JP2022136170A - 経口免疫療法用のナッツ粉および製剤の製造方法 - Google Patents

Abstract

【課題】経口免疫療法用のナッツ粉および製剤の製造方法を提供すること。【解決手段】本技術は、一般に、ナッツ粉および／または製剤の製造方法、超低脂肪ナッツ粉ならびにナッツ粉製剤のための使用に関する。特に、いくつかの実施形態は、アレルギーに冒された対象の免疫療法における経口投与用の超低脂肪ツリーナッツまたは落花生粉製剤を製造する方法を対象とする。本発明は、例えば、脱脂ツリーナッツ粉を含むツリーナッツ粉組成物であって、前記脱脂ツリーナッツ粉の少なくとも５０重量％が、２５０μｍの篩を通過する、ツリーナッツ粉組成物を提供する。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本願は、「METHODS OF MANUFACTURE OF NUT FLOURS AND FORMULATIONS FOR ORAL DESENSITIZATION」の名称で、２０１７年１月１３日に出願された米国仮出願第６２／４４６，１４７号（この出願の全体が、参照によって本明細書に組み込まれる）の優先権の利益を主張する。

技術分野
本技術は、一般に、ナッツ粉および／または製剤の製造方法、超低脂肪ナッツ粉ならびにナッツタンパク質製剤のための使用に関する。特に、いくつかの実施形態は、アレルギーの影響を受ける対象の免疫療法における経口投与用の超低脂肪ツリーナッツまたは落花生タンパク質製剤を製造する方法を対象とする。

背景
アレルギー、または外来物質（例えば、昆虫、食物、ラテックス、薬物など）に対する身体の免疫反応は、ヒトおよび動物の両方に影響を及ぼし得る。食物アレルギーの場合、このような外来物質は、対象の免疫系に障害を起こす線状エピトープおよびコンフォメーションエピトープの両方を含む、タンパク質断片またはアミノ酸構造などの食物中のタンパク質に由来するアレルゲン性エピトープを含み得る。アレルギー反応の重症度は、個体の間で異なる場合があり、軽度の刺激からアナフィラキシーまでの間の範囲であり得、アナフィラキシーは、生死に関わるほど重症のおそれがある。

落花生およびツリーナッツアレルギーは、欧米社会で比較的一般的であり、落花生アレルギーの推定有病率は、欧米諸国でおよそ１．５％～２％であり、ツリーナッツアレルギーの有病率は、米国の約１％～ＥＵの１．４％の範囲である。落花生といくつかのツリーナッツとの間でアレルギーの交差反応性が存在する場合がある。米国では、落花生アレルギーの個体のおよそ３０％がツリーナッツアレルギーであり、逆もまた同様である。食品アレルギーアナフィラキシーネットワークの落花生およびツリーナッツの登録により、かなりの数の回答者が、クルミ（３４％）；カシューナッツ（２０％）；アーモンド（１５％）；ペカン（９％）；ピスタチオ（７％）；および他のナッツ（それぞれ＜５％）を含む様々なツリーナッツに対してアレルギーを報告していることが分かった。

経口免疫療法を使用して落花生またはツリーナッツアレルギーについて患者を処置することは、投与される製剤の精密な用量設定、純度および正確なタンパク質特徴付けに供される。しかし、投与される製剤の基礎を提供する落花生またはツリーナッツ粉は、ナッツ粉中に残っている油脂のために酸敗するおそれがある。例えば、落花生およびツリーナッツ粉の脂肪含有率を減少させることで、それぞれの粉の安定性が増加することが公知であるが、ナッツ粉の脂肪含有率を低下させることにより低アレルギー性生成物がもたらされることが以前に開示されている（米国特許出願公開第２０１２／０１６４３０６号参照）。

大部分の場合、食物アレルギーは、食物中のタンパク質との反応により引き起こされる。生後間もない時期に、免疫系はまだ発達途中であり、食物抗原に対するトレランスを発生できない場合がある（これは、経口トレランスの誘導が不十分と記載される場合もある）。その結果として、乳児または小児または幼若動物は、食物タンパク質に対して悪化した免疫応答を開始し、それに対してアレルギー応答を発生する。小児における最も一般的な食物アレルギーは、牛乳、卵、落花生、およびツリーナッツである。現在、食物アレルギーに利用可能な有効な処置はない。障害を起こすアレルゲンを回避することが、食物アレルギーを管理するために唯一許容されている戦略となっている。しかし、厳密な回避食は、標識の解釈が難しいせいで、および商業的に調製された食物中に未申告のまたは隠れたアレルゲンが存在することにより、複雑になり得る。
落花生およびツリーナッツアレルギーを含む食物アレルギーのための、経口免疫療法（ＯＩＴ）および舌下免疫療法（ＳＬＩＴ）の形態の具体的な免疫療法が、近年研究されており、初期臨床試験において有益な免疫学的変化を含む、有望な安全性および有効性の結果を実証している。ＯＩＴは、大部分の対象において、臨床トレランスに向かう進行を示す経時的な免疫学的変化を伴う脱感作の誘導の証拠を示した（Skripakら、J．Allergy Clin Immunol．１２２巻（６号）：１１５４～１１６０頁、２００８年；Keetら、J．Allergy Clin Immunol．１２９巻（２号）：４４８～４５５頁、２０１２年）。
落花生およびツリーナッツアレルギーの有病率を考慮すると、これらの一般食料品に対する個体の反応の重症度を減少させるための処置に使用するための、安定な治療用化合物およびアレルゲン組成物の必要性がある。

米国特許出願公開第２０１２／０１６４３０６号明細書

Skripakら、J．Allergy Clin Immunol．１２２巻（６号）：１１５４～１１６０頁、２００８年 Keetら、J．Allergy Clin Immunol．１２９巻（２号）：４４８～４５５頁、２０１２年

ツリーナッツ粉組成物および落花生粉組成物を含むナッツ粉組成物が、本明細書に記載される。このようなナッツ粉組成物を作製する方法およびナッツアレルギーの処置方法を含むこのようなナッツ粉組成物を使用する方法も記載される。

一部の実施形態では、脱脂ツリーナッツ粉を含むツリーナッツ粉組成物であって、脱脂ツリーナッツ粉の少なくとも５０重量％が、２５０μｍの篩を通過する、ツリーナッツ粉組成物がある。一部の実施形態では、ツリーナッツ粉は、担体材料をさらに含む。一部の実施形態では、担体材料は、１種または複数の希釈剤、流動促進剤、または滑沢剤を含む。

一部の実施形態では、脱脂ツリーナッツ粉は、約１２重量％未満の含油率を有する。一部の実施形態では、脱脂ツリーナッツ粉は、約６重量％未満の含油率を有する。

一部の実施形態では、ツリーナッツは、クルミ、アーモンド、ペカン、カシューナッツ、ヘーゼルナッツ、松の実、ブラジルナッツ、またはピスタチオである。

一部の実施形態では、脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全ては、１ｍｍの篩を通過する。一部の実施形態では、脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全ては、２５０μｍの篩を通過する。一部の実施形態では、脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全ては、１４９μｍの篩を通過する。一部の実施形態では、脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全ては、７４μｍの篩を通過する。

一部の実施形態では、脱脂ツリーナッツ粉は、ツリーナッツ材料を超臨界流体と接触させること；およびツリーナッツ材料を粉砕して脱脂ツリーナッツ粉を形成することを含む方法により生成される。一部の実施形態では、超臨界流体は、超臨界二酸化炭素である。

一部の実施形態では、ツリーナッツ粉組成物は、食材と組み合わされる。

一部の実施形態では、対象に上記ツリーナッツ粉組成物の有効量を経口投与することを含む、対象におけるナッツアレルギーを処置する方法がある。

一部の実施形態では、上記ツリーナッツ粉組成物を含む、経口免疫療法用の剤形がある。一部の実施形態では、剤形は、ツリーナッツ粉組成物の測定された量を含む。一部の実施形態では、剤形は、約０．１ｍｇ～約２０００ｍｇのツリーナッツ粉を含む。一部の実施形態では、測定された用量は、約０．５ｍｇ～約１０００ｍｇのナッツタンパク質を含む。一部の実施形態では、ツリーナッツ粉組成物は、パッケージ中に封入されている。一部の実施形態では、パッケージは、剤形またはパッケージ内に含有されるナッツタンパク質の量またはナッツ粉の量を特定する。一部の実施形態では、ツリーナッツ粉組成物は、カプセル中にカプセル化されている。

一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉の測定された量を含む経口免疫療法用の剤形であって、脱脂ナッツ粉が、ナッツ材料を超臨界流体と接触させ、それにより、ナッツ材料の含油率を減少させて脱脂ナッツ粉を形成すること；および脱脂ナッツ粉の用量を測定することを含む方法により生成される、剤形がある。一部の実施形態では、測定された用量は、約０．１ｍｇ～約２０００ｍｇのナッツタンパク質を含む。一部の実施形態では、測定された用量は、約０．５ｍｇ～約１０００ｍｇのナッツタンパク質を含む。一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉を生成する方法は、脱脂ナッツ粉を粉砕することをさらに含む。一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉を生成する方法は、ナッツ材料を超臨界流体と接触させる前に、ナッツ材料を押圧または粉砕することをさらに含む。一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉は、担体材料と組み合わされる。一部の実施形態では、担体材料は、１種または複数の希釈剤、流動促進剤、または滑沢剤を含む。一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉は、パッケージ中に封入されている。一部の実施形態では、パッケージは、剤形またはパッケージ内に含有されるナッツタンパク質の量またはナッツ粉の量を特定する。一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉は、カプセル中にカプセル化されている。

剤形の一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉の少なくとも５０重量％は、２５０μｍの篩を通過する。一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉のほぼ全ては、１ｍｍの篩を通過する。一部の実施形態では、脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全ては、２５０μｍの篩を通過する。一部の実施形態では、脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全ては、１４９μｍの篩を通過する。一部の実施形態では、脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全ては、７４μｍの篩を通過する。

剤形の一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉は、約１２％未満の含油率を有する。一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉は、約６％未満の含油率を有する。

剤形の一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉は、落花生粉である。一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉は、ツリーナッツ粉である。一部の実施形態では、ツリーナッツは、クルミ、アーモンド、ペカン、カシューナッツ、ヘーゼルナッツ、松の実、ブラジルナッツ、またはピスタチオである。

剤形の一部の実施形態では、超臨界流体は、超臨界二酸化炭素である。

一部の実施形態では、上記の剤形および使用説明書を含むキットがある。一部の実施形態では、使用説明書は、脱脂ナッツ粉を食材と組み合わせるための説明書を含む。一部の実施形態では、使用説明書は、剤形の毎日投与のための説明書を含む。

一部の実施形態では、ある初期含油率を有するナッツ材料を超臨界流体と接触させて、減少した含油率を有する脱脂ナッツ材料を提供すること；および脱脂ナッツ材料を粉砕することを含む、超低脂肪ナッツ材料を製造する方法がある。

一部の実施形態では、ある初期含油率を有するナッツ材料を超臨界流体と接触させて、減少した含油率を有する脱脂ナッツ材料を提供すること；および経口免疫療法用の脱脂ナッツ材料の用量を測定することを含む、超低脂肪ナッツ材料を製造する方法がある。一部の実施形態では、脱脂ナッツ材料の測定された用量は、約０．１ｍｇ～約１０００ｍｇのナッツタンパク質を含む。

一部の実施形態では、ある初期含油率を有するナッツ材料を超臨界流体と接触させて、減少した含油率を有する脱脂ナッツ材料を提供すること；および脱脂ナッツ材料をパッケージ中にパッケージングすることを含む、超低脂肪ナッツ材料を製造する方法がある。一部の実施形態では、パッケージは、５ｍＬ未満の体積を有する。一部の実施形態では、パッケージは、カプセルである。

上記方法のいずれかの一部の実施形態では、方法は、脱脂ナッツ材料を担体材料と組み合わせることを含む。一部の実施形態では、担体材料は、１種または複数の希釈剤、流動促進剤、または滑沢剤を含む。

上記方法のいずれかの一部の実施形態では、脱脂ナッツ材料は、０．１％～１２％の間の含油率を有する。

上記方法のいずれかの一部の実施形態では、超臨界流体は、二酸化炭素である。

上記方法のいずれかの一部の実施形態では、ナッツ材料は、落花生材料である。一部の実施形態では、ナッツ材料は、ツリーナッツ材料である。一部の実施形態では、ツリーナッツ材料は、クルミ材料、カシューナッツ材料、ヘーゼルナッツ材料、アーモンド材料、ピスタチオ材料、松の実材料、ブラジルナッツ材料、またはペカン材料である。

上記方法のいずれかの一部の実施形態では、方法は、ナッツ材料を超臨界流体と接触させる前に、ナッツ材料を押圧または粉砕することを含む。

上記方法のいずれかの一部の実施形態では、方法は、脱脂ナッツ材料中の１種または複数のナッツタンパク質アレルゲンを特徴付けることを含む。一部の実施形態では、１種または複数のナッツタンパク質アレルゲンは、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、質量分析、液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣ－ＭＳ）、液体クロマトグラフィー－質量分析／質量分析（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）、または免疫ブロットを使用して特徴付けられる。

上記方法のいずれかの一部の実施形態では、方法は、ナッツ粉中のより大きい粒子をナッツ粉中のより小さいナッツ粒子から分離すること、およびより小さいナッツ粒子を保持することを含む。一部の実施形態では、より大きい粒子は、１つまたは複数の篩を使用してより小さいナッツ粒子から分離される。

上記方法のいずれかの一部の実施形態では、ナッツ材料を超臨界流体と接触させることは、ナッツ材料を通して超臨界流体を流すことを含む。

一部の実施形態では、対象におけるツリーナッツアレルギーを処置する方法であって、対象に脱脂ツリーナッツ粉を含む医薬組成物の有効量を経口投与することを含み、医薬組成物の有効量が、約０．１ｍｇ～約２０００ｍｇのツリーナッツタンパク質を含む、方法がある。一部の実施形態では、医薬組成物の有効量は、約０．５ｍｇ～約１０００ｍｇのツリーナッツタンパク質を含む。

上記方法のいずれかの一部の実施形態では、脱脂ツリーナッツ粉の少なくとも５０重量％は、２５０μｍの篩を通過する。一部の実施形態では、脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全ては、１ｍｍの篩を通過する。一部の実施形態では、脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全ては、２５０μｍの篩を通過する。一部の実施形態では、脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全ては、１４９μｍの篩を通過する。一部の実施形態では、脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全ては、７４μｍの篩を通過する。

上記方法のいずれかの一部の実施形態では、脱脂ツリーナッツ粉は、約１２重量％未満の含油率を有する。一部の実施形態では、脱脂ツリーナッツ粉は、約６重量％未満の含油率を有する。

上記方法のいずれかの一部の実施形態では、ツリーナッツは、クルミ、アーモンド、ペカン、カシューナッツ、ヘーゼルナッツ、松の実、ブラジルナッツ、またはピスタチオである。

一部の実施形態では、対象におけるナッツアレルギーを処置する方法であって、対象に脱脂ナッツ粉を含む医薬組成物の有効量を経口投与することを含み、脱脂ナッツ粉が、ナッツ材料を超臨界流体と接触させ、それにより、ナッツ材料の含油率を減少させて脱脂ナッツ粉を形成することを含む方法により生成される、方法がある。一部の実施形態では、医薬組成物の有効量は、約０．１ｍｇ～約２０００ｍｇのナッツタンパク質を含む。一部の実施形態では、医薬組成物の有効量は、約０．５ｍｇ～約１０００ｍｇのナッツタンパク質を含む。

上記方法のいずれかの一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉を生成する方法は、脱脂ナッツ粉を粉砕することをさらに含む。一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉を生成する方法は、ナッツ材料を超臨界流体と接触させる前に、ナッツ材料を押圧または粉砕することをさらに含む。

上記方法のいずれかの一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉の少なくとも５０重量％は、２５０μｍの篩を通過する。一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉のほぼ全ては、１ｍｍの篩を通過する。一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉のほぼ全ては、２５０μｍの篩を通過する。一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉のほぼ全ては、１４９μｍの篩を通過する。一部の実施形態では、脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全ては、７４μｍの篩を通過する。

上記方法のいずれかの一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉は、約１２重量％未満の含油率を有する。一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉は、約６重量％未満の含油率を有する。

上記方法のいずれかの一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉は、落花生粉である。一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉は、ツリーナッツ粉である。一部の実施形態では、ツリーナッツは、クルミ、アーモンド、ペカン、カシューナッツ、ヘーゼルナッツ、松の実、ブラジルナッツ、またはピスタチオである。

上記方法のいずれかの一部の実施形態では、超臨界流体は、超臨界二酸化炭素である。一部の実施形態では、医薬組成物は、担体材料を含む。一部の実施形態では、担体材料は、１種または複数の希釈剤、流動促進剤、または滑沢剤を含む。

上記方法のいずれかの一部の実施形態では、医薬組成物は、毎日投与される。一部の実施形態では、医薬組成物の同じ有効量が、少なくとも１週間毎日投与される。一部の実施形態では、医薬組成物の有効量は、定期的に増加される。一部の実施形態では、医薬組成物の有効量は、少なくとも１週間の期間の後に医薬組成物の異なる有効量に調整され、医薬組成物の異なる有効量は、約０．１ｍｇ～約２０００ｍｇのツリーナッツタンパク質を含む。一部の実施形態では、医薬組成物の有効量は、少なくとも１週間の期間の後に医薬組成物の異なる有効量に調整され、医薬組成物の異なる有効量は、約０．５ｍｇ～約１０００ｍｇのツリーナッツタンパク質を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、少なくとも１ヶ月間毎日投与される。

上記方法のいずれかの一部の実施形態では、対象は、ヒトである。

図１は、本明細書に開示された実施形態による、超臨界ＣＯ_２（ｓＣＯ_２）抽出落花生材料（ＳＥＰ）からＳＤＳ－ＰＡＧＥで分離されたタンパク質の結果を示す。

図２は、本明細書に開示された実施形態による、超臨界ＣＯ_２抽出落花生材料からＳＤＳ－ＰＡＧＥで分離されたタンパク質の免疫ブロット分析を示す。

図３は、本明細書に開示された実施形態による、プールされた患者の抗血清を使用する、超臨界ＣＯ_２抽出落花生材料からＳＤＳ－ＰＡＧＥで分離されたタンパク質の免疫ブロット分析を示す。

図４は、本明細書に開示された実施形態による、超臨界ＣＯ_２抽出落花生材料（ＳＥＰ）からＲＰ－ＨＰＬＣで分離されたタンパク質と参照落花生粉からのプロファイルとのクロマトグラムの重ね合わせである。

図５は、本明細書に開示された実施形態による、ＧＰＣ落花生粉と落花生粉参照標準からＲＰ－ＨＰＬＣで分離されたタンパク質のクロマトグラムの重ね合わせである。

図６Ａ～６Ｃは、本明細書に開示された実施形態による、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）による超臨界ＣＯ２抽出落花生（ＳＥＰ）材料（丸）および参照標準落花生粉（四角）中のＡｒａ ｈ１（図６Ａ）、Ａｒａ ｈ２（図６Ｂ）、およびＡｒａ ｈ６（図６Ｃ）の検出を示す。

図７は、本明細書に開示された実施形態による、超臨界ＣＯ_２抽出クルミ材料および押圧クルミ材料から抽出された総タンパク質を図示するグラフである。

図８は、本明細書に開示された実施形態による、石油エーテル抽出クルミ材料参照試料、超臨界ＣＯ_２抽出クルミ材料、およびヘキサン抽出クルミ材料からＳＤＳ－ＰＡＧＥで分離されたタンパク質の結果を示す。

図９は、本明細書に開示された実施形態による、石油エーテル抽出クルミ材料参照試料、超臨界ＣＯ_２抽出クルミ材料、およびヘキサン抽出クルミ材料からＳＤＳ－ＰＡＧＥで分離されたタンパク質の免疫ブロット分析を示す。

図１０は、本明細書に開示された実施形態による、超臨界ＣＯ_２抽出落花生（ＳＥＰ）材料の粒度分布を示す。

図１１は、市販の落花生粉の複数のロットの粒度分布を示す。左パネルは、各ロットに対して各選別メッシュサイズについて保持された落花生粉の（重量）パーセントを示し、凡例に上から下に特定されるのと同じ順序で、各ロットを各メッシュサイズに対して左から右に表示する。右パネルは、保持された累積パーセントを示す。

図１２Ａは、本明細書に開示された実施形態による、得られた焙煎クルミ粉の粒度分布を示す。

図１２Ｂは、本明細書に開示された実施形態による、得られた生クルミ粉の粒度分布を示す。

図１３は、本明細書に開示された実施形態による、得られた生ペカン粉の粒度分布を示す。

図１４Ａは、超臨界二酸化炭素を使用して低温殺菌クルミ材料から油を抽出することにより調製された脱脂クルミ粉から抽出されたタンパク質のＨＰＬＣトレースを示す。矢印は、特異的タンパク質抗原ピークを示す。

図１４Ｂは、スクリューオイルエキスペラーを使用して低温殺菌クルミ材料から油を抽出し、続いて超臨界二酸化炭素を使用して抽出することにより調製された脱脂クルミ粉から抽出されたタンパク質のＨＰＬＣトレースを示す。矢印は、特異的タンパク質抗原ピークを示す。

図１４Ｃは、市販の脱脂クルミ粉（Ｂｉｏ Ｐｌａｎｅｔｅ、Ｌｏｍｍａｔｚｓｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から抽出されたタンパク質のＨＰＬＣトレースを示す。矢印は、特異的タンパク質抗原ピークを示す。

図１５Ａは、クルミアレルギーと診断された個体から得られた、プールされた血清で染色されたクルミタンパク質抽出物の免疫ブロットを示す。種々のレーンの試料は、以下の通りである：（１）超臨界二酸化炭素を使用して約４５℃で脱脂された蒸気低温殺菌クルミ材料；（２）超臨界二酸化炭素を使用して約７５℃で脱脂された蒸気低温殺菌クルミ材料；（３）市販のクルミ粉（ロット番号０８３４０１４８；Ｂｉｏ Ｐｌａｎｅｔｅ、Ｌｏｍｍａｔｚｓｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）；（４）市販のクルミ粉（ロット番号０７２１００８１；Ｂｉｏ Ｐｌａｎｅｔｅ、Ｌｏｍｍａｔｚｓｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）；および（５）超臨界二酸化炭素を使用して約４５℃で脱脂された低温殺菌されていないクルミ材料。Ｊ２は、単離されたＪｕｇ ｒ ２を示し、Ｊ１は、単離されたＪｕｇ ｒ １を示す。

図１５Ｂは、Ｊｕｇ ｒ １およびＪｕｇ ｒ ２の両方を認識するＨＣ１２１抗体で染色されたクルミタンパク質抽出物の免疫ブロットを示す。種々のレーンの試料は、以下の通りである：（１）超臨界二酸化炭素を使用して約４５℃で脱脂された蒸気低温殺菌クルミ材料；（２）超臨界二酸化炭素を使用して約７５℃で脱脂された蒸気低温殺菌クルミ材料；（３）市販のクルミ粉（ロット番号０８３４０１４８；Ｂｉｏ Ｐｌａｎｅｔｅ、Ｌｏｍｍａｔｚｓｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）；（４）市販のクルミ粉（ロット番号０７２１００８１；Ｂｉｏ Ｐｌａｎｅｔｅ、Ｌｏｍｍａｔｚｓｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）；および（５）超臨界二酸化炭素を使用して約４５℃で脱脂された低温殺菌されていないクルミ材料。Ｊ２は、単離されたＪｕｇ ｒ ２を示し、Ｊ１は、単離されたＪｕｇ ｒ １を示す。

