JP2022130378A - 細胞性vamp切断アッセイ - Google Patents
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Abstract
Description
a)クロストリジウム神経毒活性に適した条件下で、細胞をクロストリジウム神経毒と接触させる工程と、
b)前記細胞の細胞質内容物を、VAMP切断性クロストリジウム神経毒によるVAMPの切断後に、C末端側VAMP切断産物に対する第1の検出抗体と、第1の検出抗体がC末端側VAMP切断産物と結合するのに適した条件下で接触させる工程であって、前記の第1の検出抗体が、本発明の抗体である工程と、
c)適した手段によって、前記の第1の検出抗体とC末端側VAMP切断産物との結合を検出する工程と
を含む方法を提供する。
a)対象から得られた試験サンプルに、VAMP切断性クロストリジウム神経毒を添加する工程と、
b)クロストリジウム神経毒活性に適した条件下で、細胞を、工程a)の試験サンプルと接触させる工程と、
c)前記細胞の細胞質内容物を、VAMP切断性クロストリジウム神経毒によるVAMPの切断後に、C末端側VAMP切断産物に対する第1の検出抗体と、第1の検出抗体がC末端側VAMP切断産物と結合するのに適した条件下で接触させる工程であって、前記の第1の検出抗体が、本発明の抗体である工程と、
d)適した手段によって、第1の検出抗体とC末端側VAMP切断産物との結合を検出する工程と、
e)第1の検出抗体に結合したC末端側VAMP切断産物の量を定量化する工程と、
f)試験サンプルの代わりに陰性対照サンプルを用いて工程a)~e)を反復する工程と、
g)工程(e)及び(f)における前記第1の検出抗体に結合したC末端側VAMP切断産物の量を比較する工程であって、工程(f)における前記第1の検出抗体に結合したC末端側VAMP切断産物の量と比較して、工程(e)における前記第1の検出抗体に結合したC末端側VAMP切断産物の量が低く検出されることは、VAMP切断性クロストリジウム神経毒に対する中和抗体の存在を示す工程と
を含む方法を提供する。
・ KLSELDDRADALQ (配列番号15)
・ QKLSELDDRADALQ (配列番号16)
・ KLSELDDRAD (配列番号17)
・ KLSELDDRADALQAGAS (配列番号18)
・ DQKLSELDDRADALQ (配列番号31).
・ KLSELDDRADALQ (配列番号15)
・ LSELDDRADALQ (配列番号19)
・ LSELDDRADA (配列番号20)
・ LSELDDRADALQAGAS (配列番号21).
・ ERDQKLSELDDRA (配列番号32)
・ LERDQKLSELDDRA (配列番号33)
・ VLERDQKLSELDDRA (配列番号34).
・ FETSAAKLKRKYW (配列番号22)
・ FESSAAKLKRKYW (配列番号23)
・ QFETSAAKLKRKYW (配列番号24)
・ FETSAAKLKR (配列番号25)
・ FETSAAKLKRKYWWKN (配列番号26)
・ ETSAAKLKRKYWWK (配列番号48)
・ FETSAAKLKRKYWWK (配列番号49)
・ QFESSAAKLKRKYW (配列番号50)
・ FESSAAKLKR (配列番号51)
・ FESSAAKLKRKYWWK (配列番号52).
・ AKLKRKYWWKN (配列番号27)
・ AAKLKRKYWWKN (配列番号28)
・ AKLKRKYWWKNCKM (配列番号29)
・ AKLKRKYWWKNLKM (配列番号30).
・ ADALQAGASQF (配列番号53)
・ ADALQAGASQ (配列番号54)
・ RADALQAGASQF (配列番号55)
・ ADALQAGASQFE (配列番号56)
・ ADALQAGASVF (配列番号57)
・ ADALQAGASV (配列番号58)
・ ADALQAGASVFE (配列番号59)
・ RADALQAGASVF (配列番号60)
・ RADALQAGAS (配列番号61).
・ SESLSDNATAF (配列番号62)
・ SESLSDNATA (配列番号63)
・ KSESLSDNATAF (配列番号64)
・ SESLSDNATAFS (配列番号65).
・ SDQLLDMSSTF (配列番号66)
・ SDQLLDMSST (配列番号67)
・ RSDQLLDMSSTF (配列番号68)
・ SDQLLDMSSTFN (配列番号69)
・ SDQLLDMSSAF (配列番号70)
・ SDQLLDMSSA (配列番号71)
・ RSDQLLDMSSAF (配列番号72)
・ SDQLLDMSSAFS (配列番号73)
・ RSDQLLDMSS (配列番号74).
・ SEVLGTQSKAF (配列番号75)
・ SEVLGTQSKA (配列番号76)
・ KSEVLGTQSKAF (配列番号77)
・ SEVLGTQSKAFY (配列番号78).
a)クロストリジウム神経毒活性に適した条件下で、細胞を、クロストリジウム神経毒と接触させる工程と、
b)前記細胞の細胞質内容物を、VAMP切断性クロストリジウム神経毒によるVAMPの切断後に、C末端側VAMP切断産物に対する第1の検出抗体と、第1の検出抗体がC末端側VAMP切断産物と結合するのに適した条件下で接触させる工程であって、前記の第1の検出抗体が、本発明の抗体である工程と、
c)適した手段によって、前記の第1の検出抗体とC末端側VAMP切断産物との結合を検出する工程と
を含む方法を提供する。
a)クロストリジウム神経毒活性に適した条件下で、細胞を、クロストリジウム神経毒と接触させる工程と、
b)前記細胞の細胞質内容物を、
・VAMP切断性クロストリジウム神経毒によるVAMPの切断後に、C末端側VAMP切断産物に対する第1の検出抗体と、第1の検出抗体がC末端側VAMP切断産物と結合するのに適した条件下で接触させる工程であって、前記の第1の検出抗体が、C末端側VAMP切断産物と、および全長VAMPと結合する本発明の抗体である工程と、並びに
・全長VAMPと結合するが、C末端側VAMP切断産物と結合しない第2の検出抗体と接触させる工程と、
c)適した手段によって
・第1の抗体と、C末端側VAMP切断産物との、および全長VAMPとの結合、並びに
・第2の検出抗体と全長VAMPとの結合
を検出する工程と、
d)適した手段によって、
・第1の検出抗体に結合したC末端側VAMP切断産物および全長VAMPの組み合わされた量、並びに
・第2の検出抗体に結合した全長VAMPの量
を定量化する工程と
を含む。
a)クロストリジウム神経毒活性に適した条件下で、細胞を、クロストリジウム神経毒と接触させる工程と、
b)前記細胞の細胞質内容物を、VAMP切断性クロストリジウム神経毒によるVAMPの切断後に、C末端側VAMP切断産物に対する第1の検出抗体と、第1の検出抗体がC末端側VAMP切断産物と結合するのに適した条件下で接触させる工程であって、前記の第1の検出抗体が、C末端側VAMP切断産物及び全長VAMPと結合する本発明の抗体である工程と、
c)適した手段によって、
・第1の抗体と、C末端側VAMP切断産物との結合、および
・第1の検出抗体と全長VAMPとの結合
を検出する工程であって、
第1の検出抗体とC末端側VAMP切断産物との結合から生じたシグナルが、第1の検出抗体と全長VAMPとの結合から生じたシグナルと区別され得る工程と、
d)適した手段によって、
・第1の検出抗体に結合したC末端側VAMP切断産物の量、および
・第1の検出抗体に結合した全長VAMPの量
を定量化する工程と
を含む。
a)対象から得られた試験サンプルに、VAMP切断性クロストリジウム神経毒を添加する工程と、
b)細胞を、クロストリジウム神経毒活性に適した条件下で、工程a)の試験サンプルと接触させる工程と、
c)前記細胞の細胞質内容物を、VAMP切断性クロストリジウム神経毒によるVAMPの切断後に、C末端側VAMP切断産物に対する第1の検出抗体と、第1の検出抗体がC末端側VAMP切断産物と結合するのに適した条件下で接触させる工程であって、前記の第1の検出抗体が本発明の抗体である工程と、
d)適した手段によって、第1の検出抗体とC末端側VAMP切断産物との結合を検出する工程と、
