタンパク質は細胞によって産生され、細胞培養培地はシステイン又はシスチン及び/又はトリプトファンで補充されており、ここで
・方法中に提供されたシステイン又はシスチンの総量は、2.9~7g/(1012細胞)、例えば、5.6~7g/(1012細胞)である、ここで細胞は、産生段階の終了時に予想される積分生細胞数を指す、及び/又は
・方法中に提供されたトリプトファンの総量は、2.5~3.5g/(1012細胞)である、ここで、細胞は、産生段階の終了時に予想される積分生細胞数を指す、及び
c.任意に、細胞培養培地から組換えタンパク質を回収する、
を含む、上記方法。 - 方法が、請求項2~29のいずれか一項に記載のさらなる特徴の一つ以上を有する、請求項30に記載の方法。
- 組換えタンパク質の産生段階中の細胞培養培地中に存在する
a.システイン又はシスチン及び/又は
b.トリプトファン
の総量を制限することを含む、組換え宿主細胞により産生段階において産生されるバッチ中の組換えタンパク質の集団の不均質を減少させる方法。 - 前記方法は、請求項2~29のいずれか一項に記載のさらなる特徴の一つ以上を有する、請求項32に記載の方法。
- 請求項1から33のいずれか一項に記載の方法により得られ得る又は得られる組換えタンパク質調製物。
- 抗体を含む医薬組成物であって、該組成物が請求項23から28のいずれか一項に記載のさらなる特徴の1つ以上を有し、好ましくは抗体が請求項18に記載の抗体である、上記医薬組成物。
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Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2010508853A (ja) * | 2006-11-08 | 2010-03-25 | ワイス エルエルシー | 細胞培養のための合理的に設計された培地 |
JP2015514090A (ja) * | 2012-03-26 | 2015-05-18 | サノフイ | 安定なIgG4に基づく結合剤の製剤 |
JP2015525204A (ja) * | 2012-05-14 | 2015-09-03 | ユセベ ファルマ ソシエテ アノニム | 抗FcRn抗体 |
JP2016513478A (ja) * | 2013-03-15 | 2016-05-16 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 細胞培養培地及び抗体を産生する方法 |
WO2017194646A1 (en) * | 2016-05-12 | 2017-11-16 | Ucb Biopharma Sprl | Pharmaceutical composition |
JP2020521490A (ja) * | 2017-05-31 | 2020-07-27 | ユーシービー バイオファルマ エスアールエル | 細胞培養方法 |
Family Cites Families (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2218775B1 (en) | 1996-08-30 | 2015-01-28 | Life Technologies Corporation | Method for producing a polypeptide in vitro in mammalian cells in a protein-free and serum-free culture medium |
US8030027B2 (en) * | 2008-04-29 | 2011-10-04 | St. Jude Children's Research Hospital | Method for enhancing recombinant antibody production |
JP5749930B2 (ja) | 2008-10-28 | 2015-07-15 | 中外製薬株式会社 | ペプチド含有動物細胞培養用培地 |
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US8986957B2 (en) | 2010-04-26 | 2015-03-24 | Novartis Ag | Cell culture medium |
KR101828624B1 (ko) | 2010-04-26 | 2018-02-12 | 노파르티스 아게 | 개선된 세포 배양 방법 |
WO2012145682A1 (en) * | 2011-04-21 | 2012-10-26 | Amgen Inc. | A method for culturing mammalian cells to improve recombinant protein production |
WO2013158275A1 (en) * | 2012-04-20 | 2013-10-24 | Abbvie Inc. | Cell culture methods to reduce acidic species |
US20130281355A1 (en) | 2012-04-24 | 2013-10-24 | Genentech, Inc. | Cell culture compositions and methods for polypeptide production |
GB201208367D0 (en) * | 2012-05-14 | 2012-06-27 | Ucb Pharma Sa | Biological product |
US20170204362A1 (en) | 2014-06-18 | 2017-07-20 | Medimmune, Llc | Cell culture methods and media comprising n-acetylcysteine |
KR20170100074A (ko) | 2014-12-29 | 2017-09-04 | 완롭 위롯페이싯 | 상승된 전압 및 향상된 장착 방식을 구비한 엔진 연소시스템의 산소효율 증진장치 |
GB201508180D0 (en) * | 2015-05-13 | 2015-06-24 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
KR102425040B1 (ko) * | 2016-04-28 | 2022-07-25 | 메르크 파텐트 게엠베하 | 단백질 내 트리술파이드 수준을 감소시키기 위한 방법 |
WO2018018613A1 (zh) * | 2016-07-29 | 2018-02-01 | 广东东阳光药业有限公司 | 一种提高抗体纯度的细胞培养基和培养方法 |
-
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Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2010508853A (ja) * | 2006-11-08 | 2010-03-25 | ワイス エルエルシー | 細胞培養のための合理的に設計された培地 |
JP2015514090A (ja) * | 2012-03-26 | 2015-05-18 | サノフイ | 安定なIgG4に基づく結合剤の製剤 |
JP2015525204A (ja) * | 2012-05-14 | 2015-09-03 | ユセベ ファルマ ソシエテ アノニム | 抗FcRn抗体 |
JP2016513478A (ja) * | 2013-03-15 | 2016-05-16 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 細胞培養培地及び抗体を産生する方法 |
WO2017194646A1 (en) * | 2016-05-12 | 2017-11-16 | Ucb Biopharma Sprl | Pharmaceutical composition |
JP2020521490A (ja) * | 2017-05-31 | 2020-07-27 | ユーシービー バイオファルマ エスアールエル | 細胞培養方法 |
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