JP7460370B2 - 細胞培養方法 - Google Patents
細胞培養方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7460370B2 JP7460370B2 JP2019566198A JP2019566198A JP7460370B2 JP 7460370 B2 JP7460370 B2 JP 7460370B2 JP 2019566198 A JP2019566198 A JP 2019566198A JP 2019566198 A JP2019566198 A JP 2019566198A JP 7460370 B2 JP7460370 B2 JP 7460370B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cysteine
- cystine
- tryptophan
- antigen
- antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 title description 35
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 260
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 251
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 251
- LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N D-cystine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CSSC[C@@H](N)C(O)=O LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N 0.000 claims description 232
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 claims description 232
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 212
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 190
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims description 187
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 186
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 claims description 85
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 73
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 73
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 73
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 70
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 39
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 35
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 34
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 25
- 239000013628 high molecular weight specie Substances 0.000 claims description 23
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 21
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 21
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 20
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 18
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 13
- 238000010923 batch production Methods 0.000 claims description 11
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims description 8
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims description 8
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 claims description 8
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 8
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 8
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 claims description 8
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 7
- 230000006240 deamidation Effects 0.000 claims description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 7
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 claims description 6
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 claims description 6
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 claims description 6
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 claims description 6
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 5
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 claims description 5
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 claims description 5
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 claims description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 3
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 claims description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 151
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 151
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 141
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 32
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 29
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 18
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 12
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 12
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 10
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 9
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 9
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 description 9
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 9