e)第1の検出抗体に結合したC末端側VAMP切断産物の量を定量化する工程と、
f)試験サンプルの代わりに陰性対照サンプルを用いて工程a)~e)を反復する工程と、
g)工程(e)及び(f)における前記第1の検出抗体に結合したC末端側VAMP切断産物の量を比較する工程であって、工程(f)における前記第1の検出抗体に結合したC末端側VAMP切断産物の量と比較して、工程(e)における前記第1の検出抗体に結合したC末端側VAMP切断産物の量が低く検出されることは、VAMP切断性クロストリジウム神経毒に対する中和抗体の存在を示す工程と
を含む方法を提供する。
a)対象から得られた試験サンプルに、VAMP切断性クロストリジウム神経毒を添加する工程と、
b)細胞を、クロストリジウム神経毒活性に適した条件下で、工程a)の試験サンプルと接触させる工程と、
c)前記細胞の細胞質内容物を、
・VAMP切断性クロストリジウム神経毒によるVAMPの切断後に、C末端側VAMP切断産物に対する第1の検出抗体と、第1の検出抗体がC末端側VAMP切断産物と結合するのに適した条件下で接触させる工程であって、前記の第1の検出抗体が、C末端側VAMP切断産物と、および全長VAMPと結合する本発明の抗体である工程と、並びに
・全長VAMPと結合するが、C末端側VAMP切断産物とは結合しない第2の検出抗体と接触させる工程と、
d)適した手段によって、
・第1の抗体と、C末端側VAMP切断産物との、および全長VAMPとの結合、並びに
・第2の検出抗体と全長VAMPとの結合
を検出する工程と、
e)・第1の検出抗体に結合したC末端側VAMP切断産物および全長VAMPの組み合わされた量、並びに
・第2の検出抗体に結合した全長VAMPの量
を定量化する工程と
f)工程a)~e)を、試験サンプルの代わりに陰性対照サンプルを用いて反復する工程と、
g)工程(e)及び(f)における前記第1の検出抗体に結合したC末端側VAMP切断産物の量を比較する工程であって、工程(e)における前記第1の検出抗体に結合したC末端側VAMP切断産物及び全長VAMPの組み合わされた量が、工程(f)における対応する量と比較して低く検出されること、及び/又は、工程(e)における前記第2の検出抗体に結合した全長VAMPの量が、工程(f)における対応する量と比較して高く検出されることは、VAMP切断性クロストリジウム神経毒に対する中和抗体の存在を示す工程と
を含む。
a)対象から得られた試験サンプルに、VAMP切断性クロストリジウム神経毒を添加する工程と、
b)細胞を、クロストリジウム神経毒活性に適した条件下で、工程a)の試験サンプルと接触させる工程と、
c)前記細胞の細胞質内容物を、VAMP切断性クロストリジウム神経毒によるVAMPの切断後に、C末端側VAMP切断産物に対する第1の検出抗体と、第1の検出抗体がC末端側VAMP切断産物と結合するのに適した条件下で接触させる工程であって、前記の第1の検出抗体が、C末端側VAMP切断産物と、および全長VAMPと結合する本発明の抗体である工程と、
d)適した手段によって、
・第1の抗体と、C末端側VAMP切断産物との、および全長VAMPとの結合、並びに
・第1の検出抗体と全長VAMPとの結合
を検出する工程であって、
第1の検出抗体とC末端側VAMP切断産物との結合から生じたシグナルが、第1の検出抗体と全長VAMPとの結合から生じたシグナルと区別され得る工程と、
e)・第1の検出抗体に結合したC末端側VAMP切断産物の量、および
・第1の検出抗体に結合した全長VAMPの量
を定量化する工程と、
f)工程a)~e)を、試験サンプルの代わりに陰性対照サンプルを用いて反復する工程と、
g)工程(e)及び(f)における前記第1の検出抗体に結合したC末端側VAMP切断産物の量を比較する工程であって、工程(e)における前記第1の検出抗体に結合したC末端側VAMP切断産物の量が、工程(f)における対応する量と比較して低く検出されること、及び/又は、工程(e)における前記第1の検出抗体に結合した全長VAMPの量が、工程(f)における対応する量と比較して高く検出されることは、VAMP切断性クロストリジウム神経毒に対する中和抗体の存在を示す工程と
を含む。
- 配列番号2のアミノ酸残基1~441またはそれに対して少なくとも70%、好ましくは、少なくとも75%、80%、85%、90%、95%もしくは99%の配列同一性を有するポリペプチド配列、
- 配列番号4のアミノ酸残基1~442またはそれに対して少なくとも70%、好ましくは、少なくとも75%、80%、85%、90%、95%もしくは99%の配列同一性を有するポリペプチド配列、
- 配列番号6のアミノ酸残基1~439またはそれに対して少なくとも70%、好ましくは、少なくとも75%、80%、85%、90%、95%もしくは99%の配列同一性を有するポリペプチド配列、
- 配列番号7のアミノ酸残基1~446またはそれに対して少なくとも70%、好ましくは、少なくとも75%、80%、85%、90%、95%もしくは99%の配列同一性を有するポリペプチド配列、
- 配列番号41のアミノ酸残基1~439またはそれに対して少なくとも70%、好ましくは、少なくとも75%、80%、85%、90%、95%もしくは99%の配列同一性を有するポリペプチド配列、
- 配列番号8のアミノ酸残基1~456またはそれに対して少なくとも70%、好ましくは、少なくとも75%、80%、85%、90%、95%もしくは99%の配列同一性を有するポリペプチド配列
から選択される配列を含む。
- 配列番号2またはそれに対して少なくとも70%、好ましくは、少なくとも75%、80%、85%、90%、95%もしくは99%の配列同一性を有するポリペプチド配列、
- 配列番号4またはそれに対して少なくとも70%、好ましくは、少なくとも75%、80%、85%、90%、95%もしくは99%の配列同一性を有するポリペプチド配列、
- 配列番号6またはそれに対して少なくとも70%、好ましくは、少なくとも75%、80%、85%、90%、95%もしくは99%の配列同一性を有するポリペプチド配列、
- 配列番号7またはそれに対して少なくとも70%、好ましくは、少なくとも75%、80%、85%、90%、95%もしくは99%の配列同一性を有するポリペプチド配列、
- 配列番号41またはそれに対して少なくとも70%、好ましくは、少なくとも75%、80%、85%、90%、95%もしくは99%の配列同一性を有するポリペプチド配列、
- 配列番号8またはそれに対して少なくとも70%、好ましくは、少なくとも75%、80%、85%、90%、95%もしくは99%の配列同一性を有するポリペプチド配列
から選択される配列を含む。
- BoNT/B、BoNT/D、BoNT/F、BoNT/G、BoNT/XまたはTeNTに由来する軽鎖(L)、
- BoNT/A、BoNT/B、BoNT/C、BoNT/D、BoNT/E、BoNT/F、BoNT/G、BoNT/XまたはTeNTに由来するHNドメイン、
- BoNT/A、BoNT/B、BoNT/C、BoNT/D、BoNT/E、BoNT/F、BoNT/G、BoNT/XまたはTeNTに由来するHCNドメイン、
- BoNT/A、BoNT/B、BoNT/C、BoNT/D、BoNT/E、BoNT/F、BoNT/G、BoNT/XまたはTeNTに由来するHCCドメイン
を含み、ドメインのうち少なくとも2つは、異なるクロストリジウム神経毒に由来するキメラ神経毒である。
- BoNT/B、BoNT/D、BoNT/F、BoNT/G、BoNT/XまたはTeNTから選択される第1のクロストリジウム神経毒に由来するLHNドメイン、
- BoNT/A、BoNT/B、BoNT/C、BoNT/D、BoNT/E、BoNT/F、BoNT/G、BoNT/XまたはTeNTから選択される第2のクロストリジウム神経毒に由来するHCNHCCドメイン
を含み、第1および第2のクロストリジウム神経毒が異なっているキメラ神経毒である。
- BoNT/B、BoNT/D、BoNT/F、BoNT/G、BoNT/XまたはTeNTから選択される第1のクロストリジウム神経毒に由来するLHNHCNドメイン、
- BoNT/A、BoNT/B、BoNT/C、BoNT/D、BoNT/E、BoNT/F、BoNT/G、BoNT/XまたはTeNTから選択される第2のクロストリジウム神経毒に由来するHCCドメイン
を含み、第1および第2のクロストリジウム神経毒が異なっているキメラ神経毒である。