詳細な説明
Ｉ． 概要
本技術の様々な態様は、超臨界ＣＯ_２などの超臨界流体を用いて抽出された様々なナッツ粉の低脂肪および／または超低脂肪医薬調製物を製造および使用する方法を提供し、抽出方法は、ナッツ粉のアレルゲン性を保持し、したがって、経口免疫療法レジメンに有用である。このような調製物の超低脂肪含有率により、このような製品は、より安定で、より高い脂肪含有率を有するナッツ粉よりも酸敗の問題を受けにくくなる。追加的に、脱脂ナッツ粉は、より小さい粒度に、より容易に粉砕され、そのことにより、ナッツ粉の流動性が増加し、治療用量の精密な測定が容易になる。アナフィラキシー反応の偶発的な誘導を避けるために、経口免疫療法のための用量が精密に測定されることが重要である。

さらに、クルミ粉に関する実施形態を含むが、これに限定されない、ある特定の実施形態では、結果として生じた調製物は、他の方法により脱脂されたナッツ粉よりも容易に抽出可能なタンパク質を有するという予想外の特性を有する。驚くことに、超臨界ＣＯ_２精製法はまた、調製物の芳香性をより少なくし、最終生成物中のナッツの匂いおよび味を減少させるだけでなく、色をより明るくする。多くのアレルギー患者が、アレルギーのある食物の匂いおよび味への嫌悪を報告しているので、経口免疫療法の治療用製剤中の芳香性構成成分の除去は、患者の免疫療法レジメンの遵守を改善すると予想される。ナッツ粉の超臨界ＣＯ_２脱脂の過酷な条件にもかかわらず、それでもナッツ粉は、その抗原特性を保持する。

本技術の追加的な態様は、医薬組成物に製剤化され得る超低脂肪ナッツタンパク質粉末を含む製剤を提供する。これらのここに開示される製剤は、処置レジメンにより患者に投与された場合、落花生および／またはツリーナッツ製品にアレルギーのある対象のための経口免疫療法（ＯＩＴ）を提供することができる。本技術の態様により、処置後、食物経口負荷（ＯＦＣ）を施された対象は、落花生タンパク質および／またはツリーナッツタンパク質に部分的または完全に脱感作される場合がある。

技術のいくつかの実施形態の具体的詳細は、下の詳細な説明および実施例に記載されている。経口免疫療法のための、ならびに／または落花生タンパク質および／もしくはツリーナッツタンパク質の経口免疫療法のための臨床試験に使用するための、超低脂肪ナッツタンパク質粉末および超低脂肪ナッツタンパク質粉末を含む組成物（すなわち製剤）の製造方法に関して、実施形態の多くが下に記載されているものの、本明細書に記載のものに加えて、他の適用および他の実施形態が、技術の範囲内である。追加的に、技術のいくつかの他の実施形態は、本明細書に記載の実施形態と異なる構成成分または手順を有し得る。したがって、当業者は、技術が追加的な構成成分と共に他の実施形態を有し得ること、または技術が下に示すおよび記載する態様のいくつかを伴わない他の実施形態を有し得ることを適宜理解するであろう。

本明細書に引用される刊行物、特許出願、および特許を含む全ての参考文献は、各参考文献が個別にかつ具体的に参照により組み込まれていると示され、その全体で本明細書に示される場合と同程度に、参照により本明細書に組み込まれている。

ＩＩ． 定義
特に定義しない限り、本明細書中で使用される技術および科学用語は全て、本明細書に記載の本技術が属する技術分野の専門家に一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書中で参照される特許および刊行物は全て、参照により組み込まれている。

本明細書中で使用される「動物」という用語は、ヒトならびに例えば哺乳動物、鳥類、爬虫類、両生類および魚類を含む非ヒト動物を指す。一部の実施形態では、非ヒト動物は、哺乳動物（例えば、齧歯動物、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、霊長類またはブタ）である。さらなる実施形態では、動物は、トランスジェニック動物であり得る。

本明細書中で使用される、入手源についてのさらなる修飾を有さない「ナッツ」または「ナッツタンパク質」は、落花生またはツリーナッツのいずれかを指し得る。

本明細書中で使用される「抗原」という用語は、動物における抗体応答（すなわち、体液性応答）および／またはＴ細胞との抗原特異的反応（すなわち、細胞性応答）の生成を誘発する分子を指す。

本明細書中で使用される「アレルゲン」という用語は、他のアイソタイプの抗体に加えてＩｇＥの生成を誘発する抗原のサブセットを指す。「アレルゲン」、「天然アレルゲン」および「野生型アレルゲン」という用語は、互換的に使用され得る。本技術のためのアレルゲンの一部の例は、タンパク質アレルゲンである。

本明細書中で使用される「アレルギー反応」という語句は、主に皮膚（例えば、蕁麻疹（uticaria）、血管性浮腫、掻痒）、呼吸器（例えば、喘鳴、咳嗽、喉頭浮腫、鼻漏、涙目／眼の痒み）、消化器（例えば、嘔吐、腹痛、下痢）、および心臓血管（すなわち、全身性反応が起こる場合）系に関係する臨床症候を伴うＩｇＥ媒介性である免疫応答に関する。本技術のために、喘息反応はアレルギー反応の一形態であるとみなされる。

本明細書中で使用される「アナフィラキシーアレルゲン」という語句は、自然条件下で、その自然状態で遭遇した場合にアレルギー個体にアナフィラキシー反応のリスクを提示することが認識されているアレルゲンのサブセットを指す。例えば、本技術のために、花粉アレルゲン、ダニアレルゲン、動物鱗屑または排泄物（例えば、唾液、尿）中のアレルゲン、および真菌アレルゲンは、アナフィラキシーアレルゲンとみなされない。他方で、食物アレルゲン、昆虫アレルゲンおよびゴムアレルゲン（例えば、ラテックス由来）は、一般的に、アナフィラキシーアレルゲンであるとみなされる。食物アレルゲンは、特に、本技術の実施に使用するためのアナフィラキシーアレルゲンである。特に、ナッツアレルゲン（例えば、落花生、クルミ、アーモンド、ペカン、カシューナッツ、ヘーゼルナッツ、ピスタチオ、松の実、ブラジルナッツなどに由来する）、卵／乳製品アレルゲン（例えば、卵、牛乳などに由来する）、種子アレルゲン（例えば、ゴマ、ケシ、カラシなどに由来する）、ダイズ、コムギ、および魚／甲殻類アレルゲン（例えば、エビ、カニ、ロブスター、ハマグリ、イガイ、カキ、ホタテガイ、ザリガニなどに由来する）は、本技術によるアナフィラキシー食物アレルゲンである。特に関心がもたれるアナフィラキシーアレルゲンは、それに対する反応が一般に死のリスクを生じるほど重症であるものである。

本明細書中で使用される「アナフィラキシー」または「アナフィラキシー反応」という語句は、アナフィラキシーアレルゲンにより誘導されるマスト細胞および好塩基球上の高親和性ＩｇＥ受容体の架橋に続発するマスト細胞の脱顆粒後の、メディエーター放出、ならびに標的器官、例えば気道、皮膚、消化管および心臓血管系における重症の全身性病的応答の生成により特徴付けられるアレルギー反応のサブセットを指す。当技術分野において公知のように、アナフィラキシー反応の重症度は、例えば皮膚反応、眼および口の周囲の腫脹、嘔吐ならびに／または下痢に続く、呼吸器反応、例えば喘鳴および努力性呼吸をアッセイすることにより、監視され得る。最も重症のアナフィラキシー反応は、意識喪失および／または死を招くおそれがある。

本明細書中で使用される「抗原提示細胞」または「ＡＰＣ」という語句は、抗原をプロセシングし、Ｔ細胞に提示して、抗原特異的応答を誘発する細胞、例えばマクロファージおよび樹状細胞を指す。

２つの実体が本明細書に記載のように互いに「会合」している場合、それらは直接もしくは間接的共有結合または非共有結合的相互作用により連結している。好ましくは、会合は共有結合的である。望ましい非共有結合的相互作用には、例えば水素結合、ファンデルワールス相互作用、疎水性相互作用、磁気相互作用などが含まれる。

本明細書中で使用される「減少したアナフィラキシー反応」という語句は、皮膚、呼吸器、消化器および粘膜（例えば、眼、鼻および耳の）表面または皮下注入（例えば、ハチ刺傷による）を介した曝露を含み得る、アナフィラキシーアレルゲンへの曝露に関連する症状の処置後の臨床症状の減少に関する。

「脱感作」または「脱感作する」は、患者のアレルギー反応を示さずに少量～大量のアレルギー食物源を摂食する能力を指す。脱感作は、「アレルギーのない」状態を維持するために食物源を用いた慢性処置を必要とする点で「トレランス」と異なる。一方で、「トレランス」状態では、もはや処置は必要ない。

本明細書中で使用される「エピトープ」という用語は、免疫グロブリン（例えば、ＩｇＥ、ＩｇＧなど）により結合、または主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）と併せてＡＰＣにより提示された場合、Ｔ細胞受容体により認識することができる、およそ６～１５個の間のアミノ酸のアミノ酸モチーフを含む結合部位を指す。線状エピトープは、アミノ酸が単純な線状配列の状況で認識されるエピトープである。コンフォメーションエピトープは、特定の三次元構造の状況でアミノ酸が認識されるエピトープである。

本技術によるアレルゲンの「断片」は、無傷天然アレルゲンよりも小さい、アレルゲンの任意の一部または一部分である。本技術のある特定の実施形態では、アレルゲンはタンパク質であり、断片はペプチドである。

本明細書中で使用される「免疫優性エピトープ」という語句は、感作集団の高いパーセンテージにおいて抗体により結合されるエピトープ、または同一抗原中に存在する他のエピトープに対する抗体反応のパーセンテージもしくは力価と比較して、抗体の力価が高いエピトープを指す。一実施形態では、免疫優性エピトープは、感作集団の５０％より多く、さらなる例では６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％より多くで、抗体により結合される。

「単離された」（「実質的に純粋」と互換的に使用される）は、ポリペプチドに適用される場合、それが一緒に天然に存在する他のタンパク質から分離されたポリペプチドまたはその一部分を意味する。典型的には、ポリペプチドは、それを精製するために使用される抗体またはゲルマトリックス（ポリアクリルアミド）などの物質からも実質的に（すなわち、少なくとも約７０％～約９９％）分離されている。

「吸収」は、典型的には、消化器管から血管内への送達された物質（例えば、ナッツタンパク質アレルゲン）の移動プロセスを指す。

「バイオアベイラビリティー」は、研究されている動物またはヒトの全身循環内に送達された、投薬されたナッツタンパク質アレルゲンの重量パーセンテージを指す。静脈内投与された場合の薬物の合計曝露（ＡＵＣ（０－００））は、通常、１００％バイオアベイラブル（Ｆ％）として定義される。「経口バイオアベイラビリティー」は、静脈内注入と比較して、医薬組成物が経口摂取された場合、ナッツタンパク質アレルゲンが全身循環内に吸収される程度を指す。

「血漿中濃度」は、対象の血液の血漿構成成分中のナッツタンパク質アレルゲンの濃度を指す。ナッツタンパク質アレルゲンの血漿中濃度は、代謝に関するばらつきおよび／または他の治療剤との相互作用の可能性のために、対象間で大幅に異なり得ることが理解されている。本発明の一態様によると、ナッツタンパク質アレルゲンの血漿中濃度は、対象毎に異なり得る。同様に、最大血漿中濃度（Ｃｍａｘ）もしくは最大血漿中濃度到達時間（Ｔｍａｘ）、または血漿中濃度時間曲線下総面積（ＡＵＣ（０－００））などの値は、対象毎に異なり得る。このばらつきのために、ナッツタンパク質アレルゲンの「治療有効量」を構成するために必要な量は、対象毎に異なり得る。

「測定可能な血清中濃度」または「測定可能な血漿中濃度」は、投与後に血流中に吸収された、血清１ｍＬ、１ｄＬ、または１Ｌあたりの治療剤の、典型的には、ｍｇ、μｇ、またはｎｇ単位で測定された血清または血漿中濃度を記載するものである。本明細書中で使用される測定可能な血漿中濃度は、典型的には、ｎｇ／ｍＬまたはμｇ／ｍＬ単位で測定される。

「食物経口負荷」は、食物アレルギー用の高度に精密な診断試験を指す。食物負荷の間、アレルギー専門医は、測定された用量の疑わしい食物を、症状をトリガーする可能性が低い非常に少量から開始して患者に与える。各用量に続いて、患者は、任意の反応の徴候について、ある期間観察される。症状がない場合、患者は、徐々に増大する用量を与えられる。任意の反応の徴候が明らかな場合、食物負荷を停止し、患者は、食物負荷に失敗したと特徴付けられ、アレルギー応答をトリガーする食物の量により決定される感度レベルで食物に対してアレルギーである。

「経口免疫療法」は、アレルギーを患う患者のために経口投与される医学的処置であって、患者を脱感作する、または患者にアレルゲンに対するトレランスを提供するために、患者に漸増用量のアレルゲンを投与することを含む医学的処置を指す。

「薬力学」は、作用部位での薬物濃度に対して観察された生物学的応答を決定する要因を指す。

「薬物動態学」は、作用部位での適切な薬物濃度の達成および維持を決定する要因を指す。

「担体材料」は、薬剤学において一般に使用される任意の賦形剤を含み、ナッツタンパク質アレルゲンとの適合性および所望の剤形の放出プロファイル特性に基づき選択されるべきである。例示的な担体材料には、例えば、結合剤、懸濁化剤、崩壊剤、充填剤、界面活性剤、可溶化剤、安定化剤、滑沢剤、湿潤剤、希釈剤などが含まれる。

「薬学的に適合性の担体材料」は、アカシア、ゼラチン、コロイド状二酸化ケイ素、グリセロリン酸カルシウム、乳酸カルシウム、マルトデキストリン、グリセリン、ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン（polyvinylpyrrollidone）（ＰＶＰ）、コレステロ
ール、コレステロールエステル、カゼインナトリウム、ダイズレシチン、タウロコール酸、ホスファチジルコリン（phosphotidylcholine）、塩化ナトリウム、リン酸三カルシウ
ム、リン酸二カリウム、セルロースおよびセルロースコンジュゲート、糖、ステアロイル乳酸ナトリウム、カラゲナン、モノグリセリド、ジグリセリド、アルファ化デンプンなどを含み得るが、これらに限定されない。例えば、Remington：The Science and Practice of Pharmacy、１９版（Easton、Pa．：Mack Publishing Company、１９９５年）
；Hoover、John E．、Remington's Pharmaceutical Sciences、Mack Publishing Co．、Easton、Pennsylvania １９７５年；Liberman, H．A．およびLachman, L．編、Pharmaceutical Dosage Forms、Marcel Decker、New York、N．Y．、１９８０年；ならびにPharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems、７版（Lippincott Williams & Wilkins １９９９年）を参照されたい。

「可塑剤」は、マイクロカプセル化材料またはフィルムコーティングを軟化して、それらを脆くなりにくくするために使用され得る化合物である。適切な可塑剤には、例えば、ＰＥＧ３００、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ６００、ＰＥＧ１４５０、ＰＥＧ３３５０、およびＰＥＧ８００などのポリエチレングリコール、ステアリン酸、プロピレングリコール、オレイン酸、トリエチルセルロースならびにトリアセチンが含まれる。一部の実施形態では、可塑剤は、分散剤または湿潤剤としても機能することができる。

「可溶化剤」には、トリアセチン、クエン酸トリエチル、オレイン酸エチル、カプリル酸エチル、ラウリル硫酸ナトリウム、ナトリウムドクセート（doccusate）、ビタミンＥ
ＴＰＧＳ、ジメチルアセトアミド、Ｎ－メチルピロリドン、Ｎ－ヒドロキシエチルピロリドン、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルシクロデキストリン、エタノール、ｎ－ブタノール、イソプロピルアルコール、コレステロール、胆汁酸塩、ポリエチレングリコール２００－６００、グリコフロール、トランスクトール、プロピレングリコール、ジメチルイソソルビドなどの化合物およびそれらの組合せが含まれる。

本明細書に提供される超低脂肪ナッツ粉中の総落花生および／またはツリーナッツタンパク質は、その濃度が製造直後のナッツタンパク質製剤中のこのようなタンパク質の元の濃度の±１０％である場合、「安定」とみなされ得る。別の実施形態では、ナッツタンパク質製剤が、３ヶ月を超える保存（例えば、４０℃／相対湿度７５％での保存）の間、水分含有率、外観および臭いに大幅な変化を有しない場合、本明細書に提供されるナッツタンパク質製剤は、「安定」とみなされ得る。

本明細書に記載の組成物は、経口投与経路を含むが、それに限定されない、任意の従来手段により対象に投与するために製剤化することができる。本明細書中で使用される「対象」という用語は、ヒトまたは非ヒトを含む動物、好ましくは哺乳動物を意味するために使用される。粉およびこのような粉を組み込んでいる製剤は、小児および成人におけるナッツアレルゲンの限られた量への曝露に関連する症状の予防および処置のためである。一実施形態では、対象は、約１～約２６歳である。代替的な実施形態では、対象は、２６歳よりも年長であり得る（例えば、２６～５０歳の間）。

「治療有効量」または「有効量」は、薬理学的効果を達成するためのナッツタンパク質アレルゲンの量である。「治療有効量」という用語には、例えば、予防的有効量が含まれる。ナッツタンパク質アレルゲンの「有効量」は、過度の有害副作用なしに所望の薬理学的効果または治療改善を達成するために有効な量である。ナッツタンパク質アレルゲンの有効量は、特定の対象および疾患レベルに応じて当業者により選択される。「有効量」または「治療有効量」は、対象の代謝、年齢、体重、全身状態、処置されている状態、処置されている状態の重症度、および処方医師の判断の多様性により、対象毎に異なり得ることが理解される。

アレルゲンに対する「トレランス」は、処置が中止された後であっても継続する（トレランスは、必ずしも永続しない場合があるとはいえ）、おそらくＴ細胞応答性に対する効果が原因の、免疫療法の相対的に長期持続性の効果を指す。

アレルギー関連障害の状況で使用される「処置する」または「処置」は、アレルギーに関連する障害または疾患の任意の処置、例えば、障害もしくは疾患に罹患しやすい場合があるが、障害もしくは疾患を有するとまだ診断されていない対象において障害もしくは疾患が起こることを予防すること；障害もしくは疾患を阻害すること、例えば、障害もしくは疾患の発生を阻止すること、障害もしくは疾患を軽減すること、障害もしくは疾患の後退を引き起こすこと、疾患もしくは障害により引き起こされる状態を軽減すること、または疾患もしくは障害の症状を停止させることを指す。

本明細書中で使用される「含む（comprising）」、「含む（including）」、および「
などの（such as）」という用語は、その制限のない非限定的な意味で使用される。

「約」という用語は、「およそ」という用語と同義的に使用される。当業者が理解するように、「約」の正確な境界は、組成物の構成成分に依存する。例証的に、「約」という用語の使用は、引用される値からわずかに外れる、すなわち、±０．１％～１０％の、同様に有効かつ安全な値を示す。別の実施形態では、「約」という用語の使用は、引用される値からわずかに外れる、すなわち、±０．１％～５％の、同様に有効かつ安全な値を示す。別の実施形態では、「約」という用語の使用は、引用される値からわずかに外れる、すなわち、±０．１％～２％の、同様に有効かつ安全な値を示す。

ＩＩＩ． 超低脂肪ナッツ粉組成物の製造方法
経口免疫療法に使用するための超低脂肪落花生粉および関連組成物ならびに／または超低脂肪ツリーナッツ粉および関連組成物の製造方法が、本明細書において提供される。

一部の実施形態では、アレルゲン性超低脂肪ナッツ材料（すなわち、脱脂ナッツ粉）を製造する方法は、ナッツ材料を超臨界流体と接触させて脱脂ナッツ材料を提供することを含む。脱脂ナッツ材料は、本来のナッツ材料の初期含油率と比較して減少した含油率を有する。一部の実施形態では、方法は、脱脂ナッツ材料を粉砕すること、経口免疫療法用の脱脂ナッツ材料の用量を測定すること、および／または脱脂ナッツ材料をカプセルなどのパッケージ中にパッケージングすることをさらに含む。

本明細書に記載される本発明に使用され得る例示的な超臨界流体には、超臨界二酸化炭素（ＣＯ_２）、超臨界エタン、超臨界プロパンおよび超臨界ジメチルエーテルが含まれる。

超臨界流体は、流体の超臨界点を超える温度および圧力に加熱および加圧される。一部の実施形態では、流体は、約７．４ＭＰａもしくはそれよりも大きく、約１０ＭＰａもしくはそれよりも大きく、約２０ＭＰａもしくはそれよりも大きく、約３０ＭＰａもしくはそれよりも大きく、約４０ＭＰａもしくはそれよりも大きく、約５０ＭＰａもしくはそれよりも大きく、約６０ＭＰａもしくはそれよりも大きく、または約７０ＭＰａもしくはそれよりも大きく加圧される。一部の実施形態では、流体は、約８０ＭＰａもしくはそれよりも小さく、約７０ＭＰａもしくはそれよりも小さく、約６０ＭＰａもしくはそれよりも小さく、約５０ＭＰａもしくはそれよりも小さく、約４０ＭＰａもしくはそれよりも小さく、約３０ＭＰａもしくはそれよりも小さく、または約２０ＭＰａもしくはそれよりも小さく加圧される。一部の実施形態では、超臨界流体の温度は、約３１℃もしくはそれよりも高い、約３５℃もしくはそれよりも高い、約４０℃もしくはそれよりも高い、約４５℃もしくはそれよりも高い、約５０℃もしくはそれよりも高い、または約５５℃もしくはそれよりも高い。一部の実施形態では、超臨界流体は、約８０℃もしくはそれよりも低い、約７０℃もしくはそれよりも低い、約６０℃もしくはそれよりも低い、約５５℃もしくはそれよりも低い、約５０℃もしくはそれよりも低い、約４５℃もしくはそれよりも低い、約４０℃もしくはそれよりも低い、または約３５℃もしくはそれよりも低い。

ある特定の実施形態では、超臨界流体は、ナッツ材料を連続的に流れて、脂肪を除去する。超臨界流体が、ナッツ材料を通して流れるときに、脂肪が超臨界流体中に溶解し、運び去られる。一部の実施形態では、超臨界流体は、ナッツ材料を通して約１５分またはそれよりも長く（例えば、約３０分もしくはそれよりも長く、約１時間もしくはそれよりも長く、約２時間もしくはそれよりも長く、約４時間もしくはそれよりも長く、または約６時間もしくはそれよりも長く、または約８時間もしくはそれよりも長く）流れる。一部の実施形態では、超臨界流体は、ナッツ材料を通して約１５分～約１２時間（例えば、約１５分～約３０分、約３０分～約１時間、約１時間～約２時間、約２時間～約４時間、約４時間～約６時間、約６時間～約８時間、または約８時間～約１２時間）流れる。超臨界流体の流速は、所望の抽出効率に応じて設定することができる。