- 101100476210 Caenorhabditis elegans rnt-1 gene Proteins 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 101100075829 Caenorhabditis elegans mab-3 gene Proteins 0.000 description 7
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 7
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 6
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 6
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 5
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 5
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 5
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 5
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 5
- 230000036252 glycation Effects 0.000 description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 5
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 230000002250 progressing effect Effects 0.000 description 3
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 2
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010205 computational analysis Methods 0.000 description 2
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 2
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 2
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 239000013627 low molecular weight specie Substances 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 2
- 238000012510 peptide mapping method Methods 0.000 description 2
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 2
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- VOZDNCFKGOLECZ-BTVCFUMJSA-N 2-hydroxypropanoic acid;(2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal Chemical compound CC(O)C(O)=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O VOZDNCFKGOLECZ-BTVCFUMJSA-N 0.000 description 1
- BYHQTRFJOGIQAO-GOSISDBHSA-N 3-(4-bromophenyl)-8-[(2R)-2-hydroxypropyl]-1-[(3-methoxyphenyl)methyl]-1,3,8-triazaspiro[4.5]decan-2-one Chemical compound C[C@H](CN1CCC2(CC1)CN(C(=O)N2CC3=CC(=CC=C3)OC)C4=CC=C(C=C4)Br)O BYHQTRFJOGIQAO-GOSISDBHSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 244000303258 Annona diversifolia Species 0.000 description 1
- 235000002198 Annona diversifolia Nutrition 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 241000251730 Chondrichthyes Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 241000282520 Papio Species 0.000 description 1
- 241001504519 Papio ursinus Species 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000012930 cell culture fluid Substances 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000009615 deamination Effects 0.000 description 1
- 238000006481 deamination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 239000012538 diafiltration buffer Substances 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical class CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- -1 for example Proteins 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 238000003500 gene array Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000013383 initial experiment Methods 0.000 description 1
- 239000012499 inoculation medium Substances 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 238000001139 pH measurement Methods 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 229940066779 peptones Drugs 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0018—Culture media for cell or tissue culture
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
- C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/32—Amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
- C12N2510/02—Cells for production
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2511/00—Cells for large scale production
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2523/00—Culture process characterised by temperature
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
過去30年にわたって、多くの努力が細胞培養と組換えポリペプチド発現の基本パラメータを確立するために捧げられ、細胞培養培地の組成の変化を通して最適な細胞増殖への到達(Hecklau C.、et al.J Biotech 218(2016)53-63;Zang Li.et al.Anal.Chem 83(2011)5422-5430参照)及び操作条件、及び大型バイオリアクターの開発に多くの研究の焦点が絞られてきた。
以下の特定の実施態様は、以下に番号付けされるように説明される:
a.培地で組換えタンパク質を産生できる宿主細胞を培養する;
b.産生段階を通じて培養を進行させる、ここで組換えタンパク質が前記細胞によって産生され、前記産生段階中に、培養物が
・産生される組換えタンパク質の予想される総量の10重量%~30重量%の総量までのシステイン又はシスチン;及び/又は
・産生される組換えタンパク質の予想される総量の8重量%~35重量%の総量までのトリプトファン、
で補充される;及び
c.任意に、細胞培養培地から組換えタンパク質を回収する。
a.培地で組換えタンパク質を産生できる宿主細胞を培養する;