- VAMP PEP1:H2N- SNR RLQ QTQ AQV DEC -CONH2(配列番号39)、
- VAMP PEP2:AcNH - KLS ELD DRA DAL Q - CONH2(配列番号15)または
- VAMP PEP3:H2N - CLQ AGA SQ - CONH2(配列番号40)。
MPFVNKQFNYKDPVNGVDIAYIKIPNAGQMQPVKAFKIHNKIWVIPERDTFTNPEEGDLNPPPEAKQVPVSYYDSTYLSTDNEKDNYLKGVTKLFERIYSTDLGRMLLTSIVRGIPFWGGSTIDTELKVIDTNCINVIQPDGSYRSEELNLVIIGPSADIIQFECKSFGHEVLNLTRNGYGSTQYIRFSPDFTFGFEESLEVDTNPLLGAGKFATDPAVTLAHELIHAGHRLYGIAINPNRVFKVNTNAYYEMSGLEVSFEELRTFGGHDAKFIDSLQENEFRLYYYNKFKDIASTLNKAKSIVGTTASLQYMKNVFKEKYLLSEDTSGKFSVDKLKFDKLYKMLTEIYTEDNFVKFFKVLNRKTYLNFDKAVFKINIVPKVNYTIYDGFNLRNTNLAANFNGQNTEINNMNFTKLKNFTGLFEFYKLLCVRGIITSKTKSLDKGYNKALNDLCIKVNNWDLFFSPSEDNFTNDLNKGEEITSDTNIEAAEENISLDLIQQYYLTFNFDNEPENISIENLSSDIIGQLELMPNIERFPNGKKYELDKYTMFHYLRAQEFEHGKSRIALTNSVNEALLNPSRVYTFFSSDYVKKVNKATEAAMFLGWVEQLVYDFTDETSEVSTTDKIADITIIIPYIGPALNIGNMLYKDDFVGALIFSGAVILLEFIPEIAIPVLGTFALVSYIANKVLTVQTIDNALSKRNEKWDEVYKYIVTNWLAKVNTQIDLIRKKMKEALENQAEATKAIINYQYNQYTEEEKNNINFNIDDLSSKLNESINKAMININKFLNQCSVSYLMNSMIPYGVKRLEDFDASLKDALLKYIYDNRGTLIGQVDRLKDKVNNTLSTDIPFQLSKYVDNQRLLSTFTEYIKNIINTSILNLRYESNHLIDLSRYASKINIGSKVNFDPIDKNQIQLFNLESSKIEVILKNAIVYNSMYENFSTSFWIRIPKYFNSISLNNEYTIINCMENNSGWKVSLNYGEIIWTLQDTQEIKQRVVFKYSQMINISDYINRWIFVTITNNRLNNSKIYINGRLIDQKPISNLGNIHASNNIMFKLDGCRDTHRYIWIKYFNLFDKELNEKEIKDLYDNQSNSGILKDFWGDYLQYDKPYYMLNLYDPNKYVDVNNVGIRGYMYLKGPRGSVMTTNIYLNSSLYRGTKFIIKKYASGNKDNIVRNNDRVYINVVVKNKEYRLATNASQAGVEKILSALEIPDVGNLSQVVVMKSKNDQGITNKCKMNLQDNNGNDIGFIGFHQFNNIAKLVASNWYNRQIERSSRTLGCSWEFIPVDDGWGERPL
・ 配列番号2 - BoNT/B1 - UniProtKB 受入番号 P10844 (Clostridium botulinum)
MPVTINNFNYNDPIDNNNIIMMEPPFARGTGRYYKAFKITDRIWIIPERYTFGYKPEDFNKSSGIFNRDVCEYYDPDYLNTNDKKNIFLQTMIKLFNRIKSKPLGEKLLEMIINGIPYLGDRRVPLEEFNTNIASVTVNKLISNPGEVERKKGIFANLIIFGPGPVLNENETIDIGIQNHFASREGFGGIMQMKFCPEYVSVFNNVQENKGASIFNRRGYFSDPALILMHELIHVLHGLYGIKVDDLPIVPNEKKFFMQSTDAIQAEELYTFGGQDPSIITPSTDKSIYDKVLQNFRGIVDRLNKVLVCISDPNININIYKNKFKDKYKFVEDSEGKYSIDVESFDKLYKSLMFGFTETNIAENYKIKTRASYFSDSLPPVKIKNLLDNEIYTIEEGFNISDKDMEKEYRGQNKAINKQAYEEISKEHLAVYKIQMCKSVKAPGICIDVDNEDLFFIADKNSFSDDLSKNERIEYNTQSNYIENDFPINELILDTDLISKIELPSENTESLTDFNVDVPVYEKQPAIKKIFTDENTIFQYLYSQTFPLDIRDISLTSSFDDALLFSNKVYSFFSMDYIKTANKVVEAGLFAGWVKQIVNDFVIEANKSNTMDKIADISLIVPYIGLALNVGNETAKGNFENAFEIAGASILLEFIPELLIPVVGAFLLESYIDNKNKIIKTIDNALTKRNEKWSDMYGLIVAQWLSTVNTQFYTIKEGMYKALNYQAQALEEIIKYRYNIYSEKEKSNINIDFNDINSKLNEGINQAIDNINNFINGCSVSYLMKKMIPLAVEKLLDFDNTLKKNLLNYIDENKLYLIGSAEYEKSKVNKYLKTIMPFDLSIYTNDTILIEMFNKYNSEILNNIILNLRYKDNNLIDLSGYGAKVEVYDGVELNDKNQFKLTSSANSKIRVTQNQNIIFNSVFLDFSVSFWIRIPKYKNDGIQNYIHNEYTIINCMKNNSGWKISIRGNRIIWTLIDINGKTKSVFFEYNIREDISEYINRWFFVTITNNLNNAKIYINGKLESNTDIKDIREVIANGEIIFKLDGDIDRTQFIWMKYFSIFNTELSQSNIEERYKIQSYSEYLKDFWGNPLMYNKEYYMFNAGNKNSYIKLKKDSPVGEILTRSKYNQNSKYINYRDLYIGEKFIIRRKSNSQSINDDIVRKEDYIYLDFFNLNQEWRVYTYKYFKKEEEKLFLAPISDSDEFYNTIQIKEYDEQPTYSCQLLFKKDEESTDEIGLIGIHRFYESGIVFEEYKDYFCISKWYLKEVKRKPYNLKLGCNWQFIPKDEGWTE
・ 配列番号3 - BoNT/C1 - UniProtKB 受入番号 P18640 (Clostridium botulinum)
MPITINNFNYSDPVDNKNILYLDTHLNTLANEPEKAFRITGNIWVIPDRFSRNSNPNLNKPPRVTSPKSGYYDPNYLSTDSDKDPFLKEIIKLFKRINSREIGEELIYRLSTDIPFPGNNNTPINTFDFDVDFNSVDVKTRQGNNWVKTGSINPSVIITGPRENIIDPETSTFKLTNNTFAAQEGFGALSIISISPRFMLTYSNATNDVGEGRFSKSEFCMDPILILMHELNHAMHNLYGIAIPNDQTISSVTSNIFYSQYNVKLEYAEIYAFGGPTIDLIPKSARKYFEEKALDYYRSIAKRLNSITTANPSSFNKYIGEYKQKLIRKYRFVVESSGEVTVNRNKFVELYNELTQIFTEFNYAKIYNVQNRKIYLSNVYTPVTANILDDNVYDIQNGFNIPKSNLNVLFMGQNLSRNPALRKVNPENMLYLFTKFCHKAIDGRSLYNKTLDCRELLVKNTDLPFIGDISDVKTDIFLRKDINEETEVIYYPDNVSVDQVILSKNTSEHGQLDLLYPSIDSESEILPGENQVFYDNRTQNVDYLNSYYYLESQKLSDNVEDFTFTRSIEEALDNSAKVYTYFPTLANKVNAGVQGGLFLMWANDVVEDFTTNILRKDTLDKISDVSAIIPYIGPALNISNSVRRGNFTEAFAVTGVTILLEAFPEFTIPALGAFVIYSKVQERNEIIKTIDNCLEQRIKRWKDSYEWMMGTWLSRIITQFNNISYQMYDSLNYQAGAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNEFDRNTKAKLINLIDSHNIILVGEVDKLKAKVNNSFQNTIPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFNNINDSKILSLQNRKNTLVDTSGYNAEVSEEGDVQLNPIFPFDFKLGSSGEDRGKVIVTQNENIVYNSMYESFSISFWIRINKWVSNLPGYTIIDSVKNNSGWSIGIISNFLVFTLKQNEDSEQSINFSYDISNNAPGYNKWFFVTVTNNMMGNMKIYINGKLIDTIKVKELTGINFSKTITFEINKIPDTGLITSDSDNINMWIRDFYIFAKELDGKDINILFNSLQYTNVVKDYWGNDLRYNKEYYMVNIDYLNRYMYANSRQIVFNTRRNNNDFNEGYKIIIKRIRGNTNDTRVRGGDILYFDMTINNKAYNLFMKNETMYADNHSTEDIYAIGLREQTKDINDNIIFQIQPMNNTYYYASQIFKSNFNGENISGICSIGTYRFRLGGDWYRHNYLVPTVKQGNYASLLESTSTHWGFVPVSE
