JP2022089707A - SARS-CoV-2のSpikeタンパク質の変異体およびその用途 - Google Patents
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Abstract
Description
(Sm)下記(Sm1)、(Sm2)、または(Sm3)のアミノ酸配列:
(Sm1)野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)のアミノ酸配列において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有するアミノ酸配列;
(Sm2)(Sm1)のアミノ酸配列において、1~127個の挿入、付加、置換および/または欠失を有し、かつ、(Sm1)の変異されたアミノ酸が維持されているアミノ酸配列;
(Sm3)(Sm1)のアミノ酸配列に対して、90%以上の同一性を有し、かつ、(Sm1)の変異されたアミノ酸が維持されているアミノ酸配列。
前記部分ポリペプチドは、前記変異体における、少なくとも1つの変異アミノ酸を含む。
標的SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Stタンパク質)のアミノ酸配列において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を導入する変異工程を含む。
候補SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Scタンパク質)のアミノ酸配列において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有するScタンパク質を、前記Spikeタンパク質の変異体として選抜する選抜工程を含む。
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体である。
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体である。
本発明において、「SARS-CoV-2」は、severe acute respiratory syndrome coronavirus 2を意味する。前記SARSは、コロナウイルス科(Coronaviridae)のベータコロナウイルス属(Betacoronavirus)の、SARS関連コロナウイルス種(Severe acute respiratory syndrome-related coronavirus)に属するウイルスである。また、SARS2は、ゲノムとして、一本鎖のプラス鎖RNAを有するウイルスである。
MFVFLVLLPLVSSQCVNLTTRTQLPPAYTNSFTRGVYYPDKVFRSSVLHSTQDLFLPFFSNVTWFHAIHVSGTNGTKRFDNPVLPFNDGVYFASTEKSNIIRGWIFGTTLDSKTQSLLIVNNATNVVIKVCEFQFCNDPFLGVYYHKNNKSWMESEFRVYSSANNCTFEYVSQPFLMDLEGKQGNFKNLREFVFKNIDGYFKIYSKHTPINLVRDLPQGFSALEPLVDLPIGINITRFQTLLALHRSYLTPGDSSSGWTAGAAAYYVGYLQPRTFLLKYNENGTITDAVDCALDPLSETKCTLKSFTVEKGIYQTSNFRVQPTESIVRFPNITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNFNFNGLTGTGVLTESNKKFLPFQQFGRDIADTTDAVRDPQTLEILDITPCSFGGVSVITPGTNTSNQVAVLYQDVNCTEVPVAIHADQLTPTWRVYSTGSNVFQTRAGCLIGAEHVNNSYECDIPIGAGICASYQTQTNSPRRARSVASQSIIAYTMSLGAENSVAYSNNSIAIPTNFTISVTTEILPVSMTKTSVDCTMYICGDSTECSNLLLQYGSFCTQLNRALTGIAVEQDKNTQEVFAQVKQIYKTPPIKDFGGFNFSQILPDPSKPSKRSFIEDLLFNKVTLADAGFIKQYGDCLGDIAARDLICAQKFNGLTVLPPLLTDEMIAQYTSALLAGTITSGWTFGAGAALQIPFAMQMAYRFNGIGVTQNVLYENQKLIANQFNSAIGKIQDSLSSTASALGKLQDVVNQNAQALNTLVKQLSSNFGAISSVLNDILSRLDKVEAEVQIDRLITGRLQSLQTYVTQQLIRAAEIRASANLAATKMSECVLGQSKRVDFCGKGYHLMSFPQSAPHGVVFLHVTYVPAQEKNFTTAPAICHDGKAHFPREGVFVSNGTHWFVTQRNFYEPQIITTDNTFVSGNCDVVIGIVNNTVYDPLQPELDSFKEELDKYFKNHTSPDVDLGDISGINASVVNIQKEIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQYIKWPWYIWLGFIAGLIAIVMVTIMLCCMTSCCSCLKGCCSCGSCC[KFDEDDSEPVLKGVKLHYT]
5'-ATGTTTGTTTTTCTTGTTTTATTGCCACTAGTCTCTAGTCAGTGTGTTAATCTTACAACCAGAACTCAATTACCCCCTGCATACACTAATTCTTTCACACGTGGTGTTTATTACCCTGACAAAGTTTTCAGATCCTCAGTTTTACATTCAACTCAGGACTTGTTCTTACCTTTCTTTTCCAATGTTACTTGGTTCCATGCTATACATGTCTCTGGGACCAATGGTACTAAGAGGTTTGATAACCCTGTCCTACCATTTAATGATGGTGTTTATTTTGCTTCCACTGAGAAGTCTAACATAATAAGAGGCTGGATTTTTGGTACTACTTTAGATTCGAAGACCCAGTCCCTACTTATTGTTAATAACGCTACTAATGTTGTTATTAAAGTCTGTGAATTTCAATTTTGTAATGATCCATTTTTGGGTGTTTATTACCACAAAAACAACAAAAGTTGGATGGAAAGTGAGTTCAGAGTTTATTCTAGTGCGAATAATTGCACTTTTGAATATGTCTCTCAGCCTTTTCTTATGGACCTTGAAGGAAAACAGGGTAATTTCAAAAATCTTAGGGAATTTGTGTTTAAGAATATTGATGGTTATTTTAAAATATATTCTAAGCACACGCCTATTAATTTAGTGCGTGATCTCCCTCAGGGTTTTTCGGCTTTAGAACCATTGGTAGATTTGCCAATAGGTATTAACATCACTAGGTTTCAAACTTTACTTGCTTTACATAGAAGTTATTTGACTCCTGGTGATTCTTCTTCAGGTTGGACAGCTGGTGCTGCAGCTTATTATGTGGGTTATCTTCAACCTAGGACTTTTCTATTAAAATATAATGAAAATGGAACCATTACAGATGCTGTAGACTGTGCACTTGACCCTCTCTCAGAAACAAAGTGTACGTTGAAATCCTTCACTGTAGAAAAAGGAATCTATCAAACTTCTAACTTTAGAGTCCAACCAACAGAATCTATTGTTAGATTTCCTAATATTACAAACTTGTGCCCTTTTGGTGAAGTTTTTAACGCCACCAGATTTGCATCTGTTTATGCTTGGAACAGGAAGAGAATCAGCAACTGTGTTGCTGATTATTCTGTCCTATATAATTCCGCATCATTTTCCACTTTTAAGTGTTATGGAGTGTCTCCTACTAAATTAAATGATCTCTGCTTTACTAATGTCTATGCAGATTCATTTGTAATTAGAGGTGATGAAGTCAGACAAATCGCTCCAGGGCAAACTGGAAAGATTGCTGATTATAATTATAAATTACCAGATGATTTTACAGGCTGCGTTATAGCTTGGAATTCTAACAATCTTGATTCTAAGGTTGGTGGTAATTATAATTACCTGTATAGATTGTTTAGGAAGTCTAATCTCAAACCTTTTGAGAGAGATATTTCAACTGAAATCTATCAGGCCGGTAGCACACCTTGTAATGGTGTTGAAGGTTTTAATTGTTACTTTCCTTTACAATCATATGGTTTCCAACCCACTAATGGTGTTGGTTACCAACCATACAGAGTAGTAGTACTTTCTTTTGAACTTCTACATGCACCAGCAACTGTTTGTGGACCTAAAAAGTCTACTAATTTGGTTAAAAACAAATGTGTCAATTTCAACTTCAATGGTTTAACAGGCACAGGTGTTCTTACTGAGTCTAACAAAAAGTTTCTGCCTTTCCAACAATTTGGCAGAGACATTGCTGACACTACTGATGCTGTCCGTGATCCACAGACACTTGAGATTCTTGACATTACACCATGTTCTTTTGGTGGTGTCAGTGTTATAACACCAGGAACAAATACTTCTAACCAGGTTGCTGTTCTTTATCAGGATGTTAACTGCACAGAAGTCCCTGTTGCTATTCATGCAGATCAACTTACTCCTACTTGGCGTGTTTATTCTACAGGTTCTAATGTTTTTCAAACACGTGCAGGCTGTTTAATAGGGGCTGAACATGTCAACAACTCATATGAGTGTGACATACCCATTGGTGCAGGTATATGCGCTAGTTATCAGACTCAGACTAATTCTCCTCGGCGGGCACGTAGTGTAGCTAGTCAATCCATCATTGCCTACACTATGTCACTTGGTGCAGAAAATTCAGTTGCTTACTCTAATAACTCTATTGCCATACCCACAAATTTTACTATTAGTGTTACCACAGAAATTCTACCAGTGTCTATGACCAAGACATCAGTAGATTGTACAATGTACATTTGTGGTGATTCAACTGAATGCAGCAATCTTTTGTTGCAATATGGCAGTTTTTGTACACAATTAAACCGTGCTTTAACTGGAATAGCTGTTGAACAAGACAAAAACACCCAAGAAGTTTTTGCACAAGTCAAACAAATTTACAAAACACCACCAATTAAAGATTTTGGTGGTTTTAATTTTTCACAAATATTACCAGATCCATCAAAACCAAGCAAGAGGTCATTTATTGAAGATCTACTTTTCAACAAAGTGACACTTGCAGATGCTGGCTTCATCAAACAATATGGTGATTGCCTTGGTGATATTGCTGCTAGAGACCTCATTTGTGCACAAAAGTTTAACGGCCTTACTGTTTTGCCACCTTTGCTCACAGATGAAATGATTGCTCAATACACTTCTGCACTGTTAGCGGGTACAATCACTTCTGGTTGGACCTTTGGTGCAGGTGCTGCATTACAAATACCATTTGCTATGCAAATGGCTTATAGGTTTAATGGTATTGGAGTTACACAGAATGTTCTCTATGAGAACCAAAAATTGATTGCCAACCAATTTAATAGTGCTATTGGCAAAATTCAAGACTCACTTTCTTCCACAGCAAGTGCACTTGGAAAACTTCAAGATGTGGTCAACCAAAATGCACAAGCTTTAAACACGCTTGTTAAACAACTTAGCTCCAATTTTGGTGCAATTTCAAGTGTTTTAAATGATATCCTTTCACGTCTTGACAAAGTTGAGGCTGAAGTGCAAATTGATAGGTTGATCACAGGCAGACTTCAAAGTTTGCAGACATATGTGACTCAACAATTAATTAGAGCTGCAGAAATCAGAGCTTCTGCTAATCTTGCTGCTACTAAAATGTCAGAGTGTGTACTTGGACAATCAAAAAGAGTTGATTTTTGTGGAAAGGGCTATCATCTTATGTCCTTCCCTCAGTCAGCACCTCATGGTGTAGTCTTCTTGCATGTGACTTATGTCCCTGCACAAGAAAAGAACTTCACAACTGCTCCTGCCATTTGTCATGATGGAAAAGCACACTTTCCTCGTGAAGGTGTCTTTGTTTCAAATGGCACACACTGGTTTGTAACACAAAGGAATTTTTATGAACCACAAATCATTACTACAGACAACACATTTGTGTCTGGTAACTGTGATGTTGTAATAGGAATTGTCAACAACACAGTTTATGATCCTTTGCAACCTGAATTAGACTCATTCAAGGAGGAGTTAGATAAATATTTTAAGAATCATACATCACCAGATGTTGATTTAGGTGACATCTCTGGCATTAATGCTTCAGTTGTAAACATTCAAAAAGAAATTGACCGCCTCAATGAGGTTGCCAAGAATTTAAATGAATCTCTCATCGATCTCCAAGAACTTGGAAAGTATGAGCAGTATATAAAATGGCCATGGTACATTTGGCTAGGTTTTATAGCTGGCTTGATTGCCATAGTAATGGTGACAATTATGCTTTGCTGTATGACCAGTTGCTGTAGTTGTCTCAAGGGCTGTTGTTCTTGTGGATCCTGCTGC[AAATTTGATGAAGACGACTCTGAGCCAGTGCTCAAAGGAGTCAAATTACATTACACATAA]-3'
QCVNLTTRTQLPPAYTNSFTRGVYYPDKVFRSSVLHSTQDLFLPFFSNVTWFHAIHVSGTNGTKRFDNPVLPFNDGVYFASTEKSNIIRGWIFGTTLDSKTQSLLIVNNATNVVIKVCEFQFCNDPFLGVYYHKNNKSWMESEFRVYSSANNCTFEYVSQPFLMDLEGKQGNFKNLREFVFKNIDGYFKIYSKHTPINLVRDLPQGFSALEPLVDLPIGINITRFQTLLALHRSYLTPGDSSSGWTAGAAAYYVGYLQPRTFLLKYNENGTITDAVDCALDPLSETKCTLKSFTVEKGIYQTSNFRVQPTESIVRF
NITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNFNFNGLTGTGVLTESNKKFLPFQQFGRDIADTTDAVRDPQTLE
ILDITPCSFGGVSVITPGTNTSNQVAVLYQDVNCTEVPVAIHADQLTPTWRVYSTGSNVFQTRAGCLIGAEHVNNSYECDIPIGAGICASYQTQTNSPRRARSVASQSIIAYTMSLGAENSVAYSNNSIAIPTNFTISVTTEILPVSMTKTSVDCTMYICGDSTECSNLLLQYGSFCTQLNRALTGIAVEQDKNTQEVFAQVKQIYKTPPIKDFGGFNFSQILPDPSKPSKRSFIEDLLFNKVTLADAGFIKQYGDCLGDIAARDLICAQKFNGLTVLPPLLTDEMIAQYTSALLAGTITSGWTFGAGAALQIPFAMQMAYRFNGIGVTQNVLYENQKLIANQFNSAIGKIQDSLSSTASALGKLQDVVNQNAQALNTLVKQLSSNFGAISSVLNDILSRLDKVEAEVQIDRLITGRLQSLQTYVTQQLIRAAEIRASANLAATKMSECVLGQSKRVDFCGKGYHLMSFPQSAPHGVVFLHVTYVPAQEKNFTTAPAICHDGKAHFPREGVFVSNGTHWFVTQRNFYEPQIITTDNTFVSGNCDVVIGIVNNTVYDPLQPELDSFKEELDKYFKNHTSPDVDLGDISGINASVVNIQKEIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQYIKWPWY
MSSSSWLLLSLVAVTAAQSTIEEQAKTFLDKFNHEAEDLFYQSSLASWNYNTNITEENVQNMNNAGDKWSAFLKEQSTLAQMYPLQEIQNLTVKLQLQALQQNGSSVLSEDKSKRLNTILNTMSTIYSTGKVCNPDNPQECLLLEPGLNEIMANSLDYNERLWAWESWRSEVGKQLRPLYEEYVVLKNEMARANHYEDYGDYWRGDYEVNGVDGYDYSRGQLIEDVEHTFEEIKPLYEHLHAYVRAKLMNAYPSYISPIGCLPAHLLGDMWGRFWTNLYSLTVPFGQKPNIDVTDAMVDQAWDAQRIFKEAEKFFVSVGLPNMTQGFWENSMLTDPGNVQKAVCHPTAWDLGKGDFRILMCTKVTMDDFLTAHHEMGHIQYDMAYAAQPFLLRNGANEGFHEAVGEIMSLSAATPKHLKSIGLLSPDFQEDNETEINFLLKQALTIVGTLPFTYMLEKWRWMVFKGEIPKDQWMKKWWEMKREIVGVVEPVPHDETYCDPASLFHVSNDYSFIRYYTRTLYQFQFQEALCQAAKHEGPLHKCDISNSTEAGQKLFNMLRLGKSEPWTLALENVVGAKNMNVRPLLNYFEPLFTWLKDQNKNSFVGWSTDWSPYADQSIKVRISLKSALGDKAYEWNDNEMYLFRSSVAYAMRQYFLKVKNQMILFGEEDVRVANLKPRISFNFFVTAPKNVSDIIPRTEVEKAIRMSRSRINDAFRLNDNSLEFLGIQPTLGPPNQPPVSIWLIVFGVVMGVIVVGIVILIFTGIRDRKKKNKARSGENPYASIDISKGENNPGFQNTDDVQTSF
5'-atgtcaagctcttcctggctccttctcagccttgttgctgtaactgctgctcagtccaccattgaggaacaggccaagacatttttggacaagtttaaccacgaagccgaagacctgttctatcaaagttcacttgcttcttggaattataacaccaatattactgaagagaatgtccaaaacatgaataatgctggggacaaatggtctgcctttttaaaggaacagtccacacttgcccaaatgtatccactacaagaaattcagaatctcacagtcaagcttcagctgcaggctcttcagcaaaatgggtcttcagtgctctcagaagacaagagcaaacggttgaacacaattctaaatacaatgagcaccatctacagtactggaaaagtttgtaacccagataatccacaagaatgcttattacttgaaccaggtttgaatgaaataatggcaaacagtttagactacaatgagaggctctgggcttgggaaagctggagatctgaggtcggcaagcagctgaggccattatatgaagagtatgtggtcttgaaaaatgagatggcaagagcaaatcattatgaggactatggggattattggagaggagactatgaagtaaatggggtagatggctatgactacagccgcggccagttgattgaagatgtggaacatacctttgaagagattaaaccattatatgaacatcttcatgcctatgtgagggcaaagttgatgaatgcctatccttcctatatcagtccaattggatgcctccctgctcatttgcttggtgatatgtggggtagattttggacaaatctgtactctttgacagttccctttggacagaaaccaaacatagatgttactgatgcaatggtggaccaggcctgggatgcacagagaatattcaaggaggccgagaagttctttgtatctgttggtcttcctaatatgactcaaggattctgggaaaattccatgctaacggacccaggaaatgttcagaaagcagtctgccatcccacagcttgggacctggggaagggcgacttcaggatccttatgtgcacaaaggtgacaatggacgacttcctgacagctcatcatgagatggggcatatccagtatgatatggcatatgctgcacaaccttttctgctaagaaatggagctaatgaaggattccatgaagctgttggggaaatcatgtcactttctgcagccacacctaagcatttaaaatccattggtcttctgtcacccgattttcaagaagacaatgaaacagaaataaacttcctgctcaaacaagcactcacgattgttgggactctgccatttacttacatgttagagaagtggaggtggatggtctttaaaggggaaattcccaaagaccagtggatgaaaaagtggtgggagatgaagcgagagatagttggggtggtggaacctgtgccccatgatgaaacatactgtgaccccgcatctctgttccatgtttctaatgattactcattcattcgatattacacaaggaccctttaccaattccagtttcaagaagcactttgtcaagcagctaaacatgaaggccctctgcacaaatgtgacatctcaaactctacagaagctggacagaaactgttcaatatgctgaggcttggaaaatcagaaccctggaccctagcattggaaaatgttgtaggagcaaagaacatgaatgtaaggccactgctcaactactttgagcccttatttacctggctgaaagaccagaacaagaattcttttgtgggatggagtaccgactggagtccatatgcagaccaaagcatcaaagtgaggataagcctaaaatcagctcttggagataaagcatatgaatggaacgacaatgaaatgtacctgttccgatcatctgttgcatatgctatgaggcagtactttttaaaagtaaaaaatcagatgattctttttggggaggaggatgtgcgagtggctaatttgaaaccaagaatctcctttaatttctttgtcactgcacctaaaaatgtgtctgatatcattcctagaactgaagttgaaaaggccatcaggatgtcccggagccgtatcaatgatgctttccgtctgaatgacaacagcctagagtttctggggatacagccaacacttggacctcctaaccagccccctgtttccatatggctgattgtttttggagttgtgatgggagtgatagtggttggcattgtcatcctgatcttcactgggatcagagatcggaagaagaaaaataaagcaagaagtggagaaaatccttatgcctccatcgatattagcaaaggagaaaataatccaggattccaaaacactgatgatgttcagacctccttttag-3'
参考文献1:Kabat et.al., “Sequences of Proteins of Immunological Interest”, 1987, US Department of Health and Human Services, NIH, USA
本発明は、SARS2のSタンパク質のACE2への結合能を増強する抗体の誘導能を低減しうる変異タンパク質を提供する。本発明のSARS-CoV-2のSpikeタンパク質の変異体は、下記(Sm)のアミノ酸配列からなるタンパク質である。本発明の変異タンパク質は、前記Ssタンパク質における30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有することが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。
(Sm1)野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)のアミノ酸配列において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有するアミノ酸配列;
(Sm2)(Sm1)のアミノ酸配列において、1もしくは数個の挿入、付加、置換および/または欠失を有し、かつ、(Sm1)の変異されたアミノ酸が維持されているアミノ酸配列;
(Sm3)(Sm1)のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有し、かつ、(Sm1)の変異されたアミノ酸が維持されているアミノ酸配列。
配列番号8のアミノ酸配列(X1X2YX3X4X5)を含む、または、からなる重鎖相補性決定領域(HCDR)1、配列番号9のアミノ酸配列(X6IX7X8X9X10GX11X12X13X14YX15X16X17X18X19X20)を含む、または、からなるHCDR2、および配列番号10のアミノ酸配列(X21X22X23X24X25X26X27X28X29X30X31X32X33X34X35X36X37X38X39DX40)を含む、または、からなるHCDR3を含む、重鎖可変領域である。
X1は、SまたはTである;
X2は、存在しないか、Nである;
X3は、A、D、またはWである;
X4は、MまたはWである;
X5は、G、H、N、またはSである;
X6は、A、D、N、T、V、またはWである;
X7は、G、H、N、またはSである;
X8は、Q、T、またはYである;
X9は、A、D、S、またはNである;
X10は、存在しないか、Tである;
X11は、D、G、I、N、またはSである;
X12は、E、N、P、SまたはTである;
X13は、存在しないか、Kである;
X14は、TまたはYである;
X15は、A、N、P、またはVである;
X16は、D、G、P、またはQである;
X17は、GまたはSである;
X18は、F、L、またはVである;
X19は、K、R、またはTである;
X20は、GまたはSである;
X21は、存在しないか、Aである;
X22は、DまたはRである;
X23は、F、P、Q、T、またはWである;
X24は、存在しないか、D、E、G、またはYである;
X25は、G、S、Q、W、またはYである;
X26は、D、F、G、またはLである;
X27は、I、L、N、R、またはYである;
X28は、存在しないか、G、L、P、T、W、またはYである;
X29は、存在しないか、A、G、Q、S、またはTである;
X30は、存在しないか、A、D、G、H、またはMである;
X31は、存在しないか、S、V、またはYである;
X32は、存在しないか、EまたはSである;
X33は、存在しないか、L、S、W、またはYである;
X34は、存在しないか、F、G、T、またはYである;
X35は、存在しないか、A、G、L、またはYである;
X36は、存在しないか、A、T、またはYである;
X37は、FまたはYである;
X38は、存在しないか、CまたはGである;
X39は、存在しないか、Mである;
X40は、F、I、またはVである。
配列番号11のアミノ酸配列(X41X42SX43X44X45X46X47X48X49X50X51)を含む、または、からなる軽鎖相補性決定領域(LCDR)1、配列番号12のアミノ酸配列(X52X53SX54X55X56X57)を含む、または、からなるLCDR2、および配列番号13のアミノ酸配列(X58QX59X60X61X62X63X64X65X66T)を含む、または、からなるLCDR3を含む、軽鎖可変領域である:
X41は、K、Q、またはRである;
X42は、存在しないか、AまたはSである;
X43は、存在しないか、QまたはVである;
X44は、GまたはSである;
X45は、存在しないか、I、L、またはVである;
X46は、存在しないか、L、R、またはSである;
X47は、存在しないか、Hである;
X48は、存在しないか、NまたはSである;
X49は、存在しないか、D、N、Y、またはWである;
X50は、存在しないか、GまたはLである;
X51は、存在しないか、A、G、またはKである;
X52は、A、D、E、G、またはKである;
X53は、AまたはVである;
X54は、N、S、またはTである;
X55は、LまたはRである;
X56は、A、E、F、またはQである;
X57は、SまたはTである;
X58は、L、M、またはQである;
X59は、A、H、L、S、またはYである;
X60は、G、I、またはNである;
X61は、N、S、またはQである;
X62は、存在しないか、F、W、またはYである;
X63は、存在しないか、P、S、またはWである;
X64は、PまたはRである;
X65は、存在しないか、Lである;
X66は、存在しないか、Iである。
(H1)HCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含み、
HCDR1は、下記(H1-A)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドであり、
HCDR2が、下記(H2-A)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドであり、
HCDR3が、下記(H3-A)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドである重鎖可変領域:
(H1-A)下記(H1-A1)、(H1-A2)または(H1-A3)のアミノ酸配列
(H1-A1)配列番号14(SYAMH)のアミノ酸配列
(H1-A2)配列番号14のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(H1-A3)配列番号14のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(H2-A)下記(H2-A1)、(H2-A2)または(H2-A3)のアミノ酸配列
(H2-A1)配列番号15(VISYDGSNKYYADSVKG)のアミノ酸配列
(H2-A2)配列番号15のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(H2-A3)配列番号15のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(H3-A)下記(H3-A1)、(H3-A2)または(H3-A3)のアミノ酸配列
(H3-A1)配列番号16(DQEWFRELFLFDY)のアミノ酸配列
(H3-A2)配列番号16のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(H3-A3)配列番号16のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列;
(L1)LCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含み、
LCDR1は、下記(L1-A)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドであり、
LCDR2が、下記(L2-A)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドであり、
LCDR3が、下記(L3-A)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドである軽鎖可変領域:
(L1-A)下記(L1-A1)、(L1-A2)または(L1-A3)のアミノ酸配列
(L1-A1)配列番号17(RASQGISSWLA)のアミノ酸配列
(L1-A2)配列番号17のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(L1-A3)配列番号17のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(L2-A)下記(L2-A1)、(L2-A2)または(L2-A3)のアミノ酸配列
(L2-A1)配列番号18(DASSLQS)のアミノ酸配列
(L2-A2)配列番号18のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(L2-A3)配列番号18のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(L3-A)下記(L3-A1)、(L3-A2)または(L3-A3)のアミノ酸配列
(L3-A1)配列番号19(QQANSFPPT)のアミノ酸配列