b.産生段階を通じて培養を進行させる、ここで組換えタンパク質が前記細胞によって産生され、前記産生段階中に、培養物が
・産生される組換えタンパク質の総量の10重量%~30重量%の総量までのシステイン又はシスチン;及び/又は
・産生される組換えタンパク質の総量の8重量%~35重量%の総量までのトリプトファン、で補充される;及び
c.任意に、細胞培養培地から組換えタンパク質を回収する。
a.産生段階の開始時に、
b.産生段階中の任意の時点で1回又は複数回、
c.産生段階中の継続的な添加を通して、又は
d.a.、b.及びc.の任意の組み合わせで
添加することにより達成される、先行する実施態様のいずれか一項に記載の方法。
実施態様8:システイン又はシスチン及び/又はトリプトファンが、産生段階中の毎日の添加により提供される、先行する実施態様のいずれか一項に記載の方法。
・培養物中のシステイン又はシスチンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の10重量%~30%である;及び/又は
・培養物中のトリプトファンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の8重量%~35%である、先行する実施態様のいずれか一項に記載の方法。
・培養物中のシステイン又はシスチンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の10重量%~30%である;及び/又は
・培養物中のトリプトファンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の8重量%~35%である、先行する実施態様のいずれか一項に記載の方法。
・培養物中のシステイン又はシスチンの量が、産生される組換えタンパク質の量の10重量%~30%である;及び/又は
・培養物中のトリプトファンの量が、産生される組換えタンパク質の量の8重量%~35%である、先行する実施態様のいずれか一項に記載の方法。
・培養物中のシステイン又はシスチンの量が、産生される組換えタンパク質の量の10重量%~30%である;及び/又は
・培養物中のトリプトファンの量が、産生される組換えタンパク質の量の8重量%~35%である、先行する実施態様のいずれか一項に記載の方法。
1)a.配列番号1で定義される配列を有するCDR-H1;配列番号2で定義される配列を有するCDR-H2;配列番号3で定義される配列を有するCDR-H3;配列番号4で定義される配列を有するCDR-L1;配列番号5で定義される配列を有するCDR-L2及び配列番号6で定義される配列を有するCDR-L3を含む抗体又はその抗原結合断片;又は
b.配列番号7で定義される配列を有する軽可変領域と、配列番号8で定義される配列を有する重可変領域とを含む抗体又はその抗原結合断片;又は
c.配列番号7で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する軽可変領域と、配列番号8で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する重可変領域とを含む抗体又はその抗原結合断片;
d.配列番号7で定義される配列を有する軽可変領域と、配列番号11で定義される配列を有する重鎖とを含む抗体又はその抗原結合断片;又は
e.配列番号7で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する軽可変領域と、配列番号11で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する重鎖とを含む抗体又はその抗原結合断片;又は
2)配列番号9で定義される配列を有する軽鎖と配列番号10で定義される配列を有する重鎖とを含む抗体;又は
3)配列番号9で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する軽鎖と、配列番号10で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する重鎖とを含む抗体。
a.電荷の不均質、好ましくは酸性ピーク群(APG)を減少させること;及び/又は
b.アミノ酸酸化、異性化、断片化、他の共有結合付加物糖化、脱アミド、システイニル化を減少させること;及び/又は
c.例えば組換えタンパク質の異なるバッチ間で、色又は色の強度を減少させること;及び/又は
d.高分子量種(HMWS)を減少させること;及び/又は
e.組換えタンパク質不安定性を減少させること、
を含む、先行する実施態様のいずれか一項に記載の方法。
a.培地中に組換えタンパク質を産生できる宿主細胞を培養する;
b.産生段階を通じて培養を進行させる、ここで組換えタンパク質は細胞によって産生され、細胞培養培地はシステイン又はシスチン及び/又はトリプトファンで補充されており、ここで
・方法中に提供されたシステイン又はシスチンの総量は、2.9~7g/(1012細胞)、例えば、5.6~7g/(1012細胞)である、ここで細胞は、産生段階の終了時に予想される積分生細胞数を指す、及び/又は
・方法中に提供されたトリプトファンの総量は、2.5~3.5g/(1012細胞)である、ここで、細胞は、産生段階の終了時に予想される積分生細胞数を指す、及び
c.任意に、細胞培養培地から組換えタンパク質を回収する、
を含む、上記方法。
a.培地中に組換えタンパク質を産生できる宿主細胞を培養するステップ;
b.産生段階を通じて培養を進行させるステップ、ここで組換えタンパク質は細胞によって産生され、細胞培養培地はシステイン又はシスチン及び/又はトリプトファンで補充されており、ここで
・方法中に提供されたシステイン又はシスチンの総量は、2.9~7g/(1012細胞)、例えば、5.6~7g/(1012細胞)である、ここで細胞は、産生段階の終了時での積分生細胞数である、及び/又は
・方法中に提供されたトリプトファンの総量は、2.5~3.5g/(10個の12細胞)である、ここで、細胞は、産生段階の終了時での積分生細胞数である、及び
c.任意に、細胞培養培地から組換えタンパク質を回収するステップ、
を含む、上記方法。
a.システイン又はシスチン及び/又は
b.トリプトファン
の総量を制限することを含む、組換え宿主細胞により産生段階において産生されるバッチ中の組換えタンパク質の集団の不均質を減少させる方法。
本発明は、組換えタンパク質製造方法における産生段階中の細胞培養培地中で使用されるシステイン又はシスチン及び/又はトリプトファンの総量使用を制限することにより、産生される組み換えタンパク質の不均質を減少させるという知見に基づいている。従って、本発明は培地中で発現される抗体又はその抗原結合断片の不均質を減少させるための細胞培養培地における限られた量のシステイン又はシスチン及び/又はトリプトファンの使用を開示する。
a.電荷、好ましくは酸性ピーク群(APG)不均質;及び/又は
b.アミノ酸酸化、異性化、断片化、他の共有結合付加物糖化、脱アミド、システイニル化;及び/又は
c.色又は色の強度(40mg/mLに正規化されたb*値);及び/又は
d.高分子量種(HMWS)の形成;及び/又は
e.組換えタンパク質での安定性,及び/又は
f.それらの組み合わせ。
a.培地で組換えタンパク質を産生できる宿主細胞を培養する;
b.前記産生段階を通じて培養を進行させる、ここで組換えタンパク質が前記細胞によって産生され、前記産生段階中に、培養物が
a.産生される組換えタンパク質の予想される総量の10重量%~30重量%の総量までのシステイン又はシスチン;及び/又は
b.産生される組換えタンパク質の予想される総量の8重量%~35重量%の総量までのトリプトファン、
で補充される;及び
c.任意に、細胞培養培地から組換えタンパク質を回収する。
1.システイン;又は
2.シスチン;又は
3.システイン及びシスチン;又は
4.システイン及びトリプトファン;又は
5.シスチン及びトリプトファン;又は
6.システイン、シスチン、及びトリプトファン;又は
7.トリプトファン。
a.産生段階の開始時に、
b.産生段階中の任意の時点で1回又は複数回、
c.産生段階中の継続的な添加を通して、又は
d.a.、b.及びc.の任意の組み合わせで
添加することにより達成される。
・培養物中のシステイン又はシスチンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の10重量%~30%である;及び/又は
・培養物中のトリプトファンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の8重量%~35%である。
・培養物中のシステイン又はシスチンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の10重量%~30%である;及び/又は
・培養物中のトリプトファンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の8重量%~35%である。
a.培地で組換えタンパク質を産生できる宿主細胞を培養する;
b.産生段階を通じて培養を進行させる、ここで組換えタンパク質が前記細胞によって産生され、前記細胞培養培地がシステイン又はシスチン及び/又はトリプトファンで補充され、ここで
・方法中に提供されるシステイン又はシスチンの総量が2.9~7g/(1012細胞)、例えば5.6~7g/(1012細胞)であり、ここで細胞は、産生段階の終了時に予想される積分生細胞数を指す、及び/又は
・方法中に提供されるトリプトファンの総量が2.5~3.5g/(1012細胞)であり、ここで細胞は、産生段階の終了時に予想される積分生細胞数を指す、及び
c.任意に、細胞培養培地から組換えタンパク質を回収する。