一部の実施形態では、脂肪は、バッチプロセスまたはセミバッチプロセスでナッツ材料から抽出される。例えば、一部の実施形態では、ナッツ材料は、超臨界流体と接触させられ、超臨界流体がナッツ材料から除去される前にある期間保たれる。ナッツ材料は、超臨界流体をナッツ材料に流すことにより超臨界流体と接触させることができる。ナッツ材料は、超臨界流体中に浸漬することができ、一方で、ナッツ材料中の脂肪は超臨界流体中に抽出される。超臨界流体は、例えば、抽出された脂肪を含有する超臨界流体を新鮮な超臨界流体に置き換えることにより、ナッツ材料から除去することができる。一部の実施形態では、ナッツ材料は、除去される前に超臨界流体中に約１５分またはそれよりも長く（例えば、約３０分もしくはそれよりも長く、約１時間もしくはそれよりも長く、約２時間もしくはそれよりも長く、約４時間もしくはそれよりも長く、または約６時間もしくはそれよりも長く、または約８時間もしくはそれよりも長く）浸漬される。一部の実施形態では、ナッツ材料は、除去される前に、超臨界流体中に約１５分～約１２時間（例えば、約１５分～約３０分、約３０分～約１時間、約１時間～約２時間、約２時間～約４時間、約４時間～約６時間、約６時間～約８時間、または約８時間～約１２時間）浸漬される。

必要に応じて、出発ナッツ材料は、超臨界流体と接触させられる前に加工される場合がある。例えば、出発ナッツ材料は、ナッツ材料を超臨界流体と接触させる前に細切、圧砕、押圧、または粉砕される場合がある。初期加工は、ナッツ材料から油の一部分を抽出する場合があり、超臨界流体を使用してそれをさらに脱脂することができる。一部の実施形態では、ナッツ材料は、例えば、蒸気低温殺菌または化学低温殺菌により（例えば、プロピレンオキシドを使用することにより）低温殺菌されている。一部の実施形態では、ナッツ材料は、低温殺菌されていない。

一実施形態では、ナッツタンパク質から脂肪を分離するために、ナッツは、超臨界流体または臨界液体ガス（例えば、ＣＯ_２）処理を用いて処理される。一部の実施形態では、ナッツは、超臨界流体処理の前にサイズが減少される（例えば、圧砕、細切など）。特に、ナッツは、落花生を含む場合があり、または他の実施形態では、１種もしくは複数のツリーナッツ（例えば、クルミ、カシューナッツ、ヘーゼルナッツ、アーモンド、ピスタチオ、ペカン、もしくは他のナッツ）を含む場合がある。他の例では、超臨界流体ＣＯ_２処理（または他の超臨界流体）を使用して、以前に脱脂されたナッツ粉（例えば、１２％脱脂落花生粉）をさらに脱脂して、超低脂肪高アレルゲン性ナッツ粉を得ることができる。

本明細書に記載の超臨界流体脱脂処理を使用するナッツ粉またはナッツ組成物の製造プロトコールは、経口免疫療法プロトコールに使用するための安定なナッツタンパク質を有する超低脂肪高アレルゲン性ナッツ粉および組成物をもたらすと予想される。一部の例では、超臨界流体脱脂処理は、処理後に約１２％未満の脂肪（例えば、油）含有率、約１０％未満の脂肪含有率、約８％未満の脂肪含有率、約６％未満の脂肪含有率、脂肪含有率約５％未満の脂肪含有率、約３％の脂肪含有率～約７％の脂肪含有率の間、約３％の脂肪含有率～約５％の脂肪含有率の間、または約４％の脂肪含有率を有する落花生粉を生成すると予想される。他の例では、超臨界流体脱脂処置は、処置後に約１２％未満の脂肪（例えば、油）含有率、約１０％未満の脂肪含有率、約８％未満の脂肪含有率、約６％未満の脂肪含有率、約５％未満の脂肪含有率、約１％の脂肪含有率～約７％の脂肪含有率の間、約１％の脂肪含有率～約５％の脂肪含有率の間、約２％の脂肪含有率または約３％の脂肪含有率を有するツリーナッツ粉を生成すると予想される。他の例では、超臨界流体脱脂プロセスは、約０．１～約１％の脂肪含有率の間、約０．５％の脂肪含有率または１％の脂肪含有率のナッツ粉を生成すると予想される。出発ナッツ材料は、生のナッツであり得、または他の実施形態では、出発ナッツ材料は、煎られている場合がある。

特定の実施形態では、圧砕または細挽きナッツ（例えば、１８メッシュの篩を通過する）からの超臨界流体油抽出は、約４０００ｐｓｉ～約１０，５００ｐｓｉの圧力および約１７℃～約５８℃の温度での抽出を含み得る。ある特定の実施形態では、超臨界流体と圧砕ナッツ材料との接触時間は、抽出サイクルあたりおよそ１時間～約５．５時間の範囲であり得る。１つまたは複数の超臨界流体抽出サイクルは、所望の脂肪（例えば、油）含有率が達成されるまで行うことができる。

脱脂ナッツ粉を粉砕して、より小さいサイズの粒子を有する脱脂ナッツ粉を生成することができる。一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉は、粉砕および脱脂されたナッツ粉のほぼ全てが２ｍｍ（１０メッシュ）またはそれよりも細かい篩、例えば１ｍｍ（１８メッシュ）またはそれよりも細かい篩を通過するように粉砕される。脱脂ナッツ粉は、所望の粒度分布を有する脱脂ナッツ粉を生成するように粉砕することもできる。例えば、一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉は、脱脂ナッツ粉の約２５重量％もしくはそれよりも多く、約５０重量％もしくはそれよりも多く、約７５重量％もしくはそれよりも多く、約８０重量％もしくはそれよりも多く、約８５重量％もしくはそれよりも多く、約９０重量％もしくはそれよりも多く、約９５重量％もしくはそれよりも多く、約９６重量％もしくはそれよりも多く、約９７重量％もしくはそれよりも多く、約９８重量％もしくはそれよりも多く、約９９重量％もしくはそれよりも多く、約９９．５重量％もしくはそれよりも多く、または約９９．９重量％もしくはそれよりも多くが、２ｍｍ（１０メッシュ）の篩、１ｍｍ（１８メッシュ）の篩、８４１μｍ（２０メッシュ）の篩、７０７μｍ（２５メッシュ）の篩、５９５μｍ（３０メッシュ）の篩、５００μｍ（３５メッシュ）の篩、４２０μｍ（４０メッシュ）の篩、３５４μｍ（４５メッシュ）の篩、３５４μｍ（４５メッシュ）の篩、２９７μｍ（５０メッシュ）の篩、または２５０μｍ（６０メッシュ）の篩、２１０μｍ（７０メッシュ）の篩、１７７μｍ（８０メッシュ）の篩、または１４９μｍ（１００メッシュ）の篩を通過するように粉砕される。

より大きい粒子をより小さい粒子から分離して、いっそう小さい平均粒度またはより小さい粒度分布を有する脱脂ナッツ粉を生成することができる。例えば、１つまたは複数の篩を使用して、より大きい粒子をより小さい粒子から分離することができる。一部の実施形態では、より小さい粒子は、ナッツ粉を医薬組成物に製剤化する（例えば、希釈剤、流動促進剤、または滑沢剤などの１種または複数の担体材料を添加することによる）、またはパッケージ（カプセルなど）中にパッケージングするなどのさらなる加工のために保持される。一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉のほぼ全てが１ｍｍ（１８メッシュ）の篩、８４１μｍ（２０メッシュ）の篩、７０７μｍ（２５メッシュ）の篩、５９５μｍ（３０メッシュ）の篩、５００μｍ（３５メッシュ）の篩、４２０μｍ（４０メッシュ）の篩、３５４μｍ（４５メッシュ）の篩、３５４μｍ（４５メッシュ）の篩、２９７μｍ（５０メッシュ）の篩、または２５０μｍ（６０メッシュ）の篩、２１０μｍ（７０メッシュ）の篩、１７７μｍ（８０メッシュ）の篩、または１４９μｍ（１００メッシュ）の篩を通過するように、より大きい粒子がより小さい粒子から分離される。

超臨界流体を使用するナッツ粉の脱脂は、１回または複数回繰り返すことができ、これは、１つまたは複数の粉砕ステップをさらに含み得る。例えば、ナッツ材料は、ナッツ材料を超臨界流体と接触させて脱脂ナッツ粉を生成すること、超臨界流体を脱脂ナッツ粉から除去すること、および脱脂ナッツ粉を新鮮な超臨界流体と再接触させることにより、脱脂することができる。一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉を新鮮な超臨界流体と再接触させる前に、ナッツ粉を、粉砕して、より小さいサイズの粒子を生成する。

抽出ナッツ粉の標準的な試験を使用して、ナッツ粉製剤および食品中に使用するためならびに経口免疫療法処置レジメンに使用するための適性を決定することができる。製剤生産用に許可する前に、ナッツ粉材料が外観、同一性、総タンパク質含有率および水分含有率について試験される場合がある（例えば、表５参照）。ナッツ粉は、２～８℃の制御された条件下で保存され得る。一部の実施形態では、ナッツ粉は、約２℃～約４０℃、約１０℃～約３５℃、約１５℃～約３０℃、または約２０℃～約２５℃で保存される。一部の実施形態では、ナッツ粉材料は、例えば、ナッツ粉を１つまたは複数の篩に通すことにより粒度または粒度分布について試験される。

一部の実施形態では、ナッツ粉の含油率は、例えば、ナッツ粉の質量または体積を測定することにより測定される。ナッツ粉の含油率は、例えば、ヘキサンソックスレー抽出法を使用して測定することができる。一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉の総タンパク質含有率は、例えばブラッドフォードアッセイを使用することにより測定される。

圧砕ナッツ材料および／または抽出タンパク質ナッツ粉（例えば、１つもしくは複数の抽出ステップ中、ならびに／または製剤化および／もしくはカプセル化前の最終超低脂肪ナッツ粉のもの）に対して外観評価が行われる場合がある。外観評価は、例えば、フルスペクトル光を照射した白色背景で容器を目視点検することを含み得る。

水分含有率は、タンパク質の安定性に影響するおそれがあり、油および揮発性物質の抽出前後ならびに経時的な水分含有率の変化を理解することは、場合によっては、より短い使用期限につながるおそれがある、続いて調製された製剤における変化を理解するために有用である。ナッツ粉の水分含有率は、ＵＳＰに従った乾燥減量（ＬＯＤ）の決定を使用して測定され得る。ＬＯＤのための条件は、落花生粉および／またはその後に製剤化された賦形剤の必要条件に基づき決定される場合がある。

脱脂ナッツ材料中の１種または複数のナッツタンパク質アレルゲンを特徴付けることができる。脱脂ナッツ材料中の１種または複数のナッツタンパク質アレルゲンは、例えば、１種もしくは複数のタンパク質アレルゲンの存在、１種もしくは複数のタンパク質アレルゲンの量、異なる１種もしくは複数のタンパク質アレルゲンに対する１種もしくは複数のタンパク質アレルゲンの量、または１種もしくは複数のタンパク質アレルゲンの生物活性について特徴付けられる場合がある。１種または複数のタンパク質アレルゲンは、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、免疫ブロット、質量分析、液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣ－ＭＳ）、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ、または任意の他の公知の方法を使用して特徴付けることができる。例えば、ＥＬＩＳＡを使用して、１種または複数のタンパク質アレルゲンの生物活性を決定することができ、例えば、タンパク質アレルゲンが脱脂プロセスの間に非アレルゲン性にされたかどうかを決定することができる。一部の実施形態では、ＲＰ－ＨＰＬＣを使用して、１種または複数のタンパク質アレルゲンの存在または相対量が決定される。特徴付けられ得る例示的なタンパク質アレルゲンには、１種または複数の落花生タンパク質アレルゲン（例えば、Ａｒａ ｈ １、Ａｒａ
ｈ ２、もしくはＡｒａ ｈ ６）またはクルミタンパク質アレルゲン（例えば、Ｊｕｇ ｒ １またはＪｕｇ ｒ ２）が含まれる。

逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）を使用して、その全体で参照により本明細書に組み込まれている米国特許第９，１９８，８６９号および米国特許出願公開第２０１４／０２７１７２１号に記載のように、落花生タンパク質アレルゲン（例えば、Ａｒａ ｈ １、Ａｒａ ｈ ２、Ａｒａ－ｈ ６）が物理的に分離される場合がある。ＲＰ－ＨＰＬＣを使用して、超低脂肪落花生粉および最終製剤の同一性が確認される場合がある。試料は、米国特許出願公開第２０１４／０２７１７２１号に、より詳細に記載される方法により分析され得る。

ＲＰ－ＨＰＬＣ法を使用する、抽出された試料のクロマトグラフィー分析により、落花生粉抽出物に独特なクロマトグラフィーの「フィンガープリント」が生成され得る。これらの領域の各々のタンパク質含有率（ｍｇ／ｇ）は、以下のように定量され得る：

およそ１２分～３５分の間に溶出する試料の領域が積分され得る。積分された総面積が、ＢＳＡ標準に対して定量され得る。次いで、抽出可能なタンパク質の総含有率が、次式を使用して計算され得る：

［式中：
Ｒ_ｕ＝作業試料中のＡｒａ ｈタンパク質の総ピーク面積またはＡｒａ ｈ種のピーク面積；
Ｒ_ｓ＝全作業標準における平均ＢＳＡピーク面積
ＣＳＴＤ＝ＢＳＡ作業標準濃度（ｍｇ／ｍＬ）；
Ｖ_試料＝作業試料の総希釈体積（１０．０ｍＬ）；および
Ｗｔ_試料＝落花生粉試料の重量（ｇ）］。
次いで、各領域についての総タンパク質の相対パーセント含有率を計算することができる。

例えば、脱脂ナッツ粉を１種または複数の担体材料（流動促進剤、滑沢剤、または希釈剤など）と組み合わせることにより、脱脂ナッツ粉を経口免疫療法用にさらに加工することができる。脱脂ナッツ粉と組み合わせた担体材料は、ナッツ粉中のタンパク質を希釈し、所望のタンパク質濃度に基づき、担体材料（例えば、希釈剤）の量がナッツ粉に添加される。一部の実施形態では、タンパク質の予定された量が剤形中に含まれる。異なる測定された用量（すなわち、異なる量のタンパク質）を有する様々な剤形を得るために、剤形の体積または製剤化されたナッツ粉中のタンパク質濃度を調整することができる。一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉（１種または複数の担体材料を含み得る）は、脱脂ナッツ粉の用量を測定することにより、例えばパッケージ中の脱脂ナッツ粉の体積または重量を測定することにより、さらに加工される。一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉は、カプセル、エンベロープ、サシェ、パウチ、スティックパック、または任意の他の適切なパッケージング中に脱脂ナッツ粉をパッケージングすることにより加工される。一部の実施形態では、パッケージングは、約５ｍＬもしくはそれ未満、約４ｍＬもしくはそれ未満、約３ｍＬもしくはそれ未満、約２ｍＬもしくはそれ未満、または約１ｍＬもしくはそれ未満の体積を有する。

ＩＶ． 組成物／製剤
経口免疫療法に使用するための、カプセル化製剤および食物ベースのチュー（chew）を含む、落花生およびツリーナッツ粉組成物ならびに製剤が、本明細書に提供される。一実施形態では、ナッツ粉組成物は、超臨界流体（例えば、ｓＣＯ_２）を使用して抽出された超低脂肪ナッツ粉を含む。カプセル化製剤を含む製剤は、１種または複数の賦形剤と共に配合された超低脂肪ナッツ粉を含む。例えば、超低脂肪ナッツ粉に加えて、製剤は、希釈剤、流動促進剤、滑沢剤、着色剤、およびカプセル殻構成成分のそれぞれの１つまたは複数を含み得る。

特に経口免疫療法用の低用量剤形を調製する場合、脱脂および粉砕ナッツ粉のより小さい粒度は、より容易な製剤化およびパッケージングを可能にする。アレルギーを有する対象に経口免疫療法製剤の所望よりも高い用量を投与することによる重症のアナフィラキシー反応の顕著なリスクがあるので、所望または意図される用量が実際に投与される用量であることを保証するように注意しなければならない。したがって、経口免疫療法用に製造された用量における変動を最小限にすべきである。脱脂されていないナッツ材料中の脂肪は、粒子を互いに粘着させる結果、より大きい、製剤化が困難なナッツ粉粒子を生じる。ナッツ材料を脱脂し、結果として生じた脱脂ナッツ材料を例えば本明細書に記載の方法により粉砕することにより、ナッツ粉の粒度を実質的に減少させることができる。

アレルゲン性ナッツ粉粒子の粒度および粒度分布は、１つまたは複数の篩を使用して決定することができる。ある特定のメッシュサイズの篩は、より小さい粒子（篩を通過する）をより大きい粒子から分離し、篩を通過する粒子は、篩のサイズよりも小さい。篩は、当業者が標準的な単位に容易に変換できる「メッシュ」サイズで示されることが多い。一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉（すなわち、ツリーナッツ粉または落花生粉）のほぼ全ては、１ｍｍ（１８メッシュ）の篩、４２０μｍ（４０メッシュ）の篩、２５０μｍ（６０メッシュ）の篩、１７７μｍ（８０メッシュ）の篩、１４９μｍ（１００メッシュ）の篩、または７４μｍ（２００メッシュ）の篩を通過する。一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉（すなわち、脱脂ツリーナッツ粉または脱脂落花生粉）の約２５％もしくはそれよりも多く、約５０％もしくはそれよりも多く、約７５％もしくはそれよりも多く、約８０％もしくはそれよりも多く、約８５％もしくはそれよりも多く、約９０％もしくはそれよりも多く、約９５％もしくはそれよりも多く、約９６％もしくはそれよりも多く、約９７％もしくはそれよりも多く、約９８％もしくはそれよりも多く、約９９％もしくはそれよりも多く、約９９．５％もしくはそれよりも多く、または約９９．９％もしくはそれよりも多くは、１ｍｍ（１８メッシュ）の篩、４２０μｍ（４０メッシュ）の篩、２５０μｍ（６０メッシュ）の篩、１７７μｍ（８０メッシュ）の篩、１４９μｍ（１００メッシュ）の篩、または７４μｍ（２００メッシュ）の篩を通過する。

一部の実施形態では、１種または複数の担体材料（流動促進剤、滑沢剤、および／または希釈剤など）を含む脱脂ナッツ粉は、１種または複数の担体材料を有する脱脂ナッツ粉と比較して、ナッツ粉粒子の減少した凝集を結果として生じる。一部の実施形態では、１種または複数の担体材料を含む脱脂ナッツ粉のほぼ全ては、１ｍｍ（１８メッシュ）の篩、４２０μｍ（４０メッシュ）の篩、２５０μｍ（６０メッシュ）の篩、１７７μｍ（８０メッシュ）の篩、１４９μｍ（１００メッシュ）の篩、または７４μｍ（２００メッシュ）の篩を通過する。一部の実施形態では、１種または複数の担体材料（流動促進剤、滑沢剤、および／または希釈剤など）を含む脱脂ナッツ粉（すなわち、脱脂ツリーナッツ粉または脱脂落花生粉）の約２５％もしくはそれよりも多く、約５０％もしくはそれよりも多く、約７５％もしくはそれよりも多く、約８０％もしくはそれよりも多く、約８５％もしくはそれよりも多く、約９０％もしくはそれよりも多く、約９５％もしくはそれよりも多く、約９６％もしくはそれよりも多く、約９７％もしくはそれよりも多く、約９８％もしくはそれよりも多く、約９９％もしくはそれよりも多く、約９９．５％もしくはそれよりも多く、または約９９．９％もしくはそれよりも多くは、１ｍｍ（１８メッシュ）の篩、４２０μｍ（４０メッシュ）の篩、２５０μｍ（６０メッシュ）の篩、１７７μｍ（８０メッシュ）の篩、１４９μｍ（１００メッシュ）の篩、または７４μｍ（２００メッシュ）の篩を通過する。

アレルゲン性ナッツ粉は、天然ナッツ材料と比較して好ましくは脱脂されている。ナッツ材料の脱脂は、ナッツ材料から小さいサイズの粒子を有するナッツ粉への粉砕を促進する。一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉（すなわち、脱脂ツリーナッツ粉または脱脂落花生粉）は、約１２重量％未満の含油率、約１０重量％未満の含油率、約８重量％未満の含油率、約６重量％未満の含油率、約５重量％未満の含油率、約４重量％未満の含油率、約３重量％未満の含油率、約２重量％未満の含油率、約１重量％未満の含油率、または約０．５重量％未満の含油率を有する。一部の実施形態では、脱脂ナッツ粉（すなわち、脱脂ツリーナッツ粉または脱脂落花生粉）は、約０．２重量％～約０．５重量％の間、約０．５重量％～約１重量％の間、約１重量％～約２重量％の間、約２重量％～約３重量％の間、約３重量％～約４重量％の間、約４重量％～約５重量％の間、約５重量％～約６重量％の間、約６重量％～約８重量％の間、約８重量％～約１０重量％の間、または約１０重量％～約１２重量％の間の含油率を有する。

脱脂ナッツ粉に加えて、医薬組成物は、流動促進剤、希釈剤、または滑沢剤の１種または複数などの、１種または複数の担体材料を含み得る。剤形を製造するための医薬組成物の取扱いの容易さを増加させるために、担体材料にナッツ粉を配合することができる。

経口免疫療法用の剤形は、脱脂ナッツ粉の測定された量を含む。ナッツ粉は、測定されて所望の用量にされ、経口投与用の形式にすることができる。一部の実施形態では、１種または複数の担体材料と組み合わされ得るナッツ粉は、カプセル中にカプセル化される；エンベロープ、サシェ、パウチ、スティックパック、もしくは他の適切なパッケージング中に密封される；錠剤（チュアブル錠であり得る）に押圧される；または任意の他の適切なパッケージングの形式にされる。一部の実施形態では、パッケージングは、約５ｍＬもしくはそれ未満、約４ｍＬもしくはそれ未満、約３ｍＬもしくはそれ未満、約２ｍＬもしくはそれ未満、または約１ｍＬもしくはそれ未満の体積を有する。パッケージングはまた、ブリスターパックまたはボックスなどの二次パッケージング内に含有され得る。パッケージング（一次パッケージングまたは二次パッケージングのいずれか）は、剤形またはパッケージ内に含有される投薬量（すなわち、ナッツタンパク質の量またはナッツ粉の量）を特定することができる。一部の実施形態では、カプセルは、消化されやすい材料からできており、まるごと嚥下することができる。一部の実施形態では、カプセル、エンベロープ、サシェ、パウチ、スティックパックまたは他のパッケージングが開けられ、パッケージング内に含有されるナッツ粉が、経口投与のために食材と混合される。例えば、カプセルに不都合なまたはカプセルを嚥下できない小児は、ナッツ粉をプディング、オートミール、または他の食材と混合することで、より容易な経口投与が可能になることを見出し得る。一部の実施形態では、食材は、低アレルギー性食物である。