(L3-A2)配列番号19のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(L3-A3)配列番号19のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列。
(HB)HCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含み、
HCDR1は、下記(H1-B)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドであり、
HCDR2が、下記(H2-B)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドであり、
HCDR3が、下記(H3-B)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドである重鎖可変領域:
(H1-B)下記(H1-B1)、(H1-B2)または(H1-B3)のアミノ酸配列
(H1-B1)配列番号20(SYWMN)のアミノ酸配列
(H1-B2)配列番号20のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(H1-B3)配列番号20のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(H2-B)下記(H2-B1)、(H2-B2)または(H2-B3)のアミノ酸配列
(H2-B1)配列番号21(NINQDGGEKYYVDSVRG)のアミノ酸配列
(H2-B2)配列番号21のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(H2-B3)配列番号21のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(H3-B)下記(H3-B1)、(H3-B2)または(H3-B3)のアミノ酸配列
(H3-B1)配列番号22(DPYDLYGDYGGTFDY)のアミノ酸配列
(H3-B2)配列番号22のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(H3-B3)配列番号22のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列;
(LB)LCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含み、
LCDR1は、下記(L1-B)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドであり、
LCDR2が、下記(L2-B)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドであり、
LCDR3が、下記(L3-B)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドである軽鎖可変領域:
(L1-B)下記(L1-B1)、(L1-B2)または(L1-B3)のアミノ酸配列
(L1-B1)配列番号23(RASQSVSSNLA)のアミノ酸配列
(L1-B2)配列番号23のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(L1-B3)配列番号23のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(L2-B)下記(L2-B1)、(L2-B2)または(L2-B3)のアミノ酸配列
(L2-B1)配列番号24(GASTRAT)のアミノ酸配列
(L2-B2)配列番号24のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(L2-B3)配列番号24のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(L3-B)下記(L3-B1)、(L3-B2)または(L3-B3)のアミノ酸配列
(L3-B1)配列番号25(QQYNNWWRT)のアミノ酸配列
(L3-B2)配列番号25のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(L3-B3)配列番号25のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列。
(HC)HCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含み、
HCDR1は、下記(H1-C)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドであり、
HCDR2が、下記(H2-C)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドであり、
HCDR3が、下記(H3-C)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドである重鎖可変領域:
(H1-C)下記(H1-C1)、(H1-C2)または(H1-C3)のアミノ酸配列
(H1-C1)配列番号26(SYWMS)のアミノ酸配列
(H1-C2)配列番号26のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(H1-C3)配列番号26のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(H2-C)下記(H2-C1)、(H2-C2)または(H2-C3)のアミノ酸配列
(H2-C1)配列番号27(NINQDGSEKYYVDSVKG)のアミノ酸配列
(H2-C2)配列番号27のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(H2-C3)配列番号27のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(H3-C)下記(H3-C1)、(H3-C2)または(H3-C3)のアミノ酸配列
(H3-C1)配列番号28(DWDYDILTGSWFGAFDI)のアミノ酸配列
(H3-C2)配列番号28のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(H3-C3)配列番号28のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列;
(LC)LCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含み、
LCDR1は、下記(L1-C)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドであり、
LCDR2が、下記(L2-C)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドであり、
LCDR3が、下記(L3-C)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドである軽鎖可変領域:
(L1-C)下記(L1-C1)、(L1-C2)または(L1-C3)のアミノ酸配列
(L1-C1)配列番号29(RASQGIRNDLG)のアミノ酸配列
(L1-C2)配列番号29のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(L1-C3)配列番号29のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(L2-C)下記(L2-C1)、(L2-C2)または(L2-C3)のアミノ酸配列
(L2-C1)配列番号30(AASSLQS)のアミノ酸配列
(L2-C2)配列番号30のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(L2-C3)配列番号30のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(L3-C)下記(L3-C1)、(L3-C2)または(L3-C3)のアミノ酸配列
(L3-C1)配列番号31(LQHNSYPLT)のアミノ酸配列
(L3-C2)配列番号31のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(L3-C3)配列番号31のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列。
(HD)HCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含み、
HCDR1は、下記(H1-D)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドであり、
HCDR2が、下記(H2-D)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドであり、
HCDR3が、下記(H3-D)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドである重鎖可変領域:
(H1-D)下記(H1-D1)、(H1-D2)または(H1-D3)のアミノ酸配列
(H1-D1)配列番号32(TYAMN)のアミノ酸配列
(H1-D2)配列番号32のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(H1-D3)配列番号32のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(H2-D)下記(H2-D1)、(H2-D2)または(H2-D3)のアミノ酸配列
(H2-D1)配列番号33(WINTNTGNPTYAQGFTG)のアミノ酸配列
(H2-D2)配列番号33のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(H2-D3)配列番号33のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(H3-D)下記(H3-D1)、(H3-D2)または(H3-D3)のアミノ酸配列
(H3-D1)配列番号34(DQDSGYPTYYYYYMDV)のアミノ酸配列
(H3-D2)配列番号34のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(H3-D3)配列番号34のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列;
(LD)LCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含み、
LCDR1は、下記(L1-D)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドであり、
LCDR2が、下記(L2-D)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドであり、
LCDR3が、下記(L3-D)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドである軽鎖可変領域:
(L1-D)下記(L1-D1)、(L1-D2)または(L1-D3)のアミノ酸配列
(L1-D1)配列番号35(KSSQSLLHSDGK)のアミノ酸配列
(L1-D2)配列番号35のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(L1-D3)配列番号35のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(L2-D)下記(L2-D1)、(L2-D2)または(L2-D3)のアミノ酸配列
(L2-D1)配列番号36(EVSNRFS)のアミノ酸配列
(L2-D2)配列番号36のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(L2-D3)配列番号36のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(L3-D)下記(L3-D1)、(L3-D2)または(L3-D3)のアミノ酸配列
(L3-D1)配列番号37(MQSIQPPLT)のアミノ酸配列
(L3-D2)配列番号37のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(L3-D3)配列番号37のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列。
(HE)HCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含み、
HCDR1は、下記(H1-E)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドであり、
HCDR2が、下記(H2-E)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドであり、
HCDR3が、下記(H3-E)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドである重鎖可変領域:
(H1-E)下記(H1-E1)、(H1-E2)または(H1-E3)のアミノ酸配列
(H1-E1)配列番号38(SYAMH)のアミノ酸配列
(H1-E2)配列番号38のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(H1-E3)配列番号38のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(H2-E)下記(H2-E1)、(H2-E2)または(H2-E3)のアミノ酸配列
(H2-E1)配列番号39(DISYDGSEKYYADSVKG)のアミノ酸配列
(H2-E2)配列番号39のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(H2-E3)配列番号39のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(H3-E)下記(H3-E1)、(H3-E2)または(H3-E3)のアミノ酸配列
(H3-E1)配列番号40(DFGGDNTAMVEYFFDF)のアミノ酸配列
(H3-E2)配列番号40のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(H3-E3)配列番号40のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列;
(LE)LCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含み、
LCDR1は、下記(L1-E)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドであり、
LCDR2が、下記(L2-E)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドであり、
LCDR3が、下記(L3-E)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドである軽鎖可変領域:
(L1-E)下記(L1-E1)、(L1-E2)または(L1-E3)のアミノ酸配列
(L1-E1)配列番号41(RASQSISSWLA)のアミノ酸配列
(L1-E2)配列番号41のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(L1-E3)配列番号41のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(L2-E)下記(L2-E1)、(L2-E2)または(L2-E3)のアミノ酸配列
(L2-E1)配列番号42(KASSLES)のアミノ酸配列
(L2-E2)配列番号42のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(L2-E3)配列番号42のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(L3-E)下記(L3-E1)、(L3-E2)または(L3-E3)のアミノ酸配列
(L3-E1)配列番号43(QQYNSYSPT)のアミノ酸配列
(L3-E2)配列番号43のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(L3-E3)配列番号43のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列。
(HF)HCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含み、
HCDR1は、下記(H1-F)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドであり、
HCDR2が、下記(H2-F)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドであり、
HCDR3が、下記(H3-F)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドである重鎖可変領域:
(H1-F)下記(H1-F1)、(H1-F2)または(H1-F3)のアミノ酸配列
(H1-F1)配列番号44(SYDMH)のアミノ酸配列
(H1-F2)配列番号44のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(H1-F3)配列番号44のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(H2-F)下記(H2-F1)、(H2-F2)または(H2-F3)のアミノ酸配列
(H2-F1)配列番号45(AIGTAGDTYYPGSVKG)のアミノ酸配列
(H2-F2)配列番号45のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(H2-F3)配列番号45のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(H3-G)下記(H3-G1)、(H3-G2)または(H3-G3)のアミノ酸配列
(H3-G1)配列番号46(ADPYQLLGQHYYYGMDV)のアミノ酸配列
(H3-G2)配列番号46のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(H3-G3)配列番号46のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列;
(LF)LCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含み、
LCDR1は、下記(L1-F)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドであり、
LCDR2が、下記(L2-F)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドであり、
LCDR3が、下記(L3-F)のアミノ酸配列を含む、またはからなるポリペプチドである軽鎖可変領域:
(L1-F)下記(L1-F1)、(L1-F2)または(L1-F3)のアミノ酸配列
(L1-F1)配列番号47(QSVSSSYLA)のアミノ酸配列
(L1-F2)配列番号47のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(L1-F3)配列番号47のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(L2-F)下記(L2-F1)、(L2-F2)または(L2-F3)のアミノ酸配列
(L2-F1)配列番号48(GASSRAT)のアミノ酸配列
(L2-F2)配列番号48のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(L2-F3)配列番号48のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(L3-F)下記(L3-F1)、(L3-F2)または(L3-F3)のアミノ酸配列
(L3-F1)配列番号49(QQYGSSPLIT)のアミノ酸配列
(L3-F2)配列番号49のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(L3-F3)配列番号49のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列。
参考文献2:S. Huck et.al., “Sequence of a human immunoglobulin gamma 3 heavy chain constant region gene: comparison with the other human C gamma genes.”, 1986, Nucleic Acids Res, vol. 14, No. 4, pages 1779-1789
参考文献3:P A Hieter et.al., “Evolution of human immunoglobulin kappa J region genes.”, 1982, J. Biol. Chem., vol. 257, pages 1516-1522
参考文献4:Philip A. Hieter et.al., “Cloned human and mouse kappa immunoglobulin constant and J region genes conserve homology in functional segments.”, 1980, Cell, vol. 22, pages 197-207
HFR1:配列番号50のアミノ酸配列
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFS(配列番号50)
HFR2:配列番号51のアミノ酸配列
WVRQAPGKGLEWVA(配列番号51)
HFR3:配列番号52のアミノ酸配列
RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRVEDTAVYYCAR(配列番号52)
HFR4:配列番号53のアミノ酸配列
WGQGTLVTVSS(配列番号53)
LFR1:配列番号54のアミノ酸配列
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITC(配列番号54)
LFR2:配列番号55のアミノ酸配列
WYQQKPGKAPKLLIY(配列番号55)
LFR3:配列番号56のアミノ酸配列
GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(配列番号56)
LFR4:配列番号57のアミノ酸配列
FGPGTKVDIK(配列番号57)
HFR1:配列番号58のアミノ酸配列
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS(配列番号58)
HFR2:配列番号59のアミノ酸配列
WVRQAPGKGLEWVA(配列番号59)
HFR3:配列番号60のアミノ酸配列
RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(配列番号60)
HFR4:配列番号61のアミノ酸配列
WGQGTLVTVSS(配列番号61)
LFR1:配列番号62のアミノ酸配列
EIVLTQSPATLSVSPGERATLSC(配列番号62)
LFR2:配列番号63のアミノ酸配列
WYQQKPGQAPRLLIY(配列番号63)
LFR3:配列番号64のアミノ酸配列
GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLQSEDFALYYC(配列番号64)
LFR4:配列番号65のアミノ酸配列
FGQGTKVEIN(配列番号65)
HFR1:配列番号66のアミノ酸配列
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS(配列番号66)
HFR2:配列番号67のアミノ酸配列
WVRQAPGKGLEWVA(配列番号67)
HFR3:配列番号68のアミノ酸配列
RFTISRDNAKNSLYLQVNSLRAEDTAVYYCAR(配列番号68)
HFR4:配列番号69のアミノ酸配列
WGQGTTVTVSS(配列番号69)
LFR1:配列番号70のアミノ酸配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(配列番号70)
LFR2:配列番号71のアミノ酸配列
WYQQKPGKAPKRLIY(配列番号71)
LFR3:配列番号72のアミノ酸配列
GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYC(配列番号72)
LFR4:配列番号73のアミノ酸配列
FGGGTKVEIK(配列番号73)
HFR1:配列番号74のアミノ酸配列
QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFT(配列番号74)
HFR2:配列番号75のアミノ酸配列
WVRQAPGQGLEWMG(配列番号75)
HFR3:配列番号76のアミノ酸配列
RFVFSLDTSVNTAFLHIGSLKAEDTAVYYCAR(配列番号76)
HFR4:配列番号77のアミノ酸配列
WGKGTTVTVSS(配列番号77)
LFR1:配列番号78のアミノ酸配列
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISC(配列番号78)
LFR2:配列番79のアミノ酸配列
TYLYWYLQKPGQSPQLLIY(配列番号79)
LFR3:配列番号80のアミノ酸配列
GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC(配列番号80)
LFR4:配列番号81のアミノ酸配列
FGGGTKVEIK(配列番号81)
HFR1:配列番号82のアミノ酸配列
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFS(配列番号82)
HFR2:配列番号83のアミノ酸配列
WVRQAPGKGLEWVA(配列番号83)
HFR3:配列番号84のアミノ酸配列
RFTIYRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAK(配列番号84)
HFR4:配列番号85のアミノ酸配列
WGQGTLVTVSS(配列番号85)
LFR1:配列番号86のアミノ酸配列
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC(配列番号86)
LFR2:配列番号87のアミノ酸配列
WYQQKPGKAPKLLIY(配列番号87)
LFR3:配列番号88のアミノ酸配列
GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYC(配列番号88)
LFR4:配列番号89のアミノ酸配列
FGQGTKVEIK(配列番号89)
HFR1:配列番号90のアミノ酸配列
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS(配列番号90)
HFR2:配列番号91のアミノ酸配列
WVRQATGKGLEWVS(配列番号91)
HFR3:配列番号92のアミノ酸配列
RFTISRENAKNSLYLQMNSLRAGDTAVYYCAR(配列番号92)
HFR4:配列番号93のアミノ酸配列
WGQGTTVTVSS(配列番号93)
LFR1:配列番号94のアミノ酸配列
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRAS(配列番号94)
LFR2:配列番号95のアミノ酸配列
WYQQKPGQAPRLLIY(配列番号95)
LFR3:配列番号96のアミノ酸配列
GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC(配列番号96)
LFR4:配列番号97のアミノ酸配列
FGQGTRLEIK(配列番号97)
(H-A1)配列番号98のアミノ酸配列
配列番号98:QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRVEDTAVYYCARDQEWFRELFLFDYWGQGTLVTVSS
(H-A2)配列番号98のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(H-A3)配列番号98のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(L-A1)配列番号99のアミノ酸配列
配列番号99:DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANSFPPTFGPGTKVDIK
(L-A2)配列番号99のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(L-A3)配列番号99のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(H-B1)配列番号100のアミノ酸配列
配列番号100:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMNWVRQAPGKGLEWVANINQDGGEKYYVDSVRGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPYDLYGDYGGTFDYWGQGTLVTVSS
(H-B2)配列番号100のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(H-B3)配列番号100のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(L-B1)配列番号101のアミノ酸配列
配列番号101:EIVLTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLQSEDFALYYCQQYNNWWRTFGQGTKVEIN
(L-B2)配列番号101のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(L-B3)配列番号101のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(H-C1)配列番号102のアミノ酸配列
配列番号102:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANINQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQVNSLRAEDTAVYYCARDWDYDILTGSWFGAFDIWGQGTTVTVSS
(H-C2)配列番号102のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(H-C3)配列番号102のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(L-C1)配列番号103のアミノ酸配列
配列番号103:DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK
(L-C2)配列番号103のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(L-C3)配列番号103のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(H-D1)配列番号104のアミノ酸配列
配列番号104:QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTTYAMNWVRQAPGQGLEWMGWINTNTGNPTYAQGFTGRFVFSLDTSVNTAFLHIGSLKAEDTAVYYCARDQDSGYPTYYYYYMDVWGKGTTVTVSS
(H-D2)配列番号104のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(H-D3)配列番号104のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(L-D1)配列番号105のアミノ酸配列
配列番号105:DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLLHSDGKTYLYWYLQKPGQSPQLLIYEVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQSIQPPLTFGGGTKVEIK
(L-D2)配列番号105のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(L-D3)配列番号105のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(H-E1)配列番号106のアミノ酸配列
配列番号106:QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVADISYDGSEKYYADSVKGRFTIYRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDFGGDNTAMVEYFFDFWGQGTLVTVSS
(H-E2)配列番号106のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(H-E3)配列番号106のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(L-E1)配列番号107のアミノ酸配列
配列番号107:DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYSPTFGQGTKVEIK
(L-E2)配列番号107のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(L-E3)配列番号107のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(H-F1)配列番号108のアミノ酸配列
配列番号108:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMHWVRQATGKGLEWVSAIGTAGDTYYPGSVKGRFTISRENAKNSLYLQMNSLRAGDTAVYYCARADPYQLLGQHYYYGMDVWGQGTTVTVSS
(H-F2)配列番号108のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(H-F3)配列番号108のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
(L-F1)配列番号109のアミノ酸配列
配列番号109:EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPLITFGQGTRLEIK
(L-F2)配列番号109のアミノ酸配列に対して、70%以上の同一性を有するアミノ酸配列
(L-F3)配列番号109のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および/または付加されたアミノ酸配列
参考文献5:Ed Harlow et.al., “Antibodies :A Laboratory Manual”, Cold Spring Harbor Laboratory(1988)
参考文献6:G. KOHLER, et.al., “Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity”, Nature, 1975, volume 256, pages495-497
本発明は、SARS2のSタンパク質のACE2への結合能を増強する抗体の誘導能を低減しうる変異ポリペプチドを提供する。本発明の変異ポリペプチドは、前記本発明のSpikeタンパク質の変異体の部分配列を有する部分ポリペプチドを含み、前記部分ポリペプチドは、前記変異体における、少なくとも1つの変異アミノ酸を含む。本発明の変異ポリペプチドは、前記本発明の変異タンパク質の部分配列を有する部分ポリペプチドを含み、かつ前記変異アミノ酸を含むことが特徴であり、その他の構成および条件は特に制限されない。本発明の変異ポリペプチドは、ワクチンの有効成分として用いた際に、SARS2のSタンパク質のACE2タンパク質への結合能を増強する抗体の誘導能を低減しうる。本発明の変異ポリペプチドは、前記本発明の変異タンパク質の説明を援用できる。
本発明は、前記本発明の変異タンパク質および/または前記本発明の変異ポリペプチドをコードする核酸を提供する。本発明の核酸は、前記本発明のSpikeタンパク質の変異体をコードする核酸分子および/または前記本発明の変異ポリペプチドをコードする核酸分子を含む。本発明の核酸は、前記本発明のSpikeタンパク質の変異体をコードする核酸分子および/または前記本発明の変異ポリペプチドをコードする核酸分子を含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の核酸は、前記変異タンパク質および/または変異ポリペプチドをコードする核酸分子を含むため、ワクチンの有効成分として用いた際に、SARS2のSタンパク質のACE2タンパク質への結合能を増強する抗体の誘導能を低減しうる。本発明の核酸は、前記本発明の変異タンパク質および変異ポリペプチドの説明を援用できる。
本発明は、前記本発明の変異タンパク質および/または前記本発明の変異ポリペプチドをコードする発現ベクターを提供する。本発明の発現ベクターは、本発明の核酸を含む。本発明の発現ベクターは、前記本発明の変異タンパク質、変異ポリペプチド、および核酸の説明を援用できる。本発明の発現ベクターは、前記本発明の変異タンパク質および変異ポリペプチドの遺伝子工学的手法による合成(製造)に有用である。
本発明は、前記本発明の核酸を含む、形質転換体を提供する。本発明の形質転換体は、本発明の核酸を含む。本発明の形質転換体は、前記本発明の変異タンパク質、変異ポリペプチド、および核酸の説明を援用できる。本発明の形質転換体は、前記変異タンパク質および/または変異ポリペプチドの合成(製造)に有用である。
本発明は、前記本発明の変異タンパク質および/または変異ポリペプチドの製造方法を提供する。本発明の変異タンパク質および/または変異ポリペプチドの製造方法は、特に制限されず、例えば、遺伝子工学的手法による製造があげられる。この場合、本発明の製造補法は、前記変異タンパク質および/または前記変異ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを発現させる発現工程を含む。本発明の製造方法は、前記本発明の変異タンパク質、変異ポリペプチド、核酸、発現ベクター、および形質転換体の説明を援用できる。
本発明は、SARS2のSタンパク質のACE2への結合能を増強する抗体の誘導能を低減しうる変異ウイルスを提供する。本発明のSARS-CoV-2の変異ウイルスは、前記本発明のSpikeタンパク質の変異体を含む。本発明の変異ウイルスは、前記変異タンパク質を含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の変異ウイルスは、前記Sタンパク質として、変異タンパク質を含むため、ワクチンの有効成分として用いた際に、SARS2のSタンパク質のACE2タンパク質への結合能を増強する抗体の誘導能を低減しうる。
参考文献7:Yixuan J. Hou et.al., “SARS-CoV-2 D614G variant exhibits efficient replication ex vivo and transmission in vivo”, Science, 2020, eabe8499
本発明は、SARS2のSタンパク質のACE2への結合能を増強する抗体の誘導能を低減しうるウイルス様粒子を提供する。本発明のウイルス様粒子は、前記本発明のSpikeタンパク質の変異体および/または前記本発明の変異ポリペプチドを含む。本発明のVLPは、前記変異タンパク質および/または変異ポリペプチドを含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明のVLPは、前記Sタンパク質またはその部分ポリペプチドとして、前記変異タンパク質および/または変異ポリペプチドを含むため、ワクチンの有効成分として用いた際に、SARS2のSタンパク質のACE2タンパク質への結合能を増強する抗体の誘導能を低減しうる。
参考文献8:L. Huhti et.al., “A comparison of methods for purification and concentration of norovirus GII-4 capsid virus-like particles”, Arch. Virol., 2010, vol. 155, No. 11, pages 1855-1858
本発明は、ワクチンとして使用しうる、医薬組成物を提供する。本発明の医薬組成物は、前記本発明のSpikeタンパク質の変異体、変異ポリペプチド、変異ウイルス、ウイルス様粒子、核酸、および/または発現ベクターと、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物である。本発明の医薬組成物は、有効成分として、Spikeタンパク質の変異体、変異ポリペプチド、変異ウイルス、ウイルス様粒子、核酸、および/または発現ベクター(以下、あわせて「有効成分」ともいう)を含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の医薬組成物は、有効成分として、前記変異タンパク質もしくはその部分配列を含むポリペプチド、またはこれらをコードする核酸を含むため、ワクチンの有効成分として用いた際に、SARS2のSタンパク質のACE2タンパク質への結合能を増強する抗体の誘導能を低減しうる。
変異タンパク質:1μg~10mg/1回
変異ペプチド:1μg~100mg/1回
核酸(mRNA):1μg~10mg/1回
核酸(DNA):1μg~1000mg/1回
変異ウイルス:1×106~1×1013viral particles/1回
VLP:1μg~10mg/1回
本発明は、対象に対して、SARS2に対する防御免疫を付与し、かつACE2結合増強抗体の誘導を抑制しうる方法を提供する。本発明の処置方法は、対象の処置方法であって、前記対象に、前記本発明のSpikeタンパク質の変異体、変異ポリペプチド、変異ウイルス、ウイルス様粒子、核酸、発現ベクター、および/または医薬組成物を使用する。本発明の処置方法は、有効成分である、Spikeタンパク質の変異体、変異ポリペプチド、変異ウイルス、ウイルス様粒子、核酸、および/または発現ベクター(以下、あわせて「有効成分」ともいう)を使用することが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明の処置方法は、有効成分として、前記変異タンパク質もしくはその部分配列を含むポリペプチド、またはこれらをコードする核酸を含むため、対象に対して処置した際に、SARS2のSタンパク質のACE2タンパク質への結合能を増強する抗体の誘導能を低減しうる。
本発明は、前記変異タンパク質の製造方法を提供する。本発明の方法(以下、「変異体の製造方法」ともいう)は、SARS-CoV-2のSpikeタンパク質のアンジオテンシン変換酵素2(ACE2)への結合能を増強する抗体の誘導能が低減されたSpikeタンパク質の変異体の製造方法であって、標的SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Stタンパク質)のアミノ酸配列において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を導入する変異工程を含む。本発明の変異体の製造方法は、前記変異工程において、少なくとも所定の位置のアミノ酸に変異を導入することが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明によれば、前記ACE2結合増強抗体の誘導能が低減されたSタンパク質の変異体を製造できる。
本発明は、前記変異タンパク質のスクリーニング方法を提供する。本発明の方法(以下、「スクリーニング方法」ともいう)は、SARS-CoV-2のSpikeタンパク質のアンジオテンシン変換酵素2(ACE2)への結合能を増強する抗体の誘導能が低減されたSpikeタンパク質の変異体のスクリーニング方法であって、候補SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Scタンパク質)のアミノ酸配列において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有するScタンパク質を、前記変異体として選抜する選抜工程を含む。本発明のスクリーニング方法は、前記選抜工程において、少なくとも所定の位置のアミノ酸に変異を有する候補タンパク質を選抜することが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明によれば、前記ACE2結合増強抗体の誘導能が低減されたSタンパク質の変異体をスクリーニングできる。
本発明は、SARS-CoV-2の感染増強の指標となりうる、マーカーを提供する。本発明のマーカーは、Fc受容体非依存的に、野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)のACE2タンパク質への結合性を増強する抗体(ACE2結合増強抗体)である。本発明のマーカーは、前記ACE2結合増強抗体であることが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明のマーカーによれば、SARS2への罹患の可能性等を試験できる。本発明のマーカーの具体例としては、例えば、後述の本発明の第1~第4のマーカーがあげられる。
本発明は、SARS-CoV-2の感染増強の指標となりうる、マーカーを提供する。本発明のSARS-CoV-2の感染増強マーカーは、野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する抗体である。本発明の第1のマーカーは、前記Ssタンパク質における所定の位置のアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する抗体を、感染増強のマーカーとすることが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の第1のマーカーによれば、SARS2への罹患の可能性等を試験できる。
本発明は、SARS-CoV-2の感染増強の指標となりうる、マーカーを提供する。本発明のSARS-CoV-2の感染増強マーカーは、野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)との結合について、基準抗体と競合する競合抗体であり、前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体である。本発明の第2のマーカーは、前記基準抗体と競合する競合抗体を、感染増強のマーカーとすることが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の第2のマーカーによれば、SARS2への罹患の可能性等を試験できる。
本発明は、SARS-CoV-2の感染増強の指標となりうる、マーカーを提供する。本発明のSARS-CoV-2の感染増強マーカーは、野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)に結合し、前記Swタンパク質において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有する変異タンパク質を認識しない抗体である。本発明の第3のマーカーは、前記Swタンパク質に結合し、かつ前記変異タンパク質を認識しない抗体を、感染増強のマーカーとすることが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の第3のマーカーによれば、SARS2への罹患の可能性等を試験できる。
本発明は、SARS-CoV-2の感染増強の指標となりうる、マーカーを提供する。本発明のSARS-CoV-2の感染増強マーカーは、野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)との結合について、基準抗体と競合する抗体であり、前記基準抗体は、前記Swタンパク質を認識し、前記Swタンパク質において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異を有する変異タンパク質を認識しない抗体である。本発明の第4のマーカーは、前記基準抗体と競合する競合抗体を、感染増強のマーカーとすることが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の第4のマーカーによれば、SARS2への罹患の可能性等を試験できる。
本発明は、SARS-CoV-2の感染増強の指標となりうる抗体の検出方法を提供する。本発明のSARS-CoV-2の感染増強抗体の検出方法は、被検者の生体試料について、Fc受容体非依存的に、野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)のACE2タンパク質への結合性を増強する抗体を検出する検出工程を含む。本発明の検出方法は、前記検出工程において、前記ACE2結合増強抗体を検出することが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の検出方法によれば、SARS2の感染増強に関与しうる抗体を検出できる。本発明の検出方法の具体例としては、例えば、後述の本発明の第1~第4の検出方法があげられる。
本発明は、SARS-CoV-2の感染増強の指標となりうる抗体の検出方法を提供する。本発明のSARS-CoV-2の感染増強抗体の検出方法は、被検者の生体試料について、野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体を検出する検出工程を含む。本発明の第1の検出方法は、前記検出工程において、前記Ssタンパク質における所定の位置のアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する抗体を、感染増強抗体として検出すること、すなわち、前記第1のマーカーを指標として用いることが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明の第1の検出方法によれば、SARS2の感染増強に関与しうる抗体を検出できる。
本発明は、SARS-CoV-2の感染増強の指標となりうる抗体の検出方法を提供する。本発明のSARS-CoV-2の感染増強抗体の検出方法は、被検者の生体試料について、野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)との結合について、基準抗体と競合する競合抗体を検出する検出工程を含み、前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体である。本発明の第2の検出方法は、前記検出工程において、前記基準抗体と競合する競合抗体を、感染増強抗体として検出すること、すなわち、前記第2のマーカーを指標として用いることが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明の第1の検出方法によれば、SARS2の感染増強に関与しうる抗体を検出できる。
本発明は、SARS-CoV-2の感染増強の指標となりうる抗体の検出方法を提供する。本発明のSARS-CoV-2の感染増強抗体の検出方法は、被検者の生体試料について、野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)に結合し、前記Swタンパク質において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異を有する変異タンパク質を認識しない抗体を検出する検出工程を含む。本発明の第3の検出方法は、前記検出工程において、前記Swタンパク質に結合し、かつ前記変異タンパク質を認識しない抗体を、感染増強抗体として検出すること、すなわち、前記第3のマーカーを指標として用いることが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明の第3の検出方法によれば、SARS2の感染増強に関与しうる抗体を検出できる。
本発明は、SARS-CoV-2の感染増強の指標となりうる抗体の検出方法を提供する。本発明のSARS-CoV-2の感染増強抗体の検出方法は、被検者の生体試料について、野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)との結合について、基準抗体と競合する競合抗体を検出する検出工程を含み、前記基準抗体は、前記Swタンパク質を認識し、前記Swタンパク質において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)において、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異を有する変異タンパク質を認識しない。本発明の第4の検出方法は、前記検出工程において、前記基準抗体と競合する競合抗体を、感染増強抗体として検出すること、すなわち、前記第4のマーカーを指標として用いるが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明の第4の検出方法によれば、SARS2の感染増強に関与しうる抗体を検出できる。
本発明は、SARS-CoV-2の感染増強の指標となりうる抗体の検出キットを提供する。本発明のSARS-CoV-2の感染増強抗体の検出キットは、Fc受容体非依存的に、野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)のACE2タンパク質への結合性を増強する抗体の検出試薬を含む。本発明の検出キットは、前記ACE2結合増強抗体の検出試薬を含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明のキットによれば、SARS2の感染増強に関与しうる抗体を検出できる。本発明の検出キットの具体例としては、例えば、後述の第1~第2の検出キットがあげられる。本発明の検出キットの構成部材が1つの場合、本発明の検出キットは、例えば、検出試薬ということもできる。また、本発明の検出キットは、試験キットまたは診断キットということもできる。
本発明は、SARS-CoV-2の感染増強の指標となりうる抗体の検出キットを提供する。本発明のSARS-CoV-2の感染増強抗体の検出キットは、野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)またはそのN末端ドメインと、前記Swタンパク質において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異が導入された変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、を含む。本発明の第1の検出キットは、前記Swタンパク質および前記変異タンパク質を含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の第1のキットによれば、SARS2の感染増強に関与しうる抗体を検出できる。
本発明は、SARS-CoV-2の感染増強の指標となりうる抗体の検出キットを提供する。本発明のSARS-CoV-2の感染増強抗体の検出キットは、野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)またはそのN末端ドメインと、基準抗体とを含み、前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体である。本発明の第2の検出キットは、前記Swタンパク質および前記基準抗体を含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の第2のキットによれば、SARS2の感染増強に関与しうる抗体を検出できる。
本発明は、SARS-CoV-2の感染のしやすさ(罹患の可能性)を試験する方法を提供する。本発明の方法は、SARS-CoV-2への感染しやすさの試験方法であって、被検者の生体試料について、Fc受容体非依存的に、野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)のACE2タンパク質への結合性を増強する抗体を測定する測定工程を含む。本発明の試験方法は、前記測定工程において、前記ACE2結合増強抗体を測定することが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の試験方法によれば、SARS2の感染のしやすさを試験できる。本発明の試験方法の具体例としては、例えば、後述の本発明の第1~第4の試験方法があげられる。
本発明は、SARS-CoV-2の感染のしやすさ(罹患の可能性)を試験する方法を提供する。本発明の方法は、SARS-CoV-2への感染しやすさの試験方法であって、被検者の生体試料について、野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体を測定する測定工程を含む。本発明の第1の試験方法は、前記測定工程において、前記Ssタンパク質における所定の位置のアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する抗体を、感染増強抗体として測定することが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明の第1の試験方法によれば、SARS2の感染のしやすさを試験できる。
本発明は、SARS-CoV-2の感染のしやすさ(罹患の可能性)を試験する方法を提供する。本発明の方法は、SARS-CoV-2への感染しやすさの試験方法であって、被検者の生体試料について、野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)との結合について、基準抗体と競合する競合抗体を測定する測定工程を含み、前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体である。本発明の第2の試験方法は、前記測定工程において、前記基準抗体と競合する競合抗体を、感染増強抗体として測定することが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明の第2の試験方法によれば、SARS2の感染のしやすさを試験できる。
本発明は、SARS-CoV-2の感染のしやすさ(罹患の可能性)を試験する方法を提供する。本発明の方法は、SARS-CoV-2への感染しやすさの試験方法であって、
被検者の生体試料について、野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)に結合し、前記Swタンパク質において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異を有する変異タンパク質を認識しない抗体を測定する測定工程を含む。本発明の第3の試験方法は、前記測定工程において、前記Swタンパク質に結合し、かつ前記変異タンパク質を認識しない抗体を、感染増強抗体として測定することが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明の第3の試験方法によれば、SARS2の感染のしやすさを試験できる。
本発明は、SARS-CoV-2の感染のしやすさ(罹患の可能性)を試験する方法を提供する。本発明の方法は、SARS-CoV-2への感染しやすさの試験方法であって、被検者の生体試料について、野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)との結合について、基準抗体と競合する競合抗体を測定する測定工程を含み、前記基準抗体は、前記Swタンパク質を認識し、 前記Swタンパク質において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)において、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異を有する変異タンパク質を認識しない。本発明の第4の試験方法は、前記測定工程において、前記基準抗体と競合する競合抗体を、感染増強抗体として測定することが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明の第4の試験方法によれば、SARS2の感染のしやすさを試験できる。
本発明は、SARS-CoV-2の重症化を抑制しうる方法を提供する。本発明のSARS-CoV-2の重症化の抑制方法(以下、「抑制方法」ともいう)は、被検者の生体試料から前記被検者のSARS-CoV-2の感染増強の可能性を試験する試験工程と、前記試験工程において、感染増強の可能性があると評価された被検者に対して、SARS-CoV-2の治療薬を投与する投与工程とを含み、前記試験工程は、本発明の第1~第4の試験方法により実施される。本発明の抑制方法は、前記試験工程が、本発明の第1~第4の試験方法により実施されることが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明の抑制方法によれば、SARS2感染者の重症化を抑制しうる。
本発明は、感染増強抗体を低減しうる低減剤を提供する。本発明は、SARS-CoV-2のSpikeタンパク質のアンジオテンシン変換酵素2(ACE2)への結合能を増強する抗体の低減剤(以下、「低減剤」ともいう)であって、野生型Spikeタンパク質(Swタンパク質)またはそのN末端ドメインを含む。本発明の低減剤は、前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインを含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の低減剤によれば、例えば、血液中の感染増強抗体を低減できる。
本発明は、感染増強抗体を低減しうる方法を提供する。本発明の方法は、SARS-CoV-2のSpikeタンパク質のアンジオテンシン変換酵素2(ACE2)への結合能を増強する抗体の低減方法(以下、「低減方法」という)であって、生体試料と、前記本発明の低減剤とを接触させることにより、前記生体試料における前記抗体を低減する低減工程を含む。本発明の低減方法は、前記Swタンパク質またはそのNTDを含む低減剤と、前記生体試料とを接触させることで、前記生体試料における前記抗体を低減することが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明の低減方法によれば、生体試料中の感染増強抗体を低減できる。
SARS-CoV-2の抗NTD抗体が、SARS2のSタンパク質のACE2への結合性を高めることを確認した。
SARS2に結合する抗体を、下記参考文献9および10に記載されている、SARS2のSタンパク質に結合する100種類の抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列に基づき、抗体サンプルを調製した。具体的には、各抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域をコードする遺伝子を、分泌型ヒトIgG1定常領域(Genbank Accession No.:ARA90394(タンパク質)、KY432415(mRNA))の部分配列(配列番号110)をコードする遺伝子(配列番号111)、またはヒトκ定常領域(Genbank Accession No.:CAC20459(タンパク質)、AJ294735(mRNA))の部分配列(配列番号112)をコードする遺伝子(配列番号113)と機能的に連結し、これを、プラスミドベクター(pCAGGS)にクローニングした。これにより、SARS-CoV-2のスパイクタンパク質に結合する100種類の抗体サンプルの発現ベクターを調製した。なお、各抗体のクローン名は、下記参考文献9および10の記載にしたがって付している。
参考文献9:Chi X. et.al., “A neutralizing human antibody binds to the N-terminal domain of the Spike protein of SARS-CoV-2.” Science, 2020, vol. 369, pages 650-655, doi:10.1126/science.abc6952
参考文献10:SJ, Zost. et al. “Rapid isolation and profiling of a diverse panel of human monoclonal antibodies targeting the SARS-CoV-2 spike protein.” Nat. Med., 2020, vol. 26, No. 9, pages 1422-1427, doi: 10.1038/s41591-020-0998-x.