a.産生段階の開始時に、
b.産生段階中の任意の時点で1回又は複数回、
c.産生段階中の継続的な添加を通して、又は
d.a.、b.及びc.の任意の組み合わせで
添加することにより達成される。
a.細胞培養培地中のシステイン又はシスチンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の10重量%~30%である;及び/又は
b.細胞培養培地中のトリプトファンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の8重量%~35%である。
a.システイン又はシスチンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の10重量%~30%である;及び/又は
b.トリプトファンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の8重量%~35%である。
a.電荷の不均質、好ましくは酸性ピーク群(APG)を減少させること;及び/又は
b.アミノ酸酸化、異性化、断片化、他の共有結合付加物糖化、脱アミド、システイニル化を減少させること;及び/又は
c.例えば組換えタンパク質の異なるバッチ間で、色又は色の強度を減少させること;及び/又は
d.高分子量種(HMWS)を減少させること;及び/又は
e.組換えタンパク質不安定性を減少させること、
を含む。
a.システイン又はシスチン及び/又は
b.トリプトファン
の総量を制限することを含む、組換え宿主細胞により産生段階において産生されるバッチ中の組換えタンパク質の集団の不均質を減少させる方法に関する。
a.培地で組換えタンパク質を産生できる宿主細胞を培養する;
b.産生段階を通じて培養を進行させる、ここで組換えタンパク質が前記細胞によって産生され、前記産生段階中に、培養物が
・産生される組換えタンパク質の予想される総量の10重量%~30重量%の総量までのシステイン又はシスチン;及び/又は
・産生される組換えタンパク質の予想される総量の8重量%~35重量%の総量までのトリプトファン、
で補充される;及び
c.任意に、細胞培養培地から組換えタンパク質を回収する。
a.産生段階の開始時に、
b.産生段階中の任意の時点で1回又は複数回、
c.産生段階中の継続的な添加を通して、又は
d.a.、b.及びc.の任意の組み合わせで
添加することにより達成される。
・培養物中のシステイン又はシスチンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の10重量%~30%である;及び/又は
・培養物中のトリプトファンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の8重量%~35%である。
・培養物中のシステイン又はシスチンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の10重量%~30%である;及び/又は
・培養物中のトリプトファンの量が、産生される組換えタンパク質の予想される量の8重量%~35%である。
a.電荷の不均質、好ましくは酸性ピーク群(APG);及び/又は
b.アミノ酸酸化、異性化、断片化、他の共有結合付加物糖化、脱アミド、システイニル化;及び/又は
c.例えば組換えタンパク質の異なるバッチ間の、色又は色の強度;及び/又は
d.高分子量種(HMWS);及び/又は
e.組換えタンパク質不安定性、
を減少させることを含む。
1)a.配列番号1で定義される配列を有するCDR-H1;配列番号2で定義される配列を有するCDR-H2;配列番号3で定義される配列を有するCDR-H3;配列番号4で定義される配列を有するCDR-L1;配列番号5で定義される配列を有するCDR-L2及び配列番号6で定義される配列を有するCDR-L3を含む抗体又はその抗原結合断片;又は
b.配列番号7で定義される配列を有する軽可変領域と、配列番号8で定義される配列を有する重可変領域とを含む抗体又はその抗原結合断片;又は
c.配列番号7で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する軽可変領域と、配列番号8で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する重可変領域とを含む抗体又はその抗原結合断片;
d.配列番号7で定義される配列を有する軽可変領域と、配列番号11で定義される配列を有する重鎖とを含む抗体又はその抗原結合断片;又は
e.配列番号7で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する軽可変領域と、配列番号11で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する重鎖を含む抗体又はその抗原結合断片;又は
2)配列番号9で定義される配列を有する軽鎖と配列番号10で定義される配列を有する重鎖とを含む抗体;又は
3)配列番号9で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する軽鎖と、配列番号10で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する重鎖とを含む抗体。
組換えタンパク質、抗体又はその抗原結合断片は、好ましくは哺乳動物宿主細胞、最も好ましくはチャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞を培養することにより産生され得る。
本発明の方法は、例えば、糖タンパク質及び多量体タンパク質だけでなく、重要な三次構造を有するペプチド又はより大きなタンパク質を例えば含む、あらゆる種類の組換えポリペプチド又はタンパク質を産生するために使用できる。しかし、好ましくは、本発明の方法で産生される組換えタンパク質は、抗体又はその抗原結合断片である。本明細書で使用される「抗体」(単数又は複数)という用語は、例えば、モノクローナル抗体及びポリクローナル抗体の両方、並びに単一特異性抗体、及び二重特異性抗体などの多重特異性抗体の両方を含む。
1)a.配列番号1で定義される配列を有するCDR-H1;配列番号2で定義される配列を有するCDR-H2;配列番号3で定義される配列を有するCDR-H3;配列番号4で定義される配列を有するCDR-L1;配列番号5で定義される配列を有するCDR-L2及び配列番号6で定義される配列を有するCDR-L3を含む抗体又はその抗原結合断片;又は
b.配列番号7で定義される配列を有する軽可変領域と、配列番号8で定義される配列を有する重可変領域とを含む抗体又はその抗原結合断片;又は
c.配列番号7で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する軽可変領域と、配列番号8で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する重可変領域とを含む抗体又はその抗原結合断片;
d.配列番号7で定義される配列を有する軽可変領域と、配列番号11で定義される配列を有する重鎖とを含む抗体又はその抗原結合断片;又は
e.配列番号7で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する軽可変領域と、配列番号11で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する重鎖を含む抗体又はその抗原結合断片;又は
2)配列番号9で定義される配列を有する軽鎖と配列番号10で定義される配列を有する重鎖とを含む抗体;又は
3)配列番号9で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する軽鎖と、配列番号10で定義される配列に対して少なくとも80%の同一性又は類似性、好ましくは90%の同一性又は類似性を有する重鎖とを含む抗体。
a.培地で抗体又はその抗原結合断片を産生できるCHO細胞を培養する;
b.抗体又はその抗原結合断片が細胞によって産生される産生段階を通じて培養を進行させる、ここで、前記産生段階の間に、培養物は、産生される抗体又はその抗体結合断片の予想される総量の10重量%~30重量%の総量までシステイン又はシスチンで補充される、及び
c.任意に、細胞培養培地から抗体又はその抗原結合断片を回収する、
ここで、方法中に提供されるシステイン又はシスチンの総量は、2.9~12g/(1012細胞)、例えば2.9~7g/(1012細胞)、例えば5.6~7g/(1012細胞)である、ここで細胞は産生段階の終了時に予想される積分生細胞数を意味する、
ここで、システイン又はシスチンは、産生段階で毎日添加することにより提供される、
ここで、細胞培養培地中のシステイン又はシスチン濃度は、産生段階のいずれの時点でも0.9g/Lを超えず、好ましくは、細胞培養培地中のシステイン又はシスチン濃度は、産生段階のいずれの時点でも0.3g/Lを超えない、
ここで、前記抗体又はその抗原結合断片は、好ましくは:
1)配列番号1で定義される配列を有するCDR-H1;配列番号2で定義される配列を有するCDR-H2;配列番号3で定義される配列を有するCDR-H3;配列番号4で定義される配列を有するCDR-L1;配列番号5で定義される配列を有するCDR-L2及び配列番号6で定義される配列を有するCDR-L3を含む;又は
2)配列番号7で定義される配列を有する軽可変領域と、配列番号8で定義される配列を有する重可変領域とを含む。
a.培地で抗体又はその抗原結合断片を産生できるCHO細胞を培養する;