特定の実施形態では、超低脂肪ナッツ粉（例えば、落花生粉、ツリーナッツ粉）を含む組成物は、経口免疫療法レジメンの経過中にナッツアレルギーを有する患者に提供するための食材を含み得る。本技術の態様により特徴付けられたナッツ粉含有率を含む食材の非限定的な例には、焼き菓子（例えば、クッキー、クラッカー、フードバーなど）、食物ペレット、キャンディー、ミックス粉末などが含まれる。食材の他の例には、プディングおよびオート麦（オートミールなど）が含まれる。

チュアブル錠の製剤は、当技術分野において公知であり、硬さ、崩壊、溶解、錠剤のサイズ、厚さ、摩損度、および患者がチュアブル錠を咀嚼する能力または意志（すなわち、患者は、嫌な味の錠剤を咀嚼するのでなく、まるごと嚥下するおそれがある）に影響し得る味などの品質、バイオアベイラビリティーならびに生物学的同等性を考慮する。様々な要因がチュアブル形態の製剤因子に関与する。Renuら、Chewable Tablets：A Comprehensive Review．Pharma Innovation Journal ２０１５年；４巻（５号）：１００～１０５頁を参照されたい。主要な製剤因子には、流動、潤滑、崩壊、感覚刺激特性、圧縮性、適合性、および安定性が含まれる。経口免疫療法では、アレルギーの個体は、アレルギーのある食物に味に嫌悪を有することが多いので、味のマスキングが非常に重要である。製品の設計開発上の考慮事項には、活性成分の放出を促進する崩壊剤、ならびに味のマスキング用の甘味料および香味剤が含まれる。ＦＤＡから承認された製品のための全ての構成成分は、Handbook of Pharmaceutical Excipients、６版、２００９年８月、編集者：R．C．Rowe、P．J．SheskeyおよびM．E．Quinn、出版社：The Pharmaceutical Press、London、UK；American Pharmaceutical Association、Washington DC、USA．ISBN：９７８ ０ ８５３６９ ７９２ ３（UK）９７８ １ ５８２１２ １３５ ２（USA
）に見出される賦形剤を含有しなければならない。適切な製剤構成成分の例は、当技術分野において公知であり、表１に記載されたものを含み得る。

カプセル化製剤を含むある特定の実施形態では、ナッツ粉製剤は、１種もしくは複数の希釈剤、１種もしくは複数の流動促進剤、および／または１種もしくは複数の滑沢剤を含み得る。本明細書に記載の超低脂肪ナッツ粉を含むナッツ粉製剤の意図される剤形は、例えば、（ヒドロキシプロピル）メチルセルロース（ＨＰＭＣ）ベースのカプセルを含む場合があり、剤形の強度は、約０．２ｍｇ、約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約１０ｍｇ、約１００ｍｇ、約４７５ｍｇ、約１０００ｍｇのナッツタンパク質またはナッツタンパク質の他の量であり得る。ナッツタンパク質（例えば、ナッツ粉）は、場合によっては、従来の医薬製造プロセスに資する固有の流動特性を有さない粘着材料であり得る。したがって、不活性医薬成分（賦形剤）が、製剤に添加される場合があり、それにより、ナッツ粉が、剤形の製造と、また送達との両方を高める流動特徴を有する医薬剤形にされる場合がある。

ｃＧＭＰ製造条件下で、希釈剤、流動促進剤、および／または滑沢剤と共にナッツ粉は製剤化され、続いて、サイズ３、００または０００の（ヒドロキシプロピル）メチルセルロース（ＨＰＭＣ）カプセル中に０．２、０．５、１、１０、１００、４７５、５００または１０００ｍｇのナッツ粉としてカプセル化される。

特定の製剤では、希釈剤は、開けたカプセルから分散するのに適した体積を含有するように、低および高用量を製剤化する機会を提供する。流動促進剤および滑沢剤は、対象がカプセルから粉を容易に全部取り出すように、ナッツ粉に流動性を追加することができる。臨床試験のために、カプセルは、琥珀色ボトルまたはブリスターパック中にばら包装される。使用時に、カプセルが開けられ、投与直前に内容物が味マスキング食物と混合される。

一実施形態では、組成物は、１種または複数の希釈剤を含む。製剤に使用するための「希釈剤」には、アルギン酸およびその塩；セルロース誘導体、例えばカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース（例えば、商品名ＭＥＴＨＯＣＥＬ（商標）で販売されているセルロースエーテル）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース（例えば、商品名ＫＬＵＣＥＬ（商標）で販売されているヒドロキシプロピルセルロース（hydroxyporopylcellulose））、エチルセルロ
ース（例えば、商品名ＥＴＨＯＣＥＬ（商標）で販売されているエチルセルロース）、結晶セルロース（例えば、商品名ＡＶＩＣＥＬ（登録商標）で販売されている結晶セルロース）；ケイ化結晶セルロース；結晶デキストロース；アミラーゼ；ケイ酸マグネシウムアルミニウム；酸性多糖（polysaccharide acid）；ベントナイト；ゼラチン；ポリビニルピロリドン／酢酸ビニルコポリマー；クロスポビドン；ポビドン；デンプン；アルファ化デンプン；トラガカント、デキストリン、糖、例えばスクロース（例えば、商品名ＤＩ－ＰＡＣ（登録商標）で販売されているスクロース）、グルコース、デキストロース、糖蜜、マンニトール、ソルビトール、キシリトール（例えば、商品名ＸＹＬＩＴＡＢ（登録商標）で販売されているキシリトール）、ラクトース（例えば、ラクトース一水和物、ラクトース無水物など）；リン酸二カルシウム；天然または合成ガム、例えばアカシア、トラガカント、ガッティガム、オオバコハスク（isapol husk）の粘液、ポリビニルピロリドン（例えば、ＰＯＬＹＶＩＤＩＯＮＥ（登録商標）ＣＬ、ＫＯＬＬＩＤＯＮ（登録商標）ＣＬ、ＰＯＬＹＰＬＡＳＤＯＮＥ（登録商標）ＸＬ－１０のいずれか１つの商品名で販売されているポリビニルピロリドン）、カラマツアラビノガラクタン（arabogalactan）、
商品名ＶＥＥＧＵＭ（登録商標）で販売されている材料などのケイ酸マグネシウムアルミニウム、ポリエチレングリコール、ろう、アルギン酸ナトリウム、デンプン、例えば、天然デンプン、例えばトウモロコシデンプンまたはバレイショデンプン、アルファ化デンプン、例えばＳＴＡＲＣＨ１５００（登録商標）（Ｃｏｌｏｒｃｏｎ）、ＮＡＴＩＯＮＡＬ（商標）１５５１もしくはＡＭＩＪＥＬ（登録商標）のいずれか１つの商品名で販売されているデンプン、またはデンプングリコール酸ナトリウム、例えば商品名ＰＲＯＭＯＧＥＬ（登録商標）もしくはＥＸＰＬＯＴＡＢ（登録商標）で販売されている材料；デンプングリコール酸ナトリウムなどの架橋デンプン；クロスポビドンなどの架橋ポリマー；架橋ポリビニルピロリドン；アルギン酸またはアルギン酸ナトリウムなどのアルギン酸塩などのアルギネート；商品名ＶＥＥＧＵＭ（登録商標）ＨＶで販売されている材料（ケイ酸マグネシウムアルミニウム）などのクレイ；カンテン、グアー、ローカストビーン、カラヤ、ペクチン、またはトラガカントなどのガム；デンプングリコール酸ナトリウム；ベントナイト；天然スポンジ；界面活性剤；陽イオン交換樹脂などの樹脂；柑橘類の果肉；ラウリル硫酸ナトリウム；デンプンと組み合わせたラウリル硫酸ナトリウム（sodium lauryl
sulfate in combination starch）；ならびにそれらの組合せが含まれるが、これらに限定されない。一実施形態では、製剤は、結晶セルロースまたはＳＴＡＲＣＨ１５００（登録商標）を含む。別の実施形態では、製剤は、結晶セルロースおよびＳＴＡＲＣＨ１５００（登録商標）を含む。

本明細書に記載の固形剤形に使用するために適した流動促進剤（固化防止剤）には、コロイド状二酸化ケイ素（例えば、商標ＣＡＢ－Ｏ－ＳＩＬ（登録商標）で販売されているコロイド状二酸化ケイ素）およびタルク（例えば、Ｕｌｔｒａ Ｔａｌｃ４０００）が含まれるが、これらに限定されない。一実施形態では、組成物は、商標ＣＡＢ－Ｏ－ＳＩＬ（登録商標）で販売されているコロイド状二酸化ケイ素を含む。

本明細書に記載の固形剤形に使用するために適した滑沢剤には、ステアリン酸、水酸化カルシウム、タルク、トウモロコシデンプン、フマル酸ステアリルナトリウム（sodium stearyl fumerate）、アルカリ金属塩およびアルカリ土類金属塩、例えばアルミニウム
、カルシウム、マグネシウム、亜鉛、ステアリン酸、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ろう、商品名ＳＴＥＡＲ－Ｏ－ＷＥＴ（商標）で販売されている材料などのステアリン酸マグネシウムとラウリル硫酸ナトリウムとの配合物、ホウ酸、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ロイシン、ポリエチレングリコールまたはメトキシポリエチレングリコール、例えば商品名ＣＡＲＢＯＷＡＸ（商標）で販売されているポリエチレングリコール、ＰＥＧ４０００、ＰＥＧ５０００、ＰＥＧ６０００、プロピレングリコール、オレイン酸ナトリウム、ベヘン酸グリセリル、パルミトステアリン酸グリセリル、安息香酸グリセリル、ラウリル硫酸マグネシウムまたはラウリル硫酸ナトリウム、ならびにそれらの組合せが含まれるが、それらに限定されない。一実施形態では、組成物は、ステアリン酸マグネシウムを含む。別の実施形態では、組成物は、フマル酸ステアリルナトリウムを含む。

一部の実施形態では、製剤は、１種または複数の充填剤をさらに含み得る。「充填剤」には、ラクトース、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、硫酸カルシウム、結晶セルロース、セルロース粉末、デキストロース、デキストレート、デキストラン、デンプン、アルファ化デンプン、スクロース、キシリトール、ラクチトール、マンニトール（mamiitol）、ソルビトール、塩化ナトリウム、ポリエチレングリコールなどの化合物、およびそれらの組合せが含まれる。

一実施形態では、本明細書に記載の組成物は、約０．０５％～約１００％ｗ／ｗ、またはその中の任意の整数の濃度でナッツタンパク質を含む。別の実施形態では、本明細書に記載の組成物は、約０．１％～約１００％ｗ／ｗの濃度で１種または複数のナッツタンパク質を含む。別の実施形態では、本明細書に記載の組成物は、約０．５％、約１％、約２％、約４％、または約１００％ｗ／ｗからの濃度で１種または複数のナッツタンパク質を含む。別の実施形態では、本明細書に記載の組成物は、約０．７％、約１．４２％、約３．９３％、または約１００％ｗ／ｗからの濃度で１種または複数のナッツタンパク質を含む。

一実施形態では、本明細書に記載の組成物は、目標単位重量中に約０．５ｍｇ／カプセル～約１１００ｍｇ／カプセル、またはその中の任意の整数の１種または複数のナッツタンパク質を含む。さらに別の実施形態では、本明細書に記載の組成物は、目標単位重量中に約１．０ｍｇ／カプセル～約１０００ｍｇ／カプセルの１種または複数のナッツタンパク質を含む。さらに別の実施形態では、本明細書に記載の組成物は、目標単位重量中に約１．０ｍｇ／カプセル～約２ｍｇ／カプセル、約３ｍｇ／カプセル、約６ｍｇ／カプセル、約１２ｍｇ／カプセル、約２０ｍｇ／カプセル、約４０ｍｇ／カプセル、約８０ｍｇ／カプセル、約１２０ｍｇ／カプセル、約１６０ｍｇ／カプセル、約２００ｍｇ／カプセル、約２４０ｍｇ／カプセル、約３００ｍｇ／カプセル、約５００ｍｇ／カプセルまたは約１０００ｍｇ／カプセルの１種または複数のナッツタンパク質を含む。

一部の実施形態では、剤形は、脱脂ナッツ粉の測定された量を含むことにより、剤形は、約０．１ｍｇ～約２０００ｍｇのナッツタンパク質（例えば、約０．１ｍｇ～約０．５ｍｇのナッツタンパク質、約０．５ｍｇ～約１ｍｇのナッツタンパク質、約１ｍｇ～約２．５ｍｇのナッツタンパク質、約２．５ｍｇ～約５ｍｇのナッツタンパク質、約５ｍｇ～約１０ｍｇのナッツタンパク質、約１０ｍｇ～約２５ｍｇのナッツタンパク質、約２５ｍｇ～約５０ｍｇのナッツタンパク質、約５０ｍｇ～約１００ｍｇのナッツタンパク質、約１００ｍｇ～約２５０ｍｇのナッツタンパク質、約２５０ｍｇ～約５００ｍｇのナッツタンパク質、または約５００ｍｇ～約１０００ｍｇのナッツタンパク質）を含む。

本明細書に記載の組成物中の希釈剤の濃度は、組成物の約１％～約９９％ｗ／ｗであり得る。一実施形態では、本明細書に記載の組成物中の希釈剤の濃度は、組成物の約１０％～約９０％ｗ／ｗであり得る。例えば、希釈剤は、ＳＴＡＲＣＨ１５００（登録商標）であり得、濃度は、組成物の約９．８６％～約１０％ｗ／ｗであり得る。希釈剤の目標単位重量は、約１０～約６０ｍｇ／カプセルであり得る。例えば、希釈剤は、ＳＴＡＲＣＨ１５００（登録商標）であり得、目標単位重量は、約１４、約１４．５、または約５２．５ｍｇ／カプセルであり得る。

一実施形態では、希釈剤は、結晶セルロースであり得、濃度は、組成物の約９０％～約６０％ｗ／ｗであり得る。例えば、希釈剤は、結晶セルロースであり得、濃度は、組成物の約８８．６６％、約８７．５８％、約８５．０７％、または約６５．６６％ｗ／ｗであり得る。一実施形態では、希釈剤の目標単位重量は、約１００～約４１０ｍｇ／カプセルであり得る。例えば、希釈剤は、結晶セルロースであり得、目標単位重量は、約１２５．５５、約１２６．９９、約４４６．６１、または約３９４ｍｇ／カプセルであり得る。

本明細書に記載の組成物中の流動促進剤の濃度は、組成物の約０．０１％～約１０％ｗ／ｗであり得る。一実施形態では、流動促進剤は、Ｃａｂ－Ｏ－Ｓｉｌであり、本明細書に記載の組成物中の流動促進剤の濃度は、組成物の約０．０１％、約０．０５％、約０．１％、約０．２５％、約０．５％、約０．７５％、約１．０％、約１．２５％、または約１．５％ｗ／ｗであり得る。流動促進剤の目標単位重量は、約０．０５～約５ｍｇ／カプセルであり得る。一実施形態では、流動促進剤は、Ｃａｂ－Ｏ－Ｓｉｌであり、目標単位重量は、約０．７２５、約２．６２５、または約３．０ｍｇ／カプセルである。

本明細書に記載の組成物中の滑沢剤の濃度は、組成物の約０．０１％～約１０％ｗ／ｗであり得る。一実施形態では、滑沢剤は、ステアリン酸マグネシウムであり、本明細書に記載の組成物中の滑沢剤の濃度は、組成物の約０．０１％、約０．０５％、約０．１％、約０．２５％、約０．５％、約０．７５％、約１．０％、約１．２５％、または約１．５％ｗ／ｗであり得る。滑沢剤の目標単位重量は、約０．０５～約５ｍｇ／カプセルであり得る。一実施形態では、滑沢剤は、ステアリン酸マグネシウムであり、目標単位重量は、約０．７２５、約２．６２５、または約３．０ｍｇ／カプセルである。

処方量（quantitative formula）は、製造充填重量に応じて調整されることが理解さ
れている。最終充填重量は、約１５０ｍｇ～約６００ｍｇ～約１０００ｍｇで変動し得る。一実施形態では、約０．５ｍｇのナッツタンパク質を含有する超低脂肪ナッツ粉を含む製剤は、約１５８ｍｇの最終充填重量で製造される。別の実施形態では、約１．０ｍｇのナッツタンパク質を含有するナッツタンパク質製剤は、約１５０ｍｇの最終充填重量で製造される。別の実施形態では、約１０．０ｍｇのナッツタンパク質を含有するナッツ粉製剤は、約４５０ｍｇの最終充填重量で製造される。別の実施形態では、約１００ｍｇのナッツタンパク質を含有するナッツタンパク質製剤は、約６００ｍｇの最終充填重量で製造される。

一部の実施形態では、固形剤形は、錠剤（懸濁錠、速溶錠、噛砕き崩壊（bite-disintegration）錠、速崩壊錠、発泡錠、またはカプレット錠を含む）、丸剤、散剤（無菌パッ
ケージングされた散剤を含む（「サシェパック」またはホイルパウチなど）、分配可能な散剤、または発泡散剤）、カプセル剤（軟カプセル剤または硬カプセル剤の両方を含む、例えば、動物由来ゼラチンもしくは植物由来ＨＰＭＣ製のカプセル剤、または「スプリンクルカプセル剤」）、固体分散剤、固溶体剤、ペレット剤、または顆粒剤の形態であり得る。他の実施形態では、製剤は、散剤の形態である。追加的に、製剤は、単一のカプセルまたは複数のカプセル剤形として投与され得る。一部の実施形態では、製剤は、２、または３、または４つのカプセル剤または錠剤または散剤のパッケージとして投与される。

一部の実施形態では、固形剤形、例えば、錠剤、発泡錠、およびカプセル剤は、特徴付けられたナッツアレルゲンを含むナッツ粉を１種または複数の医薬賦形剤と混合して、バルク配合組成物を形成することにより調製される。これらのバルク配合組成物を均一と呼ぶ場合、粒子が組成物全体に一様に分散していることにより、組成物が錠剤、丸剤、およびカプセル剤などの等しく有効な単位剤形に容易に細分され得ることが意味される。個別の単位投薬量は、経口摂取されると、または希釈剤と接触すると、崩壊するフィルムコーティングも含み得る。これらの製剤は、従来の薬理学的技法により製造することができる。

従来の薬理学的技法には、例えば、方法：（１）乾式混合、（２）直接圧縮、（３）粉砕、（４）乾式もしくは無水造粒、（５）湿式造粒、または（６）融合の１つまたは組合せが含まれる。例えば、Lachmanら、The Theory and Practice of Industrial Pharmacy（１９８６年）を参照されたい。他の方法には、例えば、噴霧乾燥、パンコーティ
ング、溶融造粒、造粒、流動床噴霧乾燥またはコーティング（例えば、ワースターコーティング）、接線コーティング、トップスプレー（top spraying）、打錠、押出成形など
が含まれる。

本明細書に記載の医薬固形剤形は、本明細書に記載の組成物および１種または複数の薬学的に許容される添加剤、例えば適合性の担体、結合剤、充填剤、懸濁化剤、香味剤、甘味剤、崩壊剤、分散剤、界面活性剤、滑沢剤、着色剤、希釈剤、可溶化剤、保湿剤、可塑剤、安定化剤、透過促進剤、湿潤剤、消泡剤、抗酸化剤、保存剤、またはそれらの１種もしくは複数の組合せを含み得る。なお他の態様では、Remington's Pharmaceutical Sciences、２０版（２０００年）に記載されている手技などの標準的なコーティング手技を
使用して、フィルムコーティングが製剤周囲に提供される。一実施形態では、粒子の一部または全てがコーティングされる。別の実施形態では、粒子の一部または全てがマイクロカプセル化されている。さらに別の実施形態では、ナッツアレルゲンの一部または全ては、不活性賦形剤でコーティングおよび／またはマイクロカプセル化された無定形材料である。なお別の実施形態では、粒子は、マイクロカプセル化されず、かつコーティングされない。

圧縮錠は、上記バルク配合製剤を押し固めることにより調製される固形剤形である。様々な実施形態では、口内で溶解するように設計された圧縮錠は、１種または複数の香味剤を含む。他の実施形態では、圧縮錠は、最終圧縮錠を囲むフィルムを含む。一部の実施形態では、フィルムコーティングは、製剤の遅延放出を提供することができる。他の実施形態では、フィルムコーティング（例えば、商品名ＯＰＡＤＲＹ（登録商標）コーティングで販売されているコーティング助剤または糖衣）は、対象の服薬遵守を助ける。ＯＰＡＤＲＹ（登録商標）を含むフィルムコーティングは、典型的には錠剤重量の約１％～約３％の範囲である。他の実施形態では、圧縮錠は、１種または複数の賦形剤を含む。

カプセルは、例えば、上記バルク配合製剤をカプセル内部に入れることにより調製され得る。一部の実施形態では、製剤（非水性懸濁剤および溶液剤）は、ゼラチン軟カプセル中に入れられる。他の実施形態では、製剤は、標準的なゼラチンカプセルまたはＨＰＭＣを含むカプセルなどの非ゼラチンカプセル中に入れられる。他の実施形態では、製剤は、スプリンクルカプセル中に入れられ、カプセルは、まるごと嚥下されてもよく、カプセルが開けられて、食べる前の食物の上に内容物が振りかけられてもよい。本発明の一部の実施形態では、治療用量は、複数（例えば、２、３、または４つ）のカプセルに分割される。一部の実施形態では、製剤の全用量は、カプセル形態で送達される。

様々な実施形態では、粒子および１種または複数の賦形剤は、乾燥配合され、経口投与後約３０分未満、約３５分未満、約４０分未満、約４５分未満、約５０分未満、約５５分未満、または約６０分未満以内に実質的に崩壊し、それにより、消化液中に製剤を放出する医薬組成物を提供するために十分な硬さを有する錠剤などの塊に圧縮される。

本発明の一態様では、剤形は、マイクロカプセル化製剤を含み得る。一部の実施形態では、１種または複数の他の適合性材料がマイクロカプセル化材料中に存在する。例示的な材料には、ｐＨ調整剤、侵食促進物質（erosion facilitator）、消泡剤、抗酸化剤、香味剤、および担体材料、例えば結合剤、懸濁化剤、崩壊剤、充填剤、界面活性剤、可溶化剤、安定化剤、滑沢剤、湿潤剤、および希釈剤が含まれるが、それらに限定されない。

本明細書に記載のマイクロカプセル化に有用な材料には、ナッツアレルゲンを他の非適合性賦形剤から十分に単離する、ナッツアレルゲンと適合性の材料が含まれる。ナッツアレルゲンと適合性の材料は、ナッツアレルゲンのｉｎ ｖｉｖｏ放出を遅延させる材料である。