・ 配列番号4 - BoNT/D - UniProtKB 受入番号 P19321 (Clostridium botulinum)
MTWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCLRLTKNSRDDSTCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFNSINDSKILSLQNKKNALVDTSGYNAEVRVGDNVQLNTIYTNDFKLSSSGDKIIVNLNNNILYSAIYENSSVSFWIKISKDLTNSHNEYTIINSIEQNSGWKLCIRNGNIEWILQDVNRKYKSLIFDYSESLSHTGYTNKWFFVTITNNIMGYMKLYINGELKQSQKIEDLDEVKLDKTIVFGIDENIDENQMLWIRDFNIFSKELSNEDINIVYEGQILRNVIKDYWGNPLKFDTEYYIINDNYIDRYIAPESNVLVLVQYPDRSKLYTGNPITIKSVSDKNPYSRILNGDNIILHMLYNSRKYMIIRDTDTIYATQGGECSQNCVYALKLQSNLGNYGIGIFSIKNIVSKNKYCSQIFSSFRENTMLLADIYKPWRFSFKNAYTPVAVTNYETKLLSTSSFWKFISRDPGWVE
・ 配列番号5 - BoNT/E - 受入番号 WP_003372387 (Clostridium botulinum)
MPKINSFNYNDPVNDRTILYIKPGGCQEFYKSFNIMKNIWIIPERNVIGTTPQDFHPPTSLKNGDSSYYDPNYLQSDEEKDRFLKIVTKIFNRINNNLSGGILLEELSKANPYLGNDNTPDNQFHIGDASAVEIKFSNGSQDILLPNVIIMGAEPDLFETNSSNISLRNNYMPSNHGFGSIAIVTFSPEYSFRFNDNSMNEFIQDPALTLMHELIHSLHGLYGAKGITTKYTITQKQNPLITNIRGTNIEEFLTFGGTDLNIITSAQSNDIYTNLLADYKKIASKLSKVQVSNPLLNPYKDVFEAKYGLDKDASGIYSVNINKFNDIFKKLYSFTEFDLATKFQVKCRQTYIGQYKYFKLSNLLNDSIYNISEGYNINNLKVNFRGQNANLNPRIITPITGRGLVKKIIRFCKNIVSVKGIRKSICIEINNGELFFVASENSYNDDNINTPKEIDDTVTSNNNYENDLDQVILNFNSESAPGLSDEKLNLTIQNDAYIPKYDSNGTSDIEQHDVNELNVFFYLDAQKVPEGENNVNLTSSIDTALLEQPKIYTFFSSEFINNVNKPVQAALFVSWIQQVLVDFTTEANQKSTVDKIADISIVVPYIGLALNIGNEAQKGNFKDALELLGAGILLEFEPELLIPTILVFTIKSFLGSSDNKNKVIKAINNALKERDEKWKEVYSFIVSNWMTKINTQFNKRKEQMYQALQNQVNAIKTIIESKYNSYTLEEKNELTNKYDIKQIENELNQKVSIAMNNIDRFLTESSISYLMKLINEVKINKLREYDENVKTYLLNYIIQHGSILGESQQELNSMVTDTLNNSIPFKLSSYTDDKILISYFNKFFKRIKSSSVLNMRYKNDKYVDTSGYDSNININGDVYKYPTNKNQFGIYNDKLSEVNISQNDYIIYDNKYKNFSISFWVRIPNYDNKIVNVNNEYTIINCMRDNNSGWKVSLNHNEIIWTLQDNAGINQKLAFNYGNANGISDYINKWIFVTITNDRLGDSKLYINGNLIDQKSILNLGNIHVSDNILFKIVNCSYTRYIGIRYFNIFDKELDETEIQTLYSNEPNTNILKDFWGNYLLYDKEYYLLNVLKPNNFIDRRKDSTLSINNIRSTILLANRLYSGIKVKIQRVNNSSTNDNLVRKNDQVYINFVASKTHLFPLYADTATTNKEKTIKISSSGNRFNQVVVMNSVGNNCTMNFKNNNGNNIGLLGFKADTVVASTWYYTHMRDHTNSNGCFWNFISEEHGWQEK
・ 配列番号6 - BoNT/F - UniProtKB 受入番号 YP_001390123 (Clostridium botulinum)
MPVVINSFNYNDPVNDDTILYMQIPYEEKSKKYYKAFEIMRNVWIIPERNTIGTDPSDFDPPASLENGSSAYYDPNYLTTDAEKDRYLKTTIKLFKRINSNPAGEVLLQEISYAKPYLGNEHTPINEFHPVTRTTSVNIKSSTNVKSSIILNLLVLGAGPDIFENSSYPVRKLMDSGGVYDPSNDGFGSINIVTFSPEYEYTFNDISGGYNSSTESFIADPAISLAHELIHALHGLYGARGVTYKETIKVKQAPLMIAEKPIRLEEFLTFGGQDLNIITSAMKEKIYNNLLANYEKIATRLSRVNSAPPEYDINEYKDYFQWKYGLDKNADGSYTVNENKFNEIYKKLYSFTEIDLANKFKVKCRNTYFIKYGFLKVPNLLDDDIYTVSEGFNIGNLAVNNRGQNIKLNPKIIDSIPDKGLVEKIVKFCKSVIPRKGTKAPPRLCIRVNNRELFFVASESSYNENDINTPKEIDDTTNLNNNYRNNLDEVILDYNSETIPQISNQTLNTLVQDDSYVPRYDSNGTSEIEEHNVVDLNVFFYLHAQKVPEGETNISLTSSIDTALSEESQVYTFFSSEFINTINKPVHAALFISWINQVIRDFTTEATQKSTFDKIADISLVVPYVGLALNIGNEVQKENFKEAFELLGAGILLEFVPELLIPTILVFTIKSFIGSSENKNKIIKAINNSLMERETKWKEIYSWIVSNWLTRINTQFNKRKEQMYQALQNQVDAIKTVIEYKYNNYTSDERNRLESEYNINNIREELNKKVSLAMENIERFITESSIFYLMKLINEAKVSKLREYDEGVKEYLLDYISEHRSILGNSVQELNDLVTSTLNNSIPFELSSYTNDKILILYFNKLYKKIKDNSILDMRYENNKFIDISGYGSNISINGDVYIYSTNRNQFGIYSSKPSEVNIAQNNDIIYNGRYQNFSISFWVRIPKYFNKVNLNNEYTIIDCIRNNNSGWKISLNYNKIIWTLQDTAGNNQKLVFNYTQMISISDYINKWIFVTITNNRLGNSRIYINGNLIDEKSISNLGDIHVSDNILFKIVGCNDTRYVGIRYFKVFDTELGKTEIETLYSDEPDPSILKDFWGNYLLYNKRYYLLNLLRTDKSITQNSNFLNINQQRGVYQKPNIFSNTRLYTGVEVIIRKNGSTDISNTDNFVRKNDLAYINVVDRDVEYRLYADISIAKPEKIIKLIRTSNSNNSLGQIIVMDSIGNNCTMNFQNNNGGNIGLLGFHSNNLVASSWYYNNIRKNTSSNGCFWSFISKEHGWQEN
・ 配列番号7 - BoNT/G - UniProtKB 受入番号 WP_039635782 (Clostridium botulinum)
MPVNIKNFNYNDPINNDDIIMMEPFNDPGPGTYYKAFRIIDRIWIVPERFTYGFQPDQFNASTGVFSKDVYEYYDPTYLKTDAEKDKFLKTMIKLFNRINSKPSGQRLLDMIVDAIPYLGNASTPPDKFAANVANVSINKKIIQPGAEDQIKGLMTNLIIFGPGPVLSDNFTDSMIMNGHSPISEGFGARMMIRFCPSCLNVFNNVQENKDTSIFSRRAYFADPALTLMHELIHVLHGLYGIKISNLPITPNTKEFFMQHSDPVQAEELYTFGGHDPSVISPSTDMNIYNKALQNFQDIANRLNIVSSAQGSGIDISLYKQIYKNKYDFVEDPNGKYSVDKDKFDKLYKALMFGFTETNLAGEYGIKTRYSYFSEYLPPIKTEKLLDNTIYTQNEGFNIASKNLKTEFNGQNKAVNKEAYEEISLEHLVIYRIAMCKPVMYKNTGKSEQCIIVNNEDLFFIANKDSFSKDLAKAETIAYNTQNNTIENNFSIDQLILDNDLSSGIDLPNENTEPFTNFDDIDIPVYIKQSALKKIFVDGDSLFEYLHAQTFPSNIENLQLTNSLNDALRNNNKVYTFFSTNLVEKANTVVGASLFVNWVKGVIDDFTSESTQKSTIDKVSDVSIIIPYIGPALNVGNETAKENFKNAFEIGGAAILMEFIPELIVPIVGFFTLESYVGNKGHIIMTISNALKKRDQKWTDMYGLIVSQWLSTVNTQFYTIKERMYNALNNQSQAIEKIIEDQYNRYSEEDKMNINIDFNDIDFKLNQSINLAINNIDDFINQCSISYLMNRMIPLAVKKLKDFDDNLKRDLLEYIDTNELYLLDEVNILKSKVNRHLKDSIPFDLSLYTKDTILIQVFNNYISNISSNAILSLSYRGGRLIDSSGYGATMNVGSDVIFNDIGNGQFKLNNSENSNITAHQSKFVVYDSMFDNFSINFWVRTPKYNNNDIQTYLQNEYTIISCIKNDSGWKVSIKGNRIIWTLIDVNAKSKSIFFEYSIKDNISDYINKWFSITITNDRLGNANIYINGSLKKSEKILNLDRINSSNDIDFKLINCTDTTKFVWIKDFNIFGRELNATEVSSLYWIQSSTNTLKDFWGNPLRYDTQYYLFNQGMQNIYIKYFSKASMGETAPRTNFNNAAINYQNLYLGLRFIIKKASNSRNINNDNIVREGDYIYLNIDNISDESYRVYVLVNSKEIQTQLFLAPINDDPTFYDVLQIKKYYEKTTYNCQILCEKDTKTFGLFGIGKFVKDYGYVWDTYDNYFCISQWYLRRISENINKLRLGCNWQFIPVDEGWTE
・ 配列番号8 - TeNT - UniProtKB 受入番号 P04958 (Clostridium tetani)
MPITINNFRYSDPVNNDTIIMMEPPYCKGLDIYYKAFKITDRIWIVPERYEFGTKPEDFNPPSSLIEGASEYYDPNYLRTDSDKDRFLQTMVKLFNRIKNNVAGEALLDKIINAIPYLGNSYSLLDKFDTNSNSVSFNLLEQDPSGATTKSAMLTNLIIFGPGPVLNKNEVRGIVLRVDNKNYFPCRDGFGSIMQMAFCPEYVPTFDNVIENITSLTIGKSKYFQDPALLLMHELIHVLHGLYGMQVSSHEIIPSKQEIYMQHTYPISAEELFTFGGQDANLISIDIKNDLYEKTLNDYKAIANKLSQVTSCNDPNIDIDSYKQIYQQKYQFDKDSNGQYIVNEDKFQILYNSIMYGFTEIELGKKFNIKTRLSYFSMNHDPVKIPNLLDDTIYNDTEGFNIESKDLKSEYKGQNMRVNTNAFRNVDGSGLVSKLIGLCKKIIPPTNIRENLYNRTASLTDLGGELCIKIKNEDLTFIAEKNSFSEEPFQDEIVSYNTKNKPLNFNYSLDKIIVDYNLQSKITLPNDRTTPVTKGIPYAPEYKSNAASTIEIHNIDDNTIYQYLYAQKSPTTLQRITMTNSVDDALINSTKIYSYFPSVISKVNQGAQGILFLQWVRDIIDDFTNESSQKTTIDKISDVSTIVPYIGPALNIVKQGYEGNFIGALETTGVVLLLEYIPEITLPVIAALSIAESSTQKEKIIKTIDNFLEKRYEKWIEVYKLVKAKWLGTVNTQFQKRSYQMYRSLEYQVDAIKKIIDYEYKIYSGPDKEQIADEINNLKNKLEEKANKAMININIFMRESSRSFLVNQMINEAKKQLLEFDTQSKNILMQYIKANSKFIGITELKKLESKINKVFSTPIPFSYSKNLDCWVDNEEDIDVILKKSTILNLDINNDIISDISGFNSSVITYPDAQLVPGINGKAIHLVNNESSEVIVHKAMDIEYNDMFNNFTVSFWLRVPKVSASHLEQYGTNEYSIISSMKKHSLSIGSGWSVSLKGNNLIWTLKDSAGEVRQITFRDLPDKFNAYLANKWVFITITNDRLSSANLYINGVLMGSAEITGLGAIREDNNITLKLDRCNNNNQYVSIDKFRIFCKALNPKEIEKLYTSYLSITFLRDFWGNPLRYDTEYYLIPVASSSKDVQLKNITDYMYLTNAPSYTNGKLNIYYRRLYNGLKFIIKRYTPNNEIDSFVKSGDFIKLYVSYNNNEHIVGYPKDGNAFNNLDRILRVGYNAPGIPLYKKMEAVKLRDLKTYSVQLKLYDDKNASLGLVGTHNGQIGNDPNRDILIASNWYFNHLKDKILGCDWYFVPTDEGWTND
・ 配列番号9 - VAMP1_Rat (Q63666)
MSAPAQPPAEGTEGAAPGGGPPGPPPNTTSNRRLQQTQAQVEEVVDIMRVNVDKVLERDQKLSELDDRADALQAGASVFESSAAKLKRKYWWKNCKMMIMLGAICAIIVVVIVIYIFT
・ 配列番号10 - VAMP1_human (P23763)
MSAPAQPPAEGTEGTAPGGGPPGPPPNMTSNRRLQQTQAQVEEVVDIIRVNVDKVLERDQKLSELDDRADALQAGASQFESSAAKLKRKYWWKNCKMMIMLGAICAIIVVVIVIYFFT
・ 配列番号11 - VAMP2_Rat (P63045)
MSATAATVPPAAPAGEGGPPAPPPNLTSNRRLQQTQAQVDEVVDIMRVNVDKVLERDQKLSELDDRADALQAGASQFETSAAKLKRKYWWKNLKMMIILGVICAIILIIIIVYFST
・ 配列番号12 - VAMP2_human (P63027)
MSATAATAPPAAPAGEGGPPAPPPNLTSNRRLQQTQAQVDEVVDIMRVNVDKVLERDQKLSELDDRADALQAGASQFETSAAKLKRKYWWKNLKMMIILGVICAIILIIIIVYFST
・ 配列番号13 - VAMP3_Rat (P63025)
MSTGVPSGSSAATGSNRRLQQTQNQVDEVVDIMRVNVDKVLERDQKLSELDDRADALQAGASQFETSAAKLKRKYWWKNCKMWAIGISVLVIIVIIIIVWCVS
・ 配列番号14 - VAMP3_human (Q15836)
MSTGPTAATGSNRRLQQTQNQVDEVVDIMRVNVDKVLERDQKLSELDDRADALQAGASQFETSAAKLKRKYWWKNCKMWAIGITVLVIFIIIIIVWVVSS
・ 配列番号15 - VAMPエピトープ
KLSELDDRADALQ
・ 配列番号16 - VAMPエピトープ
QKLSELDDRADALQ
・ 配列番号17 - VAMPエピトープ
KLSELDDRAD
・ 配列番号18 - VAMPエピトープ
KLSELDDRADALQAGAS
・ 配列番号19 - VAMPエピトープ
LSELDDRADALQ
・ 配列番号20 - VAMPエピトープ
LSELDDRADA
・ 配列番号21 - VAMPエピトープ
LSELDDRADALQAGAS
・ 配列番号22 - VAMPエピトープ
FETSAAKLKRKYW
・ 配列番号23 - VAMPエピトープ
FESSAAKLKRKYW
・ 配列番号24 - VAMPエピトープ
QFETSAAKLKRKYW
・ 配列番号25 - VAMPエピトープ
FETSAAKLKR
・ 配列番号26 - VAMPエピトープ
FETSAAKLKRKYWWKN
・ 配列番号27 - VAMPエピトープ
AKLKRKYWWKN
・ 配列番号28 - VAMPエピトープ
AAKLKRKYWWKN
・ 配列番号29 - VAMPエピトープ
AKLKRKYWWKNCKM
・ 配列番号30 - VAMPエピトープ
AKLKRKYWWKNLKM
・ 配列番号31 - VAMPエピトープ
DQKLSELDDRADALQ
・ 配列番号32 - VAMPエピトープ
ERDQKLSELDDRA
・ 配列番号33 - VAMPエピトープ
LERDQKLSELDDRA
・ 配列番号34 - VAMPエピトープ
VLERDQKLSELDDRA
・ 配列番号35- LHND
MGSMTWPVKDFNYSDPVNDNDILYLRIPQNKLITTPVKAFMITQNIWVIPERFSSDTNPSLSKPPRPTSKYQSYYDPSYLSTDEQKDTFLKGIIKLFKRINERDIGKKLINYLVVGSPFMGDSSTPEDTFDFTRHTTNIAVEKFENGSWKVTNIITPSVLIFGPLPNILDYTASLTLQGQQSNPSFEGFGTLSILKVAPEFLLTFSDVTSNQSSAVLGKSIFCMDPVIALMHELTHSLHQLYGINIPSDKRIRPQVSEGFFSQDGPNVQFEELYTFGGLDVEIIPQIERSQLREKALGHYKDIAKRLNNINKTIPSSWISNIDKYKKIFSEKYNFDKDNTGNFVVNIDKFNSLYSDLTNVMSEVVYSSQYNVKNRTHYFSRHYLPVFANILDDNIYTIRDGFNLTNKGFNIENSGQNIERNPALQKLSSESVVDLFTKVCVDKSEEKLYDDDDKDRWGSSLQCIKVKNNRLPYVADKDSISQEIFENKIITDETNVQNYSDKFSLDESILDGQVPINPEIVDPLLPNVNMEPLNLPGEEIVFYDDITKYVDYLNSYYYLESQKLSNNVENITLTTSVEEALGYSNKIYTFLPSLAEKVNKGVQAGLFLNWANEVVEDFTTNIMKKDTLDKISDVSVIIPYIGPALNIGNSALRGNFNQAFATAGVAFLLEGFPEFTIPALGVFTFYSSIQEREKIIKTIENCLEQRVKRWKDSYQWMVSNWLSRITTQFNHINYQMYDSLSYQADAIKAKIDLEYKKYSGSDKENIKSQVENLKNSLDVKISEAMNNINKFIRECSVTYLFKNMLPKVIDELNKFDLRTKTELINLIDSHNIILVGEVDRLKAKVNESFENTMPFNIFSYTNNSLLKDIINEYFNLEAHHHHHHHHHH
・ 配列番号36 - MBP-LF
MKIEEGKLVIWINGDKGYNGLAEVGKKFEKDTGIKVTVEHPDKLEEKFPQVAATGDGPDIIFWAHDRFGGYAQSGLLAEITPDKAFQDKLYPFTWDAVRYNGKLIAYPIAVEALSLIYNKDLLPNPPKTWEEIPALDKELKAKGKSALMFNLQEPYFTWPLIAADGGYAFKYENGKYDIKDVGVDNAGAKAGLTFLVDLIKNKHMNADTDYSIAEAAFNKGETAMTINGPWAWSNIDTSKVNYGVTVLPTFKGQPSKPFVGVLSAGINAASPNKELAKEFLENYLLTDEGLEAVNKDKPLGAVALKSYEEELAKDPRIAATMENAQKGEIMPNIPQMSAFWYAVRTAVINAASGRQTVDEALKDAQTNSSSNNNNNNNNNNLGIEGRISEFGSMPVAINSFNYNDPVNDDTILYMQIPYEEKSKKYYKAFEIMRNVWIIPERNTIGTNPSDFDPPASLKNGSSAYYDPNYLTTDAEKDRYLKTTIKLFKRINSNPAGKVLLQEISYAKPYLGNDHTPIDEFSPVTRTTSVNIKLSTNVESSMLLNLLVLGAGPDIFESCCYPVRKLIDPDVVYDPSNYGFGSINIVTFSPEYEYTFNDISGGHNSSTESFIADPAISLAHELIHALHGLYGARGVTYEETIEVKQAPLMIAEKPIRLEEFLTFGGQDLNIITSAMKEKIYNNLLANYEKIATRLSEVNSAPPEYDINEYKDYFQWKYGLDKNADGSYTVNENKFNEIYKKLYSFTESDLANKFKVKCRNTYFIKYEFLKVPNLLDDDIYTVSEGFNIGNLAVNNRGQSIKLNPKIIDSIPDKGLVEKIVKFAVDKLAAALEHHHHHH
・ 配列番号37 (組換え VAMP2-GFP)
GPLGSSATAATAPPAAPAGEGGPPAPPPNLTSNRRLQQTQAQVDEVVDIMRVNVDKVLERDQKLSELDDRADALQAGASQFETSAAKLKRKYWWKNLKLENVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTLKFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDDGNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIKVNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLLEFVTAAGITLGMDELYK
・ 配列番号38 - 組換え BoNT/FA
MPVVINSFNYDDPVNDNTIIYIRPPYYETSNTYFKAFQIMDNVWIIPERYRLGIDPSLFNPPVSLKAGSDGYFDPNYLSTNTEKNKYLQIMIKLFKRINSKPAGQILLEEIKNAIPYLGNSYTQEEQFTTNNRTVSFNVKLANGNIVQQMANLIIWGPGPDLTTNKTGGIIYSPYQSMEATPYKDGFGSIMTVEFSPEYATAFNDISIASHSPSLFIKDPALILMHELIHVLHGLYGTYITEYKITPNVVQSYMKVTKPITSAEFLTFGGRDRNIVPQSIQSQLYNKVLSDYKRIASRLNKVNTATALINIDEFKNLYEWKYQFAKDSNGVYSVDLNKFEQLYKKIYSFTEFNLAYEFKIKTRLGYLAENFGPFYLPNLLDDSIYTEVDGFNIGALSINYQGQNIGSDINSIKKLQGQGVVSRVVRLCKSVIPRKGTKAPPRLCITVNNRDLFFIASQESYGENTINTYKEIDDTTTLDPSFEDILDKVILNFNEQVIPQMPNRNVSTDIQKDNYIPKYDYNRTDIIDSYEVGRNYNTFFYLNAQKFSPNESNITLTSSFDTGLLEGSKVYTFFSSDFINNINKPVQALLFIEWVKQVIRDFTTEATKTSTVDKLKDISLVVPYIGLALNIGDEIYKQHFAEAVELVGAGLLLEFSPEFLIPTLLIFTIKGYLTGSIRDKDKIIKTLDNALNVRDQKWKELYRWVVSKWLTTINTQFNKRKEQMYKALKNQATAIKKIIENKYNNYTTDEKSKIDSSYNINEIERTLNEKINLAMKNIEQFITESSIAYLINIINNETIQKLKSYDDLVRRYLLGYIRNHSSILGNSVEELNSKVNNHLDNGIPFELSSYTNDSLLIRYFNKNYGELKYNCILNIKYEMDRDKLVDSSGYRSRINIGTGVKFSEIDKNQVQLSNLESSKIEVILNNGVIYNSMYENFSTSFWIRIPKYFRNINNEYKIISCMQNNSGWEVSLNFSNMNSKIIWTLQDTEGIKKTVVFQYTQNINISDYINRWIFVTITNNRLSNSKIYINGRLINEESISDLGNIHASNNIMFKLDGCRDPHRYIWIKYFNLFDKELNKKEIKDLYDNQSNSGILKDFWGDYLQYDKPYYMLNLYDPNKYLDVNNVGIRGYMYLKGPRGRIVTTNIYLNSTLYMGTKFIIKKYASGNKDNIVRNNDRVYINVVVKNKEYRLATNASQAGVEKILSAVEIPDVGNLSQVVVMKSENDQGIRNKCKMNLQDNNGNDIGFIGFHQFNNIAKLVASNWYNRQIGKASRTFGCSWEFIPVDDGWGESSLHHHHHHHHHH
・ 配列番号39 - Pep1
SNRRLQQTQAQVDEC
・ 配列番号40 - Pep3
CLQAGASQ
・ 配列番号41 - BoNT/X Genbank 受入番号 BAQ12790 (Clostridium botulinum)
MKLEINKFNYNDPIDGINVITMRPPRHSDKINKGKGPFKAFQVIKNIWIVPERYNFTNNTNDLNIPSEPIMEADAIYNPNYLNTPSEKDEFLQGVIKVLERIKSKPEGEKLLELISSSIPLPLVSNGALTLSDNETIAYQENNNIVSNLQANLVIYGPGPDIANNATYGLYSTPISNGEGTLSEVSFSPFYLKPFDESYGNYRSLVNIVNKFVKREFAPDPASTLMHELVHVTHNLYGISNRNFYYNFDTGKIETSRQQNSLIFEELLTFGGIDSKAISSLIIKKIIETAKNNYTTLISERLNTVTVENDLLKYIKNKIPVQGRLGNFKLDTAEFEKKLNTILFVLNESNLAQRFSILVRKHYLKERPIDPIYVNILDDNSYSTLEGFNISSQGSNDFQGQLLESSYFEKIESNALRAFIKICPRNGLLYNAIYRNSKNYLNNIDLEDKKTTSKTNVSYPCSLLNGCIEVENKDLFLISNKDSLNDINLSEEKIKPETTVFFKDKLPPQDITLSNYDFTEANSIPSISQQNILERNEELYEPIRNSLFEIKTIYVDKLTTFHFLEAQNIDESIDSSKIRVELTDSVDEALSNPNKVYSPFKNMSNTINSIETGITSTYIFYQWLRSIVKDFSDETGKIDVIDKSSDTLAIVPYIGPLLNIGNDIRHGDFVGAIELAGITALLEYVPEFTIPILVGLEVIGGELAREQVEAIVNNALDKRDQKWAEVYNITKAQWWGTIHLQINTRLAHTYKALSRQANAIKMNMEFQLANYKGNIDDKAKIKNAISETEILLNKSVEQAMKNTEKFMIKLSNSYLTKEMIPKVQDNLKNFDLETKKTLDKFIKEKEDILGTNLSSSLRRKVSIRLNKNIAFDINDIPFSEFDDLINQYKNEIEDYEVLNLGAEDGKIKDLSGTTSDINIGSDIELADGRENKAIKIKGSENSTIKIAMNKYLRFSATDNFSISFWIKHPKPTNLLNNGIEYTLVENFNQRGWKISIQDSKLIWYLRDHNNSIKIVTPDYIAFNGWNLITITNNRSKGSIVYVNGSKIEEKDISSIWNTEVDDPIIFRLKNNRDTQAFTLLDQFSIYRKELNQNEVVKLYNYYFNSNYIRDIWGNPLQYNKKYYLQTQDKPGKGLIREYWSSFGYDYVILSDSKTITFPNNIRYGALYNGSKVLIKNSKKLDGLVRNKDFIQLEIDGYNMGISADRFNEDTNYIGTTYGTTHDLTTDFEIIQRQEKYRNYCQLKTPYNIFHKSGLMSTETSKPTFHDYRDWVYSSAWYFQNYENLNLRKHTKTNWYFIPKDEGWDED
・ 配列番号42 - VAMP4_Rat (D4A560)
MPPKFKRHLNDDDVTGSVKSERRNLLEDDSDEEEDFFLRGPSGPRFGPRNDKIKHVQNQVDEVIDVMQENITKVIERGERLDELQDKSESLSDNATAFSNRSKQLRRQMWWRGCKIKAIMALAAAILLLMIITQIILHLKK
・ 配列番号43 - VAMP4_human (O75379)
MPPKFKRHLNDDDVTGSVKSERRNLLEDDSDEEEDFFLRGPSGPRFGPRNDKIKHVQNQVDEVIDVMQENITKVIERGERLDELQDKSESLSDNATAFSNRSKQLRRQMWWRGCKIKAIMALVAAILLLVIIILIVMKYRT
・ 配列番号44 - VAMP5_Rat (Q9Z2J5)
MAGKELERCQRQADQVTEIMLNNFDKVLERDGKLSELQQRSDQLLDMSSAFSKTTKTLAQQKRWENIRCRVYLGLAVAGGLLLILVVLLVIFLPSGEDSSKP
・ 配列番号45 - VAMP5_human (O95183)
MAGIELERCQQQANEVTEIMRNNFGKVLERGVKLAELQQRSDQLLDMSSTFNKTTQNLAQKKCWENIRYRICVGLVVVGVLLIILIVLLVVFLPQSSDSSSAPRTQDAGIASGPGN
・ 配列番号46 - YKT6_Rat (Q5EGY4)
MKLYSLSVFYKGEPKAVLLKAAYDVSSFSFFQRSSVQEFMTFTSQLIVERSAKGSRASVKEQEYLCHVYVRSDSLAGVVIADSEYPSRVAFTLLEKVLDEFSKQVDRIDWPVGSPATIHYTALDGHLSRYQNPREADPMSKVQAELDETKIILHNTMESLLERGEKLDDLVSKSEVLGTQSKAFYKTARKQNSCCAIM
・ 配列番号47 -YKT6_human (O15498)
MKLYSLSVLYKGEAKVVLLKAAYDVSSFSFFQRSSVQEFMTFTSQLIVERSSKGTRASVKEQDYLCHVYVRNDSLAGVVIADNEYPSRVAFTLLEKVLDEFSKQVDRIDWPVGSPATIHYPALDGHLSRYQNPREADPMTKVQAELDETKIILHNTMESLLERGEKLDDLVSKSEVLGTQSKAFYKTARKQNSCCAIM
・ 配列番号48 - VAMPエピトープ
ETSAAKLKRKYWWK
・ 配列番号49 - VAMPエピトープ
FETSAAKLKRKYWWK
・ 配列番号50 -VAMPエピトープ
QFESSAAKLKRKYW
・ 配列番号51 -VAMPエピトープ
FESSAAKLKR
・ 配列番号52 -VAMPエピトープ
FESSAAKLKRKYWWK
・ 配列番号53 -VAMPエピトープ
ADALQAGASQF
・ 配列番号54 -VAMPエピトープ
ADALQAGASQ
・ 配列番号55 -VAMPエピトープ
RADALQAGASQF
・ 配列番号56-VAMPエピトープ
ADALQAGASQFE
・ 配列番号57-VAMPエピトープ
ADALQAGASVF
・ 配列番号58-VAMPエピトープ
ADALQAGASV
・ 配列番号59-VAMPエピトープ
ADALQAGASVFE
・ 配列番号60 -VAMPエピトープ
RADALQAGASVF
・ 配列番号61 -VAMPエピトープ
RADALQAGAS
・ 配列番号62 -VAMPエピトープ
SESLSDNATAF
・ 配列番号63 -VAMPエピトープ
SESLSDNATA
・ 配列番号64 -VAMPエピトープ
KSESLSDNATAF
・ 配列番号65 -VAMPエピトープ
SESLSDNATAFS
・ 配列番号66 -VAMPエピトープ
SDQLLDMSSTF
・ 配列番号67 -VAMPエピトープ
SDQLLDMSST
・ 配列番号68 -VAMPエピトープ
RSDQLLDMSSTF
・ 配列番号69 -VAMPエピトープ
SDQLLDMSSTFN
・ 配列番号70 -VAMPエピトープ
SDQLLDMSSAF
・ 配列番号71 -VAMPエピトープ
SDQLLDMSSA
・ 配列番号72 -VAMPエピトープ
RSDQLLDMSSAF
・ 配列番号73 -VAMPエピトープ
SDQLLDMSSAFS
・ 配列番号74 -VAMPエピトープ
RSDQLLDMSS
・ 配列番号75 -VAMPエピトープ
SEVLGTQSKAF
・ 配列番号76 -VAMPエピトープ
SEVLGTQSKA
・ 配列番号77 -VAMPエピトープ
KSEVLGTQSKAF
・ 配列番号78 -VAMPエピトープ
SEVLGTQSKAFY
SEQ ID NO: 配列番号
motif: モチーフ
Rat: ラット
Human: ヒト
[図3、図4]
Coomassie: クマシー
C-term: C末端側
N-term: N末端側
Anti-Pep1: 抗Pep1
Anti-Pep2: 抗Pep2
Anti-Pep3: 抗Pep3
[図4]
Untr: 未処理
% VAMP2 cleavage: VAMP2切断%
[図5]
% SNARE cleavage: SNARE切断%
Un-Tr: 未処理
Toxin: 毒素
[図6]
UnTreated: 未処理
Anti-Pep4: 抗Pep4
Cleavage-specific: 切断特異的
Anti-Pep1: 抗Pep1
Anti-Pep2: 抗Pep2
Anti-Pep3: 抗Pep3
Claims (18)
- VAMPエピトープを含む抗原ポリペプチドであって、前記抗原ポリペプチドは、10~65個のアミノ酸残基からなり、前記VAMPエピトープは、VAMP中のクロストリジウム神経毒切断部位のすぐC末端側にある少なくとも8個のアミノ酸残基を含むVAMP配列に対して少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を含む、抗原ポリペプチド。
- 前記ポリペプチドが、10~17個のアミノ酸残基、好ましくは、10~16個のアミノ酸残基、より好ましくは、10~15個のアミノ酸残基からなる、請求項1に記載の抗原ポリペプチド。
- 前記VAMPが、VAMP1、VAMP2、VAMP3、VAMP4、VAMP5及び/又はYKT6から選択される、請求項1または2に記載の抗原ポリペプチド。
- 前記VAMPエピトープが、配列番号15~配列番号34および配列番号48~配列番号78から選択されるVAMP配列に対して少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を含む又はからなる、請求項1から3のいずれか一項に記載の抗原ポリペプチド。
- 前記VAMPエピトープが、VAMP1、VAMP2及び/又はVAMP3エピトープであり、
-KLSELDDRADALQ(配列番号15)を含む又はからなるBoNT/FまたはBoNT/D VAMPエピトープ、
-ERDQKLSELDDRA(配列番号32)を含む又はからなるBoNT/F5またはBoNT/FA VAMPエピトープ、
-FETSAAKLKRKYW(配列番号22)またはFETSAAKLKRKYWWK(配列番号49)を含む又はからなるBoNT/BまたはTeNT VAMPエピトープ、
-AKLKRKYWWKN(配列番号27)を含む又はからなるBoNT/G VAMPエピトープ、
-ADALQAGASQF(配列番号53)を含む又はからなるBoNT/X VAMPエピトープ
から選択される、請求項1から4のいずれか一項に記載の抗原ポリペプチド。 - 前記VAMPエピトープが、VAMP4、VAMP5及び/又はYKT6エピトープであり、
-SESLSDNATAF(配列番号62)、SDQLLDMSSTF(配列番号66)またはSEVLGTQSKAF(配列番号75)を含む又はからなるBoNT/X VAMPエピトープから選択される、請求項1から4のいずれか一項に記載の抗原ポリペプチド。 - 前記の請求項のいずれか一項に記載の抗原ポリペプチドを含むポリペプチドであって、天然に存在するVAMPアミノ酸配列に対して100%の配列同一性を有する17個、好ましくは、16個、より好ましくは、15個を超える連続アミノ酸の領域を含まない、ポリペプチド。
- 担体に共有結合によって連結された、請求項1から6のいずれか一項に記載のポリペプチドまたは請求項7に記載のポリペプチドを含む抗原タンパク質。
- C末端側VAMP切断産物に対する抗体を作製するための、請求項1から6のいずれか一項に記載の抗原ポリペプチドまたは請求項7に記載のポリペプチドまたは請求項8に記載の抗原タンパク質の使用。
- 請求項1から6のいずれか一項に記載の抗原ポリペプチドと結合する、または請求項7に記載のポリペプチドと結合する、または請求項8に記載の抗原タンパク質と結合する抗体。
- ポリクローナル抗体である、請求項10に記載の抗体。
- モノクローナル抗体である、請求項10に記載の抗体。
- 前記抗体および前記エピトープ間のKDが、10-7M未満である、請求項10から12のいずれか一項に記載の抗体。
- VAMP切断性クロストリジウム神経毒によるVAMP切断についてのシグナル獲得型細胞性アッセイ(gain of signal cellular assay)における、請求項10から13のいずれか一項に記載の抗体の使用。
- 細胞におけるVAMP切断性クロストリジウム神経毒によるVAMPの切断を決定する方法であって、
a)クロストリジウム神経毒活性に適した条件下で、細胞をクロストリジウム神経毒と接触させる工程と、
b)前記細胞の細胞質内容物を、VAMP切断性クロストリジウム神経毒によるVAMPの切断後に、C末端側VAMP切断産物に対する第1の検出抗体と、第1の検出抗体がC末端側VAMP切断産物と結合するのに適した条件下で接触させる工程であって、前記の第1の検出抗体が、請求項10から13のいずれか一項に記載の抗体である工程と、
c)適した手段によって、前記の第1の検出抗体とC末端側VAMP切断産物との結合を検出する工程と
を含む方法。 - d)適した手段によって、前記の第1の検出抗体に結合したC末端側VAMP切断産物の量を定量化する工程をさらに含む、請求項15に記載の方法。
- 対象においてVAMP切断性クロストリジウム神経毒に対する免疫抵抗性を決定する方法であって、
a) 対象から得られた試験サンプルに、VAMP切断性クロストリジウム神経毒を添加する工程と、
b)細胞を、クロストリジウム神経毒活性に適した条件下で、工程a)の試験サンプルと接触させる工程と、
c)前記細胞の細胞質内容物を、VAMP切断性クロストリジウム神経毒によるVAMPの切断後に、C末端側VAMP切断産物に対する第1の検出抗体と、第1の検出抗体がC末端側VAMP切断産物と結合するのに適した条件下で接触させる工程であって、前記の第1の検出抗体が、請求項10から13のいずれか一項に記載の抗体である工程と、
d)適した手段によって、第1の検出抗体とC末端側VAMP切断産物との結合を検出する工程と、
e)第1の検出抗体に結合したC末端側VAMP切断産物の量を定量化する工程と、
f)試験サンプルの代わりに陰性対照サンプルを用いて工程a)~e)を反復する工程と、
g)工程(e)及び(f)における前記第1の検出抗体に結合したC末端側VAMP切断産物の量を比較する工程であって、工程(f)における前記第1の検出抗体に結合したC末端側VAMP切断産物の量と比較して、工程(e)における前記第1の検出抗体に結合したC末端側VAMP切断産物の量が低く検出されることは、VAMP切断性クロストリジウム神経毒に対する中和抗体の存在を示す工程と
を含む方法。 - VAMP切断性神経毒による中毒に対して感受性である細胞および切断されたVAMPに対する第1の検出抗体を含むキットであって、前記の第1の検出抗体が、請求項10から13のいずれか一項に記載の抗体である、キット。
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