b.抗体又はその抗原結合断片が細胞によって産生される産生段階を通じて培養を進行させる、ここで、前記産生段階の間に、細胞培養培地が
・産生される抗体又はその抗原結合断片の予想される総量の10重量%~30重量%の総量までのシステイン又はシスチン;及び/又は
・産生される抗体又はその抗原結合断片の予想される総量の8重量%~35重量%の総量までのトリプトファン
で補充される、及び
c.任意に、細胞培養培地から抗体又はその抗原結合断片を回収する、
ここで、方法中に提供されるシステイン又はシスチンの総量は、2.9~12g/(1012細胞)、例えば2.9~7g/(1012細胞)、例えば5.6~7g/(1012細胞)であり、細胞は産生段階の終了時に予想される積分生細胞数を意味し、
ここで、方法中に提供されるトリプトファンの総量は、2.5~7g/(1012細胞)、例えば2.5~3.5g/(1012個/L)であり、ここで、細胞は産生段階の終了で予想される積分生細胞数を意味し、
ここで、システイン又はシスチン及び/又はトリプトファンは、産生段階での毎日の添加により提供され、
ここで、細胞培養培地中のシステイン又はシスチン濃度は、産生段階中のいずれの時点でも0.9g/Lを超えず、好ましくは、細胞培養培地中のシステイン又はシスチン濃度は、産生段階中のいずれの時点でも0.3g/Lを超えない、
ここで、細胞培養中のトリプトファン濃度は、産生段階のどの時点でも0.6g/L 培地を超えない、好ましくは、細胞培養培地のトリプトファン濃度は、産生中の任意の時点で0.3g/Lを超えない段階、及び
ここで、前記抗体又はその抗原結合断片は、好ましくは:
1)配列番号1で定義される配列を有するCDR-H1;配列番号2で定義される配列を有するCDR-H2;配列番号3で定義される配列を有するCDR-H3;配列番号4で定義される配列を有するCDR-L1;配列番号5で定義される配列を有するCDR-L2及び配列番号6で定義される配列を有するCDR-L3;又は
2)配列番号7で定義される配列を有する軽可変領域と、配列番号8で定義される配列を有する重可変領域とを含む。
mAb:モノクローナル抗体;MFCS:マルチ発酵制御システム;Cys:システイン又はシスチン;Trp:トリプトファン
細胞株、細胞培養及び実験手順
CHO-DG44細胞株を使用した。マルチ発酵制御システム(Sartorius Stedim Biotech)によって制御される供給塔(C‐DCUII、Sartorius Stedim Biotech)を備えた2L攪拌タンクガラス製バイオリアクター中で、シスチン(0.05g/L)及びトリプトファン(0.2g/L)を含有する化学的に定義される動物フリーの接種培地で、標準的な操作条件(pH7、温度36.8°C)の下、細胞を培養した。それぞれがmAb1、mAb2、mAb3及びmAb4と呼ばれるモノクローナル抗体(mAb)を産生する4つの異なる産生細胞株を使用した。mAb1は、配列番号9で定義される配列を有する軽鎖と配列番号10で定義される配列を有する重鎖を含む抗FcRn抗体である。
細胞は、トリパンブルー排除に基づいて作動するVI‐CELL(登録商標)XR(Beckman‐Coulter,Inc.,Brea,CA)自動細胞計数装置を使用して計数した。
NOVA400BioProfile自動分析装置(Nova Biomedical,Waltham,MA)を使用して、培養培地中のグルコース及び乳酸レベルを測定した。
製品力価分析は、ForteBio Octetモデルアナライザー(ForteBio,Inc.,Menlo Park、CA)又はプロテインA高圧液体クロマトグラフィー(HPLC)を使用して、分析前に-80°Cで保存した細胞培養上清サンプルで行った。
2リットルのバイオリアクターに、0.35×106細胞/mLの播種密度でmAb1を産生するCHO細胞を接種した。細胞培養を通して到達されたシステイン又はシスチン及びトリプトファンのさまざまな最大濃度、及び産生された総mAb1重量のシステイン又はシスチン(Cys)及びトリプトファン(Trp)重量%のさまざまな総量で、材料と方法のセクションに記載されているように8つの実験条件を流加プロセスでテストした(表2a)。第一の目的は、システイン又はシスチン及びトリプトファンの組換えmAb1の不均質への影響を評価することであった。第二の目的は、細胞培養を通じて到達された高濃度のシステイン又はシスチン及び/又はトリプトファンによる、及び/又は産生された総mAb重量の総添加量重量%による影響があったかどうかを識別することであった。
mAb1の色強度に対して、mAb1色強度(40mg/mLに正規化されたb*値)の増加と産生された総mAb1あたり添加されたトリプトファンの総量重量%(g/g)の増加との間に相関があった(図2a)。
産生された総組み換えmAb1のCys及びTrpの添加総量重量%(g/g)は、mAb1電荷変異体との色強度に影響を与える。これに反して、細胞培養培地中のシステイン又はシスチン及びトリプトファンの最大濃度は、mAb1の質に影響しなかった。
細胞培養中の、産生される総mAbのシステイン又はシスチン及びトリプトファンの総量重量%(g/g)の影響をさらに調べるために、2Lバイオリアクター実行で48の実験条件(表3)を方法のセクションで記載するように準備した。mAb1電荷変異体、凝集体(HMWS)、色強度、力価、及び生細胞増殖を分析した。
組換えモノクローナル抗体は、材料及び方法で説明されているように、産生された総組換えmAb1のさまざまなシステイン又はシスチン及びトリプトファンの総添加量重量%での3回の流加実験条件で特徴付けられる(表4)。
mAb1を発現するDG44 CHO細胞株の増殖に対するシステイン又はシスチン及びトリプトファンの阻害濃度を識別するために、3日目にシステイン又はシスチン及びトリプトファンの種々のボーラス添加を、これらのアミノ酸の高濃度に到達する目的で試験した(表2b)。産生される総mAb1重量の同じ添加量重量%のシステイン又はシスチン及びトリプトファンを得るために、フィード戦略を適合させた。図12は、それぞれ0.3g/Lから0.9g/Lまで及び0.6g/Lの高濃度のシステイン又はシスチン及びトリプトファンが著しく細胞増殖を減少させることを示す(CSVにより正規化された14日の産生段階を通しての累積IVCC)。
システイン又はシスチンの枯渇は、mAb1を発現するCHO細胞株の増殖と産生性に影響を与える可能性があるという仮説が立てた。2Lバイオリアクター中の9の実験条件を分析した(表6a):産生段階プロセスを通じてシステイン又はシスチンの枯渇のない3つの対照条件、6日目に毎日の枯渇を開始し、流加産生プロセスの終了まで6.87g/Lのフィードでシステイン又はシスチン濃度を継続する2つの実験条件、及び6日目にシステイン又はシスチンを枯渇させ、フィード中17.17g/Lのシステイン又はシスチン濃度を有する4つの実験条件である。システイン又はシスチンが毎日添加されるため、枯渇は周期的である。フィード戦略は表6bに記載されている。システイン又はシステインの添加総量及びIVCCごとのシステイン又はシステインの添加総量図13に示す。フィード添加前のCys濃度を図14cに示す。図14aに示すように、フィード中のシステイン又はシスチン濃度が約17.17g/Lである場合、6日目のシステイン又はシスチンの枯渇は細胞増殖に影響を与えない。理論に縛られることを望まないが、システイン又はシスチン関連の代謝物は細胞内に蓄積及び保存され、システイン又はシスチンが枯渇すると利用可能になると考えられる。ただし、mAb1の細胞株の産生性は、システイン又はシステインの枯渇の影響を受ける(図14b)。
総組換えmAbの産生段階を通して添加されたシステイン又はシスチン及びトリプトファンの総量重量%を制御することによって引き起こされる不均質の減少の影響は、mAb1を排除するものではない。システイン又はシスチン及びトリプトファンの総量についての実験は、組換え抗体も産生する他の三つのCHO細胞株でテストした(表7)。図15aに示すように、APG電荷変異体と色強度の増加は、総mAb2の添加されたシステイン又はシスチン及びトリプトファンの総量重量%の増加と相関している。mAb3のAPG電荷変異体を分析すると、同様の結果が得られた(15b)。最後に、APG及びBPG電荷変異体の増加とメインピークの減少は、総mAb4のシステイン又はシスチン及びトリプトファンの総量重量%の増加と相関した(15c)。これらの結果はmAb1について得られた結果を確認するものである。
産生された総組換えmAb重量の14日の産生を通して添加されたシステイン又はシスチン及びトリプトファンの総量重量%の影響を、ここでテストした4つの異なるモノクローナル抗体のデータに基づいて分析した(表3及び7)。図16(a及びb)に示すように、APG電荷変異体増加は、分析したすべての4つの抗体について、産生された組換え抗体総重量の添加されたシステイン又はシスチン及びトリプトファン総量重量%の増加に相関している。この結果は、産生された組換え抗体総重量の添加されたシステイン又はシスチン及びトリプトファン総量重量%と抗体の不均質との間の関係が、特異的な抗体に限定されず、任意の抗体に適用されることを確認するものである。
液体医薬製剤
モノクローナル抗体mAb1の医薬製剤を流加モードで大規模に、すなわち2000Lステンレススチールのバイオリアクター中で、材料及び方法に記載の標準操作条件下で、表9で特定されているように添加した、種々のシステイン又はシスチン及びトリプトファン総量を用いて製造した。抗体サンプルの緩衝液を透析濾過緩衝液(33mM His及び250mM Pro、pH5.6)と少なくとも7回(7透析体積)交換し、続いて、30kDaの分子量カットオフ(MWCO)を有する膜を使用して限外濾過を行った。抗体の濃度(140mg/ml+/-14mg/ml)が達成されたら、必要な濃度(最終濃度に基づいて0.03%w/v)でポリソルベート80を添加した。UVA280を使用して、抗体の濃度を測定した。