製剤の放出を遅延させるために有用な、例示的なマイクロカプセル化材料には、ヒドロキシプロピルセルロースエーテル（ＨＰＣ）、例えばＫＬＵＣＥＬ（商標）またはＮｉｓｓａ ＨＰＣの商品名で販売されているヒドロキシプロピルセルロースエーテル、低置換度ヒドロキシプロピルセルロースエーテル（Ｌ－ＨＰＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロースエーテル（ＨＰＭＣ）、例えば、商品名ＳＥＰＩＦＩＬＭ（商標）－ＬＣ、ＰＨＡＲＭＡＣＯＡＴ（登録商標）、ＭＥＴＯＬＯＳＥ（登録商標）ＳＲ、ＭＥＴＨＯＣＥＬ（商標）－Ｅ、ＯＰＡＤＲＹ（登録商標）ＶＳ、Ｐｒｉｍａ Ｆｌｏ、ＢＥＮＥＣＥＬ（商標）ＭＰ８２４、およびＢＥＮＥＣＥＬ（商標）ＭＰ８４３で販売されている材料、メチルセルロースポリマー、例えば商品名ＭＥＴＨＯＣＥＬ（商標）－Ａ、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートステアレートＡｑｏａｔ（ＨＦ－ＬＳ、ＨＦ－ＬＧ、ＨＦ－ＭＳ）およびＭＥＴＯＬＯＳＥ（登録商標）で販売されている材料、エチルセルロース（ＥＣ）およびその混合物、例えばＥ４６１、ＥＴＨＯＣＥＬ（商標）、ＡＱＵＡＬＯＮ（商標）－ＥＣ、ＳＵＲＥＬＥＡＳＥ（登録商標）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、例えばＯＰＡＤＲＹ（登録商標）ＡＭＢ、ヒドロキシエチルセルロース、例えばＮＡＴＲＯＳＯＬ（商標）、カルボキシメチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）の塩、例えばＡＱＵＡＬＯＮ（商標）－ＣＭＣ、ポリビニルアルコールとポリエチレングリコールとのコポリマー、例えばＫＯＬＬＩＣＯＡＴ（登録商標）ＩＲ、モノグリセリド（Ｍｙｖｅｒｏｌ）、トリグリセリド（ＫＬＸ）、ポリエチレングリコール、加工食用デンプン、アクリルポリマーおよびアクリルポリマーとセルロースエーテルとの混合物、例えば商品名ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）ＥＰＯ、ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）Ｌ３００－５５、ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）ＦＳ３００、ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）Ｌ１００－５５、ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）Ｌ１００、ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）５１００、ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）ＲＯ１００、ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）Ｅ１００、ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）Ｌ１２．５、ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）５１２．５、ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）ＮＥ３００、およびＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）ＮＥ４００で販売されているもののいずれか１つ、酢酸フタル酸セルロース、セピフィルム（sepifilm）、例えばＨＰＭＣとステアリン酸との混合物、シクロデキストリン、ならびにこれらの材料の混合物が含まれるが、それらに限定されない。

マイクロカプセル化ナッツアレルゲンは、当業者に公知の方法により製剤化され得る。このような公知の方法には、例えば、噴霧乾燥プロセス、回転盤－溶媒プロセス、ホットメルトプロセス、噴霧冷却法、流動床、静電沈着、遠心押出、回転懸濁分離、液気または固気界面での重合、圧力押出、または噴霧溶媒抽出浴が含まれる。これらに加えて、いくつかの化学技法、例えば、複合コアセルベーション、溶媒蒸発、ポリマー－ポリマー不適合、液体媒質中の界面重合、ｉｎ ｓｉｔｕ重合、液体内乾燥、および液体媒質中の脱溶媒和も使用することができる。さらに、ローラーコンパクション、押出／球状化、コアセルベーション、またはナノ粒子コーティングなどの他の方法も使用される場合がある。

本明細書に記載の製剤は、個体対象の臨床状態、投与部位および方法、投与計画、ならびに医師に公知の他の要因を考慮に入れて、適正な医療行為に従って投与および用量設定される。

本明細書に記載の剤形は、経口免疫療法での使用説明書をさらに含むキットに含まれる場合がある。説明書は、例えば、剤形の投与のための説明書、例えば剤形の毎日投与のための説明書または脱脂ナッツ粉を食材と組み合わせるための説明書を含み得る。一部の実施形態では、説明書は、本明細書に記載のようなアレルギーの処置のためのまたは経口免疫療法のための説明書を含む。

Ｖ． 使用方法
本明細書に記載の製剤は、ナッツアレルギーを患う対象を処置するために経口免疫療法（ＯＩＴ）に使用され得る。例えば、対象は、落花生アレルギーまたはツリーナッツ（例えば、クルミ、カシューナッツ、ヘーゼルナッツ、アーモンド、ピスタチオ、ペカン、または他のナッツ）アレルギーの１つまたは複数を患う場合がある。

一部の実施形態では、対象はヒトである。一部の実施形態では、対象は、約１８歳またはより若い、例えば約１６歳もしくはより若い、約１４歳もしくはより若い、約１２歳もしくはより若い、約１０歳もしくはより若い、約９歳もしくはより若い、約８歳もしくはより若い、約７歳もしくはより若い、約６歳もしくはより若い、約５歳もしくはより若い、約４歳もしくはより若い、約３歳もしくはより若い、約２歳もしくはより若い、または約１歳もしくはより若いヒトである。

一部の実施形態では、対象におけるツリーナッツアレルギーを処置する方法は、対象に脱脂ナッツ粉（脱脂落花生粉または脱脂ツリーナッツ粉など）を含む医薬組成物の有効量を経口投与することを含む。脱脂ナッツ粉は、例えば、ナッツ材料を超臨界流体と接触させてナッツ材料を脱脂することを含み得る本明細書に記載の方法を使用して生成することができる。脱脂ナッツ材料の生成は、脱脂ナッツ粉を粉砕することおよび／または脱脂ナッツ粉を担体材料と共に製剤化することも含み得る。一部の実施形態では、医薬組成物の有効量は、約０．１ｍｇ～約２０００ｍｇ、または本明細書に記載の任意の他の測定された量のナッツタンパク質（ツリーナッツタンパク質など）を含む。

本明細書に記載の製剤で処置された対象は、処置後の皮膚、呼吸器、消化器、および粘膜（例えば、眼、鼻、および耳の）表面または皮下注入（例えば、ハチ刺傷による）を介した曝露を含み得る、アナフィラキシーアレルゲンへの曝露に関連する症状の処置後の臨床症状の減少に関係して、減少したアナフィラキシー反応を示し得る。一実施形態では、対象は、プラセボを受けている対象または処置を受けていない対象と比較して、約２％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％またはそれよりも大きく減少したアナフィラキシー反応を示し得る。

本明細書に記載の組成物で処置された対象は、処置後に減少した体液性応答および／またはＴ細胞応答を示し得る。一実施形態では、対象は、プラセボを受けている対象または処置を受けていない対象と比較して、約２％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％またはそれよりも大きく減少した体液性応答および／またはＴ細胞応答を示し得る。

本明細書に記載の組成物で処置された対象は、処置後に減少したＩｇＥ応答および／または減少したマスト細胞応答を示し得る。一実施形態では、対象は、プラセボを受けている対象または処置を受けていない対象と比較して、約２％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％またはそれよりも大きく減少したＩｇＥ応答および／または減少したマスト細胞応答を示し得る。

製剤で処置された対象は、ＩｇＥ抗体と置き換わって、アレルゲンに対する免疫応答を和らげる、増加したＩｇＧ４応答も示すことで、アレルギー反応の可能性を下げる場合がある。

本明細書に記載の製剤で処置された対象は、処置後に食物経口負荷（ＯＦＣ）によりうまく耐えることが可能であり得る。

本明細書に記載の組成物で処置された対象は、処置後にナッツアレルゲンに脱感作され得る。一実施形態では、対象は、プラセボを受けている対象または処置を受けていない対象と比較して、約２％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％またはそれよりも大きく脱感作され得る。

本明細書に記載の組成物は、段階的増大計画で投与され得る。一実施形態では、段階的増大用量が処置の１日目に対象に投与される。例えば、対象は、１日目に１、２、３、４、または５用量の本明細書に記載の組成物を投与され得る。別の例では、対象は、１日目に５用量の本明細書に記載の組成物を、３０分刻みで投与され得る。対象は、２日目に復帰し、最大許容用量を受ける。２日目に中等度の症状が観察された対象は、３日目に監視付きの臨床設定での観察下での次に低い用量のために復帰する場合がある。処置の初日に処置に耐えることが可能な対象は、本明細書に記載の組成物の１つまたは複数のさらなる用量を投与される場合がある。

一部の実施形態では、組成物の有効量は、毎日投与される。一部の実施形態では、組成物の同じ有効量（すなわち、組成物の同じ用量）は、毎日、所望の期間、例えば１もしくはそれよりも長い週間、２もしくはそれよりも長い週間、３もしくはそれよりも長い週間、または４もしくそれよりも長い週間投与される。一部の実施形態では、組成物の用量は、所望の期間の後で増加される。例えば、組成物の用量は、およそ１週間に１回、およそ２週間に１回、およそ３週間に１回、またはおよそ１ヶ月に１回増加することができる。組成物は、治療過程のために同じまたは異なる用量で毎日投与することができ、これは、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、または少なくとも６ヶ月であり得る。

一実施形態では、対象は、１、２、３、４、５、６、７、８、または９つの本明細書に記載の組成物の追加的な段階的増大用量をさらに投与される。追加的な段階的増大用量は、対象に２週間間隔で投与され得る。

最終投与の後、対象は、場合によっては、食物経口負荷に供されて、対象がナッツアレルギーに脱感作したかどうかが決定される場合がある。

このような方法の一実施形態では、投与直前に、カプセル化されたカプセル製剤が解体され、成分が味マスキング食物中に混合され得る。

別の実施形態では、対象は、３、６、１２、２４ヶ月またはそれよりも長い維持期間の間、積極的処置を受け続ける。

対象は、例えば、紅潮、皮膚の激しい痒み、ならびにくしゃみおよび鼻水を含む全身症状の開始について監視され得る。熱感、全身の不快感および心的動揺／不安も起こり得る。

一実施形態では、本明細書に提供される製剤は、ナッツアレルギーを患う対象に１日または複数日投与される。

一実施形態では、対象は、プラセボを投与された対象または処置を受けていない対象と比較して、アレルギー反応なしで消費できるタンパク質の量を少なくとも約１００％増加させることができる。

別の実施形態では、対象は、減少した体液性応答および／または減少したＴ細胞応答を示す。

別の実施形態では、対象は、減少したアナフィラキシー、減少したマスト細胞応答、減少したＩｇＥ応答、減少したじんま疹、またはそれらの組合せを示す。

一部の実施形態では、本明細書に提供される製剤は、食品と併せて投与され得る。

対象は、処置の１日目に１、２、３、４、または５用量の本明細書に提供される製剤を投与され得る。

一実施形態では、対象は、処置の１日目に１０用量を投与される。

別の実施形態では、対象は、前記用量を３０分間隔で投与される。

方法は、場合によっては１つまたは複数の追加的な処置をさらに含み得る。

一部の実施形態では、１つまたは複数の追加的な処置は、２週間間隔での組成物の投与を含む。

他の実施形態では、１つまたは複数の追加的な処置は、組成物の１、２、３、４、５、６、７、８、９、またはそれよりも多い用量を含む。

一実施形態では、方法は、処置レジメンの完了後に食物経口負荷（ＯＦＣ）を施すことをさらに含み得る。

ＶＩ． 併用療法
本明細書に記載の製剤および方法はまた、処置されている状態に対する特定の有用性について選択された他の周知の治療用化合物と併せて使用され得る。一般に、本明細書に記載の製剤と、組合せ療法が用いられる実施形態では他の化合物とは、同じ製剤で投与される必要がなく、異なる物理的および化学的特徴のために、異なる経路により投与されなければならない場合があり、またはそれらは、単一の製剤で組み合わされる場合がある。投与様式および可能であれば同じ製剤中の投与の適否の決定は、十分熟練した臨床家の知識の範囲内である。初回投与は、当技術分野において公知の確立されたプロトコールに従って行うことができ、次いで、観察された効果に基づき、投薬量、投与様式および投与時間が熟練した臨床家により修正される場合がある。

使用される化合物の特定の選択は、担当医師の診断ならびにそれらによる対象の状態および適切な処置プロトコールの判断に依存する。化合物は、対象の状態および使用される化合物の実際の選択に応じて同時期に（例えば、同時に、本質的に同時にまたは同じ処置プロトコール内で）または逐次的に投与される場合がある。処置プロトコールの間の各治療剤の投与順序、および投与の繰り返し回数の決定は、対象の処置されているナッツアレルギーの重症度および状態の評価の後で、十分熟練した医師の知識の範囲内である。

ナッツアレルギーを処置、予防、または寛解するための投薬レジメンは、様々な要因に応じて修正できることが理解されている。これらの要因には、対象の年齢、体重、性別、食事、および／または医学的状態が含まれる。ゆえに、実際に用いられる投薬レジメンは、広く変動し得、したがって、本明細書に示される投薬レジメンから逸脱する場合がある。

複数の投与ステップの間の期間は、各薬剤の特性、例えば薬剤の効力、溶解度、バイオアベイラビリティー、血漿中半減期および速度論プロファイルに応じて数分～数時間の範囲であり得る。標的分子濃度の概日変動も、最適な用量間隔を決定し得る。

一部の実施形態では、製剤は、少なくとも１種の他の抗ヒスタミン剤、副腎皮質ステロイド、ベータアゴニスト、抗炎症剤、抗ＩｇＥ抗体（例えば、オマリズマブ）および／またはエピネフリンと一緒に投与される。

ＶＩＩ． 例示的な実施形態
実施形態１． 脱脂ツリーナッツ粉を含むツリーナッツ粉組成物であって、脱脂ツリーナッツ粉の少なくとも５０重量％が、２５０μｍの篩を通過する、ツリーナッツ粉組成物。

実施形態２． 脱脂ツリーナッツ粉が、約１２重量％未満の含油率を有する、実施形態１に記載のツリーナッツ粉組成物。

実施形態３． 脱脂ツリーナッツ粉が、約６重量％未満の含油率を有する、実施形態１に記載のツリーナッツ粉組成物。

実施形態４． ツリーナッツが、クルミ、アーモンド、ペカン、カシューナッツ、ヘーゼルナッツ、松の実、ブラジルナッツ、またはピスタチオである、実施形態１～３のいずれか１つに記載のツリーナッツ粉組成物。

実施形態５． 脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全てが、１ｍｍの篩を通過する、実施形態１～４のいずれか１つに記載のツリーナッツ粉組成物。

実施形態６． 脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全てが、２５０μｍの篩を通過する、実施形態１～５のいずれか１つに記載のツリーナッツ粉組成物。

実施形態７． 脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全てが、１４９μｍの篩を通過する、実施形態１～６のいずれか１つに記載のツリーナッツ粉組成物。

実施形態８． 脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全てが、７４μｍの篩を通過する、実施形態１～７のいずれか１つに記載のツリーナッツ粉組成物。

実施形態９． 担体材料をさらに含む、実施形態１～８のいずれか１つに記載のツリーナッツ粉組成物。

実施形態１０． 担体材料が、１種または複数の希釈剤、流動促進剤、または滑沢剤を含む、実施形態６に記載のツリーナッツ粉組成物。

実施形態１１． 脱脂ツリーナッツ粉が、
ツリーナッツ材料を超臨界流体と接触させること；および
ツリーナッツ材料を粉砕して脱脂ツリーナッツ粉を形成すること
を含む方法により生成される、実施形態１～１０のいずれか１つに記載のツリーナッツ粉組成物。

実施形態１２． 超臨界流体が、超臨界二酸化炭素である、実施形態８に記載のツリーナッツ粉組成物。

実施形態１３． 食材と組み合わされる、実施形態１～１２のいずれか１つに記載のツリーナッツ粉組成物。

実施形態１４． 対象におけるナッツアレルギーを処置する方法であって、対象に実施形態１～１３のいずれか１つに記載のツリーナッツ粉組成物の有効量を経口投与することを含む、方法。

実施形態１５． 実施形態１～１３のいずれか１つに記載のツリーナッツ粉組成物を含む、経口免疫療法用の剤形。

実施形態１６． ツリーナッツ粉組成物の測定された量を含む、実施形態１５に記載の剤形。

実施形態１７． 約０．１ｍｇ～約２０００ｍｇのツリーナッツ粉を含む、実施形態１５または１６に記載の剤形。

実施形態１８． 測定された用量が、約０．５ｍｇ～約１０００ｍｇのナッツタンパク質を含む、実施形態１５～１７のいずれか１つに記載の剤形。

実施形態１９． ツリーナッツ粉組成物が、パッケージ中に封入されている、実施形態１５～１８のいずれか１つに記載の剤形。

実施形態２０． パッケージが、剤形またはパッケージ内に含有されるナッツタンパク質の量またはナッツ粉の量を特定する、実施形態１９に記載の剤形。

実施形態２１． ツリーナッツ粉組成物が、カプセル中にカプセル化されている、実施形態１５～２０のいずれか１つに記載の剤形。

実施形態２２． 脱脂ナッツ粉の測定された量を含む、経口免疫療法用の剤形であって、脱脂ナッツ粉が、
ナッツ材料を超臨界流体と接触させ、それにより、ナッツ材料の含油率を減少させて脱脂ナッツ粉を形成すること；および
脱脂ナッツ粉の用量を測定すること
を含む方法により生成される、剤形。

実施形態２３． 測定された用量が、約０．１ｍｇ～約２０００ｍｇのナッツタンパク質を含む、実施形態２２に記載の剤形。

実施形態２４． 測定された用量が、約０．５ｍｇ～約１０００ｍｇのナッツタンパク質を含む、実施形態２２または２３に記載の剤形。

実施形態２５． 脱脂ナッツ粉を生成する方法が、脱脂ナッツ粉を粉砕することをさらに含む、実施形態２２～２５のいずれか１つに記載の剤形。

実施形態２６． 脱脂ナッツ粉を生成する方法が、ナッツ材料を超臨界流体と接触させる前に、ナッツ材料を押圧または粉砕することをさらに含む、実施形態２２～２５のいずれか１つに記載の剤形。

実施形態２７． 脱脂ナッツ粉が、担体材料と組み合わされる、実施形態２２～２６のいずれか１つに記載の剤形。

実施形態２８． 担体材料が、１種または複数の希釈剤、流動促進剤、または滑沢剤を含む、実施形態２７に記載の剤形。

実施形態２９． 脱脂ナッツ粉が、パッケージ中に封入されている、実施形態２２～２８のいずれか１つに記載の剤形。

実施形態３０． パッケージが、剤形またはパッケージ内に含有されるナッツタンパク質の量またはナッツ粉の量を特定する、実施形態２９に記載の剤形。

実施形態３１． 脱脂ナッツ粉が、カプセル中にカプセル化されている、実施形態２２～３０のいずれか１つに記載の剤形。

実施形態３２． 脱脂ナッツ粉の少なくとも５０重量％が、２５０μｍの篩を通過する、実施形態２２～３１のいずれか１つに記載の剤形。

実施形態３３． 脱脂ナッツ粉のほぼ全てが、１ｍｍの篩を通過する、実施形態２２～３２のいずれか１つに記載の剤形。

実施形態３４． 脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全てが、２５０μｍの篩を通過する、実施形態２２～３３のいずれか１つに記載の剤形。

実施形態３５． 脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全てが、１４９μｍの篩を通過する、実施形態２２～３４のいずれか１つに記載の剤形。

実施形態３６． 脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全てが、７４μｍの篩を通過する、実施形態２２～３５のいずれか１つに記載の剤形。

実施形態３７． 脱脂ナッツ粉が、約１２％未満の含油率を有する、実施形態２２～３６のいずれか１つに記載の剤形。

実施形態３８． 脱脂ナッツ粉が、約６％未満の含油率を有する、実施形態２２～３７のいずれか１つに記載の剤形。

実施形態３９． 脱脂ナッツ粉が、落花生粉である、実施形態２２～３８のいずれか１つに記載の剤形。

実施形態４０． 脱脂ナッツ粉が、ツリーナッツ粉である、実施形態２２～３８のいずれか１つに記載の剤形。

実施形態４１． ツリーナッツが、クルミ、アーモンド、ペカン、カシューナッツ、ヘーゼルナッツ、松の実、ブラジルナッツ、またはピスタチオである、実施形態４０に記載の剤形。

実施形態４２． 超臨界流体が、超臨界二酸化炭素である、実施形態２２～４１のいずれか１つに記載の剤形。

実施形態４３． 実施形態１５～４２のいずれか１つに記載の剤形および経口免疫療法における使用説明書を含むキット。

実施形態４４． 使用説明書が、脱脂ナッツ粉を食材と組み合わせるための説明書を含む、実施形態４３に記載のキット。

実施形態４５． 使用説明書が、剤形の毎日投与のための説明書を含む、実施形態４３または４４に記載のキット。

実施形態４６． 超低脂肪ナッツ材料を製造する方法であって、ある初期含油率を有するナッツ材料を超臨界流体と接触させて、減少した含油率を有する脱脂ナッツ材料を提供すること；および
脱脂ナッツ材料を粉砕すること
を含む、方法。

実施形態４７． 超低脂肪ナッツ材料を製造する方法であって、ある初期含油率を有するナッツ材料を超臨界流体と接触させて、減少した含油率を有する脱脂ナッツ材料を提供すること；および
経口免疫療法用の脱脂ナッツ材料の用量を測定すること
を含む、方法。

実施形態４８． 脱脂ナッツ材料の測定された用量が、約０．１ｍｇ～約１０００ｍｇのナッツタンパク質を含む、実施形態４７に記載の方法。

実施形態４９． 超低脂肪ナッツ材料を製造する方法であって、ある初期含油率を有するナッツ材料を超臨界流体と接触させて、減少した含油率を有する脱脂ナッツ材料を提供すること；および
脱脂ナッツ材料をパッケージ中にパッケージングすること
を含む、方法。

実施形態５０． パッケージが、５ｍＬ未満の体積を有する、実施形態４９に記載の方法。

実施形態５１． パッケージが、カプセルである、実施形態４９または５０に記載の方法。

実施形態５２． 脱脂ナッツ材料を担体材料と組み合わせることを含む、実施形態４６～５１のいずれか１つに記載の方法。

実施形態５３． 担体材料が、１種または複数の希釈剤、流動促進剤、または滑沢剤を含む、実施形態５２に記載の方法。

実施形態５４． 脱脂ナッツ材料が、０．１％～１２％の間の含油率を有する、実施形態４６～５３のいずれか１つに記載の方法。

実施形態５５． 超臨界流体が、二酸化炭素である、実施形態４６～５４のいずれか１つに記載の方法。

実施形態５６． ナッツ材料が、落花生材料である、実施形態４６～５５のいずれか１つに記載の方法。

実施形態５７． ナッツ材料が、ツリーナッツ材料である、実施形態４６～５５のいずれか１つに記載の方法。

実施形態５８． ツリーナッツ材料が、クルミ材料、カシューナッツ材料、ヘーゼルナッツ材料、アーモンド材料、ピスタチオ材料、松の実材料、ブラジルナッツ材料、またはペカン材料である、実施形態５７に記載の方法。

実施形態５９． ナッツ材料を超臨界流体と接触させる前に、ナッツ材料を押圧または粉砕することを含む、実施形態４６～５８のいずれか１つに記載の方法。

実施形態６０． 脱脂ナッツ材料中の１種または複数のナッツタンパク質アレルゲンを特徴付けることをさらに含む、実施形態４６～５９のいずれか１つに記載の方法。

実施形態６１． １種または複数のナッツタンパク質アレルゲンが、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、質量分析、液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣ－ＭＳ）、液体クロマトグラフィー－質量分析／質量分析（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）、または免疫ブロットを使用して特徴付けられる、実施形態６０に記載の方法。

実施形態６２． ナッツ粉中のより大きい粒子をナッツ粉中のより小さいナッツ粒子から分離すること、およびより小さいナッツ粒子を保持することをさらに含む、実施形態４６～６１のいずれか１つに記載の方法。