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
5'-GCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA-3'
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5'-GCtGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG-3'
回収した培養上清中の各抗体サンプルについて、プロテインAを用いて精製した。具体的には、100μlの培養上清をリン酸緩衝生理食塩水(PBS)で10倍希釈したサンプルを、Profinia(Bio Rad社製)を用い、アフィニティークロマトグラフにより精製した。前記アフィニティークロマトグラフでは、プロテインAを含むカラム(Bil-Scale mini UNO Sphere SUPrA Cartridege、Bio Rad社製)を使用した。そして、前記サンプルを前記カラムに供し、前記回収した培養上清中の各抗体と前記カラム中のプロテインAとを反応させた。反応後の前記カラムを、PBSで、1回洗浄した。そして、0.1mol/l Glycine-HCl(pH2.8)を添加し、前記カラムからSARS2のSタンパク質に結合する抗体を回収した。
前記各抗体をコードする遺伝子に代えて、SARS2のSタンパク質の全長配列(Ssタンパク質(配列番号1))をコードする遺伝子(配列番号2)についてコドン最適化したSsタンパク質のコード遺伝子(配列番号114)、SARS2のSsタンパク質のNTD領域(GenBank Accession No.:NC_045512.2の14~333番目のアミノ酸配列(配列番号3))をコードする遺伝子(配列番号115)、SARS2のSsタンパク質のRBD領域(GenBank Accession No.:NC_045512.2の335~587番目のアミノ酸配列(配列番号4))をコードする遺伝子(配列番号116)、またはSARS2のSsタンパク質のS2領域(GenBank Accession No.:NC_045512.2の588~1219番目のアミノ酸配列(配列番号5))をコードする遺伝子(配列番号117)を用い、プラスミドベクターとして、pME18sを用いた以外は前記実施例1(1)と同様にして、SARS2のSsタンパク質発現ベクター(全長、NTD領域、RBD領域、またはS2領域)を調製した。前記各発現ベクターを293T細胞にトランスフェクションし、全長SARS2のSsタンパク質発現細胞(全長Sタンパク質発現細胞)、SARS2のSsタンパク質NTD領域発現細胞(SARS2-NTD発現細胞)、SARS2のSsタンパク質RBD領域発現細胞(SARS2-RBD発現細胞)、およびSARS2のSsタンパク質S2領域発現細胞(SARS2-S2発現細胞)を作成した。以下の実験で用いる293T細胞、HEK293細胞、HEK293T細胞は、いずれもFc受容体を発現していないことが知られている。このため、以下の知見は、Fc受容体非依存的なメカニズムで生じる現象といえる。なお、各タンパク質のN末端には、シグナル配列とFlagタグと(MRAWIFFLLCLAGRALAASDYKDDDDKLE(配列番号118)を付加した。以下の実施例において、変異タンパク質は、類似の配列を持つSタンパク質(Ssタンパク質)をコードする遺伝子からQuickChangeマルチ変異誘発キット(Agilent Technologies社製)を使用して合成した。また、以下の実施例で用いるSタンパク質(Swタンパク質)としては、Ssタンパク質のアミノ酸配列を用いた。
5'-ATGTTCGTTTTCCTCGTACTGCTCCCTCTCGTGAGCAGCCAATGTGTGAATTTGACTACCCGCACACAACTTCCGCCAGCGTATACAAATTCCTTCACGCGAGGGGTATACTATCCCGATAAAGTTTTTCGATCCTCCGTGCTGCATTCAACACAAGATTTGTTTCTCCCATTTTTTAGTAATGTCACCTGGTTCCATGCCATCCACGTAAGCGGCACTAATGGGACCAAACGCTTCGATAACCCGGTCTTGCCCTTTAATGACGGCGTGTACTTCGCCAGCACTGAGAAAAGCAATATTATCAGAGGTTGGATTTTCGGCACGACCCTTGATAGCAAGACGCAGAGCCTGCTCATTGTCAACAATGCCACCAATGTAGTAATTAAGGTCTGCGAATTTCAATTCTGCAATGACCCCTTTTTGGGTGTGTACTACCACAAAAACAATAAAAGCTGGATGGAGTCTGAGTTTCGAGTGTATTCCTCAGCAAATAACTGCACCTTTGAATATGTGTCTCAGCCATTTCTCATGGATTTGGAAGGCAAACAAGGGAACTTCAAAAACCTCAGGGAGTTCGTCTtcaaaaatatcgatggttattttaagatttattctaagcacacgcctatcaacctGGTGCGCGACCTCCCGCAAGGCTTCTCCGCACTGGAGCCTCTTGTCGATCTGCCCATCGGCATCAATATTACCAGGTTTCAGACGCTTCTGGCCCTGCATCGGAGTTATCTTACCCCCGGAGACTCCTCTAGCGGTTGGACAGCAGGCGCTGCGGCTTACTACGTGGGATATCTCCAGCCGCGAACATTTCTCTTGAAATACAATGAGAATGGTACCATCACGGATGCAGTCGACTGCGCGTTGGACCCACTCTCCGAAACCAAATGCACTTTGAAATCATTCACAGTAGAAAAGGGAATATACCAGACTTCAAATTTTAGGGTCCAGCCTACCGAATCCATTGTCAGGTTTCCCAATATCACGAATTTGTGCCCGTTCGGAGAAGTCTTTAATGCGACGAGATTTGCCAGTGTATATGCATGGAATAGAAAGCGCATCTCCAACTGTGTAGCTGATTACTCTGTGCTGTATAACTCAGCTTCTTTCAGTACTTTCAAGTGTTACGGGGTGTCTCCAACAAAGCTTAATGATTTGTGTTTTACGAATGTGTATGCAGACTCATTTGTGATTCGGGGGGACGAGGTGCGCCAGATTGCACCAGGGCAGACGGGGAAAATTGCTGACTATAACTACAAGCTCCCCGACGATTTCACAGGCTGCGTCATAGCCTGGAATAGCAATAATCTGGATAGTAAGGTAGGCGGCAATTACAATTATCTGTATCGCCTTTTTAGAAAGTCCAACCTTAAACCATTTGAGAGGGACATAAGCACGGAAATATATCAAGCGGGGTCCACACCTTGCAATGGGGTCGAAGGATTCAACTGTTACTTCCCGTTGCAGTCCTATGGGTTCCAGCCGACTAACGGAGTTGGATATCAGCCCTACCGCGTGGTTGTACTTAGTTTCGAGCTGCTTCACGCTCCGGCTACTGTATGCGGACCTAAAAAATCCACCAACCTCGTAAAGAATAAGTGCGTAAACTTTAACTTCAATGGACTTACGGGGACCGGTGTCTTGACTGAGTCTAATAAAAAATTCCTCCCGTTCCAACAATTTGGGCGGGACATTGCAGACACCACGGACGCTGTAAGAGATCCTCAGACTCTTGAAATACTTGATATTACGCCCTGTTCATTCGGTGGAGTCTCTGTCATTACGCCGGGAACTAATACATCAAACCAAGTCGCGGTTCTCTACCAGGACGTAAACTGTACCGAAGTCCCTGTCGCGATCCATGCAGACCAGCTGACGCCAACTTGGCGGGTTTATAGTACCGGTTCAAATGTATTCCAAACCCGCGCCGGGTGTCTCATTGGCGCCGAACATGTGAATAATTCCTACGAATGCGACATACCCATAGGAGCAGGGATCTGCGCAAGCTATCAGACACAGACAAACTCCCCACGGCGAGCGAGGTCTGTTGCCAGTCAAAGTATCATAGCGTATACTATGAGCCTCGGAGCTGAGAACtccgtggcctatTCCAACAACTCAATTGCGATCCCTACAAACTTTACTATTAGCGTGACTACCGAGATCCTTCCTGTATCAATGACAAAAACGAGCGTGGACTGTACTATGTATATTTGCGGTGATTCCACAGAATGCTCTAACCTTCTCCTTCAGTACGGGAGCTTCTGCACACAACTGAACCGGGCTTTGACCGGCATCGCGGTTGAGCAGGATAAAAATACGCAGGAAGTATTTGCGCAAGTCAAACAAATATATAAAACACCTCCAATTAAAGATTTCGGTGGATTTAATTTCTCACAGATTCTTCCGGACCCGTCTAAGCCGAGTAAGCGGTCCTTTATTGAGGATTTGCTTTTCAACAAAGTCACCTTGGCTGACGCTGGCTTTATAAAGCAATACGGGGACTGCCTTGGGGACATCGCAGCACGCGATCTGATTTGCGCACAAAAATTTAATGGGTTGACAGTGCTTCCTCCGCTTCTGACCGACGAGATGATAGCCCAGTATACTAGTGCGCTTCTCGCAGGCACGATTACTTCAGGTTGGACATTCGGGGCAGGTGCAGCCCTGCAAATTCCGTTCGCGATGCAAATGGCGTACCGGTTTAACGGAATAGGCGTGACACAAAACGTGCTCTATGAGAACCAAAAACTGATTGCCAACCAATTCAACAGTGCTATAGGGAAAATCCAGGACTCTCTCTCCAGTACTGCCTCCGCATTGGGAAAATTGCAAGACGTTGTAAACCAGAATGCTCAGGCGCTGAATACGTTGGTCAAACAGCTCAGTAGTAACTTTGGGGCTATAAGCAGTGTTCTTAATGATATTCTTTCTCGGCTCGATAAGGTTGAGGCAGAAGTCCAAATCGACCGACTTATTACTGGGAGATTGCAATCACTGCAAACATACGTAACACAACAACTCATCCGCGCGGCAGAGATACGAGCGTCAGCAAACCTGGCAGCGACCAAGATGAGCGAGTGCGTGCTCGGTCAGTCAAAGCGCGTGGACTTTTGTGGGAAGGGTTATCATCTCATGTCATTTCCACAATCCGCGCCACATGGGGTAGTCTTTTTGCACGTAACATACGTACCAGCGCAAGAAAAGAATTTTACCACGGCACCAGCAATTTGCCACGATGGGAAGGCTCACTTCCCGCGGGAGGGGGTGTTTGTTAGCAATGGTACGCATTGGTTTGTTACTCAACGCAACTTTTACGAGCCGCAAATCATTACGACAGATAATACATTTGTATCAGGTAACTGTGACGTGGTAATCGGCATTGTAAATAATACTGTTTATGACCCATTGCAGCCAGAACTTGATTCCTTTAAAGAGGAGCTGGATAAGTACTTTAAAAACCACACCTCACCAGACGTTGACTTGGGCGACATCTCAGGAATAAATGCCTCAGTCGTGAATATACAAAAGGAGATTGATAGACTTAATGAAGTTGCCAAAAACCTCAACGAATCCCTCATAGATCTGCAAGAGTTGGGCAAATACGAGCAATATATTAAATGGCCCTGGTATATTTGGTTGGGGTTCATCGCTGGGCTTATAGCGATTGTTATGGTTACCATCATGCTTTGTTGCATGACAAGTTGTTGCTCATGCCTTAAGGGTTGCTGCAGCTGTGGCTCATGCTGC[AAGTTCGACGAAGACGATTCAGAACCAGTACTCAAGGGGGTCAAATTGCATTATACTtag]-3'
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下記参考文献11および12に記載の方法に従って、hACE2-マウスIgG2a Fc融合タンパク質をコードするACE2-Fc融合タンパク質発現ベクターを調製した。前記各抗体の発現ベクターに代えて、ACE2-Fc融合タンパク質発現ベクターを用いた以外は前記実施例1(1)と同様にして、ACE2-Fc融合タンパク質発現細胞を調製し、培養上清を回収した。そして、前記抗体サンプルの培養上清に代えて、ACE2-Fc融合タンパク質発現細胞の培養上清を用いた以外は前記実施例1(2)と同様にして、ACE2-Fc融合タンパク質を精製した。精製したACE2-Fc融合タンパク質を、スルホ-NHS-LC-ビオチン(Thermo Fisher Scientific社製)を用いてビオチン化し、ビオチン化ACE2-Fc融合タンパク質を調製した。
参考文献11:Hirayasu K et.al. “Microbially cleaved immunoglobulins are sensed by the innate immune receptor LILRA2.”, Nat. Microbiol. 2016, Vol. 1, Article number:16054
参考文献12:Satoh T et.al., “PILRα is a herpes simplex virus-1 entry coreceptor that associates with glycoprotein”, B. Cell., 2008, vol. 132, pages 935-944
前記実施例1(3)の全長Ssタンパク質発現細胞、SARS2-NTD発現細胞、SARS2-RBD発現細胞、またはSARS2-S2発現細胞に、前記実施例1(1)の各抗体のサンプル(終濃度3μg/ml)を10μl添加した。そして、得られた反応液を、4℃で30分間インキュベートし、反応させた。前記反応後、得られた反応液にAPC標識抗マウスIgG抗体を添加して染色し、得られた細胞をフローサイトメーター(Atune(商標)、Thermo Fisher Scientific社)を用いて解析した。これにより、各抗体のSsタンパク質における認識部位を確認した。コントロールは、前記抗体サンプルを添加しなかった以外は同様にして測定した。そして、コントロールにおける測定値(MFI)を基準とし、各抗体サンプルにおける測定値(MFI)を補正した。なお、フローサイトメトリーデータの分析は、FlowJo version 10.7(BD Biosciences社製)を使用した(以下、同様)。
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つぎに、上記各クローンと、NTD領域に結合するもののACE2への結合能の増強活性が弱いクローン2016およびクローン4A8とについて、所定濃度(0、0.1、0.3、1、3または10μg/ml)となるように、各抗体を添加した以外は、前記実施例1(5)と同様に、ACE2との結合を確認した。なお、クローン2016およびクローン4A8については、前記参考文献9および10に記載のアミノ酸配列に基づき、前記実施例1(1)および(2)と同様に調製した。以下、他の抗体クローンについても、特に言及がない限り同様に、前記参考文献9および10に記載のアミノ酸配列に基づき調製している。これらの結果を図2に示す。
つぎに、上記のうち5クローン(クローン2369、クローン2490、クローン2582、クローン8D2)と、ACE2への結合能の増強活性が弱いクローン4A8とについて、3μg/mlとなるように、各抗体を添加し、さらに、中和抗体であるクローンC144(抗RBD抗体)を、所定濃度(0、0.1、0.3、1、3または10μg/ml)となるように添加した以外は、以外は、前記実施例1(6)と同様に、ACE2との結合を確認した。これらの結果を図3に示す。
Sタンパク質のACE2への結合性を増強する抗体が、SARS2の感染増強作用を示すことを確認した。
クローン2369、クローン2490、クローン抗体2582、およびクローン8D2は、前記実施例1(1)と同様にして調製した。
SARS2の全長Ssタンパク質を発現する遺伝子を、pME18sプラスミドにクローニングし、SARS2の全長Ssタンパク質発現ベクターを得た。その後、前記SARS2の全長Ssタンパク質発現ベクターを293T細胞に一過性にトランスフェクションし、SARS2の全長Ssタンパク質発現細胞を作成した。前記トランスフェクションの24時間後、培地を新しい培地に交換し、GFPレポーター遺伝子を組み込んだVSV-G欠損水疱性口内炎ウイルス(vesicular stomatitis virus:VSV)を添加し、2時間インキュベートして前記細胞にウイルスを感染させた。つぎに、前記細胞の培地を、FBSを含まないDMEM培地で洗浄した。そして、10%FBS添加DMEMを添加し、37℃、5%CO2の条件で48時間培養した。前記培養後、SARS2の全長Ssタンパク質を含むシュードタイプウイルスを含む上清を回収し、分注後に、使用時まで-80℃で保存した。
ヒトACE2(GenBank Accession No.: NP_001358344.1(配列番号6))のコーディング領域(GenBank Accession No.: NM_001371415.1の50~2467番目の塩基配列)をコードするポリヌクレオチド(配列番号7)を、pMXsベクターにクローニングし、ヒトACE2発現ベクターを作成した。ポリエチレンイミン(PEI; Polysciences社製)を使用し、前記ヒトACE2発現ベクターと、amphotropicウイルスのエンベロープタンパク質発現ベクターとをPlatE細胞にトランスフェクションし、48時間培養することにより、レトロウイルスを発現させた。前記培養後、前記レトロウイルスを含む培養上清を回収した。前記培養上清と、DOTAPリポソームトランスフェクション試薬(Roche社製)とプレミックスした後、2400rpm、32℃、2時間の条件で、HEK293T細胞にスピントランスフェクション後、3日間培養した。前記培養後、回収した細胞を蛍光標識した抗ACE2抗体(R&D Systems社製)を用いて染色し、前記染色後の細胞について、SH800Sセルソーター(ソニー社製)でACE2陽性細胞を選別し、ACE2恒常発現細胞を得た。
前記ACE2恒常発現細胞を、96ウェルプレートに20000cell/wellとなるように播種し、SARS2の全長Ssタンパク質を含むシュードタイプウイルスを10μl添加した。つぎに、前記実施例2(1)で調製した抗NTD抗体(クローン2369、クローン2490、クローン抗体2582、クローン8D2、またはクローン4A2)を、所定濃度(0、0.03、0.01、0.1、1、または10μg/mlとなるように添加し、37℃、24時間の条件でインキュベートした。これにより、前記細胞にシュードタイプウイルスを感染させた。前記インキュベート後、BD FACSVerse(商標)フローサイトメーターにより、GFPシグナルを検出することにより、シュードタイプウイルスの感染を検出した。参考例は、抗NTD抗体に代えて、Ssタンパク質のACE2への結合増強能のない抗NTD抗体(クローン4A2)を使用した以外は同様とした。さらに、コントロールは、抗NTD抗体を添加しなかった以外は同様にして実施した。そして、コントロールにおけるシュードタイプウイルスの感染量または感染割合を基準とし、各抗体における感染細胞の割合の相対値を算出した。これらの結果を図4に示す。
つぎに、Ssタンパク質のACE2への結合性を増強する抗体が、SARS2の感染増強能を有するかを確認した。まず、SARS2としては、神奈川県衛生研究所で取得された、SARS2のKNG19-020株を利用した。具体的には、SARS2のウイルスストックは、TMPRSS2を発現するVeroE6細胞を用いて増幅した。得られたウイルスストック(6.25 log TCID50)を2%FBS含有DMEM培地で100倍に希釈し、1×105細胞/mlの感染対象細胞と混合した。前記混合時にあわせて、クローン2490の終濃度が、1μg/mlとなるように添加した。前記感染対象細胞としては、HEK293細胞、前述のヒトACE2を発現するHEK293細胞、およびヒトACEを発現するHuh7細胞を用いた。前記混合後、37℃、5%CO2、湿潤条件下で3時間培養した。前記培養後、DMEMで細胞を洗浄することによりウイルスを除去した。前記ウイルスの除去後、さらに、前記培養条件で2日間培養した。そして、培養後の培養上清を回収し、ウイルスRNA回収キット(QIAamp viral RNA extraction kit、Qiagen社製)を用いて、前記培養上清からウイルスRNAを抽出した。そして、得られたRNAおよび下記N2プライマーセットを用いて、定量的PCRを実施することにより、培養上清中のウイルスのコピー数を測定した。これらの結果を、図5に示す。
フォワードプライマー(配列番号119)
5'-AGCCTCTTCTCGTTCCTCATCAC-3'
リバースプライマー(配列番号120)
5'-CCGCCATTGCCAGCCATTC-3'
Sタンパク質のACE2への結合性を増強する抗体が、Sタンパク質への結合において競合することを確認した。
クローン2210、クローン2369、クローン2490、クローン2582、クローン2660、およびクローン8D2は、前記実施例1(1)と同様にして調製した(競合抗体)。また、定常領域について、ヒトIgG1に代えて、マウスIgG2aを用いた以外は、同様にして各クローンの定常領域がmIgG2aである抗体を調製した(バインダー抗体)。また、コントロールの競合抗体として、S2領域に結合するクローン2147抗体を同様にして調製した。
前記実施例1(3)のSARS2の全長Ssタンパク質およびGFPの遺伝子を導入した細胞に、前記実施例3(1)の6種類の抗NTD抗体(競合抗体)またはコントロールの抗体を添加し、さらに前記実施例3(1)で調製した、定常領域がマウスIgG2aである6種類の抗NTD抗体(バインダー抗体)をそれぞれ添加した。各抗体の濃度は、10μg/mlとした。前記添加後、4℃、30分間の条件でインキュベートした。前記インキュベート後、各細胞を、APC標識抗マウスIgG抗体で染色した。コントロールは、前記バインダー抗体に代えて、前記実施例1(4)で得られたビオチン化ACE2-Fc融合タンパク質を2.7μg/mlとなるように添加し、その後APC標識ストレプトマイシンで染色した以外は、同様にして実施した(ACE2)。そして、コントロールにおけるコントロールの競合抗体(クローン2147とACE2との組合せ)を添加した際の蛍光強度(MFI)を約100とし、蛍光強度の相対値として算出した。これらの結果を図6に示す。
Sタンパク質のACE2への結合性を増強させる抗体のエピトープマッピングを行い、Sタンパク質における同一領域を認識していることを確認した。
感染増強抗体の認識部位を変異させた変異タンパク質を調製し、感染増強抗体が結合しなくなることを確認した。
SARS2の感染者の血清中に、感染増強抗体が存在することを確認した。
SARS2感染者血清において、抗NTD抗体価、抗RBD抗体価、ACE2結合性、および感染増強抗体価を評価し、それぞれが相関するかを確認した。
SARS2の患者(n=54、総検体数88検体)の入院時から退院時までに経時的に採取した血清から、前記実施例6と同様にして10μlの希釈血清を調製した。前記希釈血清を、前記実施例1(3)のSARS2-NTD発現細胞に添加し、反応させた。その後、APC標識抗ヒトIgG抗体で染色し、GFP陽性細胞におけるAPCの蛍光強度を前記フローサイトメーターで解析し、SARS2感染者血清における抗NTD抗体価を測定した。
SARS2-NTD発現細胞に代えて、前記実施例1(3)のSARS2-RBD発現細胞を用いた以外は、前記実施例7(1)と同様にして、SARS2感染者血清における抗RBD抗体価を測定した。
前記血清を、0.1%BSAおよび0.05%NaN3含有HANKS緩衝液により30倍に希釈し、30倍希釈血清を得た。前記実施例1(3)で得られたSARS2の全長Ssタンパク質およびGFP発現293T細胞に、10μlの前記30倍希釈血清を添加し、反応させた。前記反応後、得られた反応液に、35ng/mlとなるように、基準抗体(実施例2のバインダー抗体の8D2)を10μl加え、さらに反応させた。その後、APC標識抗マウスIgG抗体で染色し、GFP陽性細胞におけるAPCの蛍光強度を前記フローサイトメーターで解析し、感染増強抗体価を測定した。
前記実施例1(1)で得られた抗体に代えて、前記希釈血清を用いた以外は前記実施例1(5)と同様にして、前記希釈血清の存在下における、前記全長Ssタンパク質発現細胞と、ACE2の結合性を確認した。これらの結果を図11に示す。
SARS2感染後の感染増強抗体価、抗RBD抗体価、およびACE2結合性の推移を確認した。
SARS-CoV-2非感染者の血清中の抗NTD抗体価を確認した。
感染増強抗体の結合により、Sタンパク質のACE2への結合性が増強されるメカニズムを確認した。
7jjj-A, 7jjj-D, 7jji--A, 7jji-B, 7jji-C, 7jjj-B, 7jjj-E, 7jjj-C, 7jjj-F, 6xr8-A, 6xr8-B, 6xr8-C, 6zge-A, 6zge-B, 6zge-C, 6zgi-A, 6zgi-B, 6zgi-C, 6zgh-C, 7a94-B, 7a94-C, 6zgh-B, 6zoz-A, 6zoz-B, 6zoz-C, 7a93-C, 6zgg-A, 6zgg-C, 7a95-B, 7a97-C, 7a96-C, 6xlu-B, 6xlu-C, 6zp2-A, 6zp2-B, 6zp2-C, 6xlu-A, 6xM5-A, 6xM5-B, 7c21-B, 6zxn-B, 6zxn-B, 6zxn-C, 7c21-C, 6xM4-C, 6xM3-C, 6xM3-A, 6xM0-A, 6xM4-A, 7cn9-C, 6xm5-C, 6xey-A, 6xey-B, 6xm0-C, 6xey-C, 6zp0-A, 6zp0-B, 6zp0-C, 7cai-C, 6zoy-A, 6zoy-B, 6zoy-C, 6x6p-A, 6x6p-B, 6x6p-C, 6zox-A, 6zox-B, 6zox-C, 6zp1-A, 6zp1-B, 6zp1-C, 7cn9-B, 6xf5-A, 6xf5-B, 6xf5-C, 7chh-C, 7byr-B, 6z97-A, 7chh-B, 6xf6-A, 6z43-B, 6zhd-B, 6xf6-C, 6z43-C, 6z97-C, 6zhd-C, 6zwv-A, 6zwv-B, 6zwv-C, 7jzl-A, 7jzn-A, 6xkl-B, 6xkl-C, 6vsb-B, 6vsb-C, 7byr-C, 6vxx-A, 6vxx-B, 6vxx-C, 6x29-A, 6x29-B, 6x29-C, 6x2c-A, 6x2c-B, 6x2c-C, 6vyb-A, 6x2a-A, 6x2b-A, 6xcM-A, 6x2a-C, 6vyb-C, 6wps-A, 6wps-B, 6wps-E, 6wpt-C, 6x79-A, 6x79-B, 6x79-C, 6wpt-A, 6zow-C, 6zp5-B, 6zp7-B, 6zow-B, 6zp5-C, 6zp7-C, 6zgh-A
7a94-A, 7a93-A, 7a93-B, 6zgg-B, 7a95-C, 7a95-A, 7a97-B, 7a98-A, 7a98-B, 7a98-C, 7a96-A, 7a96-B, 7a97-A, 6zxn-A, 6xm3-B, 6xm4-B, 6xm0-B, 7c21-A, 7cak-A, 7cak-B, 7cak-C, 7cai-A, 7cai-B, 7cn9-A, 7chh-A, 6wpt-B, 6zow-A, 6xs6-C, 6xs6-A, 6xs6-B, 6zdh-A, 6zdh-B, 6zdh-C, 6z97-B, 6zp5-A, 6zp7-A, 6z43-A, 6zhd-A, 7jzn-C, 6xcm-B, 6xcm-C, 6xcn-A, 6xcn-C, 6xcn-E, 7jzl-C, 7jzn-B, 7jzl-B, 6xkl-A, 6vsb-A, 7byr-A, 6vyb-B, 6x2b-B, 6x2b-C, 6x2a-B, 6xf6-B
感染増強抗体の認識部位に変異を導入することにより、対象に投与した際に、感染増強抗体の誘導能が抑制されることを確認した。
Sタンパク質における感染増強抗体の認識部位のアミノ酸は、Sタンパク質のACE2への結合を抑制していることを確認した。
前記Ssタンパク質における感染増強抗体の認識部位のアミノ酸(64W、66H、187K、213V、214R)のいずれか1つのアミノ酸をアラニン置換した変異タンパク質を発現させた以外は、前記実施例1(2)と同様にして変異タンパク質発現細胞を調製した。
得られた変異タンパク質発現細胞を用い、抗体を添加しなかった以外は、前記実施例1(5)と同様にして、ACE2への結合性を測定した。
前記Ssタンパク質における感染増強抗体の認識部位のアミノ酸(64W、66H、187K、213V、214R)のいずれか1つのアミノ酸をアラニン置換した変異タンパク質を発現させた以外は、前記実施例2(2)と同様にして、変異タンパク質を発現するシュードタイプウイルスを調製した。また、コントロールとして、Ssタンパク質を発現するシュードタイプウイルスを調製した。
つぎに、前記実施例12(3)で調製したシュードタイプウイルスを用いた以外は、前記実施例2(4)と同様にして、ACE2恒常発現細胞への感染実験を行ない、感染細胞の割合を測定した。これらの結果を図16に示す。
感染増強抗体がSタンパク質に結合することにより、Sタンパク質のコンフォメーションが変化し、ACE2の結合性が増強されることを確認した。
下記参考文献13に記載のS-R/PP/x1変異体は、Sタンパク質内でジスルフィド結合が形成されるため、RBD領域がクローズ(RBD-down)の状態で固定され、オープン(RBD-up)な状態にはならないことが知られている。そこで、前記S-R/PP/x1変異体を用いて、前記感染増強抗体が、Sタンパク質のコンフォメーションを変化させることにより、ACE2の結合性を増強していることを確認した。具体的には、まず、下記配列番号121のアミノ酸配列からなる野生型Sタンパク質をコードするポリヌクレオチド(配列番号122)を用いた以外は、前記実施例1(3)と同様にして、野生型Sタンパク質を発現する細胞を調製した。また、前記野生型Sタンパク質発現細胞において、S383C、D985C、K986P、およびV987Pのアミノ酸変異が導入された変異タンパク質を発現する細胞を調製した。
参考文献13:Xiaoli Xiong et.al., “A thermostable, closed SARS-CoV-2 spike protein trimer”, Nature Structural & Molecular Biology, vol. 27, pages 934-941
MFVFLVLLPLVSSQCVNLTTRTQLPPAYTNSFTRGVYYPDKVFRSSVLHSTQDLFLPFFSNVTWFHAIHVSGTNGTKRFDNPVLPFNDGVYFASTEKSNIIRGWIFGTTLDSKTQSLLIVNNATNVVIKVCEFQFCNDPFLGVYYHKNNKSWMESEFRVYSSANNCTFEYVSQPFLMDLEGKQGNFKNLREFVFKNIDGYFKIYSKHTPINLVRDLPQGFSALEPLVDLPIGINITRFQTLLALHRSYLTPGDSSSGWTAGAAAYYVGYLQPRTFLLKYNENGTITDAVDCALDPLSETKCTLKSFTVEKGIYQTSNFRVQPTESIVRFPNITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVCPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNFNFNGLTGTGVLTESNKKFLPFQQFGRDIADTTDAVRDPQTLEILDITPCSFGGVSVITPGTNTSNQVAVLYQDVNCTEVPVAIHADQLTPTWRVYSTGSNVFQTRAGCLIGAEHVNNSYECDIPIGAGICASYQTQTNSPRRARSVASQSIIAYTMSLGAENSVAYSNNSIAIPTNFTISVTTEILPVSMTKTSVDCTMYICGDSTECSNLLLQYGSFCTQLNRALTGIAVEQDKNTQEVFAQVKQIYKTPPIKDFGGFNFSQILPDPSKPSKRSFIEDLLFNKVTLADAGFIKQYGDCLGDIAARDLICAQKFNGLTVLPPLLTDEMIAQYTSALLAGTITSGWTFGAGAALQIPFAMQMAYRFNGIGVTQNVLYENQKLIANQFNSAIGKIQDSLSSTASALGKLQDVVNQNAQALNTLVKQLSSNFGAISSVLNDILSRLCPPEAEVQIDRLITGRLQSLQTYVTQQLIRAAEIRASANLAATKMSECVLGQSKRVDFCGKGYHLMSFPQSAPHGVVFLHVTYVPAQEKNFTTAPAICHDGKAHFPREGVFVSNGTHWFVTQRNFYEPQIITTDNTFVSGNCDVVIGIVNNTVYDPLQPELDSFKEELDKYFKNHTSPDVDLGDISGINASVVNIQKEIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQYIKWPWYIWLGFIAGLIAIVMVTIMLCCMTSCCSCLKGCCSCGSCCKFDEDDSEPVLKGVKLHYT