酸性ピーク群(APG)レベルを予測するモデルは、mAb1抗体を発現するDG44CHO細胞株のデータ(表3)に基づいて開発された(図17)。APGは、Michealis Menten速度論を用いて産生された総組換えmAb重量の14日の産生を通して重量%に添加されたシステイン又はシスチン及びトリプトファンの総量重量%の関数として表される。
Claims (25)
- 抗体又はその抗原結合断片の製造方法であって、以下を含む方法:
a.培地で抗体又はその抗原結合断片を産生できるチャイニーズハムスター卵巣(CHO)宿主細胞を培養する;
b.産生段階を通じて培養を進行させる、ここで抗体又はその抗原結合断片が前記細胞によって産生され、前記産生段階中に、培養物が
・産生される抗体又はその抗原結合断片の予想される総量の12.06重量%~28.03重量%の総量までのシステイン又はシスチン;及び
・産生される抗体又はその抗原結合断片の予想される総量の8.84重量%~32.06重量%の総量までのトリプトファン、
で補充される;及び
c.細胞培養培地から抗体又はその抗原結合断片を回収する、
ここで、抗体又はその抗原結合断片が以下である:
1)a.配列番号1で定義される配列を有するCDR-H1;配列番号2で定義される配列を有するCDR-H2;配列番号3で定義される配列を有するCDR-H3;配列番号4で定義される配列を有するCDR-L1;配列番号5で定義される配列を有するCDR-L2及び配列番号6で定義される配列を有するCDR-L3を含む抗体又はその抗原結合断片;又は
b.配列番号7で定義される配列を有する軽可変領域と、配列番号8で定義される配列を有する重可変領域とを含む抗体又はその抗原結合断片;又は
c.配列番号7で定義される配列を有する軽可変領域と、配列番号11で定義される配列を有する重鎖とを含む抗体又はその抗原結合断片;又は
2)配列番号9で定義される配列を有する軽鎖と配列番号10で定義される配列を有する重鎖とを含む抗体。 - 培養物が、産生される抗体又はその抗原結合断片の予想される総量の12.06重量%~25重量%の総量まで、又は産生される抗体又はその抗原結合断片の予想される総量の12.06重量%~20重量%の総量で、システイン又はシスチンで補充される、請求項1に記載の方法。
- 培養物が、産生される抗体又はその抗原結合断片の予想される総量の8.84重量%~30重量%の総量まで、産生される抗体又はその抗原結合断片の予想される総量の8.84重量%~25重量%の総量まで、又は産生される抗体又はその抗原結合断片の予想される総量の8.84重量%~20重量%の総量で、トリプトファンで補充される、請求項1又は2に記載の方法。
- 方法中に提供されるシステイン又はシスチンの総量が2.9~12g/(1012細胞)、2.9~7g/(1012細胞)、又は5.6~7g/(1012細胞)であり、ここで細胞は産生段階の終了時に予想される積分生細胞数を指す、請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。
- 方法中に提供されるトリプトファンの総量が2.5~7g/(1012細胞)、又は2.5~3.5g/(1012細胞)であり、ここで細胞は産生段階の終了時に予想される積分生細胞数を指す、請求項1~4のいずれか一項に記載の方法。
- 培養物中のシステイン又はシスチン及びトリプトファンの総量が、細胞培養培地にシステイン又はシスチン及びトリプトファンを:
a.産生段階の開始時に、
b.産生段階中の任意の時点で1回又は複数回、
c.産生段階中の継続的な添加を通して、又は
d.a.、b.及びc.の任意の組み合わせで
添加することにより達成される、請求項1~5のいずれか一項に記載の方法。 - 前記方法が、バッチプロセス又は流加プロセスである、請求項1~6のいずれか一項に記載の方法。
- システイン又はシスチン及びトリプトファンが、産生段階中の毎日の添加により提供される、請求項1~7のいずれか一項に記載の方法。
- システイン又はシスチンを翌日に添加する前に、システイン又はシスチンの添加を5.6~7g/(1012細胞)のレベルに減少させることによって、培養物中のシステイン又はシスチンを枯渇させ、ここで前記細胞は産生段階の終了時に予想される積分生細胞数を指す、請求項8に記載の方法。
- 産生の後期段階中に、すなわち、細胞が既に最大生存細胞密度に達したとき、トリプトファンが翌日添加される前に、培養物中のトリプトファンを枯渇させる、請求項8又は9に記載の方法。
- 細胞培養培地中のシステイン又はシスチン濃度が産生段階中の任意の時点で0.9g/Lを超えない、又は、細胞培養培地中のシステイン又はシスチン濃度が産生段階中の任意の時点で0.3g/Lを超えない、請求項1~10のいずれか一項に記載の方法。
- 細胞培養培地中のトリプトファン濃度が産生段階中の任意の時点で0.6g/Lを超えない、又は、細胞培養培地中のトリプトファン濃度が産生段階中の任意の時点で0.3g/Lを超えない、請求項1~11のいずれか一項に記載の方法。
- 産生段階が少なくとも7日間、又は少なくとも14日間実施される、請求項1~12のいずれか一項に記載の方法。
- 産生段階の後半の任意の時点で:
・培養物中のシステイン又はシスチンの量が、産生される抗体又はその抗原結合断片の予想される量の12.06重量%~28.03%である;及び
・培養物中のトリプトファンの量が、産生される抗体又はその抗原結合断片の予想される量の8.84重量%~32.06%である、請求項1~13のいずれか一項に記載の方法。 - 産生段階中の任意の時点で:
・培養物中のシステイン又はシスチンの量が、産生される抗体又はその抗原結合断片の予想される量の12.06重量%~28.03%である;及び
・培養物中のトリプトファンの量が、産生される抗体又はその抗原結合断片の予想される量の8.84重量%~32.06%である、請求項1~14のいずれか一項に記載の方法。 - 産生段階が、50L以上、100L以上、500L以上、1000L以上、2000L以上、5000L以上、10000L以上、又は20,000L以上の容量のバイオリアクター中で行われる、請求項1~15のいずれか一項に記載の方法。
- 方法は、抗体又はその抗原結合断片を細胞培養培地から回収するステップ、及び抗体又はその抗原結合断片を精製するさらなるステップを含む、請求項1~16のいずれか一項に記載の方法。
- 精製がプロテインAクロマトグラフィーを含む、請求項17に記載の方法。
- 精製された抗体又はその抗原結合断片を製剤化するステップをさらに含む、請求項17又は18に記載の方法。
- 抗体又はその抗原結合断片が、1つ以上のアミノ酸及び界面活性剤を含む液体製剤に製剤化され、該製剤が該1つ以上のアミノ酸として、5mM~100mMの濃度、又は10mM~50mMの濃度のヒスチジン、及び/又は100mM~500mMの濃度のプロリンを、5~7.4、5~6.5、又は5~6のpHで含み、該界面活性剤が、0.001%~0.1%(w/v)の濃度の、0.005%~0.1%の濃度の、0.01%~0.1%の濃度の、又は0.01%~0.05%の濃度のポリソルベート80である、請求項19に記載の方法。
- 製剤は、5.2~6.0のpHで、30mMの濃度でヒスチジンを、及び250mMの濃度でプロリンを含む、請求項20に記載の方法。
- 界面活性剤は、0.03%の濃度である、請求項20又は21に記載の方法。
- 抗体又はその抗原結合断片が10mg/ml~250mg/mlの濃度で、20mg/ml~250mg/mlの濃度で、50mg/ml~250mg/mlの濃度で、又は、120mg/ml~160mg/mlの濃度で製剤化される、請求項20~22のいずれか一項に記載の方法。
- 抗体又はその抗原結合断片が140mg/mlの濃度で製剤化される、請求項20~23のいずれか一項に記載の方法。
- 前記方法は産生される抗体又はその抗原結合断片の不均質を減少させるものであり、ここで前記不均質の減少とは
a.電荷の不均質;及び/又は
b.アミノ酸酸化、異性化、断片化、他の共有結合付加物糖化、脱アミド、システイニル化;及び/又は
c.抗体又はその抗原結合断片の異なるバッチ間の、色又は色の強度;及び/又は
d.高分子量種(HMWS);及び/又は
e.抗体又はその抗原結合断片不安定性、
を減少させることを含む、請求項1~24のいずれか一項に記載の方法。
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2021141016A JP2021185185A (ja) | 2017-05-31 | 2021-08-31 | 細胞培養方法 |
JP2022109106A JP7406593B2 (ja) | 2017-05-31 | 2022-07-06 | 細胞培養方法 |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB1708655.4 | 2017-05-31 | ||
GBGB1708655.4A GB201708655D0 (en) | 2017-05-31 | 2017-05-31 | Cell culture methods |
PCT/EP2018/064102 WO2018219968A1 (en) | 2017-05-31 | 2018-05-29 | Cell culture methods |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021141016A Division JP2021185185A (ja) | 2017-05-31 | 2021-08-31 | 細胞培養方法 |