実施形態６３． １つまたは複数の篩を使用して、より大きい粒子がより小さいナッツ粒子から分離される、実施形態６２に記載の方法。

実施形態６４． ナッツ材料を超臨界流体と接触させることが、ナッツ材料を通して超臨界流体を流すことを含む、実施形態４６～６３のいずれか１つに記載の方法。

実施形態６５． 対象におけるツリーナッツアレルギーを処置する方法であって、対象に脱脂ツリーナッツ粉を含む医薬組成物の有効量を経口投与することを含み、医薬組成物の有効量が、約０．１ｍｇ～約２０００ｍｇのツリーナッツタンパク質を含む、方法。

実施形態６６． 医薬組成物の有効量が、約０．５ｍｇ～約１０００ｍｇのツリーナッツタンパク質を含む、実施形態６５に記載の方法。

実施形態６７． 脱脂ツリーナッツ粉の少なくとも５０重量％が、２５０μｍの篩を通過する、実施形態６５または６６に記載の方法。

実施形態６８． 脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全てが、１ｍｍの篩を通過する、実施形態６５～６７のいずれか１つに記載の方法。

実施形態６９． 脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全てが、２５０μｍの篩を通過する、実施形態６５～６８のいずれか１つに記載の方法。

実施形態７０． 脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全てが、１４９μｍの篩を通過する、実施形態６５～６９のいずれか１つに記載の方法。

実施形態７１． 脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全てが、７４μｍの篩を通過する、実施形態６５～７０のいずれか１つに記載の方法。

実施形態７２． 脱脂ツリーナッツ粉が、約１２重量％未満の含油率を有する、実施形態６５～７１のいずれか１つに記載の方法。

実施形態７３． 脱脂ツリーナッツ粉が、約６重量％未満の含油率を有する、実施形態６５～７２のいずれか１つに記載の方法。

実施形態７４． ツリーナッツが、クルミ、アーモンド、ペカン、カシューナッツ、ヘーゼルナッツ、松の実、ブラジルナッツ、またはピスタチオである、実施形態６５～７３のいずれか１つに記載の方法。

実施形態７５． 対象におけるナッツアレルギーを処置する方法であって、対象に脱脂ナッツ粉を含む医薬組成物の有効量を経口投与することを含み、脱脂ナッツ粉が、ナッツ材料を超臨界流体と接触させ、それにより、ナッツ材料の含油率を減少させて脱脂ナッツ粉を形成することを含む方法により生成される、方法。

実施形態７６． 医薬組成物の有効量が、約０．１ｍｇ～約２０００ｍｇのナッツタンパク質を含む、実施形態７５に記載の方法。

実施形態７７． 医薬組成物の有効量が、約０．５ｍｇ～約１０００ｍｇのナッツタンパク質を含む、実施形態７５または７６に記載の方法。

実施形態７８． 脱脂ナッツ粉を生成する方法が、脱脂ナッツ粉を粉砕することをさらに含む、実施形態７５～７７のいずれか１つに記載の方法。

実施形態７９． 脱脂ナッツ粉を生成する方法が、ナッツ材料を超臨界流体と接触させる前に、ナッツ材料を押圧または粉砕することをさらに含む、実施形態７５～７８のいずれか１つに記載の方法。

実施形態８０． 脱脂ナッツ粉の少なくとも５０重量％が、２５０μｍの篩を通過する、実施形態７５～７９のいずれか１つに記載の方法。

実施形態８１． 脱脂ナッツ粉のほぼ全てが、１ｍｍの篩を通過する、実施形態７５～８０のいずれか１つに記載の方法。

実施形態８２． 脱脂ナッツ粉のほぼ全てが、２５０μｍの篩を通過する、実施形態７５～８１のいずれか１つに記載の方法。

実施形態８３． 脱脂ナッツ粉のほぼ全てが、１４９μｍの篩を通過する、実施形態７５～８２のいずれか１つに記載の方法。

実施形態８４． 脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全てが、７４μｍの篩を通過する、実施形態７５～８３のいずれか１つに記載の方法。

実施形態８５． 脱脂ナッツ粉が、約１２重量％未満の含油率を有する、実施形態７５～８４のいずれか１つに記載の方法。

実施形態８６． 脱脂ナッツ粉が、約６重量％未満の含油率を有する、実施形態７５～８５のいずれか１つに記載の方法。

実施形態８７． 脱脂ナッツ粉が、落花生粉である、実施形態７５～８６のいずれか１つに記載の方法。

実施形態８８． 脱脂ナッツ粉が、ツリーナッツ粉である、実施形態７５～８６のいずれか１つに記載の方法。

実施形態８９． ツリーナッツが、クルミ、アーモンド、ペカン、カシューナッツ、ヘーゼルナッツ、松の実、ブラジルナッツ、またはピスタチオである、実施形態８８に記載の方法。

実施形態９０． 超臨界流体が、超臨界二酸化炭素である、実施形態７５～８９のいずれか１つに記載の方法。

実施形態９１． 医薬組成物が、担体材料を含む、実施形態６５～９０のいずれか１つに記載の方法。

実施形態９２． 担体材料が、１種または複数の希釈剤、流動促進剤、または滑沢剤を含む、実施形態９１に記載の方法。

実施形態９３． 医薬組成物が、毎日投与される、実施形態６５～９２のいずれか１つに記載の方法。

実施形態９４． 医薬組成物の同じ有効量が、少なくとも１週間毎日投与される、実施形態９３に記載の方法。

実施形態９５． 医薬組成物の有効量が、定期的に増加される、実施形態６５～９４に記載の方法。

実施形態９６． 医薬組成物の有効量が、少なくとも１週間の期間の後に医薬組成物の異なる有効量に調整され、医薬組成物の異なる有効量が、約０．１ｍｇ～約２０００ｍｇのツリーナッツタンパク質を含む、実施形態６５～９５のいずれか１つに記載の方法。

実施形態９７． 医薬組成物の有効量が、少なくとも１週間の期間の後に医薬組成物の異なる有効量に調整され、医薬組成物の異なる有効量が、約０．５ｍｇ～約１０００ｍｇのツリーナッツタンパク質を含む、実施形態６５～９６のいずれか１つに記載の方法。

実施形態９８． 医薬組成物が、少なくとも１ヶ月間毎日投与される、実施形態６５～９７のいずれか１つに記載の方法。

実施形態９９． 対象が、ヒトである、実施形態６５～９８のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１００． 超低脂肪ナッツ材料を製造する方法であって、ある初期含油率を有するナッツ材料を超臨界流体と接触させて、減少した含油率を有する脱脂ナッツ材料を提供することを含み、脱脂ナッツ材料が、アレルゲン性である、方法。

実施形態１０１． 脱脂ナッツ材料が、０．１％～１２％の間の含油率を有する、実施形態１００に記載の方法。

実施形態１０２． 超臨界流体が、ＣＯ２である、実施形態１００に記載の方法。

実施形態１０３． ナッツ材料が、落花生またはツリーナッツの一方である、実施形態１００～１０２のいずれかに記載の方法。

実施形態１０４． ナッツ材料が、クルミ、カシューナッツ、ヘーゼルナッツ、アーモンド、ピスタチオ、松の実、ブラジルナッツ、またはペカンを含むツリーナッツである、実施形態１００～１０３のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１０５． ナッツ材料が、超臨界流体と接触させる前に粗挽きされる、実施形態１００または実施形態１０２に記載の方法。

実施形態１０６． ナッツ材料が、落花生であり、減少した含油率が、約１２％未満の含油率、約１０％未満の含油率、約８％未満の含油率、約６％未満の含油率、約５％未満の含油率、約３％の含油率～約７％の含油率の間、約３％の含油率～約５％の含油率の間、または約４％の含油率である、実施形態１００に記載の方法。

実施形態１０７． ナッツ材料が、ツリーナッツであり、減少した含油率が、約１２％未満の含油率、約１０％未満の含油率、約８％未満の含油率、約６％未満の含油率、約５％未満の含油率、約１％未満の含油率、約０．１％の含油率～約７％の含油率の間、約０．１％～１％の間の含油率、約１％～約５％の間の含油率、約２％の含油率または約３％の含油率である、実施形態１００に記載の方法。

実施形態１０８． ナッツタンパク質製剤を製造する方法であって、特徴付けられたナッツアレルゲンタンパク質を有する、実施形態１００に記載の脱脂ナッツ材料の量を、１種もしくは複数の希釈剤、１種もしくは複数の流動促進剤または１種もしくは複数の滑沢剤に添加して、散剤を形成すること；散剤を配合すること；および配合された散剤をカプセル中にカプセル化することを含む、方法。

実施形態１０９． 対象におけるツリーナッツアレルギーを処置する方法であって、
（ａ）１つまたは複数のツリーナッツアレルギーを有する対象を提供すること；
（ｂ）超低脂肪ツリーナッツ粉を含む医薬組成物を経口投与することであって、超低脂肪ツリーナッツ粉が、０．５ｍｇ～１０００ｍｇの用量のツリーナッツタンパク質を含み、医薬組成物が、毎日投与される、経口投与すること
を含む、対象におけるツリーナッツアレルギーを処置する方法。

実施形態１１０． ツリーナッツタンパク質の用量が、約３ｍｇ、６ｍｇ、１２ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、８０ｍｇ、１２０ｍｇ、１６０ｍｇ、２００ｍｇ、２４０ｍｇまたは３００ｍｇである、実施形態１０９に記載の対象におけるツリーナッツアレルギーを処置する方法。

実施形態１１１． ツリーナッツタンパク質の用量が、３ｍｇである、実施形態１１０に記載の対象におけるツリーナッツアレルギーを処置する方法。

実施形態１１２． ツリーナッツタンパク質の用量が、６ｍｇである、実施形態１１０に記載の対象におけるツリーナッツアレルギーを処置する方法。

実施形態１１３． ツリーナッツタンパク質の用量が、１２ｍｇである、実施形態１１０に記載の対象におけるツリーナッツアレルギーを処置する方法。

実施形態１１４． ツリーナッツタンパク質の用量が、２０ｍｇである、実施形態１１０に記載の対象におけるツリーナッツアレルギーを処置する方法。

実施形態１１５． 医薬組成物が、少なくとも１ヶ月間毎日送達される、実施形態１１０に記載の対象におけるツリーナッツアレルギーを処置する方法。

実施形態１１６． 対象におけるツリーナッツアレルギーを処置する方法であって、
（ａ）１つまたは複数のツリーナッツアレルギーを有する対象を提供すること；
（ｂ）０．５ｍｇ～１０００ｍｇの用量のツリーナッツタンパク質を有する超低脂肪ツリーナッツ粉を含む医薬組成物を提供することであって、超低脂肪ツリーナッツ粉が、実施形態１００に記載のように製造されている、提供すること；
（ｃ）前記医薬組成物を対象に少なくとも１ヶ月間毎日ベースで経口投与すること
を含む、方法。

実施形態１１７． 対象におけるツリーナッツアレルギーを処置する方法であって、
（ａ）１つまたは複数のツリーナッツアレルギーを有する対象を提供すること；
（ｂ）０．５ｍｇ～１０００ｍｇの用量のツリーナッツタンパク質を有する超低脂肪ツリーナッツ粉を含む医薬組成物を提供することであって、超低脂肪ツリーナッツ粉が、実施形態１０２に記載のように製造されている、提供すること；
（ｃ）前記医薬組成物を対象に少なくとも１ヶ月間毎日ベースで経口投与すること
を含む、方法。

実施形態１１８． 対象における落花生アレルギーを処置する方法であって、
（ａ）落花生アレルギーを有する対象を提供すること；
（ｂ）超低脂肪落花生粉を含む医薬組成物を経口投与することであって、超低脂肪落花生粉が、０．５ｍｇ～１０００ｍｇの用量の落花生タンパク質を含み、医薬組成物が、毎日投与される、経口投与すること
を含む、方法。

実施形態１１９． 落花生タンパク質の用量が、３ｍｇである、実施形態１１８に記載の対象における落花生アレルギーを処置する方法。

実施形態１２０． 落花生タンパク質の用量が、６ｍｇである、実施形態１１８に記載の対象における落花生アレルギーを処置する方法。

実施形態１２１． 落花生タンパク質の用量が、１２ｍｇである、実施形態１１８に記載の対象における落花生アレルギーを処置する方法。

実施形態１２２． 落花生タンパク質の用量が、２０ｍｇである、実施形態１１８に記載の対象における落花生アレルギーを処置する方法。

実施形態１２３． 落花生タンパク質の用量が、４０ｍｇである、実施形態１１８に記載の対象における落花生アレルギーを処置する方法。

実施形態１２４． 医薬組成物が、少なくとも１ヶ月間毎日送達される、実施形態１１８に記載の対象における落花生アレルギーを処置する方法。

実施形態１２５． 対象における落花生アレルギーを処置する方法であって、
（ａ）落花生アレルギーを有する対象を提供すること；
（ｂ）０．５ｍｇ～１０００ｍｇの用量の落花生タンパク質を有する超低脂肪ツリーピーナッツ（tree peanut）粉を含む医薬組成物を提供することであって、超低脂肪ナッツ粉が、超低脂肪落花生粉であり、前記超低脂肪落花生粉が、実施形態１００に記載のように製造されている、提供すること；
（ｃ）前記医薬組成物を対象に少なくとも１ヶ月間毎日ベースで経口投与すること
を含む、方法。

実施形態１２６． 対象における落花生アレルギーを処置する方法であって、
（ａ）落花生アレルギーを有する対象を提供すること；
（ｂ）０．５ｍｇ～１０００ｍｇの用量の落花生タンパク質を有する超低脂肪ナッツ粉を含む医薬組成物を提供することであって、超低脂肪落花生粉が、実施形態１０２に記載のように製造されている、提供すること；
（ｃ）前記医薬組成物を対象に少なくとも１ヶ月間毎日ベースで経口投与すること
を含む、方法。

ＶＩＩＩ． 実施例
本技術は、以下の非限定的な実施例の参照によりより良好に理解され得る。以下の実施例は、ある特定の実施形態をより十分に例証するために提示されているが、本技術の広い範囲を限定するものと決して解釈すべきでない。本技術のある特定の実施形態が示され、本明細書に記載されているものの、このような実施形態は、ほんの一例として提供されていることは明らかである。実施形態から逸脱せずに当業者に多数の変形、変更、および置換が思い浮かぶ場合がある。本明細書に記載の実施形態の様々な代替が、本明細書に記載の方法の実施に用いられ得ることが理解されるべきである。

（実施例１）
本実施例は、超低脂肪で安定な高アレルゲン性の落花生粉を生成するための超臨界ＣＯ_２（ｓＣＯ_２）を用いた焙煎落花生の油抽出を記載する。

本実施例では、焙煎落花生まるごと（「落花生」）を、分析およびｓＣＯ_２抽出のための供給原料として使用した。第１の分析ステップでは、落花生を分け、３つの部分のそれぞれを粗挽き、中挽きおよび細挽き試料に圧砕した。「粗」挽きおよび「細」挽き部分の画分を、続いてヘキサンソックスレー抽出により分析して、落花生の初期含油率および落花生の揮発性物質含有率を決定した。下の表２に示すように、粗挽きおよび細挽き画分の両方から５３％をわずかに下回る含油率が得られた。粗挽き画分と細挽き画分との差が小さいことは、物質移動が重要な問題でないことを示している。

圧砕落花生材料からの油抽出は、まるごとまたは粗挽き落花生から穏和な条件で油の約１／２を除去するように設計された第１の相、および圧砕落花生から残っている抽出可能な油を除去するように設計された第２の相の２相で進めた。

落花生まるごとを抽出器にロードし、比較的低い圧力（例えば、およそ５，０００ｐｓｉ）、低温（例えば、およそ３５℃）、および二酸化炭素（ＣＯ_２）を抽出のために使用した。これらの初期条件で、供給材料の約６％の含油率を抽出した（およそ４７％が残る）。温度を４０℃に上げ、追加的な３％の含油率を抽出した。次いで圧力を９，０００ｐｓｉに上げ、追加的な２％の含油率を抽出した。次いで、圧力を一定に保ち、温度を５０℃に上げた。このステップにより、追加的な１７％の油抽出が得られ、供給材料の合計２８％の含油率が抽出された。

まだおおむね無傷の落花生を抽出器から取り出し、圧砕し、抽出器に再ロードした。油の約１／２がすでに除去された圧砕落花生を、初期供給質量の５１．６％が油抽出物として収集されるまで９，０００ｐｓｉおよび４０～５０℃の間で抽出した。表３は、本実施例の焙煎落花生のｓＣＯ_２抽出ステップを示す。

圧砕抽出落花生固形物を抽出器から取り出し、秤量した。落花生固形物１０９ｇのうち、７ｇをヘキサンソックスレー抽出のために使用して、残留含油率を決定し、１０２ｇを篩過して、粒度分布を決定した。

表４に示すように、ヘキサンソックスレー抽出により分析して、圧砕抽出落花生固形物の残留含油率は４．１％であった。

表４は、抽出落花生材料の粒度分析を示す。篩過分析により、材料（「抽出された」）は、同等の落花生粉製品の分析と比較して粗いことが示されたので、落花生固形物の粗い画分を再圧砕および篩過した（「圧砕落花生」）。圧砕落花生の粗い画分を再度圧砕（「再圧砕落花生」）および篩過した。結果としてもたらされた粒度分析は、同等の落花生粉製品の粒度と一致した（表５）。

（実施例２）
本実施例は、実施例１のｓＣＯ_２抽出落花生粉の特徴付けを記載する。特に、本実施例は、結果としてもたらされたｓＣＯ_２抽出落花生（「ＳＥＰ」）粉（煎った落花生由来）のタンパク質特徴付けを、石油エーテル抽出落花生タンパク質（「ＣＰＰ」）（生落花生由来）およびＧｏｌｄｅｎ Ｐｅａｎｕｔ Ｃｏｍｐａｎｙ（「ＧＰＣ」）（Ａｌｐｈａｒｅｔｔａ Ｇｅｏｒｇｉａ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）（ロット番号１１４ＦＡ２１６１３）から得られた押圧により脱脂された落花生粉（煎った落花生由来）と比較して記載する。

ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）を使用して、４．１％の残留油を有する実施例１の超低脂肪落花生粉を総タンパク質含有率について分析し、クマシーブルーで染色した。図１は、ＳＥＰ、ＧＰＣ、およびＣＰＰ（落花生タンパク質特徴付けのための実験室標準）からＳＤＳ－ＰＡＧＥで分離したタンパク質の結果を示す。図示するように、分離後の総タンパク質含有率は、様々な落花生粉製品と同等に見える。

図２は、ＳＥＰ、ＣＰＰ、およびＧＰＣからＳＤＳ－ＰＡＧＥで分離したタンパク質の免疫ブロット分析を示す。ＳＤＳ－ＰＡＧＥで分離したタンパク質をポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）メンブレンに移し、落花生アレルゲン（例えば、Ａｒａ ｈ １、Ａｒａ
ｈ ２、Ａｒａ ｈ ３、Ａｒａ－ｈ ６、Ａｒａ－ｈ ８、および落花生）に対するニワトリまたはウサギ抗血清を用いた免疫ブロッティング用に加工した。一次抗血清と反応後、メンブレンを抗ニワトリ－ＨＲＰまたは抗ウサギ－ＨＲＰと共にインキュベートした。図２に示すように、ＳＥＰ粉の免疫ブロットは、ＣＰＰおよびＧＰＣブロットと同等であった。

図３は、患者のプールされた抗血清を使用してＳＥＰ、ＣＰＰ、およびＧＰＣからＳＤＳ－ＰＡＧＥで分離されたタンパク質の免疫ブロット分析を示す。図示するように、患者血清は、全ての粉からのタンパク質と同等に反応した。

逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）を使用して、その全体で参照により本明細書に組み込まれている米国特許第９，１９８，８６９号に記載のように、落花生タンパク質アレルゲン（例えば、Ａｒａ ｈ １、Ａｒａ ｈ ２、Ａｒａ－ｈ ６）を物理的に分離した。一般的に、落花生粉由来のタンパク質は、ＲＰ－ＨＰＬＣ分析の前に水性緩衝液で抽出しなければならない。ｐＨ８．２のトリス緩衝液を用いて一段階抽出手順を使用し、粉試料を１００ｍｇ／ｍＬで調製し、６０℃で３時間抽出した。遠心分離および濾過の後、ブチル固定相が結合したワイドポア３００Åシリカカラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（登録商標）Ｊｕｐｉｔｅｒ Ｃ－４、５μｍ、４．６×１５０ｍｍ）を使用するＨＰＬＣにより、最終のニートな濾液を直接分析した。２１４ｎｍのＵＶ検出器で検出を成し遂げた。

ＳＥＰ粉の保持時間およびピークパターンを落花生粉参照標準と比較することにより、ＳＥＰ粉の落花生アレルゲンの特徴付けを決定した。図４は、本技術の態様によるＲＰ－ＨＰＬＣで分離されたタンパク質のクロマトグラフの重ね合わせである。Ａｒａ ｈタンパク質の主ピークは、場合により、別個の実体として分割されない場合があり、むしろ多数の類似タンパク質の集合として見える場合がある。したがって、Ａｒａ ｈ １、Ａｒａ ｈ ２およびＡｒａ ｈ ６アレルゲンは、保持時間領域内のピークのクラスターとして見える場合がある（図４）。したがって、次いで、特定のＡｒａ ｈタンパク質の相対量を、定義された溶出領域内の総面積に対するパーセンテージとして決定する。様々領域のクロマトグラフィー分割を評価し、方法は、落花生粉タンパク質の異なるロットおよび起源についてのこれらの領域パターンのわずかな違いならびに製剤の安定性の比較のために有用であり得る。

図４に示される２１４ｎｍでのクロマトグラフは、ＳＥＰ粉抽出物（下の線）を、Ａｒａ ｈ １、Ａｒａ ｈ ２およびＡｒａ ｈ ６タンパク質を有する参照落花生粉試料からのプロファイル（上の線）と比較する。図４に示すように、Ａｒａ ｈ １、Ａｒａ
ｈ ２およびＡｒａ ｈ ６タンパク質のピークは、ＳＥＰ粉のクロマトグラフに全て存在するが、図４では、ＳＥＰ粉のクロマトグラフと参照標準との間にいくらかの差が見られる。Ａｒａ ｈ ２ピークのクラスターを参照すると、ＳＥＰ粉クロマトグラフには１５分のピークが不在である（参照標準の矢印を参照）。Ａｒａ ｈ １のピークのクラスターを参照すると、最初のピークの先導ショルダーは、ＳＥＰ粉クロマトグラフの方が小さい。Ａｒａ ｈ ２ピークのクロマトグラフ分析を用いたＲＰ－ＨＰＬＣにおけるこのような差は、ＧＰＣからの他の落花生粉ロットでも見られている。図５は、本技術の態様によるＧＰＣ落花生粉および落花生粉参照標準からＲＰ－ＨＰＬＣで分離されたタンパク質のクロマトグラフの重ね合わせである。図示するように、ＧＰＣ落花生粉のクロマトグラフ（図５）は、Ａｒａ ｈ ２ピークのクラスターでＳＥＰ粉クロマトグラフ（図４）と類似のプロファイルを有する。したがって、ＳＥＰ粉と参照標準との間で図４に見られるピーククラスターの間のばらつきは、経口免疫療法製剤についての正常な一般公差内であるとみなされる。

Ａｒａ ｈ １、Ａｒａ ｈ ２およびＡｒａ ｈ ６抗体を用いた酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用して、タンパク質アレルゲンの追加的な特徴付けを行った。図６Ａ～６Ｃは、ＳＥＰ粉（四角）および参照標準落花生粉（丸）におけるＡｒａ ｈ
１（図６Ａ）、Ａｒａ ｈ ２（図６Ｂ）、およびＡｒａ ｈ ６（図６Ｃ）の検出を示す。抽出試料を、２８０ｎｍの吸光度により決定された総タンパク質含有率に対して相互に規準化した。ＳＥＰ粉に関して、Ａｒａ ｈ ２およびＡｒａ ｈ ６の相対効力は、参照標準と非常に一致する。Ａｒａ ｈ １の相対効力は、参照標準を下回るが、予め定義された許容範囲に極めて近く、したがって、治療的に関連するとみなされる。

表６は、ＳＥＰ粉タンパク質の特徴付け試験を要約する。下に示すように、ＳＥＰ粉タンパク質の特徴付けは、Ａｒａ ｈ １のＥＬＩＳＡ曲線を除き参照試料落花生粉と一致し、わずかに高いタンパク質含有率である。

煎った落花生の超臨界ＣＯ_２抽出により、Ｇｏｌｄｅｎ Ｐｅａｎｕｔ Ｃｏｍｐａｎｙ製の粉砕された粉および粗製落花生粉と類似の特徴を有する、粉砕された粉が得られた。本実施例に示される結果は、総タンパク質のＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル、特異的抗血清を用いた免疫ブロット、およびプールされた患者の血清を用いたＩｇＥ免疫ブロットで一致する反応性パターンを実証しており、このパターンは、粗製落花生タンパク質（ＣＰＰ）およびＧｏｌｄｅｎ Ｐｅａｎｕｔ Ｃｏｍｐａｎｙ（ＧＰＣ）製の落花生粉からのパターンと一般的に一致した。

（実施例３）
本実施例は、超低脂肪で安定な高アレルゲン性クルミ粉を生成するためのｓＣＯ_２を用いた焙煎クルミの油抽出を記載する。

本実施例では、焙煎クルミまるごとを分析およびｓＣＯ_２抽出のための供給原料として使用した。第１の分析ステップでは、焙煎クルミを粗挽きし、続いて画分をヘキサンソックスレー抽出により分析して、焙煎クルミの初期含油率および揮発性物質含有率を決定した。下の表７に示すように、粗挽き焙煎クルミは、７０．７％の含油率および０．９％の揮発性物質含油率を有した。

圧砕焙煎クルミ供給原料からの油抽出は、まるごとまたは粗挽き焙煎クルミから穏和な条件で油の約１／２を除去するように設計された第１の相、および焙煎クルミをさらに圧砕して１８メッシュを通して篩過し、次いで残っている抽出可能な油を細挽き焙煎クルミから除去することを含む第２の相の２相で進めた。

粗挽き焙煎クルミをそれぞれ２３１．８４グラムおよび２３２．３１グラムの２つのバッチに分けた。ＣＯ_２を用い、約４，０００ｐｓｉ～約７，０００ｐｓｉの圧力および約３０℃～５０℃の温度でこれらのバッチを抽出した。収集した油抽出物は、２つのバッチについて供給質量の５２．３％および５３．１％であり；収集した固形残留物は、それぞれ１０３および１０９グラムであった。

最初の２つのバッチからの固形物を合わせ、１８メッシュのスクリーンを通して篩過し、残留の粗い粒子をワーリングブレンダー中で圧砕し、１８メッシュを通して篩過し、全ての粒子が１８メッシュを通過するまでこれを繰り返した。３７．７％の残留含油率と推定されるこの材料を、それぞれ１２５．９８ｇおよび７８．７２ｇの２つのバッチで抽出した。第１のバッチ（１２５．９８ｇ）を約４，０００ｐｓｉ～約１０，０００ｐｓｉの圧力および約２５℃～４５℃の温度で抽出した。第２のバッチ（７８．７２ｇ）を約６，０００ｐｓｉ～８，０００ｐｓｉの圧力および約４０℃～５０℃の温度で抽出した。収集した抽出物は、供給質量の３５．７％および４０．３％であり、２つのバッチから収集した抽出粉は、それぞれ７７．４５ｇおよび４５．９５ｇ得られた。表８は、本実施例の焙煎クルミのｓＣＯ_２抽出ステップを示す。

圧砕抽出焙煎クルミ粉を合わせた。画分（８．１２ｇ）に対するヘキサンソックスレー抽出を使用して、粉中の残留含油率を評価した。残っている１２３．４ｇの粉を篩過した。表９に示すように、圧砕抽出焙煎クルミ固形物の残留含油率は、ヘキサンソックスレー抽出により分析して、１．６％であった。ソックスレー抽出において損失した固形物質量と収集した油との差による固形物中の揮発性物質は、２．６％であった。

表１０は、抽出焙煎クルミ粉の粒度分析を示す。

（実施例４）
本実施例は、超低脂肪で安定な高アレルゲン性クルミ粉を生成するためのｓＣＯ_２を用いた生クルミの油抽出を記載する。

本実施例では、生クルミまるごとを分析およびｓＣＯ_２抽出のための供給原料として使用した。第１の分析ステップでは、生クルミを粗挽きし、続いて画分をヘキサンソックスレー抽出により分析して、焙煎クルミの初期含油率および揮発性物質（おそらく水分）含有率を決定した。下の表１１に示すように、粗挽き生クルミは、６９．９％の含油率および２．３％の揮発性物質含油率を有した。

圧砕生クルミ供給原料からの油抽出は、粗挽き生クルミから油の約１／２を除去するように設計された第１の相、および焙煎クルミをさらに圧砕して、１８メッシュを通して篩過し、次いで細挽き生クルミから残っている抽出可能な油を除去することを含む第２の相の２相で進めた。

粗挽き生クルミをそれぞれ２３１．３６グラム（バッチ１）および２５２．８１グラム（バッチ２）の２つのバッチに分けた。ｓＣＯ_２を用いてこれらのバッチを抽出した。第１のバッチは、約７，０００ｐｓｉの圧力および約３５℃～５０℃の温度で抽出し、第２のバッチは、約６，０００ｐｓｉ～約９，０００ｐｓｉの圧力および約２０℃～５６℃の温度で抽出した。収集した油抽出物は、２つのバッチについて供給質量の５２．２％および４９．５％であり；収集した固形残留物は、それぞれ１０３および１１４グラムであった。

最初の２つのバッチからの固形物を合わせ、１８メッシュのスクリーンを通して篩過し、残留の粗い粒子をワーリングブレンダー中で圧砕し、１８メッシュを通して篩過し、全ての粒子が１８メッシュを通過するまでこれを繰り返した。４２．４％の残留含油率と推定されるこの材料（１０４．７４ｇ）を、約６，０００ｐｓｉ～約８，０００ｐｓｉの圧力および約３７℃～４７℃の温度で抽出した。収集した抽出物は、供給質量の５２．３％であり、収集した抽出粉は、４９グラム生成した。表１２は、本実施例の生クルミのｓＣＯ_２抽出ステップを示す。

圧砕抽出生クルミ粉を使用して、粉中の残留含油率を評価した。残っている１２３．４ｇの粉を篩過した。表１３に示すように、圧砕抽出生クルミ固形物の残留含油率は、ヘキサンソックスレー抽出により分析して、１．６％であった。ソックスレー抽出において損失した固形物質量と収集された油との差による固形物中の揮発性物質は、２．６％であった。

表１４は、抽出生クルミ粉の粒度分析を示す。

（実施例５）
本実施例は、実施例３および４のｓＣＯ_２抽出焙煎クルミ粉および生クルミ粉の特徴付けを記載する。特に、本実施例は、結果としてもたらされたｓＣＯ_２抽出焙煎クルミ（「ｓＣＯ_２焙煎」）粉およびｓＣＯ_２抽出生クルミ粉（「ｓＣＯ_２生」）の特徴付けを、粗製（石油エーテルで抽出）クルミタンパク質（「クルミ」）、Ｐｅａｒｌ Ｃｒｏｐ（「Ｐｅａｒｌ」）（Ｓｔｏｃｋｔｏｎ、ＣＡ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）から得られた脱脂（押圧による）生クルミ粉（ロット番号３６５７３５）、およびＬａ Ｔｏｕｒａｎｇｅｌｌｅ（「Ｌａ Ｔｏｕｒａｎｇｅｌｌｅ」）（Ｂｅｒｋｅｌｅｙ、ＣＡ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）から得られた脱脂（押圧による）生クルミ粉（ロット番号ＷＭＰ－１４５１６）と比較して記載する。

クルミ粉試料における最初の違いには、食感および色が含まれる：ｓＣＯ_２抽出焙煎クルミ粉および生クルミ粉は、淡いベージュ色であり、「ふわふわした」コンシステンシーを有し、一方で、押圧から得られたクルミ粉は、濃褐色であり、密なコンシステンシーを有した。

抽出緩衝液（５０ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ７．５、および６Ｍ尿素）を用いてｓＣＯ_２焙煎、ｓＣＯ_２生、Ｐｅａｒｌ、およびＬａ Ｔｏｕｒａｎｇｅｌｌｅ試料から以下のプロトコールで総タンパク質を抽出した。

１． １．５ｍＬ遠心分離管中に１０ｍｇの粉を秤量する

２． リン酸緩衝液または尿素緩衝液のいずれか１ｍＬを添加する

３． 振盪機で６０℃で１時間加熱する

４． クルミ粉抽出物５ｕＬを９６ウェルプレートに添加する

５． ブラッドフォードアッセイ試薬（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、製品番号Ｂ６９１９）２００ｕＬを添加する

６． ５９５ｎｍの吸光度を測定する

アッセイの検量線を作成するためのタンパク質標準としてウシ血清アルブミンを２５～２０００μｇ／ｍＬの濃度範囲にわたり使用した。タンパク質レベルが較正範囲内に入るようにクルミ粉試料をさらに３または６倍希釈した。

図７は、クルミ粉試料から抽出した総タンパク質を図示するグラフである。図７に示すように、ｓＣＯ_２抽出は、より多くの抽出可能なタンパク質を有するクルミ粉を提供した。

石油エーテル粗製クルミ、ｓＣＯ_２焙煎クルミ、ｓＣＯ_２生クルミ、ならびにヘキサン生クルミ粉および焙煎クルミ粉から抽出された総タンパク質を、特異的クルミアレルゲンに関してさらに特徴付けた。１．６％％の残留油を有する実施例３の超低脂肪焙煎クルミ粉、および２．７％の残留油を有する実施例４の超低脂肪生クルミ粉を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥを使用して総タンパク質含有率について分析し、クマシーブルーで染色した。図８は、これらの粉からＳＤＳ－ＰＡＧＥで分離されたタンパク質の結果を示す。図示するように、分離されたタンパク質の総含有率は、クルミ粉生成物の間で同等であるように見える。

図９は、粗製クルミ、ｓＣＯ２焙煎クルミ、ｓＣＯ２生クルミ、およびヘキサンクルミ粉からＳＤＳ－ＰＡＧＥで分離されたタンパク質の免疫ブロット分析を示す。ＳＤＳ－ＰＡＧＥで分離したタンパク質をポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）メンブレンに移し、クルミタンパク質（例えば、Ｊｕｇ ｒ １、Ｊｕｇ ｒ ２、およびＪｕｇ ｒ ４）に対するウサギ抗血清を用いた免疫ブロッティング用に加工した。一次抗血清と反応後、メンブレンを抗ウサギ－ＨＲＰと共にインキュベートした。図９に示すように、ｓＣＯ_２抽出後の粉（ｓＣＯ_２ Ｄ．Ｒ．およびｓＣＯ_２生）からの免疫ブロットは、石油エーテル抽出クルミ粉ならびにヘキサン抽出クルミ粉から抽出されたタンパク質とタンパク質のサイズおよび量の両方において同等であった。

（実施例６）
本実施例は、超低脂肪で安定な高アレルゲン性ペカン粉を生成するためのｓＣＯ_２を用いた生ペカンの油抽出を記載する。

本実施例では、分析およびｓＣＯ_２抽出のための供給原料として生ペカンまるごとを使用した。第１の分析ステップでは、生ペカンを粗挽きし、続いて画分をヘキサンソックスレー抽出により分析して、生ペカンの初期含油率および揮発性物質含有率を決定した。下の表１５に示すように、粗挽き生ペカンは、含油率７０．５％の含油率および２．８％の揮発性物質含油率を有した。

最初の２つのバッチからの固形物を別々のままにし、１８メッシュのスクリーンを通して篩過し、ワーリングブレンダー中で粗末を圧砕し、１８メッシュを通して篩過し、粗末を再度圧砕し、全てが１８メッシュを通過するまでこれを繰り返した。約３０％の残留含油率のこの材料を、２つのバッチ、すなわち運転３－１－２（運転８１０９－３－１からの固形物）および３－２－２（運転８１０９－２－１からの固形物）で、それぞれ９２および８７ｇの供給量で抽出した。運転３－１－２を７，２００～７，６００ｐｓｉの圧力および３３～６１℃の温度で抽出したが、運転は１日で完了せず、運転を停止して再始動した。運転３－２－２を７，３００～７，５００ｐｓｉの圧力および３８～５９℃の温度で抽出した。収集した抽出物は、供給質量の３２．６および２５．８％であり；２つのバッチから収集した抽出粉は、それぞれ６２および６５ｇであった。抽出パラメーターを表１６に示す。抽出温度は、圧力ほど定常ではなかったが、始動後は、典型的には５５～６０℃であり、例外として、運転３－２－１は、暖かく開始したが、停止後は冷たく再始動した。

圧砕抽出生ペカン粉を合わせ、次いで６０メッシュを通過するまでワーリングブレンダー中でさらに圧砕した。１２７ｇのうち、６ｇをヘキサンソックスレー抽出のために使用し、圧砕および篩過の間に小さい減量があり、粉の残量を発送のために準備した。粉のソックスレー分析は、０．２％の含油率であり、残留油の目標値と一致した。ソックスレーにおいて損失した固形物質量と収集した油との差による固形物中の揮発性物質は、０．９％であった。抽出生ペカン固形物のソックスレー分析については、表１７を参照されたい。

圧砕抽出生ペカン粉を使用して、粉中の残留含油率を評価した。表１７に示すように、圧砕抽出生ペカン固形物の残留含油率は、ヘキサンソックスレー抽出により分析すると、０．２％であった。ソックスレー抽出において損失した固形物質量と収集した油との差による固形物中の揮発性物質は、０．９％であった。

（実施例７）
本実施例は、ｓＣＯ_２を使用して抽出した超低脂肪焙煎落花生粉（実施例１から）の配合製剤化および加工を記載する。

実施例１からの超臨界ＣＯ_２抽出落花生粉（ＳＥＰ）を、２０メッシュのスクリーンを通して篩過し、選別した材料３０．７５ｇを混合容器に移した。ＡＶＩＣＥＬ（登録商標）ＰＨ－１０２（６３ｇ）は、清潔な２０メッシュのスクリーンを通過させ、混合容器に移した。残っているＡＶＩＣＥＬ（登録商標）ＰＨ－１０２を０．５のＣＡＢ－Ｏ－ＳＩＬ（登録商標）が入ったポリ袋に移した。容器中でＳＥＰ材料およびＡＶＩＣＥＬ（登録商標）ＰＨ－１０２を完全に混合し、続いて４０メッシュのスクリーンを通して篩過し、混合容器に移し、２０分間混和した。４０メッシュのスクリーンを通してステアリン酸マグネシウムを篩過し、混合容器に移し、５分間混和した。表１８は、１００ｍｇ経口免疫療法カプセルへの充填用に調製された処方配合を示すものである。

結果としてもたらされた混合材料は、現行適正製造基準（ＣＧＭＰ：current good manufacturing practice）製造に適した流動特徴を有する細末であった。表１９は、ＳＥＰ落花生粉、ＳＥＰ配合材料、および市販の落花生粉ロット（Ｇｏｌｄｅｎ Ｐｅａｎｕｔ Ｃｏｍｐａｎｙ（ＧＰＣ））についての相対密度データおよび流動特徴分析を示す。表２０は、カー指数およびハウスナー比の分析を参照する。

図１０は、ＳＥＰ落花生粉の粒度分布を示し、図１１は、複数の市販の落花生粉ロット（ＧＰＣ）の粒度分布を示す。

本実施例は、焙煎落花生からの油の超臨界ＣＯ_２抽出により、製剤化に適した超低脂肪落花生粉を得ることができることを実証する。

（実施例８）
本実施例は、ｓＣＯ_２を使用して抽出した超低脂肪クルミ粉（実施例３および４から）の配合製剤化および加工を記載する。

実施例３および４からのｓＣＯ_２抽出クルミ粉を、２０メッシュのスクリーンを通して篩過し、それぞれ表２１および２２に示される選別した材料の量を混合容器に移した。ＡＶＩＣＥＬ（登録商標）ＰＨ－１０２およそ５ｇを、ＣＡＢ－Ｏ－ＳＩＬ（登録商標）０．５ｇが入ったポリ袋に移した。残っているＡＶＩＣＥＬ（登録商標）ＰＨ－１０２は、清潔な２０メッシュのスクリーンを通過させ、混合容器に移した。ポリ袋中のＡＶＩＣＥＬ（登録商標）ＰＨ－１０２およびＣＡＢ－Ｏ－ＳＩＬ（登録商標）を完全に混合し、４０メッシュのスクリーンを通過させ、混合容器に移し、２０分間混和した。ステアリン酸マグネシウムを、４０メッシュのスクリーンを通して篩過し、混合容器に移し、５分間混和した。表１９（ａ）および１９（ｂ）は、６００ｍｇ経口免疫療法カプセルへの充填用に調製された処方配合を示す。

結果としてもたらされた混合材料は、ＣＧＭＰ製造に適した流動特徴を有する細末であった。表２３は、表１９（ａ）および１９（ｂ）に示されるｓＣＯ_２抽出クルミ配合製剤のための相対密度データおよび流動特徴分析を示す。

表２３に示すように、焙煎クルミ粉の流動特徴は、生クルミ粉の流動特徴と非常に類似している。

各クルミ粉の試料１０ｇを使用して篩過分析による粒度分布（ＰＳＤ）も行った。この試験のために、試料を２０メッシュで予備選別し、１００メッシュのスクリーンを水平パルスユニットに取り替えた。焙煎クルミ粉についてのＰＳＤデータを図１２Ａに、生クルミについて図１２Ｂに示す。

本実施例は、焙煎クルミおよび生クルミの両方からの油のｓＣＯ_２抽出により、製剤化に適した超低脂肪クルミ粉を得ることができることを実証する。

（実施例９）
本実施例は、ｓＣＯ_２を使用して抽出した超低脂肪ペカン粉（実施例６から）の配合製剤化および加工を記載する。

実施例６からのｓＣＯ_２抽出ペカン粉を、２０メッシュのスクリーンを通して篩過し、表２１に示す量の選別した材料を混合容器に移した。ＡＶＩＣＥＬ（登録商標）ＰＨ－１０２およそ５ｇを、ＣＡＢ－Ｏ－ＳＩＬ（登録商標）０．５ｇが入ったポリ袋に移した。残っているＡＶＩＣＥＬ（登録商標）ＰＨ－１０２は、清潔な２０メッシュのスクリーンを通過させ、混合容器に移した。ポリ袋中のＡＶＩＣＥＬ（登録商標）ＰＨ－１０２およびＣＡＢ－Ｏ－ＳＩＬ（登録商標）を完全に混合し、４０メッシュのスクリーンを通過させ、混合容器に移し、２０分間混和した。ステアリン酸マグネシウムを、４０メッシュのスクリーンを通して篩過し、混合容器に移し、５分間混和した。表２４は、６００ｍｇ経口免疫療法カプセルへの充填用に調製された処方配合を示す。

結果としてもたらされた混合材料は、ｃＧＭＰ製造に適した流動特徴を有する細末であった。表２５は、表２４に示すｓＣＯ_２抽出ペカン配合製剤についての相対密度データおよび流動特徴分析を示す。

生ペカン粉の流動特徴は、生ペカン粉配合物の流動特徴と類似しており、製造適用のために許容できた。

ペカン粉試料１０ｇを使用して篩過分析による粒度分布（ＰＳＤ）を行った。この試験のために、試料を２０メッシュで予備選別し、水平パルスユニットを１００メッシュのスクリーンに取り替えた。生ペカン粉についてのＰＳＤデータを図１３に示す。

本実施例は、生ペカンからの油のｓＣＯ_２抽出により、製剤化に適した超低脂肪ペカン粉を得ることができることを実証する。

（実施例１０）
クルミ片をスクリューオイルエキスペラー中に供給し、押圧して、速い最初の画分を除去し、クルミの粒度を小さくした。クルミ片の押圧により、クルミ材料の脂肪含有率は、ヘキサンソックスレー抽出により測定すると、約７０％から約５４％に減少した。

超臨界二酸化炭素をおよそ６０℃に加温し、約４０ＭＰａに加圧し、６ｋｇの押圧クルミ材料におよそ１ｋｇ／分の速度でおよそ４時間流通させた。クルミ粉の残留脂肪含有率は、ヘキサンソックスレー抽出により測定すると、４．２％であった。

脱脂クルミ粉を粉砕し、一連の篩に通過させた。脱脂クルミ粉は容易に粉砕され、クルミ粉のおよそ９６重量％は５００μｍ（３５メッシュ）の篩を通過し、クルミ粉の約３８重量％は、１４９μｍ（１００メッシュ）の篩を通過した。

（実施例１１）
クルミ粉を高塩分トリスＮａＣｌ緩衝液（２５ｍＭトリス－ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１．５Ｍ ＮａＣｌ、３．５％（ｗ／ｖ）ポリビニルポリピロリドン）と１０ｍｇ／ｍＬのクルミ粉濃度で混合し、４０℃で１時間インキュベートしてクルミタンパク質を抽出することによって、ＲＰ－ＨＰＬＣ分析のために下に詳記したクルミ粉試料を調製した。インキュベーション期間中に、試料を１０分毎に２０～３０秒間ボルテックスした。タンパク質を抽出後、試料を６０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清をＲＰ－ＨＰＬＣ分析のために使用した。

Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌガードカラムを備えるＡｇｉｌｅｎｔ Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ ３００ＳＢ－Ｃ１８、２．１×７５ｍｍ、５μｍ粒子のカラムを使用してＲＰ－ＨＰＬＣ分析を行った。抽出された２．５μＬのタンパク質をカラムに注入した。移動相は、水中０．２％ＴＦＡ（Ａ相）および０．２％ＴＦＡを有する水中９５％アセトニトリル（Ｂ相）を含んでいた。移動相の勾配は、移動相Ａ、１００％で開始し、移動相Ｂを０分から１０分で３０％に、１０分から４５分で５２％に増加させた。流速を０．３ｍＬ／分に定常に保ち、カラム温度を５５℃に保った。データを２１０ｎｍのＵＶにより収集した。

試料１：クルミ材料を超臨界二酸化炭素と接触させて脱脂クルミ粉を形成することにより、蒸気低温殺菌クルミ材料を脱脂した。試料１のＲＰ－ＨＰＬＣ分析を図１４Ａに示す。図１４Ａの矢印は、異なるクルミタンパク質抗原のピークを示す。

試料２：スクリューオイルエキスペラーを使用して蒸気低温殺菌クルミ材料を最初に脱脂した。オイルエキスペラーを使用する初期脱脂に続き、クルミ材料を超臨界二酸化炭素と接触させて脱脂クルミ粉を形成することにより、クルミ材料をさらに脱脂した。試料２の脱脂クルミ粉のＲＰ－ＨＰＬＣ分析を図１４Ｂに示す。図１４Ｂの矢印は、異なるクルミタンパク質抗原のピークを示す。

試料３：市販の脱脂クルミ粉（Ｂｉｏ Ｐｌａｎｅｔｅ、Ｌｏｍｍａｔｚｓｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）。試料３のＲＰ－ＨＰＬＣ分析を図１４Ｃに示す。図１４Ｃの矢印は、異なるクルミタンパク質抗原のピークを示す。

クルミタンパク質抗原は、以下のおよその保持時間でカラムから溶出した：Ｊｕｇ ｒ
１：９．６分；Ｊｕｇ ｒ ３：１３．２分；Ｊｕｇ ｒ ２：２５．１分；Ｊｕｇ ｒ ４：２８．７分。各タンパク質抗原についてのピーク面積を表２６に示す。

（実施例１２）
クルミ粉試料からのＪｕｇ ｒ １およびＪｕｇ ｒ ２タンパク質抗原を免疫ブロットにより分析した。分析された試料は、次の通りである：（１）超臨界二酸化炭素を使用して約４５℃で脱脂した蒸気低温殺菌クルミ材料；（２）超臨界二酸化炭素を使用して約７５℃で脱脂した蒸気低温殺菌クルミ材料；（３）市販のクルミ粉（ロット番号０８３４０１４８；Ｂｉｏ Ｐｌａｎｅｔｅ、Ｌｏｍｍａｔｚｓｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）；（４）市販のクルミ粉（ロット番号０７２１００８１；Ｂｉｏ Ｐｌａｎｅｔｅ、Ｌｏｍｍａｔｚｓｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）；および（５）超臨界二酸化炭素を使用して約４５℃で脱脂した低温殺菌されていないクルミ材料。

クルミタンパク質抽出物を得るために、各クルミ粉末試料０．４グラムをホウ酸緩衝食塩水（１０ｍＭ Ｈ_３ＢＯ_３、２５ｍＭ Ｎａ_２Ｂ_４Ｏ_７、７５ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ８．５）と混合して１０ｍＬの総体積にした。次いで、試料を氷上で冷却し、その後、超音波処理し、遠心分離した。上清を移し、－２０℃または－８０℃のいずれかで保存した。タンパク質含有率をＵＶ吸収により決定した。

各試料から抽出したタンパク質２０μｇを、１２％ビス－トリスＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルを使用して分析した後、移し、患者血清または精製抗体を使用して染色した。対照として、単離したＪｕｇ ｒ １またはＪｕｇ ｒ ２を同時に分析した。患者血清試料について、クルミアレルギーと診断された個体５人から血清を収集し、プールし、ツイーン含有リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳＴ）で１：５希釈した。プールし、希釈した患者血清２ｍＬを一次抗体として使用し、ＨＲＰタグ付き抗ヒトＩｇＥマウスモノクローナル抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を二次抗体として使用した。移したタンパク質を、Ｊｕｇ
ｒ １およびＪｕｇ ｒ ２の両方を認識するＨＣ１２１抗体を使用して別々に染色した。

プールした患者血清で染色した試料についての免疫ブロットを図１５Ａに示す（「ＭＭ」は、分子量マーカーを示し、「Ｊ１」は、Ｊｕｇ ｒ １を示し、「Ｊ２」は、Ｊｕｇ
ｒ ２を示す）。５つの試料のそれぞれにおいてＪｕｇ ｒ １およびＪｕｇ ｒ ２を検出したが、試料１、２および５（それぞれ超臨界二酸化炭素を使用して脱脂）は、試料３および４よりも高いＪｕｇ ｒ １およびＪｕｇ ｒ ２レベルを有した。

ＨＣ１２１抗体で染色した試料についての免疫ブロットを図１５Ｂに示す。プールした患者の血清で染色した免疫ブロットと同様に、５つの試料のそれぞれからＪｕｇ ｒ １およびＪｕｇ ｒ ２を検出した。しかし、試料１、２および５（それぞれ超臨界二酸化炭素を使用して脱脂）は、試料３および４よりも高いＪｕｇ ｒ １およびＪｕｇ ｒ ２レベルを有した。

ＩＸ． 結論
状況が明らかに他のことを要求しない限り、本明細書および特許請求の範囲にわたり、「含む」、「含んでいる」などの語は、排他的または網羅的な意味とは対照的に包含的な意味で、いわば「を含むが、それらに限定されない」の意味で解釈されるべきである。単数または複数を使用する語は、それぞれ複数または単数も含む。追加的に、「本明細書における」、「上記」および「下記」という語ならびに類似の意味の語は、本出願に使用する場合、本出願全体を指し、本出願の任意の特定の部分も指さないものとする。

本明細書に言及された全ての刊行物、特許、および特許出願は、各個別の刊行物、特許、または特許出願が参照により組み込まれていると具体的および個別に示されているのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれている。

本開示の実施形態の記載は、網羅的であることまたは本開示を開示された正確な形態に限定することが意図されない。本開示の具体的な実施形態およびその例が、例証的な目的で本明細書に記載されるものの、関連する技術分野の技術者が認識するように、様々な等価の修飾が本開示の範囲内で可能である。例えば、プロセスステップ、製剤構成成分または機能が所与の順序で提示されるものの、代替的な実施形態が、これらを異なる順序でまたは実質的に同時に含む場合がある。本明細書に提供される本開示の教示を、本明細書に記載の組成物だけでなく他の組成物に適用することができる。本明細書に記載の様々な実施形態を組み合わせて、さらなる実施形態を提供することができる。

前述の実施形態のいずれかの特定の要素を組み合わせる、または他の実施形態における要素と置換することができる。さらに、本開示のある特定の実施形態と関連する態様が、これらの実施形態に関連して記載されてきたものの、他の実施形態もこのような態様を示す場合があり、本開示の範囲内に含まれるために全ての実施形態が必ずしもこのような態様を示す必要はない。したがって、添付の特許請求の範囲によることを除き、本開示は限定されない。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
脱脂ツリーナッツ粉を含むツリーナッツ粉組成物であって、前記脱脂ツリーナッツ粉の少なくとも５０重量％が、２５０μｍの篩を通過する、ツリーナッツ粉組成物。
（項目２）
前記脱脂ツリーナッツ粉が、約１２重量％未満の含油率を有する、項目１に記載のツリーナッツ粉組成物。
（項目３）
前記脱脂ツリーナッツ粉が、約６重量％未満の含油率を有する、項目１に記載のツリーナッツ粉組成物。
（項目４）
前記ツリーナッツが、クルミ、アーモンド、ペカン、カシューナッツ、ヘーゼルナッツ、松の実、ブラジルナッツ、またはピスタチオである、項目１～３のいずれか一項に記載のツリーナッツ粉組成物。
（項目５）
前記脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全てが、１ｍｍの篩を通過する、項目１～４のいずれか一項に記載のツリーナッツ粉組成物。
（項目６）
前記脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全てが、２５０μｍの篩を通過する、項目１～５のいずれか一項に記載のツリーナッツ粉組成物。
（項目７）
前記脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全てが、１４９μｍの篩を通過する、項目１～６のいずれか一項に記載のツリーナッツ粉組成物。
（項目８）
前記脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全てが、７４μｍの篩を通過する、項目１～７のいずれか一項に記載のツリーナッツ粉組成物。
（項目９）
担体材料をさらに含む、項目１～８のいずれか一項に記載のツリーナッツ粉組成物。
（項目１０）
前記担体材料が、１種または複数の希釈剤、流動促進剤、または滑沢剤を含む、項目６に記載のツリーナッツ粉組成物。
（項目１１）
前記脱脂ツリーナッツ粉が、
ツリーナッツ材料を超臨界流体と接触させること；および
前記ツリーナッツ材料を粉砕して前記脱脂ツリーナッツ粉を形成すること
を含む方法により生成される、項目１～１０のいずれか一項に記載のツリーナッツ粉組成物。
（項目１２）
前記超臨界流体が、超臨界二酸化炭素である、項目８に記載のツリーナッツ粉組成物。（項目１３）
前記ツリーナッツ粉組成物が、食材と組み合わされる、項目１～１２のいずれか一項に記載のツリーナッツ粉組成物。
（項目１４）
対象におけるナッツアレルギーを処置する方法であって、前記対象に項目１～１３のいずれか一項に記載のツリーナッツ粉組成物の有効量を経口投与することを含む、方法。
（項目１５）
項目１～１３のいずれか一項に記載のツリーナッツ粉組成物を含む、経口免疫療法用の剤形。
（項目１６）
前記ツリーナッツ粉組成物の測定された量を含む、項目１５に記載の剤形。
（項目１７）
約０．１ｍｇ～約２０００ｍｇのツリーナッツ粉を含む、項目１５または１６に記載の剤形。
（項目１８）
測定された用量が、約０．５ｍｇ～約１０００ｍｇのナッツタンパク質を含む、項目１５～１７のいずれか一項に記載の剤形。
（項目１９）
前記ツリーナッツ粉組成物が、パッケージ中に封入されている、項目１５～１８のいずれか一項に記載の剤形。
（項目２０）
前記パッケージが、前記剤形またはパッケージ内に含有されるナッツタンパク質の量またはナッツ粉の量を特定する、項目１９に記載の剤形。
（項目２１）
前記ツリーナッツ粉組成物が、カプセル中にカプセル化されている、項目１５～２０のいずれか一項に記載の剤形。
（項目２２）
脱脂ナッツ粉の測定された量を含む、経口免疫療法用の剤形であって、
前記脱脂ナッツ粉が、
ナッツ材料を超臨界流体と接触させ、それにより、前記ナッツ材料の含油率を減少させて脱脂ナッツ粉を形成すること；および
前記脱脂ナッツ粉の用量を測定すること
を含む方法により生成される、
剤形。
（項目２３）
前記測定された用量が、約０．１ｍｇ～約２０００ｍｇのナッツタンパク質を含む、項目２２に記載の剤形。
（項目２４）
前記測定された用量が、約０．５ｍｇ～約１０００ｍｇのナッツタンパク質を含む、項目２２または２３に記載の剤形。
（項目２５）
前記脱脂ナッツ粉を生成する前記方法が、前記脱脂ナッツ粉を粉砕することをさらに含む、項目２２～２４のいずれか一項に記載の剤形。
（項目２６）
前記脱脂ナッツ粉を生成する前記方法が、前記ナッツ材料を前記超臨界流体と接触させる前に、前記ナッツ材料を押圧または粉砕することをさらに含む、項目２２～２５のいずれか一項に記載の剤形。
（項目２７）
前記脱脂ナッツ粉が、担体材料と組み合わされる、項目２２～２６のいずれか一項に記載の剤形。
（項目２８）
前記担体材料が、１種または複数の希釈剤、流動促進剤、または滑沢剤を含む、項目２７に記載の剤形。
（項目２９）
前記脱脂ナッツ粉が、パッケージ中に封入されている、項目２２～２８のいずれか一項に記載の剤形。
（項目３０）
前記パッケージが、前記剤形またはパッケージ内に含有されるナッツタンパク質の量またはナッツ粉の量を特定する、項目２９に記載の剤形。
（項目３１）
前記脱脂ナッツ粉が、カプセル中にカプセル化されている、項目２２～３０のいずれか一項に記載の剤形。
（項目３２）
前記脱脂ナッツ粉の少なくとも５０重量％が、２５０μｍの篩を通過する、項目２２～３１のいずれか一項に記載の剤形。
（項目３３）
前記脱脂ナッツ粉のほぼ全てが、１ｍｍの篩を通過する、項目２２～３２のいずれか一項に記載の剤形。
（項目３４）
前記脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全てが、２５０μｍの篩を通過する、項目２２～３３のいずれか一項に記載の剤形。
（項目３５）
前記脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全てが、１４９μｍの篩を通過する、項目２２～３４のいずれか一項に記載の剤形。
（項目３６）
前記脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全てが、７４μｍの篩を通過する、項目２２～３５のいずれか一項に記載の剤形。
（項目３７）
前記脱脂ナッツ粉が、約１２％未満の含油率を有する、項目２２～３６のいずれか一項に記載の剤形。
（項目３８）
前記脱脂ナッツ粉が、約６％未満の含油率を有する、項目２２～３７のいずれか一項に記載の剤形。
（項目３９）
前記脱脂ナッツ粉が、落花生粉である、項目２２～３８のいずれか一項に記載の剤形。（項目４０）
前記脱脂ナッツ粉が、ツリーナッツ粉である、項目２２～３８のいずれか一項に記載の剤形。
（項目４１）
前記ツリーナッツが、クルミ、アーモンド、ペカン、カシューナッツ、ヘーゼルナッツ、松の実、ブラジルナッツ、またはピスタチオである、項目４０に記載の剤形。
（項目４２）
前記超臨界流体が、超臨界二酸化炭素である、項目２２～４１のいずれか一項に記載の剤形。
（項目４３）
項目１５～４２のいずれか一項に記載の剤形および経口免疫療法における使用説明書を含む、キット。
（項目４４）
前記使用説明書が、前記脱脂ナッツ粉を食材と組み合わせるための説明書を含む、項目４３に記載のキット。
（項目４５）
前記使用説明書が、前記剤形の毎日投与のための説明書を含む、項目４３または４４に記載のキット。
（項目４６）
超低脂肪ナッツ材料を製造する方法であって、
ある初期含油率を有するナッツ材料を超臨界流体と接触させて、減少した含油率を有する脱脂ナッツ材料を提供すること；および
前記脱脂ナッツ材料を粉砕すること
を含む、方法。
（項目４７）
超低脂肪ナッツ材料を製造する方法であって、
ある初期含油率を有するナッツ材料を超臨界流体と接触させて、減少した含油率を有する脱脂ナッツ材料を提供すること；および
経口免疫療法用の前記脱脂ナッツ材料の用量を測定すること
を含む、方法。
（項目４８）
前記脱脂ナッツ材料の前記測定された用量が、約０．１ｍｇ～約１０００ｍｇのナッツタンパク質を含む、項目４７に記載の方法。
（項目４９）
超低脂肪ナッツ材料を製造する方法であって、
ある初期含油率を有するナッツ材料を超臨界流体と接触させて、減少した含油率を有する脱脂ナッツ材料を提供すること；および
前記脱脂ナッツ材料をパッケージ中にパッケージングすること
を含む、方法。
（項目５０）
前記パッケージが、５ｍＬ未満の体積を有する、項目４９に記載の方法。
（項目５１）
前記パッケージが、カプセルである、項目４９または５０に記載の方法。
（項目５２）
前記脱脂ナッツ材料を担体材料と組み合わせることを含む、項目４６～５１のいずれか一項に記載の方法。
（項目５３）
前記担体材料が、１種または複数の希釈剤、流動促進剤、または滑沢剤を含む、項目５２に記載の方法。
（項目５４）
前記脱脂ナッツ材料が、０．１％～１２％の間の含油率を有する、項目４６～５３のいずれか一項に記載の方法。
（項目５５）
前記超臨界流体が、二酸化炭素である、項目４６～５４のいずれか一項に記載の方法。（項目５６）
前記ナッツ材料が、落花生材料である、項目４６～５５のいずれか一項に記載の方法。（項目５７）
前記ナッツ材料が、ツリーナッツ材料である、項目４６～５５のいずれか一項に記載の方法。
（項目５８）
前記ツリーナッツ材料が、クルミ材料、カシューナッツ材料、ヘーゼルナッツ材料、アーモンド材料、ピスタチオ材料、松の実材料、ブラジルナッツ材料、またはペカン材料である、項目５７に記載の方法。
（項目５９）
前記ナッツ材料を前記超臨界流体と接触させる前に、前記ナッツ材料を押圧または粉砕することを含む、項目４６～５８のいずれか一項に記載の方法。
（項目６０）
前記脱脂ナッツ材料中の１種または複数のナッツタンパク質アレルゲンを特徴付けることをさらに含む、項目４６～５９のいずれか一項に記載の方法。
（項目６１）
前記１種または複数のナッツタンパク質アレルゲンが、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、質量分析、液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣ－ＭＳ）、液体クロマトグラフィー－質量分析／質量分析（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）、または免疫ブロットを使用して特徴付けられる、項目６０に記載の方法。
（項目６２）
前記ナッツ粉中のより大きい粒子を前記ナッツ粉中のより小さいナッツ粒子から分離すること、および前記より小さいナッツ粒子を保持することをさらに含む、項目４６～６１のいずれか一項に記載の方法。
（項目６３）
１つまたは複数の篩を使用して、前記より大きい粒子が、前記より小さいナッツ粒子から分離される、項目６２に記載の方法。
（項目６４）
前記ナッツ材料を前記超臨界流体と接触させることが、前記ナッツ材料を通して前記超臨界流体を流すことを含む、項目４６～６３のいずれか一項に記載の方法。
（項目６５）
対象におけるツリーナッツアレルギーを処置する方法であって、前記対象に脱脂ツリーナッツ粉を含む医薬組成物の有効量を経口投与することを含み、前記医薬組成物の前記有効量が、約０．１ｍｇ～約２０００ｍｇのツリーナッツタンパク質を含む、方法。
（項目６６）
前記医薬組成物の前記有効量が、約０．５ｍｇ～約１０００ｍｇのツリーナッツタンパク質を含む、項目６５に記載の方法。
（項目６７）
前記脱脂ツリーナッツ粉の少なくとも５０重量％が、２５０μｍの篩を通過する、項目６５または６６に記載の方法。
（項目６８）
前記脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全てが、１ｍｍの篩を通過する、項目６５～６７のいずれか一項に記載の方法。
（項目６９）
前記脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全てが、２５０μｍの篩を通過する、項目６５～６８のいずれか一項に記載の方法。
（項目７０）
前記脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全てが、１４９μｍの篩を通過する、項目６５～６９のいずれか一項に記載の方法。
（項目７１）
前記脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全てが、７４μｍの篩を通過する、項目６５～７０のいずれか一項に記載の方法。
（項目７２）
前記脱脂ツリーナッツ粉が、約１２重量％未満の含油率を有する、項目６５～７１のいずれか一項に記載の方法。
（項目７３）
前記脱脂ツリーナッツ粉が、約６重量％未満の含油率を有する、項目６５～７２のいずれか一項に記載の方法。
（項目７４）
前記ツリーナッツが、クルミ、アーモンド、ペカン、カシューナッツ、ヘーゼルナッツ、松の実、ブラジルナッツ、またはピスタチオである、項目６５～７３のいずれか一項に記載の方法。
（項目７５）
対象におけるナッツアレルギーを処置する方法であって、前記対象に脱脂ナッツ粉を含む医薬組成物の有効量を経口投与することを含み、前記脱脂ナッツ粉が、ナッツ材料を超臨界流体と接触させ、それにより、前記ナッツ材料の含油率を減少させて前記脱脂ナッツ粉を形成することを含む方法により生成される、方法。
（項目７６）
前記医薬組成物の前記有効量が、約０．１ｍｇ～約２０００ｍｇのナッツタンパク質を含む、項目７５に記載の方法。
（項目７７）
前記医薬組成物の前記有効量が、約０．５ｍｇ～約１０００ｍｇのナッツタンパク質を含む、項目７５または７６に記載の方法。
（項目７８）
前記脱脂ナッツ粉を生成する前記方法が、前記脱脂ナッツ粉を粉砕することをさらに含む、項目７５～７７のいずれか一項に記載の方法。
（項目７９）
前記脱脂ナッツ粉を生成する前記方法が、前記ナッツ材料を前記超臨界流体と接触させる前に、前記ナッツ材料を押圧または粉砕することをさらに含む、項目７５～７８のいずれか一項に記載の方法。
（項目８０）
前記脱脂ナッツ粉の少なくとも５０重量％が、２５０μｍの篩を通過する、項目７５～７９のいずれか一項に記載の方法。
（項目８１）
前記脱脂ナッツ粉のほぼ全てが、１ｍｍの篩を通過する、項目７５～８０のいずれか一項に記載の方法。
（項目８２）
前記脱脂ナッツ粉のほぼ全てが、２５０μｍの篩を通過する、項目７５～８１のいずれか一項に記載の方法。
（項目８３）
前記脱脂ナッツ粉のほぼ全てが、１４９μｍの篩を通過する、項目７５～８２のいずれか一項に記載の方法。
（項目８４）
前記脱脂ツリーナッツ粉のほぼ全てが、７４μｍの篩を通過する、項目７５～８３のいずれか一項に記載の方法。
（項目８５）
前記脱脂ナッツ粉が、約１２重量％未満の含油率を有する、項目７５～８４のいずれか一項に記載の方法。
（項目８６）
前記脱脂ナッツ粉が、約６重量％未満の含油率を有する、項目７５～８５のいずれか一項に記載の方法。
（項目８７）
前記脱脂ナッツ粉が、落花生粉である、項目７５～８６のいずれか一項に記載の方法。（項目８８）
前記脱脂ナッツ粉が、ツリーナッツ粉である、項目７５～８６のいずれか一項に記載の方法。
（項目８９）
前記ツリーナッツが、クルミ、アーモンド、ペカン、カシューナッツ、ヘーゼルナッツ、松の実、ブラジルナッツ、またはピスタチオである、項目８８に記載の方法。
（項目９０）
前記超臨界流体が、超臨界二酸化炭素である、項目７５～８９のいずれか一項に記載の方法。
（項目９１）
前記医薬組成物が、担体材料を含む、項目６５～９０のいずれか一項に記載の方法。
（項目９２）
前記担体材料が、１種または複数の希釈剤、流動促進剤、または滑沢剤を含む、項目９１に記載の方法。
（項目９３）
前記医薬組成物が、毎日投与される、項目６５～９２のいずれか一項に記載の方法。
（項目９４）
前記医薬組成物の同じ有効量が、少なくとも１週間毎日投与される、項目９３に記載の方法。
（項目９５）
前記医薬組成物の前記有効量が、定期的に増加される、項目６５～９４に記載の方法。（項目９６）
前記医薬組成物の前記有効量が、少なくとも１週間の期間の後に前記医薬組成物の異なる有効量に調整され、前記医薬組成物の前記異なる有効量が、約０．１ｍｇ～約２０００ｍｇのツリーナッツタンパク質を含む、項目６５～９５のいずれか一項に記載の方法。
（項目９７）
前記医薬組成物の前記有効量が、少なくとも１週間の期間の後に前記医薬組成物の異なる有効量に調整され、前記医薬組成物の前記異なる有効量が、約０．５ｍｇ～約１０００ｍｇのツリーナッツタンパク質を含む、項目６５～９６のいずれか一項に記載の方法。
（項目９８）
前記医薬組成物が、少なくとも１ヶ月間毎日投与される、項目６５～９７のいずれか一項に記載の方法。
（項目９９）
前記対象が、ヒトである、項目６５～９８のいずれか一項に記載の方法。

Claims (1)

1. 本願明細書に記載の発明。

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