5'-ATGTTCGTTTTCCTCGTACTGCTCCCTCTCGTGAGCAGCCAATGTGTGAATTTGACTACCCGCACACAACTTCCGCCAGCGTATACAAATTCCTTCACGCGAGGGGTATACTATCCCGATAAAGTTTTTCGATCCTCCGTGCTGCATTCAACACAAGATTTGTTTCTCCCATTTTTTAGTAATGTCACCTGGTTCCATGCCATCCACGTAAGCGGCACTAATGGGACCAAACGCTTCGATAACCCGGTCTTGCCCTTTAATGACGGCGTGTACTTCGCCAGCACTGAGAAAAGCAATATTATCAGAGGTTGGATTTTCGGCACGACCCTTGATAGCAAGACGCAGAGCCTGCTCATTGTCAACAATGCCACCAATGTAGTAATTAAGGTCTGCGAATTTCAATTCTGCAATGACCCCTTTTTGGGTGTGTACTACCACAAAAACAATAAAAGCTGGATGGAGTCTGAGTTTCGAGTGTATTCCTCAGCAAATAACTGCACCTTTGAATATGTGTCTCAGCCATTTCTCATGGATTTGGAAGGCAAACAAGGGAACTTCAAAAACCTCAGGGAGTTCGTCTTCAAAAATATCGATGGTTATTTTAAGATTTATTCTAAGCACACGCCTATCAACCTGGTGCGCGACCTCCCGCAAGGCTTCTCCGCACTGGAGCCTCTTGTCGATCTGCCCATCGGCATCAATATTACCAGGTTTCAGACGCTTCTGGCCCTGCATCGGAGTTATCTTACCCCCGGAGACTCCTCTAGCGGTTGGACAGCAGGCGCTGCGGCTTACTACGTGGGATATCTCCAGCCGCGAACATTTCTCTTGAAATACAATGAGAATGGTACCATCACGGATGCAGTCGACTGCGCGTTGGACCCACTCTCCGAAACCAAATGCACTTTGAAATCATTCACAGTAGAAAAGGGAATATACCAGACTTCAAATTTTAGGGTCCAGCCTACCGAATCCATTGTCAGGTTTCCCAATATCACGAATTTGTGCCCGTTCGGAGAAGTCTTTAATGCGACGAGATTTGCCAGTGTATATGCATGGAATAGAAAGCGCATCTCCAACTGTGTAGCTGATTACTCTGTGCTGTATAACTCAGCTTCTTTCAGTACTTTCAAGTGTTACGGGGTGTGTCCAACAAAGCTTAATGATTTGTGTTTTACGAATGTGTATGCAGACTCATTTGTGATTCGGGGGGACGAGGTGCGCCAGATTGCACCAGGGCAGACGGGGAAAATTGCTGACTATAACTACAAGCTCCCCGACGATTTCACAGGCTGCGTCATAGCCTGGAATAGCAATAATCTGGATAGTAAGGTAGGCGGCAATTACAATTATCTGTATCGCCTTTTTAGAAAGTCCAACCTTAAACCATTTGAGAGGGACATAAGCACGGAAATATATCAAGCGGGGTCCACACCTTGCAATGGGGTCGAAGGATTCAACTGTTACTTCCCGTTGCAGTCCTATGGGTTCCAGCCGACTAACGGAGTTGGATATCAGCCCTACCGCGTGGTTGTACTTAGTTTCGAGCTGCTTCACGCTCCGGCTACTGTATGCGGACCTAAAAAATCCACCAACCTCGTAAAGAATAAGTGCGTAAACTTTAACTTCAATGGACTTACGGGGACCGGTGTCTTGACTGAGTCTAATAAAAAATTCCTCCCGTTCCAACAATTTGGGCGGGACATTGCAGACACCACGGACGCTGTAAGAGATCCTCAGACTCTTGAAATACTTGATATTACGCCCTGTTCATTCGGTGGAGTCTCTGTCATTACGCCGGGAACTAATACATCAAACCAAGTCGCGGTTCTCTACCAGGACGTAAACTGTACCGAAGTCCCTGTCGCGATCCATGCAGACCAGCTGACGCCAACTTGGCGGGTTTATAGTACCGGTTCAAATGTATTCCAAACCCGCGCCGGGTGTCTCATTGGCGCCGAACATGTGAATAATTCCTACGAATGCGACATACCCATAGGAGCAGGGATCTGCGCAAGCTATCAGACACAGACAAACTCCCCACGGCGAGCGAGGTCTGTTGCCAGTCAAAGTATCATAGCGTATACTATGAGCCTCGGAGCTGAGAACTCCGTGGCCTATTCCAACAACTCAATTGCGATCCCTACAAACTTTACTATTAGCGTGACTACCGAGATCCTTCCTGTATCAATGACAAAAACGAGCGTGGACTGTACTATGTATATTTGCGGTGATTCCACAGAATGCTCTAACCTTCTCCTTCAGTACGGGAGCTTCTGCACACAACTGAACCGGGCTTTGACCGGCATCGCGGTTGAGCAGGATAAAAATACGCAGGAAGTATTTGCGCAAGTCAAACAAATATATAAAACACCTCCAATTAAAGATTTCGGTGGATTTAATTTCTCACAGATTCTTCCGGACCCGTCTAAGCCGAGTAAGCGGTCCTTTATTGAGGATTTGCTTTTCAACAAAGTCACCTTGGCTGACGCTGGCTTTATAAAGCAATACGGGGACTGCCTTGGGGACATCGCAGCACGCGATCTGATTTGCGCACAAAAATTTAATGGGTTGACAGTGCTTCCTCCGCTTCTGACCGACGAGATGATAGCCCAGTATACTAGTGCGCTTCTCGCAGGCACGATTACTTCAGGTTGGACATTCGGGGCAGGTGCAGCCCTGCAAATTCCGTTCGCGATGCAAATGGCGTACCGGTTTAACGGAATAGGCGTGACACAAAACGTGCTCTATGAGAACCAAAAACTGATTGCCAACCAATTCAACAGTGCTATAGGGAAAATCCAGGACTCTCTCTCCAGTACTGCCTCCGCATTGGGAAAATTGCAAGACGTTGTAAACCAGAATGCTCAGGCGCTGAATACGTTGGTCAAACAGCTCAGTAGTAACTTTGGGGCTATAAGCAGTGTTCTTAATGATATTCTTTCTCGGCTCTGTCCGCCTGAGGCAGAAGTCCAAATCGACCGACTTATTACTGGGAGATTGCAATCACTGCAAACATACGTAACACAACAACTCATCCGCGCGGCAGAGATACGAGCGTCAGCAAACCTGGCAGCGACCAAGATGAGCGAGTGCGTGCTCGGTCAGTCAAAGCGCGTGGACTTTTGTGGGAAGGGTTATCATCTCATGTCATTTCCACAATCCGCGCCACATGGGGTAGTCTTTTTGCACGTAACATACGTACCAGCGCAAGAAAAGAATTTTACCACGGCACCAGCAATTTGCCACGATGGGAAGGCTCACTTCCCGCGGGAGGGGGTGTTTGTTAGCAATGGTACGCATTGGTTTGTTACTCAACGCAACTTTTACGAGCCGCAAATCATTACGACAGATAATACATTTGTATCAGGTAACTGTGACGTGGTAATCGGCATTGTAAATAATACTGTTTATGACCCATTGCAGCCAGAACTTGATTCCTTTAAAGAGGAGCTGGATAAGTACTTTAAAAACCACACCTCACCAGACGTTGACTTGGGCGACATCTCAGGAATAAATGCCTCAGTCGTGAATATACAAAAGGAGATTGATAGACTTAATGAAGTTGCCAAAAACCTCAACGAATCCCTCATAGATCTGCAAGAGTTGGGCAAATACGAGCAATATATTAAATGGCCCTGGTATATTTGGTTGGGGTTCATCGCTGGGCTTATAGCGATTGTTATGGTTACCATCATGCTTTGTTGCATGACAAGTTGTTGCTCATGCCTTAAGGGTTGCTGCAGCTGTGGCTCATGCTGCAAGTTCGACGAAGACGATTCAGAACCAGTACTCAAGGGGGTCAAATTGCATTATACTTAG-3'
前記実施例13(1)の野生型Sタンパク質発現細胞または変異型Sタンパク質発現細胞に、前記クローン2490またはクローン8D2(終濃度3μg/ml)を10μl添加した後、前記実施例1(4)で得られたビオチン化ACE2-Fc融合タンパク質(終濃度2.7μg/ml)を10μl添加した。そして、得られた反応液を、4℃で30分間インキュベートし、反応させた。前記反応後の反応液15μlに対し、APC標識ストレプトアビジン(終濃度2μg/ml)を10μl添加して染色し、得られた細胞について前記フローサイトメーターを用いて解析した。これにより、各抗体の存在下における、前記全長Ssタンパク質発現細胞と、ACE2との結合を確認した。コントロールは、前記抗体サンプルを添加しなかった以外は同様にして測定した。これらの結果を図17に示す。
上記の実施形態および実施例の一部または全部は、以下の付記のように記載されうるが、以下には限られない。
<Spikeタンパク質の変異体>
(付記1)
下記(Sm)のアミノ酸配列からなるタンパク質である、SARS-CoV-2のSpikeタンパク質の変異体:
(Sm)下記(Sm1)、(Sm2)、または(Sm3)のアミノ酸配列:
(Sm1)野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)のアミノ酸配列において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有するアミノ酸配列;
(Sm2)(Sm1)のアミノ酸配列において、1~127個の挿入、付加、置換および/または欠失を有し、かつ、(Sm1)の変異されたアミノ酸が維持されているアミノ酸配列;
(Sm3)(Sm1)のアミノ酸配列に対して、90%以上の同一性を有し、かつ、(Sm1)の変異されたアミノ酸が維持されているアミノ酸配列。
(付記2)
前記(Sm1)のアミノ酸配列は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、65位、および/または66位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有するアミノ酸配列である、付記1記載の変異体。
(付記3)
前記(Sm1)のアミノ酸配列は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、187位、213位、および/または214位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有するアミノ酸配列である、付記1または2記載の変異体。
(付記4)
前記(Sm1)のアミノ酸配列は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、65位、66位、187位、213位、および214位からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有するアミノ酸配列である、付記1から3のいずれかに記載の変異体。
(付記5)
前記(Sm1)のアミノ酸配列は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、66位、213位、および214位、64位、66位、187位、213位、および214位、または64位、65位、66位、187位、213位、および214位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有するアミノ酸配列である、付記1から4のいずれかに記載の変異体。
(付記6)
前記変異は、前記Ssタンパク質における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体との結合を低減させる、付記1から5のいずれかに記載の変異体。
(付記7)
前記抗体は、下記(H)の重散可変領域と、下記(L)の軽鎖可変領域とを含む抗体である、付記6記載の変異体:
(H)重鎖可変領域:
配列番号8のアミノ酸配列(X1X2YX3X4X5)を含む、または、からなる重鎖相補性決定領域(HCDR)1、配列番号9のアミノ酸配列(X6IX7X8X9X10GX11X12X13X14X15X16X17X18X19X20)を含む、または、からなるHCDR2、および配列番号10のアミノ酸配列(X21X22X23X24X25X26X27X28X29X30X31X32X33X34X35X36X37X38X39DX40)を含む、または、からなるHCDR3を含む、重鎖可変領域であり、
X1は、SまたはTであり、
X2は、存在しないか、Nであり、
X3は、A、D、またはWであり、
X4は、MまたはWであり、
X5は、G、H、N、またはSであり、
X6は、A、D、N、T、V、またはWであり、
X7は、G、H、N、またはSであり、
X8は、Q、T、またはYであり、
X9は、A、D、S、またはNであり、
X10は、存在しないか、Tであり、
X11は、D、G、I、N、またはSであり、
X12は、E、N、P、SまたはTであり、
X13は、存在しないか、Kであり、
X14は、TまたはYであり、
X15は、A、N、P、またはVであり、
X16は、D、G、P、またはQであり、
X17は、GまたはSであり、
X18は、F、L、またはVであり、
X19は、K、R、またはTであり、
X20は、GまたはSであり、
X21は、存在しないか、Aであり、
X22は、DまたはRであり、
X23は、F、P、Q、T、またはWであり、
X24は、存在しないか、D、E、G、またはYであり、
X25は、G、S、Q、W、またはYであり、
X26は、D、F、G、またはLであり、
X27は、I、L、N、R、またはYであり、
X28は、存在しないか、G、L、P、T、W、またはYであり、
X29は、存在しないか、A、G、Q、S、またはTであり、
X30は、存在しないか、A、D、G、H、またはMであり、
X31は、存在しないか、S、V、またはYであり、
X32は、存在しないか、EまたはSであり、
X33は、存在しないか、L、S、W、またはYであり、
X34は、存在しないか、F、G、T、またはYであり、
X35は、存在しないか、A、G、L、またはYであり、
X36は、存在しないか、A、T、またはYであり、
X37は、FまたはYであり、
X38は、存在しないか、CまたはGであり、
X39は、存在しないか、Mであり、
X40は、F、I、またはVである;
(L)軽鎖可変領域:
配列番号11のアミノ酸配列(X41X42SX43X44X45X46X47X48X49X50X51)を含む、または、からなる軽鎖相補性決定領域(LCDR)1、配列番号12のアミノ酸配列(X52X53SX54X55X56X57)を含む、または、からなるLCDR2、および配列番号13のアミノ酸配列(X58QX59X60X61X62X63X64X65X66T)を含む、または、からなるLCDR3を含む、軽鎖可変領域であり、
X41は、K、Q、またはRであり、
X42は、存在しないか、AまたはSであり、
X43は、存在しないか、QまたはVであり、
X44は、GまたはSであり、
X45は、存在しないか、I、L、またはVであり、
X46は、存在しないか、L、R、またはSであり、
X47は、存在しないか、Hであり、
X48は、存在しないか、NまたはSであり、
X49は、存在しないか、D、N、Y、またはWであり、
X50は、存在しないか、GまたはLであり
X51は、存在しないか、A、G、またはKであり、
X52は、A、D、E、G、またはKであり、
X53は、AまたはVであり、
X54は、N、S、またはTであり、
X55は、LまたはRであり、
X56は、A、E、F、またはQであり、
X57は、SまたはTであり、
X58は、L、M、またはQであり、
X59は、A、H、L、S、またはYであり、
X60は、G、I、またはNであり、
X61は、N、S、またはQであり、
X62は、存在しないか、F、W、またはYであり、
X63は、存在しないか、P、S、またはWであり、
X64は、PまたはRであり、
X65は、存在しないか、Lであり、
X66は、存在しないか、Iである。
(付記8)
前記抗体は、下記(1)~(5)および(6)からなる群から選択された少なくとも1つの抗体である、付記6または7記載の変異体。
(1)配列番号14のアミノ酸配列(SYAMH)からなる重鎖相補性決定領域(HCDR)1、配列番号15のアミノ酸配列(VISYDGSNKYYADSVKG)からなるHCDR2、および配列番号16のアミノ酸配列(DQEWFRELFLFDY)からなるHCDR3を含む重鎖可変領域と、配列番号17のアミノ酸配列(RASQGISSWLA)からなる軽鎖相補性決定領域(LCDR)1、配列番号18のアミノ酸配列(DASSLQS)からなるLCDR2、および配列番号19のアミノ酸配列(QQANSFPPT)からなるLCDR3を含む軽鎖可変領域と、を含む抗体;
(2)配列番号20のアミノ酸配列(SYWMN)からなるHCDR1、配列番号21のアミノ酸配列(NINQDGGEKYYVDSVRG)からなるHCDR2、および配列番号22のアミノ酸配列(DPYDLYGDYGGTFDY)からなるHCDR3を含む重鎖可変領域と、配列番号23のアミノ酸配列(RASQSVSSNLA)からなるLCDR1、配列番号24のアミノ酸配列(GASTRAT)からなるLCDR2、および配列番号25のアミノ酸配列(QQYNNWWRT)からなるLCDR3を含む軽鎖可変領域と、を含む抗体;
(3)配列番号26のアミノ酸配列(SYWMS)からなるHCDR1、配列番号27のアミノ酸配列(NINQDGSEKYYVDSVKG)からなるHCDR2、および配列番号28のアミノ酸配列(DWDYDILTGSWFGAFDI)からなるHCDR3を含む重鎖可変領域と、配列番号29のアミノ酸配列(RASQGIRNDLG)からなるLCDR1、配列番号30のアミノ酸配列(AASSLQS)からなるLCDR2、および配列番号31のアミノ酸配列(LQHNSYPLT)からなるLCDR3を含む軽鎖可変領域と、を含む抗体;
(4)配列番号32のアミノ酸配列(TYAMN)からなるHCDR1、配列番号33のアミノ酸配列(WINTNTGNPTYAQGFTG)からなるHCDR2、および配列番号34のアミノ酸配列(DQDSGYPTYYYYYMDV)からなるHCDR3を含む重鎖可変領域と、配列番号35のアミノ酸配列(KSSQSLLHSDGK)からなるLCDR1、配列番号36のアミノ酸配列(EVSNRFS)からなるLCDR2、および配列番号37のアミノ酸配列(MQSIQPPLT)からなるLCDR3を含む軽鎖可変領域と、を含む抗体;
(5)配列番号38のアミノ酸配列(SYAMH)からなるHCDR1、配列番号39のアミノ酸配列(DISYDGSEKYYADSVKG)からなるHCDR2、および配列番号40のアミノ酸配列(DFGGDNTAMVEYFFDF)からなるHCDR3を含む重鎖可変領域と、配列番号41のアミノ酸配列(RASQSISSWLA)からなるLCDR1、配列番号42のアミノ酸配列(KASSLES)からなるLCDR2、および配列番号43のアミノ酸配列(QQYNSYSPT)からなるLCDR3を含む軽鎖可変領域と、を含む抗体;
(6)配列番号44のアミノ酸配列(SYDMH)からなるHCDR1、配列番号45のアミノ酸配列(AIGTAGDTYYPGSVKG)からなるHCDR2、および配列番号46のアミノ酸配列(ADPYQLLGQHYYYGMDV)からなるHCDR3を含む重鎖可変領域と、配列番号47のアミノ酸配列(QSVSSSYLA)からなるLCDR1、配列番号48のアミノ酸配列(GASSRAT)からなるLCDR2、および配列番号49のアミノ酸配列(QQYGSSPLIT)からなるLCDR3を含む軽鎖可変領域と、を含む抗体。
(付記9)
前記抗体は、下記(A)2210抗体、(B)2490抗体、(C)8D2抗体、(D)2582抗体、(E)2369抗体、および(F)2660抗体からなる群から選択された少なくとも1つの抗体である、付記6から8のいずれかに記載の変異体:
(A)配列番号98のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域と、配列番号99のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域と、を含む抗体;
(B)配列番号100のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域と、配列番号101のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域と、を含む抗体;
(C)配列番号102のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域と、配列番号103のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域と、を含む抗体;
(D)配列番号104のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域と、配列番号105のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域と、を含む抗体;
(E)配列番号106のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域と、配列番号107のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域と、を含む抗体;
(F)配列番号108のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域と、配列番号109のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域と、を含む抗体。
(付記10)
前記(Sm1)のアミノ酸配列は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、N30、F32、W64、F65、H66、F186、K187、N211、V213、R214、L216、およびP217のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有するアミノ酸配列である、付記1から9のいずれかに記載の変異体。
(付記11)
前記(Sm1)のアミノ酸配列は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、N30、F32、W64、F65、H66、F186、K187、N211、V213、R214、L216、およびP217のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有するアミノ酸配列である、付記1から10のいずれかに記載の変異体。
(付記12)
前記(Sm1)のアミノ酸配列は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、W64、H66、V213、およびR214、W64、H66、K187、V213、およびR214、またはW64、F65、H66、K187、V213、およびR214のアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有するアミノ酸配列である、付記1から11のいずれかに記載の変異体。
(付記13)
前記変異が、置換である、付記1から12のいずれかに記載の変異体。
(付記14)
前記変異は、アラニン置換である、付記1から13にいずれかに記載の変異体。
(付記15)
前記(Sm1)のアミノ酸配列は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、N30、F32、W64、F65、H66、F186、K187、N211、V213、R214、L216、およびP217のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸にアラニン置換を有するアミノ酸配列である、付記1から14のいずれかに記載の変異体。
(付記16)
前記(Sm1)のアミノ酸配列は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、W64、F65、H66、K187、V213、およびR214のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸にアラニン置換を有するアミノ酸配列である、付記1から15のいずれかに記載の変異体。
(付記17)
前記(Sm1)のアミノ酸配列は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、W64、H66、V213、およびR214、W64、H66、K187、V213、およびR214、またはW64、F65、H66、K187、V213、およびR214のアミノ酸残基と対応するアミノ酸にアラニン置換を有するアミノ酸配列である、付記1から16のいずれかに記載の変異体。
(付記18)
前記(Sm1)のアミノ酸配列は、配列番号1のアミノ酸配列における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有するアミノ酸配列である、付記1から17のいずれかに記載の変異体。
<変異ポリペプチド>
(付記19)
付記1から18のいずれかに記載のSpikeタンパク質の変異体の部分配列を有する部分ポリペプチドを含み、
前記部分ポリペプチドは、前記変異体における、少なくとも1つの変異アミノ酸を含む、変異ポリペプチド。
(付記20)
付記1から18のいずれかに記載のSpikeタンパク質の変異体のN末端ドメイン(NTD)および/または受容体結合ドメイン(RBD)を含む、付記19記載の変異ポリペプチド。
<SARS-CoV-2>
(付記21)
付記1から18のいずれかに記載のSpikeタンパク質の変異体を含む、SARS-CoV-2の変異ウイルス。
(付記22)
弱毒化ウイルスまたは不活化ウイルスである、付記21記載の変異ウイルス。
<VLP>
(付記23)
付記1から18のいずれかに記載のSpikeタンパク質の変異体および/または付記19または20記載の変異ポリペプチドを含む、ウイルス様粒子。
<核酸>
(付記24)
付記1から18のいずれかに記載のSpikeタンパク質の変異体をコードする核酸分子および/または付記19または20記載の変異ポリペプチドをコードする核酸分子を含む、核酸。
<発現ベクター>
(付記25)
付記24記載の核酸を含む、発現ベクター。
(付記26)
前記発現ベクターは、ウイルスベクターである、付記25記載の発現ベクター。
<医薬組成物>
(付記27)
付記1から18のいずれかに記載のSpikeタンパク質の変異体、付記19また20記載の変異ポリペプチド、付記21または22記載の変異ウイルス、付記23記載のウイルス様粒子、付記24記載の核酸、および/または付記25または26記載の発現ベクターと、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
(付記28)
免疫賦活化剤を含む、付記27記載の医薬組成物。
<Spikeタンパク質の変異体の製造方法>
(付記29)
SARS-CoV-2のSpikeタンパク質のアンジオテンシン変換酵素2(ACE2)への結合能を増強する抗体の誘導能が低減されたSpikeタンパク質の変異体の製造方法であって、
標的SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Stタンパク質)のアミノ酸配列において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を導入する変異工程を含む、方法。
(付記30)
前記変異工程では、前記Stタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、65位、および/または66位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を導入する、付記29記載の方法。
(付記31)
前記変異工程では、前記Stタンパク質において、前記Ssタンパク質における、187位、213位、および/または214位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を導入する、付記29または30記載の方法。
(付記32)
前記変異工程では、前記Stタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、65位、66位、187位、213位、および214位からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を導入する、付記29から31のいずれかに記載の方法。
(付記33)
前記変異工程では、前記Stタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、66位、213位、および214位、64位、66位、187位、213位、および214位、または64位、65位、66位、187位、213位、および214位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を導入する、付記29から32のいずれかに記載の方法。
(付記34)
前記変異工程では、前記Stタンパク質において、前記Ssタンパク質における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体との結合を低減させる変異を導入する、付記29から33のいずれかに記載の方法。
(付記35)
前記抗体は、前記(H)の重散可変領域と、前記(L)の軽鎖可変領域とを含む抗体である、付記34記載の方法。
(付記36)
前記抗体は、前記(1)~(5)および(6)からなる群から選択された少なくとも1つの抗体である、付記34または35記載の変異体。
(付記37)
前記抗体は、前記(A)2210抗体、(B)2490抗体、(C)8D2抗体、(D)2582抗体、(E)2369抗体、および(F)2660抗体からなる群から選択された少なくとも1つの抗体である、付記34から36のいずれかに記載の変異体:
(付記38)
前記変異工程では、前記Stタンパク質において、前記Ssタンパク質における、N30、F32、W64、F65、H66、F186、K187、N211、V213、R214、L216、およびP217のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を導入する、付記29から37のいずれかに記載の方法。
(付記39)
前記変異工程では、前記Stタンパク質において、前記Ssタンパク質における、W64、F65、H66、K187、V213、およびR214のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を導入する、付記29から38のいずれかに記載の方法。
(付記40)
前記変異工程では、前記Stタンパク質において、前記Ssタンパク質における、W64、H66、V213、およびR214、W64、H66、K187、V213、およびR214、またはW64、F65、H66、K187、V213、およびR214のアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を導入する、付記29から39のいずれかに記載の方法。
(付記41)
前記変異が、置換である、付記29から40のいずれかに記載の方法。
(付記42)
前記変異は、アラニン置換である、付記29から41のいずれかに記載の方法。
(付記43)
前記変異工程では、前記Stタンパク質において、前記Ssタンパク質における、N30、F32、W64、F65、H66、F186、K187、N211、V213、R214、L216、およびP217のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸をアラニンに置換する、付記29から42のいずれかに記載の方法。
(付記44)
前記変異工程では、前記Stタンパク質において、前記Ssタンパク質における、W64、F65、H66、K187、V213、およびR214のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸をアラニンに置換する、付記29から43のいずれかに記載の方法。
(付記45)
前記変異工程では、前記Stタンパク質において、前記Ssタンパク質における、W64、H66、V213、およびR214、W64、H66、K187、V213、およびR214、またはW64、F65、H66、K187、V213、およびR214のアミノ酸残基と対応するアミノ酸をアラニンに置換する、付記29から44のいずれかに記載の方法。
(付記46)
前記変異工程は、
前記Stタンパク質のアミノ酸配列に変異を導入し、前記Stタンパク質のアミノ酸配列に変異が導入された候補タンパク質のアミノ酸配列を生成する生成工程と、
前記候補タンパク質から、前記Ssタンパク質における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有する候補タンパク質を、ACE2への結合能を増強する抗体の誘導能が低減されたSpikeタンパク質の変異体として選抜する選抜工程と、
を含む、付記29から45のいずれかに記載の方法。
(付記47)
前記生成工程では、前記Stタンパク質のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドに変異を導入し、前記Stタンパク質のアミノ酸配列に変異が導入された候補タンパク質のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを生成することにより、前記候補タンパク質を生成する、付記46記載の方法。
(付記48)
前記生成工程では、前記候補タンパク質のアミノ酸配列が、前記Stタンパク質のアミノ酸配列に対して、90%以上の同一性を有するように変異を導入する、付記46または47記載の方法。
(付記49)
前記選抜工程では、前記候補タンパク質から、前記Ssタンパク質における、64位、65位、および/または66位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有する候補タンパク質を、前記変異体として選抜する、付記46から48のいずれかに記載の方法。
(付記50)
前記選抜工程では、前記候補タンパク質から、前記Ssタンパク質における、187位、213位、および/または214位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有する候補タンパク質を、前記変異体として選抜する、付記46から49のいずれかに記載の方法。
(付記51)
前記選抜工程では、前記候補タンパク質から、前記Ssタンパク質における、64位、65位、66位、187位、213位、および214位からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有する候補タンパク質を、前記変異体として選抜する、付記46から50のいずれかに記載の方法。
(付記52)
前記選抜工程では、前記候補タンパク質から、前記Ssタンパク質における、64位、66位、213位、および214位、64位、66位、187位、213位、および214位、または64位、65位、66位、187位、213位、および214位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有する候補タンパク質を、前記変異体として選抜する、付記46から51のいずれかに記載の方法。
(付記53)
前記選抜工程では、前記候補タンパク質から、前記Ssタンパク質における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体との結合を低減させる変異を有する候補タンパク質を、前記変異体として選抜する、付記46から52のいずれかに記載の方法。
(付記54)
前記抗体は、前記(H)の重散可変領域と、前記(L)の軽鎖可変領域とを含む抗体である、付記53記載の方法。
(付記55)
前記抗体は、前記(1)~(5)および(6)からなる群から選択された少なくとも1つの抗体である、付記53または54記載の方法。
(付記56)
前記抗体は、前記(A)2210抗体、(B)2490抗体、(C)8D2抗体、(D)2582抗体、(E)2369抗体、および(F)2660抗体からなる群から選択された少なくとも1つの抗体である、付記53から55のいずれかに記載の方法。
(付記57)
前記選抜工程では、前記候補タンパク質から、前記Ssタンパク質における、N30、F32、W64、F65、H66、F186、K187、N211、V213、R214、L216、およびP217のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有する候補タンパク質を、前記変異体として選抜する、付記46から56のいずれかに記載の方法。
(付記58)
前記選抜工程では、前記候補タンパク質から、前記Ssタンパク質における、W64、F65、H66、K187、V213、およびR214のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有する候補タンパク質を、前記変異体として選抜する、付記46から57のいずれかに記載の方法。
(付記59)
前記選抜工程では、前記候補タンパク質から、前記Ssタンパク質における、W64、H66、V213、およびR214、W64、H66、K187、V213、およびR214、またはW64、F65、H66、K187、V213、およびR214のアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有する候補タンパク質を、前記変異体として選抜する、付記46から58のいずれかに記載の方法。
(付記60)
前記変異が、置換である、付記46から59のいずれかに記載の方法。
(付記61)
前記変異は、アラニン置換である、付記46から60のいずれかに記載の変異体。
(付記62)
前記選抜工程では、前記候補タンパク質から、前記Ssタンパク質における、N30、F32、W64、F65、H66、F186、K187、N211、V213、R214、L216、およびP217のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸にアラニン置換を有する候補タンパク質を、前記変異体として選抜する、付記46から61のいずれかに記載の方法。
(付記63)
前記選抜工程では、前記候補タンパク質から、前記Ssタンパク質における、W64、F65、H66、K187、V213、およびR214のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸にアラニン置換を有する候補タンパク質を、前記変異体として選抜する、付記46から62のいずれかに記載の方法。
(付記64)
前記選抜工程では、前記候補タンパク質から、前記Ssタンパク質における、W64、H66、V213、およびR214、W64、H66、K187、V213、およびR214、またはW64、F65、H66、K187、V213、およびR214のアミノ酸残基と対応するアミノ酸にアラニン置換を有する候補タンパク質を、前記変異体として選抜する、付記46から63のいずれかに記載の方法。
(付記65)
前記Stタンパク質は、配列番号1のアミノ酸配列からなるタンパク質である、付記46から64のいずれかに記載の方法。
<Spikeタンパク質のスクリーニング方法>
(付記66)
SARS-CoV-2のSpikeタンパク質のアンジオテンシン変換酵素2(ACE2)への結合能を増強する抗体の誘導能が低減されたSpikeタンパク質の変異体のスクリーニング方法であって、
候補SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Scタンパク質)のアミノ酸配列において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有するScタンパク質を、前記変異体として選抜する選抜工程を含む、方法。
(付記67)
前記選抜工程では、前記Scタンパク質から、前記Ssタンパク質における、64位、65位、および/または66位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有するScタンパク質を、前記変異体として選抜する、付記66記載の方法。
(付記68)
前記選抜工程では、前記Scタンパク質から、前記Ssタンパク質における、187位、213位、および/または214位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有するScタンパク質を、前記変異体として選抜する、付記66または67記載の方法。
(付記69)
前記選抜工程では、前記Scタンパク質から、前記Ssタンパク質における、64位、65位、66位、187位、213位、および214位からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有するScタンパク質を、前記変異体として選抜する、付記66から68のいずれかに記載の方法。
(付記70)
前記選抜工程では、前記Scタンパク質から、前記Ssタンパク質における、64位、66位、213位、および214位、64位、66位、187位、213位、および214位、または64位、65位、66位、187位、213位、および214位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有するScタンパク質を、前記変異体として選抜する、付記66から69のいずれかに記載の方法。
(付記71)
前記選抜工程では、前記Scタンパク質から、前記Ssタンパク質における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体との結合を低減させる変異を有するScタンパク質を、前記変異体として選抜する、付記66から70のいずれかに記載の方法。
(付記72)
前記抗体は、前記(H)の重散可変領域と、前記(L)の軽鎖可変領域とを含む抗体である、付記71記載の方法。
(付記73)
前記抗体は、前記(1)~(5)および(6)からなる群から選択された少なくとも1つの抗体である、付記71または72記載の方法。
(付記74)
前記抗体は、前記(A)2210抗体、(B)2490抗体、(C)8D2抗体、(D)2582抗体、(E)2369抗体、および(F)2660抗体からなる群から選択された少なくとも1つの抗体である、付記71から73のいずれかに記載の方法。
(付記75)
前記選抜工程では、前記Scタンパク質から、前記Ssタンパク質における、N30、F32、W64、F65、H66、F186、K187、N211、V213、R214、L216、およびP217のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有するScタンパク質を、前記変異体として選抜する、付記66から74のいずれかに記載の方法。
(付記76)
前記選抜工程では、前記Scタンパク質から、前記Ssタンパク質における、W64、F65、H66、K187、V213、およびR214のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有するScタンパク質を、前記変異体として選抜する、付記66から75のいずれかに記載の方法。
(付記77)
前記選抜工程では、前記Scタンパク質から、前記Ssタンパク質における、W64、H66、V213、およびR214、W64、H66、K187、V213、およびR214、またはW64、F65、H66、K187、V213、およびR214のアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有するScタンパク質を、前記変異体として選抜する、付記66から77のいずれかに記載の方法。
(付記78)
前記変異が、置換である、付記66から77のいずれかに記載の方法。
(付記79)
前記変異は、アラニン置換である、付記66から78のいずれかに記載の変異体。
(付記80)
前記選抜工程では、前記Scタンパク質から、前記Ssタンパク質における、N30、F32、W64、F65、H66、F186、K187、N211、V213、R214、L216、およびP217のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸にアラニン置換を有するScタンパク質を、前記変異体として選抜する、付記66から79のいずれかに記載の方法。
(付記81)
前記選抜工程では、前記Scタンパク質から、前記Ssタンパク質における、W64、F65、H66、K187、V213、およびR214のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸にアラニン置換を有するScタンパク質を、前記変異体として選抜する、付記66から80のいずれかに記載の方法。
(付記82)
前記選抜工程では、前記Scタンパク質から、前記Ssタンパク質における、W64、H66、V213、およびR214、W64、H66、K187、V213、およびR214、またはW64、F65、H66、K187、V213、およびR214のアミノ酸残基と対応するアミノ酸にアラニン置換を有するScタンパク質を、前記変異体として選抜する、付記66から81のいずれかに記載の方法。
<処置方法>
(付記83)
対象の処置方法であって、前記対象に、付記1から18のいずれかに記載のSpikeタンパク質の変異体、付記19また20記載の変異ポリペプチド、付記21または22記載の変異ウイルス、付記23記載のウイルス様粒子、付記24記載の核酸、付記25または26記載の発現ベクター、および/または付記27または28記載の医薬組成物を使用する、方法。
(付記84)
前記対象に、付記1から18のいずれかに記載のSpikeタンパク質の変異体、付記19また20記載の変異ポリペプチド、付記21または22記載の変異ウイルス、付記23記載のウイルス様粒子、付記24記載の核酸、付記25または26記載の発現ベクター、および/または付記27または28記載の医薬組成物を投与する工程を含む、付記83記載の方法。
(付記85)
前記対象は、ヒトである、付記83または84記載の方法。
(付記86)
前記処置は、ワクチン接種である、付記83から85のいずれかに記載の方法。
(付記87)
前記処置は、SARS-CoV-2のSpikeタンパク質またはその部分ポリペプチドに対する抗体の誘導である、付記83から86のいずれかに記載の方法。
(付記88)
前記処置は、SARS-CoV-2のSpikeタンパク質のアンジオテンシン変換酵素2(ACE2)への結合活性を増強させる抗体の誘導が低減された、SARS-CoV-2のSpikeタンパク質またはその部分ポリペプチドに対する抗体の誘導である、付記83から87のいずれかに記載の方法。
<第1の感染増強マーカー>
(付記89)
野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する抗体である、SARS-CoV-2の感染増強マーカー。
(付記90)
前記抗体は、前記Ssタンパク質における、64位、65位、および/または66位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する、付記89記載の感染増強マーカー。
(付記91)
前記抗体は、前記Ssタンパク質における、187位、213位、および/または214位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する、付記89または90記載の感染増強マーカー。
(付記92)
前記抗体は、前記Ssタンパク質における、64位、65位、66位、187位、213位、および214位からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する、付記89から91のいずれかに記載の感染増強マーカー。
(付記93)
前記抗体は、前記Ssタンパク質における、64位、66位、213位、および214位、64位、66位、187位、213位、および214位、または64位、65位、66位、187位、213位、および214位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する、付記89から92のいずれかに記載の感染増強マーカー。
(付記94)
前記抗体は、前記Ssタンパク質における、N30、F32、W64、F65、H66、F186、K187、N211、V213、R214、L216、およびP217からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する、付記89から93のいずれかに記載の感染増強マーカー。
(付記95)
前記抗体は、前記Swタンパク質との結合により、前記Swタンパク質のアンジオテンシン変換酵素2(ACE2)への結合活性を増強させる、付記89から94のいずれかに記載の感染増強マーカー。
(付記96)
前記Swタンパク質は、前記Ssタンパク質である、付記89から95のいずれかに記載の感染増強マーカー。
<第2の感染増強マーカー>
(付記97)
野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)との結合について、基準抗体と競合する競合抗体であり、
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体である、SARS-CoV-2の感染増強マーカー。
(付記98)
前記抗体は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、65位、および/または66位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する、付記97記載の感染増強マーカー。
(付記99)
前記抗体は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、187位、213位、および/または214位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する、付記97または98記載の感染増強マーカー。
(付記100)
前記抗体は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、65位、66位、187位、213位、および214位からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する、付記97から99のいずれかに記載の感染増強マーカー。
(付記101)
前記抗体は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、66位、213位、および214位、64位、66位、187位、213位、および214位、または64位、65位、66位、187位、213位、および214位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する、付記97から100のいずれかに記載の感染増強マーカー。
(付記102)
前記抗体は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、N30、F32、W64、F65、H66、F186、K187、N211、V213、R214、L216、およびP217からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する、付記97から101のいずれかに記載の感染増強マーカー。
(付記103)
前記基準抗体は、前記(H)の重散可変領域と、前記(L)の軽鎖可変領域とを含む抗体である、付記97から102のいずれかに記載の感染増強マーカー。
(付記104)
前記基準抗体は、下記(1)~(5)および(6)からなる群から選択された少なくとも1つの抗体である、付記97から103のいずれかに記載の感染増強マーカー。
(付記105)
前記基準抗体は、前記(A)2210抗体、(B)2490抗体、(C)8D2抗体、(D)2582抗体、(E)2369抗体、および(F)2660抗体からなる群から選択された少なくとも1つの抗体である、付記97から104のいずれかに記載の感染増強マーカー。
(付記106)
前記基準抗体は、前記Swタンパク質との結合により、前記Swタンパク質のアンジオテンシン変換酵素2(ACE2)への結合活性を増強させる、付記97から105のいずれかに記載の感染増強マーカー。
(付記107)
前記競合抗体は、前記Swタンパク質との結合により、前記Swタンパク質のACE2への結合活性を増強させる、付記97から106のいずれかに記載の感染増強マーカー。
(付記108)
前記Swタンパク質は、前記Ssタンパク質である、付記97から107のいずれかに記載の感染増強マーカー。
<第3の感染増強マーカー>
(付記109)
野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)に結合し、
前記Swタンパク質において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有する変異タンパク質を認識しない抗体である、SARS-CoV-2の感染増強マーカー。
(付記110)
前記変異タンパク質は、前記Ssタンパク質における、64位、65位、および/または66位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有する、付記109記載の感染増強マーカー。
(付記111)
前記変異タンパク質は、前記Ssタンパク質における、187位、213位、および/または214位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有する、付記109または110記載の感染増強マーカー。
(付記112)
前記変異タンパク質は、前記Ssタンパク質における、64位、65位、66位、187位、213位、および214位からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有する、付記109から111のいずれかに記載の感染増強マーカー。
(付記113)
前記変異タンパク質は、前記Ssタンパク質における、64位、66位、213位、および214位、64位、66位、187位、213位、および214位、または64位、65位、66位、187位、213位、および214位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有する、付記109から112のいずれかに記載の感染増強マーカー。
(付記114)
前記変異タンパク質は、前記Ssタンパク質における、N30、F32、W64、F65、H66、F186、K187、N211、V213、R214、L216、およびP217からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する、付記109から113のいずれかに記載の感染増強マーカー。
(付記115)
前記抗体は、前記Swタンパク質との結合により、前記Swタンパク質のアンジオテンシン変換酵素2(ACE2)への結合活性を増強させる、付記109から114のいずれかに記載の感染増強マーカー。
(付記116)
前記Swタンパク質は、前記Ssタンパク質である、付記109から115のいずれかに記載の感染増強マーカー。
<第4の感染増強マーカー>
(付記117)
野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)との結合について、基準抗体と競合する抗体であり、
前記基準抗体は、
前記Swタンパク質を認識し、
前記Swタンパク質において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異を有する変異タンパク質を認識しない抗体である、SARS-CoV-2の感染増強マーカー。
(付記118)
前記変異タンパク質は、前記Ssタンパク質における、64位、65位、および/または66位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有する、付記117記載の感染増強マーカー。
(付記119)
前記変異タンパク質は、前記Ssタンパク質における、187位、213位、および/または214位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有する、付記117または118記載の感染増強マーカー。
(付記120)
前記変異タンパク質は、前記Ssタンパク質における、64位、65位、66位、187位、213位、および214位からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有する、付記117から119のいずれかに記載の感染増強マーカー。
(付記121)
前記変異タンパク質は、前記Ssタンパク質における、64位、66位、213位、および214位、64位、66位、187位、213位、および214位、または64位、65位、66位、187位、213位、および214位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有する、付記117から120のいずれかに記載の感染増強マーカー。
(付記122)
前記変異タンパク質は、前記Ssタンパク質における、N30、F32、W64、F65、H66、F186、K187、N211、V213、R214、L216、およびP217からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する、付記117から121のいずれかに記載の感染増強マーカー。
(付記123)
前記基準抗体は、前記Swタンパク質との結合により、前記Swタンパク質のアンジオテンシン変換酵素2(ACE2)への結合活性を増強させる、付記117から122のいずれかに記載の感染増強マーカー。
(付記124)
前記競合抗体は、前記Swタンパク質との結合により、前記Swタンパク質のACE2への結合活性を増強させる、付記117から123のいずれかに記載の感染増強マーカー。
(付記125)
前記Swタンパク質は、前記Ssタンパク質である、付記117から124のいずれかに記載の感染増強マーカー。
<第1の感染増強抗体の検出方法>
(付記126)
被検者の生体試料について、野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体を検出する検出工程を含む、SARS-CoV-2の感染増強抗体の検出方法。
(付記127)
前記検出工程は、
Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を検出する第1の検出工程と、
Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異が導入された変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を検出する第2の検出工程とを含む、付記126記載の検出方法。
(付記128)
前記検出工程は、
前記第1検出工程における前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の検出結果と、前記第2検出工程における前記変異タンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の検出結果とを比較することにより、前記抗体を検出する比較工程を含む、付記127記載の検出方法。
(付記129)
前記検出工程において、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、65位、および/または66位のアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体を検出する、付記126から128のいずれかに記載の検出方法。
(付記130)
前記検出工程は、
Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を検出する第1の検出工程と、
Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、65位、および/または66位のアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異が導入された第1の変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記第1の変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を検出する第2の検出工程とを含む、付記129記載の検出方法。
(付記131)
前記検出工程は、
前記第1検出工程における前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の検出結果と、前記第2検出工程における前記第1の変異タンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の検出結果とを比較する比較工程を含む、付記130記載の検出方法。
(付記132)
前記検出工程において、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、187位、213位、および/または214位のアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体を検出する、付記126から128のいずれかに記載の検出方法。
(付記133)
前記検出工程は、
Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を検出する第1の検出工程と、
Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、187位、213位、および/または214位のアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異が導入された第2の変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記第2の変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を検出する第2の検出工程とを含む、付記132記載の検出方法。
(付記134)
前記検出工程は、
前記第1検出工程における前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の検出結果と、前記第2検出工程における前記第2の変異タンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の検出結果とを比較する比較工程を含む、付記133記載の検出方法。
(付記135)
前記検出工程において、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、66位、213位、および/または214位、64位、66位、187位、213位、および/または214位、または64位、65位、66位、187位、213位、および/または214位のアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体を検出する、付記126から134のいずれかに記載の検出方法。
(付記136)
前記検出工程は、
Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を検出する第1の検出工程と、
Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、65位、66位、187位、213位、および/または214位のアミノ酸に変異が導入された第3の変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記第3の変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を検出する第2の検出工程とを含む、付記135記載の検出方法。
(付記137)
前記検出工程は、
前記第1検出工程における前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の検出結果と、前記第2検出工程における前記第3の変異タンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の検出結果とを比較する比較工程を含む、付記136記載の検出方法。
(付記138)
前記検出工程で検出された抗体について、前記Swタンパク質との結合により、前記Swタンパク質のアンジオテンシン変換酵素2(ACE2)への結合活性を増強させるかを評価する評価工程を含む、付記126から137のいずれかに記載の検出方法。
(付記139)
前記検出工程において、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、N30、F32、W64、F65、H66、F186、K187、N211、V213、R214、L216、および/またはP217のアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体を検出する、付記126から138のいずれかに記載の検出方法。
(付記140)
前記Swタンパク質は、前記Ssタンパク質である、付記126から139のいずれかに記載の検出方法。
<第2の感染増強抗体の検出方法>
(付記141)
被検者の生体試料について、野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)との結合について、基準抗体と競合する競合抗体を検出する検出工程を含み、
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体である、SARS-CoV-2の感染増強抗体の検出方法。
(付記142)
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、65位、および/または66位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する、付記141記載の検出方法。
(付記143)
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、187位、213位、および/または214位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する、付記141または142記載の検出方法。
(付記144)
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、65位、66位、187位、213位、および214位からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する、付記141から143のいずれかに記載の検出方法。
(付記145)
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、66位、213位、および214位、64位、66位、187位、213位、および214位、または64位、65位、66位、187位、213位、および214位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する、付記141から144のいずれかに記載の検出方法。
(付記146)
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、N30、F32、W64、F65、H66、F186、K187、N211、V213、R214、L216、およびP217からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する、付記141から145のいずれかに記載の検出方法。
(付記147)
前記基準抗体は、前記(H)の重散可変領域と、前記(L)の軽鎖可変領域とを含む抗体である、付記141から145のいずれかに記載の検出方法。
(付記148)
前記基準抗体は、前記(1)~(5)および(6)からなる群から選択された少なくとも1つの抗体である、付記141から147のいずれかに記載の検出方法。
(付記149)
前記基準抗体は、前記(A)2210抗体、(B)2490抗体、(C)8D2抗体、(D)2582抗体、(E)2369抗体、および(F)2660抗体からなる群から選択された少なくとも1つの抗体である、付記141から148のいずれかに記載の検出方法。
(付記150)
前記基準抗体は、前記Swタンパク質との結合により、前記Swタンパク質のACE2への結合活性を増強させる、付記141から149のいずれかに記載の検出方法。
(付記151)
前記検出工程は、
Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を検出する第1の検出工程と、
前記基準抗体の存在下、Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を検出する第2の検出工程とを含む、付記141から150のいずれかに記載の検出方法。
(付記152)
前記検出工程は、
前記第1検出工程におけるSwタンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の検出結果と、前記第2検出工程におけるSwタンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の検出結果とを比較することにより、前記基準抗体と競合する競合抗体を検出する比較工程を含む、付記151記載の検出方法。
(付記153)
前記検出工程で検出された抗体について、前記Swタンパク質との結合により、前記Swタンパク質のアンジオテンシン変換酵素2(ACE2)への結合活性を増強させるかを評価する評価工程を含む、付記141から152のいずれかに記載の検出方法。
(付記154)
前記Swタンパク質は、前記Ssタンパク質である、付記141から153のいずれかに記載の検出方法。
<第3の感染増強抗体の検出方法>
(付記155)
被検者の生体試料について、野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)に結合し、
前記Swタンパク質において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異を有する変異タンパク質を認識しない抗体を検出する検出工程を含む、SARS-CoV-2の感染増強抗体の検出方法。
(付記156)
前記検出工程は、
Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を検出する第1の検出工程と、
Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異が導入された変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を検出する第2の検出工程とを含む、付記155記載の検出方法。
(付記157)
前記検出工程は、
前記第1検出工程における前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の検出結果と、前記第2検出工程における前記変異タンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の検出結果とを比較することにより、前記抗体を検出する比較工程を含む、付記156記載の検出方法。
(付記158)
前記検出工程において、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、65位、および/または66位のアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異を有する変異タンパク質を認識しない抗体を検出する、付記155から157のいずれかに記載の検出方法。
(付記159)
前記検出工程は、
Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を検出する第1の検出工程と、
Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、65位、および/または66位のアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異が導入された第1の変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記第1の変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を検出する第2の検出工程とを含む、付記158記載の検出方法。
(付記160)
前記検出工程は、
前記第1検出工程における前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の検出結果と、前記第2検出工程における前記第1の変異タンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の検出結果とを比較する比較工程を含む、付記159記載の検出方法。
(付記161)
前記検出工程において、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、187位、213位、および/または214位のアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異を有する変異タンパク質を認識しない抗体を検出する、付記155から157のいずれかに記載の検出方法。
(付記162)
前記検出工程は、
Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を検出する第1の検出工程と、
Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、187位、213位、および/または214位のアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異が導入された第2の変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記第2の変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を検出する第2の検出工程とを含む、付記161記載の検出方法。
(付記163)
前記検出工程は、
前記第1検出工程における前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の検出結果と、前記第2検出工程における前記第2の変異タンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の検出結果とを比較する比較工程を含む、付記162記載の検出方法。
(付記164)
前記検出工程において、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、65位、66位、187位、213位、および/または214位のアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異を有する変異タンパク質を認識しない抗体を検出する、付記155から163のいずれかに記載の検出方法。
(付記165)
前記検出工程は、
Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を検出する第1の検出工程と、
Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、65位、66位、187位、213位、および/または214位のアミノ酸に変異が導入された第3の変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記第3の変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を検出する第2の検出工程とを含む、付記164記載の検出方法。
(付記166)
前記検出工程は、
前記第1検出工程における前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の検出結果と、前記第2検出工程における前記第3の変異タンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の検出結果とを比較する比較工程を含む、付記165記載の検出方法。
(付記167)
前記検出工程において、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、N30、F32、W64、F65、H66、F186、K187、N211、V213、R214、L216、およびP217のアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体を検出する、付記155から166のいずれかに記載の検出方法。
(付記168)
前記検出工程で検出された抗体について、前記Swタンパク質との結合により、前記Swタンパク質のアンジオテンシン変換酵素2(ACE2)への結合活性を増強させるかを評価する評価工程を含む、付記155から167のいずれかに記載の検出方法。
(付記169)
前記Swタンパク質は、前記Ssタンパク質である、付記155から168のいずれかに記載の検出方法。
<第4の感染増強抗体の検出方法>
(付記170)
被検者の生体試料について、野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)との結合について、基準抗体と競合する競合抗体を検出する検出工程を含み、
前記基準抗体は、
前記Swタンパク質を認識し、
前記Swタンパク質において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)において、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異を有する変異タンパク質を認識しない、SARS-CoV-2の感染増強抗体の検出方法。
(付記171)
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、65位、および/または66位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有する変異タンパク質を認識しない、付記170記載の検出方法。
(付記172)
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、187位、213位、および/または214位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有する変異タンパク質を認識しない、付記170または171記載の検出方法。
(付記173)
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、65位、66位、187位、213位、および214位からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有する変異タンパク質を認識しない、付記170から172のいずれかに記載の検出方法。
(付記174)
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、66位、213位、および214位、64位、66位、187位、213位、および214位、または64位、65位、66位、187位、213位、および214位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有する変異タンパク質を認識しない、付記170から173のいずれかに記載の検出方法。
(付記175)
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、N30、F32、W64、F65、H66、F186、K187、N211、V213、R214、L216、およびP217からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有する変異タンパク質を認識しない、付記170から174のいずれかに記載の検出方法。
(付記176)
前記基準抗体は、前記(H)の重散可変領域と、前記(L)の軽鎖可変領域とを含む抗体である、付記170から175のいずれかに記載の検出方法。
(付記177)
前記基準抗体は、前記(1)~(5)および(6)からなる群から選択された少なくとも1つの抗体である、付記170から176のいずれかに記載の検出方法。
(付記178)
前記基準抗体は、前記(A)2210抗体、(B)2490抗体、(C)8D2抗体、(D)2582抗体、(E)2369抗体、および(F)2660抗体からなる群から選択された少なくとも1つの抗体である、付記170から177のいずれかに記載の検出方法。
(付記179)
前記基準抗体は、前記Swタンパク質との結合により、前記Swタンパク質のアンジオテンシン変換酵素2(ACE2)への結合活性を増強させる、付記170から178のいずれかに記載の検出方法。
(付記180)
前記検出工程は、
Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を検出する第1の検出工程と、
前記基準抗体の存在下、Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を検出する第2の検出工程とを含む、付記170から179のいずれかに記載の検出方法。
(付記181)
前記検出工程は、
前記第1検出工程におけるSwタンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の検出結果と、前記第2検出工程におけるSwタンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の検出結果とを比較することにより、前記基準抗体と競合する競合抗体を検出する比較工程を含む、付記180記載の検出方法。
(付記182)
前記検出工程で検出された抗体について、前記Swタンパク質との結合により、前記Swタンパク質のACE2への結合活性を増強させるかを評価する評価工程を含む、付記170から181のいずれかに記載の検出方法。
(付記183)
前記Swタンパク質は、前記Ssタンパク質である、付記170から182のいずれかに記載の検出方法。
<第1および第3の感染増強抗体の検出キット>
(付記184)
野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)またはそのN末端ドメインと、前記Swタンパク質において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異が導入された変異タンパク質またはそのN末端ドメインとを含む、SARS-CoV-2の感染増強抗体の検出キット。
(付記185)
前記変異タンパク質は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、65位、および/または66位のアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異が導入された第1の変異タンパク質である、付記184記載の検出キット。
(付記186)
前記変異タンパク質は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、187位、213位、および/または214位のアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異が導入された第2の変異タンパク質である、付記184または185記載のキット。
(付記187)
前記変異タンパク質は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、65位、66位、187位、213位、および/または214位のアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異が導入された第3の変異タンパク質である、付記184から186のいずれかに記載の検出キット。
(付記188)
付記126から140および155から169のいずれかに記載の感染増強抗体の検出方法に用いる、付記184から187のいずれかに記載の検出キット。
<第2および第4の感染増強抗体の検出キット>
(付記189)
野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)またはそのN末端ドメインと、基準抗体とを含み、
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体である、SARS-CoV-2の感染増強抗体の検出キット。
(付記190)
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、65位、および/または66位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する、付記189記載の検出キット。
(付記191)
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、187位、213位、および/または214位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する、付記189または190記載の検出キット。
(付記192)
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、65位、66位、187位、213位、および214位からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する、付記189から191いずれかに記載の検出キット。
(付記193)
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、66位、213位、および214位、64位、66位、187位、213位、および214位、または64位、65位、66位、187位、213位、および214位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する、付記189から192のいずれかに記載の検出キット。
(付記194)
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、N30、F32、W64、F65、H66、F186、K187、N211、V213、R214、L216、およびP217からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する、付記189から193のいずれかに記載の検出キット。
(付記195)
前記基準抗体は、前記(H)の重散可変領域と、前記(L)の軽鎖可変領域とを含む抗体である、付記189から194のいずれかに記載の検出キット。
(付記196)
前記基準抗体は、前記(1)~(5)および(6)からなる群から選択された少なくとも1つの抗体である、付記189から195のいずれかに記載の検出キット。
(付記197)
前記基準抗体は、前記(A)2210抗体、(B)2490抗体、(C)8D2抗体、(D)2582抗体、(E)2369抗体、および(F)2660抗体からなる群から選択された少なくとも1つの抗体である、付記189から196のいずれかに記載の検出キット。
(付記198)
前記基準抗体は、前記Swタンパク質との結合により、前記Swタンパク質のアンジオテンシン変換酵素2(ACE2)への結合活性を増強させる、付記189から197のいずれかに記載の検出キット。
(付記199)
付記141から154および170から183のいずれかに記載の感染増強抗体の検出方法に用いる、付記189から198のいずれかに記載の検出キット。
<第1の感染の可能性の試験方法>
(付記200)
SARS-CoV-2への感染しやすさの試験方法であって、
被検者の生体試料について、野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体を測定する測定工程を含む、試験方法。
(付記201)
前記測定工程は、
Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を測定する第1の測定工程と、
Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異が導入された変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を測定する第2の測定工程とを含む、付記200記載の試験方法。
(付記202)
前記測定工程は、
前記第1測定工程における前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の測定結果と、前記第2測定工程における前記変異タンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の測定結果とを比較することにより、前記抗体を測定する比較工程を含む、付記201記載の試験方法。
(付記203)
前記測定工程において、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、65位、および/または66位のアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体を測定する、付記200から202のいずれかに記載の試験方法。
(付記204)
前記測定工程は、
Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を測定する第1の測定工程と、
Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、65位、および/または66位のアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異が導入された第1の変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記第1の変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を測定する第2の測定工程とを含む、付記203記載の試験方法。
(付記205)
前記測定工程は、
前記第1測定工程における前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の測定結果と、前記第2測定工程における前記第1の変異タンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の測定結果とを比較する比較工程を含む、付記204記載の試験方法。
(付記206)
前記測定工程において、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、187位、213位、および/または214位のアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体を測定する、付記200から205のいずれかに記載の試験方法。
(付記207)
前記測定工程は、
Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を測定する第1の測定工程と、
Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、187位、213位、および/または214位のアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異が導入された第2の変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記第2の変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を測定する第2の測定工程とを含む、付記206記載の試験方法。
(付記208)
前記測定工程は、
前記第1測定工程における前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の測定結果と、前記第2測定工程における前記第2の変異タンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の測定結果とを比較する比較工程を含む、付記207記載の試験方法。
(付記209)
前記測定工程において、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、66位、213位、および/または214位、64位、66位、187位、213位、および/または214位、または64位、65位、66位、187位、213位、および/または214位のアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体を測定する、付記200から208のいずれかに記載の試験方法。
(付記210)
前記測定工程は、
Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を測定する第1の測定工程と、
Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、65位、66位、187位、213位、および/または214位のアミノ酸に変異が導入された第3の変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記第3の変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を測定する第2の測定工程とを含む、付記209記載の試験方法。
(付記211)
前記測定工程は、
前記第1測定工程における前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の測定結果と、前記第2測定工程における前記第3の変異タンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の測定結果とを比較する比較工程を含む、付記210記載の試験方法。
(付記212)
前記測定工程において、前記抗体として、抗体の量を測定する、付記200から211のいずれかに記載の試験方法。
(付記213)
前記抗体の量を、第1の閾値と比較することにより、前記被検者がSARS-CoV-2に感染する可能性を試験する第1の試験工程を含む、付記212記載の試験方法。
(付記214)
前記第1の閾値は、健常者の生体試料における前記抗体の量および/またはSARS-CoV-2の罹患者の生体試料における前記抗体の量に基づき設定された閾値である、付記213記載の試験方法。
(付記215)
前記第1の試験工程において、前記被検者の生体試料における抗体の量が、前記第1の閾値より高い場合、前記被検者は、SARS-CoV-2に罹患する可能性が高いとする、付記214記載の試験方法。
(付記216)
前記被検者の生体試料について、前記Swタンパク質の中和抗体を測定する第3の測定工程を含む、付記200から215のいずれかに記載の試験方法。
(付記217)
前記中和抗体は、前記Swタンパク質の受容体結合ドメインに結合する抗体である、付記216記載の試験方法。
(付記218)
前記第3の測定工程において、前記中和抗体として、中和抗体の量を測定する、付記216または217記載の試験方法。
(付記219)
前記中和抗体の量を、第2の閾値と比較することにより、前記被検者がSARS-CoV-2に感染する可能性を試験する第2の試験工程を含む、付記218記載の試験方法。
(付記220)
前記第2の閾値は、SARS-CoV-2の罹患者の生体試料における前記中和抗体の量および/またはSARS-CoV-2の罹患後、回復した者の生体試料における前記中和抗体の量に基づき設定された閾値である、付記219記載の試験方法。
(付記221)
前記第2の試験工程において、前記被検者の生体試料における抗体の量が、前記第2の閾値より高い場合、前記被検者は、SARS-CoV-2に罹患する可能性が低いとする、付記220記載の試験方法。
(付記222)
前記測定工程において、前記抗体として、抗体の量を測定し、
前記被検者の生体試料について、Swタンパク質の中和抗体の量を測定する第3の測定工程と、
前記測定工程における抗体の量(S)と、前記第3の測定工程における中和抗体の量(N)との抗体量比(S/N)を算出する算出工程と、
前記抗体量比を、第3の閾値と比較することにより、前記被検者がSARS-CoV-2に感染する可能性を試験する第3の試験工程を含む、付記200から221のいずれかに記載の試験方法。
(付記223)
前記第3の閾値は、健常者の生体試料における前記抗体量比、SARS-CoV-2の罹患者の生体試料における前記抗体量比、および/またはSARS-CoV-2の罹患後、回復した者の生体試料における前記抗体量比に基づき設定された閾値である、付記222記載の試験方法。
(付記224)
前記第3の試験工程において、前記被検者の生体試料における前記抗体量比(S/N)が、前記第3の閾値より高い場合、前記被検者は、SARS-CoV-2に罹患する可能性が高いとする、付記223記載の試験方法。
(付記225)
前記測定工程において、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、N30、F32、W64、F65、H66、F186、K187、N211、V213、R214、L216、およびP217のアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体を測定する、付記200から224のいずれかに記載の試験方法。
(付記226)
前記Swタンパク質は、前記Ssタンパク質である、付記200から225のいずれかに記載の試験方法。
<第2の感染の可能性の試験方法>
(付記227)
SARS-CoV-2への感染しやすさの試験方法であって、
被検者の生体試料について、野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)との結合について、基準抗体と競合する競合抗体を測定する測定工程を含み、
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体である、試験方法。
(付記228)
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、65位、および/または66位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する、付記227記載の試験方法。
(付記229)
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、187位、213位、および/または214位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する、付記227または228記載の試験方法。
(付記230)
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、65位、66位、187位、213位、および214位からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する、付記227から229のいずれかに記載の試験方法。
(付記231)
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、66位、213位、および214位、64位、66位、187位、213位、および214位、または64位、65位、66位、187位、213位、および214位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する、付記227から230のいずれかに記載の試験方法。
(付記232)
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、N30、F32、W64、F65、H66、F186、K187、N211、V213、R214、L216、およびP217からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する、付記227から231のいずれかに記載の試験方法。
(付記233)
前記基準抗体は、前記(H)の重散可変領域と、前記(L)の軽鎖可変領域とを含む抗体である、付記227から232のいずれかに記載の試験方法。
(付記234)
前記基準抗体は、下記(1)~(5)および(6)からなる群から選択された少なくとも1つの抗体である、付記227から233のいずれかに記載の試験方法。
(付記235)
前記基準抗体は、前記(A)2210抗体、(B)2490抗体、(C)8D2抗体、(D)2582抗体、(E)2369抗体、および(F)2660抗体からなる群から選択された少なくとも1つの抗体である、付記227から234のいずれかに記載の試験方法。
(付記236)
前記基準抗体は、前記Swタンパク質との結合により、前記Swタンパク質のアンジオテンシン変換酵素2(ACE2)への結合活性を増強させる、付記227から235のいずれかに記載の試験方法。
(付記237)
前記測定工程は、
Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を測定する第1の測定工程と、
前記基準抗体の存在下、Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を測定する第2の測定工程とを含む、付記227から236のいずれかに記載の試験方法。
(付記238)
前記測定工程は、
前記第1測定工程におけるSwタンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の測定結果と、前記第2測定工程におけるSwタンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の測定結果とを比較することにより、前記基準抗体と競合する競合抗体を測定する比較工程を含む、付記237記載の試験方法。
(付記239)
前記測定工程において、前記抗体として、抗体の量を測定する、付記227から238のいずれかに記載の試験方法。
(付記240)
前記抗体の量を、第1の閾値と比較することにより、前記被検者がSARS-CoV-2に感染する可能性を試験する第1の試験工程を含む、付記239記載の試験方法。
(付記241)
前記第1の閾値は、健常者の生体試料における前記抗体の量および/またはSARS-CoV-2の罹患者の生体試料における前記抗体の量に基づき設定された閾値である、付記240記載の試験方法。
(付記242)
前記第1の試験工程において、前記被検者の生体試料における抗体の量が、前記第1の閾値より高い場合、前記被検者は、SARS-CoV-2に罹患する可能性が高いとする、付記241記載の試験方法。
(付記243)
前記被検者の生体試料について、Swタンパク質の中和抗体を測定する第3の測定工程を含む、付記227から242のいずれかに記載の試験方法。
(付記244)
前記中和抗体は、前記Swタンパク質の受容体結合ドメインに結合する抗体である、付記243記載の試験方法。
(付記245)
前記第3の測定工程において、前記中和抗体として、中和抗体の量を測定する、付記243または244記載の試験方法。
(付記246)
前記中和抗体の量を、第2の閾値と比較することにより、前記被検者がSARS-CoV-2に感染する可能性を試験する第2の試験工程を含む、付記245記載の試験方法。
(付記247)
前記第2の閾値は、SARS-CoV-2の罹患者の生体試料における前記中和抗体の量および/またはSARS-CoV-2の罹患後、回復した者の生体試料における前記中和抗体の量に基づき設定された閾値である、付記246記載の試験方法。
(付記248)
前記第2の試験工程において、前記被検者の生体試料における抗体の量が、前記第2の閾値より高い場合、前記被検者は、SARS-CoV-2に罹患する可能性が低いとする、付記247記載の試験方法。
(付記249)
前記測定工程において、前記抗体として、抗体の量を測定し、
前記被検者の生体試料について、Swタンパク質の中和抗体の量を測定する第3の測定工程と、
前記測定工程における抗体の量(S)と、前記第3の測定工程における中和抗体の量(N)との抗体量比(S/N)を算出する算出工程と、
前記抗体量比を、第3の閾値と比較することにより、前記被検者がSARS-CoV-2に感染する可能性を試験する第3の試験工程を含む、付記237から238のいずれかに記載の試験方法。
(付記250)
前記第3の閾値は、健常者の生体試料における前記抗体量比、SARS-CoV-2の罹患者の生体試料における前記抗体量比、および/またはSARS-CoV-2の罹患後、回復した者の生体試料における前記抗体量比に基づき設定された閾値である、付記249記載の試験方法。
(付記251)
前記第3の試験工程において、前記被検者の生体試料における前記抗体量比(S/N)が、前記第3の閾値より高い場合、前記被検者は、SARS-CoV-2に罹患する可能性が高いとする、付記250記載の試験方法。
<第3の感染増強抗体の試験方法>
(付記252)
SARS-CoV-2への感染しやすさの試験方法であって、
被検者の生体試料について、野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)に結合し、
前記Swタンパク質において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異を有する変異タンパク質を認識しない抗体を測定する測定工程を含む、試験方法。
(付記253)
前記測定工程は、
Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を測定する第1の測定工程と、
Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異が導入された変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を測定する第2の測定工程とを含む、付記252記載の試験方法。
(付記254)
前記測定工程は、
前記第1測定工程における前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の測定結果と、前記第2測定工程における前記変異タンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の測定結果とを比較することにより、前記抗体を測定する比較工程を含む、付記253記載の試験方法。
(付記255)
前記測定工程において、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、65位、および/または66位のアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異を有する変異タンパク質を認識しない抗体を測定する、付記252から254のいずれかに記載の試験方法。
(付記256)
前記測定工程は、
Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を測定する第1の測定工程と、
Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、65位、および/または66位のアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異が導入された第1の変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記第1の変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を測定する第2の測定工程とを含む、付記255記載の試験方法。
(付記257)
前記測定工程は、
前記第1測定工程における前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の測定結果と、前記第2測定工程における前記第1の変異タンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の測定結果とを比較する比較工程を含む、付記256記載の試験方法。
(付記258)
前記測定工程において、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、187位、213位、および/または214位のアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異を有する変異タンパク質を認識しない抗体を測定する、付記252から257のいずれかに記載の試験方法。
(付記259)
前記測定工程は、
Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を測定する第1の測定工程と、
Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、187位、213位、および/または214位のアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異が導入された第2の変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記第2の変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を測定する第2の測定工程とを含む、付記258記載の試験方法。
(付記260)
前記測定工程は、
前記第1測定工程における前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の測定結果と、前記第2測定工程における前記第2の変異タンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の測定結果とを比較する比較工程を含む、付記259記載の試験方法。
(付記261)
前記測定工程において、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、66位、213位、および214位、64位、66位、187位、213位、および214位、または64位、65位、66位、187位、213位、および214位のアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異を有する変異タンパク質を認識しない抗体を測定する、付記252から260のいずれかに記載の試験方法。
(付記262)
前記測定工程は、
Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を測定する第1の測定工程と、
Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、65位、66位、187位、213位、および/または214位のアミノ酸に変異が導入された第3の変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記第3の変異タンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を測定する第2の測定工程とを含む、付記261記載の試験方法。
(付記263)
前記測定工程は、
前記第1測定工程における前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の測定結果と、前記第2測定工程における前記第3の変異タンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の測定結果とを比較する比較工程を含む、付記262記載の試験方法。
(付記264)
前記測定工程において、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、N30、F32、W64、F65、H66、F186、K187、N211、V213、R214、L216、およびP217のアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体を測定する、付記252から263のいずれかに記載の試験方法。
(付記265)
前記測定工程において、前記抗体として、抗体の量を測定する、付記252から264のいずれかに記載の試験方法。
(付記266)
前記抗体の量を、第1の閾値と比較することにより、前記被検者がSARS-CoV-2に感染する可能性を試験する第1の試験工程を含む、付記265記載の試験方法。
(付記267)
前記第1の閾値は、健常者の生体試料における前記抗体の量および/またはSARS-CoV-2の罹患者の生体試料における前記抗体の量に基づき設定された閾値である、付記266記載の試験方法。
(付記268)
前記第1の試験工程において、前記被検者の生体試料における抗体の量が、前記第1の閾値より高い場合、前記被検者は、SARS-CoV-2に罹患する可能性が高いとする、付記267記載の試験方法。
(付記269)
前記被検者の生体試料について、前記Swタンパク質の中和抗体を測定する第3の測定工程を含む、付記252から268のいずれかに記載の試験方法。
(付記270)
前記中和抗体は、前記Swタンパク質の受容体結合ドメインに結合する抗体である、付記269記載の試験方法。
(付記271)
前記第3の測定工程において、前記中和抗体として、中和抗体の量を測定する、付記269または270記載の試験方法。
(付記272)
前記中和抗体の量を、第2の閾値と比較することにより、前記被検者がSARS-CoV-2に感染する可能性を試験する第2の試験工程を含む、付記271記載の試験方法。
(付記273)
前記第2の閾値は、SARS-CoV-2の罹患者の生体試料における前記中和抗体の量および/またはSARS-CoV-2の罹患後、回復した者の生体試料における前記中和抗体の量に基づき設定された閾値である、付記272記載の試験方法。
中和抗体
(付記274)
前記第2の試験工程において、前記被検者の生体試料における抗体の量が、前記第2の閾値より高い場合、前記被検者は、SARS-CoV-2に罹患する可能性が低いとする、付記273記載の試験方法。
(付記275)
前記測定工程において、前記抗体として、抗体の量を測定し、
前記被検者の生体試料について、Swタンパク質の中和抗体の量を測定する第3の測定工程と、
前記測定工程における抗体の量(S)と、前記第3の測定工程における中和抗体の量(N)との抗体量比(S/N)を算出する算出工程と、
前記抗体量比を、第3の閾値と比較することにより、前記被検者がSARS-CoV-2に感染する可能性を試験する第3の試験工程を含む、付記252から264のいずれかに記載の試験方法。
(付記276)
前記第3の閾値は、健常者の生体試料における前記抗体量比、SARS-CoV-2の罹患者の生体試料における前記抗体量比、および/またはSARS-CoV-2の罹患後、回復した者の生体試料における前記抗体量比に基づき設定された閾値である、付記275記載の試験方法。
(付記277)
前記第3の試験工程において、前記被検者の生体試料における前記抗体量比(S/N)が、前記第3の閾値より高い場合、前記被検者は、SARS-CoV-2に罹患する可能性が高いとする、付記276記載の試験方法。
(付記278)
前記測定工程において、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、N30、F32、W64、F65、H66、F186、K187、N211、V213、R214、L216、およびP217のアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体を測定する、付記252から277のいずれかに記載の試験方法。
(付記279)
前記Swタンパク質は、前記Ssタンパク質である、付記252から278のいずれかに記載の試験方法。
<第4の感染増強抗体の試験方法>
(付記280)
SARS-CoV-2への感染しやすさの試験方法であって、
被検者の生体試料について、野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)との結合について、基準抗体と競合する競合抗体を測定する測定工程を含み、
前記基準抗体は、
前記Swタンパク質を認識し、
前記Swタンパク質において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)において、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸に変異を有する変異タンパク質を認識しない、試験方法。
(付記281)
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、65位、および/または66位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有する変異タンパク質を認識しない、付記280記載の試験方法。
(付記282)
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、187位、213位、および/または214位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有する変異タンパク質を認識しない、付記280または281記載の試験方法。
(付記283)
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、65位、66位、187位、213位、および214位からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有する変異タンパク質を認識しない、付記280から282のいずれかに記載の試験方法。
(付記284)
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、66位、213位、および214位、64位、66位、187位、213位、および214位、または64位、65位、66位、187位、213位、および214位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有する変異タンパク質を認識しない、付記280から283のいずれかに記載の試験方法。
(付記285)
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、N30、F32、W64、F65、H66、F186、K187、N211、V213、R214、L216、およびP217からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有する変異タンパク質を認識しない、付記280から284のいずれかに記載の試験方法。
(付記286)
前記基準抗体は、前記(H)の重散可変領域と、前記(L)の軽鎖可変領域とを含む抗体である、付記280から285のいずれかに記載の試験方法。
(付記287)
前記基準抗体は、前記(1)~(5)および(6)からなる群から選択された少なくとも1つの抗体である、付記280から286のいずれかに記載の試験方法。
(付記288)
前記基準抗体は、前記(A)2210抗体、(B)2490抗体、(C)8D2抗体、(D)2582抗体、(E)2369抗体、および(F)2660抗体からなる群から選択された少なくとも1つの抗体である、付記280から287のいずれかに記載の試験方法。
(付記289)
前記基準抗体は、前記Swタンパク質との結合により、前記Swタンパク質のアンジオテンシン変換酵素2(ACE2)への結合活性を増強させる、付記280から288のいずれかに記載の試験方法。
(付記290)
前記測定工程は、
Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を測定する第1の測定工程と、
前記基準抗体の存在下、Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料とを接触させ、前記Swタンパク質またはそのN末端ドメインと、前記生体試料における抗体との結合を測定する第2の測定工程とを含む、付記280から289のいずれかに記載の試験方法。
(付記291)
前記測定工程は、
前記第1測定工程におけるSwタンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の測定結果と、前記第2測定工程におけるSwタンパク質またはそのN末端ドメインに対する抗体の測定結果とを比較することにより、前記基準抗体と競合する競合抗体を測定する比較工程を含む、付記290記載の試験方法。
(付記292)
前記測定工程において、前記抗体として、抗体の量を測定する、付記280から291のいずれかに記載の試験方法。
(付記293)
前記抗体の量を、第1の閾値と比較することにより、前記被検者がSARS-CoV-2に感染する可能性を試験する第1の試験工程を含む、付記292記載の試験方法。
(付記294)
前記第1の閾値は、健常者の生体試料における前記抗体の量および/またはSARS-CoV-2の罹患者の生体試料における前記抗体の量に基づき設定された閾値である、付記293記載の試験方法。
(付記295)
前記第1の試験工程において、前記被検者の生体試料における抗体の量が、前記第1の閾値より高い場合、前記被検者は、SARS-CoV-2に罹患する可能性が高いとする、付記294記載の試験方法。
(付記296)
前記被検者の生体試料について、前記Swタンパク質の中和抗体を測定する第3の測定工程を含む、付記280から295のいずれかに記載の試験方法。
(付記297)
前記中和抗体は、前記Swタンパク質の受容体結合ドメインに結合する抗体である、付記296記載の試験方法。
(付記298)
前記第3の測定工程において、前記中和抗体として、中和抗体の量を測定する、付記296または297記載の試験方法。
(付記299)
前記中和抗体の量を、第2の閾値と比較することにより、前記被検者がSARS-CoV-2に感染する可能性を試験する第2の試験工程を含む、付記298記載の試験方法。
(付記300)
前記第2の閾値は、SARS-CoV-2の罹患者の生体試料における前記中和抗体の量および/またはSARS-CoV-2の罹患後、回復した者の生体試料における前記中和抗体の量に基づき設定された閾値である、付記299記載の試験方法。
中和抗体
(付記301)
前記第2の試験工程において、前記被検者の生体試料における抗体の量が、前記第2の閾値より高い場合、前記被検者は、SARS-CoV-2に罹患する可能性が低いとする、付記300記載の試験方法。
(付記302)
前記測定工程において、前記抗体として、抗体の量を測定し、
前記被検者の生体試料について、Swタンパク質の中和抗体の量を測定する第3の測定工程と、
前記測定工程における抗体の量(S)と、前記第3の測定工程における中和抗体の量(N)との抗体量比(S/N)を算出する算出工程と、
前記抗体量比を、第3の閾値と比較することにより、前記被検者がSARS-CoV-2に感染する可能性を試験する第3の試験工程を含む、付記280から301のいずれかに記載の試験方法。
(付記303)
前記第3の閾値は、健常者の生体試料における前記抗体量比、SARS-CoV-2の罹患者の生体試料における前記抗体量比、および/またはSARS-CoV-2の罹患後、回復した者の生体試料における前記抗体量比に基づき設定された閾値である、付記302記載の試験方法。
(付記304)
前記第3の試験工程において、前記被検者の生体試料における前記抗体量比(S/N)が、前記第3の閾値より高い場合、前記被検者は、SARS-CoV-2に罹患する可能性が高いとする、付記303記載の試験方法。
(付記305)
前記測定工程において、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、N30、F32、W64、F65、H66、F186、K187、N211、V213、R214、L216、およびP217のアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体を測定する、付記280から304のいずれかに記載の試験方法。
(付記306)
前記Swタンパク質は、前記Ssタンパク質である、付記280から305のいずれかに記載の試験方法。
<SARS-CoV-2の重症化の抑制方法>
(付記307)
被検者の生体試料から前記被検者のSARS-CoV-2の感染増強の可能性を試験する試験工程と、
前記試験工程において、感染増強の可能性があると評価された被検者に対して、SARS-CoV-2の治療薬を投与する投与工程とを含み、
前記試験工程は、付記200から306のいずれかに記載の試験方法により実施される、SARS-CoV-2の重症化の抑制方法。
<感染増強抗体の低減剤>
(付記308)
SARS-CoV-2のSpikeタンパク質のアンジオテンシン変換酵素2(ACE2)への結合能を増強する抗体の低減剤であって、
野生型Spikeタンパク質(Swタンパク質)またはそのN末端ドメインを含む、低減剤。
(付記309)
担体を含み、
前記Swタンパク質は、担体に保持されている、付記308記載の低減剤。
(付記310)
前記担体は、ビーズまたはフィルターである、付記309記載の低減剤。
<感染増強抗体の低減方法>
(付記311)
SARS-CoV-2のSpikeタンパク質のアンジオテンシン変換酵素2(ACE2)への結合能を増強する抗体の低減方法であって、
生体試料と、付記308から310のいずれかに記載の低減剤とを接触させることにより、前記生体試料における前記抗体を低減する低減工程を含む、低減方法。
(付記312)
前記低減工程に先立ち、対象から前記生体試料を取得する取得工程を含む、付記311記載の低減方法。
(付記313)
前記低減工程後、前記生体試料を、前記生体試料を取得した対象に投与する投与工程を含む、付記311または312記載の低減方法。
Claims (17)
- 下記(Sm)のアミノ酸配列からなるタンパク質である、SARS-CoV-2のSpikeタンパク質の変異体:
(Sm)下記(Sm1)、(Sm2)、または(Sm3)のアミノ酸配列:
(Sm1)野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)のアミノ酸配列において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有するアミノ酸配列;
(Sm2)(Sm1)のアミノ酸配列において、1~127個の挿入、付加、置換および/または欠失を有し、かつ、(Sm1)の変異されたアミノ酸が維持されているアミノ酸配列;
(Sm3)(Sm1)のアミノ酸配列に対して、90%以上の同一性を有し、かつ、(Sm1)の変異されたアミノ酸が維持されているアミノ酸配列。 - 前記(Sm1)のアミノ酸配列は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、65位、66位、187位、213位、および214位からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有するアミノ酸配列である、請求項1記載の変異体。
- 前記(Sm1)のアミノ酸配列は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、64位、66位、213位、および214位、64位、66位、187位、213位、および214位、または64位、65位、66位、187位、213位、および214位のアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有するアミノ酸配列である、請求項1または2記載の変異体。
- 前記(Sm1)のアミノ酸配列は、前記Swタンパク質において、前記Ssタンパク質における、W64、F65、H66、K187、V213、およびR214のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸にアラニン置換を有するアミノ酸配列である、請求項1から3のいずれか一項に記載の変異体。
- 前記(Sm1)のアミノ酸配列は、配列番号1のアミノ酸配列における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有するアミノ酸配列である、請求項1から4のいずれか一項に記載の変異体。
- 請求項1から5のいずれか一項に記載のSpikeタンパク質の変異体の部分配列を有する部分ポリペプチドを含み、
前記部分ポリペプチドは、前記変異体における、少なくとも1つの変異アミノ酸を含む、変異ポリペプチド。 - 請求項1から5のいずれか一項に記載のSpikeタンパク質の変異体を含む、SARS-CoV-2の変異ウイルス。
- 請求項1から5のいずれか一項に記載のSpikeタンパク質の変異体および/または請求項6記載の変異ポリペプチドを含む、ウイルス様粒子。
- 請求項1から5のいずれか一項に記載のSpikeタンパク質の変異体をコードする核酸分子および/または請求項6記載の変異ポリペプチドをコードする核酸分子を含む、核酸。
- 請求項9記載の核酸を含む、発現ベクター。
- 請求項1から5のいずれか一項に記載のSpikeタンパク質の変異体、請求項6記載の変異ポリペプチド、請求項7記載の変異ウイルス、請求項8記載のウイルス様粒子、請求項9記載の核酸、および/または請求項10記載の発現ベクターと、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
- SARS-CoV-2のSpikeタンパク質のアンジオテンシン変換酵素2(ACE2)への結合能を増強する抗体の誘導能が低減されたSpikeタンパク質の変異体の製造方法であって、
標的SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Stタンパク質)のアミノ酸配列において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を導入する変異工程を含む、方法。 - SARS-CoV-2のSpikeタンパク質のアンジオテンシン変換酵素2(ACE2)への結合能を増強する抗体の誘導能が低減されたSpikeタンパク質の変異体のスクリーニング方法であって、
候補SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Scタンパク質)のアミノ酸配列において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、65位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸に変異を有するScタンパク質を、前記Spikeタンパク質の変異体として選抜する選抜工程を含む、方法。 - 野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基と対応するアミノ酸を認識する抗体である、SARS-CoV-2の感染増強マーカー。
- 野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)との結合について、基準抗体と競合する競合抗体であり、
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体である、SARS-CoV-2の感染増強マーカー。 - 被検者の生体試料について、野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体を検出する検出工程を含む、SARS-CoV-2の感染増強抗体の検出方法。
- 被検者の生体試料について、野生型SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Swタンパク質)との結合について、基準抗体と競合する競合抗体を検出する検出工程を含み、
前記基準抗体は、前記Swタンパク質において、基準SARS-CoV-2のSpikeタンパク質(Ssタンパク質、配列番号1)における、30位、32位、64位、66位、186位、187位、211位、213位、214位、216位、および217位のアミノ酸からなる群から選択された少なくとも1つのアミノ酸残基に対応するアミノ酸を認識する抗体である、SARS-CoV-2の感染増強抗体の検出方法。
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