Publications (4)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2020521490A JP2020521490A (ja) | 2020-07-27 |
JP2020521490A5 JP2020521490A5 (ja) | 2021-09-30 |
JPWO2018219968A5 JPWO2018219968A5 (ja) | 2022-06-16 |
JP7460370B2 true JP7460370B2 (ja) | 2024-04-02 |
Family
ID=59270991
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019566198A Active JP7460370B2 (ja) | 2017-05-31 | 2018-05-29 | 細胞培養方法 |
JP2021141016A Pending JP2021185185A (ja) | 2017-05-31 | 2021-08-31 | 細胞培養方法 |
JP2022109106A Active JP7406593B2 (ja) | 2017-05-31 | 2022-07-06 | 細胞培養方法 |
Family Applications After (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021141016A Pending JP2021185185A (ja) | 2017-05-31 | 2021-08-31 | 細胞培養方法 |
JP2022109106A Active JP7406593B2 (ja) | 2017-05-31 | 2022-07-06 | 細胞培養方法 |
Country Status (18)
Country | Link |
---|---|
EP (2) | EP3630946B1 (ja) |
JP (3) | JP7460370B2 (ja) |
KR (2) | KR20240096888A (ja) |
CN (1) | CN110741077A (ja) |
AU (1) | AU2018276376B2 (ja) |
BR (1) | BR112019024390A2 (ja) |
CA (1) | CA3065661A1 (ja) |
CL (1) | CL2019003459A1 (ja) |
CO (1) | CO2019012871A2 (ja) |
EA (1) | EA201992828A1 (ja) |
GB (1) | GB201708655D0 (ja) |
HR (1) | HRP20240585T1 (ja) |
IL (1) | IL270880A (ja) |
MX (1) | MX2019014140A (ja) |
MY (1) | MY193535A (ja) |
PL (1) | PL3630946T3 (ja) |
RU (2) | RU2758674C2 (ja) |
WO (1) | WO2018219968A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB201708655D0 (en) * | 2017-05-31 | 2017-07-12 | Ucb Biopharma Sprl | Cell culture methods |
KR20230124971A (ko) * | 2020-12-22 | 2023-08-28 | 노파르티스 아게 | 세포 배양 중 분비된 재조합 발현 단백질에서 시스테인잔기의 산화 수준을 감소시키는 방법 |
GB202105424D0 (en) | 2021-04-16 | 2021-06-02 | UCB Biopharma SRL | Cell culture processes |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2010508853A (ja) | 2006-11-08 | 2010-03-25 | ワイス エルエルシー | 細胞培養のための合理的に設計された培地 |
JP2015514090A (ja) | 2012-03-26 | 2015-05-18 | サノフイ | 安定なIgG4に基づく結合剤の製剤 |
JP2015525204A (ja) | 2012-05-14 | 2015-09-03 | ユセベ ファルマ ソシエテ アノニム | 抗FcRn抗体 |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2221361A3 (en) | 1996-08-30 | 2011-02-09 | Life Technologies Corporation | Method for producing a polypeptide in vitro in mammalian cells in a protein-free and serum-free culture medium |
BR112012027430B1 (pt) | 2010-04-26 | 2020-04-07 | Novartis Ag | processo para a produção de um polipeptídeo recombinante compreendendo o cultivo de células cho |
EP2563903B1 (en) * | 2010-04-26 | 2019-08-21 | Novartis AG | Improved cell culture medium |
US9133493B2 (en) * | 2011-04-21 | 2015-09-15 | Amgen Inc. | Method for culturing mammalian cells to improve recombinant protein production |
WO2013158275A1 (en) * | 2012-04-20 | 2013-10-24 | Abbvie Inc. | Cell culture methods to reduce acidic species |
US20130281355A1 (en) | 2012-04-24 | 2013-10-24 | Genentech, Inc. | Cell culture compositions and methods for polypeptide production |
AR095348A1 (es) * | 2013-03-15 | 2015-10-07 | Genentech Inc | Medios de cultivo celular y métodos de producción de anticuerpos |
GB201508180D0 (en) * | 2015-05-13 | 2015-06-24 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
KR102425040B1 (ko) * | 2016-04-28 | 2022-07-25 | 메르크 파텐트 게엠베하 | 단백질 내 트리술파이드 수준을 감소시키기 위한 방법 |
GB201608323D0 (en) * | 2016-05-12 | 2016-06-29 | Ucb Biopharma Sprl | Pharmaceutical compositions |
GB201708655D0 (en) | 2017-05-31 | 2017-07-12 | Ucb Biopharma Sprl | Cell culture methods |
-
2017
- 2017-05-31 GB GBGB1708655.4A patent/GB201708655D0/en not_active Ceased
-
2018
- 2018-05-29 KR KR1020247019609A patent/KR20240096888A/ko not_active Application Discontinuation
- 2018-05-29 EP EP18743683.7A patent/EP3630946B1/en active Active
- 2018-05-29 WO PCT/EP2018/064102 patent/WO2018219968A1/en active Application Filing
- 2018-05-29 RU RU2019143742A patent/RU2758674C2/ru active
- 2018-05-29 EP EP24164969.8A patent/EP4397682A3/en active Pending
- 2018-05-29 EA EA201992828A patent/EA201992828A1/ru unknown
- 2018-05-29 CN CN201880035870.9A patent/CN110741077A/zh active Pending
- 2018-05-29 MY MYPI2019006875A patent/MY193535A/en unknown
- 2018-05-29 HR HRP20240585TT patent/HRP20240585T1/hr unknown
- 2018-05-29 PL PL18743683.7T patent/PL3630946T3/pl unknown
- 2018-05-29 KR KR1020197038895A patent/KR20200012972A/ko not_active IP Right Cessation
- 2018-05-29 BR BR112019024390-9A patent/BR112019024390A2/pt unknown
- 2018-05-29 RU RU2021128024A patent/RU2021128024A/ru unknown
- 2018-05-29 MX MX2019014140A patent/MX2019014140A/es unknown
- 2018-05-29 JP JP2019566198A patent/JP7460370B2/ja active Active
- 2018-05-29 AU AU2018276376A patent/AU2018276376B2/en active Active
- 2018-05-29 CA CA3065661A patent/CA3065661A1/en active Pending
-
2019
- 2019-11-18 CO CONC2019/0012871A patent/CO2019012871A2/es unknown
- 2019-11-24 IL IL270880A patent/IL270880A/en unknown
- 2019-11-26 CL CL2019003459A patent/CL2019003459A1/es unknown
-
2021
- 2021-08-31 JP JP2021141016A patent/JP2021185185A/ja active Pending
-
2022
- 2022-07-06 JP JP2022109106A patent/JP7406593B2/ja active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2010508853A (ja) | 2006-11-08 | 2010-03-25 | ワイス エルエルシー | 細胞培養のための合理的に設計された培地 |
JP2015514090A (ja) | 2012-03-26 | 2015-05-18 | サノフイ | 安定なIgG4に基づく結合剤の製剤 |
JP2015525204A (ja) | 2012-05-14 | 2015-09-03 | ユセベ ファルマ ソシエテ アノニム | 抗FcRn抗体 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2019143742A3 (ja) | 2021-06-30 |
EP3630946B1 (en) | 2024-03-27 |
CO2019012871A2 (es) | 2020-01-17 |
BR112019024390A2 (pt) | 2020-07-14 |
WO2018219968A1 (en) | 2018-12-06 |
JP2021185185A (ja) | 2021-12-09 |
AU2018276376A1 (en) | 2019-12-12 |
HRP20240585T1 (hr) | 2024-07-19 |
PL3630946T3 (pl) | 2024-07-01 |
KR20200012972A (ko) | 2020-02-05 |
RU2019143742A (ru) | 2021-06-30 |
EP3630946A1 (en) | 2020-04-08 |
CL2019003459A1 (es) | 2020-04-24 |
CA3065661A1 (en) | 2018-12-06 |
CN110741077A (zh) | 2020-01-31 |
KR20240096888A (ko) | 2024-06-26 |
US20200239923A1 (en) | 2020-07-30 |
EA201992828A1 (ru) | 2020-04-21 |
MY193535A (en) | 2022-10-18 |
JP2022153421A (ja) | 2022-10-12 |
RU2021128024A (ru) | 2021-12-08 |
IL270880A (en) | 2020-01-30 |
JP2020521490A (ja) | 2020-07-27 |
EP3630946C0 (en) | 2024-03-27 |
EP4397682A2 (en) | 2024-07-10 |
AU2018276376B2 (en) | 2024-08-15 |
JP7406593B2 (ja) | 2023-12-27 |
RU2758674C2 (ru) | 2021-11-01 |
EP4397682A3 (en) | 2024-08-21 |
MX2019014140A (es) | 2020-02-07 |
GB201708655D0 (en) | 2017-07-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7406593B2 (ja) | 細胞培養方法 | |
EP3717631B1 (en) | Cell culture methods | |
AU2021258023B2 (en) | Methods for modulating protein galactosylation profiles of recombinant proteins using peracetyl galactose | |
US11130980B2 (en) | Use of monensin to regulate glycosylation of recombinant proteins | |
US12077796B2 (en) | Cell culture methods | |
EA044551B1 (ru) | Способы культивирования клеток | |
JP2024513593A (ja) | 細胞培養方法 | |
JP2023538581A (ja) | 細胞培養プロセス | |
WO2023242238A1 (en) | Cell culture processes |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20191204 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210506 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210820 |
|
A871 | Explanation of circumstances concerning accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A871 Effective date: 20210820 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210928 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20211221 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20220204 |
|
A524 | Written submission of copy of amendment under article 19 pct |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A524 Effective date: 20220531 |
|
C60 | Trial request (containing other claim documents, opposition documents) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C60 Effective date: 20220531 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20220607 |
|
C21 | Notice of transfer of a case for reconsideration by examiners before appeal proceedings |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C21 Effective date: 20220608 |
|
A912 | Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912 Effective date: 20220722 |
|
C211 | Notice of termination of reconsideration by examiners before appeal proceedings |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C211 Effective date: 20220726 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20231117 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20240321 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7460370 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |